(57)【要約】  本発明は、Ｒ−７−（３−アミノメチル−４−メトキシイミノ−３−メチル−ピロリジン−１−イル）−１−シクロプロピル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−［１，８］ナフチリジン−３−カルボキシル酸Ｌ−アスパラギン酸塩、その製造方法及びこれを含む抗菌用薬学的組成物に関し、前記Ｒ−７−（３−アミノメチル−４−メトキシイミノ−３−メチル−ピロリジン−１−イル）−１−シクロプロピル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−［１，８］ナフチリジン−３−カルボキシル酸Ｌ−アスパラギン酸塩は、従来使用された塩酸塩及び他の塩（Ｄ−アスパラギン酸塩、リン酸塩）に比べ、溶解度が高く、毒性が低くて、抗菌剤として副作用が減少され、経口用及び注射用に有用に使用することができる。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記化学式１で表されることを特徴とするＲ−７−（３−アミノメチル−４−メトキシイミノ−３−メチル−ピロリジン−１−イル）−１−シクロプロピル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−［１，８］ナフチリジン−３−カルボキシル酸のＬ−アスパラギン酸塩。
【化１】
2013500251.tif 000010
【請求項２】
結晶形形態である請求項１に記載のＬ−アスパラギン酸塩。
【請求項３】
下記反応式１で表されるように、不活性有機溶媒の中でＲ−７−（３−アミノメチル−４−メトキシイミノ−３−メチル−ピロリジン−１−イル）−１−シクロプロピル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−［１，８］ナフチリジン−３−カルボキシル酸とＬ−アスパラギン酸とを反応させる段階を含むことを特徴とするＲ−７−（３−アミノメチル−４−メトキシイミノ−３−メチル−ピロリジン−１−イル）−１−シクロプロピル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−［１，８］ナフチリジン−３−カルボキシル酸のＬ−アスパラギン酸塩の製造方法。
【化２】
2013500251.tif 000011
【請求項４】
不活性有機溶媒が、エチルアセテート、メタノール、エタノール、イソプロパノール、アセトン、アセトニトリル、ヘキサン、イソプロピルエーテル及び水からなる群から選択される請求項３に記載の製造方法。
【請求項５】
不活性有機溶媒が、エタノールである請求項３に記載の製造方法。
【請求項６】
不活性有機溶媒の使用量が、Ｒ−７−（３−アミノメチル−４−メトキシイミノ−３−メチル−ピロリジン−１−イル）−１−シクロプロピル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−［１，８］ナフチリジン−３−カルボキシル酸の重量（ｇ）に対し、１０倍〜２０倍の容量（ｍＬ）に該当する量である請求項３に記載の製造方法。
【請求項７】
Ｌ−アスパラギン酸を、Ｒ−７−（３−アミノメチル−４−メトキシイミノ−３−メチル−ピロリジン−１−イル）−１−シクロプロピル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−［１，８］ナフチリジン−３−カルボキシル酸１当量に対し、０．９当量〜２．５当量添加する請求項３に記載の製造方法。
【請求項８】
反応が、３０℃〜７０℃で１０分間〜５時間行われる請求項３に記載の製造方法。
【請求項９】
請求項１に記載のＲ−７−（３−アミノメチル−４−メトキシイミノ−３−メチル−ピロリジン−１−イル）−１−シクロプロピル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−［１，８］ナフチリジン−３−カルボキシル酸のＬ−アスパラギン酸塩を有効成分として含有することを特徴とする抗菌用薬学的組成物。
【請求項１０】
組成物が、経口用又は注射用に剤形化される請求項９に記載の抗菌用薬学的組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、Ｒ−７−（３−アミノメチル−４−メトキシイミノ−３−メチル−ピロリジン−１−イル）−１−シクロプロピル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−［１，８］ナフチリジン−３−カルボキシル酸Ｌ−アスパラギン酸塩、その製造方法及びこれを含む抗菌用薬学的組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
キノロンカルボキシル酸誘導体は、合成抗菌剤として強力で且つ広範囲な抗菌力を示し、人間と動物の感染疾病に非常に有用であるとよく知られている。キノロン系抗菌剤としてノルフロキサシン、オフロキサシン、シプロフロキサシンなどが、現在人間の疾病治療に非常に有用に使用されており、その効果が認められている。しかし、このような薬物は、グラム陰性菌に対しては優れた抗菌作用を示すが、グラム陽性菌に対しては、普通であるかあるいは多少低い抗菌力を示す問題点がある。したがって、既存のキノロン系抗菌剤が有しているこのような問題点を克服するための研究が多様に進行されてきて、その結果、スパルフロキサシンが、グラム陽性菌に一歩進んだ抗菌力を示す代表的な例として開発された。しかし、この化合物も、連鎖状球菌（ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉ）を始めとして、メチシリン耐性ブドウ球菌（ｍｅｔｈｉｃｉｌｌｉｎ  ｒｅｓｉｓｔａｎｔ  Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ，  ＭＲＳＡ）及び現在漸増しているキノロン耐性菌株には依然と弱い抗菌力を示す。前記言及された菌株は、呼吸器感染の原因菌としてよく知られている。したがって、このような菌株に対して優れた抗菌力を奏する、より改善されたキノロン系抗菌剤の必要性が台頭されている。
