(57)【要約】本開示は一般に、治療有効量のＡ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストを、肺高血圧症またはそれに関連する症状を有する患者に投与することによって、該患者を処置することに関する。Ａ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストによって、肺高血圧症患者に付随する過剰増殖、血管リモデリングおよび高レベルのサイトカインおよびケモカインが低減され、それによって、それに関連する疾患および／または症状が処置されることが想定される。
2013533882.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
肺高血圧症の処置を必要とする患者の肺高血圧症を処置する方法であって、該患者に治療有効量のＡ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストを投与する工程を含む方法。
【請求項２】
前記肺高血圧症が肺動脈高血圧症（ＰＡＨ）である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記肺動脈高血圧症が、特発性ＰＡＨ、家族性ＰＡＨまたは他の疾患もしくは状態に関連するＰＡＨから選択される、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
肺炎症を処置するための、前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項５】
前記肺高血圧症が、肺疾患および／または低酸素症に起因する肺高血圧症である、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記患者がヒトである、前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項７】
前記投与が全身性である、前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項８】
前記投与が経口である、請求項１〜５の一項に記載の方法。
【請求項９】
前記投与が静脈内である、請求項１〜５の一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記投与が筋肉内である、請求項１〜５の一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記投与が腹腔内である、請求項１〜５の一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記投与が吸入による、請求項１〜５の一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記Ａ２Ｂ受容体アンタゴニストが８環式キサンチン誘導体である、前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項１４】
前記Ａ２Ｂ受容体アデノシンアンタゴニストが、式ＩまたはＩＩの化合物：
【化２５】
2013533882.tif 000030
（式中、
Ｒ１およびＲ２は、独立に、水素、必要に応じて置換されたアルキルまたは基−Ｄ−Ｅから選択され、Ｄは、共有結合またはアルキレンであり、Ｅは、必要に応じて置換されたアルコキシ、必要に応じて置換されたシクロアルキル、必要に応じて置換されたアリール、必要に応じて置換されたヘテロアリール、必要に応じて置換されたヘテロシクリル、必要に応じて置換されたアルケニルまたは必要に応じて置換されたアルキニルであり、ただしＤが共有結合である場合、Ｅはアルコキシであることはなく、
Ｒ３は、水素、必要に応じて置換されたアルキルまたは必要に応じて置換されたシクロアルキルであり、
Ｘは、必要に応じて置換されたアリーレンまたは必要に応じて置換されたヘテロアリーレンであり、
Ｙは、共有結合であるか、またはアルキレンであって、その１個の炭素原子が−Ｏ−、−Ｓ−もしくは−ＮＨ−で必要に応じて置き換えられていてよく、そしてヒドロキシ、アルコキシ、必要に応じて置換されたアミノまたは−ＣＯＲ１６（Ｒ１６はヒドロキシ、アルコキシまたはアミノである）で必要に応じて置換されているアルキレンであり、
ただし、必要に応じた置換がヒドロキシまたはアミノである場合、その置換はヘテロ原子に隣接することはなく、
Ｚは、必要に応じて置換された単環式アリールまたは必要に応じて置換された単環式ヘテロアリールであるか、または
Ｚは、Ｘが必要に応じて置換されたヘテロアリーレンであり、Ｙが共有結合である場合、水素であり、
ただし、Ｚは、Ｘが必要に応じて置換されたアリーレンである場合、必要に応じて置換された単環式ヘテロアリールである）
または薬学的に許容されるその塩、互変異性体、異性体、異性体の混合物もしくはプロドラッグである、前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項１５】
Ｒ１およびＲ２が独立に水素、必要に応じて置換された低級アルキルまたは基−Ｄ−Ｅであり、Ｄは共有結合またはアルキレンであり、Ｅは、必要に応じて置換されたフェニル、必要に応じて置換されたシクロアルキル、必要に応じて置換されたアルケニルまたは必要に応じて置換されたアルキニルである、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
Ｒ３が水素である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
Ｒ１およびＲ２が独立に、シクロアルキルで必要に応じて置換された低級アルキルであり、Ｘが、必要に応じて置換されたフェニレンである、請求項１４に記載の方法。
【請求項１８】
Ｙが、炭素原子が酸素で置き換えられているアルキレンである、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
Ｙが−Ｏ−ＣＨ２−であり、前記酸素がフェニレンとの結合点に存在する、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
Ｚが、必要に応じて置換されたオキサジアゾールである、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
Ｚが、必要に応じて置換されたフェニルで、または必要に応じて置換されたピリジルにより、必要に応じて置換された［１，２，４］−オキサジアゾール−３−イルである、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
Ｘが、必要に応じて置換された１，４−ピラゾレンである、請求項１４に記載の方法。
【請求項２３】
Ｙが共有結合、アルキレン、低級アルキレンであり、Ｚが水素、必要に応じて置換されたフェニル、必要に応じて置換されたピリジルまたは必要に応じて置換されたオキサジアゾールである、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
Ｒ１が、シクロアルキルにより必要に応じて置換された低級アルキルであり、Ｒ２が水素である、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
Ｙが−（ＣＨ２）−または−ＣＨ（ＣＨ３）−であり、Ｚが、必要に応じて置換されたフェニルであるか、またはＹが−（ＣＨ２）−もしくは−ＣＨ（ＣＨ３）−であり、Ｚが、必要に応じて置換されたオキサジアゾール、特に３，５−［１，２，４］−オキサジアゾールであるか、またはＹが−（ＣＨ２）−もしくは−ＣＨ（ＣＨ３）−であり、Ｚが、必要に応じて置換されたピリジルである、請求項２２に記載の方法。
【請求項２６】
Ｒ１およびＲ２が独立に、シクロアルキルにより必要に応じて置換された低級アルキルである、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
Ｙが共有結合、−（ＣＨ２）−または−ＣＨ（ＣＨ３）−であり、Ｚが水素、必要に応じて置換されたフェニルまたは必要に応じて置換されたピリジルである、請求項２２に記載の方法。
【請求項２８】
Ｙが共有結合であり、Ｚが水素である、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記受容体アンタゴニストが、
１−プロピル−８−（１−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］−メチル｝ピラゾール−４−イル）−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１−プロピル−８−［１−ベンジルピラゾール−４−イル］−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１−ブチル−８−（１−｛［３−フルオロフェニル］メチル｝ピラゾール−４−イル）−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１−プロピル−８−［１−（フェニルエチル）ピラゾール−４−イル］−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
８−（１−｛［５−（４−クロロフェニル）（１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）］メチル｝ピラゾール−４−イル）−１−プロピル−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
８−（１−｛［５−（４−クロロフェニル）（１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）］メチル｝ピラゾール−４−イル）−１−ブチル−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１，３−ジプロピル−８−ピラゾール−４−イル−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１−メチル−３−ｓｅｃ−ブチル−８−ピラゾール−４−イル−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１−シクロプロピルメチル−３−メチル−８−｛１−［（３−トリフルオロメチルフェニル）メチル］ピラゾール−４−イル｝−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１，３−ジメチル−８−｛１−［（３−フルオロフェニル）メチル］ピラゾール−４−イル｝−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
３−メチル−１−プロピル−８−｛１−［（３−トリフルオロメチルフェニル）メチル］ピラゾール−４−イル｝−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
３−エチル−１−プロピル−８−｛１−［（３−トリフルオロメチルフェニル）メチル］ピラゾール−４−イル｝−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１，３−ジプロピル−８−（１−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝ピラゾール−４−イル）−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１，３−ジプロピル−８−｛１−［（３−フルオロフェニル）メチル］ピラゾール−４−イル｝−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１−エチル−３−メチル−８−｛１−［（３−フルオロフェニル）メチル］ピラゾール−４−イル｝−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１，３−ジプロピル−８−｛１−［（２−メトキシフェニル）メチル］ピラゾール−４−イル｝−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１，３−ジプロピル−８−（１−｛［３−（トリフルオロメチル）−フェニル］エチル｝ピラゾール−４−イル）−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１，３−ジプロピル−８−｛１−［（４−カルボキシフェニル）メチル］ピラゾール−４−イル｝−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
２−［４−（２，６−ジオキソ−１，３−ジプロピル（１，３，７−トリヒドロプリン−８−イル））ピラゾリル］−２−フェニル酢酸；
８−｛４−［５−（２−メトキシフェニル）−［１，２，４］オキサジアゾール−３−イルメトキシ］フェニル｝−１，３−ジプロピル−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
８−｛４−［５−（３−メトキシフェニル）−［１，２，４］オキサジアゾール−３−イルメトキシ］フェニル｝−１，３−ジプロピル−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
８−｛４−［５−（４−フルオロフェニル）−［１，２，４］オキサジアゾール−３−イルメトキシ］フェニル｝−１，３−ジプロピル−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン：
１−（シクロプロピルメチル）−８−［１−（２−ピリジルメチル）ピラゾール−４−イル］−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１−ｎ−ブチル−８−［１−（６−トリフルオロメチルピリジン−３−イルメチル）ピラゾール−４−イル］−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
８−（１−｛［３−（４−クロロフェニル）（１，２，４−オキサジアゾール−５−イル）］メチル｝ピラゾール−４−イル）−１，３−ジプロピル−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１，３−ジプロピル−８−［１−（｛５−［４−（トリフルオロメチル）フェニル］イソオキサゾール−３−イル｝メチル）ピラゾール−４−イル］−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１，３−ジプロピル−８−［１−（２−ピリジルメチル）ピラゾール−４−イル］−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
３−｛［４−（２，６−ジオキソ−１，３−ジプロピル−１，３，７−トリヒドロプリン−８−イル）ピラゾリル］メチル｝安息香酸；
１，３−ジプロピル−８−（１−｛［６−（トリフルオロメチル）（３−ピリジル）］メチル｝ピラゾール−４−イル）−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１，３−ジプロピル−８−｛１−［（３−（１Ｈ−１，２，３，４−テトラアゾール−５−イル）フェニル）メチル］ピラゾール−４−イル｝−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
６−｛［４−（２，６−ジオキソ−１，３−ジプロピル−１，３，７−トリヒドロプリン−８−イル）ピラゾリル］メチル｝ピリジン−２−カルボン酸；
３−エチル−１−プロピル−８−［１−（２−ピリジルメチル）ピラゾール−４−イル］−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
８−（１−｛［５−（４−クロロフェニル）イソオキサゾール−３−イル］メチル｝ピラゾール−４−イル）−３−エチル−１−プロピル−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
８−（１−｛［３−（４−クロロフェニル）（１，２，４−オキサジアゾール−５−イル）］メチル｝ピラゾール−４−イル）−３−エチル−１−プロピル−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
３−エチル−１−プロピル−８−（１−｛［６−（トリフルオロメチル）（３−ピリジル）］メチル｝ピラゾール−４−イル）−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１−（シクロプロピルメチル）−３−エチル−８−（１−｛［６−（トリフルオロメチル）（３−ピリジル）］メチル｝ピラゾール−４−イル）−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；および
３−エチル−１−（２−メチルプロピル）−８−（１−｛［６−（トリフルオロメチル）（３−ピリジル）］メチル｝ピラゾール−４−イル）−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン
または薬学的に許容されるその塩、互変異性体、異性体、異性体の混合物もしくはプロドラッグからなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３０】
前記Ａ２Ｂ受容体アンタゴニストが次式の化合物：
【化２６】
2013533882.tif 000031
または薬学的に許容されるその塩、互変異性体、異性体、異性体の混合物もしくはプロドラッグである、請求項１に記載の方法。
【請求項３１】
前記Ａ２Ｂ受容体アンタゴニストが、次式：
【化２７】
2013533882.tif 000032
（式中、
Ｒ１０およびＲ１２は独立に低級アルキルであり、
Ｒ１４は、必要に応じて置換されたフェニルであり、
Ｘ１は、水素またはメチルであり、
Ｙ１は、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１７であり、Ｒ１７は、独立に、必要に応じて置換された低級アルキル、必要に応じて置換されたアリールまたは必要に応じて置換されたヘテロアリールであるか、または
Ｙ１は、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ１５）２であり、Ｒ１５は、水素または、フェニルもしくはヘテロアリールで必要に応じて置換された低級アルキルである）
を有する式ＩＩＩのプロドラッグおよび薬学的に許容されるその塩である、請求項１に記載の方法。
【請求項３２】
前記化合物が
［３−エチル−２，６−ジオキソ−１−プロピル−８−（１−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝ピラゾール−４−イル）−１，３，７−トリヒドロプリン−７−イル］メチルアセテート；
［３−エチル−２，６−ジオキソ−１−プロピル−８−（１−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝ピラゾール−４−イル）−１，３，７−トリヒドロプリン−７−イル］メチル２，２−ジメチルプロパノエート；
［３−エチル−２，６−ジオキソ−１−プロピル−８−（１−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝ピラゾール−４−イル）−１，３，７−トリヒドロプリン−７−イル］メチルブタノエート；および
［３−エチル−２，６−ジオキソ−１−プロピル−８−（１−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝−ピラゾール−４−イル）（１，３，７−トリヒドロプリン−７−イル）］メチル二水素ホスフェート
からなる群から選択される、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
強心配糖体、血管拡張剤／カルシウムチャネル遮断薬、プロスタサイクリン、抗凝固剤、利尿剤、エンドセリン受容体遮断薬、ホスホジエステラーゼ５型阻害剤、一酸化窒素吸入、アルギニン補充およびその組合せからなる群から選択される追加の治療剤を投与する工程をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３４】
前記追加の薬剤がエンドセリン受容体遮断薬である、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記エンドセリン受容体遮断薬がアンブリセンタンである、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記追加の薬剤を、前記Ａ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストと同時にまたはそれに続いて投与する、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
肺動脈平滑筋細胞におけるコラーゲン、細胞外マトリックスタンパク質および／または細胞外マトリックス酵素の過剰発現を阻害する方法であって、該細胞を有効量のＡ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストと接触させる工程を含む方法。
【請求項３８】
前記コラーゲン、前記細胞外マトリックスタンパク質および／または前記細胞外マトリックス酵素が、ＡＤＡＭＴＳ１、ＡＤＡＭＴＳ８、ＣＤＨ１、ＭＭＰ７、ＭＭＰ１２、ＨＡＳ１、ＩＴＧＡ７、ＣＯＬ１Ａ１、ＣＯＬ８Ａ１またはＣＴＧＦから選択される、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
肺動脈平滑筋細胞におけるＩＬ−６、ＩＬ−８、Ｇ−ＣＳＦおよび／またはトロンボキサン発現を低減させる方法であって、該細胞を有効量のＡ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストと接触させる工程を含む方法。
【請求項４０】
肺動脈内皮細胞におけるＩＬ−８および／またはＥＴ−１発現を低減させる方法であって、該細胞を有効量のＡ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストと接触させる工程を含む方法。
【請求項４１】
肺動脈平滑筋細胞の増殖または遊走を阻害する方法であって、該細胞を有効量のＡ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストと接触させる工程を含む方法。
【請求項４２】
血管壁肥厚の阻害を必要とする患者における血管壁肥厚を阻害する方法であって、該患者に治療有効量のＡ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストを投与する工程を含む方法。
【請求項４３】
右心室収縮期血圧（ＲＶＳＰ）および／または右心室肥大の低減を必要とする患者における右心室収縮期血圧および／または右心室肥大を低減させる方法であって、該患者に治療有効量のＡ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストを投与する工程を含む方法。
【請求項４４】
肺機能の改善を必要とする患者における肺機能を改善する方法であって、該患者に治療有効量のＡ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストを投与する工程を含む方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願への相互参照）
本願は、米国特許法第１１９条（ｅ）項の下、２０１０年６月３０日に出願された米国仮特許出願第６１／３６０，２８９号の利益を主張し、この米国仮特許出願の全体の内容は、本明細書中に参考として援用される。
【０００２】
（開示の分野）
本開示は、治療有効量のＡ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストを投与することによって、肺高血圧症の処置を必要とする患者の肺高血圧症を処置する方法を対象とする。
【背景技術】
【０００３】
（先行技術）
肺高血圧症（ＰＨ）は、危険因子についての特定可能な原因の存否に応じて、原発性（特発性）または続発性のものとして、１９７３年に世界保健機関（Ｗｏｒｌｄ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ）（ＷＨＯ）によって初めて分類された。この分類は一連の変遷をたどってきた。最新の分類は、２００８年にＤａｎａ  Ｐｏｉｎｔ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａで開催された肺高血圧症に関する第４回世界シンポジウムの際に採用されたものである。この新しい分類は肺高血圧症について５つの群を含む：
第１群：肺動脈高血圧症（ＰＡＨ）；
第１’群：肺静脈閉塞性疾患（ＰＶＯＤ）および／または肺毛細血管腫症（ＰＣＨ）；
第２群：左心疾患に起因する肺高血圧症；
第３群：肺疾患および／または低酸素症に起因する肺高血圧症；
第４群：慢性血栓塞栓性肺高血圧症（ＣＴＥＰＨ）；および
第５群：不明な多因子機序を有する肺高血圧症。
例えば、非特許文献１を参照されたい。
【０００４】
ＰＨの第Ｉ群である肺動脈高血圧症（ＰＡＨ）は、顕著な血管収縮および肺動脈壁における細胞の異常増殖を特徴とする、重篤な進行性の生命にかかわる肺血管系疾患である。この異常増殖は肺における血管の重度の収縮をもたらし、当然の結果として非常に高い肺動脈圧をもたらす。こうした圧力は、心臓が、酸素化のために十分な量の血液を肺を通してポンピングするのを困難なものにしている。ＰＡＨを有する患者は、こうした高い圧力に抗して心臓が必死にポンピングしようとするため、極端な息切れに苦しむことになる。ＰＡＨに罹っている患者においては一般に、肺血管抵抗（ＰＶＲ）の著しい上昇および肺動脈圧（ＰＡＰ）の持続的上昇を発現する。これは最終的に右心室不全および死をもたらす。ＰＡＨを有すると診断された患者の予後は不良なものとなり、彼らは等しく生活の質を損なわれ、処置を受けなかった場合、平均余命はその診断時から２〜５年となる。
【０００５】
ＰＨの第３群はしばしば、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）および肺線維症などの基礎をなす慢性肺疾患に関連するものである。第３群の主要な原因は、肺疾患の結果としての肺胞性低酸素症、呼吸の制御障害または高い高度での居住である。この群には、慢性気管支拡張症、嚢胞性線維症、および主に肺の下部域の肺線維症と主に肺の上部域の気腫の組合せを特徴とする新たに特定された症候群が含まれる。現在のところ、第３群の肺高血圧症を有する患者に対する承認された医学療法はない。
【０００６】
血管リモデリング（すなわち、過形成）に関与し得る肺細胞の増殖を含む様々な因子がＰＨの病因に関与する。例えば、肺血管リモデリングは主に、ＰＨを有する患者の動脈内皮細胞および平滑筋細胞の増殖によって起こる。Ｓｔｅｉｎｅｒら、Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６  ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎｄｕｃｅｓ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ、Ｃｉｒｃ．  Ｒｅｓ．、ｈｔｔｐ：／／ｃｉｒｃｒｅｓ．ａｈａｊｏｕｒｎａｌｓ．ｏｒｇ（２００９年）から入手可能。さらに、ＰＨは、肺動脈平滑細胞および肺内皮細胞の過剰増殖によって生じることがあることが分かっている。同文献。なお、さらに、進行したＰＡＨは、遠位肺細動脈の筋肉化（ｍｕｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ）、同心性内膜肥厚および内皮細胞を増殖させることによる血管腔の閉塞を特徴とすることがある。非特許文献２。
【０００７】
肺細胞の増殖に加えて、サイトカイン、成長因子およびケモカインの発現の変化を、ＰＨ患者の血清および／または肺において見出すことができる。これらの発現の変化は、上記疾患の病因における炎症の機序または媒介の可能性を示している。例えば、ＰＨ患者の血清および肺においては成長因子であるエンドセリン−１（ＥＴ−１）および炎症性サイトカインであるインターロイキン（ＩＬ−６）が上昇していることが実証されている。非特許文献３およびＳｔｅｉｎｅｒら（２００９年）。
【０００８】
これまで、ＰＨの病因においてＡ２Ｂ受容体を阻害することによる、上昇したＥＴ−１（またはＩＬ−６）レベルの低下との直接的な相関はなされていない。むしろ、現状技術によって、他の疾患様式の一部として、Ａ２Ｂアデノシン受容体の活性化を含む、ＥＴ−１およびＩＬ−６を増大させるための様々な方法が示されている。例えば、気管支の平滑筋細胞および線維芽細胞におけるＡ２Ｂ受容体の活性化がＩＬ−６の放出を増加させることは当該分野で公知である。非特許文献４および非特許文献５。しかし、Ａ２Ｂ受容体アンタゴニストの刺激に関連する気管支組織の炎症および線維芽細胞の分化は、ぜんそくの病因に関係していることが記述されているだけである。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】Ｓｉｍｏｎｎｅａｕら、Ｊ  Ａｍ  Ｃｏｌｌ  Ｃａｒｄｉｏ、５４巻（１号）：Ｓ４３〜５４頁（２００９年）
【非特許文献２】Ｐｉｅｔｒａら、Ｊ．  Ａｍ．  Ｃｏｌｌ．  Ｃａｒｄｉｏｌ．、４３巻：２５Ｓ〜３２Ｓ頁（２００４年）
【非特許文献３】Ａ．  Ｇｉａｉｄら、「Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ−１  ｉｎ  ｔｈｅ  ｌｕｎｇｓ  ｏｆ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ」、Ｎ．  Ｅｎｇｌ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．、３２９巻（２６号）：１９６７〜８頁（１９９３年）
【非特許文献４】Ｚｈｏｎｇら、「Ａ２Ｂ  ａｄｅｎｏｓｉｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｉｎｃｒｅａｓｅ  ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ｒｅｌｅａｓｅ  ｂｙ  ｂｒｏｎｃｈｉａｌ  ｓｍｏｏｔｈ  ｍｕｓｃｌｅ  ｃｅｌｌｓ」、Ａｍ．  Ｊ．  Ｒｅｓｐ．  Ｃｅｌｌ．  Ｍｏｌ．、３０巻：１１８〜１２５頁（２００４年）
【非特許文献５】Ｚｈｏｎｇ  ら、「Ｓｙｎｅｒｇｙ  ｂｅｔｗｅｅｎ  Ａ２Ｂ  Ａｄｅｎｏｓｉｎｅ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ａｎｄ  Ｈｙｐｏｘｉａ  ｉｎ  ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ  ｈｕｍａｎ  ｌｕｎｇ  ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ」、Ａｍ．  Ｊ．  Ｒｅｓｐｉｒ．  Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ３２巻：２〜８頁（２００５年）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
