(57)【要約】  ＨＩＶ汚染の予防、ＡＩＤＳを含むＨＩＶによって引き起こされる疾患又はＨＩＶに関連する疾患の予防及び治療のための医薬は、ＨＩＶと相互作用するか又はＨＩＶ汚染に関連して含有量及び機能活性の少なくともいずれかが変化する免疫系のタンパク質又はペプチドに対する活性化増強型抗体を含有する。一方、ＨＩＶ汚染の予防、ＡＩＤＳを含むＨＩＶによって引き起こされる疾患又はＨＩＶに関連する疾患の予防及び治療の方法では、抗原、即ち、ＨＩＶと相互作用するか又はＨＩＶ汚染に関連して含有量及び機能活性の少なくともいずれかが変化する免疫系のタンパク質又はペプチドに対する活性化増強型抗体が用いられる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＨＩＶ汚染の予防、ＡＩＤＳを含むＨＩＶによって引き起こされる疾患又はＨＩＶに関連する疾患の予防及び治療のための医薬であって、ＨＩＶと相互作用するか又はＨＩＶ汚染に起因して、含有量及び機能活性の少なくともいずれかが変化する免疫系のタンパク質又はペプチドに対する活性化増強型抗体を含むことを特徴とする医薬。
【請求項２】
可溶化抗原に対する活性化増強型抗体が用いられる請求項１に記載の医薬。
【請求項３】
可溶化抗原としてγインターフェロンを除く抗原サイトカインが用いられる請求項２に記載の医薬。
【請求項４】
免疫系の細胞の外膜に結合している抗原に対する活性化増強型抗体が用いられる請求項１に記載の医薬。
【請求項５】
免疫系の細胞の外膜に結合している抗原として免疫コンピテント細胞が用いられる請求項４に記載の医薬。
【請求項６】
免疫系の細胞の外膜に結合している抗原としてＴリンパ球のＣＤ４分子を除く分化抗原群が用いられる請求項４に記載の医薬。
【請求項７】
可溶化抗原に対する活性化増強型抗体又は免疫系の細胞の外膜に結合している抗原に対する活性化増強型抗体が、外部からの機械的作用（各希釈後の垂直方向の振盪）と併せて水又は水性アルコール溶媒で抗体のマトリックス（最初の）溶液を多数回連続希釈するプロセスによって活性が調整される活性化増強型の水溶液又は水性アルコール溶液として用いられる請求項２又は４に記載の医薬。
【請求項８】
可溶化抗原に対する活性化増強型抗体又は免疫系の細胞の外膜に結合している抗原に対する活性化増強型抗体の水溶液又は水性アルコール溶液の混合物を染み込ませた技術的に必要な量の中性担体と、薬学的に許容される添加剤とを含有する医薬組成物の固体剤形として製造される請求項２又は４に記載の医薬。
【請求項９】
可溶化抗原又は免疫系の細胞の外膜に結合している抗原に対する活性化増強型抗体の水溶液又は水性アルコール溶液が、外部からの機械的作用（各希釈後の垂直方向の振盪）と併せて抗体のマトリックス（最初の）溶液を多数回連続希釈することによって製造され、前記マトリックス（最初の）溶液の濃度が０．５ｍｇ／ｍＬ〜５．０ｍｇ／ｍＬである請求項２又は４に記載の医薬。
【請求項１０】
活性化増強型抗体が、ホメオパシー技術による様々な、主に１００倍単位の希釈物の混合物として使用される請求項２又は４に記載の医薬。
【請求項１１】
薬学的に許容される添加剤が、ラクトース、微結晶セルロース、及びステアリン酸マグネシウムを含む請求項８に記載の医薬。
【請求項１２】
ＨＩＶ汚染の予防、ＡＩＤＳを含むＨＩＶによって引き起こされる疾患又はＨＩＶに関連する疾患の予防及び治療の方法であって、ＨＩＶと相互作用するか又はＨＩＶ汚染に関連して含有量及び機能活性の少なくともいずれかが変化する免疫系のタンパク質又はペプチドである抗原に対する活性化増強型抗体を特徴とする方法。
【請求項１３】
可溶化抗原に対する活性化増強型抗体又は免疫系の細胞の外膜に結合している抗原に対する活性化増強型抗体が、外部からの機械的作用（各希釈後の垂直方向の振盪）と併せて水又は水性アルコール溶媒で抗体のマトリックス（最初の）溶液を多数回希釈するプロセスによって活性が調整される活性化増強型の水溶液又は水性アルコール溶液として用いられる請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