【０００３】
前記キノロン系抗菌剤のうち、Ｒ−７−（３−アミノメチル−４−メトキシイミノ−３−メチル−ピロリジン−１−イル）−１−シクロプロピル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−［１，８］ナフチリジン−３−カルボキシル酸は、グラム陽性菌、グラム陰性菌、メチシリン耐性菌及び既存のキノロン耐性菌株に対して非常に優れた抗菌力を示す。
【０００４】
一般に、薬学的組成物に使用される活性成分が水又は広範囲なｐＨ範囲の水溶液に対する溶解度が大きくなければならないということは、当業者に周知のことである。したがって、前記Ｒ−７−（３−アミノメチル−４−メトキシイミノ−３−メチル−ピロリジン−１−イル）−１−シクロプロピル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−［１，８］ナフチリジン−３−カルボキシル酸の生体利用率を高めるためには、より優れた溶解度を有する塩の開発が必要である。
【０００５】
本発明者らは、特許文献１にＲ−７−（３−アミノメチル−４−メトキシイミノ−３−メチル−ピロリジン−１−イル）−１−シクロプロピル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−［１，８］ナフチリジン−３−カルボキシル酸の多様な塩を開示している。この際使用される酸の例としては、塩酸、リン酸、硫酸などの無機酸と、メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、酢酸、クエン酸、マレイン酸、コハク酸、シュウ酸、安息香酸、酒石酸、フマル酸、マンデル酸、乳酸、グリコール酸、グルコン酸、ガラクツロン酸、グルタミン酸などの有機酸があり、ナトリウムイオン、カリウムイオンなどのアルカリ金属イオンもある。しかし、一般にＲ−７−（３−アミノメチル−４−メトキシイミノ−３−メチル−ピロリジン−１−イル）−１−シクロプロピル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−［１，８］ナフチリジン−３−カルボキシル酸の薬学的に許容可能な塩としては、塩酸塩を主に使用している。
【０００６】
一方、Ｌ−アスパラギン酸は、食品添加物に使用可能と米国ＦＤＡから承認されて、安全に広く使用されており、安定した無色液体であって、吸湿性及び腐食性がなく、有害でないため、製造上安全性があって、取り扱いが容易であるため、大量生産にも容易に使用することができる。また、肝解毒、ミネラルの吸収補助、ＤＮＡとＲＮＡの機能強化及び免疫能を強化すると知られている。しかし、単独投与時には、溶解度と体内吸収が低くて、このような用途で過量投与してもその効果が微弱であって、従来は薬学的に許容可能な塩として使用されなかった。
【０００７】
本発明者らは、前記Ｒ−７−（３−アミノメチル−４−メトキシイミノ−３−メチル−ピロリジン−１−イル）−１−シクロプロピル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−［１，８］ナフチリジン−３−カルボキシル酸の生体利用率を高めるためのより優れた溶解度を有する塩を開発するために研究した結果、Ｒ−７−（３−アミノメチル−４−メトキシイミノ−３−メチル−ピロリジン−１−イル）−１−シクロプロピル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−［１，８］ナフチリジン−３−カルボキシル酸のＬ−アスパラギン酸塩を製造し、前記Ｌ−アスパラギン酸塩が、塩酸塩及びＤ−アスパラギン酸塩に比べて、溶解度に優れているだけではなく、安定性などの物理学的性質にも優れており、アスパラギン酸が塩の形態で容易に溶解されて体内吸収され、毒性が他の塩に比べて低いことを確認し、本発明を完成した。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】大韓民国公開特許公報２００１−００２９６９８号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明の１つの目的は、Ｒ−７−（３−アミノメチル−４−メトキシイミノ−３−メチル−ピロリジン−１−イル）−１−シクロプロピル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−［１，８］ナフチリジン−３−カルボキシル酸のＬ−アスパラギン酸塩を提供することにある。
【００１０】
本発明の他の目的は、前記Ｒ−７−（３−アミノメチル−４−メトキシイミノ−３−メチル−ピロリジン−１−イル）−１−シクロプロピル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−［１，８］ナフチリジン−３−カルボキシル酸のＬ−アスパラギン酸塩の製造方法を提供することにある。
