(57)【要約】  本明細書で、ＰＲＴ５、ＰＲＴ６、ＰＲＴ７及びＰＲＴ８と呼ばれる４つのポリペプチド、それをコードする核酸、それらのタンパク質を含む組成物、並びに治療及び診断の方法でのそれらの使用が提供される。ポリペプチドを特異的に認識する抗体、並びにそれらの使用も提供される。各タンパク質の特徴付けは、ＰＲＴ５及びＰＲＴ８がグルコース代謝に関与し、ＰＲＴ６がアンドロゲン調節に関与し、ＰＲＴ７が癌と相関することを示した。【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号１、配列番号２、配列番号３又は配列番号４のいずれか１つによって表されるアミノ酸配列を含む単離されたポリペプチド、及び任意のその断片、誘導体又は類似体。
【請求項２】
配列番号１によって表されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の単離されたポリペプチド。
【請求項３】
配列番号２によって表されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の単離されたポリペプチド。
【請求項４】
配列番号３によって表されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の単離されたポリペプチド。
【請求項５】
配列番号４によって表されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の単離されたポリペプチド。
【請求項６】
ケモカイン様分泌タンパク質である、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項７】
請求項１に記載の単離されたポリペプチド、及び任意のその断片、誘導体又は類似体を含む単離されたタンパク質。
【請求項８】
請求項２に記載のポリペプチド、並びに任意のその断片、誘導体及び類似体をコードする配列を含む単離された核酸分子。
【請求項９】
遺伝子コードの縮重によるコドン配列が、請求項８に記載の核酸分子と異なるだけである、単離された核酸分子。
【請求項１０】
配列番号５によって表される配列を含む、請求項８に記載の単離された核酸分子。
【請求項１１】
請求項３に記載のポリペプチドをコードする配列を含む単離された核酸分子、並びに任意のその断片、誘導体及び類似体。
【請求項１２】
遺伝子コードの縮重によるコドン配列が、請求項１１に記載の核酸分子と異なるだけである、単離された核酸分子。
【請求項１３】
配列番号６によって表される配列を含む、請求項１１に記載の単離された核酸分子。
【請求項１４】
請求項４に記載のポリペプチドをコードする配列を含む単離された核酸分子、並びに任意のその断片、誘導体及び類似体。
【請求項１５】
遺伝子コードの縮重によるコドン配列が、請求項１４に記載の核酸分子と異なるだけである、単離された核酸分子。
【請求項１６】
配列番号７によって表される配列を含む、請求項１４に記載の単離された核酸分子。
【請求項１７】
請求項５に記載のポリペプチドをコードする配列を含む単離された核酸分子、並びに任意のその断片、誘導体及び類似体。
【請求項１８】
遺伝子コードの縮重によるコドン配列が、請求項１７に記載の核酸分子と異なるだけである、単離された核酸分子。
【請求項１９】
配列番号８によって表される配列を含む、請求項１７に記載の単離された核酸分子。
【請求項２０】
請求項８から１９までのいずれか一項に記載の単離された核酸分子を含むベクター。
【請求項２１】
前記核酸分子がプロモーターに作動可能に連結される、請求項２０に記載のベクター。
【請求項２２】
発現ベクターである、請求項２１に記載のベクター。
【請求項２３】
請求項２０から２２までのいずれか一項に記載のベクターを含む細胞。
【請求項２４】
植物細胞、昆虫細胞、真菌細胞、細菌細胞又は哺乳動物細胞からなる群から選択される宿主細胞である、請求項２３に記載の細胞。
【請求項２５】
請求項１及び７のいずれか一項に記載の単離されたポリペプチド又はタンパク質を含む組成物。
【請求項２６】
グルコース代謝関連の障害の治療のための、請求項２又は５のいずれか一項に記載の単離されたポリペプチド、又はそれを含むタンパク質、又はそれをコードする核酸を含む組成物。
【請求項２７】
請求項２又は５のいずれか一項に記載の単離されたポリペプチド、又はそれを含むタンパク質、又はそれをコードする核酸を含む組成物であって、グルコース代謝を増強すること、インスリン受容体の発現を誘導すること、原形質膜へのＧｌｕｔ−４輸送体の転位置を誘導すること、グルコース流入を誘導すること、グリコーゲン合成を誘導すること、並びに解糖及び脂肪酸合成を誘導することのうちの少なくとも１つのためである上記組成物。
【請求項２８】
糖尿病、メタボリックシンドローム、肥満、内分泌性疾患及び筋肉障害からなる群から選択される障害の治療のための、請求項２又は５のいずれか一項に記載の単離されたポリペプチド、又はそれを含むタンパク質、又はそれをコードする核酸を含む組成物。
【請求項２９】
テストステロン生成を増強するための、請求項３に記載の単離されたポリペプチド、又はそれを含むタンパク質、又はそれをコードする核酸を含む組成物。
【請求項３０】
テストステロン欠乏又はテストステロン欠乏関連の障害の治療のための、請求項３に記載の単離されたポリペプチド、又はそれを含むタンパク質、又はそれをコードする核酸を含む組成物。
【請求項３１】
癌の治療のための、請求項４に記載の単離されたポリペプチド、又はそれを含むタンパク質、又はそれをコードする核酸を含む組成物。
【請求項３２】
ｐ５３発現を誘導するための、請求項４に記載の単離されたポリペプチド、又はそれを含むタンパク質、又はそれをコードする核酸を含む組成物。
【請求項３３】
薬学的に許容される担体、賦形剤又は希釈剤をさらに含む、請求項２５から３０までのいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３４】
疾患又は障害の治療のための医薬の調製における請求項１及び７のいずれか一項に記載のポリペプチド又はタンパク質、又はそれをコードする核酸の使用であって、前記疾患又は障害は、免疫学的コンポーネント又は病因を有する疾患、感染症、急性及び慢性炎症性疾患、癌、移植及び自己免疫疾患、生殖能力関連の疾患、並びに炭水化物代謝障害、糖尿病、メタボリックシンドローム、肥満、内分泌性疾患及び筋肉障害からなる群から選択される上記使用。
【請求項３５】
グルコース代謝関連障害の治療のための医薬の調製における請求項２又は５のいずれか一項に記載のポリペプチド又はタンパク質、又はそれを含むタンパク質又はそれをコードする核酸の使用。
【請求項３６】
糖尿病、メタボリックシンドローム、肥満、内分泌性疾患及び筋肉障害からなる群から選択される障害の治療のための医薬の調製における、請求項２又は５のいずれか一項に記載のポリペプチド又はタンパク質、又はそれを含むタンパク質又はそれをコードする核酸の使用。
【請求項３７】
テストステロン欠乏又はテストステロン欠乏関連障害の治療のための医薬の調製における請求項３に記載のポリペプチド又はタンパク質、又はそれを含むタンパク質又はそれをコードする核酸の使用。
【請求項３８】
癌の治療のための医薬の調製における請求項４に記載のポリペプチド又はタンパク質、又はそれを含むタンパク質又はそれをコードする核酸の使用。
【請求項３９】
それを必要とする対象での疾患又は障害の治療のための方法であって、請求項１又は７のいずれか一項に記載のポリペプチド又はタンパク質、又はそれを含む組成物の治療的有効量を前記対象に投与することを含み、前記疾患又は障害は、免疫学的コンポーネント又は病因を有する疾患、感染症、急性及び慢性炎症性疾患、癌、移植及び自己免疫疾患、生殖能力関連の疾患、並びに炭水化物代謝障害からなる群から選択される上記方法。
【請求項４０】
グルコース代謝関連障害の治療のための方法であって、必要とする対象に、請求項２又は５に記載のポリペプチド又はそれを含む組成物の治療的有効量を投与することを含む上記方法。
【請求項４１】
糖尿病、メタボリックシンドローム、肥満、内分泌性疾患及び筋肉障害からなる群から選択される障害の治療のための方法であって、必要とする対象に、請求項２又は５に記載のポリペプチド又はそれを含む組成物の治療的有効量を投与することを含む上記方法。
【請求項４２】
グルコース代謝を増強するための方法であって、必要とする対象に、請求項２又は５に記載のポリペプチド又はそれを含む組成物の治療的有効量を投与することを含む上記方法。
【請求項４３】
インスリン受容体の発現を誘導するための方法であって、必要とする対象に、請求項２に記載のポリペプチド又はそれを含む組成物の治療的有効量を投与することを含む上記方法。
【請求項４４】
インスリン受容体の発現を誘導するための方法であって、ＰＲＴ５、生物学的に活性なその断片若しくは誘導体、又はそれを含む組成物の有効量と細胞を接触させることを含む上記方法。
【請求項４５】
テストステロン欠乏関連の障害の治療のための方法であって、必要とする対象に、請求項３に記載のポリペプチド又はそれを含む組成物の治療的有効量を投与することを含む上記方法。
【請求項４６】
テストステロン生成を増強するための方法であって、必要とする対象に、請求項３に記載のポリペプチド又はそれを含む組成物の治療的有効量を投与することを含む上記方法。
【請求項４７】
癌を治療するための方法であって、必要とする対象に、請求項４に記載のポリペプチド又はそれを含む組成物の治療的有効量を投与することを含む上記方法。
【請求項４８】
ｐ５３発現を誘導する方法であって、ＰＲＴ７又は生物学的に活性なその断片若しくは誘導体、又はそれを含む組成物の有効量と細胞を接触させることを含む上記方法。
【請求項４９】
請求項１又は７のいずれか一項に記載の単離されたポリペプチド又はタンパク質、又は任意のその断片若しくは誘導体を特異的に認識する抗体。
【請求項５０】
ＰＲＴ５ポリペプチド又は任意のその断片若しくは誘導体を特異的に認識する抗体。
【請求項５１】
前記ＰＲＴ５ポリペプチドが配列番号１によって表される、請求項５０に記載の抗体。
【請求項５２】
ＰＲＴ６ポリペプチド又は任意のその断片若しくは誘導体を特異的に認識する抗体。
【請求項５３】
前記ＰＲＴ６ポリペプチドが配列番号２によって表される、請求項５２に記載の抗体。
【請求項５４】
ＰＲＴ７ポリペプチド又は任意のその断片若しくは誘導体を特異的に認識する抗体。
【請求項５５】
前記ＰＲＴ７ポリペプチドが配列番号３によって表される、請求項５４に記載の抗体。
【請求項５６】
ＰＲＴ８ポリペプチド又は任意のその断片若しくは誘導体を特異的に認識する抗体。
【請求項５７】
前記ＰＲＴ８ポリペプチドが配列番号４によって表される、請求項５６に記載の抗体。
【請求項５８】
有効成分として請求項４９から５７までのいずれか一項に記載の抗体を含む組成物。
【請求項５９】
薬学的に許容される担体、賦形剤又は希釈剤をさらに含む、請求項５８に記載の組成物。
【請求項６０】
診断又は治療の方法で用いるための、請求項５８又は５９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６１】
前記抗体がＰＲＴ７、又はその断片若しくは誘導体を特異的に認識する、請求項５８から６３までのいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６２】
癌の診断で使用するための、請求項６１に記載の組成物。
【請求項６３】
請求項４９から５７までのいずれか一項に記載の抗体を生成する、抗体産生細胞系。
【請求項６４】
請求項６３に記載の細胞系によって生成される抗体。
【請求項６５】
疾患又は障害の診断のための診断組成物の調製における、請求項４９に記載の抗体の使用であって、前記疾患又は障害は、免疫学的コンポーネント又は病因を有する疾患、感染症、急性及び慢性炎症性疾患、癌、移植及び自己免疫疾患、生殖能力関連の疾患、並びに炭水化物代謝障害からなる群から選択される上記使用。
【請求項６６】
癌の診断のための診断組成物の調製における、請求項５４から５５までのいずれか一項に記載の抗体の使用。
【請求項６７】
前記癌が肺癌又はすい臓癌のいずれか１つである、請求項６６に記載の使用。
【請求項６８】
疾患又は障害の治療のための治療組成物の調製における、請求項４９に記載の抗体の使用であって、前記疾患又は障害は、免疫学的コンポーネント又は病因を有する疾患、感染症、急性及び慢性炎症性疾患、癌、移植及び自己免疫疾患、生殖能力関連の疾患、並びに炭水化物代謝障害からなる群から選択される上記使用。
【請求項６９】
それを必要とする対象での疾患又は障害の治療のための方法であって、請求項４９に記載の抗体、又はそれを含む組成物の治療有効薬量を前記対象に投与することを含み、前記疾患又は障害は、免疫学的コンポーネント又は病因を有する疾患、感染症、急性及び慢性炎症性疾患、癌、移植及び自己免疫疾患、生殖能力関連の疾患、並びに炭水化物代謝障害からなる群から選択される上記方法。
【請求項７０】
対象の疾患又は障害の診断のための方法であって、前記疾患又は障害は、免疫学的コンポーネント又は病因を有する疾患、感染症、急性及び慢性炎症性疾患、癌、移植及び自己免疫疾患、生殖能力関連の疾患、並びに炭水化物代謝障害からなる群から選択され、
ａ．前記対象からの試料を提供するステップと、
ｂ．前記試料を請求項４９に記載の抗体、又はそれを含む組成物と接触させるステップと、
ｃ．前記抗体とその特異抗原との間の複合体の形成を検出手段を通して検出するステップとを含み、
それによって複合体の検出は前記対象が前記疾患又は障害を起こしていることを示す上記方法。
【請求項７１】
対象の癌の診断のための方法であって、
ａ．前記対象からの試料を提供するステップと、
ｂ．前記試料を請求項５４から５５までのいずれか一項に記載の抗体、又はそれを含む組成物と接触させるステップと、
ｃ．前記抗体とその特異抗原との間の複合体の形成を検出手段を通して検出するステップとを含み、
それによって複合体の検出は前記対象が癌を起こしていることを示す上記方法。
【請求項７２】
試料での癌の診断のための方法であって、対象からの試料中のＰＲＴ７ポリペプチド又はそれを含むタンパク質の存在を検出することを含み、それによって、対照より高いＰＲＴ７レベルを提示する試料は癌の存在を示す上記方法。
【請求項７３】
前記癌が肺癌又はすい臓癌である、請求項７０又は７１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７４】
疾患又は障害の診断及び／又は治療効果のモニタリング及び／又は予後診断の評価のための診断キットであって、前記疾患又は障害は、免疫学的コンポーネント又は病因を有する疾患、感染症、急性及び慢性炎症性疾患、癌、移植及び自己免疫疾患、生殖能力関連の疾患、並びに炭水化物代謝障害からなる群から選択され、次のコンポーネント：
ａ．請求項４９に記載の抗体、又はそれを含む組成物、及び
ｂ．試料中の抗原の存在の検出を実施するための説明書を含み、前記抗原は前記抗体によって特異的に認識される上記キット。
【請求項７５】
次のコンポーネント：
ａ．試験する試料を収集するための少なくとも１つの手段、
ｂ．前記抗体による前記抗原の前記認識の検出のために必要な少なくとも１つの試薬、及び 
ｃ．少なくとも１つの対照試料
の少なくとも１つをさらに含む、請求項７４に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規タンパク質、それをコードする核酸及びそれを含む組成物、前記タンパク質を特異的に認識する抗体、並びに治療法及び診断法でのそれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
このセクションでの議論は、本発明に対して「先行技術」と認定される対象に限定されない。したがって、特定の対象がこの議論に含まれることを理由に、そのような先行技術の認定を意味するものでも推論されるものでもなく、そのような包含を理由に本発明者の利益に反する宣言を意味するものではない。
【０００３】
本出願全体で指摘される全ての刊行物は、そこで引用される全参考文献を含めて参照により完全に本明細書に組み込まれる。
【０００４】
組織特異的タンパク質及びそれらの発現レベルは、生物体の健康状態のための優れた指標、並びに疾患の場合の治療のための潜在的標的となることができる。
【０００５】
ヒトに影響を及ぼす疾患は、それらの原因の機構によって分類することができる。例えば、免疫学的コンポーネント又は病因を有する疾患には、感染症、急性及び慢性の炎症性疾患、癌、移植及び自己免疫疾患が含まれる。
【０００６】
用語炎症性腸疾患（ＩＢＤ）は、おそらくそれ自身の腸組織に対する体の免疫反応の結果として、腸が炎症（赤化及び腫脹）を起こす一群の障害を含み、したがって、それは自己免疫疾患と考えられる。
【０００７】
炎症性疾患には、敗血症、エンドトキシン血症、すい炎、ブドウ膜炎、肝炎、腹膜炎、角膜炎、ＳＩＲＳ及び傷害誘発性炎症が含まれる。
【０００８】
生殖能力と関連付けされている疾患には、男性不妊症及び女性不妊症が含まれる。男性不妊症は、様々な問題を原因とすることができる。より一般的な障害のいくつかを下に記載する：
・欠陥のある精子生産：９０パーセントの男性不妊症は、十分な精子生産の障害に起因する。精子が生産されないとき無精子症は起こり、ほとんど精子が生産されないとき精液過少症が診断される；
・精索静脈瘤；
・他の障害：精巣の異常発育又は傷害（内分泌障害又は炎症に起因する）、副腺の障害、性交障害、男性生殖管の嚢胞を引き起こした、１９５０年代及び１９６０年代に用いられた合成エストロゲンであるジエチルスチルベストロール（ＤＥＳ）への曝露、停留睾丸、並びに稀な場合には染色体異常などの遺伝障害。
【０００９】
テストステロン欠乏の発達への寄与因子には、以下のものが含まれる：
・医薬品、特にうつ病又は精神障害を治療するために用いられるもの；
・アルコール中毒；
・精巣を標的にするか害する癌のための化学療法又は放射線治療；
・慢性疾患；
・脳下垂体（脳から精巣へのホルモン生産を調節する物質を生産する脳内の腺）の機能障害；
・ヘモクロマトーシス（血中の過剰な鉄分）；
・性腺機能低下症（精巣が十分に高いレベルのテストステロンを生産することができない、別名アンドロゲン欠乏、又は精液を生産すること、別名精子形成、ができない）；
・炎症性疾患、例えばサルコイドーシス（精巣の損傷又は感染を引き起こす状態）；
・免疫系の障害を起こす、エイズなどの病気；
・副腎皮質系に負担をかける過度のストレス。
【００１０】
女性不妊症は、様々な問題を原因とすることができる。より一般的な障害のいくつかは、多嚢胞卵巣、骨盤内炎症性疾患、排卵機能障害、子宮フィブロイド、子宮内膜症及び免疫不妊症である。
【００１１】
炭水化物代謝の障害は、多くの形で起こる。最も一般的な障害は後天的である。糖尿病性ケトアシドーシス、高浸透圧性昏睡及び低血糖などの炭水化物代謝の後天的又は二次的混乱は、全て中枢神経系に影響を及ぼす。糖尿病では、末梢神経疾患の多くの形及び変異体も見られる。炭水化物代謝の残りの障害は、稀な先天性代謝異常（すなわち遺伝的障害）である。
【００１２】
米国で、及び国際的に、炭水化物代謝の後天的な障害はかなり一般的である。アルコール依存患者及びインスリンで治療される糖尿病患者の間で、低血糖は、神経系疾患、特に急性の精神荒廃、記憶喪失、失見当識、感覚鈍化及び昏睡の一般的原因である。他の原因による高インスリン血症は稀であるが、すい臓腫瘍が原因のこともある。様々な神経病学的合併症を伴う糖尿病は、成人患者で治療される最も一般的な障害の１つである。
【００１３】
糖尿病（真性糖尿病）は、最も一般的な内分泌性疾患であって、グルコース代謝の異常を特徴とする。本病と関連する異常なグルコース代謝は過血糖（高い血糖レベル）をもたらし、結局、目、腎臓、神経及び血管を含む複数の器官系の合併症を引き起こす。持続的な過血糖又は異常なグルコース耐性の患者は、通常本疾患と診断されるが、最も一般的には、患者は最初に過度の排尿（多尿）及び極度の渇きによる頻繁な水分補給（多飲）を訴える。これらの代表的な初期症状は、過血糖の浸透効果から生じる。
【００１４】
真性糖尿病の発生病理は、すい機能障害、特にすい臓のランゲルハンス島ベータ細胞の機能障害と一般的に関連している。この機能障害は、グルコース調節ペプチドホルモンであるインスリンを生産する、島（islet）ベータ細胞の破壊を引き起こしうる。真性糖尿病は、インスリン非依存性若しくはＩＩ型に対して、通常インスリン依存性若しくはＩ型に分類されている。
【００１５】
糖尿病の主な３形態は以下の通りである：
・Ｉ型：身体のインスリン生産障害から生じる。治療は、通常インスリン投与を含む。
・ＩＩ型：相対的なインスリン欠乏と合わさった、身体が適切にインスリンを用いることができない状態から生じる。ＩＩ型糖尿病を起こす運命にある多くの人々は、その人の血糖レベルは正常より高いが、ＩＩ型糖尿病が診断されるほど十分に高くないときに起こる状態である、糖尿病前症の状態で長年を過ごす。
・妊娠糖尿病：これまでに糖尿病を起こしたことがないが、妊娠中に高い血糖（グルコース）レベルを有する妊婦は、妊娠糖尿病を有すると言われる。妊娠糖尿病は、全ての妊婦の約４％に影響を及ぼす。それは、ＩＩ型（又は稀にはＩ型）の発症に先行することがある。
・糖尿病の他の多くの形は、これらと別に分類される。例には、インスリン分泌の遺伝子欠損による先天性糖尿病、嚢胞性線維症関連の糖尿病、グルココルチコイドの高用量によって誘発されるステロイド糖尿病、及びいくつかの形の単遺伝子性糖尿病が含まれる。
【００１６】
しかし、疾患がよりよく理解されるにつれて、この用語は次第に変化した。例えば、インスリン非依存性糖尿病の一部の患者では、疾患はインスリン依存性形に進行するが、他の患者ではインスリン依存性は生じないことが見出されている。
【００１７】
