(57)【要約】  本発明は、ＧＡＢＡA受容体のインビボイメージングのために有用な放射性フッ素化化合物を提供する。本発明によればまた、本発明の放射性フッ素化化合物の合成方法、特に自動化合成方法も提供される。本発明のさらに別の態様は、本発明の自動化合成方法を実施するのに適したカセットである。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の式Ｉの放射性フッ素化化合物。
【化１】
2013507345.tif 000033
（式中、
Ｒ1及びＲ2の一方はＣ1-4［18Ｆ］フルオロアルキル又はＣ1-4［18Ｆ］フルオロアルコキシであって、他方は水素であり、
Ｒ3はＣ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ4（式中、Ｒ4は水素又は直鎖若しくは枝分れＣ1-4アルキルであるか、或いはＲ4はＣ3-5複素環である。）である。）
【請求項２】
Ｒ1及びＲ2の一方がＣ1-4［18Ｆ］フルオロアルキルである、請求項１記載の放射性フッ素化化合物。
【請求項３】
Ｒ1及びＲ2の一方が［18Ｆ］フルオロメチル又は［18Ｆ］２−フルオロエチルである、請求項２記載の放射性フッ素化化合物。
【請求項４】
Ｒ1及びＲ2の一方がＣ1-4［18Ｆ］フルオロアルコキシである、請求項１記載の放射性フッ素化化合物。
【請求項５】
Ｒ1及びＲ2の一方が［18Ｆ］フルオロメトキシ又は［18Ｆ］２−フルオロエトキシである、請求項４記載の放射性フッ素化化合物。
【請求項６】
Ｒ1が［18Ｆ］フルオロメトキシ又は［18Ｆ］２−フルオロエトキシである、請求項５記載の放射性フッ素化化合物。
【請求項７】
Ｒ1が［18Ｆ］２−フルオロエトキシである、請求項６記載の放射性フッ素化化合物。
【請求項８】
Ｒ3がＣ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ4（式中、Ｒ4は直鎖Ｃ1-4アルキルである。）である、請求項１乃至請求項７のいずれか１項記載の放射性フッ素化化合物。
【請求項９】
Ｒ4がメチル又はエチルである、請求項８記載の放射性フッ素化化合物。
【請求項１０】
Ｒ4がエチルである、請求項９記載の放射性フッ素化化合物。
【請求項１１】
Ｒ3がＣ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ4（式中、Ｒ4は枝分れＣ1-4アルキルである。）である、請求項１乃至請求項７のいずれか１項記載の放射性フッ素化化合物。
【請求項１２】
Ｒ4がｔｅｒｔ−ブチルである、請求項１１記載の放射性フッ素化化合物。
【請求項１３】
請求項１乃至請求項１２のいずれか１項記載の放射性フッ素化化合物の合成方法であって、次の式Ｉａの前駆体化合物を適当な18Ｆ供給源と反応させる段階を含んでなる方法。
【化２】
2013507345.tif 000034
（式中、
Ｒ1a及びＲ2aの一方は前駆体基であって、他方はＨであり、Ｒ1aが前駆体基である場合にそれはＣ1-4アルキル−ＬＧ、Ｃ1-4アルコキシル−ＬＧ及びヒドロキシルから選択され、Ｒ2aが前駆体基である場合にそれはＣ1-4アルキル−ＬＧ及びＣ1-4アルコキシル−ＬＧから選択され、ＬＧはブロミド、メシレート及びトシレートから選択される脱離基であり、
Ｒ3aは請求項１及び請求項８乃至請求項１２のいずれか１項でＲ3に関して定義した通りである。）
【請求項１４】
Ｒ1aが前記前駆体基である、請求項１３記載の方法。
【請求項１５】
Ｒ1aがアルコキシ−ＬＧであり、前記適当な18Ｆ供給源が［18Ｆ］フッ化物イオンである、請求項１４記載の方法。
【請求項１６】
Ｒ1aがヒドロキシルであり、前記適当な18Ｆ供給源がＣ1-4［18Ｆ］フルオロアルキル−ＬＧである、請求項１４記載の方法。
【請求項１７】
当該方法が自動化される、請求項１３乃至請求項１６のいずれか１項記載の方法。
【請求項１８】
請求項１７記載の方法を実施するためのカセットであって、
（ｉ）請求項１３乃至請求項１６のいずれか１項記載の方法で定義された式Ｉａの前駆体化合物を含む容器、及び
（ｉｉ）適当な18Ｆ供給源を用いて容器を溶出するための手段
を含んでなるカセット。
【請求項１９】
さらに、過剰の18Ｆを除去するためのイオン交換カートリッジを含む、請求項１８記載のカセット。
【請求項２０】
請求項１乃至請求項１２のいずれか１項記載の放射性フッ素化化合物を、哺乳動物への投与に適した形態の生体適合性キャリヤーと共に含んでなる放射性医薬組成物。
【請求項２１】
ＰＥＴイメージング方法で使用するための、請求項１乃至請求項１２のいずれか１項記載の放射性フッ素化化合物。
【請求項２２】
被験体の中枢神経系（ＣＮＳ）におけるＧＡＢＡA受容体の分布を決定するための陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）イメージング方法であって、
（ｉ）請求項１乃至請求項１２のいずれか１項記載の放射性フッ素化化合物を前記被験体に投与する段階、
（ｉｉ）段階（ｉ）で投与した前記放射性フッ素化化合物を前記被験体のＣＮＳ内のＧＡＢＡA受容体に結合させる段階、
（ｉｉｉ）段階（ｉｉ）で結合させた前記放射性フッ素化化合物中に存在する18Ｆの陽電子放出崩壊から導かれる信号を検出する段階、並びに
（ｉｖ）前記信号の位置及び量の画像を形成する段階であって、前記信号が前記被験体におけるＧＡＢＡA受容体の分布を表す段階
を含んでなるＰＥＴ方法。
【請求項２３】
前記放射性フッ素化化合物が請求項２０記載の放射性医薬組成物として投与される、請求項２２記載のＰＥＴ方法。
【請求項２４】
前記被験体はＧＡＢＡA状態を有することが知られ又は疑われている、請求項２２又は請求項２３記載のＰＥＴ方法。
【請求項２５】
前記被験体に関する治療計画の進行中に繰り返して実施される請求項２２又は請求項２３記載のＰＥＴ方法であって、前記治療計画がＧＡＢＡA状態と戦うための薬物の投与を含むＰＥＴ方法。
【請求項２６】
請求項２２記載のＰＥＴ方法を、ＧＡＢＡA発現の分布を特定の臨床像に帰因させる追加段階（ｖ）と共に含んでなる診断方法。
【請求項２７】
請求項２５記載のＰＥＴ方法又は請求項２６記載の診断方法で使用するための、請求項１乃至請求項１２のいずれか１項記載の放射性フッ素化化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、インビボイメージング、特に中枢神経系（ＣＮＳ）のγ−アミノ酪酸（ＧＡＢＡ）受容体のインビボイメージングに関する。本発明は、ベンゾジアゼピンアンタゴニストであるフルマゼニルに基づく新規な放射性フッ素化化合物を提供する。
【背景技術】
【０００２】
γ−アミノ酪酸（ＧＡＢＡ）は、ヒトの脳における最も重要な抑制性神経伝達物質である。ＧＡＢＡ受容体は膜貫通受容体であり、２つの主なタイプ、即ちＧＡＢＡA受容体及びＧＡＢＡB受容体に分けられる。ＧＡＢＡA受容体は、これまで薬理学的開発の主要な対象となってきた。多くのＧＡＢＡA受容体サブタイプが発見され、これらのサブタイプに対して選択的な新規化学構造が開発されている。ＧＡＢＡA受容体が正常に活性化されれば、塩化物イオンがその細孔を選択的に通過する。この塩化物イオンチャンネルゲーティングは、膜電位を静止レベル付近に安定化することにより、ニューロンに対して一般に抑制的である。
【０００３】
ＧＡＢＡA受容体神経伝達の欠陥は、ＧＡＢＡA受容体の減少或いは例えばＧＡＢＡA受容体遺伝子の遺伝的突然変異、外傷性脳損傷又は薬学的傷害に原因するＧＡＢＡA受容体の機能欠陥によって引き起こされることがあり、てんかん、不安障害、パーキンソン病及び慢性疼痛をはじめとする若干の神経学的及び精神医学的障害に関係している。したがって、ＧＡＢＡA受容体に対して選択的な放射性リガンドの開発は、生きているヒト患者、特にＧＡＢＡA受容体神経伝達の欠陥に関連する障害に罹患している患者における脳イメージング検査に関して価値がある。
【０００４】
（フルマゼピルとしても知られる）フルマゼニル（コード名Ｒｏ １５−１７８８、商品名Ａｎｅｘａｔｅ、Ｌａｎｅｘａｔ、Ｍａｚｉｃｏｎ、Ｒｏｍａｚｉｃｏｎ）はイミダゾ［１，５−ａ］［１，４］ベンゾジアゼピンであって、これはＣＮＳにおけるＧＡＢＡA受容体の中和性アロステリックモジュレーターである（Ｊｏｈｎｓｔｏｎ １９９６ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｔｈｅｒ；６９（３）：１７３−１９８）。フルマゼニルの化学構造は次の通りである。
【０００５】
【化１】
2013507345.tif 000002
【０００６】
これまで、フルマゼニルの最も普通の用途は、ベンゾジアゼピンの過量に対する解毒剤としてのものであった。これは、フルマゼニルがＧＡＢＡA受容体のベンゾジアゼピン結合部位における競合阻害によってベンゾジアゼピンの効果を逆転させるからである。その上、フルマゼニルはアゴニスト活性をほとんど又は全く有しないので、その放射性標識バージョンが陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）ラジオトレーサーとして開発されてきた。
【０００７】
当技術分野で知られているフルマゼニルの放射性フッ素化誘導体は、［18Ｆ］フルマゼニル（［18Ｆ］ＦＭＺ）、［18Ｆ］フルオロフルマゼニル（［18Ｆ］ＦＦＭＺ）及び［18Ｆ］フルオロエチルフルマゼニル（［18Ｆ］ＦＥＦＭＺ）である。
【０００８】
［18Ｆ］ＦＭＺは、ニトロ前駆体化合物の直接放射性フッ素化によって18Ｆが導入されている点を除き、フルマゼニルと同じ化学式を有している。
【０００９】
【化２】
2013507345.tif 000003
【００１０】
