(57)【要約】  本発明は、ＣＮＳへの治療用分子又は診断用分子の移行を促進するための、シャトル剤及び同一物を使用する方法を提供する。
2013518054.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＬＲＰ８結合分子及び少なくとも１つのＣＮＳ活性化合物を含む組成物。
【請求項２】
ＬＲＰ８結合分子が、少なくとも１つのＣＮＳ活性化合物にコンジュゲートしている、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
コンジュゲーションが、ＬＲＰ８結合分子および少なくとも１つのＣＮＳ活性化合物との間の共有結合である、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
コンジュゲーションがリンカーによる、請求項２に記載の組成物。
【請求項５】
ＬＲＰ８結合分子が、ＬＲＰ８の天然リガンド、ＬＲＰ８の天然リガンドの断片、ＬＲＰ８の天然リガンドの修飾された形態、及びＬＲＰ８の天然リガンドの修飾された形態の断片から選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
ＬＲＰ８の天然リガンドがリーリン及びセレノプロテインＰから選択される、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
ＬＲＰ８結合分子が抗体である、請求項１に記載の組成物。
【請求項８】
抗体が多重特異性抗体である、請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
抗体が、モノクローナル抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、及びＬＲＰ８に結合する抗体断片から選択される請求項７に記載の組成物。
【請求項１０】
ＬＲＰ８結合分子が、ＬＲＰ８への結合において、ＬＲＰ８の１つ以上の天然リガンドと競合しない、請求項１に記載の組成物。
【請求項１１】
ＬＲＰ８結合分子が、ＬＲＰ８への結合において、ＬＲＰ８の１つ以上の天然リガンドと競合する、請求項１に記載の組成物。
【請求項１２】
ＬＲＰ８結合分子がＬＲＰ８の細胞外ドメインに結合する請求項１に記載の組成物。
【請求項１３】
ＬＲＰ８結合分子が脳で発現されたＬＲＰ８に優先的に結合する請求項１に記載の組成物。
【請求項１４】
ＣＮＳ活性化合物が、治療用化合物及び診断用化合物から選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項１５】
治療用化合物が、神経栄養因子、及び神経障害、アミロイドーシス、癌、眼の疾患又は障害、ウイルス又は細菌感染、炎症、虚血、神経変性疾患、発作、行動障害、及びリソソーム蓄積症の一つ以上を治療又は予防するための化合物から選択される、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
治療用化合物が、パーキンソン病を治療するための化合物及びアルツハイマー病を治療するための化合物から選択される、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１７】
診断用化合物が、ＣＮＳ標的に特異的に結合する標識されたペプチド又は抗体である、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１８】
ＬＲＰ８へのＬＲＰ結合分子の結合が、血液脳関門を通過するＣＮＳ活性化合物の輸送をもたらす、請求項１に記載の組成物。
【請求項１９】
請求項１に記載の組成物及び薬学的に許容される担体を含む薬学的製剤。
【請求項２０】
追加の治療剤を更に含む請求項１９に記載の薬学的製剤。
【請求項２１】
医薬としての使用のための、請求項１から１８の何れかに記載の組成物。
【請求項２２】
ＬＲＰ８の発現、安定性又は活性を調節することにより、哺乳動物における血液脳関門を通過するＣＮＳ活性化合物の輸送の調節に使用するための請求項１から１８の何れかに記載の組成物。
【請求項２３】
ＬＲＰ８を標的とすることで、タイトジャンクションを含む血管内皮細胞層を横切るＣＮＳ活性化合物の輸送の調節に使用するための請求項１から１８の何れかに記載の組成物。
【請求項２４】
ＣＮＳ疾患又はＣＮＳ障害の重症度、持続時間、又は症状の減少又は予防における使用のための、請求項１から１８の何れかに記載の組成物。
【請求項２５】
ＣＮＳ疾患又はＣＮＳ障害の診断における使用のための、請求項１から１８の何れかに記載の組成物。
【請求項２６】
ＣＮＳ疾患又はＣＮＳ障害のステージ分類における使用のための、請求項１から１８の何れかに記載の組成物。
【請求項２７】
医薬の製造における、請求項１から１８の何れかに記載の組成物の使用。
【請求項２８】
医薬が、ＬＲＰ８の発現、安定性又は活性を調節することにより、哺乳動物における血液脳関門を通過するＣＮＳ活性化合物の輸送の調節に使用されるためのものである、請求項２７の使用。
【請求項２９】
医薬が、ＬＲＰ８を標的とすることで、タイトジャンクションを含む血管内皮細胞層を横切るＣＮＳ活性化合物の輸送の調節に使用されるためのものである、請求項２７の使用。
【請求項３０】
医薬が、ＣＮＳ疾患又はＣＮＳ障害の重症度、持続時間、又は症状の減少又は予防における使用のためのものである、請求項２７の使用。
【請求項３１】
医薬が、ＣＮＳ疾患又はＣＮＳ障害の診断における使用のためのものである、請求項２７の使用。
【請求項３２】
医薬が、ＣＮＳ疾患又はＣＮＳ障害の診断におけるステージ分類における使用のためのものである、請求項２７の使用。
【発明の詳細な説明】
【発明の開示】
【０００１】
発明の分野
本発明は、ＬＲＰ８結合シャトル剤及び同じものを使用する方法に関する。また、本発明は、ＣＮＳへの治療用又は診断用分子の移行を促進する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
神経疾患は、世界的に死亡数及び身体障害の主要な原因を表している。広範な進歩にもかかわらず、現在の治療法の選択肢は、多くの面で制限されたままである。この制限の理由の一つは、脳は、分子の特定の種類にのみアクセスを許容することである。この制限されたアクセスは、脳の保護を促進するが、それはまた、多くの潜在的に有用な化合物が、中枢神経系（ＣＮＳ）に浸透することができず、従って治療活性を発揮することができないか、又はＣＮＳの特定の神経疾患やその他の疾患の診断に用いることができないないことを意味する。本発明は、血液脳関門（ＢＢＢ）を通過するその能力が他の方法では制限されている所望の分子について、ＣＮＳの標的到達性を提供する上で進歩を示している。また、本発明は、このような分子の送達における高い脳の選択性を達成するためのアプローチについて説明する。
【発明の概要】
【０００３】
本発明は、血液脳関門を通過するＣＮＳへの治療用及び診断用化合物の送達を容易にするための組成物および方法を提供する。一実施態様において、本発明は、ＬＲＰ８結合分子及び少なくとも一のＣＮＳ活性化合物を含む組成物を提供する。一態様において、ＬＲＰ８結合分子は、少なくとも１つのＣＮＳ活性化合物にコンジュゲートしている。一つのそうした態様では、コンジュゲーションはＬＲＰ８結合分子および少なくとも一のＣＮＳ活性化合物との間の共有結合である。他のそうした態様では、コンジュゲーションはリンカーによる。その他の態様では、ＬＲＰ８結合分子は、ＬＲＰ８の天然リガンド、ＬＲＰ８の天然リガンドの断片、ＬＲＰ８の天然リガンドの修飾された形態、及びＬＲＰ８の天然リガンドの修飾された形態の断片から選択される。一つのそうした態様では、ＬＲＰ８の天然リガンドはリーリン及びセレノプロテインＰから選択される。別の態様において、ＬＲＰ８結合分子は抗体である。一つのそうした態様では、抗体は、多重特異性抗体である。他のそうした態様では、抗体は、モノクローナル抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、及びＬＲＰ８を結合する抗体断片から選択される。
【０００４】
更なる態様では、ＬＲＰ８結合分子は、ＬＲＰ８への結合するために、ＬＲＰ８の一以上の天然リガンドと競合することはない。更なる態様では、ＬＲＰ８結合分子は、ＬＲＰ８への結合するために、ＬＲＰ８の一以上の天然リガンドと競合する。更なる態様では、ＬＲＰ８結合分子はＬＲＰ８の細胞外ドメインに結合する。更なる態様では、ＬＲＰ８結合分子は、脳で発現されたＬＲＰ８に優先的に結合する。
【０００５】
更なる態様では、ＣＮＳ活性化合物は、治療用化合物及び診断用化合物から選択される。一つのそうした態様では、治療用化合物は、神経障害、アミロイドーシス、癌、眼の疾患又は障害、ウイルスや細菌感染、炎症、虚血、神経変性疾患、発作、行動障害、及びリソソーム蓄積症の一つ以上を治療又は予防するための神経栄養因子及び化合物から選択される。一つのそうした態様では、治療用化合物は、パーキンソン病を治療するための化合物及びアルツハイマー病を治療するための化合物から選択される。他のそうした態様では、診断用化合物は、特にＣＮＳ標的に結合する標識されたペプチド又は抗体である。更なる態様では、ＬＲＰ８へのＬＲＰ−結合分子の結合は、血液脳関門を通過するＣＮＳ活性化合物の輸送をもたらす。
【０００６】
更なる実施態様において、本発明は、ＬＲＰ８結合分子及び少なくとも一つのＣＮＳ活性化合物及び薬学的に許容される担体を含む組成物を含む薬学的製剤を提供する。一態様において、薬学的製剤は更に付加的な治療剤を含む。
【０００７】
更なる実施態様において、本発明は、ＬＲＰ８の発現、安定性や活性を調節することにより、哺乳動物における血液脳関門を通過するＣＮＳ活性化合物の輸送を調節するための方法を提供する。一態様において、ターゲティングはＬＲＰ８結合分子を用いることにより、ＣＮＳ活性化合物の輸送が増加する。その他の態様において、ＬＲＰ８結合分子及びＣＮＳ活性化合物は、哺乳動物に同時に投与される。
【０００８】
その他の態様において、ＬＲＰ８結合分子は、ＣＮＳ活性化合物にコンジュゲートしている。一つのそうした態様では、ＬＲＰ８結合分子及びＣＮＳ活性化合物とのコンジュゲーションは、同じ多重特異性抗体内の異なる結合部分として、共有結合、リンカーによる結合から選択される。
【０００９】
更なる態様では、ＬＲＰ８結合分子は、ＬＲＰ８の天然リガンド、ＬＲＰ８の天然リガンドの断片、ＬＲＰ８の天然リガンドの修飾された形態、及びＬＲＰ８の天然リガンドの修飾された形態の断片から選択される。一つのそうした態様では、ＬＲＰ８の天然リガンドはリーリン及びセレノプロテインＰから選択される。更なる態様において、ＬＲＰ８結合分子は抗体である。一つのそうした態様では、抗体は、多重特異性抗体である。他のそうした態様では、抗体は、モノクローナル抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、及びＬＲＰ８を結合する抗体断片から選択される。
【００１０】
更なる態様では、ＬＲＰ８結合分子は、ＬＲＰ８への結合するために、ＬＲＰ８の一以上の天然リガンドと競合することはない。更なる態様では、ＬＲＰ８結合分子は、ＬＲＰ８への結合するために、ＬＲＰ８の一以上の天然リガンドと競合する。更なる態様では、ＬＲＰ８結合分子はＬＲＰ８の細胞外ドメインに結合する。更なる態様では、ＬＲＰ８結合分子は、好ましくは、脳で発現されたＬＲＰ８に結合する。
【００１１】
更なる態様では、ＣＮＳ活性化合物は、治療用化合物及び診断用化合物から選択される。一つのそうした態様では、治療用化合物は、神経障害、アミロイドーシス、癌、眼の疾患又は障害、ウイルスや細菌感染、炎症、虚血、神経変性疾患、発作、行動障害、及びリソソーム蓄積症の一つ以上を治療又は予防するための神経栄養因子及び化合物から選択される。その他のそうした態様では、治療用化合物は、パーキンソン病を治療するための化合物及びアルツハイマー病を治療するための化合物から選択される。他のそうした態様では、診断用化合物は、特にＣＮＳ標的に結合する標識されたペプチド又は抗体である。更なる態様では、哺乳動物はヒトである。
【００１２】
更なる態様では、ＬＲＰ８結合分子及びＣＮＳ活性化合物は、１つ以上の追加の治療剤と併用して投与される。一つのそうした態様では、ＬＲＰ８結合分子及びＣＮＳ活性化合物は、薬学的に許容可能な担体と併用して投与される。
【００１３】
その他の実施態様において、本発明は、ＬＲＰ８を標的とすることで、タイトジャンクションを含む血管内皮細胞層を横切るＣＮＳ活性化合物の輸送を調節するための方法を提供する。その他の実施態様において、本発明は、前述の組成物又は薬学的製剤のうちのいずれかの組成物又は薬学的製剤の有効量を個体に投与することを含む、ＣＮＳ疾患又はＣＮＳの障害を有する個体を治療する方法を提供する。
【００１４】
その他の実施態様において、本発明は、前述の組成物又は薬学的製剤のうちのいずれかの組成物又は薬学的製剤の有効量を個体に投与することを含む、ＣＮＳ疾患又はＣＮＳ障害の重篤度、持続、又は兆候を、それらに罹患している個体において、低減させるか又は予防する方法を提供する。
【００１５】
その他の実施態様において、本発明は、前述の組成物又は薬学的製剤のいずれかに記載の組成物又は薬学的製剤の有効量を個体へ投与し、個体の脳内ＣＮＳ活性化合物を視覚化及び定量化し、ＣＮＳ疾患又は障害又はその欠如の既知の実例を有する個体に由来する対照結果に対して比較することを含む、個体のＣＮＳ疾患又はＣＮＳの障害を診断する方法を提供する。
【００１６】
その他の実施態様において、本発明は、前述の組成物又は薬学的製剤のいずれかに記載の組成物又は薬学的製剤の有効量を個体へ投与し、個体の脳内ＣＮＳ活性化合物を視覚化及び定量化し、ＣＮＳ疾患又はＣＮＳ障害の既知のステージを有する個体に由来する対照結果に対して比較することを含む、個体のＣＮＳ疾患又はＣＮＳの障害をステージ分類する方法を提供する。
【００１７】
その他の実施態様において、本発明は、医薬としての使用のためのＬＲＰ８結合分子及び少なくとも一つのＣＮＳ活性化合物を提供する。一態様において、ＬＲＰ８結合分子又はＬＲＰ８結合分子を含む組成物は、上記ＬＲＰ８結合分子又はＬＲＰ８結合分子を含む組成物の一つである。一態様において、ＬＲＰ８結合分子は、少なくとも１つのＣＮＳ活性化合物にコンジュゲートしている。一つのそうした態様では、コンジュゲーションはＬＲＰ８結合分子および少なくとも一のＣＮＳ活性化合物との間の共有結合である。他のそうした態様では、コンジュゲーションはリンカーによる。
【００１８】
更なる態様では、ＬＲＰ８結合分子は、ＬＲＰ８の天然リガンド、ＬＲＰ８の天然リガンドの断片、ＬＲＰ８の天然リガンドの修飾された形態、及びＬＲＰ８の天然リガンドの修飾された形態の断片から選択される。一つのそうした態様では、ＬＲＰ８の天然リガンドはリーリン及びセレノプロテインＰから選択される。更なる態様において、ＬＲＰ８結合分子は抗体である。一つのそうした態様では、抗体は、多重特異性抗体である。他のそうした態様では、抗体は、モノクローナル抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、及びＬＲＰ８を結合する抗体断片から選択される。
【００１９】
更なる態様では、ＬＲＰ８結合分子は、ＬＲＰ８への結合するために、ＬＲＰ８の一以上の天然リガンドと競合することはない。更なる態様では、ＬＲＰ８結合分子は、ＬＲＰ８への結合するために、ＬＲＰ８の一以上の天然リガンドと競合する。更なる態様では、ＬＲＰ８結合分子はＬＲＰ８の細胞外ドメインに結合する。更なる態様では、ＬＲＰ８結合分子は、好ましくは、脳で発現されたＬＲＰ８に結合する。
【００２０】
更なる態様では、ＣＮＳ活性化合物は、治療用化合物及び診断用化合物から選択される。一つのそうした態様では、治療用化合物は、神経障害、アミロイドーシス、癌、眼の疾患又は障害、ウイルスや細菌感染、炎症、虚血、神経変性疾患、発作、行動障害、及びリソソーム蓄積症の一つ以上を治療又は予防するための神経栄養因子及び化合物から選択される。その他のそうした態様では、治療用化合物は、パーキンソン病を治療又は予防するための化合物、及びアルツハイマー病を治療又は予防するための化合物から選択される。その他のそうした態様では、診断用化合物は、特にＣＮＳ標的に結合する標識されたペプチド又は抗体である。更なる態様では、ＬＲＰ８へのＬＲＰ−結合分子の結合は、血液脳関門を通過するＣＮＳ活性化合物の輸送をもたらす。
【００２１】
その他の実施態様において、本発明は、医薬及び薬学的に許容される担体としての使用のために、ＬＲＰ８結合分子及び少なくとも一つのＣＮＳ活性化合物を含む組成物を含む薬学的製剤を提供する。一態様において、薬学的製剤は更に付加的な治療剤を含む。
【００２２】
その他の実施態様において、本発明は、ＣＮＳ疾患又はＣＮＳの障害の治療のための医薬の製造のために、ＬＲＰ８結合分子又はＬＲＰ８結合分子を含む組成物の使用を提供する。一態様において、ＬＲＰ８結合分子又はＬＲＰ８結合分子を含む組成物は、上記ＬＲＰ８結合分子又はＬＲＰ８結合分子を含む組成物の一つである。その他の実施態様において、本発明は、ＣＮＳ疾患又はＣＮＳの障害の治療又はステージ分類のための医薬の製造のために、ＬＲＰ８結合分子又はＬＲＰ８結合分子を含む組成物の使用を提供する。一態様において、ＬＲＰ８結合分子又はＬＲＰ８結合分子を含む組成物は、上記ＬＲＰ８結合分子又はＬＲＰ８結合分子を含む組成物の一つである。
【図面の簡単な説明】
【００２３】
【図１】図１は、細胞膜との関連におけるＬＲＰ８タンパク質の構造の模式図である。ＬＲＰ８の細胞外ドメインは、タンパク質のＮ末端から膜貫通領域まで延びるＬＲＰ８の部分であり、７つのリガンド結合リピート及びＥＧＦ前駆体ドメインを包含する。ＬＲＰ８の細胞内部分は、細胞内シグナル伝達ドメインを包含し、細胞内部に存在する。
【図２】図２Ａ−２Ｄは、血液脳関門に関連付けられている脳血管内皮細胞上に高度に特異的に発現するタンパク質として、ＬＲＰ８を同定する実験の結果を示す。図２Ａは、更なる実験のために他の種類の細胞に由来するＣＤ３１陽性内皮細胞をソートするためのＦＡＣＳ分析の結果を示す。図２Ｂ及び図２Ｃは、実施例１に記載のマイクロアレイ実験の結果を図示的に示す。図２Ｂ−１−２Ｂ−３において、成体サンプルからの相対的な転写レベルが示されており、図２Ｃ−１及び２Ｃ−２は同じ分析からのもので、ＬＲＰ８及びＬＲＰ１のみについては、成体、仔及び胎仔のサンプルを含んでいる。ＬＲＰ８グラフでＹ軸の最大値は５．７であり、ＬＲＰ１グラフでＹ軸の最大値は０．１２３である。図２Ｄは、実施例１に記載した検証的な定量的ＲＴ−ＰＣＲ実験の結果を示し、実質的にＬＲＰ８ ＲＮＡは肺／肝血管内皮細胞で観察されていないが、これらの細胞はＬＲＰ１ ＲＮＡの高いレベルを示すことを実証している。相対的な転写産物量の値が、１に設定された平均の脳のレベルに対して正規化された全ての値でプロットされた。
【図３】図３Ａ−３Ｅは、血管内皮細胞サンプルにおけるＬＲＰ８タンパク質に有用な試薬を同定し、その検出能を決定するための、実施例２Ａに記載の実験の結果を示す。図３Ａは、異なる抗ＡｐｏＥＲ２抗体を用いたＡｐｏＥＲ２のウエスタンブロット解析を示す。組換えヒトＡｐｏＥＲ２は、１倍の還元剤でインビトロジェンＬＤＳサンプルバッファー中に希釈され、１０ｎｇ、３ｎｇ、１ｎｇ、０．３ｎｇの量で１０％のビス−トリスＮｕｐａｇｅ１５穴のゲル上でロードされた。左のパネル：ａ）１：５００（２．０μｇ／ｍｌ）に希釈した抗ＡｐｏＥＲ２マウスモノクローナル抗体（Ａｂｃａｍ ａｂ５８２１６）が一次抗体として使用され、回転器上で４℃で４８時間ブロットと共にインキュベートされた、ｂ）１：２０００に希釈されたビオチンＸＸ抗マウス抗体が二次抗体として使用され、室温で２時間ブロットと共にインキュベートされた。中央パネル：ａ）ウサギ抗ＡｐｏＥＲ２ウサギポリクローナル抗体（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ ４０−７８００）が一次抗体として使用され、回転器上で４℃で４８時間ブロットと共にインキュベートされた、ｂ）１：２０００に希釈されたビオチンＸＸ抗ウサギ抗体が二次抗体として使用され、室温で２時間ブロットと共にインキュベートされた。左のパネル：ａ）１：５００（２．０μｇ／ｍｌ）に希釈したＬＲＰ８マウスポリクローナル抗体（Ａｂｎｏｖａ Ｈ００００７８０４−Ａ０１）が一次抗体として使用され、回転器上で４℃で４８時間ブロットと共にインキュベートされた、２）１：２０００に希釈されたビオチンＸＸ抗マウス抗体が二次抗体として使用され、室温で２時間ブロットと共にインキュベートされた。図３Ｂ及び３Ｃは、図３Ａのようにウェスタンブロットを示すが、Ｔ１７５フラスコ培養の流路３０からのＤ３の細胞ライセート中のＬＲＰ８存在を評価する。図３Ｄは、実施例２に記載のように、ＨＵＶＥＣ細胞溶解液又はＨＢＭＥＣ細胞溶解液中のＬＲＰ８タンパク質の存在を検出するウエスタン分析の結果を示す。使用左側のパネルは、ウサギ抗ヒトＬＲＰ８の抗体（Ｚｙｍｅｄ）を使用、右側のパネルは、ヤギ抗ヒト抗体ＬＲＰ８（Ｎｏｖｕｓ）を使用し、両方が９８ＫＤの分子量範囲内のバンドの存在を検出し、ＬＲＰ８の存在と相関することが期待された。図３Ｅは、競合アッセイの結果を図示的に示し、ＲＡＰがＡｐｏＥＲ２への結合のために抗ＬＲＰ８抗体と競合しないことを実証している。
【図４】図４Ａ−４Ｆは、種々の培養血管内皮細胞において、及びマウスおよびヒト組織においてＬＲＰ８の局在を評価するために、図２Ｂの例で説明した実験の結果を示している。図４Ａは、固定化された透過性ＨＵＶＥＣへの抗ＬＲＰ８結合の免疫細胞化学的解析からのイメージを示す（左のパネルは、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚのヤギ抗ヒトＬＲＰ８抗体、右のパネルは、Ｚｙｍｅｄのウサギ抗ヒトＬＲＰ８抗体）。図４Ｂは、固定化／透過処理後に（二次抗体ヤギ抗ウサギＡｌｅｘａ−Ｆｌｕｏｒ４８８）、抗ヒトＬＲＰ８抗体（Ｓｉｇｍａ Ａ３４８１）で、不死化ヒト脳血管内皮細胞（ｈＣＭＥＣ／Ｄ３、左）、又は初代ヒト脳毛細血管内皮細胞（右）を染色して得られた免疫蛍光画像を示す。両方の画像が、膜とＬＲＰ８の小胞分布を示し、発現レベルは、不死化細胞株よりも初代細胞においてより高い。図４Ｃは、それらの細胞の抗ＬＲＰ８抗体染色において、ＬＲＰ８リガンドのリーリンによるＨＵＶＥＣの前処理の効果の免疫細胞化学的解析からの画像を示しており、そのリーリン処理がＨＵＶＥＣにおけるＬＲＰ８の局在を変更しないことを示している。図４Ｄは、抗ＬＲＰ８及びＣＤ３１で標識されたマウスの脳組織の免疫組織化学的解析からの画像を提供し、ＬＲＰ８が血管内皮細胞と共局在することを示している。図４Ｅは、全身的にＡｌｅｘａ４８８標識抗ＬＲＰ８抗体で１時間処置したマウス由来の脳切片における抗ＬＲＰ８抗体の局在化を示す画像を提供する。抗体がはっきりと斑点状のパターンでセクション全体で見られ、また、血管の中で容易に可視化される。図４Ｆは、細胞の核のＤＡＰＩ染色と共にＬＲＰ８に対する一次抗体によるヒト皮質アルツハイマー病の脳切片の蛍光顕微鏡写真を示す。血管の部位でＬＲＰ８染色を検出することができる。
【図５】図５Ａは、実施例３に記載された血管外移動のアッセイを模式的に示す。図５Ｂ−５Ｃは、インビトロでの血管外移動アッセイにおいてｈＣＭＥＣ／Ｄ３細胞単層を横切って移行するＬＲＰ８の能力を決定するために、実施例３に記載の実験の結果を示している。
【００２４】
発明の実施態様の詳細な記述
Ｉ．定義
本明細書における目的のための「アクセプターヒトフレームワーク」とは、下記に定義されるように、ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワークから得られる軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）フレームワーク又は重鎖可変ドメイン（ＶＨ）フレームワークのアミノ酸配列を含有するフレームワークである。ヒト免疫グロブリンのフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワーク”に由来する”アクセプターヒトフレームワークは、その同一のアミノ酸配列を含んでもよく、又はそれはアミノ酸配列の変化を含み得る。幾つかの実施態様において、アミノ酸変化の数は、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、又は２以下である。幾つかの実施態様において、ＶＬアクセプターヒトフレームワークは、Ｖはヒト免疫グロブリンのフレームワーク配列又はヒトコンセンサスフレームワーク配列に、配列が同一である。
【００２５】
「親和性」とは、分子（例えば、抗体）の単一結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原）との間の非共有結合相互作用の総和の強度を指す。本明細書で使用する場合、特に断らない限り、「結合親和性」は、結合対（例えば、抗体と抗原）のメンバー間の１：１の相互作用を反映している本質的な結合親和性を指す。そのパートナーＹに対する分子Ｘの親和性は、一般的に解離定数（Ｋｄ）で表すことができる。親和性は、本明細書に記載したものを含む、当技術分野で知られている一般的な方法によって測定することができる。結合親和性を測定するための具体的な例示であって典型的な実施態様は、以下で説明される。
【００２６】
「親和性成熟」抗体とは、その改変を有していない親抗体と比較して、抗原に対する抗体の親和性に改良を生じせしめる、その一又は複数の超可変領域（ＨＶＲ）において一又は複数の改変を持つものである。
【００２７】
用語「抗ＬＲＰ８抗体」及び「ＬＲＰ８に特異的に結合する抗体」は、抗体がＬＲＰ８を標的とし、関連又は近位の分子のＬＲＰ８媒介転位を促進する薬剤として有用であるような十分な親和性でＬＲＰ８を結合することができる抗体を指す。一実施態様において、抗ＬＲＰ８抗体の無関係な、非ＬＲＰタンパク質への結合の程度は、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）によって測定される場合、抗体のＬＲＰ８への結合の約１０％未満である。所定の実施態様において、ＬＲＰ８へ結合する抗体は、解離定数（Ｋｄ）が、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、又は≦０．００１ｎＭ（例えば、１０−８Ｍ未満、例えば、１０−８Ｍから１０−１３Ｍ、例えば、１０−９Ｍから１０−１３Ｍ）。所定の実施態様において、抗ＬＲＰ８抗体は、異なる種由来のＬＲＰ８間で保存されているＬＲＰ８のエピトープに結合する。所定の実施態様において、抗ＬＲＰ８抗体はＬＲＰ８の細胞外エピトープに結合する。所定の実施態様において、抗ＬＲＰ８抗体は、一以上の天然のＬＲＰ８リガンドとＬＲＰ８への結合に対して競合しない。所定の実施態様において、抗ＬＲＰ８抗体は、一以上の天然のＬＲＰ８リガンドとＬＲＰ８への結合に対して競合する。
【００２８】
用語「抗体」は最も広い意味で用いられ、様々な抗体構造を包含し、限定されないが、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多特異性抗体（例えば二重特異性抗体）、及び、所望の抗原結合活性を示す限り、抗体断片を含む。
【００２９】
「抗体断片」は、インタクトな抗体が結合する抗原を結合するインタクトな抗体の一部を含むインタクトな抗体以外の分子を指す。抗体断片の例としては、限定されないが、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ '、Ｆａｂ’−ＳＨは、Ｆ（ａｂ’）２、ダイアボディ、直鎖状抗体、単鎖抗体分子（例えばｓｃＦｖ）、及び抗体断片から形成された多重特異性抗体を含む。  
【００３０】
参照抗体として「同一のエピトープに結合する抗体」とは、競合アッセイにおいて５０％以上、参照抗体のその抗原への結合をブロックする抗体、逆に競合アッセイにおいて５０％以上、その抗体のその抗原への結合をブロックするその参照抗体を指す。典型的な競合アッセイは、本明細書で提供される。
【００３１】
「血液脳関門」又は「ＢＢＢ」は、脳毛細血管内皮原形質膜内の密着結合によって形成され、脳内への分子の輸送を、尿素（６０ダルトン）などの非常に小さな分子さえも、制限する強固な障壁を作りだす末梢循環と脳及び脊髄の間の生理的障壁を指す。脳内の血液脳関門、脊髄内の血液脊髄関門、及び網膜内の血液網膜関門は、ＣＮＳ内における連続的な毛細血管障壁であり、ここに総称して血液脳関門又はＢＢＢと呼ばれる。ＢＢＢはまた、障壁が毛細血管内皮細胞よりむしろ上衣細胞で構成される、血液脳脊髄液関門を（脈絡叢）をも包含する。
【００３２】
「中枢神経系」又は「ＣＮＳ」は、身体機能を制御する神経組織の複合体を意味し、脳と脊髄が含まれる。
【００３３】
用語「キメラ」タンパク質は、タンパク質の一部分が特定の起源又は種から由来し、一方タンパク質の残りは異なる起源又は種から由来する分子を指す。抗体の関連において、「キメラ抗体」は、重鎖及び／又は軽鎖の一部分が特定の起源又は種から由来し、一方重鎖及び／又は軽鎖の残りは異なる起源又は種から由来する抗体を指す。
【００３４】
抗体の「クラス」は、その重鎖が保有する定常ドメイン又は定常領域のタイプを指す。抗体の５つの主要なクラスがあり：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭ、及びこれらのいくつかは、さらにサブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２に、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩＧＡ１、及びＩｇＡ２に分けることができる。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれα、δ、ε、γ、及びμと呼ばれる。
【００３５】
本明細書で使用する「中枢神経系活性化合物」又は「ＣＮＳ活性化合物」は、被検体のＣＮＳ内で影響を与える物質を指す。ＣＮＳ活性化合物は、限定されないが、治療用化合物、診断化合物、及び研究において有用な効力を有する化合物を含む。治療用ＣＮＳ活性化合物は、一つ以上のＣＮＳの疾患又は障害の発症や進展を阻止するため、又は一つ以上のＣＮＳの疾患又障害の重症度、持続時間、又は症状を低減又は阻止するために、一つ以上のＣＮＳの疾患又は障害を治療するのに有効である化合物である。診断用ＣＮＳ活性化合物は、一以上のＣＮＳの疾患又は障害の診断又はステージングに、又は脳の一以上の領域のイメージングに有効である化合物である。
【００３６】
本明細書で使用する「中枢神経系の疾患又は障害」又は「ＣＮＳの疾患又は障害」とは、ＣＮＳに影響を与え、及び／又はＣＮＳにおける病因を有する疾患又は障害を指す。典型的なＣＮＳの疾患又は障害は、限定されるものではないが、神経障害、アミロイドーシス、癌、眼の疾患又は障害、ウイルス又は細菌感染、炎症、虚血、神経変性疾患、発作、行動障害、及びリソソーム蓄積症を含む。この用途の目的のために、ＣＮＳは、通常、血液網膜関門によって身体の他の部分から隔離される眼を含むことが理解されるであろう。
【００３７】
本明細書で用いられる「細胞障害性剤」という用語は、細胞の機能を阻害又は阻止し及び／又は細胞破壊を生ずる物質を指す。細胞障害性剤は、限定されないが、放射性同位体（例えば、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２及びＬｕの放射性同位体）：化学療法剤又は薬物（例えば、メトトレキセート、アドリアマイシン、ビンカアルカロイド（ビンクリスチン、ビンブラスチン、エトポシド）、ドキソルビシン、メルファラン、マイトマイシンＣ、クロラムブシル、ダウノルビシンまたは他の挿入剤）、成長阻害剤、酵素及びその断片、例えば核酸分解酵素など、抗生物質、小分子毒素などの毒素、又は細菌、真菌、植物又は動物由来の酵素活性毒素（それらの断片及び／又はその変異体を含む）、及び以下に開示される様々な抗腫瘍剤又は抗癌剤を包含する。
【００３８】
「エフェクター機能」とは、抗体のアイソタイプにより変わる、抗体のＦｃ領域に起因する生物学的活性を指す。抗体エフェクター機能の例としては、Ｃ１ｑ結合及び補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、Ｆｃ受容体結合、抗体依存性細胞媒介性細胞障害（ＡＤＣＣ）、貪食、細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞レセプター）のダウンレギュレーション、及びＢ細胞の活性化を含む。
【００３９】
薬剤、例えば、医薬製剤の「有効量」とは、所望の治療的又予防的結果を達成するために必要な用量及び期間での、有効な量を指す。
【００４０】
用語「Ｆｃ領域」は、定常領域の少なくとも一部を含む、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するために使用される。該用語は、天然配列Ｆｃ領域と変異Ｆｃ領域を含む。一実施態様において、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域はＣｙｓ２２６又はＰｒｏ２３０から重鎖のカルボキシル末端まで伸長する。しかし、Ｆｃ領域のＣ末端リジン（Ｌｙｓ４４７）は存在しているか、存在していない場合がある。本明細書に明記されていない限り、Ｆｃ領域又は定常領域内のアミノ酸残基の番号付けは、Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991に記載されるように、ＥＵインデックスとも呼ばれるＥＵ番号付けシステムに従う。