したがって、しばしば島（islet）破壊の発生病理機構の観点から患者は分類され、呼称Ｉ型は現在、自己免疫性の島発生病理、すなわち島特異的な自己免疫性の攻撃に起因する糖尿病を指すために用いられ、本明細書ではそのように用いられる。用語インスリン依存性糖尿病（ＩＤＤＭ）は、明白な症状を呈するのに十分な、すい臓ベータ細胞の自己免疫性破壊が起こっている段階に進行したＩ型糖尿病を指す。用語前ＩＤＤＭは、生検又は自己免疫応答の分析によって検出することができる自己免疫状態を指し、そこにおいて、すい島ベータ細胞は、一部の細胞が破壊を受けることができる程度で特異的自己免疫性攻撃を受けている。しかし、前ＩＤＤＭでは、破壊（存在するとしても）は、インスリンの投与を必要とするのに十分な程度まで進行していない。Ｉ型糖尿病の初期段階に、明白な症状が観察されるが一部の島（islet）機能が残っている時点が存在することがあるので（「蜜月期間」として知られる）、全てのＩ型糖尿病がＩＤＤＭに分類されるわけではなく、全ての前ＩＤＤＭが明白な症状なしで現れるわけではない。
【００１８】
インスリン不足に起因する異常代謝と関連する代謝合併症は、多数の器官系に影響を及ぼすことができる。最も一般的な急性代謝合併症は、重度の過血糖（及び浸透圧利尿の結果として生じる循環血液量減少）並びに過剰な遊離脂肪酸放出及びケトン体の生産によって誘発される代謝性アシドーシスを特徴とする、糖尿病性ケトアシドーシスの合併症である。
【００１９】
ケトアシドーシスの急性代謝合併症に加えて、糖尿病患者は、かなりの罹患率及び早発性死亡率を引き起こす一連の後期合併症に罹りやすい。グルコース及び脂質の代謝異常の結果、アテローム性動脈硬化症は一般集団より糖尿病患者において、より広く及びより早期に起こる。この血管病状は、とりわけ、冠状動脈疾患、脳卒中及び壊疽を伴う末梢血管疾患をもたらしうる。網膜症は、糖尿病の別の血管合併症である。糖尿病性網膜症は盲目の主要な原因であって、増殖性網膜症として知られる閉塞、出血、動脈瘤形成及び血管新生に進行しうる、網膜毛細管の透過性増加から開始される。
【００２０】
上述の如く、血糖の細心の調節がＩ型糖尿病の後期合併症の改善に関連付けられ、ベータ細胞機能の保全又は回復が疾患の大部分の病的合併症を低減又は除去することができることを示唆している。
【００２１】
炭水化物代謝の遺伝性の障害は稀である。ピルビン酸デヒドロゲナーゼ（ＰＤＨ）複合体の重度の欠陥及びペントース尿症と呼ばれる良性の化学的異常は、わずかな（２〜６）患者でしか報告されていない。
【００２２】
低血糖、糖尿病性ケトアシドーシス及び高浸透圧性昏睡は、全て潜在的に致命的であるが、可能性としては治療可能な状態である。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２３】
本研究で、本発明者らは本発明の目的である新規分泌タンパク質、すなわちＰＲＴ５、ＰＲＴ６、ＰＲＴ７及びＰＲＴ８を発見した。本発明は、前記タンパク質を含む組成物、並びに治療法でのそれらの使用も提供する。本明細書に記載される新規タンパク質を特異的に認識する抗体、並びに診断及び治療でのそれらの使用も本発明の目的である。
【００２４】
本発明のこれら及び他の使用、並びに目的は、記載の進行に従って明瞭になる。
【課題を解決するための手段】
【００２５】
本発明の目的は、配列番号１、配列番号２、配列番号３又は配列番号４のいずれか１つによって表されるアミノ酸配列を含む単離されたポリペプチド、及び任意のその断片、誘導体又は類似体を提供することである。前記ポリペプチドはケモカイン様の分泌タンパク質であって、本明細書ではそれぞれＰＲＴ５、ＰＲＴ６、ＰＲＴ７又はＰＲＴ８とも呼ばれる。
【００２６】
同様に、本発明の目的は、単離されたポリペプチドＰＲＴ５、ＰＲＴ６、ＰＲＴ７又はＰＲＴ８のいずれか１つ、及び任意のその断片、誘導体又は類似体を含む単離されたタンパク質を提供することである。
【００２７】
本発明のさらなる目的は、単離されたポリペプチドＰＲＴ５、ＰＲＴ６、ＰＲＴ７又はＰＲＴ８のいずれか１つをコードする配列を含む単離された核酸分子、並びに任意のその断片、誘導体及び類似体を提供することである。
【００２８】
本発明のさらなる目的は、単離されたポリペプチドＰＲＴ５、ＰＲＴ６、ＰＲＴ７又はＰＲＴ８のいずれか１つをコードする単離された核酸分子を含むベクターを提供することであって、前記核酸分子はプロモーターに作動可能に結合され、前記ベクターは発現ベクターである。さらに、前記ベクターを含む細胞も、本発明によって提供される。
【００２９】
本発明の別のさらなる目的は、単離されたポリペプチドＰＲＴ５、ＰＲＴ６、ＰＲＴ７若しくはＰＲＴ８のいずれか１つ、及び任意のその断片、誘導体又は類似体、又はそれを含むタンパク質を含む組成物を提供することである。前記組成物は、薬学的に許容される担体、賦形剤又は希釈剤をさらに含むことができる。
【００３０】
ＰＲＴ５又はＰＲＴ８、又は生物学的に活性であるその断片若しくは誘導体を含む場合、本発明によって提供される前記組成物は、グルコース代謝を増強すること、インスリン受容体の発現を誘導すること、原形質膜へのＧｌｕｔ−４輸送体の転位置を誘導すること、グルコース流入及び／又はグリコーゲン合成を誘導すること、並びに解糖及び脂肪酸合成を誘導することなどの、特定の治療用途を有することができるか、或いは、前記組成物は、グルコース代謝関連の障害、糖尿病、メタボリックシンドローム、肥満、内分泌性疾患及び筋肉障害からなる群から選択される障害の治療のために用いられてもよい。
【００３１】
ＰＲＴ６又は生物学的に活性であるその断片若しくは誘導体を含む場合、本発明によって提供される前記組成物は、テストステロン生成を増強することなどの特定の治療用途を有することができるか、又はテストステロン欠乏若しくは低テストステロン関連の障害の治療のために用いてもよい。
【００３２】
代わりに、ＰＲＴ７又は生物学的に活性であるその断片若しくは誘導体を含む場合、本発明によって提供される前記組成物は、ｐ５３発現、アポトーシス若しくは細胞死を誘導することなどの特定の効果を有することができるか、又は癌の治療における治療用途を有する。
【００３３】
本発明の別のさらなる目的は、本明細書に記載される単離されたポリペプチドＰＲＴ５、ＰＲＴ６、ＰＲＴ７又はＰＲＴ８のいずれか１つの、疾患又は障害の治療のための医薬の調製における使用を提供することであり、前記疾患又は障害は、免疫学的コンポーネント又は病因を有する疾患、感染症、急性及び慢性炎症性疾患、癌、移植及び自己免疫疾患、生殖能力関連の疾患、並びに炭水化物代謝障害、糖尿病、メタボリックシンドローム、肥満、内分泌性疾患及び筋肉障害からなる群から選択される。
【００３４】
本発明のさらに他の目的は、それを必要とする対象での疾患又は障害の治療のための方法であって、単離されたポリペプチドＰＲＴ５、ＰＲＴ６、ＰＲＴ７又はＰＲＴ８、又はそれを含むタンパク質、又はそれを含む組成物の治療的有効量を前記対象に投与することを含む方法を提供することであり、前記疾患又は障害は、免疫学的コンポーネント又は病因を有する疾患、感染症、急性及び慢性炎症性疾患、癌、移植及び自己免疫疾患、生殖能力関連の疾患、炭水化物代謝障害、糖尿病、メタボリックシンドローム、肥満、内分泌性疾患並びに筋肉障害からなる群から選択される。
【００３５】
本発明のさらに他の目的は、単離されたポリペプチドＰＲＴ５、ＰＲＴ６、ＰＲＴ７又はＰＲＴ８の１つ、又はその断片若しくは誘導体、又はそれを含むタンパク質を特異的に認識することができる抗体、又は任意のその断片若しくは誘導体を提供することである。本発明は、抗ＰＲＴ５、抗ＰＲＴ６、抗ＰＲＴ７又は抗ＰＲＴ８抗体を含む組成物、並びにそれらの治療的及び診断的使用も提供する。
【００３６】
最後に、本発明は、疾患又は障害の診断及び／又は治療効果のモニタリング及び／又は予後診断の評価のための診断キットであって、前記疾患又は障害は、免疫学的コンポーネント又は病因を有する疾患、感染症、急性及び慢性炎症性疾患、癌、移植及び自己免疫疾患、生殖能力関連の疾患、並びに炭水化物代謝障害からなる群から選択され、抗ＰＲＴ５、抗ＰＲＴ６、抗ＰＲＴ７又は抗ＰＲＴ８抗体の少なくとも１つ又はそれを含む組成物；並びに試料中の抗原の存在の検出を実施するための説明書を含み、前記抗原は前記抗体によって特異的に認識されるキットを提供する。前記キットは、次のコンポーネントの少なくとも１つをさらに含むことができる：試験する試料を収集するための少なくとも１つの手段；前記抗体による前記抗原の前記認識の検出のために必要な少なくとも１つの試薬; 及び少なくとも１つの対照試料。
【図面の簡単な説明】
【００３７】
【図１Ａ】グルコースレベルに及ぼすＰＲＴ５の影響を示す図である。ＰＲＴ５注射の１日後に、０．５、１．５、２、２．５及び４時間（ｈｒ）の時点で測定された、２ｍｇ／ｋｇのグルコースを注射したＣ５７Ｂｌマウスの血液中のグルコース濃度（ｍｇ／ｄＬ）を示すグラフ。
【図１Ｂ】グルコースレベルに及ぼすＰＲＴ５の影響を示す図である。ＰＲＴ５注射の２日後に、０．５、１及び２時間（ｈｒ）の時点で測定された、２ｍｇ／ｋｇのグルコースを注射したＣ５７Ｂｌマウスの血液中のグルコース濃度（ｍｇ／ｄＬ）を示すグラフ。
【図１Ｃ】グルコースレベルに及ぼすＰＲＴ５の影響を示す図である。ＰＲＴ５注射の３日後に、０．５、１及び２時間（ｈｒ）の時点で測定された、２ｍｇ／ｋｇのグルコースを注射したＣ５７Ｂｌマウスの血液中のグルコース濃度（ｍｇ／ｄＬ）を示すグラフ。
【図１Ｄ】グルコースレベルに及ぼすＰＲＴ５の影響を示す図である。ＰＲＴ５注射の４日後に、０．５、１及び２時間（ｈｒ）の時点で測定された、２ｍｇ／ｋｇのグルコースを注射したＣ５７Ｂｌマウスの血液中のグルコース濃度（ｍｇ／ｄＬ）を示すグラフ。凡例：−◇−生理食塩水；−■−１μｇ／ｋｇ  ＰＲＴ５；−▲−５μｇ／ｋｇ  ＰＲＴ５；Ｓａｌ．＝生理食塩水；Ｇｌｕｃ．＝グルコース；Ｔ．ｉｎｊ．＝グルコース注射の後の時間。
【図２Ａ】健康な個体及び糖尿病患者のヒト血清中のＰＲＴ５レベルを示す図である。８人の健康な個体及び９人のＩＩ型糖尿病患者におけるＰＲＴ５のレベル（ｐｇ／ｍｌ）を示すヒストグラム。試料は１：３に希釈され、抗ＰＲＴ５抗体は１：２５０に希釈された。
【図２Ｂ】健康な個体及び糖尿病患者のヒト血清中のＰＲＴ５レベルを示す図である。健康個体対ＩＩ型糖尿病患者（各々平均１０試料）におけるＰＲＴ５のレベル（ｐｇ／ｍｌ）を示すヒストグラム。試料は１：３に希釈され、抗ＰＲＴ５抗体は１：２５０に希釈された。凡例：Ｈ．＝健康；Ｔ．ＩＩ  Ｄｉａｂ．＝ＩＩ型糖尿病。
【図３Ａ】テストステロンレベルに及ぼすＰＲＴ６の影響を示す図である。テストステロン較正曲線。
【図３Ｂ】テストステロンレベルに及ぼすＰＲＴ６の影響を示す図である。ＤＭＳＯの４％水溶液、０．５μｇ／ｋｇのＰＲＴ６又は５μｇ／ｋｇのＰＲＴ６で４日間処理されたマウス（１群につき６匹のマウス）の血清（１：１０に希釈された血液）中のテストステロンレベル（ｎｇ／ｍｌ）を示すヒストグラム。凡例：Ｔｅｓｔ．ｃｏｎｃ．＝テストステロン濃度；Ｔｅｓｔ．＝テストステロン；Ｔｒｅａｔ．＝治療；ｗ．ｏ．＝週齢。
【図４Ａ】すい臓癌及び肺癌の患者におけるＰＲＴ７レベルを示す図である。健康な個体（９試料）と比較してすい臓癌患者（１０人の患者、癌病期を下の各カラムに示す）におけるＰＲＴ７のレベル（ｐｇ／ｍｌ）を示すヒストグラム。
【図４Ｂ】すい臓癌及び肺癌の患者におけるＰＲＴ７レベルを示す図である。すい臓癌患者対健康個体での、それぞれ男性及び女性におけるＰＲＴ７の平均レベル（ｐｇ／ｍｌ）を示すヒストグラム。
【図４Ｃ】すい臓癌及び肺癌の患者におけるＰＲＴ７レベルを示す図である。健康な個体（５試料）と比較してすい臓癌患者（５人の患者、癌病期を下の各カラムに示す）における、男性だけからの試料中のＰＲＴ７のレベル（ｐｇ／ｍｌ）を示すヒストグラム。
【図４Ｄ】すい臓癌及び肺癌の患者におけるＰＲＴ７レベルを示す図である。すい臓癌患者対健康個体での、男性だけのＰＲＴ７の平均レベル（ｐｇ／ｍｌ）を示すヒストグラム。
【図４Ｅ】すい臓癌及び肺癌の患者におけるＰＲＴ７レベルを示す図である。健康な個体（９試料）と比較して肺癌患者（９試料）におけるＰＲＴ７のレベル（ｐｇ／ｍｌ）を示すヒストグラム。
【図４Ｆ】すい臓癌及び肺癌の患者におけるＰＲＴ７レベルを示す図である。肺癌患者対健康個体での、それぞれ男性及び女性におけるＰＲＴ７の平均レベル（ｐｇ／ｍｌ）を示すヒストグラム。凡例：Ｈ．＝健康；ＰＣ＝すい臓癌；Ｃ．ｓｔ．＝癌病期；ＬＣ＝肺癌；ｍ．＝男性；ｆ．＝女性。
【図５Ａ】グルコースレベルに及ぼすＰＲＴ８の影響を示す図である。ＰＲＴ８注射の２日後に３０、６０及び１２０分の時点に測定された、２ｍｇ／ｋｇのグルコースを注射したＣ５７Ｂｌマウスにおけるグルコースレベルを示すグラフ。
【図５Ｂ】グルコースレベルに及ぼすＰＲＴ８の影響を示す図である。ＰＲＴ８注射の３日後に３０、６０及び１２０分の時点に測定された、２ｍｇ／ｋｇのグルコースを注射したＣ５７Ｂｌマウスにおけるグルコースレベルを示すグラフ。凡例：−◇−生理食塩水；−■−１μｇ／ｋｇ  ＰＲＴ８；−▲−１０μｇ／ｋｇ  ＰＲＴ８；Ｓａｌ．＝生理食塩水；Ｇｌｕｃ．＝グルコース；Ｔ．＝グルコース注射の後の時間。
【発明を実施するための形態】
【００３８】
本発明者らは、その全ては少なくとも１つのシグナルペプチドドメインを含み、これらが分泌された又はケモカイン様のタンパク質であることを示している新規タンパク質を単離した。
【００３９】
このように、ポリペプチド配列分析は、新規の単離されたタンパク質がケモカインに似ている構造特性を有することを示し、これらがリガンド型又はケモカイン型のタンパク質であることを示した。
【００４０】
ＰＲＴ５、ＰＲＴ６、ＰＲＴ７及びＰＲＴ８と命名されたこれらの新規の単離されたタンパク質は、本発明の目的である。本明細書で言及される全てのポリペプチドは、無料のドメインソフトウェア（ＣＢＳ、Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ、Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  ＤｅｎｍａｒｋからのＳｉｇｎａｌＰ）及び自己開発ソフトウェア（データは示さず）によってチェックされる、顕著なシグナルペプチド配列を提示する。
【００４１】
異なるタンパク質の発現パターンが、本明細書の下の実施例で提示される。簡潔には、ＰＲＴ５は、特にすい臓及び精巣で、さらには脾臓、卵巣及び小腸でも見出された（例１）。ＰＲＴ６は、特に精巣で見出された（例４）。ＰＲＴ７は、特に胎児の脳で、さらに肝臓、骨格筋及び成人の脳で見出された（例６）。最後に、ＰＲＴ８は、特にすい臓及び精巣で、さらに肝臓でも見出された（例８）。
【００４２】
配列比較は、新しく同定されたタンパク質及び現在まで記載されている他のいかなるタンパク質の間でも相同性を示さなかった。
【００４３】
したがって、第一の態様では、本発明は、ケモカイン様分泌タンパク質として特徴付けられている、配列番号１、配列番号２、配列番号３及び配列番号４のいずれか１つによって表されるアミノ酸配列、並びにその断片、類似体及び誘導体を含む単離されたポリペプチドを提供する。
【００４４】
本明細書で、用語「ポリペプチド」は、ポリペプチド又はタンパク質を表すために用いられる。ポリペプチドは、遺伝子工学的方法、宿主細胞での発現、又は他の任意の適する手段を通して、合成的に得ることができる。
【００４５】
文献では、用語「タンパク質」は、通常、安定した立体構造の完全な生体分子、並びにその改変形を称すために用いられる。ポリペプチドは、通常長さに関係なくアミノ酸の任意の単一の線状鎖を指すことができるが、規定の立体構造の欠如をしばしば暗示する。
【００４６】
したがって、本発明は、配列番号１、配列番号２、配列番号３及び配列番号４によって表されるアミノ酸配列、並びにその断片、類似体及び誘導体を含むポリペプチド並びにタンパク質を指す。
【００４７】
別途示されない限り、ポリペプチドは、通常天然のＬアミノ酸から構成される。
【００４８】
ポリペプチド分子に関して、用語「生物的特性」は、それらに限定されないが本明細書に記載される生物的活性を含む、完全なＰＲＴ５、ＰＲＴ６、ＰＲＴ７又はＰＲＴ８ポリペプチドが発揮することができるｉｎ  ｖｉｔｒｏ又はｉｎ  ｖｉｖｏ効果の少なくとも１つを発揮するポリペプチドの能力を指す。例えば、生物的特性には、癌、免疫系関連疾患、ウイルス病及び炎症性疾患を治療する能力が含まれる。
【００４９】
用語「改変されていない分子と比較して改変された分子の生物的特性に有意に影響を及ぼすことなく」は、改変されていない分子の生物学的活性に質的に類似した生物学的活性を改変された分子が保持することを表すものとする。
【００５０】
本発明と関連して、改変されたポリペプチドに関しては、配列番号１、配列番号２、配列番号３及び配列番号４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するタンパク質の生物学的特性の少なくとも１つをそれが保持すると理解されている。改変されていない分子の生物学的活性に質的に類似した生物学的活性をポリペプチドが保持するかどうか判定するために、例えば改変されたポリペプチドが、平行実験又は別々に行われる実験で分析される、対応する改変されていないもの（すなわち、ＰＲＴ５、ＰＲＴ６、ＰＲＴ７若しくはＰＲＴ８ポリペプチド又はその断片）と比較される、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｉｎ  ｖｉｖｏ又は臨床実験などの１つ又は複数のアッセイを実施してもよい。
【００５１】
改変されたポリペプチドは、ＰＲＴ５、ＰＲＴ６、ＰＲＴ７又はＰＲＴ８ポリペプチドに含まれる少なくとも８、１２、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０又は少なくとも６５アミノ酸残基の同一度を対応する配列に対して有する、少なくとも８、１２、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０又は少なくとも６５アミノ酸残基の連続した配列を含むポリペプチドであってよく、同一度は、少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％、特に少なくとも９５％である。
【００５２】
本発明は、ＰＲＴ５、ＰＲＴ６、ＰＲＴ７又はＰＲＴ８に由来するポリペプチド、例えば、１つ又は複数のアミノ酸が保存的置換によって別のアミノ酸で置換される改変ポリペプチドも提供する。本明細書で用いるように、「保存的置換」は、同じクラスのアミノ酸による１つのクラスのアミノ酸の置換を指し、そこでクラスは、自然界で見出される相同タンパク質における共通の物理化学的アミノ酸側鎖特性及び高い置換頻度によって定義される。アミノ酸側鎖の６つの一般的なクラスが分類され、以下のものが含まれる：クラスＩ（Ｃｙｓ）；クラスＩＩ（Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｇｌｙ）；クラスＩＩＩ（Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ）；クラスIV（Ｈｉｓ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ）；クラスＶ（Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｍｅｔ）；及びクラスＶＩ（Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ）。例えば、ＡｓｐによるＡｓｎ、Ｇｌｎ又はＧｌｕなどの別のクラスＩＩＩ残基の置換は、保存的置換である。
【００５３】
一実施形態では、アミノ酸配列に１つの置換だけが加えられる。
【００５４】
別の実施形態では、２つの置換が加えられる。さらなる実施形態では、３つの置換が加えられる。置換の最大数は、未置換配列のアミノ酸の少なくとも７０％、望ましくは少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、最も好ましくは少なくとも９５％を残すアミノ酸数を超えるべきでない。特定の一実施形態では、他のものによって置換されている最高３つ、時には最高６つのアミノ酸残基を含む置換が、保存的置換である。
【００５５】
さらなる実施形態では、１つ又は複数のアミノ酸が、Ｄ−アミノ酸、好ましくは対応するＤ−アミノ酸で置換されてもよい。特定の実施形態では、アミノ酸の全てはＤ−アミノ酸である。
【００５６】
したがって、本明細書で開示される配列に相同である、実質的に等しいかより大きな活性を有する配列を含むタンパク質又はポリペプチドに本発明が関することを理解するべきである。相同配列とは、全アミノ酸数の２５％以下、好ましくは１０％以下までの欠失、付加又は置換を有する配列を指す。
【００５７】
好ましい置換は、タンパク質又はポリペプチドの二次構造を変更しないことが予想される変化、すなわち保存的変化である。以下のリストは、元のアミノ酸（左側）と交換されてもよいアミノ酸（右側）を示す。
【００５８】
元の残基  例示的な置換
Ａｌａ  Ｇｌｙ；Ｓｅｒ
Ａｒｇ  Ｌｙｓ
Ａｓｎ  Ｇｌｎ；Ｈｉｓ
Ａｓｐ  Ｇｌｕ
Ｃｙｓ  Ｓｅｒ
Ｇｌｎ  Ａｓｎ
Ｇｌｕ  Ａｓｐ
Ｇｌｙ  Ａｌａ；Ｐｒｏ
Ｈｉｓ  Ａｓｎ；Ｇｌｎ
Ｉｌｅ  Ｌｅｕ；Ｖａｌ
Ｌｅｕ  Ｉｌｅ；Ｖａｌ
Ｌｙｓ  Ａｒｇ；Ｇｌｎ；Ｇｌｕ
Ｍｅｔ  Ｌｅｕ；Ｔｙｒ；Ｉｌｅ
Ｐｈｅ  Ｍｅｔ；Ｌｅｕ；Ｔｙｒ
Ｓｅｒ  Ｔｈｒ
Ｔｈｒ  Ｓｅｒ
Ｔｒｐ  Ｔｙｒ
Ｔｙｒ  Ｔｒｐ；Ｐｈｅ
Ｖａｌ  Ｉｌｅ；Ｌｅｕ
【００５９】
アミノ酸は、それらの本質的な特徴、例えば電荷、側鎖のサイズなどによって分類されてもよい。以下のリストは、類似したアミノ酸の群を示す。好ましい置換は、以下の通り、１つの群に属すアミノ酸を同じ群のアミノ酸と交換するものであろう。
