(57)【要約】  本発明は、致死量の放射線に曝露した対象の死亡率を減少させる方法であって、本明細書に記載の有効量のトロンビンペプチド誘導体を対象に投与することを含む方法に関する。また、本発明は、放射線に曝露された、又は曝露されていない対象の、細菌、真菌、又はウイルスの全身性感染症を発症するリスクを減少させる方法、外傷、重症の皮膚損傷、及び／又は熱傷に罹患している、放射線に曝露される対象を治療する方法、放射線療法を受ける対象において、放射線照射に関連した損傷を減少させる方法、放射線に関連した疾患を発症するリスクを減少させる方法、及び放射線曝露により引き起こされる、及び／又は放射線に曝露された創傷の治療を促進する方法を含む。これらの方法は、本明細書に記載の有効量のトロンビンペプチド誘導体を対象に投与することを含む。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
致死量の放射線に曝露した対象の死亡リスクを減少させる方法であって、有効量のトロンビンペプチド誘導体を対象に投与することを含み、ここでトロンビンペプチド誘導体がＡｓｐ−Ａｌａ−Ｒを含み、Ｒがセリンエステラーゼ保存配列である、方法。
【請求項２】
放射線量が、少なくとも３．５Ｇｙである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
対象が、更に、外傷、重症の皮膚損傷、及び／又は熱傷を受けている、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
外傷が、骨折、又は内臓の損傷である、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
熱傷、重症の皮膚損傷、又は外傷が、対象を全身感染症に曝す、請求項３又は４に記載の方法。
【請求項６】
外傷、重症の皮膚損傷、及び／又は熱傷を有する、放射線に曝露された対象を治療する方法であって、有効量のトロンビンペプチド誘導体を対象に投与することを含み、ここでトロンビンペプチド誘導体はＡｓｐ−Ａｌａ−Ｒを含み、Ｒはセリンエステラーゼ保存配列である、方法。
【請求項７】
放射線曝露が致死量以下である、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
放射線曝露が３．５Ｇｙ未満である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
放射線療法を受ける対象において、放射線照射に関連した損傷を減少させる方法であって、有効量のトロンビンペプチド誘導体を対象に投与することを含み、ここでトロンビンペプチド誘導体がＡｓｐ−Ａｌａ−Ｒを含み、Ｒがセリンエステラーゼ保存配列である、方法。
【請求項１０】
放射線照射に関連した損傷が、皮膚潰瘍形成又は後期の皮膚破壊である、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
放射線照射に関連した損傷が、皮下線維症である、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
ポリペプチドが、放射線に曝露される又は曝露される予定である対象の正常組織に投与される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
放射線に曝露される又は曝露される予定である正常組織が皮膚である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
ポリペプチドが正常な皮膚に局所的に投与される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
放射線療法を受ける対象において、放射線照射により誘導される疾患を発症するリスクを減少させる方法であって、有効量のトロンビンペプチド誘導体を対象に投与することを含み、ここでトロンビンペプチド誘導体がＡｓｐ−Ａｌａ−Ｒを含み、Ｒがセリンエステラーゼ保存配列である、方法。
【請求項１６】
放射線曝露により引き起こされた、及び／又は放射線に曝露された、対象における創傷の治療を促進する方法であって、有効量のトロンビンペプチド誘導体を対象に投与することを含み、ここでトロンビンペプチド誘導体がＡｓｐ−Ａｌａ−Ｒを含み、Ｒがセリンエステラーゼ保存配列であり、トロンビンペプチド誘導体が少なくとも２０個のアミノ酸を有する、方法。
【請求項１７】
創傷が手術創傷である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
創傷が放射線照射により引き起こされる皮膚潰瘍である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１９】
トロンビンペプチド誘導体が、１２〜２３アミノ酸残基長である、請求項１〜１８又は４８〜６７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
セリンエステラーゼ保存配列が、Ｃｙｓ−Ｘ１−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｘ２−Ｖａｌ（配列番号１５）のポリペプチドを含み、ここでＸ１がＧｌｕ又はＧｌｎであり、Ｘ２がＰｈｅ、Ｍｅｔ、Ｌｅｕ、Ｈｉｓ、又はＶａｌである、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
セリンエステラーゼ保存配列が、Ｃｙｓ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ（配列番号１４）を含む、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
トロンビンペプチド誘導体が、ポリペプチドＡｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ａｌａ（配列番号１６）を含む、請求項１９〜２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
トロンビンペプチド誘導体が、ポリペプチドＡｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｃｙｓ−Ｘ１−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｘ２−Ｖａｌ（配列番号１）を含み、ここでＸ１がＧｌｕ又はＧｌｎであり、Ｘ２がＰｈｅ、Ｍｅｔ、Ｌｅｕ、Ｈｉｓ、又はＶａｌである、請求項１９に記載の方法。
【請求項２４】
トロンビンペプチド誘導体が、ポリペプチドＡｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｃｙｓ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ（配列番号１７）を含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項２５】
トロンビンペプチド誘導体が、ポリペプチドＡｌａ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｃｙｓ−Ｘ１−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｘ２−Ｖａｌ（配列番号２）、少なくとも１４個のアミノ酸残基を有するそのＮ末端切断フラグメント、又は少なくとも１８個のアミノ酸残基を有するそのＣ末端切断フラグメントを含み、ここでＸ１がＧｌｕ又はＧｌｎであり、Ｘ２がＰｈｅ、Ｍｅｔ、Ｌｅｕ、Ｈｉｓ、又はＶａｌである、請求項１９に記載の方法。
【請求項２６】
トロンビンペプチド誘導体が、ポリペプチドＡｌａ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｃｙｓ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ（配列番号６）、少なくとも１４個のアミノ酸残基を有するそのＮ末端切断フラグメント、又は少なくとも１８個のアミノ酸残基を有するそのＣ末端切断フラグメントを含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項２７】
トロンビンペプチド誘導体が、ポリペプチドＡｌａ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｃｙｓ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ（配列番号６）を含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項２８】
トロンビンペプチド誘導体が、Ｈ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｃｙｓ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−ＧＩｙ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−ＮＨ２（配列番号３）である、請求項１〜１８又は４８〜６７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
トロンビンペプチド誘導体が、ポリペプチドＡｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｘａａ−Ｘ１−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｘ２−Ｖａｌ（配列番号４）を含み、ここでＸａａがアラニン、グリシン、セリン、又はＳ−保護システインであり、Ｘ１がＧｌｕ又はＧｌｎであり；Ｘ２がＰｈｅ、Ｍｅｔ、Ｌｅｕ、Ｈｉｓ、又はＶａｌである、請求項１９に記載の方法。
【請求項３０】
トロンビンペプチド誘導体が、ポリペプチドＡｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｘａａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ（配列番号１１）を含み、ここでＸａａがアラニン、グリシン、セリン、又はＳ−保護システインである、請求項１９に記載の方法。
【請求項３１】
トロンビンペプチド誘導体が、ポリペプチドＡｌａ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｘａａ−Ｘ１−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｘ２−Ｖａｌ（配列番号５）、又は配列番号５のアミノ酸残基１０〜１８を含むそのフラグメントを含み、ここでＸａａがアラニン、グリシン、セリン、又はＳ−保護システインであり；Ｘ１がＧｌｕ又はＧｌｎであり；Ｘ２がＰｈｅ、Ｍｅｔ、Ｌｅｕ、Ｈｉｓ、又はＶａｌである、請求項１９に記載の方法。
【請求項３２】
トロンビンペプチド誘導体が、ポリペプチドＡｌａ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｘａａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ（配列番号２０）、又は配列番号２０のアミノ酸残基１０〜１８を含むそのフラグメントを含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項３３】
Ｘａａがアラニン又はセリンである、請求項２９〜３２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３４】
トロンビンペプチド誘導体が、ポリペプチドＨ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−ＧＩｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−ＮＨ２（配列番号２２）、又はＨ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−ＮＨ２（配列番号３０）である、請求項１９に記載の方法。
【請求項３５】
トロンビン誘導体がＣ末端アミドを含み、任意でアシル化されたＮ末端を含み、ここで前記Ｃ末端アミドが、Ｃ（Ｏ）ＮＲａＲｂにより表され、Ｒａ及びＲｂが独立して水素、１０個までの炭素原子を含む脂肪族基である、又はＲａ及びＲｂが、これらが結合する窒素原子とともにＣ３〜Ｃ１０の非芳香族ヘテロ環基を形成し、前記Ｎ末端のアシル基がＲ（）Ｃ（Ｏ）−により表され、Ｒｏが水素、１０個までの炭素原子を含む脂肪族基、又はＣ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルコキシ、ニトロ、及びシアノから選択される１又はそれ以上の基で任意に置換されるフェニル基である、請求項１９〜２７又は２９〜３４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３６】
