(57)【要約】増殖性疾患および／または炎症性疾患等のプロテインキナーゼＣＫ２介在疾患の、ＣＫ２阻害剤を用いた治療に対する感受性を決定するためのバイオマーカーが開示される。これらのバイオマーカーはＣＫ２阻害剤を用いた治療に反応しやすい対象を予測または選択するために、およびＣＫ２阻害剤を用いた治療を受けている対象を治療またはモニタリングするために使用され得る。2013506836.tif 000015
2013506836.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＣＫ２阻害剤で治療された対象の応答を監視する方法であって、該方法が、
（ａ）ＣＫ２阻害剤の投与中または投与後の時点において該対象に由来する生物試料中のバイオマーカーのレベルを決定する段階であって、ここで、該バイオマーカーが、リン酸化したＡｋｔ  Ｓ１２９のレベル、リン酸化したＡｋｔ  Ｓ１２９の総Ａｋｔに対する比率、リン酸化したＡｋｔ  Ｓ４７３のレベル、リン酸化したＡｋｔ  Ｓ４７３の総Ａｋｔに対する比率、リン酸化したｐ２１  Ｔ１４５のレベル、リン酸化したｐ２１  Ｔ１４５の総ｐ２１に対する比率、リン酸化したＮＦ−κＢ  Ｓ５２９のレベル、リン酸化したＮＦ−κＢ  Ｓ５２９の総ＮＦ−κＢに対する比率、リン酸化したＳＴＡＴ３  Ｔ７０５のレベル、リン酸化したＳＴＡＴ３  Ｔ７０５の総ＳＴＡＴ３に対する比率、リン酸化したＪＡＫ２  Ｙ１００７／１００８のレベル、およびリン酸化したＪＡＫ２  Ｙ１００７／１００８の総ＪＡＫ２に対する比率から選ばれる、段階と、
（ｂ）生物試料中のバイオマーカーのレベルを、該バイオマーカーの基準レベルと比較する段階と
を含み、
該バイオマーカーの基準レベルと比較して、該生物試料中の該バイオマーカーのレベルが減少していることが、該ＣＫ２阻害剤による治療に対して陽性の応答を示している、方法。
【請求項２】
バイオマーカーの基準レベルが、
（１）ＣＫ２阻害剤投与前の対象から採取した前記バイオマーカーのレベル；（２）参照集団から採取した前記バイオマーカーのレベル；（３）前記バイオマーカーの所定のレベル；および（４）第１時点前の第２時点における該対象から採取した前記バイオマーカーのレベル
からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記生物試料が、対象に由来する細胞、組織、組織培養物、腫瘍、または体液から選ばれる、請求項１または２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４】
前記体液が、血漿、血清、またはＰＢＭＣから選ばれる、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記細胞が末梢循環腫瘍細胞（ＣＴＣ）である、請求項３に記載の方法。
【請求項６】
前記対象が癌または悪性腫瘍に罹患している、請求項１または２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記癌または悪性腫瘍が、乳癌、炎症性乳癌（ＩＢＣ）、膵癌、前立腺癌、肺癌、結腸癌、黒色腫および多発性骨髄腫から選ばれる、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記対象が、ＣＫ−２を介した自己免疫性疾患、炎症性疾患または感染性疾患に罹患している、請求項１または２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記ＣＫ２阻害剤がＣＸ−４９４５である、請求項１または２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
ＣＫ２阻害剤で治療中の対象の応答を監視する方法であって、該方法が、
（ａ）該ＣＫ２阻害剤の投与中または投与後の時点において該対象に由来する生物試料中のバイオマーカーのｍＲＮＡおよび／またはタンパク質の発現のレベルを決定する段階であって、該バイオマーカーがＩＬ−６、ＩＬ−８、ＣＫ２α、ＣＫ２α'、ＣＫ２β、ＶＥＧＦおよびＨＩＦ−１αから選ばれる、段階と、
（ｂ）該生物試料中の該バイオマーカーのレベルと該バイオマーカーの基準レベルとを比較する段階と
を含み、
該バイオマーカーの基準レベルと比較して、該生物試料中の該バイオマーカーのレベルが減少していることが、該ＣＫ２阻害剤による治療に対する陽性の応答を示している、方法。
【請求項１１】
バイオマーカーの基準レベルが、
（１）ＣＫ２阻害剤投与前の対象から採取した前記バイオマーカーのレベル；（２）参照集団から採取した前記バイオマーカーのレベル；（３）前記バイオマーカーの所定のレベル；および（４）第１時点前の第２時点における該対象から採取した前記バイオマーカーのレベル
からなる群から選択される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記生物試料が、前記対象由来の細胞、組織、組織培養物、腫瘍、または体液から選ばれる、請求項１０または１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記体液が、血漿、血清、またはＰＢＭＣから選ばれる、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記細胞が末梢循環腫瘍細胞（ＣＴＣ）である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】
前記対象が癌または悪性腫瘍に罹患している、請求項１０または１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記癌または悪性腫瘍が、乳癌、炎症性乳癌（ＩＢＣ）、膵癌、前立腺癌、肺癌、結腸癌、黒色腫、および多発性骨髄腫より選ばれる、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記対象が、ＣＫ−２を介した自己免疫性疾患、炎症性疾患、または感染性疾患に罹患している、請求項１０または１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記ＣＫ２阻害剤がＣＸ−４９４５である、請求項１０または１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
対象におけるＣＫ２阻害剤による治療に対するＣＫ２介在疾患の臨床応答を予測する方法であって、該方法が、該対象に由来する生物試料中の一つまたは複数のバイオマーカーのレベルを決定する段階を含み、該一つまたは複数のバイオマーカーのレベルが対照の生物試料に対して高いことが、前記ＣＫ２阻害剤による治療に対するＣＫ２介在疾患の感受性を示し、該バイオマーカーが、リン酸化したＡｋｔ  Ｓ１２９のレベル、リン酸化したＡｋｔ  Ｓ１２９の総Ａｋｔに対する比率、リン酸化したＡｋｔ  Ｓ４７３のレベル、リン酸化したＡｋｔ  Ｓ４７３の総Ａｋｔに対する比率、リン酸化したｐ２１  Ｔ１４５のレベル、リン酸化したｐ２１  Ｔ１４５の総ｐ２１に対する比率、リン酸化したＮＦ−κＢ  Ｓ５２９のレベル、リン酸化したＮＦ−κＢ  Ｓ５２９の総ＮＦ−κＢに対する比率、リン酸化したＳＴＡＴ３  Ｔ７０５のレベル、リン酸化したＳＴＡＴ３  Ｔ７０５の総ＳＴＡＴ３に対する比率、リン酸化したＪＡＫ２  Ｙ１００７／１００８のレベル、リン酸化したＪＡＫ２  Ｙ１００７／１００８の総ＪＡＫ２に対する比率、ＩＬ−６の発現レベル、ＩＬ−８の発現レベル、ＣＫ２αの発現レベル、ＣＫ２α'の発現レベル、ＣＫ２βの発現レベル、ＶＥＦＧの発現レベルおよびＨＩＦ−１αの発現レベルから選ばれる、方法。
【請求項２０】
前記生物試料が、前記対象に由来する細胞、組織、組織培養物、腫瘍または体液から選ばれる、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記体液が、血漿、血清またはＰＢＭＣから選ばれる、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記細胞が末梢循環腫瘍細胞（ＣＴＣ）である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２３】
前記対象が癌または悪性腫瘍に罹患している、請求項１９に記載の方法。
【請求項２４】
前記癌または悪性腫瘍が、乳癌、炎症性乳癌（ＩＢＣ）、膵癌、前立腺癌、肺癌、結腸癌、黒色腫、および多発性骨髄腫から選ばれる、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記対象が、ＣＫ−２を介した自己免疫性疾患、炎症性疾患、または感染性疾患に罹患している、請求項１９に記載の方法。
【請求項２６】
前記ＣＫ２阻害剤がＣＸ−４９４５である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２７】
対象におけるＣＫ２阻害剤による治療に対する癌または悪性腫瘍の臨床応答を予測する方法であって、該方法が、
（ａ）該対象に由来する生物試料中のＣＫ２α'ｍＲＮＡおよび／またはタンパク質の発現のレベルを決定する段階と、
（ｂ）該対象に由来する生物試料中のｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９のレベルおよび／または総Ａｋｔに対するｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９の比率を決定する段階と
を含み、
ＣＫ２α'ｍＲＮＡおよび／またはタンパク質の発現レベルと、ｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９のレベルおよび／またはｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９の総Ａｋｔに対する比率との正の相関が、前記ＣＫ２阻害剤による治療に対する癌または悪性腫瘍の感受性を示している、方法。
【請求項２８】
前記生物試料が、前記対象に由来する細胞、組織、組織培養物、腫瘍、または体液から選ばれる、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記体液が、血漿、血清、またはＰＢＭＣから選ばれる、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記癌または悪性腫瘍が、乳癌、炎症性乳癌（ＩＢＣ）または多発性骨髄腫である、請求項２７に記載の方法。
【請求項３１】
前記ＣＫ２阻害剤がＣＸ−４９４５である、請求項２７に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、米国仮出願第６１／２４８，２７０号（２００９年１０月２日出願）、同第６１／２５５，８０５号（２００９年１０月２８日出願）、同第６１／３２３，７７１号（２０１０年４月１３日出願）、および同第６１／３８０，６８５号（２０１０年９月７日出願）に対する優先権を主張し、その全体が全ての目的のために本明細書に参考として組み込まれる。
【０００２】
技術分野
本発明は、増殖性および／または炎症性疾患などのプロテインキナーゼＣＫ２介在性疾患の、ＣＫ２阻害剤による治療に対する感受性を決定するバイオマーカーに関する。当該バイオマーカーを、ＣＫ２阻害剤による治療に反応しやすい対象を予測または選択するため、およびＣＫ２阻害剤で治療中である対象を治療または監視するために用いることができる。
【背景技術】
【０００３】
発明の背景
プロテインキナーゼＣＫ２（以前カゼインキナーゼＩＩと呼ばれ、明細書中で「ＣＫ２」とよばれる)は、偏在性で高い保存性のタンパク質であるセリン／トレオニンキナーゼである。ホロ酵素は、典型的には２つの触媒サブユニット（αおよび／またはα'）と２つの調節サブユニット（ベータ）からなる四量体複合体にみられる。ＣＫ２はいくつかの生理学的標的を有し、細胞の生存維持を含む細胞機能の複雑な連続性に関与する。正常細胞中のＣＫ２レベルは厳密に調節され、細胞成長と細胞増殖の役割を果たすと長く考えられてきた。ある種の癌を治療するために有用なＣＫ２の阻害剤は、国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ２００７／０７７４６４号（特許文献１）、国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０７４８２０号（特許文献２）、および国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ２００９／０３５６０９号（特許文献３）に記載され、その内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０００４】
ＣＫ２の広範囲な存在性と重要性の両方から、ＣＫ２が進化スケールで、その配列の進化解析においても同様に、古来酵素であり；その永続性が、ＣＫ２が非常に多くの生化学プロセスに重要になった理由と、また宿主からのＣＫ２が感染性病原体（例えばウイルス、原虫）の生き残りとライフサイクルの生化学系の重要な部分として感染性病原体に吸収された理由を説明し得ることを示唆する。これらの同様の特徴が、ＣＫ２阻害剤が本明細書に記載のように各種薬物治療に有用であると考えられている理由を説明する。ＣＫ２は、Guerra & Issinger, Curr. Med. Chem., 2008, 15:1870-1886（非特許文献１）により要約されるように生物学的プロセスの中心的役割をなすので、本明細書に記載の化合物を含むＣＫ２の阻害剤は各種疾患および疾病の治療に有用であるべきである。
【０００５】
癌細胞はＣＫ２の上昇を示し、最新の知見から、ＣＫ２は調節タンパク質をカスパーゼによる分解から保護することにより、癌細胞でのアポトーシスの強力な抑制をもたらすことが示唆される。ＣＫ２の抗アポトーシス機能は形質転換および腫瘍形成に関与する能力に寄与し得る。特に、ＣＫ２は急性および慢性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、慢性リンパ性白血病、リンパ腫、および多発性骨髄腫に関連することが示されている。さらに、増強したＣＫ２活性が、結腸、直腸、および乳房の固形腫瘍、肺の扁平上皮癌および頭頸部扁平上皮癌（ＳＣＣＨＮ）、ならび肺、結腸、直腸、腎臓、乳房、および前立腺の腺癌において観察されている。小分子によるＣＫ２阻害は、膵癌細胞、肝細胞癌細胞（ＨｅｇＧ２、Ｈｅｐ３）、および子宮頸癌細胞（ＨｅＬａ）のアポトーシスを誘発することが報告されており；そしてＣＫ２阻害剤はＲＭＳ（横紋筋肉腫）腫瘍をＴＲＡＩＬにより誘発されるアポトーシスへと劇的に感作する。ＣＫ２の阻害剤は、したがって単独でまたはＴＲＡＩＬとのもしくはＴＲＡＩＬ受容体に関するリガンドとの併用で、ＲＭＳ、子供に最もよくみられる軟部組織肉腫の治療に有用であり得る。さらに、上昇したＣＫ２は新生物の侵襲性と高い関連性があることが見出されており、強力なＣＫ２阻害剤による治療は、したがって良性病変が悪性病変に進行する傾向、または悪性病変が転移する傾向を減少させるだろう。
【０００６】
ＣＫ２は、シグナル経路（例えばＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ、ＮＦ−ｋＢ、およびＷｎｔ）およびｐ２１とｐ２７のリン酸化による細胞周期進行を促進することが見出されている。ＣＫ２はまた、腫瘍抑制因子（例えばＰＭＬ、ＰＴＥＮ、ｐ５３）を損ない、ｒＲＮＡとｔＲＮＡの生合成を促進してタンパク質を合成させることが報告されている。ＣＫ２は、癌−キナーゼを保護する役割を持ち得るＨｓｐ９０シャペロン装置を活性化させる。これらのＣＫ２の活性が癌細胞の生存を促進し得る。
【０００７】
変異が調節制御の喪失を引き起こす構造的変化にしばしば付随するような他のキナーゼおよびシグナル経路と異なり、ＣＫ２活性レベルの増加は、活性レベルに影響を与える変化というよりもむしろ活性タンパク質の上方制御または過剰発現により一般に引き起こされるようである。GuerraおよびIssingerは、活性レベルがｍＲＮＡとあまり相関しないことから、このことの原因は凝集による制御にあり得ると仮定する。ＣＫ２の過剰活性は、ＳＣＣＨＮ腫瘍、肺腫瘍、乳腺腫瘍などを含む多くの癌において示されている。同上文献。
【０００８】
結腸直腸癌でのＣＫ２活性の上昇は、悪性腫瘍の増加と相関することが示された。ＣＫ２の異常な発現と活性は、乳癌および骨髄腫細胞でのＮＦ−κＢの核酸レベルの増加を促進することが報告されている。ＣＫ２活性は、急性転化中のＡＭＬおよびＣＭＬを罹患する患者において著しく増加し、これはＣＫ２の阻害剤がこれらの症状において特に効果的であることを示唆する。多発性骨髄腫（ＭＭ）細胞の生存は、ＣＫ２の高い活性に依存することが示されており、ＣＫ２の阻害剤はＭＭ細胞に対し細胞毒性であった。同様に、ＣＫ２阻害剤はマウスｐ１９０リンパ腫細胞の成長を阻害した。ＣＫ２阻害剤のＢｃｒ／Ａｂｌとの相互作用はＢｃｒ／Ａｂｌ発現細胞の増殖に重要な役割を果たすと報告されており、ＣＫ２の阻害剤がＢｃｒ／Ａｂｌ−陽性白血病の治療に有用であり得ることが示唆される。ＣＫ２の阻害剤は、マウスの皮膚乳頭腫、前立腺異種移植片、および乳癌異種移植片の進行を阻害し、前立腺癌を促進する癌遺伝子を発現するトランスジェニックマウスの生存を長くすることが示されている。同上文献。
【０００９】
様々な非癌疾病プロセスにおけるＣＫ２の役割が最近見直されている。Guerra & Issinger, Curr. Med. Chem., 2008, 15:1870-1886（非特許文献１）を参照のこと。ＣＫ２が、例えばアルツハイマー病、パーキンソン病、および例えばグアム−パーキンソン認知症、染色体１８欠損症候群、進行性核上性麻痺、クーフス病、またはピック病などの稀な神経変性疾患を含む中枢神経系の深刻な疾病に関与することを示す知見が増加している。タウタンパク質のＣＫ２介在性選択的リン酸化がアルツハイマー病の進行性神経変性に関与し得ることが示唆される。さらに最近の研究から、ＣＫ２が記憶障害および脳虚血の一因となり、後者の効果はＣＫ２のＰＩ３Ｋ生存経路に関する調節効果によるようであることが示唆される。
【００１０】
ＣＫ２はまた、炎症性疾患、例えば急性または慢性炎症性疼痛、糸球体腎炎、ならびに例えば多発性硬化症（ＭＳ）、全身性エリテマトーデス、リウマチ様関節炎および若年性関節炎などの自己免疫疾患の調整に関与することが示されている。ＣＫ２はセロトニン５−ＨＴ３受容体チャネルを積極的に調節し、ヘムオキシゲナーゼ−２を活性化し、神経型一酸化窒素合成酵素の活性を増強する。選択的ＣＫ２阻害剤は、疼痛試験の前に脊髄組織に投与した場合に、マウスの疼痛反応を著しく減少させることが報告された。ＣＫ２阻害剤は、ＲＡ患者の滑液からのＩＩＡ型ホスホリパーゼＡ２をリン酸化し、若年性関節炎の患者の滑液に見出される炎症性分子であるＤＥＫ（核酸ＤＮＡ−結合タンパク質）の分泌を調整する。したがってＣＫ２の阻害は、本明細書の上記記載のように炎症性病変の進行を制御することが期待され、本明細書に記載した阻害剤が動物モデルでの疼痛を効果的に治療することが示された。
【００１１】
プロテインキナーゼＣＫ２はまた、例えばアテローム性動脈硬化、層流せん断応力、および低酸素状態などの血管系の疾患の一因となることが示されている。ＣＫ２はまた、心筋細胞肥大、インスリンシグナルの障害、骨組織石灰化などの骨格筋と骨組織の疾患の一因となっていることが示されている。ある研究では、ＣＫ２の阻害剤は、培養細胞中での成長因子により誘発する血管新生の遅延に効果的であった。ＣＫ２は血管新生を促進し、また低酸素状態でＨＩＦ−１αを活性化して新血管形成を維持することが報告されている。
【００１２】
さらにまた、網膜症モデルにおいて、オクトレオチド（ソマトスタチン類似体）と組み合わせたＣＫ２阻害剤は新生血管タフト（neovascular tuft）を減少させ；したがって本明細書に記載のＣＫ２阻害剤は、網膜症を治療するためにソマトスタチン類似体との併用が効果的であり得る。
【００１３】
ＣＫ２はまた、ＧＳＫ、トロポニン、およびミオシン軽鎖をリン酸化することが示されており；したがってＣＫ２は骨格筋および骨組織の生理機能に重要であり、筋組織に影響を及ぼす疾病に関連している。
【００１４】
知見から、ＣＫ２がまた、例えばタイレリア・パルバ(Theileria parva)、トリパノソーマ・クルージ(Trypanosoma cruzi)、ドノバン・リシューマニア(Leishmania donovani)、ヘルペトモナス・ムスカルム・ムスカルム(Herpetomonas muscarum muscarum)、熱帯熱マラリア原虫(Plasmodium falciparum)、トリパノソーマ・ブルーセイ（Trypanosoma brucei）、トキソプラズマ原虫（Toxoplasma gondii）およびマンソン住血吸虫(Schistosoma mansoni)などの寄生原虫の発生とライフサイクル制御に関与することが示唆される。多くの研究が、宿主細胞の浸潤に必須である寄生原虫の細胞運動性の制御に関するＣＫ２の役割を立証している。ＣＫ２の活性化またはＣＫ２の過剰な活性が、ドノバン・リシューマニア、ヘルペトモナス・ムスカルム・ムスカルム、熱帯熱マラリア原虫、トリパノソーマ・ブルーセイ、トキソプラズマ原虫、およびマンソン住血吸虫に感染している宿主において生じることが示されている。実際のところ、ＣＫ２の阻害は感染をブロックすることがT. cruziにより示されている。
【００１５】
ＣＫ２はまた、他のウイルス型（例えばヒトサイトメガロウイルス、Ｃ型肝炎およびＢ型肝炎ウイルス、ボルナ病ウイルス、アデノウイルス、コクサッキーウイルス、コロナウイルス、インフルエンザ、および水痘帯状疱疹ウイルス）のほかに、ヒト免疫不全ウイルスＩ型（ＨＩＶ−１）、ヒトパピローマウイルス、および単純ヘルペスウイルスに付随するウイルスのタンパク質との相関を示すおよび／またはこれらをリン酸化することが示されている。ＣＫ２は、インビボでＨＩＶ−１の逆転写酵素とプロテアーゼをリン酸化および活性化し、サル−ヒト免疫不全ウイルス（ＳＨＩＶ）、すなわちＨＩＶモデルの病原性を促進する。ＣＫ２の阻害剤はしたがって、ＨＩＶ感染モデルの病原性作用を減少させることができる。ＣＫ２はまた、単純ヘルペスウイルスや多くの他のウイルスの多数のタンパク質をリン酸化するが、一部の知見から、ウイルスがそれらのライフサイクルタンパク質のためのリン酸化酵素としてＣＫ２をとりいれていることが示唆されている。ＣＫ２の阻害はしたがって、宿主自身のライフサイクルのためにＣＫ２に依存するウイルス感染症の感染と進行を防ぐために期待される。
【００１６】
ＣＫ２は、ＣＫ２が悪い影響を及ぼすような多様な生物学的プロセスでは通常ではなく、他の経路においても大部分のキナーゼとは異なる：つまりＣＫ２は構造的に活性であり、ＡＴＰまたはＧＴＰを用いることができ、大部分の腫瘍で上昇しすぐに組織を増殖する。ＣＫ２はまた、同様に大部分のキナーゼと区別することができる稀な構造的性質を有し、これはＣＫ２阻害剤のＣＫ２に対する高い特異性を可能にし、一方で多くのキナーゼ阻害剤は複数のキナーゼに作用し、オフターゲット効果(off-target effect)の可能性または個々の対象間の変動性を増大させる。これらの理由から、ＣＫ２は薬剤開発のための特に興味深い標的であり、本発明は、過剰な、異常な、または望まれないレベルのＣＫ２活性による、またはこれに付随する様々な相違する疾病および疾患を治療するのに有用なＣＫ２の非常に有効な阻害剤を提供する。
【００１７】
ＣＫ２の過剰発現は、癌の否定的な予後マーカーであると仮定されてきた(Ahmad et al, 2005; Duncan & Litchfeld 2008（非特許文献２）)。さらにＣＫ２によるセリン１２９でのＡｋｔのリン酸化が文献に記載されているが(Di Maira et al., 2005（非特許文献３）; Di Maira et al.,2009（非特許文献４））、強力なＣＫ２阻害剤がＡｋｔリン酸化に作用する方法は知られておらず、また未だ予測できない。
【００１８】
ＩＬ−６とＩＬ−８は、よく記載される炎症反応メディエータである。ＩＬ−６は、前炎症性疾患および癌の一因となることが知られる炎症性サイトカインである。ＩＬ−６は、いくつかの癌のオートクリン成長因子およびパラクリン成長因子の役割をもち、高いレベルのＩＬ−６は、予後不良および血管新生因子生成の増加と相関する。ＩＬ−８は、マクロファージ、上皮細胞、および他の細胞型により生成されるケモカインであり、炎症反応の主要なメディエータである。ＩＬ−８は化学遊走物質として機能し、また強力な血管新生因子でもある。
【００１９】
ＣＫ２はリン酸化することにより、例えば核内因子カッパＢ（ＮＦ−κＢ）、シグナル伝達性転写因子（ＳＴＡＴ）１、環状アデノシン一リン酸(cAMP)応答配列結合タンパク質（ＣＲＥＢ）、ｃＡＭＰ応答配列調節因子タンパク質（ＣＲＥＭ）、ＰＵ．１、特異性タンパク質−１（Ｓｐ１）、ＣＣＡＡＴ−エンハンサ結合タンパク質（Ｃ／ＥＢＰ）、ステロイドホルモン受容体、ならびに癌原遺伝子のｃ−Ｊｕｎ、ｃ−Ｆｏｓ、ｃ−Ｍｙｃ、およびＭａｘを含む炎症反応の制御に関与する転写因子の活性を調整することが報告されている。Singh & Ramji, J. Mol. Med. 2008, 86(8):887-97（非特許文献５）を参照されたい。
【００２０】
炎症性乳癌（ＩＢＣ）は、増加した血管新生およびリンパ脈管新生を示し、非炎症性乳癌より高い転移能を有する。ＣＫ２の乳癌の役割が一般に検討されてきた一方で、ＩＢＣのＣＫ２の役割について記載する文献は存在しない。
【００２１】
ＣＫ２は、ＩκＢおよびＮＦ−κＢのリン酸化によるＮＦ−κＢ転写を調節する。ＩＬ−６およびＩＬ−８は、ＮＦ−κＢ標的遺伝子である。ＣＫ２がＮＦ−κＢの制御に関与することが知られる一方で、ＩＬ−６の発現に関与する転写因子の一つ、ＣＫ２とＩＬ−６との連関はよく実証されていない。腸でのＮＦ−κＢを介したＩＬ−８の強力な調節が報告されている(Parhar et al., 2007（非特許文献６）)。
【００２２】
表面抗原分類１９（ＣＤ１９）は濾胞樹状細胞およびＢ細胞で発現される。ＣＤ１９は、Ｂ細胞性芽球発生中の初期に認識されるＢ系細胞からのＢ細胞に存在するが、形質細胞への分化には効果がない。活性化後、ＣＤ１９の細胞質側末端がリン酸化状態になり、これがＳｒｃ−ファミリーキナーゼによる結合とＰＩ−３キナーゼの補充につながる。Ｂ細胞の発生に異常を引き起こす変異は、リンパ腫や白血病等の癌を生じ得る。ＣＤ１９は、Ａｋｔ活性の主要なレギュレータであること(Otero, Omori & Rickert, 2001（非特許文献７）)、およびＡｋｔの構成的活性が、マントル細胞リンパ腫を含む複数のＢ細胞由来疾病の病原性と残存をもたらすこと(Radelius, Pittaluga, Nishizuka et al., 2006（非特許文献８）)が示されている。
【００２３】
上記のように、ＣＫ２阻害剤は、癌化学療法に有用とする強力な抗増殖性能をもつことが見出されている。しかしながら、ＣＫ２阻害剤をより標的化して使用する必要があり、これには当該薬剤での治療に反応しやすい対象の同定を必要とする。細胞、組織、腫瘍、または対象のＣＫ２阻害剤での治療に対する反応性を予測するために必要なバイオマーカーの同定は、ＣＫ２介在性疾患、例えばこれに限定されないが癌などの増殖性疾患の治療のための標的化したアプローチを開発するのに大いに価値がある。当該バイオマーカーは、ＣＫ２阻害剤の投与から治療的恩恵を受けやすい患者を同定および／または選択するための判断基準として使用され得る。さらにこれらのおよび他のバイオマーカーはまた、対象の治療に対する反応を監視すること、および投与計画を変更するかどうかまたは治療薬を変えるまたは増やすかどうかを決定することに有用であり得る。
【００２４】
したがって、増殖性疾患および／または炎症性疾患などのＣＫ２介在性疾患の、ＣＫ２阻害剤による治療への感受性を予測するおよび／またはその反応を監視することが可能なバイオマーカーを同定する必要がある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００２５】
【特許文献１】国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ２００７／０７７４６４号
【特許文献２】国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０７４８２０号
【特許文献３】国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ２００９／０３５６０９号
【非特許文献】
【００２６】
【非特許文献１】Guerra & issinger, Curr. Med. Chem., 2008, 15:1870-1886
【非特許文献２】Ahmad et al, 2005; Duncan & Litchfeld 2008
【非特許文献３】Di Maira et al., 2005.
【非特許文献４】Di Maira et al., 2009
【非特許文献５】Singh & Ramji, J. Mol. Med. 2008, 86(8):887-97
【非特許文献６】Parhar et al., 2007
【非特許文献７】Otero, Omori & Rickert, 2001
【非特許文献８】Radelius, Pittaluga, Nishizuka et al., 2006
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００２７】
本発明は、増殖性疾患および／または炎症性疾患などのＣＫ２介在性疾患の治療薬、特にＣＫ２阻害剤による治療に対する感受性を予測する、決定するおよび／または監視するためのバイオマーカーに関する。
【００２８】
第一の態様では、本発明は、対象または系のＣＫ２阻害剤による治療に対する感受性および／または反応性を予測するのに有用なバイオマーカーを提供する。バイオマーカーおよび関連する該バイオマーカーの測定方法は、特にＣＫ２阻害剤による治療に関する個々の対象または対象集団を選択するために使用し得る。本発明はまた、ＣＫ２阻害剤を投与された対象における治療結果を監視または予測するためのこれらのバイオマーカーの使用に関する。
【００２９】
本明細書に記載のとおり、ＣＫ２阻害剤による治療に対するＣＫ２介在性疾患の感受性を予測するおよび／または反応性を監視するために有用なバイオマーカーは、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＨＩＦ−１α、ＶＥＧＦ、ＣＫ２αおよび／またはＣＫ２α'サブユニットすなわちＣＫ２βのｍＲＮＡ発現および／またはポリペプチドレベル（すなわちタンパク質発現）、ならびにリン酸化Ａｋｔセリン１２９（ｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９）の単独のレベルまたは総Ａｋｔポリペプチドに対するレベル（すなわちｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９の正規化したレベル）を含む。さらなるバイオマーカーは、リン酸化Ａｋｔセリン４７３（ｐ−Ａｋｔ  Ｓ４７３）の単独のレベルまたは総Ａｋｔポリペプチドに対するレベル（すなわちｐ−Ａｋｔ  Ｓ４７３の正規化したレベル）、リン酸化ｐ２１トレオニン１４５（ｐ−ｐ２１  Ｔ１４５）の単独のレベルまたは総ｐ２１ポリペプチドに対するレベル（すなわちｐ−ｐ２１  Ｔ１４５の正規化したレベル）、リン酸化核酸因子−κＢ（ＮＦ−κＢ）セリン５２９（ｐ−ＮＦ−κＢ  Ｓ５２９）の単独のレベルまたは総ＮＦ−κＢポリペプチドに対するレベル（すなわちｐ−ＮＦ−κＢ  Ｓ５２９の正規化したレベル）、リン酸化ＳＴＡＴ３チロシン７０５（ｐ−ＳＴＡＴ３  Ｙ７０５）の単独のレベルまたは総ＳＴＡＴ３ポリペプチドに対するレベル（すなわちｐ−ＳＴＡＴ３  Ｙ７０５の正規化したレベル）、またはリン酸化ＪＡＫ２チロシン１００７／１００８（ｐ−ＪＡＫ２  Ｙ１００７／１００８）の単独のレベルまたは総ＪＡＫ２ポリペプチドに対するレベル（すなわちｐ−ＪＡＫ２  Ｙ１００７／１００８の正規化したレベル）を含む。
【００３０】
したがって第二の態様では、本発明は、対象における増殖性疾患および／または炎症性疾患などのＣＫ２介在性疾患のＣＫ２阻害剤による治療に対する感受性を予測するおよび／または反応性を監視するための方法を提供し、この方法はさらに本明細書に記載されるように、対象由来の生体試料において、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＨＩＦ−１α、ＶＥＧＦ、ＣＫ２αおよびＣＫ２α'、ＣＫ２βから選択された１またはそれ以上のバイオマーカーのｍＲＮＡの発現および／もしくはポリペプチドレベル、ならびに／またはｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９、ｐ−Ａｋｔ  Ｓ４７３、ｐ−ｐ２１  Ｔ１４５、ｐ−ＮＦ−κＢ  Ｓ５２９、ｐ−ＳＴＡＴ３  Ｙ７０５、ｐ−ＪＡＫ２  Ｙ１００７／１００８の単独のレベルまたは総非リン酸化タンパク質レベルに対するリン酸化レベル（すなわち正規化したレベル）を決定することを含む。
【００３１】
当該一実施形態では、本方法は対象由来の生体試料のＩＬ−６ｍＲＮＡ発現および／またはＩＬ−６ポリペプチドレベルを決定することを含み、ＩＬ−６ｍＲＮＡ発現および／またはＩＬ−６ポリペプチドのレベルの対照に対する増加が、ＣＫ２介在性疾患のＣＫ２阻害剤による治療に対する感受性を予測する。
【００３２】
別の一実施形態では、本発明は、ＣＫ２阻害剤投与前の対象由来の第一の生体試料におけるＩＬ−６ｍＲＮＡ発現および／またはＩＬ−６ポリペプチドのレベルを決定することを含み；このＣＫ２阻害剤投与後の対象由来の第二の生体試料に対するＩＬ−６ｍＲＮＡ発現および／またはＩＬ−６ポリペプチドのレベルの減少が、ＣＫ２阻害剤による治療に対するＣＫ２介在性疾患の治療の積極的な反応を示している。
【００３３】
別の一実施形態では、本方法は、対象由来の生体試料におけるＩＬ−８ｍＲＮＡ発現および／またはＩＬ−８ポリペプチドのレベルを決定することを含み；このＩＬ−８ｍＲＮＡ発現および／またはＩＬ−８ポリペプチドのレベルの対照に対する増加が、ＣＫ２介在性疾患のＣＫ２阻害剤による治療に対する感受性を予測する。
【００３４】
別の一実施形態では、本方法は、ＣＫ２阻害剤投与前の対象由来の第一の生体試料におけるＩＬ−８ｍＲＮＡ発現および／またはＩＬ−８ポリペプチドのレベルを決定することを含み；このＩＬ−８ｍＲＮＡ発現および／またはＩＬ−８ポリペプチドのレベルのＣＫ２阻害剤投与後の対象由来の第二の生体試料に対する減少が、ＣＫ２介在性疾患のＣＫ２阻害剤による治療に対する積極的な反応を示している。
【００３５】
別の一実施形態では、本方法は、対象由来の生体試料におけるＣＫ２αｍＲＮＡ発現および／またはＣＫ２αポリペプチドのレベルを決定することを含み；このＣＫ２αｍＲＮＡ発現および／またはＣＫ２αポリペプチドのレベルの対照に対する増加が、ＣＫ２阻害剤による治療に対するＣＫ２介在性疾患の感受性を予測する。
【００３６】
別の一実施形態では、本方法は、ＣＫ２阻害剤投与前の対象由来の第一の生体試料におけるＣＫ２αｍＲＮＡ発現および／またはＣＫ２αポリペプチドのレベルを決定することを含み；このＣＫ２αｍＲＮＡ発現および／またはＣＫ２αポリペプチドのレベルのＣＫ２阻害剤投与後の対象由来の第二の生体試料に対する減少が、ＣＫ２阻害剤による治療に対するＣＫ２介在性疾患の治療に積極的な反応を示している。
【００３７】
別の一実施形態では、本方法は、対象の生体試料におけるＣＫ２α'ｍＲＮＡ発現および／またはＣＫ２α'ポリペプチドのレベルを決定することを含み；このＣＫ２α'ｍＲＮＡ発現および／またはＣＫ２α'ポリペプチドのレベルの対照に対する増加が、ＣＫ２阻害剤による治療に対するＣＫ２介在性疾患の感受性を予測する。
【００３８】
別の一実施形態では、本方法は、ＣＫ２阻害剤投与前の対象由来の第一の生体試料におけるＣＫ２α'ｍＲＮＡ発現および／またはＣＫ２α'ポリペプチドのレベルを決定することを含み；このＣＫ２α'ｍＲＮＡ発現および／またはＣＫ２α'ポリペプチドのレベルのＣＫ２阻害剤投与後の対象由来の第二の生体試料に対する減少が、ＣＫ２阻害剤による治療に対するＣＫ２介在性疾患の治療に積極的な反応を示している。
【００３９】
別の一実施形態では、本方法は、対象由来の生体試料におけるＶＥＧＦ  ｍＲＮＡ発現および／またはＶＥＧＦポリペプチドのレベルを決定することを含み；このＶＥＧＦ  ｍＲＮＡ発現および／またはＶＥＧＦポリペプチドのレベルの対照に対する増加が、ＣＫ２阻害剤による治療に対するＣＫ２介在性疾患の感受性を予測している。
【００４０】
別の一実施形態では、本方法は、ＣＫ２阻害剤投与前の対象由来の第一の生体試料におけるＶＥＧＦ  ｍＲＮＡ発現および／またはＶＥＧＦポリペプチドのレベルを決定することを含み；このＶＥＧＦ  ｍＲＮＡ発現および／またはＶＥＧＦポリペプチドのレベルのＣＫ２阻害剤投与後の対象由来の第二の生体試料に対する減少が、ＣＫ２阻害剤による治療に対するＣＫ２介在性疾患の治療に積極的な反応を示している。
【００４１】
別の一実施形態では、本方法は、対象由来の生体試料におけるＣＫ２αｍＲＮＡ発現および／またはＣＫ２αポリペプチドのレベルを決定すること；および対象由来の生体試料におけるリン酸化Ａｋｔ  Ｓ１２９（ｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９）ポリペプチドのレベルを決定することを含み；このＣＫ２αｍＲＮＡ発現および／またはＣＫ２αポリペプチドのレベルとｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９ポリペプチドのレベルとの間の正の相関が、ＣＫ２阻害剤による治療に対するＣＫ２介在性疾患の感受性を予測している。
【００４２】