１．小さな脂肪族、非極性：Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ；
２．極性の負に荷電した残基及びそれらのアミド：Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ；
３．極性の正に荷電した残基：Ｈｉｓ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ；
４．大きな脂肪族の無極性の残基：Ｍｅｔ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｃｙｓ；
５．大きな芳香族の残基：Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ。
【００６０】
アミノ酸置換及びタンパク質構造についてのさらなる解説は、Ｓｃｈｕｌｚら、Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  ＰｒｏｔｅｉｎＳｔｒｕｃｔｕｒｅ、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、ＮＹ、１９７９年及びＣｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｔ．Ｅ．、Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ、Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ＆  Ｃｏ．、Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ、ＣＡ  １９８３年で見出すことができる。
【００６１】
上で詳述した好ましい保存的なアミノ酸置換は、本明細書で下に詳述される、本発明のタンパク質の機能又は活性を実質的に維持するか増加させることが予想される。当然ながら、生じるタンパク質又はポリペプチドがその元の機能を保持する場合、いかなるアミノ酸置換、付加又は欠失も、本発明の範囲内であると考えられる。例えば、保存的置換は、本発明のポリペプチドが、野生型ポリペプチドを認識する抗体によって今もなお認識されるものである。
【００６２】
本発明のタンパク質又はポリペプチドは、従来の化学的方法、例えば固相合成（例えばＦＭＯＣ及びＢＯＣ技術を用いる）及び液相合成法によって生成することができる。これらのタンパク質又はポリペプチドは、下記のＣｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｃｈａｐｔｅｒ  １６に詳述される通りに、細菌若しくは昆虫細胞又は他の真核生物の転写のｉｎ  ｖｉｖｏ系で生成されてもよい。生成後、タンパク質又はポリペプチドは、それらが生成された細胞から精製される。ポリペプチドの精製及び単離法は当分野の技術者に公知であり、例えばＡｕｓｕｂｅｌら（編）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｃｈａｐｔｅｒ  １６、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、２００６年及びＣｏｌｉｇａｎら（編）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、Ｃｈａｐｔｅｒ  ５及び６、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、２００６年に詳述されている。有利には、タンパク質又はポリペプチドは、第二のタンパク質、例えばグルタチオン−Ｓ−転移酵素（ＧＳＴ）など、又はヒスチジンタグ（Ｈｉｓタグ）配列などの配列タグとの融合体として生成されてもよい。融合又はタグ付きタンパク質の使用は、上記のＣｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｃｈａｐｔｅｒ  １６、及びＨｉｓタグタンパク質発現及び精製キット［例えばＱｉａｇｅｎ  ＧｍｂＨ、Ｇｅｒｍａｎｙから入手できる］の説明書に詳述される通り、精製手順を単純化する。
【００６３】
本発明のタンパク質又はポリペプチドは、例えば細胞抽出物又はリボソームを用いて無細胞系で合成されてもよい。
【００６４】
本発明のポリペプチド又はタンパク質は、それらの機能、親和性又は安定性を改善するために、さらに改変されてもよい。例えば、ポリペプチドにより大きな安定性及び／又は全体的に改善された性能を付与するために、環化が用いられてもよい。側鎖環化及び骨格環化を含む、いくつかの異なる環化方法が開発されている。これらの方法は、先行技術でよく実証されている［例えばＹｕら、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．７巻、１６１〜７５頁、１９９９年、Ｐａｔｅｌら、Ｊ．Ｐｅｐｔ．Ｒｅｓ．５３巻、６８〜７４頁、１９９９年、Ｖａｌｅｒｏら、Ｊ．Ｐｅｐｔ．Ｒｅｓ．５３巻、５６〜６７頁、１９９９年、Ｒｏｍａｎｏｖｓｋｉｓら、Ｊ．Ｐｅｐｔ．Ｒｅｓ．５２巻、３５６〜７４頁、１９９８年、Ｃｒｏｚｅｔら、Ｍｏｌ．Ｄｉｖｅｒｓ．３巻、２６１〜７６頁、１９９８年、Ｒｉｖｉｅｒら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４１巻、５０１２〜９頁、１９９８年、Ｐａｎｚｏｎｅら、Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔ．（Ｔｏｋｙｏ）、５１巻、８７２〜９頁、１９９８年、Ｇｉｂｌｉｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９５巻、１２８１４〜８頁、１９９８年、Ｌｉｍａｌら、Ｊ．Ｐｅｐｔ．Ｒｅｓ．５２巻、１２１〜９頁、１９９８年及び米国特許第５，４４４，１５０号］。
【００６５】
環化の特定の方法は、ベンゼン環のパラ置換アミノ酸誘導体を用いることによる、両親媒性のアルファヘリックスの安定化を含む［Ｙｕら（１９９９）同書］。環化の別の特定の方法は、Ｒｅｉｓｓｍａｎｎら、Ｂｉｏｍｅｄ．Ｐｅｐｔ．Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ１巻：５１〜６頁、１９９４〜９５年及びその中の参考文献に開示されているように、骨格環化である。骨格と側鎖との連結を含む環化の別の方法を用いてもよい［Ｒｅｉｓｓｍａｎｎら（１９９４〜９５年）同書］。
【００６６】
それにもかかわらず、本発明によると、本発明のタンパク質又はポリペプチドは、天然に存在するアミノ酸又は合成アミノ酸でない様々な同一であるか異なる有機部分で、そのＮ末端及び／又はＣ末端が伸長されてもよい。そのような伸張の例として、タンパク質又はポリペプチドは、Ｎ−アセチル基でそのＮ末端及び／又はＣ末端が伸長されてもよい。
【００６７】
ポリペプチド構造を改善するために、本発明のタンパク質又はポリペプチドは、それらのＮ末端を通してラウリル−システイン（ＬＣ）残基に、並びに／又はそれらのＣ末端を通してシステイン（Ｃ）残基に、或いは免疫化のためにアジュバント（単数又は複数）にポリペプチドを結合するのに適する他の残基（単数又は複数）に結合されてもよい。
【００６８】
別の態様では、本発明は、配列番号１、配列番号２、配列番号３又は配列番号４のいずれか１つによって表されるポリペプチドをコードする配列を含む単離された核酸分子、並びにその任意の断片、誘導体及び類似体、又はその完全長補体を提供する。
【００６９】
さらに、本発明は、配列番号１、配列番号２、配列番号３又は配列番号４のいずれか１つによって表されるポリペプチドをコードする配列を含む核酸分子と、遺伝子コードの縮重によるコドン配列が異なるだけである単離された核酸分子を提供する。
【００７０】
本明細書で用いるように、用語「核酸分子」は、ＤＮＡ分子（例えば、ｃＤＮＡ）及びＲＮＡ分子（例えば、ｍＲＮＡ）、及びヌクレオチド類似体を用いて生成されたＤＮＡ又はＲＮＡの類似体を含むものとする。核酸分子は一本鎖又は二本鎖であってよいが、好ましくはそれは二本鎖ＤＮＡである。
【００７１】
用語「単離された核酸分子」は、他の核酸分子から分離され、組換え技術によって生成される場合は他の細胞物質若しくは培地を実質的に含まず、又は化学的に合成される場合には化学前駆体若しくは他の化学物質を実質的に含まない核酸分子を含むものとする。
【００７２】
本発明の範囲内の誘導体には、ポリヌクレオチド誘導体も含まれる。ポリヌクレオチド又は核酸誘導体は、ヌクレオチド配列中で記載されるか既知の配列と異なる。例えば、ポリヌクレオチド誘導体は、１つ又は複数のヌクレオチド置換、挿入又は欠失を特徴とすることができる。
【００７３】
本発明の一態様は、ＰＲＴ５、ＰＲＴ６、ＰＲＴ７又はＰＲＴ８タンパク質をコードする核酸分子（例えば、ＰＲＴ５、ＰＲＴ６、ＰＲＴ７又はＰＲＴ８をコードするｍＲＮＡ）を同定するためのハイブリダイゼーションプローブとして用いるのに十分な核酸断片、及びＰＲＴ５、ＰＲＴ６、ＰＲＴ７又はＰＲＴ８をコードする核酸分子の増幅又は突然変異のためのＰＣＲプライマーとして用いるための断片に関する。
【００７４】
別の実施形態では、配列番号１によって表されるポリペプチドをコードする配列を含む単離された核酸分子は、配列番号５によって表される配列を含む。
【００７５】
さらなる実施形態では、配列番号２によって表されるポリペプチドをコードする配列を含む単離された核酸分子は、配列番号６によって表される配列を含む。
【００７６】
さらなる実施形態では、配列番号３によって表されるポリペプチドをコードする配列を含む単離された核酸分子は、配列番号７によって表される配列を含む。
【００７７】
さらなる実施形態では、配列番号４によって表されるポリペプチドをコードする配列を含む単離された核酸分子は、配列番号８によって表される配列を含む。
【００７８】
本発明の核酸分子、例えば配列番号５、配列番号６、配列番号７又は配列番号８のいずれか１つのヌクレオチド配列、又はその一部を有する核酸分子は、標準の分子生物学技術及び本明細書で提供される配列情報を用いて生成することができる。
【００７９】
具体的な実施形態では、本発明の単離された核酸分子は、配列番号５、配列番号６、配列番号７又は配列番号８のいずれか１つに示されるヌクレオチド配列を含む。
【００８０】
さらに別の具体的な実施形態では、本発明の単離された核酸分子は、配列番号５、配列番号６、配列番号７及び配列番号８のいずれか１つに示されるヌクレオチド配列の全長と少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９８％又はそれ以上相同であるヌクレオチド配列を含む。
【００８１】
さらに、本発明の核酸分子は、配列番号５、配列番号６、配列番号７及び配列番号８のいずれか１つの核酸配列の一部だけ、例えばプライマーとして用いることができる断片、例えば配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５又は配列番号１６のいずれか１つによって表される配列、或いはＰＲＴ５、ＰＲＴ６、ＰＲＴ７又はＰＲＴ８タンパク質のいずれか１つの一部、例えばＰＲＴ５、ＰＲＴ６、ＰＲＴ７又はＰＲＴ８タンパク質のいずれか１つの生物学的活性部分をコードする断片を含むことができる。好ましい実施形態では、核酸分子は、配列番号５、配列番号６、配列番号７又は配列番号８のいずれか１つを含む核酸の少なくとも１００個の連続するヌクレオチドを含む。
【００８２】
ＰＲＴ５、ＰＲＴ６、ＰＲＴ７又はＰＲＴ８ヌクレオチド配列のいずれか１つに基づくプローブは、それを又は相同タンパク質をコードする転写産物を検出するために用いられてもよい。そのようなプローブは、例えば対象からの細胞試料でＰＲＴ５、ＰＲＴ６、ＰＲＴ７又はＰＲＴ８をコードする核酸のレベルを測定することにより、例えばＰＲＴ５、ＰＲＴ６、ＰＲＴ７又はＰＲＴ８のｍＲＮＡレベルを検出することにより、本発明のＰＲＴ５、ＰＲＴ６、ＰＲＴ７又はＰＲＴ８タンパク質のいずれか１つを発現する細胞又は組織を同定するための診断検査キットの一部として用いられてもよい。
【００８３】
ＰＲＴ５、ＰＲＴ６、ＰＲＴ７又はＰＲＴ８タンパク質のいずれか１つの「生物学的活性部分」をコードする核酸断片は、ＰＲＴ５、ＰＲＴ６、ＰＲＴ７又はＰＲＴ８タンパク質生物学的活性を有するポリペプチドをコードする、それぞれ配列番号５、配列番号６、配列番号７及び配列番号８のいずれか１つのヌクレオチド配列の一部を単離し、タンパク質のコードされる部分を発現させ（例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの組換え発現によって）、並びにタンパク質のコードされる部分の活性を評価することによって調製することができる。具体的な実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号１、配列番号２、配列番号３及び配列番号４のいずれか１つのアミノ酸配列の少なくとも３０個の連続したアミノ酸残基を含む断片をコードする。
【００８４】
本発明は、遺伝子コードの縮重によって、配列番号５、配列番号６、配列番号７及び配列番号８のいずれか１つに示されるヌクレオチド配列と異なり、したがって、それぞれ配列番号５、配列番号６、配列番号７及び配列番号８のいずれか１つに示されるヌクレオチド配列によってコードされるものと同じＰＲＴ５、ＰＲＴ６、ＰＲＴ７又はＰＲＴ８タンパク質をコードする核酸分子をさらに包含する。
【００８５】
一実施形態では、本発明の単離された核酸分子は、配列番号１、配列番号２、配列番号３及び配列番号４のいずれか１つに示すアミノ酸配列、又はその断片を有するタンパク質をコードするヌクレオチド配列を有する。別の実施形態では、本発明の単離された核酸分子は、配列番号１、配列番号２、配列番号３及び配列番号４のいずれか１つ又はその断片と、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９８％又はそれ以上の同一性を有するタンパク質をコードするヌクレオチド配列を有する。
【００８６】
それぞれ配列番号５、配列番号６、配列番号７及び配列番号８に示されるＰＲＴ５、ＰＲＴ６、ＰＲＴ７又はＰＲＴ８ヌクレオチド配列に加えて、ＰＲＴ５、ＰＲＴ６、ＰＲＴ７又はＰＲＴ８タンパク質のポリペプチド成分のアミノ酸配列の変化をもたらすＤＮＡ配列多型が集団内に存在してもよいことは、当業者によって理解される。ＰＲＴ５、ＰＲＴ６、ＰＲＴ７又はＰＲＴ８遺伝子のポリペプチドでのそのような遺伝子多型は、天然の対立遺伝子変異のために集団内に存在することができる。
【００８７】
機能的対立遺伝子変異体は、配列番号１、配列番号２、配列番号３及び配列番号４のいずれか１つの１つ又は複数のアミノ酸の保存的置換、或いはタンパク質の重要でない領域での重要でない残基の置換、欠失又は挿入を一般的に含む。
【００８８】
非機能的対立遺伝子変異体は、配列番号１、配列番号２、配列番号３及び配列番号４のいずれか１つのアミノ酸配列の非保存的置換、欠失又は挿入、又は早発トランケーション、或いはタンパク質の重要な残基又は重要な領域での置換、挿入又は欠失を一般的に含む。
【００８９】
それぞれ配列番号１、配列番号２、配列番号３及び配列番号４のいずれか１つのタンパク質に相同であるＰＲＴ５、ＰＲＴ６、ＰＲＴ７又はＰＲＴ８タンパク質をコードする単離された核酸分子は、コードされたタンパク質に１つ又は複数のアミノ酸置換、付加又は欠失が導入されるように、それぞれ配列番号５、配列番号６、配列番号７及び配列番号８のヌクレオチド配列に１つ又は複数のヌクレオチド置換、付加又は欠失を導入することによって形成することができる。突然変異は、標準技術、例えば部位特異的突然変異誘発及びＰＣＲ媒介突然変異誘発によって導入されてもよい。好ましくは、保存的アミノ酸置換は、１つ又は複数の予測される非必須アミノ酸残基に加えられる。
【００９０】
したがって、ＰＲＴ５、ＰＲＴ６、ＰＲＴ７又はＰＲＴ８タンパク質のいずれか１つで予測される非必須アミノ酸残基は、好ましくは同じ側鎖ファミリーからの別のアミノ酸残基で置換される。代わりに、別の実施形態では、突然変異は、ＰＲＴ５、ＰＲＴ６、ＰＲＴ７又はＰＲＴ８のＤＮＡコード配列のいずれか１つの全部又は一部に沿って、例えば飽和突然変異誘発によってランダムに導入されてもよく、得られる突然変異体は、ＰＲＴ５、ＰＲＴ６、ＰＲＴ７又はＰＲＴ８活性を保持する突然変異体を同定するために、ＰＲＴ５、ＰＲＴ６、ＰＲＴ７又はＰＲＴ８タンパク質の生物学的活性についてスクリーニングされてもよい。配列番号５、配列番号６、配列番号７及び配列番号８のいずれか１つの突然変異誘発に続いて、コードされているタンパク質を組換えによって発現させ、タンパク質の活性を判定することができる。
【００９１】
２つのアミノ酸配列又は２つの核酸配列の同一性百分率を決定するために、配列は最適な比較目的のために整列させられる（例えば、最適な整列のために第一及び第二のアミノ酸又は核酸配列の１つ又は両方にギャップを導入することができ、非相同配列は比較目的のために無視されてもよい）。好ましい一実施形態では、比較目的のために整列させる参照配列の長さは、参照配列の長さの少なくとも３０％、好ましくは少なくとも４０％、より好ましくは少なくとも５０％、さらにより好ましくは少なくとも６０％、さらにより好ましくは少なくとも７０％、８０％、９０％又は９５％である。対応しているアミノ酸位置又はヌクレオチド位置のアミノ酸残基又はヌクレオチドが、次に比較される。第一の配列内の位置が第二の配列の対応する位置と同じアミノ酸残基又はヌクレオチドで占められているならば、それらの分子はその位置で同一である（本明細書で用いるように、アミノ酸又は核酸の「同一性」はアミノ酸又は核酸の「相同性」に等しい）。２つの配列間の同一性百分率は、２つの配列の最適な整列のために導入する必要がある、ギャップ数及び各ギャップの長さを考慮した、両配列によって共有される同一位置の数の関数である。
【００９２】
２つの配列間の配列の比較及び同一性百分率の決定は、数値アルゴリズムを使用して達成することができる。一実施形態では、２つのアミノ酸配列間の同一性百分率は、ＧＣＧソフトウェアパッケージ（Ａｃｃｅｌｒｙｓ  Ｉｎｃ．ウェブサイト（旧名Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ）、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、Ｃａｌｉｆ．を通してオンラインで入手可能）中のＧＡＰプログラムに組み込まれているＮｅｅｄｌｅｍａｎ及びＷｕｎｓｃｈ（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．（４８巻）：４４４〜４５３頁(１９７０年)）アルゴリズムを用い、Ｂｌｏｓｓｏｍ６２マトリックス又はＰＡＭ２５０マトリックスのいずれか、並びに１６、１４、１２、１０、８、６又は４のギャップウェイト（ｇａｐ  ｗｅｉｇｈｔ）及び１、２、３、４、５又は６のレンスウェイト（ｌｅｎｇｔｈ  ｗｅｉｇｈｔ）を用いて決定される。別の実施形態では、２つのヌクレオチド配列間の同一性百分率は、ＧＣＧソフトウェアパッケージ（Ａｃｃｅｌｒｙｓ  Ｉｎｃ．ウェブサイト（旧名Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ）、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、Ｃａｌｉｆ．を通してオンラインで入手可能）中のＧＡＰプログラムを用いて、ＮＷＳｇａｐｄｎａ．ＣＭＰマトリックス並びに４０、５０、６０、７０又は８０のギャップウェイト及び１、２、３、４、５又は６のレンスウェイトを用いて決定される。さらに別の実施形態では、２つのアミノ酸又はヌクレオチド配列の間の同一性百分率は、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれているＥ．Ｍｅｙｅｒｓ及びＷ．Ｍｉｌｌｅｒ（Ｃｏｍｐｕｔ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｓｃｉ．、４巻：１１〜１７頁（１９８８年））のアルゴリズムを用い、ＰＡＭ１２０ウェイトレジデュ（ｗｅｉｇｈｔ  ｒｅｓｉｄｕｅ）表、１２のギャップレンスペナルティ及び４のギャップペナルティを用いて決定される。
【００９３】
核酸及びタンパク質配列は、例えば他のファミリーメンバー又は関連配列を同定するために公開データベースを検索するための、「照会配列」としてさらに用いることができる。そのような検索は、Ａｌｔｓｃｈｕｌら（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５巻：４０３〜１０頁のＮＢＬＡＳＴ及びＸＢＬＡＳＴプログラム（バージョン２．０）を用いて実行することができる。相同的ヌクレオチド配列を得るために、ＢＬＡＳＴヌクレオチド検索を、ＮＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝１００、ワードレンス＝１２で実行することができる。相同的アミノ酸配列を得るために、ＢＬＡＳＴタンパク質検索を、ＸＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝５０、ワードレンス＝３で実行することができる。比較目的のためにギャップ整列を得るために、Ａｌｔｓｃｈｕｌら、（１９９７）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５巻（１７号）：３３８９〜３４０２頁に記載のようにＧａｐｐｅｄ  ＢＬＡＳＴを利用することができる。ＢＬＡＳＴ及びＧａｐｐｅｄ  ＢＬＡＳＴプログラムを利用する場合は、それぞれのプログラム（例えば、ＸＢＬＡＳＴ及びＮＢＬＡＳＴ）のデフォルトパラメータを用いることができる。（例えば、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎオンラインデータベースを参照）。
