(57)【要約】      （修正有）【課題】ゲルの抜き取りが容易であるプラスチック製カラムチューブを提供する。【解決手段】本考案は、二次元電気泳動の一次元目に用いる、プラスチック製カラムチューブ1に関する。本発明はまた、電気泳動後、切り開くことによってカラム内のゲル10を破断することなく取り出すことができるプラスチックからなる、プラスチック製カラムチューブ1に関する。【選択図】図5
0003101523.tif 000002
【実用新案登録請求の範囲】
【請求項１】
二次元電気泳動の一次元目に用いる、プラスチック製カラムチューブ。
【請求項２】
電気泳動後、切り開くことによってカラム内のゲルを破断することなく取り出すことができる、請求項１記載のプラスチック製カラムチューブ。
【考案の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本考案は、電気泳動法に用いるプラスチック製カラムチューブに関する。
【背景技術】
【０００２】
二次元電気泳動法は、典型的には等電点による分離（一次元目）と分子量による分離（二次元目）の組み合わせにより、血清や組織、細胞抽出液中のきわめて多種類の蛋白質を個々のポリペプチド成分に解離し、個々のスポットとして分離することができる優れた解析方法であり、これに関連した多くの技術が開発されている（例えば特許文献１および特許文献２）。
【０００３】
二次元電気泳動法の一次元目に使用するカラムチューブとして、通常、ガラス製カラムチューブが使用されている。一次元目の電気泳動終了後、このガラス製カラムチューブに振動を与えたり軽くたたいて衝撃を与えたりといった方法でゲルを抜き取り、このゲルを二元目の電気泳動に用いる。
【０００４】
しかし、カラムチューブからゲルを抜き取る際にゲルが破断しないようにするためには熟練を要する。特にゲル濃度が高いとゲルが抜き取りにくく、ゲルの破断をきたすことが多い。また、ゲルの抜き取りに時間がかかるため、一元目の電気泳動により得られた泳動パターンが拡散して乱れてしまう恐れがある。
【０００５】
【特許文献１】特開２０００−２４９６８４号公報
【特許文献２】特表２００２−５１４３０９号公報
【考案の開示】
【考案が解決しようとする課題】
【０００６】
本考案は、二次元電気泳動法における一次元目の電気泳動終了後、ゲルを破断せずに容易に抜き取ることができるカラムチューブを提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本考案者らは、鋭意研究を重ねた結果、プラスチック製のカラムチューブを用いることにより、ゲルを容易に抜き取ることに成功した。
【０００８】
したがって、本考案は、以下の考案を包含する。
（１）二次元電気泳動の一次元目に用いる、プラスチック製カラムチューブ。
（２）電気泳動後、切り開くことによってカラム内のゲルを破断することなく取り出すことができる上記（１）のプラスチック製カラムチューブ。
【考案の効果】
【０００９】
本考案に係るプラスチック製カラムチューブを用いることにより、ゲルを破断せずに容易に抜き取ることが可能となる。
【００１０】
また、ゲルの抜き取りにかかる作業時間が大幅に短縮されるため、ゲルの抜き取りの間に泳動パターンが拡散によって乱れてしまうということがなく、精度の高い分析を行うことができる。
【００１１】
さらに、従来のガラス製カラムチューブからは抜き取りが困難であった濃度の高いゲルや長いゲルについても容易に抜き取ることができるため、様々なゲルを作製することができるようになり、電気泳動におけるゲル選択の幅が広くなる。
【００１２】
また、本考案に係るプラスチック製カラムチューブは、所望の着色をすることが可能であるため、試料毎にカラムチューブの色を変える等の手段により、試料の取り違いを防止することができる。また、カラムチューブを透明または半透明の材料で形成した場合は、ゲルや試料を充填する際に、充填量を外部から目視で確認することができるため、充填を容易に行うことができる。また、カラムチューブを透明または半透明の材料で形成した場合は、色素を単独で、またはゲルや試料と混合して電気泳動を行うことにより、色素または試料の泳動距離を目視で確認することができる。
【００１３】
