(57)【要約】本出願は、ポリペプチドを調製するための方法に関する。また、酢酸グラチラマーを調製するための提供する。一局面において、本発明は、ポリペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩を調製するための方法を提供し、この方法は：（ａ）保護アミノ酸の混合物を重合させて保護ポリペプチドを形成する工程；（ｂ）該保護ポリペプチドを酸と反応させる工程；（ｃ）必要に応じて、工程（ｂ）で得られた保護ポリペプチドを試薬で処理し、分子不純物の含有量を低減させる工程；および（ｄ）工程（ｂ）または（ｃ）で得られた保護ポリペプチドを塩基と反応させ、ポリペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩を形成する工程を包含する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ポリペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩を調製するための方法であって、該方法は：
（ａ）  保護アミノ酸の混合物を重合させて保護ポリペプチドを形成する工程；
（ｂ）  該保護ポリペプチドを酸と反応させる工程；
（ｃ）  必要に応じて、工程（ｂ）で得られた保護ポリペプチドを試薬で処理し、分子不純物の含有量を低減させる工程；および
（ｄ）  工程（ｂ）または（ｃ）で得られた保護ポリペプチドを塩基と反応させ、ポリペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩を形成する工程
を包含する、方法。
【請求項２】
前記アミノ酸が、Ｌ−チロシン、Ｌ−アラニン、Ｌ−グルタメート、およびＬ−リジンである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ポリペプチドがグラチラマーである、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
保護アミノ酸がアミノ酸のＮ−カルボキシ無水物である、請求項１〜３のいずれかに記載の方法。
【請求項５】
酸が、酢酸、プロピオン酸、酪酸、塩酸、臭化水素、フッ化水素、ヨウ化水素、メタンスルホン酸、トリフルオロメタンスルホン酸、亜リン酸、トリフルオロ酢酸、硫酸、リン酸および次リン酸のうちの１種類以上を含むものである、請求項１〜３のいずれかに記載の方法。
【請求項６】
酸が、酢酸、プロピオン酸、酪酸、塩化水素、臭化水素、フッ化水素、ヨウ化水素、メタンスルホン酸、トリフルオロメタンスルホン酸、亜リン酸、トリフルオロ酢酸、硫酸、リン酸および次リン酸のうちの２種類以上を含むものである、請求項１〜３のいずれかに記載の方法。
【請求項７】
酸が、酢酸、塩化水素、臭化水素、ヨウ化水素および次リン酸のうちの２種類以上を含むものである、請求項１〜３のいずれかに記載の方法。
【請求項８】
酸が、塩化水素、臭化水素、ヨウ化水素、硫酸および次リン酸のうちの少なくとも１種類を含むものである、請求項１〜３のいずれかに記載の方法。
【請求項９】
試薬が、チオ硫酸ナトリウム、重硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、アスコルビン酸、活性炭繊維、イオン交換樹脂、銀塩および重炭酸ナトリウムのうちの１種類以上を含むものである、請求項１〜３のいずれかに記載の方法。
【請求項１０】
塩基が有機塩基である、請求項１〜３のいずれかに記載の方法。
【請求項１１】
塩基が無機塩基である、請求項１〜３のいずれかに記載の方法。
【請求項１２】
塩基がピペリジンを含むものである、請求項１〜３のいずれかに記載の方法。
【請求項１３】
グラチラマーまたはその薬学的に許容され得る塩を調製するための方法であって、該方法は：
（ａ）  Ｌ−チロシン、Ｌ−アラニン、Ｌ−グルタメートおよびＬ−リジンの保護アミノ酸の混合物を重合させて保護グラチラマーを形成する工程；
（ｂ）  該保護グラチラマーを酸と反応させる工程；
（ｃ）  必要に応じて、工程（ｂ）で得られた保護ポリペプチドを試薬で処理し、分子不純物の含有量を低減させる工程；ならびに
（ｄ）  工程（ｂ）または（ｃ）で得られた保護ポリペプチドを塩基と反応させ、ポリペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩を形成する工程
を包含する、方法。
【請求項１４】
前記保護アミノ酸がアミノ酸のＮ−カルボキシ無水物である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
酸が、酢酸、プロピオン酸、酪酸、塩酸、臭化水素、フッ化水素、ヨウ化水素、メタンスルホン酸、トリフルオロメタンスルホン酸、亜リン酸、トリフルオロ酢酸、硫酸、リン酸および次リン酸のうちの１種類以上を含むものである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１６】
酸が、酢酸、プロピオン酸、酪酸、塩化水素、臭化水素、フッ化水素、ヨウ化水素、メタンスルホン酸、トリフルオロメタンスルホン酸、亜リン酸、トリフルオロ酢酸、硫酸、リン酸および次リン酸のうちの２種類以上を含むものである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１７】
酸が、酢酸、塩化水素、臭化水素、ヨウ化水素および次リン酸のうちの２種類以上を含むものである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１８】
酸が、塩化水素、臭化水素、ヨウ化水素、硫酸および次リン酸のうちの少なくとも１種類を含むものである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１９】
試薬が、チオ硫酸ナトリウム、重硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、アスコルビン酸、活性炭繊維、イオン交換樹脂、銀塩および重炭酸ナトリウムのうちの１種類以上を含むものである、請求項１３に記載の方法。
【請求項２０】
塩基が有機塩基である、請求項１３に記載の方法。
【請求項２１】
塩基が無機塩基である、請求項１３に記載の方法。
【請求項２２】
塩基がピペリジンを含むものである、請求項１３に記載の方法。
【請求項２３】
ポリペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩を調製するための方法であって、該方法は：
（ａ）保護アミノ酸の混合物を重合させて保護ポリペプチドを形成する工程；および
（ｂ）該保護ポリペプチドを酸と反応させてポリペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩を形成する工程
を包含する、方法。
【請求項２４】
保護アミノ酸がアミノ酸のＮ−カルボキシ無水物である、請求項２３のいずれかに記載の方法。
【請求項２５】
前記アミノ酸がＬ−チロシン、Ｌ−アラニン、Ｌ−グルタメート、およびＬ−リジンである、請求項２３に記載の方法。
【請求項２６】
前記ポリペプチドがグラチラマーである、請求項２３に記載の方法。
【請求項２７】
酸が、酢酸、ヨウ化水素、亜リン酸、リン酸および次リン酸のうちの１種類以上を含むものである、請求項２３に記載の方法。
【請求項２８】
酸が、酢酸、亜リン酸、リン酸および次リン酸のうちの２種類以上を含むものである、請求項２３に記載の方法。
【請求項２９】
酸が、酢酸、ヨウ化水素および次リン酸のうちの２種類以上を含むものである、請求項２３に記載の方法。
【請求項３０】
酸が、ヨウ化水素のうちの少なくとも１種類を含むものである、請求項２３に記載の方法。
【請求項３１】
さらに、ポリペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩を精製する工程を包含する、請求項１３〜３０に記載の方法。
【請求項３２】
さらに、グラチラマーまたはその薬学的に許容され得る塩を精製する工程を包含する、請求項１３〜３０に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
序論
本出願の諸態様は、ポリペプチドの調製方法に関する。本出願の特定の態様は、酢酸グラチラマーの調製方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
「酢酸グラチラマー」という名称が使われ始めた薬物（以前は、コポリマー−１として知られていた）は、化学的には、Ｌ−グルタミン酸、Ｌ−アラニン、Ｌ−リジンおよびＬ−チロシンのポリマーの無作為化混合物の酢酸塩である。これは、式（Ｉ）
【０００３】
【化１】
2013529194.tif 000002
の構造式および化学式を有する。
【０００４】
酢酸グラチラマーは、４種類の天然に存在するアミノ酸：Ｌ−グルタミン酸、Ｌ−アラニン、Ｌ−チロシンおよびＬ−リジンを、それぞれ０．１４１、０．４２７、０．０９５および０．３３８の平均モル分率で含む合成ポリペプチドの酢酸塩である。酢酸グラチラマーの平均分子量は５，０００〜９，０００ダルトンである。酢酸グラチラマーは、Ｔｅｖａ社によってＣＯＰＡＸＯＮＥ（登録商標）として販売されている注射用医薬製品（再発寛解型多発性硬化症（ＲＲＭＳ）を有する患者において再発頻度の低減のために処方される）の活性成分である。
【０００５】
特許文献１には、保護コポリマー−１を臭化水素酸と反応させてトリフルオロアセチルコポリマー−１を形成した後、このトリフルオロアセチルコポリマー−１をピペリジン水溶液で処理してコポリマー−１を形成し、得られたコポリマー−１を精製することによるコポリマー−１の調製方法が開示されている。
【０００６】
特許文献２には、チロシン、アラニン、γ−ベンジルグルタメートおよびＮ−トリフルオロアセチルリジンのＮ−カルボキシ無水物を重合させて保護ポリペプチドを形成し、この保護ポリペプチドを、前処理した臭化水素酸（酢酸溶液中）で脱保護してトリフルオロアセチル酢酸グラチラマーを形成した後、トリフルオロアセチル酢酸グラチラマーを水性ピペリジンと反応させて酢酸グラチラマーの溶液を形成し、酢酸グラチラマーを精製することによる酢酸グラチラマーの調製方法が開示されている。
【０００７】
特許文献３には、アミノ酸、その誘導体（エステルなど）、およびそのカルボニル化試薬（ホスゲンなど）との塩を反応させることを伴うアミノ酸のＮ−カルボキシ無水物の調製が論考されている。
【０００８】
特許文献４には、保護コポリマー６またはその塩を脱保護してポリペプチド１またはその薬学的に許容され得る塩を単一の工程で得ることによる、ランダムに配列されたＬ−アラニン、Ｌ−グルタミン酸、Ｌ−リジンおよびＬ−チロシンを含むポリペプチド１またはその薬学的に許容され得る塩の調製方法が開示されている。
【０００９】
特許文献５には、各々がグルタミン酸、アラニン、チロシンおよびリジンからなるポリペプチドの酢酸塩の混合物の作製方法が開示されている。
【００１０】
特許文献６には、Ｌ−チロシンのＮ−カルボキシ無水物、Ｌ−アラニンのＮ−カルボキシ無水物、保護Ｌ−グルタメートのＮ−カルボキシ無水物、およびＮ−ｔ−ブトキシカルボニル−Ｌ−リジンのＮ−カルボキシ無水物の混合物を重合させて保護グラチラマーを形成した後、この保護グラチラマーを酸で処理してグラチラマーを形成することによる酢酸グラチラマーの調製方法が開示されている。
【００１１】
特許文献７には、医薬品に使用されるコポリマー−１画分（酢酸グラチラマー、およそ０．１４１、０．４２７、０．０９５および０．３３８のモル比のグルタミン酸、アラニン、チロシンおよびリジンで構成されたポリペプチドの混合物）の調製方法が開示されている。
