(57)【要約】  化学療法薬と、TGF-βアンチセンスオリゴヌクレオチドとを含む医薬組成物であって、アンチセンスオリゴヌクレオチドが、化学療法薬の細胞傷害性の感受性およびIC5Oをそれぞれ低下させる、医薬組成物。好ましくは、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、TGF-β1、2および/または3アンチセンスオリゴヌクレオチドであり、化学療法薬は、好ましくは、ゲムシタビン、5-フルオロウラシル、テモゾロミド、ダカルバジン(dacarbacine)、ドセタキセル、シスプラチン、オキサリプラチン、タモキシフェンまたはイリノテカンである。【特許請求の範囲】
【請求項１】
化学療法薬と、TGF-βアンチセンスオリゴヌクレオチドとを含む医薬組成物であって、アンチセンスオリゴヌクレオチドが、化学療法薬の細胞傷害性のIC50を低下させる医薬組成物。
【請求項２】
TGF-βアンチセンスオリゴヌクレオチドが、化学療法薬のIC50を5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%または95%低下させる、請求項1に記載の医薬組成物。
【請求項３】
化学療法薬が、ゲムシタビン、5-フルオロウラシル、テモゾロミド、ダカルバジン(dacarbacine)、ドセタキセル、シスプラチン、オキサリプラチン、タモキシフェンおよびイリノテカンからなる群から選択される、請求項1または2に記載の医薬組成物。
【請求項４】
アンチセンスオリゴヌクレオチドが、TGF-β2アンチセンスオリゴヌクレオチド、TGF-β1アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはTGF-β3アンチセンスオリゴヌクレオチドである、請求項1から3のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項５】
TGF-β2アンチセンスオリゴヌクレオチドが、配列番号22〜48からなる群から選択され、TGF-β1アンチセンスオリゴヌクレオチドが、配列番号1〜21からなる群から選択され、TGF-β3アンチセンスオリゴヌクレオチドが、配列番号49〜78からなる群から選択される、請求項4に記載の医薬組成物。
【請求項６】
医薬上許容される担体、増量剤、滑沢剤、希釈液、賦形剤、崩壊剤および/またはアジュバントをさらに含む、請求項1から5のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項７】
新生物性疾患の治療において使用するための、請求項1から6のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項８】
新生物性疾患が、膵臓癌、黒色腫、脳腫瘍、膀胱癌、腎癌、肺癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、結腸直腸癌、胃癌、子宮内膜癌、骨肉腫、筋肉腫、血液由来腫瘍、白血病、腫瘍転移、血管腫、聴神経腫瘍、神経線維腫、トラコーマ、化膿性肉芽腫(pyogenic, granulomas)、乾癬、星状細胞腫(astracytoma)、聴神経腫瘍、芽細胞腫、ユーイング腫瘍、頭蓋咽頭腫、上衣腫、髄芽細胞腫、神経膠腫、血管芽腫(hemangloblastoma)、ホジキン-リンパ腫、髄芽腫(medullablastoma)、白血病、中皮腫、神経芽腫、神経線維腫、非ホジキンリンパ腫、松果体腫、網膜芽細胞腫、肉腫、セミノーマ、トラコーマ、ウィルムス腫瘍、胆管癌腫、膀胱癌腫、脳腫瘍、乳癌、気管支原性肺癌、腎臓の癌腫、子宮頸癌、絨毛癌、嚢胞腺癌(cystadenocarcinome)、胚性(embrional)癌腫、上皮癌、食道癌、子宮頸癌腫、結腸癌腫、結腸直腸癌腫、子宮内膜癌、胆嚢癌、胃癌、頭部癌、肝臓癌腫、肺癌腫、髄様癌、頚部癌、非小細胞気管支原性肺癌/肺癌腫、卵巣癌、膵臓癌腫、乳頭癌、乳頭状腺癌、前立腺(prostata)癌、小腸癌腫、前立腺癌腫、直腸癌、腎細胞癌、皮膚癌、小細胞気管支原性肺癌/肺癌腫、扁平上皮癌、皮脂腺癌腫、精巣癌腫および子宮癌からなる群から選択される、請求項7に記載の医薬組成物。
【請求項９】
脳腫瘍が、神経膠腫、星状細胞腫、乏突起膠腫および退形成性乏突起星細胞腫(oligoastrozytoma)、膠芽腫、脳転移、骨髄腫または形質細胞腫である、請求項8に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
経口的に、静脈内に、頭蓋内に、腹腔内に、膀胱内に、非経口的に、局所的に、経皮的に、結膜下にまたは舌下に投与される、請求項7、8または9のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項１１】
化学療法薬およびアンチセンスオリゴヌクレオチドが、同時に、部分的に時間的に重複して、または時間的に別個に投与される、請求項7、8、9または10のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項１２】
請求項1から7のいずれかに記載の医薬組成物を調製する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、化学療法薬およびアンチセンスオリゴヌクレオチド、好ましくは、TGF-βアンチセンスオリゴヌクレオチドまたはTGF-β系の任意の阻害剤を含む医薬組成物に関し、ここで、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたは阻害剤は、化学療法薬の細胞傷害性のIC5Oを低下させ、ひいては、化学療法薬の有効性を増大する。本発明は、癌、好ましくは、膵臓癌、膀胱癌、神経膠腫、星状細胞腫、黒色腫、腎癌、肺癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、結腸直腸癌、胃癌、子宮内膜癌および骨肉腫などの新生物性疾患を治療するための医薬の調製のための医薬組成物の使用ならびにこのような医薬組成物を製造する方法をさらに対象とする。
【背景技術】
【０００２】
医薬の調製のための化学療法薬または放射線照射の使用は、手術に加えて、新生物性疾患の治療のための最も一般的な手段である。このような化学療法薬として、例えば、アルキル化剤、代謝拮抗物質または植物由来のアルカロイドがある。これらの化学療法薬および放射線照射の効果は、それぞれ、細胞増殖の非特異的阻害および細胞死の非特異的誘導であり、多数の重篤な副作用につながる。化学療法薬または放射線照射は、例えば、腫瘍細胞以外に、迅速に増殖する細胞、例えば、毛包、結腸粘膜細胞または免疫細胞、例えば、T-リンパ球、B-リンパ球、ナチュラルキラー細胞、顆粒球、マクロファージ、ミクログリア細胞ならびに骨髄のそれぞれの前駆体細胞の増殖を阻害する。多くの場合、癌を治療するための医薬の調製のための化学療法薬の使用および/または放射線照射の使用は、患者の生存、特に、生存期間中央値の延長において十分な結果につながらず、化学療法薬および/または放射線照射の重篤な副作用を強いられることもある。
【０００３】
Muramakiら、2008年には、クラステリンアンチセンスオリゴヌクレオチドの投与による、ゲムシタビン耐性ヒト膀胱癌細胞の化学増感が記載されている。ゲムシタビンの投与は、クラステリン発現、すなわち、sCLU-2発現レベルの発現を時間依存的にアップレギュレートし、これがゲムシタビンに対する細胞の耐性をもたらす傾向があることがわかっている。sCLU-2アンチセンスオリゴヌクレオチドは、増大したsCLU-2発現レベルを低下させ、ゲムシタビンに対する耐性細胞を化学増感させ、効果を50%低減するゲムシタビンの濃度(IC50)が、100nMから10nMに低下した。
【０００４】
化学療法薬およびアンチセンスオリゴヌクレオチドの組合せは、さらにAlbertsら、2004年によって記載されている。Albertsらは、局所進行性または転移性膵臓腺癌の患者に対するゲムシタビンおよびISIS-2503、H-rasホスホロチオアートアンチセンスオリゴヌクレオチドの効果を調査した(H-rasは既知癌遺伝子である)。
【０００５】
WO2005/059133 A2は、抗悪性腫瘍化学療法薬と免疫系の刺激因子とを含む医薬組成物に言及し、これは、免疫系の刺激因子単独と比較して、神経膠腫細胞に対するリンホカイン活性化キラー細胞(LAK細胞)の細胞傷害性の増大につながった。
【０００６】
Paz-Aresら、2006年には、非小細胞肺癌を治療するための医薬の調製のためのゲムシタビン、シスプラチンおよびプロテインキナーゼC-αアンチセンスオリゴヌクレオチドの組合せの使用が開示されている。しかし、これらの化学療法薬のアンチセンスオリゴヌクレオチドとの組合せの使用は、非小細胞肺癌を患う患者の生存を増強せず、または任意のその他の正の効果を示さなかった。Belloneら、2006年によって記載される、膵臓癌腫を治療するためのゲムシタビンおよび5-フルオロウラシルの代替組合せも同様に失敗した。
【０００７】
WO02/17852 A2には、bcl-2アンチセンスオリゴヌクレオチドが患者に高用量で短期間、すなわち、14日間投与される、特定の投与用量でのbcl-2アンチセンスオリゴヌクレオチドと化学物質(chemoagent)との組合せが記載されている。記載される化学療法薬はアポトーシスの誘導物質であるので、Bcl-2は、アポトーシスの阻害剤である。bcl-2をアップレギュレートすることによって、腫瘍細胞は化学療法薬に対して耐性になる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】WO2005/059133 A2
【特許文献２】WO02/17852 A2
【特許文献３】米国特許第5,539,082号
【特許文献４】米国特許第5,714,331号
【特許文献５】米国特許第5,719,262号
【特許文献６】米国特許第4,469,863号
【特許文献７】米国特許第5,023,243号
【特許文献８】欧州特許番号第092,574号
【特許文献９】米国特許第5,075,109号
【特許文献１０】米国特許第4,452,775号
【特許文献１１】米国特許第4,675,189号
【特許文献１２】米国特許第5,736,152号
【特許文献１３】米国特許第3,854,480号
【特許文献１４】米国特許第5,133,974号
【特許文献１５】米国特許第5,407,686号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
したがって、本発明の根底にある目的とする問題は、新生物性疾患の治療における、特に非耐性細胞における、それぞれ化学療法薬およびこのような化学療法薬を含む医薬組成物の効率の改善である。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明は、一実施形態では、化学療法薬およびTGF-β系の阻害剤、好ましくは、アンチセンスオリゴヌクレオチド、例えば、抗腫瘍アンチセンスオリゴヌクレオチドを含む医薬組成物に言及し、ここで、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、驚くべきことに、化学療法薬の細胞傷害性に関して、化学療法薬の細胞傷害性のIC50の用量依存的な低減につながる。好ましいアンチセンスオリゴヌクレオチドとして、TGF-β1、TGF-β2またはTGF-β3アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはそれらの組合せのようなTGF-βアンチセンスオリゴヌクレオチドがあり、これらは、TGF-β1、-2および/または-3をコードするメッセンジャーRNA(m-RNA)および/またはDNAの領域とハイブリダイズし、またはTGF-β1、-2および/または-3受容体をコードするm-RNAおよび/またはDNAとハイブリダイズする。
【００１１】
さらに、TGF-β系の阻害剤は、例えば、抗体ではないTGF-β結合タンパク質、TGF-β結合受容体、TGF-β結合受容体の一部、TGF-β特異的ペプチドおよびTGF-βと結合する低分子物質またはTGF-βの機能を阻害するそれらのタンパク質、受容体、受容体タンパク質の一部もしくは低分子物質のいずれかからなる群から選択される。
【００１２】
TGF-β系の阻害剤、例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、耐性または非耐性細胞、すなわち、化学療法薬に対して耐性であるか、非耐性である細胞において化学療法薬の細胞傷害性のIC50の低下をもたらす。
【００１３】
本発明の医薬組成物は、特に、癌のような新生物性疾患を治療するためのもの、および自己免疫疾患の治療のためのものである。医薬組成物は、新生物性疾患、好ましくは、癌を治療するための医薬の調製のために使用されることが好ましい。医薬組成物および/またはその化合物は、任意の投与形で調製され、当技術分野で公知の任意の投与経路で投与される。
【００１４】
医薬組成物は、癌のような新生物性疾患の第1選択の治療として、または放射線照射などの治療的処置の前、その後、それと組み合わせた第2、第3選択の治療として適している。
【００１５】
医薬組成物の化学療法薬およびTGF-β系の阻害剤、好ましくは、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、別個に、または1種の製剤中で一緒にのいずれかで投与される。2種以上の化学療法薬および/または2種以上のTGF-β系の阻害剤、例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチドが投与される場合には、化学療法薬および/またはアンチセンスオリゴヌクレオチドなどのTGF-β系の阻害剤は、別個に、または1種の製剤中で一緒に投与される。
【００１６】
好ましい実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドなどのTGF-β系の阻害剤の投与は、化学療法薬の投与に続くか、先行する、またはTGF-β系の阻害剤および化学療法薬は同時に投与される。
【００１７】
化学療法薬の細胞傷害性のIC50の低下のために、化学療法薬の有効性が増大され、好ましい実施形態では、化学療法薬の量および用量は、それぞれ、低減され、その結果、化学療法薬の重篤な負の副作用が低減することが有利である。
【００１８】
さらに好ましい実施形態では、本医薬組成物における化学療法薬およびTGF-β系の阻害剤、例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチドの組合せは、化合物の、それぞれ、超相加的および相乗的抗腫瘍効果に基づいて、有利な患者の寿命の延長につながる。
【００１９】
化学療法薬は、TGF-β系の阻害剤、例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチドとその標的の相互作用に悪影響を及ぼさないことが好ましい。
【００２０】
本発明はさらに、医薬組成物を製造する方法に関する。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
【図１】データ正規化後の用量依存的な、ゲムシタビンの細胞傷害性に関するIC50に対する、TGF-β2アンチセンスオリゴヌクレオチド、例えば、配列番号30の低減効果を示す図である。Hup-T3細胞、膵臓癌腫細胞株に、ゲムシタビンを、5μM、2μM、800nM、320nM、128nM、51.2nM、20.5nM、8.2nMまたは3.3nMの濃度で、0μM(■)、5μM(△)または10μM(▽)の濃度のTGF-β2アンチセンスオリゴヌクレオチドと組み合わせて加えた。10μMのTGF-β2アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ゲムシタビンのIC50を、0μM TGF-β2アンチセンスオリゴヌクレオチドと比較して約4〜5×低下させる。
【図２】データ正規化後の、Hup-T3細胞の増殖および生存率それぞれ、ならびにTGF-β2の分泌に対するゲムシタビンの効果を示す図である。5μM、500nM、50nM、5nM、0.5nMまたは0.05nMのゲムシタビンは、TGF-β2分泌に対して特定の影響、特に特定の阻害および/または刺激効果はない。TGF-β2分泌(■)の低減は、高ゲムシタビン濃度(△)では、ゲムシタビンの細胞傷害性効果のために低減する、細胞の増殖および生存率それぞれと相関する。
【図３】TGF-β2分泌に対するTGF-β2アンチセンスオリゴヌクレオチドの用量依存的阻害効果を示す図である。Hup-T3細胞に、TGF-β2アンチセンスオリゴヌクレオチド、例えば、配列番号30を、0μM(対照)、1μM、2.5μM、5μM、10μM、20μM、40μM、60μMまたは80μMの濃度で投与した。細胞にゲムシタビンは加えなかった。
【図４】ゲムシタビンが、TGF-β2アンチセンスオリゴヌクレオチドと、その標的との相互作用に影響を及ぼさず、したがって、アンチセンスオリゴヌクレオチドの、その標的に対する阻害効果に影響を及ぼさないことを実証する図である。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ゲムシタビン(2μM、800nM、320nM、128nM、51.2nM、20.5nM、8.2nM)の存在下で、TGF-β2分泌を用量依存的(0μM(■)、5μM(△)または10μM(●)TGF-β2アンチセンスオリゴヌクレオチド)に阻害した。高ゲムシタビン濃度では、Hup-T3細胞の増殖および生存率はそれぞれ低減し、ゲムシタビンは、TGF-β2分泌に、高ゲムシタビン濃度でゲムシタビンの細胞傷害性効果のために低減する、細胞の増殖および生存率それぞれの低減を介して間接的に影響を及ぼした。
【図５】データ正規化後の用量依存的な、テモゾロミドの細胞傷害性に関するIC50に対する、TGF-β2アンチセンスオリゴヌクレオチド、例えば、配列番号30の低減効果を示す図である。MEL-Juso細胞、黒色腫細胞株に、テモゾロミドを200μM、100μM、50μM、25μM、12.5μM、6.25μM、3.125μMまたは0μMの濃度で、0μM(■)、5μM(▲)または10μM(▼)の濃度のTGF-β2アンチセンスオリゴヌクレオチドと組み合わせて加えた。10μMのTGF-β2アンチセンスオリゴヌクレオチドは、テモゾロミドのIC50を、0μMのTGF-β2アンチセンスオリゴヌクレオチドと比較して約2×低下させた。
【図６】テモゾロミドの細胞傷害性に対するTGF-β2アンチセンスオリゴヌクレオチドの効果を実証する図である。A-172細胞、神経膠腫細胞株に、テモゾロミドをそれぞれ200μMおよび800μMの濃度で、単独または10μMのTGF-β2アンチセンスオリゴヌクレオチド、例えば、配列番号30と組み合わせて投与した。テモゾロミドと、TGF-β2アンチセンスオリゴヌクレオチドとの組合せは、テモゾロミドの細胞傷害性効果を、テモゾロミド単独と比較して約2〜3×大幅に増大した。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
本発明では、アンチセンスオリゴヌクレオチド、特に、TGF-β1アンチセンスオリゴヌクレオチド、TGF-β2アンチセンスオリゴヌクレオチドおよび/またはTGF-β3アンチセンスオリゴヌクレオチドなどのTGF-β系の阻害剤は、被験体の細胞、組織および/または臓器における化学療法薬の効率を増大する。好ましい実施形態では、このようなアンチセンスオリゴヌクレオチドは、化学療法薬と一緒の医薬組成物の一部であり、これでは、化学療法薬は、例えば、ゲムシタビン、5-フルオロウラシル、テモゾロミド、ダカルバシン(dacarbacine)、ドセタキセル、シスプラチン、オキサリプラチン、タモキシフェンまたはイリノテカンである。
【００２３】
本発明の医薬組成物は、任意の哺乳類における新生物性疾患の治療に適用可能である。哺乳類の例として、マウス、ラットおよびモルモットなどのげっ歯類をはじめとする実験動物;ウシ、ヒツジ、ブタおよびヤギ(oats)などの家畜;イヌおよびネコなどのペット動物;ならびにサル、類人猿およびヒトなどの霊長類が挙げられる。医薬組成物は、ヒト臨床的状況、特に、新生物性疾患を治療するために適用されることが最も好ましい。