さらなる実施形態では、本方法は、対象由来の生体試料におけるＣＫ２α'ｍＲＮＡ発現および／またはＣＫ２α'ポリペプチドのレベルを決定すること；および対象由来の生体試料における総Ａｋｔポリペプチドのレベルに対する対象由来の生体試料におけるリン酸化Ａｋｔ  Ｓ１２９（ｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９）ポリペプチドのレベルを決定することを含み；このＣＫ２α'ｍＲＮＡ発現および／またはＣＫ２α'ポリペプチドのレベルとｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９ポリペプチドの正規化したレベルとの間の正の相関が、ＣＫ２阻害剤による治療に対するＣＫ２介在性疾患の感受性を予測している。
【００４３】
別の実施形態では、本方法は、対象由来の生体試料におけるリン酸化Ａｋｔ  Ｓ１２９（ｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９）ポリペプチドのレベルを決定することを含み；このｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９ポリペプチドのレベルの対照に対する増加が、ＣＫ２阻害剤による治療に対するＣＫ２介在性疾患の感受性を予測している。
【００４４】
別の実施形態では、本方法は、ＣＫ２阻害剤投与前の対象由来の第一の生体試料おけるリン酸化Ａｋｔ  Ｓ１２９（ｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９）ポリペプチドのレベルを決定することを含み；このリン酸化Ａｋｔ  Ｓ１２９（ｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９）ポリペプチドのレベルのＣＫ２阻害剤投与後の対象由来の第二の生体試料に対する減少が、ＣＫ２阻害剤による治療に対するＣＫ２介在性疾患の治療に積極的な反応を示している。
【００４５】
さらに別の実施形態では、本方法は、対象由来の生体試料における、総Ａｋｔポリペプチドのレベルに対するリン酸化Ａｋｔ  Ｓ１２９（ｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９）ポリペプチドのレベルを決定することを含み；この対応する対照に対するｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９ポリペプチドの正規化したレベルの増加が、ＣＫ２阻害剤による治療に対するＣＫ２介在性疾患の感受性を予測している。
【００４６】
さらに別の実施形態では、本方法は、ＣＫ２阻害剤投与前の対象由来の第一の生体試料における、総Ａｋｔポリペプチドのレベルに対するリン酸化Ａｋｔ  Ｓ１２９（ｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９）ポリペプチドのレベルを決定することを含み；このＣＫ２阻害剤投与後の対象由来の第二の生体試料と比較した場合の総Ａｋｔポリペプチドのレベルに対するリン酸化Ａｋｔ  Ｓ１２９（ｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９）ポリペプチドのレベルの減少が、ＣＫ２阻害剤による治療に対するＣＫ２介在性疾患の治療に積極的な反応を示している。
【００４７】
別の実施形態では、本方法は、対象由来の生体試料におけるリン酸化Ａｋｔ  Ｓ４７３（ｐ−Ａｋｔ  Ｓ４７３）ポリペプチドのレベルを決定することを含み；この対照に対するｐ−Ａｋｔ  Ｓ４７３ポリペプチドのレベルの増加が、ＣＫ２阻害剤による治療に対するＣＫ２介在性疾患の感受性を予測している。
【００４８】
別の実施形態では、本方法は、ＣＫ２阻害剤投与前の対象由来の第一の生体試料における、リン酸化Ａｋｔ  Ｓ４７３（ｐ−Ａｋｔ  Ｓ４７３）ポリペプチドのレベルを決定することを含み；このＣＫ２阻害剤投与後の対象由来の第二の生体試料に対するリン酸化Ａｋｔ  Ｓ４７３（ｐ−Ａｋｔ  Ｓ４７３）ポリペプチドのレベルの減少が、ＣＫ２阻害剤による治療に対するＣＫ２介在性疾患の治療に積極的な反応を示している。
【００４９】
さらに別の実施形態では、本方法は、対象由来の生体試料における総Ａｋｔポリペプチドのレベルに対するリン酸化  Ａｋｔ  Ｓ４７３（ｐ−Ａｋｔ  Ｓ４７３）ポリペプチドのレベルを決定することを含み；この対応する対照に対するｐ−Ａｋｔ  Ｓ４７３ポリペプチドの正規化したレベルの増加が、ＣＫ２阻害剤による治療に対するＣＫ２介在性疾患の感受性を予測している。
【００５０】
さらに別の実施形態では、本方法は、ＣＫ２阻害剤投与前の対象由来の第一の生体試料における、総Ａｋｔポリペプチドのレベルに対するリン酸化Ａｋｔ  Ｓ４７３（ｐ−Ａｋｔ  Ｓ４７３）ポリペプチドのレベルを決定することを含み、この方法において、ＣＫ２阻害剤投与後の対象由来の第二の生体試料と比較した場合に、総Ａｋｔポリペプチドのレベルに対するリン酸化Ａｋｔ  Ｓ４７３（ｐ−Ａｋｔ  Ｓ４７３）ポリペプチドのレベルの減少が、ＣＫ２阻害剤による治療に対するＣＫ２介在性疾患の治療に積極的な反応を示している。
【００５１】
別の実施形態では、本方法は、対象由来の生体試料におけるリン酸化ｐ２１  Ｔ１４５（ホスホ−ｐ２１  Ｔ１４５またはｐ−ｐ２１  Ｔ１４５）ポリペプチドのレベルを決定することを含み；この対照に対するｐ−ｐ２１  Ｔ１４５ポリペプチドのレベルの増加が、ＣＫ２阻害剤による治療に対するＣＫ２介在性疾患の感受性を予測している。
【００５２】
別の実施形態では、本方法は、ＣＫ２阻害剤投与前の対象由来の第一の生体試料における、ＣＫ２阻害剤投与後の対象由来の第二の生体試料に対する、リン酸化ｐ２１  Ｔ１４５（ホスホ−ｐ２１  Ｔ１４５またはｐ−ｐ２１  Ｔ１４５）ポリペプチドのレベルを決定することを含み；このリン酸化ｐ２１  Ｔ１４５（ホスホ−ｐ２１  Ｔ１４５またはｐ−ｐ２１  Ｔ１４５）ポリペプチドのレベルの増加が、ＣＫ２阻害剤による治療に対するＣＫ２介在性疾患の治療に積極的な反応を示している。
【００５３】
さらに別の実施形態では、本方法は、対象由来の生体試料における、総ｐ２１ポリペプチドのレベルに対するリン酸化ｐ２１  Ｔ１４５（ホスホ−ｐ２１  Ｔ１４５またはｐ−ｐ２１  Ｔ１４５）ポリペプチドのレベルを決定することを含み；この対応する対照に対するｐ−ｐ２１ポリペプチドの正規化したレベルの増加が、ＣＫ２阻害剤による治療に対するＣＫ２介在性疾患の感受性を予測している。
【００５４】
さらに別の実施形態では、本方法は、ＣＫ２阻害剤投与前の対象由来の第一の生体試料における、総ｐ２１ポリペプチドのレベルに対するリン酸化ｐ２１  Ｔ１４５（ホスホ−ｐ２１  Ｔ１４５またはｐ−ｐ２１  Ｔ１４５）ポリペプチドのレベルを決定することを含み；このＣＫ２阻害剤投与後の対象由来の第二の生体試料と比較した場合の総ｐ２１ポリペプチドのレベルに対するリン酸化ｐ２１  Ｔ１４５（ホスホ−ｐ２１  Ｔ１４５またはｐ−ｐ２１  Ｔ１４５）ポリペプチドのレベルの減少が、ＣＫ２阻害剤による治療に対するＣＫ２介在性疾患の治療に積極的な反応を示している。
【００５５】
別の実施形態では、本方法は、対象由来の生体試料におけるリン酸化核酸因子−κＢ（ＮＦ−κＢ）セリン５２９（ｐ−ＮＦ−κＢ  Ｓ５２９）ポリペプチドのレベルを決定することを含み；この対照に対するｐ−ＮＦ−κＢ  Ｓ５２９ポリペプチドのレベルの増加が、ＣＫ２阻害剤による治療に対するＣＫ２介在性疾患の感受性を予測している。
【００５６】
別の実施形態では、本方法は、ＣＫ２阻害剤投与前の対象由来の第一の生体試料におけるリン酸化核酸因子−κＢ（ＮＦ−κＢ）セリン５２９（ｐ−ＮＦ−κＢ  Ｓ５２９）ポリペプチドのレベルを決定することを含み；このＣＫ２阻害剤投与後の対象由来の第二の生体試料に対するリン酸化ＮＦ−κＢ  Ｓ５２９（ｐ−ＮＦ−κＢ  Ｓ５２９）ポリペプチドのレベルの減少が、ＣＫ２阻害剤による治療に対するＣＫ２介在性疾患の治療に積極的な反応を示している。
【００５７】
さらに別の実施形態では、本方法は、対象由来の生体試料における総ＮＦ−κＢ  ポリペプチドのレベルに対するリン酸化核酸因子−κＢ（ＮＦ−κＢ）セリン５２９（ｐ−ＮＦ−κＢ  Ｓ５２９）ポリペプチドのレベルを決定することを含み；この対応する対照に対するｐ−ＮＦ−κＢ  Ｓ５２９ポリペプチドの正規化したレベルの増加が、ＣＫ２阻害剤による治療に対するＣＫ２介在性疾患の感受性を予測している。
【００５８】
さらに別の実施形態では、本方法は、ＣＫ２阻害剤投与前の対象由来の第一の生体試料における、総ＮＦ−κＢポリペプチドのレベルに対するリン酸化  核酸因子−κＢ（ＮＦ−κＢ）セリン５２９（ｐ−ＮＦ−κＢ  Ｓ５２９）ポリペプチドのレベルを決定することを含み；このＣＫ２阻害剤投与後の対象由来の第二の生体試料と比較した場合の総ＮＦ−κＢポリペプチドのレベルに対するリン酸化ＮＦ−κＢ  Ｓ５２９（ｐ−ＮＦ−κＢ  Ｓ５２９）ポリペプチドのレベルの減少が、ＣＫ２阻害剤による治療に対するＣＫ２介在性疾患の治療に積極的な反応を示している。
【００５９】
別の実施形態では、本方法は、対象由来の生体試料におけるリン酸化ＳＴＡＴ３チロシン７０５（ｐ−ＳＴＡＴ３  Ｙ７０５）ポリペプチドのレベルを決定することを含み；この対照に対するｐ−ＳＴＡＴ３  Ｙ７０５ポリペプチドのレベルの増加が、ＣＫ２阻害剤による治療に対するＣＫ２介在性疾患の感受性を予測している。
【００６０】
別の実施形態では、本方法は、ＣＫ２阻害剤投与前の対象由来の第一の生体試料におけるリン酸化ＳＴＡＴ３チロシン７０５（ｐ−ＳＴＡＴ３  Ｙ７０５）ポリペプチドのレベルを決定することを含み；このＣＫ２阻害剤投与後の対象由来の第二の生体試料に対するリン酸化ＳＴＡＴ３チロシン７０５（ｐ−ＳＴＡＴ３  Ｙ７０５）ポリペプチドのレベルの減少が、ＣＫ２阻害剤による治療に対するＣＫ２介在性疾患の治療に積極的な反応を示している。
【００６１】
さらに別の実施形態では、本方法は、対象由来の生体試料における、総ＳＴＡＴ３ポリペプチドのレベルに対するリン酸化ＳＴＡＴ３チロシン７０５（ｐ−ＳＴＡＴ３  Ｙ７０５）ポリペプチドのレベルを決定することを含み；この対応する対照に対するｐ−ＳＴＡＴ３  Ｙ７０５ポリペプチドの正規化したレベルの増加が、ＣＫ２阻害剤による治療に対するＣＫ２介在性疾患の感受性を予測している。
【００６２】
さらに別の実施形態では、本方法は、ＣＫ２阻害剤投与前の対象由来の第一の生体試料における、総ＳＴＡＴ３ポリペプチドのレベルに対するリン酸化ＳＴＡＴ３チロシン７０５（ｐ−ＳＴＡＴ３  Ｙ７０５）ポリペプチドのレベルを決定することを含み、この方法においてのＣＫ２阻害剤投与後の対象由来の第二の生体試料と比較した場合に、総ＳＴＡＴ３ポリペプチドのレベルに対するリン酸化ＳＴＡＴ３チロシン７０５（ｐ−ＳＴＡＴ３  Ｙ７０５）ポリペプチドのレベルの減少が、ＣＫ２阻害剤による治療に対するＣＫ２介在性疾患の治療に積極的な反応を示している。
【００６３】
別の実施形態では、本方法は、対象由来の生体試料におけるリン酸化ＪＡＫ２チロシン１００７／１００８（ｐ−ＪＡＫ２  Ｙ１００７／１００８）ポリペプチドのレベルを決定することを含み；この対照に対するｐ−ＪＡＫ２  Ｙ１００７／１００８ポリペプチドのレベルの増加が、ＣＫ２阻害剤による治療に対するＣＫ２介在性疾患の感受性を予測している。
【００６４】
別の実施形態では、本方法は、ＣＫ２阻害剤投与前の対象由来の第一の生体試料におけるリン酸化ＪＡＫ２チロシン１００７／１００８（ｐ−ＪＡＫ２  Ｙ１００７／１００８）ポリペプチドのレベルを決定することを含み；このＣＫ２阻害剤投与後の対象由来の第二の生体試料に対するリン酸化ＪＡＫ２チロシン１００７／１００８（ｐ−ＪＡＫ２  Ｙ１００７／１００８）ポリペプチドのレベルの減少が、ＣＫ２阻害剤による治療に対するＣＫ２介在性疾患の治療に積極的な反応を示している。
【００６５】
さらに別の実施形態では、本方法は、対象由来の生体試料における、総ＪＡＫ２ポリペプチドのレベルに対するリン酸化ＪＡＫ２チロシン１００７／１００８（ｐ−ＪＡＫ２  Ｙ１００７／１００８）ポリペプチドのレベルを決定することを含み；この対応する対照に対するｐ−ＪＡＫ２  Ｙ１００７／１００８ポリペプチドの正規化したレベルの増加が、ＣＫ２阻害剤による治療に対するＣＫ２介在性疾患の感受性を予測している。
【００６６】
さらに別の実施形態では、本方法は、ＣＫ２阻害剤投与前の対象由来の第一の生体試料における、総ＪＡＫ２ポリペプチドに対するリン酸化ＪＡＫ２チロシン１００７／１００８（ｐ−ＪＡＫ２  Ｙ１００７／１００８）ポリペプチドのレベルを決定することを含み；このＣＫ２阻害剤投与後の対象由来の第二の生体試料と比較した場合の総ＪＡＫ２ポリペプチドのレベルに対するリン酸化ＪＡＫ２チロシン１００７／１００８（ｐ−ＪＡＫ２  Ｙ１００７／１００８）ポリペプチドのレベルの減少が、ＣＫ２阻害剤による治療に対するＣＫ２介在性疾患の治療に積極的な反応を示している。
【００６７】
本明細書に記載の様々な実施形態では、生体試料は、対象由来の細胞、組織、組織培養物、腫瘍、または生体液から選択されてもよい。一実施形態では、生体液は、血漿、血清、または末梢血単核球（ＰＢＭＣ）から選択されてもよい。
【００６８】
本明細書に記載の様々な実施形態では、増殖性疾患は、癌または悪性腫瘍である。一実施形態では、癌または悪性腫瘍は頭頸部癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、炎症性乳癌（ＩＢＣ）を含む乳癌、前立腺癌、膵癌、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）およびマントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）を含むリンパ腫、神経膠芽腫、肺の扁平上皮癌（ＳＣＣ）、卵巣癌、多発性骨髄腫、急性骨髄性白血病、結腸直腸癌、および甲状腺癌であってよい。
【００６９】
頻繁な実施形態では、ＣＫ２介在性疾患は、増殖性疾患および／また炎症性疾患であり、本方法は、当該疾患のＣＫ２阻害剤による治療に対する感受性を決定するために使用される。特定の実施形態では、ＣＫ２阻害剤は、ＣＸ−４９４５またはその類似体であり、これに限定されないが、化合物１および化合物２が挙げられる。
【００７０】
いくつかの実施形態では、本方法は、２またはそれ以上の上記バイオマーカーを使用してｍＲＮＡ発現および／またはポリペプチドのレベルを決定することを含む。
【００７１】
本発明はまた、ＣＫ２阻害剤による治療に関し、増殖性疾患および／または炎症性疾患などのＣＫ２介在性疾患を患う対象を選択するための上記方法、およびこれらの方法を使用して選択した対象を治療する方法に関する。
【００７２】
したがって別の態様では、本発明は、ＣＫ２阻害剤による治療のために増殖性疾患および／または炎症性疾患などのＣＫ２介在性疾患を患う対象を選択する方法を提供し、この方法は、本明細書に記載のような１またはそれ以上のバイオマーカーのレベルを決定することにより各対象のＣＫ２阻害剤による治療に対するＣＫ２介在性疾患の感受性を予測すること、およびＣＫ２阻害剤による治療のために感受性の予測を示唆する反応を示す前記対象を選択することを含む。
【００７３】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される本方法は、ＣＫ２阻害剤による治療からの恩恵を受けやすい患者または患者集団を同定または選択するために使用されてもよい。他の実施形態では、本方法は、ＣＫ２阻害剤による治療からの恩恵を受けにくい患者を同定するために有用であり得る。当該方法はまた、ＣＫ２阻害剤による治療の有効性を評価する臨床試験への組み入れ（または除外）のための患者集団の選択に使用してもよい。本明細書に記載の方法はまた、ＣＫ２阻害剤により治療中である患者の反応を評価するために使用されてもよく、したがって、ＣＫ２阻害剤による治療の結果を監視するまたは予測するために使用されてもよい。
【００７４】
さらなる態様では、本発明は、治療を必要とする患者において増殖性疾患および／または炎症性疾患などのＣＫ２介在性疾患を治療するための方法を提供し、この方法は、本明細書に記載の対象由来の生体試料における１またはそれ以上のバイオマーカーのレベルを決定すること、および対象の試料中のバイオマーカーのレベルがＣＫ２阻害剤による治療に対する感受性または反応性が予測されることが示唆された反応を提供する場合に、その対象をＣＫ２阻害剤により治療すること、を含む。
【００７５】
本発明のこれらまたは他の実施形態は、本明細書に記載されている。
【図面の簡単な説明】
【００７６】
【図１】図１は、多発性骨髄腫細胞でのＩＬ−６の効果を示している。ＩＬ−６は、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）分泌を誘発し、この分泌が血管新生を促進し、多発性骨髄腫細胞の成長および遊走を刺激し、さらにＩＬ−６分泌を増大させ、そして樹状細胞により抗原提示を抑える。
【図２】図２は、ＣＫ２阻害剤、ＣＸ−４９４５の、様々なＣＸ−４９４５類似体と比較した阻害活性を示す。
【図３】図３は、癌細胞および正常細胞間のＣＸ−４９４５の異なる感受性を示す。Ｙ軸はカスパーゼ３／７、細胞アポトーシスマーカーの活性の誘導倍率を示す。Ｘ軸は細胞型を示す。ＢＴ−４７４：乳癌細胞；Ｍｉａ  ＰａＣａ  ２およびＢｘＰＣ３−３：膵癌細胞；ＳＫ−ＯＶ−３およびＡ２７８０：卵巣癌細胞；Ａ３７５：黒色腫細胞；ＣＣＤ１８Ｃｏ：正常結腸線維芽細胞；ＣＣＤ１０５８およびＣＣＤ１０６８：正常皮膚線維芽細胞；およびＭｒｃ５およびＩＭＲ９０：正常肺線維芽細胞。
【図４】図４は、３５日間にわたりＣＸ−４９４５により治療した後の腫瘍成長の阻害を図示する（２５ｍｇ／ｋｇを１日２回または７５ｍｇ／ｋｇを１日２回）。
【図５Ａ】図５Ａは、３５日間にわたりＣＸ−４９４５により治療した後のＢＴ−４７４乳癌細胞系での乳癌腫瘍成長の阻害を図示する（２５ｍｇ／ｋｇを１日２回または７５ｍｇ／ｋｇを１日２回）。
【図５Ｂ】図５Ｂは、３５日間にわたりＣＸ−４９４５により治療した後のＳＫ−ＯＶ−３卵巣癌細胞系での卵巣癌腫瘍成長の阻害を図示する（２５ｍｇ／ｋｇを１日２回または７５ｍｇ／ｋｇを１日２回）。
【図６】図６は、３５日間にわたりＣＸ−４９４５により治療した後のＢｘＰＣ３膵癌異種移植片での膵癌腫瘍成長の阻害を図示する（１２．５ｍｇ／ｋｇを１日２回、２５ｍｇ／ｋｇを１日２回、５０ｍｇ／ｋｇを１日２回、または７５ｍｇ／ｋｇを１日２回）。薬剤は耐容性がよく、ＣＸ−４９４５の血漿濃度は投与計画と密接に相関していた。
【図７】図７は、ＣＸ−４９４５による治療後１日目に対する２１日目の血漿でのＩＬ−６およびＩＬ−８のレベルを示す（ＣＸ−４９４５）。
【図８】図８は、ＮＳＣＬＣ、前立腺、甲状腺／乳頭およびライディッヒ細胞の腫瘍を有する患者での２１日間のＣＸ−４９４５による治療後のＩＬ−６およびＩＬ−８のレベルの変化率を示す。
【図９Ａ】図９Ａは、実施例１のコホート１〜３での２１日間のＣＸ−４９４５による治療後の血清ＩＬ−６レベルの変化率を示す。
【図９Ｂ】図９Ｂは、ＣＸ−４９４５による治療１日後および２１日後の患者ＩＤ  ＮＯ：１−２４でのＩＬ−６レベルを示す。
【図１０】図１０は、ＣＸ−４９４５による治療１日後および２１日後の患者ＩＤ  ＮＯ：１−２４でのＩＬ−８レベルを示す。
【図１１】図１１は、実施例１のコホート１〜３でのＣＸ−４９４５による治療後１日目および２１日目でのＣＤ１９  ＰＢＭＣの投与後８時間目のＡｋｔ  Ｓ４７３／Ａｋｔの変化率を示す。
【図１２】図１２は、実施例１のコホート１〜３でのＣＸ−４９４５による治療後１日目および２１日目でのＣＤ４５  ＰＢＭＣの投与後４時間目のｐ２１  Ｔ１４５／ｐ２１の変化率を示す。
【図１３Ａ】図１３は、投与前時点（ｔｉｍｅ＝０）と定常状態時点（ｔｉｍｅ＝８日目または２１日目）との間の累積ＡＵＣの関数に応じたｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９（Ａ）、ｐ−Ａｋｔ  Ｓ４７３（Ｂ）、およびｐ−ｐ２１  Ｔ１４５（Ｃ）の変化を示す。
【図１３Ｂ】図１３は、投与前時点（ｔｉｍｅ＝０）と定常状態時点（ｔｉｍｅ＝８日目または２１日目）との間の累積ＡＵＣの関数に応じたｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９（Ａ）、ｐ−Ａｋｔ  Ｓ４７３（Ｂ）、およびｐ−ｐ２１  Ｔ１４５（Ｃ）の変化を示す。
【図１３Ｃ】図１３は、投与前時点（ｔｉｍｅ＝０）と定常状態時点（ｔｉｍｅ＝８日目または２１日目）との間の累積ＡＵＣの関数に応じたｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９（Ａ）、ｐ−Ａｋｔ  Ｓ４７３（Ｂ）、およびｐ−ｐ２１  Ｔ１４５（Ｃ）の変化を示す。
【図１４】図１４は、ＱＩＤスケジュールに従う患者に関する投与前時点（ｔｉｍｅ＝０）と８日目での投与後６時間時点との間の循環腫瘍細胞（ＣＴＣ）のｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９変化を示す。
【図１５】図１５は、０．０５μＭから５０μＭまでのＣＸ−４９４５濃度で６時間処置されたＳＵＭ−１４９ＰＴ炎症性乳癌（ＩＢＣ）によるＩＬ−６の分泌を示す（Ａ）。ＳＵＭ−１４９ＰＴ細胞の細胞生存率は、９６時間後に決定された（Ｂ）。
【図１６】図１６は、侵襲性ＳＵＭ−１４９ＰＴの異種移植片によるＩＬ−６の分泌に対するＣＸ−４９４５の効果を示す。腫瘍重量の効果はパネル（Ａ）に示される。侵襲性の腫瘍（１ｇ超）は、より軽い腫瘍よりＩＬ−６分泌率が高いことが見出された（Ｂ）。ＣＸ−４９４５は、全ての腫瘍においてＩＬ−６分泌を減少させ（Ｃ）、侵襲性の腫瘍によるＩＬ−６分泌を有意に減少させること（Ｄ）が見出された。
【図１７】図１７は、未処置（ＵＴＣ）または７５ｍｇ／ｋｇ  ＣＸ−４９４５で経口投与処置を単回（１回）もしくは８日間１日２回（ｘＤ８）行ったマウス関連ＳＵＭ−１４９ＰＴ異種移植片での治療効果を示す。
【図１８】図１８は、未処置細胞（ＵＴＣ）およびＣＸ−４９４５と５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、ＢＥＺ２３５、ＡＺＤ  ６２４４、エルロチニブ、ラパチニブ、ソラフェニブ、およびスニチニブ（スーテント）を含む付加的な化学療法薬とで処置された細胞でのＡｋｔ  Ｓ１２９の発現を示す。
【図１９】図１９は、可逆的洗い流し条件と比較した、１０μＭ  ＣＸ−４９４５で治療後４時間および８時間でのＴ１４５でのｐ２１およびＳ１２９でのＡｋｔのリン酸化状態を示す。
【図２０】図２０は、ＣＸ−４９４５（Ａ）、化合物１（Ｂ）、および化合物２（Ｃ）に関する乳癌細胞でのＣＫ２α  ｍＲＮＡレベル（ＲＵ）と化合物ＩＣ５０（μＭ）との関係を示す。
【図２１】図２１は、ＣＫ２α'サブユニットレベルとＣＸ−４９４５および化合物２に感受性で耐性である乳癌細胞系でのＡｋｔ  Ｓ１２９リン酸化状態との相関（Ａ）、ならびにＣＫ２α'および各種乳癌細胞系でのｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９のレベル（Ｂ）を示す。
【図２２Ａ】図２２は、ＣＸ−４９４５による治療前に対する治療２１日目投与４時間後のＰＢＭＣでのバイオマーカーＡｋｔ  Ｓ１２９（Ａ）、Ａｋｔ  Ｓ４７３（Ｂ）、およびｐ２１  Ｔ１４５（Ｃ）に関するリン酸タンパク質レベルを示す。
【図２２Ｂ】図２２は、ＣＸ−４９４５による治療前に対する治療２１日目投与４時間後のＰＢＭＣでのバイオマーカーＡｋｔ  Ｓ１２９（Ａ）、Ａｋｔ  Ｓ４７３（Ｂ）、およびｐ２１  Ｔ１４５（Ｃ）に関するリン酸タンパク質レベルを示す。
【図２２Ｃ】図２２は、ＣＸ−４９４５による治療前に対する治療２１日目投与４時間後のＰＢＭＣでのバイオマーカーＡｋｔ  Ｓ１２９（Ａ）、Ａｋｔ  Ｓ４７３（Ｂ）、およびｐ２１  Ｔ１４５（Ｃ）に関するリン酸タンパク質レベルを示す。
【図２３】図２３は、ＣＫ２αおよび正規化したｐＡｋｔ  Ｓ１２９のマーカーを用いてＣＸ−４９４５に関して予測値対計測値ＩＣ５０（Ａ）、およびＣＫαとｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９のポリペプチドレベル（Ｂ）を示す。
【図２４】図２４は、ＢＴ−４７４乳癌細胞およびＢｘＰＣ−３膵癌細胞において評価した場合の、増加したＣＸ−４９４５のＰＩＫ３／Ａｋｔシグナリングおよび細胞周期進行への効果を示す。
【図２５】図２５は、ＢＴ−４７４乳癌細胞およびＢｘＰＣ−３膵癌細胞で細胞周期を調節するためのＣＸ−４９４５の活性を図示する。
【図２６】図２６は、増加した濃度のＣＸ−４９４５の、ＢｘＰＣ−３細胞での管腔形成と遊走への効果を図示する。
【図２７】図２７は、アルドラーゼ、ｐＶＨＬ、およびｐ５３の濃度へのＣＸ−４９４５の効果を示す。
【図２８】図２８は、増加した濃度のＣＸ−４９４５に曝露する前のＨＩＦ−１αの発現を測定するために使用されるルシフェラーゼリポーターアッセイを図示する。
【図２９】図２９は、ヒト多発性骨髄腫細胞系のパネルでのＣＫ２  ｍＲＮＡ（Ａ）およびＣＫ２タンパク質（Ｂ）の発現を示す。
【図３０】図３０は、ＣＸ−４９４５の、いくつかの多発性骨髄腫細胞系でのＣＫ２活性への効果を実証するインビトロキナーゼアッセイを示す。
【図３１Ａ】図３１は、ＣＸ−４９４５が、Ａｋｔ１（Ａ）、ＮＦ−κＢ（Ｂ）、ＪＡＫ２／ＳＴＡＴ３（Ｃ）、およびＰＡＲＰ切断（Ｄ）を含むヒト多発性骨髄腫細胞におけるいくつかの主要タンパク質を調節する程度を図示する。
【図３１Ｂ】図３１は、ＣＸ−４９４５が、Ａｋｔ１（Ａ）、ＮＦ−κＢ（Ｂ）、ＪＡＫ２／ＳＴＡＴ３（Ｃ）、およびＰＡＲＰ切断（Ｄ）を含むヒト多発性骨髄腫細胞におけるいくつかの主要タンパク質を調節する程度を図示する。
【図３１Ｃ】図３１は、ＣＸ−４９４５が、Ａｋｔ１（Ａ）、ＮＦ−κＢ（Ｂ）、ＪＡＫ２／ＳＴＡＴ３（Ｃ）、およびＰＡＲＰ切断（Ｄ）を含むヒト多発性骨髄腫細胞におけるいくつかの主要タンパク質を調節する程度を図示する。
【図３１Ｄ】図３１は、ＣＸ−４９４５が、Ａｋｔ１（Ａ）、ＮＦ−κＢ（Ｂ）、ＪＡＫ２／ＳＴＡＴ３（Ｃ）、およびＰＡＲＰ切断（Ｄ）を含むヒト多発性骨髄腫細胞におけるいくつかの主要タンパク質を調節する程度を図示する。
【図３２】図３２は、１０μＭ  ＣＸ−４９４５による治療の、多発性骨髄腫細胞系でのＶＥＧＦ発現への効果を示す。
【図３３】図３３は、１０μＭ  ＣＸ−４９４５による治療の、多発性骨髄腫細胞系でのＨＩＦ−１αへの効果を示す。
【図３４】図３４は、増加したＣＸ−４９４５の、Ｕ２６６多発性骨髄腫細胞でのＩＬ−６分泌への効果を図示する。
【図３５】図３５は、ＰＩＫ３／Ａｋｔ経路で複数の基質をリン酸化するＣＫ２の活性を示す図である。
【図３６】図３６は、Ａｋｔ−Ｓ１２９のリン酸化を阻害するＣＸ−４９４５および様々な濃度のスタウロスポリン（ＳＴＳ）の活性を比較している。
【図３７】図３７は、マウスＰＢＭＣでのＡｋｔ−Ｓ１２９、Ａｋｔ−Ｓ４７３、およびｐ２１−Ｔ１４５のリン酸化に対する１日２回の７５ｍｇ／ｋｇ  ＣＸ−４９４５の効果を示す。
【図３８】図３８は、ＣＸ−４９４５のＡ２７８０卵巣癌細胞でのゲムシタビン−誘発性ＤＮＡ損傷への効果を実証するコメット解析の結果を示す。
【図３９Ａ】図３９Ａは、Ａ２７８０卵巣癌異種移植片にそれぞれ６０ｍｇ／ｋｇおよび１００ｍｇ／ｋｇ投与した場合のゲムシタビンおよびＣＸ−４９４５の相乗的な効果を示す。
【図３９Ｂ】図３９Ｂは、切断ＰＡＲＰの増加により示されるとおり、癌細胞アポトーシスでのゲムシタビンおよびＣＸ−４９４５の相乗的な活性を示す（上パネル）。下パネルは、腫瘍成長阻害率（ＴＧＩ）の点からのゲムシタビンおよびＣＸ−４９４５の相乗的な活性をおよびエンドポイントに達する中間日数を示す（ＴＴＥ）。
【図４０】図４０は、ＥＧＦＲとＣＫ２シグナリングとの関係を図示した図である。
【図４１】図４１は、ＣＸ−４９４５の、Ａ４３１（類表皮癌）およびＮＣＩ−Ｈ２１７０（肺癌細胞）での上皮成長因子（ＥＧＦ）で刺激したＣＫ２活性に対する効果を示す。
【図４２】図４２は、５０μＭエルロチニブと併用した１０μＭ  ＣＸ−４９４５の、ＮＣＩ−Ｈ１６５０およびＮＣＩ−Ｈ１９７５細胞でのＡｋｔおよびｒｐＳ６のリン酸化に対する効果を示す。
【図４３】図４３は、Ａ４３１類表皮癌細胞でのＣＸ−４９４５およびエルロチニブの相乗的な抗腫瘍活性を図示する。
【発明を実施するための形態】
【００７７】
詳細な説明
本発明は、増殖性疾患および／または炎症性疾患を含むＣＫ２介在性疾患のＣＫ２阻害剤による治療に対する感受性を予測するおよび／または反応性を監視するためのバイオマーカーに関する。
【００７８】
本明細書に記載のように、ＣＫ２は、多くの種類の癌細胞に関与し(表１)、最新の知見から、ＣＫ２がカスパーゼによる分解から調節タンパク質を保護することにより癌細胞でアポトーシスの強力な抑制をもたらすことが示唆される。
（表１）多数の癌に関連するＣＫ２
2013506836.tif 000003
【００７９】
本明細書に記載のように、本発明者らは、ＣＫ２α、ＣＫ２α'、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＶＥＧＦ、およびＨＩＦ−１αのｍＲＮＡ発現および／もしくはポリペプチドのレベル、ならびに単独のリン酸化レベルまたはそれぞれ総Ａｋｔ、ｐ２１、ＮＦ−κＢ、ＳＴＡＴ３、もしくはＪＡＫ２に対するＡｋｔ、ｐ２１、ＮＦ−κＢ、ＳＴＡＴ３、もしくはＪＡＫ２のリン酸化レベルのいずれかが、感受性または感受性の欠如を評価もしくは予測するおよび／または対象またはその系のＣＫ２阻害剤による治療に対する反応性を監視するバイオマーカーとして使用し得ることを実証する。
【００８０】
インターロイキン−６
実施例１〜３に示されるように、ＣＫ２阻害剤、ＣＸ−４９４５の使用は、炎症性乳癌（ＩＢＣ）および前立腺癌の患者でのＩＬ−６の濃度を有意に減少させる。さらに、実施例１１は、Ｕ２６６多発性骨髄腫細胞におけるＣＸ−４９４５による治療がＩＬ−６の生成を減少させることを示す。本出願はまた、ＣＫ２の阻害剤が、細胞培養液（ＩＣ５０約２．５μＭ）およびインビボでのＩＢＣ細胞ＳＵＭ−１４９ＰＴによるＩＬ−６の分泌を阻害し得ることを実証する。異種移植片モデルにおいて、ＣＸ−４９４５の投与により、５０ｍｇ／ｋｇを１日２回経口投与で３日間（ＰＯｘ３ｄ）、７５ｍｇ／ｋｇ経口投与（ＰＯ）で毎日または１日２回を８日間（ｘ８ｄ）投薬後でのヒトＩＬ−６血漿レベルの４０−６０％（腫瘍サイズによる）の減少を生じた。侵襲性（すなわち１ｇ重量超の）ＳＵＭ−１４９ＰＴ異種移植片が、非侵襲性の腫瘍（すなわち１ｇ重量より少ない）より高いレベルのＩＬ−６（腫瘍質量の１ｇあたり）を有意に生成することが、また見出された。
【００８１】
ＩＬ−６は、癌生物学において重要なサイトカインであり、頭頸部癌、炎症性乳癌、多発性骨髄腫、および甲状腺癌（表１）を含むさまざまな癌でのＣＫ２活性に関連している。多発性骨髄腫において、ＩＬ−６は多発性骨髄腫細胞および骨髄間質細胞（ＢＭＳＣ）によりパラクリン様式（paracrine fashion）で優勢に生成される。通常の状況下では、ＩＬ−６によりＢ細胞の分化が生じるが、多発性骨髄腫においては増殖を引きおこし、骨髄腫細胞のアポトーシスを阻害する。多発性骨髄腫細胞およびＢＭＳＣ間の相互作用が、ＩＬ−６の分泌を核酸因子−κＢ（ＮＦ−κＢ）依存経路により増強する。
【００８２】
ＩＬ−６は、多発性骨髄腫細胞でさらなる下流効果を有する。まず、ＩＬ−６はＲＡＳ−ＭＡＰＫ経路およびＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路のそれぞれによる細胞の増殖および生存を促進する。さらに、ＩＬ−６は、ＰＩ３Ｋ−Ａｋｔ経路によるデキサメタゾン誘発アポトーシスを妨げ、樹状細胞への分化を阻止し、したがって宿主免疫機能を損なう。さらに、ＩＬ−６は、血管新生を促進し、多発性骨髄腫細胞の成長および遊走を刺激し、さらにＩＬ−６分泌を増強するＶＥＧＦ（血管内皮成長因子）分泌を誘発し、樹状細胞による抗原提示を妨げる。図１を参照のこと。
【００８３】
本出願は、ＣＫ２阻害剤による治療がＩＬ−６レベルを減少させること、およびＩＬ−６分泌および活性がＣＫ２介在性疾患の顕著な特徴であることを実証するデータを提供する。したがって一実施形態では、本発明は、対象由来の生体試料でのＩＬ−６  ｍＲＮＡ発現および／またはＩＬ−６ポリペプチドレベルを決定することを含む、増殖性疾患および／または炎症性疾患などのＣＫ２介在性疾患の、ＣＫ２阻害剤による治療に対する感受性を予測する方法を提供し、この方法において、ＩＬ−６  ｍＲＮＡ発現および／またはＩＬ−６ポリペプチドのレベルの対照に対する増加が増殖性および／または炎症性疾患のＣＫ２阻害剤による治療に対する感受性を予測している。
【００８４】
本明細書中に使用される、用語「ポリペプチドレベル」は、核酸配列が良好に転写および翻訳されて、検出可能なレベルのアミノ酸配列またはタンパク質が発現および定量されるプロセスを意味する「タンパク質発現レベル」と同じ意味で使用される。
【００８５】
別の態様では、本発明は、各対象における増殖性疾患および／または炎症性疾患のＣＫ２阻害剤による治療に対する感受性を、前述の方法により予測すること、およびＣＫ２阻害剤による治療に関し、対照に対するＩＬ−６  ｍＲＮＡ発現および／またはＩＬ−６ポリペプチドレベルの増加を示す上記対象を選択することを含む、ＣＫ２阻害剤による治療に関し増殖性疾患および／または炎症性疾患などのＣＫ２介在性疾患を患う対象を選択する方法を提供する。
【００８６】
別の態様では、本発明は、上記記載の本方法により対象由来の生体試料でのＩＬ−６  ｍＲＮＡ発現および／またはＩＬ−６ポリペプチドレベルを決定すること、およびＩＬ−６  ｍＲＮＡ発現および／またはＩＬ−６ポリペプチドレベルが上昇している場合に、ＣＫ２阻害剤により対象を治療することを含む、治療を必要とする対象において増殖性疾患および／または炎症性疾患などのＣＫ２介在性疾患を治療する方法を提供する。
【００８７】
いくつかの実施形態では、上記記載の本方法は、対照に対するＩＬ−６  ｍＲＮＡ発現レベルを決定することを含む。他の実施形態では、本方法は、対照に対するＩＬ−６ポリペプチドレベルを決定することを含む。さらなる実施形態では、本方法は、対照に対するＩＬ−６  ｍＲＮＡ発現レベルおよびＩＬ−６ポリペプチドレベルを決定することを含む。
【００８８】
さらなる態様では、本発明は、（ａ）ＣＫ２阻害剤による治療前の対象由来の第一の生体試料でのＩＬ−６  ｍＲＮＡ発現および／またはＩＬ−６ポリペプチドレベルを決定すること；（ｂ）少なくともＣＫ２阻害剤による治療後の対象由来の第二の生体試料でのＩＬ−６  ｍＲＮＡ発現および／またはＩＬ−６ポリペプチドレベルを決定すること；および（ｃ）第二の生体試料のＩＬ−６  ｍＲＮＡ発現および／またはＩＬ−６ポリペプチドレベルと第一の生体試料のＩＬ−６  ｍＲＮＡ発現および／またはＩＬ−６ポリペプチドレベルを比較することを含む、対象においてＣＫ２阻害剤による治療に対するＣＫ２介在性疾患の反応性を監視する方法を提供する。これにより第一の生体試料と比較したこの第二の生体試料のＩＬ−６  ｍＲＮＡ発現および／またはＩＬ−６ポリペプチドレベルの減少が、ＣＫ２阻害剤による治療に対するＣＫ２介在性疾患の治療に積極的な反応を示している。
【００８９】
当該実施形態のいくつかにおいて、治療後のＩＬ−６レベルが減少すると、ＣＫ２阻害剤による治療がＣＫ２介在性疾患の治療に効果的であることが示唆される。他の実施形態では、治療後のＩＬ−６の増加率が未治療の対照に対し減少すると、ＣＫ２阻害剤による治療がＣＫ２介在性疾患の治療に効果的であることが示唆される。さらなる実施形態では、ＩＬ−６のレベルおよび／または増加率が対照に対し増加すると、治療が効果的でないことが示唆される。
【００９０】
さらなる態様では、本発明は、（ａ）化合物による治療前の対象でのＩＬ−６  ｍＲＮＡ発現および／またはＩＬ−６ポリペプチドレベルを解析すること；および（ｂ）化合物による治療後の対象でのＩＬ−６  ｍＲＮＡ発現および／またはＩＬ−６  ポリペプチドレベルを解析することを含む、ＣＫ２介在性増殖性疾患および／または炎症性疾患の治療に有用な化合物を同定する方法を提供する。この方法において、ＩＬ−６  ｍＲＮＡ発現および／またはＩＬ−６  ポリペプチドレベルの発現レベルの減少が薬剤の効果を示している。
【００９１】
ＩＬ−６  ｍＲＮＡおよび／またはポリペプチドレベルに関連する頻繁な実施形態では、増殖性疾患は、癌または悪性腫瘍を含む。例示的実施形態では、癌または悪性腫瘍は乳癌、炎症性乳癌（ＩＢＣ）、膵癌、前立腺癌、および多発性骨髄腫から選択される。
【００９２】
インターロイキン−８
本出願は、ＣＫ２阻害剤による治療がＩＬ−８レベルを減少させること、およびＩＬ−８分泌および活性がＣＫ２介在性疾患の顕著な特徴であることを実証するデータを提供する。したがって別の態様では、本発明は、対象由来の生体試料におけるＩＬ−８  ｍＲＮＡ発現および／またはＩＬ−８ポリペプチドレベルを決定することを含む、対象における増殖性疾患および／または炎症性疾患などのＣＫ２介在性疾患のＣＫ２阻害剤による治療に対する感受性を予測する方法を提供する。この方法において、対照に対するＩＬ−８  ｍＲＮＡ発現および／またはＩＬ−８ポリペプチドレベルの増加が、ＣＫ２阻害剤による治療に対する増殖性および／または炎症性疾患の感受性を予測している。
【００９３】
別の態様では、本発明は、上記方法によって各対象においてＣＫ２阻害剤による治療に対する増殖性疾患および／または炎症性疾患の感受性を予測すること、およびＣＫ２阻害剤による治療に関し、ＩＬ−８  ｍＲＮＡ発現および／またはＩＬ−８ポリペプチドレベルの対照に対する増加を示す対象を選択することを含む、ＣＫ２阻害剤による治療に関し、増殖性疾患および／または炎症性疾患などのＣＫ２介在性疾患を患う患者を選択する方法を提供する。
【００９４】