トロンビンペプチド誘導体が、置換されていないＮ末端、及び置換されていないＣ末端、又は−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２により表されるＣ末端アミドを含む、請求項４５に記載の方法。
【請求項３７】
トロンビンペプチド誘導体がポリペプチド二量体であり、ここで二量体中の各ポリペプチドが１２〜２３アミノ酸残基長であり、二量体中の各ポリペプチドは独立して、Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｃｙｓ−Ｘ１−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｘ２−Ｖａｌ（配列番号１０）を含み、Ｘ１がＧｌｕ又はＧｌｎであり、Ｘ２がＰｈｅ、Ｍｅｔ、Ｌｅｕ、Ｈｉｓ、又はＶａｌであり、前記ポリペプチドが任意でＣ末端アミドを含み；前記ポリペプチドが任意でアシル化されたＮ末端を含む、請求項１〜１８又は４８〜６７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３８】
二量体中の各ポリペプチドが同一である、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
二量体中の各ポリペプチドが、ジスルフィド結合を介して共有結合する、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
二量体中の各ポリペプチドが、Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｃｙｓ−Ｘ１−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｘ２−Ｖａｌ（配列番号１）を含み、ここでＸ１がＧｌｕ又はＧｌｎであり、Ｘ２がＰｈｅ、Ｍｅｔ、Ｌｅｕ、Ｈｉｓ、又はＶａｌである、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
二量体中の各ポリペプチドが、Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｃｙｓ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ（配列番号１７）を含む、請求項３９に記載の方法。
【請求項４２】
二量体中の各ポリペプチドが、Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｃｙｓ−Ｘ１−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｘ２−Ｖａｌ（配列番号２）、ここでＸ１がＧｌｕ又はＧｌｎであり、Ｘ２がＰｈｅ、Ｍｅｔ、Ｌｅｕ、Ｈｉｓ、又はＶａｌである、又は配列番号２のアミノ酸残基１０〜１８を含むそのフラグメントを含む、請求項３９に記載の方法。
【請求項４３】
二量体中の各ポリペプチドが、Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｃｙｓ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ（配列番号６）、又は配列番号６のアミノ酸残基１０〜１８を含むそのフラグメントを含む、請求項３９に記載の方法。
【請求項４４】
二量体中の各ポリペプチドが、Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｃｙｓ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ（配列番号６）を含む、請求項３９に記載の方法。
【請求項４５】
二量体中の各ポリペプチドが、Ｃ末端アミドを含み、任意でアシル化されたＮ末端を含み、ここで前記Ｃ末端アミドが−Ｃ（Ｏ）ＮＲ２Ｒｂにより表され、Ｒ３及びＲｂが独立して水素、１０個までの炭素原子を含むアルキル基である、又はＲ３及びＲｂが、これらが結合する窒素原子とともにＣ３〜Ｃ１０非芳香族ヘテロ環基を形成し、そして前記Ｎ末端アシル基がＲ()Ｃ（Ｏ）−により表され、Ｒ()が水素、１０個までの炭素原子を含むアルキル基、又はＣ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルコキシ、ニトロ、及びシアノから選択される１又はそれ以上の基で任意に置換されるフェニル基である、請求項３８〜４４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４６】
二量体中の各ポリペプチドが、置換されていないＮ末端、及び置換されていないＣ末端、又は−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２により表されるＣ末端アミドを含む、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
トロンビンペプチド誘導体が、以下の構造式：
【化１】
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により表される、請求項３９に記載の方法。
【請求項４８】
細菌、真菌、又はウイルス感染に曝れる対象の血液中において、細菌、真菌、又はウイルス感染症を発症するリスクを減少させる方法であって、有効量のトロンビンペプチド誘導体を対象に投与することを含み、ここでトロンビンペプチド誘導体がＡｓｐ−Ａｌａ−Ｒを含み、Ｒがセリンエステラーゼ保存配列である、方法。
【請求項４９】
対象が放射線の曝露を受けている、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
対象が、放射線照射により腸壁の破壊がされている、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
放射線曝露が致死量以下である、請求項４９又は５０に記載の方法。
【請求項５２】
対象が、致死量の放射線に曝露される、請求項４９又は５０に記載の方法。
【請求項５３】
対象が、外傷、重症の皮膚損傷、及び／又は熱傷を受けている、請求項４８〜５２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５４】
対象が、侵襲的な医療処置又は歯科的処置後３０日間又は３０日以内に、感染に曝されている、請求項４８〜５２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５５】
侵襲的な医療処置が手術である、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
対象が肺炎、又は他の肺疾患を有する、請求項４８に記載の方法。
【請求項５７】
対象が免疫不全である、請求項４８に記載の方法。
【請求項５８】
対象がＡＩＤＳに罹患している、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
対象が癌に罹患している、請求項５７に記載の方法。
【請求項６０】
対象が６０歳超である、請求項４８〜５９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６１】
対象が幼児（infant）である、請求項４８〜５９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６２】
侵襲的な医療デバイスが、対象に導入される、請求項４８〜６１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６３】
前記侵襲的な医療デバイスが、静脈若しくは動脈経路、呼吸管、導尿カテーテル、外科用ドレーン、又は人工関節を含む、請求項６２に記載の方法。
【請求項６４】
トロンビンペプチド誘導体が別の治療薬剤と組み合わせて導入される、請求項４８〜６２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６５】
薬剤が、抗生物質である、請求項６４に記載の方法。
【請求項６６】
トロンビンペプチド誘導体が静脈に投与される、請求項６４に記載の方法。
【請求項６７】
細菌、真菌、又はウイルス感染に曝される対象において、全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）を発症するリスクを減少させる方法であって、有効量のトロンビンペプチド誘導体を対象に投与することを含み、ここでトロンビンペプチド誘導体がＡｓｐ−Ａｌａ−Ｒを含み、Ｒがセリンエステラーゼ保存配列である、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本願は、２０１０年６月１１日に出願された、米国仮特許出願第６１／３５４０６７号に対する優先権を主張し、この内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれている。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
核爆発の脅威の高まりに伴い、一般市民や救急医療提供者を守るため、曝露後に供給され得る新規の対策を開発することが必要である。更に、放射線照射と、外傷、皮膚損傷又は熱傷との組み合わせは、放射線照射単独よりも最大１０倍致命的になり得るという認識により、緊急性が要求される。爆発は何千人もの人を傷つけ、複合的な放射線損傷についての有効策を持たない人々は、致死量以下であったはずの放射線で恐らく死亡する。
【０００３】
加えて、全癌患者の５０％超は、何かしらの放射線治療を受ける。放射線治療は、隣接する正常な組織に影響を及ぼし、しばしば外科的創傷の閉合を阻み、後の皮膚の破壊、又は治癒しない慢性潰瘍の形成をもたらすことがよく知られている。
【０００４】
現在、放射線曝露後の個人に関する放射線照射の軽減効果について認可された製品は存在しない。評価されている多数の潜在的な製品は、特定の態様の複合的な放射線損傷のみを対象とし、それ故、有効性は限定されている。放射線治療に関連した損傷のための最も多くの治療は、標準的な抗生物質の使用を伴う優れた創傷ケア、及び大きな潰瘍又は非治癒領域の外科的修復を伴う創傷包帯に主に基づく。ＦＤＡ承認された唯一の放射線治療保護剤であるアミフォスチン（Amifostin）は、しかしながら、分割放射線治療の前に周囲組織に注射することが要求される。それ故、偶発的な放射線曝露又は放射線治療に起因する、放射線照射に誘導される損傷を予防及び治療するための新規な方法は必要とされている。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
発明の概要
出願人は、トロンビンペプチド誘導体ＴＰ５０８の曝露後の注射により、致死量のガンマ放射線照射に曝露したマウスにおいて、生存時間を増加させ、敗血性の細菌増殖の開始を遅らせることができることを発見した（実施例３及び４）。加えて、トロンビンペプチド誘導体ＴＰ５０８の局所処置又は全身性注射は、放射線に曝露したマウスにおける開放性皮膚創傷の治癒を促進することができる（実施例５）。
【０００６】
本発明は、致死量の放射線、又は損傷と組み合わせた場合に致命的である放射線量に曝露した対象において、死亡リスクを減少させる、又は平均余命を（例えば、少なくとも５％、１０％、２０％、２５％、５０％、７５％、又は１００％まで）延長する方法であって、Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｒ（Ｒはセリンエステラーゼ保存配列である）を含んでなる有効量のトロンビンペプチド誘導体を対象に投与することを含む方法に関する。
【０００７】
別の実施形態では、本発明は、放射線に曝露された対象において、全身性の細菌、真菌、又はウイルス感染症を発症するリスクを減少させる方法に関する。該方法は、Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｒ（Ｒはセリンエステラーゼ保存配列である）を含んでなる有効量のトロンビンペプチド誘導体を対象に投与することを含む。
【０００８】
別の実施形態では、本発明は、外傷、皮膚損傷、及び／又は熱傷を有する、放射線に曝露された対象を治療する方法であって、有効量のトロンビンペプチド誘導体を対象に投与することを含み、ここでトロンビンペプチド誘導体がＡｓｐ−Ａｌａ−Ｒ（Ｒはセリンエステラーゼ保存配列である）を含んでなる、方法に関する。
【０００９】
本発明はまた、放射線療法を受ける対象において、放射線に関連する損傷を減少させる方法であって、有効量のトロンビンペプチド誘導体を対象に投与することを含み、ここでトロンビンペプチド誘導体がＡｓｐ−Ａｌａ−Ｒ（Ｒはセリンエステラーゼ保存配列である）を含んでなる、方法に関する。
【００１０】
別の実施形態では、本発明は、放射線療法を受ける対象において、放射線に誘導される疾患を発症するリスクを減少させる方法であって、有効量のトロンビンペプチド誘導体を対象に投与することを含み、ここでトロンビンペプチド誘導体がＡｓｐ−Ａｌａ−Ｒ（Ｒはセリンエステラーゼ保存配列である）を含んでなる、方法に関する。
