(57)【要約】  身体に移植された非金属製生体インプラントに関係した有害作用を生じる個体の遺伝的素因のインビトロ分析方法である。該方法は、個体からの生体試料中において、主要組織適合複合体の抗原が存在するかどうかを判定することを含む。測定を実施するためのキットの使用及び遺伝子マーカーとしての該抗原の使用もまた開示される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
身体に移植された非金属製生体インプラントに関係した有害作用を生じる個体の遺伝的素因のインビトロ分析方法であって、前記個体からの生体試料中に存在する主要組織適合複合体の抗原を測定することを含む方法。
【請求項２】
上記個体からの生体試料中において、主要組織適合複合体の抗原ＨＬＡ−Ｂ*０８及び／又はＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３の存在を測定することを含み、上記抗原の少なくとも一つの存在が上記有害作用を生じる遺伝的素因の指標である、請求項１に記載のインビトロ方法。
【請求項３】
２つの抗原ＨＬＡ−Ｂ*０８及びＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３の存在を測定することを含み、２つの抗原の存在が上記有害作用を生じる遺伝的素因の指標である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
抗原ＨＬＡ−Ｂ*０８及び／又はＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３の存在の測定が、ＨＬＡ−Ｂ*０８の対立遺伝子及び／又はＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３の対立遺伝子；又は上記抗原をコード化する遺伝子との連鎖不均衡の任意の変化のジェノタイピングによって実施される請求項２から３の何れかに記載の方法。
【請求項５】
抗原ＨＬＡ−Ｂ*０８の対立遺伝子が、ＨＬＡ−Ｂ*０８０１０１、ＨＬＡ−Ｂ*０８０１０２、ＨＬＡ−Ｂ*０８０１０３、ＨＬＡ−Ｂ*０８０１０４、ＨＬＡ−Ｂ*０８０１０５、ＨＬＡ−Ｂ*０８０１０６、ＨＬＡ−Ｂ*０８０１０７、ＨＬＡ−Ｂ*０８０１０８、ＨＬＡ−Ｂ*０８０１０９、ＨＬＡ−Ｂ*０８０１１０、ＨＬＡ−Ｂ*０８０２、ＨＬＡ−Ｂ*０８０３、ＨＬＡ−Ｂ*０８０４、ＨＬＡ−Ｂ*０８０５、ＨＬＡ−Ｂ*０８０６、ＨＬＡ−Ｂ*０８０７、ＨＬＡ−Ｂ*０８０８Ｎ、ＨＬＡ−Ｂ*０８０９、ＨＬＡ−Ｂ*０８１０、ＨＬＡ−Ｂ*０８１１、ＨＬＡ−Ｂ*０８１２０１、ＨＬＡ−Ｂ*０８１２０２、ＨＬＡ−Ｂ*０８１２０３、ＨＬＡ−Ｂ*０８１３、ＨＬＡ−Ｂ*０８１４、ＨＬＡ−Ｂ*０８１５、ＨＬＡ−Ｂ*０８１６、ＨＬＡ−Ｂ*０８１７、ＨＬＡ−Ｂ*０８１８、ＨＬＡ−Ｂ*０８１９Ｎ、ＨＬＡ−Ｂ*０８２０、ＨＬＡ−Ｂ*０８２１、ＨＬＡ−Ｂ*０８２２、ＨＬＡ−Ｂ*０８２３、ＨＬＡ−Ｂ*０８２４、ＨＬＡ−Ｂ*０８２５、ＨＬＡ−Ｂ*０８２６、ＨＬＡ−Ｂ*０８２７、ＨＬＡ−Ｂ*０８２８、ＨＬＡ−Ｂ*０８２９、ＨＬＡ−Ｂ*０８３０Ｎ、ＨＬＡ−Ｂ*０８３１、ＨＬＡ−Ｂ*０８３２、ＨＬＡ−Ｂ*０８３３、ＨＬＡ−Ｂ*０８３４、ＨＬＡ−Ｂ*０８３５、ＨＬＡ−Ｂ*０８３６、ＨＬＡ−Ｂ*０８３７、ＨＬＡ−Ｂ*０８３８、ＨＬＡ−Ｂ*０８３９、ＨＬＡ−Ｂ*０８４０、ＨＬＡ−Ｂ*０８４１、ＨＬＡ−Ｂ*０８４２、ＨＬＡ−Ｂ*０８４３、ＨＬＡ−Ｂ*０８４４、ＨＬＡ−Ｂ*０８４５、ＨＬＡ−Ｂ*０８４６、ＨＬＡ−Ｂ*０８４７、ＨＬＡ−Ｂ*０８４８、ＨＬＡ−Ｂ*０８４９、ＨＬＡ−Ｂ*０８５０、ＨＬＡ−Ｂ*０８５１、ＨＬＡ−Ｂ*０８５２、ＨＬＡ−Ｂ*０８５３、ＨＬＡ−Ｂ*０８５４、ＨＬＡ−Ｂ*０８５５、ＨＬＡ−Ｂ*０８５６、ＨＬＡ−Ｂ*０８５７、ＨＬＡ−Ｂ*０８５８、ＨＬＡ−Ｂ*０８５９、ＨＬＡ−Ｂ*０８６０、及びＨＬＡ−Ｂ*０８６１からなる群から選択される請求項４に記載の方法。
【請求項６】
抗原ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３の対立遺伝子が、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３０１０１０１、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３０１０１０２、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３０１０２、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３０１０３、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３０１０４、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３０１０５、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３０１０６、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３０１０７、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３０１０８、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３０２０１、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３０２０２、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３０３、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３０４、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３０５０１、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３０５０２、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３０５０３、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３０６、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３０７、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３０８、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３０９、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３１０、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３１１０１、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３１１０２、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３１２、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３１３０１、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３１３０２、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３１４、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３１５、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３１６、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３１７、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３１８、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３１９、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３２０、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３２１、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３２２、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３２３、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３２４、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３２５、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３２６、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３２７、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３２８、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３２９、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