【００４１】
「フレームワーク」又は「ＦＲ」は、超可変領域（ＨＶＲ）残基以外の可変ドメイン残基を指す。可変ドメインのＦＲは、一般的に４つのＦＲのドメイン、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＦＲ４で構成される。従って、ＨＶＲ及びＦＲ配列は一般にＶＨ（又はＶＬ）の以下の配列に現れる：ＦＲ１−Ｈ１（Ｌ１）−ＦＲ２−Ｈ２（Ｌ２）−ＦＲ３−Ｈ３（Ｌ３）−ＦＲ４。
【００４２】
用語「完全長抗体」、「インタクトな抗体」及び「全抗体」は、本明細書中で互換的に使用され、天然型抗体構造と実質的に類似の構造を有するか、又は本明細書で定義されるＦｃ領域を含む重鎖を有する抗体を指す。
【００４３】
用語「宿主細胞」、「宿主細胞株」及び「宿主細胞培養」は互換的に使用され、外因性の核酸が導入された細胞を指し、そのような細胞の子孫を含める。宿主細胞は、「形質転換体」及び「形質転換された細胞」を含み、継代の数に関係なく、それに由来する一次形質転換細胞及び子孫が含まれる。子孫は親細胞と核酸含量が完全に同一ではないかもしれないが、突然変異が含まれる場合がある。最初に形質転換された細胞においてスクリーニングまたは選択されたものと同じ機能又は生物活性を有する変異子孫が本明細書に含まれる。
【００４４】
「ヒト抗体」は、ヒトまたはヒト細胞により産生されるか、又はヒト抗体のレパートリーや他のヒト抗体をコードする配列を利用した非ヒト起源に由来する抗体のそれに対応するアミノ酸配列を有するものである。ヒト抗体のこの定義は、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を特に除外する。
【００４５】
「ヒトコンセンサスフレームワーク」とは、ヒト免疫グロブリンＶＬ又はＶＨフレームワーク配列の選択において最も一般的に存在するアミノ酸残基を表すフレームワークである。一般的には、ヒト免疫グロブリンＶＬ又はＶＨ配列の選択は、可変ドメイン配列のサブグループからのものである。一般的には、配列のサブグループは、 Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, NIH Publication 91-3242, Bethesda MD (1991), vols. 1-3にあるサブグループである。一実施態様において、ＶＬについて、サブグループは上掲のＫａｂａｔらにあるサブグループカッパＩである。一実施態様において、ＶＨについて、サブグループは上掲のＫａｂａｔらにあるサブグループＩＩＩである。
【００４６】
「ヒト化」抗体は、非ヒトＨＶＲ由来のアミノ酸残基、及びヒトＦＲ由来アミノ酸残基を含むキメラ抗体を指す。所定の実施態様において、ヒト化抗体は、少なくとも一つ、典型的には２つの可変ドメインの全てを実質的に含み、ＨＶＲ（例えば、ＣＤＲ）の全て又は実質的に全てが、非ヒト抗体のものに対応し、全てまたは実質的にＦＲの全てが、ヒト抗体のものに対応する。ヒト化抗体は、任意で、ヒト抗体由来の抗体定常領域の少なくとも一部を含んでもよい。抗体の「ヒト化型」、例えば、非ヒト抗体は、ヒト化を遂げている抗体を指す。
【００４７】
本明細書で使用される用語「超可変領域」又は「ＨＶＲ」は、配列が超可変であるか、及び／又は構造的に定義されたループ（「超可変ループ」）を形成する抗体可変ドメインの各領域を指す。一般的に、天然型４鎖抗体は、ＶＨ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）に３つ、及びＶＬ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）に３つの６つのＨＶＲＳを含む。ＨＶＲは、一般的に超可変ループ由来及び／又は「相補性決定領域」（ＣＤＲ）由来のアミノ酸残基を含み、後者は、最高の配列可変性であり、及び／又は抗原認識に関与している。典型的な超可変ループはアミノ酸残基２６−３２（Ｌ１）、５０−５２（Ｌ２）、９１−９６（Ｌ３）、２６−３２（Ｈ１）、５３−５５（Ｈ２）、及び９６−１０１（Ｈ３）で生じる(Chothia and Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987).)。典型的なＣＤＲ（ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、ＣＤＲ−Ｌ３、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、及びＣＤＲ−Ｈ３）は、アミノ酸残基Ｌ１の２４−３４、Ｌ２の５０−５６、Ｌ３の８９−９７、Ｈ１の３１−３５Ｂ、Ｈ２の５０−６５、及びＨ３の９５−１０２に生じる。(Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991).) ＶＨのＣＤＲ１の例外を除いて、ＣＤＲは一般的に超可変ループを形成するアミノ酸残基を含む。ＣＤＲは、抗原に接触する残基である「特異性決定残基」又は「ＳＤＲ」を含む。ＳＤＲは、略称（ａｂｂｒｅｖｉａｔｅｄ−）ＣＤＲ、又はａ−ＣＤＲと呼ばれる、ＣＤＲの領域内に含まれている。典型的なａ−ＣＤＲ（ａ−ＣＤＲ−Ｌ１、ａ−ＣＤＲ−Ｌ２、ａ−ＣＤＲ−Ｌ３、ａ−ＣＤＲ−Ｈ１、ａ−ＣＤＲ−Ｈ２、及びａ−ＣＤＲ−Ｈ３）は、アミノ酸残基Ｌ１の３１−３４、Ｌ２の５０−５５、Ｌ３の８９−９６、Ｈ１の３１−３５Ｂ、Ｈ２の５０−５８、及びＨ３の９５−１０２に生じる。（Almagro and Fransson, Front. Biosci.13:1619-1633 (2008)を参照のこと)特に断らない限り、可変ドメイン内のＨＶＲ残基及び他の残基（例えば、ＦＲ残基）は、上掲のＫａｂａｔらに従い、本明細書において番号が付けられる。
【００４８】
「イムノコンジュゲート」は、一つ以上の異種分子にコンジュゲートした抗体である。
【００４９】
「個体」又は「被検体」は、哺乳動物である。哺乳動物は、限定されないが、家畜動物（例えば、ウシ、ヒツジ、ネコ、イヌ、ウマ）、霊長類（例えば、ヒト、サルなどの非ヒト霊長類）、ウサギ、げっ歯類（例えば、マウス及びラット）を含む。所定の実施態様において、個体又は被検体はヒトである。
【００５０】
「単離された」ポリペプチドは、その自然環境の成分から分離されたものである。幾つかの実施態様において、ポリペプチドは、例えば、電気泳動（例えば、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、等電点電気泳動（ＩＥＦ）、キャピラリー電気泳動）又はクロマトグラフィー（例えば、イオン交換又は逆相ＨＰＬＣ）により決定されるように、９５％以上または９９％の純度に精製される。例えば抗体純度の評価法の総説としては、例えばFlatman et al., J. Chromatogr. B 848:79-87 (2007)を参照のこと。
【００５１】
「単離された」核酸は、その自然環境の成分から分離された核酸分子を指す。単離された核酸は、核酸分子を通常含む細胞に含まれる核酸分子を含むが、しかし、その核酸分子は、染色体外又はその自然の染色体上の位置とは異なる染色体位置に存在している。
【００５２】
「抗ＬＲＰ８抗体をコードする単離された核酸」は、抗体の重鎖および軽鎖（又はその断片）をコードする一つ以上の核酸分子を指し、単一のベクター又は別個のベクター内のそのような核酸分子、及び宿主細胞の一以上の位置に存在するそのような核酸分子を含む。
【００５３】
本明細書で使用する「リンカー部分」又は「リンカー」は、ＣＮＳ活性分子にＬＲＰ８結合化合物を共有結合又は非共有結合で連結する構造を指す。リンカーの主な機能は、スペーサーとしてであるが、本発明のシャトル剤における存在は、特定のＬＲＰ８結合分子及びコンジュゲートされるべきＣＮＳ活性化合物の必要性に応じて任意である。所定の実施態様において、リンカーはペプチドである。他の実施態様において、リンカーは化学的リンカーである。
【００５４】
本明細書において使用される場合、「アポリポタンパク質Ｅ受容体２」と「ＡｐｏＥＲ２」と交換可能に使用される用語「ＬＲＰ８」は、任意の脊椎動物の起源由来の任意の天然型ＬＲＰ８を指し、特に断らない限り、霊長類（例えばヒト）及びげっ歯類（例えば、マウス、ラット）などの哺乳動物を含む。その用語は、細胞内でのプロセシングから生じた「完全長」、未処理ＬＲＰ８並びにＬＲＰ８の任意の形態を含む。その用語はまた、天然に存在するＬＲＰ８の変異体、例えば、スプライス変異体又は対立遺伝子変異体を包含する。典型的なヒトＬＲＰ８のアミノ酸配列が配列番号１に示される：ＭＧＬＰＥＰＧＰＬＲＬＬＡＬＬＬＬＬＬＬＬＬＬＬＲＬＱＨＬＡＡＡＡＡＤＰＬＬＧＧＱＧＰＡＫＥＣＥＫＤＱＦＱＣＲＮＥＲＣＩＰＳＶＷＲＣＤＥＤＤＤＣＬＤＨＳＤＥＤＤＣＰＫＫＴＣＡＤＳＤＦＴＣＤＮＧＨＣＩＨＥＲＷＫＣＤＧＥＥＥＣＰＤＧＳＤＥＳＥＡＴＣＴＫＱＶＣＰＡＥＫＬＳＣＧＰＴＳＨＫＣＶＰＡＳＷＲＣＤＧＥＫＤＣＥＧＧＡＤＥＡＧＣＡＴＬＣＡＰＨＥＦＱＣＧＮＲＳＣＬＡＡＶＦＶＣＤＧＤＤＤＣＧＤＧＳＤＥＲＧＣＡＤＰＡＣＧＰＲＥＦＲＣＧＧＤＧＧＧＡＣＩＰＥＲＷＶＣＤＲＱＦＤＣＥＤＲＳＤＥＡＡＥＬＣＧＲＰＧＰＧＡＴＳＡＰＡＡＣＡＴＶＳＱＦＡＣＲＳＧＥＣＶＨＬＧＷＲＣＤＧＤＲＤＣＫＤＫＳＤＥＡＤＣＰＬＧＴＣＲＧＤＥＦＱＣＧＤＧＴＣＶＬＡＩＫＨＣＮＱＥＱＤＣＰＤＧＳＤＥＡＧＣＬＱＧＬＮＥＣＬＨＮＮＧＧＣＳＨＩＣＴＤＬＫＩＧＦＥＣＴＣＰＡＧＦＱＬＬＤＱＫＴＣＧＤＩＤＥＣＫＤＰＤＡＣＳＱＩＣＶＮＹＫＧＹＦＫＣＥＣＹＰＧＹＥＭＤＬＬＴＫＮＣＫＡＡＧＧＫＳＰＳＬＩＦＴＮＲＹＥＶＲＲＩＤＬＶＫＲＮＹＳＲＬＩＰＭＬＫＮＶＶＡＬＤＶＥＶＡＴＮＲＩＹＷＣＤＬＳＹＲＫＩＹＳＡＹＭＤＫＡＳＤＰＫＥＱＥＶＬＩＤＥＱＬＨＳＰＥＧＬＡＶＤＷＶＨＫＨＩＹＷＴＤＳＧＮＫＴＩＳＶＡＴＶＤＧＧＲＲＲＴＬＦＳＲＮＬＳＥＰＲＡＩＡＶＤＰＬＲＧＦＭＹＷＳＤＷＧＤＱＡＫＩＥＫＳＧＬＮＧＶＤＲＱＴＬＶＳＤＮＩＥＷＰＮＧＩＴＬＤＬＬＳＱＲＬＹＷＶＤＳＫＬＨＱＬＳＳＩＤＦＳＧＧＮＲＫＴＬＩＳＳＴＤＦＬＳＨＰＦＧＩＡＶＦＥＤＫＶＦＷＴＤＬＥＮＥＡＩＦＳＡＮＲＬＮＧＬＥＩＳＩＬＡＥＮＬＮＮＰＨＤＩＶＩＦＨＥＬＫＱＰＲＡＰＤＡＣＥＬＳＶＱＰＮＧＧＣＥＹＬＣＬＰＡＰＱＩＳＳＨＳＰＫＹＴＣＡＣＰＤＴＭＷＬＧＰＤＭＫＲＣＹＲＡＰＱＳＴＳＴＴＴＬＡＳＴＭＴＲＴＶＰＡＴＴＲＡＰＧＴＴＶＨＲＳＴＹＱＮＨＳＴＥＴＰＳＬＴＡＡＶＰＳＳＶＳＶＰＲＡＰＳＩＳＰＳＴＬＳＰＡＴＳＮＨＳＱＨＹＡＮＥＤＳＫＭＧＳＴＶＴＡＡＶＩＧＩＩＶＰＩＶＶＩＡＬＬＣＭＳＧＹＬＩＷＲＮＷＫＲＫＮＴＫＳＭＮＦＤＮＰＶＹＲＫＴＴＥＥＥＤＥＤＥＬＨＩＧＲＴＡＱＩＧＨＶＹＰＡＡＩＳＳＦＤＲＰＬＷＡＥＰＣＬＧＥＴＲＥＰＥＤＰＡＰＡＬＫＥＬＦＶＬＰＧＥＰＲＳＱＬＨＱＬＰＫＮＰＬＳＥＬＰＶＶＫＳＫＲＶＡＬＳＬＥＤＤＧＬＰ（配列番号１）（Ｇｅｎｂａｎｋ ＢＡＡ２１８２４．１）。所定の実施態様において、配列番号１の最初の３２アミノ酸はシグナル配列であり、典型的な処理されたヒトＬＲＰ８タンパク質の配列が配列番号２に示されている：ＡＡＤＰＬＬＧＧＱＧＰＡＫＥＣＥＫＤＱＦＱＣＲＮＥＲＣＩ��ＳＶＷＲＣＤＥＤＤＤＣＬＤＨＳＤＥＤＤＣＰＫＫＴＣＡＤＳＤＦＴＣＤＮＧＨＣＩＨＥＲＷＫＣＤＧＥＥＥＣＰＤＧＳＤＥＳＥＡＴＣＴＫＱＶＣＰＡＥＫＬＳＣＧＰＴＳＨＫＣＶＰＡＳＷＲＣＤＧＥＫＤＣＥＧＧＡＤＥＡＧＣＡＴＬＣＡＰＨＥＦＱＣＧＮＲＳＣＬＡＡＶＦＶＣＤＧＤＤＤＣＧＤＧＳＤＥＲＧＣＡＤＰＡＣＧＰＲＥＦＲＣＧＧＤＧＧＧＡＣＩＰＥＲＷＶＣＤＲＱＦＤＣＥＤＲＳＤＥＡＡＥＬＣＧＲＰＧＰＧＡＴＳＡＰＡＡＣＡＴＶＳＱＦＡＣＲＳＧＥＣＶＨＬＧＷＲＣＤＧＤＲＤＣＫＤＫＳＤＥＡＤＣＰＬＧＴＣＲＧＤＥＦＱＣＧＤＧＴＣＶＬＡＩＫＨＣＮＱＥＱＤＣＰＤＧＳＤＥＡＧＣＬＱＧＬＮＥＣＬＨＮＮＧＧＣＳＨＩＣＴＤＬＫＩＧＦＥＣＴＣＰＡＧＦＱＬＬＤＱＫＴＣＧＤＩＤＥＣＫＤＰＤＡＣＳＱＩＣＶＮＹＫＧＹＦＫＣＥＣＹＰＧＹＥＭＤＬＬＴＫＮＣＫＡＡＧＧＫＳＰＳＬＩＦＴＮＲＹＥＶＲＲＩＤＬＶＫＲＮＹＳＲＬＩＰＭＬＫＮＶＶＡＬＤＶＥＶＡＴＮＲＩＹＷＣＤＬＳＹＲＫＩＹＳＡＹＭＤＫＡＳＤＰＫＥＱＥＶＬＩＤＥＱＬＨＳＰＥＧＬＡＶＤＷＶＨＫＨＩＹＷＴＤＳＧＮＫＴＩＳＶＡＴＶＤＧＧＲＲＲＴＬＦＳＲＮＬＳＥＰＲＡＩＡＶＤＰＬＲＧＦＭＹＷＳＤＷＧＤＱＡＫＩＥＫＳＧＬＮＧＶＤＲＱＴＬＶＳＤＮＩＥＷＰＮＧＩＴＬＤＬＬＳＱＲＬＹＷＶＤＳＫＬＨＱＬＳＳＩＤＦＳＧＧＮＲＫＴＬＩＳＳＴＤＦＬＳＨＰＦＧＩＡＶＦＥＤＫＶＦＷＴＤＬＥＮＥＡＩＦＳＡＮＲＬＮＧＬＥＩＳＩＬＡＥＮＬＮＮＰＨＤＩＶＩＦＨＥＬＫＱＰＲＡＰＤＡＣＥＬＳＶＱＰＮＧＧＣＥＹＬＣＬＰＡＰＱＩＳＳＨＳＰＫＹＴＣＡＣＰＤＴＭＷＬＧＰＤＭＫＲＣＹＲＡＰＱＳＴＳＴＴＴＬＡＳＴＭＴＲＴＶＰＡＴＴＲＡＰＧＴＴＶＨＲＳＴＹＱＮＨＳＴＥＴＰＳＬＴＡＡＶＰＳＳＶＳＶＰＲＡＰＳＩＳＰＳＴＬＳＰＡＴＳＮＨＳＱＨＹＡＮＥＤＳＫＭＧＳＴＶＴＡＡＶＩＧＩＩＶＰＩＶＶＩＡＬＬＣＭＳＧＹＬＩＷＲＮＷＫＲＫＮＴＫＳＭＮＦＤＮＰＶＹＲＫＴＴＥＥＥＤＥＤＥＬＨＩＧＲＴＡＱＩＧＨＶＹＰＡＡＩＳＳＦＤＲＰＬＷＡＥＰＣＬＧＥＴＲＥＰＥＤＰＡＰＡＬＫＥＬＦＶＬＰＧＥＰＲＳＱＬＨＱＬＰＫＮＰＬＳＥＬＰＶＶＫＳＫＲＶＡＬＳＬＥＤＤＧＬＰ（配列番号２）。
【００５５】
「ＬＲＰ８結合分子」とは、ＬＲＰ８に特異的に結合する分子を指す。ＬＲＰ８結合分子は、限定されないが、ＬＲＰ８の天然リガンド（すなわち、リーリン、アポＥ、又はセレノプロテインＰ）、ＬＲＰ８の天然リガンドの修飾された形態、ＬＲＰ８に対する抗体は、ＬＲＰ８に特異的に結合するペプチド、ＬＲＰ８に特異的に結合するアプタマー、ＬＲＰ８に特異的に結合する小分子、及び上記のいずれかのＬＲＰ８結合断片を含む。所定の実施態様において、ＬＲＰ８結合分子は、ＬＲＰ８の天然リガンドとＬＲＰ８への結合に対して競合しない。所定の実施態様において、ＬＲＰ８結合分子は、ＬＲＰ８の天然リガンドとＬＲＰ８への結合に対して競合する。所定の実施態様において、ＬＲＰ８結合分子は、正常なＬＲＰ８機能に拮抗する。所定の実施態様において、ＬＲＰ８結合分子は、正常なＬＲＰ８機能を刺激する。
【００５６】
用語「ＬＲＰ８の天然リガンドの修飾された形態」とは、もはやＬＲＰ８のリガンドの天然に存在する形態と同一ではないように改変されているが、なおＬＲＰ８に結合する能力を保持しているＬＲＰ８の天然リガンドを指す。そのような修飾は、限定されないが、翻訳後修飾（例えば、グリコシル化）、アミノ酸修飾（すなわち、置換、欠失、またはアミノ酸の付加、修正された分子がＬＲＰ８への結合を保持している場合）、融合（すなわち、ＦＣ−融合）、及び化学修飾（すなわち、放射性標識または他の検出可能なタグ、例えば限定されないが、フルオロフォア又はヘキサヒスチジンタグの付着）を含む。
【００５７】
本明細書で使用される用語「モノクローナル抗体」とは、実質的に均一な抗体の集団から得られる抗体を意味し、すなわち、例えば、天然に生じる変異を含み、又はモノクローナル抗体製剤の製造時に発生し、一般的に少量で存在している変異体などの、可能性のある変異体抗体を除き、集団を構成する個々の抗体は同一であり、及び／又は同じエピトープに結合する。異なる決定基（エピトープ）に対する異なる抗体を一般的に含む、ポリクローナル抗体調製物とは対照的に、モノクローナル抗体調製物の各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対するものである。従って、修飾語「モノクローナル」は、実質的に均一な抗体の集団から得られる抗体の特徴を示し、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とするものとして解釈されるべきではない。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、限定されないが、ハイブリドーマ法、組換えＤＮＡ法、ファージディスプレイ法、ヒト免疫グロブリン遺伝子座の全部又は一部を含むトランスジェニック動物を利用する方法を含む様々な技術によって作成され、モノクローナル抗体を作製するためのそのような方法及び他の例示的な方法は、本明細書に記載されている。
【００５８】
「ネイキッド抗体」とは、異種の部分（例えば、ＣＮＳ活性化合物）又は放射性標識にコンジュゲートしていない抗体を指す。ネイキッド抗体は薬学的製剤中に存在してもよい。
【００５９】
「天然型抗体」は、天然に生じる様々な構造をとる免疫グロブリン分子を指す。例えば、天然型ＩｇＧ抗体は、ジスルフィド結合している２つの同一の軽鎖と２つの同一の重鎖から成る約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。Ｎ末端からＣ末端に、各重鎖は、可変重鎖ドメイン又は重鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＨ）を有し、３つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３）が続く。同様に、Ｎ末端からＣ末端に、各軽鎖は、可変軽鎖ドメイン又は軽鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＬ）を有し、定常軽鎖（ＣＬ）ドメインが続く。抗体の軽鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（κ）とラムダ（λ）と呼ばれる、２つのタイプのいずれかに割り当てることができる。
【００６０】
「ＬＲＰ８の天然リガンド」又は「ＬＲＰ８天然リガンド」ＬＲＰ８の天然リガンドであるポリペプチドを指す。このような天然に存在するリガンドとしては、リーリン、ＡｐｏＥ、セレノプロテインＰ、及びＲＡＰを含むが、これらに限定されない。所定の実施態様において、ＬＲＰ８の天然リガンドはＬＲＰ８上の任意の場所に結合する。所定の実施態様において、ＬＲＰ８の天然リガンドはＬＲＰ８の細胞外ドメインに結合する。所定の実施態様において、ＬＲＰ８の天然リガンドのＬＲＰ８結合断片が使用される。天然に生じるヒトのリーリンのアミノ酸配列は、次のとおりである。
ＭＥＲＳＧＷＡＲＱＴＦＬＬＡＬＬＬＧＡＴＬＲＡＲＡＡＡＧＹＹＰＲＦＳＰＦＦＦＬＣＴＨＨＧＥＬＥＧＤＧＥＱＧＥＶＬＩＳＬＨＩＡＧＮＰＴＹＹＶＰＧＱＥＹＨＶＴＩＳＴＳＴＦＦＤＧＬＬＶＴＧＬＹＴＳＴＳＶＱＡＳＱＳＩＧＧＳＳＡＦＧＦＧＩＭＳＤＨＱＦＧＮＱＦＭＣＳＶＶＡＳＨＶＳＨＬＰＴＴＮＬＳＦＩＷＩＡＰＰＡＧＴＧＣＶＮＦＭＡＴＡＴＨＲＧＱＶＩＦＫＤＡＬＡＱＱＬＣＥＱＧＡＰＴＤＶＴＶＨＰＨＬＡＥＩＨＳＤＳＩＩＬＲＤＤＦＤＳＹＨＱＬＱＬＮＰＮＩＷＶＥＣＮＮＣＥＴＧＥＱＣＧＡＩＭＨＧＮＡＶＴＦＣＥＰＹＧＰＲＥＬＩＴＴＧＬＮＴＴＴＡＳＶＬＱＦＳＩＧＳＧＳＣＲＦＳＹＳＤＰＳＩＩＶＬＹＡＫＮＮＳＡＤＷＩＱＬＥＫＩＲＡＰＳＮＶＳＴＩＩＨＩＬＹＬＰＥＤＡＫＧＥＮＶＱＦＱＷＫＱＥＮＬＲＶＧＥＶＹＥＡＣＷＡＬＤＮＩＬＩＩＮＳＡＨＲＱＶＶＬＥＤＳＬＤＰＶＤＴＧＮＷＬＦＦＰＧＡＴＶＫＨＳＣＱＳＤＧＮＳＩＹＦＨＧＮＥＧＳＥＦＮＦＡＴＴＲＤＶＤＬＳＴＥＤＩＱＥＱＷＳＥＥＦＥＳＱＰＴＧＷＤＶＬＧＡＶＩＧＴＥＣＧＴＩＥＳＧＬＳＭＶＦＬＫＤＧＥＲＫＬＣＴＰＳＭＤＴＴＧＹＧＮＬＲＦＹＦＶＭＧＧＩＣＤＰＧＮＳＨＥＮＤＩＩＬＹＡＫＩＥＧＲＫＥＨＩＴＬＤＴＬＳＹＳＳＹＫＶＰＳＬＶＳＶＶＩＮＰＥＬＱＴＰＡＴＫＦＣＬＲＱＫＮＨＱＧＨＮＲＮＶＷＡＶＤＦＦＨＶＬＰＶＬＰＳＴＭＳＨＭＩＱＦＳＩＮＬＧＣＧＴＨＱＰＧＮＳＶＳＬＥＦＳＴＮＨＧＲＳＷＳＬＬＨＴＥＣＬＰＥＩＣＡＧＰＨＬＰＨＳＴＶＹＳＳＥＮＹＳＧＷＮＲＩＴＩＰＬＰＮＡＡＬＴＲＮＴＲＩＲＷＲＱＴＧＰＩＬＧＮＭＷＡＩＤＮＶＹＩＧＰＳＣＬＫＦＣＳＧＲＧＱＣＴＲＨＧＣＫＣＤＰＧＦＳＧＰＡＣＥＭＡＳＱＴＦＰＭＦＩＳＥＳＦＧＳＳＲＬＳＳＹＨＮＦＹＳＩＲＧＡＥＶＳＦＧＣＧＶＬＡＳＧＫＡＬＶＦＮＫＥＧＲＲＱＬＩＴＳＦＬＤＳＳＱＳＲＦＬＱＦＴＬＲＬＧＳＫＳＶＬＳＴＣＲＡＰＤＱＰＧＥＧＶＬＬＨＹＳＹＤＮＧＩＴＷＫＬＬＥＨＹＳＹＬＳＹＨＥＰＲＩＩＳＶＥＬＰＧＤＡＫＱＦＧＩＱＦＲＷＷＱＰＹＨＳＳＱＲＥＤＶＷＡＩＤＥＩＩＭＴＳＶＬＦＮＳＩＳＬＤＦＴＮＬＶＥＶＴＱＳＬＧＦＹＬＧＮＶＱＰＹＣＧＨＤＷＴＬＣＦＴＧＤＳＫＬＡＳＳＭＲＹＶＥＴＱＳＭＱＩＧＡＳＹＭＩＱＦＳＬＶＭＧＣＧＱＫＹＴＰＨＭＤＮＱＶＫＬＥＹＳＴＮＨＧＬＴＷＨＬＶＱＥＥＣＬＰＳＭＰＳＣＱＥＦＴＳＡＳＩＹＨＡＳＥＦＴＱＷＲＲＶＩＶＬＬＰＱＫＴＷＳＳＡＴＲＦＲＷＳＱＳＹＹＴＡＱＤＥＷＡＬＤＳＩＹＩＧＱＱＣＰＮＭＣＳＧＨＧＳＣＤＨＧＩＣＲＣＤＱＧＹＱＧＴＥＣＨＰＥＡＡＬＰＳＴＩＭＳＤＦＥＮＱＮＧＷＥＳＤＷＱＥＶＩＧＧＥＩＶＫＰＥＱＧＣＧＶＩＳＳＧＳＳＬＹＦＳＫＡＧＫＲＱＬＶＳＷＤＬＤＴＳＷＶＤＦＶＱＦＹＩＱＩＧＧＥＳＡＳＣＮＫＰＤＳＲＥＥＧＶＬＬＱＹＳＮＮＧＧＩＱＷＨＬＬＡＥＭＹＦＳＤＦＳＫＰＲＦＶＹＬＥＬＰＡＡＡＫＴＰＣＴＲＦＲＷＷＱＰＶＦＳＧＥＤＹＤＱＷＡＶＤＤＩＩＩＬＳＥＫＱＫＱＩＩＰＶＩＮＰＴＬＰＱＮＦＹＥＫＰＡＦＤＹＰＭＮＱＭＳＶＷＬＭＬＡＮＥＧＭＶＫＮＥＴＦＣＡＡＴＰＳＡＭＩＦＧＫＳＤＧＤＲＦＡＶＴＲＤＬＴＬＫＰＧＹＶＬＱＦＫＬＮＩＧＣＡＮＱＦＳＳＴＡＰＶＬＬＱＹＳＨＤＡＧＭＳＷＦＬＶＫＥＧＣＹＰＡＳＡＧＫＧＣＥＧＮＳＲＥＬＳＥＰＴＭＹＨＴＧＤＦＥＥＷＴＲＩＴＩＶＩＰＲＳＬＡＳＳＫＴＲＦＲＷＩＱＥＳＳＳＱＫＮＶＰＰＦＧＬＤＧＶＹＩＳＥＰＣＰＳＹＣＳＧＨＧＤＣＩＳＧＶＣＦＣＤＬＧＹＴＡＡＱＧＴＣＶＳＮＶＰＮＨＮＥＭＦＤＲＦＥＧＫＬＳＰＬＷＹＫＩＴＧＡＱＶＧＴＧＣＧＴＬＮＤＧＫＳＬＹＦＮＧＰＧＫＲＥＡＲＴＶＰＬＤＴＲＮＩＲＬＶＱＦＹＩＱＩＧＳＫＴＳＧＩＴＣＩＫＰＲＴＲＮＥＧＬＩＶＱＹＳＮＤＮＧＩＬＷＨＬＬＲＥＬＤＦＭＳＦＬＥＰＱＩＩＳＩＤＬＰＱＤＡＫＴＰＡＴＡＦＲＷＷＱＰＱＨＧＫＨＳＡＱＷＡＬＤＤＶＬＩＧＭＮＤＳＳＱＴＧＦＱＤＫＦＤＧＳＩＤＬＱＡＮＷＹＲＩＱＧＧＱＶＤＩＤＣＬＳＭＤＴＡＬＩＦＴＥＮＩＧＫＰＲＹＡＥＴＷＤＦＨＶＳＡＳＴＦＬＱＦＥＭＳＭＧＣＳＫＰＦＳＮＳＨＳＶＱＬＱＹＳＬＮＮＧＫＤＷＨＬＶＴＥＥＣＶＰＰＴＩＧＣＬＨＹＴＥＳＳＩＹＴＳＥＲＦＱＮＷＫＲＩＴＶＹＬＰＬＳＴＩＳＰＲＴＲＦＲＷＩＱＡＮＹＴＶＧＡＤＳＷＡＩＤＮＶＶＬＡＳＧＣＰＷＭＣＳＧＲＧＩＣＤＡＧＲＣＶＣＤＲＧＦＧＧＰＹＣＶＰＶＶＰＬＰＳＩＬＫＤＤＦＮＧＮＬＨＰＤＬＷＰＥＶＹＧＡＥＲＧＮＬＮＧＥＴＩＫＳＧＴＳＬＩＦＫＧＥＧＬＲＭＬＩＳＲＤＬＤＣＴＮＴＭＹＶＱＦＳＬＲＦＩＡＫＳＴＰＥＲＳＨＳＩＬＬＱＦＳＩＳＧＧＩＴＷＨＬＭＤＥＦＹＦＰＱＴＴＮＩＬＦＩＮＶＰＬＰＹＴＡＱＴＮＡＴＲＦＲＬＷＱＰＹＮＮＧＫＫＥＥＩＷＩＶＤＤＦＩＩＤＧＮＮＶＮＮＰＶＭＬＬＤＴＦＤＦＧＰＲＥＤＮＷＦＦＹＰＧＧＮＩＧＬＹＣＰＹＳＳＫＧＡＰＥＥＤＳＡＭＶＦＶＳＮＥＶＧＥＨＳＩＴＴＲＤＬＮＶＮＥＮＴＩＩＱＦＥＩＮＶＧＣＳＴＤＳＳＳＡＤＰＶＲＬＥＦＳＲＤＦＧＡＴＷＨＬＬＬＰＬＣＹＨＳＳＳＨＶＳＳＬＣＳＴＥＨＨＰＳＳＴＹＹＡＧＴＭＱＧＷＲＲＥＶＶＨＦＧＫＬＨＬＣＧＳＶＲＦＲＷＹＱＧＦＹＰＡＧＳＱＰＶＴＷＡＩＤＮＶＹＩＧＰＱＣＥＥＭＣＮＧＱＧＳＣＩＮＧＴＫＣＩＣＤＰＧＹＳＧＰＴＣＫＩＳＴＫＮＰＤＦＬＫＤＤＦＥＧＱＬＥＳＤＲＦＬＬＭＳＧＧＫＰＳＲＫＣＧＩＬＳＳＧＮＮＬＦＦＮＥＤＧＬＲＭＬＭＴＲＤＬＤＬＳＨＡＲＦＶＱＦＦＭＲＬＧＣＧＫＧＶＰＤＰＲＳＱＰＶＬＬＱＹＳＬＮＧＧＬＳＷＳＬＬＱＥＦＬＦＳＮＳＳＮＶＧＲＹＩＡＬＥＩＰＬＫＡＲＳＧＳＴＲＬＲＷＷＱＰＳＥＮＧＨＦＹＳＰＷＶＩＤＱＩＬＩＧＧＮＩＳＧＮＴＶＬＥＤＤＦＴＴＬＤＳＲＫＷＬＬＨＰＧＧＴＫＭＰＶＣＧＳＴＧＤＡＬＶＦＩＥＫＡＳＴＲＹＶＶＳＴＤＶＡＶＮＥＤＳＦＬＱＩＤＦＡＡＳＣＳＶＴＤＳＣＹＡＩＥＬＥＹＳＶＤＬＧＬＳＷＨＰＬＶＲＤＣＬＰＴＮＶＥＣＳＲＹＨＬＱＲＩＬＶＳＤＴＦＮＫＷＴＲＩＴＬＰＬＰＰＹＴＲＳＱＡＴＲＦＲＷＨＱＰＡＰＦＤＫＱＱＴＷＡＩＤＮＶＹＩＧＤＧＣＩＤＭＣＳＧＨＧＲＣＩＱＧＮＣＶＣＤＥＱＷＧＧＬＹＣＤＤＰＥＴＳＬＰＴＱＬＫＤＮＦＮＲＡＰＳＳＱＮＷＬＴＶＮＧＧＫＬＳＴＶＣＧＡＶＡＳＧＭＡＬＨＦＳＧＧＣＳＲＬＬＶＴＶＤＬＮＬＴＮＡＥＦＩＱＦＹＦＭＹＧＣＬＩＴＰＮＮＲＮＱＧＶＬＬＥＹＳＶＮＧＧＩＴＷＮＬＬＭＥＩＦＹＤＱＹＳＫＰＧＦＶＮＩＬＬＰＰＤＡＫＥＩＡＴＲＦＲＷＷＱＰＲＨＤＧＬＤＱＮＤＷＡＩＤＮＶＬＩＳＧＳＡＤＱＲＴＶＭＬＤＴＦＳＳＡＰＶＰＱＨＥＲＳＰＡＤＡＧＰＶＧＲＩＡＦＤＭＦＭＥＤＫＴＳＶＮＥＨＷＬＦＨＤＤＣＴＶＥＲＦＣＤＳＰＤＧＶＭＬＣＧＳＨＤＧＲＥＶＹＡＶＴＨＤＬＴＰＴＥＧＷＩＭＱＦＫＩＳＶＧＣＫＶＳＥＫＩＡＱＮＱＩＨＶＱＹＳＴＤＦＧＶＳＷＮＹＬＶＰＱＣＬＰＡＤＰＫＣＳＧＳＶＳＱＰＳＶＦＦＰＴＫＧＷＫＲＩＴＹＰＬＰＥＳＬＶＧＮＰＶＲＦＲＦＹＱＫＹＳＤＭＱＷＡＩＤＮＦＹＬＧＰＧＣＬＤＮＣＲＧＨＧＤＣＬＲＥＱＣＩＣＤＰＧＹＳＧＰＮＣＹＬＴＨＴＬＫＴＦＬＫＥＲＦＤＳＥＥＩＫＰＤＬＷＭＳＬＥＧＧＳＴＣＴＥＣＧＩＬＡＥＤＴＡＬＹＦＧＧＳＴＶＲＱＡＶＴＱＤＬＤＬＲＧＡＫＦＬＱＹＷＧＲＩＧＳＥＮＮＭＴＳＣＨＲＰＩＣＲＫＥＧＶＬＬＤＹＳＴＤＧＧＩＴＷＴＬＬＨＥＭＤＹＱＫＹＩＳＶＲＨＤＹＩＬＬＰＥＤＡＬＴＮＴＴＲＬＲＷＷＱＰＦＶＩＳＮＧＩＶＶＳＧＶＥＲＡＱＷＡＬＤＮＩＬＩＧＧＡＥＩＮＰＳＱＬＶＤＴＦＤＤＥＧＴＳＨＥＥＮＷＳＦＹＰＮＡＶＲＴＡＧＦＣＧＮＰＳＦＨＬＹＷＰＮＫＫＫＤＫＴＨＮＡＬＳＳＲＥＬＩＩＱＰＧＹＭＭＱＦＫＩＶＶＧＣＥＡＴＳＣＧＤＬＨＳＶＭＬＥＹＴＫＤＡＲＳＤＳＷＱＬＶＱＴＱＣＬＰＳＳＳＮＳＩＧＣＳＰＦＱＦＨＥＡＴＩＹＮＳＶＮＳＳＳＷＫＲＩＴＩＱＬＰＤＨＶＳＳＳＡＴＱＦＲＷＩＱＫＧＥＥＴＥＫＱＳＷＡＩＤＨＶＹＩＧＥＡＣＰＫＬＣＳＧＨＧＹＣＴＴＧＡＩＣＩＣＤＥＳＦＱＧＤＤＣＳＶＦＳＨＤＬＰＳＹＩＫＤＮＦＥＳＡＲＶＴＥＡＮＷＥＴＩＱＧＧＶＩＧＳＧＣＧＱＬＡＰＹＡＨＧＤＳＬＹＦＮＧＣＱＩＲＱＡＡＴＫＰＬＤＬＴＲＡＳＫＩＭＦＶＬＱＩＧＳＭＳＱＴＤＳＣＮＳＤＬＳＧＰＨＡＶＤＫＡＶＬＬＱＹＳＶＮＮＧＩＴＷＨＶＩＡＱＨＱＰＫＤＦＴＱＡＱＲＶＳＹＮＶＰＬＥＡＲＭＫＧＶＬＬＲＷＷＱＰＲＨＮＧＴＧＨＤＱＷＡＬＤＨＶＥＶＶＬＶＳＴＲＫＱＮＹＭＭＮＦＳＲＱＨＧＬＲＨＦＹＮＲＲＲＲＳＬＲＲＹＰ（Ｇｅｎｂａｎｋ ＡＡＣ５１１０５．１）（配列番号３）。天然に生じるヒトのセレノプロテインＰのアミノ酸配列は、次のとおりである。
ＭＷＲＳＬＧＬＡＬＡＬＣＬＬＰＳＧＧＴＥＳＱＤＱＳＳＬＣＫＱＰＰＡＷＳＩＲＤＱＤＰＭＬＮＳＮＧＳＶＴＶＶＡＬＬＱＡＳＸＹＬＣＩＩＥＡＳＫＬＥＤＬＲＶＫＬＫＫＥＧＹＳＮＩＳＹＩＶＶＮＨＱＧＩＳＳＲＬＫＹＴＨＬＫＮＫＶＳＥＨＩＰＶＹＱＱＥＥＮＱＴＤＶＷＴＬＬＮＧＳＫＤＤＦＬＩＹＤＲＣＧＲＬＶＹＨＬＧＬＰＦＳＦＬＴＦＰＹＶＥＥＡＩＫＩＡＹＣＥＫＫＣＧＮＣＳＬＴＴＬＫＤＥＤＦＣＫＲＶＳＬＡＴＶＤＫＴＶＥＴＰＳＰＨＹＨＨＥＨＨＨＮＨＧＨＱＨＬＧＳＳＥＬＳＥＮＱＱＰＧＡＰＮＡＰＴＨＰＡＰＰＧＬＨＨＨＨＫＨＫＧＱＨＲＱＧＨＰＥＮＲＤＭＰＡＳＥＤＬＱＤＬＱＫＫＬＣＲＫＲＣＩＮＱＬＬＣＫＬＰＴＤＳＥＬＡＰＲＳＸＣＣＨＣＲＨＬＩＦＥＫＴＧＳＡＩＴＸＱＣＫＥＮＬＰＳＬＣＳＸＱＧＬＲＡＥＥＮＩＴＥＳＣＱＸＲＬＰＰＡＡＸＱＩＳＱＱＬＩＰＴＥＡＳＡＳＸＲＸＫＮＱＡＫＫＸＥＸＰＳＮ（ＧｅｎＢａｎｋ：ＣＡＡ７７８３６．１），（配列番号４）。
【００６１】
用語「パッケージ挿入物」は、効能、用法、用量、投与、併用療法、禁忌についての情報、及び／又はそのような治療用製品の使用に関する警告を含む、治療用製品の商用パッケージに慣習的に含まれている指示書を指すために使用される。
【００６２】
参照ポリペプチド配列に関する「パーセント（％）アミノ酸配列同一性」は、配列を整列させ、最大のパーセント配列同一性を得るために必要ならば間隙を導入した後、如何なる保存的置換も配列同一性の一部と考えないとした、参照ポリペプチドのアミノ酸残基と同一である候補配列中のアミノ酸残基のパーセントとして定義される。パーセントアミノ酸配列同一性を決定する目的のためのアラインメントは、当業者の技量の範囲にある種々の方法、例えばＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ-２、ＡＬＩＧＮ、又はＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアのような公に入手可能なコンピュータソフトウェアを使用することにより達成可能である。当業者であれば、比較される配列の完全長に対して最大のアラインメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含む、配列をアラインするための適切なパラメータを決定することができる。しかし、ここでの目的のためには、％アミノ酸配列同一性の値は、配列比較コンピュータプログラムＡＬＩＧＮ-２を使用することによって生成される。ＡＬＩＧＮ-２配列比較コンピュータプログラムはジェネンテック社によって作製され、ソースコードは米国著作権庁、ワシントンＤ．Ｃ．，２０５５９に使用者用書類とともに提出され、米国著作権登録番号ＴＸＵ５１００８７の下で登録されている。ＡＬＩＧＮ-２もまた、ジェネンテック社、サウスサンフランシスコ、カリフォルニアから公的に入手可能であり、又はそのソースコードからコンパイルすることができる。ＡＬＩＧＮ-２プログラムは、デジタルＵＮＩＸのＶ４．０Ｄを含む、ＵＮＩＸオペレーティングシステム上での使用のためにコンパイルされるべきである。全ての配列比較パラメータは、ＡＬＩＧＮ-２プログラムによって設定され変動しない。
【００６３】
アミノ酸配列比較にＡＬＩＧＮ-２が用いられる状況では、与えられたアミノ酸配列Ａの、与えられたアミノ酸配列Ｂとの、又はそれに対する％アミノ酸配列同一性（或いは、与えられたアミノ酸配列Ｂと、又はそれに対して所定の％アミノ酸配列同一性を持つ又は含む与えられたアミノ酸配列Ａと言うこともできる）は次のように計算される：
分率Ｘ／Ｙの１００倍
ここで、Ｘは配列アラインメントプログラムＡＬＩＧＮ−２により、ＡとＢのそのプログラムのアラインメントにおいて同一と一致したスコアのアミノ酸残基の数であり、ＹはＢの全アミノ酸残基数である。アミノ酸配列Ａの長さがアミノ酸配列Ｂの長さと異なる場合、ＡのＢに対する％アミノ酸配列同一性は、ＢのＡに対する％アミノ酸配列同一性とは異なることは理解されるであろう。特に断らない限り、本明細書で使用されるすべての％アミノ酸配列同一性値が、ＡＬＩＧＮ-２コンピュータプログラムを使用し、直前の段落で説明したように得られる。
【００６４】
幾つかの実施態様において、薬剤は「末梢投与」されるか又は「末梢に投与した」。本明細書で使用する場合、これらの用語は、薬剤、例えば治療的薬剤の個体への、ＣＮＳへの直接投与でない、例えば血液脳関門の脳以外の側と接触して薬剤をもたらす、投与の任意の形態を指す。末梢投与は、限定されないが、静脈内、皮下、筋肉内、腹腔内、経皮、吸入、頬、鼻、直腸、経口投与を含む。
【００６５】
用語「薬学的製剤」は、その中に有効で含有される活性成分の生物学的活性を許容するような形態であって、製剤を投与する被検体にとって許容できない毒性である他の成分を含まない調製物を指す。
【００６６】
「薬学的に許容される担体」は、被検体に非毒性であり、有効成分以外の製剤処方中の成分を指す。薬学的に許容される担体は、限定されないが、緩衝剤、賦形剤、安定剤、又は保存剤を含む。
【００６７】
本明細書中で使用される用語「シャトル剤」は、少なくとも一つのＬＲＰ８結合分子及び少なくとも一つのＣＮＳ活性化合物を含む化合物を指し、少なくとも一つのＬＲＰ８結合分子は、少なくとも一つのＣＮＳ活性化合物に、共有結合（すなわち、直接融合またはリンカー媒介コンジュゲーション）又は非共有結合（すなわち、イオン性または疎水性相互作用を介して）の何れかでコンジュゲートしている。シャトル剤には、非限定的な例として、ＬＲＰ８の各々及び所望の治療用又は診断用ＣＮＳ標的に特異的に結合する多重融合タンパク質を含む。
【００６８】
「治療効果」とは、疾患に罹患していない個体における平均的または正常な状態よりも良好である状態（すなわち、苦痛が無いか、または無症状の被験体における正常または平均的な状態に比べて平均以上の効果、例えばＣＮＳの機能に少なくとも一部が起因する被験者における、改善された認知、記憶、気分又は他の特性など）の産生を指す。
【００６９】
本明細書で用いられるように、「治療」（及び「治療する（ｔｒｅａｔ）」または「治療している（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」など文法上の変形）は、治療されている個体の自然経過を変えようと試みる臨床的介入を指し、予防のために、または臨床病理の過程においてのいずれかで実行できる。治療の望ましい効果は、限定されないが、疾患の発症又は再発を予防すること、症状の緩和、疾患の直接的または間接的な病理学的帰結の縮小、転移を予防すること、疾患の進行の速度を遅らせること、疾患状態の改善又は緩和、及び寛解又は予後の改善を含む。幾つかの実施態様において、本発明の組成物及び方法は、疾患または障害（すなわち、中枢神経系疾患または中枢神経系障害）の発症を遅延させ、または疾患又は障害の進行を遅らせるために使用される。
【００７０】
