(57)【要約】【課題】形質転換成長因子−β（ＴＧＦ−β）第Ｉ型受容体（ＡＬＫ５）及び／またはアクチビン第Ｉ型受容体（ＡＬＫ４）の抑制剤である２−ピリジルが置換されたイミダゾールを提供する。【解決手段】本発明による治療学的ＡＬＫ５及び／またはＡＬＫ４抑制剤として２−ピリジルが置換されたイミダゾール及びその製造方法、及び薬剤、具体的に受容体により媒介される疾患状態の治療及び予防におけるその用途を特徴とする。【選択図】図１
2013533252.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記化学式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩または水和物：
【化１】
2013533252.tif 000052
（式中、
それぞれのＲａは独立してＨ、ハロ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、Ｃ３−６シクロアルキル、ＯＨ、−Ｏ−Ｃ１−６アルキル、−Ｏ−Ｃ１−６ハロアルキル、−Ｏ−Ｃ３−６シクロアルキル、ＮＨ２、−ＮＨ−Ｃ１−６アルキル、−ＮＨ−Ｃ１−６ハロアルキル、−ＮＨ−Ｃ３−６シクロアルキル、−Ｓ−Ｃ１−６アルキル、−Ｓ−Ｃ１−６ハロアルキル、−Ｓ−Ｃ３−６シクロアルキル、ＣＮ、またはＮＯ２であり；
ｍは０，１，２，３または４であり；
Ａ１及びＡ２のうち１つはＮで、他の１つはＮＲ１であり、ここでＲ１はＨ、ＯＨ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、またはＣ３−６シクロアルキルであり；
Ｘは結合、−（ＣＨ２）ｐ−、−ＮＲ２−、−Ｏ−または−Ｓ−であり、ここでｐは０または１で、Ｒ２はＨまたはＣ１−３アルキルであり；
それぞれのＲｂは独立してＨ、ハロ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、Ｃ３−６シクロアルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、−（ＣＨ２）ｑ−ＯＲ３、−（ＣＨ２）ｑ−ＮＲ３Ｒ４、−（ＣＨ２）ｑ−ＳＲ３、−（ＣＨ２）ｑ−ＮＯ２、−（ＣＨ２）ｑ−ＣＯＮＨＯＨ、−（ＣＨ２）ｑ−ＣＮ、−（ＣＨ２）ｑ−ＣＯＲ３、−（ＣＨ２）ｑ−ＣＯ２Ｒ３、−（ＣＨ２）ｑ−ＣＯＮＲ３Ｒ４、−（ＣＨ２）ｑ−テトラゾール、−（ＣＨ２）ｑ−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＮ、−（ＣＨ２）ｑ−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＯ２Ｒ３、−（ＣＨ２）ｑ−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＯＮＲ３Ｒ４、−（ＣＨ２）ｑ−ＣＨ＝ＣＨ−テトラゾール、−（ＣＨ２）ｑ−ＮＨＣＯＲ３、−（ＣＨ２）ｑ−ＮＨＣＯ２Ｒ３、−（ＣＨ２）ｑ−ＣＯＮＨＳＯ２Ｒ３、−（ＣＨ２）ｑ−ＮＨＳＯ２Ｒ３、−（ＣＨ２）ｑ−Ｃ≡Ｃ−ＣＮ、−（ＣＨ）ｑ−Ｃ≡Ｃ−ＣＯ２Ｒ３、−（ＣＨ２）ｑ−Ｃ≡Ｃ−ＣＯＮＲ３Ｒ４、−（ＣＨ２）ｑ−Ｃ≡Ｃ−テトラゾール、−（ＣＨ２）ｑ−ＳＯＲ５、−（ＣＨ２）ｑ−ＳＯ２Ｒ５、または−（ＣＨ２）ｒ−（ＯＲ３）２であり、ここでＲ３及びＲ４は独立してＨ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、またはＣ３−６シクロアルキルであるか、またはこれらが結合された窒素原子と共にモノ−サイクリック環、例えばイミダゾール、ピロリジン、ピペリジン、モルホリン、ピペラジン及びホモピペラジンを形成し；Ｒ５はＣ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、またはＣ３−６シクロアルキルであり；ｑは０，１，２，３または４であり；ｒは１，２，３または４であり；
ｎは０，１，２，３，４または５である。）
【請求項２】
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）アニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−２−フルオロアニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−３−フルオロアニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−４−フルオロアニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−２，３−ジフルオロアニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−３，４−ジフルオロアニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−３，５−ジフルオロアニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−２−クロロアニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−３−クロロアニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−４−クロロアニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−２，３−ジクロロアニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−３，４−ジクロロアニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−３，５−ジクロロアニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−２−ブロモアニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−３−ブロモアニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−４−ブロモアニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−２−メチルアニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−３−メチルアニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−４−メチルアニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−２，３−ジメチルアニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−３，４−ジメチルアニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−３，５−ジメチルアニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−２−エチルアニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−３−エチルアニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−２−イソプロピルアニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−３−イソプロピルアニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−４−イソプロピルアニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−２−ビニルアニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−３−ビニルアニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−４−ビニルアニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−３−エチルアニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−２−メトキシアニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−３−メトキシアニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−４−メトキシアニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−２，３−ジメトキシアニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−３，４−ジメトキシアニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−３，５−ジメトキシアニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−２−（メトキシメチル）アニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−３−（メトキシメチル）アニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−４−（メトキシメチル）アニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−２−（トリフルオロメトキシ）アニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−３−（トリフルオロメトキシ）アニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−４−（トリフルオロメトキシ）アニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−２−（メチルチオ）アニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−３−（メチルチオ）アニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−４−（メチルチオ）アニリン；
２−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチルアミノ）ベンゾニトリル；
３−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチルアミノ）ベンゾニトリル；
４−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチルアミノ）ベンゾニトリル；
３−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチルアミノ）フタロニトリル；
２−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチルアミノ）ベンズアミド；
３−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチルアミノ）ベンズアミド；
４−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチルアミノ）ベンズアミド；
２−（３−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチルアミノ）フェニル）アセトニトリル；
２−（４−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチルアミノ）フェニル）アセトニトリル；
１−（３−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチルアミノ）フェニル）エタノン；
１−（４−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチルアミノ）フェニル）エタノン；
メチル３−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチルアミノ）ベンゾエート；
メチル４−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチルアミノ）ベンゾエート；
Ｎ−（２−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチルアミノ）フェニル）アセトアミド；
Ｎ−（３−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチルアミノ）フェニル）アセトアミド；
Ｎ−（４−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチルアミノ）フェニル）アセトアミド；
Ｎ−（２−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチルアミノ）フェニル）メタンスルホンアミド；
Ｎ−（３−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチルアミノ）フェニル）メタンスルホンアミド；
Ｎ−（４−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチルアミノ）フェニル）メタンスルホンアミド；
Ｎ１−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−Ｎ２、Ｎ２−ジメチルベンゼン−１，２−ジアミン；
Ｎ１−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−Ｎ３、Ｎ３−ジメチルベンゼン−１，３−ジアミン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−２−（ピロリジン−１−イル）アニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−２−モルホリノアニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−３−モルホリノアニリン；
Ｎ３−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−４−フルオロ−Ｎ１、Ｎ１−ジメチルベンゼン−１，３−ジアミン；
３−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチルアミノ）−５−（ジメチルアミノ）ベンゾニトリル；
３−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチルアミノ）−４−（ジメチルアミノ）ベンゾニトリル；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−２−（（ジメチルアミノ）メチル）アニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−３−（（ジメチルアミノ）メチル）アニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−２−（ピロリジン−１−イルメチル）アニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−３−（ピロリジン−１−イルメチル）アニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−２−（モルホリノメチル）アニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−３−（モルホリノメチル）アニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−５−（（ジメチルアミノ）メチル）−２−フルオロアニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−３−（（ジメチルアミノ）メチル）−２−フルオロアニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−２−フルオロ−３−（ピロリジン−１−イルメチル）アニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−２−フルオロ−３−（モルホリノメチル）アニリン；
３−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチルアミノ）−４−（（ジメチルアミノ）メチル）ベンゾニトリル；
３−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチルアミノ）−２−（（ジメチルアミノ）メチル）ベンゾニトリル；
３−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチルアミノ）−５−（（ジメチルアミノ）メチル）ベンゾニトリル；
３−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチルアミノ）−４−（ピロリジン−１−イルメチル）ベンゾニトリル；
３−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチルアミノ）−２−（ピロリジン−１−イルメチル）ベンゾニトリル；
３−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチルアミノ）−５−（ピロリジン−１−イルメチル）ベンゾニトリル；
３−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチルアミノ）−４−（モルホリノメチル）ベンゾニトリル；
３−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチルアミノ）−２−（モルホリノメチル）ベンゾニトリル；
３−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチルアミノ）−５−（モルホリノメチル）ベンゾニトリル；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−２−（２−（ジメチルアミノ）エチルアニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−３−（２−（ジメチルアミノ）エチルアニリン；
３−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−エチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチルアミノ）ベンゾニトリル；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−エチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−２−フルオロアニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−２−フルオロ−Ｎ−メチルアニリン；
３−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）（メチル）アミノ）ベンゾニトリル；
３−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）（メチル）アミノ）ベンズアミド；
６−（２−ベンジル−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン；
６−（２−（２−フルオロベンジル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン；
３−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）ベンゾニトリル；
３−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）ベンズアミド；
６−（５−（６−メチルピリジン−２−イル）−２−（フェノキシメチル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン；
６−（２−（（２−フルオロフェノキシ）メチル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン；
３−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メトキシ）ベンゾニトリル；
３−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メトキシ）ベンズアミド；
６−（５−（６−メチルピリジン−２−イル）−２−（フェニルチオメチル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン；
６−（２−（（２−フルオロフェニルチオ）メチル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン
からなる群より選択されることを特徴とする請求項１に記載の化合物、及びその薬学的に許容可能な塩または水和物。
【請求項３】
請求項１に記載の１つ以上の化合物またはその薬学的に許容可能な塩または水和物、及び薬学的に許容可能な希釈剤または担体を含む薬学組成物。
【請求項４】
ＴＧＦ−βまたはアクチビンの信号伝達経路またはこの両方とも抑制する必要のあるヒトに対して治療有効量の請求項１に記載の１つ以上の化合物またはその薬学的に許容可能な塩または水和物を投与することを含む、前記ヒトにおける前記ＴＧＦ−βまたはアクチビンの信号伝達経路またはこの両方とも抑制する方法。
【請求項５】
腫瘍細胞転移の治療、予防または減少を必要とするヒトに対して治療有効量の請求項１に記載の１つ以上の化合物またはその薬学的に許容可能な塩または水和物を投与することを含む、前記ヒトにおける前記転移を治療、予防または減少させる方法。
【請求項６】
ＴＧＦ−βの過剰発現により媒介される癌腫の治療、予防または減少を必要とするヒトに対して治療有効量の請求項１に記載の１つ以上の化合物またはその薬学的に許容可能な塩または水和物を投与することを含む、前記ヒトにおけるＴＧＦ−βの信号伝達経路を抑制することにより前記ＴＧＦ−βの過剰発現により媒介される癌腫を治療、予防または減少させる方法。
【請求項７】
脈管損傷の治療、予防または減少を必要とするヒトに対して治療有効量の請求項１に記載の１つ以上の化合物またはその薬学的に許容可能な塩または水和物を投与することを含む、前記ヒトにおける前記脈管損傷を治療、予防または減少させる方法。
【請求項８】
糸球体腎炎、糖尿病性網膜症、ループス腎炎、高血圧による腎臓病、間質性腎線維症、薬による合併症から発生する腎線維症、ＨＩＶと関連した腎臓病、移植腎臓病、全ての病因による肝線維症、感染による肝臓の機能障害、酒による肝炎、胆道系疾患、嚢胞性線維症、肺線維症、間質性肺疾患、急性肺傷害、成人呼吸窮迫症候群、特発性肺線維症、慢性閉塞性肺疾患、感染因子または毒性因子による肺疾患、心筋梗塞後の心臓線維症、うっ血性心不全、拡張型心筋症、心筋炎、血管内膜の厚膜化、血管狭窄症、高血圧による血管再形成、肺動脈高血圧、冠状再狭窄症、末梢血管再狭窄症、頚動脈再狭窄症、ステントによる再狭窄症、アテローム性動脈硬化症、眼球損傷、角膜損傷、増殖性硝子体網膜症、緑内障、眼内圧、外傷または手術での傷を治療する間に発生する真皮への過度または肥厚性瘢痕またはケロイドの形成、腹膜及び皮下の狭窄、強皮症、線維性硬化症、全身性進行性硬化症、皮膚筋炎、多発性筋炎、関節炎、骨粗しょう症、潰瘍、損傷した神経機能、男性の勃起不全、ペイロニー病、デュピュイトラン拘縮、アルツハイマー病、レイノー症候群、放射線による線維症、血栓症、腫瘍の転移性成長、多発性骨髄腫、黒色腫、神経膠腫、膠芽細胞腫、白血病、肉腫、平滑筋腫、中皮腫、及び肺、乳房、結腸、腎臓、卵巣、頸部、肝、胆道、胃腸管、膵臓、前立腺、頭頸部の癌腫からなる群より選択される疾病の治療を必要とするヒトに対して治療有効量の請求項１に記載の１つ以上の化合物またはその薬学的に許容可能な塩または水和物を投与することを含む、前記ヒトおける前記疾病を治療、予防または減少させる方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、形質転換成長因子−β（ＴＧＦ−β）第Ｉ型受容体（ＡＬＫ５）及び／またはアクチビン第Ｉ型受容体（ＡＬＫ４）の抑制剤である２−ピリジルが置換されたイミダゾール、その製造方法、及び薬剤学的用途、具体的に前記受容体により媒介される疾患状態の治療及び予防におけるその用途に関する。
【背景技術】
【０００２】
ＴＧＦ−βは、細胞の増殖及び分化、傷の治療、細胞外基質の生産、及び免疫抑制に対する多面発現的（ｐｌｅｉｏｔｒｏｐｉｃ）な調節因子（ｍｏｄｕｌａｔｏｒ）の蛋白質群（ｆａｍｉｌｙ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ）である、ＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２及びＴＧＦ−β３を示す。このような上科（ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ）を構成する別の物質としては、アクチビン（ａｃｔｉｖｉｎ）、インヒビン（ｉｎｈｉｂｉｎ）、骨形成蛋白質、成長及び分化因子、及びミュラー管（Ｍｕｌｌｅｒｒｉａｎ）抑制物質がある。
【０００３】