【００１１】
本発明のまた他の目的は、前記Ｒ−７−（３−アミノメチル−４−メトキシイミノ−３−メチル−ピロリジン−１−イル）−１−シクロプロピル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−［１，８］ナフチリジン−３−カルボキシル酸のＬ−アスパラギン酸塩を有効成分として含有する抗菌用薬学的組成物を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
上記目的を達成するために、本発明は、Ｒ−７−（３−アミノメチル−４−メトキシイミノ−３−メチル−ピロリジン−１−イル）−１−シクロプロピル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−［１，８］ナフチリジン−３−カルボキシル酸のＬ−アスパラギン酸塩、その製造方法及びこれを有効成分として含む抗菌用薬学的組成物を提供する。
【発明の効果】
【００１３】
本発明のＲ−７−（３−アミノメチル−４−メトキシイミノ−３−メチル−ピロリジン−１−イル）−１−シクロプロピル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−［１，８］ナフチリジン−３−カルボキシル酸のＬ−アスパラギン酸塩は、塩酸塩に比べて溶解度が高く、他の塩（Ｄ−アスパラギン酸塩、塩酸塩、リン酸塩）に比べて毒性が低くて、抗菌剤として副作用が減少され、経口用及び注射用に有用に使用できる。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
本発明は、下記化学式１で表されるＲ−７−（３−アミノメチル−４−メトキシイミノ−３−メチル−ピロリジン−１−イル）−１−シクロプロピル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−［１，８］ナフチリジン−３−カルボキシル酸のＬ−アスパラギン酸塩を提供する。
【化１】
2013500251.tif 000002
【００１５】
本発明のＲ−７−（３−アミノメチル−４−メトキシイミノ−３−メチル−ピロリジン−１−イル）−１−シクロプロピル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−［１，８］ナフチリジン−３−カルボキシル酸Ｌ−アスパラギン酸塩は、結晶形又は非結晶形であって、結晶形形態がさらに好ましい。
【００１６】
また、本発明は、前記化学式１のＲ−７−（３−アミノメチル−４−メトキシイミノ−３−メチル−ピロリジン−１−イル）−１−シクロプロピル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−［１，８］ナフチリジン−３−カルボキシル酸Ｌ−アスパラギン酸塩の製造方法を提供する。
【００１７】
具体的に、本発明による製造方法は、下記反応式１で表されるように、不活性有機溶媒の中でＲ−７−（３−アミノメチル−４−メトキシイミノ−３−メチル−ピロリジン−１−イル）−１−シクロプロピル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−［１，８］ナフチリジン−３−カルボキシル酸とＬ−アスパラギン酸とを反応させる段階を含む。
【化１】
2013500251.tif 000003
【００１８】
本発明による製造方法に使用されるＬ−アスパラギン酸は、アステルパームの主成分原料として広く使用しており、安定した無色固体であって、吸湿性及び腐食性がなく、有害でないため、製造上安全性があり、取り扱いが容易であるため、大量生産にも容易に使用することができる。また、肝解毒、ミネラルの吸収補助、ＤＮＡとＲＮＡの機能強化及び免疫能を強化すると知られており、抗菌剤の使用に伴われる副作用を減少させる効果を期待することができる。
【００１９】
本発明の製造方法に使用される前記不活性有機溶媒としては、エチルアセテート、メタノール、エタノール、イソプロパノール、アセトン、アセトニトリル、ヘキサン、イソプロピルエーテル、水などが含まれ、これらの中でも、エタノールが最も好ましい。
【００２０】
以下、本発明の製造方法を具体的に説明する。
【００２１】
まず、Ｒ−７−（３−アミノメチル−４−メトキシイミノ−３−メチル−ピロリジン−１−イル）−１−シクロプロピル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−［１，８］ナフチリジン−３−カルボキシル酸を不活性有機溶媒に溶かす。この際、前記不活性有機溶媒の量は、Ｒ−７−（３−アミノメチル−４−メトキシイミノ−３−メチル−ピロリジン−１−イル）−１−シクロプロピル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−［１，８］ナフチリジン−３−カルボキシル酸の重量（ｇ）に対して、１０倍〜２０倍の容量（ｍＬ）に該当する量を使用することが好ましい。
【００２２】
