(57)【要約】ＩＬ−１７Ｒに結合する天然に存在しない、且つ組換え的に修飾されたタンパク質を含み、変異したＩＬ−１７サイトカイン配列を有するタンパク質を含む結合タンパク質、そのような分子を作製する方法、及び治療剤、予防剤及び診断剤としてそのような分子を使用する方法が提供される。【選択図】  なし
2013507132.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗体を含む単離されたタンパク質であって、前記抗体が、
ａ）ＩＬ−１７Ｆ（配列番号１２）の略アミノ酸２１〜４１
ｂ）ＩＬ−１７Ａ（配列番号２）の略アミノ酸２１〜３９
ｃ）ＩＬ−１７Ｃ（配列番号６）の略アミノ酸４４〜６５
ｄ）ＩＬ−１７Ｄ（配列番号８）の略アミノ酸３２〜５３
ｅ）ＩＬ−１７Ｅ（配列番号１０）の略アミノ酸２７〜４９又は
ｆ）ＩＬ−１７Ｂ（配列番号４）の略アミノ酸３２〜５３の範囲内の領域でのエピトープにてＩＬ−１７サイトカインに結合する単離されたタンパク質。
【請求項２】
抗体を含む単離されたタンパク質であって、前記抗体が、
・ＩＬ−１７ＲＡ（配列番号１４）の略アミノ酸２２〜３６、８３〜９６、１１８〜１４７、１５２〜１７９；
・ＩＬ−１７ＲＢ（配列番号１５）の略アミノ酸２５〜３９、８６〜１００、１２６〜１５５、１６０〜１８７；又は
・ＩＬ−１７ＲＣ（配列番号１６）の略アミノ酸１５〜３０、７０〜８４、９６〜１２４、１２９〜１５６の範囲内の領域でのエピトープにてＩＬ−１７Ｒに結合する単離されたタンパク質。
【請求項３】
単離されたタンパク質であって、
・ＩＬ−１７Ａ（配列番号２）と少なくとも９０％同一であるが、１００％同一ではなく、約２１〜３９、１０〜７６、８０〜１０１及び１０２〜１３１から成る群から選択される１以上のアミノ酸が他のアミノ酸に変異する又は欠失する配列；
・ＩＬ−１７Ｂ（配列番号４）と少なくとも９０％同一であるが、１００％同一ではなく、約３２〜５３、６６〜１０５、１１０〜１３１及び１３５〜１５８から成る群から選択される１以上のアミノ酸が他のアミノ酸に変異する又は欠失する配列；
・ＩＬ−１７Ｃ（配列番号６）と少なくとも９０％同一であるが、１００％同一ではなく、約４４〜６５、７８〜１１７、１２１〜１４３及び１５３〜１７９から成る群から選択される１以上のアミノ酸が他のアミノ酸に変異する又は欠失する配列；
・ＩＬ−１７Ｄ（配列番号８）と少なくとも９０％同一であるが、１００％同一ではなく、約３２〜５３、６６〜１０５、１１０〜１３１及び１３４〜１６３から成る群から選択される１以上のアミノ酸が他のアミノ酸に変異する又は欠失する配列；
・ＩＬ−１７Ｅ（配列番号１０）と少なくとも９０％同一であるが、１００％同一ではなく、約２７〜４９、５０〜８７、９３〜１１４及び１２０〜１４８から成る群から選択される１以上のアミノ酸が他のアミノ酸に変異する又は欠失する配列；及び
・ＩＬ−１７Ｆ（配列番号１２）と少なくとも９０％同一であるが、１００％同一ではなく、約２１〜４１、４２〜７８、８２〜１０３及び１０４〜１３３から成る群から選択される１以上のアミノ酸が他のアミノ酸に変異する又は欠失する配列を含む単離されたインターロイキン１７（ＩＬ−１７）ポリペプチドを含む単離されたタンパク質。
【請求項４】
第１と第２のＩＬ−１７サブユニットを含む単離されたタンパク質であって、サブユニットはアミノ酸配列が互いに異なり、サブユニットが第１のＩＬ−１７受容体サブユニットと相互作用することができる第１の面と、相当する天然のＩＬ−１７タンパク質に比べて、第２のＩＬ−１７受容体と相互作用する低下した能力を有する第２の面とを含む二量体を形成する単離されたタンパク質。
【請求項５】
各サブユニットが、配列番号１２の１〜１２７及び配列番号２の１〜１２５に相当する領域にて成熟したヒトＩＬ−１７サイトカイン（配列番号２、４、６、８、１０及び１２）と少なくとも９０％同一である請求項４のタンパク質。
【請求項６】
少なくとも一方のサブユニットが、配列番号１２の１〜１２７及び配列番号２の１〜１２５に相当する領域にて成熟したヒトＩＬ−１７サイトカイン（配列番号２、４、６、８、１０及び１２）に対して１〜７の間の置換又は欠失を有する請求項５のタンパク質。
【請求項７】
少なくとも一方のサブユニットが、配列番号１２の１〜１２７及び配列番号２の１〜１２５に相当する領域にて成熟したヒトＩＬ−１７サイトカイン（配列番号２、４、６、８、１０及び１２）に対して１〜７の間の変異と、配列番号１２の１２８〜１３３又は配列番号２の１２６〜１３１に相当する残基のＣ末端切断を有する請求項５のタンパク質。
【請求項８】
少なくとも一方のサブユニットが、成熟したヒトＩＬ−１７サイトカイン（配列番号２、４、６、８、１０及び１２）と同一である請求項５のタンパク質。
【請求項９】
少なくとも一方のサブユニットが、成熟したヒトＩＬ−１７サイトカイン（配列番号２、４、６、８、１０及び１２）に対して１〜５の間の変異を有し、他方のサブユニットが成熟したヒトＩＬ−１７サイトカイン（配列番号２、４、６、８、１０及び１２）に対して少なくとも４つのアミノ酸のＣ末端欠失と、任意で１〜５の間の変異を有する請求項５のタンパク質。
【請求項１０】
各サブユニットが、他方のサブユニットと同一のヒトＩＬ−１７サイトカインと少なくとも９０％同一である請求項５のタンパク質。
【請求項１１】
一方のサブユニットが成熟ヒトＩＬ−１７Ａと少なくとも９０％同一であり、他方のサブユニットが成熟ＩＬ−１７Ｆと少なくとも９０％同一である請求項５のタンパク質。
【請求項１２】
二量体の第２の面が部位１における少なくとも１つの変異を含む請求項４のタンパク質。
【請求項１３】
二量体の第２の面が部位１における１〜４の間の変異を有する請求項４のタンパク質。
【請求項１４】
二量体の第２の面が部位２における少なくとも１つの変異を含む請求項４のタンパク質。
【請求項１５】
二量体の第２の面が部位２における１〜４の間の変異を有する請求項４のタンパク質。
【請求項１６】
二量体の第２の面が部位３における少なくとも１つの置換又は欠失を含む請求項４のタンパク質。
【請求項１７】
二量体の第２の面が部位３における１〜４の間の変異及び／又は少なくとも１つのアミノ酸のＣ末端欠失を有する請求項４のタンパク質。
【請求項１８】
二量体の第２の面が、以下の部位：部位１、部位２及び部位３の少なくとも２つにて少なくとも１つの置換又は欠失を有する請求項４のタンパク質。
【請求項１９】
二量体の第２の面が、以下の部位：部位１、部位２及び部位３のそれぞれにて少なくとも１つの置換又は欠失を有する請求項４のタンパク質。
【請求項２０】
第１のサブユニットが、Ｒ４７（配列番号１２の番号付けに従って）に相当する位置にて置換を含む請求項４のタンパク質。
【請求項２１】
Ｒ４７に相当する位置での置換が非塩基性残基である請求項２０のタンパク質。
【請求項２２】
Ｒ４７に相当する位置での置換が酸性残基又は疎水性残基である請求項２１のタンパク質。
【請求項２３】
第１のサブユニットがさらに、Ｓ６５、Ｖ６８若しくはＴ１０２（配列番号１２の番号付けに従って）又はＳ６４、Ｗ６７若しくはＲ１０１（配列番号２０の番号付けに従って）に相当する１以上の位置にて少なくとも第２の置換を含む請求項２０のタンパク質。
【請求項２４】
第２のサブユニットが、Ｎ８９（配列番号１２の番号付けに従って）に相当する位置にて置換を含む請求項４又は２０のタンパク質。
【請求項２５】
第２のサブユニットが、１２８〜１３３（配列番号１２の番号付けに従って）に相当する１以上のＣ末端残基の欠失又は変異を含む請求項４又は２０のタンパク質。
【請求項２６】
第２のサブユニットが、１２８〜１３３（配列番号１２の番号付けに従って）に相当するＣ末端残基について欠失する請求項４又は２０のタンパク質。
【請求項２７】
第１と第２のサブユニットが共有結合する請求項４のタンパク質。
【請求項２８】
第１と第２のサブユニットが同一ポリペプチド鎖の構成成分である請求項２７のタンパク質。
【請求項２９】
ＩＬ−１７Ａ／Ａ、ＩＬ−１７Ｆ／Ｆ又はＩＬ−１７Ａ／Ｆよりも１００倍以下弱いＩＬ−１７ＲＡに対する親和性を有する請求項４のタンパク質。
【請求項３０】
ＩＬ−１７Ａ／Ａ、ＩＬ−１７Ｆ／Ｆ又はＩＬ−１７Ａ／Ｆよりも１００倍以下弱いＩＬ−１７ＲＣに対する親和性を有する請求項４のタンパク質。
【請求項３１】
第１の面が、成熟したヒトＩＬ−１７サイトカイン（配列番号２、４、６、８、１０及び１２）に対する変異を含有しない請求項４のタンパク質。
【請求項３２】
第１のサブユニットが、ＭＥＴ１１５及びＬＹＳ１１５（配列番号１２の番号付けに従って）に相当する位置にて１以上の変異を含み、及び／又は第２のサブユニットが、ＩＬＥ２９、ＩＬＥ３１、ＴＲＰ５８、ＡＳＮ６１、ＴＹＲ６３、ＰＲＯ６４、ＳＥＲ６５、ＧＬＵ６６、ＶＡＬ１００、ＡＲＧ１０２、ＨＩＳ１０４、ＶＡＬ１０９及びＰＨＥ１１１（配列番号１２の番号付けに従って）に相当する位置にて１以上の変異を含む請求項４のタンパク質。
【請求項３３】
第１のサブユニットが、ＧＬＮ９４、ＧＬＮ９５、ＧＬＵ９６、ＬＹＳ１１５及びＬＥＵ１１７（配列番号１２の番号付けに従って）に相当する位置にて１以上の変異を含み、及び／又は第２のサブユニットが、ＧＬＮ３６、ＡＲＧ３７、ＭＥＴ４０、ＳＥＲ４１、ＡＳＮ４３、ＧＬＵ４５、ＴＹＲ５４、ＶＡＬ５６、ＧＬＵ６６、ＶＡＬ６８及びＶＡＬ１１８（配列番号１２の番号付けに従って）に相当する位置にて１以上の変異を含む請求項４のタンパク質。
【請求項３４】
第１のサブユニットが、ＬＥＵ７５、ＩＬＥ８６、ＳＥＲ８７、ＡＳＮ８９、ＶＡＬ９１、ＶＡＬ１２５、ＰＲＯ１２７、ＶＡＬ１２８、ＩＬＥ１２９、ＨＩＳ１３０、ＨＩＳ１３１及びＶＡＬ１３２（配列番号１２の番号付けに従って）に相当する位置にて１以上の変異を含み、及び／又は第２のサブユニットが、ＭＥＴ４０、ＡＲＧ４２、ＩＬＥ４４及びＡＲＧ４７（配列番号１２の番号付けに従って）に相当する位置にて１以上の変異を含む請求項４のタンパク質。
【請求項３５】
第１と第２のＩＬ−１７サブユニットを含む単離されたタンパク質であって、各サブユニットはヒトＩＬ−１７ポリペプチドと少なくとも９０％同一であり、サブユニットはまとめて、そのようなヒトＩＬ−１７ポリペプチドに対して、以下の置換又は欠失：
・第１のサブユニットにおけるＲ４７（配列番号１２の番号付けに従って）に相当する位置における置換；
・第１のサブユニットにおけるＳ６５（配列番号１２の番号付けに従って）に相当する位置における置換；
・第１のサブユニットにおけるＷ６８（配列番号１２の番号付けに従って）に相当する位置における置換；
・第１のサブユニットにおけるＲ１０２（配列番号１２の番号付けに従って）に相当する位置における置換；
・第２のサブユニットにおけるＮ８９（配列番号１２の番号付けに従って）に相当する位置における置換；
・第２のサブユニットにおけるＱ９５（配列番号１２の番号付けに従って）に相当する位置における置換；及び
・第２のサブユニットにおける１２７〜１３２（配列番号１２の番号付けに従って）に相当する位置における１以上の置換
の少なくとも２つを含む単離されたタンパク質。
【請求項３６】
サブユニットがまとめて、そのようなヒトＩＬ−１７ポリペプチドに対して、以下の置換又は欠失：
・第１のサブユニットにおけるＲ４７（配列番号１２の番号付けに従って）に相当する位置におけるＲ４７Ｅ、Ｒ４７Ａ又はＲ４７Ｄの置換；
・第１のサブユニットにおけるＳ６５（配列番号１２の番号付けに従って）に相当する位置におけるＳ６５Ｋ、Ｓ６５Ｒ又はＳ６５Ｗの置換；
・第１のサブユニットにおけるＷ６８（配列番号１２の番号付けに従って）に相当する位置におけるＷ６８Ａ、Ｗ６８Ｖ、Ｗ６８Ｓ、Ｗ６８Ｑ又はＷ６８Ｎの置換；
・第１のサブユニットにおけるＲ１０２（配列番号１２の番号付けに従って）に相当する位置におけるＲ１０２Ａ、Ｒ１０２Ｖ、Ｒ１０２Ｓ又はＲ１０２Ｔの置換；
・第２のサブユニットにおけるＮ８９（配列番号１２の番号付けに従って）に相当する位置におけるＮ８９Ａ又はＮ８９Ｖの置換；
・第２のサブユニットにおけるＱ９５（配列番号１２の番号付けに従って）に相当する位置におけるＱ９５Ａ又はＱ９５Ｗの置換；及び
・第２のサブユニットにおける１２８〜１３２（配列番号１２の番号付けに従って）に相当する位置における欠失
の少なくとも２つを含む請求項３５のタンパク質。
【請求項３７】
（１）第１のインターロイキン−１７ポリペプチドと（２）第２のインターロイキン−１７ポリペプチドを含むタンパク質を含む単離されたタンパク質であって、ＩＬ−１７ポリペプチドの一方又は双方がヒトＩＬ−１７サイトカインの変異形態であり、第１と第２のＩＬ−１７ポリペプチドが会合して二量体を形成する単離されたタンパク質。
【請求項３８】
第１と第２のＩＬ−１７ポリペプチドがそれぞれヒトＩＬ−１７サイトカインと少なくとも９５％同一である請求項３７の単離されたタンパク質。
【請求項３９】
第１と第２のＩＬ−１７ポリペプチドが単一ポリペプチド鎖の構成成分である請求項３７の単離されたタンパク質。
【請求項４０】
タンパク質がさらにＦｃドメイン又はアルブミン結合ドメインを含む請求項３７の単離されたタンパク質。
【請求項４１】
第１と第２のポリペプチドがコイル化コイルドメイン又はロイシンジッパーによって操作可能に連結される請求項３７の単離されたタンパク質。
【請求項４２】
第１と第２のポリペプチドがヒトＩＬ−１７サイトカインと同一の配列を含む請求項３７の単離されたタンパク質。
【請求項４３】
配列番号２１〜４６から成る群から選択される１以上の以下のポリペプチド配列、又は配列番号２１〜４６と少なくとも９５％同一であるが、天然の成熟ＩＬ−１７サイトカインとは異なる配列を含む単離されたタンパク質。
【請求項４４】
請求項１〜４３のいずれかに記載のタンパク質を含む医薬組成物。
【請求項４５】
対象において免疫応答又は炎症性反応を調節する方法であって、対象において免疫応答又は炎症性反応を調節するのに有効な量で請求項４４に記載の組成物を対象に投与することを含む方法。
【請求項４６】
対象においてＩＬ−１７が介在する障害を治療する方法であって、対象において免疫応答又は炎症性反応を調節するのに有効な量で請求項４４に記載の組成物を対象に投与することを含む方法。
【請求項４７】
請求項１〜４４のいずれかのタンパク質又はそのポリペプチド鎖をコードする１以上の配列を含む単離された核酸。
【請求項４８】
請求項１〜４４のいずれかのタンパク質又はそのポリペプチド鎖をコードする１以上の配列を含有する組換え核酸を含む組換え宿主細胞。
【請求項４９】
組換えタンパク質を調製する方法であって、組換えタンパク質の発現を可能にする条件下で請求項４８の宿主細胞を培養することと、組換えタンパク質を回収することとを含む方法。
【請求項５０】
組換えタンパク質が細胞溶解物又は細胞培地から精製され、及び／又は方法が、１以上の賦形剤、安定剤及び緩衝液と共に組換えタンパク質を製剤化することを含む請求項４９の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
優先権主張
本出願は、その内容が全体で組み入れられる２００９年１０月１０日に出願された米国仮特許出願第６１／２７８，７７９号に対して優先権を主張する。
【０００２】
発明の分野
本発明の分野はタンパク質の生化学及び免疫学である。さらに詳しくは、分野は修飾された免疫調節ポリペプチドに関する。
【０００３】
政府の資金提供
本発明は国立衛生研究所によって裁定された（ＡＩ５１３２１）のもとで政府の支援を受けた。政府は本発明にある種の権利を有する。
【背景技術】
【０００４】
免疫系は、癌や悪性腫瘍と同様に感染性因子（たとえば、ウイルス、細菌、及び多細胞生物）から個体を保護する。免疫系には、たとえば、好中球、単球、マクロファージ、樹状細胞（ＤＣ）、好酸球、Ｔ細胞及びＢ細胞のような多数のリンパ系及び骨髄系の細胞種が含まれる。これらの細胞は、サイトカインとして知られるシグナル伝達タンパク質を産生することが可能である。サイトカインは、多数の細胞種の増殖と分化の調節と同様に免疫細胞の増殖、発生、分化及び／又は移動の誘導を含む様々な生物作用に介在する可溶性の小型タンパク質である（たとえば、Ａｒａｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｎｎｕ．  Ｒｅｖ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  ５Ｐ：７８３  （１９９０）；  Ｍｏｓｍａｎｎ，  Ｃｕｒｒ．  Ｏｐｉｎ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ５：３１１  （１９９１）；  Ｐａｕｌ  ａｎｄ  Ｓｅｄｅｒ，  Ｃｅｌｌ  ７６：２４１  （１９９４）を参照）。サイトカインが誘導する免疫機能には、免疫細胞の全身性又は局所の蓄積を特徴とする炎症反応も含まれる。それらは宿主の保護効果を有するにもかかわらず、反応が、たとえば、自己免疫疾患（たとえば、多発性硬化症）及び癌／悪性腫瘍の疾患のような過剰な及び／又は慢性の炎症に関与する場合、これらの免疫応答は、病理学的結末を生じ得る（Ｏｐｐｅｎｈｅｉｍ  ａｎｄ  Ｆｅｌｄｍａｎｎ  （ｅｄｓ．）  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ，  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，  ＣＡ  （２００１）；  ｖｏｎ  Ａｎｄｒｉａｎ  ａｎｄ  Ｍａｃｋａｙ  Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．  ３４３：  １０２０  （２０００）；  Ｄａｖｉｄｓｏｎ  ａｎｄ  Ｄｉａｍｏｎｄ，  Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．  ３４５：３４０  （２００１）；  Ｌｕ  ｅｔ  ａｌ，  Ｍｏｌ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ４：２２１（２００６）；  Ｄａｇｌｅｉｓｈ  ａｎｄ  Ｏ‘Ｂｙｒｎｅ，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｒｅａｔ  Ｒｅｓ．  １３０：１  （２００６））。
【０００５】
サイトカイン群を構成するタンパク質には、インターロイキン、インターフェロン、コロニー刺激因子、腫瘍壊死因子、及びそのほかの調節性分子が挙げられる。たとえば、ヒトのインターロイキン−１７は、炎症誘発性の応答を誘導すること及びそれに介在することに関与する。ＩＬ−１７は一般にアレルギー反応に関係する。ＩＬ−１７は、多数の細胞種（線維芽細胞、内皮細胞、上皮細胞、角化細胞及びマクロファージ）からの多数のそのほかのサイトカイン（たとえば、ＩＬ−６、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１β、ＴＧＦ−β、ＴＮＦ−α）、ケモカイン（ＩＬ−８、ＧＲＯ−α及びＭＣＰ−１を含む）及びプロスタグランジン（たとえば、ＰＧＥ２）の産生を誘導する。近年の豊富な証拠は、多数の自己免疫及び炎症性の状態の病態形成における中心的役者としてのＴｈ１７細胞を意味づけている。
【０００６】
従って、サイトカインの実証された生体内の活性及びそれらの受容体は、他のサイトカイン、サイトカイン受容体、サイトカイン作動物質及びサイトカイン拮抗物質の臨床的な可能性及びそれに対する必要性を説明している。たとえば、炎症誘発性サイトカインファミリーの実証された生体内の活性は、たとえば、ＩＬ−１７及びＩＬ−２３のような炎症誘発性分子の拮抗物質の甚大な臨床的な可能性及びその必要性を説明している。
【０００７】
哺乳類における疾患及び障害の予防及び治療に有用な新規の組成物への進行中のニーズが存在する。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
提供されるのは、サイトカインの再設計を指向する組成物及び方法である。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
一態様では、本開示は、図４Ｄにおける番号付けに従って、たとえば、ＩＬ−１７Ｆの略アミノ酸２１〜４１、４２〜７８、８２〜１０３若しくは１０４〜１３３について、ＩＬ−１７Ａの略アミノ酸１〜３９、４０〜７６、８０〜１０１若しくは１０２〜１３１について、ＩＬ−１７Ｃの略アミノ酸４４〜６５、７８〜１１７、１２１〜１４３若しくは１５３〜１７９について、ＩＬ−１７Ｄの略アミノ酸３２〜５３、６６〜１０５、１１０〜１３１若しくは１３４〜１６３について、ＩＬ−１７Ｅの略アミノ酸２７〜４９、５０〜８７、９３〜１１４及び／又は１２０〜１４８について、又はＩＬ−１７Ｂの略アミノ酸３２〜５３、６６〜１０５、１１０〜１３１若しくは１３５〜１５８についての１以上に結合することによってＩＬ−１７サイトカインポリペプチドに特異的に結合する単離された抗体（完全長の抗体、抗体の断片及びドメインを含む）を特徴とする。
【００１０】
一実施形態では、抗体はＩＬ−１７サイトカインの領域１におけるエピトープに結合するが、領域１は、図４Ｄにおける番号付けに従って、ＩＬ−１７Ｆの略アミノ酸２１〜４１、ＩＬ−１７Ａの略アミノ酸２１〜３９、ＩＬ−１７Ｃの略アミノ酸４４〜６５、ＩＬ−１７Ｄの略アミノ酸３２〜５３、ＩＬ−１７Ｅの略アミノ酸２７〜４９又はＩＬ−１７Ｂの略アミノ酸３２〜５３に相当する。
【００１１】
一実施形態では、抗体はＩＬ−１７サイトカインの領域２におけるエピトープに結合するが、領域２は、図４Ｄにおける番号付けに従って、ＩＬ−１７Ｆの略アミノ酸４２〜７８、ＩＬ−１７Ａの略アミノ酸４０〜７６、ＩＬ−１７Ｃの略アミノ酸７８〜１１７、ＩＬ−１７Ｄの略アミノ酸６６〜１０５、ＩＬ−１７Ｅの略アミノ酸５０〜８７又はＩＬ−１７Ｂの略アミノ酸３２〜５３に相当する。
【００１２】
一実施形態では、抗体はＩＬ−１７サイトカインの領域３におけるエピトープに結合するが、領域３は、図４Ｄにおける番号付けに従って、ＩＬ−１７Ｆの略アミノ酸８２〜１０３、ＩＬ−１７Ａの略アミノ酸８０〜１０１、ＩＬ−１７Ｃの略アミノ酸１２１〜１４３、ＩＬ−１７Ｄの略アミノ酸１１０〜１３１、ＩＬ−１７Ｅの略アミノ酸９３〜１１４又はＩＬ−１７Ｂの略アミノ酸１１０〜１３１に相当する。
【００１３】
一実施形態では、抗体はＩＬ−１７サイトカインの領域４におけるエピトープに結合するが、領域４は、図４Ｄにおける番号付けに従って、ＩＬ−１７Ｆの略アミノ酸１０４〜１３３、ＩＬ−１７Ａの略アミノ酸１０２〜１３１、ＩＬ−１７Ｃの略アミノ酸１５３〜１７９、ＩＬ−１７Ｄの略アミノ酸１３４〜１６３、ＩＬ−１７Ｅの略アミノ酸１２０〜１４８又はＩＬ−１７Ｂの略アミノ酸１３５〜１５８に相当する。
【００１４】
一態様では、本開示は、ＩＬ−１７ＲＡ（配列番号１４）のアミノ酸２２〜３６、アミノ酸８３〜９６、アミノ酸１１８〜１４７、アミノ酸１５２〜１７９、又はアミノ酸２５６〜２７１に特異的に結合する単離された抗体（完全長の抗体、抗体の断片及びドメインを含む）を特徴とする。
【００１５】
別の態様では、本開示は、ＩＬ−１７ＲＢ（配列番号１５）のアミノ酸２５〜３９、アミノ酸８６〜１００、アミノ酸１２６〜１３５、アミノ酸１６０〜１８７又はアミノ酸２５４〜２６９及び／又は配列番号１５のアミノ酸３２〜４４（たとえば、３８〜４４）、８２〜９８（たとえば、８８〜９８）及び２５２〜２６９（たとえば、２５６〜２６３）に特異的に結合する単離された抗体（完全長の抗体、抗体の断片及びドメインを含む）を特徴とする。
【００１６】
別の態様では、本開示は、ＩＬ−１７ＲＣ（配列番号１６）のアミノ酸１３〜３０、アミノ酸７０〜８４、アミノ酸９６〜１２４、アミノ酸１２９〜１５６又はアミノ酸２２７〜２３７及び／又は配列番号１６のアミノ酸２４〜３５、７８〜９１及び２４８〜２５７に特異的に結合する単離された抗体（完全長の抗体、抗体の断片及びドメインを含む）を特徴とする。
【００１７】
本開示はまた以下を特徴とする
・配列番号１２の略２１〜４１、４２〜７８、８２〜１０３及び１０４〜１３３から成る群から選択される１以上のアミノ酸が任意のほかのアミノ酸に変異し、又は欠失し、たとえば、ポリペプチドが配列番号１２に少なくとも９０、９２、９４、９５、９６、９７又は９８％同一であるが１００％同一ではない配列を含む単離されたインターロイキン−１７Ｆ（ＩＬ−１７Ｆ）ポリペプチド；
・配列番号２の略２１〜３９、４０〜７６、８０〜１０１、及び１０２〜１３１から成る群から選択される１以上のアミノ酸が任意のほかのアミノ酸に変異し、又は欠失し、たとえば、ポリペプチドが配列番号２に少なくとも９０、９２、９４、９５、９６、９７又は９８％同一であるが１００％同一ではない配列を含む単離されたインターロイキン−１７Ａ（ＩＬ−１７Ａ）ポリペプチド；
・配列番号４の略３２〜５３、６６〜１０５、１１０〜１３１及び１３５〜１５８から成る群から選択される１以上のアミノ酸が任意のほかのアミノ酸に変異し、又は欠失し、たとえば、ポリペプチドが配列番号４に少なくとも９０、９２、９４、９５、９６、９７又は９８％同一であるが１００％同一ではない配列を含む単離されたインターロイキン−１７Ｂ（ＩＬ−１７Ｂ）ポリペプチド；
・配列番号６の略４４〜６５、７８〜１１７、１２１〜１４３及び１５３〜１７９から成る群から選択される１以上のアミノ酸が任意のほかのアミノ酸に変異し、又は欠失し、たとえば、ポリペプチドが配列番号６に少なくとも９０、９２、９４、９５、９６、９７又は９８％同一であるが１００％同一ではない配列を含む単離されたインターロイキン−１７Ｃ（ＩＬ−１７Ｃ）ポリペプチド；
・配列番号８の略３２〜５３、６６〜１０５、１１０〜１３１及び１３４〜１６３から成る群から選択される１以上のアミノ酸が任意のほかのアミノ酸に変異し、又は欠失し、たとえば、ポリペプチドが配列番号８に少なくとも９０、９２、９４、９５、９６、９７又は９８％同一であるが１００％同一ではない配列を含む単離されたインターロイキン−１７Ｄ（ＩＬ−１７Ｄ）ポリペプチド；
・配列番号１０の略２７〜４９、５０〜８７、９３〜１１４及び１２０〜１４８から成る群から選択される１以上のアミノ酸が任意のほかのアミノ酸に変異し、又は欠失し、たとえば、ポリペプチドが配列番号１０に少なくとも９０、９２、９４、９５、９６、９７又は９８％同一であるが１００％同一ではない配列を含む単離されたインターロイキン−１７Ｅ（ＩＬ−１７Ｅ）ポリペプチド。
【００１８】
ポリペプチドは、たとえば、タグ及び免疫グロブリン定常ドメインのようなＮ末端配列及びＣ末端配列を含む追加の特徴を含むことができる。
【００１９】
別の態様では、本開示は、第１及び第２のＩＬ−１７ポリペプチドを含む組成物を特徴とし、その際、第１及び第２のポリペプチドの少なくとも一方は修飾されたＩＬ−１７ポリペプチド（たとえば、変異したＩＬ−１７ポリペプチド）である。たとえば、組成物は、第２のＩＬ−１７ポリペプチドに操作可能に連結された第１の修飾されたＩＬ−１７ポリペプチド（たとえば、変異した）を含む。一実施形態では、第２のＩＬ−１７ポリペプチドも修飾された（たとえば、変異した）ＩＬ−１７ポリペプチドである。別の実施形態では、第２のＩＬ−１７ポリペプチドは、天然に存在するＩＬ−１７ポリペプチド（たとえば、成熟した、ヒトのＩＬ−１７、たとえば、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｂ、ＩＬ−１７Ｃ、ＩＬ−１７Ｄ、ＩＬ−１７Ｅ及びＩＬ−１７Ｆ）と同一である。
【００２０】
第１及び第２のポリペプチドは、相互作用してＩＬ−１７二量体（たとえば、単鎖二量体）に相当する構造を形成することができる。第１のポリペプチドは第２のポリペプチドに対してＮ末端に位置することができ、逆もまた同様である。ポリペプチド鎖はまた他の要素を含むことができ；たとえば、それは融合タンパク質であり得る。ポリペプチドの一方又は双方を修飾することができ、たとえば、参照ＩＬ−１７ポリペプチド（たとえば、ヒトのＩＬ−１７、たとえば、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｂ、ＩＬ−１７Ｃ、ＩＬ−１７Ｄ、ＩＬ−１７Ｅ及びＩＬ−１７Ｆ）に対して変異させることができる。一実施形態では、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドは同一ポリペプチド鎖の構成成分である。一実施形態では、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドはコイル化コイルドメイン又はロイシンジッパーによって操作可能に連結される。
【００２１】
一実施形態では、第１のポリペプチドは、修飾されたＩＬ−１７Ａポリペプチド（たとえば、配列番号２又は２０と少なくとも８５、９０、９５又は９８％同一である変異したヒトＩＬ−１７Ａ）を含み、第２のポリペプチドは、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｂ、ＩＬ−１７Ｃ、ＩＬ−１７Ｄ、ＩＬ−１７Ｅ及びＩＬ−１７Ｆから成る群から選択される修飾されたＩＬ−１７ポリペプチド（たとえば、本明細書で開示されるようなそのようなサイトカインの天然の成熟形態と少なくとも８５、９０、９５又は９８％同一である変異したヒトＩＬ−１７Ａ）又は天然の成熟形態と１００％同一であるポリペプチド（たとえば、配列番号２、４、６、８、１０、１２又は２０）を含む。従って、例となる組成物はＡ／Ａホモ二量体又はＡ／Ｆへテロ二量体に相当するポリペプチドを含む。
【００２２】
一実施形態では、第１のポリペプチドは、修飾されたＩＬ−１７Ｆポリペプチド（たとえば、配列番号１２と少なくとも８５、９０、９５又は９８％同一である変異したヒトＩＬ−１７Ｆ）を含み、第２のポリペプチドは、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｂ、ＩＬ−１７Ｃ、ＩＬ−１７Ｄ、ＩＬ−１７Ｅ及びＩＬ−１７Ｆから成る群から選択される修飾されたＩＬ−１７ポリペプチド（たとえば、本明細書で開示されるようなそのようなサイトカインの天然の成熟形態と少なくとも８５、９０、９５又は９８％同一である変異したヒトＩＬ−１７サイトカイン）又は天然の成熟形態と１００％同一であるポリペプチド（たとえば、配列番号２、４、６、８、１０、１２又は２０）を含む。従って、例となる組成物はＦ／Ｆホモ二量体又はＡ／Ｆへテロ二量体に相当するポリペプチドを含む。
【００２３】
