(57)【要約】  Ｆａｂ−ＰＥＧ又はＦａｂ’−ＰＥＧのＦａｂ又はＦａｂ’成分の分解によって生成した酸性種を測定する方法であって、ａ）酵素でＦａｂ−ＰＥＧ又はＦａｂ’−ＰＥＧからＰＥＧ及びリンカーを切断するステップと、ｂ）場合によっては、ステップａ）において生成したＰＥＧとリンカーをＦａｂ又はＦａｂ’から分離して、Ｆａｂ又はＦａｂ’をもたらすステップと、ｃ）切断されたＦａｂ若しくはＦａｂ’及び／又は切断されたＰＥＧに関連した酸性種を量的に分析するステップとを含む上記方法。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｆａｂ−ＰＥＧ又はＦａｂ’−ＰＥＧのＦａｂ又はＦａｂ’成分の分解によって生成した酸性種を測定する方法であって、
ａ）酵素でＦａｂ−ＰＥＧ又はＦａｂ’−ＰＥＧからＰＥＧ及びリンカーを切断するステップと、
ｂ）場合によっては、ステップａ）において生成したＰＥＧ及びリンカーをＦａｂ又はＦａｂ’から分離して、Ｆａｂ又はＦａｂ’をもたらすステップと、
ｃ）切断されたＦａｂ若しくはＦａｂ’及び／又は切断されたＰＥＧに関連した酸性種を量的に分析するステップと
を含む上記方法。
【請求項２】
酵素がトリプシン又はキモトリプシンである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ステップａ）における切断が、３７℃など、２５℃〜４０℃の範囲の温度で実行される、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
ステップａ）の切断が、特にＦａｂ又はＦａｂ’重鎖のＣ末端における、リシンとトレオニンの間に起こる、請求項１から３までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記リシン及びトレオニンが、Ｆａｂ’のＣ末端に位置するＳＣＤＫＴＨＴＣＡＡ配列中に見出される、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
酵素が、Ｆａｂ’のヒンジ部分を切断し、Ｆａｂ’からＰＥＧ及びリンカーを遊離させる、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
ステップａ）において生成したＰＥＧ及びリンカーが、Ｆａｂ又はＦａｂ’から分離されて、Ｆａｂ又はＦａｂ’をもたらす、請求項１から６までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記分離が、陽イオン交換クロマトグラフィー、ｃＩＥＦ、及び／又はサイズ排除クロマトグラフィーを使用して実施される、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
酸性種の定量化が、ＣＥＸ−ＨＰＬＣなどの陽イオン交換クロマトグラフィー又は画像化キャピラリー等電点電気泳動を利用して実行される、請求項１から８までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
Ｆａｂ’が、配列番号１０を含む又はから成る、請求項１から８までのいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＰＥＧ化タンパク質中の酸性種を測定するための改善されたアッセイ方法に関する。特に、本発明は、ＰＥＧ化Ｆａｂ及びＰＥＧ化Ｆａｂ’抗体形態の酸性種を測定するための改善されたアッセイ方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ＰＥＧ化Ｆａｂ及びＰＥＧ化Ｆａｂ’抗体形態は、全抗体に付随するエフェクター機能無しに、ｉｎ  ｖｉｖｏで全抗体と類似の循環半減期を備えるという点で有用である。これらの形態は治療に有効になってきており、これら治療薬の販売を認可する規制承認プロセスの支持には、長期安定性試験が義務付けられている。さらにまた、一般公衆による使用のための承認を受けたならば、製造された製品は、販売可能になる前に、バッチリリース試験を受けなければならない。
