(57)【要約】  本発明は、工学操作された多価多重特異性結合タンパク質、作成方法、及び特に疾患の予防、診断及び／または治療におけるその使用に関する。
2013507969.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎ
（ここで、
ＶＤ１は第１重鎖可変ドメインであり；
ＶＤ２は第２重鎖可変ドメインであり；
Ｃは重鎖定常ドメインであり；
Ｘ１はリンカーであり、ただしＣＨ１ではなく；
Ｘ２はＦｃ領域であり；
（Ｘ１）ｎは（Ｘ１）０または（Ｘ１）１であり；
（Ｘ２）ｎは（Ｘ２）０または（Ｘ２）１である）
からなるポリペプチド鎖を含む結合タンパク質であって、前記結合タンパク質が、ＣＤ−２０とＣＤ−１９、ＣＤ−２０とＣＤ−８０、ＣＤ−２０とＣＤ−２２、ＣＤ−２０とＣＤ−４０、ＣＤ−３とＨＥＲ−２、ＣＤ−３とＣＤ−１９、ＥＧＦＲとＨＥＲ−２、ＥＧＦＲとＣＤ−３、ＥＧＦＲとＩＧＦ１，２、ＥＧＦＲとＩＧＦ１Ｒ、ＥＧＦＲとＲＯＮ、ＥＧＦＲとＨＧＦ、ＥＧＦＲとｃ−ＭＥＴ、ＨＥＲ−２とＩＧＦ１，２、ＨＥＲ−２とＩＧＦ１Ｒ、ＲＯＮとＨＧＦ、ＶＥＧＦとＥＧＦＲ、ＶＥＧＦとＨＥＲ−２、ＶＥＧＦとＣＤ−２０、ＶＥＧＦとＩＧＦ１，２、ＶＥＧＦとＤＬＬ４、ＶＥＧＦとＨＧＦ、ＶＥＧＦとＲＯＮ、ＶＥＧＦとＮＲＰ１、ＣＤ−２０とＣＤ３、ＤＬＬ−４とＰＬＧＦ、ＶＥＧＦとＰＬＧＦ、ＥｒｂＢ３とＥＧＦＲ、ＥｒｂＢ３とＨＧＦ、ＨＥＲ−２とＥｒｂＢ３、ｃ−ＭｅｔとＥｒＢ３、ＰＬＧＦとＨＥＲ−２、及びＨＥＲ−２とＨＥＲ−２からなる群から選択される、１対の抗原に結合し得る、前記結合タンパク質。
【請求項２】
ＶＤ１及びＶＤ２が、配列番号２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４、５６、５８、６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９６、９８、１００、１０２、１０４及び１０６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の結合タンパク質。
【請求項３】
ＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎ
（ここで、
ＶＤ１は第１軽鎖可変ドメインであり；
ＶＤ２は第２軽鎖可変ドメインであり；
Ｃは軽鎖定常ドメインであり；
Ｘ１はリンカーであり、ただしＣＨ１ではなく；
Ｘ２はＦｃ領域を含まず；
（Ｘ１）ｎは（Ｘ１）０または（Ｘ１）１であり；
（Ｘ２）ｎは（Ｘ２）０または（Ｘ２）１である）
からなるポリペプチド鎖を含む結合タンパク質であって、前記結合タンパク質が、ＣＤ−２０とＣＤ−１９、ＣＤ−２０とＣＤ−８０、ＣＤ−２０とＣＤ−２２、ＣＤ−２０とＣＤ−４０、ＣＤ−３とＨＥＲ−２、ＣＤ−３とＣＤ−１９、ＥＧＦＲとＨＥＲ−２、ＥＧＦＲとＣＤ−３、ＥＧＦＲとＩＧＦ１，２、ＥＧＦＲとＩＧＦ１Ｒ、ＥＧＦＲとＲＯＮ、ＥＧＦＲとＨＧＦ、ＥＧＦＲとｃ−ＭＥＴ、ＨＥＲ−２とＩＧＦ１，２、ＨＥＲ−２とＩＧＦ１Ｒ、ＲＯＮとＨＧＦ、ＶＥＧＦとＥＧＦＲ、ＶＥＧＦとＨＥＲ−２、ＶＥＧＦとＣＤ−２０、ＶＥＧＦとＩＧＦ１，２、ＶＥＧＦとＤＬＬ４、ＶＥＧＦとＨＧＦ、ＶＥＧＦとＲＯＮ、ＶＥＧＦとＮＲＰ１、ＣＤ−２０とＣＤ３、ＤＬＬ−４とＰＬＧＦ、ＶＥＧＦとＰＬＧＦ、ＥｒｂＢ３とＥＧＦＲ、ＥｒｂＢ３とＨＧＦ、ＨＥＲ−２とＥｒｂＢ３、ｃ−ＭｅｔとＥｒＢ３、ＰＬＧＦとＨＥＲ−２、及びＨＥＲ−２とＨＥＲ−２からなる群から選択される、１対の抗原に結合し得る、前記結合タンパク質。
【請求項４】
ＶＤ１及びＶＤ２軽鎖可変ドメインが、配列番号２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９、８１、８３、８５、８７、８９、９１、９３、９５、９７、９９、１０１、１０３、１０５及び１０７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項３に記載の結合タンパク質。
【請求項５】
ｎが、０である、請求項１または３に記載の結合タンパク質。
【請求項６】
第１及び第２ポリペプチド鎖を含む結合タンパク質であって、前記第１ポリペプチド鎖が、第１ＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎ
（ここで、
ＶＤ１は第１重鎖可変ドメインであり；
ＶＤ２は第２重鎖可変ドメインであり；
Ｃは重鎖定常ドメインであり；
Ｘ１はリンカーであり、ただしＣＨ１ではなく；
Ｘ２はＦｃ領域である）
からなり、第２ポリペプチド鎖が、第２ＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎ
（ここで、
ＶＤ１は第１軽鎖可変ドメインであり；
ＶＤ２は第２軽鎖可変ドメインであり；
Ｃは軽鎖定常ドメインであり；
Ｘ１はリンカーであり、ただしＣＨ１ではなく；
Ｘ２はＦｃ領域を含まず；
（Ｘ１）ｎは（Ｘ１）０または（Ｘ１）１であり；
（Ｘ２）ｎは（Ｘ２）０または（Ｘ２）１である）
からなり、前記結合タンパク質が、ＣＤ−２０とＣＤ−１９、ＣＤ−２０とＣＤ−８０、ＣＤ−２０とＣＤ−２２、ＣＤ−２０とＣＤ−４０、ＣＤ−３とＨＥＲ−２、ＣＤ−３とＣＤ−１９、ＥＧＦＲとＨＥＲ−２、ＥＧＦＲとＣＤ−３、ＥＧＦＲとＩＧＦ１，２、ＥＧＦＲとＩＧＦ１Ｒ、ＥＧＦＲとＲＯＮ、ＥＧＦＲとＨＧＦ、ＥＧＦＲとｃ−ＭＥＴ、ＨＥＲ−２とＩＧＦ１，２、ＨＥＲ−２とＩＧＦ１Ｒ、ＲＯＮとＨＧＦ、ＶＥＧＦとＥＧＦＲ、ＶＥＧＦとＨＥＲ−２、ＶＥＧＦとＣＤ−２０、ＶＥＧＦとＩＧＦ１，２、ＶＥＧＦとＤＬＬ４、ＶＥＧＦとＨＧＦ、ＶＥＧＦとＲＯＮ、ＶＥＧＦとＮＲＰ１、ＣＤ−２０とＣＤ３、ＤＬＬ−４とＰＬＧＦ、ＶＥＧＦとＰＬＧＦ、ＥｒｂＢ３とＥＧＦＲ、ＥｒｂＢ３とＨＧＦ、ＨＥＲ−２とＥｒｂＢ３、ｃ−ＭｅｔとＥｒＢ３、ＰＬＧＦとＨＥＲ−２、及びＨＥＲ−２とＨＥＲ−２からなる群から選択される、１対の抗原に結合し得る、前記結合タンパク質。
【請求項７】
ＶＤ１及びＶＤ２重鎖可変ドメインが、配列番号２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４、５６、５８、６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９６、９８、１００、１０２、１０４及び１０６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、ＶＤ１及びＶＤ２軽鎖可変ドメインが、配列番号２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９、８１、８３、８５、８７、８９、９１、９３、９５、９７、９９、１０１、１０３、１０５及び１０７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項６に記載の結合タンパク質。
【請求項８】
Ｘ１またはＸ２が、配列番号１〜２６からなる群から選択されるアミノ酸配列である、請求項１、３または６に記載の結合タンパク質。
【請求項９】
結合タンパク質が、２つの第１ポリペプチド鎖及び２つの第２ポリペプチド鎖を含む、請求項６に記載の結合タンパク質。
【請求項１０】
Ｆｃ領域が、未変性配列Ｆｃ領域及び変異配列Ｆｃ領域からなる群から選択される、請求項１、３または６に記載の結合タンパク質。
【請求項１１】
Ｆｃ領域が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥ及びＩｇＤ由来のＦｃ領域からなる群から選択される、請求項１０に記載の結合タンパク質。
【請求項１２】
上記第１ポリペプチド鎖のＶＤ１及び上記第２ポリペプチド鎖のＶＤ１が、それぞれ同一の第１及び第２親抗体、またはその抗原結合部分から得られる、請求項１、３または６に記載の結合タンパク質。
【請求項１３】
上記第１ポリペプチド鎖のＶＤ１及び上記第２ポリペプチド鎖のＶＤ１が、それぞれ異なる第１及び第２親抗体、またはその抗原結合部分から得られる、請求項１、３または６に記載の結合タンパク質。
【請求項１４】
上記第１ポリペプチド鎖のＶＤ２及び上記第２ポリペプチド鎖のＶＤ２が、それぞれ同一の第１及び第２親抗体、またはその抗原結合部分から得られる、請求項１、３または６に記載の結合タンパク質。
【請求項１５】
上記第１ポリペプチド鎖のＶＤ２及び上記第２ポリペプチド鎖のＶＤ２が、それぞれ異なる第１及び第２親抗体、またはその抗原結合部分から得られる、請求項１、３または６に記載の結合タンパク質。
【請求項１６】
上記第１及び上記第２親抗体が、上記抗原上の異なるエピトーブに結合する、請求項１３〜１５のいずれか１項に記載の結合タンパク質。
【請求項１７】
上記第１親抗体またはその抗原結合部分が、上記第２親抗体またはその抗原結合部分が第２抗原に結合する力価とは異なる力価で第１抗原に結合する、請求項１３〜１５のいずれか１項に記載の結合タンパク質。
【請求項１８】
上記第１親抗体またはその抗原結合部分が、上記第２親抗体またはその抗原結合部分が第２抗原に結合する親和性とは異なる親和性で第１抗原に結合する、請求項１３〜１５のいずれか１項に記載の結合タンパク質。
【請求項１９】
上記第１親抗体またはその抗原結合部分及び上記第２親抗体またはその抗原結合部分が、ヒト抗体、ＣＤＲグラフト化抗体及びヒト化抗体からなる群から選択される、請求項１３〜１５のいずれか１項に記載の結合タンパク質。
【請求項２０】
上記第１親抗体またはその抗原結合部分及び上記第２親抗体またはその抗原結合部分が、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、ヒンジ領域でジスルフィド架橋により連結されている２つのＦａｂ断片からなる二価断片、ＶＨ及びＣＨ１ドメインから構成されるＦｄ断片、抗体のシクグルアームのＶＬ及びＶＨドメインから構成されるＦｖ断片、ｄＡｂ断片、単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）、一本鎖抗体及びダイアボディからなる群から選択される、請求項１３〜１５のいずれか１項に記載の結合タンパク質。
【請求項２１】
結合タンパク質が、上記第１親抗体またはその抗原結合部分、または上記第２親抗体またはその抗原結合部分により示される、少なくとも１つの所望特性を有する、請求項１、３または６に記載の結合タンパク質。
【請求項２２】
上記所望特性が、１つ以上の抗体パラメーターから選択される、請求項２２に記載の結合タンパク質。
【請求項２３】
上記抗体パラメーターが、抗原特異性、抗原に対する親和性、力価、生物学的機能、エピトープ認識、安定性、可溶性、産生効率、免疫原性、薬物動態、バイオアベイラビリティ、組織交差反応性及びオルソロガス抗原結合からなる群から選択される、請求項２１に記載の結合タンパク質。
【請求項２４】
４つのポリペプチド鎖を含む２つの抗原に結合し得る結合タンパク質であって、前記した２つのポリペプチド鎖が、ＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎ
（ここで、
ＶＤ１は第１重鎖可変ドメインであり；
ＶＤ２は第２重鎖可変ドメインであり；
Ｃは重鎖定常ドメインであり；
Ｘ１はリンカーであり、ただしＣＨ１ではなく；
Ｘ２はＦｃ領域である）
からなり、２つのポリペプチド鎖が、ＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎ
（ここで、
ＶＤ１は第１軽鎖可変ドメインであり；
ＶＤ２は第２軽鎖可変ドメインであり；
Ｃは軽鎖定常ドメインであり；
Ｘ１はリンカーであり、ただしＣＨ１ではなく；
Ｘ２はＦｃ領域を含まず；
（Ｘ１）ｎは（Ｘ１）０または（Ｘ１）１であり；
（Ｘ２）ｎは（Ｘ２）０または（Ｘ２）１である）
からなり、前記したＶＤ１及びＶＤ２重鎖可変ドメインが、配列番号２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４、５６、５８、６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９６、９８、１００、１０２、１０４及び１０６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、前記したＶＤ１及びＶＤ２軽鎖可変ドメインが、配列番号２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９、８１、８３、８５、８７、８９、９１、９３、９５、９７、９９、１０１、１０３、１０５及び１０７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、前記結合タンパク質。
【請求項２５】
４つのポリペプチド鎖を含む２つの抗原に結合し得る結合タンパク質であって、前記した２つのポリペプチド鎖が、ＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎ
（ここで、
ＶＤ１は第１重鎖可変ドメインであり；
ＶＤ２は第２重鎖可変ドメインであり；
Ｃは重鎖定常ドメインであり；
Ｘ１はリンカーであり、ただしＣＨ１ではなく；
Ｘ２はＦｃ領域であり；
（Ｘ１）ｎは（Ｘ１）０または（Ｘ１）１であり；
（Ｘ２）ｎは（Ｘ２）０または（Ｘ２）１である）
からなり、前記した２つのポリペプチド鎖が、ＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎ
（ここで、
ＶＤ１は第１軽鎖可変ドメインであり；
ＶＤ２は第２軽鎖可変ドメインであり；
Ｃは軽鎖定常ドメインであり；
Ｘ１はリンカーであり、ただしＣＨ１ではなく；
Ｘ２はＦｃ領域を含まず；
（Ｘ１）ｎは（Ｘ１）０または（Ｘ１）１であり；
（Ｘ２）ｎは（Ｘ２）０または（Ｘ２）１である）
からなり、前記ＤＶＤ−Ｉｇが、ＣＤ−２０、ＣＤ−１９、ＣＤ−８０、ＣＤ−２２、ＣＤ−４０、ＣＤ−３、ヒト上皮増殖因子受容体２（ＨＥＲ−２）、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）、インスリン様成長因子１，２（ＩＧＦ１，２）、インスリン様成長因子受容体（ＩＧＦ１Ｒ）、マクロファージ刺激タンパク質受容体チロシンキナーゼ（ＲＯＮ）、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）、間葉−上皮移行因子（ｃ−ＭＥＴ）、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、ショウジョウバエデルタホモログ（ＤＬＬ４）、ニュロピリン１（ＮＲＰ１）、胎盤成長因子（ＰＬＧＦ）及びｖ−ｅｒｂ−ｂ２トリ赤芽球性白血病ウイルス発癌ホモログ３（ＥｒｂＢ３）からなる群から選択される、少なくとも１つの抗原に結合する、前記結合タンパク質。
【請求項２６】
結合タンパク質が、１つ以上の標的に対して表面プラズモン共鳴により測定して少なくとも約１０２Ｍ−１ｓ−１、少なくとも約１０３Ｍ−１ｓ−１、少なくとも約１０４Ｍ−１ｓ−１、少なくとも約１０５Ｍ−１ｓ−１、及び少なくとも約１０６Ｍ−１ｓ−１からなる群から選択される、オン速度定数（Ｋｏｎ）を有する、請求項１、３、６、２４または２５に記載の結合タンパク質。
【請求項２７】
結合タンパク質が、１つ以上の標的に対して表面プラズモン共鳴により測定して多くとも約１０−３ｓ−１、多くとも約１０−４ｓ−１、多くとも約１０−５ｓ−１、及び多くとも約１０−６ｓ−１からなる群から選択される、オフ速度定数（Ｋｏｆｆ）を有する、請求項１、３、６、２４または２５に記載の結合タンパク質。
【請求項２８】
結合タンパク質が、１つ以上の標的に対して多くとも約１０−７Ｍ、多くとも約１０−８Ｍ、多くとも約１０−９Ｍ、多くとも約１０−１０Ｍ、多くとも約１０−１１Ｍ、多くとも約１０−１２Ｍ、及び多くとも１０−１３Ｍからなる群から選択される解離定数（ＫＤ）を有する、請求項１、３、６、２４または２５に記載の結合タンパク質。
【請求項２９】
請求項１、３、６、２４または２５のいずれか１項に記載の結合タンパク質を含む結合タンパク質コンジュゲートであって、更に免疫接着分子、イメージング剤、治療薬及び細胞傷害薬からなる群から選択される物質を含む、前記結合タンパク質コンジュゲート。
【請求項３０】
上記物質が、放射標識、酵素、蛍光標識、発光標識、生物発光標識、磁気標識及びビオチンからなる群から選択されるイメージング剤である、請求項２９に記載の結合タンパク質コンジュゲート。
【請求項３１】
上記イメージング剤が、３Ｈ、１４Ｃ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１７７Ｌｕ、１６６Ｈｏ及び１５３Ｓｍからなる群から選択される放射標識である、請求項３０に記載の結合タンパク質コンジュゲート。
【請求項３２】
上記物質が、代謝拮抗薬、アルキル化剤、抗生物質、成長因子、サイトカイン、抗血管新生薬、有糸分裂阻害薬、アントラサイクリン、毒素及びアポトーシス剤からなる群から選択される、治療薬または細胞傷害薬である、請求項３０に記載の結合タンパク質コンジュゲート。
【請求項３３】
結合タンパク質が、結晶化結合タンパク質である、請求項１、３、６、２４または２５に記載の結合タンパク質。
【請求項３４】
上記結晶が、担体非含有の医薬徐放性結晶である、請求項３３に記載の結合タンパク質。
【請求項３５】
結合タンパク質が、該結合タンパク質の可溶性相当物よりも長いインビボ半減期を有する、請求項３３に記載の結合タンパク質。
【請求項３６】
結合タンパク質が、生物活性を保持している、請求項３３に記載の結合タンパク質。
【請求項３７】
請求項１、３、６、２４または２５のいずれか１項に記載の結合タンパク質アミノ酸配列をエンコードする、単離核酸。
【請求項３８】
請求項３７に記載の単離核酸を含む、ベクター。
【請求項３９】
上記ベクターが、ｐｃＤＮＡ、ｐＴＴ、ｐＴＴ３、ｐＥＦＢＯＳ、ｐＢＶ、ｐＪＶ、ｐｃＤＮＡ３．１  ＴＯＰＯ、ｐＥＦ６  ＴＯＰＯ及びｐＢＪからなる群から選択される、請求項３８に記載のベクター。
【請求項４０】
請求項３８に記載のベクターを含む、宿主細胞。
【請求項４１】
宿主細胞が、原核細胞である、請求項４０に記載の宿主細胞。
【請求項４２】
宿主細胞が、大腸菌である、請求項４１に記載の宿主細胞。
【請求項４３】
宿主細胞が、真核細胞である、請求項４０に記載の宿主細胞。
【請求項４４】
上記真核細胞が、原生生物細胞、動物細胞、植物細胞及び真菌細胞からなる群から選択される、請求項４３に記載の宿主細胞。
【請求項４５】
上記真核細胞が、哺乳動物細胞、鳥類細胞及び昆虫細胞からなる群から選択される、動物細胞である、請求項４３に記載の宿主細胞。
【請求項４６】
宿主細胞が、ＣＨＯ細胞である、請求項４５に記載の宿主細胞。
【請求項４７】
宿主細胞が、ＣＯＳである、請求項４５に記載の宿主細胞。
【請求項４８】
宿主細胞が、酵母細胞である、請求項４３に記載の宿主細胞。
【請求項４９】
上記酵母細胞が、サッカロミセス・セレビシアエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）である、請求項４８に記載の宿主細胞。
【請求項５０】
宿主細胞が、昆虫Ｓｆ９細胞である、請求項４５に記載の宿主細胞。
【請求項５１】
請求項４０〜５０のいずれか１項に記載の宿主細胞を培地において結合タンパク質を産生するのに十分な条件下で培養することを含む、結合タンパク質の産生方法。
【請求項５２】
産生した結合タンパク質の５０％〜７５％が、二重特異性四価結合タンパク質である、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
産生した結合タンパク質の７５％〜９０％が、二重特異性四価結合タンパク質である、請求項５１に記載の方法。
【請求項５４】
産生した結合タンパク質の９０％〜９５％が、二重特異性四価結合タンパク質である、請求項５１に記載の方法。
【請求項５５】
請求項５１に記載の方法に従って産生された、タンパク質。
【請求項５６】
請求項１〜３６及び５５のいずれか１項に記載の結合タンパク質及び医薬的に許容され得る担体を含む、医薬組成物。
【請求項５７】
更に少なくとも１つの追加治療薬を含む、請求項５６に記載の医薬組成物。
【請求項５８】
上記追加治療薬が、治療薬、イメージング剤、細胞傷害薬、血管形成インヒビター、キナーゼ阻害剤、共刺激分子ブロッカー、接着分子ブロッカー、抗サイトカイン抗体またはその機能性断片、メトトレキセート、シクロスポリン、ラパマイシン、ＦＫ５０６、検出可能標識または受容体、ＴＮＦアンタゴニスト、抗リウマチ薬、筋弛緩薬、麻薬、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、鎮痛薬、麻酔薬、鎮静薬、局所麻酔薬、神経筋ブロッカー、抗微生物剤、抗乾癬薬、コルチコステロイド、タンパク同化ステロイド、エリスロポエチン、免疫化、免疫グロブリン、免疫抑制薬、成長ホルモン、ホルモン補充薬、放射線医薬品、抗うつ薬、抗精神病薬、興奮薬、喘息薬物療法、β−アゴニスト、吸入ステロイド、エピネフリンまたはアナログ、サイトカイン及びサイトカインアンタゴニストからなる群から選択される、請求項５７に記載の医薬組成物。
【請求項５９】
治療が達成されるように、被験者に対して請求項１〜３６及び５５のいずれか１項に記載の結合タンパク質を投与することによる、疾患または障害のための被験者の治療方法。
【請求項６０】
上記障害が、関節リウマチ、骨関節症、若年性慢性関節炎、敗血症性関節炎、ライム関節炎、乾癬性関節炎、反応性関節炎、脊椎関節症、全身性エリテマトーデス、クローン病、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患、インスリン依存性糖尿病、甲状腺炎、喘息、アレルギー性疾患、乾癬、皮膚炎、強皮症、移植片対宿主病、臓器移植拒絶反応、臓器移植に関連する急性または慢性免疫疾患、サルコイドーシス、アテローム性動脈硬化症、播種性血管内凝固、川崎病、グレーヴス病、ネフローゼ症候群、慢性疲労症候群、ウェジナー肉芽腫症、ヘノッホ−シェーンライン紫斑病、腎臓の顕微鏡的血管炎、慢性活動型肝炎、ブドウ膜炎、敗血症性ショック、毒素性ショック症候群、敗血症症候群、悪液質、感染性疾患、寄生虫疾患、後天性免疫不全症候群、急性横断性脊髄炎、ハンチントン舞踏病、パーキンソン病、アルツハイマー病、卒中、原発性胆汁性肝硬変、溶血性貧血、悪性腫瘍、心不全、心筋梗塞、アジソン病、散在性、Ｉ型多腺性自己免疫症及びＩＩ型多腺性自己免疫症、シュミット症候群、成人（急性）呼吸窮迫症候群、脱毛症、円形脱毛症、血清反応陰性関節症、関節症、ライター病、乾癬性関節症、潰瘍性腸炎性関節症、腸炎性滑膜炎、クラミジア、エルシニア及びサルモネラ関連関節症、脊椎関節症、アテローム性疾患／動脈硬化症、アトピー性アレルギー、自己免疫性水疱性疾患、尋常性天疱瘡、落葉状天疱瘡、類天疱瘡、線状ＩｇＡ病、自己免疫性溶血性貧血、クームズ試験陽性溶血性貧血、後天性悪性貧血、若年性悪性貧血、筋痛性脳炎／ローヤルフリー病、慢性皮膚粘膜カンジダ症、巨細胞動脈炎、原発性硬化性肝炎、特発性自己免疫性肝炎、後天性免疫不全症症候群、後天性免疫不全症関連疾患、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、分類不能型免疫不全症（分類不能型低ガンマグロブリン血症）、拡張型心筋症、女性不妊症、卵巣機能不全、早発性卵巣機能不全、線維性肺疾患、特発性線維性肺胞炎、炎症後間質性肺疾患、間質性肺炎、結合組織病関連間質性肺疾患、混合結合組織病関連肺疾患、全身性硬化症関連間質性肺疾患、関節リウマチ関連間質性肺疾患、全身性エリテマトーデス関連肺疾患、皮膚筋炎／多発性筋炎関連肺疾患、シェーグレン病関連肺疾患、強直性脊椎炎関連肺疾患、血管炎性びまん性肺疾患、ヘモジデリン沈着症関連肺疾患、薬物誘発性間質性肺疾患、線維症、放射線線維症、閉塞性細気管支炎、慢性好酸球性肺炎、リンパ球性浸潤性肺疾患、感染後間質性肺疾患、痛風性関節炎、自己免疫性肝炎、１型自己免疫性肝炎（古典的自己免疫性またはルポイド肝炎）、２型自己免疫性肝炎（抗ＬＫＭ抗体肝炎）、自己免疫媒介低血糖症、黒色表皮腫を伴うＢ型インスリン抵抗性、副甲状腺機能低下症、臓器移植に関連する急性免疫疾患、臓器移植に関連する慢性免疫疾患、変形性関節症、原発性硬化性胆管炎、１型乾癬、２型乾癬、特発性白血球減少症、自己免疫性好中球減少症、腎疾患ＮＯＳ、糸球体腎炎、腎臓の顕微鏡的血管炎、ライム病、円板状エリテマトーデス、特発性またはＮＯＳ男性不妊症、精子自己免疫、多発性硬化症（すべてのサブタイプ）、交感性眼炎、結合組織病に続発する肺性高血圧、グッドパスチャー症候群、結節性多発性動脈炎の肺症状、急性リウマチ熱、リウマチ様脊椎炎、スチル病、全身性硬化症、シェーグレン症候群、高安病／動脈炎、自己免疫性血小板減少症、特発性血小板減少症、自己免疫性甲状腺疾患、甲状腺機能亢進症、甲状腺腫様自己免疫性甲状腺機能低下症（橋本病）、萎縮性自己免疫性甲状腺機能低下症、原発性粘液水腫、水晶体原性ブドウ膜炎、原発性血管炎、白斑性急性肝疾患、慢性肝疾患、アルコール性肝硬変、アルコール誘発性肝損傷、胆汁鬱滞、特異体質性肝疾患、薬物誘発性肝炎、非アルコール性脂肪肝、アレルギー及び喘息、Ｂ群連鎖球菌（ＧＢＳ）感染、精神障害（例えば、うつ病及び統合失調症）、Ｔｈ２型及びＴｈ１型媒介疾患、急性及び慢性疼痛（いろいろな形の疼痛）、並びに癌（例えば、肺癌、乳癌、胃癌、膀胱癌、大腸癌、膵臓癌、卵巣癌、前立腺癌及び腎臓癌）及び造血性悪性腫瘍（白血病及びリンパ腫）、無βリポタンパク血症、先端チアノーゼ、急性及び慢性寄生虫または感染性プロセス、急性白血病、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性または慢性細菌感染、急性膵炎、急性腎不全、腺癌、航空機異所性拍動、エイズ認知症複合、アルコール誘発性肝炎、アレルギー性結膜炎、アレルギー性接触皮膚炎、アレルギー性鼻炎、同種移植片拒絶反応、α−１−アンチトリプシン欠損症、筋萎縮側索硬化症、貧血、狭心症、前角細胞変性、抗ｃｄ３治療、抗リン脂質症候群、抗受容体過敏反応、大動脈瘤及び末梢動脈瘤、大動脈解離、動脈性高血圧、動脈硬化症、動静脈フィステル、運動失調症、心房細動（持続性または発作性）、心房粗動、房室ブロック、Ｂ細胞リンパ腫、移植骨片拒絶反応、骨髄移植（ＢＭＴ）拒絶反応、脚ブロック、バーキットリンパ腫、火傷、心臓不整脈、心臓失神症候群、心臓腫瘍、心筋症、心肺バイパス炎症応答、軟骨移植拒絶反応、小脳皮質変性、小脳障害、無秩序または多源性心房頻拍、化学療法関連障害、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性アルコール中毒、慢性炎症性病理、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、慢性サリチル酸中毒、大腸癌、鬱血性心不全、結膜炎、接触皮膚炎、肺性心、冠動脈疾患、クロイツフェルト−ヤコブ病、培養陰性敗血症、膿疱性線維症、サイトカイン治療関連障害、拳闘家認知症、脱髄疾患、デング出血熱、皮膚炎、皮膚症状、糖尿病、真性糖尿病、糖尿病性アテローム性疾患、びまん性レヴイ小体病、拡張性鬱血性心筋症、脳幹神経節の障害、中年のダウン症候群、ＣＮＳドーパミン受容体をブロックする薬物による薬物誘発性運動障害、薬物過敏、湿疹、脳脊髄炎、心内膜炎、内分泌病、喉頭蓋炎、エプスタイン−バーウイルス感染、先端紅痛症、錐体外路性脳障害、家族性血球貪食リンパ組織球症、胎児性胸腺移植拒絶反応、フリードライヒ運動失調症、機能性末梢動脈障害、真菌性敗血症、ガス壊疽、胃潰瘍、糸球体腎炎、臓器または組織の移植片拒絶反応、グラム陰性敗血症、グラム陽性敗血症、細胞内生物による肉芽腫、毛様細胞白血病、ハラーホルデン−スパッツ病、橋本甲状腺炎、枯草熱、心臓移植拒絶反応、血色素症、血液透析、溶血性尿毒症症候群／血栓溶解性血小板減少性紫斑病、出血、肝炎（Ａ）、ヒス束不整脈、ＨＩＶ感染／ＨＩＶ神経障害、ホジキン病、運動過多性運動障害、過敏��応、過敏性肺炎、高血圧、運動減少性運動障害、視床下部−下垂体−副腎軸評価、特発性アジソン病、特発性肺線維症、抗体媒介細胞毒性、無力症、乳児脊髄性筋萎縮症、大動脈の炎症、インフルエンザＡ、電離放射線暴露、虹彩毛様体炎／ブドウ膜炎／視神経炎、虚血−再潅流傷害、虚血性発作、若年性関節リウマチ、若年性脊髄性筋萎縮症、カポジ肉腫、腎移植拒絶反応、レジオネラ、リーシュマニア症、ライ病、皮質脊髄系の病巣、脂肪浮腫、肝移植拒絶反応、リンパ水腫、マラリア、悪性リンパ腫、悪性組織球症、悪性メラノーマ、髄膜炎、骨髄炎菌血症、代謝性／特発性、片頭痛、ミトコンドリア多系統障害、混合結合組織病、単クローン性免疫グロブリン血症、多発性骨髄腫、多系統変性（メンセル・ドゥジュリーヌ−トーマス・シードレーガー及びマシャド−ジョセフ）、重症筋無力症、マイコバクテリウム・アビウム・イントラセルラーレ、結核菌、骨髄異形成症候群、心筋梗塞、心筋虚血障害、鼻咽頭癌、新生児慢性肺疾患、腎炎、ネフローゼ、神経変性疾患、神経原性Ｉ筋萎縮症、好中球減少性発熱、非ホジキンリンパ腫、腹部動脈及びその枝の閉塞、閉塞性動脈障害、ｏｋｔ３治療、睾丸炎／副睾丸炎、睾丸炎／精管復元術、臓器巨大症、骨粗しょう症、膵臓移植拒絶反応、膵臓癌、腫瘍随伴症候群／悪性腫瘍の高カルシウム血症、上皮小体移植拒絶反応、骨盤内炎症性疾患、多年性鼻炎、心膜疾患、末梢アテローム性疾患、末梢血管疾患、腹膜炎、悪性貧血、ニューモシスティス・カリニ肺炎、肺炎、ＰＯＥＭＳ症候群（多発性神経障害、臓器巨大症、内分泌症、単クローン性免疫グロブリン血症、及び皮膚症状症候群）、輸血後症候群、ポストポンプ症候群、ＭＩ後心臓切開術症候群、子癇前症、進行性核上麻痺、原発性肺性高血圧、放射線治療、レイノー現象及び病、レイノー病、レフサム病、狭いＱＲＳの規則正しい頻脈、腎血管性高血圧、再潅流傷害、拘束型心筋症、肉腫、強皮症、老人性舞踏病、レヴイ小体型老人性認知症、血清反応陰性関節症、ショック、鎌状赤血球貧血、皮膚同種片拒絶反応、皮膚症状症候群、小腸移植拒絶反応、充実性腫瘍、特異的不整脈、脊髄性運動失調症、脊髄小脳変性、連鎖球菌性筋炎、小脳の構造的病巣、亜急性硬化性汎脳炎、失神、心血管系の梅毒、全身性アナフィラクシー、全身性炎症応答症候群、全身性若年性関節リウマチ、Ｔ細胞またはＦＡＢ  ＡＬＬ、毛細管拡張症、閉塞性血栓血管炎、血小板減少症、毒性、移植片、外傷／出血、ＩＩＩ型過敏症、ＩＶ型過敏症、不安定狭心症、尿毒症、尿路敗血症、じんま疹、心臓弁膜症、静脈瘤、血管炎、静脈病、静脈血栓症、心室細動、ウイルス性及び真菌性感染、ウイルス性脳炎／無菌性髄膜炎、ウイルス関連血球貪食症候群、ウェルニッケ−コルサコフ症候群、ウィルソン病、臓器または組織の異種片移植拒絶反応、急性冠動脈症候群、急性特発性多発性神経炎、急性炎症性脱髄性多発性神経根ニューロパシー、急性虚血、成人スチル病、円形脱毛症、アナフィラキシー、抗リン脂質抗体症候群、再生不良性貧血、動脈硬化症、アトピー性湿疹、アトピー性皮膚炎、自己免疫性皮膚炎、ストレプトコッカス感染に関連する自己免疫性障害、自己免疫性腸疾患、自己免疫性難聴、自己免疫性リンパ組織増殖性症候群（ＡＬＰＳ）、自己免疫性心筋炎、自己免疫性早発性卵巣機能不全、眼瞼炎、気管支拡張症、水疱性類天疱瘡、心血管疾患、難治性抗リン脂質症候群、セリアック病、頸椎症、慢性虚血、瘢痕性類天疱瘡、多発性硬化症のリスクのある最初のエピソードからなる症候群（ｃｉｓ）、結膜炎、小児期発症精神病、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、涙嚢炎、皮膚筋炎、糖尿病性網膜症、真性糖尿病、椎間板ヘルニア、椎間板脱出、薬物誘引性免疫溶血性貧血、心内膜炎、子宮内膜炎、内眼球炎、上強膜炎、多形滲出性紅斑、重症多形紅斑、妊娠性類天疱瘡、ギランバレー症候群（ＧＢＳ）、枯草熱、ヒューズ症候群、特発性パーキンソン病、特発性間質性肺炎、ＩｇＥ媒介アレルギー、免疫溶血性貧血、封入体筋炎、感染性眼炎症性疾患、炎症性脱髄疾患、炎症性心疾患、炎症性腎疾患、ＩＰＦ／ＵＩＰ、虹彩炎、角膜炎、乾性角結膜炎、クスウマル病またはクスウマル−マイエル病、ランドリー麻痺、ランゲルハンス細胞組織球症、網状皮斑、黄斑変性、顕微鏡的多発性血管炎、ベヒテレフ病、運動ニューロン障害、粘膜類天疱瘡、多臓器不全、重症筋無力症、骨髄異形成症候群、心筋炎、神経根障害、神経障害、非Ａ非Ｂ肝炎、視神経炎、骨溶解、卵巣癌、少関節ＪＲＡ、末梢動脈閉塞性疾患（ＰＡＯＤ）、末梢血管疾患（ＰＶＤ）、末梢動脈疾患（ＰＡＤ）、静脈炎、結節性多発性動脈炎（または、結節性動脈周囲炎）、多発性軟骨炎、リウマチ性多発性筋痛、白髪、多関節性ＪＲＡ、多内分泌欠乏症候群、多発性筋炎、リウマチ性多発性筋痛（ＰＭＲ）、ポスト−ポンプ症候群、原発性パーキンソン症候群、前立腺及び腎臓癌、及び造血性悪性腫瘍（白血病及びリンパ腫）、乾癬、真性赤血球系無形成症、原発性副腎機能不全、再発性視神経脊髄炎、再狭窄症、リウマチ性心疾患、ｓａｐｈｏ（滑膜炎、ニキビ、膿庖症、骨増殖症及び骨炎）、強皮症、続発性アミロイドーシス、ショック肺、強膜炎、坐骨神経痛、続発性副腎機能不全、シリコーン関連結合組織病、スネドン−ウィルキンソン皮膚病、強直性脊椎炎、スチーブンス−ジョンソン症候群（ＳＪＳ）、全身性炎症性応答症候群、側頭動脈炎、トキソプラズマ網膜炎、中毒性表皮融解、横断性脊髄炎、ＴＲＡＰＳ（腫瘍壊死因子受容体）、１型アレルギー反応、ＩＩ型糖尿病、じんま疹、通常型間質性肺炎（ＵＩＰ）、血管炎、春季カタル、ウイルス性網膜炎、フォークト−小柳−原田症候群（ＶＫＨ症候
群）、滲出型黄斑変性、損傷治癒、エルシニア及びサルモネラ関連関節症からなる群から選択される、請求項５９に記載の方法。
【請求項６１】
被験者への投与が、非経口、皮下、筋肉内、静脈内、関節内、気管支内、腹腔内、包内、軟骨内、膣内、脳質内、小脳内、脳・小脳内、結腸内、子宮頸管内、胃内、肝内、心筋内、骨内、骨盤内、心膜内、腹腔内、胸膜内、前立腺内、肺内、直腸内、腎内、網膜内、髄腔内、髄液嚢内、胸内、子宮内、膀胱内、ボーラス、膣、直腸、頬側、舌下、鼻腔内及び経皮的から選択される、少なくとも１つのモードによる、請求項６０に記載の方法。
【請求項６２】
第１及び第２抗原に結合し得る二重可変ドメイン免疫グロブリンを作成するように、
ａ）第１抗原に結合し得る第１親抗体またはその抗原結合部分を得るステップ；
ｂ）第２抗原に結合し得る第２親抗体またはその抗原結合部分を得るステップ；
ｃ）ＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎ
（ここで、
ＶＤ１は第１親抗体またはその抗原結合部分から得られる第１重鎖可変ドメインであり；
ＶＤ２は第２親抗体またはその抗原結合部分から得られる第２重鎖可変ドメインであり；
Ｃは重鎖定常ドメインであり；
Ｘ１はリンカーであり、ただしＣＨ１でなく；
Ｘ２はＦｃ領域であり；
（Ｘ１）ｎは（Ｘ１）０または（Ｘ１）１であり；
（Ｘ２）ｎは（Ｘ２）０または（Ｘ２）１である）
からなる第１及び第３ポリペプチド鎖を構築するステップ；
ｄ）ＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎ
（ここで、
ＶＤ１は第１親抗体またはその抗原結合部分から得られる第１軽鎖可変ドメインであり；
ＶＤ２は第２親抗体またはその抗原結合部分から得られる第２軽鎖可変ドメインであり；
Ｃは軽鎖定常ドメインであり；
Ｘ１はリンカーであり、ただしＣＨ１でなく；
Ｘ２はＦｃ領域を含まず；
（Ｘ１）ｎは（Ｘ１）０または（Ｘ１）１であり；
（Ｘ２）ｎは（Ｘ２）０または（Ｘ２）１である）
からなる第２及び第４ポリペプチド鎖を構築するステップ；及び
ｅ）第１、第２、第３及び第４ポリペプチド鎖を発現させるステップ；
を含む２つの抗原を結合し得る二重可変ドメイン免疫グロブリンの作成方法であって、前記結合タンパク質が、ＣＤ−２０とＣＤ−１９、ＣＤ−２０とＣＤ−８０、ＣＤ−２０とＣＤ−２２、ＣＤ−２０とＣＤ−４０、ＣＤ−３とＨＥＲ−２、ＣＤ−３とＣＤ−１９、ＥＧＦＲとＨＥＲ−２、ＥＧＦＲとＣＤ−３、ＥＧＦＲとＩＧＦ１，２、ＥＧＦＲとＩＧＦ１Ｒ、ＥＧＦＲとＲＯＮ、ＥＧＦＲとＨＧＦ、ＥＧＦＲとｃ−ＭＥＴ、ＨＥＲ−２とＩＧＦ１，２、ＨＥＲ−２とＩＧＦ１Ｒ、ＲＯＮとＨＧＦ、ＶＥＧＦとＥＧＦＲ、ＶＥＧＦとＨＥＲ−２、ＶＥＧＦとＣＤ−２０、ＶＥＧＦとＩＧＦ１，２、ＶＥＧＦとＤＬＬ４、ＶＥＧＦとＨＧＦ、ＶＥＧＦとＲＯＮ、ＶＥＧＦとＮＲＰ１、ＣＤ−２０とＣＤ３、ＤＬＬ−４とＰＬＧＦ、ＶＥＧＦとＰＬＧＦ、ＥｒｂＢ３とＥＧＦＲ、ＥｒｂＢ３とＨＧＦ、ＨＥＲ−２とＥｒｂＢ３、ｃ−ＭｅｔとＥｒＢ３、ＰＬＧＦとＨＥＲ−２、及びＨＥＲ−２とＨＥＲ−２からなる群から選択される、１対の抗原を結合し得る、前記方法。
【請求項６３】
ＶＤ１及びＶＤ２重鎖可変ドメインが、配列番号２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４、５６、５８、６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９６、９８、１００、１０２、１０４及び１０６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、ＶＤ１及びＶＤ２軽鎖可変ドメインが、配列番号２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９、８１、８３、８５、８７、８９、９１、９３、９５、９７、９９、１０１、１０３、１０５及び１０７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項６２に記載の方法。
【請求項６４】
上記第１親抗体またはその抗原結合部分及び上記第２親抗体またはその抗原結合部分が、ヒト抗体、ＣＤＲグラフト化抗体及びヒト化抗体からなる群から選択される、請求項６２に記載の方法。
【請求項６５】
上記第１親抗体またはその抗原結合部分及び上記第２親抗体またはその抗原結合部分が、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、ヒンジ領域でジスルフィド架橋により連結されている２つのＦａｂ断片からなる二価断片、ＶＨ及びＣＨ１ドメインから構成されるＦｄ断片、抗体のシングルアームのＶＬ及びＶＨドメインから構成されるＦｖ断片、ｄＡｂ断片、単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）、一本鎖抗体及びダイアボディからなる群から選択される、請求項６２に記載の方法。
【請求項６６】
上記第１親抗体またはその抗原結合部分が、二重可変ドメイン免疫グロブリンにより示される、少なくとも１つの所望特性を有する、請求項６２に記載の方法。
【請求項６７】
上記第２親抗体またはその抗原結合部分が、二重可変ドメイン免疫グロブリンにより示される、少なくとも１つの所望特性を有する、請求項６２に記載の方法。
【請求項６８】
Ｆｃ領域が、未変性配列Ｆｃ領域及び変異配列Ｆｃ領域からなる群から選択される、請求項６２に記載の方法。
【請求項６９】
Ｆｃ領域が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥ及びＩｇＤ由来のＦｃ領域からなる群から選択される、請求項６２に記載の方法。
【請求項７０】
上記所望特性が、１つ以上の抗体パラメーターから選択される、請求項６６に記載の方法。
【請求項７１】
上記所望特性が、１つ以上の抗体パラメーターから選択される、請求項６７に記載の方法。
【請求項７２】
上記抗体パラメーターが、抗原特異性、抗原に対する親和性、力価、生物学的機能、エピトープ認識、安定性、可溶性、産生効率、免疫原性、薬物動態、バイオアベイラビリティ、組織交差反応性及びオルソロガス抗原結合からなる群から選択される、請求項７０に記載の方法。
【請求項７３】
上記抗体パラメーターが、抗原特異性、抗原に対する親和性、力価、生物学的機能、エピトープ認識、安定性、可溶性、産生効率、免疫原性、薬物動態、バイオアベイラビリティ、組織交差反応性及びオルソロガス抗原結合からなる群から選択される、請求項７１に記載の方法。
【請求項７４】
上記第１親抗体またはその抗原結合部分が、上記第２親抗体またはその抗原結合部分が上記第２抗原に結合する親和性とは異なる親和性で上記第１抗原に結合する、請求項６２に記載の方法。
【請求項７５】
上記第１親抗体またはその抗原結合部分が、上記第２親抗体またはその抗原結合部分が上記第２抗原に結合する力価とは異なる力価で上記第１抗原に結合する、請求項６２に記載の方法。
【請求項７６】
所望特性を有する第１及び第２抗原に結合し得る二重可変ドメイン免疫グロブリンが作成されるように、
ａ）第１抗原に結合し得且つ二重可変ドメイン免疫グロブリンにより示される少なくとも１つの所望特性を有する第１親抗体またはその抗原結合部分を得るステップ；
ｂ）第２抗原に結合し得且つ二重可変ドメイン免疫グロブリンにより示される少なくとも１つの所望特性を有する第２親抗体またはその抗原結合部分を得るステップ；
ｃ）ＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎ
（ここで、
ＶＤ１は第１親抗体またはその抗原結合部分から得られる第１重鎖可変ドメインであり；
ＶＤ２は第２親抗体またはその抗原結合部分から得られる第２重鎖可変ドメインであり；
Ｃは重鎖定常ドメインであり；
Ｘ１はリンカーであり、ただしＣＨ１ではなく；
Ｘ２はＦｃ領域であり；
（Ｘ１）ｎは（Ｘ１）０または（Ｘ１）１であり；
（Ｘ２）ｎは（Ｘ２）０または（Ｘ２）１である）
からなる第１及び第３ポリペプチド鎖を構築するステップ；
ｄ）（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎ
（ここで、
ＶＤ１は第１親抗体またはその抗原結合部分から得られる第１軽鎖可変ドメインであり；
ＶＤ２は第２親抗体またはその抗原結合部分から得られる第２軽鎖可変ドメインであり；
