(57)【要約】ブタノール、アセトンおよび／または他の再生可能な化学物質の製造方法が提供され、ここで、前記方法は、ポットエールおよび／またはスペントリース等のモルトウィスキー製造の副産物、紙、紙製造からのスラッジおよび酒造家および醸造者由来のビール粕等のバイオマス基質、ならびに、水および他の発酵由来の廃液等の希釈剤からなる群の１種以上を利用する。前記方法は、それを加水分解するために基質を処理する工程と、前記処理された基質を発酵させる工程を含む。また、本発明の方法により製造されたブタノールを含むバイオ燃料が提供される。【選択図】図３
2013529473.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも：
炭水化物源およびポットエールを含む基質を処理する工程であって、当該処理は、前記炭水化物源の少なくとも一部を可溶化して、処理された基質を与える工程；および
ブタノール−および／またはアセトン−形成微生物の培養菌の存在下、２０μＭ未満の遊離銅イオンの濃度で、前記処理された基質を発酵させる工程であって、当該発酵は、ブタノールおよび／またはアセトンを含む発酵生成物を与える工程を含む、ブタノールおよび／またはアセトンの製造方法。
【請求項２】
前記基質を処理する工程が、
水および水素イオンまたは水および水酸化物イオンの存在下、前記炭水化物源を加水分解する工程を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記基質を処理する工程が、
硫酸の水溶液の存在下、前記炭水化物源を加水分解する工程を含む、請求項１または請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記基質を処理する工程が、
前記炭水化物源を１種以上の酵素と共に処理する工程を含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
前記基質を処理する工程が、さらに、
前記基質を希釈する工程であって、当該希釈は、２０μＭ未満の遊離銅イオンの濃度を与える工程を含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
前記処理された基質を発酵させる工程が、５．１以上のｐＨで行われる、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
前記発酵工程における前記遊離銅イオンの濃度が、１５μＭ未満である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
前記ブタノール−および／またはアセトン−形成微生物の培養菌が、クロストリジウム属のバクテリアを含む、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
前記発酵工程が、それから固形物を除去することなく行われる、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
前記処理工程および発酵工程が、同時に行われる、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
前記処理工程および発酵工程が、連続して行われる、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
前記ポットエールが、
酵母を、水と、グルコースおよびグルコースのオリゴ糖からなる群より選択される１種以上の炭水化物とを含む麦汁に添加する工程；
前記麦汁を発酵させる工程であって、当該発酵は、水と１種以上のアルコールとを含むウォッシュを与える工程；および
前記ウォッシュを銅製の蒸留容器内で蒸留する工程であって、当該蒸留は、１種以上のアルコールを含むローワイン蒸留物と、ポットエールの蒸留残渣とを与える工程により与えられる、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
前記麦汁が、さらに、
でんぷんを含む大麦麦芽を製粉する工程であって、当該製粉は、すりつぶされた大麦麦芽を与える工程；
前記すりつぶされた大麦麦芽を水と混合する工程であって、当該混合は、水とすりつぶされた大麦麦芽とを含む麦芽汁を与える工程；
前記麦芽汁の前記すりつぶされた大麦麦芽中の前記でんぷんの少なくとも一部を加水分解する工程であって、当該加水分解は、ドラフと麦汁とを与え、前記ドラフは廃麦芽粕固形物を含み、前記麦汁は、水と、グルコースおよびグルコースのオリゴ糖からなる群より選択される１種以上の炭水化物とを含む工程；および
前記ドラフを前記麦汁から分離する工程により与えられる、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記ポットエールが、モルトウィスキー、好適にはスコッチモルトウィスキーの製造の副産物である、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
前記炭水化物源が、紙、紙製造からのスラッジ、果物くずおよび野菜くず、製パン工業からの廃棄物、海藻、海藻抽出物、林業誘導体、食用作物、穀物および作物残渣、ビール粕、チョコレート、藻類、非食用作物およびそれらの残渣ならびにエネルギー作物からなる群の１種以上から選択される、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
前記発酵生成物が、さらに、エタノール、二酸化炭素、水素、アセテートおよびブチレートからなる群より選択される化合物の１種以上を含む、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
請求項１〜１６のいずれか１項に記載の方法に従って製造されたブタノールを含むバイオ燃料。
【請求項１８】
請求項１〜１６のいずれか１項に記載の方法に従って製造されたブタノールおよび／またはアセトンを含む生成物。
【請求項１９】
