【事件の表示】
　特許第２５７３９５９号「ポリペプチド成長因子類およびサイト力イン類の肺内投与」の特許に対する特許異議の申立てについて、次のとおり決定する。
【結論】
　訂正を認める。
　特許第２５７３９５９号の特許請求の範囲第１項ないし第１８項に記載された発明についての特許を維持する。
【理由】
Ｉ．手続きの経緯
　本件特許２５７３９５９号発明は、昭和６２年８月１９日（優先権主張１９８６年月８月１９日、米国）に特許出願され、平成８年１０月２４日にその特許の設定登録がなされ、その後、竹田和子および有賀三幸より特許異議の申立てがなされ、取消理由通知がなされ、その指定期間内である平成１０年１１月９日に訂正請求がなされたものである。
ＩＩ．訂正の適否についての判断
（ア）訂正の内容
▲１▼明細書の特許請求の範囲の必須要件項の訂正
　ａ．第１項の「成長因子類及びサイトカイン類からなる群から選ばれるポリペプチド」を「５〜７５ｋＤａの分子量を有する成長因子類」に，
「ポリペプチド」を「成長因子類」に訂正する。
　ｂ．第９項の「成長因子類及びサイトカイン類からなる群から選ばれるポリペプチド」を「５〜７５ｋＤａの分子量を有する成長因子類」に，
「ポリペプチド」を「成長因子類」に，
「第９項」を「第１１項」に訂正する。
▲２▼明細書の特許請求の範囲の実施態様項の訂正
　ａ．第３項の「ポリペプチドがソマトロピン、ソマトレム、‥‥‥である第１項または第２項に記載の装置」を、
「（３）成長因子類が少なくともヒト成長ホルモンの分子量を有する第（１）項または第（２）項記載の装置。
　（４）成長因子類がヒト成長ホルモンである第（１）〜（３）項のいずれかに記載の装置。
　（５）成長因子類がｍｅｔ−ヒト成長ホルモンである第（１）〜（４）項のいずれかに記載の装置。」に訂正する。
　ｂ．第４項，第５項，第８項，１０項の「ポリペプチド」を「成長因子類」に訂正し、それぞれの項番号を「第６項」，「第７項」，「第１０項」，「第１２項」に訂正し、それぞれの引用する項番号を「第１項〜第５項」，「第１項〜第６項」，「第１項〜第９項」，「第１１項」に訂正する。
　ｃ．第１３項を削除する。
　ｄ．第６項，第７項，第１１項，第１２項，第１５項，第１６項，第１７項の各項番号をそれぞれ「第８項」，「第９項」，「第１３項」，「第１４項」，「第１６項」，「第１７項」，「第１８項」に訂正し、それぞれその引用する項番号を、「第１項〜第７項」，「第８項」，「第１１項または第１２項」，「第１１項〜第１３項」，「第１５項」，「第１１項〜第１６項」，「第１１項〜第１７項」に訂正する。
　ｅ．第１４項の「および／またはサイトカイン」を削除し、項番号を「第１５項」に訂正し、引用する項番号を「第１１項〜第１４項」に訂正する。
（イ）訂正の目的の適否及び拡張・変更の存否
　上記特許請求の範囲の必須要件項の訂正は、その記載された技術内容を限定するものであり、特許請求の範囲の減縮を目的とするもに相当する。
　また、特許請求の範囲の実施態様項の訂正は、必須要件項の訂正に基づき、それに整合するよう訂正するものであり、明瞭でない記載の釈明を目的とするものに相当する。
　そして、これらの訂正は、願書に添付した明細書または図面に記載された事項の範囲内のものであり、特許請求の範囲の減縮に該当し、実質的に特許請求の範囲を拡張又は変更するものではない。
（ウ）訂正明細書に記載の発明
　訂正明細書に記載された発明の要旨は、その特許請求の範囲の第１項および第１１項に記載された次のとおりのものと認める。（以下、「本件発明１」および「本件発明２」という）。
［第１項］
　５〜７５ｋＤａの分子量を有する成長因子類の治療学的用量を肺吸収による全身投与によって患者の血流に投与するための装置であって、
　成長因子類を蓄えておくための貯蔵手段；
該貯蔵手段中に入れられた治療学的投与形態の成長因子類；
　粒子の１５％以上が平均直径０．５〜４μｍである成長因子類含有粒子の懸濁物をガス中で生成させるための分散手段；
　成長因子類を該分散手段に移送するための手段；および
　患者の肺の肺胞に該粒子懸濁物を投与するための手段からなる装置。
［第１１項］
　５〜７５ｋＤａの分子量を有する成長因子類の治療学的用量を、
　肺吸収による全身投与によって患者の血流に投与するための、
　粒子の１５％以上が平均直径０．５〜４μｍである該成長因子類含有粒子を含有している成長因子類分散物。
（エ）独立特許要件の判断
　【引用刊行物】