したがって、当該分野では、疾患の血管リモデリング要素、増殖要素および炎症要素を含む、ＰＡＨの新規な処置方法を提供することが依然として必要である。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
要旨
本開示は、Ａ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストを用いて肺高血圧症に苦しむ患者を処置することができるという、目ざましくかつ予想外の発見を対象とする。Ａ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストによって、肺高血圧症患者に付随する過剰増殖、血管リモデリングおよび高レベルのサイトカインおよびケモカインが低減され、それによって、それに関連する疾患および／または症状が処置されることが想定される。
【００１２】
Ａ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストが肺高血圧症を予防し処置する効果が、これらに限定されないが、内皮細胞、平滑筋細胞、炎症細胞）を介することを含む複数の機序、およびこれらに限定されないが、ＩＬ−６、ＩＬ−８、エンドセリン、トロンボキサン、コラーゲン分解産生物および細胞外マトリックスタンパク質を含む複数のメディエータによって実現されることが見出されたことも目ざましいことである。したがって、Ａ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストは、これらの複数の機序および複数のメディエータのため、エンドセリンアンタゴニストまたはホスホジエステラーゼ阻害剤などの単一経路を標的とする薬剤と比べて、肺高血圧症の処置においてずっと有効であることが想定される。
【００１３】
Ａ２Ｂ受容体は、ヒト肺動脈内皮細胞（ＨＰＡＥＣ）およびヒト肺平滑筋細胞（ＨＰＡＳＭ）において高レベルで発現されることが発見されている。さらに、肺高血圧症患者において見られるリモデリングの一形態である血管壁肥厚は、そうしたアンタゴニストの投与によって低減することが発見されている。組織リモデリングに関連する、ヒト肺動脈平滑筋細胞（ＨＰＡＳＭ）におけるコラーゲン、他の細胞外マトリックスタンパク質および細胞外マトリックス酵素の発現も低減される。さらに、ＰＡＨ患者における血管リモデリングに関連する細胞であるＨＰＡＳＭの増殖および遊走は、アンタゴニストによって減少する。さらにまた、Ａ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストを投与すると、ＨＰＡＥＣの受容体を活性化することによって誘導されるＥＴ−１の産生が減少することがここに見出された。ＥＴ−１を減少させることによって、肺高血圧症に関連するＨＰＡＳＭの増殖も減少することが想定される。これらの発見はすべて、Ａ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストを投与することによって、患者の肺高血圧症を効果的に処置できることを示唆している。肺高血圧症を処置することによって、右心室の機能が改善されることも想定される。
【００１４】
肺疾患に起因する肺高血圧症（ＰＨの第３群）の前臨床モデルにおいて、アンタゴニストは、血管症および右心室収縮期血圧（ＲＶＳＰ）を低減させて肺血管リモデリングを改善し、酸素飽和度を増大させ、肺機能を改善することが示された。
【００１５】
上記に照らし、かつその方法の態様の一つにおいて、本開示は、肺高血圧症の処置を必要とする患者に治療有効量のＡ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストを投与することによって肺高血圧症を処置するための方法を対象とする。一態様では、その肺高血圧症は、第１群、１’群、２群、３群、４群または５群の肺高血圧症から選択される１つ以上である。一態様では、肺高血圧症は肺動脈高血圧症（ＰＡＨ）すなわち肺高血圧症の第１群である。別の態様では、肺高血圧症は、肺疾患および／または低酸素症に起因する肺高血圧症すなわち肺疾患および／または低酸素症の第３群である。
【００１６】
一実施形態では、Ａ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストは８環式キサンチン誘導体である。別の実施形態では、Ａ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストは式ＩまたはＩＩの化合物：
【００１７】
【化１】
2013533882.tif 000003
（式中、
Ｒ１およびＲ２は独立に、水素、必要に応じて置換されたアルキルまたは基−Ｄ−Ｅから選択され、Ｄは、共有結合またはアルキレンであり、Ｅは、必要に応じて置換されたアルコキシ、必要に応じて置換されたシクロアルキル、必要に応じて置換されたアリール、必要に応じて置換されたヘテロアリール、必要に応じて置換されたヘテロシクリル、必要に応じて置換されたアルケニルまたは必要に応じて置換されたアルキニルであり、ただしＤが共有結合である場合、Ｅはアルコキシであることはなく、
Ｒ３は、水素、必要に応じて置換されたアルキルまたは必要に応じて置換されたシクロアルキルであり、
Ｘは、必要に応じて置換されたアリーレンまたは必要に応じて置換されたヘテロアリーレンであり、
Ｙは、共有結合であるか、またはアルキレンであって、その１個の炭素原子が−Ｏ−、−Ｓ−もしくは−ＮＨ−で必要に応じて置き換えられていてよく、そしてヒドロキシ、アルコキシ、必要に応じて置換されたアミノまたは−ＣＯＲ１６（Ｒ１６は、ヒドロキシ、アルコキシまたはアミノである）で必要に応じて置換されているアルキレンであり、
ただし、必要に応じた置換がヒドロキシまたはアミノである場合、その置換はヘテロ原子に隣接することはなく、
Ｚは、必要に応じて置換された単環式アリールまたは必要に応じて置換された単環式ヘテロアリールであるか、または
Ｚは、Ｘが必要に応じて置換されたヘテロアリーレンであり、Ｙが共有結合である場合、水素であり、
ただし、Ｚは、Ｘが必要に応じて置換されたアリーレンである場合、必要に応じて置換された単環式ヘテロアリールである）
または薬学的に許容されるその塩、互変異性体、異性体、異性体の混合物もしくはプロドラッグである。
【００１８】
別の実施形態では、Ａ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストは：
１−プロピル−８−（１−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］−メチル｝ピラゾール−４−イル）−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１−プロピル−８−［１−ベンジルピラゾール−４−イル］−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１−ブチル−８−（１−｛［３−フルオロフェニル］メチル｝ピラゾール−４−イル）−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１−プロピル−８−［１−（フェニルエチル）ピラゾール−４−イル］−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
８−（１−｛［５−（４−クロロフェニル）（１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）］メチル｝ピラゾール−４−イル）−１−プロピル−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
８−（１−｛［５−（４−クロロフェニル）（１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）］メチル｝ピラゾール−４−イル）−１−ブチル−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１，３−ジプロピル−８−ピラゾール−４−イル−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１−メチル−３−ｓｅｃ−ブチル−８−ピラゾール−４−イル−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１−シクロプロピルメチル−３−メチル−８−｛１−［（３−トリフルオロメチルフェニル）メチル］ピラゾール−４−イル｝−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１，３−ジメチル−８−｛１−［（３−フルオロフェニル）メチル］ピラゾール−４−イル｝−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
３−メチル−１−プロピル−８−｛１−［（３−トリフルオロメチルフェニル）メチル］ピラゾール−４−イル｝−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
３−エチル−１−プロピル−８−｛１−［（３−トリフルオロメチルフェニル）メチル］ピラゾール−４−イル｝−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１，３−ジプロピル−８−（１−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝ピラゾール−４−イル）−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１，３−ジプロピル−８−｛１−［（３−フルオロフェニル）メチル］ピラゾール−４−イル｝−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１−エチル−３−メチル−８−｛１−［（３−フルオロフェニル）メチル］ピラゾール−４−イル｝−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１，３−ジプロピル−８−｛１−［（２−メトキシフェニル）メチル］ピラゾール−４−イル｝−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１，３−ジプロピル−８−（１−｛［３−（トリフルオロメチル）−フェニル］エチル｝ピラゾール−４−イル）−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１，３−ジプロピル−８−｛１−［（４−カルボキシフェニル）メチル］ピラゾール−４−イル｝−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
２−［４−（２，６−ジオキソ−１，３−ジプロピル（１，３，７−トリヒドロプリン−８−イル））ピラゾリル］−２−フェニル酢酸；
８−｛４−［５−（２−メトキシフェニル）−［１，２，４］オキサジアゾール−３−イルメトキシ］フェニル｝−１，３−ジプロピル−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
８−｛４−［５−（３−メトキシフェニル）−［１，２，４］オキサジアゾール−３−イルメトキシ］フェニル｝−１，３−ジプロピル−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
８−｛４−［５−（４−フルオロフェニル）−［１，２，４］オキサジアゾール−３−イルメトキシ］フェニル｝−１，３−ジプロピル−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン：
１−（シクロプロピルメチル）−８−［１−（２−ピリジルメチル）ピラゾール−４−イル］−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１−ｎ−ブチル−８−［１−（６−トリフルオロメチルピリジン−３−イルメチル）ピラゾール−４−イル］−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
８−（１−｛［３−（４−クロロフェニル）（１，２，４−オキサジアゾール−５−イル）］メチル｝ピラゾール−４−イル）−１，３−ジプロピル−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１，３−ジプロピル−８−［１−（｛５−［４−（トリフルオロメチル）フェニル］イソオキサゾール−３−イル｝メチル）ピラゾール−４−イル］−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１，３−ジプロピル−８−［１−（２−ピリジルメチル）ピラゾール−４−イル］−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
３−｛［４−（２，６−ジオキソ−１，３−ジプロピル−１，３，７−トリヒドロプリン−８−イル）ピラゾリル］メチル｝安息香酸；
１，３−ジプロピル−８−（１−｛［６−（トリフルオロメチル）（３−ピリジル）］メチル｝ピラゾール−４−イル）−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１，３−ジプロピル−８−｛１−［（３−（１Ｈ−１，２，３，４−テトラアゾール（ｔｅｔｒａａｚｏｌ）−５−イル）フェニル）メチル］ピラゾール−４−イル｝−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
６−｛［４−（２，６−ジオキソ−１，３−ジプロピル−１，３，７−トリヒドロプリン−８−イル）ピラゾリル］メチル｝ピリジン−２−カルボン酸；
３−エチル−１−プロピル−８−［１−（２−ピリジルメチル）ピラゾール−４−イル］−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
８−（１−｛［５−（４−クロロフェニル）イソオキサゾール−３−イル］メチル｝ピラゾール−４−イル）−３−エチル−１−プロピル−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
８−（１−｛［３−（４−クロロフェニル）（１，２，４−オキサジアゾール−５−イル）］メチル｝ピラゾール−４−イル）−３−エチル−１−プロピル−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
３−エチル−１−プロピル−８−（１−｛［６−（トリフルオロメチル）（３−ピリジル）］メチル｝ピラゾール−４−イル）−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１−（シクロプロピルメチル）−３−エチル−８−（１−｛［６−（トリフルオロメチル）（３−ピリジル）］メチル｝ピラゾール−４−イル）−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；および
３−エチル−１−（２−メチルプロピル）−８−（１−｛［６−（トリフルオロメチル）（３−ピリジル）］メチル｝ピラゾール−４−イル）−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン
からなる群から選択される化合物または薬学的に許容されるその塩、互変異性体、異性体、異性体の混合物もしくはプロドラッグである。
【００１９】
本開示の別の実施形態では、Ａ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストは、次式：
【００２０】
【化２】
2013533882.tif 000004
（式中、
Ｒ１０およびＲ１２は独立に低級アルキルであり、
Ｒ１４は、必要に応じて置換されたフェニルであり、
Ｘ１は、水素またはメチルであり、
Ｙ１は、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１７であり、Ｒ１７は、独立に、必要に応じて置換された低級アルキル、必要に応じて置換されたアリールまたは必要に応じて置換されたヘテロアリールであるか、または
Ｙ１は、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ１５）２であり、Ｒ１５は、水素またはフェニルもしくはヘテロアリールで必要に応じて置換された低級アルキルである）
を有する式ＩＩＩのプロドラッグおよび薬学的に許容されるその塩である。
【００２１】
式ＩＩＩの化合物またはプロドラッグには、これらに限定されないが、以下の化合物：
［３−エチル−２，６−ジオキソ−１−プロピル−８−（１−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝ピラゾール−４−イル）−１，３，７−トリヒドロプリン−７−イル］メチルアセテート；
［３−エチル−２，６−ジオキソ−１−プロピル−８−（１−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝ピラゾール−４−イル）−１，３，７−トリヒドロプリン−７−イル］メチル２，２−ジメチルプロパノエート；
［３−エチル−２，６−ジオキソ−１−プロピル−８−（１−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝ピラゾール−４−イル）−１，３，７−トリヒドロプリン−７−イル］メチルブタノエート；および
［３−エチル−２，６−ジオキソ−１−プロピル−８−（１−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝−ピラゾール−４−イル）（１，３，７−トリヒドロプリン−７−イル）］メチル二水素ホスフェート
または薬学的に許容されるその塩が含まれる。
【００２２】
本開示のまだその上さらに別の実施形態では、Ａ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストは以下の化学式
【００２３】
【化３】
2013533882.tif 000005
を有する３−エチル−１−プロピル−８−（１−（３−（トリフルオロメチル）ベンジル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１Ｈ−プリン−２，６（３Ｈ，７Ｈ）−ジオンまたは３−エチル−１−プロピル−８−（１−（（３−（トリフルオロメチル）フェニル）メチル）ピラゾール−４−イル）−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン（全体を通して「化合物Ａ」または「化合物Ａ（Ｃｏｍｐ  Ａ）」と称する）：
または薬学的に許容されるその塩、互変異性体、異性体、異性体の混合物もしくはプロドラッグであり、プロドラッグという用語は式ＩＩＩで定義されるものである。
【００２４】
その方法の別の態様では、本開示は、ヒト肺動脈平滑筋細胞（ＨＰＡＳＭ）におけるコラーゲン、他の細胞外マトリックスタンパク質および細胞外マトリックス酵素の過剰発現を阻害する方法であって、これらの細胞を有効量のＡ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストと接触させる工程を含む方法を対象とする。
【００２５】
その方法のまだその上さらに別の態様では、本開示は、肺動脈平滑筋細胞からのＩＬ−６、ＩＬ−８、Ｇ−ＣＳＦおよび／またはトロンボキサンの放出を低減させる方法であって、これらの細胞を有効量のＡ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストと接触させる工程を含む方法を対象とする。
【００２６】
別の態様では、本開示は、肺動脈内皮細胞におけるＩＬ−８および／またはＥＴ−１の発現を低減させる方法であって、これらの細胞を有効量のＡ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストと接触させる工程を含む方法を対象とする。
【００２７】
さらに別の態様では、本開示は、肺動脈平滑筋細胞の増殖または遊走を阻害する方法であって、この細胞を有効量のＡ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストと接触させる工程を含む方法を対象とする。
【００２８】
別の態様では、本開示は、血管壁肥厚の阻害を必要とする患者における血管壁肥厚を阻害する方法であって、その患者に治療有効量のＡ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストを投与する工程を含む方法を対象とする。
【００２９】
さらなる態様では、本開示は、右心室収縮期血圧（ＲＶＳＰ）および／または右心室肥大の低減を必要とする患者における右心室収縮期血圧および／または右心室肥大を低減させる方法であって、その患者に治療有効量のＡ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストを投与する工程を含む方法を対象とする。
【００３０】
さらに、一態様では、本開示は、肺機能の改善を必要とする患者の肺機能を改善する方法であって、その患者に治療有効量のＡ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストを投与する工程を含む方法を対象とする。
【００３１】
本開示は、添付の図面と一緒に以下の詳細な説明を読めば非常によく理解されよう。図面に含まれるものは以下の図である。
【図面の簡単な説明】
【００３２】
【図１】図１は、実施例３に記載するような定量的リアルタイムＲＴ−ＰＣＲを用いて得られる、ヒト肺動脈内皮細胞（ＨＰＡＥＣ）でのアデノシン受容体の４つのサブタイプ（Ａ１、Ａ２Ａ、Ａ２ＢおよびＡ３）のｍＲＮＡ発現を例示する図である。図に示されるように、アデノシン受容体の４つのサブタイプの中でＡ２Ｂの発現が最も高かった。
【図２】図２は、実施例３に記載するような定量的リアルタイムＲＴ−ＰＣＲを用いて得られる、ヒト肺動脈平滑筋細胞（ＨＰＡＳＭ）でのアデノシン受容体の４つのサブタイプ（Ａ１、Ａ２Ａ、Ａ２ＢおよびＡ３）のｍＲＮＡ発現を例示する図である。図に示されるように、アデノシン受容体の４つのサブタイプの中でＡ２Ｂの発現が最も高かった。
【図３】図３Ａ〜Ｃは、Ａ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニスト、化合物Ａ（「Ｃｏｍｐ  Ａ」）（３Ｃ）で処置した後の対照マウス（３Ａ）、アデノシンデアミナーゼ（ＡＤＡ）−／−マウス（３Ｂ）およびアデノシンデアミナーゼ（ＡＤＡ）−／−マウスにおける肺組織病理の差を表す図である。手順は実施例１３に記載されている通りである。３Ｃに示すことができるように、アデノシンが豊富にあることによって引き起こされる血管壁肥厚は、Ａ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストを用いた処置により劇的に減少した。
【図４】図４Ａ〜Ｉは、ブレオマイシンに曝露された野生型およびＡ２Ｂ受容体ノックアウト（ＫＯ）マウスにおける血管変化を示す図である。図４Ａ、４Ｄおよび４Ｇはそれぞれ、食塩水に曝露された野生型マウスからの遠位動脈、近位動脈および前細葉（ｐｒｅａｃｉｎａｒ）肺動脈を示す図である。図４Ｂ、４Ｅおよび４Ｈはそれぞれ、ブレオマイシンに曝露された野生型マウスからの遠位動脈、近位動脈および前細葉肺動脈を示す図である。図４Ｃ、４Ｆおよび４Ｉは、それぞれ、ブレオマイシンに曝露されたＡ２Ｂ受容体ＫＯマウスからの遠位動脈、近位動脈および前細葉肺動脈を示す図である。ブレオマイシンに曝露された野生型マウスは、小さい遠位肺動脈およびより近位の肺動脈周りの筋肉質（ｍｕｓｃｕｌａｒｉｔｙ）の増大を示しており、このことから、これらのマウスが、ＰＡＨの古典的な形態学的特徴を有していることが示唆された。ブレオマイシンに曝露されたＡ２Ｂ受容体ＫＯマウスはこれらの血管変化を示しておらず、これはＡ２Ｂ受容体がＰＨの病因に関与していることを示していた。
【図５】図５は、ＨＰＡＥＣを、対照、種々の濃度のＮＥＣＡ（Ｎ−エチルカルボキサミドアデノシン）（０．１μＭ、１μＭおよび１０μＭ）および、Ａ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストである化合物Ａ（１００ｎＭ）と一緒のＮＥＣＡ（１０μＭ）で１８時間インキュベートした後、ＥＬＩＳＡで測定したＨＰＡＥＣにおけるケモカイン、ＩＬ−８のレベルを示す図である。ＮＥＣＡはＩＬ−８の放出を用量依存的に増大させ、ＩＬ−８のＮＥＣＡ誘導放出は化合物Ａによって阻害された。このことから、Ａ２Ｂ受容体の活性化がＩＬ−８の放出を誘導したことが示唆された。データは、実施例５に記載する手順にしたがって得た。＊、対照と比較してｐ＜０．０５；＃、ＮＥＣＡ（１０μＭ）と比較してｐ＜０．０５。
【図６】図６は、ＨＰＡＥＣを、対照、種々の濃度のＮＥＣＡ（０．１μＭ、１μＭおよび１０μＭ）および、化合物Ａ（１００ｎＭ）と一緒のＮＥＣＡ（１０μＭ）で１８時間インキュベートした後、ＥＬＩＳＡで測定したＨＰＡＥＣにおけるエンドセリン、ＥＴ−１のレベルを示す図である。ＮＥＣＡはＥＴ−１の放出を用量依存的に増大させ、ＥＴ−１のＮＥＣＡ誘導放出はＨＰＡＥＣにおいて化合物Ａによって阻害されている。これは、Ａ２Ｂ受容体の活性化がＥＴ−１の放出を誘導したことを示唆している。データは、実施例６に記載する手順にしたがって得た。＊、対照と比較してｐ＜０．０５  ；＃、ＮＥＣＡ（１０μＭ）と比較してｐ＜０．０５。
【図７】図７は、ＨＰＡＥＣを、対照、種々の濃度のＮＥＣＡ（０．１μＭ、１μＭおよび１０μＭ）および、化合物Ａ（１００ｎＭ）と一緒のＮＥＣＡ（１０μＭ）で１８時間インキュベートした後、ＥＬＩＳＡで測定したＨＰＡＳＭにおける炎症性サイトカイン、ＩＬ−６のレベルを示す図である。ＮＥＣＡはＩＬ−６の放出を用量依存的に増大させ、ＩＬ−６のＮＥＣＡ誘導放出はＨＰＡＳＭにおいて化合物Ａによって阻害される。データは、実施例７の手順にしたがって得た。＊、対照と比較してｐ＜０．０５；＃、ＮＥＣＡ（１０μＭ）と比較してｐ＜０．０５。
【図８】図８は、ＨＰＡＥＣを、対照、種々の濃度のＮＥＣＡ（０．１μＭ、１μＭおよび１０μＭ）および、化合物Ａ（１００ｎＭ）と一緒のＮＥＣＡ（１０μＭ）で１８時間インキュベートした後、ＥＬＩＳＡで測定したＨＰＡＳＭにおけるケモカイン、ＩＬ−８のレベルを示す図である。ＮＥＣＡはＩＬ−８の放出を用量依存的に増大させ、ＩＬ−８のＮＥＣＡ誘導放出はＨＰＡＳＭにおいて化合物Ａによって阻害されている。データは、実施例７の手順にしたがって得た。＊、対照と比較してｐ＜０．０５；＃、ＮＥＣＡ（１０μＭ）と比較してｐ＜０．０５。
【図９】図９は、ＨＰＡＥＣを、対照、種々の濃度のＮＥＣＡ（０．１μＭ、１μＭおよび１０μＭ）および、化合物Ａ（１００ｎＭ）と一緒のＮＥＣＡ（１０μＭ）で１８時間インキュベートした後、ＥＬＩＳＡで測定したＨＰＡＳＭにおけるＧ−ＣＳＦのレベルを示す図である。ＮＥＣＡはＧ−ＣＳＦの放出を用量依存的に増大させ、Ｇ−ＣＳＦのＮＥＣＡ誘導放出はＨＰＡＳＭにおいて化合物Ａによって阻害される。データは、実施例７の手順にしたがって得た。
【図１０Ａ】図１０は、ビヒクル培地、ＮＥＣＡ（１０μＭ）培地、ＮＥＣＡ（１０μＭ）および化合物Ａ（１００ｎＭ）培地またはＮＥＣＡ（１０μＭ）培地および抗ＩＬ−６抗体で１８時間処理したＨＰＡＳＭでの平滑筋細胞遊走速度を示す図である。ビヒクル、ＮＥＣＡ（１０μＭ）または化合物Ａ（１００ｎＭ）で１８時間処理したＨＰＡＳＭから採取した順化培池を、化学誘引物質としてＢｏｙｄｅｎチャンバーアッセイシステムの下部ウェルに加えた。ＨＰＡＳＭを２４時間遊走させた。（Ａ）：ＮＥＣＡ培地は平滑筋細胞遊走を増進させ、その増進は化合物Ａかまたは抗ＩＬ−６抗体によって阻害された。（Ｂ）：提案する機序の説明図であり、Ａ２Ｂアデノシン受容体を活性化することによって、ＮＥＣＡはＩＬ−６を放出する平滑筋を活性化させる。放出されたＩＬ−６は次いで平滑筋細胞遊走を増進させる。＊、対照と比較してｐ＜０．０５；＃、ＮＥＣＡ（１０μＭ）と比較してｐ＜０．０５。
【図１０Ｂ】図１０は、ビヒクル培地、ＮＥＣＡ（１０μＭ）培地、ＮＥＣＡ（１０μＭ）および化合物Ａ（１００ｎＭ）培地またはＮＥＣＡ（１０μＭ）培地および抗ＩＬ−６抗体で１８時間処理したＨＰＡＳＭでの平滑筋細胞遊走速度を示す図である。ビヒクル、ＮＥＣＡ（１０μＭ）または化合物Ａ（１００ｎＭ）で１８時間処理したＨＰＡＳＭから採取した順化培池を、化学誘引物質としてＢｏｙｄｅｎチャンバーアッセイシステムの下部ウェルに加えた。ＨＰＡＳＭを２４時間遊走させた。（Ａ）：ＮＥＣＡ培地は平滑筋細胞遊走を増進させ、その増進は化合物Ａかまたは抗ＩＬ−６抗体によって阻害された。（Ｂ）：提案する機序の説明図であり、Ａ２Ｂアデノシン受容体を活性化することによって、ＮＥＣＡはＩＬ−６を放出する平滑筋を活性化させる。放出されたＩＬ−６は次いで平滑筋細胞遊走を増進させる。＊、対照と比較してｐ＜０．０５；＃、ＮＥＣＡ（１０μＭ）と比較してｐ＜０．０５。
【図１１】図１１は、ＨＰＡＥＣを、対照、種々の濃度のＮＥＣＡ（０．１μＭ、１μＭおよび１０μＭ）および、化合物Ａ（１００ｎＭ）と一緒のＮＥＣＡ（１０μＭ）で１８時間インキュベートした後、ＥＬＩＳＡで測定したＨＰＡＳＭ中の強力な動脈血管収縮物質、トロンボキサンＢ２のレベルを示す図である。ＮＥＣＡは、ＨＰＡＳＭ中で、トロンボキサンの放出およびトロンボキサンＢ２のＮＥＣＡ誘導放出を用量依存的に増進させている。データは実施例９の手順にしたがって得た。＊、対照と比較してｐ＜０．０５；＃、ＮＥＣＡ（１０μＭ）と比較してｐ＜０．０５。
【図１２Ａ】図１２Ａ〜Ｃは、化合物Ａで処置した後の、組織リモデリングにおいて重要な種々のコラーゲン、細胞外マトリックスタンパク質および細胞外マトリックス酵素の発現レベルを示す図である。データは実施例１０の手順にしたがって得た。図に示されるように、Ａ２Ｂ受容体の活性化はこれらの遺伝子（ＡおよびＢ）の一部の放出を誘導しているが、その誘導は化合物Ａ（Ｃ）によって阻害された。
【図１２Ｂ】図１２Ａ〜Ｃは、化合物Ａで処置した後の、組織リモデリングにおいて重要な種々のコラーゲン、細胞外マトリックスタンパク質および細胞外マトリックス酵素の発現レベルを示す図である。データは実施例１０の手順にしたがって得た。図に示されるように、Ａ２Ｂ受容体の活性化はこれらの遺伝子（ＡおよびＢ）の一部の放出を誘導しているが、その誘導は化合物Ａ（Ｃ）によって阻害された。
【図１２Ｃ】図１２Ａ〜Ｃは、化合物Ａで処置した後の、組織リモデリングにおいて重要な種々のコラーゲン、細胞外マトリックスタンパク質および細胞外マトリックス酵素の発現レベルを示す図である。データは実施例１０の手順にしたがって得た。図に示されるように、Ａ２Ｂ受容体の活性化はこれらの遺伝子（ＡおよびＢ）の一部の放出を誘導しているが、その誘導は化合物Ａ（Ｃ）によって阻害された。