発酵によるブタノールおよび／またはアセトンの製造における、モルトウィスキー製造由来のポットエールの使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、バイオ燃料および再生可能な化学物質の製造方法に関する。より詳しくは、本発明は、ブタノールの製造方法に関する。本発明は、さらに、アセトンの製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、原油価格の高騰、燃料供給の枯渇および環境への懸念により、バイオマス由来の燃料（「バイオ燃料」）の製造に新たな関心が持たれている。バイオブタノールは、バクテリア、通常は、クロストリジウム属を用いたバイオマスの発酵により製造される。ブタノールに加えて、これらの有機体は、重要な溶媒であるアセトン、およびエタノールも生産する。斯かる発酵反応は、しばしば、「ＡＢＥ法」（アセトン／ブタノール／エタノール法）と呼ばれることがある。現在使用されている原料または基質は、麦わらおよびトウモロコシの茎等の農業副産物と同様に、サトウダイコン、サトウキビ、トウモロコシ穀粒および小麦等のエネルギー作物を含む。斯かる基質は、発酵の間、前記有機体の成長を促進するために必要な栄養素のバランスを提供する。燃料としてのバイオブタノールの使用は、エタノールの使用に対して、いくつかの利点を有する。しかしながら、現在、バイオブタノール製造は、エタノール製造よりも高価であるため、それは大規模に商業化されていない。
【０００３】
発酵によるブタノールおよび／またはアセトンの製造のための現在の基質の多くは、上述したエネルギー作物を利用し、当該エネルギー作物は、バイオ燃料用の基質としてよりも、食糧用の原料としての需要が多い。したがって、代わりの基質を利用するブタノールおよび／またはアセトンの製造方法を提供するニーズが存在する。
【０００４】
エネルギー作物および農業副産物と同様に、製造工程の有機廃棄物および／または有機副産物等の他の有機材料は、潜在的な基質成分である可能性がある。しかしながら、多くは適していないことが判明する。例えば、一部の有機廃棄物または副産物は、前記有機体の成長を促進するのに適した栄養バランスを含まないことがあり、前記有機体に有害な場合があり、および／または前記有機体が利用可能な形態での十分な必須栄養素を含まないことがある。この理由のため、多くの有機廃棄物または副産物は、基質としての利用が限られており、そのため、経済的価値が低い。
【０００５】
本発明は、ウィスキー、特にモルトウィスキーの製造の一部として生じた、ポットエール、低価値の有機副産物を含む基質を利用するブタノールおよび／またはアセトンの製造方法を提供する。
【０００６】
モルトウィスキーとは、大麦麦芽のみからなる穀物から製造されたウィスキーをいう。モルトウィスキーの製造は、大麦を水に浸すことによる大麦の麦芽製造から始まる。麦芽製造は、前記穀物中のでんぷんを分解して、それらを糖に変換する酵素を放出する。所望の発芽状態に達したときに、前記大麦麦芽は乾燥される。当該乾燥された大麦麦芽は、糖化槽内ですりつぶされる。糖化では、前記麦芽製造過程の間に成長した前記酵素が、前記大麦でんぷんを糖に変換または加水分解する。その結果得られた前記糖を含む液体は、麦汁と呼ばれる。これは、ウォッシュバックと呼ばれる大きな容器に移され、そこで、それは、冷却され、発酵されて、「ウォッシュ」を形成する。前記可溶性の糖または麦汁の抽出後に残る残渣は、ドラフとして知られている。これは、廃麦芽粕固形物またはビール粕を含む。
【０００７】
前記ウォッシュは、銅製の蒸留容器またはウォッシュスチルとして知られている単式蒸留釜内で蒸留され、ローワインとして知られているアルコール含有蒸留液を生じる。最初の蒸留酒の蒸留後に、前記単式蒸留釜内に残っている蒸留残渣または液体は、ポットエールまたは蒸留かすとして知られている。前記ローワインは、再留釜内で２回および時には３回蒸留されて生一本を生じ、当該生一本は、オーク製の樽内で熟成され、モルトウィスキーを生じる。２回目およびそれ以降の蒸留で残っている液体は、スペントリースと呼ばれる。
【０００８】
したがって、モルトウィスキーの製造の副産物は、ドラフ、ポットエールおよびスペントリースを含む。ポットエールは、固形内容物の総量が少なく、死滅した酵母細胞、酵母残渣、可溶性タンパク質、可溶性栄養素、炭水化物ならびに前記発酵および糖化工程由来の他の材料を含む。それは、前記釜それ自体からのかなりの量の銅を含むこともある。ポットエールは、栄養素が低く、高い銅含有量を有することがあり、前記産業内での処理を難しくしている。かなりの量が、前記産業を犠牲にして海へ廃棄される。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本願の発明者らは、ポットエール、モルトウィスキー製造から得られ得る低いまたはマイナスの経済的価値の副産物、および有機廃棄物および／または有機副産物から得られるもののような炭水化物源を利用する、ブタノールおよび／またはアセトンおよび任意の他の化学物質の製造方法を開発した。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明の第１の態様によれば、少なくとも：
炭水化物源およびポットエールを含む基質を処理する工程であって、当該処理は、前記炭水化物源の少なくとも一部を可溶化して、処理された基質を与える工程；および
ブタノール−および／またはアセトン−形成微生物の培養菌の存在下、２０μＭ未満の遊離銅イオンの濃度で、前記処理された基質を発酵させる工程であって、当該発酵は、ブタノールおよび／またはアセトンを含む発酵生成物を与える工程を含む、ブタノールおよび／またはアセトンの製造方法が提供される。
【００１１】
一の実施形態では、前記ポットエールは、モルトウィスキー、好適にはスコッチモルトウィスキーの製造の副産物である。
【００１２】
さらなる実施形態では、前記炭水化物源は、これらに限定されないが、都市有機ごみ、産業有機ごみ、農作物および作物残渣、木くずおよび林業廃棄物、海洋バイオマスならびにバイオエネルギー作物を含んでいてもよい。したがって、前記炭水化物源は、紙、紙製造からのスラッジ、酒造家および醸造者由来のビール粕等のビール粕、果物くずおよび野菜くず、製パン工業からの廃棄物、海藻、海藻抽出物、木質チップおよび他の林業誘導体、食用作物、穀物および作物残渣、チョコレート、藻類（大型藻類および微細藻類）、非食用作物（および残渣）ならびにスイッチグラス等のエネルギー作物からなる群の１種以上から選択されてもよい。好適な実施形態によれば、前記炭水化物源は、モルトウィスキーのドラフではない。
【００１３】