一実施形態では、第１のポリペプチドは、修飾されたＩＬ−１７サイトカインポリペプチド（たとえば、配列番号４、６、８、又は１０と少なくとも８５、９０、９５又は９８％同一である変異したヒトＩＬ−１７Ｂ、ＩＬ−１７Ｃ、ＩＬ−１７Ｄ又はＩＬ−１７Ｅ）を含み、第２のポリペプチドは、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｂ、ＩＬ−１７Ｃ、ＩＬ−１７Ｄ、ＩＬ−１７Ｅ及びＩＬ−１７Ｆから成る群から選択される修飾されたＩＬ−１７ポリペプチド（たとえば、本明細書で開示されるようなそのようなサイトカインの天然の成熟形態と少なくとも８５、９０、９５又は９８％同一である変異したヒトＩＬ−１７サイトカイン）を含む。従って、例となる組成物はＢ／Ｂ、Ｃ／Ｃ、Ｄ／Ｄ、Ｅ／Ｅホモ二量体及び種々のへテロ二量体に相当するポリペプチドを含む。
【００２４】
別の態様では、本開示は、ＩＬ−１７ＲＡのＩＬ−１７結合決定基を含む単離されたポリペプチドを含む組成物を特徴とし、その際、ポリペプチドはＩＬ−１７ＲＡの細胞外ドメインと同一ではない。たとえば、ＩＬ−１７結合決定基は、ＩＬ−１７ＲＡ（配列番号１７）のアミノ酸２２〜３６、８３〜９６、１１８〜１４７、１５２〜１７９及び２５６〜２７１から成る群から選択される。結合決定気は、ペプチド、たとえば、ＩＬ−１７ＲＡ）のアミノ酸２２〜３６、８３〜９６、１１８〜１４７、１５２〜１７９及び２５６〜２７１を含む又はそれから成るペプチドであることができる。結合決定基は、たとえば、ＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７Ａ又はＩＬ−１７Ｃの結合決定基であり得る。一実施形態では、ポリペプチドはＩＬ−１７Ｆ及び／又はＩＬ−１７Ａを結合することが可能である。ポリペプチドのＩＬ−１７Ａとの結合は、ＩＬ−１７Ａの略２１〜３９、４０〜７６、８０〜１０１及び１０２〜１３１から成る群から選択される１以上のアミノ酸との接触を含むことができる。ポリペプチドのＩＬ−１７Ｃとの結合は、ＩＬ−１７Ｃの略４４〜６５、７８〜１１７、１２１〜１４３及び１５３〜１７９から成る群から選択される１以上のアミノ酸との接触を含むことができる。
【００２５】
一部の実施形態では、ポリペプチドはシステインノットモチーフ又は４−ヘリックスバンドルモチーフを形成することが可能である。一実施形態では、ポリペプチドをＩＬ−１７ＲＡポリペプチド、たとえば、ＩＬ−１７ＲＡポリペプチドの細胞外領域及びＩＬ−１７ＲＣポリペプチド、たとえば、ＩＬ−１７ＲＣポリペプチドの細胞外領域に操作可能に結合させる。
【００２６】
別の態様では、本開示は、ＩＬ−１７ＲＣのＩＬ−１７結合決定基を含む単離されたポリペプチドを含む組成物を特徴とし、その際、ポリペプチドはＩＬ−１７ＲＣの細胞外ドメインと同一ではない。ポリペプチドはＩＬ−１７ＲＡポリペプチド、たとえば、ＩＬ−１７ＲＡポリペプチドの細胞外領域及びＩＬ−１７ＲＣポリペプチド、たとえば、ＩＬ−１７ＲＣポリペプチドの細胞外領域に操作可能に結合することができる。ポリペプチドを、ＩＬ−１７サイトカイン、たとえば、ＩＬ−１７Ａに結合させることができ、ＩＬ−１７Ａの略２１〜３９、４０〜７６、８０〜１０１及び１０２〜１３１から成る群から選択される１以上のアミノ酸、又はＩＬ−１７Ｃに接触させることができ、ＩＬ−１７Ｃの略４４〜６５、７８〜１１７、１２１〜１４３、及び１５３〜１７９から成る群から選択される１以上のアミノ酸に接触させることができる。
【００２７】
別の態様では、第１及び第２のＩＬ−１７サブユニットを含むＩＬ−１７Ｒ結合タンパク質を特徴とし、サブユニットは、第１のＩＬ−１７受容体サブユニットと相互作用することができる第１の面と、相当する天然のＩＬ−１７タンパク質に比べて第２のＩＬ−１７受容体サブユニットと相互作用する能力が低い又はない第２の面を含む二量体を形成する。たとえば、第１のサブユニットと第２のサブユニットは互いに異なる。各サブユニットは、成熟ＩＬ−１７サイトカイン、たとえば、ヒトＩＬ−１７サイトカイン（配列番号２、４、６、８、１０、１２、又は２０）又はマウスのＩＬ−１７サイトカイン、たとえば、双方のサブユニットについて同一の参照サイトカイン又は異なった参照サイトカイン（たとえば、ＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆ）に対して少なくとも８５、８７、９０、９２、９４、９５、９６、９７、又は９８％同一であり得る。
【００２８】
特定の実施形態では、各サブユニットは、配列番号１２の１〜１２７又は配列番号２０の１〜１２６に相当する領域にて成熟ＩＬ−１７サイトカインと少なくとも８５、８７、９０、９２、９４、９５、９６、９７、又は９８％同一である。
【００２９】
一実施形態では、各サブユニットは、成熟したヒトＩＬ−１７サイトカイン（配列番号２、４、６、８、１０、１２又は２０）に対して１、２、３、４、５、６、７以上、好ましくは２０、１０、９、８、７、６、又は５未満の置換又は欠失を有する。一実施形態では、一方のサブユニットは、成熟したヒトＩＬ−１７サイトカイン（配列番号２、４、６、８、１０、１２又は２０）に対して１〜５、７又は８の間の変異を有し、他方のサブユニットは、少なくとも１、２、３、４又は５のアミノ酸のＣ末端欠失を有し、任意で、成熟したヒトＩＬ−１７サイトカイン（配列番号２、４、６、８、１０、１２又は２０）に対して１〜５の間の置換を有する。
【００３０】
一実施形態では、二量体の第２の面は、少なくとも１、２又は３の変異、たとえば、１、２又は３の置換を含む。たとえば、二量体の第２の面は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、又は１２の変異（たとえば、置換）を有する。変異は１以上の部位に位置することができる。第１の面は、成熟ＩＬ−１７サイトカイン、たとえば、成熟したヒトＩＬ−１７サイトカイン（配列番号２、４、６、８、１０、１２又は２０）に対してどんな変異も含有しなくてもよい。
【００３１】
一実施形態では、二量体の第２の面は、部位１にて少なくとも１、２又は３の変異、たとえば、少なくとも１、２又は３の置換を含む。たとえば、二量体の第２の面は、部位１において１〜３、４、５又は６の間の変異（たとえば、置換）を有する。
【００３２】
一実施形態では、二量体の第２の面は、部位２にて少なくとも１、２又は３の変異、たとえば、少なくとも１、２又は３の置換を含む。たとえば、二量体の第２の面は、部位２において１〜３、４、５又は６の間の変異（たとえば、置換）を有する。
【００３３】
一実施形態では、二量体の第２の面は、部位３にて少なくとも１、２又は３の変異、たとえば、少なくとも１、２又は３の置換を含む。たとえば、二量体の第２の面は、部位３において１〜３、４、５又は６の間の変異（たとえば、置換）を有する。
【００３４】
第１のサブユニットと第２のサブユニットは共有結合することが可能であり、たとえば、それらは同一ポリペプチド鎖の構成成分であることができる。たとえば、それらは可動性リンカーによって連結され得る。
【００３５】
一実施形態では、結合タンパク質は、ＩＬ−１７Ａ／Ａのサイトカイン活性の１％未満を有する。たとえば、それは、たとえば、本明細書に記載されるアッセイに基づいてＩＬ−１７受容体を実質的に刺激しない。
【００３６】
一実施形態では、結合タンパク質はＩＬ−１７Ａ／Ａ、ＩＬ−１７Ｆ／Ｆ又はＩＬ−１７Ａ／Ｆよりも１００倍、５０倍、２０倍、１０倍以下弱いＩＬ−１７ＲＡ又はＩＬ−１７ＲＣに対する親和性を有する。一般に、結合タンパク質は、ＩＬ−１７ＲＡとＩＬ−１７ＲＣの双方に結合して、結合タンパク質とＩＬ−１７ＲＡ及びＩＬ−１７ＲＣの双方を含有する複合体を形成することはできない。結合タンパク質は本明細書に記載されるそのほかの特徴及び特性を有することができる。
【００３７】
本明細書に記載される結合タンパク質は、２つのＩＬ−１７サブユニットを含むことができ、その際、各サブユニットは、成熟ＩＬ−１７サイトカイン、たとえば、ヒトＩＬ−１７サイトカイン（配列番号２、４、６、８、１０、１２、又は２０）と少なくとも８５、８７、９０、９２、９４、９５、９６、９７、又は９８％同一であり、まとめてサブユニットは、そのような成熟ＩＬ−１７ポリペプチドに対して少なくとも２、３、４、５以上の以下の置換又は欠失を含む：
・第１のサブユニットにてＲ４７（配列番号１２の番号付けに従って）に相当する位置での置換（たとえば、Ｒ４７Ｅ、Ｒ４７Ａ又はＲ４７Ｄ）；
・第１のサブユニットにてＳ６５（配列番号１２の番号付けに従って）に相当する位置での置換（たとえば、Ｓ６５Ｋ、Ｓ６５Ｒ又はＳ６５Ｗ）；
・第１のサブユニットにてＷ６８（配列番号１２の番号付けに従って）に相当する位置での置換（たとえば、Ｗ６８Ａ、Ｗ６８Ｖ、Ｗ６８Ｓ、Ｗ６８Ｑ又はＷ６８Ｎ）：
・第１のサブユニットにてＲ１０２（配列番号１２の番号付けに従って）に相当する位置での置換（たとえば、Ｒ１０２Ａ、Ｒ１０２Ｖ，Ｒ１０２Ｓ又はＲ１０２Ｔ）；
・第２のサブユニットにてＮ８９（配列番号１２の番号付けに従って）に相当する位置での置換（たとえば、Ｎ８９Ａ又はＮ８９Ｖ）；
・第２のサブユニットにてＱ９５（配列番号１２の番号付けに従って）に相当する位置での置換（たとえば、Ｑ９５Ａ又はＱ９５Ｗ）；及び
・第２のサブユニットにて１２７〜１３２（配列番号１２の番号付けに従って）に相当する位置での１以上の置換又は欠失（たとえば、１２８〜１３２に相当する少なくとも位置の欠失）。
【００３８】
たとえば、結合タンパク質は、上記で示した位置に関して少なくとも１以上の変異の以下の組み合わせ（たとえば、対）：（Ｒ４７、Ｓ６５）、（Ｒ４７，Ｗ６８）、（Ｒ４７，Ｒ１０２）、（Ｓ６５，Ｗ６８）、（Ｓ６５，Ｒ１０２）、（Ｒ４７，Ｎ８９）、（Ｒ４７，Ｑ９５）、（Ｎ８９，Ｒ１０２）、（Ｎ８９、１２８−１３２の欠失）、（Ｒ４７，Ｎ８９，Ｒ１０２）、（Ｎ８９，Ｑ９５）、（Ｗ６８，Ｒ１０２）、（Ｎ８９，Ｗ６８）、（Ｒ４７，Ｓ６５，Ｎ８９）、（Ｒ４７，Ｗ６８，Ｎ８９）、（Ｒ４７，Ｎ８９，Ｒ１０２）、（Ｒ４７，Ｗ６８，Ｎ８９，１２８〜１３２の欠失）、（Ｒ４７，Ｓ６５，Ｎ８９，１２８〜１３２の欠失）、（Ｓ６５，Ｎ８９，１２８〜１３２の欠失）、（Ｒ４７，Ｓ６５，１２８〜１３２の欠失）及び（Ｎ８９，Ｑ９５，１２８〜１３２の欠失）を有することができる。結合タンパク質は、本明細書に記載されるそのほかの特徴及び特性を有することができる。
【００３９】
また特徴付けられるのは、本明細書に記載されるような１以上のサイトカインサブユニットをコードする配列を含む、本明細書に記載されるポリペプチドをコードする配列を含む核酸である。核酸はさらにベクターの配列及び転写と翻訳を制御する配列を含むことができる。また特徴付けられるのは、そのような核酸を含有する宿主細胞、及び細胞にてそのような核酸を発現させることを含む方法である。方法はさらにたとえば、細胞又は細胞培地から精製することによってタンパク質を回収することを含むことができる。
【００４０】
さらなる特徴及び利点は、以下の詳細な説明及び特許請求の範囲においてさらに詳しく記載される。
【図面の簡単な説明】
【００４１】
【図１】ＩＬ−１７ＲＡ／ＩＬ−１７Ｆ複合体の構造を示す模式図である。ＩＬ−Ｆ（Ａ鎖及びＢ鎖）、Ｎ結合グリカンに結合したＩＬ−１７ＲＡのリボンダイヤグラムを球棒表示で示す。ＩＬ−１７ＲＡは、短い螺旋リンカーによって連結される２つのフィブロネクチンＩＩＩ型ドメイン（Ｄ１及びＤ２）で構成される。右側の図は、ｙ軸の周りで６０°回転させた複合体を示す。
【図２】ＩＬ−１７ＦのＩＬ−１７ＲＡへの結合には３つの異なった接触面が介在することを示す模式図である。（Ａ）部位２：ＩＬ−１７ＲＡのＤ１Ｃ−Ｃ’ループがＩＬ−１７ＦのＢ鎖のＮ末端コイル領域と鎖１及び２の間に挿入する。Ｎ末端コイルは未結合構造と結合構造の間で構造変化を受ける。（Ｂ）部位２：ノブ・イン・ホールＩＬ−１７Ｆ結合ポケットの相補性の面表示である。（Ｃ）部位１：ＩＬ−１７ＲＡのＤ１のＮ末端結合部位。（Ｄ）部位３：ＩＬ−１７ＲＡのＤ２結合部位。接触残基は棒モデルとして示す。点線は水素結合と塩橋を示す。
【図３】へテロ二量体ＩＬ−１７シグナル伝達複合体の組立とモデルを示す図である。（Ａ）表面プラスモン共鳴（ＳＰＲ）によってＩＬ−１７受容体／サイトカインの親和性を測定した。ＩＬ−１７ＲＡ、ＩＬ−１７ＲＢ及びＩＬ−１７ＲＣをＳＰＲチップ表面に不動化し、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｆ又はＩＬ−１７Ｅの結合親和性を測定した。示されている場合、次いでチップ上で事前に組み立てられた受容体サイトカイン複合体への第２の受容体の結合の親和性を測定した。動態実験については（上の３つの列）、代表的なＳＰＲセンサーグラムを着色の線で示し、曲線適合を黒色の線で示す。応答（ＲＵ、共鳴単位）に対して秒（ｓ）での時間をプロットする。注入濃度はセンサーグラムの右にある。平衡実験（４番目の列）については、代表的な実験での最大応答（ＲＵ）に対して注入濃度をプロットし；曲線適合を黒色の線として示し、解離定数（Ｋｄ）を縦線として印す。挿入図は結合事象の代表的な模式図を示す。Ｋｄは、少なくとも２つの独立した実験の平均値±平均値の標準誤差として報告する。（Ｂ）へテロ二量体シグナル伝達複合体の形成のモデル。第２の受容体（マゼンタ）は、双方の受容体が同一方向でＩＬ−１７に結合することを想定してモデル化された。受容体のＣ末端ドメイン（Ｄ２）は四角で強調したように近位に近づく。
【図４】結合接触面と保存されたＩＬ−１７残基を示す模式図である。リボン形式で黄色に着色したＩＬ−１７ＲＡを伴った白色のＩＬ−１７Ｆの表面表現。（Ａ）シアンで強調したＩＬ−１７ＲＡ／ＩＬ−１７Ｆの接触残基。（Ｂ）ＩＬ−１７ＡとＩＬ−１７Ｆの間で保存された残基をＩＬ−１７Ｆ構造の中で地図状に示す；同一の残基を点描し、保存的置換を淡ピンクで示す。（Ｃ）４、５、又は６のＩＬ−１７サイトカインファミリーメンバーの間で同一の残基を示し、６種のサイトカインすべてにわたって保存的な置換も特定する。（Ｄ）ヒトＩＬ−１７サイトカインの配列構造。ＩＬ−１７ＲＡ／ＩＬ−１７Ｆ構造で接触を形成する残基をＩＬ−１７Ｆ配列上及び配列構造の下で黒枠によって強調する。４、５、又は６のサイトカインで同一である残基を点描し、６種のサイトカインすべてで同一である残基も「＊」で印し、保存された基を「：」で印す。配列はそれぞれ、配列番号１２、２、６、８、１０及び４に相当する。
【図５】ヘテロ二量体システイン／ノット成長因子受容体複合体と比較したＩＬ−１７ＲＡ／ＩＬ−１７Ｆ受容体複合体の比較。（Ａ）ＩＬ−１７ＲＡ／ＩＬ−１７Ｆ、（Ｂ）Ｐ７５ＮＴＲ／ＮＧＦ及び（Ｃ）ＴｒｋＡ／ＮＧＦをリボンモデルで示す。
【発明を実施するための形態】
【００４２】
本発明をさらに容易に理解するために、本明細書全体を通してと同様に以下に特定の用語及び語句を定義する。
定義
【００４３】
用語「有効量」は本明細書で使用されるとき、所望の生物学的応答を引き出すのに必要な量を指す。薬剤の有効量は、所望の評価項目のような因子、送達される薬剤、追加の有効成分又は不活性成分の組成、等によって変化し得る。
【００４４】
用語「発現」は、ポリペプチドがＤＮＡから生成される過程を意味するように本明細書で使用される。過程には、遺伝子のｍＲＮＡへの転写、このｍＲＮＡのポリペプチドへの翻訳が関与する。それが使用される文脈によって「発現」はＲＮＡ、タンパク質又はその双方の生成を指してもよい。
【００４５】
用語「遺伝子産物」は本明細書で使用されるとき、遺伝子によってコードされるＲＮＡ（たとえば、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）又はマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ））又はタンパク質を意味する。
【００４６】
本明細書で使用されるとき、用語「単離された」は、実質的に純粋である分子を指す。単離されたタンパク質は、実質的に純粋であり、たとえば、他の異なったタンパク質分子を６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％又は９９％含まない。
【００４７】
本明細書で使用されるとき、用語「調節する」及び「調節」は一般に、特に標的とする遺伝子（そのＲＮＡ及び／又はタンパク質産物を含む）、シグナル伝達経路、細胞及び／又は標的とする表現型の下方調節（すなわち、阻害又は抑制）、又は標的とする遺伝子の上方調節（すなわち、誘導又は増大）を指す。たとえば、「調節する」及び「調節」は、ＩＬ−１７受容体のシグナル伝達の下方調節を指すことができる。
【００４８】
「患者」又は「対象」は、炎症性疾患のような疾患又は状態を発症するリスクを有する若しくはその中にある、炎症性疾患に罹っていると診断された若しくは診断される、又はさもなければ、本明細書に記載される組成物及び方法から利益を得る哺乳類、たとえば、ヒトを意味する。
【００４９】
用語「軽減する」は本明細書で使用されるとき、発現又は遺伝子産物の活性における阻害、軽減、低下、抑制、下方調節又は防止を指す。たとえば、発現又は活性のレベルは、阻害されない発現又は活性の、たとえば、１００％又は１００％未満、たとえば、９５％未満、９０％未満、８５％未満、８０％未満、７５％未満、７０％未満、６５％未満、６０％未満、５５％未満、５０％未満、４５％未満、４０％未満、３５％未満、３０％未満、２５％未満、２０％未満、１５％未満、１０％未満、又は５％未満であり得る。
【００５０】
用語「治療すること」又は「治療」又は「緩和」又は「改善」は、治療法及び予防上又は予防的な対策の双方を指し、その際、目的は、標的とする病理学的な状態又は障害を防ぐ又は遅らせる（軽くする）ことである。
【００５１】
用語「ＩＬ−１７受容体」は、たとえば、ＩＬ−１７ＲＡ、ＩＬ−１７ＲＢ、ＩＬ−１７ＲＣ、ＩＬ−１７ＲＤ及びＩＬ−１７ＲＥ受容体のようなＩＬ−１７サイトカインに結合するタンパク質を指し、特にこれら受容体のヒトアイソフォーム及びこれら受容体の細胞外ドメインを指す。
【００５２】
２つの配列の間での「相同性」又は「配列同一性」（用語は本明細書では相互交換可能に使用される）の計算は以下のように行われる。最適な比較目的のために配列を並べる（たとえば、最適な配置のために第１と第２のアミノ酸又は核酸の配列の一方又は双方にギャップを導入することができる）。最適な配置は、ギャップペナルティ１０及びギャップ拡張ペナルティ１と共にＢｌｏｓｓｕｍ６２スコア化マトリクスを用いたＥＭＢＯＳＳパッケージのＮｅｅｄｌｅアルゴリズムで実施されたようなＮｅｅｄｌｅｍａｎとＷｕｎｓｃｈ  のアルゴリズムを用いて最良スコアとして決定される。Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ，Ｓ．Ｂ．及びＷｕｎｓｃｈ，Ｃ．Ｄ．（１９７０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８，４４３−４５３；Ｋｒｕｓｋａｌ，Ｊ．Ｂ．（１９８３）、Ｄ．Ｓａｎｋｏｆｆ及びＪ．Ｂ．Ｋｒｕｓｋａｌ編、Ｔｉｍｅ  ｗａｒｐｓ，ｓｔｒｉｎｇ  ｅｄｉｔｓ  ａｎｄ  ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓにおける配列比較の概説：ｔｈｅ  ｔｈｅｏｒｙ  ａｎｄ  ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ，ｐｐ．１−４４、Ａｄｄｉｓｏｎ  Ｗｅｓｌｅｙ，及びｔｈｅ  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  ＵＫ）ＥＭＢＯＳＳから入手可能なツール：Ｔｈｅ  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  Ｏｐｅｎ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｓｕｉｔｅ  （２０００），Ｒｉｃｅ，Ｐら、Ａ．，Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  １６，（６）ｐｐ．２７６−２７７、並びにｈｙｐｅｒｔｅｘｔ  ｔｒａｎｓｆｅｒ  ｐｒｏｔｏｃｏｌ：／／ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｅｍｂｏｓｓ／  ａｌｉｇｎ／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍｌ及びｈｙｐｅｒｔｅｘｔ  ｔｒａｎｓｆｅｒ  ｐｒｏｔｏｃｏｌ：／／ｅｍｂｏｓｓ．ｏｐｅｎ−ｂｉｏ．ｏｒｇ／ｗｉｋｉ／Ａｐｐｄｏｃ：Ｎｅｅｄｌｅにて利用可能なオンラインを参照のこと。次いで相当するアミノ酸の位置又はヌクレオチドの位置でアミノ酸残基又はヌクレオチドを比較し、２つの配列間のパーセント同一性は、配列が共有する同一位置の数の関数である。
免疫調節性ポリペプチド
【００５３】
主として分泌されたサイトカインの作用を介して無処理のＴ細胞を刺激して特殊化したエフェクター細胞に分化させる。Ｔヘルパー（ＴＨ）細胞は通常、２つのエフェクター細胞系列：そのサイトカインの発現特性に基づいてそれぞれ細胞性及び液性のＴ細胞免疫を調節するＴＨ１細胞とＴＨ２細胞の一方に入るとみなされている（１）。さらに最近の研究によって、識別可能で、実際Ｔｈ１及びＴｈ２の系列の産物によって拮抗されるエフェクターＴＨ細胞の第３の系列、Ｔｈ１７細胞が記載された（２，３）。その記号サイトカインインターロイキン１７（ＩＬ−１７）にちなんで名付けられ、Ｔｈ細胞のこのサブセットは、細胞外の細菌及び一部の真菌に対して、これらの微生物がＴｈ１又はＴｈ２の応答によって有効に制御されない可能性があるので、高い宿主保護について特殊化された適応免疫系の一翼として進化してきたと思われる（４，５）。Ｔｈ１７細胞の分化を誘導し、恒常性を調節するサイトカイン、すなわち、ＩＬ−２３、ＩＬ−６及び形質転換増殖因子−β（ＴＧＦ−β）の種々の組織起源は、造血系及び非造血系の細胞双方におけるＩＬ−１７受容体の存在と一緒に獲得免疫の細胞と自然免疫の細胞の間に存在する複雑な関係を強調している。Ｔｈ１７細胞のエフェクター機能の完全な範囲が未だ明らかになってくる一方で、Ｔｈ１７細胞が促進する強力な炎症反応は、関節リウマチ、多発性硬化症及び乾癬を始めとする以前からＴｈ１細胞又はＴｈ２細胞に起因するとされた多数の自己免疫疾患及び炎症性疾患の病態形成に関連している（４）。
【００５４】
ＩＬ−１７Ａに加えて、ＩＬ−１７ファミリーのメンバーにはＩＬ−１７Ｂ、ＩＬ−１７Ｃ、ＩＬ−１７Ｄ、ＩＬ−１７Ｅ（ＩＬ−２５とも呼ぶ）及びＩＬ−１７Ｆが挙げられる。ＩＬ−１７ファミリーのメンバーはすべて高度に保存されたシステイン残基を含む類似したタンパク質構造を有する。ＩＬ−１７ＡとＩＬ−１７Ｆはほとんど密接に関係し、ＩＬ−１７Ｂ（２９％）、ＩＬ−１７Ｄ（２５％）、ＩＬ−１７Ｃ（２３％）がそれに続き、ＩＬ−１７ＥがＩＬ−１７Ａとは最も関係が遠い（１７％）。これらのサイトカインはすべて哺乳類で上手く保存されており、ヒトとマウスのホモログ間で６２〜８８％ものアミノ酸が保存されている。他のサイトカインとの配列類似性はない。ＩＬ−１７Ｆの結晶構造に基づいて、６種の構造的に関連するＩＬ−１７サイトカイン（ＩＬ−１７Ａ〜ＩＬ−１７Ｆ）は、神経成長因子（ＮＧＦ）のようなシステイン／ノット成長因子に相同なヘテロ二量体の折り畳み（又はＩＬ−１７Ａ〜Ｆの場合におけるヘテロ二量体の折り畳み）を形成すると予測される（７，８）。Ｔｈ１７細胞に由来するＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆは、ファミリーの範囲内で最大の相同性を共有し、シグナル伝達にＩＬ−１７ＲＡとＩＬ−１７ＲＣの双方を必要とする（９，１０）。線維芽細胞、上皮細胞及び内皮細胞がＩＬ−１７ＲＡとＩＬ−１７ＲＣの双方を同時発現することが示されている一方で、Ｔ細胞はＩＬ−１７ＲＣを優勢には発現せず、ＩＬ−１７ＲＡのみを発現する（１１）。リンパ球はＩＬ−１７に応答性ではないと考えられたが、Ｆｌａｖｅｌｌと共同研究者らは、Ｔ細胞が実際ＩＬ−１７に直接応答することを報告した（１２）。
【００５５】
サイトカインのＩＬ−１７ファミリーが、Ｔｈ１７系列のエフェクターサイトカインとしてのその作用を部分的に介して、免疫応答や炎症反応の操作に画期的なアプローチを提供する。従って、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｂ、ＩＬ−１７Ｃ、ＩＬ−１７Ｄ、ＩＬ−１７Ｅ、ＩＬ−１７Ｆ、及びそれらの受容体の拮抗物質は、本明細書に記載される拮抗物質のように単独で又は一緒に、たとえば、多発性硬化症、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、関節リウマチ、乾癬及び癌のような炎症性疾患の治療法で有用である。さらに、ＩＬ−１７ファミリーメンバーの活性の拮抗物質は、本明細書に記載される拮抗物質のようにそのほかの炎症性疾患の治療法で有用である。
【００５６】
ヒトＩＬ−１７サイトカインの一部の例となる配列は以下のとおりである。
【００５７】
ＩＬ−１７Ａ：例となるヒトＩＬ−１７Ａサイトカインの配列は以下のとおりであり、ＵｎｉＰｒｏｔ  ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ  Ｑ１６５５２によって記載されている（ｕｎｉｐｒｏｔ．ｏｒｇでのウェブ情報源及びＴｈｅ  ＵｎｉＰｒｏｔ  Ｃｏｎｓｏｒｔｉｕｍ，  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．Ｄ１４２−Ｄ１４８（２０１０）を参照）：ＬＬＬＬＬＳＬＥＡＩ  ＶＫＡＧＩＴＩＰＲＮ  ＰＧＣＰＮＳＥＤＫＮ  ＦＰＲＴＶＭＶＮＬＮＩＨＮＲＮＴＮＴＮＰ  ＫＲＳＳＤＹＹＮＲＳ  ＴＳＰＷＮＬＨＲＮＥ  ＤＰＥＲＹＰＳＶＩＷ  ＥＡＫＣＲＨＬＧＣＩＮＡＤＧＮＶＤＹＨＭ  ＮＳＶＰＩＱＱＥＩＬ  ＶＬＲＲＥＰＰＨＣＰ  ＮＳＦＲＬＥＫＩＬＶ  ＳＶＧＣＴＣＶＴＰＩＶＨＨＶＡ（配列番号１）。
【００５８】
別の例となる配列は、上記配列のアミノ酸２４〜１５５を含み、ＩＬ−１７Ａのシグナル配列を欠く形態、又は図４Ｄに示す配列を含む：ＩＴＩＰＲＮＰＧＣＰＮＳＥＤＫＮＦＰＲＴＶＭＶＮＬＮＩＨＮＲＮＴＮＴＮＰＫＲＳＳＤＹＹＮＲＳＴＳＰＷＮＬＨＲＮＥＤＰＥＲＹＰＳＶＩＷＥＡＫＣＲＨＬＧＣＩＮＡＤＧＮＶＤＹＨＭＮＳＶＰＩＱＱＥＩＬＶＬＲＲＥＰＰＨＣＰＮＳＦＲＬＥＫＩＬＶＳＶＧＣＴＣＶＴＰＩＶＨＨＶＡ（配列番号２）。
【００５９】
配列はまた、配列番号２の第１残基に先行するグリシンも含むことができる。配列番号２を参照して本明細書に記載されるＩＬ−１７Ａの各配列はまた、配列番号２において最初に記載されるアミノ酸であるイソロイシンに先行するこのグリシンも含むことができる。他の残基を使用することもできる。他の例となるＩＬ−１７Ａの配列にはマウス（Ｑ６２３８６）、ラット（Ｑ６１４５３）及びウシ（Ｑ６８７Ｙ７）の配列が挙げられる。本明細書に記載される変異及び修飾は、たとえば、本明細書に記載されるような任意の種からＩＬ−１７Ａ配列にて作製することができる。
【００６０】
ＩＬ−１７Ｂ：例となるヒトＩＬ−１７Ｂサイトカインの配列は以下のとおりであり、Ｕｎｉｐｒｏｔ  ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ  Ｑ９ＵＨＦ５によって記載されている：ＭＤＷＰＨＮＬＬＦＬＬＴＩＳＩＦＬＧＬＧＱＰＲＳＰＫＳＫＲＫＧＱＧＲＰＧＰＬＡＰＧＰＨＱＶＰＬＤＬＶＳＲＭＫＰＹＡＲＭＥＥＹＥＲＮＩＥＥＭＶＡＱＬＲＮＳＳＥＬＡＱＲＫＣＥＶＮＬＱＬＷＭＳＮＫＲＳＬＳＰＷＧＹＳＩＮＨＤＰＳＲＩＰＶＤＬＰＥＡＲＣＬＣＬＧＣＶＮＰＦＴＭＱＥＤＲＳＭＶＳＶＰＶＦＳＱＶＰＶＲＲＲＬＣＰＰＰＰＲＴＧＰＣＲＱＲＡＶＭＥＴＩＡＶＧＣＴＣＩＦ（配列番号３）。別の例となる配列は、上記配列のアミノ酸２１〜１８０を含み、ＩＬ−１７Ｂのシグナル配列を欠く形態、又は図４Ｄに示す配列を含む：ＲＳＰＫＳＫＲＫＧＱＧＲＰＧＰＬＡＰＧＰＨＱＶＰＬＤＬＶＳＲＭＫＰＹＡＲＭＥＥＹＥＲＮＩＥＥＭＶＡＱＬＲＮＳＳＥＬＡＱＲＫＣＥＶＮＬＱＬＷＭＳＮＫＲＳＬＳＰＷＧＹＳＩＮＨＤＰＳＲＩＰＶＤＬＰＥＡＲＣＬＣＬＧＣＶＮＰＦＴＭＱＥＤＲＳＭＶＳＶＰＶＦＳＱＶＰＶＲＲＲＬＣＰＰＰＰＲＴＧＰＣＲＱＲＡＶＭＥＴＩＡＶＧＣＴＣＩＦ（配列番号４）。
【００６１】
ＩＬ−１７Ｃ：例となるヒトＩＬ−１７Ｃサイトカインの配列は以下のとおりであり、Ｕｎｉｐｒｏｔ  ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ  Ｑ９Ｐ０Ｍ４によって記載されている：ＭＴＬＬＰＧＬＬＦＬＴＷＬＨＴＣＬＡＨＨＤＰＳＬＲＧＨＰＨＳＨＧＴＰＨＣＹＳＡＥＥＬＰＬＧＱＡＰＰＨＬＬＡＲＧＡＫＷＧＱＡＬＰＶＡＬＶＳＳＬＥＡＡＳＨＲＧＲＨＥＲＰＳＡＴＴＱＣＰＶＬＲＰＥＥＶＬＥＡＤＴＨＱＲＳＩＳＰＷＲＹＲＶＤＴＤＥＤＲＹＰＱＫＬＡＦＡＥＣＬＣＲＧＣＩＤＡＲＴＧＲＥＴＡＡＬＮＳＶＲＬＬＱＳＬＬＶＬＲＲＲＰＣＳＲＤＧＳＧＬＰＴＰＧＡＦＡＦＨＴＥＦＩＨＶＰＶＧＣＴＣＶＬＰＲＳＶ（配列番号５）。別の例となる配列は、上記配列のアミノ酸１９〜１９７を含み、ＩＬ−１７Ｃのシグナル配列を欠く形態、又は図４Ｄに示す配列を含む：ＨＨＤＰＳＬＲＧＨＰＨＳＨＧＴＰＨＣＹＳＡＥＥＬＰＬＧＱＡＰＰＨＬＬＡＲＧＡＫＷＧＱＡＬＰＶＡＬＶＳＳＬＥＡＡＳＨＲＧＲＨＥＲＰＳＡＴＴＱＣＰＶＬＲＰＥＥＶＬＥＡＤＴＨＱＲＳＩＳＰＷＲＹＲＶＤＴＤＥＤＲＹＰＱＫＬＡＦＡＥＣＬＣＲＧＣＩＤＡＲＴＧＲＥＴＡＡＬＮＳＶＲＬＬＱＳＬＬＶＬＲＲＲＰＣＳＲＤＧＳＧＬＰＴＰＧＡＦＡＦＨＴＥＦＩＨＶＰＶＧＣＴＣＶＬＰＲＳＶ（配列番号６）。
【００６２】
ＩＬ−１７Ｄ：例となるヒトＩＬ−１７Ｄサイトカインの配列は以下のとおりであり、Ｕｎｉｐｒｏｔ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ  Ｑ８ＴＡＤ２によって記載されている：ＭＬＶＡＧＦＬＬＡＬＰＰＳＷＡＡＧＡＰＲＡＧＲＲＰＡＲＰＲＧＣＡＤＲＰＥＥＬＬＥＱＬＹＧＲＬＡＡＧＶＬＳＡＦＨＨＴＬＱＬＧＰＲＥＱＡＲＮＡＳＣＰＡＧＧＲＰＡＤＲＲＦＲＰＰＴＮＬＲＳＶＳＰＷＡＹＲＩＳＹＤＰＡＲＹＰＲＹＬＰＥＡＹＣＬＣＲＧＣＬＴＧＬＦＧＥＥＤＶＲＦＲＳＡＰＶＹＭＰＴＶＶＬＲＲＴＰＡＣＡＧＧＲＳＶＹＴＥＡＹＶＴＩＰＶＧＣＴＣＶＰＥＰＥＫＤＡＤＳＩＮＳＳＩＤＫＱＧＡＫＬＬＬＧＰＮＤＡＰＡＧＰ（配列番号７）。別の例となる配列は、上記配列のアミノ酸１６〜２０２を含み、ＩＬ−１７Ｄのシグナル配列を欠く形態、又は図４Ｄに示す配列を含む：ＡＧＡＰＲＡＧＲＲＰＡＲＰＲＧＣＡＤＲＰＥＥＬＬＥＱＬＹＧＲＬＡＡＧＶＬＳＡＦＨＨＴＬＱＬＧＰＲＥＱＡＲＮＡＳＣＰＡＧＧＲＰＡＤＲＲＦＲＰＰＴＮＬＲＳＶＳＰＷＡＹＲＩＳＹＤＰＡＲＹＰＲＹＬＰＥＡＹＣＬＣＲＧＣＬＴＧＬＦＧＥＥＤＶＲＦＲＳＡＰＶＹＭＰＴＶＶＬＲＲＴＰＡＣＡＧＧＲＳＶＹＴＥＡＹＶＴＩＰＶＧＣＴＣＶＰＥＰＥＫＤＡＤＳＩＮＳＳＩＤＫＱＧＡＫＬＬＬＧＰＮＤＡＰＡＧＰ（配列番号８）。
