(57)【要約】本出願は、モノメチルアウリスタチンＦの新規誘導体、この誘導体の調製方法、疾患の処置および／または予防のためのこの誘導体の使用、また、疾患、より詳しくは、過剰増殖性障害および／または血管新生障害、例えば、がん性障害などの処置および／または予防のための医薬を調製するためのこの誘導体の使用に関する。かかる処置は、単独療法として、あるいは他の医薬またはさらなる治療手段と併用して行われ得る。本出願はまた、本発明の化合物を１種類以上の不活性な無毒性の医薬に適した補助剤と組み合せて含む医薬に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）
【化１１２】
2013533228.tif 000119
（式中、
Ｒ１は、水素、（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキルまたは式Ｑ１−Ｌ１−＊もしくはＱ２−Ｌ２−＊の基を表し、ここで、
＊は、前記窒素原子に対する結合点を表し、
Ｑ１は、ヒドロキシカルボニル、（Ｃ１〜Ｃ４）−アルコキシカルボニルまたはベンジルオキシカルボニルを表し、
Ｌ１は、直鎖（Ｃ１〜Ｃ１２）−アルカンジイルを表し、前記アルカンジイルは４回までメチルで置換されていてもよく、ここで、（ａ）２個の炭素原子が、互いに１，２−、１，３−もしくは１，４−の関係で架橋され、これらの間に存在する任意の炭素原子を含めて（Ｃ３〜Ｃ６）−シクロアルキル環もしくはフェニル環を形成し得るか、または（ｂ）互いに隣接していない３つまでのＣＨ２基が−Ｏ−で置き換えられ得、
Ｑ２は、ヒドロキシル、アミノまたはモノ−（Ｃ１〜Ｃ４）−アルキルアミノを表し、
Ｌ２は、直鎖（Ｃ２〜Ｃ１２）−アルカンジイルを表し、前記アルカンジイルは４回までメチルで置換されていてもよく、ここで、（ａ）２個の炭素原子が、互いに１，２−、１，３−もしくは１，４−の関係で架橋され、これらの間に存在する任意の炭素原子を含めて（Ｃ３〜Ｃ６）−シクロアルキル環もしくはフェニル環を形成し得るか、または（ｂ）互いに隣接していない３つまでのＣＨ２基が−Ｏ−で置き換えられ得、
Ｒ２は、メチルまたはヒドロキシルを表し、
Ｒ３は、水素またはメチルを表し、
Ｒ４は、イソプロピル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、フェニル、ベンジル、４−ヒドロキシベンジル、４−ヒドロキシ−３−ニトロベンジル、１−フェニルエチル、ジフェニルメチル、１Ｈ−イミダゾール−４−イルメチルもしくは１Ｈ−インドール−３−イルメチルを表すか、
または
Ｒ３とＲ４が、両者が結合している炭素原子と一緒になって、
式
【化１１３】
2013533228.tif 000120
の２−フェニルシクロプロパン−１，１−ジイル基を形成しており、式中の＃は、分子のその他の部分に対する結合点を表し、
Ｎ−Ｏ基を含有している環Ａは、式
【化１１４】
2013533228.tif 000121
の単環式または二環式の必要に応じて置換されている複素環を表し、式中、
＊＊は、カルボニル基に対する結合点を表し、
Ｒ５およびＲ６は各々、水素、ヒドロキシル、（Ｃ１〜Ｃ４）−アルコキシまたはベンジルオキシを表し、
Ｒ７は、水素、フッ素、塩素、シアノ、メチルまたはトリフルオロメチルを表す）
の化合物、また、その塩および溶媒和物ならびに前記塩の溶媒和物。
【請求項２】
Ｒ１が、水素、（Ｃ１〜Ｃ４）−アルキルまたは式Ｑ１−Ｌ１−＊もしくはＱ２−Ｌ２−＊の基を表し、ここで、
＊は、前記窒素原子に対する結合点を表し、
Ｑ１は、ヒドロキシカルボニルまたは（Ｃ１〜Ｃ４）−アルコキシカルボニルを表し、
Ｌ１は、直鎖（Ｃ１〜Ｃ１２）−アルカンジイルを表し、ここで、（ａ）２個の炭素原子が、互いに１，３−もしくは１，４−の関係で架橋され、これらの間に存在する１個もしくは２個の炭素原子を含めてフェニル環を形成し得るか、または（ｂ）互いに隣接していない３つまでのＣＨ２基が−Ｏ−で置き換えられ得、
Ｑ２は、ヒドロキシル、アミノまたはメチルアミノを表し、
Ｌ２は、直鎖（Ｃ２〜Ｃ１２）−アルカンジイルを表し、前記アルカンジイルは、１個もしくは２個のメチルで置換されていてもよく、前記アルカンジイルの互いに隣接していない３つまでのＣＨ２基は−Ｏ−で置き換えられていてもよく、
Ｒ２が、メチルまたはヒドロキシルを表し、
Ｒ３が、水素を表し、
Ｒ４が、ベンジル、４−ヒドロキシベンジル、１−フェニルエチルもしくは１Ｈ−インドール−３−イルメチルを表すか、
または
Ｒ３とＲ４が、両者が結合している炭素原子と一緒になって、式
【化１１５】
2013533228.tif 000122
の２−フェニルシクロプロパン−１，１−ジイル基を形成しており、式中の＃は、分子のその他の部分に対する結合点を表し、
Ｎ−Ｏ基を含有している環Ａが、式
【化１１６】
2013533228.tif 000123
の単環式または二環式の必要に応じて置換されている複素環を表し、式中、
＊＊は、前記カルボニル基に対する結合点を表し、
Ｒ５は、水素、ヒドロキシルまたはベンジルオキシを表す、
請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物、また、その塩および溶媒和物ならびに前記塩の溶媒和物。
【請求項３】
Ｒ１が、水素、メチルまたは式Ｑ１−Ｌ１−＊もしくはＱ２−Ｌ２−＊の基を表し、ここで、
＊は、前記窒素原子に対する結合点を表し、
Ｑ１は、ヒドロキシカルボニル、メトキシカルボニルまたはエトキシカルボニルを表し、
Ｌ１は、直鎖（Ｃ１〜Ｃ６）−アルカンジイルを表し、ここで、２個の炭素原子が、互いに１，４−の関係で架橋され、これらの間に存在する２個の炭素原子を含めてフェニル環を形成し得、
Ｑ２は、ヒドロキシルまたはアミノを表し、
Ｌ２は、直鎖（Ｃ２〜Ｃ６）−アルカンジイルを表し、
Ｒ２が、メチルを表し、
Ｒ３が、水素を表し、
Ｒ４が、ベンジル、１−フェニルエチルもしくは１Ｈ−インドール−３−イルメチルを表すか、
または
Ｒ３とＲ４が、両者が結合している炭素原子と一緒になって、式
【化１１７】
2013533228.tif 000124
の（１Ｓ，２Ｒ）−２−フェニルシクロプロパン−１，１−ジイル基を形成しており、式中、
＃１は、隣接している窒素原子に対する結合点を表し、
＃２は、前記カルボニル基に対する結合点を表し、
Ｎ−Ｏ基を含有している環Ａが、式
【化１１８】
2013533228.tif 000125
の単環式または二環式の必要に応じて置換されている複素環を表し、式中、
＊＊は、前記カルボニル基に対する結合点を表し、
Ｒ５は、水素、ヒドロキシルまたはベンジルオキシを表す、
請求項１または２に記載の式（Ｉ）の化合物、また、その塩および溶媒和物ならびに前記塩の溶媒和物。
【請求項４】
式（Ｉ−Ａ）
【化１１９】
2013533228.tif 000126
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４および環Ａは請求項１、２または３において規定した意味を有し、原子団Ｒ３とＲ４を有するＣＸ炭素原子は、図示したＳ配置を有する）
である、請求項１、２または３に記載の化合物、また、その塩および溶媒和物ならびに前記塩の溶媒和物。
【請求項５】
式（ＩＩ）の化合物
【化１２０】
2013533228.tif 000127
（式中、Ｒ２は、請求項１〜４のいずれかに示した意味を有し、
ＰＧは、例えば、（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルまたはベンジルオキシカルボニルなどのアミノ保護基を表す）
を、不活性溶媒中で、（ＩＩ）のカルボキシル官能基の活性化を伴って、
［Ａ］まず、式（ＩＩＩ）の化合物
【化１２１】
2013533228.tif 000128
もしくはその塩とカップリングさせて式（ＩＶ）の化合物
【化１２２】
2013533228.tif 000129
（式中、Ｒ２およびＰＧは上記に示した意味を有する）
を得、次いで、この化合物を、不活性溶媒中で、カルボキシル官能基の活性化を伴って、式（Ｖ）
【化１２３】
2013533228.tif 000130
（式中、Ｒ３、Ｒ４および環Ａは請求項１〜４のいずれかに示した意味を有する）
の化合物もしくはこの化合物の塩とカップリングさせて式（ＶＩ）
【化１２４】
2013533228.tif 000131
（式中、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、環ＡおよびＰＧは上記に示した意味を有する）
の化合物を得るか、または
［Ｂ］式（ＶＩＩ）
【化１２５】
2013533228.tif 000132
（式中、Ｒ３、Ｒ４および環Ａは請求項１〜４のいずれかに示す意味を有する）
の化合物もしくはこの化合物の塩とカップリングさせて、同様に式（ＶＩ）
【化１２６】
2013533228.tif 000133
（式中、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、環ＡおよびＰＧは上記に示した意味を有したものである）
の化合物を得、
それぞれで得られる式（ＶＩ）の化合物を、次いで、慣用的なペプチド化学の方法によって脱保護し、本発明による式（Ｉ−Ｂ）
【化１２７】
2013533228.tif 000134
（式中、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４および環Ａは上記に示した意味を有する）
の化合物を得、続いて、これを、所望により、（ｉ）式（ＶＩＩＩ）
Ｒ１Ａ−Ｘ  （ＶＩＩＩ）
（式中、
Ｒ１Ａは、請求項１〜４のいずれかに示したＲ１の意味を有するが、水素を表すものではなく、
Ｘは、例えば、クロリド、ブロミド、ヨージド、メシラート、トリフラートもしくはトシラートなどの脱離基を表す）
の化合物を用いる塩基誘導性アルキル化によって本発明による式（Ｉ−Ｃ）
【化１２８】
2013533228.tif 000135
（式中、Ｒ１Ａ、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４および環Ａは上記に示した意味を有する）
の化合物に変換するか、
または（ｉｉ）式（ＩＸ）
【化１２９】
2013533228.tif 000136
（式中、
Ｒ１Ｂは、上記に示したＲ１Ａの意味を有するが、アルキル鎖長はＣＨ２単位１つ分短い）
の化合物との適当な還元剤の存在下での反応によって式（Ｉ−Ｄ）
【化１３０】
2013533228.tif 000137
（式中、Ｒ１Ｂ、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４および環Ａは上記に示した意味を有する）
化合物に変換し、
この様式で得られる式（Ｉ−Ｂ）、（Ｉ−Ｃ）および（Ｉ−Ｄ）の化合物を、必要に応じて、そのエナンチオマーおよび／またはジアステレオマーに分離すること、および／または適切な（ｉ）溶媒および／または（ｉｉ）塩基もしくは酸を用いてその溶媒和物、塩および／または前記塩の溶媒和物に変換すること
を特徴とする、請求項１〜４のいずれかに記載の式（Ｉ）の化合物の調製プロセス。
【請求項６】
疾患の処置および／または予防のための請求項１〜４のいずれかに記載の化合物。
【請求項７】
がんおよび腫瘍障害の処置および／または予防のための方法における使用のための請求項１〜４のいずれかに記載の化合物。
【請求項８】
がん性障害および腫瘍障害の処置および／または予防のための医薬の調製のための請求項１〜４のいずれかに記載の化合物の使用。
【請求項９】
請求項１〜４のいずれかに記載の化合物を１種類以上の不活性な無毒性の医薬に適した補助剤と組み合せて含む医薬。
【請求項１０】
請求項１〜４のいずれかに記載の化合物を１種類以上のさらなる活性化合物と組み合せて含む医薬。
【請求項１１】
がん性障害および腫瘍障害の処置および／または予防のための請求項９または１０に記載の医薬。
【請求項１２】
有効量の少なくとも１種類の請求項１〜４のいずれかに記載の化合物または請求項９〜１１のいずれかに記載の医薬を使用する、ヒトおよび動物のがん性障害および腫瘍障害の処置および／または予防のための方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、モノメチルアウリスタチンＦの新規誘導体、この誘導体の調製方法、疾患の処置および／または予防のためのこの誘導体の使用、また、疾患、より詳しくは、過剰増殖性障害および／または血管新生障害、例えば、がん性障害などの処置および／または予防のための医薬を調製するためのこの誘導体の使用に関する。かかる処置は、単独療法として、あるいは他の医薬またはさらなる治療手段と併用して行われ得る。
【背景技術】
【０００２】
がん性障害は、多種多様な組織における制御不能な細胞成長の帰結である。多くの場合、新しい細胞は、既に存在している組織内に貫入するか（浸潤性成長）、または遠隔器官に転移する。がん性障害は多種多様な器官において発生し、該疾患は、多くの場合、組織特異的様式で進行する。したがって、一般用語としての「がん性障害」という表記は、種々の器官、組織および細胞型の規定された疾患の大きな一群を示す。
【０００３】
初期段階の腫瘍は、外科的および放射線療法的手段によって除去できる場合があり得る。転移した腫瘍には、一般的に、化学療法剤による緩和療法を施与することしかできない。その場合の目的は、生活の質の改善と残された寿命の延長の最適な並存を達成することである。
【０００４】
現在、非経口で投与される化学療法剤のほとんどは、多くの場合、腫瘍組織または腫瘍細胞において標的指向型ではなく、むしろ、その全身性投与の結果、体内に非特異的に分布し、したがって、薬物への曝露が望ましくない箇所、例えば、健常な細胞、組織および器官などに内包される。これにより、不要な副作用およびさらには深刻な一般毒性効果がもたらされ、そのため、多くの場合、薬物の治療上有用な用量範囲が大きく制限されるか、または薬物療法の完全な中止が必要となることになり得る。
【０００５】
したがって、一方において、腫瘍細胞または隣接周囲組織におけるこのような化学療法剤の改善された選択的アベイラビリティおよび関連する実際の追加刺激、ならびに他方において、毒性副作用の最小化は、数年の間、新しい化学療法剤の開発における焦点となっている。これまで、薬物を標的細胞内に効率的に導入する方法を開発するために多くの試みが行われている。薬物と細胞内標的との結合の最適化および細胞間、例えば近接細胞への薬物の分布の最小化は、それでもなお難題の構成要素のままである。
【０００６】
例えば、モノクローナル抗体は、腫瘍組織および腫瘍細胞の標的指向型の対処に適している。がん性障害の臨床処置のためのかかる抗体の重要性は、近年、トラスツズマブ（ハーセプチン）、リツキシマブ（リツキサン）、セツキシマブ（アービタックス）およびベバシズマブ（アバスチン）などの薬剤の活性に基づいて、一般的に相当な増加が見られ、これらの薬剤は、以来、個々の特定の腫瘍障害の治療に承認されている［例えば、非特許文献１を参照のこと］。そのため、腫瘍関連抗原に対する内在化抗体を連結単位（「リンカー」）を介して細胞傷害剤に共有結合で連接させたいわゆるイムノコンジュゲート（例えば、前述のＡＤＣなど）にも、関心が顕著に増大してきている。ＡＤＣが腫瘍細胞内に導入され、続いて該コンジュゲートが切断されると、細胞傷害剤自体または細胞傷害剤から形成された細胞傷害活性を有する別の代謝産物のいずれかが腫瘍細胞内に放出され、該細胞内でその効果が直接的および選択的に発現され得る。このように、がん性障害の慣用的な化学療法と比べて、かなり近い範囲内の正常組織が損傷されないようにすることが可能となり得る［例えば、非特許文献２；非特許文献３；非特許文献４；非特許文献５を参照のこと］。
【０００７】
また、抗体の代わりに、小分子薬物の球体のリガンドを、特異的標的位置（「標的」）（例えば、受容体など）に選択的に結合する結合剤として使用することも可能である［例えば、非特許文献６；非特許文献７を参照のこと］。また、細胞傷害薬とアドレス指定（ａｄｄｒｅｓｓｉｎｇ）リガンドとのコンジュゲートも知られており、これは、リガンドと薬物との間に薬物放出のための規定の切断点を示す。この種の「所定の切断点」は、例えば、ペプチド鎖内に存在するものであって、特定の部位で選択的に特異的酵素によって作用位置で切断され得るものであり得る［例えば、Ｒ．Ａ．ＦｉｒｅｓｔｏｎｅおよびＬ．Ａ．Ｔｅｌａｎ，特許文献１を参照のこと］。
【０００８】
アウリスタチンＥ（ＡＥ）およびモノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）は、最初に海洋供給源から単離され、一部の場合で腫瘍細胞に対して非常に強力な細胞傷害活性を有する線状のプソイドペプチドの特定の一群であるドラスタチンの合成類似体である［概説については、例えば、非特許文献８；非特許文献９；非特許文献１０を参照のこと］。
【０００９】
【化１】
2013533228.tif 000002
しかしながら、ＭＭＡＥは、全身毒性が比較的高いという不都合を有する。また、この化合物は、抗体／活性化合物コンジュゲート（イムノコンジュゲート）の形態で利用された場合、抗体と活性化合物との間のリンカーと非適合性であり、酵素的に切断可能な所定の切断点をもたない［非特許文献１１］。
【００１０】
モノメチルアウリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）は、Ｃ末端フェニルアラニン単位を有するアウリスタチン誘導体であり、ＭＭＡＥと比べると中程度にすぎない抗増殖活性を示す。この事実は遊離カルボキシル基に起因している可能性が非常に高く、該基の極性および電荷がこの化合物の細胞到達能力に有害に影響している。これとの関連において、ＭＭＡＦのメチルエステル（ＭＭＡＦ−ＯＭｅ）が、細胞到達能を有する中性電荷のプロドラッグ誘導体として報告されており、これは、ＭＭＡＦと比べて、種々の癌細胞株に対して数桁増大したインビトロ細胞傷害性を有する［非特許文献１１］。この効果は、そのプロドラッグが細胞内に取り込まれた後、細胞内エステル加水分解によって速やかに放出されるＭＭＡＦ自体によってもたらされると推測され得る。
【００１１】
【化２】
2013533228.tif 000003
しかしながら、単純なエステル誘導体を主体とする薬物化合物は、一般的に、意図され
る作用部位に関係なく、例えば、血漿中に存在しているエステラーゼによる非特異的エステル加水分解のために化学的不安定性のリスクに晒される；この非特異的加水分解により、治療におけるかかる化合物の有用性が有意に制限されることがあり得る。
【００１２】
したがって、本発明の目的は、有効性が中程度にすぎないモノメチルアウリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）を出発物質とする新規化合物を同定すること、および第１に全細胞アッセイにおいてより顕著に強力な細胞傷害活性を有し、第２に単純なエステル誘導体（ＭＭＡＦ−ＯＭｅなど）と比べて増大した血漿安定性を有する、特に、がん性障害の処置のためのこのような化合物を提供することであった。かかる物質は、抗増殖作用を有する（免疫）コンジュゲートを得るためのタンパク質（例えば、抗体など）あるいは低分子量リガンドに対する結合のための坦毒体として特に好適であり得る。
【００１３】
モノメチルアウリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）、またその種々のエステル誘導体およびアミド誘導体は、特許文献２に開示されている。Ｃ末端アミド置換フェニルアラニン単位を有するさらなるアウリスタチン類似体は、特許文献３に記載されている。特許文献４および特許文献５の特許請求の範囲には、フェニルアラニンの側鎖修飾に関係したＭＭＡＦ類似体が記載されており、特許文献６の特許請求の範囲には、フェニルアラニンのカルボキシル基が修飾されたものが記載されている。最近、Ｃ末端を介して連結されたアウリスタチンコンジュゲートが特許文献７に報告されている［非特許文献１２も参照のこと］。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１４】
【特許文献１】米国特許出願公開第２００２／０１４７１３８号明細書
【特許文献２】国際公開第２００５／０８１７１１号
【特許文献３】国際公開第０１／１８０３２号
【特許文献４】国際公開第０２／０８８１７２号
【特許文献５】国際公開第２００７／００８６０３号
【特許文献６】国際公開第２００７／００８８４８号
【特許文献７】国際公開第２００９／１１７５３１号
【非特許文献】
【００１５】
【非特許文献１】Ｇ．Ｐ．ＡｄａｍｓおよびＬ．Ｍ．Ｗｅｉｎｅｒ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２３，１１４７−１１５７（２００５）
【非特許文献２】Ｊ．Ｍ．Ｌａｍｂｅｒｔ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５，５４３−５４９（２００５）
【非特許文献３】Ａ．Ｍ．ＷｕおよびＰ．Ｄ．Ｓｅｎｔｅｒ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２３，１１３７−１１４６（２００５）
【非特許文献４】Ｐ．Ｄ．Ｓｅｎｔｅｒ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．１３，２３５−２４４（２００９）
【非特許文献５】Ｌ．ＤｕｃｒｙおよびＢ．Ｓｔｕｍｐ，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．２１，５−１３（２０１０）
【非特許文献６】Ｅ．Ｒｕｏｓｌａｈｔｉら，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７９，３７７−３８０（１９９８）
【非特許文献７】Ｄ．Ｋａｒｋａｎら，ＰＬｏＳ  ＯＮＥ  ３（６），ｅ２４６９（２００８年６月２５日）
【非特許文献８】Ｇ．Ｒ．Ｐｅｔｔｉｔ，Ｐｒｏｇ．Ｃｈｅｍ．Ｏｒｇ．Ｎａｔ．Ｐｒｏｄ．７０，１−７９（１９９７）
【非特許文献９】Ｇ．Ｒ．Ｐｅｔｔｉｔら，Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ  １０，５２９−５４４（１９９５）
【非特許文献１０】Ｇ．Ｒ．Ｐｅｔｔｉｔら，Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ  １３，２４３−２７７（１９９８）
【非特許文献１１】Ｓ．Ｏ．Ｄｏｒｏｎｉｎａら，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．１７，１１４−１２４（２００６）
【非特許文献１２】Ｓ．Ｏ．Ｄｏｒｏｎｉｎａら，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．１９、１９６０−１９６３（２００８）
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１６】
本発明は、ここに、一般式（Ｉ）
【００１７】
【化３】
2013533228.tif 000004
（式中、
Ｒ１は、水素、（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキルまたは式Ｑ１−Ｌ１−＊もしくはＱ２−Ｌ２−＊の基を表し、ここで、
＊は、窒素原子に対する結合点を表し、
Ｑ１は、ヒドロキシカルボニル、（Ｃ１〜Ｃ４）−アルコキシカルボニルまたはベンジルオキシカルボニルを表し、
Ｌ１は、直鎖（Ｃ１〜Ｃ１２）−アルカンジイルを表し、このアルカンジイルは４回までメチルで置換されていてもよく、ここで、（ａ）２個の炭素原子が、互いに１，２−、１，３−もしくは１，４−の関係で架橋され、これらの間に存在する任意の炭素原子を含めて（Ｃ３〜Ｃ６）−シクロアルキル環もしくはフェニル環を形成し得るか、または（ｂ）互いに隣接していない３つまでのＣＨ２基が−Ｏ−で置き換えられ得、
Ｑ２は、ヒドロキシル、アミノまたはモノ−（Ｃ１〜Ｃ４）−アルキルアミノを表し、
Ｌ２は、直鎖（Ｃ２〜Ｃ１２）−アルカンジイルを表し、このアルカンジイルは４回までメチルで置換されていてもよく、ここで、（ａ）２個の炭素原子が、互いに１，２−、１，３−もしくは１，４−の関係で架橋され、これらの間に存在する任意の炭素原子を含めて（Ｃ３〜Ｃ６）−シクロアルキル環もしくはフェニル環を形成し得るか、または（ｂ）互いに隣接していない３つまでのＣＨ２基が−Ｏ−で置き換えられ得、
Ｒ２は、メチルまたはヒドロキシルを表し、
Ｒ３は、水素またはメチルを表し、
Ｒ４は、イソプロピル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、フェニル、ベンジル、４−ヒドロキシベンジル、４−ヒドロキシ−３−ニトロベンジル、１−フェニルエチル、ジフェニルメチル、１Ｈ−イミダゾール−４−イルメチルもしくは１Ｈ−インドール−３−イルメチルを表すか、
または
Ｒ３とＲ４が、両者が結合している炭素原子と一緒になって、
式
【００１８】
【化４】
2013533228.tif 000005
の２−フェニルシクロプロパン−１，１−ジイル基を形成しており、式中の＃は、分子のその他の部分に対する結合点を表し、
Ｎ−Ｏ基を含有している環Ａは、式
【００１９】
【化５】
2013533228.tif 000006
の単環式または二環式の必要に応じて置換されている複素環を表し、式中、
＊＊は、カルボニル基に対する結合点を表し、
Ｒ５およびＲ６は各々、水素、ヒドロキシル、（Ｃ１〜Ｃ４）−アルコキシまたはベンジルオキシを表し、
Ｒ７は、水素、フッ素、塩素、シアノ、メチルまたはトリフルオロメチルを表す）
の化合物、また、その塩および溶媒和物ならびに該塩の溶媒和物を提供する。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
本発明の化合物は、式（Ｉ）の化合物、その塩および溶媒和物、ならびに該塩の溶媒和物、以下において特定する式のものであって式（Ｉ）に包含される化合物、その塩および溶媒和物ならびに該塩の溶媒和物、また、以下において作業実施例として特定するものであって式（Ｉ）に包含される化合物、その塩および溶媒和物ならびに該塩の溶媒和物である（以下において特定するものであって式（Ｉ）に包含される化合物が既に塩、溶媒和物および該塩の溶媒和物でない範囲で）。
【００２１】
その構造によっては、本発明の化合物は、異なる立体異性体形態で、すなわち、立体配置異性体あるいは適切な場合は、立体配座異性体（エナンチオマーおよび／またはジアステレオマー（アトロプ異性体の場合のものを含む））の形態で存在し得る。したがって、本発明は、エナンチオマーおよびジアステレオマーならびにそのそれぞれの混合物を包含する。立体異性体的に均一な構成要素は、かかるエナンチオマーおよび／またはジアステレオマーの混合物から既知の様式で単離することができる；この目的で、クロマトグラフィー法、より詳しくは、アキラルまたはキラル相でのＨＰＬＣクロマトグラフィーを使用することが好ましい。
【００２２】
本発明の化合物が互変異性体形態で存在し得る場合、本発明は、該互変異性体形態のすべてを包含する。
【００２３】
本発明の状況において好ましい塩は、本発明の化合物の生理学的に許容され得る塩である。また、それ自体は医薬用途に適していないが、それでも例えば本発明の化合物の単離または精製に使用され得る塩も包含する。
【００２４】
本発明の化合物の生理学的に許容され得る塩には、鉱酸、カルボン酸およびスルホン酸の酸付加塩が包含され、例は、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、トルエンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、乳酸、酒石酸、リンゴ酸、クエン酸、フマル酸、マレイン酸および安息香酸の塩である。
【００２５】
また、本発明の化合物の生理学的に許容され得る塩には、慣用的な塩基の塩も包含され、例えば、一例として好ましくは、アルカリ金属塩（例えば、ナトリウム塩およびカリウム塩）、アルカリ土類金属塩（例えば、カルシウム塩およびマグネシウム塩）、ならびにアンモニアまたは１〜１６個のＣ原子を有する有機アミンから誘導されるアンモニウム塩、例えば、一例として好ましくは、エチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、エチルジイソプロピルアミン、モノエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、ジシクロヘキシルアミン、ジメチルアミノエタノール、プロカイン、ジベンジルアミン、Ｎ−メチルピペリジン、Ｎ−メチルモルホリン、アルギニン、リシンおよび１，２−エチレンジアミンも包含される。
【００２６】
溶媒和物は、本発明の状況において、本発明の化合物が、溶媒分子との配位によって固体状態または液体状態の複合体を形成している形態のものである。水和物は、配位が水と行われている溶媒和物の具体的な一形態である。本発明の状況において好ましい溶媒和物は水和物である。
【００２７】
また、さらに、本発明は、本発明の化合物のプロドラッグも包含する。用語「プロドラッグ」は、本明細書中では、それ自体は生物学的に活性であっても不活性であってもよいが、体内に存在している間に本発明の化合物に変換される（例えば、代謝または加水分解によって）化合物であると特定する。
【００２８】
本発明の状況において、置換基の定義は、特に指定していない限り、以下のとおりである。
【００２９】
本発明の状況において、（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキルおよび（Ｃ１〜Ｃ４）−アルキルは、それぞれ、１〜６個および１〜４個の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖のアルキル原子団を表す。１〜４個の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖のアルキル原子団がより好ましい。より好ましい一例として、以下のもの：メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、２−ペンチル、３−ペンチル、ネオペンチル、ｎ−ヘキシル、２−ヘキシルおよび３−ヘキシルが挙げられ得る。
【００３０】
本発明の状況において、（Ｃ１〜Ｃ１２）−アルカンジイル、（Ｃ１〜Ｃ６）−アルカンジイル、（Ｃ２〜Ｃ１２）−アルカンジイルおよび（Ｃ２〜Ｃ６）−アルカンジイルは、それぞれ、１〜１２個、１〜６個、２〜１２個および２〜６個の炭素原子を有する直鎖α，ω−二価アルキル原子団を表す。より好ましい一例として、以下のもの：メチレン、エタン−１，２−ジイル（１，２−エチレン）、プロパン−１，３−ジイル（１，３−プロピレン）、ブタン−１，４−ジイル（１，４−ブチレン）、ペンタン−１，５−ジイル（１，５−ペンチレン）、ヘキサン−１，６−ジイル（１，６−ヘキシレン）、ヘプタン−１，７−ジイル（１，７−ヘキシレン）、オクタン−１，８−ジイル（１，８−オクチレン）、ノナン−１，９−ジイル（１，９−ノニレン）、デカン−１，１０−ジイル（１，１０−デシレン）、ウンデカン−１，１１−ジイル（１，１１−ウンデシレン）およびドデカン−１，１２−ジイル（１，１２−ドデシレン）が挙げられ得る。
【００３１】
本発明の状況において、（Ｃ３〜Ｃ６）−シクロアルキルは、３〜６個の炭素原子を有する単環式の飽和シクロアルキル基を表す。より好ましい一例として、以下のもの：シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルおよびシクロヘキシルが挙げられ得る。
【００３２】
本発明の状況において、（Ｃ１〜Ｃ４）−アルコキシは、１〜４個の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖のアルコキシ原子団を表す。より好ましい一例として、以下のもの：メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、イソプロポキシ、ｎ−ブトキシ、イソブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシおよびｔｅｒｔ−ブトキシが挙げられ得る。
【００３３】
