(57)【要約】アッセイ試薬として使用するための組成物は、シグナル生成システムのメンバー及び合成コポリマーのコーティングを含む固体支持体を含む。この合成コポリマーは、第１の重合モノマー（反応性官能基又は反応性官能基の誘導体を含むペンダント部分を含む）及び第２の重合性モノマー（少なくとも１個の炭素原子及び少なくとも２個のヘテロ原子を含むペンダント部分を含む）を含む。幾つかの実施態様において、このコポリマーは、反応性官能基又は反応性官能基の誘導体を含むペンダント部分、並びに少なくとも１個の炭素原子及び少なくとも２個のヘテロ原子を含むペンダント部分を含むポリエチレン性基本骨格を含む。【特許請求の範囲】
【請求項１】
アッセイ試薬として使用するための組成物であって、シグナル生成システムのメンバー及び合成コポリマーのコーティングを含む固体支持体を含む組成物［ここで、合成コポリマーは、反応性官能基又は誘導体化反応性官能基を含むペンダント部分を含む第１の共重合モノマー、並びに少なくとも１個の炭素原子及び少なくとも２個のヘテロ原子を含むペンダント部分を含む第２の共重合モノマーを含む］。
【請求項２】
固体支持体が、粒子である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
粒子が、ラテックス粒子である、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
シグナル生成システムのメンバーが、増感剤及び化学発光化合物よりなる群から選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
コポリマーが、ポリエチレン性基本骨格［（ｉ）反応性官能基又は誘導体化反応性官能基を含むペンダント部分、並びに（ii）少なくとも１個の炭素原子及び少なくとも２個のヘテロ原子を含むペンダント部分を含む］を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
第１の共重合モノマーのペンダント部分が、−Ｃ（Ｏ）−Ａ−（ＣＨ２）ｎ−Ｇ［式中、Ａは、Ｏ又はＮＲ１（ここで、Ｒ１は、Ｈ、又は１〜６個の炭素原子のアルキルである）であり；そしてｎは、１〜１０であり；そしてＧは、ＣＨＯ；ＣＨ（ＯＲ８）２（ここで、Ｒ８は、１〜６個の炭素原子のアルキルである）；ＣＯＯＨ若しくはその誘導体；ＮＲ１（ここで、Ｒ１は、Ｈ又は１〜６個の炭素原子のアルキルである）；ＯＨ；又は特異的結合対のメンバーである］である、請求項１に記載の組成物。
【請求項７】
少なくとも１個の炭素原子及び少なくとも２個のヘテロ原子を含む第２の共重合モノマーのペンダント部分が、ヒドロキシル基、カルボキシル基、アミン基、アミド基、エステル基、ポリオキシエチレン基、ポリオキシプロピレン基、硫酸基、亜硫酸基、リン酸基、亜リン酸基、ホスファチジルコリン基、ベタイン基及びスルホベタイン基よりなる群から選択される１個以上の基を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項８】
少なくとも１個の炭素原子及び少なくとも２個のヘテロ原子を含むペンダント部分が、下記式（ｉ）〜（iii）：
（ｉ）  −ＣＯＯＲ１０（ここで、Ｒ１０は、Ｈ又は１〜６個の炭素原子のアルキルである）；
（ii）  下記式：
【化１５】
2013530400.tif 000027
（式中、ｗは、２〜４である）；又は
（iii）  −Ｃ（Ｏ）−Ｘ−（ＣＨ２）ｐ−（Ｙ）ｑ−（ＣＨ２）ｒ−Ｚ
（式中、
Ｘは、Ｏ又はＮＲ２（ここで、Ｒ２は、Ｈ又は１〜６個の炭素原子のアルキルである）であり；
Ｙは、−（ＣＨ２Ｏ）ｍ−（ここで、ｍは、１〜１５００である）；又は＞Ｎ＋（Ｒ３Ｒ４）（ここで、Ｒ３及びＲ４は、独立にＨ又は１〜６個の炭素原子のアルキルである）であり；
ｐは、０〜１０であるが、Ｙが＞Ｎ＋（Ｒ３Ｒ４）であるとき少なくとも１であり；
ｑは、０又は１であり；
ｒは、０〜１０であるが、Ｙが＞Ｎ＋（Ｒ３Ｒ４）であるとき少なくとも１であり；そして
Ｚは、ＳＯ３−；１〜６個の炭素原子のアルキル；−（ＣＨＯＨ）ｔ（ＣＨ２）ｕＣＨ３（ここで、ｔは、１〜５であり、そしてｕは、０〜１０である）である）を有する、請求項１に記載の組成物。
【請求項９】
特異的結合対のメンバーが、固体支持体と結び付いている、請求項１に記載の組成物。
【請求項１０】
試料中の分析対象の存在及び／又は量を決定する方法であって、
（ａ）  媒体中で組合せて
（ｉ）  試料、及び
（ii）  請求項９に記載の組成物（ここで、特異的結合対（ｓｂｐ）のメンバーは、分析対象に又は第２のｓｂｐメンバーに結合することにより、分析対象の存在と関連している複合体を形成する）
を提供すること、
（ｂ）  この組合せを、複合体を形成することになる、組成物への分析対象の結合の条件に付すこと、及び
（ｃ）  このシグナル生成システムのメンバーを活性化し、そして複合体の量を検出すること（複合体の量は、試料中の分析対象の存在及び／又は量と関連している）
を含む方法。
【請求項１１】
試料中の分析対象の存在及び／又は量を決定する方法であって、
（ａ）  媒体中で組合せて
（ｉ）  試料、及び
（ii）  （Ａ）〜（Ｃ）を含む粒子を含む組成物：
（Ａ）シグナル生成システムのメンバー、
（Ｂ）分析対象に又は第２のｓｂｐメンバーに結合することにより、分析対象の存在と関連している複合体を形成する、特異的結合対のメンバー、及び
（Ｃ）下記式：
【化１６】
2013530400.tif 000028
［式中、
Ａは、Ｏ又はＮＲ１（ここで、Ｒ１は、Ｈ又は１〜６個の炭素原子のアルキルである）であり；
ｎは、１〜１０であり；
Ｇは、ＣＨＯ；ＣＨ（ＯＲ８）２（ここで、Ｒ８は、１〜６個の炭素原子のアルキルである）；ＣＯＯＨ若しくはその誘導体；ＮＲ１（ここで、Ｒ１は、Ｈ又は１〜６個の炭素原子のアルキルである）；ＯＨ；又は特異的結合対のメンバーであり；
Ｄは、（ｉ）〜（iii）：
（ｉ）  −ＣＯＯＲ１０（ここで、Ｒ１０は、Ｈ又は１〜６個の炭素原子のアルキルである）；
（ii）  下記式：
【化１７】
2013530400.tif 000029
（式中、ｗは、２〜４である）で示される基；又は
（iii）  −Ｃ（Ｏ）−Ｘ−（ＣＨ２）ｐ−（Ｙ）ｑ−（ＣＨ２）ｒ−Ｚ
（式中、
Ｘは、Ｏ又はＮＲ２（ここで、Ｒ２は、Ｈ又は１〜６個の炭素原子のアルキルである）であり；
Ｙは、−（ＣＨ２Ｏ）ｍ−（ここで、ｍは、１〜１５００である）；又は＞Ｎ＋（Ｒ３Ｒ４）（ここで、Ｒ３及びＲ４は、独立にＨ又は１〜６個の炭素原子のアルキルである）であり；
ｐは、０〜１０であるが、Ｙが＞Ｎ＋（Ｒ３Ｒ４）であるとき少なくとも１であり；
ｑは、０又は１であり；
ｒは、０〜１０であるが、Ｙが＞Ｎ＋（Ｒ３Ｒ４）であるとき少なくとも１であり；そして
Ｚは、ＳＯ３−；１〜６個の炭素原子のアルキル；−（ＣＨＯＨ）ｔ（ＣＨ２）ｕＣＨ３（ここで、ｔは、１〜５であり、そしてｕは、０〜１０である）である）であり；
Ｒ５、Ｒ６及びＲ７は、独立にＨ又は１〜６個の炭素原子のアルキルであり；そして
ｘ及びｙは、独立に１〜１０００である］で示されるコポリマーのコーティング
を提供すること、
（ｂ）  この組合せを、複合体を形成することになる、分析対象への又は第２の特異的結合対メンバーへの特異的結合対のメンバーの結合の条件に付すこと；及び
（ｃ）  このシグナル生成システムのメンバーを活性化し、そして複合体の量を検出すること（複合体の量は、試料中の分析対象の存在及び／又は量と関連している）
を含む方法。
【請求項１２】
シグナル生成システムのメンバーが、増感剤及び化学発光化合物よりなる群から選択される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
シグナル生成システムのメンバーが、粒子に取り込まれている、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
シグナル生成システムのメンバーが、光増感剤であり、そしてこの組合せが、更に化学発光剤試薬を含むか、又はシグナル生成システムのメンバーが、化学発光化合物であり、そして組合せが、更に光増感剤試薬を含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１５】
化学発光剤試薬又は光増感剤試薬が、下記式：
【化１８】
2013530400.tif 000030
［式中、
Ａは、Ｏ又はＮＲ１（ここで、Ｒ１は、Ｈ又は１〜６個の炭素原子のアルキルである）であり；
ｎは、１〜１０であり；
Ｇは、ＣＨＯ；ＣＨ（ＯＲ８）２（ここで、Ｒ８は、１〜６個の炭素原子のアルキルである）；ＣＯＯＨ若しくはその誘導体；ＮＲ１（ここで、Ｒ１は、Ｈ又は１〜６個の炭素原子のアルキルである）；ＯＨ；又は特異的結合対のメンバーであり；
Ｄは、（ｉ）〜（iii）：
（ｉ）  −ＣＯＯＲ１０（ここで、Ｒ１０は、Ｈ又は１〜６個の炭素原子のアルキルである）；
（ii）  下記式：
【化１９】
2013530400.tif 000031
（式中、ｗは、２〜４である）で示される基；又は
（iii）  −Ｃ（Ｏ）−Ｘ−（ＣＨ２）ｐ−（Ｙ）ｑ−（ＣＨ２）ｒ−Ｚ
（式中、
Ｘは、Ｏ又はＮＲ２（ここで、Ｒ２は、Ｈ又は１〜６個の炭素原子のアルキルである）であり；
Ｙは、−（ＣＨ２Ｏ）ｍ−（ここで、ｍは、１〜１５００である）；又は＞Ｎ＋（Ｒ３Ｒ４）（ここで、Ｒ３及びＲ４は、独立にＨ又は１〜６個の炭素原子のアルキルである）であり；
ｐは、０〜１０であるが、Ｙが＞Ｎ＋（Ｒ３Ｒ４）であるとき少なくとも１であり；
ｑは、０又は１であり；
ｒは、０〜１０であるが、Ｙが＞Ｎ＋（Ｒ３Ｒ４）であるとき少なくとも１であり；そして
Ｚは、ＳＯ３−；１〜６個の炭素原子のアルキル；−（ＣＨＯＨ）ｔ（ＣＨ２）ｕＣＨ３（ここで、ｔは、１〜５であり、そしてｕは、０〜１０である）である）であり；
Ｒ５、Ｒ６及びＲ７は、独立にＨ又は１〜６個の炭素原子のアルキルであり；そして
ｘ及びｙは、独立に１〜１０００である］で示されるコポリマーのコーティングを含む粒子を含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
下記式：
【化２０】
2013530400.tif 000032
［式中、
Ａは、Ｏ又はＮＲ１（ここで、Ｒ１は、Ｈ又は１〜６個の炭素原子のアルキルである）であり；
ｎは、１〜１０であり；
Ｇ’は、ＣＨＯ；ＣＨ（ＯＲ８）２（ここで、Ｒ８は、１〜６個の炭素原子のアルキルである）；特異的結合対のメンバーであり；
Ｄ’は、（ｉ）〜（iii）：
（ｉ）  −ＣＯＯＲ１０（ここで、Ｒ１０は、Ｈ又は１〜６個の炭素原子のアルキルである）；
（ii）  下記式：
【化２１】
2013530400.tif 000033
（式中、ｗは、２〜４である）で示される基；又は
（iii）  −Ｃ（Ｏ）−Ｘ−（ＣＨ２）ｐ−（Ｙ）ｑ−（ＣＨ２）ｒ−Ｚ’
（式中、
Ｘは、Ｏ又はＮＲ２（ここで、Ｒ２は、Ｈ又は１〜６個の炭素原子のアルキルである）であり；
Ｙは、−（ＣＨ２Ｏ）ｍ−（ここで、ｍは、１〜１５００である）；又は＞Ｎ＋（Ｒ３Ｒ４）（ここで、Ｒ３及びＲ４は、独立にＨ又は１〜６個の炭素原子のアルキルである）であり；
ｐは、０〜１０であるが、Ｙが＞Ｎ＋（Ｒ３Ｒ４）であるとき少なくとも１であり；
ｑは、０又は１であり；
ｒは、０〜１０であるが、Ｙが＞Ｎ＋（Ｒ３Ｒ４）であるとき少なくとも１であり；そして
Ｚ’は、ＳＯ３−；又は１〜６個の炭素原子のアルキルである）であり；
Ｒ５、Ｒ６及びＲ７は、独立にＨ又は１〜６個の炭素原子のアルキルであり；そして
ｘ及びｙは、独立に１〜１０００である］で示されるコポリマー。
【請求項１７】
請求項１６に記載のコポリマーであって、
Ａが、ＮＲ１（ここで、Ｒ１は、Ｈ又は１〜６個の炭素原子のアルキルである）であり；
ｎが、１〜１０であり；
Ｇ’が、ＣＨＯ；ＣＨ（ＯＲ８）２（ここで、Ｒ８は、１〜６個の炭素原子のアルキルである）；又は特異的結合対のメンバーであり；
Ｄ’が、−Ｃ（Ｏ）−Ｘ−（ＣＨ２）ｐ−（Ｙ）ｑ−（ＣＨ２）ｒ−Ｚ’
（式中、
Ｘは、Ｏであり；
Ｙは、＞Ｎ＋（Ｒ３Ｒ４）（ここで、Ｒ３及びＲ４は、独立にＨ又は１〜６個の炭素原子のアルキルである）であり；
ｐは、１〜１０であり；
ｑは、１であり；
ｒは、１〜１０であり；
Ｚ’は、ＳＯ３−である）であり；
Ｒ５、Ｒ６及びＲ７が、独立にＨ又は１〜６個の炭素原子のアルキルであり；そして
ｘ及びｙが、独立に１〜１０００である、コポリマー。
【請求項１８】
請求項１７に記載のコポリマーであって、
Ａが、ＮＨであり；
ｎが、１であり；
Ｇ’が、ＣＨＯ；ＣＨ（ＯＲ８）２（ここで、Ｒ８は、メチルである）；又は特異的結合対のメンバーであり；
Ｄ’が、−Ｃ（Ｏ）−Ｘ−（ＣＨ２）ｐ−（Ｙ）ｑ−（ＣＨ２）ｒ−Ｚ’
（式中、
Ｘは、Ｏであり；
Ｙは、＞Ｎ＋（Ｒ３Ｒ４）（ここで、Ｒ３及びＲ４は、両方ともメチルである）であり；
ｐは、２であり；
ｑは、１であり；
ｒは、３であり；
Ｚ’は、ＳＯ３−である）であり；
Ｒ５及びＲ６が、独立にＨ又はメチルであり、かつＲ７が、Ｈであり；そして
ｘ及びｙが、独立に１〜１０００である、コポリマー。
【請求項１９】
請求項１６に記載のコポリマーであって、
Ａが、ＮＲ１（ここで、Ｒ１は、Ｈ又は１〜６個の炭素原子のアルキルである）であり；
ｎが、１〜１０であり；
Ｇ’が、ＣＨＯ；ＣＨ（ＯＲ８）２（ここで、Ｒ８は、１〜６個の炭素原子のアルキルである）；又は特異的結合対のメンバーであり；
Ｄ’が、−Ｃ（Ｏ）−Ｘ−（ＣＨ２）ｐ−（Ｙ）ｑ−（ＣＨ２）ｒ−Ｚ’
（式中、
Ｘは、Ｏであり；
Ｙは、−（ＣＨ２Ｏ）ｍ−（ここで、ｍは、１〜１５００である）であり；
ｐは、０であり；
ｑは、１であり；
ｒは、０であり；
Ｚ’は、メチルである）であり；
Ｒ５、Ｒ６及びＲ７が、独立にＨ又は１〜６個の炭素原子のアルキルであり；そして
ｘ及びｙが、独立に１〜１０００である、コポリマー。
【請求項２０】
請求項１９に記載のコポリマーであって、
Ａが、ＮＨであり；
ｎは、１であり；
Ｇ’が、ＣＨＯ；ＣＨ（ＯＲ８）２（ここで、Ｒ８は、メチルである）；又は特異的結合対のメンバーであり；
Ｄ’が、−Ｃ（Ｏ）−Ｘ−（ＣＨ２）ｐ−（Ｙ）ｑ−（ＣＨ２）ｒ−Ｚ’
（式中、
Ｘは、Ｏであり；
Ｙは、−（ＣＨ２Ｏ）ｍ−（ここで、ｍは、１１００又は３００である）であり；
ｐは、０であり；
ｑは、１であり；
ｒは、０であり；
Ｚ’は、メチルである）であり；
Ｒ５及びＲ６が、独立にＨ又はメチルであり、かつＲ７が、Ｈであり；そして
ｘ及びｙが、独立に１〜１０００である、コポリマー。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
背景
本発明は、一般にアッセイにおけるシグナル生成成分として有用な組成物に関する。
【０００２】
生物学的成分（例えば、抗体）のような成分への結合のための官能基を提供するために、粒子状アッセイ試薬上のデキストランコーティングが利用されてきた。しかし、デキストランの化学組成には原料に依存して明らかなばらつきがある。
【０００３】
種々の成分を粒子に連結させるために、粒子の表面に信頼できる化学組成を有するコーティングを使用することが要望されている。
【０００４】
要約
本発明の１つの実施態様は、シグナル生成システム（signal producing system）（ｓｐｓ）のメンバー及び合成コポリマーのコーティングを含む固体支持体を含む組成物である。合成コポリマーは、反応性官能基又は誘導体化反応性官能基を含むペンダント部分を含む第１の共重合モノマー、並びに少なくとも１個の炭素原子及び少なくとも２個のヘテロ原子を含むペンダント部分を含む第２の共重合モノマーを含む。幾つかの実施態様において、反応性官能基又は誘導体化反応性官能基を含むペンダント部分は、アルデヒド又はアルデヒド誘導体を含むペンダント部分である。
【０００５】
本発明の別の実施態様は、試料中の分析対象の存在及び量の一方又は両方を決定する方法である。この方法は、媒体中で組合せて試料及び上記組成物を提供することを含むが、この組成物はまた、固体支持体と結び付いている特異的結合対（specific binding pair）（ｓｂｐ）のメンバーを含み、この支持体で特異的結合対のメンバーは、分析対象に又は第２のｓｂｐメンバーに結合することにより、分析対象の存在と関連している複合体を形成する。この組合せは、複合体を形成することになる組成物への分析対象の結合の条件に付される。このシグナル生成システムのメンバーが活性化され、そして複合体の量が検出される。複合体の量は、試料中の分析対象の存在及び量の一方又は両方と関連している。
【０００６】
本発明の別の実施態様は、試料中の分析対象の存在及び量の一方又は両方を決定する方法である。ある組合せが媒体中に提供される。この組合せは、試料、並びにｓｐｓメンバー、ｓｂｐメンバー（分析対象又は第２のｓｂｐメンバーに結合することにより、分析対象の存在と関連している複合体を形成する）及びコポリマーのコーティングを含む粒子を含む組成物を含む。このコポリマーは、下記式：
