(57)【要約】過酸ベースの除去可能な抗菌性コーティング組成物のその場酵素的調製および様々な場所で微生物を防除するためのそれらの使用方法が開示される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ある場所での微生物の防除を提供する方法であって、
ａ）ｉ）フィルムを形成する水溶性もしくは水分散性試剤；
ｉｉ）不活性溶媒；
ｉｉｉ）カルボン酸エステル基質；
ｉｖ）ペルオキシゲン源；
ｖ）ペルヒドロラーゼ活性を有し、それによって少なくとも１つのペルオキシ酸を形成して第１抗菌剤を少なくとも提供する、酵素触媒；および
ｖｉ）レオロジー調整剤
を含む成分を組み合わせることによって組成物を形成する工程と；
ｂ）前記組成物を前記場所に塗布する工程と；
ｃ）前記組成物を乾燥させ、それによって前記場所上にコーティングを形成する工程と
を含み、
前記成分が第２抗菌剤をさらに含み、前記第２抗菌剤が第四級アンモニウム化合物を含む方法。
【請求項２】
前記酵素触媒がＣＥ−７ファミリーの炭水化物エステラーゼから選択される請求項２に記載の方法。
【請求項３】
前記ペルオキシ酸が前記成分の組み合わせの約５分〜約２時間以内に少なくとも２０ｐｐｍの濃度で生成する、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
ある場所での微生物の防除を提供する方法であって、
（ａ）不活性溶媒およびフィルム形成剤を含む第１予混合成分を提供する工程と；
（ｂ）ペルヒドロラーゼ活性を有する酵素触媒、カルボン酸エステル基質およびペルオキシゲン源を含む第２予混合成分を提供する工程と；
（ｃ）前記第１予混合成分と前記第２予混合成分とを混合してペルオキシ酸を含む第１抗菌剤を含む液体コーティング組成物を得る工程と；
（ｄ）前記コーティング組成物を前記場所に塗布する工程と；および
（ｅ）前記コーティング組成物を乾燥させ、それによって前記場所上にコーティングを形成する工程と
を含み、
少なくとも１つの予混合成分が第２抗菌剤をさらに含み、前記第２抗菌剤が第四級アンモニウム化合物を含む方法。
【請求項５】
前記第１および第２予混合成分が多区画システムにおいて提供され；前記第１および第２予混合成分が工程（ｃ）前に別々のままである、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
１つの予混合成分が液体形態にあり、１つの予混合成分が固体形態にある、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
前記酵素触媒がＣＥ−７ファミリーの炭水化物エステラーゼを含む請求項４に記載の方法。
【請求項８】
ａ）フィルムを形成する水溶性もしくは水分散性試剤；
ｂ）不活性溶媒；
ｃ）カルボン酸エステル基質；
ｄ）ペルオキシゲン源；
ｅ）ペルヒドロラーゼ活性を有する酵素触媒；および
ｆ）レオロジー調整剤
を含む成分を含む抗菌性組成物であって、
前記成分を組み合わせると、ペルオキシ酸が形成され；前記成分が、第四級アンモニウム化合物を含む抗菌剤である成分をさらに含む組成物。
【請求項９】
少なくとも１つ以上の前記成分が、前記ペルオキシ酸を形成するためのそれらの組み合わせの前に多区画システムにおいて前記その他の成分と別々にパッケージされている請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
前記ペルオキシ酸が前記成分の組み合わせの約５分〜約２時間以内に少なくとも２０ｐｐｍの濃度で生成する、請求項８に記載の組成物。
【請求項１１】
それの少なくとも１つの表面上に抗菌性組成物でのコーティングを含む物品であって、前記抗菌性組成物が、
ａ）フィルムを形成する水溶性もしくは水分散性試剤；
ｂ）不活性溶媒；
ｃ）カルボン酸エステル基質；
ｄ）ペルオキシゲン源；および
ｅ）ペルヒドロラーゼ活性を有する酵素触媒
を含み、
（ａ）〜（ｅ）の成分を組み合わせると、ペルオキシ酸が形成される物品。
【請求項１２】
食品または飲料業界において使用される装置である請求項１１に記載の物品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、すべて２００９年７月２７日出願の４つの米国仮特許出願第６１／２２８７３２号明細書、同第６１／２２８７３５号明細書、同第６１／２２８７３７号明細書、および同第６１／２２８７４６号明細書の優先権を主張するものである。
【０００２】
本発明は、その場で酵素的に発生したペルオキシ酸を含有する除去可能な抗菌性フィルム形成組成物で表面をコートする工程を含む微生物の防除方法および前記組成物の塗布方法に関する。
【０００３】
化学消毒剤は、食品安全性を保証するため、および一層厳しい健康安全規制を遵守するために、ますます多くの業界において現在使用されている。除染、消毒および殺菌用の組成物は、優れた殺微生物効能を有し、迅速に作用し、非腐食性であり、かつ、最小量で有効でなければならない。理想的な組成物は、微生物を殺すための多重機構を有し、こうして広範囲の微生物に対して効能を提供し、かつ、耐抗菌物質性微生物の発生につながる可能性を下げなければならない。
【０００４】
過酸化物、とりわけ過酸化水素（ＨＰ）および過酢酸（ペルオキシ酢酸、ＰＡＡとも呼ばれる）を含有する組成物は非常に有効な抗菌剤であることが証明されている。多くのこのような調合液は必要な試験に合格し、殺菌剤、消毒剤、および殺胞子剤として登録された製品である。これらの過酸化物／ペルオキシ酸組成物の多くは液体溶液であり、水性溶液、表面および物体を処理するために使用することができる。食品接触表面用および食品製品の殺菌用に認可されているものがある。消毒剤または滅菌剤として、気相処理剤として登録されているものもある。
【０００５】
硬表面、肉製品、生きている植物組織、および医療装置を望ましくない微生物増殖に抗して清浄にする、消毒する、および／または殺菌するための方法が記載されている（米国特許第６，５４５，０４７号明細書；同第６，１８３，８０７号明細書；同第６，５１８，３０７号明細書；米国特許出願公開第２００３／００２６８４６号明細書；および米国特許第５，６８３，７２４号明細書）。過酸はまた洗濯洗剤用途向けの漂白組成物を調製するのに有用であると報告されている（米国特許第３，９７４，０８２号明細書；同第５，２９６，１６１号明細書；および同第５，３６４，５５４号明細書）。
【０００６】
過酸を製造する幾つかの方法がある。たとえば国際公開第２００６／０７６３３４号パンフレットは、過酸化物および過酸の水性溶液を含む殺微生物および除汚組成物を記載しており；米国特許第５，１３０，１２４号明細書は、過酸化水素入りの水性抗菌性フィルム形成組成物を記載しており；国際公開第１９９６／０２２６８７号パンフレットは、過酸化水素を含有する酸化性フィルム形成組成物を記載している。酵素触媒がまた過酸の発生を促進するために使用されてもよい。その全体を参照により本明細書に援用される、共同所有される同時係属米国特許出願公開第２００８／０１７６２９９Ａ１号明細書は、過酸の酵素的生産方法を記載している。過酸の酵素的発生のためのエステラーゼ（米国特許第３，９７４，０８２号明細書）、プロテアーゼ（米国特許第５，３６４，５５４号明細書）、エステラーゼおよびリパーゼ（米国特許第５，２９６，１６１号明細書）などの酵素の使用もまた記載されている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
上に示された過酸製造の記載にもかかわらず、表面への塗布後に短期間および延びた長期間の（または残留する）抗菌効能の両方を提供する、その場酵素的発生、過酸ベースの、容易に除去可能な、均一な抗菌性コーティング組成物が必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明は、抗菌性であり、そしてまた標的表面上に抗菌性コーティングを形成することによって微生物に対する長時間の有効性を提供する、方法および組成物を提供することによって上に特定された問題に対処するものである。
【０００９】
一態様においては本発明は、
ある場所での微生物の防除を提供する方法であって、
ａ）ｉ）フィルムを形成する水溶性もしくは水分散性試剤；
ｉｉ）不活性溶媒；
ｉｉｉ）カルボン酸エステル基質；
ｉｖ）ペルオキシゲン源；
ｖ）それによって少なくとも１つのペルオキシ酸を形成して第１抗菌剤を少なくとも提供する、ペルヒドロラーゼ活性を有する酵素触媒；および
ｖｉ）レオロジー調整剤
を含む成分を組み合わせることによって組成物を形成する工程と；
ｂ）前記組成物を前記場所に塗布する工程と；
ｃ）前記組成物を乾燥させ、それによって前記場所上にコーティングを形成する工程と
を含む方法を指向する。
【００１０】
本発明の別の態様は、
ある場所での微生物の防除を提供する方法であって、
（ａ）不活性溶媒およびフィルム形成剤を含む第１予混合成分を提供する工程と；
（ｂ）ペルヒドロラーゼ活性を有する酵素触媒、カルボン酸エステル基質およびペルオキシゲン源を含む第２予混合成分を提供する工程と；
（ｃ）前記第１予混合成分と前記第２予混合成分とを混合してペルオキシ酸を含む第１抗菌剤を含む液体コーティング組成物を得る工程と；
（ｄ）前記コーティング組成物を場所に塗布する工程と；
（ｅ）前記コーティング組成物を乾燥させ、それによって前記場所上にコーティングを形成する工程と
を含む方法を指向する。
【００１１】
本発明の別の態様は、
ａ）フィルムを形成する水溶性もしくは水分散性試剤；
ｂ）不活性溶媒；
ｃ）カルボン酸エステル基質；
ｄ）ペルオキシゲン源；
ｅ）ペルヒドロラーゼ活性を有する酵素触媒；および
ｆ）レオロジー調整剤
を含む成分を含む抗菌性組成物であって、
前記成分を組み合わせると、ペルオキシ酸が形成される組成物を指向する。
【００１２】
生物学的配列の簡単な説明
以下の配列は、３７Ｃ．Ｆ．Ｒ．§１．８２１−１．８２５（「ヌクレオチド配列および／またはアミノ酸配列開示を含有する特許出願の要件−配列規則（Ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓ  ｆｏｒ  Ｐａｔｅｎｔ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  Ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ａｎｄ／ｏｒ  Ａｍｉｎｏ  Ａｃｉｄ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄｉｓｃｌｏｓｕｒｅｓ−ｔｈｅ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｒｕｌｅｓ）」）に従っており、Ｗｏｒｌｄ  Ｉｎｔｅｌｌｅｃｔｕａｌ  Ｐｒｏｐｅｒｔｙ  Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ（ＷＩＰＯ）Ｓｔａｎｄａｒｄ  ＳＴ．２５（１９９８）およびＥｕｒｏｐｅａｎ  Ｐａｔｅｎｔ  Ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎ（ＥＰＣ）およびＰａｔｅｎｔ  Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｏｎ  Ｔｒｅａｔｙ（ＰＣＴ）Ｒｕｌｅｓ  ５．２  ａｎｄ  ４９．５（ａ−ｂｉｓ）の配列リスティング規定、ならびにＡｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｖｅ  ＩｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎｓのＳｅｃｔｉｏｎ  ２０８およびＡｎｎｅｘ  Ｃと一致している。ヌクレオチドおよびアミノ酸配列データについて用いられる記号およびフォーマットは、３７Ｃ．Ｆ．Ｒ．§１．８２２に記述されている規則に従う。
【００１３】
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１は、枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＡＴＣＣ３１９５４からのセファロスポリンＣデアセチラーゼのアミノ酸配列である。
【００１４】
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２は、枯草菌亜種サブチリス株（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ  ｓｕｂｓｐ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ  ｓｔｒａｉｎ）１６８（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＮＰ＿３８８２００）からのセファロスポリンＣデアセチラーゼのアミノ酸配列である。
【００１５】
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３は、枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＡＴＣＣ６６３３（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＹＰ＿０７７６２１．１）からのセファロスポリンＣデアセチラーゼのアミノ酸配列である。
【００１６】
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４は、バチルス・リケニホルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）ＡＴＣＣ１４５８０（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＹＰ＿０７７６２１．１）からのセファロスポリンＣデアセチラーゼのアミノ酸配列である。
【００１７】
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５は、バチルス・プミリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｕｍｉｌｉｓ）（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＣＡＢ７６４５１．２）からのアセチルキシランエステラーゼのアミノ酸配列である。
【００１８】
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６は、クロストリジウム・サーモセラム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｔｈｅｒｍｏｃｅｌｌｕｍ）ＡＴＣＣ２７４０５（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＺＰ＿００５０４９９１）からのアセチルキシランエステラーゼのアミノ酸配列である。
【００１９】
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７は、サーモトガ・ネアポリタナ（Ｔｈｅｒｍｏｔｏｇａ  ｎｅａｐｏｌｉｔａｎａ）（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＡＡＢ７０８６９．１）からのアセチルキシランエステラーゼのアミノ酸配列である。
【００２０】
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８は、サーモトガ・マリチマ（Ｔｈｅｒｍｏｔｏｇａ  ｍａｒｉｔｉｍａ）ＭＳＢ８（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＮＰ＿２２７８９３．１）からのアセチルキシランエステラーゼのアミノ酸配列である。
【００２１】
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９は、サーモアナエロバクテリウム種（Ｔｈｅｒｍｏａｎａｅｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐ．）（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＡＡＢ６８８２１．１）からのアセチルキシランエステラーゼのアミノ酸配列である。
【００２２】
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０は、バチルス種（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．）ＮＲＲＬ  Ｂ１４９１１（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＺＰ＿０１１６８６７４）からのセファロスポリンＣデアセチラーゼのアミノ酸配列である。
【００２３】
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１は、バチルス・ハロデュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｈａｌｏｄｕｒａｎｓ）Ｃ−１２５（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＮＰ＿２４４１９２）からのアセチルキシランエステラーゼのアミノ酸配列である。
【００２４】
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２は、バチルス・クラウシィ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｌａｕｓｉｉ）ＫＳＭ−Ｋ１６からのセファロスポリンＣデアセチラーゼのアミノ酸配列である。
【００２５】
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３は、サーモアナエロバクテリウム・サッカロリチカム（Ｔｈｅｒｍｏａｎａｅｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓａｃｃｈａｒｏｌｙｔｉｃｕｍ）からのアセチルキシランエステラーゼのアミノ酸配列である。
【００２６】
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４は、サーモトガ・レッチンガエ（Ｔｈｅｒｍｏｔｏｇａ  ｌｅｔｔｉｎｇａｅ）からのアセチルキシランエステラーゼのアミノ酸配列である。
【００２７】
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５は、サーモトガ・ペトロフィリア（Ｔｈｅｒｍｏｔｏｇａ  ｐｅｔｒｏｐｈｉｌｉａ）からのアセチルキシランエステラーゼのアミノ酸配列である。
【００２８】
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６は、サーモトガ種（Ｔｈｅｒｍｏｔｏｇａ  ｓｐ．）ＲＱ２”ａ”からのアセチルキシランエステラーゼのアミノ酸配列である。
【００２９】
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７は、サーモトガ種（Ｔｈｅｒｍｏｔｏｇａ  ｓｐ．）ＲＱ２”ｂ”からのアセチルキシランエステラーゼのアミノ酸配列である。
【００３０】
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８は、実施例１において使用されるプライマーｆ２７４０５についてのヌクレオチド配列である。
【００３１】
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９は、実施例１において使用されるプライマーｒ２７４０５についてのヌクレオチド配列である。
【００３２】
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０は、実施例１において使用されるプラスミドｐＳＷ１９６を調製するために使用されたＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８および１９によって増幅された核酸生成物の核酸配列である。
【００３３】
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１は、ＣＥ−７炭水化物エステラーゼにおいて見いだされる４保存モチーフの隣接アミノ酸配列である。
【００３４】
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２は、実施例８において使用されるフォワードプライマー［ＴＡＡＣＴＧＣＡＧＴ  ＡＡＧＧＡＧＧＡＡＴ  ＡＧＧＡＣＡＴＧＧＣ  ＣＴＴＣＴＴＣＧＡＴ  ＴＴＡＣＣＣＡＣＴＣ］についてのヌクレオチド配列である。
【００３５】
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３は、実施例８において使用されるリバースプライマー［ＴＧＡＴＣＴＡＧＡＴ  ＴＡＧＣＣＴＴＴＣＴ  ＣＡＡＡＴＡＧＴＴＴ  ＴＴＴＣＡＡＧＡ］についてのヌクレオチド配列である。
【００３６】
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４は、プラスミドｐＳＷ２０７を調製するために使用されたＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２および２３によって増幅された核酸生成物の核酸配列である。
【００３７】
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５は、実施例８において使用されるフォワードプライマー［ＴＡＡＧＡＡＴＴＣＴ  ＡＡＧＧＡＡＴＡＧＧ  ＡＣＡＴＧＧＣＧＴＴ  ＴＣＴＴＣＧＡＣＣＴ  ＧＣＣＴＣＴＧ］についてのヌクレオチド配列である。
【００３８】
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６は、実施例８において使用されるリバースプライマー［ＡＡＡＣＴＧＣＡＧＴ  ＴＡＧＣＣＣＴＴＣＴ  ＣＡＡＡＣＡＧＴＴＴ  ＣＴＴＣＡＧ］についてのヌクレオチド配列である。
【００３９】
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７は、実施例８において使用されるプラスミドｐＳＷ２２８を調製するために使用されたＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５および２６によって増幅された核酸生成物の核酸配列である。
【００４０】
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８は、実施例９において使用されるフォワードプライマーＴｍａ＿Ｃ２７７Ｓｆ［ＧＧＡＣＡＡＣＡＴＣＴＣＡＣＣＴＣＣＴＴＣＴＡ］についてのヌクレオチド配列である。
【００４１】
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９は、実施例９において使用されるフォワードリバースプライマーＴｍａ＿Ｃ２２７Ｓｒ［ＴＡＧＡＡＧＧＡＧＧＴＧＡＧＡＴＧＴＴＧＴＣＣ］である。
【００４２】
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０は、実施例９において使用されるプラスミドｐＳＷ２２８におけるＴ．マリチマ（Ｔ．ｍａｒｉｔｉｍａ）アセチルキシランエステラーゼのコドン最適化配列である。
【発明を実施するための形態】
【００４３】
特に明記しない限り、すべての百分率、部、比などは重量による。商標は大文字で示される。さらに、量、濃度、またはその他の値が範囲、好ましい範囲または好ましい上方値と下方値とのリストのどれかとして開示されるとき、このような開示は、個々の値が本明細書において独自にまたは個々に開示されない場合でさえ、あたかも、明記された範囲内の各個々の値−および開示された範囲内の任意の２つの個々の値の組み合わせから得られるあらゆる範囲−が明確に開示されたかのように同じ効果を有するべきである。数値の範囲が本明細書において列挙される場合、特に明記しない限り、この範囲はそれの終点、ならびにこの範囲内のすべての整数および分数を含むことが意図される。明記しない限り、本発明の範囲が、ある範囲を明確にするときに列挙される特定の値に限定されることは意図されない。
【００４４】
明確にするために、本明細書において使用される用語は、本明細書において説明されるように、またはこのような用語が本発明の技術分野の当業者によって理解されるであろうように理解されるべきである。本明細書において使用される幾つかの用語の追加の説明が以下に提供される：
【００４５】
「過酸」は、酸性−ＯＨ基が−ＯＯＨ基で置き換えられたカルボン酸である。本明細書において使用される場合、「過酸」は、ペルオキシ酸、ペルオキシ酸、過カルボン酸およびペルオキソ酸と同じ意味である。一般に知られているように、過酸としては、過酢酸が挙げられる。用語「過酢酸」または「ＰＡＡ」は、本明細書において使用される場合、ペルオキシ酢酸、エタンペルオキソ酸およびＣＡＳ登録番号７９−２１−０のすべてのその他の同意語と同じ意味である。
【００４６】
「トリアセチン」は、グリセリントリアセテート、グリセロールトリアセテート、グリセリルトリアセテート、１，２，３−トリアセトキシプロパン、１，２，３−プロパントリオールトリアセテートおよびＣＡＳ登録番号１０２−７６−１のすべてのその他の同意語と同じ意味である。
【００４７】
「ペルオキシゲン源」は、あらゆる過酸化物化合物または溶液中で放出されてもよい過酸化水素を含有する化合物を意味する。
【００４８】
「剪断速度」は、流れる物質中の速度勾配を意味し、秒の逆数のＳＩ単位（秒-1）で測定される。
【００４９】
