(57)【要約】本発明は、１−デソキシ−２−メチレン−１９−ノル−ビタミンＤ類似体及び具体的には（２０Ｓ）−２５−ヒドロキシ−１−デソキシ−２−メチレン−１９−ノル−ビタミンＤ３及びそれらに対する医薬的使用を開示する。この化合物は、比較的高い結合活性及び、未分化細胞の増殖を停止させること及び単球へのそれらの分化を誘導することにおける顕著な活性を示し、従って、特に、白血病、結腸癌、乳癌、皮膚癌又は前立腺癌の治療又は予防のための抗癌剤としての使用が立証される。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
式：
【化１】
2013506688.tif 000012
を有する化合物（式中、Ｘは、水素及びヒドロキシ−保護基からなる群から選択され、Ｒは、アルキル、水素、ヒドロキシアルキル又はフルオロアルキル基であってもよいし、Ｒは、式：
【化２】
2013506688.tif 000013
の側鎖を表してもよく、該式中、上記側鎖構造中のＺは、Ｙ、−ＯＹ、−ＣＨ２ＯＹ、−Ｃ≡ＣＹ及び−ＣＨ＝ＣＨＹから選択され、該側鎖中の二重結合はｃｉｓ又はｔｒａｎｓ幾何学配列を有し得、Ｙは、水素、メチル、−ＣＯＲ５及び構造：
【化３】
2013506688.tif 000014
の基から選択され、該構造中、ｍ及びｎは、独立して０から５の整数を表し、Ｒ１は、水素、重水素、ヒドロキシ、保護されたヒドロキシ、フルオロ、トリフルオロメチル及び、直鎖又は分岐鎖であり得、場合によってはヒドロキシ又は保護されたヒドロキシ置換基を有し得るＣ１−５アルキルから選択され、Ｒ５、Ｒ３及びＲ４はそれぞれ、独立して、重水素、重アルキル（ｄｅｕｔｅｒｏａｌｋｙｌ）、水素、フルオロ、トリフルオロメチル及び、直鎖又は分岐鎖であり得、場合によってはヒドロキシ又は保護されたヒドロキシ置換基を有し得るＣ１−５アルキルから選択され、Ｒ１及びＲ２は、一緒になって、オキソ基又は、一般式ＣｋＨ２ｋ−（式中、ｋは整数である。）を有するアルキリデン基、基＝ＣＲ２Ｒ３又は基−（ＣＨ２）Ｐ−（式中、ｐは２から５の整数である。）を表し、Ｒ３及びＲ４は、一緒になって、オキソ基又は基−（ＣＨ２）ｑ−（式中、ｑは２から５の整数である。）を表し、Ｒ５は、水素、ヒドロキシ、保護されたヒドロキシ又はＣ１−５アルキルを表し、該側鎖中の２０、２２又は２３位のＣＨ−基の何れも窒素原子により置換され得るか又は２０、２２及び２３位の基−ＣＨ（ＣＨ３）−、−（ＣＨ２）ｍ−、−ＣＲ１Ｒ２−又は−（ＣＨ２）ｎ−の何れも、それぞれ、酸素又は硫黄原子により置換され得る。）
【請求項２】
Ｘが水素である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒが、
【化４】
2013506688.tif 000015
又は
【化５】
2013506688.tif 000016
又は
【化６】
2013506688.tif 000017
又は
【化７】
2013506688.tif 000018
又は
【化８】
2013506688.tif 000019
から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
Ｘが水素である、請求項３に記載の化合物。
【請求項５】
医薬的に許容可能な賦形剤と一緒に、有効量の、請求項１に記載のような少なくとも１つの化合物を含有する、医薬組成物。
【請求項６】
前記有効量が、組成物１ｇあたり約０．０１μｇから約１０００μｇを含む、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記有効量が、組成物１ｇあたり約０．１μｇから約５００μｇを含む、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項８】
式：
【化９】
2013506688.tif 000020
を有する化合物（式中、同じでも異なっていてもよいＸ１及びＸ２は、水素又はヒドロキシ−保護基からそれぞれ選択される。）。
【請求項９】
Ｘ２が水素である、請求項８に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｘ１が水素である、請求項８に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｘ１及びＸ２が両者ともｔ−ブチルジメチルシリルである、請求項８に記載の化合物。
【請求項１２】
医薬的に許容可能な賦形剤と一緒に、有効量の、請求項８に記載のような少なくとも１つの化合物を含有する、医薬組成物。
【請求項１３】
前記有効量が、組成物１ｇあたり約０．０１μｇから約１０００μｇを含む、請求項１２に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
前記有効量が、組成物１ｇあたり約０．１μｇから約５００μｇを含む、請求項１２に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
式：
【化１０】
2013506688.tif 000021
を有する、（２０Ｓ）−２５−ヒドロキシ−１−デソキシ−２−メチレン−１９−ノル−ビタミンＤ３。
【請求項１６】
医薬的に許容可能な賦形剤と一緒に、有効量の（２０Ｓ）−２５−ヒドロキシ−１−デソキシ−２−メチレン−１９−ノル−ビタミンＤ３を含有する、医薬組成物。
【請求項１７】
前記有効量が、組成物１ｇあたり約０．０１μｇから約１０００μｇを含む、請求項１６に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
前記有効量が、組成物１ｇあたり約０．１μｇから約５００μｇを含む、請求項１６に記載の医薬組成物。
【請求項１９】
式：
【化１１】
2013506688.tif 000022
（式中、Ｘは、水素及びヒドロキシ−保護基からなる群から選択され、Ｒは、アルキル、水素、ヒドロキシアルキル又はフルオロアルキル基であってもよいし、Ｒは、次の式：
【化１２】
2013506688.tif 000023
の側鎖を表してもよく、該式中、上記側鎖構造中のＺは、Ｙ、−ＯＹ、−ＣＨ２ＯＹ、−Ｃ≡ＣＹ及び−ＣＨ＝ＣＨＹから選択され、該側鎖中の二重結合はｃｉｓ又はｔｒａｎｓ幾何学配列を有し得、Ｙは、水素、メチル、−ＣＯＲ５及び構造：
【化１３】
2013506688.tif 000024
の基から選択され、該構造中、ｍ及びｎは、独立して０から５の整数を表し、Ｒ１は、水素、重水素、ヒドロキシ、保護されたヒドロキシ、フルオロ、トリフルオロメチル及び、直鎖又は分岐鎖であり得、場合によってはヒドロキシ又は保護されたヒドロキシ置換基を有し得るＣ１−５アルキルから選択され、Ｒ５、Ｒ３及びＲ４はそれぞれ、独立して、重水素、重アルキル（ｄｅｕｔｅｒｏａｌｋｙｌ）、水素、フルオロ、トリフルオロメチル及び、直鎖又は分岐鎖であり得、場合によってはヒドロキシ又は保護されたヒドロキシ置換基を有し得るＣ１−５アルキルから選択され、Ｒ１及びＲ２は、一緒になって、オキソ基又は、一般式ＣｋＨ２ｋ−（式中、ｋは整数である。）を有するアルキリデン基、基＝ＣＲ２Ｒ３又は基−（ＣＨ２）Ｐ−（式中、ｐは２から５の整数である。）を表し、Ｒ３及びＲ４は、一緒になって、オキソ基又は基−（ＣＨ２）ｑ−（式中、ｑは２から５の整数である。）を表し、Ｒ５は、水素、ヒドロキシ、保護されたヒドロキシ又はＣ１−５アルキルを表し、該側鎖中の２０、２２又は２３位のＣＨ−基の何れも窒素原子により置換され得るか又は２０、２２及び２３位の基−ＣＨ（ＣＨ３）−、−（ＣＨ２）ｍ−、−ＣＲ１Ｒ２−又は−（ＣＨ２）ｎ−の何れも、それぞれ、酸素又は硫黄原子により置換され得る。）
を有する、有効量の１−デソキシ−２−メチレン−１９−ノル−ビタミンＤ類似体を、白血病、結腸癌、乳癌、皮膚癌又は前立腺癌からなる群から選択される疾患に罹患している対象に投与することを含む、白血病、結腸癌、乳癌、皮膚癌又は前立腺癌からなる群から選択される疾患を治療する方法。
【請求項２０】
前記ビタミンＤ類似体が経口投与される、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記ビタミンＤ類似体が非経口投与される、請求項１９に記載の方法。
【請求項２２】
前記ビタミンＤ類似体が経皮投与される、請求項１９に記載の方法。
【請求項２３】
前記化合物が直腸投与される、請求項１９に記載の方法。
【請求項２４】
前記化合物が経鼻投与される、請求項１９に記載の方法。
【請求項２５】
前記化合物が舌下投与される、請求項１９に記載の方法。
【請求項２６】
前記ビタミンＤ類似体が、約０．０１μｇ／日から約１０００ｇ／日の投与量で投与される、請求項１９に記載の方法。
【請求項２７】
前記化合物が、式：
【化１４】
2013506688.tif 000025
を有する（２０Ｓ）−２５−ヒドロキシ−１−デソキシ−２−メチレン−１９−ノル−ビタミンＤ３である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２８】
式：
【化１５】
2013506688.tif 000026
（式中、Ｘは、水素及びヒドロキシ−保護基からなる群から選択される。）
を有する、化合物。
【請求項２９】
Ｘが水素である、請求項２８に記載の化合物。
【請求項３０】
Ｘがｔ−ブチルジメチルシリルである、請求項２８に記載の化合物。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
本発明は、ビタミンＤ化合物及びとりわけ１−デソキシ−２−メチレン−１９−ノル−ビタミンＤ類似体及びそれらの医薬的使用及び特に（２０Ｓ）−２５−ヒドロキシ−１−デソキシ−２−メチレン−１９−ノルビタミンＤ３、その生物学的活性及びその医薬的使用に関する。
【０００２】
天然ホルモン、一連のエルゴステロールにおける１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３及びその類似体、即ち１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ２は、動物及びヒトにおいてカルシウムホメオスタシスの非常に強力な制御因子であることが知られており、細胞分化におけるそれらの活性も立証されている（Ｏｓｔｒｅｍら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８４，２６１０（１９８７））。１α−ヒドロキシビタミンＤ３、１α−ヒドロキシビタミンＤ２、側鎖が一致する様々なビタミン及びフッ素化類似体を含め、これらの代謝産物の多くの構造類似体が調製され、試験されてきた。これらの化合物のうち一部は、興味深いことに、細胞分化及びカルシウム制御における活性を一緒に持たない。この活性の相違は、腎性骨ジストロフィー、ビタミンＤ−抵抗性くる病、骨粗しょう症、乾癬及びある種の悪性腫瘍などの様々な疾患の治療において有用であり得る。
【０００３】
別のクラスのビタミンＤ類似体、即ちいわゆる１９−ノル−ビタミンＤ化合物は、２個の水素原子による、ビタミンＤ系の典型であるＡ環環外メチレン基（炭素１９）の置換を特徴とする。このような１９−ノル−類似体（例えば１α，２５−ジヒドロキシ−１９−ノル−ビタミンＤ３）の生物学的試験から、細胞分化誘導能が高く、カルシウム動員活性が非常に低いという、選択的活性プロファイルが明らかになった。従って、これらの化合物は、悪性腫瘍の治療又は様々な皮膚疾患の治療のための治療剤として有用である可能性がある。このような１９−ノル−ビタミンＤ類似体の２種類の異なる合成法が記載されている（Ｐｅｒｌｍａｎら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．３１，１８２３（１９９０）；Ｐｅｒｌｍａｎら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．３２，７６６３（１９９１）及びＤｅＬｕｃａら、米国特許第５，０８６，１９１号）。
【０００４】
米国特許第４，６６６，６３４号において、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３の２β−ヒドロキシ及びアルコキシ（例えばＥＤ−７１）類似体が記載されており、これは、骨粗しょう症に対する候補薬物として及び抗腫瘍剤として中外グループによって試験されている。Ｏｋａｎｏら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１６３，１４４４（１９８９）も参照のこと。１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３の他の（ヒドロキシアルキル基による、例えばＥＤ−１２０、及びフルオロアルキル基による）２−置換Ａ−環類似体も調製され、試験された（Ｍｉｙａｍｏｔｏら、Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．４１，１１１１（１９９３）；Ｎｉｓｈｉｉら、Ｏｓｔｅｏｐｏｒｏｓｉｓ  Ｉｎｔ．Ｓｕｐｐｌ．１，１９０（１９９３）；Ｐｏｓｎｅｒら、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．５９，７８５５（１９９４）及びＪ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．６０，４６１７（１９９５））。
【０００５】
１α，２５−ジヒドロキシ−１９−ノル−ビタミンＤ３の２位−置換類似体、即ち、ヒドロキシ又はアルコキシ基で（ＤｅＬｕｃａら、米国特許第５，５３６，７１３号）、２−アルキル基で（ＤｅＬｕｃａら、米国特許第５，９４５，４１０号）及び２−アルキリデン基で（ＤｅＬｕｃａら、米国特許第５，８４３，９２８号）２位が置換された化合物も合成されており、これらは、興味深く選択的な活性プロファイルを示す。これらの全ての試験から、ビタミンＤ受容体における結合部位は、合成ビタミンＤ類似体のＣ−２において様々な置換基に適応し得ることが示唆される。