本発明の状況において、（Ｃ１〜Ｃ４）−アルコキシカルボニルは、カルボニル基［−Ｃ（＝Ｏ）−］を介して結合される１〜４個の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖のアルコキシ原子団を表す。より好ましい一例として、以下のもの：メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、ｎ−プロポキシカルボニル、イソプロポキシカルボニル、ｎ−ブトキシカルボニルおよびｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルが挙げられ得る。
【００３４】
本発明の状況において、モノ−（Ｃ１〜Ｃ４）−アルキルアミノは、１〜４個の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖のアルキル置換基を有するアミノ基を表す。より好ましい一例として、以下のもの：メチルアミノ、エチルアミノ、ｎ−プロピルアミノ、イソプロピルアミノ、ｎ−ブチルアミノおよびｔｅｒｔ−ブチルアミノが挙げられ得る。
【００３５】
本発明の状況において、多重に存在する原子団はすべて、互いに独立して定義される。本発明の化合物の原子団が置換型である場合、該原子団は、特に指定していない限り、１回以上置換されていてもよい。１つまたは２つの同一もしくは異なる置換基による置換が好ましい。特に好ましいのは１つの置換基による置換である。
【００３６】
本発明の状況において、
Ｒ１が、水素、（Ｃ１〜Ｃ４）−アルキルまたは式Ｑ１−Ｌ１−＊もしくはＱ２−Ｌ２−＊の基を表し、ここで、
＊は、窒素原子に対する結合点を表し、
Ｑ１は、ヒドロキシカルボニルまたは（Ｃ１〜Ｃ４）−アルコキシカルボニルを表し、
Ｌ１は、直鎖（Ｃ１〜Ｃ１２）−アルカンジイルを表し、ここで、（ａ）２個の炭素原子が、互いに１，３−もしくは１，４−の関係で架橋され、これらの間に存在する１個もしくは２個の炭素原子を含めてフェニル環を形成し得るか、または（ｂ）互いに隣接していない３つまでのＣＨ２基が−Ｏ−で置き換えられ得、
Ｑ２は、ヒドロキシル、アミノまたはメチルアミノを表し、
Ｌ２は、直鎖（Ｃ２〜Ｃ１２）−アルカンジイルを表し、このアルカンジイルは、１個もしくは２個のメチルで置換されていてもよく、このアルカンジイル中の互いに隣接していない３つまでのＣＨ２基が−Ｏ−で置き換えられていてもよく、
Ｒ２が、メチルまたはヒドロキシルを表し、
Ｒ３が、水素を表し、
Ｒ４が、ベンジル、４−ヒドロキシベンジル、１−フェニルエチルもしくは１Ｈ−インドール−３−イルメチルを表すか、
または
Ｒ３とＲ４が、両者が結合している炭素原子と一緒になって、式
【００３７】
【化６】
2013533228.tif 000007
の２−フェニルシクロプロパン−１，１−ジイル基を形成しており、式中の＃は、分子のその他の部分に対する結合点を表し、
Ｎ−Ｏ基を含有している環Ａが、式
【００３８】
【化７】
2013533228.tif 000008
の単環式または二環式の必要に応じて置換されている複素環を表し、式中、
＊＊は、カルボニル基に対する結合点を表し、
Ｒ５は、水素、ヒドロキシルまたはベンジルオキシを表す、
式（Ｉ）の化合物、また、その塩および溶媒和物ならびに該塩の溶媒和物がより好ましい。
【００３９】
本発明の状況において、
Ｒ１が、水素、メチルまたは式Ｑ１−Ｌ１−＊もしくはＱ２−Ｌ２−＊の基を表し、ここで、
＊は、窒素原子に対する結合点を表し、
Ｑ１は、ヒドロキシカルボニル、メトキシカルボニルまたはエトキシカルボニルを表し、
Ｌ１は、直鎖（Ｃ１〜Ｃ６）−アルカンジイルを表し、このアルカンジイル中の２個の炭素原子が、互いに１，４−の関係で架橋され、これらの間に存在する２個の炭素原子を含めてフェニル環を形成し得、
Ｑ２は、ヒドロキシルまたはアミノを表し、
Ｌ２は、直鎖（Ｃ２〜Ｃ６）−アルカンジイルを表し、
Ｒ２が、メチルを表し、
Ｒ３が、水素を表し、
Ｒ４が、ベンジル、１−フェニルエチルもしくは１Ｈ−インドール−３−イルメチルを表すか、
または
Ｒ３とＲ４が、両者が結合している炭素原子と一緒になって、式
【００４０】
【化８】
2013533228.tif 000009
の（１Ｓ，２Ｒ）−２−フェニルシクロプロパン−１，１−ジイル基を形成しており、式中、
＃１は、隣接している窒素原子に対する結合点を表し、
＃２は、カルボニル基に対する結合点を表し、
Ｎ−Ｏ基を含有している環Ａが、式
【００４１】
【化９】
2013533228.tif 000010
の単環式または二環式の必要に応じて置換されている複素環を表し、式中、
＊＊は、カルボニル基に対する結合点を表し、
Ｒ５は、水素、ヒドロキシルまたはベンジルオキシを表す、
式（Ｉ）の化合物、また、その塩および溶媒和物ならびに該塩の溶媒和物が特により好ましい。
【００４２】
本発明の状況において、特に重要であるのは、式（Ｉ−Ａ）
【００４３】
【化１０】
2013533228.tif 000011
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４および環Ａは上記に規定した意味を有し、原子団Ｒ３とＲ４を有するＣＸ炭素原子は、図示したＳ配置を有する）
の化合物、また、その塩および溶媒和物ならびに該塩の溶媒和物である。
【００４４】
示した原子団のそれぞれの組合せとは独立して、原子団のそれぞれの組合せまたは好ましい組合せで示した具体的な原子団の定義は、他の組合せの原子団の定義でも置き換えられる。
【００４５】
上記の好ましい範囲の２つ以上の組合せが特に非常により好ましい。
【００４６】
さらに、本発明は、式（ＩＩ）の化合物
【００４７】
【化１１】
2013533228.tif 000012
（式中、Ｒ２は、上記に示した意味を有し、
ＰＧは、例えば、（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルまたはベンジルオキシカルボニルなどのアミノ保護基を表す）
を、不活性溶媒中で、（ＩＩ）のカルボキシル官能基の活性化を伴って、
［Ａ］まず、式（ＩＩＩ）の化合物
【００４８】
【化１２】
2013533228.tif 000013
もしくはその塩とカップリングさせて式（ＩＶ）の化合物
【００４９】
【化１３】
2013533228.tif 000014
（式中、Ｒ２およびＰＧは上記に示した意味を有する）
を得、次いで、この化合物を、不活性溶媒中で、カルボキシル官能基の活性化を伴って、式（Ｖ）
【００５０】
【化１４】
2013533228.tif 000015
（式中、Ｒ３、Ｒ４および環Ａは上記に示した意味を有する）
の化合物もしくはこの化合物の塩とカップリングさせて式（ＶＩ）
【００５１】
【化１５】
2013533228.tif 000016
（式中、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、環ＡおよびＰＧは上記に示した意味を有する）
の化合物を得るか、または
［Ｂ］式（ＶＩＩ）
【００５２】
【化１６】
2013533228.tif 000017
（式中、Ｒ３、Ｒ４および環Ａは上記に示した意味を有する）
の化合物もしくはこの化合物の塩とカップリングさせて、同様に式（ＶＩ）
【００５３】
【化１７】
2013533228.tif 000018
（式中、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、環ＡおよびＰＧは上記に示した意味を有したものである）
の化合物を得、
それぞれで得られる式（ＶＩ）の化合物を、次いで、慣用的なペプチド化学の方法によって脱保護し、本発明による式（Ｉ−Ｂ）
【００５４】
【化１８】
2013533228.tif 000019
（式中、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４および環Ａは上記に示した意味を有する）
の化合物を得、続いて、これを、所望により、（ｉ）式（ＶＩＩＩ）
Ｒ１Ａ−Ｘ  （ＶＩＩＩ）
（式中、
Ｒ１Ａは、上記に示したＲ１の意味を有するが、水素を表すものではなく、
Ｘは、例えば、クロリド、ブロミド、ヨージド、メシラート、トリフラートもしくはトシラートなどの脱離基を表す）
の化合物を用いる塩基誘導性アルキル化によって本発明による式（Ｉ−Ｃ）
【００５５】
【化１９】
2013533228.tif 000020
（式中、Ｒ１Ａ、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４および環Ａは上記に示した意味を有する）
の化合物に変換するか、
または（ｉｉ）式（ＩＸ）
【００５６】
【化２０】
2013533228.tif 000021
（式中、
Ｒ１Ｂは、上記に示したＲ１Ａの意味を有するが、該アルキル鎖長はＣＨ２単位１つ分短い）
の化合物との適当な還元剤の存在下での反応によって式（Ｉ−Ｄ）
【００５７】
【化２１】
2013533228.tif 000022
（式中、Ｒ１Ｂ、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４および環Ａは上記に示した意味を有する）
の化合物に変換し、
この様式で得られる式（Ｉ−Ｂ）、（Ｉ−Ｃ）および（Ｉ−Ｄ）の化合物を、必要に応じて、そのエナンチオマーおよび／またはジアステレオマーに分離すること、および／または適切な（ｉ）溶媒および／または（ｉｉ）塩基もしくは酸を用いてその溶媒和物、塩および／または該塩の溶媒和物に変換すること
を特徴とする、本発明による式（Ｉ）の化合物を調製するためのプロセスを提供する。
【００５８】
上記カップリング反応（それぞれのアミンとカルボン酸成分からのアミドの形成）は、一般的に、慣用的なペプチド化学の方法によって行われる［例えば、Ｍ．Ｂｏｄａｎｓｚｋｙ，Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｂｅｒｌｉｎ，１９９３；Ｍ．ＢｏｄａｎｓｚｋｙおよびＡ．Ｂｏｄａｎｓｚｋｙ，Ｔｈｅ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｂｅｒｌｉｎ，１９８４；Ｈ．−Ｄ．ＪａｋｕｂｋｅおよびＨ．Ｊｅｓｃｈｋｅｉｔ，Ａｍｉｎｏｓａｅｕｒｅｎ，Ｐｅｐｔｉｄｅ，Ｐｒｏｔｅｉｎｅ，Ｖｅｒｌａｇ  Ｃｈｅｍｉｅ，Ｗｅｉｎｈｅｉｍ，１９８２を参照のこと］。
【００５９】
カップリング反応（ＩＩ）＋（ＩＩＩ）→（ＩＶ）、（ＩＶ）＋（Ｖ）→（ＶＩ）および（ＩＩ）＋（ＶＩＩ）→（ＶＩ）のための不活性溶媒は、例えば、エーテル（ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、１，２−ジメトキシエタンもしくはビス−（２−メトキシエチル）エーテルなど）、炭化水素（ベンゼン、トルエン、キシレン、ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、シクロヘキサンもしくは鉱油留分など）、ハロゲン化炭化水素（ジクロロメタン、トリクロロメタン、四塩化炭素、１，２−ジクロロエタン、トリクロロエチレンもしくはクロロベンゼンなど）、または双極性非プロトン性溶媒（アセトン、メチルエチルケトン、アセトニトリル、酢酸エチル、ピリジン、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）、Ｎ，Ｎ’−ジメチルプロピレン尿素（ＤＭＰＵ）もしくはＮ−メチルピロリジノン（ＮＭＰ）など）である。また、かかる溶媒の混合物を使用することも可能である。Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドの使用がより好ましい。
【００６０】
このようなカップリング反応のための好適な活性化剤／縮合剤は、例えば、カルボジイミド（Ｎ，Ｎ’−ジエチル−、Ｎ，Ｎ’−ジプロピル−、Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピル−、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）もしくはＮ−（３−ジメチルアミノイソプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）など）、ホスゲン誘導体（Ｎ，Ｎ’−カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）もしくはクロロギ酸イソブチルなど）、１，２−オキサゾリウム化合物（２−エチル−５−フェニル−１，２−オキサゾリウム３−サルフェートもしくは２−ｔｅｒｔ−ブチル−５−メチルイソオキサゾリウムパークロレートなど）、アシルアミノ化合物（２−エトキシ−１−エトキシカルボニル−１，２−ジヒドロキノリンなど）、リン化合物（プロパンホスホン酸無水物、シアノリン酸ジエチル、ビス−（２−オキソ−３−オキサゾリジニル）ホスホリルクロリド、ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェートもしくはベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリス（ピロリジノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＰｙＢＯＰ）など）、またはウロニウム（ｕｒａｎｉｕｍ）化合物（Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート（ＴＢＴＵ）、Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）、２−（２−オキソ−１−（２Ｈ）−ピリジル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート（ＴＰＴＵ）、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）もしくはＯ−（１Ｈ−６−クロロベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート（ＴＣＴＵ）など）であり、適切な場合は、さらなる補助剤（１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）もしくはＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＨＯＳｕ）など）と組み合わされ、適当な塩基は、アルカリ金属炭酸塩（例えば、炭酸ナトリウムもしくは炭酸カリウム）、または第三級アミン塩基（トリエチルアミン、Ｎ−メチルモルホリン、Ｎ−メチルピペリジン、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、ピリジンもしくは４−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジンなど）である。
【００６１】
本発明の状況において、かかるカップリング反応に好ましく使用される活性化剤／縮合剤は、Ｎ−（３−ジメチルアミノイソプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）（１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンと組み合せて）、またはＯ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）（同様に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンと組み合せて）である。
【００６２】
カップリング反応（ＩＩ）＋（ＩＩＩ）→（ＩＶ）、（ＩＶ）＋（Ｖ）→（ＶＩ）および（ＩＩ）＋（ＶＩＩ）→（ＶＩ）は、一般的に−２０℃〜＋６０℃、好ましくは０℃〜＋４０℃の温度範囲で行われる。該反応は、大気圧で行っても、高圧下で行っても減圧下（例えば、０．５〜５バール）で行ってもよい；一般に、該反応は大気圧で行われる。
【００６３】
反応（Ｉ−Ｂ）＋（ＶＩＩＩ）→（Ｉ−Ｃ）のための好適な不活性溶媒は、例えば、エーテル（ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、１，２−ジメトキシエタンもしくはビス−（２−メトキシエチル）エーテルなど）、炭化水素（ベンゼン、トルエン、キシレン、ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、シクロヘキサンもしくは鉱油留分など）、または双極性非プロトン性溶媒（アセトン、メチルエチルケトン、アセトニトリル、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）、Ｎ，Ｎ’−ジメチルプロピレン尿素（ＤＭＰＵ）、Ｎ−メチルピロリジノン（ＮＭＰ）もしくはピリジンなど）である。また、かかる溶媒の混合物を使用することも可能である。Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドの使用が好ましい。
【００６４】
このアルキル化反応のための好適な塩基は、特に、アルカリ金属水酸化物（例えば、水酸化リチウム、水酸化ナトリウムもしくは水酸化カリウムなど）、アルカリ金属もしくはアルカリ土類金属の炭酸塩（炭酸リチウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸カルシウムもしくは炭酸セシウムなど）、または慣用的な有機アミン（トリエチルアミン、Ｎ−メチルモルホリン、Ｎ−メチルピペリジン、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、ピリジンもしくは４−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジンなど）である。炭酸カリウムまたは炭酸セシウムの使用が好ましい。適切な場合は、アルキル化触媒（例えば、臭化リチウムまたはヨウ化リチウム、ヨウ化ナトリウムまたはヨウ化カリウム、テトラ−ｎ−ブチルアンモニウムブロミドまたはテトラ−ｎ−ブチルアンモニウムヨージドまたはベンジルトリエチルアンモニウムブロミドなど）の添加が好都合である。
【００６５】
反応（Ｉ−Ｂ）＋（ＶＩＩＩ）→（Ｉ−Ｃ）は、一般的に−２０℃〜＋６０℃、好ましくは０℃〜＋４０℃の温度範囲で行われる。該反応は、大気圧で行っても、高圧下で行っても減圧下（例えば、０．５〜５バール）で行ってもよい；一般に、該反応は大気圧で行われる。
【００６６】
反応（Ｉ−Ｂ）＋（ＩＸ）→（Ｉ−Ｄ）は、還元的アミノ化において慣用のものでありかつ反応条件下で不活性な溶媒中で、適切な場合は、触媒としての酸および／または脱水剤の存在下で行われる。かかる溶媒としては、例えば、アルコール（メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノールもしくはｔｅｒｔ−ブタノールなど）、エーテル（テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、１，２−ジメトキシエタンもしくはビス−（２−メトキシ-エチル）エーテルなど）、または他の溶媒（ジクロロメタン、１，２−ジクロロエタン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドあるいは水など）が挙げられる。また、このような溶媒の混合物を使用することも可能である。好ましくは、使用される溶媒は、触媒として酢酸または希塩酸を添加した１，４−ジオキサン／水混合物である。
【００６７】
この反応のための好適な還元剤は、特に、水素化ホウ素の錯体、例えば、水素化ホウ素ナトリウム、シアノ水素化ホウ素ナトリウム、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウムまたはテトラ−ｎ−ブチルアンモニウムボロヒドリドなどである。シアノ水素化ホウ素ナトリウムの使用が好ましい。
【００６８】
反応（Ｉ−Ｂ）＋（ＩＸ）→（Ｉ−Ｄ）は、一般的に０℃〜＋１２０℃、好ましくは＋５０℃〜＋１００℃の温度範囲で行われる。該反応は、大気圧で行っても、高圧下で行っても減圧下（例えば、０．５〜５バール）で行ってもよい；一般に、該反応は大気圧で行われる。
【００６９】
また、原子団Ｒ１、Ｒ１Ａ、Ｒ１Ｂ、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ５および／またはＲ６に存在している任意の官能基（特に、アミノ、ヒドロキシルおよびカルボキシル基など）は、有用な場合または必要な場合、上記のプロセス工程中、一時的に保護された形態で存在してもよい。このような場合、かかる保護基は、ペプチド化学で知られた慣用的な方法にしたがって導入され、除去される［例えば、Ｔ．Ｗ．ＧｒｅｅｎｅおよびＰ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９９；Ｍ．ＢｏｄａｎｓｚｋｙおよびＡ．Ｂｏｄａｎｓｚｋｙ，Ｔｈｅ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｂｅｒｌｉｎ，１９８４を参照のこと］。保護された基が２つ以上存在する場合、これらは、必要に応じて、ワンポット反応で同時に再び遊離させてもよく、あるいは別々の反応工程で再び遊離させてもよい。
【００７０】
アミノ保護基として、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）、ベンジルオキシカルボニル（Ｚ）または（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル（Ｆｍｏｃ）を使用することが好ましく；ヒドロキシルまたはカルボキシル官能基には、ｔｅｒｔ−ブチルまたはベンジルを保護基として使用することが好ましい。ｔｅｒｔ−ブチルまたはｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基の除去は、典型的には、不活性溶媒（例えば、ジエチルエーテル、１，４−ジオキサン、ジクロロメタンまたは酢酸）中で、強酸（塩化水素、臭化水素またはトリフルオロ酢酸など）での処理によって達成される；また、この反応を、必要に応じて、不活性溶媒の添加なしで行ってもよい。保護基としてベンジルまたはベンジルオキシカルボニルの場合、この基は、好ましくは、適当なパラジウム触媒（例えば、パラジウム担持活性炭など）の存在下での水素化分解によって除去する。（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル基は、一般的に、第二級アミン塩基（ジエチルアミンまたはピペリジンなど）を用いて除去される。
【００７１】
式（ＩＩ）の化合物は、慣用的なペプチド化学の方法によって、例えば、まず、式（Ｘ）
【００７２】
【化２２】
2013533228.tif 000023
（式中、Ｚは、ベンジルオキシカルボニル保護基を表す）
のＮ−（ベンジルオキシカルボニル）−Ｌ−バリンを、縮合剤の補助を伴って、式（ＸＩ）
【００７３】
【化２３】
2013533228.tif 000024
（式中、Ｔは、（Ｃ１〜Ｃ４）−アルキルを表す）
の化合物またはこの化合物の塩とカップリングさせて式（ＸＩＩ）
【００７４】
【化２４】
2013533228.tif 000025
（式中、ＴおよびＺは上記に示した意味を有する）
の化合物を得、
次いで、Ｚ保護基の水素化分解的除去後、この化合物を、縮合剤の存在下で、式（ＸＩＩＩ）
【００７５】
【化２５】
2013533228.tif 000026
（式中、Ｒ２は上記に示した意味を有し、
ＰＧは、例えば、（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルまたはベンジルオキシカルボニルなどのアミノ保護基を表す）
のＮ−保護されたＮ−メチル−Ｌ−バリンまたはＮ−メチル−Ｌ−トレオニンとカップリングさせて式（ＸＩＶ）
【００７６】
【化２６】
2013533228.tif 000027
（式中、Ｒ２、ＰＧおよびＴは上記に示した意味を有する）
の化合物を得、
最後に、（ＸＩＶ）のエステル基−Ｃ（Ｏ）ＯＴを慣用的な方法によって遊離カルボン酸に変換することにより、調製され得る。
【００７７】
カップリング反応（Ｘ）＋（ＸＩ）→（ＸＩＩ）およびＺ−脱保護（ＸＩＩ）＋（ＸＩＩＩ）→（ＸＩＶ）は、方法［Ａ］および［Ｂ］のカップリング工程において上記のものと同様の反応条件下で行われる。
【００７８】
プロセス工程（ＸＩＶ）→（ＩＩ）におけるエステル基−Ｃ（Ｏ）ＯＴの加水分解は、慣用的な方法によって、エステルを不活性溶媒中にて酸または塩基で処理することにより行われ、ここで、後者の変形型では、最初に形成されたカルボン酸塩を、次に酸を添加することによって遊離カルボン酸に変換する。ｔｅｒｔ−ブチルエステルの場合、該切断は、好ましくは酸を用いて行われる。
【００７９】
ここで、化合物（ＸＩ）のアルキル原子団Ｔは、その除去条件が化合物（ＸＩＩＩ）のそれぞれの保護基ＰＧと適合するように選択される。
【００８０】
該エステル加水分解のための好適な塩基は慣用的な無機塩基である。このようなものとしては、特に、アルカリ金属もしくはアルカリ土類金属の水酸化物（例えば、水酸化リチウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウムもしくは水酸化バリウムなど）、またはアルカリ金属もしくはアルカリ土類金属の炭酸塩（炭酸ナトリウム、炭酸カリウムもしくは炭酸カルシウムなど）が挙げられる。水酸化リチウム、水酸化ナトリウムまたは水酸化カリウムがより好ましい。
【００８１】
該エステルの切断のための好適な酸は、一般に、硫酸、塩化水素／塩酸、臭化水素／臭化水素酸、リン酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸もしくはトリフルオロメタンスルホン酸またはその混合物であり、適切な場合は水の添加を伴う。ｔｅｒｔ−ブチルエステルの場合は塩化水素またはトリフルオロ酢酸、およびメチルエステルの場合は塩酸が好ましい。
【００８２】
この反応に適した不活性溶媒は、水、またはエステルの切断において慣用の有機溶媒である。このようなものとしては、好ましくは、低級アルコール（メタノール、エタノール、ｎ−プロパノールもしくはイソプロパノールなど）、エーテル（ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサンもしくは１，２−ジメトキシエタンなど）、または他の溶媒（ジクロロメタン、アセトン、メチルエチルケトン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドもしくはジメチルスルホキシドなど）が挙げられる。また、このような溶媒の混合物を使用することも可能である。塩基性エステル加水分解の場合、水と１，４−ジオキサン、テトラヒドロフラン、メタノール、エタノールおよび／またはジメチルホルムアミドとの混合物の使用が好ましい。トリフルオロ酢酸を用いた反応の場合はジクロロメタンの使用がより好ましく、塩化水素を用いた反応の場合はテトラヒドロフラン、ジエチルエーテル、１，４−ジオキサンまたは水の使用が好ましい。
【００８３】
該エステルの切断は、一般的に−２０℃〜＋１００℃、好ましくは０℃〜＋５０℃の温度範囲で行われる。
【００８４】
式（Ｖ）の化合物は、既知の方法と同様に、例えば、式（ＸＶ）
【００８５】
【化２７】
2013533228.tif 000028
（式中、Ｒ３とＲ４は上記に示した意味を有し、Ｂｏｃは、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル保護基を表す）
の保護されたアミノ酸を、カルボキシル官能基の活性化を伴って、
［Ｃ］式（ＸＶＩ）
【００８６】
【化２８】
2013533228.tif 000029
（式中、環Ａは上記に示した意味を有する）
の化合物もしくはこの化合物の塩とカップリングさせて式（ＸＶＩＩ）
【００８７】
【化２９】
2013533228.tif 000030
（式中、Ｒ３、Ｒ４、環ＡおよびＢｏｃは上記に示した意味を有する）
の化合物を得るか、
または
［Ｄ］まず、ヒドロキシルアミンもしくはその塩とカップリングさせて式（ＸＶＩＩＩ）
【００８８】
【化３０】
2013533228.tif 000031
（式中、Ｒ３、Ｒ４およびＢｏｃは上記に示した意味を有する）
の化合物を得、次いで、この化合物を塩基の存在下で式（ＸＩＸ）
【００８９】
【化３１】
2013533228.tif 000032
（式中、連結基Ａ’は、上記に規定した環Ａのその他の必要に応じて置換されている要素（Ｎ−Ｏ基以外）に対応する）
の二臭化物を用いてアルキル化し、環化により、同様に、
式（ＸＶＩＩ）
【００９０】
【化３２】
2013533228.tif 000033
（式中、Ｒ３、Ｒ４、環ＡおよびＢｏｃは上記に示した意味を有する）
の化合物を得、次いで、（ＸＶＩＩ）のＢｏｃ保護基を慣用的な様式で酸での処理によって除去すること
のいずれかにより調製され得る。
【００９１】
カップリング反応（ＸＶ）＋（ＸＶＩ）→（ＸＶＩＩ）および（ＸＶ）＋ヒドロキシルアミン→（ＸＶＩＩＩ）は、プロセス［Ａ］および［Ｂ］のカップリング工程において上記のものと同様の反応条件下で行われる。
【００９２】
プロセス工程（ＸＶＩＩＩ）＋（ＸＩＸ）→（ＸＶＩＩ）におけるシクロアルキル化に使用される塩基は、好ましくは、アルカリ金属水酸化物、例えば、水酸化リチウム、水酸化ナトリウムもしくは水酸化カリウムなど）、またはアルカリ金属もしくはアルカリ土類金属の炭酸塩（炭酸リチウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸カルシウムもしくは炭酸セシウムなど）である。
【００９３】
この反応のための好適な不活性溶媒は、特に、アルコール（メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノールもしくはｔｅｒｔ−ブタノールなど）、または双極性非プロトン性溶媒（アセトン、メチルエチルケトン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドもしくはジメチルスルホキシドなど）である。アセトンの使用が好ましい。
【００９４】
反応（ＸＶＩＩＩ）＋（ＸＩＸ）→（ＸＶＩＩ）は、一般的に＋２０℃〜＋１２０℃、好ましくは＋５０℃〜＋８０℃の温度範囲で行われる。該反応は、大気圧で行っても、高圧下で行っても減圧下（例えば、０．５〜５バール）で行ってもよい；一般に、該反応は大気圧で行われる。
【００９５】
一部では、式（ＶＩＩ）の化合物は、上記化合物（Ｖ）を化合物（ＸＸ）
【００９６】
【化３３】
2013533228.tif 000034
（式中、Ｂｏｃは、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル保護基を表す）
とカップリングさせて式（ＸＸＩ）
【００９７】
【化３４】
2013533228.tif 000035
（式中、Ｒ３、Ｒ４、環ＡおよびＢｏｃは上記に示した意味を有する）
の化合物を得、続いてＢｏｃ保護基を除去することにより得られ得る。一部では、化合物（ＸＸ）は、化合物（ＩＩＩ）から、適切な保護基を導入することにより得られ得る。
【００９８】
カップリング反応（Ｖ）＋（ＸＸ）→（ＸＸＩ）は、この場合も、プロセス［Ａ］および［Ｂ］のカップリング工程において上記のものと同様の条件下で行われる。
【００９９】
式（ＩＩＩ）、（ＶＩＩＩ）、（ＩＸ）、（Ｘ）、（ＸＩ）、（ＸＩＩＩ）、（ＸＶ）、（ＸＶＩ）および（ＸＩＸ）の化合物（適切な場合は、そのキラル形態またはジアステレオマー形態を含む）は、市販のものであるか、または文献にそのようなものとして記載されたものであるか、または当業者に自明の経路によって文献に公開された方法と同様に調製され得る。また、出発物質の調製に関する数多くの包括的教授、また文献情報を実験のセクション、出発化合物および中間体の調製に関するセクションにも示している。
【０１００】
また、適切な、異性体として純粋な出発物質が入手可能でない場合、本発明による化合物の対応するエナンチオマーおよび／またはジアステレオマーへの分離を、便宜的に早ければ化合物（Ｖ）、（ＶＩ）、（ＶＩＩ）、（ＸＶ）、（ＸＶＩ）、（ＸＶＩＩ）、（ＸＶＩＩＩ）または（ＸＸＩ）の段階で行い、次いで、該化合物をさらに、分離した形態で上記の反応工程に従って反応させるのがよい。立体異性体のかかる分離は、当業者に知られた慣用的な方法によって行われ得る。アキラルまたはキラル分離相でのクロマトグラフィープロセスの使用が好ましく；中間体が遊離カルボン酸の場合は、択一的に、キラル塩基の補助を伴ったジアステレオマーの塩の分離でもよい。