「剪断薄化特性」または「擬塑性特性」は、剪断速度の増加とともに粘度の減少を示す流体に関する。
【００５０】
「容易に除去可能な」は、対象となる表面への液体コーティング組成物の塗布後に形成されたコーティングを容易に除去することを意味するが、故意でない物理的接触によって除去されるほど容易には除去されないことを意味する。
【００５１】
「非揮発性」は、２５℃でのその蒸気圧が１０００パスカルより下である化合物に関する。
【００５２】
「不活性溶媒または水性溶媒」は、コーティング組成物のその場所への塗布を容易にする水またはあらゆるその他の溶媒を意味する。水性溶媒はまた、コートされた表面をリンスして必要に応じてコーティングを除去するために用いられてもよい。
【００５３】
本明細書において同じ意味で使用されてもよい、「フィルム形成剤」または「水溶性もしくは水分散性コーティング剤」は、フィルムを形成し、そして対象となる表面に保護コーティングを提供するために用いられる試剤を意味する。これらの試剤は、水溶性か水分散性かのどちらかである。これらの試剤は以下にさらに詳細に説明される。
【００５４】
「金属キレート剤」または「金属イオン封鎖剤」は、金属または金属含有不純物と結合し、そして過酸化水素またはペルオキシ酸のそれらの分解触媒作用を防ぐ試剤を意味する。
【００５５】
「レオロジー調整剤」または「レオロジー剤」は、粘度を増加させおよび／または剪断薄化特性を組成物に提供し、そして水性処理剤またはコーティング組成物を興味のある表面に粘着させる化合物を意味する。
【００５６】
「重量％」は、溶液または分散液の総重量に対する重量パーセントを意味する。
【００５７】
「液体コーティング組成物」は、少なくとも水溶性フィルム形成剤、不活性溶媒、カルボン酸エステル基質、ペルオキシゲン源、およびペルヒドロラーゼ活性を有する酵素触媒を含む組成物であって、少なくとも１つのペルオキシ酸が生成する組成物を意味する。
【００５８】
「抗菌性」または「抗菌特性」は、本明細書において使用される場合、微生物を殺す、微生物汚染をブロックするもしくは防ぐ（障壁の形成などの）、または微生物の増殖を抑えるもしくは防ぐ、殺すために微生物を捕捉する、バイオフィルム形成を防ぐもしくはバイオフィルムを排除する／除去する試剤の能力に関する。
【００５９】
「抗菌剤」は、本明細書において使用される場合、抗菌特性を有する化合物または物質を意味する。
【００６０】
「微生物」は、系統発生領域の細菌および古細菌、ならびに単細胞（たとえば、酵母）および線維状（たとえば、カビ）真菌類、単細胞および線維状藻類、単細胞および多細胞寄生生物、ウィルス、ビリノおよびビロイドからなるあらゆる生物を含むことが意図される。
【００６１】
「殺生物剤」は、本明細書において使用される場合、微生物を不活性化するかまたは殺す、典型的には幅広いスペクトルの化学試剤を意味する。微生物を不活性化するかまたは殺す能力を示す化学試剤は「殺生物」活性を有すると記載される。
【００６２】
「バイオフィルム」は、自己成長ポリマーマトリックス内に封入された、そして生きたまたは不活性表面に付着した微生物の構造化群生を意味する。
【００６３】
「乾燥」は、調合物中に存在する不活性溶媒またはあらゆるその他の液体が蒸発によって除去されるプロセスを意味する。
【００６４】
「消毒剤」は、抗菌活性を提供する試剤を意味する。公式の消毒剤試験によれば、消毒剤は、特定の試験微生物の９９．９％を試験の条件下に１０分で殺す化学薬品である。（消毒剤の殺菌作用および洗剤殺菌作用、公認分析化学者協会の公定法、パラグラフ９６０．０９および適用可能なセクション、第１５版、１９９０年（ＥＰＡガイドライン９１−２）（Ｇｅｒｍｉｃｉｄａｌ  ａｎｄ  Ｄｅｔｅｒｇｅｎｔ  Ｓａｎｉｔｉｚｉｎｇ  Ａｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｄｉｓｉｎｆｅｃｔａｎｔｓ，Ｏｆｆｉｃｉａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｏｆ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｏｆｆｉｃｉａｌ  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｓ，ｐａｒａｇｒａｐｈ  ９６０．０９  ａｎｄ  ａｐｐｌｉｃａｂｌｅ  ｓｅｃｔｉｏｎｓ，１５ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９０（ＥＰＡ  Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ  ９１−２））。
【００６５】
「酵素活性の１単位」または「活性の１単位」または「Ｕ」は、規定温度で毎分１マイクロモルの過酸生成物の生成のために必要とされるペルヒドロラーゼ活性の量と定義される。
【００６６】
「半減期」または「τ」は、ＰＡＡ濃度がその最大値の半分に低下してしまう時間と定義される。
【００６７】
「酵素触媒」および「ペルヒドロラーゼ触媒」は同じ意味で使用され、過加水分解活性を有する酵素、すなわち、過酸を形成するための過酸化物源と基質との間の反応を触媒する能力を示す酵素を含む触媒を意味し、全微生物細胞、透過処理微生物細胞、微生物細胞抽出物の１つ以上の細胞成分、部分精製酵素、または精製酵素の形態にあってもよい。
【００６８】
「アセチルキシランエステラーゼ」は、アセチル化キシランおよびその他のアセチル化糖類の脱アセチル化を触媒するおよびまたカルボン酸エステルから過カルボン酸を生成するために好適な著しい過加水分解活性を有する酵素（Ｅ．Ｃ．３．１．１．７２；ＡＸＥ）を意味する。
【００６９】
「遺伝子」は、コード配列に先行する調節配列（５’非コード配列）およびコード配列後の調節配列（３’非コード配列）を含む、特異的タンパク質を発現する核酸分子を意味する。
【００７０】
「単離核酸分子」および「単離核酸断片」は同じ意味で使用されてもよく、合成、非天然または改変ヌクレオチド塩基を任意選択的に含有する、一本鎖または二本鎖であるＲＮＡまたはＤＮＡのポリマーを意味する。ＤＮＡのポリマーの形態での単離核酸分子は、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡまたは合成ＤＮＡの１つ以上のセグメントからなってもよい。
【００７１】
「発現」は、本発明の核酸分子に由来するセンスＲＮＡ（ｍＲＮＡ）またはアンチセンスＲＮＡの転写および安定蓄積を意味する。発現はまた、ポリペプチドへのｍＲＮＡのトランスレーションを意味してもよい。
【００７２】
「形質転換」は、遺伝子的に安定な遺伝的形質をもたらす、宿主有機体のゲノムへの核酸分子の導入を意味する。本発明においては、宿主細胞のゲノムは、染色体遺伝子および染色体外（たとえば、プラスミド）遺伝子を含む。形質転換した核酸分子を含有する宿主有機体は、「遺伝子組み換えの（ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ）」または「組み換えの」または「形質転換された」有機体と言われる。
【００７３】
「ＡＴＣＣ」はＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎを意味する。微生物の収納場所は、Ｖｉｒｇｉｎｉａ，ＵＳＡに置かれている。
【００７４】
「第１抗菌剤」は、本発明の方法に従ってコーティング組成物においてその場発生した抗菌剤を意味する。好ましい実施形態においては、第１抗菌剤はペルオキシ酸である。
【００７５】
「第２抗菌剤」は、コーティング組成物において存在するペルオキシ酸以外の追加の抗菌剤を意味する。現行法によれば、この試剤はその場発生しない。好ましい実施形態においては、第２抗菌剤は第四級アンモニウム化合物である。
【００７６】
「ＲＧＱ」は、ＣＥ−７酵素ファミリーに特徴的であるＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１の位置１１８〜１２０でのアミノ酸残基の高保存モチーフを意味する。
【００７７】
「ＧＸＳＱＧ」は、ＣＥ−７酵素ファミリーに特徴的であるＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１の位置１７９〜１８３でのアミノ酸残基の高保存モチーフを意味する。
【００７８】
「ＨＥ」は、ＣＥ−７酵素ファミリーに特徴的であるＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１の位置２９８〜２９９でのアミノ酸残基の高保存モチーフを意味する。
【００７９】
「ＬＸＤ」は、ＣＥ−７酵素ファミリーに特徴的であるＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１の位置２６７〜２６９でのアミノ酸残基の高保存モチーフを意味する。
【００８０】
「実質的に類似の」は、１つ以上のヌクレオチド塩基の変化が１つ以上のアミノ酸の付加、置換、または削除をもたらすが、ＤＮＡ配列でエンコードされたタンパク質の機能特性（すなわち、過加水分解活性）に影響を及ぼさない核酸分子に関する。
【００８１】
「シグネチャーモチーフ」、「ＣＥ−７シグネチャーモチーフ」、および「診断モチーフ」は、ペルヒドロラーゼ活性などの規定の活性を有する酵素のファミリーの間で共有される保存構造を意味する。
【００８２】
一態様においては、本発明は、ペルオキシ酸を形成するためのペルオキシゲン源およびカルボン酸エステルと組み合わせたペルヒドロラーゼの使用を含む方法である。ペルヒドロラーゼは、ペルオキシゲン源（たとえば、過酸化水素）と選択された基質との反応を触媒して過酸を形成する酵素である。上に示されたように、ペルヒドロラーゼ活性を有する酵素としては、リパーゼ、エステラーゼ、プロテアーゼ、非ヘムハロペルオキシダーゼ、および、アセチルキシランエステラーゼまたはセファロスポリンＣデアセチラーゼなどの、ＣＥ−７ファミリーの炭水化物エステラーゼが挙げられるが、それらに限定されない。
【００８３】
それらの過加水分解活性に関するこれらの酵素の適用は、それらの全体を参照により本明細書に援用される、共同所有される米国特許出願公開第２００９／０００５５９０Ａ１号明細書、同第２００８／０１７６２９９Ａ１号明細書および同第２００７／０４２９２４Ａ１号明細書、ならびに米国特許出願第６１／１０２，５２０号明細書に記載されている。
【００８４】
セファロスポリンＣデアセチラーゼ（ＣＡＨ）およびアセチルキシランエステラーゼ（ＡＸＥ）などの、ＣＥ−７エステラーゼの構造ファミリーに属するある種の酵素は、ペルオキシゲンの無機源（たとえば、過酸化水素、過炭酸ナトリウム、過ホウ酸ナトリウム）の存在下にカルボン酸エステルを消毒剤および／または漂白剤として使用するために十分な濃度で過酸に変換するための著しい過加水分解活性を示す。このシステムは、高濃度のペルオキシゲンを必要とすることなく過酸を高濃度で生成することによって効率を達成する（たとえば、共同所有される米国特許出願公開第２００８／０１７６２９９Ａ１号明細書に記載されているように）。
【００８５】
ペルヒドロラーゼ触媒は、全微生物細胞、透過処理微生物細胞、微生物細胞抽出物の１つ以上の細胞成分、部分精製酵素、または精製酵素として使用されてもよい。酵素触媒はまた、（たとえば、ＰＥＧ化によってまたは架橋試薬との反応によって）化学修飾されてもよい。ペルヒドロラーゼ触媒はまた、当業者に周知の方法を用いて可溶性または不溶性担体に固定化されてもよい。
【００８６】
ＣＥ−７ファミリーの炭水化物エステラーゼ
ＣＥ−７ファミリーのメンバー、セファロスポリンＣデアセチラーゼ（Ｅ．Ｃ．３．１．１．４１；系統名セファロスポリンＣアセチルヒドロラーゼ；ＣＡＨ）およびアセチルキシランエステラーゼ（Ｅ．Ｃ．３．１．１．７２）は、植物、真菌類（たとえば、セファロスポリジウム・アクレモニウム（Ｃｅｐｈａｌｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ  ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ））、酵母（たとえば、ロドスポリジウム・トルロイデス（Ｒｈｏｄｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ  ｔｏｒｕｌｏｉｄｅｓ）、ロドトルラ・グルチニス（Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ  ｇｌｕｔｉｎｉｓ）、およびサーモアナエロバクテリウム種（Ｔｈｅｒｍｏａｎａｅｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐ．）などのバクテリア；ノルカディア・ラクタムデュランス（Ｎｏｒｃａｒｄｉａ  ｌａｃｔａｍｄｕｒａｎｓ）、ならびにバチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）の様々なメンバー（Ｐｏｌｉｔｉｎｏら，Ａｐｐｌ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．，６３：４８０７−４８１１，１９９７；Ｓａｋａｉら，Ｊ．Ｆｅｒｍｅｎｔ．Ｂｉｏｅｎｇ．８５：５３−５７，１９９８；Ｌｏｒｅｎｚ，Ｗ．ａｎｄ  Ｗｉｅｇｅｌ，Ｊ．，Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．１７９：５４３６−５４４１，１９９７；Ｃａｒｄｏｚａら，Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，５４：４０６−４１２，２０００；Ｍｉｔｓｕｓｈｉｍａら、上記を参照；Ａｂｂｏｔｔ，Ｂ．ａｎｄ  Ｆｕｋｕｄａ，Ｄ．，Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．３０：４１３−４１９，１９７５；Ｖｉｎｃｅｎｔら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，３３０：５９３−６０６，２００３；Ｔａｋａｍｉら，ＮＡＲ，２８：４３１７−４３３１，２０００；Ｒｅｙら，Ｇｅｎｏｍｅ  Ｂｉｏｌ．，５：ａｒｔｉｃｌｅ  ７７，２００４；Ｄｅｇｒａｓｓｉら，Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，１４６：１５８５−１５９１，２０００；米国特許第６，６４５，２３３号明細書；同第５，２８１，５２５号明細書；同第５，３３８，６７６号明細書；および国際公開第９９／０３９８４号パンフレット）に見いだされる。ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１と著しいホモロジーを有するＣＥ−７ファミリーメンバーの非包括的なリストは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １〜１８において提供される。
【００８７】
炭水化物エステラーゼのＣＥ−７ファミリーのメンバーとして（Ｖｉｎｃｅｎｔら、上記を参照）、セファロスポリンＣデアセチラーゼ（Ｅ．Ｃ．３．１．１．４１）およびアセチルキシランエステラーゼ（Ｅ．Ｃ．３．１．１．７２）の両方とも、アセチル化ポリマーキシラン、アセチル化キシロース、アセチル化グルコース、およびアセチル化セルロース上のアセチル基を加水分解する。したがって、アセチル化炭水化物は、本方法を用いて（すなわち、ペルオキシゲン源の存在下に）過カルボン酸を発生させるための好適な基質であることができる。アセチル化炭水化物の例としては、アセチル化グルコース（グルコースペンタアセテートなどの）、アセチル化マンノース、アセチル化キシロース（キシローステトラアセテートなどの）、およびアセチル化セルロースが挙げられるが、それらに限定されない。
【００８８】
現行法における適用のために好適なものなどの、幾つかの酵素は、規定のファミリーの基質に対して類似の酵素活性を有する構造上関連する酵素のファミリーを明確にするおよび／または同定するために用いることができるシグネチャーモチーフを有する。シグネチャーモチーフは、単一の隣接アミノ酸配列またはシグネチャーモチーフを一緒に形成する不連続の保存モチーフの集まりであることができる。典型的には、保存モチーフはアミノ酸配列で表される。本明細書において記載される場合、本ペルヒドロラーゼはＣＥ−７炭水化物エステラーゼのファミリーに属する。このファミリーの酵素は、以下に記載されるようなシグネチャーモチーフの存在によって定義することができる。
【００８９】
ＣＥ−７ファミリーメンバーは、それらがアセチル化キシロオリゴ糖およびセファロスポリンＣの両方に対してエステル加水分解活性を典型的に示すという点において異常であり、ＣＥ−７ファミリーが様々な小さな基質に対して多機能のデアセチラーゼ活性を持った単一クラスのタンパク質を表すことを示唆する（Ｖｉｎｃｅｎｔら、上記を参照）。Ｖｉｎｃｅｎｔらは、このファミリーのメンバー間での構造類似性を記載しており、ＣＥ−７ファミリーに特有のシグネチャー配列モチーフ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１）を明確にしている。ＣＬＵＳＴＡＬＷを用いて基準配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１と整列するＣＥ−７シグネチャーモチーフは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１の残基１１８〜１２０（ＲＧＱ）、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１の残基１７９〜１８３（ＧＸＳＱＧ）、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１の残基２９８〜２９９（ＨＥ）およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１の残基２６７〜２６９（ＬＸＤ）を含む、このファミリーに特徴的である幾つかの高保存モチーフを有する。アミノ酸配列の多重アラインメントは、デフォルトパラメーター（ＧＡＰ  ＰＥＮＡＬＴＹ＝１０、ＧＡＰ  ＬＥＮＧＴＨ  ＰＥＮＡＬＴＹ＝１０）でアラインメントのＣｌｕｓｔａｌ法、Ｈｉｇｇｉｎｓ  ａｎｄ  Ｓｈａｒｐ，ＣＡＢＩＯＳ，５：１５１-１５３（１９８９）を用いて行われてもよい。Ｃｌｕｓｔａｌ法を用いる一対アラインメントのためのデフォルトパラメーターは典型的には、ＫＴＵＰＬＥ  １、ＧＡＰ  ＰＥＮＡＬＴＹ＝３、ＷＩＮＤＯＷ＝５およびＤＩＡＧＯＮＡＬＳ  ＳＡＶＥＤ＝５である。
【００９０】
生じた酵素が本機能特性（すなわち、過加水分解活性）を保持する、少なくとも５０％、好ましくは少なくとも６０％、より好ましくは少なくとも７０％、さらにより好ましくは少なくとも８０％、その上さらにより好ましくは少なくとも９０％、もっとその上さらにより好ましくは少なくとも９５％、最も好ましくは少なくとも９９％が本明細書において報告される配列と同一であるアミノ酸配列を有するペルヒドロラーゼ酵素が本方法のために好適である。用語「実質的に類似の」はまた、本明細書において報告されるアミノ酸配列（たとえば、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１〜１７および３０）の核酸分子に厳しい条件下でハイブリッド化する核酸分子でエンコードされた過加水分解活性を有する酵素に関してもよい。それ故、本発明は特有の例示的配列より多くを包含すると理解される。
【００９１】
本明細書に例示されるペルヒドロラーゼ間の全体的パーセント同一性の比較は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１と３３％ほどに少ない同一性を有する酵素が（シグネチャーモチーフを保持しながら）顕著なペルヒドロラーゼ活性を示し、ＣＥ−７炭水化物エステラーゼとして構造上分類されることを示す。
【００９２】
一実施形態においては、本方法のために有用であるペルヒドロラーゼ触媒の１つは、ＣＬＵＳＴＡＬＷを用いて基準配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１と整列するＣＥ−７シグネチャーモチーフを有する酵素であって、前記シグネチャーモチーフが、
ｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１のアミノ酸位置１１８〜１２０にＲＧＱモチーフ；
ｉｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１のアミノ酸位置１７９〜１８３にＧＸＳＱＧモチーフ；
ｉｉｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１のアミノ酸位置２９８〜２９９にＨＥモチーフ
を含む酵素を含み、
ここで、前記酵素はまた、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１と少なくとも３０％アミノ酸同一性を含む。
【００９３】
さらなる実施形態においては、シグネチャーモチーフは、ＣＬＵＳＴＡＬＷを用いて基準配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１に整列させられるときにアミノ酸残基２６７〜２６９にＬＸＤモチーフと定義される第４保存モチーフをさらに含む。
【００９４】
別の実施形態では、ペルヒドロラーゼ触媒は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１〜１７および３０からなる群から選択されるペルヒドロラーゼ活性を有する酵素、または前記アミノ酸配列への１つ以上のアミノ酸を置換する、削除するまたは付加することによって誘導されるペルヒドロラーゼ活性を有する実質的に類似の酵素を含む。
【００９５】
別の実施形態においては、ペルヒドロラーゼ活性を有する実質的に類似の酵素は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１〜１７および３０からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一である。
【００９６】
別の実施形態においては、ペルヒドロラーゼ触媒は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１と定義されるような隣接シグネチャーモチーフと少なくとも３０％、好ましくは少なくとも３６％アミノ酸同一性を有する酵素であって、上記のシグネチャーモチーフ（たとえば、ＲＧＱ、ＧＸＳＱＧ、およびＨＥ、ならびに任意選択的にＬＸＤ）が保存されている酵素を含む。
【００９７】
その上さらなら実施形態においては、本方法のペルヒドロラーゼシステムは、プロテアーゼ、アミラーゼなどを含むが、それらに限定されない、追加の酵素と併せて使用される。実際に、微生物細胞壁分解および糖タンパク質分解酵素、リゾチーム、ヘミセルラーゼ、ペルオキシダーゼ、プロテアーゼ、セルラーゼ、キシラナーゼ、リパーゼ、ホスホリパーゼ、エステラーゼ、クチナーゼ、ペクチナーゼ、ケラチナーゼ、レダクターゼ、オキシダーゼ、フェノールオキシダーゼ、リポキシゲナーゼ、リグニナーゼ、プルラナーゼ、タンナーゼ、ペントサナーゼ、マラナーゼ、１３−グルカナーゼ、アラビノシダーゼ、ヒアルロニダーゼ、コンドロイチナーゼ、ラッカーゼ、エンドグルカナーゼ、ＰＮＧアーゼ、アミラーゼなど、ならびにまたはそれらの混合物を含むが、それらに限定されない様々な酵素が本発明と関連して使用されるであろうと考えられる。ある実施形態においては、酵素安定剤が本方法において使用される。酵素の組み合わせを使用することによって、本方法において必要とされる化学薬品の量が同時に低減されるであろうと考えられる。
【００９８】
好ましい一実施形態においては、炭水化物ファミリーエステラーゼファミリーＣＥ−７の構造上関連するメンバーの過加水分解活性が現行法のために用いられてきたが、過酸化水素の存在下にエステル基質を大部分は過酸へ変換する、あらゆるソースから得られたあらゆるペルヒドロラーゼ酵素がまた本方法において使用されてもよい。
【００９９】
さらに、あるヒドロラーゼ酵素が現行法に使用されてもよい。この目的のための好適なヒドロラーゼとしては、（１）ペプチジル−ペプチドヒドロラーゼクラスに属するプロテアーゼ（たとえば、ペプシン、ペプシンＢ、レンニン、トリプシン、キモトリプシンＡ、キモトリプシンＢ、エラスターゼ、エンテロキナーゼ、カテプシンＣ、パパイン、キモパパイン、フィシン、トロンビン、フィブリノリジン、レニン、スブチリシン、アスペルギロペプチダーゼＡ、コラゲナーゼ、クロストリジオペプチダーゼＢ、カリクレイン、ガストリシン、カテプシンＤ、ブロメリン、ケラチナーゼ、キモトリプシンＣ、ペプシンＣ、アスペルギロペプチダーゼＢ、ウロキナーゼ、カルボキシペプチダーゼＡおよびＢ、ならびにアミノペプチダーゼ）；（２）カルボキシルエステラーゼ、リパーゼ、ペクチンエステラーゼ、およびクロロフィラーゼを含むカルボキシレートエステルヒドロラーゼ；ならびに（３）高い過加水分解対加水分解比を有する酵素が挙げられる。それらの中で、リパーゼ、ならびに高い過加水分解対加水分解比を示すエステラーゼ、ならびに本方法のペルヒドロラーゼの第一級、第二級、第三級、および／または第四級構造的特徴を使用する、タンパク質改変エステラーゼ、クチナーゼ、およびリパーゼがとりわけ有効である。
【０１００】
好適な酵素反応混合物
「好適な酵素反応混合物」、「過酸のその場発生のために好適な成分」、「好適な反応成分」、および「好適な水性反応混合物」は、本明細書においては同じ意味で使用され、反応剤および酵素触媒が接触する材料および溶液を意味する。好適な水性反応混合物の成分が本明細書において提供され、当業者は、本方法のために好適な成分変動の範囲を十分よく理解している。
【０１０１】
