(57)【要約】本発明は、式（Ｉ）のｃｉｓ−１，２−ジオールの調製を、グラムスケールからキログラムスケールにスケールアップすることに関する。
2013530191.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉのｃｉｓ−１，２−ジオールをキログラムスケールで調製する方法であって、
【化１】
2013530191.tif 000013
［式中、環系は、４〜８員のシクロアルキルであり、Ｒは、水素、アルキル、アルコキシ、Ｏ−アセチル、カルボニル、アルコキシカルボニル、シアノ、ハロゲン、イソインドール−１，３−ジオニル、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボキシアミニル  ビス−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボキシ）アミニル、および式ＩＩまたは式ＩＩＩによる残基からなる群から選択される１種の残基を表す
【化２】
2013530191.tif 000014
（式中、
Ｂは、式Ｉの化合物であり、
Ｒ１は、水素、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ＳＨ、またはＨａｌであり、
Ｒ２は、水素、メトキシ、エトキシ、アセチレン、シアノ、ＳＨ、またはＨａｌであり、
Ｒ３、Ｒ４は、独立に、水素、ＳＨ、またはＨａｌから選択され、
Ｈａｌは、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、またはＩである）］
式ＩＶの化合物を、
【化３】
2013530191.tif 000015
（式中、環系は、４〜８員のシクロアルキルであり、Ｒは、先に記載した通りである）
不活性雰囲気下で溶媒混合物中に事前に入れておき、ジヒドロキシル化混合物を添加し、反応容器を冷却することを特徴とする方法。
【請求項２】
前記ｃｉｓ−１，２−ジオールが、式Ｖ
【化４】
2013530191.tif 000016
の化合物（式中、Ｒは、請求項１に記載した通りである）であることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ｃｉｓ−１，２−ジオールが、２−（（１Ｒ，２Ｓ，３Ｒ）−２，３−ジヒドロキシ−シクロへキシル）−イソインドール−１，３−ジオンであることを特徴とする、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記ｃｉｓ−１，２−ジオールが、式ＶＩＩの化合物、
【化５】
2013530191.tif 000017
（式中、
Ｘは、ＮＨまたはＯであり、
Ｒ１は、水素、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ＳＨ、またはＨａｌであり、
Ｒ２は、水素、メトキシ、エトキシ、アセチレン、シアノ、ＳＨ、またはＨａｌであり、
Ｒ３、Ｒ４は、独立に、水素、ＳＨ、またはＨａｌから選択され、
Ｈａｌは、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、またはＩである）
または薬学的に許容されるその塩、立体異性体、もしくは互変異性体（あらゆる比でのそれらの混合物を含む）であることを特徴とする、請求項１または２に記載の方法。
【請求項５】
前記ｃｉｓ−１，２−ジオールが、Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ，３Ｒ）−２，３−ジヒドロキシ−シクロへキシル）−３−（２−フルオロ−４−ヨード−フェニルアミノ）−イソニコチンアミド、２−クロロ−Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ，３Ｒ）−２，３−ジヒドロキシ−シクロへキシル）−５−（２−フルオロ−４−ヨード−フェニルアミノ）−イソニコチンアミド、Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ，３Ｒ）−２，３−ジヒドロキシ−シクロへキシル）−３−（２−フルオロ−４−ヨード−フェニルアミノ）−イソニコチンアミド、３−（４−ブロモ−２−フルオロ−フェニルアミノ）−Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ，３Ｒ）−２，３−ジヒドロキシ−シクロへキシル）−イソニコチンアミド、およびＮ−（（１Ｒ，２Ｓ，３Ｒ）−２，３−ジヒドロキシ−シクロへキシル）−３−（２−フルオロ−フェニルアミノ）−イソニコチンアミド、または薬学的に許容されるその塩、立体異性体、もしくは互変異性体（あらゆる比でのそれらの混合物を含む）からなる群から選択されることを特徴とする、請求項１、２、または４の１項または複数に記載の方法。
【請求項６】
−５〜１０℃の温度で行われることを特徴とする、請求項１から５の１項または複数に記載の方法。
【請求項７】
−０．５〜０．５℃の温度で行われることを特徴とする、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
溶媒混合物が、ＥｔＯＡｃ／ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏからなることを特徴とする、請求項１から７の１項または複数に記載の方法。
【請求項９】
前記溶媒混合物が、３：３：０．６の比で使用されることを特徴とする、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
ジヒドロキシル化混合物が、ＲｕＣｌ３／ＣｅＣｌ３／ＮａＩＯ４であることを特徴とする、請求項１から９の１項または複数に記載の方法。
【請求項１１】
請求項１、６、７、８、９、および１０の１項または複数に記載の調製方法で調製される式Ｉの化合物。
【請求項１２】
請求項１、２、６、７、８、９、および１０の１項または複数に記載の調製方法で調製される式Ｖの化合物。
【請求項１３】
請求項１、３、６、７、８、９、および１０の１項または複数に記載の調製方法で調製される式ＶＩの化合物。
【請求項１４】
請求項１、２、４、６、７、８、９、および１０の１項または複数に記載の調製方法で調製される式ＶＩＩの化合物、または薬学的に許容されるその塩、立体異性体、もしくは互変異性体。
【請求項１５】
前記化合物が、Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ，３Ｒ）−２，３−ジヒドロキシ−シクロへキシル）−３−（２−フルオロ−４−ヨード−フェニルアミノ）−イソニコチンアミド、２−クロロ−Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ，３Ｒ）−２，３−ジヒドロキシ−シクロへキシル）−５−（２−フルオロ−４−ヨード−フェニルアミノ）−イソニコチンアミド、Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ，３Ｒ）−２，３−ジヒドロキシ−シクロへキシル）−３−（２−フルオロ−４−ヨード−フェニルアミノ）−イソニコチンアミド、３−（４−ブロモ−２−フルオロ−フェニルアミノ）−Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ，３Ｒ）−２，３−ジヒドロキシ−シクロへキシル）−イソニコチンアミド、およびＮ−（（１Ｒ，２Ｓ，３Ｒ）−２，３−ジヒドロキシ−シクロへキシル）−３−（２−フルオロ−フェニルアミノ）−イソニコチンアミド、または薬学的に許容されるその塩、立体異性体、もしくは互変異性体（あらゆる比でのそれらの混合物を含む）からなる群から選択されることを特徴とする、請求項１４に記載の化合物。
【請求項１６】
１種または複数の疾患または状態の治療および／または予防用の医薬品を調製するための、請求項１４または１５に記載の化合物の使用。
【請求項１７】
前記疾患が、癌、炎症、膵臓炎または腎疾患、疼痛、皮膚の良性過形成、再狭窄症、前立腺、脈管形成または血管形成に関する疾患、腫瘍血管新生、乾癬、湿疹、および強皮症から選択される皮膚疾患、糖尿病、糖尿病性網膜症、末熟児網膜症、加齢黄斑変性症、血管腫、グリオーマ、黒色腫、ならびにカポジ肉腫からなる群から選択される、請求項１６に記載の使用。