用語「可変領域」又は「可変ドメイン」は、抗体の抗原への結合に関与する抗体の重鎖または軽鎖のドメインを指す。天然型抗体の可変重鎖ドメイン及び軽鎖（それぞれＶＨおよびＶＬ）は、４つの保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）と３つの超可変領域（ＨＶＲ）を含む各ドメインを持ち、一般的に似たような構造を有する。（例えば、Kindt et al. Kuby Immunology, 6th ed., W.H. Freeman and Co., page 91 (2007)を参照)。単一のＶＨ又はＶＬドメインが、抗原結合特異性を付与するのに十分であり得る。更に、特定の抗原に結合する抗体は、相補的なＶＬ又はＶＨドメインのそれぞれのライブラリーをスクリーニングするために抗原を特異的に結合する抗体由来のＶＨ又はＶＬドメインを用いて単離することができる。例えば、Portolano et al., J. Immunol. 150:880-887 (1993); Clarkson et al., Nature 352:624-628 (1991)を参照。
【００７１】
本明細書で使用される、用語「ベクター」は、それがリンクされている別の核酸を伝播することができる核酸分子を指す。この用語は、自己複製核酸構造としてのベクター、並びにそれが導入された宿主細胞のゲノムに組み込まれたベクターを含む。ある種のベクターは、それらが動作可能なようにリンクされている核酸の発現を指示することができる。このようなベクターは、本明細書では「発現ベクター」として参照される。
【００７２】
ＩＩ．組成物および方法
血液脳関門（「ＢＢＢ」）は、多くの末梢投与された化合物の中枢神経系（ＣＮＳ）への送達における制限要因である。特に、ＢＢＢは自由にＣＮＳへ浸透することができる分子に関して大きさの制限を置いている。一般に、組換えタンパク質、アンチセンス薬、遺伝子治療薬、モノクローナル抗体、またはＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）系薬物などの大きな分子治療薬は、薬理学的に有意な量で効率的にＢＢＢを通過しない。一般的に、小分子薬はＢＢＢを通過できると仮定されているが、実際には、ＢＢＢを通過する輸送の欠如のため、全ての小分子薬の２％未満が、脳内で活性である。一般的に言えば、分子は、脂溶性である必要があり、薬理学的に有意な量でＢＢＢを通過するために、４００ダルトン未満の分子量を有しており、小さな有機分子の大半は、両方の分子特性を持っていない。このように、ＢＢＢは、脳および中枢神経系のための新しい治療学、診断及び研究ツールの開発における律速段階である。
【００７３】
このＢＢＢの問題を迂回したり回避するには、侵襲的な経頭蓋薬物送達戦略、例えば、脳室内（ＩＣＶ）注入、脳内（ＩＣ）投与、対流強化拡散（ｃｏｎｖｅｃｔｉｏｎ ｅｎｈａｎｃｅｄ ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ）（ＣＥＤ）などが使用されている。植込み型デバイスも使用されている。脳への経頭蓋的薬物送達のこれらの各方法は、高価で、侵襲的で、ほとんど効果が無い。ＩＣＶの経路は通常、脳の上衣表面へタンパク質を送達するのみで、脳実質へ送達しない。更に、ＩＣの投与は、しばしば脳内の薬物拡散の効率が低いことが原因で、注射部位の局所的な領域のみへの薬物の送達をもたらす。本発明は、ＢＢＢを迂回し、薬剤、例えば、ペプチド、タンパク質及び抗体が、末梢血からＢＢＢを通過できるようにするために、これらの侵襲性が高く一般的には不満足な方法に代わるものを提供する。本発明は、末梢血からＣＮＳへ所望の物質を輸送するためのメカニズムを提供するための、ＢＢＢに存在する内因性の輸送システムの使用に基づいている。
【００７４】
本発明はまた、まだ解決されていないＣＮＳへＢＢＢを通って薬剤を送達する上で重要な鍵となる要因に対処する：脳への脳特異的送達。高度に脳特異的な受容体媒介性送達は、まだ説明されていない。送達のために以前に利用されたほとんどの受容体はまた、末梢組織で高度に発現されており、これらの分子では脳特異的送達のみ不可能にしている。改良された脳特異性の利点は、投与された化合物のより高い有効性、並びに化合物の所与の投与量におけるより少ない副作用の可能性である。本発明は、ＬＲＰ８は、抗体などの生体分子を含む、通常ＢＢＢを通過して脳に浸透することができない他の分子の移行を容易にするために利用することができる、非常にＢＢＢ−特異的なタンパク質であるという驚くべき発見を提供する。
【００７５】
ＬＲＰ８は、低密度リポタンパク質受容体（ＬＤＬＲ）ファミリーのメンバーである(Brown and Goldstein, Science 232 (1986)： 34−47)；しかし、ＬＲＰ８は、Ｓｒｃホモロジー３（ＳＨ３）結合モチーフについての最小限のコンセンサス配列の３つの可能性のある複製を含む、細胞質尾部における新規な５９アミノ酸セグメントをコードする付加的なエキソンを含む(Riddell et al., J. Lipid Res. 40 (1999):1925−1930)。ＬＲＰ８の構造の概略を図１に示す。ＬＲＰ８は、７つのリピート（連続した番号付けで、最もＮ末端部分で１から始まり、リピート領域の最もＣ末端部分で７）、ＥＧＦリピート領域、ＹＷＴＤβプロペラ領域、及び糖ドメインから成る、Ｎ末端付近のリガンド結合リピート領域を含むいくつかの細胞外ドメインを持つ。短い膜貫通領域の後ろに、タンパク質のＣ末端シグナル伝達ドメインが細胞内に位置している。
【００７６】
ＬＲＰ８は、他の記載されたトランスポーターよりも脳／血液脳関門において、より特異的に発現している。ヒトでは、ＬＲＰ８は、主に脳や胎盤に発現し、他の組織では検出されないと以前に示されている(Novak et al., J. Biol. Chem. 271: 11732-11736 (1996); Kim et al., J. Biol. Chem. 271: 8373-8380 (1996))。それを活用する治療法のために、ＬＲＰ８の高い特異性は、結合が末梢並びに脳で起きた場合、その他で必要であろうよりも少量の治療薬の利用を可能にするのみならず、それはまた、脳／ＣＮＳはさておき他の臓器への治療薬の曝露を減らすことにより、治療薬の副作用の可能性を減らすか、または防ぐことができる。
【００７７】
ＢＢＢを横断し、治療及び／又は診断機能を発揮するために脳に入ることができる治療用及び診断用組成物を提供することが本発明の目的である。従って、本発明は、ＬＲＰ８結合分子及びＣＮＳ活性化合物の両方を含む化合物を提供し、ここでＬＲＰ８結合分子はＬＲＰ８に結合し、ＢＢＢを通過して化合物の移行を生じ、ＣＮＳ活性化合物は、脳内に望まれる治療及び／又は診断機能を持っている。
【００７８】
幾つかの実施態様において、シャトル剤のＬＲＰ８結合分子の部分は、ＬＲＰ８に特異的に結合する。一態様において、ＬＲＰ８結合分子は、ＢＢＢを通過する移行を生じる方法でＬＲＰ８に特異的に結合する。一態様において、ＬＲＰ８結合分子は、ＢＢＢを通過するＬＲＰ８結合分子及び残りのその関連シャトル剤の移行を生じる方法でＬＲＰ８に特異的に結合する。
【００７９】
一実施態様において、本発明のシャトル剤のＬＲＰ８結合分子部分はＬＲＰ８の天然のリガンドである。一態様において、ＬＲＰ８結合分子はリーリンである。一態様において、ＬＲＰ８結合分子は、配列番号３のアミノ酸配列を有するタンパク質である。一態様において、ＬＲＰ８結合分子は、セレノプロテインＰである。一態様において、ＬＲＰ８結合分子は、配列番号４のアミノ酸配列を有するタンパク質である。一実施態様において、本発明のシャトル剤のＬＲＰ８結合分子部分はＬＲＰ８の天然のリガンドの修飾型である。一態様において、天然リガンドは、標識の付加により修飾される。一態様において、標識は、放射性標識、蛍光体、発色団、及び親和性タグから選択される。一態様において、天然リガンドは、１つまたはそれ以上のアミノ酸の付加、欠失、または置換により修飾される。一態様において、付加、欠失、または置換は、未修飾の天然リガンドのＬＲＰ８への結合に比べて、修飾された天然リガンドのＬＲＰ８への結合を調節する。一つのそうした態様では、調節は結合を増加させる。一つのそうした態様では、調節は結合を減少させる。一態様において、付加、欠失、または置換は、ＢＢＢを通過するＬＲＰ８による修飾された天然リガンドの移行を調節する。一つのそうした態様では、ＢＢＢを通過する移行が増加する。一つのそうした態様では、ＢＢＢを通過する移行が減少する。一態様において、天然リガンドの修飾された形態は、修飾されたリーリンである。一態様において、天然リガンドの修飾された形態は、配列番号３の修飾されたタンパク質である。一態様において、天然リガンドの修飾された形態は、修飾されたセレノプロテインＰである。一態様において、天然リガンドの修飾された形態は、配列番号４の修飾されたタンパク質である。一態様において、天然リガンドの修飾された形態は、イムノコンジュゲートである。
【００８０】
一実施態様において、本発明のシャトル剤のＬＲＰ８結合分子部分はＬＲＰ８の天然のリガンドのＬＲＰ８結合断片である。一態様において、ＬＲＰ８結合断片はリーリンの断片である。一態様において、ＬＲＰ８結合断片は、配列番号３のアミノ酸配列を有するタンパク質の断片である。一態様において、ＬＲＰ８結合断片は、セレノプロテインＰの断片である。一態様において、ＬＲＰ８結合断片は、配列番号４のアミノ酸配列を有するタンパク質の断片である。一実施態様において、本発明のシャトル剤のＬＲＰ８結合分子部分はＬＲＰ８の天然のリガンドの修飾型のＬＲＰ８結合断片である。一態様において、天然リガンドは、標識の付加により修飾される。一態様において、標識は、放射性標識、蛍光体、発色団、及び親和性タグから選択される。一態様において、天然リガンドは、１つまたはそれ以上のアミノ酸の付加、欠失、または置換により修飾される。一態様において、付加、欠失、または置換は、未修飾の天然リガンドのＬＲＰ８への結合に比べて、修飾された天然リガンドのＬＲＰ８への結合断片の結合を調節する。一つのそうした態様では、調節は結合を増加させる。一つのそうした態様では、調節は結合を減少させる。一態様において、付加、欠失、または置換は、ＢＢＢを通過するＬＲＰ８による修飾された天然リガンドのＬＲＰ８結合断片の移行を調節する。一つのそうした態様では、ＢＢＢを通過する移行が増加する。一つのそうした態様では、ＢＢＢを通過する移行が減少する。一態様において、天然リガンドのＬＲＰ８結合断片の修飾された形態は、修飾されたリーリンのＬＲＰ８結合断片である。一態様において、天然リガンドのＬＲＰ８結合断片の修飾された形態は、配列番号３の修飾されたタンパク質のＬＲＰ８結合断片である。一態様において、天然リガンドのＬＲＰ８結合断片の修飾された形態は、修飾されたセレノプロテインＰのＬＲＰ８結合断片である。一態様において、天然リガンドのＬＲＰ８結合断片の修飾された形態は、配列番号４の修飾されたタンパク質のＬＲＰ８結合断片である。一態様において、天然リガンドのＬＲＰ８結合断片の修飾された形態は、イムノコンジュゲートである。
【００８１】
一実施態様において、本発明のシャトル剤のＬＲＰ８結合分子部分はＬＲＰ８のリガンド結合リピート領域に結合する。一実施態様において、本発明のシャトル剤のＬＲＰ８結合分子部分はＬＲＰ８のリガンド結合リピート１に結合する。一実施態様において、本発明のシャトル剤のＬＲＰ８結合分子部分はＬＲＰ８のリガンド結合リピート２に結合する。一実施態様において、本発明のシャトル剤のＬＲＰ８結合分子部分はＬＲＰ８のリガンド結合リピート３に結合する。一実施態様において、本発明のシャトル剤のＬＲＰ８結合分子部分はＬＲＰ８のリガンド結合リピート４に結合する。一実施態様において、本発明のシャトル剤のＬＲＰ８結合分子部分はＬＲＰ８のリガンド結合リピート５に結合する。一実施態様において、本発明のシャトル剤のＬＲＰ８結合分子部分はＬＲＰ８のリガンド結合リピート６に結合する。一実施態様において、本発明のシャトル剤のＬＲＰ８結合分子部分はＬＲＰ８のリガンド結合リピート７に結合する。一実施態様において、本発明のシャトル剤のＬＲＰ８結合分子部分はＬＲＰ８のＥＧＦリピート領域に結合する。一実施態様において、本発明のシャトル剤のＬＲＰ８結合分子部分はＬＲＰ８のＹＷＴＤベータプロペラ領域に結合する。一実施態様において、本発明のシャトル剤のＬＲＰ８結合分子部分はＬＲＰ８の糖ドメイン領域に結合する。
【００８２】
一実施態様において、シャトル剤のＬＲＰ８結合分子の部分は、抗体である。一つの態様では、抗体は、モノクローナル抗体である。一つの態様では、抗体は、キメラ抗体である。一つの態様では、抗体は、ヒト化抗体である。一つの態様では、抗体は、ヒト抗体である。一つの態様では、抗体は、多重特異性抗体である。一つの態様では、抗体は、標識されている。一つのそのような態様において、標識は、放射性標識、蛍光体、発色団、及び親和性タグから選択される。一つの態様では、抗体は、ＢＢＢを通過してその移行を可能にするために十分なＬＲＰ８に対する親和性を持っている。一つの態様では、抗体は、ＢＢＢを通過する部分であるシャトル剤の残りの移行を可能にするために十分なＬＲＰ８に対する親和性を持っている。一つの態様では、抗体は、エフェクター機能を持たない。一つの態様では、抗体は、エフェクター機能を持つ。一つの態様では、抗体アイソタイプは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤおよびＩｇＥから選択される。一つの態様では、抗体はＬＲＰ８の細胞外ドメインに結合する。一つの態様では、抗体はＬＲＰ８の細胞外ドメインへの結合について、ＬＲＰ８の一以上の天然リガンドと競合する。一つの態様では、抗体はＬＲＰ８の細胞外ドメインへの結合について、ＬＲＰ８の一以上の天然リガンドと競合しない。その他の態様において、上記態様の任意の抗体はＬＲＰ８に結合する抗体断片である。
【００８３】
一実施態様において、シャトル剤のＬＲＰ８結合分子の部分は、ペプチド、アプタマー、および小分子から選択される。一つの態様では、ＬＲＰ８結合分子の結合親和性は、ＢＢＢを通過する移行を可能にするために十分である。一つの態様では、ＬＲＰ８結合分子は、ＢＢＢを通過する部分であるシャトル剤の残りの移行を可能にするために十分なＬＲＰ８に対する親和性を持っている。一態様において、ＬＲＰ８結合分子はＬＲＰ８結合ペプチドである。一態様において、ＬＲＰ８結合分子はアプタマーである。一態様において、ＬＲＰ８結合分子は小分子である。
【００８４】
一実施態様において、シャトル剤のＣＮＳ活性化合物部分は、１つまたは複数のＣＮＳ標的に対する作用を持つ化合物である。一つの態様では、その作用は研究において有用である。一つの態様では、その作用は治療効果である。一つの態様では、その作用は診断において有用な作用である。一つのそのような態様では、ＣＮＳ活性化合物は、ＣＮＳ内で１つ以上の標的に結合し、それらの標的のイメージングを可能にする。一つのそのような態様では、一つ以上のＣＮＳ標的へのＣＮＳ活性化合物の結合は、ＣＮＳ疾患又は障害の存在又は進行の指標である。
【００８５】
一実施態様において、シャトル剤のＣＮＳ活性化合物部分は、ＣＮＳ疾患又は障害を治療する能力において選択される。一態様において、ＣＮＳの疾患または障害は、神経障害である。一態様において、ＣＮＳの疾患または障害は、アミロイド症である。一態様において、ＣＮＳの疾患または障害は、癌である。一態様において、ＣＮＳの疾患または障害は、眼の疾患または障害である。一態様において、ＣＮＳの疾患または障害は、ウイルスまたは細菌感染である。一態様において、ＣＮＳの疾患または障害は、炎症である。一態様において、ＣＮＳの疾患または障害は、虚血である。一態様において、ＣＮＳの疾患または障害は、神経変性疾患である。一態様において、ＣＮＳの疾患または障害は、発作である。一態様において、ＣＮＳの疾患または障害は、行動障害である。一態様において、ＣＮＳの疾患または障害は、リソソーム蓄積症である。一態様において、ＣＮＳ活性化合物は、疾患または障害を排除する。一態様において、ＣＮＳ活性化合物は、疾患または障害の重症度または持続時間を減らす。一態様において、ＣＮＳ活性化合物は、疾患または障害の発症又は進行を防ぐ。
【００８６】
一実施態様において、シャトル剤のＣＮＳ活性化合物部分は、ＣＮＳ疾患又は障害を検出する能力において選択される。一態様において、ＣＮＳの疾患または障害は、神経障害である。一態様において、ＣＮＳの疾患または障害は、アミロイド症である。一態様において、ＣＮＳの疾患または障害は、癌である。一態様において、ＣＮＳの疾患または障害は、眼の疾患または障害である。一態様において、ＣＮＳの疾患または障害は、ウイルスまたは細菌感染である。一態様において、ＣＮＳの疾患または障害は、炎症である。一態様において、ＣＮＳの疾患または障害は、虚血である。一態様において、ＣＮＳの疾患または障害は、神経変性疾患である。一態様において、ＣＮＳの疾患または障害は、発作である。一態様において、ＣＮＳの疾患または障害は、行動障害である。一態様において、ＣＮＳの疾患または障害は、リソソーム蓄積症である。一態様において、ＣＮＳ活性化合物は、症状の発症前に疾患または障害を検出する。一態様において、ＣＮＳ活性化合物は、疾患または障害の重症度または持続時間の評価を可能とする。一態様において、ＣＮＳ活性化合物は、疾患または障害の非侵襲的検出及び／又はイメージングを可能とする。一つの態様では、イメージングは、Ｘ線撮影による。一つの態様では、イメージングは、断層撮影による。一つの態様では、イメージングは、磁気共鳴イメージングによる。
【００８７】
一実施態様において、ＣＮＳ活性化合物は、抗体、タンパク質、ペプチド、アプタマー、抑制性核酸、小分子、またはこれらの任意の断片から選択される。一態様において、ＣＮＳ活性化合物は抗体である。一態様において、ＣＮＳ活性化合物はタンパク質である。一態様において、ＣＮＳ活性化合物はペプチドである。一態様において、ＣＮＳ活性化合物はアプタマーである。一態様において、ＣＮＳ活性化合物は抑制性核酸である。一つのそのような態様において、抑制性核酸はｓｉＲＮＡである。一つのそのような態様において、抑制性核酸はリボザイムである。一態様において、ＣＮＳ活性化合物は小分子である。一態様において、ＣＮＳ活性化合物は、ＣＮＳ中でその活性を保持する前述の任意の断片である。一態様において、ＣＮＳ活性化合物は標識されている。一つのそのような態様において、標識は、放射性標識、蛍光体、発色団、及び親和性タグから選択される。
【００８８】
一実施態様において、ＬＲＰ８結合分子とＣＮＳ活性化合物はコンジュゲートしている。一態様において、コンジュゲーションはリンカーなしの直接結合による。一態様において、コンジュゲーションはリンカー部分を介する。一態様において、コンジュゲーションは、共有結合である。一態様において、コンジュゲーションは、非共有結合である。一態様において、リンカーはＣＮＳ内で切断可能である。一態様において、コンジュゲーションは、正常な結合及び／又は活性の一部を保持しているＬＲＰ８結合分子及びＣＮＳ活性化合物の各々をもたらす。一つのそのような態様において、各々のもとの活性の１００％が保持されている。
【００８９】
一実施態様において、ＬＲＰ８結合分子は多重特異性抗体である。一つの態様では、多重特異性抗体は、２重特異性である。一つのそのような態様において、抗体は、第２の特異性に寄与するＣＮＳ結合化合物を介して、ＬＲＰ８に特異的に結合し、また別のＣＮＳの標識にも結合する。
【００９０】
一実施態様において、シャトル剤は一以上のＬＲＰ８結合分子を含む。一態様において、ＬＲＰ８結合分子の各事例は同じである。一態様において、ＬＲＰ８結合分子は異なる。一実施態様において、シャトル剤は一以上のＣＮＳ活性化合物を含む。一態様において、シャトル剤中のＣＮＳ活性化合物の各事例は同じである。一態様において、ＣＮＳ活性化合物は異なる。
【００９１】
一実施態様において、本発明のシャトル剤は、分子の血清半減期を調節するように修飾される。一態様において、シャトル剤のＬＲＰ８結合分子の部分が修飾される。一態様において、シャトル剤のＣＮＳ活性化合物の部分が修飾される。一態様において、ＬＲＰ８結合分子部分とシャトル剤のＣＮＳ活性化合物の部分の両方が修飾される。一態様において、コンジュゲーションは、グリコシル化である。一態様において、コンジュゲーションは、ペグ化である。一態様において、修飾はＦｃドメインの追加である。所定の態様において、血中半減期は、シャトル剤のそれよりも平均で少なくとも約５倍大きい。
【００９２】
一実施態様において、前述の本発明の化合物のいずれかが処方される。一態様において、製剤は無菌である。一態様において、製剤は、薬学的に許容される担体を伴う。一態様において、製剤は、投与経路に適している。一態様において、製剤は付加的化合物を含む。一つのそのような態様において、付加的化合物は、所望を治療するために選択される。
【００９３】
一実施態様において、シャトル剤のタンパク質部分をコードする核酸分子が提供される。一態様において、シャトル剤のＬＲＰ８結合分子の部分をコードする核酸分子が提供される。一態様において、シャトル剤のＣＮＳ活性化合物の部分をコードする核酸分子が提供される。一態様において、シャトル剤のＬＲＰ８結合分子の部分及びＣＮＳ活性化合物の部分の両方をコードする単一核酸分子が提供される。一実施態様において、前述の核酸分子のいずれかを包含するベクターが提供される。一態様において、ベクターは発現ベクターである。一実施態様において、本発明のベクターで形質転換された宿主細胞が提供される。一態様において、宿主細胞は、原核生物の宿主細胞である。一態様において、宿主細胞は、真核生物の宿主細胞である。一実施態様において、本発明は、本発明のシャトル剤の製造方法を提供する。一態様において、シャトル剤は完全にタンパク質性であり、本発明の宿主細胞から発現され、精製される。一態様において、シャトル剤の一部のみがタンパク質性であり、その部分が本発明の宿主細胞から発現され、精製される。
【００９４】
一実施態様において、前述の本発明の化合物のいずれかが医薬の製造のために用いられる。一実施態様において、前述の本発明の化合物のいずれかが、ＣＮＳの疾患又は障害の治療のための医薬の製造のために用いられる。一態様において、ＣＮＳの疾患または障害は、神経障害である。一態様において、ＣＮＳの疾患または障害は、アミロイド症である。一態様において、ＣＮＳの疾患または障害は、癌である。一態様において、ＣＮＳの疾患または障害は、眼の疾患または障害である。一態様において、ＣＮＳの疾患または障害は、ウイルスまたは細菌感染である。一態様において、ＣＮＳの疾患または障害は、炎症である。一態様において、ＣＮＳの疾患または障害は、虚血である。一態様において、ＣＮＳの疾患または障害は、神経変性疾患である。一態様において、ＣＮＳの疾患または障害は、発作である。一態様において、ＣＮＳの疾患または障害は、行動障害である。一態様において、ＣＮＳの疾患または障害は、リソソーム蓄積症である。
【００９５】
一実施態様において、前述の本発明の化合物のいずれかが、ＣＮＳの疾患又は障害の検出のための医薬の製造のために用いられる。一態様において、ＣＮＳの疾患または障害は、神経障害である。一態様において、ＣＮＳの疾患または障害は、アミロイド症である。一態様において、ＣＮＳの疾患または障害は、癌である。一態様において、ＣＮＳの疾患または障害は、眼の疾患または障害である。一態様において、ＣＮＳの疾患または障害は、ウイルスまたは細菌感染である。一態様において、ＣＮＳの疾患または障害は、炎症である。一態様において、ＣＮＳの疾患または障害は、虚血である。一態様において、ＣＮＳの疾患または障害は、神経変性疾患である。一態様において、ＣＮＳの疾患または障害は、発作である。一態様において、ＣＮＳの疾患または障害は、行動障害である。一態様において、ＣＮＳの疾患または障害は、リソソーム蓄積症である。
【００９６】
一実施態様において、被験体のＣＮＳ疾患または障害を治療するための、前述の本発明の組成物を使用する方法が提供される。一実施態様において、被験体のＣＮＳ疾患または障害の進行を、検出し、ステージ分類し、又はモニタリングするための、前述の本発明の組成物を使用する方法が提供される。一態様において、上記組成物のいずれかが、末梢に投与される。一態様において、投与は経口である。一態様において、投与は静脈内である。一態様において、投与は筋肉内である。一態様において、投与は皮下である。一態様において、投与は腹腔内である。一態様において、投与は直腸である。一態様において、投与は頬である。一態様において、投与は鼻腔内である。一態様において、投与は経皮的である。一態様において、投与は吸入である。一態様において、組成物の約１ｍｇから約１００ｍｇが投与される。
【００９７】
一実施態様において、ＣＮＳ疾患または障害は、非侵襲的な治療と併せて、本発明のシャトル剤を投与することによって治療することができる。一態様において、治療は放射線治療である。その他の態様において、治療法は、行動療法や心理療法である。
【００９８】
Ａ．典型的なシャトル剤
一態様において、本発明は、ＬＲＰ８へ結合し、ＢＢＢを通過しＣＮＳへ移行する単離されたシャトル剤を提供する。本明細書に記載のように、シャトル剤は、少なくとも一つのＬＲＰ８結合分子と少なくとも一つのＣＮＳ活性化合物を含む。少なくとも一つのＬＲＰ８結合分子と少なくとも一つのＣＮＳ活性化合物との間のコンジュゲーション。
【００９９】
シャトル剤のＬＲＰ８結合分子の部分は特異的にＬＲＰ８に結合し、ＢＢＢを横切るシャトル剤の移行を容易にする。与えられた抗原に特異的に結合する結合分子の同定及び調製は、当技術分野でよく知られている。本発明のＬＲＰ８結合分子であり得る所定の分子は、限定されないが、抗体、ペプチド、ＬＲＰ８の天然リガンド（すなわち、リーリン、アポＥ、又はセレノプロテインＰ）、ＬＲＰ８の天然リガンドの修飾型、アプタマー、及び小子、及びＬＲＰ８結合活性を保持している上記のいずれかの断片を含む。所定の実施態様において、ＬＲＰ８結合分子は、ＬＲＰ８の天然リガンドとＬＲＰ８への結合に対して競合しない。所定の実施態様において、ＬＲＰ８結合分子は、ＬＲＰ８の天然リガンドとＬＲＰ８への結合に対して競合する。所定の実施態様において、ＬＲＰ８結合分子はＬＲＰ８の正常な機能を妨げない。所定の実施態様において、ＬＲＰ８結合分子は、正常なＬＲＰ８機能に拮抗する。所定の実施態様において、ＬＲＰ８結合分子は、正常なＬＲＰ８機能を刺激する。
【０１００】
シャトル剤のＣＮＳ活性化合物部分は、被験体のＣＮＳ内で作用を有する。ＣＮＳ活性化合物は、限定されないが、治療用化合物、診断化合物、及び研究において有用な効力を有する化合物を含む。治療用ＣＮＳ活性化合物は、一つ以上のＣＮＳの疾患又は障害の発症や進展を阻止するため、又は一つ以上のＣＮＳの疾患又障害の重症度、持続時間、又は症状を低減又は阻止するために、一つ以上のＣＮＳの疾患又は障害を治療するのに有効である化合物である。診断用ＣＮＳ活性化合物は、一以上のＣＮＳの疾患又は障害の診断又はステージングに、又は脳の一以上の領域のイメージングに有効である化合物である。
【０１０１】
本発明のＣＮＳ活性化合物であり得る所定の分子は、限定されないが、ＣＮＳ標的結合分子は、ＣＮＳ標的阻害剤、中枢標的活性剤、薬剤、酵素、細胞毒素、検出分子（ＣＮＳに対して一般的、または特定のＣＮＳ標的に特異的）を含む。本発明のＣＮＳ活性化合物であり得る所定の分子は、限定されないが、抗体、ペプチド、タンパク質、一つ以上の中枢神経系の標的の天然リガンド、一つ以上の中枢神経系の標的の天然リガンドの修飾型、アプタマー、抑制性核酸（即ち、小さな抑制性ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）や短いヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ））、リボザイム、及び小分子、又は上記のいずれかの活性断片を含む。本発明の典型的なＣＮＳ活性化合物は本明細書に記載され、限定されないが、抗体、アプタマー、タンパク質、ペプチド、抑制性核酸および小分子、および前述のいずれかの活性断片を含み、いずれもそれ自身であるか、又はＣＮＳ標的分子、例えば限定されないが、アミロイド前駆体タンパク質又はその部分、アミロイドベータ、ベータ−セクレターゼ、ガンマ−セクレターゼ、タウ、アルファ−シヌクレイン、パーキン、ハンチンチン、ＤＲ６、プレセニリン、ＡｐｏＥ、グリオーマ又は他のＣＮＳの癌マーカー、及びニューロトロフィンを特異的に認識するか及び／又は作用する（すなわち、阻害する、活性化する、又は検出する）。
【０１０２】
抗体が薬物にコンジュゲートする場合には、得られた複合体は、抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）と称される。一実施態様において、シャトル剤はＡＤＣである。本明細書中例えば下記Ｇ節に記載され、所定の実施態様でＣＮＳ活性化合物として使用することができる、中枢神経系の疾患または障害の治療のために以前から知られている治療用化合物に加えて、一般的な細胞傷害性薬剤が、本発明のシャトル剤において一以上のＣＮＳ活性化合物として使用することができる。そのような薬物としては、限定されないが、メイタンシノイド（米国特許第５２０８０２０号、第５４１６０６４号及び欧州特許ＥＰ０ ４２５２３５ Ｂ１を参照）；モノメチルアウリスタチン薬物部分ＤＥ及びＤＦ（ＭＭＡＥ及びＭＭＡＦ）（米国特許第５６３５４８３号及び５７８０５８８号及び７４９８２９８号を参照）などのアウリスタチン；ドラスタチン、カリケアマイシン又はその誘導体（米国特許第５７１２３７４号、５７１４５８６号、５７３９１１６号、５７６７２８５号、５７７０７０１号、５７７０７１０号、５７７３００１号、及び５８７７２９６号を参照;Hinman et al., Cancer Res. 53:3336-3342 (1993);及びLode et al., Cancer Res. 58:2925-2928 (1998)); ダウノマイシン又はドキソルビシンなどのアントラサイクリン (Kratz et al., Current Med. Chem. 13:477-523 (2006); Jeffrey et al., Bioorganic & Med. Chem. Letters 16:358-362 (2006); Torgov et al., Bioconj. Chem. 16:717-721 (2005); Nagy et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97:829-834 (2000); Dubowchik et al., Bioorg. & Med. Chem. Letters 12:1529-1532 (2002); King et al., J. Med. Chem. 45:4336-4343 (2002);及び米国特許第６６３０５７９号を参照）；メトトレキサート、ビンデシン、ドセタキセル、パクリタキセル、ラロタキセル、テセタキセル、及びオルタタキセルなどのタキサン、トリコテセン、及びＣＣ１０６５。
【０１０３】
その他の実施態様において、シャトル剤は、酵素的活性毒素またはその断片である、少なくとも一つのＣＮＳ活性化合物を含む。そのような毒素又はれらの断片は、限定されないが、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性断片、（緑膿菌からの）外毒素Ａ鎖、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデクシン(modeccin)Ａ鎖、アルファ-サルシン、アレウリテス・フォーディ(Aleurites fordii)タンパク質、ジアンチン(dianthin)タンパク質、フィトラカ・アメリカーナ(Phytolaca americana)タンパク質（PAPI、PAPII、及びPAP-S）、モモルディカ・チャランチア(momordica charantia)インヒビター、クルシン(curcin)、クロチン(crotin)、サパオナリア・オフィシナリス(sapaonaria oficinalis)インヒビター、ゲロニン(gelonin)、ミトゲリン(mitogellin)、レストリクトシン(restrictocin)、フェノマイシン(phenomycin)、エノマイシン(enomycin)及びトリコテセン(tricothecene)が含まれる。
【０１０４】
前述した実施態様のいずれにおいても、シャトル剤は放射性コンジュゲートを形成するために放射性原子を組み込む一以上部分を含んでもよい。様々な放射性同位体が放射性コンジュゲートの生産のために入手可能である。例としては、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２及びＬｕの放射性同位体を含む。検出のためにコンジュゲートを使用する場合は、それはシンチグラフィー試験のための放射性原子、例えばｔｃ９９ｍ又はＩ１２３、又は核磁気共鳴（ＮＭＲ）画像化（磁気共鳴画像化ｍｒｉとしても知られている）のためのスピン標識、例えば再び、ヨウ素−１２３、ヨウ素−１３１、インジウム−１１１、フッ素−１９、炭素−１３、窒素−１５、酸素−１７、ガドリニウム、マンガン又は鉄を含んでよい。
【０１０５】
上記実施態様のいずれにおいても、シャトル剤に含まれる抗体はヒト化され得る。一つのそのような実施態様では、シャトル剤に含まれる抗体は、ヒト以外の生物種のタンパク質からの超可変領域（ＨＶＲ）を含み、更にアクセプターヒトフレームワーク、例えばヒト免疫グロブリンのフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワークを含む。
