(57)【要約】  本発明は、（２０Ｓ，２２Ｅ）−２−メチレン−１９−ノル−２２−エン−１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３  類似体、およびより具体的には（２０Ｓ，２２Ｅ）−２−メチレン−１９−ノル−２２−エン−１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３、およびそれらの薬学的用途を開示する。この化合物は、ビタミンＤ受容体に対して顕著な結合活性および転写活性を示し、未分化細胞の増殖を阻止し、それらの単球への分化を誘発することにおいて明白な活性を示し、したがって抗癌剤として、特に白血病、結腸癌、乳癌、皮膚癌または前立腺癌の治療または予防のための用途を証明する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下式を有する化合物であって、
【化１】
2013506685.tif 000007
式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３は、同じであっても異なっていてもよく、それぞれ、水素又はヒドロキシ保護基から選択される。
【請求項２】
Ｘ３が水素である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｘ１が水素である、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３がすべてｔ−ブチルジメチルシリルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
有効量の請求項１に記載の少なくとも１つの化合物を、医薬的に許容される賦形剤とともに含有する、医薬組成物。
【請求項６】
前記有効量が、組成物１ｇあたり約０．０１μｇ〜約１０００μｇを含む、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記有効量が、組成物１ｇあたり約０．１μｇ〜約５００μｇを含む、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項８】
下式を有する、（２０Ｓ，２２Ｅ）−２−メチレン−１９−ノル−２２−エン−１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３。
【化２】
2013506685.tif 000008
【請求項９】
有効量の（２０Ｓ，２２Ｅ）−２−メチレン−１９−ノル−２２−エン−１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３を、医薬的に許容される賦形剤とともに含有する、医薬組成物。
【請求項１０】
前記有効量が、組成物１ｇあたり約０．０１μｇ〜約１０００μｇを含む、請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
前記有効量が、組成物１ｇあたり約０．１μｇ〜約５００μｇを含む、請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
白血病、結腸癌、乳癌、皮膚癌または前立腺癌からなる群より選択される疾患を有する被験者に、有効量の下式を有する化合物を投与することを含む、前記疾患を治療する方法であって、
【化３】
2013506685.tif 000009
式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３は、同じであっても異なっていてもよく、それぞれ、水素又はヒドロキシ保護基から選択される。
【請求項１３】
前記化合物が経口投与される、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記化合物が非経口投与される、請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】
前記化合物が経皮投与される、請求項１２に記載の方法。
【請求項１６】
前記化合物が直腸投与される、請求項１２に記載の方法。
【請求項１７】
前記化合物が経鼻投与される、請求項１２に記載の方法。
【請求項１８】
前記化合物が舌下投与される、請求項１２に記載の方法。
【請求項１９】
前記化合物が、約０．０１μｇ／日〜約１０００μｇ／日の用量で投与される、請求項１２に記載の方法。
【請求項２０】
前記化合物が、下式を有する、（２０Ｓ，２２Ｅ）−２−メチレン−１９−ノル−２２−エン−１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３である、請求項１２に記載の方法。
【化４】
2013506685.tif 000010
【請求項２１】
下式を有する化合物：
【化５】
2013506685.tif 000011
（式中、Ｘ３は、水素またはヒドロキシ保護基から選択される）。
【請求項２２】
Ｘ３が水素である、請求項２１に記載の化合物。
【請求項２３】
Ｘ３がｔ−ブチルジメチルシリルである、請求項２１に記載の化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ビタミンＤ化合物、より具体的には、（２０Ｓ，２２Ｅ）−２−メチレン−１９−ノル−２２−エン−１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３  類似体およびそれらの薬学的用途に関する。
【背景技術】
【０００２】
天然ホルモンである１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３  およびエルゴステロール系列の類似体、すなわち、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ２  は、動物およびヒトにおけるカルシウム恒常性の極めて強力な調整剤として知られており、細胞分化におけるこれらの活性も、Ｏｓｔｒｅｍ  ｅｔ  ａｌ．によって、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８４、２６１０（１９８７）で確立されている。１α−ヒドロキシビタミンＤ３，  １α−ヒドロキシビタミンＤ２、種々の側鎖の同族体ビタミンおよびフッ素化類似体を含め、これらの代謝物の多くの構造類似体が調製され、試験されている。これらの化合物の中には、細胞分化およびカルシウム調節において興味深い分離活性を示すものもある。この活性の差は、腎性骨ジストロフィー、ビタミンＤ抵抗性くる病、骨粗鬆症、乾癬、特定の悪性腫瘍といった種々の疾患の治療において有用であり得る。
【０００３】
別の種類のビタミンＤ類似体、すなわち、いわゆる１９−ノル−ビタミンＤ化合物は、ビタミンＤ系では典型的なＡ環の環外メチレン基（炭素１９）が２個の水素原子によって置換されていることを特徴とする。このような１９−ノル−類似体（例えば、１α，２５−ジヒドロキシ−１９−ノル−ビタミンＤ３）の生物学的試験により、細胞分化を誘発する能力は高く、カルシウム代謝活性は極めて低いという選択的活性プロフィールが明らかになった。したがって、これらの化合物は悪性腫瘍の治療、または種々の皮膚疾患の治療のための治療薬剤として潜在的に有用である。このような１９−ノル−ビタミンＤ類似体の２つの異なる合成方法が記載されている（Ｐｅｒｌｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．３１、１８２３（１９９０）；Ｐｅｒｌｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．３２、７６６３（１９９１）、ＤｅＬｕｃａ  ｅｔ  ａｌ．、米国特許第５，０８６，１９１号）。
【０００４】
米国特許第４，６６６，６３４号において、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３  の２β−ヒドロキシおよびアルコキシ（例えば、ＥＤ−７１）類似体が骨粗鬆症の有望な薬物として、および抗腫瘍剤として、Ｃｈｕｇａｉグループによって記載されており、試験されている。また、Ｏｋａｎｏ  ｅｔ  ａｌ．、Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１６３、１４４４（１９８９）も参照されたい。１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３の  他の２−置換された（ヒドロキシアルキルで、例えば、ＥＤ−１２０、フルオロアルキル基で）Ａ環類似体も、側鎖にシクロプロプル基を有する類似体（例えば、カルシポトリエンとして知られており、Ｎｉｓｈｉｉ  ｅｔ  ａｌ、米国特許第５，０６３，２２１号に記載されているＭＣ−９０３）と同様に、調製され、試験されている（Ｍｉｙａｍｏｔｏ  ｅｔ  ａｌ．、Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．４１、１１１１（１９９３）；Ｎｉｓｈｉｉ  ｅｔ  ａｌ．、Ｏｓｔｅｏｐｏｒｏｓｉｓ  Ｉｎｔ．Ｓｕｐｐｌ．１、１９０（１９９３）；Ｐｏｓｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．５９、７８５５（１９９４）、および、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．６０、４６１７（１９９５））。
【０００５】
１α，２５−ジヒドロキシ−１９−ノル−ビタミンＤ３の２−置換類似体、すなわち、２位で、ヒドロキシ基またはアルコキシ基で置換された化合物（ＤｅＬｕｃａ  ｅｔ  ａｌ．、米国特許第５，５３６，７１３号）、２−アルキル基で置換された化合物（ＤｅＬｕｃａ  ｅｔ  ａｌ、米国特許第５，９４５，４１０号）、および２−アルキリデン基で置換された化合物（ＤｅＬｕｃａ  ｅｔ  ａｌ、米国特許第５，８４３，９２８号）も合成されており、これらは、興味深く選択的な活性プロフィールを示す。これらのすべての研究は、ビタミンＤ受容体の結合部位が、合成されたビタミンＤ類似体のＣ−２に異なる置換基を受け入れることが可能であることを示す。
【０００６】
薬理学的に重要なビタミンＤ化合物である１９−ノル群を調査する努力を続けていく中で、炭素２（Ｃ−２）にメチレン置換基が存在し、炭素１（Ｃ−１）にヒドロキシル基が存在し、炭素２０（Ｃ−２０）に短い側鎖が結合していることを特徴とする類似体も合成され、試験されている。１α−ヒドロキシ−２−メチ  レン−１９−ノル−プレグナカルシフェロールは、米国特許第６，５６６，３５２号に記載されており、一方、１α−ヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノル−  ホモプレグナカルシフェロールは、米国特許第６，５７９，８６１号に記載されており、１α−ヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノル−ビスホモプレグナカルシフェロールは、米国特許第６，６２７，６２２号に記載されている。これら３種類の化合物はすべて、ビタミンＤ受容体に対して相対的に高い結合活性および比較的高い細胞分化活性を有しているが、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３と比較して、カルシウム血症活性は、それがあったとしても非常に低い。これらの生物学的活性は、’３５２特許、’８６１特許、’６２２特許に記載されているように、これらの化合物を、種々の医薬用途の優れた候補物質にする。
