(57)【要約】  本発明は、ヘテロダイマーＩＬ１２およびＩＬ２３受容体の両方の非シグナル伝達鎖であるＩＬ１２Ｒβ１に特異的に結合する抗体に関する。本発明は、さらに具体的には、血球のＩＬ１２／ＩＬ１８誘導ＩＦＮγ生産を阻害することができるＩＬ１２およびＩＬ２３受容体アンタゴニストである特異的抗体、ならびにＩＦＮγ生産、ＩＬ１２および／ＩＬ２３シグナル伝達を阻害することにより処置することができる病理学的疾患、例えば、リウマチ性関節炎、乾癬または炎症性腸疾患または他の自己免疫性および炎症性疾患を処置するための、該抗体の組成物および使用方法に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ｉ）配列番号：８９のヒトＩＬ１２Ｒベータ１ポリペプチドのエピトープに結合する単離された抗体または抗体の抗原結合部分を有するタンパク質であって、該エピトープは、ａ）ヒトＩＬ１２Ｒベータ１ポリペプチドのアミノ酸残基４１６から４２９内に含まれるか、またはｂ）上記ａ）に定義されているアミノ酸残基の少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８または９個またはそれ以上を含むか、またはｃ）上記ａ）に定義されているアミノ酸残基を含み、該抗体またはタンパク質は、１ｎＭ以下のＫＤで配列番号：８９のＩＬ１２Ｒベータ１ポリペプチドに結合し、そしてインビトロ競合結合アッセイで測定したとき、配列番号：８９のＩＬ１２Ｒベータ１ポリペプチドへのＩＬ１２および／またはＩＬ２３の結合を阻害する、単離された抗体またはタンパク質。
【請求項２】
（ａ）配列番号：１のＨＣＤＲ１、配列番号：２のＨＣＤＲ２、配列番号：３のＨＣＤＲ３を含む可変重鎖アミノ酸配列ならびに配列番号：４のＬＣＤＲ１、配列番号：５のＬＣＤＲ２および配列番号：６のＬＣＤＲ３を含む可変軽鎖アミノ酸配列；
（ｂ）配列番号：７のＨＣＤＲ１、配列番号：８のＨＣＤＲ２、配列番号：９のＨＣＤＲ３を含む可変重鎖アミノ酸配列ならびに配列番号：１０のＬＣＤＲ１、配列番号：１１のＬＣＤＲ２および配列番号：１２のＬＣＤＲ３を含む可変軽鎖アミノ酸配列；
（ｃ）配列番号：１３のＨＣＤＲ１、配列番号：１４のＨＣＤＲ２、配列番号：１５のＨＣＤＲ３を含む可変重鎖アミノ酸配列ならびに配列番号：１６のＬＣＤＲ１、配列番号：１７のＬＣＤＲ２および配列番号：１８のＬＣＤＲ３を含む可変軽鎖アミノ酸配列；
（ｄ）配列番号：１９のＨＣＤＲ１、配列番号：２０のＨＣＤＲ２、配列番号：２１のＨＣＤＲ３を含む可変重鎖アミノ酸配列ならびに配列番号：２２のＬＣＤＲ１、配列番号：２３のＬＣＤＲ２および配列番号：２４のＬＣＤＲ３を含む可変軽鎖アミノ酸配列；
（ｅ）配列番号：２５のＨＣＤＲ１’、配列番号：２６のＨＣＤＲ２’、配列番号：２７のＨＣＤＲ３’を含む可変重鎖アミノ酸配列ならびに配列番号：２８のＬＣＤＲ１’、配列番号：２９のＬＣＤＲ２’および配列番号：３０のＬＣＤＲ３’を含む可変軽鎖アミノ酸配列；
（ｆ）配列番号：３１のＨＣＤＲ１’、配列番号：３２のＨＣＤＲ２’、配列番号：３３のＨＣＤＲ３’を含む可変重鎖アミノ酸配列ならびに配列番号：３４のＬＣＤＲ１’、配列番号：３５のＬＣＤＲ２’および配列番号：３６のＬＣＤＲ３’を含む可変軽鎖アミノ酸配列；
（ｇ）配列番号：３７のＨＣＤＲ１’、配列番号：３８のＨＣＤＲ２’、配列番号：３９のＨＣＤＲ３’を含む可変重鎖アミノ酸配列ならびに配列番号：４０のＬＣＤＲ１’、配列番号：４１のＬＣＤＲ２’および配列番号：４２のＬＣＤＲ３’を含む可変軽鎖アミノ酸配列；
（ｈ）配列番号：４３のＨＣＤＲ１’、配列番号：４４のＨＣＤＲ２’、配列番号：４５のＨＣＤＲ３’を含む可変重鎖アミノ酸配列ならびに配列番号：４６のＬＣＤＲ１’、配列番号：４７のＬＣＤＲ２’および配列番号：４８のＬＣＤＲ３’を含む可変軽鎖アミノ酸配列；または
（ｉ）ＣＤＲが、上記（ａ）−（ｈ）に記載されている少なくとも１つの抗体またはタンパク質の対応するＣＤＲ配列と少なくとも６０パーセント配列同一性を共有する、可変重鎖（ＶＨ）および可変軽鎖（ＶＬ）アミノ酸配列
のいずれかを含む単離された抗体または抗体の抗原結合部分を有するタンパク質であって、該抗体またはタンパク質は、１ｎＭ以下のＫＤにて配列番号：８９のＩＬ１２Ｒβ１ポリペプチドに結合し、インビトロ競合的結合アッセイにおいて測定されたとき、配列番号：８９のＩＬ１２Ｒβ１ポリペプチドへのＩＬ１２および／またはＩＬ２３結合を阻害する、単離された抗体またはタンパク質。
【請求項３】
配列番号：９８のカニクイザルＩＬ１２Ｒβ１ポリペプチドと交差反応する、請求項１または２に記載の単離された抗体またはタンパク質。
【請求項４】
１ｎＭ以下のＩＣ５０にてヒト血球におけるＩＬ１２依存性ＩＦＮ−γ生産を阻害する、請求項１、２または３に記載の単離された抗体またはタンパク質。
【請求項５】
完全にヒトである、請求項１から４のいずれかに記載の単離された抗体またはタンパク質。
【請求項６】
変異された、または化学的に修飾されたアミノ酸Ｆｃ領域を含む請求項１から５のいずれかに記載の単離された抗体またはタンパク質であって、野生型Ｆｃ領域を有する対応する抗体と比較したとき、該変異された、または化学的に修飾されたＦｃ領域は、該抗体に対してＡＤＣＣ活性を付与しないか、または減少したＡＤＣＣ活性を付与する、単離された抗体またはタンパク質。
【請求項７】
変異された、または化学的に修飾されたアミノ酸Ｆｃ領域が変異サイレントＩｇＧ１  Ｆｃ領域である、請求項６に記載の単離された抗体またはタンパク質。
【請求項８】
配列番号：４９、配列番号：５１、配列番号：５３および配列番号：５５の少なくとも１つと少なくとも９５パーセント配列同一性を有する、ＶＨポリペプチド配列を含む、請求項１から７のいずれかに記載の単離された抗体またはタンパク質。
【請求項９】
配列番号：５０、配列番号：５２、配列番号：５４および配列番号：５６の少なくとも１つと少なくとも９５パーセント配列同一性を有する、ＶＬポリペプチド配列を含む、請求項１から８のいずれかに記載の単離された抗体またはタンパク質。
【請求項１０】
（ａ）配列番号：５７の重鎖アミノ酸配列および配列番号：６９の軽鎖アミノ酸配列；
（ｂ）配列番号：６１の重鎖アミノ酸配列および配列番号：６９の軽鎖アミノ酸配列；
（ｃ）配列番号：６５の重鎖アミノ酸配列および配列番号：６９の軽鎖アミノ酸配列；
（ｄ）配列番号：５８の重鎖アミノ酸配列および配列番号：７０の軽鎖アミノ酸配列；
（ｅ）配列番号：６２の重鎖アミノ酸配列および配列番号：７０の軽鎖アミノ酸配列；
（ｆ）配列番号：６６の重鎖アミノ酸配列および配列番号：７０の軽鎖アミノ酸配列；
（ｇ）配列番号：５９の重鎖アミノ酸配列および配列番号：７１の軽鎖アミノ酸配列；
（ｈ）配列番号：６３の重鎖アミノ酸配列および配列番号：７１の軽鎖アミノ酸配列；
（ｉ）配列番号：６７の重鎖アミノ酸配列および配列番号：７１の軽鎖アミノ酸配列；
（ｊ）配列番号：６０の重鎖アミノ酸配列および配列番号：７２の軽鎖アミノ酸配列；
（ｋ）配列番号：６４の重鎖アミノ酸配列および配列番号：７２の軽鎖アミノ酸配列；または、
（ｌ）配列番号：６８の重鎖アミノ酸配列および配列番号：７２の軽鎖アミノ酸配列
のいずれかを含む、請求項１から９のいずれかに記載の単離された抗体またはタンパク質。
【請求項１１】
ＩＬ１２Ｒβ１への結合から、請求項１から１０のいずれかに記載の少なくとも１つの抗体を交差ブロックするか、もしくは該抗体により交差ブロックされるか、または、請求項１から１０のいずれかに記載の抗体と同じエピトープへの結合に対して競合する、抗体または抗体の抗原結合部分を有するタンパク質。
【請求項１２】
（ｉ）１ｎＭ以下のＫＤにて配列番号：８９のＩＬ１２Ｒβ１ポリペプチドに結合する、
（ｉｉ）インビトロ競合的結合アッセイにおいて測定されたとき、配列番号：８９のＩＬ１２Ｒβ１ポリペプチドへのＩＬ１２および／またはＩＬ２３結合を阻害する、および
（ｉｉｉ）配列番号：９８のカニクイザルＩＬ１２Ｒβ１ポリペプチドと交差反応する、
請求項１１に記載の単離された抗体またはタンパク質。
【請求項１３】
医薬としての使用のための、請求項１から１２のいずれかに記載の単離された抗体またはタンパク質。
【請求項１４】
ＩＬ１２Ｒβ１により媒介されるか、またはＩＦＮγ生産を阻害することにより処置することができる病理学的疾患の処置における使用のための、請求項１から１３のいずれかに記載の単離された抗体またはタンパク質。
【請求項１５】
自己免疫性および炎症性疾患、例えば、リウマチ性関節炎、乾癬または炎症性腸疾患の処置における使用のための、請求項１から１４のいずれかに記載の単離された抗体またはタンパク質。
【請求項１６】
１つ以上の薬学的に許容される賦形剤、希釈剤または担体と共に、請求項１から１５のいずれかに記載の抗体またはタンパク質を含む、医薬組成物。
【請求項１７】
他の活性成分をさらに含む、請求項１６に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
請求項１から１５のいずれかに記載の抗体またはタンパク質の凍結乾燥製剤。
【請求項１９】
治療的に許容される量の請求項１から１５のいずれかに記載の抗体またはタンパク質を含む充填済シリンジ。
【請求項２０】
請求項１から１５のいずれかに記載の抗体またはタンパク質の少なくとも重鎖および／または軽鎖可変領域をコードする単離された核酸。
【請求項２１】
請求項２０に記載の１つ以上の核酸を含むクローニングまたは発現ベクター。
【請求項２２】
配列番号：７３−８８からなる群から選択される少なくとも１つの核酸を含む、宿主細胞における請求項１から１５のいずれかに記載の抗体の組換え生産のために適当なクローニングまたは発現ベクター。
【請求項２３】
適当なプロモーター配列に作動可能に連結した少なくとも以下のいずれかのコード配列：
（ａ）配列番号：７３および配列番号：８５；
（ｂ）配列番号：７７および配列番号：８５；
（ｃ）配列番号：８１および配列番号：８５；
（ｄ）配列番号：７４および配列番号：８６；
（ｅ）配列番号：７８および配列番号：８６；
（ｆ）配列番号：８２および配列番号：８６；
（ｇ）配列番号：７５および配列番号：８７；
（ｈ）配列番号：７９および配列番号：８７；
（ｉ）配列番号：８３および配列番号：８７；
（ｊ）配列番号：７６および配列番号：８８；
（ｋ）配列番号：８０および配列番号：８８；または
（ｌ）配列番号：８４および配列番号：８８
を含む、請求項２２に記載のクローニングまたは発現ベクター。
【請求項２４】
請求項２１から２３のいずれかに記載の１つ以上のクローニングまたは発現ベクターを含む宿主細胞。
【請求項２５】
請求項１から１５のいずれかに記載の抗体またはタンパク質の生産のための方法であって、請求項２４に記載の宿主細胞を培養すること、および、該抗体またはタンパク質を精製および回収することを含む方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヘテロダイマーＩＬ１２およびＩＬ２３受容体の両方の非シグナル伝達鎖であるＩＬ１２Ｒβ１に特異的に結合する抗体に関する。
【０００２】
本発明は、さらに具体的には、血球のＩＬ１２／ＩＬ１８誘導ＩＦＮγ生産を阻害することができるＩＬ１２およびＩＬ２３受容体アンタゴニストである特異的抗体、ならびにＩＦＮγ生産、ＩＬ１２および／ＩＬ２３シグナル伝達を阻害することにより処置することができる病理学的疾患、例えば、リウマチ性関節炎、乾癬または炎症性腸疾患または他の自己免疫性および炎症性疾患を処置するための、該抗体の組成物および使用方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
ＩＬ１２受容体ベータ１（ＩＬ１２Ｒβ１）鎖は、Ｔｈ１／Ｔｈ１７媒介疾患、例えば、乾癬および他の自己免疫性および炎症性疾患の処置のための可能性のある治療標的として知られている。乾癬は、表皮層の過増殖ならびに樹状細胞およびＴ細胞の高度浸潤により特徴付けられる一般的な慢性炎症性皮膚疾患である。Ｔ細胞は、タイプ１サイトカイン（ＩＦＮ−γおよびＴＮＦ−αを含む）を分泌することにより皮膚において生じる病理学的反応にいて重要な役割を果たし、ケラチン生成細胞過剰増殖、血管形成および好中球浸潤を誘導する。
【０００４】
乾癬におけるＴｈ１免疫応答の発生に重要であると思われる２つのサイトカインは、インターロイキン−１２（ＩＬ１２）およびインターロイキン−２３（ＩＬ２３）である。両方のサイトカインは、抗原提示細胞、例えば、マクロファージおよび樹状細胞により生産され、Ｔ細胞およびナチュラルキラー細胞を活性化することにより機能する。ＩＬ１２およびＩＬ２３は、ＩＬ１２においてｐ３５／ｐ４０タンパク質サブユニット、およびＩＬ２３においてｐ１９／ｐ４０タンパク質サブユニットからなる、可溶性サイトカインのヘテロダイマーファミリーのメンバーである。いずれかのサイトカインのｐ４０サブユニットは、免疫細胞の表面で見られる膜貫通ＩＬ１２受容体β１（ＩＬ１２Ｒβ１）に結合する。ＩＬ１２  ｐ４０／ＩＬ１２Ｒβ１相互作用の妨害は、ＩＬ１２およびＩＬ２３の両方の生物学的活性を防止し得る（Preskyら J.Immunol. 160 (1998): 2174-79、Parhamら J.Immunol. 168 (2002): 5699-5708）。
【０００５】
乾癬を含むいくつかの炎症性および自己免疫性疾患は、悪化したＴｈ１および／またはＴｈ１７応答に関連している。それらの多くは、現在、全ての患者において有効でない、一般的な免疫抑制剤または非常に選択的に作用する生物学的薬剤、例えば、抗−ＴＮＦ−α抗体のいずれかで処置される。これらは、感染のリスクを上昇させ、反復処置後に無効となることが見出された。したがって、上昇した安全性プロフィールおよび長期寛解または疾患治療を誘導する同時能力での処置に対する未だ満たされない医薬上の必要が存在する。
【０００６】
乾癬様状態を誘導したＴ細胞サブセットの移入後に投与したときでさえ、マウスにおいて、ＩＬ１２ｐ４０に対する中和抗体は、乾癬病巣を成功裏に破壊した（Hongら J.Immunol. 162.12 (1999): 7480-91）。ＩＬ１２およびＩＬ２３の両方を標的とする抗−ＩＬ１２ｐ４０抗体は、現在、乾癬（Kauffmanら J.Invest Dermatol. 123.6 (2004): 1037-44、Pappら Lancet. 371.9625 (2008): 1675-84、Kimballら Arch.Dermatol. 144.2 (2008): 200-07）、クローン病（Sandbornら Gastroenterology. 135.4 (2008): 1130-41）および多発性硬化症（Segalら Lancet Neurol. 7.9 (2008): 796-804）について臨床試験中である。ＩＬ１２Ｒβ１を標的化すること、したがって、Ｔｈ１およびＴｈ１７細胞集団の分化および維持ならびにこれらの細胞によるＩＬ１２およびＩＬ２３媒介性炎症性サイトカイン生産は、改善された治療剤の機会を提供する。
【０００７】
米国特許第６，０４６，０１２号は、ＩＬ１２Ｒβ１および抗−ＩＬ１２Ｒβ１に結合する抗体について、一般的に記載している。抗−マウスＩＬ１２Ｒβ１モノクローナル抗体もまた、Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ（Ｃａｔ＃  ５５１４５５）により市販されている。
【０００８】
しかしながら、今日まで、自己免疫性および炎症性疾患、例えば、乾癬、リウマチ性関節炎またはクローン病の処置における使用のための、非常に強力なＩＬ１２Ｒβ１アンタゴニスト活性を示すヒトＩＬ１２Ｒβ１に対する結合分子は当分野において記載が存在しない。それぞれの相互作用パートナー（ＩＬ１２ｐ４０）を標的化することによる間接的な証拠のみが、当該経路を有効にしている。
【発明の概要】
【０００９】
したがって、１つの局面において、本発明は、ＩＬ１２受容体およびＩＬ２３受容体の両方に結合する抗体の抗原結合部分を含む抗体またはタンパク質であって、配列番号：８９のＩＬ１２Ｒβ１ポリペプチドに特異的に結合することを特徴とする抗体またはタンパク質を提供する。
【００１０】
１つの特定の態様において、本発明の単離された抗体またはタンパク質は、
（ａ）配列番号：１のＨＣＤＲ１、配列番号：２のＨＣＤＲ２、配列番号：３のＨＣＤＲ３を含む可変重鎖アミノ酸配列ならびに配列番号：４のＬＣＤＲ１、配列番号：５のＬＣＤＲ２および配列番号：６のＬＣＤＲ３を含む可変軽鎖アミノ酸配列；
（ｂ）配列番号：７のＨＣＤＲ１、配列番号：８のＨＣＤＲ２、配列番号：９のＨＣＤＲ３を含む可変重鎖アミノ酸配列ならびに配列番号：１０のＬＣＤＲ１、配列番号：１１のＬＣＤＲ２および配列番号：１２のＬＣＤＲ３を含む可変軽鎖アミノ酸配列；
（ｃ）配列番号：１３のＨＣＤＲ１、配列番号：１４のＨＣＤＲ２、配列番号：１５のＨＣＤＲ３を含む可変重鎖アミノ酸配列ならびに配列番号：１６のＬＣＤＲ１、配列番号：１７のＬＣＤＲ２および配列番号：１８のＬＣＤＲ３を含む可変軽鎖アミノ酸配列；
（ｄ）配列番号：１９のＨＣＤＲ１、配列番号：２０のＨＣＤＲ２、配列番号：２１のＨＣＤＲ３を含む可変重鎖アミノ酸配列ならびに配列番号：２２のＬＣＤＲ１、配列番号：２３のＬＣＤＲ２および配列番号：２４のＬＣＤＲ３を含む可変軽鎖アミノ酸配列；
（ｅ）配列番号：２５のＨＣＤＲ１’、配列番号：２６のＨＣＤＲ２’、配列番号：２７のＨＣＤＲ３’を含む可変重鎖アミノ酸配列ならびに配列番号：２８のＬＣＤＲ１’、配列番号：２９のＬＣＤＲ２’および配列番号：３０のＬＣＤＲ３’を含む可変軽鎖アミノ酸配列；
（ｆ）配列番号：３１のＨＣＤＲ１’、配列番号：３２のＨＣＤＲ２’、配列番号：３３のＨＣＤＲ３’を含む可変重鎖アミノ酸配列ならびに配列番号：３４のＬＣＤＲ１’、配列番号：３５のＬＣＤＲ２’および配列番号：３６のＬＣＤＲ３’を含む可変軽鎖アミノ酸配列；
（ｇ）配列番号：３７のＨＣＤＲ１’、配列番号：３８のＨＣＤＲ２’、配列番号：３９のＨＣＤＲ３’を含む可変重鎖アミノ酸配列ならびに配列番号：４０のＬＣＤＲ１’、配列番号：４１のＬＣＤＲ２’および配列番号：４２のＬＣＤＲ３’を含む可変軽鎖アミノ酸配列；
（ｈ）配列番号：４３のＨＣＤＲ１’、配列番号：４４のＨＣＤＲ２’、配列番号：４５のＨＣＤＲ３’を含む可変重鎖アミノ酸配列ならびに配列番号：４６のＬＣＤＲ１’、配列番号：４７のＬＣＤＲ２’および配列番号：４８のＬＣＤＲ３’を含む可変軽鎖アミノ酸配列；または
（ｉ）ＣＤＲが、上記（ａ）−（ｈ）に記載されている少なくとも１つの抗体またはタンパク質の対応するＣＤＲ配列と少なくとも６０、７０、８０、９０、９５または１００パーセント配列同一性を共有する、可変重鎖（ＶＨ）および可変軽鎖（ＶＬ）アミノ酸配列のいずれかを含み、該抗体またはタンパク質は、１ｎＭ以下、１００ｐＭ以下または１０ｐＭ以下のＫＤにて配列番号：８９のＩＬ１２Ｒβ１ポリペプチドに結合し、インビトロ競合的結合アッセイにおいて測定されたとき、ＩＬ１２Ｒβ１ポリペプチドへのＩＬ１２および／またはＩＬ２３結合を阻害する。
【００１１】
別の局面において、本発明は、（ｉ）配列番号：８９のヒトＩＬ１２Ｒベータ１ポリペプチドのエピトープに結合する単離された抗体または抗体の抗原結合部分を有するタンパク質であって、該エピトープは、ａ）配列番号：８９のヒトＩＬ１２Ｒベータ１ポリペプチドのアミノ酸残基４１６から４２９内に含まれるか；またはｂ）上記ａ）に定義されているアミノ酸残基の少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８または９個またはそれ以上を含むか；またはｃ）上記ａ）に定義されているアミノ酸残基を含む、単離された抗体またはタンパク質を提供する。
【００１２】
１つの態様において、（ｉ）配列番号：８９のヒトＩＬ１２Ｒベータ１ポリペプチドのエピトープに結合する単離された抗体または抗体の抗原結合部分を有するタンパク質であって、該エピトープは、ａ）配列番号：８９のヒトＩＬ１２Ｒベータ１ポリペプチドのアミノ酸残基４１６から４２９内に含まれるか；またはｂ）上記ａ）に定義されているアミノ酸残基の少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８または９個またはそれ以上を含むか；またはｃ）上記ａ）に定義されているアミノ酸残基を含み、および／または（ｉｉ）上記（ｉ）に定義されているエピトープに結合する抗体と競合する単離された抗体またはタンパク質を提供する。
【００１３】
別の態様において、（ｉ）アミド水素／ジュウテリウム交換質量分析を使用して測定されるとき、配列番号：８９のヒトＩＬ１２Ｒベータ１ポリペプチドのエピトープに結合する単離された抗体または抗体の抗原結合部分を有するタンパク質であって、該エピトープは、ａ）配列番号：８９のヒトＩＬ１２Ｒベータ１ポリペプチドのアミノ酸残基４１６から４２９内に含まれるか；またはｂ）上記ａ）に定義されているアミノ酸残基の少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８または９個またはそれ以上を含むか；またはｃ）上記ａ）に定義されているアミノ酸残基を含み、および／または（ｉｉ）上記（ｉ）に定義されているエピトープに結合する抗体と競合する単離された抗体またはタンパク質を提供する。
【００１４】
別の態様において、（ｉ）配列番号：８９のヒトＩＬ１２Ｒベータ１ポリペプチドのエピトープに結合する単離された抗体または抗体の抗原結合部分を有するタンパク質であって、該エピトープは、ａ）ヒトＩＬ１２Ｒベータ１ポリペプチドのアミノ酸残基４１６から４２９内に含まれるか；またはｂ）上記ａ）に定義されているアミノ酸残基の少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８または９個またはそれ以上を含むか；またはｃ）上記ａ）に定義されているアミノ酸残基を含み、および／または（ｉｉ）上記（ｉ）に定義されているエピトープに結合する抗体と競合し、該抗体またはタンパク質は、１ｎＭ以下のＫＤで配列番号：８９のＩＬ１２Ｒベータ１ポリペプチドに結合し、インビトロ競合的結合アッセイにおいて測定されたとき、配列番号：８９のＩＬ１２Ｒベータ１ポリペプチドへのＩＬ１２および／またはＩＬ２３の結合を阻害する、単離された抗体またはタンパク質を提供する。
【００１５】
別の態様において、（ｉ）アミド水素／ジュウテリウム交換質量分析を使用して測定されるとき、配列番号：８９のヒトＩＬ１２Ｒベータ１ポリペプチドのエピトープに結合する単離された抗体または抗体の抗原結合部分を有するタンパク質であって、該エピトープは、ａ）ヒトＩＬ１２Ｒベータ１ポリペプチドのアミノ酸残基４１６から４２９内に含まれるか；またはｂ）上記ａ）に定義されているアミノ酸残基の少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８または９個またはそれ以上を含むか；またはｃ）上記ａ）に定義されているアミノ酸残基を含み、および／または（ｉｉ）上記（ｉ）に定義されているエピトープに結合する抗体と競合し、該抗体またはタンパク質は、１ｎＭ以下のＫＤで配列番号：８９のＩＬ１２Ｒベータ１ポリペプチドに結合し、インビトロ競合的結合アッセイにおいて測定されたとき、配列番号：８９のＩＬ１２Ｒベータ１ポリペプチドへのＩＬ１２および／またはＩＬ２３の結合を阻害する、単離された抗体またはタンパク質を提供する。
【００１６】
別の態様において、配列番号：８９のヒトＩＬ１２Ｒベータ１ポリペプチドの残基４１６から４２９内のエピトープに結合する、および／または配列番号：８９のヒトＩＬ１２Ｒベータ１ポリペプチドの残基４１６から４２９内のエピトープに結合する抗体または抗体の抗原結合部分を有するタンパク質と競合する単離された抗体または抗体の抗原結合部分を有するタンパク質を提供する。
【００１７】
別の態様において、アミド水素／ジュウテリウム交換質量分析を使用して測定されるとき、配列番号：８９のヒトＩＬ１２Ｒベータ１ポリペプチドの残基４１６から４２９内のエピトープに結合する、および／または配列番号：８９のヒトＩＬ１２Ｒベータ１ポリペプチドの残基４１６から４２９内のエピトープに結合する抗体または抗体の抗原結合部分を有するタンパク質と競合する単離された抗体または抗体の抗原結合部分を有するタンパク質を提供する。
【００１８】
別の態様において、配列番号：８９のヒトＩＬ１２Ｒベータ１ポリペプチドの残基４１６から４２９内のエピトープに結合する、および／または配列番号：８９のヒトＩＬ１２Ｒベータ１ポリペプチドの残基４１６から４２９内のエピトープに結合する抗体または抗体の抗原結合部分を有するタンパク質と競合する単離された抗体または抗体の抗原結合部分を有するタンパク質であって、該抗体またはタンパク質は、１ｎＭ以下のＫＤで配列番号：８９のＩＬ１２Ｒベータ１ポリペプチドに結合し、インビトロ競合的結合アッセイにおいて測定されたとき、配列番号：８９のＩＬ１２Ｒベータ１ポリペプチドへのＩＬ１２および／またはＩＬ２３の結合を阻害する、単離された抗体またはタンパク質を提供する。
【００１９】
別の態様において、アミド水素／ジュウテリウム交換質量分析を使用して測定されるとき、配列番号：８９のヒトＩＬ１２Ｒベータ１ポリペプチドの残基４１６から４２９内のエピトープに結合する、および／または配列番号：８９のヒトＩＬ１２Ｒベータ１ポリペプチドの残基４１６から４２９内のエピトープに結合する抗体または抗体の抗原結合部分を有するタンパク質と競合する単離された抗体または抗体の抗原結合部分を有するタンパク質であって、該抗体またはタンパク質は、１ｎＭ以下のＫＤで配列番号：８９のＩＬ１２Ｒベータ１ポリペプチドに結合し、インビトロ競合的結合アッセイにおいて測定されたとき、配列番号：８９のＩＬ１２Ｒベータ１ポリペプチドへのＩＬ１２および／またはＩＬ２３の結合を阻害する、単離された抗体またはタンパク質を提供する。
【００２０】
別の態様において、配列番号：８９のＩＬ１２Ｒベータ１ポリペプチドの残基４１６から４２９内のエピトープに結合する、および／または配列番号：８９のＩＬ１２Ｒベータ１ポリペプチドの残基４１６から４２９内に結合する抗体と競合する単離された抗体または抗体の抗原結合部分を有するタンパク質を提供する。
【００２１】
別の態様において、アミド水素／ジュウテリウム交換質量分析を使用して測定されるとき、配列番号：８９のＩＬ１２Ｒベータ１ポリペプチドの残基４１６から４２９に結合する、および／または配列番号：８９のＩＬ１２Ｒベータ１ポリペプチドの残基４１６から４２９内に結合する抗体と競合する単離された抗体または抗体の抗原結合部分を有するタンパク質を提供する。
【００２２】
別の態様において、配列番号：８９のＩＬ１２Ｒベータ１ポリペプチドの残基４１６から４２９内のエピトープに結合する、および／または配列番号：８９のＩＬ１２Ｒベータ１ポリペプチドの残基４１６から４２９内に結合する抗体と競合する単離された抗体または抗体の抗原結合部分を有するタンパク質であって、１ｎＭ以下のＫＤで配列番号：８９のＩＬ１２Ｒベータ１ポリペプチドに結合し、インビトロ競合的結合アッセイにおいて測定されたとき、配列番号：８９のＩＬ１２Ｒベータ１ポリペプチドへのＩＬ１２および／またはＩＬ２３の結合を阻害する該抗体またはタンパク質を提供する。
【００２３】
別の態様において、配列番号：８９のＩＬ１２Ｒベータ１ポリペプチドの残基４１６から４２９内の少なくとも１つのアミノ酸残基に結合する、および／または配列番号：８９のＩＬ１２Ｒベータ１ポリペプチドの残基４１６から４２９内の少なくとも１つのアミノ酸残基に結合する抗体と競合する単離された抗体または抗体の抗原結合部分を有するタンパク質を提供する。
【００２４】
別の態様において、アミド水素／ジュウテリウム交換質量分析を使用して測定されるとき、配列番号：８９のＩＬ１２Ｒベータ１ポリペプチドの残基４１６から４２９内の少なくとも１つのアミノ酸残基に結合する、および／または配列番号：８９のＩＬ１２Ｒベータ１ポリペプチドの残基４１６から４２９内の少なくとも１つのアミノ酸残基に結合する抗体と競合する単離された抗体または抗体の抗原結合部分を有するタンパク質を提供する。
【００２５】
本明細書に記載されている態様において、エピトープ結合は、アミド水素／ジュウテリウム交換質量分析または当分野で知られている他の慣用のエピトープマッピング技術を使用して決定され得る。
【００２６】
本明細書に記載されている態様において、抗体競合は、本明細書に記載されているＢｉａｃｏｒｅまたはＥｌｉｓａベースの交差ブロッキングアッセイを使用して、または以下の工程を使用して測定することができる。
【００２７】
好ましい態様において、抗体または抗体の抗原結合部分を有するタンパク質は、上記定義のエピトープでヒトＩＬ１２Ｒベータ１に結合する。
【００２８】
本発明の範囲内に含まれる抗体または抗体の抗原結合部分を有するタンパク質は、（ｉ）配列番号：８９のヒトＩＬ１２Ｒベータ１ポリペプチドに対する特異性についてスクリーニングすること；（ｉｉ）所望により、該抗体のアフィニティーを決定すること；（ｉｉｉ）所望により、インビトロ競合的結合アッセイにおいて測定されたとき、配列番号：８９のＩＬ１２Ｒベータ１ポリペプチドへのＩＬ１２および／またはＩＬ２３の結合の阻害を評価すること；および、（ｉｖ）所望により、アミド水素／ジュウテリウム交換質量分析または当分野で知られている他の慣用のエピトープマッピング技術を使用して、配列番号：８９のヒトＩＬ１２Ｒベータ１ポリペプチドのアミノ酸残基４１６から４２９により定義されるエピトープへの結合、または該エピトープ内の結合を評価すること、および／または本明細書に記載されているＢｉａｃｏｒｅまたはＥｌｉｓａベースの交差ブロッキングアッセイを使用して、または当分野で知られている他の交差ブロッキングアッセイを使用して、上記定義のエピトープに結合する抗体との競合を評価することにより同定することができる。スクリーニング工程後、（ｉ）本発明の範囲内に含まれる抗体またはタンパク質は、以下の工程：（ａ）抗体のアフィニティーを決定すること；（ｂ）インビトロ競合的結合アッセイにおいて測定されたとき、配列番号：８９のＩＬ１２Ｒベータ１ポリペプチドへのＩＬ１２および／またはＩＬ２３の結合の阻害を評価すること；（ｃ）アミド水素／ジュウテリウム交換質量分析または当分野で知られている他の慣用のエピトープマッピング技術を使用して、配列番号：８９のヒトＩＬ１２Ｒベータ１ポリペプチドのアミノ酸残基４１６から４２９により定義されるエピトープへの結合、または該エピトープ内の結合を評価すること、および（ｄ）本明細書に記載されているＢｉａｃｏｒｅまたはＥｌｉｓａベースの交差ブロッキングアッセイを使用して、または当分野で知られている他の交差ブロッキングアッセイを使用して、上記定義のエピトープに結合する抗体との競合を評価することの１または２または３または４つを行うことにより同定され得る。
