(57)【要約】  本発明は、トリカルボニルテクネシウム−９９ｍまたはレニウム−１８８標識サイクリックＲＧＤ誘導体、その製造方法及びそれを有効成分として含む新生血管関連疾患の診断または治療用薬学的組成物に関するもので、本発明のトリカルボニルテクネシウム−９９ｍまたはレニウム−１８８標識サイクリックＲＧＤ誘導体は、腫瘍によって誘導される新生血管作用で活性化したビトロネクチン受容体とも呼ばれるαｖβ３インテグリンにサブナノモル単位の高い親和度を有し、癌細胞が移植された動物でトリカルボニルテクネシウム−９９ｍ標識サイクリックＲＧＤ誘導体の初期摂取後、高い腫瘍映像を反映して肝臓と腸での摂取率が、既存に知られた放射性同位元素標識サイクリックＲＧＤ誘導体に比べて顕著に低く、選択的にαｖβ３インテグリンが活性化した癌細胞にのみ作用することが分かり、このような結果を基に、テクネシウム−９９ｍ標識に使用した同一な前駆体を用いた治療核種であるレニウム−１８８標識誘導体の場合、生理食塩水のみ注入した腫瘍動物モデルとは異なり、尾静脈注入時に効果的な腫瘍の成長阻害と治療効能を示すので、新生血管関連疾患の診断または治療用医薬品として有用に用いることができる。
2013533852.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記化学式１で表されるトリカルボニルテクネシウム−９９ｍまたはレニウム−１８８標識サイクリックＲＧＤ誘導体またはその薬学的に許容可能な塩：
【化１】
2013533852.tif 000039
（前記化学式１で、Ｍは９９ｍＴｃ、１８８Ｒｅまたは１８５，１８７Ｒｅで、
Ｒ１は、Ｎ，Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨまたはＮ（ＣＨ２ＣＯＮＨ）ｎＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨで、Ｘは直接結合、
【化２】
2013533852.tif 000040
または、
【化３】
2013533852.tif 000041
で、ここで、Ａ１およびＡ２は、各々アスパラギン酸、リジン、グルタミン酸、チロシン、システイン、スレオニンおよびセリンからなる群から選択されるアミノ酸で、Ｒ２はＮＨまたはＮＨ（Ｚ）ｎＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨで、
Ｚは−ＣＨ２ＣＨ２Ｏ−または−ＣＨ２ＣＯＮＨ−で、
ｎは０ないし８の整数で、Ｙは、
【化４】
2013533852.tif 000042
で、ここでＲ３はＨまたはＯＨで、Ｒ４は−（ＣＨ２）ｍ−または−（ＣＨ２）ｍ−ＣＯＯ−で、ｍは１ないし８の整数で、ＹはＲ１に直接結合するか、Ｘの中でＲ２に結合する）
【請求項２】
前記トリカルボニルテクネシウム−９９ｍまたはレニウム−１８８標識サイクリックＲＧＤ誘導体が、下記化学式１Ａないし化学式１Ｃで表される化合物の群から選択されることを特徴とする、請求項１に記載のトリカルボニルテクネシウム−９９ｍまたはレニウム−１８８標識サイクリックＲＧＤ誘導体またはその薬学的に許容可能な塩。
【化５】
2013533852.tif 000043
【化６】
2013533852.tif 000044
【化７】
2013533852.tif 000045
（前記化学式１Ａないし１Ｃにおいて、前記Ｍ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ａ１およびＡ２は、請求項１の化学式１で定義したのと同様である）
【請求項３】
前記トリカルボニルテクネシウム−９９ｍまたはレニウム−１８８標識サイクリックＲＧＤ誘導体は、
１）サイクリック｛（トリカルボニル［９９ｍＴｃ］テクネシウム−Ｎ−α−ビス−ヒドロキシカルボニルメチル−リジン）−アルギニン−グリシン−アスパラギン酸−Ｄ−フェニルアラニン｝、
２）サイクリック｛（トリカルボニル［１８８Ｒｅ］レニウム−Ｎ−α−ビス−ヒドロキシカルボニルメチル−リジン）−アルギニン−グリシン−アスパラギン酸−Ｄ−フェニルアラニン｝、
３）サイクリック｛（トリカルボニル−［１８５，１８７Ｒｅ］レニウム−Ｎ−α−ビス−ヒドロキシカルボニルメチル−リジン）−アルギニン−グリシン−アスパラギン酸−Ｄ−フェニルアラニン｝、
４）サイクリック｛（トリカルボニル［９９ｍＴｃ］テクネシウム−Ｎ−α−ビス−ヒドロキシカルボニルメチル−ＮＨ２（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）４ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ−リジン）−アルギニン−グリシン−アスパラギン酸−Ｄ−フェニルアラニン｝、
５）サイクリック｛（トリカルボニル［１８８Ｒｅ］レニウム−Ｎ−α−ビス−ヒドロキシカルボニルメチル−ＮＨ２（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）４ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ−リジン）−アルギニン−グリシン−アスパラギン酸−Ｄ−フェニルアラニン｝、
６）サイクリック｛（トリカルボニル−［１８５，１８７Ｒｅ］レニウム−Ｎ−α−ビス−ヒドロキシカルボニルメチル−ＮＨ２（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）４ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ−リジン）−アルギニン−グリシン−アスパラギン酸−Ｄ−フェニルアラニン｝、
７）サイクリック｛（トリカルボニル［９９ｍＴｃ］テクネシウム−Ｎ−α−ビス−ヒドロキシカルボニルメチル−グリシン−ＣＯＮＨ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）４ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ−リジン）−アルギニン−グリシン−アスパラギン酸−Ｄ−フェニルアラニン｝、
８）サイクリック｛（トリカルボニル［１８８Ｒｅ］レニウム−Ｎ−α−ビス−ヒドロキシカルボニルメチル−グリシン−ＣＯＮＨ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）４ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ−リジン）−アルギニン−グリシン−アスパラギン酸−Ｄ−フェニルアラニン｝、
９）サイクリック｛（トリカルボニル−［１８５，１８７Ｒｅ］レニウム−Ｎ−α−ビス−ヒドロキシカルボニルメチル−グリシン−ＣＯＮＨ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）４ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ−リジン）−アルギニン−グリシン−アスパラギン酸−Ｄ−フェニルアラニン｝、
１０）（トリカルボニル［９９ｍＴｃ］テクネシウム−Ｎ−α−ビス−ヒドロキシカルボニルメチル−アスパラギン酸）−［サイクリック（リジン−アルギニン−グリシン−アスパラギン酸−Ｄ−フェニルアラニン）］２、
１１）（トリカルボニル［１８８Ｒｅ］レニウム−Ｎ−α−ビス−ヒドロキシカルボニルメチル−アスパラギン酸）−［サイクリック（リジン−アルギニン−グリシン−アスパラギン酸−Ｄ−フェニルアラニン）］２、
１２）（トリカルボニル−［１８５，１８７Ｒｅ］レニウム−Ｎ−α−ビス−ヒドロキシカルボニルメチル−アスパラギン酸）−［サイクリック（リジン−アルギニン−グリシン−アスパラギン酸−Ｄ−フェニルアラニン）］２、
１３）｛トリカルボニル［９９ｍＴｃ］テクネシウム−Ｎ−α−ビス−ヒドロキシカルボニルメチル−（ポリエチレングリコール）ｎ−アスパラギン酸｝−［サイクリック（リジン−アルギニン−グリシン−アスパラギン酸−Ｄ−フェニルアラニン）］２、（ｎ＝０−８）、
１４）｛トリカルボニル［１８８Ｒｅ］レニウム−Ｎ−α−ビス−ヒドロキシカルボニルメチル−（ポリエチレングリコール）ｎ−アスパラギン酸｝−［サイクリック（リジン−アルギニン−グリシン−アスパラギン酸−Ｄ−フェニルアラニン）］２、（ｎ＝０−８）、
１５）｛トリカルボニル−［１８５，１８７Ｒｅ］レニウム−Ｎ−α−ビス−ヒドロキシカルボニルメチル−（ポリエチレングリコール）ｎ−アスパラギン酸｝−［サイクリック（リジン−アルギニン−グリシン−アスパラギン酸−Ｄ−フェニルアラニン）］２、（ｎ＝０−８）、
１６）｛トリカルボニル［９９ｍＴｃ］テクネシウム−Ｎ−α−ビス−ヒドロキシカルボニルメチル−（ポリエチレングリコール）ｎ−アスパラギン酸｝−｛（ポリエチレングリコール）ｎ−［サイクリック（リジン−アルギニン−グリシン−アスパラギン酸−Ｄ−フェニルアラニン）］｝２、（ｎ＝０−８）、
１７）｛トリカルボニル［１８８Ｒｅ］レニウム−Ｎ−α−ビス−ヒドロキシカルボニルメチル−（ポリエチレングリコール）ｎ−アスパラギン酸｝−｛（ポリエチレングリコール）ｎ−［サイクリック（リジン−アルギニン−グリシン−アスパラギン酸−Ｄ−フェニルアラニン）］｝２、（ｎ＝０−８）、
１８）｛トリカルボニル−［１８５，１８７Ｒｅ］レニウム−Ｎ−α−ビス−ヒドロキシカルボニルメチル−（ポリエチレングリコール）ｎ−アスパラギン酸｝−｛（ポリエチレングリコール）ｎ−［サイクリック（リジン−アルギニン−グリシン−アスパラギン酸−Ｄ−フェニルアラニン）］｝２、（ｎ＝０−８）、
１９）（トリカルボニル［９９ｍＴｃ］テクネシウム−Ｎ−α−ビス−ヒドロキシカルボニルメチル−アスパラギン酸）−｛アスパラギン酸−［サイクリック（リジン−アルギニン−グリシン−アスパラギン酸−Ｄ−フェニルアラニン）］２｝４、
２０）（トリカルボニル［１８８Ｒｅ］レニウム−Ｎ−α−ビス−ヒドロキシカルボニルメチル−アスパラギン酸）−｛アスパラギン酸−［サイクリック（リジン−アルギニン−グリシン−アスパラギン酸−Ｄ−フェニルアラニン）］２｝４、
２１）（トリカルボニル−［１８５，１８７Ｒｅ］レニウム−Ｎ−α−ビス−ヒドロキシカルボニルメチル−アスパラギン酸）−｛アスパラギン酸−［サイクリック（リジン−アルギニン−グリシン−アスパラギン酸−Ｄ−フェニルアラニン）］２｝４、
２２）｛トリカルボニル［９９ｍＴｃ］テクネシウム−Ｎ−α−ビス−ヒドロキシカルボニルメチル−（ポリエチレングリコール）ｎ−アスパラギン酸｝−｛アスパラギン酸−［サイクリック（リジン−アルギニン−グリシン−アスパラギン酸−Ｄ−フェニルアラニン）］２｝４、（ｎ＝０−８）、
２３）｛トリカルボニル［１８８Ｒｅ］レニウム−Ｎ−α−ビス−ヒドロキシカルボニルメチル−（ポリエチレングリコール）ｎ−アスパラギン酸｝−｛アスパラギン酸−［サイクリック（リジン−アルギニン−グリシン−アスパラギン酸−Ｄ−フェニルアラニン）］２｝４、（ｎ＝０−８）、
２４）｛トリカルボニル−［１８５，１８７Ｒｅ］レニウム−Ｎ−α−ビス−ヒドロキシカルボニルメチル−（ポリエチレングリコール）ｎ−アスパラギン酸｝−｛アスパラギン酸−［サイクリック（リジン−アルギニン−グリシン−アスパラギン酸−Ｄ−フェニルアラニン）］２｝４、（ｎ＝０−８）、
２５）｛トリカルボニル［９９ｍＴｃ］テクネシウム−Ｎ−α−ビス−ヒドロキシカルボニルメチル−（ポリエチレングリコール）ｎ−アスパラギン酸｝−｛アスパラギン酸−（ポリエチレングリコール）ｎ−［サイクリック（リジン−アルギニン−グリシン−アスパラギン酸−Ｄ−フェニルアラニン）］２｝４、（ｎ＝０−８）、
２６）｛トリカルボニル［１８８Ｒｅ］レニウム−Ｎ−α−ビス−ヒドロキシカルボニルメチル−（ポリエチレングリコール）ｎ−アスパラギン酸｝−｛アスパラギン酸−（ポリエチレングリコール）ｎ−［サイクリック（リジン−アルギニン−グリシン−アスパラギン酸−Ｄ−フェニルアラニン）］２｝４、（ｎ＝０−８）、及び
２７）｛トリカルボニル−［１８５，１８７Ｒｅ］レニウム−Ｎ−α−ビス−ヒドロキシカルボニルメチル−（ポリエチレングリコール）ｎ−アスパラギン酸｝−｛アスパラギン酸−（ポリエチレングリコール）ｎ−［サイクリック（リジン−アルギニン−グリシン−アスパラギン酸−Ｄ−フェニルアラニン）］２｝４、（ｎ＝０−８）からなる群から選択されることを特徴とする、請求項１に記載のトリカルボニルテクネシウムまたはレニウム標識サイクリックＲＧＤ誘導体またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項４】
下記スキーム１に示したように、
化学式２の前駆体化合物にトリカルボニルテクネシウム−９９ｍまたはトリカルボニルレニウム−１８８を反応させて化学式１のトリカルボニルテクネシウム−９９ｍまたはトリカルボニルレニウム−１８８が標識されたサイクリックＲＧＤ誘導体を製造する工程を含む、請求項１のトリカルボニルテクネシウムまたはレニウム標識サイクリックＲＧＤ誘導体の製造方法：
【化８】
2013533852.tif 000046
（前記スキーム１で、Ｍは９９ｍＴｃまたは１８８Ｒｅで、Ｒ１、Ｘ及びＹは請求項１の化学式１で定義したのと同様である）
【請求項５】
第４項において、前記工程が、トリカルボニルテクネシウム−９９ｍまたはトリカルボニルレニウム−１８８を蒸留水溶媒０．５〜５ｍｌに希釈して、化学式２の前駆体が入っている反応容器に入れて、７０〜８０℃で３０〜６０分間加熱して反応させることで、化学式１のトリカルボニルテクネシウム−９９ｍまたはトリカルボニルレニウム−１８８が標識されたサイクリックＲＧＤ誘導体を製造することを特徴とする、請求項４に記載の製造方法。
【請求項６】
下記スキーム２に示したように、
化学式２の前駆体化合物に（ＮＥｔ４）２Ｒｅ（ＣＯ）３Ｂｒ３を入れて反応させて、化学式１Ａのトリカルボニル１８５，１８７Ｒｅが導入されたサイクリックＲＧＤ誘導体を製造する工程を含む、請求項１のトリカルボニルテクネシウム−９９ｍまたはレニウム−１８８標識サイクリックＲＧＤ誘導体の製造方法：
【化９】