【０００７】
１７−エンビタミンＤ化合物、ならびに側鎖に二重結合を有するビタミンＤ化合物も知られており、種々の薬理学的用途が提案されている。骨粗鬆症のような骨の疾患、乾癬のような皮膚疾患、白血病のような癌、しわのような美容に関する状態は、このような化合物に対して提案されている用途のうちのほんの一部である。１７−エン化合物は、米国特許第５，５４５，６３３号；第５，９２９，０５６号および第６，３９９，７９７号に記載されており、一方、二重結合を有する側鎖を有する２−アルキリデン化合物は、例えば、米国特許第５，８４３，９２８号に記載されている。
【０００８】
環Ａの炭素−２位で、メチルのようなアルキル基、またはメチレンのようなアルキリデン基で置換されており、標準的な１つ以上のビタミンＤ３置換基を持っていない側鎖を有する１９−ノルビタミンＤ化合物も知られており、種々の薬理学的用途が提案されている。例えば、多くの２α−メチル  −１９，２６，２７−トリノル類似体が、米国特許第７，２４１，７４９号および米国特許第７，２４１，９０９号に記載されており、多くの２−メチレン−１９，２６，２７−トリノル類似体が、米国特許第７，２４４，７１９号に記載されている。それに加えて、２α−メチル−１９−ノル−（２０Ｓ）−１α−ヒドロキシ−ビスホモプレグナカルシフェロールが、公開されている米国出願番号第２００７／０２５４８５７号に記載されており、多くの２−メチレン−１９，２６−ジノルビタミンＤ類似体が、公開されている米国出願番号第２００７／０１９１３１７号および公開されている米国出願番号第２００７／０１９１３１６号に記載されている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明は、（２０Ｓ，２２Ｅ）−２−メチレン−１９−ノル−エン−１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３類似体、それらの生物学的活性およびそれらの化合物の種々の薬理学的用途に関する。これまで知られていない、これらの新規ビタミンＤ化合物は、２位（Ｃ−２）にメチレン基を有し、側鎖の２５位（Ｃ−２５）に接続したヒドロキシル置換基を有し、通常は側鎖の２１位（Ｃ−２１）に位置しているメチル基をそのエピまたはＳ配置で有し、二重結合が、側鎖の炭素原子２２  と２３（Ｃ−２２とＣ−２３）の間に位置する１９−ノル−ビタミンＤ類似体である。好ましいビタミンＤ類似体は、（２０Ｓ，２２Ｅ）−２−メチレン−１９−ノル  −２２−エン−１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３（以下、「Ｎ−２３」と称する）である。
【００１０】
構造的に、これらの（２０Ｓ，２２Ｅ）−２−メチレン−１９−ノル−２２−エン−１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３  類似体は、以下に示す一般式Ｉ：
【化１】
2013506685.tif 000002
によって特徴づけられ、式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３は、同じであっても異なっていてもよく、それぞれ、水素又はヒドロキシ保護基から選択される。好ましい類似体は、以下の式Ｉａを有する、（２０Ｓ，２２Ｅ）−２−メチレン−１９−ノル−２２−エン−１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３である：
【化２】
2013506685.tif 000003
上の化合物Ｉ、特にＩａは、望ましく、極めて有益な生物学的活性パターンを示す。これらの化合物は、ビタミンＤ受容体に対し、比較的に結合性が高いことを特徴とし、天然のホルモン１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３の結合性とほぼ同じである。これらの化合物は、１，２５（ＯＨ）２Ｄ３と比較して、細胞分化を引き起こすことおよび２４−ＯＨａｓｅ遺伝子発現を増加させることにおいてより強力である（１対数）。これらの化合物は１，２５（ＯＨ）２Ｄ３と比較して、特に推奨されている低い投与量において、腸のカルシウム輸送活性をｉｎ  ｖｉｖｏで刺激する能力は低い。これらの化合物は、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３と比較して、低い活性を有するものと分類され、したがって、腸のカルシウム輸送活性をｉｎ  ｖｉｖｏで刺激する能力は低いと分類される。これらの化合物Ｉ、特にＩａは、骨からカルシウムを移動させる著しい能力を有し、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３と比較して、骨のカルシウムを移動させる活性において多少効果が高いと分類されるであろう。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
上の化合物Ｉ、特にＩａは、比較的高い細胞分化活性と、２４−ヒドロキシラーゼ遺伝子の転写を促進することによって特徴づけられる。したがって、これらの化合物は、細胞分化および転写を引き起こすことにおいては天然ホルモンよりも強力であり、腸のカルシウム輸送を引き起こすことにおいては能力がより低いため、抗癌剤、特に、白血病、結腸癌、乳癌、皮膚癌、前立腺癌の予防および治療を目的とした抗癌剤としての潜在性を持っている。
【００１２】
上述の１つまたは複数の化合物は、上述の疾患を治療するために、組成物の約０．０１μｇ／ｇ〜約１０００μｇ／ｇの量で、好ましくは、組成物の約  ０．１μｇ／ｇ〜約５００μｇ／ｇの量で組成物中に存在してもよく、約０．０１μｇ／日〜約１０００μｇ／日、好ましくは、約０．１μｇ／日〜約  ５００μｇ／日の容量で、局所投与、経皮投与、経口投与、直腸投与、経鼻投与、舌下投与または非経口投与されてもよい。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
図面において、
（図１〜５）以下、「１，２５（ＯＨ）２Ｄ３」と称する天然のホルモンである１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３と比較した、以下「Ｎ−２３」と称する（２０Ｓ，２２Ｅ）−２−メチレン−１９−ノル−２２−エン−１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３の種々の生物学的活性を示す図である。
【図１】全長組み換えラットビタミンＤ受容体に対する結合について、［３Ｈ］−１，２５−（ＯＨ）２−Ｄ３と競合する、Ｎ−２３および１，２５（ＯＨ）２Ｄ３の相対活性を示すグラフである。
【図２】Ｎ−２３および１，２５（ＯＨ）２Ｄ３の濃度の関数として、ＨＬ−６０細胞分化の割合（％）を示すグラフである。
【図３】１，２５（ＯＨ）２Ｄ３のｉｎ  ｖｉｔｒｏでの転写活性をＮ−２３と比較して示すグラフである。
【図４】動物の一群において、１，２５（ＯＨ）２Ｄ３が、骨のカルシウムを動員する活性をＮ−２３と比較して示すグラフである。そして
【図５】動物の一群において、１，２５（ＯＨ）２Ｄ３が、腸のカルシウムを運搬する活性をＮ−２３と比較して示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
炭素２（Ｃ−２）にメチレン置換基が存在し、側鎖の２５位（Ｃ−２５）に接続したヒドロキシル置換基を有し、通常は側鎖の２１位（Ｃ−２１）に位置しているメチル基をそのエピまたはＳ配置で有し、二重結合が、側鎖の炭素原子２２と２３（Ｃ−２２とＣ−２３）の間に位置する１９−ノルビタミンＤ類似体である、（２０Ｓ，２２Ｅ）−２−メチレン−１９−ノル−２２−エン−１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３（本明細書では  「Ｎ−２３」と称する）が合成され、試験された。Ｃ−２位置にある比較的小さなメチレン基は、ビタミンＤ受容体への結合を妨害しないはずであるため、このようなビタミンＤ類似体は、興味深い標的であると思われる。構造的に、この１９−ノル類似体は、本明細書ですでに示された一般式Ｉによって特徴づけられ、そのプロドラッグ（保護されたヒドロキシ形態）は、本明細書ですでに示された一般式Ｉによって特徴づけられる。
【００１５】
構造Ｉを有する（２０Ｓ，２２Ｅ）−２−メチレン−１９−ノル−２２−エン−１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３類似体の調製は、通常の一般的な方法、すなわち、Ｗｉｎｄａｕｓ−Ｇｒｕｎｄｍａｎｎ型の二環式ケトンＩＩをアリルホスフィンオキシドＩＩＩと縮合させて、対応する２−メチレン−１９−ノ  ル−ビタミンＤ類似体ＩＶにした後、後者の化合物のＣ−１、Ｃ−３およびＣ−２５で脱保護すること（本明細書のスキーム１および２を参照）によって行うことができる：
【化３】
2013506685.tif 000004
構造ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶにおいて、Ｘ１基、Ｘ２基およびＸ３基は、ヒドロキシ保護基であり、好ましくは、ｔ−ブチルジメチルシリルであり、縮合反応に感受性であるか、または縮合反応を妨害するであろう任意の官能基は、当該技術分野で十分に知られているように適切に保護されることも理解される。上に示されるプロセスは、収束型合成の概念の適用を表しており、ビタミンＤ化合物を調製するのに  有効に適用されている［例えば、Ｌｙｔｈｇｏｅ  ｅｔ  ａｌ．、Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｐｅｒｋｉｎ  Ｔｒａｎｓ．Ｉ、５９０（１９７８）；Ｌｙｔｈｇｏｅ、Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｒｅｖ．９、４４９（１９８３）；Ｔｏｈ  ｅｔ  ａｌ．、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．４８、１４１４（１９８３）；Ｂａｇｇｉｏｌｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ．、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．５１、３０９８（１９８６）；Ｓａｒｄｉｎａ  ｅｔ  ａｌ．、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．５１、１２６４（１９８６）；Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．５１、１２６９（１９８６）；ＤｅＬｕｃａ  ｅｔ  ａｌ．、米国特許第５，０８６，１９１；ＤｅＬｕｃａ  ｅｔ  ａｌ．、米国特許第５，５３６，７１３号］。
【００１６】
一般構造ＩＩのヒドリンダノンは既知ではない。これは、本明細書のスキーム１および２に示されている方法によって調製することができる（化合物Ｎ−２３の調製を参照）。
【００１７】