　本件発明１および本件発明２に対して、当審が通知した取消理由通知で引用した刊行物１〜４には次の記載がある。
▲１▼「Ｄｒｕｇ　Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ａｎｄ　Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ　Ｐｈａｒｍａｃｙ」１２（７），（１９８６年６月）９９３〜１０１５頁
　この刊行物は、「単位薬用量吸入エアゾルの展望」に関するもので、
　「更に、明らかに腸管分解及び吸収の問題がある新世代のペプチドについて、肺及び鼻からの投与経路は注射の代替として理論的な選択であると思われる。正常な肺にはプロテアーゼ活性があることが知られているが、これは主として細胞内であり、競合する吸収の反応速度は速い。」（９９４頁１１〜１７行）
　「沈着モデルは通常、鼻が周囲のエアゾール剤に曝された後のイベントを予測するために使用されるので、至適サイズである１〜５μｍの粒子が肺及び気管気管支に沈着するフラクション（口腔沈着は無駄になる）は、口での呼吸を考慮する場合には劇的に増加することは正しく評価されていない。」（９９６頁４〜１０行）
　また、図１にはエアゾールの粒径と沈着領域との関係が示され、「Ｇｏｎｄａによる、呼吸を停止せず２２．５リットル／分で経口的にアエゾール剤を吸入する場合の、空気学的直径に対する各領域での沈着。沈着は口腔及び咽頭（Ｍ）、繊毛のある気管気管支領域（ＴＢ）及び胞状の肺領域（Ｐ）において見られる。破線（ＴＢ＋Ｐ）は肺への沈着の総量を示す。吸入後呼吸を停止した場合１〜４μｍの小サイズのものの肺への沈着が増加する。」（９９７頁１〜８行）
　また、９９９頁の図２Ｂには、エアゾール剤を調製するためのミクロネブライザーが示され、
「図２ｂに示されるアトマイザー又はネブライザーは微細な放出管の最頂部で、液体の表面に空気又は他のガスを吹きつける。二つの装置の主な違いは、第２の装置（２ｂ）は固定した球体及び放出調整装置が存在することである。この球体によって、大きな薬滴をさらに分散させ、放出調整装置は“呼吸できない”大きな薬滴が放出されるのを防ぐ。調整装置にとって放出されなかった大きな薬滴は壁に当たって貯蔵器に戻る。」（１００２頁１３〜２０行）が記載されている。
▲２▼「Ｔｈｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ　Ｄｉｓｅａｓｅｓ」１４５（４），（１９８２年４月）　５４２〜５４６頁
　この刊行物は、「ライノウイルス感染に対する低投与ヒト白血球インターフェロンの予防効果」に関するもので、
「ＨｕＩＦＮ−αのエアゾール剤をネブライザーを使用してヒトに投与したこと、予備研究ではエアゾール化したＨｕＩＦＮ−αの平均粒子径は２μｍ以下である」旨（５４３頁右欄１〜４４行）、および
　「エアゾール剤を１時間吸入したヒトの血清サンプルでは、ＨｕＩＮＦ−αは５単位／ｍｌ未満であった。」（５４５頁左欄）が記載されている。
▲３▼「Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　４」（１９８４年）４４９〜４５９頁
　この刊行物は、「コットンラットのＶＳＶ誘発肺感染に対するエアゾル化再結合ＩＦＮの効能」に関するもので、
「エアゾール装置で投与される有効成分を含む粒子は、空力的質量中央値径（ＡＭＭＤ）が５μ未満の粒子が９５％を越え、平均ＡＭＭＤは約２μであること、およびこのようなエアゾール装置でインターフェロンがコットンラットに投与されたこと」（４５１頁２３〜３５行）、および
「インターフェロン又はインターフェロン誘発物質をエアゾル装置でラットの肺に投与すると、気道のウイルス疾患の治療に使用され得ること」（４５６頁〜４５７頁の考察の項）が記載されている。
▲４▼「呼吸」５（２），（１９８６年２月）１９７〜２０４頁
　この刊行物は、「定量噴霧式吸入器による吸入療法」に関するもので、
「エロゾル治療薬がその効果を発揮するためには、エロゾルが肺内へ沈着せねばならない。このエロゾルの肺内沈着には、多くの物理学的、生理学的因子が関与する。」（１９９頁右欄９〜１２行），「図２に示すごとく、深いゆっくりした呼吸を行った場合、肺胞に到達するのは１〜３μｍの粒子で、１５μｍ以上の粒子は末梢気管支に到達せず、上気道に沈着する。一方０．５〜１μｍの微少粒子は、肺胞に達してもそこに沈着するのはせいぜい５０％で、０．５μｍ以下では大部分が再び呼出されてしまう。」（２００頁右欄３〜８行），「はじめに目的とする薬物を微粒子粉砕機にて１〜５μｍの粒子に粉砕し、これを分散剤と共に液状フロンガス中に加え、分散機にて分散させ均一な懸濁液とする。懸濁系薬剤は、噴射されるとフロンガスは気化してなくなり、１〜５μｍの薬物粒子のみが残るため均一な粒子がえられ易い。」（１９８頁左欄１６〜２１行）が記載されている。