2013533852.tif 000047
（前記スキーム２で、Ｒ１、Ｘ及びＹは請求項１の化学式１で定義したのと同様で、化学式１Ａは第１項の化学式１に含まれる）
【請求項７】
第６項において、前記工程が、試薬（ＮＥｔ４）２Ｒｅ（ＣＯ）３Ｂｒ３を蒸留水溶媒０．５〜５ｍｌに希釈して、化学式２の前駆体が入っている反応容器に入れて、７０〜８０℃で５５〜６５分間加熱して反応させることで、化学式１ａのトリカルボニル１８５，１８７Ｒｅが導入されたサイクリックＲＧＤ誘導体を製造することを特徴とする、請求項６に記載の製造方法。
【請求項８】
請求項１のトリカルボニルテクネシウム−９９ｍ標識サイクリックＲＧＤ誘導体またはその薬学的に許容可能な塩を有効成分として含む新生血管関連疾患診断用薬学的組成物。
【請求項９】
前記組成物が、対象に静脈注射で投与され、単光子放射型コンピュータ断層撮影によって新生血管関連疾患を診断することを特徴とする、請求項８に記載の診断用薬学的組成物。
【請求項１０】
前記新生血管関連疾患が、血栓症、心筋虚血、固形化腫瘍及び転移癌からなる群から選ばれるαｖβ３インテグリンが過多に分布する疾患であることを特徴とする、請求項８に記載の診断用薬学的組成物。
【請求項１１】
請求項１のトリカルボニルレニウム−１８８標識サイクリックＲＧＤ誘導体またはその薬学的に許容可能な塩を有効成分として含む新生血管関連疾患治療用薬学的組成物。
【請求項１２】
前記組成物が、対象に静脈注射で投与されることを特徴とする、請求項１１に記載の新生血管関連疾患治療用薬学的組成物。
【請求項１３】
前記新生血管関連疾患が、血栓症、心筋虚血、固形化腫瘍及び転移癌からなる群から選ばれるαｖβ３インテグリンが過多に分布する疾患であることを特徴とする、請求項１１に記載の悪性腫瘍治療用薬学的組成物。
【請求項１４】
対象に、請求項１のトリカルボニルテクネシウム−９９ｍ標識サイクリックＲＧＤ誘導体またはその薬学的に許容可能な塩を、診断学的で有効な量で投与する工程を含む対象内の新生血管関連疾患の診断方法。
【請求項１５】
前記トリカルボニルテクネシウム−９９ｍ標識サイクリックＲＧＤ誘導体またはその薬学的に許容可能な塩が、対象に静脈注射で投与され、単光子放射型コンピュータ断層撮影によって新生血管関連疾患を診断することを特徴とする、請求項１４に記載の新生血管関連疾患の診断方法。
【請求項１６】
前記新生血管関連疾患が、血栓症、心筋虚血、固形化腫瘍及び転移癌からなる群から選ばれるαｖβ３インテグリンが過多に分布する疾患であることを特徴とする、請求項１４に記載の悪性腫瘍の診断方法。
【請求項１７】
下記化学式２で表されるテクネシウム−９９ｍまたはレニウム−１８８標識のためのサイクリックＲＧＤ誘導体前駆体：
【化１０】
2013533852.tif 000048
（前記化学式２において、Ｒ１、Ｘ及びＹは、請求項１の化学式１で定義したのと同様である）
【請求項１８】
前記トリカルボニルテクネシウム−９９ｍまたはレニウム−１８８標識のためのサイクリックＲＧＤ誘導体の前駆体が、下記化学式２Ａないし化学式２Ｃで表される化合物の群から選択されることを特徴とする、請求項１７に記載の前駆体。
【化１１】
2013533852.tif 000049
【化１２】
2013533852.tif 000050
【化１３】
2013533852.tif 000051
（前記化学式２Ａないし２Ｃにおいて、前記Ｍ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ａ１およびＡ２は、請求項１の化学式１で定義したのと同様である）
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、トリカルボニルテクネシウム−９９ｍまたはレニウム−１８８標識サイクリックＲＧＤ誘導体、その製造方法及びそれを有効成分として含む新生血管関連疾患の診断または治療用薬学的組成物に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
癌の完全治癒が現代医学の重要課題になった時点で、標的分子と特異的に反応する放射性追跡子を用いて、非浸湿的に癌の早期診断及び治療のために疾病の分子水準変化観察が可能な核医学的診断及び治療技術の重要性は広く知られている。
【０００３】
既存の陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）用放射性医薬品である［１８Ｆ］−ＦＤＧ（２−フルオロ−２−デオキシ−Ｄ−グルコース）は、広く体内癌診断で広く使用されてはいるが、脳腫瘍の診断や、炎症と腫瘍との区別ができないというなどの短所があり、また癌の新生血管生成及び転移症侯に対する情報を提供するには限界性がある。
【０００４】
癌の新生血管作用は、原発性または転移性腫瘍において必須であり、癌組織は新生血管による営養分と酸素供給がなければ、１−２ｍｍ３以上成長することができない。このように新生血管作用が起きる間、原発性癌細胞が血管内に流入して他の場所に移動して転移癌を形成するようになる。したがって、新生血管映像ターゲットはすべての固形性腫瘍で共通的に使用することができるという可能性を有している。治療面では既存の抗癌化学療法は、癌の細胞が早く成長する特徴を用いた治療であるので、細胞周期が早い骨髄細胞、胃腸関係細胞など正常細胞に毒性を示す一方、新生血管作用ターゲット治療は、長期投与でも比較的少ない副作用と血管細胞が治療の対象という点で耐性を示す可能性が少ない。
【０００５】
癌の成長メカニズム過程としての新生血管は、癌組織近くの血管内αｖβ３インテグリン（ｉｎｔｅｇｒｉｎ）の過多分布を始めとして進行することが知られている。インテグリンは、細胞の付着や移動などに関与するα及びβサブユニットで構成されたヘテロダイマー細胞膜タンパク質であり、細胞によって多くの種類が存在する。その中で新生血管には、ビトロネクチン受容体とも呼ばれるαｖβ３種が重要で、平常の血管内皮細胞には発現せず、癌による新生血管作用が活性化になった場合にのみ発現する。このインテグリンと相互作用するタンパク質には、共通的にアルギニン−グリシン−アスパラギン酸（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ，ＲＧＤ）ペプチドシーケンスが存在して結合部位の役割をする。このような化合物を基にαｖβ３インテグリン正常機能を防ぐより高い結合親和度を有する拮抗物質として、環形ペプチド構造であるサイクリックＲＧＤ（ｃｙｃｌｉｃ  Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ，ｃＲＧＤ）ペプチド化合物があり、今まで多くの国内外の研究機関を通じてこの化合物に多様な放射性同位元素を導入して、癌の新生血管映像化研究が進められてきた。
【０００６】
多様なサイクリックＲＧＤ誘導体に用いた放射性同位元素は、ＰＥＴ用フルオリン−１８、ガリウム−６８と銅−６４等と、ＳＰＥＣＴ用でテクネシウム−９９ｍ、ヨード−１２３、インジウム−１１１等が標識核種に使用され、肝組織での排出を早く誘導するために単糖類を付着させることで放射性追跡子の薬物動態を良くしたり、より高い結合親和度を有するようにしたりするために２個または４個のサイクリックＲＧＤを付着した放射性追跡子が研究された（参照論文: 非特許文献１〜７）。しかし、多様な放射性同位元素標識サイクリックＲＧＤ誘導体が開発されたが、高い肝摂取及び腸での排出速度が遅い短所を有していて、腫瘍組織対正常組織間の蓄積の割合が低くくて映像の限界性を有していて、治療用放射性同位元素標識放射性追跡子の場合、正常組織にも損傷を及ぼすため、いまだに臨床適用研究が活発ではないのが現状である。
【０００７】
さまざまな放射性同位元素の中で、テクネシウム−９９ｍとレニウム−１８８は、すべての病院で単光子放射型コンピュータ断層撮影法（Ｓｉｎｇｌｅ  Ｐｈｏｔｏｎ  Ｅｍｉｓｓｉｏｎ  Ｃｏｍｐｕｔｅｄ  Ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ；ＳＰＥＣＴ）スキャナと発生器さえあれば、簡単な標識方法と分離工程を通じてＳＰＥＣＴ映像を通じた診断を行なうことができて活用的、実用的な面で優れた放射性同位元素であり、同じ前駆体を用いて治療目的にレニウムを選択して標識することができる長所を有している。
【０００８】
しかし、既存のテクネシウム−９９ｍとレニウム−１８８標識方法では、標識ポケットのサイズが大きくて体内安定性が低く前駆体合成が容易でないため、効果的な放射性追跡子を開発するのに多くの制約を有している。それとは異なりトリカルボニルテクネシウム−９９ｍとトリカルボニルレニウム−１８８は、前駆体合成が容易で、標識ポケットが小さくて安定していて、簡単な製造工程の変化で放射性追跡子の電荷を変化させることができる。それとともに体内で安定し、標識された放射性追跡子が体内代謝時に甲状腺に集まらないで早く体外に排出されることによって、相対的に良い映像を提供するなど、効率性が高い同位元素追跡子として重要視されている。このようなトリカルボニルテクネシウム−９９ｍまたはトリカルボニルレニウム−１８８の利用は、まだ微々であるが、新しい放射性医薬品開発のために国内外で研究が進行されている。
【０００９】
そこで、本発明者らは癌の新生血管作用の有力バイオマーカーであるαｖβ３インテグリンターゲット映像及び治療用医薬品として、新しいトリカルボニルテクネシウム−９９ｍまたはレニウム−１８８標識サイクリックＲＧＤ誘導体を合成して、多様な生物学的評価結果を通じて、それらトリカルボニルテクネシウムまたはレニウム標識ＲＧＤ誘導体が優れた新生血管関連疾患の診断及び治療が可能な物質であることを確認して本発明を完成した。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Haubner, R., Wester, H-J., Weber, W.A., Mang, C., Ziegler, S. I., Goodman, S. L., Senekowitsch-Schmidtke, R., Kessler, H., Schwaiger, M., Cancer Res., 2001年,第61巻，p.1781-1785
【非特許文献２】Jeong, J.M., Hong, M.K., Chang, Y.S., Lee, Y.S., Kim, Y.J., Cheon, G.J., Lee, D.S., Chung, J.K., Lee, M.C., J. Nucl. Med., 2008年,第49巻，p.830-836
【非特許文献３】Chen, W., Park, R., Tohme, M., Shahinian, A.H., Bading, J.R., Conti, P.S. Bioconjugate Chem., 2004, 15:41-49
【非特許文献４】Liu, S., Hsieh, W.Y., Kim, Y.S., Mohammel, S. I., Bioconjugate Chem., 2005 年,第16巻，p.1580-1588
【非特許文献５】Haubner, R., Wester, H-J., Reuning, U., Senekowitsch-Schmidtke, R., Diefenbach, B., Kessler, H., Stocklin G., Schwaiger, M., J. Nucl. Med., 1999 年,第40巻，p.1061-1071
【非特許文献６】Janssen, M., Oyen, W.J.G., Dijkgraaf, I., Massuger, L.F.A.G., Frielink, C., Edwards, D.S., Rajopadyhe, M., Boonstra, H., Corsten, F.H.M., Boerman, O.C., Cancer Res., 2002 年,第62巻，p.6146-6151
【非特許文献７】Wu, Y., Zhang, X., Xiong, Z., Cheng, Z., Fisher, D.R., Liu, S., Gambhir, S.S., Chen, X., J. Nucl. Med., 2005 年,第46巻，p.1707-1718
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明の目的は、新生血管関連疾患の診断または治療に有用に用いることができるトリカルボニルテクネシウム−９９ｍまたはレニウム−１８８標識サイクリックＲＧＤ誘導体またはその薬学的に許容可能な塩を提供することにある。
【００１２】
本発明の他の目的は、前記トリカルボニルテクネシウム−９９ｍまたはレニウム−１８８標識サイクリックＲＧＤ誘導体の製造方法を提供することにある。
【００１３】
本発明のまた他の目的は、前記トリカルボニルテクネシウム−９９ｍまたはレニウム−１８８標識サイクリックＲＧＤ誘導体の前駆体を提供することにある。
【００１４】
本発明のまた他の目的は、前記トリカルボニルテクネシウムまたはレニウム標識サイクリックＲＧＤ誘導体またはその薬学的に許容可能な塩を有効成分として含む、新生血管関連疾患の診断または治療用薬学的組成物を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
前記目的を達成するために、本発明は、下記化学式１のトリカルボニルテクネシウム−９９ｍまたはレニウム−１８８標識サイクリックＲＧＤ誘導体またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。
【００１６】
【化１】
2013533852.tif 000003
【００１７】
（前記式中１、Ｍ、Ｒ１、Ｘ  及びＹは本明細書で定義したとおりである）
【００１８】
また、本発明は、トリカルボニルテクネシウム−９９ｍまたはレニウム−１８８標識サイクリックＲＧＤ誘導体の製造方法を提供する。
【００１９】
さらに、本発明は、前記トリカルボニルテクネシウム−９９ｍまたはレニウム−１８８標識サイクリックＲＧＤ誘導体の前駆体を提供する。
【００２０】