【００２９】
本発明の範囲内に含まれる抗体または抗体の抗原結合部分を有するタンパク質は、（ｉ）配列番号：８９のヒトＩＬ１２Ｒベータ１ポリペプチドに対する特異性についてスクリーニングすること；（ｉｉ）該抗体のアフィニティーを決定すること；（ｉｉｉ）インビトロ競合的結合アッセイにおいて測定されたとき、配列番号：８９のＩＬ１２Ｒベータ１ポリペプチドへのＩＬ１２および／またはＩＬ２３の結合の阻害を評価すること；および（ｉｖ）所望により、アミド水素／ジュウテリウム交換質量分析または当分野で知られている他の慣用のエピトープマッピング技術を使用して、配列番号：８９のヒトＩＬ１２Ｒベータ１ポリペプチドのアミノ酸残基４１６から４２９により定義されるエピトープへの結合、または該エピトープ内の結合を評価すること、および／または本明細書に記載されているＢｉａｃｏｒｅまたはＥｌｉｓａベースの交差ブロッキングアッセイを使用して、または当分野で知られている他の交差ブロッキングアッセイを使用して、上記定義のエピトープに結合する抗体との競合を評価することにより同定することができる。
【００３０】
本発明の範囲内に含まれる抗体または抗体の抗原結合部分を有するタンパク質は、（ｉ）配列番号：８９のヒトＩＬ１２Ｒベータ１ポリペプチドに対する特異性についてスクリーニングすること；（ｉｉ）該抗体のアフィニティーを決定すること；（ｉｉｉ）インビトロ競合的結合アッセイにおいて測定されたとき、配列番号：８９のＩＬ１２Ｒベータ１ポリペプチドへのＩＬ１２および／またはＩＬ２３の結合の阻害を評価すること；および（ｉｖ）アミド水素／ジュウテリウム交換質量分析または当分野で知られている他の慣用のエピトープマッピング技術を使用して、配列番号：８９のヒトＩＬ１２Ｒベータ１ポリペプチドのアミノ酸残基４１６から４２９により定義されるエピトープへの結合、または該エピトープ内の結合を評価すること、および／または本明細書に記載されているＢｉａｃｏｒｅまたはＥｌｉｓａベースの交差ブロッキングアッセイを使用して、または当分野で知られている他の交差ブロッキングアッセイを使用して、上記定義のエピトープに結合する抗体との競合を評価することにより同定することができる。
【００３１】
本発明の範囲内に含まれる抗体または抗体の抗原結合部分を有するタンパク質は、（ｉ）配列番号：８９のヒトＩＬ１２Ｒベータ１ポリペプチドに対する特異性についてスクリーニングすること；および（ｉｉ）アミド水素／ジュウテリウム交換質量分析または当分野で知られている他の慣用のエピトープマッピング技術を使用して、配列番号：８９のヒトＩＬ１２Ｒベータ１ポリペプチドのアミノ酸残基４１６から４２９により定義されるエピトープへの結合、または該エピトープ内の結合を評価すること、および／または本明細書に記載されているＢｉａｃｏｒｅまたはＥｌｉｓａベースの交差ブロッキングアッセイを使用して、または当分野で知られている他の交差ブロッキングアッセイを使用して、上記定義のエピトープに結合する抗体との競合を評価することにより同定することができる。
【００３２】
１つの特定の態様において、単離された抗体またはタンパク質は、約１ｎＭ、１００ｐＭまたは１０ｐＭ以下のＩＣ５０でヒト血球におけるＩＬ１２依存性ＩＦＮ−γ生産を阻害する。
【００３３】
本発明の単離された抗体またはタンパク質は、完全ヒトまたはヒト化抗体であり得る。１つの態様において、それは、野生型Ｆｃ領域を有する対応する抗体と比較したとき、該抗体に対してＡＤＣＣ活性を付与しないか、または減少したＡＤＣＣ活性を付与する変異された、または化学的に修飾されたアミノ酸Ｆｃ領域を含む。特定の態様において、それは、変異サイレント(silent)ＩｇＧ１抗体である。
【００３４】
別の態様において、本発明の抗体またはタンパク質は、本質的に、ＩＬ１２Ｒβ１ポリペプチド（配列番号：８９）に特異的に結合するペグ化された抗体の抗原結合部分からなる。
【００３５】
別の態様において、本発明の抗体またはタンパク質は、配列番号：４９、配列番号：５１、配列番号：５３および配列番号：５５の少なくとも１つと少なくとも９５または１００パーセント配列同一性を有するポリペプチド配列を有する抗体の可変重鎖領域（ＶＨ）を含む。
【００３６】
別の態様において、本発明の抗体またはタンパク質は、配列番号：５０、配列番号：５２、配列番号：５４および配列番号：５６の少なくとも１つと少なくとも９５または１００パーセント配列同一性を有するポリペプチド配列を有する抗体の可変軽鎖領域（ＶＬ）を含む。
【００３７】
特定の態様において、本発明の抗体は、
（ａ）配列番号：５７の重鎖アミノ酸配列および配列番号：６９の軽鎖アミノ酸配列からなるｍＡｂ１；
（ｂ）配列番号：６１の重鎖アミノ酸配列および配列番号：６９の軽鎖アミノ酸配列からなるｍＡｂ２；
（ｃ）配列番号：６５の重鎖アミノ酸配列および配列番号：６９の軽鎖アミノ酸配列からなるｍＡｂ３；
（ｄ）配列番号：５８の重鎖アミノ酸配列および配列番号：７０の軽鎖アミノ酸配列からなるｍＡｂ４；
（ｅ）配列番号：６２の重鎖アミノ酸配列および配列番号：７０の軽鎖アミノ酸配列からなるｍＡｂ５；
（ｆ）配列番号：６６の重鎖アミノ酸配列および配列番号：７０の軽鎖アミノ酸配列からなるｍＡｂ６；
（ｇ）配列番号：５９の重鎖アミノ酸配列および配列番号：７１の軽鎖アミノ酸配列からなるｍＡｂ７；
（ｈ）配列番号：６３の重鎖アミノ酸配列および配列番号：７１の軽鎖アミノ酸配列からなるｍＡｂ８；
（ｉ）配列番号：６７の重鎖アミノ酸配列および配列番号：７１の軽鎖アミノ酸配列からなるｍＡｂ９；
（ｊ）配列番号：６０の重鎖配列および配列番号：７２の軽鎖配列からなるｍＡｂ１０；
（ｋ）配列番号：６４の重鎖配列および配列番号：７２の軽鎖配列からなるｍＡｂ１１；または、
（ｌ）配列番号：６８の重鎖配列および配列番号：７２の軽鎖配列からなるｍＡｂ１２；
（ｍ）配列番号：９０の重鎖配列および配列番号：６９の軽鎖配列からなるｍＡｂ１３；
（ｎ）配列番号：９１の重鎖配列および配列番号：７０の軽鎖配列からなるｍＡｂ１４；
（ｏ）配列番号：９２の重鎖配列および配列番号：７１の軽鎖配列からなるｍＡｂ１５；および、
（ｐ）配列番号：９３の重鎖配列および配列番号：７２の軽鎖配列からなるｍＡｂ１６
からなる群から選択される。
【００３８】
別の態様において、本発明の抗体または結合タンパク質は、少なくとも１つの上記定義の抗体ｍＡｂ１−ｍＡｂ１６によりＩＬ１２Ｒβ１への結合から交差ブロックされる。あるいは、本発明の単離された抗体または結合タンパク質は、ＩＬ１２Ｒβ１への結合から少なくとも１つの抗体ｍＡｂ１−ｍＡｂ１６を交差ブロックするものの中から選択され得る。
【００３９】
本発明はさらに、さらに好ましくは、ＩＬ１２Ｒβ１が媒介するか、またはＩＦＮγ生産、ＩＬ１２および／またはＩＬ２３シグナル伝達を阻害することにより処置することができる病理学的疾患の処置のための、医薬として使用するための本発明の該抗体またはタンパク質、特にｍＡｂ１からｍＡｂ１６抗体の使用に関する。１つの特定の態様において、本発明の抗体またはタンパク質は、自己免疫性および炎症性疾患、例えば、リウマチ性関節炎、乾癬または炎症性腸疾患の処置のために使用され得る。
【００４０】
本発明はまた、該抗体またはタンパク質を、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤、希釈剤または担体と共に含む医薬組成物を含む。１つの特定の態様において、医薬組成物は、１つ以上の他の活性成分をさらに含む。
【００４１】
１つの特定の態様において、該医薬組成物は凍結乾燥製剤である。別の特定の態様において、医薬組成物は、好ましくは充填済シリンジとして調製された、治療的に許容される量の本発明の抗体またはタンパク質を含む液体製剤である。
【００４２】
本発明はまた、本発明の抗体またはタンパク質を生産するための方法に関する。このような方法は、宿主細胞において、特に、本発明の抗体またはタンパク質、例えば、ｍＡｂ１−ｍＡｂ１６の組換え生産のための、本発明の抗体またはタンパク質の少なくとも重および／または軽鎖可変領域をコードする核酸分子またはこのような核酸を含むクローニング発現ベクターを含む。特定の態様において、このようなクローニングまたは発現ベクターは、配列番号：７３−８８および配列番号：９４−９７からなる群から選択される少なくとも１つの核酸を含む。別の態様において、それは、適当なプロモーター配列に作動可能に連結した、ｍＡｂ１からｍＡｂ１６のいずれか１つの重鎖および軽鎖配列の少なくとも以下のコード配列のいずれかを含む：
（ａ）ｍＡｂ１：配列番号：７３および配列番号：８５；
（ｂ）ｍＡｂ２：配列番号：７７および配列番号：８５；
（ｃ）ｍＡｂ３：配列番号：８１および配列番号：８５；
（ｄ）ｍＡｂ４：配列番号：７４および配列番号：８６；
（ｅ）ｍＡｂ５：配列番号：７８および配列番号：８６；
（ｆ）ｍＡｂ６：配列番号：８２および配列番号：８６；
（ｇ）ｍＡｂ７：配列番号：７５および配列番号：８７；
（ｈ）ｍＡｂ８：配列番号：７９および配列番号：８７；
（ｉ）ｍＡｂ９：配列番号：８３および配列番号：８７；
（ｊ）ｍＡｂ１０：配列番号：７６および配列番号：８８；
（ｋ）ｍＡｂ１１：配列番号：８０および配列番号：８８；
（ｌ）ｍＡｂ１２：配列番号：８４および配列番号：８８；
（ｍ）ｍＡｂ１３：配列番号：９４および配列番号：８５；
（ｎ）ｍＡｂ１４：配列番号：９５および配列番号：８６；
（ｏ）ｍＡｂ１５：配列番号：９６および配列番号：８７；または
（ｐ）ｍＡｂ１６：配列番号：９７および配列番号：８８。
【００４３】
本発明はさらに、上記１つ以上のクローニングまたは発現ベクターを含む宿主細胞、ならびに、本発明の抗体またはタンパク質、特にｍＡｂ１−ｍＡｂ１６の生産のための方法であって、宿主細胞を培養すること、該抗体またはタンパク質を精製および回収することを含む方法に関する。
【００４４】
本発明がより容易に理解されるために、特定の用語を最初に定義する。さらなる定義は、詳細な説明全体を通して示される。
【００４５】
「免疫応答」なる用語は、例えば、リンパ球、抗原提示細胞、食細胞、顆粒球、および上記細胞または肝臓により生産される可溶性高分子（抗体、サイトカインおよび補体を含む）の、侵入性病原体、病原体に感染した細胞または組織、癌性細胞、または、自己免疫もしくは病理学的炎症の場合には、正常ヒト細胞または組織を、選択的に損傷し、破壊し、または人体から除去する作用を示す。
【００４６】
「シグナル変換経路」または「シグナル伝達活性」は、一般的にタンパク質−タンパク質相互作用、例えば、受容体への増殖因子の結合により開始され、細胞のある部分から細胞の別の部分へのシグナルの伝達をもたらす生化学的因果関係を示す。一般的に、該伝達は、シグナル変換を引き起こす一連の反応における１つ以上のタンパク質上の１つ以上のチロシン、セリンまたはスレオニン残基の特異的リン酸化を含む。最後から２番目のプロセスは、一般的に核の事象を含み、遺伝子発現の変化をもたらす。
【００４７】
ＩＬ１２Ｒβ１またはＩＬ１２受容体ベータ１なる用語は、他に記載がない限り、配列番号：８９で定義されるヒトＩＬ１２Ｒβ１を示す。
【００４８】
ｐ４０なる用語は、他に記載がない限り、配列番号：９９で定義されるヒトＩＬ１２サイトカインのヒトｐ４０サブユニットを示す。
【００４９】
ｐ３５なる用語は、他に記載がない限り、配列番号：１００で定義されるヒトＩＬ１２サイトカインのヒトｐ３５サブユニットを示す。
【００５０】
ｐ１９なる用語は、他に記載がない限り、配列番号：１０１で定義されるヒトＩＬ２３サイトカインのヒトｐ１９サブユニットを示す。
【００５１】
本明細書における「抗体」なる用語は、抗体全体およびあらゆる抗原結合フラグメント（すなわち、「抗原結合部分」）またはそれらの一本鎖を含む。
【００５２】
天然「抗体」は、ジスルフィド結合により相互接続された少なくとも２つの重（Ｈ）鎖および２つの軽（Ｌ）鎖を含む糖タンパク質である。それぞれの重鎖は、重鎖可変領域（本明細書においてＶＨと略す）および重鎖定常領域で構成される。重鎖定常領域は、３つのドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３で構成される。それぞれの軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書においてＶＬと略す）および軽鎖定常領域で構成される。軽鎖定常領域は、１つのドメイン、ＣＬで構成される。ＶＨおよびＶＬ領域は、より保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）と称される領域と共に散在する、相補性決定領域（ＣＤＲ）と称される超可変性の領域にさらに細分することができる。それぞれのＶＨおよびＶＬは、アミノ末端からカルボキシ末端へ以下の順番で並んだ３つのＣＤＲおよび４つのＦＲで構成される：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含む。抗体の定常領域は、免疫系の種々の細胞（例えば、エフェクター細胞）および古典的補体系の第一成分（Ｃｌｑ）を含む宿主組織または因子への免疫グロブリンの結合を媒介し得る
【００５３】
本明細書において使用される抗体の「抗原結合部分」（または単に「抗原部分」）なる用語は、抗原（例えば、ＩＬ１２Ｒβ１の一部）に特異的に結合する能力を保持する抗体の全長または１つ以上のフラグメントを示す。抗体の抗原結合機能は、全長抗体のフラグメントにより行うことができることが知られている。抗体の「抗原結合部分」なる用語内に含まれる結合フラグメントの例は、Ｆａｂフラグメント、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインからなる一価フラグメント；Ｆ（ａｂ）２フラグメント、ヒンジ領域においてジスルフィド架橋によって連結した２つのＦａｂフラグメントを含む二価フラグメント；ＶＨおよびＣＨ１メインからなるＦｄフラグメント；抗体の単一のアームのＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖフラグメント；ＶＨドメインからなるｄＡｂフラグメント（Wardら 1989 Nature 341:544-546）；および単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）、またはこのような抗原結合部分を含むあらゆる融合タンパク質を含む。
【００５４】
さらに、Ｆｖフラグメントの２つのドメインであるＶＬおよびＶＨは別々の遺伝子によりコードされているが、それらは、組換え方法を使用して、ＶＬおよびＶＨ領域が対になって一価の分子を形成する一本鎖タンパク質（一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られる）として作成されることを可能にする合成リンカーによって連結することができる。例えば、Birdら 1988 Science 242:423-426;およびHustonら 1988 Proc. Natl. Acad. Sci. 85:5879-5883参照。このような一本鎖抗体はまた、抗体の「抗原結合部分」なる用語内に含まれることを意図する。これらの抗体フラグメントは当業者に知られている慣用の技術を使用して得られ、該フラグメントはインタクトな抗体と同じ方法で有用性についてスクリーニングされる。
【００５５】
本明細書において使用される「単離された抗体」は、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない抗体を示す（例えば、ＩＬ１２Ｒβ１に特異的に結合する単離された抗体は、ＩＬ１２Ｒβ１以外の他の抗原に特異的に結合する抗体を実質的に含まない）。しかしながら、ＩＬ１２Ｒβ１に特異的に結合する単離された抗体は、他の抗原、例えば、他の種のＩＬ１２Ｒβ１分子に対する交差反応性を有するものであってもよい。さらに、単離された抗体は、他の細胞物質および／または化学物質を実質的に含まないものであってもよい。
【００５６】
本明細書において使用される「モノクローナル抗体」または「モノクローナル抗体組成物」なる用語は、単一の分子組成物の抗体分子の調製物を示す。モノクローナル抗体組成物は、特定のエピトープに対する単一の結合特異性および親和性を示す。
【００５７】
本明細書において使用される「ヒト抗体」なる用語は、フレームワークおよびＣＤＲ領域の両方がヒト起源の配列に由来するものである可変領域を有する抗体を含むことを意図する。さらに、該抗体が定常領域を含むとき、定常領域も、このようなヒト配列、例えば、ヒト生殖細胞系列配列に由来するものであるか、または、ヒト生殖細胞系列配列の変異体バージョンであるか、あるいは、該抗体は、例えば、Ｋｎａｐｐｉｋら(2000. J Mol Biol 296, 57-86)に記載されているヒトフレームワーク配列分析から得られるコンセンサスフレームワーク配列を含むものである。
【００５８】
本発明のヒト抗体は、ヒト配列によってコードされないアミノ酸残基（例えば、インビトロのランダムもしくは部位特異的変異誘発またはインビボの体細胞変異により導入される変異）を含み得る。しかしながら、本明細書において使用される「ヒト抗体」なる用語は、別の哺乳動物種、例えばマウスの生殖細胞系列に由来するＣＤＲ配列がヒトフレームワーク配列上に移植された抗体を含むことを意図していない。
【００５９】
「ヒトモノクローナル抗体」なる用語は、フレームワークおよびＣＤＲ領域の両方がヒト配列由来である可変領域を有する単一の結合特異性を示す抗体を示す。
【００６０】
本明細書において使用される「組換えヒト抗体」なる用語は、組換え手段により調製、発現、作成または単離される全てのヒト抗体、例えば、ヒト免疫グロブリン遺伝子のトランスジェニックまたは染色体導入である動物（例えば、マウス）または該動物から調製されたハイブリドーマから単離される抗体、ヒト抗体を発現するように形質転換された宿主細胞、例えば、トランスフェクトーマから単離される抗体、組換えコンビナトリアルヒト抗体ライブラリーから単離される抗体、および、ヒト免疫グロブリン遺伝子配列の全てまたは一部を他のＤＮＡ配列へスプライシングすることを含む他のいずれかの手段により調製、発現、作成または単離される抗体を含む。このような組換えヒト抗体は、フレームワークおよびＣＤＲ領域が、ヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列に由来するものである可変領域を有する。１つの態様において、しかしながら、このような組換えヒト抗体は、インビトロの変異誘発（または、ヒトＩｇ配列に関してトランスジェニック動物を使用するとき、インビボの体細胞変異誘発）に付すことができ、したがって、該組換え抗体のＶＨおよびＶＬ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖細胞系列ＶＨおよびＶＬ配列に由来し、関連するが、インビボのヒト抗体生殖細胞系列レパートリー内には天然には存在しない可能性がある配列である。
【００６１】
本明細書において使用される「アイソタイプ」は、重鎖定常領域遺伝子により提供される抗体クラス（例えば、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、例えば、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４）を示す。
【００６２】
「抗原を認識する抗体」および「抗原に特異的な抗体」なる語句は、「抗原に特異的に結合する抗体」なる用語と本明細書において互換的に使用される。
【００６３】
本明細書において使用される「ＩＬ１２Ｒβ１ポリペプチドに特異的に結合する」抗体またはタンパク質は、１００ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、１ｎＭ以下、１００ｐＭ以下または１０ｐＭ以下のＫＤでヒトＩＬ１２Ｒβ１ポリペプチドに結合する抗体またはタンパク質を示すことが意図される。「ＩＬ１２Ｒβ１以外の抗原と交差反応する」抗体は、１０ｎＭ以下、１ｎＭ以下または１００ｐＭ以下のＫＤで抗原に結合する抗体を示すことが意図される。「特定の抗原と交差反応しない」抗体は、１００ｎＭ以上のＫＤ、または１μＭ以上のＫＤ、または１０μＭ以上のＫＤで抗原に結合する抗体を示すことが意図される。１つの態様において、抗原と交差反応しないこのような抗体は、標準結合アッセイにおいてこれらのタンパク質に対する検出不可能な結合を本質的に示す。
【００６４】
本明細書において使用される「Ｋａｓｓｏｃ」または「Ｋａ」なる用語は、特定の抗体−抗原相互作用の会合速度を示すことを意図し、本明細書において使用される「Ｋｄｉｓ」または「Ｋｄ」なる用語は、特定の抗体−抗原相互作用の解離速度を示すことを意図する。
【００６５】
本明細書において使用される「ＫＤ」なる用語は、Ｋａに対するＫｄの比（すなわちＫｄ／Ｋａ）から得られ、モル濃度（Ｍ）として表される解離定数を示すことを意図する。抗体についてのＫＤ値は、当該分野において十分に確立された方法を使用して決定することができる。抗体のＫＤを決定するための方法は、表面プラズモン共鳴を使用すること、またはバイオセンサー系、例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）システムを使用することによる。Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）システムで抗−ＩＬ１２Ｒβ１抗体ＫＤを測定するためのアッセイは、以下の実施例に記載されている。
【００６６】
本明細書において使用される「アフィニティー」なる用語は、単一の抗原性部位における抗体と抗原の間の相互作用の強さを示す。それぞれの抗原部位内において、抗体「アーム」の可変領域は、多数の部位において弱い非共有結合的力を介して抗原と相互作用する；相互作用が大きければ大きいほど、アフィニティーは強くなる。
【００６７】
本明細書において使用される「親和性」なる用語は、抗体−抗原複合体の全体的安定性または強度の有益な尺度を示す。それは、３つの主な要因：抗体エピトープアフィニティー；抗原および抗体両方の価数；および相互作用する部分の構造的配置によって制御される。最後に、これらの因子は、抗体の特異性、即ち、特定の抗体が正確な抗原エピトープに結合している可能性を規定する。
【００６８】
本明細書において使用されるＩＬ１２Ｒβ１ポリペプチドへのＩＬ１２および／またはＩＬ２３の結合を阻害する抗体またはタンパク質は、インビトロ競合的結合アッセイ、例えば、ＢｉｏｖｅｒｉｓＴＭアッセイにおいて測定されるとき、１０ｎＭ以下のＩＣ５０で、好ましくは１ｎＭ以下のＩＣ５０で、さらに好ましくは１００ｐＭ以下のＩＣ５０で、ＩＬ１２Ｒβ１ポリペプチドへのＩＬ１２および／またはＩＬ２３の結合を阻害する抗体またはタンパク質を示すことを意図する。このようなアッセイは、以下の実施例においてより詳細に記載されている。
【００６９】
本明細書において使用される「ＩＬ１２Ｒアンタゴニスト」なる用語は、ヒト細胞アッセイ、例えば、ヒト血球におけるＩＬ１２依存性ＩＦＮγ生産アッセイにおいてＩＬ１２の存在下でＩＬ１２Ｒβ１誘導シグナル伝達活性を阻害する抗体またはタンパク質を示すことを意図する。このようなアッセイは、以下の実施例においてより詳細に記載されている。いくつかの態様において、本発明の抗体またはタンパク質は、１０ｎＭ以下、１ｎＭ以下または１００ｐＭ以下のＩＣ５０でヒト血球アッセイにおいて測定されるとき、ＩＬ１２依存性ＩＦＮγ生産を阻害する。このようなアッセイは、以下の実施例においてより詳細に記載されている。
【００７０】
本明細書において使用される「ＩＬ２３Ｒアンタゴニスト」なる用語は、ヒト細胞アッセイ、例えば、ヒト血球におけるＩＬ２３依存性ＩＦＮγ生産アッセイにおいてＩＬ２３の存在下でＩＬ１２Ｒβ１誘導シグナル伝達活性を阻害する抗体を示すことを意図する。このようなアッセイは、以下の実施例においてより詳細に記載されている。いくつかの態様において、本発明の抗体またはタンパク質は、１０ｎＭ以下、１ｎＭ以下または１００ｐＭ以下のＩＣ５０でヒト血球アッセイにおいて測定されるとき、ＩＬ２３  ＩＦＮγ生産を阻害する。このようなアッセイは、以下の実施例においてより詳細に記載されている。
【００７１】
本明細書において使用される「アゴニスト活性を有しない」抗体は、細胞ベースのアッセイ、例えば、ヒト血球におけるＩＬ１２  ＩＦＮγ生産アッセイでのＩＬ１２の非存在下で、ＩＬ１２Ｒβ１媒介シグナル伝達活性を有意に増加させない抗体を示すことを意図する。このようなアッセイは、以下の実施例においてより詳細に記載されている。
【００７２】
本明細書において使用される、全血液細胞におけるＩＬ１２  エキソビボ  ＩＦＮγ生産を阻害する抗体またはタンパク質は、１０μｇ／ｍｌを超える抗−ＩＬ１２Ｒβ１  ｍＡｂ  血漿レベルで、コントロールレベルの１０％未満のレベルにＩＬ１２  エキソビボ  ＩＦＮγ生産を低下させる抗体またはタンパク質を示すことを意図する。いくつかの態様において、それは、１０μｇ／ｍｌを超える抗−ＩＬ１２Ｒβ１  ｍＡｂ  血漿レベルで霊長類血球におけるＩＬ１２  エキソビボ  ＩＦＮγ生産を完全に破壊する抗体またはタンパク質を示す。このようなアッセイは、以下の実施例においてより詳細に記載されている。
【００７３】
本明細書において使用される「ＡＤＣＣ」または「抗体依存性細胞毒性」活性なる用語は、細胞を枯渇させる活性を示す。ＡＤＣＣ活性は、以下の実施例においてより詳細に記載されているＡＤＣＣアッセイにより測定することができる。
【００７４】
本明細書において使用される、本発明の抗体またはタンパク質に対する「選択性」なる用語は、特定の標的ポリペプチドに結合するが、密接に関係するポリペプチドには結合しない抗体またはタンパク質を示す。
【００７５】
本明細書において使用される抗体に対する「高親和性」なる用語は、標的抗原に対して１ｎＭ以下のＫＤを有する抗体を示す。本明細書において使用される「対象」なる用語は、すべてのヒトまたは非ヒト動物を含む。
【００７６】
「非ヒト動物」なる用語は、全ての脊椎動物、例えば、哺乳動物および非哺乳動物、例えば、非ヒト霊長類、ヒツジ、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、鳥類、両生動物、は虫類などを含む。
【００７７】
本明細書において使用される「最適化」なる用語は、生産細胞または生物体、一般的に真核細胞、例えば、ピチア(Pichia)細胞、トリコデルマ(Trichoderma)細胞、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）またはヒト細胞において好ましいコドンを使用して、アミノ酸配列をコードするように変更されたヌクレオチド配列を意味する。最適化されたヌクレオチド配列は、「親」配列としても知られている出発ヌクレオチド配列によって元々コードされていたアミノ酸配列を完全に、または可能な限り多く保持するように操作される。本明細書における最適化された配列は、ＣＨＯ哺乳動物細胞において好ましいコドンを有するように操作されているが、しかしながら、他の真核細胞におけるこれらの配列の最適化された発現もまた本明細書において構想される。最適化されたヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列もまた、最適化されていると称される。
【００７８】
本明細書において使用される２つの配列間の同一性パーセントは、２つの配列の最適なアラインメントのために導入されるために必要であるギャップの数およびそれぞれのギャップの長さを考慮して、配列で共有される同一の位置の数の関数（すなわち、％同一性＝同一の位置の＃／全部の位置の＃×１００）である。配列間の比較および２つの配列間の同一性パーセントの決定は、以下に記載されるとおり、数学アルゴリズムを使用して、成し遂げることができる。
【００７９】
２つのアミノ酸配列間の同一性パーセントは、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれているE. MeyersおよびW. Millerのアルゴリズム（Comput. Appl. Biosci., 4:11-17, 1988）を使用し、ＰＡＭ１２０重み付き残基表、１２のギャップ長ペナルティおよび４のギャップペナルティを使用して決定することができる。あるいは、２つのアミノ酸配列間の同一性パーセントは、ＧＣＧソフトウェアパッケージ（http://www.gcg.comにおいて利用できる）中のＧＡＰプログラムに組み込まれているＮｅｅｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃｈ（J. Mol, Biol. 48:444-453, 1970）アルゴリズムを使用し、Ｂｌｏｓｓｏｍ６２マトリックスまたはＰＡＭ２５０マトリックスのいずれか、および１６、１４、１２、１０、８、６または４のギャップ重みおよび１、２、３、４、５または６の長さ重みを使用して決定することができる。
【００８０】
２つのアミノ酸配列間の同一性パーセントはまた、例えば、アルゴリズム、例えば、核酸配列に関して、デフォルトとして、１１のワード長（Ｗ）、１０の期待値（Ｅ）、Ｍ＝５、Ｎ＝４、および両鎖比較を使用するＢＬＡＳＴＮプログラムを使用して決定され得る。
【００８１】
「交差ブロックする」、「交差ブロックされる」および「交差ブロッキング」なる用語は、標準競合的結合アッセイにおいて他の抗体または結合剤とＩＬ１２Ｒβ１との結合を妨げる抗体または他の結合剤の能力を意味するために、本明細書において互換的に使用される。
【００８２】