　【本件発明と引用刊行物との対比・判断】
　本件発明１及び本件発明２と上記各引用刊行物に記載の事項とを対比すると、引用刊行物には、新世代のペプチドおよびインターフェロンの肺吸収による投与は記載されているが、本件発明の必須の構成要件である「５〜７５ｋＤａの分子量を有する成長因子類の肺呼吸による投与」の点については、記載が無く、その示唆もない。
　そして、本件発明は、前記の構成を具備することにより、明細書記載の「本発明の肺内投与によって、筋肉内投与をしたときに受け入れ可能な治療学的容量と考えられるレベルの２倍以上の血液レベルが得られることを示した。」，「本発明の方法は、２８時間以上にわたり、ｈＧＨの全身的な治療学的有効量をはるかに上まわって投与することを可能にした。」という効果を奏するものと認められる。
　してみると、本件発明１及び本件発明２が上記引用刊行物１乃至４に記載のものと同一、または記載のものから容易に発明をすることができたものといえない。
　よって、本件訂正請求に係る発明１及び発明２は特許出願の際独立して特許を受けることができない発明とすることはできない。
（オ）結語
　以上のとおりであるから、上記訂正請求は、特許法１２０条の４第２項及び同条第３項で準用する第１２６条第２項乃至同条第４項の規定に適合するので、当該訂正を認める。
ＩＩＩ．特許異議の申立てについての判断
（ア）申立ての理由の概要
　申立人，竹田和子は、本件特許請求の範囲第１項〜第８項及び特許請求の範囲第９項〜第１７項に係る発明（以下、「発明１」及び「発明２」という）は、甲第１号証乃至甲第５号証に記載された発明と同一であるか、またはこれら発明に基づいて容易に発明をすることができたものであるから、特許法第２９条第１項第３号または特許法第２９条第２項の規定により特許を受けることができないものであるから、その特許を取り消すべきであると主張している。
　また、申立人，有賀三光は、本件発明１及び発明２は、甲第１号証乃至甲第３号証に記載された発明に基づいて容易に発明をすることができたものであるから、特許法第２９条第２項の規定により特許を受けることができないものであるから、その特許を取り消すべきであると主張している。
（イ）判断
　本件発明１及び本件発明２は、上記ＩＩ（エ）で示したように取消理由通知で引用した甲号証である刊行物に記載された発明と同一、またはそれらに記載された事項に基づいて当業者が容易に発明をすることができたものとすることはできない。
　また、取消理由通知に引用していない竹田和子提出の甲第３号証［Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ　Ａｇｅｎｔｓ　ａｎｄ　ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ，２６（４），７２９〜７３４（１９８４）］について検討する。
　甲第３号証は、「エアロゾル化インターフェロンの肺沈着とクリアランス」に関するもので、
　コリソンネブライザーを備えたエアゾール機でインターフェロンをマウスに投与したこと；生成したインターフェロンの粒子の平均は（ＡＭＭＤ）は２．３μｍであること；粒子サイズは０．６〜６．６μｍで、粒子の９０％以上はＡＭＭＤが５．０μｍ未満であることが７３０頁右欄１２〜５４行に記載されている。
　また、「結果は、本研究で使用した連続エアゾル治療系で製造されたインターフェロン粒子は、生物活性のままであり、エアゾル・ミスト及び試験されたマウスの肺から容易に検出できた。」（７２９頁６〜９行）
「外部投与インターフェロンの力価は徐々に減少し、エアゾル投与の終了後２４〜４８時間の間に消失した。」（７２９頁１０〜１２行）
「後者（γＩＦＮ）の活性は通常低く、エアゾル治療をやめた直後に試験された血清にのみ存在する。」（７３２頁右欄下から８〜６行）
「一方、エアゾル治療の中止後２４時間の試験マウスの肺に外来インターフェロンが存在し続けること（図１）は、生理学的濃度において、外来インターフェロンのクリアランスは早くないことを示す。」（７３３頁左欄２９〜３３行）が記載されている。