【０００６】
１９−ノルクラスの薬理学的に重要なビタミンＤ化合物を探索するための努力を継続する過程で、炭素２（Ｃ−２）のメチレン置換基、炭素１（Ｃ−ｌ）のヒドロキシル基及び炭素２０（Ｃ−２０）に結合する短縮型側鎖の存在を特徴とする類似体も合成され、試験された。１α−ヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノル−プレグナカルシフェロールは米国特許第６，５６６，３５２号に記載されており、一方で１α−ヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノル−ホモプレグナカルシフェロールは米国特許第６，５７９，８６１号に記載されており、１α−ヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノル−ビスホモプレグナカルシフェロールは米国特許第６，６２７，６２２号に記載されている。これらの３種類の化合物は全て、ビタミンＤ受容体に対して結合活性が比較的高く、細胞分化活性が比較的高いが、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３と比較した場合、血漿カルシウム上昇活性は、有しているとしても非常に低い。’３５２、’８６１及び’６２２特許で示されるように、それらの生物学的活性により、これらの化合物は様々な医薬的使用に対する優れた候補となる。
【０００７】
炭素１０（Ｃ−１０）から炭素２（Ｃ−２）へのＡ環環外メチレン基の転移を特徴とする天然ホルモン１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３の類似体（例えば１α，２５−ジヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノルビタミンＤ類似体）が合成され、試験された［Ｓｉｃｉｎｓｋｉら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，４１，４６６２（１９９８）；Ｓｉｃｉｎｓｋｉら、Ｓｔｅｒｏｉｄｓ  ６７，２４７（２００２）；及びＤｅＬｕｃａら、米国特許第５，８４３，９２８号；同第５，９３６，１３３号及び同第６，３８２，０７１号）参照］。これらの類似体で行われた分子力学研究から、Ａ環立体構造の変化によりシクロヘキサンジオール環の偏平化が起こり得ることが予測される。分子力学的計算及びＮＭＲ研究からも、Ａ環立体構造的平衡が、およそ６：４となることが予測され、赤道部１α−ＯＨを有する配座異性体が支持される。１９−ノル−ビタミンＤ炭素骨格に２−メチレン基を導入することにより、その１α−及び３β−Ａ環ヒドロキシルの特徴が変化することがさらに予測された。これらは両者とも、天然ホルモンの分子の１α−ヒドロキシル基と同様にアリル位にある［即ち１，２５−（ＯＨ）２Ｄ３］。１α，２５−ジヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノルビタミンＤ類似体は、顕著な生物学的効果を特徴とすることが分かった。さらに、「非天然」（２０Ｓ）−立体構造が存在する場合、このような類似体の生物学的効果が大幅に促進され得る。これらの知見を考慮し、本発明は、炭素１０（Ｃ−１０）から炭素２（Ｃ−２）へのＡ環環外メチレン基の転移を特徴とするビタミンＤ化合物（例えば２−メチレン−１９−ノルビタミンＤ類似体）を標的とする。これらの類似体は、生物学的活性に重要である１α−ＯＨを欠くにもかからわず、生物においてこのようなヒドロキシル基を酵素により導入できる可能性がある。
【発明の概要】
【０００８】
本発明は、１−デソキシ−２−メチレン−１９−ノル−ビタミンＤ類似体及びそれらの医薬的使用及びより具体的には（２０Ｓ）−２５−ヒドロキシ−１−デソキシ−２−メチレン−１９−ノルビタミンＤ３、その生物学的活性及び本化合物に対する様々な医薬的使用に関する。
【０００９】
構造的にこれらの１−デソキシ−２−メチレン−１９−ノル−ビタミンＤ類似体は、以下で示される一般式を特徴とする：
【化１】
2013506688.tif 000002
（式中、Ｘは、水素及びヒドロキシ−保護基からなる群から選択され、基Ｒは、ビタミンＤ型化合物として知られる典型的側鎖の何れかを表す。従って、Ｒは、アルキル、水素、ヒドロキシアルキル又はフルオロアルキル基であってもよいし、又はＲは式：
【化２】
2013506688.tif 000003
の側鎖を表してもよく、該式中、上記側鎖構造中のＺは、Ｙ、−ＯＹ、−ＣＨ２ＯＹ、−Ｃ≡ＣＹ及び−ＣＨ＝ＣＨＹから選択され、該側鎖中の二重結合はｃｉｓ又はｔｒａｎｓ幾何学配列を有し得、Ｙは、水素、メチル、−ＣＯＲ５及び構造：
【化３】
2013506688.tif 000004
の基から選択され、該構造中、ｍ及びｎは、独立して０から５の整数を表し、Ｒ１は、水素、重水素、ヒドロキシ、保護されたヒドロキシ、フルオロ、トリフルオロメチル及び、直鎖又は分岐鎖であり得、場合によってはヒドロキシ又は保護されたヒドロキシ置換基を有し得るＣ１−５アルキルから選択され、Ｒ５、Ｒ３及びＲ４はそれぞれ、独立して、重水素、重アルキル（ｄｅｕｔｅｒｏａｌｋｙｌ）、水素、フルオロ、トリフルオロメチル及び、直鎖又は分岐鎖であり得、場合によってはヒドロキシ又は保護されたヒドロキシ置換基を有し得るＣ１−５アルキルから選択され、Ｒ１及びＲ２は、一緒になって、オキソ基又は、一般式ＣｋＨ２ｋ−（式中、ｋは整数である。）を有するアルキリデン基、基＝ＣＲ２Ｒ３又は基−（ＣＨ２）Ｐ−（式中、ｐは２から５の整数である。）を表し、Ｒ３及びＲ４は、一緒になって、オキソ基又は基−（ＣＨ２）ｑ−（式中、ｑは２から５の整数である。）を表し、Ｒ５は、水素、ヒドロキシ、保護されたヒドロキシ又はＣ１−５アルキルを表し、該側鎖中の２０、２２又は２３位のＣＨ−基の何れも窒素原子により置換され得るか又は２０、２２及び２３位の基−ＣＨ（ＣＨ３）−、−（ＣＨ２）ｍ−、−ＣＲ１Ｒ２−又は−（ＣＨ２）ｎ−の何れも、それぞれ、酸素又は硫黄原子により置換され得る。）。
【００１０】
天然２０Ｒ−立体構造を有する側鎖の重要な具体例は、下記の式（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）及び（ｅ）により表される構造、即ち、２５−ヒドロキシビタミンＤ３（ａ）；ビタミンＤ３（ｂ）；２５−ヒドロキシビタミンＤ２（ｃ）；ビタミンＤ２（ｄ）；及び２５−ヒドロキシビタミンＤ２のＣ−２４エピマー（ｅ）で出現する場合の側鎖である。
【化４】
2013506688.tif 000005
【００１１】
炭素２０に対する波線は、炭素２０がＲ又はＳ立体構造の何れかを有し得ることを示す。
【００１２】
好ましい類似体は、次の式Ｉａ：
【化５】
2013506688.tif 000006
を有する（２０Ｓ）−２５−ヒドロキシ−１−デソキシ−２−メチレン−１９−ノルビタミンＤ３である。
【００１３】
式Ｉ、特に式Ｉａの上記化合物は、所望の非常に有利な生物学的活性パターンを示す。これらの化合物は、ビタミンＤ受容体に対する比較的高い結合を特徴とし、即ち、それらは、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３よりも僅かに低い親和性で結合する。これらがＨＬ−６０細胞の分化を引き起こす能力は、１，２５（ＯＨ）２Ｄ３よりもごく僅かに低い。これらはまた、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３と比較して、転写活性も比較的低く、骨からカルシウムを動員するそれらの能力及び腸カルシウム輸送を促進するためのそれらの能力において活性が比較的低い。ゆえに、これらの化合物は、血漿カルシウム上昇活性が比較的低いことを特徴とし得る。
【００１４】
上記化合物Ｉ及び特にＩａは結合親和性が比較的高く、細胞分化活性が比較的高いことを特徴とするが、血漿カルシウム上昇活性が著しく低い。従って、このような化合物は、抗癌剤としての可能性を有し、白血病、結腸癌、乳癌、皮膚癌及び前立腺癌の予防又は治療のための治療薬を提供する。
【００１５】
上記疾患を治療又は予防するために、本化合物の１以上が、組成物約０．０１μｇ／ｇｍから約１０００μｇ／ｇｍ、好ましくは組成物約０．１μｇ／ｇｍから約５００μｇ／ｇｍの量で組成物中に存在し得、約０．０１μｇ／日から約１０００μｇ／日、好ましくは約０．１μｇ／日から約５００μｇ／日の投与量で、局所投与、経皮投与、経口投与、直腸投与、経鼻投与、舌下投与又は非経口投与され得る。
【００１６】
図１−５は、ネイティブホルモン１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３（以後、「１，２５（ＯＨ）２Ｄ３」と呼ぶ。）と比較した場合の、（２０Ｓ）−２５−ヒドロキシ−１−デソキシ−２−メチレン−１９−ノルビタミンＤ３（以後、「１−デソキシ−２ＭＤ」と呼ぶ。）の様々な生物学的活性を示す。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】図１は、全長組み換えラットビタミンＤ受容体への結合に対する［３Ｈ］−１，２５−（ＯＨ）２−Ｄ３との競合に関する、１−デソキシ−２ＭＤ及び１，２５（ＯＨ）２Ｄ３の相対活性を示すグラフである。
【図２】図２は、１−デソキシ−２ＭＤ及び１，２５（ＯＨ）２Ｄ３の濃度の関数としての、％ＨＬ−６０細胞分化を示すグラフである。
【図３】図３は、１−デソキシ−２ＭＤと比較した場合の、インビトロでの１，２５（ＯＨ）２Ｄ３の転写活性を示すグラフである。
【図４ＡＢ】図４Ａ及び４Ｂは、１−デソキシ−２ＭＤと比較した場合の、１，２５（ＯＨ）２Ｄ３の骨カルシウム動員活性を示す棒グラフである。
【図５ＡＢ】図５Ａ及び５Ｂは、１−デソキシ−２ＭＤと比較した場合の、１，２５（ＯＨ）２Ｄ３の腸カルシウム輸送活性を示す棒グラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
本記載及び特許請求の範囲で使用される場合、「ヒドロキシ−保護基」という用語は、例えばアルコキシカルボニル、アシル、アルキルシリル又はアルキルアリールシリル基（本明細書中で以後、単純に「シリル」基と呼ぶ。）及びアルコキシアルキル基などの、ヒドロキシ官能基の一時的保護のために一般に使用される何らかの基を指す。アルコキシカルボニル保護基は、メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、プロポキシカルボニル、イソプロポキシカルボニル、ブトキシカルボニル、イソブトキシカルボニル、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル、ベンジルオキシカルボニル又はアリルオキシカルボニルなどのアルキル−Ｏ−ＣＯ−基である。「アシル」という用語は、その異性体の全ての形態の、１から６個の炭素のアルカノイル基又は１から６個の炭素のカルボキシアルカノイル基、例えばオキサリル、マロニル、スクシニル、グルタリル基など、又は芳香族アシル基、例えばベンゾイル又はハロ、ニトロもしくはアルキル置換ベンゾイル基など、を指す。「アルキル」という用語は、本記載及び特許請求の範囲で使用される場合、その異性体の全ての形態の、１から１０個の炭素の直鎖又は分岐鎖アルキル基を指す。「アルコキシ」とは、酸素が結合する何らかのアルキル基、即ち「アルキル−Ｏ−」により表される基を指す。アルコキシアルキル保護基は、メトキシメチル、エトキシメチル、メトキシエトキシメチル又はテトラヒドロフラニル及びテトラヒドロピラニルなどの基である。好ましいシリル−保護基は、トリメチルシリル、トリエチルシリル、ｔ−ブチルジメチルシリル、ジブチルメチルシリル、ジフェニルメチルシリル、フェニルジメチルシリル、ジフェニル−ｔ−ブチルシリル及び類似するアルキル化シリル基である。「アリール」という用語は、フェニル−又はアルキル−、ニトロ−又はハロ置換フェニル基を指す。
【００１９】
「保護されたヒドロキシ」基とは、既に定義されるとおり、例えばシリル、アルコキシアルキル、アシル又はアルコキシカルボニル基など、ヒドロキシ官能基の一時的もしくは永久的保護のために一般に使用される上記の基の何れかにより誘導体化又は保護されているヒドロキシ基である。「ヒドロキシアルキル」、「重アルキル（ｄｅｕｔｅｒｏａｌｋｙｌ）」及び「フルオロアルキル」という用語は、１以上のヒドロキシ、重水素又はフルオロ基によりそれぞれ置換されるアルキル基を指す。「アルキリデン」とは、一般式ＣｋＨ２ｋ−（式中、ｋは整数である。）を有する基を指す。
【００２０】
基本構造Ｉの２−メチレン−１９−ノルビタミンＤ類似体の調製は、一般的方法、即ち、アリルホスフィンオキシドＩＩＩと二環式Ｗｉｎｄａｕｓ−Ｇｒｕｎｄｍａｎｎ型ケトンの縮合により遂行することができる：
【化６】
2013506688.tif 000007
【００２１】
構造ＩＩ及びＩＩＩにおいて、基Ｘ及びＲは、上記で定義される基を表し；Ｘは好ましくはヒドロキシ−保護基であり、縮合反応に感受性があるか又はそれを妨害し得るＲ中の何れの官能基も、当技術分野で周知のように適切に保護されることも理解されたい。上記で示されるプロセスは、収束合成の概念の応用に相当し、これは、ビタミンＤ化合物の調製に対して有効に適用されてきた［例えば、Ｌｙｔｈｇｏｅら、Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｐｅｒｋｉｎ  Ｔｒａｎｓ．Ｉ，５９０（１９７８）；Ｌｙｔｈｇｏｅ，Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｒｅｖ．９，４４９（１９８３）；Ｔｏｈら、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．４８，１４１４（１９８３）；Ｂａｇｇｉｏｌｉｎｉら、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．５１，３０９８（１９８６）；Ｓａｒｄｉｎａら、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．５１，１２６４（１９８６）；Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．５１，１２６９（１９８６）；ＤｅＬｕｃａら、米国特許第５，０８６，１９１号；ＤｅＬｕｃａら、米国特許第５，５３６，７１３号）］。