【０００３】
例えば保管後における、製剤中に存在する酸性種は、Ｆａｂ又はＦａｂ’の分解（特に脱アミド化）の徴候である可能性がある。規制当局によると脱アミド化は分解経路として分類されており、従って製品には脱アミド化のレベルに上限が設定されている。製品の有効期限中は脱アミド化の上限レベルを越えるべきでない。理論に束縛されるものではないが、スキーム１に提示する通り、アスパラギン残基は脱アミド化によってスクシンイミド中間体を経て分解されて、イソアスパラギン酸／アスパラギン酸などの酸性種を生成する可能性があると考えられている：
【化１】
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【０００４】
アスパラギン残基のこの脱アミド化は、タンパク質全体の電荷の変化をもたらす可能性があり、Ｆａｂ又はＦａｂ’の免疫原性を高める可能性がある。加えて、この脱アミド化はＦａｂ又はＦａｂ’の機能／有効性の変化をもたらす可能性があり、この変化は、予測不可能な治療効果／副作用又は単なる活性の喪失を引き起こす可能性がある。これは、製剤を投与した後の患者において有害作用を高める場合がある。従って、分解を最小限に抑えなければならず、保管の期間及び条件を、ほとんど分解が生じないような期間及び条件に制限しなければならない。従って、所与のＰＥＧ化Ｆａｂ又はＦａｂ’製剤中の脱アミド化を測定できることが重要である。その分析は、製品ラベルに示される有効期限及び保管条件に影響を及ぼす可能性がある。所定の上限を越える場合にはこれにより市場に出た製品が販売から回収される又は製品の特定のバッチの販売のための出荷が阻まれる可能性があるので、製品中の脱アミド化のレベルをモニタリングできることも重要である。理論的には、タンパク質中の脱アミド化は、その中に生成する酸性種を定量化することによって測定できる。
【０００５】
今日、ＰＥＧ化Ｆａｂ又はＰＥＧ化Ｆａｂ’の全酸性種の含有量は、陽イオン交換（ＣＥＸ）−ＨＰＬＣを使用して測定されている。
【０００６】
この方法は、製品中の酸性種の総量又は全体の値を測定する。しかし、酸性種が生成される経路は多数あり、それらの全てがタンパク質の脱アミド化（従って分解）に関連するわけではない。従ってその分析から得られる値は、タンパク質中の脱アミド化の実際量の値ではない。事実、その値は：
・Ｆａｂ’の分解、及び
・Ｆａｂ’又はＦａｂとＰＥＧ分子とを接続しているリンカーの加水分解
によって生成した酸性種を含んでいる。
【０００７】
図４に示すように、ＰＥＧリンカーの加水分解はスクシンイミド環を経由して進行すると考えられている。事実、この加水分解は優勢な効果である可能性があり、分析したとき、酸性種の総量値の大きな成分を生成する。全酸性種の内容が図３に概略的に表され、この図は、脱アミド化によってタンパク質中に生成した酸性種及びリンカーの加水分解によって生成した酸性種を示している。これは、図５に示すように概略的に表すことができ、この図はリンカーの加水分解によって生成した酸性種、脱アミド化によって生成した酸性種、及びその混合物の組成比率を示す。
【０００８】
分子中の酸性種の総量値は最も関心のある対象ではない。そうではなく、関心のある対象は、タンパク質中の脱アミド化の量である。しかし、全酸性種の含有量の分析では、タンパク質中の脱アミド化を表わす値が得られない。
【０００９】
脱アミド化の量は、例えばＩＳＯＱＵＡＮＴ（登録商標）アスパラギン酸検出キットを利用して測定できる。脱アミド化は、図２に概略的に表されており、この図はタンパク質の脱アミド化だけを示す。しかし、この脱アミド化アッセイは、特に強力なわけではない（Ａｌｆａｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ，２００８，８０，３８８２−３８８９）。
【００１０】