【００１２】
費用対効果が大きく環境に優しい様式で、高純度を有するポリペプチド（例えば、酢酸グラチラマー）の調製のための改善された方法の必要性が依然として存在している。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１３】
【特許文献１】米国特許第５，８００，８０８号明細書
【特許文献２】米国特許第７，４９５，０７２号明細書
【特許文献３】米国特許第７，２９４，７１９号明細書
【特許文献４】米国特許第７，０４９，３９９号明細書
【特許文献５】米国特許出願公開第２００６／０１７２９４２号明細書
【特許文献６】米国特許出願公開第２００８／００２１２００号明細書
【特許文献７】国際公開第２００９／０１６６４３号
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１４】
概要
一態様では、本出願は、以下の工程：
（ａ）  保護アミノ酸の混合物を重合させて保護ポリペプチドを形成する工程；
（ｂ）  該保護ポリペプチドを酸と反応させる工程；
（ｃ）  工程（ｂ）で得られた保護ポリペプチドを試薬で処理する工程；および
（ｄ）  工程（ｃ）で得られた保護ポリペプチドを塩基と反応させてポリペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩を形成する工程
の１つ以上を個別に、または記載の順序で含む、ポリペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩の調製方法を提供する。
【００１５】
一態様では、本出願は、以下の工程：
（ａ）  Ｌ−チロシン、Ｌ−アラニン、Ｌ−グルタメートおよびＬ−リジンから選択される保護アミノ酸の混合物を重合させて保護ポリペプチドを形成する工程；
（ｂ）  該保護ポリペプチドを酸と反応させる工程；
（ｃ）  工程（ｂ）で得られた保護ポリペプチドを試薬で処理する工程；ならびに
（ｄ）  工程（ｃ）で得られた保護ポリペプチドを塩基と反応させてポリペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩を形成する工程
の１つ以上を個別に、または記載の順序で含む、ポリペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩の調製方法を提供する。
【００１６】
一態様では、本出願は、以下の工程：
（ａ）  Ｌ−チロシン、Ｌ−アラニン、Ｌ−グルタメートおよびＬ−リジンからなる保護アミノ酸の混合物を重合させて保護グラチラマーを形成する工程；
（ｂ）  該保護グラチラマーを酸と反応させる工程；
（ｃ）  工程（ｂ）で得られた保護グラチラマーを試薬で処理する工程；ならびに
（ｄ）  工程（ｃ）で得られた保護グラチラマーを塩基と反応させてグラチラマーまたはその薬学的に許容され得る塩を形成する工程
の１つ以上を個別に、または記載の順序で含む、グラチラマーまたはその薬学的に許容され得る塩の調製方法を提供する。
【００１７】
一態様では、本出願は、以下の工程：
（ａ）  保護アミノ酸の混合物を重合させて保護ポリペプチドを形成する工程；
（ｂ）  該保護ポリペプチドを、ヨウ化水素酸および次亜リン酸と酢酸との混合物と反応させる工程；
（ｃ）  工程（ｂ）で得られた保護ポリペプチドを試薬で処理する工程；ならびに
（ｄ）  工程（ｃ）で得られた保護ポリペプチドを塩基と反応させてポリペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩を形成する工程
の１つ以上を個別に、または記載の順序で含む、ポリペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩の調製方法を提供する。
【００１８】
一態様では、本出願は、以下の工程：
（ａ）  Ｌ−チロシン、Ｌ−アラニン、Ｌ−グルタメートおよびＬ−リジンから選択される保護アミノ酸の混合物を重合させて保護ポリペプチドを形成する工程；
（ｂ）  該保護ポリペプチドを、ヨウ化水素酸および次亜リン酸と酢酸との混合物と反応させる工程；
（ｃ）  工程（ｂ）で得られた保護ポリペプチドを試薬で処理する工程；ならびに
（ｄ）  工程（ｃ）で得られた保護ポリペプチドを塩基と反応させてポリペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩を形成する工程
の１つ以上を個別に、または記載の順序で含む、ポリペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩の調製方法を提供する。
【００１９】
一態様では、本出願は、以下の工程：
（ａ）  Ｌ−チロシン、Ｌ−アラニン、Ｌ−グルタメートおよびＬ−リジンからなる保護アミノ酸の混合物を重合させて保護グラチラマーを形成する工程；
（ｂ）  該保護グラチラマーを、ヨウ化水素酸および次亜リン酸と酢酸との混合物と反応させる工程；
（ｃ）  工程（ｂ）で得られた保護グラチラマーを試薬で処理する工程；ならびに
（ｄ）  工程（ｃ）で得られた保護グラチラマーを塩基と反応させてグラチラマーまたはその薬学的に許容され得る塩を形成する工程
の１つ以上を個別に、または記載の順序で含む、グラチラマーまたはその薬学的に許容され得る塩の調製方法を提供する。
【００２０】
一態様では、本出願は、以下の工程：
（ａ）  保護アミノ酸の混合物を重合させて保護ポリペプチドを形成する工程；
（ｂ）  該保護ポリペプチドを、ヨウ化水素酸および次亜リン酸を含む酸と反応させる工程；
（ｃ）  工程（ｂ）で得られた保護ポリペプチドを試薬で処理する工程；ならびに
（ｄ）  工程（ｃ）で得られた保護ポリペプチドを塩基と反応させてポリペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩を形成する工程
の１つ以上を個別に、または記載の順序で含む、ポリペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩の調製方法を提供する。
【００２１】
一態様では、本出願は、以下の工程：
（ａ）  Ｌ−チロシン、Ｌ−アラニン、Ｌ−グルタメートおよびＬ−リジンから選択される保護アミノ酸の混合物を重合させて保護ポリペプチドを形成する工程；
（ｂ）  該保護ポリペプチドを、ヨウ化水素酸および次亜リン酸を含む酸と反応させる工程；
（ｃ）  工程（ｂ）で得られた保護ポリペプチドを試薬で処理する工程；ならびに
（ｄ）  工程（ｃ）で得られた保護ポリペプチドを塩基と反応させてポリペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩を形成する工程
の１つ以上を個別に、または記載の順序で含む、ポリペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩の調製方法を提供する。
【００２２】
一態様では、本出願は、以下の工程：
（ａ）  Ｌ−チロシン、Ｌ−アラニン、Ｌ−グルタメートおよびＬ−リジンからなる保護アミノ酸の混合物を重合させて保護グラチラマーを形成する工程；
（ｂ）  該保護グラチラマーを、ヨウ化水素酸および次亜リン酸を含む酸と反応させる工程；
（ｃ）  工程（ｂ）で得られた保護グラチラマーを試薬で処理する工程；ならびに
（ｄ）  工程（ｃ）で得られた保護グラチラマーを塩基と反応させてグラチラマーまたはその薬学的に許容され得る塩を形成する工程
の１つ以上を個別に、または記載の順序で含む、グラチラマーまたはその薬学的に許容され得る塩の調製方法を提供する。
【００２３】
一態様では、本出願は、以下の工程：
（ａ）  保護アミノ酸の混合物を重合させて保護ポリペプチドを形成する工程；
（ｂ）  該保護ポリペプチドを、ヨウ化水素酸を含む酸と反応させる工程；
（ｃ）  工程（ｂ）で得られた保護ポリペプチドを試薬で処理する工程；および
（ｄ）  工程（ｃ）で得られた保護ポリペプチドを塩基と反応させてポリペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩を形成する工程
の１つ以上を個別に、または記載の順序で含む、ポリペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩の調製方法を提供する。
【００２４】
一態様では、本出願は、以下の工程：
（ａ）  Ｌ−チロシン、Ｌ−アラニン、Ｌ−グルタメートおよびＬ−リジンから選択される保護アミノ酸の混合物を重合させて保護ポリペプチドを形成する工程；
（ｂ）  該保護ポリペプチドを、ヨウ化水素酸を含む酸と反応させる工程；
（ｃ）  工程（ｂ）で得られた保護ポリペプチドを試薬で処理する工程；ならびに
（ｄ）  工程（ｃ）で得られた保護ポリペプチドを塩基と反応させてポリペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩を形成する工程
の１つ以上を個別に、または記載の順序で含む、ポリペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩の調製方法を提供する。
【００２５】
一態様では、本出願は、以下の工程：
（ａ）  Ｌ−チロシン、Ｌ−アラニン、Ｌ−グルタメートおよびＬ−リジンからなる保護アミノ酸の混合物を重合させて保護グラチラマーを形成する工程；
（ｂ）  該保護グラチラマーを、ヨウ化水素酸を含む酸と反応させる工程；
（ｃ）  工程（ｂ）で得られた保護グラチラマーを試薬で処理する工程；ならびに
（ｄ）  工程（ｃ）で得られた保護グラチラマーを塩基と反応させてグラチラマーまたはその薬学的に許容され得る塩を形成する工程
の１つ以上を個別に、または記載の順序で含む、グラチラマーまたはその薬学的に許容され得る塩の調製方法を提供する。
【００２６】
一態様では、本出願は、以下の工程：
（ａ）  保護アミノ酸の混合物を重合させて保護ポリペプチドを形成する工程；
（ｂ）  該保護ポリペプチドを、塩酸を含む酸と反応させる工程；
（ｃ）  工程（ｂ）で得られた保護ポリペプチドを試薬で処理する工程；および
（ｄ）  工程（ｃ）で得られた保護ポリペプチドを塩基と反応させてポリペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩を形成する工程
の１つ以上を個別に、または記載の順序で含む、ポリペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩の調製方法を提供する。
【００２７】
一態様では、本出願は、以下の工程：
（ａ）  Ｌ−チロシン、Ｌ−アラニン、Ｌ−グルタメートおよびＬ−リジンから選択される保護アミノ酸の混合物を重合させて保護ポリペプチドを形成する工程；
（ｂ）  該保護ポリペプチドを、塩酸を含む酸と反応させる工程；
（ｃ）  工程（ｂ）で得られた保護ポリペプチドを試薬で処理する工程；ならびに
（ｄ）  工程（ｃ）で得られた保護ポリペプチドを塩基と反応させてポリペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩を形成する工程
の１つ以上を個別に、または記載の順序で含む、ポリペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩の調製方法を提供する。
【００２８】
一態様では、本出願は、以下の工程：
（ａ）  Ｌ−チロシン、Ｌ−アラニン、Ｌ−グルタメートおよびＬ−リジンからなる保護アミノ酸の混合物を重合させて保護グラチラマーを形成する工程；
（ｂ）  該保護グラチラマーを、塩酸を含む酸と反応させる工程；
（ｃ）  工程（ｂ）で得られた保護グラチラマーを試薬で処理する工程；ならびに