【０１０１】
本発明による化合物の調製は、以下の反応スキームによる例示的な様式で図示することができる。
【０１０２】
スキーム１
【０１０３】
【化３５】
2013533228.tif 000036
スキーム２
【０１０４】
【化３６】
2013533228.tif 000037
スキーム３
【０１０５】
【化３７】
2013533228.tif 000038
スキーム４
【０１０６】
【化３８】
2013533228.tif 000039
本発明による化合物は、有用な薬理学的特性を有し、ヒトおよび動物の障害の予防および処置に使用され得る。
【０１０７】
モノメチルアウリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）と比較すると、本発明による化合物は、かなり強い細胞傷害活性を有し、さらに、既知のＭＭＡＦエステル誘導体（ＭＭＡＦ−ＯＭｅなど）と比較すると、血漿中で有意に高い安定性を有する。したがって、この特性プロフィールに基づき、本発明による化合物は一般に、ある特定の度合までヒトおよび哺乳動物の過剰増殖性疾患処置に適している。該化合物は、一方で、細胞増殖および細胞分裂を抑止、阻止、低減または低下させ得、他方で、アポトーシスを増大させ得るものである。
【０１０８】
本発明による化合物が使用され得る処置の対象の過剰増殖性障害としては、特に、がんおよび腫瘍疾患の群が挙げられる。本発明の状況において、これは、特に、限定されないが以下の障害：乳癌および乳腺腫瘍（腺管型および小葉型、またインサイチュ）、気道の腫瘍（小細胞癌および非小細胞癌、気管支癌）、脳腫瘍（例えば、脳幹のもの、および視床下部のもの、星状細胞腫、髄芽腫、脳室上衣腫ならびに神経外胚葉性腫瘍および松果体部の腫瘍）、消化器官（食道、胃、胆嚢、小腸、大腸、直腸）の腫瘍、肝臓腫瘍（例えば、肝細胞癌、胆管細胞癌および肝細胞癌と胆管細胞癌の混合型）、頭頚部領域（喉頭、下咽頭、鼻咽頭、中咽頭、唇および口腔）の腫瘍、皮膚の腫瘍（扁平上皮癌、カポジ肉腫、悪性黒色腫、メルケル細胞皮膚がんおよび非黒色腫皮膚がん）、軟質組織の腫瘍（例えば、軟質組織肉腫、骨肉腫、悪性線維性組織球腫、リンパ肉腫および横紋筋肉腫）、目の腫瘍（例えば、眼内黒色腫および網膜芽）、内分泌腺および外分泌腺（例えば、甲状腺および副甲状腺、膵臓ならびに唾液腺）の腫瘍、尿路の腫瘍（膀胱、陰茎、腎臓、腎盂および尿管の腫瘍）ならびに生殖器官の腫瘍（女性の子宮内膜、子宮頸部、卵巣、膣、外陰部および子宮の癌ならびに男性の前立腺および精巣の癌）を意味すると理解されたい。また、このような障害としては、充実性形態の、および循環血液細胞としての増殖性血液障害、例えば、リンパ腫、白血病ならびに骨髄増殖性疾患、例えば、急性骨髄性、急性リンパ芽球性、慢性リンパ性、慢性骨髄性およびヘアリーセル白血病、また、ＡＩＤＳ相関性リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫および中枢神経系のリンパ腫も挙げられる。
【０１０９】
これらの充分に記載されたヒトの疾患は、他の哺乳動物においても同等の病因で発生することがあり得、その場合も本発明の化合物で処置され得る。
【０１１０】
本発明の状況において、用語「処置」または「処置する」は慣用的な意味で用いており、疾患または健康異常に対処する、低減させる、減衰させる、または緩和する目的、およびこの疾患（例えば、がん性障害など）で害される生活状態を改善する目的で、患者を世話する、面倒を見る、および看護することを意味する。
【０１１１】
さらに、本発明は、障害、特に上記障害の処置および／または予防のための本発明による化合物の使用を提供する。
【０１１２】
さらに、本発明は、障害、特に上記障害の処置および／または予防のための医薬の調製のための本発明による化合物の使用を提供する。
【０１１３】
さらに、本発明は、疾患、特に前述の疾患の処置および／または予防のための方法における本発明による化合物の使用を提供する。
【０１１４】
さらに、本発明は、有効量の少なくとも１種類の本発明による化合物を用いた、障害、特に上記障害の処置および／または予防のための方法を提供する。
【０１１５】
本発明による化合物は、それだけで使用してもよく、必要に応じて１種類以上の他の薬理学的に活性な物質と組み合わせて使用してもよい（この組み合わせが、不要で許容され得ない副作用をもたらすものでない限り）。したがって、本発明は、さらに、特に、前述の障害の処置および／または予防のための、本発明による化合物の少なくとも１種類と１種類以上のさらなる薬物とを含む医薬を提供する。
【０１１６】
例えば、本発明の化合物は、がん性障害の処置のための既知の抗過剰増殖性物質、細胞増殖抑制性物質または細胞傷害性物質と組み合わされ得る。一例として挙げられ得る、組み合わせるのに好適な薬物は以下のもの：
アルデスロイキン、アレンドロン酸、アルファフェロン（ａｌｆａｆｅｒｏｎｅ）、アリトレノイン、アロプリノール、アロプリム（ａｌｏｐｒｉｍ）、アロキシ、アルトレタミン、アミノグルテチミド、アミホスチン、アムルビシン、アムサクリン、アナストロゾール、アンズメト（ａｎｚｍｅｔ）、アラネスプ、アルグラビン、三酸化ヒ素、アロマシン、５−アザシチジン、アザチオプリン、ＢＣＧまたはタイスＢＣＧ、ベスタチン、酢酸ベタメタゾン、ベタメタゾンリン酸ナトリウム、ベキサロテン、硫酸ブレオマイシン、ブロクスウリジン、ボルテゾミブ、ブスルファン、カルシトニン、キャンパス、カペシタビン、カルボプラチン、カソデックス、セフェゾン（ｃｅｆｅｓｏｎｅ）、セルモロイキン、セルビジン、クロラムブシル、シスプラチン、クラドリビン、クロドロン酸、シクロホスファミド、シタラビン、ダカルバジン、ダクチノマイシン、ダウノキソーム、デカドロン、デカドロンリン酸、デレストロジェン、デニロイキンジフチトックス、デポメドロール、デスロレリン、デクスラゾキサン、ジエチルスチルベストロール、ジフルカン、ドセタキセル、ドキシフルリジン、ドキソルビシン、ドロナビノール、ＤＷ−１６６ＨＣ、エリガード、エリテック、エレンス（ｅｌｌｅｎｃｅ）、エメンド（ｅｍｅｎｄ）、エピルビシン、エポエチン−α、エポジェン、エプタプラチン、エルガミソール、エストレース、エストラジオール、リン酸エストラムスチンナトリウム、エチニルエストラジオール、エチヨル、エチドロン酸、エトプロホス（Ｅｔｏｐｏｐｈｏｓ）、エトポシド、ファドロゾール、ファルストン（ｆａｒｓｔｏｎｅ）、フィルグラスチム、フィナステリド、フィルグラスチム（ｆｌｉｇｒａｓｔｉｍ）、フロクスウリジン、フルコナゾール、フルダラビン、５−フルオロデオキシウリジンモノホスフェート、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、フルオキシメステロン、フルタミド、フォルメスタン、フォステアビン（ｆｏｓｔｅａｂｉｎｅ）、フォテムスチン、フルベストラント、ガンマガード、ゲムシタビン、ゲムツズマブ、グリベック、グリアデル、ゴセレリン、塩酸グラニセトロン、ヒストレリン、ハイカムチン、ヒドロコルトン、エリトロ−ヒドロキシノニルアデニン、ヒドロキシ尿素、イブリツモマブチウキセタン、イダルビシン、イホスファミド、インターフェロン−α、インターフェロン−α−２、インターフェロン−α−２α、インターフェロン−α−２β、インターフェロン−α−ｎ１、インターフェロン−α−ｎ３、インターフェロン−β、インターフェロン−γ−１α、インターロイキン−２、イントロンＡ、イレッサ、イリノテカン、カイトリル、硫酸化レンチナン、レトロゾール、ロイコボリン、ロイプロリド、酢酸ロイプロリド、レバミソール、レボホリン酸カルシウム塩、レボチロイド、レボキシル、ロムスチン、ロニダミン、マリノール、メクロレタミン、メコバラミン、酢酸メドロキシプロゲステロン、酢酸メゲストロール、メルファラン、メネスト、６−メルカプトプリン、メスナ、メトトレキサート、メトビクス（Ｍｅｔｖｉｘ）、ミルテホシン、ミノサイクリン、マイトマイシンＣ、ミトタン、ミトキサントロン、モドレナル、ミオセット、ネダプラチン、ニューラスタ、ニューメガ、ニューポジェン、ニルタミド、ノルバデックス、ＮＳＣ−６３１５７０、ＯＣＴ−４３、オクトレオチド、塩酸オンダンセトロン、オラプレド、オキサリプラチン、パクリタキセル、ペジアプレド、ペガスパルガーゼ、ペガシス、ペントスタチン、ピシバニール、塩酸ピロカルピン、ピラルビシン、プリカマイシン、ポルフィマーナトリウム、プレドニムスチン、プレドニゾロン、プレドニゾン、プレマリン、プロカルバジン、プロクリット、ラルチトレキセド、レビフ、レニウム−１８６エチドロネート、リツキシマブ、ロフェロン−Ａ、ロムルチド、サラジェン、サンドスタチン、サルグラモスチム、セムスチン、シゾフィラン、ソブゾキサン、ソル・メドロール、ストレプトゾシン、塩化ストロンチウム−８９、シンチロイド、タモキシフェン、タムスロシン、タソネルミン、タストラクトン、タキソテール、テセロイキン、テモゾロミド、テニポシド、プロピオン酸テストステロン、テストレド、チオグアニン、チオテパ、チロトロピン、チルドロン酸、トポテカン、トレミフェン、トシツモマブ、トラスツズマブ、トレオスルファン（ｔｅｏｓｕｌｆａｎ）、トレチノイン、トレキサル（Ｔｒｅｘａｌｌ）、トリメチルメラミン、トリメトレキサート、酢酸トリプトレリン、パモ酸トリプトレリン、ＵＦＴ、ウリジン、バルルビシン、ベスナリノン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビノレルビン、ビルリジン、ジネカルド、ジノスタチンスチマラマー、ゾフラン；ＡＢＩ−００７、アコルビフェン、アクティミューン、アフィニタク（Ａｆｆｉｎｉｔａｋ）、アミノプテリン、アルゾキシフェン、アソプリスニル、アタメスタン、アトラセンタン、アバスチン、ＢＡＹ  ４３−９００６（ソラフェニブ）、ＣＣＩ−７７９、ＣＤＣ−５０１、セレブレックス、セツキシマブ、クリスナトール、酢酸シプロテロン、デシタビン、ＤＮ−１０１、ドキソルビシン−ＭＴＣ、ｄＳＬＩＭ、デュタステリド、エドテカリン、エフロルニチン、エクサテカン、フェンレチニド、ヒスタミン二塩酸塩、ヒストレリンハイドロゲル埋入物、ホルミウム−１６６  ＤＯＴＭＰ、イバンドロン酸、インターフェロンγ、イントロンＰＥＧ、イクサベピロン、キーホールリンペットヘモシアニン、Ｌ−６５１５８２、ランレオチド、ラソフォキシフェン、リブラ、ロナファルニブ、ミプロキシフェン、ミノドロネート、ＭＳ−２０９、リポソームＭＴＰ−ＰＥ、ＭＸ−６、ナファレリン、ネモルビシン、ネオバスタット、ノラトレキセド、オブリメルセン、オンコ−ＴＣＳ、オシデム、ポリグルタメート化パクリタキセル、パミドロン酸二ナトリウム、ＰＮ−４０１、ＱＳ−２１、クアゼパム、Ｒ−１５４９、ラロキシフェン、ランピルナーゼ、１３−シス−レチノイン（ｒｅｔｉｃ）酸、サトラプラチン、セオカルシトール、Ｔ−１３８０６７、タルセバ、タキソプレキシン、チモシン−α−１、チアゾフリン、チピファルニブ、チラパザミン、ＴＬＫ−２８６、トレミフェン、トランスＭＩＤ−１０７Ｒ、バルスポダール、バプレオチド、バタラニブ、ベルテポルフィン、ビンフルニン、Ｚ−１００、ゾレドロン酸およびこれらの組合せである。
【０１１７】
好ましい実施形態では、本発明の化合物は抗過剰増殖剤と組み合わされ得、抗過剰増殖剤は、一例として、以下のもの（この列挙に確定されない）：
アミノグルテチミド、Ｌ−アスパラギナーゼ、アザチオプリン、５−アザシチジン、ブレオマイシン、ブスルファン、カルボプラチン、カルムスチン、クロラムブシル、シスプラチン、コラスパーゼ（ｃｏｌａｓｐａｓｅ）、シクロホスファミド、シタラビン、ダカルバジン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ジエチルスチルベストロール、２’，２’−ジフルオロデオキシシチジン、ドセタキセル、ドキソルビシン（アドリアマイシン）、エピルビシン、エポチロンおよびその誘導体、エリトロ−ヒドロキシノニルアデニン、エチニルエストラジオール、エトポシド、リン酸フルダラビン、５−フルオロデオキシウリジン、５−フルオロデオキシウリジンモノホスフェート、５−フルオロウラシル、フルオキシメステロン、フルタミド、ヘキサメチルメラミン、ヒドロキシ尿素、カプロン酸ヒドロキシプロゲステロン、イダルビシン、イホスファミド、インターフェロン、イリノテカン、ロイコボリン、ロムスチン、メクロレタミン、酢酸メドロキシプロゲステロン、酢酸メゲストロール、メルファラン、６−メルカプトプリン、メスナ、メトトレキサート、マイトマイシンＣ、ミトタン、ミトキサントロン、パクリタキセル、ペントスタチン、Ｎ−ホスホノアセチルＬ−アスパルテート（ＰＡＬＡ）、プリカマイシン、プレドニゾロン、プレドニゾン、プロカルバジン、ラロキシフェン、セムスチン、ストレプトゾシン、タモキシフェン、テニポシド、プロピオン酸テストステロン、チオグアニン、チオテパ、トポテカン、トリメチルメラミン、ウリジン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシンおよびビノレルビンであり得る。
【０１１８】
また、本発明の化合物は、非常に有望な様式で生物学的治療剤、例えば、抗体（例えば、アバスチン、リツキサン、エルビタックス、ハーセプチン）と組み合わされ得る。また、本発明の化合物により、血管新生に対して指向される治療剤、例えば、アバスチン、アキシチニブ、レセンチン（ｒｅｃｅｎｔｉｎ）、レゴラフェニブ、ソラフェニブまたはスニチニブなどと組み合せてプラスの効果が達成され得る。プロテアソームの阻害剤およびｍＴＯＲの阻害剤との組合せ、また、抗ホルモン剤およびステロイド代謝酵素阻害剤との組合せも同様に、その有利な副作用プロフィールのため特に好適である。
【０１１９】
一般的に、本発明の化合物と、細胞増殖抑制作用または細胞傷害作用を有する他の剤との組合せには、以下の目的：
・腫瘍の成長の遅らせること、その大きさの縮小させること、またはさらには、個々の薬物での処置と比べたときのそれを完全に除去することにおける活性の改善；
・単独療法よりも少ない投薬量での化学療法剤の使用の可能性；
・個々の投与と比べて副作用が少ないより耐容性の治療の可能性；
・より広範な腫瘍疾患の処置の可能性；
・治療に対するより高い応答速度の達成；
・今日の標準的な治療と比べて患者の生存期間の長期化
を追求するものであり得る。
【０１２０】
さらに、本発明による化合物はまた、放射線療法および／または外科的介入と組み合わせて使用してもよい。
【０１２１】
さらに、本発明は、少なくとも１種類の本発明による化合物を、慣用的に１種類以上の不活性で無毒性の医薬に適した賦形剤と一緒に含む医薬、および前述の目的でのその使用を提供する。
【０１２２】
本発明の化合物は、全身および／または局所に作用するものであり得る。該化合物は、この目的に好適な様式で、例えば、経口、非経口、経肺、経鼻、舌下、舌経由、口腔内、経直腸、経真皮、経皮、経結膜、経耳などで、または埋入物として、もしくはステントで投与され得る。
【０１２３】
本発明による化合物は、このような投与経路のための適当な投与形態で投与され得る。
【０１２４】
先行技術に従って機能を果たし、本発明の化合物を急速に、および／または改良された様式で放出し、かつ結晶性および／または非晶質および／または溶解形態の本発明の化合物を内包する投与形態、例えば、錠剤（非コートもしくはコート錠剤、例えば、胃液に抵抗性であるか、もしくは遅延様式で溶解するか、もしくは不溶性であり、本発明の化合物の放出を制御するコーティングを有するもの）、フィルム製剤／オブラート（ｏｂｌａｔｅ）もしくは錠剤（これは、口腔内で急速に崩壊する）、フィルム製剤／凍結乾燥製剤、カプセル剤（例えば、硬質もしくは軟質ゼラチンカプセル剤）、フィルムコート錠剤、顆粒剤、ペレット剤、散剤、エマルジョン剤、懸濁剤、エーロゾル剤または液剤などが経口投与に適している。
【０１２５】
非経口投与は、吸収工程の迂回を伴って（例えば、静脈内、動脈内、心臓内、脊髄内もしくは腰椎内（ｉｎｔｒａｌｕｍｂａｌｌｙ））、または吸収の包含を伴って（例えば、筋肉内、皮下、皮内、経皮もしくは腹腔内）行われ得る。非経口投与に適した投与形態としては、液剤、懸濁剤、エマルジョン剤、凍結乾燥製剤または滅菌粉末剤の形態の注射製剤および注入製剤が挙げられる。
【０１２６】
他の投与経路には、例えば、吸入医薬形態（例えば、粉末剤吸入器、ネブライザ）、点鼻薬、液剤もしくはスプレー剤、錠剤、フィルム製剤／オブラートもしくはカプセル剤（舌経由、舌下もしくは口腔内投与用）、坐剤、耳用もしくは目用の調製物、経膣カプセル剤、水性懸濁剤（ローション剤、振って使用する混合物）、親油性懸濁剤、軟膏、クリーム剤、経皮治療系（例えば、貼付剤）、乳剤、ペースト剤、フォーム剤、散布粉末剤、埋入物またはステントが適している。
【０１２７】
経口および非経口投与、特に、経口および静脈内投与が好ましい。
【０１２８】
本発明による化合物は、記載の投与形態に変換させることができる。これは、それ自体は既知の様式で、不活性で無毒性の医薬に適した賦形剤と混合することにより行われ得る。このような賦形剤としては、とりわけ、担体物質（例えば、微結晶性セルロース、ラクトース、マンニトール）、溶媒（例えば、液状ポリエチレングリコール）、乳化剤および分散化剤もしくは湿潤剤（例えば、ドデシル硫酸ナトリウム、ポリオキシソルビタンオレエート）、結合剤（例えば、ポリビニルピロリドン）、合成および天然ポリマー（例えば、アルブミン）、安定剤（例えば、酸化防止剤（例えば、アスコルビン酸など））、着色剤（例えば、無機顔料（例えば、酸化鉄など））ならびに矯味剤および／または矯臭剤が挙げられる。
【０１２９】
一般に、非経口投与の場合、有効な結果を得るのに約０．００１〜１ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは約０．０１〜０．５ｍｇ／ｋｇ体重の量を投与するのが好都合であることがわかった。経口投与の場合、投薬量は、約０．０１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは約０．０１〜２０ｍｇ／ｋｇ体重、特に非常に好ましくは０．１〜１０ｍｇ／ｋｇ体重である。
【０１３０】
そうはいうものの、特に、体重、投与経路、活性化合物に対する個々の挙動、製剤の性質および投与が行われる時点または期間に応じて、記載の量からの逸脱が必要な場合があり得る。したがって、一部の場合では、前述の最小量より少なくてもマネージメントに充分であり得るが、他の場合では、記載の上限を超えなければならない。比較的多くの量が投与される場合、この量を、その日中で数回の個々の用量に分配することが推奨され得る。
【０１３１】
以下の作業実施例は本発明を例示する。本発明は該実施例に限定されない。
【０１３２】
以下の試験および実施例におけるパーセンテージの数字は、特に記載のない限り、重量基準のパーセンテージであり；部は重量部である。液体／液体溶液の溶媒の比率、希釈率および濃度のデータは、各場合において容量基準である。
【実施例】
【０１３３】
Ａ．実施例
略語および頭字語：
【０１３４】
【数１】
2013533228.tif 000040
【０１３５】
【数２】
2013533228.tif 000041
ＨＰＬＣおよびＬＣ−ＭＳ法：
方法１（ＬＣ−ＭＳ）：
機器：Ｗａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＳＱＤ  ＵＰＬＣ  Ｓｙｓｔｅｍ；カラム：Ｗａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ  ＨＳＳ  Ｔ３  １．８μ  ５０ｍｍ×１ｍｍ；移動相Ａ：１ｌの水＋０．２５ｍｌの９９％強度のギ酸，移動相Ｂ：１ｌのアセトニトリル＋０．２５ｍｌの９９％強度のギ酸；勾配：０．０分  ９０％Ａ→１．２分  ５％Ａ→２．０分  ５％Ａ；流速：０．４０ｍｌ／分；オーブン：５０℃；ＵＶ検出：２１０〜４００ｎｍ。
【０１３６】
方法２（ＬＣ−ＭＳ）：
機器：Ｗａｔｅｒｓ  ＵＰＬＣ  Ａｃｑｕｉｔｙを備えたＭｉｃｒｏｍａｓｓ  ＱｕａｔｔｒｏＰｒｅｍｉｅｒ；カラム：Ｔｈｅｒｍｏ  Ｈｙｐｅｒｓｉｌ  ＧＯＬＤ  １．９μ  ５０ｍｍ×１ｍｍ；移動相Ａ：１ｌの水＋０．５ｍｌの５０％強度のギ酸，移動相Ｂ：１ｌのアセトニトリル＋０．５ｍｌの５０％強度のギ酸；勾配：０．０分  ９０％Ａ→０．１分  ９０％Ａ→１．５分  １０％Ａ→２．２分  １０％Ａ；流速：０．３３ｍｌ／分；オーブン：５０℃；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【０１３７】
方法３（ＬＣ−ＭＳ）：
機器：ＨＰＬＣ  Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｓｅｒｉｅ  １１００を備えたＭｉｃｒｏｍａｓｓ  Ｑｕａｔｔｒｏ  Ｍｉｃｒｏ  ＭＳ；カラム：Ｔｈｅｒｍｏ  Ｈｙｐｅｒｓｉｌ  ＧＯＬＤ  ３μ  ２０ｍｍ×４ｍｍ；移動相Ａ：１ｌの水＋０．５ｍｌの５０％強度のギ酸，移動相Ｂ：１ｌのアセトニトリル＋０．５ｍｌの５０％強度のギ酸；勾配：０．０分  １００％Ａ→３．０分  １０％Ａ→４．０分  １０％Ａ→４．０１分  １００％Ａ（流速２．５ｍｌ／分）→５．００分  １００％Ａ；オーブン：５０℃；流速：２ｍｌ／分；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【０１３８】
方法４（ＬＣ−ＭＳ）：
ＭＳ機器の型：Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ  ＺＱ；ＨＰＬＣ機器の型：ＨＰ  １１００シリーズ；ＵＶ  ＤＡＤ；カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｇｅｍｉｎｉ  ３μ  ３０ｍｍ×３．００ｍｍ；移動相Ａ：１ｌの水＋０．５ｍｌの５０％強度のギ酸，移動相Ｂ：１ｌのアセトニトリル＋０．５ｍｌの５０％強度のギ酸；勾配：０．０分  ９０％Ａ→２．５分  ３０％Ａ→３．０分  ５％Ａ→４．５分  ５％Ａ；流速：０．０分  １ｍｌ／分→２．５分／３．０分／４．５分  ２ｍｌ／分；オーブン：５０℃；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【０１３９】
方法５（ＨＰＬＣ）：
機器：ＨＰ  １０９０  Ｓｅｒｉｅ  ＩＩ；カラム：Ｍｅｒｃｋ  Ｃｈｒｏｍｏｌｉｔｈ  ＳｐｅｅｄＲＯＤ  ＲＰ−１８ｅ，５０ｍｍ×４．６ｍｍ；プレカラム：Ｍｅｒｃｋ  Ｃｈｒｏｍｏｌｉｔｈ  Ｇｕａｒｄ  Ｃａｒｔｒｉｄｇｅ  Ｋｉｔ  ＲＰ−１８ｅ，５ｍｍ×４．６ｍｍ；インジェクション容量：５μｌ；移動相Ａ：７０％ＨＣｌＯ４含有水（４ｍｌ／リットル），移動相Ｂ：アセトニトリル；勾配：０．００分  ２０％Ｂ→０．５０分  ２０％Ｂ→３．００分  ９０％Ｂ→３．５０分  ９０％Ｂ→３．５１分  ２０％Ｂ→４．００分  ２０％Ｂ；流速：５ｍｌ／分；カラム温度：４０℃。
【０１４０】
方法６（ＨＰＬＣ）：
機器：ＤＡＤ  ９９６を備えたＷａｔｅｒｓ  ２６９５；カラム：Ｍｅｒｃｋ  Ｃｈｒｏｍｏｌｉｔｈ  ＳｐｅｅｄＲＯＤ  ＲＰ−１８ｅ，５０ｍｍ×４．６ｍｍ；プレカラム：Ｍｅｒｃｋ  Ｃｈｒｏｍｏｌｉｔｈ  Ｇｕａｒｄ  Ｃａｒｔｒｉｄｇｅ  Ｋｉｔ  ＲＰ−１８ｅ，５ｍｍ×４．６ｍｍ；移動相Ａ：７０％ＨＣｌＯ４含有水（４ｍｌ／リットル），移動相Ｂ：アセトニトリル；勾配：０．００分  ５％Ｂ→０．５０分  ５％Ｂ→３．００分  ９５％Ｂ→４．００分  ９５％Ｂ；流速：５ｍｌ／分。
【０１４１】
方法７（ＬＣ−ＭＳ）：
ＭＳ機器の型：Ｗａｔｅｒｓ  ＺＱ；ＨＰＬＣ機器の型：Ａｇｉｌｅｎｔ  １１００シリーズ；ＵＶ  ＤＡＤ；カラム：Ｔｈｅｒｍｏ  Ｈｙｐｅｒｓｉｌ  ＧＯＬＤ  ３μ  ２０ｍｍ×４ｍｍ；移動相Ａ：１ｌの水＋０．５ｍｌの５０％強度のギ酸，移動相Ｂ：１ｌのアセトニトリル＋０．５ｍｌの５０％強度のギ酸；勾配：０．０分  １００％Ａ→３．０分  １０％Ａ→４．０分  １０％Ａ→４．１分  １００％Ａ（流速２．５ｍｌ／分）；オーブン：５５℃；流速：２ｍｌ／分；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【０１４２】
方法８（ＬＣ−ＭＳ）：
ＭＳ機器の型：Ｗａｔｅｒｓ  ＺＱ；ＨＰＬＣ機器の型：Ａｇｉｌｅｎｔ  １１００シリーズ；ＵＶ  ＤＡＤ；カラム：Ｔｈｅｒｍｏ  Ｈｙｐｅｒｓｉｌ  ＧＯＬＤ  ３μ  ２０ｍｍ×４ｍｍ；移動相Ａ：１ｌの水＋０．５ｍｌの５０％強度のギ酸，移動相Ｂ：１ｌのアセトニトリル＋０．５ｍｌの５０％強度のギ酸；勾配：０．０分  １００％Ａ→２．０分  ６０％Ａ→２．３分  ４０％Ａ→３．０分  ２０％Ａ→４．０分  １０％Ａ→４．２分  １００％Ａ（流速２．５ｍｌ／分）；オーブン：５５℃；流速：２ｍｌ／分；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【０１４３】
方法９（ＬＣ−ＭＳ）：
機器：Ｗａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＳＱＤ  ＵＰＬＣ  Ｓｙｓｔｅｍ；カラム：Ｗａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ  ＨＳＳ  Ｔ３  １．８μ  ５０ｍｍ×１ｍｍ；移動相Ａ：１ｌの水＋０．２５ｍｌの９９％強度のギ酸，移動相Ｂ：１ｌのアセトニトリル＋０．２５ｍｌの９９％強度のギ酸；勾配：０．０分  ９５％Ａ→６．０分  ５％Ａ→７．５分  ５％Ａ；オーブン：５０℃；流速：０．３５ｍｌ／分；ＵＶ検出：２１０−４００ｎｍ。
【０１４４】
以下において調製を明示的に記載していない反応体または試薬については、すべて、一般的に入手可能な供給源から市販品としてそれらを得た。同様に以下において調製を明示的に記載しておらず、また市販されていないか、一般的に入手可能でない供給源から得た反応体または試薬については、すべて、その調製が記載された公開文献を参照されたい。
【０１４５】
出発物質および中間体：
出発物質１
（２Ｒ，３Ｒ）−３−［（２Ｓ）−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピロリジン−２−イル］−３−メトキシ−２−メチルプロパン酸（Ｂｏｃ−ドリプラン（ｄｏｌａｐｒｏｉｎｅ））
【０１４６】
【化３９】
2013533228.tif 000042
標題化合物は、文献の手順に従い、種々の経路によって調製され得る。例えば、Ｐｅｔｔｉｔら，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  １９９６，７１９；Ｓｈｉｏｉｒｉら，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．１９９１，３２，９３１；Ｓｈｉｏｉｒｉら，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  １９９３，４９，１９１３；Ｋｏｇａら，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．１９９１，３２，２３９５；Ｖｉｄａｌら，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  ２００４，６０，９７１５；Ｐｏｎｃｅｔら，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  １９９４，５０，５３４５を参照のこと。ここでは、該化合物を、遊離酸（図示のとおり）として、または対応するジシクロヘキシルアミン塩の形態のいずれかで調製した。
【０１４７】
出発物質２
（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−５−メチル−４−（メチルアミノ）ヘプタン酸ｔｅｒｔ−ブチル塩酸塩（ドライソロイシン−ＯｔＢｕ×ＨＣｌ）
【０１４８】
【化４０】
2013533228.tif 000043
標題化合物は、文献の手順に従い、種々の経路によって調製され得る。例えば、Ｐｅｔｔｉｔら，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９９４，５９，１７９６；Ｋｏｇａら，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．１９９１，３２，２３９５；Ｓｈｉｏｉｒｉら，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．１９９１，３２，９３１；Ｓｈｉｏｉｒｉら，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  １９９３，４９，１９１３を参照のこと。
【０１４９】
出発物質３
Ｎα−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ−ヒドロキシ−Ｌ−フェニルアラニンアミド
【０１５０】
【化４１】
2013533228.tif 000044
標題化合物を文献の手順に従って調製した（Ａ．Ｒｉｔｔｅｒら，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９９４，５９，４６０２）。
収量：７５０ｍｇ（理論値の７５％）
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝１．６７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２８１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１５１】
出発物質４
１，２−オキサゾリジン塩酸塩
【０１５２】
【化４２】
2013533228.tif 000045
標題化合物は、文献の手順に従って調製され得る。例えば、Ｈ．Ｋｉｎｇ，Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１９４２，４３２を参照のこと；また、該化合物は市販品としても入手可能である。
【０１５３】
出発物質５
１，２−オキサジナン塩酸塩
【０１５４】
【化４３】
2013533228.tif 000046
標題化合物は、文献の手順に従って調製され得る。例えば、Ｈ．Ｋｉｎｇ、Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１９４２，４３２を参照のこと。
【０１５５】
出発物質６
２−オキサ−３−アザビシクロ［２．２．２］オクタ−５−エン
【０１５６】
【化４４】
2013533228.tif 000047
標題化合物は、Ｂｏｃ保護形態で、文献の手順に従って調製され得る（例えば、Ｃ．Ｊｏｈｎｓｏｎら，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．１９９８，３９，２０５９を参照のこと）；脱保護は、トリフルオロ酢酸での処理、続いて中和によって慣用的な様式で行われる。
収量：１４９ｍｇ（理論値の８９％）。
【０１５７】
出発物質７
１，２−オキサゾリジン−４−オール
【０１５８】
【化４５】
2013533228.tif 000048
標題化合物は、文献の手順に従って調製され得る。例えば、Ｎ．Ａｍｌａｉｋｙ，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  １９８２，５，４２６を参照のこと。
【０１５９】
出発物質８
［（１Ｓ，２Ｒ）−１−（ヒドロキシカルバモイル）−２−フェニルシクロプロピル］カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル
【０１６０】
【化４６】
2013533228.tif 000049
標題化合物を、文献の手順に従い（Ａ．Ｒｉｔｔｅｒら，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９９４，５９，４６０２）、市販の（１Ｓ，２Ｒ）−１−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−２−フェニルシクロプロパンカルボン酸から調製した（Ｃ．Ｃａｔｉｖｉｅｌａら，Ｃｈｉｒａｌｉｔｙ  １９９９，１１，５８３）。