［18Ｆ］ＦＭＺは、高い親和性（Ｋi＝約０．５ｎＭ）及び選択性をもってＧＡＢＡA受容体に結合する。Ｒｙｚｈｉｋｏｖ ｅｔ ａｌ（２００５ Ｎｕｃ Ｍｅｄ Ｂｉｏｌ；３２：１０９−１１６）は、ニトロ前駆体化合物からの［18Ｆ］ＦＭＺの製法を記載している。しかし、本発明者らによれば、この合成法は２．７〜７．７％という最適と言えない合成終了時（ＥＯＳ）収率を有することがわかった（本明細書中に比較例として記載されている）。さらに、Ｒｙｚｈｉｋｏｖ ｅｔ ａｌによって記載された合成法は、すべての放射合成プラットホーム上における自動化にはなじまない高い反応温度を使用する。これらのＥＯＳ収率は、Ｏｄａｎｏ ｅｔ ａｌ（Ｎｅｕｒｏｉｍａｇｅ ２００９ ４５（３）８９１−９０２）によって報告されたものと同等である。
【００１１】
［18Ｆ］ＦＦＭＺは、カルボン酸前駆体化合物のフルオロエチル化によって18Ｆが導入されているフルマゼニルの18Ｆ標識誘導体である（Ｍｉｔｔｅｒｈａｕｓｅｒ ｅｔ ａｌ ２００４ Ｎｕｃ Ｍｅｄ Ｂｉｏｌ；３１：２９１−２９５）。
【００１２】
【化３】
2013507345.tif 000004
【００１３】
［18Ｆ］ＦＦＭＺは、高い脳取込み及びＧＡＢＡA受容体に対する高い選択的結合を有するものとして報告されている。しかし、［18Ｆ］ＦＦＭＺの合成法は低いＥＯＳ収率を与える。
【００１４】
［18Ｆ］ＦＥＦＭＺは、ワンポット合成において、［18Ｆ］フルオロエチルトシレートを用いたデスメチル前駆体化合物のＮ−アルキル化によって得ることができる（Ｍｏｅｒｌｅｉｎ ａｎｄ Ｐｅｒｌｍｕｔｔｅｒ １９９２ Ｅｕｒ Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ；２１８：１０９−１１５）。
【００１５】
【化４】
2013507345.tif 000005
【００１６】
この［18Ｆ］ＦＥＦＭＺ合成法は、高い収率を与えるものとして報告されている。しかし、インビボ投与後におけるこの化合物のクリアランスは、インビボイメージングを可能にするには速すぎる。
【００１７】
本発明は、インビボでＧＡＢＡA受容体を検査するのに適した代わりの放射性フッ素化化合物であって、先行技術で知られたものに比べて改善された性質を有する放射性フッ素化化合物を提供しようとするものである。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１８】
米国特許第４，３１６，８３９号明細書
【発明の概要】
【００１９】
本発明は、ＧＡＢＡA受容体のインビボイメージングのために有用な新規放射性フッ素化化合物を提供する。本発明の放射性フッ素化化合物の合成は高い収率を与える。本発明によればまた、本発明の放射性フッ素化化合物の合成方法、特に自動化合成方法も提供される。本発明のさらに別の態様は、本発明の自動化合成方法を実施するのに適したカセットである。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
一態様では、本発明は次の式Ｉの放射性フッ素化化合物に関する。
【００２１】
【化５】
2013507345.tif 000006
【００２２】
式中、
Ｒ1及びＲ2の一方はＣ1-4［18Ｆ］フルオロアルキル又はＣ1-4［18Ｆ］フルオロアルコキシであって、他方は水素であり、
Ｒ3はＣ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ4（式中、Ｒ4は水素又は直鎖若しくは枝分れＣ1-4アルキルであるか、或いはＲ4はＣ3-5複素環である。）である。
【００２３】
「放射性フッ素化化合物」という用語は、その分子式が18Ｆを含む化合物をいう。18Ｆの容易な入手可能性及び物理的性質の点で、それはＰＥＴラジオトレーサーの開発において特に好まれる放射性同位体である（Ｓｎｙｄｅｒ ａｎｄ Ｋｉｌｂｏｕｒｎ“Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｆｌｕｏｒｉｎｅ−１８ Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ”ｐｐ １９５−２２７；“Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ”２００３：Ｗｅｌｃｈ ａｎｄ Ｒｅｄｖａｎｌｙ，Ｅｄｓ）。
【００２４】
本発明に係る好適な塩には、（ｉ）鉱酸（例えば、塩酸、臭化水素酸、リン酸、メタリン酸、硝酸及び硫酸）から導かれるもの並びに有機酸（例えば、酒石酸、トリフルオロ酢酸、クエン酸、リンゴ酸、乳酸、フマル酸、安息香酸、グリコール酸、グルコン酸、コハク酸、メタンスルホン酸及びｐ−トルエンスルホン酸）から導かれるもののような生理学的に許容される酸付加塩、並びに（ｉｉ）アンモニウム塩、アルカリ金属塩（例えば、ナトリウム塩及びカリウム塩）、アルカリ土類金属塩（例えば、カルシウム塩及びマグネシウム塩）、有機塩基（例えば、トリエタノールアミン、Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン、ピペリジン、ピリジン、ピペラジン及びモルホリン）との塩、及びアミノ酸（例えば、アルギニン及びリシン）との塩のような生理学的に許容される塩基塩がある。
【００２５】
本発明に係る好適な溶媒和物には、エタノール、水、食塩水、生理的緩衝液及びグリコールと共に生成されるものがある。
【００２６】
「アルキル」という用語は、好ましくは１〜４の炭素原子を含む直鎖又は枝分れアルキル基を意味する。かかる基の例には、メチル、エチル及びプロピルがある。
【００２７】
「アルコキシ」という用語はアルキルエーテル基を意味し、ここでアルキルという用語は上記に定義した通りである。好適なアルコキシ基の例には、メトキシ、エトキシ及びプロポキシがある。
【００２８】
「［18Ｆ］フルオロアルキル」及び「［18Ｆ］フルオロアルコキシ」という用語は、それぞれ、上記に定義したようなアルキル基及びアルコキシ基を18Ｆで置換したものをいう。好適には、18Ｆは置換基の遠位端にある水素の１つと置き換わる。即ち、Ｃ1-4［18Ｆ］フルオロアルキルは−（ＣＨ2）n−18Ｆであり、Ｃ1-4［18Ｆ］フルオロアルコキシは−Ｏ−（ＣＨ2）n−18Ｆであり、式中のｎはいずれの場合にも１〜４である。
【００２９】
「複素環」という用語は、本明細書中では、芳香族又は脂肪族環式基であって、環が窒素、酸素及び硫黄から選択される１以上のヘテロ原子を含むものをいう。
【００３０】
式Ｉの放射性フッ素化化合物の好ましい実施形態では、Ｒ1及びＲ2の一方がＣ1-4［18Ｆ］フルオロアルキルであり、最も好ましくはＲ1である。好ましいＣ1-4［18Ｆ］フルオロアルキル基は［18Ｆ］フルオロメチル及び［18Ｆ］２−フルオロエチルである。
【００３１】
式Ｉの放射性フッ素化化合物のさらに好ましい実施形態では、Ｒ1及びＲ2の一方がＣ1-4［18Ｆ］フルオロアルコキシであり、最も好ましくはＲ1である。好ましいＣ1-4［18Ｆ］フルオロアルコキシ基は［18Ｆ］フルオロメトキシ及び［18Ｆ］２−フルオロエトキシであり、最も好ましくは［18Ｆ］２−フルオロエトキシである。
る。
【００３２】
式Ｉの好ましいＲ3基は、Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ4（式中、Ｒ4は直鎖又は枝分れＣ1-4アルキルであり、最も好ましくはメチル、エチル又はｔｅｒｔ−ブチルである。）である。
【００３３】
別の態様では、本発明は、式Ｉの放射性フッ素化化合物の合成方法であって、次の式Ｉａの前駆体化合物を適当な18Ｆ供給源と反応させる段階を含んでなる方法を提供する。
【００３４】
【化６】
2013507345.tif 000007
【００３５】
式中、
Ｒ1a及びＲ2aの一方は前駆体基であって、他方はＨであり、Ｒ1aが前駆体基である場合にそれはＣ1-4アルキル−ＬＧ、Ｃ1-4アルコキシル−ＬＧ及びヒドロキシルから選択され、Ｒ2aが前駆体基である場合にそれはＣ1-4アルキル−ＬＧ及びＣ1-4アルコキシル−ＬＧから選択され、ＬＧはブロミド、メシレート及びトシレートから選択される脱離基であり、
Ｒ3aは式ＩのＲ3に関して定義した通りである。
【００３６】
「適当な18Ｆ供給源」とは、18Ｆが共有結合して式Ｉの放射性フッ素化化合物を生じるようにして前駆体化合物中の前駆体基と反応し得る化学形態の18Ｆを意味する。適当な18Ｆ供給源の選択は、それを反応させる予定の前駆体基に依存する。一層詳しい論議を以下に示す。
【００３７】
概して言えば、前駆体化合物を適当な18Ｆ供給源と「反応させる」段階は、できるだけ高い放射化学収率（ＲＣＹ）で所望の放射性フッ素化化合物を生成するのに適した反応条件下で２種の反応体を合わせることを含んでいる。若干の詳細な経路を以下に示す。
【００３８】
本発明の「前駆体化合物」は、18Ｆの好都合な化学形態との化学反応が部位特異的に起こるように18Ｆラベルの所望位置に前駆体基を含む式Ｉの放射性フッ素化化合物の非放射性誘導体からなる。前駆体基は、放射性フッ素化が最小数の段階（理想的にはただ１つの段階）で実施でき、かつ格別の精製の必要なしに（理想的にはいかなる追加の精製も必要なしに）式Ｉの所望放射性フッ素化化合物が得られるように設計されている。かかる前駆体化合物は合成品であり、良好な化学純度で簡便に得ることができる。前駆体化合物は、キット中又は自動化合成装置と共に使用するのに適したカセット中に溶液状態で供給することができる。キット及びカセットは本発明の追加の態様をなし、以下に一層詳しく論議される。
【００３９】
「前駆体基」は、上記に定義した前駆体化合物の置換基であって、18Ｆが部位特異的に組み込まれて式Ｉの所望放射性フッ素化化合物を生じるようにして18Ｆ供給源と反応するものである。
【００４０】
「脱離基」は、結合電子を伴って安定な化学種として排除される原子又は原子団である。本発明の文脈中における好適な脱離基には、ブロミド、メシレート及びトシレートがある。
【００４１】
Ｙａｎｇ ｅｔ ａｌ（２００９ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ；６：１０３６−１０４０）によって開示された反応スキームを改変することで、Ｒ1aが前駆体基である前駆体化合物を得ることができる。スキーム１は、いかにして前駆体化合物が得られるかを示している。