【請求項１８】
治療有効量の、請求項１４または１５に記載の１種または複数の化合物を含有することを特徴とする、医薬組成物。
【請求項１９】
生理学的に許容される添加剤、助剤、アジュバント、賦形剤、担体および請求項１４または１５に記載の化合物以外の薬学的に有効な薬剤からなる群から選択される１種または複数のさらなる化合物を含有することを特徴とする、請求項１８に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、式Ｉのｃｉｓ−１，２−ジオールの調製を、キログラムスケールにスケールアップすることに関する。
【０００２】
【化１】
2013530191.tif 000003
【０００３】
本発明は、好ましくは、化合物Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ，３Ｒ）−２，３−ジヒドロキシ−シクロへキシル）−３−（２−フルオロ−４−ヨード−フェニルアミノ）−イソニコチンアミドの調製を、キログラムスケールにスケールアップすることに関する。
【背景技術】
【０００４】
本発明の背景は、アルケンとも称されるオレフィンの、ｃｉｓ−１，２−ジオールへのジヒドロキシル化(dihydroxlation)を包含するものである。
【０００５】
元来、オレフィンは、四酸化オスミウムと反応させていたが、四酸化オスミウムは、毒性が高く、揮発性で、取扱いが困難である。また、触媒変形物(catalytic variant)(いわゆる、刊行物：ＶａｎＲｈｅｅｎｅｎ,Ｖ.ら、Ｔｅｔ.Ｌｅｔｔ.１９７６年、２３、１９７３〜１９７６頁に基づくＵｐｊｏｈｎ法)および低揮発性試薬(例えばＫ２ＯｓＯ２(ＯＨ)４)もあるが、ヒト使用の医薬品として使用する物質には容認できない製品汚染のリスクがある。
【０００６】
再酸化剤ＮａＩＯ４およびブレンステッド酸Ｈ２ＳＯ４またはルイス酸ＣｅＣｌ３を添加したＲｕＣｌ３からｉｎ  ｓｉｔｕ形成されるＲｕＯ４を使用する、Ｂ．Ｐｌｉｅｔｋｅｒの方法によって顕著な改善がもたらされた。可能な機構は、Ｐｌｉｅｔｋｅｒ  Ｂ.ら、Ｃｈｅｍ.２００４年、２、１１１６〜１１２４頁およびＰｌｉｅｔｋｅｒ  Ｂ.およびＭ.Ｎｉｇｇｅｍａｎｎ、Ｊ.Ｏｒｇ.Ｃｈｅｍ.、２００５年、７０、２４０２〜２４０５頁（非特許文献１）に論じられている。Ｐｌｉｅｔｋｅｒ法によれば、最初に、ＲｕＣｌ３、ＮａＩＯ４、およびＣｅＣｌ３からなるジヒドロキシル化混合物を溶媒混合物（比３：３：１の酢酸エチル、アセトニトリル、および水）中に導入し、冷却し、次いで、オレフィンを１回で添加する。さらに、反応は、非常に速く、高発熱性で、制御が困難であり、したがって、安全性、再現性、収率、および純度に関して危機的である。最後に、費用をかけて副生成物を除去しなければならない。
【０００７】
この方法をＮ−（（１Ｒ，２Ｓ，３Ｒ）−２，３−ジヒドロキシ−シクロへキシル）−３−（２−フルオロ−４−ヨード−フェニルアミノ）−イソニコチンアミドの調製に適用し、ミリモルスケールからモルスケールにスケールアップしようとした場合、実行可能性の限界にすぐに達してしまう。バッチが大きくなるにつれて、発熱はほとんど制御できなくなる。温度が４０℃以上に達すると、特に、引火性溶剤混合物に関して危機的である。これは収率の劇的な損失をまねき、副反応のグリコール開裂が優位になる。例えば、バッチ１ｇの実験では、生成物は６０％しか得られず、バッチ１００ｇでは、３０％しかない。発熱を制御するために、冷アセトンで−１０℃に冷却した場合でも、収率および純度は非常に低かった。したがって、Ｐｌｉｅｔｋｅｒ法は、ｃｉｓ−１,２−ジオールの大スケール調製には適用できない。したがって、従来技術の調製方法は、薬学的用途では容認できない汚染物を含む生成物を生じるか、または収率の劇的な損失および制御できない発熱をまねく。
【０００８】
本発明の目的は、記載の欠点を有さない、薬学用目的に特に使用されるｃｉｓ−１，２−ジオールをキログラムスケールで調製する方法を提供することであった。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】Ｐｌｉｅｔｋｅｒ  Ｂ.およびＭ.Ｎｉｇｇｅｍａｎｎ、Ｊ.Ｏｒｇ.Ｃｈｅｍ.、２００５年、７０、２４０２〜２４０５頁
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】式ＶＩの化合物のクロマトグラムを示す図である。
【図２】式ＶＩの化合物のＮＭＲを示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
発明の簡単な説明
本発明の実施形態は、式Ｉのｃｉｓ−１，２−ジオールをキログラムスケールで調製する方法であって、
【００１２】
【化２】
2013530191.tif 000004
【００１３】
［式中、環系は、４〜８員のシクロアルキルであり、Ｒは、水素、アルキル、アルコキシ、Ｏ−アセチル、カルボニル、アルコキシカルボニル、シアノ、ハロゲン、イソインドール−１，３−ジオニル、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボキシアミニル(butoxycaboxyaminyl)ビス−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボキシ）アミニル、および式ＩＩまたは式ＩＩＩによる残基からなる群から選択される１種の残基を表す
【００１４】
【化３】
2013530191.tif 000005
【００１５】
（式中、
Ｂは、式Ｉの化合物であり、
Ｒ１は、水素、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ＳＨ、またはＨａｌであり、
Ｒ２は、水素、メトキシ、エトキシ、アセチレン、シアノ、ＳＨ、またはＨａｌであり、
Ｒ３、Ｒ４は、独立に、水素、ＳＨ、またはＨａｌから選択され、
Ｈａｌは、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、またはＩである）］
式ＩＶの化合物
【００１６】
【化４】
2013530191.tif 000006
【００１７】
（式中、環系は、４〜８員のシクロアルキルであり、Ｒは、先に記載した通りである）
を、不活性雰囲気下で溶媒混合物中に事前に入れておき、ジヒドロキシル化混合物を添加し、反応容器を冷却することを特徴とする方法である。
【００１８】
本発明の別の一実施形態は、ｃｉｓ−１，２−ジオールが式Ｖ
【００１９】
【化５】
2013530191.tif 000007
【００２０】
（式中、Ｒは、先に記載した通りである）
の化合物であることを特徴とする本発明による方法である。
【００２１】
本発明の別の一実施形態は、ｃｉｓ−１，２−ジオールが２−（（１Ｒ，２Ｓ，３Ｒ）−２，３−ジヒドロキシ−シクロへキシル）−イソインドール−１，３−ジオン（式ＶＩの化合物を参照）であることを特徴とする本発明による方法である。
【００２２】
【化６】
2013530191.tif 000008
【００２３】
本発明の好ましい一実施形態は、ｃｉｓ−１，２−ジオールが、式ＶＩＩの化合物、
【００２４】
【化７】
2013530191.tif 000009
【００２５】
（式中、
Ｘは、ＮＨまたはＯであり、
Ｒ１は、水素、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ＳＨ、またはＨａｌであり、
Ｒ２は、水素、メトキシ、エトキシ、アセチレン、シアノ、ＳＨ、またはＨａｌであり、
Ｒ３、Ｒ４は、独立に、水素、ＳＨ、またはＨａｌから選択され、
Ｈａｌは、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、またはＩである）
または薬学的に許容されるその塩、立体異性体、もしくは互変異性体(あらゆる比でのそれらの混合物を含む)であることを特徴とする本発明による方法である。
【００２６】