Ｃは軽鎖定常ドメインであり；
ＸＩはリンカーであり、ただしＣＨ１ではなく；
Ｘ２はＦｃ領域を含まず；
（Ｘ１）ｎは（Ｘ１）０または（Ｘ１）１であり；
（Ｘ２）ｎは（Ｘ２）０または（Ｘ２）１である）
からなる第２及び第４ポリペプチド鎖を構築するステップ；
ｅ）第１、第２、第３及び第４ポリペプチド鎖を発現させるステップ；
を含む所望特性を有する２つの抗原に結合し得る二重可変ドメイン免疫グロブリンの作成方法であって、前記結合タンパク質が、ＣＤ−２０とＣＤ−１９、ＣＤ−２０とＣＤ−８０、ＣＤ−２０とＣＤ−２２、ＣＤ−２０とＣＤ−４０、ＣＤ−３とＨＥＲ−２、ＣＤ−３とＣＤ−１９、ＥＧＦＲとＨＥＲ−２、ＥＧＦＲとＣＤ−３、ＥＧＦＲとＩＧＦ１，２、ＥＧＦＲとＩＧＦ１Ｒ、ＥＧＦＲとＲＯＮ、ＥＧＦＲとＨＧＦ、ＥＧＦＲとｃ−ＭＥＴ、ＨＥＲ−２とＩＧＦ１，２、ＨＥＲ−２とＩＧＦ１Ｒ、ＲＯＮとＨＧＦ、ＶＥＧＦとＥＧＦＲ、ＶＥＧＦとＨＥＲ−２、ＶＥＧＦとＣＤ−２０、ＶＥＧＦとＩＧＦ１，２、ＶＥＧＦとＤＬＬ４、ＶＥＧＦとＨＧＦ、ＶＥＧＦとＲＯＮ、ＶＥＧＦとＮＲＰ１、ＣＤ−２０とＣＤ３、ＤＬＬ−４とＰＬＧＦ、ＶＥＧＦとＰＬＧＦ、ＥｒｂＢ３とＥＧＦＲ、ＥｒｂＢ３とＨＧＦ、ＨＥＲ−２とＥｒｂＢ３、ｃ−ＭｅｔとＥｒＢ３、ＰＬＧＦとＨＥＲ−２、及びＨＥＲ−２とＨＥＲ−２からなる群から選択される、１対の抗原に結合し得る、前記方法。
【請求項７７】
（ａ）改変前の結合タンパク質の特性を測定するステップ；
（ａ）重鎖及び／または軽鎖の（Ｘ１）１の長さ及び／または配列を改変させて、改変重鎖及び／または軽鎖を得るステップ；
（ｂ）改変重鎖及び軽鎖を含む改変結合タンパク質の改良された特性を測定するステップ；
を含む、請求項６に記載の結合タンパク質の特性の改良方法。
【請求項７８】
（ａ）改変前の結合タンパク質の特性を測定するステップ；
（ｂ）ＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎがＶＤ２−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ１−Ｃ−（Ｘ２）ｎに変化するように第１及び第２ポリペプチド鎖を改変させて、改変重鎖及び軽鎖を得るステップ；
（ｃ）改変重鎖及び軽鎖を含む改変結合タンパク質の改良された特性を測定するステップ；
を含む、請求項６に記載の結合タンパク質の特性の改良方法。
【請求項７９】
（ａ）改変前の結合タンパク質の特性を測定するステップ；
（ｂ）重鎖及び／または軽鎖のＶＤ１またはＶＤ２の１つのみの配列が変化するように第１及び／または第２ポリペプチド鎖を改変させるステップ；及び
（ｃ）改変重鎖及び軽鎖を含む改変結合タンパク質の特性を測定するステップ；
を含む、請求項６に記載の結合タンパク質の特性の改良方法。
【請求項８０】
特性が、標的抗原に対する結合、宿主細胞からの発現収率、インビトロ半減期、インビボ半減期、安定性、可溶性及び改良されたエフェクター機能からなる群から選択される、請求項７７〜７８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８１】
改変重鎖の（Ｘ１）１の長さを長くする、請求項７７に記載の方法。
【請求項８２】
改変重鎖の（Ｘ１）１の長さを短くする、請求項７７または８０に記載の方法。
【請求項８３】
改変軽鎖の（Ｘ１）１の長さを長くする、請求項７７または８０に記載の方法。
【請求項８４】
改変軽鎖の（Ｘ１）１の長さを短くする、請求項７７または８０に記載の方法。
【請求項８５】
改変重鎖の（Ｘ１）１が、配列番号２１または２２からなる群から選択されるアミノ酸からなる、請求項７７または８０に記載の方法。
【請求項８６】
改変軽鎖の（Ｘ１）１が、配列番号１３または１４からなる群から選択されるアミノ酸からなる、請求項７７または８０に記載の方法。
【請求項８７】
改変重鎖の（Ｘ１）１が、配列番号２２であり、改変軽鎖の（Ｘ１）１が、配列番号１４である、請求項７７または８０に記載の方法。
【請求項８８】
改変重鎖の（Ｘ１）１が、配列番号２１であり、改変軽鎖の（Ｘ１）１が、配列番号１４である、請求項７７または８０に記載の方法。
【請求項８９】
改変重鎖の（Ｘ１）１が、配列番号２２であり、改変軽鎖の（Ｘ１）１が、配列番号１３である、請求項７７または８０に記載の方法。
【請求項９０】
改変重鎖の（Ｘ１）１が、配列番号２１であり、改変軽鎖の（Ｘ１）１が、配列番号１３である、請求項７７または８０に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願は、２００９年１０月２３日に出願された米国特許出願第１２／６０５，０９４号に対して優先権を主張するものであり、参照によりその内容が本明細書に組み込まれる。米国特許出願第１２／６０５，０９４号は、２００９年７月３１日に出願された米国仮特許出願第６１／２３０，１９１号および２００９年４月２８日に出願された米国特許出願第１２／４３１，４６０号に対する優先権を主張する一部継続出願であり、米国特許出願第１２／４３１，４６０号は、２００８年４月２９日に出願された 米国仮特許出願第６１／１２５，８３４号、 ２００８年７月８日に出願された米国仮特許出願６１／１３４，２８３号、２００８年１０月２３日に出願された米国仮特許出願第６１／１９７，１９１号 および２００８年１１月１２日に出願された米国仮特許出願第６１／１９９，００９号 に対する優先権を主張する非仮出願であり、参照によりその内容が本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本発明は、多価多重特異性結合タンパク質、作成方法、並びに特に急性及び慢性炎症性疾患、癌及び他の疾患の診断、予防及び／または治療におけるその使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
２つ以上の抗原に結合し得る多重特異性抗体のような工学操作したタンパク質は当業界で公知である。前記多重特異性結合タンパク質は細胞融合、化学的コンジュゲーションまたは組換えＤＮＡ技術を用いて作成され得る。
【０００４】
双特異性抗体は、双特異性抗体の所望の特異性でマウスモノクローナル抗体（ｍＡｂ）を発現する２つの異なるハイブリドーマ細胞株の体細胞融合に基づくクアドローマテクノロジーを用いて産生されている（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ、Ｃ．  ａｎｄ  Ａ．Ｃ．Ｃｕｅｌｌｏ（１９８３）Ｎａｔｕｒｅ，３０５（５９３４）：５３７−４０を参照されたい）。生じたハイブリッド−ハイブリドーマ（すなわち、クアドローマ）内での２つの異なる免疫グロブリン（Ｉｇ）重鎖及び軽鎖のランダム対形成のために、最高１０個の異なるＩｇ種が作成され、そのうちの１個のみが機能的双特異性抗体である。誤対形成した副産物の存在及び有意に低い産生収率は、精巧な精製手順が必要であることを意味する。
【０００５】
双特異性抗体は２つの異なるｍＡｂの化学的コンジュゲーションによっても産生され得る（Ｓｔａｅｒｚ，Ｕ．Ｄ．ら（１９８５）Ｎａｔｕｒｅ，３１４（６０１２）：６２８−３１を参照されたい）。このアプローチは均質な調製物を生じない。他のアプローチは、２つの異なるｍＡｂまたはより小さい抗体断片の化学的コンジュゲーションを使用している（Ｂｒｅｎｎａｎ，Ｍ．ら（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２９（４７０８）：８１−３を参照されたい）。
【０００６】
双特異性抗体を産生するために使用される別の方法は、２つの親抗体をヘテロ二官能性架橋剤でカップリングすることであるが、架橋剤の親抗体との反応が部位特異的でないので生じた双特異性抗体は大きな分子不均一を被る。双特異性抗体のより均質な調製物を得るために、２つの異なるＦａｂ断片をそのヒンジシステイン残基で部位特異的に化学的に架橋した（Ｇｌｅｎｎｉｅ，Ｍ．Ｊ．ら（１９８７）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３９（７）：２３６７−７５を参照されたい）。しかし、この方法では、完全なＩｇＧ分子ではなく、Ｆａｂ’２断片が生ずる。
【０００７】
多種多様の他の組換え双特異性抗体フォーマットが開発されている（Ｋｒｉａｎｇｋｕｍ，Ｊ．ら（２００１）Ｂｉｏｍｏｌ．Ｅｎｇ．，１８（２）：３１−４０を参照されたい）。これらの中で、タンデム一本鎖Ｆｖ分子及びダイアボディ、並びにその各種誘導体が最も広く使用されている。日常的に、これらの分子の構築は異なる抗原を認識する２つの一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片から出発する（Ｅｃｏｎｏｍｉｄｅｓ，Ａ．Ｎ．ら（２００３）Ｎａｔ．Ｍｅｄ．，９（１）：４７−５２を参照されたい）。タンデムｓｃＦｖ分子（ｔａＦｖ）は、２つのｓｃＦｖ分子を追加のペプチドリンカーで単に結合させる簡単なフォーマットに相当する。これらのタンデムｓｃＦｖ分子中に存在する２つのｓｃＦｖ断片は別々のフォールディング実体を形成する。各種リンカーが２つのｓｃＦｖ断片を最高６３残基の長さのリンカーで結合させるために使用され得る（Ｎａｋａｎｉｓｈｉ，Ｋ．ら（２００１）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９：４２３−７４を参照されたい）。親ｓｃＦｖ断片は通常細菌中で可溶性形態で発現され得るが、タンデムｓｃＦｖ分子は細菌中で不溶性凝集物を形成することがしばしば観察されている。よって、リフォールディングプロトコルまたは哺乳動物発現系の使用が可溶性タンデムｓｃＦｖ分子を作成するために日常的に適用される。最近の研究で、ＣＤ２８に対するタンデムｓｃＦｖ及びメラノーマ関連プロテオグリカンのトランスジェニック家兎及びウシによるインビボ発現が報告された（Ｇｒａｃｉｅ、Ｊ．Ａ．ら（１９９９）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，１０４（１０）：１３９３−４０１を参照されたい）。この構築物では、２つのｓｃＦｖ分子がＣＨ１リンカーにより結合されており、最高１００ｍｇ／Ｌの血清濃度の双特異性抗体が観察された。細菌中で可溶性発現できるように、ドメイン順序の変更、或いは長さまたは融通性の異なる中間リンカーを用いることを含めた各種戦略が使用された。現在、幾つかの研究が非常に短いＡｌａ３リンカーまたは長いグリシン／セリンに富むリンカーを用いる細菌での可溶性タンデムｓｃＦｖ分子の発現を報告している（Ｌｅｕｎｇ，Ｂ．Ｐ．ら（２０００）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１６４（１２）：６４９５−５０２；Ｉｔｏ，Ａ．ら（２００３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１７０（９）：４８０２−９；Ｋａｒｎｉ，Ａ．ら（２００２）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ．，１２５（１−２）：１３４−４０を参照されたい）。別の最近の研究で、細菌中で可溶性及び活性形態で産生される分子を豊富にするために、３または６個の残基の長さのランダム化中間リンカーを含有するタンデムｓｃＦｖレパートリーのファージディスプレーを使用した。このアプローチにより、６個のアミノ酸残基リンカーを有するタンデムｓｃＦｖ分子が単離された（Ａｒｎｄｔ，Ｍ．  ａｎｄ  Ｊ．Ｋｒａｕｓｓ（２００３）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２０７：３０５−２１を参照されたい）。これらのリンカー配列がタンデムｓｃＦｖ分子の可溶性発現のための一般的な解決策に相当するかどうかは明らかでない。にもかかわらず、この研究は、定方向突然変異と組み合わせたタンデムｓｃＦｖ分子のファージディスプレーが細菌中で活性形態で発現され得る分子を豊富にするための強力なツールであることを立証した。
【０００８】
双特異性ダイアボディ（Ｄｂ）は発現のためにダイアボディフォーマットを利用している。ダイアボディは、ＶＨ及びＶＬドメインを結合させるリンカーの長さを約５個の残基に減らすことによりｓｃＦｖ断片から産生される（Ｐｅｉｐｐ，Ｍ．  ａｎｄ  Ｔ．Ｖａｌｅｒｉｕｓ（２００２）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓ．，３０（４）：５０７−１１を参照されたい）。このようにリンカーサイズを短くすると、ＶＨ及びＶＬドメインの交差対形成により２つのポリペプチド鎖のダイマー化が容易になる。双特異性ダイアボディは、同一細胞内で構造ＶＨＡ−ＶＬＢとＶＨＢ−ＶＬＡ（ＶＨ−ＶＬコンフィギュレーション）、またはＶＬＡ−ＶＨＢとＶＬＢ−ＶＨＡ（ＶＬ−ＶＨコンフィギュレーション）を有する２つのポリペプチド鎖を発現させることにより産生される。これまでに多数の各種双特異性ダイアボディが産生されており、そのうちの多くは細菌中で可溶性形態で発現されている。しかしながら、最近の比較研究は、可変ドメインの配向が発現及び活性結合部位の形成に影響を与え得ることを立証している（Ｍａｃｋ，Ｍ．ら（１９９５）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９２（１５）：７０２１−５を参照されたい）。にもかかわらず、細菌における可溶性発現はタンデムｓｃＦｖ分子よりも重要な効果を表す。しかしながら、２つの異なるポリペプチド鎖は単一細胞内で発現されるので、不活性ヘテロダイマーが活性ヘテロダイマーと一緒に産生され得る。こうなると、双特異性ダイアボディの均質調製物を得るためには追加の精製ステップの実行が必要である。双特異性ダイアボディを作成し得る１つのアプローチはノブ・イントゥー・ホールダイアボディの産生である（Ｈｏｌｌｉｇｅｒ，Ｐ．，Ｔ．Ｐｒｏｓｐｅｒｏ，  ａｎｄ  Ｇ．Ｗｉｎｔｅｒ（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０（１４）：６４４４−８．１８を参照されたい）。このアプローチはＨＥＲ２及びＣＤ３に対する双特異性ダイアボディに対して立証された。Ｖａｌ３７をＰｈｅで、Ｌｅｕ４５をＴｒｐで交換することによりＶＨドメイン中に大きなノブを導入し、抗ＨＥＲ２または抗ＣＤ３可変ドメインのいずれかにおいてＰｈｅ９８をＭｅｔに、Ｔｙｒ８７をＡｌａに変異させることによりＶＬドメイン中に相補性ホールを生成した。このアプローチを用いることにより、双特異性ダイアボディの産生は親ダイアボディによる７２％からノブ・イントゥー・ホールダイアボディよる９０％以上に増加し得る。重要なことは、これらの突然変異の結果として産生収率が僅かしか減少しないことである。しかしながら、幾つかの構築物で抗原結合活性の低下が観察された。よって、このかなり手の込んだアプローチは、未改変の結合活性を有するヘテロダイマー分子を産生する突然変異を同定するために各種構築物を分析する必要がある。加えて、前記アプローチは、定常領域で免疫グロブリン配列を変異修飾して、高い免疫原性、乏しいインビボ安定性及び望ましくない薬物動態を生じる恐れがある非天然及び非自然形態の抗体配列を作成する必要がある。
【０００９】
一本鎖ダイアボディ（ｓｃＤｂ）は双特異性ダイアボディ様分子の形成を改良するための代替戦略に相当する（Ｈｏｌｌｉｇｅｒ，Ｐ．  ａｎｄ  Ｇ．Ｗｉｎｔｅｒ（１９９７）Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．，４５（３−４）：１２８−３０；Ｗｕ，Ａ．Ｍ．ら（１９９６）Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２（１）：ｐ．２１−３６を参照されたい）。双特異性一本鎖ダイアボディは、2個のダイアボディ−形成性ポリペプチド鎖を約１５個のアミノ酸残基の長さを有する追加中間リンカーで結合させることにより産生される。従って、モノマー一本鎖ダイアボディ（５０〜６０ｋＤａ）に相当する分子量を有する分子はすべて双特異性である。幾つかの研究で、双特異性一本鎖ダイアボディは細胞において可溶性及び活性形態で発現し、精製された分子の大部分はモノマーとして存在していることが立証された（Ｈｏｌｌｉｇｅｒ，Ｐ．  ａｎｄ  Ｇ．Ｗｉｎｔｅｒ（１９９７）Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．，４５（３−４）：１２８−３０；Ｗｕ，Ａ．Ｍ．ら（１９９６）Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈｎｏｌ．，２（１）：２１−３６；Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，Ａ．  ａｎｄ  Ｐ．Ｐａｃｋ（１９９７）Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈｎｏｌ．，３（２）：８３−１０５；Ｒｉｄｇｗａｙ，Ｊ．Ｂ．ら（１９９６）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎ．，９（７）：６１７−２１を参照されたい）。よって、一本鎖ダイアボディはタンデムｓｃＦｖ（すべてのモノマーが双特異性である）及びダイアボディ（細菌中で可溶性発現）の作用効果を合わせ持つ。
【００１０】
より最近では、ダイアボディをＦｃに融合させて、ジ−ダイアボディと命名されるよりＩｇ様の分子が作成された（Ｌｕ，Ｄ．ら（２００４）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７９（４）：２８５６−６５を参照されたい）。加えて、ＩｇＧの重鎖中に２つのＦａｂリピートを含み、４つの抗原分子に結合し得る多価抗体構築物が記載されている（ＷＯ  ０１７７３４２Ａ１及びＭｉｌｌｅｒ，Ｋ．ら（２００３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１７０（９）：４８５４−６１を参照されたい）。
【００１１】
当業界には、２つ以上の抗原に結合し得る改良された多価結合タンパク質に対する要望がある。米国特許出願Ｎｏ．１１／５０７，０５０は、二重可変ドメイン免疫グロブリン（ＤＶＤ−Ｉｇ（商標））と称される高親和性で２つ以上の抗原に結合し得る結合タンパク質の新規ファミリーを提供する。本発明は更に２つ以上の抗原に結合し得る新規結合タンパク質を提供する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１２】
【特許文献１】国際公開第０１７７３４２号
【特許文献２】米国特許出願第１１／５０７，０５０号
【非特許文献】
【００１３】
【非特許文献１】Ｍｉｌｓｔｅｉｎ、Ｃ．  ａｎｄ  Ａ．Ｃ．Ｃｕｅｌｌｏ（１９８３）Ｎａｔｕｒｅ，３０５（５９３４）：５３７−４０
【非特許文献２】Ｓｔａｅｒｚ，Ｕ．Ｄ．ら（１９８５）Ｎａｔｕｒｅ，３１４（６０１２）：６２８−３１
【非特許文献３】Ｂｒｅｎｎａｎ，Ｍ．ら（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２９（４７０８）：８１−３
【非特許文献４】Ｇｌｅｎｎｉｅ，Ｍ．Ｊ．ら（１９８７）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３９（７）：２３６７−７５
【非特許文献５】Ｋｒｉａｎｇｋｕｍ，Ｊ．ら（２００１）Ｂｉｏｍｏｌ．Ｅｎｇ．，１８（２）：３１−４０
【非特許文献６】Ｅｃｏｎｏｍｉｄｅｓ，Ａ．Ｎ．ら（２００３）Ｎａｔ．Ｍｅｄ．，９（１）：４７−５２
【非特許文献７】Ｎａｋａｎｉｓｈｉ，Ｋ．ら（２００１）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９：４２３−７４
【非特許文献８】Ｇｒａｃｉｅ，Ｊ．Ａ．ら（１９９９）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，１０４（１０）：１３９３−４０１
【非特許文献９】Ｌｅｕｎｇ，Ｂ．Ｐ．ら（２０００）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１６４（１２）：６４９５−５０２
【非特許文献１０】Ｉｔｏ，Ａ．ら（２００３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１７０（９）：４８０２−９
【非特許文献１１】Ｋａｒｎｉ，Ａ．ら（２００２）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ．，１２５（１−２）：１３４−４０
【非特許文献１２】Ａｒｎｄｔ，Ｍ．  ａｎｄ  Ｊ．Ｋｒａｕｓｓ（２００３）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２０７：３０５−２１
【非特許文献１３】Ｐｅｉｐｐ，Ｍ．  ａｎｄ  Ｔ．Ｖａｌｅｒｉｕｓ（２００２）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓ．，３０（４）：５０７−１１
【非特許文献１４】Ｍａｃｋ，Ｍ．ら（１９９５）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９２（１５）：７０２１−５
【非特許文献１５】Ｈｏｌｌｉｇｅｒ，Ｐ．，Ｔ．Ｐｒｏｓｐｅｒｏ，  ａｎｄ  Ｇ．Ｗｉｎｔｅｒ（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０（１４）：６４４４−８．１８
【非特許文献１６】Ｈｏｌｌｉｇｅｒ，Ｐ．  ａｎｄ  Ｇ．Ｗｉｎｔｅｒ（１９９７）Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．，４５（３−４）：１２８−３０
【非特許文献１７】Ｗｕ，Ａ．Ｍ．ら（１９９６）Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２（１）：２１−３６
【非特許文献１８】Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，Ａ．  ａｎｄ  Ｐ．Ｐａｃｋ（１９９７）Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈｎｏｌ．，３（２）：８３−１０５
【非特許文献１９】Ｒｉｄｇｗａｙ，Ｊ．Ｂ．ら（１９９６）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎ．，９（７）：６１７−２１
【非特許文献２０】Ｌｕ，Ｄ．ら（２００４）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７９（４）：２８５６−６５
【非特許文献２１】Ｍｉｌｌｅｒ，Ｋ．ら（２００３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１７０（９）：４８５４−６１
【発明の概要】
【００１４】
本発明は、２つ以上の抗原に結合し得る多価結合タンパク質に関する。本発明は、高親和性で２つ以上の抗原に結合し得る結合タンパク質の新規ファミリーを提供する。
【００１５】
１つの実施形態では、本発明はポリペプチド鎖を含む結合タンパク質を提供し、前記ポリペプチド鎖はＶＤ１−（Ｘ１−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ）２（ここで、ＶＤ１は第１可変ドメインであり、ＶＤ２は第２可変ドメインであり、Ｃは定常ドメインであり、Ｘ１はアミノ酸またはポリペプチドを表し、Ｘ２はＦｃ領域を表し、ｎは０または１である）からなる。実施形態では、結合タンパク質中のＶＤ１及びＶＤ２は重鎖可変ドメインである。別の実施形態では、重鎖可変ドメインはマウス重鎖可変ドメイン、ヒト重鎖可変ドメイン、ＣＤＲグラフト化重鎖可変ドメイン及びヒト化重鎖可変ドメインからなる群から選択される。なお別の実施形態では、ＶＤ１及びＶＤ２は同一抗原に結合し得る。別の実施形態では、ＶＤ１及びＶＤ２は異なる抗原に結合し得る。さらに別の実施形態では、Ｃは重鎖定常ドメインである。例えば、Ｘ１はリンカーであり、ただしＸ１はＣＨ１ではない。例えば、Ｘ１はＡＫＴＴＰＫＬＥＥＧＥＦＳＥＡＲ（配列番号１）、ＡＫＴＴＰＫＬＥＥＧＥＦＳＥＡＲＶ（配列番号２）、ＡＫＴＴＰＫＬＧＧ（配列番号３）、ＳＡＫＴＴＰＫＬＧＧ（配列番号４）、ＳＡＫＴＴＰ（配列番号５）、ＲＡＤＡＡＰ（配列番号６）、ＲＡＤＡＡＰＴＶＳ（配列番号７）、ＲＡＤＡＡＡＡＧＧＰＧＳ（配列番号８）、ＲＡＤＡＡＡＡ（Ｇ４Ｓ）４（配列番号９）、ＳＡＫＴＴＰＫＬＥＥＧＥＦＳＥＡＲＶ（配列番号１０）、ＡＤＡＡＰ（配列番号１１）、ＡＤＡＡＰＴＶＳＩＦＰＰ（配列番号１２）、ＴＶＡＡＰ（配列番号１３）、ＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰ（配列番号１４）、ＱＰＫＡＡＰ（配列番号１５）、ＱＰＫＡＡＰＳＶＴＬＦＰＰ（配列番号１６）、ＡＫＴＴＰＰ（配列番号１７）、ＡＫＴＴＰＰＳＶＴＰＬＡＰ（配列番号１８）、ＡＫＴＴＡＰ（配列番号１９）、ＡＫＴＴＡＰＳＶＹＰＬＡＰ（配列番号２０）、ＡＳＴＫＧＰ（配列番号２１）、ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰ（配列番号２２）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２３）、ＧＥＮＫＶＥＹＡＰＡＬＭＡＬＳ（配列番号２４）、ＧＰＡＫＥＬＴＰＬＫＥＡＫＶＳ（配列番号２５）、ＧＨＥＡＡＡＶＭＱＶＱＹＰＡＳ（配列番号２６）からなる群から選択されるリンカーである。実施形態では、Ｘ２はＦｃ領域である。別の実施形態では、Ｘ２はバリアントＦｃ領域である。
【００１６】
実施形態では、本明細書中に開示されている結合タンパク質はポリペプチド鎖を含み、前記ポリペプチド鎖はＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎ（ここで、ＶＤ１は第１重鎖可変ドメインであり、ＶＤ２は第２重鎖可変ドメインであり、Ｃは重鎖定常ドメインであり、Ｘ１はリンカーであり、ただしＣＨ１ではなく、Ｘ２はＦｃ領域である）からなる。
【００１７】
実施形態では、結合タンパク質中のＶＤ１及びＶＤ２は軽鎖可変ドメインである。実施形態では、軽鎖可変ドメインはマウス軽鎖可変ドメイン、ヒト軽鎖可変ドメイン、ＣＤＲグラフト化軽鎖可変ドメイン及びヒト化軽鎖可変ドメインからなる群から選択される。１つの実施形態では、ＶＤ１及びＶＤ２は同一抗原に結合し得る。別の実施形態では、ＶＤ１及びＶＤ２は異なる抗原に結合し得る。実施形態では、Ｃは軽鎖定常ドメインである。別の実施形態では、Ｘ１はリンカーであり、ただしＸ１はＣＬｌではない。実施形態では、Ｘ１はＡＫＴＴＰＫＬＥＥＧＥＦＳＥＡＲ（配列番号１）、ＡＫＴＴＰＫＬＥＥＧＥＦＳＥＡＲＶ（配列番号２）、ＡＫＴＴＰＫＬＧＧ（配列番号３）、ＳＡＫＴＴＰＫＬＧＧ（配列番号４）、ＳＡＫＴＴＰ（配列番号５）、ＲＡＤＡＡＰ（配列番号６）、ＲＡＤＡＡＰＴＶＳ（配列番号７）、ＲＡＤＡＡＡＡＧＧＰＧＳ（配列番号８）、ＲＡＤＡＡＡＡ（Ｇ４Ｓ）４（配列番号９）、ＳＡＫＴＴＰＫＬＥＥＧＥＦＳＥＡＲＶ（配列番号１０）、ＡＤＡＡＰ（配列番号１１）、ＡＤＡＡＰＴＶＳＩＦＰＰ（配列番号１２）、ＴＶＡＡＰ（配列番号１３）、ＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰ（配列番号１４）、ＱＰＫＡＡＰ（配列番号１５）、ＱＰＫＡＡＰＳＶＴＬＦＰＰ（配列番号１６）、ＡＫＴＴＰＰ（配列番号１７）、ＡＫＴＴＰＰＳＶＴＰＬＡＰ（配列番号１８）、ＡＫＴＴＡＰ（配列番号１９）、ＡＫＴＴＡＰＳＶＹＰＬＡＰ（配列番号２０）、ＡＳＴＫＧＰ（配列番号２１）、ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰ（配列番号２２）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２３）、ＧＥＮＫＶＥＹＡＰＡＬＭＡＬＳ（配列番号２４）、ＧＰＡＫＥＬＴＰＬＫＥＡＫＶＳ（配列番号２５）、ＧＨＥＡＡＡＶＭＱＶＱＹＰＡＳ（配列番号２６）からなる群から選択されるリンカーである。実施形態では、結合タンパク質はＸ２を含まない。
【００１８】
実施形態では、可変重鎖及び可変軽鎖は共に同一リンカーを含む。別の実施形態では、可変重鎖及び可変軽鎖は異なるリンカーを含む。別の実施形態では、可変重鎖及び可変軽鎖は共に短（約６個のアミノ酸）リンカーを含む。別の実施形態では、可変重鎖及び可変軽鎖は共に長（６個以上のアミノ酸）リンカーを含む。別の実施形態では、可変重鎖は短リンカーを含み、可変軽鎖は長リンカーを含む。別の実施形態では、可変重鎖は長リンカーを含み、可変軽鎖は短リンカーを含む。
【００１９】
実施形態では、本明細書中に開示されている結合タンパク質はポリペプチド鎖を含み、前記ポリペプチド鎖はＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎ（ここで、ＶＤ１は第１軽鎖可変ドメインであり、ＶＤ２は第２軽鎖可変ドメインであり、Ｃは軽鎖定常ドメインであり、Ｘ１はリンカーであり、ただしＣＨ１ではなく、Ｘ２はＦｃ領域を含まない）からなる。
【００２０】
別の実施形態では、本発明は、２つのポリペプチド鎖を含む結合タンパク質を提供し、前記第１ポリペプチド鎖はＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎ（ここで、ＶＤ１は第１重鎖可変ドメインであり、ＶＤ２は第２重鎖可変ドメインであり、Ｃは重鎖定常ドメインであり、Ｘ１はリンカーであり、ただしＣＨ１ではなく、Ｘ２はＦｃ領域である）からなり、前記第２ポリペプチド鎖はＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎ（ここで、ＶＤ１は第１軽鎖可変ドメインであり、ＶＤ２は第２軽鎖可変ドメインであり、Ｃは軽鎖定常ドメイン、Ｘ１はリンカーであり、ただしＣＨ１ではなく、Ｘ２はＦｃ領域を含まない）からなる。特定実施形態では、二重可変ドメイン（ＤＶＤ）結合タンパク質は４つのポリペプチド鎖を含み、第１の２つのポリペプチド鎖はそれぞれＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎ（ここで、ＶＤ１は第１重鎖可変ドメインであり、ＶＤ２は第２重鎖可変ドメインであり、Ｃは重鎖定常ドメインであり、Ｘ１はリンカーであり、ただしＣＨ１ではなく、Ｘ２はＦｃ領域である）からなり、第２の２つのポリペプチド鎖はそれぞれＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎ（ここで、ＶＤ１は第１軽鎖可変ドメインであり、ＶＤ２は第２軽鎖可変ドメインであり、Ｃは軽鎖定常ドメインであり、Ｘ１はリンカーであり、ただしＣＨ１ではなく、Ｘ２はＦｃ領域を含まない）からなる。二重可変ドメイン（ＤＶＤ）タンパク質は４つの抗原結合部位を有する。
【００２１】
別の実施形態では、本明細書中に開示されている結合タンパク質は１つ以上の標的に結合し得る。実施形態では、標的はサイトカイン、細胞表面タンパク質、酵素及び受容体からなる群から選択される。別の実施形態では、結合タンパク質は１つ以上の標的の生物学的機能をモジュレートし得る。別の実施形態では、結合タンパク質は１つ以上の標的を中和し得る。本発明の結合タンパク質は、リンホカイン、モノカイン、ポリペプチドホルモン、受容体または腫瘍マーカーからなる群から選択されるサイトカインに結合し得る。例えば、本発明のＤＶＤ−ＩｇはＣＤ−２０、ＣＤ−１９、ＣＤ−８０、ＣＤ−２２、ＣＤ−４０、ＣＤ−３、ヒト上皮増殖因子受容体２（ＨＥＲ−２）、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）、インスリン様成長因子１，２（ＩＧＦ１，２）、インスリン様成長因子受容体（ＩＧＦ１Ｒ）、マクロファージ刺激タンパク質受容体チロシンキナーゼ（ＲＯＮ）、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）、間葉−上皮移行因子（ｃ−ＭＥＴ）、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、ショウジョウバエデルタホモログ４（ＤＬＬ４）、ニューロピリン１（ＮＲＰ１）、胎盤成長因子（ＰＬＧＦ）及びｖ−ｅｒｂ−ｂ２トリ赤芽球性白血病ウイルス発癌遺伝子ホモログ３（ＥｒｂＢ３）の２つ以上に結合し得る（表２も参照されたい）。特定実施形態では、結合タンパク質はＣＤ−２０とＣＤ−１９、ＣＤ−２０とＣＤ−８０、ＣＤ−２０とＣＤ−２２、ＣＤ−２０とＣＤ−４０、ＣＤ−３とＨＥＲ−２、ＣＤ−３とＣＤ−１９、ＥＧＦＲとＨＥＲ−２、ＥＧＦＲとＣＤ−３、ＥＧＦＲとＩＧＦ１，２、ＥＧＦＲとＩＧＦ１Ｒ、ＥＧＦＲとＲＯＮ、ＥＧＦＲとＨＧＦ、ＥＧＦＲとｃ−ＭＥＴ、ＨＥＲ−２とＩＧＦ１，２、ＨＥＲ−２とＩＧＦ１Ｒ、ＲＯＮとＨＧＦ、ＶＥＧＦとＥＧＦＲ、ＶＥＧＦとＨＥＲ−２、ＶＥＧＦとＣＤ−２０、ＶＥＧＦとＩＧＦ１，２、ＶＥＧＦとＤＬＬ４、ＶＥＧＦとＨＧＦ、ＶＥＧＦとＲＯＮ、ＶＥＧＦとＮＲＰ１、ＣＤ−２０とＣＤ３、ＤＬＬ−４とＰＬＧＦ、ＶＥＧＦとＰＬＧＦ、ＥｒｂＢ３とＥＧＦＲ、ＥｒｂＢ３とＨＧＦ、ＨＥＲ−２とＥｒｂＢ３、ｃ−ＭｅｔとＥｒＢ３、ＰＬＧＦとＨＥＲ−２、ＨＥＲ−２とＨＥＲ−２からなる群から選択される標的の対に結合し得る。
【００２２】
実施形態では、ＣＤ−２０とＣＤ−１９に結合し得る結合タンパク質は、配列番号１１２及び配列番号１１４からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号１１３及び配列番号１１５からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＣＤ−２０とＣＤ−１９に結合し得る結合タンパク質は配列番号１１２のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号１１３のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＣＤ−２０とＣＤ−１９に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号１１４のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号１１５のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００２３】
実施形態では、ＣＤ−２０とＣＤ−３（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号１１６及び配列番号１１８からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号１１７及び配列番号１１９からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＣＤ−２０とＣＤ−３（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は配列番号１１６のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号１１７のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＣＤ−２０とＣＤ−３（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号１１８のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号１１９のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００２４】
実施形態では、ＣＤ−２０とＣＤ−８０に結合し得る結合タンパク質は、配列番号１２０及び配列番号１２２からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号１２１及び配列番号１２３からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＣＤ−２０とＣＤ−８０に結合し得る結合タンパク質は配列番号１２０のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号１２１のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＣＤ−２０とＣＤ−８０に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ配列番号１２２のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号１２３のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００２５】
実施形態では、ＣＤ−２０とＣＤ−２２に結合し得る結合タンパク質は、配列番号１２４及び配列番号１２６からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号１２５及び配列番号１２７からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＣＤ−２０とＣＤ−２２に結合し得る結合タンパク質は配列番号１２４のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号１２５のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＣＤ−２０とＣＤ−２２に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号１２６のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号１２７のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００２６】
実施形態では、ＣＤ−２０とＣＤ−４０に結合し得る結合タンパク質は、配列番号１２８及び配列番号１３０からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号１２９及び配列番号１３１からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＣＤ−２０とＣＤ−４０に結合し得る結合タンパク質は配列番号１２８のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号１２９のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＣＤ−２０とＣＤ−４０に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号１３０のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号１３１のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００２７】
実施形態では、ＣＤ−３（ｓｅｑ．１）とＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号１３２及び配列番号１３４からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号１３３及び配列番号１３５からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＣＤ−３（ｓｅｑ．１）とＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は配列番号１３２のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号１３３のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＣＤ−３（ｓｅｑ．１）とＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号１３４のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号１３５のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００２８】
実施形態では、ＣＤ−３（ｓｅｑ．１）とＣＤ−１９に結合し得る結合タンパク質は、配列番号１３６及び配列番号１３８からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号１３７及び配列番号１３９からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＣＤ−３（ｓｅｑ．１）とＣＤ−１９に結合し得る結合タンパク質は配列番号１３６のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号１３７のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＣＤ−３（ｓｅｑ．１）とＣＤ−１９に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号１３８のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号１３９のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００２９】