【図１３Ａ】図１３Ａ〜Ｂは、ビヒクル（対照培地）、ＮＥＣＡ（１０μＭ、ＮＥＣＡ培地）またはＮＥＣＡおよび化合物Ａ（１００ｎＭ）で１８時間処理したＨＰＡＥＣの結果を示す図である。実施例１１にしたがって、その細胞上清（ＳＭ無血清培地中に１：１で希釈）を用いてＨＰＡＳＭを１８時間インキュベートした。ＮＥＣＡ−ＨＰＡＥＣ培地は、対照ＨＰＡＥＣ培地と比較して１８時間でＨＰＡＳＭの細胞数を増加させた。（Ａ）ＮＥＣＡ自体はＨＰＡＥＣの増殖を増進させなかった（データは示されていない）。この発見は、ＮＥＣＡによって誘導されＨＰＡＥＣから放出された特定のメディエータは、ＨＰＡＳＭの増殖を促進するかまたはＨＰＡＳＭの細胞死を阻止することができることを示唆している。（Ｂ）：化合物Ａを用いた処理はどちらもＮＥＣＡ誘導増殖を阻害した。したがって、アデノシンにより活性化されたＨＰＡＥＣはＨＰＡＳＭの増殖を誘導することができ、これはＨＰＡＥＣにおけるＡ２Ｂ受容体によって媒介される。＊、対照と比較してｐ＜０．０５；＃、ＮＥＣＡ（１０μＭ）と比較してｐ＜０．０５。
【図１３Ｂ】図１３Ａ〜Ｂは、ビヒクル（対照培地）、ＮＥＣＡ（１０μＭ、ＮＥＣＡ培地）またはＮＥＣＡおよび化合物Ａ（１００ｎＭ）で１８時間処理したＨＰＡＥＣの結果を示す図である。実施例１１にしたがって、その細胞上清（ＳＭ無血清培地中に１：１で希釈）を用いてＨＰＡＳＭを１８時間インキュベートした。ＮＥＣＡ−ＨＰＡＥＣ培地は、対照ＨＰＡＥＣ培地と比較して１８時間でＨＰＡＳＭの細胞数を増加させた。（Ａ）ＮＥＣＡ自体はＨＰＡＥＣの増殖を増進させなかった（データは示されていない）。この発見は、ＮＥＣＡによって誘導されＨＰＡＥＣから放出された特定のメディエータは、ＨＰＡＳＭの増殖を促進するかまたはＨＰＡＳＭの細胞死を阻止することができることを示唆している。（Ｂ）：化合物Ａを用いた処理はどちらもＮＥＣＡ誘導増殖を阻害した。したがって、アデノシンにより活性化されたＨＰＡＥＣはＨＰＡＳＭの増殖を誘導することができ、これはＨＰＡＥＣにおけるＡ２Ｂ受容体によって媒介される。＊、対照と比較してｐ＜０．０５；＃、ＮＥＣＡ（１０μＭ）と比較してｐ＜０．０５。
【図１４】図１４は、ＮＥＣＡ（１０μＭ）またはＮＥＣＡ（１０μＭ）および化合物Ａ（１００ｎＭ）で１．５時間インキュベートしたＨＰＡＳＭにおけるＮＯＴＣＨ３発現を示す図である。ＮＥＣＡはＮＯＴＣＨ３の発現を増進させ、ＮＥＣＡのこの効果は化合物Ａによって阻害された。＊、対照と比較してｐ＜０．０５；＃、ＮＥＣＡ（１０μＭ）と比較してｐ＜０．０５。
【図１５】図１５は、実施例１４における投与スケジュールを例示する。
【図１６】図１６は、ブレオマイシン処置の後に、アデノシンレベルとＡ２ＢＲの発現がどちらも増大していることを示す図である。（Ａ）ＨＰＬＣで測定した、ＰＢＳまたはブレオマイシン（ＢＬＭ）で処置し３３日目に屠殺したマウスの気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬＦ）からのアデノシンレベル。（Ｂ）ＰＢＳまたはＢＬＭで処置したマウスの新鮮な凍結肺からのＡ２ＢＲ転写産物レベル。
【図１７】図１７は、ブレオマイシン曝露に続く肺血管の筋肉化の増進および化合物Ａの阻害効果を示す写真とチャートを示す図である。化合物Ａ（１０ｍｇ／ｋｇ／日）を食餌でもって投与し、ＰＢＳおよびＢＬＭの群には対照食餌を提供した。（Ａ）血管の実質（上のパネル）および筋肉壁（矢印および下のパネル）における筋線維芽細胞（灰色のシグナル）を特定するためのα−ＳＭＡについての免疫染色。形態計測分析を実施して、すべての処置群の各マウスについて５〜７つの血管に存在する筋肉化の程度（Ｂ）、およびすべての群の各マウスの肺実質の１０個の無作為マイクロピクトグラフで観察された筋肉化した血管の数（Ｃ）を決定した。結果を、すべての処置群について平均値±ＳＥＭ、Ｎ＝５〜８で示す。有意水準：＊＊＊Ｐ＜０．００１はＰＢＳ処置群とＢＬＭ処置群間の比較に関係する。有意水準：＃Ｐ＜０．０５、＃＃０．００１＜Ｐ＜０．０１はＢＬＭとＢＬＭ＋化合物ＡまたはＢＬＭ＋Ａ２ＢＲ−／−間の分散分析（ＡＮＯＶＡ）比較に関係する（Ｚｈｏｕら、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １８２巻：８０３７〜４６頁（２００９年））。
【図１８】図１８は、ブレオマイシン処置後の心臓血管生理および化合物Ａの効果を示すチャートである。Ａ２ＢＲの拮抗またはノックアウトは、ブレオマイシンで処置されたマウスにおいてＲＶＳＰの増大を阻害する。化合物Ａ（１０ｍｇ／ｋｇ／日）を食餌でもって投与し、ＰＢＳおよびＢＬＭの群には対照食餌を提供した。結果を、すべての処置群について平均値±ＳＥＭ、Ｎ＝６〜８で示す。有意水準：＊＊＊Ｐ＜０．００１および＊＊０．００１＜Ｐ＜０．０１はＰＢＳ処置群とＢＬＭ処置群間の比較に関係する。有意水準：＃＃＃Ｐ＜０．００１はＢＬＭと、ＢＬＭ＋化合物ＡまたはＢＬＭ＋Ａ２ＢＲ−／−処置群との間の分散分析比較に関係する。
【図１９】図１９は、肺における血管周囲線維症を示す図である。Ａ２ＢＲの拮抗またはノックアウトは、肺におけるブレオマイシン（ｂｅｌｏｍｙｃｉｎｅ）誘発血管周囲線維症を阻害する。代表的な組織切片を、マッソントリクローム法で染色して、ＰＢＳ、ＢＬＭ、ＢＬＭ＋化合物Ａで処置されたマウスおよびＢＬＭ曝露Ａ２ＢＲ−／−マウスのコラーゲン線維（灰色のシグナル）を明らかにした。星印は、線維性線維（ｆｉｂｒｏｔｉｃ  ｆｉｂｅｒ）が存在する領域を示す。
【図２０】図２０は、ブレオマイシン処置後の肺機能測定および化合物Ａの効果を示す図である。Ａ２ＢＲの拮抗またはノックアウトは、ブレオマイシンで処置されたマウスにおいて肺機能を改善している。（Ａ）肺の動的抵抗（ｄｙｎａｍｉｃ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ）、（Ｂ）組織ダンピング（ｔｉｓｓｕｅ  ｄａｍｐｉｎｇ）（抵抗）パラメーターおよび（Ｃ）所与の容量での肺に対する弾性反跳圧（ｒｅｃｏｉｌ  ｐｒｅｓｓｕｒｅ）を反映する準静的エラスタンス。測定を、気管切開し麻酔をかけたマウスにおいてＦｌｅｘｉｖｅｎｔシステムを用いて実施した。（Ｄ）動脈酸素化レベルを、ＭｏｕｓｅＯｘシステムを用いたパルスオキシメトリーにより覚醒マウスで決定した。実験群には、ＰＢＳ、ＰＢＳおよび化合物Ａ、ＢＬＭ、ＢＬＭおよび化合物Ａで処置したマウス、またはＢＬＭで処置したＡ２ＢＲ−／−を含めた。結果を、すべての処置群について平均値±ＳＥＭ、ｎ＝８〜９で示す。有意水準：＊＊＊Ｐ＜０．００１はＰＢＳ処置群とＢＬＭ処置群間の比較に関係する。有意水準：＃＃＃Ｐ＜０．００１、＃＃０．００１＜Ｐ＜０．０１および＃Ｐ＜０．０５はＢＬＭ処置群とＢＬＭ＋化合物Ａ処置群間の分散分析比較に関係する。
【図２１】図２１は、ブレオマイシン処置後のインターロイキン（ＩＬ）−６レベルおよび化合物Ａの効果を示す図である。Ａ２ＢＲの拮抗またはノックアウトは、処置計画にしたがい３３日目に採取しＥＬＩＳＡを用いて決定した、ＢＡＬＦ（Ａ）および血漿（Ｂ）において、ＢＡＬＦ中のブレオマイシン誘導ＩＬ−６ならびに血漿ＩＬ−６タンパク質レベルを低下させている。実験群には、ＰＢＳ、ＰＢＳおよび化合物Ａ、ＢＬＭ、ＢＬＭおよび化合物Ａで処置したマウス、またはＢＬＭで処置したＡ２ＢＲ−／−を含めた。結果を、すべての処置群について平均値±ＳＥＭ、ｎ＝４〜６で示す。有意水準：＊＊＊Ｐ＜０．００１はＰＢＳ処置群とＢＬＭ処置群間の比較に関係する。有意水準：＃＃＃Ｐ＜０．００１はＢＬＭ処置群とＢＬＭ＋化合物Ａ処置群間の分散分析比較に関係する。
【図２２】図２２は、ブレオマイシンによる処置に続く血漿ＥＴ−１レベルおよび肺内のＥＴ−１発現を示す図である。Ａ２ＢＲの拮抗またはノックアウトは、ブレオマイシン誘導血漿ＥＴ−１および肺血管壁におけるＥＴ−１の発現を阻害する。（Ａ）血漿中のＥＴ−１のタンパク質レベルをＥＬＩＳＡにより決定した。（Ｂ）ＰＢＳ、ＢＬＭ、ＢＬＭ＋化合物Ａで処置したマウスおよびＢＬＭで処置したＡ２ＢＲ−／−マウスからのＥＴ−１（薄い灰色）についての免疫蛍光染色。矢印は血管壁の位置を表す。
【発明を実施するための形態】
【００３３】
詳細な説明
本開示をさらに詳細に記載する前に、まず以下の用語を定義することとする。
【００３４】
もちろん、本開示は記載される特定の実施形態にそれ自体限定されることはなく、従って、変えることができることを理解すべきである。本開示の範囲は添付の特許請求の範囲によってのみ限定されることになるので、本明細書で使用する専門用語は特定の実施形態を説明する目的のためだけのものであり、これは、限定的なものではないことも理解すべきである。
【００３５】
本明細書および添付の特許請求の範囲で使用される単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、その文脈で明らかな他の指定がなされていない限り、複数形の指示対象を含むことに留意すべきである。したがって、例えば、「糸（ａ  ｔｈｒｅａｄ）」への参照は複数の糸を含む。
【００３６】
１．定義
別段の定義のない限り、本明細書で使用するすべての技術的および科学的用語は、本開示が属する当業者によって一般に理解されているのと同じ意味を有する。本明細書で用いるように、以下の用語は以下の意味を有するものとする。
【００３７】
本明細書で用いる「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」または「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」という用語は、その組成物および方法が言及された要素を含むが、それ以外のものを排除しないことを意味するものとする。組成物および方法を定義するのに使用される場合、「本質的に〜からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ）」は、述べられた目的のための組合せに対して、任意の本質的重要性をもつ他の要素を排除することを意味するものとする。したがって、本明細書で定義される要素から本質的になる組成物は、特許請求される開示の基本的で新規な特徴（複数可）に実質的に影響を及ぼさない他の材料またはステップを排除するものではない。「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｏｆ）」は、他の成分および実質的な方法工程のトレース超の要素を排除することを意味するものとする。これらの移行用語のそれぞれによって定義される実施形態は、本開示の範囲内である。
【００３８】
範囲を含む数字表示、例えば温度、時間、量および濃度の前で用いられる場合、「約（ａｂｏｕｔ）」という用語は、（＋）もしくは（−）１０％、５％または１％で変化することができる近似値を表す。
【００３９】
上記したように、本開示は、肺高血圧症の処置を必要とする患者に治療有効量のＡ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストを投与する工程を含む肺高血圧症の処置方法を対象とする。
【００４０】
「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」という用語は：（ｉ）疾患を予防する、すなわち臨床症状を発症させないようにすること；（ｉｉ）疾患を抑制する、すなわち臨床症状の進行を停止させること；および／または、（ｉｉｉ）疾患を軽減させる、すなわち臨床症状を後退させることを含む、患者の疾患の任意の処置を意味する。ほんの一例として、処置するということは、右心室機能を改善するかつ／または、これらに限定されないが、労作性呼吸困難、疲労、胸痛およびその組合せを含む症状を緩和することを含むことができる。
【００４１】
本明細書で用いる「肺高血圧症」すなわち「ＰＨ」という用語は、肺動脈、肺静脈または肺毛細管における血圧の増大を指す。肺高血圧症の詳細な説明および分類は、例えばＳｉｍｏｎｎｅａｕら、Ｊ  Ａｍ  Ｃｏｌｌ  Ｃａｒｄｉｏ、５４巻（１号）：Ｓ４３〜５４頁（２００９年）および教科書のいたるところで見出すことができる。
【００４２】
本明細書で用いる「肺動脈高血圧症」すなわち「ＰＡＨ」という用語は、特発性ＰＡＨ、家族性ＰＡＨ、肺静脈閉塞性疾患（ＰＶＯＤ）、肺毛細血管腫症（ＰＣＨ）、新生児の持続性肺高血圧症、またはこれらに限定されないが膠原脈管疾患、先天性全身−肺シャント（ｃｏｎｇｅｎｉｔａｌ  ｓｙｓｔｅｍｉｃ−ｔｏ−ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｓｈｕｎｔ）（アイゼンメンガー症候群を含む）、門脈圧亢進症、ＨＩＶ感染症、薬物および毒素、甲状腺障害、グリコーゲン貯蔵症、ゴーシェ病、遺伝性出血性毛細管拡張症、異常ヘモグロビン症、骨髄増殖性障害または脾臓摘出などの別の疾患または状態に関連するＰＡＨを含むものとする。
【００４３】
「細胞外マトリックスタンパク質」という用語は、様々な他の機能の実行に加えて動物細胞への構造支持を提供する動物組織の細胞外部の一部である、タンパク質またはタンパク質をコードする遺伝子を指す。細胞外マトリックスタンパク質の例には、これらに限定されないが、コラーゲン、エラスチン、フィブロネクチンおよびラミニンが含まれる。
【００４４】
「細胞外マトリックス酵素」という用語は、胚発生、再生および組織リモデリングなどの正常な生理学的過程ならびに関節炎および転移などの疾患過程における細胞外マトリックスの分解に関与するタンパク質またはタンパク質をコードする遺伝子を指す。非限定的な例には、ＭＭＰ１、ＭＭＰ２、ＭＭＰ３、ＭＭＰ７、ＭＭＰ８、ＭＭＰ９、ＭＭＰ１０、ＭＭＰ１１、ＭＭＰ１２、ＭＭＰ１３、ＭＭＰ１４、ＭＭＰ１５、ＭＭＰ１６、ＭＭＰ１７、ＭＭＰ１８、ＭＭＰ１９、ＭＭＰ２０、ＭＭＰ２１、ＭＭＰ２３Ａ、ＭＭＰ２３Ｂ、ＭＭＰ２４、ＭＭＰ２５、ＭＭＰ２６、ＭＭＰ２７、およびＭＭＰ２８が含まれる。
【００４５】
「コラーゲン」という用語は、主に腱、靱帯および皮膚などの動物の線維組織において見出される細長い原線維の形態で存在する、１つ以上のタンパク質またはそうしたタンパク質をコードする遺伝子を指す。コラーゲンの非限定的な例には、ＣＯＬ１Ａ１、ＣＯＬ１Ａ２、ＣＯＬ２Ａ１、ＣＯＬ３Ａ１、ＣＯＬ４Ａ１、ＣＯＬ４Ａ２、ＣＯＬ４Ａ３、ＣＯＬ４Ａ４、ＣＯＬ４Ａ５、ＣＯＬ４Ａ６、ＣＯＬ５Ａ１、ＣＯＬ５Ａ２、ＣＯＬ５Ａ３、ＣＯＬ６Ａ１、ＣＯＬ６Ａ２、ＣＯＬ６Ａ３、ＣＯＬ７Ａ１、ＣＯＬ８Ａ１、ＣＯＬ８Ａ２、ＣＯＬ９Ａ１、ＣＯＬ９Ａ２、ＣＯＬ９Ａ３、ＣＯＬ１０Ａ１、ＣＯＬ１１Ａ１、ＣＯＬ１１Ａ２、ＣＯＬ１２Ａ１、ＣＯＬ１３Ａ１、ＣＯＬ１４Ａ１、ＣＯＬ１５Ａ１、ＣＯＬ１６Ａ１、ＣＯＬ１７Ａ１、ＣＯＬ１８Ａ１、ＣＯＬ１９Ａ１、ＣＯＬ２０Ａ１、ＣＯＬ２１Ａ１、ＣＯＬ２２Ａ１、ＣＯＬ２３Ａ１、ＣＯＬ２４Ａ１、ＣＯＬ２５Ａ１、ＥＭＩＤ２、ＣＯＬ２７Ａ１、ＣＯＬ２８Ａ１およびＣＯＬ２９Ａ１が含まれる。
【００４６】
「患者」という用語は一般に、例えばヒトなどの哺乳動物を指す。
【００４７】
「治療有効量」という用語は、上記に定義したような処置を必要とする患者に投与したとき、そのような処置を達成するのに十分なＡ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストなどの化合物の量を指す。治療有効量は、使用される薬剤の特定の活性または送達経路、患者の疾患状態の重症度および患者の年齢、健康状態、他の疾患状態の存在ならびに栄養状態に応じて変わる。さらに、患者が受けることができる他の薬物治療は、投与する治療剤の治療有効量の決定に影響を及ぼす。
【００４８】
「Ａ２Ｂアデノシン受容体」または「Ａ２Ｂ受容体」という用語は、アデノシン受容体のサブタイプを指す。他のサブタイプにはＡ１、Ａ２ＡおよびＡ３が含まれる。
【００４９】
「Ａ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニスト」または「Ａ２Ｂ受容体アンタゴニスト」という用語は、Ａ２Ｂアデノシン受容体の発現もしくは活性を阻害するかまたは別の方法で調節する任意の化合物、ペプチド、タンパク質（例えば、抗体）、ｓｉＲＮＡを指す。一実施形態では、そのアンタゴニストは、アデノシン受容体の他のサブタイプより、Ａ２Ｂ受容体を選択的に阻害する。別の実施形態では、そのアンタゴニストはＡ２Ｂ受容体に対して部分的に選択的である。推定アンタゴニストである化合物は、実施例２の手順を用いてスクリーニングすることができる。アンタゴニストの例には、これらに限定されないが、以下の節で論じるものが含まれる。
【００５０】
一実施形態では、Ａ２Ｂ受容体アンタゴニストは化学式：
【００５１】
【化４】
2013533882.tif 000006
および名称３−エチル−１−プロピル−８−（１−（３−（トリフルオロメチル）ベンジル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１Ｈ−プリン−２，６（３Ｈ，７Ｈ）−ジオンまたは３−エチル−１−プロピル−８−（１−（（３−（トリフルオロメチル）フェニル）メチル）ピラゾール−４−イル）−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオンを有する化合物である。これは全体を通して「化合物Ａ」または「Ｃｏｍｐ  Ａ」と称されることがある。この化合物は米国特許第６，８２５，３４９号に記載されており、この特許をその全体として参照により本明細書に組み込む。
【００５２】
「アルキル」という用語は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０個の炭素原子を有するモノラジカルの（ｍｏｎｏｒａｄｉｃａｌ）分岐状または非分岐状飽和炭化水素鎖を指す。この用語は、例えばメチル、エチル、ｎ−プロピル、イソ−プロピル、ｎ−ブチル、イソ−ブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ヘキシル、ｎ−デシル、テトラデシルなどの基で例示される。
【００５３】
「置換アルキル」という用語は：
１）アルケニル、アルキニル、アルコキシ、シクロアルキル、シクロアルケニル、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アミノ、アミノカルボニル、アルコキシカルボニルアミノ、アジド、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシ、ケト、チオカルボニル、カルボキシ、カルボキシアルキル、アリールチオ、ヘテロアリールチオ、ヘテロシクリルチオ、チオール、アルキルチオ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、アミノスルホニル、アミノカルボニルアミノ、ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロオキシ、ヒドロキシアミノ、アルコキシアミノ、ニトロ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、ＳＯ２−アリールおよび−ＳＯ２−ヘテロアリールからなる群から選択される１、２、３、４または５個の置換基、好ましくは１〜３個の置換基を有する上記で定義したようなアルキル基であって、定義によって別段の制約がなされていない限り、すべての置換基がアルキル、カルボキシ、カルボキシアルキル、アミノカルボニル、ヒドロキシ、アルコキシ、ハロゲン、ＣＦ３、アミノ、置換アミノ、シアノおよび−Ｓ（Ｏ）ｎＲ２０（Ｒ２０はアルキル、アリールまたはヘテロアリールであり、ｎは０、１または２である）から選択される１、２もしくは３個の置換基で必要に応じてさらに置換されていてよいアルキル基；
２）酸素、硫黄およびＮＲａ−（Ｒａは水素、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、シクロアルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリールおよびヘテロシクリルから選択される）から独立に選択される１〜１０個の原子に介在されている（ｉｎｔｅｒｒｕｐｔｅｄ）上記で定義したようなアルキル基であって、すべての置換基がアルキル、アルコキシ、ハロゲン、ＣＦ３、アミノ、置換アミノ、シアノまたは−Ｓ（Ｏ）ｎＲ２０（Ｒ２０はアルキル、アリールまたはヘテロアリールであり、ｎは０、１または２である）で必要に応じてさらに置換されていてよいアルキル基；または
３）上記で定義したような１、２、３、４もしくは５個の置換基を有し、同時に上記で定義したような１〜１０個の原子に介在されてもいる上記で定義したようなアルキル基
を指す。
【００５４】
「低級アルキル」という用語は、１、２、３、４、５もしくは６個の炭素原子を有するモノラジカル分岐状または非分岐状飽和炭化水素鎖を指す。この用語は、例えばメチル、エチル、ｎ−プロピル、イソ−プロピル、ｎ−ブチル、イソ−ブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ヘキシルなどの基で例示される。
【００５５】
「置換低級アルキル」という用語は、置換アルキルについて定義した通りの１〜５個の置換基、好ましくは１、２もしくは３個の置換基を有する上記で定義したような低級アルキル、置換アルキルについて定義した通りの１、２、３、４もしくは５個の原子に介在されてもいる上記で定義したような低級アルキル基、または上記で定義したような１、２、３、４もしくは５個の置換基を有し、同時に上記で定義したような１、２、３、４もしくは５個の原子に介在されてもいる上記で定義したような低級アルキル基を指す。
【００５６】
「アルキレン」という用語は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９もしくは２０個の炭素原子、好ましくは１〜１０個の炭素原子、より好ましくは１、２、３、４、５もしくは６個の炭素原子を有する分岐状または非分岐状飽和炭化水素鎖のジラジカル（ｄｉｒａｄｉｃａｌ）を指す。この用語は、例えばメチレン（−ＣＨ２−）、エチレン（−ＣＨ２ＣＨ２−）、プロピレン異性体（例えば、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−および−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２−）などの基で例示される。
【００５７】
「低級アルキレン」という用語は、好ましくは１、２、３、４、５もしくは６個の炭素原子を有する分岐状または非分岐状飽和炭化水素鎖のジラジカルを指す。
【００５８】
「置換アルキレン」という用語は：
（１）アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、シクロアルキル、シクロアルケニル、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アミノ、アミノカルボニル、アルコキシカルボニルアミノ、アジド、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシ、ケト、チオカルボニル、カルボキシ、カルボキシアルキル、アリールチオ、ヘテロアリールチオ、ヘテロシクリルチオ、チオール、アルキルチオ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、アミノスルホニル、アミノカルボニルアミノ、ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロオキシ、ヒドロキシアミノ、アルコキシアミノ、ニトロ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、ＳＯ２−アリールおよび−ＳＯ２−ヘテロアリールからなる群から選択される１、２、３、４または５個の置換基を有する上記で定義したようなアルキレン基であって、定義によって別段の制約がなされていない限り、すべての置換基がアルキル、カルボキシ、カルボキシアルキル、アミノカルボニル、ヒドロキシ、アルコキシ、ハロゲン、ＣＦ３、アミノ、置換アミノ、シアノおよび−Ｓ（Ｏ）ｎＲ２０（Ｒ２０はアルキル、アリールまたはヘテロアリールであり、ｎは０、１または２である）から選択される１、２もしくは３個の置換基で必要に応じてさらに置換されていてよいアルキレン基；
（２）酸素、硫黄およびＮＲａ−（Ｒａは水素、必要に応じて置換されたアルキル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリールおよびヘテロシクリル、またはカルボニル、カルボキシエステル、カルボキシアミドおよびスルホニルから選択される基から選択される）から独立に選択される１〜２０個の原子に介在されている上記で定義したようなアルキレン基；または
（３）上記で定義したような１、２、３、４もしくは５個の置換基を有し、同時に上記で定義したような１〜２０個の原子に介在されてもいる上記で定義したようなアルキレン基
を指す。置換アルキレンの例は、クロロメチレン（−ＣＨ（Ｃｌ）−）、アミノエチレン（−ＣＨ（ＮＨ２）ＣＨ２−）、メチルアミノエチレン（−ＣＨ（ＮＨＭｅ）ＣＨ２−）、２−カルボキシプロピレン異性体（−ＣＨ２ＣＨ（ＣＯ２Ｈ）ＣＨ２−）、エトキシエチル（−ＣＨ２ＣＨ２Ｏ−ＣＨ２ＣＨ２−）、エチルメチルアミノエチル（−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２−）、１−エトキシ−２−（２−エトキシ−エトキシ）エタン（−ＣＨ２ＣＨ２Ｏ−ＣＨ２ＣＨ２−ＯＣＨ２ＣＨ２−ＯＣＨ２ＣＨ２−）などである。
【００５９】
「アラルキル」という用語は、アリールおよびアルキレンが本明細書で定義する通りであるアルキレン基と共有結合しているアリール基を指す。「必要に応じて置換されたアラルキル」は、必要に応じて置換されたアルキレン基と共有結合している必要に応じて置換されたアリール基を指す。そうしたアラルキル基は、ベンジル、フェニルエチル、３−（４−メトキシフェニル）プロピルなどで例示される。
【００６０】
「アルコキシ」という用語は、Ｒ２１が必要に応じて置換されたアルキルもしくは必要に応じて置換されたシクロアルキルであるか、またはＲ２１が基−Ｙ１１−Ｚ１１である基Ｒ２１−Ｏ−を指し、ここで、Ｙ１１は必要に応じて置換されたアルキレンであり、Ｚ１１は必要に応じて置換されたアルケニル、必要に応じて置換されたアルキニルまたは必要に応じて置換されたシクロアルケニルであり、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキルおよびシクロアルケニルは本明細書で定義する通りである。好ましいアルコキシ基は必要に応じて置換されたアルキル−Ｏ−であり、その例には、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、イソ−プロポキシ、ｎ−ブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、ｎ−ペントキシ、ｎ−ヘキソキシ、１，２−ジメチルブトキシ、トリフルオロメトキシなどが含まれる。
【００６１】
「アルキルチオ」という用語は、Ｒ２１がアルコキシについて定義した通りである基Ｒ２１−Ｓ−を指す。
【００６２】
「アルケニル」という用語は、好ましくは２〜２０個の炭素原子、より好ましくは２〜１０個の炭素原子、さらにより好ましくは２〜６個の炭素原子を有し、かつ１〜６個、好ましくは１個の二重結合（ビニル）を有する分岐状または非分岐状不飽和炭化水素基のモノラジカルを指す。好ましいアルケニル基には、エテニルまたはビニル（−ＣＨ＝ＣＨ２）、１−プロピレンまたはアリル（−ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２）、イソプロピレン（−Ｃ（ＣＨ３）＝ＣＨ２）、ビシクロ［２．２．１］ヘプテンなどが含まれる。アルケニルが窒素と結合している場合、その二重結合は窒素に対してα位であることはない。
【００６３】
「低級アルケニル」という用語は、２〜６個の炭素原子を有する上記で定義したようなアルケニルを指す。
【００６４】
「置換アルケニル」という用語は、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、シクロアルキル、シクロアルケニル、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アミノ、アミノカルボニル、アルコキシカルボニルアミノ、アジド、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシ、ケト、チオカルボニル、カルボキシ、カルボキシアルキル、アリールチオ、ヘテロアリールチオ、ヘテロシクリルチオ、チオール、アルキルチオ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、アミノスルホニル、アミノカルボニルアミノ、ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロオキシ、ヒドロキシアミノ、アルコキシアミノ、ニトロ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、ＳＯ２−アリールおよび−ＳＯ２−ヘテロアリールからなる群から選択される１、２、３、４または５個の置換基、好ましくは１、２または３個の置換基を有する上記で定義したようなアルケニル基であって、定義によって別段の制約がなされていない限り、すべての置換基がアルキル、カルボキシ、カルボキシアルキル、アミノカルボニル、ヒドロキシ、アルコキシ、ハロゲン、ＣＦ３、アミノ、置換アミノ、シアノおよび−Ｓ（Ｏ）ｎＲ２０（Ｒ２０はアルキル、アリールまたはヘテロアリールであり、ｎは０、１または２である）から選択される１、２または３個の置換基で必要に応じてさらに置換されていてよいアルケニル基を指す。
【００６５】
「アルキニル」という用語は、好ましくは２〜２０個の炭素原子、より好ましくは２〜１０個の炭素原子、さらにより好ましくは２〜６個の炭素原子を有し、かつ少なくとも１個、好ましくは１〜６個のアセチレン（三重結合）不飽和部位を有する不飽和炭化水素のモノラジカルを指す。好ましいアルキニル基にはエチニル、（−Ｃ≡ＣＨ）、プロパルギル（すなわちプロパ−１−イン−３−イル、−ＣＨ２Ｃ≡ＣＨ）などが含まれる。アルキニルが窒素と結合している場合、その三重結合は窒素に対してα位であることはない。
【００６６】
「置換アルキニル」という用語は、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、シクロアルキル、シクロアルケニル、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アミノ、アミノカルボニル、アルコキシカルボニルアミノ、アジド、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシ、ケト、チオカルボニル、カルボキシ、カルボキシアルキル、アリールチオ、ヘテロアリールチオ、ヘテロシクリルチオ、チオール、アルキルチオ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、アミノスルホニル、アミノカルボニルアミノ、ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロオキシ、ヒドロキシアミノ、アルコキシアミノ、ニトロ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、ＳＯ２−アリールおよび−ＳＯ２−ヘテロアリールからなる群から選択される１、２、３、４または５個の置換基、好ましくは１、２または３個の置換基を有する上記で定義したようなアルキニル基であって、定義によって別段の制約がなされていない限り、すべての置換基がアルキル、カルボキシ、カルボキシアルキル、アミノカルボニル、ヒドロキシ、アルコキシ、ハロゲン、ＣＦ３、アミノ、置換アミノ、シアノおよび−Ｓ（Ｏ）ｎＲ２０（Ｒ２０はアルキル、アリールまたはヘテロアリールであり、ｎは０、１または２である）から選択される１、２または３個の置換基で必要に応じてさらに置換されていてよいアルキニル基を指す。