３３０、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３３１、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３３２、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３３３、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３３４、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３３５、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３３６、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３３７、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３３８、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３３９、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３４０、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３４１、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３４２、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３４３、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３４４、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３４５、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３４６、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３４７、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３４８、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３４９、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３５０、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３５１、及びＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３５２からなる群から選択される請求項４に記載の方法。
【請求項７】
ジェノタイピングがプライマー特異的ＰＣＲマルチプレックスによる増幅と続く検出によって実施される請求項４から６の何れかに記載の方法。
【請求項８】
生体試料が血液試料である請求項１から７の何れかに記載の方法。
【請求項９】
身体内に移植された非金属製生体インプラントがポリマー材料である請求項１から８の何れかに記載の方法。
【請求項１０】
ポリマー材料が、コラーゲン、ポリＬ乳酸、ポリアクリルアミド、ポリアルキルイミド、ヒアルロン酸、ポリテトラフルオロエチレンメタクリレート、シリコーン及びその混合物から選択される請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
身体に移植された非金属製材料に関連する有害作用が、移植拒絶、皮下脂肪萎縮、肉芽腫性疾患、結節炎症、硬結、血管性浮腫、サルコイドーシス、全身性炎症性免疫媒介疾患、皮膚サルコイドーシス、肺炎、ヒトアジュバント病及び上記有害作用の一を越えるものからなる群から選択される請求項１から１０の何れかに記載の方法。
【請求項１２】
請求項１から１１の何れかに記載の方法を実施するためのキットの使用であって、該キットが、主要組織適合複合体抗原を測定するための十分な手段；又は主要組織適合複合体の対立遺伝子をジェノタイピングするための手段を含む使用。
【請求項１３】
キットが、主要組織適合複合体抗原ＨＬＡ−Ｂ*０８及び／又はＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３の存在を測定するための十分な手段を含む、請求項１２に記載のキットの使用。
【請求項１４】
キットが、ＨＬＡ−Ｂ*０８の対立遺伝子及び／又はＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３の対立遺伝子、又は上記抗原をコード化する遺伝子との連鎖不均衡の任意の変化をジェノタイピングするための十分な手段を含む、請求項１２に記載のキットの使用。
【請求項１５】
身体内に移植された非金属製生体インプラントに関連した有害作用を生じる個体の遺伝的素因の分析マーカーとしての、抗原ＨＬＡ−Ｂ*０８及び／又は抗原ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、医薬の分野、つまり主として美的理由（美容又は治療）のために体内に適用され又は挿入される生体インプラントから派生する有害作用の分野に関する。本発明は、健康維持の分野に枠組みされ、上記生体インプラントから派生する深刻な副作用のリスクを分析するツールを提供する。
【背景技術】
【０００２】
増え続ける多くの人々がその加齢皮膚のため又は純粋に美的及び美容的適応のために医療的解決を求めている。病理的な状態のために生体インプラントの使用に向かう人々もいる。生体インプラントは、損傷した組織に置き換えるためにヒトの体内に外科的に移植される生体材料として定義される。生体インプラントなる用語は、ある種のインプラントを定義するもので、一般的には非金属製インプラントに関連している。上記生体インプラントの一般的な応用分野は、整形外科的（特に顎顔面）再構成プロステーシス、豊胸術プロステーシス、心臓プロステーシス（Ｃｈｉｔｒａ心臓弁のような人工心臓弁）、皮膚及び角膜を含む。今日広く使用されている生体インプラントの一種はポリマー又はセラミックインプラントであり、それらの一例はインプラントフィラー又は皮膚（真皮）又は皮下（真皮下）のマイクロプロステーシス（microprotheses）である。
【０００３】
現在、医師は、非永久的、永久的、可逆的又は非可逆的材料を含む多くの異なったタイプの皮膚及び皮下フィラーを使用しうる。皮膚及び皮下フィラーは、皺、表情線、リポジストロフィー及び個人が主に顔において修正することを望み得又は必要とし得るその他の特徴（traits）を修正するために注入される材料である。これらの化合物は、異なった原因により皮膚組織に作り出される孔又は溝に充填するために使用される。異なった分類のフィラーが、その由来と長寿命（期間）に従って、提案されている。現在、世界的に使用されている殆どのフィラーは、アクリルアミド（ポリアクリルアミド及びポリアクリルイミド化合物）、ヒアルロン酸化合物、ポリ酪酸、ポリメチルメタクリレート化合物、カルシウムハイドロキシアパタイト、コラーゲン、ポリテトラフルオロエチレン及びシリコーン油である。製造業者及び様々な刊行物はフィラーが非毒性で非免疫原性であり、合併症は非常に希であると主張しているが、使用される全ての化合物で望まれない副作用が生じる。これら副作用の幾つかは晩発性の副作用であり、これは多くの場合上記フィラー又は生体インプラントの使用に関係しているかは困難である。皮膚又は皮下フィラーの注入に関連した有害な副作用は深刻な副作用の場合があり、慢性的肉芽腫状態を生じ、希に自己免疫疾患を生じる。よって、使用されるフィラーの通常の分類には二つの概念が欠けている：長期安全性及び副作用の可逆性（reversibility）である。
【０００４】
皮膚フィラー材料を注入すると、正常な異物タイプの反応（いわゆる「安定肉芽腫」）が生じる。不幸にも、ある人々では、これらの安定肉芽腫が持続性で炎症性の有害な肉芽腫、肉芽腫性疾患、又は希であるが自己免疫疾患に発達する。しばしば、望まれない副作用は小さな外傷中又は感染後に現れる。自身の及びあらゆる個体に特異的な）遺伝的背景がこれらの有害反応の発生において重要な役割を果たしているに違いないと仮定されるが、その正確な原因は尚も未知であり、予想をすることができない。この事実はこれらの種類の生体インプラントの使用に益々多くの人々が向かうため、真の欠点である。
【０００５】
皮膚フィラーに関連した中間型又は遅延型有害作用を呈する患者のなかで、その殆どが、主として結合組織疾患に関連した局所的又は領域性副作用を報告している。注目すべきは、幾ばくかの患者が全身性炎症性免疫媒介疾患、例えば強皮症又は強皮症様疾患、多発性筋炎、シェーグレン症候群、皮膚サルコイドーシス、肉芽腫性疾患、間質性肺炎及びヒトアジュバント病を呈することである。
【０００６】
個体が皮膚及び皮下フィラーに関係した中間型又は遅延型（晩発性）有害作用を呈する易罹患性であるかを検出するこれまでの一つのアプローチ法は、前腕皮膚に皮内的に０．１ｍｌのフィラーを注入し、何らかの反応があるかを可視化することからなる。しかしながら、ある反応が現れるまでの経過時間が通常５−８週間である。加えて、生検試験（provum）では、皮膚が傷つく。更に、保健機関はこの手法に同意していない。よって、患者がインプラントフィラーに有害反応するかを検出する他の方法が必要である。
【０００７】