別の態様では、本発明は、上記記載の本方法により対象由来の生体試料でのＩＬ−８  ｍＲＮＡ発現および／またはＩＬ−８ポリペプチドレベルを決定すること、およびＩＬ−８  ｍＲＮＡ発現および／またはＩＬ−８ポリペプチドレベルが上昇している場合に、ＣＫ２阻害剤により対象を治療することを含む、治療を必要とする対象において増殖性疾患および／または炎症性疾患などのＣＫ２介在性疾患を治療する方法を提供する。
【００９５】
いくつかの実施形態では、上記記載の本方法は、対照に対するＩＬ−８  ｍＲＮＡ発現レベルを決定することを含む。他の実施形態では、本方法は、対照に対するＩＬ−８ポリペプチドレベルを決定することを含む。さらなる実施形態では、本方法は、対照に対するＩＬ−８  ｍＲＮＡ発現レベルおよびＩＬ−８ポリペプチドレベルを決定することを含む。
【００９６】
さらなる態様では、本発明は、（ａ）ＣＫ２阻害剤による治療前の対象由来の第一の生体試料でのＩＬ−８  ｍＲＮＡ発現および／またはＩＬ−８ポリペプチドレベルを決定すること；（ｂ）少なくともＣＫ２阻害剤による治療後の対象由来の第二の生体試料でのＩＬ−８  ｍＲＮＡ発現および／またはＩＬ−８ポリペプチドレベルを決定すること；および（ｃ）第二の生体試料のＩＬ−８  ｍＲＮＡ発現および／またはＩＬ−８ポリペプチドレベルと第一の生体試料のＩＬ−８  ｍＲＮＡ発現および／またはＩＬ−８ポリペプチドレベルを比較することを含む、対象においてＣＫ２阻害剤による治療に対するＣＫ２介在性疾患の反応性を監視する方法を提供する。この方法において、第一の生体試料と比較した第二の生体試料のＩＬ−８  ｍＲＮＡ発現および／またはＩＬ−８ポリペプチドレベルの減少が、ＣＫ２阻害剤による治療に対するＣＫ２介在性疾患の治療に積極的な反応を示している。
【００９７】
当該実施形態のいくつかにおいて、治療後のＩＬ−８レベルが減少すると、ＣＫ２阻害剤による治療がＣＫ２介在性疾患の治療に効果的であることが示唆される。他の実施形態では、治療後のＩＬ−８の増加率が未治療の対照に対し減少すると、ＣＫ２阻害剤による治療がＣＫ２介在性疾患の治療に効果的であることが示唆される。さらなる実施形態では、ＩＬ−８のレベルおよび／または増加率が対照に対し増加すると、治療が効果的でないことが示唆される。
【００９８】
別の態様では、本発明は、（ａ）化合物による治療前の対象でのＩＬ−８  ｍＲＮＡ発現および／またはＩＬ−８ポリペプチドレベルを解析すること；および（ｂ）化合物による治療後の対象でのＩＬ−８  ｍＲＮＡ発現および／またはＩＬ−８  ポリペプチドレベルを解析することを含む、ＣＫ２介在性増殖性疾患および／または炎症性疾患の治療に有用な化合物を同定する方法を提供する。この方法において、ＩＬ−８  ｍＲＮＡ発現および／またはＩＬ−８  ポリペプチドレベルの発現レベルの減少は薬剤の効果を示している。
【００９９】
ＩＬ−８  ｍＲＮＡおよび／またはポリペプチドレベルに関連する頻繁な実施形態では、増殖性疾患は、癌または悪性腫瘍を含む。例示的実施形態では、癌または悪性腫瘍は乳癌、炎症性乳癌（ＩＢＣ）、膵癌、前立腺癌、および多発性骨髄腫から選択される。
【０１００】
ＣＫ２αおよびＣＫ２α'
本出願は、上昇したＣＫ２αおよび／またはＣＫ２α'の発現がＣＫ２介在性疾患の顕著な特徴であることを実証するデータを提供する(例えば乳癌および多発性骨髄腫において、それぞれの増加したＣＫ２αサブユニットの発現レベルを示す実施例6および9を参照のこと)。したがっていくつかの実施形態では、バイオマーカーはＣＫ２αおよび／もしくはＣＫ２α'サブユニットまたは両方のｍＲＮＡ発現レベルならびに／またはポリペプチドレベルを含む。
【０１０１】
したがって一態様では、本発明は、対象でのＣＫ２阻害剤による治療に対する増殖性疾患および／または炎症性疾患などのＣＫ２介在性疾患の感受性を予測する方法を提供し、本方法は、以下を含む：
（ｉ）対象由来の生体試料でのＣＫ２αｍＲＮＡ発現および／またはＣＫ２αポリペプチドのレベルを決定すること（ここで対照に対するＣＫ２α  ｍＲＮＡ発現および／またはＣＫ２αポリペプチドのレベルの増加が、ＣＫ２阻害剤による治療に対するＣＫ２介在性疾患の感受性を予測する）；および／または
（ｉｉ）対象由来の生体試料でのＣＫ２α'ｍＲＮＡ発現および／またはＣＫ２α'ポリペプチドのレベルを決定すること（ここで対照に対するＣＫ２α'ｍＲＮＡ発現および／またはＣＫ２α'ポリペプチドのレベルの増加が、ＣＫ２阻害剤による治療に対するＣＫ２介在性疾患の感受性を予測する）。
【０１０２】
頻繁な実施形態では、ＣＫ２介在性疾患は増殖性疾患および／または炎症性疾患である。特定の実施形態では、ＣＫ２介在性疾患は乳癌、炎症性乳癌（ＩＢＣ）、および多発性骨髄腫から選択される。
【０１０３】
いくつかの実施形態では、上記記載の本方法は、対照に対するＣＫ２α  ｍＲＮＡ発現レベルを決定することを含む。他の実施形態では、本方法は、対照に対するＣＫ２αポリペプチドレベルを決定することを含む。さらなる実施形態では、本方法は、対照に対するＣＫ２α  ｍＲＮＡ発現のレベルおよびＣＫ２αポリペプチドのレベルを決定することを含む。
【０１０４】
いくつかの実施形態では、上記記載の本方法は、ＣＫ２α'ｍＲＮＡ発現のレベルを決定することを含む。他の実施形態では、本方法は、対照に対するＣＫ２α'ポリペプチドのレベルを決定することを含む。さらなる実施形態では、本方法は、対照に対するＣＫ２α'ｍＲＮＡ発現のレベルおよびＣＫ２α'ポリペプチドのレベルを決定することを含む。
【０１０５】
別の態様では、本発明は、上記方法によって各対象においてＣＫ２阻害剤による治療に対する増殖性疾患および／または炎症性疾患の感受性を予測すること、およびＣＫ２阻害剤による治療のためにＣＫ２α  ｍＲＮＡ発現および／またはＣＫ２αポリペプチドのレベルの増加を示す対象を選択することを含む、ＣＫ２阻害剤による治療のために、増殖性疾患および／または炎症性疾患などのＣＫ２介在性疾患を患う患者を選択する方法を提供する。
【０１０６】
さらなる態様では、本発明は上記方法によって各対象においてＣＫ２阻害剤による治療に対する増殖性疾患および／または炎症性疾患の感受性を予測すること、およびＣＫ２阻害剤による治療のために、ＣＫ２α'ｍＲＮＡ発現および／またはＣＫ２α'ポリペプチドレベルの増加を示す対象を選択することを含む、ＣＫ２阻害剤による治療のために、増殖性疾患および／または炎症性疾患などのＣＫ２介在性疾患を患う患者を選択する方法を提供する。
【０１０７】
頻繁な実施形態では、ＣＫ２介在性疾患は増殖性疾患および／または炎症性疾患である。特定の実施形態では、ＣＫ２介在性疾患は、乳癌、炎症性乳癌（ＩＢＣ）、および多発性骨髄腫から選択される。
【０１０８】
さらなる態様では、本発明は、治療を必要とする患者において増殖性疾患および／または炎症性疾患などのＣＫ２介在性疾患を治療する方法を提供し、本方法は、以下を含む：
（ｉ）請求項１の本方法により、対象由来の生体試料でのＣＫ２α  ｍＲＮＡ発現および／またはＣＫ２αポリペプチドのレベルを決定し、ＣＫ２α  ｍＲＮＡ発現および／またはＣＫ２αポリペプチドのレベルが上昇している場合に、ＣＫ２阻害剤によって対象を治療すること；および／または
（ｉｉ）上記方法により、対象由来の生体試料でのＣＫ２α'ｍＲＮＡ発現および／またはＣＫ２α'ポリペプチドのレベルを決定し、ＣＫ２α'ｍＲＮＡ発現および／またはＣＫ２α'ポリペプチドのレベルが上昇している場合に、ＣＫ２阻害剤によって対象を治療すること。
【０１０９】
本発明はまた、ＣＫ２阻害剤による治療に対する対象の感受性を予測する方法を提供し、本方法は、以下を含む：
（ｉ）対象由来の生体試料でのＣＫ２α  ｍＲＮＡ発現および／またはＣＫ２αポリペプチドのレベルを決定すること（ここで、対照に対するＣＫ２α  ｍＲＮＡ発現および／またはＣＫ２αポリペプチドのレベルの増加が、ＣＫ２阻害剤による治療に対する対象の感受性を予測する）；および／または
（ｉｉ）対象由来の生体試料でのＣＫ２α'ｍＲＮＡ発現および／またはＣＫ２α'ポリペプチドのレベルを決定すること（ここで対照に対するＣＫ２α'ｍＲＮＡ発現および／またはＣＫ２α'ポリペプチドのレベルの増加がＣＫ２阻害剤による治療に対する対象の感受性を予測する）。
【０１１０】
別の態様では、本発明は、対象由来の生体試料でのＣＫ２α  ｍＲＮＡ発現および／またはＣＫ２αポリペプチドのレベルを決定することを含む、ＣＫ２阻害剤による治療に対する対象の反応を予測する方法を提供する。この方法により、対照に対するＣＫ２α  ｍＲＮＡ発現および／またはＣＫ２αポリペプチドの増加したレベルが、ＣＫ２阻害剤する反応性を予測する。
【０１１１】
さらなる態様では、本発明は、対象由来の生体試料でのＣＫ２α'ｍＲＮＡ発現および／またはＣＫ２α'ポリペプチドのレベルを決定することを含む、ＣＫ２阻害剤による治療に対する対象の反応を予測する方法を提供する。これにより、対照に対するＣＫ２α'ｍＲＮＡ発現および／またはＣＫ２α'ポリペプチドのレベルの増加が、ＣＫ２阻害剤に対する反応性を予測する。
【０１１２】
さらなる態様では、本発明は、（ａ）ＣＫ２阻害剤による治療前の対象由来の第一の生体試料でのＣＫ２α  ｍＲＮＡ発現および／またはＣＫ２αポリペプチドのレベルを決定すること；（ｂ）少なくともＣＫ２阻害剤による治療後の対象由来の第二の生体試料でのＣＫ２α  ｍＲＮＡ発現および／またはＣＫ２αポリペプチドのレベルを決定すること；および（ｃ）第二の生体試料でのＣＫ２α  ｍＲＮＡ発現および／またはＣＫ２αポリペプチドのレベルと第一の生体試料でのＣＫ２α  ｍＲＮＡ発現および／またはＣＫ２αポリペプチドのレベルとを比較することを含む、対象でのＣＫ２阻害剤による治療に対するＣＫ２介在性疾患の反応性を監視する方法を提供する。この方法において、第一の生体試料と比較した第二の生体試料でのＣＫ２α  ｍＲＮＡ発現および／またはＣＫ２αポリペプチドのレベルの減少が、ＣＫ２阻害剤による治療に対するＣＫ２介在性疾患の治療に積極的な反応を示している。
【０１１３】
さらなる態様では、本発明は、（ａ）ＣＫ２阻害剤による治療前の対象由来の第一の生体試料でのＣＫ２α'ｍＲＮＡ発現および／またはＣＫ２α'ポリペプチドのレベルを決定すること；(ｂ）少なくともＣＫ２阻害剤による治療後の対象由来の第二の生体試料でのＣＫ２α'ｍＲＮＡ発現および／またはＣＫ２α'ポリペプチドのレベルを決定すること；および（ｃ）第二の生体試料でのＣＫ２α'ｍＲＮＡ発現および／またはＣＫ２α'ポリペプチドのレベルと第一の生体試料でのＣＫ２α'ｍＲＮＡ発現および／またはＣＫ２α'ポリペプチドのレベルとを比較することを含む、対象でのＣＫ２阻害剤による治療に対するＣＫ２介在性疾患の反応性を監視する方法を提供する。この方法において、第一の生体試料と比較した第二の生体試料でのＣＫ２α'ｍＲＮＡ発現および／またはＣＫ２α'ポリペプチドのレベルの減少が、ＣＫ２阻害剤による治療に対するＣＫ２介在性疾患の治療に積極的な反応を示している。
【０１１４】
ＣＫ２αおよびＣＫ２α'のｍＲＮＡおよび／またはポリペプチドのレベルに関する頻繁な実施形態では、増殖性疾患は癌または悪性腫瘍を含む。例示的実施形態では、癌または悪性腫瘍は、乳癌、炎症性乳癌（ＩＢＣ）、膵癌、前立腺癌、および多発性骨髄腫から選択される。
【０１１５】
Ａｋｔ−Ｓ１２９リン酸化
実施例１、５〜８、１１〜１２、および１４において示されるように、ＣＫ２阻害剤による治療は、乳癌、膵癌、および多発性骨髄腫を含む様々な細胞系でのＡｋｔ  Ｓ１２９のリン酸化を減少させた。本明細書に記載のように、Ａｋｔ−Ｓ１２９はＣＫ２がＡｋｔ／ＰＫＢをリン酸化および上方制御する際のＣＫ２特異的バイオマーカーである。したがって、本発明の特定の態様では、本方法は、生体試料、系、または対象においてセリン１２９でのＡｋｔのリン酸化状態を評価する必要がある。本明細書に記載の方法において、Ａｋｔのリン酸化状態は、ｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９ポリペプチドのレベルを単独で評価することにより決定してもよい（すなわち絶対値）。当該実施形態のいくつかにおいて、ｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９ポリペプチドのレベルは、好適な対照、例えば正常な対象からの対応する試料などに対して決定されてもよい。他の実施形態では、ｐ−ＡｋｔＳ１２９の正規化したレベルは、総Ａｋｔに対するｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９ポリペプチドのレベルを評価することにより決定されてもよく、この相対レベルは場合によっては総Ａｋｔに対するｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９のパーセントまたは比率として表してもよい。当該実施形態のいくつかにおいて、対応する対照は、正常対照での総Ａｋｔに対するｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９ポリペプチドの正規化したレベルである。
【０１１６】
本発明の特定の態様では、本方法は、ＣＫ２αおよび／もしくはＣＫ２α'のｍＲＮＡおよび／もしくはポリペプチドのレベルとｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９のリン酸化状態との関係を評価する必要がある。
【０１１７】
一つの当該態様では、本発明は、（ａ）対象由来の生体試料でのＣＫ２α'ｍＲＮＡ発現および／またはＣＫ２α'ポリペプチドのレベルを決定すること；および（ｂ）対象由来の生体試料でのリン酸化Ａｋｔ  Ｓ１２９  （ｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９）ポリペプチドのレベルを決定することを含む、対象でのＣＫ２阻害剤による治療に対する増殖性疾患および／または炎症性疾患などのＣＫ２介在性疾患の感受性を予測する方法を提供し、ＣＫ２α'ｍＲＮＡ発現および／またはＣＫ２α'ポリペプチドのレベルとｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９ポリペプチドのレベルとの間の正の相関が、ＣＫ２阻害剤による治療に対するＣＫ２介在性疾患の感受性を予測する。
【０１１８】
別の当該態様では、本発明は、上記方法によって各対象でのＣＫ２阻害剤による治療に対するＣＫ２介在性疾患の感受性を予測すること、およびＣＫ２α'ｍＲＮＡ発現および／またはＣＫ２α'ポリペプチドのレベルとｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９ポリペプチドのレベルとの間の正の相関を示す上記対象を選択することを含む、ＣＫ２阻害剤による治療に関し、増殖性疾患および／または炎症性疾患などのＣＫ２介在性疾患を患う患者を選択する方法を提供する。
【０１１９】
さらなる当該態様の一つにおいて、本発明は、上記方法によって、対象由来の生体試料でのＣＫ２α'ｍＲＮＡ発現および／またはＣＫ２α'ポリペプチドのレベルおよび対象由来の生体試料でのｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９ポリペプチドのレベルを決定すること、およびＣＫ２α'ｍＲＮＡ発現および／またはＣＫ２α'ポリペプチドのレベルとｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９ポリペプチドのレベルとの間に正の相関がある場合に、ＣＫ２阻害剤によって対象を治療することを含む、治療を必要とする対象での増殖性疾患および／または炎症性疾患などのＣＫ２介在性疾患を治療する方法を提供する。
【０１２０】
別の態様では、本発明は、（ａ）対象由来の生体試料でのＣＫ２α  ｍＲＮＡ発現および／またはＣＫ２αポリペプチドのレベルを決定すること；および（ｂ）対象由来の生体試料でのリン酸化Ａｋｔ  Ｓ１２９（ｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９）ポリペプチドのレベルを決定することを含む、対象でのＣＫ２阻害剤による治療に対する増殖性疾患および／または炎症性疾患などのＣＫ２介在性疾患の感受性を予測する方法を提供し、ＣＫ２α  ｍＲＮＡ発現および／またはＣＫ２αポリペプチドのレベルとｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９ポリペプチドのレベルとの間の正の相関が、ＣＫ２阻害剤による治療に対するＣＫ２介在性疾患の感受性を予測する。
【０１２１】
別の当該態様では、本発明は、上記方法によって各対象においてＣＫ２阻害剤による治療に対する増殖性疾患および／または炎症性疾患の感受性を予測すること、およびＣＫ２α  ｍＲＮＡ発現および／またはＣＫ２αポリペプチドのレベルとｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９ポリペプチドのレベルとの間に正の相関を示す上記対象を選択することを含む、ＣＫ２阻害剤による治療に関し、増殖性疾患および／または炎症性疾患などのＣＫ２介在性疾患を患う患者を選択する方法を提供する。
【０１２２】
さらなる当該態様では、本発明は、上記方法によって、対象由来の生体試料でのＣＫ２α  ｍＲＮＡ発現および／またはＣＫ２αポリペプチドのレベルおよび対象由来の生体試料でのｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９ポリペプチドのレベルを決定すること、およびＣＫ２α  ｍＲＮＡ発現および／またはＣＫ２αポリペプチドのレベルとｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９ポリペプチドとの間に正の相関がある場合にＣＫ２阻害剤によって対象を治療することを含む、治療を必要とする対象での増殖性疾患および／または炎症性疾患などのＣＫ２介在性疾患を治療する方法を提供する。
【０１２３】
別の態様では、本発明は、（ａ）対象由来の生体試料でのＣＫ２α'ｍＲＮＡ発現および／またはＣＫ２α'ポリペプチドのレベルを決定すること；および（ｂ）対象由来の生体試料での総Ａｋｔポリペプチドのレベルに対するリン酸化Ａｋｔ  Ｓ１２９（ｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９）ポリペプチドのレベルを決定することを含む、対象でのＣＫ２阻害剤による治療に対する増殖性疾患および／または炎症性疾患などのＣＫ２介在性疾患の感受性を予測する方法を提供し、ＣＫ２α'ｍＲＮＡ発現および／またはＣＫ２α'ポリペプチドのレベルとｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９ポリペプチドの正規化したレベルとの間の正の相関がＣＫ２阻害剤による治療に対するＣＫ２介在性疾患の感受性を予測する。
【０１２４】
別の当該態様では、本発明は、本方法によって、各対象でのＣＫ２阻害剤による治療に対するＣＫ２介在性疾患の感受性を予測すること、およびＣＫ２α'ｍＲＮＡ発現および／またはＣＫ２α'ポリペプチドのレベルとｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９ポリペプチドの正規化したレベルとの間に正の相関を示す上記対象を選択することを含む、ＣＫ２阻害剤による治療に関し、増殖性疾患および／または炎症性疾患などのＣＫ２介在性疾患を患う患者を選択する方法を提供する。
【０１２５】
さらなる当該態様では、本発明は、上記方法によって対象由来の生体試料でのＣＫ２α'ｍＲＮＡ発現および／またはＣＫ２α'ポリペプチドのレベルを決定し、対象由来の生体試料での総Ａｋｔポリペプチドのレベルに対するｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９ポリペプチドのレベルを決定すること、およびＣＫ２α'ｍＲＮＡ発現および／またはＣＫ２α'ポリペプチドのレベルとｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９ポリペプチドの正規化したレベルとの間に正の相関がある場合にＣＫ２阻害剤によって対象を治療することを含む、治療を必要とする対象での増殖性疾患および／または炎症性疾患などのＣＫ２介在性疾患を治療する方法を提供する。
【０１２６】
本発明の他の態様では、本方法は、系または対象でのｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９ポリペプチドのレベルを決定する必要がある。いくつかの実施形態では、ｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９ポリペプチドのレベルは、ｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９ポリペプチドの正規化したレベルを提供するために総Ａｋｔポリペプチドに対応して決定される。他の実施形態では、ｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９ポリペプチドのレベルは、単独で決定される。ｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９ポリペプチドの絶対レベルおよび正規化したレベルの両方が、正常な系または対象由来の対応する絶対的な対照または正規化した対照と比較され得る。
【０１２７】
したがって一つの態様では、本発明は、対象由来の生体試料でのｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９ポリペプチドのレベルを決定することを含む、対象でのＣＫ２阻害剤による治療に対する増殖性疾患および／または炎症性疾患の感受性を予測する方法を提供し、対照に対するｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９ポリペプチドのレベルの増加が、ＣＫ２阻害剤による治療に対する増殖性および／または炎症性の疾患の感受性を予測する。
【０１２８】
別の態様では、本発明は、上記方法によって、各対象においてＣＫ２阻害剤による治療に対する増殖性疾患および／または炎症性疾患の感受性を予測すること、およびＣＫ２阻害剤による治療に関してｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９ポリペプチドの増加したレベルを示す対象を選択することを含む、ＣＫ２阻害剤による治療に関し、増殖性疾患および／または炎症性疾患を患う対象を選択する方法を提供する。
【０１２９】
さらなる態様では、本発明は、上記方法によって、対象由来の生体試料でのｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９ポリペプチドのレベルを決定すること、およびｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９ポリペプチドのレベルが上昇している場合にＣＫ２阻害剤によって対象を治療することを含む、治療を必要とする対象で増殖性疾患および／または炎症性疾患を治療する方法を提供する。
【０１３０】
別の態様では、本発明は、（ａ）ＣＫ２阻害剤による治療前の対象由来の第一の生体試料でのｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９ポリペプチドのレベルを決定すること；（ｂ）少なくともＣＫ２阻害剤による治療後の対象由来の第二の生体試料でのｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９ポリペプチドのレベル決定すること；および（ｃ）第二の生体試料でのｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９ポリペプチドのレベルと第一の生体試料でのｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９ポリペプチドのレベルとを比較することを含む、対象でのＣＫ２阻害剤による治療に対するＣＫ２介在性疾患の反応性を監視する方法を提供し、第一の生体試料と比較した第二の生体試料でのｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９ポリペプチドのレベルの減少が、ＣＫ２阻害剤による治療に対し積極的な反応を示している。
【０１３１】
別の態様では、本発明は、対象由来の生体試料でのｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９ポリペプチドのレベルを決定することを含む、ＣＫ２阻害剤による治療に対する対象の反応を予測する方法を提供し、対照に対して増加したｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９ポリペプチドのレベルがＣＫ２阻害剤に対する反応性を予測する。
【０１３２】
さらなる実施形態では、ｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９ポリペプチドの正規化したレベルは、バイオマーカーとして使用される。ｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９ポリペプチドの正規化したレベルは、試料または対象での総Ａｋｔポリペプチドのレベルに対してｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９ポリペプチドのレベルを評価することにより決定され得る。
【０１３３】
当該態様の一つにおいて、本発明は、対象由来の生体試料での総Ａｋｔポリペプチドのレベルに対するｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９ポリペプチドのレベルを決定することを含む、対象でのＣＫ２阻害剤による治療に対する増殖性疾患および／または炎症性疾患の感受性を予測する方法を提供し、対応する対照に対するｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９ポリペプチドの正規化したレベルの増加が、ＣＫ２阻害剤による治療に対する増殖性および／または炎症性疾患の感受性を予測する。
【０１３４】
別の当該態様では、本発明は、上記方法によって、各対象でのＣＫ２阻害剤による治療に対する増殖性疾患および／または炎症性疾患の感受性を予測すること、およびＣＫ２阻害剤による治療に関し、総Ａｋｔポリペプチドのレベルに対して増加したｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９ポリペプチドのレベルを示す上記対象を選択することを含む、ＣＫ２阻害剤による治療に関し、増殖性疾患および／または炎症性疾患を患う対象を選択する方法を提供する。
【０１３５】
別の当該態様では、本発明は、上記方法によって、対象由来の生体試料での総Ａｋｔポリペプチドのレベルに対するｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９ポリペプチドのレベルを決定すること、および総Ａｋｔポリペプチドのレベルに対するｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９ポリペプチドのレベルが上昇している場合に、ＣＫ２阻害剤によって対象を治療することを含む、治療を必要とする対象で増殖性疾患および／または炎症性疾患を治療する方法を提供する。
【０１３６】
さらなる態様では、本発明は、（ａ）ＣＫ２阻害剤による治療前の対象由来の第一の生体試料での総Ａｋｔポリペプチドのレベルに対するｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９ポリペプチドのレベルを決定すること；（ｂ）少なくともＣＫ２阻害剤による治療後の対象由来の第二の生体試料での総Ａｋｔポリペプチドのレベルに対するｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９ポリペプチドのレベルを決定すること；および（ｃ）第二の生体試料でのｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９ポリペプチドの正規化したレベルと第一の生体試料でのｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９ポリペプチドの正規化したレベルとを比較することを含む、対象でのＣＫ２阻害剤による治療に対するＣＫ２介在性疾患の反応性を監視する方法を提供し、この方法において、第一の生体試料と比較した第二の生体試料でのｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９ポリペプチドの正規化したレベルの減少がＣＫ２阻害剤による治療に対する積極的な反応を示している。
【０１３７】
別の態様では、本発明は、（ａ）化合物による治療前の対象でのｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９ポリペプチドのレベルを解析すること；および（ｂ）化合物による治療後の対象でのｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９ポリペプチドのレベルを解析することを含む、ＣＫ２介在性増殖性疾患および／または炎症性疾患の治療に有用な化合物を同定する方法を提供する。この方法において、ｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９ポリペプチドのレベルの減少は薬剤の効果を示している。
【０１３８】
別の態様では、本発明は、（ａ）化合物による治療前の対象での総Ａｋｔポリペプチドのレベルに対するｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９ポリペプチドのレベルを解析すること；および（ｂ）化合物による治療後の対象での総Ａｋｔポリペプチドのレベルに対するｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９ポリペプチドのレベルを解析することを含む、ＣＫ２介在性増殖性疾患および／または炎症性疾患の治療に有用な化合物を同定する方法を提供する。この方法において、ｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９ポリペプチドの正規化したレベルの減少は薬剤の効果を示している。
【０１３９】
ｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９ポリペプチドのレベルに関する頻繁な実施形態では、増殖性疾患は癌または悪性腫瘍を含む。例示的実施形態では、癌または悪性腫瘍は、乳癌、炎症性乳癌（ＩＢＣ)、膵癌、前立腺癌、および多発性骨髄腫から選択される。
【０１４０】
Ａｋｔ−Ｓ４７３リン酸化
実施例１、８、１１〜１２、および１４において示されるように、ＣＫ２阻害剤による治療は、乳癌、膵癌、および多発性骨髄腫を含む様々な細胞系でのＡｋｔ  Ｓ４７３のリン酸化を減少させた。したがって、本発明の特定の態様では、本方法は、生体試料、系、または対象においてセリン４７３でのＡｋｔのリン酸化状態を評価する必要がある。本明細書に記載の方法において、Ａｋｔのリン酸化状態は、ｐ−Ａｋｔ  Ｓ４７３ポリペプチドのレベルを単独で評価することにより決定してもよい（すなわち絶対値）。当該実施形態のいくつかにおいて、ｐ−Ａｋｔ  Ｓ４７３ポリペプチドのレベルは、好適な対照、例えば正常な対象からの対応する試料などに対して決定されてもよい。他の実施形態では、ｐ−Ａｋｔ  Ｓ４７３の正規化したレベルは、総Ａｋｔに対するｐ−Ａｋｔ  Ｓ４７３ポリペプチドのレベルを評価することにより決定されてもよく、この相対レベルは場合によっては総Ａｋｔに対するｐ−Ａｋｔ  Ｓ４７３のパーセントまたは比率として表してもよい。当該実施形態のいくつかにおいて、対応する対照は、正常対照での総Ａｋｔに対するｐ−Ａｋｔ  Ｓ４７３ポリペプチドの正規化したレベルである。
【０１４１】
当該態様の一つにおいて、本発明は、（ａ）ＣＫ２阻害剤による治療前の対象由来の第一の生体試料でのｐ−Ａｋｔ  Ｓ４７３ポリペプチドのレベルを決定すること；（ｂ）少なくともＣＫ２阻害剤による治療後の対象由来の第二の生体試料でのｐ−Ａｋｔ  Ｓ４７３ポリペプチドのレベル決定すること；および（ｃ）第二の生体試料でのｐ−Ａｋｔ  Ｓ４７３ポリペプチドのレベルと第一の生体試料でのｐ−Ａｋｔ  Ｓ４７３ポリペプチドのレベルとを比較することを含む、対象でのＣＫ２阻害剤による治療に対するＣＫ２介在性疾患の反応性を監視する方法を提供し、第一の生体試料と比較した第二の生体試料でのｐ−Ａｋｔ  Ｓ４７３ポリペプチドのレベルの減少が、ＣＫ２阻害剤による治療に対し積極的な反応を示している。別の当該態様では、本発明は、（ａ）ＣＫ２阻害剤による治療前の対象由来の第一の生体試料での総Ａｋｔポリペプチドのレベルに対するｐ−Ａｋｔ  Ｓ４７３ポリペプチドのレベルを決定すること；（ｂ）少なくともＣＫ２阻害剤による治療後の対象由来の第二の生体試料での総Ａｋｔポリペプチドのレベルに対するｐ−Ａｋｔ  Ｓ４７３ポリペプチドのレベルを決定すること；および（ｃ）第二の生体試料でのｐ−Ａｋｔ  Ｓ４７３ポリペプチドの正規化したレベルと第一の生体試料でのｐ−Ａｋｔ  Ｓ４７３ポリペプチドの正規化したレベルとを比較することを含む、対象でのＣＫ２阻害剤による治療に対するＣＫ２介在性疾患の反応性を監視する方法を提供し、この方法において、第一の生体試料と比較した第二の生体試料でのｐ−Ａｋｔ  Ｓ４７３ポリペプチドの正規化したレベルの減少がＣＫ２阻害剤による治療に対する積極的な反応を示している。
【０１４２】
別の態様では、本発明は、対象由来の生体試料でのｐ−Ａｋｔ  Ｓ４７３ポリペプチドのレベルを決定することを含む、対象でのＣＫ２阻害剤による治療に対する増殖性疾患および／または炎症性疾患などのＣＫ２介在性疾患の感受性を予測する方法を提供し、この方法において、対照に対するｐ−Ａｋｔ  Ｓ４７３ポリペプチドのレベルの増加は、ＣＫ２阻害剤による治療に対する増殖性および／または炎症性疾患の感受性を予測する。
【０１４３】
さらに別の態様では、本発明は、対象由来の生体試料での総Ａｋｔポリペプチドのレベルに対するｐ−Ａｋｔ  Ｓ４７３ポリペプチドのレベルを決定することを含む、対象でのＣＫ２阻害剤による治療に対する増殖性疾患および／または炎症性疾患などのＣＫ２介在性疾患の感受性を予測する方法を提供し、この方法において、対応する対照に対するｐ−Ａｋｔ  Ｓ４７３ポリペプチドの正規化したレベルの増加は、ＣＫ２阻害剤による治療に対するＣＫ２介在性疾患の感受性を予測している。
【０１４４】
別の当該態様では、本発明は、上記方法の１つによって、各対象でのＣＫ２阻害剤による治療に対するＣＫ２介在性疾患の感受性を予測すること、およびＣＫ２阻害剤による治療に関し、ｐ−Ａｋｔ  Ｓ４７３ポリペプチドのレベルの増加またはｐ−Ａｋｔ  Ｓ４７３ポリペプチドの正規化したレベルの増加を示す上記対象を選択することを含む、ＣＫ２阻害剤による治療に関し、増殖性疾患および／または炎症性疾患などのＣＫ２介在性疾患を患う対象を選択する方法を提供する。
【０１４５】
別の態様では、本発明は、上記方法によって、対象由来の生体試料でのｐ−Ａｋｔ  Ｓ４７３ポリペプチドのレベルを決定すること、およびｐ−Ａｋｔ  Ｓ４７３ポリペプチドのレベルが上昇している場合に、ＣＫ２阻害剤によって対象を治療することを含む、治療を必要とする対象での増殖性疾患および／または炎症性疾患などのＣＫ２介在性疾患を治療する方法を提供する。
【０１４６】
別の態様では、本発明は、対象由来の生体試料でのｐ−Ａｋｔ  Ｓ４７３ポリペプチド単独のレベル、または総Ａｋｔポリペプチドのレベルに対するレベルを決定することを含む、ＣＫ２阻害剤による治療に対する対象の反応を予測する方法を提供し、この方法において、対応する対照に対する絶対的レベルまたは正規化したレベルのｐ−Ａｋｔ  Ｓ４７３ポリペプチドの増加が、ＣＫ２阻害剤に対する反応性を予測する。
【０１４７】
さらなる態様では、本発明は、（ａ）化合物による治療前の対象でのｐ−Ａｋｔ  Ｓ４７３ポリペプチドのレベルを解析すること、；および（ｂ）化合物による治療後の対象でのｐ−Ａｋｔ  Ｓ４７３ポリペプチドのレベルを解析することを含む、増殖性疾患および／または炎症性疾患などのＣＫ２介在性疾患の治療に有用な化合物を同定する方法を提供し、この方法において、ｐ−Ａｋｔ  Ｓ４７３ポリペプチドのレベルの減少が薬剤の効果を示している。
【０１４８】
なお別の態様では、本発明は、（ａ）化合物による治療前の対象での総Ａｋｔポリペプチドに対するｐ−Ａｋｔ  Ｓ４７３ポリペプチドのレベルを解析すること；および（ｂ）化合物による治療後の対象での総Ａｋｔポリペプチドに対するｐ−Ａｋｔ  Ｓ４７３ポリペプチドのレベルを解析することを含む、増殖性疾患および／または炎症性疾患などのＣＫ２介在性疾患の治療に有用な化合物を同定する方法を提供し、この方法において、ｐ−Ａｋｔ  Ｓ４７３ポリペプチドの正規化したレベルの減少が薬剤の効果を示している。
【０１４９】
ｐ−Ａｋｔ  Ｓ４７３ポリペプチドレベルに関する頻繁な実施形態では、増殖性疾患は癌または悪性腫瘍を含む。例示的実施形態では、癌または悪性腫瘍は、乳癌、炎症性乳癌（ＩＢＣ）、膵癌、前立腺癌、および多発性骨髄腫から選択される。
【０１５０】
ｐ２１−Ｔ１４５リン酸化