Ｒ−７−（３−アミノメチル−４−メトキシイミノ−３−メチル−ピロリジン−１−イル）−１−シクロプロピル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−［１，８］ナフチリジン−３−カルボキシル酸１当量に対し、０．９当量〜２．５当量、好ましくは、１．０当量〜１．５当量のＬ−アスパラギン酸を加えて、３０℃〜７０℃、好ましくは、４０℃〜６０℃の反応温度で１０分間〜５時間、好ましくは、３０分間〜２時間反応し、Ｒ−７−（３−アミノメチル−４−メトキシイミノ−３−メチル−ピロリジン−１−イル）−１−シクロプロピル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−［１，８］ナフチリジン−３−カルボキシル酸Ｌ−アスパラギン酸塩を製造することができる。
【００２３】
上記のような製造方法により、前記化学式１のＲ−７−（３−アミノメチル−４−メトキシイミノ−３−メチル−ピロリジン−１−イル）−１−シクロプロピル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−［１，８］ナフチリジン−３−カルボキシル酸Ｌ−アスパラギン酸塩を８２％〜８３％以上の高い収率で製造することができる。
【００２４】
また、本発明は、前記化学式１のＲ−７−（３−アミノメチル−４−メトキシイミノ−３−メチル−ピロリジン−１−イル）−１−シクロプロピル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−［１，８］ナフチリジン−３−カルボキシル酸Ｌ−アスパラギン酸塩を有効成分として含有する抗菌用薬学的組成物を提供する。
【００２５】
また、本発明は、前記化学式１のＲ−７−（３−アミノメチル−４−メトキシイミノ−３−メチル−ピロリジン−１−イル）−１−シクロプロピル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−［１，８］ナフチリジン−３−カルボキシル酸のＬ−アスパラギン酸塩を、患者に必要な治療的有効量を投与することを含む細菌性疾患の治療方法を提供する。
【００２６】
また、本発明は、前記化学式１のＲ−７−（３−アミノメチル−４−メトキシイミノ−３−メチル−ピロリジン−１−イル）−１−シクロプロピル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−［１，８］ナフチリジン−３−カルボキシル酸のＬ−アスパラギン酸塩の抗菌剤剤形の製造における用途を提供する。
【００２７】
本発明のＲ−７−（３−アミノメチル−４−メトキシイミノ−３−メチル−ピロリジン−１−イル）−１−シクロプロピル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−［１，８］ナフチリジン−３−カルボキシル酸のＬ−アスパラギン酸塩は、Ｒ−７−（３−アミノメチル−４−メトキシイミノ−３−メチル−ピロリジン−１−イル）−１−シクロプロピル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−［１，８］ナフチリジン−３−カルボキシル酸、これの塩酸塩及びＤ−アスパラギン酸塩より溶解度に優れていることが分かり、特に蒸留水において、塩酸塩に比べ約２倍の高い溶解度を示すことが分かった（表１参照）。また、蒸留水において室温での含量変化がほとんどなくて、化学的安定性に優れており（表２参照）、半数致死量が高く表れて、毒性が相対的に低いことが分かった（表３参照）。さらに、生体内薬物動態実験では、塩酸塩と等しい薬物動態を示した（表４参照）。
【００２８】
したがって、本発明による前記Ｌ−アスパラギン酸塩は、抗菌剤として有用に使用できる。
【００２９】
本発明による前記Ｌ−アスパラギン酸塩を有効成分として含有する組成物は、一般的な医薬品製剤の形態で使用できる。
【００３０】
即ち、本発明による前記Ｌ−アスパラギン酸塩は、実際の臨床投与時に、経口又は非経口の様々な剤形で投与できる。また、製剤化する場合は、有効成分の他に、薬剤学的に許容可能な担体を１種以上含めて製造することができる。前記薬剤学的に許容可能な担体としては、食塩水、滅菌水、リンゲル液、緩衝食塩水、デキストロース溶液、マルトデキストリン溶液、グリセロール、エタノール及びこれらの成分の１成分以上を混合して使用することができ、必要に応じて、抗酸化剤、緩衝液、静菌剤など、他の通常の添加剤を添加することができる。
【００３１】
経口投与のための固形製剤としては、錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤などが含まれる。このような固形製剤は、化合物に少なくとも一つ以上の賦形剤、例えば、デンプン、カルシウムカーボネート、スクロース、ラクトース、ゼラチンなどを混ぜて調製される。また、単純な賦形剤の他に、ステアリン酸マグネシウム、タルクのような潤滑剤も使用される。
【００３２】
また、経口投与のための液状製剤は、懸濁剤、溶液、乳剤、シロップ剤などを含む。また、前記液状製剤は、よく使用される単純希釈剤である水、リキッドパラフィンの他に、様々な賦形剤、例えば、湿潤剤、甘味剤、芳香剤、保存剤などを含む。非経口投与のための製剤には、滅菌された水溶液、非水性溶剤、懸濁剤、乳剤、凍結乾燥剤、坐剤が含まれる。前記非水性溶剤、前記懸濁溶剤としては、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブオイルのような植物性オイル、エチルオレートのような注射可能なエステルなどが使用できる。坐剤の基剤としては、ウィテップゾール（ｗｉｔｅｐｓｏｌ）、マクロゴール、ツイン（ｔｗｅｅｎ）６１、カカオ脂、ラウリン脂、グリセロゼラチンなどが使用できる。
【００３３】