実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号１４０及び配列番号１４２からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号１４１及び配列番号１４３からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は配列番号１４０のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号１４１のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号１４２のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号１４３のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００３０】
実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＣＤ−３（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号１４４及び配列番号１４６からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号１４５及び配列番号１４７からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＣＤ−３（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は配列番号１４４のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号１４５のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．１）とＣＤ−３（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号１４６のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号１４７のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００３１】
実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＩＧＦ１，２に結合し得る結合タンパク質は、配列番号１４８及び配列番号１５０からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号１４９及び配列番号１５１からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＩＧＦ１，２に結合し得る結合タンパク質は配列番号１４８のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号１４９のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＩＧＦ１，２に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号１５０のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号１５１のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００３２】
実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＩＧＦ１Ｒ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号１５２及び配列番号１５４からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号１５３及び配列番号１５５からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＩＧＦ１Ｒ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は配列番号１５２のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号１５３のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＩＧＦ１Ｒ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号１５４のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号１５５のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００３３】
第２実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＩＧＦ１Ｒ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号１５６及び配列番号１５８からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号１５７及び配列番号１５９からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＩＧＦ１Ｒ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は配列番号１５６のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号１５７のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＩＧＦ１Ｒ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号１５８のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号１５９のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００３４】
第３実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＩＧＦ１Ｒ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号１６０及び配列番号１６２からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号１６１及び配列番号１６３からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＩＧＦ１Ｒ（ｓｅｑ．１）は配列番号１６０のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号１６１のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＩＧＦ１Ｒ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号１６２のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号１６３のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００３５】
第４実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＩＧＦ１Ｒ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号１６４及び配列番号１６６からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号１６５及び配列番号１６７からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＩＧＦ１Ｒ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は配列番号１６４のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号１６５のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＩＧＦ１Ｒ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号１６６のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号１６７のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００３６】
実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＩＧＦ１Ｒ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号１６８及び配列番号１７０からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号１６９及び配列番号１７１からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＩＧＦ１Ｒ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は配列番号１６８のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号１６９のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＩＧＦ１Ｒ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号１７０のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号１７１のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００３７】
第２実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＩＧＦ１Ｒ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号１７２及び配列番号１７４からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号１７３及び配列番号１７５からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＩＧＦ１Ｒ（ｓｅｑ．２）は配列番号１７２のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号１７３のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＩＧＦ１Ｒ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号１７４のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号１７５のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００３８】
第３実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＩＧＦ１Ｒ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号１７６及び配列番号１７８からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号１７７及び配列番号１７９からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＩＧＦ１Ｒ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は配列番号１７６のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号１７７のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＩＧＦ１Ｒ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号１７８のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号１７９のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００３９】
第４実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＩＧＦ１Ｒ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号１８及び配列番号１８２からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号１８１及び配列番号１８３からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＩＧＦ１Ｒ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は配列番号１８０のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号１８１のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＩＧＦ１Ｒ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号１８２のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号１８３のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００４０】
実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＩＧＦ１Ｒ（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号１８４及び配列番号１８６からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号１８５及び配列番号１８７からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＩＧＦ１Ｒ（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は配列番号１８４のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号１８５のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＩＧＦ１Ｒ（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号１８６のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号１８７のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００４１】
第２実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＩＧＦ１Ｒ（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号１８８及び配列番号１９０からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号１８９及び配列番号１９２からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＩＧＦ１Ｒ（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は配列番号１８８のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号１８９のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＩＧＦ１Ｒ（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号１９０のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号１９１のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００４２】
第３実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＩＧＦ１Ｒ（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号１９２及び配列番号１９４からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号１９３及び配列番号１９５からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＩＧＦ１Ｒ（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は配列番号１９２のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号１９３のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＩＧＦ１Ｒ（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号１９４のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号１９５のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００４３】
第４実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＩＧＦ１Ｒ（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号１９６及び配列番号１９８からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号１９７及び配列番号１９９からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＩＧＦ１Ｒ（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は配列番号１９６のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号１９７のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＩＧＦ１Ｒ（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号１９８のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号１９９のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００４４】
実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＲＯＮ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号２００及び配列番号２０２からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号２０１及び配列番号２０３からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＲＯＮ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は配列番号２００のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号２０１のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＲＯＮ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号２０２のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号２０３のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００４５】
第２実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＲＯＮ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号２０４及び配列番号２０６からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号２０５及び配列番号２０７からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＲＯＮ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は配列番号２０４のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号２０５のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＲＯＮ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号２０６のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号２０７のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００４６】
第３実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＲＯＮ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号２０８及び配列番号２１０からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号２０９及び配列番号２１１からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＲＯＮ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は配列番号２０８のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号２０９のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＲＯＮ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号２１０のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号２１１のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００４７】
第４実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＲＯＮ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号２１２及び配列番号２１４からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号２１３及び配列番号２１５からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＲＯＮ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は配列番号２１２のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号２１３のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＲＯＮ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号２１４のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号２１５のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００４８】
実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＨＧＦ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号２１６及び配列番号２１８からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号２１７及び配列番号２１９からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＨＧＦ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は配列番号２１６のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号２１７のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＨＧＦ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号２１８のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号２１９のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００４９】
実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．１）とｃ−ＭＥＴに結合し得る結合タンパク質は、配列番号２２０及び配列番号２２２からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号２２１及び配列番号２２３からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．１）とｃ−ＭＥＴに結合し得る結合タンパク質は配列番号２２０のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号２２１のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．１）とｃ−ＭＥＴに結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号２２２のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号２２３のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００５０】
実施形態では、ＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）とＩＧＦ１，２に結合し得る結合タンパク質は、配列番号２２４及び配列番号２２６からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号２２５及び配列番号２２７からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）とＩＧＦ１，２に結合し得る結合タンパク質は配列番号２２４のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号２２５のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）とＩＧＦ１，２に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号２２６のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号２２７のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００５１】
実施形態では、ＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）とＩＧＦ１Ｒに結合し得る結合タンパク質は、配列番号２２８及び配列番号２３０からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号２２９及び配列番号２３１からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）とＩＧＦ１Ｒに結合し得る結合タンパク質は配列番号２２８のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号２２９のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）とＩＧＦ１Ｒに結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号２３０のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号２３１のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００５２】
実施形態では、ＲＯＮ（ｓｅｑ．１）とＨＧＦ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号２３２及び配列番号２３４からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号２３３及び配列番号２３５からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＲＯＮ（ｓｅｑ．１）とＨＧＦ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は配列番号２３２のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号２３３のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＲＯＮ（ｓｅｑ．１）とＨＧＦ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号２３４のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号２３５のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００５３】
実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号２３６及び配列番号２３８からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号２３７及び配列番号２３９からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は配列番号２３６のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号２３７のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号２３８のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号２３９のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００５４】
実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号２４０及び配列番号２４２からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号２４１及び配列番号２４３からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は配列番号２４０のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号２４１のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号２４２のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号２４３のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００５５】
実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＣＤ−２０に結合し得る結合タンパク質は、配列番号２４４及び配列番号２４６からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号２４５及び配列番号２４７からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＣＤ−２０に結合し得る結合タンパク質は配列番号２４４のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号２４５のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＣＤ−２０に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号２４６のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号２４７のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００５６】
実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＩＧＦ１，２に結合し得る結合タンパク質は、配列番号２４８及び配列番号２５０からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号２４９及び配列番号２５１からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＩＧＦ１，２に結合し得る結合タンパク質は配列番号２４８のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号２４９のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＩＧＦ１，２に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号２５０のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号２５１のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００５７】
実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質配列番号２５２及び配列番号２５４からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号２５３及び配列番号２５５からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は配列番号２５２のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号２５３のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号２５４のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号２５５のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００５８】
実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＨＧＦ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号２５６及び配列番号２５８からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号２５７及び配列番号２５９からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＨＧＦ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は配列番号２５６のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号２５７のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＨＧＦ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号２５８のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号２５９のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００５９】
第２実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＨＧＦ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号２６０及び配列番号２６２からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号２６１及び配列番号２６３からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＨＧＦ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は配列番号２６０のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号２６１のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＨＧＦ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号２６２のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号２６３のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００６０】
第３実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＨＧＦ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号２６４及び配列番号２６６からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号２６５及び配列番号２６７からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＨＧＦ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は列番号２６４のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号２６５のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＨＧＦ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号２６６のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号２６７のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００６１】