【００４２】
【化７】
2013507345.tif 000008
【００４３】
後の段階で所望の脱離基を導入するために必要な化学反応を実行するように準備された適当なアミノ安息香酸化合物（１）をトリホスゲンと反応させることで、ベンゾキサジン−２，４−ジオン中間体（２）を得る。ＤＭＳＯ中における２とサルコシンとの反応はベンゾジアゼピン（３）を生じる。記載された条件を用いて、一般式４の化合物が良好な収率で得られる。４をさらに修飾することで、標準的な化学変換を用いて適当な前駆体化合物を得ることができる。
【００４４】
下記の実施例２は、Ｒ1aがヒドロキシルであり、Ｒ2aが水素であり、Ｒ3aがＣ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ4（式中、Ｒ4はエチルである。）である「前駆体化合物１」を得るための方法を記載している。下記の実施例４は、Ｒ1aがヒドロキシルであり、Ｒ2aが水素であり、Ｒ3aがＣ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ4（式中、Ｒ4はｔｅｒｔ−ブチルである。）である「前駆体化合物２」を得るための方法を記載している。
【００４５】
Ｒ2が前駆体基である場合、前駆体化合物は下記のスキーム２に記載された化学反応を用いて得ることができる。この場合、適当なイソシアネートアセテートは標準的なアルキル化条件を用いて商業的に入手可能な材料から製造される。標準的な化学変換を用いて化合物８を適宜に修飾することで、所望の前駆体を生成することができる。
【００４６】
【化８】
2013507345.tif 000009
【００４７】
Ｒ3aが複素環を含む式Ｉａの前駆体化合物は、Ｗａｔｊｅｎ ｅｔ ａｌ（Ｊ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ １９８９；３２（１０）：２２８２−２２９１）によって記載された方法で得ることができる。
【００４８】
18Ｆの導入は、脱離基（ＬＧ）（即ち、ブロミド、メシレート又はトシレート、好ましくはトシレート）を含む前駆体化合物と、好適な18Ｆ供給源である18Ｆ−フッ化物イオンとの反応を含む直接標識によって達成できる。放射性フッ素化反応用の［18Ｆ］フッ化物イオン（18Ｆ-）は、通常は核反応18Ｏ（ｐ，ｎ）18Ｆから水溶液として得られ、次いでカチオン性対イオンの添加及びそれに続く水の除去によって反応性にされる。好適なカチオン性対イオンは、無水反応溶媒中において、18Ｆ-の溶解性を維持するのに十分な溶解度を有するべきである。したがって、使用されてきた対イオンには、ルビジウム又はセシウムのような大きいが軟らかい金属イオン、Ｋｒｙｐｔｏｆｉｘ（商標）のようなクリプタンドと錯体化したカリウム、或いはテトラアルキルアンモニウム塩がある。好ましい対イオンは、無水溶媒中での溶解性が良く、18Ｆ-の反応性を向上させることから、Ｋｒｙｐｔｏｆｉｘ（商標）のようなクリプタンドと錯体化したカリウムである。このようにして反応性になった18Ｆ-を、Ｃ1-4アルキル−ＬＧ又はＣ1-4アルコキシ−ＬＧを含む式Ｉａの前駆体化合物と反応させることで、Ｃ1-4［18Ｆ］フルオロアルキル又はＣ1-4［18Ｆ］フルオロアルコキシを含む式Ｉの放射性フッ素化化合物が得られる。Ｃ1-4アルキル−ＬＧ又はＣ1-4アルコキシ−ＬＧ中のアルキル又はアルコキシは、Ｃ1-4［18Ｆ］フルオロアルキル又はＣ1-4［18Ｆ］フルオロアルコキシ中のアルキル又はアルコキシにそれぞれ対応している。ここで、Ｃ1-4［18Ｆ］フルオロアルキル又はＣ1-4［18Ｆ］フルオロアルコキシは式Ｉに関して上記に好適なもの及び好ましいものとして定義した通りである。脱離基ＬＧの好適なもの及び好ましいものは上記に定義した通りである。
【００４９】
18Ｆはまた、18Ｆを含むシントン（例えば、［18Ｆ］フルオロアルキルブロミド、［18Ｆ］フルオロアルキルメシレート又は［18Ｆ］フルオロアルキルトシレート）で前駆体化合物中のヒドロキシル基をＯ−アルキル化することによっても導入できる。したがって、Ｒ1aの前駆体基がヒドロキシルである式Ｉａの前駆体化合物を、好適な18Ｆ供給源としてのＣ1-4［18Ｆ］フルオロアルキル−ＬＧと反応させることで、Ｃ1-4［18Ｆ］フルオロアルコキシを含む式Ｉの放射性フッ素化化合物が得られる。
【００５０】
実施例２（ｉｉｉ）は、ヒドロキシル前駆体基を含む前駆体化合物１を［18Ｆ］フルオロエチルトシレートで放射性フッ素化して［18Ｆ］−化合物１を得る場合を記載している。非放射性化合物１のＫiは２．４ｎＭであることがわかった（実施例５参照）。インビボモデルにおける［18Ｆ］−化合物１の体内分布は、良好な領域差別化、即ち脳のＧＡＢＡリッチ領域とＧＡＢＡプア領域との差別化を示した（実施例６参照）。
【００５１】
実施例４（ｖ）は、やはりヒドロキシル前駆体基を含む前駆体化合物２を［18Ｆ］フルオロエチルトシレートで放射性フッ素化して［18Ｆ］−化合物２を得る場合を記載している。非放射性化合物２のＫiは０．５３ｎＭであることがわかった（実施例５参照）。インビボモデルにおける［18Ｆ］−化合物２の体内分布は、良好な領域差別化、即ち脳のＧＡＢＡリッチ領域とＧＡＢＡプア領域との差別化を示した（実施例７参照）。
【００５２】
本発明の方法の好ましい実施形態では、式Ｉａの前駆体化合物のＲ1aが前駆体基である。Ｒ1aが前駆体基である場合、それは好ましくはＣ1-4アルコキシ−ＬＧ又はヒドロキシルであり、特に好ましくはメトキシ−ＬＧ、エトキシ−ＬＧ又はヒドロキシルであり、最も好ましくはヒドロキシルである。
【００５３】
現在、特にＰＥＴトレーサーとして使用するための18Ｆ標識化合物の合成は、例えばＴｒａｃｅｒｌａｂ（商標）及びＦａｓｔｌａｂ（商標）（いずれもＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社製）のような自動化放射合成装置によって最も簡便に実施されている。Ｆａｓｔｌａｂ（商標）は自動化ＰＥＴラジオトレーサー合成プラットホームに関する技術の現状を表すものである結果、新しいＰＥＴラジオトレーサーの開発に当たっては、その合成がＦａｓｔｌａｂ（商標）に適合していることが望ましい。本発明の放射性フッ素化化合物は、その合成がＦａｓｔｌａｂ（商標）に適合しているので、この点で先行技術のものに比べて有利である。放射化学は、「カセット」を装置に取り付けることにより、自動化合成装置上で実施される。通常、かかるカセットは流体通路、反応器、及び試薬バイアル並びに放射合成後の清掃段階で使用される任意の固相抽出カートリッジを受け入れるためのポートを含んでいる。
【００５４】
本発明のさらに別の態様では、本発明の自動化方法を実施するためのカセットであって、
（ｉ）本発明の方法に関して上記に定義された前駆体化合物を含む容器、及び
（ｉｉ）本発明の方法に関して上記に定義された適当な18Ｆ供給源を用いて容器を溶出するための手段
を含んでなるカセットが提供される。
【００５５】
かかるカセットはまた、過剰の18Ｆを除去するためのイオン交換カートリッジも含み得る。自動化合成のために必要な試薬、溶媒及び他の消耗品もまた、濃度、容量、送出時間などに関する最終ユーザーの要求条件を満たすように自動化合成装置を運転させるソフトウェアを保持したコンパクトディスクのようなデータ媒体と共に含めることができる。
【００５６】
本発明によればまた、本明細書中に定義される放射性フッ素化化合物を、哺乳動物への投与に適した形態の生体適合性キャリヤーと共に含んでなる「放射性医薬組成物」も提供される。
【００５７】
「生体適合性キャリヤー」は、放射性医薬組成物が生理学的に認容され得るようにして（即ち、毒性又は過度の不快感なしに哺乳動物体に投与できるようにして）放射性フッ素化化合物を懸濁又は溶解するための流体（特に液体）である。生体適合性キャリヤーは、好適には、無菌のパイロジェンフリー注射用水、（有利には注射用の最終生成物が等張性又は非低張性になるように平衡させ得る）食塩水のような水溶液、或いは１種以上の張度調整物質（例えば、血漿陽イオンと生体適合性対イオンとの塩）、糖（例えば、グルコース又はスクロース）、糖アルコール（例えば、ソルビトール又はマンニトール）、グリコール（例えば、グリセロール）又は他の非イオン性ポリオール物質（例えば、ポリエチレングリコール、プロピレングリコールなど）の水溶液のような注射可能なキャリヤー液体である。生体適合性キャリヤーはまた、エタノールのような生体適合性有機溶媒を含んでいてもよい。かかる有機溶媒は、親油性の高い化合物又は配合物を可溶化するために有用である。好ましくは、生体適合性キャリヤーはパイロジェンフリー注射用水、等張食塩水又はエタノール水溶液である。静脈内注射用生体適合性キャリヤーのｐＨは、好適には４．０〜１０．５の範囲内にある。
【００５８】
本発明の放射性医薬組成物中に含まれる場合における放射性フッ素化化合物の好適な実施形態及び好ましい実施形態は、本明細書中に既に記載した通りである。
【００５９】
かかる放射性医薬組成物は非経口的に（即ち、注射によって）投与でき、最も好ましくは水溶液である。かかる組成物は、緩衝剤、薬学的に許容される可溶化剤（例えば、シクロデキストリン或いはＰｌｕｒｏｎｉｃ、Ｔｗｅｅｎ又はリン脂質のような界面活性剤）、薬学的に許容される安定剤又は酸化防止剤（例えば、アスコルビン酸、ゲンチジン酸又はｐ−アミノ安息香酸）のような追加成分を任意に含み得る。本発明の放射性フッ素化化合物が放射性医薬組成物として提供される場合、前記放射性フッ素化化合物の製造方法はさらに、放射性医薬組成物を得るために必要な段階（例えば、有機溶媒の除去、生体適合性緩衝剤及び任意の追加成分の添加）を含むことができる。非経口的投与のためには、放射性医薬組成物が無菌性かつ無発熱原性であることを保証するための手段を講じることも必要である。
【００６０】