実施例１および８、１１〜１２、および、１４において示されるように、ＣＫ２阻害剤による治療は、乳癌および膵癌を含む様々な細胞系でのｐ２１  Ｔ１４５のリン酸化を減少させた。したがって、本発明の特定の態様では、本方法は、生体試料、系、または対象においてトレオニン１４５（ｐ−ｐ２１  Ｔ１４５）でのｐ２１のリン酸化状態を評価する必要がある。本明細書に記載の方法において、ｐ２１のリン酸化状態は、ｐ−ｐ２１  Ｔ１４５ポリペプチドのレベルを単独で評価することにより決定してもよい（すなわち絶対値）。当該実施形態のいくつかにおいて、ｐ−ｐ２１  Ｔ１４５ポリペプチドのレベルは、好適な対照、例えば正常な対象からの対応する試料などに対して決定されてもよい。他の実施形態では、ｐ−ｐ２１  Ｔ１４５の正規化したレベルは、総ｐ２１に対するｐ−ｐ２１  Ｔ１４５ポリペプチドのレベルを評価することにより決定されてもよく、この相対レベルは場合によっては総ｐ２１に対するｐ−ｐ２１  Ｔ１４５のパーセントまたは比率として表してもよい。当該実施形態のいくつかにおいて、対応する対照は、正常対照での総ｐ２１に対するｐ−ｐ２１  Ｔ１４５ポリペプチドの正規化したレベルである。
【０１５１】
当該態様の一つにおいて、本発明は、（ａ）ＣＫ２阻害剤による治療前の対象由来の第一の生体試料でのｐ−ｐ２１  Ｔ１４５ポリペプチドのレベルを決定すること；（ｂ）少なくともＣＫ２阻害剤による治療後の対象由来の第二の生体試料でのｐ−ｐ２１  Ｔ１４５ポリペプチドのレベル決定すること；および（ｃ）第二の生体試料でのｐ−ｐ２１  Ｔ１４５ポリペプチドのレベルと第一の生体試料でのｐ−ｐ２１  Ｔ１４５ポリペプチドのレベルとを比較することを含む、対象でのＣＫ２阻害剤による治療に対するＣＫ２介在性疾患の反応性を監視する方法を提供し、第一の生体試料と比較した第二の生体試料でのｐ−ｐ２１  Ｔ１４５ポリペプチドのレベルの減少が、ＣＫ２阻害剤による治療に対し積極的な反応を示している。
【０１５２】
別の当該態様では、本発明は、（ａ）ＣＫ２阻害剤による治療前の対象由来の第一の生体試料での総ｐ２１ポリペプチドのレベルに対するｐ−ｐ２１  Ｔ１４５ポリペプチドのレベルを決定すること；（ｂ）少なくともＣＫ２阻害剤による治療後の対象由来の第二の生体試料での総ｐ２１ポリペプチドのレベルに対するｐ−ｐ２１  Ｔ１４５ポリペプチドのレベルを決定すること；および（ｃ）第二の生体試料でのｐ−ｐ２１  Ｔ１４５ポリペプチドの正規化したレベルと第一の生体試料でのｐ−ｐ２１  Ｔ１４５ポリペプチドの正規化したレベルとを比較することを含む、対象でのＣＫ２阻害剤による治療に対するＣＫ２介在性疾患の反応性を監視する方法を提供し、この方法において、第一の生体試料と比較した第二の生体試料でのｐ−ｐ２１  Ｔ１４５ポリペプチドの正規化したレベルの減少がＣＫ２阻害剤による治療に対する積極的な反応を示している。
【０１５３】
さらなる態様では、本発明は、対象由来の生体試料でのｐ−ｐ２１  Ｔ１４５ポリペプチドのレベルを決定することを含む、対象でのＣＫ２阻害剤による治療に対する増殖性疾患および／または炎症性疾患などのＣＫ２介在性疾患の感受性を予測する方法を提供し、この方法において、対照に対するｐ−ｐ２１  Ｔ１４５ポリペプチドのレベルの増加は、ＣＫ２阻害剤による治療に対するＣＫ２介在性疾患の感受性を予測する。
【０１５４】
別の態様では、本発明は、対象由来の生体試料での総ｐ２１ポリペプチドのレベルに対するｐ−ｐ２１  Ｔ１４５ポリペプチドのレベルを決定することを含む、対象でのＣＫ２阻害剤による治療に対する増殖性疾患および／または炎症性疾患などのＣＫ２介在性疾患の感受性を予測する方法を提供し、この方法において、対応する対照に対するｐ−ｐ２１  Ｔ１４５ポリペプチドの正規化したレベルの増加は、ＣＫ２阻害剤による治療に対するＣＫ２介在性疾患の感受性を予測している。
【０１５５】
さらに別の態様では、本発明は、上記方法の１つによって、各対象でのＣＫ２阻害剤による治療に対するＣＫ２介在性疾患の感受性を予測すること、およびＣＫ２阻害剤による治療に関しｐ−ｐ２１  Ｔ１４５ポリペプチドのレベルの増加を示す上記対象を選択することを含む、ＣＫ２阻害剤による治療に関し、増殖性疾患および／または炎症性疾患などのＣＫ２介在性疾患を患う対象を選択する方法を提供する。
【０１５６】
なお別の態様では、本発明は、ＣＫ２阻害剤による治療に対するＣＫ２介在性疾患の感受性を予測すること、およびＣＫ２阻害剤による治療に関し、ｐ−ｐ２１  Ｔ１４５ポリペプチドの正規化したレベルの増加を示す上記対象を選択することを含む、ＣＫ２阻害剤による治療に関し、増殖性疾患および／または炎症性疾患などのＣＫ２介在性疾患を患う対象を選択する方法を提供する。
【０１５７】
さらなる態様では、本発明は、対象由来の生体試料でのｐ−ｐ２１  Ｔ１４５ポリペプチドのレベルを決定することを含む、ＣＫ２阻害剤による治療に対する対象の反応を予測する方法を提供し、この方法において、対照に対するｐ−ｐ２１  Ｔ１４５ポリペプチドのレベルの増加が、ＣＫ２阻害剤に対する反応性を予測する。
【０１５８】
別の態様では、本発明は上記方法の１つによって、対象由来の生体試料でのｐ−ｐ２１  Ｔ１４５ポリペプチドのレベルを決定すること、およびｐ−ｐ２１  Ｔ１４５ポリペプチドのレベルが上昇している場合に、ＣＫ２阻害剤によって対象を治療することを含む、治療を必要とする対象での増殖性疾患および／または炎症性疾患などのＣＫ２介在性疾患を治療する方法を提供する。
【０１５９】
別の態様では、本発明は、対象由来の生体試料での総ｐ２１ポリペプチドのレベルに対するｐ−ｐ２１  Ｔ１４５ポリペプチドのレベルを決定することを含む、ＣＫ２阻害剤による治療に対する対象の反応を予測する方法を提供し、この方法において、対応する対照に対するｐ−ｐ２１  Ｔ１４５ポリペプチドの正規化したレベルの増加がＣＫ２阻害剤に対する反応性を予測する。
【０１６０】
別の態様では、本発明は、（ａ）化合物による治療前の対象での総ｐ２１ポリペプチドに対するｐ−ｐ２１  Ｔ１４５ポリペプチドのレベルを解析すること；および（ｂ）化合物による治療後の対象での総ｐ２１ポリペプチドに対するｐ−ｐ２１  Ｔ１４５ポリペプチドのレベルを解析することを含む、ＣＫ２介在性増殖性疾患および／または炎症性疾患の治療に有用な化合物を同定する方法を提供し、この方法において、ｐ−ｐ２１  Ｔ１４５ポリペプチドの正規化したレベルの減少が薬剤の効果を示している。
【０１６１】
ｐ−ｐ２１  Ｔ１４５ポリペプチドレベルに関する頻繁な実施形態では、増殖性疾患は癌または悪性腫瘍を含む。例示的実施形態では、癌または悪性腫瘍は乳癌、炎症性乳癌（ＩＢＣ）、膵癌、および多発性骨髄腫から選択される。
【０１６２】
ＮＦ−κＢ  Ｓ５２９リン酸化
実施例１１に示すように、ＣＫ２阻害剤による治療は様々な多発性骨髄腫細胞系でのＮＦ−κＢ  Ｓ５２９のリン酸化を減少させた。したがって本発明の特定の態様では、本方法は生体試料、系または対象でのセリン５２９でのＮＦ−κＢのリン酸化を評価する必要がある。本明細書に記載の方法において、ＮＦ−κＢのリン酸化状態は、ｐ−ＮＦ−κＢ  Ｓ５２９ポリペプチドのレベルを単独で評価することにより決定し得る（すなわち絶対値）。当該実施形態のいくつかにおいて、ｐ−ＮＦ−κＢ  Ｓ５２９ポリペプチドのレベルは、正常な対象からの対応する試料などの好適な対照に相対して決定してもよい。他の実施形態では、ｐ−ＮＦ−κＢ  Ｓ５２９の正規化したレベルは、総ＮＦ−κＢに対してｐ−ＮＦ−κＢ  Ｓ５２９ポリペプチドのレベルを評価することによって決定してもよく、この相対レベルは、場合によっては総ＮＦ−κＢに対するｐ−ＮＦ−κＢ  Ｓ５２９のパーセントまたは比率として表してもよい。当該実施形態のいくつかにおいて、対応する対照は、正常対照での総ＮＦ−κＢに対するｐ−ＮＦ−κＢ  Ｓ５２９ポリペプチドの正規化したレベルである。
【０１６３】
当該態様の一つにおいて、本発明は、（ａ）ＣＫ２阻害剤による治療前の対象由来の第一の生体試料でのｐ−ＮＦ−κＢ  Ｓ５２９ポリペプチドのレベルを決定すること；（ｂ）少なくともＣＫ２阻害剤による治療後の対象由来の第二の生体試料でのｐ−ＮＦ−κＢ  Ｓ５２９ポリペプチドのレベル決定すること；および（ｃ）第二の生体試料でのｐ−ＮＦ−κＢ  Ｓ５２９ポリペプチドのレベルと第一の生体試料でのｐ−ＮＦ−κＢ  Ｓ５２９ポリペプチドのレベルとを比較することを含む、対象でのＣＫ２阻害剤による治療に対するＣＫ２介在性疾患の反応性を監視する方法を提供し、第一の生体試料と比較した第二の生体試料でのｐ−ＮＦ−κＢ  Ｓ５２９ポリペプチドのレベルの減少が、ＣＫ２阻害剤による治療に対し積極的な反応を示している。
【０１６４】
別の当該態様では、本発明は、（ａ）ＣＫ２阻害剤による治療前の対象由来の第一の生体試料での総ＮＦ−κＢポリペプチドのレベルに対するｐ−ＮＦ−κＢ  Ｓ５２９ポリペプチドのレベルを決定すること；（ｂ）少なくともＣＫ２阻害剤による治療後の対象由来の第二の生体試料での総ＮＦ−κＢポリペプチドのレベルに対するｐ−ＮＦ−κＢ  Ｓ５２９ポリペプチドのレベルを決定すること；および（ｃ）第二の生体試料でのｐ−ＮＦ−κＢ  Ｓ５２９ポリペプチドの正規化したレベルと第一の生体試料でのｐ−ＮＦ−κＢ  Ｓ５２９ポリペプチドの正規化したレベルとを比較することを含む、対象でのＣＫ２阻害剤による治療に対するＣＫ２介在性疾患の反応性を監視する方法を提供し、この方法において、第一の生体試料と比較した第二の生体試料でのｐ−ＮＦ−κＢ  Ｓ５２９ポリペプチドの正規化したレベルの減少がＣＫ２阻害剤による治療に対する積極的な反応を示している。
【０１６５】
別の態様では、本発明は、対象由来の生体試料でのｐ−ＮＦ−κＢ  Ｓ５２９ポリペプチドのレベルを決定することを含む、対象でのＣＫ２阻害剤による治療に対する増殖性疾患および／または炎症性疾患などのＣＫ２介在性疾患の感受性を予測する方法を提供し、この方法において、対照に対するｐ−ＮＦ−κＢ  Ｓ５２９ポリペプチドのレベルの増加は、ＣＫ２阻害剤による治療に対する増殖性および／または炎症性疾患の感受性を予測する。
【０１６６】
さらに別の態様では、本発明は、対象由来の生体試料での総ＮＦ−κＢポリペプチドのレベルに対するｐ−ＮＦ−κＢ  Ｓ５２９ポリペプチドのレベルを決定することを含む、対象でのＣＫ２阻害剤による治療に対する増殖性疾患および／または炎症性疾患などのＣＫ２介在性疾患の感受性を予測する方法を提供し、この方法において、対応する対照に対するｐ−ＮＦ−κＢ  Ｓ５２９ポリペプチドの正規化したレベルの増加は、ＣＫ２阻害剤による治療に対するＣＫ２介在性疾患の感受性を予測している。
【０１６７】
別の当該態様では、本発明は、各対象でのＣＫ２阻害剤による治療に対するＣＫ２介在性疾患の感受性を予測すること、およびＣＫ２阻害剤による治療に関しｐ−ＮＦ−κＢ  Ｓ５２９ポリペプチドのレベルの増加またはｐ−ＮＦ−κＢ  Ｓ５２９ポリペプチドの正規化したレベルの増加を示す上記対象を選択することを含む、ＣＫ２阻害剤による治療に関し、増殖性疾患および／または炎症性疾患などのＣＫ２介在性疾患を患う対象を選択する方法を提供する。
【０１６８】
別の態様では、本発明は上記方法の１つによって、対象由来の生体試料でのｐ−ＮＦ−κＢ  Ｓ５２９ポリペプチドのレベルを決定すること、およびｐ−ＮＦ−κＢ  Ｓ５２９ポリペプチドのレベルが上昇している場合に、ＣＫ２阻害剤によって対象を治療することを含む、治療を必要とする対象での増殖性疾患および／または炎症性疾患などのＣＫ２介在性疾患を治療する方法を提供する。
【０１６９】
別の態様では、本発明は、対象由来の生体試料での総ＮＦ−κＢポリペプチドのレベルに対するｐ−ＮＦ−κＢ  Ｓ５２９ポリペプチドのレベルを決定することを含む、ＣＫ２阻害剤による治療に対する対象の反応を予測する方法を提供し、この方法において、対応する対照に対するｐ−ＮＦ−κＢ  Ｓ５２９ポリペプチドの正規化したレベルの増加がＣＫ２阻害剤に対する反応性を予測する。
【０１７０】
さらなる態様では、本発明は、（ａ）化合物による治療前の対象でのｐ−ＮＦ−κＢ  Ｓ５２９ポリペプチドのレベルを解析すること；および（ｂ）化合物による治療後の対象でのｐ−ＮＦ−κＢ  Ｓ５２９ポリペプチドのレベルを解析することを含む、増殖性疾患および／または炎症性疾患などのＣＫ２介在性疾患の治療に有用な化合物を同定する方法を提供し、この方法において、ｐ−ＮＦ−κＢ  Ｓ５２９ポリペプチドのレベルの減少が、薬剤の効果を示している。
【０１７１】
なお別の態様では、本発明は、（ａ）化合物による治療前の対象での総ＮＦ−κＢポリペプチドに対するｐ−ＮＦ−κＢ  Ｓ５２９ポリペプチドのレベルを解析すること；および（ｂ）化合物による治療後の対象での総ＮＦ−κＢポリペプチドに対するｐ−ＮＦ−κＢ  Ｓ５２９ポリペプチドのレベルを解析することを含む、増殖性疾患および／または炎症性疾患などのＣＫ２介在性疾患の治療に有用な化合物を同定する方法を提供し、この方法において、ｐ−ＮＦ−κＢ  Ｓ５２９ポリペプチドの正規化したレベルの減少が、薬剤の効果を示している。
【０１７２】
ｐ−ＮＦ−κＢ  Ｓ５２９ポリペプチドのレベルに関する頻繁な実施形態では、増殖性疾患は癌または悪性腫瘍を含む。例示的実施形態では、癌または悪性腫瘍は多発性骨髄腫である。
【０１７３】
ＳＴＡＴ３−Ｙ７０５リン酸化
実施例１１に示すように、ＣＫ２阻害剤による治療は様々な多発性骨髄腫細胞系でのＳＴＡＴ３  Ｙ７０５のリン酸化を減少させた。したがって本発明の特定の態様では、本方法は生体試料、系または対象でのチロシン７０５でのＳＴＡＴ３のリン酸化を評価する必要がある。本明細書に記載の方法において、ＳＴＡＴ３のリン酸化状態は、ｐ−ＳＴＡＴ３  Ｙ７０５ポリペプチドのレベルを単独で評価することにより決定し得る（すなわち絶対値）。当該実施形態のいくつかにおいて、ｐ−ＳＴＡＴ３  Ｙ７０５ポリペプチドのレベルは、正常な対象からの対応する試料などの好適な対照に相対して決定してもよい。他の実施形態では、ｐ−ＳＴＡＴ３  Ｙ７０５の正規化したレベルは、総ＳＴＡＴ３に対してｐ−ＳＴＡＴ３  Ｙ７０５ポリペプチドのレベルを評価することによって決定してもよく、この相対レベルは、場合によっては総ＳＴＡＴ３に対するｐ−ＳＴＡＴ３  Ｙ７０５のパーセントまたは比率として表してもよい。当該実施形態のいくつかにおいて、対応する対照は、正常対照での総ＳＴＡＴ３に対するｐ−ＳＴＡＴ３  Ｙ７０５ポリペプチドの正規化したレベルである。
【０１７４】
当該態様の一つにおいて、本発明は、（ａ）ＣＫ２阻害剤による治療前の対象由来の第一の生体試料でのｐ−ＳＴＡＴ３  Ｙ７０５ポリペプチドのレベルを決定すること；（ｂ）少なくともＣＫ２阻害剤による治療後の対象由来の第二の生体試料でのｐ−ＳＴＡＴ３  Ｙ７０５ポリペプチドのレベル決定すること；および（ｃ）第二の生体試料でのｐ−ＳＴＡＴ３  Ｙ７０５ポリペプチドのレベルと第一の生体試料でのｐ−ＳＴＡＴ３  Ｙ７０５ポリペプチドのレベルとを比較することを含む、対象でのＣＫ２阻害剤による治療に対するＣＫ２介在性疾患の反応性を監視する方法を提供し、第一の生体試料と比較した第二の生体試料でのｐ−ＳＴＡＴ３  Ｙ７０５ポリペプチドのレベルの減少が、ＣＫ２阻害剤による治療に対し積極的な反応を示している。
【０１７５】
別の当該態様では、本発明は、（ａ）ＣＫ２阻害剤による治療前の対象由来の第一の生体試料での総ＳＴＡＴ３ポリペプチドのレベルに対するｐ−ＳＴＡＴ３  Ｙ７０５ポリペプチドのレベルを決定すること；（ｂ）少なくともＣＫ２阻害剤による治療後の対象由来の第二の生体試料での総ＳＴＡＴ３ポリペプチドのレベルに対するｐ−ＳＴＡＴ３  Ｙ７０５ポリペプチドのレベルを決定すること；および（ｃ）第二の生体試料でのｐ−ＳＴＡＴ３  Ｙ７０５ポリペプチドの正規化したレベルと第一の生体試料でのｐ−ＳＴＡＴ３  Ｙ７０５ポリペプチドの正規化したレベルとを比較することを含む、対象でのＣＫ２阻害剤による治療に対するＣＫ２介在性疾患の反応性を監視する方法を提供し、この方法において、第一の生体試料と比較した第二の生体試料でのｐ−ＳＴＡＴ３  Ｙ７０５ポリペプチドの正規化したレベルの減少がＣＫ２阻害剤による治療に対する積極的な反応を示している。
【０１７６】
別の態様では、本発明は、対象由来の生体試料でのｐ−ＳＴＡＴ３  Ｙ７０５ポリペプチドのレベルを決定することを含む、対象でのＣＫ２阻害剤による治療に対する増殖性疾患および／または炎症性疾患などのＣＫ２介在性疾患の感受性を予測する方法を提供し、この方法において、対照に対するｐ−ＳＴＡＴ３  Ｙ７０５ポリペプチドのレベルの増加は、ＣＫ２阻害剤による治療に対する増殖性および／または炎症性疾患の感受性を予測する。
【０１７７】
さらに別の態様では、本発明は、対象由来の生体試料での総ＳＴＡＴ３ポリペプチドのレベルに対するｐ−ＳＴＡＴ３  Ｙ７０５ポリペプチドのレベルを決定することを含む、対象でのＣＫ２阻害剤による治療に対する増殖性疾患および／または炎症性疾患などのＣＫ２介在性疾患の感受性を予測する方法を提供し、この方法において、対応する対照に対するｐ−ＳＴＡＴ３  Ｙ７０５ポリペプチドの正規化したレベルの増加は、ＣＫ２阻害剤による治療に対するＣＫ２介在性疾患の感受性を予測している。
【０１７８】
別の当該態様では、本発明は、各対象でのＣＫ２阻害剤による治療に対するＣＫ２介在性疾患の感受性を予測すること、およびＣＫ２阻害剤による治療に関しｐ−ＳＴＡＴ３  Ｙ７０５ポリペプチドのレベルの増加またはｐ−ＳＴＡＴ３  Ｙ７０５ポリペプチドの正規化したレベルの増加を示す上記対象を選択することを含む、ＣＫ２阻害剤による治療に関し、増殖性疾患および／または炎症性疾患などのＣＫ２介在性疾患を患う対象を選択する方法を提供する。
【０１７９】
別の態様では、本発明は上記方法の１つによって、対象由来の生体試料でのｐ−ＳＴＡＴ３  Ｙ７０５ポリペプチドのレベルを決定すること、およびｐ−ＳＴＡＴ３  Ｙ７０５ポリペプチドのレベルが上昇している場合に、ＣＫ２阻害剤によって対象を治療することを含む、治療を必要とする対象での増殖性疾患および／または炎症性疾患などのＣＫ２介在性疾患を治療する方法を提供する。
【０１８０】
別の態様では、本発明は、対象由来の生体試料での総ＳＴＡＴ３ポリペプチドのレベルに対するｐ−ＳＴＡＴ３  Ｙ７０５ポリペプチドのレベルを決定することを含む、ＣＫ２阻害剤による治療に対する対象の反応を予測する方法を提供し、この方法において、対応する対照に対するｐ−ＳＴＡＴ３  Ｙ７０５ポリペプチドの正規化したレベルの増加がＣＫ２阻害剤に対する反応性を予測する。
【０１８１】
さらなる態様では、本発明は、（ａ）化合物による治療前の対象でのｐ−ＳＴＡＴ３  Ｙ７０５ポリペプチドのレベルを解析すること；および（ｂ）化合物による治療後の対象でのｐ−ＳＴＡＴ３  Ｙ７０５ポリペプチドのレベルを解析することを含む、増殖性疾患および／または炎症性疾患などのＣＫ２介在性疾患の治療に有用な化合物を同定する方法を提供し、この方法において、ｐ−ＳＴＡＴ３  Ｙ７０５ポリペプチドのレベルの減少が、薬剤の効果を示している。
【０１８２】
なお別の態様では、本発明は、（ａ）化合物による治療前の対象での総ＳＴＡＴ３ポリペプチドに対するｐ−ＳＴＡＴ３  Ｙ７０５ポリペプチドのレベルを解析すること；および（ｂ）化合物による治療後の対象での総ＳＴＡＴ３ポリペプチドに対するｐ−ＳＴＡＴ３  Ｙ７０５ポリペプチドのレベルを解析することを含む、増殖性疾患および／または炎症性疾患などのＣＫ２介在性疾患の治療に有用な化合物を同定する方法を提供し、この方法において、ｐ−ＳＴＡＴ３  Ｙ７０５ポリペプチドの正規化したレベルの減少が、薬剤の効果を示している。
【０１８３】
ｐ−ＳＴＡＴ３  Ｙ７０５ポリペプチドのレベルに関する頻繁な実施形態では、増殖性疾患は癌または悪性腫瘍を含む。例示的実施形態では、癌または悪性腫瘍は多発性骨髄腫である。
【０１８４】
ＪＡＫ２−Ｙ１００７／１００８リン酸化
実施例１１に示すように、ＣＫ２阻害剤による治療は様々な多発性骨髄腫細胞系でのＪＡＫ２  Ｙ１００７／１００８のリン酸化を減少させた。したがって本発明の特定の態様では、本方法は生体試料、系または対象でのチロシン残基１００７および１００８でのＪＡＫ２のリン酸化を評価する必要がある。本明細書に記載の方法において、ＳＴＡＴ３のリン酸化状態は、ｐ−ＪＡＫ２  Ｙ１００７／１００８ポリペプチドのレベルを単独で評価することにより決定し得る（すなわち絶対値）。当該実施形態のいくつかにおいて、ｐ−ＪＡＫ２  Ｙ１００７／１００８ポリペプチドのレベルは、正常な対象からの対応する試料などの好適な対照に相対して決定してもよい。他の実施形態では、ｐ−ＪＡＫ２  Ｙ１００７／１００８の正規化したレベルは、総ＪＡＫ２に対してｐ−ＪＡＫ２  Ｙ１００７／１００８ポリペプチドのレベルを評価することによって決定してもよく、この相対レベルは、場合によっては総ＪＡＫ２に対するｐ−ＪＡＫ２  Ｙ１００７／１００８のパーセントまたは比率として表してもよい。当該実施形態のいくつかにおいて、対応する対照は、正常対照での総ＪＡＫ２に対するｐ−ＪＡＫ２  Ｙ１００７／１００８ポリペプチドの正規化したレベルである。
【０１８５】
当該態様の一つにおいて、本発明は、（ａ）ＣＫ２阻害剤による治療前の対象由来の第一の生体試料でのｐ−ＪＡＫ２  Ｙ１００７／１００８ポリペプチドのレベルを決定すること；（ｂ）少なくともＣＫ２阻害剤による治療後の対象由来の第二の生体試料でのｐ−ＪＡＫ２  Ｙ１００７／１００８ポリペプチドのレベル決定すること；および（ｃ）第二の生体試料でのｐ−ＪＡＫ２  Ｙ１００７／１００８ポリペプチドのレベルと第一の生体試料でのｐ−ＪＡＫ２  Ｙ１００７／１００８ポリペプチドのレベルとを比較することを含む、対象でのＣＫ２阻害剤による治療に対するＣＫ２介在性疾患の反応性を監視する方法を提供し、第一の生体試料と比較した第二の生体試料でのｐ−ＪＡＫ２  Ｙ１００７／１００８ポリペプチドのレベルの減少が、ＣＫ２阻害剤による治療に対し積極的な反応を示している。
【０１８６】
別の当該態様では、本発明は、（ａ）ＣＫ２阻害剤による治療前の対象由来の第一の生体試料での総ＪＡＫ２ポリペプチドのレベルに対するｐ−ＪＡＫ２  Ｙ１００７／１００８ポリペプチドのレベルを決定すること；（ｂ）少なくともＣＫ２阻害剤による治療後の対象由来の第二の生体試料での総ＪＡＫ２ポリペプチドのレベルに対するｐ−ＪＡＫ２  Ｙ１００７／１００８ポリペプチドのレベルを決定すること；および（ｃ）第二の生体試料でのｐ−ＪＡＫ２  Ｙ１００７／１００８ポリペプチドの正規化したレベルと第一の生体試料でのｐ−ＪＡＫ２  Ｙ１００７／１００８ポリペプチドの正規化したレベルとを比較することを含む、対象でのＣＫ２阻害剤による治療に対するＣＫ２介在性疾患の反応性を監視する方法を提供し、この方法において、第一の生体試料と比較した第二の生体試料でのｐ−ＪＡＫ２  Ｙ１００７／１００８ポリペプチドの正規化したレベルの減少がＣＫ２阻害剤による治療に対する積極的な反応を示している。
【０１８７】
別の態様では、本発明は、対象由来の生体試料でのｐ−ＪＡＫ２  Ｙ１００７／１００８ポリペプチドのレベルを決定することを含む、対象でのＣＫ２阻害剤による治療に対する増殖性疾患および／または炎症性疾患などのＣＫ２介在性疾患の感受性を予測する方法を提供し、この方法において、対照に対するｐ−ＪＡＫ２  Ｙ１００７／１００８ポリペプチドのレベルの増加は、ＣＫ２阻害剤による治療に対する増殖性および／または炎症性疾患の感受性を予測する。
【０１８８】
さらに別の態様では、本発明は、対象由来の生体試料での総ＪＡＫ２ポリペプチドのレベルに対するｐ−ＪＡＫ２  Ｙ１００７／１００８ポリペプチドのレベルを決定することを含む、対象でのＣＫ２阻害剤による治療に対する増殖性疾患および／または炎症性疾患などのＣＫ２介在性疾患の感受性を予測する方法を提供し、この方法において、対応する対照に対するｐ−ＪＡＫ２  Ｙ１００７／１００８ポリペプチドの正規化したレベルの増加は、ＣＫ２阻害剤による治療に対するＣＫ２介在性疾患の感受性を予測している。
【０１８９】
別の当該態様では、本発明は、各対象でのＣＫ２阻害剤による治療に対するＣＫ２介在性疾患の感受性を予測すること、およびＣＫ２阻害剤による治療に関しｐ−ＪＡＫ２  Ｙ１００７／１００８ポリペプチドのレベルの増加またはｐ−ＪＡＫ２  Ｙ１００７／１００８ポリペプチドの正規化したレベルの増加を示す上記対象を選択することを含む、ＣＫ２阻害剤による治療に関し、増殖性疾患および／または炎症性疾患などのＣＫ２介在性疾患を患う対象を選択する方法を提供する。
【０１９０】
別の態様では、本発明は上記方法の１つによって、対象由来の生体試料でのｐ−ＪＡＫ２  Ｙ１００７／１００８ポリペプチドのレベルを決定すること、およびｐ−ＪＡＫ２  Ｙ１００７／１００８ポリペプチドのレベルが上昇している場合に、ＣＫ２阻害剤によって対象を治療することを含む、治療を必要とする対象での増殖性疾患および／または炎症性疾患などのＣＫ２介在性疾患を治療する方法を提供する。
【０１９１】
別の態様では、本発明は、対象由来の生体試料での総ＪＡＫ２ポリペプチドのレベルに対するｐ−ＪＡＫ２  Ｙ１００７／１００８ポリペプチドのレベルを決定することを含む、ＣＫ２阻害剤による治療に対する対象の反応を予測する方法を提供し、この方法において、対応する対照に対するｐ−ＪＡＫ２  Ｙ１００７／１００８ポリペプチドの正規化したレベルの増加がＣＫ２阻害剤に対する反応性を予測する。
【０１９２】
さらなる態様では、本発明は、（ａ）化合物による治療前の対象でのｐ−ＪＡＫ２  Ｙ１００７／１００８ポリペプチドのレベルを解析すること；および（ｂ）化合物による治療後の対象でのｐ−ＪＡＫ２  Ｙ１００７／１００８ポリペプチドのレベルを解析することを含む、増殖性疾患および／または炎症性疾患などのＣＫ２介在性疾患の治療に有用な化合物を同定する方法を提供し、この方法において、ｐ−ＪＡＫ２  Ｙ１００７／１００８ポリペプチドのレベルの減少が、薬剤の効果を示している。
【０１９３】
なお別の態様では、本発明は、（ａ）化合物による治療前の対象での総ＪＡＫ２ポリペプチドに対するｐ−ＪＡＫ２  Ｙ１００７／１００８ポリペプチドのレベルを解析すること；および（ｂ）化合物による治療後の対象での総ＪＡＫ２ポリペプチドに対するｐ−ＪＡＫ２  Ｙ１００７／１００８ポリペプチドのレベルを解析することを含む、増殖性疾患および／または炎症性疾患などのＣＫ２介在性疾患の治療に有用な化合物を同定する方法を提供し、この方法において、ｐ−ＪＡＫ２  Ｙ１００７／１００８ポリペプチドの正規化したレベルの減少が、薬剤の効果を示している。
【０１９４】
ｐ−ＪＡＫ２  Ｙ１００７／１００８ポリペプチドのレベルに関する頻繁な実施形態では、増殖性疾患は癌または悪性腫瘍を含む。例示的実施形態では、癌または悪性腫瘍は多発性骨髄腫である。
【０１９５】
試料プロファイル作成のための１またはそれ以上のバイオマーカーの使用
さらに別の態様では、本発明は、（ａ）対象由来の試料でのＣＫ２α、ＣＫ２α'、およびＩＬ−６、ＩＬ−８、VEGF、HＩF-1αから選択された１またはそれ以上のバイオマーカーのｍＲＮＡ発現レベルおよび／もしくはポリペプチドレベル、ならびに／またはｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９、ｐ−Ａｋｔ  Ｓ４７３、ｐ−ｐ２１  Ｔ１４５、ｐ−ＮＦ−κＢ  Ｓ５２９、ｐ−ＳＴＡＴ３  Ｙ７０５、もしくはｐ−ＪＡＫ２  Ｙ１００７／１００８ポリペプチドのレベルを決定すること（試料は試料プロファイルを得るためにＣＫ２阻害剤に曝露しない）；および（ｂ）試料プロファイルを参照プロファイルと比較すること（参照プロファイルは、ＣＫ２阻害剤への反応性および／またはＣＫ２阻害剤への非反応性を示している）を含む、増殖性疾患および／または炎症性疾患などのＣＫ２介在性疾患の治療に関する、非反応者から反応者をＣＫ２阻害剤により予測する方法を提供する。
【０１９６】
さらに別の態様では、本発明は、（ａ）対象由来の試料でのＣＫ２α、ＣＫ２α'、およびＩＬ−６、ＩＬ−８、VEGF、HＩF-1αから選択された１またはそれ以上のバイオマーカーのｍＲＮＡ発現レベルおよび／もしくはポリペプチドレベル、ならびに／またはｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９、ｐ−Ａｋｔ  Ｓ４７３、ｐ−ｐ２１  Ｔ１４５、ｐ−ＮＦ−κＢ  Ｓ５２９、ｐ−ＳＴＡＴ３  Ｙ７０５、もしくはｐ−ＪＡＫ２  Ｙ１００７／１００８ポリペプチドのレベルを決定すること（試料は試料プロファイルを得るためにＣＫ２阻害剤に曝露しない）；および（ｂ）試料プロファイルを参照プロファイルと比較すること（参照プロファイルは、ＣＫ２阻害剤への反応性および／またはＣＫ２阻害剤への非反応性を示している）を含む、増殖性疾患および／または炎症性疾患などのＣＫ２介在性疾患の治療に関する、非反応者から反応者をＣＫ２阻害剤により予測する方法を提供する。
【０１９７】
当該実施形態のいくつかにおいて、段階（ａ）は対象由来の試料でのＩＬ−６  ｍＲＮＡ発現および／またはＩＬ−６ポリペプチドのレベルを決定することを含む。いくつかの実施形態では、段階（ａ）は対象由来の試料でのＩL-８  ｍＲＮＡ発現および／またはＩL-８ポリペプチドのレベルを決定することを含む。他の実施形態では、段階（ａ）は対象由来の試料でのＣＫ２αおよび／またはＣＫ２α'  ｍＲＮＡ発現および／またはポリペプチドのレベルを決定することを含む。さらなる実施形態では、段階（ａ）は対象由来の試料でのｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９ポリペプチドのレベルを決定することを含む。当該実施形態のいくつかにおいて、ｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９ポリペプチドの正規化したレベルは総Ａｋｔポリペプチドに対するｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９のレベルを決定することにより使用される。他の実施形態では、段階（ａ）は対象由来の試料でのｐ−Ａｋｔ  Ｓ４７３ポリペプチドのレベルを決定することを含む。当該実施形態のいくつかにおいて、ｐ−Ａｋｔ  Ｓ４７３ポリペプチドの正規化したレベルは総Ａｋｔポリペプチドに対するｐ−Ａｋｔ  Ｓ４７３のレベルを決定することにより使用される。さらなる実施形態では、段階（ａ）は対象由来の試料でのｐ−ｐ２１  Ｔ１４５ポリペプチドのレベルを決定することを含む。当該実施形態のいくつかにおいて、ｐ−ｐ２１  Ｔ１４５ポリペプチドの正規化したレベルは総ｐ２１ポリペプチドに対するｐ−ｐ２１  Ｔ１４５のレベルを決定することにより使用される。さらなる実施形態では、段階（ａ）は対象由来の試料でのｐ−ＮＦ−κＢ  Ｓ５２９ポリペプチドのレベルを決定することを含む。当該実施形態のいくつかにおいて、ｐ−ＮＦ−κＢ  Ｓ５２９ポリペプチドの正規化したレベルは総ＮＦ−κＢポリペプチドに対するｐ−ＮＦ−κＢ  Ｓ５２９のレベルを決定することにより使用される。さらなる実施形態では、段階（ａ）は対象由来の試料でのｐ−ＳＴＡＴ３  Ｙ７０５ポリペプチドのレベルを決定することを含む。当該実施形態のいくつかにおいて、ｐ−ＳＴＡＴ３  Ｙ７０５ポリペプチドの正規化したレベルは総ＳＴＡＴ３ポリペプチドに対するｐ−ＳＴＡＴ３  Ｙ７０５のレベルを決定することにより使用される。さらなる実施形態では、段階（ａ）は対象由来の試料でのｐ−ＪＡＫ２  Ｙ１００７／１００８ポリペプチドのレベルを決定することを含む。当該実施形態のいくつかにおいて、ｐ−ＪＡＫ２  Ｙ１００７／１００８ポリペプチドの正規化したレベルは総ＪＡＫ２ポリペプチドに対するｐ−ＪＡＫ２  Ｙ１００７／１００８のレベルを決定することにより使用される。
【０１９８】
いくつかの実施形態では、試料プロファイルおよび参照プロファイルの類似性は、患者がＣＫ２介在性疾患を治療するための薬剤に対し反応者であるか非反応者であるかを予測する。いくつかの実施形態では、薬剤に対し反応性を示す参照プロファイルは、1またはそれ以上の薬剤に反応する患者から得られる。他の実施形態では、薬剤に対し非反応性を示す参照プロファイルは、1またはそれ以上の薬剤に反応しない患者から得られる。頻繁な実施形態では、薬剤はＣＫ２阻害剤である。
【０１９９】
本明細書で提供される方法は、ＣＫ２阻害剤による治療が効果的であり得る対象を同定または予測し、したがって当該治療から恩恵を得られ得る個々の対象もしくはグループ、または対象集団を選択するために使用され得る。一旦同定されると、当該対象はＣＫ２阻害剤による治療のために選択および／または治療され得る。これに対して、ＣＫ２阻害剤による治療からの恩恵を受けにくいと決定された対象は、同定され、ＣＫ２阻害剤による治療から除外されるか、適切な代替治療が提供され得る。本明細書に記載の様々な実施形態では、対象はヒトまたは他の動物であり得る。例示的実施形態では、対象はヒト対象である。
【０２００】
反応性を監視するためのバイオマーカーの参照集団との比較
さらなる態様では、本発明は、（ａ）ＣＫ２阻害剤による治療後の対象由来の生体試料での１またはそれ以上のバイオマーカーのレベルを決定すること、および（ｂ）生体試料での１またはそれ以上のバイオマーカーのレベルを前記ＣＫ−２介在性疾患を患う患者の参照集団から得られた１またはそれ以上のバイオマーカーレベルと比較することを含む、対象でのＣＫ２阻害剤による治療に対するＣＫ２介在性疾患の反応性を監視する方法を提供し、この方法において、生体試料での１またはそれ以上のバイオマーカーのレベルの減少により、ＣＫ２阻害剤による治療に関する、ＣＫ２介在性疾患の治療に対する反応が示される。
【０２０１】
対象の生体試料を標準参照集団と関連付けるために、治療を受ける患者の集団、すなわちＣＫ２阻害剤による治療前および／または治療後の臨床集団により示された臨床反応のデータを得ることが必要である。この臨床データは、臨床試験結果のレトロスペクティブ分析により入手してもよい。あるいは、臨床データは、１またはそれ以上の新しい臨床試験を考案または実施することにより入手してもよい。臨床集団データの解析は、（治療法の選択に関する対象の分類に同様に有用である）標準参照集団を定義するために、および／またはＣＫ２阻害剤による治療に対する積極的な反応を示す対象を分類するために有用である。好ましい実施形態では、臨床集団に含まれる対象は、対象となる症状、例えばＣＫ２介在性疾患の有無に関し類別されている。陽性の対象の類別として、例えば標準的な理化学検査または１もしくはそれ以上の臨床検査が挙げられ得る。あるいは、対象の類別は、遺伝子発現パターン、タンパク質発現パターン、またはリン酸化パターンの使用が挙げられ得る。例えば、遺伝子発現パターンは、遺伝子発現パターンと疾病罹患率または疾病重症度との間に強い相関を有する判断基準の類別に有用である。当該標準参照集団は遺伝子発現パターンプロファイル特性を共有する（複数の）対象を有する。例えば、バイオマーカー遺伝子発現特性は、本発明の方法において所定の対象での１またはそれ以上の遺伝子発現産物の測定レベルと比較するために有用である。本発明の方法において有用なこの遺伝子発現産物として、これに限定されないが、例えば特定の遺伝子型グループに付随する特有のｍＲＮＡまたはその遺伝子型グループのポリペプチド遺伝子発現産物が挙げられる。一実施形態では、対象は分類され、特定の遺伝子型グループまたは対象での１またはそれ以上のバイオマーカーの測定されたレベルと標準参照集団での１またはそれ以上のバイオマーカーのレベルとの間の類似性に基づくクラスに割り当てられる。
【０２０２】
例示的実施形態では、バイオマーカーはＣＫ２α、ＣＫ２α'、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＶＥＧＦ、またはＨＩＦ−１αのｍＲＮＡ発現および／もしくはポリペプチドレベル、またはｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９、ｐ−Ａｋｔ  Ｓ４７３、ｐ−ｐ２１  Ｔ１４５、ｐ−ＮＦ−κＢ  Ｓ５２９、ｐ−ＳＴＡＴ３  Ｙ７０５、もしくはｐ−ＪＡＫ２  Ｙ１００７／１００８ポリペプチドのレベルから選択される。別の実施形態では、２またはそれ以上のバイオマーカーの組み合わせが使用され、ＣＫ２α、ＣＫ２α'、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＶＥＧＦ、またはＨＩＦ−１αのｍＲＮＡ発現および／もしくはポリペプチドレベル、またはｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９、ｐ−Ａｋｔ  Ｓ４７３、ｐ−ｐ２１  Ｔ１４５、ｐ−ＮＦ−κＢ  Ｓ５２９、ｐ−ＳＴＡＴ３  Ｙ７０５、もしくはｐ−ＪＡＫ２  Ｙ１００７／１００８ポリペプチドのレベルから選択される。
【０２０３】
本明細書に記載の方法において、ｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９、ｐ−Ａｋｔ  Ｓ４７３、ｐ−ｐ２１  Ｔ１４５、ｐ−ＮＦ−κＢ  Ｓ５２９、ｐ−ＳＴＡＴ３  Ｙ７０５、またはｐ−ＪＡＫ２  Ｙ１００７／１００８のレベルに関して、いずれもｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９、ｐ−Ａｋｔ  Ｓ４７３、ｐ−ｐ２１  Ｔ１４５、ｐ−ＮＦ−κＢ  Ｓ５２９、ｐ−ＳＴＡＴ３  Ｙ７０５、またはｐ−ＪＡＫ２  Ｙ１００７／１００８ポリペプチドの絶対レベルまたは正規化したレベルがそれぞれ使用され得ることは理解されよう。
【０２０４】
感受性を予測するおよび／または反応性を監視するためのバイオマーカーの組み合わせ
本明細書に記載の様々な実施形態では、本発明の方法は、本明細書に記載のＣＫ２阻害剤による治療に対するＣＫ２介在性疾患の感受性を予測するおよび／または反応性を監視するためのバイオマーカーの１またはそれ以上の組み合わせを利用し得る。
【０２０５】