本発明の特に好ましい一実施形態は、ｃｉｓ−１，２−ジオールまたは式ＶＩＩの化合物が、Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ，３Ｒ）−２，３−ジヒドロキシ−シクロへキシル）−３−（２−フルオロ−４−ヨード−フェニルアミノ）−イソニコチンアミド（式ＶＩＩＩの化合物を参照）、２−クロロ−Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ，３Ｒ）−２，３−ジヒドロキシ−シクロへキシル）−５−（２−フルオロ−４−ヨード−フェニルアミノ）−イソニコチンアミド（式ＩＸの化合物を参照）、Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ，３Ｒ）−２，３−ジヒドロキシ−シクロへキシル）−３−（２−フルオロ−４−ヨード−フェニルアミノ）−イソニコチンアミド（式Ｘの化合物を参照）、３−（４−ブロモ−２−フルオロ−フェニルアミノ）−Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ，３Ｒ）−２，３−ジヒドロキシ−シクロへキシル）−イソニコチンアミド（式ＸＩの化合物を参照）、およびＮ−（（１Ｒ，２Ｓ，３Ｒ）−２，３−ジヒドロキシ−シクロへキシル）−３−（２−フルオロ−フェニルアミノ）−イソニコチンアミド（式ＸＩＩの化合物を参照）、または薬学的に許容されるその塩、立体異性体、もしくは互変異性体（あらゆる比でのそれらの混合物を含む）からなる群から選択される化合物であることを特徴とする本発明の方法である。
【００２７】
【化８】
2013530191.tif 000010
【００２８】
本発明の別の一実施形態は、本発明による調製方法によって調製される、式Ｉ、Ｖ、ＶＩ、ＶＩＩ、ＶＩＩＩ、ＩＸ、Ｘ、ＸＩ、ＸＩＩの化合物、または薬学的に許容されるその塩、立体異性体、もしくは互変異性体(あらゆる比でのそれらの混合物を含む)である。
【００２９】
本発明の方法は、キログラムスケールでの環状オレフィンをジヒドロキシル化する効率的な方法である。本発明の方法は、驚くべきことに、従来技術の問題および危機的な欠点をすべて解決し、特に発熱に関して容易に制御することができ、さらに、反応をいつでも停止または中断して、高い安全性および再現性を導くことができる。さらに、本発明の方法は、高い収率および純度をもたらし、危機的な毒剤およびその汚染なしに進行して、高い安全性を導くものである。特に、本発明の方法は、高い収率および純度を伴ったキログラムスケールでの、安全で、容易で、かつコスト的に効果的な方法におけるｃｉｓ−１，２−ジオール、好ましくは薬学用製品に使用されるものの提供を初めて可能にするものである。
【００３０】
本発明の方法のさらなる利点は、副反応が抑えられること、ジヒドロキシル化混合物が常に活性状態にあること、ならびに必要な再酸化剤（例えばＮａＩＯ４）およびルイス酸(例えばＣｅＣｌ３)の量を著しく減らして、費用および生成物の汚染をより低くできることである。概して、本発明の方法は、大スケールで実施しても問題のない、高再現性の、ｃｉｓ−１，２−ジオールを調製する最初の方法である。
【００３１】
本発明は、Ｐｌｉｅｔｋｅｒ法の変形を提供するものであるが、ベンチスケールで適用可能なだけでなく、驚くべきことに、キログラム量を安全に高収率で合成することを可能にする。
【００３２】
驚くべきことに、最初に、出発材料を不活性雰囲気下で溶媒混合物中に導入し、混合物を冷却し、事前に調製したジヒドロキシル化混合物を少しずつ添加すると、高収率および高純度が得られる。
【００３３】
本発明の方法の収率は、６０〜１００％、好ましくは７０〜９０％、特に好ましくは７５〜８５％である。純度は、９０〜１００％、好ましくは９５〜１００％、特に好ましくは９９〜１００％である。
【００３４】
本発明による溶媒混合物は、ジクロロメタン、クロロベンゼン、テトラクロロメタン、２−メトキシ−２−メチルプロパン、２−イソプロポキシプロパン、シクロヘキサノン、アセトン、２−メチル−ペンタン−２−オン、２−メチル−テトラヒドロフラン、テトラヒドロフラン、酢酸エチルエステル、酢酸プロピルエステル、酢酸イソプロピルエステル、酢酸イソブチルエステル、アセトニトリル、および水からなる群から選択される２種以上の溶媒からなり、２−メチル−テトラヒドロフラン、酢酸エチルエステル、酢酸プロピルエステル、酢酸イソプロピルエステル、酢酸、イソブチルエステル、アセトニトリル、および水の混合物が好ましく、前記溶媒のうちの２〜４種の混合物が好ましく、３種の溶媒の混合物が特に好ましく、酢酸エチル、アセトニトリル、および水の、好ましくは、比が［２〜４］：［２〜４］：［０．１〜２］、特に好ましくは、比が［２．５〜３．５］：［２．５〜３．５］：［０．４〜１．２］、とりわけ比が３：３：０．６である混合物が好ましい。
【００３５】
出発材料と溶媒混合物とを含有している混合物を、−１０℃〜２０℃、好ましくは−５℃〜１０℃、特に好ましくは−１℃〜５℃、とりわけ−０．５℃〜０．５℃に冷却し、反応容器を冷却するものであり、本発明の方法は、−１０℃〜２０℃の温度、好ましくは−５℃〜１０℃の温度、特に好ましくは−１℃〜５℃の温度、とりわけ−０．５℃〜０．５℃の温度で行う。
【００３６】
好ましくは、出発材料と溶媒混合物とを含有している混合物を、不活性雰囲気、好ましくはアルゴンまたは窒素雰囲気、特に好ましくは窒素雰囲気に曝露させる。
【００３７】
本発明の方法は、ルイス酸促進型の二元金属ＲｕＣｌ３／ＮａＩＯ４再酸化系に基づくものである。本発明によるジヒドロキシル化混合物は、再酸化剤、触媒、および酸からなる。本発明による特に好ましいジヒドロキシル化混合物は、ＲｕＣｌ３／ＣｅＣｌ３／ＮａＩＯ４である。
【００３８】
本発明による適切な再酸化剤はＮａＩＯ４であるが、ＮａＩＯ４は適切な再酸化剤のほんの一例にすぎず、本発明は、この例に限定されるものではない。したがって、他の周知で適切な再酸化剤を本発明に従って使用することができる。
【００３９】
本発明による適切な触媒はＲｕＣｌ３であるが、ＲｕＣｌ３は適切な触媒のほんの一例にすぎず、本発明はこの例に限定されるものではない。したがって、他の周知で適切な触媒を本発明に従って使用することができる。
【００４０】
本発明による適切な酸は、ルイス酸またはブレンステッド酸である。本発明による適切なルイス酸は、ＬｉＣｌ、ＲｂＣｌ、ＦｅＣｌ３、ＦｅＣｌ２、ＳｒＣｌ２、ＮｉＣｌ２、ＣｏＣｌ２、ＺｎＣｌ２、およびＣｅＣｌ３からなる群から選択され、特に好ましくは、ＺｎＣｌ２、ＣｅＣｌ３、ＦｅＣｌ３、およびＦｅＣｌ２である。本発明によれば、ルイス酸の代わりに、ブレンステッド酸を使用することもできる。本発明による適切なブレンステッド(Bonsted)酸の例は、Ｈ２ＳＯ４、ＨＣｌ、ＮＨ４＋、またはＨＣＯ３−である。しかし、開示したルイス酸およびブレンステッド酸は、本発明による適切な酸のほんの一例にすぎず、本発明は、これらの例に限定されるものではなく、他の周知で適切なルイス酸およびブレンステッド酸を本発明に従って使用することができる。
【００４１】
ジヒドロキシル化混合物を、出発材料と溶媒混合物とを含有している混合物に、少しずつ、滴状、またはより急速に大量に、またはゆっくりと連続した流れで添加する。
【００４２】
Ｐｌｉｅｔｋｅｒによる方法の欠点は、ＮａＩＯ４が高価であること、その処分問題、およびＮａＩＯ４による薬学用製品の汚染である。本発明の方法によれば、再酸化剤、例えばＮａＩＯ４の量は、Ｐｌｉｅｔｋｅｒ法により必要とされる１．５Ｍの代わりに、１．２Ｍ、好ましくは１Ｍに減少させることができ、それによって、商品原価がより低くなり、廃物量がより少なくなり、安全性がより高くなるという利点がある。
【００４３】
本発明の方法によれば、酸、例えばルイス酸、例えばＣｅＣｌ３の量は、５〜１５ｍｏｌ％、好ましくは７〜１２ｍｏｌ％、特に好ましくは１０ｍｏｌ％に減少させることができ、Ｐｌｉｅｔｋｅｒ法よりもさらなる利点を備えている。
【００４４】
本発明の方法によれば、触媒、例えばＲｕＣｌ３の量は、０．１〜０．６ｍｏｌ％、好ましくは０．２〜０．４ｍｏｌ％、特に好ましくは０．２５〜０．３ｍｏｌ％である。