一実施形態においては、好適な酵素反応混合物は、反応成分を組み合わせるとその場で過酸を生成する。したがって、反応成分は、反応成分の１つ以上が使用まで別々のままである多成分系として提供されてもよい。多数の活性成分を組み合わせるためのシステムの設計は、当該技術分野において公知であり、個々の反応成分の物理的形態に一般に依存するであろう。たとえば、多数の活性流体（液体−液体）システムは、所望の漂白剤が反応性流体を混合すると生成する幾つかの漂白用途に見いだされるなどの、多室ディスペンサーボトルまたは２相システムを典型的には用いる（米国特許出願公開第２００５／０１３９６０８号明細書；米国特許第５，３９８，８４６号明細書；同第５，６２４，６３４号明細書；同第６，３９１，８４０号明細書；欧州特許第０８０７１５６Ｂ１号明細書；米国特許出願公開第２００５／０００８５２６号明細書；およびＰＣＴ公開国際公開第００／１１７１３  Ａ１号パンフレット）。過酸を発生させるために用いられる多成分システムのその他の形態としては、粉末（たとえば、多くの商業的に入手可能な漂白組成物、米国特許第５，１１６，５７５号明細書）、多層錠剤（米国特許第６，２１０，６３９号明細書）、複数の区画を有する水溶性パケット（米国特許第６，９９５，１２５号明細書）および水を加えると反応する固体凝集塊（米国特許第６，３１９，８８８号明細書）などの、１つ以上の固体成分または固体−液体成分のために設計されたものが挙げられてもよいが、それらに限定されない。
【０１０２】
別の態様においては、反応性成分を組み合わせるための好適なシステムは、米国特許出願公開第２００５／０１４４２７号明細書に開示されているような対ノズルボトルの使用である。本発明の方法で使用するために好適な代わりのデバイスは、欧州特許第０７１５８９９Ｂ１号明細書に開示されているような二重区画トリガー活性化流体ディスペンサーである。
【０１０３】
別の態様においては、好適な反応成分を混合するための好適なシステムは、機械力によって膜を破ると、反応成分が使用前に組み合わせられる、反応性成分を分離する膜を持った容器であってもよい。別の態様においては、好適なデバイスは、バッグ内バッグであってもよい。
【０１０４】
別の態様においては、本発明の方法に従って使用するための好適な酵素反応混合物を組み合わせるまたは混合するための手段としては、反応性成分を使用前に別々に保つために使用される、当業者に公知のシステム、デバイス、容器、キット、マルチパッグ、バッグ、ディスペンサー、および塗布機が挙げられる。
【０１０５】
別の態様においては、酵素過加水分解生成物組成物は、望ましい機能性を提供する追加の成分を含有してもよい。これらの追加の成分としては、緩衝剤、洗剤ビルダー、増粘剤、乳化剤、界面活性剤、湿潤剤、腐食防止剤（たとえば、ベンゾトリアゾール）、酵素安定剤、および過酸化物安定剤（たとえば、金属イオンキレート剤）が挙げられるが、それらに限定されない。追加の成分の多くは洗剤工業でよく知られている（たとえば、参照により本明細書に援用される、米国特許第５，９３２，５３２号明細書を参照されたい）。乳化剤の例としては、ポリビニルアルコールまたはポリビニルピロリドンが挙げられるが、それらに限定されない。増粘剤の例としては、ＬＡＰＯＮＩＴＥ（登録商標）ＲＤ、コーンスターチ、ＰＶＰ、ＣＡＲＢＯＷＡＸ（登録商標）、ＣＡＲＢＯＰＯＬ（登録商標）、ＣＡＢＯＳＩＬ（登録商標）、ポリソルベート２０、ＰＶＡ、およびレシチンが挙げられるが、それらに限定されない。緩衝系の例としては、リン酸ナトリウム一塩基性／リン酸ナトリウム二塩基性；スルファミン酸／トリエタノールアミン；クエン酸／トリエタノールアミン；酒石酸／トリエタノールアミン；コハク酸／トリエタノールアミン；酢酸／トリエタノールアミン；および炭酸水素ナトリウム／炭酸ナトリウムが挙げられるが、それらに限定されない。界面活性剤の例としては、ａ）エチレンオキシドまたはプロピレンオキシドのブロックコポリマー、エトキシル化もしくはプロポキシル化直鎖状もしくは分枝状の第一級および第二級アルコール、ならびに脂肪族ホスフィンオキシドなどの非イオン界面活性剤、ｂ）第四級アンモニウム化合物、特に、３つのＣ１〜Ｃ２アルキル基にさらに結合した窒素原子に結合したＣ８〜Ｃ２０アルキル基を有する第四級アンモニウム化合物などの陽イオン界面活性剤、ｃ）アルカンカルボン酸（たとえば、Ｃ８〜Ｃ２０脂肪酸）、アルキルホスホネート、アルカンスルホネート（たとえば、ドデシル硫酸ナトリウム「ＳＤＳ」）または直鎖状もしくは分枝状のアルキルベンゼンスルホネート、アルケンスルホネートなどの陰イオン界面活性剤ならびにｄ）アミノカルボン酸、アミノジカルボン酸、アルキルベタイン、およびそれらの混合物などの両性および双性イオン界面活性剤が挙げられるが、それらに限定されない。追加の成分としては、香料、染料、過酸化水素の安定剤（たとえば、１−ヒドロキシエチリデン−１，１−ジホスホン酸（ＤＥＱＵＥＳＴ（登録商標）２０１０、Ｓｏｌｕｔｉａ  Ｉｎｃ，（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍｏ．））およびエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）などの金属キレート剤）、ＴＵＲＰＩＮＡＬ（登録商標）ＳＬ、ＤＥＱＵＥＳＴ（登録商標）０５２０、ＤＥＱＵＥＳＴ（登録商標）０５３１、酵素活性の安定剤（たとえば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ））、ならびに洗剤ビルダーが挙げられてもよい。
【０１０６】
別の態様においては、酵素過加水分解生成物は、消毒されるべき表面または無生物物体と接触する前に所望濃度のペルオキシカルボン酸を発生させるために予混合されてもよい。
【０１０７】
別の態様においては、酵素過加水分解生成物は、所望濃度のペルオキシカルボン酸を発生するために予混合されてもよく、所望のより低い濃度の過酸入りの混合物を生成するために、水または主に水からなる溶液で任意選択的に希釈されてもよい。
【０１０８】
別の態様においては、酵素過加水分解生成物は、消毒されるべき表面または無生物物体と接触する前に所望濃度のペルオキシカルボン酸を発生させるために予混合されないが、その代わりに、所望濃度の過カルボン酸を発生させる反応混合物の成分が、消毒されるべき表面または無生物物体と接触させられ、所望濃度のペルオキシカルボン酸を発生させる。ある実施形態においては、反応混合物の成分はその場所で化合させるかまたは混合する。ある実施形態においては、反応成分はその場所に送出されるかまたは塗布され、その後混合するかまたは化合して所望のペルオキシ酸を発生させる。
【０１０９】
水性反応混合物中の触媒の濃度は、触媒の具体的な触媒活性に依存し、所望の反応速度を得るために選択される。過加水分解反応における触媒の濃度は典型的には、全反応容量の１ｍＬ当たり０．０００１ｍｇ〜１０ｍｇ、好ましくは１ｍＬ当たり０．０００５ｍｇ〜２．０ｍｇの範囲である。触媒はまた、当業者に周知の方法を用いて可溶性または不溶性担体上に固定されてもよく；たとえば、酵素および細胞の固定化（Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｅｎｚｙｍｅｓ  ａｎｄ  Ｃｅｌｌｓ）；Ｇｏｒｄｏｎ  Ｆ．Ｂｉｃｋｅｒｓｔａｆｆ，Ｅｄｉｔｏｒ；Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，Ｎ．Ｊ．，ＵＳＡ，１９９７を参照されたい。固定化触媒の使用は、触媒の回収およびその後の反応における再使用を可能にする。酵素触媒は、全微生物細胞、透過処理微生物細胞、微生物細胞抽出物、部分精製または精製酵素、およびそれらの混合物の形態にあってもよい。
【０１１０】
一態様においては、カルボン酸エステルの化学的過加水分解と酵素的過加水分解との組み合わせによって発生する過酸の濃度は、所望のｐＨで所望の用途向けの過酸の有効な濃度を提供するのに十分である。別の態様においては、本方法は、所望の有効な濃度の過酸を生成するための酵素と酵素基質との組み合わせを提供し、ここで、添加酵素の不存在下では、生成過酸の濃度はかなり低くなる。ある場合には、無機過酸化物と酵素基質との直接化学反応による酵素基質のかなりの化学的過加水分解が存在する可能性があるが、所望の用途において有効な濃度の過酸を提供するのに十分な濃度の発生過酸は存在する可能性はなく、全過酸濃度の著しい増加は、反応混合物への適切なペルヒドロラーゼ触媒の添加によって達成される。
【０１１１】
少なくとも１つのカルボン酸エステルの過加水分解によって発生する過酸（たとえば、過酢酸）の濃度は、過加水分解反応の開始の１０分以内、好ましくは５分以内、最も好ましくは１分以内に少なくとも約２ｐｐｍ、好ましくは少なくとも２０ｐｐｍ、好ましくは少なくとも１００ｐｐｍ、より好ましくは少なくとも約２００ｐｐｍ過酸、より好ましくは少なくとも３００ｐｐｍ、より好ましくは少なくとも５００ｐｐｍ、より好ましくは少なくとも７００ｐｐｍ、より好ましくは少なくとも約１０００ｐｐｍ過酸、最も好ましくは少なくとも２０００ｐｐｍ過酸である。別の態様においては、過加水分解触媒によって発生する過酸の濃度は、過加水分解反応の開始の１時間以内、より好ましくは３０分以内、最も好ましくは５分以内に少なくとも約３０００ｐｐｍ、好ましくは少なくとも５０００ｐｐｍ、より好ましくは８０００ｐｐｍ、最も好ましくは少なくとも１００００ｐｐｍである。一態様においては、所望の濃度の過酸を生成するために要する反応時間は、約２時間以下、好ましくは約３０分以下、より好ましくは約１０分以下、さらにより好ましくは約５分以下、最も好ましくは約１分以下である。その他の態様においては、ある濃度の微生物固体群で汚染された硬表面または無生物物体は、前記反応成分の組み合わせの約１分〜約１６８時間内に、もしくは約１分〜約４８時間内に、もしくは約１分〜８時間内に、もしくは前記反応成分の組み合わせの１分〜２時間内に、またはその中におけるあらゆるこのような時間間隔で本明細書において記載される方法に従って形成される過酸と接触させられる。
【０１１２】
反応の温度は、反応速度および酵素触媒活性の安定性の両方を制御するように選択される。反応の温度は、反応混合物の凍結温度（約０℃）のすぐ上から約７５℃の範囲であってもよく、反応温度の好ましい範囲は約５℃〜約５５℃である。
【０１１３】
過酸を含有する最終反応混合物のｐＨは、約５〜約９．５、好ましくは約６〜約８、より好ましくは約６．５〜約７．５である。別の実施形態においては、反応混合物のｐＨは酸性（ｐＨ＜７）である。反応中のまたは反応の完了後の反応混合物のｐＨは、リン酸塩、ピロリン酸塩、重炭酸塩、酢酸塩、またはクエン酸塩を含むが、それらに限定されない、好適な緩衝剤の添加によって任意選択的に調整されてもよい。用いられるとき、緩衝剤の濃度は、典型的には０．１ｍＭ〜１．０Ｍ、好ましくは１ｍＭ〜３００ｍＭ、最も好ましくは１０ｍＭ〜１００ｍＭである。
【０１１４】
本発明の一実施形態においては、成分の少なくとも幾つかは予混合される。予混合は、コーティング組成物の１つ以上の個々の成分の組み合わせを意味し、フィルム形成組成物の所望の成分のすべてが組み合わせられるわけではない。コーティング組成物の追加の成分は、ある特定の場所での最終塗布または使用の前に予混合成分に加えられなければならない。別の実施形態においては、２つの予混合成分は、本発明の方法に従って所望のコーティング組成物を形成するために組み合わせられなければならない。
【０１１５】
本発明のコーティング組成物の成分は、本明細書においては多区画システムとも言われる、多区画封じ込めシステムに含有することができる。多区画システムは、多区画システムコーティングシステムの２つ以上の反応性成分を使用前に別々に保つ手段を意味する。一態様においては、多区画システムは、少なくとも２つの区画を含み、そして液体形態で反応性化合物を組み合わせるために使用される多室ディスペンサーボトルまたは２相システムを含有してもよい。別の態様においては、粉末、多層錠剤、または多区画を有する水溶性パケットを、固体形態または固体形態と液体形態との組み合わせの化合物のために使用することができる。別の態様においては、反応性成分を使用前に別々に保つために使用されるあらゆる種類のシステム、デバイス、容器、パッケージ、バッグ、キット、マルチパック、ディスペンサー、または塗布機を、本方法の方法に従って使用することができる。
【０１１６】
本発明のコーティングは、水性溶液を使用して、適用後に、除去することができる。コーティング除去のために有効な水性溶液は、６０〜１００重量％の水を含有し、残りの成分が溶解されたまたは分散された成分であるあらゆる溶液である。溶解されたまたは分散された成分としては、アルコールなどの溶媒、可溶化剤、界面活性剤、塩、キレート剤、酸および塩基が挙げられてもよいが、それらに限定されない。
【０１１７】
本発明の抗菌性コーティングは耐久性コーティングである。本発明との関連で耐久性は、その除去が意図的に開始されるかまたは起こるようにされるまで典型的な使用条件下に表面上に残る、乾燥後の、塗布された抗菌性コーティングの特性または性質である。使用条件は、コーティングが本発明の塗布エリアのための標的表面上に残り、そして水との不注意な接触を含む可能性がある期間中によく見られる周囲環境条件である。
【０１１８】
標的表面に塗布された抗菌性コーティングは連続であるかまたは実質的に連続であることが好ましいことであり得る。連続の、または実質的に連続のは、本発明との関連で、空洞、割れ目、カバーされていないエリア、または故意ではなく露出した表面積を残すコーティング欠陥なしに標的表面をカバーするコーティングを意味する。
【０１１９】
本発明のコーティングは好ましくは均一であるかまたは実質的に均一である。均一な、または実質的に均一なは、本発明との関連で、コーティング表面の全域で小さな厚さ変動があるにすぎない、被覆表面の全域でコーティング厚さの標準偏差がコーティング厚さの０〜４０％の範囲にあるコーティングを意味する。均一でないかまたは実質的に均一でないコーティングは、コーティングが塗布されている全体表面にわたって均等な抗菌性および除去特性を提供しないであろうし、典型的には不均一コーティングの出現は、多くの用途にとって魅力がないと考えられる。
【０１２０】
擬塑性指数または剪断薄化指数（ＳＴＩ）は、組成物が示す垂れ下がりおよび液だれにに対する抵抗の指標を提供する。より低い剪断速度で記録された値がＳＴＩを得るためにより高い剪断速度での値で割られる。一般に、ＳＴＩが高ければ高いほど、コーティング材料の垂れ下がりおよび液だれに対する抵抗はより高いであろう。この開示においては剪断薄化指数は、第１剪断速度および第２剪断速度で測定された粘度の比と定義され、ここで、前記第２剪断速度は、前記第１剪断速度の値の１０倍である。あるいは、秒-1単位での剪断速度が知られていない場合、剪断薄化指数はまた、第１ｒｐｍおよび第２ｒｐｍで回転粘度計を用いて粘度を測定することによって計算することができ、ここで、前記第２ｒｐｍは、前記第１ｒｐｍの値の１０倍である。ＳＴＩを計算するために用いられる具体的な第１および第２剪断速度にまたは具体的な第１および第２ｒｐｍ値に限定されることなく、本実施例においては、剪断薄化指数は１ｒｐｍおよび１０ｒｐｍで測定された粘度の比として計算された。
【０１２１】
殺菌剤
本発明の抗菌性コーティングは、殺菌剤として使用することができる。本明細書において定義されるように、殺菌剤は、（ｉ）その意図が、食品と実際にまたは潜在的に接触する表面上の微生物を防除することである場合の食品接触殺菌剤か、（ｉｉ）表面が食品と接触するためにくぼみをつけられない場合の非食品接触殺菌剤かのどちらかであることができる化学薬品または化学薬品混合物である。本明細書において定義されるように、食品接触殺菌剤は、ＥＰＡ  ｐｏｌｉｃｙ  ＤＩＳ／ＴＳＳ−４：「効能データ要件−前もって清浄にされた食品接触表面の殺菌リンス剤」、米国環境保護庁、１９７９年、１月３０日（「Ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｄａｔａ  ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓ−Ｓａｎｉｔｉｚｉｎｇ  ｒｉｎｓｅｓ  ｆｏｒ  ｐｒｅｖｉｏｕｓｌｙ  ｃｌｅａｎｅｄ  ｆｏｏｄ−ｃｏｎｔａｃｔ  ｓｕｒｆａｃｅｓ」、Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  Ａｇｅｎｃｙ、Ｊａｎｕａｒｙ  ３０，１９７９）による試験方法の条件下に３０秒で特定の試験微生物の９９．９９９％を殺す。非食品接触殺菌剤は、本明細書において定義されるように、ＡＳＴＭ標準Ｅ  １１５３−０３：「無生物非食品接触表面に対して推奨される殺菌剤の効能についての標準試験方法」、２００３年４月１０日版および２００３年７月公表（ＡＳＴＭ  ｓｔａｎｄａｒｄ  Ｅ−１１５３−０３：「Ｓｔａｎｄａｒｄ  Ｔｅｓｔ  Ｍｅｔｈｏｄ  ｆｏｒ  Ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｏｆ  Ｓａｎｉｔｉｚｅｒｓ  Ｒｅｃｏｍｍｅｎｄｅｄ  ｆｏｒ  Ｉｎａｎｉｍａｔｅ  Ｎｏｎ−Ｆｏｏｄ  Ｃｏｎｔａｃｔ  Ｓｕｒｆａｃｅｓ」、ｅｄｉｔｉｏｎ  Ａｐｒｉｌ  １０，２００３  ａｎｄ  ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ  Ｊｕｌｙ  ２００３）による方法の条件下に５分で特定の試験微生物の少なくとも９９．９％を殺す。
【０１２２】
本発明のコーティング組成物は、残留抗菌効能を示すことができ、自己殺菌特性を示す。「残留抗菌効能」または「自己殺菌特性」は、乾燥後に抗菌活性のままである本明細書において記載されるように形成されたコーティングの特性を意味する。乾燥コーティングの抗菌活性は、残留自己殺菌（ＲＳＳ）試験方法を用いて測定することができる。
【０１２３】
向上した抗菌効能および向上した作用速度を有する抗菌剤が長い間必要とされてきた。このような試剤の具体的な要件は、意図される用途（たとえば、殺菌剤、消毒剤、滅菌剤、無菌包装処理など）および当てはまる公衆衛生要件に従って変わる。たとえば、消毒剤の殺菌作用および洗剤殺菌作用、公認分析化学者協会の公定法、パラグラフ９６０．０９および適用可能なセクション、第１５版、１９９０年（ＥＰＡガイドライン９１−２）（Ｇｅｒｍｉｃｉｄａｌ  ａｎｄ  Ｄｅｔｅｒｇｅｎｔ  Ｓａｎｉｔｉｚｉｎｇ  Ａｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｄｉｓｉｎｆｅｃｔａｎｔｓ，Ｏｆｆｉｃｉａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｏｆ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｏｆｆｉｃｉａｌ  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｓ，ｐａｒａｇｒａｐｈ  ９６０．０９  ａｎｄ  ａｐｐｌｉｃａｂｌｅ  ｓｅｃｔｉｏｎｓ，１５ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９０（ＥＰＡ  Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ  ９１−２））に示されているように、殺菌剤は、幾つかの試験生物に対して、室温（２３〜２７℃）で３０秒以内に９９．９９９％減少（５−ｌｏｇ次数減少）を提供すべきである。
【０１２４】
本発明のために有用なその場酵素生成過酸ベースの、除去可能な抗菌性コーティング組成物は、標準殺菌製品（希釈された第四級アンモニウム化合物溶液、過酸フォームなどの）の代替品または補足品として使用されてもよく、使用中のまたは使用中でない装置用の保護コーティングとして日常殺菌のために、ならびにより長期間保護（数週または数ヶ月）のために使用されてもよい。
【０１２５】
本開示のその場酵素的生成過酸ベースの、除去可能な抗菌性コーティング組成物は、自由生息または浮遊性微生物およびバイオフィルム中に潜伏した微生物の両方を殺すこと、バイオフィルムの形成を防ぐことによっておよびコーティングの中に、下にまたは別のやり方でコーティングと接触して微生物を捕捉することによって微生物の増殖を低減するかまたは防ぐことを含むが、それらに限定されない幾つかの利点を提供する。
【０１２６】
本明細書において開示されるコーティング組成物は、垂直の、傾いた、幾何学的に複雑なまたは到達し難い表面をコートするために組成物をレオロジー調整剤と調合することによって変性されてもよい。これは、さもなければ、伝統的な剪断−速度プロフィルおよび２５℃で約０．０１パスカル−秒より下の粘度を持った従来の抗菌性溶液の塗布によってアクセスできない装置上のまたは装置中の表面への抗菌剤の塗布を可能にする。水平および垂直表面は、液だれがレオロジー調整剤によって防止されるかまたは大きく低減されるので抗菌剤の浪費なしに保護コーティングの薄層でカバーすることができる。適切なレオロジー調整剤および架橋度で組成物を調合することによって、表面仕上げおよび保護ならびに除去の容易さの程度が変わる様々なコーティング特性のコーティング組成物を調製することができる。
【０１２７】
本発明のコーティング組成物は、汚れなどの、微生物または非微生物起源の汚染からの保護の幾つかのメカニズムを提供する。たとえば、表面上の浮遊性のまたは軽く付着した細胞は、液体コーティング組成物が塗布されるときにコーティング調合物中の抗菌剤によって、殺されるか、またはあるいは増殖が低減されるかもしくは防止される。
【０１２８】
さらに、本発明の液体抗菌性コーティング組成物の塗布後に、表面上のバイオフィルムによって潜伏した細胞は、塗布されたフィルム形成組成物が完全に乾燥して抗菌性フィルムを提供する前に、水和バイオフィルムへの抗菌剤の拡散によって、殺されるか、または増殖を低減するかもしくは防ぐことができる。持続される抗菌活性のためには、本発明の抗菌性フィルムは半透過性であることが望ましい。このように形成された抗菌性フィルムは、数秒または数分以内に典型的には垂れ落ちる従来の衛生リンス液よりはるかに長い接触時間を提供する抗菌剤の溜めを構成する。
【０１２９】
コーティングがその場所上に存在する間長持ちする活性は、様々な用途においてとりわけ有益である。本発明のフィルム形成抗菌性組成物は、標的表面から迅速に垂れ落ちず、たとえば、偶発的な接触によって容易には除去されない。本発明のコーティングのフィルム柔軟性、粘度、強度、および接着性の変動は、それが具体的な用途に合わせられることを可能にし、こうして持続する抗菌性保護を、このような持続する活性（残留利益）がこれまで利用可能ではなかった多数の状況において利用可能にする。
【０１３０】
本発明の実行において有用なフィルムを形成する水溶性もしくは水分散性試剤は、耐久性のある、除去可能な、以下に記載されるような、あらゆる試剤の少なくとも１つであってもよい。本発明のフィルムは、比較的穏和な条件下に除去可能であるように設計される。たとえば、本発明のフィルムは、１５℃より上の温度、好ましくは３０℃より上の温度で水性溶液での処理にかけられるときに除去することができる。好適なフィルム形成剤は、ポリビニルアルコール、ポリビニルアルコールコポリマー、ポリビニルピロリドン、ポリアクリル酸、アクリレートコポリマー、イオン性炭化水素ポリマー、ポリウレタン、多糖類、官能化多糖類、アラビノキシラン、グルコマンナン、グアーガム、アラビア・ゴム、ジョハニーストリー・ゴム（ｊｏｈａｎｎｉｓｔｒｅｅ  ｇｕｍ）、セルロース、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシエチルセルロース、デンプン、ヒドロキシエチルデンプン、キサンタンゴム、カラギーナン、カードラン、プルラン、ゼラチン、デキストラン、キトサン、グリセロール、アルギン酸ナトリウム、カルシウム塩で架橋されたアルギン酸ナトリウム、カラギーナン、エチレンオキシド／プロピレンオキシド／エチレンオキシドブロックコポリマー、ならびにそれらの組み合わせから選択されるが、それらに限定されない。当業者は、本発明の方法に従って容易に除去可能なコーティングを提供する範囲の水溶解度を提供するために好適な分子量の範囲を容易に選択することができる。
【０１３１】
ポリ（ビニルアルコール）と言われることもあるポリビニルアルコールは、ポリ酢酸ビニルから加水分解によって製造され、本明細書での使用に好適である。ポリビニルアルコールの物理的特性は、分子量および加水分解度によって制御される。加水分解度によって格付けされる、ポリビニルアルコールの最も一般的に入手可能なグレードは、８７〜８９％グレード（１１〜１３モル％残存酢酸ビニル単位を含有する）、９６％加水分解グレード（４モル％残存酢酸ビニル単位を含有する）、ならびに、それぞれ、約９８％および９９％超加水分解されている「完全加水分解」および「超加水分解」グレードである。より低い加水分解度（たとえば、７４％および７９％）もまた商業的に入手可能である。幾つかの好ましい加水分解度は、８５モル％超、または９２モル％超である。本発明のポリビニルアルコール成分はまた、酢酸ビニルと少量（約１５モル％以下）のその他のモノマーとのコポリマーを加水分解することによって得られるものなどの、ビニルアルコールのコポリマーであってもよい。好適なコモノマーはたとえば、アクリル酸、メタクリル酸、マレイン酸またはフマル酸、イタコン酸などのエステルである。また、酢酸ビニルと炭化水素、たとえば、エチレン、プロピレンまたはオクタデセンなどのアルファ−オレフィンとの、酪酸ビニル、２−エチルヘキサン酸ビニル、ステアリン酸ビニル、トリメチル酢酸ビニル、またはそれらの同族体（Ｓｈｅｌｌ  Ｃｈｅｍ．Ｃｏ．によって販売される「ＶＶ−１０」型のビニルエステル）などとの共重合は、加水分解して好適なポリビニルアルコールコポリマーにすることができるコポリマーを与える。その他の好適なコモノマーは、Ｎ−置換アクリルアミド、フッ化ビニル、酢酸アリル、アリルアルコールなどである。アクリル酸、メタクリル酸、マレイン酸モノメチルなどの遊離不飽和酸もまた、コモノマーとして作用することができる。