治療薬の商業的生産を支持するには、強力な分析技術が必要である。発明者はＰＥＧ化タンパク質、特にＰＥＧ化Ｆａｂ及びＦａｂ’の脱アミド化の分析のための強力且つ有効な方法を考案したと信じている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本開示の方法は、ＰＥＧ又はリンカー内ではなくＦａｂ又はＦａｂ’分子内の脱アミド化／分解の結果生じるＦａｂ又はＦａｂ’分子中の酸性種の直接的な測定を可能にする。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
従って、Ｆａｂ−ＰＥＧ又はＦａｂ’−ＰＥＧのＦａｂ又はＦａｂ’成分の分解によって生成した酸性種を測定する方法であって、
ａ）酵素でＦａｂ−ＰＥＧ又はＦａｂ’−ＰＥＧからＰＥＧ及びリンカーを切断するステップと、
ｂ）場合によっては、ステップａ）において生成したＰＥＧ及びリンカーをＦａｂ又はＦａｂ’から分離して、Ｆａｂ又はＦａｂ’をもたらすステップと、
ｃ）切断されたＦａｂ若しくはＦａｂ’及び／又は切断されたＰＥＧに関連した酸性種を量的に分析するステップと
を含む方法を提供する。
【００１３】
Ｆａｂ又はＦａｂ’からＰＥＧ及びリンカーを取り除くことにより、Ｆａｂ又はＦａｂ’中の酸性種を定量化することによって、タンパク質中の脱アミド化の量を測定できる。本方法は、再現性があり且つ強力であり、さらにＰＥＧ及びリンカーの切断はタンパク質内の脱アミド化の量に干渉しない又は変化させない。従って、切断されたＦａｂ又はＦａｂ’内の脱アミド化は、ＰＥＧ化Ｆａｂ又はＰＥＧ化Ｆａｂ’のタンパク質部分の脱アミド化を表すはずである。
【００１４】
別の実施形態において、本方法は、Ｆａｂ−ＰＥＧ又はＦａｂ’−ＰＥＧの「全」酸性種を最初に決定し、その後本方法のステップ（ａ）で切断し、次いで本方法のステップ（ｃ）で決定したＦａｂ又はＦａｂ’成分に関連する定量化された酸性種を、「全」酸性種から減算することによって、ＰＥＧリンカーの加水分解の程度を決定できる。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】ＰＥＧ化Ｆａｂ’の概略図である。
【図２】ＰＥＧ化Ｆａｂ’において起こる脱アミド化の概略図である。
【図３】その両方が酸性種を生成する脱アミド化とリンカーの加水分解の概略図である。
【図４】Ｆａｂ’のＰＥＧ化及びその後に開環して酸性種を生成する化学プロセスを示す図である。
【図５】全酸性種の含有量に寄与する酸性種の組成比率値を示すグラフである。
【図６】酵素消化の後にＰＥＧ化Ｆａｂ’から生成した種の概略図である。
【図７】ＰＥＧ化Ｆａｂ’のトリプシン消化の効率を経時的に示すグラフである。
【図８】ＰＥＧ化Ｆａｂ’のトリプシン消化から生じる粗生成物のＣＥＸ−ＨＰＬＣ分析を示す図である。
【図９】トリプシンによって消化されたＰＥＧ化Ｆａｂ’のｉＣＥＦを示す図である。
【図１０】配列１〜９である。
【図１１】配列１０及び１１である。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
本明細書において酸性種とは、カルボン酸を含む、即ち−Ｃ（Ｏ）ＯＨ基を含む部分及び分子を意味するものとする。
【００１７】
一実施形態において、酵素はトリプシンなどのプロテアーゼ、例えばトリプシン又はキモトリプシンである。利用する酵素がトリプシンの場合、切断位置は例えばＦａｂ’断片の配列ＳＣＤＫＴＨＴＣＡＡ（重鎖Ｃ末端）のＫとＴの間であると予想される。さらに切断に都合のよいことに、切断されるヒンジの小さな部分はアスパラギン残基を全く含まないので、この位置はタンパク質の脱アミド化の値を変化させない。
【００１８】
Ｆａｂ’は、ヒンジに酵素に適した基質となる配列を天然に有している。Ｆａｂ分子は酵素の基質配列を天然に有しないが、必要に応じて適切な配列を適当な位置に加工することができ、酵素消化によってＦａｂに結合したＰＥＧを除去可能になる。
【００１９】
酵素消化は、２５〜３８℃など、２０〜４０℃の範囲の温度で実行でき、特に３７℃で最適に実行される。
【００２０】
一実施形態において、出発物質がＰＥＧ化Ｆａｂ’であるとき、酵素はＦａｂ’のヒンジ部分を切断しＦａｂ’からＰＥＧとリンカーを遊離させる。
【００２１】