また、本発明は、前記トリカルボニルテクネシウム−９９ｍまたはレニウム−１８８標識サイクリックＲＧＤ誘導体またはその薬学的に許容可能な塩を有効成分として含む新生血管関連疾患の診断または治療用薬学的組成物を提供する。
【発明の効果】
【００２１】
本発明のトリカルボニルテクネシウム−９９ｍまたはレニウム−１８８標識サイクリックＲＧＤ誘導体は、腫瘍によって誘導される新生血管作用で活性化になったビトロネクチン受容体とも呼ばれるαｖβ３インテグリンにサブナノモル単位の高い親和度を有し、癌細胞が移植された動物でトリカルボニルテクネシウム−９９ｍ標識サイクリックＲＧＤ誘導体の初期摂取後、高い腫瘍映像を反映して肝臓と腸での摂取率が、既存に知られた放射性同位元素標識サイクリックＲＧＤ誘導体に比べて顕著に低くて選択的にαｖβ３インテグリンが活性化した癌細胞にのみ作用することが分かり、このような結果を基に、テクネシウム−９９ｍ標識に使用した同一な前駆体を用いた治療核種であるレニウム−１８８標識誘導体の場合、生理食塩水のみ注入した腫瘍動物モデルとは異なり、尾静脈注入時に効果的な腫瘍の成長阻害と治療効能を示すことから、あつらえ形新生血管関連疾患の診断または治療用医薬品として有用に用いることができる。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】本発明の一実施例によるトリカルボニルテクネシウム−９９ｍ標識サイクリックＲＧＤ誘導体の体内腫瘍モデルマウスでの、腫瘍摂取及び臓器別排出結果を示すグラフである。
【図２】本発明の他の一実施例によるトリカルボニルテクネシウム−９９ｍ標識サイクリックＲＧＤ誘導体の体内腫瘍モデルマウスでの、腫瘍摂取及び臓器別排出結果を示すグラフである。
【図３】本発明のまた他の一実施例によるトリカルボニルテクネシウム−９９ｍ標識サイクリックＲＧＤ誘導体の体内腫瘍モデルマウスでの、腫瘍摂取及び臓器別排出結果を示すグラフである。
【図４】本発明の一実施例によるトリカルボニルテクネシウム−９９ｍ標識サイクリックＲＧＤ誘導体の体内腫瘍モデルマウスでの、ＳＰＥＣＴ映像を撮影した写真である。
【図５】本発明の他の一実施例によるトリカルボニルテクネシウム−９９ｍ標識サイクリックＲＧＤ誘導体の体内腫瘍モデルマウスでの、ＳＰＥＣＴ映像を撮影した写真である。
【図６】本発明のまた他の一実施例によるトリカルボニルテクネシウム−９９ｍ標識サイクリックＲＧＤ誘導体の体内腫瘍モデルマウスでの、ＳＰＥＣＴ映像を撮影した写真である。
【図７】本発明の一実施例によるトリカルボニルテクネシウム−９９ｍ標識サイクリックＲＧＤ誘導体の体内腫瘍モデルマウスでの、臓器摂取率グラフ及び時間帯別に腫瘍対肝臓、腫瘍対腎臓そして腫瘍対正常細胞の摂取率グラフである。
【図８】本発明の一実施例によるトリカルボニルテクネシウム−９９ｍ標識サイクリックＲＧＤ誘導体の体内腫瘍モデルマウスでの、サイクリックＲＧＤ誘導体（ｃＲＧＤｙＶ）注入後のＳＰＥＣＴ映像を撮影した写真である。
【図９】本発明の一実施例によるトリカルボニルレニウム−１８８標識サイクリックＲＧＤ誘導体のモデルマウスの腫瘍の大きさ及び体重に及ぼす影響を示すグラフである。
【図１０】本発明の一実施例によるトリカルボニルレニウム−１８８標識サイクリックＲＧＤ誘導体のモデルマウスの腫瘍の大きさ及び体重に及ぼす影響を示すＳＰＥＣＴ映像及び関心領域別臓器の摂取率グラフである。
【図１１】本発明の一実施例によるトリカルボニルレニウム−１８８標識サイクリックＲＧＤ誘導体注入後、モデルマウスの腫瘍の大きさ及びトリカルボニルテクネシウム−９９ｍ標識サイクリックＲＧＤ ＳＰＥＣＴ映像摂取率に及ぼす影響を示し、腫瘍組織スライスをＣＤ−３１染色とＱ−ｄｏｔ−二個のＲＧＤ誘導体を利用した共焦点顕微鏡写真である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２３】
以下、本発明を詳細に説明する。
【００２４】
本発明は、下記化学式１で表されるトリカルボニルテクネシウムまたはレニウム標識サイクリックＲＧＤ誘導体またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。
【００２５】
【化２】
2013533852.tif 000004
【００２６】
（前記化学式１で、Ｍは９９ｍＴｃ、１８８Ｒｅまたは１８５，１８７Ｒｅで、
Ｒ１は、Ｎ，Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨまたはＮ（ＣＨ２ＣＯＮＨ）ｎＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨで、Ｘは直接結合、
【００２７】
【化３】
2013533852.tif 000005
【００２８】
または、
【００２９】
【化４】
2013533852.tif 000006
【００３０】
で、ここで、Ａ１およびＡ２は、各々アスパラギン酸、リジン、グルタミン酸、チロシン、システイン、スレオニンおよびセリンからなる群から選択されるアミノ酸で、Ｒ２はＮＨまたはＮＨ（Ｚ）ｎＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨで、Ｚは−ＣＨ２ＣＨ２Ｏ−または−ＣＨ２ＣＯＮＨ−で、ｎは０ないし８の整数で、Ｙは、
【００３１】
【化５】
2013533852.tif 000007
【００３２】
で、ここでＲ３はＨまたはＯＨで、Ｒ４は−（ＣＨ２）ｍ−または−（ＣＨ２）ｍ−ＣＯＯ−で、ｍは１ないし８の整数で、前記ＹはＲ１に直接結合するか、Ｘの中でＲ２に結合する）
【００３３】
好ましくは、前記トリカルボニルテクネシウムまたはレニウム標識サイクリックＲＧＤ誘導体は、下記化学式１Ａないし化学式１Ｃで表される化合物の群から選択することができる。
【００３４】
【化６】
2013533852.tif 000008
【００３５】
【化７】
2013533852.tif 000009
【００３６】
【化８】
2013533852.tif 000010
【００３７】
（前記化学式１Ａないし１Ｃにおいて、前記Ｍ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ａ１およびＡ２は、前記化学式１で定義したのと同様である）
【００３８】
本発明による前記化学式１で表されるトリカルボニルテクネシウム−９９ｍまたはレニウム−１８８標識サイクリックＲＧＤ誘導体の好ましい例は、下記に示すとおりである。
【００３９】
１）サイクリック｛（トリカルボニル［９９ｍＴｃ］テクネシウム−Ｎ−α−ビス−ヒドロキシカルボニルメチル−リジン）−アルギニン−グリシン−アスパラギン酸−Ｄ−フェニルアラニン｝、
２）サイクリック｛（トリカルボニル［１８８Ｒｅ］レニウム−Ｎ−α−ビス−ヒドロキシカルボニルメチル−リジン）−アルギニン−グリシン−アスパラギン酸−Ｄ−フェニルアラニン｝、
３）サイクリック｛（トリカルボニル−［１８５，１８７Ｒｅ］レニウム−Ｎ−α−ビス−ヒドロキシカルボニルメチル−リジン）−アルギニン−グリシン−アスパラギン酸−Ｄ−フェニルアラニン｝、
４）サイクリック｛（トリカルボニル［９９ｍＴｃ］テクネシウム−Ｎ−α−ビス−ヒドロキシカルボニルメチル−ＮＨ２（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）４ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ−リジン）−アルギニン−グリシン−アスパラギン酸−Ｄ−フェニルアラニン｝、
５）サイクリック｛（トリカルボニル［１８８Ｒｅ］レニウム−Ｎ−α−ビス−ヒドロキシカルボニルメチル−ＮＨ２（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）４ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ−リジン）−アルギニン−グリシン−アスパラギン酸−Ｄ−フェニルアラニン｝、
６）サイクリック｛（トリカルボニル−［１８５，１８７Ｒｅ］レニウム−Ｎ−α−ビス−ヒドロキシカルボニルメチル−ＮＨ２（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）４ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ−リジン）−アルギニン−グリシン−アスパラギン酸−Ｄ−フェニルアラニン｝、
７）サイクリック｛（トリカルボニル［９９ｍＴｃ］テクネシウム−Ｎ−α−ビス−ヒドロキシカルボニルメチル−グリシン−ＣＯＮＨ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）４ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ−リジン）−アルギニン−グリシン−アスパラギン酸−Ｄ−フェニルアラニン｝、
８）サイクリック｛（トリカルボニル［１８８Ｒｅ］レニウム−Ｎ−α−ビス−ヒドロキシカルボニルメチル−グリシン−ＣＯＮＨ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）４ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ−リジン）−アルギニン−グリシン−アスパラギン酸−Ｄ−フェニルアラニン｝、
９）サイクリック｛（トリカルボニル−［１８５，１８７Ｒｅ］レニウム−Ｎ−α−ビス−ヒドロキシカルボニルメチル−グリシン−ＣＯＮＨ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）４ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ−リジン）−アルギニン−グリシン−アスパラギン酸−Ｄ−フェニルアラニン｝、
１０）（トリカルボニル［９９ｍＴｃ］テクネシウム−Ｎ−α−ビス−ヒドロキシカルボニルメチル−アスパラギン酸）−［サイクリック（リジン−アルギニン−グリシン−アスパラギン酸−Ｄ−フェニルアラニン）］２、
１１）（トリカルボニル［１８８Ｒｅ］レニウム−Ｎ−α−ビス−ヒドロキシカルボニルメチル−アスパラギン酸）−［サイクリック（リジン−アルギニン−グリシン−アスパラギン酸−Ｄ−フェニルアラニン）］２、
１２）（トリカルボニル−［１８５，１８７Ｒｅ］レニウム−Ｎ−α−ビス−ヒドロキシカルボニルメチル−アスパラギン酸）−［サイクリック（リジン−アルギニン−グリシン−アスパラギン酸−Ｄ−フェニルアラニン）］２、
１３）｛トリカルボニル［９９ｍＴｃ］テクネシウム−Ｎ−α−ビス−ヒドロキシカルボニルメチル−（ポリエチレングリコール）ｎ−アスパラギン酸｝−［サイクリック（リジン−アルギニン−グリシン−アスパラギン酸−Ｄ−フェニルアラニン）］２、（ｎ＝０−８）、
１４）｛トリカルボニル［１８８Ｒｅ］レニウム−Ｎ−α−ビス−ヒドロキシカルボニルメチル−（ポリエチレングリコール）ｎ−アスパラギン酸｝−［サイクリック（リジン−アルギニン−グリシン−アスパラギン酸−Ｄ−フェニルアラニン）］２、（ｎ＝０−８）、
１５）｛トリカルボニル−［１８５，１８７Ｒｅ］レニウム−Ｎ−α−ビス−ヒドロキシカルボニルメチル−（ポリエチレングリコール）ｎ−アスパラギン酸｝−［サイクリック（リジン−アルギニン−グリシン−アスパラギン酸−Ｄ−フェニルアラニン）］２、（ｎ＝０−８）、
１６）｛トリカルボニル［９９ｍＴｃ］テクネシウム−Ｎ−α−ビス−ヒドロキシカルボニルメチル−（ポリエチレングリコール）ｎ−アスパラギン酸｝−｛（ポリエチレングリコール）ｎ−［サイクリック（リジン−アルギニン−グリシン−アスパラギン酸−Ｄ−フェニルアラニン）］｝２、（ｎ＝０−８）、
１７）｛トリカルボニル［１８８Ｒｅ］レニウム−Ｎ−α−ビス−ヒドロキシカルボニルメチル−（ポリエチレングリコール）ｎ−アスパラギン酸｝−｛（ポリエチレングリコール）ｎ−［サイクリック（リジン−アルギニン−グリシン−アスパラギン酸−Ｄ−フェニルアラニン）］｝２、（ｎ＝０−８）、
１８）｛トリカルボニル−［１８５，１８７Ｒｅ］レニウム−Ｎ−α−ビス−ヒドロキシカルボニルメチル−（ポリエチレングリコール）ｎ−アスパラギン酸｝−｛（ポリエチレングリコール）ｎ−［サイクリック（リジン−アルギニン−グリシン−アスパラギン酸−Ｄ−フェニルアラニン）］｝２、（ｎ＝０−８）、
１９）（トリカルボニル［９９ｍＴｃ］テクネシウム−Ｎ−α−ビス−ヒドロキシカルボニルメチル−アスパラギン酸）−｛アスパラギン酸−［サイクリック（リジン−アルギニン−グリシン−アスパラギン酸−Ｄ−フェニルアラニン）］２｝４、
２０）（トリカルボニル［１８８Ｒｅ］レニウム−Ｎ−α−ビス−ヒドロキシカルボニルメチル−アスパラギン酸）−｛アスパラギン酸−［サイクリック（リジン−アルギニン−グリシン−アスパラギン酸−Ｄ−フェニルアラニン）］２｝４、
２１）（トリカルボニル−［１８５，１８７Ｒｅ］レニウム−Ｎ−α−ビス−ヒドロキシカルボニルメチル−アスパラギン酸）−｛アスパラギン酸−［サイクリック（リジン−アルギニン−グリシン−アスパラギン酸−Ｄ−フェニルアラニン）］２｝４、
２２）｛トリカルボニル［９９ｍＴｃ］テクネシウム−Ｎ−α−ビス−ヒドロキシカルボニルメチル−（ポリエチレングリコール）ｎ−アスパラギン酸｝−｛アスパラギン酸−［サイクリック（リジン−アルギニン−グリシン−アスパラギン酸−Ｄ−フェニルアラニン）］２｝４、（ｎ＝０−８）、
２３）｛トリカルボニル［１８８Ｒｅ］レニウム−Ｎ−α−ビス−ヒドロキシカルボニルメチル−（ポリエチレングリコール）ｎ−アスパラギン酸｝−｛アスパラギン酸−［サイクリック（リジン−アルギニン−グリシン−アスパラギン酸−Ｄ−フェニルアラニン）］２｝４、（ｎ＝０−８）、
２４）｛トリカルボニル−［１８５，１８７Ｒｅ］レニウム−Ｎ−α−ビス−ヒドロキシカルボニルメチル−（ポリエチレングリコール）ｎ−アスパラギン酸｝−｛アスパラギン酸−［サイクリック（リジン−アルギニン−グリシン−アスパラギン酸−Ｄ−フェニルアラニン）］２｝４、（ｎ＝０−８）、