（ｄ）  工程（ｃ）で得られた保護グラチラマーを塩基と反応させてグラチラマーまたはその薬学的に許容され得る塩を形成する工程
の１つ以上を個別に、または記載の順序で含む、グラチラマーまたはその薬学的に許容され得る塩の調製方法を提供する。
【００２９】
一態様では、本出願は、以下の工程：
（ａ）  保護アミノ酸の混合物を重合させて保護ポリペプチドを形成する工程；
（ｂ）  該保護ポリペプチドを臭化水素酸の酢酸溶液と反応させる工程；
（ｃ）  工程（ｂ）で得られた保護ポリペプチドを試薬で処理する工程；および
（ｄ）  工程（ｃ）で得られた保護ポリペプチドを塩基と反応させてポリペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩を形成する工程
の１つ以上を個別に、または記載の順序で含む、ポリペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩の調製方法を提供する。
【００３０】
一態様では、本出願は、以下の工程：
（ａ）  Ｌ−チロシン、Ｌ−アラニン、Ｌ−グルタメートおよびＬ−リジンから選択される保護アミノ酸の混合物を重合させて保護ポリペプチドを形成する工程；
（ｂ）  該保護ポリペプチドを臭化水素酸の酢酸溶液と反応させる工程；
（ｃ）  工程（ｂ）で得られた保護ポリペプチドを試薬で処理する工程；ならびに
（ｄ）  工程（ｃ）で得られた保護ポリペプチドを塩基と反応させてポリペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩を形成する工程
の１つ以上を個別に、または記載の順序で含む、ポリペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩の調製方法を提供する。
【００３１】
一態様では、本出願は、以下の工程：
（ａ）  Ｌ−チロシン、Ｌ−アラニン、Ｌ−グルタメートおよびＬ−リジンからなる保護アミノ酸の混合物を重合させて保護グラチラマーを形成する工程；
（ｂ）  該保護グラチラマーを臭化水素酸の酢酸溶液と反応させる工程；
（ｃ）  工程（ｂ）で得られた保護グラチラマーを試薬で処理する工程；ならびに
（ｄ）  工程（ｃ）で得られた保護グラチラマーを塩基と反応させてグラチラマーまたはその薬学的に許容され得る塩を形成する工程
の１つ以上を個別に、または記載の順序で含む、グラチラマーまたはその薬学的に許容され得る塩の調製方法を提供する。
【００３２】
一態様では、本出願は、以下の工程：
（ａ）  保護アミノ酸の混合物を重合させて保護ポリペプチドを形成する工程；
（ｂ）  該保護ポリペプチドを、ヨウ化水素酸および次亜リン酸と酢酸との混合物と反応させる工程；および
（ｃ）  工程（ｂ）で得られた保護ポリペプチドを塩基と反応させてポリペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩を形成する工程
の１つ以上を個別に、または記載の順序で含む、ポリペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩の調製方法を提供する。
【００３３】
一態様では、本出願は、以下の工程：
（ａ）  Ｌ−チロシン、Ｌ−アラニン、Ｌ−グルタメートおよびＬ−リジンから選択される保護アミノ酸の混合物を重合させて保護ポリペプチドを形成する工程；
（ｂ）  該保護ポリペプチドを、ヨウ化水素酸および次亜リン酸と酢酸との混合物と反応させる工程；ならびに
（ｃ）  工程（ｂ）で得られた保護ポリペプチドを塩基と反応させてポリペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩を形成する工程
の１つ以上を個別に、または記載の順序で含む、ポリペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩の調製方法を提供する。
【００３４】
一態様では、本出願は、以下の工程：
（ａ）  Ｌ−チロシン、Ｌ−アラニン、Ｌ−グルタメートおよびＬ−リジンからなる保護アミノ酸の混合物を重合させて保護グラチラマーを形成する工程；
（ｂ）  該保護グラチラマーを、ヨウ化水素酸および次亜リン酸と酢酸との混合物と反応させる工程；ならびに
（ｃ）  工程（ｂ）で得られた保護グラチラマーを塩基と反応させてグラチラマーまたはその薬学的に許容され得る塩を形成する工程
の１つ以上を個別に、または記載の順序で含む、グラチラマーまたはその薬学的に許容され得る塩の調製方法を提供する。
【００３５】
一態様では、本出願は、以下の工程：
（ａ）  保護アミノ酸の混合物を重合させて保護ポリペプチドを形成する工程；
（ｂ）  該保護ポリペプチドを、ヨウ化水素酸および次亜リン酸を含む酸と反応させる工程；ならびに
（ｃ）  工程（ｂ）で得られた保護ポリペプチドを塩基と反応させてポリペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩を形成する工程
の１つ以上を個別に、または記載の順序で含む、ポリペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩の調製方法を提供する。
【００３６】
一態様では、本出願は、以下の工程：
（ａ）  Ｌ−チロシン、Ｌ−アラニン、Ｌ−グルタメートおよびＬ−リジンから選択される保護アミノ酸の混合物を重合させて保護ポリペプチドを形成する工程；
（ｂ）  該保護ポリペプチドを、ヨウ化水素酸および次亜リン酸を含む酸と反応させる工程；ならびに
（ｃ）  工程（ｂ）で得られた保護ポリペプチドを塩基と反応させてポリペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩を形成する工程
の１つ以上を個別に、または記載の順序で含む、ポリペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩の調製方法を提供する。
【００３７】
一態様では、本出願は、以下の工程：
（ａ）  Ｌ−チロシン、Ｌ−アラニン、Ｌ−グルタメートおよびＬ−リジンからなる保護アミノ酸の混合物を重合させて保護グラチラマーを形成する工程；
（ｂ）  該保護グラチラマーを、ヨウ化水素酸および次亜リン酸を含む酸と反応させる工程；ならびに
（ｃ）  工程（ｂ）で得られた保護グラチラマーを塩基と反応させてグラチラマーまたはその薬学的に許容され得る塩を形成する工程
の１つ以上を個別に、または記載の順序で含む、グラチラマーまたはその薬学的に許容され得る塩の調製方法を提供する。
【００３８】
一態様では、本出願は、以下の工程：
（ａ）  保護アミノ酸の混合物を重合させて保護ポリペプチドを形成する工程；
（ｂ）  該保護ポリペプチドを、ヨウ化水素酸を含む酸と反応させる工程；および
（ｃ）  工程（ｂ）で得られた保護ポリペプチドを塩基と反応させてポリペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩を形成する工程
の１つ以上を個別に、または記載の順序で含む、ポリペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩の調製方法を提供する。
【００３９】
一態様では、本出願は、以下の工程：
（ａ）  Ｌ−チロシン、Ｌ−アラニン、Ｌ−グルタメートおよびＬ−リジンから選択される保護アミノ酸の混合物を重合させて保護ポリペプチドを形成する工程；
（ｂ）  該保護ポリペプチドを、ヨウ化水素酸を含む酸と反応させる工程；ならびに
（ｃ）  工程（ｂ）で得られた保護ポリペプチドを塩基と反応させてポリペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩を形成する工程
の１つ以上を個別に、または記載の順序で含む、ポリペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩の調製方法を提供する。
【００４０】
一態様では、本出願は、以下の工程：
（ａ）  Ｌ−チロシン、Ｌ−アラニン、Ｌ−グルタメートおよびＬ−リジンからなる保護アミノ酸の混合物を重合させて保護グラチラマーを形成する工程；
（ｂ）  該保護グラチラマーを、ヨウ化水素酸を含む酸と反応させる工程；ならびに
（ｃ）  工程（ｂ）で得られた保護グラチラマーを塩基と反応させてグラチラマーまたはその薬学的に許容され得る塩を形成する工程
の１つ以上を個別に、または記載の順序で含む、グラチラマーまたはその薬学的に許容され得る塩の調製方法を提供する。
【００４１】
一態様では、本出願は、以下の工程：
（ａ）  保護アミノ酸の混合物を重合させて保護ポリペプチドを形成する工程；
（ｂ）  該保護ポリペプチドを、塩酸を含む酸と反応させる工程；および
（ｃ）  工程（ｂ）で得られた保護ポリペプチドをピペリジンと反応させてポリペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩を形成する工程
の１つ以上を個別に、または記載の順序で含む、ポリペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩の調製方法を提供する。
【００４２】
一態様では、本出願は、以下の工程：
（ａ）  Ｌ−チロシン、Ｌ−アラニン、Ｌ−グルタメートおよびＬ−リジンから選択される保護アミノ酸の混合物を重合させて保護ポリペプチドを形成する工程；
（ｂ）  該保護ポリペプチドを、塩酸を含む酸と反応させる工程；ならびに
（ｃ）  工程（ｂ）で得られた保護ポリペプチドをピペリジンと反応させてポリペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩を形成する工程
の１つ以上を個別に、または記載の順序で含む、ポリペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩の調製方法を提供する。
【００４３】
一態様では、本出願は、以下の工程：
（ａ）  Ｌ−チロシン、Ｌ−アラニン、Ｌ−グルタメートおよびＬ−リジンからなる保護アミノ酸の混合物を重合させて保護グラチラマーを形成する工程；
（ｂ）  該保護グラチラマーを、塩酸を含む酸と反応させる工程；
（ｃ）  工程（ｂ）で得られた保護グラチラマーをピペリジンと反応させてグラチラマーまたはその薬学的に許容され得る塩を形成する工程
の１つ以上を個別に、または記載の順序で含む、グラチラマーまたはその薬学的に許容され得る塩の調製方法を提供する。
【００４４】
一態様では、本出願は、以下の工程：
（ａ）  保護アミノ酸の混合物を重合させて保護ポリペプチドを形成する工程；
（ｂ）  該保護ポリペプチドを、硫酸を含む酸と反応させる工程；および
（ｃ）  工程（ｂ）で得られた保護ポリペプチドをピペリジンと反応させてポリペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩を形成する工程
の１つ以上を個別に、または記載の順序で含む、ポリペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩の調製方法を提供する。
【００４５】
一態様では、本出願は、以下の工程：
（ａ）  Ｌ−チロシン、Ｌ−アラニン、Ｌ−グルタメートおよびＬ−リジンから選択される保護アミノ酸の混合物を重合させて保護ポリペプチドを形成する工程；
（ｂ）  該保護ポリペプチドを、硫酸を含む酸と反応させる工程；ならびに
（ｃ）  工程（ｂ）で得られた保護ポリペプチドをピペリジンと反応させてポリペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩を形成する工程