収量：３３９ｍｇ（理論値の５９％）
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２９３（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１６１】
中間体１
（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−［｛Ｎ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル｝（メチル）アミノ］−３−メトキシ−５−メチルヘプタン酸ｔｅｒｔ−ブチル
【０１６２】
【化４７】
2013533228.tif 000050
４２５ｍｇ（１．７ｍｍｏｌ）のＮ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリンを５０ｍｌのＤＭＦに溶解させ、５００ｍｇ（１．７ｍｍｏｌ）の（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−５−メチル−４−（メチルアミノ）ヘプタン酸ｔｅｒｔ−ブチル塩酸塩（出発物質２）、３５６ｍｇ（１．９ｍｍｏｌ）の１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩、２８５ｍｇ（１．９ｍｍｏｌ）の１−ヒドロキシ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール水和物および６５５ｍｇ（５．１ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンを連続して添加した。混合物を室温で２０時間撹拌した。さらに１４２ｍｇ（０．５ｍｍｏｌ）のＮ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリン、１１９ｍｇ（０．６ｍｍｏｌ）の１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩、９５ｍｇ（０．６ｍｍｏｌ）の１−ヒドロキシ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール水和物および２１８ｍｇ（１．７ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンを添加し、混合物を超音波で９０分間処理した。次いで、混合物を半飽和塩化アンモニウム水溶液と酢酸エチルの混合物に注入した。有機相を分取し、飽和重炭酸ナトリウム溶液と飽和塩化ナトリウム溶液で連続的に洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣を分取用ＨＰＬＣによって精製した。これにより、３２９ｍｇ（理論値の４０％）の標題化合物を無色の油状物として得た。
ＨＰＬＣ（方法５）：Ｒｔ＝２．５分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．４５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４９３（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１６３】
中間体２
（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−５−メチル−４−［メチル（Ｌ−バリル）アミノ］ヘプタン酸ｔｅｒｔ−ブチル
【０１６４】
【化４８】
2013533228.tif 000051
５００ｍｇ（１ｍｍｏｌ）の（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−［｛Ｎ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル｝（メチル）アミノ］−３−メトキシ−５−メチルヘプタン酸ｔｅｒｔ−ブチル（中間体１）を５０ｍｌのメタノールに溶解させ、１００ｍｇの１０％パラジウム担持活性炭の添加後、室温にて大気圧下で１時間水素化した。次いで、この触媒を濾別し、溶媒を減圧下除去した。これにより、３７０ｍｇ（ｑｕａｎｔ．）の標題化合物をほぼ無色の油状物として得た。
ＨＰＬＣ（方法５）：Ｒｔ＝１．５９分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．７４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３５９（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１６５】
中間体３
Ｎ−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−ｔｅｒｔ−ブトキシ−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド
【０１６６】
【化４９】
2013533228.tif 000052
３９６ｍｇ（１．１ｍｍｏｌ）のＮ−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンを２０ｍｌのＤＭＦに溶解させ、３６５ｍｇ（１ｍｍｏｌ）の（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−５−メチル−４−［メチル（Ｌ−バリル）アミノ］ヘプタン酸ｔｅｒｔ−ブチル（中間体２）、２３４ｍｇ（１．２ｍｍｏｌ）の１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩および１８７ｍｇ（１．２ｍｍｏｌ）の１−ヒドロキシ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール水和物を連続して添加した。混合物を室温で一晩撹拌した。次いで、反応液を半飽和塩化アンモニウム水溶液と酢酸エチルの混合物に注入した。有機相を分取し、飽和重炭酸ナトリウム溶液と飽和塩化ナトリウム溶液で連続的に洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣を、さらに精製せずに次の工程で直接使用した。
収量：６６０ｍｇ（理論値の６８％）
ＨＰＬＣ（方法５）：Ｒｔ＝３．０分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．６１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６９４（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１６７】
中間体４
Ｎ−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−１−カルボキシ−２−メトキシ−４−メチルヘキサン−３−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド
【０１６８】
【化５０】
2013533228.tif 000053
６５０ｍｇ（０．９４ｍｍｏｌ）のＮ−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−ｔｅｒｔ−ブトキシ−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド（中間体３）を５ｍｌのジクロロメタンに溶解させ、５ｍｌのトリフルオロ酢酸を添加し、混合物を室温で一晩撹拌した。次いで混合物を減圧濃縮し、残留した残渣を分取用ＨＰＬＣによって精製した。これにより、４３０ｍｇ（理論値の７２％）の標題化合物を無色の泡状物として得た。
ＨＰＬＣ（方法５）：Ｒｔ＝２．４分；
ＬＣ−ＭＳ（方法２）：Ｒｔ＝１．５１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６３８（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１６９】
中間体５
［（２Ｓ）−１−（１，２−オキサジナン−２−イル）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル］カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル
【０１７０】
【化５１】
2013533228.tif 000054
５００ｍｇ（１．９ｍｍｏｌ）のＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−フェニルアラニンを１０ｍｌのＤＭＦに溶解させ、４６６ｍｇ（３．８ｍｍｏｌ）の１，２−オキサジナン塩酸塩（出発物質５）、４３３ｍｇ（２．３ｍｍｏｌ）の１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩、３８２ｍｇ（２．８ｍｍｏｌ）の１−ヒドロキシ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール水和物および７３１ｍｇ（５．７ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンを連続して添加した。混合物を室温で一晩撹拌した。次いで、反応液を半飽和塩化アンモニウム水溶液と酢酸エチルの混合物に注入した。有機相を分取し、飽和重炭酸ナトリウム溶液と飽和塩化ナトリウム溶液で連続的に洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。これにより、６２０ｍｇ（理論値の９８％）の標題化合物を得た。
ＨＰＬＣ（方法５）：Ｒｔ＝１．８分；
ＬＣ−ＭＳ（方法２）：Ｒｔ＝１．６２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２３５（Ｍ−Ｃ４Ｈ８−ＣＯ２＋Ｈ）＋。
【０１７１】
中間体６
（２Ｓ）−２−アミノ−１−（１，２−オキサジナン−２−イル）−３−フェニルプロパン−１−オン，トリフルオロ酢酸塩
【０１７２】
【化５２】
2013533228.tif 000055
６２０ｍｇ（１．８５ｍｍｏｌ）の［（２Ｓ）−１−（１，２−オキサジナン−２−イル）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル］カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（中間体５）を５ｍｌのジクロロメタンに溶解させ、１０ｍｌのトリフルオロ酢酸を添加し、混合物を室温で３０分間撹拌した。次いで混合物を減圧濃縮し、残留した残渣を水／アセトニトリルで凍結乾燥させた。この様式で、７５０ｍｇの標題化合物を無色の泡状物として得た。
ＨＰＬＣ（方法５）：Ｒｔ＝０．４５分；
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝１．０９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２３５（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１７３】
中間体７
（２Ｒ，３Ｒ）−３−メトキシ−２−メチル−Ｎ−［（２Ｓ）−１−（１，２−オキサジナン−２−イル）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル］−３−［（２Ｓ）−ピロリジン−２−イル］プロパンアミド，トリフルオロ酢酸塩
【０１７４】
【化５３】
2013533228.tif 000056
まず、（２Ｒ，３Ｒ）−３−［（２Ｓ）−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピロリジン−２−イル］−３−メトキシ−２−メチルプロパン酸（出発物質１）を５０ｍｇ（０．１１ｍｍｏｌ）のそのジシクロヘキシルアミン塩から、該塩を酢酸エチルに溶解させ、重硫酸カリウム水溶液で抽出することにより放出させた。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣を１０ｍｌのＤＭＦに溶解させ、４９ｍｇ（０．１１ｍｍｏｌ）の（２Ｓ）−２−アミノ−１−（１，２−オキサジナン−２−イル）−３−フェニルプロパン−１−オン，トリフルオロ酢酸塩（中間体６）、６１ｍｇ（０．１６ｍｍｏｌ）のＯ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）および５６μｌ（０．１６ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンを連続して添加した。混合物を室温で１時間撹拌した。次いで反応液を濃縮し、残渣を分取用ＨＰＬＣによって精製した。これにより、４４ｍｇ（理論値の８２％）のＢｏｃ保護中間体ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−｛［（２Ｓ）−１−（１，２−オキサジナン−２−イル）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル］アミノ｝−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−カルボキシレートを得た。
ＨＰＬＣ（方法５）：Ｒｔ＝１．９分；
ＬＣ−ＭＳ（方法２）：Ｒｔ＝１．２７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５０４（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１７５】
４４ｍｇ（０．０９ｍｍｏｌ）のこの中間体を３ｍｌのジクロロメタンに溶解させ、１ｍｌのトリフルオロ酢酸を添加し、混合物を室温で３０分間撹拌した。次いで混合物を減圧濃縮し、残留した残渣を水／アセトニトリルで凍結乾燥させた。これにより、３９ｍｇ（理論値の８６％）の標題化合物を無色の泡状物として得た。
ＨＰＬＣ（方法５）：Ｒｔ＝０．９４分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．６５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４０４（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１７６】
中間体８
（２Ｓ）−２−アミノ−１−（２−オキサ−３−アザビシクロ［２．２．２］オクタ−５−エン−３−イル）−３−フェニルプロパン−１−オン，トリフルオロ酢酸塩
【０１７７】
【化５４】
2013533228.tif 000057
４１ｍｇ（０．３７ｍｍｏｌ）の２，５−ジオキソピロリジン−１−イルＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−フェニルアラニネートを１０ｍｌのＤＭＦに溶解させ、１４９ｍｇ（０．４１ｍｍｏｌ）の２−オキサ−３−アザビシクロ［２．２．２］オクタ−５−エン（出発物質６）と７２μｌ（０．４１ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンを添加した。混合物を室温で１時間撹拌した。次いで、溶媒を減圧下除去し、残渣を酢酸エチルに溶解させ、５％強度のクエン酸溶液、次いで５％強度の重炭酸ナトリウム溶液で抽出した。有機相を濃縮し、残渣をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによって精製した（１０：１のトルエン／エタノールの移動相を使用）。適切な画分を合わせ、溶媒を減圧下除去した。高減圧下での残渣の乾燥により、６９ｍｇ（理論値の４７％）のＢｏｃ保護中間体［（２Ｓ）−１−（２−オキサ−３−アザビシクロ［２．２．２］オクタ−５−エン−３−イル）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル］カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルをジアステレオマー混合物として得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３５９（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１７８】
６４ｍｇ（０．１８ｍｍｏｌ）のこの中間体を１０ｍｌのジクロロメタンに溶解させ、１ｍｌのトリフルオロ酢酸を添加し、混合物を室温で３０分間撹拌した。次いで混合物を減圧濃縮し、残留した残渣を水／ジオキサンで凍結乾燥させた。この様式で、６６ｍｇ（ｑｕａｎｔ．）の標題化合物を無色の泡状物として得た。
ＨＰＬＣ（方法６）：Ｒｔ＝１．４５分；
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝１．１２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２５９（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１７９】
中間体９
（２Ｒ，３Ｒ）−３−メトキシ−２−メチル−Ｎ−［（２Ｓ）−１−（２−オキサ−３−アザビシクロ［２．２．２］オクタ−５−エン−３−イル）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル］−３−［（２Ｓ）−ピロリジン−２−イル］プロパンアミド，トリフルオロ酢酸塩
【０１８０】
【化５５】
2013533228.tif 000058
まず、（２Ｒ，３Ｒ）−３−［（２Ｓ）−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピロリジン−２−イル］−３−メトキシ−２−メチル-プロパン酸（出発物質１）を、８３ｍｇ（０．１８ｍｍｏｌ）のそのジシクロヘキシルアミン塩から、該塩を酢酸エチルに溶解させ、重硫酸カリウム水溶液で抽出することにより放出させた。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣を１０ｍｌのＤＭＦに溶解させ、６６ｍｇ（０．１８ｍｍｏｌ）の（２Ｓ）−２−アミノ−１−（２−オキサ−３−アザビシクロ［２．２．２］オクタ−５−エン−３−イル）−３−フェニルプロパン−１−オン，トリフルオロ酢酸塩（中間体８）、１０１ｍｇ（０．２６６ｍｍｏｌ）のＯ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）および９３μｌ（０．５３ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンを連続して添加した。混合物を室温で３０分間撹拌した。次いで反応液を濃縮し、残渣を分取用ＨＰＬＣによって精製した。これにより、５２ｍｇ（理論値の５６％）のＢｏｃ保護中間体ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−｛［（２Ｓ）−１−（２−オキサ−３−アザビシクロ［２．２．２］-オクタ−５−エン−３−イル）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル］アミノ｝−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−カルボキシレートを得た。
ＨＰＬＣ（方法６）：Ｒｔ＝２．１３分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．１３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５２８（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１８１】
５２ｍｇ（０．１ｍｍｏｌ）のこの中間体を１０ｍｌのジクロロメタンに溶解させ、１ｍｌのトリフルオロ酢酸を添加し、混合物を室温で２０分間撹拌した。次いで混合物を減圧濃縮し、残留した残渣を２０ｍｌのジエチルエーテルとともに磨砕した。１０分後、混合物を濾別し、濾過残渣を高減圧下で乾燥させた。この様式で、３９ｍｇ（理論値の７２％）の標題化合物を得た。
ＨＰＬＣ（方法６）：Ｒｔ＝１．６２分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．６８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４２８（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１８２】
中間体１０
（２Ｓ）−２−アミノ−１−（１，４−ジヒドロ−３Ｈ−２，３−ベンゾオキサジン−３−イル）−３−フェニルプロパン−１−オン，トリフルオロ酢酸塩
【０１８３】
【化５６】
2013533228.tif 000059
まず、７５ｍｇ（０．２７ｍｍｏｌ）のＮα−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ−ヒドロキシ−Ｌ−フェニルアラニンアミド（出発物質３）を出発物質とし、Ｂｏｃ保護中間体［（２Ｓ）−１−（１，４−ジヒドロ−３Ｈ−２，３−ベンゾオキサジン−３−イル）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル］カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルを、１，２−ビス（ブロモメチル）ベンゼンとの反応により、文献の手順（Ｈ．Ｋｉｎｇ，Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１９４２，４３２参照）と同様にして調製した。
収量：３６ｍｇ（理論値の３５％）
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝２．４９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３８３（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１８４】
３６ｍｇ（０．０９４ｍｍｏｌ）のこの中間体を５ｍｌのジクロロメタンに溶解させ、０．５ｍｌのトリフルオロ酢酸を添加し、混合物を室温で２０分間撹拌した。次いで混合物を減圧濃縮し、残留した残渣を分取用ＨＰＬＣによって精製した。適切な画分を合わせ、約１５ｍｌの容量まで減圧濃縮し、次いで凍結乾燥させた。これにより、１６ｍｇ（理論値の４３％）の標題化合物を無色の泡状物として得た。
ＨＰＬＣ（方法６）：Ｒｔ＝１．７分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．６９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２８３（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１８５】
中間体１１
（２Ｒ，３Ｒ）−Ｎ−［（２Ｓ）−１−（１，４−ジヒドロ−３Ｈ−２，３−ベンゾオキサジン−３−イル）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル］−３−メトキシ−２−メチル−３−［（２Ｓ）−ピロリジン−２−イル］プロパンアミド，トリフルオロ酢酸塩
【０１８６】
【化５７】
2013533228.tif 000060
最初に、（２Ｒ，３Ｒ）−３−［（２Ｓ）−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピロリジン−２−イル］−３−メトキシ−２−メチルプロパン酸（出発物質１）を、１５ｍｇ（０．０３１ｍｍｏｌ）のそのジシクロヘキシルアミン塩から、該塩を酢酸エチルに溶解させ、重硫酸カリウム水溶液で抽出することにより放出させた。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣を１０ｍｌのＤＭＦに溶解させ、１６ｍｇ（０．０３１ｍｍｏｌ）の（２Ｓ）−２−アミノ−１−（１，４−ジヒドロ−３Ｈ−２，３−ベンゾオキサジン−３−イル）−３−フェニルプロパン−１−オン，トリフルオロ酢酸塩（中間体１０）、１８ｍｇ（０．０４７ｍｍｏｌ）のＯ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）および１６μｌ（０．５３ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンを連続して添加した。混合物を室温で１６時間撹拌した。次いで反応液を濃縮し、残渣を分取用ＨＰＬＣによって精製した。これにより、１４ｍｇ（理論値の８１％）のＢｏｃ保護中間体ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−３−｛［（２Ｓ）−１−（１，４−ジヒドロ−３Ｈ−２，３−ベンゾオキサジン−３−イル）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル］アミノ｝−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−カルボキシレートを得た。
ＨＰＬＣ（方法６）：Ｒｔ＝２．３５分；
ＬＣ−ＭＳ（方法２）：Ｒｔ＝１．３９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５５２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１８７】
１４ｍｇ（０．０２５ｍｍｏｌ）のこの中間体を５ｍｌのジクロロメタンに溶解させ、１ｍｌのトリフルオロ酢酸を添加し、混合物を室温で２０分間撹拌した。次いで混合物を減圧濃縮し、残留した残渣をジオキサンで凍結乾燥させた。この様式で、１４ｍｇ（理論値の９８％）の標題化合物を得た。
ＨＰＬＣ（方法６）：Ｒｔ＝１．８３分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．７８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４５２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１８８】
中間体１２
（２Ｓ）−２−アミノ−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）−１−（１，２−オキサジナン−２−イル）プロパン−１−オン，トリフルオロ酢酸塩
【０１８９】
【化５８】
2013533228.tif 000061
１３０ｍｇ（０．３２４ｍｍｏｌ）の２，５−ジオキソピロリジン−１−イルＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−トリプトファネートを１５ｍｌのＤＭＦに溶解させ、５０ｍｇ（０．４０５ｍｍｏｌ）の１，２−オキサジナン塩酸塩（出発物質５）と１４０μｌのＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンを添加した。混合物を室温で２４時間撹拌した。次いで、同量の１，２−オキサジナン塩酸塩とＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンを添加した。さらに４時間の室温での撹拌後、反応液を減圧濃縮し、残渣をジクロロメタンに溶解させ、まず重炭酸ナトリウム溶液で、次いで水で抽出した。有機相を濃縮し、残渣をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによって精製した（４：１のジクロロメタン／酢酸エチルの移動相を使用）。適切な画分を濃縮し、残渣を高減圧下で乾燥させた。これにより、６３ｍｇ（理論値の５２％）のＢｏｃ保護中間体［（２Ｓ）−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）−１−（１，２−オキサジナン−２−イル）−１−オキソプロパン−２−イル］カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルを得た。
ＨＰＬＣ（方法６）：Ｒｔ＝２．０５分；
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝２．１６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３７４（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１９０】
６３ｍｇ（０．１６７ｍｍｏｌ）のこの中間体を１５ｍｌのジクロロメタンに溶解させ、２ｍｌのトリフルオロ酢酸を添加し、混合物を超音波浴中で４０分間処理した。次いで反応液を減圧濃縮し、残渣をジオキサン／水で凍結乾燥させた。この様式で、６５ｍｇ（理論値の９０％）の標題化合物を得た。
ＨＰＬＣ（方法６）：Ｒｔ＝１．５３分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．６１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２７４（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１９１】
中間体１３
（２Ｒ，３Ｒ）−Ｎ−［（２Ｓ）−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）−１−（１，２−オキサジナン−２−イル）−１−オキソプロパン−２−イル］−３−メトキシ−２−メチル−３−［（２Ｓ）−ピロリジン−２−イル］プロパンアミド，トリフルオロ酢酸塩
【０１９２】
【化５９】
2013533228.tif 000062
標題化合物を、中間体７の合成と同様にして、２工程で、出発物質１のジシクロヘキシルアミン塩と（２Ｓ）−２−アミノ−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）−１−（１，２−オキサジナン−２−イル）プロパン−１−オン，トリフルオロ酢酸塩（中間体１２）から調製した。
２工程での収量：６２ｍｇ（理論値の６７％）
ＨＰＬＣ（方法６）：Ｒｔ＝１．６５分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４４３（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１９３】
中間体１４
（２Ｓ）−２−アミノ−１−（１，２−オキサゾリジン−２−イル）−３−フェニルプロパン−１−オン，トリフルオロ酢酸塩
【０１９４】
【化６０】
2013533228.tif 000063
標題化合物を、中間体５および６の合成と同様にして、２工程で、Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−フェニルアラニンと１，２−オキサゾリジン塩酸塩（出発物質４）から調製した。
２工程での収量：１６５０ｍｇ（理論値の９７％）
ＨＰＬＣ（方法５）：Ｒｔ＝０．２９分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．４１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２２１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１９５】
中間体１５
（２Ｒ，３Ｒ）−３−メトキシ−２−メチル−Ｎ−［（２Ｓ）−１−（１，２−オキサゾリジン−２−イル）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル］−３−［（２Ｓ）−ピロリジン−２−イル］プロパンアミド，トリフルオロ酢酸塩
【０１９６】
【化６１】
2013533228.tif 000064
標題化合物を、中間体７の合成と同様にして、２工程で、出発物質１のジシクロヘキシルアミン塩と（２Ｓ）−２−アミノ−１−（１，２−オキサゾリジン−２−イル）−３−フェニルプロパン−１−オン，トリフルオロ酢酸塩（中間体１４）から調製した。
２工程での収量：１１０ｍｇ（理論値の９７％）
ＨＰＬＣ（方法５）：Ｒｔ＝０．５２分；