抗体または他の結合剤が別の抗体または結合分子とＩＬ１２Ｒβ１との結合を妨げることができる能力または程度、およびそれを本発明による交差ブロックすると言えるか否かは、標準競合結合アッセイを使用して決定することができる。１つの適当なアッセイは、表面プラズモン共鳴技術を使用して相互作用の程度を測定することができるＢｉａｃｏｒｅ技術（例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ  ３０００装置（Biacore, Uppsala, Sweden）を使用することにより）の使用を含む。交差ブロッキングを測定するための別のアッセイは、ＥＬＩＳＡベースのアプローチを使用する。これらの方法のさらなる詳細は、以下の実施例に挙げられている。
【００８３】
本発明において、本発明の交差ブロッキング抗体または他の結合剤は、抗体または結合剤の組合せ（混合）の記録された結合が、組合せにおいて、２つの抗体または結合剤の（上記定義のとおり）最大理論結合の８０％から０．１％（例えば、８０％から４％）、具体的には、最大理論結合の７５％から０．１％（例えば、７５％から４％）、さらに具体的には、最大理論結合の７０％から０．１％（例えば、７０％から４％）、さらに具体的には、６５％から０．１％（例えば、６５％から４％）であるように、記載されたＢＩＡｃｏｒｅ交差ブロッキングアッセイにおいてＩＬ１２Ｒβ１に結合する。
【００８４】
溶液相抗−ＩＬ１２Ｒβ１抗体が、溶液相抗−ＩＬ１２Ｒβ１抗体（すなわち陽性コントロールウェル）の非存在下で得られたＩＬ１２Ｒβ１検出シグナルと比較して、ＩＬ１２Ｒβ１検出シグナル（すなわち被覆された抗体に結合されたＩＬ１２Ｒβ１の量）の６０％から１００％、具体的には７０％から１００％、さらに具体的には８０％から１００％の減少を引き起こすことができるとき、抗体は、実施例に記載されているＥＬＩＳＡアッセイにおいて交差ブロッキングとして定義される。
【００８５】
組換え抗体
本発明の抗体は、単離され、以下の表１に記載されている全長重鎖および軽鎖アミノ酸配列により構造的に特徴付けられるヒト組換え抗体ｍＡｂ１−ｍＡｂ１６を含む：
表１：ｍＡｂ１−ｍＡｂ１６の全長重鎖および軽鎖アミノ酸配列
【表１】
2013543384.tif 000002
【００８６】
本発明のこのような単離された抗体ｍＡｂ１−ｍＡｂ１６の対応する可変領域、ＶＨおよびＶＬアミノ酸配列は、以下の表２に示される。
表２：ｍＡｂ１−ｍＡｂ１６の可変重鎖および軽鎖アミノ酸配列
【表２】
2013543384.tif 000003
【００８７】
本発明の他の抗体は、上記配列に記載されているＣＤＲ領域とＣＤＲ領域において少なくとも６０、７０、８０、９０、９５または１００同一性パーセントを有する、アミノ酸欠失、挿入または置換により変異されているアミノ酸を有するものを含む。いくつかの態様において、本発明の抗体は、わずか１、２、３、４または５個のアミノ酸が、上記配列に記載されているＣＤＲ領域と比較したとき、ＣＤＲ領域におけるアミノ酸欠失、挿入または置換により変異されている変異アミノ酸配列を含む、ｍＡｂ１−ｍＡｂ１６のいずれか１つの変異体である。
【００８８】
ｍＡｂ１−ｍＡｂ１６の全長軽鎖および重鎖ヌクレオチドコード配列は、以下の表３に示される。
表３：全長重鎖および軽鎖ＤＮＡコード配列
【表３】
2013543384.tif 000004
【００８９】
本発明の抗体をコードする他の核酸は、上記または以下の表４および５の配列に記載されているＣＤＲ対応コード領域と少なくとも６０、７０、８０、９０、９５または１００同一性パーセントを有する、ヌクレオチド欠失、挿入または置換により変異されている核酸を含む。
【００９０】
いくつかの態様において、それは、わずか１、２、３、４または５個のヌクレオチドが、上記または以下の表４および５の配列に記載されているＣＤＲコード領域とＣＤＲコード領域においてヌクレオチド欠失、挿入または置換により変化されている変異核酸を含む。
【００９１】
同じエピトープに結合する抗体において、ＶＨ、ＶＬ、全長軽鎖および全長重鎖配列（ヌクレオチド配列およびアミノ酸配列）は、「混合し、マッチングして」、本発明の他の抗−ＩＬ１２Ｒβ１結合分子を作製することができる。このような「混合し、マッチングした」抗体のＩＬ１２Ｒβ１結合は、上記結合アッセイまたは他の慣用の結合アッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡ）を使用して試験することができる。これらの鎖を混合し、マッチングしたとき、特定のＶＨ／ＶＬペアからのＶＨ配列は、構造的に類似のＶＨ配列で置換されるべきである。同様に、特定の全長重鎖／全長軽鎖ペアからの全長重鎖配列は、構造的に類似の全長重鎖配列で置換されるべきである。同様に、特定のＶＨ／ＶＬペアからのＶＬ配列は、構造的に類似のＶＬ配列で置換されるべきである。同様に、特定の全長重鎖／全長軽鎖ペアからの全長軽鎖配列は、構造的に類似の全長軽鎖配列で置換されるべきである。したがって、１つの局面において、本発明は、配列番号：４９、５１、５３および５５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；ならびに配列番号：５０、５２、５４および５６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を有する単離された組換え抗体であって；該重鎖および軽鎖領域は、該抗体がＩＬ１２Ｒβ１に特異的に結合するように選択される組換え抗体を提供する。
【００９２】
本発明のいくつかの抗体のＶＨ  ＣＤＲ１（使用されるＣＤＲ定義に依存してＨＣＤＲ１またはＨＣＤＲ１’とも称される）、ＶＨ  ＣＤＲ２（使用されるＣＤＲ定義に依存してＨＣＤＲ２またはＨＣＤＲ２’とも称される）、ＶＨ  ＣＤＲ３（使用されるＣＤＲ定義に依存してＨＣＤＲ１またはＨＣＤＲ１’とも称される）、ＶＬ  ＣＤＲ１（使用されるＣＤＲ定義に依存してＬＣＤＲ１またはＬＣＤＲ１’とも称される）、ＶＬ  ＣＤＲ２（使用されるＣＤＲ定義に依存してＬＣＤＲ２またはＬＣＤＲ２’とも称される）、ＶＬ  ＣＤＲ３（使用されるＣＤＲ定義に依存してＨＣＤＲ３またはＨＣＤＲ３’とも称される）のアミノ酸配列の例は、以下の表４および５に示される。
【００９３】
表４において、本発明のいくつかの抗体のＣＤＲ領域は、Ｋａｂａｔ系を使用して表される（Kabat, E. Aら 1991 Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242、Zhao&Lu, 2009, Molecular Immunology 47: 694-700も参照）。
【００９４】
読みやすさのために、ＣＤＲ領域がＫａｂａｔ定義にしたがって示されるとき、それらは、それぞれ、以下、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３と称される。
表４：Ｋａｂａｔ定義にしたがうｍＡｂ１からｍＡｂ１６のＣＤＲ領域
【表４】
2013543384.tif 000005
【００９５】
表５において、本発明の同じ抗体のＣＤＲ領域は、Ｃｈｏｔｈｉａ系を使用して示される（Al-Lazikaniら 1997. J. Mol. Biol. 273, 927-948）。読みやすさのために、ＣＤＲ領域がＣｈｏｔｈｉａ定義にしたがって示されるとき、それらは、それぞれ、以下、ＨＣＤＲ１’、ＨＣＤＲ２’、ＨＣＤＲ３’、ＬＣＤＲ１’、ＬＣＤＲ２’、ＬＣＤＲ３’と称される。
表５：Ｃｈｏｔｈｉａ定義にしたがうｍＡｂ１からｍＡｂ１６のＣＤＲ領域
【表５】
2013543384.tif 000006
【００９６】
これらの抗体のそれぞれがＩＬ１２Ｒβ１に結合することができ、抗原結合特異性がＣＤＲ１、２および３領域により主に提供されることを考慮すると、ＶＨＣＤＲ１、２および３配列ならびにＶＬＣＤＲ１、２および３配列は、「混合し、マッチングする」ことができる（すなわち、異なる抗体からのＣＤＲは混合し、マッチングすることができ、ＶＨＣＤＲ１、２および３ならびにＶＬＣＤＲ１、２および３を含むそれぞれの抗体は本発明の他の抗−ＩＬ１２Ｒβ１結合分子を生成する）。このような「混合し、マッチングする」抗体のＩＬ１２Ｒβ１結合は、上記および実施例の結合アッセイまたは他の慣用のアッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡ）を使用して試験することができる。ＶＨＣＤＲ配列を混合し、マッチングしたとき、特定のＶＨ配列からのＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／またはＣＤＲ３配列は、構造的に同様のＣＤＲ配列で置換されるべきである。同様に、ＶＬＣＤＲ配列を混合し、マッチングしたとき、特定のＶＬ配列からのＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／またはＣＤＲ３配列は、構造的に同様のＣＤＲ配列で置換されるべきである。新規ＶＨおよびＶＬ配列が、１つ以上のＶＨおよび／またはＶＬＣＤＲ領域配列を、本発明のモノクローナル抗体に対して本明細書に示されているＣＤＲ配列からの構造的に同様の配列で置換することにより作製することができることは、当業者に容易に理解される。
【００９７】
１つの態様において、単離された組換え抗体またはその抗原結合領域を含むタンパク質は、配列番号：１、７、１３および１９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号：２、８、１４および２０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号：３、９、１５および２１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号：４、１０、１６および２２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号：５、１１、１７および２３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；ならびに配列番号：６、１２、１８および２４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を有し、該ＣＤＲ領域は、本発明の抗体またはタンパク質がＩＬ１２Ｒβ１に特異的に結合することができるように選択される。
【００９８】
別の態様において、単離された組換え抗体またはその抗原結合領域を含むタンパク質は、配列番号：２５、３１、３７および４３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＨＣＤＲ１’；配列番号：２６、３２、３８および４４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＨＣＤＲ２’；配列番号：２７、３３、３９および４５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＨＣＤＲ３’；配列番号：２８、３４、４０および４６からなる群から選択されるアミノ酸配列軽鎖可変領域を含むＬＣＤＲ１’；配列番号：２９、３５、４１および４７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＬＣＤＲ２’；および配列番号：３０、３６、４２および４８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＬＣＤＲ３’を有し、該ＣＤＲ領域は、本発明の抗体またはタンパク質がＩＬ１２Ｒβ１に特異的に結合することができるように選択される。
【００９９】
１つの態様において、本発明の抗体またはタンパク質は、
（ａ）配列番号：１のＨＣＤＲ１、配列番号：２のＨＣＤＲ２、配列番号：３のＨＣＤＲ３を含む可変重鎖アミノ酸配列および配列番号：４のＬＣＤＲ１、配列番号：５のＬＣＤＲ２および配列番号：６のＬＣＤＲ３を含む可変軽鎖アミノ酸配列；
（ｂ）配列番号：７のＨＣＤＲ１、配列番号：８のＨＣＤＲ２、配列番号：９のＨＣＤＲ３を含む可変重鎖アミノ酸配列および配列番号：１０のＬＣＤＲ１、配列番号：１１のＬＣＤＲ２および配列番号：１２のＬＣＤＲ３を含む可変軽鎖アミノ酸配列；
（ｃ）配列番号：１３のＨＣＤＲ１、配列番号：１４のＨＣＤＲ２、配列番号：１５のＨＣＤＲ３を含む可変重鎖アミノ酸配列および配列番号：１６のＬＣＤＲ１、配列番号：１７のＬＣＤＲ２および配列番号：１８のＬＣＤＲ３を含む可変軽鎖アミノ酸配列；
（ｄ）配列番号：１９のＨＣＤＲ１、配列番号：２０のＨＣＤＲ２、配列番号：２１のＨＣＤＲ３を含む可変重鎖アミノ酸配列および配列番号：２２のＬＣＤＲ１、配列番号：２３のＬＣＤＲ２および配列番号：２４のＬＣＤＲ３を含む可変軽鎖アミノ酸配列；
（ｅ）配列番号：２５のＨＣＤＲ１’、配列番号：２６のＨＣＤＲ２’、配列番号：２７のＨＣＤＲ３’を含む可変重鎖アミノ酸配列および配列番号：２８のＬＣＤＲ１’、配列番号：２９のＬＣＤＲ２’および配列番号：３０のＬＣＤＲ３’を含む可変軽鎖アミノ酸配列；
（ｆ）配列番号：３１のＨＣＤＲ１’、配列番号：３２のＨＣＤＲ２’、配列番号：３３のＨＣＤＲ３’を含む可変重鎖アミノ酸配列および配列番号：３４のＬＣＤＲ１’、配列番号：３５のＬＣＤＲ２’および配列番号：３６のＬＣＤＲ３’を含む可変軽鎖アミノ酸配列；
（ｇ）配列番号：３７のＨＣＤＲ１’、配列番号：３８のＨＣＤＲ２’、配列番号：３９のＨＣＤＲ３’を含む可変重鎖アミノ酸配列および配列番号：４０のＬＣＤＲ１’、配列番号：４１のＬＣＤＲ２’および配列番号：４２のＬＣＤＲ３’を含む可変軽鎖アミノ酸配列；または、
（ｈ）配列番号：４３のＨＣＤＲ１’、配列番号：４４のＨＣＤＲ２’、配列番号：４５のＨＣＤＲ３’を含む可変重鎖アミノ酸配列および配列番号：４６のＬＣＤＲ１’、配列番号：４７のＬＣＤＲ２’および配列番号：４８のＬＣＤＲ３’を含む可変軽鎖アミノ酸配列
のいずれかを含む。
【０１００】
抗体の可変領域または全長鎖がヒト生殖細胞系列免疫グロブリン遺伝子を使用するシステムから得られる、本明細書において使用されるヒト抗体は、特定の生殖細胞系列配列「の生成物」である、または「に由来する」重鎖または軽鎖可変領域または全長重鎖または軽鎖を含む。このようなシステムは、ヒト免疫グロブリン遺伝子を有するトランスジェニックマウスを、興味ある抗原またはで免疫すること、ファージにディスプレイされたヒト免疫グロブリン遺伝子ライブラリーを興味ある抗原でスクリーニングすることを含む。ヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列「の生成物」である、または「に由来する」ヒト抗体は、ヒト抗体のアミノ酸配列をヒト生殖細胞系列免疫グロブリンのアミノ酸配列と比較し、ヒト抗体の配列と配列において最も近接する（すなわち、最大の％同一性）ヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列を選択することによりそれ自体同定することができる。特定のヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列「の生成物」である、または「に由来する」ヒト抗体は、例えば、自然体細胞変異または部位特異的変異の意図的導入による、生殖細胞系列配列と比較したアミノ酸の違いを含み得る。しかしながら、選択されたヒト抗体は、一般的に、ヒト生殖細胞系列免疫グロブリン遺伝子によってコードされるアミノ酸配列とアミノ酸配列において少なくとも９０％同一であり、他の種の生殖細胞系列免疫グロブリンアミノ酸配列（例えば、マウス生殖細胞系列配列）と比較したとき、ヒト抗体をヒトであると同定するアミノ酸残基を含む。ある場合において、ヒト抗体は、生殖細胞系列免疫グロブリン遺伝子によってコードされるアミノ酸配列と、アミノ酸配列において少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％または少なくとも９５％、あるいは少なくとも９６％、９７％、９８％または９９％同一であり得る。一般的に、特定のヒト生殖細胞系列配列に由来するヒト抗体は、ヒト生殖細胞系列免疫グロブリン遺伝子によってコードされるアミノ酸配列とわずか１０個のアミノ酸の違いしか示さない。ある場合において、ヒト抗体は、生殖細胞系列免疫グロブリン遺伝子によってコードされるアミノ酸配列とわずか５、あるいはわずか４、３、２または１個のアミノ酸の違いしか示さなくてもよい。
【０１０１】
同種抗体
さらに別の態様において、本発明の抗体またはタンパク質は、特に表１における、前記抗体ｍＡｂ１−ｍＡｂ１６のアミノ酸またはヌクレオチド配列と同種である、全長重鎖および軽鎖アミノ酸配列；全長重鎖および軽鎖ヌクレオチド配列、可変領域重鎖および軽鎖ヌクレオチド配列、または可変領域重鎖および軽鎖アミノ酸配列、または全６つのＣＤＲ領域アミノ酸配列またはヌクレオチドコード配列を有し、元のｍＡｂ１−ｍＡｂ１６抗体の所望の機能特性を保持する。
【０１０２】
元のｍＡｂ１−ｍＡｂ１６抗体の所望の機能特性は、
（ｉ）例えば、実施例に記載されているＢｉａｃｏｒｅアッセイにおいて測定されるとき、１ｎＭ以下、１００ｐＭ以下または１０ｐＭ以下であるＫＤで、ＩＬ１２Ｒβ１への結合親和性（ＩＬ１２Ｒβ１への特異的結合）；
（ｉｉ）          例えば、実施例に記載されているＩＬ１２またはＩＬ２３インビトロ競合的結合アッセイにおいて測定されるとき、１０ｎＭ以下または１ｎＭ以下または１００ｐＭ以下であるＩＣ５０で、ＩＬ１２Ｒβ１へのＩＬ１２またはＩＬ２３結合の競合的阻害；
（ｉｉｉ）例えば、実施例に記載されているヒト血球アッセイにおいてＩＬ１２またはＩＬ２３依存性ＩＦＮγ生産を測定されるとき、１０ｎＭ以下または１ｎＭ以下または１００ｐＭ以下であるＩＣ５０で、ヒト血球におけるＩＦＮγ生産のＩＬ１２および／またはＩＬ２３依存性阻害；
（ｉｖ）          霊長類血球におけるエキソビボＩＦＮ−γ生産のＩＬ１２依存性阻害；
（ｖ）配列番号：９８のカニクイザルＩＬ１２Ｒβ１ポリペプチドとの交差反応性；
（ｖｉ）          薬物開発のための適当な特性、特に、高い濃度で、すなわち、５０ｍｇ／ｍｌを超えて製剤中で凝集しない；および、
（ｖｉｉ）ＡＤＣＣ活性を付与しないか、または減少したＡＤＣＣ活性を付与する
からなる群から選択され得る。
【０１０３】
例えば、本発明は、可変重鎖（ＶＨ）および可変軽鎖（ＶＬ）配列を含むｍＡｂ１−ｍＡｂ１６の同種抗体（またはその抗原結合部分を含む結合タンパク質）に関し、これらのＣＤＲ配列、すなわち６個のＣＤＲ領域；ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３またはＨＣＤＲ１’、ＨＣＤＲ２’、ＨＣＤＲ３’、ＬＣＤＲ１’、ＬＣＤＲ２’、ＬＣＤＲ３’は、ｍＡｂ１−ｍＡｂ１６の少なくとも１つの抗体の対応するＣＤＲ配列と少なくとも６０、７０、９０、９５または１００パーセント配列同一性を共有し、該同種抗体または結合タンパク質は、ＩＬ１２Ｒβ１に特異的に結合し、該抗体または結合タンパク質は、ＩＬ１２Ｒβ１へのＩＬ１２およびＩＬ２３結合を阻害するか、ヒト血球におけるＩＬ１２依存性ＩＦＮγ生産を阻害するか、ヒト血球におけるＩＬ２３依存性ＩＦＮγ生産を阻害するか、または霊長類血球におけるＩＬ１２エキソビボＩＦＮ−γ生産を阻害する、機能特性の少なくとも１つを示す。関連の特定の態様において、同種抗体または結合タンパク質は、１ｎＭ以下のＫＤでＩＬ１２Ｒβ１に結合し、１ｎＭ以下のＩＣ５０でインビトロ競合的結合アッセイ、例えば、ＢｉｏｖｅｒｉｓＴＭアッセイにおいて測定されたとき、ＩＬ１２Ｒβ１へのＩＬ１２および／またはＩＬ２３結合を阻害する。ｍＡｂ１−ｍＡｂ１６のＣＤＲは、上記表４および５に定義される。
【０１０４】
本発明はさらに、ｍＡｂ１−ｍＡｂ１６抗体のいずれか１つの対応する重鎖および軽鎖可変領域と少なくとも８０％、９０％または少なくとも９５％または１００％同一である重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含むｍＡｂ１−ｍＡｂ１６の同種抗体（またはその抗原結合部分を含む結合タンパク質）に関し、該同種抗体または結合タンパク質は、ＩＬ１２Ｒβ１に特異的に結合し、ＩＬ１２Ｒβ１へのＩＬ１２およびＩＬ２３結合を阻害するか、ヒト血球におけるＩＬ１２依存性ＩＦＮγ生産を阻害するか、ヒト血球におけるＩＬ２３依存性ＩＦＮγ生産を阻害するか、または霊長類血球におけるＩＬ１２エキソビボＩＦＮ−γ生産を阻害する、機能特性の少なくとも１つを示す。関連の特定の態様において、同種抗体または結合タンパク質は、１ｎＭ以下のＫＤでＩＬ１２Ｒβ１に結合し、１ｎＭ以下のＩＣ５０でインビトロ競合的結合アッセイ、例えば、ＢｉｏｖｅｒｉｓＴＭアッセイにおいて測定されたとき、ＩＬ１２Ｒβ１へのＩＬ１２および／またはＩＬ２３結合を阻害する。ｍＡｂ１−ｍＡｂ１６のＶＨおよびＶＬアミノ酸配列は、上記表２に定義される。
【０１０５】
別の例において、本発明は、可変重鎖が、ｍＡｂ１−ｍＡｂ１６の可変重鎖および軽鎖の対応するコードヌクレオチド配列と少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％同一であるヌクレオチド配列によってコードされる、全長重鎖および全長軽鎖を含むｍＡｂ１−ｍＡｂ１６の同種抗体（またはその抗原結合部分を含む結合タンパク質）に関し、該同種抗体または結合タンパク質は、ＩＬ１２Ｒβ１に特異的に結合し、ＩＬ１２Ｒβ１へのＩＬ１２およびＩＬ２３結合を阻害するか、ヒト血球におけるＩＬ１２依存性ＩＦＮγ生産を阻害するか、ヒト血球におけるＩＬ２３依存性ＩＦＮγ生産を阻害するか、または霊長類血球におけるＩＬ１２エキソビボＩＦＮ−γ生産を阻害する、機能特性の少なくとも１つを示す。関連の特定の態様において、同種抗体または結合タンパク質は、１ｎＭ以下のＫＤでＩＬ１２Ｒβ１に結合し、１ｎＭ以下のＩＣ５０でインビトロ競合的結合アッセイ、例えば、ＢｉｏｖｅｒｉｓＴＭアッセイにおいて測定されたとき、ＩＬ１２Ｒβ１へのＩＬ１２および／またはＩＬ２３結合を阻害する。ｍＡｂ１からｍＡｂ１６の可変領域のコードヌクレオチド配列は、ｍＡｂ１−ｍＡｂ１６の全長コードヌクレオチド配列を示す表３およびｍＡｂ１−ｍＡｂ１６の可変領域のアミノ酸配列を示す表２に由来し得る。
【０１０６】
種々の態様において、抗体の抗原結合部分を含む抗体または結合タンパク質は、１つ以上、２つ以上、３つ以上または４つ以上の上記の所望の機能特性を示し得る。本発明の抗体またはタンパク質は、例えば、ヒト抗体、ヒト化抗体またはキメラ抗体であり得る。好ましくは、抗体またはタンパク質は、完全ヒトサイレント抗体、好ましくは完全ヒトサイレントＩｇＧ１抗体である。
【０１０７】
本明細書において使用される「サイレント」抗体なる用語は、実施例に記載されているＡＤＣＣ活性アッセイにおいて測定されるとき、ＡＤＣＣ活性を付与しないか、または減少したＡＤＣＣ活性を付与する抗体を示す。
【０１０８】
１つの態様において「ＡＤＣＣ活性を付与しないか、または減少したＡＤＣＣ活性を付与する」なる用語は、サイレント抗体が、対応する野生型（非サイレント）抗体で観察されるＡＤＣＣ活性の５０％以下、例えば１０％以下であるＡＤＣＣ活性を示すことを意味する。
【０１０９】
サイレントエフェクター機能は、抗体のＦｃ定常部分における変異により得ることができ、文献：Strohl 2009 (LALA & N297A); Baudino 2008, D265A (Baudinoら J.Immunol. 181 (2008): 6664-69, Strohl, CO Biotechnology 20 (2009): 685-91)に記載されている。サイレントＩｇＧ１抗体の例は、ＩｇＧ１  Ｆｃアミノ酸配列におけるＬ２３４ＡおよびＬ２３５Ａ変異を含むいわゆるＬＡＬＡ変異体を含む。サイレントＩｇＧ１抗体の別の例は、Ｄ２６５Ａ変異を含む。別のサイレントＩｇＧ１抗体は、Ｎ２９７Ａ変異を含み、グリコシル化されていない抗体または非−グリコシル化抗体となる。
【０１１０】
変異アミノ酸配列を有する抗体は、コード核酸分子の変異誘発（例えば、部位特異的またはＰＣＲ媒介性変異誘発）させ、次に、コードする変化した抗体を、保持された機能（すなわち、上記の機能）について、本明細書に記載されている機能アッセイを使用して試験することにより得ることができる。
【０１１１】
保存的修飾を有する抗体
１つの態様において、本発明の抗体（またはその抗原結合部分を含む結合タンパク質）は、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３配列（またはＨＣＤＲ１’、ＨＣＤＲ２’およびＨＣＤＲ３’）を含む重鎖可変領域およびＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３配列（またはＬＣＤＲ１’、ＬＣＤＲ２’およびＬＣＤＲ３’）を含む軽鎖可変領域を有し、１つ以上のこれらのＣＤＲ配列は、本明細書に記載されているｍＡｂ１からｍＡｂ１６抗体に基づく特定のアミノ酸配列またはその保存的修飾を有し、該抗体またはタンパク質は、本発明の抗−ＩＬ１２Ｒβ１抗体の所望の機能特性を保持する。
【０１１２】
本明細書において使用される「保存的配列修飾」なる用語は、アミノ酸残基が同様の側鎖を有するアミノ酸残基で置換されているアミノ酸置換を示すことが意図される。同様の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当分野で定義されている。これらのファミリーは、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン、トリプトファン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン）、ベータ−分岐側鎖（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）および芳香族性側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を有するアミノ酸を含む。したがって、本発明の抗体のＣＤＲ領域内の１つ以上のアミノ酸残基は、同じ側鎖ファミリーからの他のアミノ酸残基で置換することができ、変化した抗体は、本明細書に記載されている機能アッセイを使用して保持された機能について試験することができる。
【０１１３】
修飾は、当分野で知られている標準技術、例えば、部位特異的変異誘発およびＰＣＲ媒介性変異誘発により、本発明の抗体に導入することができる。
【０１１４】
ｍＡｂ１−ｍＡｂ１６のいずれか１つと交差ブロックする、および／またはｍＡｂ１−ｍＡｂ１６と同じエピトープに結合する抗体
抗体ｍＡｂ１−ｍＡｂ１６は、互いに、交差競合することが示された。したがって、さらなる抗体は、標準ＩＬ１２Ｒβ１結合アッセイにおいて、本発明の他の抗体、例えばｍＡｂ１−ｍＡｂ１６と統計的に有意な方法において交差競合する（例えば、結合を競合的に阻害する）能力に基づいて同定することができる。試験抗体は、最初に、例えば、以下に記載されるファージディスプレイ技術を使用して、例えばヒト組換え抗体ライブラリーから、ＩＬ１２Ｒβ１に対する結合親和性についてスクリーニングされ得る。ヒトＩＬ１２Ｒβ１への本発明の抗体の結合と交差競合するか、または該結合を阻害する試験抗体の能力は、該試験抗体が、ヒトＩＬ１２Ｒβ１への結合に対して、理論に縛られないが、競合する抗体として、ヒトＩＬ１２Ｒβ１上の同じ、または関連の（例えば、構造的に同様または空間的に近似）エピトープに結合し得る抗体と競合することができるということを証明する。ＢｉａｃｏｒｅまたはＥｌｉｓａベースの交差ブロッキングアッセイの例は、実施例により詳細に記載されている。
【０１１５】
したがって、１つの態様において、本発明は、ＩＬ１２Ｒβ１への結合から、ｍＡｂ１−ｍＡｂ１６の少なくとも１つの抗体と交差ブロックするか、または該抗体により交差ブロックされる単離された抗体またはタンパク質であって、
（ｉ）１ｎＭ以下のＫＤで配列番号：８９のＩＬ１２Ｒβ１ポリペプチドに結合し、（ｉｉ）インビトロ競合的結合アッセイにおいて測定されたとき、配列番号：８９のＩＬ１２Ｒβ１ポリペプチドへのＩＬ１２および／またはＩＬ２３結合を阻害する
抗体またはタンパク質を提供する。
【０１１６】
１つの特定の態様において、本発明のこのような交差ブロッキング抗−ＩＬ１２Ｒβ１抗体またはタンパク質は、配列番号：９８のカニクイザルＩＬ１２Ｒβ１ポリペプチドとさらに交差反応する。
【０１１７】
別の態様において、本発明は、本明細書に記載されている種々の特定の抗−ＩＬ１２Ｒβ１抗体ｍＡｂ１−ｍＡｂ１６と同じエピトープに結合する、抗体またはその抗原結合部分を含むタンパク質を提供する。
【０１１８】
特定の態様において、交差ブロッキング抗体またはタンパク質、または、ｍＡｂ１−ｍＡｂ１６のいずれか１つとヒトＩＬ１２Ｒβ１上の同じエピトープに結合する抗体またはタンパク質は、ヒト組換え抗体である。このようなヒト組換え抗体は、実施例に記載されているように調製および単離することができる。
【０１１９】
操作および修飾された抗体
本発明の抗原結合部分を含む他の抗体またはタンパク質は、上記ｍＡｂ１−ｍＡｂ１６のＶＨおよび／またはＶＬ配列の１つ以上を有する抗体を、修飾された抗体を操作するための出発物質として使用して調製することができ、修飾された抗体は、出発抗体とは異なる特性を有し得る。一方または両方の可変領域（すなわち、ＶＨおよび／またはＶＬ）、例えば、１つ以上のＣＤＲ領域および／または１つ以上のフレームワーク領域における１つ以上の残基を修飾することにより、抗体を操作することができる。さらに、あるいは、定常領域、例えば、抗体のエフェクター機能を変化させるために、定常領域内の残基を修飾することにより、抗体を操作することができる。
【０１２０】
