(57)【要約】  本発明は、医薬として使用するための、式(I)の化合物、そのエナンチオマーおよび薬学的に許容されるその塩から選択される化合物に関する。
2013529668.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
医薬として使用するための、以下の式(I)
【化１】
2013529668.tif 000006
の化合物、そのエナンチオマーおよび薬学的に許容されるその塩から選択される化合物。
【請求項２】
酒さの予防および/または治療において使用するための、請求項1に記載の化合物。
【請求項３】
炎症性病態の予防および/または治療において使用するための、請求項1に記載の化合物。
【請求項４】
式(I)の化合物の塩またはそのエナンチオマーの塩が、薬学的に許容される酸を有するこの化合物の塩またはそのエナンチオマーの塩から選択されることを特徴とする、請求項1から3のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項５】
前記薬学的に許容される酸が、
薬学的に許容される無機酸、例えば塩酸、硫酸、リン酸、硝酸または臭化水素酸;
および薬学的に許容される有機酸、例えば酢酸、酒石酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、フマル酸、クエン酸、乳酸、粘液酸、グルコン酸、安息香酸、コハク酸、シュウ酸、フェニル酢酸、メタンスルホン酸、トルエンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、サリチル酸、アスパラギン酸、グルタミン酸およびアスコルビン酸
から選択されることを特徴とする、請求項4に記載の化合物。
【請求項６】
式(I)の化合物、式(I)の化合物の塩酸塩、式(I)の化合物のクエン酸塩、式(I)の化合物のサリチル酸塩、式(I)の化合物の安息香酸塩、およびこれらの化合物のSエナンチオマーから選択されることを特徴とする、請求項1から5のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項７】
2-(2-メチル-5-ニトロイミダゾール-1-イル)エチル(S)-2-(4-イソブチルフェニル)プロピオネートであることを特徴とする、請求項1から6のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項８】
局所適用のための医薬組成物中にあることを特徴とする、請求項1から7のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項９】
前記医薬組成物が、溶液、ゲルまたはエマルションの形態にあることを特徴とする、請求項8に記載の化合物。
【請求項１０】
前記組成物の総重量に対して0.001重量%から10重量%の間の量で存在することを特徴とする、請求項1から9のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１１】
式(Ia)
【化２】
2013529668.tif 000007
に対応する構造の2-(2-メチル-5-ニトロイミダゾール-1-イル)エチル(S)-2-(4-イソブチルフェニル)プロピオネートおよび薬学的に許容されるその塩。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、式(I)の化合物に関し、特に酒さの治療および/または予防ならびに炎症性病態の治療および/または予防における医薬としてのその使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
酒さは、血管弛緩に関連する進行性、慢性の一般的な炎症性皮膚疾患である。酒さは主に、顔の中心部分に影響し、顔面の発赤またはほてり、顔面紅斑、丘疹、膿疱、毛細血管拡張、および時として眼性酒さとして知られる眼性病変を特徴とする。重篤な場合には、特に男性において、鼻の軟織が肥大し、鼻瘤として知られる球状の腫脹(bulbous swelling)が生じることがある。酒さは、温度変化、アルコール、香辛料、日光への曝露、または感情などの様々な刺激により悪化するエピソードを介して、数年かかって発症する。
【０００３】
酒さは、様々な臨床的特徴に応じて4つのサブタイプに分類される(Wilkin J.ら、JAAD、2002年、46: 584〜587頁)。
【０００４】
酒さの第1の特徴(ヒスタミン潮紅、持続性紅斑、丘疹および膿疱、ならびに毛細血管拡張)および第2の特徴(灼熱感またはヒリヒリと刺すような感覚、斑、皮膚の乾燥した外観、浮腫、眼性徴候、腫瘤状変化(phymatous change))は、組み合わせて観察されることが多い。兆候の表面化または組み合わせの最も一般的な様態は、以下に記載されている特定のサブタイプに暫定的に再グループ化される。各カテゴリーは、対応するサブタイプを診断するのに十分な兆候の最小数を含み(表面化の様態はこれらの兆候に必ずしも限定されないが)、患者は、酒さの複数のサブタイプを示唆する特徴を同時に呈する可能性がある。