酵素消化、例えばトリプシン消化は、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０分又はそれ以上の時間にわたって実施できる。
【００２２】
酸性種の定量化にＨＰＬＣ／ｃＩＥＦなどの技術を利用する場合、生成した物質は異なる保持時間を有し、従って追加的な分離ステップ無しで個別に定量化できるので、消化によって生成した物質を分離する必要はない。
【００２３】
しかし場合によっては、ステップａ）によって生成した物質を、公知の技術、例えば陽イオン交換クロマトグラフィー、ｃＩＥＦ、サイズ排除クロマトグラフィーなどで分離することが可能である。
【００２４】
一実施形態において、Ｆａｂ、Ｆａｂ’及び／又はＰＥＧに関連する酸性種が定量化される。
【００２５】
一実施形態において、Ｆａｂ又はＦａｂ’の脱アミド化が測定される。
【００２６】
一実施形態において、ステップｃ）における酸性種が、例えば溶出勾配を利用するＨＰＬＣ分析を利用して分析される。一実施形態において、ＨＰＬＣ分析は、ＣＥＸ−ＨＰＬＣ分析である。
【００２７】
別法として、切断されたタンパク質中の脱アミド化の量を、キャピラリー電気泳動法で測定することが可能である。
【００２８】
一実施形態において、ステップｃ）における酸性種は、ｃＩＥＦ分析を利用して分析され、適切なカートリッジにはＣｏｎｖｅｒｇｅｎｔ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅから入手可能なｉＣＥ２８０がある。
【００２９】
本明細書で完全に記載されたかのように参照により組み込まれるべきそれぞれの刊行物を具体的且つ個別に示すように、本明細書に引用される特許及び特許出願を含むがこれに限らない全ての刊行物を本明細書に参照により組み込む。
【００３０】
好ましい実施形態において、ＷＯ０１／０９４５８５（その内容を参照により本明細書に組み込む）に記載されるように、抗体は抗ＴＮＦ抗体、より好ましくは抗ＴＮＦ抗体ＣＤＰ８７０のＦａｂ’である。
【００３１】
一実施形態において、ヒトＴＮＦαに対して特異性を有する抗体は重鎖を含み、その可変ドメインはＣＤＲＨ１に対応する配列番号１に示される配列、ＣＤＲＨ２に対応する配列番号２に示される配列又はＣＤＲＨ３に対応する配列番号３に示される配列を有するＣＤＲを含む。
【００３２】
一実施形態において、抗体は軽鎖を含み、その可変ドメインがＣＤＲＬ１に対応する配列番号４に示される配列、ＣＤＲＬ２に対応する配列番号５に示される配列又はＣＤＲＬ３に対応する配列番号６に示される配列を有するＣＤＲを含む。
【００３３】
一実施形態において、抗体は、可変ドメインがＣＤＲＨ１に対応する配列番号１に示される配列、ＣＤＲＨ２に対応する配列番号２に示される配列又はＣＤＲＨ３に対応する配列番号３に示される配列を有するＣＤＲを含む重鎖と、可変ドメインがＣＤＲＬ１に対応する配列番号４に示される配列、ＣＤＲＬ２に対応する配列番号５に示される配列又はＣＤＲＬ３に対応する配列番号６に示される配列を有するＣＤＲ含む軽鎖とを含む。
【００３４】
一実施形態において、抗体は、ＣＤＲＨ１に対応する配列番号１、ＣＤＲＨ２に対応する配列番号２、ＣＤＲＨ３に対応する配列番号３、ＣＤＲＬ１に対応する配列番号４、ＣＤＲＬ２に対応する配列番号５及びＣＤＲＬ３に対応する配列番号６を含む。
【００３５】
好ましくは、抗体はＣＤＲグラフト化抗体分子であり、通常その可変ドメインはヒトアクセプターフレームワーク領域及びヒト以外のドナーＣＤＲを含む。
【００３６】
好ましくは、抗体はＣＤＰ８７０の可変ドメインの軽鎖（配列番号７）及びＣＤＰ８７０の可変ドメインの重鎖（配列番号８）を含む。
【００３７】
抗体は修飾されたＦａｂ断片であることが好ましく、その修飾は重鎖のＣ末端に対する１つ又は複数のアミノ酸の付加であり、エフェクター又はリポーター分子の結合が可能になる。好ましくは、追加的なアミノ酸は、エフェクター若しくはリポーター分子が結合可能な１個又は２個のシステイン残基を含む修飾されたヒンジ領域を形成する。そのような修飾されたＦａｂ断片は、好ましくは、配列番号１０として示される配列を含む又はから成る重鎖と配列番号９として示される配列を含む又はから成る軽鎖とを有する。
