(57)【要約】  ＬＩＭキナーゼ２の阻害剤が、これらを含む医薬組成物及びその使用方法とともに開示される。特定の化合物は、式（Ｉ）の化合物である。    【化１】2013518048.tif 000030【選択図】なし
2013518048.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
眼投与に適した製剤であって、液体媒体と、式：
【化１】
2013518048.tif 000022
（式中、
Ｒ１がＨ、Ｃ（Ｏ）ＲＡ、Ｓ（Ｏ）ｎＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＮＲＡＲＢ、Ｓ（Ｏ）ｎＮＲＡＲＢ、Ｓ（Ｏ）ｎＯＲＡ、Ｃ（ＮＨ）ＮＲＡＲＢ、Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ、Ｃ（Ｓ）ＮＲＡＲＢ、Ｃ（ＳＲＢ）ＮＲＡ、Ｐ（Ｏ）（ＯＲＡ）２、又は必要に応じて置換された（例えば必要に応じてハロ、アルキル、アルコキシル、アリール、ヘテロアリール、ヒドロキシル、シアノ、ＮＲＡＲＢ、ＳＲＡ、Ｐ（Ｏ）（ＯＲＡ）２、ＣＯ２ＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＮＲＡＲＢ、Ｓ（Ｏ）ｎＲＡ、Ｓ（Ｏ）ＮＲＡＲＢ、又はハロゲン化（例えばフッ素化）アルキル、アリール若しくはヘテロアリールで置換された）アルキル、アリール若しくは複素環であり、
Ｒ２がＨ、Ｃ（Ｏ）ＲＡ、Ｓ（Ｏ）ｎＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＮＲＡＲＢ、Ｓ（Ｏ）ｎＮＲＡＲＢ、Ｓ（Ｏ）ｎＯＲＡ、又は必要に応じて置換された（例えば必要に応じてハロ、アルキル、アルコキシル、アリール、ヘテロアリール、ヒドロキシル、シアノ、ＮＲＡＲＢ、ＳＲＡ、Ｐ（Ｏ）（ＯＲＡ）２、ＣＯ２ＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＮＲＡＲＢ、Ｓ（Ｏ）ｎＲＡ、Ｓ（Ｏ）ＮＲＡＲＢ、又はハロゲン化（例えばフッ素化）アルキル、アリール若しくはヘテロアリールで置換された）アルキル、アリール若しくは複素環であり、
Ｒ３がＨ、ハロゲン、ＯＲ、ＮＲＡＲＢ、必要に応じて置換された（例えば必要に応じてハロ、アルキル、アルコキシル、ヒドロキシル、シアノ、ＮＲＡＲＢ、ＳＲＡ、ＣＯ２ＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＮＲＡＲＢで置換された）アルキルであり、
各ＲＡが独立して、Ｈ、若しくは必要に応じて置換された（例えば必要に応じてハロ、アルキル、アルコキシル、アリール、ヘテロアリール、ヒドロキシル、シアノ、ＮＲＡＲＢ、ＳＲＡ、Ｐ（Ｏ）（ＯＲＡ）２、ＣＯ２ＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＮＲＡＲＢ、Ｓ（Ｏ）ｎＲＡ、Ｓ（Ｏ）ＮＲＡＲＢ、又はハロゲン化（例えばフッ素化）アルキル、アリール若しくはヘテロアリールで置換された）アルキル、アリール、アルキルアリール若しくはアルキル−複素環であり、
各ＲＢが、必要に応じて置換された（例えば必要に応じてハロ、アルキル、アルコキシル、アリール、ヘテロアリール、ヒドロキシル、シアノ、ＮＲＡＲＢ、ＳＲＡ、Ｐ（Ｏ）（ＯＲＡ）２、ＣＯ２ＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＮＲＡＲＢ、Ｓ（Ｏ）ｎＲＡ、Ｓ（Ｏ）ＮＲＡＲＢ、又はハロゲン化（例えばフッ素化）アルキル、アリール若しくはヘテロアリールで置換された）アルキル若しくはアリールであり、又は
ＲＡ及びＲＢが同じ窒素原子と結合する場合、ＲＡ及びＲＢは該窒素原子とともに、必要に応じて置換された複素環（例えば必要に応じてハロ、アルキル、アルコキシル、アリール、ヘテロアリール、ヒドロキシル、シアノ、ＮＲＡＲＢ、ＳＲＡ、Ｐ（Ｏ）（ＯＲＡ）２、ＣＯ２ＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＮＲＡＲＢ、Ｓ（Ｏ）ｎＲＡ、Ｓ（Ｏ）ＮＲＡＲＢ、又はハロゲン化（例えばフッ素化）アルキル、アリール若しくはヘテロアリールで置換されたピペリジニル、モルホリノ、チオモルホリノ、ピペラジニル、ピロリジノ及びアゼチジノ）を形成することができ、
ｎが０〜２である）の化合物又はその薬学的に許容される塩とを含む、眼投与に適した製剤。
【請求項２】
前記化合物が、
Ｒ１がＣ（Ｏ）ＲＡであり、Ｒ２がＣＨＦ２であり、Ｒ３が２，６−ジクロロフェニルである場合、ＲＡはエトキシ、シクロプロピル若しくはイソプロピルではなく、
Ｒ１がＣ（Ｏ）ＲＡであり、Ｒ２がＨ若しくはＣＨＦ２であり、Ｒ３が３，５−ジメチルフェニルである場合、ＲＡはメトキシではなく、又は
Ｒ１がＣ（Ｏ）ＮＲＡＲＢであり、Ｒ２がピラジルであり、Ｒ３が２，６−ジメチル−４−メトキシフェニルであり、ＲＡがＨである場合、ＲＢはエチルではない
ようなものである、請求項１に記載の製剤。
【請求項３】
前記化合物が、
Ｒ１がＨであり、Ｒ２がメチルである場合、Ｒ３はクロロではないようなものである、請求項１に記載の製剤。
【請求項４】
前記化合物が、式：
【化２】
2013518048.tif 000023
（式中、各Ｒ２Ａは独立して、シアノ、ハロ、ヒドロキシル、ＮＲＡＲＢ、ＳＲＡ、Ｐ（Ｏ）（ＯＲＡ）２、ＣＯ２ＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＮＲＡＲＢ、Ｓ（Ｏ）ｎＲＡ、Ｓ（Ｏ）ＮＲＡＲＢ、又は必要に応じて置換された（例えば必要に応じてフッ素化された）アルキル、アルコキシル若しくはアリールであり、ｍは０〜５である）の化合物である、請求項２に記載の製剤。
【請求項５】
前記化合物が、式：
【化３】
2013518048.tif 000024
の化合物である、請求項４に記載の製剤。
【請求項６】
ＲＡが、必要に応じてハロ、ヒドロキシル、アミノ、アルキルアミノ又はジアルキルアミノのうちの１つ又は複数で置換されたアルキルである、請求項５に記載の製剤。
【請求項７】
ＲＡがイソプロピルである、請求項６に記載の製剤。
【請求項８】
ＲＡがアミノで置換されたアルキルである、請求項６に記載の製剤。
【請求項９】
少なくとも１つのＲ２Ａがクロロである、請求項６に記載の製剤。
【請求項１０】
前記化合物が、式：
【化４】
2013518048.tif 000025
の化合物である、請求項９に記載の製剤。
【請求項１１】
Ｒ２Ａがブロモである、請求項１０に記載の製剤。
【請求項１２】
ｍが２又は３である、請求項６に記載の製剤。
【請求項１３】
Ｒ３がＨ又は必要に応じて置換された低級アルキルである、請求項６に記載の製剤。
【請求項１４】
Ｒ３がジフルオロメチルである、請求項１３に記載の製剤。
【請求項１５】
式：
【化５】
2013518048.tif 000026
（式中、
Ｒ１がＨ、Ｃ（Ｏ）ＲＡ、Ｓ（Ｏ）ｎＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＮＲＡＲＢ、Ｓ（Ｏ）ｎＮＲＡＲＢ、Ｓ（Ｏ）ｎＯＲＡ、Ｃ（ＮＨ）ＮＲＡＲＢ、Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ、Ｃ（Ｓ）ＮＲＡＲＢ、Ｃ（ＳＲＢ）ＮＲＡ、Ｐ（Ｏ）（ＯＲＡ）２、又は必要に応じて置換された（例えば必要に応じてハロ、アルキル、アルコキシル、アリール、ヘテロアリール、ヒドロキシル、シアノ、ＮＲＡＲＢ、ＳＲＡ、Ｐ（Ｏ）（ＯＲＡ）２、ＣＯ２ＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＮＲＡＲＢ、Ｓ（Ｏ）ｎＲＡ、Ｓ（Ｏ）ＮＲＡＲＢ、又はハロゲン化（例えばフッ素化）アルキル、アリール若しくはヘテロアリールで置換された）アルキル、アリール若しくは複素環であり、
Ｒ２がＨ、Ｃ（Ｏ）ＲＡ、Ｓ（Ｏ）ｎＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＮＲＡＲＢ、Ｓ（Ｏ）ｎＮＲＡＲＢ、Ｓ（Ｏ）ｎＯＲＡ、又は必要に応じて置換された（例えば必要に応じてハロ、アルキル、アルコキシル、アリール、ヘテロアリール、ヒドロキシル、シアノ、ＮＲＡＲＢ、ＳＲＡ、Ｐ（Ｏ）（ＯＲＡ）２、ＣＯ２ＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＮＲＡＲＢ、Ｓ（Ｏ）ｎＲＡ、Ｓ（Ｏ）ＮＲＡＲＢ、又はハロゲン化（例えばフッ素化）アルキル、アリール若しくはヘテロアリールで置換された）アルキル、アリール若しくは複素環であり、
Ｒ３がＨ、ハロゲン、ＯＲ、ＮＲＡＲＢ、必要に応じて置換された（例えば必要に応じてハロ、アルキル、アルコキシル、ヒドロキシル、シアノ、ＮＲＡＲＢ、ＳＲＡ、ＣＯ２ＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＮＲＡＲＢで置換された）アルキルであり、
各ＲＡが独立して、Ｈ、若しくは必要に応じて置換された（例えば必要に応じてハロ、アルキル、アルコキシル、アリール、ヘテロアリール、ヒドロキシル、シアノ、ＮＲＡＲＢ、ＳＲＡ、Ｐ（Ｏ）（ＯＲＡ）２、ＣＯ２ＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＮＲＡＲＢ、Ｓ（Ｏ）ｎＲＡ、Ｓ（Ｏ）ＮＲＡＲＢ、又はハロゲン化（例えばフッ素化）アルキル、アリール若しくはヘテロアリールで置換された）アルキル、アリール、アルキルアリール若しくはアルキル−複素環であり、
各ＲＢが、必要に応じて置換された（例えば必要に応じてハロ、アルキル、アルコキシル、アリール、ヘテロアリール、ヒドロキシル、シアノ、ＮＲＡＲＢ、ＳＲＡ、Ｐ（Ｏ）（ＯＲＡ）２、ＣＯ２ＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＮＲＡＲＢ、Ｓ（Ｏ）ｎＲＡ、Ｓ（Ｏ）ＮＲＡＲＢ、又はハロゲン化（例えばフッ素化）アルキル、アリール若しくはヘテロアリールで置換された）アルキル若しくはアリールであり、又は
ＲＡ及びＲＢが同じ窒素原子と結合する場合、ＲＡ及びＲＢは該窒素原子とともに、必要に応じて置換された複素環（例えば必要に応じてハロ、アルキル、アルコキシル、アリール、ヘテロアリール、ヒドロキシル、シアノ、ＮＲＡＲＢ、ＳＲＡ、Ｐ（Ｏ）（ＯＲＡ）２、ＣＯ２ＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＮＲＡＲＢ、Ｓ（Ｏ）ｎＲＡ、Ｓ（Ｏ）ＮＲＡＲＢ、又はハロゲン化（例えばフッ素化）アルキル、アリール若しくはヘテロアリールで置換されたピペリジニル、モルホリノ、チオモルホリノ、ピペラジニル、ピロリジノ及びアゼチジノ）を形成することができ、
ｎが０〜２であるが、但し
Ｒ１がＣ（Ｏ）ＲＡであり、Ｒ２がＣＨＦ２であり、Ｒ３が２，６−ジクロロフェニルである場合、ＲＡはエトキシ、シクロプロピル若しくはイソプロピルではなく、
Ｒ１がＣ（Ｏ）ＲＡであり、Ｒ２がＨ若しくはＣＨＦ２であり、Ｒ３が３，５−ジメチルフェニルである場合、ＲＡはメトキシではなく、
Ｒ１がＣ（Ｏ）ＮＲＡＲＢであり、Ｒ２がピラジルであり、Ｒ３が２，６−ジメチル−４−メトキシフェニルであり、ＲＡがＨである場合、ＲＢはエチルではなく、
Ｒ１がＨであり、Ｒ２がメチルである場合、Ｒ３はクロロではない）の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項１６】
式：
【化６】
2013518048.tif 000027
（式中、各Ｒ２Ａは独立して、シアノ、ハロ、ヒドロキシル、ＮＲＡＲＢ、ＳＲＡ、Ｐ（Ｏ）（ＯＲＡ）２、ＣＯ２ＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＮＲＡＲＢ、Ｓ（Ｏ）ｎＲＡ、Ｓ（Ｏ）ＮＲＡＲＢ、又は必要に応じて置換された（例えば必要に応じてフッ素化された）アルキル、アルコキシル若しくはアリールであり、ｍは０〜５である）の化合物である、請求項１５に記載の化合物。
【請求項１７】
式：
【化７】
2013518048.tif 000028
の化合物である、請求項１６に記載の化合物。
【請求項１８】
式：
【化８】
2013518048.tif 000029
の化合物である、請求項１７に記載の化合物。
【請求項１９】
患者の眼内圧を低下させる方法であって、それを必要とする患者に、治療的に又は予防的に有効な量の請求項１又は１５に記載の化合物を投与することを含む、患者の眼内圧を低下させる方法。
【請求項２０】
患者において視力に影響を及ぼす疾患又は障害を治療、管理又は予防する方法であって、それを必要とする患者に、治療的に又は予防的に有効な量の請求項１又は１５に記載の化合物を投与することを含む、患者において視力に影響を及ぼす疾患又は障害を治療、管理又は予防する方法。
【請求項２１】
前記視力に影響を及ぼす疾患又は障害が緑内障、神経変性又は感染症である、請求項２０に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
１．  発明の分野
本発明は、キナーゼ阻害剤、それらを含む組成物、並びに様々な疾患及び障害を治療するためのそれらの使用の方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