さらに、本考案に係るカラムチューブは、プラスチック製であるため、従来のガラス製カラムチューブと異なり、運搬中にカラムチューブが破損してゲルを損なう危険が少ない。
【００１４】
また、本考案に係るカラムチューブは使い捨てにすることができるため、実験終了後に使用済みカラムチューブを洗浄する必要がなく、実験時間の短縮を図ることができる。さらに、前回の実験で付着したゲル、試料等の汚れに起因する実験上の失敗を防ぐことができる。
【考案を実施するための最良の形態】
【００１５】
以下、図面を用いて本考案を説明する。
本考案のカラムチューブ
図１に、本考案に係るカラムチューブの一態様を示す。本考案に係るカラムチューブ１は、二次元電気泳動の一次元目の泳動において用いられ、プラスチックを材料としてなることを特徴とする。用いるプラスチックは、特に限定されるものではないが、ポリプロピレンや塩化ビニル等が挙げられ、タンパク質等の吸着のないプラスチック（例えばポリプロピレン）が好ましい。
【００１６】
カラムチューブの形状や大きさは、特に限定されるものではなく、用いるゲル、装置、サンプル等により適宜選択することができるが、典型的には、内部にゲルを入れるための連続的な空洞を設けた円柱型や角柱型のものを用いる。本考案のカラムチューブはプラスチックを材料とするため、所望の長さ、形状等に容易に切断することができる。
【００１７】
また、ゲルの取り出しを容易にするために、カラムチューブの内側面をシリコン等によりコーティングすることもできる。さらに、カラムチューブの外側面を非親水性の塩化ビニル等によりラッピングすることにより、電気泳動を行った際に液漏れがあった場合に、バッファータンクから下のタンクまで通電してしまうことを防止できる。また、ラッピングによりカラムチューブの強化を図ることもできる。
【００１８】
本考案のカラムチューブを用いたゲルの作成方法
図２に、本考案のカラムチューブ１を用いたゲル作製方法の一態様を示す。この方法では、まず、平底試験管２内に本考案に係る１本以上のカラムチューブ１を所望の本数だけ入れる。次に、カラムチューブのすき間を利用して底までシリコンチューブ３を差し込み、ゲル溶液を注入する。このとき、グラジエントゲルを作製する場合であれば、ペリスタポンプ（図示せず）を経由させてゲル溶液を注入し、濃度均一なゲルを作製する場合であれば、そのままゲル溶液を流し込めばよい。このようにしてゲルを注入することにより、ゲル中に気泡を生ずることなく、ゲルを試験管底から各カラムに均一に充填することができる。注入したゲル溶液がゲル化した後に、平底試験管２からカラムチューブ１を取り出す。
【００１９】
図２に示した方法の他、カラムチューブ１の一方の端部をシーロンフィルム等で塞ぎ、ゲル液がカラムチューブ内に留まるようにしてゲルを注入することもできる。
【００２０】
このようにして作製したプラスチック製カラムチューブ入りのゲルは、従来のガラス製カラムチューブ入りのゲルと同様の方法で二次元電気泳動の一元目の電気泳動に用いることができる。
【００２１】
電気泳動後のゲルの取り出し
一元目の電気泳動が終了した後、カラムチューブを電気泳動装置から取り外し、このカラムチューブに入ったゲルを取り出して二元目の電気泳動に用いる。
【００２２】
ゲルをカラムチューブから取り出すために、カラムチューブの側面で、好ましくは縦方向に、一般的な切断器具、例えばカッターなどで１箇所以上の切り込みを入れる。切り込みは、一定の間隔を空けて入れるか、若しくはランダムに入れることができるが、カラムチューブの上端から下端まで縦方向に、連続的かつ直線状の切り込みを入れることが好ましい。カラムチューブを剥いてゲルを取り出す場合には、カラムチューブが容易に剥けるようにするために、通常、表裏の２箇所、すなわち１箇所に切り込みを入れ、さらに当該切り込みの１８０℃反対側に対称的に同様の切り込みを入れる。なお、カラムチューブおよびゲルが柔らかい場合は１箇所の切り込みでよいが、カラムチューブの素材やゲルの種類によっては、３箇所以上の切り込みを入れることも好ましい。
【００２３】
切り込みを入れるときにゲルを傷つけないようにするために、カラムチューブを固定することが好ましい。カラムチューブを固定する装置の例として、カラムチューブを固定する溝付き台４およびスリットの入った上蓋５を図３に示す。