第４実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＨＧＦ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号２６８及び配列番号２７０からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号２６９及び配列番号２７１からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＨＧＦ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は配列番号２６８のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号２６９のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＨＧＦ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号２７０のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号２７１のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００６２】
実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＲＯＮ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号２７２及び配列番号２７４からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号２７３及び配列番号２７５からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＲＯＮ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は配列番号２７２のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号２７３のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＲＯＮ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号２７４のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号２７５のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００６３】
実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＮＲＰ１（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号２７６及び配列番号２７８からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号２７７及び配列番号２７９からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＮＲＰｌ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は配列番号２７６のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号２７７のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＮＲＰ１（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号２７８のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号２７９のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００６４】
実施形態では、ＲＯＮ（ｓｅｑ．２）とＨＧＦ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号２８０及び配列番号２８２からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号２８１及び配列番号２８２からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＲＯＮ（ｓｅｑ．２）とＨＧＦ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は配列番号２８０のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号２８１のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＲＯＮ（ｓｅｑ．２）とＨＧＦ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号２８２のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号２８３のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００６５】
実施形態では、ＲＯＮ（ｓｅｑ．２）とＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号２８４及び配列番号２８６からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号２８５及び配列番号２８７からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＲＯＮ（ｓｅｑ．２）とＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は配列番号２８４のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号２８５のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＲＯＮ（ｓｅｑ．２）とＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号２８６のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号２８７のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００６６】
実施形態では、ＲＯＮ（ｓｅｑ．２）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号２８８及び配列番号２９０からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号２８９及び配列番号２９１からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＲＯＮ（ｓｅｑ．２）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は配列番号２８８のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号２８９のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＲＯＮ（ｓｅｑ．２）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号２９０のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号２９１のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００６７】
実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．１）とＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号２９２及び配列番号２９４からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号２９３及び配列番号２９５からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．１）とＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は配列番号２９２のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号２９３のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．１）とＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号２９４のＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号２９５のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００６８】
実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．１）とＣＤ−３（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号２９６及び配列番号２９８からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号２９７及び配列番号２９９からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．１）とＣＤ−３（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は配列番号２９６のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号２９７のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．１）とＣＤ−３（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号２９８のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号２９９のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００６９】
実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．１）とＩＧＦ１Ｒに結合し得る結合タンパク質は、配列番号３００及び配列番号３０２からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号３０１及び配列番号３０３からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．１）とＩＧＦ１Ｒに結合し得る結合タンパク質は配列番号３００のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号３０１のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．１）とＩＧＦ１Ｒに結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号３０２のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号３０３のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００７０】
実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．１）とＲＯＮ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号３０４及び配列番号３０６からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号３０５及び配列番号３０７からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．１）とＲＯＮ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は配列番号３０４のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号３０５のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．１）とＲＯＮ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号３０６のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号３０７のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００７１】
実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．１）とＲＯＮ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号３０８及び配列番号３１０からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号３０９及び配列番号３１１からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．１）とＲＯＮ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は配列番号３０８のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号３０９のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．１）とＲＯＮ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号３１０のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号３１１のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００７２】
実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．１）とＨＧＦ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号３１２及び配列番号３１４からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号３１３及び配列番号３１５からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．１）とＨＧＦ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質配列番号３１２のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号３１３のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．１）とＨＧＦ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号３１４のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号３１５のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００７３】
実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．１）とｃ−ＭＥＴに結合し得る結合タンパク質は、配列番号３１６及び配列番号３１８からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号３１７及び配列番号３１９からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．１）とｃ−ＭＥＴに結合し得る結合タンパク質は配列番号３１６のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号３１７のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．１）とｃ−ＭＥＴに結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号３１８のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号３１９のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００７４】
実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．１）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号３２０及び配列番号３２２からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号３２１及び配列番号３２３からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．１）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は配列番号３２０のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号３２１のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態ではＥＧＦＲ（ｓｅｑ．１）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）、に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号３２２のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号３２３のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００７５】
実施形態では、ＮＲＰ１（ｓｅｑ．２）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号３２４及び配列番号３２６からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号３２５及び配列番号３２７からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＮＲＰ１（ｓｅｑ．２）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は配列番号３２４のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号３２５のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＮＲＰ１（ｓｅｑ．２）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号３２６のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号３２７のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００７６】
実施形態では、ＣＤ−３（ｓｅｑ．２）とＣＤ−２０に結合し得る結合タンパク質は、配列番号３２８及び配列番号３３０からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号３２９及び配列番号３３１からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＣＤ−３（ｓｅｑ．２）とＣＤ−２０に結合し得る結合タンパク質は配列番号３２８のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号３２９のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＣＤ−３（ｓｅｑ．２）とＣＤ−２０に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号３３０のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号３３１のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００７７】
実施形態では、ＣＤ−３（ｓｅｑ．２）とＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号３３２及び配列番号３３４からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号３３３及び配列番号３３５からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＣＤ−３（ｓｅｑ．２）とＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は配列番号３３２のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号３３３のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＣＤ−３（ｓｅｑ．２）とＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号３３４のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号３３５のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００７８】
実施形態では、ＣＤ−３（ｓｅｑ．２）とＣＤ−１９に結合し得る結合タンパク質は、配列番号３３６及び配列番号３３８からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号３３７及び配列番号３３９からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＣＤ−３（ｓｅｑ．２）とＣＤ−１９に結合し得る結合タンパク質は配列番号３３６のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号３３７のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＣＤ−３（ｓｅｑ．２）とＣＤ−１９に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号３３８のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号３３９のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００７９】
実施形態では、ＣＤ−３（ｓｅｑ．２）とＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号３４０及び配列番号３４２からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号３４１及び配列番号３４３からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＣＤ−３（ｓｅｑ．２）とＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は配列番号３４０のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号３４１のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＣＤ−３（ｓｅｑ．２）とＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号３４２のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号３４３のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００８０】
実施形態では、ＣＤ−３（ｓｅｑ．２）とＥＧＦＲ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号３４４及び配列番号３４６からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号３４５及び配列番号３４７からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＣＤ−３（ｓｅｑ．２）とＥＧＦＲ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は配列番号３４４のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号３４５のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＣＤ−３（ｓｅｑ．２）とＥＧＦＲ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号３４６のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号３４７のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００８１】
実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．１）とＩＧＦ１，２に結合し得る結合タンパク質は、配列番号３４８及び配列番号３５０からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号３４９及び配列番号３５１からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．１）とＩＧＦ１，２に結合し得る結合タンパク質は配列番号３４８のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号３４９のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．１）とＩＧＦ１，２に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号３５０のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号３５１のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００８２】
実施形態では、ＤＬＬ−４（ｓｅｑ．１）とＰＬＧＦ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号３５２及び配列番号３５４からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号３５３及び配列番号３５５からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＤＬＬ−４（ｓｅｑ．１）とＰＬＧＦ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は配列番号３５２のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号３５３のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＤＬＬ−４（ｓｅｑ．１）とＰＬＧＦ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号３５４のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号３５５のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００８３】
実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＰＬＧＦ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号３５６及び配列番号３５８からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号３５７及び配列番号３５９からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＰＬＧＦ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は配列番号３５６のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号３５７のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＰＬＧＦ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号３５８のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号３５９のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００８４】
第２実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＰＬＧＦ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号３６０及び配列番号３６２からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号３６１及び配列番号３６３からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＰＬＧＦ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は配列番号３６０のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号３６１のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＰＬＧＦ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号３６２のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号３６３のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００８５】
第３実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＰＬＧＦ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号３６４及び配列番号３６６からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号３６５及び配列番号３６７からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＰＬＧＦ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は配列番号３６４のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号３６５のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＰＬＧＦ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号３６６のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号３６７のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００８６】
第４実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＰＬＧＦ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号３６８及び配列番号３７０からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号３６９及び配列番号３７１からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＰＬＧＦ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は配列番号３６８のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号３６９の．ＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＰＬＧＦ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号３７０のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号３７１のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００８７】
実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号３７２及び配列番号３７４からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号３７３及び配列番号３７５からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は配列番号３７２のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号３７３のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号３７４のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号３７５のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００８８】
第２実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号３７６及び配列番号３７８からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号３７７及び配列番号３７９からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は配列番号３７６のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号３７７のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号３７８ＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号３７９のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００８９】
第３実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号３８０及び配列番号３８２からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号３８１及び配列番号３８３からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は配列番号３８０のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号３８１のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号３８２のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号３８３のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００９０】
第４実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号３８４及び配列番号３８６からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号３８５及び配列番号３８７からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は配列番号３８４のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号３８５のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号３８６のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号３８７のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００９１】
実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．１）とＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号３８８及び配列番号３９０からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号３８９及び配列番号３９１からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．１）とＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は配列番号３８８のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号３８９のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．１）とＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号３９０のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号３９１のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００９２】
実施形態では、ＨＧＦ（ｓｅｑ．１）とＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号３９２及び配列番号３９４からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号３９３及び配列番号３９５からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＨＧＦ（ｓｅｑ．１）とＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は配列番号３９２のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号３９３のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＨＧＦ（ｓｅｑ．１）とＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号３９４のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号３９５のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００９３】
実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号３９６及び配列番号３９８からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号３９７及び配列番号３９９からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は配列番号３９６のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号３９７のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号３９８のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号３９９のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００９４】