ヒト白血球抗原系（ＨＬＡ）はヒト主要組織適合複合体（ＭＨＣ）の名称である。これは、ヒトにおける免疫系機能に関連する多数の遺伝子を含むsuperlocusである。これらの遺伝子の全てがヒトにおける第６番染色体の短腕の４Ｍｂセグメントにクラスター化している。ＨＬＡ領域は、二つの異なった細胞サブセットに抗原を提示するＨＬＡクラスＩ（ＨＬＡ−Ａ，Ｂ，Ｃｗ）及びクラスＩＩ（ＨＬＡ−ＤＲ，ＤＱ，ＤＰ）に分類される構造的に相同的なタンパク質をコードする６つの主要座を含む。
【０００８】
クラスＩ分子は二つのポリペプチド鎖α及びβ２−ミクログロブリンからなる。二つの鎖はβ２−ミクログロブリン及びα３ドメインの相互作用を介して非共有的に結合している。α鎖のみ多形性であり、ＨＬＡ遺伝子によってコードされる一方、β２−ミクログロブリンサブユニットは多形性ではなくβ−２ミクログロブリン遺伝子によってコードされる。α３ドメインは細胞膜にまたがり、Ｔ細胞の膜貫通糖タンパク質ＣＤ８コレセプターと相互作用する。α１及びα２ドメインは折りたたまれてペプチドが結合するための溝を形成する。ＭＨＣクラスＩ分子は８−１０アミノ酸長であるペプチドに結合する。
【０００９】
ＨＬＡ−Ｂ遺伝子座の場合、多形性は主にエクソン２及び３に位置している。これまで、この遺伝子座の何百もの対立遺伝子変異体が知られており、これは、この遺伝子座がＨＬＡ遺伝子座のうち最も多形性であることを意味している。ＨＬＡ−Ｂ遺伝子座の対立遺伝子変異はクラスＩ分子内における推定移植片の選択において最も重要である。対立遺伝子変異体の各々には特定の数（例えばＨＬＡ−Ｂ*０８）が与えられる。密接に関連した対立遺伝子は合わせて分類される；例えば、少なくとも５４の非常に類似した対立遺伝子はＨＬＡ−Ｂ*０８のサブタイプである。これらのサブタイプはＨＬＡ−Ｂ*０８０１０１からＨＬＡ−Ｂ*０８５４と命名される。ＨＬＡ−Ｂ遺伝子は多くの異なった正常な変異を有しており、各人の免疫系が広範囲の異物侵入体に反応することを可能にしている。
【００１０】
クラスＩＩ分子は、非多形性α鎖と多形性β鎖からなるヘテロ二量体糖タンパク質である。クラスＩＩＨＬＡ（又はＭＨＣ）分子は、マクロファージ、Ｂ細胞、活性型Ｔ細胞、及びＣＤ４細胞表面糖タンパク質を発現するＴ細胞への抗原提示に関与した他の細胞型の細胞表面に発現する。ＤＰ、ＤＱ及びＤＲ遺伝子はＭＨＣの別個の領域に位置している。ＤＲ領域において、単一のＤＲＡ遺伝子座は非多形性ＤＲα鎖をコードするが、ＤＲＢ１からＤＲＢ９と称される９つの異なったＤＲＢ遺伝子座は多形性ＤＲβ鎖をコードする。しかしながら、同定されたＤＲＢ対立遺伝子の数は連続的に増加している。
【００１１】
ＨＬＡ−ＤＲＢ１遺伝子座の場合、この遺伝子座の異なった対立遺伝子は、ＤＲＢ１*０１、ＤＲＢ１*０２、ＤＲＢ１*０３等と呼ばれ、これらの対立遺伝子は全て合わせてこの明細書において「対立遺伝子群」と呼ばれるものを形成する。更に、数種の遺伝子配列は特定のＤＲＢ１対立遺伝子下でグループ化される。よって、対立遺伝子ＤＲＢ１*０３はＤＲＢ１*０３０１、ＤＲＢ１*０３０２、ＤＲＢ１*０３１１０１、ＤＲＢ１*０３１１０２等と命名される異なった配列を有しうる。
【００１２】
ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）系をコードする遺伝子はヒトにおける最も変わりやすい遺伝子であり、各変異体は異なったペプチドセットに結合する分子をコードする。これらの遺伝子は特定の個人の全ての細胞において同じであるが、ヒトによって異なる。
【００１３】
ＨＬＡの個体間の対立遺伝子変動性は深く研究されており、臓器移植拒絶を避けるための試験の遂行を可能にする幾つかの遺伝子マーカーが発見されているが、体内に移植された材料に関する有害作用を生じる個体の遺伝的素因を相関させる非代表的データはほんの僅か存在するだけである。
【００１４】
幾つかの研究はＨＬＡ（ＭＨＣ）、特にクラスＩ及びクラスＩＩ抗原、の異なったハプロタイプと多くの全身性自己免疫又は肉芽腫性疾患を関連させようとしている。よって、文献Di Lorenzo等, "Morphea after Silicone Gel Breast Implantation for Cosmetic Reasons in an HLA-BS, DR3-Positive Woman, Int. Arch Allergy Immunol 1997, vol. 112, pp. 93-95では、著者は、シリコーンゲル乳房移植後の限局性強皮症の単一のＨＬＡ−Ｂ*０８，ＤＲ３陽性患者を開示している。著者は、遺伝的背景があることと、上述のハプロタイプが、シリコーン生体インプラントによって懐柔されうる自己免疫応答に関与していることを示唆している。更に、著者は、データがハプロタイプと観察された効果の間の明確な関連性をサポートしておらず、更なる研究が必要とされると考えている。実際、本例は、シリコンインプラントが有害な作用、つまり自己免疫反応を生じると思われる少数例の一つであり、統計的な有意性をこれに与えることはできない。
【００１５】
フィラーとして使用されるシリコーンは重合化されたシロキサンからなるゲルである。１９６０年以降、広く使用されているが、その使用から生じる二次的作用は、例えば有機生体インプラント、つまりコラーゲン、ポリＬ酪酸、ポリアクリルアミド、ポリアクリルイミド、ヒアルロン酸、ポリテトラフルオロエチレン、メタクリレートインプラント並びにカルシウムハイドロキシアパタイトのミクロスフィアから形成された無機生体インプラントの使用に伴うもののような、他のフィラーが生体インプラントとして使用された場合に観察されるものよりも事例のタイプ及び数において低い。これらの材料は全て異なった構造的特徴を有しており、よってインプラントの拒絶又は全ての生体インプラントに対して有害な副作用を生じることに対する遺伝的素因を相関させることを可能にする共通のパターンを見出すことが望ましい。
【発明の概要】
【００１６】
本発明者は、おそらく、素因のある宿主において、異なった過敏性又はＩＶ型免疫媒介疾患を生じる可能性は多様で反復性の抗原曝露に関連しうると考えて、例えば皮膚又は皮下フィラーのような材料、つまり生体インプラントの移植後に、重篤な有害副作用（有害作用）を呈した患者の遺伝子型を広く試験した。
【００１７】
本発明は、第一の態様では、身体に移植された非金属製生体インプラントに関係した有害作用を生じる個体の遺伝的素因のインビトロ分析方法であって、前記個体からの生体試料中において、存在する主要組織適合複合体の抗原を測定することを含む方法を提供する。
【００１８】
本発明は、第二の態様では、体内に移植された非金属生体インプラント（非金属インプラント材料とも称する）に関連した有害作用を生じる個体の遺伝的素因のインビトロ分析方法であって、上記個体からの生物学的試料において次の主要組織適合複合体抗原：ＨＬＡ−Ｂ*０８及びＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３の少なくとも一つが存在するかを測定することを含む方法を提供する。上記抗原の少なくとも一つの存在が、生体材料に関係した上記有害作用を生じる遺伝的素因の指標である。
【００１９】
本発明の方法は、体内への、非金属材料、つまり皮膚又は皮下フィラーのような生体インプラントの移植前に、個人及び医師が全ての要因を考慮することを可能にするので、従来技術の未解決の欠点に対するゴールとなる。よって、本発明の方法は、個体に生体インプラントが適用されるときの有害な副作用を個体が生じる可能性を無害のこととして、先に検出するための有用なアッセイである。
【００２０】
第三の態様では、本発明は、上述の方法、つまり体内に移植された非金属生体インプラントに関連した有害作用を個体が生じる遺伝的素因の分析方法を実施するためのキットの使用であって、該キットが主要組織適合複合体抗原を測定するのに十分な手段；又は主要組織適合複合体の対立遺伝子をジェノタイピングする手段を含む使用を提供する。
【００２１】
本発明の第四の態様は、上述の方法を実施するためのキットの使用であり、該キットは主要組織適合複合体の抗原ＨＬＡ−Ｂ*０８及び／又はＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３の存在を測定するための十分な手段を含む使用である。
【００２２】
本発明の他の態様は、上述の方法を実施するためのキットの使用であり、該キットは、ＨＬＡ−Ｂ*０８の対立遺伝子及び／又はＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３の対立遺伝子、又は上記抗原をコード化する遺伝子との連鎖不均衡の任意の変化をジェノタイピングするための十分な手段を含む使用である。
【００２３】
更に、また体内に移植された非金属生体インプラントに関連した有害作用を生じる個体の遺伝的素因の分析用マーカーとしての抗原ＨＬＡ−Ｂ＊０８及び／又は抗原ＨＬＡ−ＤＲＢ１＊０３の使用が本発明の態様である。
【発明を実施するための形態】
【００２４】
理解のために次の定義を与える：
「有害作用」及び「有害な副作用」なる用語はこの明細書において同義語として使用され、それらは医薬又は外科手術のような他の治療介入から生じる任意の害のある及び／又は望まれない作用を意味する。有害作用は主要な又は治療効果に対して二次的であると判断される場合、「副作用」と称されうる。
【００２５】
「ジェノタイピング」及び「タイピング」なる用語はこの明細書において同義語として使用され、それらは、一を越える遺伝子型の組み合わせが同じ臨床症状を生じうる状況で特に有用な、個体によって遺伝で受け継がれた特定の対立遺伝子を明らかにする任意の試験を意味する。本明細書において、「遺伝子座（locus）」なる用語は各ＨＬＡ遺伝子によって占有される位置（例えばＨＬＡのＢ遺伝子座）を意味する。ＤＲ抗原に対する「遺伝子座（loci）」（遺伝子座の複数）はＤＲＡ及びＤＲＢ１−９を含む。