【化１】
2013530400.tif 000002
［式中、Ｄは、（ｉ）〜（iii）：
（ｉ）  −ＣＯＯＲ１０（ここで、Ｒ１０は、Ｈ又は１〜６個の炭素原子のアルキルである）；
（ii）  下記式：
【化２】
2013530400.tif 000003
（式中、ｗは、２〜４である）で示される基；又は
（iii）  −Ｃ（Ｏ）−Ｘ−（ＣＨ２）ｐ−（Ｙ）ｑ−（ＣＨ２）ｒ−Ｚ
（式中、
Ａは、Ｏ又はＮＲ１（ここで、Ｒ１は、Ｈ又は１〜６個の炭素原子のアルキルである）であり；
ｎは、１〜１０であり；
Ｇは、ＣＨＯ；ＣＨ（ＯＲ８）２（ここで、Ｒ８は、１〜６個の炭素原子のアルキルである）；ＣＯＯＨ若しくはその誘導体；ＮＲ１（ここで、Ｒ１は、Ｈ又は１〜６個の炭素原子のアルキルであり、そしてｎは、１〜１０である）；ＯＨ；又は特異的結合対のメンバーであり；
Ｘは、Ｏ又はＮＲ２（ここで、Ｒ２は、Ｈ又は１〜６個の炭素原子のアルキルである）であり；
Ｙは、−（ＣＨ２Ｏ）ｍ−（ここで、ｍは、１〜１５００である）；又は＞Ｎ＋（Ｒ３Ｒ４）（ここで、Ｒ３及びＲ４は、独立にＨ又は１〜６個の炭素原子のアルキルである）であり；
ｐは、０〜１０であるが、Ｙが＞Ｎ＋（Ｒ３Ｒ４）であるとき少なくとも１であり；
ｑは、０又は１であり；
ｒは、０〜１０であるが、Ｙが＞Ｎ＋（Ｒ３Ｒ４）であるとき少なくとも１であり；そして
Ｚは、ＳＯ３−；１〜６個の炭素原子のアルキル；−（ＣＨＯＨ）ｔ（ＣＨ２）ｕＣＨ３（ここで、ｔは、１〜５であり、そしてｕは、０〜１０である）である）であり；
Ｒ５、Ｒ６及びＲ７は、独立にＨ又は１〜６個の炭素原子のアルキルであり；そして
ｘ及びｙは、独立に１〜１０００である］を有する。
この組合せは、複合体を形成することになる、分析対象への又は第２のｓｂｐメンバーへのｓｂｐメンバーの結合の条件に付される。ｓｐｓメンバーが活性化され、そして複合体の量が検出される。複合体の量は、試料中の分析対象の存在及び量の一方又は両方と関連している。
【０００７】
本発明の別の実施態様は、下記式：
【化３】
2013530400.tif 000004
［式中、
Ａは、Ｏ又はＮＲ１（ここで、Ｒ１は、Ｈ又は１〜６個の炭素原子のアルキルである）であり；
ｎは、１〜１０であり；
Ｇ’は、ＣＨＯ；ＣＨ（ＯＲ８）２（ここで、Ｒ８は、１〜６個の炭素原子のアルキルである）；特異的結合対のメンバーであり；
Ｄ’は、（ｉ）〜（iii）：
（ｉ）  −ＣＯＯＲ１０（ここで、Ｒ１０は、Ｈ又は１〜６個の炭素原子のアルキルである）；
（ii）  下記式：
【化４】
2013530400.tif 000005
（式中、ｗは、２〜４である）で示される基；又は
（iii）  −Ｃ（Ｏ）−Ｘ−（ＣＨ２）ｐ−（Ｙ）ｑ−（ＣＨ２）ｒ−Ｚ’
（式中、
Ｘは、Ｏ又はＮＲ２（ここで、Ｒ２は、Ｈ又は１〜６個の炭素原子のアルキルである）であり；
Ｙは、−（ＣＨ２Ｏ）ｍ−（ここで、ｍは、１〜１５００である）；又は＞Ｎ＋（Ｒ３Ｒ４）（ここで、Ｒ３及びＲ４は、独立にＨ又は１〜６個の炭素原子のアルキルである）であり；
ｐは、０〜１０であるが、Ｙが＞Ｎ＋（Ｒ３Ｒ４）であるとき少なくとも１であり；
ｑは、０又は１であり；
ｒは、０〜１０であるが、Ｙが＞Ｎ＋（Ｒ３Ｒ４）であるとき少なくとも１であり；そして
Ｚ’は、ＳＯ３−；又は１〜６個の炭素原子のアルキルである）であり；
Ｒ５、Ｒ６及びＲ７は、独立にＨ又は１〜６個の炭素原子のアルキルであり；そして
ｘ及びｙは、独立に１〜約１０００である］で示されるコポリマーである。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１】図１は、ＭＡＭＤＭＡの合成の概略図である。
【図２−１】図２は、アセタール保護基の加水分解後の本組成物のコポリマーの実施態様の構造を表組みで表現したものである。図２はまた、図解したコポリマーの合成に使用した親水性モノマーの供給比を包含する。
【図２−２】図２は、アセタール保護基の加水分解後の本組成物のコポリマーの実施態様の構造を表組みで表現したものである。図２はまた、図解したコポリマーの合成に使用した親水性モノマーの供給比を包含する。
【０００９】
具体的な実施態様の詳細な説明
組成物
幾つかの実施態様において、本組成物のコポリマーは、コポリマーのモノマー単位の１つが、対象の分子（例えば、粒子及びｓｂｐメンバーなど）への結合のための反応性官能基を含み、そしてコポリマーのモノマー単位のもう１つは、生じるコポリマーが親水性になるように官能基化されている、ランダムコポリマーである。幾つかの実施態様において、このコポリマーは、例えば、２種の異なるモノマー単位、又は３種の異なるモノマー単位、又は４種の異なるモノマー単位、又は５種の異なるモノマー単位を含む。幾つかの実施態様において、第１のモノマー単位は、反応性官能基又は反応性官能基の誘導体を含む。第２のモノマー単位は、親水性部分を含む。幾つかの実施態様において、別のモノマーの反応性官能基又は反応性官能基の誘導体とは異なる反応性官能基又は反応性官能基の誘導体を含むか、あるいは別のモノマーの親水性部分とは異なる親水性部分を含む、更なるモノマー（例えば、第３、第４及び第５のモノマー）を利用することができる。
【００１０】
ランダムコポリマーでは、共重合モノマーの分布は、ブロックコポリマーとは区別されるとおり、ポリマー鎖のどの点でも第１の共重合モノマー及び第２の共重合モノマーが交互に又は反復するようになっている。
【００１１】
幾つかの実施態様において、コポリマー中のそれぞれ異なる共重合モノマーの数は、官能基化ポリマーの調製中に、ポリマーの調製に使用されるモノマー単位のモル濃度を制御することにより制御される。即ち、共重合モノマーのそれぞれの数（後述の式中のｘ及びｙ）は、最終の官能基化コポリマーにおいて制御される。このコポリマーは、例えば、１種以上の特定の支持体に、このような支持体を含む組成物に、及びこのような組成物の使用に対して合わせることができる。
【００１２】
「モノマー」又は「モノマー単位」という用語は、重合を受けてポリマーを形成することができる分子を意味し；この分子は、重合性官能基を含む。モノマー単位の数は、例えば、モノマー単位中の原子の数及びモノマー単位の組成の１つ以上に依存する。
【００１３】
上記のとおり、アッセイ試薬を調製するのに使用するため、又はアッセイ試薬として使用するための組成物は、ｓｐｓメンバー及び合成コポリマーのコーティングを含む固体支持体を含む。この合成コポリマーは、共重合してポリマーを形成する少なくとも２種のモノマーを含む。共重合モノマーの一方は、ポリマー基本骨格、及び少なくとも１つの反応性官能基又は少なくとも１つの反応性官能基の誘導体を含むペンダント部分を含む。共重合モノマーのもう一方は、少なくとも１個の炭素原子及び少なくとも２個のヘテロ原子を含む親水性部分を含む。幾つかの実施態様において、このコポリマーは、反応性官能基又は誘導体化反応性官能基を含むペンダント部分、並びに少なくとも１個の炭素原子及び少なくとも２個のヘテロ原子、又は少なくとも４個の炭素原子及び少なくとも３個のヘテロ原子、又は少なくとも４個の炭素原子及び少なくとも２個のヘテロ原子、又は少なくとも８個の炭素原子及び少なくとも７個のヘテロ原子を含むペンダント部分を含むポリエチレン性基本骨格を含む。共重合モノマーは、炭素原子の鎖を含むポリマー基本骨格を含むが、ここから１つ以上の反応性官能基含有部分又は反応性官能基の誘導体含有部分が、鎖からのペンダントであり、そして１つ以上の親水性部分が、コポリマー基本骨格の鎖からのペンダントである。
【００１４】
幾つかの実施態様において、親水性部分を含むもう一方の共重合モノマーは、１〜約１５個の炭素原子及び１〜約１０個のヘテロ原子を含む。この共重合モノマーは、炭素原子の鎖を含むポリマー基本骨格を含むが、ここから１つ以上の反応性官能基含有部分又は反応性官能基の誘導体含有部分が、鎖からのペンダントであり、そして１つ以上の親水性部分が、コポリマー基本骨格の鎖からのペンダントである。
【００１５】
コポリマーの基本骨格の鎖中の炭素原子の数は、例えば、モノマー単位の重合性官能基中の炭素原子の数のような、それぞれの共重合モノマー単位の数及び性質、並びに例えば、コポリマーの分子量に依存する。モノマー単位の重合性官能基中の炭素原子の数は、例えば、２〜約２０、又は２〜約１５、又は２〜約１０、又は２〜約５、又は２〜約４、又は２〜３、又は３〜約２０、又は３〜約１５、又は３〜約１０、又は３〜約５、又は３〜４であってよい。ペンダント反応性官能基含有部分又は反応性官能基の誘導体含有部分（本明細書では任意に第１の共重合モノマーと称される）を含むモノマー中の炭素原子の数は、少なくとも約３、又は少なくとも約４、又は少なくとも約５、又は少なくとも約６、又は少なくとも約７、又は少なくとも約８、又は少なくとも約９、又は少なくとも約１０であり、そして約３〜約１５、又は約３〜約１０、又は約３〜約９、又は約３〜約８、又は約３〜約７、又は約３〜約６、又は約３〜約５、又は３〜４の範囲にあってもよい。コポリマー中の第１の共重合モノマーの数は、ｓｂｐメンバーへの結合のニーズ及び支持体の表面への結合のニーズの１つ以上に依存する。コポリマー中の第１の共重合モノマーの数は、例えば、１〜約１，０００、又は１〜約７５０、又は１〜約５００、又は１〜約２５０、又は１〜約１００、又は１〜約５０、又は２〜約１，０００、又は２〜約７５０、又は２〜約５００、又は２〜約２５０、又は２〜約１００、又は２〜約５０、又は５〜約１，０００、又は５〜約７５０、又は５〜約５００、又は５〜約２５０、又は５〜約１００、又は５〜約５０、又は１０〜約１，０００、又は１０〜約７５０、又は１０〜約５００、又は１０〜約２５０、又は１０〜約１００、又は１０〜約５０、又は１００〜約１，０００、又は１００〜約７５０、又は１００〜約５００、又は１００〜約２５０である。
【００１６】
「重合性官能基」という用語は、そのモノマーの別の分子の一部又は異なるモノマーの分子の一部と反応するモノマー単位の一部、例えば、１個以上の二重又は三重結合を含む部分などであって、例えば、アリル基、ビニル基、アクリラート基、メタクリラート基、アクリルアミド基及びメタクリルアミド基などのことをいう。
【００１７】
「反応性官能基」という用語は、別の分子上の対応する反応性官能基と反応して共有結合を形成することができる官能基である。このような反応性官能基は、特に限定されないが実例として、例えば、アルデヒド、カルボキシ、アミノ、イミノ、スルフヒドリル及びヒドロキシを包含する。幾つかの実施態様において、この反応性官能基はアルデヒドであり、そして第１の共重合モノマーは、アルデヒド部分を含む。
【００１８】
「反応性官能基の誘導体」という用語は、反応性官能基と、反応性官能基と反応性の官能基を含む別の部分との反応により形成される部分を意味するが、この反応により２個の分子を合わせて連結する共有結合を形成して誘導体が生成する。反応性官能基の誘導体は、例えば、アセタール、カルボキシエステル、アミド、エーテル又はチオエーテルを含んでもよい。幾つかの実施態様において、反応性官能基の誘導体は、反応性官能基と、特異的結合対のメンバー（ｓｂｐメンバー）の反応性官能基との反応生成物であってもよく、これによってｓｂｐメンバーは、コポリマーに共有結合する。ｓｂｐメンバー上の官能基は、ｓｂｐメンバー上に天然に存在してもよく、また合成によりｓｂｐメンバー中に導入してもよい。このような官能基は、例えば、アミン基、ヒドロキシル基、スルフヒドリル基及びカルボキシル基を包含する。幾つかの実施態様において、反応性官能基の誘導体は、反応性官能基と、粒子の反応性官能基との反応生成物であってもよく、これによってコポリマーは、粒子に共有結合して、粒子の表面上にコポリマーのコーティングを提供する。粒子上の官能基は、粒子上に天然に存在してもよく、また合成により粒子の表面上に導入してもよい。このような官能基は、例えば、アミン基、ヒドロキシル基、アジド基及びカルボキシル基を包含する。幾つかの実施態様において、反応性官能基の誘導体は、アルデヒド誘導体である。
【００１９】
「アルデヒド誘導体」という用語は、アルデヒド基と、アルデヒド基と反応性の官能基を含む別の部分との反応により形成される部分を意味する。このアルデヒド誘導体は、２種のアルコール官能基とアルデヒドのカルボニル酸素との反応に由来するアセタールであってよい。このアルデヒド誘導体は、アルデヒド基と特異的結合対のメンバー（ｓｂｐメンバー）との、アルデヒドとｓｂｐメンバーの官能基との反応を利用する反応生成物であってよい。ｓｂｐメンバー上の官能基は、ｓｂｐメンバー上に天然に存在してもよく、また合成によりｓｂｐメンバー中に導入してもよい。このような官能基は、例えば、アミン基を包含する。アルデヒド基とｓｂｐメンバーの間の反応は、例えば、ｓｂｐメンバーのアルキルアミン又はアリールアミンとアルデヒド基の間のシッフ塩基形成を利用するものであってよい。この反応は、アルデヒド基及びｓｂｐメンバーのアミン基が関与する還元的アミノ化を利用するものであってよい。他の実施態様では、このアルデヒド誘導体は、例えば、アセタール及び重亜硫酸付加化合物を包含する。幾つかの実施態様において、アルデヒド官能基は、粒子の表面上の対応するアミン基と反応することができ、これによって粒子は、コポリマーに共有結合して、粒子の表面上にコポリマーのコーティングを提供する。粒子上の官能基は、粒子上に天然に存在してもよく、また合成により粒子の表面上に導入してもよい。
【００２０】
コポリマーのもう一方の共重合モノマー（親水性モノマー、あるいは本明細書では任意に第２の共重合モノマーと称される）は、例えば、少なくとも１個の炭素原子及び少なくとも２個のヘテロ原子、又は少なくとも１個の炭素原子及び少なくとも３個のヘテロ原子、又は少なくとも１個の炭素原子及び少なくとも４個の炭素原子、又は少なくとも２個の炭素原子及び少なくとも２個のヘテロ原子、又は少なくとも２個の炭素原子及び少なくとも３個のヘテロ原子、又は少なくとも２個の炭素原子及び少なくとも４個のヘテロ原子、又は少なくとも３個の炭素原子及び少なくとも３個のヘテロ原子、又は少なくとも３個の炭素原子及び少なくとも４個のヘテロ原子、又は少なくとも４個の炭素原子及び少なくとも３個のヘテロ原子、又は少なくとも４個の炭素原子及び少なくとも４個のヘテロ原子を含む重合性官能基を含む。上記のとおり、共重合モノマーは、炭素原子の鎖を含むポリマー基本骨格を形成するが、ここから１つ以上のペンダント部分が、この鎖から分岐している。第２のモノマー単位の重合性官能基中の炭素原子の数は、例えば、２〜約２０、又は２〜約１５、又は２〜約１０、又は２〜約５、又は２〜約４、又は２〜３、又は３〜約２０、又は３〜約１５、又は３〜約１０、又は３〜約５、又は３〜４であってよい。
【００２１】
幾つかの実施態様において、コポリマーの第２の共重合モノマーは、重合性官能基、並びに１〜約１５個の炭素原子及び１〜約１０個のヘテロ原子、又は１〜約１０個の炭素原子及び１〜約１０個のヘテロ原子、又は１〜約１０個の炭素原子及び１〜約８個のヘテロ原子、又は１〜約１０個の炭素原子及び１〜約６個のヘテロ原子、又は１〜約１０個の炭素原子及び１〜約５個のヘテロ原子、又は１〜約８個の炭素原子及び１〜約８個のヘテロ原子、又は１〜約８個の炭素原子及び１〜約７個のヘテロ原子、又は１〜約８個の炭素原子及び１〜約６個のヘテロ原子、又は４〜約８個の炭素原子及び３〜約７個のヘテロ原子を含むペンダント部分を含む。
【００２２】
ペンダント親水性部分の炭素原子の数は、例えば、少なくとも１、又は少なくとも約２、又は少なくとも約３、又は少なくとも約４、又は少なくとも約５、又は少なくとも約１０、又は少なくとも約２０、又は少なくとも約４０、又は少なくとも約６０、又は少なくとも約８０、又は少なくとも約１００、又は少なくとも約１５０、又は少なくとも約２００、又は少なくとも約３００、又は少なくとも約４００、かつ約２，５００以下、又は約２，０００以下、又は約１，５００以下、又は約１，１００以下である。幾つかの実施態様において、ペンダント部分の炭素原子の数は、例えば、１〜約２，５００、又は１〜約２，０００、又は１〜約１，５００、又は１〜約１，２００、又は１〜約１，１００、又は１〜約１，０００、又は１〜約７５０、又は１〜約５００、又は１〜約４００、又は１〜約３００、又は１〜約２００、又は１〜約１００、又は１〜約８０、又は１〜約６０、又は１〜約４０、又は１〜約２０、又は１〜約１０、又は２〜約２，５００、又は２〜約２，０００、又は２〜約１，５００、又は２〜約１，２００、又は２〜約１，１００、又は２〜約１，０００、又は２〜約７５０、又は２〜約５００、又は２〜約４００、又は２〜約３００、又は２〜約２００、又は２〜約１００、又は２〜約８０、又は２〜約６０、又は２〜約４０、又は２〜約２０、又は２〜約１０、又は３〜約２，５００、又は３〜約２，０００、又は３〜約１，５００、又は３〜約１，２００、又は３〜約１，１００、又は３〜約１，０００、又は３〜約７５０、又は３〜約５００、又は３〜約４００、又は３〜約３００、又は３〜約２００、又は３〜約１００、又は３〜約８０、又は３〜約６０、又は３〜約４０、又は３〜約２０、又は３〜約１０、又は４〜約２，５００、又は４〜約２，０００、又は４〜約１，５００、又は４〜約１，２００、又は４〜約１，１００、又は４〜約１，０００、又は４〜約７５０、又は４〜約５００、又は４〜約４００、又は４〜約３００、又は４〜約２００、又は４〜約１００、又は４〜約８０、又は４〜約６０、又は４〜約４０、又は４〜約２０、又は４〜約１０、又は５〜約２，５００、又は５〜約２，０００、又は５〜約１，５００、又は５〜約１，２００、又は５〜約１，１００、又は５〜約１，０００、又は５〜約７５０、又は５〜約５００、又は５〜約４００、又は５〜約３００、又は５〜約２００、又は５〜約１００、又は５〜約８０、又は５〜約６０、又は５〜約４０、又は５〜約２０、又は５〜約１０の範囲にある。