一般構造ＩＩＩの必要なホスフィンオキシドを調製するために、Ｐｅｒｌｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．３２、７６６３（１９９１）およびＤｅＬｕｃａ  ｅｔ  ａｌ．、米国特許第５，０８６，１９１に記載されているように、市販の（１Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）−（−）−キナ酸から容易に得られるメチルキニケート  （ｍｅｔｈｙｌ  ｑｕｉｎｉｃａｔｅ）誘導体から出発する合成経路が開発されている。
【００１８】
化合物ＩおよびＩａの全体的な合成プロセスは、「２−Ａｌｋｙｌｉｄｅｎｅ−１９−Ｎｏｒ−Ｖｉｔａｍｉｎ  Ｄ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ」という名称の米国特許第５，８４３，９２８号に示され、より完全に記載されており、その明細書は、本明細書に特に参照により組み込まれる。
【００１９】
この記載および特許請求の範囲で使用される場合、用語「ヒドロキシ保護基」は、ヒドロキシ官能基を一時的に保護するために一般的に使用される任意の基を示し、例えば、アルコキシカルボニル基、アシル基、アルキルシリル基またはアルキルアリールシリル基（以下、単に「シリル」基と称する）およびアルコキシアルキ  ル基を意味する。アルコキシカルボニル保護基は、アルキル−Ｏ−ＣＯ−群であり、例えば、メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、プロポキシカルボニル、イソプロポキシカルボニル、ブトキシカルボニル、イソブトキシカルボニル、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル、ベンジルオキシカルボニルまたはアリルオキシカルボニルである。用語「アシル」は、すべての異性体形態での１〜６個の炭素を有するアルカノイル基、または１〜６個の炭素を有するカルボキシアルカノイル基、例えば、オキサリル基、マロニル基、スクシニル基、グルタリル基、または芳香族アシル基、例えば、ベンゾイル基、またはハロ基、ニトロ基またはアルキル置換されたベンゾイル基を意味する。用語「アルキル」は、この記載および特許請求の範囲で使用される場合、すべての異性体形態での１〜１０個の炭素を有する直鎖または分枝鎖のアルキルラジカルを意味する。「アルコキシ」は、酸素が結合した任意のアルキルラジカル、すなわち「アルキル−Ｏ」で表される基を指す。アルコキシアルキル保護基は、メトキシメチル、エトキシメチル、メトキシエトキシメチル、またはテトラヒドロフラニルおよびテトラヒドロピラニルのような群である。好ましいシリル保護基は、トリメチルシリル、トリエチルシリル、ｔ−ブチルジメチルシリル、ジブチルメチルシリル、ジフェニルメチルシリル、フェニルジメチルシリル、ジフェニル−ｔ−ブチルシリル、および類似するアルキル化シリルラジカルである。  用語「アリール」は、フェニル置換されたフェニル基、またはアルキル置換されたフェニル基、ニトロ置換されたフェニル基、またはハロ置換されたフェニル基を表す。
【００２０】
「保護されたヒドロキシ」基は、ヒドロキシ官能基を一時的または永久的に保護するために一般的に使用される、例えば、すでに定義された、シリル基、アルコキシアルキル基、アシル基またはアルコキシカルボニル基のような、上述のいずれかの基によって誘導体化されたか、または保護されたヒドロキシ基である。用語「ヒドロキシアルキル」「重水素アルキル（ｄｅｕｔｅｒｏａｌｋｙｌ）」および「フルオロアルキル」は、それぞれ、１個または複数のヒドロキシ基、重水素、またはフルオロ基で置換されたアルキル基を指す。「アルキリデン」は、ｋを整数とする、一般式ＣｋＨ２ｋ−を有するラジカルを指す。
【００２１】
より具体的には、以下の実例となる例および記載、並びに化合物Ｎ−２３を調製する詳細な実例のための本明細書のスキーム１および２を参照すべきである。
【００２２】
この例では、アラビア数字（１、２、３）によって識別される特定の生成物は、スキーム１および２で識別される特定の構造を指す。
実施例
【００２３】
化学。紫外線（ＵＶ）吸収スペクトルは、記載した溶媒中、Ｈｉｔａｃｈｉ  Ｍｏｄｅｌ  ６０−１００  ＵＶ−ｖｉｓ分光計で記録された。１Ｈ核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトルは、Ｂｒｕｋｅｒ  ＡＭ−５００  ＦＴ分光計を用い、重水素クロロホルム中、５００ＭＨｚで記録された。化学シフト（δ）は、内部Ｍｅ４Ｓｉ（δ０．００）  からの低磁場で報告される。マススペクトルは、Ｋｒａｔｏｓ  ＭＳ−５５データシステムを取り付けたＫｒａｔｏｓ  ＤＳ−５０  ＴＣ装置で、７０ｅＶで記録された。試料を、直接挿入プローブを介し、１２０〜２５０℃に維持されているイオン源に導入した。高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）は、Ｗａｔｅｒｓ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ液体クロマトグラフをＭｏｄｅｌ  ６０００Ａ溶媒送達システム、Ｍｏｄｅｌ  ６  ＵＫ  Ｕｎｉｖｅｒｓａｌインジェクタ、Ｍｏｄｅｌ  ４８６の調整可能な吸光度検出器、Ｒ  ４０１型示差屈折計を取り付けて行った。
【００２４】
実施例１
【００２５】
（８Ｓ，２０Ｓ）−デス−Ａ，Ｂ−２０−（ヒドロキシメチル）−プレグナン−８−オル（１）の調製。
【００２６】
オゾンを、ビタミンＤ２（３ｇ、７．６ｍｍｏｌ）のメタノール（２５０ｍＬ）中の溶液およびピリジン（２．４４ｇ、２．５ｍＬ、３１ｍｍｏｌ）を通して５０分間−７８℃で通過させた。次いで反応混合物を酸素で１５分間洗い流し、残留したオゾンを除去し、溶液をＮａＢＨ４（０．７５ｇ、２０ｍｍｏｌ）で処理した。２０分後、第２の部分のＮａＢＨ４（０．７５ｇ、２０ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温まで温めた。次いで第３の部分のＮａＢＨ４（０．７５ｇ、２０ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を１８時間撹拌した。反応を水（４０ｍＬ）でクエンチし、溶液を減圧下で濃縮した。残滓を酢酸エチルで抽出し、混合した有機相を１ＭのＨＣｌ水溶液、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、減圧下で濃縮した。残滓をヘキサン／酢酸エチル（７５：２５）によるシリカゲルクロマトグラフィーにかけて、ジオール１を白色結晶物として得た（１．２１ｇ、収率７５％）。
【００２７】
ｍ．ｐ．  １０６〜１０８°Ｃ；  ［α］Ｄ  ＋３０．２°  （ｃ  １．４６，  ＣＨＣｌ３）；  １  Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ４．０８  （１Ｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  ２．０  Ｈｚ，  ８α−Ｈ），  ３．６３  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ  ＝  １０．５，  ３．１  Ｈｚ，  ２２−Ｈ），  ３．３８  （１  Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ  ＝  １０．５，  ６．８  Ｈｚ，  ２２−Ｈ），  １．９９  （１Ｈ，  ｂｒ．ｄ，  Ｊ  ＝  １３．２  Ｈｚ），  １．０３  （３Ｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  ６．６  Ｈｚ，  ２１−Ｈ３），  ０．９５６  （３Ｈ，  ｓ，  １８−Ｈ３）；  １  ３  Ｃ  ＮＭＲ  （１００  ＭＨｚ）  δ６９．１６  （ｄ，  Ｃ−８），  ６７．７４  （ｔ，  Ｃ−２２），  ５２．９０  （ｄ），  ５２．３３  （ｄ），  ４１．８３  （ｓ，  Ｃ−  １３），  ４０．１９  （ｔ），  ３８．２０  （ｄ），  ３３．５３  （ｔ），  ２６．６２  （ｔ），  ２２．５４  （ｔ），  １７．３６  （ｔ），  １６．５９  （ｑ，  Ｃ−２１），  １３．５４  （ｑ，  Ｃ−１８）；  ＭＳ  （ＥＩ）  ｍ／ｚ  ２１２  （２，  Ｍ  ＋  ），  １９４  （３４，  Ｍ  ＋  −  Ｈ  ２  ０），  １７９  （３３，  Ｍ  ＋  −  Ｈ  ２  ０  −  ＣＨ  ３  ），  １６３  （１８，  Ｍ  ＋  −  ＣＨ  ２  ＯＨ  −  Ｈ  ２  ０），  １３５  （３６），  １２５  （５４），  １１１  （１００），  ９５  （６３），  ８１  （６７）；  Ｃ１３Ｈ２２Ｏ（Ｍ＋−Ｈ２Ｏ）に対して算出した正確な質量１９４．１６７１，実測値１９４．１６６５。
【００２８】
（８Ｓ，２０Ｓ）−デス−Ａ，Ｂ−８−ベンゾイルオキシ−２０−（ヒドロキシメチル）−プレグナン（２）の調製
【００２９】
塩化ベンゾイル（２．４ｇ、２ｍＬ、１７ｍｍｏｌ）を、ジオール（１．２ｇ、５．７ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（３０ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）の無水のピリジン（２０ｍＬ）中の０℃の溶液に添加した。反応混合物を４℃で２４時間撹拌し、塩化メチレン（１００ｍＬ）で希釈し、５％ＨＣｌ水溶液、水、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、減圧下で濃縮した。残滓（３．３９ｇ）をＫＯＨ（１ｇ、１５．５ｍｍｏｌ）の無水のエタノール（３０ｍＬ）中の溶液で室温で処理した。反応混合物を３時間撹拌した後、氷および５％ＨＣｌ水溶液をｐＨ＝６になるまで加えた。溶液を酢酸エチル（３×５０ｍＬ）で抽出し、混合した有機相を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、減圧下で濃縮した。残滓をヘキサン／酢酸エチル（７５：２５）によるシリカゲルクロマトグラフィーにかけて、アルコール２（１．６７ｇ、９３％収率）を無色の油状物として得た：
【００３０】