【００６３】
ＩＬ−１７Ｅ：例となるヒトＩＬ−１７Ｅサイトカインの配列は以下のとおりであり、Ｕｎｉｐｒｏｔ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ  Ｑ９Ｈ２９３によって記載されている：ＭＲＥＲＰＲＬＧＥＤＳＳＬＩＳＬＦＬＱＶＶＡＦＬＡＭＶＭＧＴＨＴＹＳＨＷＰＳＣＣＰＳＫＧＱＤＴＳＥＥＬＬＲＷＳＴＶＰＶＰＰＬＥＰＡＲＰＮＲＨＰＥＳＣＲＡＳＥＤＧＰＬＮＳＲＡＩＳＰＷＲＹＥＬＤＲＤＬＮＲＬＰＱＤＬＹＨＡＲＣＬＣＰＨＣＶＳＬＱＴＧＳＨＭＤＰＲＧＮＳＥＬＬＹＨＮＱＴＶＦＹＲＲＰＣＨＧＥＫＧＴＨＫＧＹＣＬＥＲＲＬＹＲＶＳＬＡＣＶＣＶＲＰＲＶＭＧ（配列番号９）。
【００６４】
別の例となる配列は、上記配列のアミノ酸３３〜１７７を含み、ＩＬ−１７Ｅのシグナル配列を欠く形態、又は図４Ｄに示す配列を含む：ＴＨＴＹＳＨＷＰＳＣＣＰＳＫＧＱＤＴＳＥＥＬＬＲＷＳＴＶＰＶＰＰＬＥＰＡＲＰＮＲＨＰＥＳＣＲＡＳＥＤＧＰＬＮＳＲＡＩＳＰＷＲＹＥＬＤＲＤＬＮＲＬＰＱＤＬＹＨＡＲＣＬＣＰＨＣＶＳＬＱＴＧＳＨＭＤＰＲＧＮＳＥＬＬＹＨＮＱＴＶＦＹＲＲＰＣＨＧＥＫＧＴＨＫＧＹＣＬＥＲＲＬＹＲＶＳＬＡＣＶＣＶＲＰＲＶＭＧ（配列番号１０）。
【００６５】
ＩＬ−１７Ｆ：例となるヒトＩＬ−１７Ｄサイトカインの配列は以下のとおりであり、Ｕｎｉｐｒｏｔ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ  Ｑ９６ＰＤ４によって記載されている：ＭＴＶＫＴＬＨＧＰＡＭＶＫＹＬＬＬＳＩＬＧＬＡＦＬＳＥＡＡＡＲＫＩＰＫＶＧＨＴＦＦＱＫＰＥＳＣＰＰＶＰＧＧＳＭＫＬＤＩＧＩＩＮＥＮＱＲＶＳＭＳＲＮＩＥＳＲＳＴＳＰＷＮＹＴＶＴＷＤＰＮＲＹＰＳＥＶＶＱＡＱＣＲＮＬＧＣＩＮＡＱＧＫＥＤＩＳＭＮＳＶＰＩＱＱＥＴＬＶＶＲＲＫＨＱＧＣＳＶＳＦＱＬＥＫＶＬＶＴＶＧＣＴＣＶＴＰＶＩＨＨＶＱ（配列番号１１）。サイトカインの翻訳は、前述の配列のＭＥＴ１又はＭＥＴ１１で開始され得る。
【００６６】
別の例となる配列は、上記配列のアミノ酸３１〜１６３を含み、ＩＬ−１７Ｆのシグナル配列を欠く形態、又は図４Ｄに示す配列を含む：ＲＫＩＰＫＶＧＨＴＦＦＱＫＰＥＳＣＰＰＶＰＧＧＳＭＫＬＤＩＧＩＩＮＥＮＱＲＶＳＭＳＲＮＩＥＳＲＳＴＳＰＷＮＹＴＶＴＷＤＰＮＲＹＰＳＥＶＶＱＡＱＣＲＮＬＧＣＩＮＡＱＧＫＥＤＩＳＭＮＳＶＰＩＱＱＥＴＬＶＶＲＲＫＨＱＧＣＳＶＳＦＱＬＥＫＶＬＶＴＶＧＣＴＣＶＴＰＶＩＨＨＶＱ（配列番号１２）。配列は、図４Ｄと併せてＩＬ−１７のファミリーメンバーにて残基の位置を特定するために有用なデフォルトの参照先を提供する。他の例となるＩＬ−１７Ｆの配列には、マウス（Ｑ７ＴＮＩ７）、ラット（Ｑ５ＢＪ９５）及びブタ（Ｑ５ＢＪ９５）の配列が挙げられる。
【００６７】
幾つかの他の哺乳類のＩＬ−１７サイトカインの配列も既知である。たとえば、Ｕｎｉｐｒｏｔエントリ：Ｑ６２３８６（マウスＩＬ−１７Ａ）、Ｑ６１４５３（ラットＩＬ−１７Ａ）、Ｑ６８７Ｙ７（ウシＩＬ−１７Ａ）、Ｑ７ＴＮＩ７（マウスＩＬ−１７Ｆ）、Ｑ５ＢＪ９５（ラットＩＬ−１７Ｆ）、Ｑ９ＱＸＴ６（マウスＩＬ−１７Ｂ）、Ｑ９ＥＱＩ６（ハムスターＩＬ−１７Ｂ）、Ｑ８Ｋ４Ｃ５（マウスＩＬ−１７Ｃ）、Ｑ８Ｋ４Ｃ４（マウスＩＬ−１７Ｄ）及びＱ９ＶＨＨ８（マウスＩＬ−１７Ｅ）を参照のこと。
【００６８】
ＩＬ−１７ＲＡ：例となるヒトＩＬ−１７ＲＡ受容体の配列は以下のとおりであり、ＵｎｉＰｒｏｔ  ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ  Ｑ９６Ｆ４６によって記載されている：ＭＧＡＡＲＳＰＰＳＡＶＰＧＰＬＬＧＬＬＬＬＬＬＧＶＬＡＰＧＧＡＳＬＲＬＬＤＨＲＡＬＶＣＳＱＰＧＬＮＣＴＶＫＮＳＴＣＬＤＤＳＷＩＨＰＲＮＬＴＰＳＳＰＫＤＬＱＩＱＬＨＦＡＨＴＱＱＧＤＬＦＰＶＡＨＩＥＷＴＬＱＴＤＡＳＩＬＹＬＥＧＡＥＬＳＶＬＱＬＮＴＮＥＲＬＣＶＲＦＥＦＬＳＫＬＲＨＨＨＲＲＷＲＦＴＦＳＨＦＶＶＤＰＤＱＥＹＥＶＴＶＨＨＬＰＫＰＩＰＤＧＤＰＮＨＱＳＫＮＦＬＶＰＤＣＥＨＡＲＭＫＶＴＴＰＣＭＳＳＧＳＬＷＤＰＮＩＴＶＥＴＬＥＡＨＱＬＲＶＳＦＴＬＷＮＥＳＴＨＹＱＩＬＬＴＳＦＰＨＭＥＮＨＳＣＦＥＨＭＨＨＩＰＡＰＲＰＥＥＦＨＱＲＳＮＶＴＬＴＬＲＮＬＫＧＣＣＲＨＱＶＱＩＱＰＦＦＳＳＣＬＮＤＣＬＲＨＳＡＴＶＳＣＰＥＭＰＤＴＰＥＰＩＰＤＹＭＰＬＷＶＹＷＦＩＴＧＩＳＩＬＬＶＧＳＶＩＬＬＩＶＣＭＴＷＲＬＡＧＰＧＳＥＫＹＳＤＤＴＫＹＴＤＧＬＰＡＡＤＬＩＰＰＰＬＫＰＲＫＶＷＩＩＹＳＡＤＨＰＬＹＶＤＶＶＬＫＦＡＱＦＬＬＴＡＣＧＴＥＶＡＬＤＬＬＥＥＱＡＩＳＥＡＧＶＭＴＷＶＧＲＱＫＱＥＭＶＥＳＮＳＫＩＩＶＬＣＳＲＧＴＲＡＫＷＱＡＬＬＧＲＧＡＰＶＲＬＲＣＤＨＧＫＰＶＧＤＬＦＴＡＡＭＮＭＩＬＰＤＦＫＲＰＡＣＦＧＴＹＶＶＣＹＦＳＥＶＳＣＤＧＤＶＰＤＬＦＧＡＡＰＲＹＰＬＭＤＲＦＥＥＶＹＦＲＩＱＤＬＥＭＦＱＰＧＲＭＨＲＶＧＥＬＳＧＤＮＹＬＲＳＰＧＧＲＱＬＲＡＡＬＤＲＦＲＤＷＱＶＲＣＰＤＷＦＥＣＥＮＬＹＳＡＤＤＱＤＡＰＳＬＤＥＥＶＦＥＥＰＬＬＰＰＧＴＧＩＶＫＲＡＰＬＶＲＥＰＧＳＱＡＣＬＡＩＤＰＬＶＧＥＥＧＧＡＡＶＡＫＬＥＰＨＬＱＰＲＧＱＰＡＰＱＰＬＨＴＬＶＬＡＡＥＥＧＡＬＶＡＡＶＥＰＧＰＬＡＤＧＡＡＶＲＬＡＬＡＧＥＧＥＡＣＰＬＬＧＳＰＧＡＧＲＮＳＶＬＦＬＰＶＤＰＥＤＳＰＬＧＳＳＴＰＭＡＳＰＤＬＬＰＥＤＶＲＥＨＬＥＧＬＭＬＳＬＦＥＱＳＬＳＣＱＡＱＧＧＣＳＲＰＡＭＶＬＴＤＰＨＴＰＹＥＥＥＱＲＱＳＶＱＳＤＱＧＹＩＳＲＳＳＰＱＰＰＥＧＬＴＥＭＥＥＥＥＥＥＥＱＤＰＧＫＰＡＬＰＬＳＰＥＤＬＥＳＬＲＳＬＱＲＱＬＬＦＲＱＬＱＫＮＳＧＷＤＴＭＧＳＥＳＥＧＰＳＡ（配列番号１３）。
【００６９】
また提供されるのは、シグナル配列が取り除かれる（たとえば、処理される）又はアミノ酸１〜３１若しくは１〜３２が欠失するＩＬ−１７ＲＡポリペプチド、任意でそのほかの欠失、挿入及び置換である。例となるＩＬ−１７ＲＡポリペプチドは以下のとおりであり：ＳＬＲＬＬＤＨＲＡＬＶＣＳＱＰＧＬＮＣＴＶＫＮＳＴＣＬＤＤＳＷＩＨＰＲＮＬＴＰＳＳＰＫＤＬＱＩＱＬＨＦＡＨＴＱＱＧＤＬＦＰＶＡＨＩＥＷＴＬＱＴＤＡＳＩＬＹＬＥＧＡＥＬＳＶＬＱＬＮＴＮＥＲＬＣＶＲＦＥＦＬＳＫＬＲＨＨＨＲＲＷＲＦＴＦＳＨＦＶＶＤＰＤＱＥＹＥＶＴＶＨＨＬＰＫＰＩＰＤＧＤＰＮＨＱＳＫＮＦＬＶＰＤＣＥＨＡＲＭＫＶＴＴＰＣＭＳＳＧＳＬＷＤＰＮＩＴＶＥＴＬＥＡＨＱＬＲＶＳＦＴＬＷＮＥＳＴＨＹＱＩＬＬＴＳＦＰＨＭＥＮＨＳＣＦＥＨＭＨＨＩＰＡＰＲＰＥＥＦＨＱＲＳＮＶＴＬＴＬＲＮＬＫＧＣＣＲＨＱＶＱＩＱＰＦＦＳＳＣＬＮＤＣＬＲＨＳＡＴＶＳＣＰＥＭＰＤＴＰＥＰＩＰＤＹＭＰＬＷＶＹＷＦＩＴＧＩＳＩＬＬＶＧＳＶＩＬＬＩＶＣＭＴＷＲＬＡＧＰＧＳＥＫＹＳＤＤＴＫＹＴＤＧＬＰＡＡＤＬＩＰＰＰＬＫＰＲＫＶＷＩＩＹＳＡＤＨＰＬＹＶＤＶＶＬＫＦＡＱＦＬＬＴＡＣＧＴＥＶＡＬＤＬＬＥＥＱＡＩＳＥＡＧＶＭＴＷＶＧＲＱＫＱＥＭＶＥＳＮＳＫＩＩＶＬＣＳＲＧＴＲＡＫＷＱＡＬＬＧＲＧＡＰＶＲＬＲＣＤＨＧＫＰＶＧＤＬＦＴＡＡＭＮＭＩＬＰＤＦＫＲＰＡＣＦＧＴＹＶＶＣＹＦＳＥＶＳＣＤＧＤＶＰＤＬＦＧＡＡＰＲＹＰＬＭＤＲＦＥＥＶＹＦＲＩＱＤＬＥＭＦＱＰＧＲＭＨＲＶＧＥＬＳＧＤＮＹＬＲＳＰＧＧＲＱＬＲＡＡＬＤＲＦＲＤＷＱＶＲＣＰＤＷＦＥＣＥＮＬＹＳＡＤＤＱＤＡＰＳＬＤＥＥＶＦＥＥＰＬＬＰＰＧＴＧＩＶＫＲＡＰＬＶＲＥＰＧＳＱＡＣＬＡＩＤＰＬＶＧＥＥＧＧＡＡＶＡＫＬＥＰＨＬＱＰＲＧＱＰＡＰＱＰＬＨＴＬＶＬＡＡＥＥＧＡＬＶＡＡＶＥＰＧＰＬＡＤＧＡＡＶＲＬＡＬＡＧＥＧＥＡＣＰＬＬＧＳＰＧＡＧＲＮＳＶＬＦＬＰＶＤＰＥＤＳＰＬＧＳＳＴＰＭＡＳＰＤＬＬＰＥＤＶＲＥＨＬＥＧＬＭＬＳＬＦＥＱＳＬＳＣＱＡＱＧＧＣＳＲＰＡＭＶＬＴＤＰＨＴＰＹＥＥＥＱＲＱＳＶＱＳＤＱＧＹＩＳＲＳＳＰＱＰＰＥＧＬＴＥＭＥＥＥＥＥＥＥＱＤＰＧＫＰＡＬＰＬＳＰＥＤＬＥＳＬＲＳＬＱＲＱＬＬＦＲＱＬＱＫＮＳＧＷＤＴＭＧＳＥＳＥＧＰＳＡ（配列番号１４）、以下の実施例１〜３で使用される番号付けを表す。
【００７０】
別の例となるＩＬ−１７ＲＡポリペプチドには、ＩＬ−１７ＲＡの細胞外ドメイン、たとえば、配列番号１３の略アミノ酸３３〜３２０が含まれる。他の例となるＩＬ−１７ＲＡ配列には、マウス（Ｑ６０９４３）、ラット（ＮＰ＿００１１０１３５３．２、ＧｅｎＢａｎｋ）及びウシの配列（ＸＰ＿６０３３８３．５、ＧｅｎＢａｎｋ）が挙げられる。
【００７１】
ＩＬ−１７ＲＢ：例となるヒトＩＬ−１７ＲＢ受容体の配列は以下のとおりであり、Ｑ９ＮＲＭ６のＵｎｉＰｒｏｔ  ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒを有する：ＭＳＬＶＬＬＳＬＡＡＬＣＲＳＡＶＰＲＥＰＴＶＱＣＧＳＥＴＧＰＳＰＥＷＭＬＱＨＤＬＩＰＧＤＬＲＤＬＲＶＥＰＶＴＴＳＶＡＴＧＤＹＳＩＬＭＮＶＳＷＶＬＲＡＤＡＳＩＲＬＬＫＡＴＫＩＣＶＴＧＫＳＮＦＱＳＹＳＣＶＲＣＮＹＴＥＡＦＱＴＱＴＲＰＳＧＧＫＷＴＦＳＹＩＧＦＰＶＥＬＮＴＶＹＦＩＧＡＨＮＩＰＮＡＮＭＮＥＤＧＰＳＭＳＶＮＦＴＳＰＧＣＬＤＨＩＭＫＹＫＫＫＣＶＫＡＧＳＬＷＤＰＮＩＴＡＣＫＫＮＥＥＴＶＥＶＮＦＴＴＴＰＬＧＮＲＹＭＡＬＩＱＨＳＴＩＩＧＦＳＱＶＦＥＰＨＱＫＫＱＴＲＡＳＶＶＩＰＶＴＧＤＳＥＧＡＴＶＱＬＴＰＹＦＰＴＣＧＳＤＣＩＲＨＫＧＴＶＶＬＣＰＱＴＧＶＰＦＰＬＤＮＮＫＳＫＰＧＧＷＬＰＬＬＬＬＳＬＬＶＡＴＷＶＬＶＡＧＩＹＬＭＷＲＨＥＲＩＫＫＴＳＦＳＴＴＴＬＬＰＰＩＫＶＬＶＶＹＰＳＥＩＣＦＨＨＴＩＣＹＦＴＥＦＬＱＮＨＣＲＳＥＶＩＬＥＫＷＱＫＫＫＩＡＥＭＧＰＶＱＷＬＡＴＱＫＫＡＡＤＫＶＶＦＬＬＳＮＤＶＮＳＶＣＤＧＴＣＧＫＳＥＧＳＰＳＥＮＳＱＤＬＦＰＬＡＦＮＬＦＣＳＤＬＲＳＱＩＨＬＨＫＹＶＶＶＹＦＲＥＩＤＴＫＤＤＹＮＡＬＳＶＣＰＫＹＨＬＭＫＤＡＴＡＦＣＡＥＬＬＨＶＫＱＱＶＳＡＧＫＲＳＱＡＣＨＤＧＣＣＳＬ（配列番号１５）。
【００７２】
Ｔｉａｎら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ、１９：２０９８−２１０９（２０００）及びＳｈｉら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７５：１９１６７−１９１７６（２０００）も参照のこと。また提供されるのは、シグナル配列が取り除かれる（たとえば、処理される）又はアミノ酸１〜１７が欠失するＩＬ−１７ＲＢポリペプチド、任意でそのほかの欠失、挿入及び置換である。別の例となるＩＬ−１７ＲＢポリペプチドには、ＩＬ−１７ＲＢの細胞外ドメイン、たとえば、Ｑ９ＮＲＭ６の略アミノ酸１８〜２９２が含まれる。
【００７３】
ＩＬ−１７ＲＣ：例となるヒトＩＬ−１７ＲＣ受容体の配列は以下のとおりであり、Ｑ８ＮＡＣ３のＵｎｉＰｒｏｔ  ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒを有する：ＭＰＶＰＷＦＬＬＳＬＡＬＧＲＳＰＶＶＬＳＬＥＲＬＶＧＰＱＤＡＴＨＣＳＰＶＳＬＥＰＷＧＤＥＥＲＬＲＶＱＦＬＡＱＱＳＬＳＬＡＰＶＴＡＡＴＡＲＴＡＬＳＧＬＳＧＡＤＧＲＲＥＥＲＧＲＧＫＳＷＶＣＬＳＬＧＧＳＧＮＴＥＰＱＫＫＧＬＳＣＲＬＷＤＳＤＩＬＣＬＰＧＤＩＶＰＡＰＧＰＶＬＡＰＴＨＬＱＴＥＬＶＬＲＣＱＫＥＴＤＣＤＬＣＬＲＶＡＶＨＬＡＶＨＧＨＷＥＥＰＥＤＥＥＫＦＧＧＡＡＤＳＧＶＥＥＰＲＮＡＳＬＱＡＱＶＶＬＳＦＱＡＹＰＴＡＲＣＶＬＬＥＶＱＶＰＡＡＬＶＱＦＧＱＳＶＧＳＶＶＹＤＣＦＥＡＡＬＧＳＥＶＲＩＷＳＹＴＱＰＲＹＥＫＥＬＮＨＴＱＱＬＰＤＣＲＧＬＥＶＷＮＳＩＰＳＣＷＡＬＰＷＬＮＶＳＡＤＧＤＮＶＨＬＶＬＮＶＳＥＥＱＨＦＧＬＳＬＹＷＮＱＶＱＧＰＰＫＰＲＷＨＫＮＬＴＧＰＱＩＩＴＬＮＨＴＤＬＶＰＣＬＣＩＱＶＷＰＬＥＰＤＳＶＲＴＮＩＣＰＦＲＥＤＰＲＡＨＱＮＬＷＱＡＡＲＬＱＬＬＴＬＱＳＷＬＬＤＡＰＣＳＬＰＡＥＡＡＬＣＷＲＡＰＧＧＤＰＣＱＰＬＶＰＰＬＳＷＥＮＶＴＶＤＫＶＬＥＦＰＬＬＫＧＨＰＮＬＣＶＱＶＮＳＳＥＫＬＱＬＱＥＣＬＷＡＤＳＬＧＰＬＫＤＤＶＬＬＬＥＴＲＧＰＱＤＮＲＳＬＣＡＬＥＰＳＧＣＴＳＬＰＳＫＡＳＴＲＡＡＲＬＧＥＹＬＬＱＤＬＱＳＧＱＣＬＱＬＷＤＤＤＬＧＡＬＷＡＣＰＭＤＫＹＩＨＫＲＷＡＬＶＷＬＡＣＬＬＦＡＡＡＬＳＬＩＬＬＬＫＫＤＨＡＫＧＷＬＲＬＬＫＱＤＶＲＳＧＡＡＡＲＧＲＡＡＬＬＬＹＳＡＤＤＳＧＦＥＲＬＶＧＡＬＡＳＡＬＣＱＬＰＬＲＶＡＶＤＬＷＳＲＲＥＬＳＡＱＧＰＶＡＷＦＨＡＱＲＲＱＴＬＱＥＧＧＶＶＶＬＬＦＳＰＧＡＶＡＬＣＳＥＷＬＱＤＧＶＳＧＰＧＡＨＧＰＨＤＡＦＲＡＳＬＳＣＶＬＰＤＦＬＱＧＲＡＰＧＳＹＶＧＡＣＦＤＲＬＬＨＰＤＡＶＰＡＬＦＲＴＶＰＶＦＴＬＰＳＱＬＰＤＦＬＧＡＬＱＱＰＲＡＰＲＳＧＲＬＱＥＲＡＥＱＶＳＲＡＬＱＰＡＬＤＳＹＦＨＰＰＧＴＰＡＰＧＲＧＶＧＰＧＡＧＰＧＡＧＤＧＴ（配列番号１６）。
【００７４】
また提供されるのは、シグナル配列が取り除かれる（たとえば、処理される）又はアミノ酸１〜２０が欠失するＩＬ−１７ＲＣポリペプチド、任意でそのほかの欠失、挿入及び置換である。別の例となるＩＬ−１７ＲＣポリペプチドには、ＩＬ−１７ＲＣの細胞外ドメイン、たとえば、配列番号１４の略アミノ酸２１〜５３８が含まれる。他の例となるＩＬ−１７ＲＣ配列には、マウス（Ｑ８Ｋ４Ｃ２）、ラット（ＸＰ＿２１６２４０．５、ＧｅｎＢａｎｋ）及びウシの配列（ＮＰ＿００１０６８６４６．１、ＧｅｎＢａｎｋ）が挙げられる。
【００７５】
ＩＬ−１７ＲＤ：例となるヒトＩＬ−１７ＲＤ受容体の配列はＵｎｉｐｒｏｔ  ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ  Ｑ８ＮＦＭ７によって記載されている。Ｘｉｏｎｇら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７８：５０２７３−５０２８２（２００３）も参照のこと。また提供されるのは、シグナル配列が取り除かれる（たとえば、処理される）又はアミノ酸１〜１６が欠失するＩＬ−１７ＲＤポリペプチド、任意でそのほかの欠失、挿入及び置換である。別の例となるＩＬ−１７ＲＤポリペプチドには、ＩＬ−１７ＲＤの細胞外ドメイン、たとえば、Ｑ８ＮＦＭ７の略アミノ酸１７〜２９９が含まれる。
【００７６】
ＩＬ−１７ＲＥ：例となるヒトＩＬ−１７ＲＥ受容体の配列はＵｎｉｐｒｏｔ  ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ  Ｑ８ＮＦＲ９によって記載されている。また提供されるのは、シグナル配列が取り除かれる（たとえば、処理される）又はアミノ酸１〜２３が欠失するＩＬ−１７ＲＥポリペプチド、任意でそのほかの欠失、挿入及び置換である。別の例となるＩＬ−１７ＲＥポリペプチドには、ＩＬ−１７ＲＥの細胞外ドメイン、たとえば、Ｑ８ＮＦＲ９の略アミノ酸２４〜４５４が含まれる。
【００７７】
本発明は、ＩＬ−１７受容体のシグナル伝達の新規拮抗物質、たとえば、１以上のＩＬ−１７ＲＡ、ＩＬ−１７ＲＢ、ＩＬ−１７ＲＣ、ＩＬ−１７ＲＤ及びＩＬ−１７ＲＥのシグナル伝達の拮抗物質、並びに炎症性疾患及び自己免疫疾患の治療におけるそのような拮抗物質の使用を提供する。本発明はさらに、ＩＬ−１７サイトカインのシグナル伝達、たとえば、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｂ、ＩＬ−１７Ｃ、ＩＬ−１７Ｄ、ＩＬ−１７Ｅ及びＩＬ−１７Ｆのシグナル伝達の新規拮抗物質、並びに炎症性疾患及び自己免疫疾患の治療におけるその使用を提供する。
【００７８】
その例となるメンバーがＩＬ−１７ＲＡに対する拮抗物質であり、本発明の抗ＩＬ−１７ＲＡデザイナーサイトカイン拮抗物質を中和することを含む本発明の拮抗物質は、たとえば、多発性硬化症、癌（特にＩＬ−１７及び／又はＩＬ−２３の発現を特徴とする）、乾癬、乾癬性関節炎、関節リウマチ、自己免疫性眼疾患、内毒素血症、ＩＢＳ、及び炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、大腸炎、喘息、ＣＯＰＤ、嚢胞性線維症、同種移植拒絶、免疫介在性腎疾患、肝胆道疾患、アテローム性硬化症、腫瘍増殖の促進、又は変性関節疾患、アテローム性硬化症及び本明細書で開示されるそのほかの炎症性状態のような炎症及び炎症性疾患の治療においてＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｆ、又はＩＬ−１７Ａ／Ｆ又はそれらの組み合わせの活性を遮断する、阻害する、低減する、拮抗する、又は中和するのに使用することができる。
【００７９】
本発明は、ＩＬ−１７リガンド及び／又は受容体の接触面に結合し、それによって生産的相互作用を妨げる単離されたポリペプチドを提供する。さらに具体的には、本発明は、ＩＬ−１７リガンド及び／又は受容体に結合し、ＩＬ−１７受容体を発現している細胞において炎症性メディエータの産生を阻害するポリペプチドを提供する。
【００８０】
５種のＩＬ−１７受容体（ＩＬ−１７ＲＡ〜ＩＬ−１７ＲＦ）は既知の受容体のいずれとも相同ではなく、かなりの配列多様性を示す。すべて、フィブロネクチンＩＩＩ型（ＦｎＩＩＩ）ドメインで構成される細胞外ドメインと、Ｔｏｌｌ／ＩＬ−１Ｒ（ＴＬＲ）ドメインと緩やかな相同性を示す細胞質ＳＥＦ／ＩＬ−１７Ｒ（ＳＥＦＩＲ）ドメインを含有すると思われる（１３，１４）。ＩＬ−１７受容体は、１型の４ヘリックスサイトカインでさらに広く知られる受容体によって誘発されるものとは識別可能であるシグナル伝達事象に介在する（１５，１６）。ＴＬＲ刺激と同様に、ＩＬ−１７受容体の刺激はＮＦ−κＢとマイトジェン活性化タンパク質キナーゼ（ＭＡＰＫ）の活性化を生じる。しかしながら、ＩＬ−１７受容体のシグナル伝達は、ＴＬＲシグナル伝達と同様の膜近位アダプター分子のセットを利用するのではなく；ＩＬ−１７ＲはＳＥＦＩＲドメインも含有するアダプターＡｃｔ１を必要とする（１７〜１９）。ＩＬ−１７受容体のこれらの独特のシグナル伝達特性によってＴＨ−１７細胞が自然免疫細胞と獲得免疫細胞の間の橋渡しとして作用するのが可能になる。
【００８１】
機構的に、蛍光共鳴エネルギー転移（ＦＲＥＴ）試験によって、ＩＬ−１７ＲＡは、ＩＬ−１７が結合してＩＬ−１７ＲＣとのヘテロ二量体シグナル伝達複合体を形成する際に構造変化を受ける細胞表面上で事前に形成された二量体として存在し得ることが示唆されている。しかしながら、ヘテロ二量体のＩＬ−１７サイトカインがどのように２つの異なった受容体と対になるのかという分子的基礎は未知のままである（１４，２０）。本明細書で提供される構造的な及び生化学的な分析によって初めてＩＬ−１７系の特異的な拮抗物質の理に適った設計が可能になる。この分析に基づいて我々は、ＩＬ−１７のシグナル伝達を妨害し、種々の疾患の哺乳類を治療するのに有用である一連の拮抗物質を提供する。
【００８２】
本発明の好ましい実施形態には、相互交換可能に、「ＩＬ−１７Ｒ拮抗物質」、「ＩＬ−１７拮抗物質」、「ＩＬ−１７Ｒ中和物質」、「ＩＬ−１７Ｒデザイナーサイトカイン拮抗物質」、及び「ＩＬ−１７デザイナーサイトカイン拮抗物質」と呼ばれるＩＬ−１７Ｒ又はＩＬ−１７に結合する結合ペプチド、タンパク質及びその断片又は置換物が挙げられる。具体的には、一部の実施形態では、そのような結合ペプチド又はタンパク質は、ヒトＩＬ−１７Ｒに特異的に結合することができ、「ＩＬ−１７Ｒ結合タンパク質」と呼ばれる。さらに、これらの結合ペプチド又はタンパク質は、ＩＬ−１７に関連した生物活性を調節することができ、たとえば、ＩＬ−１７受容体のＩＬ−１７による活性化を拮抗することができるので、たとえば、炎症や免疫関連疾患のような種々の疾患及び病態を治療するのに有用である。例となる拮抗物質は、２００、５０、２０又は１０ｎＭ未満のＩＣ５０を有する。
【００８３】
さらに別の実施形態では、本発明は、本発明のポリペプチドをコードする単離されたポリヌクレオチドに関するものであり、前記ポリペプチドはＩＬ−１７Ｒ、たとえば、ＩＬ−１７ＲＡ、ＩＬ−１７ＲＢ、ＩＬ−１７ＲＣ、ＩＬ−１７ＲＤ及びＩＬ−１７ＲＥに結合することが可能であり、そのシグナル伝達能を低減することが可能である。
【００８４】
本発明はまた、本発明の拮抗物質と免疫グロブリン部分、たとえば、免疫グロブリンのドメイン又は領域を含む融合タンパク質も提供する。そのような融合タンパク質では、免疫グロブリン部分は、たとえば、ヒトＦｃ断片のような免疫グロブリン重鎖定常領域であってもよい。本発明はさらにそのような融合タンパク質をコードする単離された核酸を含む。
【００８５】
本発明はまた、ポリエチレングリコールのポリマーに抱合された本発明の拮抗物質を含むタンパク質抱合体も提供する。
【００８６】
本発明はさらに、薬学上許容可能なキャリアと本明細書に記載されるＩＬ−１７Ｒ拮抗物質を含む医薬組成物を包含する。
【００８７】
別の態様では、本発明は、有効量のＩＬ−１７シグナル伝達の拮抗物質を対象に投与することを含む、哺乳類対象におけるＩＬ−１７及び／又はＩＬ−２３及び／又はＩＦＮ−γの高い発現を特徴とする炎症性疾患の治療方法に関する。
【００８８】
さらに別の実施形態では、本発明は、細胞又はその培地をＩＬ−１７Ｒの拮抗物質で処理することによって哺乳類細胞にて炎症性メディエータの産生を阻害する方法に関する。
【００８９】
別の態様では、本発明は、有効量のＩＬ−１７シグナル伝達の拮抗物質を対象に投与することを含む、哺乳類対象におけるＩＬ−１７及び／又はＩＬ−２３及び／又はＩＦＮ−γの高い発現を特徴とする炎症性疾患の治療方法に関する。
【００９０】
本発明の典型的な方法には、増大した又は増強されたＩＬ−１７及び／又はＩＬ−２３及び／又はＩＦＮ−γの発現及び／又は活性に関連する又はその結果生じる哺乳類における病態又は疾患を治療する方法が含まれる。治療方法では、好ましくは各受容体活性を低減させる本発明の拮抗物質が投与されてもよい。方法は、ＩＬ−１７Ｒ複合体の形成を阻止することによってシグナル伝達を低減するＩＬ−１７Ｒの拮抗物質の使用を企図する。
【００９１】
本発明の拮抗物質（たとえば、ＩＬ−１７Ｒの拮抗物質）は、たとえば、全身性エリテマトーデス、関節炎、関節リウマチ、変形性関節炎、乾癬、中枢神経系及び末梢神経系の脱髄疾患、たとえば、多発性硬化症、特発性脱髄多発性神経障害又はギラン・バレー症候群、炎症性腸疾患、大腸炎、潰瘍性大腸炎、クローン病、グルテン感受性腸疾患、自己免疫性眼疾患、癌、悪性腫瘍疾患、アテローム性硬化症及び血管新生を含む免疫関連疾患及び炎症性疾患の治療のための薬剤及び薬物を調製するのにも有用である。
【００９２】
特定の態様では、そのような薬剤及び薬物は、薬学上許容可能なキャリアと共に治療上有効な量のＩＬ−１７Ｒ拮抗物質を含む。好ましくは、混合物は無菌である。
【００９３】
さらに別の実施形態では、本発明はＴ細胞をＩＬ−１７Ｒ拮抗物質で処理することによってＩＬ−１７の産生及び／又は維持を阻害する方法に関する。
【００９４】
その上さらなる実施形態では、本発明は、たとえば、ＩＬ−１７サイトカイン配列と相同の配列を含むＩＬ−１７Ｒ結合タンパク質のようなＩＬ−１７Ｒ拮抗物質を前記哺乳類に投与することを含む、哺乳類においてＴリンパ球の活性を下げる方法を提供し、哺乳類におけるＴリンパ球の活性は低下する。
【００９５】
その上さらなる実施形態では、本発明は、たとえば、ＩＬ−１７サイトカイン配列と相同の配列を含むＩＬ−１７Ｒ結合タンパク質のようなＩＬ−１７Ｒ拮抗物質を前記哺乳類に投与することを含む、哺乳類においてＴリンパ球の増殖を低下させる方法を提供し、哺乳類におけるＴリンパ球の増殖は低下する。
【００９６】
それらを製造する方法も本明細書に記載され、それらの方法は、前記抗体の発現に好適な条件下で適当なコーディング核酸分子を含有するベクターを含む宿主を培養することと、細胞培養物から前記抗体を回収することを含む。
ＩＬ−１７Ｒ結合タンパク質
【００９７】
ＩＬ−１７サイトカインはその受容体結合面の１つにてＩＬ−１７Ｒに接触する少なくとも３つの部位を含むことができる。ＩＬ−１７は一般に、２つのサブユニット（ここではＡ鎖及びＢ鎖とする）を含み、それぞれアミノ酸を特定の結合面に寄与させる。用語「Ａ鎖」及び「Ｂ鎖」の使用は単に参照のためである。たとえば、単鎖の形式を使用する実施形態では、「Ａ鎖」をＣ末端で「Ｂ鎖」に置いてもよく、代わりにそれをＮ末端で「Ｂ鎖」に置いてもよい。
【００９８】
ＩＬ−１７ＲＡに結合するＩＬ−１７接触面は、表１に示すような以下の接触残基を含む３つの部位（部位１、部位２及び部位３）を含む（ＩＬ−１７Ｆ及び配列番号１２の番号付けに従って）。
【表１】
2013507132.tif 000003
【００９９】
特定の残基は２つの隣接する部位の接合部にあるので、双方の部位について列記する。接触面残基の幾つかは、以下の実施例２０における表に示すようにＩＬ−１７ＲＡに結合する際、埋め込まれる。
【０１００】
一態様では、本開示は、２つのサブユニットを含むＩＬ−１７サイトカインを含むＩＬ−１７Ｒ結合タンパク質を特徴とし、２つのサブユニットによって形成される二量体の受容体結合面の１つは、１以上の置換、たとえば、少なくとも２又は３の置換、たとえば、非保存的置換又は本明細書に記載される置換を含む。たとえば、サイトカインは、上記表１で特定された位置にて少なくとも１、２、３、４、５、６又は７の置換（又は欠失）、たとえば、２〜１０、２〜７、又は３〜１０又は３〜６の間の置換（又は欠失）を有する。場合によっては、サイトカインのサブユニットの一方は、少なくとも１、２、３、４、５、６又は７の置換（又は欠失）にて他方のサブユニットと異なる。たとえば、ＩＬ−１７Ｒ結合タンパク質では、２つの受容体結合面は、たとえば、表１におけるものに相当する位置にて異なったアミノ酸、たとえば、少なくとも１、２、３、４、５、６又は７の差異を含むことができる。
【０１０１】
サブユニットの一方又は双方は、１以上の保存的な及び／又は非保存的な置換を有することができる。通常、少なくとも一方のサブユニット又は双方のサブユニットは、成熟ヒトＩＬ−１７、たとえば、配列番号２、４、６、８、１０、１２又は２０と少なくとも９０、９２、９４、９５、９６、９７又は９８％同一であるが、１００％同一ではない。一実施形態では、サブユニットのいずれもが成熟ヒトＩＬ−１７と１００％同一ではなく、それらは、それらが由来するヒトＩＬ−１７とは少なくとも１、２、又は３のアミノ酸で異なる。一実施形態では、一方のサブユニットは成熟ヒトＩＬ−１７と異なるが、他方のサブユニットは成熟ヒトＩＬ−１７と同一である。特定の実施形態では、サブユニットにおける置換は相当するマウスのタンパク質における残基ではない。
部位１
【０１０２】
一実施形態では、ＩＬ−１７Ｒ結合タンパク質は、受容体結合面の１つの部位１が１以上の変異、たとえば、少なくとも２又は３の変異、たとえば、非保存的な変異又は本明細書に記載される変異を含む、２つのサブユニットを含むＩＬ−１７サイトカインを含む。たとえば、以下の部位１の残基（ＩＬ−１７Ｆ及び配列番号１２の番号付けに基づいて特定される）の１以上は変異させられる：Ａ鎖：ＭＥＴ２５及びＬＹＳ１１５；及びＢ鎖：ＩＬＥ２９、ＩＬＥ３１、ＴＲＰ５８、ＡＳＮ６１、ＴＹＲ６３、ＰＲＯ６４、ＳＥＲ６５、ＧＬＵ６６、ＶＡＬ１００、ＡＲＧ１０２、ＨＩＳ１０４、ＶＡＬ１０９及びＰＨＥ１１１、及び図４Ｄに示すようなＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｂ、ＩＬ−１７Ｃ、ＩＬ−１７Ｄ及びＩＬ−１７Ｅにおける相当する残基。一実施形態では、結合タンパク質は、部位１の前述のＡ鎖残基の１つにて少なくとも１つの変異、及び前述のＢ鎖残基の１つにて少なくとも１つの変異を含む。部位１にて為され得る一部の例となる変異には以下が挙げられる。
【０１０３】
Ａ鎖におけるＭＥＴ２５は別のアミノ酸、たとえば、アラニン又はアラニン以外のアミノ酸に変異させることができる。たとえば、ＭＥＴ２５を、中性の親水性残基、小型の脂肪族残基、荷電した残基又は芳香族残基に変異させる。たとえば、ＭＥＴ２５をＴｒｐ又はＴｙｒに変異させる。たとえば、荷電した残基又は全体として芳香族に変異させることによってＭＥＴ２５を変異させて表面近くで疎水性のパッキングを崩壊することができる。相当する変異又は非保存的変異は、配列番号２のＶＡＬ２３、配列番号４のＡＲＧ３６、配列番号６のＬＥＵ４８、配列番号８のＬｅｕ３６及び配列番号１０のＬｅｕ３３に対して行うことができる。
【０１０４】
Ｂ鎖におけるＩＬＥ２９は別のアミノ酸、たとえば、アラニン又はアラニン以外のアミノ酸に変異させることができる。たとえば、ＩＬＥ２９を、中性の親水性残基、小型の脂肪族残基、荷電した残基又は芳香族残基に変異させる。相当する変異又は非保存的変異は、配列番号２のＩＬＥ２７に対して行うことができる。
【０１０５】
Ｂ鎖におけるＩＬＥ３１は別のアミノ酸、たとえば、アラニン又はアラニン以外のアミノ酸に変異させることができる。たとえば、ＩＬＥ３１を、小型の脂肪族残基、荷電した残基又は芳香族残基に変異させる。相当する変異又は非保存的変異は、配列番号２のＡＳＮ２９に対して行うことができる。
【０１０６】
Ｂ鎖におけるＴＲＰ５８は別のアミノ酸、たとえば、アラニン又はアラニン以外のアミノ酸に変異させることができる。たとえば、ＴＲＰ５８を、小型の脂肪族残基に変異させる。相当する変異又は非保存的変異は、配列番号２のＧＬＵ５６、配列番号４のＨＩＳ８５、配列番号６のＴＨＲ９７、配列番号８のＴＹＲ８５及び配列番号１０のＡＲＧ６７に対して行うことができる。
【０１０７】
Ｂ鎖におけるＡＳＮ６１は別のアミノ酸、たとえば、アラニン又はアラニン以外のアミノ酸に変異させることができる。たとえば、ＡＳＮ６１を、脂肪族残基、荷電した残基又は芳香族残基に変異させる。相当する変異又は非保存的変異は、配列番号２のＧＬＵ５９、配列番号４のＳＥＲ８８、配列番号６のＡＳＰ１００、配列番号８のＡＬＡ８８及び配列番号１０のＡＳＮ７０に対して行うことができる。
【０１０８】
Ｂ鎖におけるＴＹＲ６３は別のアミノ酸、たとえば、アラニン又はアラニン以外のアミノ酸に変異させることができる。たとえば、ＴＹＲ６３を、脂肪族残基、中性の親水性残基、又は荷電した残基に変異させる。たとえば、ＴＹＲ６３をＡｌａ又はＬｙｓに変異させる。相当する変異又は非保存的変異は、配列番号２のＴＹＲ６１、配列番号４のＩＬＥ９０、配列番号６のＴＹＲ１０２、配列番号８のＴＹＲ９０及び配列番号１０のＬＥＵ７２に対して行うことができる。
【０１０９】