【００４５】
本発明によれば、「スケールアップ」という用語は、本発明によるｃｉｓ−１，２−ジオールの生成用反応条件の転換、実験室から産業での製造パイプラインに移すこと、すなわち、グラムスケールからキログラムスケールにすることを意味する。
【００４６】
ＭＥＫ阻害剤Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ，３Ｒ）−２，３−ジヒドロキシ−シクロへキシル）−３−（２−フルオロ−４−ヨード−フェニルアミノ）−イソニコチンアミドの調製によって例示される、式Ｉのｃｉｓ−１，２−ジオールの合成は、以下の反応式によってなされる。
【００４７】
【化９】
2013530191.tif 000011
【００４８】
したがって、上記スキームによれば、本発明は、溶媒混合物中に事前に入れておいた式ＸＩＩＩの抽出物を、ＲｕＣｌ３、ＮａＩＯ４、およびＣｅＣｌ３からなるジヒドロキシル化混合物の添加によるｃｉｓ−ヒドロキシル化によって、２−（（１Ｒ，２Ｓ，３Ｒ）−２，３−ジヒドロキシ−シクロへキシル）−イソインドール−１，３−ジオン（式ＶＩの化合物）に転化させる反応ステップ２のプロセス最適化に関する。
【００４９】
【化１０】
2013530191.tif 000012
【００５０】
ｃｉｓ−１，２−ジオールの合成に関するすべての反応ステップの後に、任意選択で、１種または複数の後処理および／または単離操作を続けることができる。適切な手順は、当技術分野において、例えば、Houben-Weyl、Methoden der organischen Chemie［有機化学の手法］、Georg-Thieme-Verlag、Stuttgartなどの標準的な作業から知られている。こうした手順の例としては、溶媒の蒸発、蒸留、結晶化、分別結晶化、抽出操作、洗浄操作、蒸解(digesting)操作、ろ過操作、例えばＨＰＬＣによるクロマトグラフィー、ならびに乾燥操作、特に真空および／または高温での乾燥操作が挙げられるが、それらに限定されるものではない。
【００５１】
上に例示した反応式による最終生成物はＮ−（（１Ｒ，２Ｓ，３Ｒ）−２，３−ジヒドロキシ−シクロへキシル）−３−（２−フルオロ−４−ヨード−フェニルアミノ）−イソニコチンアミドとして知られており、ＵＳＰＴＯに出願番号第６１／１３７，８５８号で特許出願されている。この特許出願は、しばしばＭＡＰキナーゼ経路と呼ばれるＲａｓ／Ｒａｆ／ＭＥＫ／ＥＲＫ経路の阻害剤として、式ＶＩＩのフェニルアミノイソニコチンアミド化合物を記載している。ＭＡＰＫは、マイトジェン活性化タンパク質キナーゼを表わしている。
【００５２】
Ｒａｓ／Ｒａｆ／ＭＥＫ／ＥＲＫ経路は、複数の細胞表面受容体から、遺伝子発現を調節する核の転写因子に信号を伝達する中枢信号変換経路である。この経路は、マイトジェン、サイトカイン、および成長因子によって刺激することができる(Steelmanら、Leukemia、2004年、18、189-218頁）。刺激および細胞型に応じて、この経路は信号を伝達することができ、その結果、アポトーシスまたは細胞周期の進行が防止または誘発される。Ｒａｓ／Ｒａｆ／ＭＥＫ／ＥＲＫ経路は、細胞増殖およびアポトーシス防止において重要な役割を果たすことが示されている。この経路の異常な活性化が、悪性形質転換された細胞において一般的に観察されている。ｒａｓ癌原遺伝子の増幅、および恒常的活性型Ｒａｓタンパク質の発現をまねく突然変異の活性化は、ヒトのすべての癌の約３０％において観察されている（Ｓｔｉｒｅｗａｌｔら、Ｂｌｏｏｄ、２００１年、９７、３５８９〜９５頁）。Ｒａｓの突然変異した発癌性型が、結腸癌の５０％および膵臓癌の＞９０％、ならびに多くの他のタイプの癌において見られる（Ｋｏｈｌら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、１９９３年、２６０、１８３４〜１８３７頁）。増殖および腫瘍形成へのＲａｓの効果が、不死細胞株において報告されている（ＭｃＣｕｂｒｅｙら、Ｉｎｔ  Ｊ  Ｏｎｃｏｌ、１９９５年、７、２９５３１０）。ｂＲａｆ突然変異が、悪性黒色腫の６０％超で確認された（Ｄａｖｉｅｓ，Ｈら、Ｎａｔｕｒｅ、２００２年、４１７、９４９〜９５４頁）。Ｒａｓで検出された突然変異が高レベルである場合、この経路は、治療介入の重要な標的であると前々から考えられていた（Ｃｈａｎｇら、Ｌｅｕｋｅｍｉａ、２００３年、１７、１２６３〜９３頁）。
【００５３】
Ｒａｓ／Ｒａｆ／ＭＥＫ／ＥＲＫ信号伝達経路は、ＮＦ−κＢ、ＣＲＥＢ、Ｅｔｓ−１、ＡＰ−１、およびｃ−Ｍｙｃを含む下流の転写因子標的を介する増殖を調節することができる。ＥＲＫは、Ｅｔｓ−１、ＡＰ−１、およびｃ−Ｍｙｃを直接リン酸化し、それによって、それらを活性化させることができる。あるいは、ＥＲＫは、下流のキナーゼ標的ＲＳＫをリン酸化および活性化することができ、次いで、ＣＲＥＢなどの転写因子をリン酸化および活性化する。これらの転写因子は、細胞周期の進行に重要な遺伝子、例えば、Ｃｄｋ’ｓ、サイクリン、成長因子、およびアポトーシス阻止に重要な遺伝子、例えば、抗アポトーシス性Ｂｃｌ−２およびサイトカインの発現を誘発する。全体としては、細胞を成長因子で処理するとＥＲＫが活性化され、その結果、増殖および、ある場合には、分化が生じる(Lewisら、Adv.Cancer Res、1998年、74、49-139頁)。ＭＥＫ遺伝子ファミリーは、ＭＥＫ１、ＭＥＫ２、ＭＥＫ３、ＭＥＫ４、およびＭＥＫ５の５個の遺伝子からなる。この二重特異性キナーゼのファミリーは、セリン／スレオニンおよびチロシンキナーゼ活性の両方を有する。ＭＥＫの構造は、アミノ末端の負の調節ドメインおよびカルボキシ末端のＭＡＰキナーゼ結合ドメインからなり、それはＥＲＫの結合および活性化に必要である。調節ＭＥＫ１ドメインの欠失は、恒常的ＭＥＫ１およびＥＲＫ活性化をまねく(Steelmanら、Leukemia、2004年、18、189-218頁)。
【００５４】
ＭＥＫ１は、分子量４４ｋＤａの３９３−アミノ酸タンパク質である(Crewsら、Science、1992年、258、478-80頁)。ＭＥＫ１は、胚発生期において穏やかに発現され、成人の組織において上昇し、脳組織において最も高水準で検出される。ＭＥＫ１は、活性化にＳ２１８およびＳ２２２のリン酸化を必要とし、これらの残基をアスパラギン酸（Ｄ）またはグルタミン酸（Ｅ）で置換すると、活性が増大し、ＮＩＨ３Ｔ３細胞中にフォーカスが形成される(Huangら、Mol Biol Cell、1995年、6、237-45頁)。初代細胞培養のＭＥＫ１の恒常的活性は老化を促進し、ｐ５３およびｐ１６ＩＮＫ４ａを誘発するが、不死化細胞またはｐ５３もしくはｐ１６ＩＮＫ４ａのいずれかを欠く細胞においては、逆のことが観察された(Linら、Genes Dev.、1998年、12、3008-3019頁)。ＭＥＫ１の恒常的活性は、ｐ３８  ＭＡＰＫ活性を負の方向に調節することによって、Ｆ−κκＢ転写を阻害する(Carterら、J Biol Chem、2000年、275、27858-64頁)。ＭＥＫの主な生理学的基質は、タンパク質のＥＲＫ(細胞外信号制御キナーゼ)またはＭＡＰＫ(マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ)ファミリーのメンバーである。ＭＥＫ１の異常発現が、多くの異なるタイプの癌において検出され、ＭＥＫ１の突然変異型が、線維芽細胞、造血細胞、および他の細胞型を形質転換する。
【００５５】
ＭＥＫ１が恒常的活性化すると、細胞が形質転換される。したがって、ＭＥＫ１は、増殖性および炎症性疾患における薬理学的介入のための有望な標的である(Leeら、Nature、1994年、372、739-746頁;Dudleyら、Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.、1995年、92、7686-7689頁）。
【００５６】