【００２４】
本発明の一実施形態では、1種または複数の化学療法薬および1種または複数のアンチセンスオリゴヌクレオチドおよび/または細胞増殖を阻害する1種または複数のTGF-β系の阻害剤が、これらの成分のうち少なくとも2種を含む混合物を形成し、これでは、成分は、純粋な形態か、医薬上許容される担体、増量剤、滑沢剤、希釈液、賦形剤、崩壊剤(disintegrate)および/またはアジュバントと一緒のいずれかである。
【００２５】
本発明の別の実施形態では、1種または複数の化学療法薬およびアンチセンスオリゴヌクレオチドなどの1種または複数の阻害剤は、1種の医薬組成物中で分離している。医薬組成物は、これらの成分の各々を純粋な形態で、または医薬上許容される担体、増量剤、滑沢剤、希釈液、賦形剤、崩壊剤(disintegrate)および/またはアジュバントと一緒に含み、これでは、医薬上許容される担体、滑沢剤、希釈液、賦形剤、崩壊剤(disintegrate)および/またはアジュバント。
【００２６】
アンチセンスオリゴヌクレオチドは、化学療法薬の細胞傷害性のIC50を低下させ、ひいては、in vitro、ex vivoまたはin vivoで、化学療法薬に対する細胞、組織および/または臓器の感受性を増大する任意のTGF-βアンチセンスオリゴヌクレオチドであることが好ましい。このようなアンチセンスオリゴヌクレオチドは、例えば、プロスタグランジンE2(PGE、例えば、配列番号79〜89)、VEGF(例えば、配列番号90〜126)またはIL-10 (例えば、127〜146)に対するもの、および好ましくは、TGF-β1(例えば、配列番号1〜21)、TGF-β2(例えば、配列番号22〜48)、TGF-β3(例えば、配列番号49〜78)に対するものである。
【００２７】
抗腫瘍アンチセンスオリゴヌクレオチドは、腫瘍に影響を及ぼすオリゴヌクレオチドであり、これでは、抗腫瘍アンチセンスオリゴヌクレオチドは、腫瘍に直接的または間接的に影響を及ぼす。直接的な方法では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、例えば、腫瘍における生物学的因子であるタンパク質またはペプチドの転写および発現それぞれ、例えば、TGF-βの、特に、TGF-β2の産生を遮断する。間接的な方法では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、タンパク質またはペプチド、例えば、免疫細胞および/または免疫系の機能を誘導し、その結果、腫瘍細胞増殖を低減もしくは阻害し、および/または癌細胞の細胞死を誘導する因子の転写および/または発現に影響を及ぼす。
【００２８】
代替実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチド、特に、抗腫瘍アンチセンスオリゴヌクレオチドなどのTGF-β系の阻害剤は、腫瘍における毛細血管などの腫瘍形成および/または持続に関与している因子のシグナル伝達に影響を及ぼす、すなわち、シグナル伝達の増大または低減につながる。
【００２９】
免疫細胞は、例えば、T細胞、B細胞、NK細胞(ナチュラルキラー細胞)、NKT細胞(ナチュラルキラーT細胞)などのリンパ球細胞、好中球、好酸球、好塩基球などの顆粒球ならびに単球、マクロファージ、樹状細胞および肥満細胞などの単核細胞である。
【００３０】
本発明との関連で、TGF-β阻害剤は、TGF-βによって誘導される任意の効果が阻害されるという点で、TGF-βの機能を阻害する任意の物質、例えば、タンパク質、ペプチド、小分子である。
【００３１】
好ましい実施形態では、TGF-β阻害剤は、TGF-βの産生を阻害する物質、TGF-βと結合する物質および/またはTGF-βの機能をその活性化カスケードの下流で阻害する物質である。TGF-βアンタゴニストについてより詳細には、Wojtowicz-Praga(2003年)も参照のこと。
【００３２】
特に、TGF-β系の阻害剤は、TGF-β、特に、TGF-β1、-2および/または-3の発現または機能を阻害できる任意の物質である。阻害剤は、例えば、抗体ではないTGF-β結合タンパク質、TGF-β抗体、TGF-β結合受容体、TGF-β結合受容体の一部、TGF-β特異的ペプチドならびにTGF-βと結合する低分子物質またはTGF-βの発現および/もしくは機能を阻害するそれらのタンパク質、受容体、受容体タンパク質の一部もしくは低分子物質のいずれかからなる群から選択される。TGF-β系の阻害剤は、TGF-β系を阻害する有機または無機起源の約10kDa未満および約1Daを超える分子量を有することが好ましい。
【００３３】
さらに別の実施形態では、TGF-βの産生を阻害する物質は、ペプチド、100kDa未満のペプチドであり、ペプチドはTGF-βの一部、タンパク質、抗体ではないタンパク質および/または小分子、例えば、トラニラスト(N-[3,4-ジメトキシシンナモイル]-アントラニル酸)(Wilkenson,K.A.2000年)である。
【００３４】
一実施形態では、TGF-βの一部であるペプチドは、実施例9において示されるものの配列である。実施例9は、Mittl(1996年)にも公開されているTGF-β1、TGF-β2およびTGF-β3のアミノ酸配列を示す。
【００３５】
1つの好ましい実施形態では、ペプチドは、実施例9に記載されるTGF-β1、TGF-β2またはTGF-β3ペプチドの末端からカウントされる112個のアミノ酸を含む。それらのペプチドの開始は、RXXRモチーフの後であり、TGF-β1、TGF-β2またはTGF-β3ペプチドの末端の前で113個のアミノ酸で終了し、ここで、Rは、アミノ酸アルギニンであり、XXは、任意のアミノ酸またはアミノ酸がないことさえも表す。
【００３６】
一実施形態では、TGF-βの一部であるペプチドは、このペプチドの1個〜すべてのアミノ酸を含む実施例9に示される配列の一部であり、その他の実施形態では、好ましいペプチドは、それらのペプチドの約1〜100個のアミノ酸、約2〜50個のアミノ酸、約3〜30個のアミノ酸または約5〜20個のアミノ酸を含む。
【００３７】
さらにその他の実施形態では、好ましいアミノ酸は、それぞれの番号1〜78を有する、TGF-β1、TGF-β2およびTGF-β3について実施例7に示されるものである。
【００３８】
さらに好ましい実施形態は、約1〜50個のアミノ酸、約1〜40個、約2〜30個、約3〜25個、約4〜18個、約5〜15個または約6〜12個のアミノ酸を含む、またはからなる、上で記載されたアミノ酸の一部である。
【００３９】
上記のペプチドのさらにその他の実施形態では、ヒスチジン(H)、リシン(K)および/またはアルギニン(R)の群から選択される塩基性アミノ酸のうち少なくとも1個は、そのTGF-β拮抗効果を失うことなく、この群から選択される別の塩基性アミノ酸によって置換されている。
【００４０】
上記のペプチドのさらにその他の実施形態では、グルタミン酸(E)および/またはアスパラギン酸(D)の群から選択される酸性アミノ酸のうち少なくとも1個は、そのTGF-β拮抗効果を失うことなく、この群のその対応物によって置換されている。
【００４１】
一部のアミノ酸が、実施例9に示されるその配列と比較して保存的に置換されている、TGF-βの一部であるペプチドはまた、TGF-β1、TGF-β2および/またはTGF-β3の類似体と呼ばれる。
【００４２】
TGF-β1、TGF-β2およびTGF-β3の類似体における一部の実施形態では、アミノ酸の約1%〜約30%、約2%〜約20%、約3%〜約15%、4%〜約12%または約5%〜約10%が保存的に置換されている。
【００４３】
本発明との関連で、ペプチドの保存的類似体または活性誘導体とも呼ばれる保存的に置換されたアミノ酸は、ペプチドまたはタンパク質の少なくとも1個のアミノ酸を置換することを意味する。少なくとも1個の酸性アミノ酸(グルタミン酸(E)、アスパラギン酸(D))は、それぞれのその他の酸性アミノ酸によって置換され、それに沿って、少なくとも1個の塩基性アミノ酸が別の塩基性アミノ酸によって置換され、極性基(-OH、-SH、-CONH2)を有する少なくとも1個のアミノ酸が別の極性基を有するアミノ酸によって置換され、および/または純粋な炭素側鎖を有するアミノ酸が、別の純粋な炭素側鎖を有するアミノ酸によって置換されることが好ましい。アミノ酸で保存的に置換されたペプチドおよび/またはタンパク質は、依然として本発明の範囲中にある。
【００４４】
別の実施形態では、上記のペプチドは単独であり、化学療法薬との組合せにはない。さらに別の実施形態では、これらのペプチドは、医薬上許容される担体とともに医薬組成物を調製するために使用される。さらに別の実施形態では、これらのペプチドは、新生物性疾患の治療のための医薬組成物によって含まれ、さらに別の実施形態では、これらのペプチドは、新生物性疾患を治療する方法のために使用されるか、または本発明の新生物性疾患を治療するための医薬の調製のために使用される。新生物性疾患は、特に、膵臓癌、膀胱癌、脳腫瘍、黒色腫、腎癌、肺癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、結腸直腸癌、胃癌、子宮内膜癌、骨肉腫、筋肉腫、血液由来腫瘍、白血病、腫瘍転移、血管腫、聴神経腫瘍、神経線維腫、トラコーマ、化膿性肉芽腫、乾癬、星状細胞腫(astracytoma)、聴神経腫瘍、芽細胞腫、ユーイング腫瘍、頭蓋咽頭腫、上衣腫、髄芽細胞腫、神経膠腫、血液芽腫(hemangloblastoma)、ホジキン-リンパ腫、髄芽腫(medullablastoma)、白血病、中皮腫、神経芽腫、神経線維腫、非ホジキンリンパ腫、松果体腫、網膜芽細胞腫、肉腫、セミノーマ、トラコーマ、ウィルムス腫瘍、胆管癌腫、膀胱癌腫、脳腫瘍、乳癌、気管支原性肺癌、腎臓の癌腫、子宮頸癌、絨毛癌、嚢胞腺癌(cystadenocarcinome)、胚性癌腫(embrional carcinoma)、上皮癌、食道癌、子宮頸癌腫、結腸癌腫、結腸直腸癌腫、子宮内膜癌、胆嚢癌、胃癌、頭部癌、肝臓癌腫、肺癌腫、髄様癌、頚部癌、非小細胞気管支原性肺癌/肺癌腫、卵巣癌、膵臓癌腫、乳頭癌、乳頭状腺癌、前立腺(prostata)癌、小腸癌腫、前立腺癌腫、直腸癌、腎細胞癌、皮膚癌、小細胞気管支原性肺癌/肺癌腫、扁平上皮癌、皮脂腺癌腫、精巣癌腫および子宮癌などの癌または腫瘍である。脳腫瘍は、特に、乏突起膠腫、退形成性乏突起星細胞腫(anaplastic oligoastrozytoma)、膠芽腫、脳転移、骨髄腫、形質細胞腫、神経膠腫または星状細胞腫である。
【００４５】
さらに別の実施形態では、TGF-β阻害剤は、受容体および/またはその一部またはTGF-βと結合する抗体および/またはその一部またはTGF-βと結合し、そして、TGF-βの機能を阻害するタンパク質および/またはペプチドである。抗体は、例えば、市販されている、例えば、R & D Systems, Inc参照のこと。それらの抗体の製造は、当技術分野で周知である。例えば、ニワトリ、マウス、ウサギ、ヤギなどの動物を、精製ヒトTGF-βで免疫化し、これらの動物はTGF-βに対する抗体を産生する。抗体(例えば、IgY)は、例えば、Cooper,H.M.(1995年)によって記載されるように、例えば、アフィニティークロマトグラフィーを用いて精製され、場合により、さらに修飾される、例えば、ビオチン化される。より好ましい実施形態では、TGF-β抗体は、例えば、Carrington(1998年)によって記載されるヒト化抗体である。ペプチドの好ましい実施形態は、例えば、TGF-βの1種または複数または3種すべてのアイソフォーム(TGF-β1、TGF-β2およびTGF-β3)を阻害する潜伏期関連ペプチドである。
【００４６】
別の実施形態では、TGF-β阻害剤は、細胞外または細胞内で作用する、TGF-β受容体の機能を阻害するタンパク質、ペプチドまたは小分子である。ペプチドおよびタンパク質は、例えば、Merrifield合成またはFmoc合成などのペプチドおよびタンパク質合成の古典的方法に従って製造される。
【００４７】
代替実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチド、好ましくは、抗腫瘍アンチセンスオリゴヌクレオチドは、その標的メッセンジャーRNA(mRNA)および/またはDNAとハイブリダイズする。標的mRNAおよび/またはDNAは、癌などの新生物性疾患の形成に直接的または間接的に関与している任意のmRNAおよび/またはDNAである。好ましい実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、TGF-βアンチセンスオリゴヌクレオチド、例えば、TGF-β1、TGF-β2および/またはTGF-β3またはTGF-βのmRNAおよび/またはTGF-βをコードするDNAの領域とハイブリダイズし、ひいては、TGF-βの産生を阻害するその誘導体である。
【００４８】
用語「核酸」および「オリゴヌクレオチド」とは、リン酸基と、ならびに置換ピリミジン、例えば、シトシン(C)、チミン(T)もしくはウラシル(U)であるか、または置換プリン、例えば、アデニン(A)もしくはグアニン(G)またはそれらの修飾のいずれかである可変有機塩基と連結している、複数のヌクレオチド(すなわち、糖、例えば、リボースまたはデオキシリボースを含む分子)を指す。本明細書において用いられるように、この用語は、オリゴリボヌクレオチドならびにオリゴデオキシリボヌクレオチドを指す。この用語はまた、オリゴヌクレオシド(すなわち、リン酸を含まないオリゴヌクレオチド)および任意のその他の有機塩基含有ポリマーも含むべきである。核酸は、二本鎖または一本鎖である。二本鎖分子は、in vivoでより安定であるのに対し、一本鎖分子は、増大した活性を有する。一実施形態では、ヌクレオチドは、約6から約100ヌクレオチドの間の長さを有し、さらに別の実施形態では、ヌクレオチドは、約8から約40ヌクレオチド、それぞれ、約12から約32ヌクレオチドの長さを有する。
【００４９】
本明細書において用いられるように、核酸の連結している単位に関して、「連結している(linked)」または「連結(linkage)」とは、任意の物理化学的手段によって2つの実体が互いに結合していることを意味する。共有結合性、非共有結合性の当業者に公知の任意の連結が包含される。天然に接続している核酸の個々の単位において通常見られる天然の連結が最も一般的である。しかし、核酸の個々の単位は、合成によっても、修飾された連結によっても連結される。
【００５０】
一実施形態では、環状構造を形成するために、この直鎖ポリマー構造のそれぞれの末端がさらにつながれる。しかし、開放された直鎖構造が一般に好ましい。オリゴヌクレオチド構造内では、リン酸基は、通常、オリゴヌクレオチドのヌクレオシド間骨格を形成するといわれる。RNAおよびDNAの通常の連結または骨格は、3’から5’へのホスホジエステル連結である。
【００５１】
アンチセンスオリゴヌクレオチドまたは抗腫瘍アンチセンスオリゴヌクレオチドは、同様の機能を有する天然に存在しない部分を有するオリゴヌクレオチドを含む。このような修飾されたまたは置換されたオリゴヌクレオチドは、例えば、増強された細胞取り込み、核酸標的(例えば、タンパク質)に対する増強された親和性、変更された細胞内局在性およびヌクレアーゼの存在下での増大した安定性などの所望の特性のために、天然の形態を上回って好ましいことが多い。本明細書において用いられるように、オリゴヌクレオチドの修飾とは、糖、塩基部分および/またはヌクレオシド間連結の任意の化学修飾を含む。
【００５２】
一実施形態では、共有結合によって修飾された塩基および/または糖を含むオリゴヌクレオチドまたは抗腫瘍アンチセンスオリゴヌクレオチドは、例えば、3’および/または2’位でヒドロキシル基以外の、および5’位でリン酸基以外の低分子量有機基と共有結合によって結合している骨格糖を有するオリゴヌクレオチドを含む。したがって、修飾されたオリゴヌクレオチドは、例えば、2’-O-アルキル化リボース基を含む。さらに別の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、リボースの代わりにアラビノースなどの糖を含む。したがって、アンチセンスオリゴヌクレオチド、特に、抗腫瘍アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ペプチド-核酸(核酸塩基を含むアミノ酸骨格を有する)などの一緒に連結しているポリマー単位の任意の可能性ある組合せを含むか、または含有する骨格組成において不均一である。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、骨格組成において均一である。
【００５３】
オリゴヌクレオチドの置換プリンおよびピリミジンは、シトシンなどの標準プリンおよびピリミジンならびに置換塩基などの塩基類似体を含む(Wagnerら、1996年)。プリンおよびピリミジンとして、それだけには限らないが、アデニン、シトシン、グアニン、チミン、5-メチルシトシン、2-アミノプリン、2-アミノ-6-クロロプリン、2,6-ジアミノプリン、ヒポキサンチンならびにその他の天然に存在するおよび天然に存在しない核酸塩基、置換および非置換芳香族部分が挙げられる。
【００５４】
各オリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドポリマー中の単一のヌクレオチドは、同一の修飾を含有し、これらの修飾の組合せを含有するか、またはこれらの修飾をホスホジエステル連結と組み合わせる。オリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドポリマーをヌクレアーゼ耐性にする方法として、それだけには限らないが、プリンまたはピリミジン塩基を共有結合によって修飾することが挙げられる。例えば、塩基は、オリゴヌクレオチドもしくはポリヌクレオチドが実質的に酸性およびヌクレアーゼ耐性にされるように、メチル化、ヒドロキシメチル化されるか、または別の方法で置換される(例えば、グリコシル化される)。
【００５５】
好ましい実施形態では、オリゴヌクレオチド上の少なくとも1つの末端ブロックは、ビオチン、ビオチン類似体、アビジンまたはアビジン類似体である。これらの分子は、保護されたオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドの分解を阻止する能力を有し、修飾されたオリゴヌクレオチドと固相支持体との高親和性結合のための手段を提供する。例えば、本発明の試薬を調製するために使用されるアビジンおよびビオチン誘導体として、ストレプトアビジン、スクシニル化アビジン、単量体アビジン、ビオサイチン(ビオチン-ε-N-リシン)、ビオサイチンヒドラジド、2-イミノビオチンのアミンまたはスルフヒドリル誘導体およびビオチニル-ε-アミノカプロン酸ヒドラジドが挙げられる。さらなるビオチン誘導体、例えば、ビオチン-N-ヒドロキシスクシンイミドエステル、ビオチニル-ε-アミノカプロン酸-N-ヒドロキシスクシンイミドエステル、スルホスクシンイミジル6-(ビオチンアミド)ヘキサノアート、N-ヒドロキシスクシンイミドイミノビオチン、ビオチンブロモアセチルヒドラジド、p-ジアゾベンゾイルビオサイチンおよび3-(N-マレイミドプロピオニル)ビオサイチンも、本発明のポリヌクレオチド上の末端ブロック基として使用できる。
【００５６】
別の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチド中のヌクレオチドのリボース基の環構造は、N-H、N-R(Rは、アルキルまたはアリール置換基である)、Sおよび/またはメチレンで置換された環構造中に酸素を有する。
【００５７】
さらに別の実施形態では、適当な核酸標的化合物とのハイブリダイゼーションのために塩基単位は維持される。1つのこのようなオリゴマー化合物、優れたハイブリダイゼーション特性を有するとわかっているオリゴヌクレオチドミメティックは、例えば、ペプチド核酸(PNA)である。PNA化合物では、オリゴヌクレオチドの糖骨格は、アミド含有骨格、特に、アミノエチルグリシン骨格で置換されている。核酸塩基は、骨格のアミド部分のアザ窒素原子と直接的または間接的に結合している。PNA化合物の調製を教示する代表的な米国特許として、それだけには限らないが、米国特許第5,539,082号;同第5,714,331号および同第5,719,262号が挙げられる。PNA化合物のさらなる教示は、Nielsenら(1991年)に見い出すことができる。