【００２３】
コポリマー中の第２の共重合モノマーの分子の数は、例えば、１〜約１，０００、又は１〜約７５０、又は１〜約５００、又は１〜約２５０、又は１〜約１００、又は１〜約５０、又は２〜約１，０００、又は２〜約７５０、又は２〜約５００、又は２〜約２５０、又は２〜約１００、又は２〜約５０、又は５〜約１，０００、又は５〜約７５０、又は５〜約５００、又は５〜約２５０、又は５〜約１００、又は５〜約５０、又は１０〜約１，０００、又は１０〜約７５０、又は１０〜約５００、又は１０〜約２５０、又は１０〜約１００、又は１０〜約５０、又は１００〜約１，０００、又は１００〜約７５０、又は１００〜約５００、又は１００〜約２５０である。
【００２４】
少なくとも１個の炭素原子及び少なくとも２個のヘテロ原子を含む第２の共重合モノマーのペンダント親水性部分のヘテロ原子の数は、そのコポリマーを親水性にするのに充分な数である。「親水性」という用語は、極性であるため、中性分子又は極性分子を好み、そして極性溶媒を好む分子の性質のことをいう。親水性分子は、疎水性部分に比較して他の親水性部分に対する親和性を有する。ヘテロ原子の数は、例えば、ペンダント部分中の炭素原子の数、支持体の性質及び存在するならアルデヒド誘導体の性質のような要因に依存する。
【００２５】
ペンダント親水性部分のヘテロ原子の数は、例えば、少なくとも約２、又は少なくとも約３、又は少なくとも約４、又は少なくとも約５、又は少なくとも約６、又は少なくとも約７、又は少なくとも約８、又は少なくとも約９、又は少なくとも約１０、又は少なくとも約２０、又は少なくとも約３０、又は少なくとも約４０、又は少なくとも約５０、又は少なくとも約６０、又は少なくとも約７０、又は少なくとも約８０、又は少なくとも約９０、又は少なくとも約１００、又は少なくとも約１５０、かつ約１，５００以下、又は約１，２００以下、又は約１，１００以下、又は約１，０００以下である。幾つかの実施態様において、ヘテロ原子の数は、例えば、２〜約１，５００、又は２〜約１，２５０、又は２〜約１，０００、又は２〜約７５０、又は２〜約５００、又は２〜約２５０、又は２〜約１００、又は２〜約８０、又は２〜約６０、又は２〜約４０、又は２〜約２０、又は２〜約１０、又は３〜約１，５００、又は３〜約１，２５０、又は３〜約１，０００、又は３〜約７５０、又は３〜約５００、又は３〜約２５０、又は３〜約１００、又は３〜約８０、又は３〜約６０、又は３〜約４０、又は３〜約２０、又は３〜約１０、又は５〜約１，５００、又は５〜約１，２５０、又は５〜約１，０００、又は５〜約７５０、又は５〜約５００、又は５〜約２５０、又は５〜約１００、又は５〜約８０、又は５〜約６０、又は５〜約４０、又は５〜約２０、又は５〜約１０、又は７〜約１，５００、又は７〜約１，２５０、又は７〜約１，０００、又は７〜約７５０、又は７〜約５００、又は７〜約２５０、又は７〜約１００、又は７〜約８０、又は７〜約６０、又は７〜約４０、又は７〜約２０、又は７〜約１０の範囲にある。
【００２６】
このコポリマーの親水性は、コポリマー中のヘテロ原子（及びこのようなヘテロ原子を含む官能基）の数により制御される。コポリマー中のヘテロ原子の数は、第２の共重合モノマーのそれぞれ中のヘテロ原子の数に、また反応性官能基又は反応性官能基の誘導体を含むペンダント部分を含む共重合モノマーの数と比較したヘテロ原子を含む共重合モノマーの数にも依存する。幾つかの実施態様において、例えば、約３個の炭素原子あたり１個のヘテロ原子、又は約６個の炭素原子あたり１個のヘテロ原子、又は約１０個の炭素原子あたり１個のヘテロ原子、又は約１２個の炭素原子あたり１個のヘテロ原子、又は約１５個の炭素原子あたり１個のヘテロ原子、又は１個の炭素原子あたり２個のヘテロ原子、又は約２個の炭素原子あたり２個のヘテロ原子、又は約３個の炭素原子あたり２個のヘテロ原子、又は約４個の炭素原子あたり２個のヘテロ原子、又は約６個の炭素原子あたり２個のヘテロ原子、又は約１０個の炭素原子あたり２個のヘテロ原子、又は約１２個の炭素原子あたり２個のヘテロ原子、又は約１５個の炭素原子あたり２個のヘテロ原子、又は約４個の炭素原子あたり３個のヘテロ原子、又は約６個の炭素原子あたり３個のヘテロ原子、又は約１０個の炭素原子あたり３個のヘテロ原子、又は約１２個の炭素原子あたり３個のヘテロ原子、又は約１５個の炭素原子あたり３個のヘテロ原子、又は約４個の炭素原子あたり４個のヘテロ原子、又は約６個の炭素原子あたり４個のヘテロ原子、又は約１０個の炭素原子あたり４個のヘテロ原子、又は約１２個の炭素原子あたり４個のヘテロ原子、又は約１５個の炭素原子あたり４個のヘテロ原子、又は約４個の炭素原子あたり５個のヘテロ原子、又は約６個の炭素原子あたり５個のヘテロ原子、又は約１０個の炭素原子あたり５個のヘテロ原子、又は約１２個の炭素原子あたり５個のヘテロ原子、又は約１５個の炭素原子あたり５個のヘテロ原子、又は約５個の炭素原子あたり６個のヘテロ原子、又は約６個の炭素原子あたり６個のヘテロ原子、又は約１０個の炭素原子あたり６個のヘテロ原子、又は約１２個の炭素原子あたり６個のヘテロ原子、又は約１５個の炭素原子あたり６個のヘテロ原子、又は約７個の炭素原子あたり７個のヘテロ原子、又は約８個の炭素原子あたり７個のヘテロ原子、又は約１０個の炭素原子あたり７のヘテロ原子、又は約１２個の炭素原子あたり７個のヘテロ原子、又は約１５個の炭素原子あたり７個のヘテロ原子が存在する。
【００２７】
幾つかの実施態様において、第２の重合モノマー（親水性モノマー）のペンダント部分は、例えば、少なくとも１個の炭素原子及び少なくとも２個のヘテロ原子、又は少なくとも１個の炭素原子及び少なくとも３個のヘテロ原子、又は少なくとも１個の炭素原子及び少なくとも４個の炭素原子、又は少なくとも２個の炭素原子及び少なくとも２個のヘテロ原子、又は少なくとも２個の炭素原子及び少なくとも３個のヘテロ原子、又は少なくとも２個の炭素原子及び少なくとも４個のヘテロ原子、又は少なくとも３個の炭素原子及び少なくとも３個のヘテロ原子、又は少なくとも３個の炭素原子及び少なくとも４個のヘテロ原子、又は少なくとも４個の炭素原子及び少なくとも２個のヘテロ原子、又は少なくとも４個の炭素原子及び少なくとも３個のヘテロ原子、又は少なくとも４個の炭素原子及び少なくとも４個のヘテロ原子、又は少なくとも４個の炭素原子及び少なくとも５個のヘテロ原子、又は少なくとも５個の炭素原子及び少なくとも２個のヘテロ原子、又は少なくとも５個の炭素原子及び少なくとも３個のヘテロ原子、又は少なくとも５個の炭素原子及び少なくとも４個のヘテロ原子、又は少なくとも５個の炭素原子及び少なくとも５個のヘテロ原子、又は少なくとも５個の炭素原子及び少なくとも６個のヘテロ原子、又は少なくとも６個の炭素原子及び少なくとも２個のヘテロ原子、又は少なくとも６個の炭素原子及び少なくとも３個のヘテロ原子、又は少なくとも６個の炭素原子及び少なくとも４個のヘテロ原子、又は少なくとも６個の炭素原子及び少なくとも５個のヘテロ原子、又は少なくとも６個の炭素原子及び少なくとも６個のヘテロ原子、又は少なくとも６個の炭素原子及び少なくとも７個のヘテロ原子、又は少なくとも７個の炭素原子及び少なくとも２個のヘテロ原子、又は少なくとも７個の炭素原子及び少なくとも３個のヘテロ原子、又は少なくとも７個の炭素原子及び少なくとも４個のヘテロ原子、又は少なくとも７個の炭素原子及び少なくとも５個のヘテロ原子、又は少なくとも７個の炭素原子及び少なくとも６個のヘテロ原子、又は少なくとも７個の炭素原子及び少なくとも７個のヘテロ原子、又は少なくとも７個の炭素原子及び少なくとも８個のヘテロ原子、又は少なくとも８個の炭素原子及び少なくとも２個のヘテロ原子、又は少なくとも８個の炭素原子及び少なくとも３個のヘテロ原子、又は少なくとも８個の炭素原子及び少なくとも４個のヘテロ原子、又は少なくとも８個の炭素原子及び少なくとも５個のヘテロ原子、又は少なくとも８個の炭素原子及び少なくとも６個のヘテロ原子、又は少なくとも８個の炭素原子及び少なくとも７個のヘテロ原子、又は少なくとも８個の炭素原子及び少なくとも８個のヘテロ原子、又は少なくとも８個の炭素原子及び少なくとも９個のヘテロ原子を含むことができる。
【００２８】
反応性官能基又は反応性官能基の誘導体を含むペンダント部分を含む重合モノマーの数と比較したヘテロ原子を含む共重合モノマーの数は、重合中のモノマーの供給比により制御することができる。したがって、重合中に反応性官能基又は反応性官能基の誘導体を含むペンダント部分を含むモノマー（第１の共重合性モノマー）の供給比は、親水性モノマー（第２の共重合性モノマー）の比より増加させることができる。重合中の第１の共重合性モノマーに対する第２の共重合性モノマーの比は、例えば、１：１、又は１：１．５、又は１：２、又は１：２．５、又は１：３、又は１：３．５、又は１：４、又は１：４．５、又は１：５、又は１：５．５、又は１：６であってよい。この供給比は、以下の式中のｘ及びｙの値を制御する。更に、第１の共重合性モノマーに対する第２の共重合性モノマーの比は、シグナル生成システム（ｓｐｓ）のメンバー及び合成コポリマーのコーティングを含む固体支持体から得られるシグナルの量を制御するために調整することができる。反応性官能基を含むペンダント部分を含む第１の共重合性モノマーをより多くすることにより、固体支持体上に大量の誘導体化反応性官能基を得ることができる。このように、生じる合成コポリマーで被覆された固体支持体の親水性と誘導体化反応性官能基の数とのバランスを取ることにより、多種多様なアッセイ及びシグナル生成システムに対応させることができる。
【００２９】
ペンダント親水性部分のヘテロ原子は、例えば、酸素、硫黄、窒素及びリン、並びに酸素、硫黄、窒素及びリンの組合せを包含する。このヘテロ原子は、相互の組合せ又は他の原子（例えば、水素及び炭素の１種以上など）との組合せで、１種以上の親水性基の形で存在してもよい。幾つかの実施態様において、酸素は、水素、炭素、硫黄、窒素及びリンの１種以上に結合した、オキソ又はオキシとして存在してもよく；窒素は、例えば、アゾ、シアノ、イソシアノ、ニトロ、ニトロソ、アミド又はアミノ基のように、水素、炭素、酸素、硫黄及びリンの１種以上に結合してもよく；硫黄は、上述の酸素と類似しており；リンは、例えば、ホスホン酸又はリン酸モノ−又はジエステル基のように、水素、炭素、硫黄、酸素及び窒素の１種以上に結合してもよい。
【００３０】
ペンダント親水性部分中の親水性基の数は、２〜約１，５００、又は２〜約１，２５０、又は２〜約１，０００、又は２〜約７５０、又は２〜約５００、又は２〜約２５０、又は２〜約１２５、又は２〜約１００、又は２〜約８０、又は２〜約６０、又は２〜約４０、又は２〜約２０、又は２〜約１０、又は２〜約５、又は３〜約１，５００、又は３〜約１，２５０、又は３〜約１，０００、又は３〜約７５０、又は３〜約５００、又は３〜約２５０、又は３〜約１２５、又は３〜約１００、又は３〜約８０、又は３〜約６０、又は３〜約４０、又は３〜約２０、又は３〜約１０、又は３〜約５、又は４〜約１，５００、又は４〜約１，２５０、又は４〜約１，０００、又は４〜約７５０、又は４〜約５００、又は４〜約２５０、又は４〜約１２５、又は４〜約１００、又は４〜約８０、又は４〜約６０、又は４〜約４０、又は４〜約２０、又は４〜約１０、又は４〜５であってよく；親水性基は、独立に１個以上の後述の基であってよい。
【００３１】
幾つかの実施態様において、親水性基又はペンダント親水性部分の基は、特に限定されないが実例として、アミン基（第１級、第２級、第３級又は第４級アミン）、アミド基、ヒドロキシル基、エステル基、エーテル基、ポリエーテル基（例えば、ポリオキシエチレン基及びポリオキシプロピレン基）、エポキシド基、チオエーテル基、ポリチオエーテル基、硫酸基、亜硫酸基、リン酸基、亜リン酸基、ホスファチジルコリン基、ベタイン基、スルホベタイン基、ニトリル基、イソニトリル基、シアナート基、イソシアナート基、チオシアナート基、イソチオシアナート基、アジド基、チオール基、チオラート基、スルフィド基、スルフィン酸基、スルホン酸基、フェノラート基、カルボニル基、カルボン酸基、ホスフィン基、ホスフィンオキシド基、ホスホン酸基及びホスホラミド基、更にはこのような基の組合せ及び混合物から選択してもよい。幾つかの実施態様において、親水性基（単数又は複数）は、特に限定されないが実例として、アミン基（第１級、第２級、第３級又は第４級アミン）、アミド基、ヒドロキシル基、エステル基、エーテル基、ポリエーテル基、チオエーテル基、硫酸基、亜硫酸基、リン酸基、亜リン酸基、ホスファチジルコリン基、ベタイン基及びスルホベタイン基から選択してもよい。
【００３２】
幾つかの実施態様において、コポリマーの分子量（ダルトン）（Da）は、例えば、約３００〜約１０，０００，０００以上、又は約５００〜約１０，０００，０００、又は約１，０００〜約１０，０００，０００、又は約１０，０００〜約１０，０００，０００、又は約１００，０００〜約１０，０００，０００、又は３００〜約５，０００，０００以上、又は約５００〜約５，０００，０００、又は約１，０００〜約５，０００，０００、又は約１０，０００〜約５，０００，０００、又は約１００，０００〜約５，０００，０００、又は３００〜約１，０００，０００以上、又は約５００〜約１，０００，０００、又は約１，０００〜約１，０００，０００、又は約１０，０００〜約１，０００，０００、又は約１００，０００〜約１，０００，０００、又は約１００〜約７５０，０００、又は約５００〜約７５０，０００、又は約１，０００〜約７５０，０００、又は約１０，０００〜約７５０，０００、又は約１００，０００〜約７５０，０００、又は約１００〜約５００，０００、又は約２００〜約５００，０００、又は約１，０００〜約５００，０００、又は約１０，０００〜約５００，０００、又は約１００，０００〜約５００，０００である。
【００３３】
幾つかの実施態様において、このコポリマーは、ポリエチレン性基本骨格を含むが、ここから１つ以上の反応性官能基含有部分又は反応性官能基の誘導体含有部分（例えば、１つ以上のアルデヒド含有部分又はアルデヒド誘導体含有部分）並びに少なくとも１個の炭素原子及び少なくとも２個のヘテロ原子を含む１つ以上の部分が分岐している。このポリエチレン性基本骨格は、エチレン性基、即ち、二重結合を含むモノマーから形成された−（ＣＨＲ−ＣＨＲ）−基（ここで、Ｒは、アルキル又は水素である）の直鎖を含む。他のタイプのポリマー基本骨格もまた包含され、そしてモノマーの性質に依存する。このコポリマーが形成されるモノマーは、特に限定されないが一例として、ビニルモノマー、アリル型モノマー、オレフィン類、及び少なくとも１の不飽和度を含有する任意の低分子、並びに上記モノマー（ここで、重合性官能基は、炭素−炭素二重結合又は炭素−炭素三重結合である）の２種以上の混合物を包含する。重合性官能基に加えて、モノマーはまた、反応性官能基又は反応性官能基の誘導体のいずれかの適切な置換、あるいは少なくとも１個の炭素原子及び少なくとも２個のヘテロ原子を含む。ビニルモノマーの種類は、特に限定されないが、メタクリル酸、メタクリラート、メタクリルアミド、Ｎ−及びＮ，Ｎ−二置換メタクリルアミド、ビニル芳香族モノマー、ハロゲン化ビニル、カルボン酸のビニルエステル（例えば、酢酸ビニル）、エチレンオキシドアクリラート、ジアクリラート、及びジメタクリラートを包含する。
【００３４】
メタクリラートの例は、本実施態様のペンダント部分で適切に置換されたメタクリラート（ここで、メタクリラートは、特に限定されないが実例として、例えば、メタクリル酸メチル、メタクリル酸エチル、メタクリル酸プロピル、メタクリル酸イソプロピル、メタクリル酸ｎ−ブチル、メタクリル酸イソ−ブチル、及びメタクリル酸tert−ブチルを包含する）を包含する。使用できるビニル芳香族モノマーの例は、特に限定されないが、例えば、適切に置換されたスチレン、スチレン−ブタジエン、ｐ−クロロメチルスチレン及びジビニルベンゼンを包含する。使用できるハロゲン化ビニルは、特に限定されないが、適切に置換された塩化ビニル及びフッ化ビニリデンを包含する。使用できるカルボン酸のビニルエステルは、特に限定されないが、適切に置換された酢酸ビニル、酪酸ビニル、３，４−ジメトキシ安息香酸ビニル、リンゴ酸ビニル及び安息香酸ビニルを包含する。