【００６７】
「アミノカルボニル」という用語は基−Ｃ（Ｏ）ＮＲ２２Ｒ２２を指し、ここで各Ｒ２２は独立に水素、アルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリルである、または両方のＲ１２基が一緒になって複素環式基（例えば、モルホリノ）を形成している。定義によって別段の制約がなされていない限り、すべての置換基は、アルキル、カルボキシ、カルボキシアルキル、アミノカルボニル、ヒドロキシ、アルコキシ、ハロゲン、ＣＦ３、アミノ、置換アミノ、シアノおよび−Ｓ（Ｏ）ｎＲ２０（Ｒ２０はアルキル、アリールまたはヘテロアリールであり、ｎは０、１または２である）から選択される１〜３個の置換基で必要に応じてさらに置換されていてよい。
【００６８】
「アルコキシカルボニルアミノ」という用語は基−ＮＲ３０Ｃ（Ｏ）ＯＲ３１を指し、ここでＲ３０は水素またはアルキルであり、Ｒ３１は、水素、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、置換アリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、複素環式および置換複素環式からなる群から選択される。
【００６９】
「アミノスルホニル」という用語は基−ＳＯ２ＮＲ３２Ｒ３３を指し、ここでＲ３２およびＲ３３は独立に、水素、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、置換アリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、複素環式および置換複素環式からなる群から選択され、Ｒ３２およびＲ３３は必要に応じてそれらが結合している窒素と一緒になって複素環式基または置換複素環式基を形成しており、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、複素環式および置換複素環式は本明細書で定義する通りである。
【００７０】
「アジド」という用語は基Ｎ３−を指す。
【００７１】
「アミノカルボニルアミノ」という用語は基−ＮＲ３４Ｃ（Ｏ）ＮＲ３５Ｒ３６を指し、ここでＲ３４は水素またはアルキルであり、Ｒ３５およびＲ３６は独立に、水素、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、置換アリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、複素環式および置換複素環式からなる群から選択され、Ｒ３５およびＲ３６は必要に応じてそれらが結合している窒素と一緒になって複素環式基または置換複素環式基を形成しており、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、複素環式および置換複素環式は本明細書で定義する通りである。
【００７２】
「アルコキシアミノ」という用語は基−ＮＲ３７ＯＲ３８を指し、ここでＲ３７は水素またはアルキルであり、Ｒ３８は、水素、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、置換アリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、複素環式および置換複素環式からなる群から選択される。
【００７３】
「アシルアミノ」という用語は、基−ＮＲ２３Ｃ（Ｏ）Ｒ２３を指し、ここで各Ｒ２３は独立に水素、アルキル、アリール、ヘテロアリールまたはヘテロシクリルである。定義によって別段の制約がなされていない限り、すべての置換基は、アルキル、カルボキシ、カルボキシアルキル、アミノカルボニル、ヒドロキシ、アルコキシ、ハロゲン、ＣＦ３、アミノ、置換アミノ、シアノおよび−Ｓ（Ｏ）ｎＲ２０（Ｒ２０はアルキル、アリールまたはヘテロアリールであり、ｎは０、１または２である）から選択される１〜３個の置換基で必要に応じてさらに置換されていてよい。
【００７４】
「アシルオキシ」という用語は、基−Ｏ（Ｏ）Ｃ−アルキル、−Ｏ（Ｏ）Ｃ−シクロアルキル、−Ｏ（Ｏ）Ｃ−アリール、−Ｏ（Ｏ）Ｃ−ヘテロアリールおよび−Ｏ（Ｏ）Ｃ−ヘテロシクリルを指す。定義によって別段の制約がなされていない限り、すべての置換基は、アルキル、カルボキシ、カルボキシアルキル、アミノカルボニル、ヒドロキシ、アルコキシ、ハロゲン、ＣＦ３、アミノ、置換アミノ、シアノまたは−Ｓ（Ｏ）ｎＲ２０（Ｒ２０はアルキル、アリールまたはヘテロアリールであり、ｎは０、１または２である）で必要に応じてさらに置換されていてよい。
【００７５】
「アリール」という用語は、単環（例えば、フェニル）もしくは多環（例えば、ビフェニル）または多重縮合（縮合）環（例えば、ナフチルまたはアントリル）を有する６〜２０個の炭素原子の芳香族炭素環式基を指す。好ましいアリールにはフェニル、ナフチルなどが含まれる。
【００７６】
「アリーレン」という用語は、上記で定義したようなアリール基のジラジカルを指す。この用語は、例えば１，４−フェニレン、１，３−フェニレン、１，２−フェニレン、１，４’−ビフェニレンなどの基で例示される。
【００７７】
アリールまたはアリーレン置換基についての定義によって別段の制約がなされていない限り、そうしたアリールまたはアリーレン基は、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、シクロアルキル、シクロアルケニル、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アミノ、アミノカルボニル、アルコキシカルボニルアミノ、アジド、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシ、ケト、チオカルボニル、カルボキシ、カルボキシアルキル、アリールチオ、ヘテロアリールチオ、ヘテロシクリルチオ、チオール、アルキルチオ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、アミノスルホニル、アミノカルボニルアミノ、ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロオキシ、ヒドロキシアミノ、アルコキシアミノ、ニトロ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、ＳＯ２−アリールおよび−ＳＯ２−ヘテロアリールからなる群から選択される１〜５個の置換基、好ましくは１〜３個の置換基で必要に応じて置換されていてよい。定義によって別段の制約がなされていない限り、すべての置換基は、アルキル、カルボキシ、カルボキシアルキル、アミノカルボニル、ヒドロキシ、アルコキシ、ハロゲン、ＣＦ３、アミノ、置換アミノ、シアノおよび−Ｓ（Ｏ）ｎＲ２０（Ｒ２０はアルキル、アリールまたはヘテロアリールであり、ｎは０、１または２である）から選択される１〜３個の置換基で必要に応じてさらに置換されていてよい。
【００７８】
「アリールオキシ」という用語は、アリール基が上記定義通りである基アリール−Ｏ−を指し、これにはやはり上記定義通りである必要に応じて置換されたアリール基が含まれる。「アリールチオ」という用語は、アリールが上記定義通りである基アリール−Ｓ−を指す。
【００７９】
「アミノ」という用語は、基−ＮＨ２を指す。
【００８０】
「置換アミノ」という用語は、基−ＮＲ２４Ｒ２４を指す。ここで、各Ｒ２４は水素、アルキル、シクロアルキル、カルボキシアルキル（例えば、ベンジルオキシカルボニル）、アリール、ヘテロアリールおよびヘテロシクリル（ただし両方のＲ１４基が水素であることはない）または基−Ｙ１２−Ｚ１２（Ｙ１２は必要に応じて置換されたアルキレンであり、Ｚ１２はアルケニル、シクロアルケニルまたはアルキニルである）からなる群から独立に選択され、定義によって別段の制約がされていない限り、すべての置換基はアルキル、カルボキシ、カルボキシアルキル、アミノカルボニル、ヒドロキシ、アルコキシ、ハロゲン、ＣＦ３、アミノ、置換アミノ、シアノ、および−Ｓ（Ｏ）ｎＲ２０（Ｒ２０はアルキル、アリールまたはヘテロアリールであり、ｎは０、１または２である）から選択される１〜３個の置換基で必要に応じてさらに置換されていてよい。
【００８１】
「カルボキシアルキル」という用語は、基−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキルまたは−Ｃ（Ｏ）Ｏ−シクロアルキルを指し、アルキルおよびシクロアルキルは本明細書で定義する通りであり、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、ハロゲン、ＣＦ３、アミノ、置換アミノ、シアノまたは−Ｓ（Ｏ）ｎＲ２０（Ｒ２０はアルキル、アリールまたはヘテロアリールであり、ｎは０、１または２である）で必要に応じてさらに置換されていてよい。
【００８２】
「シクロアルキル」という用語は、単環式環または多重縮合環を有する３〜２０個の炭素原子の炭素環基を指す。そうしたシクロアルキル基の例には、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロオクチルなどの単環構造、または、アダマンタニル、ビシクロ［２．２．１］ヘプタン、１，３，３−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタ−２−イル、（２，３，３−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタ−２−イル）などの多環構造、またはそれにアリール基が縮合している炭素環式基、例えばインダンなどが含まれる。
【００８３】
「置換シクロアルキル」という用語は、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、シクロアルキル、シクロアルケニル、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アミノ、アミノカルボニル、アルコキシカルボニルアミノ、アジド、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシ、ケト、チオカルボニル、カルボキシ、カルボキシアルキル、アリールチオ、ヘテロアリールチオ、ヘテロシクリルチオ、チオール、アルキルチオ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、アミノスルホニル、アミノカルボニルアミノ、ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロオキシ、ヒドロキシアミノ、アルコキシアミノ、ニトロ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、ＳＯ２−アリールおよび−ＳＯ２−ヘテロアリールからなる群から選択される１、２、３、４もしくは５個の置換基、好ましくは１、２もしくは３個の置換基を有するシクロアルキル基を指す。定義によって別段の制約がされていない限り、すべての置換基は、アルキル、カルボキシ、カルボキシアルキル、アミノカルボニル、ヒドロキシ、アルコキシ、ハロゲン、ＣＦ３、アミノ、置換アミノ、シアノおよび−Ｓ（Ｏ）ｎＲ２０（Ｒ２０はアルキル、アリールまたはヘテロアリールであり、ｎは０、１または２である）から選択される１、２または３個の置換基で必要に応じてさらに置換されていてよい。
【００８４】
「シクロアルケニル」という用語は、単環式環または多環式環を有し、少なくとも１つの＞Ｃ＝Ｃ＜環不飽和、好ましくは１〜２個所の＞Ｃ＝Ｃ＜環不飽和を有する３〜１０個の炭素原子の非芳香族環式アルキル基を指す。
【００８５】
「ハロゲン」または「ハロ」という用語は、フルオロ、ブロモ、クロロおよびヨードを指す。
【００８６】
「アシル」という用語は基−Ｃ（Ｏ）Ｒ２５を意味する。ここでＲ２５は水素、必要に応じて置換されたアルキル、必要に応じて置換されたシクロアルキル、必要に応じて置換されたヘテロシクリル、必要に応じて置換されたアリールおよび必要に応じて置換されたヘテロアリールである。
【００８７】
「ヘテロアリール」という用語は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４もしくは１５個の炭素原子を有し、少なくとも１個の環内に酸素、窒素および硫黄から選択される１、２、３もしくは４個のヘテロ原子を有する芳香族環式基（すなわち、完全不飽和）から誘導される基を指す。そうしたヘテロアリール基は、単環（例えば、ピリジルもしくはフリル）または多重縮合環（例えば、インドリジニル、ベンゾチアゾリルもしくはベンゾチエニル）を有することができる。ヘテロアリールの例には、これらに限定されないが、［１，２，４］オキサジアゾール、［１，３，４］オキサジアゾール、［１，２，４］チアジアゾール、［１，３，４］チアジアゾール、ピロール、イミダゾール、ピラゾール、ピリジン、ピラジン、ピリミジン、ピリダジン、インドリジン、イソインドール、インドール、インダゾール、プリン、キノリジン、イソキノリン、キノリン、フタラジン、ナフチルピリジン、キノキサリン、キナゾリン、シンノリン、プテリジン、カルバゾール、カルボリン、フェナントリジン、アクリジン、フェナントロリン、イソチアゾール、フェナジン、イソオキサゾール、フェノキサジン、フェノチアジン、イミダゾリジン、イミダゾリンなど、ならびにヘテロアリール化合物を含有するＮ−オキシドおよびＮ−アルコキシ−窒素誘導体、例えばピリジン−Ｎ−オキシド誘導体が含まれる。
【００８８】
「ヘテロアリーレン」という用語は、上記で定義したようなヘテロアリール基のジラジカルを指す。この用語は、例えば、２，５−イミダゾレン、３，５−［１，２，４］オキサジアゾレン、２，４−オキサゾレン、１，４−ピラゾレンなどの基で例示される。例えば１，４−ピラゾレンは：
【００８９】
【化５】
2013533882.tif 000007
である。ここでＡは結合点を表す。
【００９０】
ヘテロアリールまたはヘテロアリーレン置換基についての定義によって別段の制約がなされていない限り、そうしたヘテロアリールまたはヘテロアリーレン基は、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、シクロアルキル、シクロアルケニル、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アミノ、アミノカルボニル、アルコキシカルボニルアミノ、アジド、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシ、ケト、チオカルボニル、カルボキシ、カルボキシアルキル、アリールチオ、ヘテロアリールチオ、ヘテロシクリルチオ、チオール、アルキルチオ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、アミノスルホニル、アミノカルボニルアミノ、ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロオキシ、ヒドロキシアミノ、アルコキシアミノ、ニトロ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、ＳＯ２−アリールおよび−ＳＯ２−ヘテロアリールからなる群から選択される１〜５個の置換基、好ましくは１〜３個の置換基で必要に応じて置換されていてよい。定義によって別段の制約がなされていない限り、すべての置換基は、アルキル、カルボキシ、カルボキシアルキル、アミノカルボニル、ヒドロキシ、アルコキシ、ハロゲン、ＣＦ３、アミノ、置換アミノ、シアノおよび−Ｓ（Ｏ）ｎＲ２０（Ｒ２０はアルキル、アリールまたはヘテロアリールであり、ｎは０、１または２である）から選択される１〜３個の置換基で必要に応じてさらに置換されていてよい。
【００９１】
「ヘテロアラルキル」という用語は、ヘテロアリールおよびアルキレンが本明細書で定義されている、アルキレン基と共有結合しているヘテロアリール基を指す。「必要に応じて置換されたヘテロアラルキル」は、必要に応じて置換されたアルキレン基と共有結合している必要に応じて置換されたヘテロアリール基を指す。そうしたヘテロアラルキル基の例は、３−ピリジルメチル、キノリン−８−イルエチル、４−メトキシチアゾール−２−イルプロピルなどである。
【００９２】
「ヘテロアリールオキシ」という用語は、基ヘテロアリール−Ｏ−を指す。
【００９３】
「ヘテロシクリル」という用語は、１〜４０個の炭素原子を有し、その環内に窒素、硫黄、リンおよび／または酸素から選択される１〜１０個のヘテロ原子、好ましくは１、２、３もしくは４個のヘテロ原子を有する単環または多重縮合環を有するモノラジカル飽和または部分不飽和基を指す。複素環式基は、単環または多重縮合環を有することができ、それらにはテトラヒドロフラニル、モルホリノ、ピペリジニル、ピペラジノ、ジヒドロピリジノなどが含まれる。
【００９４】
複素環式置換基についての定義によって別段の制約がなされていない限り、そうした複素環式基は、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、シクロアルキル、シクロアルケニル、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アミノ、アミノカルボニル、アルコキシカルボニルアミノ、アジド、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシ、ケト、チオカルボニル、カルボキシ、カルボキシアルキル、アリールチオ、ヘテロアリールチオ、ヘテロシクリルチオ、チオール、アルキルチオ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、アミノスルホニル、アミノカルボニルアミノ、ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロオキシ、ヒドロキシアミノ、アルコキシアミノ、ニトロ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、ＳＯ２−アリールおよび−ＳＯ２−ヘテロアリールからなる群から選択される１、２、３、４または５個、好ましくは１、２または３個の置換基で必要に応じて置換されていてよい。定義によって別段の制約がなされていない限り、すべての置換基は、アルキル、カルボキシ、カルボキシアルキル、アミノカルボニル、ヒドロキシ、アルコキシ、ハロゲン、ＣＦ３、アミノ、置換アミノ、シアノおよび−Ｓ（Ｏ）ｎＲ２０（Ｒ２０はアルキル、アリールまたはヘテロアリールであり、ｎは０、１または２である）から選択される１〜３個の置換基で必要に応じてさらに置換されていてよい。
【００９５】
「チオール」または「チオ」という用語は、基−ＳＨを指す。
【００９６】
「アルキルチオ」という用語は、アルキルが本明細書で定義する通りである基−Ｓ−アルキルを指す。
【００９７】
「置換アルキルチオ」という用語は、基−Ｓ−置換アルキルを指す。
【００９８】
「アリールチオ」という用語は、アリールが本明細書で定義する通りである基−Ｓ−アリールを指す。
【００９９】
「ヘテロアリールチオール」または「ヘテロアリールチオ」という用語は、そのヘテロアリール基が上記で定義した通りであり、上記で定義したような必要に応じて置換されたヘテロアリール基をやはり含む基−Ｓ−ヘテロアリールを指す。
【０１００】
「ヘテロシクリルチオ」は基−Ｓ−ヘテロシクリルを指す。
【０１０１】
「スルホキシド」という用語は、Ｒ２６がアルキル、アリールまたはヘテロアリールである基−Ｓ（Ｏ）Ｒ２６を指す。「置換スルホキシド」は、Ｒ２７が本明細書で定義したような置換アルキル、置換アリールまたは置換ヘテロアリールである基−Ｓ（Ｏ）Ｒ２７を指す。
【０１０２】
「スルホン」という用語は、Ｒ２８がアルキル、アリールまたはヘテロアリールである基−Ｓ（Ｏ）２Ｒ２８を指す。「置換スルホン」は、Ｒ２９が本明細書で定義したような置換アルキル、置換アリールまたは置換ヘテロアリールである基−Ｓ（Ｏ）２Ｒ２９を指す。
【０１０３】
「ケト」または「オキソ」という用語は基−Ｃ（Ｏ）−を指す。「チオカルボニル」という用語は基−Ｃ（Ｓ）−を指す。「カルボキシ」という用語は基−Ｃ（Ｏ）−ＯＨを指す。
【０１０４】
「必要に応じた（ｏｐｔｉｏｎａｌ）」または「必要に応じて（ｏｐｔｉｏｎａｌｌｙ）」は、その次に記載されるイベントまたは状況が起こっても起こらなくてもよく、その記載が前記イベントまたは状況が起こる場合とそれが起こらない場合とを含むことを意味する。
【０１０５】
「式Ｉ、式ＩＩまたは式ＩＩＩの化合物」という用語は、開示されているような本開示の化合物ならびにそうした化合物の薬学的に許容される塩、薬学的に許容されるエステル、プロドラッグ、水和物および多形体を包含するものとする。さらに、本開示の化合物は１つ以上の不斉中心を保持することができ、それらはラセミ混合物として、または個々の鏡像異性体またはジアステレオ異性体として生成させることができる。本開示の任意の所与化合物において存在する立体異性体の数は存在する不斉中心の数に依存する（ｎが不斉中心の数である場合、２ｎ個の立体異性体が可能である）。個々の立体異性体は、合成のある適切な段階で中間体のラセミもしくは非ラセミ混合物を分割するか、または慣用的な手段により本開示の化合物を分割することによって得ることができる。個々の立体異性体（個々の鏡像異性体およびジアステレオ異性体を含む）ならびに立体異性体のラセミおよび非ラセミ混合物は本開示の範囲内に包含され、別段の具体的な指定がない限り、そのすべては本明細書の構造物で表されているものとする。
【０１０６】
「異性体」は、同一分子式を有する異なる化合物である。
【０１０７】
「立体異性体」は、その原子が空間的に異なって配置されている点だけが異なる異性体である。
【０１０８】
「鏡像異性体」は、互いに重ね合わせ不可能な鏡像である立体異性体の対である。鏡像異性体の１：１の対の混合物は「ラセミ」混合物である。「（±）」という用語は適宜ラセミ混合物を指定するのに用いられる。
【０１０９】
「ジアステレオ異性体」は、少なくとも２個の不斉原子を有するが、それらが互いに鏡像ではない立体異性体である。
【０１１０】
絶対立体化学はカーン−インゴルド−プレローグＲ−Ｓ系（Ｃａｈｎ−Ｉｎｇｏｌｄ−Ｐｒｅｌｏｇ  Ｒ−Ｓ  ｓｙｓｔｅｍ）にしたがって特定される。化合物が純粋な鏡像異性体である場合、各キラル炭素でのその立体化学はＲかまたはＳで特定することができる。その絶対配置が不明である分割された化合物は、それらがナトリウムＤ線の波長で偏光面を回転させる方向に応じて（＋）または（−）（右旋性または左旋性）と指定される。
【０１１１】
「互変異性体」という用語は、プロトンの位置が異なる交互形態の化合物、例えばエノール、ケト、およびイミンエナミン互変異性体、または環ＮＨ部分と環＝Ｎ部分の両方と結合した環原子を含有する互変異性形態のヘテロアリール基、例えばピラゾール、イミダゾール、ベンズイミダゾール、トリアゾールおよびテトラゾールを指す。
【０１１２】
本明細書で用いる「プロドラッグ」という用語は、インビボで変換され、かつ／またはその分子の残りの部分から切り離されて活性薬物、薬学的に許容されるその塩または生物学的に活性なその代謝産物を提供することができる化学基を含む式Ｉ、ＩＩまたはＩＩＩの化合物を指す。適切な基は当該分野で周知であり、具体的には：カルボン酸部分について、例えば、これらに限定されないが、アルキルアルコール、置換アルキルアルコール、ヒドロキシ置換アリールおよびヘテロアリールなどから誘導されるものを含むエステル；アミド；ヒドロキシメチル、アルデヒドおよびその誘導体から選択されるプロドラッグが含まれる。そうしたプロドラッグの構造は以下に示す式ＩＩＩのものであってよい。
【０１１３】
多くの場合、本開示の化合物は、アミノおよび／またはカルボキシル基またはそれと類似した基が存在するために酸塩および／または塩基塩を形成することができる。「薬学的に許容される塩」という用語は、式Ｉ、ＩＩまたはＩＩＩの化合物の生物学的効果および特性を保持し、生物学的にそして別の方法で有害ではない塩を指す。薬学的に許容される塩基付加塩は、無機および有機の塩基から調製することができる。無機塩基から誘導される塩のほんの一例には、ナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩、アンモニウム塩、カルシウム塩およびマグネシウム塩が含まれる。有機塩基から誘導される塩には、これらに限定されないが、第一、第二および第三アミン、例えばアルキルアミン、ジアルキルアミン、トリアルキルアミン、置換アルキルアミン、ジ（置換アルキル）アミン、トリ（置換アルキル）アミン、アルケニルアミン、ジアルケニルアミン、トリアルケニルアミン、置換アルケニルアミン、ジ（置換アルケニル）アミン、トリ（置換アルケニル）アミン、シクロアルキルアミン、ジ（シクロアルキル）アミン、トリ（シクロアルキル）アミン、置換シクロアルキルアミン、二置換シクロアルキルアミン、三置換シクロアルキルアミン、シクロアルケニルアミン、ジ（シクロアルケニル）アミン、トリ（シクロアルケニル）アミン、置換シクロアルケニルアミン、二置換シクロアルケニルアミン、三置換シクロアルケニルアミン、アリールアミン、ジアリールアミン、トリアリールアミン、ヘテロアリールアミン、ジヘテロアリールアミン、トリヘテロアリールアミン、複素環式アミン、二複素環式アミン、三複素環式アミン、アミン上の置換基のうちの少なくとも２つが異なっており、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール、複素環式などからなる群から選択される混合されたジ−アミンおよびトリ−アミンの塩が含まれる。２つまたは３つの置換基がアミノ窒素と一緒に複素環式またはヘテロアリール基を形成しているアミンも含まれる。
【０１１４】
適切なアミンの具体的な例には、ほんの一例だが、イソプロピルアミン、トリメチルアミン、ジエチルアミン、トリ（イソ−プロピル）アミン、トリ（ｎ−プロピル）アミン、エタノールアミン、２−ジメチルアミノエタノール、トロメタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、カフェイン、プロカイン、ヒドラバミン、コリン、ベタイン、エチレンジアミン、グルコサミン、Ｎ−アルキルグルカミン、テオブロミン、プリン、ピペラジン、ピペリジン、モルホリン、Ｎ−エチルピペリジンなどが含まれる。
【０１１５】
薬学的に許容される酸付加塩は無機および有機の酸から調製することができる。無機酸から誘導される塩には、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などが含まれる。有機酸から誘導される塩には、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、シュウ酸、リンゴ酸、マロン酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、桂皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエン−スルホン酸、サリチル酸などが含まれる。
【０１１６】
本明細書で用いる「薬学的に許容されるキャリア」には、ありとあらゆる溶媒、分散媒体、コーティング剤、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤ならびに吸収遅延剤などが含まれる。薬学的に活性な物質のためのそうした媒体および剤の使用は当該分野で周知である。任意の慣用的な媒体および剤が活性成分と適合しない場合を除いて、治療用組成物においてその使用が想定される。補助的な活性成分をその組成物に組み込むことも可能である。
【０１１７】
２．命名法
【０１１８】
【化６】
2013533882.tif 000008
本開示の化合物の命名および番号付けは、８−｛４−［５−（２−メトキシフェニル）−［１，２，４］−オキサジアゾール−３−イルメトキシ］−フェニル｝−１，３−ジプロピル−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオンと称される、Ｒ１がｎ−プロピルであり、Ｒ２がｎ−プロピルであり、Ｒ３が水素、Ｘがフェニレンであり、Ｙが−Ｏ−（ＣＨ２）であり、Ｚが５−（２−メトキシフェニル）−［１，２，４］−オキサジアゾール−３−イルである代表的な式Ｉの化合物で例示される。
【０１１９】
３．方法
上述したように、本開示は、肺高血圧症を処置する方法に関する。その方法は、肺高血圧症の処置を必要とする患者に治療有効量のＡ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストを投与する工程を含む。
【０１２０】
肺高血圧症、分類および臨床パラメーター
本開示の方法によって処置される肺高血圧症の状態は、世界保健機関（ＷＨＯ）またはＤａｎａ  Ｐｏｉｎｔ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ（２００８年）の分類（例えばＳｉｍｏｎｎｅａｕら、Ｊ  Ａｍ  Ｃｏｌｌ  Ｃａｒｄｉｏ、５４巻（１号）：Ｓ４３〜５４頁（２００９年）を参照されたい）によって認められている状態：
１．肺動脈高血圧症（ＰＡＨ）
１．１．特発性ＰＡＨ
１．２．遺伝性のもの
１．２．１．骨形態発生タンパク質受容体２型（ＢＭＰＲ２）
１．２．２．アクチビン受容体様キナーゼ１型（ＡＬＫ１）、エンドグリン（遺伝性出血性毛細管拡張症を伴うまたは伴わない）
１．２．３．未知のもの
１．３．薬物および毒素誘発性
１．４．以下のものに関連するもの
１．４．１．結合組織病
１．４．２．ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）感染症
１．４．３．門脈圧亢進症
１．４．４．先天性心疾患
１．４．５．住血吸虫症
１．４．６．慢性溶血性貧血
１．５．新生児の持続性肺高血圧症
１’．肺静脈閉塞性疾患（ＰＶＯＤ）および／または肺毛細血管腫症（ＰＣＨ）
２．左心疾患に起因する肺高血圧症
２．１．収縮期性機能障害
２．２．拡張期性機能障害
２．３．弁膜疾患
３．肺疾患および／または低酸素症に起因する肺高血圧症
３．１．慢性閉塞性肺疾患
３．２．間質性肺疾患
３．３．混合した拘束性および閉塞性パターンを有する他の肺疾患
３．４．睡眠呼吸障害（ｓｌｅｅｐ−ｄｉｓｏｒｄｅｒｅｄ  ｂｒｅａｔｈｉｎｇ）
３．５．肺胞性低換気障害
３．６．高い高度への慢性的曝露
３．７．発育異常
４．慢性血栓塞栓性肺高血圧症（ＣＴＥＰＨ）
５．不明な多因子機序を有する肺高血圧症
５．１．血液学的障害：骨髄増殖性障害、脾臓摘出
５．２．全身性障害：サルコイドーシス、肺ランゲルハンス細胞組織球症：リンパ管平滑筋腫症、神経線維腫症、脈管炎