の１つ以上を個別に、または記載の順序で含む、ポリペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩の調製方法を提供する。
【００４６】
一態様では、本出願は、以下の工程：
（ａ）  Ｌ−チロシン、Ｌ−アラニン、Ｌ−グルタメートおよびＬ−リジンからなる保護アミノ酸の混合物を重合させて保護グラチラマーを形成する工程；
（ｂ）  該保護グラチラマーを、硫酸を含む酸と反応させる工程；ならびに
（ｃ）  工程（ｂ）で得られた保護グラチラマーをピペリジンと反応させてグラチラマーまたはその薬学的に許容され得る塩を形成する工程
の１つ以上を個別に、または記載の順序で含む、グラチラマーまたはその薬学的に許容され得る塩の調製方法を提供する。
【００４７】
一態様では、本出願は、以下の工程：
（ａ）  保護アミノ酸の混合物を重合させて保護ポリペプチドを形成する工程；および
（ｂ）  該保護ポリペプチドを、ヨウ化水素酸および次亜リン酸と酢酸との混合物と反応させてポリペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩を形成する工程
の１つ以上を個別に、または記載の順序で含む、ポリペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩の調製方法を提供する。
【００４８】
一態様では、本出願は、以下の工程：
（ａ）  Ｌ−チロシン、Ｌ−アラニン、Ｌ−グルタメートおよびＬ−リジンから選択される保護アミノ酸の混合物を重合させて保護ポリペプチドを形成する工程；ならびに
（ｂ）  該保護ポリペプチドをヨウ化水素（ｈｙｄｒｏｏｉｏｄｉｃ）酸と次亜リン酸の酢酸溶液と反応させてポリペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩を形成する工程
の１つ以上を個別に、または記載の順序で含む、ポリペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩の調製方法を提供する。
【００４９】
一態様では、本出願は、以下の工程：
（ａ）  Ｌ−チロシン、Ｌ−アラニン、Ｌ−グルタメートおよびＬ−リジンからなる保護アミノ酸の混合物を重合させて保護グラチラマーを形成する工程；ならびに
（ｂ）  該保護グラチラマーを、ヨウ化水素酸および次亜リン酸と酢酸との混合物と反応させてグラチラマーまたはその薬学的に許容され得る塩を形成する工程
の１つ以上を個別に、または記載の順序で含む、グラチラマーまたはその薬学的に許容され得る塩の調製方法を提供する。
【００５０】
一態様では、本出願は、以下の工程：
（ａ）  保護アミノ酸の混合物を重合させて保護ポリペプチドを形成する工程；
（ｂ）  該保護ポリペプチドを、ヨウ化水素酸および次亜リン酸を含む酸と反応させてポリペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩を形成する工程
の１つ以上を個別に、または記載の順序で含む、ポリペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩の調製方法を提供する。
【００５１】
一態様では、本出願は、以下の工程：
（ａ）  Ｌ−チロシン、Ｌ−アラニン、Ｌ−グルタメートおよびＬ−リジンから選択される（ｓｅｌｅｃｔｅｄ  ｆｏｒｍ）保護アミノ酸の混合物を重合させて保護ポリペプチドを形成する工程；ならびに
（ｂ）  該保護ポリペプチドを、ヨウ化水素酸と次亜リン酸を含む酸と反応させてポリペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩を形成する工程
の１つ以上を個別に、または記載の順序で含む、ポリペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩の調製方法を提供する。
【００５２】
一態様では、本出願は、以下の工程：
（ａ）  Ｌ−チロシン、Ｌ−アラニン、Ｌ−グルタメートおよびＬ−リジンからなる保護アミノ酸の混合物を重合させて保護グラチラマーを形成する工程；ならびに
（ｂ）  該保護グラチラマーを、ヨウ化水素酸および次亜リン酸を含む酸と反応させてグラチラマーまたはその薬学的に許容され得る塩を形成する工程
の１つ以上を個別に、または記載の順序で含む、グラチラマーまたはその薬学的に許容され得る塩の調製方法を提供する。
【００５３】
一態様では、本出願は、以下の工程：
（ａ）  保護アミノ酸の混合物を重合させて保護ポリペプチドを形成する工程；および
（ｂ）  該保護ポリペプチドを、ヨウ化水素酸を含む酸と反応させてポリペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩を形成する工程
の１つ以上を個別に、または記載の順序で含む、ポリペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩の調製方法を提供する。
【００５４】
一態様では、本出願は、以下の工程：
（ａ）  Ｌ−チロシン、Ｌ−アラニン、Ｌ−グルタメートおよびＬ−リジンから選択される保護型の混合物を重合させて保護ポリペプチドを形成する工程；ならびに
（ｂ）  該保護ポリペプチドを、ヨウ化水素酸を含む酸と反応させてポリペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩を形成する工程
の１つ以上を個別に、または記載の順序で含む、ポリペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩の調製方法を提供する。
【００５５】
一態様では、本出願は、以下の工程：
（ａ）  Ｌ−チロシン、Ｌ−アラニン、Ｌ−グルタメートおよびＬ−リジンからなる保護アミノ酸の混合物を重合させて保護グラチラマーを形成する工程；ならびに
（ｂ）  該保護グラチラマーを、ヨウ化水素酸を含む酸と反応させてグラチラマーまたはその薬学的に許容され得る塩を形成する工程
の１つ以上を個別に、または記載の順序で含む、グラチラマーまたはその薬学的に許容され得る塩の調製方法を提供する。
【発明を実施するための形態】
【００５６】
詳細な説明
本出願の諸態様において、ポリペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩の調製方法は、保護アミノ酸の混合物を重合させて保護ポリペプチドを形成する工程を含む。
【００５７】
保護ポリペプチドを形成するための保護アミノ酸の混合物の重合は、１種類以上の適当な開始剤の存在下で行なわれ得る。重合反応に使用され得る好適な開始剤としては、限定されないが、アルキルアミン、例えば、ジメチルアミン、ジエチルアミン、ジ−ｎ−プロピルアミン、ジイソプロピルアミン、トリエチルアミン、Ｎ−エチルメチルアミン、ジ−ｎ−ブチルアミン、ジイソブチルアミン、ジ−ｓｅｃ−ブチルアミン、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルアミン、ジアミルアミン、ジ−ｎ−オクチルアミン、ジ−（２−エチルヘキシル）アミン、ジ−イソ−ノニルアミン、ジアリルアミン、Ｎ−メチルアニリン、ジフェニルアミン、ヘキシルアミン、フェネチルアミンなどが挙げられる。他の有用な開始剤としては、アジリジン、ピロール、ピロリジン、イミダゾール、インドール、ピペリジン、プリン、ナトリウムメトキシド、カリウムｔ−ブトキシド、水素化ナトリウム、水素化カリウム、２，２，６，６−テトラメチルピペリジン、ジシクロヘキシルアミン、ジシクロヘキシルウンデカン（ＤＣＵ）、リチウムジイソプロピルアミド、ｔ−ブチルリチウムなど；イオン交換樹脂、例えば、イオン（例えば、ナトリウム、カリウム、リチウム、カルシウム、マグネシウム、置換または非置換のアンモニウムなど）に結合される樹脂などが挙げられる。任意の２種類以上の開始剤の組合せも有用である。
【００５８】
重合反応に使用され得る開始剤の量は、保護アミノ酸の混合物の重量に対して約５％未満、約４％未満、約３％未満、約２％未満、約１％未満、約０．５％未満、約０．２５％未満、約０．１％未満、約０．０５％未満、約０．０１％未満、および任意の他の適当な量であり得る。
【００５９】
保護ポリペプチドを形成するための保護アミノ酸の重合は溶媒中で行なわれ得る。使用され得る好適な溶媒としては、限定されないが：エーテル（例えば、ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル、ジブチルエーテル、テトラヒドロフラン、ジメチルフラン、１，２−ジメトキシエタン、２−メトキシエタノール、２−エトキシエタノール、アニソール、１，４−ジオキサンなど）；エステル（例えば、ギ酸エチル、酢酸メチル、酢酸エチル、酢酸プロピル、酢酸ブチル、プロパン酸メチル、プロパン酸エチル、ブタン酸メチル、ブタン酸エチルなど）；脂肪族または脂環式の炭化水素（例えば、ヘキサン、ヘプタン、ペンタン、シクロヘキサン、メチルシクロヘキサンなど）；ニトロメタン；ハロゲン化炭化水素（例えば、ジクロロメタン、クロロホルム、１，１，２−トリクロロエタン、１，２−ジクロロエテンなど）；芳香族炭化水素（例えば、トルエン、キシレン、クロロベンゼン、テトラリンなど）；ニトリル（例えば、アセトニトリル、プロピオニトリルなど）；極性非プロトン性溶媒（例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチルピロリドン、ピリジン、ジメチルスルホキシド、スルホラン、ホルムアミド、アセトアミド、プロパンアミドなど）；（これらの２種類以上の任意の混合物を含む）が挙げられる。
【００６０】
該重合反応に好適な温度は、約５５℃より下、約４５℃より下、約３５℃より下、約２５℃より下、約１５℃より下、約１０℃より下、または任意の他の適当な温度であり得る。
【００６１】
保護ポリペプチドの分離は、反応混合物を水と合わせ、これにより保護ポリペプチドの析出をもたらすことによって行なわれ得る。保護ポリペプチドの分離に好適な温度は、約５０℃より下、約４０℃より下、約３０℃より下、約２０℃より下、約１０℃より下、または任意の他の適当な温度であり得る。該分離に好適な時間は、約５時間未満、約３時間未満、約２時間未満、約１時間未満、約４５分未満、またはそれより長い任意の時間であり得る。完全な分離に必要とされる厳密な温度および時間は、当業者によって容易に決定され得、また、例えば、溶液またはスラリーの濃度および温度などのパラメータに依存する。また、撹拌または内容物が混合される他の択一的な方法（例えば、振盪、アジテーションなど）を分離に使用してもよい。
【００６２】
分離された保護ポリペプチドは、デカンテーション、遠心分離、重力濾過、吸引濾過などの方法、または固形物の回収のための任意の他の手法によって回収され得る。
【００６３】
回収された保護ポリペプチドは、任意選択で乾燥させてもよい。乾燥は、トレイ型乾燥機、真空炉、空気炉、流動床乾燥機、スピンフラッシュ乾燥機、フラッシュ乾燥機などで行なわれ得る。乾燥は、大気圧または減圧下で、約５５℃より下、約４５℃より下、約３５℃より下、約２５℃より下の温度、または任意の他の適当な温度にて行なわれ得る。例えば、乾燥時間は約１〜約１０時間の間で異なり得、またはそれより長くてもよい。
【００６４】
本出願の諸態様は、保護ポリペプチドを酸と反応させる工程を含むものである。
【００６５】