【００３５】
このコポリマーは、上記の適切なモノマー単位を使用してランダムコポリマーの合成のための標準的高分子化学法により合成される。幾つかの実施態様において、１個以上の重合性官能基を含むモノマー単位は、単一重合工程で化合させることができる。上記のとおり、この後者の重合アプローチにおいて、このコポリマーの共重合モノマーのそれぞれの数は、モノマー単位のモル濃度を制御することにより制御できる。
【００３６】
このランダムコポリマーは、ランダムコポリマーの調製のための任意の重合手法により調製することができる。重合手法は、例えば、ラジカル重合、原子移動ラジカル重合、可逆的付加開裂連鎖移動重合、ニトロキシドを介した重合などを包含する。例えば、温度、反応媒体、ｐＨ、反応時間、及び試薬の添加の順序のような、重合の条件は、例えば、利用する重合のタイプ、利用する任意の重合性官能基を包含するモノマー試薬の性質及び利用する任意の触媒の性質の１つ以上に依存する。このような条件は、使用できる重合手法のタイプが当該分野において周知であるため、広く知られている。
【００３７】
上記のとおり、本実施態様の幾つかによる組成物は、ｓｐｓメンバー及び合成コポリマーのコーティングを含む固体支持体を含む。この固体支持体は、透明であってもある程度透明であってもよい、有機又は無機の水不溶性材料からなっていてよい。固体支持体は、疎水性であり、そして例えば、粒状物（ビーズ及び粒子を包含する）、フィルム、膜、チューブ、ウェル、ストリップ、ロッド、及び平面（例えば、プレートなど）のような幾つかの形状のいずれであってもよい表面を有する。アッセイのタイプに応じて、固体支持体は、使用される媒体中に懸濁できるか又はできない。懸濁できる固体支持体の例は、ラテックス粒子のようなポリマー材料及び磁性粒子を包含する。他の固体支持体組成物は、例えば、ポリ（塩化ビニル）、ポリアクリルアミド、ポリアクリレート、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリ（４−メチルブテン）、ポリスチレン、ポリメタクリレート、ポリ（エチレンテレフタレート）、ナイロン、及びポリ（酪酸ビニル）のようなポリマー（これらを単独で使用するか、又は他の材料と併せて使用するかのいずれか）を包含する。
【００３８】
幾つかの実施態様において、固体支持体は粒子である。この粒子は一般に、例えば、約０．０２〜約１００ミクロン、又は約０．０５〜約１００ミクロン、又は約０．１〜約１００ミクロン、又は約０．５〜約１００ミクロン、又は約０．０２〜約５０ミクロン、又は約０．０５〜約５０ミクロン、又は約０．１〜約５０ミクロン、又は約０．５〜約５０ミクロン、又は約０．０２〜約２０ミクロン、又は約０．０５〜約２０ミクロン、又は約０．１〜約２０ミクロン、又は約０．５〜約２０ミクロンの平均直径を有する。幾つかの実施態様において、この粒子は、例えば、約０．０５ミクロン〜約２０ミクロン、又は約０．３ミクロン〜約１０ミクロン、又は約０．３ミクロン〜約５ミクロンの平均直径を有する。幾つかの実施態様において、この粒子は、ラテックス粒子又はクロム粒子である。
【００３９】
ラテックス粒子は、粒状の水懸濁性、水不溶性のポリマー材料である。幾つかの実施態様において、このラテックスは、ポリスチレン−ブタジエンのような置換ポリエチレン、ポリアクリルアミド、ポリスチレン、アミノ基を持つポリスチレン、ポリアクリル酸、ポリメタクリル酸、アクリロニトリル−ブタジエン、スチレンコポリマー、ポリ酢酸ビニル−アクリレート、ポリビニルピリジン、塩化ビニル・アクリレートコポリマーなどである。
【００４０】
ポリマー粒子は、付加又は縮合ポリマーから形成することができる。この粒子は、水性媒体に容易に分散でき、そして官能基化することにより、例えば、本明細書に記載されるコポリマー、シグナル生成システム（ｓｐｓ）のメンバー、及び特異的結合対（ｓｂｐ）のメンバーの１つ以上への結合が可能になる。この粒子はまた、天然材料、合成修飾された天然材料、及び合成材料から誘導することができる。幾つかの実施態様において、この粒子は、例えば、アミン基のような、天然に又は合成により導入された反応性官能基を有しており、そしてこれは、例えば、アルデヒド基のような、コポリマーの対応する反応性官能基と反応性である。
【００４１】
上記のとおり、このコポリマーは、支持体上のコーティングである。支持体をコポリマーで被覆することは、幾つかの方法で達成できる。このコポリマーは、支持体の表面に共有結合させることができる。幾つかの実施態様において、共有結合は、例えば、アルデヒド基のようなコポリマーの反応性官能基の一部と、支持体の表面上の官能基との、アルデヒド誘導体に関しての上述のやり方と同様の反応によって達成できる。上記のとおり、幾つかの実施態様において、支持体の性質に応じて、適切な官能基は、既に支持体の表面上に存在するか、又は表面上に合成により導入してもよい。例えば、アルデヒド基のような残りの反応性官能基は、例えば、適切に官能基化したｓｂｐメンバーとの反応に利用できる。
【００４２】
幾つかの実施態様において、支持体上に被覆されたコポリマーの量は、例えば、支持体の性質、コポリマーの性質、ｓｐｓメンバーの性質、支持体へのコポリマーの結合がアルデヒド担持部位によるかどうか、及びｓｂｐメンバーがアルデヒド担持部位に結合しているかどうかの１つ以上に依存する。幾つかの実施態様において、支持体上に被覆されたコポリマーの量（重量パーセント）は、例えば、約０．１〜約１０％、又は約０．１〜約９％、又は約０．１〜約８％、又は約０．１〜約７％、又は約０．１〜約６％、又は約０．１〜約５％、又は約０．１〜約４％、又は約０．１〜約３％、又は約０．１〜約２％、又は約０．１〜約１％、又は約０．１〜約０．５％、又は約１〜約１０％、又は約１〜約９％、又は約１〜約８％、又は約１〜約７％、又は約１〜約６％、又は約１〜約５％、又は約１〜約４％、又は約１〜約３％、又は約１〜約２％、又は約０．０５〜約０．５％、又は約０．０６〜約０．５％、又は約０．０７〜約０．５％、又は約０．０８〜約０．５％、又は約０．０９〜約０．５％、又は約０．１〜約０．５％、又は約０．０５〜約０．４％、又は約０．０６〜約０．４％、又は約０．０７〜約０．４％、又は約０．０８〜約０．４％、又は約０．０９〜約０．４％、又は約０．１〜約０．４％、又は約０．０５〜約０．３％、又は約０．０６〜約０．３％、又は約０．０７〜約０．３％、又は約０．０８〜約０．３％、又は約０．０９〜約０．３％、又は約０．１〜約０．３％、又は約０．０５〜約０．２％、又は約０．０６〜約０．２％、又は約０．０７〜約０．２％、又は約０．０８〜約０．２％、又は約０．０９〜約０．２％、又は約０．１〜約０．２％である。
【００４３】
シグナル生成システムのメンバーを含む粒子のためのコポリマーコーティングの選択は、例えば、アッセイのタイプ、シグナル生成システムのメンバーの性質、分析対象の期待濃度範囲、抗体の物理的特性及び起源、有効な抗体コーティング密度の変動、最終反応混合物のｐＨ、及び最終反応混合物のイオン強度のような幾つかの要因の１つ以上に依存する。このような要因に応じて、任意の特定の応用では一方のコポリマーコーティングが、もう一方のコポリマーコーティングより好ましいかもしれない。例えば、特定の抗体が特定のコポリマーコーティングに結合するとき、その有効な抗体コーティング密度は、シグナル生成システムに最適であるかもしれない。シグナルの量は、共重合中に、例えば、第１及び第２の重合性モノマーの供給比を調整することにより、制御できよう。
【００４４】
上記のとおり、本組成物はまた、ｓｐｓメンバーを含む。ｓｐｓメンバーの性質は、本組成物の実施態様が利用されるアッセイのタイプに依存する。このようなアッセイは、例えば、免疫沈降及び凝集法、並びに抗体複合体の検出のための対応する光散乱法（例えば、ネフェロメトリー法など）及び比濁法；並びに標識アッセイ（例えば、標識免疫測定法）、例えば、誘起ルミネセンス（発光酸素チャネリング）アッセイ、蛍光酸素チャネリングアッセイ、酵素標識アッセイ、蛍光偏光アッセイ、放射標識アッセイ及び阻害アッセイなどを包含する。
【００４５】
ｓｐｓメンバーは標識であってもよく、そしてこれは、シグナル生成システムの一部である。標識の性質は、上述のような特定のアッセイ形式に依存する。シグナル生成システムは、１つ以上の成分を包含できるが、少なくとも１つの成分は検出可能な標識であって、そしてこれが、結合及び非結合標識の量（即ち、検出される分析対象に結合したか結合しない、又は検出すべき分析対象の量を反映する物質に結合したか結合しない標識の量）の一方又は両方に関連する検出可能なシグナルを生成する。この標識は、シグナルを生成するか、又は生成するように誘導することができる、任意の分子であり、そして例えば、蛍光剤、放射標識、酵素、化学発光剤又は光増感剤であってよい。よって、シグナルは、例えば、場合によって、酵素活性、ルミネセンス、吸光度又は放射活性を検出することにより、検出及び／又は測定される。
【００４６】
適切な標識は、特に限定されないが実例として、例えば、アルカリホスファターゼ、グルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ（「Ｇ６ＰＤＨ」）及び西洋ワサビペルオキシダーゼのような酵素；リボザイム；ＱＢレプリカーゼのようなレプリカーゼの基質；プロモーター；色素；フルオレセイン、イソチオシアナート、ローダミン化合物、フィコエリトリン、フィコシアニン、アロフィコシアニン、ｏ−フタルデヒド（phthaldehyde）、及びフルオレスカミンのような蛍光剤；量子ドットとして知られている半導体ナノ結晶中に存在するＣｄＳｅ及びＺｎＳから調製されるような複合体；イソルミノールのような化学発光剤；光増感剤を包含する増感剤；補酵素；酵素基質；１２５Ｉ、１３１Ｉ、１４Ｃ、３Ｈ、５７Ｃｏ及び７５Ｓｅのような放射標識；ラテックス粒子、炭素粒子、磁性粒子、例えば、二酸化クロム（ＣｒＯ２）粒子を包含する金属粒子などのような粒子；金属ゾル；晶子；リポソーム；ヌクレオチド及び細胞を包含するが、これらは、色素、触媒又は他の検出可能な基で更に標識してもよい。
【００４７】
標識は、シグナルを直接生成させることができ、そのため、追加の成分はシグナルを生成させるために必要ではない。多数の有機分子、例えば、蛍光剤は、紫外線及び可視光を吸収することができるが、ここで、光吸収が、エネルギーをこれらの分子に伝達して、これらを励起エネルギー状態に高める。この吸収エネルギーは、次に第２の波長での発光により消失する。シグナルを直接生成させる他の標識は、放射活性同位元素及び色素を包含する。
【００４８】
あるいは、この標識は、シグナルを生成させるのに他の成分を必要とすることもあるが、するとシグナル生成システムは、測定可能なシグナルを生成させるために必要な全ての成分を包含することになる。このような他の成分は、例えば、基質、補酵素、促進剤、追加の酵素、酵素産物と反応する物質、触媒、活性化剤、補助因子、インヒビター、スカベンジャー、金属イオン、及びシグナル生成物質の結合に必要な特異的結合物質を包含することができる。
【００４９】
上記のとおり、本組成物においてｓｐｓメンバーは支持体と結び付いている。固体支持体とのｓｐｓメンバーの結び付きの様式は、支持体の性質、ｓｐｓメンバーの性質、支持体の表面積及び多孔性並びに利用する任意の溶媒の性質の１つ以上に依存する。この結び付きは、例えば、支持体によるｓｐｓメンバーの吸着、支持体へのｓｐｓメンバーの共有結合、固体支持体へのｓｐｓメンバーの溶解又は分散、結合対メンバー（例えば、アビジン−ビオチン及びジゴキシン−ジゴキシンに対する抗体）を用いての支持体へのｓｐｓメンバーの非共有結合によるものであってよい。このように、ｓｐｓメンバーは固体支持体「と結び付いて」いる。
【００５０】
本明細書において使用されるとき、「と結び付いて」という句は、例えば、直接結合によるか又はスペーサー基を通しての一方の部分のもう一方の部分への共有結合、直接か又は部分に結合した特異的結合対メンバーを用いての一方の部分のもう一方の部分への非共有結合、一方の部分をもう一方の部分に溶解するか又は合成によるなどの一方の部分のもう一方の部分への取り込み、及び一方の部分をもう一方の部分上に被覆することを包含する。
【００５１】
増感剤又は化学発光化合物のようなｓｐｓメンバーと、ラテックス粒子との結び付きは、例えば、重合による粒子の形成中の取り込み、又は例えば、粒子中への非共有の溶解による予め形成された粒子への取り込みを伴うかもしれない。幾つかのアプローチにおいて、ｓｐｓメンバーの溶液が使用される。使用できる溶媒は、例えば、アルコール類（例えば、エタノール、エトキシエタノール、メトキシエタノール、エチレングリコール及びベンジルアルコールを包含する）；アミド類（例えば、ジメチルホルムアミド、ホルムアミド、アセトアミド及びテトラメチル尿素など）；スルホキシド類（例えば、ジメチルスルホキシド及びスルホランなど）；及びエーテル類（例えば、カルビトール、エチルカルビトール及びジメトキシエタンなど）；及び水；並びに上記の２種以上の混合物を包含する。粒子が不溶性である高沸点を有する溶媒の使用は、粒子中への化合物の溶解を容易にするのに高温を使用することができ、特に適している。溶媒は、単独で又は組合せて使用してもよい。溶媒は、粒子から除去されるｓｐｓメンバーの固有の性質又は能力のために、これらのシグナル生成能力を妨げないように選択すべきである。幾つかの実施態様において、例えば、フタル酸ジブチル、ベンゾニトリル、ナフトニトリル、テレフタル酸ジオクチル、ジクロロベンゼン、ジフェニルエーテル及びジメトキシベンゼンのような、芳香族溶媒を利用することができる。
【００５２】
一般に、本手順において利用される温度は、ｓｐｓメンバー粒子からのシグナルの量を最大化するように選択される（ただし、粒子は、選択温度で融解又は凝集してはならない）。幾つかの実施態様において、高温が利用される。本手順のための温度は、約２０℃〜約２００℃、又は約５０℃〜約１７０℃の範囲であろう。室温で不溶性に近い幾つかの化合物は、例えば、エタノール及びエチレングリコールのような低分子量アルコールに高温で可溶性であることが観測されている。カルボキシル化修飾ラテックス粒子は、このような温度で低分子量アルコールに耐用性があることが証明されている。
【００５３】
本組成物の幾つかの実施態様において、ｓｐｓメンバーは、光増感剤を包含する増感剤、及び後に更に詳述される化学発光化合物よりなる群から選択される。
【００５４】
化学発光化合物（化学発光剤）は、化学的に活性化できる化合物であり、そしてこのような活性化の結果として、ある波長で発光する。化学発光剤の例は、特に限定されないが実例として、例えば、一重項酸素又は過酸化物と反応することによりヒドロペルオキシド又はジオキセタンを形成できるオレフィン（これはケトン又はカルボン酸誘導体に分解することができる）；光の作用により分解することができる安定なジオキセタン；一重項酸素と反応することによりジケトンを形成できるアセチレン；ルミノールのようなアゾ化合物又はアゾカルボニルを形成できるヒドラゾン又はヒドラジド；及びエンドペルオキシドを形成できる芳香族化合物を包含する。活性化反応の結果として、化学発光剤は、直接的又は間接的に発光を引き起こす。
【００５５】
増感剤は、化学発光化合物の活性化のための、例えば、一重項酸素のような反応性中間体の生成のための分子、通常は化合物である。本組成物の幾つかの実施態様において、増感剤は光増感剤である。化学活性化できる（例えば、酵素及び金属塩により）他の増感剤は、特に限定されないが一例として、外部光源による活性化によって、又はあまり好ましくないがこれによらずに、一重項酸素を生成できる他の物質及び組成物を包含する。例えば、ある種の化合物が、一重項酸素及び水への過酸化水素の変換を触媒することが証明されている。また光増感剤の範囲には、真の増感剤ではないが、熱、光、電離放射線、又は化学活性化により励起すると、一重項酸素の分子を放出する化合物も包含される。この種類の化合物の最もよく知られているメンバーは、１，４−ビスカルボキシエチル−１，４−ナフタレンエンドペルオキシド、９，１０−ジフェニルアントラセン−９，１０−エンドペルオキシド及び５，６，１１，１２−テトラフェニルナフタレン−５，１２−エンドペルオキシドのようなエンドペルオキシド類を包含する。これらの化合物が、加熱又は直接的な光の吸収により一重項酸素を放出する。
【００５６】