【００９４】
さらに、配列を整列させ、類似性、同一性又は相同性を決定するために、「Ｃｌｕｓｔａｌ」法（Ｈｉｇｇｉｎｓ及びＳｈａｒｐ、Ｇｅｎｅ、７３巻：２３７〜４４頁、１９８８年）及び「Ｍｅｇａｌｉｇｎ」プログラム（Ｃｌｅｗｌｅｙ及びＡｒｎｏｌｄ、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、７０巻：１１９〜２９頁、１９９７年）を用いることができる。
【００９５】
さらに別の態様では、本発明は、配列番号１、配列番号２、配列番号３及び配列番号４のいずれか１つによって表されるポリペプチド、並びにその任意の断片、誘導体又は類似体をコードする単離された核酸分子を含むベクターを提供する。したがって、前記ベクターは、それぞれ配列番号５、配列番号６、配列番号７及び配列番号８によって表される単離された核酸配列、又は遺伝子コードの縮重によってそれと異なるだけであるその任意の変異体を含む。
【００９６】
前記ベクターの一実施形態では、前記核酸分子はプロモーターに作動可能に連結される。
【００９７】
別の実施形態では、前記ベクターは発現ベクターである。
【００９８】
本明細書で用いるように、用語「ベクター」は、それが連結されている別の核酸を運ぶことが可能な核酸分子を含むものとする。ベクターは、そのようなＤＮＡ配列をベクターの本質的な生物学的機能の損失なしで確定的に切断することができ、並びにその複製及びクローニングをもたらすためにＤＮＡ断片をスプライシングすることができる、１つ又は少数の制限酵素部位で特徴付けることができる。ベクターは、そのベクターで形質転換される細胞の同定における使用のために適するマーカーをさらに含んでもよい。ベクターの１つの種類は「プラスミド」であり、それは、さらなるＤＮＡセグメントを連結することができる環状二本鎖ＤＮＡループを指す。別の種類のベクターは、さらなるＤＮＡセグメントをウイルスゲノムに連結することができるウイルスベクターである。ある種のベクターは、それらが導入される宿主細胞で自律複製が可能である（例えば、細菌の複製起点を有する細菌ベクター及びエピソーム性哺乳動物ベクター）。他のベクター（例えば、非エピソーム性哺乳動物ベクター）は、宿主細胞への導入後に宿主細胞のゲノムに組み込まれ、それによって宿主ゲノムと一緒に複製される。さらに、ある種のベクターは、それらが作動可能に連結される遺伝子の発現を指示することが可能である。そのようなベクターは、本明細書で「発現ベクター」と呼ばれる。一般に、組換えＤＮＡ技術で有用である発現ベクターは、しばしばプラスミドの形である。本明細書では、プラスミドがベクターの最も一般的に用いられる形であるので、「プラスミド」及び「ベクター」は互換的に用いることができる。しかし、本発明は、同等の機能を果たすウイルスベクター（例えば、複製に欠陥のあるレトロウイルス、アデノウイルス及びアデノ随伴ウイルス）などの他の形の発現ベクターを含むものとする。
【００９９】
用語「作動可能的に連結される」又は「作動可能に連結される」は、１つの分子の活性又は状態の変化が他の分子の活性又は状態によって影響を受けるという点で、分子が互いに機能的に結合されることを意味するものとする。対象のポリペプチド又はタンパク質をコードするＤＮＡ配列と調節配列が機能的に関連する場合、ヌクレオチド配列は「作動可能に連結している」。例えば、プロモーターヌクレオチド配列が対象のタンパク質をコードするＤＮＡ配列の転写を制御する場合は、プロモーターヌクレオチド配列は対象のタンパク質又はポリペプチドをコードするＤＮＡ配列に作動可能に連結している。一般的に、作動可能的に連結される２つのポリペプチドは、ペプチド結合を通して共有結合している。
【０１００】
別のさらなる態様では、本発明は、配列番号１、配列番号２、配列番号３及び配列番号４のいずれか１つによって表されるポリペプチド、並びにその任意の断片、誘導体又は類似体をコードする単離された核酸分子を含み、それぞれ配列番号５、配列番号６、配列番号７及び配列番号８によって表される単離された核酸配列、又は遺伝子コードの縮重によってそれと異なるだけであるその任意の変異体を含む上記のベクターを含む細胞を提供する。
【０１０１】
一実施形態では、前記細胞は、植物細胞、昆虫細胞、真菌細胞、細菌細胞又は哺乳動物細胞からなる群から選択される宿主細胞である。
【０１０２】
本明細書では、用語「宿主細胞」及び「組換え宿主細胞」は互換的に用いられる。「宿主細胞」には、異種ＤＮＡの導入によって改変することができるあらゆる培養細胞が含まれる。好ましくは、宿主細胞は、転写制御タンパク質を安定して発現させ、翻訳後に改変し、適当な細胞下コンパートメントに局在化させ、適当な転写機構に関与させることができるものである。適当な宿主細胞の選択には、検出シグナルの選択が影響を及ぼしうる。例えば、上記のリポーター構築物は、転写調節タンパク質に応じる遺伝子転写の活性化又は阻害後に選択可能であるかスクリーニング可能な形質を提供することができる。最適な選択又はスクリーニングを達成するために、宿主細胞の表現型が考慮される。そのような用語は、特定の対象細胞だけでなく、そのような細胞の後代又は潜在的な後代も指すことが理解される。突然変異又は環境の影響のために特定の改変が後継世代で起こることがあるので、そのような後代は、実際、親細胞に同一ではないかもしれないが、本明細書で用いる用語の範囲に依然として含まれる。
【０１０３】
本発明の宿主細胞には、原核細胞及び真核細胞が含まれる。原核生物には、グラム陰性又はグラム陽性の生物体、例えば大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）又は桿菌が含まれる。形質転換のために適する原核宿主細胞には、例えば大腸菌、枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、ネズミチフス菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）並びにシュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、ストレプトミセス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）及びスタフィロコッカス属（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）の他の各種が含まれる。真核細胞には、それらに限定されないが、酵母細胞、植物細胞、真菌細胞、昆虫細胞（例えば、バキュロウイルス）、哺乳動物細胞及び寄生生物、例えばトリパノソーマの細胞が含まれる。
【０１０４】
本明細書で用いるように、用語「酵母」には、厳密な分類上の意味での酵母、すなわち単細胞生物だけでなく、糸状菌の酵母様多細胞真菌類も含まれる。例示的な種には、クルイベレイ・ラクティス（Ｋｌｕｙｖｅｒｅｉ  ｌａｃｔｉｓ）、シゾサッカロミセス・ポンベ（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｐｏｍｂｅ）及びウスチラゴ・メイディス（Ｕｓｔｉｌａｇｏ  ｍａｙｄｉｓ）が含まれ、サッカロミセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）が好ましい。本発明の実施で用いることができる他の酵母は、アカパンカビ（Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ  ｃｒａｓｓａ）、クロカビ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）、偽巣性コウジ菌（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｄｕｌａｎｓ）、ピチア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓ）、カンジダ・トロピカリス（Ｃａｎｄｉｄａ  ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ）及びハンゼヌラ・ポリモルファ（Ｈａｎｓｅｎｕｌａ  ｐｏｌｙｍｏｒｐｈａ）である。
【０１０５】
哺乳動物の宿主細胞培養系には、ＨｅＬａ細胞、ＣＯＳ細胞、Ｌ細胞、３Ｔ３細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、胚幹細胞などの樹立細胞系が含まれる。
【０１０６】
別のさらなる態様では、本発明は、ＰＲＴ５、ＰＲＴ６、ＰＲＴ７及びＰＲＴ８からなる群から選択される単離されたポリペプチド又はタンパク質を含む組成物を提供し、前記タンパク質又はポリペプチドは、それぞれ上記の配列番号１、配列番号２、配列番号３又は配列番号４からなる群から選択される配列、又は任意のその断片、類似体若しくは誘導体を含む。
【０１０７】
驚くべきことに、下記の例２及び８（それぞれ図１Ａ〜１Ｄ及び５Ａ〜５Ｂ）で、ポリペプチドＰＲＴ５及びＰＲＴ８がグルコースレベル及びグルコースのターンオーバーに対して有意な影響を及ぼすことを発明者らは示した。ＰＲＴ５及びＰＲＴ８の両方は、絶食に続くグルコース注射の後に測定されたグルコースレベルの低下を誘導した。これらの結果は、ＰＲＴ５注射の２、３及び４日後、並びにＰＲＴ８注射の２及び３日後に最も顕著であった。
【０１０８】
これらの結果は、ＰＲＴ５及びＰＲＴ８がグルコース代謝の調節因子であって、糖尿病又はグルコース代謝関連の障害の治療で重要な治療薬である可能性を示唆する。
【０１０９】
例３（図２Ａ〜２Ｂ）に示す結果は、グルコース代謝の調節因子、及び糖尿病状態の因子としてのＰＲＴ５の役割をさらに裏付ける。糖尿病患者でのＰＲＴ５レベルの低下は、糖尿病でのＰＲＴ５の重要な役割を強く指し示す。したがって、ＰＲＴ５並びにＰＲＴ８は、グルコース代謝、グルコースターンオーバー、及びインスリン発現の誘導でさえも調節する治療薬として用いることができると推測できる。
【０１１０】
驚くべきことに、ＰＲＴ５処理したマウスの骨格筋で、ＰＲＴ５はインスリン受容体のレベルを増加させることが可能であることを発明者らはさらに見出した（データ示さず）。
【０１１１】
インスリンはその受容体に結合し、次にそれは多くのタンパク質活性化カスケードを開始する。インスリン受容体（ＣＤ２２０）は、インスリンによって活性化される、チロシンキナーゼ受容体の大きなクラスに属する膜貫通受容体である。それは２つのアルファサブユニットによって構成され、２つのベータサブユニットがインスリン受容体を構成する。ベータサブユニットは細胞膜を貫通し、ジスルフィド結合によって連結される。アルファ及びベータサブユニットは、単一遺伝子（ＩＮＳＲ）によってコードされる。
【０１１２】
その受容体へのインスリンの結合の結果、複雑なカスケード事象が開始され、それには以下のものが含まれる：原形質膜へのＧｌｕｔ−４輸送体の転位置及びグルコースの流入、グリコーゲン合成、解糖及び脂肪酸合成。これらの過程は、筋細胞及び脂肪組織を含むインスリン応答性組織の外膜の上で特に起こり、血液からこれらの組織へのグルコースの取り込みの増加をもたらす。
【０１１３】
したがって、インスリン受容体の発現を誘導することによって、ＰＲＴ５が同様に前記カスケード事象を誘導すると推測することができる。したがって、ＰＲＴ５は、原形質膜へのＧｌｕｔ−４輸送体の転位置及びグルコースの流入、グリコーゲン合成、解糖及び脂肪酸合成を直接的又は間接的に誘導する。
【０１１４】
グリコーゲン合成は、ＩＲＳ−１を通してインスリン受容体によっても刺激される。この場合、ＩＲＳ−１のＰ−Ｔｙｒに結合するのは、ＰＩ−３キナーゼ（ＰＩ−３Ｋ）のＳＨ２ドメインである。活性化されると、ＰＩ−３Ｋは、膜脂質ホスファチジルイノシトール４，５−ビスホスフェート（ＰＩＰ２）をホスファチジルイノシトール３，４，５−トリホスフェート（ＰＩＰ３）に変換することができる。これは、リン酸化を通して間接的にプロテインキナーゼＰＫＢ（Ａｋｔ）を活性化する。ＰＫＢは、グリコーゲン合成酵素キナーゼ３（ＧＳＫ−３）を含むいくつかの標的タンパク質を次にリン酸化する。ＧＳＫ−３は、グリコーゲン合成酵素をリン酸化する（したがって不活性化する）役割を担う。ＧＳＫ−３がリン酸化されるとき、それは不活性化され、グリコーゲン合成酵素を不活性化することが阻止される。この遠回しの方法で、インスリンはグリコーゲン合成を増加させる。
【０１１５】
したがって、１つの具体的な態様では、本発明は、インスリン受容体の発現を誘導するための、原形質膜へのＧｌｕｔ−４輸送体の転位置及びグルコース流入を誘導するための、グリコーゲン合成を誘導するための、並びに／又は解糖及び脂肪酸合成を誘導するための、単離されたポリペプチドＰＲＴ５又はＰＲＴ８のいずれか１つ、特にＰＲＴ５、又はそれを含むタンパク質、又はそれをコードする核酸を含む組成物を提供する。
【０１１６】
別の具体的な態様では、本発明は、グルコース代謝関連の障害の治療のための、単離されたポリペプチドＰＲＴ５又はＰＲＴ８のいずれか１つ、又はそれを含むタンパク質、又はそれをコードする核酸を含む組成物を提供する。
【０１１７】
インスリン抵抗性は、一般的で広く多発している代謝障害であり、それは糖尿病、メタボリックシンドローム及び肥満の病態生理に深く関与している。それは、多嚢胞卵巣症候群（ＰＣＯＳ）、甲状腺及び副腎の疾患、並びにそれらの合併症を含む、様々な内分泌性疾患の徴候であることもある。
【０１１８】
発明者らの予想外の結果は、ＰＲＴ５がこれらの障害を克服するためのバイパス機構として用いることができることを示唆する。したがって、インスリン抵抗性に関連するあらゆる病的状態、例えば糖尿病、メタボリックシンドローム、肥満及び内分泌性疾患、並びに筋肉障害の治療のための治療薬として、ＰＲＴ５を用いることができる。
【０１１９】
筋系の最も一般的な疾患及び障害のいくつかには、ミオパシー、慢性疲労症候群、線維筋痛、筋ジストロフィー及び筋区画症候群が含まれる。欠陥のある骨格筋グルコース及び／又はグリコーゲン代謝に関連する特定の疾患は、ミオホスホリラーゼ及びホスホフルクトキナーゼ欠乏であり、より簡単に述べると運動後の痛みを伴う筋痙攣である。
【０１２０】
別の具体的な態様では、本発明は、糖尿病、メタボリックシンドローム、肥満、内分泌性疾患及び筋肉障害からなる群から選択される障害の治療のための、単離されたポリペプチドＰＲＴ５又はＰＲＴ８のいずれか１つ、又はそれを含むタンパク質、又はそれをコードする核酸を含む組成物を提供する。
【０１２１】
さらなる具体的な態様では、本発明は、グルコース代謝を増強するための、単離されたポリペプチドＰＲＴ５又はＰＲＴ８のいずれか１つ、又はそれを含むタンパク質、又はそれをコードする核酸を含む組成物を提供する。
【０１２２】
さらに、下記の例５（及び図３Ａ〜３Ｂ）では、発明者らは、驚くべきことに、ポリペプチドＰＲＴ６がテストステロンレベルを増加させる有意な影響を及ぼすことを示した。これらの結果は、ＰＲＴ６がテストステロン生成の誘導及び／又は強化のための強力な剤であり、したがって、テストステロン欠乏関連の障害の療法で、又はテストステロン生成の誘導のために健康な状態でさえも用いることができることを強く示唆する。
【０１２３】
テストステロンは、成熟精巣量の約５％を構成する精細管の間の、精巣の間質性コンパートメントに位置する５００，０００，０００個のライディッヒ細胞内で、酵素の一続きの工程によってコレステロールから合成される。さらに、特定の組織中の循環性の弱い副腎性アンドロゲン前駆体ＤＨＥＡからのテストステロン及びジヒドロテストステロンの多少の性腺外生合成が記載されているが、循環テストステロンへの副腎性アンドロゲンの純寄与は小さい。精巣のテストステロン分泌は、内部ミトコンドリア膜の上に位置するチトクロームＰ−４５０コレステロール側鎖切断酵素複合体による、ライディッヒ細胞ミトコンドリア内でのプレグネノロンへのコレステロールの律速的変換のその調節を通して、黄体形成ホルモン（ＬＨ）によって主に支配される。
【０１２４】
テストステロンはアンドロゲン補充療法のために生理的用量で臨床的に用いられ、一般的により高い用量では、テストステロン又はその構造に基づく合成アンドロゲンは、薬理学的アンドロゲン療法のためにも用いられる。アンドロゲン補充療法の主な目標は、全ての体組織へのアンドロゲン曝露の生理的パターンを回復することである。そのような治療は、生理的循環テストステロンレベル及び組織に対する天然アンドロゲンの影響の全範囲（前受容体アンドロゲン活性化を含む）を複製することを目指す。薬理学的アンドロゲン療法は、他の治療薬のようにそれらの効力、安全性及び相対的な費用有効性に関して審査されるホルモン薬としての、筋肉、骨及び他の組織に対するテストステロン又は合成アンドロゲンの同化作用又は他の作用を活用する。
【０１２５】
テストステロンの生理的作用は、前思春期の作用、思春期の作用及び成人の作用と分類することができる。前思春期の作用は、少年及び少女の両方に起こる児童期の終わりのアンドロゲンレベルの上昇の最初に観察可能な作用であり、一般に、成人型体臭；皮膚及び髪の油性の増加；にきび；陰毛の出現；腋毛；急成長、骨の成熟の加速；並びに上唇及びもみあげの毛として識別可能である。思春期の作用は、何カ月又は何年もの間、アンドロゲンが正常な成人女性のレベルよりも高いときに起こり始める。男性では、これらは通常の後期思春期の作用であって、女性では、長期の血液中の高い遊離テストステロンレベルの後に起こる。これらの作用は、以下の現象として観察することができる：
・にきびを引き起こすことがある皮脂腺の拡大；
・陰茎の拡大又は陰核巨大症；
・リビドー及び勃起又は陰核充血の頻度の増加；
・陰毛は腿へ、及び上へ臍の方に伸長する；
・顔の毛（もみあげ、あごひげ、口ひげ）；
・頭髪の喪失（男性ホルモン性脱毛症）；
・胸毛、乳輪周囲の毛、肛門周囲の毛；
・脚の毛；
・腋毛；
・顔の皮下脂肪の減少；
・筋肉の力及び量の増加；
・声が太くなる；
・のどぼとけの発達；
・精巣の精子形成組織の成長、男性の生殖能力；
・下顎、額、あご、鼻の成長及び顔面骨輪郭のリモデリング；
・肩幅が広くなり、胸郭が拡大する；
・骨の成熟の完了及び成長の終結。これは、エストラジオール代謝産物を通して間接的に起こり、したがって男性では女性よりも徐々に起こる。
【０１２６】
成人のテストステロン作用は女性より男性で明らかに証明可能であるが、おそらく男女両方に重要である。これらの作用のいくつかは、テストステロンレベルが成人期の後半の数十年に低下するにしたがって低減する可能性がある。これらの作用は、一般に以下のものと認識される：
・リビドー及び陰核の充血／陰茎勃起頻度；
・ドミナンスチャレンジの下で急性ＨＰＡ（視床下部−脳下垂体−副腎系）応答を調節する；
・精神的及び身体的エネルギー；
・筋肉栄養の維持。
【０１２７】
高齢男性で正常なテストステロンレベルを維持することは、除脂肪体重の増加、内臓体脂肪量の減少、総コレステロールの低下及び血糖管理などの、心臓血管疾患リスクを低減すると考えられている多くのパラメータを改善することが分かっている。ドミナンスチャレンジの下で、テストステロンは戦闘又は逃亡応答の調節で役割を果たすことができる。
【０１２８】
さらに、テストステロンは、ヒトにおいて巨核球及び血小板の上のトロンボキサンＡ２受容体の集団を調節し、したがって血小板凝集を調節する。
【０１２９】
特に加齢男性での低いテストステロンレベルの症状のリストには、以下のものが含まれる：
・勃起不全（勃起の問題）；
・リビドー喪失（低い性衝動）；
・うつ病、短気及び疲労感を含む感情障害；
・筋肉のサイズ及び強さの低下；
・骨粗鬆症（骨の密度低下）；
・体脂肪の増加；
・集中障害及び記憶喪失；及び
・睡眠障害。
【０１３０】
したがって、別のさらなる具体的な態様では、本発明は、テストステロン生成を増強するための、単離されたポリペプチドＰＲＴ６、又はそれを含むタンパク質、又はそれをコードする核酸を含む組成物を提供する。
【０１３１】
別のさらなる具体的な態様では、本発明は、テストステロン欠乏又は低テストステロン関連障害の治療のための、単離されたポリペプチドＰＲＴ６、又はそれを含むタンパク質、又はそれをコードする核酸を含む組成物を提供する。
【０１３２】
発明者らは、驚くべきことに、ＰＲＴ７が癌で上昇することをさらに示した。この現象の非限定例は、本明細書の例７で示され、そこでは、高レベルのＰＲＴ７が肺又はすい臓の癌患者の試料で見出された。さらに、ＰＲＴ７がｐ５３を誘導することが可能なことを発明者らは観察した（データ示さず）。
【０１３３】
癌サプレッサータンパク質ｐ５３は、細胞増殖阻害及びアポトーシスにつながる熱ショック、低酸素症、浸透圧ショック及びＤＮＡ損傷などの多様な細胞ストレスによって安定化及び活性化されることが知られている（Ｋｏ及びＰｒｉｖｅｓ、Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．１０巻：１０５４〜１０７２頁、１９９６年；Ｌｅｖｉｎｅ、Ｃｅｌｌ８８巻：３２３〜３３１頁、１９９７年；Ｏｒｅｎ、Ｃａｎｃｅｒ  Ｂｉｏｌ．５巻：２２１〜２２７頁、１９９４年）。アポトーシス及び細胞周期停止が、ｐ５３の主要な腫瘍抑制機能であることも知られている（Ｌｅｖｉｎｅ、Ｃｅｌｌ８８巻：３２３〜３３１頁、１９９７年）。癌の他に、アポトーシス関連の障害の例には、動脈硬化、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症、移植片対宿主病、自己免疫性リンパ球増加症候群及びウイルス性感染症が含まれる。
【０１３４】
ＰＲＴ７がｐ５３を誘導することができるとの知見は、ＰＲＴ７が癌療法で用いられてもよいことを強く示唆する。
【０１３５】
したがって、別のさらなる具体的な態様では、本発明は、癌を治療するための、及び／又はｐ５３発現を誘導するための、及び／又はアポトーシスを誘導するための、単離されたポリペプチドＰＲＴ７、又はそれを含むタンパク質、又はそれをコードする核酸を含む組成物を提供する。