【００２２】
一般構造ＩＩのヒドリンダノンは既知であるか又は公知の方法によって調製することができる。このような既知の二環式ケトンの重要な具体例は、上述の側鎖（ａ）、（ｂ）、（ｃ）及び（ｄ）を有する構造、即ち、２５−ヒドロキシＧｒｕｎｄｍａｎｎのケトン（ｅ）［Ｂａｇｇｉｏｌｉｎｉら、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ，５１，３０９８（１９８６）］；Ｇｒｕｎｄｍａｎｎのケトン（ｆ）［Ｉｎｈｏｆｆｅｎら、Ｃｈｅｍ．Ｂｅｒ．，９０，６６４（１９５７）］；２５−ヒドロキシＷｉｎｄａｕｓケトン（ｇ）［Ｂａｇｇｉｏｌｉｎｉら、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，５１，３０９８（１９８６）］及びＷｉｎｄａｕｓケトン（ｈ）［Ｗｉｎｄａｕｓら、Ａｎｎ．，５２４，２９７（１９３６）］である。
【化７】
2013506688.tif 000008
【００２３】
構造ＩＩＩのホスフィンオキシドの調製に関して、代替的な合成経路が確立された。Ｈａｙａｓｈｉら［Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．６９，５９６６（２００４）］が作り上げた方法を用い、触媒量のＬ−プロリン存在下でのニトロソベンゼンとケトンの反応を含め、スキームＩで示されるように、アキラルの市販のアセタール−ケトン１をエナンチオ選択的にヒドロキシル化してヒドロキシケトン２を得た。導入された第二のヒドロキシルをシリル化し、メチルトリフェニルホスホニウムブロミド及びｎ−ブチルリチウムから生成されたイリドとのウィッティヒ反応に保護化合物３を供した。得られたオレフィン化合物４において、ルイス酸（ＦｅＣｌ３）との反応にてカルボニル基を脱保護し、形成されたシクロヘキサノン５をピーターソン反応に供し、α，β−不飽和エステル６及び７の混合物を得た。この段階で可能ではあるものの、（カラムクロマトグラフィーによる）幾何異性体の分離が還元段階後により容易に達成され、Ｅ−及びＺ−アリル型アルコール８及び９がそれぞれ得られた。次に、Ｅ−異性体８を３段階の手順で、対応するホスフィンオキシド１０に変換した。ホスフィンオキシド１０から生成されたリチウムホスフィンオキシカルバニオンと既知のＧｒｕｎｄｍａｎｎケトン１１とのウィッティヒ−ホーナーカップリング［Ｓｉｃｉｎｓｋｉら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，４１，４６６２（１９９８）参照］を続いて行い、保護された１９−ノルビタミンＤ化合物が生成され、フッ化テトラブチルアンモニウムでのヒドロキシル脱保護後、所望の（２０Ｓ）−２−メチレン−２５−ヒドロキシ−１９−ノル−ビタミンＤ３（１２，１−デソキシ−２ＭＤ）を得た。本明細書中の実施例Ｉでこの合成経路を記載し、本明細書中の実施例ＩＩで、Ａ環断片合成の代替的方法である、ホスフィンオキシド２７及びケトン１１とのそのカップリングを記載する。
【００２４】
スキームＩＩは、構成要素２７及び最終的なビタミン１２が得られる、異なる合成順序を示す。キラル出発化合物として市販のＤ−（−）−キナ酸１３を使用し、最初にこれを公知のラクトン１４に変換した。１，１’−チオカルボニルジイミダゾールでこの化合物を処理した結果、環状チオカルボネート１５が形成された［Ｍｉｌｌｓら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．２９，２８１（１９８８）参照］。水素化トリブチルすず及びＡＩＢＮを用いたチオカルボネート１５のＢａｒｔｏｎ−ＭｃＣｏｍｂｉｅ脱酸素反応から、２種類の異性体生成物：既知の化合物１６［Ｇｏｎｚａｌｅｓ−Ｂｅｌｌｏら、Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，Ｐｅｒｋｉｎ  Ｔｒａｎｓ．１，８４９（１９９９）参照］及び所望のジオール１７が得られた。後者の異性体中の第二のヒドロキシルの酸化によりケトン１８を得て、これをウィッティヒのメチル化に供した。次に、形成された化合物１９中のラクトン環を開環させ、第二のヒドロキシルをシリル化した。得られた生成物２０のメチルエステル部分を還元し、ジオール２１を過ヨウ素酸酸化に供した。得られたシクロヘキサノン２２と（トリフェニルホスホラニリデン）酢酸メチルとのウィッティヒ反応から、α，β−不飽和エステル２３及び２４の混合物が得られた。ＤＩＢＡＬＨによりこれらを還元し、得られたアリル型アルコールをカラムクロマトグラフィーによって分離した。次に、Ｅ−異性体２５を対応するアリルホスフィンオキシド２７に変換した。フェニルリチウムにより生成したその陰イオンを、Ｇｒｕｎｄｍａｎｎケトン１１とカップリングし、酸性ヒドロキシル脱保護後、最終生成物１９−ノルビタミン１２（１−デソキシ−２ＭＤ）を得た。
【００２５】
実施例Ｉ及びＩＩから明らかであるように、本明細書中で示される方法によって、異なる側鎖を有する他の１９−ノルビタミンＤ類似体を合成することができる。
【００２６】
本発明を次の例示的実施例により説明する。これらの実施例において、アラビア数字（例えば１、２、３など）により特定される具体的生成物は、前述の説明において及びスキームＩ及びスキームＩＩにおいて明記した特定の構造を指す。
実施例
【００２７】
化学。Ｔｈｏｍａｓ−Ｈｏｏｖｅｒ毛細管融点装置で融点（補正なし）を決定した。Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ２４１自動旋光計を用いて、２２℃にて、クロロホルム中で旋光性を測定した。Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒラムダ３Ｂ  ＵＶ−ＶＩＳ分光光度計により、エタノール中で紫外線（ＵＶ）吸収スペクトルを記録した。重クロロホルム中、２００，４００及び５００ＭＨｚで、Ｖａｒｉａｎ  Ｕｎｉｔｙ、Ｂｒｕｋｅｒ  ＤＭＸ−４００及びＢｒｕｋｅｒ  ＤＭＸ−５００スペクトロメーターを用いて、１Ｈ核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトルをそれぞれ記録した。同じスペクトロメーターを用いて、重クロロホルム中、５０、１００及び１２５ＭＨｚで、１３Ｃ核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトルを記録した。化学シフト（δ）は、内部Ｍｅ４Ｓｉ（δ０．００）から低磁場側で報告した。Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ  ＡｕｔｏＳｐｅｃ（Ｂｅｖｅｒｌｙ、ＭＡ）装置を用いて、電子衝突（ＥＩ）質量スペクトルを得た。モデル６０００Ａ溶媒送液システム、モデルＵ６Ｋ  Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ注入装置及びモデル４８６可変吸収検出器を備えたＷａｔｅｒｓ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ液体クロマトグラフにおいて、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を行った。アルゴン下で、ナトリウムベンゾフェノンケチルから、ＴＨＦを新たに蒸留した。
実施例Ｉ
【００２８】
ホスフィンオキシド１０からの（２０Ｓ）−２−メチレン−２５−ヒドロキシ−１９−ノル−ビタミンＤ３（１２，１−デソキシ−２ＭＤ）の調製
（ａ）ケタール−ケトン１のα−ヒドロキシル化（スキームＩ）。（Ｒ）−７−ヒドロキシ−１，４−ジオキサ−スピロ［４．５］デカン−８−オン（２）。ＣＨＣｌ３（１０ｍＬ）中の１，４−シクロヘキサンジオンモノエチレンケタール（１；３．００ｇ、１９．２３ｍｍｏｌ）及びＬ−プロリン（０．９７ｇ、８．４２ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＣＨＣｌ３（１６ｍＬ）中のニトロソベンゼン（３．６０ｇ、３３．６５ｍｍｏｌ）溶液をシリンジポンプによって４℃で２４時間にわたりゆっくりと添加した。次に、混合物をさらに２時間、室温で撹拌した。反応を塩水で停止させ、有機物質を酢酸エチルで抽出し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、真空下で濃縮した。シリカ上でのカラムクロマトグラフィーによる精製（０．５→２０％酢酸エチル／ヘキサン勾配）によって、油状のα−ヒドロキシケトン２（１．４５ｇ、４４％）を得た。ヘキサン／２−プロパノール（９９：１）溶媒系を用いて、この生成物の純度をＨＰＬＣにより調べた（４．６ｍｍｘ２５ｃｍ  Ｃｈｉｒａｌｃｅｌｌ  ＯＤ−Ｈカラム、１．５ｍＬ／分）：鏡像体過剰率（ｅｅ）が９４％よりも高いことが分かった（Ｒｖ＝５．７ｍＬ；Ｓ−鏡像異性体に対してＲｖ＝４．７ｍＬ）。
２：［α］Ｄ＋２７°（ｃ  ０．６５，ＣＨＣ１３）；１Ｈ  ＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＣＤＣ１３）δ１．８５（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝１２．４Ｈｚ，６β−Η），２．０５（２Ｈ，ｍ，１０−Ｈ２），２．５０（ｂｒ  ｍ，６α−及び９β−Η），２．７０（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝６．８，１３．２Ｈｚ，９α−Ｈ），３．４６（１Ｈ，ｓ，ＯＨ），４．０３（４Ｈ，ｍ，Ｏ−ＣＨ２ＣＨ２−Ｏ），４．３８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１２．４，６．８Ｈｚ，７α−Ｈ）；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ８Ｈ１２Ｏ４Ｎａ（Ｍ＋＋Ｎａ）に対して計算した精密質量１９５．０６３３、実測値１９５．０６２８。
【００２９】
（ｂ）α−ヒドロキシケトン２の保護。（Ｒ）−７−［（ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル）オキシ］−１，４−ジオキサ−スピロ［４．５］デカン−８−オン（３）。ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリルクロリド（３．５５ｍＬ、３．７５ｇ、１３．６５ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ（９ｍＬ）中のα−ヒドロキシケトン２（１．６０ｇ、１３．６５ｍｍｏｌ）及びイミダゾール（２．３２ｇ、３３．９ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。この混合物を室温で１８時間撹拌した。反応を塩水で停止させ、ヘキサンで抽出した。合わせた有機相を乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、減圧下で濃縮した。シリカ上でのカラムクロマトグラフィー（１→４％ヘキサン／酢酸エチル勾配）により、無色油状物質として保護された化合物３（３．３５ｇ、８８％）を得た。
３：１Ｈ  ＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１．１０（９Ｈ，ｓ，Ｓｉ−ｔ−Ｂｕ），１．８−２．１（４Ｈ，ｂｒ  ｍ，６−及び１０−Ｈ２），２．３５（２Ｈ，ｍ，９−Ｈ２），３．６２（１Ｈ，ｍ，−Ｏ−ＣＨ２ＣＨ２−Ｏ−の１つ），３．８２（３Ｈ，ｍ，−Ｏ−ＣＨ２ＣＨ２−Ｏ−のうち３つ），４．４０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．８，７．６Ｈｚ，７α−Ｈ），７．３８（６Ｈ，ｍ，Ａｒ−Ｈ），７．６７（４Ｈ，ｍ，Ａｒ−Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１９．４，２７．１，３４．７，３５．９，４３．８，６４．５，６４．７，７３．８，１０７．６，１２７．８，１２９．９，１３３．３，１３４．１，１３６．０，２０７．７；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２４Ｈ３０Ｏ４ＳｉＮａ（Ｍ＋＋Ｎａ）に対して計算した精密質量４３３．１８１１、実測値４３３．１８００。
【００３０】