いくつかの研究において潜在的な治療上の利益を示す、ＭＥＫの有用な阻害剤が開発された。例えば、小分子ＭＥＫ阻害剤が、ヌードマウス異種移植片においてヒト腫瘍の成長を阻害することが示された(Yeh,T.ら、Proceedings of the American Association of Cancer Research、2004年、45、Abs 3889頁、およびLee,P.ら、Proceedings of the American Association of Cancer Research、2004年、45、Abs 3890頁)。ＭＥＫ阻害剤は臨床試験も行われている、すなわち、ＡＲＲＹ１４２８８６(Wallace,E.ら、Proceedings of the American Association of Cancer Research、2004年、45、Abs 3891頁;Adjei,A.A.ら、Journal of Clinical Oncology、2008年、26、2139-2146頁; Shannon,A.M.ら、Molecular Cancer Therapeutics、2007年、6、3414S-3415Sパート2)、ＰＤ−０３２５９０１(Swanton C、Johnston S、IDDB MEETING REPORT、2003年2月13日-1;Haura,E.B.ら、Molecular Cancer Therapeutics、2007年、6、3468S~3469Sパート2;LoRusso,P.A.ら、Molecular Cancer Therapeutics、2007年、6、3469S~3470Sパート2)、ＰＤ−１８４３５２(Waterhouseら、Proceedings of the American Society for Clinical Oncology、2003年、22、Abs 816頁)、ＸＬ−５１８(Johnston,S.、Molecular Cancer Therapeutics、2007年、6、3595S-3595Sパート2)、ＲＤＥＡ−１１９(2007年プレスリリース)、およびＲＤＥＡ−４３６(2008年プレスリリース)。
【００５７】
本発明による方法で調製される化合物の「薬学的に許容される塩」という用語は、従来の非毒性塩を指しており、それには、有機酸塩（例えば、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、マレイン酸塩、酒石酸塩、メタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ギ酸塩、トルエンスルホン酸塩）、無機酸塩（例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩）などの酸付加塩、またはアミノ酸（例えば、アルギニン、アスパラギン酸、グルタミン酸）との塩、またはアルカリ金属塩（例えば、ナトリウム塩、カリウム塩）およびアルカリ土類金属塩（例えば、カルシウム塩、マグネシウム塩）などの金属塩、アンモニウム塩、または有機塩基塩（例えば、トリメチルアミン塩、トリエチルアミン塩、ピリジン塩、ピコリン塩、ジシクロヘキシルアミン塩、Ν，Ν’−ジベンジルエチレンジアミン塩）が挙げられる。
【００５８】
本明細書では、「溶媒和物」という用語は、好ましくは、溶質および溶媒によって可変化学量論的に形成された複合体を指す。したがって、化合物の溶媒和物という用語は、化合物への不活性溶媒分子の、それらの相互引力のために形成される付加を意味するものと解釈する。本発明のためのこうした溶媒は、溶質の生物学的活性を妨害しない。好ましくは、使用する溶媒は、薬学的に許容される溶媒である。適切な薬学的に許容される溶媒の例としては、水、エタノール、および酢酸が挙げられるが、それらに限定されるものではない。最も好ましくは、使用される溶媒は、水である。溶媒和物は、例えば、一水和物、二水和物、またはアルコラートである。
【００５９】
本発明による方法で調製される化合物の生理学的に許容される塩はまた、本発明に従う単離および／または処理で得られ、酸または塩基を用いる記載の反応で得ることができる。
【００６０】
本発明による方法で調製される化合物の塩基は、酸を使用して、例えば、当量の塩基と酸とを、好ましくはエタノールなどの不活性溶媒中で反応させ、続いて、蒸発させることによって、関連する酸付加塩に転化させることができる。この反応に適した酸は、具体的には、生理学的に許容される塩を生じるものである。したがって、無機酸、例えば、硫酸、亜硫酸、ジチオン酸、硝酸、塩酸や臭化水素酸などのハロゲン化水素酸、例えばオルトリン酸などのリン酸、スルファミン酸、さらに、有機酸、具体的には、脂肪族、脂環式、芳香脂肪族、芳香族、または複素環式の一塩基または多塩基のカルボン酸、スルホン酸、または硫酸、例えば、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、ヘキサン酸、オクタン酸、デカン酸、ヘキサデカン酸、オクタデカン酸、ピバル酸、ジエチル酢酸、マロン酸、コハク酸、ピメリン酸、フマル酸、マレイン酸、乳酸、酒石酸、リンゴ酸、クエン酸、グルコン酸、アスコルビン酸、ニコチン酸、イソニコチン酸、メタンスルホン酸またはエタンスルホン酸、エタンジスルホン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、トリメトキシ安息香酸、アダマンタンカルボン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、グリコール酸、エンボン酸、クロロフェノキシ酢酸、アスパラギン酸、グルタミン酸、プロリン、グリオキシル酸、パルミチン酸、パラクロロフェノキシイソ酪酸、シクロヘキサンカルボン酸、グルコース１−リン酸、ナフタレンモノスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、またはラウリル硫酸を使用することが可能である。
【００６１】
生理学的に許容されない酸との塩、例えばピクリン酸塩を、本発明による化合物の単離および／または精製に使用することができる。
【００６２】
一方、本発明による方法で調製される化合物は、塩基（例えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸ナトリウム、または炭酸カリウム）を使用して、対応する金属塩、具体的には、アルカリ金属塩もしくはアルカリ土類金属塩、または対応するアンモニウム塩に転化させることができる。適切な塩はさらに、置換アンモニウム塩、例えば、ジメチル−、ジエチル−、およびジイソプロピルアンモニウム塩、モノエタノール−、ジエタノール−、およびジイソプロパノールアンモニウム塩、シクロヘキシル−およびジシクロヘキシルアンモニウム塩、ジベンジルエチレンジアンモニウム塩、さらに例えばアルギニンまたはリシンとの塩である。
【００６３】
所望により、本発明の化合物の遊離塩基は、分子中にさらなる酸性基がない限り、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸ナトリウム、または炭酸カリウムなどの強塩基で処理することによって、その塩から遊離させることができる。本発明の化合物が遊離酸基を有する場合には、塩基で処理することによって、同様に塩を形成することができる。適切な塩基は、アルカリ金属水酸化物、アルカリ土類金属水酸化物、または第一級、第二級、もしくは第三級アミンの形の有機塩基である。
【００６４】
本発明の化合物は、プロドラッグ化合物の形とすることができる。プロドラッグ形も本発明の範囲内である。「プロドラッグ化合物」は、例えば、各々が酵素的または無酵素的に行われる酸化、還元、加水分解などによって、生体内での生理学的条件下で本発明による生物学的活性化合物に転化される誘導体を意味する。プロドラッグの例は、本発明の化合物のアミノ基がアシル化、アルキル化、もしくはリン酸化された化合物、例えば、エイコサノイルアミノ、アラニルアミノ、ピバロイルオキシメチルアミノ、またはヒドロキシル基がアシル化、アルキル化、リン酸化、もしくはホウ酸エステルに転化された化合物、例えば、アセチルオキシ、パルミトイルオキシ、ピバロイルオキシ、スクシニルオキシ、フマリルオキシ、アラニルオキシ、またはカルボキシル基がエステル化もしくはアミド化された化合物、またはスルフヒドリル基が担体分子とジスルフィド架橋を形成した化合物、例えば、薬物を選択的に標的および／もしくは細胞の細胞質ゾルに送達するペプチドである。これらの化合物は、よく知られている方法に従って本発明の化合物から生成することができる。プロドラッグの他の例は、本発明の化合物のカルボキシラートが、例えば、アルキル−、アリール−、コリン−、アミノ、アシルオキシメチルエステル、リノレノイル−エステルに転化されている化合物である。本発明の化合物の代謝産物も、本発明の範囲内にある。