さらに、本発明の薬学的組成物は、非経口で投与でき、非経口投与は、皮下注射、静脈注射又は筋肉内注射がある。非経口投与用剤形として製剤化するためには、前記化合物を安定剤又は緩衝剤と共に水で混合し、溶液又は懸濁液に製造し、これをアンプル又はバイアルの単位投与形に製剤する。
【００３４】
本発明による前記Ｌ−アスパラギン酸塩は、組成物総重量に対して、０．１重量％〜５０重量％含まれることが好ましい。しかし、上記のような組成は、必ずこれに限定されるものではなく、患者の状態、疾患の種類及び進行程度によって変わる。
【００３５】
本発明による前記Ｌ−アスパラギン酸塩の好ましい投与量は、患者の状態及び体重、疾病の程度、薬物形態、投与経路及び期間によって変わるが、当業者により適宜選択できる。しかし、好ましい効果のために、１日０．０１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｇ／ｋｇ、好ましくは、１ｍｇ／ｋｇ〜１ｇ／ｋｇ投与することが好ましい。投与は、一日一回投与しても、数回分けて投与してもよい。
【実施例】
【００３６】
以下、本発明を実施例により詳細に説明するが、本発明がこれらの実施例に限定されるものではない。
【００３７】
（実施例１）  Ｒ−７−（３−アミノメチル−４−メトキシイミノ−３−メチル−ピロリジン−１−イル）−１−シクロプロピル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−［１，８］ナフチリジン−３−カルボキシル酸Ｌ−アスパラギン酸塩の製造
Ｒ−７−（３−アミノメチル−４−メトキシイミノ−３−メチル−ピロリジン−１−イル）−１−シクロプロピル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−［１，８］ナフチリジン−３−カルボキシル酸７．８ｇにメタノール２３ｍＬと水２３ｍＬとを加えて、更にＬ−アスパラギン酸２．５７ｇを加えた後、４５℃で１時間攪拌した。反応混合物の固体をろ過した後、固体にエタノール７８ｍＬを添加して、５℃〜１０℃で２時間攪拌した後、ろ過及び乾燥して目的化合物８．５ｇを得た（収率：８２％）。
１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ，  ｐｐｍ）：  １．０３（ｄ，  ２Ｈ，  Ｊ＝４．００Ｈｚ），  １．２７（ｍ，  ２Ｈ），  １．４７（ｓ，  ３Ｈ），  ２．６７（ｄｄ，  １Ｈ，  Ｊ＝１７．５９Ｈｚ，  Ｊ＝８．８０Ｈｚ），  ２．７７（ｄｄ，  １Ｈ，  Ｊ＝２２．０３Ｈｚ，  Ｊ＝３．６４Ｈｚ），  ３．３４（ｓ，  ２Ｈ），  ３．６３（ｍ，  １Ｈ），  ３．８６（ｍ，  １Ｈ），  ３．９６（ｍ，  ５Ｈ），  ４．６７（ｓ，  ２Ｈ），  ７．６６（ｄ，  １Ｈ，  Ｊ＝１２．４３Ｈｚ），  ８．５４（ｓ，  １Ｈ）．
融点（ｍ．ｐ．）：  １６４．２℃
【００３８】
（比較例１）  Ｒ−７−（３−アミノメチル−４−メトキシイミノ−３−メチル−ピロリジン−１−イル）−１−シクロプロピル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−［１，８］ナフチリジン−３−カルボキシル酸Ｄ−アスパラギン酸塩の製造
Ｒ−７−（３−アミノメチル−４−メトキシイミノ−３−メチル−ピロリジン−１−イル）−１−シクロプロピル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−［１，８］ナフチリジン−３−カルボキシル酸１０ｇにメタノール３０ｍＬと蒸留水３０ｍＬとを加えて、更にＤ−アスパラギン酸３．３ｇを添加した後、４５℃で１時間攪拌した。反応混合物の固体をろ過した後、エタノール１００ｍＬを添加して、室温で３時間攪拌して生成された固体をろ過及び乾燥して目的化合物８．６７ｇを得た（収率：６５％）。
１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ，  ｐｐｍ）：  １．０６（２Ｈ，  ｄ，  Ｊ＝４．０４Ｈｚ），  １．３２（２Ｈ，  ｄ，  Ｊ＝６．９６Ｈｚ），  １．５１（  ３Ｈ，  ｓ），  ２．７３（１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ＝１７．５９Ｈｚ，  Ｊ＝８．８０Ｈｚ），  ２．８３（１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ＝２２．０３Ｈｚ，  Ｊ＝３．６４Ｈｚ），  ３．３８（１Ｈ，  ｓ），  ３．６５（２Ｈ，  ｍ），  ３．９０（１Ｈ，  ｍ），  ３．９９（４Ｈ，  ｍ），  ４．１０（１Ｈ，  ｍ），  ４．７１（２Ｈ，  ｓ），  ７．６８（１Ｈ，  ｄ，  Ｊ＝１２．２７Ｈｚ），  ８．５７（１Ｈ，  ｓ）．
融点（ｍ．ｐ．）：  １６３．３℃
【００３９】
（比較例２）  Ｒ−７−（３−アミノメチル−４−メトキシイミノ−３−メチル−ピロリジン−１−イル）−１−シクロプロピル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−［１，８］ナフチリジン−３−カルボキシル酸の製造
大韓民国公開特許公報２００１−００２９６９８号に記載の方法によって、（＋）−７−（３−アミノメチル−４−メトキシイミノ−３−メチル−ピロリジン−１−イル）−１−シクロプロピル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−［１，８］ナフチリジン−３−カルボキシル酸を製造した。