［α］Ｄ  ＋５６．０  （ｃ  ０．４８，  ＣＨＣｌ３）；  １  Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３  ＋  ＴＭ  ８．０８〜８．０２  （２Ｈ，  ｍ，  ο−ΗＢｚ），  ７．５９〜７．５３  （１Ｈ，  ｍ，  ｐ−ＨＢｚ），  ７．５０〜７．４０  （２Ｈ，  ｍ−ＨＢ  （１Ｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  ２．４  Ｈｚ，  ８α−Ｈ），  ３．６５  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ  ＝  １０．５，  ３．２  Ｈｚ，  ２２−Ｈ），  ３．３９  （１Ｈ，  ｄｄ，  １０．５，  ６．８  Ｈｚ，  ２２−Ｈ），  １．０８  （３Ｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  ５．３  Ｈｚ，  ２１−Ｈ３），  １．０７  （３Ｈ，  ｓ，  １８−Ｈ３）；  １３  Ｃ  Ｓ）δ（１２５  ＭＨｚ）  δ  １６６．７０  （ｓ，  Ｃ＝Ｏ），  １３２．９３  （ｄ，  ｐ−ＣＢｚ），  １３０．０４  （ｓ，  ｉ−ＣＢｚ），  １２９．７５  （ｄ，  ｚ），  ５．４２  ＣＢｚ），  １２８．５７  （ｄ，  ｍ−ＣＢＺ），  ７２．２７  （ｄ，  Ｃ−８），  ６７．９５  （ｔ，  Ｃ−２２），  ５２．９６  （ｄ），  ５１．６０  （ｄ），  ４２．１５  （ｓ，  Ｃ−  １３），  ３９．９８  （ｔ），  ３８．６１  （ｄ），  ３０．７３  （ｔ），  ２６．８１  （ｔ），  ２２．９１  （ｔ），  １８．２０  （ｔ），  １６．８７  （ｑ，  Ｃ−２１  ），  １３．８１  （ｑ，  Ｃ−１８）；  ＭＳ  （ＥＩ）  ｍ／ｚ    ３１６  （５，  Ｍ  ＋  ），  ３０１  （３，  Ｍ  ＋  −  Ｍｅ），  ２９９  （１  ，  Ｍ  ＋  −  ＯＨ），  ２９８  （２，  Ｍ  ＋  −  Ｈ２Ｏ），  ２８５  （  １０，  Ｍ  ＋  −  ＣＨ２ＯＨ），  ２５７  （６），  ２３０  （９），  １９４  （８０），  １３５  （８４），  １０５  （１００）；  Ｃ２０Ｈ２８Ｏ３に対して算出した正確な質量３１６．２０３８，実測値３１６．２０１９。
【００３１】
（８Ｓ，２０Ｓ）−デス−Ａ，Ｂ−８−ベンゾイルオキシ−２０−ホルミルプレグナン（３）の調製。
【００３２】
無水塩化メチレン（１０ｍＬ）および無水ＤＭＳＯ（２ｍＬ）中のアルコール２（６４０ｍｇ、２．０３ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（１．４１ｍＬ、  １．０２ｇ、１０．１ｍｍｏｌ）溶液に、０℃で三酸化硫黄ピリジン錯体（１．９４ｇ、１２．２ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を、アルゴン下、０℃で１時間撹拌し、次いで濃縮した。残渣を酢酸エチルで希釈し、ブラインで洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーによってヘキサン／酢酸エチル（９５：５）で精製して、アルデヒド３を油状物として得た（５２９ｍｇ、収率８３％）。
【００３３】
［α］Ｄ  ＋６３．  １  （ｃ  ５．８５，  ＣＨＣｌ３）；  １Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３＋ＴＭＳ）  δ  ９．６０  （１Ｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  ３．１  Ｈｚ，  ＣＨＯ），  ８．０５  （２Ｈ，  ｍ，  ｏ−Ｈ  Ｂｚ  ），  ７．５７  （１  Ｈ，  ｍ，  ｐ−Ｈ  Ｂｚ  ），  ７．４５  （２Ｈ，  ｍ，  ｍ−  Ｈ  Ｂｚ  ），  ５．４４  （１Ｈ，  ｓ，  ８α−Ｈ），  ２．３９  （１Ｈ，  ｍ，  ２０−Ｈ），  ２．０３  （２Ｈ，  ｄｍ，  Ｊ  ＝  １１．５  Ｈｚ），  １．１５  （３Ｈ，  ｄ，  ｊ  ＝  ６．９  Ｈｚ，  ２１−Ｈ３），  １．１０  （３Ｈ，  ｓ，  １８−Ｈ  ３  ）；  １  ３  Ｃ  ＮＭＲ  （１００  ＭＨｚ）  δ  ２０４．７８  （ｄ，  ＣＨＯ），  １６６．７０  （ｓ，  Ｃ＝０），  １３２．７８  （ｄ，  ｐ−Ｂｚ），  １３０．６９  （ｓ，  ｉ−Ｂｚ），  １２９．５０  （ｄ，  ｏ−Ｂｚ），  １２８．３８，  （ｄ，  ｍ−  Ｂｚ），  ７１．６６  （ｄ，  Ｃ−８），  ５１．３０  （ｄ），  ５０．９５  （ｄ），  ４９．２０  （ｄ），  ４２．３８  （ｓ，  Ｃ−１３），  ３９．６２  （ｔ），  ３０．４７  （ｔ），  ２５．９９  （ｔ），  ２２．９２  （ｔ），  １７．９２  （ｔ），  １３．９０  （ｑ），  １３．３５  （ｑ）；  ＭＳ  （ＥＩ）  ｍ／ｚ  ３１４  （１，  Ｍ  ＋  ），  ２９９  （０．５，  Ｍ  ＋  −  Ｍｅ），  ２８６  （１  ，  Ｍ  ＋  −  ＣＯ），  ２８５  （５，  Ｍ  ＋  −  ＣＨＯ），  ２５７  （１，  Ｍ  ＋  −  Ｃ  ３  Ｈ  ５  ０），  ２０９  （  １０，  Ｍ  ＋  −  ＰｈＣＯ），  １９２  （３８），  １３４  （６０），  １０５  （１００），  ７７  （５０）；  Ｃ２０Ｈ２６Ｏ３に対して算出した正確な質量３１４．１８８２，実測値３１４．１８８７。
【００３４】
（８Ｓ，２０Ｒ）−デス−Ａ，Ｂ−８−ベンゾイルオキシ−２０−（ヒドロキシメチル）−プレグナン（４）の調製
【００３５】
アルデヒド３（３６４ｍｇ、１．１２ｍｍｏｌ）を塩化メチレン（１５ｍＬ）に溶解し、４０％  ｎ−Ｂｕ４ＮＯＨ水溶液（１．４７ｍＬ、１．４５ｇ、２．２４ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を、アルゴン下、室温で１６時間撹拌し、塩化メチレン（２０ｍＬ）で希釈し、水で洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、減圧下で濃縮した。残渣をヘキサン／酢酸エチル（９５：５）を用いてシリカゲルクロマトグラフィーにかけ、アルデヒド３およびその２０−エピマーの混合物（２９２ｍｇ、収率８０％）を比率約１：２で得た（１Ｈ  ＮＭＲによる）。
【００３６】
このアルデヒド混合物（２９２ｍｇ、０．９ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ（５ｍＬ）に溶解し、ＮａＢＨ４（６４ｍｇ、１．７ｍｍｏｌ）を添加し、次いで、エタノール（５ｍＬ）を滴下した。反応混合物を室温で３０分間撹拌し、飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液でクエンチした。混合物をエーテルで抽出し（２０ｍＬ×３回）、混合した有機相を水で洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、  減圧下で濃縮した。残渣をヘキサン／酢酸エチル（９６：４→８０：２０）を用いてシリカゲルクロマトグラフィーにかけ、所望の純粋な（２０Ｒ）−アルコール４（１６０ｍｇ、収率５５％）を油状物として得て、４とその２０−エピマーとの混合物２（１２６ｍｇ、収率４３％）を比率約１：３で得た（１Ｈ  ＮＭＲによる）。
【００３７】
［α］Ｄ  ＋５０．１  （ｃ  １．０９，  ＣＨＣｌ３）；  １ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３  ＋  ＴＭＳ）  δ８．０５  （２Ｈ，  ｍ，  ο−ＨＢｚ），  ７．５５  （１Ｈ，  ｍ，  ｐ−ＨＢｚ），  ７．４４  （２Ｈ，  ｍ，  ｍ−  ＨＢｚ），  ５．４１  （１Ｈ，  ｓ，  ８α−Ｈ），  ３．７７  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ  ＝  １０．４，  ３．３  Ｈｚ，  ２２−Ｈ），  ３．４５  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ  ＝  １０．４，  ７．４  Ｈｚ，  ２２−Ｈ），  １．０６７  （３Ｈ，  ｓ，  １８−Ｈ３），  ０．９７３  （３Ｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  ６．６  Ｈｚ，  ２１  −Ｈ３）；  １  ３  Ｃ  ＮＭＲ  （１００  ＭＨｚ）  δ  １６６．３６  （ｓ，  Ｃ＝０），  １３２．６１  （ｄ，  ｐ−ＣＢｚ），  １３０．６３  （ｓ，  ｉ−ＣＢＺ），  １２９．３９  （ｄ，  ｏ−ＣＢＺ），  １２８．２３  （ｄ，  ｍ−ＣＢＺ），  ７１．９７  （ｄ，  Ｃ−８），  ６６．４２  （ｔ，  Ｃ−２２），  ５２．６５  （ｄ），  ５１．３８  （ｄ），  ４１．５８  （ｓ，  Ｃ−１３），  ３９．１６  （ｔ），  ３７．４５  （ｄ），  ３０．３８  （ｔ），  ２６．２９  （ｔ），  ２２．３５  （ｔ），  １７．８９  （ｔ），  １６．４２  （ｑ，  Ｃ−２１），  １３．７８  （ｑ，  Ｃ−  １８）；  ＭＳ  （ＥＩ）  ｍ／ｚ  ３１６  （１６，  Ｍ  ＋  ），  ３０１  （５，  Ｍ  ＋  −  Ｍｅ），  ２９９  （２，  Ｍ  ＋  −  ＯＨ），  ２９８  （３，  Ｍ  ＋  −  Ｈ２Ｏ），  ２８５  （９，  Ｍ  ＋  −  ＣＨ２ＯＨ），  ２５７  （５），  ２４２  （１  １），  ２３０  （８），  １９４  （６０），  １４７  （７１），  １０５  （１００）；  Ｃ２０Ｈ２８Ｏ３に対して算出した正確な質量３１６．２０３８，実測値３１６．２０５０。
【００３８】
（８Ｓ，２０Ｒ）−デス−Ａ，Ｂ−８−ベンゾイルオキシ−２０−ホルミルプレグナン（５）の調製。
【００３９】
無水塩化メチレン（５ｍＬ）および無水ＤＭＳＯ（１ｍＬ）中のアルコール４（１１１ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（１８８μＬ、１３６ｍｇ、  １．３５ｍｍｏｌ）溶液に、０℃で三酸化硫黄ピリジン錯体（２５８ｍｇ、１．６２ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を、アルゴン下、０℃で１時間撹拌し、次いで濃縮した。残渣を酢酸エチルで希釈し、ブラインで洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーによってヘキサン／酢酸エチル（９５：５）で精製して、アルデヒド５（９３ｍｇ、収率８５％）を油状物として得た：
【００４０】
［α］Ｄ  ＋２８．８  （ｃ  ０．８８，  ＣＨＣｌ３）；  １Ｈ  ＮＭＲ  （５００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３  ）  δ  ９．５５  （１Ｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  ５．０  Ｈｚ，  ＣＨＯ），  ８．０２  （２Ｈ，  ｍ，  ｏ−Ｈ  Ｂｚ  ），  ７．５４  （１Ｈ，  ｍ，  ｐ−Ｈ  Ｂｚ  ），  ７．４３  （２Ｈ，  ｍ，  ｍ−Ｈ  Ｂｚ  ），  ５．４２  （１Ｈ，  ｓ，  ８α−Ｈ），  ２．３５  （１Ｈ，  ｍ，  ２０−Ｈ），  ２．０７  （１Ｈ，  ｍ），  １．８７  （１Ｈ，  ｍ），  １．０５  （３Ｈ，  ｓ，  １８−Ｈ３  ），  １．０４  （３Ｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  ７．８  Ｈｚ，  ２１−Ｈ  ３  ）；  １  ３  Ｃ  ＮＭＲ  （１２５  ＭＨｚ）  δ  ２０５．５１  （ｄ，  ＣＨＯ），  １６６．３４  （ｓ，  Ｃ＝０），  １３２．７６  （ｄ，  ｐ−Ｃ  Ｂｚ  ），  １３０．６２  （ｓ，  ｉ−Ｃ  Ｂｚ  ），  １２９．４７  （ｄ，  ｏ−Ｃ  Ｂｚ  ），  １２８．３５，  （ｄ，  ｍ−Ｃ  Ｂｚ  ），  ７１．５２  （ｄ，  Ｃ−８），  ５２．０８  （ｄ），  ５１．０８  （ｄ），  ４８．４０  （ｄ），  ４１．５５  （ｓ，  Ｃ−１３），  ３８．５４  （ｔ），  ３０．４１  （ｔ），  ２５．２８  （ｔ），  ２２．０８  （ｔ），  １７．６８  （ｔ），  １４．４９  （ｑ），  １３．３８  （ｑ）；  ＭＳ  （ＥＩ）  ｍ／ｚ    ３１４  （２，  Ｍ  ＋  ），  ２８５  （３，  Ｍ  ＋  −  ＣＨＯ），  ２０９  （８，  Ｍ  ＋  −  ＰｈＣＯ），  １９２  （３０，  Ｍ  ＋  −  ＰｈＣＯＯＨ），  １７７  （  １４），  １３４  （４５），  １０５  （１００），  ７７  （５０）；  Ｃ１９Ｈ２５Ｏ２（Ｍ＋−ＣＨＯ）に対して算出した正確な質量２８５．１８５５，実測値２８５．１８４９。