【００２６】
「対立遺伝子」なる用語は、遺伝子配列が異なり、遺伝的特性（表現型）に観察可能な差異を生じる遺伝子の二以上の別の形態の一つを意味し、それらは染色体上の同じ場所に見出される。
【００２７】
「連鎖」は、同じ染色体上のその位置のために一緒に受け継がれる遺伝子、対立遺伝子、遺伝子座又は遺伝子マーカーの傾向を記述する。それらは、同じ染色体上で物理的に連結している二つの遺伝子、対立遺伝子、遺伝子座又は遺伝子マーカーの間の組換えパーセントによって測定されうる。
【００２８】
この明細書の意味において、遺伝子の「変化（alteration）」は野生型と考えられるヌクレオチド配列中における任意の構造的変化を意味する。変化の例は、一塩基多型、一又は複数のヌクレオチドの欠失、挿入、置換又は重複、及びヌクレオチド上の化学的修飾（例えばメチル化）を含みうる。
【００２９】
「連鎖不平衡（ＬＤ）」又は「対立遺伝子関連（allelic association）」は、集団において任意の特定の対立遺伝子頻度に対して偶然に期待されるものより頻繁な、近くの染色体位置の特定の対立遺伝子、又は遺伝子マーカーとの特定の対立遺伝子又は遺伝子マーカーの優先的な関連を意味する。例えば、遺伝子座Ｘが等しい頻度で生じる対立遺伝子ａ及びｂを有しており、関連した遺伝子座Ｙが等しい頻度で生じる対立遺伝子ｃ及びｄを有している場合、個体の集団において０．２５の頻度でハプロタイプａｃが生じることが予想される。ａｃがより頻繁に生じるならば、対立遺伝子ａ及びｃは連鎖不平衡にあると考えられる。連鎖不平衡は、対立遺伝子のある種の組み合わせの天然の選択から、又は対立遺伝子があまりに最近に集団に導入され関連対立遺伝子間と平衡に達しなかった（ランダム関連）ために生じる場合がある。
【００３０】
「ハプロタイプ」は同じ染色体上に併せて伝えられる複数遺伝子座の対立遺伝子の組み合わせである。ハプロタイプは、与えられた遺伝子座セット間で生じた組換え事象の数に応じて僅か一つの遺伝子座又は染色体全体を意味しうる。
【００３１】
「遺伝的素因の分析」なる用語は、そのヒトの本来の遺伝的チャージのため特定の表現型を生じる個体の可能性を判定することを包含する。本発明の場合、該用語は各個体の遺伝的寄与のために生体インプラントに関連した有害な副作用を生じる可能性の測定を定義する。
【００３２】
「遺伝子マーカー」又は「マーカー」は、細胞、個体又は種を同定するために使用することができる染色体上に既知の位置を持つ遺伝子又はＤＮＡ配列である。それは、観察されうる、ゲノム座における変異又は変化のために生じうる変異として記述することができる。遺伝子マーカーは、短ＤＮＡ配列、例えば単一の塩基対変化（一塩基多型ＳＮＰ）を囲む配列、又は長いもの、例えばミニサテライト、転座、又は塩基対反復でありうる。
【００３３】
「生体インプラント」、「非金属生体インプラント」及び「体内に移植された非金属材料」なる用語はこの明細書において同義語として使用される。インプラントは、金属インプラント（例えばチタン大腿）、セラミックインプラント（例えばハイドロキシアパタイト）、ポリマーインプラント（例えばポリアルキルイミド）又は生物学的インプラント（例えばボツリヌス毒素）として分類されうる。この明細書において、非金属インプラントに言及する場合、セラミックインプラント、ポリマー材料インプラント又は生物学的インプラントを包含することが意図される。セラミックは無機非金属材料と考えられる。「ポリマー材料」が使用される場合、あらゆる天然の又は生物学的ポリマー材料、例えばコラーゲン；並びに合成ポリマー材料、例えばポリアルキルイミドインプラントが包含される。インプラントは、例えば乳房シリコーンインプラントのように組織の大きな部分を置き換え又はその部分として作用するために広い領域に適用されうる。他のインプラントは狭い領域に適用される。狭い領域に適用される場合、上記インプラントの殆どは、皮膚又は皮下フィラーとしても知られているフィラーとも呼ばれる。フィラーの例はコラーゲン、ポリＬ酪酸、ポリアクリルアミド、ポリアルキルイミド、ヒアルロン酸、ポリテトラフルオロエチレン及びメタクリレートである。他の広く使用されるフィラーはカルシウムハイドロキシアパタイトである。
【００３４】
非金属インプラント（生体インプラント）の応用の一般的領域は、整形外科（特に顎顔面）の再構成プロステーシス、豊胸術プロステーシス、心臓プロステーシス（Ｃｈｉｔｒａ心臓弁のような人工心臓弁）、皮膚及び角膜を含む。
【００３５】
上に示したように、本発明の方法は、個体からの生物学的試料が少なくとも主要組織適合複合体のＨＬＡ−Ｂ*０８抗原か、又は少なくとも主要組織適合複合体のＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３抗原を含むかどうかを測定することを含み、ここで、抗原の少なくとも一つの存在が有害作用を生じる遺伝的素因の指標である。
【００３６】
抗原の一つの存在の測定は、幾つかの技術を使用して実施することができる。よって、抗原の一つが試料中に存在しているかどうかを判定する一つの方法は、抗原（タンパク質）ＨＬＡ−Ｂ*０８及びＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３のエピトープに対する特異的抗体を用いたイムノアッセイによる。以下に広く開示される他の技術は、上記抗原をコード化するＤＮＡ又はＲＮＡの検出に基づく、つまり、あるならばＨＬＡ−Ｂ*０８及び／又はＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３をコード化する対立遺伝子の存在を検出することによる。興味ある対立遺伝子の存在の検出が、増幅され、ついで特異的プローブによって検出される、ゲノム又はコード化ＤＮＡを使用して実施することができる。一般論として、該技術は、試料からのゲノム又は転写内容物、主としてＤＮＡの単離と、特異的プローブによって更に検出される興味ある遺伝子座の続く増幅を含む。遺伝子座が最終的に同定され、パターンと相関付けられる。プライマープールとプローブに応じてＤＮＡ法は低分解能法又は高分解能法として分類される。高分解能法は対立遺伝子の群の特定の対立遺伝子に関する情報を与える。つまり、それらは特定の配列又は対立遺伝子サブタイプ、例えばＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３２２、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３２３、ＨＬＡ−Ｂ*０８３８、ＨＬＡ−Ｂ*０８３９についての情報を与える。低分解能法は試料中にＨＬＡ−Ｂ*０８及び／又は抗原ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３の対立遺伝子が存在するかどうかを判定することを可能にする。
【００３７】
よって、好ましい実施態様では、本方法は、抗原ＨＬＡ−Ｂ*０８及び／又はＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３の存在を、個体の試料に含まれるＨＬＡ−Ｂ*０８の対立遺伝子及び／又はＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３の対立遺伝子；又は上記抗原をコード化する遺伝子との連鎖不均衡の任意の変化のジェノタイピングによって判定することを含む。対立遺伝子のジェノタイピングは、それに特異的なＤＮＡ配列の決定である。主要組織適合複合体のＨＬＡ−Ｂ*０８抗原をコード化する少なくとも一つの対立遺伝子又は主要組織適合複合体のＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３抗原をコード化する少なくとも一つの対立遺伝子の検出は、体内に移植された非金属材料に関連した有害作用を生じる遺伝的素因の指標である。
【００３８】
好ましい実施態様では、本方法は、ジェノタイピングを行って、上記個体からの生物学的試料が主要組織適合複合体の抗原ＨＬＡ−Ｂ*０８の少なくとも一つの対立遺伝子及び主要組織適合複合体の抗原ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３の少なくとも一つの対立遺伝子を同時に含むかどうかを測定し、ついで、体内に移植された非金属材料に関連した有害作用を生じる遺伝的素因の指標であるハプロタイプを定義することを含む。
【００３９】
個体は好ましくは哺乳動物、より好ましくはヒトである。にもかかわらず、ＨＬＡ系又は一般論としてはヒト主要組織適合複合体（ＭＨＣ）は殆どの脊椎動物においてその等価な遺伝子セットを有している。下挙がって、高い割合の相同性を共有する異なった種間の遺伝子配列はおそらくは同じ観測作用を生じる。
【００４０】