【００４０】
（比較例３）  Ｒ−７−（３−アミノメチル−４−メトキシイミノ−３−メチル−ピロリジン−１−イル）−１−シクロプロピル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−［１，８］ナフチリジン−３−カルボキシル酸塩酸塩の製造
大韓民国公開特許公報２００１−００２９６９８号に記載の方法によって、（＋）−７−（３−アミノメチル−４−メトキシイミノ−３−メチル−ピロリジン−１−イル）−１−シクロプロピル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−［１，８］ナフチリジン−３−カルボキシル酸塩酸塩を製造した。
【００４１】
（比較例４）  Ｒ−７−（３−アミノメチル−４−メトキシイミノ−３−メチル−ピロリジン−１−イル）−１−シクロプロピル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−［１，８］ナフチリジン−３−カルボキシル酸メタンスルホン酸塩の製造
トリフルオロ酢酸４０ｍＬを５℃〜１０℃に冷却させて、これに７−［３−（ｔ−ブトキシカルボニルアミノ−メチル）−４−メトキシイミノ−３−メチル−ピロリジン−１−イル］−１−シクロプロピル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−［１，８］ナフチリジン−３−カルボキシル酸２０ｇを添加した後、１時間３０分間攪拌した。この反応混合物にイソプロパノール１４０ｍＬとメタンスルホン酸３．１ｍＬとを添加して、同じ温度で２時間攪拌した。反応混合物の生成された固体をろ過及び乾燥し、目的化合物１０．２ｇを得た（収率：５１％）。
１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ，  ｐｐｍ）：  １．０５（２Ｈ，  ｄ，  Ｊ＝３．８４Ｈｚ），  １．３２（２Ｈ，  ｄ，  Ｊ＝７．１６Ｈｚ），  １．５１（ｓ，  ３Ｈ），  ２．８０（３Ｈ，  ｓ），  ３．３８（２Ｈ，  ｓ），  ３．６７（１Ｈ，  ｍ），  ３．９８（４Ｈ，  ｍ），  ４．１０（１Ｈ，  ｍ），  ４．７０（２Ｈ，  ｓ），  ７．６５（２Ｈ，  ｄ，  Ｊ＝１２．２７Ｈｚ），  ８．５４（１Ｈ，  ｓ）．
融点（ｍ．ｐ．）：  １９３．３℃
【００４２】
（比較例５）  Ｒ−７−（３−アミノメチル−４−メトキシイミノ−３−メチル−ピロリジン−１−イル）−１−シクロプロピル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−［１，８］ナフチリジン−３−カルボキシル酸ギ酸塩の製造
Ｒ−７−（３−アミノメチル−４−メトキシイミノ−３−メチル−ピロリジン−１−イル）−１−シクロプロピル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−［１，８］ナフチリジン−３−カルボキシル酸１０ｇに精製水５０ｍＬ、エタノール５０ｍＬ及びギ酸１．１ｍＬを加えて、５５℃〜６０℃で１時間攪拌した。その後、反応混合物をろ過して、ろ液にエタノール４０ｍＬを添加して室温に冷却させた後、室温で４時間攪拌し、生成された固体をろ過した後、乾燥して、目的化合物６．４ｇを得た（収率：５７％）。
１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ，  ｐｐｍ）：  １．０３（２Ｈ，  ｄ，  Ｊ＝４．０４Ｈｚ），  １．３１（２Ｈ，  ｍ），  １．４９（３Ｈ，  ｓ），  ３．３７（２Ｈ，  ｓ），  ３．６２（１Ｈ，  ｍ），  ３．９５（４Ｈ，  ｍ），  ４．０３（１Ｈ，  ｍ），  ４．６６（１Ｈ，  ｓ），  ７．６１（２Ｈ，  ｄ，  Ｊ＝１２．４３Ｈｚ），  ８．４５（１Ｈ，  ｓ），  ８．５０（１Ｈ，  ｓ）．
融点（ｍ．ｐ．）：  １９５．４℃
【００４３】
（比較例６）  Ｒ−７−（３−アミノメチル−４−メトキシイミノ−３−メチル−ピロリジン−１−イル）−１−シクロプロピル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−［１，８］ナフチリジン−３−カルボキシル酸リン酸塩の製造
リン酸４１ｍＬ、及び蒸留水４１ｍＬに、Ｒ−７−（３−アミノメチル−４−メトキシイミノ−３−メチル−ピロリジン−１−イル）−１−シクロプロピル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−［１，８］ナフチリジン−３−カルボキシル酸８．０４ｇを加えて、５５℃〜６０℃で２時間攪拌した。その後、反応混合物をろ過して、ろ液を室温に冷却させた後、エタノール３３ｍＬを添加して５℃〜１０℃で１時間攪拌した後、生成された固体をろ過して、乾燥し、目的化合物８．５４ｇを得た（収率：８５％）。
１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ，  ｐｐｍ）：  １．０６（２Ｈ，  ｄ，  Ｊ＝６．０４Ｈｚ），  １．３２（２Ｈ，  ｄ，  Ｊ＝６．９６Ｈｚ），  １．５１（３Ｈ，  ｓ），  ３．３８（２Ｈ，  ｓ），  ３．６６（１Ｈ，  ｍ），  ３．９９（４Ｈ，  ｓ），  ４．１０（１Ｈ，  ｄ，  Ｊ＝１２．２７Ｈｚ），  ４．７０（２Ｈ，  ｓ），  ７．６５（１Ｈ，  ｄ，  Ｊ＝１２．２３Ｈｚ），  ８．５４（１Ｈ，  ｓ）．