５．３．代謝障害：グリコーゲン貯蔵症、ゴーシェ病、甲状腺障害
５．４．その他：腫瘍性閉塞症、線維形成性縦隔炎、透析による慢性腎不全
の任意の１つ以上を含むことができる。
【０１２１】
一態様では、肺高血圧症の状態は、ＰＡＨ（ＷＨＯ第１群）、例えば特発性ＰＡＨ、家族性ＰＡＨまたは別の疾患もしくは状態に関連するＰＡＨを含む。
【０１２２】
ベースラインの肺高血圧症は、例えば、肺高血圧症を有する患者の疾病重症度の尺度であるＷＨＯの機能クラスによって測られるような軽度、中程度または重度であってよい。ＷＨＯの機能性分類は、ニューヨーク心臓協会（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  Ｈｅａｒｔ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）（ＮＹＨＡ）システムを適合させたものであり、例えば疾患の増悪および処置に対する応答のモニタリングにおいて、活動耐容を定性的に評価するために日常的に使用されている（Ｒｕｂｉｎ（２００４年）Ｃｈｅｓｔ  １２６巻：７〜１０頁）。４つの機能クラスがＷＨＯシステムにおいて認められている：
クラスＩ：身体活動の制限をもたらすことのない肺高血圧症；通常の身体活動によって過度の呼吸困難もしくは疲労、胸痛または失神寸前（ｎｅａｒ  ｓｙｎｃｏｐｅ）は引き起こされない；
クラスＩＩ：身体活動にわずかな制限をもたらす肺高血圧症；患者は休息していれば快適である；通常の身体活動によって過度の呼吸困難もしくは疲労、胸痛または失神寸前が引き起こされる；
クラスＩＩＩ：身体活動の著しい制限をもたらす肺高血圧症；患者は休息していれば快適である；通常の活動に至らない活動でも過度の呼吸困難もしくは疲労、胸痛または失神寸前が引き起こされる；
クラスＩＶ：症状を伴わずにいかなる身体活動も実行することができない結果となる肺高血圧症；患者は右心室不全の兆候を表す；休息していても呼吸困難および／または疲労が認められることがある；どんな身体活動であっても不快が増大する。
【０１２３】
一態様では、本方法は、無症候性肺高血圧症としても公知であるクラスＩを処置することを対象とする。
【０１２４】
一態様では、ベースラインで被験体は、少なくともＷＨＯクラスＩＩ、例えばＷＨＯクラスＩＩまたはクラスＩＩＩの肺高血圧症（例えば、ＰＡＨ）を示す。
【０１２５】
別の態様では、ベースラインで被験体は、少なくとも約３０ｍｍＨｇ、例えば少なくとも約３５、少なくとも約４０、少なくとも約４５または少なくとも約５０ｍｍＨｇの休息時平均ＰＡＰを示す。
【０１２６】
被験体に適用された場合、本開示の方法は以下の目的：
（ａ）例えば平均ＰＡＰもしくはＰＶＲを低下させる、または肺毛細管楔入圧（ＰＣＷＰ）もしくは左心室拡張終期圧（ＬＶＥＤＰ）を上昇させる、ベースラインに対する１つ以上の血行力学的パラメーターのより正常なレベルへの調節；
（ｂ）例えば６分間歩行距離（６ＭＷＤ）のテストで測定して例示されるような運動能力を増進させる、またはボルグ呼吸困難指数（ＢＤＩ）を低下させる、ベースラインに対する肺機能の改善；
（ｃ）ベースラインに対する１つ以上の生活の質パラメーターの改善、例えばＳＦ−３６（登録商標）健康調査機能スケールの少なくとも１つにおけるスコアの増大；
（ｄ）例えば、より低いＷＨＯ機能クラスへの移行による、その状態の重症度におけるベースラインに対する全般的改善；
（ｅ）予後の改善、臨床的悪化までの時間の延長もしくは臨床的悪化の可能性の減少、生活の質の増進（例えば、より高いＷＨＯ機能クラスへの進行の遅延またはＳＦ−３６（登録商標）健康調査パラメーターなどの１つ以上の生活の質パラメーターの低下の減速）および／または寿命の増進を含む、処置なしでの期待値に対する、ある期間の処置に続く臨床結果の改善（例えば、プラセボとの比較によって測定される臨床試験セッティングにおいて）；および／または、
（ｆ）臨床結果を予測できる１つ以上の分子マーカー（例えば、エンドセリン−１（ＥＴ−１）、心臓トロポニンＴ（ｃＴｎＴ）またはＢ型ナトリウム利尿ペプチド（ＢＮＰ）の血漿濃度）のより正常なレベルへの調節
の１つ以上を達成することができる。
【０１２７】
肺高血圧症、特にＰＡＨを処置するための治療有効量のＡ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストを構成するものは、処置を受ける特定の肺高血圧症の状態、その状態の重症度、個々の被験体の体重および他のパラメーターに応じて変えることができ、本明細書の開示にもとづいて医師または臨床医は過度の実験なしでそれを容易に構築することができる。しかし、想定される用量を以下に記載する。
【０１２８】
肺高血圧症療法の有用性（ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｎｅｓｓ）を評価するための種々の臨床的パラメーターおよび基準を以下に記載するが、これらもやはり当該分野で公知である。したがって、Ａ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストの有用性は、これらのパラメーターまたは基準で評価することができる。さらに、他の薬剤と比較したＡ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストの相対的有用性は、これらの臨床的パラメーターまたは基準ならびに非臨床的セッティングで決定することができる。そうした非臨床的セッティングの例には、これに限定されないが動物モデルが含まれる。動物モデルの非限定的な例を実施例において提供する。
【０１２９】
Ａ．臨床的パラメーターでの改善
一態様では、処置を受けた被験体は、処置期間の間またはその後に、
（ａ）ベースラインに対する、肺高血圧症の状態の指標となる１つ以上の血行力学的パラメーターのより正常なレベルへの調節；
（ｂ）ベースラインに対する運動能力の増進；
（ｃ）ベースラインに対するボルグ呼吸困難指数（ＢＤＩ）の低下；
（ｄ）ベースラインに対する１つ以上の生活の質パラメーターの改善；および／または
（ｅ）より低いＷＨＯ機能クラスへの移行
の少なくとも１つを体験する。
【０１３０】
適切な任意の運動能力尺度を用いることができるが；特に適切な尺度は、被験体が６分間でどれだけ遠くまで歩くことができるか、すなわち６分間歩行距離（６ＭＷＤ）を測る６分間歩行テスト（６ＭＷＴ）によって得られる。
【０１３１】
ボルグ呼吸困難指数（ＢＤＩ）は、知覚された呼吸困難（呼吸不快）を評価するための数値スケールである。これは、６分間歩行テスト（６ＭＷＴ）が完了した後の息切れの程度を測定するものであり、ＢＤＩが０であることは息切れがないことを表し、１０は最大の息切れを表す。
【０１３２】
種々の態様では、有効量の肺高血圧症治療は、肺高血圧症の状態の指標である１つ以上の血行力学的パラメーターをより正常なレベルの方へ調節する。そうした１つの態様では、平均ＰＡＰは、例えば、ベースラインに対して少なくとも約３ｍｍＨｇまたは少なくとも約５ｍｍＨｇ低下する。そうした別の態様では、ＰＶＲは低下する。さらにまた別のそうした態様では、ＰＣＷＰまたはＬＶＥＤＰは上昇する。
【０１３３】
種々の態様において、有効量の肺高血圧症治療はベースラインに対して肺機能を改善する。肺機能の任意の尺度を用いることができ；例示的には６ＭＷＤが増大するかまたはＢＤＩが低下する。
【０１３４】
そうした１つの態様では、６ＭＷＤはベースラインから、少なくとも約１０メートル、例えば少なくとも約２０メートルまたは少なくとも約３０メートル増大する。多くの場合、本実施形態の方法は、６ＭＷＤを５０メートルほどまたはさらにそれ以上にまで増大させるのに効果があることが分かる。
【０１３５】
そうした別の態様では、例示的に６ＭＷＴにしたがって測定して、ＢＤＩは、指標ポイントがベースラインから少なくとも約０．５低下する。多くの場合、本実施形態の方法は、完全に１指標ポイントほどまたはさらにそれ以上ＢＤＩを低下させるのに効果があることが分かる。
【０１３６】
ＳＦ−３６（登録商標）健康調査は、８つの健康パラメーター：身体機能、身体的健康問題に起因する役割制限、肉体的疼痛、全体的な健康、活力（エネルギーおよび疲労）、社会生活機能、情緒的な問題に起因する役割制限およびメンタルヘルス（心理的苦悩および精神的な安らぎ）を測る自己報告による多項目スケールを提供する。この調査は、身体的要素の集約および精神的要素の集約も提供する。
【０１３７】
種々の態様において、有効量の肺高血圧症治療は、例示的に、ＳＦ−３６（登録商標）調査で記録された健康パラメーターの１つ以上により測定して、被験体の生活の質を改善することができる。例えば、ＳＦ−３６（登録商標）身体的健康関連パラメーター（身体的健康、身体的役割（ｒｏｌｅ−ｐｈｙｓｉｃａｌ）、肉体的疼痛および／または全体的な健康）の少なくとも１つ、および／またはＳＦ−３６（登録商標）メンタルヘルス関連パラメーター（活力、社会生活機能、情緒的な役割および／またはメンタルヘルス）の少なくとも１つにおいて、ベースラインに対して改善が得られる。そうした改善は、１つ以上の任意のパラメーターについてのスケールで少なくとも１、例えば少なくとも２または少なくとも３ポイントの増大という形をとることができる。
【０１３８】
Ｂ．予後の改善
別の実施形態では、本開示の処置方法は、肺高血圧症の状態を有する被験体の予後を改善することができる。この実施形態の処置は、（ａ）処置期間の間の臨床的悪化イベントの可能性の減少、および／または（ｂ）ベースラインからの、血清中の脳性ナトリウム利尿ペプチド（ＢＮＰ）濃度の低下（ベースラインで、被験体におけるその状態の最初の診断からの時間は約２年以内である）を提供することができる。
【０１３９】
種々の態様において、最初の診断からの時間は、例えば約１．５年以内、約１年以内、約０．７５年以内または約０．５年以内であってよい。一態様では、Ａ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストの投与を、ほぼすぐに、例えば診断されてから約１ヵ月以内または約１週間以内に開始することができる。
【０１４０】
この実施形態では、その処置期間は定められた効果が現れるのに十分な時間である。一般に、処置が長期間続行されればされるほど、その利益はより大きく、かつより持続する。例示的には、処置期間は少なくとも約１ヵ月、例えば少なくとも約３ヵ月、少なくとも約６ヵ月または少なくとも約１年間であってよい。いくつかの場合、投与を、被験体の生涯の実質的に残りの期間続行することができる。
【０１４１】
臨床的悪化イベント（ＣＷＥ）には、死、肺移植、肺高血圧症の状態のための入院、心房中隔切開術、追加の肺高血圧症治療の開始またはそれを集合したものが含まれる。したがって、本開示の処置は、処置期間の間での死、肺移植、肺動脈高血圧症のための入院、心房中隔切開術および／または追加の肺高血圧症治療の開始の可能性を少なくとも約２５％、例えば少なくとも約５０％、少なくとも約７５％または少なくとも約８０％の低減をもたらすのに効果的であり得る。
【０１４２】
肺高血圧症の状態の臨床的悪化までの時間は、Ａ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニスト処置計画の開始時点からＣＷＥの最初の発生までの時間と定義される。
【０１４３】
本実施形態による肺高血圧症の状態は、上記したＷＨＯまたはＶｅｎｉｃｅ（２００３年）分類における状態の任意の１つ以上を含むことができる。一態様では、その状態は、ＰＡＨ（ＷＨＯ第１群）、例えば特発性ＰＡＨ、家族性ＰＡＨまたは別の疾患に関連するＰＡＨを含む。
【０１４４】
本実施形態の種々の態様では、ベースラインで被験体は、上記したような少なくともＷＨＯクラスＩＩ、例えばクラスＩＩ、クラスＩＩＩまたはクラスＩＶのＰＨ（例えば、ＰＡＨ）を示す。
【０１４５】
より特定の実施形態では、ベースラインで被験体は、少なくとも約３０ｍｍＨｇ、例えば少なくとも約３５ｍｍＨｇまたは少なくとも約４０ｍｍＨｇの休息時ＰＡＰを有する。
【０１４６】
Ｃ．寿命の延長
さらにまた別の実施形態では、本開示の処置方法は、肺高血圧症の状態を有する被験体の寿命を処置の開始時点から少なくとも約３０日間延長させることができる。この方法の変形および例示的様式は上記した通りである。
【０１４７】
Ｄ．臨床的悪化までの時間の延長
さらに別の実施形態では、本発明の方法は、肺高血圧症の状態を有する被験体における臨床的悪化までの時間を延長し、臨床的悪化イベントの可能性を少なくとも約２５％減少させることができる。この方法の変形および例示的様式は上記した通りである。
【０１４８】
Ｅ．他の処置目的
本明細書の上に記載した方法のいずれにおいても、被験体は雄性であっても雌性であってもよい。例えば、Ａ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストを、指定されたその変形および例示的様式を含む上記方法のいずれかによって雌性被験体に投与することができる。あるいは、Ａ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストを、指定されたその変形および例示的様式を含む上記方法のいずれかによって雄性被験体、例えば生殖的に活発な雄性被験体に投与することができる。
【０１４９】
別の実施形態では、本明細書で提供する方法は、その被験体の生殖能力が実質的に損なわれていない、生殖的に活発な雄性被験体の肺高血圧症の状態を処置するのに有用である。本発明の関連で「実質的に損なわれていない（ｎｏｔ  ｓｕｂｓｔａｎｔｉａｌｌｙ  ｃｏｍｐｒｏｍｉｓｅｄ）」ということは、精子形成が処置によって実質的に低下しておらず、かつ精子形成の低下を示すかまたはそれに関連するホルモンの変化が誘導されていないことを意味する。雄性の生殖能力は、例えば精液サンプルからの精子数で直接評価するか、または、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、黄体形成ホルモン（ＬＨ）、インヒビンＢおよびテストステロンなどのホルモンの変化によって間接的に評価することができる。
【０１５０】
一実施形態では、そのＰＡＨが（ａ）先天性心臓欠陥、（ｂ）門脈圧亢進症、（ｃ）食欲不振誘発因子以外の薬物または毒素の使用、（ｄ）甲状腺障害、（ｅ）グリコーゲン貯蔵症、（ｆ）ゴーシェ病、（ｇ）遺伝性出血性毛細管拡張症、（ｈ）異常ヘモグロビン症、（ｉ）骨髄増殖性障害、（ｊ）脾臓摘出、（ｋ）肺静脈閉塞性疾患および／または（ｌ）肺毛細血管腫症の１つ以上に関連する、被験体のＰＡＨを処置するための方法を提供する。この方法の変形および例示的様式は本明細書の上に記載した通りである。
【０１５１】
さらに、別の実施形態では、被験体のＷＨＯ第２〜５群に分類される肺高血圧症の状態を処置するための方法を提供する。特定の実施形態では、肺高血圧症（ｈｙｐｅｔｅｎｓｉｏｎ）の状態はＷＨＯ第３群に分類される。この方法の変形および例示的様式は本明細書の上に記載した通りである。一態様では、この状態は、左側の心房または心室の心臓疾患および／または左側の弁の心臓疾患を含む。別の態様では、この状態は、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、間質性肺疾患（ＩＬＤ）、睡眠呼吸障害、肺胞性低換気障害、高い高度への慢性的曝露、発育異常、近位および／または遠位肺動脈の血栓塞栓性閉塞、非血栓性肺塞栓症、サルコイドーシス、組織球増殖症Ｘ、リンパ管腫症および／または肺血管の圧迫の１つ以上に関連する。
【０１５２】
以下で論じるように、Ａ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストは、様々な仕方で投与することができる。
【０１５３】
肺高血圧症の処置方法
１）密な壁肥厚などの血管リモデリング；２）ヒト肺動脈平滑筋細胞（ＨＰＡＳＭ）およびヒト肺内皮細胞（ＨＰＡＥＣ）における過剰増殖；３）ＨＰＡＳＭおよびＨＰＡＥＣにおける、炎症性サイトカインＩＬ−６（Ｓｔｅｉｎｅｒら、（２００９年））を含むサイトカイン、ＩＬ−８、エンドセリン、トロンボキサンのレベルの上昇を含む肺高血圧症の病因に、幾つかの因子が関与している。
【０１５４】
ＰＨの第３群はしばしば、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）および肺線維症などの基礎をなす慢性肺疾患に関連する。この群には、慢性気管支拡張症、嚢胞性線維症、および主に肺の下部域の肺線維症と主に肺の上部域の気腫の組合せを特徴とする新たに特定された症候群が含まれる。
【０１５５】
肺高血圧症に関連する因子のいくつかは、Ａ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストの投与により処置することができることをここに見出した。特に、Ａ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストを投与することによって、壁肥厚という形態の血管リモデリングおよび肺組織における増殖を減弱させることができることを発見した。さらに、ＨＰＡＳＭおよびＨＰＡＥＣのどちらかにＡ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストを投与すると、ＩＬ−６、顆粒状コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）などの追加の炎症性分子および／またはＩＬ−８などのケモカインのレベルを低下させることを発見した。なお、さらに、Ａ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストの投与によってＨＰＡＳＭの増殖および遊走が阻害されることを発見した。
【０１５６】
これらの発見は、Ａ２Ｂアデノシン受容体がＨＰＡＳＭとＨＰＡＥＣの両方において高度に発現されるという目ざましくかつ予想外の発見にもとづいている。この結果を、実施例３のプロトコルで得た図１および図２に示す。実際、Ａ２Ｂ受容体サブタイプは、Ａ１、Ａ２ＡおよびＡ３を含む他の３つのサブタイプよりずっと高度に発現されている。肺高血圧症をＡ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストで処置できるということを実証するために、いくつかのインビボでの試験を実施した。
【０１５７】
最初に、動物モデルで試験して、Ａ２Ｂアンタゴニストによる処置で血管壁肥厚を減弱させることができるかどうかを決定した。図３および図４で認めることができ、実施例４および１３に記載するように、化合物Ａはブレオマイシンに曝露されたＡＤＡノックアウトマウスおよびＡ２Ｂ受容体ＫＯマウスにおいて血管壁肥厚を減弱させており、血管壁肥厚はもはや増進しなかった。このことから、Ａ２Ｂ受容体が、肺高血圧症の病因において非常に重要であることが示唆された。
【０１５８】
次に、ＨＰＡＥＣおよびＨＰＡＳＭを試験して、Ａ２Ｂ受容体の活性化、それに続くＡ２Ｂアンタゴニストによるその受容体の不活性化が、炎症に関連する種々のサイトカインおよびケモカインならびにリモデリングおよび増殖に関連する他のタンパク質の放出に影響を及ぼすかどうかを決定した。これらの実施例では、細胞を、安定なＡ１およびＡ２受容体アゴニストであるＮ−エチルカルボキサミドアデノシン（ＮＥＣＡ）で処理した。ＮＥＣＡを投与し、次いで再度Ａ２Ｂ受容体アンタゴニストを投与した後、タンパク質活性を測定した。
【０１５９】
目ざましいことに、強力な血管収縮物質であるＥＴ−１は、アデノシンアゴニストによって用量依存的に増大し、次いで化合物Ａの投与によって有意に減少することが分かった。実施例６、図６を参照されたい。同様に、化合物Ａによって、ＨＰＡＳＭにおけるトロンボキサンＢ２の放出は低下することが分かった。実施例８、図１１を参照されたい。これらの発見は、Ａ２Ｂ受容体の活性化が、ＥＴ−１およびトロンボキサンＢ２の放出を誘導することを示唆している。したがって、ＥＴ−１およびトロンボキサンの放出を阻害することによって、血管収縮に起因する潜在的な血管リモデリングをも阻害できることが想定される。
【０１６０】
血管リモデリングに関連することであるが、化合物Ａの投与によって、特定のコラーゲン、細胞外マトリックスタンパク質および細胞外マトリックス酵素（例えば、ＡＤＡＭＴＳ１、ＡＤＡＭＴＳ８、ＣＤＨ１、ＭＭＰ７、ＭＭＰ１２、ＨＡＳ１、ＩＴＧＡ７、ＣＯＬ１Ａ１、ＣＯＬ８Ａ１およびＣＴＧＦ）の発現が低下する（図１２Ａ〜Ｃ）ことも見出した。これは、Ａ２Ｂ受容体の活性化が、組織リモデリングに関連するこれらの遺伝子の放出を誘導することを示唆している。
【０１６１】
ＨＰＡＥＣとＨＰＡＳＭの両方において、炎症反応における主要なメディエータであるケモカイン、ＩＬ−８の放出の低下が見られた。ＩＬ−８の減少によって、肺高血圧症の炎症性機序の提案された成分も阻害できることが想定される。
【０１６２】
化合物Ａの投与後、炎症性サイトカイン、ＩＬ−６およびＧ−ＣＳＦ（顆粒状コロニー刺激因子）の放出の低下が観察された（図７〜９）。これらの発見は、Ａ２Ｂ受容体の活性化がこれらのサイトカインの放出を誘導していることを示唆している。これはさらに、本明細書に記載するアンタゴニストで、肺高血圧症の炎症性成分を調節することができることを示唆している。
【０１６３】
Ａ２Ｂアデノシン受容体の活性化によって、ＮＥＣＡは平滑筋を活性化させて、ＩＬ−６を放出させ、続いてＩＬ−６は平滑筋細胞遊走を増進させることも観察された（図１０Ａ〜Ｂ）。観察されるように、そうした増進は化合物Ａによって阻害された（図１０Ａ）。
【０１６４】
平滑筋細胞の増殖に関連することであるが、化合物Ａと、エンドセリン受容体の公知のアンタゴニストであるアンブリセンタンの両方が、アゴニストによる誘導の後の増殖を低下させることが観察された（図１３Ａ〜Ｂ）。上記したように、化合物ＡはＥＴ−１の放出を阻害した。したがって、化合物Ａ単独かまたは公知のエンドセリンアンタゴニストと併用して処置した場合、増殖を低下させることができる（図１３Ｃ）。
【０１６５】
Ａ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストによって肺高血圧症が処置されることをさらに実証するために、ＮＯＴＣＨ３の発現について平滑筋細胞を試験した。肺高血圧症は、小肺動脈平滑筋細胞におけるＮＯＴＣＨ３の過剰発現を特徴とすることが想定される。さらに、その疾患の重症度は、肺内のＮＯＴＣＨ３タンパクの量とも相関している可能性がある。Ｌｉ、Ｘ．ら、「Ｎｏｔｃｈ３  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｐｒｏｍｏｔｅｓ  ｔｈｅ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ａｒｔｅｒｉａｌ  ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ」Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、１５巻（１１号）：１２８９〜１２９７頁（２００９年）を参照されたい。図１４に認められるように、ＮＯＴＣＨ３のアゴニスト誘導発現は、平滑筋細胞において、アンタゴニストの投与によって減少した。
【０１６６】
肺疾患に起因する肺高血圧症（ＰＨの第３群）の前臨床モデルにおいて、化合物Ａは、血管症および右心室収縮期血圧（ＲＶＳＰ）を減少させて（図１８）、肺血管リモデリングを改善し（図１７）、線維症を阻害し（図１９）、サイトカインおよびＥＴ−１の放出を低下させ、肺機能を改善する（図２０〜２２）ことが示された。したがって、これらの結果は、慢性肺損傷に関連する肺高血圧症の病因におけるＡ２Ｂ受容体の役割を際立たせており、肺高血圧症の処置のためのＡ２Ｂ受容体アンタゴニストを裏付けるものである。
【０１６７】
したがってここで、肺高血圧症、特にＰＡＨおよび肺高血圧症の第３群、その基礎疾患と炎症性成分の両方を、Ａ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストの投与によって処置できることが想定される。したがって、一実施形態では、肺高血圧症の処置を必要とする患者における肺高血圧症を処置する方法であって、その患者に治療有効量のＡ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストを投与する工程を含む方法を提供する。
【０１６８】
本開示の一実施形態では、肺動脈高血圧症は、特発性ＰＡＨ、家族性ＰＡＨまたは別の疾患もしくは状態に関連するＰＡＨから選択される。別の実施形態では、その方法は肺炎症の処置のためのものである。一実施形態では、その患者はヒトである。
【０１６９】
以下でより充分に記載するように、アンタゴニストは全身、経口、静脈内、筋肉内、腹腔内および吸入を含む様々な仕方で投与することができる。
４．Ａ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニスト
一態様では、本開示は、肺高血圧症の処置を必要とする患者にＡ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストを投与することによって、肺高血圧症を処置するための方法を提供する。Ａ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストは、Ａ２Ｂ受容体の活性を阻害するあるいは別の方法で調節する任意の化合物である。Ａ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストは当該分野で公知である。例えば、その受容体のいくつかの低分子阻害剤が同定されている。そうした化合物の例には：
【０１７０】
【表１】
2013533882.tif 000009
が含まれる。
【０１７１】
追加のＡ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストは、その環式置換基がアリール、ヘテロアリール、シクロアルキルまたは複素環式であってよく、その環式基のすべてが上記に定義したように必要に応じて置換されている８環式キサンチン誘導体である。８環式キサンチン誘導体の例は文献全般にわたって見出すことができ、例えばＢａｒａｌｄｉ、Ｐ．ら、「Ｄｅｓｉｇｎ，  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，  ａｎｄ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｎｅｗ  ８−Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ  Ｘａｎｔｈｉｎｅ  Ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ  ａｓ  Ｈｉｇｈｌｙ  Ｐｏｔｅｎｔ  ａｎｄ  Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  Ｈｕｍａｎ  Ａ２Ｂ  ａｄｅｎｏｓｉｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ」、Ｊ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．，（２００３年）を参照されたい。またＷＯ０２／４２２９８、ＷＯ０３／０２５６６、ＷＯ２００７／０３９２９７、ＷＯ０２／４２２９８、ＷＯ９９／４２０９３、ＷＯ２００９／１１８７５９およびＷＯ２００６／０４４６１０にも見出すことができる。これらを、全て、その全体として参照により組み込む。
【０１７２】
様々なＡ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストが本開示において有用であることが想定される。これらの化合物は米国特許第６，８２５，３４９号、同第７，１０５，６６５号および同第６，９９７，３００号に記載されている。これらを、全て、その全体として参照により組み込む。一実施形態では、本開示は式ＩまたはＩＩの化合物
【０１７３】
【化７】
2013533882.tif 000010
（式中、
Ｒ１およびＲ２は独立に、水素、必要に応じて置換されたアルキルまたは基−Ｄ−Ｅから選択され、ここでＤは、共有結合またはアルキレンであり、Ｅは、必要に応じて置換されたアルコキシ、必要に応じて置換されたシクロアルキル、必要に応じて置換されたアリール、必要に応じて置換されたヘテロアリール、必要に応じて置換されたヘテロシクリル、必要に応じて置換されたアルケニルまたは必要に応じて置換されたアルキニルであり、ただしＤが共有結合である場合、Ｅはアルコキシであることはなく、
Ｒ３は、水素、必要に応じて置換されたアルキルまたは必要に応じて置換されたシクロアルキルであり、
Ｘは、必要に応じて置換されたアリーレンまたは必要に応じて置換されたヘテロアリーレンであり、
Ｙは、共有結合であるか、またはアルキレンであって、その１個の炭素原子が−Ｏ−、−Ｓ−または−ＮＨ−で必要に応じて置き換えられていてよく、そしてヒドロキシ、アルコキシ、必要に応じて置換されたアミノまたは−ＣＯＲ１６（Ｒ１６は、ヒドロキシ、アルコキシまたはアミノである）で必要に応じて置換されているアルキレンであり、
ただし、必要に応じた置換がヒドロキシまたはアミノである場合、その置換はヘテロ原子に隣接することはなく、
Ｚは、必要に応じて置換された単環式アリールまたは必要に応じて置換された単環式ヘテロアリールであるか、または
Ｚは、Ｘが、必要に応じて置換されたヘテロアリーレンであり、Ｙが共有結合である場合、水素であり、
ただし、Ｚは、Ｘが、必要に応じて置換されたアリーレンである場合、必要に応じて置換された単環式ヘテロアリールである）
または薬学的に許容されるその塩、互変異性体、異性体、異性体の混合物もしくはプロドラッグの使用を対象とする。
【０１７４】
一実施形態では、式ＩおよびＩＩの化合物は、Ｒ１およびＲ２が独立に水素、必要に応じて置換された低級アルキルまたは基−Ｄ−Ｅであり、Ｄは、共有結合またはアルキレンであり、Ｅは、必要に応じて置換されたフェニル、必要に応じて置換されたシクロアルキル、必要に応じて置換されたアルケニルまたは必要に応じて置換されたアルキニルであって、特にＲ３が水素であるものである。
【０１７５】
この群の中では、化合物の第１の部類（ｃｌａｓｓ）には、Ｒ１およびＲ２が独立にシクロアルキルで必要に応じて置換された低級アルキル、好ましくはｎ−プロピルであり、Ｘが必要に応じて置換されたフェニレンであるものが含まれる。この部類の中では、化合物の下位部類（ｓｕｂｃｌａｓｓ）は、Ｙが、炭素原子が酸素、好ましくは−Ｏ−ＣＨ２−で置き換えられている、より特別にはその酸素がフェニレンとの結合点であるアルキレンを含むアルキレンであるものである。この下位部類の中では、一実施形態では、Ｚは、必要に応じて置換されたオキサジアゾール、具体的には必要に応じて置換された［１，２，４］−オキサジアゾール−３−イル、特に必要に応じて置換されたフェニルまたは必要に応じて置換されたピリジルで置換された［１，２，４］−オキサジアゾール−３−イルである。
【０１７６】