特に好適な実施形態では、前記基質は、古紙等の紙である。あるいは、前記基質は、食品廃棄物および／または小麦またはパン等の小麦由来基質であってもよい。
【００１４】
さらなる実施形態では、前記発酵生成物は、さらに、エタノール、二酸化炭素、水素、アセテートおよびブチレートからなる群より選択される化合物の１種以上を含んでいてもよい。
【００１５】
他の実施形態では、前記基質は、さらに、希釈剤を含んでいてもよい。所定の実施形態では、前記希釈剤は、水、スペントリースおよび他の発酵由来の廃液からなる群の１種以上から選択される。特に、前記希釈剤は、水であってもよい。
【００１６】
さらなる実施形態では、前記基質を処理する工程は、さらに、
前記基質を希釈する工程であって、当該希釈は、２０μＭ未満の遊離銅イオンの濃度を与える工程を含んでいてもよい。
【００１７】
一の実施形態では、前記基質を処理する工程は、
水および水素イオンまたは水および水酸化物イオンの存在下、前記炭水化物源を加水分解する工程を含んでいてもよい。
【００１８】
他の実施形態では、前記基質を処理する工程は、
硫酸の水溶液の存在下、前記炭水化物源を加水分解する工程を含んでいてもよい。
【００１９】
さらなる実施形態では、前記基質を処理する工程は、前記基質を高温（すなわち、約１２０℃より高い、好適には約１００℃より高い、そしてより好適には約８０℃より高い）で加熱する工程および／または前記基質を硫酸等の酸で処理する工程を含まない。この特定の実施形態は、基質としての紙または紙由来生成物の処理に特に適している。
【００２０】
さらに別の実施形態では、前記基質を処理する工程は、
前記炭水化物源を１種以上の酵素と共に処理する工程を含む。
【００２１】
一の実施形態では、前記処理された基質を発酵させる工程は、５．１以上のｐＨで、より典型的には５．３〜５．７の範囲のｐＨで、さらにより典型的には、約５．５のｐＨで、行われてもよい。さらなる実施形態では、前記ｐＨは、前記処理された基質をバッファーと共に発酵させる工程の間、調節されてもよい。あるいは、ｐＨ調節は、特に前記基質が木または紙由来である場合には、必要ない。
【００２２】
他の実施形態では、前記発酵工程における前記遊離銅イオンの濃度は、１５μＭ未満とすることができる。さらなる実施形態では、前記発酵工程における前記遊離銅イオンの濃度は、前記処理された基質への、上述した希釈剤等の希釈剤の添加によって低減することができる。
【００２３】
さらなる実施形態では、前記ブタノール−および／またはアセトン−形成微生物の培養菌は、Ｃ．アセトブチリカム（acetobutylicum）ＡＴＣＣ  ８２４、Ｃ．サッカロリティカム（saccharolyticum）ＮＣＰ  ２６２、Ｃ．ベイジェリンキ（beijerinckii）ＮＣＩＭＢ  ８０５２およびＣ．サッカロペルブチルアセトニカム（saccharoperbutylacetonicum）ＮＣＩＭＢ  １２６０６（Ｎ１−４）等のクロストリジウム属のバクテリアを含んでいてもよい。
【００２４】
別の実施形態では、前記発酵工程は、それから固形物を除去することなく行われる場合がある。
【００２５】
さらなる実施形態では、前記処理工程および発酵工程が、同時に行われる場合があり、または連続して行われる場合がある。
【００２６】
一の実施形態では、前記ポットエールは、
酵母を、水と、グルコースおよびグルコースのオリゴ糖からなる群より選択される１種以上の炭水化物とを含む麦汁に添加する工程；
前記麦汁を発酵させる工程であって、当該発酵は、水と１種以上のアルコールとを含むウォッシュを与える工程；および
前記ウォッシュを銅製の蒸留容器内で蒸留する工程であって、当該蒸留は、１種以上のアルコールを含むローワイン蒸留物と、ポットエールの蒸留残渣とを与える工程により与えられてもよい。
【００２７】
さらなる実施形態では、前記麦汁は、
でんぷんを含む大麦麦芽を製粉する工程であって、当該製粉は、すりつぶされた大麦麦芽を与える工程；
前記すりつぶされた大麦麦芽を水と混合する工程であって、当該混合は、水とすりつぶされた大麦麦芽とを含む麦芽汁を与える工程；
前記麦芽汁の前記すりつぶされた大麦麦芽中の前記でんぷんの少なくとも一部を加水分解する工程であって、当該加水分解は、ドラフと麦汁とを与え、前記ドラフは廃麦芽粕固形物を含み、前記麦汁は、水と、グルコースおよびグルコースのオリゴ糖からなる群より選択される１種以上の炭水化物とを含む工程；および
前記ドラフを前記麦汁から分離する工程により与えられる場合がある。
【００２８】
本発明のさらなる態様によれば、本発明の前記態様のいずれかの方法に従って製造されたブタノールを含むバイオ燃料が提供される。
【００２９】
本発明のさらなる態様によれば、本発明のいずれかの態様の前記方法に従って製造されたブタノールおよび／またはアセトンを含む生成物が提供される。
【００３０】
本発明のさらなる態様によれば、発酵によるブタノールおよび／またはアセトンの製造における、モルトウィスキー製造由来のポットエールの使用が提供される。
【図面の簡単な説明】
【００３１】
【図１】図１は、ポットエール中の酸と酵素で前処理されたドラフの、Ｃ．アセトブチリカム（acetobutylicum）ＡＴＣＣ  ８２４による発酵における初期ｐＨの影響を示す。ドラフは、０．０８Ｍの硫酸で前処理されて、そのｐＨは、酵素の添加の前にｐＨ５．０〜６．０の間に調節された。酵素加水分解後に、前記ｐＨは、発酵のために４．５、４．８、５．０、５．５、６．０または６．５に調節された。図１（ａ）は、酸および酵素処理による糖を示し、図１（ｂ）は、発酵後の残留糖を示し、図１（ｃ）は、発酵由来のＡＢＥ生成物を示し、そして、図１（ｄ）は、ドラフからのブタノールとＡＢＥの収率を示す。
【図２】図２は、水または５０％ポットエールのいずれかに溶解された（ａ）白色事務用紙および（ｂ）新聞紙由来のＣ．サッカロペルブチルアセトニカム（saccharoperbutylacetonicum）ＮＣＩＭＢ  １２６０６によるＡＢＥ製造を示す。
【図３】図３は、水、酢酸アンモニウムまたは５０％ポットエールで可溶化された白色紙を用いて行われた発酵（１５０ｍｌ）由来のアセトン、ブタノールおよびエタノールの製造を示す。