融点（ｍ．ｐ．）：  １６５．４℃
【００４４】
（比較例７）  Ｒ−７−（３−アミノメチル−４−メトキシイミノ−３−メチル−ピロリジン−１−イル）−１−シクロプロピル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−［１，８］ナフチリジン−３−カルボキシル酸ｐ−トルエンスルホン酸塩の製造
ｐ−トルエンスルホン酸６ｇをエタノール５３ｍＬ及び蒸留水５３ｍＬに添加した後、Ｒ−７−（３−アミノメチル−４−メトキシイミノ−３−メチル−ピロリジン−１−イル）−１−シクロプロピル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−［１，８］ナフチリジン−３−カルボキシル酸１０．５１ｇを加えて、５５℃〜５８℃で２時間攪拌した。その後、反応混合物をろ過して、ろ液を５℃〜１０℃に冷却させた後、エタノール５２ｍＬを添加して１時間攪拌した。生成された固体をろ過して、乾燥し、目的化合物８．２４ｇを得た（収率：５５％）。
１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ，  ｐｐｍ）：  １．０６（２Ｈ，  ｄ，  Ｊ＝６．４４Ｈｚ），  １．３１（２Ｈ，  ｄ，  Ｊ＝６．９６Ｈｚ），  １．５０（３Ｈ，  ｓ），  ２．３５（３Ｈ，  ｓ），  ３．３７（２Ｈ，  ｓ），  ３．６６（１Ｈ，  ｍ），  ３．９９（４Ｈ，  ｓ），  ４．１１（１Ｈ，  ｄ，  Ｊ＝１２．１Ｈｚ），  ４．７０（２Ｈ，  ｓ），  ７．３１（２Ｈ，  ｄ，  Ｊ＝８．４４Ｈｚ），  ７．６３（２Ｈ，  ｄ，  Ｊ＝８．０４Ｈｚ），  ７．６８（１Ｈ，  ｄ，  Ｊ＝１２．２Ｈｚ），  ８．５８（１Ｈ，  ｓ）．
融点（ｍ．ｐ．）：  １８７．２℃
【００４５】
（実験例１）  溶解度試験
前記実施例及び比較例で製造したＲ−７−（３−アミノメチル−４−メトキシイミノ−３−メチル−ピロリジン−１−イル）−１−シクロプロピル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−［１，８］ナフチリジン−３−カルボキシル酸Ｌ−アスパラギン酸塩、Ｄ−アスパラギン酸塩、メタンスルホン酸塩、ギ酸塩、リン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、及び塩酸塩、並びにＲ−７−（３−アミノメチル−４−メトキシイミノ−３−メチル−ピロリジン−１−イル）−１−シクロプロピル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−［１，８］ナフチリジン−３−カルボキシル酸に対して、室温で溶解度（ｍｇ／ｍＬ）を測定した。結果を表１に示した。
【００４６】
【表１】
2013500251.tif 000004
【００４７】
表１に示したように、Ｒ−７−（３−アミノメチル−４−メトキシイミノ−３−メチル−ピロリジン−１−イル）−１−シクロプロピル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−［１，８］ナフチリジン−３−カルボキシル酸のフリー形態は、溶解度が２．７９ｍｇ／ｍＬであって、水にほとんど溶解されないが、本発明によるＬ−アスパラギン酸塩は、溶解度が１８９．７８ｍｇ／ｍＬであって、優れた溶解度を示した。特に、本発明によるＬ−アスパラギン酸塩は、光学異性体であるＤ−アスパラギン酸塩の溶解度（１１８．６４ｍｇ／ｍＬ）よりも高い溶解度を示した。また、塩酸塩の溶解度（９３．３０ｍｇ／ｍＬ）より約２倍高い溶解度を示し、また、比較例の他の塩よりも優れた溶解度を示した。したがって、本発明によるＬ−アスパラギン酸塩は、溶解度に優れており、医薬品として有用に使用できる。
【００４８】
（実験例２）  安定性試験
前記実施例及び比較例で製造したＲ−７−（３−アミノメチル−４−メトキシイミノ−３−メチル−ピロリジン−１−イル）−１−シクロプロピル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−［１，８］ナフチリジン−３−カルボキシル酸のそれぞれの塩を３０ｍｇずつ蒸留水１００ｍＬに溶かした後、室温と６０℃とで安定性試験を行った。結果を表２に示した。
【００４９】
【表２】
2013500251.tif 000005
【００５０】
表２に示されたように、本発明によるＬ−アスパラギン酸塩は、室温における含量変化がほとんどなく、化学的に安定であった。
【００５１】
（実験例３）  毒性試験
本発明によるＬ−アスパラギン酸塩の毒性程度を調べるために、下記のような実験を行った。
【００５２】
実験動物としては、雄のＩＣＲマウスを使用した。雄性ＩＣＲマウスを５匹ずつ６回投与容量群に分株して、２４時間水を除いては断食させた後、前記実施例１で製造したＲ−７−（３−アミノメチル−４−メトキシイミノ−３−メチル−ピロリジン−１−イル）−１−シクロプロピル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−［１，８］ナフチリジン−３−カルボキシル酸Ｌ−アスパラギン酸塩、及び比較例で製造した他の塩（Ｄ−アスパラギン酸塩、リン酸塩、塩酸塩）を、それぞれ５００、２５０、１２５及び０ｍｇ／ｋｇを単回腹腔投与（１０ｍＬ／ｋｇ）して１４日間で半数致死量（ＬＤ５０）を観察した。結果を表３に示した。