【０１０６】
本発明の更なる態様では、上記実施態様のいずれかに記載のシャトル剤に含まれる抗体は、キメラ、ヒト化またはヒト抗体を含むモノクローナル抗体である。一実施態様において、シャトル剤に含まれる抗体は、抗体フラグメント、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ '、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、又はＦ（ａｂ’）２断片である。その他の態様において、抗体は、全長抗体、例えば、本明細書において定義された任意の抗体クラス又はアイソタイプのインタクトな抗体である。更なる態様にて、以下のセクション１−７で説明されるように、上記実施態様のいずれかに記載のシャトル剤は、単独または組み合わせで、任意の特徴を組み込むことができる。
【０１０７】
１．親和性
所定の実施態様において、本明細書で提供されるシャトル剤は、コンジュゲートしたＣＮＳ活性化合物のＬＲＰ８媒介移行を可能にするためにＬＲＰ８に対して十分な親和性を有する。所定の実施態様において、本明細書で提供されるシャトル剤は、少なくとも二つの親和性を有する：ＬＲＰ８結合分子部分はＬＲＰ８に対する親和性を有し、ＣＮＳ活性化合物は、少なくとも一のＣＮＳ標的に対して親和性を有する。所定の実施態様において、本明細書で提供されるシャトル剤は、解離定数（Ｋｄ）が、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、又は≦０．００１ｎＭ（例えば、１０−８Ｍ未満、例えば、１０−８Ｍから１０−１３Ｍ、例えば、１０−９Ｍから１０−１３Ｍ）。
【０１０８】
一実施態様において、Ｋｄは、当技術分野で周知の標準的な技術に従って、目的のタンパク質とその標的パートナーを用いて実行される放射性標識化抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）によって測定される。例えば、Ｆａｂとを含むシャトル剤において、アッセイは以下のように行うことができる。非標識抗原の力価測定系の存在下で、最小濃度の（１２５Ｉ）−標識抗原にてＦａｂを均衡化して、抗Ｆａｂ抗体コートプレートと結合した抗原を捕獲することによって抗原に対するＦａｂの溶液結合親和性を測定する（例としてChen, et al., J. Mol. Biol. 293:865-881(1999)を参照)。アッセイの条件を決めるために、ＭＩＣＲＯＴＩＴＥＲ（登録商標）マルチウェルプレート（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を５μｇ／ｍｌの捕獲抗Ｆａｂ抗体（Ｃａｐｐｅｌ Ｌａｂｓ）を含む５０ｍＭ炭酸ナトリウム（ｐＨ９．６）にて一晩コートして、その後２％（ｗ／ｖ）のウシ血清アルブミンを含むＰＢＳにて室温（およそ２３℃）で２〜５時間、ブロックする。非吸着プレート（Ｎｕｎｃ ＃２６９６２０）に、１００ｐＭ又は２６ｐＭの［１２５Ｉ］抗原を段階希釈した所望のＦａｂと混合する（例えば、Presta等, (1997) Cancer Res. 57: 4593-4599の抗ＶＥＧＦ抗体、Ｆａｂ-１２の評価と一致する)。ついで所望のＦａｂを一晩インキュベートする；しかし、インキュベーションは平衡状態に達したことを確認するまでに長時間（例えばおよそ６５時間）かかるかもしれない。その後、混合物を捕獲プレートに移し、室温で（例えば１時間）インキュベートする。そして、溶液を取り除き、プレートを０．１％のポリソルベート２０（Ｔｗｅｅｎ２０（登録商標））を含むＰＢＳにて８回洗浄する。プレートが乾燥したら、１５０μｌ／ウェルの閃光物質（ＭＩＣＲＯＳＣＩＮＴ−２０ＴＭ；Ｐａｃｋａｒｄ）を加え、プレートをＴＯＰＣＯＵＮＴＴＭγ計測器（Ｐａｃｋａｒｄ）にて１０分間計測する。最大結合の２０％か又はそれ以下濃度のＦａｂを選択してそれぞれ競合結合測定に用いる。
【０１０９】
他の実施態様によると、〜１０反応単位（ＲＵ）の固定した標的（すなわち、ＬＲＰ８又はＣＮＳ標的）ＣＭ５チップを用いて２５℃のＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）−２０００又はＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）−３０００（ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）を用いる表面プラズモン共鳴アッセイを使用してＫｄを測定する。簡単に言うと、カルボキシメチル化デキストランバイオセンサーチップ（ＣＭ５，ＢＩＡｃｏｒｅ Ｉｎｃ．）を、提供者の指示書に従ってＮ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）及びＮ−ヒドロキシスクシニミド（ＮＨＳ）で活性化した。標的を１０ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ４．８）で５μｇ／ｍｌ（〜０．２μＭ）に希釈し、結合したタンパク質の反応単位（ＲＵ）がおよそ１０になるように５μｌ／分の流速で注入した。抗原の注入後、反応しない群をブロックするために１Ｍのエタノールアミンを注入した。動力学的な測定のために、Ｋｄを決定すべき目的のタンパク質の２倍の段階希釈（例えば、Ｆａｂ抗体、イムノコンジュゲート、又は他の結合タンパク質）（０．７８ｎＭから５００ｎＭ）を、２５℃で、およそ２５μｌ／分の流速で０．０５％ポリソルベート２０（Ｔｗｅｅｎ２０ＴＭ）界面活性剤（ＰＢＳＴ）を含むＰＢＳに注入した。会合及び解離のセンサーグラムを同時にフィットさせることによる単純一対一ラングミュア結合モデル（ｓｉｍｐｌｅ ｏｎｅ−ｔｏ−ｏｎｅ Ｌａｎｇｍｕｉｒ ｂｉｎｄｉｎｇ ｍｏｄｅｌ）（ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェアバージョン３．２）を用いて、会合速度（ｋｏｎ）と解離速度（ｋｏｆｆ）を算出した。平衡解離定数（Ｋｄ）をｋｏｆｆ／ｋｏｎ比として算出した。例えば、 Chen et al., J. Mol. Biol. 293:865-881 (1999)を参照。上記の表面プラスモン共鳴アッセイによる結合速度が１０６Ｍ−１ｓ−１を上回る場合、分光計、例えば、流動停止を備えた分光光度計（ｓｔｏｐ−ｆｌｏｗ ｅｑｕｉｐｐｅｄ ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｍｅｔｅｒ）（Ａｖｉｖ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）又は撹拌キュベットを備えた８０００シリーズＳＬＭ−ＡＭＩＮＣＯＴＭ分光光度計（ＴｈｅｒｍｏＳｐｅｃｔｒｏｎｉｃ）で測定される、漸増濃度の抗原の存在下にて、ＰＢＳ（ｐＨ７．２）、２５℃の、２０ｎＭの抗抗原抗体（Ｆａｂ型）の蛍光放出強度（励起＝２９５ｎｍ；放出＝３４０ｎｍ、帯域通過＝１６ｎｍ）における増加又は減少を測定する蛍光消光技術を用いて結合速度を測定することができる。当業者によって理解されるように、上記のアッセイが容易に非抗体結合性分子の測定に適合させることができる。
【０１１０】
２．断片
所定の実施態様において、シャトル剤のＬＲＰ８結合分子部分は、より大きなＬＲＰ８結合タンパク質のＬＲＰ８結合断片である。所定の実施態様において、シャトル剤のＬＲＰ８結合分子部分は、ＬＲＰ８の天然リガンドのＬＲＰ８結合断片、又はその修飾型である。所定の実施態様において、シャトル剤のＬＲＰ８結合分子部分は、抗ＬＲＰ８抗体のＬＲＰ８結合断片である。抗体断片は、限定されないが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ'−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、及びｓｃＦｖ断片、及び下記の他の断片を含む。所定の抗体断片の総説については、 Hudson et al. Nat. Med. 9:129-134 (2003)を参照。ｓｃFv断片の総説については、例えば、 Pluckthun, in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., (Springer-Verlag, New York), pp. 269-315 (1994)を参照；また、国際公開第９３／１６１８５号；及び米国特許第５５７１８９４号及び５，５８７，４５８号も参照。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含み、かつインビボ半減期を増加させたＦａｂ及びＦ（ａｂ '）２断片の議論については、米国特許第５８６９０４６号を参照のこと。
【０１１１】
所定の実施態様において、シャトル剤は多特異性抗体の断片を含む。ダイアボディは２価または二重特異性であり得る２つの抗原結合部位を有する抗体断片である。例えば、欧州特許第４０４０９７号；国際公開第１９９３／０１１６１号； Hudson et al., Nat. Med. 9:129-134 (2003); 及びHollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448 (1993)を参照。トリアボディ及びテトラボディもまた Hudson et al., Nat. Med. 9:129-134 (2003)に記載されている。
【０１１２】
所定の実施態様において、シャトル剤は一以上の単一ドメイン抗体を含む。単一ドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインの全て又は一部、又は軽鎖可変ドメインの全て又は一部を含む抗体断片である。所定の実施態様において、単一ドメイン抗体は、ヒト単一ドメイン抗体である（Ｄｏｍａｎｔｉｓ，Ｉｎｃ．，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ；例えば、米国特許第６２４８５１６Ｂ１号を参照)。
【０１１３】
断片は様々な技術で作成することができ、限定されないが、本明細書に記載するように、タンパク質のタンパク分解、並びに組換え宿主細胞（例えば、大腸菌やファージ）による生産を含む。
【０１１４】
３．キメラ及びヒト化分子
本明細書において、シャトル剤は、ＬＲＰ８結合分子およびＣＮＳ活性化合物の両方を備えており、それ自体キメラ分子である。所定の実施態様において、本明細書に与えられるシャトル剤のＬＲＰ８結合分子の部分は、キメラ分子である。所定の実施態様において、本明細書に与えられるシャトル剤のＣＮＳ活性化合物の部分は、キメラ分子である。所定の実施態様において、シャトル剤又はその一部として本明細書に提供される抗体は、キメラ抗体である。所定のキメラ抗体は、例えば、米国特許第４８１６５６７号、及びMorrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855 (1984))に記載されている。一例において、キメラ抗体は、非ヒト可変領域（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、又はサル等の非ヒト霊長類由来の可変領域）及びヒト定常領域を含む。更なる例において、キメラ抗体は、クラスまたはサブクラスが親抗体のものから変更された「クラススイッチ」抗体である。キメラ抗体は、その抗原結合断片を含む。
【０１１５】
非ヒト種由来のシャトル剤の一以上のアミノ酸を、ヒト免疫系に対して見かけをより「ヒトらしく」するために、及び／又はヒトに投与した場合にその活性または半減期を増加させるために、改変することが望ましい場合があることが当業者によって理解される。「ヒト化」は、非ヒト抗体又はキメラ抗体の関連において最も頻繁に実行される。そこでは、それぞれ抗体の何れもヒト分子から由来しないか、又は抗体の一部がヒト分子から由来する。非ヒト化又はキメラ抗体を含むシャトル剤は、所定の実施態様では、ヒト化されている。所定の実施態様において、キメラ抗体は、ヒト化抗体である。典型的には、非ヒト抗体は、ヒトに対する免疫原性を低減するために、親の非ヒト抗体の特異性と親和性を保持したまま、ヒト化されている。一般に、ヒト化抗体は、ＨＶＲ、例えば、ＣＤＲ（またはその一部）が、非ヒト抗体から由来し、ＦＲ（またはその一部）がヒト抗体配列に由来する、一以上の可変ドメインを含む。ヒト化抗体はまた、任意で、ヒト定常領域の少なくとも一部をも含む。所定の実施態様において、ヒト化抗体の幾つかのＦＲ残基は、抗体特異性又は親和性を回復もしくは改善するめに、非ヒト抗体（例えば、ＨＶＲ残基が由来する抗体）由来の対応する残基で置換されている。
【０１１６】
ヒト化抗体およびそれらの製造方法は、例えば、Almagro and Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008)に総説され、更に、 Riechmann et al., Nature 332:323-329 (1988); Queen et al., Proc. Nat’l Acad. Sci. USA 86:10029-10033 (1989); 米国特許第５８２１３３７号、第７５２７７９１号、第６９８２３２１号及び第７０８７４０９号； Kashmiri et al., Methods 36:25-34 (2005) （ＳＤＲ（ａ−ＣＤＲ）グラフティングを記述）; Padlan, Mol. Immunol. 28:489-498 (1991) ("リサーフェシング"を記述); Dall’Acqua et al., Methods 36:43-60 (2005) （”ＦＲシャッフリング”を記述）；及びOsbourn et al., Methods 36:61-68 (2005) 及びKlimka et al., Br. J. Cancer, 83:252-260 (2000)（ＦＲのシャッフリングへの”誘導選択”アプローチを記述）に記載されている。
【０１１７】
ヒト化に用いられ得るヒトフレームワーク領域は、限定されないが、「ベストフィット」法を用いて選択されるフレームワーク領域（例えば、Sims et al. J. Immunol. 151:2296 (1993)）；軽鎖または重鎖の可変領域の特定のサブグループのヒト抗体のコンセンサス配列由来のフレームワーク領域(例えば、Carter et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:4285 (1992); 及びPresta et al. J. Immunol., 151:2623 (1993)を参照); ヒト成熟（体細胞変異）フレームワーク領域またはヒト生殖細胞系フレームワーク領域 (例えば、Almagro and Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008)を参照); 及びFRライブラリスクリーニング由来のフレームワーク領域 (例えば、Baca et al., J. Biol. Chem. 272:10678-10684 (1997)及び Rosok et al., J. Biol. Chem. 271:22611-22618 (1996)を参照)を含む。
【０１１８】
４．ヒト分子
所定の実施態様において、本明細書で提供されるシャトル剤は、起源がヒトである。所定の実施態様において、本明細書に与えられるシャトル剤に含まれる抗体はヒト抗体である。ヒト抗体は、当技術分野で公知の様々な技術を用いて生産することができる。ヒト抗体は一般的にvan Dijk and van de Winkel, Curr. Opin. Pharmacol. 5: 368-74 (2001) 及びLonberg, Curr. Opin. Immunol. 20:450-459 (2008)に記載されている。
【０１１９】
ヒト抗体は、抗原チャレンジに応答して、インタクトなヒト抗体又はヒト可変領域を持つまたはインタクトな抗体を産生するように改変されたトランスジェニック動物に、免疫原を投与することにより調製することができる。このような動物は、典型的には、内因性免疫グロブリン遺伝子座を置換するか、又は染色体外に存在するかもしくは動物の染色体にランダムに組み込まれている、ヒト免疫グロブリン遺伝子座の全てまたは一部を含む。このようなトランスジェニックマウスでは、内因性免疫グロブリン遺伝子座は、一般的に不活性化される。トランスジェニック動物からヒト抗体を得るための方法の総説については、 Lonberg, Nat. Biotech. 23:1117-1125 (2005)を参照。また、例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥＴＭ技術を記載している、米国特許第６０７５１８１号及び６１５０５８４号；ＨｕＭａｂ（登録商標）技術を記載している米国特許第５７７０４２９号；Ｋ−Ｍ ＭＯＵＳＥ（登録商標）技術を記載している米国特許第７０４１８７０号及び、ＶＥＬＯＣＩＭＯＵＳＥ（登録商標）技術を記載している米国特許出願公開第２００７／００６１９００号）を参照。このような動物で生成されたインタクトな抗体由来のヒト可変領域は、さらに種々のヒト定常領域と組み合わせることにより、例えば、更に改変される可能性がある。
【０１２０】
ヒト抗体は、ハイブリドーマベースの方法によって製造することができる。ヒトモノクローナル抗体の産生のためのヒト骨髄腫及びマウス-ヒトヘテロ細胞株が記載されている。(例えば、Kozbor J. Immunol., 133: 3001 (1984); Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp. 51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987);及びBoerner et al., J. Immunol., 147: 86 (1991)を参照）ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術を介して生成されたヒト抗体はまた、Li et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 103:3557-3562 (2006)に記載されている。更なる方法は、例えば、米国特許第７１８９８２６号（ハイブリドーマ細胞株からのモノクローナルヒトＩｇＭ抗体の産生を記載している）及びNi,Xiandai Mianyixue, 26(4):265-268 (2006)（ヒト−ヒトハイブリドーマを記載している）に記載されたものを含む。ヒトハイブリドーマ技術（トリオーマ技術）もまた、Vollmers and Brandlein, Histology and Histopathology, 20(3):927-937 (2005) 及びVollmers and Brandlein, Methods and Findings in Experimental and Clinical Pharmacology, 27(3):185-91 (2005)に記載される。
【０１２１】
ヒト抗体はまた、ヒト由来のファージディスプレイライブラリーから選択されたＦｖクローン可変ドメイン配列を単離することによって生成され得る。このような可変ドメイン配列は、所望のヒト定常ドメインと組み合わせてもよい。抗体ライブラリーからヒト抗体を選択するための技術が、以下に説明される。
【０１２２】
５．ライブラリー由来タンパク質
本発明のシャトル剤、ＬＲＰ８結合分子、ＣＮＳ活性化合物は、シャトル剤、ＬＲＰ８結合分子または所望の活性または活性を有するＣＮＳ活性化合物のコンビナトリアルライブラリーをスクリーニングすることによって単離することができる。例えば、様々な方法が、ファージディスプレイライブラリーを生成し、所望の結合特性を有するタンパク質についてのライブラリーをスクリーニングするために、当該技術分野で知られている。そのような方法は、例えば、Sidhu et al., eds., Phage Display In Biotechnology and Drug Discovery, CRC Press (2005); Hoogenboom et al. in Methods in Molecular Biology 178:1-37 (O’Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ, 2001)に総説され、更に、例えば、McCafferty et al., Nature 348:552-554; Clackson et al., Nature 352: 624-628 (1991); Marks et al., J. Mol. Biol. 222: 581-597 (1992); Marks and Bradbury, in Methods in Molecular Biology 248:161-175 (Lo, ed., Human Press, Totowa, NJ, 2003); Sidhu et al., J. Mol. Biol. 338(2): 299-310 (2004); Lee et al., J. Mol. Biol. 340(5): 1073-1093 (2004); Fellouse, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101(34): 12467-12472 (2004); 及びLee et al., J. Immunol. Methods 284(1-2): 119-132(2004)に記載されている。
【０１２３】
抗体の同定に向けた一定のファージディスプレイ法において、ＶＨ及びＶＬ遺伝子のレパートリーが個別ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によりクローニングされ、ファージライブラリーにランダムに再結合され、その後、Winter et al., Ann. Rev. Immunol., 12: 433-455(1994)に記載されるように、抗原結合ファージについてスクリーニングすることができる。ファージは、通常、抗体断片を、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片、またはＦａｂ断片のいずれかとして提示する。免疫された起源からのライブラリーは、ハイブリドーマを構築する必要性なしで免疫原に高親和性抗体を提供する。代わりに、Griffiths et al., EMBO J, 12: 725-734 (1993)に記載されるように、ナイーブなレパートリーが、任意の免疫感作無しで、広範囲の非自己抗原及び自己抗原に対して、抗体の単一起源を提供するために、（例えば、ヒトから）クローン化することができる。最後に、ナイーブなライブラリはまた、Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol., 227: 381-388 (1992)に記載されるように、非常に可変なＣＤＲ３領域をコードし、インビトロで再構成を達成するために、幹細胞由来の未転位Ｖ遺伝子セグメントをクローニングし、ランダム配列を含むＰＣＲプライマーを使用することにより合成することができる。ヒト抗体ファージライブラリーを記述する特許公報は、例えば、米国特許第５７５０３７３号、及び米国特許出願公開第２００５／００７９５７４号、第２００５／０１１９４５５号、第２００５／０２６６０００号、第２００７／０１１７１２６号、第２００７／０１６０５９８号、第２００７／０２３７７６４号、第２００７／０２９２９３６号及び第２００９／０００２３６０号を含む。
【０１２４】
ヒトのライブラリーから単離されたタンパク質は、（すなわち、抗体または抗体断片）は、本明細書においてヒトタンパク質と考えられている。
【０１２５】
６．多重特異性抗体
所定の実施態様において、本明細書で提供されるシャトル剤は、多重特異性抗体、例えば二重特異性抗体である。多重特異性抗体は、少なくとも二つの異なる部位に対して結合特異性を有するモノクローナル抗体である。所定の実施態様において、結合特異性の一つはＬＲＰ８に対してであり、他は、任意の他のＣＮＳ標的に対してである。所定の実施態様において、多重特異性抗体は、ＬＲＰ８の２つの異なるエピトープ及び任意の他のＣＮＳ標的に結合することができる。多重特異性抗体はまたＬＲＰ８を発現する細胞にＣＮＳ活性化合物を局所化するために用いることができる。多重特異性抗体は、全長抗体又は抗体断片として調製することができる。
【０１２６】
多重特異性抗体を作製するための技術は、限定されないが、異なる特異性を有する２つの免疫グロブリン重鎖-軽鎖対の組換え共発現(Milstein and Cuello, Nature 305: 537 (1983))、国際公開第９３／０８８２９号、及びTraunecker et al., EMBO J. 10: 3655 (1991)を参照)及び“ｋｎｏｂ−ｉｎ−ｈｏｌｅ”エンジニアリング（例えば、米国特許第５７３１１６８号を参照）を含む。多重特異抗体はまた、抗体のＦｃ−ヘテロ２量体分子を作成するための静電ステアリング効果を操作すること（国際公開第２００９／０８９００４Ａ１号）、２つ以上の抗体又は断片を架橋すること（例えば米国特許第４６７６９８０号、及びBrennan et al., Science, 229: 81 (1985)を参照)、２重特異性抗体を生成するためにロイシンジッパーを使用すること(例えば、Kostelny et al., J. Immunol., 148(5):1547-1553 (1992)を参照)、二重特異性抗体フラグメントを作製するため、 "ダイアボディ"技術を使用すること(例えば、Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:6444-6448 (1993)を参照)、単鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）ダイマーを使用すること(例えば、Gruber et al., J. Immunol., 152:5368 (1994)を参照)、及び、例えばTutt et al. J. Immunol. 147: 60 (1991)に記載されているように、三重特異性抗体を調製することによって作成することができる。
【０１２７】
「オクトパス抗体」を含む、３つ以上の機能性抗原結合部位を持つ改変抗体もまた本明細書に含まれる（例えば、米国特許出願公開第２００６／００２５５７６Ａ１号を参照）。
【０１２８】
本明細書中の抗体又は断片はまた、ＬＲＰ８並びにその他の異なる抗原（例えば米国特許出願公開第２００８／００６９８２０号参照）、すなわちＣＮＳ標的、に結合する抗原結合部位を含む、「２重作用（Ｄｕａｌ Ａｃｔｉｎｇ）ＦＡｂ」又は「ＤＡＦ」を含む。
【０１２９】
７．シャトル剤変異体
所定の実施態様において、本明細書で提供されるシャトル剤のアミノ酸配列変異体が企図される。例えば、そのような部分がタンパク質である場合、ＬＲＰ８結合分子部分又はシャトル剤のＣＮＳ活性化合物の部分のいずれか、または両方の、結合親和性及び／又は他の生物学的特性を向上させることが望まれ得る。シャトル剤の全て又は一部のアミノ酸配列変異体は、シャトル剤またはその一部をコードするヌクレオチド配列に適切な改変を導入することにより、またはペプチド合成によって調製することができる。このような改変は、例えば、シャトル剤のアミノ酸配列内における、残基の欠失、及び／又は挿入及び／又は置換を含む。欠失、挿入、及び置換の任意の組み合わせが、最終コンストラクトが所望の特徴、例えば、標的結合、例えば、ＬＲＰ８及び一以上の所望のＣＮＳ標的への結合等を有していることを条件として、最終のコンストラクトに到達するように行うができる。
【０１３０】
ａ）置換、挿入、および欠失変異体
所定の実施態様において、一つ以上のアミノ酸置換を有するシャトル剤変異体が提供される。本明細書で提供されるシャトル剤の変型は、例えば、米国特許第５３６４９３４号に定められた保存的および非保存的変異についての技術とガイドラインのいずれかを使用するなどして、作ることができる。改変について検討中のシャトル剤の一部が抗体である場合、置換突然変異の対象となる部位は、超可変領域及びフレームワーク領域を含む。保存的アミノ酸置換は、表１の「保存的置換」の見出しの下に示されている。より実質的な変更が、表１の「例示的置換」の見出しの下に与えられ、アミノ酸側鎖のクラスを参照して以下に更に説明される。どのアミノ酸残基が、所望の活性に悪影響を与えずに、挿入、置換または欠失することができるか決定する上でのガイダンスは、ＬＲＰ８結合分子及び／又はシャトル剤のＣＮＳ活性化合物の配列を、相同既知のタンパク質分子のそれと比較し、高い相同性の領域で作られたアミノ酸配列変化の数を最小限にすることで見つけることができる。スキャンニングアミノ酸分析はまた、連続した配列に沿って一以上のアミノ酸を同定するために用いることができる。アミノ酸置換は、関心のあるシャトル剤をに導入することができ、所望の活性についてスクリーニングされたその産物は、例えば、ＬＲＰ８及び／又はＣＮＳ標的への結合を保持した／向上させたか、又は免疫原性を減少させた。
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アミノ酸は共通の側鎖特性に基づいてグループに分けることができる：
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
（２）中性の親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
（３）酸性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
（５）鎖配向に影響する残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ．
【０１３１】
非保存的置換は、これらの分類の一つのメンバーを他の分類に交換することを必要とするであろう。
【０１３２】
抗体コンテキストにおける置換変異体の一つのタイプは、親抗体（ヒト化又はヒト抗体など）の一以上の高頻度可変領域残基の置換を含む。一般的には、さらなる研究のために選択され得られた変異体は、親抗体と比較して、特定の生物学的特性の改変（例えば、改善）（例えば、親和性の増加、免疫原性を減少）を有し、及び／又は親抗体の特定の生物学的特性を実質的に保持しているであろう。このタイプの典型的な置換変異体は、親和性成熟抗体であり、例えば、本明細書に記載されるファージディスプレイベースの親和性成熟技術を用いて、簡便に生成され得る。簡潔に言えば、一つ以上のＨＶＲ残基が変異し、変異体抗体は、ファージ上に表示され、特定の生物学的活性（例えば、結合親和性）についてスクリーニングされる。
【０１３３】
変更（例えば、置換）は、例えば抗体の親和性を向上させるために、ＨＶＲで行うことができる。このような変更は、ＨＶＲの「ホットスポット」、すなわち、体細胞成熟過程中に高頻度で変異を受けるコドンにコードされた残基で(例えばChowdhury, Methods Mol. Biol. 207:179-196 (2008)を参照)、及び／又はＳＤＲ（ａ−ＣＤＲ）で行うことができ、得られた変異体ＶＨ又はＶＬが結合親和性について試験される。二次ライブラリから構築し選択し直すことによる親和性成熟が、例えばHoogenboom et al. in Methods in Molecular Biology 178:1-37 (O’Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ, (2001)に記載されている。親和性成熟の幾つかの実施態様において、多様性が、種々の方法（例えば、変異性ＰＣＲ、鎖シャッフリング、又はオリゴヌクレオチド指定突然変異誘発）のいずれかにより、成熟のために選択された可変遺伝子中に導入される。次いで、二次ライブラリーが作成される。次いで、ライブラリーは、所望の親和性を持つ抗体変異体を同定するためにスクリーニングされる。多様性を導入するするもう一つの方法は、いくつかのＨＶＲ残基（例えば、一度に４から６残基）がランダム化されたＨＶＲ指向のアプローチを伴う。抗原結合に関与するＨＶＲ残基は、例えばアラニンスキャニング突然変異誘発、またはモデリングを用いて、特異的に同定され得る。ＣＤＲ−Ｈ３及びＣＤＲ−Ｌ３がしばしば標的にされる。
【０１３４】
所定の実施態様において、置換、挿入、または欠失は、そのような改変が抗原に結合する抗体の能力を実質的に低下させない限りにおいて、一以上のＨＶＲ内で発生する可能性がある。例えば、実質的に結合親和性を低下させない保存的改変（例えば本明細書で与えられる保存的置換）をＨＶＲ内で行うことができる。このような改変は、ＨＶＲ「ホットスポット」又はＳＤＲの外側であってもよい。上記に与えられた変異体ＶＨ又はＶＬ配列の所定の実施態様において、各ＨＶＲは不変であるか、又はわずか１個、２個または３個のアミノ酸置換が含まれているかの何れかである。
【０１３５】