（ｃ）ケトン３のウィッティヒ反応。（Ｒ）−７−［（ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル）オキシ］−８−メチレン−１，４−ジオキサ−スピロ［４．５］デカン（４）。０℃の無水ＴＨＦ（２０ｍＬ）中のメチルトリフェニルホスホニウムブロミド（２．５ｇ、６．９９ｍｍｏｌ）にｎ−ＢｕＬｉ（ヘキサン中１．６Ｍ；８．８ｍＬ、１４．０８ｍｍｏｌ）を滴下添加した。１５分後、さらなるホスホニウム塩（２．５ｇ、６．９９ｍｍｏｌ）を添加し、０℃で１０分間及び室温で２０分間、溶液を撹拌した。次に、橙色−赤色混合物を−７８℃に冷却し、無水ＴＨＦ（７ｍＬ）中のケトン３（２．８５ｇ、６．９３ｍｍｏｌ）の予め冷却した（−７８℃）溶液に吸い取らせた。反応混合物を−７８℃で４時間、次いで室温で１時間撹拌した。混合物を塩水に注ぎ、ヘキサンで抽出した。有機抽出物を乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、蒸発させて橙色の油状の残渣を得て、これをシリカ上でフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。ヘキサン／酢酸エチル（９７：３）での溶出によって、無色油状物質として純粋な４−メチレン化合物４（２．６２ｇ、９３％）を得た。
４：１Ｈ  ＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１．０１（９Ｈ，ｓ，Ｓｉ−ｔ−Ｂｕ），１．４３（２Ｈ，ｍ，１０−Ｈ２），１．６２（２Ｈ，ｍ，６−Ｈ２），２．１９（２Ｈ，ｍ，９−Ｈ２），３．３６（１Ｈ，ｍ，Ｏ−ＣＨ２ＣＨ２−Ｏの１つ），３．７３（３Ｈ，ｍ，Ｏ−ＣＨ２ＣＨ２−Ｏのうち３つ），４．３０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．０，５．０Ｈｚ，７α−Ｈ），４．８８及び５．３１（１Ｈ及び１Ｈ，各ｂｒ  ｓ，＝ＣＨ２），７．３５（６Ｈ，ｍ，Ａｒ−Ｈ），７．７０（４Ｈ，ｍ，Ａｒ−Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１４．５，１９．５，２２．９，３０．０，３１．８，３６．３，４４．５，６４．１，６４．３，７１．２，１０６．６，１０９．２，１２７．７，１２９．８，１３４．１，１３４．８，１３５．９，１３６．２，１４９．３；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２５Ｈ３２Ｏ３ＳｉＮａ（Ｍ＋＋Ｎａ）に対して計算した精密質量４３１．２０１９、実測値４３１．２０２８。
【００３１】
（ｄ）ケタール４のカルボニル基の脱保護。（Ｒ）−３−［（ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル）オキシ］−４−メチレン−シクロヘキサノン（５）。室温の塩化メチレン（１１ｍＬ）中のケタール４（１６０ｍｇ、０．３９２ｍｍｏｌ）の溶液に、ＦｅＣｌ３ｘ６Ｈ２Ｏ（５４７ｍｇ、２．０２ｍｍｏｌ）を添加した。得られた暗黄色懸濁液を５０分間撹拌し、水の添加によって不活性化した。水層を塩化メチレンで抽出し、合わせた有機層を乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、減圧下で濃縮した。ヘキサン／酢酸エチル（９５：５）を用いた、得られた黄色残渣のシリカ上でのカラムクロマトグラフィーによって、無色油状物質としてケトン５（１４１ｍｇ、９９％）を得た。
５：１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１．０５（９Ｈ，ｓ，Ｓｉ−ｔ−Ｂｕ），２．３２−２．５２（５Ｈ，ｂｒ  ｍ，２β−Η，５−Ｈ２及び６−Ｈ２），２．８３（１Ｈ，ｍ，２α−Ｈ），４．４７（１Ｈ，ｂｒ  ｔ，Ｊ〜６Ｈｚ，３α−Ｈ），４．９０（２Ｈ，ｓ，＝ＣＨ２），７．４０（６Ｈ，ｍ，Ａｒ−Ｈ），７．６５（４Ｈ，ｍ，Ａｒ−Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１９．６，２７．１，３２．８，３６．９，４４．８，７２．８，１０７．１，１０８．２，１２８．０，１２９．８，１３３．０，１３３．３，１３５．１，２０７．７；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２３Ｈ２８Ｏ２ＳｉＮａ（Ｍ＋＋Ｎａ）に対して計算した精密質量３８７．１７５７、実測値３８７．１７４６。
【００３２】
（ｅ）ケトン５のピーターソン反応。［（Ｒ）−３’−［（ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル）オキシ］−４’−メチレン−シクロへキシリデン］酢酸メチルエステル（６及び７の混合物）。撹拌しながら、無水ＴＨＦ（２６０μＬ）中のジイソプロピルアミン（４８．５μＬ、３７６μｍｏｌ）の溶液に、−７８℃、アルゴン下で、ｎ−ＢｕＬｉ（ヘキサン中２．５Ｍ；１４８μＬ、３７６μｍｏｌ）を添加し、次にメチル（トリメチルシリル）アセテート（６０μＬ、３６７μｍｏｌ）を添加した。１５分後、無水ＴＨＦ（３００μＬ＋８０μＬ）中のケト化合物５（６３ｍｇ、１７２．８μｍｏｌ）を滴下添加した。この溶液を−７８℃で２時間撹拌し、飽和ＮＨ４Ｃｌで反応を停止させ、塩水に注ぎ、酢酸エチルで抽出した。合わせた有機抽出物を乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、蒸発させた。残渣をヘキサン中で溶解し、シリカＳｅｐ−Ｐａｋカートリッジに添加した。ヘキサン／酢酸エチル（９８：２）での溶出によって、無色油状物質として不飽和エステル６及び７（６５ｍｇ、９０％）を得た。
６及び７（異性体の混合物）：１Ｈ  ＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３；選択シグナル）δ１．１５及び１．１７（５Ｈ及び４Ｈ，各ｓ，２ｘＳｉ−ｔ−Ｂｕ），２．１−３．３（６Ｈ，ｂｒ  ｍ，２’−，５’−及び６’−Ｈ２），３．６９及び３．７３（１．６７Ｈ及び１．３３Ｈ，各ｓ，２ｘＣＯＯＣＨ３），４．２９（１Ｈ，ｍ，３’α−Ｈ），４．８２，４．９０，４．９３，５．１２（０．５６Ｈ，０．５６Ｈ，０．４４Ｈ及び０．４４Ｈ，各ｂｒ  ｓ，＝ＣＨ２），５．４８及び５．８３（０．４４Ｈ及び０．５６Ｈ，各ｂｒ  ｓ，ＣＨ−ＣＯＯＭｅ），７．４５（６Ｈ，ｍ，Ａｒ−Ｈ），７．７５（４Ｈ，ｍ，Ａｒ−Ｈ）；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２６Ｈ３２Ｏ３ＳｉＮａ（Ｍ＋＋Ｎａ）に対して計算した精密質量４４３．２０１９、実測値４４３．２０３５。
【００３３】
（ｆ）エステル６及び７の還元。（Ｅ）−及び（Ｚ）−２−［（Ｒ）−３’−［（ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル）オキシ］−４’−メチレン−シクロへキシリデン］エタノール（８及び９）。アルゴン下、−７８℃で、トルエン：塩化メチレン（２：１；８ｍＬ）中のアリルエステル６及び７（１６５ｍｇ、０．３９２ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、水素化ジイソブチルアルミニウム（トルエン中１．５Ｍ；１．９ｍＬ、２．８５ｍｍｏｌ）をゆっくりと添加した。−７８℃で１時間及び−４０℃で３０分間、撹拌を継続した。酒石酸カリウムナトリウム（２Ｎ、４ｍＬ）、ＨＣｌ水溶液（２Ｎ、４ｍＬ）及びＨ２Ｏ（１４ｍＬ）をゆっくりと添加することによってこの混合物を不活性化し、酢酸エチルで抽出した。合わせた有機層を塩水で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、蒸発させた。ヘキサン／酢酸エチル（９：１）を用いて残渣をシリカＳｅｐ−Ｐａｋカートリッジに通過させた。ヘキサン／酢酸エチル（８：２）溶媒系を用いて、アリル型アルコールの得られた混合物をＨＰＬＣ（９．４ｍｍｘ２５ｃｍ  Ｚｏｒｂａｘ−Ｓｉｌカラム、４ｍＬ／分）により分離し：Ｚ−異性体９（８２ｍｇ、５３％）をＲｖ＝３５ｍＬで回収し、Ｅ−異性体８（６０ｍｇ、３９％）をＲｖ＝４１ｍＬで回収した。
８（少ないＥ−異性体）：１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１．０８（９Ｈ，ｓ，Ｓｉ−ｔ−Ｂｕ），１．９６（１Ｈ，〜ｄｔ，Ｊ〜５，１２．５Ｈｚ，６’β−Η），２．０７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１２．５，８．５Ｈｚ，２’β−Η），２．０８（１Ｈ，ｍ，５’α−Ｈ），２．１３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１２．５，４．５Ｈｚ，２’α−Ｈ），２．３１（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝１２．５，４．５Ｈｚ，６’α−Ｈ），２．４８（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝１２．５，５．５Ｈｚ，５’β−Η），４．０９（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，−ＣＨ２ＯＨ），４．１４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．５，４．５Ｈｚ，３’α−Ｈ），４．８２及び５．１０（１Ｈ及び１Ｈ，各ｂｒ  ｓ，＝ＣＨ２），５．１６（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２−Ｈ），７．３９（６Ｈ，ｍ，Ａｒ−Ｈ），７．６５（４Ｈ，ｍ，Ａｒ−Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１９．３，２７．０，２９．３，３２．７，４６．６，５８．７，７４．０，１０７．２，１２３．６，１２７．５，１２９．６，１３３．８，１３４．５，１３５．８，１３９．７，１４９．６；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２５Ｈ３２Ｏ２ＳｉＮａ（Ｍ＋＋Ｎａ）に対して計算した精密質量４１５．２０７０、実測値４１５．２０５９。
９（主要なＺ−異性体）：１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１．０９（９Ｈ，ｓ，Ｓｉ−ｔ−Ｂｕ），１．９９（２Ｈ，ｍ，２’β−及び５’α−Ｈ），２．１１（２Ｈ，ｍ，６’α−及び６’β−Η），２．２５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１３．０，４．５Ｈｚ，２’α−Ｈ），２．４８（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝１２．５，５．５Ｈｚ，５’β−Η），３．６２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１０．０，７．２Ｈｚ，−ＣＨ２ＯＨのうち１つ），３．７１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１０．０，７．０Ｈｚ，−ＣＨ２ＯＨのうち１つ），４．０９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．０，４．５Ｈｚ，３’α−Ｈ），４．８２及び５．１０（１Ｈ及び１Ｈ，各ｂｒ  ｓ，＝ＣＨ２），５．３７（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２−Ｈ），７．３９（６Ｈ，ｍ，Ａｒ−Ｈ），７．６５（４Ｈ，ｍ，Ａｒ−Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１９．３，２７．０，３３．４，３７．３，３８．８，５８．３，７３．７，１０７．１，１２３．６，１２７．６，１２９．７，１３３．７，１３４．５，１３５．８，１３９．４，１４９．６；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２５Ｈ３２Ｏ２ＳｉＮａ（Ｍ＋＋Ｎａ）に対して計算した精密質量４１５．２０７０、実測値４１５．２０６７。
【００３４】
（ｇ）ホスフィンオキシド１０の調製。［２−［（Ｚ）−（Ｒ）−３’−［（ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル）オキシ］−４’−メチレン−シクロへキシリデン］エチル］ジフェニルホスフィンオキシド（１０）。無水ＴＨＦ（１．２ｍＬ）中のアリル型アルコール８（４９ｍｇ、１２５μｍｏｌ）の溶液に、アルゴン下、０℃で、ｎ−ＢｕＬｉ（ヘキサン中２．５Ｍ；５０μＬ、１２５μｍｏｌ）を添加した。次に、無水ＴＨＦ（２３０μＬ）中の新たに再結晶化した塩化トシル（２４ｍｇ、１２５μｍｏｌ）の溶液をアリル型アルコール−ｎ−ＢｕＬｉ溶液に添加した。この混合物を０℃で５分間撹拌し、０℃で放置した。アルゴンで空気を置換した別の乾燥したフラスコ中で、撹拌しながら、０℃で無水ＴＨＦ（３６０μＬ）中のＰｈ２ＰＨ（４４．２μＬ、２５４μｍｏｌ）の溶液にｎ−ＢｕＬｉ（ヘキサン中２．５Ｍ；１ｍＬ、０．２５ｍｍｏｌ）を添加した。橙色が持続するようになるまで、赤色溶液をアルゴン圧下でトシレート溶液に吸い取らせた（溶液のおよそ半分を添加した。）。得られた混合物をさらに３０分間、０℃で撹拌し、Ｈ２Ｏ（１４μＬ）を添加することによって不活性化した。溶媒を減圧下で蒸発させて、残渣を塩化メチレン（１．２ｍＬ）中で再溶解し、０℃で１時間、１０％Ｈ２Ｏ２（０．９ｍＬ）とともに撹拌した。有機層を分離し、冷亜硫酸ナトリウム水溶液及び水で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、蒸発させた。残渣をシリカ上でのフラッシュクロマトグラフィーに供した。ヘキサン／酢酸エチル（６：４）での溶出によって、ホスフィンオキシド１０（６４ｍｇ、７９％）を得た。