２５）｛トリカルボニル［９９ｍＴｃ］テクネシウム−Ｎ−α−ビス−ヒドロキシカルボニルメチル−（ポリエチレングリコール）ｎ−アスパラギン酸｝−｛アスパラギン酸−（ポリエチレングリコール）ｎ−［サイクリック（リジン−アルギニン−グリシン−アスパラギン酸−Ｄ−フェニルアラニン）］２｝４、（ｎ＝０−８）、
２６）｛トリカルボニル［１８８Ｒｅ］レニウム−Ｎ−α−ビス−ヒドロキシカルボニルメチル−（ポリエチレングリコール）ｎ−アスパラギン酸｝−｛アスパラギン酸−（ポリエチレングリコール）ｎ−［サイクリック（リジン−アルギニン−グリシン−アスパラギン酸−Ｄ−フェニルアラニン）］２｝４、（ｎ＝０−８）、及び
２７）｛トリカルボニル−［１８５，１８７Ｒｅ］レニウム−Ｎ−α−ビス−ヒドロキシカルボニルメチル−（ポリエチレングリコール）ｎ−アスパラギン酸｝−｛アスパラギン酸−（ポリエチレングリコール）ｎ−［サイクリック（リジン−アルギニン−グリシン−アスパラギン酸−Ｄ−フェニルアラニン）］２｝４、（ｎ＝０−８）。
【００４０】
本発明による化学式１のサイクリックＲＧＤ誘導体は、ＲＧＤサイクリックを１個ないし４個含むことができる。
【００４１】
本発明による化学式１で表されるサイクリックＲＧＤ誘導体は、薬学的に許容可能な塩の形態で使用することができる。前記塩では、薬学的かつ生理学的に許容される多様な有機酸または無機酸によって形成された酸付与塩が有用である。相応しい有機酸では、例えばカルボキシル酸、ホスホン酸、スルホン酸、酢酸、プロピオン酸、オクタン酸、デカン酸、グリコール酸、乳酸、フマル酸、コハク酸、アジピン酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、グルタミン酸、アスパラギン酸、マレイン酸、安息香酸、サリチル酸、フタル酸、フェニル酢酸ン、ベンゼンスルホン酸、２−ナフタリンスルホン酸、メチル硫酸、エチル硫酸、ドデシル硫酸などを使用することができ、相応しい無機酸としては、例えば塩酸、硫酸またはリン酸などを使用することができる。
【００４２】
本発明による前記化学式１で表されるサイクリックＲＧＤ誘導体は、薬学的に許容可能な塩だけではなく、通常の方法によって製造され得るすべての塩、水和物及び溶媒化物をすべて含むことができる。
【００４３】
また、本発明は、前記化学式１のサイクリックＲＧＤ誘導体を製造する方法を提供する。
【００４４】
具体的に、本発明によるサイクリックＲＧＤ誘導体は、下記スキーム１及びスキーム２に示された方法でに製造することができる。
【００４５】
製法１
本発明において、放射性同位元素であるトリカルボニルテクネシウム−９９ｍまたはトリカルボニルレニウム−１８８が標識されたサイクリックＲＧＤ誘導体は、下記スキーム１に示したように、
化学式２の前駆体化合物にトリカルボニルテクネシウム−９９ｍまたはトリカルボニルレニウム−１８８を反応させて、化学式１のトリカルボニルテクネシウム−９９ｍまたはトリカルボニルレニウム−１８８が標識されたサイクリックＲＧＤ誘導体を製造する工程を含む方法で製造することができる。
【００４６】
【化９】
2013533852.tif 000011
【００４７】
（前記スキーム１で、Ｍは９９ｍＴｃまたは１８８Ｒｅで、Ｒ１、Ｘ及びＹは前記化学式１で定義したのと同様である）
【００４８】
具体的に、前記トリカルボニルテクネシウム−９９ｍまたはトリカルボニルレニウム−１８８を化合物（９９ｍＴｃ（ＣＯ）３（Ｈ２０）３＋または１８８Ｒｅ（ＣＯ）３（Ｈ２０）３＋）を蒸留水溶媒０．５〜５ｍｌに希釈して、化学式２の前駆体が入っている反応容器に入れて、７０〜８０℃で３０〜６０分間加熱して反応させることで、化学式１のトリカルボニルテクネシウム−９９ｍまたはトリカルボニルレニウム−１８８が標識されたサイクリックＲＧＤ誘導体を製造することができる。
【００４９】
本発明による前記製法１において、前記トリカルボニルテクネシウム−９９ｍまたはトリカルボニルレニウム−１８８化合物は、従来から知られた方法にしたがって合成することができ、好ましくは下記文献による方法を用いることができる。
【００５０】
参照論文：Alberto, R., Schibli, R., Egli, A., Schubiger, A.P., Abram, U., Kaden, T.A., J. Am. Chem. Soc. 1998年,第120巻，p.7987-7988; Alberto, R., Schibli, R., Schubiger, A.P., Abram, U., Pietzsch, H-P., Johannsen, B., J. Am. Chem. Soc. 1999 年,第121巻，p.6076-6077; Schibli, R., Netter, M., Scapozza, L., Birringer, M., Schelling, P., Dumas, C., Schoch, J., Schubiger, P.A., J. Organomet. Chem. 2003年,第668巻，p.67-74; Schibli, R., Schwarzbach, R., Alberto, R., Ortner, K., Schmalle, H., Dumas, C., Egli, A., Schubiger, P.A. Bioconjuate Chem. 2002年,第13巻，p.750-756。
【００５１】
製造されたトリカルボニルテクネシウム−９９ｍまたはトリカルボニルレニウム−１８８が標識されたサイクリックＲＧＤ誘導体は、さらに、常温に冷却して、ｔＣ１８  Ｓｅｐ−Ｐａｋカートリッジまたは高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を行なって分離／精製することができる。
【００５２】
製法２
本発明において、非放射性同位元素であるトリカルボニル１８５，１８７Ｒｅを導入したサイクリックＲＧＤ誘導体は、下記スキーム２に示したように、
化学式２の前駆体に（ＮＥｔ４）２Ｒｅ（ＣＯ）３Ｂｒ３を入れて反応させて、化学式１Ａのトリカルボニル１８５，１８７Ｒｅが導入されたサイクリックＲＧＤ誘導体を製造する工程を含む方法で製造することができる。
【００５３】
【化１０】
2013533852.tif 000012
【００５４】
（前記スキーム２で、Ｒ１、Ｘ及びＹは前記化学式１で定義したのと同様で、化学式１Ａは化学式１に含まれる）
【００５５】
具体的に、前記試薬（ＮＥｔ４）２Ｒｅ（ＣＯ）３Ｂｒ３を蒸留水溶媒０．５〜５ｍｌに希釈して化学式２の前駆体が入っている反応容器に入れて、７０〜８０℃で５５〜６５分間加熱して反応させることで、化学式１Ａのトリカルボニル１８５，１８７Ｒｅが導入されたサイクリックＲＧＤ誘導体を製造することができる。
【００５６】
前記化学式１Ａのトリカルボニル１８５，１８７Ｒｅが導入されたサイクリックＲＧＤ誘導体は、スキーム１のトリカルボニルテクネシウム−９９ｍまたはレニウム−１８８が標識されたサイクリックＲＧＤ誘導体の基準物質で、トリカルボニルレニウム−１８８が標識されたサイクリックＲＧＤ誘導体とは同一物質なので高性能液体クロマトグラフィーで同じ保持値を有し、トリカルボニルテクネシウム−９９ｍ標識化合物が標識されたサイクリックＲＧＤ誘導体とは、１−２分程度の保持値の差を示す。
【００５７】
製造された１８５，１８７Ｒｅが導入されたサイクリックＲＧＤ誘導体は、追加的に、常温に冷却して、ｔＣ１８  Ｓｅｐ−Ｐａｋカートリッジまたは高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を行なって分離／精製することができる。
【００５８】
さらに、本発明は、前記化学式１のトリカルボニルテクネシウム−９９ｍまたはレニウム−１８８標識サイクリックＲＧＤ誘導体またはその薬学的に許容可能な塩を有効成分として含む、新生血管関連疾患の診断または治療用薬学的組成物を提供する。
【００５９】
また、本発明は、対象に前記化学式１のトリカルボニルテクネシウム−９９ｍ標識サイクリックＲＧＤ誘導体またはその薬学的に許容可能な塩を診断学的に有効な量で投与する工程を含む、対象内の新生血管関連疾患の診断方法を提供する。
【００６０】
また、本発明は、対象に前記化学式１のトリカルボニルレニウム−１８８標識サイクリックＲＧＤ誘導体またはその薬学的に許容可能な塩を治療学的に有効な量で投与する工程を含む、対象内の新生血管関連疾患の治療方法を提供する。
【００６１】
本発明による化学式１のサイクリックＲＧＤ誘導体は、アミンと２個のヒドロキシカルボニルメチル基からなる標識ポケットにトリカルボニルテクネシウム−９９ｍ、トリカルボニルレニウム−１８８またはトリカルボニルレニウム反応物が結合して、テクネシウム−９９ｍを中心に３個のカルボニル、アミン、２個のヒドロキシ基が八面体構造に形成された化合物である。
【００６２】
前記化学式１のサイクリックＲＧＤ誘導体は、１個、２個または４個のサイクリックＲＧＤを構成することができ、その中で２個のサイクリックＲＧＤを構成する場合、腫瘍によって誘発された新生血管作用バイオマーカーであるαｖβ３インテグリンにより高い結合親和度を有して、サイクリックＲＧＤと標識グループ間のリンカーであるアスパラギン酸に多様なポリエチレングリコール鎖を導入して、２個のサイクリックＲＧＤが同時に２個のαｖβ３インテグリンに結合可能な構造（ｂｉｖａｌｅｎｔ）を形成することで、より高い腫瘍映像を反映することができ、それを通じた治療効果も増進することができる。このように２個のサイクリックＲＧＤを構成する化合物は、腫瘍が移植されたネズミでの体内分布実験で血管内皮細胞でトリカルボニルテクネシウム−９９ｍまたはトリカルボニルレニウム−１８８サイクリックＲＧＤ誘導体に含まれるポケットグループが有する（−）イオンによって肝臓と大腸で早く排出されることによって、腫瘍対比正常臓器の割合が高い結果を得た。
【００６３】
また、本発明による化学式１のサイクリックＲＧＤ誘導体は、４個のサイクリックＲＧＤを構成して腫瘍によって誘発された新生血管作用バイオマーカーであるαｖβ３インテグリンにより高い結合親和度を有することができ、サイクリックＲＧＤと標識グループ間のリンカーであるアスパラギン酸に多様なポリエチレングリコール鎖を導入して４個のサイクリックＲＧＤが同時にいくつかのαｖβ３インテグリンに結合可能な構造を形成して高い腫瘍映像を反映することができ、それを通じた治療効果も増進することができる。
【００６４】
さらに、４個のサイクリックＲＧＤを構成するサイクリックＲＧＤ誘導体も、高いαｖβ３インテグリン結合親和度と、血管内皮細胞でトリカルボニルテクネシウム−９９ｍまたはトリカルボニルレニウム−１８８サイクリックＲＧＤ誘導体に含まれるポケットグループが有する（−）イオンによって、肝臓と大腸で早く排出され得る。
【００６５】
したがって、本発明による化学式１のサイクリックＲＧＤ誘導体は、腫瘍によって誘導される新生血管作用で活性化になったビトロネクチン受容体とも呼ばれるαｖβ３インテグリンにサブナノモル単位の高い親和度を有し、癌細胞が移植された動物で、トリカルボニルテクネシウム−９９ｍ標識サイクリックＲＧＤ誘導体初期摂取後、高い腫瘍映像を反映して肝臓と腸での摂取率が既存の知られた放射性同位元素標識サイクリックＲＧＤ誘導体に比べて、顕著に低くてより良い映像を提供しながら選択的にαｖβ３インテグリンが活性化した癌細胞にのみ作用することが分かり、テクネシウム−９９ｍ標識に使用された同一前駆体を使用した治療核種であるレニウム−１８８標識誘導体の場合、生理食塩水だけを注入した腫瘍動物モデルとは異なり、尾静脈注入時に効果的な腫瘍の成長阻害と治療効能を示すことから、あつらえ形新生血管関連疾患の診断または治療用医薬品として有用に用いることができる。
【００６６】
ここで、診断は前記トリカルボニルテクネシウム−９９ｍ標識サイクリックＲＧＤ誘導体またはその薬学的に許容可能な塩を対象に、静脈注射で投与して単光子放射型コンピュータ断層撮影法で新生血管関連疾患の診断をすることが好ましく、診断を通じて癌の新生血管映像を取得した場合、同一前駆体が使用されたトリカルボニルレニウム−１８８標識サイクリックＲＧＤ誘導体を用いてあつらえ形治療を行うことができる。
【００６７】
本発明において、新生血管関連疾患は、血栓症、心筋虚血、固形化腫瘍または転移癌等、αｖβ３インテグリンが過多に分布する疾患が好ましい。
【００６８】
本発明の前記化学式１のサイクリックＲＧＤ誘導体またはその薬学的に許容可能な塩は、臨床投与時に静脈注射で投与し、人体に対する投与量は、患者の年齢、体重、性別、投与形態、健康状態及び疾患の程度によって調節することができ、体重が７０Ｋｇである成人患者を基準にする時、一般的診断の場合１〜２０ｍＣｉ／ｄｏｓｅで、好ましくは３〜７ｍＣｉ／ｄｏｓｅで、また医師または薬剤師の判断によって一定時間間隔で１日１回ないし数回にで分けて投与することもできる。併せて、治療の場合は１〜１０００ｍＣｉ／ｄｏｓｅで、好ましくは１〜５００ｍＣｉ／ｄｏｓｅで、また医師または薬剤師の判断によって一定時間間隔で１日１回ないし数回に分けて投与することもできる。
【００６９】
また、本発明は、下記化学式２で表されるトリカルボニルテクネシウム−９９ｍまたはレニウム−１８８標識のためのサイクリックＲＧＤ誘導体前駆体を提供する。
【００７０】
【化１１】
2013533852.tif 000013
【００７１】
（前記化学式２において、Ｒ１、Ｘ及びＹは前記化学式１で定義したのと同様である）
【００７２】
好ましくは、前記トリカルボニルテクネシウム−９９ｍまたはレニウム−１８８標識のためのサイクリックＲＧＤ誘導体の前駆体は、下記化学式２Ａないし化学式２Ｃで表される化合物の群から選択することができる。
【００７３】
【化１２】
2013533852.tif 000014
【００７４】
【化１３】
2013533852.tif 000015
【００７５】
【化１４】
2013533852.tif 000016
【００７６】
（前記化学式２Ａないし２Ｃにおいて、前記Ｍ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ａ１およびＡ２は前記化学式１で定義したのと同様である）