化合物の第２の部類には、Ｘが必要に応じて置換された１，４−ピラゾレンであるものが含まれる。この部類の中では、化合物の下位部類は、Ｙが共有結合、アルキレン、低級アルキレンであり、Ｚが水素、必要に応じて置換されたフェニル、必要に応じて置換されたピリジルまたは必要に応じて置換されたオキサジアゾールであるものである。この下位部類の中では、一実施形態は、Ｒ１がシクロアルキルで必要に応じて置換された低級アルキルであり、Ｒ２が水素である化合物を含む。別の実施形態は、Ｙが−（ＣＨ２）−または−ＣＨ（ＣＨ３）−であり、Ｚが必要に応じて置換されたフェニルである、またはＹが−（ＣＨ２）−または−ＣＨ（ＣＨ３）−であり、Ｚが必要に応じて置換されたオキサジアゾール、特に３，５−［１，２，４］−オキサジアゾールである、またはＹが−（ＣＨ２）−または−ＣＨ（ＣＨ３）−であり、Ｚが必要に応じて置換されたピリジルである化合物を含む。この下位部類の中には、Ｒ１およびＲ２が独立にシクロアルキルで必要に応じて置換された低級アルキル、特にｎ−プロピルである化合物も含まれる。他の実施形態では、Ｙが共有結合、−（ＣＨ２）−または−ＣＨ（ＣＨ３）−であり、Ｚが水素、必要に応じて置換されたフェニルまたは必要に応じて置換されたピリジル、特にＹが共有結合であり、Ｚが水素である化合物である。
【０１７７】
現在のところ、本開示で有用な化合物には、これらに限定されないが：
１−プロピル−８−（１−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］−メチル｝ピラゾール−４−イル）−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１−プロピル−８−［１−ベンジルピラゾール−４−イル］−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１−ブチル−８−（１−｛［３−フルオロフェニル］メチル｝ピラゾール−４−イル）−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１−プロピル−８−［１−（フェニルエチル）ピラゾール−４−イル］−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
８−（１−｛［５−（４−クロロフェニル）（１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）］メチル｝ピラゾール−４−イル）−１−プロピル−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
８−（１−｛［５−（４−クロロフェニル）（１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）］メチル｝ピラゾール−４−イル）−１−ブチル−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１，３−ジプロピル−８−ピラゾール−４−イル−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１−メチル−３−ｓｅｃ−ブチル−８−ピラゾール−４−イル−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１−シクロプロピルメチル−３−メチル−８−｛１−［（３−トリフルオロメチルフェニル）メチル］ピラゾール−４−イル｝−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１，３−ジメチル−８−｛１−［（３−フルオロフェニル）メチル］ピラゾール−４−イル｝−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
３−メチル−１−プロピル−８−｛１−［（３−トリフルオロメチルフェニル）メチル］ピラゾール−４−イル｝−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
３−エチル−１−プロピル−８−｛１−［（３−トリフルオロメチルフェニル）メチル］ピラゾール−４−イル｝−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１，３−ジプロピル−８−（１−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝ピラゾール−４−イル）−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１，３−ジプロピル−８−｛１−［（３−フルオロフェニル）メチル］ピラゾール−４−イル｝−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１−エチル−３−メチル−８−｛１−［（３−フルオロフェニル）メチル］ピラゾール−４−イル｝−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１，３−ジプロピル−８−｛１−［（２−メトキシフェニル）メチル］ピラゾール−４−イル｝−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１，３−ジプロピル−８−（１−｛［３−（トリフルオロメチル）−フェニル］エチル｝ピラゾール−４−イル）−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１，３−ジプロピル−８−｛１−［（４−カルボキシフェニル）メチル］ピラゾール−４−イル｝−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
２−［４−（２，６−ジオキソ−１，３−ジプロピル（１，３，７−トリヒドロプリン−８−イル））ピラゾリル］−２−フェニル酢酸；
８−｛４−［５−（２−メトキシフェニル）−［１，２，４］オキサジアゾール−３−イルメトキシ］フェニル｝−１，３−ジプロピル−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
８−｛４−［５−（３−メトキシフェニル）−［１，２，４］オキサジアゾール−３−イルメトキシ］フェニル｝−１，３−ジプロピル−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
８−｛４−［５−（４−フルオロフェニル）−［１，２，４］オキサジアゾール−３−イルメトキシ］フェニル｝−１，３−ジプロピル−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン：
１−（シクロプロピルメチル）−８−［１−（２−ピリジルメチル）ピラゾール−４−イル］−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１−ｎ−ブチル−８−［１−（６−トリフルオロメチルピリジン−３−イルメチル）ピラゾール−４−イル］−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
８−（１−｛［３−（４−クロロフェニル）（１，２，４−オキサジアゾール−５−イル）］メチル｝ピラゾール−４−イル）−１，３−ジプロピル−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１，３−ジプロピル−８−［１−（｛５−［４−（トリフルオロメチル）フェニル］イソオキサゾール−３−イル｝メチル）ピラゾール−４−イル］−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１，３−ジプロピル−８−［１−（２−ピリジルメチル）ピラゾール−４−イル］−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
３−｛［４−（２，６−ジオキソ−１，３−ジプロピル−１，３，７−トリヒドロプリン−８−イル）ピラゾリル］メチル｝安息香酸；
１，３−ジプロピル−８−（１−｛［６−（トリフルオロメチル）（３−ピリジル）］メチル｝ピラゾール−４−イル）−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１，３−ジプロピル−８−｛１−［（３−（１Ｈ−１，２，３，４−テトラアゾール−５−イル）フェニル）メチル］ピラゾール−４−イル｝−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
６−｛［４−（２，６−ジオキソ−１，３−ジプロピル−１，３，７−トリヒドロプリン−８−イル）ピラゾリル］メチル｝ピリジン−２−カルボン酸；
３−エチル−１−プロピル−８−［１−（２−ピリジルメチル）ピラゾール−４−イル］−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
８−（１−｛［５−（４−クロロフェニル）イソオキサゾール−３−イル］メチル｝ピラゾール−４−イル）−３−エチル−１−プロピル−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
８−（１−｛［３−（４−クロロフェニル）（１，２，４−オキサジアゾール−５−イル）］メチル｝ピラゾール−４−イル）−３−エチル−１−プロピル−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
３−エチル−１−プロピル−８−（１−｛［６−（トリフルオロメチル）（３−ピリジル）］メチル｝ピラゾール−４−イル）−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１−（シクロプロピルメチル）−３−エチル−８−（１−｛［６−（トリフルオロメチル）（３−ピリジル）］メチル｝ピラゾール−４−イル）−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；および
３−エチル−１−（２−メチルプロピル）−８−（１−｛［６−（トリフルオロメチル）（３−ピリジル）］メチル｝ピラゾール−４−イル）−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン
または薬学的に許容されるその塩、互変異性体、異性体、異性体の混合物もしくはプロドラッグが含まれる。
【０１７８】
上記したＡ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストのプロドラッグも本開示の方法において有用であることが想定される。プロドラッグの例は米国特許第７，６２５，８８１号に教示されている。これをその全体として参照により本明細書に組み込む。したがって、一実施形態では、本開示の方法で有用な化合物には次式を有する式ＩＩＩのプロドラッグ
【０１７９】
【化８】
2013533882.tif 000011
（式中、
Ｒ１０およびＲ１２は独立に低級アルキルであり、
Ｒ１４は、必要に応じて置換されたフェニルであり、
Ｘ１は、水素またはメチルであり、
Ｙ１は、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１７であり、Ｒ１７は、独立に、必要に応じて置換された低級アルキル、必要に応じて置換されたアリールもしくは必要に応じて置換されたヘテロアリールであるか、または
Ｙ１は−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ１５）２であり、Ｒ１５が水素または、フェニルもしくはヘテロアリールで必要に応じて置換された低級アルキルである）
および薬学的に許容されるその塩が含まれる。
【０１８０】
式ＩＩＩの化合物の１つの群は、Ｒ１０およびＲ１２がエチルまたはｎ−プロピルであるもの、特にＲ１０がｎ−プロピルであり、Ｒ１２がエチルである化合物である。別の実施形態では、Ｒ１４は３−（トリフルオロメチル）フェニルであり、Ｘ１は水素である。
【０１８１】
１つの下位群は、Ｙ１が−Ｃ（Ｏ）Ｒ１７である式ＩＩＩの化合物、特にＲ１７がメチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｔ−ブチルまたはｎ−ペンチルである、より特定すればＲ１７がメチル、ｎ−プロピルまたはｔ−ブチルである式ＩＩＩの化合物を含む。別の下位群は、Ｙ１が−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ１５）２である式ＩＩＩの化合物、特にＲ１５が水素である式ＩＩＩの化合物を含む。
【０１８２】
式ＩＩＩの化合物またはプロドラッグには、これらに限定されないが以下の化合物：
［３−エチル−２，６−ジオキソ−１−プロピル−８−（１−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝ピラゾール−４−イル）−１，３，７−トリヒドロプリン−７−イル］メチルアセテート；
［３−エチル−２，６−ジオキソ−１−プロピル−８−（１−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝ピラゾール−４−イル）−１，３，７−トリヒドロプリン−７−イル］メチル２，２−ジメチルプロパノエート；
［３−エチル−２，６−ジオキソ−１−プロピル−８−（１−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝ピラゾール−４−イル）−１，３，７−トリヒドロプリン−７−イル］メチルブタノエート；および
［３−エチル−２，６−ジオキソ−１−プロピル−８−（１−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝−ピラゾール−４−イル）（１，３，７−トリヒドロプリン−７−イル）］メチル二水素ホスフェート
または薬学的に許容されるその塩が含まれる。
【０１８３】
５．合成反応パラメーター
「溶媒」、「不活性有機溶媒」または「不活性溶媒」という用語は、それと併せて記載される反応の条件下で不活性な溶媒を意味する［例えばベンゼン、トルエン、アセトニトリル、テトラヒドロフラン（「ＴＨＦ」）、ジメチルホルムアミド（「ＤＭＦ」）、クロロホルム、塩化メチレン（すなわちジクロロメタン）、ジエチルエーテル、メタノール、ピリジンなどを含む］。それと反対の指定がない限り、本開示の反応で使用される溶媒は不活性有機溶媒である。
【０１８４】
「ｑ．ｓ．」という用語は、指定された役割を達成するのに十分な量を加える、例えば溶液を所望の容積（すなわち、１００％）にすることを意味する。
【０１８５】
本開示の方法で有用な化合物を作製するための合成の例は、米国特許第６，８２５，３４９号、同第６，９９７，３００号、同第７，１２５，９９３号、同第７，５２１，５５４号および同第７，６２５，８８１号に見出すことができる。
【０１８６】
【化９】
2013533882.tif 000012
（式中、Ｘ、Ｙ、Ｚ、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は上記定義通りである）。
【０１８７】
ステップ１−式（２）の調製
式（２）の化合物は、還元ステップにより式（１）の化合物から作製される。例えば水性アンモニア溶液中の亜ジチオン酸ナトリウムを使用する慣用的な還元技術を用いることができ、好ましくは還元を水素と金属触媒を用いて実施する。反応は、水素雰囲気下、好ましくは加圧下例えば約３０ｐｓｉで不活性溶媒例えばメタノール中、触媒例えば１０％パラジウム炭素触媒の存在下で約２時間実施する。反応が実質的に完了したら、式（２）の生成物を慣用的な手段で単離して式（２）の化合物を得る。
【０１８８】
ステップ２−式（３）の調製
次いで式（２）の化合物を、カルボジイミド、例えば１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩の存在下で式Ｚ−Ｙ−Ｘ−ＣＯ２Ｈのカルボン酸と反応させる。反応を、プロトン性溶媒例えばメタノール、エタノール、プロパノールなど、好ましくはメタノール中、約２０〜３０℃の温度、好ましくは室温で約１２〜４８時間、好ましくは約１６時間実施する。反応が実質的に完了したら、式（３）の生成物を慣用的に、例えば減圧下での溶媒の除去により単離し、生成物を洗浄する。あるいは、さらに精製することなく次のステップを実施することができる。
【０１８９】
式（３）の化合物の代替調製
あるいは、最初に、ハロゲン化剤例えば塩化チオニルまたは臭化チオニル、好ましくは塩化チオニルと反応させることによって、式Ｚ−Ｙ−Ｘ−ＣＯ２Ｈのカルボン酸を式Ｚ−Ｙ−Ｘ−Ｃ（Ｏ）Ｌ（Ｌはクロロまたはブロモである）の酸ハライドに転換させる。あるいは、塩化オキサリル、五塩化リンまたはオキシ塩化リンを使用することができる。反応は好ましくは、溶媒の非存在下で過剰のハロゲン化剤を用いて、例えば約６０〜８０℃、好ましくは約７０℃の温度で約１〜８時間、好ましくは約４時間実施する。反応が実質的に完了したら、式Ｚ−Ｙ−Ｘ−Ｃ（Ｏ）Ｌの生成物を慣用的に、例えば減圧下での過剰ハロゲン化剤の除去により単離する。
【０１９０】
次いで生成物を、不活性溶媒例えばアセトニトリル中、第三塩基例えばトリエチルアミンの存在下で式（２）の化合物と反応させる。反応は、約０℃の初期温度で、次いで２０〜３０℃に加温し、好ましくは室温で約１２〜４８時間、好ましくは約１６時間実施する。反応が実質的に完了したら、式（３）の生成物を慣用的に、例えば反応混合物を水で希釈し、生成物をろ別して単離し、生成物を水で洗浄し、続いてエーテルで洗浄する。
【０１９１】
ステップ３−Ｒ３が水素である場合の式ＩＩの調製
次いで式（３）の化合物を、環化反応により式ＩＩの化合物に転換させる。反応を、プロトン性溶媒例えばメタノール、エタノール、プロパノールなど、好ましくはメタノール中、塩基例えば水酸化カリウム、水酸化ナトリウム、ナトリウムメトキシド、ナトリウムエトキシド、カリウムｔ−ブトキシド、好ましくは水性水酸化ナトリウムの存在下、約５０〜８０℃、好ましくは約８０℃の温度で約１〜８時間、好ましくは約３時間実施する。反応が実質的に完了したら、式ＩＩの生成物を慣用的に、例えば減圧下で溶媒を除去し、残留物を水性の酸で酸性化し、生成物をろ別することにより単離し、次いで生成物を洗浄、乾燥する。
【０１９２】
式ＩＩＩの化合物の合成
Ｙが、必要に応じて置換された低級アルキル、必要に応じて置換されたアリールまたは必要に応じて置換されたヘテロアリールである式Ｉの化合物を調製するための方法を反応スキームＩＩに示す。
【０１９３】
【化１０】
2013533882.tif 000013
（式中、Ｒ１０、Ｒ１２、Ｒ１４、Ｘ１およびＹ１は上記定義通りである）。
【０１９４】
一般に、式（４）の化合物を極性溶媒例えばＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中で式Ｙ１ＯＣＨＸ１Ｃｌ（５）の化合物と反応させる。反応は、塩基、好ましくは無機塩基例えば炭酸カリウムの存在下、約３０〜８０℃、好ましくは約６０℃の温度で約８〜２４時間実施する。反応が実質的に完了したら、式ＩＩＩの生成物を慣用的な手段、例えば分取クロマトグラフィーにより単離する。
【０１９５】
式（４）の出発化合物は、米国特許第６，８２５，３４９号に開示されている技法または米国特許出願番号第１０／７１９，１０２号、公開番号第２００４／０１７６３９９号に開示されている技法により調製することができる。これらの全内容を参照により本明細書に組み込む。
【０１９６】
Ｙ１が−Ｃ（Ｏ）Ｒ１７（Ｒ１７は複素環式である）である場合、式（５’）（ＲＣ（Ｏ）ＯＣＨＸ１Ｃｌ）の化合物は商業的に入手できるか、または例としてピリジンを用いて以下に示すようにして調製することができる。
【０１９７】
【化１１】
2013533882.tif 000014
一般に、式（ａ）のカルボン酸を、不活性溶媒例えばジクロロメタン中、四級塩例えばテトラブチルアンモニウムサルフェートの存在下で式（ｂ）のクロロメチル誘導体と反応させる。反応は塩基、好ましくは無機塩基例えば重炭酸ナトリウムの存在下、約０℃の温度で実施し、続いて室温で約２〜１０時間実施する。反応が実質的に完了したら、生成物のクロロメチルピリジン−３−カルボキシレート（５’）を慣用的な手段で単離する。
【０１９８】
カルバメート誘導体は反応スキームＩＩＩ
【０１９９】
【化１２】
2013533882.tif 000015
（式中、Ｒ１０、Ｒ１２およびＲ１４は上記定義通りであり、ＲａＲｂＮＨはアミンを表す）
に示すようにして調製することができる。
【０２００】
一般に、式ＲａＲｂＮＨのアミンを、極性溶媒例えばＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中、塩基、好ましくは無機塩基例えば炭酸カリウムの存在下、約０℃の温度でクロロメチルクロロホーメートと約１時間反応させる。次いで極性溶媒中の式（１）の化合物の０℃での溶液を加え、混合物を２４時間反応させ、温度を室温に上昇させる。反応が実質的に完了したら、生成物を慣用的な手段、例えば分取クロマトグラフィーにより単離する。
【０２０１】
カルバメート誘導体のエーテル誘導体を調製するために、その誘導体を、適切なクロロメチルエーテルと慣用的に反応させる。
【０２０２】
Ｙ１が−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２である式ＩＩＩの化合物を調製するための方法を反応スキームＩＶに示す。
【０２０３】
【化１３】
2013533882.tif 000016
ステップ１
一般に、式（６）の化合物を、極性溶媒例えばＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中、塩基、好ましくは無機塩基例えば炭酸カリウムの存在下、約３０〜９０℃の温度で約４〜２４時間、式（４）の化合物と反応させる。反応が実質的に完了したら、式（７）の生成物を慣用的な手段で単離し、例えば分取クロマトグラフィーで精製する。
【０２０４】
ステップ２
式（７）の生成物を、不活性溶媒例えばジクロロメタン中で強酸例えばトリフルオロ酢酸または代替的にギ酸などの弱酸で慣用的に脱保護する。反応をおよそ室温で約４〜２４時間実行する。反応が実質的に完了したら、Ｙ１が−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２である式ＩＩＩの生成物（８）を慣用的な手段で単離し、例えば分取クロマトグラフィーで精製する。
【０２０５】
式（２）の出発材料
式（２）の化合物、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルクロロメチルホスフェートは以下に示すようにしてビス（ｔｅｒｔ−ブトキシ）ホスフィノ−１−オールから調製する。
【０２０６】
【化１４】
2013533882.tif 000017
ステップ１
一般に、式（ａ）の化合物、ビス（ｔｅｒｔ−ブトキシ）ホスフィノ−１−オールを水性溶媒中、弱い塩基例えば炭酸水素カリウムの存在下で酸化剤例えば過マンガン酸カリウムと反応させる。反応を最初は約０℃の温度で実施し、次いでおよそ室温で約１時間実施する。反応が実質的に完了したら、式（ｂ）の生成物、リン酸水素二ｔｅｒｔ−ブチル（ｄｉｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌ  ｈｙｄｒｏｇｅｎ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）を慣用的な手段で、例えば酸性化およびこれで形成されるホスフェートのろ過により単離する。
【０２０７】
ステップ２
最初に（ｂ）のテトラメチルアンモニウム塩を、不活性溶媒例えばアセトン中、約０℃の温度でリン酸水素二ｔｅｒｔ−ブチルを水酸化テトラメチルアンモニウムと反応させて調製する。リン酸水素二ｔｅｒｔ−ブチルのテトラメチルアンモニウム塩を慣用的な手段、例えば溶媒の除去により単離する。
【０２０８】
次いでリン酸水素二ｔｅｒｔ−ブチルのテトラメチルアンモニウム塩を、不活性溶媒例えば１，２−ジメトキシエタン中でジハロメタン誘導体例えばジブロモメタンまたはクロロヨードメタンと反応させる。反応は約６０〜９０℃の温度で実施する。反応が実質的に完了したら、式（６）の生成物を慣用的な手段で単離する。
【０２０９】
６．併用療法
Ａ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストを、医学療法および／または酸素補給療法を含む他の肺高血圧症治療と組み合わせて投与することができる。血管壁リモデリングを低減させることによって、アンタゴニストは、カルシウムチャネル遮断薬、エンドセリンアンタゴニスト、ＰＤＥ５阻害剤、プロスタサイクリンなどの現在の肺高血圧症治療の肺血管拡張効果を増強させることができることが想定される。肺高血圧症を処置するのに当該分野で認められている医学療法には、強心配糖体、血管拡張剤／カルシウムチャネル遮断薬、プロスタサイクリン、抗凝固剤、利尿剤、エンドセリン受容体遮断薬、ホスホジエステラーゼ５型阻害剤、一酸化窒素吸入、アルギニン補充およびその組合せなどの治療剤が含まれる。
【０２１０】
具体的には、これに限定されないがアンブリセンタンを含むエンドセリン受容体遮断薬またはアンタゴニストと組み合わせて使用した場合が想定される。
【０２１１】
任意の様々な血管拡張剤／カルシウムチャネル遮断薬をＡ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストと組み合わせて使用することができる。その例には、これらに限定されないが、ニフェジピン、ジルチアゼム、アムロジピンおよびその組合せが含まれる。
【０２１２】
さらに、任意の様々なプロスタサイクリンをＡ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストと組み合わせて使用することができる。その例には、これらに限定されないが、エポプロステノール、トレプロスチニル、イロプロスト、ベラプロストおよびその組合せが含まれる。
【０２１３】
投与に関しては、２つ以上の薬剤を同時にまたは続いて投与することができることが想定される。２つ以上の薬剤を同時に投与する場合、これらは単一の用量かまたは別個の用量として投与することができる。さらに、担当臨床医は、追加の薬剤の所要投薬量、投与計画および好ましい投与経路を容易に決定することができることが想定される。そうした組成物は薬学的技術分野で周知の方法で調製される（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｍａｃｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、ＰＡ  １７ｔｈ  Ｅｄ．（１９８５年）および「Ｍｏｄｅｒｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ」、Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ、Ｉｎｃ．  ３ｒｄ  Ｅｄ．（Ｇ．Ｓ．  Ｂａｎｋｅｒ  ＆  Ｃ．Ｔ．  Ｒｈｏｄｅｓ、Ｅｄｓ．）を参照されたい。
【０２１４】
７．投与
本開示の化合物は、例えば、直腸、口腔、鼻腔内および経皮経路、動脈内注射、静脈内、腹腔内、非経口、筋肉内、皮下、経口、局所により、吸入剤として、あるいは例えばステントなどの含浸させるもしくはコーティングしたデバイスまたは動脈挿入用円筒状ポリマーを介することを含む、参照により組み込まれている特許および特許出願に記載されているものと類似の有用性を有する薬剤の許容される投与方式のいずれかによって、単回用量かまたは複数回用量で投与することができる。
【０２１５】
投与のための１つの方式は、非経口（ｐａｒｅｎｔａｌ）、特に注射によるものである。本開示の新規組成物を注射による投与のために組み入れることができる形態には、ゴマ油、トウモロコシ油、綿実油またはピーナッツ油ならびにエリキシル剤、マンニトール、デキストロースまたは滅菌水性溶液および類似の薬学的ビヒクルを用いた水性もしくは油性の懸濁剤もしくは乳剤が含まれる。食塩水中の水性溶液も注射用に慣用的に使用されるが、本開示の関連ではこれはあまり好ましくはない。エタノール、グリセロール、プロピレングリコール、液状ポリエチレングリコールなど（および適切なその混合物）、シクロデキストリン誘導体および植物油も使用することができる。適度の流動性は、例えば、レシチンなどのコーティング剤の使用によって、分散液の場合の所要粒径の維持によって、および界面活性剤の使用によって保持することができる。微生物の作用の防止は、種々の抗菌剤および抗真菌剤、例えばパラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサールなどで行うことができる。
【０２１６】
滅菌注射液剤は、本開示の化合物を上に列挙したような種々の他の成分と一緒に適切な溶媒に所要量を組み入れ、必要に応じて、続いてろ過滅菌して調製する。一般に、分散剤は、種々の滅菌活性成分を、基礎分散媒および上に列挙したものからの他の所要成分を含有する滅菌ビヒクルに組み入れることによって調製する。滅菌注射液剤を調製するための滅菌粉末の場合、好ましい調製方法は真空乾燥法および凍結乾燥法であり、これによって活性成分＋任意の追加所望成分の粉末が、予め滅菌ろ過したその溶液から得られる。
【０２１７】
経口投与は本開示の化合物を投与するための別の経路である。投与はカプセル剤または腸溶コーティングした錠剤などによることができる。少なくとも１つの本開示の化合物を含む薬学的組成物の作製において、その活性成分は通常賦形剤で希釈される、かつ／またはカプセル、サシェ、紙または他の容器の形態であってよいキャリアなどの中に封入される。賦形剤が希釈剤の働きをする場合、それは、活性成分のためのビヒクル、キャリアまたは媒体として作用する固体、半固体または液体材料（上記のような）であってよい。したがって、組成物は、例えば最大で１０重量％の活性化合物を含有する錠剤、丸剤、散剤、ロゼンジ剤、サシェ剤、カシェ剤、エリキシル剤、懸濁剤、乳剤、液剤、シロップ剤、エアゾール剤（固体としてまたは液体媒体中で）、軟膏剤、軟質および硬質ゼラチンカプセル剤、滅菌注射液剤および滅菌包装粉剤の形態であってよい。
【０２１８】
適切な賦形剤のいくつかの例には、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、デンプン、アカシアガム、リン酸カルシウム、アルギン酸塩、トラガカント、ゼラチン、ケイ酸カルシウム、微結晶性セルロース、ポリビニルピロリドン、セルロース、滅菌水、シロップおよびメチルセルロースが含まれる。製剤はタルク、ステアリン酸マグネシウムおよび鉱油などの滑剤；湿潤剤；乳化剤および懸濁化剤；メチルおよびプロピルヒドロキシベンゾエートなどの保存剤；甘味剤ならびに香味剤を追加して含むことができる。
【０２１９】
本開示の組成物は、当該分野で公知の手順を用いて患者へ投与した後、活性成分の急速な、持続したまたは遅延した放出が提供されるように処方することができる。経口投与のための制御放出による薬物送達システムには、ポリマーコーティングされたリザーバまたは薬物ポリマーマトリックス処方物を含有する浸透圧ポンプシステムおよび溶解システムが含まれる。制御放出システムの例は、米国特許第３，８４５，７７０号、同第４，３２６，５２５号、同第４，９０２，５１４号および同第５，６１６，３４５号に示されている。本開示の方法で使用するための別の処方物は経皮送達デバイス（「パッチ」）を使用する。そうした経皮パッチを用いて、本開示の化合物を制御された量で連続的注入または不連続注入で提供することができる。薬学的作用物質の送達のための経皮パッチの構成および使用は当該分野で周知である。例えば、米国特許第５，０２３，２５２号、同第４，９９２，４４５号および同第５，００１，１３９号を参照されたい。そうしたパッチは薬学的作用物質の連続送達、パルス状送達またはオンデマンド送達用に構成することができる。