【０１３２】
文献において公知か商業的に入手可能かのいずれにしても、グレードの多様性のために、当業者は、公知のまたは商業的なグレードをあらゆる所望の比で単にブレンドすることによって、７４〜９９％超の範囲である平均加水分解度を有するポリビニルアルコール溶液を調合してもよい。
【０１３３】
ポリビニルアルコールフィルムのフィルム柔軟性、感水性、溶媒和の容易さ、粘度、フィルム強度および接着性は、分子量および加水分解度を調節することによって変え得る。
【０１３４】
一実施形態においては、本発明の方法に使用するためのポリビニルアルコールは、約８５％〜９９％超の加水分解度を有する。別の実施形態においては、ポリビニルアルコールは、約８７％〜８９％超の加水分解度を有する。一実施形態においては、ポリビニルアルコールは、約４，０００〜約２００，０００、または約４，０００〜約１５０，０００、または１０，０００〜約１００，０００の範囲の数平均分子量（Ｍｎ）を有する。
【０１３５】
一実施形態においては、ポリビニルアルコールは、約１０，０００〜１３０，０００の範囲に入る分子量を有する。別の実施形態においては、様々な分子量のポリビニルアルコールが、所望の特性を与えるためにブレンドされてもよい。
【０１３６】
一実施形態においては、ポリビニルアルコールは、溶液の重量の約２重量％〜約３０重量％で使用される。より特異的な実施形態においては、ポリビニルアルコールは、溶液の重量の約２重量％〜約１５重量％で使用される。さらにより特異的な実施形態においては、ポリビニルアルコールは、溶液の重量の約５重量％〜約１２重量％で使用される。
【０１３７】
本発明のフィルム形成組成物は、約０．２５〜約５０重量％の濃度でＰＶＰを含有してもよい。ＰＶＰの好適なグレードは、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｓｐｅｃｉａｌｔｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ（Ｗａｙｎｅ，ＮＪ，ＵＳＡ）から入手できる。このようなグレードとしては、約６，０００〜約１５，０００の分子量（Ｍｗ）平均範囲を有する、Ｋ−１５；約４０，０００〜約８０，０００の分子量範囲を有する、Ｋ−３０；約２４０，０００〜約４５０，０００の分子量範囲を有する、Ｋ−６０；約９００，０００〜約１，５００，０００の分子量範囲を有するＫ−９０；および約２，０００，０００〜約３，０００，０００の分子量範囲を有する、Ｋ−１２０が挙げられる。ＰＶＰとその他のフィルム形成化合物との組み合わせであってもよいような、ＰＶＰの混合物が用いられてもよい。好適なグレードは、それらの全体を参照により本明細書に援用される、共同所有されるおよび同時係属の米国特許出願公開第２００７／０２７５１０１  Ａ１号明細書および同第２００８／００２６０２６Ａ１号明細書に記載されている。
【０１３８】
典型的には、より低い分子量ＰＶＰは、同じ濃度において、より高い分子量ＰＶＰよりも粘性の少ない生成物を与えるであろう。所与の濃度のＰＶＰについては、分子量範囲が増加するにつれて、粘度もまた増加するであろう。本発明は、多数の分子量範囲のどれを有するＰＶＰを用いてもよい。しかし、約１５，０００〜約３，０００，０００ｇ／モルの分子量分布のＰＶＰを使用することが好ましい。この分子量分布を有するＰＶＰは、容易に調整することができ、かつ塗装された表面との相互作用の目に見える兆候が全くなしに容易に表面を洗い流し得る粘度のフィルム形成組成物を典型的には与える。好ましい実施形態においては、約１５，０００〜約３，０００，０００ｇ／モルの分子量分布のＰＶＰは、約０．２５重量％〜約４０重量％の濃度で存在する。別の好ましい実施形態においては、約３０，０００〜約１，２００，０００ｇ／モルの分子量分布のＰＶＰは、約０．２５重量％〜約１０重量％の濃度で存在する。
【０１３９】
高度に有効な消毒剤を含むとして広く認められている１クラスの分子は、有機ペルオキシ酸のそれである。ここ数年研究は、それらの配送の安定なおよび安全な手段を提供することを特に目的として、これらの化合物に向けられてきた。ペルオキシ酸の中で、最も注視の対象であったものは、ペルオキシ酢酸（多くの場合過酢酸またはＰＡＡと言われる）であった。この特定のペルオキシ酸は、純化合物として単離されることはめったになく、普通は水性および非水性媒体の両方中の溶液で遭遇する。ペルオキシ酢酸は、安定剤などの多数のその他の少量成分と一緒に、主として水、酢酸および過酸化水素を含む平衡混合物として多くの場合供給される（国際公開第２００６／０７６３３４号パンフレット；米国特許第５，５０８，０４６号明細書）。しかし、ペルオキシ酢酸の平衡システムでさえ、酢酸および酸素へのペルオキシ酢酸の分解のために本質的に熱力学的に不安定である。このような分解は、特別な手段が講じられる場合に減速される可能性があるが、完全に防止することはできない。それらを使用するまたは貯蔵するのを困難にするペルオキシ酸のさらなる特性は、それら、特に低分子量のおよび高純度のペルオキシ酸が迅速におよび激しく分解することである。この問題を解決するために、ペルオキシ酸は、特定の所望の機能を果たすために多くの場合その場発生させられる。このようなその場発生は、生成するペルオキシ酸の量が出発原料の相対的組成を選択することによって化学量論的に制御され得るという点において利点を有する。さらに、その場システムの非平衡性のために平衡システムから入手可能であるものより高い濃度のペルオキシ酸が達成される可能性がある。
【０１４０】
必要とされる速度でペルオキシ酸を発生させることがまた必要とされており：余りにも遅い速度は性能の欠如をもたらす可能性がある。本方法は、所望の有効な濃度の過酸を生成するための酵素と酵素基質との組み合わせを提供し、ここで、添加酵素が存在しないと、著しくより低い濃度の過酸が生成する。ある場合には、無機過酸化物と酵素基質との直接化学反応による酵素基質のかなりの化学的過加水分解が存在する可能性があるが、所望の用途における有効な濃度の過酸を提供するのに十分な濃度の過酸は発生しない可能性があり、全過酸濃度の著しい増加は、反応混合物への適切なペルヒドロラーゼ触媒の添加によって達成される。
【０１４１】
過酸の安定性の固有の欠如に対する一解決策は、過酸を生成する、または形成するために反応する反応成分が必要とされるまで別々に維持されるシステムを提供することである（国際公開第２００６／０１６１４５号パンフレット）。この問題に対するこのような解決策は、本明細書に記載される方法において熟考される。
【０１４２】
本発明においてフィルム形成成分は、カルボン酸エステル基質、ペルヒドロラーゼ活性を有する酵素触媒、およびペルオキシゲン源を含む、その他の成分と組み合わせられる。フィルム形成成分と次の成分、カルボン酸エステル基質、酵素触媒、およびペルオキシゲン源の１つ以上とは、抗菌性コーティング組成物を形成するための組み合わせおよび標的表面への塗布の前に、１つの区画に一緒に貯蔵するか、または別個の区画に貯蔵することができる。たとえば、フィルム形成成分は、カルボン酸エステル基質、酵素触媒およびペルオキシゲン源とは別個の区画に貯蔵し、標的表面への塗布の直前に組み合わせることができるか、あるいは、フィルム形成成分は、それらが組み合わせられ、そして標的表面に塗布されるような時間までカルボン酸エステル基質と一緒に、しかし酵素触媒もしくはペルオキシゲン源とは別々に貯蔵することができる。
【０１４３】
本方法は、炭水化物エステラーゼのＣＥ−７ファミリーからの酵素のペルヒドロラーゼ活性を用いて耐久性のある、連続的なおよび容易に除去可能なフィルム形成組成物における効果ある濃度の過酸のその場酵素的生成を提供する。本明細書において記載されるように、前記酵素（たとえば、サーモトガ・ネアポリタナ（Ｔｈｅｒｍｏｔｏｇａ  ｎｅａｐｏｌｉｔａｎａ）から単離されたアミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７、サーモトガ・マリチマ（Ｔｈｅｒｍｏｔｏｇａ  ｍａｒｉｔｉｍａ）から単離されたアミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８、または実質的に類似のアミノ酸配列の酵素）をエンコードする遺伝子が現行法における適用のために好適である。上に開示されたように、ペルヒドロラーゼ活性を有する、様々なソースからの、その他の酵素がまた、本明細書において開示される本方法に使用されてもよい。
【０１４４】
好ましい実施形態においては、無機過酸化物源は過酸化水素である。本発明が無機過酸化水素に限定されることは意図されない。過酸化水素は、酵素触媒および好適な基質を使用して発生させられてもよい。好適な基質で過酸化水素および酸を発生させるあらゆる酵素が本方法において使用される。たとえば、乳酸と酸素とからの公知の過酸化水素プロデューサーである、ラクトバチルス種（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐｅｃｉｅｓ）からのラクテートペルオキシダーゼが現行法に使用されてもよい。
【０１４５】
過酸化水素を発生させることができるその他の酵素（たとえば、グルコースオキシダーゼ、アルコールオキシダーゼ、エチレングリコールオキシダーゼ、グリセロールオキシダーゼ、アミノ酸オキシダーゼなど）もまた、過酸を発生させるために本方法のペルヒドロラーゼ酵素と組み合わせてエステル基質で使用される。過酸化水素の発生なしに基質から酸を発生させる酵素もまた本発明において使用される。このような酵素の例としては、プロテアーゼが挙げられるが、それらに限定されない。
【０１４６】
別の態様においては、ペルオキシゲン源はあらゆる過酸化物化合物であってもよく、次のもの：過酸化水素、過ホウ酸ナトリウム一水和物、過ホウ酸ナトリウム四水和物、ピロリン酸ナトリウムペルオキシハイドレート、ウレアペルオキシハイドレート、過炭酸ナトリウム、過酸化ナトリウムおよびそれらの混合物から選択されてもよいが、それらに限定されない。
【０１４７】
一実施形態においては、好適な基質としては、次式：
［Ｘ］mＲ5
（式中、Ｘ＝式Ｒ6Ｃ（Ｏ）Ｏのエステル基であり、
Ｒ6＝ヒドロキシル基またはＣ１〜Ｃ４アルコキシ基で任意選択的に置換された、Ｃ１〜Ｃ７の直鎖状、分枝状または環式ヒドロカルビル部分であり、ここで、Ｒ6は、Ｒ6＝Ｃ２〜Ｃ７については１つ以上のエーテル結合を任意選択的に含み；
Ｒ5＝ヒドロキシル基で任意選択的に置換されたＣ１〜Ｃ６の直鎖状、分枝状、または環式ヒドロカルビル部分であり、ここで、Ｒ5中の各炭素原子は個別に、１つ以下のヒドロキシル基または１つ以下のエステル基を含み、Ｒ5は１つ以上のエーテル結合を任意選択的に含み；
ｍ＝１からＲ5中の炭素原子の数までである）
で与えられるエステルであって、
２５℃で少なくとも５ｐｐｍの水への溶解度を有するエステルが挙げられる。
【０１４８】
別の実施形態においては、好適な基質としてはまた、式：Ｒ1−ＣＯＯ−Ｒ2（式中、Ｒ1＝ヒドロキシル基またはＣ１〜Ｃ４アルコキシ基で任意選択的に置換された、Ｃ１〜Ｃ７の直鎖状、分枝状鎖アルキルであり、Ｒ2＝Ｃ１〜Ｃ１０の直鎖状、分枝状鎖アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アルキルアリール、アルキルヘテロアリール、ヘテロアリール、−（ＣＨ2ＣＨ2−Ｏ）nＨまたは−（ＣＨ2ＣＨ（ＣＨ3）−Ｏ）nＨであり、ｎ＝１〜１０である）のエステルが挙げられる。
【０１４９】
別の実施形態においては、好適な基質としては、式：Ｒ1−ＣＯＯ−ＣＨ2−ＣＨ（ＯＲ3）−ＣＨ2−ＯＲ4（式中、Ｒ1＝ヒドロキシル基またはＣ１〜Ｃ４アルコキシ基で任意選択的に置換されたＣ１〜Ｃ７の直鎖状または分枝状鎖アルキルであり、Ｒ3およびＲ4は個別にＨまたはＲ1Ｃ（Ｏ）である）のグリセリドが挙げられる。
【０１５０】
別の実施形態においては、Ｒ6は、ヒドロキシル基またはＣ１〜Ｃ４アルコキシ基で任意選択的に置換された、１つ以上のエーテル結合を任意選択的に含む、Ｃ１〜Ｃ７の直鎖状ヒドロカルビル部分である。さらなる好ましい実施形態においては、Ｒ6は、ヒドロキシル基で任意選択的に置換された、および／または１つ以上のエーテル結合を任意選択的に含む、Ｃ２〜Ｃ７の直鎖状ヒドロカルビル部分である。
【０１５１】
別の実施形態においては、好適な基質としてはまた、アセチル化単糖類、二糖類、および多糖類からなる群から選択されるアセチル化糖類が挙げられる。好ましい実施形態においては、アセチル化糖類としては、アセチル化単糖類、二糖類、および多糖類が挙げられる。別の実施形態においては、アセチル化糖類は、アセチル化キシラン、アセチル化キシランの断片、アセチル化キシロース（キシローステトラアセテートなどの）、アセチル化グルコース（グルコースペンタアセテートなどの）、β−Ｄ−リボフラノース−１，２，３，５−テトラアセテート、トリ−Ｏ−アセチル−Ｄ−ガラクタール、およびトリ−Ｏ−アセチル−Ｄ−グルカール、ならびにアセチル化セルロースからなる群から選択される。好ましい実施形態においては、アセチル化糖類は、β−Ｄ−リボフラノース−１，２，３，５−テトラアセテート、トリ−Ｏ−アセチル−Ｄ−ガラクタール、およびトリ−Ｏ−アセチル−Ｄ−グルカール、ならびにアセチル化セルロースからなる群から選択される。したがって、アセチル化炭水化物は、本方法（すなわち、ペルオキシゲン源の存在下に）を用いて過カルボン酸を発生させるための好適な基質であり得る。
【０１５２】
一実施形態においては、基質は、モノアセチン；ジアセチン；トリアセチン；モノプロピオニン；ジプロオピオニン；トリプロピオニン；モノブチリン；ジブチリン；トリブチリン；グルコースペンタアセテート；キシローステトラアセテート；アセチル化キシラン；アセチル化キシラン断片；β−Ｄ−リボフラノース−１，２，３，５−テトラアセテート；トリ−Ｏ−アセチル−Ｄ−ガラクタール；トリ−Ｏ−アセチル−グルカール；１，２−エタンジオール、１，２−プロパンジオール、１，３−プロパンジオール、１，２−ブタンジオール、１，３−ブタンジオール、２，３−ブタンジオール、１，４−ブタンジオール、１，２−ペンタンジオール、２，５−ペンタンジオール、１，６−ペンタンジオール、１，２−ヘキサンジオール、２，５−ヘキサンジオール、１，６−ヘキサンジオールのモノエステルまたはジエステル；ならびにそれらの混合物からなる群から選択される。
【０１５３】
好ましい実施形態においては、基質は、酢酸エチル、乳酸メチル、乳酸エチル、グリコール酸メチル、グリコール酸エチル、メトキシ酢酸メチル、メトキシ酢酸エチル、３−ヒドロキシ酪酸メチル、３−ヒドロキシ酪酸エチル、２−アセチルクエン酸トリエチル、グルコースペンタアセテート、グルコノラクトン、モノアセチン、ジアセチン、トリアセチン、モノプロピオニン、ジプロオピオニン（グリセリルジジプロピオネート）、トリプロピオニン（１，２，３−トリプロピオニルグリセロール）、モノブチリン、ジブチリン（グリセリルジブチレート、トリブチリン（１，２，３−トリブチリルグリセロール）などのグリセリド（モノ−、ジ−、およびトリグリセリド）、アセチル化糖類、ならびにそれらの混合物からなる群から選択される。
【０１５４】
さらに好ましい態様においては、カルボン酸エステル基質は、モノアセチン、ジアセチン、トリアセチン、モノプロピオニン、ジプロオピオニン、トリプロピオニ、モノブチリン、ジブチリン、トリブチリン、酢酸エチル、および乳酸エチルからなる群から選択される。さらに別の態様においては、カルボン酸エステル基質は、ジアセチン、トリアセチン、酢酸エチル、および乳酸エチルからなる群から選択される。好ましい態様においては、カルボン酸エステルは、モノアセチン、ジアセチン、トリアセチン、およびそれらの混合物からなる群から選択されるグリセリドである。
【０１５５】
本発明のために有用な不活性溶媒としては、水または少なくとも５０重量％の水を含む溶媒が挙げられる。追加の溶媒としては、好ましくは約１〜約６個の炭素原子および１〜約６個のヒドロキシ基を含有する、モノアルコール、一官能性および多官能性アルコールが挙げられる。例としては、エタノール、イソプロパノール、ｎ−プロパノール、１，２−プロパンジオール、１，２−ブタンジオール、２−メチル−２，４−ペンタンジオール、マンニトールおよびグルコースが挙げられる。高級グリコール、ポリグリコール、ポリオキシド、グリコールエーテルおよびプロピレングリコールエーテルもまた有用である。追加の溶媒としては、遊離の酸ならびに、トルエン、キシレン、クメンおよびフェノールまたはフェノールエーテルもしくはジフェニルエーテルスルホネートなどのスルホン化アルキルアリールのアルカリ金属塩；アルキルおよびジアルキルナフタレンスルホネートならびにアルコキシル化誘導体が挙げられる。
【０１５６】
本発明のために有用な組成物はまた、１つ以上の界面活性剤を含有してもよい。理論に制約されることなく、界面活性剤はカバーされるべき表面の湿潤化を助け、かつ、フィルムによる一様な被覆を助けるであろう。界面活性剤はまた、除去されたときにフィルムによる泡立ちを助け、それによってフィルムの除去および保護された表面の洗浄を助けると考えられる。好適な界面活性剤は、約９〜約１７の好ましい親水性−親油性バランス（ＨＬＢ）を有する。好適な界面活性剤としては、Ｔｏｍａｈ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ製のＡｍｐｈｏｔｅｒｉｃ  Ｎなどの、両性界面活性剤；ＢＹＫ  Ｃｈｅｍｉｅ（ＢＹＫ−Ｃｈｅｍｉｅ  ＧｍｂＨ，（Ｗｅｓｅｌ，Ｇｅｒｍａｎｙ））から入手可能なＢＹＫ  ３４８などの、シリコーン界面活性剤；ＤｕＰｏｎｔ（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＤＥ，ＵＳＡ）製のＺｏｎｙｌ（登録商標）ＦＳ３００などのフッ素化界面活性剤；およびＤｏｗ（Ｍｉｄｌａｎｄ，ＭＩ，ＵＳＡ）から入手可能なＴｒｉｔｏｎ  Ｎ−１０１などの、ノニルフェノキシポリエトキシエタノールベースの界面活性剤が挙げられるが、それらに限定されない。その他の好適な界面活性剤としては、Ａｉｒ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  ＆  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ（Ａｌｌｅｎｔｏｗｎ，ＰＡ，ＵＳＡ）から入手可能なＳｕｒｆｙｎｏｌ  ４６５などのエトキシル化デシンジオール；Ｄｏｗから入手可能なＴｒｉｔｏｎ  ＣＦ−１０などのアルキルアリールポリエーテル；Ｄｏｗから入手可能なＴｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００などのオクチルフェノキシポリエトキシエタノール；Ｓｈｅｌｌ（Ｔｈｅ  Ｈａｇｕｅ，ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）から入手可能なＮｅｏｄｏｌ  ２３−５またはＮｅｏｄｏｌ  ９１−８などのエトキシル化アルコール；Ｄｏｗから入手可能なＴｅｒｇｉｔｏｌ  １５−Ｓ−７；Ｓｔｅｏｌ−４Ｎ、Ｓｔｅｐａｎ  Ｃｏｍｐａｎｙ（Ｎｏｒｔｈｆｉｅｌｄ，ＩＬ，ＵＳＡ）製の２８％ラウレス硫酸ナトリウム；Ｓｔｅｐａｎから入手可能なＡｍｍｏｎｙｘ（登録商標）ＬＯなどのアミノオキシド；ＢＡＳＦ（Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ，ＮＪ，ＵＳＡ）から入手可能なＰｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）１７Ｒ４などのＥＯ／ＰＯブロックコポリマー；Ｕｎｉｑｅｍａ（Ｎｅｗ  Ｃａｓｔｌｅ，ＤＥ，ＵＳＡ）製のＴｗｅｅｎ  ２０またはＴｗｅｅｎ  ６０などのソルビタン誘導体；および塩化ベンザルコニウムなどの、第四級アンモニウム化合物が挙げられる。
【０１５７】
その他の好適な界面活性剤としては、Ｓｅｔｒｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ（Ｍｅｍｐｈｉｓ，ＴＮ，ＵＳＡ）製のＳｉｌｗｅｔ（登録商標）Ｌ−７７などのオルガノ−シリコーン界面活性剤；ＤｏｗＣｏｒｎｉｎｇ  Ｓｉｌｉｃｏｎｅｓ（Ｍｉｄｌａｎｄ，ＭＩ，ＵＳＡ）製のＤｏｗＣｏｒｎｉｎｇ（登録商標）Ｑ２−５２１１；またはＳｉｌｔｅｃｈ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｔｏｒｏｎｔｏ，ＯＮ，Ｃａｎａｄａ）によるＳｉｌｓｕｒｆ（登録商標）Ａ００８が挙げられる。
【０１５８】
得られたフィルムが可塑化されることは、保護フィルムの柔軟性および完全性のために重要であり得る。フィルムの可塑化は、ポリエチレングリコールまたはグリセロールなどの好適な可塑剤の組み込みによって本発明の目的のために成し遂げられてきた。本発明のために好適なその他の可塑剤としては、溶媒、ポリオール、２００〜８００ｇ／モルの平均分子量のポリエチレングリコールおよびソルビトールが挙げられるが、それらに限定されない。グリセロールは微生物によって容易に代謝され、微生物増殖をもたらす可能性があるので、ＰＥＧがグリセロールよりも好ましい。
【０１５９】
可塑剤の包含は一般にまた、わずかに粘着性の表面感触をフィルムに保持させる。可塑剤レベルが増加するにつれて、生じたフィルムはまた増加する程度の粘着性を示すであろう。このような粘着性は、空中粒子および汚物またはその他の材料を捕捉するために低いレベルで望ましいかもしれない。しかし、可塑剤レベルが余りにも高い場合、コーティングは余りにも粘着性になり、たとえば、拭くことによる、偶然の機械的除去に対して低い抵抗を示すであろう。
【０１６０】
好ましい可塑剤量は、フィルム形成体の重量の約１重量％〜約２０重量％、より好ましくは約５重量％〜約１０重量％である。
【０１６１】
本発明のために有用な組成物はまた、粘度を高め、または増粘し、水性処理剤またはコーティング組成物を表面に粘着させるために用いられる１つ以上のレオロジー調整剤を含有してもよい。粘着は、組成物がより長い期間、一時的なおよび常在する微生物と接触したままであり、微生物学的効能を促進し、かつ、過度の液だれによる浪費に抵抗することを可能にする。レオロジー調整剤はフィルム形成体であってもよく、またはフィルム形成剤と協調的に行動して追加の保護を提供する障壁を形成してもよい。有用である水溶性のまたは水分散性のレオロジー調整剤は無機または有機として分類されてもよい。有機増粘剤は天然および合成ポリマーにさらに分けられてもよく、後者は合成天然ベースおよび合成石油ベースものに、その上さらに細かく分けられる。
【０１６２】
無機増粘剤は一般に、大きい表面対サイズ比の粒子を生み出すために融解されたまたは沈澱させられたコロイド状ケイ酸マグネシウムアルミニウム（ＶＥＥＧＵＭ（登録商標））、コロイド状粘土（ベントナイト）、またはシリカ（ＣＡＢ−Ｏ−ＳＩＬ（登録商標））などの化合物である。役立つ天然ヒドロゲル増粘剤は、主として植物由来の滲出液である。たとえば、トラガカンスゴム、カラヤゴム、およびアカシアゴム；ならびにカラギーナン、ローカストビーンガム、グアーガムおよびペクチンなどの抽出物；または、キサンタンゴムなどの純粋培養発酵生成物はすべて、本発明において有用である可能性がある。化学的には、これらの物質のすべては複合アニオン多糖類の塩である。用途を有する合成天然ベースの増粘剤は、直鎖状アンヒドログルコースポリマー上の遊離ヒドロキシル基が、水に溶解し、そして粘稠な溶液を与える物質の一族を与えるためにエーテル化されたまたはエステル化されたセルロース誘導体である。この群の物質としては、アルキルおよびヒドロキシル−アルキルセルロース、具体的にはメチルセルロース、ヒドロキシエチルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシブチルメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、エチルヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、およびカルボキシ−メチルセルロースが挙げられる。別の好ましい群の増粘剤としては、独占所有権のあるＡｃｕｓｏｌ増粘剤（たとえば、Ａｃｕｓｏｌ  ８２３，Ｒｏｈｍ  ａｎｄ  Ｈａａｓ，（Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ，ＵＳＡ））などのポリアクリレート、およびＣａｒｂｏｐｏｌ  ９３４またはＣａｒｂｏｐｏｌ  Ａｑｕａ−３０  Ｐｏｌｙｍｅｒ（Ｂ  Ｆ  Ｇｏｏｄｒｉｃｈ，（Ｃｌｅｖｅｌａｎｄ，ＯＨ，ＵＳＡ））などの、Ｃａｒｂｏｐｏｌ増粘剤が挙げられる。追加の好ましいアクリレートベースのレオロジー調整剤としては、独占所有権のあるカチオン性Ｒｈｅｏｖｉｓ（登録商標）増粘剤（Ｃｉｂａ，（Ｂａｓｅｌ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ））が挙げられる。ポリアクリレート増粘剤は、フィルム形成体重量の約３重量％以下の濃度で使用されてもよい。増粘剤の混合物がまた用いられてもよく、ここで、総量は、使用される増粘剤および最終製品の所望の粘度に依存して約３重量％以下であってもよい。
【０１６３】
本出願のためのその他の潜在的な増粘剤としては、デキストリン、コーンスターチおよび、商品名Ｌａｐｏｎｉｔｅ  ＸＬＧ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｃｌａｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｉｎｃ．，（Ｇｏｎｚａｌｅｓ，ＴＸ，ＵＳＡ））で販売されるケイ酸ナトリウムマグネシウムなどの、水和ケイ酸マグネシウムが挙げられる。
【０１６４】
その場発生ペルオキシ酸に加えて、１つ以上の追加の抗菌剤が本組成物中に存在してもよい。本発明のために有用な抗菌剤は、無機試剤か有機試剤かのどちらか、またはそれらの混合物であってもよい。