【００２４】
溝付き台４は、カラムチューブの十分な安定が確保される大きさであることが必要とされる。溝付き台４は、好ましくは縦１８０〜２５０ｍｍ、横３０〜５０ｍｍ、高さ１５〜４０ｍｍの直方体であるが、この大きさや形状は、カラムチューブの大きさや形状により適宜選択することができる。溝付き台４の中央には、カラムチューブを収納するための溝５が設けられている。溝の大きさはカラムチューブに合わせて適宜選択することができるが、カラムチューブに切り込みを入れる間にカラムチューブが動くことがなく、かつカラムチューブの着脱が容易であるような大きさとする。また、溝５を複数設けて、複数のカラムを同時に収納できるようにすることも可能である（図示せず）。
【００２５】
上蓋６は、溝付き台４を内側に収納することができるような形状、大きさとする。上蓋６への溝付き台４の収納は、カラムチューブに切り込みを入れるときに上蓋６または溝付き台４がずれて動いてしまうことがないようにするために、溝付き台４と上蓋６の側面の一部または全部を係合させることが好ましい。上蓋６と溝付き台４との係合部分に凹凸を設けて嵌合させる等の手段によって両者をより確実に固定することも可能である。上蓋６には、溝付き台４と上蓋６を係合させた際に、溝付き台４の溝５の上方に配置されるスリット７が設けられている。溝付き台４に溝５が複数設けられている場合は、スリット７についても、溝５の数に応じた数、位置に設けることが好ましい。
【００２６】
図４は、カラムチューブ１を収納した溝付き台４を上蓋６に収納し、上蓋６のスリット７にカッター８の刃を沿わせて、カラムチューブ１の側面に切り込みを入れるところを示した図である。この図に示すように、カラムチューブに切り込みを入れるには、スリット７にカッター等の刃を差し込み、スリット７に沿って刃を動かすことにより、溝付き台４の溝５に置かれたカラムチューブ１に容易に切り込みを入れることができる。
【００２７】
カラムチューブ１に切り込みを入れた後は、ヘラ９等でカラムチューブ１の内側面を一方向になぞってゲル１０をカラムチューブ１から押し出すか（図５）、あるいはカラムチューブ１を剥いてゲルから外すことにより（図示せず）、ゲルを取り出すことができる。
【００２８】
また、予めカラムチューブに切り込みを入れて、当該切り込み部分をイージーピールオープン性を有するシールで密封しておくことにより、電気泳動後に当該シールをはがして、ゲルを容易に取り出すこともできる。
【００２９】
ゲルの保存
作製したゲルは、通常４℃で２週間程度保存することができるが、保存の際に、カラムチューブからゲルを取り出して保存することもできるし、カラムチューブにゲルを入れたままで保存することもできる。また、ゲルを−２０〜−８０℃で凍結させて長期間凍結保存することもできる。凍結保存する場合は、電気泳動後にカラムチューブからゲルを取り出して凍結保存してもよいし、あるいはカラムチューブに入れたままで凍結保存してもよい。カラムチューブに入れたままゲルを凍結保存した場合は、電気泳動を始める直前に解凍してゲルを取り出せばよい。
【実施例】
【００３０】
プラスチック製カラムチューブとガラス製カラムチューブとの比較実験
本考案に係るカラムチューブと、従来のガラス製のカラムチューブを用いて一次元目に非変性ブルーネィティブ電気泳動を行う二次元電気泳動を行い、カラムチューブ間の電気泳動およびゲルの取り出しを比較した。
【００３１】
長さ１８０ミリ、内径４．５ミリのプラスチック製のカラムチューブと、このカラムチューブと同形状のガラス製のカラムチューブ各２０本を、それぞれ平底試験管に入れた。カラムチューブのすき間を利用して平底試験管の底にシリコンチューブを差し込み、ペリスタポンプとグラジエントミキサーを経由させて、濃度勾配５％から１８％の非変性ポリアクリルアミドゲルを、シリコンチューブを通じて各カラムチューブに流し込み、カラムチューブ入りゲルを作製した。これらのゲルを用いて、定常圧室温８℃の条件下で、イネ葉蛋白質およびカイコ蛋白質について二次元電気泳動を行った。各カラムチューブについて、同一条件で５回ゲルを作製し、電気泳動の状態を確認した。
【００３２】