１０：１Ｈ  ＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１．０８（９Ｈ，ｓ，Ｓｉ−ｔ−Ｂｕ），１．３５−２．４５（６Ｈ，ｂｒ  ｍ，２’−，５’−及び６’−Ｈ２），２．５２（２Ｈ，ｂｒ  ｍ，＝ＣＨ−ＣＨ２），３．８８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１０．０，５．０Ｈｚ，３’α−Ｈ），４．８０及び５．１７（１Ｈ及び１Ｈ，各ｂｒ  ｓ，＝ＣＨ２），５．１４（１Ｈ，ｍ，２−Ｈ），７．２−７．５（１６Ｈ，ｂｒ  ｍ，Ａｒ−Ｈ），７．５７（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．０，１．５Ｈｚ，Ａｒ−Ｈ），７．６８（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．０，１．５Ｈｚ，Ａｒ−Ｈ）；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ３７Ｈ４１Ｏ２ＰＳｉＮａ（Ｍ＋＋Ｎａ）に対して計算した精密質量５９９．２５１２、実測値５９９．２５３４。
【００３５】
（ｈ）ホスフィンオキシド１０及びＧｒｕｎｄｍａｎｎケトン１１のウィッティヒ−ホーナー反応。（２０Ｓ）−２５−ヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノルビタミンＤ３（１２）。撹拌しながら、０℃の無水ＴＨＦ（２３０μＬ）中のホスフィンオキシド１０（１９ｍｇ、２９．４μｍｏｌ）の溶液に、アルゴン下でｎ−ＢｕＬｉ（ヘキサン中２．５Ｍ；１２μＬ、２９．７μｍｏｌ）をゆっくりと添加した。溶液が赤色に変化した。混合物を−７８℃に冷却し、無水ＴＨＦ（６０μＬ＋４０μＬ）中の保護されたヒドロキシケトン１１（３ｍｇ、７．６２μｍｏｌ）の予め冷却した（−７８℃）溶液をゆっくりと添加した。アルゴン下、−７８℃で１時間及び０℃で１９時間、混合物を撹拌した。酢酸エチルを添加し、有機層を塩水で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、蒸発させた。残渣をヘキサン中で溶解し、シリカＳｅｐ−Ｐａｋカートリッジに添加し、ヘキサン／ジエチルエーテル（９８：２）で洗浄し、１９−ノルビタミン誘導体１２（４ｍｇ、７０％）をシリル化した。
【００３６】
生成物をＴＨＦ（３５０μＬ）中で溶解し、アルゴン下、室温で、フッ化テトラブチルアンモニウム（ＴＨＦ中１．０Ｍ；３１８μＬ、３１８μｍｏｌ）を添加した。撹拌を１８時間継続し、塩水を添加し、混合物を酢酸エチルで抽出した。有機抽出物を乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、蒸発させた。ヘキサン／２−プロパノールアセテート（９５：５）溶媒系を使用したＨＰＬＣ（９．４ｍｍｘ２５ｃｍ  Ｚｏｒｂａｘ−Ｓｉｌカラム、４ｍＬ／分）によって残渣を精製し、Ｒｖ＝１９ｍＬで１９−ノルビタミン１２（１．８ｍｇ、８５％）を回収した。メタノール／水（８５：１５）溶媒系を用いたＨＰＬＣ（９．４ｍｍｘ２５ｃｍ  Ｚｏｒｂａｘ  Ｅｃｌｉｐｓｅ  ＸＤＢ−Ｃ１８カラム、４ｍＬ／分）後、このビタミンの分析用試料を得た（Ｒｖ＝４４ｍＬ）。
１２：ＵＶ（ＥｔＯＨ）λｍａｘ２４４，２５２，２６１ｎｍ；１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ０．５５８（３Ｈ，ｓ，１８−Ｈ３），０．８５７（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，２１−Ｈ３），１．２１７（６Ｈ，ｓ，２６−及び２７−Ｈ３），１．９５−２．０５（２Ｈ，ｍ），２．１４（１Ｈ，ｍ），２．２３−２．３５（２Ｈ，ｍ），２．３７−２．４７（２Ｈ，ｍ），２．５９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１３．０，４．１Ｈｚ，４α−Ｈ），２．８２（１Ｈ，ｂｒ  ｄｄ，Ｊ〜１３，４．５Ｈｚ，９β−Η），４．１９（１Ｈ，ｎａｒｒ  ｍ，ｗ／２＝１４Ｈｚ，３α−Ｈ），４．８３及び４．９６（１Ｈ及び１Ｈ，各ｂｒ  ｓ，＝ＣＨ２），５．８４及び６．２１（１Ｈ及び１Ｈ，各ｄ，Ｊ＝１１．３Ｈｚ，７−及び６−Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１２．３，１８．６，２０．９，２２．１，２３．５，２７．３，２８．８，２９．１，２９．３，３２．２，３５．４，３６．０，４０．４，４４．３，４５．７，４６．７，５６．１，５６．３，７１．１，７３．０，１０７．２，１１５．６，１２１．４，１３４．３，１４２．３，１５０．３；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２７Ｈ４４Ｏ２Ｎａに対して計算した精密質量（Ｍ＋＋Ｎａ）４２３．３２３９、実測値４２３．３２５３。
実施例ＩＩ
【００３７】
ホスフィンオキシド２７からの（２０Ｓ）−２−メチレン−２５−ヒドロキシ−１９−ノル−ビタミンＤ３（１２，１−デソキシ−２ＭＤ）の調製。
（ａ）キナ酸１３（スキームＩＩ）のラクトン化。（１Ｓ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−ｌ，３，４−トリヒドロキシ−６−オキサ−ビシクロ［３．２．１］オクタン−７−オン（１４）。無水トルエン（２００ｍＬ）及び無水ＤＭＦ（７５ｍＬ）中のＤ−（−）−キナ酸（２０．０ｇ、１０４ｍｍｏｌ）及びｐ−トルエンスルホン酸（２．２ｇ、１１．６ｍｍｏｌ）の溶液をディーンスタークトラップ下で３４時間還流させた。反応混合物を２３℃に冷却し、減圧下で濃縮して、濃黄色油状物質を得た。これを塩化メチレン（１００ｍＬ）で希釈し、ヘキサン（２００ｍＬ）を添加し、得られた混合物を２３℃で１２時間、放置した。沈殿生成物を真空ろ過によって回収し、これをさらに真空下で乾燥させて、白色粉末としてラクトン１４（１３．０ｇ、７２％）を得た（ｍｐ１８４−１８８℃、ｌｉｔ．ｍｐ  １８４−１８５℃）。
１４：１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ１．８７（１Ｈ，ｂｒ  ｔ，Ｊ〜１１Ｈｚ，２α−Ｈ），２．０２（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝１１．７，６．５，２．９Ｈｚ，２β−Η），２．２２（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝１１．４，６．０，２．９Ｈｚ，８β−Ｈ），２．４７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．４Ｈｚ，８α−Ｈ），３．７０（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝１１．４，６．５，４．４Ｈｚ，３β−Η），３．９８（１Ｈ，ｂｒ  ｔ，Ｊ〜５Ｈｚ，４β−Η），４．７０（１Ｈ，ｂｒ  ｔ，Ｊ〜５Ｈｚ，５α−Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ３７．８，４０．０，６６．８，６７．３，７３．１，７７．８，１７９．５；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ７Ｈ１０Ｏ５Ｎａ（Ｍ＋＋Ｎａ）に対して計算した精密質量１９７．０４２６、実測値１９７．０４２０。
【００３８】
（ｂ）ラクトン１４のヒドロキシ基保護。（１Ｒ，２Ｓ，６Ｒ，８Ｒ）−８−ヒドロキシ−４−チオキソ−３，５，１０−トリオキサ−トリシクロ［６．２．１．０＊２，６＊］ウンデカン−９−オン（１５）。１，１’−チオカルボニルジイミダゾール（１．３ｇ、６．８６ｍｍｏｌ）を無水アセトニトリル（７０ｍＬ）中のラクトン１４（１．０８ｇ、６．２４ｍｍｏｌ）の懸濁液に添加した。混合物を室温で６時間、激しく撹拌し、次に溶媒を減圧下で蒸発させた。シリカ上でのカラムクロマトグラフィー（３％メタノール／塩化メチレン）によって残渣を精製し、無色結晶として三環系化合物１５（０．８４ｇ、６３％）を得た（ｍｐ２１９−２２２℃）。
１５：［α］Ｄ−９．７°［ｃ  １．０６，（ＣＨ３）２ＣＯ］；１Ｈ  ＮＭＲ［４００ＭＨｚ，（ＣＤ３）２ＣＯ］δ２．２４（２Ｈ，ｍ），２．６２（１Ｈ，ｍ），２．６８（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝１５．２，８．０，２．５Ｈｚ，７α−Ｈ），５．０３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝５．９，２．７Ｈｚ，１α−Ｈ），５．２６（１Ｈ，ｍ，２β−Η），５．５６（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝３．１，８．０Ｈｚ，６β−Η）；１３Ｃ  ＮＭＲ［１００ＭＨｚ，（ＣＤ３）２ＣＯ］δ３５．５，３７．８，７０．７，７３．３，７７．７，７９．４，１７６．８，１９１．３；ＭＳ（ＥＩ）ｍ／ｚ（相対強度）２１６（Ｍ＋，６０），２１１（１５），２０４（１２），１９６（４２），１８１（１００）；Ｃ８Ｈ８Ｏ５Ｓに対して計算した精密質量２１６．００９２、実測値２１６．００８９。
【００３９】
（ｃ）水素化ｎ−トリブチルすずでの化合物１５の還元。（１Ｓ，３Ｓ，５Ｓ）−１，３−ジヒドロキシ−６−オキサ−ビシクロ［３．２．１］オクタン−７−オン（１６）及び（１Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−１，４−ジヒドロキシ−６−オキサ−ビシクロ［３．２．１］オクタン−７−オン（１７）。無水ベンゼン／ＴＨＦ（３／１、２３０ｍＬ）中の化合物１５（３．１８ｇ、１４．７ｍｍｏｌ）及び２，２’−アゾビスイソブチロニトリル（０．３６ｇ、２．２０ｍｍｏｌ）の還流溶液に、水素化ｎ−トリブチルすず（７．８８ｍＬ；８．５５ｇ、２９．４０ｍｍｏｌ）をシリンジポンプによって７５分以内に添加した。この混合物をさらに３時間還流下で加熱し、次いで１２時間放置した。溶媒を減圧下で蒸発させ、シリカ上でのカラムクロマトグラフィー（１５→４０％アセトン／塩化メチレン勾配）により残渣を精製し、無色結晶としてジオール１７（１．９４ｇ、８３％）を得て（ｍｐ２１２−２１４℃）、無色結晶として異性化合物１６（０．１１ｇ、５％）を得た（ｍｐ１４８−１５２℃）。
１６：［α］Ｄ−６０．３°（ｃ  ０．８４，ＣＨ３ＯＨ），ｌｉｔ［α］Ｄ−５９．０°（ｃ  ０．８０，ＣＨ３ＯＨ）；１Ｈ  ＮＭＲ［４００ＭＨｚ，（ＣＤ３）２ＣＯ］δ１．４８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１３．４，１０．０Ｈｚ，４α−Ｈ），１．７４（１Ｈ，ｔ，Ｊ〜１１Ｈｚ，２α−Ｈ），２．０２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．１Ｈｚ，８α−Ｈ），２．２３（１Ｈ，ｍ），２．３４（１Ｈ，ｍ），２．４２（１Ｈ，ｍ），３．８８（１Ｈ，ｍ，３β−Η），４．７８（１Ｈ，ｔ，Ｊ〜５Ｈｚ，５α−Ｈ）；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ１．４４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１３．４，１０．１Ｈｚ，４α−Ｈ），１．７５（１Ｈ，ｔ，Ｊ〜１１Ｈｚ，２α−Ｈ），１．９７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．２Ｈｚ，８α−Ｈ），２．２３（１Ｈ，ｍ），２．３６−２．４３（２Ｈ，ｍ），３．８７（１Ｈ，ｍ，３β−Η），４．８１（１Ｈ，ｔ，Ｊ〜５Ｈｚ，５α−Ｈ）；１Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ３７．３，４４．３，４４．４，６５．３，７４．１，７５．９．１７９．７；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ７Ｈ１０Ｏ４Ｎａ（Ｍ＋＋Ｎａ）に対して計算した精密質量１８１．０４７７、実測値１８１．０４８２。
１７：［α］Ｄ−５９．７°［ｃ  １．１５，（ＣＨ３）２ＣＯ］；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ１．７０（１Ｈ，ｍ），１．７８（１Ｈ，ｍ），１．８６（１Ｈ，ｍ），１．９７（１Ｈ，ｍ），２．２６（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝１１．３，６．１，２．７Ｈｚ，８β−Η），２．４５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．３Ｈｚ，８α−Ｈ），３．９７（１Ｈ，ｂｒ  ｔ，Ｊ〜４Ｈｚ，４β−Η），４．６０（１Ｈ，ｂｒ  ｔ，Ｊ〜５Ｈｚ，５α−Ｈ）；１Ｈ  ＮＭＲ［４００ＭＨｚ，（ＣＤ３）２ＣＯ］δ１．６６−１．７７（２Ｈ，ｍ），１．８４（１Ｈ，ｍ），１．９６（１Ｈ，ｍ），２．２４（ＩＨ，ｄｄｄ，Ｊ＝１１．２，６．２，２．８Ｈｚ，８β−Η），２．４６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．２Ｈｚ，８α−Ｈ），４．００（１Ｈ，ｍ，４β−Η），４．５８（１Ｈ，ｂｒ  ｔ，Ｊ〜５Ｈｚ，５α−Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ［１００ＭＨｚ，（ＣＤ３）２ＣＯ］δ２８．１，３０．２，３８．２，６４．４，７４．７，７７．６，１７８．３；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ７Ｈ１０Ｏ４Ｎａ（Ｍ＋Ｎａ）に対して計算した精密質量１８１．０４７７、実測値１８１．０４７１。
【００４０】