Ｂ鎖におけるＰＲＯ６４は別のアミノ酸、たとえば、アラニン又はアラニン以外のアミノ酸に変異させることができる。たとえば、ＰＲＯ６４を、グリシン、脂肪族残基、中性の親水性残基、荷電した残基、又は芳香族残基に変異させる。相当する変異又は非保存的変異は、配列番号２のＰＲＯ６２、配列番号４のＰＲＯ９１、配列番号６のＰＲＯ１０３、配列番号８のＰＲＯ９１及び配列番号１０のＰＲＯ７３に対して行うことができる。
【０１１０】
Ｂ鎖におけるＳＥＲ６５は別のアミノ酸、たとえば、アラニン又はアラニン以外のアミノ酸に変異させることができる。たとえば、ＳＥＲ６５を、脂肪族残基、特に大きな脂肪族残基、荷電した残基、又は芳香族残基に変異させる。たとえば、ＳＥＲ６５をＬｙｓ又はＴｒｐに変異させる。相当する変異又は非保存的変異は、配列番号２のＳＥＲ６３、配列番号４のＶＡＬ９２、配列番号６のＧＬＮ１０４、配列番号８のＡＲＧ９２及び配列番号１０のＧＬＮ７４に対して行うことができる。
【０１１１】
Ｂ鎖におけるＶＡＬ１００は別のアミノ酸、たとえば、アラニン又はアラニン以外のアミノ酸に変異させることができる。たとえば、ＶＡＬ１００を、中性の親水性残基、大きな脂肪族残基、荷電した残基、又は芳香族残基に変異させる。相当する変異又は非保存的変異は、配列番号２のＬＥＵ９８、配列番号４のＡＲＧ１２８、配列番号６のＬＥＵ１４０、配列番号８のＬＥＵ１２８、及び配列番号１０のＰＨＥ１１１に対して行うことができる。
【０１１２】
Ｂ鎖におけるＡＲＧ１０２は別のアミノ酸、たとえば、アラニン又はアラニン以外のアミノ酸に変異させることができる。たとえば、ＡＲＧ１０２を、脂肪族残基、中性の親水性残基、酸性残基、又は芳香族残基に変異させる。たとえば、ＡＲＧ１０２をＡｌａ、Ｓｅｒ、Ｇｌｎ又はＡｓｎに変異させる。相当する変異は、配列番号２のＡＲＧ１００、配列番号４のＡＲＧ１３０、配列番号６のＡＲＧ１４２、配列番号８のＡＲＧ１３０及び配列番号１０のＡＲＧ１１３に対して行うことができる。
【０１１３】
Ｂ鎖におけるＨＩＳ１０４は別のアミノ酸、たとえば、アラニン又はアラニン以外のアミノ酸に変異させることができる。たとえば、ＨＩＳ１０４を、脂肪族残基又は酸性残基に変異させる。たとえば、ＨＩＳ１０４をＧｌｕ又はＡｓｐに変異させる。相当する変異又は非保存的変異は、配列番号２のＰＲＯ１０２、配列番号４のＰＲＯ１３６、配列番号６のＰＲＯ１５３、配列番号８のＣＹＳ１３４及び配列番号１０のＧＬＹ１２１に対して行うことができる。
【０１１４】
Ｂ鎖におけるＶＡＬ１０９は別のアミノ酸、たとえば、アラニン又はアラニン以外のアミノ酸に変異させることができる。たとえば、ＶＡＬ１０９を、中性の親水性残基、大きな脂肪族残基、荷電した残基、又は芳香族残基に変異させる。
【０１１５】
Ｂ鎖におけるＰＨＥ１１１は別のアミノ酸、たとえば、アラニン又はアラニン以外のアミノ酸に変異させることができる。たとえば、ＰＨＥ１１１を、小さな脂肪族残基、中性の親水性残基、又は荷電した残基に変異させる。たとえば、ＰＨＥ１１１をＡｌａに変異させる。相当する変異又は非保存的変異は、配列番号２のＰＨＥ１０９、配列番号４のＧＬＮ１４３、配列番号６のＰＨＥ１６０、配列番号８のＴＹＲ１４１及び配列番号１０のＬＥＵ１２８に対して行うことができる。
【０１１６】
Ｂ鎖におけるＧＬＵ６６は別のアミノ酸、たとえば、アラニン又はアラニン以外のアミノ酸に変異させることができる。たとえば、ＧＬＵ６６を、脂肪族残基、中性の親水性残基、塩基性残基、又は芳香族残基に変異させる。たとえば、変異を行ってＧＬＵ６６による水素結合を壊す。相当する変異又は非保存的変異は、配列番号２のＶＡＬ６４、配列番号４のＡＳＰ９３、配列番号６のＬＹＳ１０５、配列番号８のＴＹＲ９３及び配列番号１０のＡＳＰ７５に対して行うことができる。
【０１１７】
Ａ鎖におけるＬＹＳ１１５は別のアミノ酸、たとえば、アラニン又はアラニン以外のアミノ酸に変異させることができる。たとえば、ＬＹＳ１１５を、脂肪族残基、中性の親水性残基、酸性残基、又は芳香族残基に変異させる。たとえば、ＬＹＳ１１５をＡｌａに変異させる。相当する変異又は非保存的変異は、配列番号２のＬＹＳ１１３、配列番号４のＭＥＴ１４７、配列番号６のＰＨＥ１６４、配列番号８のＴＹＲ１４５及び配列番号１０のＬＥＵ１３２に対して行うことができる。
部位２
【０１１８】
一実施形態では、ＩＬ−１７Ｒ結合タンパク質は、受容体結合面の１つの部位２が１以上の変異、たとえば、少なくとも２又は３の変異、たとえば、非保存的な変異又は本明細書に記載される変異を含む２つのサブユニットを含むＩＬ−１７サイトカインを含む。たとえば、以下の部位２の残基（ＩＬ−１７Ｆ及び配列番号１２についての番号付けに基づいて特定される）の１以上を変異させる：Ａ鎖：ＧＬＮ９４、ＧＬＮ９５、ＧＬＵ９６、ＬＹＳ１１５及びＬＥＵ１１７；及びＢ鎖：ＧＬＮ３６、ＡＲＧ３７、ＭＥＴ４０、ＳＥＲ４１、ＡＳＮ４３、ＧＬＵ４５、ＴＹＲ５４、ＶＡＬ５６、ＧＬＵ６６、ＶＡＬ６８及びＶＡＬ１１８、及び図４Ｄに示されるようなＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｂ、ＩＬ−１７Ｃ、ＩＬ−１７Ｄ及びＩＬ−１７Ｅにおける相当する残基。一実施形態では、結合タンパク質は、部位２の前述のＡ鎖残基の１つにおける少なくとも１つの変異と、前述のＢ鎖残基の１つにおける少なくとも１つの変異を含む。部位２で行われ得る一部の例となる変異には以下が挙げられる。
【０１１９】
Ｂ鎖におけるＧＬＮ３６は別のアミノ酸、たとえば、アラニン又はアラニン以外のアミノ酸に変異させることができる。たとえば、ＧＬＮ３６を、脂肪族残基、荷電した残基、又は芳香族残基に変異させる。たとえば、ＧＬＮ３６を変異させてこの残基による水素結合を壊す。相当する変異又は非保存的変異は、配列番号２のＴＨＲ３４、配列番号４のＭＥＴ４７、配列番号６のＧＬＹ５９、配列番号８のＰＲＯ４７及び配列番号１０のＳＥＲ４４に対して行うことができる。
【０１２０】
Ｂ鎖におけるＡＲＧ３７は別のアミノ酸、たとえば、アラニン又はアラニン以外のアミノ酸に変異させることができる。たとえば、ＡＲＧ３７を、脂肪族残基、中性の親水性残基、酸性残基、又は芳香族残基に変異させる。たとえば、ＡＲＧ３７をＡｌａ又はＧｌｕに変異させる。相当する変異又は非保存的変異は、配列番号２のＡＳＮ３５、配列番号４のＶＡＬ４８、配列番号６のＡＲＧ６０、配列番号８のＡＲＧ４８及び配列番号１０のＣＹＳ４５に対して行うことができる。
【０１２１】
Ｂ鎖におけるＭＥＴ４０は別のアミノ酸、たとえば、アラニン又はアラニン以外のアミノ酸に変異させることができる。たとえば、ＭＥＴ４０を、中性の親水性残基、小さな脂肪族残基、荷電した残基、又は芳香族残基に変異させる。相当する変異又は非保存的変異は、配列番号２のＡＲＧ３８、配列番号４のＬＥＵ５１、配列番号６のＡＲＧ６３、配列番号８のＡＬＡ５１及び配列番号１０のＳＥＲ４８に対して行うことができる。たとえば、配列番号２のＡＲＧ３８及び配列番号６のＡＲＧ６３をＧｌｕ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｔｈｒ、又はＳｅｒに変異させることができ、又は水素結合若しくは塩橋を形成する能力を壊す別の残基に変異させることができる。
【０１２２】
Ｂ鎖におけるＳＥＲ４１は別のアミノ酸、たとえば、アラニン又はアラニン以外のアミノ酸に変異させることができる。たとえば、ＳＥＲ４１を、脂肪族残基、荷電した残基、又は芳香族残基に変異させる。たとえば、ＳＥＲ４１をＡｌａ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ａｒｇ、又はＬｙｓに変異させる。相当する変異又は非保存的変異は、配列番号２のＳＥＲ３９に対して行うことができる。
【０１２３】
Ｂ鎖におけるＡＳＮ４３は別のアミノ酸、たとえば、アラニン又はアラニン以外のアミノ酸に変異させることができる。たとえば、ＡＳＮ４３を、脂肪族残基、荷電した残基、又は芳香族残基に変異させる。たとえば、ＡＳＮ４３をＧｌｕ又はＡｓｐに変異させる。相当する変異又は非保存的変異は、配列番号２のＡＳＰ４１、配列番号４のＭＥＴ７０、配列番号６のＡＳＰ８２、配列番号８のＰＲＯ７０及び配列番号１０のＰＲＯ５２に対して行うことができる。たとえば、配列番号２のＡＳＰ４１をＩｌｅ、Ｌｅｕ、Ｔｙｒ，Ａｒｇ、又はＬｙｓに変異させることができる。
【０１２４】
Ｂ鎖におけるＧＬＵ４５は別のアミノ酸、たとえば、アラニン又はアラニン以外のアミノ酸に変異させることができる。たとえば、ＧＬＵ４５を、脂肪族残基、又は芳香族残基に変異させる。相当する変異又は非保存的変異は、配列番号２のＴＹＲ４３、配列番号４のＡＳＮ７２、配列番号６のＨＩＳ８４、配列番号８のＡＳＮ７２及び配列番号１０のＡＳＮ５４に対して行うことができる。
【０１２５】
Ｂ鎖におけるＴＹＲ５４は別のアミノ酸、たとえば、アラニン又はアラニン以外のアミノ酸に変異させることができる。たとえば、ＴＹＲ５４を、脂肪族残基、中性の親水性残基、又は荷電した残基に変異させる。相当する変異又は非保存的変異は、配列番号２のＬＥＵ５２、配列番号４のＴＹＲ８１、配列番号６のＴＹＲ９３、配列番号８のＴＹＲ８１及び配列番号１０のＴＹＲ６３に対して行うことができる。
【０１２６】
Ｂ鎖におけるＶＡＬ５６は別のアミノ酸、たとえば、アラニン又はアラニン以外のアミノ酸に変異させることができる。たとえば、ＶＡＬ５６を、中性の親水性残基、大きな脂肪族残基、荷電した残基、又は芳香族残基に変異させる。相当する変異又は非保存的変異は、配列番号２のＡＲＧ５４、配列番号４のＩＬＥ８３、配列番号６のＶＡＬ９５、配列番号８のＩＬＥ８３及び配列番号１０のＬｅｕ６５に対して行うことができる。
【０１２７】
Ｂ鎖におけるＶＡＬ６８は別のアミノ酸、たとえば、アラニン又はアラニン以外のアミノ酸に変異させることができる。たとえば、ＶＡＬ６８を、中性の親水性残基、大きな脂肪族残基、荷電した残基、又は芳香族残基に変異させる。たとえば、ＶＡＬ６８をＧｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ又はＴｈｒに変異させる。相当する変異又は非保存的変異は、配列番号２のＴＲＰ６６、配列番号４のＰＲＯ９５、配列番号６のＡＬＡ１０７、配列番号８のＰＲＯ９５及び配列番号１０のＴＹＲ７７に対して行うことができる。
【０１２８】
Ａ鎖におけるＧＬＮ９４は別のアミノ酸、たとえば、アラニン又はアラニン以外のアミノ酸に変異させることができる。たとえば、ＧＬＮ９４を、脂肪族残基、荷電した残基、又は芳香族残基に変異させる。相当する変異又は非保存的変異は、配列番号２のＧＬＮ９２、配列番号４のＰＨＥ１２２、配列番号６のＬＥＵ１３４、配列番号８のＴＹＲ１２２及び配列番号１０のＴＹＲ１０５に対して行うことができる。
【０１２９】
Ａ鎖におけるＧＬＮ９５は別のアミノ酸、たとえば、アラニン又はアラニン以外のアミノ酸に変異させることができる。たとえば、ＧＬＮ９５を、脂肪族残基、荷電した残基、又は芳香族残基に変異させる。たとえば、ＧＬＮ９５をＡｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｌａ又はＴｒｐに変異させる。相当する変異又は非保存的変異は、配列番号２のＧＬＮ９３、配列番号４のＳＥＲ１２３、配列番号６のＧＬＮ１３５、配列番号８のＭＥＴ１２３、及び配列番号１０のＨＩＳ１０６に対して行うことができる。
【０１３０】
Ａ鎖におけるＧＬＵ９６は別のアミノ酸、たとえば、アラニン又はアラニン以外のアミノ酸に変異させることができる。たとえば、ＧＬＵ９６を、脂肪族残基、塩基性残基、又は芳香族残基に変異させる。相当する変異又は非保存的変異は、配列番号２のＧＬＵ９４、配列番号４のＧＬＮ１２４、配列番号６のＳＥＲ１３６、配列番号８のＰＲＯ１２４及び配列番号１０のＡＳＮ１０７に対して行うことができる。
【０１３１】
Ａ鎖におけるＬＥＵ１１７は別のアミノ酸、たとえば、アラニン又はアラニン以外のアミノ酸に変異させることができる。たとえば、ＬＥＵ１１７を、中性の親水性残基、小さな脂肪族残基、荷電した残基、又は芳香族残基に変異させる。相当する変異又は非保存的変異は、配列番号２のＬＥＵ１１５、配列番号４のＴＨＲ１４９、配列番号６のＨＩＳ１６６、配列番号８のＴＨＲ１４７及び配列番号１０のＡＲＧ１３４に対して行うことができる。
【０１３２】
Ｂ鎖におけるＶＡＬ１１８は別のアミノ酸、たとえば、アラニン又はアラニン以外のアミノ酸に変異させることができる。たとえば、ＶＡＬ１１８を、中性の親水性残基、大きな脂肪族残基、荷電した残基、又は芳香族残基に変異させる。相当する変異又は非保存的変異は、配列番号２のＶＡＬ１１６、配列番号４のＩＬＥ１５０、配列番号６のＶＡＬ１６７、配列番号８のＩＬＥ１４８及び配列番号１０のＶＡＬ１３５に対して行うことができる。
【０１３３】
加えて、配列番号２のＬＹＳ３７を別のアミノ酸、たとえば、アラニン又はアラニン以外のアミノ酸に変異させることができる。たとえば、それをＧｌｕ、Ａｓｐ、ＧＬｎ、Ａｓｎ、Ｔｈｒ、又はＳｅｒに変異させることができ、又は水素結合若しくは塩橋を形成する能力を壊す別の残基に変異させることができる。
【０１３４】
配列番号２のＡＲＧ３０及び配列番号１０のＡＲＧ４０を別のアミノ酸、たとえば、アラニン又はアラニン以外のアミノ酸に変異させることができる。たとえば、それをＧｌｕ、Ａｓｐ、ＧＬｎ、Ａｓｎ、Ｔｈｒ、又はＳｅｒに変異させることができ、又は水素結合若しくは塩橋を形成する能力を壊す別の残基に変異させることができる。
部位３
【０１３５】
一実施形態では、ＩＬ−１７Ｒ結合タンパク質は、受容体結合面の１つの部位３が１以上の変異、たとえば、少なくとも２又は３の変異、たとえば、非保存的な変異又は本明細書に記載される変異を含む２つのサブユニットを含むＩＬ−１７サイトカインを含む。たとえば、以下の部位３の残基（ＩＬ−１７Ｆ及び配列番号１２についての番号付けに基づいて特定される）の１以上を変異させる：Ａ鎖：ＬＥＵ７５、ＩＬＥ８６、ＳＥＲ８７、ＡＳＮ８９、ＶＡＬ９１、ＶＡＬ１２５、ＰＲＯ１２７、ＶＡＬ１２８、ＩＬＥ１２９、ＨＩＳ１３０、ＨＩＳ１３１及びＶＡＬ１３２、及び／又はＶＡＬ１２５、ＴＨＲ１２６、ＰＲＯ１２７、ＶＡＬ１２８、ＩＬＥ１２９、ＨＩＳ１３０、ＨＩＳ１３１又はＶＡＬ１３２に先行する残基でＡ鎖を切り捨てることができる；及びＢ鎖：ＭＥＴ４０、ＡＲＧ４２、ＩＬＥ４４及びＡＲＧ４７、及び図４Ｄに示されるようなＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｂ、ＩＬ−１７Ｃ、ＩＬ−１７Ｄ及びＩＬ−１７Ｅにおける相当する残基。一実施形態では、結合タンパク質は、部位３の前述のＡ鎖残基の１つにおける少なくとも１つの変異と、前述のＢ鎖残基の１つにおける少なくとも１つの変異を含む。
【０１３６】
部位３にて行われ得る一部の例となる変異には以下が挙げられる。
【０１３７】
Ｂ鎖におけるＡＲＧ４２は別のアミノ酸、たとえば、アラニン又はアラニン以外のアミノ酸に変異させることができる。たとえば、ＡＲＧ４２を、脂肪族残基、中性の親水性残基、酸性残基、又は芳香族残基に変異させる。たとえば、ＡＲＧ４２をＧｌｕ、Ａｓｐ、Ｔｒｐ又はＡｌａに変異させる。相当する変異又は非保存的変異は、配列番号２のＳＥＲ４０、配列番号４のＴＲＰ６９、配列番号６のＡＬＡ８１、配列番号８のＰＲＯ６９及び配列番号１０のＧＬＹ５１に対して行うことができる。
【０１３８】
Ｂ鎖におけるＩＬＥ４４は別のアミノ酸、たとえば、アラニン又はアラニン以外のアミノ酸に変異させることができる。たとえば、ＩＬＥ４４を、中性の親水性残基、小さな脂肪族残基、荷電した残基、又は芳香族残基に変異させる。相当する変異又は非保存的変異は、配列番号２のＴＹＲ４２、配列番号４のＳＥＲ７１、配列番号６のＴＨＲ８３、配列番号８のＴＨＲ７１及び配列番号１０のＬＥＵ５３に対して行うことができる。
【０１３９】
Ｂ鎖におけるＡＲＧ４７は別のアミノ酸、たとえば、アラニン又はアラニン以外のアミノ酸に変異させることができる。たとえば、ＡＲＧ４７を、脂肪族残基、中性の親水性残基、酸性残基、又は芳香族残基に変異させる。たとえば、ＡＲＧ４７をＧｌｕ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、又はＡｓｎに変異させる。相当する変異又は非保存的変異は、配列番号２のＡＲＧ４５、配列番号４のＡＲＧ７４、配列番号６のＡＲＧ８６、配列番号８のＡＲＧ７４及び配列番号１０のＡＲＧ５６に対して行うことができる。
【０１４０】
Ａ鎖におけるＬＥＵ７５は別のアミノ酸、たとえば、アラニン又はアラニン以外のアミノ酸に変異させることができる。たとえば、ＬＥＵ７５を、中性の親水性残基、小さな脂肪族残基、荷電した残基、又は芳香族残基に変異させる。相当する変異又は非保存的変異は、配列番号２のＬＥＵ７３、配列番号４のＬＥＵ１０２、配列番号６のＡＲＧ１１４、配列番号８のＡＲＧ１０２及び配列番号１０のＰＲＯ８４に対して行うことができる。
【０１４１】
Ａ鎖におけるＩＬＥ８６は別のアミノ酸、たとえば、アラニン又はアラニン以外のアミノ酸に変異させることができる。たとえば、ＩＬＥ８６を、中性の親水性残基、小さな脂肪族残基、又は荷電した残基に変異させる。相当する変異又は非保存的変異は、配列番号２のＴＹＲ８４、配列番号４のＡＲＧ１１４、配列番号６のＡＬＡ１２６、配列番号８のＶＡＬ及び配列番号１０のＰＲＯ９７に対して行うことができる。
【０１４２】
Ａ鎖におけるＳＥＲ８７は別のアミノ酸、たとえば、アラニン又はアラニン以外のアミノ酸に変異させることができる。たとえば、ＳＥＲ８７を、脂肪族残基、荷電した残基、又は芳香族残基に変異させる。相当する変異又は非保存的変異は、配列番号２のＨＩＳ８５、配列番号４のＳＥＲ１１５、配列番号６のＡＬＡ１２７、配列番号８のＡＲＧ１１５及び配列番号１０のＡＲＧ９８に対して行うことができる。
【０１４３】
Ａ鎖におけるＡＳＮ８９は別のアミノ酸、たとえば、アラニン又はアラニン以外のアミノ酸に変異させることができる。たとえば、ＡＳＮ８９を、脂肪族残基、荷電した残基、又は芳香族残基に変異させる。たとえば、ＡＳＮ８９をＡｌａに変異させる。相当する変異又は非保存的変異は、配列番号２のＡＳＮ８７、配列番号４のＶＡＬ１１７、配列番号６のＡＳＮ１２９、配列番号８のＡＲＧ１１７及び配列番号１０のＡＳＮ１００に対して行うことができる。
【０１４４】
Ａ鎖におけるＶＡＬ９１は別のアミノ酸、たとえば、アラニン又はアラニン以外のアミノ酸に変異させることができる。たとえば、ＶＡＬ９１を、中性の親水性残基、大きな脂肪族残基、荷電した残基、又は芳香族残基に変異させる。たとえば、ＶＡＬ９１をＡｓｐ又はＧｌｕに変異させる。相当する変異又は非保存的変異は、配列番号２のＶＡＬ８９、配列番号４のＶＡＬ１１９、配列番号６のＶＡＬ１３１、配列番号８のＡＬＡ１１９及び配列番号１０のＧＬＵ１０２に対して行うことができる。
【０１４５】
Ａ鎖におけるＶＡＬ１２５は別のアミノ酸、たとえば、アラニン又はアラニン以外のアミノ酸に変異させることができる。たとえば、ＶＡＬ１２５を、中性の親水性残基、大きな脂肪族残基、荷電した残基、又は芳香族残基に変異させる。相当する変異又は非保存的変異は、配列番号２のＶＡＬ１２３、配列番号４のＩＬＥ１５７、配列番号６のＶＡＬ１７４、配列番号８のＶＡＬ１５５及び配列番号１０のＶＡＬ１４２に対して行うことができる。
【０１４６】
Ａ鎖におけるＰＲＯ１２７は別のアミノ酸、たとえば、アラニン又はアラニン以外のアミノ酸に変異させることができる。たとえば、ＰＲＯ１２７を、脂肪族残基、中性の親水性残基、荷電した残基、又は芳香族残基に変異させる。一実施形態では、ＰＲＯ１２７を欠失させる。相当する変異又は非保存的変異は、配列番号２のＰＲＯ１２７、配列番号６のＰＲＯ１７６、配列番号８のＧＬＵ１５７及び配列番号１０のＰＲＯ１４４に対して行うことができる。
【０１４７】
Ａ鎖におけるＶＡＬ１２８は別のアミノ酸、たとえば、アラニン又はアラニン以外のアミノ酸に変異させることができる。たとえば、ＶＡＬ１２８を、中性の親水性残基、大きな脂肪族残基、荷電した残基、又は芳香族残基に変異させる。一実施形態では、ＶＡＬ１２８を欠失させる。相当する変異又は非保存的変異は、配列番号２のＩＬＥ１２６、配列番号６のＡＲＧ１７７、配列番号８のＰＲＯ１５８及び配列番号１０のＡＲＧ１４５に対して行うことができる。
【０１４８】
Ａ鎖におけるＩＬＥ１２９は別のアミノ酸、たとえば、アラニン又はアラニン以外のアミノ酸に変異させることができる。たとえば、ＩＬＥ１２９を、中性の親水性残基、小さな脂肪族残基、荷電した残基、又は芳香族残基に変異させる。一実施形態では、ＩＬＥ１２９を欠失させる。相当する変異又は非保存的変異は、配列番号２のＶＡＬ１２７、配列番号６のＳＥＲ１７８、配列番号８のＧＬＵ１５９及び配列番号１０のＶＡＬ１４６に対して行うことができる。
【０１４９】
Ａ鎖におけるＨＩＳ１３０は別のアミノ酸、たとえば、アラニン又はアラニン以外のアミノ酸に変異させることができる。たとえば、ＨＩＳ１３０を、脂肪族残基、又は酸性残基に変異させる。一実施形態では、ＨＩＳ１３０を欠失させる。相当する変異又は非保存的変異は、配列番号２のＨＩＳ１２８、配列番号６のＶＡＬ１７９、配列番号８のＬＹＳ１６０及び配列番号１０のＭＥＴ１４７に対して行うことができる。
【０１５０】
Ａ鎖におけるＨＩＳ１３１は別のアミノ酸、たとえば、アラニン又はアラニン以外のアミノ酸に変異させることができる。たとえば、ＨＩＳ１３１を、脂肪族残基、又は酸性残基に変異させる。一実施形態では、ＨＩＳ１３１を欠失させる。相当する変異又は非保存的変異は、配列番号２のＨＩＳ１２９、配列番号８のＡＳＰ１６１及び配列番号１０のＧＬＹ１４８に対して行うことができる。
【０１５１】
Ａ鎖におけるＶＡＬ１３２は別のアミノ酸、たとえば、アラニン又はアラニン以外のアミノ酸に変異させることができる。たとえば、ＶＡＬ１３２を、中性の親水性残基、大きな脂肪族残基、荷電した残基、又は芳香族残基に変異させる。一実施形態では、ＶＡＬ１３２を欠失させる。相当する変異又は非保存的変異は、配列番号２のＶＡＬ１３０、及び配列番号８のＡＬＡ１６２に対して行うことができる。
【０１５２】
サイトカインのサブユニットは、以下の残基とサブユニットの天然のＣ末端との間に１以上の、たとえば、少なくとも２、３、４又は５の欠失を含有することができる：配列番号１２におけるＰＴＯ１２７、配列番号２のＰＲＯ１２５、配列番号６のＰＲＯ１７６、配列番号８のＧＬＵ１５７、及び配列番号１０のＰＴＯ１４４。一部の実施形態では、サイトカインのサブユニットは、前述の位置の１つの直後又はそのような位置から１、２又は３残基離れて切り捨てられる。サイトカインのサブユニットを含有するポリペプチドはそのような切捨てで終了することができ、又は代わりに切り捨てられたサイトカインのサブユニットの末端に融合する他の外因性配列（たとえば、ポリペプチドのタグ）を含めることができる。
【０１５３】
例となるＩＬ−１７Ｒ結合タンパク質は、たとえば、以下のような複数の変異を含む：
・部位１における少なくとも１、２又は３の置換及び部位２における少なくとも１、２又は３の置換；
・部位１における少なくとも１、２又は３の置換及び部位３における少なくとも１、２又は３の置換；
・部位２における少なくとも１、２又は３の置換及び部位３における少なくとも１、２又は３の置換；
・部位１における少なくとも１、２又は３の置換と、部位２における少なくとも１、２又は３の置換と、部位３における少なくとも１、２又は３の置換。
【０１５４】
例となるＩＬ−１７Ｒ結合タンパク質は、ＩＬ−１７サイトカインにて複数の置換及び／又は欠失を含む。たとえば、ＩＬ−１７結合タンパク質は、以下の特徴（配列番号１２の番号付けに従って）の少なくとも２、３又は４を含むことができる：（ｉ）Ｒ４７でのＡ鎖における置換、（ｉｉ）Ｓ６５でのＡ鎖における置換、（ｉｉｉ）Ｗ６８でのＡ鎖における置換、（ｉｖ）Ｒ１０２でのＡ鎖における置換、（ｖ）Ｎ８９でのＢ鎖における置換、及び（ｖｉ）配列番号１２の少なくとも２つのＣ末端残基又は配列番号１２の１２７〜１３２に相当する少なくとも２、３、４若しくは５の残基の欠失。タンパク質はさらに、本明細書に記載されるそのほかの特徴を有することができる。
【０１５５】
一部の例となる変異のあるＩＬ−１７サイトカインの配列を実施例２４〜２７にて列記する。そのような配列と少なくとも８５、９０，９２、９４、９６、９８又は９９％同一であり、そのような配列と同一の位置で置換を含む配列も使用してもよい。
【０１５６】
相当する変異は、図４Ｄで示す対応によって示されるように他のＩＬ−１７サイトカインで行うことができる。加えて、以下の残基は特定の実施形態ではＩＬ−１７サイトカインのコアに埋め込まれる可能性があり、これら残基の少なくとも５０、６０、７０、８０、９０又は１００％に変異はない。
【表２】
2013507132.tif 000004
【０１５７】
一実施形態では、ＩＬ−１７Ｒ結合タンパク質を用いて、試料にて又は患者にて、たとえば、細胞の表面上でＩＬ−１７Ｒを検出する。たとえば、ＩＬ−１７Ｒ結合タンパク質は、受容体を刺激することなくＩＬ−１７Ｒに結合し、検出することができる。ＩＬ−１７Ｒ結合タンパク質を標識することができる。
【０１５８】
一実施形態では、ＩＬ−１７Ｒ結合タンパク質を受容体の拮抗物質として用いて、たとえば、ＩＬ−１７受容体に結合させ、受容体の二量体化を妨げる。
アミノ酸の修飾
【０１５９】
本明細書に記載されるポリペプチドは、置換、欠失又は付加を含む種々の方法で修飾することができる。置換は、１つのアミノ酸の別のアミノ酸への置き換えを生じる。そのような置き換えは、遺伝子コードによって直接コードされる２０種のアミノ酸：アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン酸、グルタミン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン及びバリンを用いて行うことができる。加えて、ポリペプチドのアミノ酸は、遺伝子コードによって直接コードされていないアミノ酸：たとえば、セレノシステイン、ピロリジン、ｐ−ニトロフェニルアラニン、ｐ−スルホチロシン、ｐ−カルボキシフェニルアラニン、ｏ−ニトロフェニルアラニン、５−ニトロＨｉｓ、３−ニトロＴｙｒ、２−ニトロＴｙｒ、ニトロ置換Ｌｅｕ、ニトロ置換Ｈｉｓ、ニトロ置換Ｉｌｅ、ニトロ置換Ｔｒｐ、２−ニトロＴｒｐ、４−ニトロＴｒｐ、５−ニトロＴｒｐ、６−ニトロＴｒｐ、７−ニトロＴｒｐ、アミノチロシン及びカルボキシフェニルアラニンを用いて置き換えることができる。
【０１６０】
保存的なアミノ酸の置換は、タンパク質の構造又は機能のいずれかを変えることなくタンパク質にて行われることが多い。置換は、（ａ）置換の近傍の主鎖構造、たとえば、シート構造又は螺旋構造、（ｂ）標的部位での分子の電荷若しくは疎水性、又は（ｃ）側鎖の容積及び分枝に対する影響の可能性に基づいて選択することができる。
【０１６１】
アミノ酸残基は側鎖の特性に基づいて分類することができる：（１）脂肪族：Ａｌａ、Ｖａｌ］，Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；（２）小型脂肪族：Ａｌａ、Ｖａｌ；（３）大型脂肪族：Ｍｅｔ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；（４）中性親水性：Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；（５）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；（６）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ，Ａｒｇ；（７）荷電性：Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ；（８）主鎖の構造に影響を及ぼす残基：Ｇｌｙ，Ｐｒｏ；及び芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。非保存的は置換には、異なった部類のメンバーに対するこれら部類の１つのメンバーを置換すること又は以下の表で特定されない置換を行うことが含まれ得る。保存的な置換には、同一部類の別のメンバーに対するこれら部類の１つのメンバーを置換することが含まれ得る。一般に変異はＣｙｓに対して行われない。
【０１６２】
例となる保存的置換を以下の表に記載する（保存的な置換として特定されない残基への置換である例となる非保存的な置換と共に）。
【表３】
2013507132.tif 000005
【表４】
2013507132.tif 000006
ヘテロ二量体の形成
【０１６３】
任意の適当なやり方を用いて本明細書に記載される２つのサイトカインサブユニットのヘテロ二量体を形成することができる。例となるヘテロ二量体には、たとえば、ＩＬ−１７Ａの配列変異型とＩＬ−１７Ｆの野生型又は変異型；ＩＬ−１７Ｆの配列変異型とＩＬ−１７Ａの野生型又は変異型などのような２つの異なったサイトカインファミリーメンバーを組み合わせるヘテロ二量体と同様にＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７Ｂ、ＩＬ−１７Ｃ、ＩＬ−１７Ｄ、及びＩＬ−１７Ｅの２つの異なった配列変異型のヘテロ二量体が挙げられる。
【０１６４】
ヘテロ二量体を形成するやり方の１つは、ヘテロ二量体の一方の配列に２つのサブユニットの一方を接続し、対の他方の配列に他方のサブユニットを接続することである。ヘテロ二量体対に由来する外因性のヘテロ二量体化配列はサイトカインのＮ末端又はＣ末端に位置することができる。たとえば、ヘテロ二量体化の対は、非サイトカインタンパク質、たとえば、転写因子（たとえば、ｆｏｓ／ｊｕｎ）、受容体又は人工的な配列のヘテロ二量体化ドメインであり得る。例となる人工的な配列は操作された酸性／塩基性ジッパーである。別の例となる二量体化のやり方は、たとえば、Ｆｃドメインの範囲内で又は独立してヘテロ二量体、たとえば、ノブ・イン・ホールで修飾したＣＨ３ドメインを形成するように操作したＦｃドメインを使用することである。たとえば、Ｒｉｄｇｗａｙ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．１９９６、Ｊｕｌ；９（７）：６１７−２を参照のこと。さらに別のやり方には、免疫グロブリン軽鎖の定常領域にサイトカインサブユニットの一方を連結し、免疫グロブリンの重鎖のＣＨ１定常領域にサイトカインサブユニットの他方を連結することが挙げられる。
【０１６５】