【００６５】
本発明の化合物またはそれらのプロドラッグの互変異性、例えば、ケト−エノール互変異性が起こる可能性がある場合、個々の形、例えば、ケトまたはエノール形は、別々に、および一緒になって任意の比の混合物として特許請求される。同じことが、立体異性体、例えば、鏡像異性体、異性体、配座異性体などにあてはまる。所望により、異性体を、当技術分野でよく知られている方法、例えば、液体クロマトグラフィーによって分離することができる。同じことが、例えば、キラル固定相を使用することによって、鏡像異性体に適用される。さらに、鏡像異性体は、それらをジアステレオマーに転化することによって単離することができる、すなわち、エナンチオマーとして純粋な補助化合物とカップリングさせ、続いて、得られたジアステレオマーを分離し、補助残基を開裂させることによって単離することができる。あるいは、本発明の化合物の任意の鏡像異性体を、光学的に純粋な出発材料を使用する立体選択的合成から得ることができる。
【００６６】
本発明による方法で調製した式ＶＩＩの化合物は、薬学的に許容される担体と共に、有効成分としての化合物、または薬学的に許容されるその塩、立体異性体、もしくは互変異性体（あらゆる比のそれらの混合物を含む）を含む医薬組成物の製剤に使用することができる。
【００６７】
「医薬組成物」は、１種または複数の有効成分、および担体を構成する１種または複数の不活性成分、ならびにそれらの成分のうちの任意の２種以上の組合せ、錯体、もしくは集合から、またはそれらの成分のうちの１種もしくは複数の解離から、またはそれらの成分のうちの１種もしくは複数の他のタイプの反応もしくは相互作用から直接または間接的に生じる任意の生成物を意味する。したがって、医薬組成物は、本発明による方法で調製される式ＶＩＩの化合物と薬学的に許容される担体との混合によって作製された任意の組成物を包含する。
【００６８】
医薬組成物はさらに、有効成分としての、本発明による方法で調製される式ＶＩＩのうちの１種もしくは複数の他の化合物、または他のＭＥＫ阻害剤、または本発明の化合物以外の他の薬学的に有効な薬剤を含むことができる。
【００６９】
医薬組成物としては、経口、直腸、局所、非経口(皮下、筋肉内、および静脈内を含む)、眼(眼内)、肺(鼻または頬吸入)、または経鼻投与に適した組成物が挙げられるが、任意の所与の場合における最適な経路は、治療する状態の性質および重さ、ならびに有効成分の性質に依存する。これらは、単位剤形として提供されることが好都合であり、製剤分野でよく知られている方法のいずれかによって調製することができる。
【００７０】
一実施形態では、本発明による方法で調製される式ＶＩＩの前記化合物は、上記の医薬組成物のうちの１種として、癌、例えば、脳腫瘍、肺癌、扁平上皮癌、膀胱癌、胃癌、膵臓癌、乳癌、頭部癌、頸部癌、腎癌、腎臓癌、卵巣癌、前立腺癌、結腸直腸癌、食道癌、精巣癌、婦人科癌、甲状腺癌、黒色腫、血液悪性腫瘍、例えば、急性骨髄性白血病、多発性骨髄腫、慢性骨髄性白血病（chronic myelogneous leukemia）、骨髄細胞白血病、または他のタイプの固形もしくは液状腫瘍などの治療に使用することができる。別の一実施形態では、前記医薬組成物は、非癌性過剰増殖性障害、例えば、皮膚の良性過形成（例えば乾癬）、再狭窄症、多発性嚢胞腎疾患、または前立腺（例えば良性前立腺肥大(ＢＰＨ)）の治療のためのものであり、また、炎症性および自己免疫性疾患、例えば、リウマチ性関節炎、クローン病、喘息、潰瘍性大腸炎、過敏性腸症候群、多発性硬化症、ループスエリテマトーデスなどの治療のためのものでもある。別の一実施形態では、前記医薬組成物は、ＭＥＫ／ＥＲＫ経路の上方調節を特徴とする遺伝的状態、例えば、コステロ症候群、ヌーナン症候群、心臓・顔・皮膚症候群などの治療のためのものである。
【００７１】
本発明はまた、哺乳動物におけるＭＥＫの過剰活性に係わる過剰増殖性疾患ならびにＭＥＫカスケードによりモジュレートされる疾患、または癌や炎症などの異常増殖により媒介される疾患の治療用の医薬品を調製するための本発明による方法で調製される式ＶＩＩの化合物の使用に関する。
【００７２】
本発明はまた、治療有効量の本発明の化合物、または薬学的に許容されるその塩、立体異性体、もしくは互変異性体、および薬学的に許容される担体を含む、哺乳動物における膵臓炎または腎疾患（腎疾患により誘発される増殖性糸球体腎炎および糖尿病を含む）または疼痛を治療するための本発明による方法で調製される式ＶＩＩの化合物または本発明による医薬組成物に関する。
【００７３】
本発明はまた、治療有効量の本発明の化合物、または薬学的に許容されるその塩、立体異性体、もしくは互変異性体（あらゆる比のそれらの混合物を含む）、および薬学的に許容される担体を含む、哺乳動物における未分化胚芽細胞着床(blastocyte implantation)を防止するための本発明による方法で調製される式ＶＩＩの化合物または本発明による医薬組成物に関する。
【００７４】
本発明はまた、治療有効量の本発明の化合物、または薬学的に許容されるその塩、立体異性体、もしくは互変異性体（あらゆる比のそれらの混合物を含む）、および薬学的に許容される担体を含む、哺乳動物における脈管形成または血管形成に関する疾患を治療するための本発明による方法で調製される式ＶＩＩの化合物または本発明による医薬組成物に関する。
【００７５】
一実施形態では、本発明による方法で調製される式ＶＩＩの前記化合物または本発明による医薬組成物は、腫瘍血管新生、リウマチ性関節炎などの慢性炎症性疾患、炎症性腸疾患、アテローム性動脈硬化症、乾癬、湿疹、および強皮症(sclerodema)などの皮膚疾患、糖尿病、糖尿病性網膜症、末熟児網膜症、加齢黄斑変性症、血管腫、グリオーマ、黒色腫、カポジ肉腫、ならびに卵巣癌、乳癌、肺癌、膵臓癌、前立腺癌、結腸癌、および類表皮癌からなる群から選択される疾患を治療するためのものである。
【００７６】
本発明はまた、ある量の本発明の化合物、または薬学的に許容されるその塩、立体異性体、もしくは互変異性体(あらゆる比のそれらの混合物を含む)を、有糸分裂阻害剤、アルキル化剤、代謝拮抗剤、挿入抗生物質、成長因子阻害剤、抗血管新生剤、細胞周期阻害剤、酵素阻害剤、トポイソメラーゼ阻害剤、生物学的応答調節剤、抗ホルモン、血管新生阻害剤、および抗アンドロゲン剤または免疫調節剤からなる群から選択されるある量の別の抗癌治療剤と組み合わせて含み、この化合物、またはその塩、立体異性体、もしくは互変異性体と、化学療法剤との量が一緒になって、異常細胞増殖を阻害するのに有効である、哺乳動物における異常細胞増殖を阻害するための本発明による方法で調製される式ＶＩＩの化合物または本発明による医薬組成物に関する。現在、当技術分野で多くの抗癌治療剤が知られている。一実施形態では、抗癌治療剤は、有糸分裂阻害剤、アルキル化剤、抗代謝剤、挿入抗生物質、成長因子阻害剤、細胞周期阻害剤、酵素、トポイソメラーゼ阻害剤、生物学的応答調節剤、抗ホルモン、血管新生阻害剤、および抗アンドロゲン剤からなる群から選択される化学療法剤である。別の一実施形態では、抗癌治療剤は、ベバシズマブ、ＣＤ４０−特異的抗体、ｃｈＴＮＴ−１／Ｂ、デノスマブ、ザノリムマブ、ＩＧＦ１Ｒ−特異的抗体、リンツズマブ、エドレコロマブ、ＷＸ  Ｇ２５０、リツキシマブ、チシリムマブ、トラスツズマブ、およびセツキシマブからなる群から選択される抗体である。
【００７７】