【図４】図４ａ〜４ｃは、（ａ）白色紙、（ｂ）新聞印刷用紙および（ｃ）リーフレット紙におけるクロストリジウムの４つの菌株を用いて行われた発酵（１５０ｍｌ）由来のアセトン、ブタノールおよびエタノールの製造を示す。基質は、５０％ポットエール中に希釈され、ｐＨ５．５に緩衝され、そして、工業用酵素で処理された。
【図５】図５は、ポットエール中でのパンにおけるクロストリジウムの４つの菌株を用いて行われた発酵（１５０ｍｌ）由来のアセトン、ブタノールおよびエタノールの製造を示す。
【図６】図６は、ポットエール中での小麦におけるクロストリジウムの４つの菌株を用いて行われた発酵（１５０ｍｌ）由来のアセトン、ブタノールおよびエタノールの製造を示す。
【図７】図７は、ポットエール中での食品廃棄物におけるクロストリジウムの２つの菌株を用いて行われた発酵（１５０ｍｌ）由来のアセトン、ブタノールおよびエタノールの製造を示す。
【図８】図８は、酸処理にかけられた小麦を用いたポットエール中でのクロストリジウムの４つの菌株を用いて行われた発酵（１５０ｍｌ）由来のアセトン、ブタノールおよびエタノールの製造を示す。
【図９】図９は、緩衝することなく、新聞印刷用紙、白色紙およびリーフレット紙を用いて行われた発酵（１Ｌ）由来のアセトン、ブタノールおよびエタノールの製造を示す。
【発明を実施するための形態】
【００３２】
発明の詳細な説明
本発明は、発酵法によるブタノールおよび／またはアセトンの製造において、基質としてポットエールおよび炭水化物源を利用する。特に、本発明者らは、驚くべきことに、ポットエールの存在下で発酵を行うことができることを見出した。前記銅製の蒸留釜由来のポットエール中の高い銅含有量が、クロストリジウム属のバクテリア等のブタノール−および／またはアセトン−形成微生物を阻害すると予期されていた。しかしながら、本発明者らは、前記基質が２０μＭより低い遊離銅イオンの濃度を有する場合、阻害効果がないことを示した。
【００３３】
前記銅釜からの最初の蒸留残渣から直接与えられるポットエールは、通常、２０μＭを超える銅濃度等のブタノール−および／またはアセトン−形成微生物に有害なレベルの遊離銅イオンの濃度を有する。そのため、改良されていないポットエールは、前記バイオマス基質の形成に不適当な培地である場合がある。しかしながら、前記ブタノール−および／またはアセトン−形成微生物を阻害しない遊離銅イオン濃度が、当該遊離銅イオン濃度を低減することにより達成され得て、例えば、前記基質を与えるためにそれが前記炭水化物源に混合される前、前記基質を与えるためにそれが前記炭水化物源に混合された後、または前記処理された基質を与えるために前記基質の処理後、のいずれかに前記ポットエールを希釈することにより、達成され得る。しかしながら、遊離銅イオン濃度の減少がいつ行われても、これは、前記微生物が害されることを防止するために、前記ポットエールを含む前記処理された基質と前記ブタノール−および／またはアセトン−形成微生物とを混合する前であることが好適であることは、明らかである。
【００３４】
ブタノール、アセトンおよび／または他の再生可能な化学物質の製造におけるポットエールの使用は、いくつかの関連した利点を有する。ポットエールは、現在、経済的な価値が低いまたはマイナスなものとして分類されている。本発明におけるポットエールの使用は、ポットエールの経済的価値を増大させることができる。さらに、前記ポットエールは、前記炭水化物源を水和するための希釈剤として作用する。したがって、ポットエールが使用される際には、必要な水または他の希釈剤の量が低減される。加えて、ポットエールは、前記微生物に必須栄養素を与え、特に、それによって前記発酵および基質から生成物への全体の変換を向上させる窒素源を与える。
【００３５】
ブタノールおよび／またはアセトンおよび付加的な他の化学物質の製造のために前記基質中の前記炭水化物源としての有機廃棄物または副産物の使用は、また、それがこれらの基質の廃棄物に解決法を提供するために、有利である。所定の態様では、本発明は、紙、特に古紙を、炭水化物源として利用する。そのため本発明は、さらに、古新聞紙または使用済みコピー用紙等の古紙の廃棄物に解決法を提供する。紙系基質からのブタノールおよび／またはアセトンの製造のための適した発酵培地を作製するために、ポットエールの使用が必要であることが見出された。
【００３６】
前記基質は、前記炭水化物源の少なくとも一部を可溶化するために処理されなければならない。当該可溶化は、加水分解の形態を取ることがあり、したがって、前記炭水化物源を発酵に適した形態に分解する。よって、所定の実施形態では、前記基質は、前記炭水化物源を可溶化、特に加水分解するための１種以上の処理工程、例えば、すりつぶし、加熱、酸またはアルカリの添加、酵素の添加、またはこれらの組み合わせ、にかけられる。所定の実施形態では、前記炭水化物源を可溶化するための前記基質の処理は、水および水素イオンまたは水および水酸化物イオンの存在下、前記炭水化物源を加水分解する工程を含む。所定の実施形態では、それを可溶化するための前記炭水化物源の処理は、前記炭水化物源を加水分解することが可能な任意の適した酸の存在下で行われる。好適な酸の例は、硫酸および硝酸を含む。硫酸は、本明細書に記載される方法での使用する酸の好適な例である。前記基質が紙系、または紙由来である場合は、温度または酸処理は必要ではない。
【００３７】
所定の実施形態では、前記炭水化物源を加水分解するための前記基質の処理は、セルラーゼおよびヘミセルラーゼ等の１種以上の酵素の添加を含む。所定の実施形態では、発酵に適した形態の処理された基質を与えるために、処理の組み合わせ、例えば、酸と酵素の両方の添加、を利用してもよい。処理の組み合わせは、同時にまたは連続して適用されてもよい。
【００３８】
他の実施形態では、前記基質が、紙、紙くず、小麦およびパン等の小麦系生成物のうち少なくとも１種を含む場合、前記処理は、酵素の添加を含んでいてもよい。この酵素処理は、酵素活動に最適な温度（すなわち、約５０℃）よりも低い温度で起こってもよい。さらには、前記温度は、両方のプロセスが同時に進行することを可能とする、前記発酵温度（例えば、３３℃）と同じであってもよい。適した温度範囲は、２５〜４０℃、好適には３０〜３５℃、そしてより好適には、３２〜３４℃とすることができる。パンおよび／または紙くず等の製品の製造における前の工程が、前記炭水化物の含有量を濃縮し、かつ、有害材料（例えば、紙系製品からのリグニン）を除去することができるため、酵素処理のみが必要とされることがある。