【００１１】
別の実施形態では、本発明は、放射線曝露により引き起こされる、及び／又は放射線に曝露された対象の創傷の治癒を促進する方法であって、有効量のトロンビンペプチド誘導体を創傷に投与すること、又は有効量のトロンビンペプチド誘導体を放射線曝露後に全身的に投与することを含み、ここでトロンビンペプチド誘導体がＡｓｐ−Ａｌａ−Ｒ（Ｒはセリンエステラーゼ保存配列である）を含んでなる、方法に関する。
【００１２】
更に別の実施形態では、本発明は、放射線に曝露されておらず、血中において細菌、真菌、又はウイルス感染症を発症するリスクにあるかもしれない対象の血中において、細菌、真菌、又はウイルス感染症を発症するリスクを減少させる方法に関する。該方法は、Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｒ（Ｒはセリンエステラーゼ保存配列である）を含んでなる有効量のトロンビンペプチド誘導体を対象に投与することを含む。
【００１３】
本発明はまた、致死量の放射線に曝露された対象の死亡リスクを減少させ、放射線に曝露された対象において細菌、真菌、又はウイルス感染症を発症するリスクを減少させ、放射線に曝露され外傷、皮膚損傷、及び／又は熱傷を有する対象を治療し、放射線療法を受ける対象において放射線に関連する損傷を減少させ、放射線療法を受けている対象において放射線に誘導される疾患を発症するリスクを減少させ、放射線曝露により引き起こされる、及び／又放射線に曝露された対象の創傷の治癒を促進するためのトロンビンペプチド誘導体、ここでトロンビンペプチド誘導体はＡｓｐ−Ａｌａ−Ｒ（Ｒはセリンエステラーゼ保存配列である）を含んでなる、の使用に関する。本発明はまた、放射線曝露により引き起こされる、及び／又は放射線に曝露された対象の治癒を促進するための使用に関する。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】図１は、０、５、１０、若しくは２０Ｇｙの放射線に曝露し、生理食塩水又は３０ｕｇ／ｍｌ  ＴＰ５０８で処理した、ヒト微小血管内皮細胞（ＨＭＶＥＣ）において測定したカスパーゼ活性を示すグラフである。
【００１５】
【図２】図２は、局所的に又は静脈内に送達される生理食塩水プラセボ又はＴＰ５０８で処置したマウスの、８Ｇｙ放射線曝露及び皮膚切除をした後の、異なる日における生存率を示すグラフである。
【００１６】
【図３】図３は、１２Ｇｙ放射線曝露、及び生理食塩水又はＴＰ５０８のいずれかの単回の曝露後ボーラス投与後の、異なる日におけるマウスの生存率を示すグラフである。
【００１７】
【図４】図４は、０又は１２Ｇｙ放射線の曝露、及び生理食塩水プラセボ又はＴＰ５０８注射の６及び７日後の、マウスの血中の生菌数（ＣＦＵ）を示す棒グラフである。
【００１８】
【図５】図５は、０又は８Ｇｙの放射線に曝露後０〜５日及び５〜１６日後の、局所的又は静脈注射により生理食塩水プラセボ又はＴＰ５０８のいずれかを投与したマウスにおける線形の創傷治癒の速度（ｍｍ／日で測定する）を示す棒グラフである。
【００１９】
【図６】図６は、二つの棒グラフを有するパネルである。パネルＡの棒グラフは、０及び８Ｇｙで放射線照射し、生理食塩水プラセボ（Ｐ）、又は局所的（ＴＰｔ）若しくは静脈内（ＴＰｉｖ）のいずれかで投与したＴＰ５０８で処置したマウスにおける、放射線照射後１１日に測定した血清ＩＬ−６レベル（ｎｇ／ｍｌ）を示す。パネルＢの棒グラフは、０及び１２Ｇｙで放射線照射し、生理食塩水プラセボ（Ｐ）又は局所的（ＴＰｔ）若しくは静脈内（ＴＰｉｖ）のいずれかで投与したＴＰ５０８で処置したマウスにおける、放射線照射後７日に測定された血清ＩＬ−６レベル（ｎｇ／ｍｌ）を示す。
【００２０】
【図７】図７は、大動脈移植片培養の５日後、出芽面積の倍数増加を示す棒グラフである。大動脈は、０、３、８、又は１０Ｇｙの放射線での曝露、及び静脈内に投与した生理食塩水プラセボ又はＴＰ５０８のいずれかでの処置の２４時間後、マウスから単離した。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
実施形態の詳細な説明
本発明は、対象における放射線曝露の悪影響を減少させる方法であって、本明細書に記載の有効量のトロンビンペプチド誘導体を対象に投与することを含む方法に関する。放射線曝露は、例えば核爆発、核兵器、偶発的な放射線曝露（例えば原子炉における事故、又は放射線源からの不十分な保護による）又は放射線療法に起因し得る。少量の放射線曝露は、航空会社の労働者及び宇宙飛行士；原子力及び核燃料処理工場の労働者；研究所の労働者；及びウラン鉱山労働者に及ぶ職業的な危険であり得る。加えて、医療診断検査、例えばＸ線は、一般の人々に対しての低レベルの放射線曝露の原因となり得る。
【００２２】
本発明はまた、放射線に曝露されていない対象において、血中の細菌、真菌、又はウイルス感染症を発症するリスクを減少させる方法であって、本明細書に記載の有効量のトロンビンペプチド誘導体を対象に投与することを含む方法に関する。感染は、例えば外科手術時（特に、それが粘膜、例えば胃腸管を含む場合）に疾患の合併症、例えば肺炎、又は髄膜炎として、又は動脈又は静脈に侵入するカテーテル及び他の異物（静注薬物乱用を含む）により、血流に侵入し得る。加えて、肺疾患、炎症性腸疾患、及び全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）に罹患する個人、又は免疫不全の個人はまた、血液感染のリスクにある。病院において、留置カテーテルは、皮膚上通常で発見される細菌が血流に侵入し得る手段を提供するので、血液感染の常習的な原因である。血液感染の他の原因としては、歯科的処置（しばしば、単純な歯磨きを含む）、ヘルペス（疱疹性ひょう疽を含む）、尿路感染、腹膜炎、クロストリジウム・ディフィシル大腸炎、静脈麻薬の使用、及び結腸直腸癌が挙げられる。血液感染は、口腔咽頭の、胃腸の、又は泌尿生殖器の手術若しくは検査の結果でもあり得る。血液感染に対する免疫反応は、比較的高い死亡率を有する敗血症及び敗血性ショックを引き起こし得る。本明細書に記載される方法では、本発明のペプチドは、抗生物質と組み合わせて、投与することができる。
【００２３】
一つの態様では、本発明は、致死量の放射線に曝露された対象における死亡リスクを減少させる方法であって、本明細書に記載の有効量のトロンビンペプチド誘導体を対象に投与することを含む方法に関する。
【００２４】
致死量の放射線は、１０日間に、試験された対象の半数の死亡を引き起こす用量、即ち、１０日間においてＬＤ５０である。致死量は対象の属性に依存する。例えば、ヒトについての致死量は約３．５Ｇｙ以上であり、マウスについての致死量は約１２Ｇｙ以上である。
【００２５】
致死量の放射線で曝露された対象はまた、さらに外傷、皮膚損傷及び／又は熱傷を受け得る。
【００２６】
「熱傷」とは、熱、電気、化学物質、光、放射線、摩擦、又は熱により引き起こされる皮膚損傷の種類である。例えば核爆発のイベントにおける放射線曝露により引き起こされる「熱傷」としては、例えば、赤外線熱放射による温熱熱傷、浅くイオン化するベータ放射線によるベータ線熱傷、及び高い透過性を有するガンマ放射線によるガンマ線熱傷が挙げられる。熱傷は、Ｉ度、ＩＩ度、又はＩＩＩ度の熱傷であり得る。全体表面積（ＴＢＳＡ）の様々なパーセンテージは、熱傷により影響され得る。例えば、１％未満、１％超、５％超、１０％超、１５％超、２０％超、３０％超、４０％超、５０％超、又は１〜１０％、１０〜２０％、２０〜３０％、３０〜４０％、４０〜５０％又は５０〜７０％のＴＢＳＡは、熱傷により影響された。
【００２７】
「外傷」とは、力又は衝撃により引き起こされる物理的損傷である。外傷は、しばしば二次性合併症、例えばショック状態、呼吸不全、及び死亡に関連する。例えば、外傷は、爆発のエネルギー又は落下物及び飛行物のエネルギーにより引き起こされ得る。外傷はまた、臓器からの出血及び／又は少なくとも部分的な機能の喪失をもたらす内臓損傷を含む。例えば内臓損傷は、例えば銃弾又は飛行発射物の貫通により引き起こされ得る。外傷はまた、筋骨格系、例えば骨、筋肉、軟骨、腱、靱帯、関節、及び結合組織に対する損傷を含み得る。一つの実施形態では、外傷は骨折である。
【００２８】
皮膚損傷は、皮膚の真皮層の損傷である。いくつかの皮膚損傷は、少なくとも１００ｍｍ２に広がる皮膚創傷をもたらす皮膚損傷及び／又は完全な厚みの（Full-thickness）創傷（即ち皮膚の表皮及び真皮の双方を貫通する創傷）である。
【００２９】
一つの実施形態では、対象により受ける熱傷、外傷、又は皮膚損傷は、対象を全身性感染症に曝す。「全身性感染症」とは、血流に侵入した感染であり、複数の臓器及び／又は組織又は全身を冒し得る。
【００３０】
別の実施形態では、本明細書に記載のトロンビンペプチド誘導体は、本発明の方法により治療する対象において、白血球減少症及び／又は好中球減少症を減少させる。或いは、本明細書に記載のトロンビンペプチド誘導体は、本発明の方法により治療する対象において、放射線損傷による骨髄前駆細胞の集団の減少を減少させる。
【００３１】
別の態様では、本発明は、対象における全身性細菌、真菌、又はウイルス感染症を発症するリスクを減少させる方法であって、本明細書に記載の有効量のトロンビンペプチド誘導体を対象に投与することを含む方法である。一つの実施形態では、対象は、細菌、真菌、又はウイルス感染に曝される。一つの例では、全身性の細菌、ウイルス、又は真菌感染症を発症するリスクにある対象は、放射線に曝露される。例えば、核爆発のイベントにおける、医療従事者、入院患者、救助隊、衛生のための従業者、及び例えば病院のような細菌、真菌、又はウイルス感染の発生が起こりやすい環境若しくは場所にいる人々である。或いは、放射線曝露、例えば核爆発に起因する熱傷、外傷、又は皮膚損傷に罹患する対象は、斯かる損傷に罹患していない対象よりも細菌、真菌、又はウイルス感染により罹りやすい。或いは、放射線曝露の前に未治癒の創傷を有する対象は、細菌、真菌、又はウイルス感染症をより発症しやすい。或いは、例えば手術により放射線に曝露される前に存在する創傷を有する、放射線療法を受ける患者は、事前に創傷を有しない患者よりも細菌、真菌、又はウイルス感染症を発症する高いリスクを有する。本明細書に記載のトロンビンペプチド誘導体は、放射線曝露に関する上述の対象における全身性細菌、真菌、又はウイルス感染症を発症するリスクの減少に効果的である。
【００３２】
一つの実施形態では、該方法は、対象の血液中の細菌、真菌、又はウイルス感染症を発症するリスクを減少させる。高用量の放射線曝露は、急性疾患、例えば、対象を敗血症性感染により感染し易くさせる腸壁の破壊をもたらす。一つの実施形態では、本発明は、放射線に曝露された対象において、敗血性全身性感染症の発症を遅らせる方法であって、本明細書に記載の有効量のトロンビンペプチド誘導体を対象に投与することを含む方法に関する。前記対象は、致死量の放射線に曝露されてもよい。或いは、前記対象は、致死量以下の放射線に曝露されてもよい。
【００３３】
或いは、対象は、細菌、真菌、又はウイルス感染症を発症するリスクにあり、放射線に曝露されていない。これらの対象としては、１又はそれ以上の以下：ａ）外傷、重症な皮膚損傷、及び／又は熱傷を受けた対象；ｂ）侵襲的な医療処置又は歯科的処置を受けた対象；ｃ）侵襲的な医療装置の挿入を受けた対象；ｄ）肺炎又は急性呼吸促迫症候群を引き起こし得る他の肺疾患又は全身性感染症に罹患した対象；ｅ）免疫不全である対象；ｆ）幼児である、又は６０歳以上である対象；又はｇ）幼児である、又は６０歳以上である、ａ〜ｄの分類の１又はそれ以上の対象を含む。
【００３４】
対象を感染に曝す侵襲的な医療処置は、皮膚に外科的傷口を作ること、又は器具、例えばニードル又はチューブを対象の身体に挿入することを含む。侵襲的な医療処置は、外部の生物、例えば細菌又は真菌を、対象の身体に導入するリスクを増加させ、対象の血液中の細菌、真菌、又はウイルス感染の増加したリスクを導く。侵襲的な医療処置の例としては、任意の兆候のための手術が挙げられる。侵襲的な医療処置の別の例としては、侵襲的医療デバイスが対象に導入される処置が挙げられる。侵襲的な医療デバイスの例としては、静脈又は動脈経路、呼吸管、導尿カテーテル、外科用ドレーン、人工関節、又は栄養チューブが挙げられる。栄養チューブの例としては、Ｇ−チューブ／ＰＥＧチューブ、Ｊ−チューブ（空腸造瘻術チューブ）及びＮＧ−チューブ（鼻腔栄養チューブ）が挙げられる。
【００３５】