（ｄ）ジオール１７の酸化。（１Ｓ，５Ｒ）−１−ヒドロキシ−６−オキサ−ビシクロ［３．２．ｌ］オクタン−４，７−ジオン（１８）。アルコール１７（２．６７ｇ、１６．８８ｍｍｏｌ、過乾燥の活性化４Å分子ふるい（２．７ｇ）、重クロム酸ピリジニウム（１２．９０ｇ、３４．２８ｍｍｏｌ）及び無水アセトニトリル（２５０ｍＬ）の混合物を室温で５時間、激しく撹拌した。次に、反応混合物をＣｅｌｉｔｅのパッドに通してろ過し（３００ｍＬの酢酸エチルで洗浄）、溶媒を減圧下で除去した。残渣のシリカ上でのカラムクロマトグラフィー（１５→４０％アセトン／塩化メチレン勾配）によって、無色結晶としてケトン１８（２．１７ｇ、８２％）を得た（ｍｐ１４４−１４５℃）。
１８：［α］Ｄ−２２５°［ｃ  １．１６，（ＣＨ３）２ＣＯ］；１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤ３ＣＮ）δ２．１１（２Ｈ，ｍ，２−Ｈ２），２．３５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２．５Ｈｚ，８α−Ｈ），２．４６（１Ｈ，ｂｒ  ｄｄ，Ｊ＝１６．７，〜６Ｈｚ，３α−Ｈ），２．７０（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝１６．７，〜１０Ｈｚ，３β−Η），２．７８（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝１２．５，６．８，２．８Ｈｚ，８β−Η），４．５１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，５α−Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＣＤ３ＣＮ）δ３２．８，３４．０，４２．６，７４．４，８０．５，１７８．０，２０４．７；ＭＳ（ＥＩ）ｍ／ｚ１５６（Ｍ＋，５５），１３８（１００），１００（４２），７０（４３）；ＨＲＭＳ（ＥＩ）Ｃ７Ｈ８Ｏ４に対して計算した精密質量１５６．０４２３、実測値１５６．０４１７。
【００４１】
（ｅ）ケトン１８のウィッティヒ反応。（１Ｓ，５Ｒ）−１−ヒドロキシ−４−メチレン−６−オキサ−ビシクロ［３．２．１］オクタン−７−オン（１９）。０℃の無水ＴＨＦ（３５ｍＬ）中のメチルトリフェニルホスホニウムブロミド（１．７８ｇ、４．９９ｍｍｏｌ）に、ＴＨＦ中のカリウムｔｅｒｔ−ブトキシドの溶液（１．０Ｍ；４．７４ｍＬ、４．７４ｍｍｏｌ）を滴下添加した。混合物を室温まで温め、さらに１０分間撹拌した。カニューレを介してＴＨＦ（１０ｍＬ）中のケトラクトン１８（０．３８ｇ、２．４３ｍｍｏｌ）を添加し、室温で次の２時間、撹拌を継続した。次いで溶媒を減圧下で除去し、残渣を酢酸エチル（２０ｍＬ）と塩水（４０ｍＬ）との間で分配した。層を分離し、水層を酢酸エチルで抽出した（５ｘ２０ｍＬ）。有機抽出物を合わせ、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、ろ過し、減圧下で濃縮した。シリカ上でのカラムクロマトグラフィーにより残渣を精製し（３０％酢酸エチル／ヘキサン）、半固体の化合物１９（０．３０ｇ、８０％）を得た。
１９：［α］Ｄ−１２９°（ｃ  １．１５，ＣＨＣｌ３）；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１．９６（２Ｈ，ｍ），２．０５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．３Ｈｚ，８α−Ｈ），２．４８（２Ｈ，ｍ），２．７０（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝１１．３，６．３，２．７Ｈｚ，８β−Η），４．９３（１Ｈ，ｂｒ  ｓ，＝ＣＨ２の１つ），４．９８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，５α−Ｈ），５．０１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．４Ｈｚ，＝ＣＨ２の１つ）；Ｉ３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ２６．３，３３．８，４４．１，７４．４，８０．２，１１２．１，１４１．４，１７８．７；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ８Ｈ１０Ｏ３Ｎａ（Ｍ＋＋Ｎａ）に対して計算した精密質量１７７．０５２８、実測値１７７．０５２５。
【００４２】
（ｆ）ラクトン１９のメタノリシス及びヒドロキシル保護。［（１Ｓ，３Ｒ）−３−［（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ］−１−ヒドロキシ−４−メチレン］シクロヘキサンカルボン酸メチルエステル（２０）。活性化した過乾燥４Å分子ふるい（０．２２ｇ）の存在下で、無水メタノール（３０ｍＬ）でラクトン１９（０．８８ｇ、５．７１ｍｍｏｌ）を処理した。反応混合物を室温で４８時間撹拌した。次に、分子ふるいをろ過して取り除き、溶媒を減圧下で蒸発させた。無水塩化メチレン（３０ｍＬ）及び２，６−ルチジン（１．２６ｍＬ；１．１６ｇ、１０．８４ｍｍｏｌ）中で粗製メチルエステルを溶解し、−４０℃に冷却し、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルトリフルオロメタンスルホネート（１．９７ｍＬ；２．２６ｇ、８．５６ｍｍｏｌ）を滴下添加した。反応混合物を−４０℃で５０分間撹拌した。湿潤塩化メチレン（１０ｍＬ）をゆっくりと添加し、冷却槽を除去し、反応混合物をゆっくりと室温に温めた。次にこれをＣｅｌｉｔｅのパッドに通してろ過し（３０ｍＬの塩化メチレンで洗浄）、飽和ＣｕＳＯ４水溶液（２ｘ１５ｍＬ）及び塩水（１５ｍＬ）で洗浄した。有機層を合わせ、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、ろ過し、減圧下で濃縮した。シリカ上でのカラムクロマトグラフィーにより（１０％酢酸エチル／ヘキサン）粗製生成物を精製し、無色油状物質としてエステル２０（１．３７ｇ、８０％）を得た。
２０：［α］Ｄ−０．２°（ｃ  １．０５，ＣＨＣｌ３）；１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ０．０７及び０．０８（３Ｈ及び３Ｈ，各ｓ，２ｘＳｉＣＨ３），０．９０（９Ｈ，ｓ，Ｓｉ−ｔ−Ｂｕ），１．７０（１Ｈ，ｍ），１．８１（２Ｈ，ｍ），１．９７（１Ｈ，ｍ），２．３３（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝１３．５，４．３，２．４Ｈｚ，５β−Η），２．４６（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝１３．５，４．３Ｈｚ，５α−Ｈ），３．７７（３Ｈ，ｓ，ＣＯＯＣＨ３），４．４２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．１，５．０Ｈｚ，３α−Ｈ），４．８０及び５．０３（１Ｈ及び１Ｈ，各ｓ，＝ＣＨ２）；１３Ｃ  ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ−５．０５，−５．０１，１８．３，２５．８，２９．３，３６．０，４５．３，５３．０，６９．０，７５．１，１０５．７，１４９．６，１７６．６；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１５Ｈ２８Ｏ４ＳｉＮａ（Ｍ＋＋Ｎａ）に対して計算した精密質量３２３．１６５５、実測値３２３．１６４３。
【００４３】
（ｇ）エステル２０の還元。［（１Ｓ’，３Ｒ’）−３’−［（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ］−１’−ヒドロキシ−４’−メチレン−シクロヘキシル］メタノール（２１）。水素化ジイソブチルアルミニウム（塩化メチレン中１．０Ｍ；３．８３ｍＬ、３．８３ｍｍｏｌ）を、−７０℃の塩化メチレン（１８ｍＬ）中のメチルエステル２０（０．２３ｇ、０．７６ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にゆっくりと添加した。−７０℃で１時間及び−３０℃で２時間撹拌を継続した。酒石酸カリウムナトリウム（２Ｎ，４ｍＬ）をゆっくりと添加することによって混合物を不活性化し、塩化メチレン（２００ｍＬ）で希釈し、塩水（３ｘ３０ｍＬ）及び水（２ｘ３０ｍＬ）で洗浄した。有機層を乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、ろ過し、減圧下で濃縮した。残渣をシリカＳｅｐ−Ｐａｋカートリッジ（１０→３０％酢酸エチル／ヘキサン勾配）に通過させ、無色結晶としてジオール２１（０．２０ｇ、９４％）を得た（ｍｐ８９−９０℃）。
２１：［α］Ｄ＋１．３°（ｃ  １．０４，ＣＨＣｌ３）；１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ０．０７及び０．０８（３Ｈ及び３Ｈ，各ｓ，２ｘＳｉＣＨ３），０．９１（９Ｈ，ｓ，Ｓｉ−ｔ−Ｂｕ），１．４０（２Ｈ，ｍ），１．７０（１Ｈ，ｍ），１．９６（１Ｈ，ｍ），２．３３（２Ｈ，ｍ），３．４８（２Ｈ，ｓ，−ＣＨ２ＯＨ），４．４０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１０．２，５．０Ｈｚ，３’α−Ｈ），４．７８及び４．９７（１Ｈ及び１Ｈ，各ｓ，＝ＣＨ２）；１３Ｃ  ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ−５．０，−４．９，１８．３，２５．８，２８．９，３５．１，４４．７，６９．７，７０．７，７３．４，１０５．９，１５０．４；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１５Ｈ２８Ｏ３Ｓｉ（Ｍ＋＋Ｈ）に対して計算した精密質量２７３．１８８６、実測値２７３．１８８５。
【００４４】
（ｈ）ジオール２１の過ヨウ素酸酸化。（Ｒ）−３−［（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ］−４−メチレン−シクロヘキサノン（２２）。メタノール／水（５／１、５３ｍＬ）中のジオール２１（０．７６ｇ、２．８１ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、０℃で過ヨウ素酸ナトリウム（１．８０ｇ、８．４３ｍｍｏｌ）を添加した。０℃で１時間撹拌を継続し、反応混合物を酢酸エチル（１４０ｍＬ）で希釈し、塩水（３ｘ２０ｍＬ）及び水（２０ｍＬ）で抽出した。合わせた水層を酢酸エチルで抽出した（３ｘ２０ｍＬ）。有機層を合わせ、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、次いでろ過し、減圧下で濃縮した。シリカＳｅｐ−Ｐａｋカートリッジ（５％酢酸エチル／ヘキサン）上で残渣を精製し、無色油状物質としてケトン２２（０．６４ｇ、９５％）を得た。
２２：［α］Ｄ−４３°（ｃ  １．２５，ＣＨＣｌ３）；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ０．０３及び０．０５（３Ｈ及び３Ｈ，各ｓ，２ｘＳｉＣＨ３），０．８６（９Ｈ，ｓ，Ｓｉ−ｔ−Ｂｕ），２．２８−２．４５（３Ｈ，ｍ），２．４８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１４．１，６．７Ｈｚ，２β−Η），２．６０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１４．１，４．２Ｈｚ，２α−Ｈ），２．７１（１Ｈ，ｍ），４．４２（１Ｈ，ｍ，３β−Η），４．９４及び５．０８（１Ｈ及び１Ｈ，各ｓ，＝ＣＨ２）；１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ−５．１，−５．０，１８．１，２５．６，２８．７，４１．５，５１．５，７２．７，１０９．８，１４７．０，２０８．９；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１３Ｈ２４Ｏ２ＳｉＮａ（Ｍ＋＋Ｎａ）に対して計算した精密質量２６３．１４４３、実測値２６３．１４３８。
【００４５】
（ｉ）ケトン２２のウィッティヒ反応。［（Ｒ）−３’−［（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ］−４’−メチレン−シクロへキシリデン］酢酸メチルエステル（２３及び２４の混合物）。無水ベンゼン（２０ｍＬ）中のケトン２２（０．６５ｇ、２．３８ｍｍｏｌ）の溶液に、メチル（トリフェニルホスホラニリデン）アセテート（１．５９ｇ、４．７７ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を還流下で１５時間加熱し、次いで減圧下で濃縮し、シリカＳｅｐ−Ｐａｋカートリッジ（３→５％酢酸エチル／ヘキサン）上で残渣を精製し、不飽和エステル２３及び２４の混合物を得た（比率およそ２：３；０．６３ｇ、８９％）。
２３及び２４（異性体の混合物）：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３；選択シグナル）δ０．０５及び０．０７及び０．１１（１．２Ｈ，３Ｈ及び１．８Ｈ，各ｓ，２ｘＳｉＣＨ３），０．９０（９Ｈ，ｓ，Ｓｉ−ｔ−Ｂｕ），３．２９（０．４Ｈ，ｍ，６’α−Ｈ），３．５１（０．６Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１３．０，４．４Ｈｚ，２’α−Ｈ），４．１２（１Ｈ，ｍ，３’α−Ｈ），４．８０，４．８２，５．０１及び５．０３（０．６Ｈ，０．４Ｈ，０．４Ｈ及び０．６Ｈ，各ｓ，＝ＣＨ２），５．６８及び５．７３（０．４Ｈ及び０．６Ｈ，ｓ，２−Ｈ）；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１６Ｈ２８Ｏ３ＳｉＮａ（Ｍ＋＋Ｎａ）に対して計算した精密質量３１９．１７０５、実測値３１９．１７１０。