【０１６５】
本明細書において使用される用語「無機抗菌剤」は、抗菌特性を有する銀、亜鉛、銅などの、金属または金属イオンを含有する無機化合物に対する一般用語である。
【０１６６】
本発明は、あらゆる特定の抗菌剤の選択に限定されず、抗菌剤が組成物中のその他の成分と化学的に相溶性であるという条件で、抗菌剤、防かび剤、防腐剤、消毒剤、殺菌剤、殺菌薬、殺藻剤、防汚剤、保存料、および前述の組み合わせなどの、あらゆる公知の水溶性もしくは水分散性の抗菌剤が本発明の組成物中に含められてもよい。好適なクラスの抗菌剤は以下に記載される。
【０１６７】
有用な抗菌剤の例としては、クロルヘキシジン、クロルヘキシジングルコネート、グルタラール、ハラゾン、ヘキサクロロフェン、ニトロフラゾン、ニトロメルゾール、チメロソル、Ｃ１〜Ｃ５パラベン、次亜塩素酸塩、クロフカルバン、クロロフェン、フェノール類、マフェナイドアセテート、アミナクリン塩酸塩、第四級アンモニウム塩、塩素および臭素放出化合物（たとえば、アルカリおよびアルカリ土類次亜塩素酸塩および次亜臭素酸塩、イソシアヌレート；ヒダントイン、スルファミド、アミンの塩素化誘導体など）、過酸化物およびペルオキシ酸化合物（たとえば、過酢酸、過オクタン酸）、プロトン化短鎖カルボン酸、オキシクロロセン、メタブロムサラン、メルブロミン、ジブロムサラン、グリセリルラウレート、ナトリウムおよび／または亜鉛ピリチオン、リン酸三ナトリウム、（ドデシル）（ジエチレンジアミン）グリシンおよび／または（ドデシル）（アミノプロピル）グリシンなどが挙げられる。有用な第四級アンモニウム塩としては、ハロゲン化物、たとえば、塩化物、臭化物およびヨウ化物；サルフェート、メトサルフェートなどの水可溶化アニオンを含むＮ−Ｃ10〜Ｃ24アルキル−Ｎ−ベンジル−第四級アンモニウム塩ならびにイミダゾリウム塩などの複素環イミドが挙げられる。第四級アンモニウム塩はまた、プロピオネートおよびサッカリネートなどのその他の非ハロゲン化アニオンを含んでもよい。有用なフェノール殺菌剤としては、フェノール、ｍ−クレゾール、ｏ−クレゾール、ｐ−クレゾール、ｏ−フェニル−フェノール、４−クロロ−ｍ−クレゾール、クロロキシレノール、６−ｎ−アミル−ｍ−クレゾール、レゾルシノール、レゾルシノールモノアセテート、ｐ−第三ブチルフェノールおよびｏ−ベンジル−ｐ−クロロフェノールが挙げられる。うどん粉菌コロニーの目に見える増殖を防ぐのに有効であることが知られる有用な抗菌剤としては、たとえば、３−ヨード−２−プロピニルブチルカルバメート、２−（４−チアゾリル）ベンズイミダゾール、ジヨードメチル−ｐ−トリルスルホン、テトラクロロイソフタロニトリル、２−ピリジンチオール−１−オキシドの亜鉛錯体（それの塩を含む）ならびに前述の組み合わせが挙げられる。抗菌剤を含むコーティング組成物は、種々の微生物からの保護を提供する。
【０１６８】
一実施形態においては、本コーティング組成物は、グラム陽性菌またはグラム陰性菌から保護する。本コーティングによって抑止されるまたは殺されるグラム陽性菌としては、クロストリジウム・テタニ（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｔｅｔａｎｉ）、Ｃ．パーフリンゲンス（Ｃ．ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）、Ｃ．ボツリナム（Ｃ．ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ）、その他のクロストリジウム種（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、ヒト型結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、ウシ型結核菌（Ｍ．ｂｏｖｉｓ）、マイコバクテリウム・ティフィムリウム（Ｍ．ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）、ウシ型結核菌株ＢＣＧ（Ｍ．ｂｏｖｉｓ  ｓｔｒａｉｎ  ＢＣＧ）、ＢＣＧ亜株（ＢＣＧ  ｓｕｂｓｔｒａｉｎｓ）、トリ型結核菌（Ｍ．ａｖｉｕｍ）、Ｍ．イントラセルラーレ（Ｍ．ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ）、Ｍ．アフリカナム（Ｍ．ａｆｒｉｃａｎｕｍ）、Ｍ．カンサシ（Ｍ．ｋａｎｓａｓｉｉ）、Ｍ．マリヌム（Ｍ．ｍａｒｉｎｕｍ）、Ｍ．ウルセランス（Ｍ．ｕｌｃｅｒａｎｓ）、トリ型結核菌亜種パラ結核菌（Ｍ．ａｖｉｕｍ  ｓｕｂｓｐｅｃｉｅｓ  ｐａｒａｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）、表皮ブドウ球菌（Ｓ．ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ）、Ｓ．エクイ（Ｓ．ｅｑｕｉ）、化膿連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ）、ストレプトコッカス・アガラクチアエ（Ｓ．ａｇａｌａｃｔｉａｅ）、リステリア・モノサイトゲネス（Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）、Ｌ．イバノビイ（Ｌ．ｉｖａｎｏｖｉｉ）、炭疽菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｎｔｈｒａｃｉｓ）、枯草菌（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、ノカルディア・アステロイデス（Ｎｏｃａｒｄｉａ  ａｓｔｅｒｏｉｄｅｓ）、およびその他のノカルディア種（Ｎｏｃａｒｄｉａ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、ビリダンス型連鎖球菌群（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｖｉｒｉｄａｎｓ  ｇｒｏｕｐ）、ペプトコッカス種（Ｐｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、ペプトストレプトコッカス種（Ｐｅｐｔｏｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、イスラエル放線菌（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ  ｉｓｒａｅｌｉｉ）およびその他のアクチノミセス種（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、プロピオニバクテリウム・アクネス（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｃｎｅｓ）、ならびにエンテロコッカス種（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐｅｃｉｅｓ）が挙げられるが、それらに限定されない。本コーティングによって抑止されるまたは殺されるグラム陰性菌としては、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、その他のシュードモナス種（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、カンピロバクター種（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、コレラ菌（Ｖｉｂｒｉｏ  ｃｈｏｌｅｒａｅ）、エールリヒア種（Ｅｈｒｌｉｃｈｉａ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、アクチノバチルス・プルロニューモニエ（Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌｅｕｒｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、パスツレラ・ヘモリチカ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ  ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃａ）、Ｐ．ムルトシダ（Ｐ．ｍｕｌｔｏｃｉｄａ）、そ��他のパスツレラ種（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、レジオネラ・ニューモフィラ（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ）、その他のレジオネラ種（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、チフス菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉ）、その他のサルモネラ種（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、シゲラ種（Ｓｈｉｇｅｌｌａ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、ウシ流産菌（Ｂｒｕｃｅｌｌａ  ａｂｏｒｔｕｓ）、その他のブルセラ種（Ｂｒｕｃｅｌｌａ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、クラミジア・トラコマチス（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ）、Ｃ．シッタシ（Ｃ．ｐｓｉｔｔａｃｉ）、コクシエラ・バーネッティイ（Ｃｏｘｉｅｌｌａ  ｂｕｒｎｅｔｔｉ）、ナイセリア・メニンギティディス（Ｎｅｉｓｅｒｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、淋菌（Ｎ．ｇｏｎｏｒｒｈｅａ）、インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）、デュクレー菌（Ｈ．ｄｕｃｒｅｙｉ）、その他のヘモフィルス種（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、ペスト菌（Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｐｅｓｔｉｓ）、エルシニア・エンテロリチカ（Ｙ．ｅｎｔｅｒｏｌｉｔｉｃａ）、その他のエルシニア種（Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）、エシェリキア・ヒラエ（Ｅ．ｈｉｒａｅ）およびその他のエシェリキア種（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、ならびにその他のエントロバクレイアカエ（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃａｅ）、バークホルデリア・セパシア（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｃｅｐａｃｉａ）、類鼻疽菌（Ｂ．ｐｓｅｕｄｏｍａｌｌｅｉ）、野兎病菌（Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ  ｔｕｌａｒｅｎｓｉｓ）、バクテロイデス・フラギリス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｆｒａｇｉｌｉｓ）、フゾバクテリウム・ヌクレアーツム（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｎｕｃｌｅａｔｕｍ）、プロベッテラ種（Ｐｒｏｖｅｔｅｌｌａ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、コウドリア・ルミナンチウム（Ｃｏｗｄｒｉａ  ｒｕｍｉｎａｎｔｉｕｍ）、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、ならびにプロテウス種（Ｐｒｏｔｅｕｓ  ｓｐｅｃｉｅｓ）が挙げられるが、それらに限定されない。
【０１６９】
別の実施形態においては、本コーティングは、アルテルナリア・アルタナータ（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ  ａｌｔｅｒｎａｔａ）、アスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）、オーレオバシジウム・プルランス（Ａｕｒｅｏｂａｓｉｄｉｕｍ  ｐｕｌｌｕｌａｎｓ）、クラドスポリウム・クラドスポリオイデス（Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ  ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｏｉｄｅｓ）、ドレクスレラ・アオストラリエンシス（Ｄｒｅｃｈｓｌｅｒａ  ａｕｓｔｒａｌｉｅｎｓｉｓ）、グリオマスチックス・セレアリス（Ｇｌｉｏｍａｓｔｉｘ  ｃｅｒｅａｌｉｓ）、モニリア・グリセア（Ｍｏｎｉｌｉａ  ｇｒｉｓｅａ）、ペニシリウム・コンミュネ（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｃｏｍｍｕｎｅ）、フォーマ・フィメチ（Ｐｈｏｍａ  ｆｉｍｅｔｉ）、ピトマイセス・チャータラム（Ｐｉｔｈｏｍｙｃｅｓ  ｃｈａｒｔａｒｕｍ）、およびスコレコバシディウム・フミコラ（Ｓｃｏｌｅｃｏｂａｓｉｄｉｕｍ  ｈｕｍｉｃｏｌａ）を含むが、それらに限定されない真菌類からの保護を提供する。
【０１７０】
痕跡量の不純物、とりわけ金属は、過酸化水素およびペルオキシ酸と反応し、分解を引き起こす可能性がある。それ故、多くの過酸化物／ペルオキシ酸組成物は、金属および金属含有不純物材料を封鎖する化合物などの、安定化原料を含む。好ましいキレート剤の例としては、それらの幾つかが名称Ｄｅｑｕｅｓｔ（登録商標）（Ｔｈｅｒｍｐｈｏｓ，Ｖｉｓｓｉｎｇｅｎ，  ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）でマークされる、アルキリデンアミノホスホン酸またはそれらの塩、それらの幾つかが名称Ｔｕｒｐｉｎａｌ（登録商標）（Ｔｈｅｒｍｐｈｏｓ）でマークされる、１−ヒドロキシエチリデン−１，１−ジホスホン酸およびそれの塩、ならびにＢａｙｈｉｂｉｔ（登録商標）でＬＡＮＸＥＳＳ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ，ＰＡ，ＵＳＡ）から入手可能な、２−ホスホノ−１，２，４−ブタントリカルボン酸およびそれの塩が挙げられるが、それらに限定されない。使用するために好適なさらなるクラスの化合物は、アミノカルボン酸またはそれらの塩である。例は、エチレンジアミン四酢酸である。
【０１７１】
さらに、その他の好適なキレート剤としては、ジピコリン酸、エタン−１，１，２−トリホスホン酸およびエチリデン−１，１−ジホスホン酸が挙げられる。さらに、リン酸塩、ポリリン酸塩、ピロリン酸塩、および、クエン酸またはサリチル酸などの、カルボン酸もまたキレート剤として当該技術分野においてよく知られている。安定剤は、過酸化物／ペルオキシ酸の分解を抑止するのに十分な量で存在するべきである。
【０１７２】
本発明は、着色剤または染料を任意選択的に含むことができる。本発明のために有用な着色剤としては、染料および食品グレード顔料などの顔料が挙げられる。
【０１７３】
本発明のために有用な染料としては、水溶性染料および水不溶性染料の両方が挙げられる。水溶性染料は、本発明の水性系に容易に調合することができる。水不溶性染料は、本発明のために有用な抗菌性コーティング組成物中に分散されてもまたは懸濁されてもよい油相中に含められてもよい。本発明の目的のための有用な染料は典型的には、可視光を吸収し、検出できる色の出現をもたらす有機化合物である。蛍光染料がまた、たとえば、紫外光によってフィルムを見えるようにするために使用されてもよい。
【０１７４】
本発明において典型的に有用な染料は、食品、医薬品、化粧品および医療装置における使用を認可されている着色剤である。現在使用中の着色剤およびそれらの状況は次の通りである：（１）認証の対象である食品において許可される着色剤：ＦＤ＆Ｃ  Ｂｌｕｅ  Ｎｏ．１、ＦＤ＆Ｃ  Ｂｌｕｅ  Ｎｏ．２、ＦＤ＆Ｃ  Ｇｒｅｅｎ  Ｎｏ．３、ＦＤ＆Ｃ  Ｒｅｄ  Ｎｏ．３、ＦＤ＆Ｃ  Ｒｅｄ  Ｎｏ．４０、ＦＤ＆Ｃ  Ｙｅｌｌｏｗ  Ｎｏ．５、ＦＤ＆Ｃ  Ｙｅｌｌｏｗ  Ｎｏ．６、Ｃｉｔｒｕｓ  Ｒｅｄ  Ｎｏ．２、およびＯｒａｎｇｅ（Ｂ）；（２）認証を免除される食品において許可される着色剤：アナトー抽出物、シータ−アポ−８’−カロテナール、カンタキサンチン、カラメル、シータ−カロテン、ニンジン油、コチニール抽出物（カルミン）、トウモロコシ胚乳油、脱水ビート（ビート粉末）、乾燥藻類ミール、グルコン酸第一鉄、フルーツジュース、ブドウ色抽出物、ブドウ皮抽出物、パプリカ、パプリカ・オレオレジン、リボフラビン、サフラン、合成酸化鉄、マンジュギク・ミールおよび抽出物、二酸化チタン、焼いた部分脱脂調理済み綿実粉、ターメリック、ターメリック・オレオレジン、ウルトラマリン・ブルー、および野菜ジュース。（１）認証の対象である医薬品において許可される着色剤（食品において許可される着色剤を含む）：ＦＤ＆Ｃ  Ｒｅｄ  Ｎｏ．４、Ｄ＆Ｃ  Ｂｌｕｅ  Ｎｏ．４、Ｄ＆Ｃ  Ｂｌｕｅ  Ｎｏ．９、Ｄ＆Ｃ  Ｇｒｅｅｎ  Ｎｏ．５、Ｄ＆Ｃ  Ｇｒｅｅｎ  Ｎｏ．６、Ｄ＆Ｃ  Ｇｒｅｅｎ  Ｎｏ．８、Ｄ＆Ｃ  Ｏｒａｎｇｅ  Ｎｏ．４、Ｄ＆Ｃ  Ｏｒａｎｇｅ  Ｎｏ．５、Ｄ＆Ｃ  Ｏｒａｎｇｅ  Ｎｏ．１０、Ｄ＆Ｃ  Ｏｒａｎｇｅ  Ｎｏ．１１、Ｄ＆Ｃ  Ｒｅｄ  Ｎｏ．６、Ｄ＆Ｃ  Ｒｅｄ  Ｎｏ．７、Ｄ＆Ｃ  Ｒｅｄ  Ｎｏ．１７、Ｄ＆Ｃ  Ｒｅｄ  Ｎｏ．２１、Ｄ＆Ｃ  Ｒｅｄ  Ｎｏ．２２、Ｄ＆Ｃ  Ｒｅｄ  Ｎｏ．２７、Ｄ＆Ｃ  Ｒｅｄ  Ｎｏ．２８、Ｄ＆Ｃ  Ｒｅｄ  Ｎｏ．３０、Ｄ＆Ｃ  Ｒｅｄ  Ｎｏ．３１、Ｄ＆Ｃ  Ｒｅｄ  Ｎｏ．３３、Ｄ＆Ｃ  Ｒｅｄ  Ｎｏ．３４、Ｄ＆Ｃ  Ｒｅｄ  Ｎｏ．３６、Ｄ＆Ｃ  Ｒｅｄ  Ｎｏ．３９、Ｄ＆Ｃ  Ｖｉｏｌｅｔ  Ｎｏ．２、Ｄ＆Ｃ  Ｙｅｌｌｏｗ  Ｎｏ．７、Ｄ＆Ｃ  Ｙｅｌｌｏｗ  Ｎｏ．８、Ｄ＆Ｃ  Ｙｅｌｌｏｗ  Ｎｏ．１０、Ｄ＆Ｃ  Ｙｅｌｌｏｗ  Ｎｏ．１１、およびＥｘｔ．Ｄ＆Ｃ  Ｙｅｌｌｏｗ  Ｎｏ．７。さらに、カンタキサンチン、ベータカロテン、クロロフィリン、およびその他の着色剤も公知である。認可された着色剤に関するより詳細な列挙および／または考察については、Ｄ．Ｍ．Ｍａｒｍｉｏｎ，Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｕ．Ｓ．Ｃｏｌｏｒａｎｔｓ，Ｆｏｏｄｓ，Ｄｒｕｇｓ，Ｃｏｓｍｅｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｄｅｖｉｃｅｓ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ  Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９９１）およびＵ．Ｓ．Ｃｏｄｅ  ｏｆ  Ｆｅｄｅｒａｌ  Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｓ，Ｔｉｔｌｅ  ２１，ｐａｒｔｓ  ７０−８２を参照されたい。
【０１７５】
本発明は、架橋剤を任意選択的に含んでもよい。フィルム形成組成物で架橋剤を使用することの利点としては、粘着性および機械的強度などの、機械的フィルム特性、ならびにコーティングの溶解性に影響を及ぼすことが挙げられる。さらに、架橋は、粘着性を低下させ、汚物および微生物がポリマーフィルムに物理的に付着するのを防ぎ、それは、ある種の用途にとって望ましい可能性がある。架橋度は、特性の望ましい組み合わせを達成するように調整される。
【０１７６】
ポリビニルアルコールおよびそれのコポリマーで使用するために好適な架橋剤としては、アルデヒド（たとえば、ホルムアルデヒド、グリオキサール、グルタルアルデヒド）、ホウ酸、四ホウ酸ナトリウム、金属イオン（たとえば、Ｚｎ、Ｆｅ、Ａｌ、Ｎｉ、Ｖ、Ｃｏ、Ｃｕ、Ｚｒ、Ｔｉ、Ｍｎのイオン）、有機金属化合物（たとえば、ＤｕＰｏｎｔ  Ｔｙｚｏｒ（登録商標）などの有機チタネート、ＤｕＰｏｎｔ  Ｑｕｉｌｏｎ（登録商標）などの有機Ｃｒ（ＩＩＩ）錯体）、シロキサン（たとえば、テトラエトキシシラン、ポリジメチルシロキサン）、イソシアネート（たとえば、ブロックされた、水溶性もしくは分散型の）、エポキシド（たとえば、ジグリシジルエーテル）、ジカルボン酸（たとえば、シュウ酸、マレイン酸、フマル酸、フタル酸）、ウレアベースの架橋剤（たとえば、Ｓｕｎｒｅｚ  ７００）が挙げられるが、それらに限定されない。Ｂｉおよび三価金属カチオン（たとえば、Ｆｅ（ＩＩ）、Ｆｅ（ＩＩＩ）、Ａｌ（ＩＩＩ））は、それらがフィルム乾燥時にＰＶＯＨポリマー鎖との間で配位結合の形成を提供するので好ましい。これは、架橋剤が「ワン−ポット」混合物においてフィルム形成液体に加えられることを可能にする。微粒子レオロジー調整剤などのその他の原料を沈澱させることなくポリマーを効率的に架橋するために、適切な濃度を選択するよう注意しなければならない。
【０１７７】
ほとんどの場合に架橋剤は、標準的な混合技法を用いてその他の原料と混合されるであろう。架橋反応は、当業者によく知られているように、触媒の存在下に任意選択的に実施されてもよい。アルデヒド、イソシアネート、シロキサン、ジグリシジルエーテル、およびジカルボン酸の場合には、熱および酸触媒または金属触媒がさらに使用されてもよい。
【０１７８】
調合物中の架橋剤濃度は、ゼロから、沈澱が起こり始める調合物の安定性限界か、生じたフィルムを効率的に除去することができないかのどちらかによって決定される上限までであってもよい。
【０１７９】
好ましい架橋剤濃度は、使用される架橋剤のタイプに強く依存する可能性があり、典型的にはポリマー含量の２５重量％より下、より好ましくはポリマー含量の１０重量％より下である。
【０１８０】
前述の成分に加えて、本発明の組成物はまた、「性能エンハンサー」としても知られる１つ以上の性能向上添加剤を含んでもよい。これらとしては、材料および地金と接触すると錆が形成するのを防ぐために水性系で使用される多数の有機または無機物質のいずれかを含む、フラッシュ錆防止剤が挙げられる。２つの例は、安息香酸ナトリウムまたはベンゾトリアゾールである。
【０１８１】
別の任意選択の性能向上添加剤としては、塗布中に生成物の望ましくない発泡を防ぐために、水性系のために推奨される数多くの消泡剤の１つ以上が挙げられる。余りにも多くの泡は、生成物の必要とされる連続フィルム形成を妨げ、そして生成物破損をもたらす可能性がある。マスキング組成物の混合および処理を助けるために、Ａｓｈｌａｎｄ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ，Ｉｎｃ．Ｄｒｅｗ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ  Ｄｉｖｉｓｉｏｎ（Ｃｏｖｉｎｇｔｏｎ，ＫＹ，ＵＳＡ）製のＤｒｅｗｐｌｕｓ  Ｌ４７５などの、泡制御製品を添加することもまた有利である可能性がある。追加の任意選択の性能向上添加剤は、コーティング調合物の貯蔵寿命を延ばすための酸化防止剤である。一例はブチル化ヒドロキシトルエンである。さらなる追加の添加剤としては、香料が挙げられる。
【０１８２】
発泡剤が、塗布されたコーティング中に気泡を生み出すためにさらに添加されてもよい。気泡は、塗布を容易にするためのおよび／または、たとえば、傾いた表面からの液だれを防ぐことによって表面とのより長い接触時間を可能にするためのおよび／またはある一定の表面積または容量を処理するために要するコーティング調合物の量を減らすための乳白剤として機能し得る。
【０１８３】
アプリケーションインジケータもまた添加されてもよい。これらの幾つかは上に記載されているが、顔料、染料、蛍光染料、ｐＨ指示薬または塗布中に発生した気泡を含む。
【０１８４】
少量（典型的には１重量パーセント未満）のこれらの追加の材料が、水またはその他の成分の適切な調整で添加されてもよい。前述の任意選択の成分の任意の１つ以上の混合物もまた用いられてもよいことが理解されるべきである。
【０１８５】
繊維状基材からなる場所のためには、任意選択の性能向上原料は、表面効果を提供する試剤である。このような表面効果としては、ノーアイロン、アイロン掛けが容易、収縮制御、しわが寄らない、パーマネントプレス、湿度制御、柔らかさ、強度、スリップ防止、帯電防止、ほつれ防止、抗ピル性、撥染み性、染み放出、撥汚物性、汚物放出、撥水性、撥油性、臭気制御、抗菌性、または日焼け防止が挙げられる。
【０１８６】
フィルムまたはコーティングは、流し込みを含む、あらゆる手段によって標的表面または場所に塗布されてもよい。フィルムまたはコーティングは、連続のおよび／または均一の層を標的表面上に達成するために塗布される。ブラシ、ローラー、ペイントパッド、マット、スポンジ、櫛、手動式ポンプディスペンサー、圧縮空気操作スプレーガン、エアレススプレーガン、電気または静電気噴霧器、バックパックスプレー塗布装置、エアゾールスプレー缶、クロス、紙、羽毛、スタイラス、ナイフ、およびその他の塗布機ツールなどの、しかしそれらに限定されない、ペイントおよびコーティングのために日常的に用いられるコーティングシステムがコーティングのために用いられてもよい。ディッピングがコーティングを塗布するための方法として用いられる場合、特別な装置は全く必要とされない。エアゾールスプレー缶が塗布のために用いられる場合、コーティング組成物は、エアゾール噴射剤（圧縮ガスなどの）と混合してもよく、またはコーティング組成物は、缶内部のポリマーバッグなどの障壁材料によって噴射剤から物理的に分離してもよく；コーティング組成物と噴射剤とが混合される場合、この混合物は１つ以上の液相を構成してもよい。