【０１３６】
一実施形態では、本発明で提供されるあらゆる組成物は、薬学的に許容される担体、賦形剤又は希釈剤をさらに含むことができる。
【０１３７】
組成物の調製は当技術分野で周知であり、多くの論文及び教科書に記載されており、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｇｅｎｎａｒｏ  Ａ．Ｒ．編、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ、１９９０年、特にその中の１５２１〜１７１２頁を参照されたい。
【０１３８】
本発明の組成物は、薬学的に許容されるアジュバント、担体、希釈剤又は賦形剤の少なくとも１つをさらに含んでもよい。
【０１３９】
用語「薬学的に許容される担体」は、有効成分と反応しない不活性の非毒性物質のいずれか１つを意味する。担体は、所望の剤形に基づいて時々選択される。薬剤の安定性を改善するために、クリアランス速度を遅くするために、緩放出特性を付与するために、好ましくない副作用を減少させるなどのために、担体はまた、標的組織への有効成分の送達又は浸透を改善する作用を時に有することができる。製剤に食品の風味などを提供するために、担体は製剤を安定させる物質（例えば防腐剤）であってもよい。担体は、従来用いられるもののいずれかであってよく、溶解性及び本発明の抗体との反応性の欠如などの化学物理的考慮、並びに投与経路だけによって制限される。担体は、添加剤、着色剤、希釈剤、緩衝剤、崩壊剤、湿潤剤、保存料、着香料及び薬理学的に適合する担体を含むことができる。さらに、担体は、定義によると予測可能な方法で有効成分の作用に影響を及ぼす物質である、アジュバントであってもよい。担体の代表的な例には、（ａ）活性物質の有効量が水、生理食塩水、天然果汁、アルコール、シロップなどの希釈剤に溶解される溶液；（ｂ）各々固体又は顆粒として所定量の活性剤を含む、カプセル（例えば、界面活性剤、滑剤及び不活性充填剤などを含有する通常の硬質又は軟質シェルのゼラチンタイプ）、錠剤、ロゼンジ（活性物質がショ糖及びアカシア若しくはトラガカンタなどの着香料中にあるか、又は活性物質がゼラチン及びグリセリンなどの不活性の基剤中にある）、並びにトローチ；（ｃ）粉末；（ｄ）適当な液体中の懸濁液；（ｅ）適する乳濁液；（ｆ）リポソーム製剤；並びにその他が含まれる。
【０１４０】
別の実施形態では、本発明の組成物は、それらに限定されないが抗生物質、サイトカイン、リンフォカイン、増殖因子、ホルモン、抗酸化剤、ビタミンなどのさらなる活性剤を任意選択でさらに含んでもよい。
【０１４１】
別のさらなる態様では、本発明は、疾患又は障害の治療薬の調製のための、上で定義されるＰＲＴ５、ＰＲＴ６、ＰＲＴ７及びＰＲＴ８からなる群から選択されるポリペプチド又はタンパク質の使用を提供し、前記疾患又は障害は、免疫学的コンポーネント又は病因を有する疾患、感染症、急性及び慢性炎症性疾患、癌、移植及び自己免疫疾患、生殖能力関連の疾患、並びに炭水化物代謝障害からなる群から選択される。
【０１４２】
特定のさらなる一態様では、本発明は、グルコース代謝関連の障害の治療薬の調製における、単離されたポリペプチドＰＲＴ５又はＰＲＴ８のいずれか１つ、又はそれを含むタンパク質、又はそれをコードする核酸の使用を提供する。
【０１４３】
より具体的には、本発明は、糖尿病、メタボリックシンドローム、肥満、内分泌性疾患及び筋肉障害からなる群から選択される障害の治療薬の調製における、単離されたポリペプチドＰＲＴ５又はＰＲＴ８のいずれか１つ、又はそれを含むタンパク質、又はそれをコードする核酸の使用を提供する。
【０１４４】
別の特定のさらなる態様では、本発明は、テストステロン欠乏又はテストステロン欠乏関連の障害の治療薬の調製における、単離されたポリペプチドＰＲＴ６、又はそれを含むタンパク質、又はそれをコードする核酸の使用を提供する。
【０１４５】
別の特定のさらなる態様では、本発明は、癌の治療薬の調製における、単離されたポリペプチドＰＲＴ７、又はそれを含むタンパク質、又はそれをコードする核酸の使用を提供する。
【０１４６】
別のさらなる態様では、本発明は、必要とする対象での疾患又は障害の治療の方法であって、上で定義されるＰＲＴ５、ＰＲＴ６、ＰＲＴ７及びＰＲＴ８からなる群から選択されるポリペプチド又はタンパク質、又はそれを含む組成物の治療的有効量を前記対象に投与することを含む方法を提供し、前記疾患又は障害は、免疫学的コンポーネント又は病因を有する疾患、感染症、急性及び慢性炎症性疾患、癌、移植及び自己免疫疾患、生殖能力関連の疾患、炭水化物代謝障害、糖尿病、メタボリックシンドローム、肥満、内分泌性疾患並びに筋肉障害からなる群から選択される。
【０１４７】
別の特定のさらなる態様では、本発明は、グルコース代謝関連の障害、糖尿病、メタボリックシンドローム、肥満、内分泌性疾患及び筋肉障害からなる群から選択される障害の治療のための方法であって、単離されたポリペプチドＰＲＴ５若しくはＰＲＴ８、又はそれを含むタンパク質、又はそれをコードする核酸、又はそれを含む組成物の治療的有効量を必要とする対象に投与することを含む方法を提供する。
【０１４８】
別の特定のさらなる態様では、本発明は、グルコース代謝を増強するための方法であって、単離されたポリペプチドＰＲＴ５若しくはＰＲＴ８、又はそれを含むタンパク質、又はそれをコードする核酸、又はそれを含む組成物の治療的有効量を必要とする対象に投与することを含む方法を提供する。
【０１４９】
別のさらなる特定の態様では、本発明は、インスリン受容体の発現を誘導するための方法であって、単離されたポリペプチドＰＲＴ５若しくはＰＲＴ８、特にＰＲＴ５、又はそれを含むタンパク質、又はそれをコードする核酸、又はそれを含む組成物の治療的有効量を必要とする対象に投与することを含む方法を提供する。
【０１５０】
同様に、本発明は、細胞中のインスリン受容体の発現を誘導するための方法であって、ＰＲＴ５又は生物学的に活性なその断片若しくは誘導体、又はそれを含む組成物の有効量と細胞を接触させることを含む方法を提供する。前記方法は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ又はｅｘ  ｖｉｖｏの方法であってよい。前記細胞は、通常、筋細胞、脂肪細胞、それらの前駆体、又はインスリン受容体の発現が望ましいであろうあらゆる細胞である。
【０１５１】
別の特定のさらなる態様では、本発明は、テストステロン欠乏関連の障害の治療のための、又はテストステロン生成を増強するための方法であって、単離されたポリペプチドＰＲＴ６、又はそれを含むタンパク質、又はそれをコードする核酸、又はそれを含む組成物の治療的有効量を必要とする対象に投与することを含む方法を提供する。
【０１５２】
別のさらなる態様では、本発明は、癌の治療のための方法であって、単離されたポリペプチドＰＲＴ７、又はそれを含むタンパク質、又はそれをコードする核酸、又はそれを含む組成物の治療的有効量を必要とする対象に投与することを含む方法を提供する。
【０１５３】
さらに、本発明は、細胞でｐ５３、アポトーシス又は細胞死のいずれか１つを誘導するための方法であって、ＰＲＴ７又は生物学的に活性なその断片若しくは誘導体、又はそれを含む組成物の有効量と細胞を接触させることを含む方法を提供する。前記方法は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ又はｅｘ  ｖｉｖｏの方法であってよい。前記細胞は、ｐ５３を誘導すること、又は癌細胞などアポトーシス若しくは細胞死を誘導することが望ましいであろういかなる細胞であってもよい。
【０１５４】
本明細書で称されるように、用語「有効量」は、選択される結果を達成するのに必要な量を意味し、それは、今は障害を治療するために必要であるＰＲＴ５、ＰＲＴ６、ＰＲＴ７又はＰＲＴ８、又は生物学的に活性なその誘導体の量を含む。
【０１５５】
前記治療的有効量又は投薬は、治療される疾患状態の重症度及び応答性に依存し、治療クールは、１時間から数時間、１日から数日、又は治癒が達成されるか若しくは疾患状態の軽減が達成されるまで続く。当業者は、最適な投薬量、投薬方法及び繰返し速度を容易に決定することができる。最適な投薬量は、本発明の各ポリペプチド若しくはタンパク質、又はそれを含む組成物の相対的な効能によって異なることがあり、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ並びにｉｎ  ｖｉｖｏの動物モデルで有効であることが分かっているＥＣ５０に一般に基づいて推定することができる。当業者は、測定された滞留時間、濃度及び使用されるポリペプチド又はタンパク質の調整に基づいて、投薬の繰返し速度を容易に推定することができる。
【０１５６】
本明細書で用いる用語「治療する、治療すること又は治療」は、疾患又は障害を有する患者で、疾患活動性の１つ又は複数の臨床徴候を改善することを意味する。「治療」は、治療的処置を指す。
【０１５７】
「患者」又は「必要とする対象」は、その障害又は疾患を克服するために障害又は疾患の治療が望まれるあらゆる哺乳動物、特にヒト対象を意味する。
【０１５８】
通常、「治療的有効量」は、予防又は治療の目的、投与経路及び患者の一般状態（年齢、性別、体重及び主治医に公知である他の考慮事項）と合わせて、疾患の重症度によっても決定される。
【０１５９】
本発明に記載されるポリペプチドＰＲＴ５、ＰＲＴ６、ＰＲＴ７又はＰＲＴ８を必要とする対象に送達するために、様々な投与方法を用いることができる。前記ポリペプチド、又はそれを含む組成物は、静脈内（ｉ．ｖ．）、筋肉内（ｉ．ｍ．）、腹腔内（ｉ．ｐ．）、又は局所の注射を通して、又は当業者によって適することが見出されている他の任意の経路を通して送達することができる。治療的に有効であるために、本発明のポリペプチド又はタンパク質は、投与後の系でのそれらの安定性を可能にするであろう方法で調製されるべきである。
【０１６０】
本明細書で用いるように、用語「障害」は、正常な機能の障害がある状態を指す。「疾患」とは、影響を受ける人又はその人と接触する者に、不快、機能障害又は苦痛を引き起こす体又は心のあらゆる異常状態である。時々、損傷、先天性奇形、障害、症候群、症状、常軌を逸した挙動並びに構造及び機能の非定型的な変異、疾患から生じる慢性又は恒久的な健康状態の欠陥を含むように、本用語は広義に用いられる。
【０１６１】
用語「疾患」、「障害」、「状態」及び「病気」は、本明細書で同等に用いられる。
【０１６２】
さらなる態様では、本発明は、ＰＲＴ５、ＰＲＴ６、ＰＲＴ７及びＰＲＴ８からなる群から選択されるポリペプチド、又は任意のその断片若しくは誘導体を特異的に認識する抗体を提供する。
【０１６３】
具体的には、前記ＰＲＴ５、ＰＲＴ６、ＰＲＴ７又はＰＲＴ８ポリペプチドは、それぞれ配列番号１、配列番号２、配列番号３又は配列番号４によって表される。本発明の抗体によって認識される断片の非限定例は、前記抗体を生成するための抗原として用いられるペプチドである。したがって、具体例では、抗ＰＲＴ５抗体は配列番号１７によって表されるペプチドを認識し、抗ＰＲＴ６抗体は配列番号１８によって表されるペプチドを認識し、抗ＰＲＴ７抗体は配列番号１９によって表されるペプチドを認識し、抗ＰＲＴ８抗体は配列番号２０によって表されるペプチドを認識する。
【０１６４】
本明細書で定義されるように、本発明の抗体は通常天然に誘導されるか、天然に生成される。したがって、抗体はポリクローナル抗体又はモノクローナル抗体である。代わりに、本発明の抗体は、例えば化学合成によって合成的に生成されるか、又はそれぞれの抗体産生細胞若しくは細胞系からの特定のｍＲＮＡの単離を通して組換えで生成されてもよい。組換えで生成された抗体を生成するために、前記特定のｍＲＮＡは、標準の分子生物学操作（ｃＤＮＡを得て、前記ｃＤＮＡを発現ベクターなどに導入する）を次に経る。前記技術は、当業者には周知である。
【０１６５】
下の実施例に記載されるように、本発明の抗体は、ポリクローナル抗体を生成する当業者に公知である標準技術を用いてウサギで生成された。
【０１６６】
タンパク質に対するポリクローナル抗体の生成は当業者に周知である技術であり、それは、とりわけＣｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｊｏｈｎ  Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎら（編）、Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ  Ｉｎｃ．のチャプター２に記載されている。
【０１６７】
本発明によると、ＰＲＴ５、ＰＲＴ６、ＰＲＴ７又はＰＲＴ８抗原のいずれか１つを認識するポリクローナル抗体とは、ポリクローナル抗体の主要な認識部位がそれぞれＰＲＴ５、ＰＲＴ６、ＰＲＴ７又はＰＲＴ８抗原に対応することを意味する。一般に、ＰＲＴ５、ＰＲＴ６、ＰＲＴ７又はＰＲＴ８、又はその断片は、本発明に記載される抗体の１つを生成するために、ウサギ、モルモット、ヤギ、マウス、ラット、ヒツジ、サルなどの動物を免疫化するための免疫原として用いられる。生じた抗ＰＲＴ５、抗ＰＲＴ６、抗ＰＲＴ７又は抗ＰＲＴ８抗血清それぞれから、公知の方法によって抗体分画が精製される。生じた抗体は、ポリクローナル抗体として用いられる。ポリクローナル抗体の特異性に関しては、それぞれＰＲＴ５、ＰＲＴ６、ＰＲＴ７又はＰＲＴ８が認識されるはずである。ポリクローナル抗体の主要な認識部位は、ＰＲＴ５、ＰＲＴ６、ＰＲＴ７又はＰＲＴ８タンパク質のＣ末端領域に位置する。Ｃ末端領域の主要な認識部位を有するポリクローナル抗体は、例えば配列番号１７によって表されるペプチド、又は配列番号１８によって表されるペプチド、又は配列番号１９によって表されるペプチド、又は配列番号２０によって表されるペプチドをそれぞれ認識する抗体である。
【０１６８】
一般に、ポリクローナル抗体は、免疫原で免疫化された動物血清から精製される免疫グロブリンから調製される。個々の動物に由来する個体差及び抗血清でのロットの差を避けるために、異なるロットからのポリクローナル抗体を混合してもよい。ポリクローナル抗体は抗体の集合であるので、ポリクローナル抗体は複数の認識部位を有する。
【０１６９】
モノクローナル抗体は、雑種細胞の増殖に有利である条件下での不死化Ｂ細胞との融合によって、免疫化された動物、特にラット又はマウスの脾臓又はリンパ節からとられるＢ細胞から調製されてもよい。モノクローナル抗体を生成する技術は、多くの論文及び教科書、例えば上記のＣｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙのチャプター２に記載されている。その中のチャプター２に記載されているように、モノクローナル抗体の生成のために、これらの動物の脾臓又はリンパ節細胞は、タンパク質で免疫化された動物の脾臓又はリンパ節細胞と同じ方法で用いることができる。モノクローナル抗体の生成で用いられる技術は、Ｋｏｈｌｅｒ及びＭｉｌｓｔｅｉｎ［Ｋｏｈｌｅｒ及びＭｉｌｓｔｅｉｎ（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ２５６巻：４９５〜４９７頁］及び米国特許第４，３７６，１１０号にさらに記載されている。
【０１７０】
用語「抗体」は、完全な分子に加えてその断片、例えば抗原に結合することが可能である抗体のｓｃＦｖ、Ｆｖ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ、ダイアボディ、線状の抗体、Ｆ（ａｂ’）２抗原結合断片の両方も含むものとする［Ｗａｈｌら（１９８３）Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．２４巻、３１６〜３２５頁］。
【０１７１】
抗体のＦａｂ及びＦ（ａｂ’）２及び他の断片は、完全な抗体分子のための本明細書で開示される方法による、生体試料中の、本発明の抗体の生成のための抗原として用いられるタンパク質の検出、並びに本明細書で開示される抗体の他の用途のために有用である。そのような断片は、例えばパパイン（Ｆａｂ断片を生成するため）又はペプシン（Ｆ（ａｂ’）２断片を生成するため）などの酵素を用いて、タンパク分解性開裂によって生成することができる。したがって、本発明で有用な抗体のＦａｂ及びＦ（ａｂ’）２及び他の断片は、意図する用途によって様々なタグで標識されてもよい。これらのタグは、検出を促進するための検出可能なタグであってもよく、又は腫瘍細胞を死滅させるであろう毒性のタグであってもよく、又は他の細胞若しくは物質が腫瘍細胞を死滅させるように誘導することができる「誘導」タグであってもよい。
【０１７２】
抗体は、それが分子（抗原）と特異的に反応することができ、それによって抗体が前記分子に結合するならば、分子に「結合すること」又はそれを「認識すること」が可能であると言われる。用語「エピトープ」は、抗体が結合することが可能であり、その抗体又はその抗体を生成する細胞が認識することもできるいかなる分子の部分を指すものとする。エピトープ又は「抗原決定基」は、通常アミノ酸又は糖側鎖などの化学的に活性である表面分子グループからなり、特異的な三次元構造特性並びに特異的な電荷特性を有する。
【０１７３】
「抗原」は、抗体が認識し、結合することが可能な分子又は分子の一部である。抗原は、１つ又は複数のエピトープを有することができる。上で言及される特異反応は、抗原が、その対応する抗体と高度に選択的及び特異的に反応するが、他の抗原が呼び起こすことができる他の多くの抗体とは反応しないであろうことを示すものとする。
【０１７４】
本発明では、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９及び配列番号２０によって表されるペプチドは、本発明のポリクローナル抗体を生成するための抗原として用いられ、したがって本発明の抗体によって認識される。同様に、本明細書に記載される完全長タンパク質は、各々それ自身の特異性（すなわち、抗ＰＲＴ５に対してＰＲＴ５、抗ＰＲＴ６に対してＰＲＴ６、抗ＰＲＴ７に対してＰＲＴ７、抗ＰＲＴ８に対してＰＲＴ８）によって本発明の抗体によって認識され、それが結合することができる抗原と称されてもよい。
【０１７５】
本発明によって提供される抗体は、任意のアイソタイプ、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＡ又はＩｇＤのものでよい。
【０１７６】
抗体に関して、「生物学的特性」又は「生物学的活性」は、エピトープを特異的に認識し、その結果それに結合する抗体の能力を通常指す。エピトープは完全長タンパク質の一部であってもよく、又はタンパク質の断片若しくはポリペプチドに包埋されてもよい。
【０１７７】
さらなる態様では、本発明は、有効成分として本発明に記載の抗体を含む組成物を提供する。したがって、本発明の組成物を活性剤として含む前記抗体は、ＰＲＴ５、ＰＲＴ６、ＰＲＴ７又はＰＲＴ８からなる群から選択されるポリペプチド、又はその任意の断片、類似体若しくは誘導体を認識して結合する抗体又はその断片である。
【０１７８】
前記組成物は、診断及び／又は治療の方法での使用のためであってもよい。
【０１７９】
前記抗体又はそれを含む前記組成物は、ＰＲＴ５、ＰＲＴ６、ＰＲＴ７又はＰＲＴ８の発現及び／又は機能のいずれか１つに影響を及ぼす疾患又は障害の診断のために有用である。代わりに、前記抗体又はそれを含む組成物は、ＰＲＴ５、ＰＲＴ６、ＰＲＴ７又はＰＲＴ８の発現及び／又は機能のいずれか１つに影響を及ぼす疾患又は障害の治療のために用いられてもよい。
【０１８０】
別の実施形態では、本発明に記載の抗体を含む前記組成物は、癌の治療で用いられてもよい。
【０１８１】
下の例７では、発明者らは、すい臓癌又は肺癌の男性患者から得られた試料で、循環ＰＲＴ７の上昇したレベルを意外にも示した。したがって、ＰＲＴ７は、癌を検出するためのマーカーとして用いられてもよく、すい臓癌又は肺癌が具体的な非限定例である。したがって、抗ＰＲＴ７特異抗体は、癌の診断手段として用いられてもよい。
【０１８２】
したがって、特定の一実施形態では、前記組成物は、ポリペプチドＰＲＴ７又はその断片若しくは誘導体を認識する抗体を含む。
【０１８３】
さらなる実施形態では、本発明に記載の抗体を含む組成物は、例えば癌の予後診断で用いられてもよい。治療効果の指標を有することが必須である癌治療を受けている患者で、予後診断の必要性が特に存在する。したがって、本発明に記載の少なくとも１つの抗体を含む組成物は、ＰＲＴ５、ＰＲＴ６、ＰＲＴ７又はＰＲＴ８タンパク質のいずれか１つのレベルの検出又は測定を通して治療の結果を判定することが可能なはずである。
【０１８４】
本発明では、本発明によって抗体を生成する抗体産生細胞系も提供される。したがって、本発明は、ＰＲＴ５、ＰＲＴ６、ＰＲＴ７及びＰＲＴ８からなる群から選択されるタンパク質に対するモノクローナル抗体を生成するハイブリドーマ細胞系を提供する。
【０１８５】
一実施形態では、本発明の目的でもある抗体産生細胞系を生成するために、抗体産生細胞はクローンとして単離され、不死化される。細胞不死化は当分野の技術者に公知である方法に従って達成することができ、例えば、Ｌａｎｚａｖｅｃｃｈｉａら、２００７年［Ｌａｎｚａｖｅｃｃｈｉａ  Ａ、Ｃｏｒｔｉ  Ｄ、Ｓａｌｌｕｓｔｏ  Ｆ．（２００７）Ｈｕｍａｎ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｂｙ  ｉｍｍｏｒｔａｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｂ  ｃｅｌｌｓ．Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ；１８巻(６号)：５２３〜８頁］によって記載されている。
【０１８６】