【００４６】
（ｊ）エステル２３及び２４の還元。（Ｅ）−及び（Ｚ）−２−［（Ｒ）−３’−［（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ］−４’−メチレン−シクロへキシリデン］エタノール（２５及び２６）。
水素化ジイソブチルアルミニウム（塩化メチレン中１．０Ｍ；９．８９ｍＬ、９．８９ｍｍｏｌ）を、−７０℃の塩化メチレン（４０ｍＬ）中のエステル２３及び２４の混合物（０．７３ｇ、２．４７ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にゆっくりと添加した。−７０℃で２時間及び−４０℃で１時間撹拌を継続した。酒石酸カリウムナトリウム（２Ｎ，６ｍＬ）をゆっくりと添加することによって混合物を不活性化し、塩化メチレン（２５０ｍＬ）で希釈し、塩水（３ｘ３０ｍＬ）及び水（２ｘ３０ｍＬ）で洗浄した。有機層を乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、ろ過し、減圧下で濃縮した。シリカ上でのカラムクロマトグラフィーにより（１０→２０％酢酸エチル／ヘキサン勾配）残渣を精製し、無色油状物質としてアリル型アルコール２５（０．２５ｇ、３９％）及び油状の異性化合物２６（０．３７ｇ、５８％）を得た。
２５（少ないＥ−異性体）：［α］Ｄ＋５．８°（ｃ  ０．９８，ＣＨＣｌ３）；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ０．０６及び０．０７（３Ｈ及び３Ｈ，各ｓ，２ｘＳｉＣＨ３），０．９１（９Ｈ，ｓ，Ｓｉ−ｔ−Ｂｕ），１．９７（２Ｈ，ｍ），２．１４（１Ｈ，ｂｒ  ｔ，Ｊ〜１１Ｈｚ，２’β−Η），２．４７（３Ｈ，ｍ），４．０５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．８，４．９Ｈｚ，３’α−Ｈ），４．１７（２Ｈ，ｍ，−ＣＨ２ＯΗ），４．７８及び５．０１（１Ｈ及び１Ｈ，各ｓ，＝ＣＨ２），５．４６（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２−Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ−５．０，−４．９，１８．３，２５．８，２９．２，３２．９，４７．３，５８．７，７３．２，１０６．５，１２３．４，１４０．２，１５０．０；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１５Ｈ２８Ｏ２ＳｉＮａ（Ｍ＋＋Ｎａ）に対して計算した精密質量２９１．１７５６、実測値２９１．１７５６。
２６（主要なＺ−異性体）：［α］Ｄ−２６°（ｃ  １．０９，ＣＨＣｌ３）；１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ０．０６及び０．０８（３Ｈ及び３Ｈ，各ｓ，２ｘＳｉＣＨ３），０．９０（９Ｈ，ｓ，Ｓｉ−ｔ−Ｂｕ），２．０９（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝１２．７，６．６Ｈｚ，５’β−Η），２．１７（２Ｈ，ｍ，５’α−及び６’β−Η），２．２７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１２．９，７．９Ｈｚ，２’β−Η），２．４３（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝１２．７，５．８Ｈｚ，６’α−Ｈ），２．５０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１２．９，４．２Ｈｚ，２’α−Ｈ），４．０９（１Ｈ，ｍ，−ＣＨ２ＯＨの１つ），４．１３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．９，４．２Ｈｚ，３’α−Ｈ），４．１８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．９，７．２Ｈｚ，−ＣＨ２ＯＨの１つ），４．７８及び４．９６（１Ｈ及び１Ｈ，各ｓ，＝ＣＨ２），５．６０（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２−Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ−４．９４，−４．９，１８．３，２５．８，３３．１，３７．４，３９．０，５８．３，７３．３，１０７．６，１２３．７，１４０．４，１４９．９；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１５Ｈ２８Ｏ２ＳｉＮａ（Ｍ＋＋Ｎａ）に対して計算した精密質量２９１．１７５６、実測値２９１．１７６９。
【００４７】
（ｋ）ホスフィンオキシド２７の調製。［（Ｅ）−［（３’Ｒ）−［（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ］−４’−メチレンシクロへキシリデン］エチル］ジフェニルホスフィンオキシド（２７）。無水ＴＨＦ（５ｍＬ）中のアリル型アルコール２５（１９０．０ｍｇ、７０８μｍｏｌ）に、アルゴン下、０℃でｎ−ＢｕＬｉ（ヘキサン中１．６Ｍ；４５０μＬ、１２５μｍｏｌ）を添加した。次に、無水ＴＨＦ（１．５ｍＬ）中の新たに再結晶化した塩化トシル（１４１．５ｍｇ、７４３μｍｏｌ）の溶液をアリル型アルコール−ｎ−ＢｕＬｉ溶液に添加した。混合物を０℃で５分間撹拌し、０℃で放置した。アルゴンで空気が置換されている別の乾燥したフラスコ中で、撹拌しながら、ｎ−ＢｕＬｉ（ヘキサン中１．６Ｍ；９４２μＬ，１．５１ｍｍｏｌ）を、０℃の無水ＴＨＦ（２ｍＬ）中のジフェニルホスフィン（２５０μＬ、１．４４ｍｍｏｌ）に添加した。橙色が持続するまで、赤色の溶液をアルゴン圧力下でトシレート溶液に吸い取らせた。得られた混合物を０℃でさらに３０分間撹拌し、Ｈ２Ｏ（０．８ｍＬ）を添加することによって不活性化した。溶媒を減圧下で蒸発させて、残渣を塩化メチレン（６．５ｍＬ）中で再溶解し、１０％Ｈ２Ｏ２（３．８ｍＬ）とともに０℃で１時間撹拌した。有機層を分離し、冷亜硫酸ナトリウム水溶液（１．５ｍＬ）及び水（１．５ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、ろ過し、減圧下で蒸発させた。残渣をシリカＳｅｐ−Ｐａｋカートリッジ（５％酢酸エチル／ヘキサン）で精製し、半結晶性ホスフィンオキシド２７（２２０ｍｇ、６９％）を得た。
２７：［α］Ｄ＋７．９°（ｃ  １．０７，ＣＨＣｌ３）；１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ０．０３（６Ｈ，ｓ，２ｘＳｉＣＨ３），０．８８（９Ｈ，ｓ，Ｓｉ−ｔ−Ｂｕ），１．６０（２Ｈ，ｍ），２．０４（１Ｈ，ｍ，２’β−Η），２．２５（２Ｈ，ｍ），２．３９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１２．６，４．８Ｈｚ，２’α−Ｈ），３．１２（２Ｈ，ｍ，＝ＣＨ−ＣＨ２，３．８５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．８，４．８Ｈｚ，３’α−Ｈ），４．７０及び４．９５（１Ｈ及び１Ｈ，各ｓ，＝ＣＨ２），５．３０（１Ｈ，〜ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，２−Ｈ），７．２５−７．５（６Ｈ，ｍ，Ａｒ−Ｈ），７．７４（４Ｈ，ｍ，Ａｒ−Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ−５．０，１８．３，２５．８，２９．２，３０．１，３０．７，３２．４，４７．４，７３．１，１０６．２，１１２．２，１１２．３，１２８．４，１２８．５，１２８．５１，１２８．５５，１３１．０，１３１．１，１３１．２，１３１．８，１４１．２，１４１．３，１４９．９；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２７Ｈ３７Ｏ２ＰＳｉＮａ（Ｍ＋＋Ｎａ）に対して計算した精密質量４７５．２１９８、実測値４７５．２２０８。
【００４８】
（ｌ）ホスフィンオキシド２７及びＧｒｕｎｄｍａｎｎケトン１１のウィッティヒ−ホーナー反応。（２０Ｓ）−２５−ヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノルビタミンＤ３（１２）。無水ＴＨＦ（８００μＬ）中の２７（４９ｍｇ、１０８μｍｏｌ）の撹拌溶液に、この溶液が濃橙色になるまで、２滴のフェニルリチウム溶液（ジ−ｎ−ブチルエーテル中１．８Ｍ）を２０℃で添加した。次に、５４μＬ（９７μｍｏｌ）のフェニルリチウム溶液を滴下添加した。２０分後、反応混合物を−７８℃に冷却し、カニューレを介して、無水ＴＨＦ（４００μＬ＋１００μＬ）中の予め冷却した（−７８℃）ケトン１１の溶液（２８ｍｇ、７１μｍｏｌ）を添加した。混合物を−７８℃で２時間及び０℃で４時間撹拌した。酢酸エチル（３０ｍＬ）を添加し、有機相を塩水（７ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、ろ過し、減圧下で濃縮した。シリカＳｅｐ−Ｐａｋカートリッジ（０→２％酢酸エチル／ヘキサン）上で残渣を精製し、保護された１９−ノルビタミンＤ誘導体を得た。
【００４９】
メタノール（２ｍＬ）中の得られた油状化合物（１１ｍｇ、１７μｍｏｌ）の撹拌溶液に、（１Ｓ）−（＋）−１０−カンファースルホン酸（７ｍｇ、３０μｍｏｌ）を０℃で添加した。次いで、冷却槽を除去し、反応混合物を室温で一晩撹拌した。数滴の重炭酸ナトリウム飽和水溶液及び水（３ｍＬ）を添加し、混合物を酢酸エチルで抽出した（５ｘ７ｍＬ）。合わせた有機相を乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、減圧下で濃縮し、シリカＳｅｐ−Ｐａｋカートリッジ（１０％酢酸エチル／ヘキサン）上でならびに７％ヘキサン／２−プロパノール溶媒系を用いたＨＰＬＣ（９．４ｍｍｘ２５ｃｍ  Ｚｏｒｂａｘ  Ｒｘ−Ｓｉｌカラム、４ｍＬ／分）によって残渣を精製した（Ｒｖ＝２１ｍＬ）。メタノール／水（８５：１５）溶媒系（Ｒｖ＝４４ｍＬ）を用いたＨＰＬＣ（９．４ｍｍｘ２５ｃｍ  Ｚｏｒｂａｘ  Ｅｃｌｉｐｓｅ  ＸＤＢ−Ｃ１８カラム、４ｍＬ／分）によって、さらなる精製を遂行した。分析上純粋な１９−ノルビタミンＤ３類似体１２（６．９ｍｇ、１１より１４％収率）を得たが、これは、実施例Ｉに記載の化合物と全ての点で同一であった。
スキームＩ及びスキームＩＩを次に示す。
【化８】
2013506688.tif 000009
2013506688.tif 000010
2013506688.tif 000011
【００５０】
（２０Ｓ）−２５−ヒドロキシ−１−デソキシ−２−メチレン−１９−ノルビタミンＤ３の生物学的活性
２−位へのメチレン基の導入、炭素１０のメチレン置換基の除去及びそのエピ又はＳ配置に炭素２０のメチル基を配向させることは、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３と比較して、全長組み換えラットビタミンＤ受容体への結合に殆ど又は全く影響しなかった。化合物１−デソキシ−２ＭＤの受容体への結合は、標準的な１，２５−（ＯＨ）２Ｄ３と比較した場合、親和性がごく僅かに低かった（図１）。これらの結果から、化合物１−デソキシ−２ＭＤが同等の生物学的活性を有することが予想され得る。しかし、驚くべきことに、化合物１−デソキシ−２ＭＤは、特有の生物学的活性を有する非常に選択的な類似体である。
【００５１】
図５Ａ及び５Ｂは、腸カルシウム輸送の刺激において、天然ホルモンである１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３（１，２５（ＯＨ）２Ｄ３）の活性と比較した場合、１−デソキシ−２ＭＤの活性が比較的低いことを示す。１−デソキシ−２ＭＤは、消化器官全体の能動的カルシウム輸送の促進において、１，２５（ＯＨ）２Ｄ３よりも約２０倍弱い。
【００５２】
図４Ａ及び４Ｂは、１，２５（ＯＨ）２Ｄ３と比較した場合、１−デソキシ−２ＭＤの骨カルシウム動員活性が比較的低いことを示す。１−デソキシ−２ＭＤは、骨カルシウム貯蔵物の放出において、ネイティブのホルモンよりも作用が弱く、ラット１匹あたり７０２０ｐｍｏｌを投与するまでは活性が殆ど又は全く観察されず、一方、ネイティブホルモンを投与する場合は７８０ｐｍｏｌで血清カルシウムの顕著な上昇が見られる。
【００５３】
このようにして、図４−５から、１−デソキシ−２ＭＤは、血漿カルシウム上昇活性が比較的低いことを特徴とし得ることが示される。
【００５４】
図２は、ＨＬ−６０細胞分化において、１−デソキシ−２ＭＤが１，２５（ＯＨ）２Ｄ３とほぼ同じ強さの作用を有することを示し、このため、１−デソキシ−２ＭＤは、癌治療に対する、特に白血病、結腸癌、乳癌、皮膚癌及び前立腺癌の予防又は治療に対する優れた候補となる。
【００５５】
図３は、骨細胞において、化合物１−デソキシ−２ＭＤの転写活性が、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３よりも低いことを示す。骨細胞において、１−デソキシ−２ＭＤは、２４−ヒドロキシラーゼ遺伝子の転写上昇に関して、１，２５（ＯＨ）２Ｄ３よりも約２０倍作用が弱い。この結果から、図２の細胞分化活性と併せて、１−デソキシ−２ＭＤは、細胞分化、遺伝子転写の惹起及び細胞増殖の抑制において、直接的な細胞活性を有するので、上述の癌の治療において非常に有効であることが示唆される。