【０１８７】
織物およびカーペットなどの、繊維状基材のためには、本コーティングは、吸尽、泡、フレックス−ニップ、ニップ、パッド、キス−ロール、ベック、かせ、ウインチ、液体注入、オーバーフロー冠水、ロール、ブラシ、ローラー、スプレー、ディッピング、浸漬などによって塗布されてもよい。本コーティングはまた、従来のベック染色手順、連続染色手順またはスレッド−ライン塗布を用いて塗布されてもよい。
【０１８８】
本開示の一実施形態においては、静電噴霧器を、表面をコートするために用いることができる。静電噴霧器は、高電位によってエネルギーを水性コーティング組成物に与える。このエネルギーは、水性コーティング組成物を霧化し、帯電させる働きをし、細かい帯電した粒子のスプレーを生み出す。静電噴霧器は、Ｔａｅ  Ｉｎ  Ｔｅｃｈ  Ｃｏ．，（Ｓｏｕｔｈ  Ｋｏｒｅａ）およびＳｐｅｃｔｒｕｍ，（Ｈｏｕｓｔｏｎ，ＴＸ，ＵＳＡ）などの供給業者から容易に入手可能である。
【０１８９】
本発明の別の実施形態においては、エアレススプレーガンが、標的表面に塗布するために用いられてもよい。エアレススプレーガンは、圧縮空気よりもむしろ、高い流体圧力および独特のノズルを用いて液体を搬送し、霧化する。液体は、典型的には３．５〜４５ＭＰａの範囲の圧力で流体ポンプによってエアレスガンに供給される。ペイントがこの圧力で流体ノズルを出るとき、それはわずかに膨張し、霧化空気の衝突なしにとても小さい小滴へと霧化される。出ていくペイントの高速は、小滴を標的表面に向かって推進させる。エアレスガンの流体ノズルは、空気霧化ガンの流体ノズルとは大いに異なる。適切なノズルの選択が、どれだけ多くのペイントが送出されるかおよび塗布のファンパターンを決定する。エアレスノズルオリフィスのサイズは、スプレーされるペイントの量を決定する。エアレス流体送出量は高く、７００〜２０００ｍＬ／分の範囲である。推奨されるガン距離は標的から約３０ｃｍであり、ノズルタイプに依存し、１０〜４５ｃｍのファンパターンが可能である。このように、ノズルは、標的表面のサイズおよび形状と塗布されるべきコーティングの厚さとに基づいて各塗布について選択されてもよい。エアレスガンは、食品加工装置、孵化場などに見いだされるであろうなどの、「到達し難いエリア」から液体を排斥し得る乱気流をほとんど生み出さない。この高い流量は、抗菌性コーティングが大きい表面積および多重表面の全域に塗布されるべきである、浄化および消毒状況でエアレスを有利にする。
【０１９０】
塗布され、乾燥されたフィルムの厚さは、様々な因子に依存するであろう。これらの因子としては、フィルム形成剤の濃度、レオロジー調整添加剤および／またはその他の添加剤の濃度、ならびに塗布温度および湿度が挙げられる。フィルム厚さおよびフィルム一様性はまた、流体送出、スプレーオリフィス直径、空気圧またはエアレス塗布の場合にはピストンポンプ圧、およびスプレー塗布機から標的表面までの距離などの、塗布装置のパラメータに、少なくともある程度、依存する。それ故、液体調合物は、所望のフィルム厚さを生成するために調節されてもよい。コーティング液の霧化は、薄膜が標的エリアに均一に塗布されるように選択される。
【０１９１】
標的表面（場所）としては、消毒剤または殺菌剤を（到達し難い表面など）に塗布することが典型的には困難な表面を含む、微生物で潜在的に汚染される可能性があるすべての表面が挙げられる。標的表面の例としては、食品もしくは飲料業界に見いだされる装置表面（タンク、コンベヤ、床、ドレイン、クーラー、フリーザー、冷蔵庫、装置表面、天井、壁、バルブ、ベルト、パイプ、ドレイン、配管、ジョイント、クレバス、それらの組み合わせなど）；建設中の建物、新築住宅建築物を含む、建物表面、および別荘表面（天井、壁、木枠、床、窓、配管などの）のような季節資産中または上の表面、台所（流し、ドレイン、カウンター−トップ、冷蔵庫、まな板）、浴室（シャワー、トイレ、ドレイン、パイプ、配管、バスタブ）、（とりわけカビ除去のための）、テラス、木材、羽目板およびその他の住居外装、アスファルト板ぶき、パティオまたはストーンエリア（とりわけ藻類処理のための）；ボートおよびボート遊び装置表面；生ごみ処理機、ごみ缶および大型ごみ容器またはその他のごみ除去装置および表面；非食品工業関連パイプおよびドレイン；病院にある表面；または外科、外来または獣医科の診療が行われる場所（天井、壁、床、配管、ベッド、装置；手術着、シューズを含む、病院／獣医院またはその他の医療の場で着用された衣類、およびその他の病院または獣医院表面などの）の表面、第一対応者またはその他の緊急医療サービス装置および衣類；材木工場装置、表面および木製品；レストラン表面；スーパーマーケット、食料品店、小売店およびコンビニエンスストア装置および表面；デリ設備および表面ならびに食品調理表面；醸造所および製パン所表面；流し、シャワー、カウンター、およびトイレなどの浴室表面；クロスおよびシューズ；玩具；学校および体育館の設備、天井、壁、床、窓、配管およびその他の表面；流し、カウンター、電化製品などの台所表面；木製テラスまたは複合材テラス、プール、温水浴槽および温泉表面；カーペット；紙；皮革；動物の死骸、毛皮および獣皮；納屋、または、家禽、畜牛、乳牛、山羊、馬および豚などの、家畜用の家畜小屋の表面；ならびに家禽用またはエビ用の孵化場が挙げられる。たとえば檻および畜舎などの、動物が収容される構造物内の表面は、本明細書において記載される抗菌性コーティングを使用してコートすることができる。追加の表面としては、牛肉、鶏肉、豚肉、野菜、果物、シーフード、それらの組み合わせなどの、食品がまた挙げられる。
【０１９２】
本発明において使用するために好適な追加の場所は繊維状表面基材を含み、繊維、糸、布、織物、不織布、カーペット、皮革、または紙を含む。繊維状基材は、羊毛、綿、ジュート、サイザルアサ、海草、紙、コイアおよびセルロース、もしくはそれらの混合物などの天然繊維で製造されるか；またはポリアミド、ポリエステル、ポリオレフィン、ポリアラミド、アクリルおよびそれらのブレンドなどの合成繊維；もしくは少なくとも１つの天然繊維と少なくとも１つの合成繊維とのブレンドで製造される。「布」とは、綿、レーヨン、絹、羊毛、ポリエステル、ポリプロピレン、ポリオレフィン、ナイロン、ならびに「ＮＯＭＥＸ（登録商標）」および「ＫＥＶＬＡＲ（登録商標）」などのアラミドなどの繊維からなる、天然もしくは合成布、またはそれらのブレンドを意味する。「布ブレンド」とは、２つ以上のタイプの繊維でできた布を意味する。典型的にはこれらのブレンドは、少なくとも１つの天然繊維と少なくとも１つの合成繊維との組み合わせであるが、同様に２つ以上の天然繊維のブレンドまたは２つ以上の合成繊維のブレンドであってもよい。不織基材としては、たとえば、Ｅ．Ｉ．ｄｕ  Ｐｏｎｔ  ｄｅ  Ｎｅｍｏｕｒｓ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＤＥ，ＵＳＡ）から入手可能なＳＯＮＴＡＲＡなどの、スパンレース不織布、およびスパンボンド−メルトブローン−スパンボンド不織布などの、積層不織布が挙げられる。
【０１９３】
表面材料の例は、金属（たとえば、スチール、ステンレススチール、クロム、チタン、鉄、銅、真ちゅう、アルミニウム、およびそれらの合金）、鉱物（たとえば、コンクリート）、天然または合成のポリマーおよびプラスチック（たとえば、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリスチレン、ポリ（メタ）アクリレート、ポリアクリロニトリル、ポリブタジエン、ポリ（アクリロニトリル、ブタジエン、スチレン）、ポリ（アクリロニトリル、ブタジエン）、アクリロニトリルブタジエンなどの、ポリオレフィン；ポリエチレンテレフタレートなどのポリエステル；およびナイロンなどのポリアミド）である。追加の表面としては、煉瓦、タイル、セラミック、磁器、ガラス、木材、ビニル、およびリノリウムが挙げられる。
【０１９４】
一時的コーティングで保護される装置または表面は、保護される間、使用中であってもまたは使用中でなくてもよい。標的表面は、疎水性または親水性であってもよい。
【０１９５】
本コーティングシステムはまた１つ以上の成分であってもよいし、触媒を含んでもよい。一般に、本コーティングは、フィルムを形成するために約５分超、固定または乾燥させられる。しかし、本コーティングは、３０秒後などの、より短い時間枠で抗菌的に有効であることができる。本コーティングは、所望の使用に依存してそれが乾燥される前にまたはその後いつでも除去されてもよい。乾燥時間は、湿度および温度などの環境条件を含む、多数の因子に部分的に依存するであろう。乾燥時間はまた、塗布されたコーティングの厚さに依存するであろう。
【０１９６】
標的表面上へ塗布されたフィルムまたはコーティングの厚さは、除去のために要する時間および表面に塗布された単位面積当たりの殺生物剤の量に影響を及ぼす。より厚いフィルムは、フィルムが所望の抗菌特性を維持するために再塗布されなければならないまでの時間間隔を大きくする。より薄いフィルムは、リンスすることによって除去するのがより容易で、より速いであろう。したがって、コーティングの容易な除去および長続きする抗菌特性の両方を可能にするフィルム厚さをもたらすやり方で調合物を塗布することが重要である。上に記載されたように、フィルムまたはコーティングは、約０．３〜約３００マイクロメートルの厚さを有する。より特異的な実施形態においては、フィルムまたはコーティングは、約０．５〜約１００マイクロメートルの厚さを有する。さらにより特異的な実施形態においては、フィルムまたはコーティングは、約１．０〜約３０マイクロメートルの厚さを有する。
【０１９７】
本発明は、ユーザーによって適切であると決定される時間に除去することができるフィルムを指向する。本コーティングは容易に除去され、水性溶媒または溶液で表面をリンスすることによって除去され得る。除去の時は、（ｉ）出発個体群から殺されるまたは不活性化される微生物の量として典型的には表される、所望の抗菌活性を可能にするための所望の最小接触時間か（ｉｉ）その後の操作または処理工程を開始する前にコーティングを表面から取り除く必要性または願望かのどちらかによって決定されてもよい。コーティングは、乾燥後などの、いつでも除去されてもよいが、フィルム厚さ、抗菌剤の濃度、および具体的な用途が除去に適切な時を決定する。たとえばユーザーは、処理された装置をある期間の運転シャットダウン後に平常運転に戻したいと願うかもしれない。たとえば、果実は食べる前に洗浄することを要するであろう。フィルム中の殺生物剤が使い果たされると、フィルムを取り除くことができ、新鮮なコーティング層を塗布することができよう。たとえば、ドレインは、毎日、週１回または隔週になど定期的に処理されてもよい。抗菌活性は、フィルムの塗布後の３０秒、数時間、数日、数週、数ヶ月、さらに数年後ほど早期に測定されてもよい。それ故、コーティングの除去の適時選択は、コーティングが用いられる用途の関数である。
【０１９８】
フィルム除去は、生じたコーティングの溶解または分散によって達成されてもよい。これは、コーティング上への水性溶液の適用によって達成されてもよい。一実施形態においては、この溶液の温度は約１５℃〜約１００℃の範囲にある。別の実施形態においては、この溶液の温度は約３０〜約８０℃である。溶液、または水の適用は、簡単なリンスまたは表面上へのスプレーによって達成されてもよい。コーティング除去はまた、追加の機械力によって除去を容易にする、圧力洗浄機を用いて達成されてもよい。コーティング除去はまた、クロスまたはスポンジと一緒に水で洗浄することによって達成されてもよい。さらに、一般に使用される酸もしくは塩基、キレート剤または洗剤を含む、穏和な添加剤が、フィルム形成剤または水分散性試剤を可溶化するまたは分散させるのを助けるために利用されてもまたは水性溶液と混合されてもよい。あるいは、フィルムは、ドレインにおいてなど、ドレイン下流への水および／またはその他の成分の繰り返し洗浄によって、分解されてもよい。フィルムはまた、それを表面から剥がす、表面からすり減らすもしくはブラシにかけて落とす、または除去のその他の機械的メカニズムによって除去されてもよい。
【０１９９】
オペレータによる意図的な除去に加えて、除去としてはまた、自動またはロボットシステムによる除去と、たとえば、パイプまたはドレインにおいて、時間をかけてコーティングと連続的にもしくは定期的に接触する液体による、または摩耗などの、機械力の連続的なもしくは定期的な印加による非意図的な除去とが挙げられる。
【０２００】
接触時間は、コーティングまたはコーティング組成物が、前記コーティングまたはコーティング組成物と接触するまたはその近くに来る微生物への抗菌特性を提供する時間を意味する。抗菌性調合物の具体的な要件に依存して、接触時間は、消毒剤の殺菌作用および洗剤殺菌作用、公認分析化学者協会の公定法、パラグラフ９６０．０９および適用可能なセクション、第１５版、１９９０年（ＥＰＡガイドライン９１−２）（Ｇｅｒｍｉｃｉｄａｌ  ａｎｄ  Ｄｅｔｅｒｇｅｎｔ  Ｓａｎｉｔｉｚｉｎｇ  Ａｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｄｉｓｉｎｆｅｃｔａｎｔｓ，Ｏｆｆｉｃｉａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｏｆ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｏｆｆｉｃｉａｌ  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｓ，ｐａｒａｇｒａｐｈ  ９６０．０９  ａｎｄ  ａｐｐｌｉｃａｂｌｅ  ｓｅｃｔｉｏｎｓ，１５ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９０（ＥＰＡ  Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ  ９１−２））に示されているように、変わるであろう。たとえば、本開示の意図される用途が食品接触表面のための殺菌剤としての使用である場合、本組成物は、幾つかの試験微生物に対して室温で３０秒以内に９９．９９９％減少（５−ｌｏｇ次数減少）を提供すべきである。意図される用途が非食品接触表面のための殺菌剤としてである場合、本組成物は、幾つかの試験微生物に対して室温で５分以内に９９．９％減少（３−ｌｏｇ次数減少）を提供すべきである。この意図が本開示を消毒剤として使用することである場合、本組成物は１０分以内に９９．９％減少（３−ｌｏｇ次数減少）を提供すべきである。意図される用途が残留抗菌活性を提供することである場合、本方法は、微生物との１０分超の接触時間を有することが許されるであろう。
【０２０１】
本発明のコーティングは、物理的障壁を提供する。本明細書では、物理的障壁は、本フィルム形成組成物から形成されたフィルムと定義される。生じたフィルムは、汚物、脂肪、ダスト、微生物などの、周囲のものによる汚染から処理表面を密封する。これらの汚染はコーティングの表面上にとどまり、コーティングの除去の時に洗い流されるであろう。
【０２０２】
本明細書において開示され、特許請求される方法および組成物のすべては、本開示に照らして過度の実験なしに製造し、実行することができる。本開示の方法および組成物は本発明の様々な態様および好ましい実施形態の観点から記載されてきたが、変形が、本発明の概念、精神、および範囲から逸脱することなく組成物および方法に、および本明細書において記載される方法の工程においてまたは一連の工程において適用されてもよいことは当業者に明らかであろう。より具体的には、化学的に関連する、ある種の試剤が、同じまたは類似の結果が達成されながら本明細書において記載される試剤の代わりに使用されてもよいことは明らかであろう。当業者に明らかなすべてのこのような類似の代用品および修正品は、添付の特許請求の範囲によって定義されるような本発明の精神、範囲、および概念内にあると考えられる。
【０２０３】
（実施例）
本発明は、以下の実施例においてさらに明確にされる。これらの実施例は、本発明のある種の好ましい実施形態を示すが、例示のためだけに示されることが理解されるべきである。上記の考察およびこれらの実施例から、当業者は、本発明の本質的特性を解明することができ、本発明の精神および範囲から逸脱することなく、本発明を様々な用途および条件に適応させるために本発明の様々な変更および修正を行うことができる。
【０２０４】
実施例において使用される省略形
次の省略形が実施例において使用される：「ＡＴＣＣ」はＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎを意味し、「℃」は度摂氏を意味し、「ＣＦＵ」はコロニー形成単位を意味し、「ＦＢＳ」はウシ胎仔血清を意味し、「Ｌ」はリットルを意味し、「ｌｏｇ  ＣＦＵ」はＣＦＵ数の常用対数を意味し、「ｍＬ」はミリリットルを意味し、「ＣＦＵ／ｍＬ」は１ミリリットル当たりのＣＦＵを意味し、「ＮＦＣ」は非食品接触殺菌剤試験を意味し、「Ｐａ*ｓ」はパスカル秒を意味し、「ＰＡＡ」は過酢酸を意味し「ＰＥＧ」はポリエチレングリコールを意味し、「ｐｐｍ」は百万当たりの部を意味し、以下の実施例においてはｍｇ／Ｌ（１リットル当たりのミリグラム）を意味し、「ＲＰＭ」は１分当たりの回転数を意味し、「ＲＳＳ」は残留自己殺菌活性を意味し；「ＳＳ３１６」はステンレススチール、タイプ３１６（ＡＳＴＭ標準）を意味し；「ＴＡＥＤ」はテトラアセチルエチレンジアミンを意味し、「ｗｔ％」は重量パーセントを意味し、「ｍｍ」はミリメートルを意味し、「ｃｍ」はセンチメートルを意味し、「ｇ」はグラムを意味し、「ＤＩ  ｗａｔｅｒ」は脱イオン水を意味し、「ｍｉｎ」は分を意味し、「μＬ」はマイクロリットルを意味し、「％」はパーセントを意味し、「ｓｅｃ」は秒を意味し、「ｍＬ／ｍｉｎ」は１分当たりのミリリットルを意味し、「ＭＰａ」はメガパスカルを意味し、「ｇ／ｍｏｌ」は１モル当たりのグラムを意味し、そして「ｍｏｌ％」はモルパーセントを意味する。
【０２０５】
化学薬品
すべての化学薬品は、特に明記しない限りＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ，ＵＳＡ）から入手した。Ｅｌｖａｎｏｌ（登録商標）５１−０４（部分加水分解グレードポリビニルアルコール、８８％グレード）はＤｕＰｏｎｔ（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＤＥ，ＵＳＡ）製であった。ポリエチレングリコール（ＰＥＧ−３００）はＤｏｗ（Ｍｉｄｌａｎｄ，ＭＩ，ＵＳＡ）製であった。ＢＴＣ（登録商標）８８５、Ｏｎｙｘｉｄｅ（登録商標）３３００およびＢｉｏｓｏｆｔ（登録商標）Ｎ２５−７はＳｔｅｐａｎ（Ｎｏｒｔｈｆｉｅｌｄ，ＩＬ，ＵＳＡ）製であった。Ｒｈｅｏｖｉｓ（登録商標）ＦＲＣはＣｉｂａ（Ｂａｓｅｌ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）から入手し、ＴＡＥＤ  Ｂ６７５はＷａｒｗｉｃｋ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｌｔｄ（Ｆｌｉｎｔｓｈｉｒｅ，Ｕ．Ｋ．）製であり、Ｐｒｏｖｏｘ（登録商標）ＣはＯＣＩ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｒｐ．（Ｄｅｃａｔｕｒ，ＡＬ，ＵＳＡ）製であった。Ｇｌｕｃｏｐｏｎ（登録商標）２１５  ＵＰはＣｏｇｎｉｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｃｉｎｃｉｎｎａｔｉ，ＯＨ）から入手した。ＰＣ  ５４５０  ＮＦはＰｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，ＬＬＣ（Ｃｏｎｃｏｒｄ，ＮＨ）製であった。ＢａｃｔｏTM  Ｄ／Ｅ中和ブロスはＤｉｆｃｏ（Ｃａｔ．Ｎｏ．２８１９１０，ＤｉｆｃｏTM  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｄｅｔｒｏｉｔ，ＭＩ，ＵＳＡ）製であった。
【０２０６】
一般的な方法
微生物の組み換え技術および増殖
本実施例において用いられる標準組み換えＤＮＡおよび分子クローニング技術は、当該技術分野においてよく知られており、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｊ．，Ｆｒｉｔｓｃｈ，Ｅ．Ｆ．ａｎｄ  Ｍａｎｉａｔｉｓ，Ｔ．，分子クローニング：実験室マニュアル（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ），Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８９によって、Ｔ．Ｊ．Ｓｉｌｈａｖｙ，Ｍ．Ｌ．Ｂｅｎｎａｎ，ａｎｄ  Ｌ．Ｗ．Ｅｎｑｕｉｓｔ，遺伝子融合を使った実験（Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  Ｇｅｎｅ  Ｆｕｓｉｏｎｓ），Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８４によって、ａｎｄ  Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｆ．Ｍ．ら，分子生物学における現行プロトコル（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ），Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ａｓｓｏｃ．ａｎｄ  Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎ．Ｙ．，１９８７によって記載されている。
【０２０７】
細菌培養の維持および増殖のために好適な材料および方法はまた、当該技術分野においてよく知られている。以下の実施例において用いるために好適な技術は、一般細菌学のための方法のマニュアル（Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ），Ｐｈｉｌｌｉｐｐ  Ｇｅｒｈａｒｄｔ，Ｒ．Ｇ．Ｅ．Ｍｕｒｒａｙ，Ｒａｌｐｈ  Ｎ．Ｃｏｓｔｉｌｏｗ，Ｅｕｇｅｎｅ  Ｗ．Ｎｅｓｔｅｒ，Ｗｉｌｌｉｓ  Ａ．Ｗｏｏｄ，Ｎｏｅｌ  Ｒ．Ｋｒｉｅｇ  ａｎｄ  Ｇ．Ｂｒｉｇｇｓ  Ｐｈｉｌｌｉｐｓ，ｅｄｓ，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｆｏｒ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，ＤＣ，ＵＳＡ，１９９４において、またはＴｈｏｍａｓ  Ｄ．  Ｂｒｏｃｋによるバイオテクノロジー：工業的微生物学の教科書（Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ａ  Ｔｅｘｔｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ），Ｓｅｃｏｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｓｉｎａｕｅｒ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｓｕｎｄｅｒｌａｎｄ，ＭＡ，ＵＳＡ，１９８９に見いだすことができる。
【０２０８】
細菌細胞の増殖および維持のために使用されるすべての試薬、制限酵素および材料は、特に明記しない限り、Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ（Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ，ＷＩ，ＵＳＡ）、ＢＤ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｓｐａｒｋｓ，ＭＤ，ＵＳＡ）、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ，ＵＳＡ）、またはＳｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ，ＵＳＡ）から入手された。
【０２０９】
ＳＤＳゲル電気泳動
ＳＤＳゲル電気泳動は、当該技術分野においてよく知られる方法を用いて行った。
【０２１０】
硬表面上での抗菌活性についての試験方法
過酸は殺生物活性を有する可能性がある。本発明において使用するために好適である可能性がある、当該技術分野において公知の典型的な代わりの殺生物剤としては、たとえば、塩素、二酸化塩素、クロロイソシアヌレート、次亜塩酸塩、オゾン、アミン、塩素化フェノール類、銅塩、有機硫黄化合物、および第四級アンモニウム塩が挙げられる。コーティング組成物の殺生物効能または抗菌効能は、以下に記載される２つの試験方法を用いて測定した。
【０２１１】
非食品接触殺菌剤試験：微生物汚染が本抗菌性コーティング組成物の塗布時に標的表面上に既に存在する状況についてコーティング組成物の抗菌活性を評価するために、ＡＳＴＭ標準Ｅ１１５３−０３に従った「無生物非食品接触表面に対して推奨される殺菌剤の効能についての標準試験方法（Ｓｔａｎｄａｒｄ  Ｔｅｓｔ  Ｍｅｔｈｏｄ  ｆｏｒ  Ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｏｆ  Ｓａｎｉｔｉｚｅｒｓ  Ｒｅｃｏｍｍｅｎｄｅｄ  ｆｏｒ  Ｉｎａｎｉｍａｔｅ  Ｎｏｎ−Ｆｏｏｄ  Ｃｏｎｔａｃｔ  Ｓｕｒｆａｃｅｓ）」を用いた。この試験方法は、非食品接触殺菌剤試験または「ＮＦＣ試験」と言われる。
【０２１２】