一次元目の電気泳動後、プラスチック製のカラムチューブについては、縦２０５ｍｍ、横４０ｍｍ、高さ２５ｍｍの直方体の溝付き台の溝にカラムチューブを乗せて半固定した。この溝付き台に、幅１ｍｍ、長さ２０５ｍｍのスリットの入った縦２１５ｍｍ、横５０ｍｍ、高さ１８ｍｍの直方体の上蓋をかぶせ、次にカッターを上蓋のスリットに差しこみ、カラムチューブの上端から下端まで縦方向に連続的な切り込みを入れた。この切り込みにヘラを差し込み、カラムチューブの内側面をなぞるようにしてゲルを押し出して取り出した。ガラス製のカラムチューブについては従来のように注射器と長い針を用いて、カラムチューブの一方の先端に水流を当てながら針を徐々に差込み、水流と針によりカラムチューブからゲルをはがしてゲルをカラムチューブから滑り出させることでゲルを取り出した（図示せず）。
【００３３】
結果
プラスチック製のカラムチューブとガラス製カラムチューブは、いずれも同様に電気泳動が行われており、電気泳動中の液漏れも発生しなかった。
【００３４】
また、一次元目の電気泳動終了後のゲルの取り出しについて、プラスチック製カラムチューブを用いた場合は、全てのカラムチューブについて、ゲルを破断せずに容易かつ迅速に取り出すことができたが、ガラス製カラムチューブを用いた場合は、ゲルを破断せずに取り出せたのは２０本中１〜２本だった。
【００３５】
なお、この実験においては、一次元目に非変性ブルーネィティブ電気泳動を行ったが、その他の種類の二次元電気泳動、例えば一次元目に非還元状態でのＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動、二次元目に還元状態で泳動する非還元二次元電気泳動、一次元目に金属イオンキレート状態、二次元目に金属イオンがある状態で泳動を行う二次元電気泳動、一次元目にアガロースゲルを用いた高分子タンパク質のための等電点電気泳動、二次元目に通常の二次元電気泳動で用いられるポリアクリルアミドゲル電気泳動を行う二次元電気泳動、または一次元目および二次元目とも通常の二次元電気泳動を用いる二次元電気泳動においても、同様の結果となることが確認されている。一次元目にイモロビンを用いた等電点電気泳動、二次元目に通常のＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動を用いる二次元電気泳動についても同様の結果となることが予想される。
【図面の簡単な説明】
【００３６】
【図１】本考案に係るプラスチック製カラムチューブの斜視図である。
【図２】本考案のカラムチューブを用いてゲルを作製しているところを示す。
【図３】カラムチューブの側面に切り込みを入れるための溝付き台と上蓋の斜視図である。
【図４】カラムチューブに切り込みを入れているところを示す。
【図５】カラムチューブからゲルを取り出しているところを示す。
【符号の説明】
【００３７】
１…カラムチューブ
２…平底試験管
３…シリコンチューブ
４…溝付き台
５…溝
６…上蓋
７…スリット
８…カッター
９…ヘラ
１０…ゲル
【図１】
0003101523.tif 000003
【図２】
0003101523.tif 000004
【図３】
0003101523.tif 000005
【図４】
0003101523.tif 000006
【図５】
0003101523.tif 000007
【手続補正書】
【提出日】平成15年10月23日(2003.10.23)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２２】
ゲルをカラムチューブから取り出すために、カラムチューブの側面で、好ましくは縦方向に、一般的な切断器具、例えばカッターなどで１箇所以上の切り込みを入れる。切り込みは、一定の間隔を空けて入れるか、若しくはランダムに入れることができるが、カラムチューブの上端から下端まで縦方向に、連続的かつ直線状の切り込みを入れることが好ましい。カラムチューブを剥いてゲルを取り出す場合には、カラムチューブが容易に剥けるようにするために、通常、表裏の２箇所に切り込みを入れる。すなわち１箇所に切り込みを入れ、さらに当該切り込みの１８０℃反対側に対称的に切り込みを入れる。なお、カラムチューブおよびゲルが柔らかい場合は１箇所の切り込みでよいが、カラムチューブの素材やゲルの種類によっては、３箇所以上の切り込みを入れることも好ましい。