本発明は、さらに別の態様において、本明細書中に好適なもの及び好ましいものとして定義した放射性フッ素化化合物であって、インビボイメージング方法で使用するためのものを提供する。最も好ましくは、インビボイメージング方法で使用するための放射性フッ素化化合物は、本明細書中に好適なもの及び好ましいものとして定義した放射性医薬組成物として提供される。
【００６１】
さらに別の態様では、本発明は、被験体の中枢神経系（ＣＮＳ）におけるＧＡＢＡA受容体の分布を決定するための陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）方法であって、
（ｉ）本明細書中に好適なもの及び好ましいものとして定義した放射性フッ素化化合物を前記被験体に投与する段階、
（ｉｉ）段階（ｉ）で投与した前記放射性フッ素化化合物を前記被験体のＣＮＳ内のＧＡＢＡA受容体に結合させる段階、
（ｉｉｉ）段階（ｉｉ）で結合させた前記放射性フッ素化化合物中に存在する18Ｆの陽電子放出崩壊から導かれる信号を検出する段階、並びに
（ｉｖ）前記信号の位置及び量の画像を形成する段階であって、前記信号が前記被験体におけるＧＡＢＡA受容体の分布を表す段階
を含んでなるＰＥＴ方法を提供する。。
【００６２】
本発明のＰＥＴ方法に関しては、放射性フッ素化化合物の好適な実施形態及び好ましい実施形態は本明細書中に前述した通りである。
【００６３】
放射性フッ素化化合物を「投与する」段階は、好ましくは非経口的に実施され、最も好ましくは静脈内に実施される。静脈内経路は、放射性フッ素化化合物を被験体の身体全域に送達するための、したがって血液脳関門（ＢＢＢ）を横切って前記被験体のＣＮＳ内で発現されたＧＡＢＡA受容体に接触させるための最も効率的な方法である。本発明の放射性フッ素化化合物は、好ましくは本明細書中に定義した本発明の医薬組成物として投与される。
【００６４】
投与段階後かつ検出段階前に、放射性フッ素化化合物をＧＡＢＡA受容体に結合させる。放射性フッ素化化合物は哺乳動物の身体を通って動的に移動し、体内の様々な組織に接触する。ひとたび放射性フッ素化化合物がＧＡＢＡA受容体に接触すれば、特異的な相互作用が起こる結果、ＧＡＢＡA受容体をもった組織からの放射性フッ素化化合物のクリアランスは、ＧＡＢＡA受容体をもたない組織又はＧＡＢＡA受容体の少ない組織よりも長い時間がかかる。一定の時点に達すれば、ＧＡＢＡA受容体をもった組織に結合した放射性フッ素化化合物とＧＡＢＡA受容体をもたない組織又はＧＡＢＡA受容体の少ない組織に結合した放射性フッ素化化合物との比の結果として、ＧＡＢＡA受容体に特異的に結合した放射性フッ素化化合物の検出が可能となる。理想的には、この比は２：１以上である。
【００６５】
本発明の方法の「検出」段階は、18Ｆの陽電子放出崩壊から導かれる信号を、前記信号に対して感受性を有する検出器（ＰＥＴスキャナー中に存在するシンチレーター）によって検出することを含んでいる。陽性β崩壊としても知られる陽電子放出崩壊では、陽電子が放出され、次いで最大数ミリメートルまで飛行して電子と遭遇する。陽電子と電子との遭遇は１対の消滅（γ線）光子を生成し、これらは互いに約１８０度の角をなして放出される。これらの消滅光子が「陽電子放出崩壊から導かれる信号」である。
【００６６】
本発明の方法の「形成」段階は、取得された信号データに再構築アルゴリズムを適用してデータセットを得るコンピューターによって実施される。次いで、このデータセットを操作することで、18Ｆから放出される信号の位置及び／又は量を示す画像が形成される。
【００６７】
本発明の「被験体」は、任意のヒト又は動物被験体であり得る。好ましくは、本発明の被験体は哺乳動物である。最も好ましくは、前記被験体はインタクトな哺乳動物生体である。特に好ましい実施形態では、本発明の被験体はヒトである。
【００６８】
本ＰＥＴ方法は、健常被験体或いはＧＡＢＡA受容体の異常発現に関連する病的状態（「ＧＡＢＡA状態」）を有することが知られ又は疑われる被験体においてＧＡＢＡA受容体を検査するために使用できる。本発明のＰＥＴ方法が役に立つかかるＧＡＢＡA状態の例には、てんかん、不安障害、パーキンソン病及び慢性疼痛がある。本発明の放射性フッ素化化合物は、中枢神経系（ＣＮＳ）におけるＧＡＢＡA受容体発現のＰＥＴイメージングに特に適している。
【００６９】
別の実施形態では、本発明のＰＥＴ方法は前記被験体に関する治療計画の進行中に繰り返して実施することができ、前記治療計画はＧＡＢＡA状態と戦うための薬物の投与を含んでいる。例えば、本明細書中に好適なもの及び好ましいものとして定義したＰＥＴ方法は、ＧＡＢＡA状態と戦うための薬物による治療前、治療中及び治療後に実施できる。このようにすれば、前記治療の効果を経時的にモニターすることができる。ＰＥＴは優れた感度及び分解能を有する結果、病変部における比較的小さい変化でも経時的に観察でき、これは治療モニタリングのために有利である。ＰＥＴスキャナーは、日常的にピコモル範囲内の放射能濃度を測定している。現在、マイクロＰＥＴスキャナーは約１ｍｍの空間分解能に接近しているが、臨床スキャナーは約４〜５ｍｍである。
【００７０】
さらに別の態様では、本発明はＧＡＢＡA状態の診断方法を提供する。本発明の診断方法は、上記に好適なもの及び好ましいものとして定義したＰＥＴ方法を、ＧＡＢＡA受容体発現の分布を特定の臨床像に帰因させる追加段階（ｖ）（即ち、演繹的な医学的決断段階）と共に含んでいる。
【００７１】
別の態様では、本発明は、本明細書中で定義した診断方法で使用するための、本明細書中に好適なもの及び好ましいものとして定義した放射性フッ素化化合物を提供する。
【００７２】
さらに別の態様では、本発明は、本明細書中で定義した診断方法で使用するための本明細書中で定義した放射性医薬組成物の製造で使用するための、本明細書中で定義したインビボイメージング剤を提供する。
【実施例】
【００７３】
以下、一連の非限定的な実施例によって本発明を例示する。
【００７４】
実施例の簡単な説明
実施例１は、非放射性化合物１の合成法を記載している。
【００７５】
実施例２は、前駆体化合物１からの放射性フッ素化化合物１の合成法を記載している。
【００７６】
実施例３は、非放射性化合物２の合成法を記載している。
【００７７】
実施例４は、前駆体化合物２からの放射性フッ素化化合物２の合成法を記載している。
【００７８】
実施例５は、ＧＡＢＡA受容体に対する非放射性化合物１及び化合物２の親和性を評価するために使用したインビトロアッセイを記載している。
【００７９】
実施例６及び実施例７は、それぞれ［18Ｆ］−化合物１及び［18Ｆ］−化合物２のインビボ体内分布を記載している。
【００８０】
比較例８は、［18Ｆ］フルマゼニルを得るための既知方法を記載している。
【００８１】
実施例中で使用される略語のリスト
％ｉｄ        パーセント注射量
％ｉｄ／ｇ    １グラム当たりのパーセント注射量
ＤＣＭ        ジクロロメタン
ＤＭＳＯ      ジメチルスルホキシド
ＦＦＭＺ      フルオロフルマゼニル
ＦＥＦＭＺ    フルオロエチルフルマゼニル
ＦＭＺ        フルマゼニル
ＭＢｑ        メガベクレル
ＯＴｓ        トシレート
ｐｉ          注射後
ＳＤ          標準偏差
ＴＨＦ        テトラヒドロフラン
実施例１：非放射性化合物１の合成法
【００８２】
【化９】
2013507345.tif 000010
【００８３】
実施例１（ｉ）：６−メトキシ−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］［１，３］オキサジン−２，４−ジオン（２）の合成
【００８４】
【化１０】
2013507345.tif 000011
【００８５】
商業的に入手可能な２−アミノ−５−メトキシ安息香酸（２０ｇ、１２０ｍｍｏｌ）をジオキサン（２００ｍＬ）に溶解した。冷却しながらトリホスゲン（１５ｇ、５０．６ｍｍｏｌ）を添加した（添加中に濃厚な沈殿が生じた）。流動性を高めるためにジオキサン（５０ｍＬ）を添加した。混合物を１時間加熱還流し、次いで放冷した。得られた沈殿を濾過によって集めることで、中間体２をベージュ色の粉末（２０．８ｇ、９０％）として得た。
【００８６】
1Ｈ ＮＭＲ（Ｄ6−ＤＭＳＯ）：δ ３．８１（３Ｈ，ｓ，ＣＨ3）、７．１１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９Ｈｚ，ＮＨＣＣＨＣＨＣＯＣＨ3）、７．３４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３Ｈｚ，ＣＨ3ＯＣＣＨＣＣＯ）、７．３９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９ ａｎｄ ３Ｈｚ，ＣＨＣＯＣＨ3ＣＨ）、１１．６（１Ｈ，ｂｒ ｓ，ＮＨ）。
【００８７】
実施例１（ｉｉ）：７−メトキシ−４−メチル−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］［１，４］ジアゼピン−２，５−ジオン（３）の合成
【００８８】
【化１１】
2013507345.tif 000012
【００８９】
中間体２（２０．８ｇ、１０８ｍｍｏｌ）をＤＭＳＯ（５５ｍＬ）中に懸濁した。次いで、混合物を予熱したマントル（１５７℃）上に配置した。混合物を撹拌した。ほとんどすべての出発原料が溶解した後、サルコシン（３２．０ｇ、１０８ｍｍｏｌ）を少しずつ添加した。ほとんど直ぐに、発泡が認められた。混合物を２時間加熱した後、約７０℃まで放冷し、次いで水（３００ｍＬ）中に注ぎ込んだ。小さな白色のボーブル（ｂａｕｂｌｅｓ）の形成が見られ、次いでこれらが拡大して白色の粉末を生じた。これを濾過によって集め、次いで真空オーブン内において５０℃で一晩乾燥した（１３．９ｇ、５９％）。
【００９０】