【００４１】
（８Ｓ，２０Ｓ）−デス−Ａ，Ｂ−８−ベンゾイルオキシ−２０−［４’−ヒドロキシ−４’−メチル−ペント−（１’Ｅ）−エン−イル］プレグナン（７）の調製。
【００４２】
ホスホニウム塩６（４７６ｍｇ、１．１１ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（６ｍＬ）懸濁物を撹拌し、これに、−２０℃で、ｎ−ブチルリチウム（１．６１Ｍ，１．３８ｍＬ、  ２．２２ｍｍｏｌ）を添加した。溶液は橙色に変わった。１時間後、あらかじめ冷却しておいた（−２０℃）アルデヒド５（９３ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（１＋０．５ｍＬ）溶液を添加し、反応混合物を、−２０℃で３時間撹拌し、室温で１８時間撹拌した。反応を水でクエンチし、混合物を酢酸エチルで抽出し  た。混合した有機相をブラインで洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、蒸発させた。残渣をヘキサン／酢酸エチル（９５：５）を用いて、シリカゲルクロマトグラフィーにかけ、生成物７を得た（５２ｍｇ、収率４５％）：
【００４３】
［α］Ｄ−２５．１  （ｃ  ２．５，  ＣＨＣｌ３）；  ｌ  Ｈ  ＮＭＲ  （５００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ８．０４  （２Ｈ，  ｍ，  ｏ−ＨＢｚ），  ７．５５  （１  Ｈ，  ｍ，  ｐ−ＨＢｚ），  ７．４４  （２Ｈ，  ｍ，  ｍ−ＨＢｚ），  ５．４２  （３Ｈ，  ｍ，  ８α−Ｈ，  ２２−Ｈ，  ２３−Ｈ），  １．２２  （６Ｈ，  ｓ，  ２６，２７−Ｈ  ６  ），  １．０４  （３Ｈ，  ｓ，  １８−Ｈ  ３  ），  ０．９４  （３Ｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  ６．６  Ｈｚ，  ２１  −Ｈ  ３  ）；  １  ３  Ｃ  ＮＭＲ  （１２５  ＭＨｚ）  δ  １６６．４１  （ｓ，  Ｃ＝０），  １４１．３４  （ｄ，  Ｃ−２２），  １３２．６４  （ｄ．  ｐ−ＣＢｚ），  １３０．８３  （ｓ，  ｉ−ＣＢＺ）．  １２９．５０  （ｄ，  ｏ−ＣＢＺ），  １２８．２９  （ｄ，  ｍ−ＣＢｚ），  １２２．８６  （ｄ，  Ｃ−２３），  ７２．０６  （ｄ，  Ｃ−８），  ７０．６８  （ｓ，  Ｃ−  ２５），  ５６．３０  （ｄ），  ５１．４６  （ｄ），  ４６．９２  （ｔ），  ４１．９１  （ｓ，  Ｃ−１３），  ４０．２３  （ｄ），  ３９．３３  （ｔ），  ３０．５７  （ｔ），  ２９．１２および２９．１  １  （それぞれｑ，  Ｃ−２６  およびＣ−２７），  ２６．８３  （ｔ），  ２２．４９  （ｔ），  ２１．５７  （ｑ，  Ｃ−２１），  １７．７８  （ｔ），  １３．８０  （ｑ，  Ｃ−１８）；  ＭＳ  （ＥＩ）  ｍ／ｚ  ｎｏ  Ｍ  ＋  ，  ３６６  （５，  Ｍ  ＋  −  Ｈ  ２  ０），  ３２６  （３８，  Ｍ  ＋  −  Ｃ  ３  Ｈ  ６  ０），  ２８４  （３８，  Ｍ  ＋  −  Ｃ  ６  Ｈ  １２  ０），  ２０４  （５４），  １６２  （８８），  １３５  （９３），  １２１  （５３），  １０５  （  １００）；  Ｃ２５Ｈ３６Ｏ３Ｎａ（ＭＮａ＋）に対して算出した正確な質量４０７．２５６２，実測値４０７．２５６１。
【００４４】
（８Ｓ，２０Ｓ）−デス−Ａ，Ｂ−８−ベンゾイルオキシ−２０−［４’−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ−４’−メチル−ペント−（１’Ｅ）−エン−イル］プレグナン（８）。
【００４５】
アルコール７（５２ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）および２，６−ルチジン（３０μＬ、３０ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）の無水塩化メチレン（３ｍＬ）溶液に、−２０℃  で、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルトリフルオロメタンスルホネート（３２μＬ、３７ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）を添加した。この混合物を、アルゴン下、  ０℃で３時間撹拌した。反応を水でクエンチし、塩化メチレンで抽出した。混合した有機相をブラインで洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、減圧下で濃縮した。残渣をヘキサン、次いでヘキサン／酢酸エチル（９７：３）を用いて、シリカゲルクロマトグラフィーにかけ、生成物８を得た（６５ｍｇ、９３％）：
【００４６】
［α］Ｄ  −２１．２  （ｃ  ４．９５，  ＣＨＣｌ３）；  ｌ  Ｒ  ＮＭＲ  （５００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３  ＋ＴＭＳ）  δ  ８．０５  （２Ｈ，  ｍ，  ｏ−ＨＢｚ），  ７．５４  （１Ｈ，  ｍ，  ｐ−ＨＢｚ），  ７．４３  （２Ｈ，  ｍ，  ｍ−ＨＢｚ），  ５．４１  （２Ｈ，  ｍ，  ８α−Ｈおよび２３−Ｈ），  ５．２９  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ  ＝  １５．４，  ９．１  Ｈｚ，  ２２−Ｈ），  １．１８  （６Ｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  ４．５  Ｈｚ，  ２６，２７−Ｈ  ６  ），  １．０４  （３Ｈ，  ｓ，  １８−Ｈ３），  ０．９３  （３Ｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  ６．６  Ｈｚ，  ２１−Ｈ  ３  ），  ０．８７  （９Ｈ，  ｓ，  Ｓｉ−ｔ−Ｂｕ），  ０．０８  （６Ｈ，  ｓ，  ＳｉＭｅ２  ）；  １  ３  Ｃ  ＮＭＲ  （１２５  ＭＨｚ）  δ  １６６．４３  （ｓ，  Ｃ＝０），  １３９．１０  （ｄ，  Ｃ−２２），  １３２．６２  （ｄ，  ｐ−ＣＢｚ），  １３０．９１  （ｓ，  ｉ−ＣＢｚ），  １２９．５３  （ｄ，  ｏ−ＣＢｚ），  １２８．３０  （ｄ，  ｍ−ＣＢｚ），  １２４．３９  （ｄ，  Ｃ−２３），  ７３．７２  （ｓ，  Ｃ−２５），  ７２．１４  （ｄ，  Ｃ−８），  ５６．４４  （ｄ），  ５１．５２  （ｄ），  ４８．２９  （ｔ），  ４１．９４  （ｓ，  Ｃ−１３），  ４０．３０  （ｄ），  ３９．２８  （ｔ），  ３０．６３  （ｔ），  ２９．７６および２９．６５  （それぞれｑ，  Ｃ−２６およびＣ−２７），  ２６．８８  （ｔ），  ２５．８３  （ｑ，  ＳｉＣＭｅ３），  ２２．５６  （ｔ），  ２１．５３  （ｑ，  Ｃ−２１），  １８．０４  （ｓ，  ＳｉＣＭｅ３  ），  １７．８２  （ｔ），  １３．６８  （ｑ，  Ｃ−１８），  −２．０４  （ｑ，  ＳｉＭｅ２  ）；  ＭＳ  （ＥＩ）  ｍ／ｚ  Ｍ  ＋  なし，  ４８３  （５，  Ｍ  ＋  −  ＣＨ３  ），  ４４１  （８，  Ｍ＋−  Ｃ  ４  Ｈ  ９  ），  ３５９  （２），  ３３９  （５），  ２４５  （６），  ２３７  （９），  １７３  （１００），  １６３  （３６），  １３５  （３８），  １０５  （５４）；  Ｃ３１Ｈ５０Ｏ３ＳｉＮａ（ＭＮａ＋）に対して算出した正確な質量５２１．３４２７，実測値５２１．３４５０。
【００４７】
（８Ｓ，２０Ｓ）−デス−Ａ，Ｂ−２０−［４’−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）−４’−メチル−ペント−（１’Ｅ）−エン−イル］プレグナン−８−オール（９）の調製。
【００４８】
ベンゾエート８（６５ｍｇ、１３１μｍｏｌ）の無水エタノール（２０ｍＬ）溶液を撹拌し、これに、水酸化ナトリウムのエタノール（２．５Ｍ、８ｍＬ）溶液を添加し、反応混合物を２１時間還流した。この混合物を室温まで冷却し、５％ＨＣｌ水溶液で中和し、ジクロロメタンで抽出した。混合した有機相を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、蒸発させた。残渣をヘキサン／酢酸エチル（９７：３）を用いて、シリカゲルクロマトグラフィーにかけ、アルコール９を得た（４９ｍｇ、収率９５％）：
【００４９】
［α］Ｄ  ＋１  １  （ｃ  ３．６，  ＣＨＣｌ３）；  １Ｈ  ＮＭＲ  （５００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ５．３８  （１Ｈ，  ｄｄｄ，  Ｊ  ＝  １５．４，  ７．９，  ７．０  Ｈｚ，  ２３−Ｈ），  ５．２５  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ  ＝  １５．４，  ９．１  Ｈｚ，  ２２−Ｈ），  ４．０７  （１Ｈ，  ｓ，  ８α−Ｈ），  ２．１０  （３Ｈ，  ｍ），  １．１６  （６Ｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  ３．０  Ｈｚ，  ２６，２７−Ｈ  ６  ），  ０．９２  （３Ｈ，  ｓ，  １８−Ｈ３），  ０．８９  （３Ｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  ６．７  Ｈｚ，  ２１−Ｈ３），  ０．８６  （９Ｈ，  ｓ，  Ｓｉ−ｔ−Ｂｕ），  ０．０７  （６Ｈ，  ｓ，  ＳｉＭｅ２  ）；  １３  Ｃ  ＮＭＲ  （１２５  ＭＨｚ）  δ１３９．１５  （ｄ，  Ｃ−２２），  １２４．２７  （ｄ，  Ｃ−２３），  ７３．７３  （ｓ，  Ｃ−２５），  ６９．３５  （ｄ，  Ｃ−８），  ５６．６９  （ｄ），  ５２．５３  （ｄ），  ４８．２８  （ｔ），  ４１．８６  （ｓ，  Ｃ−１３），  ４０．０６  （ｄ），  ３９．７１  （ｔ），  ３３．６６  （ｔ），  ２９．７７および２９．６１  （それぞれｑ，  Ｃ−２６およびＣ−２７），  ２６．９３  （ｔ），  ２５．８２  （ｑ，  ＳｉＣＭｅ３），  ２２．３９  （ｔ），  ２１．５１  （ｑ，  Ｃ−２１），  １８．０４  （ｓ，  ＳｉＣＭｅ３  ），  １７．２２  （ｔ），  １３．６８  （ｑ，  Ｃ−１８），  −２．０５  （ｑ，  ＳｉＭｅ２）：  ＭＳ  （ＥＩ）  ｍ／ｚ  ｎｏ  Ｍ  ＋なし ，  ３９３  （０．５，  Ｍ  ＋  −  Ｈ），  ３７９  （５，  Ｍ  ＋  −  ＣＨ  ３  ），  ３３７  （３，  Ｍ  ＋  −  Ｃ４  Ｈ９  ），  ２７９  （６，  Ｍ  ＋  −  ｔ−ＢｕＳｉＭｅ２  ），  ２５５  （９），  ２３７  （９６），  １９３  （４２），  １７３  （１００），  １５７  （４３），  １３５  （４０），  １１５  （３７）；  Ｃ２４Ｈ４６Ｏ２ＳｉＮａ（ＭＮａ＋）に対して算出した正確な質量４１７．３１６５，実測値４１７．３１６５。