別のさらなる態様では、本発明は、診断用組成物の調製における、ＰＲＴ５、ＰＲＴ６、ＰＲＴ７及びＰＲＴ８からなる群から選択されるタンパク質を認識する本発明に記載の抗体の使用を提供する。詳細には、前記組成物は、疾患又は障害の診断用であり、前記疾患又は障害は、免疫学的コンポーネント又は病因を有する疾患、感染症、急性及び慢性炎症性疾患、癌、移植及び自己免疫疾患、生殖能力関連の疾患、並びに炭水化物代謝障害からなる群から選択される。
【０１８７】
本明細書で称されるように、自己免疫疾患には、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、クローン病、多発性硬化症（ＭＳ）、自己免疫性ブドウ膜炎、自己免疫性ブドウ膜網膜炎、自己免疫性甲状線炎、橋本病、インスリン炎、シェーグレン症候群、自然流産、実験的な自己免疫性心筋炎、慢性関節リウマチ（ＲＡ）、ループス（ＳＬＥ）、乾癬及び糖尿病、特にＩ型が含まれる。自己免疫疾患のさらなる例には、急性壊死出血性白質脳炎、アジソン病、無ガンマグロブリン血症、アレルギー性喘息、アレルギー性鼻炎、限局性脱毛症、アミロイド症、強直性脊椎炎、抗ＧＢＭ／抗ＴＢＭ腎炎、抗リン脂質症候群（ＡＰＳ）、自己免疫性再生不良性貧血、自己免疫性自律神経障害、自己免疫性肝炎、自己免疫性高脂血症、自己免疫性免疫不全、自己免疫性内耳疾患（ＡＩＥＤ）、自己免疫性心筋炎、自己免疫性血小板減少性紫斑病（ＡＴＰ）、軸索及びニューロンの神経病、バル病（Ｂａｌ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ）、ベーネット病（Ｂｅｈｎｅｔ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ）、水泡性類天疱瘡、心筋症、キャッスルマン病、腹腔スプルー（非熱帯の）、シャガス病、慢性疲労症候群、慢性炎症性脱髄性多発性神経炎（ＣＩＤＰ）、チャーグ−ストラウス症候群、瘢痕性類天疱瘡／良性粘膜類天疱瘡、コーガン症候群、寒冷凝集素症、先天的な心臓ブロック、コクサッキー心筋炎、クレスト疾患、本態性混合クリオグロブリン血症、脱髄性神経病、皮膚筋炎、ドヴィック病、円板状ループス、ドレスラー症候群、子宮内膜症、好酸球性筋膜炎、結節性紅斑、実験的アレルギー性脳脊髄炎、エヴァン症候群、線維筋痛、線維化性肺胞隔炎、巨細胞性動脈炎（側頭動脈炎）、グッドパスチャー症候群、グレーブス病、ギランバレー症候群、溶血性貧血、ヘノッホ−シェーンライン紫斑病、妊娠性疱疹、低ガンマグロブリン血症、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、ＩｇＡ腎症、免疫調節性リポタンパク、封入体筋炎、インスリン依存性糖尿病（１型）、間質性膀胱炎、若年性関節炎、若年型糖尿病、川崎病、ランバート−イートン症候群、白血球破砕性脈管炎、扁平苔癬、硬化性苔癬、木質性結膜炎、線状ＩｇＡ疾患（ＬＡＤ）、ライム病、メニエール病、顕微鏡的多発血管炎、混合型結合組織病（ＭＣＴＤ）、モーレン潰瘍、ミュシャ−ハーバーマン病、重症筋無力症、筋炎、ナルコレプシー、好中球減少症、目の瘢痕性類天疱瘡、骨関節炎、再発性リウマチ、腫瘍随伴小脳変性、発作性夜間血色素尿症（ＰＮＨ）、パーソニッジ−ターナー症候群、扁平部炎（周辺性ブドウ膜炎）、天疱瘡、末梢神経疾患、静脈周囲脳脊髄炎、悪性貧血、ＰＯＥＭＳ症候群、結節性多発動脈炎、Ｉ型、ＩＩ型及びＩＩＩ型自己免疫性多腺症候群、リウマチ性多発性筋痛、多発性筋炎、心筋梗塞後症候群、心膜切開後症候群、黄体ホルモン皮膚炎、原発性胆汁性肝硬変症、乾癬性関節炎、特発性肺線維症、壊疽性膿皮症、赤芽球癆、レイノー現象、灼熱痛、ライター症候群、再発性多発性軟骨炎、不穏下肢症候群、リウマチ熱、サルコイドーシス、シュミット症候群、強膜炎、強皮症、精子及び精巣の自己免疫、全身硬直症候群、亜急性細菌性心内膜炎（ＳＢＥ）、交感性眼炎、高安動脈炎、側頭動脈炎／巨細胞性動脈炎、血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）、自己免疫性甲��腺疾患、トロサ−ハント症候群、横断脊髄炎及び壊死性ミエロパシー、潰瘍性大腸炎、未分化結合組織疾患（ＵＣＴＤ）、脈管炎、小水疱水疱症、白斑及びヴェーゲナー肉芽腫症が含まれる。
【０１８８】
さらなる態様では、本発明は、治療組成物の調製における、ＰＲＴ５、ＰＲＴ６、ＰＲＴ７及びＰＲＴ８からなる群から選択されるポリペプチド、又はその断片若しくは誘導体を特異的に認識することができる、本発明に記載の抗体の使用を提供する。
【０１８９】
本発明で提供される抗ＰＲＴ５、抗ＰＲＴ６、抗ＰＲＴ７及び抗ＰＲＴ８抗体、又はその断片は、試料中の、本発明の抗体の生成のための抗原として用いられるタンパク質又はそれらの断片を定量的又は定性的に検出するために用いてもよい。これは、視覚的に検出可能なシグナルを与える技術によって達成することができ、それは、蛍光（免疫蛍光法）、酵素反応の発色性生成物、沈殿の生成、化学発光又は生物発光のいずれか１つであってよい。蛍光又は色標識抗体の利用が、下記のように光学顕微鏡、フローサイトメトリー又は蛍光定量的検出と合わさった。抗体を検出するために用いることができる他の技術及び標識には、それらに限定されないが、コロイド金、放射性タグ、ＧＦＰ（緑色蛍光タンパク質）など、アビジン／ストレプトアビジン−ビオチン、磁気ビーズ、並びに実際の結合への感度が高い物理システム、例えばナノ技術システムが含まれる。
【０１９０】
本発明で提供される抗体又はその断片は、免疫組織化学、免疫蛍光法又は免疫電子顕微鏡法の場合のように組織学染色で、並びにタンパク質のｉｎ  ｓｉｔｕ検出のために使用されてもよい。ｉｎ  ｓｉｔｕ検出は、対象から組織学検体を取り出し、本発明の標識抗体をそのような検体と接触させることによって達成することができる。抗体（又は断片）は、標識抗体（又は断片）を生物試料（前記検体）に適用又は重層することによって接触させる。そのような手法の使用により、抗原の存在だけでなく、検査組織へのその分布も判定することが可能である。本発明を用いて、そのようなｉｎ  ｓｉｔｕ検出を達成するために、染色手法などの多種多様な組織学的方法のいずれかを改変することができることに当業者は容易に気づく。
【０１９１】
本発明に従う抗体を標識し、直接的に検出することができる方法の１つは、それを酵素に連結してエンザイムイムノアッセイ（ＥＩＡ）で用いることによる。この酵素は、後に適当な基質に曝露させると、次に、例えば分光光度的、蛍光定量的又は視覚的手段によって検出することができる化学部分を生成するような方法で基質と反応する。検出可能に抗体を標識するために用いることができる酵素には、それらに限定されないが、リンゴ酸デヒドロゲナーゼ、ブドウ球菌ヌクレアーゼ、デルタ−５−ステロイドイソメラーゼ、酵母アルコールデヒドロゲナーゼ、アルファ−グリセロリン酸デヒドロゲナーゼ、トリオースリン酸イソメラーゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、アスパラギナーゼ、グルコースオキシダーゼ、ベータ−ガラクトシダーゼ、リボヌクレアーゼ、ウレアーゼ、カタラーゼ、グルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ、グルコアミラーゼ及びアセチルコリンエステラーゼが含まれる。検出は、酵素のために発色性基質を使用する比色法によって達成することができる。検出は、同じように調製された標準との基質の酵素反応の程度の目視比較によって達成することもできる（この手法は、例えばニトロセルロース又はプラスチック支持体上の可溶性着色生成物及び非可溶性着色生成物の両方に適する）。
【０１９２】
本発明において、適当な例では、抗原との抗体の反応を検出することは、異なるエピトープと特異的に、又は非特異的に、リガンド又は反応抗体と反応性である二次抗体又は他のリガンドの使用によってさらに助けることができる。
【０１９３】
免疫蛍光測定法（ＩＦＡ）、光度測定アッセイ、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）、ＥＬＩＳＰＯＴアッセイ及びイムノブロッティングなどのエンザイムイムノアッセイは、特異抗体の検出を達成するために容易に適合させることができる。
【０１９４】
用いてもよい他の検出システムには、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）カウアン株Ｉに由来するプロテインＡ、Ｃ群ストレプトコッカス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）の種（株２６ＲＰ６６）からのプロテインＧの使用に基づくもの、又はビオチン−アビジン結合反応の使用を採用するシステムが含まれる。
【０１９５】
本発明の抗体が使用されてもよい免疫酵素検出の他の方法は、ウエスタンブロット及びドットブロットである。試料は電気泳動によって分離され、ニトロセルロース膜又は他の適する支持体へ移される。試験する試料（例えば培養液上清、組織試料）を次に膜と接触させ、形成される免疫複合体の存在は、既に記載される方法によって検出される。この方法の変異形態では、精製された抗体を膜の上に線状又はスポット状に加えて結合させる。その後、試験する培養物の前後に膜を試料と接触させ、形成される免疫複合体は本明細書に記載される技術を用いて検出される。
【０１９６】
抗体抗原複合体の存在は、凝集によって検出することもできる。本発明による抗体は、例えば均一な懸濁液を形成するラテックス粒子にコーティングするために用いてもよい。試料、例えば抗体によって認識される特異抗原を含む血清と混合されると、ラテックス粒子は凝集させられ、大きな凝集体の存在は視覚的に検出することができる。
【０１９７】
イムノアッセイ技術による抗体の測定に適用できる免疫学的手法及びイムノアッセイ手法のレビューについては、Ｂａｓｉｃ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ［Ｄ．Ｓｔｉｔｅｓら（編）（１９９４）Ｂａｓｉｃ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、８版］を参照。
【０１９８】
抗原との抗体の反応を検出することは、当技術分野で公知である方法によって検出可能な部分で標識される抗体又はリガンドを用いて促進することができる。そのような検出可能な部分は、沈殿若しくは変色の視覚的検出、顕微鏡検査による視覚的検出、又は分光測定若しくは放射測定による自動検出などを可能にする。検出可能な部分の例には、フルオレセイン及びローダミン（蛍光顕微鏡検査法のため）、西洋ワサビペルオキシダーゼ及びアルカリホスファターゼ（光学顕微鏡若しくは電子顕微鏡法及び生化学検出のため、並びに変色による生化学検出のため）、並びにビオチン−ストレプトアビジン（光学又は電子顕微鏡法のため）が含まれる。用いられる検出法及び部分は、例えば上のリストから、又はそのような選択に適用される標準基準による他の適する例から選択することができる［Ｈａｒｌｏｗ及びＬａｎｅ（１９８８）：Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、ＮＹ］。
【０１９９】
検出は、様々な他のイムノアッセイのいずれかを用いて達成することができる。例えば、抗体又は抗体断片を放射性標識することによって、放射免疫検定（ＲＩＡ）を用いることにより抗原を検出することが可能である。ＲＩＡの優れた記載は、Ｗｏｒｋ，Ｔ．Ｓ．らによるＬａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ａｎｄ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｎｏｒｔｈ  Ｈｏｌｌａｎｄ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、ＮＹ（１９７８）に見出すことができ、特に、参照により本明細書に組み込まれる、Ｃｈａｒｄ，Ｔ．による「放射免疫アッセイ及び関連技術の序論（Ａｎ  Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｅ  Ａｓｓａｙ  ａｎｄ  Ｒｅｌａｔｅｄ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ）」と題した章を参照されたい。放射性同位元素は、ガンマ／ベータカウンター若しくはシンチレーションカウンターの使用などの手段又はオートラジオグラフィーによって検出することができる。
【０２００】
本発明による抗体を蛍光化合物で標識することも可能である。蛍光標識抗体が適当な波長の光に曝露されると、蛍光のために次にその存在を検出することができる。最も一般的に用いられる蛍光標識化合物には、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、フィコエリトリン、フィコシアニン、アロフィコシアニン、ｏ−フタルデヒド及びフルオレサミンが含まれる。
【０２０１】
抗体は、１５２Ｅ又はランタニド系列の他のものなどの蛍光発光金属を用いて検出可能に標識することもできる。これらの金属は、ジエチレントリアミン五酢酸（ＥＴＰＡ）などの金属キレート化基を用いて抗体に結合させることができる。
【０２０２】
抗体は、それを化学発光化合物に結合することによって、検出可能に標識することもできる。化学発光標識した抗体の存在は、化学反応の過程で起こる発光の存在を検出することによって次に判定される。特に有用な化学発光標識化合物の例は、ルミノール、イソルミノール、セロマティックアクリジニウムエステル、イミダゾール、アクリジニウム塩及びシュウ酸エステルである。
【０２０３】
同様に、本発明の抗体を標識するために、生物発光化合物を用いてもよい。生物発光は、触媒タンパク質が化学発光反応の効率を増加させる生物系で見出される１種の化学発光である。生物発光タンパク質の存在は、発光の存在を検出することによって判定される。標識の目的に重要な生物発光化合物は、ルシフェリン、ルシフェラーゼ及びエクオリンである。
【０２０４】
本発明の抗体分子は、「２部位」又は「サンドイッチ」アッセイとしても知られる免疫測定アッセイでの利用に適合させてもよい。代表的な免疫測定アッセイでは、非標識抗体（又は抗体断片）の一定量を固体の支持体又は担体に結合させ、固相抗体、抗原及び標識抗体の間で形成される三元複合体の検出及び／又は定量を可能にするために、検出可能に標識された可溶性抗体の一定量を加える。
【０２０５】
本発明の抗体は、いくつかの異なる癌の画像化のために用いるために、放射性標識されてもよい。抗体の標識及び画像化技術による可視化のために、Ｉｎ１１１及びＴｃ９９のような放射性同位体が用いられる。放射免疫シンチグラフィー（ＲＩＳ）は、腫瘍のｉｎ  ｖｉｖｏ画像化を可能にする機能的検査である。これは、放射性標識抗体及び標準のガンマシンチレーションカメラを用いて達成される。各患者は、全身の調査を受ける。体の調査は、完全長の前後全身収集として実施される。各場合において、病変部のサイズ及び場所の正確性を増加させるために、既知の又は疑われる疾患の部位の選択的な平面像（斜め及び側面の像を含む）が得られる。
【０２０６】
本発明の抗体は、ヒト及びマウスの免疫系の異なる基本的な生理的状態及び疾患に関与する化合物のハイスループットスクリーニングのために、複合イムノアッセイで用いられてもよい。複合イムノアッセイは当業者に公知であり、とりわけ、Ａｎｄｅｒｓｏｎ及びＤａｖｉｓｏｎ［Ａｎｄｅｒｓｏｎ及びＤａｖｉｓｏｎ（１９９９）Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１５４巻：１０１７〜１０２２頁］によって記載されている。
【０２０７】
したがって、上記のように、本発明は、対象での腫瘍又は癌の存在の検出又は表示のためのスクリーニングアッセイとして有用である。本明細書に記載される検出可能なマーカーに直接的にコンジュゲートした場合、抗体又はその断片は、癌細胞の存在を示すｉｎ  ｖｉｖｏでの抗原（又はその断片）の検出で用いることができ、画像化技術の助けを借りると、診断対象への注射及び画像化による検出によって可視化することができる。
【０２０８】
さらに、本発明によって提供される抗体は、例えば癌の治療においてそれ自体で又は組成物の一部として用いるために、細胞毒性薬にコンジュゲートしてもよい。
【０２０９】
したがって、上記のように、本発明によって提供される抗体は、癌性又は前癌性の細胞を死滅させるために、毒性の薬剤のための送達系として適する。
【０２１０】
別のさらなる態様では、本発明は、必要とする対象での疾患又は障害の治療のための方法であって、ＰＲＴ５、ＰＲＴ６、ＰＲＴ７及びＰＲＴ８からなる群から選択されるタンパク質、又はその断片若しくは誘導体、又はそれを含む組成物を認識する抗体の治療的有効薬量を前記対象に投与することを含む方法を提供し、前記疾患又は障害は、免疫学的コンポーネント又は病因を有する疾患、感染症、急性及び慢性炎症性疾患、癌、移植及び自己免疫疾患、生殖能力関連の疾患、炭水化物代謝障害、糖尿病、メタボリックシンドローム、肥満、内分泌性疾患並びに筋肉障害からなる群から選択される。
【０２１１】
さらに、本明細書で提示される抗体は、医薬の活性剤として用いられてもよく、又は細胞の治療を達成するために、毒性又は治療的な薬剤のための送達系であってもよい。
【０２１２】
細胞毒性薬の一例は、増殖抑制薬剤分子であり、それは直接的に又はリンカーを通して、本発明の抗体のいずれか１つ、すなわち抗ＰＲＴ５、抗ＰＲＴ６、抗ＰＲＴ７又は抗ＰＲＴ８に共有結合されてもよく、前記抗体は、例えば癌細胞中に豊富であるか、又はそれによって分泌されるプロテアーゼによって特異的に任意選択で切断可能でもよく、それによってプロテアーゼの作用によって前記癌細胞の中に、その近くに、又はそこに増殖抑制薬剤を優先的に放出する。
【０２１３】
増殖抑制薬剤の例は、シクロホスファミド、クロラムブシル、ブスルファン、メルファラン、チオテパ、イホスファミド、ナイトロジェンマスタード、メトトレキセート、５−フルオロウラシルシトシンアラビノシド、６−チオグアニン、６−メルカプトプリン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、イドルビシン、ダクチノマイシン、ブレオマイシン、マイトマイシン、プリカマイシン、エピポドフィロトキシンビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンクレスチン、エトポシド、テニポシド、カルムスチン、ロムスチン、セムスチン、ストレプトゾシン、副腎コルチコイド、エストロゲン、抗エストロゲン、プロゲスチン、アロマターゼ阻害薬、アンドロゲン、抗アンドロゲン、ダカルバジン、ヘキサメチルメラミン、ヒドロキシ尿素、ミトタン、プロカルバジド、シスプラスチン、カルボプラチン、メルファラン、メトトレキセート及びクロラムブシルである。
【０２１４】
代わりに、抗ＰＲＴ５、抗ＰＲＴ６、抗ＰＲＴ７又は抗ＰＲＴ８抗体は、腫瘍に金属イオン（鉄又は亜鉛又はその他）などの特定の物質を運ぶことができ、したがって、腫瘍に毒性物質（放射性又は細胞傷害性化学物質、すなわち、前記のようにリシンのような毒素又は細胞傷害性アルキル化剤又は細胞傷害性プロドラッグ）を送達する手段又は担体の役目を果たす。抗体と毒素又は放射性同位体との結合は、化学的であってよい。直接連結された毒素の例は、ドキソルビシン、クロラムブシル、リシン、シュードモナス外毒素などである。抗原及び毒素への二重特異性を有するハイブリッド毒素を生成することができる。そのような二価の分子は、腫瘍に結合し、腫瘍に細胞毒性薬を送達するか、又はＴ３−Ｔｉ受容体複合体への結合など、細胞傷害性リンパ球に結合して活性化する役目を果たすことができる。
【０２１５】
本発明は、既に診断されている癌の予後診断の評価で用いることができる方法も提供する。詳細には、治療の前、中及び後の経過観察が重要である。代わりに、特に試験される試料が、患者から得られる最も「患者フレンドリーな」種類の試料の１つである血液試料である場合、前記方法は癌検診にも適当である。
【０２１６】
したがって、別のさらなる態様では、本発明は、対象の疾患又は障害の診断のための方法であって、前記疾患又は障害は、免疫学的コンポーネント又は病因を有する疾患、感染症、急性及び慢性炎症性疾患、癌、移植及び自己免疫疾患、生殖能力関連の疾患、炭水化物代謝障害、糖尿病、メタボリックシンドローム、肥満、内分泌性疾患並びに筋肉障害からなる群から選択され、
ａ．前記対象からの試料を提供するステップと、
ｂ．前記試料を、抗ＰＲＴ５、抗ＰＲＴ６、抗ＰＲＴ７及び抗ＰＲＴ８抗体からなる群から選択される本発明による抗体、又はそれを含む組成物と接触させるステップと、
ｃ．検出手段を通して前記少なくとも１つの抗体及びその特異抗原の間の複合体の形成を検出するステップとを含み、
それによって複合体の検出は前記対象が癌を起こしていることを示す方法を提供する。
【０２１７】
したがって、本発明は、さらなる態様で、試料中の癌の診断のための方法であって、対象からの試料中のＰＲＴ７ポリペプチド又はそれを含むタンパク質の存在を検出することを含み、それによって、対照より高いＰＲＴ７レベルを提示する試料は、癌の存在を示す方法も提供する。
【０２１８】
特定の一実施形態では、前記癌は、肺癌又はすい臓癌である。
【０２１９】
本明細書で対象と称すとき、前記対象はヒト又はヒト以外の哺乳動物であってよい。ヒト以外の哺乳動物には、それらに限定されないが、ウシ、ウマ、イヌ、ネコ、マウス、ラット、モルモットなどが含まれる。通常、対象はヒト、特に患者又は健康な個体である。
【０２２０】
本発明の診断法の一実施形態では、前記試料は血液試料である。
【０２２１】
本発明の診断法の別の実施形態では、前記試料は前記癌の生検材料である。
【０２２２】