ＴＧＦ−β１は、２つの非常によく保存された単一膜貫通（ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ）セリン／スレオニンキナーゼ（ｓｅｒｉｎｅ／ｔｈｒｅｏｎｉｎｅ ｋｉｎａｓｅｓ）、第Ｉ型（ＡＬＫ５）及び第ＩＩ型ＴＧＦ−β受容体を通して信号を変換させる。リガンドによりオリゴマー化（ｏｌｉｇｏｍｅｒｚａｔｉｏｎ）が誘導されると、前記第ＩＩ型受容体は、前記ＡＬＫ５のＧＳ領域内のセリン／スレオニン残期（ｒｅｓｉｄｕｅ）を過剰リン酸化させるが、これはスマッド（Ｓｍａｄ）蛋白質の結合部位を生成させることで、前記ＡＬＫ５の活性化を誘導する。前記活性化されたＡＬＫ５は、Ｃ−末端ＳＳＸＳ−モチーフ（ｍｏｔｉｆ）でスマッド２及びスマッド３蛋白質をリン酸化させ、これによって、前記受容体からの解離及びスマッド４との異型複合体（ｈｅｔｅｒｏｍｅｒｉｃ ｘｏｍｐｌｅｘ）の形成を誘導する。スマッド複合体は、核内に移動して特異的なＤＮＡと結合する補助因子及び補助調節因子と会合して細胞外基質成分及び基質分解プロテアーゼの抑制剤の転写を最終的に活性化させる。
【０００４】
アクチビンは、ＴＧＦ−βと類似する方式で信号を変換させる。アクチビンは、セリン／スレオニンキナーゼ、アクチビン第ＩＩ型受容体（ＡｃｔＲＩＩＢ）と結合し、前記活性化された第ＩＩ型受容体は、前記ＡＬＫ４のＧＳ領域内のセリン／スレオニン残期を過剰リン酸化させる。前記活性化されたＡＬＫ４は、スマッド２及びスマッド３をリン酸化させる。スマッド４との異種−スマッド複合体の結果的な形成により、遺伝子転写をアクチビン誘導により調節（ａｃｔｉｖｉｎ−ｉｎｄｕｓｅｄ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ）する結果をもたらす。
【０００５】
数多くの動物実験研究は、最近考察された通り（非特許文献１）、増殖性糸球体腎炎のＴｈｙ−１ラットモデル、抗−ＧＢＭ糸球体腎炎のラビットモデル、及び巣状分節状糸球体硬化症の５／６腎摘出術ラットモデルを含み、ＴＧＦ−βの糸球体発現と線維症間の関係を明らかにする。ＴＧＦ−βを中和する抗体は、前記Ｔｈｙ−１腎炎モデルにおいて糸球体の組織学を改善する（非特許文献２）。
【０００６】
高血糖状態は、マウスの近位尿細管細胞及びヒトのメサンギウム細胞（ｍｅｓａｎｇｉａｌ ｃｅｌｌ）の両方ともでＴＧＦ−β ｍＲＮＡ及び蛋白質合成を増加させる（非特許文献３、非特許文献４）。初期腎臓病を患う糖尿病患者は糸球体内にＴＧＦ−β ｍＲＮＡ及び蛋白質の蓄積が増加する（非特許文献５）。慢性的な間質性腎線維症を有する腎臓の特徴は、厚くなった管状基底膜及び膨張された間質区画（ｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌ ｃｏｍｐａｒｔｍｅｎｔ）であり、この際、間質性線維症はコラーゲンＩ、ＩＩＩ、Ｖ、ＶＩＩ、及びフィブロネクチン（ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ）が増加する（非特許文献６）。
ブレオマイシン、シリカ、石綿及び放射線などによる肺線維症に対する多様な動物モデルでは、ＴＧＦ−β遺伝子発現及び蛋白質生産が増加する（非特許文献７、非特許文献８、非特許文献９）。ヒトの肺線維疾患において、特発性肺線維症と隣接した組織切片でのＴＧＦ−β１蛋白質及びコラーゲン遺伝子の発現が同時に増加することが観察される（非特許文献１０）。ＴＧＦ−β生産の増加は、サルコイド、塵肺症、石綿症、及び放射線により線維症にかかった患者から証明された（非特許文献１１、非特許文献１２）。ブレオマイシンにより誘導された肺線維症の齧歯類モデルにおいて、抗−ＴＧＦ−β抗体及びＴＧＦ−β−溶解性受容体は線維症を部分的に抑制することができる（非特許文献１３、非特許文献１４）。末梢気道病変に続く慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）を誘発する最も重要な因子の１つとしてタバコの煙がその原因になる（非特許文献１５）。ＣＯＰＤは気道閉塞の機能的異常を特長とする、ゆっくり進行する不可逆的な疾患である。ＴＧＦ−βは、ＣＯＰＤのような慢性の気道炎症性疾患に見られる気道リモデリングに関連すると推定されている（非特許文献１６、非特許文献１７）。
【０００７】
肝線維症において、肝星細胞（ＨＳＣ）は、細胞外基質蛋白質の主要供給源である。ＴＧＦ−β１の作用により活性化された肝星細胞による細胞外基質の生産は顕著に増加する（非特許文献１８、非特許文献１９）。肝でＴＧＦ−β１を過剰発現するトランスジェニックマウスは、肝線維症だけでなく肝以外の疾患、例えば腎線維症にもかかる（非特許文献２０）。
【０００８】
ＴＧＦ−β１及びその受容体は、損傷された血管及び線維増殖性脈管の病変から過剰発現されて細胞外基質の過剰生産を誘導する（非特許文献２１、非特許文献２２）。
抗−ＴＧＦ−β抗体は、傷跡を減少させ、ラットの新生真皮の細胞構築を改善させ（非特許文献２３）、ラビットの角膜の傷の治療を改善させ（非特許文献２４）、ラットの胃潰瘍の傷の治療を促進させる（非特許文献２５）。
【０００９】
放射線線維症は、正常なヒト組織において、治療または偶然放射線に過多露出された場合によく発生される。ＴＧＦ−β１は、最近考察された通り、放射線線維症の開示、展開、及び持続に中心的な役割を果たす（非特許文献２６）。
【００１０】
臓器移植の場合、腎臓のような一部の臓器は、慢性的な拒否反応により合併症が出てきて状況が悪化することが多いが、これは移植失敗の主な形態である。ヒトの場合、肺及び腎臓移植の慢性的な拒否反応は、その組織内でＴＧＦ−βの発現増加と関連がある（非特許文献２７、非特許文献２８）。
【００１１】
ＴＧＦ−βは、腹膜癒着に関連がある（非特許文献２９）。前記腹膜及び皮下線維性癒着は、ＡＬＫ５及び／またはＡＬＫ４の抑制剤により予防することができる。
【００１２】
ＴＧＦ−β２は、原発性開放隅角緑内障（ＰＯＡＧ）の約５０％、及び目の水性体液中に若年緑内障の大部分で増加する（非特許文献３０）。偽落屑緑内障及びＰＯＡＧを持っている患者に由来して培養されたヒトのテノン嚢（Ｔｅｎｏｎ’ｓ ｃａｐｓｕｌｅ）の線維芽細胞において、ＴＧＦ−β１及びＴＧＦ−β２の同型は両方とも細胞外基質の生産を増加させると報告された（非特許文献３１）。特許文献１は、ＡＬＫ５調節因子を使用する緑内障の治療及び眼内圧力の調節に関して開示しているが、ＡＬＫ５抑制剤はＴＧＦ−β２により処理された、かん流されたヒトの前眼部内のフィブロネクチンの水準、及びＴＧＦ−β２により処理された線維柱帯細胞培養物内のフィブロネクチン、プラスミノーゲン活性抑制剤−１（ＰＡＩ−１）、及びプロコラーゲン第Ｉ型Ｃ−ペプチドの水準を減少させる。
【００１３】
様々な癌の末期段階にある腫瘍内の腫瘍細胞及び間質細胞は一般的にＴＧＦ−βを過剰発現する。これは、血管の形成及び細胞運動の刺激、免疫系の抑制、及び腫瘍細胞と細胞外基質の相互作用の増加を引き起こす（非特許文献３２）。結果的に前記腫瘍細胞は、さらに侵略を始め、遠く離れた器官に転移する（非特許文献３３、非特許文献３４）。
【００１４】
ＰＡＩ−１は、組織−類型プラスミノーゲン活性剤及びウロキナーゼ−類型プラスミノーゲン活性剤の主な生理学的抑制剤である。ＰＡＩ−１の水準の増加は、血栓症及び脈管疾患と関連性があり、高い血漿ＰＡＩ−１が線維素溶解と凝固との間の自然のバランスを破壊することによって凝固性亢進状態を促進することを意味する（非特許文献３５）。ＴＧＦ−βは、ＰＡＩ−１の発現を刺激することが公知されている（非特許文献３６）。したがって、ＴＧＦ−βの信号伝達経路の抑制剤によるＰＡＩ−１の生産抑制は新規の線維素溶解療法を提示することができる。
【００１５】
アクチビン信号伝達及びアクチビンの過剰発現は、細胞外基質蓄積及び線維症（非特許文献３７、非特許文献３８、非特許文献３９、非特許文献４０、非特許文献４１、非特許文献４２、非特許文献４３）、炎症反応（非特許文献４４）、悪液質または消耗化（ｗａｓｔｉｎｇ）（非特許文献４５、非特許文献４６、非特許文献４７）、中枢神経系での疾患または病理学的反応（非特許文献４８、非特許文献４９、非特許文献５０、非特許文献５１、非特許文献５２）、及び高血圧（非特許文献５３）を伴う病理学的疾患と関連している。研究は、ＴＧＦ−β及びアクチビンが相互作用して細胞外基質の生産を誘導できることを見せている（非特許文献５４）。
【００１６】
したがって、本発明の好ましい化合物によるスマッド２及びスマッド３のＡＬＫ５及び／またはＡＬＫ４のリン酸化の抑制により、前記信号伝達経路と関連した疾患を治療及び予防できることが明らかになる。
【００１７】
特許文献２及び特許文献３は、トリアリールイミダゾール誘導体及びＡＬＫ５抑制剤としての用途を開始する。特許文献４は、ピリジニルイミダゾール誘導体及びＡＬＫ５抑制剤としての用途を開始する。特許文献５は、ＡＬＫ５抑制剤としてイミダゾリル環状アセタール誘導体の用途を開始する。特許文献６は、三置換ヘテロアリール及びＡＬＫ５及び／またはＡＬＫ４抑制剤としての用途を開始する。特許文献７及び特許文献８は、ＡＬＫ５及び／またはＡＬＫ４抑制剤として２−ピリジルが置換されたイミダゾールを開始する。  
【００１８】
特に、特許文献７及び特許文献８に請求された代表的な化合物のうちの１つのＩＮ−１１３０は、様々な動物モデルにおいてＡＬＫ５及び／またはＡＬＫ４抑制剤としての用途を見せている。ＩＮ−１１３０は、ラットにおいて、片方の尿管閉塞（ＵＵＯ）により誘発された腎臓線維症を有効に抑制し（非特許文献５５）、ＭＯＧ３５−５５により免疫されたＳＢＥ−ｌｕｃ及びＧＦＡＰ−ｌｕｃマウスにおいて実験的な自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）を改善させ（非特許文献５６）、ラットにおいて膜線維症を減らし、ペイロニー病を治療し（非特許文献５７）、マウスの前立腺癌細胞株トランプ（Ｔｒａｍｐ）Ｃ２により処理されたマウスにおいて、免疫反応を増大させると共に腫瘍の体積を大きく減少させる（非特許文献５８）。
【００１９】
また、特許文献９はＡＬＫ５及び／またはＡＬＫ４抑制剤として２−ピリジルが置換されたイミダゾールを開始する。特に、特許文献９に請求された代表的な化合物のうちの１つのＩＮ−１２３３は、ＡＬＫ５及び／またはＡＬＫ４抑制剤として様々な動物モデルにおいてその用途を見せている。ＩＮ−１２３３は、ＴＧＦ−β信号伝達を抑制してモノクロタリンラットモデルにおいて肺動脈高血圧の発達及び進行を有効に予防し（非特許文献５９）、ラットの尿道モデルにおいて、ベアメタルステント（ｂａｒｅ ｍｅｔａｌｌｉｃ ｓｔｅｎｔ）手術後に肉芽組織が形成されることも予防する（非特許文献６０）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００２０】
【特許文献１】ＵＳ ２００７／０１４２３７６ Ａ１
【特許文献２】ＷＯ ００／６１５７６
【特許文献３】ＵＳ ２００３／０１４９２７７ Ａ１
【特許文献４】ＷＯ ０１／６２７５６ Ａ１
【特許文献５】ＷＯ ０２／０５５０７７ Ａ１
【特許文献６】ＷＯ ０３／０８７３０４ Ａ２
【特許文献７】ＷＯ ２００５／１０３０２８ Ａ１
【特許文献８】ＵＳ ７，４０７，９５８ Ｂ２
【特許文献９】ＵＳ ２００８／０３１９０１２ Ａ１
【非特許文献】
【００２１】
【非特許文献１】Bitzer, M. et al., Kidney Blood Press. Res. 21: 1-12 (1998)
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【非特許文献３】Wahab, N. A. et al., Biochem. J. 316: 985-992 (1996)
【非特許文献４】Rocco, M. V. et al., Kidney Int. 41: 107-114 (1992)
【非特許文献５】Yoshioka, K. et al., Lab. Invest. 68:154-163 1993
【非特許文献６】Eddy, A. A., J. Am. Soc. Nephrol. 7: 2495-2508 (1996)
【非特許文献７】Phan, S. H. and Kunkel, S. L., Exp. Lung Res. 18: 29-43 (1992)
【非特許文献８】Williams, A. O. et al., Am. J. Pathol. 142: 1831-1840 (1993)
【非特許文献９】Rube, C. E. et al., Int. J. Radiat. Oncol. Biol. Phys. 47: 1033-1042 (2000)
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【非特許文献１４】Wang, Q. et al., Thorax 54: 805-812 (1999)
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【非特許文献１７】Ning, W. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101: 14895-14900 (2004)
【非特許文献１８】Friedman, S. L., Prog. Liver Dis. 14: 101-130 (1996)
【非特許文献１９】Pietrangelo, A., Semin. Liver Dis. 16: 13-30 (1996)
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【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２２】
驚くべきことに、２−ピリジルが置換されたイミダゾール基がＡＬＫ５及び／またはＡＬＫ４に対して強力で選択された抑制剤として作用し、そのため、ＡＬＫ５及び／またはＡＬＫ４により媒介される多様な疾患状態、例えば糸球体腎炎、糖尿病性網膜症、ループス腎炎、高血圧による腎臓病、間質性腎線維症、薬による合併症から発生する腎線維症、ＨＩＶと関連した腎臓病、移植腎臓病、全ての病因による肝線維症、感染による肝臓の機能障害、酒による肝炎、胆道系疾患、嚢胞性線維症、肺線維症、間質性肺疾患、急性肺傷害、成人呼吸窮迫症候群、特発性肺線維症、慢性閉塞性肺疾患、感染因子または毒性因子による肺疾患、心筋梗塞後の心臓線維症、うっ血性心不全、拡張型心筋症、心筋炎、血管内膜の厚膜化、血管狭窄症、高血圧による血管再形成、肺動脈高血圧、冠状再狭窄症、末梢血管再狭窄症、頚動脈再狭窄症、ステントによる再狭窄症、アテローム性動脈硬化症、眼球損傷、角膜損傷、増殖性硝子体網膜症、緑内障、眼内圧、外傷または手術での傷を治療する間に発生する真皮への過度または肥厚性瘢痕またはケロイドの形成、腹膜及び皮下狭窄、強皮症、線維性硬化症、全身性進行性硬化症、皮膚筋炎、多発性筋炎、関節炎、骨粗しょう症、潰瘍、損傷した神経機能、男性の勃起不全、ペイロニー病、デュピュイトラン拘縮、アルツハイマー病、レイノー症候群、放射線による線維症、血栓症、腫瘍の転移性成長、多発性骨髄腫、黒色腫、神経膠腫、膠芽細胞腫、白血病、肉腫、平滑筋腫、中皮腫、及び肺、乳房、結腸、腎臓、卵巣、頸部、肝、胆道、胃腸管、膵臓、前立腺、頭頸部の癌腫の治療、予防及び減少に有用であることが明らかになった。
【００２３】
したがって、本発明は、形質転換成長因子−β（ＴＧＦ−β）第Ｉ型受容体（ＡＬＫ５）及び／またはアクチビン第Ｉ型受容体（ＡＬＫ４）の抑制剤の２−ピリジルが置換されたイミダゾール、その製造方法、及び薬剤、具体的に前記受容体により媒介される疾患状態の治療及び予防におけるその用途を提供する。
【課題を解決するための手段】
【００２４】
本発明は、下記化学式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩または水和物を提供する：
【００２５】
【化１】
2013533252.tif 000003
【００２６】
（式中、
それぞれのＲａは独立してＨ、ハロ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、Ｃ３−６シクロアルキル、ＯＨ、−Ｏ−Ｃ１−６アルキル、−Ｏ−Ｃ１−６ハロアルキル、−Ｏ−Ｃ３−６シクロアルキル、ＮＨ２、−ＮＨ−Ｃ１−６アルキル、−ＮＨ−Ｃ１−６ハロアルキル、−ＮＨ−Ｃ３−６シクロアルキル、−Ｓ−Ｃ１−６アルキル、−Ｓ−Ｃ１−６ハロアルキル、−Ｓ−Ｃ３−６シクロアルキル、ＣＮ、またはＮＯ２であり；
ｍは０，１，２，３または４であり；
Ａ１及びＡ２のうち１つはＮで、他の１つはＮＲ１であり、ここでＲ１はＨ、ＯＨ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、またはＣ３−６シクロアルキルであり；
Ｘは結合、−（ＣＨ２）ｐ−、−ＮＲ２−、−Ｏ−または−Ｓ−であり、ここでｐは０または１で、Ｒ２はＨまたはＣ１−３アルキルであり；
それぞれのＲｂは独立してＨ、ハロ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、Ｃ３−６シクロアルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、−（ＣＨ２）ｑ−ＯＲ３、−（ＣＨ２）ｑ−ＮＲ３Ｒ４、−（ＣＨ２）ｑ−ＳＲ３、−（ＣＨ２）ｑ−ＮＯ２、−（ＣＨ２）ｑ−ＣＯＮＨＯＨ、−（ＣＨ２）ｑ−ＣＮ、−（ＣＨ２）ｑ−ＣＯＲ３、−（ＣＨ２）ｑ−ＣＯ２Ｒ３、−（ＣＨ２）ｑ−ＣＯＮＲ３Ｒ４、−（ＣＨ２）ｑ−テトラゾール、−（ＣＨ２）ｑ−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＮ、−（ＣＨ２）ｑ−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＯ２Ｒ３、−（ＣＨ２）ｑ−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＯＮＲ３Ｒ４、−（ＣＨ２）ｑ−ＣＨ＝ＣＨ−テトラゾール、−（ＣＨ２）ｑ−ＮＨＣＯＲ３、−（ＣＨ２）ｑ−ＮＨＣＯ２Ｒ３、−（ＣＨ２）ｑ−ＣＯＮＨＳＯ２Ｒ３、−（ＣＨ２）ｑ−ＮＨＳＯ２Ｒ３、−（ＣＨ２）ｑ−Ｃ≡Ｃ−ＣＮ、−（ＣＨ）ｑ−Ｃ≡Ｃ−ＣＯ２Ｒ３、−（ＣＨ２）ｑ−Ｃ≡Ｃ−ＣＯＮＲ３Ｒ４、−（ＣＨ２）ｑ−Ｃ≡Ｃ−テトラゾール、−（ＣＨ２）ｑ−ＳＯＲ５、−（ＣＨ２）ｑ−ＳＯ２Ｒ５、または−（ＣＨ２）ｒ−（ＯＲ３）２であり、ここでＲ３及びＲ４は独立してＨ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、またはＣ３−６シクロアルキルであるか、またはこれらが結合された窒素原子と共にモノ−サイクリック環、例えばイミダゾール、ピロリジン、ピペリジン、モルホリン、ピペラジン及びホモピペラジンを形成し；Ｒ５はＣ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、またはＣ３−６シクロアルキルであり；ｑは０，１，２，３または４であり；ｒは１，２，３または４であり；
ｎは０，１，２，３，４または５である。）
【発明の効果】
【００２７】
本発明の化合物はＡＬＫ５及び／またはＡＬＫ４の効能があり、選択的な抑制剤として作用するため、ＡＬＫ５及び／またはＡＬＫ４により媒介される多様な疾患状態、例えば糸球体腎炎、糖尿病性網膜症、ループス腎炎、高血圧による腎臓病、間質性腎線維症、薬による合併症から発生する腎線維症、ＨＩＶと関連した腎臓病、移植腎臓病、全ての病因による肝線維症、感染による肝臓の機能障害、酒による肝炎、胆道系疾患、嚢胞性線維症、肺線維症、間質性肺疾患、急性肺傷害、成人呼吸窮迫症候群、特発性肺線維症、慢性閉塞性肺疾患、感染因子または毒性因子による肺疾患、心筋梗塞後の心臓線維症、うっ血性心不全、拡張型心筋症、心筋炎、血管内膜の厚膜化、血管狭窄症、高血圧による血管再形成、肺動脈高血圧、冠状再狭窄症、末梢血管再狭窄症、頚動脈再狭窄症、ステントによる再狭窄症、アテローム性動脈硬化症、眼球損傷、角膜損傷、増殖性硝子体網膜症、緑内障、眼内圧、外傷または手術での傷を治療する間に発生する真皮への過度または肥厚性瘢痕またはケロイドの形成、腹膜及び皮下狭窄、強皮症、線維性硬化症、全身性進行性硬化症、皮膚筋炎、多発性筋炎、関節炎、骨粗しょう症、潰瘍、損傷した神経機能、男性の勃起不全、ペイロニー病、デュピュイトラン拘縮、アルツハイマー病、レイノー症候群、放射線による線維症、血栓症、腫瘍の転移性成長、多発性骨髄腫、黒色腫、神経膠腫、膠芽細胞腫、白血病、肉腫、平滑筋腫、中皮腫、及び肺、乳房、結腸、腎臓、卵巣、頸部、肝、胆道、胃腸管、膵臓、前立腺、頭頸部の癌腫の治療、予防及び減少の効果ある。
【００２８】
本発明の上述した態様及び他の特徴を添付した図面と共に下記明細書で説明する。
【図面の簡単な説明】
【００２９】
【図１】ＨａＣａＴ−３ＴＰ−Ｌｕｃ細胞において、ＴＧＦ−β１−誘導された３ＴＰ−Ｌｕｃレポーターの活性に対する実施例２、６０、８６、９２及び９４の効果を示す図面である。
【図２】４Ｔ１−３ＴＰ−Ｌｕｃ細胞において、ＴＧＦ−β１−誘導された３ＴＰ−Ｌｕｃレポーターの活性に対する実施例２、６０、８６、９２及び９４の効果を示す図面である。
【図３】ＭＣＦ１０Ａ細胞において、ＴＧＦ−β１−誘導されたスマッド２／３核転座に対する実施例２の効果を示す図面である。
【図４】ＭＣＦ１０Ａ細胞において、ＴＧＦ−β１−誘導された細胞移動に対する実施例２の効果を示す図面である。
【図５−ａ】４Ｔ１細胞において、ＴＧＦ−β１−誘導された細胞浸潤に対する実施例２の効果を示す図面であって、基底部の表面上に残っているＤＡＰＩ−染色された細胞を示す。
【図５−ｂ】４Ｔ１細胞において、ＴＧＦ−β１−誘導された細胞浸潤に対する実施例２の効果を示す図面であって、５個の無作為に選んだ視野から獲得した視野当たり平均細胞数を示す。
【図６】４Ｔ１細胞の細胞生育に対する実施例２の効果を示す図面である。
【図７】ＭＣＦ１０Ａ細胞の細胞生育に対する実施例２の効果を示す図面である。
【図８−ａ】ＢＡＬＢ／ｃ ４Ｔ１異種移植されたマウスにおいて、乳房腫瘍の肺への転移に対する実施例３の効果を示す図面であって、水（ビヒクル）中に溶解された実施例３（１３．６または２７．３ｍｇ／ｋｇ）を４週間１週に５日連続してマウスに経口ＢＩＤ提供する場合、肺の表面上の白色斑点は転移性結節（白色矢印）を示す。
【図８−ｂ】ＢＡＬＢ／ｃ ４Ｔ１異種移植されたマウスにおいて、乳房腫瘍の肺への転移に対する実施例３の効果を示す図面であって、水（ビヒクル）中に溶解された実施例３（１３．６または２７．３ｍｇ／ｋｇ）を４週間１週に５日連続してマウスに経口ＢＩＤ提供する場合、全体肺の表面上の転移性結節の数を示す。
【図９−ａ】ＢＡＬＢ／ｃ ４Ｔ１異種移植されたマウスにおいて、乳房腫瘍の肺への転移に対する実施例２の効果を示す図面であって、人工胃液剤形（ビヒクル）中に溶解された実施例２（５、１０、２０または４０ｍｇ／ｋｇ）を３週間１週に５日連続してマウスに経口提供する場合、肺の表面上の白色斑点は転移性結節を示す。
【図９−ｂ】ＢＡＬＢ／ｃ ４Ｔ１異種移植されたマウスにおいて、乳房腫瘍の肺への転移に対する実施例２の効果を示す図面であって、人工胃液剤形（ビヒクル）中に溶解された実施例２（５、１０、２０または４０ｍｇ／ｋｇ）を３週間１週に５日連続してマウスに経口提供する場合、左側肺葉の表面上の転移性結節の数を示す。
【図１０−ａ】ＢＡＬＢ／ｃ ４Ｔ１異種移植されたマウスにおいて、乳房腫瘍の肺への転移に対する実施例２の効果を示す図面であって、人工胃液剤形（ビヒクル）中に溶解された実施例２（５、１０、２０または４０ｍｇ／ｋｇ）を２４日間２日ごとに（週３回）マウスに経口提供する場合、肺の表面上の白色斑点は転移性結節を示す。
【図１０−ｂ】ＢＡＬＢ／ｃ ４Ｔ１異種移植されたマウスにおいて、乳房腫瘍の肺への転移に対する実施例２の効果を示す図面であって、人工胃液剤形（ビヒクル）中に溶解された実施例２（５、１０、２０または４０ｍｇ／ｋｇ）を２４日間２日ごとに（週３回）マウスに経口提供する場合、左側肺葉の表面上の転移性結節の数を示す。
【図１０−ｃ】ＢＡＬＢ／ｃ ４Ｔ１異種移植されたマウスにおいて、乳房腫瘍の肺への転移に対する実施例２の効果を示す図面であって、人工胃液剤形（ビヒクル）中に溶解された実施例２（５、１０、２０または４０ｍｇ／ｋｇ）を２４日間２日ごとに（週３回）マウスに経口提供する場合、腫瘍組織でＴＧＦ−β１−誘導されたスマッド２リン酸化に対する効果を示す。
【図１１−ａ】ＢＡＬＢ／ｃ ４Ｔ１異種移植されたマウスにおいて、乳房腫瘍の肺への転移に対する実施例６１の効果を示す図面であって、塩水（ビヒクル）中に溶解された実施例６１（４３．６ｍｇ／ｋｇ）を２．５週間２日ごとに（週３回）マウスの腹腔内に提供する場合、肺の表面上の白色斑点は転移性結節を示す。
【図１１−ｂ】ＢＡＬＢ／ｃ ４Ｔ１異種移植されたマウスにおいて、乳房腫瘍の肺への転移に対する実施例６１の効果を示す図面であって、塩水（ビヒクル）中に溶解された実施例６１（４３．６ｍｇ／ｋｇ）を２．５週間２日ごとに（週３回）マウスの腹腔内に提供する場合、左側肺葉の表面上の転移性結節の数を示す。
【図１１−ｃ】ＢＡＬＢ／ｃ ４Ｔ１異種移植されたマウスにおいて、乳房腫瘍の肺への転移に対する実施例６１の効果を示す図面であって、塩水（ビヒクル）中に溶解された実施例６１（４３．６ｍｇ／ｋｇ）を２．５週間２日ごとに（週３回）マウスの腹腔内に提供する場合、原発性腫瘍の体積を示す。
【図１２−ａ】ＭＭＴＶ／ｃ−Ｎｅｕマウスにおいて、乳房腫瘍の肺への転移に対する実施例６１の効果を示す図面であって、腫瘍を持っているＭＭＴＶ／ｃ−Ｎｅｕマウスに３週間２日ごとに実施例６１（４３．６ｍｇ／ｋｇ）を腹腔内に処理する場合、乳房腫瘍及び肺組織のヘマトキシリン及びエオシン（Ｈ＆Ｅ）染色結果を示す。
【図１２−ｂ】ＭＭＴＶ／ｃ−Ｎｅｕマウスにおいて、乳房腫瘍の肺への転移に対する実施例６１の効果を示す図面であって、腫瘍を持っているＭＭＴＶ／ｃ−Ｎｅｕマウスに３週間２日ごとに実施例６１（４３．６ｍｇ／ｋｇ）を腹腔内に処理する場合、肺中の組織学的に検出可能な転移性病変の数を示す。
【図１２−ｃ】ＭＭＴＶ／ｃ−Ｎｅｕマウスにおいて、乳房腫瘍の肺への転移に対する実施例６１の効果を示す図面であって、腫瘍を持っているＭＭＴＶ／ｃ−Ｎｅｕマウスに３週間２日ごとに実施例６１（４３．６ｍｇ／ｋｇ）を腹腔内に処理する場合、乳房腫瘍の体積を示す。
【図１２−ｄ】ＭＭＴＶ／ｃ−Ｎｅｕマウスにおいて、乳房腫瘍の肺への転移に対する実施例６１の効果を示す図面であって、腫瘍を持っているＭＭＴＶ／ｃ−Ｎｅｕマウスに３週間２日ごとに実施例６１（４３．６ｍｇ／ｋｇ）を腹腔内に処理する場合、β−カゼインｍＲＮＡ水準を示す。
【図１３−ａ】ＭＭＴＶ／ｃ−Ｎｅｕマウスにおいて、乳房腫瘍の肺への転移に対する実施例３の効果を示す図面であって、腫瘍を持っているＭＭＴＶ／ｃ−Ｎｅｕマウスに１０週間２日ごとに実施例３（４３．６ｍｇ／ｋｇ）を腹腔内に処理する場合、β−カゼインｍＲＮＡ水準を示す。