【０００５】
サブタイプ1:紅斑毛細血管拡張性酒さ(Erythematotelangiectatic rosacea)
紅斑毛細血管拡張性酒さは、主にヒスタミン潮紅および持続性中心性顔面紅斑を特徴とする。毛細血管拡張の存在は一般的であるが、このサブタイプの診断に不可欠ではない。中心性顔面浮腫、灼熱感およびヒリヒリと刺すような感覚、ならびに発赤または落屑も時として観察される。ヒスタミン潮紅単独の既往は、紅斑毛細血管拡張性酒さに罹患している患者の場合に一般的である。
【０００６】
サブタイプ2:丘疹膿疱性酒さ(Papulopustular rosacea)
丘疹膿疱性酒さは、持続性中心性顔面紅斑ならびに顔の中心に分布した一過性の丘疹および/または膿疱を特徴とする。しかし、丘疹および膿疱はまた、開口周辺部(すなわち口周囲、鼻周囲または眼周囲領域)に影響することもある。丘疹膿疱性サブタイプは尋常性座瘡に似ているが、面皰はない。酒さおよび座瘡は共存することがあり、酒さに似ている丘疹および膿疱に加えて、当該患者は恐らく面皰も有するであろう。丘疹膿疱性酒さに罹患している患者は、時として灼熱感およびヒリヒリと刺すような感覚を訴える。
【０００７】
このサブタイプは、サブタイプ1(毛細血管拡張の存在を含む)の前または同時に観察されることが多い。毛細血管拡張リスクは、持続性紅斑および丘疹または膿疱により目立たなくなる。
【０００８】
サブタイプ3:瘤腫性酒さ(Phymatous rosacea)
瘤腫性酒さは、皮膚の肥厚、表面がでこぼこした小結節および腫脹を呈する。鼻瘤は、最も一般的な症状であるが、瘤腫性酒さは、顎、額、頬および耳を含む他の部位に影響することもある。このサブタイプに罹患している患者の場合、拡大し突起した毛包口の存在が、毛細血管拡張と同じように病変部で時として報告される。
【０００９】
このサブタイプは、サブタイプ1または2(持続性紅斑、毛細血管拡張、丘疹および膿疱の存在を含む)の前または同時に観察されることが多い。鼻瘤の場合、これらの追加の徴候リスクは、鼻部で特に著しい。
【００１０】
サブタイプ4:眼性酒さ(Ocular rosacea)(または目酒さ(ophthalmic rosacea))
眼性酒さの診断は、患者が次の眼兆候および症状の1つまたは複数、すなわち、涙目のもしくは充血した外観(眼瞼間(interpalpebral)結膜充血)、異物の存在の感覚、灼熱感もしくはヒリヒリと刺すような感覚、乾燥、掻痒、光線過敏性、霧視、結膜および眼瞼のふちの毛細血管拡張、または眼瞼の紅斑および眼周囲の紅斑を有する場合に想定されなければならない。眼瞼炎、結膜炎および眼瞼のふちのでこぼこは、検出され得る他の兆候である。麦粒腫を呈し、および原因がマイボーム腺の機能障害である霰粒腫または慢性ブドウ球菌感染は、酒さに関連した眼性疾患の高頻度の兆候である。患者のなかには、角膜合併症(点状角膜炎、角膜浸潤/角膜潰瘍または辺縁角膜炎)が原因である視力の低下を訴えるものもいる。皮膚酒さの治療は、単独では、眼性酒さに関連する視力低下のリスクに対する影響がない可能性があり、眼科的アプローチが恐らく必要とされるであろう。
【００１１】
最後に、酒さの他のより稀な形態(異型)、特に肉芽腫性酒さが存在する。
【００１２】
眼性酒さの診断は、皮膚兆候および症状も検出される場合に最も頻繁に行われる。しかし、診断をするのに皮膚兆候および症状が必ずしも存在するわけではなく、小規模の研究は、眼性酒さに罹患している患者の最大20%が、皮膚徴候が現れる前に眼性兆候および症状を発症する可能性があることを示唆している。皮膚病変は、これらの患者の約半数の症例で最初に現れ、2つのタイプの徴候は、該患者の少数で同時に生じる。
【００１３】
酒さは、一般に25歳から70歳の間に生じ、色白の人にはるかに多く見られる。酒さは、より特に女性に影響するが、この愁訴は一般に、男性の場合により重症である。
【００１４】
酒さの病因はあまり理解されておらず、幾つかの要因を含んでいる可能性がある。これらは、例えば、血管要因(異常な血管反応性)、免疫要因、あるいは細菌およびニキビダニ(Demodex folliculorum mite)などの毛包微生物の存在などの外因的要因である(Diamantis S. & Waldorf H.A.、J. Drug Dermatol.、2006年、5: 8〜12頁; Wilkin J.K.、Arch. Dermatol.、1994年、130: 359〜362頁; Buechner S.A.、Dermatology、2005年、210: 100〜108頁)。
【００１５】
さらに、研究、特に臨床研究は、酒さが炎症性病変であることを示唆する傾向がある(McKeageら、Am. J. Clin. Dermatol. 2010年; 11(3): 217〜22頁).