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝１．１５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３９０（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１９７】
中間体１６
（２Ｓ，３Ｓ）−２−アミノ−１−（１，２−オキサジナン−２−イル）−３−フェニルブタン−１−オン，トリフルオロ酢酸塩
【０１９８】
【化６２】
2013533228.tif 000065
標題化合物を、中間体５および６の合成と同様にして、２工程で、（βＳ）−Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−β−メチル−Ｌ−フェニルアラニンと１，２−オキサジナン塩酸塩（出発物質５）から調製した。
２工程での収量：６５２ｍｇ（理論値の６３％）
ＨＰＬＣ（方法５）：Ｒｔ＝０．５３分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．２５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２４９（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１９９】
中間体１７
（２Ｒ，３Ｒ）−３−メトキシ−２−メチル−Ｎ−［（２Ｓ，３Ｓ）−１−（１，２−オキサジナン−２−イル）−１−オキソ−３−フェニルブタン−２−イル］−３−［（２Ｓ）−ピロリジン−２−イル］プロパンアミド，トリフルオロ酢酸塩
【０２００】
【化６３】
2013533228.tif 000066
標題化合物を、中間体７の合成と同様にして、２工程で、出発物質１のジシクロヘキシルアミン塩と（２Ｓ，３Ｓ）−２−アミノ−１−（１，２−オキサジナン−２−イル）−３−フェニルブタン−１−オン，トリフルオロ酢酸塩（中間体１６）から調製した。
２工程での収量：１０１ｍｇ（理論値の９０％）
ＨＰＬＣ（方法５）：Ｒｔ＝１．０７分；
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝１．３３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４１８（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２０１】
中間体１８
（２Ｓ）−２−アミノ−３−（４−ヒドロキシ−３−ニトロフェニル）−１−（１，２−オキサジナン−２−イル）プロパン−１−オン，トリフルオロ酢酸塩
【０２０２】
【化６４】
2013533228.tif 000067
標題化合物を、中間体５および６の合成と同様にして、２工程で、Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−３−ニトロ−Ｌ−チロシンと１，２−オキサジナン塩酸塩（出発物質５）から調製した。
２工程での収量：３７４ｍｇ（理論値の４７％）
ＨＰＬＣ（方法５）：Ｒｔ＝０．４分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２９６（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２０３】
中間体１９
（２Ｒ，３Ｒ）−Ｎ−［（２Ｓ）−３−（４−ヒドロキシ−３−ニトロフェニル）−１−（１，２−オキサジナン−２−イル）−１−オキソプロパン−２−イル］−３−メトキシ−２−メチル−３−［（２Ｓ）−ピロリジン−２−イル］プロパンアミド，トリフルオロ酢酸塩
【０２０４】
【化６５】
2013533228.tif 000068
標題化合物を、中間体７の合成と同様にして、２工程で、出発物質１のジシクロヘキシルアミン塩と（２Ｓ）−２−アミノ−３−（４−ヒドロキシ−３−ニトロフェニル）−１−（１，２−オキサジナン−２−イル）プロパン−１−オン，トリフルオロ酢酸塩（中間体１８）から調製した。生成物を（これは６３％の純度で得た）、さらに精製せずに後続の反応でそのまま使用した。
２工程での収量：１２８ｍｇ（理論値の６１％）
ＨＰＬＣ（方法５）：Ｒｔ＝０．８分；
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝１．２４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４６５（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２０５】
中間体２０
Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−１−カルボキシ−２−メトキシ−４−メチルヘキサン−３−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド
【０２０６】
【化６６】
2013533228.tif 000069
５１ｍｇ（０．０８ｍｍｏｌ）のＮ−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−１−カルボキシ−２−メトキシ−４−メチルヘキサン−３−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド（中間体４）を１０ｍｌのＤＭＦに溶解させ、０．５ｍｌのピペリジンを添加した。室温で１０分間の撹拌後、反応液を減圧濃縮し、残渣をジエチルエーテルとともに磨砕した。不溶性成分を濾別し、ジエチルエーテルで繰り返し洗浄した。次いで、濾過残渣を５ｍｌのジオキサン／水（１：１）に溶解させ、この溶液を１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液でｐＨ１１に調整した。超音波処理しながら、合計３４９ｍｇ（１．６ｍｍｏｌ）の二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチルを、溶液のｐＨを１１に維持しながら複数回に分けて添加した。反応が終了した後、ジオキサンを蒸発させ、この水性溶液を、クエン酸を用いてｐＨ２〜３に調整した。混合物を、各場合において５０ｍｌの酢酸エチルで２回抽出した。有機相を合わせ、硫酸マグネシウムで乾燥させ、減圧濃縮した。残渣をジエチルエーテルに溶解させ、生成物をペンタンで析出させた。溶媒をデカンテーションによって除去した。残渣をペンタンで繰り返し温浸し（ｄｉｇｅｓｔ）、最後に高減圧下で乾燥させた。これにより、３１ｍｇ（理論値の９３％）の標題化合物を得た。
ＨＰＬＣ（方法６）：Ｒｔ＝２．２分；
ＬＣ−ＭＳ（方法２）：Ｒｔ＝１．３２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５１６（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２０７】
中間体２１
ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−３−｛［（２Ｓ）−３，３−ジメチル−１−（１，２−オキサジナン−２−イル）−１−オキソブタン−２−イル］アミノ｝−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−カルボキシレート
【０２０８】
【化６７】
2013533228.tif 000070
標題化合物を、中間体５および６の合成と同様にして、３工程で、市販のＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−３−メチル−Ｌ−バリンを１，２−オキサジナン塩酸塩（出発物質５）とカップリングさせ、続いてトリフルオロ酢酸で脱保護し、さらに出発物質１とカップリングさせることにより調製した。最終生成物を分取用ＨＰＬＣによって精製した。
ＨＰＬＣ（方法５）：Ｒｔ＝１．９２分；
ＬＣ−ＭＳ（方法７）：Ｒｔ＝２．１９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４７０（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２０９】
中間体２２
ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−｛［（２Ｓ）−１−（１，２−オキサジナン−２−イル）−１−オキソ−３，３−ジフェニルプロパン−２−イル］アミノ｝−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−カルボキシレート
【０２１０】
【化６８】
2013533228.tif 000071
標題化合物を、中間体５および６の合成と同様にして、３工程で、市販のＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−β−フェニル−Ｌ−フェニルアラニンを１，２−オキサジナン塩酸塩（出発物質５）とカップリングさせ、続いてトリフルオロ酢酸で脱保護し、さらに出発物質１とカップリングさせることにより調製した。最終生成物を分取用ＨＰＬＣによって精製した。
ＨＰＬＣ（方法５）：Ｒｔ＝２．０７分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．２２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５８０（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２１１】
中間体２３
ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−｛［（１Ｓ，２Ｓ）−１−（１，２−オキサジナン−２−イルカルボニル）−２−フェニル-シクロプロピル］アミノ｝−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−カルボキシレート
【０２１２】
【化６９】
2013533228.tif 000072
標題化合物を、中間体５および６の合成と同様にして、３工程で、市販の（１Ｓ，２Ｓ）−１−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−２−フェニルシクロプロパンカルボン酸を１，２−オキサジナン塩酸塩（出発物質５）とカップリングさせ、続いてトリフルオロ酢酸で脱保護し、さらに出発物質１とカップリングさせることにより調製した。最終生成物を分取用ＨＰＬＣによって精製した。
ＨＰＬＣ（方法５）：Ｒｔ＝２．１９分；
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝２．２８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５１６（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２１３】
中間体２４
ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−｛［（１Ｓ，２Ｒ）−１−（１，２−オキサジナン−２−イルカルボニル）−２−フェニル-シクロプロピル］アミノ｝−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−カルボキシレート
【０２１４】
【化７０】
2013533228.tif 000073
標題化合物を、中間体５および６の合成と同様にして、３工程で、市販の（１Ｓ，２Ｒ）−１−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−２−フェニルシクロプロパンカルボン酸を１，２−オキサジナン塩酸塩（出発物質５）とカップリングさせ、続いてトリフルオロ酢酸で脱保護し、さらに出発物質１とカップリングさせることにより調製した。最終生成物を分取用ＨＰＬＣによって精製した。
ＨＰＬＣ（方法５）：Ｒｔ＝２．１２分；
ＬＣ−ＭＳ（方法２）：Ｒｔ＝１．２５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５１６（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２１５】
中間体２５
［（２Ｓ）−１−（４−ヒドロキシ−１，２−オキサゾリジン−２−イル）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル］カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（ジアステレオマー１および２）
【０２１６】
【化７１】
2013533228.tif 000074
２００ｍｇ（１．５９ｍｍｏｌ）の１，２−オキサゾリジン−４−オール（出発物質７）を１０ｍｌのＤＭＦに溶解させ、６０６ｍｇ（１．６７ｍｍｏｌ）の２，５−ジオキソピロリジン−１−イル−Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−フェニル-アラニネートと２７７μｌのＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンを添加した。室温で６０時間の撹拌後、反応液を減圧濃縮し、残渣を１００ｍｌの酢酸エチルに溶解させた。混合物を、各場合において５％強度のクエン酸溶液と１０％強度の重炭酸ナトリウム溶液で２回抽出した。次いで、有機相を減圧濃縮した。この２つのジアステレオマーのさらなる精製および分離を、シリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによって行った（９８：２のジクロロメタン／メタノールの移動相を使用）。適切な画分を濃縮し、残渣を高減圧下で乾燥させた。
ジアステレオマー１：
収量：１５４ｍｇ［依然としてＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−フェニルアラニンが夾雑しており、これを次の工程で除去した］
Ｒｆ＝０．４４（９５：５のジクロロメタン／メタノール）。
ジアステレオマー２：
収量：８６ｍｇ（理論値の１６％）
Ｒｆ＝０．４０（９５：５のジクロロメタン／メタノール）。
【０２１７】
中間体２６
｛（２Ｓ）−１−［４−（ベンジルオキシ）−１，２−オキサゾリジン−２−イル］−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル｝カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（ジアステレオマー１）
【０２１８】
【化７２】
2013533228.tif 000075
７５ｍｇ（約０．２２ｍｍｏｌ）の中間体２５のジアステレオマー１を１０ｍｌのアセトンに溶解させ、２２８ｍｇ（１．３４ｍｍｏｌ）の臭化ベンジル、６１６ｍｇ（４．４６ｍｍｏｌ）の炭酸カリウムとスパチュラの先端１杯分のテトラ−ｎ−ブチルアンモニウムヨージドを添加した。反応液を２０時間還流加熱し、次いで減圧濃縮した。残渣を１００ｍｌのジクロロメタンとともに撹拌し、濾過し、次いでジクロロメタン相を濃縮した。残留した残渣を分取用ＨＰＬＣによって精製した。これにより、６８ｍｇ（理論値の７２％）の標題化合物を得た。
ＨＰＬＣ（方法６）：Ｒｔ＝２．３１分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．１８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４２７（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２１９】
中間体２７
｛（２Ｓ）−１−［４−（ベンジルオキシ）−１，２−オキサゾリジン−２−イル］−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル｝カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（ジアステレオマー２）
【０２２０】
【化７３】
2013533228.tif 000076
８３ｍｇ（０．２５ｍｍｏｌ）の中間体２５のジアステレオマー２を１５ｍｌのアセトンに溶解させ、１２７ｍｇ（０．７４ｍｍｏｌ）の臭化ベンジル、６８２ｍｇ（４．９３ｍｍｏｌ）の炭酸カリウムおよびスパチュラの先端１杯分のテトラ−ｎ−ブチルアンモニウムヨージドを添加した。反応液を２０時間還流加熱し、次いで減圧濃縮した。残渣を１００ｍｌのジクロロメタンとともに撹拌し、濾過し、次いでジクロロメタン相を濃縮した。残留した残渣を分取用ＨＰＬＣによって精製した。これにより、８７ｍｇ（理論値の８３％）の標題化合物を得た。
ＨＰＬＣ（方法６）：Ｒｔ＝２．３０分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．２２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４２７（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２２１】
中間体２８
（２Ｓ）−２−アミノ−１−［４−（ベンジルオキシ）−１，２−オキサゾリジン−２−イル］−３−フェニルプロパン−１−オン，トリフルオロ酢酸塩（ジアステレオマー１）
【０２２２】
【化７４】
2013533228.tif 000077
６８ｍｇ（０．１６ｍｍｏｌ）の｛（２Ｓ）−１−［４−（ベンジルオキシ）−１，２−オキサゾリジン−２−イル］−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル｝カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（ジアステレオマー１，中間体２６）を１０ｍｌのジクロロメタンに溶解させ、１ｍｌのトリフルオロ酢酸を添加し、混合物を室温で３０分間撹拌した。次いで混合物を減圧濃縮し、残留した残渣をジオキサン／水で凍結乾燥させた。これにより、６９ｍｇ（理論値の９８％）の標題化合物を無色の泡状物として得た。
ＨＰＬＣ（方法６）：Ｒｔ＝１．７２分；
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝１．４１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３２７（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２２３】
中間体２９
（２Ｓ）−２−アミノ−１−［４−（ベンジルオキシ）−１，２−オキサゾリジン−２−イル］−３−フェニルプロパン−１−オン，トリフルオロ酢酸塩（ジアステレオマー２）
【０２２４】
【化７５】
2013533228.tif 000078
８２ｍｇ（０．１９ｍｍｏｌ）の｛（２Ｓ）−１−［４−（ベンジルオキシ）−１，２−オキサゾリジン−２−イル］−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル｝カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（ジアステレオマー２，中間体２７）を１０ｍｌのジクロロメタンに溶解させ、１ｍｌのトリフルオロ酢酸を添加し、混合物を室温で３０分間撹拌した。次いで混合物を減圧濃縮し、残留した残渣をジオキサン／水で凍結乾燥させた。これにより、８０ｍｇ（理論値の９５％）の標題化合物を無色の泡状物として得た。
ＨＰＬＣ（方法６）：Ｒｔ＝１．８０分；
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝１．５０分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３２７（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２２５】
中間体３０
Ｎ−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−２−カルボキシ−１−メトキシプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド
【０２２６】
【化７６】
2013533228.tif 000079
３１５ｍｇ（０．４９４ｍｍｏｌ）のＮ−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−１−カルボキシ−２−メトキシ−４−メチルヘキサン−３−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド（中間体４）を１２ｍｌのＤＭＦに溶解させ、１０４ｍｇ（０．５４３ｍｍｏｌ）の１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩と８３ｍｇ（０．５４３ｍｍｏｌ）の１−ヒドロキシ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール水和物を添加し、混合物を室温で９０分間撹拌した。１１２μｌのＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンと１４９ｍｇ（０．４９４ｍｍｏｌ）の（２Ｒ，３Ｒ）−３−メトキシ−２−メチル−３−［（２Ｓ）−ピロリジン−２−イル］プロパン酸，トリフルオロ酢酸塩（これは、事前に、出発物質１からＢｏｃ保護基をトリフルオロ酢酸で除去することによって調製しておいた）を添加した。混合物を室温で２時間撹拌し、次いで高減圧下で濃縮した。残留した残渣を２回の分取用ＨＰＬＣによって精製した。これにより、１４０ｍｇ（理論値の３５％）の標題化合物を無色の泡状物の形態で得た。
ＨＰＬＣ（方法５）：Ｒｔ＝２．４０分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．３８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８０７（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２２７】
中間体３１
［（１Ｓ，２Ｒ）−１−アミノ−２−フェニルシクロプロピル］（１，４−ジヒドロ−３Ｈ−２，３−ベンゾオキサジン−３−イル）メタノン，トリフルオロ酢酸塩
【０２２８】
【化７７】
2013533228.tif 000080
標題化合物を、中間体１０の合成と同様にして、［（１Ｓ，２Ｒ）−１−（ヒドロキシカルバモイル）−２−フェニルシクロプロピル］カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（出発物質８）から出発して調製した。
ＨＰＬＣ（方法６）：Ｒｔ＝１．６０分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．７０分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２９５（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２２９】
中間体３２
Ｎ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｎ−メチル−Ｌ−トレオニル−Ｎ−［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−１−カルボキシ−２−メトキシ−４−メチル-ヘキサン−３−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド
【０２３０】
【化７８】
2013533228.tif 000081
まず、Ｎ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｎ−メチル−Ｌ−トレオニンを２３７ｍｇ（０．８８７ｍｍｏｌ）のそのジシクロヘキシルアミン塩から、該塩を酢酸エチルに溶解させ、５％強度の水性硫酸で抽出することにより放出させた。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣を１６ｍｌのＤＭＦに溶解させ、３６５ｍｇ（１ｍｍｏｌ）の（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−５−メチル−４−［メチル（Ｌ−バリル）アミノ］ヘプタン酸ｔｅｒｔ−ブチル（中間体２）、１８５ｍｇ（０．９６７ｍｍｏｌ）の１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩および１４８ｍｇ（０．９６７ｍｍｏｌ）の１−ヒドロキシ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール水和物を連続して添加した。混合物を室温で２時間撹拌した。次いで、反応液を半飽和塩化アンモニウム水溶液と酢酸エチルの混合物に注入した。有機相を分取し、飽和重炭酸ナトリウム溶液と飽和塩化ナトリウム溶液で連続的に洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣を分取用ＨＰＬＣによって精製した。これにより、２８３ｍｇ（理論値の５３％）のｔｅｒｔ−ブチルエステル中間体Ｎ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｎ−メチル−Ｌ−トレオニル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−ｔｅｒｔ−ブトキシ−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミドを得た。
ＨＰＬＣ（方法５）：Ｒｔ＝２．１７分。
【０２３１】
２８３ｍｇ（０．４６６ｍｍｏｌ）のこの中間体を５ｍｌのジクロロメタンに溶解させ、５ｍｌの無水トリフルオロ酢酸を添加し、混合物を室温で２時間撹拌した。次いで、反応液を高減圧下で濃縮し、残留した残渣を分取用ＨＰＬＣによって精製した。これにより、１５６ｍｇ（理論値の６１％）の標題化合物を無色の泡状物として得た。
ＨＰＬＣ（方法５）：Ｒｔ＝１．５０分；
ＬＣ−ＭＳ（方法２）：Ｒｔ＝１．０９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５５２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２３２】
中間体３３
（２Ｒ）−２−アミノ−１−（１，２−オキサジナン−２−イル）−３−フェニルプロパン−１−オン，トリフルオロ酢酸塩
【０２３３】
【化７９】
2013533228.tif 000082
標題化合物を、中間体６の合成と同様にして、Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｄ−フェニルアラニンから出発して調製した。
ＨＰＬＣ（方法６）：Ｒｔ＝１．４０分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．５０分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２３５（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２３４】
中間体３４
（２Ｓ）−２−アミノ−２−メチル−１−（１，２−オキサジナン−２−イル）−３−フェニルプロパン−１−オン，トリフルオロ酢酸塩
【０２３５】
【化８０】
2013533228.tif 000083
標題化合物を、中間体６の合成と同様にして、市販のＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−α−メチル−Ｌ−フェニルアラニンから出発して調製した。
ＨＰＬＣ（方法５）：Ｒｔ＝０．４５分；
ＬＣ−ＭＳ（方法２）：Ｒｔ＝０．６１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２４９（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２３６】
作業実施例：
実施例１
Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−｛［（２Ｓ）−１−（１，２−オキサジナン−２−イル）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル］アミノ｝−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド，トリフルオロ酢酸塩
【０２３７】
【化８１】
2013533228.tif 000084
１４３ｍｇ（０．２２３ｍｍｏｌ）のＮ−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−１−カルボキシ−２−メトキシ−４−メチルヘキサン−３−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド（中間体４）を１５ｍｌのＤＭＦに溶解させ、１４１ｍｇ（０．２２ｍｍｏｌ）の（２Ｒ，３Ｒ）−３−メトキシ−２−メチル−Ｎ−［（２Ｓ）−１−（１，２−オキサジナン−２−イル）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル］−３−［（２Ｓ）−ピロリジン−２−イル］プロパンアミド，トリフルオロ酢酸塩（中間体７）、１０２ｍｇ（０．２７ｍｍｏｌ）のＯ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）および１２８μｌ（０．７４ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンを連続して添加した。混合物を室温で３時間撹拌した。次いで、反応液を半飽和塩化アンモニウム水溶液と酢酸エチルの混合物に注入した。有機相を分取し、飽和重炭酸ナトリウム溶液と飽和塩化ナトリウム溶液で連続的に洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。これにより、２７５ｍｇ（ｑｕａｎｔ．）のＦｍｏｃ保護中間体Ｎ−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−｛［（２Ｓ）−１−（１，２−オキサジナン−２−イル）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル］アミノ｝−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミドを得た。
ＨＰＬＣ（方法５）：Ｒｔ＝２．７３分；
ＬＣ−ＭＳ（方法４）：Ｒｔ＝３．１９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０２３（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２３８】
４６ｍｇ（０．０４５ｍｍｏｌ）のこの中間体を４ｍｌのＤＭＦに溶解させた。１ｍｌのピペリジンの添加後、混合物を室温で１時間撹拌した。次いで混合物を減圧濃縮し、残渣を分取用ＨＰＬＣによって精製した（移動相：アセトニトリル＋０．０１％ＴＦＡ／水＋０．０１％ＴＦＡ）。これにより、２２ｍｇ（理論値の５４％）の標題化合物を無色の泡状物として得た。
ＨＰＬＣ（方法５）：Ｒｔ＝１．６８分；
ＬＣ−ＭＳ（方法２）：Ｒｔ＝１．０３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８０１（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ−ＮＭＲ（６００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ＝８．８（ｍ，２Ｈ），８．７（ｍ，１Ｈ），８．４２および８．１５（２ｄ，１Ｈ），７．３−７．１（ｍ，５Ｈ），５．１２および４．９５（２ｍ，１Ｈ），４．７０および４．６２（２ｍ，１Ｈ），４．６２および４．５０（２ｔ，１Ｈ），４．１−３．９（ｍ，３Ｈ），３．８５（ｍ，１Ｈ），３．７５−３．６（ｍ，２Ｈ），３．２３，３．１８，３．１７，３．１４，３．０２および２．９６（６ｓ，９Ｈ），３．１−２．９および２．７５（２ｍ，２Ｈ），２．４６（ｍ，３Ｈ），２．４−２．１（ｍ，２Ｈ），２．０５（ｂｒ．ｍ，２Ｈ），１．８５−１．５５（ｂｒ．ｍ，６Ｈ），１．５−１．２（ｂｒ．ｍ，３Ｈ），１．１−０．８（ｍ，１８Ｈ），０．７５（ｔ，３Ｈ）［さらなるシグナルがＨ２Ｏピーク下に隠れている］。