1Ｈ ＮＭＲ（Ｄ6−ＤＭＳＯ）δ ３．１４（３Ｈ，ｓ，ＮＣＨ3）、３．７５（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ3）、３．８２（２Ｈ，ｓ，ＮＣＨ2）、７．０３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９Ｈｚ，ＣＨＣＨＣＯＣＨ3）、７．１２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９ ａｎｄ ３Ｈｚ，ＣＨＣＨＣＯＣＨ3）、７．２２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３Ｈｚ，ＣＯＣＣＨＣＯＣＨ3）、１０．３（１Ｈ，ｂｒ ｓ，ＮＨ）。
【００９１】
実施例１（ｉｉｉ）：７−ヒドロキシ−４−メチル−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］［１，４］ジアゼピン−２，５−ジオン（４）の合成
【００９２】
【化１２】
2013507345.tif 000013
【００９３】
無水ＤＣＭ（１０ｍＬ）中における中間体３（０．５ｇ、２．２７ｍｍｏｌ）の撹拌懸濁液に、三臭化ホウ素（ＤＣＭ中１Ｍ）（６．８ｍＬ、６．８１ｍｍｏｌ）を（窒素流下及び−７８℃で）滴下した。滴下の完了後、混合物を窒素下室温で１６時間撹拌し続けた。次いで、溶媒を真空中で除去し、残留物中に氷水を注意深く注ぎ込んだ。次いで、不溶物を濾過によって集めたところ、所望の生成物（０．２ｇ、４３％）であることがわかった。
【００９４】
1Ｈ ＮＭＲ（Ｄ6−ＤＭＳＯ）δ ３．０８（３Ｈ，ｓ，ＮＣＨ3）、３．７０−３．８０（２Ｈ，ｍ，ＮＣＨ2）、６．９１（２Ｈ，ｓ，ＡｒＣＨ×２）、７．１０（１Ｈ，ｓ，ＡｒＣＨ）、１０．２（１Ｈ，ｂｒ ｓ，ＮＨ）。
【００９５】
実施例１（ｉｖ）：７−（２−フルオロエトキシ）−４−メチル−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］［１，４］ジアゼピン−２，５−ジオン（５）の合成
【００９６】
【化１３】
2013507345.tif 000014
【００９７】
ＤＭＦ（１００ｍＬ）中の中間体４（３．４ｇ、１６．４ｍｍｏｌ）及びフルオロエチルトシレート（５．４ｇ、２４．６ｍｍｏｌ）に、炭酸セシウム（８．０ｇ、２４．６ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を６０℃で２時間加熱した（その間に混合物は暗褐色になった）。ＴＬＣ（９０％ＤＣＭ、１０％ＭｅＯＨ）は反応が完了したことを示した。溶媒を減圧下で除去し、次いで残留物を水で洗浄し、有機物を酢酸エチルで抽出した。次いで、有機層をＭｇＳＯ4上で乾燥し、濾過し、蒸発乾固して粗生成物を得た。次いで、これをフラッシュクロマトグラフィー（１００％ＤＣＭ→９５％ＤＣＭ、５％ＭｅＯＨ）で精製して所望の生成物（０．８ｇ、２０％）を得た。
【００９８】
1Ｈ ＮＭＲ（Ｄ6−ＤＭＳＯ）δ ３．１１（３Ｈ，ｓ，ＮＣＨ3）、３．８２（２Ｈ，ｓ，ＮＣＨ2）、４．２５（２Ｈ，ｄｔ，ＪHF＝３０Ｈｚ，ＪHH＝４Ｈｚ，ＣＨ2Ｏ）、４．７４（２Ｈ，ｄｔ，ＪHF＝４８Ｈｚ，ＪHH＝４Ｈｚ，ＣＨ2Ｆ）、７．０４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９Ｈｚ，ＣＨＣＨＣＯＣＨ2ＣＨ2Ｆ）、７．１６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９ ａｎｄ ３Ｈｚ，ＣＨＣＨＣＯＣＨ2ＣＨ2Ｆ）、７．２４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３Ｈｚ，ＣＯＣＣＨＣＯＣＨ2ＣＨ2Ｆ）、１０．３０（１Ｈ，ｂｒ ｓ，ＮＨ）。
【００９９】
実施例１（ｖ）：非放射性化合物１の合成
【０１００】
【化１４】
2013507345.tif 000015
【０１０１】
中間体５（０．８０ｇ、３．１７ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（６ｍＬ）及びＴＨＦ（１０ｍＬ）中に懸濁した。次に、窒素下で冷却しながら水素化ナトリウム（鉱油中６０％分散液０．１５ｇ、３．７９ｍｍｏｌ）を添加した。水素発生がやんだ後、冷却しながらジエチルホスホロクロリデート（０．６７ｍＬ、４．７５ｍｍｏｌ）を滴下した（溶液は鮮黄色になった）。直後に、イソシアノ酢酸エチル（０．４１ｍＬ、３．８０ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（３ｍＬ）に溶解した溶液をＮ2下で調製した。次いで、冷却しながら水素化ナトリウム（鉱油中６０％分散液０．１１ｇ、４．５８ｍｍｏｌ）を添加した。水素発生がやんだ後、冷却しながらこの混合物を中間体５に滴下した。混合物を０℃で３０分間撹拌し、室温で１８時間撹拌し続けた。次いで、酢酸（０．１７ｍＬ、６．１４ｍｍｏｌ）を反応物に添加した。次いで、混合物を氷水中に注ぎ込み、有機物を酢酸エチルで抽出し、ＭｇＳＯ4上で乾燥し、濾過し、蒸発乾固した。次いで、得られた褐色の油状物を、１００％ＤＣＭ→９５％ＤＣＭ、５％ＭｅＯＨを用いるフラッシュクロマトグラフィーに２回付した。次いで、得られた鮮黄色の固体をエーテルで洗浄し、エーテルが無色になるまで続けた。淡黄色の固体を濾過によって集めた（０．６ｇ、５５％）。
【０１０２】
1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ １．４４（３Ｈ，ｓ，ＣＨ3）、３．２４（３Ｈ，ｓ，ＮＣＨ3）、４．１９−４．４５（５Ｈ，ｍ，ＯＣＨ2,ＮＣＨ，ＯＣＨ2）、４．７８（２Ｈ，ｄｔ，ＪHF＝４７Ｈｚ，ＪHH＝４Ｈｚ，ＣＨ2Ｆ）、５．２０（１Ｈ，ｂｒ ｓ，ＮＣＨ’）、７．２１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９ ａｎｄ ３Ｈｚ，ＣＨＣＨＣＯＣＨ2ＣＨ2Ｆ）、７．３６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，ＣＨＣＨＣＯＣＨ2ＣＨ2Ｆ）、７．５４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３Ｈｚ，ＣＯＣＣＨＣＯＣＨ2ＣＨ2Ｆ）、７．８４（１Ｈ，ｓ，ＮＣＨＮ）。
【０１０３】
実施例２：放射性フッ素化化合物１の合成法
実施例２（ｉ）：８−メトキシ−５−メチル−６−オキソ−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−２，５，１０ｂ−トリアザ−ベンゾ［ｅ］アズレン−３−カルボン酸エチルエステル（６）の合成
【０１０４】
【化１５】
2013507345.tif 000016
【０１０５】
中間体３（１．０ｇ、４．５４ｍｍｏｌ、合成法は実施例１（ｉｉ）に記載）をＤＭＦ（９ｍＬ）及びＴＨＦ（１４ｍＬ）中に懸濁した。次に、窒素下で冷却しながら水素化ナトリウム（鉱油中６０％分散液０．１３ｇ、５．４１ｍｍｏｌ）を添加した。水素発生がやんだ後、冷却しながらジエチルホスホロクロリデート（１．１８ｇ、０．９９ｍＬ、６．８１ｍｍｏｌ）を滴下した（溶液は鮮黄色になった）。直後に、イソシアノ酢酸エチル（０．６２ｇ、０．６０ｍＬ、５．４８ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（４．５ｍＬ）に溶解した溶液をＮ2下で調製した。次いで、冷却しながら水素化ナトリウム（鉱油中６０％分散液０．１５ｇ、６．２５ｍｍｏｌ）を添加した。水素発生がやんだ後、冷却しながらこの混合物を中間体３に滴下した。混合物は橙色の懸濁液であった。混合物を室温で１８時間撹拌し続けた。次いで、酢酸（１ｍＬ）を反応物に添加した。次いで、混合物を氷水中に注ぎ込んだ。沈殿が認められた。これを濾過によって集め、水で洗浄し、乾燥し、次いでジエチルエーテルで洗浄した。固体は純粋な生成物（０．５８ｇ）であることがわかった。水性濾液を酢酸エチルで洗浄し、ＭｇＳＯ4上で乾燥し、濾過し、蒸発乾固した。次いで、得られた橙色の固体をエーテルで洗浄した。次いで、淡黄色の固体を濾過によって集めた（０．２ｇ＋０．５８ｇ＝５７％）。
【０１０６】
1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ １．４５（３Ｈ，ｓ，ＣＨ3）、３．２５（３Ｈ，ｓ，ＮＣＨ3）、３．９１（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ3）、４．２５−４．４９（３Ｈ，ｍ，ＯＣＨ2,ＮＣＨ）、５．１６−５．２１（１Ｈ，ｍ，ＮＣＨ’）、７．１３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９ ａｎｄ ３Ｈｚ，ＣＨＣＨＣＯＣＨ3）、７．３５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９Ｈｚ，ＣＨＣＨＣＯＣＨ3）、７．５５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３Ｈｚ，ＣＯＣＣＨＣＯＣＨ3）、７．８４（１Ｈ，ｓ，ＮＣＨＮ）。
【０１０７】
実施例２（ｉｉ）：前駆体化合物１の合成
【０１０８】
【化１６】
2013507345.tif 000017
【０１０９】