　本件発明１及び本件発明２とこの甲第３号証の記載とを対比すると、上記ＩＩ（エ）でも示した本件発明１及び本件発明２の構成要件である「５〜７５ｋＤａの分子量を有する成長因子類の投与」については甲第３号証には記載もなく、これを示唆するものもない。
　してみると、上記ＩＩ（エ）に示したと同様に、本件発明１及び本件発明２は、この甲第３号証および他の甲各号証に記載された事項に基づいて、当業者が容易に発明をすることができたものとすることはできない。
ＩＶ．むすび
　また、他に本件発明１および発明２の特許を取消すべき理由を発見しない。
　よって、結論のとおり決定する。
【異議決定日】
平成１１年７月２７日（１９９９．７．２７）
【訂正の要旨】
　登録第２５７３９５９号特許の明細書を訂正請求書に添付された訂正明細書のとおり、即ち、それぞれ下記のように訂正する。
▲１▼明細書の特許請求の範囲の必須要件項である第１項及び第９項を特許請求の範囲の減縮及び明瞭でない記載の釈明を目的として、次のように訂正する。
　ａ．第１項の「成長因子類及びサイトカイン類からなる群から選ばれるポリペプチド」を「５〜７５ｋＤａの分子量を有する成長因子類」に，「ポリペプチド」を「成長因子類」に訂正する。
　ｂ．第９項の「成長因子類及びサイトカイン類からなる群から選ばれるポリペプチド」を「５〜７５ｋＤａの分子量を有する成長因子類」に，「ポリペプチド」を「成長因子類」に，「第９項」を「第１１項」に訂正する。
▲２▼明細書の特許請求の範囲の実施態様項を必須要件項の訂正に整合させ、明瞭でない記載の釈明を目的として、次のように訂正する。
　ａ．第３項の「ポリペプチドがソマトロピン、ソマトレム、‥‥‥である第１項または第２項に記載の装置」を、
「（３）成長因子類が少なくともヒト成長ホルモンの分子量を有する第１項または第２項記載の装置。
　（４）成長因子類がヒト成長ホルモンである第１〜３項のいずれかに記載の装置。
　（５）成長因子類がｍｅｔ−ヒト成長ホルモンである第１〜４項のいずれかに記載の装置。」に訂正する。
　ｂ．第４項，第５項，第８項，１０項の「ポリペプチド」を「成長因子類」に訂正し、それぞれの項番号を「第６項」，「第７項」，「第１０項」，「第１２項」に訂正し、それぞれの引用する項番号を「第１項〜第５項」，「第１項〜第６項」，「第１項〜第９項」，「第１１項」に訂正する。
　ｃ．第１３項を削除する。
　ｄ．第６項，第７項，第１１項，第１２項，第１５項，第１６項，第１７項の各項番号をそれぞれ「第８項」「第９項」「第１３項」「第１４項」「第１６項」「第１７項」「第１８項」に訂正し、それぞれの引用する項番号を、「第１項〜第７項」，「第８項」，「第１１項または第１２項」，「第１１項〜第１３項」，「第１５項」，「第１１項〜第１６項」，「第１１項〜第１７項」に訂正する。
　ｅ．第１４項の「および／またはサイトカイン」を削除し、項番号を「第１５項」に訂正し、引用する項番号を「第１１項〜第１４項」に訂正する。
（５４）【発明の名称】
ポリペプチド成長因子類およびサイトカイン類の肺内投与
（５７）【特許請求の範囲】
　（１）
５〜７５ｋＤａの分子量を有する
　
成長因子類
成長因子類
成長因子類
成長因子類
　（２）４μｍ以上の平均直径を有する粒子の割合が２５％未満である第（１）項記載の装置。
　（３）
成長因子類が少なくともヒト成長ホルモンの分子量を有する第（１）項または第（２）項記載の装置。
　（４）
成長因子類がヒト成長ホルモンである第（１）〜（３）項のいずれかに記載の装置。
　（５）
成長因子類がｍｅｔ−ヒト成長ホルモンである第（１）〜（４）項のいずれかに記載の装置。
　（
６
成長因子類
５
　（
７
成長因子類
５
　（
８
７
　（
９
８
　（
１０
成長因子類
９
　（
１１
５〜７５ｋＤａの分子量を有する
　
成長因子類
成長因子類
　（
１２
成長因子類
１１
　（
１３
１１
または第（１２）項
　（
１４
１１
１３
　（
１５
　
１１
１４
　（
１６
１５
　（
１７
１１
１６
　（
１８
１１
１７
【発明の詳細な説明】
　
産業上の利用分野
　本発明は肺からの吸収によるタンパク質投与に関する。さらに詳しくは、本発明は、肺組織に刺激や損傷を与えることなく、持続した治療学的用量の成長ホルモン類またはサイトカイン類（ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ）を血流に投与することに関する。