【００３８】
本開示は、完全体の特定の混合物を含む実施形態を明示的に開示する。本開示は、基本的に完全体の前記混合物から成る又はから成る実施形態にも及ぶ。
【００３９】
技術的に可能な様に、選好及び／又は実施形態を組み合わせることができる。
【００４０】
本発明は、以下の実施例を参照してここに記述されることになるが、これら実施例は単なる例証であり決して本発明の範囲を制限するものとして解釈されるべきでない。
【実施例】
【００４１】
トリプシン消化法
エッペンドルフチューブに、Ｆａｂ’ＰＥＧ  １．０ｍｇを５０ｍＭ  ＮａＯＡｃ、１２５ｍＭ  ＮａＣｌ  ｐＨ５．０に添加し、全容量を５０μＬにする。０．２Ｍ  Ｎａ２ＨＰＯ４  ５０μＬ、続いてトリプシン再懸濁緩衝液（５０ｍＭ酢酸）４０μＬを添加し、最終ｐＨはｐＨ７．５の範囲にあるべきである。１０秒間ボルテックスする。
【００４２】
反応は、３７℃で２時間インキューベーションする。ＣＥＸ  ＨＰＬＣ又は画像化キャピラリー等電点電気泳動で分析する。
【００４３】
ＨＴＲＰ  ＨＰＬＣによって決定される消化効率
ＨＴＲＰ  ＨＰＬＣアッセイに反応物を直ちに注入できるように、３７℃でインキューベーションされたアジレント１１００シリーズ自動サンプラを使用して、Ｆａｂ’ＰＥＧを用いたトリプシン消化物を準備した。Ｆａｂ’Ｐｅｇ及びＦａｂ’対照の注入を順次９回実施した。Ｆａｂ’ＰＥＧは、図７に示される消化プロファイルを示した。この図から、Ｆａｂ’ＰＥＧ産物含有量が２時間以内に２０％以下に減少することが実証される。
【００４４】
分析
消化後にサンプルを取り出し、サンプル希釈緩衝液（２０ｍＭ酢酸ナトリウムｐＨ４．５）に１ｍｇ／ｍＬとなるように希釈した。図８に示す通り、消化ステップから得られた混合物を前処理すること無しに、Ｆａｂ’ＰＥＧ及び切断されたＦａｂ’をそれぞれの酸性種と一緒に同定できる。図８で示す通り次の物を順次溶出する；未消化のＦａｂ’ＰＥＧ酸性種、未消化のＦａｂ’ＰＥＧ、切断されたＦａｂ’酸性種、及び切断されたＦａｂ’。
【００４５】
ＣＥＸ  ＨＰＬＣによる切断されたＦａｂ’酸性種の検出に適切なクロマトグラフィー条件
溶剤Ａ  平衡緩衝液１０ｍＭ  ２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸ｐＨ６．２
溶剤Ｂ  溶離緩衝液１０ｍＭ  ２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸、５０ｍＭ塩化ナトリウムｐＨ６．２
カラム  Ｄｉｏｎｅｘ  Ｐｒｏｐａｃ  ＳＣＸ−１０カラム
流速  ０．５ｍＬ／分
停止時間  ７５分
最大圧力  ２５０バール
方法実行圧（ガイド）  ６０バール以下
カラム温度  ２５℃
注入量  １００μＬ
自動サンプラ温度  ４℃
検出波長  ２８０ｎｍ（帯域幅１６）、スリット幅４ｎｍ
ロード  １ｍｇ／ｍＬを１００μＬ
【表１】
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【００４６】
ピークが組み込まれているＨＰ  Ｃｈｅｍｓｔａｔｉｏｎソフトウェアを使用してデータを分析できる。記述された適切なクロマトグラフィー条件を使用したＦａｂ’ＰＥＧ消化のクロマトグラムの例については図８を参照のこと。次のものが検出される；未消化の酸性Ｆａｂ’ＰＥＧ、未消化Ｆａｂ’ＰＥＧ、切断された酸性Ｆａｂ’、切断されたＦａｂ’。
【００４７】
画像化キャピラリー等電点電気泳動を使用する分析の別法
ｉＣＥ２８０を使用する分析用のサンプル調製
２００μＬ容量の一般的なサンプルの調製は、以下の通りである：
・トリプシン消化物（１ｍｇ／ｍｌの濃度で脱塩され自由イオンを含まない）−４０μｌ（原則：タンパク質の終濃度は、最終的なサンプル混合物において約０．１〜０．３ｍｇ／ｍｌになるべきである）。
・１％メチルセルロース：７０μＬ（最終的な混合物中のメチルセルロース濃度は０．３５％になるべきである）
・両性電解質担体：（３−１０Ｐｈａｒｍａｌｙｔｅ）−８μＬ（両性電解質担体は最終サンプル混合物において４％の濃度を有するべきである）。