可溶化抗原又は免疫系の細胞の外膜に結合している抗原に対する活性化増強型抗体の水溶液又は水性アルコール溶液が、外部からの機械的作用（各希釈後の垂直方向の振盪）と併せて抗体のマトリックス（最初の）溶液を多数回連続希釈することによって製造され、前記マトリックス（最初の）溶液の濃度が０．５ｍｇ／ｍＬ〜５．０ｍｇ／ｍＬである請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
可溶化抗原に対する活性化増強型抗体が用いられる請求項１２に記載の方法。
【請求項１６】
可溶化抗原としてγインターフェロンを除くサイトカインが用いられる請求項１２に記載の方法。
【請求項１７】
免疫系の細胞の外膜に結合している抗原に対する活性化増強型抗体が用いられる請求項１２に記載の方法。
【請求項１８】
免疫系の細胞の外膜に結合している抗原として免疫コンピテント細胞が用いられる請求項１２に記載の方法。
【請求項１９】
免疫系の細胞の外膜に結合している抗原としてＴリンパ球のＣＤ４分子を除く分化抗原群が用いられる請求項１２に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、医学分野に属し、有効なＨＩＶ汚染の予防、ＡＩＤＳを含むＨＩＶによって引き起こされる疾患及びＨＩＶに関連する疾患の予防及び治療のために用いることができる。
【背景技術】
【０００２】
先行技術には、非常に低用量の抗インターフェロン抗体の活性化型に基づくウイルス性疾患を含む感染性疾患を治療するための医薬について記載されている（特許文献１）。しかし、この医薬は、ＨＩＶ汚染の予防にも、ＡＩＤＳを含む広範囲に亘るＨＩＶによって引き起こされる疾患又はＨＩＶに関連する疾患の予防及び治療にも有効ではない場合がある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】露国特許第２１９２８８８号明細書
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明は、重度の副作用なしに、ＨＩＶ汚染の有効な予防、並びにＨＩＶ陽性被験体における感染及び侵襲、悪性腫瘍、並びにＡＩＤＳを含むＨＩＶによって引き起こされる疾患及びＨＩＶに関連する疾患の予防及び有効な治療を可能にする複合医薬の開発に関する。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
この問題の解決策は、本発明に係るＨＩＶ汚染の予防、並びにＡＩＤＳを含むＨＩＶによって引き起こされる疾患及びＨＩＶに関連する疾患の予防及び治療のための医薬が、抗原、即ち、ＨＩＶと反応するか又はＨＩＶの存在下で含有量若しくは機能活性が変化する免疫系のタンパク質若しくはペプチド、又は主に免疫系によって産生されるタンパク質若しくはペプチドに対する活性化増強型抗体を含有するという事実によって保証される。
【０００６】
更に、主に可溶化抗原（又は可溶性抗原、即ち、免疫細胞の外膜に結合していない抗原）に対する活性化増強型抗体を用いてよい。
【０００７】
可溶性抗原として（γインターフェロンを除く）サイトカインを用いてよい。
【０００８】
その他、主に免疫細胞の外膜に結合している抗原に対する活性化増強型抗体を用いてもよい。
【０００９】
更に、免疫コンピテント細胞受容体が、免疫細胞の外膜に結合している抗原として用いられる。
【００１０】
更に、（Ｔリンパ球のＣＤ４分子を除く）分化抗原群を免疫細胞の外膜に結合している抗原として用いてもよい。
【００１１】
可溶化抗原に対する活性化増強型抗体又は免疫細胞の外膜に結合している抗原に対する活性化増強型抗体は、活性化増強水溶液又は水性アルコール溶液の形態で用いられ、その活性は、外部からの機械的衝撃（各希釈後の垂直方向の振盪）と併せて抗体の原液（最初の溶液）を水又は水性アルコール溶媒で多数回連続希釈するプロセスに基づいている。
【００１２】