【００１６】
従来、酒さは経口的または局所的に治療される。「酒さ」適応症に対する市販の承認を得ている薬剤には、局所メトロニダゾールおよび経口ドキシサイクリンがある(Cribier B.、La rosacee、Masson-Eticom、Paris、2002年)。
【００１７】
テトラサイクリン誘導体による長期経口治療は、多くの理由のため、特に重大な副作用のため問題がある。テトラサイクリン、特にドキシサイクリンの経口投与は、100mg/日以上で光線過敏性、またはさらには光毒性(Layton A.M.、Cunliffe W.J. Phototoxic eruptions due to doxycycline-a dose-related phenomenon. Clin. Exp. Dermatol. 1993年; 18: 425〜427頁)、あるいは胃腸障害(Maibach H. Second-generation tetracyclines、a dermatologic overview: clinical uses and pharmacology. Cutis. 1991年; 48: 411〜417頁)を誘発する可能性がある。
【００１８】
さらに、これらの治療では、酒さに関連する症状の全てを効果的に治療および/または予防することができない。寛解および増悪の典型的プロフィールを有する酒さの慢性の性質を考慮すると、理想の治療は、安全および有効な方法で長期にわたり得る使用を必要とする。
【００１９】
特許出願WO 02/74290は、酒さを治療するための少なくとも1つの非ステロイド性抗炎症薬(NSAID)の使用を記載している。この化合物は、特にピロキシカム、アスピリン、イブフェナックまたはナプロキセンであり得る。該化合物は、場合によりニトロイミダゾールと組み合わせて使用することができる。しかし、NSAIDおよびニトロイミダゾールの同時使用は、相当な副作用、ニトロイミダゾールとしてのメトロニダゾールの使用に関連する特に胃腸および腎臓作用(D.I. Edwards、Br. J. Vener. Dis. 1980年; 56: 285〜290頁)、またはNSAIDの使用に関連する潰瘍(C.J. Hawkey、J. Rheumatology、2002年; 29: 4; 650〜652頁)を有する。
【００２０】
したがって、長期間使用することができ、および副作用の可能性が最も低い、酒さの治療に有効である活性剤が必要である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００２１】
【特許文献１】特許出願WO 02/74290
【非特許文献】
【００２２】
【非特許文献１】Wilkin J.ら、JAAD、2002年、46: 584〜587頁
【非特許文献２】Diamantis S. & Waldorf H.A.、J. Drug Dermatol.、2006年、5: 8〜12頁
【非特許文献３】Wilkin J.K.、Arch. Dermatol.、1994年、130: 359〜362頁
【非特許文献４】Buechner S.A.、Dermatology、2005年、210: 100〜108頁
【非特許文献５】McKeageら、Am. J. Clin. Dermatol. 2010年; 11(3): 217〜22頁
【非特許文献６】Cribier B.、La rosacee、Masson-Eticom、Paris、2002年
【非特許文献７】Layton A.M.、Cunliffe W.J. Phototoxic eruptions due to doxycycline-a dose-related phenomenon. Clin. Exp. Dermatol. 1993年; 18: 425〜427頁
【非特許文献８】Maibach H. Second-generation tetracyclines、a dermatologic overview: clinical uses and pharmacology. Cutis. 1991年; 48: 411〜417頁
【非特許文献９】D.I. Edwards、Br. J. Vener. Dis. 1980年; 56: 285〜290頁