したがって一実施形態では、本発明は、対象からの生体試料の第一のバイオマーカーレベルを検出するための第一の試験、および前記生体試料の第二のバイオマーカーのレベルを検出するための第二の試験を含む、ＣＫ２阻害剤による治療の有効性を予測または決定することに有効な試験の組み合わせを提供し、第一のマーカーは第二のマーカーとは異なる。一実施形態では、第一のバイオマーカーは、ＣＫ２α、ＣＫ２α'、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＶＥＧＦ、もしくは  ＨＩＦ−１αのｍＲＮＡ発現および／またはポリペプチドレベル、またはｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９、ｐ−Ａｋｔ  Ｓ４７３、ｐ−ｐ２１  Ｔ１４５、ｐ−ＮＦ−κＢ  Ｓ５２９、ｐ−ＳＴＡＴ３  Ｙ７０５、もしくはｐ−ＪＡＫ２  Ｙ１００７／１００８ポリペプチドのレベルから選択される。さらなる実施形態では、第二のバイオマーカーは、ＣＫ２α、ＣＫ２α'、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＶＥＧＦ、もしくは  ＨＩＦ−１αのｍＲＮＡ発現および／またはポリペプチドレベル、またはｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９、ｐ−Ａｋｔ  Ｓ４７３、ｐ−ｐ２１  Ｔ１４５、ｐ−ＮＦ−κＢ  Ｓ５２９、ｐ−ＳＴＡＴ３  Ｙ７０５、もしくはｐ−ＪＡＫ２  Ｙ１００７／１００８ポリペプチドのレベルから選択される。
【０２０６】
別の実施形態では、本発明は、ＣＫ２阻害剤による治療の有効性を予測または決定するために有効なバイオマーカーの組み合わせ（すなわちバイオマーカーパネル）を提供する。一実施形態では、バイオマーカーパネルは、ＣＫ２α、ＣＫ２α'、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＶＥＧＦ、もしくは  ＨＩＦ−１αのｍＲＮＡ発現および／またはポリペプチドレベル、またはｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９、ｐ−Ａｋｔ  Ｓ４７３、ｐ−ｐ２１  Ｔ１４５、ｐ−ＮＦ−κＢ  Ｓ５２９、ｐ−ＳＴＡＴ３  Ｙ７０５、もしくはｐ−ＪＡＫ２  Ｙ１００７／１００８ポリペプチドのレベルから選択される、１またはそれ以上のバイオマーカーを含む。別の実施形態では、バイオマーカーパネルは、ＣＫ２α、ＣＫ２α'、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＶＥＧＦ、もしくは  ＨＩＦ−１αのｍＲＮＡ発現および／またはポリペプチドレベル、またはｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９、ｐ−Ａｋｔ  Ｓ４７３、ｐ−ｐ２１  Ｔ１４５、ｐ−ＮＦ−κＢ  Ｓ５２９、ｐ−ＳＴＡＴ３  Ｙ７０５、もしくはｐ−ＪＡＫ２  Ｙ１００７／１００８ポリペプチドのレベルから選択される、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、またはそれ以上のバイオマーカーを含む。例示的実施形態では、バイオマーカーパネルは、ＣＫ２α、ＣＫ２α'、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＶＥＧＦ、もしくは  ＨＩＦ−１αのｍＲＮＡ発現および／またはポリペプチドレベル、またはｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９、ｐ−Ａｋｔ  Ｓ４７３、ｐ−ｐ２１  Ｔ１４５、ｐ−ＮＦ−κＢ  Ｓ５２９、ｐ−ＳＴＡＴ３  Ｙ７０５、もしくはｐ−ＪＡＫ２  Ｙ１００７／１００８ポリペプチドのレベルから選択されるバイオマーカーの全てを含む。
【０２０７】
別の実施形態では、本発明は、生体試料からの１またはそれ以上のバイオマーカーのレベルを決定すること、およびＣＫ２阻害剤で治療される対象での１またはそれ以上のバイオマーカーのレベルの増加または減少に基づく治療効果の予測または決定をもたらすものに１またはそれ以上のバイオマーカーのレベルを提供することを含む、ＣＫ２阻害剤による治療の有効性を予測または決定するための有用な情報を提供する方法を提供する。一実施形態では、バイオマーカーは、ＣＫ２α、ＣＫ２α'、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＶＥＧＦ、もしくはＨＩＦ−１αのｍＲＮＡ発現および／またはポリペプチドレベル、またはｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９、ｐ−Ａｋｔ  Ｓ４７３、ｐ−ｐ２１  Ｔ１４５、ｐ−ＮＦ−κＢ  Ｓ５２９、ｐ−ＳＴＡＴ３  Ｙ７０５、もしくはｐ−ＪＡＫ２  Ｙ１００７／１００８ポリペプチドのレベルから選択される。
【０２０８】
反応性を予測するための対象のスクリーニング方法
本発明はしたがって、上記記載の方法によってＣＫ２触媒サブユニット（ＣＫ２α／ＣＫ２α'）、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＶＥＧＦ、ＨＩＦ−１αのｍＲＮＡ発現レベルおよび／もしくはポリペプチドレベル、および／またはｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９、ｐ−Ａｋｔ  Ｓ４７３、ｐ−ｐ２１  Ｔ１４５、ｐ−ＮＦ−κＢ  Ｓ５２９、ｐ−ＳＴＡＴ３  Ｙ７０５、およびｐ−ＪＡＫ２−Ｙ１００７／１００８のリン酸化状態を決定することを含む、ＣＫ２阻害剤による治療に対するその反応性を予測するために、増殖性疾患を患う対象をスクリーニングする方法を提供する。
【０２０９】
さらなる態様では、本発明は、明細書に記載の方法によって、対象由来の試料でのＣＫ２触媒サブユニット（ＣＫ２α／ＣＫ２α'）、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＶＥＧＦ、ＨＩＦ−１αの発現レベル、および／またはＡｋｔ、好ましくはＡｋｔ  Ｓ１２９もしくはＡｋｔ  Ｓ４７３、またはｐ２１、好ましくはＴ１４５、またはＮＦ−κＢ、好ましくはＳ５２９、ＳＴＡＴ３、好ましくはＹ７０５、またはＪＡＫ２、好ましくはＹ１００７もしくはＹ１００８のリン酸化状態を決定すること、およびＣＫ２触媒サブユニット、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＶＥＧＦ、ＨＩＦ−１αの発現レベルおよび／またはリン酸化Ａｋｔ、ｐ２１、ＮＦ−κＢ、ＳＴＡＴ３、もしくはＪＡＫ２が上昇している場合にＣＫ２阻害剤によって対象を治療することを含む、治療を必要とする対象での増殖性および／または炎症性疾患を治療する方法を提供する。
【０２１０】
細胞または組織、系または対象などの生体試料におけるある特定の１または複数のバイオマーカーに関し決定されたレベルは、適切な対照試料と比較してもよい。例えば対照試料は、疾病を患っていない対象由来の生体試料、または同じ対象からの正常組織（すなわち非腫瘍組織）である試料を含んでもよい。
【０２１１】
ＣＫ２α、ＣＫ２α'、および／もしくはＩＬ−６、ＩＬ−８、ＶＥＧＦ、ＨＩＦ−１αに関するｍＲＮＡ発現および／またはポリペプチドの上昇したレベル、ならびに／またはリン酸化Ａｋｔ、ｐ２１、ＮＦ−κＢ、ＳＴＡＴ３、もしくはＪＡＫ２の単独のまたは総Ａｋｔ、ｐ２１、ＮＦ−κＢ、ＳＴＡＴ３、もしくはＪＡＫ２に対する上昇したレベルは、それぞれＣＫ２阻害剤の有益な治療効果を予測することが見出されている。ＣＫ２阻害剤の治療用途に適応する上昇したレベルは当業者によって決定され得る。ある実施形態では、ＣＫ２阻害剤による治療は、試料での上昇したレベルが対照レベルを超えて検出可能である場合、またはそのレベルが対照より少なくとも５０％、７５％、１００％、３００％、５００％  または  １０００％高い場合に適応され得る。
【０２１２】
いくつかの実施形態では、適切な対照は、正常対象または増殖性疾患および／または炎症性疾患を患っていない対象のグループから得られる対照試料である。場合によって、適切な対照は増殖性疾患および／または炎症性疾患を患う対象の正常細胞または正常組織からの対照試料であってもよい。例えば癌を患う対象での、試験用の生体試料は癌に冒された組織での腫瘍由来であってよく、対照試料は癌に冒されていない組織から得られるものであってよい。対照試料は、対象となるバイオマーカーのｍＲＮＡ発現のレベルおよび／もしくはポリペプチドレベル、またはバイオマーカーのリン酸化状態に関し評価され、試験用の生体試料での対象となるバイオマーカーに関する対応するレベルと比較され得る。
【０２１３】
本方法がＣＫ２阻害剤に対する感受性または反応性の予測に関する場合、対象は、典型的には増殖性疾患および／または炎症性疾患などのＣＫ２介在性疾患であると同定または診断されている対象およびＣＫ２阻害剤による治療中である対象である。したがって本方法は、どの対象がＣＫ２阻害剤による治療に反応しやすいかを予測するために、治療を開始する前に使用することができる。他の実施形態では、その対象はＣＫ２阻害剤を投与されており、その対象はその治療の有効性を監視するために評価されている。
【０２１４】
同定したバイオマーカーを使用して用量を選択する方法
本発明の方法はまた、ＣＫ２阻害剤の適切な投与量を選択して各対象への治療を個々に最適化するために使用され得る。適切な投与量を選択する際に考慮すべき因子として、治療を受けている特定の対象および条件、個々の患者の臨床症状、活性化合物の送達部位、活性化合物の特定の型、投与方法、投与スケジュール、症状の重症度、および医療従事者に知られている他の因子が挙げられる。投与される活性化合物の治療に有効な量は、症状などにより決定され、疾患を予防する、寛解させる、または治療するために必要な最小量である。当該量は好ましくは、宿主に有毒であるかまたは宿主に有意により感染を受けやすくする量より少ない。
【０２１５】
生体試料
本明細書に記載のように、本方法は系でのバイオマーカーレベルの決定に関する。系はインビトロまたはインビボであってよい。したがって本方法は、インビボまたはインビトロ、例えばこれに限定されないが、ヒト対象などの哺乳類の対象を含む対象由来の生体試料で実施してもよい。一実施形態では、生体試料は、例えば細胞（例えば循環腫瘍細胞）、細胞系、組織（例えば生検組織）、組織培養物、細胞もしくは組織の溶解物、腫瘍、またはそれらの生体液もしくは画分、例えば血漿、血清、血液、尿、唾液、もしくは末梢血単核球（ＰＢＭＣ）（例えばリンパ球ＰＢＭＣまたは単球ＰＢＭＣ）などの対象由来の生体物質である。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣは、ＣＤ１９陽性（ＣＤ１９＋）ＰＢＭＣまたはＣＤ４５陽性（ＣＤ４５＋）ＰＢＭＣなどの表現系に分類される。ＰＢＭＣは、当業者に知られる方法を用いて、例えばフィコールの使用により、または低張溶解法（hypotonic lysis）により全血から単離または抽出され得る。
【０２１６】
バイオマーカー測定
本明細書に記載のバイオマーカーに関する発現レベルおよび／またはリン酸化は、生体試料にて、例えばＲＴ−ＰＣＲおよびＤＮＡマイクロアレイの手法を用いたＲＮＡ発現に基づく、または例えばイムノアッセイ、免疫沈降法、および電気泳動法を含む、ウエスタンブロット法、免疫組織化学、もしくはＥＬＩＳＡの手法を用いるタンパク質発現に基づく（すなわちポリペプチドレベルを測定するための)任意の技術的手法により検定される。
【０２１７】
ＣＫ２触媒サブユニット（ＣＫ２α／ＣＫ２α'）、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＶＥＧＦ、ＨＩＦ−１α、Ａｋｔ、ｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９、ｐ−Ａｋｔ  Ｓ４７３、ｐ２１、ｐ−ｐ２１  Ｔ１４５、ＮＦ−κＢ、ｐ−ＮＦ−κＢ  Ｓ５２９、ＳＴＡＴ３、ｐ−ＳＴＡＴ３  Ｙ７０５、ＪＡＫ２、およびｐ−ＪＡＫ２−Ｙ１００７／１００８に対して特異的な抗体は、発現レベルを測定するための標準イムノアッセイ形態で使用してもよい。例えば、モノクローナル抗体またはポリクローナル抗体を使用するＥＬＩＳＡ（酵素免疫測定法(enzyme linked Immunosorbent)）タイプのアッセイ、免疫沈降法タイプのアッセイ、従来のウエスタンブロット法のアッセイ、免疫蛍光アッセイ、および免疫組織化学アッセイもまた、バイオマーカータンパク質としてのＣＫ２触媒サブユニット（ＣＫ２α／ＣＫ２α'）、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＶＥＧＦ、ＨＩＦ−１α、Ａｋｔ、ｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９、ｐ−Ａｋｔ  Ｓ４７３、ｐ２１、ｐ−ｐ２１  Ｔ１４５、ＮＦ−κＢ、ｐ−ＮＦ−κＢ  Ｓ５２９、ＳＴＡＴ３、ｐ−ＳＴＡＴ３  Ｙ７０５、ＪＡＫ２、およびｐ−ＪＡＫ２−Ｙ１００７／１００８のレベルを決定するために利用され得る。これらのバイオマーカーに対し特異的なポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体は既知の方法に従って作製してもよい。
【０２１８】
バイオマーカーレベルはまた、当分野に公知の方法を用いて、二次元（２−Ｄ）ゲル電気泳動を用いて測定し、その後例えば抗体を用いるイムノブロット解析により解析することができる。
【０２１９】
ＣＫ２介在性疾患
本発明の頻繁な実施形態では、ＣＫ２介在性疾患は増殖性疾患および／または炎症性疾患である。いくつかの実施形態では、増殖性疾患は、癌を含む。癌は、乳房、前立腺、結腸、直腸、膵臓、肝臓、脳、または頭頸部の癌、肺癌（ＳＣＬＣまたはＮＳＣＬＣ）、または皮膚癌（例えば黒色腫)であり得る。特定の実施形態では、癌は前立腺癌または乳癌である。特定の実施形態では、癌は炎症性乳癌である。他の実施形態では、疾患は急性もしくは慢性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、慢性リンパ性白血病、Ｂｃｒ／Ａｂｌ−陽性白血病、リンパ腫、または多発性骨髄腫である。他の実施形態では、疾患は進行固形腫瘍を含む固形腫瘍である。他の実施形態では、疾患はキャスルマン病である。
【０２２０】
他の実施形態では、本明細書に記載の疾患は、炎症性疾患である。場合によっては、炎症性疾患は糸球体腎炎、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス、リウマチ様関節炎、または若年性関節炎である。いくつかの実施形態では、マウスモデルからＣＫ２が侵害受容性のシグナル伝達を調節することが実証され、脊髄に注入されるとマウスでの疼痛反応を低減することから、化合物は炎症性疼痛を緩和するために使用される。
【０２２１】
代替実施形態では、ＣＫ２介在性疾患は、神経変性疾患、疼痛、血管系疾患、骨格筋もしくは骨組織の病態生理学的異常、寄生原虫、またはウイルス性疾患から成る群から選択される。
【０２２２】
特定の実施形態では、ＣＫ２介在性疾患は神経変性疾患である。当該実施形態のいくつかにおいて、神経変性疾患はアルツハイマー病、パーキンソン病、記憶障害、脳虚血、グアム−パーキンソン認知症、１８番染色体欠損症候群、進行性核上性麻痺、クーフス病、またはピック病である。
【０２２３】
さらなる実施形態では、ＣＫ２介在性疾患は血管系の疾患である。当該実施形態のいくつかにおいて、血管系の疾患はアテローム性動脈硬化、層流せん断応力、または低酸素状態である。
【０２２４】
他の実施形態では、ＣＫ２介在性疾患は骨格筋または骨組織の病態生理学的異常である。これらの症状はアテローム性動脈硬化、層流せん断応力、および低酸素状態、ならびに関連する症状を含む。当該実施形態のいくつかにおいて、疾患は心筋細胞肥大、インスリンシグナルの障害、または骨組織石灰化である。
【０２２５】
さらにまた他の実施形態では、疾患は原虫寄生である。原虫による感染は感染宿主でのＩＬ−８レベルのほぼ即時的な増加を導くことが示されている。
【０２２６】
ＣＫ２阻害剤の上記記載の当該病原体のライフサイクルへの関与のほかに、ＩＬ−８発現の抑制が寄生性病原体に付随する限局性損傷部を寛解させるのに役立ち得る。本発明の化合物はしたがって、とりわけタイレリア・パルバ；トキソプラズマ原虫、トリパノソーマ・クルージ（シャーガス病）、ドノバン・リシューマニア、ヘルペトモナス・ムスカルム・ムスカルム、熱帯熱マラリア原虫、トリパノソーマ・ブルーセイ、およびマンソン住血吸虫による寄生虫症の治療に有用である。
【０２２７】
さらなる実施形態では、疾患はウイルス性疾患である。当該実施形態のいくつかにおいて、ウイルス性疾患は、ヒト免疫不全ウイルスＩ型（ＨＩＶ−１）、ヒトパピローマウイルス、エプスタイン・バーウイルス、または単純ヘルペスウイルスである。他の実施形態では、ウイルス性疾患はヒトパピローマウイルス、ヒトサイトメガロウイルス、Ｃ型肝炎もしくはＢ型肝炎、ボルナ病ウイルス、アデノウイルス、コクサッキーウイルス、コロナウイルス、または水痘帯状疱疹ウイルスである。
【０２２８】
ＣＫ２阻害剤
ＣＫ２は、スタウロスポリン、すなわちキナーゼに対するＡＴＰ結合を阻止することによりプロテインキナーゼを阻害するストレプトマイセス・スタウロスポレウス（Streptomyces staurosporeus）から１９７７年に最初に単離された天然物(Omura et al., 1977, J. Antiiot. 30: 275-82)を含むさまざまな既知の治療剤により阻害され得る固有の活性部位をもつタンパク質である。スタウロスポリンのほかに、ＣＫ２の多くのＡＴＰ−競合的阻害剤が文献で報告されており、これには５，６−ジクロロ−１−β−Ｄ−リボフラノシルベンゾイミダゾール（ＤＲＢ）、６−メチル−１，３，８−トリヒドロキシアントラキノン（エモジン）、２−ジメチルアミノ−４，５，６，７−テトラブロモ−１Ｈ−ベンズイミダゾール（ＤＭＡＴ）、４，５，６，７−テトラブロモベンゾトリアゾール（ＴＢＢ）、レゾルフィン、４，４′，５，５′，６，６′−ヘキサヒドロキシジフェン酸  ２，６，２′，６′−ジラクトン（エラグ酸）、［５−オキソ−５，６−ジヒドロインドロ−（１，２−ａ）キナゾリン−７−イル］酢酸（ＩＱＡ）、および２−（３，４−ジヒドロキシフェニル）−３，５，７−トリヒドロキシ−４Ｈ−クロメン−４−オン（ケルセチン）が挙げられる。例えばZhu et al., 2009, Mol. Cell. Biochem. 333: 159-67; Lopez-Ramos et al., 2010, Fase J. 24: 3171-85およびCozza et al., 2010, Med. Res. Rev. 30: 419-62を参照のこと。
【０２２９】
ＣＫ２阻害剤は、これに限定されないが、細胞増殖を阻害することおよびプロテインキナーゼ活性を調節することを含む生物活性を発揮する。ＣＫ２阻害剤はプロテインキナーゼＣＫ２の活性を調節することができ、理論に束縛されるものではないが、ＣＫ２阻害剤でのＣＫ２阻害が、異常な、過剰な、または望まれないレベルのＣＫ２活性に付随する本明細書に記載の様々な疾患を治療する機能をもたらすと考えられている。したがって当該化合物は、当業者により多くの用途に利用され得る。例えばＣＫ２阻害剤は、これに限定されないが、（ｉ）プロテインキナーゼ活性（例えばＣＫ２活性）の調節、（ｉｉ）細胞増殖の調節、（ｉｉｉ）アポトーシスの調節、（ｉｖ）白血病、リンパ腫、多発性骨髄腫、および固形腫瘍（例えば乳房または前立腺の腫瘍）などの細胞増殖の関連疾患の治療、ならびに（ｖ）神経変性疾患、炎症性疾患、血管系疾患、骨格筋または骨組織の疾患、原虫寄生病、ウイルス性疾患、および疼痛の治療を含む使用に見られる。
【０２３０】
ＣＫ２阻害剤は、医薬組成物として処方され得る。そのような医薬組成物は、ひいては任意の好適なルート、例えば経口で、非経口で、吸入で、直腸で、または局所的での投与により、従来の無毒性の薬学的に許容される担体、アジュバント、および賦形剤を所望されるように含む投与単位剤形で、投与することができる。薬剤処方は、例えば、Hoover, John E., REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES, Mack PulishIng Co., Easton, Pa.; 1975に記載される。薬剤処方の他の実施例は、Lierman, H. A.およびLachman, L., Eds., PHARMACEUTiCAL DOSAGE FORMS, Marcel Decker, New York, N.Y., 1980において見られる。本発明での使用に好適な医薬組成物は、活性成分が使用目的を成す有効量で含まれる組成物を含む。有効量および適切な投与計画の決定は、当業者の技量の範囲内で行うことができる。
【０２３１】
ＣＫ２阻害剤は、医薬組成物、処方、または薬物において、有効な量であり得、これは所望の生物学的効果を導くことができ、疾患または状態の症状を寛解、軽減、緩和、または除去するように導く量である。これらの用語はまた、細胞増殖率を減らすもしくは止めること（例えば腫瘍成長を遅延または停止すること）または増殖する癌細胞の数を減少させること（例えば腫瘍を部分的または全てを取り除くこと）を意味する。
【０２３２】
本明細書に記載のＣＫ２阻害剤には、これらに限定されないが、以下に記載される任意の式の化合物が含まれ、各々の内容の全体が参照により本明細書に組み込まれる：国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２００７／０７７４６４号、第ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０７４８２０号および第ＰＣＴ／ＵＳ２００９／０３５６０９号、並びに米国仮特許出願第６１／１７０，４６８号（２００９年４月１７日出願）、第６１／２４２，２２７号（２００９年９月１４日出願）、第６１，１８０，０９０号（２００９年５月２０日出願）、第６１／２１８，３１８号（２００９年６月１８日出願）、第６１／１７９，９９６号（２００９年５月２０日出願）、第６１／２１８，２１４号（２００９年６月１４日出願）、第６１／４１，８０６号（２００９年９月１１日出願）、第６１／１８０，０９９号（２００９年５月２０日出願）、第６１／２１８，３４７号（２００９年６月１８日出願）、第６１／２３７，２２７号（２００９年８月２６日出願）、第６１／２４３，１０７号（２００９年９月１６日出願）および第６１／２４３，１０４号（２００９年９月１６日出願）。ＣＫ２阻害剤は当技術分野において周知の方法により合成することができ、それらの方法には、国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２００７／０７７４６４号、第ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０７４８２０号および第ＰＣＴ／ＵＳ２００９／０３５６０９号で開示された方法が含まれる。
【０２３３】
本発明の一実施形態において、ＣＫ２阻害剤は構造式（Ａ）を有する化合物：
2013506836.tif 000004
またはその薬理学的に許容できる塩、その溶媒和化合物、および／またはそのプロドラッグであり；
式中、αで表示された基はＱ１を含む環に融合した５または６員の芳香族または芳香族複素環を表し、αは環員として一つまたは複数の窒素原子を任意に含む６員のアリール環、またはチオフェンおよびチアゾールから選択される５員のアリール環であり；
Ｑ１はＣ＝Ｘであり、Ｑ２はＮＲ５であり、Ｑ１およびＱ２間の結合は単結合であり；またはＱ１はＣ−Ｘ−Ｒ５であり、Ｑ２はＮであり、Ｑ１およびＱ２間の結合は二重結合であり；
ここで、ＸはＯ、ＳまたはＮＲ４を表し；
Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３およびＺ４はそれぞれＮまたはＣＲ３を表し、Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３およびＺ４の一つまたは複数はＣＲ３であり；
Ｒ３はそれぞれ独立してＨ、または置換されてもよいＣ１〜Ｃ８アルキル基、Ｃ２〜Ｃ８ヘテロアルキル基、Ｃ２〜Ｃ８アルケニル基、Ｃ２〜Ｃ８ヘテロアルケニル基、Ｃ２〜Ｃ８アルキニル基、Ｃ２〜Ｃ８ヘテロアルキニル基、Ｃ１〜Ｃ８アシル基、Ｃ２〜Ｃ８ヘテロアシル基、Ｃ６〜Ｃ１０アリール基、Ｃ５〜Ｃ１２ヘテロアリール基、Ｃ７〜Ｃ１２アリールアルキル基またはＣ６〜Ｃ１２ヘテロアリールアルキル基であり、
またはＲ３はそれぞれハロ、ＯＲ、ＮＲ２、ＮＲＯＲ、ＮＲＮＲ２、ＳＲ、ＳＯＲ、ＳＯ２Ｒ、ＳＯ２ＮＲ２、ＮＲＳＯ２Ｒ、ＮＲＣＯＮＲ２、ＮＲＣＯＯＲ、ＮＲＣＯＲ、ＣＮ、ＣＯＯＲ、ＣＯＮＲ２、ＯＯＣＲ、ＣＯＲまたはＮＯ２であり、
ここで各Ｒは独立してＨ、またはＣ１〜Ｃ８アルキル基、Ｃ２〜Ｃ８ヘテロアルキル基、Ｃ２〜Ｃ８アルケニル基、Ｃ２〜Ｃ８ヘテロアルケニル基、Ｃ２〜Ｃ８アルキニル基、Ｃ２〜Ｃ８ヘテロアルキニル基、Ｃ１〜Ｃ８アシル基、Ｃ２〜Ｃ８ヘテロアシル基、Ｃ６〜Ｃ１０アリール基、Ｃ５〜Ｃ１０ヘテロアリール基、Ｃ７〜Ｃ１２アリールアルキル基またはＣ６〜Ｃ１２ヘテロアリールアルキル基であり、
同じ原子または隣接する原子に結合している２つのＲは結合して一つまたは複数のＮ、ＯまたはＳを任意に含む３〜８員の環を形成し；
各Ｒ基および２つのＲ基が一緒になって結合して形成された各環は、ハロ、＝Ｏ、＝Ｎ−ＣＮ、＝Ｎ−ＯＲ'、＝ＮＲ'、ＯＲ'、ＮＲ'２、ＳＲ'、ＳＯ２Ｒ'、ＳＯ２ＮＲ'２、ＮＲ'ＳＯ２Ｒ'、ＮＲ'ＣＯＮＲ'２、ＮＲ'ＣＯＯＲ'、ＮＲ'ＣＯＲ'、ＣＮ、ＣＯＯＲ'、ＣＯＮＲ'２、ＯＯＣＲ'、ＣＯＲ'およびＮＯ２から選択される一つまたは複数の置換基で置換されてもよく、
ここで各Ｒ'は独立してＨ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６ヘテロアルキル、Ｃ１〜Ｃ６アシル、Ｃ２〜Ｃ６ヘテロアシル、Ｃ６〜Ｃ１０アリール、Ｃ５〜Ｃ１０ヘテロアリール、Ｃ７〜１２アリールアルキルまたはＣ６〜Ｃ１２ヘテロアリールアルキルであり、そのそれぞれがハロ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４ヘテロアルキル、Ｃ１〜Ｃ６アシル、Ｃ１〜Ｃ６ヘテロアシル、ヒドロキシ、アミノおよび＝Ｏから選択される一つまたは複数の基で置換されてもよく；
２つのＲ'は結合してＮ、ＯおよびＳから選択される３つまでのヘテロ原子を任意に含む３〜７員の環を形成することができ、
Ｒ４はＨ、またはＣ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６ヘテロアルキルおよびＣ１〜Ｃ６アシルから成る群から選択される置換されてもよい員であり；
Ｒ５はそれぞれ独立してＨ、またはＣ１〜１０アルキル、Ｃ２〜１０アルケニル、Ｃ２〜１０ヘテロアルキル、Ｃ３〜８環状炭素およびＣ３〜８複素環からなる群から選択される置換されてもよい員であり、更に置換されてもよい炭素環またはヘテロ環に任意に融合し；またはＲ５は置換されてもよいＣ３〜８環状炭素またはＣ３〜８複素環で置換されたＣ１〜１０アルキル、Ｃ２〜１０アルケニルまたはＣ２〜１０ヘテロアルキルであり；
各−ＮＲ４Ｒ５において、Ｒ４およびＲ５はＮと一緒になって、置換されていてもよい３〜８員の環を形成してもよく、該環は、Ｎ、ＯおよびＳから選択される更なるヘテロ原子を環員として任意に含んでもよく；
式（Ａ）中のＱ１がＣ−ＮＨΦであり、Φが置換されてもよいフェニルである場合：
αで表示された環が少なくとも１つのＮを環員として含む６員環であるならば、存在している少なくとも１つのＲ３は極性置換基でなければならず、もしくはＲ３がそれぞれＨであるならば、Φは置換されなければならず；
αで表示された環がフェニルであり、Ｚ１〜Ｚ４のうちの３つがＣＨを表すならば、Ｚ２はＣ-ＯＲ"ではあり得ず、Ｚ３はＮＨ２、ＮＯ２、ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｒ"またはＮＨＣ（＝Ｏ）−ＯＲ"ではあり得ず、ここでＲ"はＣ１〜Ｃ４アルキルである。
【０２３４】
式（Ａ）の一実施形態において、前記化合物は構造式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩまたはＩＶで表わされ：
2013506836.tif 000005
またはその薬理学的に許容できる塩、その溶媒和化合物、および／またはそのプロドラッグであり；
式中：
Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３およびＺ４はそれぞれＮまたはＣＲ３であり；
Ｚ５、Ｚ６、Ｚ７およびＺ８はそれぞれＮまたはＣＲ６であり；
０、１つまたは２つのＺ１〜Ｚ４はＮであり、０、１つまたは２つのＺ５〜Ｚ８はＮであり；
各Ｒ３および各Ｒ６は独立してＨ、または置換されてもよいＣ１〜Ｃ８アルキル基、Ｃ２〜Ｃ８ヘテロアルキル基、Ｃ２〜Ｃ８アルケニル基、Ｃ２〜Ｃ８ヘテロアルケニル基、Ｃ２〜Ｃ８アルキニル基、Ｃ２〜Ｃ８ヘテロアルキニル基、Ｃ１〜Ｃ８アシル基、Ｃ２〜Ｃ８ヘテロアシル基、Ｃ６〜Ｃ１０アリール基、Ｃ５〜Ｃ１２ヘテロアリール基、Ｃ７〜Ｃ１２アリールアルキル基またはＣ６〜Ｃ１２ヘテロアリールアルキル基であり、
各Ｒ３および各Ｒ６は独立してハロ、ＯＲ、ＮＲ２、ＮＲＯＲ、ＮＲＮＲ２、ＳＲ、ＳＯＲ、ＳＯ２Ｒ、ＳＯ２ＮＲ２、ＮＲＳＯ２Ｒ、ＮＲＣＯＮＲ２、ＮＲＣＯＯＲ、ＮＲＣＯＲ、ＣＮ、ＣＯＯＲ、ＣＯＮＲ２、ＯＯＣＲ、ＣＯＲ、極性置換基、カルボキシバイオイソスター、ＣＯＯＨまたはＮＯ２であり、
ここで各Ｒは独立してＨ、またはＣ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ２〜Ｃ８ヘテロアルキル、Ｃ２〜Ｃ８アルケニル、Ｃ２〜Ｃ８ヘテロアルケニル、Ｃ２〜Ｃ８アルキニル、Ｃ２〜Ｃ８ヘテロアルキニル、Ｃ１〜Ｃ８アシル、Ｃ２〜Ｃ８ヘテロアシル、Ｃ６〜Ｃ１０アリール、Ｃ５〜Ｃ１０ヘテロアリール、Ｃ７〜Ｃ１２アリールアルキルまたはＣ６〜Ｃ１２ヘテロアリールアルキルであり、
同じ原子または隣接する原子に結合している２つのＲは結合して一つまたは複数のＮ、ＯまたはＳを任意に含む３〜８員の環を形成し；
各Ｒ基および２つのＲ基が一緒になって結合して形成された各環は、ハロ、＝Ｏ、＝Ｎ−ＣＮ、＝Ｎ−ＯＲ'、＝ＮＲ'、ＯＲ'、ＮＲ'２、ＳＲ'、ＳＯ２Ｒ'、ＳＯ２ＮＲ'２、ＮＲ'ＳＯ２Ｒ'、ＮＲ'ＣＯＮＲ'２、ＮＲ'ＣＯＯＲ'、ＮＲ'ＣＯＲ'、ＣＮ、ＣＯＯＲ'、ＣＯＮＲ'２、ＯＯＣＲ'、ＣＯＲ'、およびＮＯ２から選択される一つまたは複数の置換基で置換されてもよく、
ここで各Ｒ'は独立してＨ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６ヘテロアルキル、Ｃ１〜Ｃ６アシル、Ｃ２〜Ｃ６ヘテロアシル、Ｃ６〜Ｃ１０アリール、Ｃ５〜Ｃ１０ヘテロアリール、Ｃ７〜１２アリールアルキルまたはＣ６〜Ｃ１２ヘテロアリールアルキルであり、そのそれぞれがハロ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４ヘテロアルキル、Ｃ１〜Ｃ６アシル、Ｃ１〜Ｃ６ヘテロアシル、ヒドロキシ、アミノおよび＝Ｏから選択される一つまたは複数の基で置換されてもよく；
２つのＲ'は結合してＮ、ＯおよびＳから選択される３つまでのヘテロ原子を任意に含む３〜７員の環を形成することができ、
Ｒ４はＨ、またはＣ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６ヘテロアルキルおよびＣ１〜Ｃ６アシルから成る群から選択される置換されてもよい員であり；
Ｒ５はそれぞれ独立してＨ、またはＣ１〜１０アルキル、Ｃ２〜１０アルケニル、Ｃ２〜１０ヘテロアルキル、Ｃ３〜８環状炭素およびＣ３〜８複素環からなる群から選択される置換されてもよい員であり、更に置換されてもよい炭素環またはヘテロ環に任意に融合し；またはＲ５は置換されてもよいＣ３〜８環状炭素またはＣ３〜８複素環で置換されたＣ１〜１０アルキル、Ｃ２〜１０アルケニルまたはＣ２〜１０ヘテロアルキルであり；
各−ＮＲ４Ｒ５において、Ｒ４およびＲ５はＮと一緒になって、置換されてもよい３〜８員の環を形成してもよく、該環は、環員としてＮ、ＯおよびＳから選択される更なるヘテロ原子を含んでもよく；
式（Ｉ）中の−ＮＲ４Ｒ５が−ＮＨΦであり、Φが置換されてもよいフェニルである場合：
Ｚ５〜Ｚ８の全てがＣＨであるかもしくはＺ５−Ｚ８のうちの１つがＮであるならば、Ｚ１〜Ｚ４のうちの少なくとも１つはＣＲ３であり、少なくとも１つのＲ３は水素以外の置換基でなければならず；
もしくはＲ３がＨであるならば、Φは置換されなければならず；
もしくはＺ５〜Ｚ８の全てがＣＨであるもしくはＺ５〜Ｚ８のうちの１つがＮであるならば、Ｚ２はＣ−ＯＲ"ではなく、Ｚ３はＮＨ２、ＮＯ２、ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｒ"またはＮＨＣ（＝Ｏ）−ＯＲ"ではなく、ここでＲ"はＣ１〜Ｃ４アルキルである。
【０２３５】
式Ｉの一実施形態において、前記化合物は構造式Ｉａ、Ｉｂ、ＩｃまたはＩｄで表わされ：
2013506836.tif 000006
またはその薬理学的に許容できる塩、その溶媒和化合物および／またはそのプロドラッグであり；式中：
Ｚ５はＮまたはＣＲ６Ａであり；
Ｒ６Ａ、Ｒ６Ｂ、Ｒ６ＣおよびＲ８はそれぞれ独立してＨ、または置換されてもよいＣ１〜Ｃ８アルキル基、Ｃ２〜Ｃ８ヘテロアルキル基、Ｃ２〜Ｃ８アルケニル基、Ｃ２〜Ｃ８ヘテロアルケニル基、Ｃ２〜Ｃ８アルキニル基、Ｃ２〜Ｃ８ヘテロアルキニル基、Ｃ１〜Ｃ８アシル基、Ｃ２〜Ｃ８ヘテロアシル基、Ｃ６〜Ｃ１０アリール基、Ｃ５〜Ｃ１２ヘテロアリール基、Ｃ７〜Ｃ１２アリールアルキル基またはＣ６〜Ｃ１２ヘテロアリールアルキル基であり、
もしくはＲ６Ａ、Ｒ６Ｂ、Ｒ６ＣおよびＲ８はそれぞれ独立してハロ、ＣＦ３、ＣＦＮ、ＯＲ、ＮＲ２、ＮＲＯＲ、ＮＲＮＲ２、ＳＲ、ＳＯＲ、ＳＯ２Ｒ、ＳＯ２ＮＲ２、ＮＲＳＯ２Ｒ、ＮＲＣＯＮＲ２、ＮＲＣＯＯＲ、ＮＲＣＯＲ、ＣＮ、ＣＯＯＲ、カルボキシバイオイソスター、ＣＯＮＲ２、ＯＯＣＲ、ＣＯＲまたはＮＯ２であり、
Ｒ９は独立して置換されてもよいＣ１〜Ｃ８アルキル基、Ｃ２〜Ｃ８ヘテロアルキル基、Ｃ２〜Ｃ８アルケニル基、Ｃ２〜Ｃ８ヘテロアルケニル基、Ｃ２〜Ｃ８アルキニル基、Ｃ２〜Ｃ８ヘテロアルキニル基、Ｃ１〜Ｃ８アシル基、Ｃ２〜Ｃ８ヘテロアシル基、Ｃ６〜Ｃ１０アリール基、Ｃ５〜Ｃ１２ヘテロアリール基、Ｃ７〜Ｃ１２アリールアルキル基またはＣ６〜Ｃ１２ヘテロアリールアルキル基であり、
もしくはＲ９は独立してハロ、ＯＲ、ＮＲ２、ＮＲＯＲ、ＮＲＮＲ２、ＳＲ、ＳＯＲ、ＳＯ２Ｒ、ＳＯ２ＮＲ２、ＮＲＳＯ２Ｒ、ＮＲＣＯＮＲ２、ＮＲＣＯＯＲ、ＮＲＣＯＲ、ＣＮ、ＣＯＯＲ、ＣＯＮＲ２、ＯＯＣＲ、ＣＯＲまたはＮＯ２であり、
ここで各Ｒは独立してＨ、またはＣ１〜Ｃ８アルキル基、Ｃ２〜Ｃ８ヘテロアルキル基、Ｃ２〜Ｃ８アルケニル基、Ｃ２〜Ｃ８ヘテロアルケニル基、Ｃ２〜Ｃ８アルキニル基、Ｃ２〜Ｃ８ヘテロアルキニル基、Ｃ１〜Ｃ８アシル基、Ｃ２〜Ｃ８ヘテロアシル基、Ｃ６〜Ｃ１０アリール基、Ｃ５〜Ｃ１０ヘテロアリール基、Ｃ７〜Ｃ１２アリールアルキル基またはＣ６〜Ｃ１２ヘテロアリールアルキル基であり、
同じ原子または隣接する原子に結合している２つのＲは結合して一つまたは複数のＮ、ＯまたはＳを任意に含む３〜８員の環を形成し；
各Ｒ基および２つのＲ基が一緒になって結合して形成された各環は、ハロ、＝Ｏ、＝Ｎ−ＣＮ、＝Ｎ−ＯＲ'、＝ＮＲ'、ＯＲ'、ＮＲ'２、ＳＲ'、ＳＯ２Ｒ'、ＳＯ２ＮＲ'２、ＮＲ'ＳＯ２Ｒ'、ＮＲ'ＣＯＮＲ'２、ＮＲ'ＣＯＯＲ'、ＮＲ'ＣＯＲ'、ＣＮ、ＣＯＯＲ'、ＣＯＮＲ'２、ＯＯＣＲ'、ＣＯＲ'およびＮＯ２から選択される一つまたは複数の置換基で置換されてもよく、
ここで各Ｒ'は独立してＨ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６ヘテロアルキル、Ｃ１〜Ｃ６アシル、Ｃ２〜Ｃ６ヘテロアシル、Ｃ６〜Ｃ１０アリール、Ｃ５〜Ｃ１０ヘテロアリール、Ｃ７〜１２アリールアルキルまたはＣ６〜１２ヘテロアリールアルキルであり、そのそれぞれがハロ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４ヘテロアルキル、Ｃ１〜Ｃ６アシル、Ｃ１〜Ｃ６ヘテロアシル、ヒドロキシ、アミノおよび＝Ｏから選択される一つまたは複数の基で置換されてもよく；
２つのＲ'は結合してＮ、ＯおよびＳから選択される３つまでのヘテロ原子を任意に含む３〜７員の環を形成することができ、
ｎは０から４であり；
ｐは０から４である。
【０２３６】
式Ｉの特定の実施形態において、前記化合物は下記の化合物からなる群から選択される。
2013506836.tif 000007
2013506836.tif 000008
【０２３７】
本明細書に記載される方法の特定の実施形態において、ＣＫ２阻害剤は化合物Ｋ（ＣＸ−４９４５）：
2013506836.tif 000009
もしくはその薬理学的に許容できる塩またはエステルである。
【０２３８】
本明細書で使用するとき、「化合物Ｋ」という用語はＣＸ−４９４５と同義的に用いられており、ファーストインクラスの、強力且つ選択的で経口投与可能な、好適な薬物特性を有する、ＣＫ２のＡＴＰ−競合的阻害剤を意味している。ＣＸ−４９４５は現在、進行性固形腫瘍、キャッスルマン病および多発性骨髄腫を含むいくつかの異なる癌型の治療に関して研究がなされている。例えば、"CX-4945, an Orally Bioavailable Selective inhibitor of Protein Kinase CK2, inhibits Survival and Angiogenic Signaling and Exhibits Antitumor Efficacy"、Siddiqui-Jain, A.ら、Cancer Research（投稿中）；および"Discovery and Structure Activity Relationship of CX−4945, a First-in-Class Potent, Selective and Orally Available inhibitor of Protein Kinase CK2 for the Treatment of Cancer"、Pierre, F.ら、J. Med. Chem.（投稿予定）を参照されたい。ＣＸ−４９４５は非常に強力なＣＫ２阻害剤であり、ＣＫ２に対するＩＣ５０は０．００１μＭである。図２を参照されたいが、そこでは種々のＣＸ−４９４５類似体と比較して、ＣＸ−４９４５のＣＫ２阻害活性が示されている。表２に示すように、ＣＸ−４９４５はＣＫ２αおよびＣＫ２α'サブユニットに対して高い特異性を有する。