光増感剤は、例えば、光での励起による一重項酸素の生成によっての、光活性化合物の活性化のための増感剤である。光増感剤は、光活性化可能であり、そして、例えば、色素及び芳香族化合物を包含し、そして通常は共有結合した原子からなる化合物であり、通常は複数の共役二重又は三重結合を伴う。この化合物は、２００〜１，１００nm、又は３００〜１，０００nm、又は４５０〜９５０nmの波長範囲の光を、その励起波長で５００M−１cm−１を上回る、又は５，０００M−１cm−１を上回る、又は５０，０００M−１cm−１を上回るそれの最大吸光度の吸光係数で吸収するはずである。光増感剤は、比較的光安定性であり、そして好ましくは、一重項酸素と効率よく反応しない。光増感剤の例は、特に限定されないが実例として、例えば、アセトン、ベンゾフェノン、９−チオキサントン、エオシン、９，１０−ジブロモアントラセン、メチレンブルー、ヘマトポルフィリンのようなメタロ−ポルフィリン、フタロシアニン、クロロフィル、ローズベンガル、及びバックミンスターフラーレン、並びにこれらの化合物の誘導体を包含する。
【００５７】
本組成物の実施態様に利用できる化学発光化合物及び光増感剤の例は、米国特許第5,340,716号（Ullmanら）に明記されており、この開示の相当部分は引用例として本明細書に取り込まれる。
【００５８】
幾つかの実施態様において、アルデヒド又はアルデヒド誘導体を含む重合モノマー（第１の重合モノマー）のペンダント部分は、下記式：
−Ｃ（Ｏ）−Ａ−（ＣＨ２）ｎ−Ｇ
［式中、
Ａは、Ｏ又はＮＲ１であり、そしてここで、Ｒ１は、Ｈ、又は例えば、１〜６個、若しくは１〜５個、若しくは１〜４個、若しくは１〜３個、若しくは１〜２個、若しくは２〜６個、若しくは２〜５個、若しくは２〜４個、若しくは２〜３個、若しくは３〜６個、若しくは３〜５個、若しくは３〜４個、若しくは４〜６個、若しくは４〜５個、若しくは５〜６個の炭素原子のアルキルであり；
ｎは、例えば、１〜１０、又は１〜９、又は１〜８、又は１〜７、又は１〜６、又は１〜５、又は１〜４、又は１〜３、又は１〜２、又は２〜１０、又は２〜９、又は２〜８、又は２〜７、又は２〜６、又は２〜５、又は２〜４、又は２〜３、又は３〜１０、又は３〜９、又は３〜８、又は３〜７、又は３〜６、又は３〜５、又は３〜４、又は４〜１０、又は４〜９、又は４〜８、又は４〜７、又は４〜６、又は４〜５、５〜１０、又は５〜９、又は５〜８、又は５〜７、又は５〜６、６〜１０、又は６〜９、又は６〜８、又は６〜７、又は７〜１０、又は７〜９、又は７〜８、又は８〜１０、又は８〜９、又は９〜１０であり；そして
Ｇは、ＣＨＯ；ＣＨ（ＯＲ８）２（ここで、Ｒ８は、例えば、１〜６個、又は１〜５個、又は１〜４個、又は１〜３個、又は１〜２個、又は２〜６個、又は２〜５個、又は２〜４個、又は２〜３個、又は３〜６個、又は３〜５個、又は３〜４個、又は４〜６個、又は４〜５個、又は５〜６個の炭素原子のアルキルである）；ＣＯＯＨ、又は例えば、エステル若しくはアミドのようなその誘導体；ＮＲ１（ここで、Ｒ１は、Ｈ又は１〜６個の炭素原子のアルキルである）；特異的結合対のメンバーである］で示される。
【００５９】
幾つかの実施態様において、少なくとも１個の炭素原子及び少なくとも２個のヘテロ原子を含む重合モノマーのペンダント部分は、下記式（ｉ）〜（iii）を有する：
（ｉ）  −ＣＯＯＲ１０［ここで、Ｒ１０は、Ｈ、又は例えば、１〜６個、若しくは１〜５個、若しくは１〜４個、若しくは１〜３個、若しくは１〜２個、若しくは２〜６個、若しくは２〜５個、若しくは２〜４個、若しくは２〜３個、若しくは３〜６個、若しくは３〜５個、若しくは３〜４個、若しくは４〜６個、若しくは４〜５個、若しくは５〜６個の炭素原子のアルキルである］；
（ii）  下記式：
【化５】
2013530400.tif 000006
［式中、ｗは、２〜４、又は２〜３、又は３〜４、又は２、又は３、又は４である］；又は
（iii）  −Ｃ（Ｏ）−Ｘ−（ＣＨ２）ｐ−（Ｙ）ｑ−（ＣＨ２）ｒ−Ｚ
［式中、
Ｘは、Ｏ又はＮＲ２であり、そしてここで、Ｒ２は、Ｈ、又は例えば、１〜６個、若しくは１〜５個、若しくは１〜４個、若しくは１〜３個、若しくは１〜２個、若しくは２〜６個、若しくは２〜５個、若しくは２〜４個、若しくは２〜３個、若しくは３〜６個、若しくは３〜５個、若しくは３〜４個、若しくは４〜６個、若しくは４〜５個、若しくは５〜６個の炭素原子のアルキルであり；
Ｙは、−（ＣＨ２Ｏ）ｍ−（ここで、ｍは、例えば、１〜１００、又は２〜１００、又は３〜１００、又は４〜１００、又は１〜９０、又は１〜８０、又は１〜７０、又は１〜６０、又は１〜５０、又は１〜４０、又は１〜３０、又は１〜２０、又は１〜１０、又は１〜５、又は５〜１００、又は５〜９０、又は５〜８０、又は５〜７０、又は５〜６０、又は５〜５０、又は５〜４０、又は５〜３０、又は５〜２０、又は５〜１０、又は１０〜１００、又は１０〜９０、又は１０〜８０、又は１０〜７０、又は１０〜６０、又は１０〜５０、又は１０〜４０、又は１０〜３０、又は１０〜２０である）；又は＞Ｎ＋（Ｒ３Ｒ４）（ここで、Ｒ３及びＲ４は、独立にＨ、又は例えば、１〜６個、若しくは１〜５個、若しくは１〜４個、若しくは１〜３個、若しくは１〜２個、若しくは２〜６個、若しくは２〜５個、若しくは２〜４個、若しくは２〜３個、若しくは３〜６個、若しくは３〜５個、若しくは３〜４個、若しくは４〜６個、若しくは４〜５個、若しくは５〜６個の炭素原子のアルキルである）であり；
ｐは、例えば、０〜１０、又は０〜９、又は０〜８、又は０〜７、又は０〜６、又は０〜５、又は０〜４、又は０〜３、又は０〜２、又は０〜１、又は１〜１０、又は１〜９、又は１〜８、又は１〜７、又は１〜６、又は１〜５、又は１〜４、又は１〜３、又は１〜２、又は２〜１０、又は２〜９、又は２〜８、又は２〜７、又は２〜６、又は２〜５、又は２〜４、又は２〜３、又は３〜１０、又は３〜９、又は３〜８、又は３〜７、又は３〜６、又は３〜５、又は３〜４、又は４〜１０、又は４〜９、又は４〜８、又は４〜７、又は４〜６、又は４〜５、又は５〜１０、又は５〜９、又は５〜８、又は５〜７、又は５〜６、又は６〜１０、又は６〜９、又は６〜８、又は６〜７、又は７〜１０、又は７〜９、又は７〜８、又は８〜１０、又は８〜９、又は９〜１０であって、Ｙが、＞Ｎ＋（Ｒ３Ｒ４）であるとき、少なくとも１であり；
ｑは、０又は１であり；
ｒは、例えば、０〜１０、又は０〜９、又は０〜８、又は０〜７、又は０〜６、又は０〜５、又は０〜４、又は０〜３、又は０〜２、又は０〜１、又は１〜１０、又は１〜９、又は１〜８、又は１〜７、又は１〜６、又は１〜５、又は１〜４、又は１〜３、又は１〜２、又は２〜１０、又は２〜９、又は２〜８、又は２〜７、又は２〜６、又は２〜５、又は２〜４、又は２〜３、又は３〜１０、又は３〜９、又は３〜８、又は３〜７、又は３〜６、又は３〜５、又は３〜４、又は４〜１０、又は４〜９、又は４〜８、又は４〜７、又は４〜６、又は４〜５、又は５〜１０、又は５〜９、又は５〜８、又は５〜７、又は５〜６、又は６〜１０、又は６〜９、又は６〜８、又は６〜７、又は７〜１０、又は７〜９、又は７〜８、又は８〜１０、又は８〜９、又は９〜１０であって、Ｙが、＞Ｎ＋（Ｒ３Ｒ４）であるとき、少なくとも１であり；
Ｚは、ＳＯ３−；例えば、１〜６個、若しくは１〜５個、若しくは１〜４個、若しくは１〜３個、若しくは１〜２個、若しくは２〜６個、若しくは２〜５個、若しくは２〜４個、若しくは２〜３個、若しくは３〜６個、若しくは３〜５個、若しくは３〜４個、若しくは４〜６個、若しくは４〜５個、若しくは５〜６個の炭素原子のアルキル；又は−（ＣＨＯＨ）ｔ（ＣＨ２）ｕＣＨ３（ここで、ｔは、例えば、１〜５、又は１〜４、又は１〜３、又は１〜２、又は２〜５、又は２〜４、又は２〜３、又は３〜５、又は３〜４、又は４〜５であり、そしてｕは、例えば、０〜１０、又は０〜９、又は０〜８、又は０〜７、又は０〜６、又は０〜５、又は０〜４、又は０〜３、又は０〜２、又は０〜１、又は１〜１０、又は１〜９、又は１〜８、又は１〜７、又は１〜６、又は１〜５、又は１〜４、又は１〜３、又は１〜２、又は２〜１０、又は２〜９、又は２〜８、又は２〜７、又は２〜６、又は２〜５、又は２〜４、又は２〜３、又は３〜１０、又は３〜９、又は３〜８、又は３〜７、又は３〜６、又は３〜５、又は３〜４、又は４〜１０、又は４〜９、又は４〜８、又は４〜７、又は４〜６、又は４〜５、又は５〜１０、又は５〜９、又は５〜８、又は５〜７、又は５〜６、又は６〜１０、又は６〜９、又は６〜８、又は６〜７、又は７〜１０、又は７〜９、又は７〜８、又は８〜１０、又は８〜９、又は９〜１０である）である］。
【００６０】
幾つかの実施態様において、ペンダント部分は、約４個の炭素原子及び約３個のヘテロ原子を含む。幾つかの実施態様において、ペンダント部分は、約８個の炭素原子及び約７個のヘテロ原子を含む。幾つかの実施態様において、ペンダント部分は、約４個の炭素原子及び約２個のヘテロ原子を含む。幾つかの実施態様において、ペンダント部分は、約１個の炭素原子及び約２個のヘテロ原子を含む。
【００６１】
本組成物を利用できるアッセイの一般的な説明
以下の考察は、実例として挙げられ特に限定されない。本組成物は、粒子試薬を利用する任意のアッセイにおいて利用できる。本組成物は、非被覆粒子が疎水性表面を有するポリマー被覆粒子を利用するアッセイに特に応用される。このアッセイは、アッセイ成分又は生成物の分離もなしに（均一系）又は分離を伴って（不均一系）のいずれかで実施できる。不均一系アッセイは、通常１つ以上の分離工程を伴い、競合法であっても非競合法であってもよい。
【００６２】
免疫測定法は、標識又は非標識試薬を含んでよい。非標識試薬を伴う免疫測定法は、通常１種以上の抗体を伴う比較的大きな複合体の形成を含む。このようなアッセイは、例えば、免疫沈降法及び凝集法、並びに抗体複合体の検出のための対応する光散乱法（例えば、ネフェロメトリーなど）及び比濁法を包含する。標識免疫測定法は、化学発光免疫測定法、酵素免疫測定法、蛍光偏光免疫測定法、放射免疫測定法、阻害アッセイ、誘起ルミネセンス、蛍光酸素チャネリングアッセイなどを包含する。
【００６３】
試料中の分析対象の存在及び／又は量を決定するために本組成物の実施態様を利用できる免疫測定法の１つの一般的な群は、限定濃度のアッセイ試薬の１つを用いる免疫測定法を包含する。免疫測定法の別の群は、過剰の１種以上の主要試薬の使用を伴う。免疫測定法の別の群は、標識試薬が、本組成物と試料中の分析対象との結合による標識シグナルを調節する、分離不要の均一系アッセイである。
【００６４】
典型的な競合不均一系アッセイにおいて、分析対象に結合するｓｂｐメンバーを含む本組成物の実施態様は、分析対象を含有することが疑われる試料を含有する媒体と接触させ、本組成物のｓｐｓメンバーと反応性の、又はｓｐｓメンバーの活性化の産物と反応性の標識に分析対象を結合させる。本組成物のｓｐｓメンバーの活性化により、分析対象が存在すれば標識からシグナルが生成し、これを従来法により測定して、試料中の分析対象の量と関連付けられる。
【００６５】
典型的な非競合サンドイッチアッセイにおいて、免疫サンドイッチ複合体がアッセイ媒体中に生成する。複合体は、分析対象、本組成物のｓｂｐメンバー（第１のｓｂｐメンバー）及び分析対象に結合するか又は第１のｓｂｐメンバーに結合する第２のｓｂｐメンバーを含む。続いて、免疫サンドイッチ複合体を検出して、試料中の分析対象の量と関連付けられる。この免疫サンドイッチ複合体は、複合体中の本組成物の標識及び第２のｓｂｐメンバーの標識の１種以上の存在のおかげで検出される。
【００６６】
幾つかの既知のアッセイは、第１及び第２のｓｐｓメンバーを使用するシグナル生成システムを利用する。ｓｐｓメンバーは、ｓｐｓの一方のメンバーの活性化が、例えば、光のような産物を生成させ、これによってｓｐｓのもう一方のメンバーの活性化が起こるという点で関連している。
【００６７】
サンドイッチアッセイにおける１つのアプローチにおいて、本組成物の第１のインキュベーション物を、分析対象を含有することが疑われる試料を含有する媒体と接触させる。洗浄及び分離工程後、本組成物の支持体を、第２のインキュベーション期間、酵素のような標識を含有する、例えば、分析対象に対する抗体のような第２のｓｂｐメンバーを含有する媒体と接触させる。標識は、一方の標識の活性化が、媒体中に分析対象が存在するならば、もう一方の標識を活性化するという点で関連している。支持体は、再度洗浄して、媒体から分離し、そして媒体又は支持体のいずれかをシグナルの存在について検査する。シグナルの存在及び量は、分析対象の存在又は量と関連付けられる。
【００６８】
上記サンドイッチアッセイの変形態様において、適切な媒体中の分析対象を含有することが疑われる試料を、分析対象に対する標識抗体と接触させ、一定時間インキュベートする。次に、この媒体を、上記の標識抗体の標識に関連する標識を含む本組成物と接触させる。インキュベーション期間後、支持体を媒体から分離して、洗浄することにより非結合試薬を除去する。分析対象の存在又は量に関連するシグナルの存在について支持体又は媒体を検査する。上記の別の変形態様において、試料、本組成物及び標識抗体を媒体中に合わせて、単一インキュベーション工程でインキュベートする。分離、洗浄工程及びシグナルに関する検査は、上記のとおりである。
【００６９】
既知のアッセイの幾つかの実施態様において、ｓｐｓメンバーは、例えば、光増感剤のような増感剤、及び化学発光組成物（ここで、増感剤の活性化により、化学発光組成物を活性化する生成物が生じる）を含む。第２のｓｐｓメンバーは、通常、結合及び／又は非結合ｓｐｓメンバーの量、即ち、検出される分析対象に、又は検出すべき分析対象の量を反映する物質に、結合しているか又は結合してないｓｐｓメンバーの量に関連する検出可能なシグナルを生成する。本発明の実施態様において、本組成物は、増感剤試薬又は化学発光試薬のいずれか一方を含むことができる。
【００７０】
このようなアッセイの実施態様において、アッセイが本実施態様の組成物を使用し、組成物のｓｐｓメンバーとして増感剤又は化学発光化合物を包含する、誘起ルミネセンス免疫測定法を利用できる。誘起ルミネセンス免疫測定法は、米国特許第5,340,716号（Ullman）に参照されるが、この開示は引用例として本明細書に取り込まれる。本実施態様の１つのアプローチにおいて、アッセイは、本実施態様のコポリマーで被覆され、それと共に光増感剤及び第１のｓｂｐメンバーが結び付いた粒子を使用する。化学発光試薬は、第２のｓｂｐメンバーを含む。媒体中の分析対象の存在と関連して、ｓｂｐメンバーが、分析対象に結合することにより複合体を形成するか、又は第１のｓｂｐメンバーが、第２のｓｂｐメンバーに結合することにより複合体を形成する。分析対象が存在するならば、光増感剤及び化学発光化合物は、分析対象の存在に基づく結合のために、極めて接近する。光増感剤は、一重項酸素を生成し、２つの標識が接近すると化学発光試薬を活性化する。活性化化学発光試薬は、次に発光する。発光の量は、生成した複合体の量に関連付けられ、そして順に存在する分析対象の量に関連付けられる。
【００７１】
誘起ルミネセンスアッセイの幾つかの実施態様において、アビジン又はストレプトアビジンに結合した光増感剤粒子を利用する。分析対象に結合するビオチン化ｓｂｐメンバーもまた利用される。ｓｐｓメンバーが化学発光試薬であり、ｓｂｐメンバーが分析対象に結合する、本組成物の実施態様は、検出系の一部として利用される。反応媒体をインキュベートすることにより、アビジンとビオチンとの間の結合のために、光増感剤粒子がビオチン化ｓｂｐメンバーに結合でき、また本組成物の一部である分析対象に対する結合パートナーが分析対象に結合できる。次に、媒体を光照射することにより、光増感剤を励起させるが、これは、その励起状態で酸素を一重項状態に活性化することができる。化学発光試薬は、分析対象の存在のために光増感剤に極めて接近しているため、一重項酸素により活性化され、発光する。次に媒体をルミネセンス又は発光の存在及び／又は量について検査するが、その存在は、分析対象の存在及び／又は量に関連している。
【００７２】
アッセイできる分析対象の濃度は、一般に約１０−５〜約１０−１７Ｍ、又は約１０−６〜約１０−１４Ｍを変動する。このアッセイが定性的か、半定量的か又は定量的（試料中に存在する分析対象の量に対して）か、特定の検出法及び分析対象の期待濃度のような考察が、普通は種々の試薬の濃度を決定する。
【００７３】
アッセイ媒体中の種々の試薬の濃度は、一般に分析対象の対象の濃度範囲、アッセイの性質などにより決定される。しかし試薬のそれぞれの最終濃度は、普通は経験的に、その範囲にわたるアッセイの感度を最適化するように決定される。即ち、重要な分析対象の濃度の変化は、正確に測定可能なシグナルの差を提供すべきである。例えば、シグナル生成システムの性質及び分析対象の性質のような考察が、種々の試薬の濃度を決定する。
【００７４】
上記のとおり、試料及び試薬は媒体中に組合せて提供される。媒体への添加の順序は変化してもよいが、本明細書に記載されるアッセイ様式の幾つかの実施態様にはある種の優先傾向が存在するだろう。当然添加の最も単純な順序は、全ての材料を同時に添加して、均一系アッセイ中のようにアッセイ媒体がシグナルに及ぼす効果を決定することである。あるいは、試薬のそれぞれ、又は試薬の群は、逐次合わせることができる。幾つかの実施態様において、上記のように各添加に続けて、インキュベーション工程を含めることができる。不均一系アッセイにおいて、１つ以上のインキュベーション工程の後に洗浄工程もまた利用することができる。