【００５０】
（２０Ｓ）−デス−Ａ，Ｂ−２０−［４’−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）−４’−メチル−ペント−（１’Ｅ）−エン−イル］−プレグナン−８−オン（１０）の調製。
【００５１】
４−メチルモルホリンオキシド（５５ｍｇ、０．４７ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（０．６ｍＬ）溶液に、分子篩Ａ４（０．６ｇ）を添加した。混合物を室温で１５分間攪拌し、テトラプロピルアンモニウムペルルテナート（８ｍｇ、２３μｍｏｌ）を添加し、続いて、アルコール９（２８ｍｇ、７１μｍｏｌ）のジクロロメタン（３００＋２５０μＬ）溶液を添加した。得られた懸濁物を室温で１時間撹拌した。反応混合物をＷａｔｅｒｓ  ｓｉｌｉｃａ  Ｓｅｐ−Ｐａｋカートリッジ（５ｇ）で濾過し、さらに、ジクロロメタンで洗浄した。溶媒を除去した後、ケトン１０（２７ｍｇ、収率９７％）を無色油状物として得た：
【００５２】
［α］Ｄ  −３９．３  （ｃ  １．３５，  ＣＨＣｌ３）；  ｌ  Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ５．４２  （１Ｈ，  ｄｄｄ，  Ｊ  ＝  １５．４，  ８．２，  ７．０  Ｈｚ，  ２３−Ｈ），  ５．２８  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ  ＝  １５．４，  ９．１  Ｈｚ，  ２２−Ｈ），  ２．４２  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ  ＝  １１．４，  ７．６  Ｈｚ），  １．１７  （６Ｈ，  ｓ，  ２６，２７−Ｈ６  ），  ０．９４  （３Ｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  ６．６  Ｈｚ，  ２１−Ｈ３  ），  ０．８６  （９Ｈ，  ｓ，  Ｓｉ−ｔ−Ｂｕ），  ０．６１  （３Ｈ，  ｓ，  １８−Ｈ３），  ０．０６９および０．０６５  （それぞれ３Ｈ，  それぞれｓ，  それぞれＳｉＭｅ２  ）；  １３  Ｃ  ＮＭＲ  （１００  ＭＨｚ）  δ２１２．１０  （ｓ，  Ｃ＝０），  １３８．６９  （ｄ，  Ｃ−２２），  １２４．９７  （ｄ，  Ｃ−２３），  ７３．６５  （ｓ，  Ｃ−２５），  ６１．９１  （ｄ），  ５６．５７  （ｄ），  ５０．０３  （ｓ，  Ｃ−１３），  ４８．２３  （ｔ），  ４１．０３  （ｔ），  ４０．４４  （ｄ），  ３８．２８  （ｔ），  ２９．７９および２９．６２  （それぞれｑ，  Ｃ−２６およびＣ−２７），  ２７．２１  （ｔ），  ２５．７９  （ｑ，  ＳｉＣＭｅ３），  ２３．９３  （ｔ），  ２１．５２  （ｑ，  Ｃ−２１），  １８．９７  （ｔ），  １８．０３  （ｓ，  ＳｉＣＭｅ３），  １２．４９  （ｑ，  Ｃ−１８），  −２．０６  （ｑ，  ＳｉＭｅ２）；  ＭＳ  （ＥＩ）  ｍ／ｚ  ｎｏ  Ｍ  ＋  ，  ３７７  （６，  Ｍ  ＋  −  ＣＨ３  ），  ３３５  （２６，  Ｍ  ＋  −ｔ−Ｂｕ），  ２５３  （５９），  ２０９  （２４），  １７３  （１００），  １６１  （２５），  １３３  （２２）；Ｃ２４Ｈ４４Ｏ２ＳｉＮａ（ＭＮａ＋）に対して算出した正確な質量４１５．３００８，実測値４１５．３０１８。
【００５３】
（２０Ｓ，２２Ｅ）−２−メチレン−１９−ノル−２２−エン−１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３（１３）の調製。
【００５４】
ホスフィンオキシド１１（６７ｍｇ、１１５μｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（５００μＬ）溶液に、−２０℃で、アルゴン下、撹拌しながら、ＰｈＬｉ（ジ−ｎ−ブチルエーテル中１．８３Ｍ、７５μＬ、１３７μｍｏｌ）をゆっくりと添加した。溶液は深い橙色に変わった。３０分後、混合物を−７８℃まで冷却し、あらかじめ冷却しておいた（−７８℃）ケトン１０（２６ｍｇ、６６μｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（３００＋３００μＬ）溶液をゆっくりと添加した。この混合物を、アルゴン下、−７８℃で３時間撹拌し、０℃で１８時間撹拌した。酢酸エチルを添加し、有機相をブラインで洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、  蒸発させた。残渣をヘキサンに溶解し、Ｗａｔｅｒｓ  ｓｉｌｉｃａ  Ｓｅｐ−Ｐａｋカートリッジ（２ｇ）に塗布した。このカートリッジを、ヘキサンおよびヘキサン／酢酸エチル（９９．５：０．５）で洗浄し、１９−ノルビタミン誘導体１２を得た（３９．５４ｍｇ、収率７９％）。
【００５５】
ＵＶ  （ヘキサン中）  ｍａｘ  ２６２．５，  ２５３．０，  ２４５．０  ｎｍ；  ｌ  Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ６．２１および  ５．８３  （それぞれ１Ｈ，  それぞれｄ，  Ｊ  ＝  １１．１  Ｈｚ，  ６−  および７−Ｈ），  ５．３８  （１Ｈ，  ｄｄｄ，  Ｊ  ＝  １５．４，  ８．４，  ６．８  Ｈｚ，  ２３−Ｈ），  ５．２９  （１  Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ  ＝  １５．４，  ８．７  Ｈｚ，  ２２−Ｈ），  ４．９７および４．９２  （それぞれ１Ｈ，  それぞれｓ，  ＝ＣＨ２），  ４．４２  （２Ｈ，  ｍ，  １β−および３α−Ｈ），  ２．８１  （１Ｈ，  ｄｍ，  Ｊ  ＝  １３．１  Ｈｚ，  ９β−Η），  ２．５２  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ  ＝  １３．２，  ５．８  Ｈｚ，  １０α−Ｈ），  ２．４６  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ  ＝  １２．７，  ４．３  Ｈｚ，  ４α−Ｈ），  ２．３３  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ  ＝  １３．２，  ２．４  Ｈｚ，  １０β−Η），  ２．１７  （１Η，  ｄｄ，  Ｊ  ＝  １２．７，  ８．４  Ｈｚ，  ４β−Η），  １．１６  （６Ｈ，  ｓ，  ２６，２７−Ｈ  ６  ），  ０．９３  （３Ｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  ６．４  Ｈｚ，  ２１  −Ｈ  ３  ），  ０．８９５  （９Ｈ，  ｓ，  Ｓｉ−ｔ−Ｂｕ），  ０．８６５  （９Ｈ，  ｓ，  Ｓｉ−ｔ−Ｂｕ），  ０．８５５  （９Ｈ，  ｓ，  Ｓｉ−ｔ−Ｂｕ），  ０．５１８  （３Ｈ，  ｓ，  １８−Ｈ  ３  ），  ０．０７７  （３Ｈ，  ｓ，  ＳｉＭｅ），  ０．０６６  （９Ｈ，  ｓ，  ３  ｘ  ＳｉＭｅ），  ０．０４７  （３Ｈ，  ｓ，  ＳｉＭｅ），  ０．０２５  （３Ｈ，  ｓ，  ＳｉＭｅ）；  １３  Ｃ  ＮＭＲ  （１００  ＭＨｚ）  δ１５２．９９  （ｓ，  Ｃ−２），  １４１．３２  （ｓ，  Ｃ−８），  １３９．４０  （ｄ，  Ｃ−２２），  １３２．６３  （ｓ，  Ｃ−５），  １２４．２５  （ｄ，  Ｃ−２３），  １２２．４２  （ｄ，  Ｃ−６），  １１６．００  （ｄ，  Ｃ−７），  １０６．２４  （ｔ，  ＝ＣＨ  ２  ），  ７３．７８  （ｓ，  Ｃ−２５），  ７２．５３および７１．６３  （それぞれｄ，  Ｃ−１およびＣ−３），  ５６．６７  （ｄ），  ５６．２０  （ｄ），  ４８．２９  （ｔ），  ４７．６１  （ｔ），  ４５．７６  （ｓ，  Ｃ−ｌ  ３），  ４０．９１  （ｄ），  ３９．８６  （ｔ），  ３８．５５  （ｔ），  ２９．８３および２９．６２  （それぞれｑ，  Ｃ−２６およびＣ−２７），  ２８．７７  （ｔ），  ２７．４１  （ｔ），  ２５．８４  （ｑ，  ２  ｘ  ＳｉＣＭｅ３），  ２５．７８  （ｑ，  ＳｉＣＭｅ３），  ２３．２３  （ｔ），  ２２．１１  （ｔ），  ２１．５７  （ｑ，  Ｃ−２１），  １８．２５  （ｓ，  ＳｉＣＭｅ３  ），  １８．１６  （ｓ，  ＳｉＣＭｅ３  ），  １８．０７  （ｓ，  ＳｉＣＭｅ３  ），  １２．１１  （ｑ，  Ｃ−１８），  −２．０４  （ｑ，  ２  ｘ  ＳｉＭｅ），  −４．８６  （ｑ，  ２  ｘ  ＳｉＭｅ），  −４．９０  （ｑ，  ＳｉＭｅ），  −５．１０  （ｑ，  ＳｉＭｅ）；  Ｃ４５Ｈ８４Ｏ３Ｓｉ３Ｎａ（ＭＮａ＋）に対して算出した正確な質量７７９．５６２６，実測値７７９．５６５１。
【００５６】
保護されたビタミン１２（３９．４４ｍｇ、５２μｍｏｌ）を、ＴＨＦ（５ｍＬ）およびアセトニトリル（３ｍＬ）に溶解した。４８％  ＨＦ水のアセトニトリル溶液（比率１：９、５ｍＬ）を０℃で添加し、得られた混合物を室温で１１時間撹拌した。飽和ＮａＨＣＯ３水溶液を添加し、反応混合物を酢酸エチルで抽出した。混合した有機相をブラインで洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）  、減圧下で濃縮した。残渣を、ヘキサン／酢酸エチル（８：２）２ｍＬで希釈し、Ｗａｔｅｒｓ  ｓｉｌｉｃａ  Ｓｅｐ−Ｐａｋカートリッジ（２ｇ）に塗布した。ヘキサン／酢酸エチル（７５：２５）で溶出し、粗生成物１３（１８ｍｇ）を得た。ビタミン１３を、順相ＨＰＬＣ［９．４×２５０ｍｍ  Ｚｏｒｂａｘ  Ｓｉｌカラム、５ｍＬ／分、２−プロパノール／ヘキサン（１５：８５）溶媒系、Ｒｔ＝６．４６分］で精製し、逆相ＨＰＬＣ［９．４×２５０ｍｍ  Ｚｏｒｂａｘ  ＲＸ−Ｃ１８カラム、３ｍＬ／分、メタノール／水（８５：１５）溶媒系、Ｒｔ＝１０．１９分］でさらに精製して、無色油状物を得た（１２．７４５ｍｇ、収率５９％）：