【０２３９】
実施例２
Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−｛［（２Ｓ）−１−（１，２−オキサジナン−２−イル）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル］アミノ｝−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド
【０２４０】
【化８２】
2013533228.tif 000085
５０ｍｇ（０．０４１１ｍｍｏｌ）のＮ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−｛［（２Ｓ）−１−（１，２−オキサジナン−２−イル）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル］アミノ｝−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド，トリフルオロ酢酸塩（実施例１）を３ｍｌのジオキサン／水（１：１）に溶解させ、４．９ｍｇ（０．０８１ｍｍｏｌ）の二量体のグリコールアルデヒドを添加した。次いで、２．８ｍｇ（０．０４５ｍｍｏｌ）のシアノ水素化ホウ素ナトリウムを添加した。次いで、５０μｌの０．１Ｎ塩酸を用いて混合物をｐＨ４〜５に調整し、１００℃で１時間撹拌した。次いで、反応液を半飽和重炭酸ナトリウム水溶液と酢酸エチルの混合物に注入した。有機相を分取し、飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣を分取用ＨＰＬＣによって精製した。これにより、２１ｍｇ（理論値の６１％）の標題化合物を無色の泡状物の形態で得た。
ＨＰＬＣ（方法５）：Ｒｔ＝１．６９分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８４５（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ−ＮＭＲ（６００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ＝９．２（ｍ，１Ｈ），８．９（ｍ，１Ｈ），８．４および８．１５（２ｄ，１Ｈ），７．３−７．１（ｍ，５Ｈ），５．１２および４．９５（２ｍ，１Ｈ），４．７０および４．６２（２ｍ，１Ｈ），４．６２および４．５５（２ｔ，１Ｈ），４．１−３．９（ｍ，３Ｈ），３．９−３．７（ｍ，５Ｈ），３．２３，３．１８，３．１７，３．１５，３．０２および２．９８（６ｓ，９Ｈ），２．９５および２．７５（２ｍ，２Ｈ），２．８（ｍ，３Ｈ），２．４６−２．００（ｍ，４Ｈ），１．８５−１．５５（ｂｒ．ｍ，６Ｈ），１．５−１．２（ｂｒ．ｍ，３Ｈ），１．１−０．８（ｍ，１８Ｈ），０．７５（ｔ，３Ｈ）［さらなるシグナルがＨ２Ｏピーク下に隠れている］。
【０２４１】
実施例３
Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−｛［（２Ｓ）−１−（１，２−オキサジナン−２−イル）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル］アミノ｝−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド
【０２４２】
【化８３】
2013533228.tif 000086
２０ｍｇ（０．０２２ｍｍｏｌ）のＮ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−｛［（２Ｓ）−１−（１，２−オキサジナン−２−イル）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル］アミノ｝−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド，トリフルオロ酢酸塩（実施例１）を１ｍｌのＤＭＦに溶解させ、３．４ｍｇ（１μｌ）のヨードメタンと７．６ｍｇ（０．０５５ｍｍｏｌ）の炭酸カリウムを添加し、混合物を室温で１時間撹拌した。次いで、同量の炭酸カリウムを添加し、反応液を超音波浴中で１０分間処理した。次いで、溶媒を減圧下で留去し、残留した残渣を分取用ＨＰＬＣによって精製した。これにより、８ｍｇ（理論値の４４％）の標題化合物を得た。
ＨＰＬＣ（方法５）：Ｒｔ＝１．７１分；
ＬＣ−ＭＳ（方法２）：Ｒｔ＝１．０４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８１５（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ−ＮＭＲ（６００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ＝９．５５（ｍ，１Ｈ），８．９−８．７（ｍ，１Ｈ），８．４５および８．１５（２ｄ，１Ｈ），７．３−７．１（ｍ，５Ｈ），５．１２および４．９５（２ｍ，１Ｈ），４．７０および４．６２（２ｍ，１Ｈ），４．６２および４．５５（２ｔ，１Ｈ），４．１−３．９（ｍ，３Ｈ），３．９−３．６（ｍ，３Ｈ），３．５５（ｍ，２Ｈ），３．２３，３．１８，３．１７，３．１５，３．０２および２．９８（６ｓ，９Ｈ），２．９５および２．７（２ｍ，２Ｈ），２．８−２．７（２  ｂｒ．ｓ、６Ｈ），２．４６−２．００（ｍ，４Ｈ），１．８５−１．５５（ｂｒ．ｍ，６Ｈ），１．５−１．２（ｂｒ．ｍ，３Ｈ），１．１−０．８（ｍ，１８Ｈ），０．７５（ｔ，３Ｈ）［さらなるシグナルがＨ２Ｏピーク下に隠れている］。
【０２４３】
実施例４
Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−｛［（２Ｓ，３Ｓ）−１−（１，２−オキサジナン−２−イル）−１−オキソ−３−フェニルブタン−２−イル］アミノ｝−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド，トリフルオロ酢酸塩
【０２４４】
【化８４】
2013533228.tif 000087
１２６ｍｇ（０．１９８ｍｍｏｌ）のＮ−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−１−カルボキシ−２−メトキシ−４−メチルヘキサン−３−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド（中間体４）を１０ｍｌのＤＭＦに溶解させ、１０５ｍｇ（０．１９８ｍｍｏｌ）の（２Ｒ，３Ｒ）−３−メトキシ−２−メチル−Ｎ−［（２Ｓ，３Ｓ）−１−（１，２−オキサジナン−２−イル）−１−オキソ−３−フェニルブタン−２−イル］−３−［（２Ｓ）−ピロリジン−２−イル］プロパンアミド，トリフルオロ酢酸塩（中間体１７）、４１．６ｍｇ（０．２１７ｍｍｏｌ）の１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩、３３ｍｇ（０．２１７ｍｍｏｌ）の１−ヒドロキシ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール水和物および７９μｌ（０．４５４ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンを連続して添加した。混合物を室温で一晩撹拌した。次いで、反応液を半飽和塩化アンモニウム水溶液と酢酸エチルの混合物に注入した。有機相を分取し、飽和重炭酸ナトリウム溶液と飽和塩化ナトリウム溶液で連続的に洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。これにより、２２０ｍｇ（ｑｕａｎｔ．）のＦｍｏｃ保護中間体Ｎ−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−｛［（２Ｓ，３Ｓ）−１−（１，２−オキサジナン−２−イル）−１−オキソ−３−フェニルブタン−２−イル］アミノ｝−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミドを得た。
ＨＰＬＣ（方法５）：Ｒｔ＝２．７７分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０３７（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２４５】
２２０ｍｇ（０．２１２ｍｍｏｌ）のこの中間体を５ｍｌのＤＭＦに溶解させた。１ｍｌのピペリジンの添加後、混合物を室温で１時間撹拌した。次いで混合物を減圧濃縮し、残渣を分取用ＨＰＬＣによって精製した（移動相：アセトニトリル＋０．０１％ＴＦＡ／水＋０．０１％ＴＦＡ）。これにより、９１ｍｇ（理論値の４６％）の標題化合物を無色の泡状物として得た。
ＨＰＬＣ（方法５）：Ｒｔ＝１．７１分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８１５（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ−ＮＭＲ（６００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ＝８．８７および８．８０（２ｄ，２Ｈ），８．７５（ｍ，１Ｈ），８．４０および７．９８（２ｄ，１Ｈ），７．３−７．１（ｍ，５Ｈ），５．４５および５．２（２ｔ，１Ｈ），４．７８および４．６２（２ｍ，１Ｈ），４．７３および４．５８（２ｔ，１Ｈ），４．２−４．０（ｍ，３Ｈ），３．７−３．６（ｍ，１Ｈ），３．３５，３．２０，３．１８，３．１４，３．１２および３．００（６ｓ，９Ｈ），３．１および２．９５（２ｍ，２Ｈ），２．４６（ｍ，３Ｈ），２．４−２．０（ｍ，４Ｈ），１．９−１．６（ｍ，４Ｈ），１．６−１．２（ｍ，５Ｈ），１．１−０．７５（ｍ，２１Ｈ），０．８０（ｔ，３Ｈ）［さらなるシグナルがＨ２Ｏピーク下に隠れている］。
【０２４６】
実施例５
Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−｛［（２Ｓ）−１−（１，２−オキサゾリジン−２−イル）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル］アミノ｝−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド，トリフルオロ酢酸塩
【０２４７】
【化８５】
2013533228.tif 000088
１３８ｍｇ（０．２１６ｍｍｏｌ）のＮ−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−１−カルボキシ−２−メトキシ−４−メチルヘキサン−３−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド（中間体４）を１４ｍｌのＤＭＦに溶解させ、１０９ｍｇ（０．２１６ｍｍｏｌ）の（２Ｒ，３Ｒ）−３−メトキシ−２−メチル−Ｎ−［（２Ｓ）−１−（１，２−オキサゾリジン−２−イル）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル］−３−［（２Ｓ）−ピロリジン−２−イル］プロパンアミド，トリフルオロ酢酸塩（中間体１５）、４５．６ｍｇ（０．２３８ｍｍｏｌ）の１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩、３６．５ｍｇ（０．３８ｍｍｏｌ）の１−ヒドロキシ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール水和物および４９μｌ（０．２８１ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンを連続して添加した。混合物を室温で一晩撹拌した。次いで、反応液を半飽和塩化アンモニウム水溶液と酢酸エチルの混合物に注入した。有機相を分取し、飽和重炭酸ナトリウム溶液と飽和塩化ナトリウム溶液で連続的に洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。これにより、１７０ｍｇ（理論値の７８％）のＦｍｏｃ保護中間体Ｎ−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−｛［（２Ｓ）−１−（１，２−オキサゾリジン−２−イル）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル］アミノ｝−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミドを得た。
ＨＰＬＣ（方法５）：Ｒｔ＝２．６４分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．４４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１００９（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２４８】
１７０ｍｇ（０．１６８ｍｍｏｌ）のこの中間体を５ｍｌのＤＭＦに溶解させた。１ｍｌのピペリジンの添加後、混合物を室温で１時間撹拌した。次いで混合物を減圧濃縮し、残渣を分取用ＨＰＬＣによって精製した（移動相：アセトニトリル＋０．０１％ＴＦＡ／水＋０．０１％ＴＦＡ）。これにより、３７ｍｇ（理論値の２４％）の標題化合物を無色の泡状物として得た。
ＨＰＬＣ（方法５）：Ｒｔ＝１．５７分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７８７（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ−ＮＭＲ（６００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ＝８．９−８．７（ｍ，３Ｈ），８．５および８．２（２ｍ，１Ｈ），７．３−７．１（ｍ，５Ｈ），５．６および５．４（２ｍ，１Ｈ），４．７および４．６（２ｍ，１Ｈ），４．６５および４．５５（２ｔ，１Ｈ），４．０−３．９（ｍ，３Ｈ），３．７５−３．６（ｍ，２Ｈ），３．２３，３．２０，３．１５，３．０５および２．９８（５ｓ，９Ｈ），３．０および２．７（２ｍ，２Ｈ），２．４６（ｍ，３Ｈ），２．３５−２．１５（ｍ，４Ｈ），２．１−２．０（ｍ，２Ｈ），１．８５−１．６（ｍ，３Ｈ），１．４５（ｍ，１Ｈ），１．２５（ｍ，１Ｈ），１．１−０．８５（ｍ，１８Ｈ），０．７５（ｔ，３Ｈ）［さらなるシグナルがＨ２Ｏピーク下に隠れている］。
【０２４９】
実施例６
Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−｛［（２Ｓ）−１−（２−オキサ−３−アザビシクロ［２．２．２］オクタ−５−エン−３−イル）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル］アミノ｝−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド，トリフルオロ酢酸塩
【０２５０】
【化８６】
2013533228.tif 000089
４４．５ｍｇ（０．０７１ｍｍｏｌ）のＮ−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−１−カルボキシ−２−メトキシ−４−メチルヘキサン−３−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド（中間体４）を１０ｍｌのＤＭＦに溶解させ、３８．６ｍｇ（０．０７１ｍｍｏｌ）の（２Ｒ，３Ｒ）−３−メトキシ−２−メチル−Ｎ−［（２Ｓ）−１−（２−オキサ−３−アザビシクロ［２．２．２］オクタ−５−エン−３−イル）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル］−３−［（２Ｓ）−ピロリジン−２−イル］プロパンアミド，トリフルオロ酢酸塩（中間体９）、３２．５ｍｇ（０．０８６ｍｍｏｌ）のＯ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）および４１μｌ（０．２３５ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンを連続して添加した。混合物を室温で１時間撹拌した。次いで反応液を減圧濃縮し、残渣を酢酸エチルに溶解させた。有機相を５％強度のクエン酸溶液と５％強度の重炭酸ナトリウム溶液で連続的に洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。これにより、７３ｍｇ（理論値の９８％）のＦｍｏｃ保護中間体Ｎ−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−｛［（２Ｓ）−１−（２−オキサ−３−アザビシクロ［２．２．２］オクタ−５−エン−３−イル）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル］アミノ｝−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミドを得た。
ＨＰＬＣ（方法６）：Ｒｔ＝２．７８分；
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝２．９６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０４７（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２５１】
７３ｍｇ（０．０７１ｍｍｏｌ）のこの中間体を５ｍｌのＤＭＦに溶解させた。０．５ｍｌのピペリジンの添加後、反応液を室温で１０分間撹拌した。次いで混合物を減圧濃縮し、残渣をジエチルエーテルで繰り返し温浸した。このエーテルをデカンテーションした後、残渣を分取用ＨＰＬＣによって精製した（移動相：アセトニトリル／０．１％水性ＴＦＡ）。これにより、１６ｍｇ（理論値の２６％）の標題化合物を無色の泡状物として得た。
ＨＰＬＣ（方法６）：Ｒｔ＝１．９４分；
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝１．７１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８２５（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ−ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ＝８．９−８．６（ｍ，３Ｈ），８．４，８．３，８．１および８．０（４ｄ，１Ｈ），７．３−７．１（ｍ，５Ｈ），６．７−６．５（ｍ，２Ｈ），５．２−４．８（ｍ，３Ｈ），４．７５−４．５５（ｍ，３Ｈ），４．０５−３．９５（ｍ，１Ｈ），３．７−３．４（ｍ，４Ｈ），３．２２，３．１７，３．１５，３．０５，３．０２および２．９５（６ｓ，９Ｈ），３．０および２．７（２  ｂｒ．ｍ，２Ｈ），２．４６（ｍ，３Ｈ），２．４−１．２（ｂｒ．ｍ，１３Ｈ），１．１−０．８５（ｍ，１８Ｈ），０．７５（ｍ，３Ｈ）［さらなるシグナルがＨ２Ｏピーク下に隠れている］。
【０２５２】
実施例７
Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−３−｛［（２Ｓ）−３−（４−ヒドロキシ−３−ニトロフェニル）−１−（１，２−オキサジナン−２−イル）−１−オキソプロパン−２−イル］アミノ｝−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド，トリフルオロ酢酸塩
【０２５３】
【化８７】
2013533228.tif 000090
１６０ｍｇ（０．２５１ｍｍｏｌ）のＮ−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−１−カルボキシ−２−メトキシ−４−メチルヘキサン−３−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド（中間体４）を１３ｍｌのＤＭＦに溶解させ、１４５ｍｇ（０．２５１ｍｍｏｌ）の（２Ｒ，３Ｒ）−Ｎ−［（２Ｓ）−３−（４−ヒドロキシ−３−ニトロフェニル）−１−（１，２−オキサジナン−２−イル）−１−オキソプロパン−２−イル］−３−メトキシ−２−メチル−３−［（２Ｓ）−ピロリジン−２−イル］プロパンアミド，トリフルオロ酢酸塩（中間体１９）、５３ｍｇ（０．２７６ｍｍｏｌ）の１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩、４２．２ｍｇ（０．２７６ｍｍｏｌ）の１−ヒドロキシ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール水和物および６５μｌ（０．３７６ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンを連続して添加した。混合物を室温で一晩撹拌した。次いで、反応液を半飽和塩化アンモニウム水溶液と酢酸エチルの混合物に注入した。有機相を分取し、飽和重炭酸ナトリウム溶液と飽和塩化ナトリウム溶液で連続的に洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。これにより、２６０ｍｇ（理論値の９６％）の粗製Ｆｍｏｃ保護中間体Ｎ−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−３−｛［（２Ｓ）−３−（４−ヒドロキシ−３−ニトロフェニル）−１−（１，２−オキサジナン−２−イル）−１−オキソプロパン−２−イル］アミノ｝−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミドを得、これを、さらに精製せずに次の工程で使用した。
【０２５４】
２６０ｍｇ（０．２４ｍｍｏｌ）のこの中間体を３ｍｌのＤＭＦに溶解させた。０．６ｍｌのピペリジンの添加後、混合物を室温で１時間撹拌した。次いで混合物を減圧濃縮し、残渣を分取用ＨＰＬＣによって精製した（移動相：アセトニトリル＋０．０１％ＴＦＡ／水＋０．０１％ＴＦＡ）。これにより、１０５ｍｇ（理論値の４５％）の標題化合物をわずかに黄色がかった泡状物として得た。
ＨＰＬＣ（方法５）：Ｒｔ＝１．６２分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８６２（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ−ＮＭＲ（５００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ＝１０．８５および１０．７２（２ｓ，１Ｈ），８．９−８．６（ｍ，３Ｈ），８．４５および８．２（２ｄ，１Ｈ），７．７０および７．７２（２ｓ，１Ｈ），７．４０および７．３２（２ｄ，１Ｈ），７．０１および７．００（２ｄ，１Ｈ），５．０−４．８５（ｍ，１Ｈ），４．７−４．５（ｍ，２Ｈ），４．１５−４．０（ｍ，２Ｈ），３．９５−３．７５（ｍ，２Ｈ），３．７−３．６（ｍ，２Ｈ），３．２８，３．２１，３．１６，３．１５，３．０２および２．９６（６ｓ，９Ｈ），２．９および２．７５（２ｍ，２Ｈ），２．４６（ｍ，３Ｈ），２．４−２．３（ｍ，１Ｈ），２．３−２．２（ｍ，１Ｈ），２．１−１．９５（ｂｒ．ｍ，２Ｈ），１．８５−１．７（ｍ，４Ｈ），１．７−１．５５（ｍ，２Ｈ），１．５５−１．３５（ｍ，２Ｈ），１．３５（ｍ，１Ｈ），１．１−０．８（ｍ，１８Ｈ），０．７５（ｔ，３Ｈ）［さらなるシグナルがＨ２Ｏピーク下に隠れている］。
【０２５５】
実施例８
Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−３−｛［（２Ｓ）−１−（１，４−ジヒドロ−３Ｈ−２，３−ベンゾオキサジン−３−イル）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル］アミノ｝−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド，トリフルオロ酢酸塩
【０２５６】
【化８８】
2013533228.tif 000091
１５．８ｍｇ（０．０２５ｍｍｏｌ）のＮ−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−１−カルボキシ−２−メトキシ−４−メチルヘキサン−３−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド（中間体４）を５ｍｌのＤＭＦに溶解させ、１４ｍｇ（０．０２５ｍｍｏｌ）の（２Ｒ，３Ｒ）−Ｎ−［（２Ｓ）−１−（１，４−ジヒドロ−３Ｈ−２，３−ベンゾオキサジン−３−イル）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル］−３−メトキシ−２−メチル−３−［（２Ｓ）−ピロリジン−２−イル］プロパンアミド，トリフルオロ酢酸塩（中間体１１）、１１．３ｍｇ（０．０３ｍｍｏｌ）のＯ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）および１４μｌ（０．０８２ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンを連続して添加した。混合物を室温で１０分間撹拌した。次いで反応液を減圧濃縮し、残渣を直接、分取用ＨＰＬＣによって精製した。これにより、１３ｍｇ（理論値の４９％）のＦｍｏｃ保護中間体Ｎ−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−３−｛［（２Ｓ）−１−（１，４−ジヒドロ−３Ｈ−２，３−ベンゾオキサジン−３−イル）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル］アミノ｝−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミドを得た。
ＨＰＬＣ（方法６）：Ｒｔ＝２．９３分；
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝３．１０分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０７１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２５７】
１３ｍｇ（０．０１２ｍｍｏｌ）のこの中間体を２ｍｌのＤＭＦに溶解させた。０．５ｍｌのピペリジンの添加後、混合物を室温で１０分間撹拌した。次いで混合物を減圧濃縮し、残渣を分取用ＨＰＬＣによって精製した（移動相：アセトニトリル／０．１％水性ＴＦＡ）。これにより、１０ｍｇ（理論値の９７％）の標題化合物を得た。
ＨＰＬＣ（方法６）：Ｒｔ＝２．１０分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８４９（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ−ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ＝８．９０−８．６２（ｍ，３Ｈ），８．６０および８．３３（２ｄ，１Ｈ），７．３５−７．１（ｍ，９Ｈ），５．４−５．０（ｍ，４Ｈ），４．７−４．５（ｍ，３Ｈ），３．９５（ｍ，１Ｈ），３．７−３．４（ｍ，３Ｈ），３．２４，３．２０，３．１８，３．１６，３．１０および３．０８（６ｓ，９Ｈ），３．０および２．８５（２  ｂｒ．ｍ，２Ｈ），２．４６（ｍ，３Ｈ），２．３（ｂｒ．ｍ，２Ｈ），２．０５（ｂｒ．ｍ，２Ｈ），１．９−１．６（ｍ，３Ｈ），１．５−１．２（ｂｒ．ｍ，２Ｈ），１．１−０．８５（ｍ，１８Ｈ），０．７５（ｍ，３Ｈ）［さらなるシグナルがＨ２Ｏピーク下に隠れている］。
【０２５８】
実施例９
Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−３−｛［（２Ｓ）−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）−１−（１，２−オキサジナン−２−イル）−１−オキソプロパン−２−イル］アミノ｝−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド，トリフルオロ酢酸塩
【０２５９】
【化８９】
2013533228.tif 000092
４０ｍｇ（０．０７６ｍｍｏｌ）のＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−１−カルボキシ−２−メトキシ−４−メチルヘキサン−３−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド（中間体２０）を５ｍｌのＤＭＦに溶解させ、４３ｍｇ（０．０７８ｍｍｏｌ）の（２Ｒ，３Ｒ）−Ｎ−［（２Ｓ）−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）−１−（１，２−オキサジナン−２−イル）−１−オキソプロパン−２−イル］−３−メトキシ−２−メチル−３−［（２Ｓ）−ピロリジン−２−イル］プロパンアミド，トリフルオロ酢酸塩（中間体１３）、３５ｍｇ（０．０９３ｍｍｏｌ）のＯ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）および４５μｌ（０．２５６ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンを連続して添加した。混合物を室温で２時間撹拌した。反応液を減圧濃縮し、残渣を直接、分取用ＨＰＬＣによって精製した。これにより、１０ｍｇ（理論値の１４％）のＢｏｃ保護中間体Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−３−｛［（２Ｓ）−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）−１−（１，２−オキサジナン−２−イル）−１−オキソプロパン−２−イル］-アミノ｝−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミドを得た。
ＨＰＬＣ（方法６）：Ｒｔ＝２．５２分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．３５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９４０（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２６０】
５ｍｇ（０．００５ｍｍｏｌ）のこの中間体を３ｍｌのジクロロメタンに溶解させた。０．５ｍｌのトリフルオロ酢酸の添加後、反応液を超音波浴中で３０分間処理し、次いで、室温でさらに３０分間撹拌した。次いで混合物を減圧濃縮し、残渣にアセトニトリルを添加し、再度、混合物を濃縮した。ジオキサン／水で凍結乾燥させ、５ｍｇ（理論値の９９％）の標題化合物を得た。
ＨＰＬＣ（方法６）：Ｒｔ＝１．９４分；
ＬＣ−ＭＳ（方法２）：Ｒｔ＝０．９９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８４０（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ−ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ＝１０．８および８．８（２ｍ，３Ｈ），８．３５および８．０５（２ｄ，１Ｈ），７．５５（ｍ，１Ｈ），７．３（ｄ，１Ｈ），７．２０−６．９１（ｍ，３Ｈ），５．１２および４．９５（２ｍ，１Ｈ），４．７−４．５（ｍ，２Ｈ），４．１−３．９（ｍ，２Ｈ），３．８５（ｍ，２Ｈ），３．７５−３．４（ｍ，５Ｈ），３．２１，３．１５，３．１４，３．１０，２．９５および２．８５（６ｓ，９Ｈ），２．４６（ｍ，３Ｈ），２．４−２．２（ｍ，２Ｈ），２．１−１．９（ｍ，２Ｈ），１．８５−１．６５（ｍ，４Ｈ），１．６５−１．２（ｍ，３Ｈ），１．０５および１．０（２ｄ，３Ｈ），０．９５−０．８（ｍ，１５Ｈ），０．７５（ｍ，３Ｈ）［さらなるシグナルがＨ２Ｏピーク下に隠れている］。
【０２６１】