【００７５】
本組成物の実施態様を利用するアッセイ方法
上記のとおり、本発明の実施態様は、試料中の分析対象の存在及び量の１つ以上を決定する方法である。分析対象は、検出及び／又は定量すべき、対象の物質又は化合物又は組成物である。分析対象は、例えば、薬物、代謝物、殺虫剤及び汚染物質を包含する。代表的分析対象は、特に限定されないが実例として、アルカロイド、ステロイド、ラクタム、アミノアルキルベンゼン、ベンズヘテロサイクリック（benzheterocyclics）、プリン、マリファナから誘導される薬物、ホルモン、タンパク質を包含するポリペプチド、免疫抑制物質、ビタミン、プロスタグランジン、三環系抗うつ薬、抗悪性腫瘍薬、ヌクレオシド及びヌクレオチド（ポリヌクレオシド及びポリヌクレオチドを包含する）、種々の個別の薬物（メタドン、メプロバメート、セロトニン、メペリジン、リドカイン、プロカインアミド、アセチルプロカインアミド、プロプラノロール、グリセオフルビン、バルプロ酸、ブチロフェノン、抗ヒスタミン、クロラムフェニコール、抗コリン作動性薬物を包含する）、並びに上記全ての代謝物及び誘導体を包含する。また包含されるものは、病態に関連する代謝物、アミノグリコシド（ゲンタマイシン、カナマイシン、トブラマイシン、及びアミカシンなど）、及び殺虫剤（例えば、ポリハロゲン化ビフェニル、リン酸エステル、チオリン酸エステル、カルバメート及びポリハロゲン化スルフェンアミドなど）並びにこれらの代謝物及び誘導体である。分析対象という用語はまた、ポリペプチド及びタンパク質、多糖及び核酸の２種以上の組合せを包含する。このような組合せは、例えば、細菌、ウイルス、染色体、遺伝子、ミトコンドリア、核及び細胞膜の成分を包含する。タンパク質分析対象は、例えば、イムノグロブリン、サイトカイン、酵素、ホルモン、癌抗原、栄養マーカー及び組織特異的抗原を包含する。このようなタンパク質は、特に限定されないが実例として、プロタミン、ヒストン、アルブミン、グロブリン、硬タンパク質、リンタンパク質、ムコタンパク質、色素タンパク質、リポタンパク質、核タンパク質、糖タンパク質、Ｔ細胞受容体、プロテオグリカン、ＨＬＡ、未分類タンパク質、例えば、ソマトトロピン、プロラクチン、インスリン、ペプシン、ヒト血漿中に見い出されたタンパク質、血液凝固因子、タンパク質ホルモン（例えば、卵胞刺激ホルモン、黄体形成ホルモン、黄体刺激ホルモン、プロラクチン、絨毛性ゴナドドロピンなど）、組織ホルモン、サイトカイン、癌抗原（例えば、ＰＳＡ、ＣＥＡ、α−フェトプロテイン、酸ホスファターゼ、ＣＡ１９．９、ＣＡ１５．３及びＣＡ１２５など）、組織特異的抗原（例えば、アルカリホスファターゼ、ミオグロビン、ＣＰＫ−ＭＢ及びカルシトニンなど）、及びペプチドホルモンを包含する。他の対象のポリマー材料は、ムコ多糖及び多糖である。上記のとおり、分析対象という用語は、例えば、ｍ−ＲＮＡ、ｒ−ＲＮＡ、ｔ−ＲＮＡ、ＤＮＡ及びＤＮＡ−ＲＮＡ二本鎖のような、オリゴヌクレオチド及びポリヌクレオチド分析対象を更に包含する。
【００７６】
試験すべき試料は、非生物学的又は生物学的であってよい。「非生物学的試料」は、生物学的材料に関連しないものであり、そして例えば、土壌試料、水試料及び鉱物試料を包含する。「生物学的試料」という句は、例えば、体液、組織などのような任意の生物学的材料のことをいい、そしてこれは、哺乳動物の体から得られる。体液は、例えば、全血、血漿、血清、間質液、汗、唾液、尿、精液、水疱液、炎症性滲出液、糞便、喀痰、脳脊髄液、涙、粘液、リンパ液、膣粘液などを包含する。生物学的組織は、臓器又はホストの他の身体部位から切除された組織、例えば、組織生検；毛髪及び皮膚などを包含する。
【００７７】
本方法は、媒体中に組合せて、試料（前処理をしてもしなくともよい）、及び本組成物の実施態様（支持体と結び付いたｓｂｐメンバーを含む）を提供することを含む。ｓｂｐメンバーは、分析対象に又は第２のｓｂｐメンバーに結合することにより分析対象の存在に関連する複合体を形成する。ｓｂｐメンバーは、表面上又は孔中に面積を占める２種の異なる分子の一方であり、これはもう一方の分子に特異的に結合し、そのためもう一方の分子の特定の空間及び極性の組織と相補的であると定義される。このｓｂｐメンバーは、通常は抗原−抗体のような免疫学的対のメンバーであろうが、ビオチン−アビジン、ホルモン−ホルモン受容体、酵素−基質、核酸二本鎖、ＩｇＧ−プロテインＡ、ポリヌクレオチド対（例えば、ＤＮＡ−ＤＮＡ、ＤＮＡ−ＲＮＡなど）のような他の特異的結合対は、免疫学的対ではないが、ｓｂｐメンバーという句の範囲に含まれる。幾つかの実施態様において、以下に更に充分に説明されるように実施されるアッセイの性質に応じて、例えば、他のｓｂｐメンバー及び他のｓｐｓメンバーのような他の試薬が、媒体中に包含される。
【００７８】
試料は、任意の便利な媒体中に調製することができる。例えば、試料は、アッセイ媒体中に調製してもよく、これは本明細書で更に充分に後述される。幾つかの場合に、試料に、例えば、血球を溶解するなどのために前処理を適用してもよい。このような前処理は、通常は、続くアッセイを妨害しない媒体中で実施される。前処理には水性媒体が好ましい。
【００７９】
ｓｂｐメンバーは、組成物の支持体と結び付いている。幾つかの実施態様において、ｓｂｐメンバーは、固体支持体上に被覆したコポリマーに共有結合している。幾つかの実施態様において、コポリマーは、固体支持体のコポリマーコーティングのアルデヒド担持部位に共有結合している。
【００８０】
幾つかの実施態様において適度なｐＨの水性緩衝媒体である、アッセイ媒体は、一般に最適なアッセイ感度を提供するものである。この水性媒体は、単に水であっても、又は０．１〜約４０容量パーセントの共溶媒（例えば、水混和性有機溶媒、例えば、アルコール、エーテル又はアミドなど）を包含してもよい。媒体のｐＨは、通常、例えば、約４〜約１１の範囲に、又は約５〜約１０の範囲に、又は約６．５〜約９．５の範囲になるだろう。使用されるｐＨは、しばしば任意の特異的結合対の結合メンバーの最適結合と、アッセイの他の試薬（例えば、シグナル生成システムのメンバーなど）に最適なｐＨとの間の妥協の結果である。所望のｐＨを達成し、かつ測定中ｐＨを維持するために、種々の緩衝液を使用することができる。緩衝液の実例は、ホウ酸塩、リン酸塩、炭酸塩、トリス、バルビタール、ＰＩＰＥＳ、ＨＥＰＥＳ、ＭＥＳ、ＡＣＥＳ、ＭＯＰＳ、ＢＩＣＩＮＥなどを包含する。使用される特定の緩衝液は、決定的に重要なものではないが、個々のアッセイにおいてあれやこれやの緩衝液が好ましいであろう。
【００８１】
アッセイ方法において種々の補助材料を使用してもよい。例えば、緩衝液の他に、媒体は、媒体のための及び使用される試薬のための安定化剤を含むことができる。幾つかの実施態様において、これらの添加剤の他に、媒体は、例えば、アルブミンのようなタンパク質；例えば、ホルムアミドのような有機溶媒；第４級アンモニウム塩；例えば、硫酸デキストランのようなポリアニオン；結合増強剤、例えば、ポリアルキレングリコール；デキストランのような多糖、トレハロースなどを包含してもよい。媒体はまた、血栓の生成を防ぐための物質を含むことができる。このような物質は、当該分野において周知であり、例えば、ＥＤＴＡ、ＥＧＴＡ、クエン酸塩及びヘパリンを包含する。媒体はまた、例えば、アジ化ナトリウム、硫酸ネオマイシン、PROCLIN（登録商標）300及びストレプトマイシンのような、当該分野において知られているような１種以上の保存料を含むことができる。上記物質のいずれもが、使用されるならば、所望の効果又は機能を達成するのに充分な濃度又は量で存在する。
【００８２】
上記のとおり、利用されるアッセイの性質に応じて、媒体は、例えば、低分子、追加の粒子、追加のｓｐｓメンバー及び追加の結合物質（１種以上のｓｂｐメンバー（例えば、抗体）など）のような、更に１種以上の成分（これらは、本組成物の一部であるものとは異なる）を含むことができる。更に、再び利用されるアッセイの性質に応じて、初期の組合せとして、又は後に加えて、他の試薬を包含させてもよい。
【００８３】
本組合せは、複合体を形成することになる、組成物への分析対象の結合のための条件に付される。このような条件は、上記のものを包含するアッセイに使用する種々の試薬（その幾つか又は全てが、初期の組合せに含まれていてもよい）の添加の間の任意の間隔を包含する１回以上の間隔を空けて媒体に適用できる、１つ以上のインキュベーション期間を包含することができる。媒体は、通常試薬の種々の成分の結合、及び相補的ｓｂｐメンバー（例えば、分析対象と相補的ｓｂｐメンバー、又は第１及び第２のｓｂｐメンバー）の間の結合が起こるのに充分な温度及び時間でインキュベートする。測定の期間中、本方法を実行するために適度な温度、そして通常一定の温度、好ましくは、室温が普通は利用される。幾つかの実施態様において、インキュベーション温度は、例えば、約５°〜約９９℃、又は約１５℃〜約７０℃、又は約２０℃〜約４５℃の範囲である。インキュベーションの時間は、例えば、約０．２秒間〜約２４時間、又は約１秒間〜約６時間、又は約２秒間〜約１時間、又は約１〜約１５分間である。この時間は、媒体の温度及び種々の試薬の結合の速度に依存するが、例えば、会合速度定数、濃度、結合定数及び解離速度定数の１つ以上により決定される。
【００８４】
上記のインキュベーション時間に続いて、もしあれば、ｓｐｓメンバーが活性化し、そして分析対象とｓｂｐメンバーとの間で、又はｓｂｐメンバーとｓｂｐメンバーの間で生成される複合体の量（これが、分析対象を示す）を検出する。複合体の量は、試料中の分析対象の存在及び量の一方又は両方に関連している。複合体の検出は、例えば、実行されるアッセイの性質、ｓｐｓメンバーの性質、及びｓｂｐメンバーの性質に依存する。
【００８５】
ある実施態様において、本発明は、試料中の分析対象の存在及び量の１つ以上を決定する方法である。媒体中の組合せが提供される。この組合せは、試料、並びにシグナル生成システムのメンバー、分析対象に又は第２のｓｂｐメンバーに結合して分析対象の存在に関連する複合体を形成する特異的結合対のメンバーを含む粒子、及びコポリマーのコーティングを含む組成物を含む。コポリマーは、下記式：
【化６】
2013530400.tif 000007
［式中、
Ｄは、（ｉ）〜（iii）：
（ｉ）  −ＣＯＯＲ１０（ここで、Ｒ１０は、Ｈ、又は例えば、１〜６個、若しくは１〜５個、若しくは１〜４個、若しくは１〜３個、若しくは１〜２個、若しくは２〜６個、若しくは２〜５個、若しくは２〜４個、若しくは２〜３個、若しくは３〜６個、若しくは３〜５個、若しくは３〜４個、若しくは４〜６個、若しくは４〜５個、若しくは５〜６個の炭素原子のアルキルである）；
（ii）  下記式：
【化７】
2013530400.tif 000008
（式中、ｗは、上記と同義である）で示される基；又は
（iii）  −Ｃ（Ｏ）−Ｘ−（ＣＨ２）ｐ−（Ｙ）ｑ−（ＣＨ２）ｒ−Ｚ
（式中、
Ａ、Ｒ１、ｎ、Ｇ、Ｒ８、Ｘ、Ｒ２、Ｙ、ｍ、Ｒ３、Ｒ４、ｐ、ｑ、ｒ、Ｚ、ｔ及びｕは、上記と同義である）であり；
Ｒ５、Ｒ６及びＲ７は、独立にＨ、又は例えば、１〜６個、若しくは１〜５個、若しくは１〜４個、若しくは１〜３個、若しくは１〜２個、若しくは２〜６個、若しくは２〜５個、若しくは２〜４個、若しくは２〜３個、若しくは３〜６個、若しくは３〜５個、若しくは３〜４個、若しくは４〜６個、若しくは４〜５個、若しくは５〜６個の炭素原子のアルキルであり；そして
ｘ及びｙは、独立に例えば、１〜約１０００、又は１〜約８００、又は１〜約６００、又は１〜約４００、又は１〜約２００、又は１〜約１００、又は約５〜約１０００、又は約５〜約８００、又は約５〜約６００、又は約５〜約４００、又は約５〜約２００、又は約５〜約１００、又は約１０〜約１０００、又は約１０〜約８００、又は約１０〜約６００、又は約１０〜約４００、又は約１０〜約２００、又は約１０〜約１００、又は約５０〜約１０００、又は約５０〜約８００、又は約５０〜約６００、又は約５０〜約４００、又は約５０〜約２００、又は約５０〜約１００、又は約１００〜約１０００、又は約１００〜約８００、又は約１００〜約６００、又は約１００〜約４００、又は約１００〜約２００である］を有する。
【００８６】
この組合せは、複合体を形成することになる、分析対象への又は第２の特異的結合対メンバーへの特異的結合対のメンバーの結合の条件に付される。シグナル生成システムのメンバーを活性化して、複合体の量を検出する。複合体の量は、試料中の分析対象の存在及び量の１つ以上に関連している。
【００８７】
上記方法の幾つかの実施態様において、本組成物のシグナル生成システムのメンバーは、光増感剤であり、そしてこの組合せは更に、そこに結び付いている化学発光化合物を有しており、かつ下記式：
【化８】
2013530400.tif 000009
［式中、
Ｄは、（ｉ）〜（iii）：
（ｉ）  −ＣＯＯＲ１０（ここで、Ｒ１０は、上記と同義である）；
（ii）  下記式：
【化９】
2013530400.tif 000010
（式中、ｗは、上記と同義である）で示される基；又は
（iii）  −Ｃ（Ｏ）−Ｘ−（ＣＨ２）ｐ−（Ｙ）ｑ−（ＣＨ２）ｒ−Ｚ’
（式中、
Ａ、Ｒ１、ｎ、Ｇ、Ｒ８、Ｘ、Ｒ２、Ｙ、ｍ、Ｒ３、Ｒ４、ｐ、ｑ、ｒ、ｔ、ｕ、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、ｘ及びｙは、上記と同義であり、そして
Ｚ’は、ＳＯ３−；又は例えば、１〜６個、若しくは１〜５個、若しくは１〜４個、若しくは１〜３個、若しくは１〜２個、若しくは２〜６個、若しくは２〜５個、若しくは２〜４個、若しくは２〜３個、若しくは３〜６個、若しくは３〜５個、若しくは３〜４個、若しくは４〜６個、若しくは４〜５個、若しくは５〜６個の炭素原子のアルキルである）である］で示されるコポリマーのコーティングを有する粒子を含む化学発光試薬を含む。
【００８８】
上記方法の幾つかの実施態様において、本組成物のシグナル生成システムのメンバーは、化学発光化合物であり、そしてこの組合せは更に、そこに結び付いている光増感剤を有しており、かつ下記式：
【化１０】
2013530400.tif 000011
［式中、
Ｄは、（ｉ）〜（iii）：
（ｉ）  −ＣＯＯＲ１０（ここで、Ｒ１０は、上記と同義である）；
（ii）  下記式：
【化１１】
2013530400.tif 000012
（式中、ｗは、上記と同義である）で示される基；又は
（iii）  −Ｃ（Ｏ）−Ｘ−（ＣＨ２）ｐ−（Ｙ）ｑ−（ＣＨ２）ｒ−Ｚ’
（式中、
Ａ、Ｒ１、ｎ、Ｇ、Ｒ８、Ｘ、Ｒ２、Ｙ、ｍ、Ｒ３、Ｒ４、ｐ、ｑ、ｒ、ｔ、ｕ、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、ｘ及びｙは、上記と同義であり、そして
Ｚ’は、ＳＯ３−；又は例えば、１〜６個、若しくは１〜５個、若しくは１〜４個、若しくは１〜３個、若しくは１〜２個、若しくは２〜６個、若しくは２〜５個、若しくは２〜４個、若しくは２〜３個、若しくは３〜６個、若しくは３〜５個、若しくは３〜４個、若しくは４〜６個、若しくは４〜５個、若しくは５〜６個の炭素原子のアルキルである）である］で示されるコポリマーのコーティングを有する粒子を含む光増感剤試薬を含む。
【００８９】
検査工程
アッセイ法の次の工程において、媒体は、分析対象を含む複合体の存在について検査する。複合体の存在及び量の一方又は両方は、試料中の分析対象の存在及び量の一方又は両方を示す。
【００９０】
「分析対象の量を測定」という句は、分析対象の定量的、半定量的及び定性的測定のことをいう。定量的、半定量的及び定性的である方法、更には分析対象を測定する他の全ての方法が、分析対象の量を測定する方法と考えられる。例えば、分析対象を含有することが疑われる試料中の分析対象の存在又は非存在を単に検出する方法は、本組成物を利用できるアッセイの範囲に含まれると考えられる。「検出」及び「測定」という用語、更には他のよく使われる測定の同義語は、アッセイ方法の範囲内で考慮される。
【００９１】
多くの実施態様において、媒体の検査は、媒体からのシグナルの検出を伴う。シグナルの存在及び量の一方又は両方は、試料中の分析対象の存在及び量の一方又は両方に関連している。検出の詳細な方式は、シグナル生成システムの性質に依存する。上述のとおり、シグナル生成システムの標識が、外部手段により検出可能なシグナルを生成できる多数の方法が存在する。シグナル生成システムの活性化は、シグナル生成システムメンバーの性質に依存する。
【００９２】
測定中の温度は、一般には例えば、約１０°〜約７０℃、又は約２０°〜約４５℃、又は約２０°〜約２５℃の範囲である。１つのアプローチにおいて、既知濃度の分析対象を用いて標準曲線が形成される。較正物質及び他の対照物質もまた使用できる。
【００９３】