突然変異誘発のために標的とすることができる抗体の残基又は領域を同定するための有用な方法は、Cunningham and Wells (1989) Science, 244:1081-1085により説明されるように、「アラニンスキャニング変異誘発」と呼ばれる。この方法では、標的残基の残基またはグループ（例えば、ａｒｇ、ａｓｐ、ｈｉｓ、ｌｙｓ及びｇｌｕなどの荷電残基）が同定され、抗原と抗体との相互作用が影響を受けるかどうかを判断するために、中性または負に荷電したアミノ酸（例えば、アラニンまたはポリアラニン）に置換される。更なる置換が、最初の置換に対する機能的感受性を示すアミノ酸の位置に導入され得る。代わりに、又は更に、抗原抗体複合体の結晶構造が、抗体と抗原との接触点を同定する。そのような接触残基及び隣接残基が、置換の候補として標的とされるか又は排除され得る。変異体はそれらが所望の特性を含むかどうかを決定するためにスクリーニングされ得る。
【０１３６】
アミノ酸配列挿入は、一残基から百以上の残基を含有するポリペプチド長にわたるアミノ及び／又はカルボキシル末端融合、並びに単一または複数のアミノ酸残基の配列内挿入を含む。末端挿入の例としては、Ｎ末端メチオニン残基を有する抗体が含まれる。抗体分子の他の挿入変異体は、酵素に対する抗体のＮ末端またはＣ末端への融合（例えばＡＤＥＰＴの場合）、または抗体の血清半減期を増加させるポリペプチドへの融合を含む。
【０１３７】
ｂ）グリコシル化変異体
所定の実施態様において、本明細書で提供されるシャトル剤はシャトル剤がグリコシル化される程度を増加または減少するように改変される。シャトル剤へのグリコシル化部位の付加または欠失は、一以上のグリコシル化部位が作成または削除されるようにアミノ酸配列を変えることによって簡便に達成することができる。
【０１３８】
シャトル剤がＦｃ領域を含む場合には、それに付着する糖を変えることができる。哺乳動物細胞によって生成された天然型抗体は、典型的には、Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７にＮ−結合により一般的に付着した分岐鎖、二分岐オリゴ糖を含んでいる。例えばWright et al. TIBTECH 15:26-32 (1997)を参照。オリゴ糖は、様々な炭水化物、例えば、二分岐糖鎖構造の”幹”のＧｌｃＮＡｃに結合した、マンノース、Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトース、シアル酸、並びにフコースを含み得る。幾つかの実施態様において、本発明のシャトル剤におけるオリゴ糖の改変は一定の改善された特性を有するシャトル剤変異型を作成するために行われ得る。
【０１３９】
一実施態様において、シャトル剤変異体は、Ｆｃ領域に（直接または間接的に）付着されたフコースを欠いた糖鎖構造を有して提供される。例えば、このようなシャトル剤のフコース量は、１％から８０％、１％から６５％、５％から６５％、または２０％から４０％であり得る。フコースの量は、例えば、国際公開第２００８／０７７５４６号に記載されているように、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析法によって測定されるＡｓｎ２９７に付着しているすべての糖構造の合計（例えば、コンプレックス、ハイブリッド及び高マンノース構造）に対して、Ａｓｎ２９７の糖鎖中のフコースの平均量を計算することによって決定される。Ａｓｎ２９７は、Ｆｃ領域（Ｆｃ領域残基のＥＵ番号付け）でおよそ２９７の位置に位置するアスパラギン残基を指し、しかし、Ａｓｎ２９７もまた位置２９７の上流または下流のおよそ±３アミノ酸に、すなわち抗体の軽微な配列変異に起因して、位置２９４と３００の間に配置され得る。このようなフコシル化変異体はＡＤＣＣ機能を改善させた可能性がある。例えば、米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号（Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ．）；米国特許出願公開第２００４／００９３６２１号（Ｋｙｏｗａ Ｈａｋｋｏ Ｋｏｇｙｏ Ｃｏ．,Ｌｔｄ）を参照。「フコース非修飾」又は「フコース欠損」抗体変異体に関連する出版物の例としては、米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号、国際公開第２０００／６１７３９号、国際公開第２００１／２９２４６号、米国特許出願公開第２００３／０１１５６１４号、米国特許出願公開第２００２／０１６４３２８号、米国特許出願公開第２００４／００９３６２１号、米国特許出願公開第２００４／０１３２１４０号、米国特許出願公開第２００４／０１１０７０４号、米国特許出願公開第２００４／０１１０２８２号、米国特許出願公開第２００４／０１０９８６５号、国際公開第２００３／０８５１１９号、国際公開第２００３／０８４５７０号、国際公開第２００５／０３５５８６号、国際公開第２００５／０３５７７８号、国際公開第２００５／０５３７４２号、国際公開第２００２／０３１１４０号、Okazaki et al. J. Mol. Biol. 336:1239-1249 (2004); Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004)が含まれる。フコース非修飾タンパク質を産生する能力を有する細胞株の例としては、タンパク質フコシル化を欠損しているＬｅｃ１３ ＣＨＯ細胞(Ripka et al. Arch. Biochem. Biophys. 249:533-545 (1986); 米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８Ａ１号、Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ；及び国際公開第２００４／０５６３１２Ａ１号、Ａｄａｍｓら、特に実施例１１）、及びノックアウト細胞株、アルファ−１、６−フコシルトランスフェラーゼ遺伝子、ＦＵＴ８、ノックアウトＣＨＯ細胞（例えば、Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004); Kanda, Y. et al., Biotechnol. Bioeng., 94(4):680-688 (2006); 及び国際公開第２００３／０８５１０７号を参照）を含む。
【０１４０】
シャトル剤変異体は、例えば、シャトル剤のＦｃ領域に結合した二分岐オリゴ糖がＧｌｃＮＡｃによって二分されている二分オリゴ糖とともに更に与えられる。このようなシャトル剤変異体はフコシル化を減少させ、及び／又はＡＤＣＣ機能を改善している可能性がある。そのようなシャトル剤変異体の例は、例えば、国際公開第２００３／０１１８７８号（Ｊｅａｎ−Ｍａｉｒｅｔら）；米国特許第６６０２６８４号（Ｕｍａｎａら）；及び米国特許出願公開第２００５／０１２３５４６号（Ｕｍａｎａら）に記載されている。Ｆｃ領域に結合したオリゴ糖内に少なくとも１つのガラクトース残基を持つシャトル剤変異体も提供される。このような変異体はＣＤＣ機能を改善させた可能性がある。抗体コンテキストにおけるこのような変異体は、例えば、国際公開第１９９７／３００８７号（Ｐａｔｅｌら）；国際公開第１９９８／５８９６４号（Ｒａｊｕ，Ｓ．）；及び国際公開第１９９９／２２７６４号（Ｒａｊｕ，Ｓ．）に記載されている。
【０１４１】
ｃ）Ｆｃ領域変異体
所定の実施態様において、１つまたは複数のアミノ酸改変が、本明細書で提供されるシャトル剤に含まれるＦｃ領域に導入することができ、それによってＦｃ領域変異体を生成する。Ｆｃ領域の変異体は、１つまたは複数のアミノ酸位置においてアミノ酸修飾（例えば置換）を含むヒトＦｃ領域の配列（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４のＦｃ領域）を含んでもよい。
【０１４２】
所定の実施態様において、本発明は、インビボにおけるシャトル剤の半減期が重要であるが、ある種のエフェクター機能（例えば補体およびＡＤＣＣなど）が不要または有害である用途のための望ましい候補とならしめる、全てではないが一部のエフェクター機能を有するＦｃ変異体を含むシャトル剤を意図している。インビトロ及び／又はインビボでの細胞毒性アッセイでは、ＣＤＣ活性及び／又はＡＤＣＣ活性の減少／枯渇を確認するために行うことができる。例えば、Ｆｃレセプター（ＦｃＲ）結合アッセイは、抗体がＦｃＲ結合を欠くが（それゆえ、おそらくＡＤＣＣ活性を欠く）、ＦｃＲｎ結合能力を保持していることを確認するために行うことができる。ＡＤＣＣ、ＮＫ細胞を媒介する初代細胞は、ＦｃＲＩＩＩのみを発現するが、単球はＦｃＲＩ、ＦｃＲＩＩ及びＦｃＲＩＩＩを発現する。造血細胞におけるＦｃＲの発現は、Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9:457-492 (1991)の464ページの表３に要約されている。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するためのインビトロアッセイの非限定的な例は、米国特許第５５００３６２号（例えば、Hellstrom, I. et al. Proc. Nat’l Acad. Sci. USA 83:7059-7063 (1986)を参照) 及びHellstrom, I et al., Proc. Nat’l Acad. Sci. USA 82:1499-1502 (1985);第５８２１３３７号 (Bruggemann, M. et al., J. Exp. Med. 166:1351-1361 (1987)を参照)に説明される。あるいは、非放射性アッセイ法を用いることができる（例えば、フローサイトメトリー用のＡＣＴＩＴＭ非放射性細胞傷害性アッセイ（ＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ，ＣＡ；及びＣｙｔｏＴｏｘ ９６（登録商標）非放射性細胞毒性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）。このようなアッセイに有用なエフェクター細胞には、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が含まれる。あるいは、またはさらに、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、Clynes et al. Proc. Nat’l Acad. Sci. USA 95:652-656 (1998)に開示されるように、インビボで、例えば動物モデルにおいて評価することができるＣ１ｑ結合アッセイはまた、抗体が体Ｃ１ｑを結合することができないこと、したがって、ＣＤＣ活性を欠いていることを確認するために行うことができる。例えば、国際公開第２００６／０２９８７９号及び国際公開第２００５／１００４０２号のＣ１ｑおよびＣ３ｃ結合ＥＬＩＳＡを参照。補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイを行うことができる(例えば、Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods 202:163 (1996); Cragg, M.S. et al., Blood 101:1045-1052 (2003);及びCragg, M.S. and M.J. Glennie, Blood 103:2738-2743 (2004)を参照)。ＦｃＲｎ結合、及びインビボでのクリアランス／半減期の測定ではまた、当該分野で公知の方法を用いて行うことができる（例えば、Petkova, S.B. et al., Int’l. Immunol. 18(12):1759-1769 (2006)を参照)。
【０１４３】
エフェクター機能が減少したＦｃ含有シャトル剤は、Ｆｃ領域の残基２３８、２６５、２６９、２７０、２９７、３２７、３２９の一つ以上の置換を有するものが含まれる（米国特許第６７３７０５６号）。そのようなＦｃ変異体は、残基２６５及び２９７のアラニンへの置換を有する、いわゆる”ＤＡＮＡ”Ｆｃ変異体を含む、アミノ酸位置２６５、２６９、２７０、２９７及び３２７の２以上での置換を有するＦｃ変異体を含む（米国特許第７３３２５８１号）。
【０１４４】
ＦｃＲへの結合を改善又は減少させた特定のＦｃ変異体が記載されている。（例えば、米国特許第６７３７０５６号；国際公開第２００４／０５６３１２号、及びShields et al., J. Biol. Chem. 9(2): 6591-6604 (2001)を参照）
【０１４５】
所定の実施態様において、Ｆｃ含有シャトル剤の変異体はＡＤＣＣを改善する１つまたは複数のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃ領域の位置２９８、３３３、及び／又は３３４における置換（ＥＵの残基番号付け）を含む。
【０１４６】
幾つかの実施態様において、改変された（すなわち改善されたか減少した）Ｃ１ｑ結合及び／又は補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を生じる、Ｆｃ領域における改変がなされ、例えば、米国特許第６１９４５５１号、国際公開第９９／５１６４２号、及びIdusogie et al. J. Immunol. 164: 4178-4184 (2000)に説明される。
【０１４７】
増加した半減期および胎仔への母性ＩｇＧの移送を担う、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への結合が改善された抗体 (Guyer et al., J. Immunol. 117:587 (1976) 及びKim et al., J. Immunol. 24:249 (1994))が、米国特許出願公開第２００５／００１４９３４Ａ１号（Ｈｉｎｔｏｎら）に記載されている。これらの抗体は、ＦｃＲｎへのＦｃ領域の結合を改善する一つまたは複数の置換を有するＦｃ領域を含む。このようなＦｃ変異体は、Ｆｃ領域の残基の１以上の置換を有するものが含まれる：２３８、２５６、２６５、２７２、２８６、３０３、３０５、３０７、３１１、３１２、３１７、３４０、３５６、３６０、３６２、３７６、３７８、３８０、３８２、４１３、４２４又は４３４、例えば、Ｆｃ領域の残基４３４の置換（米国特許第７３７１８２６号）。
【０１４８】
Duncan & Winter, Nature 322:738-40 (1988); 米国特許第５６４８２６０号；米国特許第５６２４８２１号；及び、Ｆｃ領域の変異体の他の例に関しては国際公開第９４／２９３５１号も参照のこと。
【０１４９】
ｄ）システイン改変抗体変異体
所定の実施態様において、シャトル剤が、抗体または抗体断片を含む場合、抗体または抗体断片の１つ以上の残基がシステイン残基で置換されている、システイン改変抗体、例えば、「ｔｈｉｏＭＡｂｓ」を作成することが望ましいかもしれない。特定の実施態様において、置換された残基は、抗体のアクセス可能な部位で起きる。それらの残基をシステインで置換することにより、反応性チオール基は、それによって抗体のアクセス可能な部位に配置され、本明細書中でさらに記載されるように、イムノコンジュゲーを作成するために、例えば薬物部分またはリンカー−薬剤部分などの他の部分に抗体をコンジュゲートするために使用することができる。所定の実施態様において、以下の残基のいずれかまたは複数がシステインに置換され得る：軽鎖のＶ２０５（Ｋａｂａｔ番号付け）；重鎖のＡ１１８（ＥＵ番号付け）；及び重鎖Ｆｃ領域のＳ４００（ＥＵ番号付け）。システイン改変抗体は、例えば、米国特許第７５２１５４１号に記載のように生成され得る。
【０１５０】
ｅ）誘導体
所定の実施態様において、本明細書で提供されるシャトル剤は、当技術分野で知られ、容易に入手されている追加の非タンパク質部分を含むように更に改変することができる。シャトル剤の誘導体化に適した部分としては、限定されないが、水溶性ポリマーを含む。水溶性ポリマーの非限定的な例は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールの共重合体、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ−１，３−ジオキソラン、ポリ−１，３，６−トリオキソラン、エチレン／無水マレイン酸共重合体、ポリアミノ酸（単独重合体又はランダム共重合体の何れか）及びデキストラン又はポリ（ｎ−ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロピレングリコール単独重合体、プロピレンオキシド／エチレンオキシド共重合体、ポリオキシエチル化ポリオール（例えばグリセロール）、ポリビニルアルコール及びこれらの混合物を包含するポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドはその水中での安定性のために製造において好都合である。ポリマーは何れかの分子量のものであってよく、そして分枝鎖又は未分枝鎖であってよい。シャトル剤に結合するポリマーの数は変動してよく、そして、１つより多い重合体が結合する場合は、それらは同じか又は異なる分子であることができる。一般的に、誘導体化に使用するポリマーの数及び／又は種類は、限定されないが、向上させるべきシャトル剤の特定の特性又は機能、シャトル剤誘導体が特定の条件下で治療に使用されるのか等を考慮しながら決定することができる。
【０１５１】
その他の実施態様において、放射線への曝露によって選択的に加熱されてもよいシャトル剤と非タンパク質部分のコンジュゲートが、提供される。一実施態様において、非タンパク質部分はカーボンナノチューブである(Kam et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 102: 11600-11605 (2005)。放射線は、任意の波長であって良いが、限定されないものの、通常の細胞に害を与えないが、抗体非タンパク質部分の近位細胞が死滅される温度に非タンパク質部分を加熱する波長が含まれる。
【０１５２】
Ｂ．組換え方法及び組成物
シャトル剤は、当技術分野でよく知られている組換え法および組成物を用いて製造することができる。抗体の産生および精製の一例については、米国特許第４８１６５６７号を参照。一実施態様において、本明細書に記載されるシャトル剤の全部または一部をコードする単離された核酸が提供される。シャトル剤が多特異性抗体であるか、又はシャトル剤の一部が抗体である場合、そのような核酸は、ＶＬを含むアミノ酸配列、及び／又は抗体のＶＨを含むアミノ酸配列（例えば抗体の軽鎖及び／又は重鎖）をコードすることができる。
【０１５３】
更なる実施態様において、そのような核酸を含む１つ以上のベクター（例えば、発現ベクター）が提供される。更なる実施態様において、そのような核酸を含む宿主細胞が提供される。シャトル剤をまたはその一部が、抗体または抗体断片である場合、宿主細胞は以下を含む（例えば、以下で形質転換される）：（１）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列、及び抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含むベクター、又は（２）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第一ベクター、及び抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第二ベクター。一実施態様において、宿主細胞は、真核生物、例えばチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、またはリンパ系細胞（例えば、Ｙ０、ＮＳ０、Ｓｐ２０細胞）である。
【０１５４】
一実施態様において、シャトル剤又はその一部分を作る方法が提供され、その方法は、上記のように、シャトル剤またはその一部の発現に適した条件下で、シャトル剤又はその一部をコードする核酸を含む宿主細胞を培養することを含み、および必要に応じて、宿主細胞（または宿主細胞培養培地）から抗体を回収することを含む。
【０１５５】
シャトル剤の組換え生産のために、例えば上述したように、シャトル剤をコードする核酸が単離され、宿主細胞内でのさらなるクローニングおよび／または発現のために１つ以上のベクターに挿入される。このような核酸は、容易に単離され、従来の手順を用いて（例えば、シャトル剤をコードする遺伝子（群）に特異的に結合できるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）配列決定することができる。
【０１５６】
シャトル剤をコードし、ＬＲＰ８結合分子をコードし、またはＣＮＳ活性化合物をコードするベクターのクローニングまたは発現に適切な宿主細胞は、本明細書に記載の原核生物または真核細胞を含む。例えば、特に、グリコシル化およびＦｃエフェクター機能が必要ない場合には、シャトル剤は、細菌で製造することができる。細菌における抗体断片およびポリペプチドの発現については、例えば、米国特許第５６４８２３７号、第５７８９，１９９号及び第５８４０５２３号を参照。（また、大腸菌における抗体の発現を説明している、Charlton, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ, 2003), pp. 245-254,も参照。）発現の後、シャトル剤は可溶性画分において細菌の細胞ペーストから単離され得、さらに精製することができる。
【０１５７】
原核生物に加えて、糸状菌又は酵母菌のような真核微生物は、菌類や酵母菌株を含むシャトル剤をコードするベクターのための、適切なクローニング又は発現宿主であり、そのグリコシル化経路は、"ヒト化"されており、部分的または完全なヒトのグリコシル化パターンを有するシャトル剤の生成をもたらす。Gerngross, Nat. Biotech. 22:1409-1414 (2004)、及びLi et al., Nat. Biotech. 24:210-215 (2006)を参照。タンパク質発現に適した原核生物および真核生物宿主細胞は、ＰＣＴ公開国際公開第２００８０８００４５号に記載されている。
【０１５８】
グリコシル化シャトル剤の発現に適した宿主細胞は、多細胞生物（無脊椎動物と脊椎動物）から派生している。無脊椎動物細胞の例としては、植物および昆虫細胞が挙げられる。多数のバキュロウイルス株が同定され、これらは特にSpodoptera frugiperda細胞のトランスフェクションのために、昆虫細胞と組み合わせて使用することができる。
【０１５９】
植物細胞培養を宿主として利用することができる。例えば、 Thomas et al.,“Production of Therapeutic Products in Plants,” U. Calif. Agricultural Biotechnology in California Series, Pub. No. 8078 (2002)、及び米国特許第５９５９１７７号、第６０４０４９８、６４２０５４８号、第７１２５９７８号及び第６４１７４２９号（トランスジェニック植物で抗体を産生するためのＰＬＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳＴＭ技術を説明）を参照。
【０１６０】
脊椎動物細胞もまた宿主として用いることができる。例えば、懸濁液中で増殖するように適合されている哺乳動物細胞系は有用であり得る。有用な哺乳動物宿主細胞株の他の例は、ＳＶ４０（ＣＯＳ−７）で形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株、ヒト胚腎臓株 (Graham et al., J. Gen Virol. 36:59 (1977)に記載された２９３又は２９３細胞、ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）、マウスのセルトリ細胞(Mather, Biol. Reprod. 23:243-251 (1980)に記載されるＴＭ４細胞）、サル腎細胞（ＣＶ１）、アフリカミドリザル腎細胞（ＶＥＲＯ−７６）、ヒト子宮頚癌細胞（ＨｅＬａ）、イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ；バッファローラット肝臓細胞（ＢＲＬ ３Ａ）、ヒト肺細胞（Ｗ１３８）；ヒト肝細胞（ＨｅｐＧ２）、マウス乳腺腫瘍（ＭＭＴ０６０５６２）、例えばMather et al., Annals N.Y. Acad. Sci. 383:44-68 (1982)に記載されるＴＲＩ細胞、ＭＲＣ５細胞、およびＦＳ４細胞である。他の有用な哺乳動物宿主細胞株は、ＤＨＦＲ− ＣＨＯ細胞(Urlaub et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216 (1980))を含むチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、及びＹ０、ＮＳ０およびＳｐ２／０などの骨髄腫細胞株を含む。例えば抗体産生に適した特定の哺乳動物宿主細胞系の総説については、例えば、Yazaki and Wu, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ), pp. 255-268 (2003)を参照。
【０１６１】
宿主細胞におけるクローニングおよび発現に加えて、その宿主細胞培養からのシャトル剤またはその部分が精製され、本発明のシャトル剤またはその部分を生産する他の当該分野で公知の方法が当技術分野において知られている。例えば、タンパク質は固相技術を用いた直接ペプチド合成により合成することができ(例えば、Stewart et al., Solid-Phase Peptide Synthesis, W.H. Freeman Co., San Francisco, CA (1969); Merrifield, J. Am. Chem. Soc. 85:2149-2154 (1963)を参照、又は製造元の指示に従って、自動ペプチド合成の適用により合成することができる。
【０１６２】
本明細書に記載の通り、ＬＲＰ８結合分子部分とシャトル剤をＣＮＳ活性化合物の部分は、リンカーによるか又はリンカー無しで、共有結合または非共有結合でコンジュゲートされ得る。シャトル剤の製造の上記方法はシャトル剤の成分の生産に対して同じシャトル剤の他の部分とは別々に同等に適用されることが、当業者によって理解されるであろう。ＬＲＰ８結合分子部分とＣＮＳ活性化合物部分との間の非共有結合で構成される単一のシャトル剤の異なる部分が別々に製造されている場合、それらは後に、特定のシャトル剤に用いられる特定のコンジュゲーション法に従って、既知の化学的および分子生物学的手法を用いて、単一のシャトルベクターに組み合わせることができる。
【０１６３】
Ｃ．アッセイ
本明細書で提供されるシャトル剤は、同定され、当技術分野で公知の様々なアッセイによってその物理的／化学的性質および／または生物学的活性についてスクリーニングされ、または特徴づけることができる。
【０１６４】
１．結合アッセイとその他のアッセイ
シャトル剤のＬＲＰ８結合分子部分はＬＲＰ８に結合し、その結合活性を測定することができる。所定の実施態様において、シャトル剤のＣＮＳ活性部分は、１つまたは複数のＣＮＳ標的に特異的に結合する結合分子である。したがって、一実施態様では、本発明のシャトル剤は、例えば、ＥＬＩＳＡ、ウエスタンブロットなどの公知の方法によって、その標的結合活性（すなわちＬＲＰ８及び／又はＣＮＳ標的への）について試験される。
【０１６５】
その他の態様にて、競合アッセイが、ＬＲＰ８またはＣＮＳ標的への結合について、他の既知のＬＲＰ８またはＣＮＳ標的結合剤と競合するシャトル剤を同定するために用いられ得る。所定の実施態様において、このような競合するシャトル剤は、既知のＬＲＰ８またはＣＮＳ標的結合剤により結合されるエピトープと同じエピトープ（例えば、直鎖状又は立体構造エピトープ）に結合する。抗体または他の結合タンパク質が結合するエピトープをマッピングするための詳細な例示的な方法が、Morris (1996) “Epitope Mapping Protocols,” in Methods in Molecular Biology vol. 66 (Humana Press, Totowa, NJ)に提供されている。
【０１６６】
典型的な競合アッセイにおいて、固定化ＬＲＰ８またはＣＮＳ標的は、ＬＲＰ８またはＣＮＳ標的に結合する第一の標識された結合剤（例えば、抗体）、及びＬＲＰ８またはＣＮＳ標的へ結合について第一の結合剤と競合するその能力について試験された未標識の第二のシャトル剤を含む溶液中でインキュベートされる。コントロールとして、固定化ＬＲＰ８又はＣＮＳ標的は、第二の未標識のシャトル剤でなく、第一の標識された結合剤を含む溶液中でインキュベートされる。ＬＲＰ８又はＣＮＳ標的への第一の結合剤の結合を許容する条件下でインキュベートした後、過剰の未結合の結合剤が除去され、固定化されたＬＲＰ８又はＣＮＳ標的に付随した標識の量を測定する。もし、固定化ＬＲＰ８又はＣＮＳ標的に付随した標識の量が、コントロールサンプルと比較して試験サンプル中で実質的に減少している場合、それは、シャトル剤がＬＲＰ８又はＣＮＳ標的への結合に対して、第一の結合剤と競合していることを示している。Harlow and Lane (1988) Antibodies: A Laboratory Manual ch.14 (Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY)を参照。
【０１６７】
２．活性のアッセイ
一態様では、アッセイは、生物学的活性を有する、すなわちシャトル剤のＣＮＳ活性化合物部分が１つ以上のＣＮＳ標的に影響を及ぼすシャトル剤を同定するために与えられている。生物学的活性は、例えば、酵素活性、阻害（拮抗）活性、刺激（アゴニスト）活性、輸送活性、および構造活性を含むことができる。インビボ及び／又はインビトロでこのような生物学的活性を有するシャトル剤もまた与えられる。
【０１６８】
所定の実施態様において、本発明のシャトル剤は、インビトロでそのような生物学的活性について試験されている。シャトル剤のＣＮＳ活性化合物部分の性質に応じて、当該分野で公知の様々なアッセイが利用可能であり、シャトル剤内に含まれる特定のＣＮＳ活性化合物の活性をテストするために、適切な当該技術分野で既知のアッセイを選択する方法はよく知られている。例えば、シャトル剤が酵素であるＣＮＳ活性化合物部分を含む場合、シャトル剤の酵素活性は、多くはキットの形で市販されているよく知られている酵素アッセイ（すなわち、キナーゼのアッセイ、ホスファターゼ、プロテアーゼ、リパーゼなど）を使用して容易に評価することができる。別の非限定的な例として、特定のＣＮＳ標的の阻害剤または活性化因子であるＣＮＳ活性化合物の部分を含むシャトル剤において、実行できるのＣＮＳ標的の活性を阻害または刺激するそのシャトル剤の能力を測定するインビトロアッセイを行うことができる（すなわち、ＣＮＳ標的のペプチド、アプタマー又は小分子阻害剤又は活性剤について、そのＣＮＳ標的の活性を、そのペプチド、アプタマー又は小分子阻害剤又は活性剤の存在下又は非存在下で測定することができる。
【０１６９】
所定の実施態様において、本発明のシャトル剤は、インビボでそのような生物学的活性について試験されている。様々な動物モデルもまた候補の治療薬の有効性を試験するために使用することができる。このようなモデルのインビボの性質により、それらはヒト患者における応答を特に予測する。例えば、様々な神経変性疾患の動物モデル、及び、神経変性のこれらのモデルに関連付けられる（例えばシャトル剤の存在下および非存在下でなど）病理学的プロセスを調べるための関連手法は、当技術分野において容易に入手可能である。様々な神経疾患の動物モデルは、非組換え及び組換え（トランスジェニック）動物が両方含まれる。非組換え動物モデルは、例えば、げっ歯類、例えば、マウスモデルが含まれる。このようなモデルは、標準的な技術、例えば皮下注射、尾静脈注射、脾臓注入、腹腔内注入、腎被膜下への移植を用いた同系マウスに細胞を導入することにより、生成できる。インビボでのモデルは、脳卒中／脳虚血のモデル、パーキンソン病のマウスモデルのような神経変性疾患のインビボモデル、アルツハイマー病のマウスモデル、筋萎縮性側索硬化症のマウスモデル、脊髄性筋萎縮症のマウスモデル、病巣および全脳虚血のマウス／ラットモデル、例えば、総頸動脈閉塞または中大脳動脈閉塞モデル、またはエキソビボ全胚培養物を含む。非限定的な例としては、アルツハイマー病のため数多くの当該技術分野で既知のマウスモデルがある ((例えば、Rakover et al., Neurodegener. Dis. (2007); 4(5): 392-402; Mouri et al., FASEB J. (2007) Jul;21 (9): 2135-48; Minkeviciene et al ., J. Pharmacol. Exp. Ther. (2004) Nov; 311 (2) :677-82、及びYuede et al., Behav Pharmacol. (2007) Sep; 18 (5-6): 347-63を参照)。当技術分野で周知であり、文献に記載されているような様々なアッセイは、既知のインビトロまたはインビボアッセイ方式で行うことができる。様々な動物モデルは、ジャクソン・ラボラトリーなど商用ベンダーからも入手できる。