【００５８】
さらに修飾されたオリゴヌクレオチド骨格として、例えば、ホスホロチオアート、キラルホスホロチオアート、ホスホロジチオアート、ホスホロトリエステル、アミノアルキルホスホロトリエステル、3’-アルキレンホホナート(phophonates)およびキラルホスホナートをはじめとするメチル-およびその他のアルキ-ホスホナート、ホスフィナート、3’-アミノホスホルアミダートおよびアミノアルキルホスホルアミダートをはじめとするホスホルアミダート、チオノホスホルアミダート、チオノアルキルホスホナート、チオノアルキルホスホトリエステルおよび標準の3’-5’連結を有するボラノホスフェート、これらの2’-5’連結した類似体およびヌクレオシド単位の隣接する対が、3’-5’から5’-3’または2’-5’から5’-2’に連結している反転した極性を有するものが挙げられる。種々の塩、混合塩および遊離酸性形態も含まれる。
【００５９】
さらなる実施形態では、オリゴヌクレオチドの少なくとも1つのヌクレオチドが、上記の修飾のうち1種に記載されるように修飾される。修飾は、オリゴヌクレオチドに連続してまたは不規則にのいずれかで及ぶ。
【００６０】
さらに別の実施形態では、1つのオリゴヌクレオチド内で、上記の少なくとも2種の修飾が組み合わされる。
【００６１】
別の実施形態では、オリゴヌクレオチドの3’および/または5’末端の1〜約12または1〜約8または1〜約4または1〜約2のオリゴヌクレオチドおよび/またはヌクレオチド連結が、上記のように修飾される。
【００６２】
一実施形態では、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、標的、例えば、TGF-βまたはそのサブタイプTGF-β1、TGF-β2、TGF-β3またはVEGF、IL-IOまたはPGEとハイブリダイズしている。
【００６３】
3’および/または5’末端の少なくとも一方に、好ましい実施形態では、2’および/または5’末端の少なくとも一方に、結合しているさらなるヌクレオチド、例えば、約1〜約1000のヌクレオチド、約1〜約500、約1〜約100、約1〜約50、約1〜約20、約1〜約10、約1〜約5または約1〜約2ヌクレオチドを含む配列表のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、依然、本発明の範囲内にある。
【００６４】
アンチセンスオリゴヌクレオチドは、当技術分野で周知のいくつかの手順のいずれかを使用してde novoで合成され、その結果、「合成アンチセンスオリゴヌクレオチド」が得られる。このような手順として、例えば、b-シアノエチルホスホルアミダイト法(Beaucageら1981年)またはヌクレオシドH-ホスホナート法(Gareggら1986年、Froehlerら1986年、Gareggら1986年、Gaffneyら1988年)がある。これらのアンチセンスオリゴヌクレオチドは、市場で入手可能なさまざまな自動化オリゴヌクレオチドシンセサイザーによって実施される。
【００６５】
あるいは、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、プラスミドにおいて大規模で製造され(例えば、Sambrookら1989年参照のこと)、小片に分離されるか、全体として投与される。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、既存の核酸配列(例えば、ゲノムまたはcDNA)から、制限酵素、エキソヌクレアーゼまたはエンドヌクレアーゼを使用するものなどの既知技術を使用して調製される。このように調製されたアンチセンスオリゴヌクレオチドは、単離核酸と呼ばれる。アンチセンスオリゴヌクレオチドおよび抗腫瘍アンチセンスオリゴヌクレオチドはそれぞれ、合成および単離アンチセンスオリゴヌクレオチドの両方を包含する。
【００６６】
修飾された骨格、例えば、ホスホロチオアート結合を有するアンチセンスオリゴヌクレオチドは、例えば、ホスホルアミダートまたはH-ホスホナート化学を使用する自動化技術を使用して合成される。アリール-およびアルキル-ホスホナートは、例えば、米国特許第4,469,863号に記載のように製造される。米国特許第5,023,243号および欧州特許番号第092,574号に記載されるように、荷電した酸素部分がアルキル化されているアルキル(Alkyi)ホスホトリエステルは、市販の試薬を使用して自動化固相合成によって調製される。アンチセンスオリゴヌクレオチドのさらなる骨格修飾および置換を製造する方法は記載されている(Uhlmannら1990年、Goodchild 1990年)。
【００６７】
あるいは、ホスホロチオアートは、ホスホルアミダートまたはH-ホスホナート化学のいずれかを使用し、自動化技術を使用して合成される。アリール-およびアルキル-ホスホナートは、例えば、米国特許第4,469,863号に記載されるように製造され;アルキルホスホトリエステル(米国特許第5,023,243号および欧州特許番号第092,574号に記載されるように、荷電した酸素部分がアルキル化されている)は、市販の試薬を使用して自動化固相合成によって調製される。その他のDNA骨格修飾および置換を製造する方法は、記載されている(Uhlmann, E.ら1990年、Goodchild, J.1990年)。
【００６８】
本発明の用語「新生物性疾患」とは、正常な増殖制御に対して感受性を失っている、細胞の増殖によって引き起こされる、またはそれを特徴とする増殖性障害を指す。本発明の用語「癌」は、良性の(benigne)および悪性の(maligne)腫瘍および任意のその他の増殖性障害、例えば、転移の形成を含む。同じ組織種の癌は、一般に、同一組織を起源とし、例えば、その生物学的特徴に基づいて異なるサブタイプに分けられる。一般に、癌の4つのカテゴリーは、癌腫、肉腫、白血病およびリンパ腫である。200を超える異なる種類の癌が知られており、身体のあらゆる臓器または組織が影響を受け得る。癌の定義を制限しない癌の特定の例として、固形腫瘍、白血病、急性または慢性骨髄性(myelotic)またはリンパ芽球性白血病などの血液由来腫瘍;腫瘍転移;良性腫瘍、例えば、血管腫、聴神経腫瘍、神経線維腫、トラコーマおよび化膿性肉芽腫;前悪性腫瘍;毛様細胞性星状細胞腫WHO I、星状細胞腫WHO II、星状細胞腫WHO IIIを含む星状細胞腫、芽細胞腫、乳癌、脊索腫、頭蓋咽頭腫、子宮内膜癌、上衣腫、ユーイング腫瘍、胃癌、胚細胞腫、神経膠腫、膠芽腫、血管芽腫、血管周囲細胞腫(hemangioperycatioma)、ホジキンリンパ腫、髄芽細胞腫、白血病、中皮腫、神経芽腫、非ホジキンリンパ腫、松果体腫、網膜芽細胞腫、肉腫(血管肉腫、軟骨肉腫、内皮肉腫、線維肉腫、平滑筋肉腫、脂肪肉腫、リンパ管内皮細胞肉腫(lymphangioandotheliosarcoma)、リンパ管肉腫(lyphangiosarcoma)、髄芽細胞腫、黒色腫、髄膜腫、筋肉腫、神経鞘腫、乏突起膠腫、骨原性肉腫、骨肉腫を含む)、セミノーマ、上衣下腫、ウィルムス腫瘍が挙げられ、または胆管癌腫、膀胱癌腫、脳腫瘍、乳癌、気管支原性肺癌、腎臓の癌腫、子宮頸癌腫、絨毛癌、嚢胞腺癌(cystadenocarcinome)、胎生期癌、上皮癌、食道癌腫、子宮頸癌腫、結腸癌腫、結腸直腸癌腫、子宮内膜癌腫、胆嚢癌腫、胃癌腫、頭頚部癌腫、肝臓癌腫、肺癌腫、髄様癌、非小細胞気管支原性肺癌/肺癌腫、肺癌、卵巣癌腫、膵臓癌腫、乳頭癌、乳頭状腺癌、前立腺癌腫、小腸癌腫、直腸癌腫、腎細胞癌、皮膚癌腫、小細胞気管支原性肺癌/肺癌腫、扁平上皮癌、皮脂腺癌腫、精巣癌腫、骨肉腫、卵巣癌または子宮癌腫の群から選択される。
【００６９】
好ましい実施形態では、転移の形成は、肝臓、肺、脳、リンパ腫結節および/または内臓転移の形成を指す。これらの転移の各々は、本発明の医薬組成物の使用によって治療可能である。
【００７０】
本発明の化学療法薬は、細胞増殖を阻害する物質および/または細胞死を誘導する物質、好ましい実施形態では、転移の形成をさらに阻害する物質である。用語化学療法薬は、それだけには限らないが、化学療法薬、化学療法薬を補助的に増強する薬剤および放射性薬剤を含む。この群の例は、本明細書に示されている。
【００７１】
一実施形態では、化学療法薬は、ゲムシタビン、テモゾロミド(telozolomid)、ニトロソウレア、ビンカアルカロイド、プリンおよびピリミジン塩基のアンタゴニスト、細胞分裂停止抗生物質、カンプトテシン(camphotecine)誘導体、抗エストロゲン剤(anti-estrogenes)、抗アンドロゲン剤およびゴナドトロピン放出ホルモンの類似体の群から選択される。
【００７２】
好ましい実施形態では、ニトロソウレアの群は、ACNU、BCNU、CCNUおよび/またはHCNUを含む。別の実施形態では、抗悪性腫瘍化学療法薬は、ニトロソウレア、例えば、ACNU、BCNU、HCNUおよび/またはCCNU、細胞傷害性活性抗生物質、例えば、ドキソルビシン、ぺグ化リポソームドキソルビシン(Caelyx(登録商標))、5-フルオロデオキシウリジン、5-フルオロウラシル、5-フルオロウリジン、ゲムシタビン、プロカルバジン、タキソール、タキソテール、テモゾロミド、ビンブラスチン、ビンクリスチンの群から選択される。ACNUの同義語として、3-[(-4-アミノ-2-メチル-5-ピリミジニル)メチル]-1-(2-クロロエチル)-1-ニトロソウレアヒドロクロリド、CS-439 HCl、塩酸ニドラン、塩酸ニムスチン、NSC-245382がある。BCNUは、ビスクロロエチルニトロソウレアであり、化学名は、N,N’-ビス(2-クロロエチル)-N-ニトロソ-ウレアであり、その他の名称として、BiCNU、カルムスチンがある。CCNUは、1-(2-クロロエチル)-3-シクロヘキシル-1-ニトロソウレアである。同義語として、N-(2-クロロエチル)-N’-シクロヘキシル-N-ニトロソ-ウレア、ベルスチン(Belustine)、Cee NU、クロロエチルシクロヘキシルニトロソウレア、ICIG 1109、ロムスチン、NSC 79037がある。テモゾロミドの1つの化学名として、3,4-ジヒドロ-3-メチル-4-オキソイミダゾ->5,1d’1,2,3,4-テトラジン-8-カルボキシミドがある。テモゾロミドのその他の名称として、テモダール(Temodal)、テモダール(Temodar)、メタゾラストン、CCRG81045、SCH52365、NSC362856、M&B39836がある。
【００７３】
テニポシドの同義語として、4’-デメチルエピポドフィロトキシン、9-(4,6-O-2-テニリデン-b-D-グルコピラノシド)、エピポドフィロトキシン、EPT、テニポシド  VM-26、VM26、5,8,8a,9-テトラヒドロ-5-(4-ヒドロキシ-3,5-ジメトキシフェニル)-9-{[4,6-O-(2-チエニルメチレン)-b-D-グルコピラノシル]オキシ}フロ[3’,4’:6,7]ナフト[2,3-d]-1,3-ジオキソール-6(5aH)-オンがある。
【００７４】
一実施形態では、ビンカアルカロイドは、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシンおよびその活性誘導体を含む。
【００７５】
一実施形態では、プリンおよびピリミジン塩基のアンタゴニストは、5-フルオロウラシル、5-フルオロデオキシウリジン、シタラビンおよびゲムシタビンの群から選択される。
【００７６】
その他の実施形態では、化学療法薬は、ドキソルビシン(doxorubicine)およびリポソームPEG化ドキソルビシンの群から選択され、カンプトテシン(camphthotecine)誘導体は、イリノテカン(irinotecane)およびトポテカン(topotecane)の群から選択され、抗エストロゲン剤(anti estrogenes)は、タモキシフェン、エキセメスタン、アナストロゾールおよびフルベストラントの群から選択され、抗アンドロゲン剤は、フルタミドおよびビカルタミドの群から選択され、抗プロゲステロン(antprogesterons)は、ミフェプリストンの群から選択され、ゴナドトロピン放出ホルモンの類似体は、ロイプロリドおよびゴセレリン(gosereline)の群から選択される。
【００７７】
その他の実施形態では、TGF-β阻害剤が、以下の群:アシビシン;アクラルビシン;塩酸アコダゾール;アクロニン;アドゼレシン;アドリアマイシン;アルデスロイキン;アルトレタミン;アンボマイシン;酢酸アメタントロン;アミノグルテチミド;アムサクリン;アナストロゾール;アントラマイシン;アスパラギナーゼ;アスペルリン(Asperlin);アバスチン;アザシチジン;アゼテパ;アゾトマイシン(Azotomycin);バチマスタット;ベンゾデパ;ビカルタミド;塩酸ビサントレン;二メシル酸ビスナフィド;ビゼレシン;硫酸ブレオマイシン;ブレキナルナトリウム;ブロピリミン;ブスルファン;カクチノマイシン;カルステロン;カラセミド;カルベチマー;カルボプラチン;カルムスチン;塩酸カルブシン(Carubicin);カルゼレシン;セデフィンゴール;セツキシマブ;クロラムブシル;シロレマイシン(Cirolemycin);シスプラチン;クラドリビン(Cirolemycin);メシル酸クリスナトール;シクロホスファミド;シタラビン;ダカルバジン;DACA(N-[2-(ジメチル-アミノ)エチル]アクリジン-4-カルボキサミド);ダクチノマイシン;塩酸ダウノルビシン;ダウノマイシン;デシタビン;デキソルマプラチン;デザグアニン;メシル酸デザグアニン;ジアジクオン;ドセタキセル;ドキソルビシン;塩酸ドキソルビシン;ドロロキシフェン;クエン酸ドロロキシフェン;プロピオン酸ドロモスタノロン;デュアゾマイシン(Duazomycin);エダトレキサート;塩酸エフロルニチン;エルサミトルシン(Elsamitrucin);エンロプラチン;エンプロマート;エピプロピジン;塩酸エピルビシン;エルズロゾール(Erbulozole);エルロチニブ;塩酸エソルビシン(Esorubicin);エストラムスチン;エストラムスチンリン酸ナトリウム;エタニダゾール;エチオダイズド油I131;エトポシド;リン酸エトポシド;エトプリン;塩酸ファドロゾール;ファザラビン;フェンレチニド;フロクスウリジン;リン酸フルダラビン;5-フルオロウラシル;5-FdUMP;フルロシタビン;ホスキドン;ホストリエシンナトリウム;ゲフィチニブ;ゲムシタビン;塩酸ゲムシタビン;金Au198;ヒドロキシ尿素;塩酸イダルビシン;イフォスファミド;イルモホシン;メシル酸イマチニブ;インターフェロンアルファ-2a;インターフェロンアルファ-2b;インターフェロンアルファ-n1;インターフェロンアルファ-n1;インターフェロンベータ-Ia;インターフェロンガンマ-Ib;イプロプラチン;イレッサ;塩酸イリノテカン;酢酸ランレオチド;レトロゾール;酢酸ロイプロリド;塩酸リアロゾール;ロメトレキソールナトリウム;ロムスチン;塩酸ロソキサントロン;マソプロコール;マイタンシン;塩酸メクロレタミン;酢酸メゲストロール;酢酸メレンゲストロール;メルファラン;メノガリル;メルカプトプリン;メトトレキサート;メトトレキサートナトリウム;メトプリン;メツレデパ;ミチンドミド;マイトカルシン(Mitocarcin);ミトクロミン;マイトギリン(Mitogillin);マイトマルシン(Mitomalcin);マイトマイシン;マイトスパー(Mitosper);ミトタン;塩酸ミトキサントロン;ミコフェノール酸;ノコダゾール;ノガラマイシン;オルマプラチン;オキサリプラチン;オキシスラン;パクリタキセル;ペガスパルガーゼ;ペリオマイシン(Peliomycin);ペンタムスチン;硫酸ペプロマイシン;ペルホスファミド;ピポブロマン;ピポスルファン;塩酸ピロキサントロン;プリカマイシン;プロメスタン;ポルフィマーナトリウム;ポルフィロマイシン;プレドニムスチン;塩酸プロカルバジン;プロマイシン;塩酸プロマイシン;ピラ��フリン;リボプリン;リツキシマブ;ログレチミド;サフィノール;塩酸サフィンゴール;セムスチン;シムトラゼン;スパルフォセートナトリウム;スパルソマイシン;塩酸スピロゲルマニウム;スプロムスチン;スピロプラチン;ストレプトニグリン;ストレプトゾシン;ストロンチウム塩化物Sr89;スロフェヌル;タリソマイシン;タモキシフェン;タキサン;タキソイド;テコガランナトリウム;テガフル;塩酸テロキサントロン;テモポルフィン;テニポイド;テロキシロン;テストラクトン;チアミプリン;チオグアニン;チオテパ;チミタック;チアゾフリン;チラパザミン;トムデックス;TOP-53;塩酸トポテカン;クエン酸トレミフェン;トラスツズマブ;酢酸トレストロン(Trestolone);リン酸トリシリビン;トリメトレキサート;グルクロン酸トリメトレキサート;トリプトレリン;塩酸ツブロゾール;ウラシル・マスタード;ウレデパ;バプレオチド;ベルテポルフィン;ビンブラスチン;硫酸ビンブラスチン;ヴィンクリスチン;硫酸ヴィンクリスチン;ビンデシン;硫酸ビンデシン;硫酸バインピジン(Vinepidine);硫酸ヴィングリシネート(Vinglycinate);硫酸ビンレウロシン(Vinleurosine);酒石酸ビノレルビリン;硫酸ヴィンロシジン(vinrosidine);硫酸ヴィンゾリディン;ボロゾール;ゼニプラチン;ジノスタチン;塩酸ゾルビシン;2-クロロデオキシアデノシン;2’-デオキシホルマイシン;9-アミノカンプトテシン;ラルチドレキセド;N-プロパルギル-5,8-アザ葉酸;2-クロロ-2’-アラビノ-フルオロ-2’-デオキシアデノシン;2-クロロ-2’-デオキシアデノシン;アニソマイシン;トリコスタチンA;hPRL-G129R;CEP-751;リノマイドから選択される少なくとも1種の化学療法薬と組み合わされる場合には、少なくとも1種のアンチセンスオリゴヌクレオチド、好ましくは、TGF-β1、TGF-β2およびTGF-β3および/または阻害剤からなる群から選択されるアンチセンスオリゴヌクレオチド。
【００７８】