更に、請求される医薬は、可溶化抗原に対する活性化増強型抗体又は免疫細胞の外膜に結合している抗原に対する活性化増強型抗体の水溶液及び水アルコール溶液の混合物を染み込ませた技術的に必要な（有効な）量の中性ビヒクルと、例えば、ラクトース、微結晶セルロース、及びステアリン酸マグネシウムを含む薬学的に許容される賦形剤とを含有する医薬組成物として固体剤形で設計してよい。
【００１３】
可溶化抗原又は免疫細胞の外膜に結合している抗原に対する活性化増強型抗体の水溶液及び水アルコール溶液は、外部からの機械的衝撃（各希釈後の垂直方向の振盪）と併せて抗体の原液（最初の溶液）を多数回連続希釈することによって得ることができる。原液の濃度は、０．５ｍｇ／ｍＬ〜５．０ｍｇ／ｍＬである。
【００１４】
活性化増強型抗体は、ホメオパシー技術による様々な、主に１００倍単位の希釈物の混合物の形態で用いることができる。
【００１５】
また、この問題の解決策は、ＨＩＶ汚染の予防、並びにＡＩＤＳを含むＨＩＶによって引き起こされる疾患又はＨＩＶに関連する疾患の予防及び治療の方法において、ＨＩＶと反応するか又はＨＩＶ汚染によって含有量若しくは機能活性が変化する抗原（免疫系のタンパク質若しくはペプチド、又は主に免疫系によって産生されるタンパク質若しくはペプチド）に対する活性化増強型抗体が本発明で用いられるという事実によって保証される。
【００１６】
可溶化抗原に対する活性化増強型抗体又は免疫細胞の外膜に結合している抗原に対する活性化増強型抗体は、各成分の活性化増強水溶液又は水性アルコール溶液の形態で用いられ、前記成分の活性は、外部からの機械的衝撃（各希釈後の垂直方向の振盪）と併せて抗体の原液（最初の溶液）を水又は水性アルコール溶媒で多数回希釈するプロセスに基づいている。
【００１７】
可溶化抗原又は免疫細胞の外膜に結合している抗原に対する活性化増強型抗体の水溶液及び水性アルコール溶液は、主に、外部からの機械的衝撃（各希釈後の垂直方向の振盪）と併せて抗体の原液（最初の溶液）を多数回連続希釈することによって得られる。原液の濃度は、０．５ｍｇ／ｍＬ〜５．０ｍｇ／ｍＬである。
【００１８】
本発明によれば、活性化増強型は、ＨＩＶ汚染の予防、並びにＡＩＤＳを含むＨＩＶによって引き起こされる疾患又はＨＩＶに関連する疾患の予防及び治療の薬理学的モデル及び／又は臨床的方法において活性のある、ホメオパシーポテンタイゼーションの技術に従って外部からの機械的衝撃（各希釈後の垂直方向の振盪）と併せて抗体の原液（最初の溶液）を多数回連続希釈することによって調製される抗体の形態である。
【００１９】
提唱されている可溶化抗原（例えば、腫瘍壊死因子α又はヒトαインターフェロン）又は免疫細胞の外膜に結合している抗原（例えば、ＣＤ８受容体）に対する活性化増強型抗体の使用は、ＨＩＶ汚染の予防、並びにＡＩＤＳを含むＨＩＶによって引き起こされる疾患又はＨＩＶに関連する疾患の予防及び治療においてより高い医薬効果として現れる予想外の治療効果をもたらす。
【００２０】
請求される医薬は、細胞及びその細胞内複製物へのヒト免疫不全ウイルスの侵入を防ぐというＨＩＶに対する高い予防効果を特徴とすることが実験的に示されているので、ＨＩＶ感染の二次予防を含む慢性的に経過する傾向のあるウイルス性疾患の有効な治療及び予防のために用いることができる。
【００２１】
請求される医薬は、逆転写酵素阻害剤（例えば、ジドブジン誘導体）等の複合剤を含む抗レトロウイルス剤と組み合わせて使用してもよく、それによって、低用量の抗レトロウイルス剤で恒常的に高い治療効果を得、且つ有害事象の発生率を低下させることができる。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
医薬は、主に、以下の通り調製される。
【００２３】
活性物質の活性化増強型を調製するために、モノクローナル抗体又は（主に）ポリクローナル抗体が用いられる。これらは、公知の技術、具体的には、例えば、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｍｅｔｈｏｄｓ，ｕｎｄｅｒ  ｔｈｅ  ｅｄｉｔｏｒｓｈｉｐ  ｏｆ  Ｇ．Ｆｒｉｍｅｌ，Ｍ．，‘Ｍｅｄｉｔｓｉｎａ’，１９８７，ｐ．９−３３［Ｒｕｓｓｉａｎ］；又は論文Ｌａｆｆｌｙ  Ｅ．，Ｓｏｄｏｙｅｒ  Ｒ．Ｈｕｍ．Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｄ  ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，３０  ｙｅａｒｓ  ａｆｔｅｒ．−２００５−Ｖｏｌ．１４．−Ｎ  １−２．Ｐ．３３−５５に記載されている技術を用いて得ることができる。