【図１３−ｂ】ＭＭＴＶ／ｃ−Ｎｅｕマウスにおいて、乳房腫瘍の肺への転移に対する実施例３の効果を示す図面であって、腫瘍を持っているＭＭＴＶ／ｃ−Ｎｅｕマウスに１０週間２日ごとに実施例３（４３．６ｍｇ／ｋｇ）を腹腔内に処理する場合、原発性乳房腫瘍におけるＭＭＰ−９及びＭＭＰ−２の活性を示す。
【図１４−ａ】ラットにおいて、胆道−結紮された肝線維症に対する実施例３の効果を示す図面であって、塩水（ビヒクル）中に溶解された実施例３（２１．８または４３．６ｍｇ／ｋｇ）をラットにＢＤＬ手術から４週間１週３回経口提供する場合、血清アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）及びアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）の活性を示す。
【図１４−ｂ】ラットにおいて、胆道−結紮された肝線維症に対する実施例３の効果を示す図面であって、塩水（ビヒクル）中に溶解された実施例３（２１．８または４３．６ｍｇ／ｋｇ）をラットにＢＤＬ手術から４週間１週３回経口提供する場合、肝におけるｐスマッド３蛋白質の水準を示す。
【図１４−ｃ】ラットにおいて、胆道−結紮された肝線維症に対する実施例３の効果を示す図面であって、塩水（ビヒクル）中に溶解された実施例３（２１．８または４３．６ｍｇ／ｋｇ）をラットにＢＤＬ手術から４週間１週３回経口提供する場合、肝におけるａ−ＳＭＡ、フィブロネクチン、及びビメンチン蛋白質の水準を示す。
【図１４−ｄ】ラットにおいて、胆道−結紮された肝線維症に対する実施例３の効果を示す図面であって、塩水（ビヒクル）中に溶解された実施例３（２１．８または４３．６ｍｇ／ｋｇ）をラットにＢＤＬ手術から４週間１週３回経口提供する場合、肝組織のヘマトキシリン及びエオシン（Ｈ＆Ｅ）染色結果を示す。
【図１５−ａ】ラットにおいて、胆道−結紮された肝線維症に対する実施例２の効果を示す図面であって、人工胃液剤形（ビヒクル）中に溶解された実施例２（５、１０または２０ｍｇ／ｋｇ）をラットにＢＤＬ手術から４週間１週３回経口提供する場合、ＡＬＴ及びＡＳＴの活性を示す。
【図１５−ｂ】ラットにおいて、胆道−結紮された肝線維症に対する実施例２の効果を示す図面であって、人工胃液剤形（ビヒクル）中に溶解された実施例２（５、１０または２０ｍｇ／ｋｇ）をラットにＢＤＬ手術から４週間１週３回経口提供する場合、肝におけるａ−ＳＭＡ及びフィブロネクチン蛋白質の水準を示す。
【図１５−ｃ】ラットにおいて、胆道−結紮された肝線維症に対する実施例２の効果を示す図面であって、人工胃液剤形（ビヒクル）中に溶解された実施例２（５、１０または２０ｍｇ／ｋｇ）をラットにＢＤＬ手術から４週間１週３回経口提供する場合、肝組織のヘマトキシリン及びエオシン（Ｈ＆Ｅ）染色結果を示す。
【図１６−ａ】マウスにおいて、ブレオマイシン−誘発された肺線維症に対する実施例２の効果を示す図面であって、人工胃液剤形（ビヒクル）中に溶解された実施例２（５、１０または２０ｍｇ／ｋｇ）をマウスに第７日から２週間１週５回経口提供する場合、肺におけるａ−ＳＭＡ及びフィブロネクチン蛋白質の水準を示す。
【図１６−ｂ】マウスにおいて、ブレオマイシン−誘発された肺線維症に対する実施例２の効果を示す図面であって、人工胃液剤形（ビヒクル）中に溶解された実施例２（５、１０または２０ｍｇ／ｋｇ）をマウスに第７日から２週間１週５回経口提供する場合、肺組織のヘマトキシリン及びエオシン（Ｈ＆Ｅ）染色結果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００３０】
表１は、実施例１から１３９の構造及び１Ｈ ＮＭＲ及びＭＳスペクトルデータを示す図面である。
表２は、実施例１４０から１５３の構造及び１Ｈ ＮＭＲ及びＭＳスペクトルデータを示す図面である。
表３は、ＡＬＫ５キナーゼリン酸化に対する選択された実施例のＩＣ５０値を示す図面である。
表４は、多様なキナーゼリン酸化に対する実施例２のＩＣ５０値または抑制％を示す図面である。
表５は、ＢＤＬラットにおいて、体重及び器官重量の変化に対する実施例３の効果を示す図面である。
表６は、ＢＤＬラットにおいて、体重及び器官重量の変化に対する実施例２の効果を示す図面である。
【００３１】
本発明の具体例として、下記化学式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。
【００３２】
【化２】
2013533252.tif 000004
【００３３】
（式中、
それぞれのＲａは独立してＨ、ハロ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、Ｃ３−６シクロアルキル、ＯＨ、−Ｏ−Ｃ１−６アルキル、−Ｏ−Ｃ１−６ハロアルキル、−Ｏ−Ｃ３−６シクロアルキル、ＮＨ２、−ＮＨ−Ｃ１−６アルキル、−ＮＨ−Ｃ１−６ハロアルキル、−ＮＨ−Ｃ３−６シクロアルキル、−Ｓ−Ｃ１−６アルキル、−Ｓ−Ｃ１−６ハロアルキル、−Ｓ−Ｃ３−６シクロアルキル、ＣＮ、またはＮＯ２であり；
ｍは０，１，２，３または４であり；
Ａ１及びＡ２のうち１つはＮで、他の１つはＮＲ１であり、ここでＲ１はＨ、ＯＨ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、またはＣ３−６シクロアルキルであり；
Ｘは結合、−（ＣＨ２）ｐ−、−ＮＲ２−、−Ｏ−または−Ｓ−であり、ここでｐは０または１で、Ｒ２はＨまたはＣ１−３アルキルであり；
それぞれのＲｂは独立してＨ、ハロ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、Ｃ３−６シクロアルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、−（ＣＨ２）ｑ−ＯＲ３、−（ＣＨ２）ｑ−ＮＲ３Ｒ４、−（ＣＨ２）ｑ−ＳＲ３、−（ＣＨ２）ｑ−ＮＯ２、−（ＣＨ２）ｑ−ＣＯＮＨＯＨ、−（ＣＨ２）ｑ−ＣＮ、−（ＣＨ２）ｑ−ＣＯＲ３、−（ＣＨ２）ｑ−ＣＯ２Ｒ３、−（ＣＨ２）ｑ−ＣＯＮＲ３Ｒ４、−（ＣＨ２）ｑ−テトラゾール、−（ＣＨ２）ｑ−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＮ、−（ＣＨ２）ｑ−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＯ２Ｒ３、−（ＣＨ２）ｑ−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＯＮＲ３Ｒ４、−（ＣＨ２）ｑ−ＣＨ＝ＣＨ−テトラゾール、−（ＣＨ２）ｑ−ＮＨＣＯＲ３、−（ＣＨ２）ｑ−ＮＨＣＯ２Ｒ３、−（ＣＨ２）ｑ−ＣＯＮＨＳＯ２Ｒ３、−（ＣＨ２）ｑ−ＮＨＳＯ２Ｒ３、−（ＣＨ２）ｑ−Ｃ≡Ｃ−ＣＮ、−（ＣＨ）ｑ−Ｃ≡Ｃ−ＣＯ２Ｒ３、−（ＣＨ２）ｑ−Ｃ≡Ｃ−ＣＯＮＲ３Ｒ４、−（ＣＨ２）ｑ−Ｃ≡Ｃ−テトラゾール、−（ＣＨ２）ｑ−ＳＯＲ５、−（ＣＨ２）ｑ−ＳＯ２Ｒ５、または−（ＣＨ２）ｒ−（ＯＲ３）２であり、ここでＲ３及びＲ４は独立してＨ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、またはＣ３−６シクロアルキルであるか、またはこれらが結合された窒素原子と共にモノ−サイクリック環、例えばイミダゾール、ピロリジン、ピペリジン、モルホリン、ピペラジン及びホモピペラジンを形成し；Ｒ５はＣ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、またはＣ３−６シクロアルキルであり；ｑは０，１，２，３または４であり；ｒは１，２，３または４であり；
ｎは０，１，２，３，４または５である。）
【００３４】
本発明で用いられるように、化学式Ｉの点線により表示される二重結合は、本発明の範囲に属する化合物の可能な互変異性環を示し、前記二重結合は非置換の窒素である。
【００３５】
好ましくは、ＲａはＣ１−３アルキルまたはハロである。
好ましくは、ｍは１または２である。
好ましくは、Ａ１及びＡ２のうち１つはＮで、他の１つはＮＲ１であり、ここでＲ１はＨである。
好ましくは、Ｘは−（ＣＨ２）ｐ−または−ＮＲ２−であり、ここでｐは０で、Ｒ２はＨである。
好ましくは、Ｒｂはハロ、Ｃ１−３アルキル、Ｃ１−３ハロアルキル、Ｃ３−４シクロアルキル、Ｃ２−４アルケニル、Ｃ２−４アルキニル、−（ＣＨ２）ｑ−ＯＲ３、−（ＣＨ２）ｑ−ＮＲ３Ｒ４、−（ＣＨ２）ｑ−ＳＲ３、−（ＣＨ２）ｑ−ＣＮ、−（ＣＨ２）ｑ−ＣＯＲ３、−（ＣＨ２）ｑ−ＣＯ２Ｒ３、−（ＣＨ２）ｑ−ＣＯＮＲ３Ｒ４、−（ＣＨ２）ｑ−ＮＨＣＯＲ３、−（ＣＨ２）ｑ−ＮＨＳＯ２Ｒ３、−（ＣＨ２）ｑ−ＳＯＲ５、または−（ＣＨ２）ｑ−ＳＯ２Ｒ５であり、ここでＲ３及びＲ４は独立してＨ、Ｃ１−３アルキル、Ｃ１−３ハロアルキル、またはＣ３−４シクロアルキルであるか；またはこれらが結合された窒素原子と共にモノ−サイクリック環、例えばイミダゾール、ピロリジン、ピペリジン、モルホリン、ピペラジン及びホモピペラジンを形成し；Ｒ５はメチルであり；ｑは０、１または２である。
好ましくは、ｎは１、２または３である。
【００３６】
本発明の具体的な化合物は下記の化合物及びこれらの薬学的に許容可能な塩を含む：
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）アニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−２−フルオロアニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−３−フルオロアニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−４−フルオロアニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−２，３−ジフルオロアニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−３，４−ジフルオロアニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−３，５−ジフルオロアニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−２−クロロアニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−３−クロロアニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−４−クロロアニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−２，３−ジクロロアニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−３，４−ジクロロアニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−３，５−ジクロロアニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−２−ブロモアニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−３−ブロモアニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−４−ブロモアニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−２−メチルアニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−３−メチルアニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−４−メチルアニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−２，３−ジメチルアニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−３，４−ジメチルアニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−３，５−ジメチルアニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−２−エチルアニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−３−エチルアニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−２−イソプロピルアニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−３−イソプロピルアニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−４−イソプロピルアニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−２−ビニルアニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−３−ビニルアニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−４−ビニルアニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−３−エチルアニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−２−メトキシアニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−３−メトキシアニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−４−メトキシアニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−２，３−ジメトキシアニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−３，４−ジメトキシアニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−３，５−ジメトキシアニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−２−（メトキシメチル）アニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−３−（メトキシメチル）アニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−４−（メトキシメチル）アニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−２−（トリフルオロメトキシ）アニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−３−（トリフルオロメトキシ）アニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−４−（トリフルオロメトキシ）アニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−２−（メチルチオ）アニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−３−（メチルチオ）アニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−４−（メチルチオ）アニリン；
２−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチルアミノ）ベンゾニトリル；
３−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチルアミノ）ベンゾニトリル；
４−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチルアミノ）ベンゾニトリル；
３−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチルアミノ）フタロニトリル；
２−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチルアミノ）ベンズアミド；
３−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチルアミノ）ベンズアミド；
４−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチルアミノ）ベンズアミド；
２−（３−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチルアミノ）フェニル）アセトニトリル；
２−（４−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチルアミノ）フェニル）アセトニトリル；
１−（３−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチルアミノ）フェニル）エタノン；
１−（４−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチルアミノ）フェニル）エタノン；
メチル３−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチルアミノ）ベンゾエート；
メチル４−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチルアミノ）ベンゾエート；
Ｎ−（２−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチルアミノ）フェニル）アセトアミド；
Ｎ−（３−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチルアミノ）フェニル）アセトアミド；
Ｎ−（４−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチルアミノ）フェニル）アセトアミド；
Ｎ−（２−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチルアミノ）フェニル）メタンスルホンアミド；
Ｎ−（３−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチルアミノ）フェニル）メタンスルホンアミド；
Ｎ−（４−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチルアミノ）フェニル）メタンスルホンアミド；
Ｎ１−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−Ｎ２、Ｎ２−ジメチルベンゼン−１，２−ジアミン；
Ｎ１−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−Ｎ３、Ｎ３−ジメチルベンゼン−１，３−ジアミン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−２−（ピロリジン−１−イル）アニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−２−モルホリノアニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−３−モルホリノアニリン；
Ｎ３−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−４−フルオロ−Ｎ１、Ｎ１−ジメチルベンゼン−１，３−ジアミン；
３−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチルアミノ）−５−（ジメチルアミノ）ベンゾニトリル；
３−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチルアミノ）−４−（ジメチルアミノ）ベンゾニトリル；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−２−（（ジメチルアミノ）メチル）アニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−３−（（ジメチルアミノ）メチル）アニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−２−（ピロリジン−１−イルメチル）アニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−３−（ピロリジン−１−イルメチル）アニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−２−（モルホリノメチル）アニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−３−（モルホリノメチル）アニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−５−（（ジメチルアミノ）メチル）−２−フルオロアニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−３−（（ジメチルアミノ）メチル）−２−フルオロアニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−２−フルオロ−３−（ピロリジン−１−イルメチル）アニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−２−フルオロ−３−（モルホリノメチル）アニリン；
３−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチルアミノ）−４−（（ジメチルアミノ）メチル）ベンゾニトリル；
３−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチルアミノ）−２−（（ジメチルアミノ）メチル）ベンゾニトリル；
３−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチルアミノ）−５−（（ジメチルアミノ）メチル）ベンゾニトリル；
３−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチルアミノ）−４−（ピロリジン−１−イルメチル）ベンゾニトリル；
３−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチルアミノ）−２−（ピロリジン−１−イルメチル）ベンゾニトリル；
３−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチルアミノ）−５−（ピロリジン−１−イルメチル）ベンゾニトリル；
３−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチルアミノ）−４−（モルホリノメチル）ベンゾニトリル；
３−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチルアミノ）−２−（モルホリノメチル）ベンゾニトリル；
３−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチルアミノ）−５−（モルホリノメチル）ベンゾニトリル；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−２−（２−（ジメチルアミノ）エチルアニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−３−（２−（ジメチルアミノ）エチルアニリン；
３−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−エチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチルアミノ）ベンゾニトリル；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−エチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−２−フルオロアニリン；
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−２−フルオロ−Ｎ−メチルアニリン；
３−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）（メチル）アミノ）ベンゾニトリル；
３−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）（メチル）アミノ）ベンズアミド；
６−（２−ベンジル−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン；
６−（２−（２−フルオロベンジル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン；
３−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）ベンゾニトリル；
３−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）ベンズアミド；
６−（５−（６−メチルピリジン−２−イル）−２−（フェノキシメチル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン；
６−（２−（（２−フルオロフェノキシ）メチル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン；
３−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メトキシ）ベンゾニトリル；
３−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メトキシ）ベンズアミド；
６−（５−（６−メチルピリジン−２−イル）−２−（フェニルチオメチル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン；
６−（２−（（２−フルオロフェニルチオ）メチル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン。