中間体６（０．５５ｇ、１．７４ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（５ｍＬ）に溶解し、次いで三臭化ホウ素（ジクロロメタン中１Ｍ溶液１．７５ｍＬ、１．７５ｍｍｏｌ）を−７０℃で滴下した。１時間後、混合物から試料を採取し、メタノールで希釈した。ＴＬＣ（９５％ＤＣＭ、５％ＭｅＯＨ）は、基線上に出発原料及び新しいスポットの存在を示した。この試料のＮＭＲは、それがイミダゾールのＨ塩であり、脱メチル化はまだ起こっていないことを示した。反応物をフリーザー内に一晩放置した。翌日、さらに同等量の三臭化ホウ素を−７０℃で滴下した。１時間後、ＴＬＣは出発原料、基線物質、及び出発原料直下の新しいスポットの存在を示した。混合物を室温で３時間撹拌し続けた。ＴＬＣは出発原料の大部分が消失したことを示し、ＬＣＭＳは生成物の存在を示した。メタノールで希釈し、蒸発させ、重水素化メタノールに再溶解することで、別のＮＭＲ試料を採取した。ＮＭＲは４種の化合物の存在を示したが、そのうちの２種はメチルエステルであった。これは、ＢＢｒ3反応中にエステルの加水分解が起こってカルボン酸を生じ、次いでそれがメタノール処理中にメチル化されることを示している。したがって、インサイチュでの再エステル化によって一層多くの生成物を得ることができよう。そこで、バルク反応混合物をエタノールで（注意しながらゆっくりと）希釈した。この添加後に反応混合物はわずかに温かく、次いで終末中ＲＴで撹拌し続けた。次いで、混合物を蒸発させ、水に溶解し、中和した。次に、水性相を酢酸エチルで洗浄し、次いで有機相を合わせ、ＭｇＳＯ4上で乾燥し、濾過し、蒸発乾固して橙色の固体を得た。これをエーテルで洗浄し、エーテルが無色になるまで続けた。次いで固体を、９９％ＤＣＭ、１％ＭｅＯＨ→３％ＭｅＯＨを用いるカラムクロマトグラフィーに付した。生成物は３０ＣＶで溶出した。不純物は５ＣＶ（１％ＭｅＯＨ）で除去された。固体をシリカ４ｇのカラム上に装填した。所望の生成物は白色の固体（２０ｍｇ、４％）として得られた。
【０１１０】
1Ｈ ＮＭＲ（Ｄ3−Ｍｅｔｈａｎｏｌ）δ １．４１（３Ｈ，ｓ，ＣＨ3）、３．２０（３Ｈ，ｓ，ＮＣＨ3）、４．３２−４．５５（３Ｈ，ｍ,ＮＣＨ，ＯＣＨ2）、５．１２（１Ｈ，ｂｒ ｄ，Ｊ＝１５Ｈｚ，ＮＣＨ’）、７．１１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９Ｈｚ ａｎｄ ３Ｈｚ，ＣＨＣＨＣＯＨ）、７．３４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３Ｈｚ，ＯＣＣＣＨＣＯＨ）、７．５１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９Ｈｚ，ＣＨＣＨＣＯＨＣＨ）、８．１８（１Ｈ，ｓ，ＮＣＨＮ）。
【０１１１】
実施例２（ｉｉｉ）：［18Ｆ］−化合物１を得るための放射性フッ素化
【０１１２】
【化１７】
2013507345.tif 000018
【０１１３】
［18Ｆ］フッ化物を吸引によってＰ６バイアルから３ｍＬのＶバイアルに移した。Ｐ６バイアルに、Ｋｒｙｐｔｏｆｉｘ ２２２（４ｍｇ）をＭｅＣＮ（０．５ｍＬ）及びＫＨＣＯ3（１００μＬ、０．１Ｍ）に溶解した予備調製溶液を添加した。バイアルをかきまぜ、溶液を吸引によってＶバイアルに移した。バイアルを窒素流（０．２Ｌ／分）下において１１０℃で２０分間加熱し、次いで室温に冷却した。乾燥した［18Ｆ］フッ化物及びＫｒｙｐｔｏｆｉｘ ２２２の混合物に、ＭｅＣＮ（１ｍＬ）中のエタンジオール−ｐ−トルエンスルホネート（５ｍｇ）を添加した。得られた黄色の溶液を８０℃で１０分間加熱し、次いで室温に冷却した。反応バイアルに水（１．５ｍＬ）を添加し、精製用の分取ＨＰＬＣ（Ｈｉｃｈｒｏｍ ＡＣＥ Ｃ５ １０ｘ１００ｍｍカラム、溶媒Ａ＝５０ｍＭ酢酸アンモニウム，溶媒Ｂ＝ＭｅＣＮ、流量４ｍｌ／分、ＵＶ ２５４ｎｍ）上に装填した。単離されたＨＰＬＣ画分を水（２０ｍＬ）中に希釈し、次いでＷａｔｅｒｓ ｔＣ１８−ｌｉｇｈｔ Ｓｅｐ Ｐａｋカートリッジ上に装填した。次いで、カートリッジを高圧窒素ライン上で１５分間乾燥した。
【０１１４】
１ｍＬのホイートンバイアル中に前駆体化合物１（２ｍｇ）及び炭酸セシウム（１０ｍｇ）を注意深く秤取し、次いでＤＭＦ（０．１ｍＬ）を撹拌棒と共に添加した。懸濁液を室温で１０分間撹拌した。乾燥した［18Ｆ］フルオロエチルトシレートをＤＭＦ（０．５ｍＬ）でＳＰＥからホイートンバイアル中に溶出し、得られた反応混合物を１３０℃で１０分間撹拌した。反応混合物を冷却し、５０ｍＭ酢酸アンモニウム（３．５ｍＭ）中に希釈し、次いでＨＰＬＣ（Ｈｉｃｈｒｏｍ ＡＣＥ Ｃ５ １０ｘ１００ｍｍカラム、溶媒Ａ＝５０ｍＭ酢酸アンモニウム，溶媒Ｂ＝ＭｅＣＮ、流量４ｍｌ／分、ＵＶ ２５４ｎｍ）によって精製した。
【０１１５】
単離されたＨＰＬＣ画分を水（２０ｍＬ）中に希釈し、ｔＣ１８ ｌｉｇｈｔ Ｓｅｐ Ｐａｋ上に捕捉し、次いでＰＢＳ（０．５ｍＬ）を含む予備秤量バイアル中にエタノール（０．５ｍＬ）で溶出した。元の塊状体が得られるまで、エタノールを真空中で除去した。下記実施例６に記載されるインビボ体内分布アッセイで使用するため、［18Ｆ］−化合物１のアリコート（５０ＭＢｑ）を５ＭＢｑ／ｍＬでＰＢＳ中に製剤化した。
【０１１６】
分析ＨＰＬＣ（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８（２）５０ｘ２ｍｍカラム、溶媒Ａ＝０．０１Ｍリン酸，溶媒Ｂ＝ＭｅＣＮ、０．４ｍＬ／分、ＵＶ ２５４ｎｍ）により、［18Ｆ］−化合物１が２３％の合成終了時収率と共に９５％の放射化学純度で得られたことが確認された。
【０１１７】
実施例３：非放射性化合物２の合成法
実施例３（ｉ）：７−ブロモ−４−メチル−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］［１，４］ジアゼピン−２，５−ジオン（７）の合成
【０１１８】
【化１８】
2013507345.tif 000019
【０１１９】
ＤＭＳＯ（１００ｍＬ）中における５−ブロモイサト酸無水物（４０．０ｇ、１６５ｍｍｏｌ）及びサルコシン（１４．７ｇ、１６５ｍｍｏｌ）の混合物を、１４８〜１５０℃に予熱された加熱マントル内に配置した。間もなく、濃い橙色の溶液は淡い橙色に変わり、発泡が認められた。混合物を１５０℃で約３０分間加熱し、次いで水（６００ｍＬ）中に注ぎ込んだ。得られた淡黄色の沈殿を濾過によって集めることで、３３．４ｇ（７５％）の７を得た。
【０１２０】
1Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）：δH ３．１１（３Ｈ，ｓ，ＮＣＨ3）、３．８９（２Ｈ，ｓ，ＣＨ2）、７．０６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，ＮＨＣＣＨＣＨ）、７．６９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．０ ａｎｄ ２．０Ｈｚ，ＢｒＣＨＣＨ）、７．８２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，ＯＣＣＣＨ）、ａｎｄ １０．６（１Ｈ，ｂｒ ｓ，ＮＨ）。
【０１２１】
実施例３（ｉｉ）：非放射性化合物２の合成
【０１２２】
【化１９】
2013507345.tif 000020
【０１２３】
ＴＨＦ（５２ｍＬ）中の７（０．６５ｇ、２．５８ｍｍｏｌ）に、０℃でカリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（０．３２ｇ、２．８３ｍｍｏｌ）を添加した。次に、混合物を０℃で２０分間撹拌し（その間に鮮黄色の沈殿が認められた）、次いで−３５℃に冷却した。ジエチルクロロホスフェート（０．５８ｇ、３．３５ｍｍｏｌ、０．４９ｍＬ）をゆっくりと添加した。反応物を０℃で３０分間撹拌し、その間に混合物は鮮黄色になった。反応フラスコを−３５℃に冷却し、ｔｅｒｔ−ブチルイソシアノアセテートの溶液（０．４ｇ、２．８３ｍｍｏｌ、０．４１ｍＬ）を添加し、次いでカリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（０．３２ｇ、２．８３ｍｍｏｌ）を添加した。次いで、懸濁液を室温で一晩撹拌し続けた。反応物をＮａＨＣＯ3水溶液（７０ｍＬ）で奪活し、ＥｔＯＡｃ（３×７０ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせ、ＭｇＳＯ4上で乾燥し、濃縮して橙色のシロップを得た。粗物質を、ＤＣＭ（Ａ）：ＭｅＯＨ（Ｂ）（１〜５％Ｂ、９ＣＶ、１２０ｇ、４０ｍＬ／分）で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーによって精製した。非放射性化合物２を淡黄色の固体（０．５３ｇ（５５％））として得た。
【０１２４】
1Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δH １．６５（９Ｈ，ｓ，Ｃ（ＣＨ3）3）、３．２５（３Ｈ，ｓ，ＮＣＨ3）、４．２３−４．４１（５Ｈ，ｍ，ＯＣＨ2,ＣＯＮＣＨ3ＣＨaＨb）、４．８０（２Ｈ，ｄｔ，ＪHF＝４７．０ ａｎｄ Ｊ＝４．０Ｈｚ，ＣＨ2Ｆ）、５．１５（１Ｈ，ｂｒ ｄ，Ｊ＝１４．０Ｈｚ，ＣＯＮＣＨ3ＣＨaＨb）、７．２１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．０Ａｎｄ３．０Ｈｚ，ＣＨＣＨＣＯＣＨ2ＣＨ2Ｆ）、７．３６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，ＮＣＣＨＣＨ）、７．５５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．０Ｈｚ，ＯＣ−ＣＣＨ）、ａｎｄ ７．８４（１Ｈ，ｓ，ＮＣＨＮ）。
【０１２５】
実施例４：放射性フッ素化化合物２の合成法
実施例４（ｉ）：７−ベンジルオキシ−４−メチル−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］［１，４］ジアゼピン−２，５−ジオン（８）の合成
【０１２６】
【化２０】
2013507345.tif 000021
【０１２７】