ヘテロ二量体を形成する別のやり方は、単鎖タンパク質を形成するリンカーを用いて２つのサブユニットを接続することである。リンカーは、たとえば、少なくとも２４、２５、２７、２９、３０又は３２の残基、たとえば、２５〜３４の間又は２７〜３７の残基の間のような適当な長さであり得る。リンカーは、たとえば、（Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ）ｎ又は（Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ）ｎ又は（Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ）ｎのような反復配列を含むことができ、ｎはたとえば、２、３、４、５、６、７以上である。さらに長い及びさらに短いリンカーも使用することができる。最大の安定性を伴ったリンカーの長さと最大のヘテロ二量体形成を選択し、使用することができる。
【０１６６】
ＩＬ−１７Ｒ結合タンパク質及び本明細書に記載されるそのほかのタンパク質は、組換え宿主細胞における発現だけでなく、たとえば、試験管内の転写及び翻訳及び化学合成のようなそのほかの方法によっても製造することができる。細胞での発現については、結合タンパク質をコードする１以上の核酸（たとえば、ｃＤＮＡ又はゲノムＤＮＡ）をクローニング又は発現のための複製可能なベクターに挿入してもよい。種々のベクターが公的に利用可能である。ベクターは、たとえば、プラスミド、コスミド、ウイルスゲノム、ファージミド、ファージゲノム、又はそのほかの自発的に複製する配列であってもよい。種々の手順によって適当なコーディング核酸配列をベクターに挿入してもよい。たとえば、適当な制限エンドヌクレアーゼ部位を操作することができる（たとえば、ＰＣＲを用いて）。次いで制限消化と連結を用いて適当な位置でコーディング核酸配列を挿入することができる。ベクターの構成成分には一般に１以上の複製開始点、１以上のマーカー遺伝子、エンハンサ要素、プロモータ及び転写終了配列が含まれる。
【０１６７】
細菌での発現については、シグナル配列を伴って又はシグナル配列なしで結合タンパク質を産生することができる。たとえば、それが封入体に蓄積するように細胞内でそれを産生することができる。たとえば、原核細胞シグナル配列、たとえば、アルカリホスファターゼ、ペニシリナーゼ又は熱安定性腸毒素ＩＩのような適当なリーダー配列の添加によってそれを分泌させることもできる。発現のための例となる細菌の宿主細胞には、形質転換可能な大腸菌Ｋ−１２株（たとえば、大腸菌Ｃ６００，ＡＴＣＣ  ２３７２４；大腸菌ＨＢ１０１  ＮＲＲＬＢ−１１３７１，ＡＴＣＣ−３３６９４；大腸菌ＭＭ２９４  ＡＴＣＣ−３３６２５；大腸菌Ｗ３１１０  ＡＴＣＣ−２７３２５）、枯草菌、緑膿菌及びそのほかの桿菌の株が挙げられる。細菌系で産生されるタンパク質は通常グリコシル化を欠く。
【０１６８】
結合タンパク質は、酵母宿主細胞、たとえば、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｐｏｍｂｅ、Ｈａｎｓｅｕｌａ又はＰｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓにおいて発現させることができる。酵母での発現については、結合タンパク質は細胞内で産生することができ、又はたとえば、酵母インベルターゼリーダー又はアルファ因子リーダーを用いた分泌によって産生することもできる。哺乳類細胞での発現では、ウイルスの分泌リーダーと同様に、同一種又は関連種の分泌ポリペプチドに由来するシグナル配列のような哺乳類のシグナル配列をタンパク質の直接分泌に使用してもよい。真核宿主細胞（酵母、真菌、昆虫、植物、動物、ヒト又はそのほかの多細胞生物に由来する有核細胞）で使用される発現ベクターは転写の終了のために及びｍＲＮＡを安定化されるのに必要な配列も含有することができる。そのような配列は一般に真核細胞又はウイルスのＤＮＡ又はｃＤＮＡの５’及び時には３’の非翻訳領域から入手可能である。これらの領域は、結合タンパク質をコードするｍＲＮＡの非翻訳部分におけるポリアデニル化断片として転写されたヌクレオチド断片を含有する。発現ベクターは１以上のイントロン配列も含んでもよい。
【０１６９】
結合タンパク質は、たとえば、ｐＦＡＳＴ−ＢＡＣ（商標）系を用いたＳｆ９細胞又はＳＦ２１細胞のような昆虫細胞でも発現させることができる。結合タンパク質は哺乳類細胞でも発現させることができる。たとえば、哺乳類起源の細胞株も採用されてもよい。哺乳類宿主細胞株の例には、サル腎臓細胞のＣＯＳ−７株（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １６５１）（Ｇｌｕｚｍａｎら、Ｃｅｌｌ、２３：１７５，１９８１）、Ｌ細胞、Ｃ１２７細胞、３Ｔ３細胞（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  １６３）、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）細胞、ＨｅＬａ細胞、及びＢＨＫ（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １０）細胞株、及びＭｃＭａｈａｎら（ＥＭＢＯ  Ｊ．１０：２８２１，１９９１）によって記載されたようなアフリカミドリザル腎臓細胞株ＣＶ１（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ７０）に由来するＣＶ１／ＥＢＮＡ細胞株が挙げられる。哺乳類細胞にＤＮＡを導入する確立された方法は記載されている（Ｋａｕｆｍａｎ，  Ｒ．  Ｊ．，  Ｌａｒｇｅ  Ｓｃａｌｅ  Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ，  １９９０，  ｐｐ．  １５６９）。
【０１７０】
組換え細胞にて結合タンパク質を合成するのに適合させるのに好適なさらにそのほかの方法、ベクター及び宿主細胞は、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，第３版、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（ｅｄｓ．），Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ，（２００１）（ＩＳＢＮ：０８７９６９５７７３）に記載されている。ＩＬ−１７サイトカインタンパク質は、たとえば、哺乳類、真菌又は細菌の細胞にて適当な方法によって発現させ、精製することができる。タンパク質はグリコシル化することができ、又はグリコシル化することができない。
【０１７１】
細胞にていったん発現されると、ＩＬ−１７Ｒ結合タンパク質及び本明細書に記載されるタンパク質は、細胞培地、封入体又は細胞溶解物から回収することができる。たとえば、凍結融解の繰り返し、超音波処理、機械的崩壊又は細胞溶解剤（たとえば、界面活性剤）のような種々の物理的又は化学的な手段によって細胞を壊すことができる。細胞溶解物又は細胞培地に見い出すことができる細胞のそのほかのタンパク質又はポリペプチドからＩＬ−１７Ｒ結合タンパク質及び本明細書に記載されるタンパク質を精製することができる。例となる精製手順の１つには、陽イオン交換クロマトグラフィ及びゲル濾過が挙げられる。たとえば、Ｍｕｒｐｈｙら、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｘｐｒ  Ｐｕｒｉｆ．１９９８、Ｍａｒ；１２（２）：２０８−１４を参照のこと。タンパク質精製の種々の方法が採用されてもよく、そのような方法は当該技術で既知であり、Ｄｅｕｔｓｃｈｅｒ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，１８２（１９９０）；及びＳｃｏｐｅｓ，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（２０１０）（ＩＳＢＮ：１４４１９２８３３２）に記載されている。タンパク質分解による切断によって精製部分（たとえば、エピトープタグ、及び親和性ハンドル）を任意で取り出すことができる。
使用方法
【０１７２】
本明細書に記載される組成物は、脊椎動物対象における疾患又は障害を治療する又は予防する方法に有用である。そのような方法の１つでは、１以上のポリペプチドを含有する組成物を対象に投与する工程が提供される。本明細書に記載されるように、組成物は、小胞内に、局所に、経口で、直腸に、眼に、光学的に、鼻内に、又は吸入を介して投与される。
【０１７３】
本明細書に記載される結合タンパク質（たとえば、ＩＬ−１７Ｒ結合タンパク質、ＩＬ−１７サイトカインメンバーに対する抗体、及びＩＬ−１７Ｒに対する抗体）を用いて脊椎動物の免疫系を調節する方法も提供される。たとえば、治療上有効な量の修飾されたＩＬ−１７を含む組成物を対象に投与することによって哺乳類対象に修飾されたポリペプチドを投与する際、炎症性サイトカインのレベルを下げることができる。例となる炎症性サイトカインは、ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１７、ＩＬ−２１及びＩＬ−２３である。哺乳類の血液及び／又はそのほかの組織に存在する炎症性サイトカインのレベルを一般に低下させる。免疫系の調節には、哺乳類対象にて抗炎症性サイトカインのレベルを高める方法も含まれる。たとえば、抗炎症性サイトカインはＩＬ−１０、ＩＬ−４、ＩＬ−１１、ＩＬ−１３又はＴＧＦ−βである。任意で、哺乳類の血液における抗炎症性サイトカインのレベルを高める。
【０１７４】
一部の態様では、ＩＬ−１７Ｒ結合タンパク質又は本明細書に記載される操作されたそのほかのタンパク質を対象に投与してＴｈ１７が介在する障害又はＩＬ−１７サイトカインファミリーメンバーが介在する障害を治療する。たとえば、タンパク質を対象に投与してアトピー性皮膚炎及び接触性皮膚炎、大腸炎、内毒素血症、関節炎、関節リウマチ、乾癬性関節炎、自己免疫性眼疾患（ブドウ膜炎、強膜炎）、成人呼吸器疾患（ＡＲＤ）、脱髄疾患、敗血症ショック、多臓器不全、たとえば、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、気道過敏症、慢性気管支炎、アレルギー性喘息のような炎症性肺傷害、乾癬、湿疹、ＩＢＳ、及びたとえば、潰瘍性大腸炎及びクローン病のような炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、糖尿病、ヘリコバクターピロリ感染症、腹腔炎症（たとえば、感染、傷害等）の結果としての腹内癒着及び／又は膿瘍、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、多発性硬化症、全身性硬化症、腎炎症候群、臓器移植の拒絶、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、腎臓、肺、心臓等の移植の拒絶、連鎖球菌細胞壁誘導の関節炎、変形性関節症、歯肉炎／歯周病、ヘルペス性間質角膜炎、再狭窄、川崎病、及びＩＬ−１７及び／又はＩＬ−２３の発現を特徴とする、前立腺癌、直腸癌、結腸癌、卵巣癌及び子宮頚癌、及び白血病を含むが、これらに限定されない癌／悪性腫瘍を治療することができる（Ｔａｒｔｏｕｒ  ｅｔ  ａｌ，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ５Ｐ：３６９８  （１９９９）；  Ｋａｔｏ  ｅｔ  ａｌ，  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  Ｒｅｓ．  Ｃｏｍｍｕｎ．  ２８２：７３５  （２００１）；  Ｓｔｅｉｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ，  Ｐｒｏｓｔａｔｅ．  ５６：１７１  （２００３）；  Ｌａｎｇｏｗｋｓｉ  ｅｔ  ａｌ，  Ｎａｔｕｒｅ  ４４２：  ４６１，  ２００６）。たとえば、結合タンパク質は、ＩＬ−１７のファミリーメンバーを結合し、遮断し、阻害し、低減し、拮抗し、又は中和することが可能である（個々に又は一緒に、のいずれかで）。
【０１７５】
本明細書に記載される組成物は治療上又は予防上使用され得る。種々の異なったポリペプチドのカクテルを一緒に使用して１又は複数の標的、たとえば、複数の細胞種に同時に結合し、作用することができる。上手く行った治療は内科医に精通する日常の手順によって評価することができる。
【０１７６】
一実施形態では、ＩＬ−１７Ｒ結合タンパク質又は本明細書に記載される操作されたそのほかのタンパク質（たとえば、抗体）を投与して、眼の表面を冒す眼疾患、少なくとも部分的に自己免疫反応が介在する眼疾患、全身性の自己免疫疾患（たとえば、シェーグレン症候群及び関節リウマチ）に関連する又はＩＬ−１７サイトカインのファミリーメンバーが関与する疾患に関連する眼疾患を含む眼の疾患を治療する。患者はさらなる全身性の自己免疫疾患の他の兆候を有してもよく又は有さなくてもよい。
【０１７７】
眼疾患は、眼の表面を冒すドライアイ疾患であり得る。疾患には、乾性角結膜炎、乾燥角膜炎、乾燥症候群、眼球乾燥症、涙液膜疾患、涙液産生の低下、水性涙液欠乏症、及びマイボーム腺機能不全とも呼ばれる状態が含まれる。加えて、本明細書に記載される結合タンパク質を用いて春季カタル及び緑内障関連の炎症を治療することができる。
【０１７８】
ドライアイには、シェーグレン症候群（ＳＳ）に関連する、たとえば、シェーグレン症候群関連の乾性角結膜炎の形態だけではなく、シェーグレン症候群に関連しない、たとえば、非シェーグレン症候群関連の乾性角結膜炎の形態も含まれ得る。患者は、全身性自己免疫疾患の他の兆候を有してもよく又は有さなくてもよい。
【０１７９】
ドライアイを有する患者は、眼の乾燥の炎症を示してもよく、チクチクする、とげとげしい、ムズムズする、ほてった又は圧迫された感覚、刺激、疼痛及び発赤を経験し得る。ドライアイは、過剰な眼の水分及び逆に不十分な涙液産生の双方に関連する。ＩＬ−１７Ｒ結合タンパク質又は本明細書に記載される操作されたそのほかのタンパク質（たとえば、抗体）をそのような対象に投与して、１以上のそのような症状の発症又は悪化を改善する又は防ぐことができる。
【０１８０】
ＩＬ−１７Ｒ結合タンパク質又は本明細書に記載される操作されたそのほかのタンパク質（たとえば、抗体）を使用して眼の表面、たとえば、角膜を冒すそのほかの疾患を治療することができる。そのような疾患には、角膜眼表面炎症状態、角膜血管新生、末梢の潰瘍性角膜炎及び微生物性角膜炎を含む角膜炎が挙げられる。ＩＬ−１７Ｒ結合タンパク質又は本明細書に記載される操作されたそのほかのタンパク質（たとえば、抗体）を使用して結膜瘢痕化疾患及び結膜炎を含む結膜を冒す疾患を治療することができる。ＩＬ−１７Ｒ結合タンパク質又は本明細書に記載される操作されたそのほかのタンパク質（たとえば、抗体）を使用して類天疱瘡症候群及びスティーブンス・ジョンソン症候群のようなさらにそのほかの疾患を治療することができる。
【０１８１】
角膜移植／角膜形成、人工角膜移植手術、薄層移植、選択的内皮移植を受けようとしている、経験している又は受けている対象にＩＬ−１７Ｒ結合タンパク質又は本明細書に記載される操作されたそのほかのタンパク質（たとえば、抗体）を投与することができる。ＩＬ−１７Ｒ結合タンパク質又は本明細書に記載される操作されたそのほかのタンパク質（たとえば、抗体）を対象に投与して眼の中の又は眼の周りの血管新生を調節することができる。
【０１８２】
眼を冒すアレルギー反応を有する対象、たとえば、重篤なアレルギー性（アトピー性）眼疾患を経験している対象にＩＬ−１７Ｒ結合タンパク質又は本明細書に記載される操作されたそのほかのタンパク質（たとえば、抗体）を投与することができる。
【０１８３】
眼を冒す自己免疫疾患を有する対象にＬ−１７Ｒ結合タンパク質又は本明細書に記載される操作されたそのほかのタンパク質（たとえば、抗体）を投与することができる。例となる自己免疫性の眼疾患には、交感性眼炎、フォークト・小柳・原田（ＶＫＨ）症候群、バーショット網脈絡膜疾患、眼の瘢痕性類天疱瘡、ファッチの異色性虹彩毛様体炎、及びブドウ膜炎の種々の形態が挙げられる。ＩＬ−１７Ｒ結合タンパク質又は本明細書に記載される操作されたそのほかのタンパク質（たとえば、抗体）を対象に投与して前述の疾患を治療することができる。
【０１８４】
ブドウ膜炎には、急性と慢性の形態が挙げられ、虹彩、毛様体、及び脈絡膜の１以上の炎症が含まれ、前部形態、中部形態及び後部形態が含まれる。慢性の形態は、全身性の自己免疫疾患、たとえば、ベーチェット症候群、強直性脊椎炎、若年性関節リウマチ、ライター症候群、及び炎症性腸疾患と関連し得る。ＩＬ−１７Ｒ結合タンパク質又は本明細書に記載される操作されたそのほかのタンパク質（たとえば、抗体）を対象に投与してブドウ膜炎の前述の形態のいずれかを治療することができる。
【０１８５】
任意の方式によってＩＬ−１７Ｒ結合タンパク質又は本明細書に記載される操作されたそのほかのタンパク質（たとえば、抗体）を投与して眼の疾患を治療することができる。非経口の方式によって剤を送達することができる。代わりに又は加えて、剤を直接眼に又は眼の近傍に送達することができる。たとえば、タンパク質をたとえば、以下に記載するように局所的に又は眼内に投与することができる。
【０１８６】
局所投与のために、たとえば、液体点眼剤若しくは軟膏としての投与のために、又は眼の前房若しくは結膜嚢への注入のために眼科用製剤を送達することができる。点眼器を用いて液体点眼剤を送達することができる。眼の送達用に製剤化される場合、ＩＬ−１７Ｒ結合タンパク質は０．００１〜５％、たとえば、０．０１〜５％、０．１〜２％又は１〜５％の濃度で存在し得る。
製剤
【０１８７】
１以上の治療剤を単独で又は１以上の化学療法剤と併用して、対象への投与のために薬学上許容可能なキャリアと共に製剤化することができる。一部の実施形態では、治療剤は可動化因子、及び任意で化学療法剤と併用して製剤化される。有効成分は、逐次投与のために単独で（個々に）製剤化することができ、同時投与のために一緒に製剤化されてもよい。
【０１８８】
用語「薬学上許容可能なキャリア」は本明細書で使用されるとき、対象への投与に好適である１以上の相溶性の固体又は液体の充填剤、希釈剤又は被包物質を意味する。医薬組成物の構成成分はまた、所望の医薬効率を損なう相互作用がないような方法で互いに混ぜ合うことも可能である。そのような調製物は、薬学上許容可能な濃度の塩、緩衝剤、保存剤、相溶性キャリア、補助剤及び任意でそのほかの治療用成分を日常的に含有してもよい。
【０１８９】
本明細書に記載される組成物は遊離の塩基として又は薬学上許容可能な塩として投与され得る。そのような薬理学的に及び薬学上許容可能な塩には、以下の酸：塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、マレイン酸、酢酸、サリチル酸、ｐ−トルエンスルホン酸、酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸、ギ酸、マロン酸、コハク酸、ナフタレンスルホン酸、及びベンゼンスルホン酸から調製されるものが挙げられるが、これらに限定されない。また、薬学上許容可能な塩は、たとえば、カルボン酸基のナトリウム塩、カリウム塩又はカルシウム塩のようなアルカリ金属塩又はアルカリ土類塩として調製することができる。
【０１９０】
医薬組成物はまた好適な固相又はゲル相のキャリア又は賦形剤を含んでもよい。そのようなキャリア又は賦形剤の例には、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、種々の糖類、デンプン、セルロース誘導体、ゼラチン、及びポリエチレングリコールのようなポリマー類が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１９１】
好適な緩衝剤には、酢酸及び塩（１〜２％ｗ／ｖ）、クエン酸及び塩（１〜３％ｗ／ｖ）、ホウ酸及び塩（０．５〜２．５％ｗ／ｖ）、及びリン酸及び塩（０．８〜２％ｗ／ｖ）が挙げられる。好適な保存剤には、塩化ベンザルコニウム（０．００３〜０．０３％ｗ／ｖ）、クロロブタノール（０．３〜０．９％ｗ／ｖ）、パラベン類（０．０１〜０．２５％ｗ／ｖ）及びチメロサール（０．００４〜０．０２％ｗ／ｖ）が挙げられる。
【０１９２】
好適な液体又は固体の医薬調製物の形態は、たとえば、吸入用の水溶液又は生理食塩水であり、微細被包されたもの、渦巻き型のもの、微細金粒子上に被覆されたもの、脂質様のもの、噴霧されたエアゾール、皮膚への埋め込み用のペレット、皮膚で引掻き傷をつける鋭い物体上で乾燥させたものである。医薬組成物はまた、顆粒、粉末、錠剤、被覆錠剤、（マイクロ）カプセル剤、座薬、シロップ、エマルション、懸濁液、クリーム、組成物の長期放出を伴う点滴剤又は調製物も含み、その調製物中には、賦形剤及び添加剤及び／又はたとえば、崩壊剤、結合剤、被覆剤、膨潤剤、潤滑剤、香味剤、甘味剤、又は可溶化剤のような補助剤が通例、上述のように使用される。医薬組成物は種々の薬剤送達系での使用に好適である。薬剤送達のための方法の手短な概説については、Ｌａｎｇｅｒ，Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４９：１５２７−１５３３，１９９０及びＬａｎｇｅｒとＴｉｒｒｅｌｌ，Ｎａｔｕｒｅ，２００４、Ａｐｒ．１；４２８（６９８２）：４８７−９２を参照のこと。
【０１９３】
組成物は単位投与形態で好都合に提示されてもよく、製薬学の技術で周知の方法のいずれかによって調製されてもよい。特定の実施形態では、投与される組成物は、溶液としてではなく、粉末又は粒子状の形態である。本発明の一部として企図される粒子状の形態の例は、米国特許第２００２／０１２８２２５号に提供されている。一部の実施形態では、組成物はエアゾールの形態で投与される。他の実施形態では、組成物は、使用前に好適な賦形薬、たとえば、無菌の発熱物質を含まない水で構築されるための粉末形態であってもよい。
【０１９４】
加えて、本明細書に記載される組成物は、デポー製剤、持続放出型、遅延放出型又は徐放性の送達方式として製剤化され得る。そのような方式は本明細書に記載される組成物の反復投与を回避することができ、対象及び内科医の利便性を高める。そのような長時間作用型の製剤は、好適なポリマー材料若しくは疎水性材料（たとえば、許容可能な油中のエマルションとして）、又はイオン交換樹脂と共に、又は難溶性の誘導体、たとえば、難溶性の塩として製剤化されてもよい。多くの種類の放出送達方式が利用可能であり、当業者に既知である。それらには、たとえば、ポリ乳酸及びポリグリコール酸、β−グルカン粒子、ポリ無水物及びポリカプロラクトンのようなポリマーに基づく方式；コレステロール、コレステロールエステル及び脂肪酸のようなステロール類、モノ−、ジ−及びトリ−グリセリドのような中性脂肪、又は脂質様物質を含む脂質である非ポリマー方式；ヒドロゲル放出方式；シラスティック方式；ペプチドに基づく方式；ワックスのコーティング、従来の結合剤と賦形剤を用いた圧縮錠剤、部分的に融合したインプラントなどが挙げられる。加えて、ポンプに基づくハードウエア方式を使用することができ、その一部は埋め込みに適合する。
【０１９５】
制御放出は、生体適合性で且つ生分解性である適切な賦形剤物質によっても達成することができる。徐放性を達成するこれらのポリマー物質は、非生侵食性／非生分解性及び生侵食性／生分解性のポリマーを含むが、これらに限定されない粒子を生成するために好適なポリマー物質であり得る。そのようなポリマーは従来技術で極めて詳細に記載されており、β−グルカン粒子、ポリアミド、ポリカーボネート、ポリアルキレン、ポリアルキレングリコール、ポリアルキレンオキシド、ポリアルキレンテレフタレート、ポリビニルアルコール、ポリビニルエーテル、ポリビニルエステル、ポリビニルハロゲン化合物、ポリビニルピロリドン、ポリグリコリド、ポリシロキサン、ポリウレタン、及びこれらのコポリマー、アルキルセルロース、ヒドロキシアルキルセルロース、セルロースエーテル、セルロースエステル、ニトロセルロース、アクリル酸エステルとメタクリルさんエステルのポリマー、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシブチルメチルセルロース、セルロースアセテート、セルロースプロピオネート、セルロースアセテートブチレート、セルロースアセテートフタレート、カルボキシエチルセルロース、セルローストリアセテート、セルロース硫酸ナトリウム塩、ポリ（メタクリル酸メチル）、ポリ（メタクリル酸エチル）、ポリ（メタクリル酸ブチル）、ポリ（メタクリル酸イソブチル）、ポリ（メタクリル酸ヘキシル）、ポリ（メタクリル酸イソデシル）、ポリ（メタクリル酸ラウリル）、ポリ（メタクリル酸フェニル）、ポリ（アクリル酸メチル）、ポリ（アクリル酸イソプロピル）、ポリ（アクリル酸イソブチル）、ポリ（アクリル酸オクタデシル）、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリ（エチレングリコール）、ポリ（エチレンオキシド）、ポリ（エチレンテレフタレート）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリ（酢酸ビニル）、ポリ塩化ビニルポリスチレン、ポリビニルピロリドン、ヒアルロン酸及びコンドロイチン硫酸が挙げられるが、これらに限定されない。一実施形態では、徐放性ポリマーは、たとえば、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）／ポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）（ＰＬＧＡ）ブロックコポリマーのようなブロックコポリマーである。
【０１９６】
非生分解性ポリマーの例には、エチレンビニルアセテート、ポリ（メタ）アクリル酸、ポリアミド、これらのコポリマー及び混合物が挙げられる。
【０１９７】
生分解性ポリマーの例には、合成ポリマー、たとえば、β−グルカン粒子、乳酸とグリコール酸のポリマー、ポリ無水物、ポリ（オルソ）エステル、ポリウレタン、ポリ（酪酸）、ポリ（吉草酸）、ポリ（カプロラクトン）、ポリ（ヒドロキシブチレート）、ポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）、及びポリ（ラクチド−ｃｏ−カプロラクトン）、並びに天然ポリマー、たとえば、アルギン酸、及びデキストラン及びセルロース、コラーゲン、その化学的誘導体（化学基、たとえば、アルキル、アルキレン、の置換、付加、水和、酸化及び当業者によって日常的に為されるそのほかの修飾）を含むそのほかの多糖類、アルブミン及びそのほかの親水性タンパク質、ゼイン及びそのほかのプロラミン及び疎水性タンパク質、これらのコポリマー及び混合物が挙げられる。一般に、これらの物質は、生体内での酵素的加水分解又は水分への暴露によって、表面又は全体の侵食によって分解する。前述の物質は単独で使用してもよく、物理的混合物（ブレンド）として又はコポリマーとして使用してもよい。好ましいポリマーは、ポリエステル、ポリ無水物、ポリスチレン及びこれらの混合物である。
【０１９８】
有効量の本明細書に記載される組成物が、そのような治療を必要とする対象に投与される。有効量は、状態、疾患又は障害、又は状態、疾患又は障害の兆候に所望の改善を生じる量である。
【０１９９】
有効な用量は、投与方式によって、１ｎｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／体重ｋｇ、１００ｎｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／体重ｋｇ、又は１μｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／体重ｋｇに及ぶ。或いは、有効な用量は、細胞の４平方センチメートルの面積当たり３マイクログラム〜１４ミリグラムに及ぶことができる。絶対的な量は、種々の因子（投与がほかの治療法と併用かどうか、投与回数、年齢、身体状態、大きさ及び体重を含む個々の患者のパラメータ）に左右され、日常の実験によって決定することができる。あり得る有用な用量の１つは、健全な医療判断に従った最高に安全な用量である。
【０２００】
種々の活性剤の送達間の時間は、動態、送達、放出、剤の薬物力学、剤の薬物動態の第１原理、又はそれらの組み合わせによって合理的に定義され得る。或いは、種々の活性剤の送達間の時間は、何時最大の効果が達成され得るかを規定する実験によって経験的に定義され得る。
投与の方式
【０２０１】
投与の方式は、経口投与、舌下投与、鼻内投与、クモ膜下投与、吸入、眼投与、局所投与、経皮投与、皮内投与、直腸投与、膣投与、皮下投与、静脈内投与、筋肉内投与、腹腔内投与、胸骨内投与、又は経粘膜投与を含む医学的に許容可能な方式であり得る。加えて、投与の方式は、体外の装置及び／又は組織を貫通する電磁装置を介してもよい。
【０２０２】
選択される特定の方式は、選択される特定の活性剤、所望の結果、治療される特定の状態及び治療の有効性に必要とされる投与量によって決まる。本明細書に記載される方法は、一般的に言えば、医学的に許容可能である投与の方式、たとえば、臨床的に許容できない有害効果を起こさないで有効なレベルの炎症反応の変化を生じる方式を用いて実践され得る。
【０２０３】
組成物は、障害及び投与方式によって異なった容器、賦形薬又は製剤で提供することができる。たとえば、経口適用については、組成物は、舌下錠剤、ガム、洗口液、歯磨き粉、キャンディ、ゲル、フィルム等として、眼への適用については、点眼器における点眼剤、眼軟膏、眼ゲル、コンタクトレンズ保存液又は洗浄液におけるコンタクトレンズ又は眼内レンズのコーティングとしての眼パック等として、局所投与については、ローション、軟膏、ゲル、クリーム、スプレー、ティッシュ、綿球、拭き取り等として、膣又は直腸への適用については、軟膏、タンポン、座薬、粘膜粘着製剤等として投与することができる。
【０２０４】
組成物は、注射によって、たとえば、ボーラス注射又は持続点滴によって、静脈内、皮下、筋肉内、腹腔内、胸骨内の経路を介して投与され得る。注射のための製剤は、単位投与形態で、たとえば、添加した保存剤と共にアンプル又は複数回用量の容器にて提示され得る。組成物は、懸濁液、溶液、又は油性若しくは水性の賦形薬におけるエマルションのような形態を取り得るし、懸濁剤、安定剤及び／又は分散剤のような製剤化剤を含有し得る。経口投与については、組成物は、当該技術で周知の薬学上許容可能なキャリアと組成物を組み合わせることによって、たとえば、舌下錠剤、液体製剤又は経口ゲルとして容易に製剤化することができる。