【００５７】
ＵＶ  （ＥｔＯＨ中）  ｍａｘ  ２６１．０，  ２５２．０，  ２４４．５  ｎｍ；  ｌ  Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ６．３５および  ５．８８  （それぞれ１Ｈおよび１Ｈ，  それぞれｄ，  Ｊ  ＝  １１．２  Ｈｚ，  ６−  および７−Ｈ），  ５．４４  （２Ｈ，  ｍ，  ２２−Ｈおよび２３−Ｈ），  ５．１１および５．０９  （それぞれ１Ｈ，  それぞれｓ，  ＝ＣＨ２），  ４．４８  （２Ｈ，  ｍ，  １  β−  および３α−Ｈ），  ２．８４  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ  ＝  １３．３，  ４．４  Ｈｚ，  １０β−Η），  ２．８０  （１Ｈ，  ｂｒ  ｄ，  Ｊ  ＝  １４．２  Ｈｚ，  ９β−Η），  ２．５６  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ  ＝  １３．４，  ３．６  Ｈｚ，  ４α−Ｈ），  ２．３２  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ  ＝  １３．４，  ６．０  Ｈｚ，  ４β−Η），  ２．２８  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ  ＝  １３．３，  ８．４  Ｈｚ，  １０α−Ｈ），  １．２０  （６Ｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  １．２  Ｈｚ，  ２６，２７−Ｈ  ６  ），  ０．９５  （３Ｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  ６．６  Ｈｚ，  ２１−Ｈ３），  ０．５２８  （３Ｈ，  ｓ，  １８−Ｈ３）；  １  ３  Ｃ  ＮＭＲ  （１００  ＭＨｚ）  δ１５１．９６  （ｓ，  Ｃ−２），  １４３．２７  （ｓ，  Ｃ−８），  １４１  ．７１  （ｄ，  Ｃ−２２），  １３０．４５  （ｓ，  Ｃ−５），  １２４．１４  （ｄ，  Ｃ−６），  １２２．６４  （ｄ，  Ｃ−２３），  １１５．２６  （ｄ，  Ｃ−７），  １０７．６９  （ｔ，  ＝ＣＨ２），  ７１．７６  （ｄ，  Ｃ−１），  ７０．７５  （ｓ，  Ｃ−２５），  ７０．６０  （ｄ，  Ｃ−３），  ５６．５４  （ｄ），  ５６．１３  （ｄ），  ４６．９０  （ｔ），  ４５．８０  （ｓ，  Ｃ−１３），  ４５．７４  （ｔ），  ４０．７２  （ｄ），  ３９．８０  （ｔ），  ３８．１１  （ｔ），  ２９．１１および２９．０５  （それぞれｑ，  Ｃ−２６およびＣ−２７），  ２８．９１  （ｔ），  ２７．２６  （ｔ），  ２３．２４  （ｔ），  ２２．０９  （ｔ），  ２１．６１  （ｑ，  Ｃ−２１），  １２．２８  （ｑ，  Ｃ−１８）；  ＭＳ  （Ｅｌ）  ｍ／ｚ    ４１４  （３７，  Ｍ  ＋  ），  ３９６  （４，  Ｍ  ＋  −  Ｈ２  ０），  ３８１  （１  Ｍ  ＋  −  Ｈ  ２  ０  −  ＣＨ  ３  ），  ３７８  （１Ｍ  ＋  −  ２Ｈ  ２  ０），  ３５６  （２），  ３１１  （４），  ２８７  （１２），  ２６９  （２１），  ２５１  （２６），  １９４  （４２），  １４７  （４１），  １３５  （１００）；  Ｃ２７Ｈ４２Ｏ３（Ｍ＋）に対して算出した正確な質量４１４．３１３４，実測値４１４．３１４２。
【化４】
2013506685.tif 000005
【化５】
2013506685.tif 000006
［（２０Ｓ，２２Ｅ）−２−メチレン−１９−ノル−２２−エン−１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３類似体の生物学的活性］
【００５８】
２位にメチレン基、および側鎖の２５位（Ｃ−２５）に接続したヒドロキシル置換基の導入、通常は側鎖の２１位（Ｃ−２１）に位置しているメチル基を、そのエピまたはＳ構造で有していること、側鎖の炭素原子２２と２３（Ｃ−２２とＣ−２３）の間の位置への二重結合の導入は、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３と比較して、全長組み換えラットビタミンＤ受容体に対するＮ−２３の結合にほとんど影響を及ぼさなかった。化合物Ｎ−２３は、標準物質１，２５−（ＯＨ）２Ｄ３と  比較して、核内ビタミンＤ受容体に対して同じ親和性で結合した（図１）。これらの結果から、化合物Ｎ−２３は、同等の生体活性を有するであろうと予想され得る。しかし、驚くべきことに、化合物Ｎ−２３は、固有の生体活性を有し、きわめて選択的な類似体である。
【００５９】
図５は、Ｎ−２３が、低投与量で、ｉｎ  ｖｉｖｏで腸のカルシウムを輸送する活性を上昇させる能力が相対的に低いことを示す。Ｎ−２３は、天然ホルモンである１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３（１，２５（ＯＨ）２Ｄ３）の効能と比較して、腸のカルシウム輸送の刺激について、特に、推奨されている低い用量では、ｉｎ  ｖｉｖｏでの効能が明らかに低い。
【００６０】
図４は、Ｎ−２３が、１，２５（ＯＨ）２Ｄ３と比較して、骨のカルシウムを動員する活性が著しいことを示す。Ｎ−２３は、１，２５（ＯＨ）２Ｄ３よりも、骨のカルシウムを動員させる活性を多少多く示した（投与量２６０ｐｍｏｌにおいて１，２５（ＯＨ）２Ｄ３  ６．１ｍｇ／ｄＬに対し、Ｎ−２３は６．８ｍｇ／ｄＬ）。したがって、Ｎ−２３は、１，２５（ＯＨ）２Ｄ３と比較して、骨からカルシウムを移動させる効能が多少高いことは明白である。
【００６１】
したがって、図４および図５は、Ｎ−２３が、１，２５（ＯＨ）２Ｄ３よりも腸のカルシウムを輸送する活性は低いが、骨のカルシウムを動員する活性を促進することにおいては、１，２５（ＯＨ）２Ｄ３よりも効能が多少高いという特徴を有し得ることを示す。
【００６２】
図２は、Ｎ−２３が、ＨＬ−６０細胞分化、すなわち、ＨＬ−６０細胞を単球に分化させることに対し、１，２５（ＯＨ）２Ｄ３よりも約１０倍以上強力であることを示す。したがって、Ｎ−２３は、癌の治療に対し、特に、白血病，結腸癌、乳癌、皮膚癌、前立腺癌に対し、優れた候補物質であろう。
【００６３】
図３は、骨の細胞において、化合物Ｎ−２３が、２４−ヒドロキシラーゼ遺伝子の転写を高めることについて１，２５（ＯＨ）２Ｄ３よりも約１０倍以上強力であることを示す。この結果を、図２の細胞分化活性とあわせると、Ｎ−２３が、細胞分化、遺伝子転写を引き起こし、細胞成長を抑制するという直接的な細胞活性を有しているため、上記の癌の治療に極めて有効である可能性を示唆している。
［実験法］
【００６４】
ビタミンＤ受容体の結合
【００６５】
試験物質
【００６６】
タンパク質源
【００６７】
全長組み換えラット受容体が、Ｅ．ｃｏｌｉ  ＢＬ２１（ＤＥ３）Ｃｏｄｏｎ  Ｐｌｕｓ  ＲＩＬ細胞で発現され、２種類の異なるカラムクロマトグラフィーシステムを用いて均一になるように精製した。第１の系は、このタンパク質に対し、Ｃ−末端ヒスチジンタグを利用するニッケル親和性樹脂であった。この樹脂から溶出したタンパク質を、イオン交換クロマトグラフィー（Ｓ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ  Ｆａｓｔ  Ｆｌｏｗ）を用いてさらに精製した。精製したタンパク質を等分し、液体窒素で迅速に凍結し、使用するまで−８０℃で保存した。結合アッセイで使用するために、このタンパク質を、０．１％  Ｃｈａｐｓ洗浄剤を含むＴＥＤＫ５０（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ、１．５ｍＭ  ＥＤＴＡ、ｐＨ７．４、５ｍＭ  ＤＴＴ、１５０ｍＭ  ＫＣｌ）で希釈した。受容体タンパク質およびリガンド濃度は、受容体に結合する添加された放射能標識されたリガンドが２０％を超えないように最適化された
【００６８】
研究薬物
【００６９】
標識されていないリガンドを、エタノールに溶解し、ＵＶ分光光度法を用いて濃度を決定した（１，２５（ＯＨ）２Ｄ３：モル吸光係数＝１８，２００およびλｍａｘ＝２６５ｎｍ；類似体：モル吸光係数＝４２，０００およびλｍａｘ＝２５２ｎｍ）。放射能標識されたリガンド（３Ｈ−１，２５（ＯＨ）２Ｄ３、１５９Ｃｉ／ｍｍｏｌｅ以下）を、最終濃度が１ｎＭになるようにエタノールに添加した。
【００７０】
アッセイ条件
【００７１】
放射能標識されたリガンドおよび標識されていないリガンドを、最終エタノール濃度が１０％以下になるように希釈したタンパク質１００ｍｃｌに添加し、混合して、結合を平衡状態にするため、氷上で一晩インキュベーションした。次の日に、ヒドロキシルアパタイトスラリー（５０％）１００ｍｃｌをそれぞれの管に  添加し、１０分間隔で３０分間混合した。ヒドロキシルアパタイトを、遠心分離によって収集し、次いで、０．５％  Ｔｉｔｒｏｎ  Ｘ−１００を含有するＴｒｉｓ−ＥＤＴＡバッファ（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ、１．５ｍＭ  ＥＤＴＡ、ｐＨ７．４）で３回洗浄した。最後の洗浄が終わったら、Ｂｉｏｓａｆｅ  ＩＩシンチレーションカクテル４ｍｌを含有するシンチレーションバイアルにペレットを移し、混合して、シンチレーションカウンターに置いた。放射能標識されたリガンドのみを含む管から、全結合を決定した。
【００７２】
ＨＬ−６０の分化
【００７３】
試験物質
【００７４】
研究薬物
【００７５】
研究薬物を、エタノールに溶解し、ＵＶ分光光度法を用いて濃度を決定した。細胞培養物中の最終エタノール濃度（≦０．２％）を変えずに、さまざまな薬物濃度を試験することができるように、段階希釈物を調製した。
【００７６】
細胞
【００７７】
ヒト前骨髄球性白血病（ＨＬ６０）細胞を、１０％胎児ウシ血清を含有するＲＰＭＩ−１６４０培地で成長させた。この細胞を、５％ＣＯ２存在下、３７℃でインキュベーションした。
【００７８】
アッセイ条件
【００７９】
ＨＬ６０細胞を、１．２×１０５細胞／ｍｌで播種した。播種してから１８時間後、２組の細胞を、薬物で処理した。４日後、細胞を採集し、ニトロブルーテトラゾリウム還元アッセイを行った（Ｃｏｌｌｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．、１９７９；Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１４９：９６９−９７４）。分化した細胞の割合は、合計２００細胞を計数し、細胞内に黒〜青色のホルマザンの沈殿  を含む数を記録することによって決定した。単球細胞への分化の検証を、食作用活性を測定することによって決定した（データは示されていない）。
【００８０】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの転写アッセイ
【００８１】