第２実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号４００及び配列番号４０２からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号４０１及び配列番号４０３からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は配列番号４００のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号４０１のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号４０２のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号４０３のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００９５】
第３実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号４０４及び配列番号４０６からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号４０５及び配列番号４０７からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は配列番号４０４のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号４０５のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号４０６のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号４０７のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００９６】
第４実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号４０８及び配列番号４１０からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号４０９及び配列番号４１１からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は配列番号４０８のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号４０９のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号４１０のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号４１１のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００９７】
実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．１）とＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号４１２及び配列番号４１４からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号４１３及び配列番号４１５からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．１）とＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は配列番号４１２のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号４１３のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．１）とＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号４１４のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号４１５のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００９８】
実施形態では、ＨＧＦ（ｓｅｑ．１）とＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号４１６及び配列番号４１８からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号４１７及び配列番号４１９からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＨＧＦ（ｓｅｑ．１）とＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は配列番号４１６のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号４１７のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＨＧＦ（ｓｅｑ．１）とＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号４１８のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号４１９のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００９９】
実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号４２０及び配列番号４２２からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号４２１及び配列番号４２３からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は配列番号４２０のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号４２１のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号４２２のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号４２３のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１００】
第２実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号４２４及び配列番号４２６からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号４２５及び配列番号４２７からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は配列番号４２４のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号４２５のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号４２６のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号４２７のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１０１】
第３実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号４２８及び配列番号４３０からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号４２９及び配列番号４３１からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は配列番号４２８のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号４２９のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号４３０のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号４３のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１０２】
第４実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号４３２及び配列番号４３３からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号４３４及び配列番号４３５からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は配列番号４３２のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号４３３のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号４３４のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号４３５のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１０３】
実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号４３６及び配列番号４３８からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号４３７及び配列番号４３９からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は配列番号４３６のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号４３７のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号４３８のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号４３９のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１０４】
第２実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号４４０及び配列番号４４２からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号４４１及び配列番号４４３からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は配列番号４４０のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号４４１のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号４４２のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号４４３のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１０５】
第３実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号４４４及び配列番号４４６からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号４４５及び配列番号４４７からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は配列番号４４４のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号４４５のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号４４６のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号４４７のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１０６】
第４実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号４４８及び配列番号４５０からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号４４９及び配列番号４５１からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は配列番号４４８のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号４４９のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号４５０のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号４５１のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１０７】
実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号４５２及び配列番号４５４からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号４５３及び配列番号４５５からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は配列番号４５２のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号４５３のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号４５４のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号４５５のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１０８】
第２実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号４５６及び配列番号４５８からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号４５７及び配列番号４５９からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は配列番号４５６のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号４５７のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号４５８のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号４５９のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１０９】
第３実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号４６０及び配列番号４６２からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号４６１及び配列番号４６３からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は配列番号４６０のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号４６１のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号４６２のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号４６３のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１１０】
第４実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号４６４及び配列番号４６６からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号４６５及び配列番号４６７からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は配列番号４６４のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号４６５のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号４６６のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号４６７のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１１１】
実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号４６８及び配列番号４７０からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号４６９及び配列番号４７１からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は配列番号４６８のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号４６９のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号４７０のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号４７１のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１１２】
第２実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号４７２及び配列番号４７４からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号４７３及び配列番号４７５からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は配列番号４７２のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号４７３のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号４７４のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号４７５のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１１３】
第３実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号４７６及び配列番号４７８からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号４７７及び配列番号４７９からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は配列番号４７６のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号４７７のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号４７８のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号４７９のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１１４】
第４実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号４８０及び配列番号４８２からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号４８１及び配列番号４８３からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は配列番号４８０のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号４８１のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号４８２のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号４８３のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１１５】
実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号４８４及び配列番号４８６からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号４８５及び配列番号４８７からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は配列番号４８４のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号４８５のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号４８６のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号４８７のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１１６】
第２実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号４８８及び配列番号４９０からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号４８９及び配列番号４９１からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は配列番号４８８のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号４８９のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号４９０のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号４９１のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１１７】
第３実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号４９２及び配列番号４９４からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号４９３及び配列番号４９５からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は配列番号４９２のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号４９３のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号４９４のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号４９５のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１１８】
第４実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号４９６及び配列番号４９８からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号４９７及び配列番号４９９からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は配列番号４９６のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号４９７のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号４９８のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号４９９のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１１９】
実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号５００及び配列番号５０２からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号５０１及び配列番号５０３からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は配列番号５００のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号５０１のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号５０２のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号５０３のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１２０】
第２実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号５０４及び配列番号５０６からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号５０５及び配列番号５０７からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は配列番号５０４のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号５０５のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号５０６のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号５０７のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１２１】
第３実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号５０８及び配列番号５１０からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号５０９及び配列番号５１１からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は配列番号５０８のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号５０９のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号５１０のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号５１１のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１２２】
実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号５１２及び配列番号５１４からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号５１３及び配列番号５１５からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は配列番号５１２のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号５１３のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号５１４のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号５１５のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１２３】
第２実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号５１６及び配列番号５１８からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号５１７及び配列番号５１９からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は配列番号５１６のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号５１７のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号５１８のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号５１９のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１２４】
第３実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号５２０及び配列番号５２２からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号５２１及び配列番号５２３からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は配列番号５２０のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号５２１のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号５２２のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号５２３のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１２５】
第４実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号５２４及び配列番号５２６からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号５２５及び配列番号５２７からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は配列番号５２４のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号５２５のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号５２６のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号５２７のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１２６】
実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号５２８及び配列番号５３０からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号５２９及び配列番号５３１からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は配列番号５２８のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号５２９のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号５３０のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号５３１のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１２７】
第２実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号５３２及び配列番号５３４からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号５３３及び配列番号５３５からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は配列番号５３２のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号５３３のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号５３４のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号５３５のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１２８】
第３実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号５３６及び配列番号５３８からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号５３７及び配列番号５３９からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は配列番号５３６のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号５３７のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号５３８のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号５３９のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１２９】
第４実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号５４０及び配列番号５４２からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号５４１及び配列番号５４３からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は配列番号５４０のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号５４１のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号５４２のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号５４３のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１３０】
実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号５４４及び配列番号５４６からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号５４５及び配列番号５４７からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は配列番号５４４のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号５４５のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号５４６のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号５４７のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１３１】
第２実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号５４８及び配列番号５５０からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号５４９及び配列番号５５２からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は配列番号５４８のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号５４９のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号５５０のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号５５のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１３２】
第３実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号５５２及び配列番号５５４からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号５５３及び配列番号５５５からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は配列番号５５２のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号５５３のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号５５４のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号５５５のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１３３】
第４実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号５５６及び配列番号５５８からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号５５７及び配列番号５５９からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は配列番号５５６のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号５５７のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号５５８のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号５５９のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１３４】
実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．４）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号５６０及び配列番号５６２からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号５６１及び配列番号５６３からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．４）に結合し得る結合タンパク質は配列番号５６０のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号５６１のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．４）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号５６２のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列及び配列番号５６３のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列を含む。
【０１３５】
第２実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．４）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号５６４及び配列番号５６６からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号５６５及び配列番号５６７からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．４）に結合し得る結合タンパク質は配列番号５６４のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号５６５のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．４）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号５６６のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号５６７のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１３６】