【非特許文献１０】C.J. Hawkey、J. Rheumatology、2002年; 29: 4; 650〜652頁
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２３】
本発明の目的は、したがって、特に患者の副作用を減少させる酒さの有効な治療を提案することである。好ましくは、この治療は局所的に行われ、いずれの全身性副作用もかなり減少させる。
【課題を解決するための手段】
【００２４】
本発明の1つの主題は、したがって、医薬として使用するための、以下の式(I)
【００２５】
【化１】
2013529668.tif 000003
【００２６】
の化合物、そのエナンチオマーおよび薬学的に許容されるその塩から選択される化合物である。
【００２７】
式(I)の化合物は、化学名2-(2-メチル-5-ニトロイミダゾール-1-イル)エチル2-(4-イソブチルフェニル)プロピオネートを有する。
【００２８】
この化合物は、実施例2に示されているように、角化細胞で特異的に切断されるエステル官能基を含有する。比較目的のために、NSAID、例えばインドメタシン、ニフルム酸、ジフルニサルまたはケトロラクエステルと一緒に他のメトロニダゾールエステルが調製され、角化細胞培養物で試験された。全てのこれらの化合物は、本発明による式(I)の化合物とは異なり、角化細胞の存在下で安定である。
【００２９】
式(I)の化合物、そのエナンチオマーおよび薬学的に許容されるその塩のこの特有の不安定性は、したがって驚くべきことであり、予想外である。いかなる理論にも拘束されることを望むものではないが、式(I)の化合物、そのエナンチオマーまたは薬学的に許容されるその塩が、皮膚に浸透し、角化細胞と接触して加水分解されると、式(I)の化合物、そのエナンチオマーおよび薬学的に許容されるその塩のこの特有の驚くべき不安定性が、抗炎症活性および抗酒さ活性を得ることを可能にする可能性は極めて高い。
【００３０】
本発明の主題はまた、酒さの治療および/または予防において使用するための、式(I)の化合物、そのエナンチオマーおよび薬学的に許容されるその塩から選択される化合物である。
【００３１】
本発明の主題はまた、炎症性病態の予防および/または治療において使用するための、式(I)の化合物、そのエナンチオマーおよび薬学的に許容されるその塩から選択される化合物である。
【００３２】
本発明の主題はまた、酒さを治療および/または予防する医薬を調製するための、式(I)の化合物、そのエナンチオマーおよび薬学的に許容されるその塩から選択される少なくとも1つの化合物の使用である。
【００３３】
最後に、本発明の主題は、式(I)の化合物のSエナンチオマー(すなわち2-(2-メチル-5-ニトロイミダゾール-1-イル)エチル(S)-2-(4-イソブチルフェニル)プロピオネート)および薬学的に許容されるその塩である。
【発明を実施するための形態】
【００３４】
用語「本発明による式(I)の化合物の塩またはそのエナンチオマーの塩」は、薬学的に許容される酸を有するこの化合物またはそのエナンチオマーの塩を意味する。
【００３５】
薬学的に許容される酸は、特に、
薬学的に許容される無機酸、例えば塩酸、硫酸、リン酸、硝酸もしくは臭化水素酸;
または薬学的に許容される有機酸、例えば酢酸、酒石酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、フマル酸、クエン酸、乳酸、粘液酸、グルコン酸、安息香酸、コハク酸、シュウ酸、フェニル酢酸、メタンスルホン酸、トルエンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、サリチル酸、アスパラギン酸、グルタミン酸およびアスコルビン酸
である。
【００３６】
好ましくは、式(I)の化合物の塩は、式(I)の化合物の塩酸塩、クエン酸塩、サリチル酸塩および安息香酸塩から選択される。
【００３７】