実施することができる可変領域操作の一種が、ＣＤＲ移植(CDR 移植ing)である。抗体は、６つの重鎖および軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）に位置するアミノ酸残基によって主として標的抗原と相互作用する。この理由のため、ＣＤＲ内のアミノ酸配列は、ＣＤＲ外の配列よりも個々の抗体間でより多様である。ＣＤＲ配列はほとんどの抗体−抗原相互作用に関与するため、異なる特性を有する異なる抗体由来のフレームワーク配列上に移植した特定の天然抗体由来のＣＤＲ配列を含む発現ベクターを構築することにより、特定の天然の特性を模倣する組換え抗体を発現することが可能である（例えば、Riechmann, Lら 1998 Nature 332:323-327; Jones, Pら 1986 Nature 321:522-525; Queen, Cら 1989 Proc. Natl. Acad. See. U.S.A. 86:10029-10033; Winterによる米国特許第5,225,539号ならびにQueenらによる米国特許第5,530,101; 5,585,089; 5,693,762および6,180,370号参照）。
【０１２１】
したがって、本発明の別の態様は、表４または５において定義されているｍＡｂ１−ｍＡｂ１６のいずれか１つの６つのＣＤＲ領域を含み、元の抗体と異なるフレームワーク配列を含む単離された組換えＣＤＲ移植抗−ＩＬ１２Ｒβ１抗体に関する。
【０１２２】
このようなフレームワーク配列は、生殖細胞系列抗体遺伝子配列を含む公開ＤＮＡデータベースまたは公開文献から得ることができる。例えば、ヒト重鎖および軽鎖可変領域遺伝子のための生殖細胞系列ＤＮＡ配列は、「ＶＢａｓｅ」ヒト生殖細胞系列配列データベース（www.mrc-cpe.cam.ac.uk/vbaseでインターネットで利用できる）、ならびにKabat, E. Aら 1991 Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242; Tomlinson, I. Mら 1992 J. Mol. Biol. 227:776-798;およびCox, J. P. Lら 1994 Eur. J Immunol. 24:827-836において、見いだすことができる。
【０１２３】
フレームワーク配列の例は、ｍＡｂ１−ｍＡｂ１６のいずれか１つにおいて使用されるフレームワーク配列と構造的に類似のものである。ＶＨ  ＣＤＲ１、２および３配列ならびにＶＬ  ＣＤＲ１、２および３配列は、フレームワーク配列が由来する生殖細胞系列免疫グロブリン遺伝子において見られるものと同一の配列を有するフレームワーク領域上に移植することができ、あるいは、該ＣＤＲ配列は、生殖細胞系列配列と比較して１つ以上の変異を含むフレームワーク領域上に移植することができる。例えば、場合によっては、抗体の抗原結合能力を維持または向上するために、フレームワーク領域内の残基を変異させることが有益であるということが見出されている（例えば、Ｑｕｅｅｎらによる米国特許第５，５３０，１０１；５，５８５，０８９；５，６９３，７６２および６，１８０，３７０号参照）。
【０１２４】
別の種類の可変領域修飾は、ＶＨおよび／またはＶＬ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／またはＣＤＲ３領域内のアミノ酸残基を変異させ、それにより、興味ある抗体の１つ以上の結合特性（例えば、アフィニティー）を改善することであり、「親和性成熟」として知られる。「部位特異的変異誘発またはＰＣＲ媒介変異誘発を実施して変異を導入でき、抗体結合または他の興味ある機能特性に対する効果は、本明細書に記載され、実施例に提供されるインビトロまたはインビボアッセイにおいて評価することができる。したがって、１つの態様において、本発明は、ｍＡｂ１−ｍＡｂ１６抗体の１つに由来のアフィニティー媒介抗体に関する。（上記に議論されるような）保存的修飾を導入することができる。変異は、アミノ酸置換、付加または欠失であり得る。さらに、一般的に、ＣＤＲ領域内のわずか１、２、３、４または５つの残基が変化される。例えば、本発明の抗体は、ＣＤＲ領域内のわずか１、２、３、４または５つの残基が変化されている、ｍＡｂ１−ｍＡｂ１６の１つの６つのＣＤＲを含むアフィニティー変異抗体である。
【０１２５】
したがって、別の態様において、本発明は、抗体の重鎖および／または軽鎖アミノ酸配列が、元の配列と比較して、１、２、３、４または５つのアミノ酸置換、欠失または付加を含むことを除いて、ｍＡｂ１からｍＡｂ１６抗体の少なくとも１つの対応する重鎖および軽鎖可変領域と同一である重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む単離され操作された抗−ＩＬ１２Ｒβ１抗体を提供する。
【０１２６】
別のフレームワークまたはスカフォールドへの抗原−結合ドメインの移植
得られるポリペプチドがＩＬ１２Ｒβ１に特異的に結合するｍＡｂ１からｍＡｂ１６の少なくとも１つの結合領域を含む限り、多種多様の抗体／免疫グロブリンフレームワークまたはスカフォールドが使用できる。このようなフレームワークまたはスカフォールドは、ヒト免疫グロブリンの５つの主なイディオタイプまたはそれらのフラグメント（例えば、本明細書の他に記載されているもの）を含み、また、好ましくはヒト化局面を有する、他の動物種の免疫グロブリンを含む。単一の重鎖抗体、例えば、ラクダにおいて同定されるものは、この点において特定の興味のあるものである。新規フレームワーク、スカフォールドおよびフラグメントが、当業者により発見および開発され続けている。
【０１２７】
１つの局面において、本発明は、本発明のＣＤＲを移植することができる非免疫グロブリンスカフォールドを使用して、非免疫グロブリンベースの抗体を産生することに関する。既知の、または将来の非免疫グロブリンフレームワークおよびスカフォールドは、配列番号：８９の標的タンパク質に特異的な結合領域を含む限り、使用され得る。このような化合物は、本明細書において、「標的特異的な結合領域を含むポリペプチド」と称される。非免疫グロブリンフレームワークの例は、以下の節にさらに記載されている（ラクダ抗体よび非抗体スカフォールド）。
【０１２８】
ラクダ抗体
ラマ種（Ｌａｍａ  ｐａｃｃｏｓ、Ｌａｍａ  ｇｌａｍａおよびＬａｍａ  ｖｉｃｕｇｎａ）などの新世界メンバーを含む、ラクダおよびヒトコブラクダ（Ｃａｍｅｌｕｓ  ｂａｃｔｒｉａｎｕｓおよびＣａｌｅｌｕｓ  ｄｒｏｍａｄｅｒｉｕｓ）ファミリーのメンバーから得た抗体タンパク質は、サイズ、構造の複雑性およびヒト対象に対する抗原性について、特徴付けられている。天然に見出される哺乳動物のこのファミリー由来の特定のＩｇＧ抗体は、軽鎖を欠き、したがって、他の動物由来の抗体における２つの重鎖および２つの軽鎖を有する典型的な４鎖の四次構造とは構造的に異なる。ＰＣＴ公開ＷＯ９４／０４６７８参照。
【０１２９】
ＶＨＨと同定される小さな１個の可変ドメインであるラクダ抗体の領域は、遺伝子操作により標的に対して高親和性を有する小タンパク質を得て、「ラクダナノボディ」として知られる低分子量抗体由来タンパク質を得ることができる。１９９８年６月２日公開の米国特許第５，７５９，８０８号参照；Stijlemans, Bら 2004 J Biol Chem 279: 1256-1261; Dumoulin, Mら 2003 Nature 424: 783-788; Pleschberger, Mら 2003 Bioconjugate Chem 14: 440-448; Cortez-Retamozo, Vら 2002 Int J Cancer 89: 456-62;およびLauwereys, Mら 1998 EMBO J 17: 3512-3520も参照。ラクダ抗体および抗体フラグメントの操作されたライブラリーは、例えば、Ａｂｌｙｎｘ、Ｇｈｅｎｔ、Ｂｅｌｇｉｕｍから市販されている。非ヒト起源の他の抗体として、ラクダ抗体のアミノ酸配列を組換え的に変化させて、ヒト配列により似た配列を得ることができ、すなわち、ナノボディを「ヒト化」することができる。したがって、ヒトに対するラクダ抗体の天然の低い抗原性をさらに低下させることができる。
【０１３０】
ラクダナノボディは、ヒトＩｇＧ分子の約１０分の１の分子量を有し、該タンパク質は、わずか数ナノメートルの物理的直径を有する。小さいサイズの一つの帰結は、より大きな抗体タンパク質には機能的に不可視の抗原部位に結合するというラクダ抗体の能力であり、すなわち、ラクダナノボディは、従来の免疫学的技術を使用して隠される抗原を検出する試薬として、可能性のある治療剤として有用である。したがって、小さいサイズのさらに別の帰結は、ラクダナノボディが標的タンパク質の溝または小さな割れ目の特定の部位に結合することの結果として、阻害でき、したがって、伝統的な抗体のものよりも伝統的な低分子量薬物の機能により似た能力を提供できることである。
【０１３１】
低分子量および緻密化サイズは、さらに、極めて熱安定であり、極端なｐＨおよびタンパク分解に安定であり、低い抗原性をラクダナノボディにもたらす。別の帰結は、ラクダナノボディが循環系から組織に容易に移動すること、および血液脳関門を通過して神経組織に作用する障害を処置することができることである。ナノボディはさらに、薬物の血液脳関門通過を促進することができる。２００４年８月１９日公開の米国特許番号第２００４０１６１７３８号参照。ヒトへの低抗原性と組み合わさったこれらの特徴は、大きな治療的可能性を示す。さらに、これらの分子は、原核細胞、例えば大腸菌において完全に発現され、バクテリオファージにおいて融合タンパク質として発現され、機能的である。
【０１３２】
操作されたナノボディは、４５分から２週間のレシピエント対象における半減期を有するように、さらに遺伝子操作によりカスタマイズすることができる。特定の態様において、ラクダ抗体またはナノボディは、例えばＰＣＴ公開ＷＯ９４／０４６７８に記載されているとおり、本発明のヒト抗体のｍＡｂ１からｍＡｂ１６の１つの重鎖または軽鎖のＣＤＲ配列を、ナノボディまたは単一ドメイン抗体フレームワーク配列内に移植することにより、得られる。
【０１３３】
非抗体スカフォールド
既知の非免疫グロブリンフレームワークまたはスカフォールドは、限定はしないが、アドネクチン（フィブロネクチン）（Compound Therapeutics, Inc., Waltham, MA）、アンキリン（Molecular Partners AG, Zurich, Switzerland）、ドメイン抗体（Domantis, Ltd (Cambridge, MA)およびAblynx nv (Zwijnaarde, Belgium)）、リポカリン（Anticalin）（Pieris Proteolab AG, Freising, Germany）、小モジュラー免疫医薬（Trubion Pharmaceuticals Inc., Seattle, WA）、マキシボディ(maxybodies)（Avidia, Inc. (Mountain View, CA)）、プロテインＡ（Affibody AG, Sweden）およびアフィリン（ガンマクリスタリン(crystalline)またはユビキチン）（Scil Proteins GmbH, Halle, Germany）、タンパク質エピトープ模擬物（Polyphor Ltd, Allschwil, Switzerland）を含む。
【０１３４】
（ｉ）フィブロネクチンスカフォールド
フィブロネクチンスカフォールドは、好ましくは、フィブロネクチンＩＩＩ型ドメイン（例えば、フィブロネクチンＩＩＩ型の第１０モジュール（１０Ｆｎ３ドメイン））に基づく。フィブロネクチンＩＩＩ型ドメインは、互いにパックしてタンパク質のコアを形成する、２つのベータシート間に分布する７または８個のベータストランドを有し、さらに、ベータストランドと互いに結合し、溶媒に曝されるループ（ＣＤＲに類似する）を含む。ベータシートサンドイッチの各端にかかるループが少なくとも３個存在し、該端はベータストランドの方向に垂直なタンパク質の境界である（米国特許第６，８１８，４１８）。
【０１３５】
これらのフィブロネクチンベースのスカフォールドは免疫グロブリンではないが、全体的な折りたたみは、最も小さい機能性抗体フラグメントであり、ラクダおよびラマＩｇＧの全抗原認識ユニットを含む重鎖可変領域のものと極めて関連している。この構造のため、非免疫グロブリン抗体は、抗体の性質およびアフィニティーにおいて類似する抗原結合特性を模倣する。これらのスカフォールドは、インビボでの抗体の親和性成熟のプロセスと類似であるインビトロでのループランダム化およびシャッフル戦略において使用することができる。これらのフィブロネクチンベースの分子は、該分子のループ領域を、標準クローニング技術を使用してｍＡｂ１からｍＡｂ１６の１つのＣＤＲで置換するとき、スカフォールドとして使用することができる。
【０１３６】
（ｉｉ）アンキリン−分子パートナー
該技術は、異なる標的に結合するために使用することができる可変領域を保持するためのスキャフォールドとして、アンキリン由来反復モジュールを備えるタンパク質を使用することに基づく。アンキリン反復モジュールは、２つの逆平行αヘリックスおよびβターンからなる３３アミノ酸ポリペプチドである。可変領域の結合は、通常、リボソームディスプレイを使用することにより最適化される。
【０１３７】
（ｉｉｉ）マキシボディ／アビマー(Avimer)−アビディア(Avidia)
アビマーは、天然Ａドメイン含有タンパク質、例えば、ＬＲＰ−１に由来する。これらのドメインは、本来、タンパク質−タンパク質相互作用のために使用され、ヒトにおいて２５０個以上のタンパク質がＡドメインに構造的に基づく。アビマーは、アミノ酸リンカーを介して連結した多くの異なる「Ａ−ドメイン」モノマー（２−１０）からなる。標的抗原に結合することができるアビマーは、例えば、米国特許公報第２００４０１７５７５６；２００５００５３９７３；２００５００４８５１２；および２００６０００８８４４号に記載された方法論を使用して作製することができる。
【０１３８】
（ｖｉ）プロテインＡ−アフィボディ(Affibody)
アフィボディ（登録商標）アフィニティーリガンドは、プロテインＡのＩｇＧ結合ドメインの１個のスカフォールドに基づいた３ヘリックスバンドルからなる小さい単純なタンパク質である。プロテインＡは、細菌黄色ブドウ球菌由来の表面タンパク質である。このスカフォールドドメインは、５８個のアミノ酸からなり、この１３個はランダム化されて、多くのリガンド変異体を有するアフィボディ（登録商標）ライブラリーを作製する（例えば、米国特許第５，８３１，０１２号参照）。アフィボディ（登録商標）分子は抗体を模倣し、１５０ｋＤａである抗体の分子量と比較して、それらは６ｋＤａの分子量を有する。その小さいサイズにもかかわらず、アフィボディ（登録商標）分子の結合部位は抗体のものと同様である。
【０１３９】
（ｖ）アンチカリン(Anticalins)−Ｐｉｅｒｉｓ
アンチカリン（登録商標）は、Ｐｉｅｒｉｓ  ＰｒｏｔｅｏＬａｂ  ＡＧ社により開発された製品である。それらは、化学的に感受性または不溶性の化合物の生理学的輸送または保存に通常関与する広範なグループの小さい強力なタンパク質であるリポカリンに由来する。いくつかの天然リポカリンは、ヒト組織または体液中に生じる。
【０１４０】
タンパク質構造は、免疫グロブリンに類似しており、強固なフレームワークの上端に超可変ループを有する。しかしながら、抗体またはその組換えフラグメントと対照的に、リポカリンは、単一の免疫グロブリンドメインよりもわずかに大きい１６０から１８０個のアミノ酸残基を有する単一のポリペプチド鎖からなる。
【０１４１】
結合ポケットを構成する４個のループのセットは顕著な構造可塑性を示し、種々の側鎖に耐容性である。したがって、結合部位は、高親和性および特異性で異なる形の所定の標的分子を認識するため、特許の方法で再形成することができる。
【０１４２】
リポカリンファミリーの１つのタンパク質であるＰｉｅｒｉｓ  Ｂｒａｓｓｉｃａｅのビリン結合タンパク質（ＢＢＰ）は、４個のループのセットを変異することによりアンチカリンを開発するために使用されている。「アンチカリン」を記載する特許出願の一例は、ＰＣＴ公開ＷＯ１９９９１６８７３である。
【０１４３】
（ｖｉ）アフィリン(Affilin)−Ｓｃｉｌタンパク質
アフィリンＴＭ分子は、タンパク質および小分子に対する特異的アフィニティーについて設計されている小さい非免疫グロブリンタンパク質である。新規アフィリンＴＭ分子は、それぞれ異なるヒト由来スカフォールドタンパク質に基づく２つのライブラリーから非常に迅速に選択することができる。
【０１４４】
アフィリンＴＭ分子は、免疫グロブリンタンパク質に対して何ら構造的相同性を示さない。Ｓｃｉｌタンパク質は２つのアフィリンＴＭスカフォールドを使用し、この１つは、ヒトの構造的眼レンズタンパク質であるガンマクリスタリンであり、他方は「ユビキチン」スーパーファミリータンパク質である。ヒトスカフォールドの両方は、非常に小さく、高い温度安定性を示し、ｐＨ変化および変性剤にほぼ耐性である。この高い安定性は、主に、該タンパク質の伸長ベータシート構造のためである。ガンマクリスタリン由来タンパク質の例はＷＯ２００１０４１４４に記載されており、「ユビキチン様」タンパク質の例はＷＯ２００４１０６３６８に記載されている。
【０１４５】
（ｖｉｉ）タンパク質エピトープ模擬物（ＰＥＭ）
ＰＥＭは、タンパク質−タンパク質相互作用に関与する主な二次構造である、タンパク質のベータ−ヘアピン二次構造を模倣する、中間サイズの環状ペプチド様分子（ＭＷ  １−２ｋＤａ）である。
【０１４６】
フレームワークまたはＦｃ操作
操作された本発明の抗体は、例えば抗体の特性を改善するために、ＶＨおよび／またはＶＬ内のフレームワーク残基に修飾が施されているものを含む。一般的には、このようなフレームワーク修飾は、抗体の免疫原性を低下させるために行われる。例えば、１つのアプローチは、１つ以上のフレームワーク残基を対応する生殖細胞系列配列に「復帰変異する(backmutate)」ことである。さらに具体的には、体細胞変異を起こした抗体が、その抗体から由来する生殖細胞系列配列とは異なるフレームワーク残基を含み得る。このような残基は、抗体フレームワーク配列と抗体に由来する生殖細胞系列配列を比較することにより同定することができる。フレームワーク領域配列をその生殖細胞系列立体配置に戻すため、体細胞変異は、例えば、部位特異的変異誘発またはＰＣＲ−媒介変異誘発による生殖細胞系列配列への「復帰変異」であり得る。このような「復帰変異された」抗体も、本発明に含まれる。
【０１４７】
他の型のフレームワーク修飾は、Ｔ細胞−エピトープを除去するための、フレームワーク領域内または１つ以上のＣＤＲ領域内の１つ以上の残基での変異を含み、それにより抗体の潜在的な免疫原性を低下させる。このアプローチは、「脱免疫化」としても称され、Ｃａｒｒらの米国特許公開第２００３０１５３０４３号により詳細に記載されている。
【０１４８】
フレームワークまたはＣＤＲ領域内で行われる修飾に加えてまたはそれとは別に、本発明の抗体は、一般的に、抗体の１つ以上の機能特性、例えば、血清半減期、補体結合、Ｆｃ受容体結合および／または抗原依存的細胞毒性を変化させるための、Ｆｃ領域内の修飾を含むように操作し得る。さらに、本発明の抗体は、化学的に修飾させるか（例えば、１つ以上の化学的部分を抗体に付着させることができる）、またはそのグリコシル化を変化させ、再び、抗体の１つ以上の機能特性を変化させるために、修飾し得る。これらの態様の各々は、以下にさらに詳細に記載されている。
【０１４９】
本明細書において使用される「Ｆｃ領域」なる用語は、天然配列Ｆｃ領域および変異Ｆｃ領域を含む、免疫グロブリン重鎖のＣ−末端領域を定義するために使用される。ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、一般的に、ＩｇＧ抗体の位置Ｃ２２６から、またはＰ２３０からカルボキシル−末端までのアミノ酸残基を含む領域として定義される。Ｆｃ領域における残基の番号付けは、ＫａｂａｔのＥＵ指標のものである。Ｆｃ領域のＣ−末端リジン（残基Ｋ４４７）は、例えば、抗体の生産または精製中に、除去され得る。したがって、本発明の抗体の組成物は、全てのＫ４４７残基が除去された抗体集団、Ｋ４４７残基が除去されていない抗体集団、ならびにＫ４４７残基を有する抗体および該残基を有さない抗体の混合物を有する抗体集団を含み得る。
【０１５０】
１つの態様において、ＣＨ１のヒンジ領域は、ヒンジ領域内のシステイン残基数が変化、例えば、増加または減少するように修飾される。このアプローチは、Ｂｏｄｍｅｒらの米国特許第５，６７７，４２５号にさらに記載されている。ＣＨ１のヒンジ領域内のシステイン残基数を変化させて、例えば、軽鎖および重鎖の集合を促進し、あるいは抗体の安定性を上昇または低下させる。
【０１５１】
別の態様において、抗体のＦｃヒンジ領域を変異して、該抗体の生物学的半減期を減少させる。さらに具体的には、１つ以上のアミノ酸変異は、Ｆｃ−ヒンジフラグメントのＣＨ２−ＣＨ３ドメイン接合面領域に導入され、該抗体が天然Ｆｃ−ヒンジドメインＳｐＡ結合と比較して改善されたブドウ球菌タンパク質Ａ（ＳｐＡ）結合を有する。このアプローチは、Ｗａｒｄらの米国特許第６，１６５，７４５号にさらに詳細に記載されている。
【０１５２】
別の態様において、抗体を修飾して、その生物学的半減期を上昇させる。種々のアプローチが可能である。例えば、Ｗａｒｄの米国特許第６，２７７，３７５号に記載されているとおり、下記変異の１つ以上を導入することができる、Ｔ２５２Ｌ、Ｔ２５４Ｓ、Ｔ２５６Ｆ。あるいは、生物学的半減期を上昇させるために、Ｐｒｅｓｔａらの米国特許第５，８６９，０４６および６，１２１，０２２号に記載されているとおり、抗体をＣＨ１またはＣＬ領域内で変化させて、ＩｇＧのＦｃ領域のＣＨ２ドメインの２個のループから得たサルベージ受容体結合エピトープを含めることができる。
【０１５３】
さらに他の態様において、少なくとも１つのアミノ酸残基を異なるアミノ酸残基で置換してＦｃ領域を変化させて、抗体のエフェクター機能を変化させる。例えば、１つ以上のアミノ酸を異なるアミノ酸残基で置換して、抗体がエフェクターリガンドに対する変化した親和性を有するが親抗体の抗原結合能を保持するようにできる。アフィニティーが変化されたエフェクターリガンドは、例えばＦｃ受容体または補体のＣ１成分であり得る。このアプローチは、Ｗｉｎｔｅｒらの米国特許第５，６２４，８２１および５，６４８，２６０号にさらに詳細に記載されている。
【０１５４】
別の態様において、アミノ酸残基から選択される１つ以上のアミノ酸は、抗体が変化したＣ１ｑ結合および／または低下もしくは消滅した補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）を有するように、異なるアミノ酸残基で置換され得る。このアプローチは、Ｉｄｕｓｏｇｉｅらの米国特許第６，１９４，５５１号にさらに詳細に記載されている。
【０１５５】
別の態様において、１つ以上のアミノ酸残基が変化させて、それにより抗体の補体を固定化する能力を変化させる。このアプローチは、ＢｏｄｍｅｒらのＰＣＴ公開ＷＯ９４／２９３５１にさらに詳細に記載されている。
【０１５６】
さらに別の態様において、Ｆｃ領域は、１つ以上のアミノ酸を修飾することにより、抗体の抗体依存的細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を媒介する能力を向上しおよび／またはＦｃγ受容体に対する抗体のアフィニティーを向上させるように、修飾される。このアプローチは、ＰｒｅｓｔａのＰＣＴ公開ＷＯ００／４２０７２にさらに詳細に記載されている。さらに、ＦｃγＲｌ、ＦｃγＲＩＩ、ＦｃγＲＩＩＩおよびＦｃＲｎに対するヒトＩｇＧ１上の結合部位がマッピングされており、改善された結合を有する変異体が記載されている（Shields, R.Lら 2001 J. Biol. Chem 276:6591-6604参照）。
【０１５７】
１つの態様において、ＩｇＧ１アイソタイプのＦｃドメインを使用する。いくつかの特定の態様において、ＩｇＧ１  Ｆｃフラグメントの変異体、例えば、抗体依存的細胞毒性（ＡＤＣＣ）を媒介する、および／またはＦｃγ受容体に結合する融合ポリペプチドの能力を減少されている、または除去されているサイレントＩｇＧ１  Ｆｃを使用する。ＩｇＧ１  アイソタイプサイレント変異体の例は、ＨｅｚａｒｅｈらによるJ. Virol 2001 Dec;75(24):12161-8に記載されているアミノ酸位置２３４および２３５で、ロイシンがアラニンに置換されているＩｇＧ１である。ＩｇＧ１  アイソタイプサイレント変異体の別の例は、Ｄ２６５Ａ変異（位置２６５でアスパラギン酸がアラニンにより置換されている）を有するＩｇＧ１である。
【０１５８】
１つの態様において、Ｆｃドメインは、Ｆｃドメインの位置２９７でグリコシル化を防止するサイレントＦｃ変異体である。例えば、Ｆｃドメインは、位置２９７でアスパラギンのアミノ酸置換を含む。このようなアミノ酸置換の例は、Ｎ２９７のグリシンまたはアラニンによる置換である。
【０１５９】
さらに別の態様において、抗体のグリコシル化を修飾させる。例えば、非グリコシル化抗体を作成することができる（すなわち、該抗体はグリコシル化を欠く）。グリコシル化は、例えば、抗原に対する抗体のアフィニティーを上昇させるために、変化させることができる。このような炭水化物修飾は、例えば、抗体配列内の１つ以上のグリコシル化部位を変化することにより成し遂げることができる。例えば、１つ以上の可変領域フレームワークグリコシル化部位の除去をもたらし、それにより該部位でのグリコシル化を除去する１つ以上のアミノ酸置換を作成することができる。このような非グリコシル化は、抗原に対する抗体のアフィニティーを上昇させ得る。このようなアプローチは、Ｃｏらの米国特許第５，７１４，３５０および６，３５０，８６１号にさらに詳細に記載されている。
【０１６０】
さらにまたはあるいは、グリコシル化の型が変化された抗体、例えば、フコシル残基の量が減少している低フコシル化抗体または増加した二分ＧｌｃＮａｃ構造を有する抗体を作製することができる。このような変化されたグリコシル化パターンは、抗体のＡＤＣＣ能を増加させることが証明されている。このような炭水化物修飾は、例えば、変化されたグリコシル化機構を有する宿主細胞において抗体を発現することにより、達成することができる。変化されたグリコシル化機構を有する細胞は、当分野において記載されており、本発明の組換え抗体を発現し、それにより変化されたグリコシル化を有する抗体を産生する宿主細胞として使用することができる。例えば、ＨａｎｇらのＥＰ１１７６１９５は、このような細胞系において発現される抗体が低フコシル化を示すように、フコシルトランスフェラーゼをコードする機能的に破壊されているＦＵＴ８遺伝子を有する細胞系を記載している。したがって、１つの態様において、本発明の抗体は、低フコシル化パターンを示す細胞系、例えば、フコシルトランスフェラーゼをコードするＦＵＴ８遺伝子の欠損した発現を有する哺乳動物細胞系における組換え発現により産生される。ＰｒｅｓｔａのＰＣＴ公開ＷＯ０３／０３５８３５は、Ａｓｎ（２９７）結合糖にフコースを結合させる能力が低下し、また宿主細胞において発現される抗体の低フコシル化をもたらすＣＨＯ細胞系変異体であるＬｅｃｌ３細胞を記載している（Shields, R.L. ら2002 J. Biol. Chem. 277:26733-26740も参照）。ＵｍａｎａらのＰＣＴ公開ＷＯ９９／５４３４２は、操作された細胞系において発現される抗体が抗体のＡＤＣＣ活性の増加をもたらす二分(bisecting)ＧｌｃＮａｃ構造の増加を示すように、糖タンパク質修飾グリコシルトランスフェラーゼ（例えば、ベータ（１，４）−ＮアセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ（ＧｎＴＩＩＩ））を発現するように操作された細胞系を記載している（Umanaら1999 Nat. Biotech. 17:176-180も参照）。あるいは、本発明の抗体は、哺乳動物様グリコシル化パターンに対して操作された酵母または糸状菌において産生することができ、グリコシル化パターンとしてフコースを欠く抗体を産生することができる（例えばＥＰ１２９７１７２参照）。
【０１６１】
本発明により考えられる本明細書における抗体の別の修飾は、ペグ化である。抗体は、例えば、抗体の生物学的（例えば、血清）半減期を増加させるためにペグ化することができる。抗体をペグ化するために、一般的に、抗体またはそのフラグメントを、１つ以上のＰＥＧ基が抗体または抗体フラグメントに結合する条件下で、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、例えば、反応性エステルまたはＰＥＧのアルデヒド誘導体と反応させる。ペグ化は、反応性ペグ分子（またはアナログ反応性水溶性ポリマー）とアシル化反応またはアルキル化反応することにより行うことができる。本明細書において使用される「ポリエチレングリコール」なる用語は、他のタンパク質を誘導体化するために使用されている任意の形態のＰＥＧ、例えば、モノ（Ｃ１−Ｃ１０）アルコキシ−またはアリールオキシ−ポリエチレングリコールまたはポリエチレングリコール−マレイミドを包含することが意図される。１つの態様において、ペグ化される抗体は非グリコシル化抗体である。タンパク質をペグ化するための方法は、当分野で知られており、本発明の抗体に適用することができる。例えば、ＮｉｓｈｉｍｕｒａらのＥＰ０１５４３１６およびＩｓｈｉｋａｗａらのＥＰ０４０１３８４参照。
【０１６２】
本発明により考えられる抗体の別の修飾は、得られる分子の半減期を増加させるために、本発明の抗体の少なくとも抗原結合領域と血清タンパク質、例えば、ヒト血清アルブミンまたはそのフラグメントとの抱合体またはタンパク質融合物である。このようなアプローチは、例えば、ＢａｌｌａｎｃｅらのＥＰ０３２２０９４に記載されている。
【０１６３】
別の可能性は、得られる分子の半減期を増加させるために、本発明の抗体の少なくとも抗原結合領域とヒト血清アルブミンのような血清タンパク質に結合することができるタンパク質との融合物である。このようなアプローチは、例えば、ＮｙｇｒｅｎらのＥＰ０４８６５２５に記載されている。
【０１６４】
変化された抗体を操作する方法