本発明はさらに、哺乳動物における異常細胞増殖を阻害し、または過剰増殖性障害を治療する方法であって、ある量の本発明による方法で調製される式ＶＩＩの化合物、または薬学的に許容されるその塩、立体異性体、もしくは互変異性体を、放射線療法と組み合わせて、哺乳動物に投与するステップを含み、この化合物、薬学的に許容されるその塩、立体異性体、または互変異性体の量が、放射線療法と組み合わせて、哺乳動物における異常細胞増殖を阻害し、または過剰増殖性障害を治療するのに有効である方法に関する。放射線療法を施す技術は当技術分野で周知であり、これらの技術は本明細書に記載の併用療法に使用することができる。この併用療法における本発明の化合物の投与は、本明細書に記載のように決定することができる。本発明の化合物は、異常細胞の増殖を阻害および／または殺すために、こうした細胞を放射線での治療により感受性にすることができると考えられる。
【００７８】
したがって、本発明はさらに、哺乳動物における異常細胞を放射線での治療に感受性にする方法であって、ある量の本発明による方法で調製される式ＶＩＩの化合物、または薬学的に許容されるその塩、立体異性体、もしくは互変異性体を哺乳動物に投与するステップを含み、その量が、異常細胞を放射線での治療に感受性にするのに有効である方法に関する。この方法における化合物、塩、立体異性体、または互変異性体の量は、本明細書に記載のこうした化合物の有効量を確認するための手段に従って決定することができる。本発明はまた、哺乳動物における異常細胞増殖を阻害する方法であって、ある量の本発明による方法で調製される式ＶＩＩの化合物、または薬学的に許容されるその塩、立体異性体、互変異性体、もしくは同位体標識した誘導体、ならびに抗血管形成剤、信号伝達阻害剤、および抗増殖剤から選択されるある量の１種または複数の物質を含む方法に関する。
【００７９】
実際の使用では、本発明の化合物を有効成分として、従来の製剤調合技術に従って薬学的担体と組み合わせて緊密混合することができる。担体は、投与、例えば、経口または非経口（静脈内を含む）に望まれる製剤形に応じて、多種多様な形状を取ることができる。経口剤形の組成物の調製では、例えば、水、グリコール、オイル、アルコール、香味剤、防腐剤、着色剤などの通常の薬学的媒体のうちのどれでも使用することができる。経口液状製剤の場合、任意の通常の薬学的媒体、例えば、懸濁液、エリキシル、および溶液など；または担体、例えば、デンプン、糖、微結晶性セルロース、賦形剤(diluent)、顆粒化剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤などを使用することができる。経口固形製剤の場合、組成物は、例えば、散剤、硬および軟カプセル剤、ならびに錠剤などの形状を取ることができ、固形経口製剤が、液状製剤よりも好ましい。
【００８０】
その投与の容易性故に、錠剤およびカプセル剤が最も有利な経口投与単位形であり、その場合、明らかに固形の薬学的担体が使用される。所望により、錠剤は、標準的な水性または非水性技術によって被覆することができる。こうした組成物および製剤は、少なくとも０．１％の活性化合物を含有するべきである。これらの組成物中の活性化合物の百分率はもちろん変えることができ、単位の重量の約２％〜約６０％が好都合である。こうした治療に有用な組成物中の活性化合物の量は、有効投与量が得られるような量である。活性化合物はまた、例えば液状ドロップ剤またはスプレー剤として、鼻腔内投与することができる。
【００８１】
錠剤、丸剤、カプセル剤などはまた、結合剤、例えば、トラガカントゴム、アカシア、トウモロコシデンプン、またはゼラチンなど；添加剤(excipient)、例えば、リン酸二カルシウムなど；崩壊剤、例えば、トウモロコシデンプン、ジャガイモデンプン、アルギン酸など；滑沢剤、例えば、ステアリン酸マグネシウムなど；および甘味剤、例えば、スクロース、ラクトース、またはサッカリンなどを含有することができる。投与単位形がカプセル剤である場合、前記タイプの材料に加えて、脂肪油などの液状担体を含有することができる。
【００８２】
様々な他の材料が、被覆物として、または投与単位の物理的形態を変化させるために存在することができる。例えば、錠剤を、シェラック、糖、またはその両方で被覆することができる。シロップまたはエリキシル剤は、有効成分に加えて、甘味剤としてのスクロース、防腐剤としてのメチルおよびプロピルパラベン、染料、ならびにチェリーまたはオレンジフレーバーなどのフレーバー付与剤を含有することができる。
【００８３】
本発明の化合物はまた、非経口的に投与することができる。これらの活性化合物の溶液または懸濁液は、ヒドロキシ−プロピルセルロースなどの界面活性剤と適切に混合された水中で調製することができる。分散液はまた、グリセロール中で、液状ポリエチレングリコール中で、およびオイル中のそれらの混合物の中で調製することができる。貯蔵および使用の一般的条件下では、これらの製剤は、微生物の成長を防止するために防腐剤を含有する。
【００８４】
注射用途に適した薬学的形態としては、滅菌注射用溶液または分散剤、および滅菌水溶液または分散液の即時調製のための滅菌粉末が挙げられる。すべての場合、形態は滅菌でなくてはならず、容易に注入できる程度まで流体でなくてはならない。これは、製造および貯蔵の条件下に安定でなくてはならず、細菌および真菌などの微生物の汚染作用に対して保護されなくてはならない。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液状ポリエチレングリコール）、それらの適切な混合物、および植物オイルを含有する溶媒または分散媒とすることができる。
【００８５】
哺乳動物、特にヒトに、有効用量の本発明の化合物を提供するために、任意の適切な投与経路を使用することができる。例えば、経口、直腸、局所、非経口、眼内、肺、鼻孔などを使用することができる。剤形としては、錠剤、トローチ剤、分散剤、懸濁剤、溶液剤、カプセル剤、クリーム剤、軟膏剤、エアゾール剤などが挙げられる。好ましくは、本発明の化合物は、経口投与される。
【００８６】
使用する有効成分の有効投与量は、使用する特定の化合物、投与様式、治療する状態、および治療する状態の重さに応じて変わり得る。こうした投与量は、当業者によって容易に確認することができる。
【００８７】
本発明の化合物が指示される癌、炎症、または他の増殖性疾患を治療または予防する場合、本発明の化合物を、動物の体重１ｋｇ当たり約０．０１ｍｇ〜約１００ｍｇの１日投与量で投与、好ましくは、１日１回の投与とすれば、一般に満足な結果が得られる。ほとんどの大型哺乳動物にとって、１日の全投与量は、約０．１ｍｇ〜約１０００ｍｇ、好ましくは約０．２ｍｇ〜約５０ｍｇである。７０ｋｇの成人の場合、１日の全用量は、一般に、約０．２ｍｇ〜約２００ｍｇである。この投与計画は、最適な治療効果を提供するために調整することができる。
【００８８】
本発明の別の一実施形態はまた、
ａ）治療有効量の本発明による方法で調製される式ＶＩＩの１種または複数の化合物と、
ｂ）本発明の化合物以外の、治療有効量の１種または複数の別の薬学的に有効な薬剤と
の別々のパケットからなるセット（キット）である。
【００８９】
セットは、適切な容器、例えば、箱、個々の瓶、袋またはアンプルを含む。このセットは、例えば、別々のアンプルを含み、各々は、有効量の本発明による方法で調製される式ＶＩＩの化合物、ならびに／または薬学的に許容されるその塩、立体異性体、および互変異性体（あらゆる比のそれらの混合物を含む）、ならびに有効量の別の医薬有効成分を、溶解または凍結乾燥された形で含有する。
【００９０】
本発明の別の一実施形態はまた、医薬組成物を調製する方法であって、本発明による方法で調製される式ＶＩＩの化合物のうちの１種または複数、ならびに固体、液体、または半流動体の添加剤、助剤、アジュバント、賦形剤、担体および本発明による化合物以外の薬学的に有効な薬剤からなる群から選択される１種または複数の化合物を、適切な剤形に転化させることを特徴とする方法である。
【００９１】
本発明の化合物は、適切な材料を使用して、上記および下記のスキームおよび例の手順に従って調製することができる。本発明の方法はさらに、以下の具体例によって例示される。スキームおよび例において別段の指示がない限り、変えたものは上述と同じ意味を有する。さらに、当技術分野における通常の技術と組み合わせて、本明細書に記載の手順を利用することによって、本明細書に特許請求している本発明のさらなる化合物を容易に調製することができる。しかし、例に示す化合物および方法が、本発明と考えられる唯一の種類を形成するものと解釈するべきではない。これらの例はさらに、本発明の化合物の調製のための詳細を説明する。以下の調製手順の条件およびプロセスの公知の変形形態を使用して、これらの化合物を調製し得ることを、当業者なら容易に理解されよう。