実施例１０
Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−３−｛［（２Ｓ）−３−（４−ヒドロキシ−３−ニトロフェニル）−１−（１，２−オキサジナン−２−イル）−１−オキソプロパン−２−イル］アミノ｝−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド塩酸塩
【０２６２】
【化９０】
2013533228.tif 000093
２５ｍｇ（０．０２６ｍｍｏｌ）のＮ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−３−｛［（２Ｓ）−３−（４−ヒドロキシ−３−ニトロフェニル）−１−（１，２−オキサジナン−２−イル）−１−オキソプロパン−２−イル］アミノ｝−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソ-プロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド，トリフルオロ酢酸塩（実施例７）を２ｍｌの１Ｎ塩酸に溶解させ、次いで凍結乾燥させた。これにより、１６．４ｍｇ（理論値の７１％）の標題化合物をわずかに黄色がかった泡状物として得た。
ＨＰＬＣ（方法５）：Ｒｔ＝１．６３分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８６２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２６３】
実施例１１
Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−３−（｛（２Ｓ）−１−［４−（ベンジルオキシ）−１，２−オキサゾリジン−２−イル］−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル｝アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド，トリフルオロ酢酸塩（ジアステレオマー１）
【０２６４】
【化９１】
2013533228.tif 000094
標題化合物を、実施例８の合成と同様にして、出発物質１を中間体２８とカップリングさせ、続いてトリフルオロ酢酸で脱保護し、次いで中間体４とカップリングさせ、最後にピペリジンで脱保護することにより調製した。最終生成物の精製を分取用ＨＰＬＣによって行った（移動相：アセトニトリル／０．１％水性ＴＦＡ）。これにより、１６．４ｍｇの標題化合物を得た。
ＨＰＬＣ（方法５）：Ｒｔ＝２．０８分；
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝１．９０分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８９３（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ−ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ＝８．８−８．６（ｍ，３Ｈ），８．４５および８．４（２ｄ，１Ｈ），７．３５−７．１（ｍ，１０Ｈ），５．２および５．０（２ｍ，１Ｈ），４．７−４．５（ｍ，５Ｈ），４．１５（ｄ，１Ｈ），４．０−３．６（ｍ，５Ｈ），３．６−３．４（ｍ，２Ｈ），３．７５−３．４（ｍ，５Ｈ），３．２２，３．１６，３．１５，３．０５および２．９６（５ｓ，９Ｈ），３．１−２．９および２．８−２．６（２ｍ，２Ｈ），２．４５および２．４４（２ｓ，３Ｈ），２．４−２．２（ｍ，２Ｈ），２．１−２．０（ｍ，２Ｈ），１．８５−１．６（ｍ，２Ｈ），１．５−１．２（ｍ，３Ｈ），１．１−０．８（ｍ，１８Ｈ），０．７５（ｍ，３Ｈ）。
【０２６５】
実施例１２
Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−３−（｛（２Ｓ）−１−［４−（ベンジルオキシ）−１，２−オキサゾリジン−２−イル］−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル｝アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド，トリフルオロ酢酸塩（ジアステレオマー２）
【０２６６】
【化９２】
2013533228.tif 000095
標題化合物を、実施例８の合成と同様にして、出発物質１を中間体２９とカップリングさせ、続いてトリフルオロ酢酸で脱保護し、次いで中間体４とカップリングさせ、最後にピペリジンで脱保護することにより調製した。最終生成物の精製を分取用ＨＰＬＣによって行った（移動相：アセトニトリル／０．１％水性ＴＦＡ）。これにより、２８ｍｇの標題化合物を得た。
ＨＰＬＣ（方法５）：Ｒｔ＝２．１１分；
ＬＣ−ＭＳ（方法７）：Ｒｔ＝１．９６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８９３（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ−ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ＝８．９−８．６（ｍ，３Ｈ），８．４５および８．３（２ｄ，１Ｈ），７．４−７．１（ｍ，１０Ｈ），５．２および４．９５（２ｍ，１Ｈ），４．７−４．５（ｍ，５Ｈ），４．２５（ｄ，１Ｈ），４．０−３．８（ｍ，３Ｈ），３．７−３．６（ｍ，２Ｈ），３．６−３．４（ｍ，２Ｈ），３．２３、３．１９，３．１８，３．１５，３．０５および２．９６（６ｓ，９Ｈ），３．１−３．０および２．８−２．６５（２ｍ，２Ｈ），２．５−２．４（ｍ，３Ｈ），２．３５−２．１５（ｍ，２Ｈ），２．１−１．９５（ｍ，２Ｈ），１．８−１．６（ｍ，２Ｈ），１．５−１．２（ｍ，３Ｈ），１．１−０．８（ｍ，１８Ｈ），０．７５（ｍ，３Ｈ）。
【０２６７】
実施例１３
Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−３−｛［（２Ｓ）−１−（４−ヒドロキシ−１，２−オキサゾリジン−２−イル）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル］アミノ｝−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド（ジアステレオマー２）
【０２６８】
【化９３】
2013533228.tif 000096
２７ｍｇ（０．０３ｍｍｏｌ）の実施例１２の化合物を、４２ｍｌのＴＨＦと２２ｍｌの水の混合物に溶解させ、１．３５ｍｌの２Ｍ塩酸を添加し、混合物を、１０％パラジウム／炭素上で室温および大気圧にて２０分間水素化した。次いで、この触媒を濾別し、反応混合物を重炭酸ナトリウム水溶液で中和した。次いで、混合物を酢酸エチルで抽出した。相の分離後、酢酸エチル相を濃縮し、残渣をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによって精製した（移動相ジクロロメタン／メタノール／１７％水性アンモニア（１２５：３：０．３）を使用）。適切な画分を濃縮し、残渣をジオキサンで凍結乾燥させた。これにより、２５ｍｇの標題化合物を得た。
ＨＰＬＣ（方法６）：Ｒｔ＝１．７４分；
ＬＣ−ＭＳ（方法８）：Ｒｔ＝２．０６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８０３（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ−ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ＝８．４５および８．２（２ｄ，１Ｈ），８．１（ｍ，１Ｈ），７．３−７．１（ｍ，５Ｈ），５．５（ｍ，１Ｈ），５．１５および４．９５（２ｍ，１Ｈ），４．７−４．４（ｍ，３Ｈ），４．１−３．９（ｍ，３Ｈ），３．５−３．４（ｍ，３Ｈ），３．２３，３．１９，３．１８，３．１６，３．０５および２．９６（６ｓ，９Ｈ），３．１−３．０および２．８−２．６５（２ｍ，２Ｈ），２．４−２．１５（ｍ，５Ｈ），２．１−１．９５（ｍ，２Ｈ），１．８−１．６（ｍ，３Ｈ），１．５−１．２（ｍ，２Ｈ），１．０５−０．８（ｍ，１８Ｈ），０．７５（ｍ，３Ｈ）。
【０２６９】
実施例１４
Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−３−｛［（２Ｓ）−３，３−ジメチル−１−（１，２−オキサジナン−２−イル）−１−オキソブタン−２−イル］アミノ｝−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド，トリフルオロ酢酸塩
【０２７０】
【化９４】
2013533228.tif 000097
標題化合物を、３工程で、中間体２１から出発して、まずトリフルオロ酢酸で脱保護した後、中間体４とカップリングさせ、最後にピペリジンで脱保護することにより調製した。最終生成物の精製を分取用ＨＰＬＣによって行った（移動相：アセトニトリル＋０．０１％ＴＦＡ／水＋０．０１％ＴＦＡ）。これにより、２．５ｍｇの標題化合物を得た。
ＨＰＬＣ（方法５）：Ｒｔ＝１．６７分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９０分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７６７（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２７１】
実施例１５
Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−｛［（２Ｓ）−１−（１，２−オキサジナン−２−イル）−１−オキソ−３，３−ジフェニルプロパン−２−イル］アミノ｝−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド，トリフルオロ酢酸塩
【０２７２】
【化９５】
2013533228.tif 000098
標題化合物を、３工程で、中間体２２から出発して、まずトリフルオロ酢酸で脱保護した後、中間体４とカップリングさせ、最後にピペリジンで脱保護することにより調製した。最終生成物の精製を分取用ＨＰＬＣによって行った（移動相：アセトニトリル＋０．０１％ＴＦＡ／水＋０．０１％ＴＦＡ）。これにより、２０ｍｇの標題化合物を得た。
ＨＰＬＣ（方法５）：Ｒｔ＝１．７８分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８７７（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２７３】
実施例１６
Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−｛［（１Ｓ，２Ｓ）−１−（１，２−オキサジナン−２−イルカルボニル）−２−フェニルシクロプロピル］アミノ｝−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド，トリフルオロ酢酸塩
【０２７４】
【化９６】
2013533228.tif 000099
標題化合物を、３工程で、中間体２３から出発して、まずトリフルオロ酢酸で脱保護した後、中間体４とカップリングさせ、最後にピペリジンで脱保護することにより調製した。最終生成物の精製を分取用ＨＰＬＣによって行った（移動相：アセトニトリル／０．１％水性ＴＦＡ）。これにより、９ｍｇの標題化合物を得た。
ＨＰＬＣ（方法６）：Ｒｔ＝１．９５分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９０分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８１３（Ｍ＋Ｈ）＋。
１Ｈ−ＮＭＲ（５００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ＝８．８５（ｍ，２Ｈ），８．７（ｍ，１Ｈ），８．２および７．８（２ｓ，１Ｈ），７．３−７．１（ｍ，５Ｈ），４．７５および４．６５（２ｍ，１Ｈ），４．７および４．６（２ｔ，１Ｈ），４．０−３．９（ｍ，２Ｈ），３．８５（ｍ，１Ｈ），３．７５−３．６（ｍ，４Ｈ），３．５５（ｍ，１Ｈ），３．２２，３．２０，３．１８，３．１７，３．０３および２．９８（６ｓ，９Ｈ），２．９２および２．８２（２ｔ，１Ｈ），２．５−２．４５（ｍ，３Ｈ），２．４−１．３（ｍ，１５Ｈ），１．０−０．７（ｍ，１８Ｈ），０．６５および０．６（２ｄ，３Ｈ）［さらなるシグナルがＨ２Ｏピーク下に隠れている］。
【０２７５】
実施例１７
Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−｛［（１Ｓ，２Ｒ）−１−（１，２−オキサジナン−２−イルカルボニル）−２−フェニルシクロプロピル］アミノ｝−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド，トリフルオロ酢酸塩
【０２７６】
【化９７】
2013533228.tif 000100
６１７ｍｇ（１．２ｍｍｏｌ）のｔｅｒｔ−ブチル（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−｛［（１Ｓ，２Ｒ）−１−（１，２−オキサジナン−２−イルカルボニル）−２−フェニルシクロプロピル］アミノ｝−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−カルボキシレート（中間体２４）を４４ｍｌのジクロロメタンに溶解させ、４．４ｍｌのトリフルオロ酢酸を添加し、混合物を室温で３０分間撹拌した。次いで混合物を減圧濃縮し、残留した残渣をジオキサン／水で凍結乾燥させた。これにより、７０２ｍｇ（ｑｕａｎｔ．）の脱保護化合物（２Ｒ，３Ｒ）−３−メトキシ−２−メチル−Ｎ−［（１Ｓ，２Ｒ）−１−（１，２−オキサジナン−２−イルカルボニル）−２−フェニルシクロプロピル］−３−［（２Ｓ）−ピロリジン−２−イル］プロパンアミド，トリフルオロ酢酸塩を粗製生成物として得、これを、さらに精製せずに次の工程で使用した。
【０２７７】
４７０ｍｇ（０．７４ｍｍｏｌ）のＮ−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−１−カルボキシ−２−メトキシ−４−メチルヘキサン−３−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド（中間体４）を５７ｍｌのＤＭＦに溶解させ、３９０ｍｇ（約０．７４ｍｍｏｌ）の上記で得られた（２Ｒ，３Ｒ）−３−メトキシ−２−メチル−Ｎ−［（１Ｓ，２Ｒ）−１−（１，２−オキサジナン−２−イルカルボニル）−２−フェニルシクロプロピル］−３−［（２Ｓ）−ピロリジン−２−イル］プロパンアミド，トリフルオロ酢酸塩、３３６ｍｇ（０．８８ｍｍｏｌ）のＯ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）および４２３μｌ（２．４ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンを連続して添加した。混合物を室温で２時間撹拌した。次いで、反応液を半飽和塩化アンモニウム水溶液と酢酸エチルの混合物に注入した。有機相を分取し、飽和重炭酸ナトリウム溶液と飽和塩化ナトリウム溶液で連続的に洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣を分取用ＨＰＬＣによって精製した。これにより、４５３ｍｇ（理論値の５９％）のＦｍｏｃ保護中間体Ｎ−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−｛［（１Ｓ，２Ｒ）−１−（１，２−オキサジナン−２−イルカルボニル）−２−フェニルシクロプロピル］アミノ｝−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミドを得た。
ＨＰＬＣ（方法５）：Ｒｔ＝２．５８分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝３．１０分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０３５（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２７８】
４５３ｍｇ（０．４３８ｍｍｏｌ）のこの中間体を２４ｍｌのＤＭＦに溶解させた。２．４ｍｌのピペリジンの添加後、反応液を室温で３０分間撹拌した。次いで混合物を減圧濃縮し、残渣を分取用ＨＰＬＣによって精製した（移動相：アセトニトリル／０．１％水性ＴＦＡ）。これにより、２６０ｍｇ（理論値の６４％）の標題化合物を無色の泡状物として得た。
ＨＰＬＣ（方法５）：Ｒｔ＝１．６４分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８１３（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ−ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ＝８．８（ｍ，２Ｈ），８．６５（ｍ，２Ｈ），７．３−７．１（ｍ，５Ｈ），４．８−４．０５（ｍ，２Ｈ），４．０および３．８２（２ｍ，２Ｈ），３．８−３．５（ｍ，８Ｈ），３．３２，３．２９，３．２０，３．１９，３．１２および３．００（６ｓ，９Ｈ），２．６５（ｔ，１Ｈ），２．５−２．４５（ｍ，３Ｈ），２．４−１．３（ｍ，１５Ｈ），１．１５−０．８５（ｍ，１８Ｈ），０．８および０．７５（２ｄ，３Ｈ）［さらなるシグナルがＨ２Ｏピーク下に隠れている］。
【０２７９】
実施例１８
Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−３−｛［（１Ｓ，２Ｒ）−１−（１，４−ジヒドロ−３Ｈ−２，３−ベンゾオキサジン−３−イルカルボニル）−２−フェニルシクロプロピル］アミノ｝−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド，トリフルオロ酢酸塩
【０２８０】
【化９８】
2013533228.tif 000101
１６６ｍｇ（０．１９６ｍｍｏｌ）のＮ−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−２−カルボキシ−１−メトキシプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド（中間体３０）を４０ｍｌのＤＭＦに溶解させ、８０ｍｇ（０．１９６ｍｍｏｌ）の［（１Ｓ，２Ｒ）−１−アミノ−２−フェニルシクロプロピル］（１，４−ジヒドロ−３Ｈ−２，３−ベンゾオキサジン−３−イル）メタノン、トリフルオロ酢酸塩（中間体３１）、１１２ｍｇ（０．２９４ｍｍｏｌ）のＯ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）および６８２μｌ（３．９ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンを連続して添加した。次いで、混合物を室温で一晩撹拌した。次いで反応液を減圧濃縮し、残渣を酢酸エチルに溶解させ、この溶液を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。最後に残渣を分取用ＨＰＬＣによって精製した。この様式で、１９ｍｇ（理論値の９％）のＦｍｏｃ保護中間体Ｎ−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−３−｛［（１Ｓ，２Ｒ）−１−（１，４−ジヒドロ−３Ｈ−２，３−ベンゾオキサジン−３−イルカルボニル）−２−フェニル-シクロプロピル］アミノ｝−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミドを得た。
ＨＰＬＣ（方法５）：Ｒｔ＝１．６８分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．５１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０８３（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２８１】
１９ｍｇ（０．０１５ｍｍｏｌ）のこの中間体を４ｍｌのＤＭＦに溶解させた。８１７μｌのピペリジンの添加後、反応液を室温で５分間撹拌した。次いで混合物を減圧濃縮し、残渣を、まずジエチルエーテルで温浸し、次いで分取用ＨＰＬＣによって精製した（移動相：アセトニトリル＋０．１％ＴＦＡ／０．１％水性ＴＦＡ）。適切な画分を合わせ、溶媒を減圧下除去し、次いで、残渣をジオキサン／水で凍結乾燥させた。これにより、１２ｍｇ（理論値の９２％）の標題化合物を無色の泡状物として得た。
ＨＰＬＣ（方法６）：Ｒｔ＝２．０分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８６１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２８２】
実施例１９
Ｎ−メチル−Ｌ−トレオニル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−｛［（２Ｓ）−１−（１，２−オキサジナン−２−イル）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル］アミノ｝−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド
【０２８３】
【化９９】
2013533228.tif 000102
１００ｍｇ（０．１８１ｍｍｏｌ）のＮ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｎ−メチル−Ｌ−トレオニル−Ｎ−［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−１−カルボキシ−２−メトキシ−４−メチルヘキサン−３−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド（中間体３２）を５ｍｌのＤＭＦに溶解させ、９４ｍｇ（０．１８１ｍｍｏｌ）の（２Ｒ，３Ｒ）−３−メトキシ−２−メチル−Ｎ−［（２Ｓ）−１−（１，２−オキサジナン−２−イル）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル］−３−［（２Ｓ）−ピロリジン−２−イル］プロパンアミド，トリフルオロ酢酸塩（中間体７）、４２ｍｇ（０．２１８ｍｍｏｌ）の１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩、３３ｍｇ（０．２１８ｍｍｏｌ）の１−ヒドロキシ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール水和物および６３μｌ（０．３６ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンを連続して添加した。次いで、混合物を室温で２時間撹拌した。次いで、溶媒を減圧下除去し、残渣を分取用ＨＰＬＣによって精製した。これにより、１２８ｍｇ（理論値の７５％）のＺ保護中間体Ｎ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｎ−メチル−Ｌ−トレオニル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−｛［（２Ｓ）−１−（１，２−オキサジナン−２−イル）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル］アミノ｝−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミドを得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法２）：Ｒｔ＝１．３２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９３７（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２８４】
１００ｍｇ（０．１０７ｍｍｏｌ）のこの中間体を２０ｍｌのメタノールに溶解させ、１０％パラジウム／炭素上で室温および大気圧にて１時間水素化した。次いで、この触媒を濾別し、溶媒を蒸発させた。残留した残渣をジオキサン／水（１：１）で凍結乾燥させた。これにより、８８ｍｇ（理論値の９７％）の標題化合物を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８０３（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２８５】
実施例２０
Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｌ−トレオニル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−｛［（２Ｓ）−１−（１，２−オキサジナン−２−イル）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル］アミノ｝−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド
【０２８６】
【化１００】
2013533228.tif 000103
８４ｍｇ（０．１０５ｍｍｏｌ）のＮ−メチル−Ｌ−トレオニル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−｛［（２Ｓ）−１−（１，２−オキサジナン−２−イル）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル］アミノ｝−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド（実施例１９）を、５ｍｌのジオキサン／水（１：１）に溶解させ、３１μｌ（０．４１８ｍｍｏｌ）の３７％強度のホルムアルデヒド水溶液と８ｍｇ（０．１２６ｍｍｏｌ）のシアノ水素化ホウ素ナトリウムを添加した。次いで、１ｍｌの０．１Ｎ塩酸を用いて混合物をｐＨ６〜７に調整し、１００℃で１時間撹拌した。次いで、反応液を半飽和重炭酸ナトリウム水溶液と酢酸エチルの混合物に注入した。有機相を分取し、飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。最後に残渣をアセトニトリル／水で凍結乾燥させた。これにより、７２ｍｇ（理論値の８４％）の標題化合物を無色の泡状物の形態で得た。
ＨＰＬＣ（方法５）：Ｒｔ＝１．６分；
ＬＣ−ＭＳ（方法２）：Ｒｔ＝０．９６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８１７（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２８７】
実施例２１
Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−｛［（２Ｒ）−１−（１，２−オキサジナン−２−イル）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル］アミノ｝−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド，トリフルオロ酢酸塩
【０２８８】
【化１０１】
2013533228.tif 000104
標題化合物を、実施例１８の合成と同様にして、中間体３０を（２Ｒ）−２−アミノ−１−（１，２−オキサジナン−２−イル）−３−フェニルプロパン−１−オン，トリフルオロ酢酸塩（中間体３３）とカップリングさせ、続いてピペリジンで脱保護することにより調製した。最終生成物の精製を分取用ＨＰＬＣによって行った（移動相：アセトニトリル＋０．１％ＴＦＡ／０．１％水性ＴＦＡ）。
ＨＰＬＣ（方法６）：Ｒｔ＝１．９分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８０１（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ−ＮＭＲ（５００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ＝８．８（ｍ，２Ｈ），８．６５（ｍ，１Ｈ），８．３２および８．１（２ｄ，１Ｈ），７．３−７．１（ｍ，５Ｈ），５．０５および４．９５（２ｍ，１Ｈ），４．６５（ｍ，１Ｈ），４．６２および４．５６（２ｔ，１Ｈ），４．１−３．７５（ｍ，５Ｈ），３．７−３．４５（ｍ，４Ｈ），３．２８，３．２２，３．１８，３．１７，３．０４および２．９９（６ｓ，９Ｈ），２．９および２．７５（２ｍ，２Ｈ），２．４６（ｍ，３Ｈ），２．４５−２．２（ｍ，３Ｈ），２．１−１．５（ｍ，１２Ｈ），１．０−０．８（ｍ，１８Ｈ），０．８および０．７５（２ｄ，３Ｈ）［さらなるシグナルがＨ２Ｏピーク下に隠れている］。
【０２８９】
実施例２２
Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−｛［（２Ｓ）−２−メチル−１−（１，２−オキサジナン−２−イル）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル］アミノ｝−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド，トリフルオロ酢酸塩
【０２９０】
【化１０２】
2013533228.tif 000105
標題化合物を、実施例１８の合成と同様にして、中間体３０を（２Ｓ）−２−アミノ−２−メチル−１−（１，２−オキサジナン−２−イル）−３−フェニルプロパン−１−オン，トリフルオロ酢酸塩（中間体３４）とカップリングさせ、続いてピペリジンで脱保護することにより調製した。最終生成物の精製を分取用ＨＰＬＣによって行った（移動相：アセトニトリル＋０．１％ＴＦＡ／０．１％水性ＴＦＡ）。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８１５（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２９１】
実施例２３
Ｎ−（３−カルボキシプロピル）−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−｛［（１Ｓ，２Ｒ）−１−（１，２−オキサジナン−２−イルカルボニル）−２−フェニルシクロプロピル］アミノ｝−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド
【０２９２】
【化１０３】
2013533228.tif 000106
５０ｍｇ（０．０５４ｍｍｏｌ）のＮ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−｛［（１Ｓ，２Ｒ）−１−（１，２−オキサジナン−２−イルカルボニル）−２−フェニルシクロプロピル］アミノ｝−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド，トリフルオロ酢酸塩（実施例１７）を８ｍｌのジオキサン／水（１：１）に溶解させ、７０ｍｌ（０．１０８ｍｍｏｌ）の１５％強度の４−オキソブタン酸の水溶液を添加した。次いで、反応液を１００℃で１時間撹拌した。室温まで冷却後、３．７ｍｇ（０．０５９ｍｍｏｌ）のシアノ水素化ホウ素ナトリウムを添加し、約３００μｌの０．１Ｎ塩酸の添加によって混合物をｐＨ３に調整した。次いで、反応液を１００℃でさらに２時間撹拌した。冷却後、さらに７０ｍｌ（０．１０８ｍｍｏｌ）の１５％強度の４−オキソブタン酸溶液を添加し、反応液をもう一度１００℃で１時間撹拌した。次いで、さらに３．７ｍｇ（０．０５９ｍｍｏｌ）のシアノ水素化ホウ素ナトリウムを添加し、続いて、約３００μｌの０．１Ｎ塩酸を用いてｐＨを３に再調整した。次いで、反応液を１００℃でさらに２時間撹拌した。反応が未だ終了していなかった場合は、３回目のこの手順を繰り返した。最後に反応液を濃縮し、残渣を分取用ＨＰＬＣによって精製した。この様式で、３２ｍｇ（理論値の６５％）の標題化合物を無色の泡状物の形態で得た。