【０２０５】
吸入による投与については、組成物は、好適な高圧ガス、たとえば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素又はそのほかの好適な気体の使用によって、加圧包装又は噴霧器からのエアゾールスプレー提示の形態で好都合に送達され得る。加圧エアゾールの場合、投与量単位は、測定された量を送達する弁を提供することによって決定され得る。吸入具又は吸入器で使用するためのたとえば、ゼラチンのカプセル及びカートリッジは、組成物とたとえば、ラクトース又はデンプンのような好適な粉末基剤を含有して製剤化され得る。治療法の吸入のための医療器具は当該技術で既知である。一部の実施形態では、医療器具は吸入具である。ほかの実施形態では、医療器具は、測定した用量の吸入具、ディスクヘラー、タービュヘイラー、ディスカス又はスペーサーである。これらの実施形態の特定のものでは、吸入具はスピンヘラーである（Rhone-Poulenc Rorer, West Malling, Kent）。そのほかの医療器具は当該技術で既知であり、Ｉｎｈａｌｅ／Ｐｆｉｚｅｒ，Ｍａｎｎｋｉｎｄ／Ｇｌａｘｏ及びＡｄｖａｎｃｅｄ  Ｉｎｈａｌａｔｉｏｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ／Ａｌｋｅｒｍｅｓが挙げられる。
【０２０６】
組成物はまた、たとえば、カカオバター又はそのほかのグリセリドのような従来の座薬基剤を含有する座薬又は停留浣腸のような直腸又は膣の組成物で製剤化され得る。
抗体の産生
【０２０７】
例となるＩＬ−１７サイトカイン拮抗物質は、抗体、たとえば、ＩＬ−１７ＲＡ、ＩＬ−１７ＲＢ、ＩＬ−１７ＲＣ、ＩＬ−１７ＲＤ若しくはＩＬ−１７ＲＥのようなＩＬ−１７サイトカイン受容体に結合する抗体、又はＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｂ，ＩＬ−１７Ｃ、ＩＬ−１７Ｄ、ＩＬ−１７Ｅ又はＩＬ−１７ＦのようなＩＬ−１７サイトカインに結合する抗体である。本明細書で使用されるとき、用語「抗体」は、少なくとも１つの免疫グロブリン可変領域を含むタンパク質を指す。たとえば、抗体は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含むことができる。別の例では、抗体は、２つのＶＨ領域及び２つのＶＬ領域を含む。用語「抗体」は、完全な抗体、たとえば、ＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＤ、ＩｇＭの型の未処理の免疫グロブリン（それらの亜型及び修飾型と同様に）と同様に抗体の抗原結合断片（たとえば、単鎖抗体、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片及びｄＡｂ断片）を包含する。さらにそのほかの抗体は、単一の免疫グロブリン可変ドメインのみを含む。たとえば、Ｊａｎｓｓｅｎｓら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０３（４１）：１５１３０−５（２００６）を参照のこと。
【０２０８】
各ＶＨ及びＶＬは通常、アミノ末端からカルボキシル末端に以下の順：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４で配置される３つの「相補性決定領域（「ＣＤＲ」）と４つの「フレームワーク領域」（ＦＲ）によって構成される。ＦＲとＣＤＲの程度は正確に定義されている（Ｋａｂａｔ，  Ｅ．Ａ．，  ｅｔ  ａｌ．  （１９９１）  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，  Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｕ．Ｓ．  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，  ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．  ９１−３２４２；  ａｎｄ  Ｃｈｏｔｈｉａ，  Ｃ．  ｅｔ  ａｌ．  （１９８７）  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  １９６：９０１−９１７を参照）。カバットの定義を本明細書で使用する。Ｃｈｏｔｈｉａら（１９９２）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：７９９−８１７；Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎら（１９９２）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：７７６−７９８）；及びＴｏｍｌｉｎｓｏｎら（１９９５）ＥＭＢＯ  Ｊ．１４（１８）：４６２８−３８に記載されたように、免疫グロブリン可変部の超可変ループの標準的構造をその配列から推測することができる。
【０２０９】
例となる抗体は、１０６Ｍ以上の、好ましくは１０７Ｍ以上の、さらに好ましくは１０８Ｍ以上の最も好ましくは１０９Ｍ以上の結合親和性でＩＬ−１７サイトカイン又はＩＬ−１７サイトカイン受容体に特異的に結合する。抗体の結合親和性は、たとえば、Ｓｃａｔｃｈａｒｄ解析によって当業者により容易に決定することができる。例となる抗体はまた１００ｎＭ、２０ｎＭ又は５ｎＭ未満のＥＣ５０も有し得る。さらに、例となる抗体は、ＩＬ−１７サイトカイン及びＩＬ−１７サイトカイン受容体の結合、たとえば、ＩＬ−１７ＡのＩＬ−１７ＲＡ若しくはＩＬ−１７ＲＣへの結合、又はＩＬ−１７ＦのＩＬ−１７ＲＡ若しくはＩＬ−１７ＲＣへの結合を妨害することができる。
【０２１０】
特異的な抗体は、たとえば、標準のウエスタンブロット解析を用いて所望のポリペプチドを検出するが、そのほかの細胞性ポリペプチドを検出しなければ、無関係のポリペプチド分子と有意には交差反応しない。一部の実施形態では、抗体は、そのほかに比べて１つのＩＬ−１７サイトカイン又はＩＬ−１７受容体に特異的であり、たとえば、抗体は、少なくとも１０倍、１００倍又は１０００倍でＩＬ−１７サイトカイン又は受容体の特定の１つに優先的に結合する。
【０２１１】
一実施形態では、抗体は、ＩＬ−１７ＲＡ、たとえば、ＩＬ−１７ＲＡのＤ１又はＤ２ドメインに結合する。たとえば、抗体は、ＩＬ−１７ＲＡ（配列番号１４）のアミノ酸２２〜３６、アミノ酸８３〜９６、アミノ酸１１８〜１４７、アミノ酸１５２〜１７９又はアミノ酸２５６〜２７１の範囲内の１以上のアミノ酸、たとえば、配列番号１４のＴｈｒ２５〜Ｔｒｐ３１、Ｌｅｕ８６〜Ａｒｇ９３又はＣｙｓ２５９〜Ａｒｇ２６５の範囲内での少なくとも２又は３のアミノ酸を含むエピトープに結合する。たとえば、抗体は、ＩＬ−１７ＲＡとＩＬ−１７サイトカイン、たとえば、ＩＬ−１７Ａ又はＩＬ−１７Ｆの間の結合を少なくとも１００、２００、５００、１０００又は５０００倍低下させる。
【０２１２】
別の実施形態では、抗体は、ＩＬ−１７ＲＢに、たとえば、ＩＬ−１７ＲＢ（配列番号１５）のアミノ酸８６〜１００、アミノ酸１２６〜１５５、アミノ酸１６０〜１８７又はアミノ酸２５４〜２６９の範囲内の１以上のアミノ酸、及び／又は配列番号１５のアミノ酸３２〜４４（たとえば、３８〜４４）、８２〜９８（たとえば、８８〜９８）及び２５２〜２６９（たとえば、２５６〜２６３）を含むエピトープに結合する。別の実施形態では、抗体はＩＬ−１７ＲＣに、たとえば、ＩＬ−１７ＲＣ（配列番号１６）のアミノ酸１５〜３０、アミノ酸７０〜８４、アミノ酸９６〜１２４、アミノ酸１２９〜１５６又はアミノ酸２２７〜２３７及び／又は配列番号１６のアミノ酸２４〜３５、７８〜９１及び２４８〜２５７を含むエピトープに結合する。
【０２１３】
既知の方法を用いてポリペプチドに対するポリクローナル抗体を調製することができる。たとえば、Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  （Ｍａｎｓｏｎ編）（Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ  １９９２）中のＧｒｅｅｎらの「Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｏｌｙｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｓｅｒａ」を参照のこと。モノクローナル抗体を生成することができる。当業者に既知の方法によって特定の抗原に対するげっ歯類のモノクローナル抗体を入手してもよい（たとえば、Ｋｏｈｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５  （１９７５）；  Ｃｏｌｉｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．  （ｅｄｓ．），  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  （Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ  １９９１）；  Ｐｉｃｋｓｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，  “Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｇａｉｎｓｔ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ｉｎ  Ｅ．  ｃｏｌｉ，”  ｉｎ  ＤＮＡ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  ２：  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，  ２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｇｌｏｖｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  （ｅｄｓ．）  （Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ  １９９５を参照）。
【０２１４】
たとえば、モノクローナル抗体は、ポリペプチドを含む組成物をマウスに注射し、血清試料を取り出すことによって抗体産生の存在を検証し、Ｂリンパ球を得るために脾臓を取り出し、Ｂリンパ球を骨髄腫細胞と融合させてハイブリドーマを産生し、ハイブリドーマをクローニングし、抗原に対する抗体を産生する陽性クローンを選抜し、抗原に対する抗体を産生するクローンを培養し、ハイブリドーマ培養物から抗体を単離することによって得ることができる。
【０２１５】
ポリペプチドに対するヒト抗体も導き出すことができる。ヒトのモノクローナル抗体は、抗原の感作に応答して特異的なヒト抗体を産生するように操作されたトランスジェニックマウスから得られる。この技法では、ヒトの重鎖及び軽鎖の遺伝子座の要素を、内因性の重鎖及び軽鎖の遺伝子座を標的として破壊した胚性幹細胞株由来のマウスの株に導入する。トランスジェニックマウスはヒト抗原に特異的なヒト抗体を合成することができ、マウスを用いてヒト抗体を分泌するハイブリドーマを作製することができる。トランスジェニックマウスからヒト抗体を得る方法は、たとえば、Ｇｒｅｅｎら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔ．７：１３（１９９４），Ｌｏｎｂｅｒｇら、Ｎａｔｕｒｅ、３６８：８５６（１９９４），及びＴａｙｌｏｒら、Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎ．６：５７９（１９９４）に記載されている。
【０２１６】
種々の定評のある技法によってモノクローナル抗体をハイブリドーマの培養物から単離し、精製することができる。そのような単離法には、プロテインＡセファロースによるアフィニティクロマトグラフィ、サイズ排除クロマトグラフィ、及びイオン交換クロマトグラフィが挙げられる（たとえば、Ｃｏｌｉｇａｎ；  Ｂａｉｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，  “Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  Ｇ  （ＩｇＧ），”  ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  （Ｔｈｅ  Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｉｎｃ．  １９９２）を参照）。
【０２１７】
抗体は、「ヒト化された」モノクローナル抗体であることができる。ヒト化されたモノクローナル抗体は、マウス免疫グロブリンの重鎖及び軽鎖の可変鎖由来のマウス相補性決定領域をヒトの可変ドメインに移すことによって作製される。次いでヒト抗体の典型的な残基がマウス相方のフレームワーク領域で置換される。ヒト化モノクローナル抗体に由来する抗体構成成分の使用は、マウス定常領域の免疫原性に関連する問題の可能性を未然に防ぐ。マウスの免疫グロブリン可変ドメインをクローニングする一般的な技法は、たとえば、Ｏｒｌａｎｄｉら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８６：３８３３（１９８９）によって記載されている。ヒト化モノクローナル抗体を作製する技法は、たとえば、Ｊｏｎｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ、３２１：５２２（１９８６）；Ｃａｒｔｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８９：４２８５（１９９２）；Ｓａｎｄｈｕ，Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．１２：４３７（１９９２）；Ｓｉｎｇｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎ．１５０：２８４４（１９９３）；Ｓｕｄｈｉｒ（編），Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ（Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．１９９５）；Ｋｅｌｌｅｙ，”Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，”ｉｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ｃｌｅｌａｎｄら（編）（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．１９９６）；及びＱｕｅｅｎら、米国特許第５，６９３，７６２号によって記載されている。
【０２１８】
当業者に既知である種々のアッセイを利用してポリペプチドに特異的に結合する抗体を検出することができる。例となるアッセイはＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ（編），Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，１９８８に詳細に記載されている。そのようなアッセイの代表的な例には、放射性免疫アッセイ、放射性免疫沈降、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ドットブロット又はウエスタンブロットアッセイ、阻害又は競合アッセイ、サンドイッチアッセイ及び表面プラスモン共鳴が挙げられる。
Ｆｃ及びそのほかの融合タンパク質
【０２１９】
本明細書に開示されるタンパク質、たとえば、ＩＬ−１７Ｒ結合タンパク質は、たとえば、免疫グロブリンの定常ドメイン、免疫グロブリンのＦｃ領域、血清アルブミン、又は血清アルブミン結合ドメインのような非相同ドメインと会合することができる。たとえば、少なくとも１つのＩＬ−１７ポリペプチド配列とＦｃ領域の１以上の定常ドメインは同一ポリペプチド鎖の構成成分であることができ、たとえば、リンカーによって連結され得る。例となるＦｃ領域は、ヒトのＩｇＧ、たとえば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４に由来する。非相同のポリペプチドには、免疫グロブリンのＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン及び／又はヒンジ領域のすべて又は一部を挙げることができる。非相同ポリペプチドをリンカー、たとえば、可動性リンカーによって接続することができる。
【０２２０】
Ｆｃ領域の断片もＦｃ突然変異タンパク質であり得るように使用することができる。たとえば、Ｆｃ領域のヒンジ領域内の特定の残基は、ＦｃγＲＩに対する高い親和性結合に決定的に重要である。Ｃａｎｆｉｅｌｄ及びＭｏｒｒｉｓｏｎ（１９９１）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７３：１４８３）は、Ｕ９３７細胞上に存在するＦｃγＲＩへのＩｇＧ３の高い親和性結合にＬｅｕ２３４及びＬｅｕ２３５が決定的に重要であることを報告した。同様の結果は、Ｌｕｎｄら（１９９１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：２６５７によって得られた。ＩｇＧＦｃ領域にてそのような変異を単独で又は組み合わせで行ってＩｇＧ１のＦｃＲへの親和性を低下させる。Ｆｃ結合、抗体依存性細胞介在性の細胞傷害性（ＡＤＣＣ）、及び補体依存性の細胞傷害性（ＣＤＣ）を達成するそのほかのＦｃ突然変異タンパク質はＳｈｉｅｌｄｓら（２００１）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６（９）：６５９１及び米国特許第２００４／０１３２１０１号に記載されている。
追加の使用
【０２２１】
本明細書に記載される結合タンパク質（たとえば、ＩＬ−１７Ｒ結合タンパク質又は本明細書に記載される抗体）は、標識である又はシグナルを生成する部分、たとえば、酵素、放射性標識、エピトープ、又は蛍光タンパク質（たとえば、緑色蛍光タンパク質）で直接又は間接的に標識することができる。結合タンパク質を試料又は細胞に接触させ、たとえば、標準の免疫ブロッティング、免疫蛍光、酵素免疫アッセイ（ＥＩＡ）、放射性免疫アッセイ（ＲＩＡ）、蛍光エネルギー転移、ウエスタンブロット及びそのほかの診断法及び検出法を用いて、試料に又は細胞上に受容体が存在するかどうかを判定することができる。
【０２２２】
結合タンパク質を生体内での検出のために標識し、対象に投与することもできる。たとえば、ＮＭＲ又はそのほかの断層撮影手段によって対象を画像化することができる。たとえば、１３１Ｉ、１１１Ｉｎ、１２３Ｉ、９９ｍＴｃ、３２Ｐ、１２５Ｉ、３Ｈ、１４Ｃ及び１８８Ｒｈのような放射性標識、フルオレセイン及びローダミンのような蛍光標識、核磁気共鳴活性化標識、ポジトロン放出断層撮影（「ＰＥＴ」）スキャナーによって検出可能なポジトロン放出アイソトープ、ルシフェリンのような化学発光剤、ペルオキシダーゼ及びホスファターゼのような酵素によって結合タンパク質を標識することができる。常磁性剤及び強磁性剤又は超常磁性剤（主としてＴ２応答を変化させる）のような造影剤によって結合タンパク質を標識することができる。
【０２２３】
結合タンパク質を用いてそれが結合する受容体を発現している細胞を精製することもできる。たとえば、結合タンパク質を不動化した支持体（たとえば、磁気ビーズ又はカラムマトリクス）に結合させ、受容体を発現し得る細胞に接触させる。支持体を、たとえば、生理的緩衝液で洗浄し、細胞を支持体から回収することができる。
【０２２４】
結合タンパク質を用いてそれが結合する受容体の可溶性形態を精製することができる。たとえば、可溶性の受容体を不動化した結合タンパク質に接触させ、次いでたとえば、洗浄した後、不動化した結合タンパク質から回収することができる。
【０２２５】
ＩＬ−１７受容体に結合する結合タンパク質を用いて、ＩＬ−１７受容体を発現する細胞に毒素又は細胞傷害効果を送達することができる。たとえば、結合タンパク質は、毒素と会合することができ（共有結合で）、又は細胞毒素、治療剤又は放射性金属イオンのような治療用部分に抱合され得る。細胞毒素又は細胞傷害剤には、別のタンパク質、たとえば、アブリン、リシンＡ、シュードモナス内毒素若しくはジフテリア毒素のような毒素、又はＡＤＣＣ若しくは補体介在性の細胞傷害性反応を動員するのに適任のＦｃドメインを含む細胞に有害である剤が挙げられる。結合タンパク質に会合することができるそのほかの毒素には、タキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１−デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、及びプロマイシン及びこれらの類似体又はホモログが挙げられる。治療剤には、代謝拮抗剤（たとえば、メソトレキセート、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、シタラビン、５−フルオロウラシルデカルバジン）、アルキル化剤（たとえば、メクロレタミン、チオエパクロラムブシル、メルファラン、カルムスチン及びロムスチン、シクロトスファミド、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、マイトマイシンＣ、及びシス−ジクロロジアミンプラチナ（ＩＩ）（ＤＤＰ）シスプラチン）、アントラサイクリン類（たとえば、ダウノルビシン（以前のダウノマイシン）及びドキソルビシン）、抗生物質（たとえば、ダクチノマイシン、ブレオマイシン、ミトラマイシン、及びアントラマイシン）、及び細胞分裂抑制剤（たとえば、ビンクリスチン及びビンブラスチン）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２２６】
たとえば、α−、β−又はγ−放射体のような放射性アイソトープに結合タンパク質を結合させることができる。放射性アイソトープの例には、ヨウ素（１３１Ｉ又は１２５Ｉ）、イットリウム（９０Ｙ）、ルテニウム（１７７Ｌｕ）、アクチニウム（２２５ＡＣ）、プラセオジム、又はビスマス（２１２Ｂｉ又は２１３Ｂｉ）が挙げられる。結合タンパク質は、タキサン（たとえば、タキソール又はタキソテレ）又はカリケアミシンと同様に生体タンパク質、植物又は細菌に由来する分子（又はその誘導体）、たとえば、マイタンシノイド（たとえば、マイタンシノール、その類似体又はＤＭＩ）に結合させることができる。マイタンシノール類似体の例には、修飾された芳香族環（たとえば、Ｃ−１９−デクロロ、Ｃ−２０−デメトキシ、Ｃ−２０−アシルオキシ）を有するもの及び他の位置での修飾を有するもの（たとえば、Ｃ−９−ＣＨ、Ｃ−１４−アルコキシメチル、Ｃ−１４−ヒドロキシメチル又はアセロキシメチル、Ｃ−１５−ヒドロキシ／アシルオキシ、Ｃ−１５−メトキシ、Ｃ−１８−Ｎ−デメチル、４，５−デオキシ）が挙げられる。マイタンシノール及びマイタンシノール類似体は、たとえば、米国特許第６，３３３，４１０号に記載されている。たとえば、Ｎ−スクシンイミジル３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート（Ｎ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）ペンタノエート又はＳＰＰとしても知られる）、４−スクシンイミジル−オキシカルボニル−ａ−（２−ピリジルジチオ）−トルエン（ＳＭＰＴ）、Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）ブチレート（ＳＤＰＢ）、２−イミノチオラン、又は無水Ｓ−アセチルコハク酸を用いてマイタンシノールを結合することができる。
【０２２７】
本明細書で指される特許文献及び科学論文、並びにそれによって引用される特許文献及び科学論文のそれぞれの開示全体が、あらゆる目的で参照によって本明細書に明白に組み入れられる。
実施例
実施例１．ＩＬ−１７ＲＡ／ＩＬ−１７Ｆ複合体の発現及び結晶化
【０２２８】
我々は、単一重原子同形置換法（ＳＩＲＡＳ）の位相整合（表１）を用いて３．３Åの解像でＩＬ−１７Ｆに結合するＩＬ−１７ＲＡの結晶構造を決定した。我々は、バキュロウイルスからＩＬ−１７Ｆを発現させ、２９３ＳＧｎＴＩ細胞を用いてＩＬ−１７ＲＡの細胞外ドメイン（ＥＣＤ）を発現させた。結晶化を円滑にするために、結晶化に先立って、複合体をメチル化し、激しくグリコシル化された受容体のＥＣＤをエンドグリコシダーゼによって「そぎ落とし」、均質性を改善し、Ａｓｎ結合のグリコシル化部位のそれぞれにてＧｌｃＮＡｃ残基を１つ残した（図１）。そぎ落とした複合体とそぎ落とさなかった複合体は生化学的に同一に挙動した。ゲル濾過によって、ＩＬ−１７ＲＡのＥＣＤとのＩＬ−１７Ｆ又はＩＬ−１７Ａの混合物は、２：２（２受容体＋１ＩＬ−１７二量体）及び１：２（１受容体＋１ＩＬ−１７二量体）の化学量論での複合体の同時溶出を生じ、主要な種は１：２であった。２：２は高タンパク質濃度でのみ検出されたが、低濃度では過剰なＩＬ−１７ＲＡの存在下でさえ１：２が優勢だった。結晶は、ＩＬ−１７Ｆホモ二量体１つに結合したＩＬ−１７ＲＡ１つを含有した（図１）。以下で議論するように、この「部分的な」シグナル伝達複合体は、実際、ＩＬ−１７ＲＡ／ＩＬ−１７Ｆ及びＩＬ−１７ＲＡ／ＩＬ−１７Ａの複合体の生物学的に意味のある形態であり得る。
実施例２．ＩＬ−１７ＲＡ／ＩＬ−１７Ｆ複合体の全体的な構造
【０２２９】
ＩＬ−１７ＲＡの細胞外ドメインは、１８アミノ酸のリンカーによって連結された独特のＦｎＩＩＩドメインで構成される（図１）。配列からは明らかではないが、ＩＬ−１７ＲＡの構造は、直列ｂ−サンドイッチドメインを含有するという点で造血系サイトカインの受容体を彷彿させるが、ドメイン自体は標準的なＦｎＩＩＩ折り畳みからの若干の実質的な逸脱を含有し、リガンド相互作用の方式はそのほかのサイトカイン受容体とは全体として異なる。予測された２８６の細胞外ドメイン残基のうち残基２〜２７２（配列番号１４に示すように残基１は成熟ペプチドの最初のアミノ酸である）は、受容体鎖に対して連続電子密度にモデル化され、７つのＮ結合グリカンと思われるもののうち５つは明瞭に見える。第１のＦｎＩＩＩドメイン（Ｄ１）は追加の４０アミノ酸のＮ末端伸長を有し、独特の折り畳みを形成する。鎖は、ジスルフィド結合（Ｃｙｓ１２−Ｃｙｓ１９）によって架橋されたヘアピン様の旋回を有し、旋回の第２の鎖は、ＦｎＩＩＩβシートを伸長し、次いでドメインを通り過ぎてＦｎＩＩＩドメインのＡ鎖を開始する前にＤ１ドメイン、Ｃ’鎖のＣｙｓ９５とのジスルフィド結合の周りを包み込むβ鎖（Ａ’）を形成する。ドメイン間のリンカー領域は短い螺旋を含有し、内部ジスルフィド結合（Ｃｙｓ−１５４−Ｃｙｓ１６５）によって安定化される。第２のＦｎＩＩＩドメイン（Ｄ２）は、２つの異型のジスルフィド結合を有し、一方はＣ−Ｃ’ループをＤ−Ｆループ（Ｃｙｓ２４５）に連結し、第２はＦ−Ｇループの中（Ｃｙｓ２５９−Ｃｙｓ２６３）にある。我々は、クラスＩＩサイトカイン受容体で認められたのに類似して第３のジスルフィド結合がＦ−Ｇループ（Ｃｙｓ２４６）とＧ鎖のＮ末端（Ｃｙｓ２７２）の間に存在すると予測するが、この結合は現在の電子密度地図では上手く定められない。
【０２３０】
ＩＬ−１７ＲＡに結合したＩＬ−１７Ｆ分子のコア構造は、ＩＬ−１７Ｆのリガンド結合していないもの（７）と比べて本質的に変化しなかったが、周辺の鎖及びループは構造的な順応を経験してＩＬ−１７ＲＡへの結合を促進した。リガンド結合していないＩＬ−１７Ｆの構造で認められる立体構造は、受容体のＮ末端コイル領域との立体的な衝突を生じるのでＩＬ−１７ＲＡに結合した状態では維持できなかった。ＩＬ−１７Ｆの各モノマーは、システイン・ノットファミリーのタンパク質に相同なように２つのジスルフィド結合によって連結される第２及び第４の鎖と共に２対の逆平行βシート（鎖１〜４）から構成される。そのうちの残基２９〜４２が第２のＩＬ−１７Ｆプロモータの鎖３及び４と平行に走る５０アミノ酸のＮ末端伸長がある。このコイル領域は、隣接する鎖との幾つかの水素結合を含む多数の相互作用によって安定化される。ＩＬ−１７ＲＡに結合したＩＬ−１７Ｆの立体構造では、この領域（残基３３〜４２）が動き出して結合ポケットを広げ、受容体（図２Ａ）と相互作用する。各ＩＬ−１７Ｆ鎖の最初の２４アミノ酸、及びＩＬ−１７Ｆプロモータの１つの上の３〜４ループに由来する残基１０５〜１０９はモデル化できなかった。リガンド結合していないＩＬ−１７Ｆの構造では、Ｃｙｓ１７は隣接するＩＬ−１７Ｆ鎖上の３〜４ループの先端でＣｙｓ１０７とジスルフィド結合を形成する。これらの鎖間ジスルフィド結合はモデル化しなかったが、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ上ではジスルフィド結合した二量体として挙動するタンパク質として存在した。
実施例３．ＩＬ−１７ＲＡ／ＩＬ−１７Ｆの結合接触面
【０２３１】