ベンゼン環と-COO-基の間に位置する炭素原子(式(I)にアスタリスクで示された)は、不斉であり、分子はしたがってキラルである。したがって、用語「式(I)の化合物のエナンチオマー」は、この化合物のRおよびSエナンチオマーを意味する。Sエナンチオマーが好ましい形態である。式(I)の化合物のSエナンチオマーは、したがって2-(2-メチル-5-ニトロイミダゾール-1-イル)エチル(S)-2-(4-イソブチルフェニル)プロピオネート)である。
【００３８】
好ましくは、式(I)の化合物のSエナンチオマーの塩は、前記Sエナンチオマーの塩酸塩、クエン酸塩、サリチル酸塩および安息香酸塩(すなわち2-(2-メチル-5-ニトロイミダゾール-1-イル)エチル(S)-2-(4-イソブチルフェニル)プロピオネート塩酸塩、2-(2-メチル-5-ニトロイミダゾール-1-イル)エチル(S)-2-(4-イソブチルフェニル)プロピオネートクエン酸塩、2-(2-メチル-5-ニトロイミダゾール-1-イル)エチル(S)-2-(4-イソブチルフェニル)プロピオネートサリチル酸塩および2-(2-メチル-5-ニトロイミダゾール-1-イル)エチル(S)-2-(4-イソブチルフェニル)プロピオネート安息香酸塩)から選択される。
【００３９】
用語、酒さの「治療(treatment)」または「治療(treating)」は、酒さの発症および/またはこの症状を減少および/または抑制することを意味する。
【００４０】
用語、酒さの「予防(prevention)」または「予防(preventing)」は、酒さの症状の出現を減少および/または回避することを意味する。
【００４１】
用語「炎症性病態」は、乾癬、アトピー性皮膚炎、座瘡または湿疹などの皮膚の炎症性病態を特に意味する。
【００４２】
用語「本発明による化合物」は、式(I)の化合物、そのエナンチオマーおよび/または薬学的に許容されるその塩を無差別に意味する。
【００４３】
より優先的には、本発明による化合物は、式(I)の化合物のSエナンチオマー、または式(Ia)
【００４４】
【化２】
2013529668.tif 000004
【００４５】
に対応する構造の2-(2-メチル-5-ニトロイミダゾール-1-イル)エチル(S)-2-(4-イソブチルフェニル)プロピオネートである。
【００４６】
ラセミ体での本発明による化合物は、刊行物R.C. Prasadら、Indian Journal of Chemistry、1990年、29B(11)、1034頁に示されているように調製することができる。エナンチオマーは、これ自体、キラルHPLCなどの、当技術分野で知られている方法によって分離することができる。特に、Sエナンチオマーは、実施例1に示されているように、S立体配置でイブプロフェンから開始して調製することができる。
【００４７】
式(I)の化合物、そのエナンチオマーおよび薬学的に許容されるその塩から選択される化合物は、したがってヒト用の医薬組成物中に製剤化することができる。前記組成物は、薬学的に許容される媒体中に、式(I)の化合物、そのエナンチオマーおよび薬学的に許容されるその塩から選択される少なくとも1つの化合物を含む。
【００４８】
用語「薬学的に許容される媒体」は、皮膚、粘膜および外皮に適合可能である媒体を意味する。
【００４９】
本発明により使用され得る医薬組成物は、局所的、非経口的または経口的に投与することができる。
【００５０】
好ましくは、式(I)の化合物、そのエナンチオマーおよび薬学的に許容されるその塩から選択される化合物は、局所適用のための医薬組成物中に存在する。
【００５１】
用語「局所適用」は、皮膚、粘膜および/または外皮への適用を意味する。
【００５２】
本発明による組成物は、組成物の総重量に対して0.001重量%から10重量%の本発明による化合物を含む。優先的には、本発明による組成物は、組成物の総重量に対して0.1重量%から5重量%の本発明による化合物を含有する。
【００５３】
局所用医薬組成物は、液体、ペースト状または固体形態、およびより詳細には、軟膏、クリーム、ミルク、ポマード、粉末、含浸パッド、合成洗剤、ワイプ、溶液、ゲル、スプレー、ムース、懸濁液、ローション、スティック、シャンプーまたは洗浄ベースの形態にあってもよい。該組成物はまた、微小球もしくはナノ粒子もしくは脂質もしくはポリマーベシクルの懸濁液またはポリマーパッチおよび制御放出を可能にするヒドロゲルの形態にあってもよい。局所適用のためのこの医薬組成物は、無水形態、水性形態またはエマルションの形態にあってもよい。