　
先行技術
　エーロゾルなどの粒子から、肺吸収によって薬物を投与する方法は、薬物の標的組織が肺である場合の局所投与のいくつかにおいて、かなりの成功を収めている（最も顕著なものは、喘息の治療におけるβ−アドレナリン作動性拮抗体類の使用である）。この態様で投与される他の薬物には、コルチコステロイド類およびクロモリンナトリウムが含まれる。一方、この経路による、全身的に作用するアミノグリコシド抗生物質類、抗ウィルス薬類および抗ガン薬類の投与は、その一部で成功を収めているにすぎない。ある場合には、血流への放出不足は、薬物が肺胞皮膜を通過することができないことに起因していた。またある場合には、薬物が刺激性であり、気管支収縮性であることがわかった［ジュリアーノ（Ｊｕｌｉａｎｏ，Ｐｈａｒｍ．Ｔｈｅｒ．，
２４
　同様に、タンパク質およびポリペプチドの肺吸収について広範囲な研究が行なわれた。これら分子の、大きさ、脂肪との非親和性、および多分その他のあまり特徴付けが為されていない性質が、それらの血流中への吸収に対する実質的な障壁を生み出しているものと考えられるが［ジュリアーノ（上記）；イーガン（Ｅｇａｎ，Ａｍ．Ｒｅｖ．Ｒｅｓｐ．Ｄｉｓ．，
１２７
３８
　ドミンゲッツ等［Ｄｏｍｉｎｇｕｅｚ　ｅｔ　ａｌ．，Ｌａｂ．Ｉｎｖｅｓｔ．，
１６
８６
５３
１８
１５７
　ベンシュ等［Ｂｅｎｓｃｈ　ｅｔ　ａｌ．，Ｙａｌｅ　Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．，
４３
　コーナー等［Ｃｏｎｎｅｒ　ｅｔ　ａｌ．，Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ　ａｎｄ　Ａｐｐｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ，
５
　アルブミン、γグロブリンおよびＨＲＰ以外の他のポリペプチドプローブ類が肺吸収の研究に用いられていた。これらには、ミクロペルオキシダーゼ、ウマチトクロム
ｃ
３７
１３２
３５
　米国特許Ｎｏ．４，４７６，１１６は、タンパク質およびキレート化試薬を含有する鼻噴霧剤の鼻腔吸収によってヒト成長ホルモンまたはインターフェロンを投与することを提案している。５μｍあるいはそれ以上の粒子は鼻咽頭領域で除かれるので［ジュリアーノ等（Ｊｕｌｉａｎｏ　ｅｔ　ａｌ．）］、有効な鼻噴霧剤は少なくともこの平均直径のエーロゾル粒子を含んでいると結論されなければならない。同様に、ＥＰ１２２０３６は、成長ホルモンあるいはインターフェロンの鼻内投与用の粉体組成物について開示している（ここでは、粒子の少なくとも９０％が１０〜２５０ミクロンの有効直径を有している）。この最小直径は粒子が肺に入るのを避ける目的で決められた。
　成長ホルモン類あるいはインターフェロン類の鼻内投与は、投与量が変動すること、鼻刺激などの副作用、ポリペプチドの血流中への透過性が極めて乏しいこと、および通常の鼻内微生物によるポリペプチドの分解のゆえに望ましくない。もちろん、これらのポリペプチド類は注射または注入によって普通に投与されていたが、この投与経路には明らかな欠点が存在し、その最も顕著なものは、幼児において規則的な成長ホルモン注射が必要とされること、または、悪性疾患の治療に用いられるインターフェロンの場合、患者にカテーテル挿入を行うための健全な血管系がないことであった。従って、これらのタンパク質を投与するための改良法が必要とされている。
　
発明の目的および構成
　本発明の目的は、ある種のポリペプチド類を注射あるいは注入する必要性を不要なものにすることである。
　また、肺組織から持続的に放出させることによってある種のポリペプチド類の投与回数を減少させることも本発明の目的である。
　さらに、治療学的に重要なポリペプチドの分解が起こることなく、または気管支、上皮あるいはその他の肺組織を刺激することにつながる薬剤を使用することなく、治療学的有効量のある種のポリペプチド類を投与することも本発明の目的である。
　これらのおよびその他の本発明の目的は本明細書全体から明らかとなる。