ＤＭＦ（５０ｍＬ）中の４（４．１３ｇ、２０ｍｍｏｌ、実施例１（ｉｉｉ）に従って製造した）及び臭化ベンジル（３．４２ｇ、２０ｍｍｏｌ、２．３８ｍＬ）に、炭酸セシウム（６．５３ｇ、２０ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を６０℃で２時間加熱した。その後、ＴＬＣ（９０％ＤＣＭ、１０％ＭｅＯＨ）は反応が完了していないことを示した。さらに同等量の臭化ベンジルを添加したところ、１時間後のＴＬＣは反応が完了したことを示した。溶媒を減圧下で除去し、次いで残留物を水及び酢酸エチルで洗浄した。溶媒界面間に白色の沈殿が認められ、これを濾過によって集めた。これを少量の酢酸エチルでトリチュレートし、濾過によって集めることで、８を白色の固体（２．７７ｇ（４７％））として得た。
【０１２８】
1Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）：δH ３．１１（３Ｈ，ｓ，ＮＣＨ3）、３．８２（２Ｈ，ｓ，ＮＣＨ2）、５．１２（２Ｈ，ｓ，ＯＣＨ2）、７．０４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，ＨＮＣＣＨＣＨ）、７．１９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．０ ａｎｄ ３．０Ｈｚ，ＢｎＯＣＣＨaＨb）、７．３１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．０Ｈｚ，Ｏ＝ＣＣＣＨ）、７．３３−７．４７（５Ｈ，ｍ，ＣＨ×５）、ａｎｄ １０．３０（１Ｈ，ｂｒ ｓ，ＮＨ）。
【０１２９】
実施例４（ｉｉ）：８−ベンジルオキシ−５−メチル−６−オキソ−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−２，５，１０ｂ−トリアザ−ベンゾ［ｅ］アズレン−３−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（９）の合成
【０１３０】
【化２１】
2013507345.tif 000022
【０１３１】
８（２．７ｇ、９．１１ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（２４ｍＬ）及びＴＨＦ（３８ｍＬ）中に懸濁した。次に、窒素下で冷却しながら水素化ナトリウム（鉱油中６０％分散液０．４３ｇ、１０．８ｍｍｏｌ）を添加した。水素発生がやんだ後、冷却しながらジエチルクロロホスフェート（２．３６ｇ、１３．７ｍｍｏｌ、１．９８ｍＬ）を滴下した（溶液は黄色になった）。直後に、イソシアノ酢酸ｔｅｒｔ−ブチル（１．５４ｇ、１０．９ｍｍｏｌ、１．５９ｍＬ）をＤＭＦ（１２ｍＬ）に溶解した溶液をＮ2下で調製した。次いで、冷却しながら水素化ナトリウム（鉱油中６０％分散液０．５１ｇ、１２．９ｍｍｏｌ）を添加した。水素発生がやんだ後、冷却しながらこの混合物を８の混合物に滴下した。混合物は橙色の懸濁液であった。混合物を室温で１８時間撹拌し続けた。次いで、酢酸（１ｍＬ）を反応物に添加した。次いで、混合物を氷水中に注ぎ込み、有機物を酢酸エチルで抽出し、ＭｇＳＯ4上で乾燥し、濾過し、蒸発乾固した。粗物質を、ＤＣＭ（Ａ）：ＭｅＯＨ（Ｂ）（０〜５％Ｂ、１０ＣＶ、５０ｇ、４０ｍＬ／分）で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーによって精製した。生成物を最少の酢酸エチルに溶解し、次いで混合物が不透明になるまで石油スピリットを滴下した。数滴の酢酸エチルを添加すると、溶液は透明になった。次いで、混合物を２時間静置することで、９を白色の固体（０．１８ｇ（５％））として得た。
【０１３２】
1Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δH １．６９（３Ｈ，ｓ，３×ＣＨ3）、３．２４（３Ｈ，ｓ，ＮＣＨ3）、４．３６（１Ｈ，ｂｒ ｓ，ＣＯＮＣＨ3ＣＨaＨb）、５．０５−５．１６（３Ｈ，ｍ，ＯＣＨ2，ＣＯＮＣＨ3ＣＨaＨb）、７．２０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．０ ａｎｄ ３．０Ｈｚ，ＣＨＣＨＣＯＢｎ）、７．３２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，ＮＣＣＨＣＨ）、７．３５−７．４６（５Ｈ，ｍ，ＡｒＣＨ×５）、７．６３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．０Ｈｚ，ＯＣＣＣＨ）、ａｎｄ ７．８１（１Ｈ，ｓ，ＮＣＨＮ）。
【０１３３】
実施例４（ｉｉｉ）：８−ヒドロキシ−５−メチル−６−オキソ−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−２，５，１０ｂ−トリアザ−ベンゾ［ｅ］アズレン−３−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（前駆体化合物２）の合成
【０１３４】
【化２２】
2013507345.tif 000023
【０１３５】
９（５０ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）をメタノール（１０ｍＬ）に溶解した。次いで、混合物を（１ｍＬ／分の流量で）パラジウムカートリッジに通し、６０℃で水素流フルＨ2モードに付した。ＴＬＣは反応が完了したことを示した。溶液を蒸発乾固することで、前駆体化合物２を白色の固体（３０ｍｇ、７７％）として得た。
【０１３６】
1Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）：δH １．５６（３Ｈ，ｓ，Ｃ（ＣＨ3）3）、３．０９（３Ｈ，ｓ，ＮＣＨ3）、４．４２（１Ｈ，ｂｒ ｓ，ＣＯＮＣＨ3ＣＨaＨb）、４．８５（１Ｈ，ｂｒ ｓ，ＣＯＮＣＨ3ＣＨaＨb）、７．０９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．０ ａｎｄ ３．０Ｈｚ，ＣＨＣＨＣＯＨ）、７．２５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．０Ｈｚ，ＯＣ−ＣＣＨＣＯＨ）、７．５３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，ＮＣＣＨＣＨ）、ａｎｄ ８．２２（１Ｈ，ｓ，ＮＣＨＮ）。
【０１３７】
実施例４（ｖ）：［18Ｆ］−化合物２を得るための放射性フッ素化
【０１３８】
【化２３】
2013507345.tif 000024
【０１３９】
ＦＡＳＴｌａｂの反応器内に［18Ｆ］フッ化物イオンを吸引し、次いで浸漬管入口を通してアセトニトリル（５００μｌ）及びＫＨＣＯ3（０．１ｍｏｌ ｄｍ-3、５０μｌ）中のＫｒｙｐｔｏｆｉｘ ２．２．２（２ｍｇ）を添加した。第１の窒素ガスラインを第２の短い入口に連結し、第２の窒素ガスラインを閉鎖浸漬管弁に連結した。窒素ガス流量は０．２〜０．４Ｌ／分に設定した。ヒーターコントローラーは１００℃に設定した。これに到達した後、18Ｆ-を５分間乾燥した。５分後、窒素ガス流量を０．１〜０．２Ｌ／分未満に減少させ、浸漬弁を開放し、さらに４分間加熱した。４分後、窒素ガス流量を０．２〜０．４Ｌ／分に増加させ、さらに１１〜１６分間乾燥した。
【０１４０】
浸漬管弁を通してアセトニトリル（１０００μｌ）中のＴｓＯ−Ｅｔ−ＯＴｓ（５ｍｇ）を添加した。反応器を密封し、コントローラーを１００℃に設定し、１０分間加熱した。反応物を冷却し、浸漬管を通して抜き取り、反応器を水（１５００μｌ）ですすぎ、主たる粗反応物を含むガラスバイアルに加えた。全反応物を半分取ＨＰＬＣループに装填し、精製を開始した（条件については下記参照）。［18Ｆ］Ｆ（ＣＨ2）2ＯＴｓカットピーク（保持時間８分）を水で約２０ｍｌの体積に希釈し、コンディショニング済みのライトｔ−Ｃ１８ ｓｅｐ ｐａｋ上に装填し、Ｈ2Ｏ（１×２ｍｌ）でフラッシュした。ｓｅｐ ｐａｋを高圧窒素ガスライン上で２０分間乾燥した。
【０１４１】
撹拌機を含むホイートンバイアル内で、ＤＭＦ（１００μｌ）中の前駆体化合物２（５ｍｇ）及びＣｓ2ＣＯ3（１０ｍｇ）を室温で１〜２時間撹拌した。［18Ｆ］Ｆ（ＣＨ2）2ＯＴｓをＣＨ3ＣＮ（０．５ｍｌ）でホイートンバイアル中に溶出した。反応物を１２０〜１３０℃の油浴中で１５分間加熱撹拌した。その後、反応物を冷却し、水（５００μｌ）で奪活した。全反応物をＨＰＬＣシステム上に装填し、下記に記載する条件を用いて生成物を精製した（保持時間１１分）。
【０１４２】
カットピークを水（１０ｍＬ）で希釈し、真空ポンプを用いてプレコンディショニング済みのｓｅｐ ｐａｋ ｔ−Ｃ１８ ｌｉｇｈｔ上に捕捉した。捕捉した物質を水（２ｍＬ）で洗浄し、エタノール（０．７ｍＬ）及びリン酸緩衝食塩水（６．３ｍＬ）で溶出した。
【０１４３】
１８．４％の合成終了時収率。２．２μｇのコールドリガンド総量。＞９９％の放射化学純度。
【０１４４】
分取ＨＰＬＣシステムの詳細：ＨＰＬＣカラム−ＨＩＣＨＲＯＭ ＡＣＥ ５ Ｃ１８カラム，５μ，１００ｘ１０ｍｍ、溶媒Ａ＝水，Ｂ＝ＭｅＯＨ、流量３ｍｌ／分、ＵＶ ２５４ｎｍ、ループ５ｍＬ。
【０１４５】
［18Ｆ］ＦＥｔＯＴｓカットに関するＨＰＬＣ条件：０−１分 ５０％（Ｂ）、１−２５分 ５０−９５％（Ｂ）、２５−３０分 ９５％、３０−３１分 ９５−５０％（Ｂ）、３１−３３分 ５０％（Ｂ）。
【０１４６】
［18Ｆ］−化合物２に関するＨＰＬＣ条件：０−１分 ３０％（Ｂ）、１−２０分 ３０−９５％（Ｂ）、２０−２５分 ９５％（Ｂ）、２５−２６分 ９５−３０％（Ｂ）、２６−２８分 ３０％（Ｂ）。
【０１４７】
分析ＨＰＬＣ：ＨＰＬＣカラム−Ｌｕｎａ Ｃ８（２） １５０ｘ４．６ｍｍ、溶媒Ａ＝水，Ｂ＝ＭｅＣＮ、流量１ｍＬ／分、ＵＶ ２５４ｎｍ、ループ１００μＬ。
【０１４８】
実施例５：インビトロ親和性アッセイ