【００７７】
前記トリカルボニルテクネシウムまたはレニウム標識のためのサイクリックＲＧＤ誘導体の前駆体は、下記で説明する実施例を通じて製造することができるが、これに制限されない。
【発明を実施するための形態】
【００７８】
以下、本発明を実施例によって詳しく説明する。但し、下記の実施例は、本発明の内容が下記の実施例によって限定されるのではない。
【００７９】
＜製造例１＞本発明によるトリカルボニルテクネシウム−９９ｍまたはレニウム−１８８標識サイクリックＲＧＤ誘導体の前駆体の出発物質（３）の製造
【００８０】
【化１５】
2013533852.tif 000017
【００８１】
本発明によるトリカルボニルテクネシウム−９９ｍまたはレニウム−１８８標識サイクリックＲＧＤ誘導体の前駆体の出発物質に用いる前記化学式３の化合物は、文献（Haubner, R., Wester, H-J., Reuning, U., Senekowitsch-Schmidtke, R., Diefenbach, B., Kessler, H., Stocklin G., Schwaiger, M., J. Nucl. Med., 1999年,第40巻,p.1061-1071）によって合成した。
【００８２】
＜製造例２＞ベンジル  １−アミノ−３，６，９，１２−テトラオキサペンタデカン−１５−オエート（７）の製造
【００８３】
【化１６】
2013533852.tif 000018
【００８４】
（工程１）
１−（Ｎ−（ｔ−ブチルオキシカルボニル）−アミノ）−３，６，９，１２−テトラオキサペンタデカノン酸（１−（Ｂｏｃ−ａｍｉｎｏ）−３，６，９，１２−ｔｅｔｒａｏｘａｐｅｎｔａｄｅｃａｎｏｉｃ  ａｃｉｄ，２２４ｍｇ，０．６１ｍｍｏｌ，５）をアルゴンガス下でアセトニトリル（５ｍｌ）に溶解してセシウムカーボネート（ＣｓＣＯ３，５９６ｍｇ，１．８３ｍｍｏｌ）とベンジルクロライド（２１１μｌ，１．８３ｍｍｏｌ）を加えた後、８０℃下で３０分間撹拌させた。反応容器を常温で冷却させて減圧下で溶媒を除去した後、カラムクロマトグラフィーを通じて分離して目的化合物（６）を得た。
【００８５】
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.38-7.30 (m, 5H), 5.14 (s, 2H), 3.77 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.64-3.59 (m, 12H), 3.53 (t, J = 5.0 Hz, 2H), 3.30 (m, 2H), 2.65 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 1.44 (s, 9H)。
【００８６】
（工程２）
工程１で得た化学式６の化合物（２６０ｍｇ，０．５７ｍｍｏｌ）をメチレンクロライド（１０ｍｌ）で溶解して、０℃下でトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ，１ｍｌ）を加えた後、室温で１時間撹拌した後、飽和ナトリウムバイカーボネート（ｓａｔｕｒａｔｅｄ  ＮａＨＣＯ３，２５ｍｌ）を加えてメチレンクロライド（１００ｍｌ×３）溶液で抽出した後、有機溶媒層を減圧下で除去して、目的化合物であるベンジル  １−アミノ−３，６，９，１２−テトラオキサペンタデカン−１５−オエート（７）を得た。
【００８７】
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.53 (s, 5H), 5.14 (s, 2H), 3.78 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 3.65-3.62 (m, 12H), 3.58 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 2.93 (brs, 2H), 2.66 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 2.51 (brs, 2H)。
【００８８】
＜製造例３＞トリカルボニルテクネシウム−９９ｍまたはトリカルボニルレニウム−１８８化合物［９９ｍＴｃ（ＣＯ）３（Ｈ２Ｏ）３＋または１８８Ｒｅ（ＣＯ）３（Ｈ２Ｏ）３＋］の製造
標識されるトリカルボニルテクネシウム−９９ｍまたはレニウム−１８８化合物は、文献（Alberto, R., Schibli, R., Egli, A., Schubiger, A.P., Abram, U., Kaden, T.A., J. Am. Chem. Soc. 1998年,第120巻,p.7987-7988; Alberto, R., Schibli, R., Schubiger, A.P., Abram, U., Pietzsch, H-P., Johannsen, B., J. Am. Chem. Soc. 1999年,第121巻,p.6076-6077; Schibli, R., Netter, M., Scapozza, L., Birringer, M., Schelling, P., Dumas, C., Schoch, J., Schubiger, P.A., J. Organomet. Chem. 2003年,第668巻,p.67-74; Schibli, R., Schwarzbach, R., Alberto, R., Ortner, K., Schmalle, H., Dumas, C., Egli, A., Schubiger, P.A. Bioconjuate Chem. 2002年,第13巻,p.750-756）に記載された方法を行なって製造した。
【００８９】
＜実施例１〜５＞本発明によるトリカルボニルテクネシウム−９９ｍまたはレニウム−１８８標識サイクリックＲＧＤ誘導体の前駆体の製造
＜実施例１＞サイクリック｛（トリカルボニル−Ｎ−α−ビス−ヒドロキシカルボニルメチル−リジン）−アルギニン−グリシン−アスパラギン酸−Ｄ−フェニルアラニン｝（２ａ）の製造
【００９０】
【化１７】
2013533852.tif 000019
【００９１】
（工程１）
前記製造例１で製造された化学式３の化合物（２４０ｍｇ，０．２６ｍｍｏｌ）とｔ−ブチルブロモアセテート（１１５μｌ，０．７７ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（ＣＨ３ＣＮ，５ｍｌ）とＮ，Ｎ’−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ，１３０μｌ，０．７７ｍｍｏｌ）に溶解して５０℃下で１２時間撹拌させた。反応後、溶媒を減圧下で除去して得られた化合物は、有機溶媒であるメタノールとジクロロメタン（１０：９０＝ＭｅＯＨ：ＣＨ２Ｃｌ２）溶液でカラムクロマトグラフィーを通じて分離して化学式４の化合物を得た。
【００９２】
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ  ＭＳ（Ｍ＋Ｎａ＋）＝１１６３．４
【００９３】
（工程２）
前記工程１で製造された化学式４の化合物を、ＴＦＡ：Ｅｔ３ＳｉＨ：Ｈ２Ｏ（９５：２．５：２．５，１０ｍｌ）に溶解して常温で１２時間反応させた後、すべての溶液を減圧下でほとんど蒸発させた後に、ジエチルエーテルを添加して得られた固体をロ過した。このようにして得られた白色固体を充分にエーテルで洗浄した後、乾燥して化学式２Ａの化合物を製造した。
【００９４】
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ  ＭＳ（Ｍ＋Ｎａ＋）＝７２０．８
【００９５】
＜実施例２＞サイクリック｛（トリカルボニル−Ｎ−α−ビス−ヒドロキシカルボニルメチル−グリシン−ＣＯＮＨ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）４ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ−リジン）−アルギニン−グリシン−アスパラギン酸−Ｄ−フェニルアラニン｝（２ｂ）の製造
【００９６】
【化１８】
2013533852.tif 000020
【００９７】
（工程１）
出発物質として化学式３の化合物の代わりに化学式８のグリシン−メチルエステル−ヒドロクロライドを使用することを除き、前記実施例１の工程１と同一な方法で行なって化学式９の化合物を得た。
【００９８】
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.71 (s, 3H), 3.64 (s, 2H), 3.53 (s, 4H), 1.44 (s, 18H)。
【００９９】
（工程２）
前記工程１で製造された化学式９の化合物（５５０ｍｇ，１．７３ｍｍｏｌ）をメタノール（ＭｅＯＨ，１０ｍｌ）に溶解した後、１Ｍ水酸化リチウム（１Ｍ  ＬｉＯＨ，３．４ｍｌ，３．４ｍｍｏｌ）を加えて５０℃下で１時間の間撹拌させた後、１Ｎ塩酸（１Ｎ  ＨＣｌ，３．８ｍｌ，２．２ｍｍｏｌ）を加えて中和させて有機溶媒層を減圧下で除去して化学式１０の化合物を得た。
【０１００】
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.48 (s, 2H), 3.47 (s, 4H), 1.48 (s, 18H)。
【０１０１】
（工程３）
前記工程２で製造された化学式１０の化合物（６０ｍｇ，０．１９ｍｍｏｌ）をＮ−ヒドロキシベンゾトリアゾール（５１ｍｇ，０．３８ｍｍｏｌ）、Ｏ−ベンゾトリアゾール−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−ウロニウム−ヘキサフルオロホスファート（１４４ｍｇ，０．３８ｍｍｏｌ）とともにアルゴン下で、Ｎ，Ｎ’−ジメチルホルムアミド（５ｍｌ）に溶解して３０分間撹拌させた後、前記製造例２で製造された化学式７の化合物（４７ｍｇ，０．１３ｍｍｏｌ）とＮ，Ｎ’−ジイソプロピルエチルアミン（１３３μｌ，０．７６２ｍｍｏｌ）を入れて常温で１６時間撹拌させた。減圧下でＮ，Ｎ’−ジメチルホルムアミドを除去した後、カラムクロマトグラフィーを通じて分離して目的化合物（１１）を得た。
【０１０２】
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.09 (brs), 7.34 (brs, 5H), 5.13 (s, 2H), 3.76-3.36 (m, 22H), 2.65-2.64 (m, 2H), 1.45 (s, 18H)。
【０１０３】
（工程４）
反応容器に１０％パラジウムチャコール（１０％Ｐｄ／Ｃ，３４ｍｇ，０．０３２ｍｍｏｌ）を窒素充填下に入れて前記工程３で製造された化学式１１の化合物（７０ｍｇ，０．１１ｍｍｏｌ）をメタノール（５ｍｌ）に溶解して反応容器に加えた後、反応容器内を水素ガスに転換して常温で水素ガス下で１６時間の間撹拌させた。セライト（ｃｅｌｉｔｅ）フィルターを通じてパラジウムを除去した後、減圧下でメタノールを除去して目的化合物（１２）を得た。
【０１０４】
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.02 (brs), 8.20 (brs), 3.75-3.70 (m, 2H), 3.63-3.56 (m, 14H), 3.52-3.47 (m, 2H), 3.38-3.36 (m, 2H), 2.57 (t, J = 6.0 Hz), 1.44 (s, 18H).
【０１０５】
（工程５）
反応物質として前記工程４で製造された化学式１２の化合物と前記製造例１で製造された化学式３の化合物を使用することを除き、前記実施例２の工程５と同一な方法で行なって目的化合物（１３）を得た。
【０１０６】
ＥＳＩ  ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）＝１４４４．７
【０１０７】
（工程６）
出発物質として前記工程５で製造された化学式１３の化合物の化合物を使用することを除き、前記実施例１の工程２と同一な方法で行なって目的化合物（２ｂ）を得た。
【０１０８】
ＥＳＩ  ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）＝１０２４．５．
【０１０９】
＜実施例３＞（トリカルボニル−Ｎ−α−ビス−ヒドロキシカルボニルメチル−アスパラギン酸）−［サイクリック（リジン−アルギニン−グリシン−アスパラギン酸−Ｄ−フェニルアラニン）］２（２ｃ）の製造
【０１１０】
【化１９】
2013533852.tif 000021
【０１１１】
（工程１）
出発物質としてＯ，Ｏ’−ダイベンジルアスパラギン酸ヒドロクロライドを使用することを除き、前記実施例１の工程１と同一な方法で行なって目的化合物（１５）を得た。
【０１１２】
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.36-7.26 (m, 10 H), 5.14-5.06 (m, 4H), 3.99 (dd, J = 9.2, 5.2 Hz, 1H), 3.61-3.50 (m 4H), 2.94 (dd, J = 16.8, 9.6 Hz, 1H), 2.82 (dd, J = 16.4, 5.6 Hz, 1H), 1.42 (s, 18H).
【０１１３】
（工程２）
出発物質として前記工程１で製造された化学式１５の化合物を使用することを除き、前記実施例２の工程２と同一な方法で行なって目的化合物（１６）を得た。
【０１１４】
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.60 (brs, 2H), 3.90 (t, J = 6.6 Hz, 1H), 3.55-3.40 (m, 4H), 2.98 (dd, J = 16.4, 5.2 Hz, 1H), 2.66 (dd, J = 16.8, 7.6 Hz, 1H), 1.46 (s, 18H).