　上記の目的は、成長因子類およびサイトカイン類からなる群から選ばれるポリペプチドの治療学的用量を患者の血流に投与するための方法であって、治療学的有効量のポリペプチドを患者の肺に投与することからなる方法を提供することによって達成される。この方法を達成するため、ポリペプチドを蓄えておくための貯蔵手段；該貯蔵手段中に入れられた治療学的投与形態のポリペプチド；該ポリペプチドを含有する粒子懸濁物をガス中で生成させるための分散手段（ここで、該粒子の大きさは、吸入によって患者の肺の肺胞中に入り込むのが可能である程度に十分小さい）：ポリペプチドを該分散手段に移送するための手段；および粒子懸濁物を患者の肺の肺胞に投与するための手段からなる装置が提供される。
　治療学的用量のこれら特定のポリペプチド類を投与することに関する利点は、それらが、肺に対して病的に作用することなく、またはエーテル、酸化亜鉛、抗原類、ヒスタミン、メタコリン、水溶性かつ両親媒性のステロイド類、胆汁酸塩類（グリココール酸ナトリウムなど）、セルロースの低級アルキルエーテル類、キレート化試薬類、または吸水性の水不溶性物質（ポリビニルピロリドン、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリレートなど）などの吸収促進剤あるいは上皮刺激剤を必要とすることなく、肺吸収によって全身的に投与されることである。
　
図面の説明
　第１図は、ポリペプチドエーロゾルの肺内投与用装置を示す図である。
　第２図は、麻酔したヒヒにメチオニル・ヒト成長ホルモンの微細エーロゾルを肺内投与した後の血清ｈＧＨ濃度を示す図である。それぞれ６０ｍｇの２回の投与がＤ１およびＤ２で示されている。それぞれの投与は、「Ｄ１の終わり」および「Ｄ２の終わり」で示したところで終わっている。血清中の成長ホルモン濃度は、それぞれの投与の後、急速かつ付加的に増加した。
　第３図および第４図は、麻酔したラットにヒトγインターフェロンおよび腫瘍壊死因子−αを気管内注入したのちに測定したこれら薬物の血清中濃度を示すものである。気管内への投与量は各グラフの下に示されている。
　
詳細な説明
　肺内吸収によって投与されるポリペプチド類は成長因子類およびサイトカイン類である。成長因子類あるいはホルモン類は、標的細胞の増殖あるいは拡大を誘起するポリペプチド類である。このような因子類あるいはホルモン類（本明細書中では、簡単にするため単にホルモン類と呼ぶこともある）は標的細胞の代謝あるいは呼吸速度を付随的に増加させることもあるが、本明細書では、細胞の有糸分裂あるいは拡大が増加しない場合、このポリペプチドを成長ホルモンとはみなさない。成長ホルモン類の大部分は、約５〜７５ｋＤの分子量および約４〜８の範囲のｐＩを示す。具体的な例には、成長ホルモン［ソマトロピン（ｓｏｍａｔｒｏｐｉｎ）］、チモシン、ソマトメジン類（ＩＧＦ‐１あるいはＩＧＦ‐２など）、形質転換成長因子‐αおよびβ、神経成長因子、血小板由来の成長因子、卵巣成長因子、線維芽細胞成長因子、筋芽細胞成長因子、表皮成長因子などが含まれるが、インスリンは含まれない。これらの物質は当分野でよく知られており、多くの場合、クローン化され、組換え生物中で発現されている。本発明で用いるに好ましい成長ホルモンは、ソマトトロピンまたはそのＮ−末端メチオニン化変異体［ソマトレム（ｓｏｍａｔｒｅｍ）］である（後記）。
　サイトカイン類は、免疫系を構成している細胞（たとえば、Ｂ‐細胞およびＴ‐細胞などのリンパ細胞であり、ヘルパーおよびサプレッサーＴ‐細胞、マクロファージ、および好中球を含む）のポリペプチド分泌産物である。サイトカイン類は、他の免疫細胞の活性あるいは分泌産物の変化を誘導するエフェクターとして、または標的の非免疫細胞の変化を誘導する直接作用性のタンパク質として働く。さらに、多くのサイトカイン類（たとえば、チモシンあるいはγインターフェロンなど）は、分化した免疫標的細胞の増殖を誘導する成長ホルモンとみなされることもある。通常、サイトカイン類は約５〜３０ｋＤの分子量および約４〜８のｐＩを有している。サイトカイン類の例には、インターロイキン類、腫瘍壊死因子類、インターフェロン類および免疫サプレッサー因子類が含まれる。本発明で用いるに好ましいサイトカイン類は、腫瘍壊死因子‐αおよびβ、ならびにインターフェロン‐α、βおよびγである。