（表２）ＣＸ−４９４５は高い選択性を有するＣＫ２阻害剤である。
2013506836.tif 000010
【０２３９】
ＣＫ２を発現する腫瘍を有する患者におけるＣＸ−４９４５の進行中の第Ｉ相臨床試験が、実施例１に記載されている。ＣＸ−４９４５は種々の癌細胞株において細胞増殖を阻害し、複数の癌の異種移植モデルにおいて効果的であることが見出されている。さらに、ＣＸ−４９４５は種を超えて経口投与可能であり（％Ｆ  ２０〜４８）、５ＣＹＰアイソフォームおよびｈＥＲＧチャネルをインビトロで有意に阻害せず、突然変異を誘発しない。
【０２４０】
図３に示すように、ＣＸ−４９４５は癌細胞および正常細胞の間で異なる感受性を示す。特に、ＣＸ−４９４５は癌細胞において有意水準のアポトーシスを誘導するが、正常細胞は影響を受けないままである。インビボにおいて、ＣＸ−４９４５は乳癌および卵巣癌のモデルを含む複数のモデルにおける、腫瘍増殖および薬力学的マーカーを阻害する。図４、５Ａ（乳癌）、および図５Ｂ（卵巣癌）を参照されたい。更に、ＣＸ−４９４５への全血漿曝露はＢｘＰＣ−３（膵癌）異種移植片における腫瘍容積の縮小に相関する（図６参照）。
【０２４１】
他の特定の実施形態において、ＣＫ２阻害剤は式：
2013506836.tif 000011
を有する化合物（化合物１または化合物２）、もしくはその薬理学的に許容できる塩またはエステルである。
【０２４２】
化合物１はＣＫ２阻害に対し６ｎＭのＩＣ５０を示し；化合物２は約９ｎＭのＩＣ５０を示した（ＣＫ２阻害に対し１ｎＭのＩＣ５０を示すＣＸ−４９４５と比較して、図１および表２を参照）。
【０２４３】
他の特定の実施形態において、ＣＫ２阻害剤はＤＲＢ、エモジン、ＤＭＡＴ、ＴＢＢ、レゾルフィン、エラグ酸、ＩＱＡおよびケルセチンから選択される。
【０２４４】
上記のような本発明の化合物は当業者に周知の方法、技術および材料を用いて合成することができ、前記方法、技術および材料は、例えば、March, ADVANCED ORGANIC CHEMISTRY 4.sup.th Ed., (Wiley 1992); Carey and Sundberg, ADVANCED ORGANIC CHEMISTY 3.sup.rd Ed., Vols. A and B (Plenum 1992)、および Green and Wuts, PROTECTIVE GROUPS IN ORGANIC SYNTHESIS 2.sup.nd Ed. (Wiley 1991)に記載されている。本発明の化合物およびその中間体を調製するのに有用な出発物質は例えば下記の会社から市販されている：アルドリッチ・ケミカル社（ウィスコンシン州、ミルウォーキー）、シグマ・ケミカル社（ミズーリ州、セントルイス）、メイブリッジ社（英国コーンウォール州）、アシネックス（Ａｓｉｎｅｘ）社（ノースカロライナ州、ウィンストン・セーレム）、ケムブリッジ社（カリフォルニア州、サンディエゴ）、ケムディブ（ＣｈｅｍＤｉｖ）社（カリフォルニア州、サンディエゴ）、スペックス（ＳＰＥＣＳ）社（オランダ、デルフト）、ティメテック（Ｔｉｍｔｅｃ）社（デラウェア州、ニューワーク）。あるいは、前記出発物質は周知の合成法により調製することができ、例えば、Harrison et al., "Compendium of Synthetic Organic Methods", Vols. 1-8 (John Wiley and Sons, 1971-1996); "Beilstein Handbook of Organic Chemistry," Beilstein institute of Organic Chemistry, Frankfurt, Germany; Feiser et al., "Reagents for Organic Synthesis," Volumes 1-21, Wiley interscience; Trost et al., "Comprehensive Organic Synthesis," Pergamon Press, 1991; "Theilheimer's Synthetic Methods of Organic Chemistry," Volumes 1-45, Karger, 1991; March, "Advanced Organic Chemistry," Wiley interscience, 1991; Larock "Comprehensive Organic Transformations," VCH Publishers, 1989; Paquette, "Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis," 3d Edition, John Wiley & Sons, 1995を参照されたい。本化合物および/またはその出発物質を合成するための他の方法はどちらも当分野で報告されており、当業者には容易に明らかであろう。前記試薬および/または保護基の代替は、上記の参考文献および当業者に周知の他の概論に見出され得る。
【０２４５】
本化合物の調製には、一つまたは複数の保護および脱保護ステップが含まれ得る（例えば、アセタール基の形成および除去）。好適な保護基を選択する指針は、例えば、Greene & Wuts, "Protective Groups in Organic Synthesis," Wiley interscience, 1999に見出され得る。更に、前記調製には、カラムクロマトグラフィ、フラッシュ・クロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）、再結晶、蒸留、高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）等の種々の精製が含まれ得る。また、水素イオンおよび炭素１３核磁気共鳴（１Ｈおよび１３Ｃ  ＮＭＲ）、赤外および紫外分光法（ＩＲおよびＵＶ）、Ｘ線結晶解析、元素分析（ＥＡ）、ＨＰＬＣおよび質量分析（ＭＳ）等の化学反応産物を同定および定量化するための、化学分野において周知の種々の技術も同様に使用され得る。前記調製には、化学分野で周知である、保護および脱保護、精製並びに同定および定量化の他の任意の方法を含んでもよい。
【０２４６】
本ＣＫ２阻害剤の調製に関する更なる記述は、２００７年８月３１日に出願された米国実用特許出願第１１／８４９，２３０号（２００９年４月２３日に第ＵＳ２００９／０１０５２３３号として公開）に見出され得る。前記出願の内容はあらゆる目的でその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０２４７】
「本発明の化合物」、「これらの化合物」、「このような化合物」、「前記化合物」および「本化合物」という用語は、本明細書に記述された構造式、例えば式（Ａ）、（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（Ｉａ）、（Ｉｂ）、（Ｉｃ）および（Ｉｄ）により包含される化合物を意味し、本明細書に記載される構造を式内に含むいかなる具体的な化合物も含まれる。化合物は化学構造および／または化学名のいずれかにより特定され得る。化学構造および化学名が矛盾する場合、化学構造により化合物は同定される。更に、本化合物はＣＫ２タンパク質の生物活性を阻害することができ、それにより本明細書では「阻害剤」または「ＣＫ２阻害剤」とも呼称される。式（Ａ）、（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（Ｉａ）、（Ｉｂ）、（Ｉｃ）および（Ｉｄ）の化合物、並びに本明細書に記載の任意の具体的な化合物は、例示的な「阻害剤」である。
【０２４８】
本化合物は一つまたは複数のキラル中心および／または二重結合を含んでよく、それゆえ、例えば二重結合異性体（すなわちＥおよびＺ等の幾何異性体）、鏡像異性体またはジアステレオマー等の、立体異性体として存在し得る。本発明はそれぞれの単離した立体異性体、並びに、ラセミ混合物およびジアステレオマーの混合物を含む、キラル純度が異なる立体異性体の混合物を含む。従って、本明細書に記載される化学構造は、例示された化合物の全ての可能な鏡像異性体および立体異性体を包含し、立体異性的に純粋な形態（例えば、幾何的に純粋、鏡像異性体的に純粋またはジアスレレオマー的に純粋）並びに鏡像異性体および立体異性体の混合物を含む。鏡像異性体および立体異性体の混合物は、当業者に周知である分離技術またはキラル合成技術を使用して成分鏡像異性体または成分立体異性体に分離され得る。本発明はそれぞれの単離された立体異性体並びにラセミ混合物を含むキラル純度が異なる立体異性体の混合物を含む。本発明はまた種々のジアステレオマーをも包含する。他の構造が具体的な異性体を描写するために記載され得るが、単に便宜のためのものであり、描写されたオレフィン異性体に本発明を限定することを意図していない。
【０２４９】
本化合物はまたいくつかの互変異性型で存在してもよく、ある互変異性体に関する本明細書の描写は単に便宜のためものであり、示された形態の他の互変異性体をも包含することを理解されたい。従って、本明細書に描写された化学構造は、例示された化合物の全ての可能な互変異性型を包含する。本明細書で使用される「互変異性体」という用語は、非常に容易く互いへと変化し、平衡状態で一緒に存在できる異性体を意味する。例えば、ケトンおよびエノールは１つの化合物の２つの互変異性型である。他の実施例において、置換された１、２、４−トリアゾール誘導体は下記に示す少なくとも３つの互変異性型で存在し得る：
2013506836.tif 000012
ＲＴ１はＨまたは置換されてもよいアルキルである。
ＲＴ２は置換されてもよいアリールである。
【０２５０】
本発明の化合物は、塩として調製可能とするためにしばしばイオン性基を有する。その場合、前記化合物に言及がなされる場合はいつでも、薬理学的に許容できる塩もまた使用され得ることが当該分野では理解される。これらの塩は無機または有機酸を含む酸付加塩であってもよく、本発明の化合物が酸の形態（acidic form）である場合は、前記塩は無機または有機塩基から調製されてもよい。しばしば、前記化合物は薬理学的に許容される酸または塩基の付加生成物として調製される、薬理学的に許容できる塩として調製され使用される。好適な薬理学的に許容される酸および塩基は当技術分野で周知であり、例えば、酸付加塩を形成するための塩酸、硫酸、臭化水素、酢酸、乳酸、クエン酸、酒石酸、並びに塩基性塩を形成するための水酸化カリウム、水酸化ナトリウム、水酸化アンモニウム、カフェイン、種々のアミン等である。適切な塩を調製するための方法は当分野において十分に確立されている。場合により、前記化合物は酸性および塩基性官能基を両方含んでもよく、その場合２つのイオン化基が含まれ得るが実効電荷は持たない。薬理学的に許容できる塩およびそれらの製剤を調製するための標準方法は当技術分野において周知であり、種々の参考文献で開示されていて、例えば"Remington： The Science and Practice of Pharmacy"、A. Gennaro、ed.、２０th edition、Lippincott、Williams & Wilkins、Philadelphia、PAが含まれる。
【０２５１】
本明細書で使用される「溶媒和化合物」という用語は、溶媒和（溶媒分子および溶質分子またはイオンの混合）により形成される化合物、もしくは一つまたは複数の溶媒分子を有する溶質イオンまたは分子、すなわち本発明の化合物からなる集合体を意味する。水が溶媒である場合、対応する溶媒和化合物は「水和物」である。例えば水和物には、これらに限定されないが、半水化物、一水和物、二水和物、三水和物、六水和物等が含まれる。本化合物の薬理学的に許容できる塩および／またはプロドラッグは溶媒和化合物の形態でも存在し得ることは、当業者によって理解されるべきである。溶媒和化合物は通常、本化合物の調製のいずれかの部分である水和反応を介して、または本発明の無水化合物による水分の自然吸収を介して、形成される。
【０２５２】
「エステル」という用語は本化合物の任意のエステルを意味し、その中で分子の任意の−ＣＯＯＨ官能基が−ＣＯＯＲ官能基に置換され、前記エステルのＲ部分は任意の炭素含有基であり、その炭素含有基は安定したエステル部分を形成し、限定はされないが前記エステル部分には、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルアルキルおよび置換されたその誘導体が含まれる。本化合物の加水分解性エステルは、そのカルボキシル基が加水分解性エステル基の形態で存在する化合物である。すなわち、これらのエステルは薬理学的に許容され、インビボにおいて加水分解され対応するカルボキシル酸となり得る。これらのエステルは通常のエステルであり得、例えばピバロイルオキシメチルエステルおよび１−ピバロイルオキシエチルエステル等の低級アルカノイルオキシアルキルエステル；例えばメトキシカルボニルオキシメチルエステル、１−エトキシカルボニルオキシエチルエステルおよび１−イソプロピルカルボニルオキシエチルエステル等の低級アルコキシカルボニルアルキルエステル；例えばメトキシメチルエステル、ラクトニルエステル、ベンゾフランケトエステル、チオベンゾフランケトエステル等の低級アルコキシメチルエステル；並びに、例えばアセチルアミノメチルエステル等の低級アルカノイルアミノメチルエステルが含まれる。他のエステルもまた使用することができ、例えばベンジルエステルおよびシアノメチルエステルが含まれる。これらのエステルの他の実施例には以下が含まれる：（２，２−ジメチル−１−オキシプロピルオキシ）メチルエステル；（１ＲＳ）−１−アセチルエチルエステル、２−［（２−メチルプロピルオキシ）カルボニル］−２−ペンテニルエステル、１−［［（１−メチルエトキシ）カルボニル］−オキシ］エチルエステル；イロプロピルオキシカルボニルオキシエチルエステル、（５−メチル−２−オキソ−１，３−ジオキソール−４−イル）メチルエステル、１−［［（シクロヘキシルオキシ）カルボニル］オキシ］エチルエステル；３，３−ジメチル−２−オキソブチルエステル。本化合物の加水分解性エステルは従来の方法を用いて前記化合物の遊離カルボキシル基で形成し得ることは、当業者には明らかである。代表的なエステルには、ピバロイルオキシメチルエステル、イロプロピルオキシカルボニルオキシエチルエステルおよび（５−メチル−２−オキソ−１，３−ジオキソール−４−イル）メチルエステルが含まれる。
【０２５３】
「プロドラッグ」という用語は薬理学的活性化合物の前駆物質を意味し、その中で前駆物質自体は薬理学的活性があってもなくてもよいが、投与時に、代謝的または他の方法のいずれかにより、重要な薬理学的活性化合物または薬剤に変換されるであろう。例えば、プロドラッグは薬理学的活性化合物のエステル、エーテルまたはアミドの形態であり得る。種々のプロドラッグが調製されており、種々の医薬品のために開示されている。例えば、Bundgaard, H. and Moss, J., J. Pharm. Sci. 78: 122-126 (1989)を参照されたい。このように、このようなプロドラッグを通常使用される有機合成技術を用いて調製する方法は当業者に周知である。
【０２５４】
「保護基」という用語は、分子面（molecule mask）の反応性官能基に結合したときにその官能基の反応性を減少または阻害する、原子の集団を意味する。保護基の例は、Green et al., "Protective Groups in Organic Chemistry", (Wiley, 2nd ed. 1991) およびHarrison et al., "Compendium of Synthetic Organic Methods", Vols. 1−8 (John Wiley and Sons, 1971−1996)に見出すことができる。代表的なアミノ保護基には、これらに限定されないが、ホルミル、アセチル、トリフルオロアセチル、ベンジル、ベンジルオキシカルボニル（ＣＢＺ）、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）、トリメチルシリル（ＴＭＳ）、２−トリメチルシリル−エタンスルホニル（ＳＥＳ）、トリチルおよび置換されたトリチル、アリルオキシカルボニル、９−フルオレニルメチルオキシカルボニル（ＦＭＯＣ）、ニトロ−ベラチルオキシカルボニル（ＮＶＯＣ）等、が含まれる。代表的なヒドロキシ保護基には、これらに限定されないが、ヒドロキシ基がアシル化またはアルキル化されている、ベンジルおよびトリチルエーテル並びにアルキルエーテル、テトラヒドロピラニルエーテル、トリアルキルシリルエーテルおよびアリルエーテルが含まれる。
【０２５５】
本明細書で使用される場合、「アルキル」、「アルケニル」および「アルキニル」という用語は直鎖、分岐鎖および環式の一価のヒドロカルビルラジカル、並びにその組み合わせを意味し、それらが非置換のものである場合ＣおよびＨのみを含む。例として、メチル、エチル、イソブチル、シクロヘキシル、シクロペンチルエチル、２-プロペニル、３-ブチニル等が挙げられる。このような基それぞれにおける炭素原子の総数は本明細書に記載されることがあり、例えば、前記基が１０個までの炭素原子を含み得る場合、前記基は１〜１０ＣまたはＣ１〜Ｃ１０もしくはＣ１〜１０と表わされ得る。ヘテロ原子（通常Ｎ、ＯおよびＳ）がヘテロアルキル基として炭素原子を置換してもよい場合、例えば、基を記載する数字は、例えばＣ１〜Ｃ６等と書かれていても、基の中に含まれる炭素原子の数と、炭素原子の置換として記述しようとしている環の骨格または鎖に含まれるようなヘテロ原子の数の合計を表わす。
【０２５６】
通常、本発明のアルキル、アルケニルおよびアルキニル置換基は１〜１０Ｃ（アルキル）または２〜１０Ｃ（アルケニルまたはアルキニル）を含み、好ましくは１〜８Ｃ（アルキル）または２〜８Ｃ（アルケニルまたはアルキニル）を含み、時に１〜４Ｃ（アルキル）または２〜４Ｃ（アルケニルまたはアルキニル）を含む場合がある。単一の基は２種類以上の多重結合または２つ上の多重結合を含むことができ、少なくとも一つの炭素炭素二重結合を含む場合、このような基は「アルケニル」という用語の定義の中に含まれ、少なくとも一つの炭素炭素三重結合を含む場合、「アルキニル」という用語の定義の中に含まれる。
【０２５７】
アルキル、アルケニルおよびアルキニル基は、置換が化学的に意味をなす範囲でしばしば置換されてもよい。典型的な置換基には、これらに限定されないが、ハロ、＝Ｏ、＝Ｎ−ＣＮ、＝Ｎ−ＯＲ、＝ＮＲ、ＯＲ、ＮＲ２、ＳＲ、ＳＯ２Ｒ、ＳＯ２ＮＲ２、ＮＲＳＯ２Ｒ、ＮＲＣＯＮＲ２、ＮＲＣＳＮＲ２、ＮＲＣ（＝ＮＲ）ＮＲ２、ＮＲＣＯＯＲ、ＮＲＣＯＲ、ＣＮ、Ｃ≡ＣＲ、ＣＯＯＲ、ＣＯＮＲ２、ＯＯＣＲ、ＣＯＲおよびＮＯ２が含まれ、ここで各Ｒは独立してＨ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ２〜Ｃ８ヘテロアルキル、Ｃ１〜Ｃ８アシル、Ｃ２〜Ｃ８ヘテロアシル、Ｃ２〜Ｃ８アルケニル、Ｃ２〜Ｃ８ヘテロアルケニル、Ｃ２〜Ｃ８アルキニル、Ｃ２〜Ｃ８ヘテロアルキニル、Ｃ６〜Ｃ１０アリールまたはＣ５〜Ｃ１０ヘテロアリールであり、各Ｒはハロ、＝Ｏ、＝Ｎ−ＣＮ、＝Ｎ−ＯＲ'、＝ＮＲ'、ＯＲ'、ＮＲ'２、ＳＲ'、ＳＯ２Ｒ'、ＳＯ２ＮＲ'２、ＮＲ'ＳＯ２Ｒ'、ＮＲ'ＣＯＮＲ'２、ＮＲ'ＣＳＮＲ'２、ＮＲ'Ｃ（＝ＮＲ'）ＮＲ'２、ＮＲ'ＣＯＯＲ'、ＮＲ'ＣＯＲ'、ＣＮ、Ｃ≡ＣＲ'、ＣＯＯＲ'、ＣＯＮＲ'２、ＯＯＣＲ'、ＣＯＲ'およびＮＯ２に置換されてもよく、ここで各Ｒ'は独立してＨ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ２〜Ｃ８ヘテロアルキル、Ｃ１〜Ｃ８アシル、Ｃ２〜Ｃ８ヘテロアシル、Ｃ６〜Ｃ１０アリールまたはＣ５〜Ｃ１０ヘテロアリールである。アルキル、アルケニルおよびアルキニル基はまた、Ｃ１〜Ｃ８アシル、Ｃ２〜Ｃ８ヘテロアシル、Ｃ６〜Ｃ１０アリールまたはＣ５〜Ｃ１０ヘテロアリールで置換され得、それぞれが特定の基に適切な置換基により置換され得る。２つのＲまたはＲ'が同じ原子（例えば、ＮＲ２）に接して存在する場合、または一緒に結合している隣接する原子（例えば、−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）Ｒ）に接して存在する場合、前記２つのＲまたはＲ'基はそれらが結合する原子と一緒になって５〜８員の環を形成することができ、前記環はＣ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アシル、ハロ、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ等で置換することができ、環員としてＮ、ＯおよびＳから選択される追加のヘテロ原子を含むことができる。
【０２５８】
本明細書で使用される場合、「置換されてもよい」という用語は、記載された特定の基または複数の基が水素以外の置換基を持たない場合があること、または一つまたは複数の水素以外の置換基を持つ場合があることを示している。特に断りがなければ、存在し得るような置換基の総数は、記載された基の非置換形態上に存在する水素原子の総数に等しい。任意の置換基がカルボニル酸素（＝Ｏ）のように二重結合を介して結合している場合、前記基は２つの利用可能な原子価を占めるため、含まれ得る置換基の総数は利用可能な原子価の数に準じて減少する。
【０２５９】
特定の基またはラジカルを修飾するときに用いられる「置換された」という用語は、特定の基またはラジカルの一つまたは複数の水素原子がそれぞれ互いに独立して同じまたは異なる置換基で置換されることを意味する。
【０２６０】
特定の基またはラジカルに含まれる飽和炭素原子を置換するために有用な置換基は、これらに限定されないが、−Ｒａ、ハロ、−Ｏ−、＝Ｏ、−ＯＲｂ、−ＳＲｂ、−Ｓ−、＝Ｓ、−ＮＲｃＲｃ、＝ＮＲｂ、＝Ｎ−ＯＲｂ、トリハロメチル、−ＣＦ３、−ＣＮ、−ＯＣＮ、−ＳＣＮ、−ＮＯ、−ＮＯ２、＝Ｎ２、−Ｎ３、−Ｓ（Ｏ）２Ｒｂ、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲｂ、−Ｓ（Ｏ）２Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）２ＯＲｂ、−ＯＳ（Ｏ）２Ｒｂ、−ＯＳ（Ｏ）２Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）２ＯＲｂ、−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）２、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲｂ）（Ｏ−）、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲｂ）（ＯＲｂ）、−Ｃ（Ｏ）Ｒｂ、−Ｃ（Ｓ）Ｒｂ、−Ｃ（ＮＲｂ）Ｒｂ、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）ＯＲｂ、−Ｃ（Ｓ）ＯＲｂ、−Ｃ（Ｏ）ＮＲｃＲｃ、−Ｃ（ＮＲｂ）ＮＲｃＲｃ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒｂ、−ＯＣ（Ｓ）Ｒｂ、−ＯＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）ＯＲｂ、−ＯＣ（Ｓ）ＯＲｂ、−ＮＲｂＣ（Ｏ）Ｒｂ、−ＮＲｂＣ（Ｓ）Ｒｂ、−ＮＲｂＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＮＲｂＣ（Ｏ）ＯＲｂ、−ＮＲｂＣ（Ｓ）ＯＲｂ、−ＮＲｂＣ（Ｏ）ＮＲｃＲｃ、−ＮＲｂＣ（ＮＲｂ）Ｒｂおよび−ＮＲｂＣ（ＮＲｂ）ＮＲｃＲｃを含み、ここでＲａはアルキル、シクロアルキル、ヘテロアルキル、シクロヘテロアルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリールおよびヘテロアリールアルキルからなる群から選択され；各Ｒｂは独立して水素またはＲａであり；各Ｒｃは独立してＲｂであるか、あるいは２つのＲｃはそれらが結合している窒素原子と一緒になって４−、５−、６−または７−員のシクロヘテロアルキルを形成し、前記シクロヘテロアルキルはＯ、ＮおよびＳから選択される１から４個の同じまたは異なる追加のヘテロ原子を任意に含み得る。具体的な実施例として、−ＮＲｃＲｃは−ＮＨ２、−ＮＨ−アルキル、Ｎ−ピロリジニルおよびＮ−モルホリニルを含むことが意図されている。他の具体的な実施例として、置換されたアルキルは、−アルキレン−Ｏ−アルキル、−アルキレン−ヘテロアリール、−アルキレン−シクロヘテロアルキル、−アルキレン−Ｃ（Ｏ）ＯＲｂ、−アルキレン−Ｃ（Ｏ）ＮＲｂＲｂおよび−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ３を含むことが意図されている。一つまたは複数の置換基は、それらが結合している原子と一緒になって、シクロアルキルおよびシクロヘテロアルキルを含む環（cyclic ring）を形成し得る。
【０２６１】
同様に、特定の基またはラジカルに含まれる不飽和炭素原子を置換するために有用な置換基は、これらに限定されないが、−Ｒａ、ハロ、−Ｏ-、−ＯＲｂ、−ＳＲｂ、−Ｓ−、−ＮＲｃＲｃ、トリハロメチル、−ＣＦ３、−ＣＮ、−ＯＣＮ、−ＳＣＮ、−ＮＯ、−ＮＯ２、−Ｎ３、−Ｓ（Ｏ）２Ｒｂ、−Ｓ（Ｏ）２Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）２ＯＲｂ、−ＯＳ（Ｏ）２Ｒｂ、−ＯＳ（Ｏ）２Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）２ＯＲｂ、−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）２、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲｂ）（Ｏ−）、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲｂ）（ＯＲｂ）、−Ｃ（Ｏ）Ｒｂ、−Ｃ（Ｓ）Ｒｂ、−Ｃ（ＮＲｂ）Ｒｂ、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）ＯＲｂ、−Ｃ（Ｓ）ＯＲｂ、−Ｃ（Ｏ）ＮＲｃＲｃ、−Ｃ（ＮＲｂ）ＮＲｃＲｃ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒｂ、−ＯＣ（Ｓ）Ｒｂ、−ＯＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）ＯＲｂ、−ＯＣ（Ｓ）ＯＲｂ、−ＮＲｂＣ（Ｏ）Ｒｂ、−ＮＲｂＣ（Ｓ）Ｒｂ、−ＮＲｂＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＮＲｂＣ（Ｏ）ＯＲｂ、−ＮＲｂＣ（Ｓ）ＯＲｂ、−ＮＲｂＣ（Ｏ）ＮＲｃＲｃ、−ＮＲｂＣ（ＮＲｂ）Ｒｂおよび−ＮＲｂＣ（ＮＲｂ）ＮＲｃＲｃが含まれ、ここでＲａ、ＲｂおよびＲｃは前記と同じ定義である。
【０２６２】
ヘテロアルキル基およびシクロヘテロアルキル基に含まれる窒素原子を置換するために有用な置換基は、これらに限定されないが、−Ｒａ、−Ｏ−、−ＯＲｂ、−ＳＲｂ、−Ｓ−、−ＮＲｃＲｃ、トリハロメチル、−ＣＦ３、−ＣＮ、−ＮＯ、−ＮＯ２、−Ｓ（Ｏ）２Ｒｂ、−Ｓ（Ｏ）２Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）２ＯＲｂ、−ＯＳ（Ｏ）２Ｒｂ、−ＯＳ（Ｏ）２Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）２ＯＲｂ、−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）２、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲｂ）（Ｏ−）、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲｂ）（ＯＲｂ）、−Ｃ（Ｏ）Ｒｂ、−Ｃ（Ｓ）Ｒｂ、−Ｃ（ＮＲｂ）Ｒｂ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲｂ、−Ｃ（Ｓ）ＯＲｂ、−Ｃ（Ｏ）ＮＲｃＲｃ、−Ｃ（ＮＲｂ）ＮＲｃＲｃ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒｂ、−ＯＣ（Ｓ）Ｒｂ、−ＯＣ（Ｏ）ＯＲｂ、−ＯＣ（Ｓ）ＯＲｂ、−ＮＲｂＣ（Ｏ）Ｒｂ、−ＮＲｂＣ（Ｓ）Ｒｂ、−ＮＲｂＣ（Ｏ）ＯＲｂ、−ＮＲｂＣ（Ｓ）ＯＲｂ、−ＮＲｂＣ（Ｏ）ＮＲｃＲｃ、−ＮＲｂＣ（ＮＲｂ）Ｒｂおよび−ＮＲｂＣ（ＮＲｂ）ＮＲｃＲｃが含まれ、ここでＲａ、ＲｂおよびＲｃは前記と同じ定義である。
【０２６３】
「アセチレン」置換基は置換されてもよい２〜１０Ｃアルキニル基であり、式−Ｃ≡Ｃ−Ｒａで表わされ、ここでＲａはＨ、またはＣ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ２〜Ｃ８ヘテロアルキル、Ｃ２〜Ｃ８アルケニル、Ｃ２〜Ｃ８ヘテロアルケニル、Ｃ２〜Ｃ８アルキニル、Ｃ２〜Ｃ８ヘテロアルキニル、Ｃ１〜Ｃ８アシル、Ｃ２〜Ｃ８ヘテロアシル、Ｃ６〜Ｃ１０アリール、Ｃ５〜Ｃ１０ヘテロアリール、Ｃ７〜Ｃ１２アリールアルキルまたはＣ６〜Ｃ１２ヘテロアリールアルキルであり、各Ｒａ基はハロ、＝Ｏ、＝Ｎ−ＣＮ、＝Ｎ−ＯＲ'、＝ＮＲ'、ＯＲ'、ＮＲ'２、ＳＲ'、ＳＯ２Ｒ'、ＳＯ２ＮＲ'２、ＮＲ'ＳＯ２Ｒ'、ＮＲ'ＣＯＮＲ'２、ＮＲ'ＣＳＮＲ'２、ＮＲ'Ｃ（＝ＮＲ'）ＮＲ'２、ＮＲ'ＣＯＯＲ'、ＮＲ'ＣＯＲ'、ＣＮ、ＣＯＯＲ'、ＣＯＮＲ'２、ＯＯＣＲ'、ＣＯＲ'およびＮＯ２から選択される一つまたは複数の置換基で置換されてもよく、ここで各Ｒ'は独立してＨ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６ヘテロアルキル、Ｃ１〜Ｃ６アシル、Ｃ２〜Ｃ６ヘテロアシル、Ｃ６〜Ｃ１０アリール、Ｃ５〜Ｃ１０ヘテロアリール、Ｃ７〜１２アリールアルキルまたはＣ６〜１２ヘテロアリールアルキルであり、そのそれぞれがハロ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４ヘテロアルキル、Ｃ１〜Ｃ６アシル、Ｃ１〜Ｃ６ヘテロアシル、ヒドロキシ、アミノおよび＝Ｏから選択される一つまたは複数の基で置換されてもよく；ここで２つのＲ'は結合して、Ｎ、ＯおよびＳから選択される３つまでのヘテロ原子を任意に含む３〜７員の環を形成することができる。いくつかの実施形態では、−Ｃ≡Ｃ−ＲａのＲａはＨまたはＭｅである。２つのＲまたはＲ'が同じ原子（例えば、ＮＲ２）に接して、または一緒になって結合している隣接する原子（例えば、−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）Ｒ）に接して存在している場合、前記２つのＲまたはＲ'基は、それらが結合している原子と一緒になって５〜８員の環を形成することができ、前記５〜８員の環はＣ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アシル、ハロ、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ等で置換することができ、Ｎ、ＯおよびＳから選択される追加のヘテロ原子を環員として含むことができる。
【０２６４】
「ヘテロアルキル」、「ヘテロアルケニル」および「ヘテロアルキニル」等は、同様に、対応するヒドロカルビル（アルキル、アルケニルおよびアルキニル）基と定義されるが、「ヘテロ」という用語は骨格残基に含まれる１〜３個のＯ，ＳまたはＮヘテロ原子もしくはその組み合わせを含む基を意味し；従って、対応するアルキル、アルケニルまたはアルキニル基の少なくとも１つの炭素原子は特定のヘテロ原子の一つにより置換され、ヘテロアルキル、ヘテロアルケニルまたはヘテロアルキニル基を形成する。アルキル、アルケニルおよびアルキニル基のヘテロ形態に対して典型的且つ好適な大きさは、対応するヒドロカルビル基に対するものと通常同じであり、ヘテロ形態に存在し得る置換基はヒドロカルビル基に対する上記のものと同じである。化学安定性の理由で、特に断りがない限り、このような基は、ニトロ基やスルホニル基のようにオキソ基がＮまたはＳに結合して存在しない限り、３つ以上の隣接するヘテロ原子を含まないことも理解される。
【０２６５】
本明細書で使用される場合、「アルキル」はシクロアルキル基およびシクロアルキルアルキル基を含むが、「シクロアルキル」は、環炭素原子を介して結合する炭素環式の非芳香族基を記述するために本明細書では使用される場合があり、「シクロアルキルアルキル」は、アルキルリンカーを介して前記分子に結合する炭素環式の非芳香族基を記述するために使用される場合がある。同様に、「ヘテロシクリル」は少なくとも１つのヘテロ原子を環員として含み、ＣまたはＮであり得る環原子を介して前記分子に結合する非芳香族環式基を記述するために使用される場合があり；「ヘテロシクリルアルキル」という用語は、リンカーを介して他の分子に結合するような基を記述するために用いられる場合がある。シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクリルおよびヘテロシクリルアルキル基に対して適切な大きさ（ｓｉｚｅ）および置換基はアルキル基に対する上記の置換基と同じである。本明細書で使用される場合、これらの用語は、芳香族の環でない限り、１つまたは２つの二重結合を含む環をも含む。
【０２６６】
本明細書で使用される場合、「アシル」はカルボニル炭素原子の２つの利用可能な原子価位置のうちの一つに結合したアルキル、アルケニル、アルキニル、アリールまたはアリールアルキルのラジカルを含む基を包含し、「ヘテロアシル」という用語は、カルボニル基の炭素以外の少なくとも１つの炭素がＮ、ＯおよびＳから選択されるヘテロ原子により置換されている対応する基を意味する。従って、ヘテロアシルは、例えば−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲおよび−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ２並びに−Ｃ（＝Ｏ）−ヘテロアリールを含む。
【０２６７】
アシル基およびヘテロアシル基は、カルボニル炭素原子の自由原子価（open valence）を介して任意の基または分子に結合している。通常、前記基または分子は、ホルミル、アセチル、ピバロイルおよびベンゾイルを含むＣ１〜Ｃ８アシル基、並びにメトキシアセチル、エトキシカルボニルおよび４−ピリジノイルを含むＣ２〜Ｃ８ヘテロアシル基である。ヒドロカルビル基、アリール基、およびアシル基またはヘテロアシル基を含むようなヘテロ形態の基は、アシル基またはヘテロアシル基の対応するそれぞれの成分に一般的に適切である置換基として本明細書で記載される置換基と置換され得る。
【０２６８】
「芳香族」部分または「アリール」部分は、芳香族性という周知の特徴を有する単環式部分または融合した二環式部分を意味し；例としてフェニルおよびナフチルが含まれる。同様に、「ヘテロ芳香族」および「ヘテロアリール」は、Ｏ、ＳおよびＮから選択される一つまたは複数のヘテロ原子を環員として含むような、単環式環または融合した二環式環を意味する。ヘテロ原子を含むことにより、５員環並びに６員環に芳香族性を持たせることができる。典型的なヘテロ芳香族系には、ピリジル、ピリミジル、ピラジニル、チエニル、フラニル、ピロリル、ピラゾリル、チアゾリル、オキサゾリルおよびイミダゾリル等の単環式C５〜C６芳香族基、並びにこれらの単環式基のうちの１つを、フェニル環もしくはインドリル、ベンジミダゾリル、インダゾリル、ベンゾトリアゾリル、イソキノリル、キノリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾフラニル、ピラゾロピリジル、キナゾリニル、キノキサリニル、シンノニリル等のC８〜C１０二環式基を形成するための任意のヘテロ芳香族単環式基のうちの１つと、融合することにより形成される融合二環式部分が含まれる。環構造全体の電子分布に関して芳香族性の特徴を有する任意の単環式系または縮合二環式系は、この定義に含まれる。前記分子の残りの部分に直接結合する少なくともその環が芳香族性の特徴を有している場合、二環式基もまた含まれる。典型的には、前記環構造は５〜１２個の環員原子を含む。好ましくは、前記単環式ヘテロアリールは５〜６個の環員を含み、前記二環式ヘテロアリールは８〜１０個の環員を含む。
【０２６９】
アリール部分およびヘテロアリール部分は、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ２〜Ｃ８アルケニル、Ｃ２〜Ｃ８アルキニル、Ｃ５〜Ｃ１２アリール、Ｃ１〜Ｃ８アシルおよびそのヘテロ形態を含む種々の置換基で置換されてもよく、それぞれ自身が更に置換され得；