２．  背景
タンパク質キナーゼは、ＡＴＰから受容タンパク質へのγ−リン酸基の移動を触媒する酵素群である。ヒトゲノムは、５００種類を超える様々なタンパク質キナーゼをコードすると推測されており、それらのキナーゼのうち多くががん及び炎症を含む広範な疾患及び障害に関与している。
【０００３】
ＬＩＭキナーゼ（ＬＩＭＫ）は、ｐ５３経路と結び付いている。例えば、特許文献１を参照されたい。ＬＩＭＫは、２つのＮ末端ＬＩＭモチーフと１つのＣ末端タンパク質キナーゼドメインとの特有の組合せを有する小さなサブファミリーのキナーゼに属する。これらのＬＩＭモチーフ及びキナーゼドメインは、幾つかの推定カゼインキナーゼ認識部位及びｍａｐキナーゼ認識部位を含有する高プロリン領域及び高セリン領域により連結されている。ＬＩＭキナーゼ及びそれらの経路タンパク質は、アクチン細胞骨格のＲｈｏ誘導性の再組織化に寄与すると考えられている（同上）。ＬＩＭキナーゼファミリー成員には、ＬＩＭキナーゼ１（ＬＩＭＫ１）及びＬＩＭキナーゼ２（ＬＩＭＫ２）が含まれる。その両方がコフィリンをリン酸化し、Ｒｈｏファミリー依存性のアクチン細胞骨格の再構成（rearrangement）を調節する（同上）。
【０００４】
ＬＩＭキナーゼ阻害剤ががんの治療に提唱されている（同上、特許文献２、非特許文献１、非特許文献２）。ＬＩＭＫ阻害剤が、柱細胞（trabecular cells）におけるアクチン脱重合を促進すること及び眼圧を低下させることによって、緑内障を治療するのに有用であり得ることも示唆されている。特許文献３を参照されたい。特許文献４及び特許文献５も参照されたい。現在の緑内障療法は、様々なメカニズムにより効果を発揮する。プロスタグランジンＦ２ａ類似体（例えば、ラタノプロスト）は、眼からの流体流出の眼内圧（ＩＯＰ）非依存性の増大をもたらす。炭酸脱水酵素（Carbonic anhydrous）阻害剤（例えば、アセタゾールアミド）、β−ブロッカー（例えば、チモロール）、交感神経模倣薬（例えば、ピロカルピン）、及びαアドレナリン受容体アゴニスト（例えば、ブリモニジン）は、房水産生を減少させる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】国際公開第０２／０９９０４８号
【特許文献２】国際公開第２００３００３０１６号
【特許文献３】国際公開第０４／０４７８６８号
【特許文献４】米国特許出願公開第２００９−００４２８９３号
【特許文献５】米国特許出願公開第２００９−０２６４４５０号
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Stanyon, Clement A. and Bernard, Ora., Int. J. Biochem. & Cell Biol. 31(3/4): 389-394 (1999)
【非特許文献２】Yoshioka, Kiyoko et al., Proc. National Acad. Sci. USA 100(12): 7247-7252 (2003)
【発明の概要】
【０００７】
３．  発明の概要
本発明は一部には、式：
【０００８】
【化１】
2013518048.tif 000003
【０００９】
の化合物、及びそれらの薬学的に許容される塩に関し、その置換基が本明細書で規定される。特定の化合物は、ＬＩＭＫ２の強力な阻害剤である。
【００１０】
本発明の一つの実施の形態は、本明細書で開示の化合物を含む医薬製剤（formulations）を包含する。
【００１１】
別の実施の形態は、緑内障、神経変性及び感染症等の視力に影響を及ぼす様々な疾患及び障害（例えば、眼の疾患及び障害）の治療、管理及び予防のために本明細書に開示の化合物を使用する方法を包含する。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
４．  図面の簡単な説明
【図１】以下の実施例に記載の眼圧亢進アッセイにおける本発明の化合物（Ｓ）−Ｎ−（５−（１−（２，６−ジクロロフェニル）−３−（ジフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）チアゾール−２−イル）−２−（ピロリジン−２−イル）アセトアミドの用量応答を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
５．  詳細な説明
５．１．  定義
特に明示のない限り、「アルケニル」という用語は、２〜２０（例えば、２〜１０又は２〜６）個の炭素原子を有し、少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を含む直鎖、分岐鎖及び／又は環式の炭化水素を意味する。代表的なアルケニル部分としては、ビニル、アリル、１−ブテニル、２−ブテニル、イソブチレニル、１−ペンテニル、２−ペンテニル、３−メチル−１−ブテニル、２−メチル−２−ブテニル、２，３−ジメチル−２−ブテニル、１−ヘキセニル、２−ヘキセニル、３−ヘキセニル、１−ヘプテニル、２−ヘプテニル、３−ヘプテニル、１−オクテニル、２−オクテニル、３−オクテニル、１−ノネニル、２−ノネニル、３−ノネニル、１−デセニル、２−デセニル及び３−デセニルが挙げられる。
【００１４】
特に明示のない限り、「アルコキシ」という用語は、−Ｏ−アルキル基を意味する。アルコキシ基の例としては、−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）２ＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）３ＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）４ＣＨ３及び−Ｏ（ＣＨ２）５ＣＨ３が挙げられるが、これらに限定されない。
【００１５】
特に明示のない限り、「アルキル」という用語は、１〜２０（例えば、１〜１０又は１〜４）個の炭素原子を有する直鎖、分岐鎖及び／又は環式（「シクロアルキル」）の炭化水素を意味する。１個〜４個の炭素を有するアルキル部分は「低級アルキル」と称される。アルキル基の例としては、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル、イソブチル、ペンチル、ヘキシル、イソヘキシル、ヘプチル、４，４−ジメチルペンチル、オクチル、２，２，４−トリメチルペンチル、ノニル、デシル、ウンデシル及びドデシルが挙げられるが、これらに限定されない。シクロアルキル部分は単環式又は多環式であってもよく、例としてはシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル及びアダマンチルが挙げられる。アルキル部分の更なる例は直鎖部分、分岐鎖部分及び／又は環式部分（例えば、１−エチル−４−メチル−シクロヘキシル）を有する。「アルキル」という用語は飽和炭化水素、並びにアルケニル部分及びアルキニル部分を含む。
【００１６】
特に明示のない限り、「アルキルアリール」又は「アルキル−アリール」という用語は、アリール部分と結合したアルキル部分を意味する。
【００１７】
特に明示のない限り、「アルキルヘテロアリール」又は「アルキル−ヘテロアリール」という用語は、ヘテロアリール部分と結合したアルキル部分を意味する。
【００１８】
特に明示のない限り、「アルキル複素環」又は「アルキル−複素環」という用語は、複素環部分と結合したアルキル部分を意味する。
【００１９】
特に明示のない限り、「アルキニル」という用語は、２〜２０（例えば、２〜２０又は２〜６）個の炭素原子を有し、少なくとも１つの炭素−炭素三重結合を含む直鎖、分岐鎖又は環式の炭化水素を意味する。代表的なアルキニル部分としては、アセチレニル、プロピニル、１−ブチニル、２−ブチニル、１−ペンチニル、２−ペンチニル、３−メチル−１−ブチニル、４−ペンチニル、１−ヘキシニル、２−ヘキシニル、５−ヘキシニル、１−ヘプチニル、２−ヘプチニル、６−ヘプチニル、１−オクチニル、２−オクチニル、７−オクチニル、１−ノニニル、２−ノニニル、８−ノニニル、１−デシニル、２−デシニル及び９−デシニルが挙げられる。
【００２０】
特に明示のない限り、「アリール」という用語は、炭素原子及びＨ原子で構成される芳香環、又は芳香族若しくは部分芳香族の環系を意味する。アリール部分はともに結合又は融合した複数の環を含んでいてもよい。アリール部分の例としては、アントラセニル、アズレニル、ビフェニル、フルオレニル、インダン、インデニル、ナフチル、フェナントレニル、フェニル、１，２，３，４−テトラヒドロ−ナフタレン及びトリルが挙げられるが、これらに限定されない。
【００２１】
特に明示のない限り、「アリールアルキル」又は「アリール−アルキル」という用語は、アルキル部分と結合したアリール部分を意味する。
【００２２】
特に明示のない限り、「ハロゲン」及び「ハロ」という用語は、フッ素、塩素、臭素及びヨウ素を包含する。
【００２３】
特に明示のない限り、「ヘテロアルキル」という用語は、炭素原子の少なくとも１つがヘテロ原子（例えば、Ｎ、Ｏ又はＳ）で置き換えられたアルキル部分（例えば、直鎖、分岐鎖又は環式）を表す。
【００２４】
特に明示のない限り、「ヘテロアルキルアリール」又は「ヘテロアルキル−アリール」という用語は、アルキル部分と結合したヘテロアルキル部分を表す。
【００２５】
特に明示のない限り、「ヘテロアルキル複素環」又は「ヘテロアルキル−複素環」という用語は、複素環部分と結合したヘテロアルキル部分を表す。
【００２６】
特に明示のない限り、「ヘテロアリール」という用語は、炭素原子の少なくとも１つがヘテロ原子（例えば、Ｎ、Ｏ又はＳ）で置き換えられたアリール部分を意味する。例としては、アクリジニル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾフラニル、ベンゾイソチアゾリル、ベンゾイソオキサゾリル、ベンゾキナゾリニル、ベンゾチアゾリル、ベンゾオキサゾリル、フリル、イミダゾリル、インドリル、イソチアゾリル、イソオキサゾリル、オキサジアゾリル、オキサゾリル、フタラジニル、ピラジニル、ピラゾリル、ピリダジニル、ピリジル、ピリミジニル、ピリミジル、ピロリル、キナゾリニル、キノリニル、テトラゾリル、チアゾリル及びトリアジニルが挙げられるが、これらに限定されない。
【００２７】
特に明示のない限り、「ヘテロアリールアルキル」又は「ヘテロアリール−アルキル」という用語は、アルキル部分と結合したヘテロアリール部分を意味する。
【００２８】
特に明示のない限り、「複素環」という用語は、炭素、Ｈ及び少なくとも１つのヘテロ原子（例えば、Ｎ、Ｏ又はＳ）で構成される芳香族、部分芳香族、又は非芳香族の単環式又は多環式の環又は環系を表す。複素環は、ともに融合又は結合した複数（すなわち２つ以上）の環を含み得る。複素環はヘテロアリールを含む。例としては、ベンゾ［１，３］ジオキソリル、２，３−ジヒドロ−ベンゾ［１，４］ジオキシニル、シンノリニル、フラニル、ヒダントイニル、モルホリニル、オキセタニル、オキシラニル、ピペラジニル、ピペリジニル、ピロリジノニル、ピロリジニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロピリジニル、テトラヒドロピリミジニル、テトラヒドロチオフェニル、テトラヒドロチオピラニル及びバレロラクタミルが挙げられるが、これらに限定されない。
【００２９】
特に明示のない限り、「複素環アルキル」又は「複素環−アルキル」という用語は、アルキル部分と結合した複素環部分を表す。
【００３０】
特に明示のない限り、「ヘテロシクロアルキル」という用語は、非芳香族の複素環を表す。
【００３１】
特に明示のない限り、「ヘテロシクロアルキルアルキル」又は「ヘテロシクロアルキル−アルキル」という用語は、アルキル部分と結合したヘテロシクロアルキル部分を表す。
【００３２】
特に明示のない限り、「ＬＩＭＫ２  ＩＣ５０」という用語は、以下の実施例に記載のｉｎ  ｖｉｔｒｏヒトＬＩＭキナーゼ２阻害アッセイを使用して決定した化合物のＩＣ５０である。
【００３３】
特に明示のない限り、「管理する（manage）」、「管理すること（managing）」及び「管理（management）」という用語は、特定の疾患若しくは障害に既に罹患した患者において疾患若しくは障害の再発を予防すること、及び／又は疾患若しくは障害に罹患している患者が寛解期にある時間を延長させることを包含する。この用語は、疾患若しくは障害の閾値、発症及び／若しくは継続期間を調節すること、又は患者の疾患若しくは障害に対する応答の仕方を変えることを包含する。
【００３４】