　成長ホルモンおよびサイトカインなる語句には、天然分子の、アミノ酸配列変異体、グリコシル化変異体およびその他の変異体が含まれているものと考えるべきである。これらの変異体は、天然分子の通常の生物学的活性が増強されていることもあるし、また逆に天然分子に対して拮抗するように作用することもある。さらに、酸化に対する安定性、延長された生物学的半減期などの改良された性質について変異体を選択することもある。既知の、あるいは将来開発されるであろうこのような変異体は、本発明で用いるのに適している。たとえば、Ｎ‐末端メチオニンヒト成長ホルモン（ソマトレム）は、組換え細胞培養物において調製される一般的な変異体の例である（天然物には見い出されないメチオニン残基が正常なＮ‐末端アミノ酸残基に共有結合している）。
　本発明に従って投与されるポリペプチド類は、始めに粒子状に分散した形態にされる。これは、ポリペプチドを含有する水性エーロゾルまたは固体粒子を調製することによって行なわれる。普通には、所望のポリペプチドならびに通常の薬学的に許容しうる担体および安定剤からなる水溶液または水性懸濁液を得、水性エーロゾルを調製する。この担体および安定剤は各ポリペプチドの要求に依存して変わるであろうが、代表的には、非イオン系界面活性剤類［ツイーン類（Ｔｗｅｅｎｓ）、プルロニック類（Ｐｌｕｒｏｎｉｃｓ）あるいはポリエチレングリコール］、無害のタンパク質類（血清アルブミンなど）、ソルビタンエステル類、オレイン酸、レシチン、アミノ酸類（グリシンなど）、緩衝液類、塩類、糖類または糖アルコール類が含まれる。また、この製剤はムコ分解剤（米国特許Ｎｏ．４，１３２，８０３に記載されているような）ならびに気管支拡張剤を含有することもできる。この製剤は滅菌されるであろうし、また、通常エーロゾルは等張溶液から調製されるであろう。この粒子は、所望により通常の肺表面活性剤タンパク質を含有することもある。
　本発明の範囲内には、水性または非水性［たとえば、フッ化炭素プロペラント（ｐｒｏｐｅｌｌａｎｔ）］懸濁物中の粒子のエーロゾルを生成させることも含まれる。このような粒子には、たとえば分子内集合体のポリペプチド類またはリポソーム性あるいはマイクロカプセルに捕捉されたポリペプチド類が含まれる。このエーロゾルは肺刺激物質、すなわち急性気管支収縮、咳、肺浮腫または組織破壊を引き起こす物質を含まないものであるべきである。しかし、非刺激性の吸収促進剤は本発明で用いるのに適している。
　エーロゾルの調製に音波分散器を用いるのが好ましい。この音波分散器はポリペプチド類が剪断にさらされるのを最小にする（剪断は分子を分解に導く）。装置として適しているのはバード・マイクロネブライザー（Ｂｉｒｄ　Ｍｉｃｒｏｎｅｂｕｌｉｚｅｒ）である。しかし、投与されるタンパク質に適合し、所望の大きさの粒子を放出することができるものであるなら、他のアトマイズ化あるいは分散システムまたは気管内投与システム、たとえば米国特許Ｎｏ．３，９１５，１６５、エーロゾル発生吸入器（ＥＰ１６６４７６）、ジェット分散器［ニューマン等（Ｎｅｗｍａｎ　ｅｔ　ａｌ．，Ｔｈｏｒａｘ，
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　粒状エーロゾル懸濁物は、実質的にはポリペプチド類を含有する微細な乾燥粉末である。これらは多数の常法によって調製される。その最も簡単な方法は、ポリペプチドを微細化し（たとえば、結晶あるいは凍結乾燥ケーキなど）、この粒子を乾燥フッ化炭素プロペラント中に懸濁することである。このような配合においては、ポリペプチド類は疎水性のプロペラント（加圧されている装置から懸濁物を空気中に放出させた後に蒸発する）に溶解せず、ポリペプチド類はフッ化炭素中に懸濁する。別の態様では、ポリペプチド類はプロペラントとは別の区画に蓄えられる。プロペラントの放出により、予め決められた量がこの貯蔵区画から引き出される。この方法で薬物を投与するのに用いる装置は、所定量吸入器（ＭＤＩ）として知られている［バイロン（Ｐ．Ｒ．Ｂｙｒｏｎ，Ｄｒｕｇ　Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ａｎｄ　Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ　Ｐｈａｒｍａｃｙ，
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　エーロゾルまたは粒子の大きさは、通常、約０．５〜４μｍ、好ましくは約０．５〜１μｍの範囲であろう。より小さい粒子は、沈積されないで発散してしまう傾向にあるので望ましくない。より大きい粒子は、その大部分が肺胞のレベルで沈積されずに鼻咽頭あるいは口腔内での衝突によって除かれてしまうので好ましくない［バイロン（Ｂｙｒｏｎ，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．，