【０２２０】
組成物は単位剤形で処方することが好ましい。「単位剤形」という用語は、ヒト被験体および他の哺乳動物のための単一の投与量として適している物理的に分離した単位を指し、各単位は、適切な薬学的賦形剤（例えば、錠、カプセル、アンプル）と一緒に、所望の治療効果をもたらすように計算された所定量の活性物質を含有する。式Ｉの化合物は広い投与量範囲にわたって有効であり、一般に薬学的有効量で投与される。経口投与のためには、各投薬単位は１０ｍｇ〜２ｇの本開示の化合物、より好ましくは１０〜７００ｍｇを含有し、非経口投与のためには、好ましくは１０〜７００ｍｇの本開示の化合物、より好ましくは約５０〜２００ｍｇを含むことが好ましい。しかし、実際に投与される本開示の化合物の量は、処置される状態、選択される投与の経路、投与される実際の化合物およびその相対的活性、個々の患者の年齢、体重および応答、患者の症状の重症度などを含む関連する状況に照らして医師によって決定されることを理解されよう。
【０２２１】
錠剤などの固体組成物を調製するためには、主活性成分を薬学的賦形剤と混合して、本開示の化合物の均一混合物を含有する固体状の予備処方組成物を生成する。これらの予備処方組成物を均一と称する場合、これはその組成物が錠剤、丸剤およびカプセル剤などの均等で効果的な単位剤形に容易にさらに分割できるように、活性成分が組成物全体に一様に分散されていることを意味する。
【０２２２】
持続的な作用の利点をもたらす、または胃の酸性条件から保護するための剤形を提供するため、本開示の錠剤または丸剤をコーティングするあるいは別の方法で配合することができる。例えば、錠剤または丸剤は、内側投薬成分および外側投薬成分であって、後者が前者を包む外被の形態で存在する成分を含むことができる。２つの成分を、胃の中で崩壊に抵抗するように働き、内側成分が損なわれることなく十二指腸へ通過できるようにするまたは放出が遅延されるようにする腸溶性層で分離することができる。様々な材料をそうした腸溶性層またはコーティングのために使用することができる。そうした材料には、いくつかのポリマー酸、およびポリマー酸とシェラック、セチルアルコールおよび酢酸セルロースなどの材料との混合物が含まれる。
【０２２３】
吸入剤（ｉｎｈａｌａｔｉｏｎ）または吸入剤（ｉｎｓｕｆｆｌａｔｉｏｎ）のための組成物には、薬学的に許容される水性溶媒もしくは有機溶媒またはその混合物中の溶液および懸濁液、ならびに粉末が含まれる。液体組成物または固体組成物は、上記したような適切な薬学的に許容される賦形剤を含有することができる。組成物は、局所的または全身的作用のために、経口または経鼻の呼吸経路で投与することが好ましい。好ましくは薬学的に許容される溶媒中の組成物を、不活性ガスを用いて噴霧させることができる。噴霧された溶液を噴霧デバイスから直接吸入するか、またはその噴霧デバイスをフェイスマスクテントまたは間欠型陽圧呼吸器に取り付けることができる。溶液、懸濁液または粉末組成物は、適切な仕方で処方物を送達するデバイスから、好ましくは経口または経鼻で投与することができる。
【０２２４】
本開示の好ましい実施形態を実証するために以下の実施例を含む。当業者は、以下の実施例で開示される技術が、本開示の実践においてよく機能するように本発明者らが発見した技術を示しており、したがって、その実践のための好ましい方式を構成するとみなされることを理解するべきである。しかし、当業者は、本開示に照らし、開示された具体的な実施形態において多くの変更を加えることができ、さらに本開示の趣旨および範囲から逸脱することなく類似のまたは同様の結果が得られることを十分に認めるべきである。
【０２２５】
（処方実施例１）
以下の成分を含有する硬質ゼラチンカプセル剤を調製する：
成分                    （ｍｇ／カプセル）
活性成分                    ３０．０
デンプン                    ３０５．０
ステアリン酸マグネシウム    ５．０
上記成分を混合し、硬質ゼラチンカプセル中に充てんする。
【０２２６】
（処方実施例２）
以下の成分を用いて錠剤処方物を調製する：
成分                    （ｍｇ／錠）
活性成分                    ２５．０
微結晶性セルロース          ２００．０
コロイド状二酸化ケイ素      １０．０
ステアリン酸                ５．０
成分をブレンドし、圧縮して錠剤を形成させる。
【０２２７】
（処方実施例３）
以下の成分を含有する吸入器用乾燥粉末処方物を調製する：
成分                          重量％
活性成分                      ５
ラクトース                    ９５
活性成分をラクトースと混合し、混合物を乾燥粉末吸入器具に加える。
【０２２８】
（処方実施例４）
それぞれ３０ｍｇの活性成分を含有する錠剤を以下のようにして調製する：
成分                          （ｍｇ／錠）
活性成分                      ３０．０ｍｇ
デンプン                      ４５．０ｍｇ
微結晶性セルロース            ３５．０ｍｇ
ポリビニルピロリドン
（滅菌水中の１０％溶液として）  ４．０ｍｇ
カルボキシメチルデンプンナトリウム  ４．５ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム        ０．５ｍｇ
タルク                          １．０ｍｇ
合計                            １２０ｍｇ。
【０２２９】
活性成分、デンプンおよびセルロースを番号２０メッシュＵ．Ｓ．ふるいに通し、十分に混合する。ポリビニルピロリドンの溶液を得られた粉末と混合し、次いでこれを１６メッシュＵ．Ｓ．ふるいに通す。そのように得られた顆粒を５０℃〜６０℃で乾燥し、１６メッシュＵ．Ｓ．ふるいに通す。次いで、予め番号３０メッシュＵ．Ｓ．ふるいに通したカルボキシメチルデンプンナトリウム、ステアリン酸マグネシウムおよびタルクをその顆粒に加え、混合した後、錠剤機で圧縮してそれぞれ１２０ｍｇの重量の錠剤を得る。
【０２３０】
（処方実施例５）
それぞれ２５ｍｇの活性成分を含有する坐剤を以下の通り作製する：
成分                            量
活性成分                      ２５ｍｇ
飽和脂肪酸グリセリド          ２，０００ｍｇまで。
【０２３１】
活性成分を番号６０メッシュＵ．Ｓ．ふるいに通し、必要最小限の熱を加えて予め融解させた飽和脂肪酸グリセリドに懸濁させる。次いで混合物を公称２．０ｇの容量の坐剤用型（ｍｏｌｄ）に注入し、冷却させる。
【０２３２】
（処方実施例６）
それぞれ５．０ｍＬ用量当たり５０ｍｇの活性成分を含有する懸濁剤を以下の通り作製する：
成分                                  量
活性成分                        ５０．０ｍｇ
キサンタンガム                  ４．０ｍｇ
カルボキシメチルセルロースナトリウム（１１％）
微結晶性セルロース（８９％）    ５０．０ｍｇ
スクロース                      １．７５ｇ
安息香酸ナトリウム              １０．０ｍｇ
香味剤および着色剤              任意の量（ｑ．ｖ．）
精製水                          ５．０ｍＬまで。
【０２３３】
活性成分、スクロースおよびキサンタンガムをブレンドし、番号１０メッシュＵ．Ｓ．ふるいに通し、次いで予め作製した微結晶性セルロースおよびカルボキシメチルセルロースナトリウムの水溶液と混合する。安息香酸ナトリウム、香味剤および着色剤をいくらかの水で希釈し、撹拌しながら加える。次いで十分量の水を加えて所要体積にする。
【０２３４】
（処方実施例７）
皮下用処方物は以下のようにして調製することができる：
成分                              量
活性成分                    ５．０ｍｇ
トウモロコシ油              １．０ｍＬ
（処方実施例８）
以下の組成を有する注射用調製物を調製する：
成分                              量
活性成分                    ２．０ｍｇ／ｍＬ
マンニトール、ＵＳＰ        ５０ｍｇ／ｍＬ
グルコン酸、ＵＳＰ          適量（ｐＨ５〜６）
水（蒸留、滅菌済）          １．０ｍＬまで適量
窒素ガス、ＮＦ              適量
（処方実施例９）
以下の組成物を有する局所用調製物を調製する：
成分                        グラム
活性成分                  ０．２〜１０
Ｓｐａｎ６０              ２．０
Ｔｗｅｅｎ６０            ２．０
鉱油                      ５．０
ワセリン                  ０．１０
メチルパラベン            ０．１５
プロピルパラベン          ０．０５
ＢＨＡ（ブチル化ヒドロキシアニソール）  ０．０１
水                        １００まで適量。
【０２３５】
水を除く上記成分のすべてを一緒にし、撹拌しながら６０℃に加熱する。次いで６０℃の、十分量の水を強く撹拌しながら加えて成分を乳化させ、次いで１００ｇまでの適量の水を加える。
【実施例】
【０２３６】
本開示を、以下の実施例を参照してさらに明確にする。脈絡（ｔｈｒｅａｄ）と方法の両方への多くの変更を、本開示の範囲から逸脱することなく実施することができることは当業者には明らかである。
【０２３７】
略語
別段の言及のない限り、すべての温度は摂氏温度（℃）である。またこれらの実施例やそのほかで、略語は以下の意味を有する：
【０２３８】
【表２−１】
2013533882.tif 000018
【０２３９】
【表２−２】
2013533882.tif 000019
方法および試薬
細胞および試薬
ＨＰＡＳＭおよびＨＰＡＥＣならびに細胞培池はＬｏｎｚａ  Ｇｒｏｕｐ  Ｌｔｄ．（Ｂａｓｅｌ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）から入手した。化合物Ａは、以下の実施例１において論じるとおりＧｉｌｅａｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｉｎｃ．（Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）により合成された。他の化合物はＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、Ｍｉｓｓｏｕｒｉ）から入手した。
【０２４０】
細胞培養および処理
ＨＰＡＳＭを平滑筋成長培地（ＳＭＧＭ−２）で成長させた。ＨＰＡＥＣを内皮成長培地（ＥＧＭ−２）で成長させた。処理の前に、細胞を２４−ウェルプレートに播種し、約８０％密集度に成長させた。細胞を洗浄し、次いでアデノシン受容体アゴニストおよびアンタゴニストの非存在下または存在下、無血清基礎培地でインキュベートした。増殖アッセイにおいては、ＨＰＡＳＭを、ビヒクルまたはＮＥＡＣで処理したＨＰＡＥＣ細胞から採取した５０％培地でインキュベートした。
【０２４１】
リアルタイムＲＴ−ＰＣＲ
遺伝子発現を、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ  ＰＣＲ装置を備えたリアルタイムＲＴ−ＰＣＲ（Ｌａ  Ｊｏｌｌａ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）を用いて決定した。Ｚｈｏｎｇ  Ｈ．ら、「Ａ２Ｂ  ａｄｅｎｏｓｉｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｉｎｃｒｅａｓｅ  ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ｒｅｌｅａｓｅ  ｂｙ  ｂｒｏｎｃｈｉａｌ  ｓｍｏｏｔｈ  ｍｕｓｃｌｅ  ｃｅｌｌｓ」、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  Ｃｅｌｌ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、３０巻（１号）：１１８〜１２５頁（２００４年）。
【０２４２】
ＩＬ−６、ＩＬ−８、Ｇ−ＣＳＦ、エンドセリン−１およびトロンボキサンＢ２の測定
ＩＬ−６およびＧ−ＣＳＦをＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｃａｒｌｓｂａｄ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）からのヒト３０−ｐｌｅｘ  ｌｕｍｉｎｅｘキットを用いて測定した。ＩＬ−８、エンドセリン−１、トロンボキサンＢ２を、ＥＬＩＳＡ（それぞれ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ＡｓｓａｙＤｅｓｉｇｎｓ（Ａｎｎ  Ａｒｂｏｒ、Ｍｉｃｈｉｇａｎ）およびＣａｙｍｅｎ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ（Ａｎｎ、Ａｒｂｏｒ、Ｍｉｃｈｉｇａｎ）から得たキット）を用いて測定した。
【０２４３】
（実施例１）
化合物Ａおよびそのプロドラッグの合成
Ａ．６−アミノ−１−エチル−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオンの調製
【０２４４】
【化１５】
2013533882.tif 000020
ナトリウムエトキシドの溶液をナトリウム（４．８ｇ、２２６ｍｍｏｌ）および無水エタノール（１５０ｍＬ）から調製した。この溶液に、アミノ−Ｎ−エチルアミド（１０ｇ、１１３ｍｍｏｌ）およびシアノ酢酸エチル（１２．８ｇ、１１３ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を還流下で６時間撹拌し、冷却し、減圧下で反応混合物から溶媒を除去した。残留物を水（５０ｍＬ）に溶解し、塩酸でｐＨを７に調節した。混合物を０℃で終夜静置し、沈殿物をろ別し、水で洗浄し、風乾して６−アミノ−１−エチル−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオンを得た。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  １０．２９（ｓ，  １Ｈ），  ６．７９（ｓ，  ２Ｈ），  ４．５１（ｓ，  １Ｈ），  ３．７４−３．７９（ｍ，  ２Ｈ），  １．０７（ｔ，  ３Ｈ，  Ｊ＝７．０３Ｈｚ）；ＭＳ  ｍ／ｚ１５５．９８（Ｍ＋）、１７７．９９（Ｍ＋＋Ｎａ）。
【０２４５】
Ｂ．６−［２−（ジメチルアミノ）−１−アザビニル］−１−エチル−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオンの調製
【０２４６】
【化１６】
2013533882.tif 000021
無水Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（２５ｍＬ）およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドジメチルアセタール（２．７ｍＬ、２０ｍｍｏｌ）中の６−アミノ−１−エチル−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオン（０．７７ｇ、５ｍｍｏｌ）の懸濁液を４０℃で９０分間加温した。次いで溶媒を減圧下で除去し、残留物をエタノールで摩砕し、ろ過し、エタノールで洗浄して６−［２−（ジメチルアミノ）−１−アザビニル］−１−エチル−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオンを得た。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  １０．６２（ｓ，  １Ｈ），  ８．０８（ｓ，  １Ｈ），  ４．９９（ｓ，  １Ｈ），  ３．８８−３．９５（ｍ，  ２Ｈ），  ３．１３（ｓ，  ３Ｈ），  ２．９９（ｓ，  ３Ｈ），  １．０７（ｔ，  ３Ｈ，  Ｊ＝７．０３Ｈｚ）；ＭＳ  ｍ／ｚ  ２１０．８６（Ｍ＋）、２３２．８７（Ｍ＋＋Ｎａ）。
【０２４７】
Ｃ．６−［２−（ジメチルアミノ）−１−アザビニル］−１−エチル−３−プロピル−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオンの調製
【０２４８】
【化１７】
2013533882.tif 000022
ジメチルホルムアミド（２５ｍＬ）中の６−［２−（ジメチルアミノ）−１−アザビニル］−１−エチル−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオン（１．５ｇ、７．１ｍｍｏｌ）溶液、炭酸カリウム（１．５ｇ、１１ｍｍｏｌ）およびヨウ化ｎ−プロピル（１．５４ｇ、１１ｍｍｏｌ）の混合物を８０℃で５時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却し、ろ過し、溶媒を蒸発させ、生成物６−［２−（ジメチルアミノ）−１−アザビニル］−１−エチル−３−プロピル−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオンをそのまま次の反応で使用した。
【０２４９】
Ｄ．６−アミノ−１−エチル−３−プロピル−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオンの調製
【０２５０】
【化１８】
2013533882.tif 000023
６−［２−（ジメチルアミノ）−１−アザビニル］−１−エチル−３−プロピル−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオン（２．１ｇ）の溶液をメタノール（１０ｍＬ）と２８％水性アンモニア溶液（２０ｍＬ）の混合液に溶解し、室温で７２時間撹拌した。次いで溶媒を減圧下で除去し、残留物を、シリカゲルカラムを用いたクロマトグラフィーによりジクロロメタン／メタノール（１５／１）の混合液で溶出させて精製して６−アミノ−１−エチル−３−プロピル−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオンを得た。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  ６．８０（ｓ，  ２Ｈ），  ４．６４（ｓ，  １Ｈ），  ３．７９−３．８４（ｍ，  ２Ｈ），  ３．６３−３．６７（ｍ，  ２Ｈ），  １．４１−１．５１（ｍ，  ２Ｈ），  １．０９（ｔ，  ３Ｈ，  Ｊ＝７．０３Ｈｚ），  ０．８０（ｔ，  ３Ｈ，  Ｊ＝７．４２Ｈｚ）；ＭＳ  ｍ／ｚ  １９７．８２（Ｍ＋）。
【０２５１】
Ｅ．６−アミノ−１−エチル−５−ニトロソ−３−プロピル−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオンの調製
【０２５２】
【化１９】
2013533882.tif 000024
５０％酢酸／水（３５ｍＬ）の混合液中の６−アミノ−１−エチル−３−プロピル−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオン（１．４ｇ、７．１ｍｍｏｌ）の溶液に、亜硝酸ナトリウム（２ｇ、２８．４ｍｍｏｌ）を１０分間かけて分割して加えた。混合物を７０℃で１時間撹拌し、次いで反応混合物を減圧下で濃縮して小容積にした。固体をろ別し、水で洗浄して６−アミノ−１−エチル−５−ニトロソ−３−プロピル−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオンを得た。ＭＳ  ｍ／ｚ  ２２７．０５（Ｍ＋）、２４９．０８（Ｍ＋＋Ｎａ）。
【０２５３】
Ｆ．５，６−ジアミノ−１−エチル−３−プロピル−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオンの調製
【０２５４】
【化２０】
2013533882.tif 000025
メタノール（１０ｍＬ）中の６−アミノ−１−エチル−５−ニトロソ−３−プロピル−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオン（３００ｍｇ）の溶液に１０％パラジウム炭素（５０ｍｇ）を加え、混合物を水素下、３０ｐｓｉで２時間水素化した。混合物をセライト（ｃｅｌｉｔｅ）でろ過し、溶媒を減圧下でろ液から除去して５，６−ジアミノ−１−エチル−３−プロピル−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオンを得た。ＭＳ  ｍ／ｚ  ２１３．０３（Ｍ＋）、２３５．０６（Ｍ＋＋Ｎａ）。
【０２５５】
Ｆ．Ｎ−（６−アミノ−１−エチル−２，４−ジオキソ−３−プロピル（１，３−ジヒドロピリミジン−５−イル））（１−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝−ピラゾール−４−イル）カルボキサミドの調製
【０２５６】
【化２１】
2013533882.tif 000026
メタノール（１０ｍＬ）中の５，６−ジアミノ−１−エチル−３−プロピル−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオン（１００ｍｇ、０．４７ｍｍｏｌ）および１−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝ピラゾール−４−カルボン酸（０．１５１ｇ、０．５６ｍｍｏｌ）の混合物に１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（０．１３５ｇ、０．７ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で終夜撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、残留物をＢｉｏｔａｇｅを用いて１０％メタノール／塩化メチレンで溶出させて精製してＮ−（６−アミノ−１−エチル−２，４−ジオキソ−３−プロピル（１，３−ジヒドロピリミジン−５−イル））（１−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝−ピラゾール−４−イル）カルボキサミドを得た。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  ８．５９（ｓ，  １Ｈ），  ８．０２（ｓ，  １Ｈ），  ７．５９−７．７１（ｍ，  ４Ｈ），  ６．７１（ｓ，  ２Ｈ），  ５．５１（ｓ，  ２Ｈ），  ３．９１−３．９６（ｍ，  ２Ｈ），  ３．７０−３．７５（ｍ，  ２Ｈ），  １．４７−１．５５（ｍ，  ２Ｈ），  １．１４（ｔ，  ３Ｈ，  Ｊ＝７．０３Ｈｚ），  ０．８５（ｔ，  ３Ｈ，  Ｊ＝７．４２Ｈｚ）。
【０２５７】
Ｇ．３−エチル−１−プロピル−８−（１−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝ピラゾール−４−イル）−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオンの調製
【０２５８】
【化２２】
2013533882.tif 000027
Ｎ−（６−アミノ−１−エチル−２，４−ジオキソ−３−プロピル（１，３−ジヒドロピリミジン−５−イル））（１−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝ピラゾール−３−イル）カルボキサミド（８０ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）、１０％水酸化ナトリウム水溶液（５ｍｌ）およびメタノール（５ｍｌ）の混合物を１００℃で２時間撹拌した。混合物を冷却し、減圧下でメタノールを除去し、残留物を水で希釈し、塩酸で酸性化した。沈殿物をろ別し、水で洗浄し、次いでメタノールで洗浄して３−エチル−１−プロピル−８−（１−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝ピラゾール−４−イル）−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオンを得た。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  ８．５７（ｓ，  １Ｈ），  ８．１５（ｓ，  １Ｈ），  ７．６０−７．７５（ｍ，  ４Ｈ），  ５．５４（ｓ，  ２Ｈ），  ４．０５−４．５０（ｍ，  ２Ｈ），  ３．８７−３．９１（ｍ，  ２Ｈ），  １．５５−１．６４（ｍ，  ２Ｈ），  １．２５（ｔ，  ３Ｈ，  Ｊ＝７．０３Ｈｚ），  ０．９０（ｔ，  ３Ｈ，  Ｊ＝７．４２Ｈｚ）；ＭＳ  ｍ／ｚ  ４４７．２（Ｍ＋）。
【０２５９】
Ｈ．［３−エチル−２，６−ジオキソ−１−プロピル−８−（１−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝−ピラゾール−４−イル）（１，３，７−トリヒドロプリン−７−イル）］メチル二水素ホスフェートの調製
【０２６０】
【化２３】
2013533882.tif 000028
ステップ１−ジ−ｔｅｒｔ−ブチルクロロメチルホスフェートの調製
【０２６１】
【化２４】
2013533882.tif 000029
リン酸水素二ｔｅｒｔ−ブチルの調製
水（４ｍＬ）中の０℃でのビス（ｔｅｒｔ−ブトキシ）ホスフィノ−１−オール（０．７８ｇ、４ｍｍｏｌ）および炭酸水素カリウム（０．６ｇ、２．４ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に過マンガン酸カリウム（０．４４ｇ、２．８ｍｍｏｌ）を（分割して）加えた。混合物を室温に加温し、１時間撹拌した。次いで脱色用活性炭（６０ｍｇ）を加え、混合物を６０℃で１５分間攪拌し、次いでろ過した。このように得られた固体を水（３０ｍＬ）で洗浄し、一緒にしたろ液をさらなる１００ｍｇの脱色用活性炭で６０℃で２０分間処理した。混合物をろ過し、ろ液を０℃に冷却し、撹拌しながら濃塩酸（２ｍＬ）で注意深く酸性化した。沈殿物をろ別し、冷水で洗浄してリン酸水素二ｔｅｒｔ−ブチルを白色固体として得た。
【０２６２】
リン酸水素二ｔｅｒｔ−ブチルのテトラメチルアンモニウム塩の調製
ステップａ）で得たリン酸水素二ｔｅｒｔ−ブチルの溶液をアセトン（１０ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却した。この溶液に水酸化テトラメチルアンモニウムの１０％水溶液（２．４ｍＬ、２．６ｍｍｏｌ）を加え、均一溶液を減圧下で蒸発させて固体を得た。これを還流（ｒｅｆｌｕｘｉｎｇ）１，２−ジメトキシエタンから結晶化させてテトラメチルアンモニウムリン酸水素二ｔｅｒｔ−ブチルを白色固体として得た。
【０２６３】
ステップｂで得たテトラメチルアンモニウムリン酸水素二ｔｅｒｔ−ブチルを、還流１，２−ジメトキシメタン（１５ｍＬ）に溶解し、クロロヨードメタン（３．２ｇ、１８．１ｍｍｏｌ）を加え、混合物を９０分間還流させた。溶媒を減圧下で除去し、残留物、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルクロロメチルホスフェートをさらに精製することなくそのまま用いた。
【０２６４】
ステップ２
３−エチル−１−プロピル−８−（１−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝−ピラゾール−４−イル）−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン（０．４７ｇ、１ｍｍｏｌ）の溶液を２０ｍＬのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドに溶解し、炭酸カリウム（０．４２ｇ、４ｍｍｏｌ）を加え、続いてジ−ｔｅｒｔ−ブチルクロロメチルホスフェート（０．３４ｇ、１．３２ｍｍｏｌ）を加え、混合物を６０℃で終夜撹拌した。反応混合物を冷却し、沈殿物をろ別し、酢酸エチルで洗浄した。ろ液を減圧下で濃縮し、残留物を、分取薄層クロマトグラフィーを用いて４％メタノール／塩化メチレンで溶出させてｔｅｒｔ−ブチル［３−エチル−２，６−ジオキソ−１−プロピル−８−（１−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝ピラゾール−４−イル）（１，３，７−トリヒドロプリン−７−イル）］メチルメチルエチルホスフェート（０．２６ｇ）を無色油状物として得た。
【０２６５】
ステップ３
ｔｅｒｔ−ブチル［３−エチル−２，６−ジオキソ−１−プロピル−８−（１−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝ピラゾール−４−イル）（１，３，７−トリヒドロプリン−７−イル）］メチルメチルエチルホスフェート（８０ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）の溶液を塩化メチレン（６ｍＬ）に溶解し、トリフルオロ酢酸（０．７２ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で終夜撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、固体状の白色残留物をエーテルで摩砕し、ろ過して収集して［３−エチル−２，６−ジオキソ−１−プロピル−８−（１−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝−ピラゾール−４−イル）（１，３，７−トリヒドロプリン−７−イル）］メチル二水素ホスフェート（４１ｍｇ）を得た。
ＮＭＲ  １Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  ８．７０（ｓ，  １Ｈ），  ８．１５（ｓ，  １Ｈ），  ７．７４（ｓ，  １Ｈ），  ７．６９−７．７１（ｍ，  １Ｈ），  ７．６０−７．６３（ｍ，  ２Ｈ），  ６．１２（ｄ，  ２Ｈ，  Ｊ＝５．４Ｈｚ），  ５．５４（ｓ，  ２Ｈ），  ４．０６（ｑ，  ２Ｈ，  Ｊ＝１３．８Ｈｚ），  ３．８４（ｔ，  ２Ｈ，  Ｊ＝７．４Ｈｚ），  １．５２−１．６２（ｍ，  ２Ｈ），  １．２５（ｔ，  ３Ｈ，  Ｊ＝７．０Ｈｚ），  ０．８７（ｔ，  ３Ｈ，  Ｊ＝７．４Ｈｚ）；ＭＳ  ｍ／ｚ  ５７９．０２（Ｍ＋＋Ｎａ）
（実施例２）
アデノシン受容体アッセイ