【００３９】
前記処理された基質の発酵は、５．１以上の範囲、より好適には５．２〜６．２の範囲、さらに好適には５．３〜５．７の範囲、特に好適には約５．５、のｐＨで行われる。５．３〜５．７のｐＨ範囲の使用が、ブタノールおよび／またはアセトンの高収率を与えることが示された。さらに、このｐＨ範囲によって、それから固形物を除去する必要なく、発酵が行われることが可能となり、したがって、コスト削減と固形物の除去の必要に起因する何らかの技術的な問題を回避することができる。このｐＨ範囲は、ブタノールおよび／またはアセトン製造を最大化する一方、前記処理された基質からの何らかの潜在毒性を防ぐ。
【００４０】
発酵は、ブタノール−および／またはアセトン−形成微生物の培養菌の存在下で行われる。前記ブタノール−および／またはアセトン−形成微生物は、ブタノールおよび／またはアセトンを形成するために前記基質を発酵させることが可能な任意の溶媒製造微生物から選択することができる。好適な微生物は、溶媒を製造するために改変された微生物を含む。好適な微生物の例は、ＡＢＥ（アセトン／ブタノール／エタノール）製造に現在使用されているもの、特に、Ｃ．アセトブチリカム（acetobutylicum）、Ｃ．ベイジェリンキ（beijerinckii）、Ｃ．サッカロペルブチルアセトニカム（saccharoperbutylacetonicum）およびＣ．サッカロブチリカム（saccharobutylicum）等のクロストリジウム属のバクテリア、を含む。一部の実施形態では、前記ブタノール−および／またはアセトン−形成微生物は、Ｃ．アセトブチリカム（acetobutylicum）を含む。他の実施形態では、前記微生物は、Ｃ．サッカロペルブチルアセトニカム（saccharoperbutylacetonicum）を含む。この特定の菌株は、紙系基質に特に有効である。
【００４１】
発酵は、２０μＭ未満の遊離銅イオンの濃度で行われる。これが、前記銅イオンの存在が有する負の効果を無くす／最小にすることを確保する。所定の実施形態では、水または他の水溶液が、遊離銅イオンの濃度を２０μＭ遊離銅イオンよりも低くするために、加えられてもよい。所定の実施形態では、前記遊離銅イオンの濃度は、少なくとも前記発酵工程の間、１９，１８，１７，１６，１５，１４，１３，１２，１１，１０，９，８，７，６または５μＭ遊離銅イオン未満である。所定の実施形態では、前記遊離銅イオンの濃度は、１５μＭ未満である。所定の実施形態では、前記遊離銅イオンの濃度は、１０μＭ未満である。
【００４２】
所定の実施形態では、前記処理工程および発酵工程は、同時に行われる。これは、必要な時間量、含まれる工程数および関連する製造コストを削減する。
【００４３】
別の実施形態では、前記処理工程および発酵工程は、連続して行われる。例えば、前記基質は、発酵の前に、２つの工程で、第１に酸で、次いで酵素で、前処理されてもよい。
【００４４】
所定の実施形態では、前記発酵生成物は、さらに、エタノール、二酸化炭素、水素、アセテートおよびブチレートからなる群より選択される化合物の１種以上を含む。ブタノールおよび／またはアセトンは、従来の分離技術を用いて、前記発酵生成物から取り出されてもよい。あるいは、前記発酵生成物は、燃料として、またはさもなければ、さらに精製せずに使用されてもよい。
【００４５】
本明細書で使用される用語「バイオブタノール」は、バイオマスから製造されたブタノールをいう。
【００４６】
本明細書で使用される用語「ポットエール」は、モルトウィスキー製造において、最初の蒸留後に前記ウォッシュスチル（銅釜）内に残っている液体をいう。それは、ローワインの蒸留による抽出後の前記ウォッシュの残渣である。
【００４７】
本明細書で使用される用語「スペントリース」は、モルトウィスキー製造において、２回目およびそれ以降の蒸留後に前記蒸留容器内に残っている液体をいう。それは、生一本の蒸留による抽出後の前記ローワインの残渣である。
【００４８】
用語「遊離銅イオンの濃度」は、固形物と結びついていない銅イオンの濃度、すなわち、上澄みの銅イオンの濃度をいう。ポットエール内の銅の総濃度は、死滅した酵母細胞等の固形物に結びついて残っている一部の銅としての遊離銅イオンの濃度よりも高くなる。
【００４９】
本明細書で使用される用語「スコッチウィスキー」は、スコットランドで製造されたウィスキーをいう。別の実施形態では、前記モルトウィスキーは、アイルランドまたはインド等の他の国で製造されたモルトウィスキーであり、ここで、その国でのモルトウィスキーの製造方法は、スコッチモルトウィスキーの製造のためにスコットランドで用いられている方法と類似または同一である。
【００５０】
次に、本発明を以下の例を参照して説明するが、これは説明目的のために提供されるものであり、本発明を限定するものと解釈されることを意図したものではない。
【実施例】
【００５１】
参考例１ならびに例２および３は、前記発酵方法における前記基質のｐＨと遊離銅イオン濃度の効果を示す。参考例１と例３の両方で、グルコースを炭水化物源として使用した。参考例１は、前記基質中にポットエールが存在しないため、参考試験として示す。
【００５２】
参考例１は、ＡＢＥが４．５より大きく６．５までのｐＨ範囲でグルコースの発酵から製造され得ることを示す。４．５のｐＨでは、グルコースは消費されていない、または、ＡＢＥは製造されていなかった。６．５のｐＨでは、酸のみが製造され、ＡＢＥは製造されなかった。例２は、ポットエールと基質（ドラフ）を含む基質の発酵について、約５．５の好適な初期範囲ｐＨを示す。
【００５３】
例３は、不希釈ポットエールが、発酵に有害な遊離銅イオンの濃度を有し、添加された遊離銅イオンのない基質に比べてＡＢＥ収率が減少したことを示す。さらに、前記遊離銅イオンの濃度が２０μＭから５μＭに減少するにつれて、ＡＢＥの収率が、添加された遊離銅イオンのない基質から得られたものにまで増大した。
【００５４】
例４は、基質へのポットエールの添加が、水等の希釈剤の添加に比べて、ＡＢＥ収率の増大という結果になったことを示す。
【００５５】
例５は、基質へのポットエールの添加が、硫酸アンモニウムの添加と同様の効果を有し、前記ポットエールが窒素源として作用することを表していることを示す。
【００５６】
例６は、ポットエールを様々な基質および微生物と組み合わせて用いて、ＡＢＥが製造され得ることを示す。実証された基質は、様々な種類の紙材料、パン、小麦および食品廃棄物である。