【００５６】
実験方法
本発明の化合物を調製し、次の方法を用いて試験した。
【００５７】
ビタミンＤ受容体結合
試験材料
タンパク質の供給源
全長組み換えラット受容体をＥ．コリ（大腸菌）ＢＬ２１（ＤＥ３）Ｃｏｄｏｎ  Ｐｌｕｓ  ＲＩＬ細胞で発現させ、２種類の異なるカラムクロマトグラフィーシステムを使用して均一になるように精製した。第一のシステムは、このタンパク質上のＣ末端ヒスチジンタグを使用するニッケルアフィニティー樹脂であった。イオン交換クロマトグラフィー（Ｓ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ  Ｆａｓｔ  Ｆｌｏｗ）を用いて、この樹脂から溶出されたタンパク質をさらに精製した。精製タンパク質の分注液を液体窒素中で急速凍結し、使用するまで−８０°Ｃで保存した。結合アッセイで使用する場合、０．１％Ｃｈａｐｓ界面活性剤入りのＴＥＤＫ５０（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ、１．５ｍＭ  ＥＤＴＡ、ｐＨ７．４、５ｍＭ  ＤＴＴ、１５０ｍＭ  ＫＣＩ）中でタンパク質を希釈した。添加した放射性標識リガンドのうち受容体に結合するものが２０％を超えないように、受容体タンパク質及びリガンド濃度を最適化した。
【００５８】
試験薬物
未標識リガンドをエタノール中で溶解し、ＵＶ分光光度法を用いて濃度を決定した（１，２５（ＯＨ）２Ｄ３：モル吸光係数＝１８，２００及びλｍａｘ＝２６５ｎｍ）。最終濃度１ｎＭとなるようにエタノール中の放射性標識リガンド（３Ｈ−１，２５（ＯＨ）２Ｄ３、〜１５９Ｃｉ／ｍｍｏｌｅ）を添加した。
【００５９】
アッセイ条件
１００ｍｃｌの希釈タンパク質に放射性標識及び未標識リガンドを添加し、≦１０％の最終エタノール濃度とし、混合し、氷上で一晩インキュベートし、結合平衡状態に到達させた。翌日、１００ｍｃｌのヒドロキシルアパタイトスラリー（５０％）を各試験管に添加し、１０分間隔で３０分間混合した。ヒドロキシルアパタイトを遠心により回収し、次いで０．５％Ｔｉｔｒｏｎ  Ｘ−１００を含有するＴｒｉｓ−ＥＤＴＡ緩衝液（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ、１．５ｍＭ  ＥＤＴＡ、ｐＨ７．４）で３回洗浄した。最終的な洗浄後、４ｍＬのＢｉｏｓａｆｅ  ＩＩシンチレーションカクテルを含有するシンチレーションバイアルにペレットを移し、混合し、シンチレーションカウンターに載せた。放射性標識リガンドのみを含有する試験管から、総結合を調べた。
【００６０】
ＨＬ−６０分化
試験材料
試験薬物
試験薬物をエタノール中で溶解し、ＵＶ分光光度法を用いて濃度を確認した。細胞培養中に存在する最終エタノール濃度（≦０．２％）を変化させることなく薬物濃度の範囲を試験することができるように、連続希釈液を調製した。
【００６１】
細胞
１０％ウシ胎仔血清を含有するＲＰＭＩ−１６４０培地中でヒト前骨髄球性白血病（ＨＬ６０）細胞を増殖させた。５％ＣＯ２の存在下、３７℃で細胞をインキュベートした。
【００６２】
アッセイ条件
１．２ｘ１０５個（細胞）／ｍｌになるようにＨＬ６０細胞を播種した。播種から１８時間後、２つ組で細胞を薬物処理した。４日後、細胞を回収し、ニトロブルーテトラゾリウム還元アッセイを行った（Ｃｏｌｌｉｎｓら、１９７９；Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１４９：９６９−９７４）。全部で２００個の細胞を数え、細胞内に黒−青色のホルマザン沈着を含有した数を記録することによって、分化した細胞の％を調べた。単球系細胞への分化の検証は、食作用性の活性を測定することにより行った（データは示さない。）。
【００６３】
インビトロ転写アッセイ
ルシフェラーゼレポーター遺伝子の２４−ヒドロキシラーゼ（２４Ｏｈａｓｅ）遺伝子プロモーター上流を安定的に形質移入したＲＯＳ１７／２．８（骨）細胞（Ａｒｂｏｕｒら、１９９８）において、転写活性を測定した。細胞に一連の用量を与えた。投与から１６時間後、細胞を回収し、ルミノメーターを用いてルシフェラーゼ活性を測定した。ＲＬＵ＝相対的ルシフェラーゼ単位。
【００６４】
腸カルシウム輸送及び骨カルシウム動員
雄、離乳Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットに、１週間、Ｄｉｅｔ  １１（Ｓｕｄａら、Ｊ．Ｎｕｔｒ．１００：１０４９，１９７０）（０．４７％Ｃａ）＋ビタミンＡＥＫを与え、続いてＤｉｅｔ  １１（０．０２％Ｃａ）＋ビタミンＡＥＫを３週間与えた。次に、これらのラットの餌を１週間、０．４７％Ｃａを含有する同じ餌に切り替え、続いて２週間、０．０２％Ｃａを含有する同じ餌を与えた。０．０２％カルシウム餌の最終週の間に薬物投与を開始した。およそ２４時間の間隔をあけて、４回の連続ｉｐ投与を行った。
【００６５】
最終投与から２４時間後、切断した頸部から血液を回収し、骨カルシウム動員の目安として原子吸光分析法によって血清カルシウム濃度を測定した。反転腸管法（ｅｖｅｒｔｅｄ  ｇｕｔ  ｓａｃ  ｍｅｔｈｏｄ）を用いた腸カルシウム輸送分析のために、腸の最初の１０ｃｍも回収した。
【００６６】
データの解釈
ＶＤＲ結合、ＨＬ６０細胞分化及び転写活性。全長組み換えラットビタミンＤ受容体への結合に対する［３Ｈ］−１，２５（ＯＨ）２Ｄ３とのその競合能において、１−デソキシ−２ＭＤ（Ｋｉ＝１ｘ１０−１０Ｍ）の活性は、天然ホルモン１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３（Ｋｉ＝５ｘ１０−１１Ｍ）よりも僅かに低い（図１）。１−デソキシ−２ＭＤはまた、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３（ＥＣ５０＝４ｘｌ０−９Ｍ）と比較して、そのＨＬ６０分化促進能（効率又は有効性）も少し低い（ＥＣ５０＝１ｘｌ０−８Ｍ）（図２参照）。また、化合物１−デソキシ−２ＭＤ（ＥＣ５０＝４ｘｌ０−９Ｍ）の骨細胞における転写活性は、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３（ＥＣ５０＝２ｘｌ０−１０Ｍ）よりも約２０倍低い（図３参照）。これらのデータからまた、１−デソキシ−２ＭＤは、細胞分化の惹起及び細胞増殖の抑制において、直接的な細胞に対する活性を有するので、特に白血病、結腸癌、乳癌、皮膚癌及び前立腺癌の予防又は治療において、抗癌剤として顕著な活性を有するであろうことが示される。
【００６７】
ビタミンＤ−欠乏動物における骨からのカルシウム動員及び腸カルシウム吸収。低カルシウム餌（０．０２％）のビタミンＤ−欠乏ラットを用いて、腸及び骨における１−デソキシ−２ＭＤ及び１，２５（ＯＨ）２Ｄ３の活性を試験した。予想されるように、ネイティブのホルモン（１，２５（ＯＨ）２Ｄ３）は、試験した投与量で血清カルシウムレベルを上昇させた（図４Ａ及び４Ｂ）。図４Ａ及び４Ｂはまた、骨からのカルシウム動員において、１−デソキシ−２ＭＤの活性が、１，２５（ＯＨ）２Ｄ３よりも顕著に低いことも示す。４連続日にわたる７８０ｐｍｏｌ／日の１−デソキシ−２ＭＤの投与の結果、骨カルシウムの動員は僅かであるか又は全くなかった。１−デソキシ−２ＭＤは、骨カルシウム貯蔵物の放出において、ネイティブホルモンよりも作用が弱く、ラット１匹あたり７０２０ｐｍｏｌを投与するまでは活性が殆ど又は全く見られず、一方、ネイティブホルモンを投与する場合は、７８０ｐｍｏｌで顕著な血清カルシウムの上昇が見られる。
【００６８】
反転腸管法（ｅｖｅｒｔｅｄ  ｇｕｔ  ｓａｃ  ｍｅｔｈｏｄ）を用いて、動物の同じ群において、腸カルシウム輸送を評価した（図５Ａ及び５Ｂ）。これらの結果から、推奨される低投与量で投与される場合、１，２５（ＯＨ）２Ｄ３と比較して、化合物１−デソキシ−２ＭＤは、腸カルシウム輸送活性の促進において、約２０倍作用が弱いことが示される。従って、１−デソキシ−２ＭＤは試験した用量で腸カルシウム輸送活性が低いと結論付けることができる。
【００６９】
これらの結果から、１−デソキシ−２ＭＤが、本明細書中に記載のように多くのヒトの治療法に対する優れた候補であることがさらに示される。１−デソキシ−２ＭＤは、（１）顕著な、ＶＤＲ結合、転写活性及び細胞分化活性を有し；（２）１，２５（ＯＨ）２Ｄ３とは異なり、高カルシウム血症の易罹病性のリスクが低く、（３）容易に合成されるので、癌を治療するための優れた候補である。
【００７０】
予防及び／又は治療のために、当技術分野で公知の従来の方法に従い、式Ｉ及びＩａにより定義される本発明の化合物を、医薬的応用のために、無害な溶媒中の溶液として、又は適切な溶媒もしくは担体中の乳液、懸濁液又は分散液として、又は固体担体とともに、丸剤、錠剤もしくはカプセル剤として、処方することができる。何らかのこのような製剤には、安定化剤、抗酸化剤、結合剤、着色料又は乳化もしくは味覚修飾剤などの、他の医薬的に許容可能な及び無毒性の賦形剤も含有され得る。
【００７１】
式Ｉの化合物及び特に式Ｉａの１−デソキシ−２ＭＤは、経口投与、局所投与、非経口投与、直腸投与、鼻腔投与、舌下投与又は経皮投与することができる。本化合物は、有利に、注射によって又は静脈内点滴もしくは適切な滅菌溶液によって、又は消化管を介して液体もしくは固体投与の形態で又はクリーム剤、軟膏剤、パッチ剤もしくは経皮投与に適切な同様のビヒクルの形態で、投与される。予防及び／又は治療のためには、０．０１μｇから１０００μｇ／日の用量の化合物Ｉ、特に１−デソキシ−２ＭＤ、好ましくは約０．１μｇから約５００μｇ／日が適切であり、このような用量は、当技術分野でよく理解されているように、治療しようとする疾患、その重症度及び対象の反応に従い調整される。本化合物は、作用の特異性を示すので、様々な程度の骨塩動員及びカルシウム輸送刺激が好都合であることが認められている状況において、それぞれが、単独で又は段階的用量の別の活性ビタミンＤ化合物−−例えば１α−ヒドロキシビタミンＤ２又はＤ３又は１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３−−とともに適切に投与され得る。
【００７２】
上述の治療での使用のための組成物は、活性成分としての有効量の化合物Ｉ、特に上記式Ｉ及びＩａにより定義されるような１−デソキシ−２ＭＤと、適切な担体と、を含む。本発明に従う使用のためのこのような化合物の有効量は、組成物約０．０１μｇから約１０００μｇ／ｇｍ、好ましくは組成物約０．１ｇから約５００μｇ／ｇｍであり、約０．０１μｇ／日から約１０００μｇ／日、及び好ましくは約０．１μｇ／日から約５００μｇ／日の投与量で、局所投与、経皮投与、経口投与、直腸投与、鼻腔投与、舌下投与又は非経口投与することができる。
【００７３】
化合物Ｉ、特に１−デソキシ−２ＭＤは、クリーム剤、ローション剤、軟膏剤、局所パッチ剤、丸剤、カプセル剤もしくは錠剤、坐薬、エアロゾルとして又は、医薬的に無害であり許容可能な溶媒もしくは油中の溶液、乳液、分散液もしくは懸濁液として液体形態で処方され得、このような製剤には、さらに他の医薬的に無害であるか又は利益がある成分、例えば、安定化剤、抗酸化剤、乳化剤、着色料、結合剤又は味覚修飾剤などが含有され得る。
【００７４】
化合物Ｉ、特に１−デソキシ−２ＭＤは、有利に、正常なマクロファージへの前骨髄球細胞の分化を達成するのに十分な量で投与され得る。上述のとおりの投与量が適切であり、与えられた量は、当技術分野でよく理解されているように、疾患の重症度、対象の状態及び反応に従い調整すべきであることが理解されよう。
【００７５】
本発明の製剤は、医薬的に許容可能な担体とともに活性成分を含み、従って及び場合によってはその他の治療用成分を含む。担体は、製剤のその他の成分と適合性があり、その製剤の受容者にとって有害ではないという意味で、「許容可能」でなけらればならない。
【００７６】
経口投与に適切な本発明の製剤は、所定量の活性成分をそれぞれ含有する、カプセル剤、サシェ剤、錠剤又はトローチ剤のような個別単位の形態、粉剤又は顆粒剤の形態、水溶液もしくは非水性液体中の溶液もしくは懸濁液の形態又は水中油乳液もしくは油中水乳液の形態であり得る。
【００７７】
直腸投与用の製剤は、活性成分及びカカオバターなどの担体を組み込む坐薬の形態又は浣腸の形態であり得る。
【００７８】
非経口投与に適切な製剤は、従来、好ましくは受容者の血液と等張である活性成分の滅菌油状又は水性調製物を含む。
【００７９】
局所投与に適切な製剤としては、液体又は半液体調製物、例えば、塗布薬、ローション剤、外用薬、水中油又は油中水乳液、例えばクリーム剤、軟膏剤もしくはペースト剤；又は溶液もしくは懸濁液、例えば滴剤；又はスプレー剤が挙げられる。
【００８０】
鼻腔投与の場合、スプレー缶、ネブライザー又はアトマイザーで投与される、粉剤の吸入、セルフプロぺリング（ｓｅｌｆ−ｐｒｏｐｅｌｌｉｎｇ）又はスプレー製剤を使用することができる。投与する場合、これらの製剤は、好ましくは、１０から１００μの範囲の粒径を有する。
【００８１】
本製剤は、都合よく、投与単位形態であり得、医薬の技術分野で周知の何れかの方法によって調製され得る。「投与単位」という用語は、活性成分そのもの又は活性成分と固体もしくは液体の医薬用希釈剤もしくは担体との混合物の何れかを含む、物理学的及び化学的に安定な単回投与量で患者に投与することができる、単位、即ち単回投与量を意味する。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【国際調査報告】
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