より好ましい実施態様では、本方法は、ＨＬＡ−Ｂ*０８０１０１（ＨＬＡ００１４６）、ＨＬＡ−Ｂ*０８０１０２（ＨＬＡ０２２１９）、ＨＬＡ−Ｂ*０８０１０３（ＨＬＡ０２４００）、ＨＬＡ−Ｂ*０８０１０４（ＨＬＡ０２８５３）、ＨＬＡ−Ｂ*０８０１０５（ＨＬＡ０３０３４）、ＨＬＡ−Ｂ*０８０１０６（ＨＬＡ０３４４９）、ＨＬＡ−Ｂ*０８０１０７（ＨＬＡ０３９３９）、ＨＬＡ−Ｂ*０８０１０８（ＨＬＡ０４２１０）、ＨＬＡ−Ｂ*０８０１０９（ＨＬＡ０４２２１）、ＨＬＡ−Ｂ*０８０１１０（ＨＬＡ０４５０４）、ＨＬＡ−Ｂ*０８０２（ＨＬＡ００１４７）、ＨＬＡ−Ｂ*０８０３（ＨＬＡ００１４８）、ＨＬＡ−Ｂ*０８０４（ＨＬＡ００１４９）、ＨＬＡ−Ｂ*０８０５（ＨＬＡ００１５０）、ＨＬＡ−Ｂ*０８０６（ＨＬＡ００１５１）、ＨＬＡ−Ｂ*０８０７（ＨＬＡ００９７４）、ＨＬＡ−Ｂ*０８０８Ｎ（ＨＬＡ００９７５）、ＨＬＡ−Ｂ*０８０９（ＨＬＡ００９７６）、ＨＬＡ−Ｂ*０８１０（ＨＬＡ０１０８２）、ＨＬＡ−Ｂ*０８１１（ＨＬＡ０１１９３）、ＨＬＡ−Ｂ*０８１２０１（ＨＬＡ０１２３０）、ＨＬＡ−Ｂ*０８１２０２（ＨＬＡ０３９３５）、ＨＬＡ−Ｂ*０８１２０３（ＨＬＡ０４１８６）、ＨＬＡ−Ｂ*０８１３（ＨＬＡ０１３５２）、ＨＬＡ−Ｂ*０８１４（ＨＬＡ０１４１８）、ＨＬＡ−Ｂ*０８１５（ＨＬＡ０１５３５）、ＨＬＡ−Ｂ*０８１６（ＨＬＡ０１６４１）、ＨＬＡ−Ｂ*０８１７（ＨＬＡ０１６５４）、ＨＬＡ−Ｂ*０８１８（ＨＬＡ０１７０１）、ＨＬＡ−Ｂ*０８１９Ｎ（ＨＬＡ０１７１７）、ＨＬＡ−Ｂ*０８２０（ＨＬＡ０１７５２）、ＨＬＡ−Ｂ*０８２１（ＨＬＡ０１７７２）、ＨＬＡ−Ｂ*０８２２（ＨＬＡ０１９１７）、ＨＬＡ−Ｂ*０８２３（ＨＬＡ０２１３２）、ＨＬＡ−Ｂ*０８２４（ＨＬＡ０２１４２）、ＨＬＡ−Ｂ*０８２５（ＨＬＡ０２２５２）、ＨＬＡ−Ｂ*０８２６（ＨＬＡ０２３０８）、ＨＬＡ−Ｂ*０８２７（ＨＬＡ０２４０６）、ＨＬＡ−Ｂ*０８２８（ＨＬＡ０２４９０）、ＨＬＡ−Ｂ*０８２９（ＨＬＡ０２４９６）、ＨＬＡ−Ｂ*０８３０Ｎ（ＨＬＡ０２５９１）、ＨＬＡ−Ｂ*０８３１（ＨＬＡ０２７６２）、ＨＬＡ−Ｂ*０８３２（ＨＬＡ０２７７１）、ＨＬＡ−Ｂ*０８３３（ＨＬＡ０２８４９）、ＨＬＡ−Ｂ*０８３４（ＨＬＡ０３０９１）、ＨＬＡ−Ｂ*０８３５（ＨＬＡ０３１６４）、ＨＬＡ−Ｂ*０８３６（ＨＬＡ０３２６５）、ＨＬＡ−Ｂ*０８３７（ＨＬＡ０３４５０）、ＨＬＡ−Ｂ*０８３８（ＨＬＡ０３４８１）、ＨＬＡ−Ｂ*０８３９（ＨＬＡ０３６６３）、ＨＬＡ−Ｂ*０８４０（ＨＬＡ０３６４８）、ＨＬＡ−Ｂ*０８４１（ＨＬＡ０３９０２）、ＨＬＡ−Ｂ*０８４２（ＨＬＡ０３９４１）、ＨＬＡ−Ｂ*０８４３（ＨＬＡ０４０８１）、ＨＬＡ−Ｂ*０８４４（ＨＬＡ０４１８８）、ＨＬＡ−Ｂ*０８４５（ＨＬＡ０４２３０）、ＨＬＡ−Ｂ*０８４６（ＨＬＡ０４２３４）、ＨＬＡ−Ｂ*０８４７（ＨＬＡ０４２４０）、ＨＬＡ−Ｂ*０８４８（ＨＬＡ０４４３８）、ＨＬＡ−Ｂ*０８４９（ＨＬＡ０４４４２）、ＨＬＡ−Ｂ*０８５０（ＨＬＡ０４４９９）、ＨＬＡ−Ｂ*０８５１（ＨＬＡ０４５０７）、ＨＬＡ−Ｂ*０８５２（ＨＬＡ０４５１５）、ＨＬＡ−Ｂ*０８５３（ＨＬＡ０４５１６）、ＨＬＡ−Ｂ*０８５４（ＨＬＡ０４５���０）、ＨＬＡ−Ｂ*０８５５（ＨＬＡ０４７０８）、ＨＬＡ−Ｂ*０８５６（ＨＬＡ０４７２０）、ＨＬＡ−Ｂ*０８５７（ＨＬＡ０４７２２）、ＨＬＡ−Ｂ*０８５８（ＨＬＡ０４７５３）、ＨＬＡ−Ｂ*０８５９（ＨＬＡ０４７８８）、ＨＬＡ−Ｂ*０８６０（ＨＬＡ０４８１６）、ＨＬＡ−Ｂ*０８６１（ＨＬＡ０４８６０）からなる群から選択される抗原ＨＬＡ−Ｂ*０８の対立遺伝子の存在を判定することを含む。
【００４１】
他の好ましい実施態様では、本方法は、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３０１０１０１（ＨＬＡ００６７１）、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３０１０１０２（ＨＬＡ０３４８３）、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３０１０２（ＨＬＡ００６７２）、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３０１０３（ＨＬＡ００６７２）、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３０１０４（ＨＬＡ０２８３０）、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３０１０５（ＨＬＡ０２９５５）、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３０１０６（ＨＬＡ０３０６１）、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３０１０７（ＨＬＡ０３８５５）、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３０１０８（ＨＬＡ０４５７７）、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３０１０９（ＨＬＡ０４６９１）、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３０２０１（ＨＬＡ００６７３）、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３０２０２（ＨＬＡ００６７４）、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３０３（ＨＬＡ００６７５）、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３０４（ＨＬＡ００６７６）、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３０５０１（ＨＬＡ００６７７）、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３０５０２（ＨＬＡ０１４２８）、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３０５０３（ＨＬＡ０３７６５）、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３０６（ＨＬＡ００６７８）、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３０７（ＨＬＡ００６７９）、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３０８（ＨＬＡ００６８０）、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３０９（ＨＬＡ００６８１）、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３１０（ＨＬＡ００６８２）、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３１１０１（ＨＬＡ００６８３）、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３１１０２（ＨＬＡ０４４０６）、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３１２（ＨＬＡ００６８４）、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３１３０１（ＨＬＡ０１００７）、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３１３０２（ＨＬＡ０３６８４）、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３１４（ＨＬＡ０１００８）、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３１５（ＨＬＡ０１０８７）、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３１６（ＨＬＡ０１１５２）、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３１７（ＨＬＡ０１１５３）、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３１８（ＨＬＡ０１３４９）、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３１９（ＨＬＡ０１４３２）、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３２０（ＨＬＡ０１４５５）、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３２１（ＨＬＡ０１５０１）、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３２２８ＨＬＡ０１５５７）、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３２３（ＨＬＡ０１６１４）、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３２４（ＨＬＡ０１６８７）、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３２５（ＨＬＡ０１６９２）、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３２６（ＨＬＡ０１８６８）、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３２７（ＨＬＡ０１９３０）、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３２８（ＨＬＡ０１９３３）、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３２９（ＨＬＡ０２４２０）、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３３０（ＨＬＡ０２６０３）、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３３１（ＨＬＡ０２６０６）、