【００２４】
モノクローナル抗体は、例えば、ハイブリドーマ技術を用いて得られる。更に、プロセスの最初の段階は、ポリクローナル抗血清の調製について既に開発されている原理に基づく免疫化を含む。このプロセスの更なる段階は、同一の特異性を有する抗体のクローンを産生するハイブリドーマ細胞を得ることを含む。それらの単離は、ポリクローナル抗血清と同じ方法を用いて行われる。
【００２５】
ポリクローナル抗体は、動物の能動免疫化によって得ることができる。この目的のために、特別なスキームを用いて、本発明に係る所要の物質、即ち、抗原又はコンジュゲート抗原（ＨＩＶと反応するか又はＨＩＶ汚染によって、含有量及び機能活性の少なくともいずれかが変化する免疫系のタンパク質若しくはペプチド又は主に免疫系によって産生されるタンパク質若しくはペプチド）の一連の注入を動物に行う。この手順の結果として、活性化増強型を産生するために用いられる単一特異性の抗血清が得られる。必要に応じて、抗血清中に存在する抗体は、例えば、アフィニティークロマトグラフィー、塩析による分画、又はイオン交換クロマトグラフィーの方法を使用することによって精製される。
【００２６】
例えば、請求される医薬を作製するために、腫瘍壊死因子αに対するポリクローナル抗体を用いてよく、これは、更に活性化増強型を調製するための原液（最初の溶液）（濃度：０．５ｍｇ／ｍＬ〜５．０ｍｇ／ｍＬ）として用いられる。
【００２７】
請求される医薬を調製するためにポリクローナル抗体を用いることが好ましく、これらは、以下の通りウサギの免疫化を用いて得ることができる。
【００２８】
例えば、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）に対するポリクローナル抗体は、以下の配列を有するＴＮＦ−αの分子全体を使用して得ることができる。
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【００２９】
腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）に対するポリクローナル抗体を得るために、例えば、以下の配列から選択される腫瘍壊死因子のポリペプチド断片を使用することが可能である。
2013538195.tif 000003
【００３０】
血液試料を採取する７日間〜９日間前に、抗体のレベルを上昇させるために１回〜３回静脈内注射を行う。免疫化プロセス中、抗体の量を推定するために、ウサギから少量の血液プローブを回収する。大部分の抗原の注射に対する免疫応答は、最初の注射から４０日間後〜６０日間後にの最大レベルに達する。ウサギの免疫化の最初の周期の後、ウサギの健康を回復させるために３０日間おき、１回〜３回の静脈内注射を含む免疫化を繰り返す。抗血清を得るために、免疫化されたウサギから血液を採取して、容積５０ｍＬの遠心管に入れる。木べらを用いて、形成された血餅を遠心管の壁から除去し、遠心管の中心に形成される血餅にスティックを入れる。血液を冷蔵庫（温度は４℃である）に一晩入れる。次の日に、へらに付着した血餅を除去し、残りの液体を１３，０００ｇで１０分間遠心分離する。上清（沈渣の上方の液体）が、抗血清である。得られる抗血清は、黄色であるはずである。最終濃度が０．０２％になるまで２０％のＮａＮ３を加え、使用するまで−２０℃の温度で凍結した状態にて（又はＮａＮ３を添加せずに−７０℃の温度で）保管しなければならない。腫瘍壊死因子αに対する抗体の抗血清からの分離は、以下の通り行ってよい：
１．  ウサギの抗血清１０ｍＬを０．１５ＭのＮａＣｌで２倍希釈し、６．２６ｇのＮａ２ＳＯ４を加え、次いで混合し、４℃で１２時間〜１６時間インキュベートしなければならない。