【００５７】
例７は、所定の基質は、酸処理を必要としないことを示す。実際に、小麦の酸処理は、未処理の小麦よりもＡＢＥの収率が低くなる。
【００５８】
例８は、紙系基質において、発酵前緩衝が、常に必要というわけではないことを示す。
【００５９】
一般的方法
以下の有機体を用いた：Ｃ．アセトブチリカム（acetobutylicum）ＡＴＣＣ  ８２４、Ｃ．サッカロリティカム（saccharolyticum）ＮＣＰ  ２６２、Ｃ．ベイジェリンキ（beijerinckii）ＮＣＩＭＢ  ８０５２およびＣ．サッカロペルブチルアセトニカム（saccharoperbutylacetonicum）  ＮＣＩＭＢ  １２６０６（Ｎ１−４）。クロストリジウムを、４℃で胞子懸濁として保持した。胞子に、熱ショックを８０℃で１０分間加え、そして、補強されたクロストリジウム培地（RCM、Oxoid社、Cambridge、UK）に植菌した。
【００６０】
例１〜３では、前記培養菌を２４時間培養して、次いで、全ての実験で開始培養菌（５％ｖ／ｖ）として使用する前に、グルコースを含むトリプトン−酵母エキス−酢酸アンモニウム培地（ＴＹＡ）培地に二次培養した。ＴＹＡは、トリプトン、６ｇ／ｌ；酵母エキス、２ｇ／ｌ；酢酸アンモニウム、３ｇ／ｌ；ＫＨ２ＰＯ４、０．５ｇ／ｌ；ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ、０．３ｇ／ｌ；５％グルコースが補充されたＦｅＳＯ４・７Ｈ２Ｏ、０．０１ｇ／ｌ、から構成される。全てのクロストリジウム培養菌を、３３℃、Ｎ２−Ｈ２−ＣＯ２（８０：１０：１０）雰囲気下の嫌気性のワークステーション内で培養した。例４〜８では、開始培養菌を２４時間培養して、次いで、ｐＨ５．５に緩衝された５０％ポットエールに二次培養した。全てのクロストリジウム培養菌を、３３℃、Ｎ２−Ｈ２−ＣＯ２（８０：１０：１０）雰囲気下の嫌気性のワークステーション内で培養した。小スケールの発酵（１５０ｍｌ）を嫌気性のワークステーション内のガラス瓶内で行った。
【００６１】
１Ｌスケールについて、発酵を発酵槽（Biostat A Plus、Sartorius Stedim社、Surrey、ＵＫ）内で行った。クロストリジウムの植菌の前に、１時間、無酸素の窒素で発酵槽内で前記培地を、散布することにより、無酸素状態を達成した。全ての１Ｌの発酵について、撹拌は、２００ｒｐｍおよび温度３３℃に設定した。
【００６２】
蒸留所からポットエールを得て、水で体積比１：１に希釈した。これは、遊離銅イオンの濃度を２０μＭ未満に減少させるのに十分であった。
【００６３】
ウェットなドラフは、蒸留所から受け取った際、７５〜８０％の含水率であった。述べるところでは、ドラフは、含水率が約４％となるまで８０℃で乾燥され、さらなる処理の前に製粉された。
【００６４】
フレームイオン化検出器と、長さ１０ｍおよび直径０．３２ｍｍのＣＰ  ＳＩＬ  ５ＣＢカラム（全てChrompack、Middelburg、オランダ）とを備えたChrompack  ９００１ガスクロマトグラフを用いて、エタノール、アセトンおよびブタノールを分析した。分析前に全てのサンプルを０．２μｍ酢酸セルロースシリンジフィルターを通してろ過し、濃度は、エタノール、アセトンおよびブタノール標準品を参照して決定した。
【００６５】
酸（酢酸および酪酸）ならびに単糖（グルコース、キシロースおよびアラビノース）分析のため、サンプルを０．２μｍシリンジフィルターを通してろ過し、硫酸で酸性にした。ＵＶ−ＶＩＳ二波長と屈折率検出器が組み込まれて装着されたVarian 920 LC（Varian社、Oxford、UK）を用いたＨＰＬＣにより、サンプルを分析した。Rezex ROA有機酸Ｈ＋８％  ３００×７．８ｍｍカラム（Phenomenex社、Cheshire、UK）で、０．００５Ｎ硫酸、移動相の流速０．５ｍｌ／分で、成分を室温で分離した。酸は、２１０ｎｍで検出し、一方、糖は、前記ＲＩ検出器で検出し、そして、濃度は、対応する標準品を参照して決定した。
【００６６】
参考例１  クロストリジウムによるＡＢＥ製造におけるｐＨ制御の効果
Ｃ．アセトブチリカム（acetobutylicum）ＡＴＣＣ  ８２４によるＴＹＡ培地でのグルコースの発酵におけるｐＨの効果を調査した。発酵を１Ｌスケールで行い、ｐＨ４．５〜６．５の設定点の範囲で、アルカリまたは酸のいずれかを自動で添加することによりそのｐＨを制御した。ｐＨ４．５では、グルコースの利用、酸またはＡＢＥ製造は、検出されなかった。他の全ての発酵について、グルコースは４８時間以内に完全に消費され、酸（酪酸および酢酸）と溶媒（アセトン、ブタノールおよびエタノール）とが製造された（表２）。ＡＢＥ製造は、ｐＨ４．８と５．０で最も高く、対応する収率は、それぞれ、０．３４と０．３０  ＡＢＥ（ｇ）／糖（ｇ）である。ｐＨ５．５〜６．５で、糖のＡＢＥへの変換の減少に対応して、酸製造が増大した。ｐＨ６．５では、酸のみが、それぞれ、７．８および１２．８ｇ／ｌの酢酸および酪酸の最終濃度で製造された。
【００６７】
【表１】
2013529473.tif 000003
【００６８】
例２  クロストリジウムによるＡＢＥ製造における初期ｐＨの影響
ドラフとポットエールを含む前処理された基質の発酵における初期ｐＨの効果を調査した。乾燥し、製粉されたドラフを、５０％ポットエール中で０．０８Ｍ硫酸を用いて２５０ｍｌのデュラン瓶に１０．５％（ｗ／ｖ）を添加することにより前処理を行い、１２１℃で１５分間殺菌した。冷却後、そのｐＨを、１０Ｍ水酸化ナトリウムを添加することによりｐＨ５．０〜６．０に調節し、３３℃で２４時間、セルラーゼおよびヘミセルラーゼ酵素と共に培養した。発酵のため、Ｃ．アセトブチリカム（acetobutylicum）ＡＴＣＣ  ８２４の植菌の前に、前記溶液の初期ｐＨを４．５，４．８，５．０，５．５，６．０または６．５のいずれかに調節した。発酵前にその初期糖濃度を測定し、発酵後のその残余の糖、ＡＢＥ濃度およびＡＢＥ収率を計算した（図１）。糖の初期濃度は、全てのサンプルについて同様であり、約９．６、１１．２、および９．９ｇ／ｌのグルコース、キシロースおよびアラビノースだった。ｐＨ５．０以下では、成長またはガス製造が無いことが明らかであり、糖の利用はなかった。ＡＢＥ製造は、ｐＨ５．５で最大（１４．２ｇ／ｌ）であり、１３．２ｇ／ドラフ１００ｇの収率だった。これは、ｐＨ６．０ではＡＢＥ９．３ｇ／ドラフ１００ｇに減少した。ｐＨ６．５では、約半分の糖が利用されたが、最終濃度２．３ｇ／ｌとＡＢＥへの変換は乏しかった。