【０１７０】
シャトル剤が認知障害（すなわち、アルツハイマー病または軽度認知障害）によって特徴付けられるＣＮＳ疾患または障害を治療するためにヒトに投与される場合、包括的評価と併せて１つ以上の認知結果判定法をシャトル剤の効力を評価するために使用することができる(例えば、Leber P: Guidelines for the Clinical Evaluation of Antidementia Drugs, 第一草稿, Rockville, MD, US Food and Drug Administration, 1990を参照)。ＡＤなどの神経疾患への影響は、例えば、単一または複数の基準セットを使用して、調べることができる。たとえば、欧州医薬品審査庁（ＥＭＥＡ）は、機能的かつ網羅的な活動の両方で認知および安定性における改善についてあらかじめ指定された度合いに対応する応答者の定義を導入した（例えば、欧州医薬品審査庁（ＥＭＥＡ）：アルツハイマー型認知症治療における医薬品に関するガイドラインについての注意、ロンドン、ＥＭＥＡ、１９９７年）。薬剤に対する患者の応答性を評価するために、単独で、または組み合わせて使用することができる数得多くの具体的な確立した試験が、当技術分野で知られている。例えば、高度に障害された認知機能を評価するための検査（ＳＩＢ）、より重度のＡＤ患者における認知の変化を測定するために使用される試験、を使用して薬剤に対する反応性を評価することができる（例えばSchmitt et al., Alzheimer Dis. Assoc. Disord. 1997; 11 (付録2):51-56を参照）。また、薬剤への応答性は、認知症の後期を対象とし且つ有効である、日常生活で行われる活動の独立性のレベルを測定する１９項目一覧表であるthe 19-item Alzheimer’s Disease Cooperative Study Activities of Daily Living inventory (ADCSADL19)を使用して測定されうる(例えば、Galasko等, J Int Neuropsychol Soc 2005; 11:446 453を参照)。また、薬剤へ応答性は、患者と介護士の両方への構造化面接に基づいて評価される７ポイントの全体変化である、the Clinician's Interview-Based Impression of Change Plus Caregiver Input (CIBIC-Plus)を使用して測定されうる(例えば、Schneider等, Alzheimer Dis Assoc Disord 1997; 11(付録2):22 32を参照)。また、薬剤への応答性は、介護士のインタビューに基づいて１２の行動上の症状の頻度及び重症度を評価する、神経精神医学インベントリ（ｔｈｅ Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｉａｔｒｉｃ Ｉｎｖｅｎｔｏｒｙ）（ＮＰＩ)を使用して測定されうる(例えば、Cummings等., Neurology 1994; 44:2308-2314)。
【０１７１】
Ｄ．コンジュゲーション
本明細書に記載の通り、本発明のシャトル剤はＬＲＰ８結合分子部分とＣＮＳ活性化合物の部分を含む。２つの部分は、単一のシャトル剤にコンジュゲートしている。このようなコンジュゲーションは、共有結合または非共有結合することができ、コンジュゲーションのための配慮の下にある特定のＬＲＰ８結合分子およびＣＮＳ活性化合物に適切に依存するであろう。
【０１７２】
共有結合は、直接またはリンカーを介してすることができる。所定の実施態様において、直接コンジュゲーションは、タンパク質融合の（すなわち、ＬＲＰ８結合分子やＣＮＳ活性化合物をコードする２つの遺伝子の遺伝子融合、及び単一のタンパク質としての発現による）構築によるものである。所定の実施態様において、直接コンジュゲーションは、シャトル剤の２つの部分の片方の反応基とシャトル剤の他の部分の対応する基またはアクセプターとの間の共有結合を形成することによる。所定の実施態様において、直接コンジュゲーションは、適切な条件下でコンジュゲートすべき他の分子に共有結合を形成する反応性基を（非限定的な例として、スルフヒドリル基またはカルボキシル基など）を含めるために、コンジュゲートすべき２分子の一方の改変（すなわち、遺伝子組み換え）によるものである。
【０１７３】
非限定的な例としては、所望の反応基（すなわち、システイン残基）を有する分子（すなわち、アミノ酸）を、ＬＲＰ８結合分子部分中に導入することができ、ジスルフィド結合がＣＮＳ活性化合物部分と形成される。タンパク質に対して核酸を共有結合するための方法もまた、当技術分野で知られている（すなわち光架橋、例えばZatsepin et al(2005) Russ. Chem. Rev. 74: 77-95を参照)。非共有結合は、当業者によって容易に理解されるように、疎水結合、イオン結合、静電相互作用などを含む、任意の非共有結合法によるものである。コンジュゲーションはまたさまざまなリンカーを使って行うことができる。例えば、ＬＲＰ８結合分子部分とシャトル剤のＣＮＳ活性化合物の部分は、様々な二官能性タンパク質カップリング剤、例えば、Ｎ−スクシンイミジル３−（２−ピリジルチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ＳＭＣＣ）、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの２官能性誘導体（例えばジメチルアジピミデートＨＣｌ）、活性エステル（例えばジスクシンイミジルズベレート）、アルデヒド（例えばグルタルアルデヒド）、ビス−アジド化合物（例えばビス（ｐ−アジドベンゾイル）ヘキサンジアミン）、ビスジアゾニウム誘導体（例えばビス（ｐ−ジアゾニウムベンゾイル）エチレンジアミン）、ジイソシアネート（例えばトルエン２，６−ジイソシアネート）及びビス活性フッ素化合物（例えば１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼン）など、を使って結合させることができる。ペプチド結合により連結した１から２０個のアミノ酸から成るペプチドリンカーもまた使用することができる。所定の実施態様において、アミノ酸は２０個の天然に存在するアミノ酸から選択される。所定の他のこのような実施態様では、アミノ酸の１つ以上が、グリシン、アラニン、プロリン、アスパラギン、グルタミンおよびリジンから選ばれる。リンカーは、脳への送達時にＣＮＳ活性化合物の放出を容易にする”切断可能なリンカー”であり得る。例えば、酸に不安定なリンカー、ペプチダーゼ過敏性リンカー、光解離性リンカー、ジメチルリンカー又はジスルフィド含有リンカー（Chari et al., Cancer Res. 52:127-131 (1992);米国特許第５２０８０２０号）が使用され得る。
【０１７４】
本明細書でシャトル剤は、限定されないが、市販の（例えばＰｉｅｒｃｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ．，Ｕ.Ｓ.Ａからの）、ＢＭＰＳ、ＥＭＣＳ、ＧＭＢＳ、ＨＢＶＳ、ＬＣ−ＳＭＣＣ、ＭＢＳ ＭＰＢＨ、ＳＢＡＰ、ＳＩＡ、ＳＩＡＢ、ＳＭＣＣ、ＳＭＰＢ、ＳＭＰＨ、スルホ−ＥＭＣＳ、スルホ−ＧＭＢＳ、スルホ−ＫＭＵＳ、スルホ−ＭＢＳ、スルホ−ＳＩＡＢ、スルホ−ＳＭＰＢ、及びスルホ−ＳＭＰＢ、ＳＶＳＢ（スクシンイミジル（４−ビニルスルホン）ベンゾエート）を含むクロスリンカー試薬を用いて調製されるコンジュゲートを限定されないが明示的に熟考している。
【０１７５】
Ｅ．診断及び検出のための方法および組成物
所定の実施態様において、標識されたシャトル剤が与えられる。標識は、限定されるものではないが、（例えば、蛍光、発色、高電子密度の化学発光、放射性標識など）直接検出される標識又は部分、並びに、例えば、酵素反応や分子間相互作用を介して間接的に検出されるような酵素やリガンドのような部分が含まれる。このような標識の例には、ラジオアイソトープ３２Ｐ、１４Ｃ、１２５Ｉ、３Ｈ、及び１３１Ｉ、フルオロフォア、例えば希土類キレート又はフルオレセイン及びその誘導体、ローダミン及びその誘導体、ダンシル、ウンベリフェロン、ルシェフェラーゼ、例えばホタルルシェフェラーゼ及び細菌ルシェフェラーゼ（米国特許第４７３７４５６号）、ルシェフェリン、２，３−ジヒドロフタルジネジオン、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）、アルカリフォスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、グルコアミラーゼ、リゾチーム、糖オキシダーゼ、例えばグルコースオキシダーゼ、ガラクトースオキシダーゼ、及びグルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ、ヘテロサイクリックオキシダーゼ、例えばウリカーゼ及びキサンチンオキシダーゼ、色素前駆体、例えばＨＲＰ、ラクトペルオキシダーゼ、又はマイクロペルオキシダーゼ、ビオチン／アビジン、スピンラベル、バクテリオファージラベル、安定な遊離ラジカルなどを酸化する過酸化水素を利用する酵素とカップリングさせたもの、などが含まれる。
【０１７６】
所定の実施態様において、本明細書で提供されるシャトルの薬剤のいずれかは、生体試料または被検体におけるＬＲＰ８及び／又は一つ以上のＣＮＳ標的の存在を検出するのに有用である。本明細書で使用する”検出”という用語は、定量的または定性的検出を包含する。所定の実施態様において、生物学的サンプルは、脳脊髄液、神経細胞、又は脳組織などの細胞または組織を含む。
【０１７７】
一実施態様において、インビトロ診断または検出の方法で使用するためのシャトル剤が提供される。更なる態様において、生物学的サンプル中のＬＲＰ８の存在を検出する方法が提供される。更なる態様において、サンプル中の一以上のＣＮＳ標的の存在を検出する方法が提供される。所定の実施態様において、本方法はＬＲＰ８および／または一以上のＣＮＳ標的へのシャトル剤の結合を許容する条件下で、本明細書に記載のシャトル剤と生物学的サンプルを接触させ、複合体がシャトル剤とＬＲＰ８及び／又は一つ以上のＣＮＳ標的の間に形成されているかどうかを検出することを含む。そのような方法は、インビトロ又はインビボ法であり得る。一実施態様において、例えばＣＮＳ標的が患者の選択のためのバイオマーカーであるなど、シャトル剤がシャトル剤による治療にふさわしい被検体を選択するために使用される。
【０１７８】
一実施態様において、インビボ診断または検出の方法で使用するためのシャトル剤が提供される。一態様において、被検体の一以上のＣＮＳ標的の存在、量及び／又は活性を検出する方法が提供される。所定の態様において、シャトル剤が被験体に投与され、ＣＮＳ内でのシャトル剤の局在が検出される。所定の態様において、シャトル剤は標識されている。所定の態様において、検出は、非侵襲的イメージング手段（すなわち、Ｘ線撮影、断層撮影、磁気共鳴イメージング、または他のイメージング技術）によるものである。所定の態様において、検出はシャトル剤がシャトル剤の存在および／または活性のために投与されていた被験体からの一以上の生体試料を評価することによってである。所定の態様において、ＣＮＳ内のシャトル剤の量は、ＣＮＳ内のシャトル剤の局在化に加えてか又はその代わりに測定される。所定の態様において、ＣＮＳ内シャトル剤の活性を測定した（すなわち当業者によって理解されるように、シャトル剤の標識は、シャトル剤のＣＮＳ活性部分が活性である場合にのみ検出可能であるように選択することができる）。所定の態様において、被検体はヒトである。所定の態様において、検出は、被検体におけるＣＮＳの状態の決められた評価のためのものである。所定の態様において、検出は、ＣＮＳ内の変性や傷害の検出のためのものである。所定の態様において、検出は、ＣＮＳの疾患または障害の有無の一つ以上の指標を早期に検出するためのものである。所定の態様において、検出は、ＣＮＳの疾患または障害の重症度および／または進行を評価することである。所定の態様において、検出は、特定の療法又は治療法の有効性やインパクトを評価することである。当業者には、検出の前述のタイプのいずれかが、与えられた時間枠で収集された一連の検出、又は、特定の検出の結果の、健常被検体又はＣＮＳの疾患または障害の既知の状態であるコントロール被検体からの結果に対する比較、から恩恵を受け得るか又は関与し得ることが理解されるであろう。
【０１７９】
本発明の抗体を使用して診断され得る典型的な疾患又は障害は、神経障害、アミロイドーシス、癌、ウイルス又は細菌感染、炎症、虚血、神経変性疾患、発作、行動障害、及びリソソーム蓄積症を含む。
【０１８０】
Ｆ．薬学的処方物
本明細書に記載のシャトル剤（例えば、ＣＮＳ活性化合物にコンジュゲートした抗ＬＲＰ８抗体）の薬学的処方物は、所望の程度の純度を有するそのようなシャトル剤と任意の薬学的に許容される担体(Remington's Pharmaceutical Sciences 20th edition, Osol, A. Ed.: Williams and Wilkins PA, USA (2000)) とを、凍結乾燥製剤または水性溶液の形態で混合することによって調製される。薬学的に許容される担体は、使用される投薬量および濃度でレシピエントに毒性でなく、そしてこれには、限定しないが、リン酸塩、クエン酸塩および他の有機酸のような緩衝液；塩酸塩、水素酸塩、硫酸塩などの鉱酸塩；アスコルビン酸およびメチオニンを含む抗酸化剤；防腐剤（例えば、オクタデシルジメチオルベンジルアンモニウムクロライド；ヘキサメトニウムクロライド；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、フェノール、ブチルまたはベンジルアルコール；アルキルパラベン、例えば、メチルまたはプロピルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；チメロサール；およびｍ−クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；タンパク質、例えば、血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えば、ポリビニルピロリドン；アミノ酸、例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニンまたはリジン；マンノサッカライド、ジサッカライド、およびグルコース、マンノースまたはデキストリンを含む他の炭水化物；キレート剤、例えば、ＥＤＴＡ；糖、例えば、スクロース、マンニトール、トレハロースまたはソルビトール；塩形成対イオン、例えば、ナトリウム、金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質錯体）；モノステアリン酸アルミニウムなどの吸収遅延剤、及び／又はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等の非イオン性界面活性剤が挙げられる。本明細書における典型的な薬学的に許容される担体は、介在性薬物分散剤、例えば、水溶性の中性アクティブヒアルロニダーゼ糖タンパク質（ｓＨＡＳＥＧＰ）、例えば、ｒＨｕＰＨ２０（ＨＹＬＥＮＥＸ（登録商標）、Ｂａｘｔｅｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．）などのヒト可溶性ＰＨ−２０ヒアルロニダーゼ糖タンパク質を更に含む。所定の典型的なｓＨＡＳＥＧＰ及び使用法は、ｒＨｕＰＨ２０を含み、米国特許出願公開第２００５／０２６０１８６号及び２００６／０１０４９６８に開示されている。一態様において、ｓＨＡＳＥＧＰは、コンドロイチナーゼなどの１つまたは複数の追加のグルコサミノグリカンと組み合わされる。
【０１８１】
典型的な凍結乾燥抗体製剤は、米国特許第６２６７９５８号に記載されている。水性の抗体製剤は、米国特許第６１７１５８６号及び国際公開第２００６／０４４９０８号に記載されているものが含まれ、後者の製剤はヒスチジン−酢酸緩衝液を含む。
【０１８２】
本明細書の製剤はまた、治療を受けている特定の徴候のために必要な一以上の活性成分、好ましくは、互いに悪影響を及ぼさない相補的活性を持つものが含まれる場合がある。例えば、シャトル剤が治療するために意図される場合、同一又は異なるＣＮＳ疾患または障害を治療するのに適した１つまたは複数の化合物を更に提供することが望まれ得る。同様に、シャトル剤が診断するために意図される場合、同一又は異なるＣＮＳ疾患または障害を診断するのに適した１つまたは複数の化合物を更に提供することが望まれ得る。適切なの追加化合物は、当業者には周知であろう。例えば、シャトル剤が、ＬＲＰ８及び、アルツハイマー病の治療を目的とされたＣＮＳ標的、例えば、アミロイド前駆体タンパク質、アミロイドβペプチド（モノマー、オリゴマー、またはフィブリル形態）、βセクレターゼ、γセクレターゼ等を標的とする二重特異性抗体である場合、そのシャトル剤の製剤はまた、一以上の付加的なアルツハイマー病の治療薬（すなわち、コリンエステラーゼ阻害剤、メマンチン、抗動揺病薬、抗うつ、抗不安薬など）を含んでいてもよい。このような活性成分は、意図した目的のために有効な量で組み合わされ適切に存在する。
【０１８３】
活性成分はまた、調製されるマイクロカプセルに、例えば、コアセルベーション技術によって、または界面重合によって、捕捉され得る、例えば、それぞれ、ヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチン−マイクロカプセルおよびポリ−（メチルメタクリレート）マイクロカプセル、コロイド薬物送達系で（例えば、リポソーム、アルブミンマイクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子およびナノカプセル）、またはマクロエマルジョンで。 このような技術は、Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980) に開示される。
【０１８４】
徐放性調製物が調製されてもよい。徐放性製剤の好適な例は、抗体を含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリクスを含み、そのマトリックスが成形品、例えばフィルムまたはマイクロカプセルの形をしている。
【０１８５】
インビボ投与に使用される製剤は、一般的に無菌である。無菌性は、例えば、滅菌濾過膜を通して濾過することにより、達成することができる。
【０１８６】
Ｇ．治療的方法及び組成物
本発明のシャトル剤は治療用組成物として用いることができる。所定の実施態様において、本発明のシャトル剤は、１つまたは複数のＣＮＳの疾患または障害を治療または予防するために使用される。典型的なＣＮＳの疾患又は障害は、限定されるものではないが、神経障害、アミロイドーシス、癌、ウイルス又は細菌感染、炎症、虚血、神経変性疾患、発作、行動障害、及びリソソーム蓄積症を含む。
【０１８７】
神経障害性疾患は、不適切または制御されていない神経シグナル伝達またはそれらの欠如を特徴とする神経系の疾患や異常であり、限定されないが、慢性疼痛（侵害受容性疼痛（がん性疼痛を含む体組織への損傷によって引き起こされる痛み）、神経因性疼痛（神経、脊髄や脳の異常によって引き起こされる痛み）、及び心因性の痛み（完全に、または大部分が心理的障害に関連する）、頭痛、片頭痛、神経障害、及びしばしばめまいや吐き気などの神経障害障害を伴う症状や症候群を含む。
【０１８８】
アミロイドーシスは、ＣＮＳにおける細胞外タンパク性沈着に関連する疾患および障害のグループであり、限定されないが、続発性アミロイドーシス、加齢に伴うアミロイドーシス、アルツハイマー病（ＡＤ）、軽度認知障害（ＭＣＩ）、レビー小体型認知症、ダウン症候群、アミロイドーシスを伴う遺伝性脳出血（オランダ型）；パーキンソン認知症症候群、脳アミロイド血管症、ハンチントン病、進行性核上性麻痺、多発性硬化症、クロイツフェルトヤコブ病、パーキンソン病、伝達性海綿状脳症、ＨＩＶ関連認知症、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、封入体筋炎（ＩＢＭ）、およびβ−アミロイド沈着（に関連する眼疾患（すなわち、黄斑変性症、ドルーゼ関連視神経症、白内障）を含む。
【０１８９】
ＣＮＳの癌は、一つ以上のＣＮＳの細胞（すなわち、神経細胞）の異常増殖によって特徴づけられ、限定されないが、神経膠腫、多形性膠芽腫、髄膜腫、星状細胞腫、聴神経腫、軟骨腫、乏突起膠腫、髄芽腫、神経節膠腫、神経鞘腫、神経線維腫、神経芽細胞腫、および硬膜外、硬膜内髄内または腫瘍を含む。
【０１９０】
眼疾患又は障害は、眼の疾患または障害であり、本明細書における目的においてＢＢＢの影響を受けるＣＮＳの器官と見なされる。眼疾患又は障害は、限定されないが、強膜、角膜、虹彩、毛様体（すなわち、強膜炎、角膜炎、角膜潰瘍、角膜上皮剥離、雪眼炎、アーク目、タイゲソン点状表層角膜炎、角膜血管新生、フックス角膜内皮変性症、円錐角膜、乾性角結膜炎、虹彩炎やブドウ膜炎）の障害、レンズの障害（すなわち、白内障）、脈絡膜と網膜の障害（すなわち、網膜剥離、網膜分離症、高血圧性網膜症、糖尿病性網膜症、網膜症、未熟児網膜症、加齢黄斑変性症、黄斑変性症（湿式または乾式）、網膜上の障害膜、網膜色素変性症や黄斑浮腫）、緑内障、飛蚊症、視神経や視覚経路の障害（すなわち、レーバー遺伝性視神経症と視神経乳頭ドルーゼン）、眼筋／両眼運動調節／屈折（すなわち、斜視、眼麻痺、進行性外眼筋麻痺、内斜視、外斜視、遠視、近視、乱視、不同視、老眼や眼筋麻痺）の障害、視覚障害及び失明（すなわち、弱視、レーバー先天性黒内障、暗点、色覚異常、色覚異常、夜盲、失明、河川盲目症と小眼球症／コロボーマ）、赤目、アーガイル・ロバートソン瞳孔、角膜真菌症、眼球乾燥症及び無こう彩を含む。
【０１９１】
ＣＮＳのウイルスまたは微生物感染は、限定されないが、ウイルス（即ち、インフルエンザ、ＨＩＶ、ポリオ、風疹、）、細菌（例えば、ナイセリア属、レンサ球菌属、シュードモナス属、プロテウス属、大腸菌、黄色ブドウ球菌、肺炎球菌属、髄膜炎菌属、ヘモフィルス属、および結核菌）、真菌（すなわち、酵母、クリプトコックス・ネオフォルマンス）、寄生虫（すなわち、トキソプラズマ原虫）などの他の微生物、又は、限定されないが、急性または慢性であり得る髄膜炎、脳炎、脊髄炎、血管炎、膿瘍を含むＣＮＳの病態生理を生じるアメーバによる感染症を含む。
【０１９２】
ＣＮＳの炎症はＣＮＳへの損傷によって引き起こされる炎症であり、物理的な損傷（すなわち、事故、手術、脳外傷、脊髄損傷、脳震盪により）、又は、ＣＮＳの一つ以上の他の疾患または障害（すなわち、膿瘍、癌、ウイルスや細菌感染）に起因するか又は関連する傷害であり得る。
【０１９３】
ＣＮＳの虚血は、本明細書で使用される場合、異常な血流や脳内の血管の挙動又はその原因に関連する疾患群を指し、従って、局所脳虚血、全脳虚血、脳卒中（すなわち、くも膜下出血や脳内出血）及び動脈瘤を含むが、これらに限定されない。
【０１９４】
神経変性疾患はＣＮＳ内の神経細胞の機能の喪失及び死に関連する疾患および障害のグループであり、限定されないが、副腎白質ジストロフィー、アレキサンダー病、アルパーズ症候群、筋萎縮性側索硬化症、毛細血管拡張性運動失調症、バッテン病、コケーン症候群、大脳皮質基底核変性症、アミロイドーシスに起因するか又は関連付けられている変性、フリードライヒ失調症、前頭側頭葉変性症、ケネディ病、多系統萎縮症、多発性硬化症、原発性側索硬化症、進行性核上性麻痺、脊髄性筋萎縮症、横断性脊髄炎、レフサム病、脊髄小脳失調を含む。
【０１９５】
ＣＮＳの発作性疾患および障害は、ＣＮＳにおいて不適切及び／又は異常な電気伝導を伴い、限定されないが、てんかん（すなわち、欠神発作、脱力発作、良性ローランドてんかん、小児欠、間代発作、複雑部分発作、前頭葉てんかん、熱性けいれん、乳児痙攣、若年性ミオクロニーてんかん、若年欠神てんかん、レノックス・ガストー症候群、ランダウＫｌｅｆｆｎｅｒ症候群、Ｄｒａｖｅｔ（ドラベ）症候群、大田原症候、ウエスト症候群、ミオクロニー発作、ミトコンドリア病、進行性ミオクローヌスてんかん、心因性発作、反射てんかん、ラスムッセン症候群、単純部分発作、二次性全般化発作、側頭葉てんかん、強直間代発作、強直発作、精神運動発作、辺縁系てんかん、部分てんかん発作、全身てんかん発作、てんかん重積状態、腹部てんかん、無動発作、自律神経発作、重度の両側性ミオクローヌス、月経随伴性てんかん、くず折れ発作、感情的な発作、焦点発作、笑い発作、ジャクソンマーチ、ラフォラ病、運動発作、多発性発作、夜間発作、感光性発作、擬似発作、感覚発作、微妙な発作、シルヴァン発作、離脱性痙攣、および視覚反射発作）を含む。
【０１９６】
行動障害とは、罹患している被験者の一部の異常な行動によって特徴づけられるＣＮＳの障害であり、限定されないが、睡眠障害（すなわち、不眠、睡眠時随伴症、夜驚症、概日リズム睡眠障害、ナルコレプシー）、気分障害（すなわち、うつ病、自殺、うつ病、不安、慢性的な情動障害、恐怖症、パニック発作、強迫性障害、注意欠陥多動性障害（ＡＤＨＤ）、注意欠陥障害（ＡＤＤ）、慢性疲労症候群、広場恐怖症、心的外傷後ストレス障害、双極性障害）、摂食障害（すなわち、食欲不振や過食症）、精神病、発達行動障害（すなわち、自閉症、レット症候群、アスペルガー症候群）、人格障害及び精神病性障害（すなわち、統合失調症、妄想性障害など）を含む。
【０１９７】
リソソーム蓄積症は、幾つかの場合ではＣＮＳに関連し、又はＣＮＳ特有の症状を有する代謝性疾患であり、そのような障害は、限定されないが、テイサックス病、ゴーシェ病、ファブリー病、ムコ多糖症（タイプＩ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ、ＶＩ及びＶＩＩ）、糖原病、ＧＭ１−ガングリオシドーシス、異染性白質ジストロフィー、ファーバー病、カナバンの白質ジストロフィー、およびニューロンセロイド脂褐素症１型および２型、ニーマンピック病、ポンペ病、クラッベ病を含む。
【０１９８】
本明細書で提供されるシャトルの薬剤のいずれかが、治療方法で使用することができる。一態様では、医薬として使用するためのシャトル剤が提供される。更なる態様において、ＣＮＳの疾患または障害の治療に使用するためのシャトル剤が提供される。所定の実施態様において、治療の方法における使用のためにシャトル剤が提供される。所定の実施態様において、本発明は、個体にシャトル剤の有効量を投与することを含むＣＮＳの疾患または障害を有する個体を治療する方法における使用のためのシャトル剤を提供する。一つのそのような実施態様において、上に詳述されたように、ＣＮＳ疾患または障害は、神経障害、アミロイドーシス、癌、ウイルス又は細菌感染、炎症、虚血、神経変性疾患、発作、行動障害、およびリソソーム蓄積症から選択される。一つのそのような実施態様において、この方法は、例えば後述するように、少なくとも１つのさらなる治療剤の有効量を個体に投与することを更に含む。上記実施態様のいずれかに記載の”個体”は、好ましくはヒトである。
【０１９９】
更なる態様にて、本発明は、医薬の製造または調製におけるシャトル剤の使用を提供する。一実施態様において、本医薬はＣＮＳの疾患または障害の治療のためのものである。更なる実施態様において、本医薬は、ＣＮＳの疾患または障害を有する個体に、医薬の有効量を投与することを含む、ＣＮＳの疾患または障害を治療する方法で使用するためのものである。一つのそのような実施態様において、この方法は、例えば後述するように、少なくとも１つのさらなる治療剤の有効量を個体に投与することを更に含む。そのような実施態様の何れかにおいて、ＣＮＳ疾患または障害は、神経障害、アミロイドーシス、癌、ウイルス又は細菌感染、炎症、虚血、神経変性疾患、発作、行動障害、およびリソソーム蓄積症から選択される。上記実施態様のいずれかに記載の”個体”は、ヒトであり得る。  
【０２００】
更なる態様にて、本発明は、ＣＮＳの疾患または障害を治療する方法を提供する。一実施態様において、本方法は、ＣＮＳの疾患または障害などを有する個体に、シャトル剤の有効量を投与することを含む。一つのそのような実施態様において、この方法は、後述するように、少なくとも１つのさらなる治療剤の有効量を個体に投与することを更に含む。そのような実施態様の何れかにおいて、ＣＮＳ疾患または障害は、神経障害、アミロイドーシス、癌、ウイルス又は細菌感染、炎症、虚血、神経変性疾患、発作、行動障害、およびリソソーム蓄積症から選択される。上記実施態様のいずれかに記載の"個体"は、ヒトであり得る。
【０２０１】
更なる態様において、本発明は、例えば、上記の治療法のいずれかで使用するために、本明細書で提供されるシャトルの薬剤のいずれかを含む薬学的製剤を提供する。一実施態様において、薬学的製剤は、本明細書で提供されるシャトルの薬剤のいずれかと、薬学的に許容される担体を含む。その他の実施態様において、薬学的製剤は、本明細書で提供されるシャトルの薬剤のいずれかと、少なくとも１つのさらなる治療剤を、例えば後述するように含む。
【０２０２】
特定のシャトル剤のＣＮＳ活性化合物部分は、特定のＣＮＳの疾患または障害の検出、予防及び／又は治療に有用であることが当業者に知られている化合物から選択することができる。与えられたＣＮＳ活性化合物は、複数のＣＮＳ疾患または障害を検出し、予防し、及び／又は治療することにおいて有効性や有用性を有し得る。
【０２０３】
神経障害性障害については、ＣＮＳ活性化合物は、限定されないが、オピオイド／麻薬性鎮痛薬（すなわち、モルヒネ、フェンタニル、ヒドロコドン、メペリジン、メタドン、オキシモルフォン、ペンタゾシン、プロポキシフェン、トラマドール、コデイン、オキシコドン）、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）（すなわち、イブプロフェン、ナプロキセン、ジクロフェナク、ジフルニサル、エトドラク、フェノプロフェン、フルルビプロフェン、インドメタシン、ケトロラク、メフェナム酸、メロキシカム、ナブメトン、オキサプロジン、ピロキシカム、スリンダク、およびトルメチン）、コルチコステロイド（すなわち、コーチゾン、プレドニゾン、プレドニゾロン、デキサメタゾン、メチルプレドニゾロンやトリアムシノロン）、抗片頭痛剤（すなわち、スマトリプタン、アルモトリプタン、フロバトリプタン、スマトリプタン、リザトリプタン、エレトリプタン、ゾルミトリプタン、エレトリプタンとエルゴタミン、ジヒドロエルゴタミン）、アセトアミノフェン、サリチル酸塩（すなわち、アスピリン、サリチル酸コリン、サリチル酸マグネシウム、ジフルニサル、そしてサルサラート）抗痙攣（すなわち、カルバマゼピン、クロナゼパム、ガバペンチン、ラモトリジン、プレガバリン、チアガビン、およびトピラマート）、麻酔薬（すなわち、イソフルラン、トリクロロエチレン、ハロタン、セボフルラン、ベンゾカイン、クロロ、コカイン、シクロメチカイン、ジメトカイン、プロポキシカイン、プロカイン、ノボカイン、プロパラカイン、テトラカイン、アルチカイン、ブピバカイン、アルチカイン、シンコカイン、エチドカイン、レボブピバカイン、リドカイン、メピバカイン、ピペロカイン、プリロカイン、ロピバカイン、トリメカイン、サキシトキシンとテトロドトキシン）、及びＣＯＸ−２阻害剤（すなわち、セレコキシブ、ロフェコキシブ、およびバルデコキシブ）、を含む鎮痛剤から選択することができる。めまいが伴う神経障害性障害については、ＣＮＳ活性化合物は、限定されないが、メクリジン、ジフェンヒドラミン、プロメタジン、ジアゼパムを含む、抗めまい剤から選択してもよい。吐き気が伴う神経障害性障害については、ＣＮＳ活性化合物は、限定されないが、プロメタジン、クロルプロマジン、プロクロルペラジン、トリメトベンズアミド、及びメトクロプラミドを含む抗吐き気剤から選択してもよい。神経変性疾患において、ＣＮＳ活性化合物は、成長ホルモンや神経栄養因子から選択することができ、例としては、限定されなが、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、神経成長因子（ＮＧＦ）、ニューロトロフィン−４／５、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）−２および他のＦＧＦ、ニューロトロフィン（ＮＴ）−３、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）、上皮成長因子（ＥＧＦ）、トランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ）−α、ＴＧＦ−β、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、インターロイキン−１受容体アンタゴニスト（ＩＬ−１ｒａ）、毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ）、グリア由来神経栄養因子（ＧＤＮＦ）、ニュールツリン、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、ヘレグリン、ニューレグリン、アルテミン、ペルセフィン、インターロイキン、グリア��胞株由来神経栄養因子（ＧＦＲ）、顆粒球コロニー刺激因子（ＣＳＦ）、顆粒球−マクロファージ−ＣＳＦ、ネトリン、カルジオトロフィン、ヘッジホッグ、白血病抑制因子（ＬＩＦ）、ミッドカイン、プレイオトロフィン、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）、ネトリン、サポシン、セマフォリン、および幹細胞因子（ＳＣＦ）を含む。