アリール部分およびヘテロアリール部分に対する他の置換基は、ハロ、ＯＲ、ＮＲ２、ＳＲ、ＳＯ２Ｒ、ＳＯ２ＮＲ２、ＮＲＳＯ２Ｒ、ＮＲＣＯＮＲ２、ＮＲＣＳＮＲ２、ＮＲＣ（＝ＮＲ）ＮＲ２、ＮＲＣＯＯＲ、ＮＲＣＯＲ、ＣＮ、Ｃ≡ＣＲ、ＣＯＯＲ、ＣＯＮＲ２、ＯＯＣＲ、ＣＯＲおよびＮＯ２を含み、ここで各Ｒは独立してＨ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ２〜Ｃ８ヘテロアルキル、Ｃ２〜Ｃ８アルケニル、Ｃ２〜Ｃ８ヘテロアルケニル、Ｃ２〜Ｃ８アルキニル、Ｃ２〜Ｃ８ヘテロアルキニル、Ｃ６〜Ｃ１０アリール、Ｃ５〜Ｃ１０ヘテロアリール、Ｃ７〜Ｃ１２アリールアルキルまたはＣ６〜Ｃ１２ヘテロアリールアルキルであり、各Ｒは前述のようにアルキル基に対して置換されてもよい。２つのＲまたはＲ'が同じ原子（例えば、ＮＲ２）に結合して、または一緒に結合している隣接する原子（例えば、−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）Ｒ）に結合して存在する場合、前記２つのＲまたはＲ'はそれらが結合している原子と一緒になって５〜８員の環を形成することができ、前記５〜８員の環はＣ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アシル、ハロ、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ等と置換されることができ、Ｎ、ＯおよびＳから選択される追加のヘテロ原子を環員として含むことができる。
【０２７０】
アリール基またはヘテロアリール基における置換基は当然ながら、各種このような置換基または置換基の各成分に対して適切であると本明細書に記載された基で更に置換され得る。従って、例えば、アリールアルキル置換基はアリール部分において、アリール基に対して典型的であると本明細書に記載の置換基で置換され得、アルキル部分において、アルキル基に対して典型的または適切であると本明細書に記載の置換基で更に置換され得る。
【０２７１】
同様に、「アリールアルキル」および「ヘテロアリールアルキル」は、芳香族系および芳香族複素環系を意味し、それらは置換もしくは非置換の、飽和もしくは不飽和の、環式もしくは非環式のリンカーを含むアルキレン等の連結基を介して付着点に結合している。典型的には、前記リンカーはＣ１〜Ｃ８アルキルまたはそのヘテロ形態である。このようなリンカーはまた、カルボニル基も含んでよく、それにより前記リンカーがアシル部分またはヘテロアシル部分として置換基を提供できるようになる。アリールアルキル基またはヘテロアリールアルキル基におけるアリール環またはヘテロアリール環は、アリール基に対する上記と同じ置換基と置換され得る。好ましくは、アリールアルキル基は、アリール基並びに非置換または１つまたは２つのＣ１〜Ｃ４アルキル基またはヘテロアルキル基で置換されたＣ１〜Ｃ４アルキレンに対する上記で定義された基で置換されてもよいフェニル環を含み、ここで前記アルキルまたはヘテロアルキル基は任意に閉環しシクロプロパン、ジオキソランまたはオキサシクロペンタンを形成することができる。同様に、ヘテロアリールアルキル基は好ましくは、アリール基および非置換のもしくは１つまたは２つのＣ１〜Ｃ４アルキル基またはヘテロアルキル基で置換されたＣ１〜Ｃ４アルキレンに対し典型的な置換基として上記された基で置換されてもよいＣ５〜Ｃ６単環式ヘテロアリール基を含み、もしくは置換されたフェニル環またはＣ５〜Ｃ６単環式ヘテロアリールおよびＣ１〜Ｃ４ヘテロアルキレンを含み、前記Ｃ１〜Ｃ４ヘテロアルキレンは非置換であるかもしくは１つまたは２つのＣ１〜Ｃ４アルキルまたはヘテロアルキル基で置換されており、前記アルキルまたはヘテロアルキル基は任意に閉環してシクロプロパン、ジオキソランまたはオキサシクロペンタン等の環を形成する。
【０２７２】
アリールアルキル基またはヘテロアリールアルキル基が置換されてもよいと記述された場合、その置換基は基のアルキル部分またはヘテロアルキル部分のどちらか、もしくはアリール部分またはヘテロアリール部分のどちらかに存在し得る。アルキルまたはヘテロアルキル部分上に存在し得る置換基は、アルキル基に対して一般的である上記の置換基と同一であり；アリールまたはヘテロアリール部位に任意に存在する前記置換基は、アリール基に対して一般的である上記の置換基と同一である。
【０２７３】
本明細書で使用される「アリールアルキル」基は、それらが非置換である場合ヒドロカルビル基であり、環およびアルキレンまたは同様のリンカーにおける炭素原子の総数により記述される。従って、ベンジル基はＣ７−アリールアルキル基であり、フェニルエチルはＣ８−アリールアルキルである。
【０２７４】
上記のような「ヘテロアリールアルキル」は、連結基を介して結合するアリール基を含む部分を意味し、アリール部分の少なくとも１つの環原子または連結基中の１つの原子がＮ、ＯおよびＳから選択されるヘテロ原子である「アリールアルキル」とは異なる。ヘテロアリールアルキル基は、結合した環およびリンカー中の原子の総数に従い本明細書に記載され、ヘテロアルキルリンカーを介して結合したアリール基；アルキレン等のヒドロカルビルリンカーを介して結合したヘテロアリール基；ヘテロアルキルリンカーを介して結合したヘテロアリール基が含まれる。従って、例えば、Ｃ７−ヘテロアリールアルキルはピリジルメチル、フェノキシおよびＮ−ピロリルメトキシを含むであろう。
【０２７５】
本明細書で使用される「アルキレン」は二価のヒドロカルビル基であり；二価であることから、２つの他の基と結合することができる。通常、前記「アルキレン」は−（ＣＨ２）ｎ−を意味し、ここでｎは１〜８、好ましくはｎは１〜４であるが、断りがある場合、アルキレンは他の基により置換されてもよく、他の長さであってもよく、その自由原子価（open valence）は鎖の反対端同士にある必要はない。従って、−ＣＨ（Ｍｅ）−および−Ｃ（Ｍｅ）２−は、アルキレンとして称される場合もあり、シクロプロパン−１，１−ジイル等のような環式基も同様である。アルキレン基が置換されている場合、その置換基は本明細書に記載されるようなアルキル基上に典型的に存在するものを含む。
【０２７６】
通常、任意のアルキル、アルケニル、アルキニル、アシル、またはアリールもしくはアリールアルキル基、または置換基中に含まれるこれらの基のうちの１つの任意のヘテロ形態は、それ自体、追加の置換基により置換されてもよい。これらの置換基の性質は、置換基が他に記述されていない限り、一次置換基（primary substituent）自体に関して列挙した置換基と類似している。従って、Ｒ７の具体例が例えばアルキルである場合、このアルキルは、化学的に意味をなし、且つアルキル自体に備わる大きさ限度を害さない場合に、Ｒ７に対する具体例として列挙された残りの置換基により置換されてもよい；例えば、アルキルまたはアルケニルにより置換されたアルキルは、単純にこれらの具体例の炭素原子の上限を拡張するであろうものであり、含まれない。しかしながら、アリール、アミノ、アルコキシ、＝Ｏ等により置換されたアルキルは本発明の範囲に含まれるであろう。これらの置換基の原子は記述されているアルキル、アルケニル等の基を記述するために使用される数に含まれない。置換基の数が記述されていない場合、このようなアルキル、アルケニル、アルキニル、アシルまたはアリール基はそれぞれ、その利用可能な原子価に従った数の置換基で置換され得る；特に、これらの基のいずれもが、例えば、任意のまたは全ての利用可能な原子価でフッ素原子に置換され得る。
【０２７７】
本明細書で使用される「ヘテロ形態」は、アルキル、アリールまたはアシル等の基の誘導体を意味し、その中で指定された炭素環式基の少なくとも１つの炭素原子がＮ、ＯおよびＳから選択されるヘテロ原子により置換されている。従って、アルキル、アルケニル、アルキニル、アシル、アリールおよびアリールアルキルのヘテロ形態は、それぞれ、ヘテロアルキル、ヘテロアルケニル、ヘテロアルキニル、ヘテロアシル、ヘテロアリールおよびヘテロアリールアルキルである。オキソ基がＮまたはＳに結合しニトロまたはスルホニル基を形成する場合以外で、３つ以上のＮ、ＯまたはＳ原子が通常同時に結合しないことが理解される。
【０２７８】
本明細書で使用される「ハロ」にはフルオロ、クロロ、ブロモおよびヨードが含まれる。フルオロおよびクロロがしばしば好まれる。
【０２７９】
本明細書で使用される「アミノ」はＮＨ２を意味するが、アミノが「置換された」または「置換されてもよい」と記述される場合、その用語はＮＲ'Ｒ"を含み、その中でＲ'およびＲ"のそれぞれは独立してＨであるか、もしくはアルキル、アルケニル、アルキニル、アシル、アリールまたはアリールアルキル基もしくはこれらの基の一つのヘテロ形態であり、そのそれぞれが対応する基に対して適切であると本明細書に記載の置換基で置換されてもよい。前記用語は、Ｒ'およびＲ"が一緒になって結合し、３〜８員の環を形成する形態も含み、前記３〜８員の環は飽和、不飽和または芳香族であり、Ｎ、ＯおよびＳから環員として独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を含み、アルキル基に対して適切であると記述された置換基で置換されてもよく、もしくはＮＲ'Ｒ"が芳香族基であるならば、ヘテロアリール基に対して典型的であると記述された置換基で置換されてもよい。
【０２８０】
本明細書で使用される場合、「炭素環」という用語は、環内に炭素原子のみを含む環式化合物を意味し、ここで「ヘテロ環」はヘテロ原子を含む環式化合物を意味する。炭素環式およびヘテロ環式構造は単環式、二環式または多環式構造を有する化合物を包含する。本明細書で使用される場合、これらの用語は、環が芳香族でない限り、１つまたは２つの二重結合を含む環も含む。
【０２８１】
本明細書で使用される場合、「ヘテロ原子」という用語は、窒素、酸素または硫黄等の、炭素または水素以外の任意の原子を意味する。
【０２８２】
ヘテロ環の実例には、これらに限定されないが、テトラヒドロフラン、１，３−ジオキソラン、２，３−ジヒドロフラン、ピラン、テトラヒドロピラン、ベンゾフラン、イソベンゾフラン、１，３−ジヒドロ−イソベンゾフラン、イソキサゾール、４，５−ジヒドロイソキサゾール、ピペリジン、ピロリジン、ピロリジン−２−オン、ピロール、ピリジン、ピリミジン、オクタヒドロ−ピロロ［３，４ｂ］ピリジン、ピペラジン、ピラジン、モルホリン、チオモルホリン、イミダゾール、イミダゾリジン２，４−ジオン、１，３−ジヒドロベンジミダゾール−２−オン、インドール、チアゾール、ベンゾチアゾール、チアジアゾール、チオフェン、テトラヒドロチオフェン１，１−ジオキシド、ジアゼピン、トリアゾール、グアニジン、ジアザビシクロ［２．２．１］ヘプタン、２，５−ジアザビシクロ［２．２．１］ヘプタン、２，３，４，４ａ，９，９ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−β−カルボリン、オキシラン、オキセタン、テトラヒドロピラン、ジオキサン、ラクトン、アジリジン、アゼチジン、ピペリジン、ラクタムが含まれ、ヘテロアリールも包含されてもよい。ヘテロアリールの他の実例は、これらに限定されないが、フラン、ピロール、ピリジン、ピリミジン、イミダゾール、ベンズイミダゾールおよびトリアゾールが含まれる。
【０２８３】
本明細書で使用される場合、「無機置換基」という用語は、炭素を含まない置換基、もしくは水素以外の元素に結合した炭素（例えば、元素状炭素、一酸化炭素、二酸化炭素および炭酸）を含む置換基を意味する。無機置換基の例としては、これらに限定されないが、ニトロ、ハロゲン、アジド、シアノ、スルホニル、スルフィニル、スルホン酸、リン酸等が挙げられる。
【０２８４】
本明細書で使用される「極性置換基」という用語は、電気双極子、および任意に双極子モーメント（例えば、非対称的な極性置換基は双極子モーメントを有し、対称的な極性置換基は双極子モーメントを有さない）を有する任意の置換基を意味する。極性置換基は水素結合を受容するまたは供与する置換基、並びに生理的ｐＨレベルの水溶液中で少なくとも部分的に正または負の電荷を担うであろう基が含まれる。特定の実施形態において、極性置換基は別の化学的部分との非共有結合性水素結合において電子を受容または供与できる置換基である。
【０２８５】
特定の実施形態において、極性置換基は、約７から８またはそれ以上のｐＨで陰イオンとして主に存在する、炭酸、カルボキシバイオイソスターまたは他の酸由来部分（acid-derived moiety）から選択される。他の極性置換基には、これらに限定されないが、ＯＨまたはＮＨ、エーテル酸素、アミン窒素、酸化型の硫黄または窒素、カルボニル、ニトリル、並びに窒素含有または酸素含有の複素環が含まれ、芳香族であるか非芳香族であるかは問わない。いくつかの実施形態では、極性置換基（Ｘとして表記）はカルボン酸またはカルボキシレートバイオイソスターである。
【０２８６】
本明細書で使用される「カルボキシレート バイオイソスター」または「カルボキシバイオイソスター」は、生理的ｐＨでかなりの程度に負に帯電していることを期待される部分を意味する。特定の実施形態において、カルボキシレート バイオイソスターは下記からなる群から選択される部分：
2013506836.tif 000013
および上記の塩であり、ここで各Ｒ７は独立してＨ、またはＣ１〜１０アルキル、Ｃ２〜１０アルケニル、Ｃ２〜１０ヘテロアルキル、Ｃ３〜８環状炭素およびＣ３〜８複素環からなる群から選択される置換されてもよい員であり、前記複素環は任意に融合し追加の置換されてもよい炭素環または複素環となり；もしくはＲ７は、置換されてもよいＣ３〜８炭素環もしくはＣ３〜８複素環で置換されたＣ１〜１０アルキル、Ｃ２〜１０アルケニルまたはＣ２〜１０ヘテロアルキルである。
【０２８７】
特定の実施形態において、極性置換基はカルボン酸、カルボン酸エステル、カルボキサミド、テトラゾール、トリアゾール、オキサジアゾール、オキソチアジアゾール、チアゾール、アミノチアゾール、ヒドロキシチアゾールおよびカルボキシメタンスルホンアミドからなる群から選択される。本明細書に記載の化合物のいくつかの実施形態では、存在する少なくとも一つの極性置換基はカルボン酸もしくはその塩、エステルまたはバイオイソスターである。特定の実施形態において、存在する少なくとも一つの極性置換基は、カルボン酸含有置換基もしくはその塩、エステルまたはバイオイソスターである。後者の実施形態では、極性置換基は、例えば、カルボン酸（もしくはその塩、エステルまたはバイオイソスター）に結合したＣ１〜Ｃ１０アルキルまたはＣ１〜Ｃ１０アルケニルであり得る。
【０２８８】
本明細書で使用される「ソルグループ（ｓｏｌｇｒｏｕｐ）」または「溶解性増強基」という用語は、元々比較的に難溶解性である化合物の生理的溶解性を増強する能力のために選択される分子断片を意味する。水または生体媒質中の任意の特定分子の溶解を促進できる置換基は溶解性増強基としての機能を果たす。可溶化基の例としては、これらに限定されないが、以下が挙げられる：０から１４の範囲のｐＨで水中でイオン化し易い基を含む任意の置換基；塩を形成し易い任意のイオン性基；または大きい極性と大きい双極子モーメントを有し、水分子と強い相互作用を形成することができる任意の置換基。可溶化基の例としては、これらに限定されないが、以下が含まれる：置換アルキルアミン、置換アルキルアルコール、アルキルエーテル、アリールアミン、ピリジン、フェノール、カルボン酸、テトラゾール、スルホンアミド、アミド、スルホニルアミド、スルホン酸、スルフィン酸、リン酸、スルホニルウレア。
【０２８９】
この目的に好適な基には、例えば、式−Ａ−（ＣＨ２）０〜４−Ｇの基が含まれ、ここでＡは不在、ＯまたはＮＲであり、ＲはＨまたはＭｅであり；Ｇはカルボキシ基、カルボキシバイオイソスター、ヒドロキシ、ホスホン酸、スルホン酸もしくは式−ＮＲｙ２またはＰ（Ｏ）（ＯＲｙ）２の基であり得、ここでＲｙは独立してＨまたはＣ１〜Ｃ４アルキルであり、前記Ｃ１〜Ｃ４アルキルはＮＨ２、ＯＨ、ＮＨＭｅ、ＮＭｅ２、ＯＭｅ、ハロまたは＝Ｏ（カルボニル酸素）である基の一つまたは複数（典型的には３つまで）で置換され得；１つのこのような基における２つのＲｙは一緒になって結合して５〜７員の環を形成し、前記５〜７員の環は追加のヘテロ原子（Ｎ、ＯまたはＳ）を環員として任意に含み、Ｃ１〜Ｃ４アルキルで置換されてもよく、前記Ｃ１〜Ｃ４アルキルはＮＨ２、ＯＨ、ＮＨＭｅ、ＮＭｅ２、ＯＭｅ、ハロまたは＝Ｏ（カルボニル酸素）である基の一つまたは複数（典型的には３つまで）でそれ自身が置換され得る。
【０２９０】
ＣＫ２阻害剤を含む治療的併用剤（therapeutic combination）を用いた治療に対するＣＫ２介在疾患の感受性の予測および／または応答のモニタリング
前述の実施形態に加えて、本発明はまた、追加の治療薬と併用した場合のＣＫ２阻害剤による、増殖性疾患および／または炎症性疾患等のＣＫ２介在疾患の感受性の予測および／または応答のモニタリングのためのバイオマーカーを提供する。
【０２９１】
一態様において、本発明は、抗癌剤、抗炎症剤、抗感染剤等の追加の治療薬、並びに
疼痛治療剤（例えば鎮痛剤）および自己免疫障害治療剤と併用して使用された場合の、ＣＫ２阻害剤を用いた治療に対する対象または系の感受性および／または応答性の予測に有用であるバイオマーカーを提供する。従って、一実施形態において、バイオマーカーおよび前記バイオマーカーを測定するための関連方法は、個々の対象または対象集団を、ＣＫ２阻害剤を含む特定の治療的併用剤を用いた治療を目的として選択するために使用され得る。本発明はまた、ＣＫ２阻害剤を含む治療的併用剤を投与される対象における治療の結果をモニタリングまたは予測するための、これらのバイオマーカーの使用に関する。
【０２９２】
本発明に記載されるように、ＣＫ２阻害剤を含む治療的併用剤を用いた治療に対するＣＫ２介在疾患の感受性の予測および／または応答性のモニタリングに有用なバイオマーカーには、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＨＩＦ−１α、ＶＥＧＦ、ＣＫ２αおよび／またはＣＫ２α'サブユニット、ＣＫ２βのｍＲＮＡ発現および／またはポリポプチドレベル（すなわち、タンパク質発現）、並びにリン酸化したＡｋｔのセリン１２９（ｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９）単独のレベルまたは総Ａｋｔポリペプチドに対するレベル（すなわち、ｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９の正規化したレベル）が含まれる。追加のバイオマーカーには、リン酸化したＡｋｔのセリン４７３（ｐ−Ａｋｔ  Ｓ４７３）単独のレベルまたは総Ａｋｔポリペプチドに対するレベル（すなわち、ｐ−Ａｋｔ  Ｓ４７３の正規化したレベル）、リン酸化したｐ２１のスレオニン１４５（ｐ−ｐ２１  Ｔ１４５）単独のレベルまたは総ｐ２１ポリペプチドに対するレベル（すなわち、ｐ−ｐ２１  Ｔ１４５の正規化したレベル）、リン酸化した核内因子−κＢ（ＮＦ−κＢ）のセリン５２９（ｐ−ＮＦ−κＢ  Ｓ５２９）単独のレベルまたは総ＮＦ−κＢポリペプチドに対するレベル（すなわち、ｐ−ＮＦ−κＢ  Ｓ５２９の正規化したレベル）、リン酸化したＳＴＡＴ３のチロシン７０５（ｐ−ＳＴＡＴ３  Ｙ７０５）単独のレベルまたは総ＳＴＡＴ３ポリペプチドに対するレベル（すなわち、ｐ−ＳＴＡＴ３  Ｙ７０５の正規化したレベル）もしくはリン酸化したＪＡＫ２のチロシン１００７／１００８（ｐ−ＪＡＫ２  Ｙ１００７／１００８）単独のレベルまたは総ＪＡＫ２ポリペプチドに対するレベル（すなわち、ｐ−ＪＡＫ２  Ｙ１００７／１００８の正規化したレベル）が含まれる。
【０２９３】
一実施形態において、前記治療的併用剤は、ＣＫ２阻害剤および１つの追加の治療薬を含む。代替的な実施形態において、前記治療用組成物は、ＣＫ２阻害剤および２つ、３つ、４つ、５つまたはそれ以上の追加の治療薬を含む。
【０２９４】
一実施において、追加の治療薬は抗癌剤である。本出願のＣＫ２阻害剤と併用して用いられる抗癌剤には、当業者に周知の任意のクラスから選択される薬剤が含まれ、例えば、アルキル化剤、代謝拮抗剤、植物性アルカノイドおよびテルペノイド（例えば、タキサン）、トポイソメラーゼ阻害剤、抗腫瘍抗生物質、ホルモン療法剤、分子標的薬剤等が挙げられる。一般に、このような抗癌剤は、アルキル化剤、代謝拮抗剤、ビンカアルカロイド、タキサン、トポイソメラーゼ阻害剤、抗腫瘍抗生物質、チロシンキナーゼ阻害剤、免疫抑制マクロライド、Ａｋｔ阻害剤、ＨＤＡＣ阻害剤、Ｈｓｐ９０阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤、ＰＩ３Ｋ／ｍＴＯＲ阻害剤またはＰＩ３Ｋ阻害剤である。通常、抗癌剤はＡｋｔ阻害剤、ＨＤＡＣ阻害剤、Ｈｓｐ９０阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤、ＰＩ３Ｋ／ｍＴＯＲ阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤および腫瘍／癌抗原を標的とするモノクローナル抗体からなる群から選択され；あるいは、抗癌剤はＡｋｔ阻害剤、ＨＤＡＣ阻害剤、Ｈｓｐ９０阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤、ＰＩ３Ｋ／ｍＴＯＲ阻害剤およびＰＩ３Ｋ阻害剤からなる群から選択される。
【０２９５】
アルキル化剤には、（ａ）シスプラチン、カルボプラチン、ネダプラチン、オキサリプラチン、サトラプラチン、および（ＳＰ−４−３）−（ｃiｓ）−アンミンジクロロ−［２−メチルピリジン］白金（ＩＩ）等のアルキル化様（alkylating-like）白金系化学療法剤；（ｂ）ブスルファン等のスルホン酸アルキル；（ｃ）アルトレタミンおよびチオテパ等のエチレンイミンおよびメチルメラミン誘導体；（ｄ）クロラムブシル、シクロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、トロフォスファミド（trofosamide）、プレドニムスチン、メルファラン、およびウラムスチン（uramustine）等のナイトロジェンマスタード；（ｅ）カルムスチン、ロムスチン、ホテムスチン、ニムスチン、ラニムスチンおよびストレプトゾシン等のニトロソウレア；（ｆ）ダカルバジン、プロカルバジン、テモゾラミドおよびテモゾロミド等のトリアゼンおよびイミダゾテトラジンが含まれる。
【０２９６】
代謝拮抗剤には、（ａ）フルダラビン、クラドリビン、クロロデオキシアデノシン、クロファラビン、メルカプトプリン、ペントスタチンおよびチオグアニン等のプリン類似体；（ｂ）フルオロウラシル、ゲムシタビン、カペシタビン、シタラビン、アザシチジン、エダトレキサート、フロクスウリジンおよびトロキサシタビン等のピリミジン類似体；並びに（ｃ）メトトレキサート、ペメトレキセド、ラルチトレキセドおよびトリメトレキサート等の葉酸代謝拮抗剤が含まれる。代謝拮抗剤にはまた、フルオロウラシル、ラルチトレキセド、カペシタビン、フロクスウリジンおよびペメトレキセド等のチミジル酸合成酵素阻害剤；並びにクラドリビン（claribine）、クロファラビンおよびフルダラビン等のリボヌクレオチド還元酵素阻害剤が含まれる。
【０２９７】
植物性アルカノイドおよびテルペノイド由来薬剤には、ビンカアルカロイドビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、およびビノレルビン等の有糸分裂阻害剤；並びにタキサン等の微小管ポリマー安定剤（microtubule polymer stabilizer）が含まれ、これらに限定されないが、パクリタキセル、ドセタキセル、ラロタキセル（larotaxel）、オルタタキセル（ortataxel）、およびテセタキセル（tesetaxel）が含まれる。
【０２９８】
トポイソメラーゼ阻害剤には、カンプトテシン、トポテカン、イリノテカン、ルビテカン（rubitecan）、およびベロテカン等のトポイソメラーゼＩ阻害剤；並びにエトポシド、テニポシド、およびアムサクリン等のトポイソメラーゼＩＩ阻害剤が含まれる。
【０２９９】
抗腫瘍性抗生物質には、（ａ）ダウノルビシン（リポソームダウノルビシンを含む）、ドキソルビシン（リポソームドキソルビシンを含む）、エピルビシン、イダルビシン、およびバルルビシン等のアントラサイクリン；（ｂ）ブレオマイシン、アクチノマイシン、ミトラマイシン、マイトマイシン、ポルフィロマイシン等のストレプトマイセス関連物質（streptomyces-related agent）；並びに（ｃ）ミトキサントロンおよびピクサントロン等のアントラセンジオンが含まれる。アントラサイクリンは３つの作用機序、つまりＤＮＡ／ＲＮＡ鎖の塩基対間へのインターカレーション；トポイソメラーゼＩＩ酵素の阻害；ＤＮＡおよび細胞膜を損傷させる酸素ラジカルの鉄を媒介した生成、を有する。アントラサイクリンは一般にトポイソメラーゼＩＩ阻害剤と特徴付けられている。
【０３００】
ホルモン療法には、（ａ）フルオキシメステロンおよびテストラクトン等のアンドロゲン；（ｂ）ビカルタミド、シプロテロン、フルタミド、およびニルタミド等の抗アンドロゲン薬；（ｃ）アミノグルテチミド、アナストロゾール、エキセメスタン、ホルメスタン、およびレトロゾール等のアロマターゼ阻害薬；（ｄ）デキサメタゾンおよびプレドニゾン等の副腎皮質ステロイド；（ｅ）ジエチルスチルベストロール等のエストロゲン；（ｆ）フルベストラント、ラロキシフェン、タモキシフェン、およびトレミフェン（toremifine）等の抗エストロゲン剤；（ｇ）ブセレリン、ゴセレリン、ロイプロリド、およびトリプトレリン等のＬＨＲＨアゴニストおよびアンタゴニスト；（ｈ）酢酸メドロキシプロゲステロンおよび酢酸メゲストロール等のプロゲスチン；並びに（ｉ）レボチロキシンおよびリオチロニン等の甲状腺ホルモンが含まれる。
【０３０１】
分子標的剤には、（ａ）阻害剤等の受容体型チロシンキナーゼ（「ＲＴＫ」）阻害剤、例えばエルロチニブ、ゲフィチニブおよびネラチニブを含むＥＧＦＲ阻害剤；バンデタニブ、セマキシニブおよびセジラニブを含むＶＥＧＦＲ阻害剤；並びにＰＤＧＦＲ阻害剤；ＥＧＦＲおよびＨＥＲ２の両方を阻害するラパチニブ等の複数の受容体部位で作用するＲＴＫ阻害剤、並びにこれらに制限されないが、アキシチニブ、スニチニブ、ソラフェニブおよびトセラニブ（toceranib）を含む、Ｃ−ｋiｔ、ＰＤＧＦＲおよびＶＥＧＦＲのそれぞれで作用する阻害剤がさらに含まれ；イマチニブ等のＢＣＲ−ＡＢＬ、ｃ−ｋiｔおよびＰＤＧＦＲもまた含まれ；（ｂ）バフィロマイシン、ラパマイシン（シロリムス）およびエベロリムスを含む、免疫抑制マクロライド抗生物質等のＦＫＢＰ結合剤；（ｃ）例えばアダパレン、ベキサロテン、トランスレチノイン酸、９−ｃiｓ−レチノイン酸、およびＮ−（４−ヒドロキシフェニル）レチンアミドを含む、レチノイドおよびレキシノイド（rexinoid）等の遺伝子治療薬剤、アンチセンス治療薬剤および遺伝子発現調節物質；（ｄ）アレムツズマブ、ベバシズマブ、セツキシマブ、イブリツモマブ・チウキセタン、リツキシマブおよびトラスツズマブ等のモノクローナル抗体を含む表現型指向性治療薬剤（phenotype-directed therapy agent）；（ｅ）ゲムツズマブオゾガマイシン等の免疫毒素；（ｆ）１３１Ｉ−トシツモマブ等の放射性免疫複合体；並びに（ｇ）癌ワクチンが含まれる。
【０３０２】
モノクローナル抗体には、これらに限定されないが、マウスの、キメラの、または部分的または完全ヒト化のモノクローナル抗体が含まれる。このような抗体医薬には、これらに限定されないが、腫瘍もしくはその細胞表面上または細胞内のいずれかにある癌抗原を対象とする抗体が含まれる。このような抗体医薬にはまた、これらに限定されないが、ＣＫ２に直接的または間接的に関連する標的または経路を対象とする抗体も含まれる。治療抗体（Therapeutic antibody）は更に、これらに限定されないが、本発明の化合物に関連する標的または経路と直接相互作用する標的または経路を対象とする抗体を含んでもよい。一変形例において、抗体医薬には、これらに限定されないが、アバゴボマブ（Ａｂａｇｏｖｏｍａｂ）、アデカツムマブ(Ａｄｅｃａｔｕｍｕｍａｂ)、アフツズマブ、アラシズマブ・ペゴール（Ａｌａｃｉｚｕｍａｂ  ｐｅｇｏｌ）、アレムツズマブ、ペンテト酸アルツモマブ（Ａｌｔｕｍｏｍａｂ  ｐｅｎｔｅｔａｔｅ）、アナツモマブ・マフェナトクス（Ａｎａｔｕｍｏｍａｂ  ｍａｆｅｎａｔｏｘ）、アポリズマブ、バビツキシマブ（Ｂａｖｉｔｕｘｉｍａｂ）、ベリムマブ、ベバシズマブ、ビバツズマブ・メルタンシン（Ｂｉｖａｔｕｚｕｍａｂ  ｍｅｒｔａｎｓｉｎｅ）、ブリナツマブ（Ｂｌｉｎａｔｕｍｏｍａｂ）、ブレンツキシマブ・ベドチン、カンツズマブ・メルタンシン、カツマキソマブ、セツキシマブ、シタツズマブ・ボガトックス（Ｃｉｔａｔｕｚｕｍａｂ  ｂｏｇａｔｏｘ）、シクスツムマブ（Ｃｉｘｕｔｕｍｕｍａｂ）、シバツズマブ・テトラキセタン（Ｃｌｉｖａｔｕｚｕｍａｂ  ｔｅｔｒａｘｅｔａｎ）、コナツムマブ（Ｃｏｎａｔｕｍｕｍａｂ）、ダセツズマブ、デツモマブ（Ｄｅｔｕｍｏｍａｂ）、エクロメキシマブ（Ｅｃｒｏｍｅｘｉｍａｂ）、エドレコロマブ、エロツズマブ（Ｅｌｏｔｕｚｕｍａｂ）、エプラツズマブ、エルツマキソマブ（Ｅｒｔｕｍａｘｏｍａｂ）、エタラシズマブ（Ｅｔａｒａｃｉｚｕｍａｂ）、ファーレツズマブ、フィギツムマブ、フレソリムマブ（Ｆｒｅｓｏｌｉｍｕｍａｂ）、ガリキシマブ、グレムバツムマブ・ベドチン（Ｇｌｅｍｂａｔｕｍｕｍａｂ  ｖｅｄｏｔｉｎ）、イブリツモマブ・チウキセタン、インテツムマブ（Ｉｎｔｅｔｕｍｕｍａｂ）、イノツズマブ・オゾガマイシン、イピリムマブ、イラツムマブ（Ｉｒａｔｕｍｕｍａｂ）、ラベツズマブ、レクサツムマブ、リンツズマブ、ルカツムマブ（Ｌｕｃａｔｕｍｕｍａｂ）、ルミリキシマブ、マパツズマブ、マツズマブ、ミラツズマブ、ミツモマブ（Ｍｉｔｕｍｏｍａｂ）、ナコロマブ・タフェナトクス（Ｎａｃｏｌｏｍａｂ  ｔａｆｅｎａｔｏｘ）、ナプツモマブ・エスタフェナトクス、ネシツムマブ、ニモツズマブ（Ｎｉｍｏｔｕｚｕｍａｂ）、オファツムマブ、オララツマブ（Ｏｌａｒａｔｕｍａｂ）、オポルツズマブ・モナトクス（Ｏｐｏｒｔｕｚｕｍａｂ  ｍｏｎａｔｏｘ）、オレゴボマブ、パニツムマブ、ペムツモマブ（Ｐｅｍｔｕｍｏｍａｂ）、ペルツズマブ、ピンツモマブ（Ｐｉｎｔｕｍｏｍａｂ）、プリツムマブ（Ｐｒｉｔｕｍｕｍａｂ）、ラムシルマブ、リロツムマブ（Ｒｉｌｏｔｕｍｕｍａｂ）、リツキシマブ、ロバツムマブ（Ｒｏｂａｔｕｍｕｍａｂ）、シブロツ��マブ（Ｓｉｂｒｏｔｕｚｕｍａｂ）、タカツズマブ・テトラキセタン（Ｔａｃａｔｕｚｕｍａｂ  ｔｅｔｒａｘｅｔａｎ）、タプリツモマブ・パプトクス（Ｔａｐｌｉｔｕｍｏｍａｂ  ｐａｐｔｏｘ）、テナツモマブ（Ｔｅｎａｔｕｍｏｍａｂ）、チシリムマブ（Ｔｉｃｉｌｉｍｕｍａｂ）、ティガツズマブ、トシツモマブ、トラスツズマブ、トレメリムマブ、ツコツズマブセルモロイキン（Ｔｕｃｏｔｕｚｕｍａｂ  ｃｅｌｍｏｌｅｕｋｉｎ）、ベルツズマブ、ボロシキシマブ、ボツムマブ（Ｖｏｔｕｍｕｍａｂ）、ザルツムマブおよびザノリムマブ等の抗癌剤が含まれる。いくつかの実施形態では、このような抗体医薬には、アレムツズマブ、ベバシズマブ、セツキシマブ、ダクリズマブ、ゲムツズマブ、イブリツモマブ・チウキセタン、パンチツムマブ（ｐａｎｔｉｔｕｍｕｍａｂ）、リツキシマブ、トシツモマブおよびトラスツズマブが含まれ；他の実施形態では、このようなモノクローナル抗体には、アレムツズマブ、ベバシズマブ、セツキシマブ、イブリツモマブ・チウキセタン、リツキシマブおよびトラスツズマブが含まれ；あるいはこのような抗体は、ダクリズマブ、ゲムツズマブおよびパンチツムマブ（ｐａｎｔｉｔｕｍｕｍａｂ）が含まれる。更に別の実施形態において、感染治療に有効な抗体医薬には、これらに限定されないが、アフェリモマブ、エフングマブ（Ｅｆｕｎｇｕｍａｂ）、エクスビビルマブ（Ｅｘｂｉｖｉｒｕｍａｂ）、フェルビズマブ（Ｆｅｌｖｉｚｕｍａｂ）、フォラビルマブ（Ｆｏｒａｖｉｒｕｍａｂ）、イバリズマブ（Ｉｂａｌｉｚｕｍａｂ）、リビビルマブ（Ｌｉｂｉｖｉｒｕｍａｂ）、モタビズマブ、ネバクマブ、パギバキシマブ、パリビズマブ、パノバクマブ（Ｐａｎｏｂａｃｕｍａｂ）、ラフィビルマブ（Ｒａｆｉｖｉｒｕｍａｂ）、ラキシバクマブ、レガビルマブ、セビルマブ（Ｓｅｖｉｒｕｍａｂ）、テフィバズマブ（Ｔｅｆｉｂａｚｕｍａｂ）、ツビルマブ（Ｔｕｖｉｒｕｍａｂ）およびウルトキサズマブが含まれる。更なる実施形態において、炎症治療および／または自己免疫障害に有効な抗体医薬には、これらに限定されないが、アダリムマブ、アツリズマブ（Ａｔｌｉｚｕｍａｂ）、アトロリムマブ（Ａｔｏｒｏｌｉｍｕｍａｂ）、アセリズマブ（Ａｓｅｌｉｚｕｍａｂ）、バピニューズマブ、バシリキシマブ、ベンラリズマブ（Ｂｅｎｒａｌｉｚｕｍａｂ）、ベルチリムマブ（Ｂｅｒｔｉｌｉｍｕｍａｂ）、ベシレソマブ、ブリアキヌマブ、カナキヌマブ、セデリズマブ（Ｃｅｄｅｌｉｚｕｍａｂ）、セルトリズマブ・ペゴール、クレノリキシマブ、ダクリズマブ、デノスマブ、エクリズマブ、エドバコマブ（Ｅｄｏｂａｃｏｍａｂ）、エファリズマブ、エルリズマブ（Ｅｒｌｉｚｕｍａｂ）、フェザキヌマブ（Ｆｅｚａｋｉｎｕｍａｂ）、フォントリズマブ、フレソリムマブ（Ｆｒｅｓｏｌｉｍｕｍａｂ）、ガンテネルマブ（Ｇａｎｔｅｎｅｒｕｍａｂ）、ガビリモマブ（Ｇａｖｉｌｉｍｏｍａｂ）、ゴリムマブ、ゴミリキシマブ（Ｇｏｍｉｌｉｘｉｍａｂ）、インフリキシマブ、イノリモマブ、ケリキシマブ、レブリキズマブ（Ｌｅｂｒｉｋｉｚｕｍａｂ）、レルデリムマブ（Ｌｅｒｄｅｌｉｍｕｍａｂ）、メポリズマブ、メテリムマブ（Ｍｅｔｅｌｉｍｕ��ａｂ）、ムロモナブ−ＣＤ３、ナタリズマブ、オクレリズマブ、オヅリモマブ（Ｏｄｕｌｉｍｏｍａｂ）、オマリズマブ、オテリキシズマブ、パスコリズマブ（Ｐａｓｃｏｌｉｚｕｍａｂ）、プリリキシマブ（Ｐｒｉｌｉｘｉｍａｂ）、レスリズマブ、リツキシマブ、ロンタリズマブ（Ｒｏｎｔａｌｉｚｕｍａｂ）、ロベリズマブ（Ｒｏｖｅｌｉｚｕｍａｂ）、ルプリズマブ（Ｒｕｐｌｉｚｕｍａｂ）、シファリムマブ（Ｓｉｆａｌｉｍｕｍａｂ）、シプリズマブ、ソラネズマブ、スタムルマブ（Ｓｔａｍｕｌｕｍａｂ）、タリズマブ、タネズマブ、テプリズマブ、トシリズマブ、トラリズマブ（Ｔｏｒａｌｉｚｕｍａｂ）、ウステキヌマブ、ベドリズマブ、ベパリモマブ（Ｖｅｐａｌｉｍｏｍａｂ）、ビジリズマブ、ザノリムマブおよびゾリモマブ・アリトクス（Ｚｏｌｉｍｏｍａｂ  ａｒｉｔｏｘ）が含まれ得る。更に別の実施形態において、このような抗体医薬には、これらに限定されないが、アダリムマブ、バシリキシマブ、セルトリズマブ・ペゴール、エクリズマブ、エファリズマブ、インフリキシマブ、ムロモナブ−ＣＤ３、ナタリズマブおよびオマリズマブが含まれる。あるいは前記抗体医薬には、アブシキシマブまたはラニビズマブが含まれ得る。一般に、抗体医薬は非抱合型であるか、もしくは放射性核種、サイトカイン、トキシン、薬剤活性化酵素または薬剤を充填したリポソームに抱合される。
【０３０３】
Ａｋｔ阻害剤には、１Ｌ６-ヒロドキシメチル−カイロ−イノシトール−２−（Ｒ）−２−Ｏ−メチル−３−Ｏ−オクタデシル−ｓｎ−グリセロカルボネート（ｇｌｙｃｅｒｏｃａｒｂｏｎａｔｅ）、ＳＨ−５（カルビオケムカタログ番号１２４００８）、ＳＨ−６（カルビオケムカタログ番号１２４００９）、カルビオケムカタログ番号１２４０１１、トリシリビン（ＮＳＣ１５４０２０、カルビオケムカタログ番号１２４０１２）、１０−（４′−（Ｎ−ジエチルアミノ）ブチル）−２−クロロフェノキサジン、Ｃｕ（ＩＩ）Ｃｌ２（３−ホルミルクロモンチオセミカルバゾン）、１，３−ジヒドロ−１−（１−（（４−（６−フェニル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｇ］キノキサリン−７−イル）フェニル）メチル）−４−ピペリジニル）−２Ｈ−ベンズイミダゾール−２−オン、ＧＳＫ６９０６９３（４−（２−（４−アミノ−１，２，５−オキサジアゾール−３−イル）−１−エチル−７−｛［（３Ｓ）−３−ピペリジニルメチル］オキシ｝−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−４−イル）−２−メチル−３−ブチン−２−オル）、ＳＲ１３６６８（（２，１０−ジカルベトキシ−６−メトキシ−５，７−ジヒドロ−インドロ［２，３−ｂ］カルバゾール）、ＧＳＫ２１４１７９５、ペリホシン、ＧＳＫ２１１１０１８３、ＸＬ４１８、ＸＬ１４７、ＰＦ−０４６９１５０２、ＢＥＺ−２３５［２−メチル−２−［４−（３−メチル−２−オキソ−８−キノリン−３−イル−２，３−ジヒドロ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル）−フェニル］−プロピオニトリル］、ＰＸ−８６６（（酢酸（１Ｓ，４Ｅ，１０Ｒ，１１Ｒ，１３Ｓ，１４Ｒ）−［４−ジアリルアミノメチレン−６−ヒドロキシ−１−メトキシメチル−１０，１３−ジメチル−３，７，１７−トリオキソ−１，３，４，７，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−ドデカヒドロ−２−オキサ−シクロペンタ［ａ］フェナンスレン−１１−イルエステル））、Ｄ-１０６６６９、ＣＡＬ−１０１、ＧＤＣ０９４１（２−（１Ｈ−インダゾール−４−イル）−６−（４−メタンスルホニル−ピペラジン−１−イルメチル）−４−モルフォリン−４−イル−チエノ［３，２−ｄ］ピリミジン）、ＳＦ１１２６、ＳＦ１１８８、ＳＦ２５２３、ＴＧ１００−１１５［３−［２，４−ジアミノ−６−（３−ヒドロキシフェニル）プテリジン−７−イル］フェノール］が含まれる。これらの阻害剤のいくつか、例えば、ＢＥＺ−２３５、ＰＸ−８６６、Ｄ１０６６６９、ＣＡＬ-１０１、ＧＤＣ０９４１、ＳＦ１１２６、ＳＦ２５２３等は、当該技術分野においてＰＩ３Ｋ／ｍＴＯＲ阻害剤としても認められており；追加の例として、ＰＩ−１０３［３−［４−（４−モルホリニルピリド［３'，２'：４，５］フロ［３，２−ｄ］ピリミジン−２−イル］フェノールハイドロクロライド］等は当業者に周知である。追加の周知のＰＩ３Ｋ阻害剤には、ＬＹ２９４００２［２−（４−モルホリニル）−８−フェニル−４Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン］およびワートマニンが含まれる。当業者に周知であるｍＴＯＲ阻害剤には、テムシロリムス、デフォロリムス、シロリムス、エベロリムス、ゾタロリムス、およびバイオリムスＡ９が含まれる。こ���ような阻害剤の代表としては、テムシロリムス、デフォロリムス、ゾタロリムスおよびバイオリムスＡ９が含まれる。