第３実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．４）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号５６８及び配列番号５７０からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号５６９及び配列番号５７１からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．４）に結合し得る結合タンパク質は配列番号５６８のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号５６９のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．４）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号５７０のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号５７１のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１３７】
第４実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．４）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号５７２及び配列番号５７４からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号５７３及び配列番号５７５からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．４）に結合し得る結合タンパク質は配列番号５７２のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号５７３のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．４）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号５７４のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号５７５のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１３８】
実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．４）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号５７６及び配列番号５７８からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号５７７及び配列番号５７９からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．４）に結合し得る結合タンパク質は配列番号５７６のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号５７７のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．４）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号５７８のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号５７９のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１３９】
第２実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．４）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号５８０及び配列番号５８２からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号５８１及び配列番号５８３からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．４）に結合し得る結合タンパク質は配列番号５８０のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号５８１のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．４）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号５８２のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号５８３のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１４０】
第３実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．４）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号５８４及び配列番号５８６からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号５８５及び配列番号５８７からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．４）に結合し得る結合タンパク質は配列番号５８４のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号５８５のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．４．）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号５８６のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号５８７のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１４１】
第４実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．４）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号５８８及び配列番号５９０からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号５８９及び配列番号５９１からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．４）に結合し得る結合タンパク質は配列番号５８８のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号５８９のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．４）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号５９０のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号５９１のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１４２】
実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．４）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号５９２及び配列番号５９４からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号５９３及び配列番号５９５からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．４）に結合し得る結合タンパク質は配列番号５９２のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号５９３のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．４）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号５９４のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号５９５のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１４３】
第２実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．４）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号５９６及び配列番号５９８からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号５９７及び配列番号５９９からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．４）に結合し得る結合タンパク質は配列番号５９６のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号５９７のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．４）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号５９８のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号５９９のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１４４】
第３実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．４）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号６００及び配列番号６０２からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号６０１及び配列番号６０３からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．４）に結合し得る結合タンパク質は配列番号６００のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号６０１のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．４）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号６０２のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号６０３のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１４５】
第４実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．４）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号６０４及び配列番号６０６からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号６０５及び配列番号６０７からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．４）に結合し得る結合タンパク質は配列番号６０４のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号６０５のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）とＤＬＬ−４（ｓｅｑ．４）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号６０６のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号６０７のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１４６】
実施形態では、ＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）とＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号６０８及び配列番号６１０からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号６０９及び配列番号６１１からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）とＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は配列番号６０８のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号６０９のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）とＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号６１０のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号６１１のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１４７】
第２実施形態では、ＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）とＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号６１２及び配列番号６１４からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号６１３及び配列番号６１５からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）とＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は配列番号６１２のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号６１３のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）とＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号６１４のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号６１５のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１４８】
第３実施形態では、ＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）とＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号６１６及び配列番号６１８からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号６１７及び配列番号６１９からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）とＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は配列番号６１６のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号６１７のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）とＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号６１８のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号６１９のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１４９】
第４実施形態では、ＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）とＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号６２０及び配列番号６２２からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号６２１及び配列番号６２３からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）とＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は配列番号６２０のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号６２１のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）とＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号６２２のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号６２３のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１５０】
実施形態では、ＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）とＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号６２４及び配列番号６２６からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号６２５及び配列番号６２７からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）とＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は配列番号６２４のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号６２５のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）とＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号６２６のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号６２７のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１５１】
第２実施形態では、ＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）とＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号６２８及び配列番号６３０からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号６２９及び配列番号６３１からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）とＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は配列番号６２８のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号６２９のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）とＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号６３０のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号６３１のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１５２】
第３実施形態では、ＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）とＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号６３２及び配列番号６３４からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号６３３及び配列番号６３５からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）とＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は配列番号６３２のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号６３３のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）とＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号６３４のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号６３５のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１５３】
第４実施形態では、ＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）とＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号６３６及び配列番号６３８からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号６３７及び配列番号６３９からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）とＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は配列番号６３６のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号６３７のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）とＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号６３８のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号６３９のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１５４】
実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号６４０及び配列番号６４２からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号６４１及び配列番号６４３からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は配列番号６４０のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号６４１のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号６４２のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号６４３のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１５５】
第２実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号６４４及び配列番号６４６からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列;及び配列番号６４５及び配列番号６４７からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は配列番号６４４のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号６４５のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号６４６のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号６４７のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１５６】
第３実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号６４８及び配列番号６５０からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号６４９及び配列番号６５１からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は配列番号６４８のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号６４９のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号６５０のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号６５１のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１５７】
第４実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号６５２及び配列番号６５４からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号６５３及び配列番号６５５からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は配列番号６５２のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号６５３のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）とＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号６５４のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号６５５のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１５８】
実施形態では、ＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）とＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号６５６及び配列番号６５８からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号６５７及び配列番号６５９からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）とＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は配列番号６５６のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号６５７のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）とＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号６５８のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号６５９のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１５９】
第２実施形態では、ＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）とＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号６６０及び配列番号６６２からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号６６１及び配列番号６６３からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）とＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は配列番号６６０のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号６６１のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）とＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号６６２のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号６６３のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１６０】
第３実施形態では、ＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）とＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号６６４及び配列番号６６６からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号６６５及び配列番号６６７からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）とＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は配列番号６６４のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号６６５のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）とＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号６６６のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号６６７のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１６１】
第４実施形態では、ＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）とＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号６６８及び配列番号６７０からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号６６９及び配列番号６７１からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）とＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は配列番号６６８のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号６６９のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）とＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号６７０のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号６７１のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１６２】
実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＰＬＧＦ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号６７２及び配列番号６７４からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号６７３及び配列番号６７５からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＰＬＧＦ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は配列番号６７２のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号６７３のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＰＬＧＦ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号６７４のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号６７５のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１６３】
第２実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＰＬＧＦ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号６７６及び配列番号６７８からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号６７７及び配列番号６７９からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＰＬＧＦ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は配列番号６７６のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号６７７のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＰＬＧＦ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号６７８のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号６７９のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１６４】
第３実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＰＬＧＦ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号６８０及び配列番号６８２からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号６８１及び配列番号６８３からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＰＬＧＦ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は配列番号６８０のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号６８１のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＰＬＧＦ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号６８２のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号６８３のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１６５】
第４実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＰＬＧＦ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号６８４及び配列番号６８６からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号６８５及び配列番号６８７からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＰＬＧＦ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は配列番号６８４のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号６８５のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）とＰＬＧＦ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号６８６のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号６８７のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１６６】
実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）とＰＬＧＦ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号６８８及び配列番号６９０からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号６８９及び配列番号６９１からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）とＰＬＧＦ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は配列番号６８８のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号６８９のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）とＰＬＧＦ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号６９０のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号６９１のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１６７】
第２実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）とＰＬＧＦ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号６９２及び配列番号６９４からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号６９３及び配列番号６９５からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）とＰＬＧＦ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は配列番号６９２のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号６９３のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）とＰＬＧＦ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号６９４のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号６９５のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１６８】