任意の標識から生成したルミネセンス又は光は、目視により、写真により、光量計により、分光光度計により又はその量を測定するための任意の他の便利な手段により測定できるが、これは、媒体中の分析対象の量に関連している。シグナルの存在及び量の一方又は両方の検査はまた、シグナルの検出を包含するが、これは、一般には単にシグナルが読まれる工程である。シグナルは普通は器具を用いて読まれるが、その性質は、シグナルの性質に依存する。器具は、例えば、分光光度計、蛍光光度計、吸光度計、照度計、又はケミルミノメーターであってよい。
【００９４】
アッセイを実施するための試薬を含むキット
ある分析対象の特定のアッセイを実施するための本組成物及び他の試薬の実施態様は、分析対象を測定するためのアッセイを便利に実行するのに有用なキットとして存在することができる。幾つかの実施態様において、キットは、包装された組合せ中に本実施態様の組成物（ここで、ｓｂｐメンバーは分析対象に対する抗体であり、そしてｓｐｓメンバーは光増感剤又は化学発光化合物である）を含む。幾つかの実施態様において、本組成物のｓｐｓメンバーに応じて、キットはまた、分析対象に対するｓｂｐメンバーと結び付いている光増感剤又は化学発光化合物を包含する。このキットは更に、アッセイを実行するための他の試薬を包含するが、その性質は、特定のアッセイ方式に依存する。
【００９５】
試薬は、試薬の交差反応性及び安定性に応じて、それぞれ別々の容器に入れるか、又は種々の試薬を１つ以上の容器に合わせてもよい。このキットは更に、アッセイを実施するための他の別々に包装された試薬（例えば、追加のｓｂｐメンバー、ｓｐｓメンバー及び補助試薬など）を包含することができる。
【００９６】
キット中の種々の試薬の相対量は、本方法中に起こる必要がある反応を実質的に最適化する試薬の濃度を提供するため、そして更にアッセイの感度を実質的に最適化するために広く変動させることができる。適切な状況下で、キット中の１つ以上の試薬は、賦形剤を包含する通常は凍結乾燥したドライパウダーとして提供することができ、これは、溶解により、本組成物の実施態様を利用する方法又はアッセイを実行するのに適切な濃度を有する試薬溶液を提供する。このキットは更に、上述の方法の記載された説明を包含することができる。
【００９７】
コポリマーの実施態様
以下のコポリマーの実施態様は、実例として述べられ、特に限定されるものではない。
【００９８】
幾つかの実施態様において、コポリマーは、下記式：
【化１２】
2013530400.tif 000013
［式中、
Ａは、Ｏ又はＮＲ１であり、そしてここで、Ｒ１は、Ｈ、又は例えば、１〜６個、若しくは１〜５個、若しくは１〜４個、若しくは１〜３個、若しくは１〜２個、若しくは２〜６個、若しくは２〜５個、若しくは２〜４個、若しくは２〜３個、若しくは３〜６個、若しくは３〜５個、若しくは３〜４個、若しくは４〜６個、若しくは４〜５個、若しくは５〜６個の炭素原子のアルキルであり；
ｎは、例えば、１〜１０、又は１〜９、又は１〜８、又は１〜７、又は１〜６、又は１〜５、又は１〜４、又は１〜３、又は１〜２、又は２〜１０、又は２〜９、又は２〜８、又は２〜７、又は２〜６、又は２〜５、又は２〜４、又は２〜３、又は３〜１０、又は３〜９、又は３〜８、又は３〜７、又は３〜６、又は３〜５、又は３〜４、又は４〜１０、又は４〜９、又は４〜８、又は４〜７、又は４〜６、又は４〜５、５〜１０、又は５〜９、又は５〜８、又は５〜７、又は５〜６、又は６〜１０、又は６〜９、又は６〜８、又は６〜７、又は７〜１０、又は７〜９、又は７〜８、又は８〜１０、又は８〜９、又は９〜１０であり；そして
Ｇ’は、ＣＨＯ；ＣＨ（ＯＲ８）２（ここで、Ｒ８は、例えば、１〜６個、又は１〜５個、又は１〜４個、又は１〜３個、又は１〜２個、又は２〜６個、又は２〜５個、又は２〜４個、又は２〜３個、又は３〜６個、又は３〜５個、又は３〜４個、又は４〜６個、又は４〜５個、又は５〜６個の炭素原子のアルキルである）；特異的結合対のメンバーであり；
Ｄ’は、（ｉ）〜（iii）：
（ｉ）  −ＣＯＯＲ１０（ここで、Ｒ１０は、Ｈ、又は例えば、１〜６個、若しくは１〜５個、若しくは１〜４個、若しくは１〜３個、若しくは１〜２個、若しくは２〜６個、若しくは２〜５個、若しくは２〜４個、若しくは２〜３個、若しくは３〜６個、若しくは３〜５個、若しくは３〜４個、若しくは４〜６個、若しくは４〜５個、若しくは５〜６個の炭素原子のアルキルである）；
（ii）  下記式：
【化１３】
2013530400.tif 000014
（式中、ｗは、２〜４、又は２〜３、又は３〜４、又は２、又は３、又は４である）；又は
（iii）  −Ｃ（Ｏ）−Ｘ−（ＣＨ２）ｐ−（Ｙ）ｑ−（ＣＨ２）ｒ−Ｚ’
（式中、
Ｘは、Ｏ又はＮＲ２であり、そしてここで、Ｒ２は、Ｈ、又は例えば、１〜６個、若しくは１〜５個、若しくは１〜４個、若しくは１〜３個、若しくは１〜２個、若しくは２〜６個、若しくは２〜５個、若しくは２〜４個、若しくは２〜３個、若しくは３〜６個、若しくは３〜５個、若しくは３〜４個、若しくは４〜６個、若しくは４〜５個、若しくは５〜６個の炭素原子のアルキルであり；
Ｙは、−（ＣＨ２Ｏ）ｍ−（ここで、ｍは、例えば、１〜１００、又は２〜１００、又は３〜１００、又は４〜１００、又は１〜９０、又は１〜８０、又は１〜７０、又は１〜６０、又は１〜５０、又は１〜４０、又は１〜３０、又は１〜２０、又は１〜１０、又は１〜５、又は５〜１００、又は５〜９０、又は５〜８０、又は５〜７０、又は５〜６０、又は５〜５０、又は５〜４０、又は５〜３０、又は５〜２０、又は５〜１０、又は１０〜１００、又は１０〜９０、又は１０〜８０、又は１０〜７０、又は１０〜６０、又は１０〜５０、又は１０〜４０、又は１０〜３０、又は１０〜２０である）；又は＞Ｎ＋（Ｒ３Ｒ４）（ここで、Ｒ３及びＲ４は、独立にＨ、又は例えば、１〜６個、若しくは１〜５個、若しくは１〜４個、若しくは１〜３個、若しくは１〜２個、若しくは２〜６個、若しくは２〜５個、若しくは２〜４個、若しくは２〜３個、若しくは３〜６個、若しくは３〜５個、若しくは３〜４個、若しくは４〜６個、若しくは４〜５個、若しくは５〜６個の炭素原子のアルキルである）であり；
ｐは、例えば、０〜１０、又は０〜９、又は０〜８、又は０〜７、又は０〜６、又は０〜５、又は０〜４、又は０〜３、又は０〜２、又は０〜１、又は１〜１０、又は１〜９、又は１〜８、又は１〜７、又は１〜６、又は１〜５、又は１〜４、又は１〜３、又は１〜２、又は２〜１０、又は２〜９、又は２〜８、又は２〜７、又は２〜６、又は２〜５、又は２〜４、又は２〜３、又は３〜１０、又は３〜９、又は３〜８、又は３〜７、又は３〜６、又は３〜５、又は３〜４、又は４〜１０、又は４〜９、又は４〜８、又は４〜７、又は４〜６、又は４〜５、又は５〜１０、又は５〜９、又は５〜８、又は５〜７、又は５〜６、又は６〜１０、又は６〜９、又は６〜８、又は６〜７、又は７〜１０、又は７〜９、又は７〜８、又は８〜１０、又は８〜９、又は９〜１０であって、Ｙが、＞Ｎ＋（Ｒ３Ｒ４）であるとき、少なくとも１であり；
ｑは、０又は１であり；
ｒは、例えば、０〜１０、又は０〜９、又は０〜８、又は０〜７、又は０〜６、又は０〜５、又は０〜４、又は０〜３、又は０〜２、又は０〜１、又は１〜１０、又は１〜９、又は１〜８、又は１〜７、又は１〜６、又は１〜５、又は１〜４、又は１〜３、又は１〜２、又は２〜１０、又は２〜９、又は２〜８、又は２〜７、又は２〜６、又は２〜５、又は２〜４、又は２〜３、又は３〜１０、又は３〜９、又は３〜８、又は３〜７、又は３〜６、又は３〜５、又は３〜４、又は４〜１０、又は４〜９、又は４〜８、又は４〜７、又は４〜６、又は４〜５、又は５〜１０、又は５〜９、又は５〜８、又は５〜７、又は５〜６、又は６〜１０、又は６〜９、又は６〜８、又は６〜７、又は７〜１０、又は７〜９、又は７〜８、又は８〜１０、又は８〜９、又は９〜１０であって、Ｙが、＞Ｎ＋（Ｒ３Ｒ４）であるとき、少なくとも１であり；そして
Ｚ’は、ＳＯ３−；例えば、１〜６個、又は１〜５個、又は１〜４個、又は１〜３個、又は１〜２個、又は２〜６個、又は２〜５個、又は２〜４個、又は２〜３個、又は３〜６個、又は３〜５個、又は３〜４個、又は４〜６個、又は４〜５個、又は５〜６個の炭素原子のアルキルである）であり；
Ｒ５、Ｒ６及びＲ７は、独立にＨ、又は例えば、１〜６個、若しくは１〜５個、若しくは１〜４個、若しくは１〜３個、若しくは１〜２個、若しくは２〜６個、若しくは２〜５個、若しくは２〜４個、若しくは２〜３個、若しくは３〜６個、若しくは３〜５個、若しくは３〜４個、若しくは４〜６個、若しくは４〜５個、若しくは５〜６個の炭素原子のアルキルであり；そして
ｘ及びｙは、独立に例えば、１〜約１０００、又は１〜約８００、又は１〜約６００、又は１〜約４００、又は１〜約２００、又は１〜約１００、又は約５〜約１０００、又は約５〜約８００、又は約５〜約６００、又は約５〜約４００、又は約５〜約２００、又は約５〜約１００、又は約１０〜約１０００、又は約１０〜約８００、又は約１０〜約６００、又は約１０〜約４００、又は約１０〜約２００、又は約１０〜約１００、又は約５０〜約１０００、又は約５０〜約８００、又は約５０〜約６００、又は約５０〜約４００、又は約５０〜約２００、又は約５０〜約１００、又は約１００〜約１０００、又は約１００〜約８００、又は約１００〜約６００、又は約１００〜約４００、又は約１００〜約２００である］を有する。
【００９９】
上記コポリマーの幾つかの実施態様において：
Ａは、ＮＲ１であり、そしてここで、Ｒ１は、上記と同義であり；
ｎ、Ｇ、Ｒ８、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、ｘ及びｙは、上記と同義であり；
Ｄ’は、−Ｃ（Ｏ）−Ｘ−（ＣＨ２）ｐ−（Ｙ）ｑ−（ＣＨ２）ｒ−Ｚ’
（式中、
Ｘは、Ｏであり；
Ｙは、＞Ｎ＋（Ｒ３Ｒ４）であり、そしてここで、Ｒ３及びＲ４は、上記と同義であり；
ｐは、例えば、１〜１０、又は１〜９、又は１〜８、又は１〜７、又は１〜６、又は１〜５、又は１〜４、又は１〜３、又は１〜２、又は２〜１０、又は２〜９、又は２〜８、又は２〜７、又は２〜６、又は２〜５、又は２〜４、又は２〜３、又は３〜１０、又は３〜９、又は３〜８、又は３〜７、又は３〜６、又は３〜５、又は３〜４、又は４〜１０、又は４〜９、又は４〜８、又は４〜７、又は４〜６、又は４〜５、又は５〜１０、又は５〜９、又は５〜８、又は５〜７、又は５〜６、又は６〜１０、又は６〜９、又は６〜８、又は６〜７、又は７〜１０、又は７〜９、又は７〜８、又は８〜１０、又は８〜９、又は９〜１０であり；
ｑは、１であり；
ｒは、例えば、１〜１０、又は１〜９、又は１〜８、又は１〜７、又は１〜６、又は１〜５、又は１〜４、又は１〜３、又は１〜２、又は２〜１０、又は２〜９、又は２〜８、又は２〜７、又は２〜６、又は２〜５、又は２〜４、又は２〜３、又は３〜１０、又は３〜９、又は３〜８、又は３〜７、又は３〜６、又は３〜５、又は３〜４、又は４〜１０、又は４〜９、又は４〜８、又は４〜７、又は４〜６、又は４〜５、又は５〜１０、又は５〜９、又は５〜８、又は５〜７、又は５〜６、又は６〜１０、又は６〜９、又は６〜８、又は６〜７、又は７〜１０、又は７〜９、又は７〜８、又は８〜１０、又は８〜９、又は９〜１０であり；そして
Ｚ’は、ＳＯ３−である）である。
【０１００】
上記コポリマーの幾つかの実施態様において：
Ａは、ＮＨであり；
ｎは、１であり；
Ｇは、ＣＨＯ；ＣＨ（ＯＲ８）２（ここで、Ｒ８は、メチルである）；特異的結合対のメンバーであり；
Ｄ’は、−Ｃ（Ｏ）−Ｘ−（ＣＨ２）ｐ−（Ｙ）ｑ−（ＣＨ２）ｒ−Ｚ’
（式中、
Ｘは、Ｏであり；
Ｙは、＞Ｎ＋（Ｒ３Ｒ４）であり、そしてここで、Ｒ３及びＲ４は、両方ともメチルであり；
ｐは、２であり；
ｑは、１であり；
ｒは、３であり；
Ｚ’は、ＳＯ３−である）であり；
Ｒ５及びＲ６は、独立にＨ又はメチルであり、かつＲ７は、Ｈであり；そして
ｘ及びｙは、上記と同義である。
【０１０１】
上記コポリマーの幾つかの実施態様において：
Ａは、ＮＲ１であり、そしてここで、Ｒ１は、上記と同義であり；
ｎ、Ｇ、Ｒ８、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、ｘ及びｙは、上記と同義であり； 
Ｄ’は、−Ｃ（Ｏ）−Ｘ−（ＣＨ２）ｐ−（Ｙ）ｑ−（ＣＨ２）ｒ−Ｚ’
（式中、
Ｘは、Ｏであり；
Ｙは、−（ＣＨ２Ｏ）ｍ−であり、そしてここで、ｍは、上記と同義であり；
ｐは、０であり；
ｑは、１であり；
ｒは、０であり；そして
Ｚ’は、メチルである）である。
【０１０２】
上記コポリマーの幾つかの実施態様において：
Ａは、ＮＨであり；
ｎは、１であり；
Ｇは、ＣＨＯ；ＣＨ（ＯＲ８）２（ここで、Ｒ８は、メチルである）；特異的結合対のメンバーであり；
Ｄ’は、−Ｃ（Ｏ）−Ｘ−（ＣＨ２）ｐ−（Ｙ）ｑ−（ＣＨ２）ｒ−Ｚ’
（式中、
Ｘは、Ｏであり；
Ｙは、−（ＣＨ２Ｏ）ｍ−であり、そしてここで、ｍは、上記と同義であり；
ｐは、０であり；
ｑは、１であり；
ｒは、０であり；そして
Ｚ’は、メチルである）であり；
Ｒ５及びＲ６は、独立にＨ又はメチルであり、かつＲ７は、Ｈであり；そして
ｘ及びｙは、上記と同義である。
【０１０３】
上記コポリマーの幾つかの実施態様において：
Ａは、ＮＲ１であり、そしてここで、Ｒ１は、Ｈ又は１〜６個の炭素原子のアルキルであり；
ｎは、１〜１０であり；
Ｇ’は、ＣＨＯ；ＣＨ（ＯＲ８）２（ここで、Ｒ８は、１〜６個の炭素原子のアルキルである）；又は特異的結合対のメンバーであり；
Ｄ’は、−ＣＯＯＨであり；
Ｒ５、Ｒ６及びＲ７は、独立にＨ又は１〜６個の炭素原子のアルキルであり；そして
ｘ及びｙは、独立に１〜１０００である。
【０１０４】
上記コポリマーの幾つかの実施態様において：
Ａは、ＮＨであり；
ｎは、１であり；
Ｇ’は、ＣＨＯ；ＣＨ（ＯＲ８）２（ここで、Ｒ８は、メチルである）；又は特異的結合対のメンバーであり；
Ｄ’は、下記式：
【化１４】
2013530400.tif 000015
（式中、ｗは、３である）で示される基であり； 
Ｒ５及びＲ６は、独立にＨ又はメチルであり、かつＲ７は、Ｈであり；そして
ｘ及びｙは、独立に１〜１０００である。
【０１０５】
定義
以下の定義は、上に特に定義されない用語及び句について提供される。
【０１０６】
「少なくとも」という句は、本明細書に使用されるとき、特定される事項の数が、挙げられた数と等しいか又はこれより大きいことを意味する。
【０１０７】
「約」という句は、本明細書に使用されるとき、挙げられた数が、プラスマイナス１０％異なってもよいことを意味する；例えば、「約５」は、４．５〜５．５の範囲を意味する。
【０１０８】
「第１」及び「第２」という指定は、例えば、「第１のｓｐｓメンバー」及び「第２のｓｐｓメンバー」、又は「第１の重合モノマー」及び「第２の重合モノマー」のように、２つの事項の間を区別する目的で専ら使用され、例えば、一方の事項がもう一方より順番又は順序又は重要性がどうかとか、あるいは添加の何らかの順序を暗示するものではない。
【０１０９】
以下の実施例により、本発明の特定の実施態様を、特に限定されないが実例によって更に説明するが、これは、本発明を説明するものであって、その範囲を限定するものではない。本明細書に開示される部及び百分率は、特に断りない限り容量による。
【０１１０】
実施例
材料：
特に断りない限り、試薬はSigma-Aldrich（Milwaukee, WI）から購入して、特に断りない限り受領時のまま使用した。
【０１１１】
略語：
ｃＴｎＩ                  心臓トロポニンＩ
ｃＴｎＩフレックス        Siemens製の市販のｃＴｎＩアッセイのFLEX（登録商標）カートリッジ
ＢＳＡ                    ウシ血清アルブミン
ＬＯＣＩ                  発光酸素チャネリング免疫測定法
ＨＥＰＥＳ                ヒドロキシエチルピペラジン−エタンスルホン酸
洗浄緩衝液                ５０mM  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ８．０
ＢＳＡ洗浄緩衝液          ５０mM  ＨＥＰＥＳ−１．０mg/mL  ＢＳＡ、ｐＨ８．０
ＨＰＭＡ                  Ｎ−２−ヒドロキシプロピルメタクリルアミド
ＤＭＳＯ                  ジメチルスルホキシド
ＡＩＢＮ                  アゾビス（イソブチロニトリル）
ＰＥＧ                    ポリ（エチレングリコール）
ＮａＣＮＢＨ３            シアノ水素化ホウ素ナトリウム
ＭＡＭＤＭＡ              メタクリルアミドアセトアルデヒドジメチルアセタール
ＴＨＦ                    テトラヒドロフラン
ＨＣｌ                    塩酸
ＮａＯＨ                  水酸化ナトリウム
ＴＡＰＳ                  Ｎ−トリス−（ヒドロキシメチル）メチル−３−アミノプロピルスルホン酸