上記のとおり、本明細書において示されるＶＨおよびＶＬ配列または全長重鎖および軽鎖配列を有する抗−ＩＬ１２Ｒβ１抗体を使用して、全長重鎖および／または軽鎖配列、ＶＨおよび／またはＶＬ配列、またはそれに結合した定常領域を修飾することにより新規抗−ＩＬ１２Ｒβ１抗体を作製することができる。したがって、本発明の別の局面において、本発明の抗−ＩＬ１２Ｒβ１抗体の構造的特徴を使用して、ヒトＩＬ１２Ｒβ１との結合およびＩＬ１２Ｒβ１の１個以上の機能特性の阻害など（例えば、ＩＬ１２Ｒβ１へのＩＬ１２および／またはＩＬ２３の結合の阻害、血球におけるＩＬ１２誘導ＩＦＮγ生産の阻害など）の、本発明の抗体の少なくとも１個の機能特性を保持する、構造的に関連した抗−ＩＬ１２Ｒβ１抗体を作製する。
【０１６５】
例えば、ｍＡｂ１からｍＡｂ１６のいずれか１つまたはその変異体の１個以上のＣＤＲ領域を、既知のフレームワーク領域および／または他のＣＤＲと組換え的に結合して、上記のとおり、さらなる本発明の組換え的に操作された抗−ＩＬ１２Ｒβ１抗体を作製することができる。他の型の修飾は、前節に記載されているものを含む。操作方法のための出発物質は、上記表において提供されるｍＡｂ１−ｍＡｂ１６のＶＨおよび／またはＶＬ配列の１個以上またはそのＣＤＲ配列の１個以上である。操作された抗体を作製するためには、ｍＡｂ１またはｍＡｂ１６のＶＨおよび／またはＶＬ配列の１個以上またはそのＣＤＲ配列の１個以上を有する抗体を実際に作製する（すなわち、タンパク質として発現する）必要はない。むしろ、配列に含まれる情報を出発物質として使用して、元の配列に由来する「第二世代」配列を作製し、当該「第二世代」配列が調製され、タンパク質として発現される。
【０１６６】
第二世代配列は、例えば、Ａｂ１からｍＡｂ１６のいずれか１つの重鎖可変領域抗体配列および／または軽鎖可変領域抗体配列内の少なくとも１つのアミノ酸残基のＤＮＡコード配列を変化させて、少なくとも１つの変化した抗体配列を作製し；変化した抗体配列をタンパク質として発現させることによる。
【０１６７】
したがって、別の態様において、本発明は、哺乳動物細胞における発現のために最適化された、ｍＡｂ１からｍＡｂ１６のいずれか１つの全長重鎖抗体配列および／または全長軽鎖抗体配列からなる抗−ＩＬ１２Ｒβ１抗体を作製するための方法であって、全長重鎖抗体配列および／または全長軽鎖抗体配列内のアミノ酸残基をコードするヌクレオチドコード配列における少なくとも１つのコドンを変化させ、少なくとも１つの変化した抗体配列を作製し；変化した抗体配列をタンパク質として発現させる、方法を提供する。
【０１６８】
変化した抗体配列はまた、ｍＡｂ１−ｍＡｂ１６のいずれか１つのＣＤＲ３配列のユニークな(unique)重鎖および軽鎖、またはＵＳ特許公報２００５０２５５５５２号に記載されている最小必須結合決定部分、およびＣＤＲ１およびＣＤＲ２配列に対する代替配列を有する抗体ライブラリーをスクリーニングすることにより調製することができる。スクリーニングは、抗体ライブラリーから抗体をスクリーニングするために適当な任意のスクリーニング技術、例えば、ファージディスプレイ技術にしたがって実施することができる。
【０１６９】
標準分子生物学技術を使用して、変化した抗体配列を調製し、発現させることができる。変化した抗体配列によってコードされる抗体は、本明細書に記載されている抗−ＩＬ１２Ｒβ１抗体の１個、数個の、または全ての所望の機能特性を保持するものであり、該機能特性は、ヒトＩＬ１２Ｒβ１との特異的結合；および／またはＩＬ１２Ｒβ１ポリペプチドへのＩＬ１２およびＩＬ２３結合を阻害；および／またはヒト血球におけるＩＬ１２誘導ＩＦＮγ生産を阻害；ヒト血球におけるＩＬ２３誘導ＩＦＮγ生産を阻害；および／または霊長類血球におけるＩＬ１２エキソビボＩＦＮ−γ生産を阻害を含むがこれらに限定されない。
【０１７０】
変化した抗体は、１つ以上、２つ以上、または３つ以上の上記機能特性を示し得る。
【０１７１】
本発明の抗体を操作する方法の１つの態様において、抗−ＩＬ１２Ｒβ１抗体コード配列の全部または一部にわたってランダムにまたは選択的に変異を導入することができ、そして得られた修飾抗−ＩＬ１２Ｒβ１抗体は、結合活性および／または本明細書に記載されている他の機能特性についてスクリーニングすることができる。変異方法は当分野において記載されている。例えば、ＳｈｏｒｔのＰＣＴ公開ＷＯ０２／０９２７８０は、飽和変異誘発、合成ライゲーションアセンブリまたはそれらの組合せを使用する抗体変異体の作製作成およびスクリーニングのための方法を記載している。あるいは、ＬａｚａｒらのＰＣＴ公開ＷＯ０３／０７４６７９は、抗体の物理化学的特性を最適化するための計算スクリーニング方法を使用する方法を記載している。
【０１７２】
本発明の抗体をコードする核酸分子
本発明の別の局面は、本発明の抗体またはタンパク質をコードする核酸分子に関する。可変軽鎖ヌクレオチド配列の例は、ｍＡｂ１からｍＡｂ１６のいずれか１つの可変軽鎖アミノ酸配列をコードするものであり、後者の配列は、表３（ｍＡｂ１からｍＡｂ１６の重鎖および軽鎖の全ヌクレオチドコード配列を示す）および表２（ｍＡｂ１からｍＡｂ１６の可変領域のアミノ酸配列を示す）に由来する。
【０１７３】
本発明はまた、哺乳動物細胞、例えば、ＣＨＯ細胞系におけるタンパク質発現のために最適化されている後者の配列に由来する核酸分子に関する。
【０１７４】
核酸は、全細胞中、細胞溶解物中に存在してもよく、または、部分的に精製された、もしくは実質的に精製された形態の核酸であってもよい。核酸は、他の細胞成分または他の汚染物質から、例えば、他の細胞核酸またはタンパク質から精製されるとき、標準技術、例えば、アルカリ／ＳＤＳ処理、ＣｓＣｌバンディング、カラムクロマトグラフィー、アガロースゲル電気泳動および当分野でよく知られている他の技術により「単離」されるか、または「実質的に純粋」にされる。F. Ausubelらed. 1987 Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing and Wiley Interscience, New York参照。本発明の核酸は、例えば、ＤＮＡまたはＲＮＡであってよく、イントロン配列を含んでも、含まなくてもよい。１つの態様において、核酸は、ｃＤＮＡ分子である。核酸は、ベクター、例えば、ファージディスプレイベクターまたは組換えプラスミドベクター中に存在していてもよい。
【０１７５】
本発明の核酸は、標準分子生物学技術を使用して得ることができる。例えば、ＶＨおよびＶＬセグメントをコードするＤＮＡフラグメントが得られたとき、これらのＤＮＡフラグメントは、例えば、可変領域遺伝子を完全長の抗体鎖遺伝子に、Ｆａｂフラグメント鎖遺伝子に、またはｓｃＦｖ遺伝子に変換するように、標準組換えＤＮＡ技術によりさらに操作され得る。これらの操作において、ＶＬ−またはＶＨ−をコードするＤＮＡフラグメントは、別のＤＮＡ分子に、または別のタンパク質をコードするフラグメントに、例えば、抗体定常領域に、またはフレキシブルな(flexible)リンカーに作動可能に連結される。この文脈において使用される「作動可能に連結」なる用語は、２つのＤＮＡフラグメントが、例えば、２つのＤＮＡフラグメントによってコードされるアミノ酸配列がインフレームのままであるように、または、タンパク質が所望のプロモーターの制御下に発現されるように、機能的な様式においてに結合されることを意味することが意図される。
【０１７６】
ＶＨ領域をコードする単離されたＤＮＡは、ＶＨをコードするＤＮＡと重鎖定常領域（ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３）をコードする別のＤＮＡ分子を作動可能に連結することにより、完全長の重鎖遺伝子に変換することができる。ヒト重鎖定常領域遺伝子の配列は、当分野で知られており（例えば、Kabat, E. Aら 1991 Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242参照）、これらの領域を含むＤＮＡフラグメントは標準ＰＣＲ増幅により得ることができる。重鎖定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＭまたはＩｇＤ定常領域であり得る。いくつかの態様において、重鎖定常領域はＩｇＧ１アイソタイプから選択される。Ｆａｂフラグメント重鎖遺伝子において、ＶＨをコードするＤＮＡは、重鎖ＣＨ１定常領域のみをコードする別のＤＮＡ分子に作動可能に連結することができる。
【０１７７】
ＶＬ領域をコードする単離されたＤＮＡは、ＶＬをコードするＤＮＡと軽鎖定常領域ＣＬをコードする別のＤＮＡ分子を作動可能に連結することにより、完全長の軽鎖遺伝子（ならびにＦａｂ軽鎖遺伝子）に変換することができる。ヒト軽鎖定常領域遺伝子の配列は、当分野で知られており（例えば、Kabat, E. Aら 1991 Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242参照）、これらの領域を含むＤＮＡフラグメントは標準ＰＣＲ増幅により得ることができる。軽鎖定常領域は、カッパまたはラムダ定常領域であり得る。
【０１７８】
ｓｃＦｖ遺伝子を作製するために、ＶＨおよびＶＬをコードするＤＮＡフラグメントは、フレキシブルなリンカーにより結合したＶＬおよびＶＨ領域にて、ＶＨおよびＶＬ配列が連続した一本鎖タンパク質として発現することができるように、フレキシブルなリンカーをコードする、例えば、アミノ酸配列（Ｇｌｙ４−Ｓｅｒ）３をコードする別のフラグメントに作動可能に連結される（例えば、Birdら 1988 Science 242:423-426; Hustonら 1988 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883; McCaffertyら 1990 Nature 348:552-554参照）。
【０１７９】
本発明の組換え抗体の単離
抗体をスクリーニングする種々の方法は、文献に記載されている。このような方法は、インビボ系、例えば、抗原免疫化時に完全ヒト抗体を生産することができるトランスジェニックマウス、ならびに、抗体ＤＮＡコードライブラリーを作製すること、抗体生産のために適当な系におけるＤＮＡライブラリーを発現すること、アフィニティー選択基準で、標的に結合する抗体候補物を発現するクローンを選択すること、および、選択されたクローンの対応するコード配列を回収することからなるインビトロ系に分類され得る。これらのインビトロ技術は、ディスプレイ技術として知られ、ファージディスプレイ、ＲＮＡまたはＤＮＡディスプレイ、リボソームディスプレイ、酵母または哺乳動物細胞ディスプレイを含むが、これらに限定されない。それらは、文献に記載されている（参考のために、例えば：Nelsonら 2010 Nature Reviews Drug discovery, “Development trends for human monoclonal antibody therapeutics” (Advance Online Publication) and Hoogenboomら in Method in Molecular Biology 178:1-37, O’Brienら ed., Human Press, Totowa, N.J., 2001参照）。１つの特定の態様において、本発明のヒト組換え抗体は、ヒト組換え抗体ライブラリー、例えば、ＨｕＣＡＬ（登録商標）ライブラリーのスクリーニングライブラリーのためのファージディスプレイ方法を使用して単離される。
【０１８０】
ＶＨおよびＶＬ遺伝子または関連ＣＤＲ領域のレパートリーは、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）により別々にクローニングされるか、またはＤＮＡシンセサイザーにより合成され、ファージライブラリーにおいてランダム的に再結合され得、次に抗原結合クローンに対してスクリーニングされ得る。ヒト抗体を単離するためのこのようなファージディスプレイ方法は、当分野で確立されているか、以下の実施例に記載されている。例えば：Ｌａｄｎｅｒらの米国特許第５，２２３，４０９；５，４０３，４８４；および５，５７１，６９８号；Ｄｏｗｅｒらの米国特許第５，４２７，９０８および５，５８０，７１７号；ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙらの米国特許第５，９６９，１０８および６，１７２，１９７号；ならびにＧｒｉｆｆｉｔｈｓらの米国特許第５，８８５，７９３；６，５２１，４０４；６，５４４，７３１；６，５５５，３１３；６，５８２，９１５および６，５９３，０８１号参照。
【０１８１】
特定の態様において、ＩＬ１２Ｒβ１に対するヒト抗体は、マウス系よりもむしろヒト免疫系の一部を有するトランスジェニックマウスまたは染色体を導入したマウスを使用して同定することができる。これらのトランスジェニックマウスおよび染色体を導入したマウスは、本明細書においてＨｕＭＡｂマウスおよびＫＭマウスとそれぞれ称されるマウスを含み、本明細書において「ヒトＩｇマウス」と総称される。
【０１８２】
ＨｕＭＡｂマウス（登録商標）（Medarex, Inc.）は、内因性μおよびｋ鎖遺伝子座を不活性化する標的変異と共に、非再配列ヒト重鎖（μおよびγ）およびｋ軽鎖免疫グロブリン配列をコードするヒト免疫グロブリン遺伝子ミニ遺伝子座を含む（例えば、Lonbergら 1994 Nature 368(6474): 856-859参照）。したがって、マウスは、マウスＩｇＭまたはｋの提言した発現を示し、免疫化に応答して、導入されたヒト重鎖および軽鎖導入遺伝子は、クラススイッチングおよび体細胞変異を経て、高親和性ヒトＩｇＧｋモノクローナルを産生する（上記Lonberg, Nら 1994; Lonberg, N., 1994 Handbook of Experimental Pharmacology 113:49-101におけるレビュー; Lonberg, N. and Huszar, D., 1995 Intern. Rev. Immunol.13: 65-93、およびHarding, F. and Lonberg, N., 1995 Ann. N. Y. Acad. Sci. 764:536-546）。ＨｕＭＡｂマウスの調製および使用ならびにこのようなマウスにより行われるゲノム修飾は、Taylor, Lら 1992 Nucleic Acids Research 20:6287-6295; Chen, Jら 1993 International Immunology 5: 647-656; Tuaillonら 1993 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94:3720-3724; Choiら 1993 Nature Genetics 4:117-123; Chen, Jら 1993 EMBO J. 12: 821-830; Tuaillonら 1994 J. Immunol. 152:2912-2920; Taylor, Lら, 1994 International Immunology 579-591;およびFishwild, Dら 1996 Nature Biotechnology 14: 845-851にさらに記載されている。さらに、全てＬｏｎｂｅｒｇおよびＫａｙの米国特許第５，５４５，８０６；５，５６９，８２５；５，６２５，１２６；５，６３３，４２５；５，７８９，６５０；５，８７７，３９７；５，６６１，０１６；５，８１４，３１８；５，８７４，２９９；および５，７７０，４２９号；Ｓｕｒａｎｉらの米国特許第５，５４５，８０７号；全てＬｏｎｂｅｒｇおよびＫａｙのＰＣＴ公開ＷＯ９２１０３９１８、ＷＯ９３／１２２２７、ＷＯ９４／２５５８５、ＷＯ９７１１３８５２、ＷＯ９８／２４８８４およびＷＯ９９／４５９６２；ならびにＫｏｒｍａｎらのＰＣＴ公開ＷＯ０１／１４４２４参照。
【０１８３】
別の態様において、本発明のヒト抗体は、導入遺伝子および導入染色体においてヒト免疫グロブリン配列を有するマウス、例えば、ヒト重鎖導入遺伝子およびヒト軽鎖導入染色体を有するマウスを使用して得ることができる。このようなマウスは、本明細書において「ＫＭマウス」と称され、ＩｓｈｉｄａらのＰＣＴ公開ＷＯ０２／４３４７８に詳細に記載されている。
【０１８４】
さらに、ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現する代替トランスジェニック動物系が、当分野で利用でき、本発明の抗−ＩＬ１２Ｒβ１抗体を得るために使用することができる。例えば、Ｘｅｎｏｍｏｕｓｅ（Abgenix, Inc.）と称される代替トランスジェニック系を使用することができる。このようなマウスは、例えば、Ｋｕｃｈｅｒｌａｐａｔｉらの米国特許第５，９３９，５９８；６，０７５，１８１；６，１１４，５９８；６、１５０，５８４および６，１６２，９６３号に記載されている。
【０１８５】
さらに、ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現する代替導入染色体動物系が、当分野で利用でき、本発明の抗−ＩＬ１２Ｒβ１抗体を得るために使用することができる。例えば、「ＴＣマウス」と称されるヒト重鎖導入染色体およびヒト軽鎖導入染色体の両方を有するマウスを使用することができる。このようなマウスは、Tomizukaら 2000 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97:722-727に記載されている。
【０１８６】
本発明のヒトモノクローナル抗体はまた、ヒト抗体応答が免疫化時に産生することができるように、ヒト免疫細胞が再構成されているＳＣＩＤマウスを使用して調製することができる。このようなマウスは、例えば、Ｗｉｌｓｏｎらの米国特許第５，４７６，９９６および５，６９８，７６７号に記載されている。
【０１８７】
マウス系からの本発明のモノクローナル抗体の作製
モノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、慣用のモノクローナル抗体方法論、例えば、Kohler and Milstein, 1975 Nature 256: 495の標準体細胞ハイブリダイゼーション技術を含む種々の技術により産生することができる。モノクローナル抗体を産生するための多数の技術は、例えば、Ｂリンパ球のウイルス性または発がん性遺伝子による形質転換を使用することができる。
【０１８８】
ハイブリドーマを調製するための動物系は、マウス系である。マウスにおけるハイブリドーマ生産は、十分に確立された方法である。融合のための免疫化脾細胞の単離のための免疫化プロトコールおよび技術は当分野で知られている。融合パートナー（例えば、マウス骨髄腫細胞）および融合方法もまた、知られている。
【０１８９】
本発明のキメラまたはヒト化抗体は、上記のとおりに調製したマウスモノクローナル抗体の配列に基づいて調製することができる。重鎖および軽鎖免疫グロブリンをコードするＤＮＡは、興味あるマウスハイブリドーマから得られ、標準分子生物学技術を使用して非マウス（例えば、ヒト）免疫グロブリン配列を含むように操作することができる。例えば、キメラ抗体を作製するために、マウス可変領域は、当分野で知られている方法を使用してヒト定常領域に連結することができる（例えば、Ｃａｂｉｌｌらの米国特許第４，８１６，５６７号参照）。ヒト化抗体を作製するために、マウスＣＤＲ領域は、当分野で知られている方法を使用してヒトフレームワークに挿入することができる。例えば、Ｗｉｎｔｅｒの米国特許第５，２２５，５３９号ならびにＱｕｅｅｎらの米国特許第５，５３０，１０１；５，５８５，０８９；５，６９３，７６２および６，１８０，３７０号参照。
【０１９０】
ヒトモノクローナル抗体を生産するハイブリドーマの作製
本発明のヒトモノクローナル抗体を生産するハイブリドーマを作製するために、免疫化されたマウスからの脾細胞および／またはリンパ節細胞を単離し、適当な不死化細胞系、例えば、マウス骨髄腫細胞系に融合することができる。得られるハイブリドーマは、抗原特異的またはエピトープ特異的抗体の生産についてスクリーニングすることができる。例えば、免疫化されたマウスからの脾臓のリンパ球の単一の細胞懸濁液は、５０％のＰＥＧで、６分の１の数のＰ３Ｘ６３−Ａｇ８．６５３非分泌性のマウス骨髄腫細胞（ＡＴＣＣ、ＣＲＬ  １５８０）に融合させることができる。細胞を約２×１４５平底マイクロタイタープレートに播種し、次に、２０％胎児クローン血清、１８％の「６５３」馴化培地、５％のオリゲン（ＩＧＥＮ）、４ｍＭのＬ−グルタミン、１ｍＭのピルビン酸ナトリウム、５ｍＭのＨＥＰＥＳ、０：０５５ｍＭの２−メルカプトエタノール、５０ユニット／ｍｌのペニシリン、５０ｍｇ／ｍｌのストレプトマイシン、５０ｍｇ／ｍｌのゲンタマイシンおよび１×ＨＡＴ（Ｓｉｇｍａ；ＨＡＴは融合の２４時間に加える）を含む選択培地で２週間インキュベートする。約２週間後、細胞は、ＨＡＴがＨＴに置き換えられた培地中で培養することができる。次に、個々のウェルは、ヒトモノクローナルＩｇＭおよびＩｇＧ抗体について、ＥＬＩＳＡによりスクリーニングすることができる。大規模なハイブリドーマ増殖が起こったとき、培地を通常１０−１４日後に観察することができる。抗体を分泌するハイブリドーマを再度播種し、再度スクリーニングすることができ、まだヒトＩｇＧ陽性のとき、モノクローナル抗体を限界希釈により少なくとも２回サブクローニングすることができる。次に、安定なサブクローンは、インビトロで培養し、特性化のための組織培養培地中で少量の抗体を生産することができる。
【０１９１】
ヒトモノクローナル抗体を精製するために、選択されたハイブリドーマをモノクローナル抗体精製のための２リットルスピナー−フラスコで培養することができる。上清を濾過し、濃縮し、プロテインＡ−セファロース（Pharmacia, Piscataway, N.J.）でのアフィニティークロマトグラフィーに付すことができる。純度を保証するために、溶離させたＩｇＧをゲル電気泳動および高速液体クロマトグラフィーにより確認することができる。バッファー溶液はＰＢＳに交換することができ、濃度を１．４３減衰係数を使用するＯＤ２８０により決定することができる。モノクローナル抗体をアリコートし、−８０℃でで貯蔵することができる。
【０１９２】
モノクローナル抗体を生産するトランスフェクトーマの作製
本発明の抗体は、例えば、当分野でよく知られている（例えば、Morrison, S. (1985) Science 229:1202）組換えＤＮＡ技術および遺伝子トランスフェクション方法の組合せを使用して、宿主細胞トランスフェクトーマにおいて生産することができる。
【０１９３】
例えば、抗体またはその抗体フラグメントを発現させるために、部分または全長軽鎖および重鎖をコードするＤＮＡは、標準分子生物学または生化学技術（例えば、ＤＮＡ化学合成、ＰＣＲ増幅または興味ある抗体を発現するハイブリドーマを使用するｃＤＮＡクローニング）により得ることができ、ＤＮＡは、遺伝子が転写および翻訳コントロール配列に作動可能に連結されるように発現ベクターに挿入することができる。この文脈において、「作動可能に連結」なる用語は、ベクター内の転写および翻訳コントロール配列が、抗体遺伝子の転写および翻訳を調節する意図される機能を果たすように、抗体遺伝子がベクターに結合されることを意味することが意図される。発現ベクターおよび発現コントロール配列は、使用される発現宿主細胞と適合するように選択される。抗体の軽鎖遺伝子および抗体の重鎖遺伝子は、別のベクターに挿入することができ、またさらに一般的には、両方の遺伝子は、同じ発現ベクターに挿入される。抗体遺伝子は、標準方法（例えば、抗体遺伝子フラグメントおよびベクターにおける相補的制限酵素認識部位のライゲーション、または制限酵素認識部位が存在しないとき、平滑末端ライゲーション）により発現ベクターに挿入される。本明細書に記載されている抗体の軽鎖および重鎖可変領域は、ＶＨセグメントがベクター内のＣＨセグメントに作動可能に連結され、ＶＬセグメントがベクター内のＣＬセグメントに作動可能に連結されるように、既に所望のアイソタイプの重鎖定常および軽鎖定常領域をコードする発現ベクターに挿入することにより、任意の抗体アイソタイプの全長抗体遺伝子を作製するために使用することができる。さらに、あるいは、組換え発現ベクターは、宿主細胞からの抗体鎖の分泌を促進するシグナルペプチドをコードすることができる。シグナルペプチドが抗体鎖遺伝子のアミノ末端にインフレームで連結されるように、抗体鎖遺伝子はベクターにクローニングすることができる。シグナルペプチドは、免疫グロブリンシグナルペプチドまたは異種シグナルペプチド（すなわち、非免疫グロブリンタンパク質由来のシグナルペプチド）であり得る。
【０１９４】
抗体鎖遺伝子に加えて、本発明の組換え発現ベクターは、宿主細胞における抗体鎖遺伝子の発現をコントロールする調節配列を有する。「調節配列」なる用語は、抗体鎖遺伝子の転写または翻訳をコントロールするプロモーター、エンハンサーおよび他の発現コントロール因子（例えば、ポリアデニル化シグナル）を含むことが意図される。このような調節配列は、例えば、Ｇｏｅｄｄｅｌ（Gene Expression Technology. Methods in Enzymology 185, Academic Press, San Diego, CA 1990）に記載されている。調節配列の選択を含む発現ベクターの設計が、形質転換される宿主細胞の選択、所望のタンパク質の発現レベルなどのような因子に依存し得ることは、当業者に理解される。哺乳動物宿主細胞発現のための調節配列は、哺乳動物細胞における高レベルのタンパク質発現を指向するウイルスエレメント、例えば、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、シミアンウイルス(Simian Virus)４０（ＳＶ４０）、アデノウイルス（例えば、アデノウイルス主要後期プロモーター（ＡｄＭＬＰ））およびポリオーマに由来するプロモーターおよび／またはエンハンサーを含む。あるいは、非ウイルス調節配列、例えば、ユビキチンプロモーターまたはＰ−グロビンプロモーターが使用され得る。さらに、調節因子は、ＳＶ４０初期プロモーターおよびヒトＴ細胞白血病ウイルスタイプ１の末端反復からの配列を含むＳＲａプロモーターシステムのような異なる供給源からの配列からなった（Takebe, Yら 1988 Mol. Cell. Biol. 8:466-472）。
【０１９５】
抗体鎖遺伝子および調節配列に加えて、本発明の組換え発現ベクターは、さらなる配列、例えば、宿主細胞におけるベクターの複製を制御する配列（例えば、複製起点）および選択可能なマーカー遺伝子を有し得る。選択可能なマーカー遺伝子は、ベクターが導入されている宿主細胞の選択を容易にする（例えば、全てＡｘｅｌらの米国特許第４，３９９，２１６、４，６３４，６６５および５，１７９，０１７号参照）。例えば、選択可能なマーカー遺伝子は、一般的に、ベクターが導入された宿主細胞において、薬物、例えば、Ｇ４１８、ハイグロマイシンまたはメトトレキサートに対する耐性を付与する。選択可能なマーカー遺伝子は、ジヒドロ葉酸レダクターゼ（ＤＨＦＲ）遺伝子（メトトレキサート選択／増幅でのｄｈｆｒ−宿主細胞における使用のための）およびｎｅｏ遺伝子（Ｇ４１８選択のための）を含む。
【０１９６】
軽鎖および重鎖の発現のために、重鎖および軽鎖をコードする発現ベクターは、標準技術により宿主細胞にトランスフェクトされる。種々の形態の「トランスフェクション」なる用語は、原核生物または真核宿主細胞への外因性ＤＮＡの導入のために一般的に使用される多種多様の技術、例えば、エレクトロポレーション、リン酸カルシウム沈殿、ＤＥＡＥ−デキストラントランスフェクションなどを含むことが意図される。原核生物または真核宿主細胞のいずれかにおいて本発明の抗体を発現させることが理論的に可能である。真核細胞、例えば、哺乳動物宿主細胞、酵母または糸状菌における抗体の発現は、このような真核細胞、特に哺乳動物細胞が、原核細胞よりも、適当に折り畳まれ、免疫学的に活性な抗体を組み立て、分泌しやすいため、議論される。
【０１９７】
１つの特定の態様において、本発明のクローニングまたは発現ベクターは、適当なプロモーター配列に作動可能に連結した以下のコード配列（ａ）−（ｐ）のいずれかの少なくとも１つを含む：
（ａ）配列番号：７３および配列番号：８５；
（ｂ）配列番号：７７および配列番号：８５；
（ｃ）配列番号：８１および配列番号：８５；
（ｄ）配列番号：７４および配列番号：８６；
（ｅ）配列番号：７８および配列番号：８６；
（ｆ）配列番号：８２および配列番号：８６；
（ｇ）配列番号：７５および配列番号：８７；
（ｈ）配列番号：７９および配列番号：８７；
（ｉ）配列番号：８３および配列番号：８７；
（ｊ）配列番号：７６および配列番号：８８；
（ｋ）配列番号：８０および配列番号：８８；
（ｌ）配列番号：８４および配列番号：８８；
（ｍ）配列番号：９４および配列番号：８５；
（ｎ）配列番号：９５および配列番号：８６；
（ｏ）配列番号：９６および配列番号：８７；および
（ｐ）配列番号：９７および配列番号：８８。
【０１９８】
本発明の組換え抗体を発現するための哺乳動物宿主細胞は、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ細胞）（例えば、R.J. Kaufman and P.A. Sharp, 1982 Mol. Biol. 159:601-621に記載されている、ＤＨ  ＦＲ選択可能なマーカーを使用する、Urlaub and Chasin, 1980 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216-4220に記載されている、ｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞を含む）、ＣＨＯＫ１  ｄｈｆｒ＋細胞系、ＮＳＯ骨髄腫細胞、ＣＯＳ細胞およびＳＰ２細胞を含む。特に、ＮＳＯ骨髄腫細胞での使用のための、別の発現系は、ＰＣＴ公開ＷＯ８７／０４４６２、ＷＯ８９／０１０３６およびＥＰ０３３８８４１において示されているＧＳ遺伝子発現系である。１つの態様において、本発明の組換え抗体を発現するための哺乳動物宿主細胞は、例えば米国特許第６，９４６，２９２号に記載されている、ＦＵＴ８遺伝子発現欠損哺乳動物細胞系を含む。