保護ポリペプチドと１種類以上の適当な酸との反応に使用され得る好適な酸としては、限定されないが、酢酸、プロピオン酸、酪酸、塩酸、臭化水素、フッ化水素、ヨウ化水素（ヨウ化水素酸）、メタンスルホン酸、トリフルオロメタンスルホン酸、亜リン酸、トリフルオロ酢酸、硫酸、リン酸および次リン酸；など；またはその混合物が挙げられる。保護ポリペプチドと１種類以上の適当な酸との反応に使用され得る酸の量は、容積基準で保護ポリペプチドの重量の約５０倍未満、約４０倍、約３０倍未満（ｌｅｓｓ）、約２０倍未満、約１０倍未満、約５倍未満であり得る。好適には、前記酸は、重量基準で約３０％以上の濃度を有するのがよい。酸の種々の濃度に対して、保護ポリペプチドと１種類以上の適当な酸との反応に使用される酸の量は、当業者には容易に計算され得よう。
【００６６】
諸実施形態において、使用される酸は、保護基を保護ポリペプチドから切断してポリペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩を形成するものであり得る。
【００６７】
保護ポリペプチドと１種類以上の適当な酸との反応に使用され得る好適な温度は、約６０℃より下、約５０℃より下、約４０℃より下、約３０℃より下、約２５℃より下、約１５℃より下、約１０℃より下、約５℃より下、約０℃より下、または任意の他の適当な温度であり得る。
【００６８】
保護ポリペプチドと１種類以上の適当な酸との反応に使用され得る好適な溶媒としては、限定されないが：エーテル（例えば、ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル、ジブチルエーテル、テトラヒドロフラン、１，２−ジメトキシエタン、２−メトキシエタノール、２−エトキシエタノール、アニソール、１，４−ジオキサンなど）；エステル（例えば、ギ酸エチル、酢酸メチル、酢酸エチル、酢酸プロピル、酢酸ブチル、プロパン酸メチル、プロパン酸エチル、ブタン酸メチル、ブタン酸エチルなど）；脂肪族または脂環式の炭化水素（例えば、ヘキサン、ヘプタン、ペンタン、シクロヘキサン、メチルシクロヘキサンなど）；ニトロメタン；ハロゲン化炭化水素（例えば、ジクロロメタン、クロロホルム、１，１，２−トリクロロエタン、１，２−ジクロロエテンなど）；芳香族炭化水素（例えば、トルエン、キシレン、クロロベンゼン、テトラリンなど）；ニトリル（例えば、アセトニトリル、プロピオニトリルなど）；極性非プロトン性溶媒（例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチルピロリドン、ピリジン、ジメチルスルホキシド、スルホラン、ホルムアミド、アセトアミド、プロパンアミドなど）；酢酸など；およびこれらの２種類以上の任意の混合物が挙げられる。
【００６９】
保護ポリペプチドの分離または保護グラチラマーは、例えば、溶媒の除去、冷却、反応集塊物（ｍａｓｓ）の濃縮、貧溶媒と合わせることなどの方法によって行なわれ得る。諸実施形態において、保護ポリペプチドの分離は、反応混合物に水を添加し、これにより保護ポリペプチドまたは保護グラチラマーの析出をもたらすことによって行なわれ得る。該分離に好適な温度は、約５０℃より下、約４０℃より下、約３０℃より下、約２０℃より下、約１０℃より下、または任意の他の適当な温度であり得る。該分離に好適な時間は、約５時間未満、約３時間未満、約２時間未満、約１時間未満、約４５分未満であり得る。完全な分離に必要とされる厳密な温度および時間は、当業者によって容易に決定され得、また、例えば、溶液またはスラリーの濃度および温度などのパラメータに依存する。また、撹拌または内容物が混合される他の択一的な方法（例えば、振盪、アジテーションなど）を分離に使用してもよい。
【００７０】
分離された保護ポリペプチドまたは保護グラチラマーは、デカンテーション、遠心分離、重力濾過、吸引濾過などの方法、または固形物の回収のための任意の他の手法によって回収され得る。
【００７１】
回収された固形物は、任意選択で乾燥させてもよい。乾燥は、トレイ型乾燥機、真空炉、空気炉、流動床乾燥機、スピンフラッシュ乾燥機、フラッシュ乾燥機などで行なわれ得る。乾燥は、大気圧または減圧下で、約５５℃より下、もしくは約４５℃より下、もしくは約３５℃より下、もしくは約２５℃より下の温度、または任意の他の適当な温度にて行なわれ得る。諸実施形態において、乾燥時間は約１〜約１０時間の間で異なり得るか、またはそれより長くてもよい。
【００７２】
本出願の諸態様は、保護ポリペプチドを酸と反応させることによって得られた保護ポリペプチドまたは保護グラチラマーを、ポリペプチドまたはグラチラマーを形成するための該保護ポリペプチドまたは保護グラチラマーと塩基との反応に使用する前に、試薬で処理する工程を含むものである。
【００７３】
試薬での保護ポリペプチドまたは保護グラチラマーの処理は、例えば、洗浄、スラリー化、クエンチングなどの方法によって行なわれ得る。
【００７４】
保護ポリペプチドと酸との反応に使用され得る酸または酸の組合せにおける分子種の含有量は、ポリペプチドまたはグラチラマー中における官能化ポリペプチドの形成に重要な役割を有し得る。
【００７５】
例えば、保護ポリペプチドと酸との反応に使用され得る酸または酸の組合せにおける分子状ハロゲンまたは遊離ハロゲン種の含有量は、ポリペプチドまたはグラチラマー中におけるハロゲン化ポリペプチドの形成に重要な役割を果たし得る。
【００７６】
調製に使用された酸または酸の組合せに由来する分子種を含有する保護ポリペプチドまたは保護グラチラマーは、保護ポリペプチドまたは保護グラチラマーを塩基と反応させてポリペプチドまたはグラチラマーを形成させている間に、ポリペプチドの１つ以上の官能基による官能基変換を伴うことがあり得、得られるポリペプチドまたはグラチラマー中に官能化ポリペプチドまたは官能化グラチラマーが夾雑物として存在することになることが知得された。
【００７７】
例えば、表面に結合された分子状ハロゲンまたは遊離ハロゲン種を含有する保護ポリペプチドまたは保護グラチラマーは、保護ポリペプチドまたは保護グラチラマーを塩基と反応させてポリペプチドまたはグラチラマーを形成させている間にポリペプチドの１つ以上の官能基と相互作用することがあり得、得られるポリペプチドまたはグラチラマー中にハロゲン化ポリペプチドまたはハロゲン化グラチラマーが夾雑物として存在することになる。
【００７８】
これは、保護ポリペプチドと酸との反応によって得られた保護ポリペプチドまたは保護グラチラマーを、該保護ポリペプチドまたは保護グラチラマーと塩基との反応に使用する前に試薬で処理することにより抑制され得、分子種を実質的に含有していない保護ポリペプチドまたは保護グラチラマーの形成がもたらされる。
【００７９】
例えば、保護ポリペプチドと酸との反応によって得られた保護ポリペプチドまたは保護グラチラマーを、該保護ポリペプチドまたは保護グラチラマーと塩基との反応に使用する前に試薬で処理することにより、分子状ハロゲンまたは遊離ハロゲン種を実質的に含有していない保護ポリペプチドまたは保護グラチラマーの形成がもたらされ得る。
【００８０】
分子不純物の含有量を低減させるためのこの処理に使用され得る好適な試薬としては、限定されないが：アルカリ金属またはアルカリ土類金属のチオ硫酸塩（例えば、チオ硫酸ナトリウムなど）；アルカリ金属重硫酸塩（例えば、重硫酸ナトリウムなど）；アルカリ金属メタ重亜硫酸塩（例えば、メタ重亜硫酸ナトリウムなど）；アスコルビン酸；活性炭繊維；有機液溶解性イオン交換樹脂（例えば、Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ（登録商標）ＬＡ−２など）の溶液；銀塩；重炭酸ナトリウム；などが挙げられる。
【００８１】
Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ  ＬＡ−２は、液状の高度に分枝状の第２級アミンであり、平均約３５０〜４００の分子量、約２．２〜２．３ｍｅｑ／ｍＬの結合能、およびＣＡＳ  Ｎｏ．１１１２８−９６−４を有する。これは、有機溶媒に可溶性であり、水性媒体に不溶性である。
【００８２】
保護ポリペプチドまたは保護グラチラマーを試薬で処理することによって得られた保護ポリペプチドまたは保護グラチラマーを、さらに溶媒で洗浄してもよい。使用され得る好適な溶媒としては、限定されないが：水、脂肪族または脂環式の炭化水素（例えば、ヘキサン、ヘプタン、ペンタン、シクロヘキサン、メチルシクロヘキサンなど）；エーテル（例えば、ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル、ジブチルエーテル、テトラヒドロフラン、１，２−ジメトキシエタン、２−メトキシエタノール、２−エトキシエタノール、アニソール、１，４−ジオキサンなど）；エステル（例えば、ギ酸エチル、酢酸メチル、酢酸エチル、酢酸プロピル、酢酸ブチル、プロパン酸メチル、プロパン酸エチル、ブタン酸メチル、ブタン酸エチルなど）；およびこれらの２種類以上の任意の混合物が挙げられる。
【００８３】
諸実施形態において、本出願において記載の方法に従って調製される保護ポリペプチドまたは保護グラチラマーは、ゲル透過クロマトグラフィー（ＧＰＣ）などの手法を用いて測定したとき、約２０００ダルトン〜約４０，０００ダルトン、または約４０００ダルトン〜約１８，０００ダルトン、または約４０００ダルトン〜約１３，０００ダルトン、または約５０００ダルトン〜約９０００ダルトンの範囲の平均ピーク分子量を有する。
【００８４】
本出願の諸態様は、保護ポリペプチドまたは保護グラチラマーを塩基と反応させる工程を含むものである。
【００８５】
ポリペプチドもしくは保護グラチラマーまたはその薬学的に許容され得る塩を形成するための保護ポリペプチドまたは保護グラチラマーと塩基との反応に使用され得る塩基としては、限定されないが：有機塩基（例えば、トリエチルアミン、トリブチルアミン、Ｎ−メチルモルホリン、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、Ｎ−メチルピロリジン、ピペリジン、水性ピペリジン、ピロリジン  ピリジン、４−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）ピリジン、モルホリン、イミダゾール、２−メチルイミダゾール、４−メチルイミダゾール、メタノール性アンモニアなど）；無機塩基、例えば：アルカリ金属水酸化物（例えば、水酸化リチウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、および水酸化セシウムなど）；アルカリ土類金属水酸化物（例えば、水酸化バリウム、水酸化マグネシウム、水酸化カルシウムなど）；アルカリ金属炭酸塩（例えば、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸リチウム、炭酸セシウムなど）、アルカリ土類金属炭酸塩（例えば、炭酸マグネシウム、炭酸カルシウム、炭酸バリウムなど）；アルカリ金属重炭酸塩（例えば、重炭酸リチウム、重炭酸ナトリウム、重炭酸カリウムなど）；ならびに任意のこれらの２種類以上の混合物が挙げられる。
【００８６】
ポリペプチドまたはグラチラマーまたはその薬学的に許容され得る塩を形成するための保護ポリペプチドまたは保護グラチラマーと塩基との反応は、溶媒中で行なわれ得る。ポリペプチドまたはグラチラマーを形成するための保護ポリペプチドと塩基との反応に使用され得る好適な溶媒としては、限定されないが：水、エーテル（例えば、ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル、ジブチルエーテル、テトラヒドロフラン、１，２−ジメトキシエタン、２−メトキシエタノール、２−エトキシエタノール、アニソール、１，４−ジオキサンなど）；エステル（例えば、ギ酸エチル、酢酸メチル、酢酸エチル、酢酸プロピル、酢酸ブチル、プロパン酸メチル、プロパン酸エチル、ブタン酸メチル、ブタン酸エチルなど）；脂肪族または脂環式の炭化水素（例えば、ヘキサン、ヘプタン、ペンタン、シクロヘキサン、メチルシクロヘキサンなど）；ニトロメタン；ハロゲン化炭化水素（例えば、ジクロロメタン、クロロホルム、１，１，２−トリクロロエタン、１，２−ジクロロエテンなど）；芳香族炭化水素（例えば、トルエン、キシレン、クロロベンゼン、テトラリンなど）；ニトリル（例えば、アセトニトリル、プロピオニトリルなど）；極性非プロトン性溶媒（例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチルピロリドン、ピリジン、ジメチルスルホキシド、スルホラン、ホルムアミド、アセトアミド、プロパンアミドなど）；酢酸など；およびこれらの２種類以上の任意の混合物が挙げられる。