第３実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）とＰＬＧＦ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号６９６及び配列番号６９８からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号６９７及び配列番号６９９からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）とＰＬＧＦ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は配列番号６９６のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号６９７のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）とＰＬＧＦ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号６９８のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号６９９のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１６９】
第４実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）とＰＬＧＦ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号７００及び配列番号７０２からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号７０１及び配列番号７０３からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）とＰＬＧＦ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は配列番号７００のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号７０１のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）とＰＬＧＦ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号７０２のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号７０３のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１７０】
実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）とＰＬＧＦ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号７０４及び配列番号７０６からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号７０５及び配列番号７０７からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）とＰＬＧＦ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は配列番号７０４のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号７０５のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）とＰＬＧＦ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号７０６のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号７０７のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１７１】
第２実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）とＰＬＧＦ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号７０８及び配列番号７１０からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号７０９及び配列番号７１１からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）とＰＬＧＦ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は配列番号７０８のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号７０９のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）とＰＬＧＦ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号７１０のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号７１１のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１７２】
第３実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）とＰＬＧＦ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号７１２及び配列番号７１４からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号７１３及び配列番号７１５からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）とＰＬＧＦ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は配列番号７１２のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号７１３のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）とＰＬＧＦ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号７１４のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号７１５のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１７３】
第４実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）とＰＬＧＦ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号７１６及び配列番号７１８からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号７１７及び配列番号７１９からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）とＰＬＧＦ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は配列番号７１６のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号７１７のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）とＰＬＧＦ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号７１８のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号７１９のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１７４】
実施形態では、ＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）とＰＬＧＦ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号７２０及び配列番号７２２からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号７２１及び配列番号７２３からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）とＰＬＧＦ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は配列番号７２０のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号７２１のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）とＰＬＧＦ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号７２２のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号７２３のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１７５】
第２実施形態では、ＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）とＰＬＧＦ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号７２４及び配列番号７２６からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号７２５及び配列番号７２７からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）とＰＬＧＦ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は配列番号７２４のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号７２５のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）とＰＬＧＦ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号７２６のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号７２７のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１７６】
第３実施形態では、ＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）とＰＬＧＦ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号７２８及び配列番号７３０からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号７２９及び配列番号７３１からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）とＰＬＧＦ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は配列番号７２８のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号７２９のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）とＰＬＧＦ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号７３０のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号７３１のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１７７】
第４実施形態では、ＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）とＰＬＧＦ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号７３２及び配列番号７３４からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号７３３及び配列番号７３５からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）とＰＬＧＦ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は配列番号７３２のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号７３３のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）とＰＬＧＦ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号７３４のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号７３５のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１７８】
実施形態では、ＰＬＧＦ（ｓｅｑ．１）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号７３６及び配列番号７３８からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列；及び配列番号７３７及び配列番号７３９からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＰＬＧＦ（ｓｅｑ．１）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は配列番号７３６のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号７３７のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＰＬＧＦ（ｓｅｑ．１）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号７３８のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号７３９のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１７９】
第２実施形態では、ＰＬＧＦ（ｓｅｑ．１）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号７４０及び配列番号７４２からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号７４１及び配列番号７４３からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＰＬＧＦ（ｓｅｑ．１）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は配列番号７４０のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号７４１のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＰＬＧＦ（ｓｅｑ．１）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号７４２のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号７４３のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１８０】
第３実施形態では、ＰＬＧＦ（ｓｅｑ．１）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号７４４及び配列番号７４６からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号７４５及び配列番号７４７からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＰＬＧＦ（ｓｅｑ．１）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は配列番号７４４のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号７４５のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＰＬＧＦ（ｓｅｑ．１）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号７４６のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号７４７のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１８１】
第４実施形態では、ＰＬＧＦ（ｓｅｑ．１）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号７４８及び配列番号７５０からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号７４９及び配列番号７５１からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＰＬＧＦ（ｓｅｑ．１）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は配列番号７４８のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号７４９のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＰＬＧＦ（ｓｅｑ．１）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号７５０のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号７５１のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１８２】
実施形態では、ＰＬＧＦ（ｓｅｑ．１）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号７５２及び配列番号７５４からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号７５３及び配列番号７５５からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＰＬＧＦ（ｓｅｑ．１）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は配列番号７５２のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号７５３のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＰＬＧＦ（ｓｅｑ．１）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号７５４のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号７５５のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１８３】
第２実施形態では、ＰＬＧＦ（ｓｅｑ．１）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号７５６及び配列番号７５８からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号７５７及び配列番号７５９からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＰＬＧＦ（ｓｅｑ．１）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は配列番号７５６のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号７５７のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＰＬＧＦ（ｓｅｑ．１）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号７５８のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号７５９のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１８４】
第３実施形態では、ＰＬＧＦ（ｓｅｑ．１）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号７６０及び配列番号７６２からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号７６１及び配列番号７６３からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＰＬＧＦ（ｓｅｑ．１）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は配列番号７６０のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号７６１のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＰＬＧＦ（ｓｅｑ．１）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号７６２のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号７６３のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１８５】
第４実施形態では、ＰＬＧＦ（ｓｅｑ．１）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号７６４及び配列番号７６６からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号７６５及び配列番号７６７からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＰＬＧＦ（ｓｅｑ．１）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は配列番号７６４のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号７６５のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＰＬＧＦ（ｓｅｑ．１）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号７６６のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号７６７のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１８６】
実施形態では、ＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）とＰＬＧＦ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号７６８及び配列番号７７０からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号７６９及び配列番号７７１からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）とＰＬＧＦ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は配列番号７６８のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号７６９のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）とＰＬＧＦ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号７７０のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号７７１のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１８７】
第２実施形態では、ＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）とＰＬＧＦ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号７７２及び配列番号７７４からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号７７３及び配列番号７７５からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）とＰＬＧＦ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は配列番号７７２のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号７７３のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）とＰＬＧＦ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号７７４のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号７７５のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１８８】
第３実施形態では、ＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）とＰＬＧＦ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号７７６及び配列番号７７８からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号７７９及び配列番号７８１からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）とＰＬＧＦ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は配列番号７７６のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号７７７のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）とＰＬＧＦ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号７６７８のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号７７９のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１８９】
第４実施形態では、ＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）とＰＬＧＦ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号７８０及び配列番号７８２からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号７８１及び配列番号７８３からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）とＰＬＧＦ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号７８０のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号７８１のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）とＰＬＧＦ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号７８２のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号７８３のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１９０】
実施形態では、ＨＧＦ（ｓｅｑ．１）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号７８４及び配列番号７８６からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号７８５及び配列番号７８７からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列に結合し得る結合タンパク質を含む。実施形態では、ＨＧＦ（ｓｅｑ．１）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は配列番号７８４のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号７８５のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＨＧＦ（ｓｅｑ．１）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号７８６のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号７８７のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１９１】
第２実施形態では、ＨＧＦ（ｓｅｑ．１）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号７８８及び配列番号７９０からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号７８９及び配列番号７９１からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＨＧＦ（ｓｅｑ．１）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は配列番号７８８のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号７８９のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＨＧＦ（ｓｅｑ．１）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号７９０のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号７９１のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１９２】
第３実施形態では、ＨＧＦ（ｓｅｑ．１）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号７９２及び配列番号７９４からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号７９３及び配列番号７９５からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＨＧＦ（ｓｅｑ．１）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は配列番号７９２のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号７９３のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＨＧＦ（ｓｅｑ．１）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号７９４のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号７９５のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１９３】
第４実施形態では、ＨＧＦ（ｓｅｑ．１）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号７９６及び配列番号７９８からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号７９７及び配列番号７９９からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＨＧＦ（ｓｅｑ．１）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は配列番号７９６のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号７９７のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＨＧＦ（ｓｅｑ．１）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号７９８のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号７９９のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１９４】
実施形態では、ＨＧＦ（ｓｅｑ．１）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号８００及び配列番号８０２からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号８０１及び配列番号８０３からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＨＧＦ（ｓｅｑ．１）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は配列番号８００のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号８０１のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＨＧＦ（ｓｅｑ．１）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号８０２のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号８０３のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１９５】
第２実施形態では、ＨＧＦ（ｓｅｑ．１）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号８０４及び配列番号８０６からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号８０５及び配列番号８０７からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＨＧＦ（ｓｅｑ．１）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は配列番号８０４のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号８０５のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＨＧＦ（ｓｅｑ．１）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号８０６のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号８０７のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１９６】
第３実施形態では、ＨＧＦ（ｓｅｑ．１）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号８０８及び配列番号８１０からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号８０９及び配列番号８１１からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＨＧＦ（ｓｅｑ．１）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は配列番号８０８のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号８０９のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＨＧＦ（ｓｅｑ．１）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号８１０のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号８１１のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１９７】
第４実施形態では、ＨＧＦ（ｓｅｑ．１）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号８１２及び配列番号８１４からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号８１３及び配列番号８１５からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＨＧＦ（ｓｅｑ．１）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は配列番号８１２のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号８１３のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＨＧＦ（ｓｅｑ．１）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号８１４のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号８１５のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１９８】
実施形態では、ＨＧＦ（ｓｅｑ．２）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号８１６及び配列番号８１８からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号８１７及び配列番号８１９からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＨＧＦ（ｓｅｑ．２）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は配列番号８１６のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号８１７のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＨＧＦ（ｓｅｑ．２）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号８１８のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号８１９のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１９９】