その他の化学療法薬として、20-エピ-1,25二水酸化ビタミンD3;5-エチニルウラシル;アビラテロン;アクラルビシン;アシルフルベン;アデシペノール(adecypenol);アドゼレシン;アルデスロイキン;ALL-TK拮抗薬;アルトレタミン;アンバムスチン;アミドクス;アミホスチン;アミノレブリン酸;アムルビシン;アムサクリン;アナグレリド;アナストロゾール;アンドログラフォロイド;新脈管形成阻害剤;拮抗薬D;拮抗薬G;アンタレリクス;抗背側化形態形成タンパク質-1;抗アンドロゲン、前立腺癌;抗エストロゲン;抗腫瘍薬;アンチセンスオリゴヌクレオチド;グリシン酸アフィジコリン;アポトーシス遺伝子モジュレータ;アポトーシス調節剤;アプリン酸;アラ-CDP-DL-PTBA;アルギニンデアミナーゼ;アスラクリン(asulacrine);アタメスタン;アトリムスチン;アキシナスタチン1;アキシナスタチン2;アキシナスタチン3;アザセトロン;アザトキシン;アザチロシン;バッカチンIII誘導体;バラノル(balanol);バチマスタット;BCR/ABL拮抗薬;ベンゾクロリン;ベンゾイルスタイロスポリン;ベータラクタム誘導体;ベータアレシン(beta-alethine);ベータクラマイシンB;ベツリン酸;bFGF阻害剤;ビカルタミド;ビサントレン;ビスアジリジニルスペルミン(bisaziridinylspermine);ビスナフィド;ビストラテンA;ビゼレシン;ブレフレート(breflate);ブロピリミン;ブドチタン;ブチオニンスルフォキシミン;カルシポトリオール;カルフォスチンC;カンプトテシン誘導体(例えば、10水酸基カンプトテシン);カナリポックスIL-2;カペシタビン;カルボキサミド-アミノ-トリアゾール;カルボキシアミドトリアゾール;CaRestM3;CARN700;軟骨由来阻害剤;カルゼレシン;カゼインキナーゼ阻害剤(ICOS);カスタノスペルミン;セクロピンB;セトロレリクス;クロリン;クロロキノキサリンスルホンアミド;シカプロスト;シス-ポリフィリン;シロレマイシン(cirolemycin);クロミフェンアナログ;クロトリマゾール;コリスマイシンA;コリスマイシンB;コンブレタスタチンA4;コンブレタスタチンアナログ;コナゲニン;クランベシジン816;クリスナトール;クリプトフィシン8;クリプトフィシンA誘導体;クラシンA;シクロペンタアントラキノン;シクロプラタム;シペマイシン;シタラビンオクフォスファート;細胞溶解因子;サイトスタチン;ダクリズマブ;デシタビン;デヒドロダイデムニンB;デスロレリン;デキシフォスファミド(dexifosamide);デクスラゾキサン;デクスベラパミル;ジアジクオン;ダイデムニンB;ディドクス(didox);ジエチルノルスペルミン;ジヒドロ-5-アザシチジン;ジヒドロタキソール,9-;ディオキサマイシン;ジフェニルスプロムスチン;ディスコダーモライド;ドコサノール;ドラセトロン;ドキシフルリジン;ドロロキシフェル;ドロナビノール;デュオカルマイシンSA;エブセレン;エコムスチン;エデルホシン;エドレコロマブ;エフロルニチン;エレメン;エミテフル;エピルビシン;デソキシエポチロン(A,R.dbd.H;B,R.dbd.Me)を含むエポチロン類;エピシロン;エプリステリド;エストラムスチンアナログ;エストロゲン作動薬;エストロゲン拮抗薬;エタニタゾール;エトポシド;エトポシド4’-リン酸(エトポフォス(etopofos));エクセメスタン;ファドロゾール;ファザラビン;フェンレチニド;フィルグラスティム;フィナステリド;フラボピリドール;フレゼラスチン;フルアステロン;フルダラビン;塩酸フルオロダウロルニシン(fluorodaunorunicin);フォルフェニメクス;ホルメスタン;ホストリエシン;ホテムスチン;ガド���ニウムテキサフィリン;硝酸ガリウム;ガロシタビン;ガニレリックス;ゼラチナーゼ阻害剤;ゲムシタビン;グルタチオン阻害剤;ヘプスルファム;ヘレグリン;ヘキサメチレンビスアセトアミド;ヒペリシン;イバンドロン酸;イダルビシン;イドキシフェン;イドラマントン;イルモホシン;イロマスタット;イミダゾアクリドン;イミキモド;免疫刺激剤ペプチド;インスリン様増殖因子-1受容体阻害剤;インターフェロン作動薬;インターフェロン;インターロイキン;イオベングアン;ヨードドキソルビシン;イポメアノール,4-;イリノテカン;イロプラクト(iroplact);イルソグラジン;イソベンガゾール(isobengazole);イソホモハリコンドリン(isohomohalicondrin)B;イタセトロン;ジャスプラキノライド;カハラライドF;ラメラリン-Nトリアセテート;ランレオチド;レイナマイシン;レノグラスチム;硫酸レンチナン;レプトルスタチン;レトロゾール;白血病抑制因子;白血球アルファ・インターフェロン;リュープロライド+エストロゲン+プロゲステロン;リュープロレリン;レバミゾール;リアロゾール;直線ポリアミンアナログ;親油性二糖類ペプチド;親油性プラチナ化合物;リソクリナミド(lissoclinamide)7;ロバプラチン;ロンブリシン;ロメトレキソール;ロニダミン;ロソキサントロン;ロバスタチン;ロキソリビン;ルートテカン(lurtotecan);ルテチウムテキサフィリン;リソフィリン;溶解ペプチド;マイタンシン;マンノスタチンA;マリマスタット;マソプロコール;マスピン;マトリリシン阻害剤;マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤;メノガリル;メルバロン;メテレリン;メチオニナーゼ;メトクロプラミド;MIF阻害剤;ミフェプリストン;ミルテホシン;ミリモスチム;対応が合致しない二重RNA;ミトラシン;ミトグアゾン;ミトラクトール;マイトマイシンアナログ;メトナフィド;マイトトキシン線維芽細胞増殖因子-サポリン;ミトキサントロン;モファロテン;モルグラモスチム;モノクローナル抗体、ヒト絨毛性ゴナドトロピン;一リン酸化脂質A+マイコバクテリウム細胞壁sk;モピダモール;多剤耐性遺伝子阻害剤;多腫瘍抑制剤1に基づく治療;マスタード抗癌剤;ミカペルオキシド(mycaperoxide)B;マイコバクテリア細胞壁抽出物;ミリアポロン;N-アセチルジナリン;N-置換ベンズアミド;ナファレリン;ナグレスティップ(nagrestip);ナロキソン+ペンタゾシン;ナパヴィン(napavin);ナフテルピン;ナルトグラスチム;ネダプラチン;ネモルビシン(nemorubicin);ネリドロン酸;中性エンドペプチダーゼ;ニルタミド;ニサマイシン(nisamycin);酸化窒素モジュレータ;窒素酸化物抗酸化物質;ニトルリン(nitrullyn);O6-ベンジルグアニン;オクトレオチド;オキセノン;オリゴヌクレオチド;オナプリストン;オンダンセトロン;オンダンセトロン;オラシン;経口サイトカイン誘導物質;オルマプラチン;オサテロン;オキサリプラチン;オキザウノマイシン;パクリタキセルアナログ;パクリタキセル誘導体;パラウアミン;パルミトイルリゾキシン;パミドロン酸;パナキシトリオール;パノミフェン;パラバクチン(parabactin);パゼリプチン;ペガスパルガーゼ;ペルデシン;ポリ硫酸ペントサンナトリウム;ペントスタチン;ペントロゾール(pentrozole);ペルフルブロン;ペルホスファミド;ペリリルアルコール;フェナジノマイシン;フェニル酢酸;ホスファターゼ阻害剤;ピシバニル;塩酸ピロカルピン;ピラルビシン;ピリトレキシム;プラセチンA;プラセチンB;プラスミノゲン・アクチベータ阻害剤;��ラチナ錯体;プラチナ化合物;プラチナ-トリアミン錯体;ポドフィロトキシン;ポルフィマーナトリウム;ポルフィロマイシン;プロピルビス-アクリドン;プロスタグランジンJ2;プロテアソーム阻害剤;タンパク質Aに基づく免疫調節剤;プロテインキナーゼC阻害剤;プロテインキナーゼC阻害剤類、微細藻類;タンパク質チロシンホスファターゼ阻害剤;プリン・ヌクレオシド・ホスホリラーゼ阻害剤;プルプリン;ピラゾロアクリジン;ピリドキシレート化ヘモグロビンポリオキシエチレン複合体;raf拮抗薬;ラルチドレキセド;ラモセトロン;rasファルネシルタンパク質トランスフェラーゼ阻害剤;ras阻害剤;ras-GAP阻害剤;脱メチル化レテリプチン;エチドロン酸レニウムRe 186;リゾキシン;リボザイム;RIIレチナミド(retinamide);ログレチミド;ロヒツキン(rohitukine);ロムルチド;ロキニメクス;ルビギノン(rubiginone)B1;ルボキシル;サフィンゴール;サイントピン(saintopin);SarCNU;サルコフィトールA;サルグラモスチム;Sdi1ミメティクス;セムスチン;セネセンス由来阻害剤1;センスオリゴヌクレオチド;シグナル変換阻害剤;シグナル変換調節剤;一本鎖抗原結合部分;シゾフィラン;ソブゾキサン;ボロカプタートナトリウム;フェニル酢酸ナトリウム;ソルベロール(solverol);ソマトメジン結合タンパク質;ソネルミン;スパルホス酸;スピカマイシンD;スプロムスチン;スプレノペンチン(splenopentin);スポンジスタチン1;スクアラミン;幹細胞阻害剤;幹細胞分割阻害剤;スティピアミド(stipiamide);ストロメライシン阻害剤;スルフィノシン(sulfinosine);超活性血管活性腸管ペプチド拮抗薬;スラディスタ(suradista);スラミン;スワンソニン;合成グルコサミノグリカン;タリムスチン;タモキシフェンメチオジド;タウロムスチン;タザロテン;テコガランナトリウム;テガフル;テルラピリニウム(tellurapyrylium);テロメラーゼ阻害剤;テモポルフィン;テモゾロマイド;テニポシド;テトラクロロデキサオキシド(terachlorodecaoxide);テトラゾミン(terazomine);サリブラスチン(thaliblastine);サリドマイド;チオコラリン;トロンボポエチン;トロンボポエチン模倣薬;チマルファシン;サイモポエチン受容体作動薬;チモトリナン;甲状腺刺激ホルモン;チンエチルエチオプルプリン;チラパザミン;二塩化チタノセン;トポテカン;トプセンチン(topsentin);トレミフェン;全能性幹細胞因子;翻訳阻害剤;トレチノイン;トリアセチルリジン;トリシリビン;トリメトレキサート;トリプトレリン;トロピセトロン;ツロステリド;チロシンキナーゼ阻害剤;チルフォスチン;UBC阻害剤;ウベニメクス;尿生殖洞由来成長阻害因子;ウロキナーゼ受容体拮抗薬;バプレオチド;バリオリンB;ベクトルシステム、赤血球遺伝子療法;ベラレソール;ベラミン;ベルジン;ベルテポルフィン;ビノレルビン;ビンキサルチン;バイタキシン;ボロゾール;ザノテロン(zanoterone);ゼニプラチン;ジラスコルブ;ジノスタチンスチマラマーが挙げられる。
【００７９】
化学療法薬を補助的に増強する薬剤として、例えば、三環系抗うつ剤(例えば、イミプラミン、デシプラミン、アミトリプチリン、クロミプラミン、トリミプラミン、ドクセピン、ノルトリプチリン、プロトリプチリン、アモキサピンおよびマプロチリン);非三環系抗うつ剤(例えば、セルトラリン、トラゾドンおよびシタロプラム);Ca++拮抗薬(例えば、ベラパミル、ニフェジピン、ニトレンジピンおよびカロベリン);カルモジュリン阻害剤(例えば、プレニラミン、トリフルオロペラジンおよびクロミプラミン);アンホテリシンB;トリパラノールアナログ(例えば、タモキシフェン);抗不整脈薬(例えば、キニジン);抗高血圧薬(例えば、レゼルピン);チオールディプリーター(例えば、ブチオニンおよびスルフォキシミン)およびクレモホールELといった多剤耐性還元剤がある。本発明の化合物は、顆粒球コロニー刺激因子といったサイトカインとも併用投与できる。抗増殖剤として、例えば、イセチオン酸ピリトレキシムがある。
【００８０】
放射性物質として、例えば、フィブリノゲンI125;フルデオキシグルコースF18;フルオロドパF18;インスリンI125;インスリンI131;イオベングアンI123;ヨージパミドナトリウムI131;ヨードアンチピリンI131;ヨードコレステロールI131;ヨウ化ヒプル酸ナトリウムI123;ヨウ化ヒプル酸ナトリウムI125;ヨウ化ヒプル酸ナトリウムI131;ヨードピラセトI125;ヨードピラセトI131;塩酸イオフェタミンI123;イオメチンI125;イオメチンI131;ヨータラム酸ナトリウムI125ヨータラム酸ナトリウムI131;イオチロシンI131;リオチロニンI125;リオチロニンI131;酢酸メリソプロールHg197;酢酸メリソプロールHg203;メリソプロールHg197;セレノメチオニンSe75;アンチモン三硫化物コロイドテクネチウムTc99m;Bicisate(ビシセート)テクネチウムTc99m;ジソフェニンテクネチウムTc99m;エチドロン酸テクネチウムTc99m;エクサメタジムテクネチウムTc99m;フリホスミンテクネチウムTc99m;グルセプテートテクネチウムTc99m;リドフェニンテクネチウムTc99m;メブロフェニンテクネチウムTc99m;メドロネートテクネチウムTc99m;メドロネート二ナトリウムテクネチウムTc99m;メルチアチドテクネチウムTc99m;オキシドロネート(Oxidronate)テクネチウムTc99m;ペンテタートテクネチウムTc99m;ペンテタートカルシウム三ナトリウムテクネチウムTc99m;セスタミビテクネチウムTc99m;シボロキシムテクネチウムTc99m;サクシマーテクネチウムTc99m;硫黄コロイドテクネチウムTc99m;テボロキシムテクネチウムTc99m;テトロホスミンテクネチウムTc99m;チアチドテクネチウムTc99m;チロキシンI125;チロキシンI131;トルポピドンI131;トリオレイン125;トリオレイン131がある。
【００８１】
化学療法薬の活性誘導体ならびにプロドラッグもまた、本発明の一部である。
【００８２】
化学療法薬の一般的であるが、許容できる副作用として、悪心および嘔吐があるので、これらの効果は、悪心および/または嘔吐を誘発する化学療法薬と併用して抗催吐薬を投与することによって軽減される(avelliatably)ことは当業者には明らかである。例えば、オンダンセトロンを、悪心/嘔吐誘発性抗悪性腫瘍剤が投与される約30分前に約8mgの用量で経口で与えてもよい。もちろん、ハサルドール(Hasaldol)、ベナドリルおよびアチバンなどのその他の抗催吐剤(anti-emtics)も必要に応じて使用してよい。したがって、代替実施形態では、本発明の医薬組成物は、化学療法薬の副作用を低減するためにさらなる化合物またはTGF-β系の阻害剤を含む。
【００８３】
放射線照射は、約1Gy〜約100Gy、より好ましくは、約20〜約80Gy、最も好ましくは、例えば、星状細胞腫、神経膠芽腫および神経膠腫の治療のために、約40〜約60Gyの投与量で適用される。
【００８４】
好ましい実施形態では、投与量は、分割され、これは、約1〜約20週間、約2〜約10週間または4〜約8週間の間に数回反復される1セッションで約0.1〜約10Gyまたは約1Gy〜約5Gyまたは約1Gy〜約2Gyが適用されることを意味する。化学療法薬および/またはTGF-β系の阻害剤、例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、放射線照射の前に、その後に、それと一緒に投与される。腫瘍サイズの低減に応じて、1サイクルの放射線療法ならびに数サイクルの放射線照射があり得る。
【００８５】
放射線照射は、通常、60Coを用いて実施される。中性子、プロトン、陰性パイ中間子または中性子捕獲を用いる放射線照射も同様に適用できる。投与量がさらに、腫瘍の大きさ、患者の体格および適用される放射線照射の種類によって変わることは、当業者には明らかである。特定の実施形態では、投与量は、上記のように、約2〜約100倍高いかまたは低く、投与量が適用される分割の数に応じても変わる。
【００８６】
別の実施形態では、少なくとも1種の化学療法薬および少なくとも1種のTGF-β系の阻害剤、例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチドを含む医薬組成物は、疾患を治療するためのその他の手順と組み合わせて使用される。例えば、腫瘍は、手術および/または放射線照射を用いて従来的に治療され得る、次いで、マイクロ転移の休止状態を延長するために、また任意の残存する新生物性疾患、すなわち、腫瘍を安定化する、個々に、低減するために、本発明の化学療法薬および少なくとも1種のアンチセンスオリゴヌクレオチドおよび/または少なくとも1種のTGF-β系の阻害剤を含む組成物が、患者に続いて投与される。
【００８７】
好ましい実施形態では、少なくとも1種の化学療法薬および少なくとも1種のTGF-β系の阻害剤、例えば、アンチセンス(antisesne)オリゴヌクレオチドを含む医薬組成物が、転移病巣を有する可能性が高い(その時点で、臨床的に認識できる場合もあり、そうではない場合もある)部位に投与される。転移病巣である可能性が高い部位(または組織)に特別に埋め込まれた持続放出製剤は、これらの後者の症例において適している。
【００８８】
有効量で投与される、少なくとも1種の化学療法薬および少なくとも1種のTGF-β系の阻害剤、例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチド、例えば、配列番号30などのTGF-β2アンチセンスオリゴヌクレオチドを含む医薬組成物の実施形態。一般に、用語、医薬組成物、化学療法薬およびTGF-β系の阻害剤の「有効量」とは、それぞれ、所望の生物学的効果を実現するのに必要または十分な量を指す。これは、中でも、送達様式(例えば、局所または全身)、投与期間、医薬組成物を受けとる被験体の年齢、体重、全身の健康状態、性別および食事に応じて変わる。具体的には、有効量とは、新生物性疾患(neoplastis diseases)の形成の速度を低減する、または、完全に阻害する量である。例えば、被験体が腫瘍を有する場合、有効量とは、新生物性疾患を減少させるかまたは排除する量である。さらに、有効量は、新規新生物性疾患の増大を防ぐか、新規新生物性疾患の減少を引き起こす量であり得る。有効量は、組成物が、単回または複数の投与量で使用されるかどうかに応じて変わる。本明細書において示される投与量は、成人に対してである。ヒトが小児、さらなる病気またはその他の状況によってストレスを受けている人である場合には、これらの投与量は適応させなければならないことは当業者にはかなり明らかである。
【００８９】
一実施形態では、本明細書に記載される化合物の対象用量は、通常、投与あたり約0.1μg〜約10mgの範囲であり、これは、1時間毎に、1日毎に、1週間毎に、または1カ月毎に、およびその間の任意のその他の時間の量で行われ得る適用に応じて変わる。さらに別の実施形態では、用量は、投与あたり約10μg〜約5mgまたは約100μg〜約1mgの範囲であり、1〜10回の投与は、数時間、数日または数週間の間隔をあける。しかし、いくつかの実施形態では、用量は、上記の通常の用量よりも2〜100倍高いまたは低い範囲でさえ使用してもよい。これらの用量は、主に、成人の治療に言及するものであって、小児の治療の場合には、当業者には公知のように、用量は低減されなければならない。
【００９０】
化合物の効果は、例えば、その標的の50%阻害に必要である阻害剤の濃度を表す、すなわち、ある生物学的プロセスを50%阻害するために、どの程度特定の物質/分子が必要とされるかを評価する、そのIC50、最大半数阻害濃度によって示される。本発明によれば、化学療法薬のIC50は、50%細胞傷害性をもたらす化学療法薬の濃度を説明する。IC50は、化合物の効率を説明し、化合物のIC50が低いほど、より効果的な化合物である。好ましい実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチド、特に、TGF-β1、-2または-3などの抗腫瘍アンチセンスオリゴヌクレオチドは、化学療法薬、好ましくは、ゲムシタビンのIC50の1.5x、2x、2.5x、5x、5.5x、6x、6.5x、7x、7.5x、8x、8.5x、9x、9.5x、1Ox、15x、2Ox、25x、3Ox、35x、4Ox、45x、50x、55x、60x、65x、70x、75x、80x、85x、90x、95xまたは99xの低減につながる。好ましくは、ゲムシタビンまたはテモゾロミドなどの化学療法薬のIC50は、アンチセンスオリゴヌクレオチド、特に、TGF-β1、-2、および/または-3アンチセンスオリゴヌクレオチドを伴わないゲムシタビンと比較して、アンチセンスオリゴヌクレオチド(oligonuclotide)、例えば、TGF-β1、-2、および/または-3アンチセンスオリゴヌクレオチド、および/またはTGF-β系の阻害剤によって、1%、2%、3%、4%、5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%または99%低下する。化学療法薬のIC50の低下によって、低濃度の化学療法薬を用いて同じ細胞傷害性効果に達すること、または同じ濃度の化学療法薬を用いて、より増大した細胞傷害性効果に達することが可能となる。好ましい実施形態では、TGF-β系の阻害剤は、化学療法薬のIC50を用量依存的に低下させる。
【００９１】
驚くべきことに、化学療法薬は、アンチセンスオリゴヌクレオチドなどのTGF-β系の阻害剤の標的の発現または活性に影響を及ぼさず、化学療法薬のIC50低下につながり、TGF-β系の阻害剤、例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチドと標的との相互作用にも影響を及ぼさない。化学療法薬は、TGF-β系の阻害剤、例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチドと、標的との相互作用を支持し、増大しさえする。アンチセンスオリゴヌクレオチドの好ましい標的は、TGF-β1、-2、および/または-3である。
【００９２】
本発明の一実施形態では、少なくとも1種のTGF-β系の阻害剤、特に、TGF-β1、-2または-3アンチセンスオリゴヌクレオチドは、約1μg/kg/日〜約100mg/kg/日または約10μg/kg/日〜約10mg/kg/日または約100μg/kg/日〜約1mg/kg/日の用量範囲で投与される。
【００９３】
さらに好ましい実施形態では、医薬組成物は、カテーテルを用いて直接腫瘍中に投与される。アンチセンスオリゴヌクレオチドの濃度は、滅菌水溶液中、約0.1μM/L〜約1M/L、より好ましくは、約1μM/L〜約500μM/L、さらにより好ましくは、約10〜約200μM/Lまたは約50μM/L〜約150μM/Lである。さらに別の好ましい実施形態では、この溶液は、約0.1μL/分〜約50μL/分または約2μL/分〜約12μL/分または約3μL/分〜約10μL/分の流速で腫瘍中に投与される。