【０１１５】
（工程３）
出発物質として前記工程２で製造された化学式１６の化合物を使用することを除き、前記実施例２の工程５と同一な方法で行なって目的化合物（１７）を得た。
【０１１６】
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ  ＭＳ（Ｍ＋Ｎａ＋）＝２１７１．０６
【０１１７】
（工程４）
出発物質として前記工程３で製造された化学式１７の化合物を使用することを除き、前記実施例１の工程２と同一な方法で行なって目的化合物（２ｃ）を得た。
【０１１８】
ＥＳＩ  ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）＝１４２０．５
【０１１９】
＜実施例４＞｛トリカルボニル−Ｎ−α−ビス−ヒドロキシカルボニルメチル−アスパラギン酸｝−｛（ポリエチレングリコール）４−［サイクリック（リジン−アルギニン−グリシン−アスパラギン酸−Ｄ−フェニルアラニン）］｝２（２ｄ）の製造
【０１２０】
【化２０】
2013533852.tif 000022
【０１２１】
（工程１）
出発物質として化学式３の化合物の代わりに化学式１６の化合物を使用することを除き、前記実施例２の工程５と同一な方法で行なって化学式１８の化合物を得た。
【０１２２】
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.46 (brt, 1H), 7.38-7.30 (m, 10H), 6.84 (brs, 1H), 5.13 (s, 4H), 3.87 (t, J = 6.4 Hz, 1H), 3.77 (t, J = 6.4 Hz, 4H), 3.63-3.61 (m, 24H), 3.57-3.53 (m 4H), 3.51-3.42 (m 6H), 3.31-3.27 (m, 2H), 2.81 (dd, J = 10.8, 6.4 Hz, 1H), 2.65 (t, J = 6.6 Hz, 4H), 2.38 (dd, J = 14.8, 6.4 Hz, 1H), 1.44 (s, 18H)。
【０１２３】
（工程２）
出発物質として前記工程１で製造された化学式１８の化合物を使用することを除き、前記実施例２の工程６と同一な方法で行なって化学式１９の化合物を得た。
【０１２４】
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.57 (brt, 1H), 7.82 (brs, 1H), 5.13 (s, 4H), 3.92 (t, J = 6.6 Hz, 1H), 3.77-3.70 (m, 4H), 3.64-3.55 (m, 31H), 3.47-3.30 (m 2H), 3.34-3.29 (m 3H), 2.81 (dd, J = 22, 7.2 Hz, 1H), 2.59 (t, J = 12 Hz, 4H), 2.46 (dd, J = 20.4, 5.2 Hz, 1H), 1.45 (s, 18H).
【０１２５】
（工程３）
出発物質として前記工程２で製造された化学式１９の化合物と前記製造例１で製造された化学式３の化合物を使用することを除き、前記実施例２の工程５と同一な方法で行なって化学式２０の化合物を得た。
【０１２６】
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ  ＭＳ（Ｍ＋Ｎａ＋）＝２６６５．８７
【０１２７】
（工程４）
出発物質として前記工程３で製造された化学式２０の化合物を使用することを除き、前記実施例１の工程２と同一な方法で行なって目的化合物（２ｄ）を得た。
【０１２８】
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ  ＭＳ（Ｍ＋Ｎａ＋）＝１９１４．６５
【０１２９】
＜実施例５＞｛トリカルボニル−Ｎ−α−ビス−ヒドロキシカルボニルメチル−（ポリエチレングリコール）４−アスパラギン酸｝−［サイクリック（リジン−アルギニン−グリシン−アスパラギン酸−Ｄ−フェニルアラニン）］２（２ｅ）の製造
【０１３０】
【化２１】
2013533852.tif 000023
【０１３１】
（工程１）
出発物質として前記製造例２で製造された化学式７の化合物を使用することを除き、前記実施例１の工程１と同一な方法で行なって化学式２１の化合物を得た。
【０１３２】
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.37-7.34 (m, 5H), 5.14 (s, 4H), 3.77 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.63-3.58 (m, 14H), 3.49 (s 4H), 2.94 (t, J = 5.8 Hz 2H), 2.65 (t, J = 6.6 Hz 2H), 1.45 (s, 18H)。
【０１３３】
（工程２）
出発物質として前記工程１で製造された化学式２１の化合物を使用することを除き、前記実施例２の工程６と同一な方法で行なって化学式２２の化合物を得た。
【０１３４】
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.97 (brs, 1H), 3.74 (t, J = 5.8 Hz, 2H), 3.64-3.60 (m, 14H), 3.50 (s, 4H), 2.95 (t, J = 5.0 Hz, 2H), 2.57 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 1.44 (s, 18H)。
【０１３５】
（工程３）
出発物質として前記工程２で製造された化学式２２の化合物とＯ，Ｏ’−ダイベンジルアスパラギン酸ヒドロクロライドを使用することを除き、前記実施例２の工程５と同一な方法で行なって化学式２３の化合物を得た。
【０１３６】
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.36-7.27 (m, 10H), 5.13 (d, J = 1.6 Hz, 2H), 5.06 (d, J = 0.8 Hz, 2H), 4.94-4.90 (m, 1H), 3.67 (t, J = 5.8 Hz, 2H), 3.64-3.55 (m, 14H), 3.47 (s, 4H), 3.06 (dd, J = 22, 4.8 Hz, 1H), 2.94-2.87 (m, 3H), 2.49 (td, J = 6.8, 2.0 Hz, 2H), 1.44 (s, 18H)。
【０１３７】
（工程４）
出発物質として前記工程３で製造された化学式２３の化合物を使用することを除き、前記実施例２の工程６と同一な方法で行なって化学式２４の化合物を得た。
【０１３８】
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.49 (brs, 1H), 7.61 (brd, J = 4.4 Hz, 1H), 4.69 (brs, 1H), 3.68-3.41 (m, 20H), 2.99-2.94 (m, 3H), 2.78 (dd, J = 24, 7.2 Hz, 1H), 2.52 (brs, 1H), 1.45 (s, 18H)。
【０１３９】
（工程５）
出発物質として前記工程４で製造された化学式２４の化合物と前記製造例１で製造された化学式３の化合物を使用することを除き、前記実施例２の工程５と同一な方法で行なって化学式２５の化合物を得た。
【０１４０】
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ  ＭＳ（Ｍ＋Ｎａ＋）＝２４１８．７０
【０１４１】
（工程６）
出発物質として前記工程５で製造された化学式２５の化合物を使用することを除き、前記実施例１の工程２と同一な方法で行なって目的化合物（２ｅ）を得た。
【０１４２】
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ  ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）＝１６６７．８
【０１４３】
＜実施例６＞サイクリック｛（トリカルボニル−［１８５，１８７Ｒｅ］レニウム−Ｎ−α−ビス−ヒドロキシカルボニルメチル−リジン）−アルギニン−グリシン−アスパラギン酸−Ｄ−フェニルアラニン｝の製造
【０１４４】
【化２２】
2013533852.tif 000024
【０１４５】
前記実施例１で製造された化学式２Ａの前駆体化合物（２．６ｍｇ，０．００２ｍｍｏｌ）とビス−（Ｎ−テトラエチル）−トリブロモトリカルボニルレニウム（（ＮＥｔ４）２ＲｅＢｒ３（ＣＯ）３，１．６ｍｇ，０．００２５ｍｍｏｌ）を水：メタノール  （ｖ／ｖ＝１／１，１ｍｌ）で溶解して、１時間２０分間撹拌させた後、窒素ガスを用いて溶媒を除去して水に溶解して高性能液体クロマトグラフィーを用いて目的化合物を合成し、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析を用いて目的化合物の質量を分析した（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ  ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）＝９９０．８５）。
【０１４６】
高性能液体クロマトグラフィー分離条件は、０．１％トリフルオロ酢酸が含まれたアセトニトリル（２０％）と蒸留水（８０％）を移動相にして最終３０分後には９０：１０割合に増加させる勾配条件を用いて、静止相にはＣ１８カラム（ＹＭＣ，５μｍ，１０×２５０ｍｍ）を用いて分当り２ｍｌで移動相を流して検出器（２１４ｎｍ，ＵＶ）で検出した結果、実施例６の目的化合物が２１．８分に検出された。
【０１４７】
＜実施例７＞サイクリック｛（トリカルボニル−［１８５，１８７Ｒｅ］レニウム−Ｎ−α−ビス−ヒドロキシカルボニルメチル−グリシン−ＣＯＮＨ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）４ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ−リジン）−アルギニン−グリシン−アスパラギン酸−Ｄ−フェニルアラニン｝の製造
【０１４８】
【化２３】
2013533852.tif 000025
【０１４９】
前記実施例１で製造された化学式２Ａの前駆体化合物の代わりに前記実施例２で製造された化学式２Ｂの前駆体化合物を使用することを除き、前記実施例６と同一な方法で行なって目的化合物を合成して、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析を用いて目的化合物の質量を分析した（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ  ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）＝１２９３．４）。
【０１５０】
高性能液体クロマトグラフィー分離条件は、前記実施例６と同一な条件で分離し、検出器（２１４ｎｍ，ＵＶ）を通じて実施例１３の目的化合物が２１．６分に検出された。
【０１５１】
＜実施例８＞（トリカルボニル−［１８５，１８７Ｒｅ］レニウム−Ｎ−α−ビス−ヒドロキシカルボニルメチル−アスパラギン酸）−［サイクリック（リジン−アルギニン−グリシン−アスパラギン酸−Ｄ−フェニルアラニン）］２の製造
【０１５２】
【化２４】
2013533852.tif 000026
【０１５３】
前記実施例１で製造された化学式２Ａの前駆体化合物の代わりに前記実施例３で製造された化学式２Ｃの前駆体化合物を使用することを除き、前記実施例６と同一な方法で行なって目的化合物を合成して、ＥＳＩ質量分析を用いて目的化合物の質量を分析した（ＥＳＩ  ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）＝１６８８．５）。
【０１５４】
高性能液体クロマトグラフィー分離条件は、前記実施例６と同一な条件で分離し、検出器（２１４ｎｍ，ＵＶ）を通じて実施例１３の目的化合物が１９．２分に検出された。
【０１５５】
＜実施例９＞（トリカルボニル−［１８５，１８７Ｒｅ］レニウム−Ｎ−α−ビス−ヒドロキシカルボニルメチル−グリシン−ＣＯＮＨ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）４ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ−リジン）−[サイクリック（リジン−アルギニン−グリシン−アスパラギン酸−Ｄ−フェニルアラニン）]２の製造
【０１５６】
【化２５】
2013533852.tif 000027
【０１５７】
前記実施例１で製造された化学式２ａの前駆体化合物の代わりに前記実施例５で製造された化学式２ｅの前駆体化合物を使用することを除き、前記実施例６と同一な方法で行なって目的化合物を合成して、ＥＳＩ質量分析を用いて目的化合物の質量を分析した（ＥＳＩ  ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）＝２００７．７）。
【０１５８】
高性能液体クロマトグラフィー分離条件は、前記実施例６と同一な条件で分離し、検出器（２１４ｎｍ，ＵＶ）を通じて実施例９の目的化合物が２０．８分に検出された。
【０１５９】
＜実施例１０＞サイクリック｛（トリカルボニル−［１８８レニウム］−Ｎ−α−ビス−ヒドロキシカルボニルメチル−リジン）−アルギニン−グリシン−アスパラギン酸−Ｄ−フェニルアラニン｝の製造
【０１６０】
【化２６】
2013533852.tif 000028
【０１６１】
アンモニウムボラン（ＮＨ３−ＢＨ３  ｃｏｍｐｌｅｘ，５ｍｇ）をゴム栓を有する１０ｍｌバイアルに入れて、ＣＯガスを１０分間吹き入れた後、リン酸（Ｈ３ＰＯ４，６μｌ）と１８８ＲｅＯ４−（１０ｍＣｉ，１ｍｌ）を入れて反応中に内部圧力を緩衝するために空の２０ｍｌ注射器をさして６０℃で１５分間撹拌した。反応が終わって室温まで冷やした後、１００ｍＭ  ＰＢＳ（２００μｌ）と飽和されたナトリウムバイカーボネート（５０μｌ）で中和して、レニウムトリカルボニル化合物［１８８Ｒｅ（Ｈ２Ｏ）３（ＣＯ）３＋］を合成し、ラジオ薄層クロマトグラフィー（Ｒａｄｉｏ−ＴＬＣ）を通じて反応化合物合成を確認した。