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３３２（ＨＬＡ０２８２７）、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３３３（ＨＬＡ０２８７０）、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３３４（ＨＬＡ０２８８６）、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３３５（ＨＬＡ０２９０２）、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３３６（ＨＬＡ０２９９６）、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３３７（ＨＬＡ０３０５９）、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３３８（ＨＬＡ０３０６７）、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３３９（ＨＬＡ０３０７５）、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３４０（ＨＬＡ０３３７０）、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３４１（ＨＬＡ０３６４１）、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３４２（ＨＬＡ０３７４９���、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３４３（ＨＬＡ０３８３６）、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３４４（ＨＬＡ０３８４２）、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３４５（ＨＬＡ０３８４３）、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３４６（ＨＬＡ０３８４４）、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３４７（ＨＬＡ０３８５９）、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３４８（ＨＬＡ０３８６９）、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３４９（ＨＬＡ０４３５５）、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３５０（ＨＬＡ０４３８６）、ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３５１（ＨＬＡ０４４１１）、及びＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３５２（ＨＬＡ０４６３４）からなる群から選択される抗原ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３の対立遺伝子の存在を判定することを含む。
【００４２】
上で特定されたＨＬＡ−Ｂ*０８及びＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３の対立遺伝子は世界保健機関（ＷＨＯ）ＨＬＡ系因子に対する命名委員会によって承認された公式の配列（２０１０年４月１日版）である。全ての対立遺伝子の括弧内の標記（ＨＬＡｘｘｘｘｘ）は、ＥＭＢＬ／ＧｅｎＢａｎｋ／ＤＤＢＪデータベースのＩＭＧＴ／ＨＬＡデータベースに列挙され、各対立遺伝子を定義する配列の受託番号（ＩＭＧＴ／ＨＬＡ受託番号）を意味する。
【００４３】
好ましい実施態様では、ジェノタイピングはプライマー特異的マルチプレックスポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲマルチプレックス）による増幅と続く検出によって実施される。
【００４４】
より好ましい実施態様では、ジェノタイピングは、配列特異的オリゴヌクレオチドを用いたＰＣＲ（ＰＣＲ−ＳＳＯ）によって実施される。
【００４５】
ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）法によるＨＬＡジェノタイピングは臨床診療で広く使用されている血清学的方法の代替手段になった。最も一般的に使用されるＰＣＲ系タイピング法は配列特異的プライマーを用いるＰＣＲ（ＰＣＲ−ＳＳＰ）及び配列特異的オリゴヌクレオチドを用いるＰＣＲ（ＰＣＲ−ＳＳＯ）である。ＰＣＲ−ＳＳＯ法では、膜が調製され（そこにＨＬＡ遺伝子特異的プライマーによって増幅されたＤＮＡが固定される）、ＨＬＡの各タイプに対する特異的オリゴヌクレオチドプローブがタイピングのためにハイブリダイズされる。ＰＣＲ−ＳＳＯによるＨＬＡジェノタイピングの一例は、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）(Lifecodes Molecular Diagnostics）を用いて使用されるＬｉｆｅｃｏｄｅｓ ＨＬＡ−ＳＳＯタイピングで実施される商業的手順である。
【００４６】
試料のゲノム内容物を分析するために使用される技術の殆どは、分析される個体の細胞のＤＮＡを用いる。しかし、ＲＮＡもまた使用できる。
【００４７】
あるいは、上で明らかにしたように、本発明の方法は興味ある対立遺伝子によってコードされるタンパク質の存在を検出することにより実施することができる。この種の検出は特異的抗体を用いて主になされる。抗体を用いた検出は、個体が体内に移植された非金属材料に関係した有害作用を生じる遺伝的素因の分析に対して既に有用である抗原ＨＬＡ−Ｂ*０８及び／又は抗原ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３が試料中に存在しているかどうかを判定することを可能にする。
【００４８】
分析されるＤＮＡ、ＲＮＡ又はタンパク質は任意の種類の生物学的試料から任意の既知の方法を使用して調製することができるが、好ましいものは、全血又は臍帯血からの血液試料である。他の適した生物学的試料は血液含浸カード（ステインカード）、バッカルスワブ、及び尿を含む。
分析される試料の収集と調製方法の一例はＱＩＡＡｍｐ（登録商標）(Qiagen)法である。
【００４９】
本発明の方法は、体内に移植された非金属材料に関係した有害作用を個体が生じる遺伝的素因の分析を可能にし、該材料は好ましくは例えばコラーゲン、ポリＬ酪酸、ポリアクリルアミド、ポリアルキルイミド、ヒアルロン酸、ポリテトラフルオロエチレン及びメタクリレートのような広く使用されているもので、有機化学構造を有する。他のポリマー材料インプラントはシリコーン油（又は医療用シリコーン）である。
【００５０】
該方法が有害作用を個体が生じる遺伝的素因の適切な分析をまたもたらす他の材料は無機材料ハイドロキシアパタイトであり、好ましくは（ミクロスフィアの形態で広く使用される）カルシウムハイドロキシアパタイトである。カルシウムハイドロキシアパタイトはセラミックインプラントの一種である。
【００５１】
体内への移植に上述の非金属材料の少なくとも二種の混合物をまた用いることができる。本発明は一を越える材料が移植される場合に有害作用を生じる遺伝的素因を分析する方法をまた提供する。
【００５２】
生体インプラントが所定の個体に適用される場合に幾つかの有害な副作用が生じると思われるが、本発明の方法は、ある場合には慢性的進行を伴う重篤な副作用であるいわゆる晩発性有害作用を避けるのに特に有用である。従って、本発明の方法は、個体が有害な副作用を呈する易罹患性を前もって（移植の前に）検出することを可能にし、よって非常に興味深い。更に、該方法は従来技術の間隙を満たすと同時に、直ぐにはならなかったがおそらくは後でゆっくりと深刻で重大な病理状態になる仮想症例を最小にすることを可能にする。
【００５３】
体内に移植された非金属材料に関連した有害作用の幾つかは、移植拒絶、皮下脂肪萎縮、肉芽腫性疾患、結節炎症、硬結、血管性浮腫、サルコイドーシス、全身性炎症性免疫媒介疾患、皮膚サルコイドーシス、肺炎、ヒトアジュバント病及び上記有害作用の一を越えるものからなる群から選択される。
【００５４】
体内に移植された非金属材料に関連した有害作用の幾つかは、好ましくは、移植拒絶；アンチプロテアーゼ薬（例えばエイズ患者に投与される抗レトロウイルス療法）を含む高負荷抗レトロウイルス療法に関連した皮下脂肪萎縮；異なった原因から由来する肉芽腫を含む遅発型肉芽腫反応；サルコイドーシス；血管炎（nodulosis）；皮膚硬結；膿瘍及び偽性膿瘍；線維症；血管性浮腫；過敏症；間質性肺炎；肝炎；強皮症；又は炎症性突発性ミオパチーで、その殆どが免疫媒介疾患に入れられるものから選択される。これらの有害作用は全て抗原ＨＬＡ−Ｂ*０８の少なくとも一つの対立遺伝子及び／又は抗原ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３の少なくとも一つの対立遺伝子の存在によって定まるハプロタイプの試料における判定と相関している。
【００５５】
他の好ましい実施態様では、抗原ＨＬＡ−Ｂ*０８及び／又は抗原ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３は、体内に移植された非金属材料に関係した有害作用を生じる個体の遺伝的素因の分析のためのマーカーとして用いられる。
【００５６】