【００６９】
例３  クロストリジウムによるＡＢＥ製造用の成長培地としてのポットエール
スコットランドの麦芽蒸留所からポットエールを回収し、銅含有量について分析した。そのポットエールは、合計、７１．８μＭの銅を有し、そのうち２１．１μＭは、上澄み中の「遊離」銅として利用可能であり、残りは固形物に結びついていると決定した。この銅濃度がＣ．アセトブチリカム（acetobutylicum）ＡＴＣＣ  ８２４に有毒かどうかを評価するために、銅の異なる濃度で補充された１００ｍｌＴＹＡ培地での５％グルコースの発酵を比較した（表３）。銅は、５と１０μＭでは、ＡＢＥ濃度が約１２ｇ／ｌと、銅のない対照のそれと同様で、ＡＢＥ製造に影響が無かった。より高い銅濃度では、ＡＢＥ濃度は、８．６ｇ／ｌまで減少し、この濃度では、銅がクロストリジウムを阻害していることを示している。前記ポットエールが２１．１μＭの「遊離」銅含有量を有するため、阻害レベル未満に前記Ｃｕ濃度を減少させるために、半分の濃度のポットエールでクロストリジウム発酵を試験することを決定した。グルコース補充した半分濃度のポットエールは、８２４の成長に十分な栄養素を与え、前記ＴＹＡ対照と同様のＡＢＥ製造を与えた（表３）。
【００７０】
【表２】
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【００７１】
例４  古紙のブタノールとアセトンへの変換方法
白色事務用紙と新聞紙を５ｍｍ幅の細長い切れに細かく刻み、２５０ｍｌデュラン瓶中で、水または５０％ポットエールのいずれかで６．７％（ｗ／ｖ）を混合し、そのｐＨをｐＨ５．５に調節した。殺菌後、前記瓶を冷却し、セルラーゼとＣ．サッカロペルブチルアセトニカム（saccharoperbutylacetonicum）  ＮＣＩＭＢ  １２６０６を添加した。発酵後、そのＡＢＥ濃度を決定した（図２）。水における紙のＡＢＥへの変換は、ポットエールに比べて乏しく、追加の栄養素を与えるためにポットエールが必要であることを実証した。ポットエール中では、Ｃ．サッカロペルブチルアセトニカム（saccharoperbutylacetonicum）を用いた発酵後のそのＡＢＥ収率は、ＡＢＥ２４．８ｇ／事務用紙１００ｇとＡＢＥ１６．８ｇ／新聞紙１００ｇであった。
【００７２】
例５  クロストリジウムによるＡＢＥ製造における窒素源としてのポットエールの効果
処理によってその炭水化物含有量が増大した所定の基質は、窒素不足となることがある。炭水化物源としての紙および５０％ポットエールを含む基質を、紙および水を含む基質と、紙および酢酸アンモニウム水溶液を含む基質と比較した。用いた操作方法は、前述の例について用いたものと同様である。
【００７３】
図３に示したように、紙および水を含む前記基質の発酵は、ＡＢＥを少量しか製造しなかった。紙および水を含む基質を酢酸アンモニウムで補充すると、良好な結果を生じ、紙炭水化物源は、窒素が不足していることを示している。紙およびポットエールを含む前記基質は、酢酸アンモニウムで補充した前記基質よりもさらに良い結果を生じた。図３は、硫酸アンモニウムまたはポットエールのいずれかを用いた発酵が、水を用いたそれよりも、よりＡＢＥを製造したことを示す。用いた菌株はＮ１−４である。
【００７４】
例６  ポットエールを含む基質の範囲からのＡＢＥ製造
炭水化物源を含む基質の範囲を、白色紙、新聞印刷用紙、リーフレット紙、パン（Kingsmillからの精白）、小麦および食品廃棄物からなる群より選択した。はじめの５つの炭水化物源は、容易に入手可能な廃棄物材料を表し、一方、小麦は、代替農作物を表す。前記炭水化物源を以下のように調製した：紙サンプルは、市販のペーパーシュレッダーを用いて細断し、前記パン、小麦および食品廃棄物のサンプルは、家庭用フードプロセッサーで細断した。前記炭水化物源を５０％ポットエール中で可溶化し、水酸化ナトリウムでｐＨ５．５に緩衝し、工業用酵素（Ｃ−ＴｅｃｈおよびＨ−Ｔｅｃｈ、Novozymesから市販されているセルラーゼとヘミセルラーゼ）を用いて処理し、そして、前述したクロストリジウムのバクテリアの４つの菌株を用いて発酵した。全ての発酵が、ＡＢＥを製造した（図４−７に示す）。前記Ｎ１−４菌株は、製造されたＡＢＥ濃度が一貫して７ｇ／ｌを超えており、１２ｇ／ｌを超えることもあったため、前記紙系基質について特に高効率であった。
【００７５】
例７  異なる炭水化物源の前処理
モルトウィスキードラフは、使用した前記酵素が発酵のための糖を放出するように利用可能なその構造を提供するために高温で酸での処理を必要とする。対照的に、パンおよび紙くず等の炭水化物源は、前記製造方法の前に行われた工程でリグニン等の有害材料を除去し、前記炭水化物含有量を濃縮しているため、処理を必要としない。したがって、斯かる炭水化物源は、発酵前の低温での酵素処理のみを必要とする。
【００７６】
図８は、小麦が酸処理にかけられた後に得られたＡＢＥの濃度を示す。図６に示した結果と比較すると分かるように、小麦を用いた場合、前記処理は、何ら向上につながらず、クロストリジウムの特定の菌株に関して厳しい有害効果さえも示す（すなわち、Ｐ２６２とＮ１−４）。
【００７７】
例１０  発酵前緩衝
酸処理を経ていない基質は、酸処理を経たそれよりも高いｐＨ値を有する。したがって、酸処理を経ていないそれらの基質における発酵ｐＨへの緩衝は、弱まることがあり、一部の場合では、必要ではない。図９に示したように、紙が炭水化物源として使用される場合、最適な菌株、Ｎ１−４が、植菌の前の緩衝がなくとも十分な性能が達成されたように、より高いｐＨで発酵することができるため、緩衝は必要ではなかった。
【００７８】
特定の好適な実施形態に関連して本発明を説明したが、請求項に係る本発明は、斯かる特定の実施形態に不当に制限されないことが理解される。実に、当業者にとって自明な形態であって、本発明を実行するために記載された形態の様々な変更は、本発明に含まれることが意図されている。
【図１】
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【図２】