【００８７】
ポリペプチドまたはグラチラマーを形成するための保護ポリペプチドと塩基との反応に使用され得る好適な温度は、約６０℃より下、約５５℃より下、約５０℃より下、約４５℃より下、約４０℃より下、約３５℃より下、約３０℃より下、約２５℃より下、約１５℃より下、約１０℃より下、約５℃より下、約０℃より下、または任意の他の適当な温度である。
【００８８】
一態様では、本出願の方法に従って調製されたポリペプチドまたはグラチラマーを精製してもよい。精製は、当該技術分野で知られた方法などの任意の手法を用いて行なわれ得る。諸実施形態において、ポリペプチドまたはグラチラマーの精製には、透析または限外濾過などの方法が使用され得る。
【００８９】
諸実施形態において、ポリペプチドまたはグラチラマーは、分子量カットオフ膜（例えば、１ＫＤａ、２ＫＤａ、３ＫＤａ、および３０ＫＤａ）を使用し、段階的（ｓｔｅｐ）または定常的様式の操作で、水または緩衝薬剤（酢酸バッファー、リン酸バッファー、または酢酸バッファーなど）に対するダイアフィルトレーションに供される。諸実施形態において、ダイアフィルトレーション溶液は、弱酸（水性酢酸など）で酸性にし、水に対して透析され得る。例えば、酢酸の濃度は、容積基準で約１％未満、または約０．５％未満であり得る。
【００９０】
限外濾過膜に通して濃縮することによって得られた最終透析溶液を凍結乾燥させると、実質的に純粋なポリペプチドまたは実質的に純粋なグラチラマーまたはその薬学的に許容され得る塩が形成され得る。
【００９１】
本明細書において上記に使用している場合、語句「実質的に純粋な」とは、特に定義していない限り、ポリペプチド、グラチラマーまたはその薬学的に許容され得る塩が、約４０ＫＤａより高い分子量を有する１種類以上のポリペプチド断片を実質的に含有していない、または約２ＫＤａより小さい分子量を有するポリペプチド断片を実質的に含有していないことをいう。
【００９２】
本明細書において上記に使用している場合、語句「実質的に含有していない」とは、特に定義していない限り、ポリペプチド、グラチラマーまたはその薬学的に許容され得る塩に含有されている約４０ＫＤａ以上の分子量を有するポリペプチドまたは約２ＫＤａ以下の分子量を有するポリペプチド断片の１種類以上の対応種が、重量基準で約５％未満、約３％未満、約２％未満、約１％未満、または約０．５％未満であることをいう。
【００９３】
諸実施形態において、本出願において記載の方法に従って調製されるポリペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩は、ゲル透過クロマトグラフィー（ＧＰＣ）などの手法を用いて測定したとき、約２，０００ダルトン〜約４０，０００ダルトン、または約４，０００ダルトン〜約１８，０００ダルトン、または約４，０００ダルトン〜約１３，０００ダルトン、または約５，０００ダルトン〜約９，０００ダルトンの範囲の平均ピーク分子量を有するものであり得る。
【００９４】
諸実施形態において、本出願において記載の方法に従って調製されるグラチラマーまたはその薬学的に許容され得る塩は、ゲル透過クロマトグラフィー（ＧＰＣ）などの手法を用いて測定したとき、約５，０００ダルトン〜約９，０００ダルトンの範囲の平均ピーク分子量を有するものであり得る。
【００９５】
諸実施形態において、本出願において記載の方法に従って調製されるポリペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩は、約２，０００ダルトン〜約２０，０００ダルトンの分子量範囲のモル分率が少なくとも７５％である。
【００９６】
諸実施形態において、本出願において記載の方法に従って調製される酢酸グラチラマーは、約２，０００ダルトン〜約２０，０００ダルトンの分子量範囲のモル分率が少なくとも７５％である。
【００９７】
ポリペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩の分子量の測定に有用なゲル透過クロマトグラフィー法には、Ｓｕｐｅｒｏｓｅ（商標）１２，１０×３００〜３１０ｍｍ，１１μｍ、または同等のカラムが使用される。さらなるパラメータは表１に示したとおりである。
【００９８】
【表１】
2013529194.tif 000003
ポリペプチド中のアミノ酸のモル分率は、当該技術分野で知られた方法を用いて測定され得る。例えば、試料溶液を、２ｍｇのポリペプチドを用いて調製し、６Ｎ  ＨＣｌを用いてＮ２雰囲気下、約１１０〜１３０℃で加水分解する。グルタミン酸、アラニン、チロシンおよびリジンの各々の塩酸塩を含むアミノ酸標準溶液を調製する。標準溶液と試料溶液をフルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）試薬で誘導体化する。標準溶液と試料溶液は、Ｃ１８カラムまたは同等のカラムを用いて、ＵＶ検出器を備えた機器で解析され得る。さらなるパラメータは表２に示したとおりである。
【００９９】
【表２】
2013529194.tif 000004
ポリペプチド試料中のアミノ酸のモル分率をピーク面積に基づいて求める。
【０１００】
本出願の方法に従って得られる保護ポリペプチドは、塩化ベンジルを実質的に含有していないものであり得る。
【０１０１】
本出願の方法に従って得られる保護グラチラマーは、塩化ベンジルを実質的に含有していないものであり得る。
【０１０２】
本出願の方法に従って得られるトリフルオロアセチルグラチラマーは、塩化ベンジルを実質的に含有していないものであり得る。
【０１０３】
本出願の方法に従って得られるポリペプチドは、塩化ベンジルを実質的に含有していないものであり得る。
【０１０４】
本出願の方法に従って得られる酢酸グラチラマーは、塩化ベンジルを実質的に含有していないものであり得る。
【０１０５】
語句「実質的に含有していない」は、この状況では、該化合物に含有されている塩化ベンジルが、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を用いて測定したとき、重量基準で約３％未満、約２％未満、約１％未満、約０．５％未満、約０．３％未満、約０．１％未満、約０．０５％未満、または約０．０１％未満であることを意味する。
【０１０６】
塩化ベンジル含有量の解析のためのＨＰＬＣ法には、Ｃ１８カラムまたは同等のカラムが使用される。さらなるパラメータは表３に示したとおりである。
【０１０７】
【表３】
2013529194.tif 000005
本出願の方法に従って調製されるポリペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩は、ＨＰＬＣによって測定したとき、１種類以上のその対応する官能化ポリペプチド（例えば、１つ以上の官能基が単官能化、二官能化または多官能化されたポリペプチド）を実質的に含有していないものであり得る。
【０１０８】
例えば、本出願の方法に従って調製されるポリペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩は、１種類以上のその対応するハロゲン化ポリペプチド（例えば、チロシン部分がモノ−、ジ−、またはポリ−ハロゲン化されたポリペプチド）を実質的に含有していないものであり得る。ハロゲンの例は塩素、臭素およびヨウ素である。
【０１０９】
本出願の方法に従って得られる酢酸グラチラマーは、１種類以上のその対応するハロゲン化ポリペプチド（例えば、チロシン部分がモノ−、ジ−、またはポリ−ハロゲン化されたポリペプチド）を実質的に含有していないものであり得る。ハロゲンの例は塩素、臭素およびヨウ素である。
【０１１０】
官能化ポリペプチドを「実質的に含有していない」という語句は、本明細書で用いる場合、ＨＰＬＣなどの手法を用いて測定したとき、重量基準で約２％未満、約１％未満、約０．５％未満、約０．３％未満、約０．１％未満、約０．０５％未満、約０．０１％未満、約０．００５％未満、または約０．００１％未満を意味する。官能化ポリペプチドは、本明細書で用いる場合、特に定義していない限り、１つ以上の官能基が単官能化、二官能化または多官能化されたポリペプチドをいう。
【０１１１】
ハロゲン化ポリペプチドを「実質的に含有していない」という語句は、本明細書で用いる場合、ＨＰＬＣを用いて測定したとき、重量基準で約２％未満、約１％未満、約０．５％未満、約０．３％未満、約０．１％未満、約０．０５％未満、約０．０１％未満、約０．００５％未満、または約０．００１％未満を意味する。ハロゲン化ポリペプチドは、本明細書で用いる場合、特に定義していない限り、チロシン部分がモノ−、ジ−、またはポリ−ハロゲン化されたポリペプチドをいう。ハロゲンの例は塩素、臭素およびヨウ素である。
【０１１２】
特に表示していない限り、本明細書で用いる割合および比率はすべて、組成物の総重量に対するものであり、行なった測定はすべて、２５℃および大気圧におけるものである。特に指定のない限り、温度はすべてセ氏温度である。本明細書で用いる場合、“ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ（〜を含む）”は、記載の要素またはその構造もしくは機能の等価体＋記載されていない任意の他の要素（１つまたは複数）を意味する。また、用語“ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ（〜を含む）”、“ｈａｖｉｎｇ（〜を有する）”、および“ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ（〜を含む）”は、文脈からそうでないことが示唆されない限り、オープンエンドと解釈されたい。本明細書で用いる場合、「本質的に〜からなる」は、本出願において、請求項に記載のものに加えて諸成分を含めてもよいが、該さらなる成分は、請求項に記載の本出願の基本的かつ新規な特徴を実質的に改変しないものである場合に限ることを意味する。本明細書に記載の範囲はすべて、両端点（例えば、「〜と〜の間」の範囲を記載している２つの値）を含む。用語「約」、「一般的に」、「実質的に」などは、絶対的でないというような用語または値の修飾と解釈されたい。かかる用語は、状況および該用語が修飾する用語（この当業者によって理解されよう）によって規定される。このようなものとしては、最低限でも、予測される実験誤差、手法の誤差、および値を測定するために使用される所与の手法での機器の誤差の度合が挙げられる。
【０１１３】
ポリペプチド中のモノ−、ジ−、およびポリ−ハロゲン化チロシンの含有量は、当該技術分野で知られた方法を用いて測定され得る。例えば、試料溶液を酸および／または塩基を用いて加水分解する。モノ−、ジ−、またはポリ−ハロゲン化チロシン標準溶液は、表４の希釈剤１を使用することにより調製される。標準溶液と試料溶液は、ＬｉＣｈｒｏＣＡＲＴ（登録商標）ＲＰ１８ｅカラム、または同等のカラムを用いて、ＵＶ検出器を備えた機器で解析される。さらなるパラメータは表４に示したとおりである。
【０１１４】
【表４】
2013529194.tif 000006