【００５３】
【表３】
2013500251.tif 000006
【００５４】
表３に示されたように、本発明のＬ−アスパラギン酸塩は、他の塩（Ｄ−アスパラギン酸塩、リン酸塩、塩酸塩）に比べて、半数致死量が高く表れて、毒性が少ないことが分かる。
【００５５】
（実験例４）  生体内遺伝毒性試験
生体内遺伝毒性を分析するために、Ｌ−アスパラギン酸塩及び塩酸塩の微小核試験を雄性マウスで以下のように行った。
【００５６】
Ｌ−アスパラギン酸塩を２回腹腔内投与して２４時間後、又は、シクロホスファミド（ＣＰＡ）を１回腹腔内投与して２４時間後に、全ての動物を犠牲させて、５００個の赤血球からＰＣＥ／（（ＰＣＥ＋正常体赤血球（ＮＣＥ））比率を計算して、２，０００ＰＣＥｓから一つ又はそれ以上の核のある多染性赤血球（ＭＮＰＣＥ）数の変化を計算した。担体としての蒸留水２０ｍＬに溶解された６０ｍｇ／ｋｇの容量を本実験で最も高い容量として選択したが、これは、マウス微小核試験でキノロン系抗生剤が陽性の結果を示したからであり、２倍の比率として３０、１５及び７．５ｍｇ／ｋｇを投与した。また、正常対照群及び陽性対照群（ＣＰＡ  ７０ｍｇ／ｋｇ）を追加した。
【００５７】
その結果、３０、１５及び７．５ｍｇ／ｋｇ  Ｌ−アスパラギン酸塩処理群でＭＮＰＣＥ数は、正常対照群に比べ、有意な変化を示さなかった。しかし、７．５ｍｇ／ｋｇ塩酸塩を処理した群では、ＭＮＰＣＥの数が有意に増加した。
【００５８】
（実験例５）  生体内薬物動態試験
本発明によるＬ−アスパラギン酸塩及び塩酸塩をＳＤラットにそれぞれ経口又は静脈内投与して、定められた時間に採血し、生体内薬物動態を比較した。薬物動態学的パラメーターを表４に示した。
【００５９】
この際、Ｃｍａｘ：最高血中濃度、Ｔｍａｘ：最高血中濃度到達時間、Ｔ１／２：薬物の生体内半減期、ＡＵＣ０−ｔ：測定時間までの血中濃度−時間曲線下面積、ＡＵＣ０−ｉｎｆ：血中濃度−時間曲線下面積である。
【００６０】
【表４】
2013500251.tif 000007
＊後外挿による推定値（Ｃ０）
ａ本結果は、ＡＵＣ０−Ｔ比率で計算される。
【００６１】
塩酸塩及びＬ−アスパラギン酸塩の薬物動態学的パラメーターが表４に記載されている。統計的有意性はなかったが、本発明のＬ−アスパラギン酸塩の平均経口生体利用率（ＢＡ、％）は、相対的に塩酸塩より高かった。塩酸塩と本発明のＬ−アスパラギン酸塩のＢＡ値は、それぞれ５０．９６％及び７０．０５％であった。
【００６２】
（実験例６）  生体内組織分布試験
本発明によるＬ−アスパラギン酸塩と塩酸塩の臓器別薬物の分布程度を確認するために、生体内組織分布試験を行った。８週齢のＩＣＲマウスを購入して、実験室で適応させた後、それぞれの塩を１００ｍｇ／ｋｇ容量で経口投与した後、定められた時間に放血致死させて、各臓器を摘出し、臓器別に濃度を測定した。塩酸塩及びＬ−アスパラギン酸塩の投与後、時間別の各臓器の濃度及びこれによる時間−濃度曲線下面積（ＡＵＣ）と組織透過比を表５及び６にそれぞれ示した。
【００６３】
ここで、「Ｐ  ｒａｔｉｏ」は、筋肉透過率であって、筋肉内ＡＵＣ／血漿内ＡＵＣで計算される。
【００６４】
【表５】
2013500251.tif 000008
【００６５】
【表６】
2013500251.tif 000009
【００６６】
表５及び６に示されたように、本発明によるＬ−アスパラギン酸及び塩酸塩を経口投与した結果、臓器組織内に分布される薬物の濃度及びＡＵＣは、塩の形態によって大きい差がなく、本発明によるＬ−アスパラギン酸がよく透過される臓器は、肝臓、腎臓、脳、脾臓、肺、胸腺、心臓、筋肉及び睾丸の順に確認された。
【００６７】
（製剤例）  薬学的製剤の製造
（１−１）散剤の製造
化学式１の化合物    ２ｇ
乳糖                １ｇ
上記の成分を混合した後、気密布に充填して散剤を製造した。
【００６８】
（１−２）錠剤の製造
化学式１の化合物          １００
玉蜀黍デンプン            １００
乳糖                      １００
ステアリン酸マグネシウム      ２
上記の成分を混合した後、通常の錠剤の製造方法によって打錠し、錠剤を製造した。
【００６９】
（１−３）カプセル剤の製造
化学式１の化合物          １００
玉蜀黍デンプン            １００
乳糖                      １００
ステアリン酸マグネシウム      ２
上記の成分を混合した後、通常のカプセル剤の製造方法によってゼラチンカプセルに充填し、カプセル剤を製造した。
【００７０】
（１−４）注射液剤の製造
化学式１の化合物              １０／
薄い塩酸ＢＰ                  ｐＨ３．５になるまで
注射用塩化ナトリウムＢＰ      最大１
【００７１】
適切な容積の注射用塩化ナトリウムＢＰに化学式１の化合物を溶解させて、生成された溶液のｐＨを、薄い塩酸ＢＰを使用してｐＨ３．５に調節し、注射用塩化ナトリウムＢＰを使用して容積を調節して、十分混合した。溶液を、透明ガラスの５タイプＩアンプルに充填して、ガラスを溶解させることにより、空気の上部格子下に封入させて、１２０℃で１５分間以上オートクレーブさせて殺菌し、注射液剤を製造した。
【国際調査報告】
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2013500251.tif 000013