特に明示のない限り、「薬学的に許容される塩」という用語は、薬学的に許容される非毒性の酸又は塩基（無機酸及び無機塩基並びに有機酸及び有機塩基を含む）から調製される塩を表す。好適な薬学的に許容される塩基付加塩としては、アルミニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、カリウム、ナトリウム及び亜鉛から生成される金属塩、又はリジン、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、メグルミン（Ｎ−メチルグルカミン）及びプロカインから生成される有機塩が挙げられるが、これらに限定されない。好適な非毒性の酸としては、酢酸、アルギン酸、アントラニル酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、カンファースルホン酸、クエン酸、エテンスルホン酸、ギ酸、フマル酸、フロ酸、ガラクツロン酸、グルコン酸、グルクロン酸、グルタミン酸、グリコール酸、臭化水素酸、塩酸、イセチオン酸、乳酸、マレイン酸、リンゴ酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、ムチン酸、硝酸、パモン酸、パントテン酸、フェニル酢酸、リン酸、プロピオン酸、サリチル酸、ステアリン酸、コハク酸、スルファニル酸、硫酸、酒石酸及びｐ−トルエンスルホン酸等の無機酸及び有機酸が挙げられるが、これらに限定されない。具体的な非毒性酸としては、塩酸、臭化水素酸、リン酸、硫酸、及びメタンスルホン酸が挙げられる。したがって、具体的な塩の例としては、塩酸塩及びメシル酸塩が挙げられる。他のものも当該技術分野において既知である。例えば、Remington's Pharmaceutical Sciences（第１８版、Mack Publishing, Easton PA: 1990）、及びRemington: The Science and Practice of Pharmacy（第１９版、Mack Publishing, Easton PA: 1995）を参照されたい。
【００３５】
特に明示のない限り、「強力なＬＩＭＫ２阻害剤」は、ＬＩＭＫ２  ＩＣ５０が約２５０ｎＭ未満である化合物である。
【００３６】
特に明示のない限り、「予防する（prevent）」、「予防すること（preventing）」及び「予防（prevention）」という用語は、患者が特定の疾患又は障害に罹患し始める前に行う処置を意図するものであり、疾患又は障害の重症度を抑制又は低減する。換言すると、この用語は予防法を包含する。
【００３７】
特に明示のない限り、化合物の「予防的に有効な量」は、疾患若しくは病態、若しくは疾患若しくは病態に関連する１つ若しくは複数の症状を予防するのに、又はその再発を予防するのに十分な量である。化合物の「予防的に有効な量」は、単独で又は他の薬剤と組み合わせて、疾患の予防において予防的利点をもたらす治療剤の量を意味する。「予防的に有効な量」という用語は、予防法を全体的に改善する、又は別の予防剤の予防的な有効性を高める量を包含し得る。
【００３８】
特に明示のない限り、「置換された」という用語は、化学構造又は部分を説明するために使用する場合は、Ｈ原子の１つ又は複数が、アルコール、アルデヒド、アルコキシ、アルカノイルオキシ、アルコキシカルボニル、アルケニル、アルキル（例えば、メチル、エチル、プロピル、ｔ−ブチル）、アルキニル、アルキルカルボニルオキシ（−ＯＣ（Ｏ）アルキル）、アミド（例えば、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−アルキル−、−アルキルＮＨＣ（Ｏ）アルキル）、アミジニル（例えば、−Ｃ（ＮＨ）ＮＨ−アルキル−、−Ｃ（ＮＲ）ＮＨ２）、アミン（アルキルアミノ、アリールアミノ、アリールアルキルアミノ等の第１級、第２級及び第３級のアミン）、アロイル、アリール、アリールオキシ、アゾ、カルバモイル（例えば、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｏ−アルキル−、−ＯＣ（Ｏ）ＮＨ−アルキル）、カルバミル（例えば、ＣＯＮＨ２、ＣＯＮＨ−アルキル、ＣＯＮＨ−アリール、ＣＯＮＨ−アリールアルキル）、カルボニル、カルボキシル、カルボン酸、カルボン酸無水物、カルボン酸塩化物、シアノ、エステル、エポキシド、エーテル（例えば、メトキシ、エトキシ）、グアニジノ、ハロ、ハロアルキル（例えば、−ＣＣｌ３、−ＣＦ３、−Ｃ（ＣＦ３）３）、ヘテロアルキル、ヘミアセタール、イミン（第１級及び第２級）、イソシアネート、イソチオシアネート、ケトン、ニトリル、ニトロ、オキソ、ホスホジエステル、スルフィド、スルホンアミド（例えば、ＳＯ２ＮＨ２）、スルホン、スルホニル（アルキルスルホニル、アリールスルホニル及びアリールアルキルスルホニルを含む）、スルホキシド、チオール（例えば、スルフヒドリル、チオエーテル）並びに尿素（例えば、−ＮＨＣＯＮＨ−アルキル−）等の（しかしこれらに限定されない）化学的部分又は官能基で置換された、その構造又は部分の誘導体を表す。
【００３９】
特に明示のない限り、化合物の「治療的に有効な量」は、疾患若しくは病態の治療若しくは管理において治療的利点をもたらすのに、又は疾患若しくは病態に関連した１つ若しくは複数の症状を遅延させる若しくは最小限に抑えるのに十分な量である。化合物の「治療的に有効な量」は、疾患又は病態の治療又は管理に治療的利点をもたらす、単独の又は他の療法と組み合わせた治療剤の量を意味する。「治療的に有効な量」という用語は、療法を全体的に改善するか、疾患若しくは病態の症状若しくは原因を低減若しくは回避するか、又は別の治療剤の治療的な有効性を高める量を包含し得る。
【００４０】
特に明示のない限り、「治療する（treat）」、「治療すること（treating）」及び「治療（treatment）」という用語は、患者が特定の疾患又は障害に罹患している間に行う処置を意図し、これによって疾患若しくは障害の重症度が低減するか、又は疾患若しくは障害の進行が遅延若しくは減速する。
【００４１】
特に明示のない限り、「挙げられる（含む）（include）」という用語は、「挙げられる（含む）が、これらに限定されない」と同じ意味を有し、「挙げられる（含む）（includes）」という用語は、「挙げられる（含む）が、これらに限定されない」と同じ意味を有する。同様に、「等の（such as）」という用語は、「等の（しかしこれらに限定されない）」という用語と同じ意味を有する。
【００４２】
特に明示のない限り、一連の名詞の直前にくる１つ又は複数の形容詞は、それぞれの名詞を修飾するものとして解釈される。例えば、「必要に応じて置換されたアルキル（alkyl）、アリール又はヘテロアリール」という語句は、「必要に応じて置換されたアルキル、必要に応じて置換されたアリール、又は必要に応じて置換されたヘテロアリール」と同じ意味を有する。
【００４３】
より大きい化合物の一部分を形成する化学的部分は、単一分子として存在する場合に一般的に指す名称、又はその基を一般的に指す名称を使用して本明細書に記載されることがあることに留意すべきである。例えば、「ピリジン」及び「ピリジル」という用語は、他の化学的部分と結合した部分を記載するのに使用する場合に、同じ意味を表す。したがって、「ＸＯＨ（式中、Ｘはピリジルである）」及び「ＸＯＨ（式中、Ｘはピリジンである）」という２つの語句には同じ意味が与えられ、化合物ピリジン−２−オール、ピリジン−３−オール及びピリジン−４−オールを包含する。
【００４４】
或る構造又は或る構造の一部分の立体化学が例えば太線又は破線で示されない場合、その構造又はその構造の一部分はその全ての立体異性体を包含すると解釈されることにも留意すべきである。さらに、満たされていない原子価を有することが図で示された任意の原子はこの原子価を満たすのに十分なＨ原子と結合していると推測される。さらに、一本の破線と平行した一本の実線で示された化学結合は、原子価が許容する場合、単結合及び二重結合の両方（例えば、芳香族結合）を包含する。
【００４５】
５．２．  化合物
本発明は、式：
【００４６】
【化２】
2013518048.tif 000004
【００４７】
（式中、Ｒ１がＨ、Ｃ（Ｏ）ＲＡ、Ｓ（Ｏ）ｎＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＮＲＡＲＢ、Ｓ（Ｏ）ｎＮＲＡＲＢ、Ｓ（Ｏ）ｎＯＲＡ、Ｃ（ＮＨ）ＮＲＡＲＢ、Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ、Ｃ（Ｓ）ＮＲＡＲＢ、Ｃ（ＳＲＢ）ＮＲＡ、Ｐ（Ｏ）（ＯＲＡ）２、又は必要に応じて置換された（例えば必要に応じてハロ、アルキル、アルコキシル、アリール、ヘテロアリール、ヒドロキシル、シアノ、ＮＲＡＲＢ、ＳＲＡ、Ｐ（Ｏ）（ＯＲＡ）２、ＣＯ２ＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＮＲＡＲＢ、Ｓ（Ｏ）ｎＲＡ、Ｓ（Ｏ）ＮＲＡＲＢ、又はハロゲン化（例えばフッ素化）アルキル、アリール若しくはヘテロアリールで置換された）アルキル、アリール若しくは複素環であり、Ｒ２がＨ、Ｃ（Ｏ）ＲＡ、Ｓ（Ｏ）ｎＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＮＲＡＲＢ、Ｓ（Ｏ）ｎＮＲＡＲＢ、Ｓ（Ｏ）ｎＯＲＡ、又は必要に応じて置換された（例えば必要に応じてハロ、アルキル、アルコキシル、アリール、ヘテロアリール、ヒドロキシル、シアノ、ＮＲＡＲＢ、ＳＲＡ、Ｐ（Ｏ）（ＯＲＡ）２、ＣＯ２ＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＮＲＡＲＢ、Ｓ（Ｏ）ｎＲＡ、Ｓ（Ｏ）ＮＲＡＲＢ、又はハロゲン化（例えばフッ素化）アルキル、アリール若しくはヘテロアリールで置換された）アルキル、アリール若しくは複素環であり、Ｒ３がＨ、ハロゲン、ＯＲ、ＮＲＡＲＢ、必要に応じて置換された（例えば必要に応じてハロ、アルキル、アルコキシル、ヒドロキシル、シアノ、ＮＲＡＲＢ、ＳＲＡ、ＣＯ２ＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＮＲＡＲＢで置換された）アルキルであり、各ＲＡが独立して、Ｈ、若しくは必要に応じて置換された（例えば必要に応じてハロ、アルキル、アルコキシル、アリール、ヘテロアリール、ヒドロキシル、シアノ、ＮＲＡＲＢ、ＳＲＡ、Ｐ（Ｏ）（ＯＲＡ）２、ＣＯ２ＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＮＲＡＲＢ、Ｓ（Ｏ）ｎＲＡ、Ｓ（Ｏ）ＮＲＡＲＢ、又はハロゲン化（例えばフッ素化）アルキル、アリール若しくはヘテロアリールで置換された）アルキル、アリール、アルキルアリール若しくはアルキル−複素環であり、各ＲＢが、必要に応じて置換された（例えば必要に応じてハロ、アルキル、アルコキシル、アリール、ヘテロアリール、ヒドロキシル、シアノ、ＮＲＡＲＢ、ＳＲＡ、Ｐ（Ｏ）（ＯＲＡ）２、ＣＯ２ＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＮＲＡＲＢ、Ｓ（Ｏ）ｎＲＡ、Ｓ（Ｏ）ＮＲＡＲＢ、又はハロゲン化（例えばフッ素化）アルキル、アリール若しくはヘテロアリールで置換された）アルキル若しくはアリールであり、又はＲＡ及びＲＢが同じ窒素原子と結合する場合、ＲＡ及びＲＢは該窒素原子とともに、必要に応じて置換された複素環（例えば必要に応じてハロ、アルキル、アルコキシル、アリール、ヘテロアリール、ヒドロキシル、シアノ、ＮＲＡＲＢ、ＳＲＡ、Ｐ（Ｏ）（ＯＲＡ）２、ＣＯ２ＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＮＲＡＲＢ、Ｓ（Ｏ）ｎＲＡ、Ｓ（Ｏ）ＮＲＡＲＢ、又はハロゲン化（例えばフッ素化）アルキル、アリール若しくはヘテロアリールで置換されたピペリジニル、モルホリノ、チオモルホリノ、ピペラジニル、ピロリジノ及びアゼチジノ）を形成することができ、ｎが０〜２である）の化合物、及びその薬学的に許容される塩を包含する。
【００４８】
特定の実施形態では、上記化合物は、以下のうちの１つ又は複数が当てはまるようなものである：Ｒ１がＣ（Ｏ）ＲＡであり、Ｒ２がＣＨＦ２であり、Ｒ３が２，６−ジクロロフェニルである場合、ＲＡはエトキシ、シクロプロピル若しくはイソプロピルではなく；Ｒ１がＣ（Ｏ）ＲＡであり、Ｒ２がＨ若しくはＣＨＦ２であり、Ｒ３が３，５−ジメチルフェニルである場合、ＲＡはメトキシではなく；Ｒ１がＣ（Ｏ）ＮＲＡＲＢであり、Ｒ２がピラジルであり、Ｒ３が２，６−ジメチル−４−メトキシフェニルであり、ＲＡがＨである場合、ＲＢはエチルではなく；又はＲ１がＨであり、Ｒ２がメチルである場合、Ｒ３はクロロではない。
【００４９】
一つの実施形態では、上記化合物は、式：
【００５０】
【化３】
2013518048.tif 000005
【００５１】
（式中、各Ｒ２Ａは独立して、シアノ、ハロ、ヒドロキシル、ＮＲＡＲＢ、ＳＲＡ、Ｐ（Ｏ）（ＯＲＡ）２、ＣＯ２ＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＮＲＡＲＢ、Ｓ（Ｏ）ｎＲＡ、Ｓ（Ｏ）ＮＲＡＲＢ、又は必要に応じて置換された（例えば必要に応じてフッ素化された）アルキル、アルコキシル若しくはアリールであり、ｍは０〜５である）の化合物である。
【００５２】
別の実施形態では、上記化合物は、式：
【００５３】
【化４】
2013518048.tif 000006
【００５４】
の化合物である。
【００５５】