ＴＡＰＳ緩衝液            ＴＡＰＳナトリウム塩緩衝液、５０mM、ｐＨ９．０
ＭＥＳ                    ２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸
ＭＥＳ緩衝液              ５０mM  ＭＥＳ緩衝液、ｐＨ５．０
ＳＴＵＴ                  テトラフルオロホウ酸Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−Ｏ−（Ｎ−スクシンイミジル）−ウロニウム
ＤＭＦ                    ジメチルホルムアミド
ＤＭＡＰ                  ４−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ−ピリジン
ＭＡ．Ａｃｔｌ            メタクリルアミドアセトアルデヒド
ＮＨＡ                    ４，４，５，５，６，６，６−ヘプタフルオロ−１−（ナフタレン−２−イル）ヘキサン−１，３−ジオン
ＤＰＰ                    ４，７−ジフェニル−１，１０−フェナントロリン
Ｃ−２８チオキセン        Ｃ−２８チオキセン、置換Ｎ−フェニルオキサジン及び９，１０−ビス（フェニルエチニル）アントラセン（ＢＰＥＡ）に結合したチオキセン［米国特許第6,406,667号（これの相当する開示は引用例として本明細書に取り込まれる）に記載されるように調製］
hrs                      時間（hours）
min                      分（minutes）
ＤＩ                      脱イオン化
w/w                      重量対重量
rpm                      回転/分
mL                        ミリリットル
mg                        ミリグラム
ｇ                        グラム
mM                        ミリモル
センシビーズ（Sensibead）
光増感剤色素（ビス−（トリヘキシル）−シリコン−ｔ−ブチル−フタロシアニン）［米国特許第6,153,442号、7,022,529号、7,229,842号及び米国特許出願公開第20050118727A号（これらの相当する開示は引用例として本明細書に取り込まれる）に記載される方法と同様の方法を用いて調製］を含むラテックス粒子
ケミビーズ（Chemibead）  化学発光化合物（ユーロピウム、ＮＨＡ、ＤＰＰ及びＣ−２８チオキセンの混合物）［米国特許第5,811,311号（これの相当する開示は引用例として本明細書に取り込まれる）に記載されるような方法で調製］を含むラテックス粒子。
【０１１２】
試薬の調製
ＭＡＭＤＭＡの合成（図１）：  メタクリル酸（９．０ｇ、０．１mol）及びＮ−ヒドロキシスクシンイミド（１１．５ｇ、０．１mol）を丸底フラスコに入れて、ＴＨＦ  ３００mLに溶解した。この溶液を氷浴中で冷却した。ＴＨＦ  ５０mLに溶解したジシクロヘキシルカルボジイミド（２１．０ｇ、０．１mol）を加えた。この反応混合物を氷浴中で２時間撹拌した。アミノアセトアルデヒドジメチルアセタール（１５．０ｇ、０．１mol）及びトリエチルアミン（１５．０ｇ、０．１５mol）を加えた。この添加により、反応混合物は塊の状態まで凝固し、撹拌するのが困難になった。更にＴＨＦ  ３００mLを加えた。反応混合物を室温まで温めて、３日間撹拌した。反応混合物を濾過することにより、沈殿した固体を除去した。清澄な溶液を減圧下で濃縮した。粘性液体としてＭＡＭＤＭＡを得た。収量：２０．０ｇ、９０％。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：5.4 δ 1H, 5.6 δ 1H (二重結合プロトン), 3.5 δ 6H (アセタールプロトン) 3.1 δ 1H (-CH-(OCH3)2), 2.5 δ 2H (-CH2-CH-), 2.3 δ 1H (-NH-), 1.8 δ 3H (=C-CH3)。
【０１１３】
ＭＡＭＤＭＡと種々の親水性モノマーとの重合の手順（図２）：  アルゴンガス注入口及び排出口を取り付けた丸底フラスコ中で、ＭＡＭＤＭＡ（０．０１Ｍ）、親水性モノマー（０．０１mol）及びＡＩＢＮ（０．０００１mol、［モノマー］／［ＡＩＢＮ］＝２００）をＤＭＳＯ  ３０mLに溶解した。アルゴンガスは、ＤＭＳＯ溶液を通して室温で３０分間パージした。モノマー溶液を含有するフラスコを、８０℃に予熱した油浴に浸した。重合は、アルゴンパージ下で８０℃で１６時間実施した。ＤＭＳＯ溶液をジエチルエーテル７００mL中に注ぎ入れ、ポリマーを沈殿させた。ポリマーを水１００mLに溶解して、分子量カットオフ５，０００ダルトンの限外濾過膜を用いて１０〜１５mLまで濃縮した。
【０１１４】
アルデヒド含有合成コポリマーを得るためのアセタール基の加水分解の手順：  上記のとおり合成したコポリマー２〜３ｇを含有する水溶液（１００mL）をエルレンマイヤーフラスコにとった。ここに、１Ｎ  ＨＣｌ  １００mLを加えた。この酸性溶液を室温で２日間撹拌した；溶液のｐＨは、濃ＮａＯＨの添加により５．０に調整した。コポリマー中のアルデヒド基の存在は、プルパルド（purpald）アッセイ（Dickinson, R.G.; Jacobsen, N.W., Chemical Communications, p. 1719 (1970)）により定性的に確認した。このコポリマー溶液は、分子量カットオフ５，０００ダルトンの限外濾過膜を用いて１０mLまで濃縮した。水性ポリマー溶液（１００〜１５０mg固体/mL）を４℃で保存した。
【０１１５】
アルデヒド含有合成コポリマーで被覆したセンシビーズの調製方法：  アルデヒド含有コポリマーの水溶液（５mL、ｐＨ５．０、１００〜１５０mg固体/mL）をファルコンチューブにとった（Falcon tube）。溶液ｐＨを８．５に調整した。この溶液に、ヒドラジド被覆染色センシビーズの懸濁液（２５mg/mL固体、ｐＨ９．０）１mLを加えた。ヒドラジドでのケミビーズのコーティングについて後述される方法と同様に、ｐＨ９．０でＳＴＵＴの存在下でのビーズとヒドラジンとの反応により、ビーズをヒドラジドで被覆した。この反応混合物を５０℃で７２時間穏やかに振盪しながらインキュベートした。ポリマー被覆ビーズは、１５，０００rpmで１５℃で３０分間の遠心分離により水で２回洗浄し、次に新鮮水に再懸濁した。ポリマー被覆ビーズを０．１Ｍ酢酸緩衝液ｐＨ５．０  ２mLに懸濁した。ここに、ストレプトアビジン（７．０mg）を加え、室温で３０分間インキュベートした。ここに、ＮａＣＮＢＨ３（４０mg）を加えて、３７℃で７２時間穏やかに振盪しながらインキュベートした。ストレプトアビジン被覆ビーズ（センシビーズ）は、１５，０００rpmで１５℃で３０分間の遠心分離によりＢＳＡ洗浄緩衝液で２回洗浄して、緩衝液に再懸濁した。洗浄したセンシビーズは、プローブ超音波発生装置を用いて４℃で２分間の超音波処理により懸濁した。センシビーズの固体含量を測定して、１０mg/mLに調整した。粒子あたりのストレプトアビジン数は、異なる濃度の粒子を固定濃度のビオチン−フルオレセイン結合体と共にインキュベートしたときの蛍光の減少から求めた。センシビーズは、更に使用するまで４℃で１０mg/mL濃度で保存した。結果は表１に明記する。
【０１１６】
【表１】
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【０１１７】
合成コポリマーで被覆したケミビーズの調製：
工程１：  ヒドラジド被覆染色ケミビーズの調製：  ケミビーズ懸濁液（１５mL、１．０４６ｇ粒子）を丸底フラスコにとった。ここに、３００mM  ＴＡＰＳ緩衝液ｐＨ９．０  ３７mLを加えて、２０mg/mL粒子懸濁液を作った。ヒドラジン（０．１mL）を加えて、ｐＨ電極を粒子懸濁液に浸し、室温で撹拌した。ここに、ＳＴＵＴ（新たにＤＭＦ  １mLに溶解）１００mgを加え、続いてＤＭＡＰのＤＭＦ溶液（１００mg/mL）０．２５mLを加えた。この反応混合物を１０分間撹拌して、５Ｎ  ＮａＯＨの添加によりｐＨを９．０に調整した。ＳＴＵＴ及びＤＭＡＰの添加を４回繰り返し、粒子懸濁液を更に１時間撹拌した。ヒドラジド被覆染色ケミビーズは、１５，０００rpmで１０℃で３０分間の遠心分離により１mM  ＴＡＰＳ緩衝液ｐＨ９．０で２回洗浄して、緩衝液に再懸濁した。洗浄した粒子は、１mM  ＴＡＰＳ緩衝液ｐＨ９．０  １７mLに懸濁した。固体含量は４１．２３mg/mLであった。
【０１１８】
工程２：  ポリ（ＨＰＭＡ−ｃｏ−ＭＡ−Ａｃｔｌ）（１：２）被覆染色ケミビーズの調製：  上記からのヒドラジド被覆ケミビーズ懸濁液（０．６mL、２５mgビーズ）を１５mLファルコンチューブにとった。ポリ（ＨＰＭＡ−ｃｏ−ＭＡ−Ａｃｔｌ）（１：２）（図２）（３mL、ｐＨ５．０、固体含量２４．７mg/mL）を別のチューブにとり、ｐＨを８．８に調整した。ｐＨ８．８のポリマー溶液及びｐＨ９．０のヒドラジド被覆ビーズ懸濁液を一緒に混合して、３７℃で５０時間穏やかに振盪しながらインキュベートした。ポリマー被覆ビーズ（ＣＢ２）は、１５，０００rpmで１０℃で３０分間の遠心分離により５０mM  ＭＥＳ緩衝液、ｐＨ６．０で２回洗浄して、ＭＥＳ緩衝液に再懸濁した。洗浄したビーズは、プローブ超音波発生装置を用いて超音波処理によりＭＥＳ緩衝液０．２５mLに再懸濁した。
【０１１９】
工程３：  捕捉抗体被覆ケミビーズの調製：  ｃＴｎＩ捕捉抗体は、０．２％トゥイーン２０（登録商標）を含有する１０mM  ＰＯ４−３００mM  ＮａＣｌ、ｐＨ７．０で緩衝液交換した。緩衝液交換した抗体の濃度は、７．７mg/mLであった。ｃＴｎＩ捕捉抗体溶液（１mL、７．７mg抗体）、ポリ（ＨＰＭＡ−ｃｏ−ＭＡ−Ａｃｔｌ）（１：２）被覆ケミビーズ（０．２５mL、２５mgビーズ）、酢酸（０．４μL）を４℃で一緒に混合した。この混合物はｐＨ５．７であった。ＮａＣＮＢＨ３（１２μL、２５mg/mL）を加え、この懸濁液を４℃で１６時間穏やかに振盪しながらインキュベートした。次にこの粒子を３７℃で２４時間インキュベートした。抗体被覆ケミビーズは、１５，０００rpmで１０℃で３０分間の遠心分離により洗浄緩衝液（ｐＨ８．０）で２回洗浄して、洗浄緩衝液に再懸濁した。洗浄した粒子は、プローブ超音波発生装置での超音波処理によりＢＳＡ洗浄緩衝液（ｐＨ８．０）１mLに再懸濁した。固体含量は１３．３７mg/mLであった。
【０１２０】
アルデヒド含有合成コポリマーの分子量特性：  ポリマーは、光散乱法と一緒になったサイズ排除クロマトグラフィーにより特性決定した。得られたデータは、表２に要約する。全ての合成ポリマーは、多分散性の高いポリマーが生成することが知られている、フリーラジカル重合の従来法により合成した。表２のデータはまた、アルデヒド含有コポリマーが多分散性であったことを示す。表２に記載されたポリマーのピークは、厳密には二峰性ではなく、光散乱検出器からソフトウェアのAstra（Wyatt Technology Corporation, Santa Barbara CA）を使用して測定するとき、むしろ各ポリマーについて存在する広いガウス型ピークからデコンボリューション（deconvoluted）されている。ポリマー試料において優勢なピークの分子量は、個々のモノマー構造及びその重合性に応じて２５kDa〜３３００kDaを変動した。
【０１２１】
【表２】
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【０１２２】
アッセイ
本コポリマーの実施態様で被覆されたセンシビーズを用いるｃＴｎＩアッセイの一般的手順：  全てのアッセイは、DIMENSION（登録商標）VISTA（登録商標）装置（Siemens Healthcare Diagnostics Inc., Newark DE）（Siemens）で実行した。簡単に述べると、市販のｃＴｎＩフレックスカートリッジ（Siemens Healthcare Diagnostics catalog # K6421）のウェル＃８のカバーに穴を開けた。この市販のｃＴｎＩ製品は、ＬＯＣＩ法及び試薬を利用する。この市販品のデキストラン被覆センシビーズ懸濁液を吸引して、コポリマー被覆センシビーズ懸濁液（０．７mL、１．５mgセンシビーズ/mL  ＢＳＡ洗浄緩衝液）を清浄なウェルに加えた。次に製品と共に供給された製造業者の取扱説明書にしたがい、較正物質を試料として用いてｃＴｎＩアッセイを実行した。装置のパラメーター、緩衝液の配合、又は使用する試薬の濃度のいずれにも最適化は行わなかった。アッセイの結果は、以下の表３（ＳＢ１）、表４（ＳＢ２）、表５（ＳＢ３）、表６（ＳＢ４）、表７（ＳＢ５）、表８（ＳＢ６）、表９（ＳＢ７）及び表１０（ＳＢ８）に要約する。
【０１２３】
【表３】
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【０１２４】
【表４】
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【０１２５】
【表５】
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【０１２６】
【表６】
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【０１２７】
【表７】
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【０１２８】
【表８】
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【０１２９】
【表９】
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【０１３０】
【表１０】
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【０１３１】
ＳＢ２及びＣＢ２を用いるｃＴｎＩアッセイの一般的手順：  全てのアッセイは、DIMENSION（登録商標）VISTA（登録商標）装置（Siemens Healthcare Diagnostics Inc., Newark DE）（Siemens）で実行した。簡単に述べると、市販のｃＴｎＩフレックスカートリッジのウェル＃８のカバーに穴を開けた。デキストラン被覆センシビーズ懸濁液を吸引して、ＳＢ２懸濁液（０．７mL、１．５mg  ＳＢ２/mL  ＢＳＡ洗浄緩衝液）を清浄なウェルに加えた。更に、市販のｃＴｎＩ製品のケミビーズをＣＢ２（０．９mL、０．１９mg  ＣＢ２/mL  ＢＳＡ洗浄緩衝液）で置き換えた。次に製品と共に供給された製造業者の取扱説明書にしたがい、較正物質を試料として用いてｃＴｎＩアッセイを実行した。装置のパラメーター、緩衝液の配合、又は使用する試薬の濃度のいずれにも最適化は行わなかった。アッセイの結果は、以下の表１１に要約する。
【０１３２】
【表１１】
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【０１３３】
本明細書に引用される全ての刊行物及び特許出願は、あたかも個々の刊行物又は特許出願が具体的にかつ個別に引用例として取り込まれるかのように、引用例として本明細書に取り込まれる。
【０１３４】
前記発明は、理解の明確さを目的として実例及び実施例により幾分詳細に説明されているが、添付の請求の範囲の本質又は範囲を逸することなく、ここにある種の変更及び修飾を加えることができることは、本発明の教示に照らせば当業者には直ぐに明らかとなろう。更には、説明を目的とする前記説明文では、本発明の深い理解を提供するために特別な用語体系を使用した。しかし、具体的な詳細事項は、本発明を実施するために必要ではないことが当業者には明らかであろう。即ち、本発明の具体的な実施態様の前記説明は、例証及び説明を目的として提示される；これらは、本発明を網羅しようとするものではなく、また開示された正確な形態に限定するものではない。上記教示を考慮して、多くの修飾法及び変法が見込まれる。実施態様は、本発明の原理及びその実用的応用を説明するために、それによって当業者が本発明を利用できるように、選択して記載した。
【図１】
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【図２−１】
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【図２−２】
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【国際調査報告】
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