【００９４】
さらに別の実施形態では、少なくとも1種のTGF-β系の阻害剤、例えば、TGF-β1、-β2-または-β3アンチセンスオリゴヌクレオチドなどのアンチセンスオリゴヌクレオチドと組み合わせて、少なくとも1種の化学療法薬が、ニトロソウレア、より好ましくは、BCNU、CCNUおよび/またはACNUの群から選択される。ゲムシタビンまたはテモゾロミドなどの化学療法薬は、例えば、約1mg/m2〜約1000mg/m2の用量範囲で、より好ましくは、約50mg/m2〜約500mg/m2の用量、最も好ましくは、約150mg/m2〜200mg/m2の単回用量で、静脈内に、6週間毎に投与される。単回用量として与えられても、2連続日での約75mg/m2〜約100mg/m2などの毎日の注射に分割されてもよい。
【００９５】
新生物性疾患の治療におけるさらに別の実施形態では、化学療法薬は、ゲムシタビンであり、少なくとも、TGF-β系の阻害剤、例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチドおよび/または約10mg/m2〜約10g/m2、より好ましくは、約100mg〜約5g/m2、最も好ましくは、約500mg/m2〜約2000mg/m2の投与量の放射線照射とともに投与される。
【００９６】
ゲムシタビンは、アンチセンスオリゴヌクレオチドの投与の前後、約10分〜約120分内に投与されることが好ましく、より好ましくは、約15分〜約60分内に、最も好ましくは、約20分〜約40分内に投与される。最も好ましい実施形態では、ゲムシタビンは、1種または複数のアンチセンスオリゴヌクレオチドと同じ時間に同時投与され、これでは、ゲムシタビンおよび配列番号30などのアンチセンスオリゴヌクレオチドは、別個に投与されるか、組み合わせて投与される。好ましい実施形態では、ゲムシタビンなどの化学療法薬の単回用量は、約4〜約10日、それぞれ、約5〜約8日内で、最も好ましくは、約7日内で反復して投与される。約1〜約8、より好ましくは、約2〜約6、最も好ましくは、約3〜約4の単回用量が、約4〜約10日、それぞれ、約5〜約8日内で、最も好ましくは、約7日内で投与される。この後、約2〜約60日、より好ましくは、約5〜約30日、最も好ましくは、約10〜約20日の治療のない間隔を適用する。これらの周期の数回、例えば、1〜10、2〜10、3〜10、4〜10、5〜10、6〜10、7〜10、8〜10または9または10の反復があり得る。
【００９７】
さらに別の実施形態では、少なくとも1種の化学療法薬は、テモゾロミドであり、約2〜約28連続日の期間にわたって、より好ましくは、約4〜約7連続日の期間にわたって、最も好ましくは、約5連続日の期間にわたって、約500〜約1200mg/m2の総用量で投与される。したがって、総用量は、約5日の期間にわたって投与される約1000mg/m2であるはずである場合、この期間の毎日用量は、約200mg/m2/日である。テモゾロミドは、1日あたり少なくとも1回投与される。投与計画は、1日あたり2回、1日あたり3回または1日あたり4回となることが好ましい。テモゾロミド投与の第1日目から、約28〜約42日の期間、または約28〜約35日またはより好ましくは、28日後、別の投与周期を開始してもよい。
【００９８】
さらに別の実施形態では、テモゾロミドは低投与量でかなり長期間投与してもよい。例えば、テモゾロミドは、約50mg/m2/日〜約150mg/m2、約50mg/m2/日〜約75mg/m2/日の、最も好ましくは、約75mg/m2/日の1日投与量で1日2回以上、最大6週間投与される。より好ましくは、これらの1日用量はほぼ均等に、1日あたり2回以上投与される2以上の用量に分けられる。
【００９９】
さらに別の実施形態では、ビンブラスチンは、約0.1mg/m2〜約50mg/m2の投与量で、より好ましくは、1mg/m2〜約10mg/m2の用量で、さらにより好ましくは、約4mg/m2〜約8mg/m2で投与される。
【０１００】
さらなる実施形態では、ビンクリスチンは、約0.1mg/m2〜10mg/m2の用量で、より好ましくは、約0.5mg/m2〜約5mg/m2の用量、より好ましくは、約0.8mg/m2〜約2mg/m2で、1週間に約1回投与されるが、神経毒性が投与量制限因子である。約0.1mg/mL〜約10mg/mLの硫酸ビンクリスチンの溶液が、約0.1mg/m2〜約50mg/m2の単回用量を用いて、より好ましくは、約0.5mg/m2〜約10mg/m2、さらにより好ましくは、約1mg/m2〜約5.0mg/m2の用量で投与されることが最も一般的である。
【０１０１】
一実施形態では、膵臓癌腫、膠芽腫および/または退形成性星状細胞腫の治療のための医薬組成物は、少なくとも1種のアンチセンスオリゴヌクレオチド、例えば、TGF-β1、-2および/または-3アンチセンスオリゴヌクレオチド、好ましくは、配列番号1〜78のTGF-βアンチセンスオリゴヌクレオチドと、好ましくは、テモゾロミド、ACNU、BCNU、CCNU、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシンおよびそれらの活性誘導体、5-フルオロウラシル、5-フルオロデオキシウリジン、シタラビン、ゲムシタビン(gemicitabine)、ぺグ化リポソームドキソルビシン、プロカルバジンおよびビンクリスチンからなる群から選択される化学療法薬の組合せを含む。
【０１０２】
別の実施形態では、化学療法薬プロカルバジン、CCNUおよびビンクリスチンは、配列番号1〜127、より好ましくは、配列番号22〜48の下で配列表において同定されるアンチセンスオリゴヌクレオチドおよび/またはTGF-β系の阻害剤と一緒に投与される。この実施形態では、投与量は、約40mg/m2〜約80mg/m2のプロカルバジンp.o.(投与の開始から約8日目〜約21日目)、約80〜約120mg/m2のCCNU、p.o.(投与のほぼ1日目)、約8日目および約29日目(投与の開始から)に約2mg/m2 i.v.の最大を有する約1.2mg/m2〜約1.8mg/m2 p.o.のビンクリスチン(投与の1日目)である。アンチセンスオリゴヌクレオチドおよび/またはTGF-β系の阻害剤は、化学療法薬の投与の前、それと一緒にまたはその後に与えられる、すなわち、一般に、本発明の医薬組成物の化合物は、同時に、時間的に重複して、または時間的に別個に投与される。別の実施形態では、この周期が、約6〜約8週後に1回または数回反復される。
【０１０３】
さらに好ましい実施形態では、少なくとも1種のアンチセンスオリゴヌクレオチド、さらにより好ましくは、TGF-β1、-2または-3のアンチセンスオリゴヌクレオチド、最も好ましくは、配列番号1〜127の下で配列表において同定されるアンチセンスオリゴヌクレオチド、さらにより好ましくは、配列番号22〜48を有する配列およびテロゾロミド(telozolomide)が、医薬組成物の一部である。この場合には、新生物性疾患、より好ましくは、膵臓癌腫、神経膠腫、膠芽腫および/または退形成性星状細胞腫などの癌の治療のためのテモゾロミドの投与量は、周期の1〜5日目に約120〜約180mg/m2、p.o.である。より好ましい実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、約1μg/kg/日〜約50mg/kg/日で投与される。周期は、約3〜5週間後に反復される。
【０１０４】
神経膠腫の治療のためのさらに好ましい実施形態では、放射線照射が、上記の標準スケジュールに従ってさらに投与される。一実施形態では、放射線照射が上記の組合せの投与と一緒に適用される。その他の実施形態では、放射線照射は、本発明の医薬組成物の投与の前または後に適用される。
【０１０５】
新生物性疾患、より好ましくは、膵新生物の治療のための医薬組成物の一実施形態では、細胞増殖を阻害する、および/または細胞死を誘導する少なくとも1種の化学療法薬は、シスプラチン、カルボプラチン、シクロホスファミド(cyclophosphamid)、ドセタキセル、PEG-リポソームドキソルビシン、エトポシド(etoposid)、フォリン酸(folinicc acid)、5-フルオロウラシル、ミトキサントロン、パクリタキセル、トポテカンおよび/またはトレオスルファンの群から選択される。
【０１０６】
新生物性疾患の治療のためのより好ましい実施形態では、化学療法薬パクリタキセルまたはカルボプラチンは、本発明の医薬組成物の少なくとも一部分である。約100mg/m2〜約200mg/m2、より好ましくは、約175mg/m2のパクリタキセルまたは周期の1日目にi.v.投与されるカルボプラチン。この周期は、約20〜約30日後に反復される。
【０１０７】
膵臓癌腫などの新生物性疾患の治療のためのさらに別の実施形態では、本発明の医薬組成物の少なくとも1種の化学療法薬は、ゲムシタビンである。ゲムシタビンは、約10分〜約60分内に、より好ましくは、約12分〜約20分内に、約800mg/m2〜約1200mg/m2、より好ましくは、約1000mg/m2 i.v.の投与量で投与される。この適用は、約5〜約10日間反復される。
【０１０８】
さらにその他の実施形態では、カルボプラチンと併用されるパクリタキセル、カルボプラチンと併用されるドセタキセル、シクロホスファミド(cyclophosphamid)と併用されるカルボプラチン、トレオスルファンと併用されるシスプラチン、エトポシド(etoposid)、フォリン酸(folin acid)と併用されるミトキサントロンおよび5-フルオロウラシル、トポテクト(topotect)またはPEG-リポソームドキソルビシンが、膵臓癌の治療のための本発明の医薬組成物の少なくとも1種の化学療法薬である。
【０１０９】
膵臓癌の治療のための上記の実施形態のより好ましい実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、配列番号1〜127の下で配列表において同定されるオリゴヌクレオチド、さらにより好ましくは、配列番号22〜48を有する配列である。
【０１１０】
さらに好ましい実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、1、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95または100μMの用量で投与される。
【０１１１】
これらの医薬組成物を投与するためのさらに別の実施形態では、放射線療法が上記の標準スケジュールに従って適用される。
【０１１２】
あるいは、本発明の医薬組成物の局所投与のために、好ましい実施形態では、組成物は全身投与される。
【０１１３】
本発明の医薬組成物は、医薬組成物の成分を形成する、少なくとも1種の化学療法薬、例えば、ゲムシタビンまたはテモゾロミドと、少なくとも1種のTGF-β系の阻害剤、例えば、TGF-β2アンチセンスオリゴヌクレオチド、例えば、配列番号30を含むことが好ましい。これらの成分は、一緒に混合された純粋な形態か、一緒に混合された医薬上許容される担体、滑沢剤、希釈液、賦形剤、崩壊剤(disintegrate)および/またはアジュバントと一緒のいずれかである。代替実施形態では、医薬組成物の成分は、純粋な形態で、または医薬上許容される担体、滑沢剤、希釈液、賦形剤、崩壊剤(disintegrate)および/またはアジュバントと一緒のいずれかで分離されている。好ましい実施形態では、成分の医薬上許容される担体、滑沢剤、希釈液、賦形剤、崩壊剤(disintegrate)および/またはアジュバントは、同一であるか、または異なっている。
【０１１４】
本発明の医薬組成物を「投与すること」は、当業者に公知の任意の手段によって達成される。投与経路として、それだけには限らないが、経口、鼻腔内、気管内、眼への、経肺(pulmonal)、経膣、経直腸、非経口(例えば、筋肉内、皮内、静脈内、腫瘍内または皮下または直接注射)、デポー(depo)注射、移植、徐放性様式、頭蓋内、腹腔内、膀胱内、結膜下、局所、経皮または舌下が挙げられる。
【０１１５】
癌などの腫瘍を形成する新生物性疾患の治療のための医薬組成物の一実施形態では、少なくとも1種の化学療法薬と、少なくとも1種のTGF-β系の阻害剤、例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチドの組合せは、生分解性、ポリマー性インプラントまたは埋め込みカテーテルによって送達されることが好ましい。
【０１１６】
用語「医薬組成物」とは、固体および/または液体形態の成分を含む組成物を指し、ここで、成分は、純粋な形態および/または医薬上許容される担体、増量剤、滑沢剤、希釈液、賦形剤、崩壊剤(disintegrate)および/またはアジュバントと一緒である。
【０１１７】
本発明の製薬上許容される担体、増量剤、滑沢剤、希釈液、賦形剤、崩壊剤(disintegrate)および/またはアジュバントは、有機または無機起源、天然または合成起源のものであり、それと一緒に医薬組成物の成分が、例えば、適用を容易にするために、または成分の効率を増大するために組み合わされる、被験体への投与に適した任意の物質である。担体、増量剤、滑沢剤、希釈液、賦形剤、崩壊剤(disintegrate)および/またはアジュバントが、医薬組成物の成分または医薬組成物が、治療されるべき被験体による経口摂取のための、錠剤、コート錠、発泡錠(evervescent tablet)、顆粒剤、ロゼンジ、散剤、丸剤、糖衣錠、(マイクロ)カプセル剤、液体、ゲル、シロップ、スラリー、懸濁液、エマルジョンなどとして製剤されるのを可能にすることが好ましい。
【０１１８】
医薬組成物はまた、顆粒剤、散剤、錠剤、コート錠、(マイクロ)カプセル剤、坐剤、シロップ、エマルジョン、懸濁液、クリーム、点滴剤、微細金粒子上にコートされたものまたは成分を持続的に放出する製剤を含み、その製剤中では、上記のように、賦形剤および添加物および/または補助剤、例えば、崩壊剤、結合剤、コート剤、膨潤剤、滑沢剤、矯味剤、甘味料または可溶化剤が、通常使用される。薬物送達のための本方法の短い概説については、Langer(1990年)参照のこと。
【０１１９】
一実施形態では、経口使用用の医薬品は、錠剤または糖衣錠のコアを得るために、必要に応じて、適した補助剤を添加した後に、場合により、得られた混合物をすりつぶし、顆粒剤の混合物を処理する固体賦形剤として得られる。適した賦形剤として、特に、ラクトース、スクロース、マンニトールまたはソルビトールを含めた糖などの増量剤;例えば、トウモロコシデンプン、コムギデンプン、コメデンプン、ジャガイモデンプン、ゼラチン、トラガカントゴム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチル-セルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロースおよび/またはポリビニルピロリドン(PVP)などのセルロース調製物がある。
【０１２０】
さらに別の実施形態では、崩壊剤、例えば、架橋ポリビニルピロリドン、寒天またはアルギン酸もしくはその塩、例えば、アルギン酸ナトリウムが添加される。場合により、経口製剤はまた、内部酸性状態を中和するために生理食塩水またはバッファー中で製剤してもよい。
【０１２１】
さらに別の実施形態では、糖衣錠コアは、適したコーティングとともに提供される。この目的上、濃縮糖溶液を使用してもよく、これは、場合により、アラビアガム、タルク、ポリビニルピロリドン、カーボポール(carbopol)ゲル、ポリエチレングリコールおよび/または二酸化チタン、ラッカー液および適した有機溶媒または溶媒混合物を含有し得る。
【０１２２】
さらに別の実施形態では、異なる組合せの活性化合物用量を同定または特徴づけるために、錠剤または糖衣錠コーティングに染料または顔料が添加される。別の実施形態では、経口的に使用され得る医薬品、「ベジキャップ(vegicaps)」は、ゼラチンで作られた押し込み型カプセル剤ならびにゼラチンで作られたソフト密閉カプセル剤および可塑剤、例えば、グリセロールまたはソルビトールを含む。一実施形態では、押し込み型カプセル剤は、ラクトースなどの増量剤、デンプンなどの結合剤および/またはタルクもしくはステアリン酸マグネシウムなどの滑沢剤、および場合により、安定化剤との混合物中に有効成分を含有する。ソフトカプセル剤の別の実施形態では、活性化合物は、脂肪オイル、流動パラフィンまたは液体ポリエチレングリコールなどの適した液体中に溶解または懸濁される。さらに、安定化剤を加えてもよい。さらに別の実施形態では、当業者には周知の経口投与用に製剤されたミクロスフェアが使用される。経口投与のための製剤は、このような投与に適した投与量中にある。
【０１２３】
頬側投与のためのさらに別の実施形態では、組成物は、例えば、従来法で製剤された錠剤またはロゼンジの形態をとる。
【０１２４】
吸入による投与のためのさらに別の実施形態では、本発明に従って使用するための化合物は、適した噴射剤、例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素またはその他の適したガスを使用して、加圧パックまたは噴霧器から、エアゾールスプレーの形態で送達され得ることが好都合である。加圧エアゾールの場合には、投与量単位は、計測された量を送達するためのバルブを提供することによって決定され得る。例えば、化合物ならびにラクトースまたはデンプンなどの適した粉末基剤の粉末混合物を含有する、吸入器(inhaler)または吸入器(insufflator)において使用するためのゼラチンのカプセルおよびカートリッジを製剤してもよい。適した薬剤担体として、例えば、リポソーム中にマイクロカプセル化、エンコヒレート化、含有された、霧状にされた吸入用の水溶液または生理食塩水溶液、エアロゾルがある。
【０１２５】
さらに別の実施形態では、例えば、経口、静脈内、頭蓋内(intracaranial)、腹腔内、膀胱内(intravesicel)、局所、経皮、結膜下、舌下、非経口、デポー(depo)注射、徐放性様式、くも膜下腔内、脳室内または腫瘍内投与のための化合物の製薬上許容される担体として、バッファーを含有する場合もある滅菌水溶液、希釈剤およびその他の適した添加物、例えば、それだけには限らないが、浸透促進剤、担体化合物およびその他の製薬上許容される担体、増量剤、滑沢剤、希釈剤、賦形剤、崩壊剤(disintegrate)および/またはアジュバントが挙げられる。
【０１２６】
医薬組成物またはその成分の全身送達のためのさらに別の実施形態では、それらは、例えば、注射(例えば、ボーラス注射または連続注入による)による非経口投与のための薬剤担体、増量剤、滑沢剤、希釈液、賦形剤、崩壊剤(disintegrate)および/またはアジュバントと一緒になっている。注射用製剤は、例えば、単位投与形で、例えば、アンプル中で、または添加された防腐剤を含む複数用量容器中で提示される。医薬組成物は、中でも、油性または水性ビヒクル中の懸濁液、溶液またはエマルジョンのような形態をとり、懸濁剤、安定化剤および/または分散剤などの製剤化剤(formulatory agents)を含有することが好ましい。一実施形態では、非経口投与用の薬剤担体、増量剤、滑沢剤、希釈剤、賦形剤、崩壊剤(disintegrate)および/またはアジュバントとして、水溶性形態の活性化合物の水溶液が挙げられる。
【０１２７】
さらに別の実施形態では、本発明の医薬組成物の1種または複数の成分の懸濁液は、適当な油性注射用懸濁液として調製される。適した親油性溶媒またはビヒクルとして、脂肪オイル、例えば、ゴマ油または合成脂肪酸エステル、例えば、オレイン酸エチルもしくはトリグリセリドまたはリポソームが挙げられる。水性注射用懸濁液は、懸濁液の粘度を高める物質、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトールまたはデキストランを含む。場合により、懸濁液はまた、適した安定化剤または化合物の溶解度を高めて、高濃度溶液の調製を可能にする薬剤を含有し得る。
【０１２８】
さらに別の実施形態では、化学療法薬および/またはTFG-β系の阻害剤、例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、適したビヒクル、使用前の、例えば、滅菌発熱物質不含水での構成のための、または皮膚に擦りこまれる鋭い物体上に乾燥された散剤の形態にある。