【００３７】
本発明の化合物は、通常、一般的に約１，０００ダルトン未満の大きさを有する小さな有機分子（非ペプチド性低分子）である。好ましい非ペプチド性低分子は、約７５０ダルトン未満、より好ましくは約５００ダルトン未満の分子量を有する。
【００３８】
また、化学式Ｉの化合物を患者に投与する際、化学式Ｉの化合物を放出するように考案された「プロドラッグ」の形態で供給することができる。プロドラッグ形態のデザインは、当該分野において公知となっており、化学式Ｉの化合物に含まれた置換体により変わる。例えば、内因性酵素により除去されるまで、または患者の体内の特定受容体または位置に標的化された酵素により除去されるまで前記化合物を生物学的に不活性なものとする担体と、ヒドロキシルを含有する置換体と、を結合させることができる。
【００３９】
本来酸性である化学式Ｉの化合物（例えば、カルボキシルまたはフェノールヒドロキシ基を有する）は、薬学的に許容可能な塩、例えばナトリウム、カリウム、カルシウム、または金塩を形成することができる。薬学的に許容可能なアミン、例えばアンモニア、アルキルアミン、ヒドロキシアルキルアミン、及びＮ−メチルグリカミンと、形成された塩も本発明の範囲内に属する。化学式Ｉの化合物を酸で処理して酸付加塩を形成することができる。上記のような酸の例は、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、メタンスルホン酸、リン酸、ｐ−ブロモフェニルスルホン酸、炭酸、コハク酸、クエン酸、安息香酸、シュウ酸、マロン酸、サリチル酸、リンゴ酸、フマル酸、アスコルビン酸、マレイン酸、酢酸、及び当該分野の技術者にとって公知となった他の無機及び有機酸を含む。前記酸付加塩は、遊離塩基形態の化学式Ｉの化合物を酸付加塩（例えば、塩化水素塩）の生成に十分な量の酸（例えば、塩酸）で処理することにより製造することができる。前記酸付加塩は、適切に薄い塩基性水溶液（例えば、水酸化ナトリウム、重炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、またはアンモニア）で処理することにより、再び遊離塩基に転換させることができる。
【００４０】
本発明の化合物の一部は、水性及び有機溶媒のような溶媒から結晶化または再結晶化することができる。上記のような場合、溶媒和物が形成される。本発明は、その範囲内に凍結乾燥のような工程により生成される可変量の水を含有する化合物だけでなく、水和物を含む化学量論的溶媒和物を含む。
【００４１】
化学式Ｉの化合物は、１つ以上の非対称中心を含有でき、そのため、鏡像異性体または部分立体異性体として存在し得る。本発明が化学式Ｉの化合物の混合物及び別途の個別異性体をいずれも含むことは当然のことである。また、アルケニル基を含有する化学式Ｉのいくつかの化合物は、シス−またはトランス−異性体として存在し得る。それぞれの場合、本発明は、混合物及び別途の個別異性体をいずれも含む。
【００４２】
また、化学式Ｉの化合物は互変異性体型でも存在し得、本発明は、これらの混合物及び別途の個別の互変異性体を両方とも含む。
また、生物学的な研究に適した化学式Ｉの化合物に放射性が表示された誘導体も本発明に含まれる。
【００４３】
本発明において、「アルキル」基は、炭素数１〜６の飽和脂肪族炭化水素基を称する。アルキル基は、直鎖または分岐鎖でもある。アルキル基の例としては、制限されることはないが、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、第２級ブチル、第３級ブチル、ｎ−ペンチル、及びｎ−ヘキシルがある。アルキル基は、１つ以上の置換体、例えばアルコキシ、シクロアルコキシ、アミノ、ニトロ、カルボキシ、シアノ、ハロ、ヒドロキシ、スルホ、またはメルカプトにより任意に置換させることができる。
本発明において、「シクロアルキル」基は、炭素数３〜６の脂肪族炭素環を称する。シクロアルキル基の例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、及びシクロヘキシルがある。
【００４４】
本発明において、「ハロアルキル基」は、１つ以上のハロゲン原子を含有するアルキル基を称する。ハロアルキル基の例としては、フルオロメチル、クロロメチル、ブロモメチル、及びトリフルオロメチルを含む。
本発明において、「ハロ基」は、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素を称する。
【００４５】
本発明において、「アルケニル基」は、炭素数２〜６及び１つ以上の二重結合を含有する脂肪族炭素基を称する。アルキル基と同様に、アルケニル基は直鎖または分岐鎖でもある。アルケニル基の例としては、制限されることなく、ビニル、アリル、イソプレニル、２−ブテニル、及び２−ヘキセニルを含む。アルケニル基を１つ以上の置換体、例えばアルコキシ、シクロアルコキシ、アミノ、ニトロ、カルボキシ、シアノ、ハロ、ヒドロキシ、スルホ、またはメルカプトにより任意に置換させることができる。
【００４６】
本発明において、「アルキニル基」は、炭素数２〜６及び１つ以上の三重結合を含有する脂肪族炭素基を称する。アルキニル基は直鎖または分岐鎖でもある。アルキニル基の例としては、制限されることはないが、エチニル、プロパルギル、及びブチニルを含む。アルキニル基を１つ以上の置換体、例えばアルコキシ、シクロアルコキシ、アミノ、ニトロ、カルボキシ、シアノ、ハロ、ヒドロキシ、スルホ、またはメルカプトにより任意に置換させることができる。
【００４７】
本発明において、「ＡＬＫ５及び／またはＡＬＫ４抑制剤」は、ｐ３８または第ＩＩ型受容体より優先的にＡＬＫ５及び／またはＡＬＫ４受容体を選択的に抑制する、抑制性スマッド、例えばスマッド６及びスマッド７以外の化合物を称する。
本発明において、「ＡＬＫ５及び／またはＡＬＫ４−媒介疾患状態」は、ＡＬＫ５及び／またはＡＬＫ４により媒介（または調節）される任意の疾患状態、例えばＴＧＦ−β及び／またはアクチビンの信号伝達経路でスマッド２及びスマッド３のリン酸化を抑制することにより調節される疾患を称する。
本発明において、「潰瘍」は、制限されることはないが、糖尿性潰瘍、慢性潰瘍、胃潰瘍、及び十二指腸潰瘍を含む。
化学式Ｉの化合物は、商業的に利用可能なまたは公知の出発物質から多くの公知の方法により製造され得る。出発物質が商業的な利用可能でなければ、当該分野で公知となった方法により製造され得る。
【００４８】
【化３】
2013533252.tif 000005
【００４９】
１つの方法で、Ａ１がＮで、Ａ２がＮＨであるか、またはＡ１がＮＨで、Ａ２がＮであり、Ｘが−ＮＨ−である化学式Ｉの化合物を反応式１に従って製造する。具体的に、Ｒａ−置換されたピリジン−２−カルバルデヒドＩＩをアニリン及びジフェニルホスフェートと反応させてＮ，Ｐ−アセタールＩＩＩを提供し、これを［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−カルバルデヒドとさらに結合させた後、酸性条件下で加水分解させてモノケトンＩＶを生成する。前記モノケトンＩＶをＤＭＳＯ内でＨＢｒによりジケトンＶに酸化させることもできる。前記ジケトンＶをアンモニウムアセテートの存在下で２，２−ジメトキシアセトアルデヒドと縮合してアセタール−保護されたイミダゾールＶＩを提供し、これを酸性条件下で加水分解させてイミダゾール−２−カルバルデヒドＶＩＩを生成させることができる。前記イミダゾール−２−カルバルデヒドＶＩＩを酢酸のような酸の存在下でＲｂ−置換されたアニリンＶＩＩＩと結合させてイミンを生成し、これを還元剤、例えば水素化ホウ素ナトリウムまたはナトリウムトリアセトキシボロヒドリドによりさらに還元させて化学式Ｉの化合物を提供することができる。Ｒａ、Ｒｂ、ｍ及びｎは上記の通り定義される。
【００５０】
【化４】
2013533252.tif 000006
【００５１】
また、他の方法で、Ａ１がＮで、Ａ２がＮＨであるか、またはＡ１がＮＨで、Ａ２がＮであり、Ｘが−（ＣＨ２）ｐ−、−ＮＲ２−、−Ｏ−または−Ｓ−であり、ここでｐが０または１であり、Ｒ２がＣ１−３アルキルである化学式Ｉの化合物を反応式２に従って製造する。ジケトンＶをアンモニウムアセテートの存在下で適したＲｂ−置換されたアルデヒドＩＸと縮合させて化学式Ｉの化合物を提供することができる。Ｒａ、Ｒｂ、ｍ及びｎは上記の通り定義される。
【００５２】
【化５】
2013533252.tif 000007
【００５３】
一方、化学式ＩのＲｂ化合物が−（ＣＨ２）ｑ−ＣＮ、−（ＣＨ２）ｑ−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＮ、または−（ＣＨ２）ｑ−Ｃ≡Ｃ−ＣＮである場合、前記化合物を反応式３に示すようにさらに作用させて化学式Ｉの化合物を形成することができる。Ｒａ、Ｒ３、Ｒ４、Ｘ、ｍ及びｑは上記の通り定義される。
化学式Ｉ〜ＩＸで表される本発明の生成化合物を適切な通常の方法、例えばカラムクロマトグラフィ及び再結晶化により分離及び精製することができる。
本発明の化合物を任意の適切な経路、例えば経口、口腔、舌下、直腸、膣、鼻腔、局所または非経口（静脈内、筋肉内、皮下及び冠状動脈内を含む）投与により投与することができる。
【００５４】
本発明の局所製剤は、例えば、軟膏、クリームやローション、眼軟膏剤及び点眼液または点耳液、薬品含浸ドレッシング及びエアロゾルの形態で提供でき、これは適切な通常の添加剤、例えば防腐剤、薬品浸透を助ける溶媒または軟膏とクリームでの軟化剤を含有することができる。
【００５５】
また、前記製剤は、相溶性の通常の担体、例えばクリームまたは軟膏ベース及びローション用エタノールまたはオレイルアルコールを含有することができる。上記のような担体は、前記製剤の約１％〜約９８％を提供することもできる。さらに好ましくは、前記担体は前記製剤の約８０％を形成することができる。
前記定義された疾患の治療または予防学的な治療としてヒトに投与するために、化学式Ｉの化合物の経口、口腔または舌下投与量は、通常、平均的な成人患者（７０ｋｇ）に対して５０〜５０００ｍｇ／日の範囲である。したがって、典型的な成人患者の場合、個別錠剤またはカプセルは、１日１回または数回、単一または数回容量で投与するために、適切な薬学的に許容可能なビヒクルまたは担体内で２５〜５００ｍｇの活性化合物を含有する。非経口投与時の投与量は、通常、必要に応じて単一容量当たり２５〜２５０ｍｇの範囲内である。実際に、医者がそれぞれの患者に最も適当な実際投与量を決定し、これは特定患者の年令、体重及び反応による。前記投与量は、平均的な場合の例示したものであり、投与量は、個別的な状況に応じてより高いか、より低いこともあり、これは本発明の範囲に属する。
【００５６】
ヒトに適用する場合、化学式Ｉの化合物を単独で投与することができるが、一般的には、所望の投与経路及び標準薬学慣行を考慮して選択された薬学担体と混合して投与する。例えば、前記化合物は、澱粉またはラクトースのようなビヒクルを含有する錠剤の形態で、または単独またはビヒクルとの混合物としてカプセルまたは膣挫剤の中に、または風味剤または着色剤を含有するエリキシル剤または懸濁液の形態で経口、口腔または舌下に投与することができる。上記のような液体製剤は、薬学的に許容可能な添加剤、例えば懸濁剤（メチルセルロース、半合成グリセリド、ウィテプソルまたはグリセリドの混合物、杏仁油及びＰＥＧ−６エステルの混合物またはＰＥＧ−８及びカプリル酸／カプリン酸グリセリドの混合物）を使用して製造することができる。また、化合物を非経口的に、例えば静脈内、筋肉内、皮下、または冠状動脈内に注射することもできる。非経口投与の場合、前記化合物を他の物質、例えば溶液を血液と等張性を形成するための塩、または単糖類、例えばマンニトールまたはグルコースを含有することもできる滅菌水溶液の形態で使用することが最も好ましい。
【００５７】
したがって、本発明は、また他の態様で、化学式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容可能な塩または溶媒和物をその薬学的に許容可能な希釈剤または担体と共に含む薬学組成物を提供する。
【００５８】
また、本発明は、治療に使用するための化学式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容可能な塩または溶媒和物、またはこれらを含む薬学組成物を提供する。
本発明は、哺乳類において、前記ＡＬＫ５及び／またはＡＬＫ４受容体により媒介される疾病の治療のための薬剤を製造するための化学式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容可能な塩または溶媒和物、またはこれらを含む薬学組成物の用途をさらに提供する。
ＡＬＫ５及び／またはＡＬＫ４により媒介される疾患状態は、制限されることはないが、糸球体腎炎、糖尿病性網膜症、ループス腎炎、高血圧による腎臓病、間質性腎線維症、薬による合併症から発生する腎線維症、ＨＩＶと関連した腎臓病、移植腎臓病、全ての病因による肝線維症、感染による肝臓の機能障害、酒による肝炎、胆道系疾患、嚢胞性線維症、肺線維症、間質性肺疾患、急性肺傷害、成人呼吸窮迫症候群、特発性肺線維症、慢性閉塞性肺疾患、感染因子または毒性因子による肺疾患、心筋梗塞後の心臓線維症、うっ血性心不全、拡張型心筋症、心筋炎、血管内膜の厚膜化、血管狭窄症、高血圧による血管再形成、肺動脈高血圧、冠状再狭窄症、末梢血管再狭窄症、頚動脈再狭窄症、ステントによる再狭窄症、アテローム性動脈硬化症、眼球損傷、角膜損傷、増殖性硝子体網膜症、緑内障、眼内圧、外傷または手術での傷を治療する間に発生する真皮への過度または肥厚性瘢痕またはケロイドの形成、腹膜及び皮下狭窄、強皮症、線維性硬化症、全身性進行性硬化症、皮膚筋炎、多発性筋炎、関節炎、骨粗しょう症、潰瘍、損傷した神経機能、男性の勃起不全、ペイロニー病、デュピュイトラン拘縮、アルツハイマー病、レイノー症候群、放射線による線維症、血栓症、腫瘍の転移性成長、多発性骨髄腫、黒色腫、神経膠腫、膠芽細胞腫、白血病、肉腫、平滑筋腫、中皮腫、及び肺、乳房、結腸、腎臓、卵巣、頸部、肝、胆道、胃腸管、膵臓、前立腺、頭頸部の癌腫を含む。
【００５９】
本発明は、ヒトにおいて、ＴＧＦ−β及び／またはアクチビンの信号伝達経路を抑制する、例えば、ＡＬＫ５及び／またはＡＬＫ４によるスマッド２またはスマッド３のリン酸化を抑制する方法をさらに提供する。
本発明は、ＴＧＦ−β及び／またはアクチビンの信号伝達経路を抑制することにより、例えばＡＬＫ５及び／またはＡＬＫ４によるスマッド２またはスマッド３のリン酸化を抑制することにより、ヒトにおける過剰の細胞外基質の蓄積を減少させる方法をさらに提供する。
【００６０】
本発明は、ＴＧＦ−βの信号伝達経路を抑制することにより、ヒトにおいて腫瘍細胞の転移を治療、予防、または減少させる方法をさらに提供する。
本発明は、ＴＧＦ−βの信号伝達経路を抑制することにより、ヒトにおいてＴＧＦ−βの過剰発現により媒介される癌腫を治療、予防、また減少させる方法をさらに提供する。
本発明は、ＴＧＦ−βの信号伝達経路を抑制することにより、ヒトにおいて脈管損傷を治療、予防、または減少させる方法をさらに提供する。
【００６１】
本発明は、下記の実施例により詳細に説明するが、これら実施例により特許請求の範囲に開示している発明の範囲を制限することはない。実施例において、電気噴霧イオン化質量スペクトル（ＥＳＩ−ＭＳ）は、Ｑ−Ｔｏｆ２質量分光計（マイクロマス（Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ）社製、英国、マンチェスター所在）を用いて得た。
【００６２】
実施例
製造実施例１
ジフェニル（６−メチルピリジン−２−イル）（フェニルアミノ）メチルホスホン酸（Ｒａ＝ＣＨ３である化学式ＩＩＩの化合物）の製造
６−メチルピリジン−２−カルボキシアルデヒド（２．１２ｇ、１７．５０ｍｍｏｌ）、アニリン（１．６３ｇ、１７．５０ｍｍｏｌ）、ジフェニルホスフェート（４．９２ｇ、２１．００ｍｍｏｌ）及び塩化酸化ジルコニウム八水和物（０．５６ｇ、１．７５ｍｍｏｌ）の混合物を室温で１時間撹拌した。前記反応混合物をＣＨ２Ｃｌ２（３×５０ｍｌ）で抽出し、前記ＣＨ２Ｃｌ２溶液を水（２×２０ｍｌ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させて濾過し、減圧下で蒸発乾燥させた。残渣はＥｔＯＡｃ及びヘキサンの混合物を溶出剤として用いてシリカゲル上でＭＰＬＣにより精製させて白色固体の標題の化合物（６．９６ｇ、９２％）を提供した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ７．５１（ｔ、１Ｈ、Ｊ＝７．８Ｈｚ）、７．３８（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝７．６、２．０Ｈｚ）、７．２７−７．２２（ｍ、４Ｈ）、７．１９−７．１５（ｍ、２Ｈ）、７．１４−７．０７（ｍ、４Ｈ）、７．０５−７．０２（ｍ、３Ｈ）、６．８０−６．７４（ｍ、３Ｈ）、５．５３（ｐｓｅｕｄｏ ｔ、１Ｈ、Ｊ＝７．４Ｈｚ）、５．３６（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝２１．０、８．２Ｈｚ）、２．５４（ｓ、３Ｈ）
【００６３】
製造実施例２
ジフェニル（６−エチルピリジン−２−イル）（フェニルアミノ）メチルホスホン酸（Ｒａ＝ＣＨ２ＣＨ３である化学式ＩＩＩの化合物）の製造
標題の化合物を、６−メチルピリジン−２−カルボキシアルデヒドの代わりに６−エチルピリジン−２−カルボキシアルデヒドを使用して製造実施例１と同様に製造した。収率：８１％；
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ７．５５（ｔ、１Ｈ、Ｊ＝７．６Ｈｚ）、７．３８（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝７．６、２．０Ｈｚ）、７．２６−７．０９（ｍ、８Ｈ）、７．０７−７．００（ｍ、５Ｈ）、５．５９（ｐｓｅｕｄｏ ｔ、１Ｈ、Ｊ＝７．０Ｈｚ）、５．３４（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝２０．８、８．０Ｈｚ）、２．８２（ｑ、２Ｈ、Ｊ＝７．６Ｈｚ）、１．２８（ｔ、３Ｈ、Ｊ＝７．６Ｈｚ）
【００６４】
製造実施例３
２−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−１−（６−メチルピリジン−２−イル）エタノン（Ｒａ＝ＣＨ３である化学式ＩＶの化合物）の製造
ＴＨＦ（４０ｍｌ）及びｉ−ＰｒＯＨ（１０ｍｌ）の混合物において、［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−カルバルデヒド（２．５０ｇ、１７．０１ｍｍｏｌ）（ＷＯ ０３／０８７３０４ Ａ２に記載した方法で製造）と、ジフェニル（６−メチルピリジン−２−イル）（フェニルアミノ）メチルホスホン酸（７．３２ｇ、１７．０１ｍｍｏｌ）が撹拌された溶液にＣｓ２ＣＯ３（７．２０ｇ、２２．１１ｍｍｏｌ）を加え、前記混合物を室温で一晩撹拌した。３Ｎ ＨＣｌ（２５ｍｌ）溶液を反応混合物に滴加し、前記混合物を１時間撹拌した。これを第３級−ブチルメチルエーテル（４０ｍｌ）で希釈させ、１Ｎ ＨＣｌ（２×３５ｍｌ）で抽出した。水性抽出物をｐＨ７〜８に到達する時まで５０％ＫＯＨで中和させた。沈殿物を濾過により回収し、水で洗浄し、真空下でＰ２Ｏ５上で乾燥させて灰色固体の標題の化合物（３．４１ｇ、８０％）を提供した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ８．６１（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝０．８Ｈｚ）、８．３１（ｓ、１Ｈ）、７．８８（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝７．６、１．６Ｈｚ）、７．７３（ｔ、１Ｈ、ｏｖｅｒｌａｐｐｅｄ、Ｊ＝７．６Ｈｚ）、７．７１（ｄｄ、１Ｈ、ｏｖｅｒｌａｐｐｅｄ、Ｊ＝９．２、０．８Ｈｚ）、７．５４（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝９．２、１．６Ｈｚ）、７．３７（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝７．６、１．６Ｈｚ）、４．６２（ｓ、２Ｈ）、２．６７（ｓ、３Ｈ）
【００６５】
製造実施例４
２−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−１−（６−エチルピリジン−２−イル）エタノン（Ｒａ＝ＣＨ２ＣＨ３である化学式ＩＶの化合物）の製造
標題の化合物を、ジフェニル（６−メチルピリジン−２−イル）（フェニルアミノ）メチルホスホン酸の代わりにジフェニル（６−エチルピリジン−２−イル）（フェニルアミノ）メチルホスホン酸を使用して製造実施例３と同様に製造した。収率：７８％；
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ８．６１（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝１．６、０．８Ｈｚ）、８．２９（ｓ、１Ｈ）、７．８８（ｂｒ ｄ、１Ｈ、Ｊ＝７．６Ｈｚ）、７．７４（ｔ、１Ｈ、Ｊ＝７．６Ｈｚ）、７．７０（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝９．２、０．８Ｈｚ）、７．５４（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝９．２、１．６Ｈｚ）、７．３７（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝７．６、０．８Ｈｚ）、４．６２（ｓ、２Ｈ）、２．９３（ｑ、２Ｈ、Ｊ＝７．６Ｈｚ）、１．３９（ｔ、３Ｈ、Ｊ＝７．６Ｈｚ）
【００６６】
製造実施例５
２−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−２−（６−メチルピリジン−２−イル）エタン−１，２−ジオン（Ｒａ＝ＣＨ３である化学式Ｖの化合物）の製造
ＤＭＳＯ（４８ｍｌ）において、２−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−１−（６−メチルピリジン−２−イル）エタノン（６．２０ｇ、２４．５７ｍｍｏｌ）が撹拌された懸濁液に０℃でＨＢｒ（水中４８重量％、５．９６ｇ、１２．４ｍｌ）を滴加し、前記混合物を６０〜７０℃で加熱した。２時間後、反応混合物を０℃に冷却させ、氷水（２０ｍｌ）に注ぎ、固体Ｋ２ＣＯ３でｐＨ１０に塩基性化した。前記混合物をＣＨＣｌ３（２×２５０ｍｌ）で抽出し、有機層を水（２×１００ｍｌ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させて濾過し、減圧下で蒸発乾燥させた。残渣はＭｅＯＨ及びＣＨ２Ｃｌ２の混合物を溶出剤として用いてシリカゲル上でＭＰＬＣにより精製させ、明るい黄色固体の標題の化合物（６．０２ｇ、９２％）を提供した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ９．１１（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝１．６、１．２Ｈｚ）、８．４７（ｓ、１Ｈ）、８．１４（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝９．２、１．６Ｈｚ）、８．０４（ｂｒ ｄ、１Ｈ、Ｊ＝７．６Ｈｚ）、７．８８（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝９．２、１．２Ｈｚ）、７．８４（ｔ、１Ｈ、Ｊ＝７．８Ｈｚ）、７．４２（ｂｒ ｄ、１Ｈ、Ｊ＝８．０Ｈｚ）、２．４９（ｓ、３Ｈ）
【００６７】
製造実施例６
２−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−２−（６−エチルピリジン−２−イル）エタン−１，２−ジオン（Ｒａ＝ＣＨ２ＣＨ３である化学式Ｖの化合物）の製造
標題の化合物を、２−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−１−（６−メチルピリジン−２−イル）エタノンの代わりに２−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−１−（６−エチルピリジン−２−イル）エタノンを使用して製造実施例５と同様に製造した。収率：７９％；
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ９．１１（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝１．６、０．８Ｈｚ）、８．４２（ｓ、１Ｈ）、８．０８（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝９．２、１．６Ｈｚ）、７．９８（ｂｒ ｄ、１Ｈ、Ｊ＝７．６Ｈｚ）、７．８３（ｄｄ、１Ｈ、ｏｖｅｒｌａｐｐｅｄ、Ｊ＝９．２、０．８Ｈｚ）、７．８２（ｔ、１Ｈ、ｏｖｅｒｌａｐｐｅｄ、Ｊ＝７．６Ｈｚ）、７．３８（ｂｒ ｄ、１Ｈ、Ｊ＝７．６Ｈｚ）、２．７１（ｑ、２Ｈ、Ｊ＝７．６Ｈｚ）、１．０８（ｔ、３Ｈ、Ｊ＝７．６Ｈｚ）
【００６８】
製造実施例７
６−（２−（ジメトキシメチル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン（Ｒａ＝ＣＨ３である化学式ＶＩの化合物）の製造