別の実施形態では、本発明は、肺炎を有する対象の血液中の細菌、真菌、又はウイルス感染症を発症するリスクを減少させる方法に関する。肺炎は、肺、特に肺胞の炎症性疾患である。感染は、肺炎の最も一般的な原因である。感染源は、細菌、ウイルス、真菌、又は寄生虫であり得る。肺に対する化学的熱傷又は物理的損傷は肺炎を引き起こし得る。細菌は、肺炎の最も一般的に原因であり、市中肺炎の場合、最も一般的に単離される細菌は、肺炎レンサ球菌（streptococcus pneumoniae）である。別の重要な肺炎の原因となるグラム陽性は、新生児における肺炎の重大な原因であるストレプトコッカス・アガラクティエ（streptococcus agalactiae）を含む黄色ブドウ球菌（staphylococcus aureus）である。グラム陰性細菌は、グラム陽性細菌ほど頻繁に肺炎を引き起こさない。肺炎を引き起こすいくつかのグラム陰性細菌としては、インフルエンザ菌（Haemophilus influenzae）、肺炎桿菌（Klebsiella pneumoniae）、大腸菌（Escherichia coli）、緑膿菌（Pseudomonas aeruginosa）、及びカタラリス菌（Moraxella catarrhalis）が挙げられる。これらの細菌は、しばしば胃や腸内で生存し、吐瀉物を吸引する場合、肺に侵入し得る。肺炎を引き起こす「代表的ではない」細菌としては、クラミドフィラ・ニューモニエ（Chlamydophila pneumoniae）、マイコプラズマ・ニューモニエ（Mycoplasma pneumoniae）、及びレジオネラ・ニューモフィラ（Legionella pneumophila）が挙げられる。
【００３６】
別の実施形態では、本発明は、免疫不全の対象の血液中で細菌、真菌、又はウイルス感染症を発症するリスクを減少させる方法に関する。免疫不全の対象は、免疫系が弱くなった、又は欠損している対象である。免疫不全である対象は、適切に機能しない免疫応答のために、感染と戦うことがほとんどできない。免疫不全の対象の例としては、以下：ａ）免疫系の機能に影響を及ぼす遺伝子欠陥を有する対象；ｂ）疾患、例えばＡＩＤＳ、又は白血病、リンパ腫、若しくは多発性骨髄腫を含む癌に罹患した対象；ｃ）慢性疾患、例えば透析を必要とする末期腎不全、糖尿病、又は肝硬変に罹患している対象；ｄ）ステロイド、化学療法、放射線、免役抑制の移植後薬物療法を含む治療を受けている対象；ｅ）妊娠している対象を含む。
【００３７】
一つの実施形態では、細菌、真菌、又はウイルス感染としては（放射線曝露の存在又は不存在下で）、限定しないが、ブドウ球菌（staphylococci）（例えば黄色ブドウ球菌（staphylococcus aureus））、腸球菌（enterococci）、レンサ球菌（streptococci）（例えば肺炎レンサ球菌（streptococcus pneumoniae））、緑膿菌（pseudomonas aeruginosa）、バークホルデリア・セノセパシア（burkholderia cenocepacia）、トリ型結核菌（mycobacterium avium）、エンテロバクター属（enterobacter）、バクテロイデス・フラジリス（bacteroides fragilis）、化膿レンサ球菌（streptococcus pyogenes）、腸球菌種（enterococcus sp.）、インフルエンザ菌（haemophilus influenzae）、レジオネラ菌種（legionella sp.）、クラミジア・ニューモニエ（chlamydia pneumoniae）、大腸菌（escherichia coli）、クロストリジウム属種（Clostridium sp.）、ブドウ球菌属種（staphylococcus sp.）、エンテロバクター属種（enterobacter sp.）、プロテウス属種（proteus sp.）、ナイセリア・メニンギティディス（neiserria meningitidis）、リステリア・モノサイトゲネス（listeria monocytogenes）、カンジダ属種（Candida sp.）（例えばカンジダ・アルビカンス（Candida albicans））、腸球菌属種（enterococcus sp.）、クレブシエラ菌（klebsiella）、ｓ．アガラクチア（s. agalactiae）、及びアスペルギルス属（aspergillus）の感染が挙げられる。細菌、真菌、又はウイルス感染はまた、全身性細菌感染、全身性真菌感染、及び全身性ウイルス感染を含む。
【００３８】
核爆発のイベントでは、人々は、しばしば放射線曝露に加えて開放性皮膚創傷を受ける。加えて、放射線曝露は、しばしば皮膚損傷、例えば皮膚潰瘍を引き起こし得る。放射線療法の場合、癌患者はしばしば、腫瘍の外科的除去後に放射線療法を受け、放射線療法を受ける場合、結果として放射線に曝露される外科的創傷を有する。対象はまた、核爆発、偶発的な放射線曝露又は放射線療法を含む放射線曝露の前に、事前に存在する創傷を有し得る。本明細書に記載のトロンビンペプチド誘導体は、上述のこれらの創傷の治癒を促進することができる。
【００３９】
一つの実施形態では、放射線曝露は、致死量以下である。例えば、放射線曝露は、対象がヒトである場合、３．５Ｇｙ未満である。
【００４０】
更に別の態様では、本発明は、放射線療法を受けた対象において、放射線照射に関連する損傷を減少させる方法に関する。該方法は、対象に、本明細書に記載の有効量のトロンビンペプチド誘導体を投与することを含む。
【００４１】
「放射線照射に関連する損傷」とは、核爆発、核兵器、偶発的な放射線曝露、又は放射線療法に起因する放射線曝露による損傷である。例えば、核爆発のイベントにおいて対象が高い放射線量に曝露される場合、放射線曝露は、しばしば対象において、骨髄、脾臓、及びリンパ節への放射線照射の影響の結果として造血症候群、消化管を裏打ちする細胞への放射線照射の影響に起因する胃腸症候群（例えば腸壁の破壊）、及び脳損傷を含む急性疾患を引き起こす。放射線曝露、例えば放射線療法はまた、様々な皮膚損傷、例えば放射された部位における皮膚の強度の発赤、水疱形性、及び潰瘍形成、及び後期の皮膚破壊、並びに脱毛を引き起こす毛嚢の損傷を引き起こし得る。高用量の放射線曝露は、永久的な脱毛、脂肪分泌及び汗腺の損傷、萎縮、線維症（例えば皮下線維症）、減少又は増加した皮膚色素沈着、及び曝露された組織の潰瘍又は壊死を引き起こし得る。一つの実施形態では、放射線照射に関連する損傷は、皮膚潰瘍又は後期の破壊である。放射線曝露、例えば放射線療法はまた、筋骨格系、例えば骨、筋肉、軟骨、筋、靱帯、関節、及び結合組織を損傷し得る。一つの実施形態では、本発明は、放射線曝露される及び／又は放射線曝露された対象において、骨の治癒を促進する方法であって、前記骨が、骨折している、又は例えば骨の腫瘍を取り除くために外科的に治療されている、方法に関する。
【００４２】
一つの実施形態では、放射線療法を受ける対象において放射線関連損傷を減少させる方法のために、放射線に曝露をされる、又は曝露される予定である対象の正常組織にトロンビンペプチド誘導体を、投与する。例えば、トロンビンペプチド誘導体を、放射線に曝露される正常な皮膚に局所的に投与する。放射線療法の間、放射線は、しばしば放射線曝露を標的部位に限定できないので、放射線照射の標的部位の周りの組織の下に損傷を引き起こす。これらの正常組織への放射線関連損傷を減少させるために、トロンビンペプチド誘導体を、例えば放射線療法の前、間、又は後に、局所的に（例えば注射や持続放出装置等の埋め込みにより、又はカテーテルを通して）又は全身的に、下部組織に直接的に投与することができる。或いは、放射線療法の間又は放射線療法の後に、トロンビンペプチド誘導体を、局所的に又は全身的に投与又は送達することができる。
【００４３】
更に別の態様では、本発明は、放射線療法を受けた対象において放射線照射により誘導される疾患を発症するリスクを減少させる方法であって、本明細書に記載の有効量のトロンビンペプチド誘導体を対象に投与することを含む方法に関する。
【００４４】
「放射線照射により誘導される疾患」とは、放射線曝露により引き起こされる細胞損傷に起因する障害、疾患、又は症状を意味する。例えば、放射線への曝露は、様々な細胞損傷、例えば造血細胞に対する損傷、前駆細胞の減少した利用可能性、生存能力、及び機能、遅延した血管新生及び血管再生、腸微小血管内皮細胞、上皮細胞、腺窩細胞、脳及び他の組織中の神経細胞、並びに心筋のアポトーシスをもたらし得る。そのため、放射線照射により誘導される疾患としては、放射線曝露により引き起こされる上述の細胞損傷に起因する疾患、障害、症状が挙げられる。典型的な放射線照射により誘導される疾患としては、限定しないが、白血球減少症、好中球減少症、感染症、全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）、敗血症、多臓器不全症候群（ＭＯＤＳ）、肺障害、肺／気道疾患、脳微小血管障害、脳血管障害、脳卒中、アテローム性動脈硬化症、末梢血管損傷、末梢動脈疾患（ＰＡＤ）、糖尿病性神経障害、及び血管障害、並びに癌が挙げられる。
【００４５】
更に別の態様では、本発明は、放射線曝露により引き起こされた、及び／又は放射線に曝露される対象における創傷の治癒を促進させる方法に関する。該方法は、本明細書に記載の有効量のトロンビンペプチド誘導体を（例えば局所的に、又は全身的に、例えばＩ．Ｖ．により）創傷に投与することを含む。
【００４６】
皮膚が裂かれた、切られた又は刺された創傷（開放創）は、損傷の種類である。開放創としては、切開又は切開創（ぎざぎざでない、刃の鋭い物体、例えば、ナイフ、かみそり、又はガラスの破片により引き起こされる）；裂創（鈍的外傷により引き起こされる、一様でなく裂けたような創傷）；擦り傷；刺創；貫通創、又は銃創（身体に向かう、又は貫通する銃弾又は同様の発射物により引き起こされる）が挙げられる。
【００４７】
本明細書で用いられるように、トロンビン誘導体ペプチド、及び改変されたトロンビンペプチド誘導体、及び後述のトロンビンペプチド誘導体二量体は、集合的に「トロンビンペプチド誘導体」と称され得る。トロンビン誘導体ペプチド、改変されたトロンビンペプチド誘導体、及びトロンビンペプチド誘導体二量体のそれぞれのポリペプチドは１９〜２３個のアミノ酸を有する（即ち１９〜２３アミノ酸長）。
【００４８】
トロンビン誘導体ペプチド
トロンビンペプチド誘導体（「トロンビン誘導体ペプチド」も同様）は、トロンビンのアミノ酸配列の少なくとも一部に由来するアミノ酸配列を有するトロンビンのアナログであり、非タンパク質分解的に活性化されるトロンビン受容体（ＮＰＡＲ）において活性である。トロンビンペプチド誘導体は、例えば、組み換えＤＮＡ法により生成されるペプチド、トロンビンの酵素的消化により生成されるペプチド、及び合成的に生成されるペプチドを含み、それは、トロンビンと比較して、特に末端においてアミノ酸置換及び／又は改変されたアミノ酸を含む。
【００４９】
本発明のトロンビンペプチド誘導体は、米国特許第５，３５２，６６４号及び第５，５００，４１２号に記載のトロンビン誘導体ペプチドを含む。一つの実施形態では、本発明のトロンビンペプチド誘導体は、トロンビンペプチド誘導体、又は生理学的機能の同等物、即ち約５０個以下のアミノ酸、好ましくは約３０個以下のアミノ酸を有し、トロンビンのアミノ酸５０８〜５３０（Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｃｙｓ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ；配列番号６）に対応するヒト  トロンビンのフラグメントに対して十分な相同性を有し、ＮＰＡＲを活性化するポリペプチドである。
【００５０】
別の実施形態では、本発明のトロンビンペプチド誘導体は、構造式（Ｉ）：
Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｒ（Ｉ）
により表される部分を含んでなるトロンビンペプチド誘導体である。Ｒはセリンエステラーゼ保存ドメインである。セリンエステラーゼ、例えばトリプシン、トロンビン、及びキモトリプシン等は、高度に保存される領域を有する。「セリンエステラーゼ保存ドメイン」とは、これらの保存領域の一つのアミノ酸配列を有するポリペプチドを意味し、トロンビンペプチド誘導体がＮＰＡＲ活性化能を保持するこれらの保存領域の一つと十分な相同性を有する。
【００５１】
トロンビン誘導体の生理学的機能の同等物は、トロンビン受容体結合ドメイン又はセリンエステラーゼ保存アミノ酸配列の機能に影響を与えない態様において、トロンビン誘導体と異なる分子を含む。斯かる態様は、限定しないが、（下記で定義されるような）保存的アミノ酸置換及び改変、例えばカルボキシル末端のアミド化、アミノ末端のアセチル化、生理学的に不活性な担体分子とポリペプチドとの結合、又はセリンエステラーゼ保存配列に基づく配列改変を含んでもよい。
【００５２】
セリンエステラーゼ保存配列を有するドメインは、セリンプロテアーゼ中に高度に保存されていることがこれまでに示されているドデカペプチド（Ａｓｐ−Ｘ１−Ｃｙｓ−Ｘ２−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｘ３−Ｖａｌ；配列番号１３；ここで、Ｘ１はＡｌａ又はＳｅｒのいずれかであり、Ｘ２はＧｌｕ又はＧｌｎであり；及びＸ３は、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、Ｌｅｕ、Ｈｉｓ、又はＶａｌである）の少なくとも４〜１２個のＮ末端のアミノ酸を含むポリペプチド配列を含み得る。