残留自己殺菌試験：微生物汚染が既に乾燥したコーティングと接触している状況についてコーティング組成物の抗菌活性を評価するために、次の残留自己殺菌試験方法を用いた。この試験方法は、残留自己殺菌試験または「ＲＳＳ試験」と言われる。サイズが２５．４×２５．４ｍｍの非多孔性の、前もってきれいにしたステンレススチール（タイプＳＳ３１６）クーポンを試験のために使用した。生物のストックプレート（引き続いて３回移したが、３０以下の移行）から、コロニーを選択し、１０ｍＬのＡＯＡＣ  Ｎｕｔｒｉｅｎｔ  Ｂｒｏｔｈ（ＮａＣｌ  ２．５ｇ；牛肉エキス２．５ｇ；Ａｎａｔｏｎｅ  ５ｇ；脱イオン水５００ｍＬ）中に入れた。接種培養物を静置条件下に３５℃で２４時間培養した。試験接種物の調製において、静置培養物を、Ｖｏｒｔｅｘミキサーを用いて激しくかき混ぜ、１５分間放置し、培養物の上方２／３を滅菌管（約６ｍＬ）に移した。有機汚物負荷のウシ胎児血清（ＦＢＳ）を、５重量％有機汚物負荷の最終濃度に向けてこの試験接種物に加えた。最終試験接種物密度は約１×１０8ＣＦＵ／ｍＬであった。
【０２１３】
試験クーポンを７０重量％エタノール中に一晩入れ、穏和な洗剤に少なくとも３０分間浸漬し、十分に水道水でリンスし、風乾させた。いったんきれいにした、表面のすべての取り扱いは、滅菌鉗子を用いて行った。クーポンを７０重量％エタノールでスプレーし、完全に乾燥させた。試験されるべきコーティング組成物のアリコート（５０μＬ）を各ステンレススチール・クーポンに塗布し、滅菌プラスチック延展機で均一に広げ、滅菌プラスチックペトリ皿に入れ、生物学的安全キャビネット中で一晩風乾させた。周囲空気温度および相対湿度を記録した。コートされていないクーポンを対照表面として使用し、本コーティング組成物で処理されたクーポンと同じ条件下に取り扱った。
【０２１４】
コートされたクーポンの表面の全域に少なくとも３０スポットを使用して０．０１ｍＬの接種物をスポットすることによってクーポンに接種した。１コーティング組成物当たり少なくとも２つの反復試験クーポンを接種した。５分後に、試験クーポンを２０ｍＬのＢａｃｔｏTM  Ｄ／Ｅ中和ブロスに無菌で移した。チューブを手動で激しく振盪し、超音波処理水浴中、最大設定で１０秒間超音波処理し、最後に回転振盪機で２５０ｒｐｍで４分間振盪した。培養物の細胞密度は、Ｂｕｔｔｅｒｆｉｅｌｄ  Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  Ｂｕｆｆｅｒ希釈管およびＴｒｙｐｔｉｃａｓｅTM  Ｓｏｙ  Ａｇａｒ（ＴＳＡ）ペトリ皿を使って連続希釈延展プレート技法を用いて測定した。すべてのサンプルをＤ／Ｅ  Ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇ  Ｂｒｏｔｈへのそれらの移行の約３０分以内に数え上げた。
【０２１５】
処理および未処理クーポンの両方について反復試験測定の平均細胞密度（ＣＦＵ／ｍＬ）を、個々のＣＦＵ測定値の幾何平均として計算した。すべてのｌｏｇ数は自然対数である。
【０２１６】
（実施例）
以下の実施例は、本発明の好ましい態様を実証するために提供される。以下に続く本実施例において開示される技法は本発明の実施においてうまく機能することが本発明者によって発見された技法を表し、したがってその実施のための好ましいモードを構成すると考え得ることは、当業者によって十分理解されるべきである。しかし、当業者は、本開示を踏まえて、多くの変更が本発明の精神および範囲から逸脱することなく、開示される具体的な実施形態において行われ、同様のまたは類似の結果を依然として得ることができることを十分理解するべきである。
【０２１７】
本実施例において使用される省略形
本明細書における以下の省略形は、次の通り測定の単位、技法、特性、または化合物に対応する：「ｓｅｃ」または「ｓ」は秒を意味し、「ｍｉｎ」は分を意味し、「ｈ」または「ｈｒ」は時間を意味し、「ｍｍ」はミリメートルを意味し、「μＬ」はマイクロリットルを意味し、「ｍＬ」はミリリットルを意味し、「Ｌ」はリットルを意味し、「ｍＭ」は１リットル当たりのミルモルを意味し、「Ｍ」は１リットル当たりのモルを意味し、「ｍｍｏｌ」はミリモルを意味し、「℃」は摂氏温度を意味し、「ｐｐｍ」は百万当たりの部を意味し、以下の実施例においてはｍｇ／Ｌ（１リットル当たりのミリグラム）を意味し、「ｗｔ」は重量を意味し、「ｗｔ％」は重量によるパーセントを意味し、「ｇ」はグラムを意味し、「μｇ」はマイクログラムを意味し、「ｇ」は地球重力定数を意味し、「ＨＰＬＣ」は高性能液体クロマトグラフィーを意味し、「ｄｄ  Ｈ2Ｏ」は蒸留および脱イオン水を意味し、「ＤＩ」は脱イオン化を意味し、「ｄｃｗ」は乾燥細胞重量を意味し、「ＡＴＣＣ」または「ＡＴＣＣ（登録商標）」はＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ、ＵＳＡ）を意味し、「Ｕ」はペルヒドロラーゼ活性の単位を意味し、「Ｕ／ｍｇタンパク質」は１ミリグラムタンパク質当たりのペルヒドロラーゼ活性の単位を意味し、「ｒｐｍ」は回転数毎分を意味し、「ＥＤＴＡ」はエチレンジアミン四酢酸を意味し、「ＰＡＡ」は過酢酸を意味し、「ＰＥＧ」はポリエチレングリコールを意味し、「Ｐａ・ｓ」はパスカル秒を意味し、「ＩＰＴＧ」はイソプロピル−ベータ−Ｄ−チオガラクトピラノシドを意味し、「ＭＰａ」はメガパスカルを意味し、「ＮＭＷＣＯ」は名目分子量カットオフ値を意味し、「ＬＢ」はＬｕｒｉａブロス培地を意味し、「ＯＤ」は光学密度を意味し、「ｇ供給／分」はグラム供給毎分を意味し、「ＳＤＳ」はドデシル硫酸ナトリウムを意味し、「ｏ−ＤＡ」はオルト−ジアニジジンを意味し、「ｐＮＰＡ」はパラ−ニトロフェニルアセテートを意味し、「Ｌ・ｃｍ-1・ｍｏｌ-1」は１モル当たり１センチメートル当たりのリットルを意味し、「ｍｇ／ｍＬ」は１ミリリットル当たりのミリグラムを意味し、「ｋｇ」はキログラムを意味し、「Ｕ／ｍｇ」は１ミリグラム当たりの単位を意味し、「ＣＦＵ」はコロニ形成単位を意味し、「ＦＢＳ」はウシ胎児血清を意味し、「ｌｏｇ  ＣＦＵ」はＣＦＵ数の常用対数を意味し、「ＣＦＵ／ｍＬ」は１ミリリットル当たりのＣＦＵを意味し、「ＮＦＣ」は非食品接触殺菌剤試験を意味し、「ＲＳＳ」は残留自己殺菌活性を意味し、「ＳＳ３１６」はステンレススチール、タイプ３１６（ＡＳＴＭ標準）を意味し、「ＴＡＥＤ」はテトラアセチルエチレンジアミンを意味する。
【０２１８】
化学薬品
すべての化学薬品は、特に明記しない限りＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ，ＵＳＡ）から入手した。Ｅｌｖａｎｏｌ（登録商標）５１−０４（部分加水分解グレードポリビニルアルコール、８８％グレード）はＤｕＰｏｎｔ（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＤＥ，ＵＳＡ）製であった。３００ｇ／モルの平均分子量のポリエチレングリコール（Ｃａｒｂｏｗａｘ(商標)  ＰＥＧ−３００）はＤｏｗ（Ｍｉｄｌａｎｄ，ＭＩ，ＵＳＡ）製であった。ＢＴＣ（登録商標）８８５、Ｏｎｙｘｉｄｅ（登録商標）３３００およびＢｉｏｓｏｆｔ（登録商標）Ｎ２５−７はＳｔｅｐａｎ（Ｎｏｒｔｈｆｉｅｌｄ，ＩＬ，ＵＳＡ）製であった。ＢＴＣ（登録商標）８８５は、抗菌剤としての５０重量％第四級アンモニウム化合物と５０重量％不活性材料とを含有する。Ｒｈｅｏｖｉｓ（登録商標）ＦＲＣはＣｉｂａ（Ｂａｓｅｌ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）から入手した。Ｇｌｕｃｏｐｏｎ（登録商標）２１５  ＵＰはＣｏｇｎｉｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｃｉｎｃｉｎｎａｔｉ，ＯＨ）から入手した。ＰＣ  ５４５０  ＮＦはＰｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，ＬＬＣ（Ｃｏｎｃｏｒｄ，ＮＨ）製であった。テトラアセチルエチレンジアミン（ＴＡＥＤ  Ｂ６７５）はＷａｒｗｉｃｋ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｌｔｄ．（Ｆｌｉｎｔｓｈｉｒｅ，ＵＫ）製であった。過炭酸ナトリウム（Ｐｒｏｖｏｘ（登録商標）Ｃ）はＯＣＩ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｒｐ．（Ｄｅｃａｔｕｒ，ＡＬ，ＵＳＡ）製であった。Ｔｕｒｐｉｎａｌ（登録商標）ＳＬはＴｈｅｒｍｐｈｏｓ（Ｖｌｉｓｓｉｎｇｅｎ，ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）から入手した。Ｓｉｌｗｅｔ（登録商標）Ｌ−７７はＳｅｔｒｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ（Ｍｅｍｐｈｉｓ，ＴＮ，ＵＳＡ）から入手した。微生物増殖培地は、ＤＩＦＣＯ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｄｅｔｒｏｉｔ，ＭＩ，ＵＳＡ）、ＧＩＢＣＯ／ＢＲＬ（Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ，ＵＳＡ）、ＴＣＩ  Ａｍｅｒｉｃａ（Ｐｏｒｔｌａｎｄ，ＯＲ，ＵＳＡ）、Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ，ＵＳＡ）またはＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ（Ｓｔ．  Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ，ＵＳＡ）から入手した。ＢａｃｔｏTM  Ｄ／Ｅ中和ブロスはＤｉｆｃｏ（Ｃａｔ．Ｎｏ．２８１９１０，ＤｉｆｃｏTM  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｄｅｔｒｏｉｔ，ＭＩ，ＵＳＡ）製であった。
【０２１９】
ｐＮＰＡマイクロプレート・アッセイ
９６ウェル・マイクロプレートの４ウェルのそれぞれへ、１７０μＬのリン酸カリウム緩衝液（５０ｍＭ、ｐＨ７．２）および１０μＬの０．１ｍｇ全タンパク質／１ｍＬの細胞溶解物か１０μＬの０．０２ｍｇ全タンパク質／１ｍＬの噴霧乾燥酵素溶液かのどちらかを加えた。プレートをカバーし、マイクロプレート読取り機（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  ＳＰＥＣＴＲＡｍａｘ（登録商標）３８４  Ｐｌｕｓ）に入れ、次に数秒間混合し、３０℃で１０分間平衡させた。プレートの各ウェルに次に、０．６ｍＬのアセトニトリル中１００ｍＭのｐＮＰＡと１．４ｍＬの５０ｍＭのリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．２）とを（使用の直前に）混合することによって調製した２０μＬの３０ｍＭのｐＮＰＡ溶液を同時に加えた。４００ｎｍでの吸光度の変化を、１分の反応時間にわたって測定した。ｐＮＰＡ加水分解のバックグランド速度（酵素の存在下に測定された加水分解の速度から差し引かれる）を、細胞溶解物または酵素含有溶液の代わりに１０μＬ／ウェルのリン酸カリウム緩衝液（５０ｍＭ、ｐＨ７．２）を使用することによって４ウェルにおいて別々に測定した。１ｃｍ路長セルにおいてｐＨ７．２で測定された、パラ−ニトロフェノールについての吸光係数は１０，９０９Ｌ・ｃｍ-1・モル-1であった。酵素活性の１ｐＮＰＡ単位は、１分に１マイクロモルのｐＮＰＡの加水分解を触媒するタンパク質の量に等しい。
【０２２０】
レオロジー特性の測定
液体抗菌性調合物のレオロジー特性は、ＲＶ  Ｓｅｒｉｅｓスピンドル＃６付きのＢｒｏｏｋｆｉｅｌｄ  Ｄｉｇｉｔａｌ  Ｖｉｓｃｏｍｅｔｅｒ  Ｍｏｄｅｌ  ＤＶ−ＩＩ（Ｂｒｏｏｋｆｉｅｌｄ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｍｉｄｄｌｅｂｏｒｏ，ＭＡ，ＵＳＡ）および丈が高いガラスビーカーを用いて評価した。サンプルをガラスビーカーに注ぎ込むことによって装填した。粘度測定値を異なるｒｐｍで採取した。
【０２２１】
高性能クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）
反応混合物中のＰＡＡの濃度は、ＨＰＬＣを用いて測定した。プレカラムＳｕｐｅｌｃｏ  Ｓｕｐｅｒｇｕａｒｄ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｃ８付きのＳｕｐｅｌｃｏ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｃ８カラム（１５ｃｍ×４．０ｍｍ、５μｍ）を使用した。注入容量は１０μＬであった。１．０ｍＬ／分および周囲温度でアセトニトリルおよび脱イオン水でのグラジエント法を下表に示す。
【０２２２】
【表１】
2013500346.tif 000002
【０２２３】
このＨＰＬＣ法を用いる、対象となる化合物の保持時間は、ＭＴＳＯ（メチルｐ−トリルスルホキシド）＝２．３４分；ＤＥＥＴ（Ｎ，Ｎ−ジエチル−ｍ−トルアミド）＝４．４０分；ＴＰＰＯ（トリフェニルホスフィンオキシド）＝５．０２分；ＭＴＳ（メチルｐ−トリルスルフィド）＝５．９９分およびＴＰＰ（トリフェニルホスフィン）＝６．４８分であった。
【０２２４】
実施例１
サーモトガ・ネアポリタナ（Ｔｈｅｒｍｏｔｏｇａ  ｎｅａｐｏｌｉｔａｎａ）からのアセチルキシランエステレラーゼのクローニングおよび発現
サーモトガ・ネアポリタナ（Ｔｈｅｒｍｏｔｏｇａ  ｎｅａｐｏｌｉｔａｎａ）（ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）登録番号ＡＡＢ７０８６９、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７）からのアセチルキシランエステラーゼをエンコードするコード領域を、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）（ＤＮＡ  ２．０，Ｍｅｎｌｏ  Ｐａｒｋ，ＣＡ，ＵＳＡ）での発現のために最適化されたコドンを使用して合成した。このコーティング領域をその後、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９として同定されるプライマーを使用してＰＣＲ（９４℃で０．５分、５５℃で０．５分、７０℃で１分、３０サイクル）によって増幅した。生じた核酸生成物（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０）を、ｐＳＷ１９６として同定されるプラスミドを発生させるためにｐＴｒｃＨｉｓ２−ＴＯＰＯ（登録商標）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ，ＵＳＡ）へサブクローン化した。プラスミドｐＳＷ１９６を使用して大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＫＬＰ１８を形質転換してＫＬＰ１８／ｐＳＷ１９６として同定される菌株を発生させた（全体を参照により本明細書に援用される米国特許出願公開第２００８／０１７６２９９号明細書を参照されたい）。ＫＬＰ１８／ｐＳＷ１９６を０．４〜０．５のＯＤ600nmまで振盪しながら３７℃でＬＢ培地において増殖させ、その時点でイソプロピル−ベータ−Ｄ−チオガラクトピラノシド（ＩＰＴＧ）を１ｍＭの最終濃度まで加え、培養を２〜３時間続行した。細胞を遠心分離によって収穫し、−８０℃で２０重量％グリセロール中に貯蔵し；全可溶性タンパク質の２０〜４０％でのペルヒドロラーゼの発現を、ＳＤＳ−ＰＡＧＥを用いて測定した。
【０２２５】
実施例２
Ｔ．ネアポリタナ（Ｔ．ｎｅａｐｏｌｉｔａｎａ）ペルヒドロラーゼを発現する大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＫＬＰ１８／ＰＳＷ１９６の発酵
発酵を３段階：フラスコにおけるプレ種調製、１４Ｌ発酵槽における種調製、および２００Ｌ発酵槽におけるスケールアップで行った。種培養物を、酵母抽出液（Ｄｉｆｃｏ、１．０ｇ／Ｌ）、Ｋ2ＨＰＯ4（１０．０ｇ／Ｌ）、ＫＨ2ＰＯ4（７．０ｇ／Ｌ）、クエン酸ナトリウム二水和物（１．０ｇ／Ｌ）、（ＮＨ4）2ＳＯ4（４．０ｇ／Ｌ）、ＭｇＳＯ4七水和物（１．０ｇ／Ｌ）およびクエン酸第二鉄アンモニウム（０．１０ｇ／Ｌ）を含有する０．５Ｌ種培地を２Ｌ振盪フラスコに装入することによって調製した。培地のｐＨを６．８に調整し、培地をフラスコにおいて滅菌した。ポスト滅菌添加物は、グルコース（５０重量％、１０．０ｍＬ）および１ｍＬアンピシリン（２５ｍＬ／ｍＬ）原液を含んだ。種培地を、２０％グリセロール中の大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＫＬＰ１８／ｐＳＷ１９６の１ｍＬの培養物で植菌し、３５℃および３００ｒｐｍで培養した。
【０２２６】
種培養物を、ＫＨ2ＰＯ4（５．０ｇ／Ｌ）、ＦｅＳＯ4七水和物（０．０５ｇ／Ｌ）、ＭｇＳＯ4七水和物（１．０ｇ／Ｌ）、クエン酸ナトリウム二水和物（１．９０ｇ／Ｌ）、Ｂｉｏｓｐｕｍｅｘ１５３Ｋ消泡剤（０．５ｍＬ／Ｌ、Ｃｏｇｎｉｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、ＮａＣｌ（１．０ｇ／Ｌ）、ＣａＣｌ2二水和物（０．１ｇ／Ｌ）と、クエン酸一水和物（１０ｇ／Ｌ）、ＭｎＳＯ4水和物（２ｇ／Ｌ）、ＮａＣｌ（２ｇ／Ｌ）、ＦｅＳＯ4七水和物（０．５ｇ／Ｌ）、ＺｎＳＯ4七水和物（０．２ｇ／Ｌ）、ＣｕＳＯ4五水和物（０．０２ｇ／Ｌ）およびＮａＭｏＯ4二水和物（０．０２ｇ／Ｌ）を含有する微量要素溶液（１０ｍＬ／Ｌ）とを含有する８Ｌの培地とともに約１〜２の５５０ｎｍでの光学密度で１４Ｌ種発酵槽（Ｂｒａｕｎ，Ｂ．Ｂｒａｕｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  Ｉｎｃ．，（Ａｌｌｅｎｔｏｗｎ，ＰＡ，ＵＳＡ））に移した。ポスト滅菌添加物は、グルコース溶液（５０重量％、８０．０ｇ）、アンピシリン（２５ｍｇ／ｍＬ）原液（１６．００ｍＬ）およびチアミン（３．３ｇ／Ｌ）原液（６．００ｍＬ）を含んだ。溶存酸素（ＤＯ）濃度を２５％の空気飽和で制御した。ＤＯは、先ず羽根車かき混ぜ速度（４００〜１４００ｒｐｍ）によって、その後曝気速度（標準状態で２〜１０Ｌ／分）によって制御した。温度を３５℃で制御した。ｐＨを６．８に調整した。ＮＨ4ＯＨ（２９重量％）およびＨ2ＳＯ4（２００ｇ／Ｌ）をｐＨ調整のために使用した。オーバーヘッド圧力を０．５０バールに維持した。培養密度が５超のＯＤ550ｎｍに達したときまたはブロス中のグルコース濃度が１ｇ／Ｌ未満に低下したとき、８Ｌ培養物を２００ＬのＳａｒｔｏｒｉｕｓ  Ｂｉｏｓｔｅｔ−ＤＣＵ−Ｄ生産発酵槽に移した。
【０２２７】
２００ＬのＳａｒｔｏｒｉｕｓ  Ｂｉｏｓｔｅｔ−ＤＣＵ−Ｄ生産発酵槽（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ  Ｓｔｅｄｉｕｍ  Ｎｏｒｔｈ  Ａｍｅｒｉｃａ  Ｉｎｃ．，（Ｂｏｈｅｍｉａ，ＮＹ，ＵＳＡ））に装入された培地の初期容量は１５０Ｌであり、ここで、この培地は、１４Ｌ種発酵槽におけるものと同じ原料および濃度を使用して調製した。ポスト滅菌添加物は、グルコース−ＭｇＳＯ4溶液（グルコース５０重量％およびＭｇＳＯ4七水和物１重量％；１６００ｇ）、アンピシリン（２５ｇ／Ｌ）原液（３２００ｍＬ）およびチアミン（３．３ｇ／Ｌ）原液（１２０ｍＬ）を含んだ。溶存酸素（ＤＯ）濃度を２５％の空気飽和で制御した。ＤＯは、先ず羽根車かき混ぜ速度（２００〜４５０ｒｐｍ）によって、その後曝気速度（標準状態で３５〜８０Ｌ／分）によって制御した。温度を３５℃で制御した。ｐＨを６．８に調整した。ＮＨ4ＯＨ（２９重量％）およびＨ2ＳＯ4（２００ｇ／Ｌ）をｐＨ調整のために使用した。オーバーヘッド圧力を０．５０バールに維持した。グルコース−ＭｇＳＯ4溶液（グルコース（５０重量％）およびＭｇＳＯ4七水和物（１重量％））を流加増殖のために使用した。グルコース供給は、グルコース濃度が０．５ｇ／Ｌに低下したときに開始し、６．３０ｇ供給／分の速度でスタートし、それぞれ、７．３０、８．５０、９．８、１１．４０、１３．３０、１５．４０、１７．２ｇ／分に漸次毎時増やし；速度はその後一定のままであった。培地中のグルコース濃度を監視し、その濃度が０．１ｇ／Ｌを超えた場合、供給速度を下げるかまたは一時的に停止した。誘導は、１８０ｍＬのＩＰＴＧ（０．５Ｍ）の添加で７６のＯＤ550nmで（２６．７時間で）開始した。細胞をＩＰＴＧ添加１６時間後に遠心分離によって収穫した。発酵を４２．７時間で終了させ、１ｍｇの細胞乾燥重量当たり３．４ｐＮＰＡ  Ｕのペルヒドロラーゼ比活性を有する約２１ｋｇの湿潤細胞ペースト収穫した。
【０２２８】
実施例３
Ｔ．ネアポリタナ（Ｔ．ｎｅａｐｏｌｉｔａｎａ）ペルヒドロラーゼの調製
細胞ペースト（１３ｋｇ；実施例２において記載されたように調製された、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＫＬＰ１８／ｐＳＷ１９６）をｐＨ７．４で４０Ｌの５０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液中に懸濁させ、細胞懸濁液を、８３ＭＰａおよび室温で運転するＡＰＶ  １６．５６ホモジナイザー（ＡＰＶ  Ｆｌｕｉｄ  Ｈａｎｄｌｉｎｇ  ａｎｄ  Ｈｏｍｏｇｅｎｉｚｅｒｓ，（Ｄｅｌａｖａｎ，ＷＩ，ＵＳＡ））を用いて均質化し、生じたホモジネートを６５℃に加熱し、室温に冷却する前にこの温度で３０分間保持した。０．１マイクロメートル中空繊維膜カートリッジ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，（Ｌｉｔｔｌｅ  Ｃｈａｌｆｏｎｔ，Ｕｎｉｔｅｄ  Ｋｉｎｇｄｏｍ））を用いて固形分をタンパク質溶液から分離した。浄化したタンパク質溶液を次に、３０，０００  ＮＭＷＣＯ中空繊維膜カートリッジ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いて濃縮して１４．７Ｌの最終コンセントレートを得、それを−８０℃で凍結させた。この材料をその後解凍し、さらに濃縮して（３０，０００  ＮＭＷＣＯ）約２５６グラムのタンパク質（３４．１５ｇタンパク質／Ｌ；Ｍｉｃｒｏ−ＢＣＡタンパク質アッセイ（Ｓｉｇｍａ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｏｒｐ．，（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ，ＵＳＡ））を用いて測定される）を含有する７．５リットルの溶液を得た。この溶液に、５００ｇのＭａｌｔｒｉｎ  Ｍ１００マルトデキストリン、１１０ｇのＭａｌｔｒｉｎ  Ｍ２５０コーンシロップ固形分、および１１０ｇのＭａｌｔｒｉｎ  Ｍ０４０マルトデキストリン（すべてがＧｒａｉｎ  Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（ＧＰＣ），（Ｍｕｓｃａｔｉｎｅ，ＩＡ，ＵＳＡ）製）を加えた。
【０２２９】
生じた混合物（約７．９ｋｇ）を噴霧乾燥して（入口温度＝２２５℃、出口温度＝７６℃、供給速度＝６０ｇ／分）合計７８６グラムの固形分（６８％収率）の酵素粉末：９３．２％乾燥重量、２０．３重量％タンパク質、３４．５ｐＮＰＡ  Ｕ／ｍｇタンパク質を生成した。
【０２３０】
実施例４
ペルヒドロラーゼ活性を有する酵素とともにポリビニルアルコールの存在下での過酢酸のその場発生
本実施例は、ポリビニルアルコールの存在下にペルヒドロラーゼ活性を有する酵素での過酢酸のその場発生を例示する。反応は、Ｔ．ネアポリタナ（Ｔ．ｎｅａｐｏｌｉｔａｎａ）から単離したペルヒドロラーゼ酵素を使用して行った。磁気撹拌棒を備えた７５ｍＬガラス瓶に、１２．３ｍＬの０．２Ｍ重炭酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．２；４４ｍＭ）、３６．２ｍＬのＤＩ水、４１．７ｍｇのＴｕｒｐｉｎａｌ（登録商標）ＳＬ（Ｔｈｅｒｍｐｈｏｓ，（Ｖｌｉｓｓｉｎｇｅｎ，ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）），０．９５ｍＬのトリアセチン（９０ｍＭ）および６．０ｇのＥｌｖａｎｏｌ（登録商標）５１−０４（２０％水性溶液，ＤｕＰｏｎｔ，（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＤＥ，ＵＳＡ））を入れ、サンプルが均一になるまで室温で撹拌した。この時点で、０．５１ｍＬの３０重量％過酸化水素（８９ｍＭ）、引き続き直ちに５０ｍＭ重炭酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．２）中の２０ｍｇ／ｍＬのＴ．ネアポリタナ（Ｔ．ｎｅａｐｏｌｉｔａｎａ）ペルヒドロラーゼ酵素の１２５μＬを加えた。過酸化水素および過酢酸濃度を、硫酸セリウム／チオ硫酸ナトリウム滴定分析（Ｇｒｅｅｎｓｐａｎ，Ｆ．Ｐ．；ＭａｃＫｅｌｌｅｒ，Ｄ．Ｇ．Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．，２０：１０６１−１０６３，１９４８）を用いて経時監視した。対照反応を、（１２．３ｍＬの０．２Ｍ重炭酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ７．２、５０ｍＭ；０．５１ｍＬの３０％過酸化水素、１００ｍＭ；３６．２ｍＬのＤＩ水；４１．７ｍｇのＴｕｒｐｉｎａｌ（登録商標）ＳＬ；０．９５ｍＬのトリアセチン、０．１Ｍ；５０ｍＭ重炭酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ７．２中の２０ｍｇ／ｍＬのＴ．ネアポリタナ（Ｔ．ｎｅａｐｏｌｉｔａｎａ）ペルヒドロラーゼ酵素（酵素粉末中の重量％タンパク質を基準として）の１２５μＬ）で、および添加酵素なし（酵素なしの上の対照条件と同一）で行った。３０分間にわたって、添加酵素全くなしのトリアセチンおよび過酸化水素で行った対照反応は、トリアセチンと過酸化水素との化学反応から１１４ｐｐｍ過酢酸を生成した。添加酵素ありのトリアセチンおよび過酸化水素で行った対照反応は、１分以内に３８０ｐｐｍ過酢酸を生成し、３０分にわたって２２８０ｐｐｍに増加した。ポリビニルアルコールの存在下でのＰＡＡのその場酵素的生成は、１分以内に４５６ｐｐｍを生成し、３０分にわたって１９７６ｐｐｍに増加した。表１は、フィルム形成剤の存在下でのＰＡＡのその場酵素的生成から生成したＰＡＡ濃度を示す。