２．  形成された沈渣を遠心分離によって除去し、リン酸緩衝液１０ｍＬで希釈し、次いで、同じ緩衝液に対して室温で一晩透析する。
３．  遠心分離によって沈渣を除去した後、リン酸緩衝液で平衡させたＤＥＡＥ−セルロースカラムに溶液を入れる。
４．  ２８０ｎｍにおける溶出液の光学濃度を測定することによって抗体画分を決定する。
【００３１】
カラムの不溶性マトリックスに付着している抗原（腫瘍壊死因子α）と腫瘍壊死因子αに対する抗体との結合を用いて、抗原の付着しているカラムにおいてアフィニティークロマトグラフィー法によって抗体を清浄化し、次いで、濃縮した塩類溶液によって抗体を溶出させる。
【００３２】
この方法によって得られる腫瘍壊死因子αに対するポリクローナル抗体の緩衝溶液（濃度：０．５ｍｇ／ｍＬ〜５．０ｍｇ／ｍＬ、好ましくは２．０ｍｇ／ｍＬ〜３．０ｍ／ｍＬ）が、活性化増強型抗体を更に調製するためのマトリックス（最初の）溶液として用いられる。
【００３３】
ヒトαインターフェロンに対するポリクローナル抗体は、上述の方法によって得られる。ウサギを免疫化するための免疫原（抗原）の役割は、アジュバント及び以下の配列のうちの１つのヒトαインターフェロンの分子全体によって表される：
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【００３４】
ウサギを免疫化するための免疫原（抗原）としてヒトαインターフェロンに対するポリクローナル抗体を得るために、アジュバント、及び例えば、ヒトαインターフェロンのポリペプチド断片のうちの１つの使用が可能である。
【００３５】
アジュバント及びウサギを免疫化するための免疫原（抗原）としての以下のアミノ酸配列を有するＣＤ８受容体の分子全体を用いて、上述の方法に従ってＣＤ８受容体に対するポリクローナル抗体が得られる：
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【００３６】
ウサギを免疫化するための免疫原（抗原）としてＣＤ８受容体に対するポリクローナル抗体を得るために、アジュバント及び例えば、以下の配列から選択されるＣＤ８受容体の断片のうちの１つを使用することが可能である：
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【００３７】
医薬を調製するために、抗体の一次マトリックス溶液の３種の水アルコール溶液を使用することが好ましく、前記溶液は、それぞれ１００１２倍、１００３０倍、及び１００２００倍に希釈されており、ホメオパシー技術によって調製される１００倍単位溶液Ｃ１２、Ｃ３０、及びＣ２００に相当する。請求される医薬を固体剤形で作製する場合、指示された成分の混合物を中性担体に浸透させる。
【００３８】
各成分の活性化増強型は、上述のマトリックス溶液から出発して、希釈される各溶液１部を中性溶液９部（１０倍単位希釈Ｄ）、又は９９部（１００倍単位希釈Ｃ）、又は９９９部（１，０００倍単位希釈Ｍ）に溶解させて均一に濃度低下させる方法を、作製された溶液それぞれを多数回垂直方向に振盪すること（ポテンタイゼーション又は「ダイナマイゼーション」）と併せて調製される。所要のポーテンシー、即ち、ホメオパシー法による多様な溶液が得られるまで、希釈のそれぞれには全て別々の容器を使用する（例えば、Ｗ．Ｓｈｗａｂｅ“Ｈｏｍｅｏｐａｔｈｉｃ  ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓ”，Ｍ．，１９６７，ｐ．１４−２９を参照されたい）。
【００３９】
また、濃度低下のプロセスにおける外部処理は、超音波、電磁気、又は他の物理的作用を使用することによって行ってもよい。
【００４０】