【０１６２】
得られた［１８８Ｒｅ（Ｈ２Ｏ）３（ＣＯ）３＋］と前記実施例１で製造された化学式２Ａの前駆体化合物（０．５ｍｇ）を入れて、７５℃で６０分間加熱して氷水に浸して冷やした後、ｔＣ１８  Ｓｅｐ−Ｐａｋカートリッジ分離を通じて精製し、再び高性能液体クロマトグラフィーに注入して目的化合物を精製した。
【０１６３】
高性能液体クロマトグラフィー分離条件は、前記実施例６と同一な条件で分離し、検出器（ｇａｍｍａ−ｒａｙ，ＮａＩ）を通じて実施例１０の目的化合物が２１．８分に検出された。それは、前記実施例６の化合物の検出器（ＵＶ，２１４ｎｍ）での保持時間と一致した。減衰補正された放射化学的収率は５０−６０％であって、放射化学的純度は９７％以上である。
【０１６４】
＜実施例１１＞サイクリック｛（トリカルボニル［１８８Ｒｅ］レニウム−Ｎ−α−ビス−ヒドロキシカルボニルメチル−グリシン−ＣＯＮＨ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）４ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ−リジン）−アルギニン−グリシン−アスパラギン酸−Ｄ−フェニルアラニン｝の製造
【０１６５】
【化２７】
2013533852.tif 000029
【０１６６】
前記実施例１で製造された化学式２ａの前駆体化合物の代わりに前記実施例２で製造された化学式２ｂの前駆体化合物を使用することを除き、前記実施例９と同一な方法で行なって目的化合物を製造した。
【０１６７】
高性能液体クロマトグラフィー分離条件は、前記実施例６と同一な条件で分離し、検出器（ｇａｍｍａ−ｒａｙ，ＮａＩ）を通じて実施例１１の目的化合物が２１．６分に検出された。それは、前記実施例７の化合物の検出器（ＵＶ，２１４ｎｍ）での保持時間と一致した。減衰補正された放射化学的収率は５０−６０％であっって、放射化学的純度は９７％以上である。
【０１６８】
＜実施例１２＞（トリカルボニル［１８８Ｒｅ］レニウム−Ｎ−α−ビス−ヒドロキシカルボニルメチル−アスパラギン酸）−［サイクリック（リジン−アルギニン−グリシン−アスパラギン酸−Ｄ−フェニルアラニン）］２の製造
【０１６９】
【化２８】
2013533852.tif 000030
【０１７０】
前記実施例１で製造された化学式２ａの前駆体化合物の代わりに前記実施例３で製造された化学式２ｃの前駆体化合物を使用することを除き、前記実施例１０と同一な方法で行なって目的化合物を製造した。
【０１７１】
高性能液体クロマトグラフィー分離条件は、前記実施例６と同一な条件で分離し、検出器（ｇａｍｍａ−ｒａｙ，ＮａＩ）を通じて実施例１２の目的化合物が１９．２分に検出された。それは、前記実施例８の化合物の検出器（ＵＶ，２１４ｎｍ）での保持時間と一致した。減衰補正された放射化学的収率は５０−６０％であって、放射化学的純度は９７％以上である。
【０１７２】
前記実施例１０ないし１２の場合、前記実施例６ないし８の化合物に含む非放射性同元素１８５，１８７Ｒｅが放射性同位元素１８８Ｒｅに変わった化合物であり、分析方法では質量分析で検証された実施例６、７及び８の化合物の各々の高性能液体クロマトグラフィーでの保持時間（ｔＲ）と実施例１０、１１及び１２の化合物の保持時間が一致することを通じて、実施例１０、１１及び１２で製造された化合物がレニウム−１８８のみが変わった化合物であることを証明した。
【０１７３】
＜実施例１３＞サイクリック｛（トリカルボニル［９９ｍＴｃ］テクネシウム−Ｎ−α−ビス−ヒドロキシカルボニルメチル−リジン）−アルギニン−グリシン−アスパラギン酸−Ｄ−フェニルアラニン｝の製造
【０１７４】
【化２９】
2013533852.tif 000031
【０１７５】
ナトリウムカボネート（Ｎａ２ＣＯ３，４ｍｇ）、ナトリウムボロハイドライド（ＮａＢＨ４，５．５ｍｇ）及びＬ−酒石酸ナトリウム二水和物（５ｍｇ）を１０ｍｌのゴム栓を有するバイアルに入れて、ＣＯガスを１０分間注入した。そこに発生器で得た９９ｍＴｃＯ４−（１０ｍＣｉ，１ｍｌ）を注射器で入れて内部圧力を緩衝するために空の２０ｍｌ注射器を栓に突刺した。バイアルを７５℃で２５分間加熱した。以後、前記バイアルを氷水に浸して冷やした後、１００ｍＭ  ＰＢＳ（２００μｌ）と１Ｎ塩酸（１Ｎ  ＨＣｌ，１８０μｌ）を用いて中性化させた。合成されたトリカルボニルテクネシウム−９９ｍ化合物［９９ｍＴｃ（Ｈ２Ｏ）３（ＣＯ）３＋］は、ラジオ薄層クロマトグラフィー（Ｒａｄｉｏ−ＴＬＣ）を通じて確認した。得られた［９９ｍＴｃ（Ｈ２Ｏ）３（ＣＯ）３＋］と前記実施例１で製造された化学式２ａの前駆体化合物（０．５ｍｇ）を入れて、７５℃で３０分間加熱して氷水に浸して冷やした後、ｔＣ１８  Ｓｅｐ−Ｐａｋカートリッジ分離を通じて精製し、再び高性能液体クロマトグラフィーに注入してトリカルボニルテクネシウム−９９ｍ化合物が標識された化合物を製造した。
【０１７６】
高性能液体クロマトグラフィー分離条件は、０．１％トリフルオロ酢酸が含まれたアセトニトリル（２０％）と蒸留水（８０％）を移動相にして最終３０分後には９０：１０の割合に増加させる勾配条件を用いて、静止相ではＣ１８カラム（ＹＭＣ，５μｍ，１０×２５０ｍｍ）を用いて分当り２ｍｌで移動相を流して検出器（ｇａｍｍａｒ  ｒａｙ，ＮａＩ）で検出した結果、前記実施例１３の目的化合物が２０．６分に検出された。それは、前記実施例６の化合物の検出器（ＵＶ，２１４ｎｍ）での保持時間（２１．８分）と１分の差がある。減衰補正された放射化学的収率は６０−７０％であって、放射化学的純度は９７％以上である。
【０１７７】
＜実施例１４＞サイクリック｛（トリカルボニル［９９ｍＴｃ］テクネシウム−Ｎ−α−ビス−ヒドロキシカルボニルメチル−グリシン−ＣＯＮＨ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）４ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ−リジン）−アルギニン−グリシン−アスパラギン酸−Ｄ−フェニルアラニン｝の製造
【０１７８】
【化３０】
2013533852.tif 000032
【０１７９】
前記実施例１で製造された化学式２ａの前駆体化合物の代わりに前記実施例２で製造された化学式２ｂの前駆体化合物を使用することを除き、前記実施例１３と同一な方法で行なって目的化合物を製造した。
【０１８０】
高性能液体クロマトグラフィー分離条件は、前記実施例６と同一な条件で分離し、検出器（ｇａｍｍａ−ｒａｙ，ＮａＩ）を通じて実施例１３の目的化合物が２１．４分に検出された。それは、前記実施例７の化合物の検出器（ＵＶ，２１４ｎｍ）での保持時間（２１．６分）と０．２分の差がある。減衰補正された放射化学的収率は６０−７０％であって、放射化学的純度は９７％以上である。
【０１８１】
＜実施例１５＞（トリカルボニル９９ｍＴｃ］テクネシウム−Ｎ−α−ビス−ヒドロキシカルボニルメチル−アスパラギン酸）−［サイクリック（リジン−アルギニン−グリシン−アスパラギン酸−Ｄ−フェニルアラニン）］２の製造
【０１８２】
【化３１】
2013533852.tif 000033
【０１８３】
前記実施例１で製造された化学式２ａの前駆体化合物の代わりに前記実施例３で製造された化学式２ｃの前駆体化合物を使用することを除き、前記実施例１３と同一な方法で行なって目的化合物を製造した。
【０１８４】
高性能液体クロマトグラフィー分離条件は、前記実施例６と同一な条件で分離し、検出器（ｇａｍｍａ−ｒａｙ，ＮａＩ）を通じて実施例１５の目的化合物が１８．４分に検出された。それは、前記実施例８の化合物の検出器（ＵＶ，２１４ｎｍ）での保持時間（１９．２分）と０．８分の差がある。減衰補正された放射化学的収率は６０−７０％であって、放射化学的純度は９７％以上である。
【０１８５】
＜実施例１６＞（トリカルボニル９９ｍＴｃ］テクネシウム−Ｎ−α−ビス−ヒドロキシカルボニルメチル−グリシン−ＣＯＮＨ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）４ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ−リジン）−[サイクリック（リジン−アルギニン−グリシン−アスパラギン酸−Ｄ−フェニルアラニン）]２の製造
【０１８６】
【化３２】
2013533852.tif 000034
【０１８７】
前記実施例１で製造された化学式２ａの前駆体化合物の代わりに前記実施例５で製造された化学式２ｅの前駆体化合物を使用することを除き、前記実施例１３と同一な方法で行なって目的化合物を合成した。
【０１８８】
高性能液体クロマトグラフィー分離条件は、前記実施例６と同一な条件で分離し、検出器（ｇａｍｍａ−ｒａｙ，ＮａＩ）を通じて実施例１６の目的化合物が１９．９分に検出された。それは、前記実施例９の化合物の検出器（ＵＶ，２１４ｎｍ）での保持時間（２０．８分）と０．９分の差がある。減衰補正された放射化学的収率は５０−７０％であって、放射化学的純度は９７％以上である。
【０１８９】
前記実施例１３ないし１６の化合物の場合、前記実施例６ないし８の化合物が含む非放射性同位元素１８５，１８７Ｒｅが、放射性同位元素９９ｍＴｃに変わった化合物であり、分析方法では質量分析で検証された実施例６、７及び８の化合物の各々の高性能液体クロマトグラフィーでの保持時間（ｔＲ）と実施例１３、１４及び１６の保持時間が１分内外の差が出ながら前駆体の大部分が高い収率で標識されることを通じて、前記実施例１３ないし１６の化合物がテクネシウム−９９ｍのみ変わった化合物であることを証明した（テクネシウムとレニウムは、周期律表上で同族の金属イオンであって前駆体と同一反応性を有している）。
【０１９０】
＜実験例１＞トリカルボニルテクネシウム−９９ｍまたはレニウム−１８８標識サイクリックＲＧＤ誘導体の生物学的活性測定
＜１−１＞結合親和力（ＩＣ５０）値測定
本発明によるトリカルボニルテクネシウムまたはレニウム標識サイクリックＲＧＤ誘導体の新生血管作用の有力バイオマーカーであるαｖβ３インテグリンに対する結合活性を調べるために、次のような実験を行なった。
【０１９１】
αｖβ３インテグリンが過多発現したことが知られたヒト臍帯静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）を牛胎児血清（ＦＢＳ）、ヒドロコチソン、ヒト線維芽細胞基本成長因子（ｈＦＧＦ−Ｂ）、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）、Ｒ３−ＩＧＦ−１、アスコルビン酸、人体上皮成長因子（ｈＥＧＦ）、ＧＡ−１０００、及びヘパリンが含まれた内皮細胞塩基担体−２（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｃｅｌｌ  ｂａｓａｌ  ｍｅｄｉｕｍ−２；ＥＢＭ−２）に３７℃、５％ＣＯ２の条件下で培養した。１×１０６個のＨＵＶＥＣ細胞をエッペンドルフチューブに分注した後、２μＣｉのトリカルボニルテクネシウム−９９ｍまたはレニウム−１８８標識サイクリックＲＧＤ誘導体を添加して、同時に０、０．０１、０．０５、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、１、３、５ｎＭの競争反応基準物質サイクリックＲＧＤ（ｃＲＧＤｙＶ）を各チューブ別に添加して３７℃、５％ＣＯ２の条件下で１時間の間結合反応を誘導した。反応が終わったＨＵＶＥＣ細胞を１００ｍＭリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）で３回水洗した後、ガンマカウンターで競争反応を通じて特異的に結合したトリカルボニルテクネシウムまたはレニウム標識サイクリックＲＧＤ誘導体の放射能を測定した。測定された放射エネルギーの値と競争反応を誘導した基準物質サイクリックＲＧＤの濃度別値を用いて、非線形回帰曲線を完成した後、それを基にＩＣ５０値を算出した。ＩＣ５０値の算出は、シグマプロットソフトウェアを用いた。
【０１９２】
前記方法で本発明の化合物のαｖβ３インテグリンとの結合親和力（ＩＣ５０）を測定して、その結果を下記表１に示した。
【０１９３】
【表１】
2013533852.tif 000035
【０１９４】
表１に示したように、サイクリックＲＧＤを１個導入した誘導体である実施例１３及び実施例１０の化合物はそれぞれＩＣ５０値が１．６ｎＭ、１．４ｎＭを示し、同一前駆体に放射性同位元素のみを変えた場合に、αｖβ３インテグリンとの結合親和力に差がないことを示した。実施例１４の場合もまたＰＥＧ連結基を導入した時にも実施例１３と１０に比べて大きな影響力がないことを確認しました。サイクリックＲＧＤを２個導入した誘導体である実施例１５及び実施例１２の化合物はサブナノモルの結合数値である０．４ｎＭと０．５ｎＭを示して最も優れた結合親和力を示し、この場合も同様にテクネシウム−９９ｍとレニウム−１８８を同じ前駆体に導入するかしないかによる結合親和力に差異がないことが示され、ＰＥＧ連結基を導入した実施例１６の場合にも実施例１２と１５と同様に結合親和力に格別な影響がありませんでした。
【０１９５】
したがって、本発明によるサイクリックＲＧＤ誘導体は、導入するサイクリックＲＧＤが多いほどαｖβ３インテグリンに高い結合親和力を示すことが分かる。
【０１９６】
＜１−２＞体内腫瘍モデルマウスでのトリカルボニルテクネシウム−９９ｍ標識サイクリックＲＧＤ誘導体の腫瘍摂取及び臓器別排出程度の評価
先天的胸腺欠損マウス（７週齢，ＢＡＬＢ／ｃ−ｎｕ  Ｓｌｃ  ｓｔｒａｉｎ、以下ヌードマウス）を用いて本発明で得られた三種類のトリカルボニルテクネシウム−９９ｍ標識サイクリックＲＧＤ誘導体（実施例１３−１５）の時間による腫瘍モデルマウスの腫瘍と臓器別摂取及び排出程度を実験した。
【０１９７】
ヌードマウスの腫瘍形成は、ヒト膠芽腫Ｕ８７−ＭＧ細胞株（１×１０６／１００μｌ  ｉｎ  ＰＢＳ）を皮下注射した後、約２週間の成長期間を経て０．４〜０．５ｃｃの大きさの腫瘍形成モデルのみを選別して実験に用いた。