【０１９９】
抗体遺伝子をコードする組換え発現ベクターが、哺乳動物宿主細胞に導入されたとき、抗体は、宿主細胞における抗体の発現または宿主細胞が培養される培養培地への抗体の分泌を可能にする十分な期間、宿主細胞を培養することにより生産される。抗体は、標準タンパク質精製方法（例えばAbhinavら 2007, Journal of Chromatography 848: 28-37参照）を使用して、培養培地から回収することができる。
【０２００】
１つの特定の態様において、本発明の宿主細胞は、適当なプロモーター配列に作動可能に連結した、ｍＡｂ１−ｍＡｂ１６のそれぞれの発現のために適当な（ａ）−（ｐ）からなる群から選択されるコード配列を有する発現ベクターでトランスフェクトされた宿主細胞である：
（ａ）配列番号：７３および配列番号：８５；
（ｂ）配列番号：７７および配列番号：８５；
（ｃ）配列番号：８１および配列番号：８５；
（ｄ）配列番号：７４および配列番号：８６；
（ｅ）配列番号：７８および配列番号：８６；
（ｆ）配列番号：８２および配列番号：８６；
（ｇ）配列番号：７５および配列番号：８７；
（ｈ）配列番号：７９および配列番号：８７；
（ｉ）配列番号：８３および配列番号：８７；
（ｊ）配列番号：７６および配列番号：８８；
（ｋ）配列番号：８０および配列番号：８８；
（ｌ）配列番号：８４および配列番号：８８；
（ｍ）配列番号：９４および配列番号：８５；
（ｎ）配列番号：９５および配列番号：８６；
（ｏ）配列番号：９６および配列番号：８７；および
（ｐ）配列番号：９７および配列番号：８８。
【０２０１】
次に、後者の宿主細胞は、ｍＡｂ１−ｍＡｂ１６のそれぞれからなる群から選択される本発明の抗体の発現および生産のために適当な条件下でさらに培養され得る。
【０２０２】
免疫抱合体(immunoconjugate)
別の局面において、本発明は、本発明の抗−ＩＬ１２Ｒβ１抗体またはそのフラグメントが、治療的部分、例えば、細胞毒素、薬物（例えば、免疫抑制剤）または放射性毒素に結合(conjugate)することを特徴とする。このような抱合体は、「免疫抱合体」として本明細書で称される。１つ以上の細胞毒素を含む免疫抱合体は、「免疫毒素」として称される。細胞毒素または細胞毒性剤は、細胞に有害（例えば、殺す）あらゆる剤を含む。例えば、タキソン(taxon)、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テニポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ｔコルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラセンジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１−デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロールおよびピューロマイシンならびにこれらのアナログまたはホモログを含む。治療剤はまた、例えば、代謝拮抗剤（例えば、メトトレキサート、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、シタラビン、５−フルオロウラシルデカルバジン）、アルキル化剤(ablating agent)（例えば、メクロレタミン、チオエパクロラムブシル、メルファラン、カルムスチン（ＢＳＮＵ）およびロムスチン（ＣＣＮＵ）、シクロホスファミド、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、マイトマイシンＣならびにｃｉｓ−ジクロロジアミン白金（ＩＩ）（ＤＤＰ）シスプラチン、アントラサイクリン（例えば、ダウノルビシン（以前はダウノマイシン）およびドキソルビシン）、抗生物質（例えば、ダクチノマイシン（以前はアクチノマイシン）、ブレオマイシン、ミトラマイシンおよびアントラマイシン（ＡＭＣ））、ならびに抗有糸分裂剤（例えば、ビンクリスチンおよびビンブラスチン）を含む。
【０２０３】
本発明の抗体と結合することができる治療的細胞毒素の他の例は、デュオカルマイシン、カリケアマイシン、メイタンシンおよびアウリスタチン、ならびにこれらの誘導体を含む。カリケアマイシン免疫抱合体の一例は、市販されている（MylotargTm; Wyeth-Ayerst）。
【０２０４】
細胞毒素は、当分野で利用できるリンカー技術を使用して本発明の抗体と結合することができる。細胞毒素を抗体に結合させるために使用されているリンカーの型の例は、ヒドラゾン、チオエーテル、エステル、ジスルフィドおよびペプチド含有リンカーを含むが、これらに限定されない。リンカーは、例えば、リソソーム区画内で低いｐＨにより開裂されやすい、または、カテプシン（例えば、カテプシンＢ、Ｃ、Ｄ）などの、腫瘍組織で優先的に発現されるプロテアーゼなどの、プロテアーゼにより開裂されやすい、ものから選択することができる。
【０２０５】
抗体へ治療剤を結合させるための細胞毒素の型、リンカーおよび方法のさらなる考察のために、Saito, Gら2003 Adv. Drug Deliv. Rev. 55:199-215; Trail, P.Aら 2003 Cancer Immunol. Immunother. 52:328-337; Payne, G., 2003 Cancer Cell 3:207-212; Allen, T.M., 2002 Nat. Rev. Cancer 2:750-763; Pastan, I. and Kreitman, R. J., 2002 Curr. Opin. Investig. Drugs 3:1089-1091; Senter, P.D. and Springer, C.J., 2001 Adv. Drug Deliv. Rev. 53:247-264も参照。
【０２０６】
本発明の抗体はまた、放射性同位体と結合して、放射性免疫抱合体としても称される細胞毒性放射性医薬品を生成することができる。診断または治療的使用のための抗体と結合することができる放射性同位体の例は、ヨウ素１３１、インジウム１１１、イットリウム９０およびルテチウム１７７を含むが、これらに限定されない。放射性免疫抱合体を調製する方法は、当分野において確立されている。放射性免疫抱合体の例は、商業的に利用でき、ＺｅｖａｌｉｎＴＭ（DEC Pharmaceuticals）およびＢｅｘｘａｒＴＭ（Corixa Pharmaceuticals）を含み、同様の方法を、本発明の抗体を使用して放射性免疫抱合体を調製するために使用することができる。
【０２０７】
本発明の免疫抱合体は、既知の生物学的応答を修飾するために使用することができ、薬物部分は、古典的な化学治療剤に限定解釈されない。例えば、薬物部分は、所望の生物学的活性を有するタンパク質またはポリペプチドであり得る。このようなタンパク質は、例えば、酵素的に活性な毒素、またはその活性なフラグメント、例えば、アブリン、リシンＡ、緑膿菌外毒素、またはジフテリア毒素；タンパク質、例えば、腫瘍壊死因子またはインターフェロン−γ；または、生物学的応答修飾因子、例えば、例えば、リンホカイン、インターロイキン−１（「ＩＬ１」）、インターロイキン−２（「ＩＬ２」）、インターロイキン−６（「ＩＬ６」）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（「ＧＭ−ＣＳＦ」）、顆粒球コロニー刺激因子（「Ｇ−ＣＳＦ」）、または他の増殖因子を含み得る。
【０２０８】
抗体に治療的部分を結合するための技術は、よく知られている、例えば、Amonら “Monoclonal Antibodies For Immunotargeting Of Drugs In Cancer Therapy”, in Monoclonal Antibodies And Cancer Therapy, Reisfeldら (eds.), pp. 243-56 (Alan R. Liss, Inc. 1985); Hellstromら “Antibodies For Drug Delivery”, in Controlled Drug Delivery (2nd Ed.), Robinsonら (eds.), pp. 623-53 (Marcel Dekker, Inc. 1987); Thorpe, “Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy: A Review”, in Monoclonal Antibodies ’84: Biological And Clinical Applications, Pincheraら (eds.), pp. 475-506 (1985); “Analysis, Results, And Future Prospective Of The Therapeutic Use Of Radiolabeled Antibody In Cancer Therapy”, in Monoclonal Antibodies For Cancer Detection And Therapy, Baldwinら (eds.), pp. 303-16 (Academic Press 1985)、およびThorpeら “The Preparation And Cytotoxic Properties Of Antibody-Toxin Conjugates”, Inmunol. Rev., 62:119-58 (1982)参照。
【０２０９】
二重特異性分子
別の局面において、本発明は、本発明の抗−ＩＬ１２Ｒβ１抗体を含む二重特異性または多特異的分子を特徴とする。本発明の抗体は、誘導体化され、または、別の機能性分子、例えば、別のペプチドまたはタンパク質（例えば、別の抗体または受容体のリガンド）に連結され、少なくとも２つの異なる結合部位または標的分子に結合する二重特異性分子を産生することができる。実際には、本発明の抗体は、誘導体化されるか、または２つ以上の他の機能性分子に連結され、２つ以上の異なる結合部位および／または標的分子に結合する多特異的分子を産生され得る。このような多特異的分子はまた、本明細書において使用される「二重特異性分子」なる用語により包含されることが意図される。本発明の二重特異性分子を作製するために、本発明の抗体は、二重特異性分子となるように、１つ以上の他の結合分子、例えば、別の抗体、抗体フラグメント、ペプチドまたは結合模擬物に機能的に連結することができる（例えば、化学結合、遺伝子融合、非共有結合またはその他により）。
【０２１０】
したがって、本発明は、ＩＬ１２Ｒβ１に対する少なくとも１つの第１の結合特異性、例えば、ｍＡｂ１−ｍＡｂ１６のいずれか１つの１つの抗原結合部分、および第２の標的エピトープに対する第２の結合特異性を含む二重特異性分子を含む。例えば、第２の標的エピトープは、第１の標的エピトープと異なるＩＬ１２Ｒβ１の別のエピトープである。別の例は、ＩＬ１２Ｒβ１に対する少なくとも１つの第１の結合特異性、例えば、ｍＡｂ１−ｍＡｂ１６のいずれか１つの１つの抗原結合部分、およびＩＬ１２Ｒβ２またはＩＬ２３Ｒα内のエピトープに対する第２の結合特異性を含む二重特異性分子を含む。
【０２１１】
さらに、二重特異性分子が多特異性である本発明において、該分子は、第１および第２の標的エピトープに加えて、第３の結合特異性をさらに含むことができる。
【０２１２】
１つの態様において、本発明の二重特異性分子は、結合特異性として、少なくとも１つの抗体またはその抗体フラグメント、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖまたは一本鎖Ｆｖを含む。抗体はまた、軽鎖または重鎖ダイマー、またはその任意の最小限のフラグメント、例えば、ＦｖまたはＬａｄｎｅｒらの米国特許第４，９４６，７７８号に記載されている一本鎖構築物であり得る。
【０２１３】
本発明の二重特異性分子において使用することができる他の抗体は、マウス、キメラおよびヒト化モノクローナル抗体である。
【０２１４】
本発明の二重特異性分子は、当分野で知られている方法を使用して、構成結合特異性をコンジュゲートすることにより調製することができる。例えば、二重特異性分子のそれぞれの結合特異性は、別々に作製され、互いにコンジュゲートすることができる。結合特異性がタンパク質またはペプチドであるとき、種々のカップリングまたは架橋剤を共有コンジュゲートのために使用することができる。架橋剤の例は、プロテインＡ、カルボジイミド、Ｎ−スクシンイミジル−Ｓ−アセチル−チオアセテート（ＳＡＴＡ）、５，５’−ジチオビス（２−ニトロ安息香酸）（ＤＴＮＢ）、ｏ−フェニレンジマレイミド（ｏＰＤＭ）、Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）およびスルホスクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロへキサン−ｌ−カルボキシレート（スルホ−ＳＭＣＣ）を含む（例えば、Karpovskyら 1984 J. Exp. Med. 160:1686; Liu, MAら 1985 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82:8648参照）。他の方法は、Paulus, 1985 Behring Ins. Mitt. No. 78,118-132; Brennanら 1985 Science 229:81-83)およびGlennieら 1987 J. Immunol. 139: 2367-2375)に記載されているものを含む。コンジュゲート剤は、ＳＡＴＡおよびスルホ−ＳＭＣＣであり、両方ともＰｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．  （Rockford, IL）から利用できる。
【０２１５】
結合特異性が抗体である場合、２つの重鎖のＣ−末端ヒンジ領域のスルフヒドリル結合によりコンジュゲートされ得る。特定の態様において、コンジュゲーションより前に、奇数、例えば１個のスルフヒドリル残基を含むようにヒンジ領域が修飾される。
【０２１６】
あるいは、両方の結合特異性は同じベクター内でコードされ、同じ宿主細胞で発現され、そして組み立てられ得る。この方法は、二重特異性分子が、ｍＡｂｘｍＡｂ、ｍＡｂｘＦａｂ、ＦａｂｘＦ（ａｂ’）２またはリガンドｘＦａｂ融合タンパク質であるとき、特に有用である。本発明の二重特異性分子は、１つの一本鎖抗体および１つの結合決定因子を含む一本鎖分子、または２つの結合決定因子を含む一本鎖二重特異性分子であり得る。二重特異性分子は、少なくとも２つの一本鎖分子を含み得る。二重特異性分子を調製するための方法は、例えば、米国特許第５，２６０，２０３号；米国特許第５，４５５，０３０号；米国特許第４，８８１，１７５号；米国特許第５，１３２，４０５号；米国特許第５，０９１，５１３号；米国特許第５，４７６，７８６号；米国特許第５，０１３，６５３号；米国特許第５，２５８，４９８号；および米国特許第５，４８２，８５８号に記載されている。
【０２１７】
特異的標的への二重特異性分子の結合は、例えば、酵素免疫吸着法アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＥＡ）、ＦＡＣＳ分析、バイオアッセイ（例えば、増殖阻害）またはウェスタンブロットアッセイにより確認することができる。これらのアッセイはそれぞれ、一般的に、興味ある複合体に特異的な標識化試薬（例えば、抗体）を使用することにより、特定の対象のタンパク質−免疫抱合体の存在を検出する。
【０２１８】
多価抗体
別の局面において、本発明は、例えば、ｍＡｂ１−ｍＡｂ１６のいずれか１つの抗原結合部分から選択される、ＩＬ１２Ｒβ１に結合する本発明の抗体の少なくとも２つの同一の、または異なる抗原結合部分を含む多価抗体を提供する。１つの態様において、多価抗体は、抗体の少なくとも２、３または４つの抗原結合部分を提供する。抗原結合部分は、タンパク質融合または共有もしくは非共有結合を介して互いに連結され得る。あるいは、連結の方法は、二重特異性分子に記載されている。四価化合物は、例えば、本発明の抗体を、本発明の抗体の定常領域、例えばＦｃまたはヒンジ領域に結合する抗体と架橋することにより、得ることができる。
【０２１９】
医薬組成物
別の局面において、本発明は、本発明の抗体の１つ、例えば、ｍＡｂ１−ｍＡｂ１６からなる群から選択される１つの抗体、または、薬学的に許容される担体と共に製剤化された組合せを含む組成物、例えば、医薬組成物を提供する。このような組成物は、本発明の（例えば、２つ以上の異なる）抗体の１つまたは組合せ、または免疫抱合体または二重特異性分子を含み得る。例えば、本発明の医薬組成物は、標的抗原上の異なるエピトープに結合する抗体、または相補的な活性を有する抗体の組合せを含むことができる。
【０２２０】
本発明の医薬組成物はまた、併用療法において投与される、すなわち、他の薬剤と組み合わせることができる。例えば、該併用療法は、本発明の抗−ＩＬ１２Ｒβ１抗体、例えばｍＡｂ１−ｍＡｂ１６からなる群から選択される１つの抗体を、少なくとも１つの他の抗炎症または別の化学療法剤、例えば、免疫抑制剤と組み合わせて含むことができる。併用療法において使用することができる治療剤の例は、以下の本発明の抗体の使用のセクションで、より詳細に記載されている。
【０２２１】
本明細書において使用される「薬学的に許容される担体」は、生理学的に適合性のある、あらゆるすべての溶媒、分散媒体、コーティング剤、抗菌剤および抗真菌剤、等張化剤および吸収遅延剤などを含む。担体は、静脈内、筋肉内、皮下、非経口、脊髄または表皮投与（例えば、注射または注入による）のために適当であるべきである。１つの態様において、担体は、皮下経路のために適当であるべきである。投与経路に依存して、活性化合物、すなわち、抗体、免疫抱合体または二重特異性分子は、化合物を不活性化し得る酸の作用および他の天然条件から化合物を保護する材料で被覆され得る。
【０２２２】
本発明の医薬組成物は、１つ以上の薬学的に許容される塩を含み得る。「薬学的に許容される塩」は、親化合物の所望の生物学的活性を保持し、あらゆる望ましくない毒物学的効果に影響しない塩を示す（例えば、Berge, S.Mら 1977 J. Pharm. Sci. 66:1-19参照）。このような塩の例は、酸付加塩および塩基付加塩を含む。酸付加塩は、無毒性無機酸、例えば、塩酸、硝酸、リン酸、硫酸、臭化水素酸、ヨウ化水素、亜リン酸など、ならびに無毒性有機酸、例えば、脂肪族モノ−およびジ−カルボン酸、フェニル置換アルカン酸、ヒドロキシアルカン酸、芳香族酸、脂肪族および芳香族性スルホン酸などに由来するものを含む。塩基付加塩は、アルカリ土類金属、例えば、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウムなど、ならびに無毒性有機アミン、例えば、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、Ｎ−メチルグルカミン、クロロプロカイン、コリン、ｄｉエタノールアミン、エチレンジアミン、プロカインなどに由来するものを含む。
【０２２３】
本発明の医薬組成物はまた、薬学的に許容される酸化防止剤を含み得る。薬学的に許容される抗酸化剤の例は、水溶性抗酸化剤、例えば、アスコルビン酸、システイン塩酸塩、重硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、硫酸ナトリウムなど；油溶性抗酸化剤、例えば、パルミチン酸アスコルビル、ブチルヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチルヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、レシチン、没食子酸プロピル、アルファ−トコフェロールなど；および、金属キレート化剤、例えば、クエン酸、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ソルビトール、酒石酸、リン酸などを含む
【０２２４】
本発明の医薬組成物において使用され得る適当な水性および非水性担体の例は、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど）、およびそれらの適当な混合物、植物油、例えば、オリーブ油、および注射可能な有機エステル、例えば、オレイン酸エチルを含む。適切な流動性は、例えば、被覆材料、例えば、レシチンの使用により、分散液の場合に必要な粒径の維持により、および界面活性剤の使用により、維持することができる。
【０２２５】
これらの組成物はまた、アジュバント、例えば、防腐剤、湿潤剤、乳化剤および分散剤を含み得る。微生物の存在の防止は、滅菌手段および種々の抗菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノールソルビン酸などの包含の両方により保証され得る。組成物に等張剤、例えば、糖、塩化ナトリウムなどを含むことが望ましいこともある。加えて、注射可能な医薬品形態の長期吸収が、吸収遅延剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンの包含によりもたらされ得る。
【０２２６】
薬学的に許容される担体は、滅菌注射可能溶液または分散液の即時調製用の滅菌水溶液または分散液および滅菌粉末を含む。このような媒体および薬学的に活性な物質の薬剤の使用は、当分野で知られている。いずれかの慣用の媒体または薬剤が活性化合物と適合性でない場合を除き、本発明の医薬組成物において、それらを使用することが考慮される。補助的な活性化合物もまた、組成物に組み込むことができる。
【０２２７】
治療組成物は、一般的に、滅菌状態であって、製造および保存の条件下で安定でなければならない。該組成物は、溶液、マイクロエマルジョン、リポソーム、または高薬物濃度に適当な他の規則構造として処方することができる。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコールおよび液体ポリエチレングリコールなど）、およびそれらの適当な混合物を含む溶媒または分散媒であることができる。適切な流動性は、例えば、被覆材料、例えば、レシチンの使用により、分散液の場合に必要な粒径の維持により、および界面活性剤の使用により、維持することができる。多くの場合、等張剤、例えば、糖、多価アルコール、例えば、マンニトール、ソルビトールまたは塩化ナトリウムを組成物中に含むことができる。注射可能な組成物の長期吸収は、吸収遅延剤、例えば、モノステアリン酸塩およびゼラチンを組成物への包含によりもたらされ得る。
【０２２８】
安定なタンパク質（例えば、抗体）製剤の開発に関するレビューは、Clelandら (1993) Crit. Reviews. Ther. Drug Crrier Systems 10(4):307-377およびWei Wang (1999) Int. J. Pharmaceutcs 185:129-88において見いだされ得る。抗体に対するさらなる製剤の説明は、例えば、Daugherty and Mrsny (2006) Advanced Drug Delivery Reviews 58: 686-706; 米国特許番号第６，１７１，５８６、４，６１８，４８６号、米国出願第２００６０２８６１０３号、ＰＣＴ公開ＷＯ０６／０４４９０８、ＷＯ０７／０９５３３７、ＷＯ０４／０１６２８６、Colandeneら (2007) J. Pharm. Sci 96: 1598-1608; Schulman (2001) Am. J. Respir. Crit. Care Med. 164:S6-S11および他の既知の文献において見いだされ得る。
【０２２９】
皮内または皮下適用のために使用される溶液または懸濁液は、一般的に、１つ以上の以下の成分を含む：滅菌希釈剤、例えば、注射用水、塩水、固定油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールまたは他の合成溶媒、抗菌剤、例えば、ベンジルアルコールまたはメチルパラベン、抗酸化剤、例えば、アスコルビン酸または亜硫酸水素ナトリウム、キレート化剤、例えば、エチレンジアミンテトラ酢酸、バッファー、例えば、酢酸塩、クエン酸塩またはリン酸塩、および緊張力(tonicity)の調整のための薬剤、例えば、塩化ナトリウムまたはデキストロース。ｐＨは、酸または塩基、例えば、塩酸または水酸化ナトリウムで調整することができる。このような製剤は、ガラスまたはプラスチック製のアンプル、使い捨てシリンジまたは複数回投与バイアルに封入され得る。
【０２３０】
滅菌注射可能溶液は、活性化合物を適当な溶媒中で必要な量で、上で列挙した成分の１つまたは組合せと混合し、必要に応じて、次に滅菌精密濾過を行うことにより調製することができる。一般的に、分散液は、基本的な分散媒および上で列挙した必要な他の成分を含む滅菌ビヒクルに本発明の抗体またはタンパク質を組み込むことにより調製される。滅菌注射可能溶液の調製のための滅菌粉末の場合、調製方法は、以前に滅菌濾過された溶液から、活性成分プラス任意のさらなる所望の成分の粉末を生じる真空乾燥およびフリーズドライ（凍結乾燥）である。
【０２３１】
単回投与形態を生産するために担体材料と組み合わせることができる活性成分の量は、処置される対象および特定の投与経路に依存して変化する。単回投与形態を生産するために担体材料と組み合わせることができる活性成分の量は、一般的に、治療効果を生じる組成物の量である。一般的に、この量は、薬学的に許容される担体と組み合わせて、１００パーセントのうち、活性成分の約０．０１パーセントから約９９パーセント、活性成分の約０．１パーセントから約７０パーセント、または活性成分の約１パーセントから約３０パーセントの範囲である。
【０２３２】
投与レジメンは、最適な所望の応答（例えば、治療応答）を提供するために調整される。例えば、単回のボーラスは投与され得、複数回分割投与は時間にわたって投与され得、または用量は治療状況の緊急性により比例的に減少または増加され得る。投与の容易さおよび投薬量の均一性のために、投与単位形態における非経口組成物を処方することがとりわけ利点である。本明細書において使用される投与単位形態は、処置される対象のための単一投与として適当な物理的に別々の単位を示す。それぞれの単位は、必要な医薬担体と共に所望の治療効果を生じるように計算された活性化合物の所定の量を含む。本発明の投与単位形態の仕様は、活性化合物のユニークな特性およびなし遂げられる特定の治療効果、ならびに個体の処置感度に関するこのような活性化合物を合成する分野に内在する限界により指示され、直接的に依存する。
【０２３３】
抗体の投与において、用量は、約０．０００１から１００ｍｇ／ｋｇ、さらに通常０．０１から５ｍｇ／ｋｇ宿主体重の範囲である。例えば、用量は、０．３ｍｇ／ｋｇ体重、１ｍｇ／ｋｇ体重、３ｍｇ／ｋｇ体重、５ｍｇ／ｋｇ体重または１０ｍｇ／ｋｇ体重または１−１０ｍｇ／ｋｇの範囲内であり得る。典型的な処置レジメンは、週に１回、２週に１回、３週に１回、４週に１回、月に１回、３月に１回または６月に１回の投与を必要とする。本発明の抗−ＩＬ１２Ｒβ１抗体またはタンパク質に対する投与レジメンは、静脈内投与による１ｍｇ／ｋｇ体重または３ｍｇ／ｋｇ体重を含み、抗体が以下の投与スケジュール：４週ごとに６回投与、次に３月ごと；３週ごと；３週ごと３ｍｇ／ｋｇ体重で１回、次に１ｍｇ／ｋｇ体重の１つを使用して投与される。
【０２３４】
いくつかの方法において、投与されるそれぞれの抗体の用量が示される範囲内となる場合、異なる結合特異性を有する２つ以上のモノクローナル抗体が同時に投与される。本発明の抗体またはタンパク質は、通常複数回投与される。単一の投与間の間隔は、例えば、毎週、毎月、３月ごとまたは毎年であり得る。間隔はまた、患者において標的抗原に対する抗体の血液レベルを測定することにより示されるように不規則であり得る。いくつかの方法において、用量は、約１−１０００μｇ／ｍｌおよびいくつかの方法において約２５−３００μｇ／ｍｌの血漿抗体濃度をなし遂げるように調整される。
【０２３５】
あるいは、低頻度での投与が必要である場合、抗体またはタンパク質は、持続放出製剤として投与することができる。用量および頻度は、患者における抗体の半減期に依存して変化する。一般的に、ヒト抗体は、最も長い半減期を示し、次に、ヒト化抗体、キメラ抗体、非ヒト抗体が続く。投与の用量および頻度は、処置が予防または治療であるかに依存して変化し得る。予防適用において、比較的低用量が、長期間にわたって比較的まれな間隔で投与される。一部の患者は、生涯にわたって処置を受け続ける。治療適応において、比較的短い間隔で比較的高い用量が、ときどき、疾患の進行が低減または終了するまで、または、患者が疾患の症状の部分的または完全な改善を示すまでに必要である。その後、患者は予防レジメンで投与することができる。
【０２３６】
本発明の医薬組成物中の活性成分の実際の投与レベルは、患者への毒性がなく、特定の患者、組成物および投与経路に対して所望の治療応答をなし遂げるために有効である活性成分の量を得るように変化され得る。選択される投与レベルは、種々の薬物動態学因子、例えば、使用される本発明の特定の組成物またはそのエステル、塩もしくはアミドの活性、投与経路、投与時間、使用される特定の化合物の排出速度、処置期間、使用される特定の化合物と組み合わせて使用される他の薬物、化合物および／または物質、年齢、性別、体重、状態、処置される患者の全身健康状態および病歴、医療分野で知られている因子に依存する。
【０２３７】
本発明の「治療有効用量」の抗−ＩＬ１２Ｒβ１抗体またはタンパク質は、疾患症状の重症度の低下、疾患無症状期間の頻度および期間の増加、または疾患の苦痛による損傷または障害の予防をもたらすことができる。
【０２３８】