上で明らかにしたように、マーカーの判定は、好ましくは、ジェノタイピングと抗原ＨＬＡ−Ｂ*０８の少なくとも一つの対立遺伝子及び／又は抗原ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３の少なくとも一つの対立遺伝子の存在によって定まるハプロタイプの判定によって実施される。
【００５７】
本発明の方法を実施するための十分な（適切な）手段が併せて提供される場合、体内に移植された材料に関係した有害作用を生じる個体の遺伝的素因の分析に有用なキットが得られる。該キットは、配列特異的オリゴヌクレオチドを用いたＰＣＲ（ＰＣＲ−ＳＳＯ）を実施するための手段を含み得、よって、対応するアプリコン（増幅ＤＮＡ領域）を得るためにＨＬＡ−Ｂ*０８及びＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３をコード化する対立遺伝子を特異的に増幅させるためのプライマー；アプリコンの単離及び検出のためのプローブ；及びパターンのような得られた結果を解釈するための手段を含む。
【００５８】
同じようにして、本発明の方法は、ＨＬＡ−Ｂ*０８の少なくとも一つの対立遺伝子及び／又はＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３の一つの対立遺伝子の存在を判定するための十分な（適切な）手段を含む任意の他の既知のキットを使用して実施される。これらのキットは、ＨＬＡ−Ｂ*０８の対立遺伝子及び／又はＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３の対立遺伝子、又は上記抗原をコードする遺伝子との連鎖不均衡の任意の変化をジェノタイピングするための手段を含む。
【００５９】
あるいは、本発明の方法において使用されるキットは、タンパク質、つまりＨＬＡ−Ｂ*０８抗原及び／又はＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３抗原の存在を判定するための十分な（適切な）手段を含みうる。十分な手段は、抗体・抗原複合体の検出を可能にする抗原のための任意の特異的抗体及び化合物（二次抗体、蛍光又は放射性同位元素マーカー等）を含む。
【００６０】
明細書及び特許請求の範囲を通して、「含む（comprise）」なる語句及び該語句の変形語は、他の技術的特徴、添加物、成分、又は工程を排除することを意図するものではない。本発明の更なる目的、効果及び特徴は明細書を調べれば当業者には明らかになるであろうしあるいは発明の実施によって知得されうる。次の実施例は例示のために提供するもので、本発明を限定することは意図していない。更に、本発明はここに記載した特定の好ましい実施態様のあらゆる可能な組み合わせを範囲に含む。
【実施例】
【００６１】
この発明は、部分的には非金属材料の移植後の有害な副作用を生じる素因に対する新規な易罹患性遺伝子座の発見と特徴付けに基づいている。上記遺伝子座はＨＬＡ−Ｂ*０８のもの又はＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３のもの、又はハプロタイプＨＬＡ−Ｂ*０８及びＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３、並びに上記遺伝子座の遺伝子から由来するタンパク質（セロタイプ）である。
【００６２】
実施例Ａ）分析した集団（ｎ＝２４５）の試料調製及び結果
２４５名の患者及びコントロールのＨＬＡ−Ｂ及びＤＲＢ１対立遺伝子の低分解能ジェノタイピングを、Ｌｕｍｉｎｅｘマイクロビーズ技術（Ｌｉｆｅｃｏｄｅｓ ＨＬＡ−ＳＳＯタイピングキット，Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）と共に使用，参照及びバージョンＬＣ７７５ＩＶＤ．１１（０２／０９），Ｔｅｐｎｅｌ Ｌｉｆｅｃｏｄｅｓ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ−Ｓｔａｍｆｏｒｄ製）を使用する）配列特異的オリゴヌクレオチドプローブ（ＳＳＯＰ）によって実施した。以下の表１に例証されるように、ある個体は、有機又は無機化学的性質の皮膚又は皮下フィラーのような生体インプラントの注入から生じる有害作用を有していた。
【００６３】
ＬＩＦＥＣＯＤＥＳ ＨＬＡ−ＳＳＯタイピング手順は標識された一本鎖ＰＣＲアンプリコンをＳＳＯプローブにハイブリダイズさせることに基づく。プローブは、対立遺伝子に独特の増幅ＤＮＡ内の配列又は対立遺伝子の一群に相同でありうる。プローブはアンプリコンに存在していてもしていなくともよい相補領域にハイブリダイズする。遺伝子座の全ての対立遺伝子に存在する配列に相同なコンセンサスプローブをまた用いることができ、増幅及びハイブリダイゼーション工程の成功を示す指標となる。ＬＩＦＥＣＯＤＥＳ ＨＬＡ−ＳＳＯタイピング手順では、プローブは、Ｌｕｍｉｎｅｘ機器（登録商標）において使用されるように適合化されたＬｕｍｉｎｅｘ Ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅｓ（登録商標）に取り付けられている。ミクロスフィアの各集団は独特の色によって区別されるので、ミクロスフィアの幾つかの集団が混合され、併せて分析される。この技術は、ＰＣＲ産物の相対量を定量するために使用することもできるので有利であり、全ての試料（個々）のＨＬＡ表現型の判定に至る。
【００６４】
Ａ．１．ＤＮＡ抽出：
ＤＮＡは患者及びコントロールの血液試料から抽出した；またこれをＱＩＡＡｍｐ（登録商標）（Ｑｉａｇｅｎ，Ｓ．Ａ．）法を使用して調製した。単離したＤＮＡはヌクレアーゼ非含有水中１０ｍＭのＴＲＩＳ，ｐＨ８．０−９．０に保存した。ＤＮＡの最終濃度は１０−２００ｎｇ／μｌであった。
【００６５】
Ａ．２．ＤＮＡ増幅（ＰＣＲ）：
ＤＮＡ増幅のための反応成分及び量は次の通りであった：
−  プライマーミックス（ＬＩＦＥＣＯＤＥＳマスターミックス）；１５μｌ
−  ゲノムＤＮＡ；２００ｎｇまで
−  組換えＴａｑポリメラーゼ；０．５μｌ（２．５Ｕ）
−  ヌクレアーゼ非含有水（Ｔｅｐｎｅｌ Ｌｉｆｅｃｏｄｅｓ）；５０μｌの最終体積まで。
【００６６】
プライマーミックスはバッファーと増幅を実施するためのｄＮＴＰ（デオキシヌクレオチド）を含む。
増幅のためのサーマルサイクラー条件は次の通りであった：
−  ９５℃で５分、
−  次の工程の１サイクル：３０秒９５℃；４５秒６０℃；４５秒７２℃、
−  次の工程の８サイクル：３０秒９５℃；４５秒６３℃；４５秒７２℃、及び
−  ７２℃、１５分で３２サイクル。
増幅はサーマルサイクラー（ＰＣＲ）９６ウェルプレート（Ｃｏｓｔａｒ（登録商標）、Ｎｏ．６５０９）で実施した。
【００６７】
Ａ．３．プローブハイブリダイゼーション及び試料分析。
あらゆる遺伝子座特異的ＰＣＲ産物の５μｌのアリコートを、プローブミックス（ＬＩＦＥＣＯＤＥＳ ＨＬＡプローブミックス）の１５μｌのアリコートと一緒にサーマルサイクラー９６ウェルプレート（Ｃｏｓｔａｒ（登録商標），Ｎｏ．６５０９）に加えた。プレートをＭｉｃｒｏｓｅａｌ（登録商標）フィルムでシールした。試料を、以下のインキュベーション条件に従ってハイブリダイズさせた。
−  ９７℃で５分；４７℃で３０分；５６℃で１０分。
【００６８】
一度ハイブリダイゼーションを実施したところで、ストレプトアビジン-フィコエリトリンの１：２００希釈液の１７０μｌ溶液を各ウェルに加えた。ついで、結果の解釈に必要とされるソフトウェアを含むＬｕｍｉｎｅｘ機器に試料を移し、つまり、あらゆる試料のプローブヒットパターンをキットと共に提供されるプローブヒットテーブルと比較した。
【００６９】
次の表１は、上で明らかにしたようにして分析されたあらゆる試料のジェノタイピングを示しており、生体インプラントの適用に関係した有害作用の存在とあらゆるハプロタイプを相関させる。「生体インプラント」の欄は、あらゆる試料に適用された生体インプラント又は生体インプラント混合物に関する。「観察及び／又は有害作用」の欄は観察される病理状態及び幾つかのメディカルアノテーションに関係する。試料は非金属材料が移植された個体であった。「Ｙ」は有り（ｙｅｓ）を意味する；「Ｎ」はなし（ＮＯ）を意味する；「ＮＩ」は小結節炎症を意味する；ＨＬＡ−Ｂ*（１）は前駆体（１）から受け継がれたＨＬＡ−Ｂタイプの対立遺伝子である；ＨＬＡ−Ｂ*（２）は前駆体（２）から受け継がれたＨＬＡ−Ｂタイプの対立遺伝子である；ＨＬＡ−ＤＲＢ１*（１）は前駆体（１）から受け継がれたＨＬＡ−ＤＲＢ１*タイプの対立遺伝子である；ＨＬＡ−ＤＲＢ１*（２）は前駆体（２）から受け継がれたＨＬＡ−ＤＲＢ１*タイプの対立遺伝子である。
【００７０】
【表１】
2013530682.tif 000002
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【００７１】
表１から、本発明の予想試験又は方法を使用して、生体インプラント、つまり皮膚及び皮下フィラーに関係した晩発性有害作用及び幾らかの即時性有害作用を、生体材料の移植を選択し晩発性有害作用を示した個体の３０−４０％において防止することができることが推定される。換言すれば、有害作用を生じる可能性は、抗原ＨＬＡ−Ｂ*０８及び／又はＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３の一つの少なくとも一つの対立遺伝子を含む個体においてより大きい。
【００７２】