【００５３】
一つの実施形態では、セリンエステラーゼ保存配列は、配列番号１４のアミノ酸配列（Ｃｙｓ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ）、又は配列番号１４のアミノ酸配列を有するポリペプチドのＣ末端切断フラグメントを含む。しかしながら、それは、セリンエステラーゼ保存配列中の０、１、２、又は３個のアミノ酸は、配列番号１４の対応するアミノ酸と異なり得ることは理解される。好ましくは、配列番号１４の対応するアミノ酸と異なるセリンエステラーゼ保存配列中のアミノ酸は、下記に定義されるような保存的置換であり、より好ましくは、高度に保存的な置換である。「Ｃ末端切断フラグメント」とは、Ｃ末端からアミノ酸又はアミノ酸のブロックを除いた後に残るフラグメント（前記フラグメントは、少なくとも６個の、より好ましくは少なくとも９個のアミノ酸を有する）を意味する。
【００５４】
別の実施形態では、セリンエステラーゼ保存配列は、配列番号１５のアミノ酸配列（Ｃｙｓ−Ｘ１−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｘ２−Ｖａｌ；Ｘ１はＧｌｕ又はＧｌｎであり、Ｘ２は、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、Ｌｅｕ、Ｈｉｓ、又はＶａｌである）、又は少なくとも６個のアミノ、好ましくは少なくとも９個のアミノ酸を有するそのＣ末端切断フラグメントを含む。
【００５５】
好ましい実施形態では、トロンビンペプチド誘導体は、セリンエステラーゼ保存配列、及びより特定のトロンビンアミノ酸配列Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ａｌａ（配列番号１６）を有するポリペプチドを含む。この種類のトロンビンペプチド誘導体の一つの例としては、Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｃｙｓ−Ｘ１−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｘ２−Ｖａｌ（配列番号１）が挙げられる。Ｘ１及びＸ２は、上記に定義される通りである。トロンビンペプチド誘導体は、配列番号６のアミノ酸配列（Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｃｙｓ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ）又はそのＮ末端切断フラグメントを含む（ただし、トロンビンペプチド誘導体の位置１〜９において０、１、２、又は３個のアミノ酸が配列番号６に対応する位置におけるアミノ酸と異なる）。好ましくは、配列番号６中の対応するアミノ酸残基と異なるトロンビンペプチド誘導体中のアミノ酸残基は、下記で定義される保存的置換であり、より好ましくは高度に保存された置換である。「Ｎ末端切断フラグメント」とは、Ｎ末端からアミノ酸又はアミノ酸ブロック、好ましくは６個以下のアミノ酸のブロック、より好ましくは３個以下のアミノ酸のブロックを取り除いた後に残るフラグメントを意味する。
【００５６】
任意で、本明細書に記載のトロンビンペプチド誘導体は、Ｃ末端においてアミド化、及び／又はＮ末端においてアシル化され得る。特定の実施形態では、トロンビンペプチド誘導体は、Ｃ末端アミドを含み、任意でアシル化されたＮ末端を含み、ここで、前記Ｃ末端アミドは−Ｃ（Ｏ）ＮＲａＲｂにより表され、Ｒａ及びＲｂは、独立して水素、Ｃ１〜Ｃ１０の置換された又は置換されていない脂肪族基である、又はＲａ及びＲｂは、これらが結合する窒素原子とともにＣ１〜Ｃ１０の非芳香族ヘテロ環基を形成し、そして前記Ｎ末端アシル基は、ＲｃＣ（Ｏ）−により表され、ＲＬが水素、Ｃ１〜Ｃ１０の置換された又は置換されていない芳香族基、又はＣ１〜Ｃ１０の置換された又は置換されていない芳香族基である。別の特定の実施形態では、トロンビンペプチド誘導体のＮ末端は、遊離（即ち未置換）であり、Ｃ末端が遊離（即ち未置換）又は好ましくは、カルボキサミド（即ち−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２）としてアミド化される。特定の実施形態では、トロンビンペプチド誘導体は、以下のアミノ酸配列：Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｃｙｓ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ（配列番号６）を含む。別の特定の実施形態では、トロンビンペプチド誘導体は、Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｃｙｓ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ（配列番号１７）のアミノ酸配列を含む。或いは、トロンビンペプチド誘導体は、配列番号１８のアミノ酸配列：Ａｓｐ−Ａｓｎ−Ｍｅｔ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｃｙｓ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｍｅｔ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅを含む。配列番号６、１７、又は１８のアミノ酸を含んでなるトロンビンペプチド誘導体は、任意で、Ｃ末端においてアミド化され、及び／又はＮ末端においてアシル化され得る。好ましくは、Ｎ末端は、遊離（即ち未置換）であり、Ｃ末端が遊離（即ち未置換）又は好ましくは、カルボキサミド（即ち−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２）としてアミド化される。しかしながら、トロンビンペプチド誘導体の位置１〜９、及び１４〜２３における、０、１、２、又は３個のアミノ酸が、配列番号６中の対応するアミノ酸と異なり得ることは、理解される。トロンビンペプチド誘導体の位置１〜１４、及び１９〜３３における、０、１、２、又は３個のアミノ酸が、配列番号１８中の対応するアミノ酸と異なり得ることはまた、理解される。好ましくは、配列番号６又は配列番号１８中の対応するアミノ酸残基と異なるトロンビンペプチド誘導体中のアミノ酸は、下記で定義される保存的置換であり、より好ましくは高度に保存された置換である。或いは、少なくとも１４個のアミノ酸を有するトロンビンペプチド誘導体のＮ末端の切断されたフラグメント、又は少なくとも１８個のアミノ酸を有するトロンビンペプチド誘導体のＣ末端の切断されたフラグメントは、本発明の方法に用いることができる。
【００５７】
「Ｃ末端切断フラグメント」とは、Ｃ末端からアミノ酸又はアミノ酸のブロックを取り除いた後に残るフラグメントを意味する。「Ｎ末端切断フラグメント」とは、Ｎ末端からアミノ酸又アミノ酸のブロックを取り除いた後に残るフラグメントを意味する。用語「Ｃ末端切断フラグメント」及び「Ｎ末端切断フラグメント」とは、上述のように、Ｎ末端におけるアシル化及び／又はＣ末端におけるアミド化を含む。
【００５８】
開示される方法に使用のための、好ましいトロンビンペプチド誘導体は、配列番号２のアミノ酸配列：Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−ＧＩｙ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｃｙｓ−Ｘ１−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｘ２−Ｖａｌを含む。開示される方法に使用のための、別の好ましいトロンビンペプチド誘導体は、配列番号１９のアミノ酸配列：Ａｓｐ−Ａｓｎ−Ｍｅｔ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｃｙｓ−Ｘ１−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｘ２−Ｖａｌ−Ｍｅｔ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅを含む。Ｘ１はＧｌｕ又はＧｌｎであり；Ｘ２は、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、Ｌｅｕ、Ｈｉｓ、又はＶａｌである。配列番号２及び配列番号１９のトロンビンペプチド誘導体は、任意で、上述のように、Ｃ末端アミド及び／又はアシル化されたＮ末端を含み得る。好ましくは、Ｎ末端は、遊離（即ち未置換）であり、Ｃ末端が遊離（即ち未置換）又は好ましくは、カルボキサミド（即ち−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２）としてアミド化される。或いは、これらの好ましいトロンビンペプチド誘導体のＮ末端切断フラグメント（前記Ｎ末端切断フラグメントは少なくとも１４個のアミノ酸を有する）、又はこれらの好ましいトロンビンペプチド誘導体のＣ末端切断フラグメント（前記Ｃ末端切断フラグメント少なくとも１８個のアミノ酸を有する）はまた、開示された方法に用いることができる。
【００５９】
ＴＰ５０８は、トロンビンペプチド誘導体の一つの例であり、２３アミノ酸残基長であり、ここで、Ｎ末端のアミノ酸残基Ａｌａは、置換されておらず、Ｃ末端のアミノ酸残基ＶａｌのＣＯＯＨは、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２により表されるアミドに改変されている（配列番号３）。トロンビンペプチド誘導体の別の例は、配列番号６のアミノ酸配列を含み、ここで双方のＮ及びＣ末端は、置換されていない（「脱アミドＴＰ５０８」）。開示される方法に用いられ得るトロンビンペプチド誘導体の他の例としては、ＴＰ５０８のＮ末端切断フラグメント（又は脱アミドＴＰ５０８）（前記Ｎ末端切断フラグメントは少なくとも１４個のアミノ酸を有する）又はＴＰ５０８（又は脱アミドＴＰ５０８）のＣ末端切断フラグメント（前記Ｃ末端切断フラグメント少なくとも１８個のアミノ酸を有する）が挙げられる。
【００６０】
本明細書では、ポリペプチド中の「保存的置換」とは、アミノ酸の、同一の正味電荷及びおおよそ同一のサイズ及び形状を有する別のアミノ酸との置換である。脂肪族、又は置換された脂肪族アミノ酸側鎖を有するアミノ酸は、これらの側鎖中の炭素及びヘテロ原子の数の合計が約４個以下で異なる場合、おおよそ同じサイズを有する。これらの側鎖中の分枝の数が１以下で異なる場合、これらはおおよそ同じ形状を有する。これらの側鎖中にフェニル又は置換されたフェニル基を有するアミノ酸は、おおよそ同じサイズ及び形状を有すると考えられる。５つのアミノ酸群を以下に列挙する。ポリペプチド中のアミノ酸を同一の群からの別のアミノ酸で置換することは、保存的置換をもたらす：
【００６１】
群Ｉ：グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、セリン、スレオニン、システイン、及びＣ１〜Ｃ４脂肪族側鎖、又はＣ１〜Ｃ４ヒドロキシル置換された脂肪族側鎖（直鎖又は一分枝鎖）を有する非天然のアミノ酸。
【００６２】
群ＩＩ：グルタミン酸、アスパラギン酸、及びカルボン酸置換されたＣ１〜Ｃ４脂肪族側鎖（無枝又は一分枝点）を有する非天然のアミノ酸。
【００６３】
群ＩＩＩ：リジン、オルニチン、アルギニン、及びアミン又はグアニジノ置換されたＣ１〜Ｃ４脂肪族側鎖（無枝又は一分枝点）を有する非天然のアミノ酸。
【００６４】
群ＩＶ：グルタミン、アスパラギン、及びアミド置換されたＣ１〜Ｃ４脂肪族側鎖（無枝又は一分枝点）を有する非天然のアミノ酸。
【００６５】
群Ｖ：フェニルアラニン、フェニルグリシン、チロシン、及びトリプトファン。
【００６６】
本明細書では、ポリペプチド中の「高度な保存的置換」とは、アミノ酸の、側鎖に同じ官能基及び、ほぼ同じサイズ及び形状を有する別のアミノ酸との置換である。脂肪族又は置換された脂肪族アミノ酸側鎖を有するアミノ酸は、これらの側鎖中の炭素及びヘテロ原子の合計数が２以下で異なる場合、ほぼ同じサイズを有する。これらの側鎖において同数の分枝鎖を有する場合、これらはほぼ同じ形状を有する。高度な保存的置換の例としては、ロイシンの代わりにバリン、セリンの代わりにスレオニン、グルタミン酸の代わりにアスパラギン酸、及びフェニルアラニンの代わりにフェニルグリシンが挙げられる。高度に保存的ではない置換の例としては、バリンの代わりにアラニン、セリンの代わりにアラニン、及びセリンの代わりにアスパラギン酸が挙げられる。
【００６７】
改変されたトロンビンペプチド誘導体
本発明の一つの実施形態では、トロンビンペプチド誘導体は、前述のトロンビンペプチド誘導体に対して改変され、ここで、前述のトロンビンペプチド誘導体のシステイン残基は、ペプチドの二量体化を最小限にするために、同様のサイズ及び電荷を有するアミノ酸で置き換えられる。好適なアミノ酸の例としては、アラニン、グリシン、セリン、又はＳ’保護システインが挙げられる。好ましくは、システインはアラニンで置換される。改変されたトロンビンペプチド誘導体は、未改変のトロンビンペプチド誘導体とおおよそ同一の生物学的活性を有する。米国特許出願公開第２００５／０１５８３０１Ａ１号明細書を参照のこと（これは、参照により本明細書に組み込まれている）。