本発明の組成物は、当分野で知られている１つ以上の種々の方法を使用する１つ以上の投与経路により投与することができる。当業者により理解されるとおり、投与経路および／または投与様式は、所望の結果に依存して変化する。本発明の抗体に対する投与経路は、静脈内、筋肉内、皮内、腹腔内、皮下、脊髄または他の非経口投与経路、例えば、注射または注入を含む。本明細書において使用される「非経口投与」なる語句は、通常、注射による、経腸および局所投与以外の投与様式を意味し、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、くも膜下、髄腔内、硬膜外および幹内注射および注入を含むが、これらに限定されない。
【０２３９】
あるいは、本発明の抗体またはタンパク質は、経口経路、例えば、局所、表皮または粘膜投与経路、例えば、鼻腔内、経口、経膣、経直腸、舌下または局所的により投与することができる。
【０２４０】
本発明の抗体またはタンパク質は、迅速な放出に対して抗体を保護する担体、例えば、制御放出製剤、例えば、インプラント、経皮パッチおよびマイクロカプセル化送達系と共に調製することができる。生分解性、生体適合性ポリマー、例えば、エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステルおよびポリ乳酸を使用することができる。このような製剤の調製のための多数の方法が、特許を付与され、または一般的に当業者に知られている。例えば、Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J.R. Robinson, ed., Marcel Dekker, Inc., New York, 1978参照。
【０２４１】
治療組成物は、当分野で知られている医療機器で投与することができる。例えば、１つの態様において、本発明の治療組成物は、無針皮下注射デバイス、例えば、米国特許第５，３９９，１６３；５，３８３，８５１；５，３１２，３３５；５，０６４，４１３；４，９４１，８８０；４，７９０，８２４または４，５９６，５５６号に示されているデバイスで投与することができる。本発明において有用なよく知られるインプラントおよびモジュールの例は、米国特許第４，４８７，６０３号が示す制御された速度で薬物を分配するための移植可能な微小注入ポンプ；米国特許第４，４８６，１９４号が示す皮膚を介して薬物を投与するための治療デバイス；米国特許第４，４４７，２３３号が示す正確な注入速度で薬物を送達するための薬物注入ポンプ；米国特許第４，４４７，２２４号が示す連続的薬物送達のための可変流量移植可能な注入装置；米国特許第４，４３９，１９６号が示すマルチチャンバーコンパートメントを有する浸透圧薬送達系；および米国特許第４，４７５，１９６号が示す浸透圧薬送達系を含む。多数の他のこのようなインプラント、送達系およびモジュールは当業者に知られている。
【０２４２】
１つの態様において、本発明の抗体またはタンパク質は、インビボでの適切な分配を保証するように製剤化することができる。例えば、血液脳関門（ＢＢＢ）は、多くの高親水性化合物を除外する。本発明の治療化合物がＢＢＢ（所望により）を通過することを保証するため、それらを、例えば、リポソーム中に製剤化することができる。リポソームを製造する方法について、例えば、米国特許４，５２２，８１１；５，３７４，５４８；および５，３９９，３３１参照。リポソームは、特定の細胞または臓器に選択的に輸送される１つ以上の部分を含み得、したがって標的薬物送達を増強する（例えば、V.V. Ranade, 1989 J. Cline Pharmacol. 29:685参照）。典型的な標的部分は、葉酸またはビオチン（例えば、Ｌｏｗらの米国特許５，４１６，０１６参照）；マンノシド（Umezawaら 1988 Biochem. Biophys. Res. Commun. 153:1038）；抗体（P.G. Bloemanら 1995 FEBS Lett. 357:140; M. Owaisら 1995 Antimicrob. Agents Chernother. 39:180）；サーファクタントプロテインＡ受容体（Briscoeら 1995 Am. J. Physiol.1233:134）；ｐ１２０（Schreierら 1994 J. Biol. Chem. 269:9090）； K. Keinanen; M.L. Laukkanen, 1994 FEBSLett. 346:123; J.J. Killion; I.J. Fidler, 1994 Imrnunomethods 4:273も参照を含む。
【０２４３】
本発明の使用および方法
本発明の抗体またはタンパク質は、インビトロおよびインビボの診断および治療の有用性を有する。例えば、これらの分子は、例えばインビトロまたはインビボで培養中の細胞に、または、対象において種々の疾患を処置、予防または診断するために、例えば、インビボで、投与することができる。
【０２４４】
該方法は、ＩＬ１２Ｒβ１−関連障害および／または自己免疫性および炎症性疾患、例えば、リウマチ性関節炎、乾癬または炎症性腸疾患を処置、予防または診断するために特に適当である。
【０２４５】
本発明はまた、治療効率的な用量の本発明の抗体を含む組成物を投与することにより、ヒト血球におけるＩＬ１２またはＩＬ２３誘導シグナル伝達応答を減少または抑制するための方法を提供する。
【０２４６】
本明細書において使用される「ＩＬ１２Ｒβ１−関連障害」は、異常ＩＬ１２および／またはＩＬ２３レベルと関連するか、またはそれにより特徴付けられる状態、および／または、ヒト血球におけるＩＬ１２および／またはＩＬ２３誘導シグナル伝達活性、例えば、血漿において測定されるときのＩＦＮγまたはＩＬ１７の生産、または、フローサイトメトリー方法またはウェスタンブロットにより測定されるときのＳＴＡＴ４タンパク質のリン酸化の程度を減少または抑制することにより処置することができる疾患または状態を含む。これらは、炎症状態および自己免疫疾患、例えば、リウマチ性関節炎、乾癬および炎症性腸疾患を含む。これらは、アレルギーおよびアレルギー性状態、過敏性反応、および臓器または組織移植拒絶反応をさらに含む。
【０２４７】
例えば、本発明の抗体またはタンパク質は、心臓、肺、複合心肺、肝臓、腎臓、膵臓、皮膚または角膜移植のレシピエント、例えば、同種移植片拒絶反応または異種移植片拒絶反応の処置のために、ならびに、例えば骨髄移植後の移植片対宿主病および臓器移植関連動脈硬化症の予防のために使用され得る。
【０２４８】
本発明の抗体またはタンパク質は、自己免疫疾患および炎症状態、特に病因、例えば、自己免疫要素、例えば、関節炎（例えばリウマチ性関節炎、慢性進行性関節炎および変形性関節炎）およびリウマチ性疾患、例えば骨量の減少を含む炎症状態およびリウマチ性疾患、炎症性疼痛、脊椎関節炎、例えば強直性脊椎炎、ライター症候群、反応性関節炎、乾癬性関節炎および腸関連関節炎、過敏症（例えば気道過敏症および皮膚過敏症の両方）およびアレルギーを有する炎症状態の処置、予防または改善のために有用である。本発明の抗体が使用され得る特定の自己免疫疾患は、自己免疫性血液疾患（例えば溶血性貧血、再生不良性貧血、純赤血球貧血および特発性血小板減少症）、全身性エリテマトーデス、炎症性筋肉障害、多発性軟骨炎、強皮症(sclerodoma)、ヴェグナー肉芽腫症、皮膚筋炎、慢性活動性肝炎、重症筋無力症、乾癬、スティーブンス・ジョンソン症候群、特発性スプルー、自己免疫性炎症性腸疾患（例えば潰瘍性大腸炎、クローン病および過敏性腸症候群）、内分泌眼症、グレーブス病、サルコイドーシス、多発性硬化症、原発性胆汁性肝硬変、若年性糖尿病（Ｉ型糖尿病）、ブドウ膜炎（前部および後部）、乾性角結膜炎および春季カタル、間質性肺線維症、乾癬性関節炎および糸球体腎炎（ネフローゼ症候群、例えば特発性ネフローゼ症候群または微小変化性ネフロパシーあり、またはなし）、腫瘍、多発性硬化症、皮膚および角膜の炎症性疾患、筋炎、骨インプラントの緩み、代謝障害、例えば、アテローム性動脈硬化症、糖尿病および脂質異常症を含む。
【０２４９】
本発明の抗体またはタンパク質はまた、喘息、気管支炎、塵肺症、肺気腫および気道の他の閉塞性または炎症性疾患の処置、予防または改善のために有用であり得る。
【０２５０】
本発明の抗体またはタンパク質はまた、骨代謝疾患、例えば、骨関節症、骨粗鬆症および他の炎症性関節炎、および、骨量の減少、一般的に例えば、加齢に伴う骨量の減少および特に歯周疾患を処置するために有用であり得る。
【０２５１】
本発明の抗体またはタンパク質は、単独の活性成分として、または、例えば、上記疾患の処置または予防のための、他の薬物、例えば、免疫抑制性または免疫調節剤または他の抗炎症剤または他の細胞毒性剤または抗癌剤のアジュバントとして、組み合わせて投与され得る。例えば、本発明の抗体は、ＤＭＡＲＤ、例えば金塩、スルファサラジン、抗マラリア、メトトレキサート、Ｄ−ペニシラミン、アザチオプリン、ミコフェノール酸、シクロスポリンＡ、タクロリムス、シロリムス、ミノサイクリン、レフルノミド、グルココルチコイド；カルシニューリン阻害剤、例えばシクロスポリンＡまたはＦＫ５０６；リンパ球再循環のモジュレーター、例えばＦＴＹ７２０およびＦＴＹ７２０アナログ；ｍＴＯＲ阻害剤、例えばラパマイシン、４０−Ｏ−（２−ヒドロキシエチル）−ラパマイシン、ＣＣＩ７７９、ＡＢＴ５７８、ＡＰ２３５７３またはＴＡＦＡ−９３；免疫抑制特性を有するアスコマイシン、例えばＡＢＴ−２８１、ＡＳＭ９８１など；コルチコステロイド；シクロホスファミド；アザチオプリン；メトトレキサート；レフルノミド；ミゾルビン；ミコフェノール酸；ミコフェノール酸モフェチル；１５−デオキシスパーガリンまたは免疫抑制性ホモログ、その類似体または誘導体；免疫抑制性モノクローナル抗体、例えば、白血球受容体に対するモノクローナル抗体、例えば、ＭＨＣ、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ５８、ＣＤ８０、ＣＤ８６またはそれらのリガンド；他の免疫調節化合物、例えばＣＴＬＡ４の細胞外ドメインの少なくとも一部またはその変異体を有する組換え結合分子、例えば非ＣＴＬＡ４タンパク質配列に結合されたＣＴＬＡ４の少なくとも細胞外部分またはその変異体、例えばＣＴＬＡ４Ｉｇ（ＡＴＣＣ６８６２９受託）またはその変異体、例えばＬＥＡ２９Ｙ；接着分子阻害剤、例えばＬＦＡ−１アンタゴニスト、ＩＣＡＭ−１または−３アンタゴニスト、ＶＣＡＭ−４アンタゴニストまたはＶＬＡ−４アンタゴニスト；または化学療法剤、例えばパクリタキセル、ゲムシタビン、シスプラスチン、ドキソルビシンまたは５−フルオロウラシル；抗ＴＮＦ剤、例えばＴＮＦに対するモノクローナル抗体、例えばインフリキシマブ、アダリムマブ、ＣＤＰ８７０、またはＴＮＦ−ＲＩまたはＴＮＦ−ＲＩＩに対する受容体構築物、例えばエタネルセプト、ＰＥＧ−ＴＮＦ−ＲＩ；炎症性サイトカインの遮断薬、ＩＬ１遮断薬、例えばアナキンラまたはＩＬ１トラップ、ＡＡＬ１６０、ＩＬ１７遮断薬、ＩＬ１３遮断薬、ＩＬ４遮断薬、ＩＬ６遮断薬；ケモカイン遮断薬、例えばプロテアーゼ阻害剤または活性剤、例えばメタロプロテアーゼ、抗−ＩＬ１５抗体、抗−ＩＬ６抗体、抗−ＩＬ１７抗体、抗−ＩＬ４抗体、抗−ＩＬ１３抗体、抗−ＣＤ２０抗体、抗−Ｂｌｙｓまたは抗−ＢＡＦＦＲ抗体、ＮＳＡＩＤ、例えばアスピリンまたは抗−感染因子（記載されている薬剤に限定されない）と組み合わせて使用され得る。
【０２５２】
前記にしたがって、本発明は、さらなる局面において、治療有効量の本発明の抗−ＩＬ１２Ｒβ１抗体またはタンパク質、および少なくとも１つの第２の薬物の、例えば、同時に、または連続しての共投与を含む上記定義の方法であって、該第２の薬物は、例えば上記定義の、免疫抑制／免疫調節、抗炎症化学療法または抗感染薬物である方法、または、治療有効量のａ）本発明の抗体またはタンパク質、およびｂ）例えば上記の、免疫抑制／免疫調節、抗炎症化学療法または抗感染薬物から選択される少なくとも１つの第２の物質を含む治療組合せ、例えば、キットを提供する。該キットは、投与のための指示書を含み得る。
【０２５３】
本発明の抗体が他の免疫抑制／免疫調節、抗炎症化学療法または抗感染療法と共に投与されるとき、共投与される組合せ化合物の用量は、もちろん、使用される共薬物の型、例えばＤＭＡＲＤ、抗−ＴＮＦ、ＩＬ１ブロッカーまたは他のもの、使用される特定の薬物、処置される状態などに依存して変化する。
【０２５４】
１つの特定の態様において、本発明の抗体は、抗ＴＮＦ剤と組み合わせて投与され得る。
【０２５５】
別の態様において、本発明の抗体は、全身性紅斑性狼瘡またはリウマチ性関節炎に罹患しており、ＩＬ１２各々、ＩＦＮγまたはＩＬ１７の異常血清レベル、または、血球中のホスホＳＴＡＴ４のレベルおよび頻度の上昇を示す患者の中から選択される患者集団のみに投与される。他の態様において、本発明の抗体は、抗−ＩＬ１２または抗−ｐ４０処置に応答する患者グループ間で選択される患者集団のみに投与される。抗−ＩＬ１２（または抗−ｐ４０）処置に対する応答の可能性の増大を有する患者を同定するバイオマーカーは、血清ＩＬ１２のレベルの上昇、特定のＴ細胞サブセットのレベルの上昇、単離された末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）からのＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＩＬ１２Ｒβ２またはＳＴＡＴ４のｍＲＮＡレベル、皮膚生検ＰＢＭＣにおけるホスホＳＴＡＴ４発現のいずれかであり得るが、これらに限定されない。
【０２５６】
１つの態様において、本発明の抗体またはタンパク質は、ＩＬ１２Ｒβ１のレベルまたはＩＬ１２Ｒβ１を含む細胞のレベルを検出するために使用することができる。これは、例えば、抗体とＩＬ１２Ｒβ１間で複合体の形成を可能にする条件下で、サンプル（例えば、インビトロサンプル）およびコントロールサンプルを抗−ＩＬ１２Ｒβ１抗体と接触させることにより、なし遂げることができる。抗体とＩＬ１２Ｒβ１間で形成される複合体は、サンプルおよびコントロールにおいて検出および比較される。例えば、当分野でよく知られている標準検出方法、例えば、ＥＬＩＳＡおよびフローサイトメトリーアッセイは、本発明の組成物を使用して行うことができる。
【０２５７】
したがって、１つの局面において、本発明は、抗体またはその部分とＩＬ１２Ｒβ１間で複合体の形成を可能にする条件下で、サンプルおよびコントロールサンプルをＩＬ１２Ｒβ１に特異的に結合する本発明の抗体またはタンパク質またはその抗原結合領域と接触させることを含む、サンプル中のＩＬ１２Ｒβ１（例えば、ヒトＩＬ１２Ｒβ１抗原）の存在を検出するための、またはＩＬ１２Ｒβ１の量を測定するための方法をさらに提供する。次に、複合体の形成を検出し、コントロールサンプルと比較してサンプル間の複合体の形成における違いがサンプルにおけるＩＬ１２Ｒβ１の存在を示す。
【０２５８】
本発明の組成物（例えば、抗体、タンパク質、ヒト抗体および二重特異性分子）および使用のための指示書からなるキットもまた、本発明の範囲内である。キットは、少なくとも１つのさらなる試薬、または１つ以上のさらなる本発明の抗体またはタンパク質（例えば、第１の抗体と異なる標的抗原上のエピトープに結合する相補的活性を有する抗体）をさらに含むことができる。キットは、一般的に、キットの内容の使用目的を示すラベルを含む。ラベルなる用語は、キット上またはキットと共に提供される、または他にキットに付随したあらゆる文章または記録物質を含む。キットは、患者が上記定義の抗−ＩＬ１２Ｒβ１抗体処置に応答するグループに属するか否かを診断するためのツールをさらに含み得る。
【０２５９】
完全に記載されている本発明は、以下の実施例および特許請求の範囲によりさらに説明されるが、これは、例示であり、さらなる限定を意味しない。
【実施例】
【０２６０】
方法
１．表面プラズモン共鳴（Biacore system）を使用するアフィニティー決定
ＫＤ値の決定のために、表面プラズモン共鳴技術を、ＢｉａｃｏｒｅＴＭ技術を使用して適用した。ＩＬ１２Ｒβ１−Ｆｃ−融合物を捕獲するために、抗−ヒト−Ｆｃ−捕獲ＣＭ５チップ（Biacore, Sweden）を使用し、次に、異なる濃度でリガンド（Ｆａｂ）注射を行った。
【０２６１】
２．ＩＬ１２Ｒβ１−ＩＬ１２／ＩＬ２３インビトロ競合的結合阻害アッセイ（Ｂｉｏｖｅｒｉｓ）
ＩＣ５０は、受容体／リガンド相互作用の５０％阻害のために必要であったＦａｂまたはＩｇＧの濃度を示す。アッセイ処理中、（ほぼ最大のシグナルをもたらすようにあらかじめ決定された）固定された量の受容体を、溶液中で、精製されたＦａｂ／ＩｇＧの濃度を増加と共に（１：１００から１００：１モル比）インキュベートした。次に、サンプルを、リガンド被覆され、ブロックされたＭＳＤマルチタイタープレートに移した。遊離受容体はリガンドに結合し、適当なルテニウム錯体標識抗体を介して検出され、定量された。インキュベーションのために使用されるＦａｂ／ＩｇＧ濃度の逆関数として結合受容体の濃度を、それぞれのモデルを使用して合わせた。近似曲線の変曲点は、ＩＣ５０値を示す。
【０２６２】
３．ヒト血球のＩＬ１２−依存性ＩＦＮγ生産の阻害
ドナー血液由来の末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、一般的に使用されるＦｉｃｏｌｌ／Ｈｉｓｔｏｐａｑｕｅ勾配（Noble and Cutts, 1967 CanVetJ 8(5): 110-111）を介して単離した。細胞を（Ｘ−Ｖｉｖｏ  １５培地中で）２Ｅ＋６細胞／ｍｌに調節した。５０μｌの細胞（１Ｅ＋５）を９６ウェルＵ底プレートに移し、所望の濃度で、阻害抗体、例えば、抗ヒトＩＬ１２Ｒβ１  ＦａｂまたはサイレントＩｇＧ１またはコントロールｍＡｂまたはコントロールと共にインキュベートし、シェーカー上で３０分間ＲＴでプレインキュベートした。２μｇ／ｍｌの抗−ＣＤ３および抗−ＣＤ２８ｍＡｂならびに２ｎｇ／ｍｌの組換えヒトサイトカインＩＬ１２での刺激を、５％ＣＯ２インキュベーター中で、３７℃２０時間ｏ／ｎで行った。次の日、上清を２５０ｇでＲＴで５分間細胞の遠心分離により回収し、新しい９６ウェルプレートに移し、ＥＬＩＳＡ測定のために使用されたか、またはアッセイが行われるまで−２０℃で貯蔵した。
【０２６３】
ＩＦＮγ  ＥＬＩＳＡのために、上記回収した上清をＸ−Ｖｉｖｏ１５培地で希釈し、ＥＬＩＳＡをＢｅｎｄｅｒＭｅｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  ＃ＢＭＳ２２８ＨＳまたはＢｉｏｚｏｌ／Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ  ＃ＢＬＤ−４３０１０５の製造業者のプロトコールにしたがって行った。ＩＦＮγ生産をＩＦＮγ標準滴定曲線にしたがって決定した。
【０２６４】
４．ヒト血球のＩＬ２３−依存性ＩＦＮγ生産の阻害
ＰＨＡ刺激ＰＢＭＣを使用して、別のアッセイ系を試験した。該細胞集団において、レクチン暴露時にＴ細胞が増殖し、したがって、該集団におけるＴ細胞の割合が増加する。予備実験において、ＩＬ−１２、ＩＬ−２３、ＩＬ−１８およびＬＰＳ単独または組合せに対するこれらの細胞の応答性を評価し、最適な刺激条件を確立した。ＩＦＮ−γ分泌に対するＩＬ−１２＋ＩＬ−１８およびＩＬ−２３＋ＩＬ−１８の効果は、それぞれ約７ｎｇ／ｍｌおよび８００ｐｇ／ｍｌの誘導であった。
【０２６５】
あるいは、ヒトドナー血液由来のＰＢＭＣを密度勾配で遠心分離により単離し、３０分間ＲＴでＩｇＧの連続希釈物とインキュベートした。ＩＬ−１８およびＩＬ−２３を加え、細胞を４８時間３７℃／５％ＣＯ２でインキュベートした。５倍希釈上清（標準曲線１０ｎｇ／ｍｌ−２０ｐｇ／ｍｌの範囲内の濃度をなし遂げるためにＰＢＳ／２ｍＭＥＤＴＡにおいて）を取り、標準サンドウィッチＥＬＩＳＡによりＩＦＮ−γを定量した。
【０２６６】
５．全血におけるＩＬ１２−依存性ＩＦＮγ生産の阻害
ヒトまたはカニクイザル起源の抗凝固血液のアリコートを、Ｕ−底  ９６ウェルプレート（Costar, 3799）の個々のウェルに分配し、Ｘ−Ｖｉｖｏ  １５培地中のｍＡｂの連続希釈物を加え、３０分間ＲＴでインキュベートした。ヒトサイトカインＩＬ−１２およびＩＬ−１８を加えた後、細胞を２０−２４時間３７℃で、５％ＣＯ２でインキュベートし、上清をサンプリングし、ＥＬＩＳＡによりＩＦＮ−γを定量した。
【０２６７】
６．ＡＤＣＣアッセイ
カルセインと対照的に、そのアセトキシ−メチルエステル（カルセイン−ＡＭ）は、細胞膜を通過することができる化合物である。細胞内で、エステル結合は細胞性エステラーゼにより加水分解される。したがって、蛍光カルセインは、細胞内部に捕捉される。それは、膜完全性が妨げられるとき、すなわち細胞が殺されるときのみ、漏出する。カルセイン標識標的細胞は、ＮＫエフェクター細胞に対する標的として働き、上清において測定されるカルセインの量は、抗体調製物がＡＤＣＣを媒介する能力に比例する。
【０２６８】
ＮＫ３．３アッセイのために、２日間、飢餓培地（ＩＬ−２およびＩＬ−１０なし）においてＮＫ３．３細胞を培養することにより飢餓にする必要がある。
【０２６９】
ヒトＩＬ−１２Ｒβ１トランスフェクトマウス  プレＢ細胞をカルセインで標識し、試験される抗体とインキュベートした。ＣＤ２０を発現するヒトＢ細胞系Ｒａｊｉおよび抗−ＣＤ２０ｍＡｂを、ＮＫ３．３細胞の殺活性に対するコントロールとして使用する。標識細胞のみからの自発的放出およびｍＡｂなしでＮＫ３．３細胞の添加によるバックグラウンド死もまた、決定する。Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ１００での細胞溶解により誘導される全放出との相関関係において、％特異的溶解を決定する。
【０２７０】
７．カニクイザル薬物動力学（ＰＤ）アッセイ
ヘパリン化血液サンプルを９６−Ｕウェルプレート（１０９０μｌ／ウェル）に分配した。組換えヒトＩＬ−１２（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ；最終１００ｎｇ／ｍｌ）およびＩＬ−１８（ＭＢＬ；最終５０ｎｇ／ｍｌ）をそれぞれのウェルに加え、プレートを穏やかに３分間撹拌した。６％ＣＯ２で３７℃で２４時間のインキュベーション後、プレートを２０００ｒｐｍで１０分間遠心した。血漿を回収し、さらなる処理まで−８０℃で維持した。
【０２７１】
ＩＬ−２、ＴＮＦαおよびＩＦＮ−γ決定を、製造業者（UcyTech Biosciences, Utrecht）により説明されているとおりに、ＮＨＰ特異的ＥＬＩＳＡ−キット（ＣＴ７１１、ＣＴ１４８およびＣＴ１４１）で行った。
【０２７２】
ＰＤ読み出しのため、ＩＮＦγ／ｍｌのｐｇにおける結果をそれぞれのサンプル中に見出されるリンパ球数により補正し、最後にｐｇ／１０６リンパ球として表した。
【０２７３】
８．ラットインビボ適合性アッセイ
ラットに所定量のｍＡｂを注入し、血液サンプルを様々な間隔で取り、ピーク血漿濃度および放出速度をモニターし、血漿半減時間を決定した。ラット標的への交差反応性が予測されないため、標的関連効果（内在化、ターンオーバー）もまた、結果に影響することが予測することができない。
【０２７４】
９．ＣＤ４５ＲＢｈｉ移植炎症性腸疾患マウスモデル
体重減少により特徴付けられる疾患を誘発するため、ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＢＨｉ  Ｔリンパ球をＦＡＣＳ−ソートによりＢＡＬＢ／ｃマウス脾臓から単離し、１０週齢のメスＳＣＩＤマウスに注射した（２×１０５細胞／マウス、ｉ．ｐ．）（０日目）。ネガティブコントロールマウスにＰＢＳをｉ．ｐ．で与える。マウスグループに、１、７、１４および２１日目にｍＡｂ（抗−ＩＬ１２ｐ４０クローンＣ１７．８または抗−ＩＬ１２Ｒβ１抗体またはアイソタイプコントロール）またはＰＢＳの皮下または腹腔内注射による処置を与える。試験中および試験終了時点で、それぞれのマウスの体重をモニタリングする。末端大腸の組織学的実験および血清ハプトグロビンの決定を、２８日目に検視で決定する。
【０２７５】
１０．Ｂｉａｃｏｒｅ交差ブロッキングアッセイ
以下は、一般的に、抗体または他の結合剤が、本発明の抗体と交差ブロックするか、または交差ブロッキングすることができたか否かを決定するための適当なＢｉａｃｏｒｅアッセイを記載する。アッセイは、本明細書に記載されているＩＬ１２Ｒβ１結合剤のいずれかで使用することができることが理解される。
【０２７６】
Ｂｉａｃｏｒｅ機械（例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ  ３０００）は、製造業者の推奨ししたがって操作される。
【０２７７】
ＩＬ１２Ｒβ１細胞外ドメインは、日常的に使用されるアミンカップリング化学、例えば、ＥＤＣ−ＮＨＳアミンカップリングの方法により、例えばＣＭ５  Ｂｉａｃｏｒｅチップと結合させ、ＩＬ１２Ｒβ１被覆表面が作製され得る。測定可能な結合レベルを得るために、一般的に、ＩＬ１２Ｒβ１の２００−８００共鳴ユニットをチップに結合させ得る（この量は、測定可能な結合レベルを与え、同時に、使用されている試験試薬の濃度により容易に飽和化できる）。
【０２７８】
ＢＩＡｃｏｒｅチップにＩＬ１２Ｒβ１を結合する代替方法は、ＩＬ１２Ｒβ１の「タグ付け」のバージョン、例えば、Ｎ−末端またはＣ−末端Ｈｉｓ−タグ化ＩＬ１２Ｒβ１を使用することによる。この形式において、抗−Ｈｉｓ抗体は、Ｂｉａｃｏｒｅチップと結合し、次に、Ｈｉｓ−タグ化ＩＬ１２Ｒβ１は、チップの表面を通過し、抗−Ｈｉｓ抗体により捕捉される。
【０２７９】
互いに交差ブロックする能力について評価される２つの抗体は、テスト混合物を作製するために適当なバッファーにおいて結合部位の化学量論量で、例えば、１対１のモル比で混合される。使用されるバッファーは、一般的に、タンパク質化学で通常使用されるバッファー、例えば、ＰＢＳ（１３６ｍＭのＮａＣｌ、２．７ｍＭのＫＣｌ、１０ｍＭのＮａ２ＨＰＯ４、１．７６ｍＭのＫＨ２ＰＯ４、ｐＨ７．４）である。結合部位に基づいて濃度を計算するとき、抗体の分子量は、抗体上の標的（すなわちＩＬ１２Ｒβ１）結合部位の数で割られた抗体の全分子量であると仮定される。
【０２８０】
試験混合物中のそれぞれの抗体の濃度は、ＢＩＡｃｏｒｅチップ上に結合されているＩＬ１２Ｒβ１分子上の抗体に対する結合部位の飽和を保証するために十分に高いはずである。混合物中の抗体は同じモル濃度にあり（結合に基づいて）、濃度は、一般的に、１．０ｍＭから１．５ｍＭ（結合部位に基づいて）である。
【０２８１】
別々の抗体を単独で含む別々の溶液も調製する。これらの別々の溶液に対して使用されるバッファーは、試験混合物に対して使用されるものと同じバッファーで同じ濃度であるべきである。
【０２８２】
試験混合物をＩＬ１２Ｒβ１−被覆ＢＩＡｃｏｒｅチップ上を通過させ、結合を記録する。その後、約１分間、例えば酸、例えば３０ｍＭのＨＣｌでチップを処理することにより、結合した抗体を除去した。チップに結合しているＩＬ１２Ｒβ１分子が損傷していないことが重要である。
【０２８３】
次に、一次抗体の溶液単独を、ＩＬ１２Ｒβ１−被覆表面上を通過させ、結合を記録した。その後、例えば、上記酸処理の方法により、チップ結合ＩＬ１２Ｒβ１を損傷することなく、すべての結合抗体を除去するために、チップを処理する。
【０２８４】
次に、二次抗体の溶液単独を、ＩＬ１２Ｒβ１−被覆表面上を通過させ、結合量を記録する。
【０２８５】
最大理論的結合は、それぞれの抗体の別々のＩＬ１２Ｒβ１への結合の合計として定義することができる。次に、これは、測定される抗体の混合物の実際の結合と比較する。実際の結合が理論的結合よりも低いとき、２つの抗体は、互いに交差ブロッキングしている。
【０２８６】
１１．Ｅｌｉｓａベースの交差ブロッキングアッセイ
抗−ＩＬ１２Ｒβ１抗体または別のＩＬ１２Ｒβ１結合剤の交差ブロッキングはまた、ＥＬＩＳＡアッセイを使用することにより検出され得る。
【０２８７】
ＥＬＩＳＡ−アッセイの一般原理は、ＥＬＩＳＡプレートのウェル上に抗−ＩＬ１２Ｒβ１抗体を被覆することを含む。次に、過剰量の第２の潜在的に交差ブロッキングする抗−ＩＬ１２Ｒβ１抗体を溶液に加える（すなわち、ＥＬＩＳＡプレートに結合しない）。次に、限られた量のＩＬ１２Ｒβ１−Ｆｃをウェルに加える。
【０２８８】
ウェル上に被覆した抗体および溶液中の抗体は、限られた数のＩＬ１２Ｒβ１分子の結合に対して競合する。次に、プレートを洗浄し、被覆された抗体に結合しなかったＩＬ１２Ｒβ１−Ｆｃを除去し、第２の溶液相の抗体ならびに第２の溶液相の抗体とＩＬ１２Ｒβ１−Ｆｃ間で形成されたあらゆる複合体も除去する。次に、結合したＩＬ１２Ｒβ１の量を、適当なＩＬ１２Ｒβ１検出試薬を使用して測定する。被覆した抗体と交差ブロックすることができる溶液中の抗体は、第２の溶液相の抗体の非存在下で被覆した抗体が結合することができるＩＬ１２Ｒβ１分子の数と比較して、被覆した抗体が結合することができるＩＬ１２Ｒβ１分子の数の減少を引き起こすことができる。
【０２８９】
このアッセイは、Ａｂ−ＸおよびＡｂ−Ｙと称される２つの抗体について以下でさらに詳細に記載されている。Ａｂ−Ｘが固定化された抗体に選択される場合、それはＥＬＩＳＡプレートのウェル上に被覆され、その後、プレートを適当なブロッキング溶液でブロックし、次に加えられる試薬の非特異的結合を最小限にする。過剰量のＡｂ−Ｙを、ウェルあたりのＡｂ−Ｙ  ＩＬ１２Ｒβ１結合部位のモルが、ＥＬＩＳＡプレートの被覆の間、ウェルあたりに使用されるＡｂ−Ｘ  ＩＬ１２Ｒβ１結合部位のモルよりも少なくとも１０倍高くなるようにＥＬＩＳＡプレートに加えた。次に、ＩＬ１２Ｒβ１−Ｆｃを、ウェルあたりに加えられるＩＬ１２Ｒβ１−Ｆｃのモルが、それぞれのウェルを被覆するために使用されるＡｂ−Ｘ  ＩＬ１２Ｒβ１結合部位のモルよりも少なくとも２５倍低くなるように加えた。適当なインキュベーション期間後、ＥＬＩＳＡプレートを洗浄し、ＩＬ１２Ｒβ１検出試薬を加え、被覆抗−ＩＬ１２Ｒβ１抗体（この場合、Ａｂ−Ｘ）により特異的に結合されるＩＬ１２Ｒβ１の量を測定する。アッセイに対する背景シグナルは、被覆抗体（この場合、Ａｂ−Ｘ）、第２の溶液相抗体（この場合、Ａｂ−Ｙ）、バッファーのみ（すなわち、ＩＬ１２Ｒβ１なし）およびＩＬ１２Ｒβ１検出試薬でウェルにおいて得られるシグナルとして定義される。アッセイに対する陽性対照シグナルは、被覆抗体（この場合、Ａｂ−Ｘ）、第２の溶液相抗体バッファーのみ（すなわち、第２の溶液相抗体なし）、ＩＬ１２Ｒβ１およびＩＬ１２Ｒβ１検出試薬でウェルにおいて得られるシグナルとして定義される。ＥＬＩＳＡアッセイは、陽性対照シグナルが背景シグナルの少なくとも６倍となるような様式で行う必要がある。