【０１２９】
さらに別の実施形態では、化合物は、直腸用または膣用組成物、例えば、坐剤または保留浣腸または例えば、ココアバターもしくはその他のグリセリドなどの従来の坐剤基剤を含有する錠剤に製剤される。
【０１３０】
さらに別の実施形態では、化合物は、デポー製剤として製剤される。一実施形態では、このような長期作用性製剤は、適したポリマー物質または疎水性物質を用いて(例えば、許容されるオイル中のエマルジョンとして)またはイオン交換樹脂を用いて、または難溶性誘導体として、例えば、難溶性塩として製剤される。その他の実施形態では、送達系は、徐放性、遅延放出または持続放出送達系を含む。このような系は、化合物の反復投与を避けることができ、被験体および医師にとっての利便性を高める。多数の種類の放出送達系が利用可能であり、当業者に公知である。代替実施形態では、送達系は、ポリマー基剤系、例えば、ポリ(ラクチド-グリコリド)、コポリオキサレート、ポリカプロラクトン、ポリエステルアミド、ポリオルトエステル、ポリヒドロキシ酪酸およびポリ酸無水物を含む。薬物を含有する前記のポリマーのマイクロカプセルが、例えば、米国特許第5,075,109号に記載されている。
【０１３１】
別の実施形態では、送達系は、例えば、コレステロール、コレステロールエステルなどのステロールおよび脂肪酸またはモノ-、ジ-およびトリグリセリドなどの中性脂肪をはじめとする脂質である非ポリマー系;ヒドロゲル放出系;サイラスティック(sylastic)系;ペプチドベースの系;ワックスコーティング;従来の結合剤および賦形剤を使用する圧縮錠剤;部分融合されたインプラントなどを含む。特定の例として、それだけには限らないが:(a)米国特許第4,452,775号、同第4,675,189号および同第5,736,152号に記載されるものなどの、本発明の薬剤がマトリックス内の形態で含有されている浸食系および(b)米国特許第3,854,480号、同第5,133,974号および同第5,407,686号に記載されるものなどの、活性成分が制御された速度でポリマーから浸透する拡散系が挙げられる。さらに、ポンプをベースとするハードウェア送達系が使用されることが好ましく、その一部は、移植に適応している。
【０１３２】
さらなる実施形態では、化学療法薬および/またはアンチセンスオリゴヌクレオチドおよび/またはTGF-β系の阻害剤は、GELFOAM(登録商標)、ゆっくりと分解する修飾されたコラーゲン線維からなる市販の製品を用いて製剤される。さらに、医薬組成物はまた、例えば、適した固体またはゲル相担体、増量剤、滑沢剤、希釈剤、賦形剤、崩壊剤(disintegrate)および/またはアジュバントも含む。このような担体、増量剤、滑沢剤、希釈剤、賦形剤、崩壊剤(disintegrate)および/またはアジュバントの例として、それだけには限らないが、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、種々の糖、デンプン、セルロース誘導体、ゼラチンおよびポリエチレングリコールなどのポリマーが挙げられる。
【０１３３】
化学療法薬および/またはアンチセンスオリゴヌクレオチドおよび/またはTGF-β系の阻害剤は、そのまままたは製薬上許容される塩の形態で投与されることが好ましい。塩は、製薬上許容されなくてはならないが、製薬上許容されない塩を使用して、その製薬上許容される塩を調製してもよい。このような塩として、それだけには限らないが、以下の酸から調製されたもの:塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、マレイン酸、酢酸、サリチル酸、p-トルエンスルホン酸、酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸、ギ酸、マロン酸、コハク酸、ナフタレン-2-スルホン酸およびベンゼンスルホン酸が挙げられる。また、このような塩は、カルボン酸基のアルカリ金属塩またはアルカリ土類塩、例えば、ナトリウム、カリウムまたはカルシウム塩として調製される場合もある。
【０１３４】
一実施形態では、適した緩衝剤として、それだけには限らないが:酢酸および塩(1〜2% w/v);クエン酸および塩(1〜3% w/v);ホウ酸および塩(0.5〜2.5% w/v)ならびにリン酸および塩(0.8〜2% w/v)が挙げられる。適した保存料として、塩化ベンザルコニウム(0.003〜0.03% w/v);クロロブタノール(0.3〜0.9% w/v);パラベン(0.01〜0.25% w/v)およびチメロサール(0.004〜0.02% w/v)が挙げられる。
【０１３５】
一実施形態では、本発明の医薬組成物の少なくとも2種の成分の局所投与のための医薬上許容される担体として、経皮パッチ、軟膏、ローション、クリーム、ゲル、液滴、坐剤、スプレー、液体および粉末が挙げられる。従来の薬剤担体、水性の粉末または油性の基剤、増粘剤などが、必要であるかまたは望ましい場合もある。さらに別の実施形態では、コーティングされたコンドーム、グローブなども有用である。さらに別の実施形態では、医薬組成物は、消化管送達を促進するために浸透促進剤を含む。浸透促進剤は、5つの広義のカテゴリー、すなわち、脂肪酸、胆汁酸塩、キレート化剤、界面活性剤および非界面活性剤のうちの1つに属するものとして分類され得る(Leeら、1991年、Muranishi 1990年)。これらの広義のカテゴリーのうち1種または複数に由来する1種または複数の浸透促進剤が含まれることが好ましい。種々の脂肪酸および浸透促進剤として作用するその誘導体として、例えば、オレイン酸、ラウリン酸、カプリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、リノール酸、リノレン酸、ジカプレート、トリカプレート、レシンレエート(recinleate)、モノオレイン(別名1-モノオレオイル-rac-グリセロール)、ジラウリン、カプリル酸、アラキドン酸(arichidonic acid)、グリセリル1-モノカプレート、1-ドデシルアザシクロヘプタン-2-オン、アシルカルニチン、アシルコリン、モノ-およびジ-グリセリドおよび生理学的に許容されるその塩(すなわち、オレイン酸塩、ラウリン酸塩、カプリン酸塩、ミリスチン酸塩、パルミチン酸塩、ステアリン酸塩、リノール酸塩など)が挙げられる(Leeら1991年、Muranishi 1990年、El-Haririら1992年)。いくつかの現在の好ましい脂肪酸の例として、0.5〜5%の濃度で、単独で、または組合せて使用されるカプリン酸ナトリウムおよびラウリン酸ナトリウムがある。胆汁の生理学的役割として、脂質および脂溶性ビタミンの分散および吸収の促進が挙げられる(Brunton 1996年)。種々の中性胆汁酸塩およびその合成誘導体が、浸透促進剤として作用する。したがって、用語「胆汁酸塩」は、胆汁の天然に存在する成分のいずれかならびにその合成誘導体のいずれかを含む。現在好ましい胆汁酸塩として、一般に、0.5〜2%の濃度で使用されるケノデオキシコール酸(CDCA)(Sigma Chemical Company、St. Louis、Mo.)がある。好ましい実施形態(ambodiment)では、1種または複数の浸透促進剤を含む複雑な製剤が使用される。例えば、胆汁酸塩は、複雑な製剤を製造するために脂肪酸と組み合わせて使用される。好ましい組合せとして、カプリン酸ナトリウムまたはラウリン酸ナトリウムと組み合わせたCDCAが挙げられる(一般に、0.5〜5%)。
【０１３６】
一実施形態では、さらに、キレート化剤が使用され、これとして、それだけには限らないが、エチレンジアミン四酢酸二ナトリウム(EDTA)、クエン酸、サリチレート(例えば、サリチル酸ナトリウム、5-メトキシサリチレートおよびホモバニラート)、コラーゲンのN-アシル誘導体、ラウレス-9およびβ-ジケトンのN-アミノアシル誘導体(エナミン)が挙げられる(Leeら1991年;Muranishi 1990年;Buurら1990年)。キレート化剤は、DNアーゼ阻害剤としても働く追加の利点を有する。
【０１３７】
さらに別の実施形態では、さらに、界面活性剤が使用される。界面活性剤として、例えば、ラウリル硫酸ナトリウム、ポリオキシエチレン-9-ラウリルエーテルおよびポリオキシエチレン-20-セチルエーテル(Leeら1991年);およびFC-43などのパーフルオロ化学エマルジョンが挙げられる(Takahashiら1988年)。非界面活性剤として、例えば、不飽和環状尿素、1-アルキル-および1-アルケニルアザシクロ-アルカノン誘導体(Leeら1991年);およびジクロフェナクナトリウム、インドメタシンおよびフェニールブタゾンなどの非ステロイド系抗炎症薬(Yamashitaら1987年)が挙げられる。
【０１３８】
一実施形態では、本発明の医薬組成物は、医薬組成物中に従来見られるその他の補助成分を、その技術によって確立された利用レベルで、さらに含有する。したがって、例えば、組成物は、さらなる適合する薬学的に活性な物質、例えば、鎮痒薬、収斂薬、局所麻酔または抗炎症薬などを含有し得るか、または本発明の組成物の種々の投与形を物理的に製剤するのに有用なさらなる物質、例えば、色素、香味剤、保存料、抗酸化剤、乳白剤、増粘剤および安定化剤を含有し得る。しかし、このような材料は、添加される場合に、本発明の組成物の成分の生物活性を過度に干渉してはならない。
【０１３９】
(実施例)
本発明は、以下の実施例において示されるが、本発明はこれらの実施例に制限されない。
【０１４０】
(実施例1)
ゲムシタビンのIC50を低減するTGF-β2アンチセンスオリゴヌクレオチド(図1)
96ウェル組織培養プレート中に、4000個細胞/ウェルのヒト膵臓腫瘍細胞株Hup-T3(German Collection of Microorganisms and Cell Cultures GmbH、Braunschweig、Germany)を播種した。Hup-T3細胞株は、ゲムシタビンに対して耐性ではない。播種後1日で、細胞を、8種の異なるゲムシタビン濃度、すなわち、それぞれ、5μM、2μM、800nM、320nM、128nM、51.2nM、20.5nM、8.2nM、3.3nMおよび0nMゲムシタビンを、0μM(■)、5μM(△)または10μM(▽)TGF-β2アンチセンスオリゴヌクレオチド、例えば、配列番号30と組み合わせて用いて、5時間同時処理した。その後、ゲムシタビンと、TGF-β2アンチセンスオリゴヌクレオチドとを含む第1の処理溶液を除去し、TGF-β2アンチセンスオリゴヌクレオチドを含有するが、ゲムシタビンを含有しない第2の処理溶液によって置換した。処理溶液は、場合により、3日後に置換した。
【０１４１】
すべての処理の7日後、細胞上清を回収し、TGF-β2濃度を分析した(実施例4および図4参照のこと)。
【０１４２】
Hup-T3細胞の増殖/生存率を、EZ4U法を製造業者(Biozol Diagnostca Vertrieb GmbH)の使用説明書に従って使用して分析し、EZ4U溶液とともに75分のインキュベーション時間の後に、プレートリーダー「Fluostar-Optima」(BMG LABTECH GmbH)を使用してODを測定した。結果は、ゲムシタビンがTGF-β2アンチセンスオリゴヌクレオチドと組み合わせて投与された場合に、ゲムシタビンによる細胞増殖の阻害の予期しない増大を示す。したがって、TGF-β2アンチセンスオリゴヌクレオチドは、驚くべきことに、ゲムシタビンびIC50を用量依存的に低減した(図1)。
【０１４３】
(実施例2)
TGF-β2分泌に対するゲムシタビンの効果(図2)
TGF-β2発現および分泌それぞれに対するゲムシタビンの効果を、Hup-T3細胞で調べた。ゲムシタビンは、Hup-T3細胞に、以下の濃度:5μM、0.5μM、50nM、5nM、0.5nM、0.05nMまたは0nMで投与し、細胞を実施例1にしたがって5時間インキュベートした。処理溶液は、場合により、3日後に置換した。
【０１４４】
処理の7日後、細胞上清を、TGF-β2濃度の分析のために回収した。TGF-β2分泌(△)を、標準TGF-β2-ELISAキット(R&D Systems、Minneapolis、USA)によって、製造業者の使用説明書に従って定量化した。
【０１４５】
Hup-T3細胞の増殖/生存率(■)を、製造業者(Biozol Diagnostca Vertrieb GmbH)の使用説明書に従ってEZ4U法を使用して分析し、EZ4U溶液とともに75分のインキュベーション時間の後に、プレートリーダー「Fluostar-Optima」(BMG LABTECH GmbH)を使用してODを測定した。
【０１４６】
TGF-β2分泌の低減(△)は、ゲムシタビンの細胞傷害性効果のために高ゲムシタビン濃度で低減する、細胞の増殖および生存率(■)それぞれと相関する。これは、図2の重複する曲線によって示される。驚くべきことに、ゲムシタビンは、細胞傷害性効果を有するが、Hup-T3細胞のTGF-β2分泌(△)に特異的に影響を及ぼさない(図2参照のこと)。
【０１４７】
(実施例3)
TGF-β2分泌に対するTGF-β2アンチセンスオリゴヌクレオチドの効果(図3)
さらなる実験では、TGF-β2の、発現および分泌それぞれに対するTGF-β2アンチセンスオリゴヌクレオチドの効果をHup-T3細胞で調べた。TGF-β2アンチセンスオリゴヌクレオチドは、例えば、配列番号30を、実施例1に記載されるようにHup-T3細胞に投与した(0μM、1μM、2.5μM、5μM、10μM、20μM、40μM、60μMまたは80μM TGF-β2アンチセンスオリゴヌクレオチド)。細胞を、処理の7日後に実施例1に従ってインキュベートし、R&D SystemsのTGF-β  2-ELISAキットを使用するTGF-β2濃度の分析のために細胞上清を回収した。
【０１４８】
予測されたように、TGF-β2アンチセンスオリゴヌクレオチドは、TGF-β2発現および分泌をそれぞれ、用量依存的に阻害した(図3参照のこと)。
【０１４９】
(実施例4)
TGF-β2アンチセンスオリゴヌクレオチドによる、TGF-β2分泌の抑制に対するゲムシタビンの効果(図4)
Hup-T3細胞を、種々の濃度のゲムシタビン(2μM、800nM、320nM、128nM、51.2nM、20.5nM、8.2nMおよび0nM)および実施例1のTGF-β2アンチセンスオリゴヌクレオチド(0μM(■)、5μM(△)または10μM(●)TGF-β2アンチセンスオリゴヌクレオチド)とともにインキュベートし、細胞上清を処理の7日後に、R&D SystemsのTGF-β  2-ELISAキットを使用するTGF-β2濃度の分析のために回収した。
【０１５０】
驚くべきことに、ゲムシタビンは、TGF-β2アンチセンスオリゴヌクレオチドと、そのTGF-β2標的との相互作用に負に影響を及ぼさなかった、すなわち、ゲムシタビンは、TGF-β2アンチセンスオリゴヌクレオチドによるTGF-β2分泌の抑制を損なわない。
【０１５１】
(実施例5)
テモゾロミドのIC50を低下させるTGF-β2アンチセンスオリゴヌクレオチド(図5)
48ウェルの組織培養プレート中に、10000個細胞/ウェルのヒト黒色腫細胞株MEL-Juso(CLS-Cell Lines Service、Eppelheim、Germany)を播種した。MEL-Juso細胞株は、テモゾロミドに対して耐性ではない。播種の6時間後、細胞を8種の異なるテモゾロミド濃度、すなわち、200μM、100μM、50μM、25μM、12.5μM、6.25μM、3.125μMおよび0μMテモゾロミドを、それぞれ、0μM(■)、5μM(△)または10μM(▽)TGF-β2アンチセンスオリゴヌクレオチド、例えば、配列番号30と組み合わせて用いて、2日間同時処理した。物質(テモゾロミドおよびTGF-β2アンチセンスオリゴヌクレオチド)は、水溶液で調製し、4℃で保存し、4週間使用した。その後、テモゾロミド(temozolomidee)とTGF-β2アンチセンスオリゴヌクレオチドとを含む第1の処理溶液を回収し、上記の濃度のTGF-β2アンチセンスオリゴヌクレオチドとテモゾロミドとを含有する第2の処理溶液によってさらに2日間置換した。TGF-β2アンチセンスオリゴヌクレオチドとテモゾロミドとを含有する処理溶液を回収し、細胞に新鮮な試験溶液をさらに3日間加えた。
【０１５２】
すべての処理の7日後、細胞上清を回収し、TGF-β2濃度を分析した。
【０１５３】
MEL-Juso細胞の増殖/生存率を、Cyquant法を使用し、製造業者(Invitrogen)の使用説明書に従って分析し、Cyquant溶液(検出試薬、直接核酸株および直接核酸バックグラウンドサプレッサー)とともに60分のインキュベーション時間後に、プレートリーダー「Fluostar-Optima」(BMG LABTECH GmbH)を使用してODを測定した。結果は、テモゾロミドがTGF-β2アンチセンスオリゴヌクレオチドと組み合わせて投与された場合に、テモゾロミドによる細胞増殖の阻害の予期しない増大を示す。したがって、TGF-β2アンチセンスオリゴヌクレオチドは、驚くべきことに、テモゾロミドのIC50を用量依存的に低減した(図5)。
【０１５４】
(実施例6)
テモゾロミドの細胞傷害性を増大するTGF-β2アンチセンスオリゴヌクレオチド(図6)
48ウェルプレートに、A-172細胞(約7000個細胞/ウェル)を播種し、播種の6時間後、細胞に、0μM、200μMまたは800μMテモゾロミドを、単独(灰色の棒)または10μMのTGF-β2アンチセンスオリゴヌクレオチド(oligonuclotide)、例えば、配列番号30と組み合わせて(黒色の棒)のいずれかで加えた。2日インキュベーションした後、処理溶液を置換し、細胞をさらに3日間インキュベートした(総処理時間:5日)。その後、処理によって誘導されたストレスの結果として、溶解した細胞に由来する、および上清中に浮遊している細胞の乳酸デヒドロゲナーゼ(LDH)を含有する細胞上清を、ウェルから回収した。上清の細胞を、例えば、CytoToxicity Detection Kit Plus(Roche Diagnostics GmbH)に由来する溶解溶液を添加することによって溶解し、LDHレベルを、例えば、キットのマニュアルに従って調べた。放出されたLDHの量は、テモゾロミドと、TGF-β2アンチセンスオリゴヌクレオチドの組合せを用いて大幅に増大した(図6)。
【０１５５】
(実施例7)
ヒトトランスフォーミング増殖因子TGF-β1、-2および-3のアンチセンスm-RNA:
ヒトTGF-β1のアンチセンスm-RNA:
CTGCAGCCTTGACCTCCCAGGATCAAGTGATCCTCCCACCTTAGCCTCCAGAGTAGCTGGGACCACAGGTGTACATTTTTTAAAAGTGTTTTGTAGAGATAGGGTCTCACTATGTTACCCAGGCTGGTCTCAAATGCCTGGATTCAAGTATCCTCCCATCTCTGCCTCCCAAAAGTGCTAGGATTACAGGCGTGAGCACCCCGCCTGGCCTGAACTACTATCTTTTATTGTCTTCTTCACTATCCCCCACTAAAGCAGGTTCCTGGTGGGCAGGAACTCCTCCCTTAACCTCTCTGGGCTTGTTTCCTCAACCTTTAAAATGGGTGTTATCAGAGTCCCTGCCATCTCAGAGTGTTGCTATGGTGACTGAATGAGTTCATTAATGTAAGGCACTTCAACAGTGCCCAAGGTGCTCAATAAATAGATCTAACTACAGTAGTGTTCCCCACTGGTCCCCTGTGCCTTGATGCCGGGCAAAGGAATAGTGCAGACAGGCAGGAGGAGGCAGAGAGGGAGAGAGAGGGAGTGGGAGTGGGGGAACGTCAGGGATGGAGACCCCAGGCAGGCGCCCAATGACACAGAGATCCGCAGTCCTCTCTCCATCTTTAATGGGGCCCCAGGTGGGCTTGGGGCACGGTGTCCTTAAATACAGCCCCCATGGGCAAGGCAGCGGGGGCGGGGCGGGGTGGGGCCGGGCCTGCCGGGGCGGGGCGGGGCGGGGCGGGACCTCAGCTGCACTTGCAGGAGCGCACGATCATGTTGGACAGCTGCTCCACCTTGGGCTTGCGGCCCACGTAGTACACGATGGGCAGCGGCTCCAGCGCCTGCGGCACGCAGCACGGCGCCGCCGAGGCGCCCGGGTTATGCTGGTTGTACAGGGCCAGGACCTTGCTGTACTGCGTGTCCAGGCTCCAAATGTAGGGGCAGGGCCCGAGGCAGAAGTTGGCATGGTAGCCCTTGGGCTCGTGGATCCACTTCCAGCCGAGGTCCTTGCGGAAGTCAATGTACAGCTGCCGCACGCAGCAGTTCTTCTCCGTGGAGCTGAAGCAATAGTTGGTGTCCAGGGCTCGGCGGTGCCGGGAGCTTTGCAGATGCTGGGCCCTCTCCAGCGGGGTGGCCATGAGAAGCAGGAAAGGCCGGTTCATGCCATGAATGGTGGCCAGGTCACCTCGGCGGCCGGTAGTGAACCCGTTGATGTCCACTTGCAGTGTGTTATCCCTGCTGTCACAGGAGCAGTGGGCGCTAAGGCGAAAGCCCTCAATTTCCCCTCCACGGCTCAACCACTGCCGCACAACTCCGGTGACATCAAAAGATAACCACTCTGGCGAGTCGCTGGGTGCCAGCAGCCGGTTGCTGAGGTATCGCCAGGAATTGTTGCTGTATTTCTGGTACAGCTCCACGTGCTGCTCCACTTTTAACTTGAGCCTCCTCAGCAGACGCAGCTCTGCCCGGGAGAGCAACACGGGTTCAGGTACCGCTTCTCGGAGCTCTGATGTGTTGAAGAACATATATATGCTGTGTGTACTCTGCTTGAACTTGTCATAGATTTCGTTGTGGGTTTCCACCATTAGCACGCGGGTGACCTCCTTGGCGTAGTAGTCGGCCTCAGGCTCGGGCTCCGGTTCTGCACTCTCCCCGGCCACCCGGTCGCGGGTGCTGTTGTACAGGGCGAGCACGGCCTCGGGCAGCGGGCCGGGCGGCACCTCCCCCTGGCTCGGGGGGCTGGCGAGCCGCAGCTTGGACAGGATCTGGCCGCGGATGGCCTCGATGCGCTTCCGCTTCACCAGCTCCATGTCGATAGTCTTGCAGGTGGATAGTCCCGCGGCCGGCGGGCCAGGCGTCAGCACCAGTAGCCACAGCAGCGGTAGCAGCAGCGGCAGCAGCCGCAGCCCGGAGGGCGGCATGGGGGAGGCGGCGCCCCCCGGCACTGCCGAGAGCGCGAACAGGGCTGGTGTGGTGGGGAGGCCCCGCCCCTGCAGGGGCTGGGGGTCTCCCGGCAAAAGGTAGGAGGGCCTCGAGGGAAAGCTGAGGCTCCTCAGGGAGAAGGGCGCAGTGGTGGAGGGGAGGCTTGGACCGGGGGTGTCTCAGTATCCCACGGAAATAACCTAGATGGGCGCGATCTGGTACCAGAAGGTGGGTGGTCTTGAATAGGGGATCTGTGGCAGGTCGGAGAGAGATCCGTCTCCTGGAGGAGAAAGGGTCTAGGATGCGCGGGGGCTCAGGAGACAGGCCGGGGATGAAGGCGGCGTGCAGGGGGTGCGCCCGAGGTCTGGGGAAAAGTCTTTGCGGGAGGCCGGGTCGGCGACTCCCGAGGGCTGGTCCGGAATGGGGGCGCCTGAGGGACGCCGTGTAGGGGGCAGGGAGGGAGCAAGCGTCCCCGGCGGCAAAGGGAGGCGGTCTGGGGTCCCCAAGTCCTGCCTCCTCGCGGGGCAGCGTCGCGCCAAGAGGTCCCCGCGCCTCCGGCTCCCAGCGGCAACGGAAAAGTCTCAAAAGTTTTTTTCCTCTTCTCCCGACCAGCTCGTCCCTCCTCCCGCTCCTCCTCCCCCTCCTCCCCGCAGTGGCGGGGGCGGCGGCGGCTCGTCTCAGACTCTGGGGCCTCAGGCTGCTCCTCGGCGACTCCTTCCTCCGCTCCGGGCCGAGGCCGGCCCCGCGGGCGGCTCAGAGCCGGGGGGGGTGCCCCGGACGGGGCGTCCCCCCTGCCCCCGGCCGGGGCCCTCGCTGTCTGGCTGCTCCGCGGAGGGAGGT
【０１５６】
ヒトTGF-β2のアンチセンスm-RNA:
TTTAAAAAAATTTGCTTCTTGTCTCTCTCACTTACAAAGTAGGTGAAATGTAGAATAAGGCCTTCAACTTTTTTTGTGTCAGATGCCAGTTTTAACAAACAGAACACAAACTTCCAAAGTGTCTGAACTAGTACCGCCTTTTCAAAAATTTTTTAACACTGATGAACCAAGGCTCTCTTATGTTTTCTTGTTACAAGCATCATCGTTGTCGTCGTCATCATCATTATCATCATCATTGTCATTTTGGTCTTGCCACTTTTCCAAGAATTTTAGCTGCATTTGCAAGACTTTACAATCATATTAGAAAGCTGTTCAATCTTGGGTGTTTTGCCAATGTAGTAGAGAATGGTTAGAGGTTCTAAATCTTGGGACACGCAGCAAGGAGAAGCAGATGCTTCTGGATTTATGGTATTATATAAGCTCAGGACCCTGCTGTGCTGAGTGTCTGAACTCCATAAATACGGGCATGCTCCAGCACAGAAGTTGGCATTGTACCCTTTGGGTTCGTGTATCCATTTCCACCCTAGATCCCTCTTGAAATCAATGTAAAGTGGACGTAGGCAGCAATTATCCTGCACATTTCTAAAGCAATAGGCCGCATCCAAAGCACGCTTCTTCCGCCGGTTGGTCTGTTGTGACTCAAGTCTGTAGGAGGGCAATAACATTAGCAGGAGATGTGGGGTCTTCCCACTGTTTTTTTTCCTAGTGGACTTTATAGTTTTCTGATCACCACTGGTATATGTGGAGGTGCCATCAATACCTGCAAATCTTGCTTCTAGTTCTTCACTTTTATTTGGGATGATGTAATTATTAGATGGTACAAAAGTGCAGCAGGGACAGTGTAAGCTTATTTTAAATCCCAGGTTCCTGTCTTTATGGTGAAGCCATTCATGAACAGCATCAGTTACATCGAAGGAGAGCCATTCGCCTTCTGCTCTTGTTTTCACAACTTTGCTGTCGATGTAGCGCTGGGTTGGAGATGTTAAATCTTTGGACTTGAGAATCTGATATAGCTCAATCCGTTGTTCAGGCACTCTGGCTTTTGGGTTCTGCAAACGAAAGACTCTGAACTCTGCTTTCACCAAATTGGAAGCATTCTTCTCCATTGCTGAGACGTCAAATCGAACAATTCTGAAGTAGGGTCTGTAGAAAGTGGGCGGGATGGCATTTTCGGAGGGGAAGAAGGGCGGCATGTCTATTTTGTAAACCTCCTTGGCGTAGTACTCTTCGTCGCTCCTCTCGCGCTCGCAGGCGGCCGCCCTCCGGCTCGCCTTCTCCTGGAGCAAGTCCCTGGTGCTGTTGTAGATGGAAATCACCTCCGGGGGGACTTCCTCGGGCTCAGGATAGTCTTCTGGGGGACTGGTGAGCTTCAGCTTGCTCAGGATCTGCCCGCGGATCGCCTCGATCCTCTTGCGCATGAACTGGTCCATATCGAGTGTGCTGCAGGTAGACAGGCTGAGCGCGACCGTGACCAGATGCAGGATCAGAAAAGCGCTCAGCACACAGTAGTGCATTTTTTAAAAAAGTGGAAAAAAAAGTTGTTTTTAAAAGTCAGAATAAAAAAAAAGAAATCAACAATTCTCAAAGTATAGATCAAGGAGAGTTGTTTGGTTTTTTGTTGTTGTTGTTTGTTTTTGATGCGAAACTTTTGCAAACAATCTAGTCAATGCCCAACAGAAAAACGTATCCTGCTTG
【０１５７】
ヒトTGF-β3のm-RNAのアンチセンス
CAGGATGCCCCAAAAATATTTATTTATACAAAGATTTTGAGAGTAATATTCATACTTGTCTTTATACCTCAGTCTATGCGTCTGGGGCCAAGTCACTGTGTGGCACATGTCGAGCTTCCCCGAATGCCTCACATGTTGTCGCACCTGCTTCCAGGAACACCAAATGAACACAGGGTCTTGGAGGGGAAGTGGGGGAAGAACCCATAATGCCCCAACCCTGCATGGAACCACAATCCAGAAATGTGCATCCTGACCTGGAAGGCGTCTAACCAAGTGTCCAAGGGGAAATATGATCGAGGGAGAGGTGAGAGGAGGGACCCAGAGGCAGACAGGAGAGGGTTGATTTCCACCCTTTCTTCTGCGTTCAGCATATCCAAAAGGCCCAATACAGTTGATGGGCCAGGAACTGCATGACCTGGATTTTCTCCCTGTAGTGACCCACGATGTTAATTGATGTAGAGGACAGTTTGCAAAAGTAATAGATTTGCCCTTAATCCCAGACAGTATGAGATACAATTCTGGGACTTTGTCTTCGTAACCTGTCTTTAAAAAAAAAAAAAAATGCTTGCCTTGTATAACATAATCCAGATTCCCTAGAGCAGATGTGGTACAGCAATGAGCAAATCCAACCTCAGATCTGAAGTGTCTTCCAGTCTGGCCCTGACCCAGCCATTCTCTGCCCTTCCTTCTCCCTTTAGGGTAGCCCAAATCCCATTGCCACACAACATCTCAACTTACCATCCCTTTCCTCTATCCCCATCCCCTCTGTCTGCGTCACAGAAAGTCTGTGTGTTCTGAAGAGTTCAGCCTTCCTCTAACCAAACCCACACTTTCTTTACCACCGTGATTCTCAGAGCCAGCAAGAAAGAAATGTTCCAAAAGGAAACCTCCATCTCAGCCATTTGCCCGGAGCCGAAGGTTGTGGGCTCCAGGCCTCTCAGTGAGGTTTGTTGCTTGTGTGTTTCCCGAGGAGCGGGCAGTCAGGCAGTGGTGGTTCTCTCTCCCCTCTCTCTGTCGCACGTGGGGTCTCAGCTACATTTACAAGACTTCACCACCATGTTGGAGAGCTGCTCCACTTTGGGGGTCCTCCCAACATAGTACAGGATGGTCAGGGGCTCCAGGTCCTGGGGCACGCAGCAAGGCGAGGCAGATGCTTCAGGGTTCAGAGTGTTGTACAGTCCCAGCACCGTGCTGTGGGTTGTGTCTGCACTGCGGAGGTATGGGCAAGGGCCTGAGCAGAAGTTGGCATAGTAGCCCTTAGGTTCATGGACCCACTTCCAGCCCAGATCCTGTCGGAAGTCAATGTAGAGGGGGCGCACACAGCAGTTCTCCTCCAAGTTGCGGAAGCAGTAATTGGTGTCCAAAGCCCGCTTCTTCCTCTGACCCCCCTGGCCCGGGTTGTCGAGCCGGTGTGGGGGAATCATCATGAGGATTAGATGAGGGTTGTGGTGATCCTTCTGCTTCTTGAGGCGCCCCAGATCTCCACGGCCATGGTCATCCTCATTGTCCACGCCTTTGAATTTGATTTCCATCACCTCGTGAATGTTTTCCAGGATATCTCCATTGGGCTGAAAGGTGTGACATGGACAGTGAATGCTGATTTCTAGACCTAAGTTGGACTCTCTTCTCAACAGCCACTCACGCACAGTGTCAGTGACATCAAAGGACAGCCACTCGGCAGTGCCCCGTGTGGGCAGATTCTTGCCACCGATATAGCGCTGTTTGGCAATGTGCTCATCTGGCCGAAGGATCTGGAAGAGCTCGATCCTCTGCTCATTCCGCTTAGAGCTGGGGTTGGGCACCCGCAAGACCCGGAATTCTGCTCGGAATAGGTTGGTTCTATTTTTCTCCACTGAGGACACATTGAAGCGGAAAACCTTGGAGGTAATTCCTTTAGGGCAGACAGCCAGTTCGTTGTGCTCCGCCAGCCCCTGGATCATGTCGAATTTATGGATTTCTTTGGCATAGTATTCCGACTCGGTGTTTTCCTGGGTGCAGCCTTCCTCCCTCTCCCCATGCATCTCCTCCAGCAGCTCCCGGGTGCTGTTGTAAAGGGCCAGGACCTGATAGGGGACGTGGGTCATCACCGTTGGCTCAGGGGGGCTGGTGAGCCTGAGCTTGCTCAAGATCTGTCCCCTAATGGCTTCCACCCTCTTCTTCTTGATGTGGCCGAAGTCCAAGGTGGTGCAAGTGGACAGAGAGAGGCTGACCGTGGCAAAGTTCAGCAGGGCCAGGACCACCAGAGCCCTTTGCAAGTGCATCTTCATGTGTGAGCTGGGAAGAGAGGCCAGGGGGACGGCAAGGCCTGGAGAGGAAGAGACCCCAGCAGACGTGCAGAAGGAGGGAGGAAAACCAGGCGGCCTCCCCAGATCCCAAAGACTGAGGCTTGGCAAGAAGGTGCATGAACTCACTGCACTGCGAGAGCTTCAGGACTTCCAGGAAGCGCTGGCAACCCTGAGGACGAAGAAGCGGACTGTGTGCCTTGTAGCGCTGGGATTCTTGTCCATGTGTCTAAACAGGTTTTGCTGG
【０１５８】
ヒトインターロイキン10(IL-10)のm-RNAのアンチセンス
TCACCCTATGGAAACAGCTTAAAAACAGGTGAAAATAATAAATATTGAAAAAAATTATAATATTGGGCTTCTTTCTAAATCGTTCACAGAGAAGCTCAGTAAATAAATAGAAATGGGGGTTGAGGTATCAGAGGTAATAAATATTCTATAAGAGAGGTACAATAAGGTTTCTCAAGGGGCTGGGTCAGCTATCCCAGAGCCCCAGATCCGATTTTGGAGACCTCTAATTTATGTCCTAGAGTCTATAGAGTCGCCACCCTGATGTCTCAGTTTCGTATCTTCATTGTCATGTAGGCTTCTATGTAGTTGATGAAGATGTCAAACTCACTCATGGCTTTGTAGATGCCTTTCTCTTGGAGCTTATTAAAGGCATTCTTCACCTGCTCCACGGCCTTGCTCTTGTTTTCACAGGGAAGAAATCGATGACAGCGCCGTAGCCTCAGCCTGAGGGTCTTCAGGTTCTCCCCCAGGGAGTTCACATGCGCCTTGATGTCTGGGTCTTGGTTCTCAGCTTGGGGCATCACCTCCTCCAGGTAAAACTGGATCATCTCAGACAAGGCTTGGCAACCCAGGTAACCCTTAAAGTCCTCCAGCAAGGACTCCTTTAACAACAAGTTGTCCAGCTGATCCTTCATTTGAAAGAAAGTCTTCACTCTGCTGAAGGCATCTCGGAGATCTCGAAGCATGTTAGGCAGGTTGCCTGGGAAGTGGGTGCAGCTGTTCTCAGACTGGGTGCCCTGGCCTGGGCTGGCCCTCACCCCAGTCAGGAGGACCAGGCAACAGAGCAGTGCTGAGCTGTGCATGCCTTCTTTTGCAAGTCTGTCTTGTGGTTTGGTTTTGCAAGAGCAACCCCCTGATGTGTAGACCTTCACCTCTCTGTCCCCCTTTTATATTGTAAGCTCAGGGAGGCCTCTTCATTCATTAAAAAGCCACAATCAAGGTTTCCCGGCACAGGATTTTTTCTGCTTAGAGCTCCTCCTTCTCTAACCTCTCTAATAAACTTAGTTTTCAATTTTTGCATCGTAAGCAAAAATGATTGGTTGAACATGAACTTCTGCATTACAGCTATTTTTAGGATGGGCTACCTCTCTTAGAATAATTTTTTAGCTTCTCAATTAAAAAAAGTTGATTTCCTGGGGAGAACAGCTGTTCTGTCCGCAGAGGCCCTCAGCTGTGGGTTCTCATTCGCGTGTTCCTAGGTCACAGTGACGTGGACAAATTGCCCATTCCAGAATACAATGGGATTGAGAAATAATTGG
【０１５９】
ヒトプロスタグランジンE2シンターゼのアンチセンスm-RNA
tttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttCCATGAGATGCCTGCCATGACAGGCGCCACAAACCTTTCCTTTATTGCAAACATGTCCCAGTCCCGGGAGGCTTGGGAAGAGTGGGAACCAGGGGAACCCAGGGATGGGATTCCACTGAAAACAAACCGTCCTGCTGTCCTGTCGAGGGCCCCCACCCACAGGATGTAGCCATGGGACAGCCACTGAGGGTCCAGGAAGAGGGGCGGCAGAGCAGGGAGGCAGGGACAGGGAGGGGTCGCCCCAGGGCAGTGGCAGGGCTGGAACTCGTCCCTAACATCCCTGAGCCCCAGCAGGTGCCCTGTGTTAGAAGCGAGAGGGCTGGTGGGGGTGCGTGGACAAGGGGCAGAATGATCCTGCCCCCAACCAGTATCGCCAGGCGCTGGCCCAGTGGCCCCAGGCCCTGGCAGCTGGCGTCTTCCGCTGCCTTCCCTCTGCTCTGCGCGGGGACATTCAGTGCGCTGGGGAGGCCTCGGTGATGGCCCTCTCCACCCGCAGGTACCAGGGCTGGATGTGCGTGTGCTGCATCAGGTCATCGAATGCATCCAGCCCCTCCATCACACGCAGCACGCCATACACCGCCAAATCAGCGAGATTCGGCTTCTGGCCCCCCATGAAGGGCCGGTCCTTGCCCACAGCAGCCACCCACTTGTCAGCAGCCTCATAGAGGTCCTCGCGCACGTTGTCCTGGAGGCGGTGCCTGCTCTTGAGTCGCTTGCTGATGAGGTACATGGCCGCTGCACCCATGTACTTGGCCACGGCACCCTCCACGGCTCCGAACTTGCCCTCGCGGACAATGTAGTCAAAGGACGCCAGAGCCTCGGTGGGCGTGCGGTACACATTGGGGGAGATCAGGTGCACCAGCCAGTCGTCCGCCCACTGCCGCCACTTCATCTCCTCCGTCCTGGCCTCCTTCCCACCATACACTTGCTGGGCCTCCTTCTCGTTGAGCATGAGCCAGTACTTATTGCCGAACTCGGTCACCTCCTTGCCCTGCTCGTTCACAGCCTTCATGGCTGGGTAGTAGGTGATGATCTCTTCCAGGGGCTGCCCCGACACCAGGTAGGTCTTGAGGGCGCTGATGATGACAGAGGAGTCATTTAGTTGTTGCGAGCTTTCTCCTTCCTGGGCCACCAGGATGGGCACCTTTCTGTAGGAGGAGAACTTGATCTCAGCCCTGCGCACAGGGTTCACCTCCACCACCTGGTAGGGCAGGGCATGGAAGTCGAGGAAGGCTCGGACCTTGCTGCAGAAGGGACACGTCTTGTACTGGTACAGGGTCAGCTGCAGGCGGCTGGACAGGGAGAGCTGCGCGGCTGAGCGCTCTGCGTGGAGGTCCTGGGCGCGCAGGTGCCACCGCGCCGTGTGGTACAGCCCCAGGGCTCCCCCCAGGGCCAGCGCCGCAGCTCCCAGCAGCCGCGGGCTCCCCTTACGAGCTGCAGCCACGGGGCTCGGGCCGCCCGCCGCCCCCGCGAAGCCAGCCCGGCTCTGCGTGGGTAGCAGCGGCTGGGGGCGGCCTCCCAGCCTCCAGGCCAAGGCGCACCCACCAGGCCACAGCGCCCGCACCACCCGCGCAGCCGGGTCCATGTTCGCTCCGCCGGCGCCGCGGGCGGGCGCGCGAAACGAAGACGCCGAGGCACGCGCGGCGTTTAAAGGGCCAGGACTCTGGCGCCCCGCGGGTTGGCCGGGGTGAGGGCGACGCTAAGGGAACCCTCAGCGCTCTCGGGACTGGGCGTGTGCCCGGCGCCCAAGTTCGAAACGCCCGCC