・ｐＩマーカー：ｐＩ値がタンパク質及びその関連種の両端にあるべき２つの異なるｐＩマーカーを各１μＬ添加する。
・ＨＰＬＣ品質水：容量が２００μＬになるように必要量のＨＰＬＣ水を加える。
【００４８】
１５〜３０秒間ボルテックスすることによって上記のサンプルを混合して、異なる成分を適当に混合させる。混合物を１６０００ｇで１０分間遠心して、分析に干渉する気泡及び塵粒を取り除く。
【００４９】
ｉＣＥ２８０技術を利用する器具の設定及び分析
Ｃｏｎｖｅｒｇｅｎｔ  ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｉｓｏｇｅｎヨーロッパ）のｉＣＥ２８０は、画像化キャピラリー等電点電気泳動器具であり、この器具を使用して様々なタンパク質サンプル及びその関連種のｐＩを決定する。
【００５０】
陽極及び陰極を使用するキャピラリーを通して高電圧が印加され、両極は陰極液（ＯＨ−）及び陽極液（Ｈ＋）を含む小さな容器に浸されている。両性電解質担体を用いてサンプルを調製し、高電圧を印加することによってタンパク質分子はそれぞれのｐＩに従って移動し最終的にｐＩに焦束する。陽極液は、０．１％メチルセルロースに算出した量のリン酸を加えて最終的に０．０８Ｍリン酸溶液を得ることによって調製できる。陰極液は、０．１％メチルセルロース２ｍｌに５０重量／重量％ＮａＯＨ溶液１０．４μｌを加えることによって調製できる。陰極液は、新たに調製しなければならず、再利用するべきでない。通常、容器を一回満たすには２ｍｌで十分である。
【００５１】
全ての非ＰＥＧ化サンプルについて通常、３０００ｖで５〜６分間の集束時間は十分であるべきだが、異なるタンパク質は異なる電荷分布を有するので、集束時間もそれに応じて変化させることになる。その場合、設定は２、３個のサンプルを流すことにより最適化される必要がある。
【００５２】
データ分析は、ＥＺＣｈｒｏｍソフトウェアを使用して実施できる。「Ｓｕｐｅｒｃｏｍｐａｒｅ」を使用して重ね合わせることによってプロファイルを比較でき、ＥＺクロムソフトウェアの「方法開発」オプションを使用して電気泳動図を統合することができる。Ｆａｂ’ＰＥＧ消化の電気泳動図の例については図９を参照のこと。次のものが検出される；低ｐＩマーカー、切断されたＦａｂ’酸性種、切断されたＦａｂ’種、切断されたＦａｂ’塩基性種、高ｐＩマーカー。
【配列表フリーテキスト】
【００５３】
配列番号１はＣＤＰ８７０のＣＤＲＨ１のアミノ酸配列を示す。
配列番号２はＣＤＰ８７０のＣＤＲＨ２のアミノ酸配列を示す。
配列番号３はＣＤＰ８７０のＣＤＲＨ３のアミノ酸配列を示す。
配列番号４はＣＤＰ８７０のＣＤＲＬ１のアミノ酸配列を示す。
配列番号５はＣＤＰ８７０のＣＤＲＬ２のアミノ酸配列を示す。
配列番号６はＣＤＰ８７０のＣＤＲＬ３のアミノ酸配列を示す。
配列番号７はＣＤＰ８７０の軽鎖可変領域のヌクレオチド及び予測されるアミノ酸配列を示す。
配列番号８はＣＤＰ８７０の重鎖可変領域のヌクレオチド及び予測されるアミノ酸配列を示す。
配列番号９はグラフトされた抗ＴＮＦα  ＣＤＰ８７０のＦａｂ軽鎖のアミノ酸配列を示す。
配列番号１０はグラフトされた抗ＴＮＦα  ＣＤＰ８７０のＦａｂ重鎖のアミノ酸配列を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
2013533490.tif 000011
【図８】
2013533490.tif 000012
【図９】
2013533490.tif 000013
【図１０】
2013533490.tif 000014
【図１１】
2013533490.tif 000015
【配列表】
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【国際調査報告】
2013533490.tif 000016
2013533490.tif 000017
2013533490.tif 000018
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