【００５４】
本発明の1つの好ましい変形形態では、局所適用のための医薬組成物は、溶液、ゲルまたはエマルションの形態にある。
【００５５】
このような医薬組成物は、当業者によく知られている方法により製造することができる。
【００５６】
本発明による化合物の調製および使用の様々な例が、例示目的のためおよび非限定的性質によりこれより示される。
【００５７】
(実施例)
(実施例1)
2-(2-メチル-5-ニトロイミダゾール-1-イル)エチル(S)-2-(4-イソブチルフェニル)プロピオネートの合成
ジクロロメタン50mL中、(S)-イブプロフェン(5g、24.23mmol)およびメトロニダゾール(4.15g、24.23mmol)の溶液に、100mgのDMAP (4-ジメチルアミノピリジン)、次いで5.1g (26.6mmol)のEDC (1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド)を連続的に添加する。反応混合物を室温で4時間撹拌し、次いで100mLの水で急冷し、100mLのジクロロメタンで抽出する。有機相を、2×100mLの5%クエン酸溶液、次いで100mLの水で洗浄する。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥させ、次いで減圧下で蒸発させる。残留物をペンタンから結晶化する。
【００５８】
7.4gの2-(2-メチル-5-ニトロイミダゾール-1-イル)エチル(S)-2-(4-イソブチルフェニル)プロピオネートが得られる。
収率=84%。
【００５９】
【数１】
2013529668.tif 000005
【００６０】
注:ラセミ体で本発明による式(I)の化合物を得るには、上記方法は、S-イブプロフェンをラセミイブプロフェンと置き換えて使用される。
【００６１】
式(I)の化合物の各エナンチオマーは、次の条件下でキラルHPLCにより同定される:
カラムIC 250×4.6mm 5μm
経路A  ヘプタン                      75%+0.1% TFA
経路B  イソプロパノール              25%+0.1% TFA
流速=1.2ml/分
(S): 8.2分/ (R): 10分
【００６２】
(実施例2)
角化細胞培養物で評価した安定性
角化細胞培養物での安定性は、75cm2フラスコで培養し、植物性トリプシン(trypLE GIBCO)により90〜100%の集密で分離したヒト新生児角化細胞(Cell'N Tech)を用いて評価する。式(I)の化合物は、24ウェルプレートで0.1%プルロン酸を補充した培地CNT-057 (Cell'N Tech)において2μMで試験した。最終DMSO濃度は、0.1%である。分解速度(Degradation kinetics)は、24時間にわたりTecan EVOロボットにより行う。採取した試料を、次いで、試料と同じ条件下(1/3培養培地および2/3メタノール)で調製した試験生成物の較正範囲と比較してLC/MS/MS (Micromass)によりアッセイする。クロマトグラフィー条件は、生成物ごとに最適化する。メトロニダゾールの出現のアッセイも、これらの同じ試料を用いて行う。
【００６３】
式(I)のラセミ化合物(すなわち2-(2-メチル-5-ニトロイミダゾール-1-イル)エチル2-(4-イソブチルフェニル)プロピオネート)の半減期(t1/2)は、3時間である。
【００６４】
式(I)の化合物のSエナンチオマー(すなわち2-(2-メチル-5-ニトロイミダゾール-1-イル)エチル(S)-2-(4-イソブチルフェニル)プロピオネート)の半減期(t1/2)は、20時間である。
【００６５】
比較目的のために、インドメタシン、ニフルム酸、ジフルニサルまたはケトロラクと一緒のメトロニダゾールエステルは、角化細胞培養物では加水分解されない。
【００６６】
(実施例3)
抗炎症活性
a)マウス耳での急性炎症のモデル:アラキドン酸誘発浮腫