例えば、第１２の１００倍単位溶液（Ｃ１２）を調製するために、２．５ｍｇ／ｍＬの濃度の、例えば腫瘍壊死因子αに対する抗体の（一次）マトリックス溶液１部を、中性の水性又は水性アルコール溶媒９９部に溶解させ、次いで多数回（１０回以上）垂直方向に振盪して増強し、第１の１００倍単位溶液（Ｃ１）を得る。第１の１００倍単位溶液（Ｃ１）から第２の１００倍単位溶液（Ｃ２）を作製する。この手順を１１回繰り返して第１２の１００倍単位溶液（Ｃ１２）を作製する。このように、第１２の１００倍単位溶液（Ｃ１２）は、異なる容器内で、一次マトリックス溶液の第１の部分を１２回連続希釈することによって得られる溶液を表し、中性溶媒９９部中２．５ｍｇ／ｍＬの濃度のヒトγインターフェロンに対する抗体の溶液、即ち、マトリックス溶液を１００１２倍希釈することによって得られる溶液である。Ｃ３０及びＣ５０を得るために、関連する多様な希釈物を用いて同様の手順を実施する。
【００４１】
例えば、様々な、主に１００倍単位の溶液の混合物の形態の、腫瘍壊死因子αに対する活性化増強型抗体を使用する場合、各溶液（例えば、Ｃ１２、Ｃ３０、Ｃ５０）は、最後から３つ手前の希釈物が得られるまで（それぞれＣ９、Ｃ２７、及びＣ４７が得られるまで）上記技術を用いて別々に調製し、次いで各成分１部ずつを、混合物の組成に従って１つの容器に加え、所要量（例えば、１００倍単位溶液の場合は９７部）の溶媒と混合する。更に、得られた混合物を１：１００の比率で２回連続希釈し、得られる溶液を各溶解操作後に増強する。一方、１００倍単位溶液Ｃ１２、Ｃ３０、Ｃ５０の混合物に相当する、例えば、超低用量のヒトαインターフェロンに対する活性化増強型抗体は、マトリックス溶液を１００１２倍、１００３０倍、１００５０倍希釈することによって得られる。
【００４２】
有効性が実験的に示されているホメオパシー技術を使用して調製される、例えば、他の様々な１０倍単位及び／又は１００倍単位（Ｄ２０、Ｃ３０、Ｃ１００又はＣ１２、Ｃ３０、Ｃ２００等）溶液の混合物の形態で各成分を別々に使用することが可能である。
【００４３】
請求される医薬の固体剤形を作製するために、擬似流動沸騰層に注入される中性物質の顆粒に染み込むまで、沸騰層（例えば、Ｈｕｔｔｌｉｎ  ＧｍｂＨ製の「Ｈｕｔｔｌｉｎ  Ｐｉｌｏｔｌａｂ」型）の装置において湿式プロセスを実行する。前記物質は、主に抗体溶液１ｋｇに対してラクトース５ｋｇ又は１０ｋｇ（１：５〜１：１０）の比率のＣＤ４に対する活性化増強型抗体の水溶液又は水性アルコール溶液によって予め作製されている粒径５０μｍ〜５００μｍのラクトース（乳糖）であり、４０℃以下の温度にて加熱下で導かれる加熱空気の流れにおいて同時に乾燥される。上記技術に従って抗体で活性化増強されたラクトースの計算量（錠剤質量の１０％〜９１％）をミキサーに入れ、錠剤質量の３％〜１０％の量の活性化増強型抗体で湿潤しているラクトース及び錠剤質量の８４％以下の量の純粋なラクトースと混合する（医学的作用効果を低下させることなく技術的なプロセスの費用を縮小し、それを単純化及び加速するため）。次いで、錠剤質量の５％〜１０％の量の微結晶セルロース及び錠剤質量の１％の量のステアリン酸マグネシウムを添加する。得られる錠剤の塊を均一に混合し、（例えば、Ｋｏｒｓｃｈ−ＸＬ４００打錠機において）乾式プレスすることによって錠剤化する。錠剤化した後、ホメオパシー技術によって調製された１００倍単位溶液Ｃ１２、Ｃ３０及びＣ５０の混合物に相当する、１００１２倍、１００３０倍、１００５０倍希釈されたマトリックス溶液から調製される超低用量の腫瘍壊死因子αに対する活性化増強型抗体の全ての成分の水性アルコール溶液を染み込ませた３００ｍｇの錠剤を得る。
【００４４】
請求される医薬１錠〜２錠を１日２回〜４回好ましく使用することが推奨される。
【実施例】
【００４５】
実施例１
ＨＩＶ−１−ＬＡＩ株をインビトロで感染させたヒト末梢血単核細胞の培養物中におけるＨＩＶの複製阻害によって、請求される医薬の抗レトロウイルス作用を調べた。ＨＩＶの複製阻害の効果は、上清中における塩基性ヌクレオカプシドタンパク質ｒ２４の含有量によって推定した。
【００４６】