双方の受容体ＦｎＩＩＩドメインが「側面」方向で結合し、リガンドの二量体接触面で形成された割れ目に端の鎖を用いて挿入する、ＩＬ−１７ＲＡへのＩＬ−１７Ｆの全体的な結合方式は、他のサイトカイン又は増殖因子の受容体複合体とは異なる。ＩＬ−１７ＲＡはＩＬ−１７Ｆとの広い結合接触面を形成し、表面積の約２２００Å２を埋め込み、この埋め込まれた面の約７０％にＩＬ−１７ＲＡのＤ１ドメインが介在する。結合接触面には３つの主な相互作用部位が存在する。部位１は、ＩＬ−１７ＲＡのＮ末端伸長（配列番号１４のＴｈｒ２５〜Ｔｒｐ３１）とＩＬ−１７ＦのＢ鎖の１〜２ループ（Ｐｒｏ６０〜Ｔｙｒ６３）プラス鎖のＣ末端領域（Ｖａｌ１００，Ａｒｇ１０２）との間で形成され；この相互作用は約３３０Å２を埋め込む（図２Ｃ）。受容体のＴｒｐ３１はこの結合部位の中心で埋め込まれ；主鎖ＯはＡｒｇ１０２と水素結合を形成し、側鎖はＰｒｏ６０と水素結合を形成する。２つの追加の水素結合は、ＩＬ−１７ＲＡのＴｈｒ２５及びＣｙｓ２６とＩＬ−１７ＦのＴｙｒ６３との間で形成される。部位２は、複合体の最も重要な接触面の特徴であり、Ｎ末端伸長が隣接する深い結合ポケットに入り込むＩＬ−１７ＲＡのＤ１のＣ’〜Ｃループ（配列番号１４のＬｅｕ８６〜Ａｒｇ９３）とＩＬ−１７ＦのＢ鎖の鎖２とＩＬ−１７のＡ鎖の鎖３とで構成され；この相互作用はほぼ５５０Å２を埋め込む（図２Ａ、Ｂ）。この８アミノ酸のＩＬ−１７ＲＡのループは、ＩＬ−１７ＲＡのＧｌｕ９２とＩＬ−１７ＦのＢ鎖のＡｒｇ３７との間の塩橋と思われるもの、及びＩＬ−１７ＲＡのＡｓｎ８９の主鎖ＯとＩＬ−１７ＦのＡ鎖のＡｓｎ９５との間の水素結合を含むＩＬ−１７Ｆの双方の鎖との広い疎水性で極性の相互作用を形成する。約４１０Å２の埋め込まれた表面積（ＢＳＡ）を包含する部位３は、ＩＬ−１７ＲＡのＤ２のＦ〜Ｇループ（Ｃｙｓ２５９〜Ａｒｇ２６５）とＩＬ−１７ＦのＡ鎖の鎖３と４のＣ末端領域及びＩＬ−１７ＦのＢ鎖のＮ末端伸長との間で形成される（図２Ｄ）。部位３は、９つの水素結合であると思われるもの及びＩＬ−１７ＲＡのＡｓｐ２６２とＩＬ−１７ＦのＢ鎖のＡｒｇ４７との間の塩橋との荷電された相互作用が豊富である。全体として接触面は広く、多数の特異的な接触から構成される。接触残基の配列保存を考えると、そのほかのＵＫ−受容体／サイトカインの対によって類似する結合方式が使用されることが考えられる（以下で議論される）。しかしながら、さらに高い親和性の複合体では、さらに大きな結合／ネットワーク及び／又は形状の相補性が採用され得る。
実施例４．ヘテロ二量体受容体複合体の形成
【０２３２】
受容体複合体の化学量論は未だ完全に解明されてはいないが（６）、非対称のＩＬ−１７ＲＡ／ＩＬ−１７Ｆ複合体は第２の異なった受容体とのヘテロ二量体化について優先傾向を示唆している。従って我々は、ヘテロ二量体のサイトカインが２つの異なった受容体をおそらく協調させるメカニズムを検討した。ＩＬ−１７ＲＢ及びＩＬ−１７ＲＣの双方は、ＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆに独立して結合することができるが、シグナル伝達には双方の受容体が必要である（９，１０，２２）。シグナル伝達複合体がどのように形成されるのかをさらに理解するために、我々は、試験管内でサイトカインのヘテロ二量体受容体複合体と異種受容体複合体の双方の親和性を測定するために可溶性タンパク質を用いた表面プラスモン共鳴（ＳＰＲ）戦略を工夫した。ほかの人は、ＩＬ−１７ＡとＩＬ−１７Ｆに対するＩＬ−１７ＲＡとＩＬ−１７ＲＣの結合親和性を報告しているが（７，２２）、我々は、第２の受容体結合部位の結合親和性を評価することが妥当であるとみなした。戦略は、チップ上での受容体のホモ二量体化（たとえば、架橋）の可能性をできるだけ抑えるために低い結合密度でＳＰＲチップ上の一方の受容体を不動化することだった。次いで各受容体が二量体のＩＬ−１７リガンドの一方に結合して、第２の受容体結合部位を暴露し、接近可能なままにするようにこの受容体によって二量体ＩＬ−１７サイトカインを捕捉した。その後、第２の受容体は事前に形成された受容体／サイトカインの複合体を通り過ぎ、第２の受容体結合事象の親和性を測定する。この方法では、複合体は段階的に組み立てられ、結合親和性のそれぞれが測定された（図３）。ＩＬ−１７Ａは高親和性でＩＬ−１７ＲＡ（２．８±０．９ｎＭ）及びＩＬ−１７ＲＣ（１．２±０．１ｎＭ）の双方に結合した。ＩＬ−１７ＡはＩＬ−１７ＲＡ分子によっていったん結合されると、第２のＩＬ−１７ＲＡに対する結合親和性は３．１±０．５μＭに低下したが、この第２の結合部位についてのＩＬ−１７ＲＣの親和性は１７４±３ｎＭだった。ＩＬ−１７Ａが元々ＩＬ−１７ＲＣに捕捉されたのであれば、１６２±２９ｎＭの親和性で第２のＩＬ−１７ＲＡは存在するＩＬ−１７ＲＣ／ＩＬ−１７Ａ複合体に結合し；存在するＩＬ−１７ＲＣ／ＩＬ−１７Ａ複合体への第２のＩＬ−１７ＲＣの親和性はたった８．０±０．５μＭだった。
【０２３３】
ＩＬ−１７Ｆについても同様のパターンが認められ、ＩＬ−１７ＲＡ（２９２±１９ｎＭ）に比べてＩＬ−１７ＲＣ（４．４±０．２ｎＭ）について高い親和性を有した。多様な親和性を考えると、ＩＬ−１７Ｆは当初ＩＬ−１７ＲＣに捕捉されるのはありそうなことであり；いったん結合すると、ＩＬ−１７ＲＣ／ＩＬ−１７Ｆ複合体に対するＩＬ−１７ＲＡの親和性は２３．８±３μＭだった。それに対して、事前に形成されたＩＬ−１７ＲＡ／ＩＬ−１７Ｆ複合体及びＩＬ−１７ＲＣ／ＩＬ−１７Ｆ複合体に対するＩＬ−１７ＲＡ及びＩＬ−１７ＲＣの結合親和性はそれぞれ非常に弱いのでこれらの実験で使用された濃度範囲では正確に算出できなかった。従って、これらの知見は、ＩＬ−１７Ａ又はＩＬ−１７ＦによるＩＬ−１７ＲＡ又はＩＬ−１７ＲＣの会合が第２の受容体結合部位についての優先傾向を促し、異なった受容体に会合し、それによってヘテロ二量体受容体複合体を形成することを明瞭に示している。
【０２３４】
ＩＬ−１７ＲＡは、ＩＬ−１７ＲＢと一緒にＩＬ−１７Ｅ（ＩＬ−２５としても知られる）のシグナル伝達に関係するとみなされている（２３）。ＩＬ−２５は、Ｔｈ２の炎症反応を促進し、ＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆと約２０％の同一性を共有する。結合実験は、ＩＬ−２５は高親和性でＩＬ−１７ＲＢに結合する一方でＩＬ−１７ＲＡに対して明らかな親和性を有さないことを示した（２３〜２５）。我々は、ＩＬ−２５がいったんＩＬ−１７ＲＢに捕捉されるとＩＬ−１７ＲＡはＩＬ−２５のみを結合し得るという仮説を立てた。この仮説を調べるために、我々は、ＩＬ−１７ＲＢをＳＰＲチップ上に不動化し、ＩＬ−２５を捕捉させ、ＩＬ−１７ＲＢ／ＩＬ−２５複合体に対するＩＬ−１７ＲＡの親和性を測定した。我々の仮説を支持して、１４．４±２．４μＭの親和性でＩＬ−１７ＲＡはＩＬ−１７ＲＢ／ＩＬ−２５複合体に結合した（図３）。５０μＭまでの濃度では、ＩＬ−１７ＲＡとＩＬ−２５との間、又はＩＬ−１７ＲＢ／ＩＬ−２５複合体と第２のＩＬ−１７ＲＢ分子との間で相互作用は認められなかった。ＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆの結合データと総合して、これらの結果は、ヘテロ二量体複合体の形成には受容体間のアロステリック効果及び／又は相互作用が介在し得ることを示している。
【０２３５】
この概念にさらに対処するために、我々は、第２のＩＬ−１７ＲＡ分子をモデル化して仮説上の２：２受容体／サイトカイン複合体（図３Ｂ）を形成した。同一の方式で第２の受容体が第１に結合すると想定して、ＩＬ−１７ＲＡのＤ２の基部を第２のＩＬ−１７ＲＡのＤ２の極めて近傍に入れる（図３Ｂ、斜線の四角）。ＩＬ−１７Ｆに結合した２つのＩＬ−１７ＲＡ分子の場合、一方のＩＬ−１７ＲＡのＣ−Ｃ’ループ上のＨｉｓ２１２は、第２のＩＬ−１７ＲＡのＨｉｓ２１２と衝突する。この相互作用すると思われる部位によって受容体がその対合を調節するのを可能にし得る。立体衝突は第２の同一受容体についての親和性を低下し得るか、又は好ましい受容体／受容体の相互作用は異種受容体複合体を安定化させ得る。我々は、特定の条件下でホモ二量体の受容体複合体が細胞上に形成する可能性を除外しないが、我々のデータは、受容体のヘテロ二量体が優勢なシグナル伝達の種であると思われることを論じている。
実施例５．一般的な受容体としてのＩＬ−１７ＲＡの機能
【０２３６】
ＩＬ−１７ＲＡは、ＩＬ−１７Ｆよりも約１００倍高い親和性でＩＬ−１７Ａに結合する。ＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆは約５０％の同一性を共有し、ＩＬ−１７Ｆの構造上での保存された残基のマッピングは受容体結合ポケットの周りでの可変残基の蹄鉄形状の環を示す（図４）。ＩＬ−１７ＲＡのＣ’−Ｃループの相互作用の大半はＩＬ−１７ＡとＩＬ−１７Ｆの分子間で異なる残基によって形成されるが、Ｎ末端領域とＩＬ−１７ＲＡのＤ２のＦ−Ｇループの相互作用には大部分、保存された残基が関与する。我々はここで、ＩＬ−１７ＲＡの細胞外領域もＩＬ−１７ＲＢ／ＩＬ−２５複合体に結合することを報告したが、ＩＬ−１７ＲＤはＩＬ−１７ＲＡと相互作用し、ＩＬ−１７Ａのシグナル伝達に介在し得ることが最近示された（２６）。ＩＬ−１７ＲＡと多様なＩＬ−１７ファミリーメンバーとのこの関連を考えると、我々は、ＩＬ−１７ＲＡがクラスＩサイトカイン受容体複合体で利用されるものに類似する共用受容体として作用し得ると推測している（２７）。この可能性を検討するために、我々は、ＩＬ−１７Ｆ表面上で、ＩＬ−１７ファミリーメンバー間で保存された残基をマッピングした。ＩＬ−１７ＲＡ／ＩＬ−１７Ｆ複合体におけるこれら残基の位置を分析して、ＩＬ−１７ＲＡがＤ１ドメインのＮ末端領域及びＤ２ドメインのＦ−Ｇループと共にこれら保存された残基に接触することはもっともらしいと思われる（図４Ｃ）。それに対して、ＩＬ−１７ＲＡは、Ｃ−Ｃ’ループと共に非保存のサイトカイン残基に接触することによって各サイトカインに対する特異性を調節し得る（図４Ｃ）。次いでまとめて、ＩＬ−１７ＲＡは、幾つかの異なったＩＬ−１７サイトカインと共に異なった接触の背景の間で保存された接触のサブセットに基づいた交差反応性の戦略を使用すると思われる。このことは、異なった神経栄養因子のリガンドの認識のために共用ｐ７５受容体によって利用される戦略に類似し、たとえば、異なった４螺旋サイトカインとの大きく異なった分子相互作用を形成するｇｐ１３０及びｇｃ鎖による交差反応性に使用されるメカニズムとは対照的である（２７）。
実施例６．システイン・ノット成長因子の受容体結合方式
【０２３７】
たとえば、神経成長因子（ＮＧＦ）（２８〜３０）、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）（３１）、２グリア細胞由来神経栄養因子（ＧＤＮＦ）ファミリーメンバー（３２）などのような受容体／システイン・ノット成長因子リガンドについての幾つかの結晶構造；これらの構造は、ＩＬ−１７ＲＡが介在するリガンド会合の方式との教訓的な比較として役立ち得る（図５）。ｐ７５神経栄養因子に結合したＮＧＦの複合体（ｐ７５ＮＴＲ、死の受容体メンバー）（２８，３０）では、受容体はＩＬ−１７ＲＡとの構造的類似性を持たないが、ＩＬ−１７ＲＡと同様にｐ７５ＮＴＲは、リガンドの二量体接触面にてくぼんだ溝の中でＮＧＦに会合する（図５Ｂ）。ＮＧＦとのＴｒｋＡの複合体の場合（２９，３３）、ＩＬ−１７ＲＡのＦｎＩＩＩドメインに構造的に関連するＴｒｋＡにおける免疫グロブリン（Ｉｇ）−ドメインがリガンドの結合に使用される。しかしながら、ＴｒｋＡのＩｇ−ドメインは、ＮＧＦのβシートによって形成されるＮＧＦの「サドル」における平面に横向きに結合するので結合の方式ははっきりと異なる（図５Ｃ）。興味深いことに、ＮＧＦ−ｐ７５ＮＴＲの複合体は、それぞれへテロ二量体ｐ７５シグナル伝達複合体の部分形態及び完全形態を表し得る１：２及び２：２の複合体双方として報告されている（２８，３０）。しかしながら、その場合、ホモ二量体のＮＧＦリガンドは２つの同一のｐ７５分子に会合するので、２つの異なった受容体をヘテロ二量体化する対称二量体リガンドのための構造的メカニズムを必要としない。
実施例７．ヒトＩＬ−１７ＲＣ又はヒトＩＬ−１７ＲＡの結合
【０２３８】
形質移入細胞へのビオチン化サイトカインの結合
ビオチン化したヒトＩＬ−１７Ａ、ヒトＩＬ−１７Ｆ及び本明細書に記載される拮抗物質を含むそれらの変異体を結合する能力について、ヒトＩＬ−１７ＲＡ、ヒトＩＬ−１７ＲＣ又はこれら受容体の双方をコードする発現ベクターで形質移入した幼若ハムスターの腎臓（ＢＨＫ）細胞を評価する。ヴェルセンと共に細胞を回収し、計数し、ＨＢＳＳに１ｍｇ／ｍｌのウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）と１０ｍＭのＨＥＰＥＳと０．１％のアジ化ナトリウム（ｗ／ｖ）を加えた染色培地（ＳＭ）にて１０７個の細胞／ｍｌに希釈する。ビオチン化したヒトＩＬ−１７Ａ、ヒトＩＬ−１７Ｆ及びそのほかの当該タンパク質を種々の濃度で氷上にて３０分間、細胞と共にインキュベートする。３０分後、過剰なタンパク質をＳＭで洗い流し、フィコエリスリンに結合したストレプトアビジン（ＳＡ−ＰＥ）の１：１００希釈と共に氷上で３０分間、細胞をインキュベートする。過剰なＳＡ−ＰＥを洗い流し、細胞をフローサイトメトリーで解析する。染色の平均蛍光強度から結合の量を定量する。
【０２３９】
ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）へのビオチン化サイトカインの結合
Ｆｉｃｏｌｌ密度勾配遠心によって全血からＰＢＭＣを調製する。１μｇ／ｍｌのビオチン化したＩＬ−１７Ａ又はＩＬ−１７Ｆ又は当該タンパク質と、種々の白血球細胞系列を区別するように設計する特異的な細胞表面タンパク質に対する、蛍光色素を結合した抗体と共に１０７個／ｍｌの細胞を同時にインキュベートする。これらのマーカーには、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１９、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ５６及びＣＤ１６が挙げられる。過剰な抗体とサイトカインを洗い流し、上述のＳＡ−ＰＥと共にインキュベートすることによって特異的なサイトカインの結合を検出する。試料をフローサイトメトリーで解析する。
【０２４０】
特異的結合の阻害
上記で議論したように結合試験を実施するが、過剰な非標識のＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆ又は過剰な非標識の、本明細書に記載されるタンパク質のような当該タンパク質を結合反応に含める。ＢＨＫ細胞による試験では、非標識のタンパク質の量は濃度の範囲を超えて変化し、ＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆ双方のＩＬ−１７ＲＣ及びＩＬ−１７ＲＡ双方への結合に競合する能力について非標識のＩＬ−１７Ａ及び当該タンパク質を評価する。
実施例８．マウスのＮＩＨ３Ｔ３細胞はヒトのＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆに反応する
【０２４１】
ヒト免疫不全ウイルス−１の長い末端反復配列のコンセンサスＮＦ−κＢ結合部位と直列ＮＦ−κＢ結合部位と、２コピーのコラゲナーゼＡＰ−１要素と、ルシフェラーゼのレポーターカセットに連結した１コピーのｃ−ＪｕｎＴＲＥを含有し、Ｂｌｕｍｂｅｒｇら（２００１）Ｃｅｌｌ、１０４：９−１９に記載されたようにそれをｐＡＣＣＭＶ．ｐＬｐＡアデノウイルスシャトルベクターに入れたＫｚ１４２アデノウイルス粒子によってマウスＮＩＨ３Ｔ３細胞に形質移入する。
【０２４２】
アデノウイルス粒子のレポーターとの一晩のインキュベートに続いて、０．２８％ＢＳＡを含有する無血清培地にて（たとえば、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｆ又はそのほかの当該タンパク質による）処理を調製する。アデノウイルス粒子及び培地を取り除き、適当な用量を与える。３７℃及び５％ＣＯ２でのインキュベートを４時間継続し、その後、培地を取り除き、細胞を１５分間溶解し、ルシフェラーゼアッセイ系と試薬（Cat.#e1531 Promega, Madison, WI)）と微量プレート照度計を用いて平均蛍光強度（ＭＦＩ）を測定した。安定した細胞株を作製することもできる。安定的な細胞株及び／又は一過性の細胞株を用いて活性について本明細書に記載されるタンパク質を評価する。
実施例９．ヒト末梢血単核細胞にてＩＬ−１７Ａは高いレベルのＩＦＮγ及びＴＮＦαを遊走する
【０２４３】
Ｆｉｃｏｌｌ密度勾配遠心によってヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を精製し、次いで培地のみ、５０ｎｇ／ｍｌの抗ヒトＣＤ３抗体、又は５０ｎｇ／ｍｌの抗ヒトＣＤ３抗体と１μｇ／ｍｌの抗ヒトＣＤ２８抗体の組み合わせと共に３７℃にて一晩インキュベートする。これらの条件のそれぞれについて同型培養を設定し、サイトカインを与えない、又は２５ｎｇ／ｍｌのＩＬ−１７Ａ、２５ｎｇ／ｍｌのＩＬ−１７Ｆ、又は種々の濃度の当該タンパク質（たとえば、サイトカインの存在下で）を与える。２４時間のインキュベートの後、各培養物からの上清を回収し、Ｂ−ＤＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅのヒトＴｈ１／Ｔｈ２サイトメトリックビーズアレイ（ＣＢＡ）を用いてサイトカイン含量についてアッセイする。我々は、抗ＣＤ３又は抗ＣＤ３プラス抗ＣＤ２８のいずれかで刺激し、ＩＬ−１７Ａを補完した培養物が、サイトカインを加えない又はＩＬ−１７Ｆを受け取った培養物を超えて有意に高いレベルのＩＦＮγ及びＴＮＦαを含有することを期待する。当該タンパク質は、ＩＬ−１７ＡによるＩＦＮγ及びＴＮＦαの誘導を阻害する能力について評価され得る。
実施例１０．マウスのコラーゲン誘導の関節炎（ＣＩＡ）モデル
【０２４４】
マウスのコラーゲン誘導の関節炎（ＣＩＡ）モデルを用いてヒトの関節炎を治療するための薬剤（たとえば、本明細書に記載されるタンパク質）の治療可能性を評価することができる。８〜１０週齢のオスＤＢＡ／ＩＪマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｓ，それぞれ２５〜３０ｇ）をこれらの試験に使用する。−２１日目に、完全フロインドアジュバントにて調製した１００μｇ／ｍｌのヒヨコＩＩ型コラーゲンを尾の皮内に注射して動物に与え、３週間後、０日目に、不完全フロインドアジュバントで調製したことを除いて同様の注射をマウスに施す。２回目のコラーゲンの注射に続いて動物は関節炎の症状を示し始め、ほとんどの動物が１〜２週間以内に炎症を発症する。キャリパを用いて足の厚さを測定し、各足についての臨床スコア（０〜３）：０＝正常、０．５＝足指の発赤腫脹、１＝軽い足の炎症、２＝中程度の足の炎症、３＝重篤な足の炎症を指定することによって疾患の程度を評価する。
【０２４５】
このモデルでは疾患の発症率は通常９５〜１００％であり、４０匹の動物を用いた試験では０〜２の非応答動物（観察の６週後に判定される）が通常認められる。炎症が始まるにつれて、種々の低次元の足又は足指の炎症の一般的な一時的な発生が生じ得ることに留意すること。この理由のために、顕著で持続的な足の腫脹が発生するまで動物は確立した疾患を有するとはみなされない。
【０２４６】
動物すべてを毎日観察し、足における疾患の状態を評価するが、それは、各足に定量的臨床スコアを割り当てることによって実施される。毎日、各動物は、臨床疾患の状態に従ってスコア化された４つの足を有する。臨床スコアを判定するには、足が、３つのゾーン、足指、足そのもの（手首又は足首から先）及び手首又は足首の関節を有すると考えられる。これらのゾーンに対する炎症の程度と重症度は、腫脹についての各足指の観察、裂けた爪又は足指の発赤、足のいずれかにおける浮腫又は発赤の証拠の記録、腱又は骨の細かな解剖学的区分の喪失の記録、浮腫又は発赤についての手首又は足首の評価、並びに炎症が近位で脚まで広がっているかどうかの記録を含めて言及される。１、２又は３の足スコアは、第１に重症度の全体的な印象に基づき、第２にどれだけ多くのゾーンが関与するかに基づく。
【０２４７】
治療：確立した疾患は、１以上にランク分けされた足炎症の定量的スコアとして定義される。確立した疾患がいったん存在すると、日付が記録され、「確立した疾患」を得た動物の最初の日として指定され、治療が開始される。ＰＢＳによって、又は５回の総用量：１５０μｇ、７５μｇ、２５μｇ及び１０μｇにて１日おきに種々の用量の当該タンパク質でｉｐによってマウスを治療する。
【０２４８】
実験期間全体を通して採血し、血清の免疫グロブリンとサイトカインのレベルと同様に抗コラーゲン抗体の血清レベルをモニターする。最後（５回目）の治療の４８時間後、疾患の発症後およそ１０日の動物を安楽死させる。血清用に血液を回収し、足すべてを組織学検査用に１０％ＮＢＦに回収する。免疫グロブリンとサイトカインのアッセイのために血清を回収し、−８０℃で凍結する。治療したマウスにおける臨床スコアの重症度の用量依存性の有意な低下は、この試験系におけるタンパク質についての生物学的効果を示す。
実施例１１．追加の疾患モデル
【０２４９】
炎症性腸疾患（ＩＢＤ）のモデルは、ＩＢＤ患者からの培養した腸組織が健常対照からの組織に比べて高レベルの炎症性メディエータを生じることを示すように設計される。炎症性メディエータ（Ｌ−１β、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７Ａ及びＦ、ＩＬ−１８、ＩＬ−２３、ＴＮＦ−α、ＩＦＮ−γ、ＭＩＰファミリーメンバー、ＭＣＰ−１、Ｇ−及びＧＭ−ＣＳＦなどを含むが、これらに限定されない）のこの高い産生は、炎症性経路を活性化することに対する及びエフェクター細胞の下流へのそれらの効果を介して、たとえば、クローン病（ＣＤ）及び潰瘍性大腸炎（ＵＣ）のようなＩＢＤに関連する症状及び病理に寄与する。次いでこれらの経路及び構成成分は、生体内で認められるような組織及び細胞の損傷／破壊をもたらす。従って、このモデルはＩＢＤのこの高い炎症性メディエータの態様を刺激することができる。さらに、健常な対照又はヒト腸管上皮細胞（ＩＥＣ）株に由来する腸管組織をこれら炎症性成分の存在下で培養すると、組織及び細胞の損傷の証拠と共に、炎症性経路のシグナル伝達を観察することができる。
【０２５０】
生体内でヒトＩＢＤに有効であろう治療法は、炎症性メディエータの産生及び／又は存在を阻害する及び／又は中和することによって上記生体外モデル又はＩＥＣモデルで機能する。
【０２５１】
このモデルでは、ヒトの腸管組織は、ＩＢＤ患者、又は腸管生検、再切片法を受けている健常対照、又は死後の組織採取から集められ、Ａｌｅｘａｋｉｓら（Ｇｕｔ、５３：８５−９０；２００４）の改変を用いて処理する。無菌条件下で、多量のＰＢＳによって試料を穏やかに清浄し、その後、完全な組織培養培地（抗生物質を加えて細菌の過剰増殖を防ぐ）の存在下で細片した組織を培養する。細片組織の同一プールを以下の１つ：媒体（ＰＢＳ）、組換えヒト（ｒｈ）ＩＬ−１７Ａ、ｒｈＩＬ−１７Ｆ又はｒｈＩＬ−１７Ａ＋ｒｈＩＬ−１７Ｆで処理する。加えて、これらの試料を単独又は組み合わせでのＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７Ｂ、ＩＬ−１７Ｃ、ＩＬ−１７Ｄ及びＩＬ−１７Ｅのいずれかの拮抗物質と共に、又はそれを伴わずに処理する。細胞を既存のストックから継代することを除いてヒトのＩＥＣ株による試験についてこの実験プロトコールを続ける。培養の時間を変化させた後（１時間〜数日）、上清を回収し、上記のものを含む炎症性メディエータのレベルについて解析する。ＩＢＤ患者からの試料又はｒｈＩＬ−１７Ａ及び／又はｒｈＩＬ−１７Ｆで処理した試料では、無処理の健常対照の組織試料に比べて炎症性サイトカイン及びケモカインのレベルが上昇する。炎症性メディエータの産生を低下させるのでヒトＩＢＤにて有効である能力について当該タンパク質を評価することができる。
【０２５２】
ドライアイ疾患についてのマウスのモデルで当該タンパク質を評価することができる。スコポラミンの皮下注射、次いで制御した環境のチャンバーにマウスを入れることによってマウスにてドライアイを誘導することができる。制御した環境のチャンバーは、相対湿度、温度及び空気の流れについて制御することができる。たとえば、Ｂａｒａｂｉｎｏら、Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｈｔｈ．Ｖｉｓ．Ｓｃｉ．，４６：２７６６−７１，２００５を参照のこと。種々のマウス系統を使用することができる。これらには、たとえば、Ｃ５７ＢＬ／６、ＢＡＬＢ／ｃ、ＮＺＢ／Ｗ及びＭＬＲ／ｌｐｒ、ＭＬＲ／＋が挙げられる。他の動物、たとえば、ウサギ、ラット、サル、イヌ、及びネコもドライアイ疾患のモデルとして使用することができる。たとえば、Ｎｇｕｙｅｎ及びＰｅｃｋ、Ｏｃｕｌ．Ｓｕｒｆ．，７（１）：１１−２７，２００９（表１を含む）、並びにＢａｒａｂｉｎｏ及びＤａｎａ，Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｈｔｈ．Ｖｉｓ．Ｓｃｉ．，４５（６）：１６４１−４６，２００４を参照のこと。
【０２５３】
例証として、３０％未満の湿度（一般に約１９％）、速い空気の流れ（一般に約１５リットル／分を超える）及び一定の温度（約２２℃）で制御された環境チャンバーにて乾燥環境に連続してさらすことによって正常で健常な６〜１０週齢のメスＣ５７ＢＬ／６マウスにてドライアイを誘導することができる。チャンバーに入れたマウスをスコポラミンで処理して涙液分泌も阻害する。徐放性経皮スコポラミン貼付剤（Novartis, Summit NJ）の１／４を脱毛したマウスの尾の中間に４８時間ごとに塗布し、又はたとえば、７５０μｇのスコポラミンを１日２回皮下に注射することができる。制御した環境チャンバーとスコポラミンの組み合わせは、相対的に短い時間枠（約２〜４日）で重篤なドライアイを生じる。これらの条件下で疾患の発症後、当該タンパク質によって７〜１４日間マウスを治療することができ、偽薬又は賦形薬で治療した対照と比較することができる。たとえば、（ａ）涙液産生の評価、（ｂ）角膜表面の損傷のマーカーである角膜フルオレセイン染色、（ｃ）上下の結膜における杯細胞の密度の評価、（ｄ）一般的な眼科検査、たとえば、結膜上皮の形態、（ｅ）角膜表面の走査電子顕微鏡検査、及び（ｆ）免疫組織化学検査を行うことによってドライアイについてマウスをモニターし、評価することができる。
実施例１２．関節リウマチ（ＲＡ）及び変形性関節症（ＯＡ）のモデル
【０２５４】
このモデルは、ヒトの滑膜培養物（滑膜マクロファージ、滑膜線維芽細胞及び関節軟骨細胞を含む）及びＲＡ患者やＯＡ患者に由来する外植片が健常対照由来の培養物／外植片に比べて高いレベルの炎症性メディエータを産生することを示すように設計される。炎症性メディエータ（オンコスタチンＭ、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７Ａ及びＦ、ＩＬ−１８、ＩＬ−２３、ＴＮＦ−α、ＩＦＮ−γ、ＩＰ−１０、ＲＡＮＴＥＳ、ＲＡＮＫＬ、ＭＩＰファミリーメンバー、ＭＣＰ−１、Ｇ−及びＧＭ−ＣＳＦ、一酸化窒素などを含むが、これらに限定されない）のこの高い産生は、炎症性経路を活性化することに対する及びエフェクター細胞の下流へのそれらの効果を介して、ＲＡ及びＯＡに関連する症状及び病理に寄与する。次いでこれらの経路及び構成成分は、炎症性浸潤、軟骨及びマトリクスの喪失／破壊、骨喪失、及びプロスタグランジンやサイクロオキシゲナーゼの上方調節をもたらす。従って、このモデルは、試験管内及び体外での実験にてＲＡ及びＯＡの破壊的な炎症性の側面を刺激することができる。さらに、健常対照に由来する外植片や滑膜培養物をこれらの炎症性成分（たとえば、オンコスタチンＭ、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−１７Ａ及びＦ、ＩＬ−１５等）の幾つかの存在下で培養すると、炎症性経路のシグナル伝達を観察することができる。生体内でヒトのＲＡに有効である治療法は、炎症性メディエータの産生及び／又は存在を阻害する及び／又は中和することによって上記の試験管内及び生体外のモデルにて効果を有し得る。
【０２５５】
このモデルでは、ヒトの滑膜外植片は、ＲＡ、ＯＡの患者から、又は関節置換を受けている健常対照から、又は死後の組織採取から集められ、ＷｏｏｌｅｙとＴｅｔｌｏｗ (Arthritis Res 2: 65-70, 2000)及びｖａｎ’ｔ  Ｈｏｆら(Rheumatology 39:1004-1008, 2000)の改変を用いて処理される。滑膜線維芽細胞、滑膜マクロファージ、及び関節軟骨細胞の培養も検討される。同型試料を以下の１つ：媒体（ＰＢＳ）、組換えヒト（ｒｈ）ＩＬ−１７Ａ、ｒｈＩＬ−１７Ｆ又はｒｈＩＬ−１７Ａ＋ｒｈＩＬ−１７Ｆで処理し、一部の試料はオンコスタチンＭ、ＴＮＦ-α、ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｆ及びＩＬ−１５の組み合わせを含有する。加えて、当該タンパク質の存在下又は非存在下でこれらを評価することができる。培養時間を変化させた後（１時間〜数日）、上清を回収し、上記で列記されたものを始めとして炎症性メディエータについて解析する。ＲＡ又はＯＡの患者に由来する試料又はｒｈＩＬ−１７Ａ及び／又はＦ（単独又は他の炎症性サイトカインとの組み合わせでのいずれか）で処理した試料では、無処理の健常対照の外植片又は無処理の細胞培養物に比べて炎症性サイトカイン及びケモカインのレベルは上昇する。炎症性メディエータの産生を低下させるのでヒトのＲＡ及びＯＡで有効である能力について当該タンパク質を評価することができる。
実施例１３．Ｇ−ＣＳＦ、ＩＬ−６及びＩＬ−８の誘導
【０２５６】
ヒトＩＬ−１７Ａ又は人ＩＬ−１７Ｆで処理したヒトの小気道上皮細胞（ＳＡＥＣ）は、たとえば、処理後４８時間の細胞上清の評価によってＧ−ＣＳＦ、ＩＬ−６及びＩＬ−８の用量依存性の誘導を示すことができる。この誘導を阻害する能力について当該タンパク質を評価することができる。
実施例１４．ヒトの関節リウマチ（「ＲＡ」）と変形性関節症（「ＯＡ」）の試料
【０２５７】
これらのモデルは、ヒトの滑膜培養物（滑膜線維芽細胞、滑膜マクロファージ、及び関節軟骨細胞を含む）及びＲＡやＯＡの患者由来の外植片が、健常対照の培養物／外植片に比べて高いレベルの炎症性メディエータを産生することを示すように設計されるが、それは言い換えれば、細胞外マトリクス成分（たとえば、骨、軟骨等）の劣化に寄与し、そのことはこれら疾患の顕著な特徴となっている。加えて、以下に記載される共培養モデルは、ＲＡ／ＯＡの滑液に存在する炎症性メディエータ及び／又は活性化されたＴ細胞もまたさらに大きな炎症やマトリクスの劣化を生じることを示すように設計される。
【０２５８】