【００６８】
本明細書で開示される改変されたトロンビンペプチド誘導体は、任意で上述のようなＣ末端アミド及び／又はＮ末端アシル基を含み得ることは理解される。好ましくは、トロンビンペプチド誘導体のＮ末端は、遊離（即ち未置換）であり、Ｃ末端は、遊離（即ち未置換）又は好ましくは、カルボキサミド（即ち−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２）としてアミド化されている。
【００６９】
特定の実施形態では、改変されたトロンビンペプチド誘導体は、配列番号４のアミノ酸配列：Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｘａａ−Ｘ１−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｘ２−Ｖａｌを有するポリペプチド、又は少なくとも６個のアミノ酸を有するそのＣ末端切断フラグメントを含む。より具体的には、トロンビンペプチド誘導体は、配列番号２０のアミノ酸配列：Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｘａａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ、又は配列番号２０のアミノ酸１０〜１８を含むそのフラグメントを含む。更により具体的には、トロンビンペプチド誘導体は、配列番号５のアミノ酸配列：Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｘａａ−Ｘ１−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｘ２−Ｖａｌ、又は配列番号５のアミノ酸１０〜１８を含むそのフラグメントを含む。Ｘａａは、アラニン、グリシン、セリン又はＳ−保護システインである。Ｘ１はＧｌｕ又はＧｌｎであり、Ｘ２は、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、Ｌｅｕ、Ｈｉｓ、又はＶａｌである。好ましくは、Ｘ１はＧｌｕであり、Ｘ２はＰｈｅであり、Ｘａａはアラニンである。この種類のトロンビンペプチド誘導体の一つの例は、アミノ酸配列Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ（配列番号２１）を有するポリペプチドである。この種類のトロンビンペプチド誘導体の更なる例は、ポリペプチドＨ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−ＮＨ２（配列番号２２）である。この種類のトロンビンペプチド誘導体の別の例は、ポリペプチドＨ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−ＮＨ２（配列番号３０）である。Ｘａａが、アラニン、グリシン、セリン又はＳ−保護システインである場合、トロンビンペプチド誘導体中の０、１、２、又は３個のアミノ酸は、配列番号４、２０、５、２１又は２２の対応する位置におけるアミノ酸と異なる。好ましくは、違いは、以下に定義するように保存的である。
【００７０】
別の特定の実施形態では、トロンビンペプチド誘導体は、配列番号２３のアミノ酸配列：Ａｓｐ−Ａｓｎ−Ｍｅｔ−Ｐｈｅ−Ｘｂｂ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｘａａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｍｅｔ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅを有するポリペプチド、又はアミノ酸６〜２８を含むそのフラグメントを含む。より好ましくは、トロンビンペプチド誘導体は、配列番号２４のアミノ酸配列：Ａｓｐ−Ａｓｎ−Ｍｅｔ−Ｐｈｅ−Ｘｂｂ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｘａａ−Ｘ１−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｘ２−Ｖａｌ−Ｍｅｔ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅを有するポリペプチド、又はアミノ酸６〜２８を含むそのフラグメントを含む。Ｘａａ及びＸｂｂは、独立してアラニン、グリシン、セリン、又はＳ−保護システインである。Ｘ１はＧｌｕ又はＧｌｎであり、Ｘ２は、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、Ｌｅｕ、Ｈｉｓ、又はＶａｌである。好ましくは、Ｘ１はＧｌｕであり、Ｘ２はＰｈｅであり、Ｘａａ及びＸｂｂはアラニンである。この種類のトロンビンペプチド誘導体の一つの例は、アミノ酸配列Ａｓｐ−Ａｓｎ−Ｍｅｔ−Ｐｈｅ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ａｌａ−ＡＩａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｍｅｔ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ（配列番号２５）を含むポリペプチドである。この種類のトロンビンペプチド誘導体の更なる例は、ポリペプチドＨ−Ａｓｐ−Ａｓｎ−Ｍｅｔ−Ｐｈｅ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｍｅｔ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−ＮＨ２（配列番号２６）である。トロンビンペプチド誘導体中の０、１、２、又は３個のアミノ酸は、配列番号２３、２４、２５又は２６の対応する位置におけるアミノ酸と異なり得る。Ｘａａ及びＸｂｂは、独立してアラニン、グリシン、セリン、又はＳ−保護システインである。好ましくは、違いは、トロンビンペプチド誘導体の保存的置換におけるように、保存的である。
【００７１】
「Ｓ−保護システイン」とは、反応性のチオール部分である−ＳＨが保護基でブロックされているシステイン残基である。好適な保護基は、当該技術分野において知られており、例えば、T. W. Greene and P. G. M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3 rd Edition, John Wiley & Sons, (1999), pp. 454-493に開示され、その教示は、その全体が参照により本明細書に組み込まれている。好適な保護基は、毒性がなく、医薬製剤において安定であるべきであり、トロンビンペプチド誘導体の活性を維持するために最小限の更なる機能性を有する。遊離のチオールは、チオエーテル、チオエステルとして保護され得、又非対称的なジスルフィドには酸化され得る。好ましくは、該チオールは、チオエーテルとして保護される。好適なチオエーテルとしては、限定しないが、Ｓ−アルキルチオエーテル（例えばＣ１−Ｃ５アルキル）、及びＳ−ベンジルチオエーテル（例えば、システイン−Ｓ−Ｓ−ｔ−Ｂｕ）が挙げられる。好ましくは、保護基は、アルキルチオエーテルである。より好ましくは、Ｓ−保護システインは、Ｓ−メチルシステインである。或いは、該保護基は：１）ジスルフィド結合によるトロンビンペプチド誘導体のシステインチオール基と結合したシステイン又はシステインを含むペプチド（「保護ペプチド」）；又は２）トロンビンペプチド誘導体のシステインチオール基と保護ペプチド中の（例えば、Ｃ末端又は側鎖のアスパラギン酸又はグルタミン酸における）カルボン酸間のチオアミド結合により結合したアミノ酸又はペプチド（「保護ペプチド」）であり得る。保護ペプチドは、生理学的に不活性（例えば、システインにより任意に遮られる約５０個以下のアミノ酸のポリグリシン、又はポリアラニン）であってもよく、又は所望の生物学的活性を有してもよい。
【００７２】
トロンビンペプチド誘導体二量体
本発明のいくつかの態様では、本方法のトロンビンペプチド誘導体は、トロンビンペプチド誘導体二量体である。米国特許出願公開２００５／０１５３８９３号を参照のこと（それは参照により本明細書に組み込まれている。）。該二量体は、本質的に単量体に戻らず、上述のようなトロンビンペプチド誘導体単量体としてほぼ同一の生物学的に活性をなおも有する。「トロンビンペプチド誘導体二量体」とは、共有結合、好ましくはシステイン残基間のジスルフィド結合により結合した二つのトロンビンペプチド誘導体を含む分子である。トロンビンペプチド誘導体二量は、典型的に、本質的には、例えば９５重量％超、好ましくは９９重量％超、対応する単量体から遊離している。好ましくは、該ポリペプチドは、同一であり、ジスルフィド結合を介して共有結合を形成する。
【００７３】
本発明のトロンビンペプチド誘導体二量体は、上述のトロンビンペプチド誘導体を含む。特に、トロンビンペプチド誘導体は、約５０個未満のアミノ酸、好ましくは約３３個未満のアミノ酸を有する。トロンビンペプチド誘導体はまた、ポリペプチドがＮＰＡＲを活性化するように、トロンビンアミノ酸残基５０８〜５３０：Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｃｙｓ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ（配列番号６）に対応するヒト  トロンビンのフラグメントと十分な相同性を有する。
【００７４】
特定の実施形態では、二量体を含む各トロンビンペプチド誘導体は、配列番号１のアミノ酸配列：Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｃｙｓ−Ｘ１−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｘ２−Ｖａｌを有するポリペプチド、又は少なくとも６個のアミノ酸を含むそのＣ末端切断フラグメントを含む。より具体的には、各トロンビンペプチド誘導体は、配列番号６のアミノ酸配列：Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｃｙｓ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ、又は配列番号５のアミノ酸１０〜１８を含むそのフラグメントを含む。さらにより具体的には、トロンビンペプチド誘導体は、配列番号２のアミノ酸配列：Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｃｙｓ−Ｘ１−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｘ２−Ｖａｌ、又は配列番号２のアミノ酸１０〜１８を含むそのフラグメントを含む。Ｘ１はＧｌｕ又はＧｌｎであり、Ｘ２は、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、Ｌｅｕ、Ｈｉｓ、又はＶａｌである。好ましくは、Ｘ１はＧｌｕであり、Ｘ２はＰｈｅである。この種類のトロンビンペプチド誘導体の一つの例は、アミノ酸配列Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｃｙｓ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ（配列番号６）を含むポリペプチドである。この種類のトロンビンペプチド誘導体の更なる例は、アミノ酸配列Ｈ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｃｙｓ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−ＮＨ２（配列番号３）を有するポリペプチドである。トロンビンペプチド誘導体中の０、１、２、又は３個のアミノ酸は、配列番号６、１、２、又は３の対応する位置におけるアミノ酸と異なる。好ましくは、違いは、トロンビンペプチド誘導体の保存的置換に関して保存的である。
【００７５】
本発明のトロンビンペプチド誘導体二量体の一つの例は、式（ＩＶ）：
【００７６】
【化１】
2013529600.tif 000003
【００７７】
により表される。
【００７８】