第３級−ブチルメチルエーテル（１２０ｍｌ）において、１−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−２−（６−メチルピリジン−２−イル）エタノン−１，２−ジオン（６．００ｇ、２２．４９ｍｍｏｌ）が撹拌された溶液をグリオキサルジメチルアセタール（水中６０重量％溶液、７．８ｍｌ、４４．９８ｍｍｏｌ）で処理した。ＭｅＯＨ（６０ｍｌ）中のＮＨ４ＯＡｃ（４．３３ｇ、５６．２ｍｍｏｌ）を前記溶液に加え、生成混合物を室温で３時間撹拌した。前記反応のｐＨを飽和された水性ＮａＨＣＯ３溶液で８に調節した。反応混合物をＣＨＣｌ３（２×１５０ｍｌ）で抽出し、前記ＣＨＣｌ３溶液を水（１００ｍｌ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させて濾過し、減圧下で蒸発乾燥させた。残渣はＭｅＯＨ及びＣＨ２Ｃｌ２の混合物を溶出剤として用いてシリカゲル上でＭＰＬＣにより精製させ、明るい黄色フォームとして標題の化合物（６．１３ｇ、７８％）を提供した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ１０．５４（ｂｒ ｓ、１Ｈ）、８．９６（ｓ、１Ｈ）、８．３６（ｓ、１Ｈ）、７．８２（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝９．２、１．６Ｈｚ）、７．７７（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝９．２、０．８Ｈｚ）、７．４７（ｔ、１Ｈ、Ｊ＝７．８Ｈｚ）、７．２３（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝７．６Ｈｚ）、７．０４（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝８．０Ｈｚ）、５．５７（ｓ、１Ｈ）、３．４８（ｓ、６Ｈ）、２．５８（ｓ、３Ｈ）
【００６９】
製造実施例８
６−（２−（ジメトキシメチル）−５−（６−エチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン（Ｒａ＝ＣＨ２ＣＨ３である化学式ＶＩの化合物）の製造
標題の化合物を、１−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−２−（６−メチルピリジン−２−イル）エタノン−１，２−ジオンの代わりに１−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−２−（６−エチルピリジン−２−イル）エタノン−１，２−ジオンを使用して製造実施例７と同様に製造した。収率：６８％。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ１０．６７（ｂｒ ｓ、１Ｈ）、８．９７（ｂｒ ｓ、１Ｈ）、８．３５（ｓ、１Ｈ）、７．８３（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝９．２、１．６Ｈｚ）、７．７６（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝９．２、０．８Ｈｚ）、７．５０（ｔ、１Ｈ、Ｊ＝７．８Ｈｚ）、７．２５（ｂｒ ｄ、１Ｈ、Ｊ＝７．６Ｈｚ）、７．０５（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝８．０Ｈｚ）、５．５６（ｓ、１Ｈ）、３．４６（ｓ、６Ｈ）、２．８３（ｑ、２Ｈ、Ｊ＝７．６Ｈｚ）、１．３１（ｔ、３Ｈ、Ｊ＝７．６Ｈｚ）
【００７０】
製造実施例９
４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−カルバルデヒド（Ｒａ＝ＣＨ３である化学式ＶＩＩの化合物）の製造
６−（２−（ジメトキシメチル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン（６．００ｇ、１７．１２ｍｍｏｌ）を１Ｎ ＨＣｌ（１２０ｍｌ）に溶解させ、前記混合物を７０℃で３時間加熱した。反応混合物を０℃に冷却させ、これを飽和された水性ＮａＨＣＯ３溶液で中和させた。前記混合物をＣＨＣｌ３（３×２００ｍｌ）中の１０％ＭｅＯＨで抽出し、有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させて濾過し、減圧下で蒸発乾燥させて明るい黄色固体の標題の化合物（４．６９ｇ、９０％）を提供した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ９．８２（ｓ、１Ｈ）、９．０１（ｂｒ ｓ、１Ｈ）、８．４１（ｓ、１Ｈ）、７．８５（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝９．２、０．８Ｈｚ）、７．８２（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝９．２、１．６Ｈｚ）、７．５５（ｔ、１Ｈ、Ｊ＝７．８Ｈｚ）、７．３３（ｂｒ ｓ、１Ｈ）、７．１６（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝８．０Ｈｚ）、２．６０（ｓ、３Ｈ）
【００７１】
製造実施例１０
４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−エチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−カルバルデヒド（Ｒａ＝ＣＨ２ＣＨ３である化学式ＶＩＩの化合物）の製造
標題の化合物を、６−（２−（ジメトキシメチル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジンの代わりに６−（２−（ジメトキシメチル）−５−（６−エチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジンを使用して製造実施例９と同様に製造した。収率：９９％；
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ９．８６（ｔ、１Ｈ、Ｊ＝１．２Ｈｚ）、９．５９（ｓ、１Ｈ）、８．４３（ｓ、１Ｈ）、８．２１（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝９．２、１．６Ｈｚ）、７．８２（ｂｒ ｄ、１Ｈ、Ｊ＝８．０Ｈｚ）、７．７３（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝９．２、０．８Ｈｚ）、７．６９（ｔ、１Ｈ、Ｊ＝７．８Ｈｚ）、７．０８（ｂｒ ｄ、１Ｈ、Ｊ＝７．６Ｈｚ）、２．７１（ｑ、２Ｈ、Ｊ＝７．６Ｈｚ）、１．１６（ｔ、３Ｈ、Ｊ＝７．６Ｈｚ）
【００７２】
製造実施例１１
３−アミノ−５−（ジメチルアミノ）ベンゾニトリル（Ｒｂ＝３−シアノ−５−ジメチルアミノである化学式ＶＩＩＩの化合物）の製造。前記化合物を下記２段階により製造した。
３−ブロモ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−５−ニトロアニリン（１．７３ｇ、７．０６ｍｍｏｌ）（文献［Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．６０：５０９１−５１０３（２００３）］に記載した方法で製造）、ピリジン（２４ｍｌ）、及びＣｕＣＮ（１．２６ｇ、２．１４ｍｍｏｌ）を乾燥した密閉チューブに加えた。前記混合物を３．５時間撹拌しながら２２０℃で加熱した。反応混合物を１００℃に冷却させ、水性アンモニア（１００ｍｌ）及び水（１００ｍｌ）の混合物を含有するフラスコに注ぎ、ＥｔＯＡｃ（２×１００ｍｌ）で抽出した。前記ＥｔＯＡｃ溶液を、希釈したアンモニア溶液（１００ｍｌ）、水（１００ｍｌ）及び塩水（１００ｍｌ）で連続洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させて濾過し、減圧下で蒸発乾燥させた。残渣はＥｔＯＡｃとヘキサンの混合物を溶出剤として用いてシリカゲル上でＭＰＬＣにより精製させ、オレンジ色固体として３−（ジメチルアミノ）−５−ニトロベンゾニトリル（０．４４ｇ、３３％）を提供した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ７．７４（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝２．０、１．２Ｈｚ）、７．６５（ｔ、１Ｈ、Ｊ＝２．２Ｈｚ）、７．１１（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝２．４、１．２Ｈｚ）、３．１０（ｓ、６Ｈ）
メタノール（８０ｍｌ）中の前記ニトロ化合物、３−（ジメチルアミノ）−５−ニトロベンゾニトリル（０．４２ｇ、２．２２ｍｍｏｌ）を水素気体の雰囲気下の１０％Ｐｄ／Ｃ（０．０４ ｇ）の存在下で一晩水素化させた。反応混合物をセライトパッドを通して濾過し、濾液を減圧下で蒸発乾燥させた。残渣はＥｔＯＡｃ及びヘキサンの混合物を溶出剤として用いてシリカゲル上でＭＰＬＣにより精製させ、茶色の粘性液体として標題の化合物（０．２９ｇ、８０％）を提供した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ６．３５（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝２．４、１．６Ｈｚ）、６．２８（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝２．０、１．６Ｈｚ）、６．１４（ｔ、１Ｈ、Ｊ＝２．２Ｈｚ）、３．７６（ｂｒ ｓ、２Ｈ）、２．９２（ｓ、６Ｈ）
【００７３】
製造実施例１２
３−（（ジメチルアミノ）メチル）−２−フルオロアニリン（Ｒｂ＝３−（ジメチルアミノ）メチル−２−フルオロである化学式ＶＩＩＩの化合物）の製造。前記化合物を商業的に利用可能な２−フルオロ−１−メチル−３−ニトロベンゼンを出発物質として下記３段階により製造した。
【００７４】
ＣＣｌ４（４００ｍｌ）において、２−フルオロ−１−メチル−３−ニトロベンゼン（１５．８０ｇ、１０１．９４ｍｍｏｌ）とＮ−ブロモスクシンイミド（１８．１４ｇ、１０１．９４ｍｍｏｌ）が撹拌された溶液を過酸化ベンゾイル（０．３７ｇ、１．５２ｍｍｏｌ）で処理した。前記混合物を一晩還流温度で加熱し、室温で冷却させた。反応混合物を濾過し、濾液を減圧下で蒸発乾燥させた。残渣はＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍｌ）に溶解させて再濾過した。濾液を減圧下で蒸発乾燥させ、残渣はＥｔＯＡｃ及びヘキサンの混合物を溶出剤として用いてシリカゲル上でＭＰＬＣにより精製させ、灰色固体として１−（ブロモメチル）−２−フルオロ−３−ニトロベンゼン（８．１１ｇ、３４％）を提供した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ８．０２（ｍ、１Ｈ）、７．７１（ｍ、１Ｈ）、７．３０（ｔｄ、１Ｈ、Ｊ＝８．４、１．６Ｈｚ）、４．５５（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝１．６Ｈｚ）
【００７５】
ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍｌ）において、１−（ブロモメチル）−２−フルオロ−３−ニトロベンゼン（０．７０ｇ、２．９９ｍｍｏｌ）とジメチルアミン塩酸塩（０．４８ｇ、５．９８ｍｍｏｌ）が撹拌された混合物にトリエチルアミン（０．９１ｇ、８．９７ｍｍｏｌ）を滴加した。前記混合物を室温で３時間撹拌し、減圧下で蒸発乾燥させた。残渣は水（１０ｍｌ）で希釈させ、ＥｔＯＡｃ（２×２５ｍｌ）で抽出した。前記ＥｔＯＡｃ溶液を水（２０ｍｌ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させて濾過し、減圧下で蒸発乾燥させた。残渣はＥｔＯＡｃ及びヘキサンの混合物を溶出剤として用いてシリカゲル上でＭＰＬＣにより精製させ、黄色の粘性液体として１−（２−フルオロ−３−ニトロフェニル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルメタンアミン（０．４５ｇ、７６％）を提供した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ）：δ８．０４−７．９９（ｍ、１Ｈ）、７．７８−７．７３（ｍ、１Ｈ）、７．３７（ｔｄ、１Ｈ、Ｊ＝８．０、１．０Ｈｚ）、３．６４（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝２．０Ｈｚ）、２．２９（ｄ、６Ｈ、Ｊ＝０．８Ｈｚ）
前記ニトロ化合物、１−（２−フルオロ−３−ニトロフェニル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルメタンアミン（０．４５ｇ、１．９３ｍｍｏｌ）、鉄粉末（１．３５ｇ、２．４１ｍｍｏｌ）、２Ｎ ＨＣｌ（１ｍｌ）及びエタノール（５ｍｌ）の混合物を２時間撹拌しながら還流温度で加熱した。室温に冷却させた後、前記混合物をセライトパッドを通して濾過した。濾液を減圧下で蒸発乾燥させ、残渣を水（１０ｍｌ）で希釈させ、固体Ｋ２ＣＯ３でｐＨ１０に塩基性化した。水性混合物をＥｔＯＡｃ（２×２５ｍｌ）で抽出し、前記ＥｔＯＡｃ溶液を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させて濾過し、減圧下で蒸発乾燥させた。残渣はＥｔＯＡｃ及びヘキサンの混合物を溶出剤として用いてシリカゲル上でＭＰＬＣにより精製させ、白色固体の標題の化合物（０．３５ｇ、９１％）を提供した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ６．８８（ｔｄ、１Ｈ、Ｊ＝７．８、１．０Ｈｚ）、６．７２−６．６７（ｍ、２Ｈ）、３．７１（ｂｒ ｓ、２Ｈ）、３．４７（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝１．６Ｈｚ）、２．２７（ｓ、６Ｈ）
【００７６】
製造実施例１３
２−フルオロ−３−（ピロリジン−１−イルメチル）アニリン（Ｒｂ＝２−フルオロ−３−（ピロリジン−１−イルメチル）である化学式ＶＩＩＩの化合物）の製造
ＣＨ２Ｃｌ２（１５ｍｌ）において、１−（ブロモメチル）−２−フルオロ−３−ニトロベンゼン（２．００ｇ、８．５４ｍｍｏｌ）とピロリジン（０．９１ｇ、１２．８２ｍｍｏｌ）が撹拌された溶液に０℃でトリエチルアミン（１．７２ｇ、１７．０８ｍｍｏｌ）を滴加した。前記混合物を室温で一晩撹拌し、減圧下で蒸発乾燥させた。残渣を水（１５ｍｌ）で希釈させ、ＥｔＯＡｃ（２×３０ｍｌ）で抽出した。前記ＥｔＯＡｃ溶液を塩水（２０ｍｌ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で蒸発乾燥させた。残渣はＥｔＯＡｃ及びヘキサンの混合物を溶出剤として用いてシリカゲル上でＭＰＬＣにより精製させ、粘性のオイルとして１−（２−フルオロ−３−ニトロベンジル）ピロリジン（１．２０ｇ、６３％）を提供した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ）：δ８．０２−７．９７（ｍ、１Ｈ）、７．８１−７．７６（ｍ、１Ｈ）、７．３６（ｔｄ、１Ｈ、Ｊ＝８．０、１．２Ｈｚ）、３．８１（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝２．０Ｈｚ）、２．６２−２．５８（ｍ、４Ｈ）、１．８４−１．８０（ｍ、４Ｈ）
標題の化合物を、１−（２−フルオロ−３−ニトロフェニル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルメタンアミンの代わりに１−（２−フルオロ−３−ニトロベンジル）ピロリジンを使用して製造実施例１２と同様に製造した。収率：８０％；
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ）：δ６．８７（ｔｄ、１Ｈ、Ｊ＝８．０、０．８Ｈｚ）、６．７７（ｔｄ、１Ｈ、Ｊ＝８．０、２．０Ｈｚ）、６．６８−６．６４（ｍ、１Ｈ）、３．６７（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝１．６Ｈｚ）、２．６０−２．５７（ｍ、４Ｈ）、１．８２−１．７８（ｍ、４Ｈ）。
【００７７】
製造実施例１４
２−フルオロ−３−（モルホリノメチル）アニリン（Ｒｂ＝２−フルオロ−３−（モルホリノメチル）である化学式ＶＩＩＩの化合物）の製造
トルエン（２４ｍｌ）において、１−（ブロモメチル）−２−フルオロ−３−ニトロベンゼン（２．５０ｇ、１０．６ｍｍｏｌ）とモルホリン（２．７８ｇ、３２．０ｍｍｏｌ）が撹拌された溶液を還流温度で２．５時間加熱した。前記反応混合物を室温に冷却させ、１Ｎ ＮａＯＨ（２×２０ｍｌ）で洗浄した。水性層をＥｔＯＡｃ（２×２５ｍｌ）で抽出し、トルエン溶液及びＥｔＯＡｃ抽出物を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で蒸発乾燥させた。残渣はＥｔＯＡｃ及びヘキサンの混合物を溶出剤として用いてシリカゲル上でＭＰＬＣにより精製させ、明るい黄色固体として４−（２−フルオロ−３−ニトロベンジル）モルホリン（１．９５ｇ、８９％）を提供した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ）：δ８．０２−７．９７（ｍ、１Ｈ）、７．８３−７．７８（ｍ、１Ｈ）、７．３６（ｔｄ、１Ｈ、Ｊ＝８．０、１．０Ｈｚ）、３．７０−３．６７（ｍ、６Ｈ）、２．５１（ｂｒ ｔ、４Ｈ、Ｊ＝４．６Ｈｚ）
標題の化合物を、１−（２−フルオロ−３−ニトロフェニル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルメタンアミンの代わりに（４−（２−フルオロ−３−ニトロベンジル）モルホリン）を使用して製造実施例１２と同様に製造した。収率：９０％；
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ）：δ６．８７（ｔｄ、１Ｈ、Ｊ＝８．０、０．８Ｈｚ）、６．７７（ｔｄ、１Ｈ、Ｊ＝８．０、２．０Ｈｚ）、６．６８−６．６４（ｍ、１Ｈ）、３．６８（ｂｒ ｔ、４Ｈ、Ｊ＝４．８Ｈｚ）、３．５５（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝１．６Ｈｚ）、２．４９（ｂｒ ｔ、４Ｈ、Ｊ＝４．８Ｈｚ）
【００７８】
製造実施例１５
３−アミノ−４−（（ジメチルアミノ）メチル）ベンゾニトリル（Ｒｂ＝５−シアノ−２−（ジメチルアミノ）メチルである化学式ＶＩＩＩの化合物）の製造
ＣＨ２Ｃｌ２（７０ｍｌ）において、４−（ブロモメチル）−３−ニトロベンゾニトリル（５．００ｇ、２０．７４ｍｍｏｌ）（ＷＯ ０７／０２４９４５ Ａ１に記載した方法で製造）とジメチルアミン塩酸塩（２．０３ｇ、２４．８９ｍｍｏｌ）が撹拌された混合物に０℃でトリエチルアミン（６．３０ｇ、６２．２３ｍｍｏｌ）を滴加し、前記混合物を室温で一晩撹拌した。反応混合物を減圧下で蒸発乾燥させ、残渣を水（２０ｍｌ）で希釈させ、ＣＨ２Ｃｌ２（３×１００ｍｌ）で抽出した。前記ＣＨ２Ｃｌ２溶液を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させて濾過し、減圧下で蒸発乾燥させた。残渣はＥｔＯＡｃ及びヘキサンの混合物を溶出剤として用いてシリカゲル上でＭＰＬＣにより精製させ、オレンジ色固体として４−（（ジメチルアミノ）メチル）−３−ニトロベンゼン（３．５８ｇ、８４％）を提供した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ８．１５（ｂｒ ｓ、１Ｈ）、７．９２（ｂｒ ｓ、１Ｈ）、７．８５（ｂｒ ｄ、１Ｈ、Ｊ＝７．２Ｈｚ）、３．８０（ｓ、２Ｈ）、２．２７（ｓ、６Ｈ）
標題の化合物を、３−（ジメチルアミノ）−５−ニトロベンゾニトリルの代わりに４−（（ジメチルアミノ）メチル）−３−ニトロベンゾニトリルを使用して製造実施例１１と同様に製造した。収率：９１％；
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ７．０２（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝７．６、０．４Ｈｚ）、６．９１（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝７．６、１．６Ｈｚ）、６．８４（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝１．６Ｈｚ）、５．０５（ｂｒ ｓ、２Ｈ）、３．４３（ｓ、２Ｈ）、２．１８（ｓ、６Ｈ）
【００７９】
製造実施例１６
３−アミノ−２−（（ジメチルアミノ）メチル）ベンゾニトリル（Ｒｂ＝３−シアノ−２−（ジメチルアミノ）メチルである化学式ＶＩＩＩの化合物）の製造
ＣＨ２Ｃｌ２（１５ｍｌ）において、２−（ブロモメチル）−３−ニトロベンゾニトリル（１．１０ｇ、４．５６ｍｍｏｌ）（文献［Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ ４０：１８６３−１８６８（１９８４）］に記載した方法で製造）とジメチルアミン塩酸塩（０．７４ｇ、９．１３ｍｍｏｌ）が撹拌された混合物に０℃でトリエチルアミン（１．８５ｇ、１８．２５ｍｍｏｌ）を滴加した。生成混合物を室温で２時間撹拌し、減圧下で蒸発乾燥させた。残渣を水（１０ｍｌ）で希釈させ、ＥｔＯＡｃ（３×５０ｍｌ）で抽出した。前記ＥｔＯＡｃＣ溶液を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させて濾過し、減圧下で蒸発乾燥させた。残渣はＥｔＯＡｃ及びヘキサンの混合物を溶出剤として用いてシリカゲル上でＭＰＬＣにより精製させ、黄色オイルとして２−（（ジメチルアミノ）メチル）−３−ニトロベンゼン（０．７５ｇ、８０％）を提供した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ７．９３（ｂｒ ｄ、１Ｈ、Ｊ＝８．０Ｈｚ）、７．８５（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝８．０、１．４Ｈｚ）、７．５５（ｔ、１Ｈ、Ｊ＝８．０Ｈｚ）、３．９４（ｓ、２Ｈ）、２．２４（ｓ、６Ｈ）
標題の化合物を、３−（ジメチルアミノ）−５−ニトロベンゾニトリルの代わりに２−（（ジメチルアミノ）メチル）−３−ニトロベンゾニトリルを使用して製造実施例１１と同様に製造した。収率：９３％；
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ７．１５（ｔ、１Ｈ、Ｊ＝７．６Ｈｚ）、７．００（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝７．６、０．８Ｈｚ）、６．８３（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝７．６Ｈｚ）、５．０６（ｂｒ ｓ、２Ｈ）、３．７３（ｓ、２Ｈ）、２．２９（ｓ、６Ｈ）
【００８０】
製造実施例１７
３−アミノ−５−（（ジメチルアミノ）メチル）ベンゾニトリル（Ｒｂ＝３−シアノ−５−（ジメチルアミノ）メチル）である化学式ＶＩＩＩの化合物）の製造
ＣＨ２Ｃｌ２（１５ｍｌ）において、３−（ブロモメチル）−５−ニトロベンゾニトリル（１．５０ｇ、６．２２ｍｍｏｌ）（文献［Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．５５：１０４０−１０４３（１９９０）］に記載した方法で製造）とジメチルアミン塩酸塩（１．０１ｇ、１２．４４ｍｍｏｌ）が撹拌された混合物に０℃でトリエチルアミン（１．８８ｇ、１８．６６ｍｍｏｌ）を滴加した。生成混合物を室温で３時間撹拌し、減圧下で蒸発乾燥させた。残渣を水（１５ｍｌ）で希釈させ、ＥｔＯＡｃ（３×５０ｍｌ）で抽出した。前記ＥｔＯＡｃ溶液を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させて濾過し、減圧下で蒸発乾燥させた。残渣はＥｔＯＡｃ及びヘキサンの混合物を溶出剤として使用してシリカゲル上でＭＰＬＣにより精製させ、粘性液体として３−（（ジメチルアミノ）メチル）−５−ニトロベンゾニトリル（１．１０ｇ、８７％）を提供した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ８．４５（ｓ、１Ｈ）、８．４０（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝１．６Ｈｚ）、８．０１（ｓ、１Ｈ）、３．５９（ｓ、２Ｈ）、２．３０（ｓ、６Ｈ）
標題の化合物を、３−（ジメチルアミノ）−５−ニトロベンゾニトリルの代わりに３−（（ジメチルアミノ）メチル）−５−ニトロベンゾニトリルを使用して製造実施例１１と同様に製造した。収率：９８％；
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ６．９６（ｍ、１Ｈ）、６．８８（ｂｒ ｄ、１Ｈ、Ｊ＝０．８Ｈｚ）、６．８０（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝２．４、１．６Ｈｚ）、３．８６（ｂｒ ｓ、２Ｈ）、３．３４（ｓ、２Ｈ）、２．２４（ｓ、６Ｈ）
【００８１】
製造実施例１８
３−アミノ−４−（ピロリジン−１−イルメチル）ベンゾニトリル（Ｒｂ＝５−シアノ−２−（ピロリジン−１−イルメチル）である化学式ＶＩＩＩの化合物）の製造
ＣＨ２Ｃｌ２（７２ｍｌ）において、４−（ブロモメチル）−３−ニトロベンゾニトリル（５．１２ｇ、２１．５７ｍｍｏｌ）とピロリジン（１．８４ｇ、２５．８８ｍｍｏｌ）が撹拌された溶液に０℃でトリエチルアミン（６．５４ｇ、６４．７１ｍｍｏｌ）を滴加した。前記混合物を室温で１．５時間撹拌し、減圧下で蒸発乾燥させた。残渣を水（３０ｍｌ）で希釈させ、ＣＨ２Ｃｌ２（３×１００ｍｌ）で抽出した。前記ＣＨ２Ｃｌ２溶液を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させて濾過し、減圧下で蒸発乾燥させた。残渣はＥｔＯＡｃ及びヘキサンの混合物を溶出剤として使用してシリカゲル上でＭＰＬＣにより精製させ、黄色固体として３−ニトロ−４−（ピロリジン−１−イルメチル）ベンゾニトリル（２．２４ｇ、４５％）を提供した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ８．１６（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝１．６Ｈｚ）、７．９４（ｂｒ ｄ、１Ｈ、Ｊ＝８．０Ｈｚ）、７．８３（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝８．０、１．６Ｈｚ）、３．９９（ｓ、２Ｈ）、２．５４（ｂｒ ｓ、４Ｈ）、１．７９（ｍ、４Ｈ）