炎症性メディエータ（オンコスタチンＭ、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７Ａ及びＦ、ＩＬ−１８、ＩＬ−２３、ＴＮＦ−α、ＩＦＮ−γ、ＩＰ−１０、ＲＡＮＴＥＳ、ＲＡＮＫＬ、ＭＩＰファミリーメンバー、ＭＣＰ−１、ＭＭＰ−９、Ｇ−及びＧＭ−ＣＳＦ，一酸化窒素等を含むが、これらに限定されない）の高い産生は、炎症性経路を活性化することに対する及びエフェクター細胞の下流へのそれらの効果を介して、ＲＡ及びＯＡに関連する症状及び病理に寄与する。次いでこれらの経路及び構成成分は、炎症性浸潤、軟骨及びマトリクスの喪失／破壊、骨喪失、及びマトリクスメタロプロテアーゼ、プロスタグランジンやサイクロオキシゲナーゼの上方調節をもたらす。従って、このモデルは、試験管内及び体外での実験にてＲＡ及びＯＡの破壊的な炎症性の側面を刺激することができる。さらに、健常対照に由来する外植片や滑膜培養物を外因性に添加した炎症性成分（たとえば、オンコスタチンＭ、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−１７Ａ及びＦ、ＩＬ−１５等）の幾つかの存在下で、或いは、ＲＡ患者由来に滑液（内因性の炎症性成分を含有する）の存在下で培養すると、炎症性で分解性の経路のシグナル伝達を観察することができる。生体内でヒトのＲＡに有効である治療法は、炎症性メディエータの産生及び／又は存在を阻害する及び／又は中和することによって上記の試験管内及び生体外のモデルにて機能する。
【０２５９】
これのモデルでは、ヒトの滑膜外植片は、ＲＡ、ＯＡの患者から、又は関節置換を受けている健常対照から、又は死後の組織採取から集められ、ＷｏｏｌｅｙとＴｅｔｌｏｗ (Arthritis Res 2: 65-70, 2000)及びｖａｎ’ｔ  Ｈｏｆら（Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ  ３９：１００４−１００８，  ２０００）の改変を用いて処理される。滑膜線維芽細胞、滑膜マクロファージ、及び関節軟骨細胞の培養も検討される。同型試料を以下の１つ：媒体（ＰＢＳ）、組換えヒト（ｒｈ）ＩＬ−１７Ａ、ｒｈＩＬ−１７Ｆ又はｒｈＩＬ−１７Ａ＋ｒｈＩＬ−１７Ｆで処理し、一部の試料はオンコスタチンＭ、ＴＮＦ-α、ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｆ及びＩＬ−１５の組み合わせを含有する。試料の別々のセットを、活性化ヒトＴ細胞又は健常対照又はＲＡ若しくはＯＡの患者からの滑液によって処理する。培養時間を変化させた後（１時間〜数日）、上清及び細胞を回収し、上記で列記したものを含めて炎症性メディエータ及び軟骨／骨／マトリクスの生体マーカーのレベルについて解析する。試料を当該タンパク質で処理し、炎症性で軟骨／骨／マトリクス分解性のメディエータの産生を低下させるのでヒトのＲＡ及びＯＡで有効である能力について評価することができる。
実施例１５．単鎖ヒトＩＬ−１７Ａ：ＩＬ−１７Ｆのヘテロ二量体
【０２６０】
組換えヒトＩＬ−１７Ａ：ＩＬ−１７Ｆのヘテロ二量体又は組換えＩＬ−１７Ａ：ＩＬ−１７Ｆ変異体をＣＨＯＤＸＢ１１細胞における適当な単鎖構築物の発現とＷＡＶＥ装置における細胞培養から産生させる。構築物の１つは、（Ｇ４Ｓ）３リンカーで連結されたＣ末端でのＩＬ−１７Ｆを伴ったＮ末端でのヒトＩＬ−１７Ａの配列で構成され；別の例となる構築物は、（Ｇ４Ｓ）３リンカーで連結されたＣ末端でのＩＬ−１７Ｆ変異体を伴ったＮ末端でのヒトＩＬ−１７Ａの配列で構成される。産物の捕捉のためにＨｉｓタグをＣ末端に含めることができる。例となる精製方法は、米国特許第２００８０２４１１３８号に記載されている。手短には、それは酸性沈殿工程、濾過、それに続くクロマトグラフィを含むことができる。たとえば、およそ１０Ｌの調整培地を回収し、０．２μｍのフィルターで無菌濾過する。撹拌しながら酢酸の添加によって培地をｐＨ５．０に合わせる。沈殿の後、０．８〜０．２ミクロンのフィルターの２段階を介して、ｐＨ調整した培地を再び濾過する。次いでＳＰＦａｓｔＦｌｏｗ樹脂上の陽イオン交換クロマトグラフィに培地を供し、塩勾配によって溶出することができる。次いで、たとえば、５ｍｌのＨＩＳＴＲＡＰ（登録商標）ＩＭＡＣカラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いたＩＭＡＣクロマトグラフィにピーク分画を供することができる。イミダゾールで溶出した後、たとえば、ＳＵＰＥＲＤＥＸ（登録商標）２００上でのサイズ排除クロマトグラフィにピーク分画を供することができる。次いでピーク分画をプールして使用することができる。ウエスタン解析（たとえば、抗Ｈｉｓタグ抗体）及び／又はクマシーゲル染色を伴ったＳＤＳ−ＰＡＧＥによって分画を評価することができる。
実施例１６．ＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆの発現及び精製
【０２６１】
ヒトＩＬ−１７ＲＡの天然のシグナルペプチドと細胞外領域（残基１〜２８６）をＢＡＣＭＡＭ（登録商標）発現ベクターｐＶＬＡＤ６３７にクローニングした。１％のウシ胎児血清（ＦＢＳ）及び１０ｍＭの酪酸ナトリウムを補完したＰＲＯ０２９（商標）培地（Ｌｏｎｚａ）における３７℃での２９３ＧｎＴＩ細胞の浮遊培養にて組換えタンパク質は一過性に発現した。Ｃ末端のヘキサ−Ｈｉｓタグを伴った完全長のＩＬ−１７ＦをｐＡｃＧＰ６７−Ａ発現ベクター（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）にクローニングし、ＩＮＳＥＣＴＸＰＲＥＳＳ（商標）培地（Ｌｏｎｚａ）における２７℃でのＨｉｇｈＦｉｖｅ昆虫細胞培養によってタンパク質を分泌させた。ＩＬ−１７ＲＡとＩＬ−１７Ｆのタンパク質を含有する上清を混合し、Ｎｉアフィニティ精製の前に濃縮した。エンドグリコシダーゼＨ処理によってＩＬ−１７ＲＡタンパク質を脱グリコシル化し、３Ｃ−プロテアーゼとカルボキシペプチダーゼＡ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）を用いてＩＬ−１７ＲＡとＩＬ−１７Ｆの精製タグを切断した。Ｗａｌｔｅｒら（３８）によって記載されたようにジメチルアミン／ホウ酸の錯体とホルムアルデヒドを用いた還元的リジンメチル化にタンパク質複合体を供した。１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４と１５０ｍＭのＮａＣｌで平衡化したＳＵＰＥＲＤＥＸ（登録商標）２００上でのサイズ排除カラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いてＩＬ−１７ＲＡ／ＩＬ−１７Ｆ複合体をさらに精製した。結晶化試行のためにＩＬ−１７ＲＡ／ＩＬ−１７Ｆ複合体を含有する分画を約１５ｍｇ／ｍｌに濃縮した。
【０２６２】
セレノ−メチオニン（ＳｅＭｅｔ）で標識したＩＬ−１７ＲＡタンパク質を以下の改変と共に記載されたように調製した（３９）。ＦＢＳを補完したＤＭＥＭ培地（Ｉｎｖｉｒｔｏｇｅｎ）にて形質移入していない付着性の２９３ＧｎＴＩ細胞を培養した。リン酸緩衝化生理食塩水で１回洗浄した後、４０ｍｇ／ｍｌのＬ−Ｃｙｓ、４５ｍｇ／ｍｌのセレノン−Ｌ−Ｍｅｔ、２％のＦＢＳ、Ｌ−グルタミン酸塩、ピルビン酸ナトリウム、ＩＬ−１７ＲＡＢａｃＭａｍウイルス及び１０ｍＭの酪酸ナトリウムを補完したＭｅｔとＣｙｓを含まないＤＭＥＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）に培地を交換した。発現を７２時間進めた。ＩＬ−１７ＲＡ／ＳｅＭｅｔタンパク質の上清をＩＬ−１７Ｆと混合し、上述のように精製した。
【０２６３】
結合実験については、タンパク質を発現させ、基本的に上述のように精製した。Ｃ末端のＢｉｒＡリガーゼタグの有無にて２９３ｓＧｎＴＩ細胞によってＩＬ−１７ＲＡ、ＩＬ−１７ＲＢ及びＩＬ−１７ＲＣの細胞外ドメインを発現させた。サイズ排除クロマトグラフィに先立って３Ｃ−プロテアーゼで切断する追加のＣ末端Ｆｃタグと共にＩＬ−１７ＲＣを発現させた。Ｃ末端ヘキサーＨｉｓタグと共にＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｆ及びＩＬ−２５サイトカインを発現させた。ＢｉｒＡリガーゼを用いてタンパク質を酵素的にビオチン化し、サイズ排除クロマトグラフィを介して精製した。
実施例１７．結晶化及びＸ線データの収集
【０２６４】
１０％ＰＥＧ６０００及び０．１ＭのビシンｐＨ９．０における懸滴蒸気拡散を介してＩＬ−１７ＲＡ／ＩＬ−１７Ｆ複合体を先ず成長させた。タンパク質／沈殿の液滴に直接加えた２０ｍＭのＣａＣｌ２又は１０ｍＭのＣａＣｌ２及び１．５％ｗ／ｖのトリメチルアミンＮ−オキシド二水和物を伴ったＰＥＧ６０００（４〜１４％）と０．１ＭのＣＡＰＳＯ緩衝液（ｐＨ９．１〜９．３）にて、最適化した天然の及びＳｅＭｅｔのタンパク質複合体の結晶を成長させた。０．５ｍＭのＫ２ＰｔＣｌ４と２％のエチレングリコールを補完した井戸水に結晶を６時間浸すことによって重金属誘導体を調製した。データを収集する前に２０〜２５％のエチレングリコールを加えた井戸水にて結晶を冷凍保護し、１００Ｋに冷却した。結晶は、空間群Ｐ４１２１２に属し、約１７１、１７１、８３Åの単位格子の寸法を有する。Ｓｔａｎｆｏｒｄ  Ｓｙｎｃｈｒｏｔｒｏｎ  Ｒａｄｉａｔｉｏｎ  Ｌｉｇｈｔｓｏｕｒｃｅ（ＳＳＲＬ）ビームライン９−２（Ｓｔａｎｆｏｒｄ，ＣＡ）にて当初の天然のデータセットを回収した。Ｐｔ誘導体及びＳｅＭｅｔのデータセットはＳＳＲＬのビームライン１１−１にて回収した。Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｐｈｏｔｏｎ  Ｓｏｕｒｃｅ（ＡＰＳ）ビームラインＩＤ−２３Ｄ（Ａｒｇｏｎｎｅ，ＩＬ）ではさらに高い解像の天然のデータセットを回収した。プログラムＭｏｓｆｌｍ４０を用いてデータはすべて索引を付け、統合し、ＣＣＰ４スイートからＳＣＡＬＡによって縮小した（４１）。回折は異方性であり、データセットを３．４、３．４及び３．９Åに縮小する回折異方性サーバー（４２）を用いて当初の天然のデータセットを楕円的切断及び異方的スケーリングに供した。
実施例１８．構造決定及び精製
【０２６５】
モデルとして以前決定した２．８５ÅのＩＬ−１７Ｆの構造（ＰＤＢＩＤ１ＪＰＹ）と共にプログラムＰｈａｓｅｒ４３を用いて単一のＩＬ−１７Ｆホモ二量体の分子置換法を決定した（７）。当初の地図は、ＩＬ−１７ＲＡについての結合部位を説明するＩＬ−１７Ｆ二量体の片側に追加的な密度を示した。プログラムＳｈａｒｐにて異常分散効果を利用した単一重原子同形置換法を介してＫ２ＰｔＣｌ４を用いて位相を計算した（４４）。７１％の溶媒を想定し、２０回のうち１０回についてのＩＬ−１７Ｆの分子置換からの部分モデルを含めて密度を修正した地図を計算した。プログラムＣｏｏｔを用いてＩＬ−１７ＲＡ主鎖の部分モデルを手動でこの地図に組み込んだ（４５）。
【０２６６】
ファストＦｏｕｒｉｅｒトランスフォーム（ＦＦＴ）を介してＩＬ−１７ＲＡのＭｅｔ残基の位置を計算し、ＣＣＰ４スイートにおけるプログラムＦＦＴを用いて異常な差異の地図を生成した。ＳｅＭｅｔデータセットは、天然のデータセットと同形ではなく、単一異常差異（ＳＡＤ）位相整合法を介して部位を位置づけるにはシグナルが弱すぎるので、部分的に組み立てたモデルをＳｅＭｅｔデータセットの分子置換モデルとして用い、計算した位相を用いてセレノニウムのピークを見つけた。ＩＬ−１７ＲＡのＭｅｔ１５９、Ｍｅｔ１６６及びＭｅｔ２１８に相当する、６つのＳｅＭｅｔ残基と思われるもののうち３つを位置づけた。予測されたＡｓｎ結合のグリコシル化部位とジスルフィド結合に加えてこれらＭｅｔの位置を用いて、密度におけるポリペプチドと当初のＩＬ−１７ＲＡモデルの完全な構築を登録した。Ｃｏｏｔにおける手動のモデル構築と交差するプログラムＰｈｅｎｉｘ４６を用いて複数回の組み合わせとＢ因子の精製を行った。初回のモデル構築は、プログラムＣＮＳによって計算したＢ因子が際立たせるσＡ−加重の段階的な組み合わせ地図を利用した（４７）。最終モデルは、それぞれ２２．７％及び２５．３％のＲ因子及びＲフリーによって３．３Åに純化した。非対称単位でＩＬ−１７ＲＡ／ＩＬ−１７Ｆ複合体が１つある。モデルには、ＩＬ−１７ＲＡ鎖の４３位にてジメチルリジン、ＩＬ−１７ＲＡ鎖上での５つの単一Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）部位、ＩＬ−１７ＦのＢ鎖上での２つのＧｌｃＮＡｃ残基との部位１つ、及びカルシウムイオンが含まれる。プログラムＰＲＯＣＨＥＣＫ４８及びＷＨＡＴ＿ＣＨＥＣＫ（４９）を用いて最終モデルの構造を評価した。ＣＣＰ４スイートプログラムＣｏｎｔａｃｔ及びＡｒｅａｉｍｏｌを用いてそれぞれ接触面の接触及び埋め込まれた表面積を決定した。構造図はすべてプログラムＰｙｍｏｌ（５０）を用いて生成した。
実施例１９．親和性測定
【０２６７】
ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）Ｔ１００（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）での表面プラスモン共鳴（ＳＰＲ）を介して結合親和性を計算した。ＳＡセンサーチップ又はＣＭ４センサーチップの（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）いずれかの上で不動化したストレプトアビジンに、Ｃ末端をビオチン化したＩＬ−１７受容体を結合させた。無関係なビオチン化タンパク質を同等の不動化密度で捕捉してフローセルを制御した。第２の受容体の結合相互作用を測定するために、サイトカインを先ず不動化受容体に捕捉させて、次いで第２の受容体を注入した。低い結合密度（２００〜４００ＲＵ）と過剰なサイトカイン濃度を用いて単一受容体に結合するサイトカインのホモ二量体の数を最適化した。各サイクルの間で３ＭのＭｇＣｌ２を用いて表面を再生した。動態実験については、５０μｌ／分の流速を用いた。ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）Ｔ１００の評価ソフトウエア、バージョン２．０（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いてデータを解析した。少なくとも２回の独立した実験の平均値±平均値の標準誤差（ｓ．ｅ．ｍ．）として親和性を報告する。
実施例２０
【０２６８】
ＩＬ−１７ＲＡに結合したＩＬ−１７Ｆの構造を解析した。
【０２６９】
Ａｓｎ８９はＩＬ−１７ＡとＩＬ−１７Ｆの間で保存されており、Ａ鎖では、部位３のポケットにてＩＬ−１７ＲＡ主鎖との水素結合を形成する。たとえば、アラニンによる置換は相互作用を取り去ってしまう。
【０２７０】
Ａ鎖におけるＧｌｎ９５は、部位２のポケットにて若干の疎水性相互作用を行う。たとえばアラニンのような小さな残基による置換を用いて相互作用を破壊することができ、たとえば、トリプトファンのような大きな基による置換を用いてＩＬ−１７ＲＡループの挿入を阻止することができる。
【０２７１】
ＩＬ−１７Ｆ（配列番号１２）のＢ鎖におけるＡｒｇ３７：Ａｒｇ３７は、ＩＬ−１７ＲＡと水素結合及び塩橋と思われるものを形成し、側鎖は自信を持ってモデル化され得ないが、４１位はセリンである。Ａｒｇ３７におけるアラニンは水素結合及び塩橋を破壊する。ＩＬ−１７Ａは、Ａｒｇ３７に相当する位置で荷電残基を有さないが、配列番号２の３７位（配列番号１２の３９位に相当する）でリジンを有する。ＩＬ−１７Ｆ（配列番号１２）における３７位で荷電残基を置換すること又はＩＬ−１７Ａ（配列番号２）におけるＬｙｓ３７若しくはＡｒｇ３８を置換することを用いて受容体への親和性を低下させることができる。反対の電荷を持つ残基、たとえば、グルタミン酸又はアスパラギン酸によるこれらの位置の置換も使用することができる。
【０２７２】
Ｂ鎖におけるＡｒｇ４２、Ａｒｇ４７及びＡｒｇ１０２は保存されたアルギニン残基である。ＩＬ−１７ＲＡ／ＩＬ−１７Ｆ複合体では、これらのアルギニン残基は、部位３（Ａｒｇ４２及びＡｒｇ４７）及び部位１（Ａｒｇ１０２）にて水素結合及び塩橋を形成し得る。Ａｒｇ４２とＡｒｇ４７は類似環境にあるので、双方共一緒に標的化され得る。たとえば、同一分子にて、たとえば、非荷電残基又は酸性残基によっていずれか１つ、２つ又は３つすべてが置換され得る。加えて、ＩＬ−１７Ａの文脈では、配列番号２のＡｒｇ３８は、たとえば、Ａｒｇ４７及びＡｒｇ１０２に相当する位置との組み合わせで置換され得る。
【０２７３】
Ｂ鎖におけるＴｙｒ６３は６種のＩＬ−１７サイトカインのうち４種で保存されており、はかの２種では疎水性である。Ｔｙｒ６３は、部位１の中央に埋め込まれるＴｒｐ３１を含めて広い疎水性相互作用を行う。Ｔｙｒ６３はまた他の部位１の残基と水素結合と思われる結合を形成する。アラニン置換を用いて相互作用を破壊することができ、荷電残基（たとえば、リジン）を用いてポケットを遮断することができる。
【０２７４】
Ｂ鎖におけるＶａｌ６８（ＩＬ−１７ＡにおけるＴｒｐ）は部位２において受容体との疎水性相互作用を形成する。たとえば、長い、極性の側鎖（たとえば、グルタミン）によってＶａｌ６８を置換することを用いてループの挿入を壊すことができる。
【０２７５】
Ｂ鎖におけるＰｈｅ１１１は部位１のポケットの一番上にて疎水性相互作用を形成する。アラニンによる置換及び／又はＡｒｇ１０２置換との組み合わせでの置換を用いて結合接触面でのこれらの相互作用を破壊することができる。
【０２７６】
加えて、表３における観察を行った（ＩＬ−１７Ｆ及び配列番号１２を参照して特定される残基）
【表５】
2013507132.tif 000007
【表６】
2013507132.tif 000008
【０２７７】
欄３は、折り畳まれない状態で標準化した、ＩＬ−１７ＲＡへの結合によって埋め込まれた側鎖の溶媒アクセス可能表面領域（ＳＡＳＡ）の割合を提供する。欄４は、残基中の任意の側鎖原子からＩＬ−１７ＲＡにおける任意の原子への最小距離を提供する（オングストロームで）。
実施例２１．酸／塩基ジッパーで形成されたＩＬ−１７へテロ二量体
【０２７８】
幾つかの変異のあるＩＬ−１７サイトカイン二量体タンパク質を２つの異なったサブユニット配列のヘテロ二量体として設計した。そのようなヘテロ二量体を調製するやり方の１つは、２つのヘテロ二量体ジッパー配列の１つ、たとえば、１対の酸／塩基ジッパーの１つに各サブユニットを融合することによる。たとえば、Ｏ’Ｓｈｅａら、Ｃｕｒｒ．Ｂｉｏｌ．（１９９３），３（１０）：６５８−６７を参照のこと。この例では、ＩＬ−１７Ａのサブユニットの１つは、酸性配列とヘキサヒスチジンタグを含有するＣ末端タグと共に発現させた。ＩＬ−１７Ａの別のサブユニットは、塩基性配列とヘキサヒスチジンタグを含有するＣ末端タグと共に発現させた。これらサブユニットの配列は以下のとおりである。
【０２７９】
ＩＬ−１７Ａ酸性ジッパー：ＧＩＴＩＰＲＮＰＧＣＰＮＳＥＤＫＮＦＰＲＴＶＭＶＮＬＮＩＨＮＲＮＴＮＴＮＰＫＲＳＳＤＹＹＮＲＳＴＳＰＷＮＬＨＲＮＥＤＰＥＲＹＰＳＶＩＷＥＡＫＣＲＨＬＧＣＩＮＡＤＧＮＶＤＹＨＭＮＳＶＰＩＱＱＥＩＬＶＬＲＲＥＰＰＨＣＰＮＳＦＲＬＥＫＩＬＶＳＶＧＣＴＣＶＴＰＩＶＨＨＶＡＳＧＧＧＧＳＲＧＧＬＥＶＬＦＱＧＰＥＦＧＧＳＴＴＡＰＳＡＱＬＥＫＥＬＱＡＬＥＫＥＮＡＱＬＥＷＥＬＱＡＬＥＫＥＬＡＱＨＨＨＨＨＨ（配列番号１７）
【０２８０】
ＩＬ−１７Ａ塩基性ジッパー：ＧＩＴＩＰＲＮＰＧＣＰＮＳＥＤＫＮＦＰＲＴＶＭＶＮＬＮＩＨＮＲＮＴＮＴＮＰＫＲＳＳＤＹＹＮＲＳＴＳＰＷＮＬＨＲＮＥＤＰＥＲＹＰＳＶＩＷＥＡＫＣＲＨＬＧＣＩＮＡＤＧＮＶＤＹＨＭＮＳＶＰＩＱＱＥＩＬＶＬＲＲＥＰＰＨＣＰＮＳＦＲＬＥＫＩＬＶＳＶＧＣＴＣＶＴＰＩＶＨＨＶＡＳＧＧＧＧＳＲＧＧＬＥＶＬＦＱＧＰＥＦＧＧＳＴＴＡＰＳＡＱＬＫＫＫＬＱＡＬＫＫＫＮＡＱＬＫＷＫＬＱＡＬＫＫＫＬＡＱＨＨＨＨＨＨ（配列番号１８）
【０２８１】
構築物を２９３細胞に同時形質移入し、タンパク質を回収した。
実施例２２．単鎖融合によって形成されたＩＬ−１７へテロ二量体
【０２８２】
ヘテロ二量体を調製する別のやり方は、可動性ペプチドリンカーを用いて２つのサブユニットを共有結合させ、単一のポリペプチド鎖として発現させることによる。単鎖ＩＬ−１７Ａの例は以下のとおりである：
ＧＩＴＩＰＲＮＰＧＣＰＮＳＥＤＫＮＦＰＲＴＶＭＶＮＬＮＩＨＮＲＮＴＮＴＮＰＫＲＳＳＤＹＹＮＲＳＴＳＰＷＮＬＨＲＮＥＤＰＥＲＹＰＳＶＩＷＥＡＫＣＲＨＬＧＣＩＮＡＤＧＮＶＤＹＨＭＮＳＶＰＩＱＱＥＩＬＶＬＲＲＥＰＰＨＣＰＮＳＦＲＬＥＫＩＬＶＳＶＧＣＴＣＶＴＰＩＶＨＨＶＡＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＩＴＩＰＲＮＰＧＣＰＮＳＥＤＫＮＦＰＲＴＶＭＶＮＬＮＩＨＮＲＮＴＮＴＮＰＫＲＳＳＤＹＹＮＲＳＴＳＰＷＮＬＨＲＮＥＤＰＥＲＹＰＳＶＩＷＥＡＫＣＲＨＬＧＣＩＮＡＤＧＮＶＤＹＨＭＮＳＶＰＩＱＱＥＩＬＶＬＲＲＥＰＰＨＣＰＮＳＦＲＬＥＫＩＬＶＳＶＧＣＴＣＶＴＰＩＶＨＨＶＡＳＨＨＨＨＨＨ（配列番号１９）。
【０２８３】
タンパク質は２９３細胞で発現させた。細胞からの上清を非還元ゲル上で移動させ、抗ヘキサヒスチジン抗体を用いたウエスタンブロット解析を行った。Ｈｉｓタグを付けたタンパク質の相当な部分が、単鎖タンパク質の単量体形態に相当する分子量（約３５ｋＤａ）で移動した。
実施例２３．ＩＬ−１７活性についてのアッセイ
【０２８４】
Ｆｏｓｓｉｅｚら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８３（６）：２５９３−６０３（１９９６）の方法に従って細胞に基づいた機能的アッセイにて対照のＩＬ−１７ＡとＩＬ−１７Ｆタンパク質及び変異体のＩＬ−１７ＡとＩＬ−１７Ｆタンパク質を評価した。手短には、１０％ＦＢＳを伴ったＤＭＥＭにて１×１０５個／ウェルの濃度で９６穴プレートにおいてＭＲＣ−５ヒト胚性線維芽細胞を継代培養した。最終濃度０．１〜１０，０００ｎｇ／ｍｌにてＰＢＳ、ｐＨ７．４中の対照タンパク質及び当該タンパク質を各ウェルに加えた。細胞をさらに４８時間培養した。次いで、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｈｕｍａｎ  ＩＬ−６  Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ  Ｓｅｔ（ｃａｔ＃ＥＮＥＳＳ０００５）によって上清中のＩＬ−６濃度を測定した。このアッセイを用いて、ＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆの対照タンパク質は、ＩＬ−１７Ａについて１〜１０ｎｇ／ｍｌ及びＩＬ−１７Ｆについて２０〜１００ｎｇ／ｍｌの公表された範囲内でＥＣ５０を有することが認められた。
実施例２４．ＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆの単一突然変異
【０２８５】
ＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ａ二量体及びＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ｆ二量体の双方にて単一の突然変異を行った−すなわち、それぞれ単一の突然変異を含有する２つの同一サブユニットを有するタンパク質を作製した。表４及び表５は、実施例２３に記載されたアッセイを用いてこの形式での各変異について観察された活性の低下を示す。
【表７】
2013507132.tif 000009
【表８】
2013507132.tif 000010
変異Ｆ１１０Ｑ及びＹ６３Ａは乏しい分泌を生じた。
実施例２５．ＩＬ−１７Ａにおける複合変異
【０２８６】
サブユニット１がＩＬ−１７Ａの背景で表７の第１欄にて特定される変異を含有し、サブユニット２がＩＬ−１７Ａの背景で第２欄にて特定される変異を含有する二量体タンパク質において突然変異を行った。実施例２１に記載された酸／塩基ジッパー法を用いてサブユニット１とサブユニット２を含有する二量体を作製した。タンパク質を２９３細胞で発現させ、上清を回収して解析した。実施例２３に記載されたアッセイにて刺激するタンパク質の能力を評価し、野生型ＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ａ二量体と比較した。
【０２８７】
ＩＬ−１７Ａについて別の有用な参照配列は以下のとおりであり、Ｎ末端のグリシンを含めて配列番号２に相当する：
ＧＩＴＩＰＲＮＰＧＣＰＮＳＥＤＫＮＦＰＲＴＶＭＶＮＬＮＩＨＮＲＮＴＮＴＮＰＫＲＳＳＤＹＹＮＲＳＴＳＰＷＮＬＨＲＮＥＤＰＥＲＹＰＳＶＩＷＥＡＫＣＲＨＬＧＣＩＮＡＤＧＮＶＤＹＨＭＮＳＶＰＩＱＱＥＩＬＶＬＲＲＥＰＰＨＣＰＮＳＦＲＬＥＫＩＬＶＳＶＧＣＴＣＶＴＰＩＶＨＨＶＡ（配列番号２０）。
【０２８８】
以下に列記した配列を有するサブユニットを用いてタンパク質を調製したが、ＩＬ−１７Ａにおける変異は、上記（欄２）参照配列の番号付けに従って、及びＩＬ−１７Ｆの番号付け（欄３）に従って特定された。
【表９】
2013507132.tif 000011
【０２８９】
配列番号１２の１２８位（配列番号２の１２６位又は配列番号２０の１２７位）直前でのＣ末端の切断は、配列番号１２の１２７位（配列番号２の１２５位又は配列番号２０の１２６位）でプロリンを残している。
【表１０】
2013507132.tif 000012
加えて、変異の以下の組み合わせ（ｗｔ／Ｎ８９Ａ）、（Ｒ４７Ｅ／Ｎ８９Ａ）、（Ｒ４７Ｅ，Ｓ６５Ｋ／Ｎ８９Ａ）、（Ｒ４７Ｅ，Ｗ６８Ｑ／Ｎ８９Ａ）、（Ｒ４７Ｅ，Ｒ１０２Ａ／Ｎ８９Ａ）を伴ったタンパク質は、プレート結合アッセイにてＩＬ−１７ＲＡに結合することが認められた。
実施例２６
【０２９０】
そのほかのヒトＩＬ−１７サイトカインについてのさらにそのほかの例となる変異の配列には以下が挙げられる：
【表１１】
2013507132.tif 000013
【表１２】
2013507132.tif 000014
【表１３】
2013507132.tif 000015
実施例２７
【０２９１】
細胞に基づいた拮抗アッセイにて変異体単鎖ＩＬ−１７Ａタンパク質を評価した。具体的には、変異タンパク質は、一方のサブユニットがＲ４７ＥとＳ６５Ｋ（配列番号２２にて上記示された）の変異を含み、第２のサブユニットがＮ８９Ａ変異とＣ末端切断（配列番号２７にて上記示された）を含む単鎖ＩＬ−１７Ａだった。２つのサブユニットを（Ｇ４Ｓ）６設計のリンカーで連結した。タンパク質はＣ末端のヒスチジンタグも含んだ。タンパク質の配列は以下のとおりだった：
ＧＩＴＩＰＲＮＰＧＣＰＮＳＥＤＫＮＦＰＲＴＶＭＶＮＬＮＩＨＮＲＮＴＮＴＮＰＫＲＳＳＤＹＹＮＥＳＴＳＰＷＮＬＨＲＮＥＤＰＥＲＹＰＫＶＩＷＥＡＫＣＲＨＬＧＣＩＮＡＤＧＮＶＤＹＨＭＮＳＶＰＩＱＱＥＩＬＶＬＲＲＥＰＰＨＣＰＮＳＦＲＬＥＫＩＬＶＳＶＧＣＴＣＶＴＰＩＶＨＨＶＡＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＩＴＩＰＲＮＰＧＣＰＮＳＥＤＫＮＦＰＲＴＶＭＶＮＬＮＩＨＮＲＮＴＮＴＮＰＫＲＳＳＤＹＹＮＲＳＴＳＰＷＮＬＨＲＮＥＤＰＥＲＹＰＳＶＩＷＥＡＫＣＲＨＬＧＣＩＮＡＤＧＮＶＤＹＨＭＡＳＶＰＩＱＱＥＩＬＶＬＲＲＥＰＰＨＣＰＮＳＦＲＬＥＫＩＬＶＳＶＧＣＴＣＶＴＰＡＳＨＨＨＨＨＨ（配列番号４６）。
【０２９２】
ＩＬ−１７ＲＡの可溶性細胞外ドメインへのプレート結合アッセイでは、変異タンパク質は、野生型ＩＬ−１７Ａに匹敵する親和性で結合することが認められた（およそ４倍以内で）。
【０２９３】
活性のアッセイについては、ＤＭＥＭ＋１０％ＦＢＳにて１×１０５個／ウェルの濃度で９６穴プレートのウェルにおいてＭＲＣ−５ヒト胚性線維芽細胞を培養した。４〜２４００ｎＭの最終濃度で変異体単鎖ＩＬ−１７Ａタンパク質をウェルに加えた。野生型ＩＬ−１７Ａ及びＴＮＦ−αをそれぞれ５ｎｇ／ｍｌ及び２ｎｇ／ｍｌの最終濃度でウェルに加えた。３７℃、５％ＣＯ２にて４８時間細胞をインキュベートした。次いでＴｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｈｕｍａｎ  ＩＬ−６  Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ  Ｓｅｔ（ｃａｔ＃ＥＮＥＳＳ０００５）を用いたＥＬＩＳＡによって上清中のＩＬ−６濃度を測定した。結果を以下の表９に示すが、このタンパク質は約１０〜１５ｎＭのＩＣ５０でＩＬ−１７Ａに拮抗できることを示している。
【表１０】
2013507132.tif 000016
【０２９４】
参考文献
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【０２９５】
等価
本発明は、その精神及び本質的な特徴から逸脱することなく他の具体的な形態で具体化されてもよい。従って、前述の実施形態はあらゆる点で、本明細書に記載された本発明における限定ではなく実例とみなされるべきである。
【図４Ｂ】
2013507132.tif 000017
【図４Ｃ】
2013507132.tif 000018
【図４Ｄ】
2013507132.tif 000019
【図５Ａ】
2013507132.tif 000020
2013507132.tif 000021
2013507132.tif 000022
【図１Ａ】
2013507132.tif 000023
【図１Ｂ】
2013507132.tif 000024
【図２】
2013507132.tif 000025
【図３Ａ】
2013507132.tif 000026
【図３Ｂ】
2013507132.tif 000027
【図３Ｃ】
2013507132.tif 000028
【図３Ｄ】
2013507132.tif 000029
【図３Ｅ】
2013507132.tif 000030
【図３Ｆ】
2013507132.tif 000031
【図３Ｇ】
2013507132.tif 000032
【図３Ｈ】
2013507132.tif 000033
【図３Ｉ】
2013507132.tif 000034
【図３Ｊ】
2013507132.tif 000035
【図３Ｋ】
2013507132.tif 000036
【図３Ｌ】
2013507132.tif 000037
【図３Ｍ】
2013507132.tif 000038
【図４Ａ】
2013507132.tif 000039
【図５Ｂ】
2013507132.tif 000040
【図５Ｃ】
2013507132.tif 000041
【配列表】
2013507132000001.app
【国際調査報告】
2013507132.tif 000042
2013507132.tif 000043
2013507132.tif 000044
2013507132.tif 000045