別の特定の実施形態では、二量体を含む各トロンビンペプチド誘導体は、配列番号２７のアミノ酸配列：Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｃｙｓ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｍｅｔ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｔｙｒを含むポリペプチド、又は少なくとも２３個のアミノ酸を有するそのＣ末端切断フラグメントを含む。より好ましくは、各トロンビンペプチド誘導体は、配列番号２８のアミノ酸配列：Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｃｙｓ−Ｘ１−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｘ２−Ｖａｌ−Ｍｅｔ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｔｙｒ又は少なくとも２３個のアミノ酸を有するそのＣ末端切断フラグメントを含む。Ｘ１はＧｌｕ又はＧｌｎであり、Ｘ２は、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、Ｌｅｕ、Ｈｉｓ、又はＶａｌである。好ましくは、Ｘ１はＧｌｕであり、Ｘ２はＰｈｅである。この種類のトロンビンペプチド誘導体の一つの例は、アミノ酸配列Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｃｙｓ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｍｅｔ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｔｙｒ（配列番号２７）を含むポリペプチドである。この種類のトロンビンペプチド誘導体の更なる例は、アミノ酸配列Ｈ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｃｙｓ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｍｅｔ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｔｙｒ−ＮＨ２（配列番号２９）を含むポリペプチドである。トロンビンペプチド誘導体中の０、１、２、又は３個のアミノ酸は、配列番号２７、２８、又は２９の対応する位置におけるアミノ酸と異なる。好ましくは、違いは、トロンビンペプチド誘導体の保存的置換に関して保存的である。
【００７９】
「対象」とは、好ましくは、ヒトであるが、本明細書に開示されるトロンビンペプチド誘導体での治療を必要とする動物、例えばペット（例えばイヌ、ネコ等）、家畜（例えばウシ、ブタ、ウマ等）、及び実験動物（例えばラット、マウス、テンジクネズミ等）でもよい。
【００８０】
「有効量」とは、治療をしない場合と比較して、トロンビンペプチド誘導体での治療を受ける疾患の改善された臨床結果をもたらす本明細書に記載のトロンビンペプチド誘導体の量である。投与するトロンビンペプチド誘導体の量は、疾患又は症状の程度、重症度及び種類、所望の治療の量、並びに医薬的製剤の放出特性に依存する。それはまた、対象の健康状態、サイズ、体重、年齢、性別及び薬物に対する耐性に依存する。典型的に、トロンビンペプチド誘導体は、所望の治療効果を達成するのに十分な期間投与される。典型的に、特に局所投与のために、約１μｇ／日〜約１ｍｇ／日のトロンビンペプチド誘導体（好ましくは約５μｇ／日〜約１００μｇ／日）が、治療を必要とする対象に投与される。トロンビンペプチド誘導体はまた、特に全身投与のために、約０．１ｍｇ／ｋｇ／日〜約１５ｍｇ／ｋｇ／日、好ましくは、約０．２ｍｇ／ｋｇ／日〜約３ｍｇ／ｋｇ／日の用量で投与することができる。本発明のトロンビンペプチド誘導体のための典型的な用量はまた、特に全身投与法ために、５〜５００ｍｇ／日、好ましくは２５〜２５０ｍｇ／日である。
【００８１】
本明細書に記載される方法では、トロンビンペプチド誘導体又は組成物は、放射線曝露の前、間、又は後に投与することができる。本明細書に記載される方法では、本発明のペプチドは、血管新生増殖因子と組み合わせて投与することができる。「血管新生増殖因子」とは、血管の発達を刺激し、例えば血管形成、内皮細胞増殖、血管の安定性、及び／又は脈管形成を促進するポリペプチドである。例えば、血管新生因子としては、限定しないが、例えばＶＥＧＦ−Ａ、及びＶＥＧＦファミリーのメンバー、ＰＩＧＦ、ＰＤＧＦファミリー、線維芽細胞増殖因子ファミリー（ＦＧＦ）、ＴＩＥリガンド（アンジオポエチン）、エフリン、ＡＮＧＰＴＬ３、ＡＮＧＰＴＬ４等が挙げられる。血管新生因子としてはまた、ポリペプチド、例えば成長ホルモン、インスリン様増殖因子−Ｉ（ＩＧＦ−Ｉ）、ＶＩＧＦ、上皮細胞増殖因子（ＥＧＦ）、ＣＴＧＦ及びそのファミリーのメンバー、並びにＴＧＦ−α及びＴＧＦ−βが挙げられる。
【００８２】
「治療すること」とは、トロンビンペプチド誘導体又はトロンビンペプチド誘導体を含む組成物を投与する期間後、有益な治療及び／又は予防結果が達成されることを意味し、それは、症状の重症度の減少、又は症状の発症の遅延若しくは阻害、増加した寿命、及び／又は疾患若しくは症状のより迅速な若しくはより完全な消散、又は観察される部位、若しくは特定の疾患若しくは障害について測定されるパラメータにより測定される他の改善された臨床結果を含み得る。
【００８３】
「リスクを減少させること」とは、対象において、疾患、傷害、又は臨床症状を発症する可能性が減少すること、ここで対象は、例えば、疾患、傷害、又は症状を発症するリスクにある対象である、を意味する。
【００８４】
「放射線関連損傷を減少させること」とは、放射線曝露により誘導される損傷の重症度の減少を意味する。
【００８５】
開示されるトロンビンペプチド誘導体は、局部的（例えば、局所に）、又は全身的に（例えば非経口投与を含む）、任意の好適な経路により投与することができる。非経口投与としては、例えば筋肉内、静脈内、皮下、若しくは腹腔内注射、又は血管投与が挙げられ、また経皮貼布、及び例えばポンプなどの埋め込まれた徐放放出装置も挙げられる。局所投与としては、例えば、クリーム、ゲル、軟膏、エアロゾルが挙げられる。呼吸器投与としては、例えば、吸入又は鼻腔内点滴が挙げられる。特定の適用のために、トロンビンペプチド誘導体を直接治療部位に注入又は埋め込むことは、有利である。トロンビンペプチド誘導体は、徐放性製剤において有利に投与することができる。トロンビンペプチド誘導体は、慢性的に投与することができ、ここで慢性的若しくは再発性の疾患若しくは症状を治療するために、間隔をおいて、又は連続送達方法により、ペプチド誘導体が長期（少なくとも６０日間、より典型的には少なくとも１年間）に亘り投与される。
【００８６】
トロンビンペプチド誘導体は、医薬組成物の一部として、許容される医薬担体と併せて、対象に投与することができる。医薬組成物の製剤は、選択される投与経路に従って変わる。好適な医薬担体は、化合物と相互作用しない不活性成分を含んでもよい。アーナー（earners）は、生物適合性を有するべきであり、即ち毒性がなく、非炎症性で、非免疫原性であり、投与部位において他の望ましくない反応をしないべきである。医薬的に許容される担体の例としては、例えば生理食塩水、エアロゾル、市販の不活性ガス、又はアルブミンが添加された液体、メチルセルロース、又はコラーゲンマトリックスが挙げられる。標準的な医薬製剤技術、例えばRemington’s Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, PAに記載されるものを、用いることができる。他の好適な医薬担体は、米国特許第７，２９４，５９６号に記載されるものが挙げられ、その技術全体は、参照により本明細書に組み込まれる。
【００８７】
本発明の方法に用いられる組成物は、トロンビンペプチド誘導体が溶解され、又は懸濁される医薬担体を更に含むことができる。医薬的に許容される担体の例としては、例えば生理食塩水、エアロゾル、市販の不活性ガス、又はアルブミンが添加された液体、メチルセルロース、又はコラーゲンマトリックスが挙げられる。斯かる製剤の典型的な例は、ゲルである。ゲルは、上述の通り、脂肪性基剤、水、又は乳化−懸濁基剤から選択される基剤からなる。基剤中のマトリックスを形成するゲル化剤は、基剤に添加され、半固体の硬さまでその粘性を増加させる。ゲル化剤の例としては、ヒドロキシプロピルセルロース、アクリル酸ポリマー等が挙げられる。活性成分は、所望の濃度で、ゲル化剤の添加の前の時点で製剤に添加され、又はゲル化プロセス後に混合され得る。
【００８８】
注入可能な送達製剤は、治療の必要な部位に、静脈に又は直接投与されてもよい。注入可能な担体は、粘性溶液、又はゲルでもよい。
【００８９】
送達製剤としては、生理食塩水、静菌性生理食塩水（約０．９％ｍｇ／ｍＬベンジルアルコールを含む生理食塩水）、リン酸緩衝生理食塩水、ハンクス溶液、リンゲル乳酸、又はアルブミン、メチルセルロース若しくはヒアルロン酸が添加された液体が挙げられる。注入可能なマトリックスとしては、ポリ（エチレンオキシド）のポリマー、及びエチレンとプロピレンオキシドのコポリマーが挙げられる（Cao et al, J. Biomater. Sci 9:475 (1998) and Sims et al, Plast Reconstr. Surg. 98:843 (1996)を参照のこと、その教示全体は、参照により本明細書に組み込まれる）。
【００９０】
組成物をカプセル化（例えば硬ゼラチン又はシクロデキストランでコーティングされた）するための方法は、当該技術分野において知られている（Baker, et al, "Controlled Release of Biological Active Agents", John Wiley and Sons, 1986）。
【００９１】
軟膏は、典型的に、例えば固定油若しくは炭化水素、例えばペトロラタム若しくは鉱物油を含む脂肪性基剤、又は例えば吸着性無水物質又は物質（複数）、例えば脱水ラノリンからなる吸着剤基剤を用いて調製される。基剤の形成に続いて、活性成分は所望の濃度で添加される。
【００９２】
クリームは、典型的に、固定油、炭化水素等、例えばワックス、ペトロラタム、鉱物油等を含む油相（内相）、並びに水及び水溶性物質、例えば付加塩を含む水相（連続槽）を含む。二つの相は、乳化剤、例えば表面活性剤、例えばラウリル硫酸ナトリウム；親水性コロイド、例えばアカシアコロイド粘土、ビーガム（ｂｅｅｇｕｍ）等の使用により安定化される。エマルジョンの形成に関して、活性成分は、所望の濃度で添加される。
【００９３】
ゲルは、上述のように、脂肪性基剤、水、又は乳化−懸濁基剤から選択される基剤を含む。基材中でマトリックスを形成するゲル化剤を基材に添加し、半固体の濃度まで粘度を増大させる。ゲル化剤の例としては、ハイドロキシプロピルセルロース、アクリル酸ポリマー等が挙げられる。活性成分は、所望の濃度で、ゲル化剤の添加の前の時点で製剤に添加される。
【００９４】
開示されるトロンビンペプチド誘導体で治療可能な疾患及び症状は、しばしば兆候及び疾病、例えば疼痛及び衰弱を伴う。特定の例では、斯かる問題を扱うために、トロンビンペプチド誘導体と一緒に１又はそれ以上の更なる薬理活性剤を共投与することは有利であり得る。例えば、疼痛及び炎症の管理に、鎮痛剤又は抗炎症剤との共投与を要求してもよい。感染症の管理に、抗菌剤、抗生物質又は殺菌剤との共投与を要求してもよい。
【００９５】
トロンビンペプチド誘導体は、単独で、又は１若しくはそれ以上の治療薬、例えば、コレステロール降下薬、抗高血圧剤、ベータ遮断薬、抗凝血剤、血栓溶解剤、鎮痛剤、抗炎症剤、抗歯垢形成剤、インスリン、酸化窒素発生剤、抗ウイルス剤、又は抗生物質と組み合わせて対象に投与することができる。一つの方法では、トロンビンペプチド誘導体は、アルギニン、例えば経口栄養剤としてアルギニンと組み合わせて、対象に投与され得る。
【００９６】
トロンビンペプチド誘導体及び改変されたトロンビンペプチド誘導体は、固相ペプチド合成（例えばＢＯＣ又はＦＭＯＣ）法により、液相合成により、又は上述の方法の組み合わせを含む他の好適な技術により、合成することができる。確立され、広く用いられているＢＯＣ及びＦＭＯＣ法は、Merrifield, J. Am. Chem. Sot: 88:2149 (1963); Meienhofer, Hormonal Proteins and Peptide s, C.H. Li, Ed., Academic Press, 1983, pp. 48-267;及びBarany and Merrifield, in The Peptides, E. Gross and J. Meienhofer, Eds., Academic Press, New York, 1980, pp. 3-285に記載される。固相ペプチド合成の方法は、Merrifield, R.B., Science, 232: 341 (1986); Carpino, L.A. and Han, G.Y., J. Org. Chem., 37: 3404 (1972); and Gauspohl, H. et al, Synthesis, J: 315 (1992)に記載される。これらの６つの文献の教示は、その全体が参照により本明細書に組み込まれている。
【００９７】