【０３０４】
ＨＤＡＣ阻害剤には、（ｉ）トリコスタチンＡ、ボリノスタット（スベロイルアニリドヒドロキサム酸（ＳＡＨＡ））、パノビノスタット（ＬＢＨ５８９）およびベリノスタット（ＰＸＤ１０１）等のヒドロキサム酸、（ｉｉ）トラポキシンＢ等の環式ペプチド、およびロミデプシン（ＮＳＣ６３０１７６）等のデプシペプチド、（ｉｉｉ）ＭＳ−２７５（３−ピリジルメチル−Ｎ−｛４−［（２−アミノフェニル）−カルバモイル］−ベンジル｝−カルバメート）、ＣＩ９９４（４−アセチルアミノ−Ｎ−（２アミノフェニル）−ベンズアミド）およびＭＧＣＤ０１０３（Ｎ−（２−アミノフェニル）−４−（（４−（ピリジン−３−イル）ピリミジン−２−イルアミノ）メチル）ベンズアミド）等のベンズアミド、（ｉｖ）求電子性ケトン、並びに（ｖ）フェニル酪酸およびバルプロ酸等の脂肪族酸化合物が含まれる。
【０３０５】
Ｈｓｐ９０阻害剤には、ゲルダナマイシン、１７−ＤＭＡＧ（１７−ジメチルアミノ−エチルアミノ−１７−デメトキシゲルダナマイシン）、タネスピマイシン（１７−ＡＡＧ、１７−アリルアミノ−１７−デメトキシゲルダナマイシン）、ＥＣ５、レタスピマイシン（ＩＰＩ−５０４、１８，２１−ジデヒドロ−１７−デメトキシ−１８，２１−ジデオキソ−１８，２１−ジヒドロキシ−１７−（２−プロペニルアミノ）−ゲルダナマイシン）、およびハービマイシン等のベンゾキノンアンサマイシン；ＣＣＴ０１８１５９（４−［４−（２，３−ジヒドロ−１，４−ベンゾダイオキシン−６−イル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］−６−エチル−１，３−ベンゼンジオール）等のピラゾール；ラジシコール（radicocol）等のマクロライド；並びにＢＩＩＢ０２１（ＣＮＦ２０２４）、ＳＮＸ−５４２２、ＳＴＡ−９０９０、およびＡＵＹ９２２が含まれる。
【０３０６】
種々雑多な薬剤（Miscellaneous agent）には、アルトレタミン、亜ヒ酸、硝酸ガリウム、ヒドロキシｕｒｅａ、レバミゾール、ミトタン、オクトレオチド、プロカルバジン、スラミン、サリドマイド、レナリドマイド、メトキサレンおよびポルフィマーナトリウム（sodium porfimer）等の光線力学的化合物、並びにボルテゾミブ等のプロテアソーム阻害剤が含まれる。
【０３０７】
生物学的療薬剤の例としては、インターフェロン−α２ａおよびインターフェロン−α２ｂ等のインターフェロン並びにアルデスロイキン、デニロイキンジフチトクスおよびオプレルベキン等のインターロイキンが挙げられる。
【０３０８】
癌細胞の抑制を目的とする抗癌剤に加えて、併用療法には保護剤または補助剤が含まれ、例としてはアミホスチン（armifostine）、デクスラゾキサン（dexrazonxanｅ）およびメスナ等の細胞保護剤、パミドロネート（parmidronate）およびゾレドロン酸等のホスホン酸、並びにエポエチン、ダルベポエチン（darbeopetin）、フィルグラスチム、ＰＥＧ−フィルグラスチムおよびサルグラモスチム等の刺激因子が想定される。
【０３０９】
別の実施形態では、追加の治療薬は抗炎症剤である。本出願のＣＫ２阻害剤と併用して使用される抗炎症剤には、糖質コルチコイド、ＮＳＡＩＤ、コキシブ、副腎皮質ステロイド、鎮痛剤、５−リポキシゲナーゼ阻害剤、５−リポキシゲナーゼ活性化タンパク質阻害剤およびロイコトリエン受容体アンタゴニストから選択される薬剤が含まれ得る。非ステロイド系抗炎症剤の例としては、これらに限定されないが、ケトプロフェン、フルルビプロフェン、イブプロフェン、ナプロキセン、フェノプロフェン、ベノキサプロフェン、インドプロフェン、ピルプロフェン、カプロフェン、オキサプロジン、プラノプロフェン、スプロフェン、アルミノプロフェン、ブチブフェン、ジクロフェナク、ケトロラク、アスピリン、ベクストラ、セレブレックス、バイオックスおよびアセトミノフェン（acetominophen）が含まれる。一実施形態では、抗炎症剤はモノクローナル形態である。別の実施形態では、抗炎症剤は炎症に直接的または間接的に関連する受容体または抗原を標的とするモノクローナル抗体である。別の実施形態では、抗炎症剤はＣＫ２キナーゼまたはＣＫ２制御経路を標的とするモノクローナル抗体である。更に別の実施形態では、抗炎症剤の例としては、これらに限定されないが、アダリムマブ、アツリズマブ（Atlizumab）、アトロリムマブ（Atorolimumab）、アセリズマブ（Aselizumab）、バピニューズマブ、バシリキシマブ、ベンラリズマブ（Benralizumab）、ベルチリムマブ（Bertilimumab）、ベシレソマブ、ブリアキヌマブ、カナキヌマブ、セデリズマブ（Cedelizumab）、セルトリズマブ・ペゴール、クレノリキシマブ、ダクリズマブ、デノスマブ、エクリズマブ、エドバコマブ（Edobacomab）、エファリズマブ、エルリズマブ（Erlizumab）、フェザキヌマブ（Fezakinumab）、フォントリズマブ、フレソリムマブ（Fresolimumab）、ガンテネルマブ（Gantenerumab）、ガビリモマブ（Gavilimomab）、ゴリムマブ、ゴミリキシマブ（Gomiliximab）、インフリキシマブ、イノリモマブ、ケリキシマブ、レブリキズマブ（Lebrikizumab）、レルデリムマブ（Lerdelimumab）、メポリズマブ、メテリムマブ（Metelimumab）、ムロモナブ−ＣＤ３、ナタリズマブ、オクレリズマブ、オヅリモマブ（Odulimomab）、オマリズマブ、オテリキシズマブ、パスコリズマブ（Pascolizumab）、プリリキシマブ（Priliximab）、レスリズマブ、リツキシマブ、ロンタリズマブ（Rontalizumab）、ロベリズマブ（Rovelizumab）、ルプリズマブ（Ruplizumab）、シファリムマブ（Sifalimumab）、シプリズマブ、ソラネズマブ、スタムルマブ（Stamulumab）、タリズマブ、タネズマブ、テプリズマブ、トシリズマブ、トラリズマブ（Toralizumab）、ウステキヌマブ、ベドリズマブ、ベパリモマブ（Vepalimomab）、ビジリズマブ、ザノリムマブおよびゾリモマブ・アリトクス（Zolimomab aritox）が挙げられる。
【０３１０】
他の実施形態では、追加の治療薬は抗感染剤である。本出願のＣＫ２阻害剤と併用されて使用される抗感染剤の例としては、ウイルス性、真菌性、寄生虫性または細菌性の感染を治療するための当技術分野において周知のこれらの薬剤が挙げられる。本明細書で使用される「抗生物質」という用語は、微生物の増殖を阻害する、または殺す化学物質を意味する。この用語に包含されるのは、微生物により産生される抗生物質、並びに当技術分野において周知の合成抗生物質である。抗生物質の例としては、これらに限定されないが、クラリスロマイシン、シプロフロキサシン、およびメトロニダゾールが挙げられる。一実施形態では、抗感染剤は感染性病原体または微生物に関連する抗原を対象としたモノクローナル抗体である。感染治療に効果的なモノクローナル抗体の限定されない例としては、アフェリモマブ、エフングマブ（Ｅｆｕｎｇｕｍａｂ）、エクスビビルマブ（Ｅｘｂｉｖｉｒｕｍａｂ）、フェルビズマブ（Ｆｅｌｖｉｚｕｍａｂ）、フォラビルマブ（Ｆｏｒａｖｉｒｕｍａｂ）、イバリズマブ（Ｉｂａｌｉｚｕｍａｂ）、リビビルマブ（Ｌｉｂｉｖｉｒｕｍａｂ）、モタビズマブ、ネバクマブ、パギバキシマブ、パリビズマブ、パノバクマブ（Ｐａｎｏｂａｃｕｍａｂ）、ラフィビルマブ（Ｒａｆｉｖｉｒｕｍａｂ）、ラキシバクマブ、レガビルマブ、セビルマブ（Ｓｅｖｉｒｕｍａｂ）、テフィバズマブ（Ｔｅｆｉｂａｚｕｍａｂ）、ツビルマブ（Ｔｕｖｉｒｕｍａｂ）およびウルトキサズマブが含まれる。
【０３１１】
他の実施形態では、追加の治療薬は疼痛、炎症、感染および／または自己免疫障害の治療に有効な免疫治療薬剤である。本出願のＣＫ２阻害剤と併用して使用されるこのような薬剤の例としては、これらに限定されないが、微生物または細菌の成分（例えば、ムラミルジペプチド誘導体、ピシバニール）、免疫増強活性を有する多糖類（例えば、レンチナン、シゾフィラン、クレスチン）、遺伝子工学技術により得られるサイトカイン（例えば、インターフェロン、インターロイキン（ＩＬ））、コロニー刺激因子（例えば、Ｇ−ＣＳＦ（フィルグラスチム／ペグフィルグラスチム、レノグラスチム）、ＧＭ−ＣＳＦ（モルグラモスチム、サルグラモスチム）、ＳＣＦ（アンセスチム）およびエリスロポエチン）等が挙げられる。このような治療効果を有するモノクローナル抗体の例としては、これらに限定されないが、アダリムマブ、アツリズマブ（Ａｔｌｉｚｕｍａｂ）、アトロリムマブ（Ａｔｏｒｏｌｉｍｕｍａｂ）、アセリズマブ（Ａｓｅｌｉｚｕｍａｂ）、バピニューズマブ、バシリキシマブ、ベンラリズマブ（Ｂｅｎｒａｌｉｚｕｍａｂ）、ベルチリムマブ（Ｂｅｒｔｉｌｉｍｕｍａｂ）、ベシレソマブ、ブリアキヌマブ、カナキヌマブ、セデリズマブ（Ｃｅｄｅｌｉｚｕｍａｂ）、セルトリズマブ・ペゴール、クレノリキシマブ、ダクリズマブ、デノスマブ、エクリズマブ、エドバコマブ（Ｅｄｏｂａｃｏｍａｂ）、エファリズマブ、エルリズマブ（Ｅｒｌｉｚｕｍａｂ）、フェザキヌマブ（Ｆｅｚａｋｉｎｕｍａｂ）、フォントリズマブ、フレソリムマブ（Ｆｒｅｓｏｌｉｍｕｍａｂ）、ガンテネルマブ（Ｇａｎｔｅｎｅｒｕｍａｂ）、ガビリモマブ（Ｇａｖｉｌｉｍｏｍａｂ）、ゴリムマブ、ゴミリキシマブ（Ｇｏｍｉｌｉｘｉｍａｂ）、インフリキシマブ、イノリモマブ、ケリキシマブ、レブリキズマブ（Ｌｅｂｒｉｋｉｚｕｍａｂ）、レルデリムマブ（Ｌｅｒｄｅｌｉｍｕｍａｂ）、メポリズマブ、メテリムマブ（Ｍｅｔｅｌｉｍｕｍａｂ）、ムロモナブ−ＣＤ３、ナタリズマブ、オクレリズマブ、オヅリモマブ（Ｏｄｕｌｉｍｏｍａｂ）、オマリズマブ、オテリキシズマブ、パスコリズマブ（Ｐａｓｃｏｌｉｚｕｍａｂ）、プリリキシマブ（Ｐｒｉｌｉｘｉｍａｂ）、レスリズマブ、リツキシマブ、ロンタリズマブ（Ｒｏｎｔａｌｉｚｕｍａｂ）、ロベリズマブ（Ｒｏｖｅｌｉｚｕｍａｂ）、ルプリズマブ（Ｒｕｐｌｉｚｕｍａｂ）、シファリムマブ（Ｓｉｆａｌｉｍｕｍａｂ）、シプリズマブ、ソラネズマブ、スタムルマブ（Ｓｔａｍｕｌｕｍａｂ）、タリズマブ、タネズマブ、テプリズマブ、トシリズマブ、トラリズマブ（Ｔｏｒａｌｉｚｕｍａｂ）、ウステキヌマブ、ベドリズマブ、ベパリモマブ（Ｖｅｐａｌｉｍｏｍａｂ）、ビジリズマブ、ザノリムマブおよびゾリモマブ・アリトクス（Ｚｏｌｉｍｏｍａｂ  ａｒｉｔｏｘ）が挙げられる。
【実施例】
【０３１２】
下記の実施例は本発明を例示するものであって限定するものではない。
【０３１３】
実施例１：ＣＸ−４９４５を用いた第Ｉ相臨床試験
2013506836.tif 000014
ＣＸ−４９４５は前臨床において広い治療濃度域で異種移植片の腫瘍増殖を抑制する、単剤での効能を示す。最大耐用量（ＭＴＤ）および用量制限毒性（ＤＬＴ）を決定し、薬物動態学（ＰＫ）を特徴付け、ＣＸ−４９４５の薬力学的効果を研究するために、第Ｉ相試験が行われた。
【０３１４】
手順
進行性固形腫瘍、キャッスルマン病または進行性の多発性骨髄腫を患う適格患者、または有用な標準的治療がない患者に、ＣＸ−４９４５を１投与当たり９０、１６０、３００、４６０、７００および１０００ｍｇの連続的な投与量コホートで投与した。４週間サイクルの２１日間連続で１日２回、経口投与された。承諾した患者に対し、ＣＸ−４９４５への不耐性の兆候が観察されるか、または疾患の進行が証明されるまで、治療が継続された。ＲＥＣＩＳＴによる応答が毎２サイクル後に決定された。連続的な血液および血漿試料がサイクル１の最初および最後の投薬日（すなわち１日目および２１日目）に採取され、薬物動態解析および薬力学的バイオマーカーの評価（特に、総ｐ２１およびＡｋｔまたはリン酸化型ｐ２１およびＡｋｔ）に用いられた。
【０３１５】
同じ適格基準を有する追加の患者に、ＣＸ−４９４５を１投与当たり３００、５００、６００および８００ｍｇの連続的な投与量コホートで投与した。４週間サイクルの２１日間連続で１日４回、経口投与された。承諾した患者に対し、ＣＸ−４９４５への不耐性の兆候が観察されるか、または疾患の進行が証明されるまで、治療が継続された。ＲＥＣＩＳＴによる応答が毎２サイクル後に決定された。連続的な血液および血漿試料がサイクル１の最初および８回目の投薬日（すなわち１日目および８日目）に採取され、薬物動態解析および薬力学的バイオマーカーの評価（特に、総ｐ２１およびＡｋｔまたはリン酸化型ｐ２１およびＡｋｔ）に用いられた。
【０３１６】
レーザー走査型サイトメトリー方法が開発され、細胞におけるｐ２１およびＡｋｔのリン酸化の定量化と、ＣＸ−４９４５等のＣＫ２阻害剤で治療を受けている患者から採取した循環血液細胞および末梢循環腫瘍細胞（ＣＴＣ）におけるこれら基質の特徴付けとに有効であることが証明された。
【０３１７】
結果の概要：
進行性固形腫瘍を有する３６人の患者（１コホート当たり３〜４人の患者、６つの別個の投与量コホートから）がＣＸ−４９４５の経口投与を受け、試験における全ての患者がＰＢＭＣの採取に参加した。コホート３の患者に始まり、ＣＫ２の阻害と同時にバイオマーカーのプロフィールの変化が示された。
【０３１８】
投与の経路およびスケジュール：
コホート１〜６の患者は経口カプセル剤で１日２回（ＢＩＤ）投与を受けた。コホート１は９０ｍｇのＣＸ−４９４５を１日２回投与された。コホート２は１６０ｍｇのＣＸ−４９４５を１日２回投与された。コホート３は３００ｍｇのＣＸ−４９４５を１日２回投与された。コホート４は４６０ｍｇのＣＸ−４９４５を１日２回投与された。コホート５は７００ｍｇのＣＸ−４９４５を１日２回投与された。コホート６は１０００ｍｇのＣＸ−４９４５を１日２回投与された。
【０３１９】
コホート７〜９の患者は経口カプセル剤で１日４回（ＱＩＤ）投与を受けた。コホート７は３００ｍｇのＣＸ−４９４５を１日４回投与された。コホート８は５００ｍｇのＣＸ−４９４５を１日４回投与された。コホート９は６００ｍｇのＣＸ−４９４５を１日４回投与された。
【０３２０】
バイオマーカー分析
ＣＫ２阻害に有効なバイオマーカーを同定するために、全血試料が治療前、１日目および２１日目の最初のＣＸ−４９４５投与から４時間および８時間後に採取された。血漿試料もまた、ＩＬ−６およびＩＬ−８の定量化のためにこの時点で収集され、ＣＸ−４９４５処理の２１日後の血清中におけるＩＬ−６およびＩＬ−８レベルの変化が測定された。
【０３２１】
図７に示されるように、ＩＬ−６レベルは３患者（＃９、＃１０、＃２０）において著しく減少し、ＩＬ−８レベルは３患者（＃９、＃１３、＃２０）において著しく減少した。化合物Ｋ（ＣＸ−４９４５）で治療を受けている患者におけるＩＬ−６およびＩＬ−８の増減率が、ＮＳＣＬＣ腫瘍（＃６）、前立腺腫瘍（＃９）、甲状腺／乳頭腫瘍（＃１３、＃２０）およびライディッヒ細胞腫（＃１６）を有する患者について決定された。ＩＬ−６レベルは２患者（＃９、＃２０、（＃１３でより小さい減少））において著しく減少し、ＩＬ−８レベルは３患者（＃９、＃１３、＃２０）において著しく減少した。治療後２１日目におけるＩＬ−６およびＩＬ−８のレベルの減少は、治療時間の増加から証明されるように、安定病態の出現に関係していた（図８）。図９Ａおよび９Ｂに示すように、炎症性乳癌（ＩＢＣ）および前立腺癌患者における血清中のＩＬ−６レベルの顕著な減少が、投与後２１日目に観察された。図１０に示すように、ＩＬ−８レベルは前立腺腫瘍、甲状腺／乳頭腫瘍およびライディッヒ細胞腫を有する患者において著しく減少した。
【０３２２】
更に、ＰＢＭＣが単離され、１日目および２１日目の投与から０、４、８時間後の総ｐ２１、ｐ２１−Ｔ１４５、総Ａｋｔ、Ａｋｔ−Ｔ１２９、Ａｋｔ−Ｓ４７３が分析された。ＰＢＭＣは全体として分析され、また、表現型（ＣＤ１９、ＣＤ４５）に分別された。各時点に関して、ｐ２１−Ｔ１４５／総ｐ２１、Ａｋｔ−Ｓ１２９／総Ａｋｔ、およびＡｋｔ−Ｓ４７３／総Ａｋｔの比率が計算された。
【０３２３】
コホート１〜３についてのＰＢＭＣ（ＣＤ１９）における、１日目および２１日目の投与から８時間後のｐ−Ａｋｔ  Ｓ４７３の総Ａｋｔに対する比率の変化を図１１に示した。ＰＢＭＣ（ＣＤ４５）における、１日目および２１日目の投与から４時間後のｐ−ｐ２１  Ｔ１４５の総ｐ２１に対する比率の変化を図１２に示した。
【０３２４】
更に、ＰＢＭＣが単離され、１日２回の用量スケジュールに関して１日目および２１日目における投与後０、４、および８時間の時点の、並びに１日４回の用量スケジュールに関して１日目および８日目における投与後０、２、４、および６時間の時点の、ｐ−ｐ２１  Ｔ１４５、ｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９およびｐ−Ａｋｔ  Ｓ４７３が分析された。ＰＢＭＣは全体として分析され、また、表現型（ＣＤ１９、ＣＤ４５）に分別された。
【０３２５】
ｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９の変化率が、投与前（時間＝０）から、４時間の時点において、１日目と２１日目の間（または１日目と８日目の間）で、累積ＣＸ−４９４５ＡＵＣの関数として比較された（図１３Ａ参照）。
【０３２６】
ｐ−Ａｋｔ  Ｓ４７３の変化率が、投与前（時間＝０）から、４時間の時点において、１日目と２１日目の間（または１日目と８日目の間）で、累積ＣＸ−４９４５ＡＵＣの関数として比較された（図１３Ｂ参照）。
【０３２７】
ｐ−ｐ２１  Ｔ１４５の変化率が、投与前（時間＝０）から、４時間の時点において、１日目と２１日目の間（または１日目と８日目の間）で、累積ＣＸ−４９４５ＡＵＣの関数として比較された（図１３Ｃ参照）。
【０３２８】
図１３Ａ〜Ｃに示すように、バイオマーカーであるＡｋｔ−Ｓ１２９、Ａｋｔ−Ｓ４７３およびｐ２１−Ｔ１４５のリン酸化は、曝露量に明白に相関して（ＡＵＣ）減少する。さらに、このデータにより、ＣＸ−４９４５がＰＢＭＣにおいてＣＫ２特異的バイオマーカーであるＡｋｔ−Ｓ１２９に作用することが示され、ＣＸ−４９４５がその標的分子であるＣＫ２に多大な影響を与えることが示された。
【０３２９】
更に、末梢循環腫瘍細胞（ＣＴＣ）が単離され、１日４回投与スケジュールを受けた患者に関して、１日目の投与前（時間＝０）および８日目の投与から６時間目におけるｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９が分析された。ＣＴＣ数およびＣＴＣにおいて測定されたｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９の変化率が１日目の投与前（時間＝０）から、８日目の６時間目と比較された（図１４参照）。
【０３３０】
実施例２  炎症性乳癌細胞によるＩＬ−６分泌に対するＣＫ２阻害剤の効果
ＳＵＭ−１４９ＰＴ炎症性乳癌（ＩＢＣ）細胞によるＩＬ−６分泌をＣＫ２阻害剤濃度の関数として評価した。無治療対照群の割合としてのＩＬ−６レベルが、０．０５μＭから５０μＭまでの濃度のＣＸ−４９４５の投与後６時間の時点で測定された。ＳＵＭ−１４９ＰＴ細胞の細胞生存率が９６時間後に測定された。結果を図１５に示す。
【０３３１】
実施例３：侵襲性の炎症性乳癌異種移植片によるＩＬ−６分泌に対するＣＫ２阻害剤の効果
侵襲性ＳＵＭ−１４９ＰＴ異種移植片によるＩＬ−６分泌に対するＣＫ２阻害剤の効果についても調べられた。侵襲性腫瘍（１ｇより大きい）はより小さい腫瘍よりもより高いＩＬ−６分泌率を有することが見出された（図１６Ｂ）。
【０３３２】
ＣＸ−４９４５は侵襲性腫瘍によるＩＬ−６分泌を著しく減少させることが見出された（図１６Ｄ）。
【０３３３】
実施例４：ＳＵＭ−１４９ＰＴ異種移植片マウスにおけるインビボ検査
ＳＵＭ−１４９ＰＴ異種移植片マウスは、未処理（ＵＴＣ）のままにされるか、または７５ｍｇ／ｋｇのＣＸ−４９４５を経口１回または１日２回ｘ８日間（ｘＤ８）経口投与された。
【０３３４】
血漿を分離し、腫瘍を摘出後に重量を計測した。血漿中のヒトＩＬ−６レベルをＥＬＩＳＡで測定し、結果の値を腫瘍重量で正規化した。
【０３３５】
図１７に示すように、単回投与および１日２回ｘ８日間処理の両方において、動物の血漿中におけるヒトＩＬ−６レベルが劇的に減少する結果となった（それぞれ４６％および５８％）。
【０３３６】
実施例５：Ａｋｔ  Ｓ１２９のリン酸化状態はＣＫ２特異的なバイオマーカーである
Ａｋｔ１のＳ１２９部位はＣＫ２に特異的であることが、Ｓｃａｎｓｉｔｅ２．０ソフトウェアを用いることにより見出された。Ovenauerらの、Scansite 2.0: Proteome-wide prediction of cell signaling interactions using short sequence motifs、２００３年、Nucl Acids Res 31: 3635-41を参照されたい。
【０３３７】
ＡｋｔＳ１２９のリン酸化状態に対するＣＸ−４９４５の効果を評価するために、ＡｋｔＳ１２９の発現が未処理細胞（ＵＴＣ）において測定され、ＣＸ−４９４５およびいくつかの他の化学療法剤で処理した細胞と比較された。前記化学療法剤には５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、ＢＥＺ２３５（ＰＩＫ３／ｍＴＯＲ二重阻害剤）、ＡＺＤ６２４４（ＭＥＫ阻害剤）、エルロチニブ（ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤）、ラパチニブ（ＥＧＦＲおよびＨｅｒ２二重阻害剤）、ソラフェニブ（多標的ＲＴＫ（Ｒａｆ、ＰＤＧＦ、ＶＥＧＦ、Ｃ−Ｋｉｔ））、およびスニチニブ（スーテント）（多標的ＲＴＫ）が含まれる。図１８に示すように、ｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９マーカーはＣＸ−４９４５処理に早く応答する。これらの結果はマウスＰＢＭＣ中および腫瘍組織（ＩＨＣ）中の細胞培養液において確認された。
【０３３８】
更に、ＣＸ−４９４５によるＡｋｔ  Ｓ１２９のリン酸化阻害は可逆的であることが見出された（図１９参照）。これらの結果により、Ａｋｔ−Ｓ１２９のリン酸化状態は癌細胞のＣＫ２阻害剤に対する応答をモニタリングするために使用され得ることが示された。
【０３３９】
実施例６：ＣＫ２サブユニットの発現およびＣＫ２阻害剤に対する感受性
ＣＫ２αのｍＲＮＡレベルが、乳癌細胞において標準方法で測定された。より高いレベルのＣＫ２αのｍＲＮＡを有する乳癌細胞はＣＫ２阻害剤により感受性であることが見出され、ＣＸ−４９４５（Ａ）、化合物１（Ｂ）および化合物２（Ｃ）で処理した乳癌細胞に関して、図２０に示した。
【０３４０】
ＣＫ２サブユニットの発現、ＡｋｔＳ１２９のリン酸化状態、並びにＣＸ−４９４５および化合物２に対する感受性の間の相関関係が分析された。
【０３４１】
癌細胞におけるＣＫ２αのｍＲＮＡの発現レベルおよびいくつかのＣＫ２阻害剤の活性の間には直接的な相関関係があることが確認された。より高いレベルのＣＫ２αのｍＲＮＡを有する乳癌細胞は、ＣＫ２αの発現レベルが低い細胞よりも、化合物Ｋ（ＣＸ−４９４５）および他のＣＫ２阻害剤（例えば化合物１および化合物２）に、より感受性であることが見出された（図２０参照）。
【０３４２】
ＣＸ−４９４５および化合物２に対して感受性である乳癌細胞株において、ＡｋｔＳ１２９のリン酸化状態はＣＫ２α'の発現量に正比例していた。ＣＸ−４９４５および化合物２に対して耐性がある乳癌細胞株において、ＡｋｔＳ１２９のリン酸化状態はＣＫ２α'の発現量に逆数比例（multiplicative inversely proportional）していた。結果を図２１に示す。
【０３４３】
リン酸化タンパク質のレベルはＣＫ２阻害剤の曝露量が増加する程に減少し、累積ＡＵＣにより測定されたように、細胞内ＣＫ２活性の阻害が示された。
【０３４４】
従って、ＣＫ２触媒サブユニットの発現およびＡｋｔＳ１２９のリン酸化状態の間の関係を分析することにより、ＣＸ−４９４５などのＣＫ２阻害剤に対する癌細胞の感受性を予測し得る。
【０３４５】
更に、バイオマーカーである、ＰＩ３経路中のＡｋｔ  Ｓ１２９、Ａｋｔ  Ｓ４７３およびｐ２１  Ｔ１４５のリン酸化は曝露量に明白に相関して（ＡＵＣ）減少し（図２２Ａ〜Ｃ）、これによりＡｋｔ  Ｓ１２９、Ａｋｔ  Ｓ４７３およびｐ２１  Ｔ１４５のリン酸化状態が、ＣＫ２阻害剤を用いたＣＫ２介在疾患の治療の応答をモニタリングするために使用され得ることが示された。
【０３４６】
実施例７：ＣＫ２阻害剤に対する感受性に影響するマーカーを決定するための分析
ＣＫ２αサブユニット、ｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９および総Ａｋｔ１の発現量が標準的な技術を用いて決定された。癌細胞におけるＣＫ２阻害剤に対するＩＣ５０を予測するための、これらマーカーの有用性が評価された。
【０３４７】
ＣＸ−４９４５のＩＣ５０は、下記の式に従い、ＣＫ２αの相対発現量および総Ａｋｔ発現量に対し正規化したＡｋｔ  Ｓ１２９リン酸化状態を調べることにより最良に予測される（図２３参照）。
ＩＣ５０＝５．５８−０．１４（ＣＫ２α）＋４．５（ｐＡｋｔＳ１２９ｎｏｒｍ）
【０３４８】
実施例８：ＣＸ−４９４５はＰＩ３Ｋ／Ａｋｔシグナリングおよび細胞周期進行を調節する
ＣＸ−４９４５の濃度増加に伴うＰＩＫ３／Ａｋｔシグナリングおよび細胞周期進行に対する効果がＢＴ−４７４乳癌細胞およびＢｘＰＣ−３膵癌細胞において評価された。図２４に示すように、ＣＸ−４９４５は両細胞型においてｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９およびｐ−Ａｋｔ  Ｓ４７３、並びにｐ−ｐ２１  Ｔ１４５のレベルを減少させる。
【０３４９】
図２５に示すように、ＣＸ−４９４５はＢＴ−４７４癌細胞およびＢｘＰＣ−３癌細胞の両方における細胞周期を調節する。血管新生および低酸素に関して、ＣＸ−４９４５の濃度増加に伴いＢｘＰＣ−３細胞において管形成および遊走に顕著な効果があることが見出された（図２６参照）。ＣＸ−４９４５処理後にアルドラーゼ濃度が減少したが、ｐＶＨＬおよびｐ５３のレベルは増加した（図２７参照）。ルシフェラーゼレポーターアッセイを用いて、低酸素誘導因子−１α（ＨＩＦ−１α）の発現量が測定され、曝露するＣＸ−４９４５の濃度増加にともないＨＩＦ−１αの活性が減少することが見出された（図２８）。
【０３５０】
実施例９：ＣＫ２はヒト多発性骨髄腫細胞株のパネル（Panel）において過剰発現される
ＣＫ２のｍＲＮＡおよびタンパク質レベルが、ＨＭＣＬ（ヒト骨髄腫細胞株）および正常血漿細胞（ＣＤ１３８＋）において評価された。ＣＫ２α、ＣＫ２α'およびＣＫ２βのレベルが測定され、アクチン転写物で正規化された。図２９に示すように、ＣＫ２α、ＣＫ２α'およびＣＫ２βのｍＲＮＡおよびタンパク質レベルは正常血漿細胞に比べて多発性骨髄腫細胞において増加していた。
【０３５１】
実施例１０：多発性骨髄腫細胞株におけるＣＸ−４９４５によるＣＫ２キナーゼ活性の減少
多発性骨髄腫細胞株における１０μＭのＣＸ−４９４５処理後のＣＫ２キナーゼ活性を測定するためにインビトロキナーゼアッセイが行われた。図３０に示すように、ＣＸ−４９４５は未処理細胞（ＵＴＣ）に比べ、Ｕ２６６、ＲＰＭＩ、ＯＣＩ−ＭＹ１およびＫＭＳ１１多発性骨髄腫細胞株においてＣＫ２キナーゼ活性を著しく減少させた。
【０３５２】
実施例１１：ヒト多発性骨髄腫細胞におけるＣＸ−４９４５によるＣＫ２シグナリングの調節
本実施例により、ＣＸ−４９４５が、多発性骨髄腫細胞を含む、Ａｋｔ−Ｓ１２９、ｐ２１−Ｔ１４５、ＮＦ−κＢおよびＪＡＫ／ＳＴＡＴのリン酸化の減少、ＩＬ−６レベルの減少、並びに細胞アポトーシスの誘導を含む、いくつかの活性を仲介することが示される。加えて、ＣＸ−４９４５により、低酸素誘導型ＨＩＦ−１αが阻害され、ＶＥＧＦが抑制される。本研究の評価対象となる応答には下記のマーカーのレベルの決定が含まれる：ｐ−ｐ２１、ｐ−Ａｋｔ、ＩＬ−６、ＩＬ−８、Ｋｉ６７、カスパーゼ、ＣＴＣおよびＦＤＧ−ＰＥＴ。
【０３５３】
ＣＫ２シグナリングに対するＣＸ−４９４５の効果が、ヒト多発性骨髄腫細胞において測定された。特に、Ａｋｔ１およびＮＦ−κＢのリン酸化、ＪＡＫ／ＳＴＡＴの調節、並びにＰＡＲＰ切断に対するＣＸ−４９４５の効果が評価された（図３１Ａ〜Ｄ参照）。ＣＸ−４９４５により、ｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９およびＳ４７３のリン酸化（図３１Ａ）、並びにｐ−ＮＦ−κＢ  Ｓ５２９のリン酸化（図３１Ｂ）が減少した。更に、ＣＸ−４９４５によりｐ−ＳＴＡＴ３  Ｙ７０５およびｐ−ＪＡＫ２  Ｙ１００７／１００８のリン酸化が減少することが示され（図３１Ｃ）、細胞アポトーシスのマーカーであるＰＡＲＰ切断の増加が観察された（図３１Ｄ）。
【０３５４】
加えて、ＶＥＧＦ分泌に対するＣＸ−４９４５の効果が調べられた。図３２に示すように、１０μＭのＣＸ−４９４５で処理することにより、多発性骨髄腫細胞株におけるＶＥＧＦの分泌が減少した。更に、ＣＸ−４９４５により多発性骨髄腫細胞株のパネルにおけるＨＩＦ−１αの発現が調節されることが観察された（図３３参照）。
【０３５５】
最後に、Ｕ２６６多発性骨髄腫細胞をＣＸ−４９４５で処理することにより、ミエローマ細胞の重要な増殖および生存因子であり、多発性骨髄腫患者に対する主要な罹患因子でもある、ＩＬ−６の産生が減少することが示された（図３４参照）。
【０３５６】
ＣＸ−４９４５は多発性骨髄腫細胞におけるＣＫ２活性を減少させることにより、この疾患におけるいくつかの重要なタンパク質の活性を調節する効果を持つ。特に、ＣＫ２はＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ経路における複数の基質をリン酸化するが、その中にはＣＫ２により独占的にリン酸化されるＡｋｔ−Ｓ１２９が含まれる。加えて、ＣＫ２はＪＡＫ／ＳＴＡＴを修飾し、ＮＦ−κＢのＳ５２９を含むＮＦ−κＢをリン酸化する。更に、ＣＫ２は細胞アポトーシスを抑制し、低酸素下で発現量が増加する。
【０３５７】
実施例１２：ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ経路におけるＣＸ−４９４５活性に関する更なる研究
上記のように、ＣＫ２はＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ経路における複数の基質をリン酸化する（図３５参照）。本発明者らは、Ａｋｔ−Ｓ１２９がＣＫ２により独占的にリン酸化されることを示した。
【０３５８】
本実施例では、ＣＫ２阻害剤であるＣＸ−４９４５のＡｋｔ−１２９に対するリン酸化阻害能を、他のキナーゼ阻害剤であるスタウロスポリン（ＳＴＳ）のそれと比較した。興味深いことに、ＣＸ−４９４５によりＡｋｔ−Ｓ１２９のリン酸化は阻害されたが、ＳＴＳ曝露によってはＡｋｔ−Ｓ１２９のリン酸化は影響を受けなかった（図３６参照）。
【０３５９】
ＰＩＫ３／Ａｋｔ経路の種々の標的のリン酸化を減少させるＣＸ−４９４５の能力を更に調査するために、前記化合物をマウスに経口投与し（７５ｍｇ／ｋｇを一日２回）、Ａｋｔ−Ｓ１２９、Ａｋｔ−Ｓ４７３およびｐ２１−Ｔ１４５のリン酸化をマウスＰＢＭＣにおいて評価した。図３７に示すように、Ａｋｔ−Ｓ１２９、Ａｋｔ−Ｓ４７３およびｐ２１−Ｔ１４５のリン酸化はＣＸ−４９４５処理されたマウスにおいて減少した。
【０３６０】
実施例１３：ＣＸ−４９４５のＤＮＡ損傷化学療法剤との併用
コメットアッセイを用いて、ＣＸ−４９４５により、Ａ２７８０卵巣癌細胞におけるゲムシタビン誘導性ＤＮＡ損傷が増加することが観察された（図３８参照）。加えて、ゲムシタビンおよびＣＸ−４９４５は、Ａ２７８０異種移植片において相乗的な抗腫瘍活性を示した（図３９Ａおよび３９Ｂ参照）。
【０３６１】
実施例１４：ＣＸ−４９４５のＥＧＦＲを標的とする薬剤との併用
図４０に示すように、ＥＧＦＲおよびＣＫ２のシグナリングの間にはクロストークが存在する。特に、ＣＫ２はキナーゼを標的とする分子シャペロンであるＣｄｃ３７をリン酸化することにより複数のプロテインキナーゼを制御し、Ｃｄｃ３７はＥＧＦＲに直接作用するだけでなく、Ｓｒｃにも作用しＥＧＦＲと相互作用させる。更に、Ｓ６Ｋ１ＩＩの核外輸送はＣＫ２のＳｅｒ−１７におけるリン酸化により制御されており、一方でＥＧＦ誘導型のＥＲＫ活性化により、ＣＫ２が仲介するβカテニンからのαカテニンの解離とβカテニンのトランス活性化が促進される。最後に、Ｃ２ＫはＫＳＲ１足場複合体（scaffold complex）の一成分であり、Ｒａｆキナーゼ活性化に寄与する。
【０３６２】
上皮増殖因子（ＥＧＦ）誘導型のＣＫ２活性へのＣＸ−４９４５の効果を調べるために、Ａ４３１（類表皮癌）およびＮＣＩ−Ｈ２１７０（肺癌細胞）が１００ｎｇ／ｍｌのＥＧＦおよび／または１０μＭのＣＸ−４９４５で処理され、ｐ−Ａｋｔ  Ｓ１２９およびｐ−Ａｋｔ  Ｓ４７３のレベルが測定された。どちらの細胞型においても、ＣＸ−４９４５がＥＧＦ誘導型ＣＫ２活性を著しく阻害することが観察された（図４１参照）。
【０３６３】
図４２Ａおよび図４２Ｂに示すように、ＣＸ−４９４５のエルロチニブとの併用はＡｋｔおよびｒｐＳ６のリン酸化を減少させる。エルロチニブは上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）を標的とし、他の癌型の中でもＮＳＣＬＣおよび膵癌を治療するために使用される。Ａ４３１異種移植片において、エルロチニブおよびＣＸ−４９４５は相乗的な抗腫瘍活性を示す（図４３参照）。エルロチニブおよびＣＸ−４９４５はどちらも単独で使用されたときに腫瘍増殖を著しく阻害することが示されたが、その併用はさらに強力であり、相乗活性を示し、エンドポイントまでの時間を延長させた。
【０３６４】
本明細書において引用される特許、特許出願、公報および文献は各々の全体が参照により本明細書に組み込まれる。上記の特許、特許出願、公報および文献のいかなる引用も、上記のいずれもが適切な先行技術であることを自認するものではなく、またこれらの公報または文献の内容または日付に関するいかなる自認を構成するものでもない。
【０３６５】
前述の実施例は本発明を例示するために提供されており、本発明の範囲を制限するものでも規定するものでもない。本発明の基本的な特徴から逸脱することなく、上記に変更が加えられ得る。本発明は一つまたは複数の特定の実施形態に関連して十分詳細に説明されているが、当業者は本出願で具体的に開示されている実施形態に変更を加えてもよいこと、およびこのような変更および改良が本発明の範囲および精神内にあることを認識するだろう。本明細書に例示的に記述されている発明は、本明細書において具体的に開示されていな任意の要素なしで適切に実施されてもよい。従って、例えば、本明細書における各例において、「〜を含む」、「実質的に〜から成る」および「〜から成る」という言い回しはいずれも、他の２つの言い回しのいずれかで置き換えられてもよい。従って、使用されている用語および表現は、限定ではなく説明のための用語として用いられ、本明細書に示され説明されている特徴またはその一部の同等物は除外されず、本発明の範囲内で様々な変更が可能であることが認識される。本発明の実施形態は下記の特許請求の範囲で記述される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３Ａ】
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【図１３Ｂ】
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【図１３Ｃ】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２Ａ】
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【図２２Ｂ】
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【図２２Ｃ】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１Ａ】
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【図３１Ｂ】
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【図３１Ｃ】
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【図３１Ｄ】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６】
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【図３７】
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【図３８】
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【図３９Ａ】
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【図３９Ｂ】
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【図４０】
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【図４１】
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【図４２】
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【図４３】
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【国際調査報告】
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