より具体的には、生体インプラントに関係した晩発性有害作用は、ＨＬＡ−Ｂ*０８の一対立遺伝子とＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３の一対立遺伝子の同時の存在（ハプロタイプＨＬＡ−Ｂ*０８／ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３）によって定まるハプロタイプを含む個体において６００倍である。抗原の一対立遺伝子を呈するときの相対リスク（ｒｒ）対ハプロタイプＨＬＡ−Ｂ*０８／ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３を呈するときの相対リスクは１対５．９（ｒｒ＝１対ｒｒ＝５．９）である。
【００７３】
表１の全てのデータを、９５％の信頼区間でフィッシャー直接検定（２ｔａｉｌ）を使用して統計的に解析した。ハプロタイプＨＬＡ−Ｂ*０８／ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３を含む試料は、５．８１のオッズ比の値を明らかにし、フィッシャー直接検定は０．０２より低かった。
【００７４】
従って、ハプロタイプＨＬＡ−Ｂ*０８／ＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３の存在は生体インプラントに関係した有害作用を生じる大きなリスクを意味するが、ＨＬＡ−Ｂ*０８の少なくとも一つの単一対立遺伝子又はＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３の少なくとも一つの単一対立遺伝子の存在は、表１のデータに従って、またリスク因子として考慮されなければならない。
【００７５】
表１から、ＨＬＡ−Ｂ*０８及びＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３のものとは異なったハプロタイプに相関する幾つかの晩発性有害作用が生じうることがまた抽出されうる。これらの症例は、本発明の方法では検出することができず、更なる研究が必要とされる。
【００７６】
更に詳細な形では、表１は検出される有害な副作用を示す。遅延型肉芽腫性反応は、コラーゲン、シリコーン、ポリＬ酪酸、ポリアクリルアミド、ポリアルキルイミド、ヒアルロン酸、ポリテトラフルオロエチレン（Gore-Tex（登録商標））及びメタクリレートインプラントに関係していた。同じタイプの有害反応は、メタクリレート-コラーゲン(Artecoll（登録商標）)又はエチルメタクリレート-ヒアルロン酸(Dermalive（登録商標）)の組み合わせの使用で記述されている。ポリアルキルイミドに対する幾つかの異なった晩発性有害反応がまた報告されている。ヒアルロン酸（HA-AH, Dermalive（登録商標））、メタクリレート−コラーゲン（Artecoll（登録商標））、ポリ酪酸(New-Fill（登録商標））、シリコーン及びポリアクリルアミド（Aquamid（登録商標））に関係した異なった特定の組織の肉芽腫さえ記載されている。ヒトにおいて免疫媒介性の有害作用を誘発する生体インプラントの能力は生体インプラントの異なった化学組成及び個体の生物学的特徴に関係している場合がある。全ての生体インプラントは、インビトロで、マクロファージ活性化に基づく一次免疫媒介異物タイプ応答とＴ細胞応答の可能な誘導を誘発しうる。理論では、肉芽腫に関して、生体インプラント粒子の回りの網目コラーゲン繊維の徐々の発生はそれに対する炎症反応の減少と一致するように思われる。しかし、いわゆる安定な肉芽腫が、皮膚又は皮下フィラーのような生体インプラントに対する進行性の異常な肉芽腫性応答になりうる。しばしば、望まれない作用が小さい外傷中又は感染後に現れる。自身及び特定の遺伝的背景がこれらの有害な反応の発生に重要な役割を担っているに違いないとの仮説が成り立つ。
【００７７】
実施例Ｂ）臨床例
アトピー前駆症状及び推定薬剤過敏症を呈し、顔の皺を改善するために外科医による処置を望んでいた６０歳の患者を、本発明の方法によって最初に分析した。患者がインプラント（皮下フィラー）拒絶又は有害な副作用の発生を被りやすいかどうかを判定することが意図された。選択されたフィラーはヒアルロン酸である。古典的な分析（ＡＮＡｓ，ＣＨ５０，Ｃ４，タンパク像の測定）を実施した後、またＨＬＡ−Ｂ及びＨＬＡ−ＤＲＢ１遺伝子座のハプロタイプを実験的に試験した後（Ｌｉｆｅｃｏｄｅｓ ＨＬＡ−ＳＳＯタイピングキット，Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）と共に使用，ＬＣ７７５ＩＶＤ．１１（０２／０９），Ｔｅｐｎｅｌ Ｌｉｆｅｃｏｄｅｓ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ−Ｓｔａｍｆｏｒｄ製）、患者が次のハプロタイプ：ＨＬＡ−Ｂ*０８及びＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３を呈することを判定した。外科医はヒアルロン酸フィラーを注入することを拒絶したので、顔の皺とりのみを進めた。
【００７８】
実施例Ｃ）他の臨床例
Ｃ１．  ４５歳の患者は、ヒアルロン酸及びメタクリレートからなる顔のインプラント（フィラー注入）から１８ヶ月後の顔の結節、皮膚の病巣及び乾燥症候群の発症のために治療を求めていた。血液検査は、高ガンマグロブリン血症、高レベルの急性期反応物質、並びに高い値のアンジオテンシン変換酵素を明らかにした。バッカルスワブからのＨＬＡ−Ｂ及びＨＬＡ−ＤＲＢ１遺伝子座のハプロタイプを実験的に試験した後、患者が次のハプロタイプＨＬＡ−Ｂ*０８及びＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３を呈していたことが測定された（Ｌｉｆｅｃｏｄｅｓ ＨＬＡ−ＳＳＯタイピングキット，Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）と共に使用，ＬＣ７７５ＩＶＤ．１１（０２／０９），Ｔｅｐｎｅｌ Ｌｉｆｅｃｏｄｅｓ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ−Ｓｔａｍｆｏｒｄ製）。患者には新しい生体インプラント（フィラー注入）を使用した場合に有害作用を生じる高いリスクを十分に告知した。
【００７９】
Ｃ２．  生体インプラントに関係した晩発性有害作用の推定リスクを判定するために皮膚科専門医から導かれた患者を分析した。患者はコラーゲンとメタクリレートの移植後に前に顔に反応を生じたようであった。血液からＨＬＡ−Ｂ及びＨＬＡ−ＤＲＢ１遺伝子座のハプロタイプを、実施例Ｂにおいてなされたようにして実験的に検査した後、患者が次のハプロタイプ：ＨＬＡ−Ｂ*０８及びＨＬＡ−ＤＲＢ１*０３を呈することを測定した。患者には新しい生体インプラント（フィラー）を使用した場合に有害作用を生じる高いリスクを十分に告知した。また外科医はフィラーの注入を告知し悪い評価をした。しかし、患者はヒアルロン酸フィラーの注入に応じた他の専門医に相談をした。フィラーの注入から３ヶ月後に顔の一回目及び二回目に治療された領域に深刻な炎症の発生が観察された。
【００８０】
本発明者が知る限りでは、体内に移植された材料に関係した有害作用を個体が発症する遺伝的素因を相関付ける有意な統計的データはこれまで報告されていない。これは、生体インプラントを市販している会社がインプラントから生じるリスクについて黙秘していたためであり得；又は単に有害作用の殆どが晩発性の有害作用であり、数年前の生体材料の移植と即座に相関させることが困難であるためである。
【００８１】
全ての試験された個体（患者又はコントロール）において生体インプラントに対する反応性抗体は検出されなかった点は強調される。よって、観察された炎症反応及び免疫疾患は自己免疫反応パターンのためではない。同じように、フィラーのような異なった生体インプラントに対する特定の自己抗体は現在の試料では検出されなかった。また、生体インプラントに関係する有害な副作用の場合に観察された生検は自己免疫疾患において観察されたものと全く異なっている。通常、これらの生検で観察される病理組織学的パターンはＩＶ型過敏症反応（Gell及びCoombsの分類）に特徴的である。よって、Ｂ細胞よりもＴ細胞の関与が裏付けられる。しかしながら、炎症が慢性状態に発展すると、血管炎、多発性筋炎、シェーグレン症候群等のような自己免疫疾患を発生させ又は「目覚めさせ」うる。これらの重篤な疾患は、生体インプラント（非金属材料インプラント）を受容することが薦められている個体で本発明の方法が実施されると、避けることができる。
【００８２】
本発明の方法は、ハプロタイプ又はＨＬＡ系の幾つかの対立遺伝子の存在、又は対立遺伝子によってコードされるタンパク質（抗原）の存在を、生体材料の移植後に有害作用を生じるリスクと相関させる最初の有意な統計的アッセイから生じる。幸運にも生体インプラントに関係した有害作用の罹患率は低いが、上記有害作用の発症は実に重篤な場合がある。よって、本発明の方法は、美容処理の本来の狙いとは反対に深刻な有害作用の発生に至りうる外科的又は美容的処置を可能にするため、重要である。
【００８３】
本発明は、体内に移植された材料、つまり皮膚及び皮下フィラーに由来する（晩発性又は即時性）有害作用を生じる個体の易罹患性又は素因に特定のハプロタイプを連関させる有意な統計的データを初めて提供する。
【００８４】
出願中に引用した文献
-  Di Lorenzo等, "Morphea after Silicone Gel Breast Implantation for Cosmetic Reasons in an HLA-BS, DR3-Positive Woman, Int. Arch Allergy Immunol 1997, vol. 112, pp. 93-95。
【国際調査報告】
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