ラセミ体での式(I)の化合物、式(I)の化合物のSエナンチオマー、メトロニダゾールおよびイブプロフェンの抗炎症活性は、マウスモデルで行ったインビボ試験において測定した。このモデルでは、アラキドン酸(AA)の単回適用によりマウス耳の炎症を誘発する。メスBalb/c ByJIcoマウスを使用する。浮腫は、1/1 THF/メタノール混合物中で4%に溶解した20μLのAAをマウス耳に適用して誘発する。式(I)の化合物のSエナンチオマー、ラセミ体での式(I)の化合物、メトロニダゾールおよびイブプロフェンの抗炎症活性は、4%AAを含有する1/1 THF/メタノール混合物中の化合物の溶液20μLを、マウス耳の内面に局所適用した後に評価した。
【００６７】
0.01%、0.03%、0.1%、0.3%、1%および2%の試験化合物を含有する溶液を、したがって調製する。パーセンテージは、溶液の容量当たりの試験化合物の重量に相当する。浮腫は、Oditest(登録商標)マイクロメーターを用いて耳の厚さを測定して、適用1時間後に評価する。AA単独により誘発された浮腫は、Oditest(登録商標)マイクロメーターを用いて耳の厚さを測定して、適用1時間後に評価する。これを、ビヒクル(1/1 THF/メタノール)のみを含む群と比べて評価する。
【００６８】
浮腫の抑制は、AA単独により誘発された浮腫の、試験分子による試験濃度での減少のパーセンテージとして表される。
【００６９】
IC50は、AA単独により誘発された浮腫の50%抑制が観察される濃度(または用量)に相当する。
【００７０】
結果は次の通りである。
メトロニダゾールは、このモデルでは抗炎症活性を有さない。
式(I)の化合物のSエナンチオマー、すなわち2-(2-メチル-5-ニトロイミダゾール-1-イル)エチル(S)-2-(4-イソブチルフェニル)プロピオネートは、1%の用量で、AA単独により誘発された浮腫を49%抑制する。
【００７１】
b)マウス耳での急性炎症のモデル:TPA (ホルボール12-ミリステート-13-アセテート)により誘発された浮腫
ラセミ体での式(I)の化合物、式(I)の化合物のSエナンチオマー、メトロニダゾールおよびイブプロフェンの抗炎症活性は、マウスモデルで行ったインビボ試験において測定した。
【００７２】
使用したモデルは、TPA (ホルボール12-ミリステート-13-アセテート)の単回適用により誘発されるマウス耳炎症のモデルである。メスBalb/c ByJIcoマウスを使用する。
【００７３】
浮腫は、エタノールに溶解した20μlの0.01% TPAを耳に適用して誘発する。
【００７４】
式(I)のラセミ化合物を0.01% TPA溶液に所望の濃度で溶解し、こうしてTPAと同時にマウス群に適用する。
【００７５】
式(I)の化合物のSエナンチオマーは0.01% TPA溶液に所望の濃度で溶解し、こうしてTPAと同時に別のマウス群に適用される。
【００７６】
同様に、イブプロフェン(ラセミ)を0.01% TPA溶液に所望の濃度で溶解し、TPAと同時に別のマウス群に適用する。
【００７７】
最後に、メトロニダゾールを0.01% TPA溶液に所望の濃度で溶解し、TPAと同時に別のマウス群に適用する。
【００７８】
浮腫は、Oditest(登録商標)マイクロメーターを用いて耳の厚さを測定して、試験生成物の適用6時間後に評価する。
【００７９】
TPA誘発浮腫は、エタノールビヒクル群と比べて評価する。TPA単独により誘発された浮腫の、式(I)のラセミ化合物、式(I)の化合物のSエナンチオマー、イブプロフェン(ラセミ)またはメトロニダゾールによる抑制は、IC50により表される。
【００８０】
IC50は、TPA単独により誘発された浮腫の50%抑制が観察される濃度(または用量)に相当する。
【００８１】
結果は次の通りである。
メトロニダゾールは、このモデルでは抗炎症活性を有さない。
ラセミ体での式(I)の化合物、すなわち2-(2-メチル-5-ニトロイミダゾール-1-イル)エチル2-(4-イソブチルフェニル)プロピオネートは、これ自体が0.28%に等しいIC50を有する。
この化合物は、したがって注目すべき抗炎症活性を有する。
【国際調査報告】
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