実験を実施するために、研究者らは、専門のバイオテクノロジー企業によって注文に従って調製された腫瘍壊死因子αに対するアフィニティー精製ウサギポリクローナル抗体を用い、これを、１００倍単位ホメオパシー溶液Ｃ１２、Ｃ３０、Ｃ５０の混合物（以下、ＴＮＦ−αに対するＥＳＤ  ＡＢ）に相当する、一次マトリックス溶液（濃度２．５ｍｇ／ｍＬ）を１００１２倍、１００３０倍、１００５０倍超希釈することによってホメオパシー技術を用いて作製される超低用量の腫瘍壊死因子αに対する抗体の水溶液の活性化増強型を調製するための基剤とした。複合調製物の抗ウイルス活性の推定は、ＨＩＶ−１−ＬＡＩ株をインビトロで感染させたヒト末梢血単核細胞を用いて行った。
【００４７】
ヒト末梢血単核細胞は、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅ密度勾配において遠心分離機を使用して健常な抗体陰性ドナーの血液から単離した。１ｍｃｇ／ｍＬのフィトヘマグルチニンＰ及び５ＭＥ／ｍＬの組換えヒトインターロイキンを用いて、細胞を３日間活性化した。
【００４８】
抗レトロウイルス活性を推定するために、１００ＴＣＩＤ５０（ＨＩＶ−１−ＬＡＩ株の接種材料５０μＬ）の用量でＨＩＶ−１−ＬＡＩ株を細胞に感染させる２４時間前又は１５分間後に、１００μＬの活性化ヒト末梢血単核細胞を含有するカップに調製物を入れた。カップに入れる前に、ＴＮＦ−αに対するＥＳＤ  ＡＢ（１２．５μＬ）又は１，０００ｎＭの用量のアジドチミジン（活性物質−ジドブジン）（比較調製物）を、最終容積が５０μＬになるまでＲＰＭＩ１６４０培地（ＤＩＦＣＯ）と混合した。
【００４９】
感染後７日目に細胞培養物の上清を回収した。調製物の効果は、ＨＩＶの複製阻害から規定し、これは、ＥＩＡ（Ｒｅｔｒｏｔｅｋ  Ｅｌｉｓａキット）の方法を用いて細胞の上清における塩基性ヌクレオカプシドタンパク質ｒ２４ＨＩＶの含有量によって推定した。
【００５０】
ＴＮＦ−αに対するＥＳＤ  ＡＢは、ＨＩＶ−１−ＬＡＩ株を細胞に感染させる２４時間前にカップに入れたとき、ＨＩＶの複製を９２±３％阻害し、１５分間後にカップに入れたとき、１３±１３％阻害した。１，０００ｎＭの用量のアジドチミジンは、ＨＩＶ−１−ＬＡＩ株を細胞に感染させる２４時間前及び１５分間後にカップに入れたとき、それぞれ、ＨＩＶの複製を９９±０％及び９９±１％阻害した。
【００５１】
したがって、インビトロにおける研究において、ＴＮＦ−αに対する活性化増強型のウサギポリクローナル抗体に基づいて、請求される医薬の高い抗レトロウイルス活性が示される。
【００５２】
注：ＴＣＩＤ５０は、組織培養由来の細胞の５０％が感染する用量である。
【００５３】
実施例２
ＨＩＶ−１−ＬＡＩ株をインビトロで感染させたヒト末梢血単核細胞の培養物中におけるＨＩＶの複製を阻害する請求される医薬の抗レトロウイルス作用について調べた。ＨＩＶの複製を阻害する効果は、上清中の塩基性ヌクレオカプシドタンパク質ｒ２４ＨＩＶの含有量によって推定した。
【００５４】
実験を実施するために、研究者らは、専門のバイオテクノロジー企業によって注文に従って調製されたＣＤ８に対するアフィニティー精製ウサギポリクローナル抗体を用い、これを、１００倍単位ホメオパシー溶液Ｃ１２、Ｃ３０、Ｃ５０の混合物（以下、ＣＤ８に対するＥＳＤ  ＡＢ）に相当する、一次マトリックス溶液（濃度２．５ｍｇ／ｍＬ）を１００１２倍、１００３０倍、１００５０倍超希釈することによってホメオパシー技術を用いて作製される超低用量のＣＤ８に対する抗体の水溶液の活性化増強型を調製するための基剤として用いた。
【００５５】
複合調製物の抗ウイルス活性の推定は、ＨＩＶ−１−ＬＡＩ株をインビトロで感染させたヒト末梢血単核細胞を用いて行った。ヒト末梢血単核細胞は、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅ密度勾配において遠心分離を用いて健常な抗体陰性ドナーの血液から単離した。１ｍｃｇ／ｍＬのフィトヘマグルチニンＰ及び５ＭＥ／ｍＬの組換えヒトインターロイキン−２を用いて、細胞を３日間活性化した。
【００５６】