標題の化合物を、３−（ジメチルアミノ）−５−ニトロベンゾニトリルの代わりに３−ニトロ−４−（ピロリジン−１−イルメチル）ベンゾニトリルを使用して製造実施例１１と同様に製造した。収率：９１％；
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ７．０６（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝７．６Ｈｚ）、６．９１（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝７．６、１．６Ｈｚ）、６．８４（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝１．６Ｈｚ）、５．０８（ｂｒ ｓ、２Ｈ）、３．６４（ｓ、２Ｈ）、２．４７（ｂｒ ｓ、４Ｈ）、１．７８（ｂｒ ｓ、４Ｈ）
【００８２】
製造実施例１９
３−アミノ−２−（ピロリジン−１−イルメチル）ベンゾニトリル（Ｒｂ＝３−シアノ−２−（ピロリジン−１−イルメチル）である化学式ＶＩＩＩの化合物）の製造
ＣＨ２Ｃｌ２（１５ｍｌ）において、２−（ブロモメチル）−３−ニトロベンゾニトリル（１．１０ｇ、４．５６ｍｍｏｌ）とピロリジン（０．６５ｇ、９．１３ｍｍｏｌ）が撹拌された溶液に０℃でトリエチルアミン（１．８５ｇ、１８．２５ｍｍｏｌ）を滴加した。前記混合物を室温で２時間撹拌し、減圧下で蒸発乾燥させた。残渣を水（１０ｍｌ）で希釈させ、ＣＨ２Ｃｌ２（３×５０ｍｌ）で抽出した。前記ＣＨ２Ｃｌ２溶液を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させて濾過し、減圧下で蒸発乾燥させた。残渣はＥｔＯＡｃ及びヘキサンの混合物を溶出剤として使用してシリカゲル上でＭＰＬＣにより精製させ、黄色固体として３−ニトロ−２−（ピロリジン−１−イルメチル）ベンゾニトリル（０．９６ｇ、９１％）を提供した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ７．９０（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝７．６Ｈｚ）、７．８３（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝７．６、０．８Ｈｚ）、７．５２（ｔ、１Ｈ、Ｊ＝７．６Ｈｚ）、４．１４（ｓ、２Ｈ）、２．５２（ｂｒ ｓ、４Ｈ）、１．７２（ｂｒ ｓ、４Ｈ）
標題の化合物を、３−（ジメチルアミノ）−５−ニトロベンゾニトリルの代わりに３−ニトロ−２−（ピロリジン−１−イルメチル）ベンゾニトリルを使用して製造実施例１１と同様に製造した。収率：９３％；
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ７．１３（ｔ、１Ｈ、Ｊ＝７．８Ｈｚ）、６．９９（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝７．８、１．２Ｈｚ）、６．８２（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝８．０Ｈｚ）、５．１１（ｂｒ ｓ、２Ｈ）、３．９１（ｓ、２Ｈ）、２．５８（ｂｒ ｓ、４Ｈ）、１．８１（ｂｒ ｓ、４Ｈ）
【００８３】
製造実施例２０
３−アミノ−５−（ピロリジン−１−イルメチル）ベンゾニトリル（Ｒｂ＝３−シアノ−５−（ピロリジン−１−イルメチル）である化学式ＶＩＩＩの化合物）の製造
ＣＨ２Ｃｌ２（１５ｍｌ）において、３−（ブロモメチル）−５−ニトロベンゾニトリル（１．５０ｇ、６．２２ｍｍｏｌ）とピロリジン（０．５３ｇ、７．４６ｍｍｏｌ）が撹拌された溶液に０℃でトリエチルアミン（１．８８ｇ、１８．６８ｍｍｏｌ）を滴加し、前記混合物を室温で一晩撹拌した。反応混合物を減圧下で蒸発乾燥させ、残渣を水（１５ｍｌ）で希釈させ、ＥｔＯＡｃ（３×５０ｍｌ）で抽出した。前記ＥｔＯＡｃ溶液を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させて濾過し、減圧下で蒸発乾燥させた。残渣はＥｔＯＡｃ及びヘキサンの混合物を溶出剤として使用してシリカゲル上でＭＰＬＣにより精製させ、黄色固体として３−ニトロ−５−（ピロリジン−１−イルメチル）ベンゾニトリル（１．３０ｇ、９０％）を提供した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ８．４５（ｂｒ ｓ、１Ｈ）、８．３９（ｂｒ ｔ、１Ｈ、Ｊ＝１．６Ｈｚ）、８．０２（ｂｒ ｓ、１Ｈ）、３．７８（ｓ、２Ｈ）、２．５６（ｂｒ ｓ、４Ｈ）、１．８４（ｂｒ ｓ、４Ｈ）
標題の化合物を、３−（ジメチルアミノ）−５−ニトロベンゾニトリルの代わりに３−ニトロ−５−（ピロリジン−１−イルメチル）ベンゾニトリルを使用して製造実施例１１と同様に製造した。収率：８５％；
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ６．９９（ｐｓｅｕｄｏ ｔ、１Ｈ、Ｊ＝１．６Ｈｚ）、６．９４（ｐｓｅｕｄｏ ｔ、１Ｈ、Ｊ＝１．６Ｈｚ）、６．７９（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝２．４、１．６Ｈｚ）、３．８７（ｂｒ ｓ、２Ｈ）、３．５６（ｓ、２Ｈ）、２．５４（ｍ、４Ｈ）、１．８１（ｍ、４Ｈ）
【００８４】
製造実施例２１
３−アミノ−４−（モルホリノメチル）ベンゾニトリル（Ｒｂ＝５−シアノ−２−（モルホリノメチル）である化学式ＶＩＩＩの化合物）の製造
ＣＨ２Ｃｌ２（９８ｍｌ）において、４−（ブロモメチル）−３−ニトロベンゾニトリル（７．１２ｇ、２９．５５ｍｍｏｌ）とモルホリン（３．０９ｇ、３５．４５ｍｍｏｌ）が撹拌された溶液に０℃でトリエチルアミン（８．９７ｇ、８８．６４ｍｍｏｌ）を滴加した。前記混合物を室温で１．５時間撹拌し、減圧下で蒸発乾燥させた。残渣を水（４０ｍｌ）で希釈させ、ＣＨ２Ｃｌ２（３×１００ｍｌ）で抽出した。前記ＣＨ２Ｃｌ２溶液を水（５０ｍｌ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させて濾過し、減圧下で蒸発乾燥させた。残渣はＥｔＯＡｃ及びヘキサンの混合物を溶出剤として用いてシリカゲル上でＭＰＬＣにより精製させ、黄色固体として４−（モルホリノメチル）−３−ニトロベンゾニトリル（５．８４ｇ、８０％）を提供した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ８．１２（ｓ、１Ｈ）、７．８３（ｂｒ ｓ、２Ｈ）、３．８４（ｓ、２Ｈ）、３．６７（ｔ、４Ｈ、Ｊ＝４．６Ｈｚ）、２．４５（ｔ、４Ｈ、Ｊ＝４．６Ｈｚ）
標題の化合物を、３−（ジメチルアミノ）−５−ニトロベンゾニトリルの代わりに４−（モルホリノメチル）−３−ニトロベンゾニトリルを使用して製造実施例１１と同様に製造した。収率：７８％；
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ７．０５（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝８．０Ｈｚ）、６．９２（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝８．０、１．６Ｈｚ）、６．８６（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝１．６Ｈｚ）、５．０２（ｂｒ ｓ、２Ｈ）、３．６８（ｂｒ ｔ、４Ｈ、Ｊ＝４．０Ｈｚ）、３．５３（ｓ、２Ｈ）、２．４１（ｂｒ ｓ、４Ｈ）
【００８５】
製造実施例２２
３−アミノ−２−（モルホリノメチル）ベンゾニトリル（Ｒｂ＝３−シアノ−２−（モルホリノメチル）である化学式ＶＩＩＩの化合物）の製造
ＣＨ２Ｃｌ２（１５ｍｌ）において、２−（ブロモメチル）−３−ニトロベンゾニトリル（１．１０ｇ、４．５６ｍｍｏｌ）とモルホリン（０．８０ｇ、９．１３ｍｍｏｌ）が撹拌された溶液に０℃でトリエチルアミン（１．８５ｇ、１８．２５ｍｍｏｌ）を滴加した。前記混合物を室温で１．５時間撹拌し、減圧下で蒸発乾燥させた。残渣を水（１０ｍｌ）で希釈させ、ＣＨ２Ｃｌ２（３×５０ｍｌ）で抽出した。前記ＣＨ２Ｃｌ２溶液を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させて濾過し、減圧下で蒸発乾燥させた。残渣はＥｔＯＡｃ及びヘキサンの混合物を溶出剤として用いてシリカゲル上でＭＰＬＣにより精製させ、黄色固体として２−（モルホリノメチル）−３−ニトロベンゾニトリル（１．０２ｇ、９０％）を提供した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ７．９０（ｂｒ ｄ、１Ｈ、Ｊ＝８．０Ｈｚ）、７．８４（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝８．０、１．２Ｈｚ）、７．５６（ｔ、１Ｈ、Ｊ＝８．０Ｈｚ）、３．９９（ｓ、２Ｈ）、３．６０（ｂｒ ｔ、４Ｈ、Ｊ＝４．４Ｈｚ）、２．４６（ｂｒ ｓ、４Ｈ）。
標題の化合物を、３−（ジメチルアミノ）−５−ニトロベンゾニトリルの代わりに２−（モルホリノメチル）−３−ニトロベンゾニトリルを使用して製造実施例１１と同様に製造した。収率：８２％；
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ７．１５（ｔ、１Ｈ、Ｊ＝７．６Ｈｚ）、７．０１（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝７．６Ｈｚ）、６．８３（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝７．６Ｈｚ）、５．００（ｂｒ ｓ、２Ｈ）、３．７８（ｓ、２Ｈ）、３．６９（ｂｒ ｓ、４Ｈ）、２．５０（ｂｒ ｓ、４Ｈ）
【００８６】
製造実施例２３
３−アミノ−５−（モルホリノメチル）ベンゾニトリル（Ｒｂ＝３−シアノ−５−（モルホリノメチル）である化学式ＶＩＩＩの化合物）の製造
ＣＨ２Ｃｌ２（１５ｍｌ）において、３−（ブロモメチル）−５−ニトロベンゾニトリル（１．５０ｇ、６．２２ｍｍｏｌ）とモルホリン（０．６５ｇ、７．４６ｍｍｏｌ）が撹拌された溶液に０℃でトリエチルアミン（１．８８ｇ、１８．６６ｍｍｏｌ）を滴加した。前記混合物を室温で一晩撹拌し、減圧下で蒸発乾燥させた。残渣を水（１５ｍｌ）で希釈させ、ＥｔＯＡｃ（３×５０ｍｌ）で抽出した。前記ＥｔＯＡｃ溶液を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させて濾過し、減圧下で蒸発乾燥させた。残渣はＥｔＯＡｃ及びヘキサンの混合物を溶出剤として使用してシリカゲル上でＭＰＬＣにより精製させ、灰色固体として３−（モルホリノメチル）−５−ニトロベンゾニトリル（０．８７ｇ、８５％）を提供した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ８．４５（ｂｒ ｓ、１Ｈ）、８．４１（ｂｒ ｓ、１Ｈ）、８．０１（ｂｒ ｓ、１Ｈ）、３．７４（ｂｒ ｔ、４Ｈ、Ｊ＝４．４Ｈｚ）、３．６４（ｓ、２Ｈ）、２．４８（ｂｒ ｔ、４Ｈ、Ｊ＝４．４Ｈｚ）
標題の化合物を、３−（ジメチルアミノ）−５−ニトロベンゾニトリルの代わりに３−（モルホリノメチル）−５−ニトロベンゾニトリルを使用して製造実施例１１と同様に製造した。収率：８５％；
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ７．００（ｂｒ ｔ、１Ｈ、Ｊ＝１．６Ｈｚ）、６．９３（ｂｒ ｓ、１Ｈ）、６．８１（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝２．４、１．６Ｈｚ）、３．８８（ｂｒ ｓ、２Ｈ）、３．７４（ｂｒ ｔ、４Ｈ、Ｊ＝４．６Ｈｚ）、３．４４（ｓ、２Ｈ）、２．４７（ｂｒ ｓ、４Ｈ）
【００８７】
製造実施例２４
２−（２−フルオロフェノキシ）アセトアルデヒド（Ｒｂ＝２−フルオロ、Ｘ＝Ｏである化学式ＩＸの化合物）の製造。前記化合物を下記２段階により製造した。
無水ＤＭＦ（１０ｍｌ）において、２−フルオロフェノール（１．００ｇ、８．９２ｍｍｏｌ）、２−ブロモ−１，１−ジエトキシエタン（１．７５ｇ、８．９２ｍｍｏｌ）、及びＫ２ＣＯ３（１．４７ｇ、１０．７ｍｍｏｌ）が撹拌された混合物を１１０℃で一晩加熱した。反応混合物を氷冷水（１５ｍｌ）に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（２×１００ｍｌ）で抽出した。前記ＥｔＯＡｃ溶液を水（２５ｍｌ）及び塩水（２５ｍｌ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させて濾過し、減圧下で蒸発乾燥させた。残渣はＥｔＯＡｃ及びヘキサンの混合物を溶出剤として用いてシリカゲル上でＭＰＬＣにより精製させ、粘性液体として１−（２，２−ジエトキシエトキシ）−２−フルオロベンゼン（１．６５ｇ、８１％）を提供した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ７．０９−６．９６（ｍ、３Ｈ）、６．９３−６．８７（ｍ、１Ｈ）、４．８５（ｔ、１Ｈ、Ｊ＝５．２Ｈｚ）、４．０７（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝５．２Ｈｚ）、３．８２−３．７４（ｍ、２Ｈ）、３．６９−３．６１（ｍ、２Ｈ）、１．２４（ｔ、６Ｈ、Ｊ＝７．０Ｈｚ）
１，４−ジオキサン（５０ｍｌ）及び水（４０ｍｌ）の混合物において、１−（２，２−ジエトキシエトキシ）−２−フルオロベンゼン（１．６５ｇ、７．２３ｍｍｏｌ）が撹拌された溶液に０℃で濃ＨＣｌ（１７．６ｍｌ）を加え、前記混合物を室温で一晩撹拌した。反応混合物を０℃に冷却させ、飽和されたＮａＨＣＯ３溶液で中和させ、ＥｔＯＡｃ（２×２００ｍｌ）で抽出した。前記ＥｔＯＡｃ溶液を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させて濾過し、減圧下で蒸発乾燥させた。残渣はＥｔＯＡｃ及びヘキサンの混合物を溶出剤として使用してシリカゲル上でＭＰＬＣにより精製させ、粘性液体として標題の化合物（０．７８ｇ、７１％）を提供した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ９．８７（ｓ、１Ｈ）、７．１２（ｄｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝１１．４、８．２、１．６Ｈｚ）、７．０８−７．０４（ｍ、１Ｈ）、７．０１−６．９５（ｍ、１Ｈ）、６．９１（ｔｄ、１Ｈ、Ｊ＝８．２、１．６Ｈｚ）、４．６３（ｓ、２Ｈ）
【００８８】
製造実施例２５
２−（２−フルオロフェニルチオ）アセトアルデヒド（Ｒｂ＝２−フルオロ、Ｘ＝Ｓである化学式ＩＸの化合物）の製造。前記化合物を下記２段階により製造した。
無水ＤＭＦ（２０ｍｌ）において、２−フルオロティオペノル（１．００ｇ、７．８０ｍｍｏｌ）、ブロモアセトアルデヒドジエチルアセタール（１．４１ｍｌ、９．３６ｍｍｏｌ）、及びＣｓ２ＣＯ３（３．０５ｇ、９．３６ｍｍｏｌ）の混合物をＮ２下で室温で一晩撹拌した。反応混合物を焼結した漏斗を通して濾過し、濾液を水（２０ｍｌ）で希釈させた。水性混合物をＥｔ２Ｏ（３×１００ｍｌ）で抽出し、有機層を無水ＭｇＳＯ４上で乾燥させて濾過し、減圧下で蒸発乾燥させた。残渣はＥｔＯＡｃ及びヘキサンの混合物を溶出剤として用いてシリカゲル上でＭＰＬＣにより精製させ、粘性液体として（２，２−ジエトキシエチル）（２−フルオロフェニル）スルファン（１．８１ｇ、９５％）を提供した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ７．４６−７．４１（ｍ、１Ｈ）、７．２４−７．１８（ｍ、１Ｈ）、７．０９−７．０２（ｍ、１Ｈ）、４．６４（ｔ、１Ｈ、Ｊ＝５．６Ｈｚ）、３．６９−３．６１（ｍ、２Ｈ）、３．５６−３．４９（ｍ、２Ｈ）、３．１０（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝５．６Ｈｚ）、１．１７（ｔ、６Ｈ、Ｊ＝７．２Ｈｚ）
１，４−ジオキサン（３０ｍｌ）及び水（２５ｍｌ）の混合物において、（２，２−ジエトキシエチル）（２−フルオロフェニル）スルファン（１．００ｇ、４．０９ｍｍｏｌ）が撹拌された溶液に０℃で濃ＨＣｌ（９ｍｌ）を加え、前記混合物を室温で２時間撹拌した。反応混合物を０℃に冷却させ、飽和されたＮａＨＣＯ３溶液で中和させ、ＣＨ２Ｃｌ２（３×５０ｍｌ）で抽出した。有機層を水（５０ｍｌ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させて濾過し、減圧下で蒸発乾燥させ、粘性液体として標題の化合物（０．５９ｇ、８５％）を提供するが、これをさらに精製することなく、直ちに次の段階で使用した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ９．５６（ｔｄ、１Ｈ、Ｊ＝３．２、１．２Ｈｚ）、７．４２−７．３８（ｍ、１Ｈ）、７．３１−７．２５（ｍ、１Ｈ）、７．１２−７．０６（ｍ、２Ｈ）、３．５８（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝３．２Ｈｚ）
【００８９】
製造実施例２６
３−（メチル（２−ヨウ素エチル）アミノ）ベンゾニトリル（Ｒｂ＝３−シアノ、Ｘ＝ＮＭｅである化学式ＩＸの化合物）の製造。前記化合物を商業的に利用可能な３−アミノベンゾニトリルを出発物質として下記３段階により製造した。
無水ＤＭＳＯ（３０ｍｌ）において、３−アミノベンゾニトリル（２．５０ｇ、２１．１０ｍｍｏｌ）が撹拌された溶液に０℃でＮａＨ（０．６１ｇ、２５．３９ｍｍｏｌ）を分けて加え、前記混合物を室温で２０分間撹拌し、ブロモアセトアルデヒドジエチルアセタール（４．２０ｇ、２１．１０ｍｍｏｌ）で処理した。２時間後、前記溶液に飽和された水性ＮＨ４Ｃｌ（２０ｍｌ）を０℃で徐々に加え、前記反応混合物をＥｔＯＡｃ（２×５０ｍｌ）で抽出した。前記ＥｔＯＡｃ溶液を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させて濾過し、減圧下で蒸発乾燥させた。残渣はＥｔＯＡｃ及びヘキサンを溶出剤として用いてシリカゲル上でＭＰＬＣにより精製させ、明るいオレンジ色のオイルとして３−（２，２−ジエトキシエチルアミノ）ベンゾニトリル（０．８６ｇ、１７％）を提供した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ７．２２（ｔｄ、１Ｈ、Ｊ＝７．８、０．６Ｈｚ）、６．９７（ｍ、１Ｈ）、６．８４−６．８１（ｍ、２Ｈ）、４．６７（ｔ、１Ｈ、Ｊ＝５．４Ｈｚ）、３．７７−３．６９（ｍ、２Ｈ）、３．６１−３．５３（ｍ、２Ｈ）、３．２４（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝５．６Ｈｚ）、１．２４（ｔ、６Ｈ、Ｊ＝７．０Ｈｚ）
無水ＤＭＦ（５ｍｌ）において、３−（２，２−ジエトキシエチルアミノ）ベンゾニトリル（０．８４ｇ、３．５９ｍｍｏｌ）が撹拌された溶液に０℃でＮａＨ（０．１０ｇ、４．３０ｍｍｏｌ）を分けて加えた。２０分後、ＭｅＩ（０．６１ｇ、４．３０ｍｍｏｌ）を加え、前記混合物を室温で６時間撹拌した。前記反応混合物を０℃に冷却させ、ここに水性ＮＨ４Ｃｌ（１０ｍｌ）溶液を滴加した。前記水性混合物をＣＨＣｌ３（２×３０ｍｌ）で抽出し、有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させて濾過し、減圧下で蒸発乾燥させた。残渣はＥｔＯＡｃ及びヘキサンを溶出剤として用いてシリカゲル上でＭＰＬＣにより精製させ、粘性液体として３−（（２，２−ジエトキシエチル）（メチル）アミノ）ベンゾニトリル（０．６５ｇ、７３％）を提供した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ７．２８−７．２４（ｍ、１Ｈ）、６．９６−６．９３（ｍ、３Ｈ）、４．６０（ｔ、１Ｈ、Ｊ＝５．２Ｈｚ）、３．７６−３．６９（ｍ、２Ｈ）、３．５５−３．４７（ｍ、２Ｈ）、３．４６（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝５．２Ｈｚ）、３．０２（ｓ、３Ｈ）、１．２０（ｔ、６Ｈ、Ｊ＝７．０Ｈｚ）
無水ジオキサン（６ｍｌ）において、３−（（２，２−ジエトキシエチル）（メチル）アミノ）ベンゾニトリル（０．６５ｇ、２．６１ｍｍｏｌ）が撹拌された溶液に０℃で１Ｎ ＨＣｌ（４．３０ｍｍｏｌ）を滴加し、前記混合物を室温で１時間撹拌した。反応混合物を０℃に冷却させ、水性ＮａＨＣＯ３溶液で中和させ、ＣＨＣｌ３（２×３０ｍｌ）で抽出した。前記ＣＨＣｌ３溶液を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させて濾過し、減圧下で蒸発乾燥させ、粘性液体として標題の化合物（０．２４ｇ、５２％）を提供するが、これをさらに精製することなく、次の段階で使用した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ９．７４（ｔ、１Ｈ、Ｊ＝０．８Ｈｚ）、７．２９（ｄｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝８．８、７．４、０．８Ｈｚ）、７．０２（ｄｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝７．４、０．８、１．２Ｈｚ）、６．８６（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝２．４、１．２Ｈｚ）、６．８２（ｄｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝８．８、２．４、１．２Ｈｚ）４．１４（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝０．８Ｈｚ）、３．１０（ｓ、３Ｈ）
【００９０】
製造実施例２７
２−（（２−フルオロフェニル）（メチル）アミノ）アセトアルデヒド（Ｒｂ＝２−フルオロ、Ｘ＝ＮＭｅである化学式ＩＸの化合物）の製造。前記化合物を商業的に利用可能な２−フルオロアニリンを出発物質として下記３段階により製造した。
無水ＤＭＦ（１０ｍｌ）において、２−フルオロアニリン（２．００ｇ、１７．９０ｍｍｏｌ）、ブロモアセトアルデヒドジメチルアセタール（３．２５ｍｌ、２１．４０ｍｍｏｌ）、及びＣｓ２ＣＯ３（１１．７０ｇ、３５．８０ｍｍｏｌ）が撹拌された混合物を１２０℃で一晩加熱した。反応混合物を減圧下で蒸発乾燥させ、残渣をＥｔ２Ｏ（２×１５０ｍｌ）で抽出した。前記Ｅｔ２Ｏ溶液を水（４×５０ｍｌ）及び塩水（２×５０ｍｌ）で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４上で乾燥させて濾過し、減圧下で蒸発乾燥させた。残渣はＥｔＯＡｃ及びヘキサンの混合物を溶出剤として用いてシリカゲル上でＭＰＬＣにより精製させ、無色オイルとしてＮ−（２，２−ジエトキシエチル）−２−フルオロアニリン（２．００ｇ、４９％）を提供した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ７．０３−６．９５（ｍ、２Ｈ）、６．８２−６．７７（ｍ、１Ｈ）、６．７１−６．６５（ｍ、１Ｈ）、４．７２（ｔ、１Ｈ、Ｊ＝５．６Ｈｚ）、３．７８−３．７１（ｍ、２Ｈ）、３．６２−３．５４（ｍ、２Ｈ）、３．２９（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝５．６Ｈｚ）、１．２６−１．２２（ｍ、６Ｈ）
無水ＤＭＦ（１０ｍｌ）において、Ｎ−（２，２−ジエトキシエチル）−２−フルオロアニリン（１．００ｇ、４．４０ｍｍｏｌ）が撹拌された溶液に０℃でＮａＨ（０．１６ｇ、６．６０ｍｍｏｌ）を分けて加えた。３０分後、ＭｅＩ（０．５ｍｌ、８．８０ｍｍｏｌ）を加え、前記混合物を室温で一晩撹拌した。反応混合物をＥｔＯＡｃ（２×１００ｍｌ）で抽出し、前記ＥｔＯＡｃ溶液を水（５０ｍｌ）及び塩水（５０ｍｌ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させて濾過し、減圧下で蒸発乾燥させ、無色オイルとしてＮ−（２，２−ジエトキシエチル）−２−フルオロ−Ｎ−メチルアニリン（０．４１ｇ、３８％）を提供した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ７．０５−６．９６（ｍ、３Ｈ）、６．８３−６．８１（ｍ、１Ｈ）、４．６９（ｔ、１Ｈ、Ｊ＝５．２Ｈｚ）、３．７２−３．６４（ｍ、２Ｈ）、３．５５−３．４９（ｍ、２Ｈ）、３．３３（ｄｄ、２Ｈ、Ｊ＝５．２、１．２Ｈｚ）、２．９７（ｓ、３Ｈ）、１．１９−１．５３（ｍ、６Ｈ）
１，４−ジオキサン（５ｍｌ）において、Ｎ−（２，２−ジエトキシエチル）−２−フルオロ−Ｎ−メチルアニリン（０．４０ｇ、１．６０ｍｍｏｌ）が撹拌された溶液に０℃で２．５Ｎ ＨＣｌ（５ｍｌ）を滴加し、前記混合物を室温で一晩撹拌した。反応混合物を０℃に急冷し、飽和されたＮａＨＣＯ３溶液で中和させ、ＣＨＣｌ３（２×５０ｍｌ）で抽出した。前記ＣＨＣｌ３溶液を水（２０ｍｌ）及び塩水（２０ｍｌ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させて濾過し、減圧下で蒸発乾燥させ、無色オイルとして標題の化合物（０．２７ｇ、９８％）を提供するが、これをさらに精製することなく、次の段階で使用した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ９．８０（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝２．４、１．２Ｈｚ）、７．０７−６．８９（ｍ、４Ｈ）、３．９１（ｄｄ、２Ｈ、Ｊ＝１．８、０．８Ｈｚ）、２．９７（ｓ、３Ｈ）。
実行実施例１
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−３−ビニルアニリン（実施例３７）の製造
【００９１】
【化６】
2013533252.tif 000008
【００９２】