【０２０４】
癌については、ＣＮＳ活性化合物は、化学療法剤から選択されてもよい。化学療法剤の例には、チオテパ及びシクロホスファミド（ＣＹＴＯＸＡＮ（登録商標））のようなアルキル化剤；ブスルファン、インプロスルファン及びピポスルファンのようなスルホン酸アルキル類；ベンゾドーパ(benzodopa)、カルボコン、メツレドーパ(meturedopa)、及びウレドーパ(uredopa)のようなアジリジン類；アルトレートアミン(altretamine)、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホラミド(triethylenethiophosphaoramide)及びトリメチローロメラミン(trimethylolomelamine)を含むエチレンイミン類及びメチラメラミン類；アセトゲニン（特にブラタシン及びブラタシノン）；デルタ−９−テトラヒドロカナビノール（ドロナビノール、ＭＡＲＩＮＯＬ（登録商標）；βラパチョーネ；ラパコール；コルヒチン；ベツリン酸；カンプトセシン（合成アナログトポテカン（ＨＹＣＡＭＴＩＮ（登録商標）、ＣＰＴ−１１（イリノテカン、ＣＡＭＰＴＯＳＡＲ（登録商標））、アセチルカンプトテシン、スコポレクチン(scopolectin)及び９−アミノカンプトテシンを含む）；ブリオスタチン；カリスタチン；ＣＣ-１０６５（そのアドゼレシン、カルゼレシン及びビゼレシン合成アナログを含む）；ポドフィロトキシン；ポドフィリン酸(podophyllinic acid)；テニポシド；クリプトフィシン（特にクリプトフィシン１及びクリプトフィシン８）；ドラスタチン；ドゥオカルマイシン（合成アナログ、ＫＷ-２１８９及びＣＢ１-ＴＭ１を含む）；エロイテロビン；パンクラチスタチン；サルコジクチン；スポンギスタチン；クロランブシル、クロロナファジン(chlornaphazine)、チョロホスファミド(cholophosphamide)、エストラムスチン、イフォスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシドヒドロクロリド、メルファラン、ノベンビチン(novembichin)、フェネステリン(phenesterine)、プレドニムスチン(prednimustine)、トロフォスファミド(trofosfamide)、ウラシルマスタードなどのナイトロジェンマスタード；カルムスチン、クロロゾトシン(chlorozotocin)、フォテムスチン(fotemustine)、ロムスチン、ニムスチン、ラニムスチンなどのニトロスレアス(nitrosureas)；抗生物質、例えばエネジイン抗生物質(例えば、カリケアマイシン(calicheamicin)、特にカリケアマイシンγ１Ｉ及びカリケアマイシンωＩ１（例えばAgnew Chem Intl. Ed. Engl. 33:183-186(1994)参照）；ダイネマイシン(dynemicin)Ａを含むダイネマイシン；エスペラマイシン；並びにネオカルチノスタチン発色団及び関連する色素タンパクエネジイン抗生物質発色団)、アクラシノマイシン類(aclacinomysins)、アクチノマイシン、オースラマイシン(authramycin)、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン(cactinomycin)、カラビシン(carabicin)、カルミノマイシン、カルジノフィリン(carzinophilin)、クロモマイシン類、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン(detorbicin)、６-ジアゾ-５-オキソ-Ｌ-ノルロイシン、ＡＤＲＩＡＭＹＣＩＮ（登録商標）ドキソルビシン(モルホリノ-ドキソルビシン、シアノモルホリノ-ドキソルビシン、２-ピロリノ-ドキソルビシン及びデオキシドキソルビシンを含む)、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マーセロマイシン(marcellomycin)、マイトマイシンＣのようなマイトマイシン、マイコフェノール酸(mycophenolic acid)、ノガラマイシン(nogalamycin)、オリボマイシン(olivomycins)、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン(potfiromycin)、ピューロマイシン、ケラマイシン(quelamycin)、ロドルビシン(rodorubicin)、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン(tubercidin)、ウベニメクス、ジノスタチン(zinostatin)、ゾルビシン(zorubicin)；代謝拮抗剤、例えばメトトレキセート及び５-フルオロウラシル(５-ＦＵ)；葉酸アナログ、例えばデノプテリン(denopterin)、メトトレキセート、プテロプテリン(pteropterin)、トリメトレキセート(trimetrexate)；プリンアナログ、例えばフルダラビン(fludarabine)、６-メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン；ピリミジンアナログ、例えばアンシタビン、アザシチジン(azacitidine)、６-アザウリジン(azauridine)、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン(enocitabine)、フロキシウリジン(floxuridine)；アンドロゲン類、例えばカルステロン(calusterone)、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン(testolactone)；抗副腎剤、例えばアミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタン；葉酸リプレニッシャー(replenisher)、例えばフロリン酸(frolinic acid)；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン(amsacrine)；ベストラブシル(bestrabucil)；ビサントレン(bisantrene)；エダトラキセート(edatraxate)；デフォファミン(defofamine)；デメコルシン(demecolcine)；ジアジコン(diaziquone)；エルフォルニチン(elfornithine)；酢酸エリプチニウム(elliptinium)；エポチロン(epothilone)；エトグルシド(etoglucid)；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダミン(lonidamine)；メイタンシノイド(maytansinoid)類、例えばメイタンシン(maytansine)及びアンサミトシン(ansamitocine)；ミトグアゾン(mitoguazone)；ミトキサントロン；モピダモール(mopidamol)；ニトラクリン(nitracrine)；ペントスタチン；フェナメット(phenamet)；ピラルビシン；ロソキサントロン；２-エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ(登録商標)多糖複合体（JHS Natural Products, Eugene, OR）；ラゾキサン(razoxane)；リゾキシン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム(spirogermanium)；テニュアゾン酸(tenuazonic acid)；トリアジコン(triaziquone)；２,２',２''-トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン類(特にＴ-２毒素、ベラクリン(verracurin)Ａ、ロリジン(roridine)Ａ及びアングイジン(anguidine))；ウレタン；ビンデシン（ＥＬＤＩＳＩＮＥ（登録商標）、ＦＩＬＤＥＳＩＮ（登録商標））；ダカーバジン；マンノムスチン(mannomustine)；ミトブロニトール；ミトラクトール(mitolactol)；ピポブロマン(pipobroman)；ガシトシン(gacytosine)；アラビノシド（「Ａｒａ-Ｃ」）；チオテパ；タキソイド類、例えばＴＡＸＯＬ（登録商標）パクリタキセル（Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, NJ）、ＡＢＲＡＸＡＮＥＴＭパクリタキセルのクレモフォー無添加アルブミン操作ナノ粒子製剤（American Pharmaceutical Partners, Schaumberg, Illinois）、及びＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）ドキセタキセル（Rhone-Poulenc Rorer, Antony, France）；クロランブシル；ゲムシタビン(gemcitabine) （ＧＥＭＺＡＲ(登録商標)）；６-チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；プラチナアナログ、例えばシスプラチン及びカルボプラチン；ビンブラスチン（ＶＥＬＢＡＮ（登録商標））；プラチナ；エトポシド(ＶＰ-１６)；イホスファミド；マイトキサントロン；ビンクリスチン（ＯＮＣＯＶＩＮ（登録商標））；オキサリプラチン；ロイコボビン(leucovovin)；ビノレルビン（ＮＡＶＥＬＢＩＮＥ(登録商標)）；ノバントロン(novantrone)；エダトレキセート；ダウノマイシン；アミノプテリン；イバンドロナート(ibandronate)；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ２０００；ジフルオロメチロールニチン(ＤＭＦＯ)；レチノイン酸のようなレチノイド；カペシタビン(capecitabine)（ＸＥＬＯＤＡ（登録商標）；上述したもののいずれかの薬学的に許容可能な塩類、酸類又は誘導体：並びに上記のうち２以上の組み合わせ、例えば、シクロフォスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、及びプレドニソロン併用療法の略称であるＣＨＯＰ、及び５−ＦＵ及びロイコボビン(leucovovin)とオキサリプラチン（ＥＬＯＸＡＴＩＮＴＭ）を組み合わせた治療法の略称であるＦＯＬＦＯＸが含まれる。
【０２０５】
また化学療法剤の定義に含まれるものには、癌の成長を助けるホルモンの作用を調節、低減、遮断又は阻害するように働き、多くの場合全身処置の形態で使用される抗ホルモン剤がある。それらはそれ自体がホルモンであってもよい。例として、抗エストロゲン及び選択的エストロゲン受容体調節物質（ＳＥＲＭ）を含み、例えば、タモキシフェン（ＮＯＬＶＡＤＥＸ（登録商標）タモキシフェンを含む）、ＥＶＩＳＴＡ（登録商標）ラロキシフェン(raloxifene)、ドロロキシフェン、４-ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン(trioxifene)、ケオキシフェン(keoxifene)、ＬＹ１１７０１８、オナプリストーン(onapristone)、及びＦＡＲＥＳＴＯＮ（登録商標）トレミフェン；抗プロゲステロン；エストロゲンレセプター下方調節剤（ＥＲＤ）；卵巣を抑止又は停止させる機能がある作用剤、例えばＬＵＰＲＯＮ（登録商標）及びＥＬＩＧＡＲＤ（登録商標）酢酸ロイプロリド等の黄体形成ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ）アゴニスト、酢酸ゴセレリン、酢酸ブセレリン及びトリプテレリン(tripterelin)；その他抗アンドロゲン、例えばフルタミド(flutamide)、ニルタミド(nilutamide)、ビカルタミド；並びに副腎のエストロゲン産生を調節する酵素アロマターゼを阻害するアロマターゼ阻害剤、例えば４(５)-イミダゾール、アミノグルテチミド、ＭＥＧＡＳＥ(登録商標)酢酸メゲストロール、ＡＲＯＭＡＳＩＮ(登録商標)エキセメスタン、フォルメスタニー(formestanie)、ファドロゾール、ＲＩＶＩＳＯＲ(登録商標)ボロゾール、ＦＥＭＡＲＡ(登録商標)レトロゾール、及びＡＲＩＭＩＤＥＸ(登録商標)アナストロゾールである。加えて、このような化学療法剤の定義には、クロドロネート（例えばＢＯＮＥＦＯＳ（登録商標）又はＯＳＴＡＣ（登録商標））、ＤＩＤＲＯＣＡＬ（登録商標）エチドロン酸、ＮＥ−５８０９５、ＺＯＭＥＴＡ（登録商標）ゾレドロン酸／ゾレドロネート、ＦＯＳＡＭＡＸ（登録商標）アレンドロネート、ＡＲＥＤＩＡ（登録商標）パミドロン酸、ＳＫＥＬＩＤ（登録商標）チルドロン酸、又はＡＣＴＯＮＥＬ（登録商標）リセドロン酸、並びにトロキサシタビン(troxacitabine)（１,３-ジオキソランヌクレオシドシトシン類似体）；アンチセンスオリゴヌクレオチド、特に接着細胞の増殖に結びつくシグナル伝達経路における遺伝子の発現を阻害するもの、例えばＰＫＣ-α、Ｒａｆ、及びＨ-Ｒａｓ、及び上皮成長因子レセプター（ＥＧＦ−Ｒ）；ＴＨＥＲＡＴＯＰＥ（登録商標）ワクチン及び遺伝子治療ワクチン等のワクチン、例えばＡＬＬＯＶＥＣＴＩＮ（登録商標）ワクチン、ＬＥＵＶＥＣＴＩＮ（登録商標）ワクチン、及びＶＡＸＩＤ(登録商標)ワクチン；ＬＵＲＴＯＴＥＣＡＮ(登録商標)トポイソメラーゼ１阻害剤；ＡＢＡＲＥＬＩＸ(登録商標)ｒｍＲＨ；ラパチニブ（lapatinib ditosylate）（ＧＷ５７２０１６としても知られるＥｒｂＢ−２及びＥＧＦＲ二重チロシンキナーゼ小分子阻害剤）及び上記のもののいずれかの製薬的に許容される塩類、酸類又は誘導体が含まれる。
【０２０６】
癌の治療又は予防のためのＣＮＳ活性化合物として選択することができる化合物の別の群は、抗癌免疫グロブリン（限定されないが、トラスツズマブ、ベバシズマブ、アレムツズマブ、セツキシマブ、ゲムツズマブオゾガマイシン、イブリツモマブチウキセタン、パニツムマブ、リツキシマブを含む）である。幾つかの場合、有毒な標識と併用した抗体が、所望の細胞（すなわち、癌細胞）を標的とし、死滅させるために使用され得、限定しないが、１３１Ｉ放射性標識物トシツモマブが含まれる。
【０２０７】
眼疾患または障害について、ＣＮＳ活性化合物は、抗血管新生点眼剤（すなわち、ベバシズマブ、ラニビズマブ及びペガプタニブ）、緑内障点眼剤（トラボプロストとラタノプロストすなわち、カルバコール、エピネフリン、臭化デメカリウム、アプラクロニジン、ブリモニジン、ブリンゾラミド、レボブノロール、チモロール、ベタキソロール、ドルゾラミド、ビマトプロスト、カルテオロール、メチプラノロール、ジピベフリン）、炭酸脱水酵素阻害剤（すなわち、メタゾラミド 及びアセタゾラミド）、眼科用抗ヒスタミン薬（すなわち、ナファゾリン、フェニレフリンとテトラヒドロゾリン）、眼潤滑剤、眼科用ステロイド（すなわち、フルオロメトロン、プレドニゾロン、ロテプレドノール、デキサメタゾン、ジフルプレドナート、リメキソロン、フルオシノロンアセトニド、メドリゾン 及びトリアムシノロン）、点眼麻酔薬（すなわち、リドカイン、テトラカイン及びプロパラカイン）、眼科用抗感染薬（すなわち、レボフロキサシン、ガチフロキサシン、シプロフロキサシン、モキシフロキサシン、クロラムフェニコール、バシトラシン/ポリミキシンｂ、スルファセタミド、トブラマイシン、アジスロマイシン、ベシフロキサシン、ノルフロキサシン、スルフイソキサゾール、ゲンタマイシン、イドクスウリジン、エリスロマイシン、ナタマイシン、グラミシジン、ネオマイシン、オフロキサシン、トリフルリジン、ガンシクロビル、ビダラビン）、眼科用抗炎症剤（すなわち、ネパフェナク、ケトロラク、フルルビプロフェン、スプロフェン、シクロスポリン、トリアムシノロン、ジクロフェナクとブロムフェナク）、及び眼科用抗ヒスタミン剤又は充血除去剤（すなわち、ケトチフェン、オロパタジン、エピナスチン、ナファゾリン、クロモリン、テトラヒドロゾリン、ペミロラスト、ベポタスチン、ナファゾリン、フェニレフリン、ネドクロミル、ロドキサミド、フェニレフリン、エメダスチン及びアゼラスチン）から選択することができる。
【０２０８】
発作性疾患については、ＣＮＳ活性化合物は、抗けいれん薬又は抗てんかん薬から選択され得、限定されないが、バルビツレート系抗けいれん薬（すなわち、プリミドン、メタルビタール、メホバルビタール、アロバルビタール、アモバルビタール、アプロバルビタール、アルフェナール、バルビタール、ブラロバルビタール及びフェノバルビタール）、ベンゾジアゼピン系抗けいれん薬（すなわち、ジアゼパム、クロナゼパム、およびロラゼパム）、カルバメート抗けいれん薬（すなわちフェルバメート）、炭酸脱水酵素阻害薬の抗けいれん薬（すなわち、アセタゾラミド、トピラマートとゾニサミド）、ジベンズアゼピン抗けいれん薬（すなわち、ルフィナマイド、カルバマゼピン、そしてオクスカルバゼピン）、脂肪酸誘導体の抗痙攣薬（すなわち、ジバルプロックスとバルプロ酸）、γ-アミノ酪酸類似体（すなわち、プレガバリン、ガバペンチンおよびビガバトリン）、γ-アミノ酪酸再取り込み阻害剤（すなわち、チアガビン）、γ-アミノ酪酸トランスアミナーゼ阻害剤（すなわち、ビガバトリン）、ヒダントイン抗けいれん薬（例えば、フェニトイン、エトトイン、ホスフェニトイン及びメフェニトイン）、その他の抗けいれん薬（すなわち、ラコサミド、硫酸マグネシウム）、プロゲスチン（すなわち、プロゲステロン）、オキサゾリジンの抗けいれん薬（すなわち、パラメタジオン 及びトリメタジオン）、ピロリジン抗けいれん薬（すなわち、レベチラセタム）、スクシンイミド抗けいれん薬（すなわち、エトスクシミド及びメトスクシミド ）、トリアジン抗けいれん薬（すなわち、ラモトリジン）、及び尿素抗けいれん薬（すなわち、フェナセミド及びフェネトライド）を含む。
【０２０９】
リソソーム蓄積症について、ＣＮＳ活性化合物は、それ自体が又は別の方法で、病気で損なわれている酵素の活性を模倣するものが選択され得る。リソソーム蓄積症の治療のための例示的な組換え酵素は、限定されないが、例えば、米国特許出願公開第２００５０１４２１４１号に記載されるもの（即ち、α−Ｌ−イズロニダーゼ、イズロン酸−２−スルファターゼ、Ｎ−スルファターゼ、α−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼ、Ｎ−アセチルガラクトサミン−６−スルファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、アリールスルファターゼＢ、β−グルクロニダーゼ、酸性α−グルコシダーゼ、グルコセレブロシダーゼ、α−ガラクトシダーゼＡ、ヘキソサミニダーゼＡ、酸性スフィンゴミエリナーゼ、β−ガラクトセレブロシダーゼ、β−ガラクトシダーゼ、アリールスルファターゼＡ、酸性セラミダーゼ、アスパルトアシラーゼ、パルミトイル−プロテインチオエステラーゼ１、及びトリペプチジルアミノペプチダーゼ１）を含む。
【０２１０】
アミロイドーシスについては、ＣＮＳ活性化合物が選択することができ、限定されないが、抗体、又は、βセクレターゼ、タウ、プレセニリン、そのアミロイド前駆体タンパク質またはその部分、アミロイドβペプチドまたはそれらのオリゴマーまたは線維、細胞死受容体６（ＤＲ６）、糖化最終産物に対する受容体（ＲＡＧＥ）、パーキン、そしてチンチン、コリンエステラーゼ阻害剤（すなわち、ガランタミン、ドネペジル、リバスチグミン及びタクリン）；ＮＭＤＡ受容体拮抗薬（すなわち、メマンチン）、モノアミン枯渇薬（すなわち、テトラベナジン）；メシル酸エルゴロイド、抗コリン抗パーキンソン剤（すなわち、プロシクリジン、ジフェンヒドラミン、トリヘキシフェニジル、ベンズトロピン、ビペリデン及びトリヘキシフェニジル）；ドーパミン作動性抗パーキンソン剤（すなわち、エンタカポン、セレギリン、プラミペキソール、ブロモクリプチン、ロチゴチン、セレギリン、ロピニロール、ラサギリン、アポモルフィン、カルビドパ、レボドパ、ペルゴリド、トルカポンとアマンタジン）；テトラベナジン；抗炎症薬（限定されないが、非ステロイド性抗炎症薬（すなわち、インドメタシン及び上記の他の化合物）を含む；ホルモン（すなわち、エストロゲン、プロゲステロン及びロイプロリド）；ビタミン（すなわち、葉酸、ニコチンアミド）；ジメボリン；ホモタウリン（すなわち、３−アミノプロパンスルホン酸；３ＡＰＳ）；セロトニン受容体活性のモジュレーター（すなわち、キサリプロデン）；インターフェロン、及びグルココルチコイド、から選択される標的に特異的に結合する他の結合分子（限定されないが、小分子、ペプチド、アプタマー、または他の蛋白質結合を含む）を含む。
【０２１１】
ウイルス性疾患または微生物病については、ＣＮＳ活性化合物が選択され、限定されないが、抗ウイルス化合物（限定されないが、アダマンタン抗ウイルス（すなわち、リマンタジン及びアマンタジン）、抗ウイルス薬インターフェロン（すなわち、ペグインターフェロンアルファ−２ｂ）；ケモカイン受容体拮抗薬（すなわち、マラビロク）；インテグラーゼ鎖移転阻害剤（すなわち、ラルテグラビル）；ノイラミニダーゼ阻害剤（すなわち、オセルタミビルとザナミビル）；非ヌクレオシド系逆転写酵素阻害剤（すなわち、エファビレンツ、エトラビリン、デラビルジン及びネビラピン）;ヌクレオシド系逆転写酵素阻害剤（テノホビル、アバカビル、ラミブジン、ジドブジン、スタブジン、エンテカビル、エムトリシタビン、アデフォビル、ザルシタビン、テルビブジンとジダノシン）;プロテアーゼ阻害剤（すなわち、ダルナビル、アタザナビル、ホスアンプレナビル、チプラナビル、リトナビル、ネルフィナビル、アンプレナビル、インジナビル及びサキナビル）;プリンヌクレオシド（すなわち、バラシクロビル、ファムシクロビル、バルガンシクロビル、ガンシクロビル、リバビリン、アシクロビル及びシドフォビル）;及びその他の抗ウイルス（すなわち、エンフビルチド、ホスカルネット、パリビズマブ及びホミビルセン）を含む）;抗生物質（限定されないが、アミノペニシリン（すなわち、アモキシシリン、アンピシリン、オキサシリン、ナフシリン、クロキサシリン、ジクロキサシリン、フルクロキサシリン、テモ、アズロシリン、カルベニシリン、チカルシリン、メズロシリン、ピペラシリンとバカンピシリン）；セファロスポリン（すなわち、セファゾリン、セファレキシン、セファロチン、セファマンドール、セフトリアキソン、セフォタキシム、セフポドキシム、セフタジジム、セファドロキシル、セフラジンロラカルベフ、セフォテタン、セフロキシム、セフプロジル、セファクロル、およびセフォキシチン）、カルバペネム/ペネム（すなわち、イミペネム、メロペネム、エルタペネム、ファロペネム及びドリペネム）：モノバクタム（すなわち、アズトレオナム、チゲモナム、ノカルディシンA及びタブトキシニン-β-ラクタム：他のβ-ラクタム系抗生物質と併用したβ-ラクタマーゼ阻害剤（すなわち、クラブラン酸、スルバクタム及びタゾバクタム）；アミノグリコシド（すなわち、アミカシン、ゲンタマイシン、カナマイシン、ネオマイシン、ネチルマイシン、ストレプトマイシン、トブラマイシン、及びパロモマイシン）；アンサマイシン（すなわち、ゲルダナマイシンおよびハービマイシン）：カルバセフェム（すなわち、ロラカルベフ）；糖ペプチド（すなわち、テイコプラニンとバンコマイシン）；マクロライド系（すなわち、アジスロマイシン、クラリスロマイシン、ジリスロマイシン、エリスロマイシン、ロキシスロマイシン、トロレアンドマイシン、テリスロマイシン、スペクチノマイシン）：モノバクタム（すなわち、アズトレオナム）；キノロン（例えば、シプロフロキサシン、エノキサシン、ガチフロキサシン、レボフロキサシン、ロメフロキサシン、モキシフロキサシン、ノルフロキサシン、オフロキサシン、トロバフロキサシン、グレパフロキサシン、スパルフロキサシン���テマフロキサシン）；スルホンアミド（すなわち、マフェニド、スルホンアミドクリソイジン、スルファセタミド、スルファジアジン、スルファメチゾール、スルファニルアミド、スルファサラジン、スルフイソキサゾール、トリメトプリム、トリメトプリムとスルファメトキサゾール）；テトラサイクリン（すなわち、テトラサイクリン、デメクロサイクリン、ドキシサイクリン、ミノサイクリン、オキシテトラサイクリン）；抗腫瘍性抗生物質または細胞傷害性抗生物質（すなわち、ドキソルビシン、ミトキサントロン、ブレオマイシン、ダウノルビシン、ダクチノマイシン、エピルビシン、イダルビシン、プリカマイシン、マイトマイシン、ペントスタチン及びバルルビシン）；およびその他の抗菌性化合物（すなわち、バシトラシン、コリスチンおよびポリミキシンB）を含む）、抗真菌剤（すなわち、メトロニダゾール、ニタゾキサニド、チニダゾール、クロロキン、ヨードキノールとパロモマイシン）;及び駆虫薬（限定されないが、キニーネ、クロロキン、アモジアキン、ピリメタミン、スルファドキシン、プログアニル、メフロキン、アトバコン、プリマキン、アルテミシニン、ハロファントリン、ドキシサイクリン、クリンダマイシン、メベンダゾール、パモ酸ピランテル、チアベンダゾール、ジエチルカルバマジン、イベルメクチン、リファンピシン、アムホテリシンＢ、メラルソプロール、エフロルニチン及びアルベンダゾールを含む）を含む。
【０２１２】
虚血については、ＣＮＳ活性化合物は、限定されないが、血栓溶解剤（すなわち、ウロキナーゼ、アルテプラーゼ、レテプラーゼとテネクテプラーゼ）、血小板凝集阻害剤（例えば、アスピリン、シロスタゾール、クロピドグレル、プラスグレルとジピリダモール）、スタチン（すなわち、ロバスタチン、プラバスタチン、フルバスタチン、ロスバスタチン、アトルバスタチン、シンバスタチン、セリバスタチンおよびピタバスタチン）、血流や血管の柔軟性を向上させるための化合物、例えば血圧の薬を含むものから選択され得る。
【０２１３】
行動障害については、ＣＮＳ活性化合物は、限定されないが、非定型抗精神薬（すなわち、リスペリドン、オランザピン、アリピプラゾール、クエチアピン、パリペリドン、アセナピン、クロザピン、イロペリドンおよびジプラシドン）、フェノチアジン系抗精神病薬（すなわち、プロクロルペラジン、クロルプロマジン、フルフェナジン、ペルフェナジン、トリフルオ、チオリダジン及びメソリダジン）、チオキサンテン（すなわち、チオチキセン）、その他の抗精神病薬（すなわち、ピモジド、リチウム、モリンドン、ハロペリドールとロキサピン）、選択的セロトニン再取り込み阻害剤（すなわち、シタロプラム、エスシタロプラム、パロキセチン、フルオキセチンやセルトラリン）、セロトニン-ノルエピネフリン再取り込み阻害薬、抗うつ薬（すなわち、デュロキセチン、ベンラファキシン、デスベンラファキシン、三環系（すなわち、ドキセピン、クロミプラミン、アモキサピン、ノルトリプチリン、アミトリプチリン、トリミプラミン、イミプラミン、プロトリプチリンとデシプラミン）、四環系抗うつ薬（すなわち、ミルタザピン及びマプロチリン）、抗うつフェニルピペラジン（すなわち、トラゾドンとネファゾドン）、モノアミン酸化酵素阻害薬（すなわち、イソカルボキサジド、フェネルジン、セレギリンおよびトラニルシプロミン）、ベンゾジアゼピン（すなわち、フルラゼパム、クロナゼパム、ロラゼパム、ジアゼパム、エスタゾラム、アルプラゾラム）、ノルエピネフリンドーパミン再取り込み阻害剤（すなわち、ブプロピオン）、中枢神経系の興奮剤（すなわち、フェンテルミン、ジエチル、メタンフェタミン、デキストロアンフェタミン、アンフェタミン、メチルフェニデート、デクスメチルフェニデート、リスデキサンフェタミン、モダフィニル、ペモリン、フェンジメトラジン、ベンズフェタミン、フェンジメトラジン、アルモダフィニル、ジエチルプロピオン、カフェイン、アトモキセチン、ドキサプラム、及びマジンドール）、鎮静剤/抗不安薬/催眠薬（限定されないが、バルビツレート（すなわち、セコバルビタール、フェノバルビタールとメホバルビタール）、ベンゾジアゼピン（前述のとおり）、およびその他の鎮静剤/抗不安薬/催眠薬（つまりジフェンヒドラミン、ナトリウムオキシベート、ザレプロン、ヒドロキシジン、抱水クロラール、ゾルピデム、ブスピロン、ドキセピン、ゾピクロン、ラメルテオン、メプロバメートとエトクロルビノール）を含む）、セクレチン(例えば、Ratliff-Schaub et al. (2005) Autism 9: 256-265を参照)、オピオイドペプチド(例えば、Cowen et al., (2004) J. Neurochem. 89:273-285を参照)、及び神経ペプチド(例えば、Hethwa et al. (2005) Am. J. Physiol. 289: E301-305を参照)を含む行動改質化合物から選択することができる。
【０２１４】
ＣＮＳ炎症については、ＣＮＳ活性化合物は、炎症そのものを解決すること（すなわち、イブプロフェンやナプロキセンなどの非ステロイド性抗炎症薬）、または炎症の根本的な原因を扱うもの（すなわち、抗ウイルスや抗がん剤）を選択することができる。
【０２１５】
発明のシャトル剤は、治療において、単独で、または他の薬剤と組み合わせて使用することができる。例えば、本発明のシャトル剤が少なくとも１つのさらなる治療剤と同時投与することができる。所定の実施態様において、シャトル剤が治療に使用される場合、追加の治療薬剤は、同一又は異なるＣＮＳ疾患または障害の治療に有効な治療薬剤である。例示的な追加の治療剤としては、限定されないが、上述した種々のＣＮＳ活性化合物、コリンエステラーゼ阻害薬（ドネペジル、ガランタミン、リバスチグミン、およびタクリンなど）、ＮＭＤＡ受容体アンタゴニスト（例えばメマンチン）、アミロイドβペプチドの凝集阻害剤、酸化防止剤、γ−セクレターゼモジュレーター、神経成長因子（ＮＧＦ）模倣物またはＮＧＦ遺伝子治療、ＰＰＡＲγアゴニスト、ＨＭＳ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤（スタチン）、アンパカイン、カルシウムチャネル遮断薬、ＧＡＢＡ受容体拮抗薬、グリコーゲン合成酵素キナーゼ阻害剤、静脈注射用免疫グロブリン、ムスカリン受容体アゴニスト、ニコチン受容体モジュレーター、能動的または受動的アミロイドβペプチド免疫化、ホスホジエステラーゼ阻害剤、セロトニン受容体拮抗薬及び抗アミロイドβペプチド抗体を含む。所定の実施態様において、ＣＮＳ活性化合物の一つまたはそれ以上の副作用を軽減する能力に関して、少なくとも１つのさらなる治療剤が選択される。
【０２１６】
上記のこうした併用療法は、併用投与（２つ以上の治療剤が、同一または別々の製剤に含まれている）、及び、本発明の抗体の投与が、追加の治療剤及び／又はアジュバントの投与の前、同時、及び／又はその後に起きうる分離投与を包含する。本発明の抗体はまた、他の介入的治療法、限定されないが、例えば、放射線療法、行動療法、又は当技術分野で公知の他の治療法と組み合わせて使用することができ、治療される又は予防されるべきＣＮＳ疾患又は障害に対して適切である。
【０２１７】
本発明のシャトル剤（および任意の追加の治療剤）は、任意の適切な手段によって投与することができ、経口、肺内、および鼻腔内、及び局所治療が所望される場合、病巣内投与が含まれる。非経口注入には、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、又は皮下投与が含まれる。投薬は、その投与が短期間か又は長期であるかどうかに部分的に依存し、任意の適切な経路、例えば、静脈内または皮下注射などの注射により行うことができる。限定されないが、、様々な時間ポイント上の単一または複数回投与、ボーラス投与、パルス注入を含む様々な投与スケジュールが本明細書で考えられている。
【０２１８】
本発明のシャトル剤は良好な医療行為に合致した方法で処方され、投与され、投薬される。この観点において考慮すべき要因は、治療すべき特定の障害、治療すべき特定の哺乳類、個々の患者の臨床状態、障害の原因、薬剤送達部位、投与方法、投与日程及び医療従事者が知る他の要因を包含する。シャトル剤は必要ではないが、任意で、問題となる障害の予防又は治療のために現在使用中の一又は複数の薬剤ともに処方される。そのような他の薬剤の有効量は製剤中に存在するシャトル剤の量、障害又は治療の種類及び上記した他の要因に依存する。これらは一般的には本明細書に記載されるのと同じ用量及び投与経路において、又は、本明細書に記載された用量の１％から９９％で、又は経験的に／臨床的に妥当であると決定された任意の用量及び任意の経路により使用される。
【０２１９】