転写活性を、ルシフェラーゼレポーター遺伝子の上流の２４−ヒドロキシラーゼ（２４Ｏｈａｓｅ）遺伝子プロモーターで安定にトランスフェクトされたＲＯＳ  １７／２．８（骨）細胞で測定した（Ａｒｂｏｕｒ  ｅｔ  ａｌ．、１９９８）。細胞に、さまざまな投与量を与えた。投与の１６時間後、細胞を採集し、ルシフェラーゼ活性を、照度計を用いて測定した。
【００８２】
ＲＬＵ＝相対ルシフェラーゼユニット
【００８３】
腸のカルシウム輸送および骨のカルシウム動員
【００８４】
雄の離乳期Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットを、Ｄｉｅｔ  １１（０．４７％  Ｃａ）食餌＋ＡＥＫ油の状態に１週間置き、次いで、Ｄｉｅｔ  １１（０．０２％  Ｃａ）＋ＡＥＫ油の状態に３週間置いた。次いで、このラットを、０．４７％  Ｃａを含む食餌に１週間変更し、次いで、０．０２％  Ｃａを含有する食餌に２週間変更した。０．０２％  カルシウムの食餌の最後の週に、投与量の投与を開始した。約２４時間の間隔をあけて、４回連続して腹腔内投与を行った。最後の投与から２４時間後、切断された頸部から血液を採集し、血清カルシウム濃度を、骨のカルシウム動員の測定値として測定した。反転腸管法を用いて腸のカルシウム輸送を分析するために、  最初の腸１０ｃｍも採集した。
［データの解釈］
【００８５】
生物学的知見のまとめ。この化合物Ｎ−２３は、天然のホルモンと同じ親和性でＶＤＲに結合し、この活性において、１，２５（ＯＨ）２Ｄ３と同等の効能を持つと考えることができる。また、Ｎ−２３は、１，２５（ＯＨ）２Ｄ３と比較して、約１０倍以上の細胞分化活性を示し、約１０倍以上のｉｎ  ｖｉｔｒｏでの遺伝子転写活性を示す。この化合物は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでは１，２５（ＯＨ）２Ｄ３よりも効能が強いが、天然ホルモンと比較して、ｉｎ  ｖｉｖｏでのカルシウム動員は多少高い活性を示し、天然ホルモンと比較して、ｉｎ  ｖｉｖｏでの腸管のカルシウム輸送の促進は多少低い活性を示す。Ｎ−２３は、骨の貯蔵庫からカルシウムを動員する効能はより高く、腸管で能動カルシウム輸送を刺激する効能はより低いため、治療薬開発に潜在的に価値のある化合物であるが、細胞分化における効能がより高いため、すでに作られている化合物よりも安全性の範囲が大きい化合物である。この化合物は、比較的顕著な細胞分化および転写活性を示すが、骨のカルシウム血症活性は比較的低いため、種々の癌を患う患者の治療、特に白血病、結腸癌、乳癌、皮膚癌および前立腺癌の治療に有用となり得る。Ｎ−２３は、上に列挙した癌の治療に有用なだけではなく、上に列挙した癌の予防にも有用であろう。
【００８６】
ＶＤＲへの結合、ＨＬ６０細胞分化、および転写活性。Ｎ−２３（Ｋｉ＝６ｘ１０−１１Ｍ）は、全長組み換えラットビタミンＤ受容体に対する結合について、［３Ｈ］−１，２５−（ＯＨ）２−Ｄ３と競合する能力に関し、天然ホルモンである１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３（Ｋｉ＝４ｘ１０−１１Ｍ）とほぼ同じ活性を有する（図１）。Ｎ−２３は、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３（ＥＣ５０＝２ｘ１０−９Ｍ）と比較した場合、ＨＬ−６０の細胞分化を促進する能力（有効性または効力）において、約１０倍以上の活性を示す（ＥＣ５０＝１ｘ１０−１０Ｍ）（図２を参照）。また、化合物Ｎ−２３（ＥＣ５０＝２ｘ１０−１１Ｍ）は、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３（ＥＣ５０＝２ｘ１０−１０Ｍ）よりも、骨細胞における転写活性が約１０倍以上である（図３を参照）。これらの結果は、Ｎ−２３は細胞分化と遺伝子転写を引き起こし、細胞成長を抑制するという直接的な細胞活性を有しているため、Ｎ−２３が抗癌剤として顕著な活性を有しており、極めて有効である可能性を示唆している。
【００８７】
ビタミンＤ欠乏物における、骨からのカルシウム動員および腸のカルシウム吸収。低カルシウムの食餌（０．０２％）を与えたビタミンＤ欠乏ラットを使い、腸および骨におけるＮ−２３および１，２５（ＯＨ）２Ｄ３の活性を試験した。予想されたように、天然のホルモン（１，２５（ＯＨ）２Ｄ３）  は、すべての投与量で血清カルシウム濃度を増加させた（図４）。図４に報告されている研究は、Ｎ−２３が、骨からカルシウムを動員する顕著な活性を有することを示す。２６０ｐｍｏｌ／日の投与量でＮ−２３を連続して４日間投与した場合、骨のカルシウム動員が起こり、天然のホルモンである１，２５（ＯＨ）２Ｄ３は、２６０ｐｍｏｌ／日の投与量で顕著な活性を有し、大幅な影響がみられた（６．１ｍｇ／ｄＬ）。
【００８８】
腸のカルシウム輸送を、反転腸管法を用いて、同じ動物群で評価した（図５）。図５に報告されている研究は、Ｎ−２３が持つ腸のカルシウムを輸送する活性は１，２５（ＯＨ）２Ｄ３よりも低いことを示す。３２ｐｍｏｌ／日の投与量でＮ−２３を連続して４日間投与した場合、同じく３２ｐｍｏｌ／日の投与量で投与した１，２５（ＯＨ）２Ｄ３と比較して、活性は低かった。
【００８９】
これらの結果は、化合物Ｎ−２３が、用量に依存する様式で腸のカルシウム輸送を促進することを示している。したがって、Ｎ−２３は、推奨される、より低い用量において、腸のカルシウムを輸送する活性が１，２５（ＯＨ）２Ｄ３よりも低いと結論づけることができるだろう。
【００９０】
これらの結果は、Ｎ−２３が、本明細書に記載されるような多くのヒトの治療のために、優れた候補物質であることをさらに示している。Ｎ−２３は、癌の治療のための優れた候補物質である。なぜなら、（１）Ｎ−２３は、顕著なＶＤＲ結合活性、転写活性および細胞分化活性を有してお  、（２）Ｎ−２３は、１，２５（ＯＨ）２Ｄ３とは異なり、高カルシウム血症のリスクが低く、（３）Ｎ−２３は、簡単に合成されるからである。
【００９１】
予防および／または治療の目的で、式Ｉに定義される本発明の化合物、特にＮ−２３は、医薬用途のために、当該技術分野で既知の従来の方法に従って、無害な溶媒の溶液、または適切な溶媒または担体のエマルション、懸濁物または分散物、または固体担体とともに丸薬、錠剤またはカプセルとして配合されてもよい。また、任意のこのような配合物は、安定化剤、抗酸化剤、結合剤、着色剤、乳化剤または味覚改質剤のような、他の医薬的に許容され、毒性のない賦形剤を含有していてもよい。
【００９２】
式Ｉの化合物、特にＮ−２３は、経口、局所、非経口、直腸、経鼻、舌下または経皮で投与されてもよい。この化合物は、注射によって、または静脈内注入または適切な滅菌溶液によって、または、液体または固体の投薬形態で、消化管を経て、または、クリーム、軟膏、パッチまたは経皮塗布するのに適した同様のビヒクルの形態で、有益に投与される。化合物Ｉ、特にＮ−２３の投与量が１日あたり０．０１μｇ〜１０００μｇ、好ましくは、１日あたり約０．１μｇ〜約  ５００μｇであることが、予防および／または治療目的で適しており、このような投与量は、当該技術分野では十分に理解されているように、治療すべき疾患、疾患の重篤度、被験者の応答によって調整される。この化合物が作用について特異性を示すため、それぞれを単独で適切に投与してもよく、骨中の無機質の動員およびカルシウム輸送の刺激が異なるレベルであることが有益であることが分かっている状況では、別の活性があるビタミンＤ化合物、例えば、１α−ヒドロキシビタミンＤ２またはＤ３、すなわち１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３の投与量を段階的に変えて併用投与してもよい。
【００９３】
上述の治療のための組成物は、活性成分として上の式ＩおよびＩａによって定義される有効な量の式Ｉの化合物、特にＮ−２３と、適切な担体とを含む。本発明に従って使用するための、このような化合物の有効な量は、組成物１ｇあたり、約０．０１μｇ〜約１０００μｇ、好ましくは、組成物１ｇあたり、約  ０．１μｇ〜約５００μｇであり、約０．０１μｇ／日〜約１０００μｇ／日の投与量で、好ましくは、約０．１μｇ／日〜約５００μｇ／日の投与量で、局所、経皮、経口、直腸、経鼻、舌下、または非経口で投与されてもよい。
【００９４】
化合物Ｉ、特にＮ−２３は、クリーム、ローション、軟膏、局所用パッチ、丸薬、カプセルまたは錠剤、坐剤、エアロゾルとして配合されてもよく、または、  医薬的に無害で許容される溶媒または油の溶液、エマルション、分散物または懸濁物として液体形態で配合されてもよく、このような製剤は、それに加えて、安定化剤、酸化防止剤、乳化剤、着色剤、結合剤または味覚改質剤のような、他の医薬的に無害または有益な成分を含有していてもよい。
【００９５】
式Ｉの化合物、特にＮ−２３は、前骨髄球から正常なマクロファージへの分化に影響を与えるのに十分な量で投与されるのが有益な場合がある。上述のような  投与量が適しており、与えられている量は、当該技術分野で十分に理解されているように、疾患の重篤度、被験者の状態および反応に従って調整すべきであることが理解される。
【００９６】
本発明の配合物は、従って医薬的に許容される担体と組み合わせて、活性成分を含み、場合により、他の治療成分を含む。担体は、配合物の他の成分と適合性を有し、受容者に有害ではないという観点で、「許容される」ものでなければならない。
【００９７】
経口投与に適した本発明の配合物は、それぞれ所定量の活性成分を含むカプセル、小袋、錠剤またはトローチ剤のような別個の投与単位の形態、粉末または顆粒の形態、水系液体または非水系液体の溶液または懸濁物の形態、または水中油エマルションまたは油中水エマルションの形態であり得る。
【００９８】
直腸投与のための配合物は、活性成分と、ココアバターのような担体とが組み込まれた坐剤の形態、または浣腸剤の形態であってもよい。
【００９９】
非経口投与に適した配合物は、便宜上、油系または水系の活性成分の滅菌製剤を含み、好ましくは、受容者の血液と等張性である。
【０１００】
局所投与に適した配合物は、塗布薬、ローション、膏薬、水中油エマルションまたは油中水エマルション、例えば、クリーム、軟膏もしくはペースト、または溶液もしくは懸濁物、例えば、点薬、もしくはスプレーのような、液体または半液体の製剤を含む。
【０１０１】
経鼻投与の場合、粉末の吸入、スプレー缶を用いて分注する自己噴射式配合物またはスプレー式配合物、ネブライザまたはアトマイザを用いてもよい。配合物が分注される場合、好ましくは、粒径は、１０〜１００μの範囲である。
【０１０２】
配合物は、便宜上、投薬単位形態で存在していてもよく、医薬分野でよく知られている任意の方法によって調製することができる。用語「投薬単位」とは、単位を意味し、すなわち、活性成分を、それ自体で含むか、または、医薬品用の固体または液体の希釈剤または担体とともに含む、物理的および化学的に安定な単位投与量として患者に投与することが可能な１つの投与量を意味する。
【図１】
2013506685.tif 000012
【図２】
2013506685.tif 000013
【図３】
2013506685.tif 000014
【図４】
2013506685.tif 000015
【図５】
2013506685.tif 000016
【国際調査報告】
2013506685.tif 000017
2013506685.tif 000018
2013506685.tif 000019