１，２−ジクロロエタン（２４０ｍｌ）において、４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−カルバルデヒド（４．００ｇ、１３．１４ｍｍｏｌ）が撹拌された溶液に３−ビニルアニリン（２．３６ｇ、１９．７１ｍｍｏｌ）及びＡｃＯＨ（０．７９ｇ、１３．１４ｍｍｏｌ）を加え、前記混合物を８０℃で２時間加熱した。反応混合物を０℃に冷却させ、ここにＮａＢＨ（ＯＡｃ）３（５．５６ｇ、２６．２０ｍｍｏｌ）を加えた。前記混合物を４０℃で一晩撹拌し、反応混合物のｐＨを０℃で１０％Ｋ２ＣＯ３溶液で７〜８に調節した。反応混合物をＣＨＣｌ３（２×２００ｍｌ）中の５％ＭｅＯＨで抽出し、有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させて濾過し、減圧下で蒸発乾燥させた。残渣はＭｅＯＨ及びＣＨ２Ｃｌ２の混合物（１：１９（ｖ／ｖ））を溶出剤として用いてシリカゲル上でＭＰＬＣにより精製させ、固体の標題の化合物（２．８９ｇ、６３％）を提供した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ１０．５９（ｂｒ ｓ、１Ｈ）、８．９４（ｓ、１Ｈ）、８．３７（ｓ、１Ｈ）、７．８１（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝９．２Ｈｚ）、７．７７（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝９．２Ｈｚ）、７．４５（ｔ、１Ｈ、Ｊ＝７．８Ｈｚ）、７．２０（ｂｒ ｄ、１Ｈ、ｏｖｅｒｌａｐｐｅｄ、Ｊ＝７．６Ｈｚ）、７．１５（ｔ、１Ｈ、ｏｖｅｒｌａｐｐｅｄ、Ｊ＝７．８Ｈｚ）、７．００（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝８．０Ｈｚ）、６．８６（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝７．６Ｈｚ）、６．７５（ｔ、１Ｈ、Ｊ＝２．０Ｈｚ）、６．６３（ｄｄ、１Ｈ、ｏｖｅｒｌａｐｐｅｄ、Ｊ＝１７．６、１０．８Ｈｚ）、６．６１（ｄｄ、１Ｈ、ｏｖｅｒｌａｐｐｅｄ、Ｊ＝８．０、２．０Ｈｚ）、５．６９（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝１７．６、０．８Ｈｚ）、５．２１（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝１０．８、０．８Ｈｚ）、４．５５（ｓ、２Ｈ）、４．３９（ｂｒ ｓ、１Ｈ）、２．５１（ｓ、３Ｈ）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ ４０８．２１（ＭＨ＋）
【００９３】
実行実施例２
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−３−ビニルアニリン塩酸塩（実施例３８）の製造
【００９４】
【化７】
2013533252.tif 000009
【００９５】
無水ＣＨＣｌ３（１２ｍｌ）において、Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−３−ビニルアニリン（１．００ｇ、２．４５ｍｍｏｌ）が撹拌された懸濁液を５０℃で加熱して澄明な溶液を提供した。前記ＣＨＣｌ３溶液を０℃に冷却させ、ここにＥｔ２Ｏ（７．３６ｍｌ、７．３６ｍｍｏｌ）中の１．０Ｍ ＨＣｌを加えた。５分後、沈殿物をＮ２下で濾過し、真空下でＰ２Ｏ５上で徹底的に乾燥させ、黄色粉末として標題の化合物（１．０７ｇ、９８％）を提供した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ９．４９（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝１．６、０．８Ｈｚ）、８．６５（ｓ、１Ｈ）、７．９７（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝９．２、０．８Ｈｚ）、７．８６（ｄｄ、１Ｈ、ｏｖｅｒｌａｐｐｅｄ、Ｊ＝９．２、１．６Ｈｚ）、７．８５（ｔ、１Ｈ、ｏｖｅｒｌａｐｐｅｄ、Ｊ＝７．８Ｈｚ）、７．６５（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝８．０Ｈｚ）、７．３８（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝７．６Ｈｚ）、７．１２（ｔ、１Ｈ、Ｊ＝７．８Ｈｚ）、６．９１（ｔ、１Ｈ、Ｊ＝１．６Ｈｚ）、６．７９（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝７．６Ｈｚ）、６．７１（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝８．０１．６Ｈｚ）、６．６４（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝１７．６、１１．２Ｈｚ）、５．８０（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝１７．６、０．８Ｈｚ）、５．２０（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝１１．２、０．８Ｈｚ）、４．７９（ｓ、２Ｈ）、２．５１（ｓ、３Ｈ）
【００９６】
実行実施例３
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−３−ビニルアニリン硫酸塩（実施例３９）の製造
【００９７】
【化８】
2013533252.tif 000010
【００９８】
無水ＥｔＯＨ（２ｍｌ）において、Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−３−ビニルアニリン（１００ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）が撹拌された懸濁液に無水ＥｔＯＨ（０．２０ｍｌ、０．３７ｍｍｏｌ）中の１０％Ｈ２ＳＯ４を加えた。前記混合物を室温に加温して１０分間撹拌した。反応混合物を無水Ｅｔ２Ｏ（８ｍｌ）で希釈させ、さらに１０分間撹拌した。沈殿物をＮ２下で濾過し、無水Ｅｔ２Ｏ（４×４ｍｌ）で洗浄し、真空下でＰ２Ｏ５上で徹底的に乾燥させ、黄色固体の標題の化合物（７９ｍｇ、６４％）を提供した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ９．４０（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝１．６、０．８Ｈｚ）、８．６３（ｓ、１Ｈ）、７．９８（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝９．２、０．８Ｈｚ）、７．８４（ｔ、１Ｈ、Ｊ＝８．０Ｈｚ）、７．７６（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝９．２、１．６Ｈｚ）、７．４３（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝７．６Ｈｚ）、７．４０（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝８．０Ｈｚ）、７．１３（ｔ、１Ｈ、Ｊ＝７．８Ｈｚ）、６．８０（ｂｒ ｓ、１Ｈ）、６．７９（ｄ、１Ｈ、ｏｖｅｒｌａｐｐｅｄ、Ｊ＝７．６Ｈｚ）、６．６４（ｄｄ、１Ｈ、ｏｖｅｒｌａｐｐｅｄ、Ｊ＝１７．６、１１．２Ｈｚ）、６．６３（ｄｄ、１Ｈ、ｏｖｅｒｌａｐｐｅｄ、Ｊ＝７．６、２．０Ｈｚ）、５．７４（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝１７．６、０．８Ｈｚ）、５．２１（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝１１．２、０．８Ｈｚ）、４．６８（ｓ、２Ｈ）、２．５８（ｓ、３Ｈ）
【００９９】
実行実施例４
３−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチルアミノ）−４−（（ジメチルアミノ）メチル）ベンゾニトリル（実施例１１６）の製造
【０１００】
【化９】
2013533252.tif 000011
【０１０１】
１，２−ジクロロエタン（３０ｍｌ）において、４−（（１，２，４）トリアゾロ（１，５−ａ）ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−カルバルデヒド（０．５０ｇ、１．６４ｍｍｏｌ）が撹拌された溶液に３−アミノ−４−（（ジメチルアミノ）メチル）ベンゾニトリル（０．４３ｇ、２．４６ｍｍｏｌ）及びＡｃＯＨ（０．２０ｇ、３．２９ｍｍｏｌ）を加え、前記混合物を８０℃で一晩加熱した。反応混合物を減圧下で濃縮させ、残渣を無水ＭｅＯＨ（３０ｍｌ）で溶解させた。０℃でメタノール溶液にＮａＢＨ４（０．２５ｇ、６．５７ｍｍｏｌ）を加え、前記混合物を室温に加温し、さらに３時間撹拌した。反応混合物のｐＨを０℃で１Ｎ ＨＣｌで７〜８に調節し、減圧下でＭｅＯＨを除去した。水性混合物をＣＨ２Ｃｌ２（２×５０ｍｌ）で抽出し、前記ＣＨ２Ｃｌ２溶液をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させて濾過し、減圧下で蒸発乾燥させた。残渣はＭｅＯＨ及びＣＨ２Ｃｌ２の混合物（１：１９（ｖ／ｖ））を溶出剤として用いてシリカゲル上でＭＰＬＣにより精製させ、白色固体の標題の化合物（０．６０ｇ、７９％）を提供した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ８．９９（ｓ、１Ｈ）、８．３６（ｓ、１Ｈ）、７．８６（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝９．２、１．６Ｈｚ）、７．７８（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝９．２、０．８Ｈｚ）、７．４７（ｔ、１Ｈ、Ｊ＝７．６Ｈｚ）、７．２３（ｂｒ ｄ、１Ｈ、Ｊ＝７．６Ｈｚ）、７．０９（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝７．６Ｈｚ）、７．０１（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝７．６Ｈｚ）、６．９８（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝７．６、１．６Ｈｚ）、６．９３（ｂｒ ｓ、１Ｈ）、４．５９（ｓ、２Ｈ）、３．６３（ｓ、２Ｈ）、２．５３（ｓ、３Ｈ）、２．３３ｓ、６Ｈ）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ ４６４．２３（ＭＨ＋）
下記表１に表された化合物は前記実行実施例１から４とほぼ同様の方式で製造した。これら化合物の質量分光学データを表１に含む。
【０１０２】
【表１】
2013533252.tif 000012
【０１０３】
【表２】
2013533252.tif 000013
【０１０４】
【表３】
2013533252.tif 000014
【０１０５】
【表４】
2013533252.tif 000015
【０１０６】
【表５】
2013533252.tif 000016
【０１０７】
【表６】
2013533252.tif 000017
【０１０８】
【表７】
2013533252.tif 000018
【０１０９】
【表８】
2013533252.tif 000019
【０１１０】
【表９】
2013533252.tif 000020
【０１１１】
【表１０】
2013533252.tif 000021
【０１１２】
【表１１】
2013533252.tif 000022
【０１１３】
【表１２】
2013533252.tif 000023
【０１１４】
【表１３】
2013533252.tif 000024
【０１１５】
【表１４】
2013533252.tif 000025
【０１１６】
【表１５】
2013533252.tif 000026
【０１１７】
【表１６】
2013533252.tif 000027
【０１１８】
【表１７】
2013533252.tif 000028
【０１１９】
【表１８】
2013533252.tif 000029
【０１２０】
【表１９】
2013533252.tif 000030
【０１２１】
【表２０】
2013533252.tif 000031
【０１２２】
【表２１】
2013533252.tif 000032
【０１２３】
【表２２】
2013533252.tif 000033
【０１２４】
【表２３】
2013533252.tif 000034
【０１２５】
【表２４】
2013533252.tif 000035
【０１２６】
【表２５】
2013533252.tif 000036
【０１２７】
【表２６】
2013533252.tif 000037
【０１２８】
【表２７】
2013533252.tif 000038
【０１２９】
【表２８】
2013533252.tif 000039
【０１３０】
【表２９】
2013533252.tif 000040
【０１３１】
【表３０】
2013533252.tif 000041
【０１３２】
実行実施例５
Ｎ−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）−２−フルオロ−Ｎ−メチルアニリン（実施例１４０）の製造
【０１３３】
【化１０】
2013533252.tif 000042
【０１３４】
第３級−ブチルメチルエーテル（１０ｍｌ）及びＭｅＯＨ（８ｍｌ）の混合物において、１−（（１，２，４）トリアゾロ（１，５−ａ）ピリジン−６−イル）−２−（６−メチルピリジン−２−イル）エタン−１，２−ジオン（０．２０ｇ、０．７５ｍｍｏｌ）が撹拌された溶液に２−（（２−フルオロフェニル）（メチル）アミノ）アセトアルデヒド（１９０ｍｇ、１．１３ｍｍｏｌ）及びＮＨ４ＯＡｃ（０．１５ｇ、１．８８ｍｍｏｌ）を加え、前記混合物を室温で２時間撹拌した。前記混合物のｐＨを飽和された水性ＮａＨＣＯ３溶液で８に調節した。前記溶媒の除去後、反応混合物をＣＨＣｌ３（２×１００ｍｌ）で抽出し、前記ＣＨＣｌ３溶液を水（２０ｍｌ）及び塩水（２０ｍｌ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させて濾過し、減圧下で蒸発乾燥させた。残渣はＭｅＯＨ及びＣＨ２Ｃｌ２の混合物（１：１９（ｖ／ｖ））を溶出剤として用いてシリカゲル上でＭＰＬＣにより精製させ、薄い黄色固体の標題の化合物（９０ｍｇ、３２％）を提供した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ８．９７（ｂｒ ｓ、１Ｈ）、８．３７（ｓ、１Ｈ）、７．８２（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝９．２、１．６Ｈｚ）、７．７８（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝９．２、１．２Ｈｚ）、７．４９（ｔ、１Ｈ、Ｊ＝７．８Ｈｚ）、７．２５（ｂｒ ｄ、１Ｈ、Ｊ＝７．６Ｈｚ）、７．１４−７．０６（ｍ、３Ｈ）、７．０４（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝７．６Ｈｚ）、７．００−６．９４（ｍ、１Ｈ）、４．４４（ｓ、２Ｈ）、２．９１（ｓ、３Ｈ）、２．５８（ｓ、３Ｈ）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ ４１４．２０（ＭＨ＋）
【０１３５】
実行実施例６
３−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）ベンゾニトリル（実施例１４５）の製造
【０１３６】
【化１１】
2013533252.tif 000043
第３級−ブチルメチルエーテル（３０ｍｌ）及びＭｅＯＨ（３０ｍｌ）の混合物において、１−（（１，２，４）トリアゾロ（１，５−ａ）ピリジン−６−イル）−２−（６−メチルピリジン−２−イル）エタン−１，２−ジオン（４．００ｇ、１５．０２ｍｍｏｌ）が撹拌された溶液に３−（ホルミルメチル）ベンゾニトリル（ＷＯ ０２／０９６８７５ Ａ１に記載した方法で製造）（６．５４ｇ、４５．０７ｍｍｏｌ）及びＮＨ４ＯＡｃ（１１．５８ｇ、１５０．２４ｍｍｏｌ）を加え、前記混合物を室温で９０分間撹拌した。前記混合物のｐＨを飽和された水性ＮａＨＣＯ３溶液で８に調節した。前記溶媒の除去後、反応混合物をＥｔＯＡｃ（２×１５０ｍｌ）で抽出し、前記ＥｔＯＡｃ溶液を水（５０ｍｌ）及び塩水（５０ｍｌ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させて濾過し、減圧下で蒸発乾燥させた。残渣はＭｅＯＨ及びＣＨ２Ｃｌ２の混合物（１：１９（ｖ／ｖ））を溶出剤として用いてシリカゲル上でＭＰＬＣにより精製させ、黄色固体の標題の化合物（１．９２ｇ、３３％）を提供した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１２．７０（ｂｒ ｓ、１Ｈ）、９．５３（ｂｒ ｓ、１Ｈ）、８．４９（ｓ、１Ｈ）、７．９６（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝９．２、１．８Ｈｚ）、７．８４（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝２．０Ｈｚ）、７．８２（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝９．２Ｈｚ）、７．７４−７．７１（ｍ、２Ｈ）、７．６９（ｔ、１Ｈ、ｏｖｅｒｌａｐｐｅｄ、Ｊ＝７．６Ｈｚ）、７．５６（ｔ、１Ｈ、Ｊ＝７．８Ｈｚ）、７．４７（ｂｒ ｓ、１Ｈ）、７．１５（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝７．６Ｈｚ）、４．１８（ｓ、２Ｈ）、２．４７（ｓ、３Ｈ）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ ３９２．１８（ＭＨ＋）
実行実施例７
３−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）ベンズアミド（実施例１４７）の製造
【０１３７】
【化１２】
2013533252.tif 000044
【０１３８】
ＥｔＯＨ（２ｍｌ）において、３−（（４−（［１，２，４］トリアゾロ（１，５−ａ）ピリジン−６−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）ベンゾニトリル（４１ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）が撹拌された溶液に２８％Ｈ２Ｏ２（１３．９ｍｌ、０．１１ｍｍｏｌ）及び１Ｎ ＮａＯＨ（０．３９ｍｌ、０．３９ｍｍｏｌ）を室温で加えた。前記混合物を６０℃で１時間加熱て、ここに０℃で１Ｎ ＨＣｌを加えてｐＨ７〜８に調節した。前記溶媒の除去後、残渣をＣＨ２Ｃｌ２（２×１５ｍｌ）で抽出した。前記ＣＨ２Ｃｌ２溶液を水（５ｍｌ）及び塩水（５ｍｌ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させて濾過し、減圧下で蒸発乾燥させた。残渣はＭｅＯＨ及びＣＨ２Ｃｌ２の混合物（１：９（ｖ／ｖ））を溶出剤として用いてシリカゲル上でＭＰＬＣにより精製させ、黄色固体の標題の化合物（１５ｍｇ、３５％）を提供した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ８．９３（ｂｒ ｓ、１Ｈ）、８．３２（ｓ、１Ｈ）、７．７７（ｓ、１Ｈ）、７．７６（ｄｄ、１Ｈ、ｏｖｅｒｌａｐｐｅｄ、Ｊ＝９．２、１．６Ｈｚ）、７．６９（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝９．２Ｈｚ）、７．５６（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝８．０Ｈｚ）、７．４４（ｔ、１Ｈ、Ｊ＝７．６Ｈｚ）、７．３９（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝７．６Ｈｚ）、７．２６（ｔ、１Ｈ、Ｊ＝８．０Ｈｚ）、７．２１（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝７．６Ｈｚ）、６．９８（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝７．６Ｈｚ）、６．６０（ｂｒ ｓ、１Ｈ）、６．２７（ｂｒ ｓ、１Ｈ）、４．１５（ｓ、２Ｈ）、２．４４（ｓ、３Ｈ）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ ４１０．１９（ＭＨ＋）
【０１３９】
下記表２に表される化合物を前記実行実施例５から７とほぼ同様の方式で製造した。これら化合物の質量分光学データを表２に含む。
【０１４０】
［表２］
【０１４１】
【表３１】
2013533252.tif 000045
【０１４２】
【表３２】
2013533252.tif 000046
【０１４３】
【表３３】
2013533252.tif 000047
【０１４４】
生物学的データ
本発明化合物の生物学的活性を下記の分析を用いて評価することができる：
＜ＡＬＫ５キナーゼリン酸化の抑制を評価するための無細胞分析＞
ＡＬＫ５蛋白質をバキュロウイルス発現システムを用いてヒト再組合ＧＳＴ−融合蛋白質としてＳｆ９昆虫細胞で発現させた。発現した蛋白質はＧＳＨ−アガロース（シグマアルドリッチ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）社製）を用いて親和性クロマトグラフィにより精製した。キナーゼ分析を５０μｌ反応体積中のパーキンエルマー（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）（米国、マサチューセッツ州、ボストン所在）の９６−ウェルフラッシュプレート（商標）で行った。前記反応カクテルを下記の順序で４段階のピペット操作を行った：２０μｌの分析緩衝剤（標準緩衝剤）、５μｌのＨ２Ｏ中のＡＴＰ溶液、５μｌの１０％ＤＭＳＯ中の化学式Ｉのそれぞれの試験化合物、１０μｌのＧＳＫ３（１４−２７）（２００ｎｇ）／１０μｌのＡＬＫ５溶液（１ｎｇ）（予混合）。前記反応カクテルは６０ｍＭ ＨＥＰＥＳ−ＮａＯＨ、ｐＨ７．５、３ｍＭ ＭｇＣｌ２、３ｍＭ ＭｎＣｌ２、３μＭ Ｎａ３ＶＯ４、１．２ｍＭ ＤＴＴ、５０μｇ／ｍｌ ＰＥＧ２００００、１μＭ［γ−３３Ｐ］−ＡＴＰ（約２．５×１０５ｃｐｍ／ウェル）、２００ｎｇ／１０μｌ ＧＳＫ３（１４−２７）、及び１ｎｇ／１０μｌ ＡＬＫ５を含有した。前記反応カクテルを３０℃で６０分間培養した。前記反応を５０μｌの２％（ｖ／ｖ）Ｈ３ＰＯ４で中止させ、プレートを吸出し、２００μｌ ０．９％（ｗ／ｖ）ＮａＣｌで２回洗浄した。分析をベックマン・コールター・バイオメック（ＢｅｃｋｍａｎＣｏｕｌｔｅｒ Ｂｉｏｍｅｋ）２０００ロボットシステムで行った。３３Ｐｉの結合（「ｃｐｍ」カウンティング）を微細プレートフラッシュカウンター（Ｍｉｃｒｏｂｅｔａ、Ｗａｌｌａｃ）で測定した。
化学式Ｉの化合物は、通常１μＭ未満のＩＣ５０値を示し；一部は０．１μＭ未満のＩＣ５０値を示し；一部は１０ｎＭ未満のＩＣ５０値を示し、これを表３に記載する。
【０１４５】
【表３４】
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【０１４６】
＜ＡＬＫ４キナーゼリン酸化の抑制を評価するための無細胞分析＞
化学式Ｉの試験化合物によるＡＬＫ４キナーゼリン酸化の抑制を、ＧＳＴ−表示されたＡＬＫ４（インビトロジェン社（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ））及びＲＢＥＲ−ＣＨＫｔｉｄｅを前記ＧＳＴ−表示されたＡＬＫ５及びＧＳＫ３（１４−２７）の代わりに使用することを除いては、ＡＫＬ５の抑制に対して上述したこととほぼ同様の方式で測定することができる。
化学式Ｉの化合物は、通常１μＭ未満のＩＣ５０値を示し；一部は０．１μＭ未満のＩＣ５０値を示し；一部は１０ｎＭ未満のＩＣ５０値を示した。
【０１４７】
＜キナーゼ選択性のプロファイリング＞
キナーゼ分析を５０μｌ反応体積中のパーキンエルマーの９６−ウェルフラッシュプレート（商標）で行った。前記反応カクテルを下記の順序で４段階のピペット操作を行った：１５μｌのＨ２Ｏ中のＡＴＰ溶液、２０μｌの分析緩衝剤（標準緩衝剤）、５μｌの１０％ＤＭＳＯ中の実施例２、１０μｌのＨ２Ｏ中の酵素／基質混合物。前記反応カクテルは、７０ｍＭ ＨＥＰＥＳ−ＮａＯＨ、ｐＨ７．５、３ｍＭ ＭｎＣｌ２、３μＭ Ｎａ３ＶＯ４、１．２ｍＭ ＤＴＴ、１μＭ［γ−３３Ｐ］−ＡＴＰ（約６×１０５ｃｐｍ／ウェル）、蛋白質キナーゼ（可変量）、及び基質（可変量）を含有した。前記反応カクテルを３０℃で６０分間培養した。前記反応を５０μｌの２％（ｖ／ｖ）Ｈ３ＰＯ４で中止させ、プレートを吸出し、２００μｌ ０．９％（ｗ／ｖ）ＮａＣｌで２回洗浄した。全ての分析をベックマン・コールター・バイオメック２０００／ＳＬロボットシステムで行った。３３Ｐｉの結合（「ｃｐｍ」のカウンティング）を微細プレートフラッシュカウンターで測定した。
【０１４８】
【表３５】
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【０１４９】
＜ＴＧＦ−βの信号伝達の細胞抑制を評価するための分析＞
ｐ３ＴＰ−Ｌｕｃ（ｎｅｏ）発現プラスミドを有するＨａＣａＴ−３ＴＰ−Ｌｕｃ安定性細胞または４Ｔ１−３ＴＰ−Ｌｕｃ安定性細胞をそれぞれ９６−ウェルプレートで２．５×１０４細胞／ウェルまたは５×１０５細胞／ウェルで播種した。細胞を５％ＣＯ２、３７℃で２４時間、約６０〜７０％合流率で化学式Ｉのそれぞれの試験化合物の存在または不在下で０．２％ＦＢＳ中のＴＧＦ−β１（２ｎｇ／ｍｌ）で同時に処理した。細胞溶解物をメーカーの説明に従ってルシフェラーゼ分析システム（プロメガ（Ｐｒｏｍｅｇａ）社製）を用いて製造し、発光を発光測定装置のマイクロプレートルミノメーター（Ｍｉｃｒｏ Ｌｕｍａｔ Ｐｌｕｓ）（ベルトールド（Ｂｅｒｔｈｏｌｄ）社製、ドイツ所在）により測定した。
化学式Ｉの化合物は、通常１μＭ未満のＩＣ５０値を示し；一部は０．１μＭ未満のＩＣ５０値を示し；一部は１０ｎＭ未満のＩＣ５０値を示した。