【０１６０】
ヒトVEGFのアンチセンスm-RNA
CAGTGTGCTGGCGGCCGCGGTGTGTCTACAGGAATCCCAGAAATAAAACTCTCTAATCTTCCGGGCTCGGTGATTTAGCAGCAAGAAAAATAAAATGGCGAATCCAATTCCAAGAGGGACCGTGCTGGGTCACCCGCCCGGGAATGCTTCCGCCGGAGTCTCGCCCTCCGGACCCAAAGTGCTCTGCGCAGAGTCTCCTCTTCCTTCATTTCAGGTTTCTGGATTAAGGACTGTTCTGTCGATGGTGATGGTGTGGTGGCGGCAGCGTGGTTTCTGTATCGATCGTTCTGTATCAGTCTTTCCTGGTGAGAGATCTGGTTCCCGAAACCCTGAGGGAGGCTCCTTCCTCCTGCCCGGCTCACCGCCTCGGCTTGTCACATCTGCAAGTACGTTCGTTTAACTCAAGCTGCCTCGCCTTGCAACGCGAGTCTGTGTTTTTGCAGGAACATTTACACGTCTGCGGATCTTGTACAAACAAATGCTTTCTCCGCTCTGAGCAAGGCCCACAGGGATTTTCTTGTCTTGCTCTATCTTTCTTTGGTCTGCATTCACATTTGTTGTGCTGTAGGAAGCTCATCTCTCCTATGTGCTGGCCTTGGTGAGGTTTGATCCGCATAATCTGCATGGTGATGTTGGACTCCTCAGTGGGCACACACTCCAGGCCCTCGTCATTGCAGCAGCCCCCGCATCGCATCAGGGGCACACAGGATGGCTTGAAGATGTACTCGATCTCATCAGGGTACTCCTGGAAGATGTCCACCAGGGTCTCGATTGGATGGCAGTAGCTGCGCTGATAGACATCCATGAACTTCACCACTTCGTGATGATTCTGCCCTCCTCCTTCTGCCATGGGTGCAGCCTGGGACCACTTGGCATGGTGGAGGTAGAGCAGCAAGGCGAGGCTCCAATGCACCCAAGACAGCAGAAAGTTCATGGTTTCGGAGGCCCGACCGGGGCCGGGCCGGCTCGCGCCGGGCCGCCAGCACACTG
【０１６１】
(実施例8)
TGF-β阻害剤
TGF-βを阻害する小分子
GlaxoSmithKline製のSB-431542 TBRIキナーゼ阻害剤(Callahanら2002年、Lapingら2002年、Inmanら2002年)
Scios、Inc.製のNPC30345 TBRIキナーゼ阻害剤(Dumont & Arteaga 2003年)
SD-093 TBR-Iキナーゼ阻害剤(Subramanian, G.ら2003年)
Lilly Inc.製のLY364947 TBRIキナーゼ阻害剤(Sawyerら2003年)
デコリン、活性TGF-βの種々の形態と結合する小さいコンドロイチン-デルマタン硫酸プロテオグリカン(Borderら1992年)。
TGF-βを阻害するタンパク質
エンドグリン、95kDa糖タンパク質と結合するTGF-β(Gougosら1992年)。
【０１６２】
TGF-βと結合する抗体
Genzyme/CAT製のCAT-192ヒト化TGF-β1 mAB(Benigniら2003年)。
Genzyme/CAT製のCAT-152ヒト化TGF-β2 mAB(Siriwardenaら2002年)。
Genzyme/CAT製の1D11 TGF-β1、2、3mAB(Ananthら1999年)。
Genentech製の2G7 TGF-β1、2、3モノクローナルIgG2(Arteagaら1993年)。
【０１６３】
R&D製のTGF-β1、-2または-3に対する抗体
例えば、カタログ614 R&D systems、McKinley Place NE、Minneapolis、MN USA 55413ウサギ抗-TGF-β2LAP参照のこと:(Schlotzer-Schrehardt, U.ら2001年)。
【０１６４】
可溶性受容体
Biogen製のsTBRII:Fc(RII/Fc hu IgG1融合タンパク質)(Muraokaら2002年、Rowland-Goldsmithら2001年)
sTBRII:Fc(Yang, Y. A.ら2002年)
βグリカン(組換え可溶性TBRIII)(Bandyopadhyayら2002年)
【０１６５】
(実施例9)
TGF-β1、-2および-3のアミノ酸配列
RXXR:成熟(活性)部分の切断部位(XXは、どんなものでもよい)
ASPC:このモチーフのCは、2つの単量体を機能的な二量体に連結する分子間シスチン架橋のCである
C C C:分子内システイン架橋(システインノットモチーフ)
TGF-β1、2および3の成熟タンパク質は、このリストの最後から112個のアミノ酸を含有する
【０１６６】
TGF-β1
MPPSGLRLLLLLLPLLWLLVLTPGRPAAGLSTCKTIDMELVKRKRIEAIRGQILSKLRLASPPSQGEVPPGPLPEAVLALYNSTRDRVAGESAEPEPEPEADYYAKEVTRVLMVETHNEIYDKFKQSTHSIYMFFNTSELREAVPEPVLLSRAELRLLRLKLKVEQHVELYQKYSNNSWRYLSNRLLAPSDSPEWLSFDVTGVVRQWLSRGGEIEGFRLSAHCSCDSRDNTLQVDINGFTTGRRGDLATIHGMNRPFLLLMATPLERAQHLQSSRHRRALDTNYCFSSTEKNCCVRQLYIDFRKDLGWKWIHEPKGYHANFCLGPCPYIWSLDTQYSKVLALYNQHNPGASAAPCCVPQALEPLPIVYYVGRKPKVEQLSNMIVRSCKCS
【０１６７】
TGF-β1の好ましいアミノ酸配列:
1) ALDTNYCFSSTEKNCCVRQL
2) YIDFRKDLGWKWIHEPKGYH
3) ANFCLGPCPYIWSLDTQYSK
4) VLALYNQHNPGASAAPCCVP
5) QALEPLPIVYYVGRKPKVEQ
6) LSNMIVRSCKCS
7) TEKNCCVRQLYIDFRKDLGW
8) KWIHEPKGYHANFCLGPCPY
9) WSLDTQYSKVLALYNQHNP
10) GASAAPCCVPQALEPLPIVY
11) YVGRKPKVEQLSNMIVRSCKCS
12) QYSKVLALYNQHNPGASAAPCCVPQALEPLPIVYYVGRKP
13) QYSKVLALYNQHNPGASAAPCCVPQALEPLPIVYYVGRKP
I
QYSKVLALYNQHNPGASAAPCCVPQALEPLPIVYYVGRKP
【０１６８】
(AAPCモチーフのシトシンでs-s架橋によって結合しているTGF-β1アミノ酸配列番号12の二量体)
14)ALDTNYCFSSTEKNCCVRQLYIDFRKDLGWKWIHEPKGYHANFCLGPCPYIWSLDTQYSKVLALYNQHNPGASAAPCCVPQALEPLPIVYYVGRKPKVEQLSNMIVRSCKCS
15) ALDTNYCFSSTEKNCCVRQLYIDFRKDLGW
16) KWIHEPKGYHANFCLGPCPYIWSLDTQYSK
17) VLALYNQHNPGASAAPCCVPQALEPLPIVY
18) YVGRKPKVEQLSNMIVRSCKCS
19) CVRQLYIDFRKDLGWKWIHEPKGYHANFCL
20) GPCPYIWSLDTQYSKVLALYNQHNPGASAA
21) PCCVPQALEPLPIVYYVGRKPKVEQLSNMI
【０１６９】
TGF-β2
MHYCVLSAFLILHLVTVALSLSTCSTLDMDQFMRKRIEAIRGQILSKLKLTSPPEDYPEPEEVPPEVISIYNSTRDLLQEKASRRAAACERERSDEEYYAKEVYKIDMPPFFPSENAIPPTFYRPYFRIVRFDVSAMEKNASNLVKAEFRVFRLQNPKARVPEQRIELYQILKSKDLTSPTQRYIDSKVVKTRAEGEWLSFDVTDAVHEWLHHKDRNLGFKISLHCPCCTFVPSNNYIIPNKSEELEARFAGIDGTSTYTSGDQKTIKSTRKKNSGKTPHLLLMLLPSYRLESQQTNRRKRALDAAYCFRNVQDNCCLRPLYIDFKRDLGWKWIHEPKGYNANFCAGACPYLWSSDTQHSRVLSLYNTINPEASASPCCVSQDLEPLTILYYIGKTPKIEQLSNMIVKSCKCS
【０１７０】
TGF-β2の好ましいアミノ酸配列
1) ALDAAYCFRNVQDNCCLRPL
2) YIDFKRDLGWKWIHEPKGYN
3) ANFCAGACPYLWSSDTQHSR
4) VLSLYNTINPEASASPCCVS
5) QDLEPLTILYYIGKTPKIEQ
6) LSNMIVKSCKCS
7) VQDNCCLRPLYIDFKRDLGW
8) KWIHEPKGYNANFCAGACPY
9) LWSSDTQHSRVLSLYNTINP
10) EASASPCCVSQDLEPLTILY
11) YIGKTPKIEQLSNMIVKSCKCS
12) QHSRVLSLYNTINPEASASPCCVSQDLEPLTILYYIGKTPK
13) QHSRVLSLYNTINPEASASPCCVSQDLEPLTILYYIGKTPK
I
QHSRVLSLYNTINPEASASPCCVSQDLEPLTILYYIGKTPK
【０１７１】
(ASPCモチーフのシトシンでs-s架橋によって結合しているTGF-β2アミノ酸配列番号12の二量体)
14)ALDAAYCFRNVQDNCCLRPLYIDFKRDLGWKWIHEPKGYNANFCAGACPYLWSSDTQHSRVLSLYNTINPEASASPCCVSQDLEPLTILYYIGKTPKIEQLSNMIVKSCKCS
15) ALDAAYCFRNVQDNCCLRPLYIDFKRDLGW
16) KWIHEPKGYNANFCAGACPYLWSSDTQHSR
17) VLSLYNTINPEASASPCCVSQDLEPLTILY
18) YIGKTPKIEQLSNMIVKSCKCS
19) CLRPLYIDFKRDLGWKWIHEPKGYNANFCA
20) GACPYLWSSDTQHSRVLSLYNTINPEASAS
21) PCCVSQDLEPLTILYYIGKTPKIEQLSNMI
【０１７２】
TGF-β3
MKMHLQRALVVLALLNFATVSLSLSTCTTLDFGHIKKKRVEAIRGQILSKLRLTSPPEPTVMTHVPYQVLALYNSTRELLEEMHGEREEGCTQENTESEYYAKEIHKFDMIQGLAEHNELAVCPKGITSKVFRFNVSSVEKNRTNLFRAEFRVLRVPNPSSKRNEQRIELFQILRPDEHIAKQRYIGGKNLPTRGTAEWLSFDVTDTVREWLLRRESNLGLEISIHCPCHTFQPNGDILENIHEVMEIKFKGVDNEDDHGRGDLGRLKKQKDHHNPHLILMMIPPHRLDNPGQGGQRKKRALDAAYCFRNVQDNCCLRPLYIDFKRDLGWKWIHEPKGYNANFCAGACPYLWSSDTQHSRVLSLYNTINPEASASPCCVSQDLEPLTILYYIGKTPKIEQLSNMIVKSCKCS
【０１７３】
TGF-β3の好ましいアミノ酸配列:
1) ALDTNYCFRNLEENCCVRPL
2) YIDFRQDLGWKWVHEPKGYY
3) ANFCSGPCPYLRSADTTHST
4) VLGLYNTLNPEASASPCCVP
5) QDLEPLTILYYVGRTPKVEQ
6) LSNMVVKSCKCS
7 NLEENCCVRPLYIDFRQDLG
8 WKWVHEPKGYYANFCSGPCP
9) YLRSADTTHSTVLGLYNTLN
10) PEASASPCCVPQDLEPLTIL
11) YYVGRTPKVEQLSNMVVKSCKCS
12) THSTVLGLYNTLNPEASASPCCVPQDLEPLTILYYVGRTPK
13) THSTVLGLYNTLNPEASASPCCVPQDLEPLTILYYVGRTPK
I
THSTVLGLYNTLNPEASASPCCVPQDLEPLTILYYVGRTPK
【０１７４】
(ASPCモチーフのシトシンでs-s架橋によって結合しているTGF-β3アミノ酸配列番号12の二量体)
14)ALDAAYCFRNVQDNCCLRPLYIDFKRDLGWKWIHEPKGYNANFCAGACPYLWSSDTQHSRVLSLYNTINPEASASPCCVSQDLEPLTILYYIGKTPKIEQLSNMIVKSCKCS
15) ALDAAYCFRNVQDNCCLRPLYIDFKRDLGW
16) KWIHEPKGYNANFCAGACPYLWSSDTQHSR
17) VLSLYNTINPEASASPCCVSQDLEPLTILY
18) YIGKTPKIEQLSNMIVKSCKCS
19) CLRPLYIDFKRDLGWKWIHEPKGYNANFCA
20) GACPYLWSSDTQHSRVLSLYNTINPEASAS
21) PCCVSQDLEPLTILYYIGKTPKIEQLSNMI
【０１７５】
【表１Ａ】
2013500313.tif 000002
【０１７６】
【表１Ｂ】
2013500313.tif 000003
【０１７７】
【表１Ｃ】
2013500313.tif 000004
【０１７８】
【表１Ｄ】
2013500313.tif 000005
【０１７９】
【表１Ｅ】
2013500313.tif 000006
【０１８０】
【表１Ｆ】
2013500313.tif 000007
【０１８１】
【表１Ｇ】
2013500313.tif 000008
【０１８２】
【表１Ｈ】
2013500313.tif 000009
【図１】
2013500313.tif 000010
【図２】
2013500313.tif 000011
【図３】
2013500313.tif 000012
【図４】
2013500313.tif 000013
【図５】
2013500313.tif 000014
【図６】
2013500313.tif 000015
【配列表】
2013500313000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成24年3月28日(2012.3.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
化学療法薬と、TGF-βアンチセンスオリゴヌクレオチドとを含む医薬組成物であって、アンチセンスオリゴヌクレオチドが、化学療法薬の細胞傷害性のIC50を低下させる医薬組成物。
【請求項２】
TGF-βアンチセンスオリゴヌクレオチドが、化学療法薬のIC50を5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%または95%低下させる、請求項1に記載の医薬組成物。
【請求項３】
化学療法薬が、ゲムシタビン、5-フルオロウラシル、テモゾロミド、ダカルバジン(dacarbacine)、ドセタキセル、シスプラチン、オキサリプラチン、タモキシフェンおよびイリノテカンからなる群から選択される、請求項1または2に記載の医薬組成物。
【請求項４】
アンチセンスオリゴヌクレオチドが、TGF-β2アンチセンスオリゴヌクレオチド、TGF-β1アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはTGF-β3アンチセンスオリゴヌクレオチドである、請求項1から3のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項５】
TGF-β2アンチセンスオリゴヌクレオチドが、配列番号22〜48からなる群から選択され、TGF-β1アンチセンスオリゴヌクレオチドが、配列番号1〜21からなる群から選択され、TGF-β3アンチセンスオリゴヌクレオチドが、配列番号49〜78からなる群から選択される、請求項4に記載の医薬組成物。
【請求項６】
医薬上許容される担体、増量剤、滑沢剤、希釈液、賦形剤、崩壊剤および/またはアジュバントをさらに含む、請求項1から5のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項７】
有効成分として、化学療法薬と、請求項1から6のいずれかに規定されたTGF-βアンチセンスオリゴヌクレオチドとを含有する新生物性疾患の医薬組成物。
【請求項８】
新生物性疾患が、膵臓癌、黒色腫、脳腫瘍、膀胱癌、腎癌、肺癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、結腸直腸癌、胃癌、子宮内膜癌、骨肉腫、筋肉腫、血液由来腫瘍、白血病、腫瘍転移、血管腫、聴神経腫瘍、神経線維腫、トラコーマ、化膿性肉芽腫(pyogenic, granulomas)、乾癬、星状細胞腫(astracytoma)、聴神経腫瘍、芽細胞腫、ユーイング腫瘍、頭蓋咽頭腫、上衣腫、髄芽細胞腫、神経膠腫、血管芽腫(hemangloblastoma)、ホジキン-リンパ腫、髄芽腫(medullablastoma)、白血病、中皮腫、神経芽腫、神経線維腫、非ホジキンリンパ腫、松果体腫、網膜芽細胞腫、肉腫、セミノーマ、トラコーマ、ウィルムス腫瘍、胆管癌腫、膀胱癌腫、脳腫瘍、乳癌、気管支原性肺癌、腎臓の癌腫、子宮頸癌、絨毛癌、嚢胞腺癌(cystadenocarcinome)、胚性(embrional)癌腫、上皮癌、食道癌、子宮頸癌腫、結腸癌腫、結腸直腸癌腫、子宮内膜癌、胆嚢癌、胃癌、頭部癌、肝臓癌腫、肺癌腫、髄様癌、頚部癌、非小細胞気管支原性肺癌/肺癌腫、卵巣癌、膵臓癌腫、乳頭癌、乳頭状腺癌、前立腺(prostata)癌、小腸癌腫、前立腺癌腫、直腸癌、腎細胞癌、皮膚癌、小細胞気管支原性肺癌/肺癌腫、扁平上皮癌、皮脂腺癌腫、精巣癌腫および子宮癌からなる群から選択される、請求項7に記載の医薬組成物。
【請求項９】
脳腫瘍が、神経膠腫、星状細胞腫、乏突起膠腫および退形成性乏突起星細胞腫(oligoastrozytoma)、膠芽腫、脳転移、骨髄腫または形質細胞腫である、請求項8に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
経口的に、静脈内に、頭蓋内に、腹腔内に、膀胱内に、非経口的に、局所的に、経皮的に、結膜下にまたは舌下に投与される、請求項7、8または9のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項１１】
化学療法薬およびアンチセンスオリゴヌクレオチドが、同時に、部分的に時間的に重複して、または時間的に別個に投与される、請求項7、8、9または10のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項１２】
請求項1から7のいずれかに記載の医薬組成物を調製する方法。
【国際調査報告】
2013500313.tif 000016
2013500313.tif 000017
2013500313.tif 000018
2013500313.tif 000019
2013500313.tif 000020
2013500313.tif 000021