本発明の化合物の親和性を評価するため、トリチウム化ＦＭＺを競合剤として利用する競合放射性リガンド結合アッセイを実施した。トリチウム化フルマゼニルは、１ｍＣｉ／ｍＬの濃度でＭＥＮ Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ社（Ｃａｔ．ＮＥＴ７５７２５０ＵＣ）から購入した。簡単に述べれば、１０μｌの試験化合物を（４０ｎＭに希釈した）２ｎＭトリチウム化ＦＭＺの存在下でラット小脳の粗ホモジネートと共にインキュベートした。ホモジネートは、Ｄｏｕｎｃｅホモジナイザーを用いて、１０×容量のホモジナイゼーション緩衝液（１０ｍＭ ＫＨ2ＰＯ4緩衝液、ｐＨ７．４）中で小脳をホモジナイズすることで調製した。ホモジネートを４８０００ｇ（ＳＷ４０Ｔｉローターを用いて１９５６ＲＰＭ）で４℃で３０分間遠心した。ホモジネートは常に氷上に保った。９０分後、アッセイ物をガラス繊維マットで濾過し、それによってホモジネート及びそれに結合したリガンドを濾別した。次いで、液体シンチレーションを用いてフィルターマット上の放射能の量を測定した。化合物１及び化合物２に関する親和性データを、商業的に入手可能な先行技術の化合物であるフルマゼニルと共に、下記表１に示す。
【０１４９】
【表１】
2013507345.tif 000025
【０１５０】
実施例６：［18Ｆ］−化合物１のインビボ体内分布
成体雄Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（体重２０２±３７ｇ、平均±ＳＤ）に、側尾静脈を通して１〜５ＭＢｑの［18Ｆ］−化合物１を注射した。いずれの動物も意識があったが、注射中は軽く拘束し、次いで短期代謝ケージ内に収容した。特定の時点、即ち注射後（ｐｉ）３０秒、２分、１０分、３０分及び６０分（各時点についてｎ＝３）に、動物を頸部脱臼によって屠殺した。剖検後、脳及び末梢の組織又は体液を試料採取した。Ｗａｌｌａｃガンマカウンターを用いて脳試料中の放射能を測定した。アッセイ後、放射性崩壊に関する自動補正を含む双晶ガンマカウンターシステム（ＢＡＳＩＬ社）を用いて脳組織を残りの器官又は組織試料と共にアッセイした。下記表２は、脳領域において得られたデータを示している。
【０１５１】
【表２】
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【０１５２】
［18Ｆ］−化合物１の全脳取込みは注射後１０分で０．９％のピークに達し、次いで（プラトーに向かって）減少する速度でゆっくりと排出された。（脳のＧＡＢＡリッチ領域とＧＡＢＡプア領域との間には）良好な領域差別化が存在し、これは注射後３０分でも明らかに保たれた。
【０１５３】
実施例７：［18Ｆ］−化合物２のインビボ体内分布
化合物１に関して実施例６に記載した体内分布プロトコルを用いて化合物２を評価した。下記表３は、脳領域において得られたデータを示している。
【０１５４】
【表３】
2013507345.tif 000027
【０１５５】
［18Ｆ］−化合物２の全脳取込みは注射後２分で０．８２％のピークに達し、次いで（プラトーに向かって）減少する速度でゆっくりと排出された。（脳のＧＡＢＡリッチ領域とＧＡＢＡプア領域との間には）良好な領域差別化が存在し、これは注射後１０分でも明らかに保たれた。
【０１５６】
比較例８：［18Ｆ］フルマゼニル（［18Ｆ］ＦＭＺ）の合成法
比較例８（ｉ）：４−メチル−７−ニトロ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］［１，４］ジアゼピン−２，５−ジオン（１０）の合成
【０１５７】
【化２４】
2013507345.tif 000028
【０１５８】
フラスコを撹拌しながらゆっくりと１４０℃に加熱することで、商業的に入手可能な５−ニトロイサト酸無水物（４０ｇ、０．１９２ｍｏｌ）をＤＭＳＯ（５０ｍＬ）に溶解した。溶液にサルコシン（１７．１ｇ、０．１９２ｍｏｌ）を少しずつゆっくりと添加した。添加後、１４０℃で溶液は泡立ち始めた（ＣＯ2の生成）。混合物を２．５時間撹拌し続けた。混合物を放冷し、ビーカー内の氷冷水中にゆっくりと注ぎ込んだ。溶液をガラス棒で撹拌したところ、黄色の固体が析出した。固体を濾過によって分離し、水で数回洗浄し、次いで４０℃の真空オーブン内で一晩乾燥した。単離された黄色の固体は、収率７８％の所望生成物１０であることが確認された。
【０１５９】
1Ｈ ＮＭＲ（Ｄ6−ＤＭＳＯ）：δ ３．１４（３Ｈ，ｓ，ＮＣＨ3）、３．９７（２Ｈ，ｓ，ＮＣＨ2ＣＯ）、７．３０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９Ｈｚ，ＨＮＣＣＨＣＨ）、８．３３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９ ａｎｄ ３Ｈｚ，ＣＨＣＨＣＮＯ2ＣＨ）、８．３３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３Ｈｚ，ＯＣ−ＣＣＨ）、１１．０５（１Ｈ，ｓ，ＮＨ）。
【０１６０】
比較例８（ｉｉ）：ニトロマゼニル（１１）の製造
【０１６１】
【化２５】
2013507345.tif 000029
【０１６２】
中間体１０（１ｇ、４．３ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１０ｍＬ）及びＤＭＦ（２ｍＬ）に溶解した溶液に、窒素下０℃でカリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（０．６ｇ、５ｍｍｏｌ）を添加した。３０分後、反応物を０℃に冷却し、ジエチルクロロホスフェート（０．７ｍＬ、５ｍｍｏｌ）の滴下で処理し、３０分間撹拌した。他方、エチルイソシアノアセテート（０．６ｍＬ、５ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１０ｍＬ）に溶解した撹拌溶液に、窒素下０℃でカリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（０．６ｇ、５ｍｍｏｌ）を添加し、１５分間撹拌した。次いで、これを中間体１０の混合物に０℃でゆっくりと添加した。これを０℃で０．５時間撹拌し、次いで室温でさらに２時間撹拌した。ＴＬＣ（酢酸エチル）は、ＵＶ及びＫＭｎＯ4により、出発原料（Ｒｆ ０．４）及び新しいスポット（Ｒｆ ０．２）を示した。
【０１６３】
反応物を酢酸で奪活し、一晩撹拌し続けた。反応混合物を氷水中に注ぎ込んだ。これを酢酸エチルで抽出し、有機層を水及びブラインで洗浄し、乾燥し、濃縮して濃暗色の濃厚油状物を得た。これを、下記の条件を用いたクロマトグラフィーによって数回処理した。
１）ＤＣＭ／酢酸エチルを用いたＣｏｍｐａｎｉｏｎ（２回）
２）ペトロール／酢酸エチルを用いたＣｏｍｐａｎｉｏｎ（２回）
５０ｍｇの純物質１１を無色の固体（収率４％）として得た。
【０１６４】
1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：δ １．３９（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，ＣＨ3）、３．２８（３Ｈ，ｓ，ＡｒＣＯＮＣＨ3）、４．３７（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝７Ｈｚ，ＯＣＨ2）、４．４０（１Ｈ，ｂｒ ｓ，ＣＨ2）、５．２６（１Ｈ，ｂｒ ｓ，ＣＨ2）、７．６０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，ＡｒＣＨＣＨＣＮＯ2）、７．９４（１Ｈ，ｓ，ＮＣＨＮ）、８．４５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．９ ａｎｄ ２．８Ｈｚ，ＡｒＣＨＣＨＣＮＯ2）、８．９５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，ＡｒＣＨＣＮＯ2）。
【０１６５】
比較例８（ｉｉｉ）：［18Ｆ］フルマゼニル（［18Ｆ］ＦＭＺ）を得るためのニトロマゼニル（１１）の放射性フッ素化
【０１６６】
【化２６】
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【０１６７】
ＴＲＡＣＥＲｌａｂ自動化合成モジュール（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社）上で18Ｆ標識を行った。プレコンディショニング済みのＱＭＡカートリッジ上に［18Ｆ］フッ化物イオンを捕捉し、次いでテトラ−ｎ−ブチルアンモニウム重炭酸塩をＭｅＣＮ／水に溶解した溶液（ＭｅＣＮ １４００μＬ、水１００μＬ、ＴＢＡ・ＨＣＯ3 ２７ｍｇ）を用いてバイアル１から反応器に移した。窒素＋真空フローを使用しながら、溶液を１００℃で１０分間、次いで１２０℃で２０分間乾燥し、次いで５０℃に冷却した。
【０１６８】
乾燥した［18Ｆ］フッ化物イオンに、ＤＭＦ（１ｍＬ）中のニトロマゼニル（１８．８ｍｇ）をバイアル３から添加した。反応混合物を１６０℃で３０分間加熱し、次いで５０℃に冷却した。反応混合物をバイアル５からの１０ｍＭリン酸（２．５ｍＬ）で希釈し、粗生成物管に移した。
【０１６９】
次いで、粗生成物を分取ＨＰＬＣループに手動で移した。分取ＨＰＬＣは１７．５分の保持時間を有するピークを与えたが、これを水（１２ｍＬ）の入ったＴＲＡＣＥＲｌａｂの丸底フラスコ内にカットした。分取ＨＰＬＣシステムは液体フローシンチレーションカウンターを備えていた。
【０１７０】
【表４】
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【０１７１】
丸底フラスコ内の混合物を、（１ｍＬのエタノール、次いで２ｍＬの水でプレコンディショニングを施した）ｔＣ１８ ｐｌｕｓ ｌｉｔｅ ＳＰＥカートリッジ上に捕捉した。ＳＰＥカートリッジを水（３ｍＬ）で洗浄し、ＥｔＯＨ（０．３ｍＬ）及び水（４．５ｍＬ）を用いて粗生成物をＰ６バイアル中に溶出した。
【０１７２】
【表５】
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【国際調査報告】
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