トロンビンペプチド誘導体二量体は、単量体の酸化により調製することができる。トロンビンペプチド誘導体二量体は、過剰な酸化剤とトロンビンペプチド誘導体とを反応させることにより調製することができる。よく知られている好適な酸化剤は、ヨウ素である。
【００９８】
本明細書では、「非芳香族複素環基」とは、３〜１０個の原子を有し、少なくとも一つのヘテロ原子、例えば窒素、酸素、又は硫黄を含む非芳香族炭素環である。非芳香族複素環基の例としては、ピペラジニル、ピペリジニル、ピロリジニル、モルホリニル、チオモルホリニルが挙げられる。
【００９９】
「アルキル」とは、直鎖又は分枝鎖の飽和した炭化水素ラジカルである。典型的に、アルキル基は、１〜約１０個の炭素原子、好ましくは１〜約４個の炭素原子を有する。典型的なアルキル基は、限定しないが、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉｓｏ−プロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、シクロペンチル、ヘキシル、シクロヘキシル、オクチル、及びシクロオクチルが挙げられる。
【実施例】
【０１００】
本発明は、以下の実施例により例証され、それは、いかなる方法においても限定することを意図しない。
【０１０１】
実施例１．  放射線に曝露されたヒト微小血管内皮細胞（ＨＭＶＥＣ）のアポトーシスに関するＴＰ５０８の効果
ヒト皮膚微小血管内皮細胞（ＨＭＶＥＣ）に、５、１０、及び２０Ｇｙの曝露を供給するために、J.L., Shepherd & Associates, Mark 1, 9K, 137 Cs Gamma Irradiatorを用いて放射線照射した。放射線照射後、細胞に、３０ｕ−ｇ／ｍｌ  ＴＰ５０８又は生理食塩水（未処理）を与えた。３時間後、細胞を、Caspase-Glo（登録商標）3/7Assay（Promega, Madison, WI）を用いるアポトーシスの測定として、カスパーゼ−３及びカスパーゼ−７の活性化について評価した。図１に示すように、放射線照射は、カスパーゼ３／７活性の用量依存的な増加を引き起こした。しかしながら、これらの細胞のＴＰ５０８処理は、カスパーゼ３／７の放射線に誘導される活性化を著しく減少させた。このデータは、ＴＰ５０８が、放射線照射により誘導される微小血管内皮細胞においてアポトーシスを減衰させることを示した。
【０１０２】
実施例２．  ８Ｇｙの放射線曝露後のマウス生存率に関するＴＰ５０８の効果
Ｓｗｉｓｓ  ＩＣＲマウスに、８Ｇｙ又は３Ｇｙの曝露で放射線照射をした（137 Cs Gamma Irradiator Mark 30, Shephard and Associates, San Fernando, CA）。４時間〜２４時間後、マウスを、麻酔し、手術のために準備した。一つの１．５ｃｍ平方の完全な皮膚の切除を行い、生理食塩水（２５μｌ）又はＴＰ５０８（０．２５μｌ）を加えた生理食塩水で局所的に処置し、Opsite（登録商標）閉鎖包帯で覆った。複合的な放射線損傷を受けたマウスの生存率は著しく減少した（下記の表１）。放射線曝露の２４時間後に、マウスにＴＰ５０８を注射した場合、生存率の著しい増加が観察された（表１を参照のこと）。ＴＰ５０８での創傷の局所処置をしたマウスにおいて、生存率の増加がまた、観察された（表１及び図２）。
【０１０３】
表１．  複合的な放射線損傷を有するマウスの生存率に関するＴＰ５０８の効果
【表１】
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【０１０４】
実施例３．  致死量の１２Ｇｙでの放射線曝露後のマウス生存率に関するＴＰ５０８の効果
マウスを、致死量の１３７Ｃｓガンマ線放射（１２Ｇｙ）に曝露した。曝露後２時間以内のＴＰ５０８の単回のボーラス用量（５００μｇ）の注射は、処理される群において最初のマウスの死亡を３日遅らせ、群の平均生存時間を約１５％増加させた（図３を参照のこと）。ＴＰ５０８は、短い半減期を有し、従って、最初の２〜３時間のみ有効濃度で血液に存在することができる。これは、ＴＰ５０８が生存率を数日間延長する理由を説明することができる。
【０１０５】
実施例４．  放射線照射後の動物の血液中における細菌増殖に関するＴＰ５０８の効果
致死量の放射線照射は、腸管の破壊や死亡を導く敗血症性感染により、しばしば死亡を引き起こす。従って、放射線照射したマウスにおいて、ＴＰ５０８の細菌敗血症性感染症の発症を遅らせる効果を測定した。血液は、放射線照射後、様々な日に放射線照射したマウスから採取した（実施例３を参照のこと）。各マウス（３匹のマウス／群）からの血液を、その後希釈し、培養し、１ｍｌの血液あたりのコロニー形成単位（ＣＦＵ）として定量される生菌数を測定した。図４に示すように、放射線照射の６日後（ＰＩ）、生菌は、放射線照射しプラセボ処置したマウスの血液中に存在したが、ＴＰ５０８処置したマウスには存在しなかった。７日では、プラセボ処置したマウスは、平均で１．６ｘ１０６ＣＦＵ／ｍｌを有する一方で、ＴＰ５０８を注射したマウスは、平均で１００ＣＦＵ／ｍｌをちょうど上回り、ちょうど感染を示し始めた。
【０１０６】
実施例５．  開放皮膚創傷の治癒に関するＴＰ５０８の効果
Ｓｗｉｓｓ  ＩＣＲマウスを、８Ｇｙ又は３Ｇｙの曝露で放射線照射した（137 Cs Gamma Irradiator Mark 30, Shephard and Associates, San Fernando, CA）。４時間〜２４時間後、マウスを麻酔し、手術のために準備した。一つの１．５ｃｍ平方の完全な皮膚の切除を行い、生理食塩水（２５ｕｌ）又はＴＰ５０８（０．３ｕｇ）を加えた生理食塩水で局所的に処置し、Opsite（登録商標）閉鎖包帯で覆った。８Ｇｙでの放射線照射の４時間後、放射線照射は、皮膚創傷を受けたマウスにおいて創傷治癒を遅らせたが、ＴＰ５０８での単回局所処置は治癒を加速した。これらの創傷の５０％創傷閉合までの時間は、放射線照射されていない対照について９．２日；８ＧＹ＋生理食塩水について１３．０日；及び８Ｇｙ＋ＴＰ５０８について８．９日であった。従って、ＴＰ５０８は、放射線照射したマウスに対する治癒速度を正常に戻すと見られる。これは、これらの創傷において治癒の線形速度を計算することにより確認された（図５を参照のこと）。興味深いことに、全ての群についての治癒の線形速度は、創傷形成後の最初の５日間は同様であり、おそらく放射線照射に影響を受けない収縮に起因する。５〜１６日間では、しかしながら、放射線照射は、治癒を著しく害するが、ＴＰ５０８処置は、この減損を克服する。
【０１０７】
二度目の実験では、３Ｇｙの曝露を受けたマウスは、放射線照射の２４時間後、皮膚創傷手術を受けた。これらの創傷はまた、放射線照射されていない対照マウスと比較して、遅延された治癒を例証した。８Ｇｙの曝露実験のように、ＴＰ５０８局所処置は、治癒を加速し、放射線照射の影響を克服した。これらの実験では、我々はまた、創傷閉合に関するＴＰ５０８の曝露後ＩＶ注射の効果を評価した。創傷形成の約２０時間前のＴＰ５０８のＩＶ注射はまた、創傷の閉合を加速し、局所処置よりもわずかに早く創傷を閉合する傾向があった。この僅かな違いはまた、放射線照射されていない対照、３Ｇｙ生理食塩水対照、３Ｇｙ局所ＴＰ５０８、及び４Ｇｙ  ＩＶ  ＴＰ５０８間の線形的な創傷治癒の速度の比較においても見られる。ＩＶと局所的ＴＰ５０８処置との組み合わせは、ＩＶ治療単独と異なるように見えなかった。
【０１０８】
実施例６．  腸陰窩前駆細胞のアポトーシス、増殖及び移動に関するＴＰ５０８の効果
曝露の５日後において、１２Ｇｙの全身照射で曝露したマウスから得た空腸の組織切片は、タネル（tunnel）染色により調べられるように、腸陰窩内に多数のアポトーシスを起こした細胞を含む。ＴＰ５０８を注入したマウスは、より少ないアポトーシスを起こした細胞を有するように見える。ＴＰ５０８の効果は、曝露後２及び１２日において、ＥｄＵ取り込み（ＤＮＡ合成）を測定することにより確認され、Click IT（登録商標）での２４時間のインキュベーション期間において、ＤＮＡを合成する細胞を可視化した。放射線曝露の増加に伴い、より少ない腺窩細胞が２日後増殖を続ける。対照的に、３Ｇｙ曝露を受けた陰窩の中でも、ＴＰ５０８注射を受けた、増殖及び移動する細胞の数は、非照射（０Ｇｙ）対照と等しい。８Ｇｙの区分では、おおよそ同数の細胞が標識され、しかしＴＰ５０８群では、細胞は絨毛にさらに移動する傾向がある。１５Ｇｙ曝露後でさえ、いくらかの腺窩細胞は、ＴＰ５０８で処置された動物の陰窩において、増殖を続ける。８Ｇｙ曝露の１２日後でさえ、腺窩細胞の増殖及び移動は減少するが、それにも関わらず、ＴＰ５０８で処置した動物において、増殖及び移動は、対照レベルまで完全に保持しているようにみえる。
【０１０９】
実施例７．  放射線照射及びＲＣＩに誘導されるＩＬ−６の上方調節に関するＴＰ５０８の効果
ＩＣＲ白色雄性マウスを、０Ｇｙ（対照）又は８Ｇｙのガンマ線に曝露し、２４時間後に傷つけた。創傷を、局所的に、生理食塩水プラセボ（Ｐ）又は生理食塩水中ＴＰ５０８（ＴＰｔ）で処置した。別々の群のマウスは、８Ｇｙ曝露の２時間後、５００マイクログラムのＴＰ５０８をＩＶで注射した。１１日後、酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）を用いて、マウスからの血清をＩＬ−６Ａの量について分析した（図６、パネルＡ）。
【０１１０】
ＩＣＲ白色雄性マウスを傷つけることなく０Ｇｙ又は１２Ｇｙの核照射に曝露し、曝露後に、プラセボ又はＴＰ５０８をＩＶで注射した。７日後にマウスから血清を単離し、酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）により、ＩＬ−６の量を測定した（図６、パネルＢ）。
【０１１１】
８Ｇｙ放射線曝露と創傷との組み合わせは、創傷単独よりもＩＬ−６レベルを増加させる。創傷の局所ＴＰ５０８処置は、ＩＬ−６レベルを約７５％に減少させる。ＴＰ５０８の全身的なＩＶ注射は、ＩＬ−６レベルを９０％超に減少させる。創傷のない１２Ｇｙの曝露単独はまた、ＩＬ−６レベルを増加させる。ＴＰ５０８注射は、７日目において測定されるＩＬ−６産生を約５０％に減少させる。
【０１１２】
ＩＬ−６増加は死亡率及び全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）の発症と相関するので、これらの結果は、ＴＰ５０８が、放射線照射又は損傷と組み合わされた放射線照射により発症する全身性炎症反応症候群を減少させることを示す。
【０１１３】
実施例８．  大動脈移植片内皮細胞出芽アッセイにより示される内皮機能に関するＴＰ５０８の効果
ＴＰ５０８が内皮機能の維持を助けるかどうかを調べるために、確立された血管形成アッセイを用いた。これらの実験では、マウスを、非照射、又は３Ｇｙ、８Ｇｙ又は１０Ｇｙで照射した。曝露の約２時間後、マウスに、生理食塩水、又はＴＰ５０８（１５ｍｇ／ｋｇ）を加えた生理食塩水を、ＩＶで注射した。マウスを、曝露の２４時間後に屠殺し、大動脈を取り除き、大動脈切片を、matrigel（登録商標）上に置き、ＶＥＧＦ及びＦＧＦ２を含む増殖サプリメントを含む内皮増殖培地中で５日間培養した。照射していない対照（０Ｇｙ）では、ＴＰ５０８は、出芽又は長い出芽突起が占める面積を測定することにより測定されるように、５日間のインキュベーションで、大動脈切片からの内皮出芽の量を２倍超にした。３Ｇｙを照射したマウスからの大動脈切片移植片は、生理食塩水を注射した群において幾らかの出芽を有したが、先の場合と同様に、この出芽はＴＰ５０８を注射したマウスにおいて２倍超であった。８Ｇｙ及び１０Ｇｙの群では、プラセボマウスから単離した大動脈切片からは実質的に出芽しなかった一方で、Ｔ５０８処置したマウスからの移植片の端においては、明らかな出芽が観察され続けた。
【０１１４】
実施例９．  骨髄前駆細胞の造血回復及び増殖増加に関するＴＰ５０８の効果
曝露していない、及び曝露後にＴＰ５０８注射を受けた又は受けていない８Ｇｙで曝露したマウスから骨髄を単離した。サンプルを、完全血球算定（ＣＢＣ）分析に供し、それは、ＴＰ５０８で処置したマウスにおける白血球、赤血球、及び血小板の早期回復を示した。この結果は、ＴＰ５０８が造血を刺激する、又は骨髄細胞（ＢＭＣ）を保護することを示す。
【０１１５】
８Ｇｙで曝露の８日後の骨髄の組織構造は、０Ｇｙのマウスと比較して、８Ｇｙ照射したマウスの骨髄中のＢＭＣの枯渇を示す。これらのマウスのＴＰ５０８処置は、ＢＭＣの数及び密度を増加させる。
【０１１６】
この発見は、ＥｄＵ取り込み（ＤＮＡ合成）により確認された。曝露後１２日において、８Ｇｙ曝露したマウスにおける限られた程度の回復を示すＢＭＣのいくつかの新しい増殖が存在する。ＴＰ５０８処置を受けた８Ｇｙマウスにおいて、ＢＭＣの３〜５倍超の増殖が観察された。従って、ＴＰ５０８の単回曝露後注射は、ＢＭＣについての回復的特性を有するイベントのカスケードを開始する。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【国際調査報告】
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