ポリペプチド試料中のモノ−、ジ−、およびポリ−ハロゲン化チロシンの含有量は、ピーク面積に基づいて測定される。
【０１１５】
本出願のポリペプチド（グラチラマーなど）を含む医薬組成物は、当該技術分野で知られた方法を用いて製剤化され得る。諸実施形態において、液状組成物は凍結乾燥させ、後で溶解させて、注射に適した水性液剤を形成させることができる。あるいはまた、酢酸グラチラマーは、ペプチド薬物の経口、経鼻、口腔内および経直腸製剤の調製のための当該技術分野で知られた任意の形態に製剤化され得る。
【０１１６】
典型的には、酢酸グラチラマーは、多発性硬化症に苦しんでいる患者に２０ｍｇの投薬量で毎日投与される。
【０１１７】
定義
以下の定義は、文脈にそうでないことを示していない限り、本出願との関連において用いる。
【０１１８】
用語「ポリペプチド」は、本明細書で用いる場合、少なくとも２個のアミノ酸から形成される化合物をいう。
【０１１９】
用語「アミノ酸」は、本明細書で用いる場合、少なくとも１つのアミノ基と少なくとも１つの酸性基を含む有機化合物をいう。アミノ酸は、天然に存在するアミノ酸であっても合成起源のものであってもよく、アミノ酸誘導体またはアミノ酸類似体であってもよい。
【０１２０】
用語「保護アミノ酸」は、本明細書で用いる場合、アミノ酸の官能基が、該官能基を望ましくない反応に参加しないようにすることができ、かつ後で容易に除去することができる任意の適当な保護基で誘導体化されたアミノ酸をいう。
【０１２１】
用語「保護基」は、本明細書で用いる場合、アミノ酸またはペプチドまたはポリペプチドの官能基に結合されているが、特定の組の条件下では該ペプチドまたはポリペプチドから切断され得る基をいう。当該技術分野で知られた好適な保護基は、Ｊ．Ｆ．Ｗ．ＭｃＯｍｉｅ，“Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ”，Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ，Ｌｏｎｄｏｎ  ａｎｄ  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  １９７３、Ｔｈ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ，“Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”，Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  １９８１、“Ｔｈｅ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ”，第３巻（Ｅ．ＧｒｏｓｓおよびＪ．Ｍｅｉｅｎｈｏｆｅｒ編），Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｌｏｎｄｏｎ  ａｎｄ  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  １９８１、“Ｍｅｔｈｏｄｅｎ  ｄｅｒ  ｏｒｇａｎｉｓｃｈｅｎ  Ｃｈｅｍｉｅ”，Ｈｏｕｂｅｎ−Ｗｅｙｌ，第４版，第１５／Ｉ巻，Ｇｅｏｒｇ  Ｔｈｉｅｍｅ  Ｖｅｒｌａｇ，Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ  １９７４、Ｈ．−Ｄ．ＪａｋｕｂｋｅおよびＨ．Ｊｅｓｃｈｅｉｔ，“Ａｍｉｎｏｓａｕｒｅｎ，Ｐｅｐｔｉｄｅ，Ｐｒｏｔｅｉｎｅ’（“Ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄｓ，ｐｅｐｔｉｄｅｓ，ｐｒｏｔｅｉｎｓ”），Ｅ．Ｇｒｏｓｓ  ＆  Ｊ．Ｍｅｉｅｎｈｏｆｅｒ，Ｔｈｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ：Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｂｉｏｌｏｇｙ，第３巻：Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．，１９８１）；Ｋｒｉｃｈｅｌｄｏｒｆ，Ｈ．Ｒ．α−Ａｍｉｎｏ  Ａｃｉｄ  Ｎ−Ｃａｒｂｏｘｙ−Ａｎｈｙｄｒｉｄｅ  ａｎｄ  Ｒｅｌａｔｅｄ  Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｅｓ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ：Ｂｅｒｌｉｎ，１９８７；Ｂｌａｃｋｌｏｃｋ，Ｔ．Ｊ．；Ｈｉｒｓｃｈｍａｎｎ，Ｒ．；Ｖｅｂｅｒ，Ｄ．Ｆ．Ｔｈｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ；Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ：Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８７；第９巻，第３９頁に記載されたものなどである。
【０１２２】
一部の特定の具体的な態様および実施形態を以下の実施例によってさらに説明する。実施例は、例示の目的のために示したものにすぎず、なんら本出願の範囲を限定するものと解釈されるべきでない。
【実施例】
【０１２３】
実施例１
酢酸グラチラマーの調製
Ｌ−アラニンのＮ−カルボキシ無水物（ｃａｒｂｏｘｙａｎｙｈｙｄｒｉｄｅ）（１．３７ｇ）、Ｌ−チロシンのＮ−カルボキシ無水物（０．４９ｇ）、Ｎ−トリフルオロアセチルＬ−リジンのＮ−カルボキシ無水物（２．２８ｇ）、およびγ−ベンジルＬ−グルタメートのＮ−カルボキシ無水物（１．０１）を、丸底フラスコ内に窒素雰囲気下で投入する。１，４−ジオキサン（９６ｍＬ）を２５〜３０℃で添加し、混合物を１５分間撹拌する。ジエチルアミン（３６μＬ）を２５〜３０℃で添加し、混合物を同じ温度で２４時間撹拌する。混合物を水（２６０ｍＬ）にゆっくり注入し、集塊物を２５〜３０℃で３０分間撹拌する。固形物を濾過によって収集し、水（２０ｍＬ）で洗浄し、２８〜３２℃で減圧乾燥させると３．８６ｇの保護グラチラマーが得られる。
【０１２４】
この保護グラチラマー（３．８６ｇ）を丸底フラスコ内に投入し、３３％のＨＢｒを含む酢酸（３８．６ｍＬ）を添加し、混合物を２５〜３０℃で１７時間撹拌する。混合物を２５〜３０℃で水（７７．２ｍＬ）にゆっくり添加し、集塊物を１０分間撹拌する。固形物を濾過によって収集し、水（２００ｍＬ）とヘキサン（５０ｍＬ）の混合物で洗浄し、２５〜３０℃で減圧乾燥させると、２．９６８ｇのトリフルオロアセチルグラチラマーが得られる。
【０１２５】
トリフルオロアセチルグラチラマー（２．９６ｇ）、ピペリジン（１５．９ｇ）、および水（１４３．６ｍＬ）を丸底フラスコ内に投入する。混合物を２５〜３０℃で２４時間撹拌し、次いで、酢酸アンモニウムバッファー（ｐＨ５．５±０．３）に対して段階的様式の操作で、透過液のｐＨが６〜６．５に達するまでダイアフィルトレーションに供する（１ＫＤａ分子量カットオフ膜を使用）。保持液溶液を０．３％酢酸とともにｐＨが４．３〜４．５に達するまで循環させ、保持液のｐＨが５〜５．５に達するまで水に対してダイアフィルトレーションし、過剰の酢酸を除去する。得られた溶液を凍結乾燥させると、９００ｍｇの酢酸グラチラマーが得られる。
【０１２６】
ＧＰＣによる酢酸グラチラマーの平均ピーク分子量：８４０３ダルトン；アラニン、グルタミン酸、チロシンおよびリジンの平均モル分率：それぞれ、０．４４１、０．１５５、０．０８０、および０．３２３。
【０１２７】
実施例２
酢酸グラチラマーの調製．
Ｌ−アラニンのＮ−カルボキシ無水物（５．４８ｇ）、Ｌ−チロシンのＮ−カルボキシ無水物（１．９６ｇ）、Ｎ−トリフルオロアセチルＬ−リジンのＮ−カルボキシ無水物（９．１２ｇ）、およびγ−ベンジルＬ−グルタメートのＮ−カルボキシ無水物（４．０４ｇ）を、丸底フラスコ内に窒素雰囲気下で投入する。１，４−ジオキサン（３８４ｍＬ）を２５〜３０℃で添加し、混合物を１５分間撹拌する。ジエチルアミン（１４４μＬ）を２５〜３０℃で添加し、混合物を同じ温度で２４時間、窒素雰囲気下にて撹拌する。混合物を水（１０００ｍＬ）にゆっくり注入し、集塊物を２５〜３０℃で３０分間撹拌する。固形物を濾過によって収集し、水（８０ｍＬ）で洗浄し、２８〜３２℃で減圧乾燥させると、１５．１０ｇの保護グラチラマーが得られる。
【０１２８】
この保護グラチラマー（１．０ｇ）を丸底フラスコ内に投入する。濃ＨＣｌ（１２ｍＬ）と氷酢酸（３８ｍＬ）の混合物を添加し、混合物を１５〜２０℃で１８時間撹拌する。混合物を２５〜３０℃で水（２５０ｍＬ）にゆっくり添加し、集塊物を１０分間撹拌する。固形物を濾過によって収集し、水（１００ｍＬ）とヘキサン（５０ｍＬ）の混合物で洗浄し、２５〜３０℃で減圧乾燥させると０．５５０ｇのトリフルオロアセチルグラチラマーが得られる。
【０１２９】
トリフルオロアセチルグラチラマー（０．４０ｇ）、ピペリジン（２．２ｇ）、および水（１９．８ｍＬ）を丸底フラスコ内に投入する。混合物を２５〜３０℃で２４時間撹拌し、次いで、酢酸アンモニウムバッファー（ｐＨ５．５±０．３）に対して段階的様式の操作で、透過液のｐＨが６〜６．５に達するまでダイアフィルトレーションに供する（１ＫＤａ分子量カットオフ膜を使用）。保持液溶液を０．３％酢酸とともにｐＨが４．３〜４．５に達するまで循環させ、保持液のｐＨが５〜５．５に達するまで水に対してダイアフィルトレーションし、過剰の酢酸を除去する。ダイアフィルトレーションした試料を、次いで３ＫＤａ分子量カットオフ膜に通して濃縮させ、濃縮された溶液を凍結乾燥させると、１３７ｍｇの酢酸グラチラマーが得られる。
【０１３０】
ＧＰＣによる酢酸グラチラマーの平均ピーク分子量：７６６２ダルトン。
【０１３１】
実施例３
酢酸グラチラマーの調製
実施例２の保護グラチラマー（１．０ｇ）とテトラヒドロフラン（２００ｍＬ）を丸底フラスコ内に投入し、２５〜３０℃で５分間撹拌する。混合物を０〜５℃まで冷却し、濃Ｈ２ＳＯ４（１０ｍＬ）を同じ温度で添加する。混合物を０〜５℃で２時間撹拌し、次いで、２５〜３０℃で２０時間撹拌する。溶媒を混合物から３０℃で留去する。得られた集塊物に２５〜３０℃で水（１００ｍＬ）を添加し、１０分間撹拌する。固形物を濾過によって収集し、水（１００ｍＬ）で洗浄し、２５〜３０℃で減圧乾燥させると、０．５１０ｇのトリフルオロアセチルグラチラマーが得られる。
【０１３２】
トリフルオロアセチルグラチラマー（０．４０ｇ）、ピペリジン（２．２ｇ）、および水（１８ｍＬ）を丸底フラスコ内に投入する。混合物を２５〜３０℃で２４時間撹拌する。混合物を、酢酸アンモニウムバッファー（ｐＨ５．５±０．３）に対して段階的様式の操作で、透過液のｐＨが６〜６．５に達するまでダイアフィルトレーションに供する（１ＫＤａ分子量カットオフ膜を使用）。保持液溶液を０．３％酢酸とともにｐＨが４．３〜４．５に達するまで循環させ、保持液のｐＨが５〜５．５に達するまで水に対してダイアフィルトレーションし、過剰の酢酸を除去する。得られた溶液を凍結乾燥させると、１００ｍｇの酢酸グラチラマーが得られる。
【０１３３】
ＧＰＣによる酢酸グラチラマーの平均ピーク分子量：５３７１ダルトン。
【０１３４】
実施例４
酢酸グラチラマーの調製．
Ｌ−アラニンのＮ−カルボキシ無水物（５．４８ｇ）、Ｌ−チロシンのＮ−カルボキシ無水物（１．９６ｇ）、Ｎ−トリフルオロアセチル−Ｌ−リジンのＮ−カルボキシ無水物（９．１２ｇ）、およびγ−ベンジル−Ｌ−グルタメートのＮ−カルボキシ無水物（４．０４ｇ）を、丸底フラスコ内に窒素雰囲気下で投入する。１，４−ジオキサン（３８４ｍＬ）を３０℃で添加し、混合物を１５分間撹拌する。ジエチルアミン（１４４μＬ）を２５〜３０℃で添加し、混合物を同じ温度で２４時間、窒素雰囲気下にて撹拌する。混合物を水（１０００ｍＬ）にゆっくり注入し、集塊物を２５〜３０℃で１０分間撹拌する。固形物を濾過によって収集し、水（２０ｍＬ）で洗浄し、２５〜３５℃で減圧乾燥させると、１５．０ｇの保護グラチラマーが得られる。