したがって、本発明は、癌治療法の効力を監視する方法も提供する。治療の効力を監視することは、癌治療法の予後診断を評価するために必須である。したがって、本明細書で提示される診断の方法は、癌治療法の前、間又は後に対象で実行してもよく、結果の分析は、正常集団での同じ複合体のパターンと比較して各時点で得られる（少なくとも２つの抗原抗体複合体の間の関係のパターン）。正常集団のものと最も近い対象のパターンが、治療成功を示す。
【０２２３】
本明細書で称されるように、癌治療法は、放射線療法、化学療法などを含む、その疾患を根絶するためのあらゆる治療法に関連する。
【０２２４】
本発明を記載するために本明細書で用いるように、「腫瘍」、「癌」、「悪性の増殖性障害」及び「悪性腫瘍」の全ては、組織又は器官の過形成に同等に関連する。その組織がリンパ系又は免疫系の一部である場合、悪性細胞は循環細胞の非固形腫瘍を含むことができる。他の組織又は器官の悪性腫瘍は、固形腫瘍を生成することができる。一般に、非固形腫瘍及び固形腫瘍は、例えば、癌、黒色腫、白血病及びリンパ腫である。
【０２２５】
癌及び腫瘍の種類の非限定例には、副腎皮質癌；膀胱癌；結腸癌；結直腸癌；直腸癌；神経外胚葉及び松果体の癌；小児期脳幹神経膠腫；小児期小脳系神経膠星状細胞腫；小児期脳神経膠星状細胞腫；小児期髄芽細胞腫；小児期視覚路神経膠腫；髄膜腫；混合性神経膠腫；乏突起神経膠腫；神経膠星状細胞腫；脳室上衣細胞腫；下垂体腺腫；聴神経腫；脊柱傍の悪性奇形腫；乳癌；男性乳癌；乳腺新生物；卵巣癌；カルチノイド腫瘍；子宮頸癌；子宮癌；子宮内膜癌；膣癌；陰門癌；妊娠期栄養膜の癌；卵管癌；白血病、例えば骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、成熟による急性骨髄性白血病、急性前骨髄球性白血病、好塩基球増加を伴う急性非リンパ球性白血病、急性リンパ性白血病；急性骨髄性白血病；急性単球性白血病、好酸球増加症を伴う急性骨髄単球性白血病、リンパ性白血病、例えば急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ球性白血病；リンパ腫（ホジキン病及び非ホジキン病）；悪性リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫；バーキットリンパ腫；骨髄増殖性の疾患；良性髄膜腫；唾液腺混合腫瘍；唇及び口腔の腫瘍；咽頭；喉頭、副鼻腔；結腸アデノーマ；腺管癌；まぶたの癌；結膜癌；涙腺癌；腎細胞癌；転移性腺癌；腺癌、例えば小細胞肺癌、腎臓、子宮、前立腺；扁平上皮癌；絨毛上皮腫；神経芽細胞腫；網膜芽細胞腫；肉腫；横紋筋肉腫；軟部組織肉腫；カポジ肉腫；ユーイング肉腫；骨肉腫；外骨格の粘液様軟骨肉腫；子宮肉腫；眼窩の肉腫；脳、脊髄、脈管系；血管肉腫；ウィルムの腫瘍；ファンコニ貧血；ランゲルハンス細胞組織球増殖症；腎臓の悪性杆状腫瘍；肝癌；内分泌癌；子宮内膜癌；食道癌；眼癌；胃癌；胃腸の癌；性尿器の癌；神経膠腫；婦人科癌；頭頚部癌；肝細胞癌；下咽頭癌；すい島細胞癌；腎臓癌；喉頭癌；肺癌；皮膚癌；非黒色腫皮膚癌；黒色腫；悪性黒色腫；結膜の悪性黒色腫；ブドウ膜の悪性黒色腫；中皮腫；骨髄腫、多発性；鼻咽頭癌；食道癌；すい臓癌；下垂体癌；前立腺癌；胃癌；精巣癌；胸腺癌；甲状腺癌；移行細胞癌；栄養膜の癌；精巣及び卵巣の未分化胚細胞腫が含まれる。
【０２２６】
本明細書で定義されるように、「試料」は、対象、一般に哺乳動物の対象から得られる任意の試料を指す。生体試料の例には、体液及び組織検体が含まれる。試料の源泉は、生理的媒体、例えば血液、血清、血漿、母乳、膿、脳脊髄液、スワブ、組織削り屑、洗浄水、尿、糞便、体腔の洗浄から得られるリンス液、痰、人体の部位（のど、膣、耳、目、皮膚、痛む組織、例えばリンパ節など）からとられるスワブに由来してもよい。組織検体には、脾臓、リンパ節及びあらゆるリンパ球含有組織の生検材料が含まれる。
【０２２７】
本明細書及び請求項中の用語「試料」は、本明細書でその最も広い意味で用いられる。
【０２２８】
一般的に、先験的に液体でないスワブ及び試料は液体媒体と接触させ、それは次に検出剤と接触させる。
【０２２９】
本発明の特定の一実施形態では、本発明の方法で用いられる前記試料は、体液又は培養由来試料のいずれか１つである。
【０２３０】
培養由来の試料は、細胞抽出物、媒体試料、又は体液の培養、例えば血液試料の培養であってよい。
【０２３１】
「全血」は、動物又はヒトから収集される血液を意味する。全血は、凝集及び凝固を予防するヘパリン、ＥＤＴＡ、クエン酸塩又は他の任意の物質で収集されてもよい。
【０２３２】
生体試料は、ニトロセルロースなどの固相支持体若しくは担体、又は細胞、細胞粒子又は可溶タンパク質を固定化することが可能である他の固体支持体若しくは担体で処理されてもよい。支持体又は担体は、適する緩衝液で次に洗浄し、上記したように、本発明による検出可能に標識された抗体で処理してもよい。次に、未結合の抗体を除去するために、固相支持体又は担体をもう一度緩衝液で洗浄してもよい。前記固体支持体又は担体上に結合した抗原又は標識の量は、従来の手段によって次に検出することができる。
【０２３３】
「固相支持体」、「固相担体」、「固体支持体」、「固体担体」、「支持体」又は「担体」は、抗原又は抗体を結合することが可能なあらゆる支持体又は担体を意図する。周知の支持体又は担体には、ガラス、ポリスチレン、ポリプロピレン、ポリエチレン、デキストラン、ナイロンアミラーゼ、天然及び改変されたセルロース、ポリアクリルアミド並びに磁鉄鉱が含まれる。担体の性質は、本発明の目的のために、ある程度可溶性であるか又は不溶性であってよい。結合分子が抗原又は抗体に結合することが可能な限り、支持材は、実質的にあらゆる可能な構造的構成を有してもよい。したがって、支持体又は担体の構造は、ビーズの場合のように球状でも、試験管の内面又はロッドの外面の場合のように円筒形でもよい。同じ試験管内で異なる抗原のために異なる担体を用いてもよい。代わりに、表面はシート、検査片のように平らでよい。具体的な支持体又は担体には、ポリスチレンビーズが含まれる。当業者は、抗体又は抗原の結合に適する他の多くの担体を承知するか、又は通常の実験を用いてそれを確かめることができる。
【０２３４】
特定の状況に慣例であるか必要であるように、洗浄、撹拌、振とう、ろ過などの他のステップをアッセイに加えてもよい。
【０２３５】
本明細書で定義されるように、「培地」は、それらに限定されないが、好ましくは適当な抗生物質及びグルタミン、任意選択で他の添加剤、例えば抗かび剤、非必須アミノ酸、ＤＴＴ、ピルビン酸ナトリウムなどが補われた、ウシ胎仔（ウシ）血清を含むか含まないＲＰＭＩ１６４０を含め、本発明を実施するために試料を持続させるために用いることができる任意の培地を意味する。本発明の実施で用いられてもよい他の培地には、それらに限定されないが、イーグル、ダルベッコ、マッコイ、培地１９９、ウェイマウス培地、及び補助剤を含むか含まない無血清培地が含まれる。別の実施形態では、刺激剤は培地を含まない。
【０２３６】
本発明は、それを必要とする対象での疾患又は障害の治療方法であって、前記疾患又は障害は、免疫学的コンポーネント又は病因を有する疾患、感染症、急性及び慢性炎症性疾患、癌、移植及び自己免疫疾患、生殖能力関連の疾患、並びに炭水化物代謝障害からなる群から選択され、前記対象に本発明のポリペプチド又は抗体の治療的有効投薬量を投与することを含む方法も提供する。詳細には、前記ポリペプチド又は抗体は、治療のために用いられる場合、細胞毒性薬にコンジュゲートされるか、又は標的細胞若しくは組織への毒性物質の送達のための担体としての役目を果たす。この関係において、標的細胞は前記疾患又は障害と関連する細胞である。
【０２３７】
下記の実施例で、本発明者らは、ＰＲＴ７が特定の種類の癌で上昇することを示した。詳細には、発明者らは、ＰＲＴ７がすい臓癌又は肺癌の男性患者で有意に上昇することを証明した。
【０２３８】
したがって、本発明は、試料中の癌の診断のための方法であって、対象からの試料中のＰＲＴ７ポリペプチド又はそれを含むタンパク質の存在を検出することを含み、それによって、対照より高いＰＲＴ７レベルを提示する試料は癌の存在を示す方法を提供する。
【０２３９】
別のさらなる態様では、本発明は、疾患又は障害の診断及び／又は治療効果のモニタリング及び／又は予後診断の評価のための診断キットであって、前記疾患又は障害は、免疫学的コンポーネント又は病因を有する疾患、感染症、急性及び慢性炎症性疾患、癌、移植及び自己免疫疾患、生殖能力関連の疾患、並びに炭水化物代謝障害からなる群から選択され、次のコンポーネント：
ａ．本発明の明細書に記載される抗体又はそれを含む組成物、及び
ｂ．試料中の抗原の存在の検出を実施するための説明書を含み、前記抗原は前記抗体によって特異的に認識されるキットを提供する。
【０２４０】
前記キットは、次のコンポーネントの少なくとも１つをさらに含むことができる：
ａ．試験する試料を収集するための少なくとも１つの手段；
ｂ．前記抗体による前記抗原の前記認識の検出のために必要な少なくとも１つの試薬;及び 
ｃ．少なくとも１つの対照試料。
【０２４１】
本発明によって提供されるキットの１つの具体例は、ＰＲＴ７ポリペプチド、その断片若しくは誘導体、又はそれを含むタンパク質を特異的に認識する抗体を含み、癌の診断のために有効であるキットである。
【０２４２】
対象はヒト又はヒト以外の哺乳動物であってよい。通常、対象はヒト患者、又は健康な個体である。
【０２４３】
一実施形態では、そのようないかなるキットも、例えば、固体支持体、本発明で定義される少なくとも１つの抗体、及び適宜任意選択で二次抗体を含むＥＬＩＳＡキットのような、抗体（又は認識する剤）捕捉アッセイキットである。キットは、上記のような検出可能な部分、酵素基質及び呈色試薬などの、他のいかなる必要な試薬もさらに任意選択で含むことができる。代わりに、抗体捕捉診断キットは、本明細書に記載されるコンポーネント及び試薬を一般に含むイムノブロットキットである。本発明の診断キットに含まれる特定の試薬及び他のコンポーネントは、キットで実施される特定の診断法に従って当技術分野で利用できるものから選択されてもよい。そのようなキットは、対象から得られる、培養前及び／又は培養後の生体試料、例えば組織又は体液、特に全血、ＰＢＭＣ若しくは白血球中の抗体を検出するために用いることができる。
【０２４４】
本発明の診断法で適する手段と指摘される場合、前記適する手段は、中でも免疫親和性手法、酵素アッセイ、又は構造的特徴を検出するための手段であってもよい。
【０２４５】
前記適する手段が免疫親和性手法である場合、前記手法は、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）、ウエスタンブロット、免疫沈降反応、ＦＡＣＳ、又は本発明に記載の抗体を利用する他の任意の免疫親和性手法のいずれか１つである。
【０２４６】
特定の一実施形態では、検出は捕捉ＥＬＩＳＡで実行される。
【０２４７】
捕捉ＥＬＩＳＡ（別名「サンドイッチ」ＥＬＩＳＡ）は、ピコグラムからマイクログラムの量の物質（ホルモン、細胞シグナル伝達化学物質、感染症抗原及びサイトカインなど）を定量化するための、高感度アッセイである。この種のＥＬＩＳＡは、分析する物質が、濃度が低すぎてポリスチレンマイクロタイタープレートに結合しない（細胞培養上清中のタンパク質など）か、又はプラスチックにうまく結合しない（小有機分子など）場合に特に求められる。捕捉抗体、試料、対照、及び検出抗体のために最適な希釈、並びにインキュベーション時間は経験的に決定され、多大な滴定を必要とすることがある。理想的には、酵素標識検出抗体が用いられるであろう。しかし、検出抗体が非標識である場合、二次抗体はコーティング抗体とも、試料とも交差反応しないはずである。適当な陰性及び陽性対照も、含まれるべきである。
【０２４８】
用いる捕捉又はコーティング抗体は、炭酸−重炭酸緩衝液又はＰＢＳで希釈するべきである。捕捉抗体は、一般的に０．２〜１０μｇ／ｍｌでプレーティングされる。親和性精製抗体を用いるか、最低限でＩｇＧ分画を用いることが好ましい。一般に、試料は１ウェルにつき１０ｎｇ〜１０μｇの範囲（アッセイの感度が高いほど、より少ない試料を必要とする）で、ＰＢＳに希釈される。
【０２４９】
ここに明細書で用いるように、用語「検出可能な部分」は、その存在、不在又はレベルを直接的又は間接的に監視することができる、任意の原子、分子又はその一部を指す。１つの例は、放射性同位体を含む。他の例には、（ｉ）発色又は光放射（発光）反応を触媒することができる酵素、及び（ｉｉ）蛍光団が含まれる。例えば蛍光団の場合のように、検出可能な部分がそれ自身検出可能であるならば、検出可能な部分の検出は直接的であってよい。代わりに、検出可能な部分の検出は、間接的であってもよい。後者の場合、検出可能な部分と反応する、それ自身が直接的に検出可能である第二の部分が好ましくは使用される。検出可能な部分は、抗体に固有であってもよい。例えば、抗体の定常領域は、直接検出可能な部分を有する二次抗体が特異的に結合することができる、間接的な検出可能な部分の役目を果たすことができる。
【０２５０】
したがって、二次抗体は、本発明の方法での抗体の検出のための特に適する手段である。この二次抗体は、それ自体が検出可能な部分にコンジュゲートされてもよい。本発明に従う抗体を検出可能に標識することができる方法の１つは、それを酵素に連結することによる。この酵素は、後に適当な基質に曝露させると、次に、例えば分光光度的、蛍光定量的又は視覚的手段によって検出することができる化学部分を生成するような方法で基質と反応する。検出可能に抗体を標識するために用いることができる酵素には、それらに限定されないが、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、リンゴ酸デヒドロゲナーゼ、ブドウ球菌ヌクレアーゼ、デルタ−５−ステロイドイソメラーゼ、酵母アルコールデヒドロゲナーゼ、アルファ−グリセロリン酸デヒドロゲナーゼ、トリオースリン酸イソメラーゼ、アスパラギナーゼ、グルコースオキシダーゼ、ベータ−ガラクトシダーゼ、リボヌクレアーゼ、ウレアーゼ、カタラーゼ、グルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ、グルコアミラーゼ及びアセチルコリンエステラーゼが含まれる。
【０２５１】
検出は、酵素のために発色性基質を使用する比色法によって達成することができる。検出は、同じように調製された標準と比較した、基質の酵素反応の程度の目視比較によって達成することもできる。
【０２５２】
第一の抗体が結合する固体支持体は、任意の水不溶性、水非懸濁性の固体支持体であってよい。適する固体支持体の例には、例えばポリスチレンの大きなビーズ、ろ紙、試験管及びマイクロタイタープレートが含まれる。第一の抗体は、共有結合又は吸着によって固体支持体に結合してよい。固体支持体を使用することの利点は、固液相の分離のために遠心工程が必要とされないことである。
【０２５３】
上で指摘される固体支持体には、ポリマー、例えばポリスチレン、アガロース、セファロース、セルロース、ガラスビーズ及びセルロース若しくは他のポリマーの磁化可能な粒子が含まれてもよい。固体支持体は、大きいか小さなビーズ若しくは粒子、チューブ、プレートの形、又は他の形であってよい。
【０２５４】
固体支持体として、その内壁が第一の抗体、例えば本発明のために発明者らによって調製される抗ＰＲＴ５、抗ＰＲＴ６、抗ＰＲＴ７若しくは抗ＰＲＴ８抗体、又はその任意の断片若しくは誘導体でコーティングされる、マイクロタイタープレートの試験管が好ましくは利用される。
【０２５５】
本発明の診断法によって用いられる「判定する」への言及は、特定の試料に存在するバイオマーカーの量を推定、定量化、計算すること、さもなければ導くことを含む。これは、例えば検出可能な生成物の出現、例えば基質レベルの任意の検出可能な変化、又は生成物の出現若しくは基質の消滅速度の任意の変化であってよいエンドポイント指標を測定することによって、或いは本発明によって記載されるバイオマーカーに結合する抗体の量を測定することによって達成されてもよい。
【０２５６】
前記試験キットの全てにおいて、試験試料を収集するための前記手段は、スワブ、ピペット又は類似した収集手段であってよく、前記インキュベーション手段は、プレート、試験管、ガラス若しくはプラスチック表面、ウェル、又は吸収紙の細片の上に置かれる液体若しくは半固体の培地、或いは類似した手段であってよい。
【０２５７】
試験がスキャナ上で実行され、結果がリアルタイムでコンピュータに送られることを可能にするためにも、キットの任意のバージョンが設計されていることを理解するべきである。これは、全情報を全関係者に直接送信することができること、及びいかなる将来の参照のためにもそれが完全に保存されることを保証する。
【０２５８】
キットの別の実施形態では、前記試料は、体液及び培養由来の試料のいずれか１つである。
【０２５９】
本発明の抗体と接触させる試料は、アレイに配列されてもよい。
【０２６０】
本発明の方法及びキットで用いられる用語「アレイ」は、認識剤、すなわち本発明の抗体の少なくとも１つの「番地指定された」立体配置を指す。アレイの各「番地」は、認識剤を含む所定の特異的空間領域である。例えば、アレイは、各々異なる抗体を含む複数の容器（試験管）、プレート、マイクロプレート中のマイクロウェルであってよい。アレイは、互いに異なる領域（ドット、線、カラム）に異なる既知の認識剤、例えば抗体を保持する任意の固体支持体であってもよい。アレイは、好ましくは一体型の適当な対照、例えば試料を含まない領域、抗体を含まない領域、いずれも含まない領域、すなわち溶媒及び試薬だけを含むもの、並びに抗体によって認識される合成であるか単離されたタンパク質又はペプチドを含む領域（陽性対照）を含む。本発明のアレイのために用いられる固体支持体は、本発明によって提供されるキットに関連して、以下の本明細書でさらに詳細に記載される。
【０２６１】
本発明のキット用に適する固体支持体は、一般的に実質的に液相に不溶性である。本発明の固体支持体は、特定の種類の支持体に限定されない。むしろ、多数の支持体が利用でき、それらは当業者に公知である。したがって、有用な固体支持体には、固体及び半固体のマトリックス、例えばエーロゲル及びヒドロゲル、樹脂、ビーズ、バイオチップ（薄膜をコーティングしたバイオチップを含む）、微流動チップ、シリコンチップ、マルチウェルプレート（マイクロタイタープレート又はマイクロプレートとも呼ばれる）、膜、フィルター、伝導性及び不伝導性金属、ガラス（顕微鏡スライドを含む）並びに磁性支持体が含まれる。有用な固体支持体のより具体的な例には、シリカゲル、高分子膜、粒子、誘導体化されたプラスチックフィルム、ガラスビーズ、綿、プラスチックビーズ、アルミナゲル、多糖、例えばセファロース、ナイロン、ラテックスビーズ、磁性ビーズ、常磁性ビーズ、超常磁性ビーズ、デンプンなどが含まれる。
【０２６２】
本発明の方法及びキットのいずれかに含まれる試薬のいずれも、上記の固体支持材のいずれかに包埋、連結、接続、固着、設置又は融合される試薬として提供されてよいことをさらに記すべきである。
【０２６３】
本発明の方法及びキットにより用いられるいずれの抗体も、本発明の抗体に由来するポリクローナル、モノクローナル、組換え体、例えばキメラ、又は一本鎖の抗体（ＳｃＦｖ）であってもよいことを記すべきである。
【０２６４】
本発明は、その内容は本明細書の開示の中に含まれると解釈されるべき請求項によって定義される。
【０２６５】
開示及び記載されているが、そのような工程段階及び材料はいくぶん変更されることがあるので、本発明は、本明細書に開示される特定の実施例、工程段階及び材料に限定されないことを理解するべきである。本発明の範囲は添付の請求項及びその同等物によってのみ限定されるので、本明細書で用いられる用語は特定の実施形態を記載することだけのために用いられ、限定するものではないことも理解されたい。
【０２６６】
本明細書と添付の請求項で用いられているように、単数形「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、明らかに別の指示がない限り複数形を含むことに注意しなければならない。
【０２６７】
以下の本明細書及び請求項全体において、文脈上特に必要がない限り、語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、並びに例えば「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」及び「含んでいる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」などの変異形は、表示される整数若しくは段階又は整数若しくは段階の群が含まれることを意味するが、他のいかなる整数若しくは段階又は整数若しくは段階の群の除外も意味するものではないことが理解される。
【０２６８】
以下の実施例は、本発明の態様の実施において発明者らによって使用される技術を代表するものである。これらの技術は本発明の実施のための好ましい実施形態の例であるが、本開示を考慮して、本発明の適用範囲から逸脱することなく多くの改変を加えることができることを当業者は認識することを理解するべきである。
【０２６９】
特記されていない限り、本明細書で用いられる全ての専門用語及び科学用語は、本発明が関連する分野の技術者によって通常理解されるのと同じ意味を有する。
【実施例】
【０２７０】
分子生物学の一般方法