【０２９０】
被覆抗体として使用する抗体、および第２（競合）抗体として使用する抗体の選択から引き起こされるあらゆるアーティファクト(artifact)（例えば、Ａｂ−ＸとＡｂ−Ｙ間のＩＬ１２Ｒβ１に対する有意に異なる親和性）を避けるために、交差ブロッキングアッセイは、１）Ａｂ−ＸがＥＬＩＳＡプレート上に被覆されている抗体であり、Ａｂ−Ｙが溶液中にある競合抗体である形式１、および２）Ａｂ−ＹがＥＬＩＳＡプレート上に被覆されている抗体であり、Ａｂ−Ｘが溶液中にある競合抗体である形式２、の２つの形式で実行する必要がある。
【０２９１】
１２．細胞結合アッセイ
選択される抗体の細胞結合を、種々のＩＬ−１２Ｒβ１を発現する細胞系、例えばキット２２５またはＨＳＣ−Ｆ、またはヒトおよびカニクイザルＴ細胞芽細胞を使用して、フローサイトメトリーを使用して試験する。抗体連続希釈物とのインキュベーション後、細胞の染色を、フローサイトメトリー分析により定量する。
【０２９２】
１３．エピトープ結合
エピトープ結合実験を、フローサイトメトリーを使用して行った。キット２２５細胞を、１００倍過剰のＦａｂ−フラグメントおよびＥＣ５０濃度のＩｇＧとインキュベートした。細胞へのＩｇＧ結合を、フローサイトメトリーによりＰＥ−標識Ｆｃ−特異的二次抗体で定量した。同じエピトープまたは同じ提示表面への結合に対するＦａｂとＩｇＧ間の競合は、すぐ近くの領域において（同じビン）、ＩｇＧ検出減少をもたらした。
【０２９３】
１４．重角光散乱検出器と連結したサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ−ＭＡＬＳ）
ＳＥＣ−ＭＡＬＳ測定を、三角形光散乱検出器（miniDAWN Treos, Wyatt Technology, Santa Barbara, CA, USA）に連結したＡｇｉｌｅｎｔ  １２００  ＨＰＬＣシステム（Agilent Technologies）にて行った。サンプルの濃度は、０．１８６ｍｌ／ｇの特定の屈折率増加（ｄｎ／ｄｃ）値を使用して示差屈折計（Optilab rEX, Wyatt Technology）でオンラインで追跡された（Wenら 1996）。５０μｌのサンプル容量をＳｕｐｅｒｄｅｘ  ２００  １０／３００  ＧＬ  カラム（GE Healthcare）に注入した。データを記録し、ＡＳＴＲＡ  Ｖ  ソフトウェア（Wyatt Technology）を使用して処理した。ＭＡＬＳ検出器に対する検出器遅延容量および正規化係数を決定するために、ＢＳＡサンプル（Sigma, A8531）を参照として使用した。デスパイキング(despiking)もバンド拡大補正(band broadening correction)も適用しなかった。
Wen, J., Arakawa, T., Philo, J.S., 1996. Anal. Biochem. 240, 155-166も参照。
【０２９４】
１５．細胞上清における抗体濃度のインプロセスコントロール（力価）
抗体含有上清の濃度決定を、プロテインＡカラムを使用するＨＰ１１００  ＨＰＬＣシステム（Agilent Technologies）で行った。６２．５μｌのプロテインＡ  セファロース４ファーストフロー(fast flow)（Amersham Biosciences）をＨＰＬＣカートリッジに充填した。ランニングバッファーは５０ｍＭのＨ３ＢＯ３、２００ｍＭのＮａ２ＳＯ４であり、バッファーＡはＮａＯＨを使用してｐＨ７．５に調整されており、バッファーＢはＨ２ＳＯ４を使用してｐＨ２．５に調整されていた。流速は０．７５ｍｌ／分であった。一般的に、０．２ｍｌの上清をプロテインＡカラムに注入した。５．５分間バッファーＡでリンスした後、結合抗体を２．５分間、バッファーＢで溶離した。次のサンプル注射の前に、カラムをバッファーＡで平衡にした。２１５ｎｍ  ＵＶ線をモニタリングし、溶離ピーク領域または高さを定量のために使用した。培養培地に加えられた異なる量の精製された抗体を有するサンプルから得られた標準曲線を、校正のために使用した。
【０２９５】
１６．ヒト抗体の等電点（ｐＩ）のコンピューター内予測
コンピューター内予測ｐＩを、Ｍａｒｋｕｓ  Ｈｅｉｔｚｍａｎｎ、Ｔｉｎａ  Ｂｕｃｈ、Ｓａｌｖａｔｏｒｅ  Ｌｅｏｎａｒｄｉ、Ｎｏｒａ  ＥｉｆｌｅｒおよびＭｉｃｈａｅｌ  ＶｅｔｓｃｈによりＮＢｘ−ＰＳＰ−ＣＰＤで開発されたＮｏｖａｒｔｉｓ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ  ｐＩ  Ｃａｌｃｕｌａｔｏｒ  ｖｅｒｓｉｏｎ  １．１で完全抗体の一次アミノ酸配列を分析することにより計算した。ｐＫ値は、Grimsley GR., Scholtz JM, and Pace CN. (2009) Protein Sci. 2009 18:247-51からである。
【０２９６】
１７．プロテインＡ回収（％）
多重波長ナノドロップ分光光度計ＮＤ１０００（Ｐｅｑｌａｂ）を使用して、２８０ｎｍの波長でプロテインＡ精製後のサンプル抗体の濃度を決定した。プロテインＡ回収は、プロテインＡ  ＨＰＬＣ（上記）により測定される細胞上清中の精製された抗体の全量および抗体の量の比率である。
【０２９７】
１８．ｐＨ７．４でのＩｇＧの融点決定
使用されるシステムは、Ｔｈｅｒｍｏｆｌｕｏｒ（登録商標）  ｉＱＴＭ  ５  Ｏｐｔｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍ（BioRad Laboratories）であり、使用されるソフトウェアは、ｉＱＴＭ  ５  Ｏｐｔｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍ  ｖ２．０であった。９６−ウェル白色マイクロプレート（ｍｕｌｔｉｐｌａｔｅ（登録商標）  ＰＣＲ  ＰｌａｔｅＴＭ）はＢｉｏｒａｄ（＃ＭＰＬ９５６１）であった。プレートは、Ｍｉｃｒｏｓｅａｌ（登録商標）  ‘Ｂ’  Ｆｉｌｍで密封した。ＳＹＰＲＯ（登録商標）  Ｏｒａｎｇｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｇｅｌ  ＳｔａｉｎはＳｉｇｍａ（＃Ｓ５６９２）であった。使用前に、濃縮された色素をｄＨ２Ｏで希釈した（１ｍｌのｄＨ２Ｏ中１．４μｌ）。１０μｌの抗体サンプルを、１０μｌの２５０ｍＭのナトリウムリン酸バッファー  ｐＨ７．４、２３μｌのｄＨ２Ｏに加え、７μｌの希釈された色素を含ませた。最終容量はウェルあたり５０μｌであった。プレートを、ハンドヘルドシーラー（指紋を回避する）を使用してＭｉｃｒｏｓｅａｌ（登録商標）  ‘Ｂ’  Ｆｉｌｍで密封し、プレートを２分間１０００ｇで遠心した。Ｔｍ測定は、温度を９０分間２０℃から９５℃へ０．５℃ずつの増加でＴｈｅｒｍｏｆｌｕｏｒ装置において行った。
【０２９８】
１９．ｐＨ７．４、ｐＨ６．０、ｐＨ３．５でＦａｂの融点決定
使用されるシステムは、Ｔｈｅｒｍｏｆｌｕｏｒ（登録商標）  ｉＱＴＭ  ５  Ｏｐｔｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍ（BioRad Laboratories）であり、使用されるソフトウェアは、ｉＱＴＭ  ５  Ｏｐｔｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍ  ｖ２．０であった。９６−ウェル白色マイクロプレート（ｍｕｌｔｉｐｌａｔｅ（登録商標）  ＰＣＲ  ＰｌａｔｅＴＭ）はＢｉｏｒａｄ（＃ＭＰＬ９５６１）であった。プレートは、Ｍｉｃｒｏｓｅａｌ（登録商標）  ‘Ｂ’  Ｆｉｌｍで密封した。ＳＹＰＲＯ（登録商標）  Ｏｒａｎｇｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｇｅｌ  ＳｔａｉｎはＳｉｇｍａ（＃Ｓ５６９２）であった。使用前に、濃縮された色素をｄＨ２Ｏで希釈した（１ｍｌのｄＨ２Ｏ中１．４μｌ）。２５μｌの大腸菌発現Ｆａｂサンプルを、１８μｌの５０ｍＭのクエン酸塩  ｐＨ３．５または１００ｍＭのＭＥＳ  ｐＨ６．０またはＰＢＳに加え、最後に７μｌの希釈された色素を含ませた。最終容量はウェルあたり５０μｌであった。プレートを、密封ツールを使用してＭｉｃｒｏｓｅａｌ  ’Ｂ’  Ａｄｈｅｓｉｖｅ  Ｓｅａｌｓ  （ＢｉｏＲａｄ、＃ＭＳＢ１００１）で密封し、混合し、遠沈した。融解温度を、２０から１００℃へ０．５℃ずつの増加でｉＱＴＭ５  Ｍｕｌｔｉｃｏｌｏｒ  Ｒｅａｌ  Ｔｉｍｅ  ＰＣＲ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍにおいてサンプルを加熱することにより測定した。結果は、ｉＱ５を使用して分析した。
【０２９９】
２０．エピトープのアミド水素／ジュウテリウム交換質量分析マッピング
アミド水素／ジュウテリウム交換質量分析（Ｈ／ＤｘＭＳ）を使用して、以下の抗体のグループ：（ｉ）ｍＡｂ１、ｍＡｂ２、ｍＡｂ３、ｍＡｂ１３（ＭＯＲ１１８７３）、（ｉｉ）ｍＡｂ４、ｍＡｂ５、ｍＡｂ６、ｍＡｂ１４（ＭＯＲ１１８７８）、および（ｉｉｉ）ｍＡｂ１０、ｍＡｂ１１、ｍＡｂ１２、ｍＡｂ１６（ＭＯＲ１１８８０）に対するエピトープに関する情報のためにＩＬ１２Ｒベータ１をプローブした。Ｈ／ＤｘＭＳマッピングは、１Ｈと２Ｈ（ジュウテリウムとも称され、原子記号Ｄで省略される）またはジュウテリウムの同位体質量間の質量の違いによる。水（Ｈ２Ｏ）から重水（Ｄ２Ｏ）への変化時、タンパク質の水素原子が重陽子（すなわち、水素のより重いアイソトープ）で徐々に置き換えられるため、タンパク質は質量における増加を生じる。水素／ジュウテリウム交換事象の可能性は、生理学的条件下で主にタンパク質構造により決定される。該構造は、所定の位置でのタンパク質の熱力学的安定性および部位特異的溶媒接近性をコントロールする。Ｈ／ＤｘＭＳ技術は、生理学的条件下でタンパク質へのジュウテリウム取り込みに起因するタンパク質のタンパク質分解性フラグメントの質量シフトを測定するために使用される。これらの質量シフトは、間接的に、局所的タンパク質構造的特徴（幾何学的およびエネルギー的）に折り返し伝えられる。標識分析後に残るように十分に他の部位でジュウテリウム化を安定化することができないため、タンパク質における交換可能な水素のアミド水素のみがＨ／ＤｘＭＳ分析において観察される。
【０３００】
結合パートナーが抗体標的に結合するとき（例えば抗原／抗体相互作用）、水素／ジュウテリウム交換率における実験的変化は、局所環境の溶媒排除およびエネルギー的安定化の結果として観察され得る。溶媒から排除される表面領域は、はるかにゆっくり、複合体形成交換時に接近する。したがって、交換の減少は、結合部位に対する指標として直接的に使用することができる。具体的には、抗原−抗体相互作用において、これらの変化は、エピトープの位置を強調し得る。該解釈は、タンパク質が共同的様式においてリガンド結合に対して応答するため、（幾何学的およびエネルギー的）変化がタンパク質の他の場所に起こることができる（アロステリックな変化）という事実により複雑化される。水素−ジュウテリウム交換におけるアロステリックな効果は、幾何学的／構造的情報が回収されないとき、質量分析ベースのアッセイにおいて区別することができない。それにもかかわらず、実際には、溶媒排除が、遊離抗原に関するようなタンパク質−抗原複合体形成において観察される保護パターンを主に説明し、交換の減少を示すタンパク質上の位置が結合接合面を高度に示すということが観察される。
【０３０１】
抗体結合後の重陽子取り込みの減少の位置は、標的タンパク質の消化、次に、水素／ジュウテリウム交換（例えば適当な酵素、例えば、ペプシンでの）、次に、関連フラグメントの質量シフトを決定するための質量分析により推測され得る。
【０３０２】
実験的記述：標識実験において、抗原（ＩＬ１２Ｒベータ１）および抗原免疫複合体を、自動液体処理システムを使用してあらかじめ決定された時間、０℃で溶液中で交換した。
【０３０３】
１０分の交換期間後、サンプルを、低ｐＨ（約２．５、これは、ｐＨ７．５と比較して、アミド−水素の交換プロセスを５桁ゆっくりにする）にクエンチし、過剰の酸性クエンチバッファーの添加により交換を停止し、標識状態を保存する。低ｐＨへのクエンチは、タンパク質分解（ペプシン）に対する、および液体クロマトグラフィー質量分析による分析のための標識状態（半減期〜３０分）の十分な安定化を提供する。
【０３０４】
抗体−抗原複合体と遊離抗原からのフラグメントに対するジュウテリウム化における違いを検査する。マイナスの値は、抗体−抗原複合体において溶媒保護を示し、相互作用の最も可能性の高い部位として解釈する。
【０３０５】
この分析の結果は、表１３に挙げられているＭＯＲ＃可変領域ＭＯＲ１１８７３、ＭＯＲ１１８７８、ＭＯＲ１１８８０を有する抗体の３つのグループからの典型的な抗体で行ったとき、以下の表１５に提供される。
【０３０６】
実施例ｍＡｂ１からｍＡｂ１６
表６は、実施例ｍＡｂ１からｍＡｂ１６の全長重鎖および軽鎖のアミノ酸配列（配列番号）を記載している。
表６：実施例ｍＡｂ１−ｍＡｂ１６
【表６】
2013543384.tif 000007
【０３０７】
実施例ｍＡｂ１からｍＡｂ１６は、慣用の抗体組換え生産および精製方法を使用して、生産することができる。例えば、表７において定義されるコード配列を、哺乳動物生産細胞系における組換え発現のための生産ベクターにクローニングする。
表７：ｍＡｂ１−ｍＡｂ１６のコードＤＮＡ配列
【表７】
2013543384.tif 000008
【０３０８】
ＩＬ１２Ｒβ１と同じ結合特性を実質的に保持する他の抗体は、ｍＡｂ１からｍＡｂ１６のいずれか１つの同じＶＨおよびＶＬ領域ならびに異なる定常領域（例えば、異なるアイソタイプ、例えばＩｇＧ４またはＩｇＧ２から選択される異なるＦｃ領域）を保持するｍＡｂ１からｍＡｂ１６のいずれか１つのキメラ抗体を含む。
【０３０９】
表８は、ｍＡｂ１からｍＡｂ１６由来のキメラ抗体を作製するために使用することができるｍＡｂ１からｍＡｂ１６の可変重鎖（ＶＨ）および軽鎖（ＶＬ）アミノ酸配列を要約する。
表８：可変重鎖（ＶＨ）および軽鎖（ＶＬ）アミノ酸配列
【表８】
2013543384.tif 000009
【０３１０】
ｍＡｂ１−ｍＡｂ１６と同様のＩＬ１２Ｒβ１に対する結合特性を実質的に保持する他の抗体の例は、異なるフレームワークおよび／または定常領域を有するｍＡｂ１からｍＡｂ１６のいずれか１つのＣＤＲ領域を保持する、ＣＤＲ移植によるｍＡｂ１からｍＡｂ１６のいずれか１つのＣＤＲ移植抗体を含む。
【０３１１】
表９は、ｍＡｂ１からｍＡｂ１６のＣＤＲ領域がＫａｂａｔ定義にしたがって定義される代替ＣＤＲ移植抗体を作製するためのｍＡｂ１からｍＡｂ１６の有用なＣＤＲ配列を要約する。
表１０は、ｍＡｂ１からｍＡｂ１６のＣＤＲ領域がＣｈｏｔｈｉａ定義にしたがって定義される代替ＣＤＲ移植抗体を作製するためのｍＡｂ１からｍＡｂ１６の有用なＣＤＲ配列を要約する。
表９：ｍＡｂ１からｍＡｂ１６のＣＤＲ領域は、Ｋａｂａｔ定義にしたがって定義される
【表９】
2013543384.tif 000010
表１０：ｍＡｂ１からｍＡｂ１６のＣＤＲ領域は、Ｃｈｏｔｈｉａ定義にしたがって定義される
【表１０】
2013543384.tif 000011
【０３１２】
抗−ＩＬ１２Ｒベータ１  ｍＡｂの作製
一旦、本明細書に記載されている所望の特性を有する単一の典型的な抗−ヒト−ＩＬ１２Ｒベータ１抗体、例えばｍＡｂ１から１６のいずれか１つが単離されれば、当分野で既知の方法を使用することにより、同様の特性を有する他の抗体を作製することは容易である。例えば、マウスをＩＬ１２Ｒベータ１で免疫化し、ハイブリドーマを生産し、得られた抗体を配列番号：８９のＩＬ１２Ｒベータ１ポリペプチドへの結合についてスクリーニングし得る。あるいは、ファージディスプレイ方法論を使用して、配列番号：８９のＩＬ１２Ｒベータ１ポリペプチドに対する特異性を有する他の抗体を作製し得る。
【０３１３】
次に、配列番号：８９のＩＬ１２Ｒベータ１ポリペプチドに対する特異性を有するこのような他の抗体を、以下の１つ以上の特性：表面プラズモン共鳴（Biacore system）を使用して１ｎＭ以下のＫＤ、インビトロ競合的結合アッセイにおいて測定されたとき、配列番号：８９のＩＬ１２Ｒベータ１ポリペプチドへのＩＬ１２および／またはＩＬ２３の結合の阻害、表面プラズモン共鳴（Biacore system）またはＥｌｉｓａベースの交差ブロッキングアッセイを使用して測定されるとき、ＩＬ１２Ｒベータ１への結合について典型的なｍＡｂと競合する能力、アミド水素／ジュウテリウム交換質量分析を使用して測定されるとき、同じエピトープ内への、または該エピトープへの結合についてスクリーニングすることができる。あるいは、出典明示により本明細書に包含させるJespersら Biotechnology 12:899, 1994の方法は、典型的なｍＡｂ、例えば、ｍＡｂ１から１６のいずれか１つのものと同じエピトープ、したがって同様の特性を有するｍＡｂの選択を導くために使用され得る。ファージディスプレイを使用して、典型的な抗体の第１の重鎖を（好ましくはヒト）軽鎖のレパートリーと対にし、ＩＬ１２Ｒベータ１に結合するｍＡｂを選択し、次に、新規軽鎖を（好ましくはヒト）重鎖のレパートリーと対にし、典型的なｍＡｂと同じエピトープを有する（好ましくはヒト）ＩＬ１２Ｒベータ１に結合するｍＡｂを選択する。
【０３１４】
例えば、本明細書に記載されているエピトープ内または該エピトープへ結合する他の抗体を同定するために、抗体を上記のとおりに作製し、次に、アミド水素／ジュウテリウム交換質量分析を使用してエピトープへの結合、または該エピトープ内の結合についてスクリーニングすることができる。あるいは、ＩＬ１２Ｒベータ１への結合に対して典型的なｍＡｂと競合する他の抗体を同定するために、抗体を上記のとおりに作製し、次に、表面プラズモン共鳴（Biacore system）またはＥｌｉｓａベースの交差ブロッキングアッセイを使用して競合についてスクリーニングすることができる。
【０３１５】
本明細書に記載されている機能特性を有する他の抗体を同定するために、抗体を上記のとおりに作製し、次に、表面プラズモン共鳴（Biacore system）を使用して１ｎＭ以下のＫＤ、および、インビトロ競合的結合アッセイにおいて測定されたとき、配列番号：８９のＩＬ１２Ｒベータ１ポリペプチドへのＩＬ１２および／またはＩＬ２３の結合の阻害についてスクリーニングすることができる。
【０３１６】
本明細書に記載されている機能特性を有し、本明細書に記載されているエピトープ内または該エピトープへ結合する他の抗体を同定するために、抗体を上記のとおりに作製し、表面プラズモン共鳴（Biacore system）を使用して１ｎＭ以下のＫＤ、および、インビトロ競合的結合アッセイにおいて測定されたとき、配列番号：８９のＩＬ１２Ｒベータ１ポリペプチドへのＩＬ１２および／またはＩＬ２３の結合の阻害についてスクリーニングし、アミド水素／ジュウテリウム交換質量分析を使用してエピトープへの結合、または該エピトープ内の結合についてスクリーニングすることができる。
【０３１７】
本明細書に記載されている機能特性を有し、ＩＬ１２Ｒベータ１への結合について典型的なｍＡｂと競合する他の抗体を同定するために、抗体を上記のとおりに作製し、表面プラズモン共鳴（Biacore system）を使用して１ｎＭ以下のＫＤについてスクリーニングし、インビトロ競合的結合アッセイにおいて測定されたとき、配列番号：８９のＩＬ１２Ｒベータ１ポリペプチドへのＩＬ１２および／またはＩＬ２３の結合の阻害についてスクリーニングし、表面プラズモン共鳴（Biacore system）またはＥｌｉｓａベースの交差ブロッキングアッセイを使用して競合についてスクリーニングすることができる。
表１１：本発明を実施するために有用なアミノ酸およびヌクレオチド配列の簡単な説明
【表１１−１】
2013543384.tif 000012
【表１１−２】
2013543384.tif 000013
【表１１−３】
2013543384.tif 000014
【表１１−４】
2013543384.tif 000015
【表１１−５】
2013543384.tif 000016
【表１１−６】
2013543384.tif 000017
【０３１８】
表１２：本発明を実施するために有用なアミノ酸およびヌクレオチド配列
【表１２−１】
2013543384.tif 000018
【表１２−２】
2013543384.tif 000019
【０３１９】
【表１２−３】
2013543384.tif 000020
【表１２−４】
2013543384.tif 000021
【０３２０】
【表１２−５】
2013543384.tif 000022
【表１２−６】
2013543384.tif 000023
【０３２１】
【表１２−７】
2013543384.tif 000024
【表１２−８】
2013543384.tif 000025
【０３２２】
【表１２−９】
2013543384.tif 000026
【表１２−１０】
2013543384.tif 000027
【０３２３】
【表１２−１１】
2013543384.tif 000028
【表１２−１２】
2013543384.tif 000029
【０３２４】
【表１２−１３】
2013543384.tif 000030
【表１２−１４】
2013543384.tif 000031
【０３２５】
【表１２−１５】
2013543384.tif 000032
【０３２６】
結果
実施例ｍＡｂ１からｍＡｂ１６は、以下に記載されるとおりに得られ、生産された：
【０３２７】
ＩＬ１２Ｒｂ１に対して高親和性を有するＦａｂ抗体のスクリーニングおよび同定
迅速な成熟と共にライブラリースクリーニングを記載されているとおりに行った（Knappikら 2000 J.Mol.Biol. 296: 57-86; Prasslerら 2009 Immunotherapy 1(4): 571-83）。古典的なスクリーニングに加えて、確認された結合物（Ｆａｂ）を、ＩＬ−１２Ｒを天然に発現するヒト（Ｋｉｔ−２２５）およびカニクイザル（ＨＳＣ−Ｆ）細胞への結合について即座に試験した。これは、最初に観察された５５２０個から１１９個のユニークなクローンの選択を可能にした。次に、それらを、有効な候補物のために、ヒト全血アッセイ、次にカニクイザルバージョンにおける機能性阻害について試験した（４６から２０ファミリー、４エピトープビンに分類された）。したがって、６つの有効な機能性阻害剤（４つのファミリーから）を、最初に、カニクイザルおよびヒトＩＬ−１２機能を阻害するＩＣ５０によって最終候補にリストした。トップ４つ（それぞれＭＯＲ１１８７３、ＭＯＲ１１８７８、ＭＯＲ１１８７９およびＭＯＲ１１８８０と命名された；後者２つは同一のＣＤＲを含む２つの異なるフレームワークである）を、それらの発展性を改善するように最適化操作のために選択し、最適なサイレントバージョンの評価のために４つの異なるＩｇＧ１  Ｆｃバージョンにおいて調製した（ＡＤＣＣ／ＣＤＣまで）。
【０３２８】
大腸菌におけるＨｕＣＡＬ（登録商標）−Ｆａｂ抗体の発現および精製
可溶性Ｆａｂの迅速な発現を促進するために、選択されたＨｕＣＡＬ  ＰＬＡＴＩＮＵＭ（登録商標）ファージのＦａｂコード挿入物を、哺乳動物細胞系におけるＩＰＴＧ誘導Ｆａｂ発現のための発現ベクターにサブクローニングし、Ｎｉ−ＮＴＡクロマトグラフィーによりＦａｂの精製を行った。ＴＧ−１細胞におけるＦａｂフラグメントの発現を、ＩＰＴＧの添加により誘導した。リゾチームおよびＮｉ−ＮＴＡクロマトグラフィー（Bio-Rad, Germany）により単離されたＦａｂフラグメントを使用して細胞を、破壊した。タンパク質濃度を、ＵＶ−分光光度法により測定した。ＨＰ−ＳＥＣにより自然(native)条件で、およびＳＤＳ−ＰＡＧＥを使用して変性し、還元した状態で、Ｆａｂフラグメントの純度を分析した。
【０３２９】
ＩｇＧへの変換
ヒトＩｇＧ１ｆ野生型、ヒトＩｇＧ１ｆＤ２６５Ａ、ヒトＩｇＧ１ｆＮ２９７Ａおよび以下「ＬＡＬＡ」と称されるヒトＩｇＧ１ｆ  Ｌ２３４ＡＬ２３５Ａについて、全長ＩｇＧを発現させるために、４つの有力な候補物であるＭＯＲ１１８７３、ＭＯＲ１１８７８、ＭＯＲ１１８７９およびＭＯＲ１１８８０の重鎖（ＶＨ）および軽鎖（ＶＬ）の可変ドメインフラグメントを、Ｆａｂ発現ベクターから適当な発現ベクターにサブクローニングし、本発明の１６個の抗体である、以下の表１３に記載されているｍＡｂ１−ｍＡｂ１６の生産のための発現ベクターを得た：
表１３：ｍＡｂ１−ｍＡｂ１６の可変領域およびＩｇＧ１  Ｆｃ領域の記載
【表１３】
2013543384.tif 000033
【０３３０】
ヒトＩｇＧの一過性発現および精製
ＩｇＧ  ｍＡｂ１、ｍＡｂ４、ｍＡｂ７およびｍＡｂ１０の重鎖および軽鎖をコードする発現ベクターＤＮＡで真核ＨＫＢ１１細胞をトランスフェクトした。滅菌濾過後、溶液を、標準プロテインＡアフィニティークロマトグラフィー（MabSelect SURE, GE Healthcare）に付した。タンパク質濃度を、ＵＶ−分光光度法により測定した。ＳＤＳ−ＰＡＧＥにおいて、変性、還元、および非還元条件下で、またはＨＰ−ＳＥＣにより自然条件で、かつ、Ｃａｌｉｐｅｒ  ＬａｂＣｈｉｐ（登録商標）ＳｙｓｔｅｍまたはＡｇｉｌｅｎｔ  ＢｉｏＡｎａｌｙｚｅｒを使用することにより、ＩｇＧの純度を、分析した。上記パラグラフの方法に記載されている方法にしたがって、全ての候補抗体を、ヒトおよびカニクイザルにおいてそれらのＩＬ１２Ｒβ１結合親和性（ＳＰＲ、ＫＤ  ｎＭ）、ＩＬ１２／ＩＬ２３インビトロ競合的結合阻害、ＩＬ１２／ＩＬ１８依存性ＩＦＮγ生産について試験した。該結果は、表１４に示される。
表１４：ｍＡｂ１、ｍＡｂ４、ｍＡｂ７およびｍＡｂ１０のプロファイリングデータ
【表１４−１】
2013543384.tif 000034
【表１４−２】
2013543384.tif 000035
【０３３１】
驚くべきことに、本発明の抗体は、ＫＤアフィニティー、および、機能性ヒトアッセイにより測定されるとき、ＩＬ１２競合的結合に対して１００ｐＭ以下、さらに１０ｐＭ以下のＩＣ５０を有し、したがって薬物としての使用のために特に適当である。さらに、それらは、有利な発展性特性を有する。それらはまた、カニクイザルＩＬ１２Ｒβ１（配列番号：９８）と交差反応し、可変領域をコードするコード配列は、サイレントＩｇＧ１抗体、例えばＬ２３４Ａ  Ｌ２３５Ａ変異を含むＩｇＧ１  Ｆｃ変異体、またはＤ２６５Ａ変異を含むＩｇＧ１  Ｆｃ変異体、またはＮ２９７Ａ変異を含むＩｇＧ１  Ｆｃ変異体を作製するために容易に移動することができる。
【０３３２】
エピトープ結合実験
抗体を交差競合（エピトープ結合）実験で試験し、４つの別個のグループは、全ての最初に同定された機能的に阻害するｍＡｂ中で区別することができた。選択されたトップ４つの候補物ＭＯＲ１１８７３、ＭＯＲ１１８７８、ＭＯＲ１１８７９およびＭＯＲ１１８８０は全て、偶然、エピトープ  ビンＢと称される第２のグループに分類され、したがって互いに競合する。全ｍＡｂ１−ｍＡｂ１６が４つのトップ候補物の１つに由来する結合領域を有するため、したがって、全ｍＡｂ１−ｍＡｂ１６抗体は互いに競合することが予期される。
【０３３３】
アミド水素／ジュウテリウム交換質量分析エピトープマッピングの要約
本発明の抗体間の結合関連性の明確な状況を発達させるために、エピトープマッピング試験を行った。目的は、標的ヒトＩＬ１２Ｒベータ１分子上への候補モノクローナル抗体の結合部位を決定することであった。特に、目的は、抗体と標的間の結合相互作用に関与するヒトＩＬ１２Ｒベータ１の特異的アミノ酸残基を同定することであった。エピトープマッピングは一般的に、当業者が利用できる当分野の技術の様式を使用して行った。特に、水素／ジュウテリウム交換質量分析は、抗体結合に影響する、すなわち関連エピトープに関与するアミノ酸残基に対するヒトＩＬ１２Ｒベータ１の構造をプローブするために使用した。表１５における結果は、Δ（デルタ）値、すなわちＩＬ１２Ｒベータ１／抗体複合体と遊離ＩＬ１２Ｒベータ１タンパク質間のジュウテリウム化における差を示す。マイナスの値は、抗体−抗原複合体において溶媒保護を示し、相互作用の最も可能性の高い部位として解釈する。
表１５：Ｈ／ＤｘＭＳエピトープマッピングデータ
【表１５】
2013543384.tif 000036
【０３３４】
Ｈ／ＤｘＭＳエピトープマッピング結果は、ヒトＩＬ１２Ｒベータ１配列のアミノ酸残基４１６−４２９（ＩＴＩＦＡＳＡＨＰＥＫＬＴＬ）に対応する１つのペプチドが全てのグループの抗体に対して保護を示したことを示す。このデータは、これらのグループの抗体が互いに競合を示すという事実と一致し、４１６−ＩＴＩＦＡＳＡＨＰＥＫＬＴＬ−４２９のペプチドが、全３つのグループの抗体に対するエピトープに対応することを示す。さらに、これらのデータは、抗体がカニクイザルＩＬ１２Ｒベータ１と交差反応性であるが、同等の齧歯動物配列（マウスおよびラット）と交差反応性ではないという事実と一致する。ヒト、カニクイザル、ラットおよびマウスにおける該エピトープ配列の比較は、表１６に示され、アラインされたエピトープ配列は下線が引かれている。
表１６：ヒト、カニクイザル、ラットおよびマウスにおけるＩＬ１２Ｒベータ１抗体エピトープ配列の比較
【表１６】
2013543384.tif 000037
【０３３５】
カニクイザルおよびヒト配列は、ヒトおよびカニクイザル配列の両方と抗体の交差反応性を有する該エピトープ配列において１つのアミノ酸残基のみ異なる。対照的に、該エピトープにおける齧歯動物配列は、ヒトおよびカニクイザル配列と比較して大きな違いを示し、これは、齧歯動物ＩＬ１２Ｒベータ１タンパク質と抗体の特異性の欠如と一致する。
【配列表】
2013543384000001.app
【国際調査報告】
2013543384.tif 000038
2013543384.tif 000039