2013529473.tif 000006
【図３】
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【図４】
2013529473.tif 000008
【図５】
2013529473.tif 000009
【図６】
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【図７】
2013529473.tif 000011
【図８】
2013529473.tif 000012
【図９】
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【手続補正書】
【提出日】平成25年2月21日(2013.2.21)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも：
炭水化物源およびポットエールを含む基質を処理する工程であって、当該処理は、前記炭水化物源の少なくとも一部を可溶化して、処理された基質を与える工程；および
ブタノール−および／またはアセトン−形成微生物の培養菌の存在下、２０μＭ未満の遊離銅イオンの濃度で、前記処理された基質を発酵させる工程であって、当該発酵は、ブタノールおよび／またはアセトンを含む発酵生成物を与える工程を含む、ブタノールおよび／またはアセトンの製造方法。
【請求項２】
前記基質を処理する工程が、
水および水素イオンまたは水および水酸化物イオンの存在下、前記炭水化物源を加水分解する工程を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記基質を処理する工程が、
硫酸の水溶液の存在下、前記炭水化物源を加水分解する工程を含む、請求項１または請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記基質を処理する工程が、
前記炭水化物源を１種以上の酵素と共に処理する工程を含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
前記基質を処理する工程が、さらに、
前記基質を希釈する工程であって、当該希釈は、２０μＭ未満の遊離銅イオンの濃度を与える工程を含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
前記処理された基質を発酵させる工程が、５．１以上のｐＨで行われる、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
前記発酵工程における前記遊離銅イオンの濃度が、１５μＭ未満である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
前記ブタノール−および／またはアセトン−形成微生物の培養菌が、クロストリジウム属のバクテリアを含む、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
前記発酵工程が、それから固形物を除去することなく行われる、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
前記処理工程および発酵工程が、同時に行われる、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
前記処理工程および発酵工程が、連続して行われる、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
前記ポットエールが、
酵母を、水と、グルコースおよびグルコースのオリゴ糖からなる群より選択される１種以上の炭水化物とを含む麦汁に添加する工程；
前記麦汁を発酵させる工程であって、当該発酵は、水と１種以上のアルコールとを含むウォッシュを与える工程；および
前記ウォッシュを銅製の蒸留容器内で蒸留する工程であって、当該蒸留は、１種以上のアルコールを含むローワイン蒸留物と、ポットエールの蒸留残渣とを与える工程により与えられる、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
前記麦汁が、さらに、
でんぷんを含む大麦麦芽を製粉する工程であって、当該製粉は、すりつぶされた大麦麦芽を与える工程；
前記すりつぶされた大麦麦芽を水と混合する工程であって、当該混合は、水とすりつぶされた大麦麦芽とを含む麦芽汁を与える工程；
前記麦芽汁の前記すりつぶされた大麦麦芽中の前記でんぷんの少なくとも一部を加水分解する工程であって、当該加水分解は、ドラフと麦汁とを与え、前記ドラフは廃麦芽粕固形物を含み、前記麦汁は、水と、グルコースおよびグルコースのオリゴ糖からなる群より選択される１種以上の炭水化物とを含む工程；および
前記ドラフを前記麦汁から分離する工程により与えられる、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記ポットエールが、モルトウィスキー、好適にはスコッチモルトウィスキーの製造の副産物である、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
前記炭水化物源が、紙、紙製造からのスラッジ、果物くずおよび野菜くず、製パン工業からの廃棄物、海藻、海藻抽出物、林業誘導体、食用作物、穀物および作物残渣、ビール粕、チョコレート、藻類、非食用作物およびそれらの残渣ならびにエネルギー作物からなる群の１種以上から選択される、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
前記発酵生成物が、さらに、エタノール、二酸化炭素、水素、アセテートおよびブチレートからなる群より選択される化合物の１種以上を含む、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
請求項１〜１６のいずれか１項に記載の方法に従って製造されたブタノールを含むバイオ燃料。
【請求項１８】
請求項１〜１６のいずれか１項に記載の方法に従って製造されたブタノールおよび／またはアセトンを含む生成物。
【国際調査報告】
2013529473.tif 000014
2013529473.tif 000015
2013529473.tif 000016
2013529473.tif 000017