本明細書に記載の式により包含される特定の化合物では、ＲＡは、必要に応じてハロ、ヒドロキシル、アミノ、アルキルアミノ又はジアルキルアミノのうちの１つ又は複数で置換されたアルキルである。幾つかの実施形態では、ＲＡはイソプロピルである。幾つかの実施形態では、ＲＡはアミノで置換されたアルキルである。幾つかの実施形態では、少なくとも１つのＲ２Ａはクロロである。
【００５６】
一つの実施形態では、上記化合物は、式：
【００５７】
【化５】
2013518048.tif 000007
【００５８】
の化合物である。
【００５９】
本明細書に記載の式により包含される特定の化合物では、Ｒ２Ａはブロモである。幾つかの実施形態では、ｍは２又は３である。幾つかの実施形態では、Ｒ３はＨ又は必要に応じて置換された低級アルキルである。幾つかの実施形態では、Ｒ３はジフルオロメチルである。
【００６０】
本発明の特定の化合物は、強力なＬＩＭＫ２阻害剤である。或る特定の化合物は、約１００ｎＭ未満、７５ｎＭ未満、５０ｎＭ未満、２５ｎＭ未満又は１０ｎＭ未満のＬＩＭＫ２  ＩＣ５０を有する。
【００６１】
５．３．  合成方法
本発明の化合物を、当該技術分野で既知の方法により調製することができる共通の中間体Ｎ−（２，４−ジメトキシベンジル）−４−アセチル−２−アミノチアゾール（ａ）から合成することができる。アプローチの１つが、Ross-MacDonald, et al., Mol. Cancer Ther. 7:3490 (2008)に記載されており、以下のスキーム１で示される：
【００６２】
【化６】
2013518048.tif 000008
【００６３】
次に、得られるＮ−（２，４−ジメトキシ）−４−アセチル−２−アミノチアゾール（ａ）を、以下のスキーム２に示されるように本発明の化合物に変換する：
【００６４】
【化７】
2013518048.tif 000009
【００６５】
スキーム２に示した方法では、Ｎ−（２，４−ジメトキシ）−４−アセチル−２−アミノチアゾール（ａ）を、適切な求電子剤（例えば置換マロネート又はジメチルホルムアミドジメチルアセタール）及び塩基（例えばナトリウムエトキシド）の存在下で加熱することによりカルボニル化して、化合物（ｂ）を得る。エノン（ｂ）と式Ｒ２−ＮＨＮＨ２の置換ヒドラジン（ｃ）との縮合により、ピラゾール（ｄ）が与えられる。高温で吸湿性のある（wet）酸（例えばトリフルオロ酢酸）を用いた化合物（ｄ）の脱保護により、２−アミノチアゾール（ｅ）が与えられる。それから２−アミノチアゾール（ｅ）を、適切な求電子剤（例えば酸塩化物、スルホニルクロリド、イソシアネート又はヘテロアリールクロリド）の添加を介して、又は２−ブロモ−アミノチアゾールへの変換（Das, et al.  J. Med. Chem.  2006, 49, 6819-6832を参照されたい）及び好適な求核剤（例えばアミン、アルコール又はアニリン）との置換を介して化合物（ｆ）へと変換することができる。
【００６６】
式Ｒ２−ＮＨＮＨ２のヒドラジン（ｃ）を、当該技術分野で既知の方法に従ってそれらに対応するアミンから調製することができる。アプローチの１つが、Finkelstein, et al.の国際公開第２００８１２４０９２号に記載されており、以下のスキーム３で示される：
【００６７】
【化８】
2013518048.tif 000010
【００６８】
５．４．  使用方法
本発明は、ＬＩＭＫ２を阻害する方法であって、ＬＩＭＫ２を強力なＬＩＭＫ２阻害剤と接触させることを含む、ＬＩＭＫ２を阻害する方法を包含する。好ましい強力なＬＩＭＫ２阻害剤は本発明の化合物（すなわち本明細書で開示の化合物）である。
【００６９】
特定の実施形態は、患者において炎症性の疾患又は障害を治療、管理又は予防する方法であって、それを必要とする患者に治療的に又は予防的に有効な量の本発明の化合物を投与することを含む、患者において炎症性の疾患又は障害を治療、管理又は予防する方法を包含する。
【００７０】
別の実施形態は、患者においてがんを治療、管理又は予防する方法であって、それを必要とする患者に治療的に又は予防的に有効な量の本発明の化合物を投与することを含む、患者においてがんを治療、管理又は予防する方法を包含する。
【００７１】
別の実施形態は、患者の眼内圧を低下させる方法であって、それを必要とする患者においてＬＩＭＫ２の活性又は発現を阻害することを含む、患者の眼内圧を低下させる方法を包含する。一方法では、ＬＩＭＫ２の活性は、患者の眼を強力なＬＩＭＫ２阻害剤と接触させることによって阻害される。特定の強力なＬＩＭＫ２阻害剤が、本明細書で開示される。別の方法では、ＬＩＭＫ２の発現は、ＬＩＭＫ２の発現を阻害する化合物（例えば、ｓｉＲＮＡ）を患者の眼に投与することによって阻害される。
【００７２】
別の実施形態は、患者において視力に影響を及ぼす疾患又は障害を治療、管理又は予防する方法であって、それを必要とする患者においてＬＩＭＫ２の活性又は発現を阻害することを含む、患者において視力に影響を及ぼす疾患又は障害を治療、管理又は予防する方法を包含する。一方法では、ＬＩＭＫ２の活性は、患者の眼を強力なＬＩＭＫ２阻害剤と接触させることによって阻害される。特定の強力なＬＩＭＫ２阻害剤が、本明細書で開示される。視力に影響を及ぼす疾患及び障害としては、緑内障、神経変性疾患、及び感染性疾患が挙げられる。
【００７３】
５．５．  医薬製剤
本発明は、１つ又は複数の本発明の化合物を含む医薬組成物を包含する。或る特定の医薬組成物は、患者への経口投与、粘膜（例えば、鼻腔、舌下、膣、口腔又は直腸）投与、非経口（例えば、皮下、静脈内、ボーラス注入、筋肉内又は動脈内）投与、経皮投与、局所投与及び眼（例えば、局所、硝子体内）投与に好適な単一の単位剤形である。
【００７４】
剤形の例としては、限定されるものではないが、錠剤；カプレット；軟弾性ゼラチンカプセル等のカプセル；カシェ（cachets：カプセル）；トローチ；ロゼンジ；分散液；坐剤；軟膏；パップ（湿布）；ペースト；粉末；包帯剤；クリーム；硬膏；溶液；パッチ；エアロゾル（例えば、経鼻スプレー又は吸入器）；ゲル；懸濁液（例えば、水性又は非水性の液体懸濁液、水中油型エマルション、又は油中水型液体エマルション）、溶液及びエリキシルを含む患者への経口投与又は粘膜投与に好適な液体剤形；患者への非経口投与に好適な液体剤形；並びに再構成して患者への非経口投与に好適な液体剤形をもたらすことができる無菌固体（例えば、結晶性又は非結晶性の固体）が挙げられる。
【００７５】
製剤は、投与方式に合わせる必要がある。例えば、経口投与は、本発明の化合物を消化管内での分解から保護するために腸溶性コーティングを必要とする。同様に、製剤は作用部位への活性成分（複数の場合もあり）の送達を促進する成分を含有し得る。例えば、化合物は、分解酵素から該化合物を保護し、循環系における輸送を促進し、細胞膜を通って細胞内部位へ至る送達を行うために、リポソーム製剤で投与され得る。
【００７６】
剤形の組成、形状及び種類は、その用途に応じて異なる。例えば、疾患の急性期治療に使用する剤形は、該剤形に含まれる１つ又は複数の活性成分を、同じ疾患の慢性期治療に使用する剤形よりも多量に含有していてもよい。同様に、非経口剤形は、該剤形に含まれる１つ又は複数の活性成分を、同じ疾患を治療するために使用する経口剤形よりも少量含有していてもよい。本発明により包含される特定の剤形が互いに異なるこれら及び他の方法は、当業者には容易に明らかである。例えばRemington's Pharmaceutical Sciences、第１８版（Mack Publishing, Easton PA: 1990）を参照されたい。
【００７７】
５．５．１．  経口剤形
経口投与に好適な本発明の医薬組成物は、錠剤（例えば、チュアブル錠）、カプレット、カプセル及び液体（例えば、香味付与したシロップ）等の（しかしこれらに限定されない）個別の剤形として提供することができる。このような剤形は所定量の活性成分を含有し、当業者に既知の製薬法によって調製することができる。例えば、Remington's Pharmaceutical Sciences、第１８版、（Mack Publishing, Easton PA: 1990）を参照されたい。
【００７８】
典型的な経口剤形は、従来の薬学的配合技法に従い、密接な混和物中で活性成分（複数の場合もあり）を少なくとも１つの賦形剤と組み合わせることによって調製する。賦形剤は、投与に望ましい調製物の形態に応じて広範な形態を取ることができる。
【００７９】
その投与のしやすさのため、錠剤及びカプセルが最も有益な経口単位剤形である。所望に応じて、錠剤は、標準的な水性又は非水性の技法によってコーティングすることができる。このような剤形は、従来の製薬法により調製することができる。一般に、医薬組成物及び剤形は、活性成分を液体担体、微粉固体担体、又はその両方と均一かつ密接に混和し、次に生成物を必要に応じて所望の形状に成形することによって調製する。崩壊剤は、固体剤形に組み込み、迅速な溶解を容易にする（facilitate）ことができる。また、滑剤を組み込んで、剤形（例えば、錠剤）の製造を容易にすることができる。
【００８０】
５．５．２．  非経口剤形
非経口剤形は、皮下経路、静脈内経路（ボーラス注入を含む）、筋肉内経路及び動脈内経路を含むがこれらに限定されない様々な経路によって患者に投与することができる。典型的には夾雑物に対する患者の自然防御を介さずに投与するため、非経口剤形は具体的には無菌であるか、又は患者に投与する前に滅菌可能である。非経口剤形の例としては、すぐに注入できる溶液、薬学的に許容される注入用の媒体にすぐに溶解又は懸濁できる乾燥製品、すぐに注入できる懸濁液、及びエマルションが挙げられるが、これらに限定されない。
【００８１】
本発明の非経口剤形を提供するために使用することができる好適な媒体は、当業者に既知である。例としては、注射用水（ＵＳＰ）；塩化ナトリウム注射液、リンゲル液、デキストロース注射液、デキストロース及び塩化ナトリウム注射液、並びに乳酸加リンゲル液等の（しかしこれらに限定されない）水性媒体；エチルアルコール、ポリエチレングリコール及びポリプロピレングリコール等の（しかしこれらに限定されない）水混和性媒体；並びにトウモロコシ油、綿実油、ラッカセイ油、ゴマ油、オレイン酸エチル、ミリスチン酸イソプロピル及び安息香酸ベンジル等の（しかしこれらに限定されない）非水性媒体が挙げられるが、これらに限定されない。
【００８２】
５．５．３．  経皮剤形、局所剤形及び粘膜剤形
経皮剤形、局所剤形及び粘膜剤形としては、点眼溶液、スプレー、エアロゾル、クリーム、ローション、軟膏、ゲル、溶液、エマルション、懸濁液、又は当業者に既知の他の形態が挙げられるが、これらに限定されない。例えば、Remington's Pharmaceutical Sciences、第１８版（Mack Publishing, Easton PA: 1990）、及びIntroduction to Pharmaceutical Dosage Forms、第４版（Lea & Febiger, Philadelphia: 1985）を参照されたい。経皮剤形としては、皮膚に貼付し一定時間装用することにより、所望量の活性成分の透過が可能となり得る、「リザーバ型」パッチ又は「マトリクス型」パッチが挙げられる。
【００８３】
経皮剤形、局所剤形及び粘膜剤形を提供するために使用され得る好適な賦形剤（例えば、担体及び希釈剤）並びに他の材料は、薬学の当業者に既知であり、所定の医薬組成物又は剤形を適用する特定の組織に応じて異なる。
【００８４】
治療対象の特定の組織に応じて、本発明の活性成分による治療前に、治療と同時に、又は治療後に、更なる構成成分を使用することができる。例えば、透過亢進剤を使用して、組織への活性成分の送達を補助し得る。
【００８５】
また、医薬組成物若しくは剤形のｐＨ、又は医薬組成物若しくは剤形が適用される組織のｐＨを調整して、１つ又は複数の活性成分の送達を改善することができる。同様に、溶媒担体の極性、そのイオン強度、又は張性（tonicity）を調整して、送達を改善することができる。また、送達が改善するように、ステアレート等の化合物を医薬組成物又は剤形に添加して、１つ又は複数の活性成分の親水性又は親油性を有利に変化させることができる。この点に関して、ステアレートは、製剤用の脂質媒体として、乳化剤又は界面活性剤として、及び送達亢進剤又は透過亢進剤として作用し得る。活性成分の種々の塩、水和物又は溶媒和物を使用して、得られる組成物の特性を更に調整することができる。
【００８６】
５．５．４．  点眼剤形
本発明の化合物は、水溶液、水性懸濁液及び軟膏を使用して、眼に（例えば、局所的に）送達することができる。当業者が認識するように、点眼製品は、眼の微生物汚染を防ぐために最終容器中で無菌でなければならない。容器を開けた場合に、無菌性を維持するのに保存料を使用してもよい。点眼製剤は、製剤のｐＨ、緩衝能、粘性及び張性を制御することも必要とする。好ましい製剤は、ｐＨが約６．５〜８．５であり、緩衝能が約０．０１〜０．１である。特定の製剤は等張である。特定の製剤は、粘性が約２５ｃｐｓ〜５０ｃｐｓである。
【００８７】
活性医薬成分（ＡＰＩ）をその作用部位に効果的に送達する安全な媒体を提供するのに使用され得る成分は、既知であるが、ＡＰＩの物理的及び化学的な特徴に応じて変わる。
【００８８】