【０２３１】
【表２】
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【０２３２】
実施例５
ペルヒドロラーゼ活性を有する酵素ありのフィルム形成組成物における過酢酸のその場発生
本実施例は、追加の性能向上添加剤とともにフィルム形成組成物の存在下にペルヒドロラーゼ活性を有する酵素での過酢酸のその場発生を例示する。反応は、Ｔ．ネアポリタナ（Ｔ．ｎｅａｐｏｌｉｔａｎａ）からのペルヒドロラーゼ酵素を使用して行った。磁気撹拌棒を備えた７５ｍＬガラス瓶に、１２．３ｍＬの０．２Ｍ重炭酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．２；４４ｍＭ）、３６．２ｍＬのＤＩ水、４１．７ｍｇのＴｕｒｐｉｎａｌ（登録商標）ＳＬ（Ｔｈｅｒｍｐｈｏｓ，（Ｖｌｉｓｓｉｎｇｅｎ，ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）），０．９５ｍＬのトリアセチン（８９ｍＭ）、６．０ｇのＥｌｖａｎｏｌ（登録商標）５１−０４（２０％水性溶液，ＤｕＰｏｎｔ，（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＤＥ，ＵＳＡ））、０．５ｇのＰＥＧ−３００（Ｄｏｗ，（Ｍｉｄｌａｎｄ，ＭＩ，ＵＳＡ））および０．２５ｇのＳｉｌｗｅｔ（登録商標）Ｌ−７７（Ｓｅｔｒｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ，（Ｍｅｍｐｈｉｓ，ＴＮ，ＵＳＡ））を入れ、サンプルが均一になるまで室温で撹拌した。この時点で、０．５１ｍＬの３０％過酸化水素（８８ｍＭ）、引き続き直ちに５０ｍＭ重炭酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．２）中の２０ｍｇ／ｍＬのＴ．ネアポリタナ（Ｔ．ｎｅａｐｏｌｉｔａｎａ）ペルヒドロラーゼ酵素（酵素粉末中の重量％タンパク質を基準として）の１２５μＬを加えた。過酸化水素および過酢酸濃度を、硫酸セリウム／チオ硫酸ナトリウム滴定試験（Ｇｒｅｅｎｓｐａｎ，Ｆ．Ｐ．；ＭａｃＫｅｌｌｅｒ，Ｄ．Ｇ．Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．，２０：１０６１−１０６３，１９４８）を用いて経時監視した。対照反応を、（１２．３ｍＬの０．２Ｍ重炭酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ７．２、５０ｍＭ；０．５１ｍＬの３０％過酸化水素、１００ｍＭ；３６．２ｍＬのＤＩ水（脱イオン水）；４１．７ｍｇのＴｕｒｐｉｎａｌ（登録商標）ＳＬ；０．９５ｍＬのトリアセチン、０．１Ｍ；５０ｍＭ重炭酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ７．２中の２０ｍｇ／ｍＬのＴ．ネアポリタナ（Ｔ．ｎｅａｐｏｌｉｔａｎａ）ペルヒドロラーゼ酵素（酵素粉末中の重量％タンパク質を基準として）の１２５μＬ）で、および添加酵素なし（酵素なしの上の対照条件と同一）で行った。３０分間にわたって、添加酵素全くなしのトリアセチンおよび過酸化水素で行った対照反応は、トリアセチンと過酸化水素との化学反応から１１４ｐｐｍ過酢酸を生成した。添加酵素ありのトリアセチンおよび過酸化水素で行った対照反応は、１分以内に３８０ｐｐｍ過酢酸を生成し、３０分にわたって２２８０ｐｐｍに増加した。フィルム形成組成物におけるＰＡＡのその場酵素的生成は、１分以内に３４２ｐｐｍを生成し、３０分にわたって１９００ｐｐｍに増加した。表２は、追加の性能向上添加剤とともにフィルム形成組成物の存在下でのＰＡＡのその場酵素的生成から生成したＰＡＡの濃度を示す。
【０２３３】
【表３】
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【０２３４】
実施例６
第２殺生物剤およびレオロジー調整剤を含有するフィルム形成組成物における過酢酸のその場酵素的発生
本実施例は、レオロジー調整剤および第２殺生物剤を含有するフィルム形成組成物の存在下にペルヒドロラーゼ活性を有する酵素での過酢酸のその場発生を例示する。撹拌棒を備えた１００ｍＬガラス瓶に、Ｅｌｖａｎｏｌ（登録商標）５１−０４の２０重量％水性溶液の２５ｇ、１４ｇの脱イオン水、０．８ｇのＲｈｅｏｖｉｓ（登録商標）ＦＲＣ、０．５ｇのＰＥＧ  ３００および０．１５ｇのＢＴＣ（登録商標）８８５を入れ、サンプルが均一になるまで室温で撹拌した。この時点で、１．０９ｇのトリアセチン（１００ｍＭ）および０．６７ｇの３０重量％過酸化水素（１００ｍＭ）を加え、撹拌して混合した。ｐＨを、８ｇの０．２Ｍ重炭酸ナトリウム緩衝液（３２ｍＭ）の添加で７．０より上に調整した。ｐＨ調整の後に、１２５μＬのＴ．ネアポリタナ（Ｔ．ｎｅａｐｏｌｉｔａｎａ）ペルヒドロラーゼ酵素（５０ｍＭ重炭酸ナトリウム緩衝液中の２０ｍｇ／ｍＬ溶液（酵素粉末中の重量％タンパク質を基準として））を加え、タイマーをスタートさせた。対照反応は、酵素なしを除いて、上の条件と同一で行った。過酢酸濃度を、硫酸セリウム／チオ硫酸ナトリウム滴定試験を用いて５分、３０分および１時間、経時監視した。１時間にわたって、添加酵素なしの対照反応は、トリアセチンと過酸化水素との化学反応からの４８７ｐｐｍ過酢酸を生成した。フィルム形成組成物におけるＰＡＡのその場酵素的生成は、５分以内に２１１２ｐｐｍを生成し、１時間にわたって２５９３ｐｐｍに増加した。表３は、フィルム形成組成物における酵素的に発生したＰＡＡの濃度を示す。
【０２３５】
【表４】
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【０２３６】
実施例７
除去可能な抗菌性コーティング組成物の剪断薄化指数
「擬塑性指数」または「剪断薄化指数」（ＳＴＩ）は、垂れ下がりおよび液だれにに対する組成物の抵抗に関する指標を提供する。一般的な測定は、２つの異なる剪断速度で粘度を測定する。より低い剪断速度で記録された値をより高い剪断速度での値で割ってＳＴＩを得る。一般に、ＳＴＩが高ければ高いほど、コーティング材料の垂れ下がりおよび液だれに対する抵抗はより高いであろう。ＳＴＩ値は、本明細書において使用される場合、酵素の添加３０分後に粘度を測定することによって測定した。粘度は、ＲＶ  Ｓｅｒｉｅｓスピンドル＃６付きのＢｒｏｏｋｆｉｅｌｄ  Ｄｉｇｉｔａｌ  Ｖｉｓｃｏｍｅｔｅｒ  Ｍｏｄｅｌ  ＤＶ−ＩＩ（Ｂｒｏｏｋｆｉｅｌｄ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，（Ｍｉｄｄｌｅｂｏｒｏ，ＭＡ，ＵＳＡ））を用いて室温で測定した。剪断薄化指数（ＳＴＩ）は、１ｒｐｍで測定された粘度を１０ｒｐｍで測定された粘度で割ることによって計算した。本発明のコーティング組成物Ａ（組成については表４を参照されたい）についてのＳＴＩを表５に示す。１ｒｐｍでフィルム形成組成物Ａの粘度は１２．８Ｐａ・ｓであり、１０ｒｐｍで４．８６Ｐａ・ｓに低下した。このコーティング組成物についての剪断薄化指数は２．７４である。
【０２３７】
【表５】
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【０２３８】
【表６】
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【０２３９】
実施例８
サーモトガ・マリタナ（Ｔｈｅｒｍｏｔｏｇａ  ｍａｒｉｔｉｍａ）からのアセチルキシランエステレラーゼのクローニングおよび発現
ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）（登録番号ＮＰ＿２２７８９３．１，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８）に報告されているようなＴ．マリタナ（Ｔ．ｍａｒｉｔｉｍａ）ＭＳＢ８からのアセチルキシランエステラーゼをエンコードする遺伝子を合成した（ＤＮＡ  ２．０，（Ｍｅｎｌｏ  Ｐａｒｋ，ＣＡ，ＵＳＡ））。この遺伝子をその後、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３として同定されるプライマーを使用してＰＣＲ（９４℃で０．５分、５５℃で０．５分、７０℃で１分、３０サイクル）によって増幅した。生じた核酸生成物（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４）を制限酵素ＰｓｔＩおよびＸｂａＩでカットし、ｐＳＷ２０７として同定されるプラスミドを発生させるためにｐＵＣ１９中のＰｓｔＩおよびＸｂａＩサイトの間でサブクローン化した。大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）における発現のためのＴ．マリチマ（Ｔ．ｍａｒｉｔｉｍａ）ＭＳＢ８アセチルキシランエステラーゼのコドン最適化バージョンを合成し、その後、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５および２６として同定されるプライマーを使用してＰＣＲ（９４℃で０．５分、５５℃で０．５分、７０℃で１分、３０サイクル）によって増幅した。生じた核酸生成物（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７）を制限酵素ＥｃｏＲＩおよびＰｓｔＩでカットし、ｐＳＷ２２８として同定されるプラスミドを発生させるためにｐＴｒｃ９９Ａ（ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）登録番号Ｍ２２７４４）中のＰｓｔＩおよびＸｂａＩサイトの間でサブクローン化した。プラスミドｐＳＷ２０７およびｐＳＷ２２８を使用して大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＫＬＰ１８を形質転換して（参照により本明細書に援用される米国特許出願公開第２００８／０１７６２９９号明細書）、それぞれ、ＫＬＰ１８／ｐＳＷ２０７およびＫＬＰ１８／ｐＳＷ２２８として同定される菌株を発生させた。ＫＬＰ１８／ｐＳＷ２０７およびＫＬＰ１８／ｐＳＷ２２８をＯＤ600nm  ０．４〜０．５まで振盪しながら３７℃でＬＢ培地において増殖させ、その時点でＩＰＴＧを１ｍＭの最終濃度まで加え、培養を２〜３時間続行した。細胞を遠心分離によって収穫し、ＳＤＳ−ＰＡＧＥを、全可溶性タンパク質の２０〜４０％でのペルヒドロラーゼの発現を確認するために行った。
【０２４０】
実施例９
残基Ｃ２７７でのサーモトガ・マリチマ（Ｔｈｅｒｍｏｔｏｇａ  ｍａｒｉｔｉｍａ）アセチルキシランエステラーゼ突然変異の構成
Ｔ．マリチマ（Ｔ．ｍａｒｉｔｉｍａ）アセチルキシランエステラーゼのＣ２７７（Ｃｙｓ２７７）位を、プラスミドｐＳＷ２２８におけるＴ．マリチマ（Ｔ．ｍａｒｉｔｉｍａ）アセチルキシランエステラーゼのコドン最適化配列（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０）をベースとして設計されたオリゴヌクレオチドプライマー対（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８および２９）を使用してＳｅｒに変更した。突然変異は、製造業者の指示書に従ってＱｕｉｋｃｈａｎｇｅ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ，（Ｃｅｄａｒ  Ｃｒｅｅｋ，ＴＸ，ＵＳＡ））を使用して行った。増幅されたプラスミドを３７℃で１時間１ＵのＤｐｎＩで処理した。処理されたプラスミドを使用して化学的に有能な大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＸＬ１−Ｂｌｕｅ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）を形質転換した。形質転換体を、０．１ｍｇアンピシリン／ｍＬで補足されたＬＢ寒天プレート上に筋状にし、３７℃で一晩増殖させた。５つ以下の個々のコロニーを選別し、予期される突然変異を確認するためにプラスミドＤＮＡの配列を決定した。
【０２４１】
実施例１０
大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＫＬＰ１８におけるサーモトガ・マリチマ（Ｔｈｅｒｍｏｔｏｇａ  ｍａｒｉｔｉｍａ）アセチルキシランエステラーゼＣ２７７Ｓ突然変異体の発現
確認されたアセチルキシランエステラーゼＣ２７７Ｓ突然変異のプラスミドを使用して大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＫＬＰ１８を形質転換して（実施例１）ＫＬＰ１８／ｐＳＷ２２８／Ｃ２７７Ｓとして同定される菌株を発生させた。形質転換体を、ＯＤ600nm  ０．４〜０．５まで振盪しながら３７℃でＬＢ培地において増殖させ、その時点でＩＰＴＧを１ｍＭの最終濃度まで加え、培養を２〜３時間続行した。細胞を遠心分離によって収穫し、ＳＤＳ−ＰＡＧＥを、全可溶性タンパク質の２０〜４０％でのアセチルキシランエステラーゼＣ２７７Ｓ突然変異体の発現を確認するために行った。
【０２４２】
実施例１１
噴霧乾燥Ｔ・マリチマ（Ｔ．ｍａｒｉｔｉｍａ）アセチルキシランエステラーゼ野生型およびその突然変異体Ｃ２７７Ｓの調製
（Ｔ．マリチマ（Ｔ．ｍａｒｉｔｉｍａ）アセチルキシランエステラーゼを生成するために）大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＫＬＰ１８／ｐＳＷ２２８または（Ｔ．マリチマ（Ｔ．ｍａｒｉｔｉｍａ）アセチルキシランエステラーゼＣ２７７Ｓ突然変異体を生成するために）大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＫＬＰ１８／ｐＳＷ２２８／Ｃ２７７Ｓを増殖させるために用いられる発酵プロトコルは、それが１０Ｌ規模で行われたことを除いて、実施例２に記載されたものと似ていた。細胞ペーストを、５，０００×ｇで１５分間の遠心分離によって収穫し、後の使用のために−８０℃で凍結貯蔵した。
【０２４３】
細胞ペーストのサンプルを、１．０ｍＭジチオスレイトール（Ｄｉｔｈｉｏｔｈｒｅｉｔｏｌ）（ＤＤＴ）で補足された５０ｍＭリン酸塩緩衝液ｐＨ７．０中に再懸濁させた（２００ｇ／Ｌ）。再懸濁細胞を、＞９５％細胞溶解を確実にするために２回Ｆｒｅｎｃｈ  Ｐｒｅｓｓｕｒｅ  Ｃｅｌｌを通過させた。溶解細胞を、１２，０００×ｇで３０分間遠心分離し、上澄み液を７５℃で２０分間加熱し、引き続き氷浴中で２分間急冷した。沈澱したタンパク質を、１１．０００×ｇで１０分間の遠心分離によって除去した。ＳＤＳ−ＰＡＧＥは、ＣＥ−７酵素がこの調製における全タンパク質の約８５〜９０％を占めることを示した。
【０２４４】
実施例３において記載されたものと類似の手順を、上に記載されたように調製されたどちらかの細胞ペーストを使用して繰り返した。生じたＴ．マリチマ（Ｔ．ｍａｒｉｔｉｍａ）ペルヒドロラーゼ噴霧乾燥酵素粉末は、９５．５乾燥重量％、２７．８重量％タンパク質、８６．１ｐＮＰＡ  Ｕ／ｍｇタンパク質であった。生じたＴ．マリチマ（Ｔ．ｍａｒｉｔｉｍａ）Ｃ２７７Ｓペルヒドロラーゼ噴霧乾燥酵素粉末は、９５．５乾燥重量％、２５．５重量％タンパク質、１２９．５ｐＮＰＡ  Ｕ／ｍｇタンパク質であった。
【０２４５】
実施例１２
マルチプルペルヒドロラーゼを使用するフィルム形成組成物における過酢酸のその場酵素的発生
本実施例においては、ＰＡＡを発生させるための異なる好適なペルヒドロラーゼを使用するフィルム形成組成物におけるＰＡＡのその場酵素的発生ならびに調合物において第２殺生物剤およびレオロジー調整剤を使用する能力が実証された。
【０２４６】
実施例６において記載されたものと類似のコーティング組成物を、上記と同じ方法を用いて、しかし表６に示されるような原料および重量％単位の組成を用いて製造した。コーティング組成物Ｂは、酵素なしでＴＡＥＤおよび過炭酸ナトリウムを使用してフィルム形成組成物においてＰＡＡを発生させ、比較のためのみに使用される。コーティング組成物Ｃは酵素を欠き、酵素含有組成物Ｄ、ＥおよびＦの対照として役立つ。各酵素反応混合物の初期ｐＨは約７．０であった。ＴＡＥＤ反応混合物の初期ｐＨは約８．０であった。
【０２４７】
反応混合物中のＰＡＡの濃度の測定は、Ｋａｒｓｔらによって記載された方法（Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．，６９：３６２３−３６２７，１９９７）に従って行った。所望の時点（１分、５分など）で、反応混合物のアリコートを取り出し（約２５〜５０ｍｇ）、反応を停止させるために５ｍＭリン酸で重量により希釈した。典型的な希釈は、２０００ｐｐｍ超のＰＡＡ濃度のサンプルについては１：３５、約１０００ｐｐｍのＰＡＡ濃度のサンプルについては１：２５、２００ｐｐｍ未満のＰＡＡ濃度のサンプルについては１：１０であった。約２００μＬ（またはフィルターカップを完全に満たすためにそれ以上）の希釈アリコートを、非滅菌の１０，０００ＮＭＷＬ（名目分子量限界）フィルター・ユニット（Ｎａｎｏｓｅｐ  １０Ｋ  Ｏｍｅｇａ，ＰＡＬＬ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，（Ｅａｓｔ  Ｈｉｌｌｓ，ＮＹ，ＵＳＡ））に移し、１２，０００ｒｐｍで７分間の遠心分離によって濾過した。生じた濾液のアリコート（１００μＬ）を、３００μＬの脱イオン水を含有する１．８ｍＬスクリューキャップＨＰＬＣバイアル（１．８ｍＬのＲＯＢＯ  Ａｕｔｏｓａｍｐｌｅｒ  Ｖｉａｌ，ＶＷＲ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，（Ｗｅｓｔ  Ｃｈｅｓｔｅｒ，ＰＡ，ＵＳＡ））に移し、次にアセトニトリル中の２０ｍＭのＭＴＳ（メチル−ｐ−トリル−スルフィド）の１００μＬを加え、バイアルに蓋をし、内容物を、光の不存在下に約２５℃での１０分培養の前に短く混合した。各バイアルに次に４００μＬのアセトニトリルおよび１００μＬのアセトニトリル中のトリフェニルホスフェンの溶液（１２０ｍＭ）を加え、バイアルに再び蓋をし、生じた溶液を混合し、光の不存在下に約２５℃で３０分間培養した。各バイアルに次に１００μＬの２．５ｍＭのＮ，Ｎ−ジエチル−ｍ−トルアミド（ＤＥＥＴ；ＨＰＬＣ外部標準）を加え、生じた溶液を上記のようにＨＰＬＣによって分析した。
【０２４８】
経時ＰＡＡ濃度を表７に示す。すべての酵素含有ならびにＴＡＥＤ含有組成物についてＰＡＡの最高観察濃度は、それぞれの化学反応を開始した後０．５〜２時間の間に観察された。最高濃度に達した後、濃度は、式ｃ（ｔ）＝ｋ・ｅｘｐ［−ｔ／（ｌｎ（２）・τ）］（ここで、ｃ（ｔ）は、反応時間ｔの関数としてのＰＡＡの濃度を表す）の指数関数的減衰関数によって数学的に近似することができる時間プロフィールで低下する。パラメーターｋおよびτは、τがおおよその半減期、すなわち、ＰＡＡ濃度がその最高値の半分に低下してしまう時間を示して、各組成物について異なってもよい定数である。おおよその半減期は、最小二乗法を用いて上の指数関数的減衰関数に経時ＰＡＡ濃度データを２〜１２０時間の時間についてフィットさせることによって計算した。半減期τをまた表７に示す。理解できるように、酵素的に発生したＰＡＡについての半減期は似ており、約２７〜２９時間である。対照的に、コーティング組成物Ｂの非酵素的に発生したＰＡＡについての半減期は７時間超より短い。それ故に、酵素的に発生した組成物は、液体コーティング組成物においてＰＡＡ濃度のより遅い経時低下を提供する。これは、具体的な最小ＰＡＡ濃度がより長い期間にわたって存在することが望ましい状況において有益であり得る。
【０２４９】
【表７】
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【０２５０】
【表８】
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【０２５１】
実施例１３
黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）へのフィルム形成抗菌性組成物Ｇの効能
フィルム形成組成物Ｇ（表８）の抗菌特性を、ＮＦＣ試験法および黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）（ＡＴＣＣ  ６５３８）を試験微生物として使用して試験した。重量％単位でのＧの組成を表８に示す。混合後の組み合わせた試薬は１００重量％であった。１クーポン当たり０．０５ｍＬの容量のコーティング組成物を均一に塗布した。５分暴露で、少なくとも９９．９９９％だけのＣＦＵ数の減少に等しい、コロニー形成単位（ＣＦＵ）の５．６  ｌｏｇ減少またはそれ以上が観察された。
【０２５２】
【表９】
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【０２５３】
実施例１４
黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）へのフィルム形成抗菌性組成物Ｈの効能
フィルム形成組成物Ｈ（表９）の抗菌特性を、ＲＳＳ試験法および黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）（ＡＴＣＣ  ６５３８）を試験微生物として使用して試験した。重量％単位でのＨの組成を表９に示す。全組み合わせた試薬は１００重量％に等しかった。１クーポン当たり０．０５ｍＬの容量のコーティング組成物を均一に塗布した。表９に示されるように、少なくとも９９．９％だけのＣＦＵ数の減少に等しい、ＣＦＵの３．１  ｌｏｇ減少が組成物Ｈについて達成された。
【０２５４】
【表１０】
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【０２５５】
実施例１５
商業的に入手可能なＰＡＡ溶液とフィルムにおけるその場発生ＰＡＡとの比較
本実施例は、フィルム形成組成物パックＡ中へドープされた商業的に入手可能な平衡ＰＡＡ溶液とフィルム形成組成物におけるその場発生ＰＡＡとの間でフィルムにおけるＰＡＡ濃度を経時的に比較する。
【０２５６】
重量％単位でのＨおよび＃１４１Ｂのフィルム形成組成物を表１０に示す。すべての成分を混合すると、１００重量％の抗菌性コーティング組成物をもたらす。組成物＃１４１Ｂについては、商業的に入手可能なＰＡＡ（９０μＬの３２重量％溶液）を、その場発生の代わりにパックＡに加えた。
【０２５７】
【表１１】
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【０２５８】
組成物のすべての成分を一緒に混合した後、フィルムを、８パス湿潤フィルム塗布機（５ミルフィルム深さ、モデルＮｏ．１５，Ｐａｕｌ  Ｎ．Ｇａｒｄｎｅｒ  Ｃｏ．Ｉｎｃ．，（Ｐｏｍｐａｎｏ  Ｂｅａｃｈ，ＦＬ，ＵＳＡ））を用いてプラスチックパネルに塗布した。フィルムにおけるＰＡＡ濃度を、フィルムが乾燥されるときに一定間隔で監視した。典型的な実験においては、フィルムは、３０分以内では接触に対して粘着性であり、１時間までに完全に乾燥した。反応混合物中のＰＡＡの濃度の測定は、Ｋａｒｓｔらによって記載された方法（Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．，６９：３６２３−３６２７，１９９７）に従って行った。実施例１２における詳細を参照されたい。
【０２５９】
コーティング組成物ＨにおけるＰＡＡ濃度は、１時間で７３２ｐｐｍのＰＡＡに低下するまで、１分で１９２５ｐｐｍのＰＡＡから１０分で最高の２５９９ｐｐｍのＰＡＡまで増加することが観察されたが、組成物＃１４１ＢにおけるＰＡＡ濃度は、１分で最高の２８４９ｐｐｍのＰＡＡから１時間で２２ｐｐｍのＰＡＡまで１時間にわたって着実に低下した。本実施例は、ＰＡＡが前もって調製されるよりむしろその場発生する本発明のフィルム形成組成物の利益を強調する。
【０２６０】
【表１２】
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【０２６１】
実施例１６
コーティング組成物Ｈの塗布および除去
コーティング組成物Ｈ（表９）を、８パス湿潤フィルム塗布機（５ミルフィルム深さ、モデルＮｏ．１５，Ｐａｕｌ  Ｎ．Ｇａｒｄｎｅｒ  Ｃｏ．Ｉｎｃ．，（Ｐｏｍｐａｎｏ  Ｂｅａｃｈ，ＦＬ，ＵＳＡ））を用いてアルミニウムパネルに塗布した。乾燥後に生じたコーティングは、垂れ下がり、泡もしくは気泡、クレーターまたはカバーされていないエリアなどのコーティング欠陥の不存在で特徴づけられる優れた外観を有した。乾燥フィルムは、パネルを３０〜３２℃の水道水でリンスすることによって容易に除去された。アルミニウムパネル上に後に残された目に見える残渣は全くなく、このフィルムの良好な除去特性を実証した。
【配列表】
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【国際調査報告】
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