【０１３５】
この保護グラチラマー（０．５ｇ）を丸底フラスコ内に投入する。５７％のＨＩとＨ３ＰＯ２の混合物（５ｍＬ）を添加し、混合物を３０℃で１７時間撹拌する。混合物を３０℃で水（２０ｍＬ）にゆっくり添加し、集塊物を１５分間撹拌する。固形物を濾過によって収集し、水（５０ｍＬ）とヘキサン（２０ｍＬ）の混合物で洗浄し、２５〜３０℃で減圧乾燥させると、０．１６５ｇのトリフルオロアセチルグラチラマーが得られる。
【０１３６】
ＨＰＬＣによる塩化ベンジルの含有量：０．３％。
【０１３７】
トリフルオロアセチルグラチラマー（１１０ｍｇ）、ピペリジン（０．６ｍＬ）および水（５．５ｍＬ）を丸底フラスコ内に投入する。混合物を３０℃で２４時間撹拌し、次いで、酢酸アンモニウムバッファー（ｐＨ５．５±０．３）に対して段階的様式の操作で、透過液のｐＨが６〜６．５に達するまでダイアフィルトレーションに供する（１ＫＤａ分子量カットオフ膜を使用）。保持液溶液を０．３％酢酸とともにｐＨが４．３〜４．５に達するまで循環させ、保持液のｐＨが５〜５．５に達するまで水に対してダイアフィルトレーションし、過剰の酢酸を除去する。ダイアフィルトレーションした試料を、次いで３ＫＤａ分子量カットオフ膜に通して濃縮させ、濃縮された溶液を凍結乾燥させると、６８ｍｇの酢酸グラチラマーが得られる。
【０１３８】
ＧＰＣによる酢酸グラチラマーの平均ピーク分子量：４５４５ダルトン；ＨＰＬＣによる塩化ベンジルの含有量：０．０６％。
【０１３９】
実施例５
酢酸グラチラマーの調製
実施例４の保護グラチラマー（Ａ）（１．０ｇ）を丸底フラスコ内に投入する。５７％のＨＩおよびＨ３ＰＯ２（５ｍＬ）と酢酸（１５ｍＬ）の混合物を添加し、混合物を３０℃で１６時間撹拌する。混合物を３０℃で水（６０ｍＬ）にゆっくり添加し、集塊物を１５分間撹拌する。固形物を濾過によって収集し、水（１００ｍＬ）とヘキサン（４０ｍＬ）の混合物で洗浄し、２５〜３０℃で減圧乾燥させると、７４０ｍｇのトリフルオロアセチルグラチラマーが得られる。
【０１４０】
ＨＰＬＣによる塩化ベンジルの含有量：０．２５％。
【０１４１】
トリフルオロアセチルグラチラマー（５００ｍｇ）、ピペリジン（２．７５ｍＬ）および水（２５ｍＬ）を丸底フラスコ内に投入する。混合物を３０℃で２４時間撹拌し、次いで、酢酸アンモニウムバッファー（ｐＨ５．５±０．３）に対して段階的様式の操作で、透過液のｐＨが６〜６．５に達するまでダイアフィルトレーションに供する（１ＫＤａ分子量カットオフ膜を使用）。保持液溶液を０．３％酢酸とともにｐＨが４．３〜４．５に達するまで循環させ、保持液のｐＨが５〜５．５に達するまで水に対してダイアフィルトレーションし、過剰の酢酸を除去する。ダイアフィルトレーションした試料を、次いで３ＫＤａ分子量カットオフ膜に通して濃縮させ、濃縮された溶液を凍結乾燥させると、３００ｍｇの酢酸グラチラマーが得られる。
【０１４２】
ＧＰＣによる酢酸グラチラマーの平均ピーク分子量：６９３８ダルトン；ＨＰＬＣによる塩化ベンジルの含有量：０．０５％。
【０１４３】
実施例６
保護グラチラマーの調製
Ｌ−アラニンのＮ−カルボキシ無水物（１３．５６ｇ）、Ｌ−チロシンのＮ−カルボキシ無水物（４．９９ｇ）、Ｎ−トリフルオロアセチル−Ｌ−リジンのＮ−カルボキシ無水物（２２．８ｇ）、およびγ−ベンジル−Ｌ−グルタメートのＮ−カルボキシ無水物（９．８９ｇ）を、丸底フラスコ内に窒素雰囲気下で投入する。１，４−ジオキサン（９９６ｍＬ）を２５〜３０℃で添加し、混合物を１５分間撹拌する。ジエチルアミン（３６０μＬ）を２５〜３０℃で添加し、混合物を同じ温度で２４時間撹拌する。混合物をゆっくり水（２．６Ｌ）に注入し、集塊物を２５〜３０℃で３０分間撹拌する。固形物を濾過によって収集し、水（１．５Ｌ）で洗浄し、２５〜３５℃で減圧乾燥させると、３４．５ｇの保護グラチラマーが得られる。
【０１４４】
実施例７
酢酸グラチラマーの調製．
実施例６の保護グラチラマー（５．０ｇ）を丸底フラスコ内に、光から保護した状態で３３℃にて投入する。５７％のＨＩおよびＨ３ＰＯ２（２５ｍＬ）と酢酸（７５ｍＬ）の予備混合溶液を添加し、混合物を、光から保護した状態で３０〜３５℃にて１７時間撹拌する。混合物を３０〜３５℃で水（５００ｍＬ）にゆっくり添加し、集塊物を１５分間撹拌する。固形物を濾過し、水（５０ｍＬ）で洗浄すると褐色化合物が得られる。この湿潤化合物を１０％チオ硫酸ナトリウム溶液（Ｎａ２Ｓ２Ｏ３・５Ｈ２Ｏ）（５×１００ｍＬ）で洗浄すると白色化合物が得られ、水（２Ｌ）で洗浄し、最後にヘキサン（２５０ｍＬ）で洗浄し、２５〜３０℃で減圧乾燥させると、３．５ｇのトリフルオロアセチルグラチラマーが得られる。
【０１４５】
ＨＰＬＣによるモノヨードチロシン含有量：検出されず；ＨＰＬＣによるジヨードチロシン含有量：検出されず。
【０１４６】
トリフルオロアセチルグラチラマー（３．０ｇ）、ピペリジン（１６．５ｍＬ）、および水（１５０ｍＬ）を丸底フラスコ内に投入する。混合物を２５〜３５℃で２４時間撹拌し、次いで、酢酸アンモニウムバッファー（ｐＨ５．５±０．３）に対して段階的様式の操作で、透過液のｐＨが５．５〜６．５に達するまでダイアフィルトレーションに供する（１ＫＤａ分子量カットオフ膜を使用）。保持液溶液を０．３％酢酸とともに、ｐＨが４．５〜４．６に達するまで循環させ、保持液のｐＨが４．８〜４．９に達するまで水に対してダイアフィルトレーションし、過剰の酢酸を除去する。ダイアフィルトレーションした試料を、次いで３ＫＤａ分子量カットオフ膜に通して濃縮させ、濃縮された溶液を凍結乾燥させると、１７５０ｍｇの酢酸グラチラマーが得られる。
【０１４７】
ＧＰＣによる酢酸グラチラマーの平均ピーク分子量：７９８８ダルトン；ＨＰＬＣによるモノヨードチロシン含有量：検出されず；ＨＰＬＣによるジヨードチロシン含有量：検出されず。
【０１４８】
実施例８
酢酸グラチラマーの調製．
実施例６の保護グラチラマー（１０．０ｇ）を丸底フラスコ内に、光から保護した状態で３３℃にて投入する。５７％のＨＩおよびＨ３ＰＯ２（５０ｍＬ）と酢酸（１５０ｍＬ）の予備混合溶液を添加し、混合物を、光から保護した状態で３０〜３５℃にて１７時間撹拌する。この反応混合物を３等分に分け、各々を別々にさらに処理する。
【０１４９】
第１の一部の反応混合物（１８０ｍＬ）は水（９００ｍＬ）中に投入し、５分間撹拌する。固形物を濾過し、水（１００ｍＬ）で洗浄すると、褐色固形物が得られる。この湿潤固形物を１０％チオ硫酸ナトリウム溶液（Ｎａ２Ｓ２Ｏ３・５Ｈ２０）（５×２００ｍＬ）で洗浄すると白色固形物が得られ、次いで、水（４Ｌ）で洗浄し、ヘキサン（５００ｍＬ）で洗浄し、２５〜３０℃で減圧乾燥させると、６．９ｇのトリフルオロアセチルグラチラマーが得られる。
【０１５０】
ＨＰＬＣによるモノヨードチロシン含有量：検出されず；ＨＰＬＣによるジヨードチロシン含有量：検出されず。
【０１５１】
第２の一部の反応混合物（１０ｍＬ）は、５％のアスコルビン酸を含む水（５０ｍＬ）中でクエンチし、５分間撹拌する。得られた固形物を濾過し、水（３０ｍＬ）で洗浄し、ヘキサン（２０ｍＬ）で洗浄し、２５〜３０℃で減圧乾燥させると、０．１５ｇのトリフルオロアセチルグラチラマーが得られる。
【０１５２】
ＨＰＬＣによるモノヨードチロシン含有量：０．０１６％；ＨＰＬＣによるジヨードチロシン含有量：検出されず。
【０１５３】
第３の一部の反応混合物（１０ｍＬ）は、水（５０ｍＬ）中でクエンチし、５分間撹拌する。得られた固形物を濾過し、５％のアスコルビン酸を含む水（５０ｍＬ）で２回洗浄する。得られた固形物を水（２０ｍＬ）、ヘキサン（２０ｍＬ）で洗浄し、２５〜３０℃で減圧乾燥させると、０．１５ｇのトリフルオロアセチルグラチラマーが得られる。
【０１５４】
第１の一部のトリフルオロアセチルグラチラマー（５．０ｇ）、ピペリジン（２７．５ｍＬ）および水（２５０ｍＬ）を丸底フラスコ内に投入する。混合物を２５〜３５℃で２４時間撹拌し、次いで、酢酸アンモニウムバッファー（ｐＨ５．５±０．３）に対して段階的様式の操作で、透過液のｐＨが５．５〜６．５に達するまでダイアフィルトレーションに供する（１ＫＤａ分子量カットオフ膜を使用）。保持液溶液を０．３％酢酸とともに、ｐＨが４．５〜４．６に達するまで循環させ、保持液のｐＨが４．８〜４．９に達するまで水に対してダイアフィルトレーションし、過剰の酢酸を除去する。ダイアフィルトレーションした試料を、次いで３ＫＤａ分子量カットオフ膜に通して濃縮させ、濃縮された溶液を凍結乾燥させると、３４００ｍｇの酢酸グラチラマーが得られる。
【０１５５】
ＧＰＣによる酢酸グラチラマーの平均ピーク分子量：８７３７ダルトン；ＨＰＬＣによるモノヨードチロシン含有量：検出されず；ＨＰＬＣによるジヨードチロシン含有量：検出されず。
【０１５６】
実施例９
トリフルオロアセチルグラチラマーの調製．
実施例６の保護グラチラマー（２．０ｇ）を丸底フラスコ内に投入し、３３％のＨＢｒを含む酢酸（２０ｍＬ）を添加し、混合物を２５〜３０℃で１７時間撹拌する。混合物を２５〜３０℃で水（４０ｍＬ）にゆっくり添加し、集塊物を１０分間撹拌する。固形物を濾過し、水（１００ｍＬ）で洗浄すると、褐色固形物が得られる。この湿潤固形物を１０％チオ硫酸ナトリウム溶液（Ｎａ２Ｓ２Ｏ３・５Ｈ２Ｏ）（２００ｍＬ）で洗浄すると白色固形物が得られ、水（２００ｍＬ）で洗浄し、ヘキサン（１００ｍＬ）で洗浄し、２５〜３０℃で減圧乾燥させると、１．３５ｇのトリフルオロアセチルグラチラマーが得られる。
【０１５７】
ＨＰＬＣによるモノヨードチロシン含有量：０．３６％；ＨＰＬＣによるジヨードチロシン含有量：検出されず。
【０１５８】
実施例１０
酢酸グラチラマーの調製．
実施例６の保護グラチラマー（１．０ｇ）を丸底フラスコ内に、光から保護した状態で３０〜３５℃にて投入する。５７％のＨＩおよびＨ３ＰＯ２（５．０ｍＬ）と酢酸（１５ｍＬ）の予備混合溶液を添加する。混合物を４０℃まで加熱し、光から保護した状態で４時間撹拌する。反応液を５％チオ硫酸ナトリウム溶液（１００ｍＬ）でクエンチし、１０〜１５分間撹拌する。固形物を濾過し、チオ硫酸ナトリウムの溶液（５０ｍＬ）で洗浄し、水（６００ｍＬ）で洗浄し、ヘキサン（５０ｍＬ）で洗浄し、２５〜３０℃で減圧乾燥させると、０．６ｇのトリフルオロアセチルグラチラマーが得られる。
【０１５９】
ＨＰＬＣによるモノヨードチロシン含有量：検出されず；ＨＰＬＣによるジヨードチロシン含有量：検出されず。
【０１６０】
トリフルオロアセチルグラチラマー（５００ｍｇ）、ピペリジン（２．８ｍＬ）、および水（２５ｍＬ）を丸底フラスコ内に投入する。混合物を２５〜３５℃で２４時間撹拌し、次いで、酢酸アンモニウムバッファー（ｐＨ５．５±０．３）に対して段階的様式の操作で、透過液のｐＨが５．５〜６．５に達するまでダイアフィルトレーションに供する（１ＫＤａ分子量カットオフ膜を使用）。保持液溶液を０．３％酢酸とともに、ｐＨが４．５〜４．６に達するまで循環させ、保持液のｐＨが４．８〜４．９に達するまで水に対してダイアフィルトレーションし、過剰の酢酸を除去する。ダイアフィルトレーションした試料を、次いで３ＫＤａ分子量カットオフ膜に通して濃縮させ、濃縮された溶液を凍結乾燥させると、１７５０ｍｇの酢酸グラチラマーが得られる。
【０１６１】
ＨＰＬＣによるモノヨードチロシン含有量：検出されず；ＨＰＬＣによるジヨードチロシン含有量：検出されず。
【国際調査報告】
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