適切に緩衝化した水溶液を水溶性の化合物の送達に使用してもよい。典型的には、溶液組成物において、組成物の粘性を増大させるのに高分子成分を使用する。好適なポリマーの例としては、セルロースポリマー（例えば、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、エチルヒドロキシエチルセルロース）、合成ポリマー（例えば、カルボキシビニルポリマー、ポリビニルアルコール）、多糖類（例えば、キサンタンガム、グアーガム及びデキストラン）及びそれらの混合物が挙げられる。例えば、米国特許第４，１３６，１７３号及び同第７，２４４，４４０号を参照されたい。化合物を送達するのに懸濁液を使用してもよい。高分子成分は典型的には、不溶性成分の懸濁又は容易な再分散性の維持に役立つ物理的安定性助剤として懸濁液組成物中で使用される（同上）。
【００８９】
製剤の無菌性を確保するのに、保存料を使用してもよい。好適な保存料としては、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、クロロブタノール、酢酸フェニル水銀、硝酸フェニル水銀、チメロサール、メチルパラベン及びプロピル−パラベンが挙げられる。また、酸化を受けやすい製剤の安定性を確保するために、抗酸化剤を使用してもよい。好適な抗酸化剤としては、エチレンジアミン四酢酸、重亜硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム及びチオ尿素が挙げられる。
【実施例】
【００９０】
６．実施例
本発明の態様は、以下の実施例から理解することができるが、該実施例は本発明の範囲を限定しない。
【００９１】
６．１．  Ｎ−（２，４−ジメトキシベンジル）−４−アセチル−２−アミノチアゾール（３）の合成
【００９２】
【化９】
2013518048.tif 000011
【００９３】
１−（２，４−ジメトキシベンジル）チオ尿素（１）
２，４−ジメトキシベンジルアミン（１５ｍＬ、９９．８ｍｍｏｌ）を３００ｍＬのジクロロメタン中の１，１’−チオカルボニルジイミダゾール（９０％、２１．８ｇ、１１０ｍｍｏｌ）の溶液に３０分かけて添加漏斗によって添加した。反応混合物を室温で３時間撹拌した。反応時にメタノール性アンモニア溶液（２Ｎ、２５０ｍＬ、５００ｍｍｏｌ）を添加して、それを７２時間撹拌した。揮発性物質を真空下で除去した。得られる固体を１００ｍＬのジクロロメタン中でスラリー状にし、ろ過した。沈殿物を過剰量のジクロロメタンで洗浄し、褐色の固体としてチオ尿素１を得た（１７．５ｇ、収率７７％）。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：７．６６（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）、７．１２（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ）、７．００（ｂｒ．ｓ．，２Ｈ）、６．５５（ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，１Ｈ）、６．４９（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ）、４．４６（ｄ，Ｊ＝４．２Ｈｚ，２Ｈ）、３．７９（ｓ，３Ｈ）、３．７４（ｓ，３Ｈ）。ＭＳ（ＥＳ＋）［Ｍ＋Ｈ］＋：２２７．２。
Ｎ’−（２，４−ジメトキシベンジルカルバモチオイル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムイミドアミド（２）
ジメチルホルムアミドジメチルアセタール（５．８ｍＬ、４１．０ｍｍｏｌ）を、３０ｍＬのエタノール中の１−（２，４−ジメトキシベンジル）チオ尿素（１、６．２ｇ、２７．３ｍｍｏｌ）の溶液に添加し、８０℃（この温度で反応物が均質な溶液になる）で１時間加熱し、ＬＣＭＳ分析により反応が完了したとみなした。室温まで冷却しながら、反応物に窒素ガス流を通し、これにより白色の固体が析出した。この固体をろ過し、１００ｍＬのエタノールで２回洗浄して、白色の固体としてイミン異性体の１：１混合物を得た（６．５５ｇ、収率８５％、イミドアミド異性体の２．５：１混合物）。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：（主異性体）：８．７９（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ）、８．７０（ｓ，１Ｈ）、７．００（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ）、６．５３（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ）、６．４３〜６．４６（ｍ，１Ｈ）、４．６１（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ）、３．７８（ｓ，３Ｈ）、３．７３（ｓ，３Ｈ）、３．１３（ｓ，３Ｈ）、２．９９（ｓ，３Ｈ）。（副異性体）：８．６７（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ）、８．６５（ｓ，１Ｈ）、７．０２（ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ）、６．５１（ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，１Ｈ）、６．４４〜６．４７（ｍ，１Ｈ）、４．４５（ｄ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，２Ｈ）、３．７７（ｓ，３Ｈ）、３．７３（ｓ，３Ｈ）、３．１３（ｓ，３Ｈ）、２．９７（ｓ，３Ｈ）。ＭＳ（ＥＳ＋）［Ｍ＋Ｈ］＋：２８２．２。
Ｎ−（２，４−ジメトキシベンジル）−４−アセチル−２−アミノチアゾール（３）
クロロアセトン（１．２１ｍＬ、１５．２ｍｍｏｌ）を３２ｍＬのアセトニトリル中のホルムイミドアミド２（３．５６ｇ、１２．７ｍｍｏｌ）に添加した。この混合物を３時間かけて７５℃まで加熱した。開始反応体積が半分に低減するまで、室温まで冷却しながら、反応物に窒素ガス流を通した。３７．５ｍＬの水及び１２．５ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ３水溶液を添加し、スラリーを１５分間撹拌した。沈殿物をろ過し、水及び２０％ジエチルエーテル／ヘキサンをそれぞれ１００ｍＬ用いて洗浄して、真空下で乾燥させた後、オフホワイト色の固体としてアセチルチアゾール３を得た（３．４９ｇ、収率９５％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：８．８５（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）、７．９７（ｓ，１Ｈ）、７．１５（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ）、６．５７（ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，１Ｈ）、６．４８（ｄｄ，Ｊ＝８．４，２．２Ｈｚ，１Ｈ）、４．３７（ｄ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，２Ｈ）、３．７９（ｓ，３Ｈ）、３．７４（ｓ，３Ｈ）、２．３４（ｓ，３Ｈ）。ＭＳ（ＥＳ＋）［Ｍ＋Ｈ］＋：３７１．１、［Ｍ＋Ｈ＋Ｈ２Ｏ］＋：３８９．１。
【００９４】
６．２．  ５−（１−（２，６−ジクロロフェニル）−３−（ジフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）チアゾール−２−アミン（６）の合成
【００９５】
【化１０】
2013518048.tif 000012
【００９６】
１−（２−（２，４−ジメトキシベンジルアミノ）チアゾール−５−イル）−４，４−ジフルオロブタン−１，３−ジオン（４）
エタノール（およそ３Ｎ、５．４ｍＬ）中のナトリウムエトキシドの溶液におけるアミノチアゾール３（１．１１ｇ、３．８０ｍｍｏｌ）及びジエチル２，２−ジフルオロマロネート（２．９８ｇ、１５．２ｍｍｏｌ）の混合物を５時間かけて７５℃まで加熱し、その後反応物は均質になった。室温まで冷却した後、反応混合物を過剰量の水とともにフラスコに移した。ｐＨを氷酢酸を用いて５〜６に調整した。得られる固体をろ過し、水／メタノール（２：１（ｖ：ｖ））及びジエチルエーテル／ヘキサン（１：４（ｖ：ｖ））をそれぞれ１００ｍＬ用いて洗浄した。固体を真空下で終夜乾燥させ、橙色の固体として表題の化合物を得た（１．０５ｇ、収率７４％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：９．２６（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）、８．３３（ｓ，１Ｈ）、７．１６（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ）、６．５７〜６．６１（ｍ，２Ｈ）、６．５０（ｄｄ，Ｊ＝８．３，２．５Ｈｚ，１Ｈ）、４．４１（ｂｒ．ｓ．，２Ｈ）、３．８０（ｓ，３Ｈ）、３．７５（ｓ，３Ｈ）、３．３５（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）。１９Ｆ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：−１２６．７０（ｄ，Ｊ＝５３．９Ｈｚ）。ＭＳ（ＥＳ＋）［Ｍ＋Ｈ］＋：２９３．１。
５−（１−（２，６−ジクロロフェニル）−３−（ジフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−Ｎ−（２，４−ジメトキシベンジル）チアゾール−２−アミン（５）
６ｍＬのエタノール中のケトン４（２９６ｍｇ、０．８００ｍｍｏｌ）と２，６−ジクロロフェニルヒドラジン塩酸塩（２０５ｍｇ、０．９６０ｍｍｏｌ）との混合物を２時間かけて７５℃まで加熱した。反応物を冷却し、４ｍＬの水及び１．５ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で処理し（treated）、それにより沈殿物の形成がもたらされた。沈殿物をろ過し（filtered）、水／メタノール（２：１（ｖ：ｖ））及びジエチルエーテル／ヘキサン（１：４（ｖ：ｖ））をそれぞれ１０ｍＬ用いて洗浄した。固体を真空下で終夜乾燥させ、ベージュ色の固体としてピラゾール５を得た（３５８ｍｇ、収率８８％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：８．１２（ｔ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ）、７．７７（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ）、７．７７（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，１Ｈ）、７．７０（ｄｄ，Ｊ＝９．４，６．６Ｈｚ，１Ｈ）、７．２１（ｓ，１Ｈ）、７．０７（ｄ，Ｊ＝３．８Ｈｚ，１Ｈ）、７．０１（ｔ，Ｊ＝３２．１Ｈｚ，１Ｈ）、６．５３（ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，１Ｈ）、６．４５（ｄｄ，Ｊ＝８．３，２．５Ｈｚ，１Ｈ）、４．２５（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ）、３．７６（ｓ，３Ｈ）、３．７３（ｓ，３Ｈ）。１９Ｆ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：−１１２．５２（ｄ，Ｊ＝５３．９Ｈｚ）。ＭＳ（ＥＳ＋）［Ｍ＋Ｈ］＋：５１１．０。
５−（１−（２，６−ジクロロフェニル）−３−（ジフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）チアゾール−２−アミン（６）
ピラゾール５（３５８ｍｇ、０．７０３ｍｍｏｌ）の入ったバイアルに、０．５ｍＬの水及び５ｍＬのトリフルオロ酢酸を添加した。反応が進行するにつれて、反応物は明るいピンク色に変わる。４時間後、反応物を２０ｍＬの水で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で中和した。固体をろ過し、水で洗浄して、シリカゲルクロマトグラフィ（５０％から１００％までの勾配の酢酸エチル／ヘキサン）により更に精製して、薄い橙色の無定形の固体として２−アミノチアゾール６を得た（２３７ｍｇ、収率９４％）。１Ｈ  ＮＭＲ（メタノール−ｄ４）δ：７．５７〜７．６８（ｍ，３Ｈ）、６．９３（ｓ，１Ｈ）、６．８６（ｓ，１Ｈ）、６．８０（ｔ，Ｊ＝５４．６Ｈｚ，１Ｈ）。１９Ｆ  ＮＭＲ（メタノール−ｄ４）δ：−１１４．３７（ｄ，Ｊ＝５５．１Ｈｚ）。ＭＳ（ＥＳ＋）［Ｍ＋Ｈ］＋：３６１．１。
【００９７】