ＨＰＬＣ（方法６）：Ｒｔ＝１．６４分；
ＬＣ−ＭＳ（方法９）：Ｒｔ＝４．７６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８９９（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ−ＮＭＲ（５００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ＝８．９５および８．８（２ｍ，１Ｈ），８．８８および８．６５（２ｓ，１Ｈ），７．４−７．１（ｍ，５Ｈ），５．０，４．７８，４．６５および４．５５（４ｍ，２Ｈ），４．１−３．７（ｍ，５Ｈ），３．３２，３．２９，３．２０，３．１２，３．１および３．０（６ｓ，９Ｈ），２．７５（ｍ，２Ｈ），２．６３（ｔ，１Ｈ），２．４−２．２（ｍ，４Ｈ），２．１−１．２（ｍ，１２Ｈ），１．２−０．８（ｍ，１６Ｈ），０．７５（ｍ，３Ｈ）［さらなるシグナルがＨ２ＯピークおよびＤＭＳＯピーク下に隠れている］。
【０２９３】
実施例２４
Ｎ−（３−カルボキシプロピル）−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−｛［（２Ｓ）−１−（１，２−オキサジナン−２−イル）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル］アミノ｝−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド
【０２９４】
【化１０４】
2013533228.tif 000107
標題化合物を、実施例２３の合成と同様にして、５０ｍｇのＮ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−｛［（２Ｓ）−１−（１，２−オキサジナン−２−イル）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル］アミノ｝−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド，トリフルオロ酢酸塩（実施例１）を４−オキソブタン酸と反応させることにより調製した。
収量：３４ｍｇ（理論値の７０％）
ＨＰＬＣ（方法５）：Ｒｔ＝１．６４分；
ＬＣ−ＭＳ（方法９）：Ｒｔ＝４．７７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８８７（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２９５】
実施例２５
Ｎ−（４−カルボキシベンジル）−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−｛［（１Ｓ，２Ｒ）−１−（１，２−オキサジナン−２−イルカルボニル）−２−フェニルシクロプロピル］アミノ｝−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド
【０２９６】
【化１０５】
2013533228.tif 000108
標題化合物を、実施例２３の合成と同様にして、１５ｍｇのＮ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−｛［（１Ｓ，２Ｒ）−１−（１，２−オキサジナン−２−イルカルボニル）−２−フェニルシクロプロピル］アミノ｝−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド，トリフルオロ酢酸塩（実施例１７）を４−ホルミル安息香酸と反応させることにより調製した。
収量：７．５ｍｇ（理論値の４８％）
ＨＰＬＣ（方法５）：Ｒｔ＝１．７５分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９４７（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２９７】
実施例２６
Ｎ−（５−カルボキシペンチル）−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−｛［（１Ｓ，２Ｒ）−１−（１，２−オキサジナン−２−イルカルボニル）−２−フェニルシクロプロピル］アミノ｝−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド
【０２９８】
【化１０６】
2013533228.tif 000109
１０ｍｇ（０．０１１ｍｍｏｌ）のＮ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−｛［（１Ｓ，２Ｒ）−１−（１，２−オキサジナン−２−イルカルボニル）−２−フェニルシクロプロピル］アミノ｝−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド，トリフルオロ酢酸塩（実施例１７）を２ｍｌのジオキサン／水（１：１）に溶解させ、２．８ｍｇ（０．０２２ｍｍｏｌ）の６−オキソヘキサン酸を添加した。次いで、反応液を１００℃で１時間撹拌した。室温まで冷却後、０．７５ｍｇ（０．０１２ｍｍｏｌ）のシアノ水素化ホウ素ナトリウムを添加し、０．１Ｎ塩酸の添加によって混合物をｐＨ３に調整した。次いで、反応液を１００℃でさらに１時間撹拌した。冷却後、さらに２．８ｍｇ（０．０２２ｍｍｏｌ）の６−オキソヘキサン酸を添加し、反応液をもう一度１００℃で１時間撹拌した。さらに０．７５ｍｇ（０．０１２ｍｍｏｌ）のシアノ水素化ホウ素ナトリウムを添加し、次いで、０．１Ｎ塩酸を用いてｐＨを３に再調整した。次いで、反応液を１００℃でさらに１時間撹拌した。次いで、３回目のこの手順を繰り返した。最後に反応液を濃縮し、粗製生成物を分取用ＨＰＬＣによって精製した。これにより、６．４ｍｇ（理論値の６４％）の標題化合物を無色の泡状物の形態で得た。
ＨＰＬＣ（方法５）：Ｒｔ＝１．６８分；
ＬＣ−ＭＳ（方法９）：Ｒｔ＝４．８６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９２７（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２９９】
実施例２７
Ｎ−（２−アミノエチル）−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−｛［（２Ｓ）−１−（１，２−オキサジナン−２−イル）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル］アミノ｝−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド、ビス（トリフルオロ酢酸）塩
【０３００】
【化１０７】
2013533228.tif 000110
標題化合物を、実施例２の合成と同様にして、６８ｍｇのＮ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−｛［（２Ｓ）−１−（１，２−オキサジナン−２−イル）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル］アミノ｝−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド，トリフルオロ酢酸塩（実施例１）を（２−オキソエチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルと反応させ、続いて、Ｂｏｃ保護基をトリフルオロ酢酸で除去することにより調製した。
収量：４９ｍｇ（２工程で理論値の６２％）
ＨＰＬＣ（方法５）：Ｒｔ＝１．５８分；
ＬＣ−ＭＳ（方法２）：Ｒｔ＝１．０５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８４４（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ−ＮＭＲ（６００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ＝８．２５（ｍ，１Ｈ），８．４５および８．１５（２ｄ，１Ｈ），７．６５−７．５５（ｍ，３Ｈ），７．２３−７．１（ｍ，５Ｈ），５．１２および４．９５（２ｍ，１Ｈ），４．７２および４．６２（２ｍ，１Ｈ），４．６および４．５２（２ｔ，１Ｈ），４．２−３．８（ｍ，４Ｈ），３．７（ｄ，１Ｈ），３．２３，３．２０，３．１９，３．１８，３．０３および２．９８（６ｓ，９Ｈ），３．０−２．７（ｍ，６Ｈ），２．４−１．２（ｍ，１５Ｈ），１．０５，１．０，０．８８および０．８２（４ｄ，６Ｈ），０．９２（ｍ，６Ｈ），０．７３（ｍ，６Ｈ）［さらなるシグナルがＨ２Ｏピーク下に隠れている］。
【０３０１】
実施例２８
Ｎ−（３−アミノプロピル）−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−｛［（１Ｓ，２Ｒ）−１−（１，２−オキサジナン−２−イルカルボニル）−２−フェニルシクロプロピル］アミノ｝−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド
【０３０２】
【化１０８】
2013533228.tif 000111
標題化合物を、実施例２７の合成と同様にして、２５ｍｇ（０．０２７ｍｍｏｌ）のＮ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−｛［（１Ｓ，２Ｒ）−１−（１，２−オキサジナン−２−イルカルボニル）−２−フェニルシクロプロピル］アミノ｝−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド，トリフルオロ酢酸塩（実施例１７）を（３−オキソプロピル）カルバミン酸ベンジルと反応させ、続いて、Ｚ保護基を水素化分解的除去する（溶媒としてのエタノール中で、触媒として１０％パラジウム担持炭素を使用して）ことにより調製した。
収量：１１ｍｇ（２工程で理論値の４１％）
ＨＰＬＣ（方法５）：Ｒｔ＝１．５３分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．７２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８７０（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０３０３】
実施例２９
Ｎ−（４−メトキシ−４−オキソブチル）−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−｛［（２Ｓ）−１−（１，２−オキサジナン−２−イル）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル］アミノ｝−３−オキソ-プロピル］ピロリジン−１−イル｝−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド
【０３０４】
【化１０９】
2013533228.tif 000112
標題化合物を、実施例２３の合成と同様にして、９．５ｍｇのＮ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−｛［（２Ｓ）−１−（１，２−オキサジナン−２−イル）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル］アミノ｝−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド，トリフルオロ酢酸塩（実施例１）を４−オキソブタン酸メチルと反応させることにより調製した。
収量：４ｍｇ（理論値の４３％）
ＨＰＬＣ（方法５）：Ｒｔ＝１．７３分；
ＬＣ−ＭＳ（方法９）：Ｒｔ＝４．９１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９０１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０３０５】
実施例３０
Ｎ−（６−アミノヘキシル）−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−｛［（２Ｓ）−１−（１，２−オキサジナン−２−イル）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル］アミノ｝−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド
【０３０６】
【化１１０】
2013533228.tif 000113
標題化合物を、実施例２８の合成と同様にして、２０ｍｇ（１６μｍｏｌ）のＮ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−｛［（２Ｓ）−１−（１，２−オキサジナン−２−イル）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル］アミノ｝−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド，トリフルオロ酢酸塩（実施例１）を（６−オキソヘキシル）カルバミン酸ベンジルと反応させ、続いて、Ｚ保護基を水素化分解的除去する（溶媒としてのメタノール中で、触媒として１０％パラジウム担持炭素を使用して）ことにより調製した。
収量：７．６ｍｇ（２工程で理論値の５５％）
ＨＰＬＣ（方法６）：Ｒｔ＝１．８分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．７０分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９０１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０３０７】
実施例３１
Ｎ−（６−アミノヘキシル）−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−｛［（１Ｓ，２Ｒ）−１−（１，２−オキサジナン−２−イルカルボニル）−２−フェニルシクロプロピル］アミノ｝−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド
【０３０８】
【化１１１】
2013533228.tif 000114
標題化合物を、実施例２８の合成と同様にして、２００ｍｇ（０．１０８ｍｍｏｌ）のＮ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−｛［（１Ｓ，２Ｒ）−１−（１，２−オキサジナン−２−イルカルボニル）−２−フェニルシクロプロピル］アミノ｝−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド，トリフルオロ酢酸塩（実施例１７）を（６−オキソヘキシル）カルバミン酸ベンジルと反応させ、続いて、Ｚ保護基を水素化分解的除去する（溶媒としてのメタノール中で、触媒として５％パラジウム担持炭素を使用して）ことにより調製した。
収量：６９ｍｇ（２工程で理論値の６５％）
ＨＰＬＣ（方法５）：Ｒｔ＝１．７分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．７６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９１２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０３０９】
Ｂ．生物学的活性の評価
本発明による化合物の生物学的活性は、当業者に知られたインビトロおよびインビボ検査によって実証することができる。例えば、本発明による化合物の薬理学的特性および薬物動態特性は、下記のアッセイを採用して調べることができる。
【０３１０】
Ｂ−１．７８６−Ｏ  ＲＣＣ細胞株に対する抗増殖効果の測定：
規定細胞数のヒト腎がん細胞株７８６−Ｏを、９６ウェルマイクロタイタープレート内の完全培地中に播種し（２５００または７０００細胞／ウェル）、３７℃／５％ＣＯ２で一晩インキュベートした。１８時間後、播種培地を無血清培地または２％ＦＣＳを含む培地と置き換えた。種々の濃度（１０−５Ｍ〜１０−１４Ｍ）のそれぞれの試験物質の添加によって処理を開始した。選択したインキュベーション時間は４８時間〜９６時間であった。ＭＴＴアッセイ（ＡＴＣＣ，Ｍａｎａｓｓａｓ，Ｖｉｒｇｉｎｉａ，ＵＳＡ，カタログ番号３０−１０１０Ｋ）を採用して増殖を測定した。インキュベーション時間後、ＭＴＴ試薬を細胞とともに４時間インキュベートし、続いて、洗浄剤を添加することにより細胞を一晩溶解させた。形成された色素を５７０ｎｍで検出した。試験物質で処理しなかったが、それ以外は同一に処理した細胞の増殖を１００％と規定した。この試験で得たデータは三連の測定値であり、少なくとも２回の独立した実験を行った。
【０３１１】
以下の表１に、このアッセイの代表的な作業実施例のＩＣ５０値を示す。
【０３１２】
【表１−１】
2013533228.tif 000115
【０３１３】
【表１−２】
2013533228.tif 000116
比較として、この試験では、モノメチルアウリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）は、２６０ｎＭのＩＣ５０値を有する。
【０３１４】
Ｂ−２．ＨＴ２９ｗｔ細胞株に対する抗増殖効果の測定
規定細胞数のヒト結腸癌細胞株ＨＴ２９ｗｔ（野生型）を、９６ウェルマイクロタイタープレート内の完全培地（１０％ＦＣＳ−ＲＰＭＩ）中に播種し（２５００細胞／ウェル）、３７℃／５％ＣＯ２で一晩インキュベートした。１８時間後、播種培地を、１０％ＦＣＳを含む新鮮培地と置き換えた。それぞれの試験物質の添加によって処理を開始した。試験対象の物質から、１０−５Ｍ〜１０−１４Ｍの濃度範囲（１：１０の希釈列）の用量／活性曲線を作成した。選択したインキュベーション時間は４８時間〜９６時間とした。ＭＴＴアッセイ（ＡＴＣＣ，Ｍａｎａｓｓａｓ，Ｖｉｒｇｉｎｉａ，ＵＳＡ，カタログ番号３０−１０１０Ｋ）を採用して増殖を測定した。インキュベーション時間後、ＭＴＴ試薬を細胞とともに４時間インキュベートし、続いて、洗浄剤を添加することにより細胞を一晩で溶解させた。形成された色素を５７０ｎｍで検出した。試験物質で処理しなかったが、それ以外は同一に処理した細胞の増殖を１００％と規定した。この試験で得たデータは三連の測定値であり、少なくとも２回の独立した実験を行った。
【０３１５】
以下の表２に、このアッセイの代表的な作業実施例のＩＣ５０値を示す。
【０３１６】
【表２】
2013533228.tif 000117
比較として、この試験では、モノメチルアウリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）は、１０ｎＭのＩＣ５０値を有する。
【０３１７】
Ｂ−３．チューブリンの重合に対する効果の測定：
がん細胞は、多くの場合、細胞分裂の増大の結果として、腫瘍の形成もまたもたらす変性細胞である。微小管は、紡錐体装置の紡錘糸を形成しており、細胞周期の必須の構成要素である。微小管の調節された構築および破壊により、娘細胞での染色体の厳密な分裂が可能になり、連続的な動的プロセスが構成される。この動的プロセスの破壊により、不正確な細胞分裂がもたらされ、最終的に細胞死がもたらされる。しかしながら、がん細胞の細胞分裂の増大により、該細胞は、特に、化学療法の固定構成要素を構成する紡錘糸毒に対して感受性にもなる。パクリタキセルまたはエポチロンなどの紡錘糸毒は、微小管の重合速度の急激な増大をもたらすものであるが、ビンカアルカロイドあるいはモノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）は、微小管の重合速度の急激な低減をもたらすものである。どちらの場合も、細胞周期の必要なダイナミズムが決定的に破壊される。本発明との関連における試験対象の化合物は、微小管の重合速度の低減をもたらすものである。
【０３１８】
チューブリンの重合は、Ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔｏｎ社の“Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ−ｂａｓｅｄ  Ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒｉｓａｔｉｏｎ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ”（Ｄｅｎｖｅｒ，Ｃｏｌｏｒａｄｏ，ＵＳＡ；注文番号：ＢＫ０１１）を用いて調べた。このアッセイでは、非重合チューブリンにＧＴＰを添加し、自発的に重合させる。このアッセイは、フルオロフォア４’，６−ジアミジノ−２−フェニルインドール（ＤＡＰＩ）のチューブリンに対する結合に基づいている。遊離型と結合型のＤＡＰＩは、発光スペクトルの違いに基づいて識別され得る。ＤＡＰＩは、非重合チューブリンと比べて重合チューブリンに対して有意に高い親和性を示すため、チューブリンの重合は、結合したＤＡＰＩフルオロフォアの蛍光の増大によって追跡することができる。
【０３１９】
このアッセイの実施のため、本発明の化合物（ＤＭＳＯ中の溶液）を、初期濃度１０ｍＭから１μＭまで水で希釈した。バッファー対照に加え、重合増大効果を有するパクリタキセルと重合阻害効果を有するビンブラスチンを、アッセイ対照としてさらに実験した。測定は、９６ウェルプレートの底面積の半分を用いて行った。チューブリンの重合の速度論を、蛍光測定器で３７℃にて１時間モニタリングした。励起波長を３５５ｎｍとし、発光は４６０ｎｍでモニタリングした。最初の１０分以内の線形増大領域で、１分あたりの蛍光の変化（ΔＦ／分）の計算を行い、これを微小管の重合速度として表す。試験物質の効力を、そのそれぞれの重合速度の低減に基づいて定量した。
【０３２０】
Ｂ−４．インビトロでの血漿安定性の測定：
方法Ａ：
１ｍｇの対象試験物質を０．５ｍｌのアセトニトリル／ＤＭＳＯ（９：１）に溶解させた。この溶液から、２０μｌを取り出し、１ｍｌのラットまたはヒト血漿に３７℃で添加した（Ｈａｒｌａｎ  ＆  ＷｉｎｋｅｌｍａｎｎのＬｉヘパリンを加えた雄Ｗｉｓｔａｒラットの血漿または全血試料由来の新鮮ヒト白血球枯渇血漿）。激しく振ったこの血漿溶液から、１００μｌのアリコートを、試料の添加の直後（参照としての初期値）、次いで、５、１０、３０、６０、１２０、１８０および２４０分後、ならびに必要に応じて２４時間後に取り出し、３００μｌのアセトニトリルに添加した。沈殿した血漿タンパク質を５０００ｒｐｍで１０分間の遠心分離によって除去し、３０μｌの上清みをＨＰＬＣにより、未修飾試験物質の含有量について解析した。定量は、対応するピークの面積パーセンテージによるものとした。
【０３２１】
ラット血漿でのＨＰＬＣ法：
機器：ＤＡＤ、バイナリーポンプ、オートサンプラー、カラムオーブンおよびサーモスタットを備えたＡｇｉｌｅｎｔ  １２００；カラム：Ｋｒｏｍａｓｉｌ  １００  Ｃ１８，２５０ｍｍ×４ｍｍ，５μｍ；カラム温度：４５℃；移動相Ａ：５ｍｌの過塩素酸／１ｌの水，移動相Ｂ：アセトニトリル；勾配：０〜８分  ９８％Ａ，２％Ｂ；８〜１５分  ５６％Ａ，４４％Ｂ；１５〜２０分  １０％Ａ，９０％Ｂ；２０〜２１分  １０％Ａ，９０％Ｂ；２１〜２３分  ９８％Ａ，２％Ｂ；２３〜２５分  ９８％Ａ，２％Ｂ；流速：２ｍｌ／分；ＵＶ検出：２２０ｎｍ。
【０３２２】
ヒト血漿でのＨＰＬＣ法：
機器：ＤＡＤ、バイナリーポンプ、オートサンプラー、カラムオーブンおよびサーモスタットを備えたＡｇｉｌｅｎｔ  １１００；カラム：Ｋｒｏｍａｓｉｌ  １００  Ｃ１８，２５０ｍｍ×４ｍｍ，５μｍ；カラム温度：４５℃；移動相Ａ：５ｍｌの過塩素酸／１ｌの水，移動相Ｂ：アセトニトリル；勾配：０〜３分  ９８％Ａ，２％Ｂ；３〜１０分  ６５％Ａ，３５％Ｂ；１０〜１５分  ４０％Ａ，６０％Ｂ；１５〜２１分  １０％Ａ，９０％Ｂ；２１〜２２分  １０％Ａ，９０％Ｂ；２２〜２４分  ９８％Ａ，２％Ｂ；２４〜２６分  ９８％Ａ，２％Ｂ；流速：２ｍｌ／分；ＵＶ検出：２２０ｎｍ。
【０３２３】
方法Ｂ：
試験物質を、ラット血漿またはヒト血漿中で３７℃にて５時間にわたって静かに攪拌しながらインキュベートした。種々の時点（０、２、５、１０、２０、３０、６０、１２０、１８０および３００分）で、１００μｌのアリコートを取り出した。内部標準（１０μｌ）の添加後、２００μｌのアセトニトリルの添加によってタンパク質を沈殿させ、混合物をエッペンドルフ遠心機にて５分間遠心分離した。１５０μｌの酢酸アンモニウムバッファー（ｐＨ３）を１５０μｌの上清みに添加後、未修飾試験物質の含有量をＬＣ／ＭＳＭＳによって解析した。
【０３２４】
以下の表３に、このラット血漿での代表的な作業実施例のデータから求めた半減期（ｔ１／２）を示す。
【０３２５】
【表３】
2013533228.tif 000118
比較として、ラット血漿では、モノメチルアウリスタチンＦのメチルエステル（ＭＭＡＦ−ＯＭｅ）は、＜１分のｔ１／２値を有する（方法Ａによる）。
【０３２６】
ヒト血漿では、一例として、本発明による作業実施例１、１７および２１の化合物では、２４時間後、分解は観察されなかったが、モノメチルアウリスタチンＦのメチルエステル（ＭＭＡＦ−ＯＭｅ）は、この期間中に約２０％が分解された。
【０３２７】
Ｂ−５．細胞透過性の測定：
物質の細胞透過性は、Ｃａｃｏ−２細胞を用いた流入アッセイでのインビトロ試験によって調べることができる［Ｍ．Ｄ．ＴｒｏｕｔｍａｎおよびＤ．Ｒ．Ｔｈａｋｋｅｒ，Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．２０（８），１２１０−１２２４（２００３）］。この目的で、細胞を２４ウェルフィルタープレートで１５〜１６日間培養した。透過の測定のため、それぞれの作業実施例をＨＥＰＥＳバッファー中で細胞に、先端部（Ａ）または基底部（Ｂ）のいずれかに適用し、２時間インキュベートした。０時間後および２時間後、試料をシス区画およびトランス区画から採取した。試料をＨＰＬＣ（Ａｇｉｌｅｎｔ  １２００，Ｂｏｅｂｌｉｎｇｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）により逆相カラムを用いて分離した。このＨＰＬＣシステムを、Ｔｕｒｂｏ  Ｉｏｎ  Ｓｐｒａｙ  Ｉｎｔｅｒｆａｃｅを介してＴｒｉｐｌｅ  Ｑｕａｄｒｏｐｏｌ質量分析計ＡＰＩ  ４０００（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  Ａｐｐｌｅｒａ，Ｄａｒｍｓｔａｄｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ）に連結させた。透過性をＰａｐｐ値に基づいて評価し、該値は、Ｓｃｈｗａｂらによって公開された式を用いて計算した［Ｄ．Ｓｃｈｗａｂら，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４６，１７１６−１７２５（２００３）］。物質は、Ｐａｐｐ（Ａ−Ｂ）に対するＰａｐｐ（Ｂ−Ａ）の比率が＞２または＜０．５である場合、能動輸送されたと分類した。
【０３２８】
Ｂ−６．Ｐ−糖タンパク質（Ｐ−ｇｐ）に対する基質特性の測定：
多くの腫瘍細胞は薬物に対して輸送タンパク質を発現し、これには、高頻度で細胞増殖抑制薬に対する耐性の発現が伴う。したがって、かかる輸送タンパク質（例えば、Ｐ−糖タンパク質（Ｐ−ｇｐ）またはＢＣＲＰなど）の基質でない物質では、活性プロフィールの改善が示され得る。
【０３２９】
Ｐ−ｇｐ（ＡＢＣＢ１）に対する物質の基質特性を、Ｐ−ｇｐを過剰発現しているＬＬＣ−ＰＫ１細胞（Ｌ−ＭＤＲ１細胞）を用いた流入アッセイによって調べた［Ａ．Ｈ．Ｓｃｈｉｎｋｅｌら，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９６，１６９８−１７０５（１９９５）］。この目的で、ＬＬＣ−ＰＫ１細胞またはＬ−ＭＤＲ１細胞を、９６ウェルフィルタープレートで３〜４日間培養した。透過の測定のため、それぞれの試験物質を単独または阻害剤（例えば、イベルメクチンもしくはベラパミルなど）の存在下、ＨＥＰＥＳバッファー中で細胞に、先端部（Ａ）または基底部（Ｂ）のいずれかに適用し、２時間インキュベートした。０時間後および２時間後、試料をシス区画およびトランス区画から採取した。試料をＨＰＬＣにより逆相カラムを用いて分離した。このＨＰＬＣシステムを、Ｔｕｒｂｏ  Ｉｏｎ  Ｓｐｒａｙ  Ｉｎｔｅｒｆａｃｅを介してＴｒｉｐｌｅ  Ｑｕａｄｒｏｐｏｌ質量分析計ＡＰＩ  ３０００（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  Ａｐｐｌｅｒａ，Ｄａｒｍｓｔａｄｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ）に連結させた。透過性をＰａｐｐ値に基づいて評価し、該値は、Ｓｃｈｗａｂらによって公開された式を用いて計算した［Ｄ．Ｓｃｈｗａｂら，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４６，１７１６−１７２５（２００３）］。物質は、Ｐａｐｐ（Ａ−Ｂ）に対するＰａｐｐ（Ｂ−Ａ）の流出比が＞２である場合、Ｐ−ｇｐの基質と分類した。
【０３３０】
Ｐ−ｇｐの基質特性のさらなる評価基準として、Ｌ−ＭＤＲ１細胞とＬＬＣ−ＰＫ１細胞の流出比または阻害剤の存在下もしくは非存在下での流出比を互いに比較してもよい。これらの値が２倍より大きく異なる場合、対象の物質はＰ−ｇｐの基質である。
【０３３１】
Ｃ．医薬組成物の作業実施例
本発明による化合物は、以下のような医薬製剤に変換され得る：
錠剤：
組成：
１００ｍｇの本発明による化合物、５０ｍｇのラクトース（一水和物）、５０ｍｇのトウモロコシデンプン（天然）、１０ｍｇのポリビニルピロリドン（ＰＶＰ  ２５）（ＢＡＳＦ，Ｌｕｄｗｉｇｓｈａｆｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）および２ｍｇのステアリン酸マグネシウム。
【０３３２】
錠剤の重量２１２ｍｇ．直径８ｍｍ，曲率半径１２ｍｍ。
【０３３３】
調製：
本発明による化合物、ラクトースおよびデンプンの混合物を、ＰＶＰの５％強度の水溶液（ｗ／ｗ）を用いて造粒する。乾燥後、この顆粒をステアリン酸マグネシウムと５分間混合する。この混合物を、慣用的な錠剤用プレス機でプレスする（錠剤形式については上記参照）。プレスの推奨値として１５ｋＮのプレス力が使用される。
【０３３４】
経口投与ための懸濁剤：
組成：
１０００ｍｇの本発明による化合物、１０００ｍｇのエタノール（９６％）、４００ｍｇのＲｈｏｄｉｇｅｌ（登録商標）（ＦＭＣ（Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ，ＵＳＡ）製のキサンタンガム）および９９ｇの水。
【０３３５】
１０ｍｌの経口懸濁剤が、本発明による化合物の単独用量（ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌ  ｄｏｓｅ）１００ｍｇに相当する。
【０３３６】
調製：
Ｒｈｏｄｉｇｅｌをエタノール中に懸濁させ、この懸濁液に本発明による化合物を添加する。撹拌しながら水を添加する。混合物をおよそ６時間、Ｒｈｏｄｉｇｅｌの膨潤が終了するまで撹拌する。
【０３３７】
経口投与のための液剤：
組成：
５００ｍｇの本発明による化合物、２．５ｇのポリソルベートおよび９７ｇのポリエチレングリコール４００。２０ｇの経口液剤が、本発明による化合物の単独用量１００ｍｇに相当する。
【０３３８】
調製：
本発明による化合物をポリエチレングリコールとポリソルベートの混合物中に、撹拌しながら懸濁させる。撹拌操作を、本発明による化合物が完全に溶解するまで継続する。
【０３３９】
ｉ．ｖ．溶液剤：
本発明による化合物を、飽和溶解度より下の濃度で、生理学的に許容され得る溶媒（例えば、等張性生理食塩水溶液、５％グルコース溶液および／または３０％ＰＥＧ４００溶液）に溶解させる。この溶液を滅菌濾過に供し、滅菌された発熱物質を含まない注射容器内に移す。
【国際調査報告】
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