【０１９８】
以後、実施例１３−１５で製造された化合物を生理食塩水に溶解して各匹当たり１００μｌ（２０μＣｉ）ずつ尾静脈を通じて注射した。体内分布時間帯は、１０、３０、６０、１２０、２４０分に決定し、個体数は各時間帯に４〜５匹を用いた。各時間帯別にマウスを犠牲にして血液、腫瘍及び各臓器（肝臓、肺、脾臓、腎臓、小腸、大腸、甲状腺、筋肉、脳）を摘出して各臓器の重さ（ｇ）及びガンマカウンターを用いて薬物の臓器摂取率（ｒａｄｉｏａｃｔｉｖｉｔｙ）を測定した。各臓器の薬物摂取率は、％ＩＤ／ｇ（ｐｅｒｃｅｎｔ  ｉｎｊｅｃｔｅｄ  ｄｏｓｅ  ｐｅｒ  ｇｒａｍ）単位で計算して、その結果を図１〜３に示した。％ＩＤ／ｇ値の算出は、下記の数式１によって計算した。
【０１９９】
［数１］
％ＩＤ／ｇ＝（薬物の摂取率／薬物の注射量×１００）／各臓器の重さ（ｇ）・・・数式１
【０２００】
測定結果を下記の表２〜４に示した。
【０２０１】
【表２】
2013533852.tif 000036
【０２０２】
【表３】
2013533852.tif 000037
【０２０３】
【表４】
2013533852.tif 000038
【０２０４】
表２〜４と図１〜３に示したように、実施例１３〜１５の化合物の時間別腫瘍及び臓器の摂取及び排出程度を詳しくみると、実施例１３の化合物は初期に低い腫瘍摂取と高い肝臓と小腸摂取を有し、すべての臓器で時間が経過することにしたがって早く排出されることを確認することができた。薬物注射後１０分に５％ＩＤ／ｇを上位だった肝摂取率は時間が経つにつれて早く排出されて２時間後には０．３％ＩＤ／ｇの非常に低い摂取率を示した。肝臓で代謝された薬物は、大部分腸を通じて体外に排出されることが確認され、注射後２時間までも４％ＩＤ／ｇ水準を維持することからして活発な腸排出が進行していることを確認することができる。その外、血液を含む脳、筋肉組織での特異的摂取率は示されず、甲状腺の摂取率も０．０１〜０．０５％ＩＤ／ｇ水準を維持することからして、生体内で前記薬物の安定性を確認した。腫瘍の摂取率は、注射後１０分に１．４３％ＩＤ／ｇから２時間後の０．３３％ＩＤ／ｇに早い初期摂取率を示す一方、時間が経つにつれて漸次的にその摂取率が減少する様相を確認した。
【０２０５】
サイクリックＲＧＤのリジンにＰＥＧ鎖を連結して標識ポケットが有する（−）イオンとサイクリックＲＧＤのアルギニンが有する（＋）イオン間の相殺効果を減らすために合成した実施例１４の化合物の時間別腫瘍及び臓器の摂取及び排出程度は、薬物注射後１０分に５．３％ＩＤ／ｇの摂取率を示し、肝の場合時間が経つにつれて早く代謝されて注射後４時間には０．６４％ＩＤ／ｇの非常に低い摂取率を示し、肝臓で代謝された薬物は大部分腸を通じて体外に排出されることを確認することができた。注射後２時間からは、小腸を過ぎた薬物の大腸摂取率が急激に増加することからして、この時期が体外への排出が始まっている時間であることを確認した。少量の薬物は、腎臓でのろ過過程を通じて膀胱に集まってから小便で排出されることが分かった。血液を含む脳、筋肉組織での特異的な摂取率は示されず、甲状腺の摂取率も０．０１〜０．２０％ＩＤ／ｇ水準を維持することからして生体内で前記薬物の安定性を確認した。腫瘍の摂取率は、注射後１０分に５．４３％ＩＤ／ｇで比較的高い水準を示し、時間が経って代謝が進行するにつれて徐々に減少して前記薬物の４時間目の摂取率は１．４１％ＩＤ／ｇ値を示した。
【０２０６】
２個のサイクリックＲＧＤを導入した実施例１５の化合物での時間別腫瘍及び臓器の摂取及び排出程度は、薬物注射後１０分に３．１％ＩＤ／ｇで非常に低い初期の肝摂取率を示し、非常に早い肝代謝速度を示して４時間後には１％ＩＤ／ｇ水準まで急激に減少した。肝臓で代謝が進行された前記薬物は、非常に早い速度で腎臓を通じて小便で排出されていることを確認することができ、小便を通じた体外排出に起因した腎臓の最大摂取率は注射後６０分に一時１２％ＩＤ／ｇを上回った。小腸と大腸を含む前記薬物の腸を通じた排出は５％ＩＤ／ｇ台未満で不備な水準であって、投与された大部分の薬物が小便を通じて体外に排出されることを確認した。血液を含む脳、筋肉組織での特異的が摂取率は示されず、甲状腺の摂取率も０．１％ＩＤ／ｇ水準を持続的に維持することからして、生体内で前記薬物の安定性を確認した。初期１０分の腫瘍の摂取率は１２．４４％ＩＤ／ｇで非常に高く、早い薬物の腫瘍集積能力を示し、注射後１時間までその摂取を維持した。以後、徐々に腫瘍から薬物が抜け出ることを確認することができたが、注射後４時間目にも６％ＩＤ／ｇを越える非常に高い腫瘍摂取率を確認した。
【０２０７】
＜１−３＞体内腫瘍モデルマウスでのトリカルボニルテクネシウム−９９ｍサイクリックＲＧＤ誘導体のＳＰＥＣＴ映像評価
腫瘍モデルマウスの製作は、前記＜１−２＞と同一な方法で製作した。腫瘍形成マウスモデルを用いて本発明による実施例１３〜１５の化合物（０．５〜１ｍＣｉ）を生理食塩水１００μｌに溶解して尾静脈に注射して、映像獲得時間の間動物モデルの痲酔は２％イソフルランガスを用い、注射時間から１８０分間マウス映像を騒動物専用単光子放射型コンピュータ断層撮影ギ（Ｂｉｏｓｃａｎ，ｎａｎｏＳＰＥＣＴ／ＣＴ）を通じて静止画像を獲得した。映像プロトコルは次のように放射と送信を繰り返した。
【０２０８】
［２０分放射＋送信］×９回
【０２０９】
前記実施例１３〜１５の化合物のＳＰＥＣＴ映像を図４〜６に示した。
【０２１０】
実施例１３の化合物の場合、薬物注射初期１０分後から腫瘍に摂取され約１時間まで観察が可能だった。大部分の薬物が肝代謝を経て腸に早く排出されることを確認することができ、一部薬物だけが腎臓を通じて小便で排出されることが分かる。
【０２１１】
実施例１４の化合物の場合、薬物注射初期１０分後から腫瘍の高い摂取率を示しそれは約３時間まで観察が可能だった。前記実施例１３の化合物と類似に肝代謝を経て腸に早く排出されることを確認することができ、一部薬物だけが腎臓を通じて小便で排出されることが分かる。
【０２１２】
実施例１５の化合物の場合、薬物注射初期１０分後から非常に高い腫瘍摂取率を示して３時間以上持続することを確認することができた。実施例１３及び１４の化合物とは相異して肝臓で代謝された薬物を大部分が腎臓を通じて小便で排出されることを確認することができる。図７では、腫瘍を基準で肝臓、腎臓、筋肉の相対的な摂取比率をグラフで表示し、前記結果を通じて表４の実施例１５の化合物の腫瘍摂取及び臓器別排出程度評価と、図６での実施例１５の化合物のＳＰＥＣＴ映像評価実験との間の同一性を観察することができる。
【０２１３】
＜１−４＞体内腫瘍モデルマウスでの競争反応基準物質サイクリックＲＧＤ誘導体（ｃＲＧＤｙＶ）注入フトリカルボニルテクネシウム−９９ｍサイクリックＲＧＤ誘導体のＳＰＥＣＴ映像評価
サイクリックＲＧＤ誘導体の特異的腫瘍摂取を確認するために、競争反応基準物質サイクリックＲＧＤ（ｃＲＧＤｙＶ）を投与した後、ＳＰＥＣＴ／ＣＴ映像を獲得した。基準物質には、サイクリックＲＧＤ−タイロシン−バリン誘導体を１８ｍｇ／Ｋｇの濃度で尾静脈注射した。基準物質注射後１０分後にテクネシウム−９９ｍが標識された実施例１５の化合物（１ｍＣｉ／２００μｌ）を尾静脈に注射した。注射と同時にＳＰＥＣＴ／ＣＴ映像を獲得し、その条件は下記のとおりである。
【０２１４】
映像獲得時間の間、動物モデルの痲酔は２％イソフルランガスを用い、動物モデルの腫瘍の大きさは０．４ｃｃだった。ＣＴ映像は、４５Ｋｖ、１７８μＡの条件下で４分３０秒間撮影し、ＳＰＥＣＴ映像は、注射と同時に１０分おきに総９回（注射後９０分）獲得して図８に示した。
【０２１５】
図８に示したように、αｖβ３インテグリンに特異的結合をすると知られたサイクリックＲＧＤ（ｃＲＧＤｙＶ）を注入した後、本発明による実施例１５の化合物のＳＰＥＣＴ映像が図６の実施例１５の化合物の映像対比腫瘍摂取が２５分で９４％以上減少することを通じて、αｖβ３インテグリンに特異的結合を通じた腫瘍映像が反映されることの証拠とした。
【０２１６】
＜１−５＞体内腫瘍モデルマウスでのトリカルボニルレニウム−１８８標識サイクリックＲＧＤ誘導体の腫瘍成長阻害及び治療性能評価
トリカルボニルレニウム−１８８標識サイクリックＲＧＤ誘導体の腫瘍成長抑制能力を確認するため、治療効果実験を行なった。
【０２１７】
週１回ずつ４週間総４回、レニウム−１８８標識サイクリックＲＧＤ誘導体である実施例５を注射した。治療効果判定モデルは、３００μＣｉの少ない放射能注射グループと６００μＣｉの多い放射能注射グループに分けて作り、同じ時点に滅菌生理食塩水を注射する対照群と毎日１００μｇのサイクリックＲＧＤ（ｃＲＧＤｙＶ）を腹腔に注射する比較群とを設定した。実施例１１の化合物と滅菌生理食塩水の注射は、尾静脈を通じて投薬した。週１回、ＣＴ映像を獲得して皮下腫瘍の成長程度及び大きさを映像で測定し、週３回ノギスを用いた腫瘍の実測及び動物モデルの体重を総４週間持続的に測定してグラフに表示して、その結果を図９に示した。
【０２１８】
図９に示したように、初期０．６９、０．７ｃｃの腫瘍の大きさを示した滅菌生理食塩水投与群とサイクリックＲＧＤ投与群は、時間が経つにつれて腫瘍の成長速度が急激に増加することを確認した。治療２週目には、それぞれ３．０、３．９ｃｃまで成長し、３週目には２個のグループとも８．０ｃｃまで成長し、治療最後の週にはそれぞれ１３．０、１２，９ｃｃで非常に早い腫瘍の成長を示した。２個のグループ間の腫瘍成長速度は、有意的差異を有さず体重も初期２３ｇから滅菌生理食塩水投与群が３３ｇ、サイクリックＲＧＤ投与群が３０ｇで、非常に大きな増加幅を示した。それは、既存の動物の重さから腫瘍が急速に成長したことによる結果であると思慮される。実施例１１の３００μＣｉ投与群の初期腫瘍は、０．２３ｃｃの大きさから週１回ずつ４週間にわたった治療が終わる時点で、０．６６ｃｃまで腫瘍の成長を確認した。滅菌生理食塩水投与群とサイクリックＲＧＤ投与群に比べて約５０％程度の腫瘍成長抑制能力を有していることを確認した。放射エネルギーによる体重の変化は、治療前２０ｇから４週間の治療後２５ｇに増加したが、実際治療過程で動物の重さは減少することが観察され、約５ｇの重さの増加は成長した腫瘍の重さであると思慮される。より高い放射エネルギーを放出する６００μＣｉ投与群の腫瘍成長は、初期０．３ｃｃから２週目０．３ｃｃ、３週目０．７ｃｃ、最後の治療が終わる時点では１．４ｃｃで、非常に遅い腫瘍成長速度を示し、それは滅菌生理食塩水投与群とサイクリックＲＧＤ投与君に比べて約９０％、低い放射エネルギー治療群（３００μＣｉ）に比べて約７９％程度の腫瘍成長抑制能力を示した。４回にわたった投与薬物の高い放射エネルギーに起因した動物の体重変化は、治療前１９．９ｇから漸次的に減少して治療が終わる時点の重さは１７．０９ｇで、約１４％減少した。それは、生命倫理審議委員会（ＩＲＢ）が提示する腫瘍の放射治療の前後体重変化が、２０％を越えてはいけないという基準において、腫瘍成長抑制を示した結果である。
【０２１９】
＜１−６＞体内腫瘍モデルマウスでのトリカルボニルレニウム−１８８標識サイクリックＲＧＤ誘導体の腫瘍成長阻害及び治療性能評価２
同じ腫瘍大きさ（０．３ｃｃ）の体内腫瘍モデルマウス二匹を用いて、レニウム−１８８標識サイクリックＲＧＤ誘導体である実施例１２の化合物（６００μＣｉ／２００μｌ）を注射したモデルと注射しない腫瘍モデルを、３日後に実施例１５の化合物を用いてＳＰＥＣＴ映像撮影した結果を図１０に示した。
【０２２０】
注射時間から６０分間マウス映像を小動物専用単光子放射型コンピュータ断層撮影機（Ｂｉｏｓｃａｎ、ｎａｎｏＳＰＥＣＴ／ＣＴ）を通じて、静止画像を獲得した。映像プロトコルは、次のように放射と送信を繰り返した。
【０２２１】
［１０分放射＋送信］×６回
【０２２２】
実施例１２の化合物投与群と正常群間の腫瘍、肝臓、腎臓、筋肉の相対的な摂取割合をグラフにして図１０に示し、２個のグループ間の腫瘍を直接除去した後、腫瘍周辺の血管分布を写真に撮影して図１１に示した。
【０２２３】
図１０及び図１１に示したように、初期０．３ｃｃの腫瘍大きさは、実験例６を注射したモデルでは０．３５ｃｃに育ち、投与しないモデルは０．６５ｃｃの腫瘍大きさを示し、腫瘍のＳＰＥＣＴ映像比較のためにテクネシウム標識サイクリックＲＧＤ誘導体である実施例１５の化合物を注入して、二つのグループ間の映像を比較時、腫瘍での摂取の割合が実施例１２の化合物を投与した群で５９％減少することを確認することができた。また二つのグループ間の腫瘍写真で、実施例１２の化合物を投与したモデルの腫瘍が、投与しないモデルの腫瘍とは異なり、周辺の血管分布が確実に少なく、腫瘍を取り囲んだ血管の数も急激に減ったことを確認し、摘出した腫瘍組織スライスをＣＤ−３１血管染色した時にも、実施例１２を投与した腫瘍細胞では明確に管が観察されなかった。また、腫瘍組織スライドにＱ−ｄｏｔが導入された二個のＲＧＤ誘導体を利用したαｖβ３インテグリン分布評価実験で、図１１のように実施例１２を投与した腫瘍組織で大部分のインテグリンが損傷されていることを確認できた。
【０２２４】
したがって、本発明によるトリカルボニルレニウム−１８８標識されたサイクリックＲＧＤ誘導体は、腫瘍の成長阻害及び腫瘍の新生血管作用抑制力が優れているので、腫瘍の新生血管作用から誘発される疾病の治療に有用に用いることができる。
【０２２５】
一方、本発明による前記化合物は、目的によって多くの形態製剤化が可能である。下記には、本発明による前記化合物を活性成分として含むいくつかの製剤化方法を例示するが、本発明がこれに限定されるのではない。
【０２２６】
＜製剤例＞注射剤の製造
本発明の化学式１の化合物  ５ｍＣｉ
エタノール              １００ｍｇ
生理食塩水              ２０００ｍｇ
【０２２７】
本発明の化学式１の化合物をエタノールとともに蒸留水に溶解させて、滅菌フィルターを通過させて滅菌バイアルに貯蔵後、通常の方法によって注射剤を製造した。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【国際調査報告】
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