６．３．  Ｎ−（５−（１−（２，６−ジクロロフェニル）−３−（ジフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）チアゾール−２−イル）ブチルアミドの合成
【００９８】
【化１１】
2013518048.tif 000013
【００９９】
Ｎ−（５−（１−（２，６−ジクロロフェニル）−３−（ジフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）チアゾール−２−イル）ブチルアミド（７）
ＴＨＦ（０．５ｍＬ）中のアミノチアゾール６（２０ｍｇ、０．０５５ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｎ−メチルモルホリン（０．０３０ｍＬ、０．２７８ｍｍｏｌ）、その後塩化ブチリル（０．０３０ｍＬ、０．２７８ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を５分間撹拌した。反応物をろ過し、真空下で濃縮して、分取ＨＰＬＣ（３０×１００ｍｍのＣ１８カラム、１０％から１００％までのメタノール：水（１０ｍＭの酢酸アンモニウム）、１５分、４５ｍＬ／分）により精製して、所望のアミド７を得た（９．５ｍｇ、収率４０％、ＨＰＬＣ分析による純度９８．９％）。１Ｈ  ＮＭＲ（メタノール−ｄ４）δ：７．５７〜７．６９（ｍ，３Ｈ）、７．３７（ｓ，１Ｈ）、７．００（ｓ，１Ｈ）、６．８３（ｔ，Ｊ＝５４．８Ｈｚ，１Ｈ）、２．４１（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ）、１．６３〜１．７５（ｍ，２Ｈ）、０．９６（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，３Ｈ）。１９Ｆ  ＮＭＲ（メタノール−ｄ４）δ：−１１４．４０（ｄ，Ｊ＝５５．１Ｈｚ）。ＭＳ（ＥＳ＋）［Ｍ＋Ｈ］＋：４３１．０。
【０１００】
６．４．  Ｎ−（５−（１−（２，６−ジクロロフェニル）−３−（ジフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）チアゾール−２−イル）−４−（ジメチルアミノ）ブタンアミドの合成
【０１０１】
【化１２】
2013518048.tif 000014
【０１０２】
Ｎ−（５−（１−（２，６−ジクロロフェニル）−３−（ジフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）チアゾール−２−イル）−４−（ジメチルアミノ）ブタンアミド（８）
酢酸イソ−プロピル（２．０ｍＬ）中のアミノチアゾール６（８０ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．１９ｍＬ、１．１ｍｍｏｌ）、４−（ジメチルアミノ）ブタン酸塩酸塩（９３ｍｇ、０．５５ｍｍｏｌ）及びＨＡＴｕ（２１１ｍｇ、０．５５ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を８０℃で１時間加熱し、その後飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液／ブラインの１：１（ｖ：ｖ）混合物を用いてクエンチした。水層を酢酸エチルで抽出した。複合有機層をブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、ろ過し、濃縮した。粗残渣を分取ＨＰＬＣ（３０×１００ｍｍのＣ１８カラム、１０％から１００％までのメタノール：水（１０ｍＭのギ酸アンモニウム）、１５分、４５ｍＬ／分）により精製して、所望のアミドを得た（８、６５ｍｇ、収率６２％）。１Ｈ  ＮＭＲ（メタノール−ｄ４）δ：７．５７〜７．６９（ｍ，３Ｈ）、７．３９（ｓ，１Ｈ）、７．０１（ｓ，１Ｈ）、６．８４（ｔ，Ｊ＝５４．８Ｈｚ，１Ｈ）、３．０６〜３．１５（ｍ，２Ｈ）、２．８４（ｓ，６Ｈ）、２．５９（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ）、１．９９〜２．１０（ｍ，２Ｈ）。１９Ｆ  ＮＭＲ（メタノール−ｄ４）δ：−１１４．３７（ｄ，Ｊ＝５４．９Ｈｚ）。ＭＳ（ＥＳ＋）［Ｍ＋Ｈ］＋：４７４．０。
【０１０３】
６．５．  （Ｓ）−Ｎ−（５−（１−（２，６−ジクロロフェニル）−３−（ジフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）チアゾール−２−イル）−２−（ピロリジン−２−イル）アセトアミドの合成
【０１０４】
【化１３】
2013518048.tif 000015
【０１０５】
（Ｓ）−Ｎ−（５−（１−（２，６−ジクロロフェニル）−３−（ジフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）チアゾール−２−イル）−２−（ピロリジン−２−イル）アセトアミド（９）
酢酸イソ−プロピル（０．５ｍＬ）中のアミノチアゾール６（２５ｍｇ、０．０６９ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．０６０ｍＬ、０．３５ｍｍｏｌ）、（Ｓ）−２−（１−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピロリジン−２−イル）酢酸塩酸塩（３９ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）及びＨＡＴｕ（６５ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を８０℃で１時間加熱し、その後飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液／ブラインの１：１（ｖ：ｖ）混合物を用いてクエンチした。水層を酢酸エチルで抽出した。複合有機層をブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、ろ過し、濃縮した。粗残渣を１ｍＬのメタノールに入れ、４Ｎ  ＨＣｌのジオキサン溶液０．２ｍＬを添加した。反応物を６０℃で１時間加熱した。揮発性物質を真空下で除去し、粗残渣を分取ＨＰＬＣ（３０×１００ｍｍのＣ１８カラム、１０％から１００％までのメタノール：水（１０ｍＭのギ酸アンモニウム）、１５分、４５ｍＬ／分）により精製して、モノホルメート塩として所望のアミドを得た（９、１３．０ｍｇ、収率３６％）。１Ｈ  ＮＭＲ（メタノール−ｄ４）δ：８．４７（ｓ，１Ｈ）、７．５６〜７．６９（ｍ，３Ｈ）、７．４５（ｓ，１Ｈ）、７．０２（ｓ，１Ｈ）、６．８４（ｔ，Ｊ＝５４．６Ｈｚ，１Ｈ）、３．８５〜３．９６（ｍ，１Ｈ）、３．０６（ｄｄ，Ｊ＝１７．６，３．７Ｈｚ，１Ｈ）、２．８１〜２．９３（ｍ，１Ｈ）、２．２２〜２．３４（ｍ，１Ｈ）、２．０４〜２．１５（ｍ，１Ｈ）、１．９２〜２．０４（ｍ，１Ｈ）、１．６５〜１．７９（ｍ，１Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：１６８．７、１５８．７、１４８．２（ｔ，Ｊ＝２９．３Ｈｚ）、１３８．４、１３８．３、１３４．４、１３３．８、１３３．５、１２９．５、１１６．６、１１１．０（ｔ，Ｊ＝２３２．７Ｈｚ）、１０３．２、５４．８、４４．６、３６．８、２９．８、２３．０。１９Ｆ  ＮＭＲ（メタノール−ｄ４）δ：−１１４．３８（ｄ，Ｊ＝５５．１Ｈｚ）。ＭＳ（ＥＳ＋）［Ｍ＋Ｈ］＋：４７２．１。
【０１０６】
６．６．  ５−（１−（２，６−ジクロロフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）チアゾール−２−アミン（１３）の合成
【０１０７】
【化１４】
2013518048.tif 000016
【０１０８】
１−（２−（２，４−ジメトキシベンジルアミノ）チアゾール−５−イル）−３−（ジメチルアミノ）プロパ−２−エン−１−オン（１１）
２２．５ｍＬのジメチルホルムアミドジメチルアセタール中のケトン３（２．２５ｇ、７．７０ｍｍｏｌ）を１０５℃まで１８時間かけて加熱した。溶液を周囲温度まで冷却した。２．５ｍＬのエタノール、その後６７ｍＬのジエチルエーテルを添加した。この沈殿した混合物を３０分間撹拌し、ろ過した。沈殿物を過剰量のジエチルエーテルで洗浄し、１８時間真空下で乾燥させ、オフホワイト色の固体としてエノン１１を得た（１．００ｇ、収率３７％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：８．３８（ｔ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ）、７．７７（ｓ，１Ｈ）、７．４７（ｄ，Ｊ＝１２．３Ｈｚ，１Ｈ）、７．１５（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ）、６．５６（ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，１Ｈ）、６．４８（ｄｄ，Ｊ＝８．３，２．３Ｈｚ，１Ｈ）、５．５８（ｄ，Ｊ＝１２．６Ｈｚ，１Ｈ）、４．３２（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，２Ｈ）、３．８０（ｓ，３Ｈ）、３．７４（ｓ，３Ｈ）、３．３３（ｓ，６Ｈ）。ＭＳ（ＥＳ−）［Ｍ−Ｈ］：３４６．１。
【０１０９】
５−（１−（２，６−ジクロロフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−Ｎ−（２，４−ジメトキシベンジル）チアゾール−２−アミン（１２）
７ｍＬのエタノール中のケトン１１（３４７ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ）と２，６−ジクロロフェニルヒドラジン塩酸塩（２５６ｍｇ、１．２０ｍｍｏｌ）との混合物を７５℃まで２時間かけて加熱した。反応物を冷却し、５ｍＬの水及び１．５ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で処理し、沈殿物の形成がもたらされた。沈殿物をろ過し、水／メタノール（２：１（ｖ：ｖ））及びジエチルエーテル／ヘキサン（１：４（ｖ：ｖ））をそれぞれ１０ｍＬ用いて洗浄した。固体を真空下で乾燥させ、更に精製することなく次の工程に使用した。ＭＳ（ＥＳ＋）［Ｍ＋Ｈ］＋：４６１．１。
５−（１−（２，６−ジクロロフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）チアゾール−２−アミン（１３）
ピラゾール１２（４６０ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ）の入ったバイアルに、１．５ｍＬの水及び７ｍＬのトリフルオロ酢酸を添加した。反応が進行するにつれて、反応物は明るいピンク色に変わる。４時間後、反応物を２０ｍＬの水で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で中和した。固体をろ過し、水で洗浄して、シリカゲルクロマトグラフィ（４０％から８０％までの勾配の酢酸エチル／ヘキサン）により更に精製して、薄い黄色の固体として２−アミノチアゾール１３を得た（２１６ｍｇ、２工程で収率７０％）。１Ｈ  ＮＭＲ（メタノール−ｄ４）δ：７．７６（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ）、７．５５〜７．６６（ｍ，３Ｈ）、６．８４（ｓ，１Ｈ）、６．６４（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ）。ＭＳ（ＥＳ＋）［Ｍ＋Ｈ］＋：３１１．１。
【０１１０】
６．７．  Ｎ−（５−（１−（２，６−ジクロロフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）チアゾール−２−イル）ブチルアミド（１４）の合成
【０１１１】
【化１５】
2013518048.tif 000017
【０１１２】
Ｎ−（５−（１−（２，６−ジクロロフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）チアゾール−２−イル）ブチルアミド（１４）
ＴＨＦ（１．０ｍＬ）中のアミノチアゾール１３（３５ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｎ−メチルモルホリン（０．１２ｍＬ、１．１ｍｍｏｌ）、その後塩化ブチリル（０．１２ｍＬ、１．１ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を５分間撹拌した。反応物をろ過し、真空下で濃縮して、分取ＨＰＬＣ（（３０×１００ｍｍのＣ１８カラム、１０％から１００％までのメタノール：水（１０ｍＭの酢酸アンモニウム）、１５分、４５ｍＬ／分）により精製して、所望のアミド１４を得た（７．４ｍｇ、収率１８％、ＨＰＬＣ分析による純度９７．６％）。１Ｈ  ＮＭＲ（メタノール−ｄ４）δ：７．８３（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ）、７．５５〜７．６８（ｍ，３Ｈ）、７．２８（ｓ，１Ｈ）、６．７９（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ）、２．４１（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ）、１．６２〜１．７６（ｍ，２Ｈ）、０．９６（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，３Ｈ）。ＭＳ（ＥＳ＋）［Ｍ＋Ｈ］＋：３８１．１。