分子生物学分野のいくつかの方法は当分野の技術者に周知であるので、本明細書で詳述されない。そのような方法には、ＰＣＲ、ｃＤＮＡの発現、ヒト細胞のトランスフェクションなどが含まれる。そのような方法を記載している教科書は、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（１９８９）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ、Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、ＩＳＢＮ：０８７９６９３０９６；Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌ（１９８８）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、ＩＳＢＮ：０４７１５０３３８Ｘ、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．である。さらに、例えばウエスタンブロットのようないくつかの免疫学的技術は当分野の技術者に周知であるので、それぞれの場合に本明細書で詳細に記載されていない。例えばＨａｒｌｏｗ及びＬａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙを参照。
【０２７１】
ＥＬＩＳＡ一般プロトコル
酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）は、容易に分析される酵素に結合させた抗体又は抗原を用いて、抗体の特異性を簡単な酵素アッセイの感度と組み合わせる。ＥＬＩＳＡは、抗原又は抗体濃度の有用な測定を提供することができる。ＥＬＩＳＡは、５段階手法である：１）ＰＢＳに希釈した抗原でマイクロタイタープレートウェルをコーティングし、４℃で一晩インキュベートし、洗浄する；２）偽陽性結果を防止するためにＰＢＳ中のＢＳＡ／ＦＣＳで全ての未結合部位をブロックし、１時間インキュベートし、洗浄する；３）抗体をウェルに加える、１時間インキュベートし、洗浄する；４）酵素にコンジュゲートさせた抗ヒトＩｇＧを加え、１時間インキュベートし、洗浄する；５）基質を酵素と反応させて着色した生成物を生成する、したがって陽性反応を示す。
【０２７２】
ＦＡＣＳプロトコル
１．収穫し、細胞を洗浄し、氷冷ＰＢＳ、１０％ＦＣＳ、１％アジ化ナトリウムで１〜５×１０６細胞／ｍｌの濃度に細胞懸濁液を調節する。
２．０．１〜１０μｇ／ｍｌの一次標識抗体を加える。必要に応じて、３％ＢＳＡ／ＰＢＳで希釈溶液を作製するべきである
３．室温又は４℃で少なくとも３０分間インキュベートする。
４．４００ｇで５分間の遠心によって細胞を３回洗浄し、５００μｌ〜１ｍｌの氷冷ＰＢＳ、１０％ＦＣＳ、１％アジ化ナトリウムでそれらを再懸濁する。
５．フローサイトメーターで細胞を分析する。
【０２７３】
ＥＬＩＳＡ手順：
１．較正曲線：２０００ｐｇ／ｍｌ〜３１ｐｇ／ｍｌのタンパク質の連続希釈液をＰＢＳ（Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ、カタログ番号０２−０２３−５Ａ）で調製する。
２．３７℃の浴槽で試料を速やかに解凍する。
３．試料を加える：Ｍａｘｉｓｏｒｐ９６ウェルプレート（ＮＵＮＣ、Ｆ９６  Ｍａｘｉｓｏｒｐ、カタログ番号４４２４０４）に、各血液試料（希釈なし）の７０μlの２反復及び標準試料の７０μｌの３反復を加える。振盪させながら４℃で一晩インキュベートする。
４．洗浄：液体を除去し、マルチピペットを用いて、ＰＢＳ中の３００μｌの０．０５％ＴＷ−２０（Ａｍｒｅｓｃｏ、カタログ番号０７７７−１Ｌ）で４回プレートを洗浄する。
５．ブロックする：ＰＢＳ中で５％ＢＳＡ（ＭＰ  ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ、カタログ番号１６００６９）を希釈する。各ウェルに３００μlのブロック緩衝液を加える。振盪させながら室温で１時間インキュベートする。
６．洗浄：段階４を繰り返す。
７．検出：希釈剤（ＰＢＳ中の０．０５％ＴＷ−２０、０．１％ＢＳＡ）で、特異抗体（親和性精製）を１：２５０に希釈する。各ウェルに１００μlの検出抗体を加える。振盪させながら室温で２時間インキュベートする。
８．洗浄：上の段階４を繰り返す。
９．ＨＲＰコンジュゲート：希釈剤でヤギ抗ウサギＨＲＰコンジュゲート抗体（Ｃｅｌｌ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ、カタログ番号７０７４）を１：２００に希釈する。各ウェルに１００μｌのＨＲＰコンジュゲートを加える。振盪させながら室温で３０分間インキュベートする。
１０．洗浄：上の段階４を繰り返す、４回の代わりに５回の洗浄だけ。
１１．発色：各ウェルに１００μｌのＴＭＢ（３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン、西洋ワサビペルオキシダーゼ基質、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、カタログ番号ＥＳ００１−５００ＭＬ）を加え、青い発色を待ち、次に５０μｌの２Ｎ  Ｈ２ＳＯ４（Ｆｒｕｔａｒｏｍ、カタログ番号５５５２５４０）を加える。
１２．マイクロプレートリーダーで、ウェルの吸光度を４５０ｎｍで検査する。
【０２７４】
ポリクローナル抗体の調製
ポリクローナル抗体の調製のための標準プロトコルを用いて、ウサギでポリクローナル抗体を生成した。
【０２７５】
ＰＲＴ５に対するポリクローナル抗体は、前記ポリペプチドの最後の１４アミノ酸を含むＰＲＴ５のＣ末端断片を抗原として用いて、ウサギで生成された。この断片は、本明細書では配列番号１７で表される。
【０２７６】
ＰＲＴ６に対するポリクローナル抗体は、前記ポリペプチドの最後の１４アミノ酸を含むＰＲＴ６のＣ末端断片を抗原として用いて、ウサギで生成された。この断片は、本明細書では配列番号１８で表される。
【０２７７】
ＰＲＴ７に対するポリクローナル抗体は、前記ポリペプチドの最後の１４アミノ酸を含むＰＲＴ７のＣ末端断片を抗原として用いて、ウサギで生成された。この断片は、本明細書では配列番号１９で表される。
【０２７８】
ＰＲＴ８に対するポリクローナル抗体は、前記ポリペプチドの最後の１４アミノ酸を含むＰＲＴ８のＣ末端断片を抗原として用いて、ウサギで生成された。この断片は、本明細書では配列番号２０で表される。
【０２７９】
いくつかの免疫学的技術は当分野の技術者に周知であるので、それぞれの場合に本明細書で詳細に記載されておらず、これらは、例えばＨａｒｌｏｗ及びＬａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｕｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙに詳述されている。
【０２８０】
逆転写酵素ＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲ）
単離された新規タンパク質の発現パターンを確立するために、ＲＴ−ＰＣＲ分析を様々な組織で実施した。適用したＰＣＲ条件は、９５℃で２分間、続いて１サイクルが９５℃で４５秒間、５９℃で４５秒間及び７２℃で５分間のものを４０サイクル、最終サイクルが７２℃で５分間であった。
【０２８１】
配列
本発明で言及される全ての配列を、下の表１に提示する。
【表１−１】
2013500739.tif 000002
【表１−２】
2013500739.tif 000003
【０２８２】
（例１）ＰＲＴ５の特徴付け
新規ｃＤＮＡをヒトｃＤＮＡライブラリーから単離し、そのタンパク質生成物をＰＲＴ５と名付けた。
【０２８３】
ＲＴ−ＰＣＲ分析のために以下のプライマーを用いた：
【化１】
2013500739.tif 000004
【０２８４】
ＰＣＲの生成物は、配列決定をされた。ＰＣＲ生成物をアガロースゲルで分析し、Ｃｙｂｅｒ  Ｇｒｅｅｎ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎｅ）で染色し、ＰＣＲ生成物の強度はＢｉｏＲａｄ  ＣｈｅｍｉＤｏｃアナライザーを用いて評価した。結果を下の表２に提示するが、すい臓及び精巣で高度な発現を、さらには脾臓、卵巣及び小腸で識別可能な発現を実証している。
【表２】
2013500739.tif 000005
【０２８５】
（例２）Ｃ５７Ｂ１マウスのグルコースレベルに及ぼすＰＲＴ５投与の影響
上に示されるように、すい臓でのＰＲＴ５の高発現は、ＰＲＴ５がグルコース代謝に関与するかもしれないことを示唆した。したがって、この実験の目標は、グルコースのレベル及びターンオーバーに及ぼすＰＲＴ５投与の影響を検証することであった。
【０２８６】
手順：
７週齢雌Ｃ５７Ｂ１マウス（Ｈａｒｌａｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  Ｌｔｄ．、Ｊｅｒｕｓａｌｅｍ、Ｉｓｒａｅｌから購入）に以下のものを注射した：
・生理食塩水−３匹のマウス×４
・１μｇ／マウスのＰＲＴ５−３匹のマウス×４
・５μｇ／マウスのＰＲＴ５−３匹のマウス×４
【０２８７】
マウスを４群に分けた。第一の群は絶食させて、注射の１日後に血糖レベルを検査した（Ａｃｃｕ−Ｃｈｅｋ（登録商標）Ｐｅｒｆｏｒｍａ装置、Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓを用いて）；第二群−注射の２日後、第三群−注射の３日後、及び第四群−注射の４日後。絶食は一晩（グルコース注射の前の晩）実行し、その翌日に２ｍｇ／ｋｇのグルコースを各マウスに注射した。グルコースレベルの時間経過分析は、０、３０、９０、１２０、１５０及び２４０分経過後にグルコースレベルを検査して実施した。ＰＲＴ５投与及びグルコース測定のためのプロトコルは、下の表３に提示される。
【表３】
2013500739.tif 000006
【０２８８】
結果を、図１Ａ〜１Ｄに提示する。全てのマウスで、グルコースレベルは、注射後の最初の３０分でピークに達した。しかし、ＰＲＴ５投与の２日後から意外な結果が観察され、そこでは、１μｇ／ｋｇ又は５μｇ／ｋｇを投与されたマウスのグルコースレベルは、生理食塩水を投与されたマウスのグルコースレベルより有意に低かった。この影響は、グルコースレベルが測定された最終日、実験の５日目、ＰＲＴ５の注射の４日後まで繰り返された。
【０２８９】
ＰＲＴ５処理したマウスの骨格筋で、ＰＲＴ５はインスリン受容体のレベルを増加させることが可能であることも発明者らは観察した（データ示さず）。
【０２９０】
（例３）健康人及びＩＩ型糖尿病患者のヒト血液でのＰＲＴ５レベル
この実験の狙いは、健康個体及びＩＩ型糖尿病患者個体でＰＲＴ５レベルを比較することであった。
【０２９１】
試料：
以下の通り、５０〜８０歳の男性及び女性からの２０個のヒト血液血清試料が、Ｂｉｏｒｅｃｌａｍａｔｉｏｎ，Ｉｎｃ．から得られた：
・健康個体（男性５人／女性５人）からの１０個の試料
・ＩＩ型糖尿病患者（男性６人／女性４人）からの１０個の試料
試料は、−８０℃未満に保たれた。試料の詳細は、下の表４ａ及び４ｂに示す。全ての試料は、白色人種の個体からのものであった。
【表４】
2013500739.tif 000007
【表５】
2013500739.tif 000008
【０２９２】
ＰＲＴ５レベルは、抗ＰＲＴ５抗体を用いてＥＬＩＳＡによって検出された。ＥＬＩＳＡ手法は、上記の通りであった。血液試料は希釈せず、抗ＰＲＴ５抗体は、希釈剤（ＰＢＳ中の０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０、０．１％ＢＳＡ）で１：２５０に希釈した。較正曲線のために、４０００ｐｇ／ｍｌ〜６２．５ｐｇ／ｍｌのＰＲＴ５の連続希釈をＰＢＳで調製した。
【０２９３】
結果を図２Ａ〜２Ｂに示す。特に図２Ｂに示されるように、ＰＲＴ５のレベルはＩＩ型糖尿病試料で有意に低減されている。
【０２９４】
ここに示す結果は、上の例２に記載される結果と一緒に、ＰＲＴ５がグルコース代謝に、特にその調節に深く関与することを強く示唆する。最も重要なことに、二組の結果は、糖尿病の治療のための治療薬としてのＰＲＴ５の使用を支持する。
【０２９５】
（例４）ＰＲＴ６の特徴付け
第二の新規ｃＤＮＡをヒトｃＤＮＡライブラリーから単離し、そのタンパク質生成物をＰＲＴ６と名付けた。
【０２９６】
ＲＴ−ＰＣＲ分析のために以下のプライマーを用いた：
【化２】
2013500739.tif 000009
【０２９７】
上の例１の場合のように、組織発現分析はＲＴ−ＰＣＲを用いて実施され、得られた結果は下の表５に要約した。基本的に、ＰＲＴ６の発現は、精巣で排他的に見出された。
【表６】
2013500739.tif 000010
【０２９８】
（例５）雄性Ｂａｌｂ／Ｃテストステロンレベルに及ぼすＰＲＴ６投与の影響
表５に示す、精巣でのＰＲＴ６の高発現は、ＰＲＴ６がテストステロン発現に関与するかもしれないことを示唆した。したがって、この実験の目標は、テストステロンレベルに及ぼすＰＲＴ６投与の影響を検証することであった。
【０２９９】
手順：
２群のＢａｌｂ／Ｃマウスを用いた：
・３〜４週齢雄性Ｂａｌｂ／Ｃ−テストステロン陰性対照−１８匹のマウス
・７〜８週齢雄性Ｂａｌｂ／Ｃマウス−１８匹のマウス
【０３００】
各群を、３亜群（各々６匹のマウス）に分けた。４日間の間毎日、以下の１つの２００μｌを各群に注射した：
・再蒸留水（ＤＤＷ）中の４％ＤＭＳＯ
・０．５μｇ／ｋｇのＰＲＴ６（ＤＤＷに希釈する）
・５μｇ／ｋｇのＰＲＴ６（ＤＤＷに希釈する）
【０３０１】
４日後に、血清をマウスから抽出し、テストステロンレベルを検査した。テストステロンの測定は、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｔｅｓｔｏｓｔｅｒｏｎｅ  Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓカタログ番号ＫＧＥ０１０）を用いて行った。このアッセイは、競合的結合技術に基づく。テストステロンに特異的なモノクローナル抗体は、マイクロプレートにコーティングされたヤギ抗マウス抗体に結合する。過剰なモノクローナル抗体を除去するために洗浄した後、試料に存在するテストステロンは、モノクローナル抗体上の部位をめぐって固定量の西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）標識テストステロンと競合する。これの後に、過剰なコンジュゲート及び未結合の試料を除去するために、さらに洗浄する。基質溶液をウェルに加えて、結合した酵素活性を判定する。発色を停止させ、吸光度を４５０ｎｍで読みとる。色の強度は、試料中のテストステロン濃度に反比例する。
【０３０２】
結果を図３Ａ〜３Ｂに提示する。興味深いことに、ＰＲＴ６で処理されたマウスは、テストステロンレベルの有意な増加を示した。５μｇ／ｋｇの投与の影響は、０．５μｇ／ｋｇの投与後のものよりずっと顕著であったが、両治療ともテストステロンレベルの増加をもたらした。
【０３０３】
（例６）ＰＲＴ７の特徴付け
第三の新規ｃＤＮＡをヒトｃＤＮＡライブラリーから単離し、そのタンパク質生成物をＰＲＴ７と名付けた。
【０３０４】
ＲＴ−ＰＣＲ分析のために以下のプライマーを用いた：
【化３】
2013500739.tif 000011
【０３０５】
上の例１の場合のように、組織発現分析はＲＴ−ＰＣＲを用いて実施し、得られた結果は下の表６に要約した。基本的に、ＰＲＴ７の顕著な発現は、胎児の脳で、さらに骨格筋及び肝臓でも見出された。
【表７】
2013500739.tif 000012
【０３０６】
（例７）健康な個体及びすい臓癌又は肺癌患者のヒト血液中のＰＲＴ７レベル
この実験は、健康な個体並びにすい臓癌又は肺癌患者からの血液中のＰＲＴ７のレベルを検証することを目指した。
【０３０７】
試料：
−すい臓癌（Ｉ）：
以下の通り、１９個のヒト血液血清試料が、Ｂｉｏｒｅｃｌａｍａｔｉｏｎ，Ｉｎｃ．から得られた：
・健康：男性５人／女性４人
・すい臓癌：男性５人／女性５人
−すい臓癌（ＩＩ）：
以下の通り、１０個のヒト男性血液血清試料が、Ｂｉｏｒｅｃｌａｍａｔｉｏｎ，Ｉｎｃ．から得られた：
・健康５人
・すい臓癌５人
−肺癌：
男性及び女性からの２０個のヒト（男性及び女性）血液血清試料が、Ｂｉｏｒｅｃｌａｍａｔｉｏｎ，Ｉｎｃ．から得られた：
・健康１０人（男性５人／女性５人）
・肺癌１０人（男性５人／女性５人）
【０３０８】
試料は、−８０℃未満に保たれた。試料の詳細は、下の表７ａ〜７ｂ、８ａ〜８ｂ及び９ａ〜９ｂに示す。全ての試料は、白色人種の個体からのものであった。
【表８】
2013500739.tif 000013
【表９】
2013500739.tif 000014
【表１０】
2013500739.tif 000015
【表１１】
2013500739.tif 000016
【表１２】
2013500739.tif 000017
【表１３】
2013500739.tif 000018
【０３０９】
ＰＲＴ７レベルは、抗ＰＲＴ７抗体を用いてＥＬＩＳＡによって検出された。ＥＬＩＳＡ手法は、上記の通りであった。血液試料はＰＢＳで１：３に希釈し、抗ＰＲＴ７抗体は、希釈剤（ＰＢＳ中の０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０、０．１％ＢＳＡ）で１：２００に希釈した。較正曲線のために、４０００ｐｇ／ｍｌ〜６２．５ｐｇ／ｍｌのＰＲＴ７の連続希釈をＰＢＳで調製した。
【０３１０】
結果を図４Ａ〜４Ｆに示す。意外にも、ＰＲＴ７レベルは、男性のすい臓癌患者からの試料で有意に高かった（図４Ｂ〜４Ｄ）が、女性からの試料ではそうでなかった（図４Ａ〜４Ｂ）。同様に、ＰＲＴ７レベルは、男性の肺癌患者からの試料で有意に上昇していたが、女性からの試料ではそうでなかった（図４Ｅ〜４Ｆ）。
【０３１１】
これらの結果は、ＰＲＴ７が男性ですい臓癌及び肺癌の両方のマーカーとなることができ、したがって、男性ですい臓癌及び肺癌の検出のための診断ツールとして用いられてもよいことを示す。
【０３１２】
最も意外なことは、発明者らはＰＲＴ７がｐ５３の発現を誘導することができることをさらに観察した［データ示さず］。
【０３１３】
（例８）ＰＲＴ８の特徴付け
第四の新規ｃＤＮＡをヒトｃＤＮＡライブラリーから単離し、そのタンパク質生成物をＰＲＴ８と名付けた。
【０３１４】
ＲＴ−ＰＣＲ分析のために以下のプライマーを用いた：
【化４】
2013500739.tif 000019
【０３１５】
上の例１の場合のように、組織発現分析はＲＴ−ＰＣＲを用いて実施し、得られた結果は下の表１０に要約した。基本的に、ＰＲＴ８の発現は、精巣、肝臓及びすい臓で見出された。
【表１４】
2013500739.tif 000020
【０３１６】
（例９）Ｃ５７Ｂ１マウスのグルコースレベルに及ぼすＰＲＴ８投与の影響
すい臓でのＰＲＴ８の発現は、ＰＲＴ８がすい臓の機能、特にグルコース代謝に関与する可能性を示唆した。したがって、グルコースレベルに及ぼすＰＲＴ８投与の影響を調べた。
【０３１７】
手順：
７週齢雌Ｃ５７Ｂ１マウス（Ｈａｒｌａｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  Ｌｔｄ．、Ｊｅｒｕｓａｌｅｍ、Ｉｓｒａｅｌから購入）に以下のものを注射した：
・生理食塩水−３匹のマウス×２群
・１μｇ／マウスのＰＲＴ８−３匹のマウス×２群
・１０μｇ／マウスのＰＲＴ８−３匹のマウス×２群
【０３１８】
１日目に全てのマウスにＰＲＴ８（又は生理食塩水）を注射した。２日目に第一の群を絶食させ、３日目に血糖レベルを検査した（Ａｃｃｕ−Ｃｈｅｋ（登録商標）Ｐｅｒｆｏｒｍａ装置、Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓを用いて）。第二の群を絶食させ、注射の３日後に血糖レベルを検査した。絶食は一晩（グルコース注射の前の晩）実行し、その翌日に２ｍｇ／ｋｇのグルコースを各マウスに注射した。グルコースレベルの時間経過分析は、グルコース注射から０、３０、６０及び１２０分経過後にグルコースレベルを検査して実施した。
【０３１９】
結果は、図５Ａ〜５Ｂに示す。全ての処理で、グルコースレベルは、注射後の最初の３０分でピークに達した。しかし、ＰＲＴ８投与の２日後から意外な結果が観察され、そこでは、１μｇ／ｋｇ又は１０μｇ／ｋｇのＰＲＴ８を投与されたマウスのグルコースレベルは、生理食塩水を投与されたマウスのグルコースレベルより有意に低かった。グルコースレベルの分析がＰＲＴ８注射から３日後に行われたとき、この影響はより明白であった。これらの結果は、ＰＲＴ８がグルコース代謝に深く関与し、その調節に用いることができることを強く示唆する。
【図１Ａ】
2013500739.tif 000021
【図１Ｂ】
2013500739.tif 000022
【図１Ｃ】
2013500739.tif 000023
【図１Ｄ】
2013500739.tif 000024
【図２Ａ】
2013500739.tif 000025
【図２Ｂ】
2013500739.tif 000026
【図３Ａ】
2013500739.tif 000027
【図３Ｂ】
2013500739.tif 000028
【図４Ａ】
2013500739.tif 000029
【図４Ｂ】
2013500739.tif 000030
【図４Ｃ】
2013500739.tif 000031
【図４Ｄ】
2013500739.tif 000032
【図４Ｅ】
2013500739.tif 000033
【図４Ｆ】
2013500739.tif 000034
【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
2013500739.tif 000036
【配列表】
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【国際調査報告】
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2013500739.tif 000038
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