疾患の予防又は治療のためには、本発明のシャトル剤の適切な用量（単独で使用されるか、又は、一以上の更なる治療的薬剤との組み合わされる場合）は治療すべき疾患の種類、シャトル剤の種類、疾患の重症度及び経過、シャトル剤を予防又は治療目的のいずれにおいて投与するか、以前の治療、患者の臨床的履歴及びシャトル剤に対する応答性、及び担当医の判断に依存する。シャトル剤は、患者に対して、単回、又は一連の治療に渡って適切に投与される。疾患の種類及び重症度に応じて、例えば一回以上の別個の投与によるか、連続注入によるかに関わらず、シャトル剤約１μｇ／ｋｇから１５ｍｇ／ｋｇ（例えば０．１ｍｇ／ｋｇから１０ｍｇ／ｋｇ）が患者への投与のための初期候補用量となり得る。１つの典型的な一日当たり用量は上記した要因に応じて約１μｇ／ｋｇから１００ｍｇ／ｋｇ又はそれ以上の範囲である。数日間以上に渡る反復投与の場合には、状態に応じて、治療は疾患症状の望まれる抑制が起こるまで持続するであろう。１つの例示される抗体用量は約０．０５ｍｇ／ｋｇから約１０ｍｇ／ｋｇの範囲である。従って、約０．５ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇ又は１０ｍｇ／ｋｇの１つ以上の用量（又はこれらの何れかの組み合わせ）を患者に投与してよい。このような用量は断続的に、例えば毎週又は３週毎（例えば患者が約２から約２０、例えばシャトル剤の約６投与量を受けるように）投与してよい。初期の高負荷用量の後、１つ以上の低用量を投与してよい。しかしながら、他の用量用法も使用してよい。この治療法の進行は従来の手法及び試験により容易にモニタリングされる。
【０２２０】
Ｈ．製造品
本発明の他の実施態様において、上述したＣＮＳ疾患及び障害の治療、予防、及び／又は診断に有用な材料を含む製造品が提供される。製造品は、容器とラベルまたは容器上にあるまたは容器に付属するパッケージ挿入物を含む。好適な容器は、例としてボトル、バイアル、シリンジ、ＩＶ輸液バッグ等を含む。容器はガラス又はプラスチックなどの様々な材料から形成されうる。容器は、疾患の治療、予防、及び／又は診断に有効である、それ自体か、又はその他の組成物と併用される化合物を収容し、無菌のアクセスポートを有し得る（例えば、容器は皮下注射針による穴あきストッパーを有する静脈内溶液バッグ又はバイアルであってよい）。組成物中の少なくとも一の活性剤は本発明のシャトル剤である。ラベルまたはパッケージ挿入物は、組成物が特定の症状の治療のために使用されることを示している。更に、製造品は、（ａ）組成物が本発明のシャトル剤を包含する組成物を含む第一の容器；および（ｂ）組成物が更なる治療的薬剤を包含する組成物を含む第２の容器を含み得る。本発明の本実施態様における製造品は、組成物が特定の疾患を治療することに用いることができることを示すパッケージ挿入物をさらに含んでいてもよい。別法として、または加えて、製造品は、薬学的に許容されるバッファー、例えば注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝化塩水、リンガー溶液およびデキストロース溶液を含む第二（または第三）の容器をさらに含んでもよい。これは、他のバッファー、希釈剤、フィルター、針、およびシリンジを含む、商業的およびユーザーの立場から望まれる他の物質のさらに含んでもよい。
【実施例】
【０２２１】
ＩＩＩ．実施例
以下は本発明の方法および組成物の例である。上記提供される一般的な説明を前提として、他の様々な実施態様が実施され得ることが理解される。
【０２２２】
実施例１：候補のＢＢＢ特異的転座促進標的としてのＬＲＰ８の同定
マイクロアレイ遺伝子発現解析が、（ａ）血液脳関門に特異的で、（ｂ）高発現レベルが示され、（ｃ）動物のライフサイクル中に異なる時点で常に存在するタンパク質を同定するために行われた。従って、タンパク質の発現は、胎仔、若年、及び成体マウスにおける、精製された脳内皮細胞対肝臓及び肺細胞において解析された。具体的には、Ｃ５７ｂｌ６成体、仔（生後７日目）、及び胎仔（１４．５日）マウスが、標準的な技術により屠殺された。成体と仔については、大脳皮質、肝臓と肺が氷冷ＰＢＳ中に採取された。各組織において単一細胞懸濁液を以下のように調製した。脳について、髄膜が除去され（成体と仔ではワットマン紙により、及び胎仔では鉗子による）及び大脳皮質が切開され前脳から離された。パパインベースの神経解離キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）を、ＰＢＳの代わりのＨＢＳＳを用いたことを除いて、製造業者の指示に従って使用し、細胞を７０ミクロンのフィルターを通じて３分間１２００ｒｐｍで遠心して濾過した。キットの通常のミエリン除去工程は胎仔サンプルの場合に用いられなかった。肺（成体、仔、及び胎仔の各々の全肺葉）および肝臓（肝門脈を避けるために選択された各葉の周辺領域）については、修飾された神経解離キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）を用い、そこでは最初のパパインインキュベーションは、メーカーが指示した１５分の代わりに、１時間（成体）、３０分（仔）または１から５分（胎仔）行われた。成体のサンプルについてのみ、肝/肺サンプルは粉砕の前に、ローターで均質化した。
【０２２３】
すべての細胞懸濁液において内皮細胞のＦＡＣＳ選別は以下のように行った。細胞懸濁液を、ＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ中２％ＢＳＡ）で１回洗浄した。１：１００のＦｃプレブロック（ｐｒｅｂｌｏｃｋ）（ＣＤ１６またはＣＤ３２）が４℃で１０分間添加され、その後、細胞マーカーに特異的な２つの蛍光標識された一次抗体の各々の付加１：１００が続いた（内皮細胞マーカーとしてＦＩＴＣとコンジュゲートした抗マウスＣＤ３１及び有核造血細胞のマーカーとしてフィコエリトリンとコンジュゲートした抗マウスＣＤ４５）。細胞をＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄し、７０ミクロンのフィルターを通じて３分間１，２００ｒｐｍで遠心分離し濾過した。ＦＡＣＳソーティングの最中に死んだ細胞の選別を可能にするために、ヨウ化プロピジウムが最終濃度１μｇ／ｍｌまで添加された。脳細胞試料の約０．８％がＣＤ３１陽性かつＣＤ４５陰性内皮細胞であり、そのＲＮＡがＲＮｅａｓｙマイクロプラスキット（Ｑｉａｇｅｎ）により精製され、マイクロアレイ解析でさらに使用するために採取された（図２Ａ参照）。
【０２２４】
上記の結果を検証するために、特定の細胞特異的なマーカーについての標準技術を使用して、定量的ＲＴ−ＰＣＲ法も行われた。ＲＴ−ＰＣＲ反応は、ＱｕａｎｔｉＴｅｃｔ ＳＹＢＲ ＧｒｅｅｎのＲＴ−ＰＣＲキットワンステップキット（Ｑｉａｇｅｎ）を用いて、以下ように異なる細胞に特異的なプライマーにより、一般的に実施された。内皮細胞の含量を評価するために、マーカーのＴｉｅ２が、Ｍｍ＿Ｔｅｋ＿１ ＳＧのＱｕａｎｔｉＴｅｃｔプライマーアッセイ（Ｑｉａｇｅｎ）を用いて測定された。星状細胞含量を評価するために、マーカーのアクアポリン４がＭｍ＿Ａｑｐ４＿１＿ＳＧのＱｕａｎｔｉＴｅｃｔプライマーアッセイ（Ｑｉａｇｅｎ）を用いて測定された。オリゴデンドロサイトの含量を評価するために、マーカーのＳＯＸ１０がＭｍ＿Ｓｏｘ１０＿２＿ＳＧのＱｕａｎｔｉＴｅｃｔプライマーアッセイ（Ｑｉａｇｅｎ）を用いて測定された。ニューロン含量を評価するために、マーカーＳＮＡＰ２５はＭｍ＿Ｓｎａｐ２５＿２＿ＳＧのＱｕａｎｔｉＴｅｃｔプライマーアッセイ（Ｑｉａｇｅｎ）を用いて測定された。ミクログリア含量を評価するために、マーカーＣＤ６８がＭｍ＿ＣＤ６８＿１＿ＳＧのＱｕａｎｔｉＴｅｃｔプライマーアッセイ（Ｑｉａｇｅｎ）を用いて測定された。全ての反応は、鋳型ＲＮＡ（または限られた入手可能な出発材料の場合には２ｎｇ）を約１０ｎｇで使用され、製造元の指示に従った。ＲＴ−ＰＣＲ反応はストラタジーン社ＭＸ３０００Ｐ ＰＣＲシステムで、９６ウェルプレート中で行った。
【０２２５】
ＲＮＡのマイクロアレイ解析については、ＲＮＡ濃度が、分光光度計（光度計ＮＤ−１０００）を用いて測定された。全ＲＮＡが二本鎖ＤＮＡを合成するために使用され、標準的な手順を用いて、標識ｃＲＮＡを生成する蛍光色素の存在下でインビトロ転写を行った。Ｃｙ５標識試験サンプルのＲＮＡ及びＣｙ３標識ユニバーサルマウスの参照ＲＮＡが、自動化された装置（テカン）を使用して、商用のＡｇｉｌｅｎｔ全マウス遺伝子発現アレイ（４ｘ４４ＫをＷＭＧ）に同時にハイブリダイズさせた。ハイブリダイゼーション後、アレイは、洗浄され、スキャンした画像は、特徴抽出ソフトウェア（Ａｇｉｌｅｎｔ）で処理された。得られたデータは、生物分析ソフトウェア（Ｐａｒｔｅｋ Ｇｅｎｏｍｉｃ Ｓｕｉｔｅ）と他の自動化されたマイクロアレイ解析を用いて解析された。定量的ＲＴ−ＰＣＲが、上記の最上位の２つの結果を確認するために用いられた。ＲＴ−ＰＣＲは上記のように、しかし以下のプライマー（Ｑｉａｇｅｎからすべて）で実行された：ＬＲＰ８：ＱＴ００１５６１００、及び比較目的のためにＬＲＰ１：ＱＴ００１５５９８１。
【０２２６】
結果を図２Ｂ−２Ｄに示す。一方、多数の低密度リポタンパク質受容体ファミリーのメンバーが、成体マウスの血液脳関門の内皮細胞を精製で高度に発現されたが、唯一ＬＲＰ８が脳血管内皮細胞に高発現を、肺／肝細胞に最小発現を示した（２Ｂ−１から図２Ｂ−３）。更に、この高発現は、胎仔、仔、成体サンプル（図２Ｃ−１、２Ｃ−２）で一貫して発見されたが、肺／肝臓での発現は、すべての時点にわたり常に最小限に抑えられた。これらのマイクロアレイの結果は、これらのマイクロアレイヒットの最良の２つ、ＬＲＰ８及び比較目的のＬＲＰ１に特異的なプライマーを用いて、ｑＲＴ−ＰＣＲにより確認した（図２Ｄ）。ＬＲＰ１は肺／肝細胞に比べて脳血管内皮細胞により高度に発現していたが、肺／肝細胞におけるＬＲＰ８の発現が事実上無かったが、肺／肝細胞内でＬＲＰ１の有意な発現は、ＬＲＰ８がＢＢＢ特異的ターゲティング及びＢＢＢを通過してＣＮＳへの輸送を追求するために同定された分子間の好ましい選択肢であることが示唆された。
【０２２７】
実施例２：血管内皮細胞におけるＬＲＰ８発現の局在
前の例では、ＬＲＰ８が高度に特異的にＢＢＢの内皮細胞上に発現し、ＬＲＰ８を発現するファージは、インビトロでＤ３細胞単層を横切って移行することができることを示した。ＬＲＰ８の役割と、それが治療的送達のために利用されるかもしれないかどうかをより良く理解するため、細胞や組織サンプルにおけるＬＲＰ８の局在を決定するために実験が行われた。
【０２２８】
Ａ 入手可能な抗ＬＲＰ８抗体の同定と特徴付け
異なる市販のモノクローナルおよびポリクローナル抗ＬＲＰ８抗体の結合の調査が、標準的な技術を用いたウェスタン分析によって行われ、精製された状態で、またはタンパク質の複合混合物（すなわち細胞ライセート）でＬＲＰ８を認識することができる１つ以上の抗体を同定した。組換えヒトＡｐｏＥＲ２（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ社＃３５２０−ＡＲ）が１Ｘの還元剤でインビトロジェンＬＤＳサンプルバッファー中に希釈され、１０ｎｇ、３ｎｇ、１ｎｇ、及び０．３ｎｇで１０％のビス−トリスＮｕｐａｇｅ１５穴ゲル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ ＮＰ０３０３ＢＯＸ）へ負荷された。ゲルは室温で５０分間、ＭＯＰＳ緩衝液で泳動され、その後、ｉＢｌｏｔシステム（ミリポア社）へ移され、ブロッキング緩衝液（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で２時間ブロッキングした。一ブロット（図３Ａ、左のパネル）は、一次抗体として、１：５００の希釈（２．０μｇ／ｍｌ）で、マウス抗ＡｐｏＥＲ２モノクローナル抗体（Ａｂｃａｍ ａｂ５８２１６）と共に、回転体上４℃で４８時間インキュベートされた。洗浄後、ブロットを室温で２時間１：２０００の希釈でヒオチンＸＸ抗マウス二次抗体とインキュベートした。もう一つのブロット（図３Ａ、中央パネル）は、ウサギ抗ＡｐｏＥＲ２ポリクローナル一次抗体（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ４０から７８００）と共に回転体上４℃で４８時間インキュベートされた。洗浄後、ブロットを室温で２時間１：２０００希釈ビオチンＸＸ抗ウサギ二次抗体とインキュベートした。第三ブロット（図３Ａ、右パネル）を１：５００（２．０μｇ／ｍｌ）での希釈度回転体上のでマウス抗ＬＲＰ８ポリクローナル一次抗体（Ａｂｎｏｖａ Ｈ００００７８０４−Ａ０１）と共に４℃で４８時間インキュベートした。洗浄後、ブロットを室温で２時間１：２０００希釈ビオチンＸＸ抗マウス二次抗体とインキュベートした。すべてのブロットは、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｑｄｏｔ６２５ストレプトアビジンコンジュゲートを使用して開発された。図３Ａは、テストした３つの抗体のＬＲＰ８の中でも最も高感度な検出が一番左のブロットで観察されたことを示す。
【０２２９】
Ａｂｃａｍ抗ＬＲＰ８抗体が細胞溶解物中ＬＲＰ８を検出することができたかどうかを評価するために、更なるウェスタンブロット実験を行った。Ｄ３細胞は、継代３０までＴ１７５フラスコ中で増殖され、細胞が掻き取られ、ＰＢＳで洗浄し、ピペットチップを介して浸漬することによって２００μｌの溶解緩衝液（２０ｍＭリン酸ナトリウム、５００ｍＭの塩化ナトリウム、２ｍＭのＭｇＣｌ２、４ｍＭのＯＧ、１Ｘ完全）を添加して溶解した。サンプルを１０分間７０，０００ｒｐｍで遠心分離し、清澄は１００μｌの７Ｍ尿素、０．１ＭのＮａＨ２ＰＯ４、１００ｍＭのトリス−ＨＣｌ、２ｍＭのＭｇＣｌ２に加えた。この混合物に０．５μｌの１ＭのＭｇＣｌ２および０．５μｌベンゾナーゼヌクレアーゼが添加され、その後、ボルテックスし、２０℃で１０分間、７万ｒｐｍで遠心分離した。得られたペレットを尿素に溶解し、抽出液と溶解液は、１ｘ還元剤でインビトロジェンＬＤＳサンプルバッファー中に希釈した。サンプルは様々な量で、１０ｎｇ、３ｎｇ、１ｎｇ、及び０．３ｎｇの組換えヒトＡｐｏＥＲ２、１０μｇの可溶化液 （ｍＢＲ／２９３、図３Ｂ）または３６μｇの可溶化液 （ｈｕ−胎盤／ｍＢＲ／２９３、図３Ｃ）を含み、４−１２％ＮｕＰａｇｅビス−トリスゲル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）にロードされた：ゲルは室温で５０分、２００ＶでＭＯＰＳ緩衝液で泳動され、ｉＢｌｏｔシステム（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）中のニトロセルロースに移され、ブロッキング緩衝液（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて１時間ブロックされた。ブロットを４℃で１：５００に希釈した一次抗体アブカム抗ＡｐｏＥＲ２（＃５８２１６）の１μｇ／ｍｌで一晩インキュベートし、その後、室温で４時間１：２０００希釈した二次抗体ビオチンＸＸ抗マウスでインキュベートした。ブロットは、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ ＱＤｏｔ６２５ストレプトアビジンコンジュゲートを使用して開発された。データは明らかにＤ３の細胞株にＬＲＰ８の存在を示している（図３Ｂおよび３Ｃを参照）。
【０２３０】
細胞溶解物中ＬＲＰ８を検出するための抗体の特定の能力は類似のアッセイを用いて決定され、そこではヒト臍帯静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）、ヒト脳微小血管内皮細胞（ＨＢＭＥＣ）のサンプルはトリトン溶解バッファーで、４℃で３０分間、プロテアーゼ阻害剤の存在下（完全ミニＥＤＴＡフリープロテアーゼ阻害剤錠剤、Ｒｏｃｈｅ社）で溶解された。一次抗ＡｐｏＥＲ２抗体（２μｇ／ｍｌのＺｙｍｅｄ ４０−７８００；０．３μｇ／ｍｌのＮｏｖｕｓ ＮＢ１００−４１３９１）とのインキュベーションは４℃で一晩起きることが許可され、二次抗体（抗ヤギまたは西洋ワサビペルオキシダーゼに結合した抗ウサギ抗体）が室温で１時間インキュベートされた。感受性の異なる細胞抽出物の両方でＬＲＰ８を検出することができるいくつかの市販の抗体が同定され（図３Ｂ−３Ｄを参照）、そのうちのいくつかは、ヒトとマウスＬＲＰ８両方を特異的に認識した（例えば図３Ｂ及び３Ｃを参照）。
【０２３１】
これらの特性（マウスモノクローナル抗ヒトＡｐｏＥＲ２、Ａｂｃａｍ＃５８２１６）で同定された一抗体が、製造元の指示に従って、Ｃｙ５標識キット（Ａｍｅｒｓｈａｍ）を用いて蛍光色素Ｃｙ５で標識した。標準的なＥＬＩＳＡアッセイが、１μｇ／ｍｌの組換えヒトＡｐｏＥＲ２でコーティングしたウェルでプレートを用いて行われ、種々の濃度の抗ＡｐｏＥＲ２が、一晩４℃で結合することを認められた。プレートを洗浄し、１：１０，０００希釈で、西洋ワサビペルオキシダーゼをコンジュゲートさせた二次抗マウスＩｇＧ抗体で処理し、プレートが読み取られた。結果により、この特定の抗ＡｐｏＥＲ２抗体についてのＩＣ５０は６８ｎｇ／ｍｌであったことが示された。抗体が、ＡｐｏＥＲ２への結合に対してＲＡＰと競合するかどうかを判断するために、別のＥＬＩＳＡが上記のように行われたが、抗ＡｐｏＥＲ２の濃度を変化させる代わりに、様々な量の組換えヒトＲＡＰの量の存在下または非存在下で、一貫して１μｇ／ｍｌの抗ＡｐｏＥＲ２が使用された。具体的には、Ｎｕｎｃ−ＩｍｍｕｎｏＴＭポリスチレンマキシソープ９６穴プレート（ＮＵＮＣ）が、ＰＢＳ中の１μｇ／ｍｌの組換えヒトＡｐｏ ＥＲ２（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ＃３５２０−ＡＲ）を１００μｌ／ウェルにて、４℃で一晩、被覆された。５％粉ミルク（Ｂｉｏ Ｒａｄ １７０−０６０４）のＴ−ＰＢＳ（０．１％のＴｗｅｅｎ−２０ Ｓｉｇｍａ ９３７７３−２５０Ｇの２００マイクロリットルが、室温で２時間、各ウェルに添加された。洗浄緩衝液で洗浄した後、ヒトＲＡＰ（Ｉｎｎｏｖａｔｉｖｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ＃ＩＲＡＰ）が添加され（５０μｌ／ウェル、１％ ＭＰ Ｔ−ＰＢＳ中に０．００３−２．０μｇ／ｍｌ）、室温で３０分間プレインキュベートした。抗ＡｐｏＥＲ２（アブカム＃５８２１６）が添加され（５０μｌ／ウェルへ１％ＭＰ Ｔ−ＰＢＳ中１μｇ／ｍｌの最終濃度に）、プレートが４℃で一晩インキュベートされた。ウェルが、以前と同様に洗浄され、１％ＭＰ Ｔ−ＰＢＳ中のＨＲＰコンジュゲート抗マウスＩｇＧ（Ｓｉｇｍａ＃−９０４４）（１００μｌ／ウェル）が、製造元が推奨する希釈に従って各ウェルに添加され、ウェルはＴＭＢ基質キット（Ｐｉｅｒｃｅ＃３４０２１）を用いて開発された。４５０ｎｍでの光学密度がＶｅｒｓａｍａｘリーダーを用いて測定された。図３Ｅに示すように、このアッセイにおいて、この抗体とｒｈＲＡＰ間で全く競争は観察されなかった。
【０２３２】
Ｂ．内皮細胞内および種々の組織におけるＬＲＰ８分布の解析
免疫細胞化学的および免疫組織化学的分析が、異なる起源からのヒト血管内皮細胞や組織でのＬＲＰ８の分布を評価するために行われた。
１．ＨＵＶＥＣ
免疫細胞化学的解析がヒト血管内皮細胞上ＬＲＰ８の分布を評価するために行われた。簡単に言えば、ＨＵＶＥＣ細胞は、約５０００細胞／ｃｍ２の密度まで増殖させた。細胞は４％ＰＦＡで固定され、ＰＢＳで２回洗浄し、次いで、５％ＢＳＡ＋０．３％Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ１００のＰＢＳで室温で３０分間、ブロックされた。一次抗ＬＲＰ８抗体（Ｚｙｍｅｄ ４０−７８００；Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ １０１１２）が、１：１００で１％ＢＳＡ＋０．３％Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ１００中の細胞に加えられ、室温で２時間インキュベートした。細胞をＰＢＳで２回洗浄し、適切な二次抗ヤギＩｇＧまたは抗ウサギＩｇＧ抗体（Ａｌｅｘａ）が１％ＢＳＡ＋０．３％Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ１０中に１：１０００で加えられた。免疫蛍光をＡｘｉｏｐｌａｎ２イメージング（Ｚｅｉｓｓ）で観察した。図４Ａに示すように、透過性ＨＵＶＥＣにおいてＬＲＰ８染色は断続するように見えたが、すべての細胞での一貫性のある染色が観察された。しかしこれらの実験は、上記のように、ＰＢＳによる洗浄前に、５ｎＭ、２５ｎＭ又は１２５ｎＭのＬＲＰ８リガンドのリーリン（ＵＳ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ）による３７℃で３０分間の処理と、その後の固定と免疫標識を施されたＨＵＶＥＣで繰り返された。未処理ＨＵＶＥＣは、任意の濃度のリーリンで前処理されていたＨＵＶＥＣと同じ染色パターンを表示し、リーリンは、ＨＵＶＥＣでＬＲＰ８局在に影響を与えなかったことを示す（図４Ｃ）。
【０２３３】
２．ｈＣＭＥＣ／Ｄ３と一次ヒト脳血管内皮細胞
コラーゲン被覆カバーガラス上でコンフルエンスまで増殖した、一次ヒト脳血管内皮細胞（ＣｅｌｌＳｙｓｔｅｍｓ）とｈＣＭＥＣ／Ｄ３細胞の単層は、メタノールで−２０℃で１０分間固定された。細胞は１．５％ＢＳＡを含む１×ＰＢＳで室温で１時間インキュベートし、（０．１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００で１×ＰＢＳ）で１０分間透過処理され、Ｓｉｇｍａ（Ａ３４８１）またはＡｂｃａｍ（ａｂ５２９０５）から入手したウサギ抗ヒトＡｐｏＥＲ２抗体と共に室温で１時間インキュベートした。細胞は１×ＰＢＳで１５分間洗浄に施され、その後、室温で１時間、ヤギ抗ウサギＩｇＧ−Ａｌｅｘａ Ｆｌｏｕｒ４８８（１：２００，Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）（１：２００、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）でインキュベートした。細胞を３０分間１ＸＰＢＳで洗浄し、カバーガラスにＵｌｔｒａＣｒｕｚの蛍光封入剤（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ）にマウントされ、蛍光顕微鏡により分析された。結果を図４Ｂに示す。両方の画像がＬＲＰ８の膜と小胞の分布を示し、発現レベルは不死化細胞株（左パネル）に比べて初代細胞（右パネル）の方が高い。
【０２３４】
３．マウスとヒトの脳組織
同様の研究を、マウスの脳組織で実施した。まず、インビトロでの組織内ＬＲＰ８可視化を評価した。実験は以下のように行った。Ｃ５７ＢＬ６マウスから脳を採取し、ＰＢＳで灌流し、４℃で４８時間４％ＰＦＡで固定した。組織は、その後、４℃で２４時間、３０％ショ糖溶液中でインキュベートした。一次ウサギ抗ヒト抗体ＬＲＰ８（４０から７８００をＺｙｍｅｄ社）と抗ＣＤ３１抗体（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を１：５００希釈でそれぞれ添加し、４℃で一晩インキュベートした。組織は、ＰＢＳを複数回変更して洗浄し、二次抗ウサギまたは抗ヤギＩｇＧ抗体（Ａｌｅｘａ）は１：２００の希釈で添加され、サンプルを室温で２時間インキュベートした。免疫蛍光画像が可視化され、Ａｘｉｏｐｌａｎ２イメージング顕微鏡およびソフトウェア（Ｚｅｉｓｓ）で評価された。図４Ｄに示すように、ＬＲＰ８染色はＣＤ３１染色と共局在していた。ＣＤ３１は、既知の血管内皮細胞マーカーであるので、これはＬＲＰ８がインビボで、このような細胞に発現していることを示唆し、そのＬＲＰ８染色は、血液脳関門で見つけられるようにＣＤ３１陽性血管内皮細胞に特異的である。
【０２３５】
全身的に投与される抗ＬＲＰ８抗体が脳内で検出される可能性があるかどうかを決定するために、マウスに標識抗体を静脈内注射し、脳内の抗体の存在を評価した。簡単に説明すると、マウスに、２．５ｍｇ／ｋｇの用量でＡｌｅｘａ４８８コンジュゲート抗ＬＲＰ８抗体（Ａｂｃａｍ）またはＡｌｅｘａ４８８コンジュゲート制御免疫グロブリンが、静脈尾静脈を介して注入された。１時間後、マウスをＰＢＳで灌流し、脳を摘出し、すぐに固定せずに凍結した。脳はクライオスタット上に（４０ミクロンの切片）切片にされ、その切片ははフルオロゴールドでスライド上にマウントされた。免疫蛍光画像が可視化され、Ａｘｉｏｐｌａｎ２イメージング顕微鏡およびソフトウェア（Ｚｅｉｓｓ）で評価された。図４Ｅに示すように、染色はほとんど全くコントロール抗体像（左パネル）で観察されなかったが、有意な染色は抗ＬＲＰ８抗体画像（右パネル）で観察された。血管がひどく（血液脳関門におけるＬＲＰ８の存在のために期待されるように）染色されたが、しかし有意な染色もまた斑点状のパターンで脳組織全体で観察された。これは、尾静脈注射によって投与、抗ＬＲＰ８抗体が循環して、マウスの脳にＢＢＢを横切って輸送されたことを示す。
【０２３６】
図４Ｆに示す免疫組織化学データは、間接免疫蛍光法により標識した、死体解剖から得た大脳皮質領域由来の固定されていないヒト脳組織の凍結切片を用いて実施した。連続した２段階のインキュベーションは、Ａｌｅｘａ５５５（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ社）とコンジュゲートアフィニティー精製ヤギ抗ウサギＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）を含むウサギポリクローナル抗ＬＲＰ８抗体（Ｓｉｇｍａ）を検出するために使用された。切片化、染色、蛍光顕微鏡法は、細胞核を識別するために、ＤＡＰＩ染色とともに標準的な手順に従って行った。血管と一致するＬＲＰ８の染色は容易に検出された。
【０２３７】
実施例３：インビトロ血管外移動アッセイ 
前の例では、ＬＲＰ８が高度かつ特異的に、インビトロ及びインビボの両方で血液脳関門における血管内皮細胞上に発現されることを実証している。血管内皮細胞層を横切って関連するタンパク質を移行することＬＲＰ８の能力を評価するために、血管外移動アッセイを行った。実験のセットアップを図５Ａに模式的に説明する。簡単に言えば、ｈＣＭＥＣ／Ｄ３細胞を、１０μｇ／ｍｌのコラーゲン（ラット尾部コラーゲン１型＃３５４３６）の０．０２Ｎ酢酸中でプレコートされた１２穴培養プレート上で１．１平方センチメートルの増殖領域を持つコーニング０．４μｍのトランスウェル（＃３４６０）を使用して、トランスウェルプレートに播種した。細胞は、０．５ｍｌ／ウェル（１．５ミリリットル側低）の総量中に、１２．５％ヒト血清および２．２μＭのヒドロコルチゾン（Ｓｉｇｍａ ＃Ｈ０８８８）を含む静止培地（ＥＧＭ２基本培地；Ｌｏｎｚａ ＣＣ−４１７６）に２．５ｘ１０４細胞／ｍｌの密度で播種された。培地は３日目と６日以降に変更された。細胞は８日目でコンフルエントであった。Ｃｙ５標識抗ＬＲＰ８抗体はＣｙ５のモノクローナル抗体ラベリングキット（Ａｍｅｒｓｈａｍ＃ＰＡ３５００１）を用いて調製し、トランスウェルプレートの頂端側に５００μｌの培地中０．２３ｍｇ／ｍｌの濃度に添加した。Ｃｙ５標識コントロール抗体（抗ＩＬ１β）が同様に同じキットを用いて調製され、また、頂端側に追加された。
【０２３８】
血管外移動実験では、抗ＬＲＰ８−Ｃｙ５の抗体（０．０１μＭの最終濃度は１．５μｇ／ｍｌ）または抗ＬＲＰ８−Ｃｙ５抗体は、組換えヒトＡｐｏＥＲ２の１０倍過剰（最終濃度０．１１μＭ、／１０μｇ／ｍｌ）で予め混合され、トランスウェルの頂端側のＤ３細胞に添加した。２つのタイプのトランスウェルのセットアップが評価された：高密度孔フィルター及び低密度孔フィルター。抗ＩＬ１β−Ｃｙ５の抗体コントロールは同一濃度を用いて行った。Ｄ３細胞を欠いたフィルターのみのコントロール（コラーゲンをコートした）が、バックグランド輸送を測定するために使用された。トランスウェルプレートの基底側からの培地のアリコート（１００μｌ）が、様々な時間間隔で除去され、エンビジョン蛍光リーダー（ＤａｋｏＣｙｔｏｍａｔｉｏｎ）を用いた抗ＬＲＰ８と抗ＩＬ１β含有量が、側底チャンバーへのサンプルの交換の前に９６ウェル黒色プレート中で６２０ｎｍの励起波長および６８５ｎｍの発光波長を使用して測定された。
【０２３９】
図５Ｂの結果は、抗ＬＲＰ８抗体がＤ３細胞層を越えて遊出し、この遊出は過剰な可溶性ＬＲＰ８競合者の存在下で減少したことを示す。Ｄ３細胞層を通過する抗ＩＬ１β抗体の輸送はほとんど観察されなかった。これらの結果は明らかに、輸送を促進するためのこの系におけるＬＲＰ８に対する特異的結合の必要性を示唆している。
【０２４０】
図５Ｃは、実施例２のＥＬＩＳＡ法と同様に実行されたＥＬＩＳＡ実験を示している。プレートを１００μｌ／ウェルの体積になるようにＰＢＳに希釈された１μｇ／ｍｌの組換えヒトＡｐｏＥＲ２（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ社＃３５２０−ＡＲ）で被覆し、４℃で一晩インキュベートした。ウェルをＴ−ＰＢＳ（０．１％のＴｗｅｅｎ−２０、シグマ＃９３７７３−２５０Ｇ）に希釈した２００μｌの５％粉乳（ＢｉｏＲａｄ社１７０から６４０４）の添加によりブロックし、プレートを室温で２時間インキュベートした。ウェルを洗浄し、抗ＬＲＰ８−Ｃｙ５を含有する上記実験からの側底媒体１００μｌ／ウェルが、ＬＲＰ８を添加又は添加せずに、加えられ、４℃で一晩インキュベートした。ウェルを洗浄し、１％ＭＰ Ｔ−ＰＢＳに希釈されたＨＲＰ標識抗マウスＩｇＧ（シグマ＃−９０４４）が１００μｌ／ウェル追加された。プレートは、製造元の指示に従って、ＴＭＢ基質キット（Ｐｉｅｒｃｅ＃３４０２１）を使用して開発され、ＶｅｒｓａＭａｘリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）において４５０ｎｍで測定された。結果（図５Ｃ）は、図５Ｂのデータと一致し、抗ＬＲＰ８抗体はＤ３細胞層を横切って輸送され、さらに可溶性ＬＲＰ８との競争が存在しない場合、より多くの量の抗ＬＲＰ８抗体が、Ｄ３細胞層を横切って輸送されることを示している。ＬＲＰ８の１０倍過剰による頂端サンプルの低い観測値は、ＥＬＩＳＡアッセイでの干渉によるものである。
【０２４１】
実施例４：インビボでの血管外移動アッセイ 
前の実施例では、抗ＬＲＰ８抗体がＬＲＰ８に結合し、インビトロでＢＢＢを通過して移動していることを実証している。実験はマウスモデルにおけるインビボでの単回静脈内投与後の標識抗ＬＲＰ８抗体の組織分布を評価するために行われる。簡単に言えば、ＬＲＰ８に結合しない１３１Ｉ−標識コントロール抗体の存在下または非存在下で、Ｃ５７ＢＬ／６マウスに１２５Ｉ標識抗ＬＲＰ８を注射する。各グループの２つのマウスは注射後３０分、１時間、４時間、１２時間および２４時間の時点で屠殺され、血液や組織は、各標識の存在と量の分析のために収集される。
【０２４２】
前述の発明は、理解を明確にする目的のために例示および実施例によってある程度詳細に説明してきたが、説明や例は、本発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。すべての特許および本明細書に引用される科学文献の開示は、参照によりその全体が援用される。
【図１】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ−１】
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【図２Ｂ−２】
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【図２Ｂ−３】
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【図２Ｃ−１】
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【図２Ｃ−２】
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【図２Ｄ】
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【図３Ｅ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図５Ｃ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ−Ｃ】
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【図３Ｄ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図４Ｄ】
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【図４Ｅ】
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【図４Ｆ】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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