【０１１３】
６．８．  ４−アセトアミド−Ｎ−（５−（１−（２，６−ジクロロフェニル）−３−（ジフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）チアゾール−２−イル）ブタンアミド（１５）の合成
【０１１４】
【化１６】
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【０１１５】
４−アセトアミド−Ｎ−（５−（１−（２，６−ジクロロフェニル）−３−（ジフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）チアゾール−２−イル）ブタンアミド（１５）
酢酸イソ−プロピル（０．５ｍＬ）中のアミノチアゾール１３（２０ｍｇ、０．０６４ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．０５７ｍＬ、０．３２ｍｍｏｌ）、４−アセトアミドブタン酸（２８ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）及びＨＡＴｕ（９４ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を８０℃で１時間加熱し、その後飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液／ブラインの１：１（ｖ：ｖ）混合物を用いてクエンチした。水層を酢酸エチルで抽出した。複合有機層をブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、ろ過し、濃縮した。粗残渣を分取ＨＰＬＣ（３０×１００ｍｍのＣ１８カラム、１０％から１００％までのメタノール：水（１０ｍＭの酢酸アンモニウム）、１５分、４５ｍＬ／分）により精製して、所望のアミドを得た（１５、８．５ｍｇ、収率３０％、ＨＰＬＣ分析による純度９５％）。１Ｈ  ＮＭＲ（メタノール−ｄ４）δ：７．８２（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ）、７．５５〜７．６８（ｍ，３Ｈ）、７．２７（ｓ，１Ｈ）、６．７８（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ）、３．２１（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ）、２．４７（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ）、１．９０（ｓ，３Ｈ）、１．８５（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ）。ＭＳ（ＥＳ＋）［Ｍ＋Ｈ］＋：４３８．０。
【０１１６】
６．９．  （２，６−ジメチルフェニル）ヒドラジン塩酸塩の合成
【０１１７】
【化１７】
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【０１１８】
（２，６−ジメチルフェニル）ヒドラジン塩酸塩（１８）
添加漏斗を備えた１００ｍＬ容の丸底フラスコに、６．２５ｍＬの濃ＨＣｌ及び５ｍＬの水を入れた。溶液を−５℃に冷却した。２，６−ジメチルアニリン（３．５ｍＬ、２８．２ｍｍｏｌ）をシリンジによって滴下すると、白色の沈殿物が形成した。この混合物を更に１５分間撹拌した。５ｍＬの水中の亜硝酸ナトリウム（１．９５ｇ、２８．２ｍｍｏｌ）の溶液を−５℃でシリンジによって滴下し、白色の混合物が橙色に変わった。３０分後、２３ｍＬの濃ＨＣｌ／水の１：１（ｖ：ｖ）溶液中の塩化スズ（ＩＩ）（１３．４ｇ、７０．５ｍｍｏｌ）の溶液を添加漏斗によって１時間かけて滴下した。反応物を周囲温度で終夜激しく撹拌した。得られる沈殿物をろ過し、ブライン及びジエチルエーテルで連続して洗浄した。それから沈殿物を、３５ｍＬのジエチルエーテル及び５０ｍＬの１０Ｎ  ＮａＯＨ水溶液の入ったフラスコに０℃で添加した。固体が溶解するまで、混合物を周囲温度で撹拌した。層を分離し、水層を５０ｍＬのジエチルエーテルで２回抽出した。複合エーテル層を０℃に冷却し、ジオキサン（６．２５ｍＬ）中の４Ｎ  ＨＣｌを滴下し、反応物を３０分間撹拌した。得られる白色の固体をろ過し、冷ジエチルエーテルで洗浄して、真空下で乾燥させ、ヒドラジンの一塩酸塩１８を得た（１．２４ｇ、収率２５％）。
【０１１９】
６．１０．  （２，６−ジメチル−４−シアノフェニル）ヒドラジン塩酸塩の合成
【０１２０】
【化１８】
2013518048.tif 000020
【０１２１】
（２，６−ジクロロ−４−シアノフェニル）ヒドラジン塩酸塩（１９）
８１ｍＬのＴＨＦ中の２，６−ジクロロ−４−シアノアニリン（５．００ｇ、２６．７ｍｍｏｌ）の溶液の入ったフラスコを０℃に冷却した。三フッ化ホウ素ジエチルエーテレート（５．０３ｍＬ、４０．１ｍｍｏｌ）をシリンジによって滴下し、その後亜硝酸ｔｅｒｔ−ブチル（３．８０ｍＬ、３２．０ｍｍｏｌ）を滴下した。この反応物を更に６０分間撹拌すると、その間に褐色の沈殿物が形成した。１００ｍＬのジエチルエーテルを添加し、混合物を３０分間撹拌した。沈殿物をろ過し、過剰量のジエチルエーテルで洗浄した。ジアゾニウム塩を褐色の固体として単離し（５．５７ｇ、収率７８％）、更に精製せずに続く還元に使用した。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：８．３１（ｓ，２Ｈ）。生成物は質量分析計では電離しない。
【０１２２】
これまでの工程から得られたジアゾニウム塩（５．５７ｇ、２０．８ｍｍｏｌ）を５２ｍＬの濃ＨＣｌ／水の１：１（ｖ：ｖ）溶液中で懸濁し、０℃に冷却した。塩化スズ（ＩＩ）（９．８５ｇ、５２.０ｍｍｏｌ）を５００ｍｇずつ添加した。反応物を室温で４５時間撹拌した。得られる沈殿物をろ過し、ブライン及びジエチルエーテルで連続して洗浄した。それから沈殿物を、１００ｍＬのジエチルエーテル及び１００ｍＬの６Ｎ  ＮａＯＨ水溶液の入ったフラスコに添加した。混合物を周囲温度で３時間撹拌した。層を分離し、水層を１００ｍＬのジエチルエーテル及び５０ｍＬの酢酸エチルで抽出した。複合有機層を濃縮した。粗残渣を１５０ｍＬのジエチルエーテル及び２０ｍＬの酢酸エチルに０℃で入れた。４Ｎ  ＨＣｌのジオキサン溶液（８．０ｍＬ）を滴下し、反応物を０℃で３０分間撹拌して、終夜０℃に置いた。褐色の固体をろ過により回収し、冷ジエチルエーテルで洗浄し、真空下で乾燥させ、主に一塩酸塩としてヒドラジン１９を得た（９２８ｍｇ、収率１９％、１Ｈ  ＮＭＲ分析による純度約７０％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：８.０９（ｓ，２Ｈ）。ＭＳ（ＥＳ−）［Ｍ−Ｈ］：２００．１。
【０１２３】
６．１１．  ＬＩＭＫ２の発現及び精製
ＬＩＭＫ２を、ＢＡＣ−ｔｏ−ＢＡＣ（商標）バキュロウイルス発現系（Invitrogen）を使用して発現させた。取扱説明書に記載の製造業者の指示に従って、組換えバキュロウイルスを作製した。簡潔に述べると、ＬＩＭＫ２インサートを保有するプラスミド（ｐＦａｃｔＢａｃ１又はｐＦａｓｔＢａｃＨＴ）をＭＡＸ  ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ  ＤＨ１０Ｂａｃコンピテント大腸菌中に形質転換して、組換えバクミドを生成した。ＤＨ１０Ｂａｃ大腸菌宿主株は、ミニ−ａｔｔＴｎ７標的部位を有するバキュロウイルスシャトルベクター（バクミド）と、ヘルパープラスミドとを含有し、ｐＦａｓｔＢａｃベクター上のミニ−Ｔｎ７因子と、バクミド上のミニ−（mini-）ａｔｔＴｎ７標的部位との間の転位後に組換えバクミドの生成を可能にする。転位反応が、ヘルパープラスミドによって供給される転位タンパク質の存在下で起こる。細胞をプレート培養し、取扱説明書に記載のように、白色のコロニーを摘み出してバクミドを単離した。
【０１２４】
単離バクミドＤＮＡをＳＦ９細胞中にトランスフェクトし、組換えバキュロウイルスを生成し、トランスフェクションの５日後にウイルスを回収した。ウイルスを０．２の感染多重度（ＭＯＩ）でＴ７５フラスコ内で増幅させた。増幅ウイルスを使用して、タンパク質発現のために５のＭＯＩでＳＦ９細胞を感染させた。
【０１２５】
ＬＩＭＫ２構築物の小規模精製のために、組換えバキュロウイルスに感染させたＳｆ９細胞の培養液５０ｍｌを使用した。細胞を５００×ｇで５分間の遠心分離によって採取した。それから、細胞をリシスバッファー（細胞１ｇ当たり５倍量）中で再懸濁した。典型的なリシスバッファーは以下のものを含有する：５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（ｐＨ８．０）、３００ｍＭ  ＫＣｌ、１０％  グリセロール、１％  ＮＰ−４０、１５ｍＭ  イミダゾール、１ｍＭ  ベンズアミジン、及びRocheの完全プロテアーゼ阻害剤（細胞溶解液５０ｍｌ当たり１錠）。１４０００ｐｓｉ〜２００００ｐｓｉの液体圧でMicrofluidicsのＭｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｚｅｒ  Ｍ−１１０Ｙに１回通し、その後４℃で１５分間６００００×ｇで溶解液を遠心分離することにより細胞懸濁液を溶解させた。
【０１２６】
それから、上清を、ニトリロ三酢酸（ＮＴＡ）と共有結合したコバルトイオンを含有するクロマトグラフィマトリクス上に直接装荷した。クロマトグラフィマトリクスは、タンパク質ローディング（loading）溶液と同じバッファー中で平衡化した。イオン荷電樹脂は典型的には、充填（packed）樹脂１ｍｌ当たり５ｍｇ〜１０ｍｇのヒスチジンタグ付けタンパク質と同等の結合能を有する。カラム上に装荷することができる抽出物の量は、抽出物中の可溶性ヒスチジンタグ付けタンパク質の量に応じて変わる。それからこのカラムを、１回目に５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（ｐＨ８．０）、３００ｍＭ  ＫＣｌ、１０％  グリセロール、１％  ＮＰ−４０、１５ｍＭ  イミダゾール、１ｍＭ  ベンズアミジンで；２回目に、２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（ｐＨ８．０）、５００ｍＭ  ＫＣｌ、１０％  グリセロール及び２０ｍＭ  イミダゾールで；３回目に、２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（ｐＨ８．０）、１００ｍＭ  ＫＣｌ、１０％  グリセロール及び２０ｍＭ  イミダゾールで段階的に洗浄し、その後同じバッファー中の２５０ｍＭ  イミダゾールで溶出した。それから、ＬＩＭＫ２タンパク質溶液を、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、及びタンパク質のカルボキシル末端と内部触媒ドメインとの両方に指向性を有する市販の抗体を使用するウェスタンブロットで解析した。保存の目的で、このタンパク質を、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．５）、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、０．１％  ＢＭＥ、０．０３％  Ｂｒｉｊ−３５及び５０％  グリセロールに透析した。
【０１２７】
大規模なＬＩＭＫ２の精製を、１０Ｌの培養量でＷａｖｅ  Ｂｉｏｒｅａｃｔｏｒ（Wave Biotech）において行った。１ｍＬ当たり２〜３×１０６個の生存細胞の細胞培養液１０ＬをＭＯＩ＝５ｐｆｕ／細胞で感染させ、感染後４８時間で採取した。
【０１２８】
６．１２．  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＬＩＭＫ２阻害アッセイ
ＬＩＭＫ２阻害剤を同定するのに使用するｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイを開発した。解析の読み取り値は、ＡＴＰ基質から固定化ミエリン塩基性タンパク質でコーティングしたフラッシュプレート（Perkin Elmer Biosciences）中への３３Ｐの取り込みであり、これは、プレートリーダーを備えたシンチレーションカウンタ（ＴｏｐＣｏｕｎｔ, Packard Bioscience, Meriden, CT）で計測した。３８４ウェルの平底ＭＢＰフラッシュプレートを使用し、総アッセイ量は５０μｌとした。ＨＴＳプログラムは、希釈のためにＢｉｏｍｅｋ  ＦＸを利用するものとした。
【０１２９】