Ａ２Ｂアンタゴニストについてスクリーニングするためには通常２種類のアッセイ：１）以下に記載するように所与の化合物がＡ２Ｂ受容体と結合できることを決定するための放射リガンド結合アッセイと、２）その化合物がアゴニスト（受容体を活性化する）であるかまたはアンタゴニスト（受容体の活性化の活性化を阻害する）であるかどうかを決定する機能アッセイ（ｃＡＭＰアッセイまたはその他）を用いる。
【０２６６】
Ａ２Ｂアデノシン受容体についての放射リガンド結合アッセイを、化合物のＡ２Ｂアデノシン受容体に対する親和性を決定するために用いる。その一方で、他のアデノシン受容体についての放射リガンド結合アッセイを、Ａ１、Ａ２ＡおよびＡ３アデノシン受容体に対する化合物の親和性を決定するために実施する。化合物は、他のアデノシン受容体に対してより、Ａ２Ｂ受容体に対してより高い親和性（少なくとも３倍）を有するはずである。
【０２６７】
Ａ２Ｂ受容体についてのｃＡＭＰアッセイは、化合物がアンタゴニストであり、ｃＡＭＰにおけるＡ２Ｂ受容体媒介による増大をブロックすることを確認するためにしばしば用いられる。
【０２６８】
Ａ２Ｂアデノシン受容体についての放射リガンド結合
Ａ２Ｂ受容体に対する推定のアンタゴニストである化合物を、以下のアッセイにもとづいて必要な活性についてスクリーニングすることができる。ヒトＡ２Ｂアデノシン受容体ｃＤＮＡを、ＨＥＫ−２９３細胞に安定的にトランスフェクトする（ＨＥＫ−Ａ２Ｂ細胞と称する）。ＨＥＫ−Ａ２Ｂ細胞の単層をＰＢＳで１回洗浄し、１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）、１０ｍＭ  ＥＤＴＡおよびプロテアーゼ阻害剤を含有する緩衝液に採取する。これらの細胞をポリトロン（ｐｏｌｙｔｒｏｎ）において、セッティング４で１分間ホモジナイズし、２９０００ｇ、４℃で１５分間遠心分離する。細胞ペレットを１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）、１ｍＭ  ＥＤＴＡおよびプロテアーゼ阻害剤を含有する緩衝液で１回洗浄し、１０％スクロースを補充した同じ緩衝液に再懸濁させる。凍結させた一定分量を−８０℃で保持する。１０ｎＭ  ３Ｈ−ＺＭ２４１３８５（Ｔｏｃｒｉｓ  Ｃｏｏｋｓｏｎ）を、１単位／ｍＬアデノシンデアミナーゼを補充したＴＥ緩衝液（５０ｍＭトリスおよび１ｍＭ  ＥＤＴＡ）中の種々の濃度の試験化合物および５０μｇ膜タンパク質と混合させて競合アッセイを開始する。分析物を９０分間インキュベートし、Ｐａｃｋａｒｄ収穫器を用いたろ過により停止し、氷冷ＴＭ緩衝液（１０ｍＭトリス、１ｍＭ  ＭｇＣｌ２、ｐＨ７．４）で４回洗浄する。非特異的結合を１０μＭ  ＺＭ２４１３８５の存在下で決定する。化合物の親和性（すなわち、Ｋｉ値）をＧｒａｐｈＰａｄソフトウェアを用いて計算する。
【０２６９】
他のアデノシン受容体についての放射リガンド結合
ヒトＡ１、Ａ２Ａ、Ａ３アデノシン受容体ｃＤＮＡを、ＣＨＯかまたはＨＥＫ−２９３細胞中に安定的にトランスフェクトする（ＣＨＯ−Ａ１  ＨＥＫ−Ａ２Ａ、ＣＨＯ−Ａ３と称する）。上記したのと同じプロトコルを用いて、これらの細胞から膜を調製する。０．５ｎＭ  ３Ｈ−ＣＰＸ（ＣＨＯ−Ａ１のため）、２ｎＭ  ３Ｈ−ＺＭ２４１３８５（ＨＥＫ−Ａ２Ａ）または０．１ｎＭ  １２５Ｉ−ＡＢ−ＭＥＣＡ（ＣＨＯ−Ａ３）を、１単位／ｍＬアデノシンデアミナーゼを補充したＴＥ緩衝液（５０ｍＭトリスおよび１ｍＭ  ＥＤＴＡ（ＣＨＯ−Ａ１およびＨＥＫ−Ａ２Ａについて））またはＴＥＭ緩衝液（５０ｍＭトリス、１ｍＭ  ＥＤＴＡおよび１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２（ＣＨＯ−Ａ３について））中の種々の濃度の試験化合物および透視膜（ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅ  ｍｅｍｂｒａｎｅ）と混合させて競合アッセイを開始する。分析物を９０分間インキュベートし、Ｐａｃｋａｒｄ収穫器を用いたろ過により停止し、氷冷ＴＭ緩衝液（１０ｍＭトリス、１ｍＭ  ＭｇＣｌ２、ｐＨ７．４）で４回洗浄する。非特異的結合を１μＭ  ＣＰＸ（ＣＨＯ−Ａ１）、１μＭ  ＺＭ２１４３８５（ＨＥＫ−Ａ２Ａ）および１μＭ  ＩＢ−ＭＥＣＡ（ＣＨＯ−Ａ３）の存在下で決定する。化合物の親和性（すなわち、Ｋｉ値）をＧｒａｐｈＰａｄソフトウェアを用いて計算する。
【０２７０】
ｃＡＭＰ測定
トランスフェクト細胞の単層を５ｍＭ  ＥＤＴＡを含有するＰＢＳに採取する。細胞をＤＭＥＭで１回洗浄し、１単位／ｍＬアデノシンデアミナーゼを含有するＤＭＥＭに、１００，０００  ５００，０００細胞／ｍＬの密度で再懸濁させる。１００μＬの細胞懸濁液を種々のアゴニストおよび／またはアンタゴニストを含有する２５μＬと混合し、反応物を３７℃で１５分間保持する。１５分経ったら１２５μＬの０．２Ｎ  ＨＣｌを加えて反応を停止させる。細胞を１０００ｒｐｍで１０分間遠心分離する。１００μＬの上清を除去し、アセチル化する。上清中のｃＡＭＰの濃度を、Ａｓｓａｙ  Ｄｅｓｉｇｎからの直接ｃＡＭＰアッセイを用いて測定する。
【０２７１】
Ａ２ＡおよびＡ２Ｂアデノシン受容体をＧｓタンパク質と共役させると、Ａ２Ａアデノシン受容体に対するアゴニスト（ＣＧＳ２１６８０、ＣＡＳ＃２０２２５−５４−９など）またはＡ２Ｂアデノシン受容体に対するアゴニスト（ＮＥＣＡなど）はｃＡＭＰの蓄積を増大させるが、これらの受容体に対するアンタゴニストはアゴニストによって誘導されたｃＡＭＰ蓄積の増大を防止する。Ａ１およびＡ３アデノシン受容体をＧｉタンパク質と共役させると、Ａ１アデノシン受容体に対するアゴニスト（ＣＰＡなど）またはＡ３アデノシン受容体に対するアゴニスト（ＩＢ−ＭＥＣＡなど）は、ホルスコリンによって誘導されたｃＡＭＰ蓄積の増大を阻害する。Ａ１およびＡ３受容体に対するアンタゴニストはｃＡＭＰ蓄積における阻害を防止する。
【０２７２】
上記アッセイプロトコルにもとづいて、化合物がＡ２Ｂ受容体アンタゴニストに対するアンタゴニストであるかどうかを決定するのは当業者の技術の範囲内である。
【０２７３】
（実施例３）
ＨＰＡＳＭおよびＨＰＡＥＣにおけるアデノシン受容体の発現
この実施例は、アデノシン受容体の４つのサブタイプ（Ａ１、Ａ２Ａ、Ａ２ＢおよびＡ３）のうちＡ２Ｂは、ヒト肺動脈細胞において最も高い発現を有する。
【０２７４】
ヒト肺動脈内皮細胞（ＨＰＡＥＣ）およびヒト肺動脈平滑筋細胞（ＨＰＡＳＭ）におけるアデノシン受容体の４つのサブタイプＡ１、Ａ２Ａ、Ａ２ＢおよびＡ３の発現を、上記した方法を用いた定量的リアルタイムＲＴ−ＰＣＲにより決定した。
【０２７５】
結果を図１（ＨＰＡＥＣ）および図２（ＨＰＡＳＭ）に示す。図から認められるように、目ざましいことに、両方の細胞型においてＡ２Ｂの発現は、β−アクチンのパーセンテージに対して示すようにＡｄｏＲの４つのサブタイプの中で最も高かった。Ａ１およびＡ３の発現は、どちらの細胞においても検出されなかった。
【０２７６】
（実施例４）
ブレオマイシン誘発血管壁肥厚はＡ２Ｂ受容体によって媒介される
この実施例は、ブレオマイシン誘発血管壁肥厚におけるＡ２Ｂ受容体の役割を示しており、したがって、肺高血圧症の病因におけるその関与を実証している。
【０２７７】
ブレオマイシンは、細菌のＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｕｓによって産生されるグリコペプチド抗生物質である。ブレオマイシンは、肺線維症および肺機能障害を含む重篤な合併症に関わる公知の抗がん剤である。ブレオマイシンは酸素毒性に対する感受性を誘導することが示唆されており、最近の研究は、ブレオマイシン誘発肺損傷の機序における炎症促進性サイトカインＩＬ−１８およびＩＬ−１βの役割を支持している。
【０２７８】
図４Ａ〜Ｉは、ブレオマイシンに曝露された野生型およびＡ２Ｂ受容体ノックアウト（ＫＯ）マウスにおける血管の変化を示している。マウスに、ブレオマイシン（０．３５単位）または食塩水の腹腔内注射を４日ごとに３３日間施した。プロトコルの最後に、肺をＨ＆Ｅ染色用に処理した。図４Ａ、４Ｄおよび４Ｇはそれぞれ、食塩水に曝露された野生型マウスからの遠位動脈、近位動脈および前細葉肺動脈を示す。図４Ｂ、４Ｅおよび４Ｈはそれぞれ、ブレオマイシンに曝露された野生型マウスからの遠位動脈、近位動脈および前細葉肺動脈を示す。図４Ｃ、４Ｆおよび４Ｉはそれぞれ、ブレオマイシンに曝露されたＡ２Ｂ受容体ＫＯマウスからの遠位動脈、近位動脈および前細葉肺動脈を示す。ブレオマイシンに曝露された野生型マウスは小さい遠位肺動脈およびより近位の肺動脈周りの筋肉質の増大を示しており、このことから、これらのマウスが、肺高血圧症の古典的な形態学的特徴を有していることが示唆された。重要なことに、ブレオマイシンに曝露されたＡ２Ｂ受容体ＫＯマウスはこれらの血管変化を示さなかった。このことから、Ａ２Ｂ受容体が肺高血圧症の病因に関与していることが示唆された。
【０２７９】
（実施例５）
内皮細胞におけるＩＬ−８の放出
この実施例は、Ａ２Ｂ受容体の活性化はＩＬ−８の放出を誘導し、その誘導をＡ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストで阻害できることを示している。
【０２８０】
ＨＰＡＥＣを、基礎培地中で種々の濃度（０．１μＭ、１μＭおよび１０μＭ）のＮＥＣＡ（Ｎ−エチルカルボキサミドアデノシン）および化合物Ａ（１００ｎＭ）の非存在下または存在下で１８時間インキュベートした。ＮＥＣＡはＡ１およびＡ２サブタイプの公知のアデノシンアゴニストである。ｐｇ／ｍＬで与えられるＩＬ−８の量をＥＬＩＳＡで測定した。結果を図５に示す。図５で認められるように、ＮＥＣＡは１８時間でＩＬ−８の放出を用量依存的に増大させた。ＮＥＣＡ（１０μＭ）のこの効果はＡ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニスト、化合物Ａ（Ｃｏｍｐ  Ａ）により著しく低下した。このことから、Ａ２Ｂ受容体の活性化がＩＬ−８の放出を誘導したことが示唆された。
【０２８１】
（実施例６）
ＨＰＡＥＣからのエンドセリン−１放出
実施例５と同様に、この実施例は、Ａ２Ｂ受容体の活性化がＥＴ−１の放出を誘導し、その誘導をＡ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストで阻害できることを示している。
【０２８２】
ＨＰＡＥＣを、種々の濃度（０．１μＭ、１μＭおよび１０μＭ）のＮＥＣＡおよび化合物Ａ（１００ｎＭ）の非存在下または存在下で１８時間インキュベートした。ｐｇ／ｍＬで与えられるＥＴ−１の量を上記で論じたＥＬＩＳＡプロトコルにより測定した。結果を図６に示す。図６で認められるように、ＮＥＣＡは１８時間でＥＴ−１の放出を用量依存的に増大させた。ＮＥＣＡ（１０μＭ）のこの効果はＡ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニスト、化合物Ａにより著しく低下した。このことから、Ａ２Ｂ受容体の活性化がＥＴ−１の放出を誘導したことが示唆された。
【０２８３】
（実施例７）
ＨＰＡＳＭからのサイトカイン放出
実施例５および６と同様に、この実施例は、Ａ２Ｂ受容体の活性化は筋肉細胞においてもサイトカインの放出を誘導し、これをＡ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストで阻害できることを示している。
【０２８４】
ＨＰＡＳＭを、種々の濃度（０．１μＭ、１μＭおよび１０μＭ）のＮＥＣＡおよび化合物Ａ（１００ｎＭ）の非存在下または存在下で１８時間インキュベートした。ＮＥＣＡは１８時間でＩＬ−６（図７を参照）、ＩＬ−８（図８を参照）およびＧ−ＣＳＦ（図９）の放出を用量依存的に増大させた。ＮＥＣＡ（１０μＭ）のこれらの効果は、Ａ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニスト、化合物Ａにより著しく低下した。このことから、Ａ２Ｂ受容体の活性化がこれらのサイトカインの放出を誘導したことが示唆された。
【０２８５】
（実施例８）
平滑筋細胞遊走
この実施例は、ＮＥＣＡが平滑筋遊走を増大させ、その増大はＡ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニスト、化合物Ａまたは抗ＩＬ−６抗体で阻害できることを示している。
【０２８６】
順化培池を、ビヒクル、ＮＥＣＡ（１０μＭ）、ＮＥＣＡ（１０μＭ）および化合物Ａ（１００ｎＭ）、またはＮＥＣＡ（１０μＭ）および抗ＩＬ−６抗体（１ｎｇ／ｍＬ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎから購入）で１８時間処理したＨＰＡＳＭから採取し、Ｂｏｙｄｅｎチャンバーアッセイシステムの下部ウェルに化学誘引物質として加えた。ＨＰＡＳＭを２４時間遊走させた。図１０Ａに示すように、ＮＥＣＡは平滑筋細胞遊走を増大させ、その増大は化合物Ａかまたは抗ＩＬ−６抗体のいずれかにより阻害された。またＩＬ−８中和抗体は細胞遊走に対して効果がないことも観察された。したがって、この実施例は、Ａ２Ｂアデノシン受容体を活性化することによって、ＮＥＣＡが平滑筋を活性化し、その平滑筋がＩＬ−６を放出することを示している。放出されたＩＬ−６は次には平滑筋細胞遊走を増進させる（例示のための図１０Ｂを参照されたい）。
【０２８７】
（実施例９）
ＨＰＡＳＭからのトロンボキサンＢ２放出
この実施例は、ＨＰＡＳＭにおいて、Ａ２Ｂ受容体の活性化が、肺血管収縮を誘発することが公知であるトロンボキサンＢ２の放出を誘導することを示している。
【０２８８】
ＨＰＡＳＭを種々の濃度（０．１μＭ、１μＭおよび１０μＭ）のＮＥＣＡおよび化合物Ａ（１００ｎＭ）の非存在下または存在下で１８時間インキュベートした。図１１で認められるように、ＮＥＣＡは１８時間でトロンボキサンＢ２の放出を用量依存的に増大させた。ＮＥＣＡ（１０μＭ）のこの効果は化合物Ａにより著しく低下した。このことから、Ａ２Ｂ受容体の活性化がトロンボキサンＢ２の放出を誘導したことが示唆された。
【０２８９】
（実施例１０）
コラーゲン、他の細胞外マトリックスタンパク質および細胞外マトリックス酵素の発現
ＨＰＡＳＭを、ＮＥＣＡ（１０μＭ）の存在下または化合物Ａ（１００ｎＭ）と一緒のＮＥＣＡ（１０μＭ）の存在下で１．５時間インキュベートした。組織リモデリングに関与する遺伝子に焦点をあてたリアルタイム−ＲＴ−ＰＣＲアレイを、ＨＰＡＳＭから単離したＲＮＡについて実施した。ＮＥＣＡは、ＡＤＡＭＴＳ１、ＡＤＡＭＴＳ８、ＣＤＨ１、ＭＭＰ７、ＭＭＰ１２、ＨＡＳ１、ＩＴＧＡ７、ＣＯＬ１Ａ１、ＣＯＬ８Ａ１およびＣＴＧＦのｍＲＮＡ発現を増大させた（図１２Ａ−Ｂ）。ＮＥＣＡのこれらの効果は化合物Ａによって低下した（図１２Ｃ）。このことから、Ａ２Ｂ受容体の活性化がこれらの遺伝子の放出を誘導したことが示唆された。
【０２９０】
（実施例１１）
ＨＰＡＳＭの増殖に対するＮＥＣＡ活性化ＨＰＡＥＣの効果
この実施例は、ＨＰＡＥＣにおけるＡ２Ｂ受容体がＥＴ−１の放出を増大させ、次いでそのＥＴ−１がＨＰＡＳＭの増殖を誘導することを示している。他方、Ａ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストによる処理はそうした誘導を阻害する。
【０２９１】
細胞上清を、ビヒクル（対照培地）、ＮＥＣＡ（１０μＭ、ＮＥＣＡ培地）またはＮＥＣＡおよび化合物Ａ（１００ｎＭ）で１８時間処理したＨＰＡＥＣから採集した。アンブリセンタン（３０ｎＭ）を含むまたは含まないこれらの細胞上清（ＭｕｒａｓｈｉｇｅおよびＳｋｏｏｇ（ＭＳ）基礎培地で１：１希釈）を用いて、ＨＰＡＳＭを１８時間インキュベートした。細胞をカウントした。結果を図１３Ａに示す。ＮＥＣＡ−ＨＰＡＥＣ培地は、対照ＨＰＡＥＣ培地と比較して、１８時間でＨＰＡＳＭの細胞数を増大させた。この発見は、ＮＥＣＡにより誘導されＨＰＡＥＣから放出された特定のメディエータはＨＰＡＳＭの増殖を促進する、またはＨＰＡＳＭの細胞死を防止することができ得ることを示唆している。
【０２９２】
図１３Ａに示すように、化合物Ａとアンブリセンタンの両方で処理すると、ＮＥＣＡ誘導増殖が阻害された。具体的には、化合物Ａ（Ｇｉｌｅａｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｉｎｃ．から入手可能）は内皮細胞の活性化を阻害し、次いでその内皮細胞はＥＴ−１の放出を減少させることを実証している。ＥＴＡ（エンドセリンＡ）受容体のアンタゴニストであるアンブリセンタンは、ＮＥＣＡがＨＰＡＳＭを活性化することによって誘導されたＨＰＡＳＭの増殖を阻害する。したがって、アデノシンにより活性化されたＨＰＡＥＣはＨＰＡＳＭの増殖を誘導することができ、これは、ＥＴ−１の放出の増大をもたらすＨＰＡＥＣのＡ２Ｂ受容体によって媒介される。
【０２９３】
（実施例１２）
ＨＰＡＳＭにおけるＮＯＴＣＨ３のＮＥＣＡ誘導発現
肺高血圧症は、小肺動脈平滑筋細胞におけるＮＯＴＣＨ３の過剰発現を特徴とし得ることが想定される。さらに、その疾患の重症度は、肺におけるＮＯＴＣＨ３タンパク質の量とも相関している可能性がある。Ｌｉ、Ｘ．ら、「Ｎｏｔｃｈ３  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｐｒｏｍｏｔｅｓ  ｔｈｅ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ａｒｔｅｒｉａｌ  ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ」Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、１５巻（１１号）：１２８９〜１２９７頁（２００９年）を参照されたい。
【０２９４】
ＨＰＡＳＭを、ＮＥＣＡ（１０μＭ）とともに、または化合物Ａ（１００ｎＭ）と一緒のＮＥＣＡ（１０μＭ）とともに１．５時間インキュベートした。ＮＯＴＣＨ３の発現を、上記した方法を用いて定量的リアルタイムＲＴ−ＰＣＲにより測定した。
【０２９５】
結果を図１４に示す。図に認められるように、ＮＯＴＣＨ３の遺伝子発現およびＮＥＣＡによって誘導されたＮＯＴＣＨ３発現の増大は化合物Ａによって阻害された。したがって、さらに、肺高血圧症はＡ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストを用いて処置できることが想定される。
【０２９６】
（実施例１３）
ＡＤＡ欠損マウスの肺における血管壁肥厚の減弱
この実施例は、アデノシン依存性肺損傷モデルにおいて、Ａ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストを用いた処置が血管壁の肥厚を減弱させることを実証している。
【０２９７】
使用されるモデル系は、アデノシン依存性肺損傷のアデノシンデアミナーゼ（ＡＤＡ）欠損マウスモデルである。マウスは、Ｂｌａｃｋｂｕｒｎ、Ｍ．ら、「Ａｄｅｎｏｓｉｎｅ  Ｄｅａｍｉｎａｓｅ−ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ  Ｍｉｃｅ  Ｇｅｎｅｒａｔｅｄ  Ｕｓｉｎｇ  ａ  Ｔｗｏ−ｓｔａｇｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  Ｓｔｒａｔｅｇｙ  Ｅｘｈｉｂｉｔ  ａ  Ｃｏｍｂｉｎｅｄ  Ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ」Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．、２７３巻（９号）：５０９３〜５１００頁（１９９８年）に記載されている方法にしたがって得た。
【０２９８】
この実施例は、Ｓｕｎ  ＣＸら、「Ｒｏｌｅ  ｏｆ  Ａ２Ｂ  ａｄｅｎｏｓｉｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｉｎ  ａｄｅｎｏｓｉｎｅ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｉｎｊｕｒｙ」、Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ．、１１６巻（８号）：２１７３〜２１８２頁（２００６年）（これを参照により本明細書に組み込む）に記載されているプロトコルにしたがう。
【０２９９】
すべてのＡＤＡ欠損マウスを、誕生から生後２１日目までＡＤＡ酵素療法で維持して、肺胞発達の欠陥を防止した。Ｂａｎｅｒｊｅｅら、Ａｍ．  Ｊ．  Ｒｅｓｐｉｒ．  Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ３０−３８−５０（２００４年）。生後２１日目にＡＤＡ酵素療法を中止し、３日後、マウスに１ｍｇ／ｋｇの化合物Ａを腹腔内注射で毎日２回１４日間与えた。
【０３００】
生後３８日目のマウスから肺を採取し、慣行的な仕方で切断およびＨ＆Ｅ染色用に調製した。対照（ＡＤＡ＋）マウス（図３Ａ）、ＡＤＡ欠損マウス（図３Ｂ）および化合物Ａで処置したＡＤＡ欠損マウス（図３Ｃ）から組織を取った。切片は、それぞれの処置群からの６〜８匹の異なるマウスを代表するものである。図に認められるように、ＡＤＡ−／−マウスは、ＡＤＡ＋マウスの血管壁肥厚と比較して血管壁肥厚の増大を示した。さらに、化合物Ａで処置したＡＤＡ−／−マウスにおける肥厚は劇的に減少している。
【０３０１】
（実施例１４）
アデノシンＡ２Ｂ受容体は慢性肺疾患に関連する肺高血圧症を調節する
この実施例は、慢性肺損傷に関連する肺高血圧症の病因におけるＡ２Ｂアデノシン受容体の役割を明らかにしており、Ａ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストがそうした肺高血圧症を処置するのに有用であることを実証している。
【０３０２】
方法：雄性Ｃ５７ＢＬ６マウスを、マウス当たり０．０３５単位のブレオマイシン（ＢＬＭ）またはビヒクル（リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ））で、腹腔内に週２回４週間処置した。肺線維症が確立されたら、１５日目に、続く１８日間、マウスにＡ２Ｂ受容体アンタゴニスト、化合物Ａ（約１０ｍｇ／ｋｇ／日用量）を含有する特別な固形飼料を供給した（図１５）。その一方、対照群には通常の固形飼料を与えた。
【０３０３】
３３日目に、右心室収縮期血圧（ＲＶＳＰ）、全身血圧、心拍数および肺機能測定を実施した。さらに、肺を、α−平滑筋アクチン（αＳＭＡ）についての免疫組織化学（ＩＨＣ）のために採取した。
【０３０４】
統計分析：すべてのデータを、Ｎｅｗｍａｎ−Ｋｅｕｌｓ事後検定による一元配置分散分析（１−ｗａｙ  ＡＮＯＶＡ）を用いて分析した。統計分析を実行するのに使用したソフトウェアはＧｒａｐｈ−Ｐａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ｖ５．００（Ｌａ  Ｊｏｌｌａ  ＣＡ）であった。関連するすべての図において、有意水準：＊Ｐ＜０．０５、＊＊０．００１＜Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１はＰＢＳ群とＢＬＭ間の比較に関係する；有意水準：＃Ｐ＜０．０５、＃＃０．００１＜Ｐ＜０．０１、＃＃＃Ｐ＜０．００１はＢＬＭ群とＢＬＭ＋化合物Ａ群間の比較に関係する。図におけるすべての値は、群当たり５〜８匹のマウスについての平均値＋ＳＥＭ（平均値の標準誤差（ｓｔａｎｄａｒｄ  ｅｒｒｏｒ  ｏｒ  ｔｈｅ  ｍｅａｎ））を表す。
【０３０５】
結果：肺高血圧症（ＰＨ）はしばしば慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）および肺線維症などの基礎をなす慢性肺疾患に関連する。いくつかの分類体系において、ＰＨは５つの群に分類され、肺疾患に関連するＰＨは第３群として分類される（例えば、Ｓｉｍｏｎｎｅａｕら、「Ｕｐｄａｔｅｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ」、Ｊ  Ａｍ  Ｃｏｌｌ  Ｃａｒｄｉｏｌ  ５４巻：Ｓ４３〜５４頁（２００９年））。
【０３０６】
ここで、肺線維症動物モデルはブレオマイシン（ＢＬＭ）を用いた処置で確立される。上記したように、ＢＬＭは細菌のＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｕｓによって産生されるグリコペプチド抗生物質であり、これは、肺線維症および肺機能障害を含む重篤な合併症に関わる公知の抗がん剤である。図１６Ａ〜Ｂに示すように、ＨＰＬＣで測定して、マウスの気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬＦ）からのアデノシンレベルおよび新鮮な凍結肺からのＡ２ＢＲ発現レベルはブレオマイシン処置の後に有意に増大した。
【０３０７】
ブレオマイシン曝露の後の血管リモデリングの変化および化合物Ａの効果は、実質（上のパネル）および血管の筋肉壁（矢印および下のパネル）における筋線維芽細胞（灰色のシグナル）を特定するのためのα−ＳＭＡについての免疫染色を示す図１７Ａから明らかである。ＢＬＭは、血管の筋肉化の程度（図１７Ｂ）および筋肉化した血管の数（図１７Ｃ）を有意に増大させた。その増大は、化合物Ａ処置マウスまたはＡ２ＢＲ−／−マウス（ｎｉｃｅ）において減弱した。さらに、図１８に示すように、ＢＬＭはＲＶＳＰ（左側パネル）およびＲＶ肥大（右側パネル）を有意に増大させた。しかし、そうした増大は、化合物Ａ処置マウスまたはＡ２ＢＲ−／−マウスにおいても減弱した。さらに、ＢＬＭは肺における全コラーゲン量によって表されるように血管周囲線維症を増進させており、この増進は化合物Ａ処置マウスまたはＡ２ＢＲ−／−マウスにおいても同様に減弱した（図１９）。
【０３０８】
図２０Ａ〜Ｂは、ブレオマイシン処置および化合物Ａの効果を示すいくつかの肺機能測定値を含む。すべての場合において、ＢＬＭは、肺機能（例えば、肺の動的抵抗の増大（Ａ）、組織ダンピングの増進（Ｂ）、準静的エラスタンスの増大（Ｃ）および動脈酸素化レベルの低下（Ｄ）に対して大きな影響を及ぼした。しかし、そうしたすべての効果は、化合物Ａの処置によって、またはＡ２ＢＲ−／−マウスにおいて減弱した。
【０３０９】
実施例７および８と同様に、ＢＬＭ  ＰＨ動物モデルにおいて、ＢＬＭは、インターロイキン（ＩＬ）−６レベル（図２１）およびＥＴ−１（図２２）の放出を有意に増大させた。これは上記観察と一致し、そうした増大は、化合物Ａの処置によって、またはＡ２ＢＲ−／−マウスにおいて有意に減弱した。
【０３１０】
要約すれば、ＢＬＭに曝露されたマウスは、対照マウスと比較してＲＶＳＰが増大した。処置群間で、全身収縮期血圧や心拍数の変化は観察されなかった。ＢＬＭ曝露マウスにおいて、肺機能の測定値は気道抵抗の増大ならびに気道および組織コンプライアンスの減少を示した。これは肺線維症の発現と一致した。αＳＭＡについてのＩＨＣは、ＢＬＭ曝露の後に新たに筋肉化した血管の増大を示した。Ａ２Ｂ受容体の遮断は、ＲＶＳＰのＢＬＭ誘導による増大を阻害することができ、また肺機能におけるＢＬＭの効果を減弱させ、肺血管の筋肉化の程度を低減させることもできた。
【０３１１】
これらの結果は、慢性肺損傷に関連する肺高血圧症の病因におけるＡ２Ｂ受容体の役割を際立たせており、Ａ２Ｂ受容体を、肺高血圧症の処置のための有効な標的として確認するものである。
【０３１２】
当業者は、本明細書では明確に記載されていないまたは示されていないが、本開示の原理を具現化し本開示の趣旨および範囲内に包含されている種々の構成（ａｒｒａｎｇｅｍｅｎｔ）を案出することができることを理解されよう。さらに、本明細書で挙げたすべての条件付き用語（ｃｏｎｄｉｔｉｏｎａｌ  ｌａｎｇｕａｇｅ）は、基本的には、読者が、本開示の原理および当該技術を促進させようとする本発明者が寄与する概念を理解する助けとなるようにするものであり、そうした具体的に挙げられた条件に限定されないと解釈されるべきである。さらに、本開示の原理、態様および実施形態に言及する本明細書のすべての記述は、その構造的均等物と機能的均等物の両方を包含するものとする。さらに、そうした均等物は現時点で公知の均等物と将来開発される均等物、すなわち構造に関係なく、同じ機能を遂行する開発された任意の要素の両方を包含するものとする。したがって、本開示の範囲は、本明細書で示し記載した例示としての実施形態に限定されるものではない。むしろ、本開示の範囲および趣旨は添付の特許請求の範囲によって具現化される。
【図１】
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【図２】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図４Ｄ】
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【図４Ｅ】
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【図４Ｆ】
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【図４Ｇ】
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【図４Ｈ】
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【図４Ｉ】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１１】
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【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ】
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【図１２Ｃ】
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【図１３Ａ】
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【図１３Ｂ】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１８】
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【図２０】
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【図２１】
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【図１７】
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【図１９】
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【図２２】
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【国際調査報告】
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