【００９２】
本化合物は、一般に、上述のものなどの薬学的に許容される塩の形で単離する。単離した塩に対応するアミン遊離塩基は、水溶液状の炭酸水素ナトリウム、炭酸ナトリウム、水酸化ナトリウム、および水酸化カリウムなどの適切な塩基を用いて中和し、遊離させたアミン遊離塩基を有機溶媒中に抽出し、続いて蒸発させることによって生成させることができる。この方法で単離したアミン遊離塩基は、有機溶媒中に溶解させ、続いて適切な酸を添加し、次に、蒸発、沈殿、または結晶化させることによって、別の薬学的に許容される塩にさらに転化させることができる。
【００９３】
例による詳細な説明は、本発明の範囲を限定すると解釈するべきではない。
【実施例】
【００９４】
例１−実験手順
機械的に撹拌しながら、アセトニトリル３６．０ｌ、酢酸エチル３６．０ｌ、および水２．０ｌの溶液の入っている乾燥済みの窒素パージした４００Ｌ容の反応器に、ラセミ体の２−シクロヘキサ−２−エニルイソインドール−１，３−ジオン４５４５．２ｇ(２０．０ｍｏｌ)を＋２℃で添加する。次いで、事前調製した酸化試薬混合物［メタ過ヨウ素酸ナトリウム１２８０．０ｇ(６．０ｍｏｌ)を水１４００ｍｌ中に懸濁させ、塩化セシウム(ＩＩＩ)七水和物１８６．０ｇ(０．３７ｍｏｌ)を添加し、混合物を２分間撹拌する。次いで、塩化ルテニウム(ＩＩＩ)の５％水溶液６０．０ｍｌ(１４．４ｍｏｌ)を添加し、混合物をさらに１分間撹拌する］を、迅速に添加する。この添加中に、温度は＋４℃に上昇する。混合物を０℃でさらに１時間撹拌する。この操作をさらに３回繰り返す。反応温度は、それぞれ＋４．５℃、＋４．５℃、および＋５．０℃に上昇する。試薬の消費は、合計で、ＮａＩＯ４５１２０ｇ(２３．９４ｍｏｌ)、Ｃｅ(ＩＩＩ)Ｃｌ３・７Ｈ２Ｏ７４４．０ｇ(２．０ｍｏｌ)、およびＲｕ(ＩＩＩ)Ｃｌ３／５％２４０．０ｍｌ(５７．８５ｍｍｏｌ)である。転化は、２０％から、４２％、６０％を経て、８０％に増加し、最後に、ＨＰＬＣによって５％未満のオレフィンを検出する。添加完了後、反応混合物を１時間にわたって１５℃に暖める。酢酸エチル２００ｌおよび水５０ｌを添加して、引き続いて懸濁液にし、次いで、撹拌する。有機相を分離した後、水性相を酢酸エチル１０ｌで洗浄する。有機相を一緒にし、毎回、水５０ｌで３回、続いて、毎回、亜硫酸ナトリウム希釈溶液２０ｌで２回、最後に、毎回、水１０ｌでさらに３回洗浄する。１２時間後、有機懸濁液を体積１５ｌに濃縮し、氷中で２時間冷却し、吸引ろ過し、２−メトキシ−２−メチルプロパン３ｌですすいで、白色結晶として、融点２２１〜２２２℃のｒａｃ−［（１Ｒ，２Ｓ，３Ｒ−１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ）−２，３−ジヒドロキシシクロヘキシル］イソインドール−１，３−ジオン４２７０ｇ(収率８２％)を得る；
１Ｈ−ＮＭＲ（δ，ｐｐｍ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：７．８７−７．８１(４Ｈ，ｍ)、４．７８(１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ)、４．５０(１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．９Ｈｚ)、４．３０(１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝１２．６，１０．６，３．９Ｈｚ)、４．０６(１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝１０．６，５．８，２．８Ｈｚ)、３．９５(１Ｈ，ｍ)、２．０２(１Ｈ，ｍ)、１．７８−１．６０(３Ｈ，ｍ)、１．４９−１．３９(２Ｈ，ｍ)  ＭＳ（ＥＩ）：ｍ／ｅ  ２６１。
【００９５】
例２−生物学的活性試験
２．１ＭＥＫ−１酵素アッセイ（ＬＡＮＣＥ−ＨＴＲＦ）
本発明の化合物の活性は、次の手順によって決定することができる：ヒトＭＥＫ１キナーゼ活性の阻害を、均一な蛍光系アッセイでモニターした。このアッセイは、ＭＥＫ１によるＥＲＫ１のリン酸化に関するプローブへの時間分解蛍光共鳴エネルギー転移を使用する。このアッセイは、低体積９６ウェルマイクロタイタープレートで実施する。合計体積１５μｌにおいて、化合物を、２０ｍＭのＴＲＩＳ／ＨＣｌ、１０ｍＭのＭｇＣｌ２、１００μΜのＮａＶＯ４、１ｍＭのＤＴＴ、および０．００５％Ｔｗｅｅｎ２０(ｐＨ７．４)を含有する緩衝液を用いて、１００ｎＭのＭＥＫ１、１５μＭのＡＴＰ、および３００ｎＭのＥＲＫ２と共にインキュベートする。２時間後、５０ｍＭのＥＤＴＡおよび０．０５％ＢＳＡを含有する緩衝液中の５ｎＭのユウロピウム−抗−ＰＹ２０(Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ製)および５０ｎＭの抗−ＧＳＴ−アロフィコシアニン(ＣｉｓＢｉｏ製)を添加し、反応物を暗所で１時間インキュベートする。時間分解した蛍光を、励起波長３４０ｎｍおよび発光波長６６５ｎｍとしてＬＪＬ−Ａｎａｌｙｓｔ(Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ製)を使用して測定する。ＤＭＳＯの最終濃度は２％である。化合物の阻害ポテンシャルを評価するのに、ＩＣ５０値を決定する。
【００９６】
２．２腫瘍細胞増殖アッセイ（ＡＴＰ  Ｌｉｔｅ）
ネズミ結腸Ｃ２６、ヒト黒色腫Ａ３７５、およびヒト膵臓のＭｉａＰａＣａ−２細胞を、９６ウェルコーニングホワイトプレート(Ｃ２６に関しては１５００細胞／ウェル、ならびにＡ３７５およびＭｉａＰａＣａ−２に関しては２０００細胞／ウェル)に播き、５％ＣＯ２中で３７℃で一晩培養する。阻害剤を１００％ＤＭＳＯ中に連続的に希釈し、続いて、細胞に添加して、最終濃度を０．２５％ＤＭＳＯとする。細胞成長培地(Ｃ２６およびＭｉａＰａＣａ−２に関しては、１０％ウシ胎児血清および２ｍＭのグルタミンを含むＤＭＥＭ、Ａ３７５に関しては、１０％ウシ胎児血清および２ｍＭのグルタミンを含むＲＰＭＩ)において、試験化合物の存在下、細胞を４日間インキュベートする。細胞増殖を、ＡＴＰ  ｌｉｔｅ細胞増殖キット（Ｐａｃｋａｒｄ製）を使用して定量化する。
【００９７】
２．３  ｉｎ  ｖｉｖｏ効能研究（マウス異種移植モデル）
雄ヌード(ｎｕ／ｎｕ)マウスに、Ｃｏｌｏ−２０５、Ａ３７５、またはＭｉａＰａＣａ２などのヒト腫瘍細胞株のある数の細胞を、右前肢の上部に皮下注射する。細胞を移植してから１週間後、腫瘍をカリパスを用いて測定する。腫瘍の長さ(ｌ)および幅(ｗ)を測定し、腫瘍体積を式ｌ＊ｗ２／２で計算する。動物を、各群の平均腫瘍体積が１５０〜２００ｍｍ３となるようにいくつかの群に仕分けし、化合物での処理を開始する(０日目と表示)。０、４、６、８、１０、１２、および１４日目に、各動物について腫瘍体積および体重を測定する。腫瘍体積および体重％を、二元配置反復測定分散分析(ＲＭ−ＡＮＯＶＡ)、続いて、処理群平均のＦｉｓｈｅｒのポストホック多重ペアワイズ比較により分析する。
【００９８】
図１：測定条件
方法：
流量：２ｍｌ／分
勾配：９５％Ａ→５％Ａ
溶出液Ａ：水＋０．３％トリフルオロ酢酸
溶出液Ｂ：アセトニトリル＋０．３％トリフルオロ酢酸＋０．１％水
検出：波長２２０ｎｍ
カラム：Ｃｈｒｏｍｏｌｉｔｈ  ＳｐｅｅｄＲＯＤ（ＲＰ−１８ｅ、５０−４．６ｍｍ）
【図１】
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【図２】
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【国際調査報告】
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