各アッセイに関して、成分及び条件は以下のとおりであった：２００ｎｇの酵素をアッセイバッファー（１×アッセイバッファーは、３０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（ｐＨ８．０）、５ｍＭ  ＤＴＴ及び１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２を含有する）、１０μＭ  ＡＴＰ、０．２μＣｉ［γ−３３Ｐ］−ＡＴＰ、及び１０μＭの候補阻害化合物においてインキュベートした。反応物を室温で６０分間インキュベートし、７５μｌの停止／洗浄バッファー（１×停止／洗浄（wash）バッファーは、５０ｍＭ  ＥＤＴＡ及び２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．４）を含有する）で３回洗浄した後、プレートをシンチレーションカウンタで読み取った。種々の濃度のスタウロスポリン（４００ｎＭ、２００ｎＭ、１００ｎＭ及び５０ｎＭ；BIOMOL（Plymouth Meeting, PA）で購入した）を各プレートの対照として使用した。
【０１３０】
６．１３．  デキサメタゾン誘導性の眼圧亢進モデル
１日当たりおよそ０．１ｍｇのデキサメタゾン（ｄｅｘ）を放出するように、２８日齢のマウスのＡｌｚｅｔ浸透圧ミニポンプ（DURECT Corp., Cupertino, CA）に、水溶性のｄｅｘのＰＢＳ溶液（Sigma, St. Louis, MO）を満たした。ポンプがｄｅｘで満たされると、ポンプを、３７℃で６０時間、ＰＢＳで平衡化した。平衡化したポンプは、重量２５グラム〜３５グラムの野生型Ｃ５７：１２９  Ｆ２ハイブリッドマウスの背中の皮下に外科的に設置した。外科切開傷は、５−０編み絹（braided silk）（ROBOZ, Gaithersburg, MD）で縫合し、試験期間全体を通して、抗生物質軟膏で処理した。外科切開傷は、ＴｉｓｓｕｅＭｅｎｄ  ＩＩ（Webster Veterinary, Houston, TX）で接着した。鎮痛剤（ブプレノルフィン）を、外科処置の日及び外科処置の２４時間後に、ＩＰ注射により投与した。眼内圧（ＩＯＰ）を、ＴｏｎｏＬａｂ（Colonial Medical Supply Co., Franconia, NH）眼圧計を使用してこれらのマウスについて測定した。マウスを、イソフルランで軽く鎮静化し、０．５％プロパラカイン（Akorn, Buffalo Grove, IL）で局所麻酔を行った後、ＩＯＰ測定を行った。ベースラインのＩＯＰを、ミニポンプ埋め込みの１日前に測定した。ミニポンプ埋め込み後、４週間にわたり１週間に２〜３回、ＩＯＰ測定を行った。眼圧降下候補化合物による薬理学試験を、埋め込みの２１日〜２８日後に行った。
【０１３１】
図１は、このモデルでの（Ｓ）−Ｎ−（５−（１−（２，６−ジクロロフェニル）−３−（ジフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）チアゾール−２−イル）−２−（ピロリジン−２−イル）アセトアミドの用量依存的な効果を示している。投与時間からのＩＯＰ測定値の平均変化は表１に与えられる。
【０１３２】
【表１】
2013518048.tif 000021
【０１３３】
上で引用した全ての刊行物（例えば、特許及び特許出願）はその全体が、参照により本明細書中に援用される。
【図１】
2013518048.tif 000031
【手続補正書】
【提出日】平成23年5月25日(2011.5.25)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
眼投与に適した製剤であって、液体媒体と、式：
【化１】
2013518048.tif 000032
（式中、
Ｒ１がＨ、Ｃ（Ｏ）ＲＡ、Ｓ（Ｏ）ｎＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＮＲＡＲＢ、Ｓ（Ｏ）ｎＮＲＡＲＢ、Ｓ（Ｏ）ｎＯＲＡ、Ｃ（ＮＨ）ＮＲＡＲＢ、Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ、Ｃ（Ｓ）ＮＲＡＲＢ、Ｃ（ＳＲＢ）ＮＲＡ、Ｐ（Ｏ）（ＯＲＡ）２、又は必要に応じて置換された（例えば必要に応じてハロ、アルキル、アルコキシル、アリール、ヘテロアリール、ヒドロキシル、シアノ、ＮＲＡＲＢ、ＳＲＡ、Ｐ（Ｏ）（ＯＲＡ）２、ＣＯ２ＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＮＲＡＲＢ、Ｓ（Ｏ）ｎＲＡ、Ｓ（Ｏ）ＮＲＡＲＢ、又はハロゲン化（例えばフッ素化）アルキル、アリール若しくはヘテロアリールで置換された）アルキル、アリール若しくは複素環であり、
各Ｒ２Ａが独立して、シアノ、ハロ、ヒドロキシル、ＮＲＡＲＢ、ＳＲＡ、Ｐ（Ｏ）（ＯＲＡ）２、ＣＯ２ＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＮＲＡＲＢ、Ｓ（Ｏ）ｎＲＡ、Ｓ（Ｏ）ＮＲＡＲＢ、又は必要に応じて置換された（例えば必要に応じてフッ素化された）アルキル、アルコキシル若しくはアリールであり、
Ｒ３がＨ、ハロゲン、ＯＲ、ＮＲＡＲＢ、必要に応じて置換された（例えば必要に応じてハロ、アルキル、アルコキシル、ヒドロキシル、シアノ、ＮＲＡＲＢ、ＳＲＡ、ＣＯ２ＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＮＲＡＲＢで置換された）アルキルであり、
各ＲＡが独立して、Ｈ、若しくは必要に応じて置換された（例えば必要に応じてハロ、アルキル、アルコキシル、アリール、ヘテロアリール、ヒドロキシル、シアノ、ＮＲＡＲＢ、ＳＲＡ、Ｐ（Ｏ）（ＯＲＡ）２、ＣＯ２ＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＮＲＡＲＢ、Ｓ（Ｏ）ｎＲＡ、Ｓ（Ｏ）ＮＲＡＲＢ、又はハロゲン化（例えばフッ素化）アルキル、アリール若しくはヘテロアリールで置換された）アルキル、アリール、アルキルアリール若しくはアルキル−複素環であり、
各ＲＢが、必要に応じて置換された（例えば必要に応じてハロ、アルキル、アルコキシル、アリール、ヘテロアリール、ヒドロキシル、シアノ、ＮＲＡＲＢ、ＳＲＡ、Ｐ（Ｏ）（ＯＲＡ）２、ＣＯ２ＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＮＲＡＲＢ、Ｓ（Ｏ）ｎＲＡ、Ｓ（Ｏ）ＮＲＡＲＢ、又はハロゲン化（例えばフッ素化）アルキル、アリール若しくはヘテロアリールで置換された）アルキル若しくはアリールであり、又は
ＲＡ及びＲＢが同じ窒素原子と結合する場合、ＲＡ及びＲＢは該窒素原子とともに、必要に応じて置換された複素環（例えば必要に応じてハロ、アルキル、アルコキシル、アリール、ヘテロアリール、ヒドロキシル、シアノ、ＮＲＡＲＢ、ＳＲＡ、Ｐ（Ｏ）（ＯＲＡ）２、ＣＯ２ＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＮＲＡＲＢ、Ｓ（Ｏ）ｎＲＡ、Ｓ（Ｏ）ＮＲＡＲＢ、又はハロゲン化（例えばフッ素化）アルキル、アリール若しくはヘテロアリールで置換されたピペリジニル、モルホリノ、チオモルホリノ、ピペラジニル、ピロリジノ及びアゼチジノ）を形成することができ、
ｍが０〜５であり、
ｎが０〜２である）の化合物又はその薬学的に許容される塩とを含む、眼投与に適した製剤。
【請求項２】
前記化合物が、式：
【化２】
2013518048.tif 000033
の化合物である、請求項１に記載の製剤。
【請求項３】
ｍが２又は３である、請求項３に記載の製剤。
【請求項４】
ＲＡが、必要に応じてハロ、ヒドロキシル、アミノ、アルキルアミノ又はジアルキルアミノのうちの１つ又は複数で置換されたアルキルである、請求項２に記載の製剤。
【請求項５】
ＲＡがイソプロピルである、請求項３に記載の製剤。
【請求項６】
ＲＡがアミノで置換されたアルキルである、請求項３に記載の製剤。
【請求項７】
少なくとも１つのＲ２Ａがクロロである、請求項３に記載の製剤。
【請求項８】
前記化合物が、式：
【化３】
2013518048.tif 000034
の化合物である、請求項２に記載の製剤。
【請求項９】
Ｒ２Ａがブロモである、請求項７に記載の製剤。
【請求項１０】
Ｒ３がＨ又は必要に応じて置換された低級アルキルである、請求項６に記載の製剤。
【請求項１１】
Ｒ３がジフルオロメチルである、請求項１０に記載の製剤。
【請求項１２】
式：
【化４】
2013518048.tif 000035
（式中、
Ｒ１がＨ、Ｃ（Ｏ）ＲＡ、Ｓ（Ｏ）ｎＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＮＲＡＲＢ、Ｓ（Ｏ）ｎＮＲＡＲＢ、Ｓ（Ｏ）ｎＯＲＡ、Ｃ（ＮＨ）ＮＲＡＲＢ、Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ、Ｃ（Ｓ）ＮＲＡＲＢ、Ｃ（ＳＲＢ）ＮＲＡ、Ｐ（Ｏ）（ＯＲＡ）２、又は必要に応じて置換された（例えば必要に応じてハロ、アルキル、アルコキシル、アリール、ヘテロアリール、ヒドロキシル、シアノ、ＮＲＡＲＢ、ＳＲＡ、Ｐ（Ｏ）（ＯＲＡ）２、ＣＯ２ＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＮＲＡＲＢ、Ｓ（Ｏ）ｎＲＡ、Ｓ（Ｏ）ＮＲＡＲＢ、又はハロゲン化（例えばフッ素化）アルキル、アリール若しくはヘテロアリールで置換された）アルキル、アリール若しくは複素環であり、
各Ｒ２Ａが独立して、シアノ、ハロ、ヒドロキシル、ＮＲＡＲＢ、ＳＲＡ、Ｐ（Ｏ）（ＯＲＡ）２、ＣＯ２ＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＮＲＡＲＢ、Ｓ（Ｏ）ｎＲＡ、Ｓ（Ｏ）ＮＲＡＲＢ、又は必要に応じて置換された（例えば必要に応じてフッ素化された）アルキル、アルコキシル若しくはアリールであり、
Ｒ３がＨ、ハロゲン、ＯＲ、ＮＲＡＲＢ、必要に応じて置換された（例えば必要に応じてハロ、アルキル、アルコキシル、ヒドロキシル、シアノ、ＮＲＡＲＢ、ＳＲＡ、ＣＯ２ＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＮＲＡＲＢで置換された）アルキルであり、
各ＲＡが独立して、Ｈ、若しくは必要に応じて置換された（例えば必要に応じてハロ、アルキル、アルコキシル、アリール、ヘテロアリール、ヒドロキシル、シアノ、ＮＲＡＲＢ、ＳＲＡ、Ｐ（Ｏ）（ＯＲＡ）２、ＣＯ２ＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＮＲＡＲＢ、Ｓ（Ｏ）ｎＲＡ、Ｓ（Ｏ）ＮＲＡＲＢ、又はハロゲン化（例えばフッ素化）アルキル、アリール若しくはヘテロアリールで置換された）アルキル、アリール、アルキルアリール若しくはアルキル−複素環であり、
各ＲＢが、必要に応じて置換された（例えば必要に応じてハロ、アルキル、アルコキシル、アリール、ヘテロアリール、ヒドロキシル、シアノ、ＮＲＡＲＢ、ＳＲＡ、Ｐ（Ｏ）（ＯＲＡ）２、ＣＯ２ＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＮＲＡＲＢ、Ｓ（Ｏ）ｎＲＡ、Ｓ（Ｏ）ＮＲＡＲＢ、又はハロゲン化（例えばフッ素化）アルキル、アリール若しくはヘテロアリールで置換された）アルキル若しくはアリールであり、又は
ＲＡ及びＲＢが同じ窒素原子と結合する場合、ＲＡ及びＲＢは該窒素原子とともに、必要に応じて置換された複素環（例えば必要に応じてハロ、アルキル、アルコキシル、アリール、ヘテロアリール、ヒドロキシル、シアノ、ＮＲＡＲＢ、ＳＲＡ、Ｐ（Ｏ）（ＯＲＡ）２、ＣＯ２ＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＮＲＡＲＢ、Ｓ（Ｏ）ｎＲＡ、Ｓ（Ｏ）ＮＲＡＲＢ、又はハロゲン化（例えばフッ素化）アルキル、アリール若しくはヘテロアリールで置換されたピペリジニル、モルホリノ、チオモルホリノ、ピペラジニル、ピロリジノ及びアゼチジノ）を形成することができ、
ｍが０〜５であり、
ｎが０〜２である）の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項１３】
式：
【化５】
2013518048.tif 000036
の化合物である、請求項１２に記載の化合物。
【請求項１４】
式：
【化６】
2013518048.tif 000037
の化合物である、請求項１３に記載の化合物。
【請求項１５】
患者の眼内圧を低下させる方法であって、それを必要とする患者に、治療的に又は予防的に有効な量の請求項１２に記載の化合物を投与することを含む、患者の眼内圧を低下させる方法。
【請求項１６】
患者において視力に影響を及ぼす疾患又は障害を治療、管理又は予防する方法であって、それを必要とする患者に、治療的に又は予防的に有効な量の請求項１２に記載の化合物を投与することを含む、患者において視力に影響を及ぼす疾患又は障害を治療、管理又は予防する方法。
【請求項１７】
前記視力に影響を及ぼす疾患又は障害が緑内障、神経変性又は感染症である、請求項１６に記載の方法。 
【国際調査報告】
2013518048.tif 000038
2013518048.tif 000039
2013518048.tif 000040