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　この粒子は実効電荷を有していてもよいし、有していなくてもよい。実効電荷が存在すると、粒子が静電気によって互いに反発するので、空気中での粒子の集合を最小にするのに望ましい。等電点以外のｐＨ（たとえば、等電点のどちらかの側にｐＨを約０．５〜２ずらすのが普通である）でポリペプチド溶液から水を除去することによって荷電粒子を調製する。一方、等電点以外のｐＨでのポリペプチドの脱水はタンパク質の沈澱あるいは変性につながることもあるので、このようなｐＨを用いるのが望ましいかどうかは投与しようとするポリペプチドの知られている性質に依存するであろう。
　本発明のポリペプチド吸入投与に適したシステムを第１図で説明する。圧縮空気の供給源
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　作動時には、プログラム化されたコントロール装置
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　以下に実施例を挙げて本発明をさらに詳しく説明するが、これらは本発明を限定しようとするものではない。
　
実施例１
　体重２４ｋｇの成体ヒヒをペントバルビタールの静脈内投与で麻酔し、気管に挿管し、そして投与するまで、および投与中は、普通に呼吸させた。バード・マーク７（Ｂｉｒｄ　Ｍａｒｋ）呼吸器と接続したバード・マイクロネブライザーに、マンニトール／リン酸緩衝液中の１２ｍｇ／ｍｌプロトロピン　［Ｐｒｏｔｒｏｐｉｎ　；ｍｅｔ−ｈＧＨ（ソマトレム）のブランド名］溶液を５〜１０ｍｌ入れた。次いで、このマイクロネブライザーを、２２ｃｍＨ２Ｏの圧力、１．８ｍｇ／ｈＧＨ／分の速度で３０分間作動させ、動物の換気と投与を同時に行った。この圧力においては、動物はほぼ正常な吸気量で換気した。この動物を、それぞれの換気呼吸ののち普通に呼気させ、投与のためにあおむけにした。第１の投与期間が経過した後、２０分間動物を普通に呼吸させ、次いで、第１の投与と同様にして第２の投与を行った。第１の投与の開始時間、およびそれ以後は第２図中のデータをプロットした点で示される時間に血液血漿試料を採取した。最後のペントバルビタール注射の８時間後にヒヒは麻酔から完全に覚醒した。これらの血清でのｍｅｔ−ｈＧＨの放射線免疫検定は、本発明の肺内投与によって、筋肉内投与したときに受け入れ可能な治療学的用量と考えられるレベルの２倍以上の血液レベルが得られることを示した。また、本実施例で用いられる放射線免疫検定は正常なヒヒ成長ホルモンとも交差反応するであろうから、投与開始の２８時間後に検出されるｈＧＨの幾分かは、ヒヒ成長ホルモンにおける生物学的リズムまたはストレス誘起性の増加を示していると考えられる［おそらくはアカゲザルでのレベル（１０ｎｇ／ｍｌ）と同程度］。霊長類で検出される正常時のＧＨレベルは１０〜２０μｑ／ｍｌの範囲内であるので、本発明の方法は、２８時間以上にわたり、ｈＧＨの全身的な治療学的有効量をはるかに上まわって投与することを可能にした。このことは、肺内吸入によっては長期間の薬物投与（＞１２時間）を達成することができないというのが一般的な見解（バイロン、上記）であるので特に驚くべきことであった。
　
実施例２
　一群の成体ラットを麻酔し、各動物の気管に挿管した。ヒト組換えγインターフェロンおよびヒト組換え腫瘍壊死因子の溶液を、それぞれ３ｍｇ／ｋｇおよび３７８ｍｃｇ／ｋｇ量が投与されるまで被験動物の気管に注入した。第３図および第４図に示した時間に各被験動物から血清試料を採取し、それぞれのポリペプチドについて検定を行った。第３図および第４図に示されているように、これらの結果は、本方法がこれら２種類のサイトカイン類投与の効果的なシステムであることを明確に示すものである。
【図面の簡単な説明】
　第１図は、本発明に係る肺内投与用装置の模式図であり、第２図は、麻酔したヒヒにメチオニル・ヒト成長ホルモンの微細エーロゾルを肺内投与した後の血清ｈＧＨ濃度を示すグラフであり、第３図および第４図は、それぞれヒトγインターフェロンおよび腫瘍壊死因子−αを麻酔したラットに気管内注入した後の、これら薬物の血清濃度を示すグラフである。１‥‥圧縮空気の供給源、４‥‥分散器、７‥‥毛細管、８‥‥貯蔵器、１２‥‥マウスピース。