抗レトロウイルス活性を推定するために、１００ＴＣＩＤ５０（ＨＩＶ−１−ＬＡＩ株の接種材料５０μＬ）の用量でＨＩＶ−１−ＬＡＩ株を細胞に感染させる２４時間前又は１５分間後に、１００μＬの活性化ヒト末梢血単核細胞を含有するカップに調製物を入れた。カップに入れる前に、ＣＤ８に対するＥＳＤ  ＡＢ（１２．５μＬ）又は１，０００ｎＭの用量のアジドチミジン（活性物質−ジドブジン）（比較調製物）を、最終容積が５０μＬになるまでＲＰＭＩ１６４０培地（ＤＩＦＣＯ）と混合した。
【００５７】
感染後７日目に細胞培養物の上清を回収した。調製物の効果は、ＨＩＶの複製の阻害から規定し、これは、ＥＩＡ（Ｒｅｔｒｏｔｅｋ  Ｅｌｉｓａキット）の方法を用いて細胞の上清における塩基性ヌクレオカプシドタンパク質ｒ２４ＨＩＶの含有量に基づいて推定した。
【００５８】
ＣＤ８に対するＥＳＤ  ＡＢは、ＨＩＶ−１−ＬＡＩ株を細胞に感染させる２４時間前にカップに入れたとき、ＨＩＶの複製を８７±１１％阻害し、１５分間後にカップに入れたとき、４０±４％阻害した。１，０００ｎＭの用量のアジドチミジンは、ＨＩＶ−１−ＬＡＩ株を細胞に感染させる２４時間前及び１５分間後にカップに入れたとき、それぞれ、９９±０％及び９９±１％ＨＩＶの複製を阻害した。
【００５９】
したがって、インビトロにおける研究において、ＣＤ８に対する超低用量のウサギポリクローナル抗体の高い抗レトロウイルス活性が示される。
【００６０】
注：ＴＣＩＤ５０は、培養組織の細胞の５０％が感染する用量である。
【００６１】
実施例３
１００倍単位ホメオパシー希釈物Ｃ１２、Ｃ３０、Ｃ５０の混合物（ＩＦＮ−αに対するＥＳＤ  ＡＢ）に相当する、最初のマトリックス溶液（濃度２．５ｍｇ／ｍＬ）を１００１２倍、１００３０倍、１００５０倍超希釈することによって作製される超低用量（ＵＬＤ）のインターフェロンαに対するポリクローナルアフィニティー精製ウサギ抗体の水希釈物の活性化増強型の抗レトロウイルス活性を、ＨＩＶ−１−ＬＡＩ株をインビトロで感染させたヒト末梢血単核細胞を用いて推定した。比較調製物としてアジドチミジンを用いた。
【００６２】
ヒト末梢血単核細胞は、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅ密度勾配において遠心分離を用いて健常な血清陰性ドナーの血液から単離した。１ｍｃｇ／ｍＬのフィトヘマグルチニンＰ及び５ＭＥ／ｍＬのヒト組換えインターロイキン−２を用いて、細胞を３日間活性化した。
【００６３】
ＨＩＶ−１−ＬＡＩ株を細胞に感染させ、１００ＴＣＩＤ５０の用量（培養組織の細胞のうちの５０％を感染させる用量）に相当するＨＩＶ−１−ＬＡＩ株の接種材料５０μＬを入れた。
【００６４】
レトロウイルス活性を推定するために、ＨＩＶ−１−ＬＡＩ株を細胞に感染させる２４時間前又は１５分間後に、１００μＬの活性化ヒト末梢血単核細胞を含有するカップに、調製物ＩＦＮ−αに対するＡＳＤ  ＡＢ及び比較調製物アジドチミジンを入れた。カップに入れる前に、ＩＦＮ−αに対するＥＳＤ  ＡＢの調製物（１２．５μＬ）又は１，０００ｎＭの用量のアジドチミジンの調製物を、最終容積が５０μＬになるまでＲＰＭＩ１６４０培地（ＤＩＦＣＯ）と混合した。
【００６５】
感染後７日目に細胞培養物の上清を回収した。調製物の効果は、ＨＩＶの複製阻害によって規定し、これは、ＥＩＡ（Ｒｅｔｒｏｔｅｋ  Ｅｌｉｓａキット）の方法を用いて細胞の上清における塩基性ヌクレオカプシドタンパク質ｒ２４の含有量によって推定した。
【００６６】
ＩＦＮ−αに対するＥＳＤ  ＡＢの調製物は、それぞれ、ＨＩＶ−１−ＬＡＩ株を細胞に感染させる２４時間前にカップに入れたとき、ＨＩＶの複製を９５±２％阻害し、１５分間後にカップに入れたとき、５９±１４％阻害した。１，０００ｎＭの用量のアジドチミジンは、ＨＩＶ−１−ＬＡＩ株を細胞に感染させる２４時間前及び１５分間後にカップに入れたとき、それぞれ、９９±０％及び９９±１％ＨＩＶの複製を阻害した。
【００６７】
したがって、インビトロにおける研究において、ＥＳＤのＩＦＮ−αに対するＡＢの調製物の高い抗レトロウイルス活性が示される。
【配列表】
2013538195000001.app
【国際調査報告】
2013538195.tif 000016
2013538195.tif 000017