【０１５０】
＜免疫蛍光分析＞
ＭＣＦ１０Ａ細胞を６−ウェルプレートにおけるカバーグラス上に２×１０５細胞／ウェルで塗抹した。１２時間後、細胞が付着すると、１０％ＦＢＳ培地を０．５％ＦＢＳ培地に交換した。２４時間後、細胞を実施例２（１μ）の存在または不在下で２時間、ＴＧＦ−β１（２ｎｇ／ｍｌ）で処理した。細胞を室温で３０分間４％ホルムアルデヒド溶液で固定させ、急冷溶液（ＰＢＳ中の５０ｍＭ ＮＨ４Ｃｌ）で１５分間急冷させた。ＰＢＳで３回洗浄した後、細胞を室温で１時間遮断／浸透溶液（ＰＢＳ中の１％ＢＳＡ及び０．１％トリトンＸ−１００）と共に培養し、４℃で一晩抗−スマッド２／３抗体（ＢＤバイオサイエンス（Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）社製、米国、ニュージャジー州フランクリンレイクス所在）と共に培養した。蛍光をＣｙ３−接合されたヤギ抗−マウスＩｇＧ（ジャクソン・イムノ・リサーチ・ラボラトリーズ（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）社製、米国、メイン州バーハーバー所在）により表面化した。同じ細胞の核をＤＡＰＩ溶液で染色した。細胞をＬＳＭ ５１０ ＭＥＴＡレーザー共焦点顕微鏡検査システム（カール・ツァイス社製、ドイツ所在）を用いて分析した。
実施例２はＭＣＦ１０Ａ細胞でＴＧＦ−β１−誘導されたスマッド２／３核転座を抑制した。
【０１５１】
＜傷治療分析＞
ＭＣＦ１０Ａ細胞を６−ウェルプレートで２×１０５細胞／ウェルで播種した。それぞれのウェルで面積の８０％以上が細胞により占有された時、１０％ＦＢＳを０．２％ＦＢＳに交換した。２４時間後、プラスチックピペットチップを用いて傷を作り、細胞を実施例２（１μＭ）の存在または不在下で１６時間、ＴＧＦ−β１（２ｎｇ／ｍｌ）で処理した。０時間から１６時間までの傷の面積変化を顕微鏡で測定した細胞の位相−コントラスト像に基づき、イメージJプログラム（Ｉｍａｇｅ Ｊ ｐｒｏｇｒａｍ）（ＮＩＨ、米国、メリーランド所在）により計算した。
【０１５２】
実施例２はＭＣＦ１０Ａ細胞でＴＧＦ−β１−誘導された細胞移動を抑制した。
＜マトリゲル（Ｍａｔｒｉｇｅｌ）浸潤分析＞
トランスウェル（Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ）（６．５ｍｍ直径、８μｍ気孔サイズ；コーニング（Ｃｏｒｎｉｎｇ）、米国、マサチューセッツ州ローウェル所在）の上部表面を２０μｌの希釈されたマトリゲル（ＢＤバイオサイエンス）でコーティングした。４Ｔ１細胞を実施例２の存在または不在下でＴＧＦ−β１（２ｎｇ／ｍｌ）と共にまたは使用せずに無血清培地中のトランスウェルの上部チャンバー上に４×１０４細胞／ウェルで播種した。下部チャンバーは、実施例２の存在または不在下でＴＧＦ−β１（２ｎｇ／ｍｌ）と共に１０％ＦＢＳで充填した。５％ＣＯ２下での３７℃で２０時間培養した後、前記膜の上部表面上に残っている細胞を綿棒で除去し、底部の表面上に残っているＤＡＰＩ−染色された細胞を蛍光顕微鏡検査により観察した。視野当たり平均細胞数は、５個の無作為に選んだ視野から獲得した。
実施例２はマトリゲル浸潤分析でＴＧＦ−β１−誘導された細胞浸潤を抑制した。
【０１５３】
＜細胞生育研究＞
４Ｔ１細胞またはＭＣＦ１０Ａ細胞を９６−ウェルプレートで１ウェル当たり５×１０３細胞で播種した。細胞が付着された後、細胞を０．２％血清培地でＤＭＳＯに溶解された実施例２で処理した。４日間培養した後、細胞生育力をＳＲＢ分析により測定した。
実施例２は有意水準がなく、４Ｔ１細胞生育に対して効果が見られず、少し増加されたＭＣＦ１０Ａ細胞生育を示し、これは実施例２の転移抑制効果が円発腫瘍成長抑制によることでないことを意味する。
【０１５４】
＜ＢＡＬＢ／ｃ ４Ｔ１異種移植されたマウスモデルに対する転移−抑制効果＞
雌ＢＡＬＢ／ｃマウスをオリエントバイオ社（Ｏｒｉｅｎｔ Ｂｉｏ Ｉｎｃ．）（大韓民国、ソウル所在）から購入した。動物は温度を調節した部屋（２２℃）に維持させ、餌と水を自由に供給した。４Ｔ１細胞（１．２×１０４細胞）をＰＢＳに懸濁し、これを５〜６週の雌ＢＬＡＢ／ｃマウスの左側＃４乳房の脂肪層に移植した（０日目）。実験１で、腫瘍の移植後に処理を始めた（０日目）。水中に溶解された実施例３（１３．６または２７．３ｍｇ／ｋｇ）を４週間１週に５日連続してマウスに経口ＢＩＤで提供した。実験２で、４日目に処理を始めた。人工胃液剤形中に溶解された実施例２（５、１０、２０または４０ｍｇ／ｋｇ）を３週間１週に５日連続してマウスに経口で提供した。実験３で、４日目に処理を始めた。人工胃液剤形中に溶解された実施例２（５、１０、２０または４０ｍｇ／ｋｇ）を２４日間２日ごとに（週３回）マウスに経口で提供した。実験４で、４Ｔ１細胞（１×１０４細胞）をＰＢＳに懸濁し、これを１０週の雌ＢＬＡＢ／ｃマウスの左側＃４乳房の脂肪層に移植した（０日目）。処理を１０日目に始めた。塩水中に溶解された実施例６１（４３．６ｍｇ／ｋｇ）を２．５週間２日ごとにマウスの腹腔内に提供した。全実験において、マウスへの最後の投与後、２４〜７２時間目に殺し、ＰＢＳ中の１５％インディアインク溶液（ハーディ・ダイアグノスティクス（Ｈａｒｄｙ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ））を器官に直ちに注射した。前記インディアインクにより染色された肺を単離し、２０分以上フェケット（Ｆｅｋｅｔ）溶液（ＰＢＳ中の６０％エタノール、３％ホルムアルデヒド、及び４％酢酸）で染色除去した。転移性結節の数を左側肺葉の表面上でカウントし、肺をデジタルカメラで撮影した。腫瘍のサイズをキャリパーで測定し、腫瘍の体積を下記式を用いて計算した：
腫瘍の体積＝（０．５２３６）×（幅）２ ×（長さ）
【０１５５】
実施例２、３及び６１は、肺における転移性結節の数を顕著に減少させた。
実験３で、ウエスタンブロット分析を行って腫瘍組織中のスマッド２リン酸化に対する実施例２の効果を検査した。１つのビヒクル緩衝剤（４ｍＭ ＨＣｌ、１ｍｇ／ｍｌ ＢＳＡ）またはＴＧＦ−β１（５０ｎｇ／マウス）を、マウスを殺す２時間前に前記マウスの静脈内に提供した。マウスからの腫瘍組織を氷上で２０分間ＲＩＰＡ緩衝剤［５０ｍＭトリス、ｐＨ７．５、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、０．１％ドデシル硫酸ナトリウム、０．５％デオキシコール酸ナトリウム、１％ＮＰ−４０、１ｍＭ ＮａＦ、１ｍＭ Ｎａ３ＶＯ４、１ｍＭ ＰＭＳＦ、プロテアーゼ抑制剤カクテル（ロシュ・ダイアグノスティックス（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）ＧｍｂＨのプロテアーゼ抑制剤カクテル／１０ｍｌ１錠）（ロシュ）］に溶解させた。溶解物を４℃で２０分間１３０００ｒｐｍで遠心分離して澄明化した。上澄液の蛋白質含量をマイクロ−ＢＣＡ（ビシンコニン酸）蛋白質分析キット（サーモサイエンティフィック（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）社製）を用いて測定した。２０〜５０μｇの総蛋白質を含有する溶解物をポリアクリルアミドゲル上で電気泳動により分離させ、ポリフッ化ビニリデンのトランスファーメンブレン（ミリポア、米国、マサチューセッツ州ビルリカ所在）に電気泳動により移動させた。メンブレンを０．５％ツイン−２０（ＰＢＳＴ）を含有するＰＢＳ中の５％ＢＳＡ（シグマアルドリッチ社）で１時間遮断し、下記の抗体の１つと共に４℃で一晩培養した：１％ＢＳＡを含有するＰＢＳＴ中の抗−ホスホ−スマッド２（ミリポア）、抗−スマッド２／３（ＢＤトランスダクションラボラトリー（Ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）社製、米国、ニュージャジー州所在）、または抗−β−アクチン（シグマアルドリッチ社製）メンブレンをＰＢＳＴで３回洗浄し、室温で１時間、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）−接合されたヤギ抗マウス抗体またはＨＲＰ−接合されたヤギ抗ラビット抗体（サンタクルーズバイオテクノロジー（ＳａｎｔａＣｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）社製、米国、カリフォルニア州サンタクルーズ所在）と共に培養した。結合された抗体をウェスタンブロッティングルミノール試薬（サンタクルーズバイオテクノロジー社製）を用いて検出した。バンド強度を濃度計ＬＡＳ−３０００映像装置（ＦＵＪＩＦＩＬＭ社製、日本、東京所在）を用いて分析した。
実施例２は腫瘍組織でＴＧＦ−β１−誘導されたスマッド２リン酸化を抑制した。
【０１５６】
＜ＭＭＴＶ／ｃ−Ｎｅｕマウスの乳癌モデルに対する転移抑制効果＞
ＭＭＴＶ／ｃ−Ｎｅｕ雌トランスジェニックマウスをジャクソンラボラトリーズ（米国、メイン州バーハーバー所在）から購入した。動物を温度−調節されたＳＰＦ部屋（２２℃）で維持させ、餌と水を自由に供給した。実験１で、塩水中に溶解された実施例６１（４３．６ｍｇ／ｋｇ）を３週間２日ごとに３２週のＭＭＴＶ／ｃ−Ｎｅｕマウスの腹腔内に提供した。実験２で、塩水中に溶解された実施例３（４３．６ｍｇ／ｋｇ）を１０週間２日ごとに３２週のＭＭＴＶ／ｃ−Ｎｅｕマウスの腹腔内に提供した。マウスへの最後の投与後、２４時間目に殺し、乳房腫瘍及び肺の組織をヘマトキシリン及びエオシン（Ｈ＆Ｅ）染色により分析した。乳房腫瘍及び肺組織中のβ−カゼインｍＲＮＡ水準を分析するために、全体ＲＮＡをメーカーの説明に従ってＴＲＩｚｏｌ試薬（インビトロジェン社製）及びＲＮｅａｓｙミニキット（キアゲン（Ｑｉａｇｅｎ）社製）を用いて前記組織から単利した。前記ｃＤＮＡを３７℃で１時間、ＭＭＬＶ ＲＴａｓｅ（インビトロジェン社製）によりランダムプライマー（インビトロジェン社製）を用いて２μｇの総ＲＮＡから合成し、Ｔａｑポリメラーゼ（プロメガ（Ｐｒｏｍｅｇａ）社製）及び下記の遺伝子−特異性プライマーを用いてＰＣＲ増幅を加えた：マウスＧＡＰＤＨ（順方向）５’−ＡＴＧ ＴＧＴ ＣＣＧ ＴＣＧ ＴＧＧ ＡＴＣ ＴＧＡ−３’及び（逆方向）５’−ＴＴＧ ＡＡＧ ＴＣＧ ＣＡＧ ＧＡＧ ＡＣＡ ＡＣＣ−３’、マウスβ−カゼイン（順方向）５’−ＴＣＣ ＣＡＣ ＡＡＡ ＡＣＡ ＴＣＣ ＡＧＣ Ｃ−３’及び（逆方向）５’−ＡＣＧ ＧＡＡ ＴＧＴ ＴＧＴ ＧＧＡ ＧＴＧ Ｇ−３’。増幅されたＤＮＡをアガロースゲル電気泳動により分析した。
【０１５７】
実施例６１は、肺中の転移性病変の数を顕著に減少させた。顕著な水準のβ−カゼイン（乳房分化マーカー）ｍＲＮＡがＭＭＴＶ／ｃ−Ｎｅｕマウスの肺で検出された。実施例３及び６１は、肺でβ−カゼインｍＲＮＡ発現水準を顕著に抑制し、これは前記実施例３及び６１の転移−抑制効果を意味する。
【０１５８】
前記原発性乳房腫瘍におけるＭＭＰ−９及びＭＭＰ−２の活性をゼラチンザイモグラフィにより測定した。マウスからの腫瘍組織（３０ｍｇ）を氷上で１０〜２０分間５００μｌ ＲＩＰＡ緩衝剤（５０ｍＭトリス、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、０．１％ドデシル硫酸ナトリウム、０．５％デオキシコール酸ナトリウム、１％ＮＰ−４０、ＥＤＴＡ不在プロテアーゼ抑制剤）に溶解させた。溶解物を４℃、１３０００ｒｐｍで１０分間遠心分離して澄明化した。上澄液の蛋白質含量をマイクロ−ＢＣＡ蛋白質分析キット（サーモサイエンティフィック社製）を用いて測定した。ローディングサンプルは、１５μｇの総蛋白質を含有する溶解物にローディング緩衝剤（０．５Ｍトリス、ｐＨ６．８、５０％グリセロール、１０％ＳＤＳ、及び１％ブロモフェノールブルー溶液）を加えて製造した。ローディングサンプルを６０℃で５分間加熱し、０．２％ゼラチンを含有する１０％ポリアクリルアミドゲル上で電気泳動により分離させた。ゲルを室温で３０分間洗浄緩衝剤［２．５％トリトン−Ｘ １００、０．０５Ｍトリス−ＨＣｌ、ｐＨ７．５、及び０．１Ｍ ＮａＣｌ］で２回洗浄した。次に、前記ゲルを３７℃で１６〜１８時間振とうしながら培養緩衝剤［０．０５Ｍトリス−ＨＣｌ、ｐＨ７．５、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、０．０１Ｍ ＣａＣｌ２、０．０２％ＮａＮ３及び１μＭ ＺｎＣｌ２］で培養した。ゲルは、室温で２〜４時間、５％メタノール及び１０％酢酸を含有する０．５％クマシー・ブルーＲ２５０溶液により染色し、染色除去溶液（５％メタノール及び１０％酢酸）により室温で３０分間２回染色除去した。ゲル像をサイバーグリーンモードの濃度計ＬＡＳ−３０００映像装置（ＦＵＪＩＦＩＬＭ社製）を用いて得た。
実施例３は原発性乳房腫瘍でのＭＭＰ−９及びＭＭＰ−２の活性を顕著に抑制した。
【０１５９】
＜胆管−結紮された肝線維症モデルに対する線維症抑制効果＞
６週の雄ＳＤラット（Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ ｒａｔ）をオリエントバイオ社から購入した。実験１で、１８０〜２００ｇ重量のＳＤラットを５個の実験群に無作為分割した：模擬−実行された対照用ラット（ｎ＝５）、実施例３（４３．６ｍｇ／ｋｇ、ｎ＝５）で処理された模擬−実行されたラット、胆管−結紮された（ＢＤＬ）ラット（ｎ＝１０）、２１．８または４３．６ｍｇ／ｋｇの実施例３で処理されたＢＤＬラット（ｎ＝１０）。実験２で、１８０〜２００ｇ重量のＳＤラットを５個の実験群に無作為分割した：模擬−実行された対照用ラット（ｎ＝５）、ＢＤＬラット（ｎ＝１０）、５、１０または２０ｍｇ／ｋｇの実施例２で処理されたＢＤＬラット（ｎ＝１０）。ＢＤＬの場合、前記動物をゾレチル（２０ｍｇ／ｋｇ）及びキシラジン（１０ｍｇ／ｋｇ）で麻酔させ、総胆管を露出させて３−０絹糸にて二重結紮した。
【０１６０】
第１の結紮糸を肝管の連結部の下方に置き、第２の結紮糸は膵臓管の入口の上方に置いた。前記総胆管を前記二重結紮糸の間で切断した。模擬−実行されたラットにおいて、腹部を切開していかなる処理をすることなく閉腹した。外科的手術後、２時間以内に処理を始めた。塩水中に溶解された実施例３（実験１）または人工胃液剤形中に溶解された実施例２（実験２）をＢＤＬ手術から４週間週３回ラットに経口提供した。動物は温度調節された部屋（２１℃）に維持させ、オートクレーブ処理された餌と水を供給した。最後の投与後、４８時間目に動物を殺し、血清、脾臓及び肝を除去した。肝を矢状スライスして複数の部分にし、液体窒素で急速凍結させて−７０℃で保管した。肝の一部を組織病理学的に検査するために、１０％中性の緩衝された−ホルマリンに浸した。全実験過程を協会の指針の通り行った。血清アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）及びアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）の活性をメーカーの説明に従って分光光度測定酵素分析キット（アサンファーム社製（Ａｓａｎ Ｐｈａｒｍ．Ｃｏ．、Ｌｔｄ．）、大韓民国、華城市所在）を用いて測定した。
【０１６１】
また、自動化装置を用いて一般的な血清生化学を分析した。肝臓標本をパラフィン−埋没されたブロックに通常的に処理する前に、１０％中性の緩衝された−ホルマリンに固定させた。セクション（５μｍ厚さ）を切断し、ヘマトキシリン及びエオシン（Ｈ＆Ｅ）を用いて染色し、光顕微鏡により検査した。肝組織を氷上で２０分間ＲＩＰＡ緩衝剤［５０ｍＭトリス、ｐＨ７．５、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、１ｍＭ ＥＤＴＡ、０．１％ドデシル硫酸ナトリウム、０．５％デオキシコール酸ナトリウム、１％ＮＰ−４０、５０ｍＭ ＮａＦ、１ｍＭ Ｎａ３ＶＯ４、１ｍＭ ＰＭＳＦ、プロテアーゼ抑制剤カクテル（ロシュ・ダイアグノスティックスＧｍｂＨのプロテアーゼ抑制剤カクテル／１０ｍｌ１錠）（ロシュ）］に溶解させた。溶解物を４℃で２０分間１３０００ｒｐｍで遠心分離して澄明化した。
【０１６２】
上澄液の蛋白質含量をマイクロ−ＢＣＡ蛋白質分析キット（サーモサイエンティフィック社製）を用いて測定した。２０〜６０μｇの総蛋白質を含有する溶解物を６〜１０％ドデシル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミドゲル上で電気泳動により分離させ、ニトロ−セルロース（ワットマン（Ｗｈａｔｍａｎ）（登録商標）、ドイツ所在）またはポリフッ化ビニリデンメンブレン（ミリポア社製）に移動させた。メンブレンを５％ＢＳＡ（シグマアルドリッチ社製）または５％無脂肪粉乳溶液で１時間遮断して下記の抗体の１つと共に４℃で一晩培養した：ラビット抗ホスホ−スマッド３（セルシグナリングテクノロジー（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）社製、米国、マサチューセッツ州ベヴァリー所在）、ラビット抗−ａ−ＳＭＡ（ミリポア社製）、マウス抗−フィブロネクチン、マウス抗−ビメンチン（ＢＤバイオサイエンス）、またはマウス抗−β−アクチン（シグマアルドリッチ）。
【０１６３】
メンブレンをトリス−緩衝された塩水で３回洗浄し、室温で１時間ＨＲＰ−接合されたヤギ抗マウス抗体またはＨＲＰ−接合されたヤギ抗ラビット抗体（サンタクルーズバイオテクノロジー社製）と共に培養した。結合された抗体をＥＣＬキット（ＧＥヘルスケア、米国、ニュージャジー州プリンストン所在）を用いて検出した。バンド強度を濃度計ＬＡＳ−３０００映像装置（ＦＵＪＩＦＩＬＭ）を用いて分析した。
【０１６４】
ＢＤＬラットは、模擬−実行された対照用ラットに比べて、体重損失及び器官（肝及び脾臓）の重量増加があった。実施例２及び３では、ＢＤＬラットが体重損失を回復し、器官（肝及び脾臓）重量を減少させた。ＢＤＬラットは、模擬−実行された動物に比べて、血清ＡＬＴ及びＡＳＴの顕著な増加が観察された。実施例２及び３は、ＢＤＬラットの血清ＡＬＴ及びＡＳＴを改善させた。実施例３は、ＢＤＬラットの肝でスマッドの信号伝達を抑制し、ａ−ＳＭＡ、フィブロネクチン及びビメンチンを抑制した。実施例２は、ＢＤＬラットの肝でａ−ＳＭＡ及びフィブロネクチンを抑制した。ＢＤＬラットの肝は正常なラットの肝に比べて、中央±中央構造崩壊及び架橋線維症の形成を特徴とする代表的な組織学的変化を示した。実施例２及び３は、ＢＤＬ−誘発された組織学的変化を大きく除去した。
【０１６５】
［表５］
【０１６６】
【表３６】
2013533252.tif 000050
データは平均±Ｓ．Ｅ．（ｎ＝５〜８）を示す。
【０１６７】
［表６］
【０１６８】
【表３７】
2013533252.tif 000051
データは平均±Ｓ．Ｅ．（ｎ＝５〜８）を示す。
【０１６９】
＜ブレオマイシン−誘発された肺線維症モデルに対する線維症の抑制効果＞
６週の雄ＩＣＲマウスをオリエントバイオ社から購入した。３１〜３５ｇ重量のマウスを５個の実験群に無作為分割した：模擬−実行された対照用ラット（塩水、ｎ＝６）、ブレオマイシン（ＢＬＭ）−処理されたマウス（ｎ＝１０）、５、１０または２０ｍｇ／ｋｇの実施例２で処理されたＢＬＭ−処理されたマウス（ｎ＝１０）。肺線維症を誘導するために、マウスをゾレチル（１０ｍｇ／ｋｇ）及びキシラジン（５ｍｇ／ｋｇ）で麻酔させ、気管内への滴下により０日目に塩水６０μｌに溶解されたＢＬＭ（ＢＬＭ硫酸塩として提供、１ｍｇ／ｋｇ）（ＭＢｃｅｌｌ社製、米国、カリフォルニア州ロサンゼルス所在）を１回提供した。人工胃液剤形中に溶解された実施例２を第７日から２週間週５回マウスに経口で提供した。動物は温度調節された部屋（２１℃）に維持させ、オートクレーブ処理された餌と水を供給した。手術後３週目に動物を殺し、肺を除去した。
【０１７０】
前記肺を矢状スライスして複数の部分にし、液体窒素で急速凍結させて−７０℃で保管した。肝の一部を組織病理学的に検査するために、１０％中性の緩衝された−ホルマリンに浸した。全実験過程を協会の指針の通り行った。肺標本をパラフィン−埋没されたブロックに通常的に処理する前に、１０％中性の緩衝された−ホルマリンに固定させた。セクション（５μｍ厚さ）を切断し、ヘマトキシリン及びエオシン（Ｈ＆Ｅ）を用いて染色し、光顕微鏡により検査した。
【０１７１】
肺組織を氷上で２０分間ＲＩＰＡ緩衝剤［５０ｍＭトリス、ｐＨ７．５、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、１ｍＭ ＥＤＴＡ、０．１％ドデシル硫酸ナトリウム、０．５％デオキシコール酸ナトリウム、１％ＮＰ−４０、５０ｍＭ ＮａＦ、１ｍＭ Ｎａ３ＶＯ４、１ｍＭ ＰＭＳＦ、プロテアーゼ抑制剤カクテル（ロシュ・ダイアグノスティックスＧｍｂＨのプロテアーゼ抑制剤カクテル／１０ｍｌ１錠）（ロシュ）］に溶解させた。
【０１７２】
溶解物を４℃で２０分間１３０００ｒｐｍで遠心分離して澄明化した。上澄液の蛋白質含量をマイクロ−ＢＣＡ蛋白質分析キット（サーモサイエンティフィック社製）を用いて測定した。２０〜５０μｇの総蛋白質を含有する溶解物を６〜１０％ドデシル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミドゲル上で電気泳動により分離させ、ニトロ−セルロース（ワットマン（登録商標））に移動させた。メンブレンを５％無脂肪粉乳溶液で１時間遮断してラビット抗−ａ−ＳＭＡ（ミリポア社製）またはマウス抗−フィブロネクチン（ＢＤバイオサイエンス社製）と共に４℃で一晩培養した。
【０１７３】
メンブレンをトリス−緩衝された塩水で３回洗浄し、室温で１時間ＨＲＰ−接合されたヤギ抗マウス抗体またはＨＲＰ−接合されたヤギ抗ラビット抗体（サンタクルーズバイオテクノロジー社製）と共に培養した。結合された抗体をＥＣＬキット（ＧＥヘルスケア社製）を用いて検出した。バンド強度を濃度計ＬＡＳ−３０００映像装置（ＦＵＪＩＦＩＬＭ）を用いて分析した。
【０１７４】
ＢＬＭ−誘発された線維症肺は、模擬−実行された対照用動物に比べて、向上した水準のａ−ＳＭＡ及びフィブロネクチンを示した。実施例２では、ＢＬＭ−誘発された線維症肺でａ−ＳＭＡ及びフィブロネクチンを抑制した。前記ＢＬＭ−処理されたマウスからの肺組織は、肺胞間中隔が厚くなり、前記間質において、コラーゲン沈着と共に炎症細胞により浸潤された代表的な組織学を示した。実施例２は、テストした全容量水準でＢＬＭ−誘発された組織の変化を大きく減少させた。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５−ａ】
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【図５−ｂ】
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【図６】
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【図７】
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【図８−ａ】
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【図８−ｂ】
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【図９−ａ】
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【図９−ｂ】
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【図１０−ａ】
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【図１０−ｂ】
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【図１０−ｃ】
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【図１１−ａ】
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【図１１−ｂ】
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【図１１−ｃ】
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【図１２−ａ】
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【図１２−ｂ】
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【図１２−ｃ】
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【図１２−ｄ】
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【図１３−ａ】
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【図１３−ｂ】
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【図１４−ａ】
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【図１４−ｂ】
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【図１４−ｃ】
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【図１４−ｄ】
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【図１５−ａ】
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【図１５−ｂ】
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【図１５−ｃ】
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【図１６−ａ】
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【図１６−ｂ】
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【国際調査報告】
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