第２実施形態では、ＨＧＦ（ｓｅｑ．２）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号８２０及び配列番号８２２からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号８２１及び配列番号８２３からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＨＧＦ（ｓｅｑ．２）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は配列番号８２０のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号８２１のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＨＧＦ（ｓｅｑ．２）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号８２２のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号８２３のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０２００】
第３実施形態では、ＨＧＦ（ｓｅｑ．２）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号８２４及び配列番号８２６からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号８２５及び配列番号８２７からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＨＧＦ（ｓｅｑ．２）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は配列番号８２４のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号８２５のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＨＧＦ（ｓｅｑ．２）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号８２６のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号８２７のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０２０１】
第４実施形態では、ＨＧＦ（ｓｅｑ．２）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号８２８及び配列番号８３０からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号８２９及び配列番号８３１からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＨＧＦ（ｓｅｑ．２）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は配列番号８２８のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号８２９のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＨＧＦ（ｓｅｑ．２）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号８３０のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号８３１のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０２０２】
実施形態では、ＨＧＦ（ｓｅｑ．２）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号８３２及び配列番号８３４からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号８３３及び配列番号８３５からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＨＧＦ（ｓｅｑ．２）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は配列番号８３２のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号８３３のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＨＧＦ（ｓｅｑ．２）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号８３４のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号８３５のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０２０３】
第２実施形態では、ＨＧＦ（ｓｅｑ．２）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号８３６及び配列番号８３８からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号８３７及び配列番号８３９からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＨＧＦ（ｓｅｑ．２）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は配列番号８３６のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号８３７のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＨＧＦ（ｓｅｑ．２）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号８３８のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号８３９のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０２０４】
第３実施形態では、ＨＧＦ（ｓｅｑ．２）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号８４０及び配列番号８４２からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号８４１及び配列番号８４３からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＨＧＦ（ｓｅｑ．２）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は配列番号８４０のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号８４１のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＨＧＦ（ｓｅｑ．２）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号８４２のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号８４３のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０２０５】
第４実施形態では、ＨＧＦ（ｓｅｑ．２）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号８４４及び配列番号８４６からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号８４５及び配列番号８４７からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＨＧＦ（ｓｅｑ．２）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は配列番号８４４のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号８４５のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＨＧＦ（ｓｅｑ．２）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号８４６のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号８４７のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０２０６】
実施形態では、ＨＧＦ（ｓｅｑ．２）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号８４８及び配列番号８５０からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号８４９及び配列番号８５１からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＨＧＦ（ｓｅｑ．２）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は配列番号８４８のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号８４９のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＨＧＦ（ｓｅｑ．２）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号８５０のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号８５１のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０２０７】
第２実施形態では、ＨＧＦ（ｓｅｑ．２）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号８５２及び配列番号８５４からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号８５３及び配列番号８５５からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＨＧＦ（ｓｅｑ．２）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は配列番号８５２のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号８５３のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＨＧＦ（ｓｅｑ．２）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号８５のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号８５５のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０２０８】
第３実施形態では、ＨＧＦ（ｓｅｑ．２）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号８５６及び配列番号８５８からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列;及び配列番号８５７及び配列番号８５９からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＨＧＦ（ｓｅｑ．２）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は配列番号８５６のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号８５７のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＨＧＦ（ｓｅｑ．２）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号８５８のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号８５９のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０２０９】
第４実施形態では、ＨＧＦ（ｓｅｑ．２）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号８６０及び配列番号８６２からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号８６１及び配列番号８６３からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＨＧＦ（ｓｅｑ．２）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は配列番号８６０のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号８６１のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＨＧＦ（ｓｅｑ．２）とＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号８６２のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号８６３のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０２１０】
実施形態では、ＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）とＨＥＲ−２（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号８６４及び配列番号８６６からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号８６５及び配列番号８６７からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）とＨＥＲ−２（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は配列番号８６４ＤＶＤの重鎖アミノ酸配列及び配列番号８６５のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）とＨＥＲ−２（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号８６６のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号８６７のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０２１１】
第２実施形態では、ＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）とＨＥＲ−２（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号８６８及び配列番号８７０からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号８６９及び配列番号８７１からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）とＨＥＲ−２（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は配列番号８５８のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号８６９のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）とＨＥＲ−２（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号８７０のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号８７１のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０２１２】
第３実施形態では、ＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）とＨＥＲ−２（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号８７２及び配列番号８７４からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号８７３及び配列番号８７５からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）とＨＥＲ−２（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は配列番号８７２のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号８７３のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）とＨＥＲ−２（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号８７４のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号８７５のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０２１３】
第４実施形態では、ＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）とＨＥＲ−２（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号８７６及び配列番号８７８からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号８７７及び配列番号８７９からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）とＨＥＲ−２（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は配列番号８７６のＤＶＤの重鎖アミノ酸配列及び配列番号８７７のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）とＨＥＲ−２（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号８７８のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号８７９のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０２１４】
実施形態では、ＣＤ−３（ｓｅｑ．２）とＣＤ−１９（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号８８０及び配列番号８８２からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号８８１及び配列番号８８３からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＣＤ−３（ｓｅｑ．２）とＣＤ−１９（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は配列番号８８０のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号８８１のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＣＤ−３（ｓｅｑ．２）とＣＤ−１９（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号８８２のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号８８３のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０２１５】
実施形態では、ＣＤ−３（ｓｅｑ．３）とＣＤ−１９（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号８８４及び配列番号８８６からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号８８５及び配列番号８８７からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＣＤ−３（ｓｅｑ．３）とＣＤ−１９（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は配列番号８８４のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号８８５のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＣＤ−３（ｓｅｑ．３）とＣＤ−１９（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号８８６のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号８８７のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０２１６】
実施形態では、ＣＤ−３（ｓｅｑ．２）とＣＤ−１９（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号８８８及び配列番号８９０からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号８８９及び配列番号８９１からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＣＤ−３（ｓｅｑ．２）とＣＤ−１９（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は配列番号８８８のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号８８９のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＣＤ−３（ｓｅｑ．２）とＣＤ−１９（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号８９０のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号８９１のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０２１７】
実施形態では、ＣＤ−３（ｓｅｑ．３）とＣＤ−１９（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号８９２及び配列番号８９４からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号８９３及び配列番号８９５からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＣＤ−３（ｓｅｑ．３）とＣＤ−１９（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は配列番号８９２のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号８９３のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＣＤ−３（ｓｅｑ．３）とＣＤ−１９（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号８９４のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号８９５のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０２１８】
実施形態では、ＣＤ−３（ｓｅｑ．２）とＣＤ−１９（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号８９６及び配列番号８９８からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号８９７及び配列番号８９９からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＣＤ−３（ｓｅｑ．２）とＣＤ−１９（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は配列番号８９６のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号８９７のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＣＤ−３（ｓｅｑ．２）とＣＤ−１９（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号８９８のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号８９９のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０２１９】
実施形態では、ＣＤ−３（ｓｅｑ．３）とＣＤ−１９（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号９００及び配列番号９０２からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号９０１及び配列番号９０３からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＣＤ−３（ｓｅｑ．３）とＣＤ−１９（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は配列番号９００のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号９０１のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＣＤ−３（ｓｅｑ．３）とＣＤ−１９（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号９０３２のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号９０３のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０２２０】
実施形態では、ＣＤ−３（ｓｅｑ．４）とＣＤ−１９（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号９０４及び配列番号９０６からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号９０５及び配列番号９０７からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＣＤ−３（ｓｅｑ．４）とＣＤ−１９（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は配列番号９０４のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号９０５のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＣＤ−３（ｓｅｑ．４）とＣＤ−１９（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号９０６のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号９０７のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０２２１】
実施形態では、ＣＤ−３（ｓｅｑ．４）とＣＤ−１９（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号９０８及び配列番号９１０からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号９０９及び配列番号９１１からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＣＤ−３（ｓｅｑ．４）とＣＤ−１９（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は配列番号９０８のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号９０９のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＣＤ−３（ｓｅｑ．４）とＣＤ−１９（ｓｅｑ．３）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号９１０のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号９１１のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０２２２】
実施形態では、ＣＤ−３（ｓｅｑ．４）とＣＤ−１９（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号９１２及び配列番号９１４からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号９１３及び配列番号９１５からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＣＤ−３（ｓｅｑ．４）とＣＤ−１９（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は配列番号９１２のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号９１３のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＣＤ−３（ｓｅｑ．４）とＣＤ−１９（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号９１４のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号９１５のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＣＤ−３（ｓｅｑ．４）とＣＤ−１９（ｓｅｑ．１）に結合し得る結合タンパク質は配列番号９１６のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号９１７のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０２２３】
実施形態では、ＣＤ−３（ｓｅｑ．２）とＣＤ−１９（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は、配列番号９１８及び配列番号９２０からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号９１９９９及び配列番号９２１からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ＣＤ−３（ｓｅｑ．２）とＣＤ−１９（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は配列番号９１８のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号９１９のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＣＤ−３（ｓｅｑ．２）とＣＤ−１９（ｓｅｑ．２）に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号９２０のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号９２１のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０２２４】
実施形態では、マウスｍＣＤ−３とマウスｍＣＤ−１９に結合し得る結合タンパク質は、配列番号９２２及び配列番号９２４からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号９２３及び配列番号９２５からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ｍＣＤ−３とｍＣＤ−１９に結合し得る結合タンパク質は配列番号９２２のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号９２３のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ｍＣＤ−３とｍＣＤ−１９に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号９２４のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号９２５のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０２２５】
別の実施形態では、マウスｍＣＤ−３とマウスｍＣＤ−１９に結合し得る結合タンパク質は、配列番号９２６及び配列番号９２８からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列、及び配列番号９２７及び配列番号９２９からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。実施形態では、ｍＣＤ−３とｍＣＤ−１９に結合し得る結合タンパク質は配列番号９２６のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号９２７のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ｍＣＤ−３とｍＣＤ−１９に結合し得る結合タンパク質は逆配向を有し、配列番号９２８のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号９２９のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０２２６】
別の実施形態では、本発明はポリペプチド鎖を含む結合タンパク質を提供し、前記ポリペプチド鎖はＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎ（ここで、ＶＤ１は第１親抗体またはその抗原結合部分から得られる第１重鎖可変ドメインであり；ＶＤ２は第２親抗体またはその抗原結合部分から得られる第２重鎖可変ドメインであり；Ｃは重鎖定常ドメインであり；（Ｘ１）ｎはリンカーであり、ただしＣＨ１ではなく、（Ｘ１）ｎは存在するか存在せず；（Ｘ２）ｎはＦｃ領域であり、（Ｘ２）ｎは存在するか存在しない）からなる。実施形態では、Ｆｃ領域は結合タンパク質から存在しない。
【０２２７】
別の実施形態では、本発明はポリペプチド鎖を含む結合タンパク質を提供し、前記ポリペプチド鎖はＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎ（ここで、ＶＤ１は第１親抗体またはその抗原結合部分から得られる第１軽鎖可変ドメインであり；ＶＤ２は第２親抗体またはその抗原結合部分から得られる第２軽鎖可変ドメインであり；Ｃは軽鎖定常ドメインであり；（Ｘ１）ｎはリンカーであり、ただしＣＨ１ではなく、（Ｘ１）ｎは存在するか存在せず；（Ｘ２）ｎはＦｃ領域を含まず、（Ｘ２）は存在するか存在しない）からなる。実施形態では、（Ｘ２）ｎは結合タンパク質から存在しない。
【０２２８】
別の実施形態では、本発明の結合タンパク質は第１及び第２ポリペプチド鎖を含み、前記第１ポリペプチド鎖は第１ＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎ（ここで、ＶＤ１は第１親抗体またはその抗原結合部分から得られる第１重鎖可変ドメインであり；ＶＤ２は第２親抗体またはその抗原結合部分から得られる第２重鎖可変ドメインであり；Ｃは重鎖定常ドメインであり；（Ｘ１）ｎはリンカーであり、ただしＣＨ１ではなく、（Ｘ１）ｎは存在するか存在せず；（Ｘ２）ｎはＦｃ領域であり、（Ｘ２）ｎは存在するか存在しない）からなり、第２ポリペプチド鎖は第２ＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎ（ここで、ＶＤ１は第１親抗体またはその抗原結合部分から得られる第１軽鎖可変ドメインであり；ＶＤ２は第２親抗体またはその抗原結合部分から得られる第２軽鎖可変ドメインであり；Ｃは軽鎖定常ドメインであり；（Ｘ１）ｎはリンカーであり、ただしＣＨ１ではなく、（Ｘ１）ｎは存在するか存在せず；（Ｘ２）ｎはＦｃ領域を含まず、（Ｘ２）ｎは存在するか存在しない）からなる。別の実施形態では、結合タンパク質は２つの第１ポリペプチド鎖及び２つの第２ポリペプチド鎖を含む。更に別の実施形態では、（Ｘ２）ｎは第２ポリペプチドから存在しない。さらに別の実施形態では、第１ポリペプチド中に存在するならば、Ｆｃ領域は未変性配列Ｆｃ領域及びバリアント配列Ｆｃ領域からなる群から選択される。さらに別の実施形態では、Ｆｃ領域はＩｇＧｌ、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥ及びＩｇＤ由来のＦｃ領域からなる群から選択される。
【０２２９】
別の実施形態では、本発明の結合タンパク質は４つのポリペプチド鎖を含む２つの抗原に結合し得るＤＶＤ−Ｉｇであり、前記した第１及び第３ポリペプチド鎖はＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎ（ここで、ＶＤ１は第１親抗体またはその抗原結合部分から得られる第１重鎖可変ドメインであり；ＶＤ２は第２親抗体またはその抗原結合部分から得られる第２重鎖可変ドメインであり；Ｃは重鎖定常ドメインであり；（Ｘ１）ｎはリンカーであり、ただしＣＨ１ではなく、（Ｘ１）ｎは存在するか存在せず；（Ｘ２）ｎはＦｃ領域であり、（Ｘ２）ｎは存在するか存在しない）からなり、前記した第２及び第４ポリペプチド鎖はＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎ（ここで、ＶＤ１は第１親抗体またはその抗原結合部分から得られる第１軽鎖可変ドメインであり；ＶＤ２は第２親抗体またはその抗原結合部分から得られる第２軽鎖可変ドメインであり；Ｃは軽鎖定常ドメインであり；（Ｘ１）ｎはリンカーであり、ただしＣＨ１ではなく、（Ｘ１）ｎは存在するか存在せず；（Ｘ２）ｎはＦｃ領域を含まず、（Ｘ２）ｎは存在するか存在しない）からなる。
【０２３０】
本発明は、親抗体を予め選択することによりＤＶＤ−Ｉｇ結合タンパク質を作成する方法を提供する。実施形態では、２つの抗原に結合し得る二重可変ドメイン免疫グロブリンを作成する方法は、第１及び第２抗原に結合し得る二重可変ドメイン免疫グロブリンが作成されるように、ａ）第１抗原に結合し得る第１親抗体またはその抗原結合部分を得るステップ；ｂ）第２抗原に結合し得る第２親抗体またはその抗原結合部分を得るステップ；ｃ）ＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎ（ここで、ＶＤ１は第１親抗体またはその抗原結合部分から得られる第１重鎖可変ドメインであり；ＶＤ２は第２親抗体またはその抗原結合部分から得られる第２重鎖可変ドメインであり；Ｃは重鎖定常ドメインであり；（Ｘ１）ｎはリンカーであり、ただしＣＨ１ではなく、（Ｘ１）ｎは存在するか存在せず；（Ｘ２）ｎはＦｃ領域であり、（Ｘ２）ｎは存在するか存在しない）からなる第１及び第３ポリペプチド鎖を構築するステップ；ｄ）ＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎ（ここで、ＶＤ１は第１親抗体またはその抗原結合部分から得られる第１軽鎖可変ドメインであり；ＶＤ２は第２親抗体またはその抗原結合部分から得られる第２軽鎖可変ドメインであり；Ｃは軽鎖定常ドメインあり；（Ｘ１）ｎはリンカーであり、ただしＣＨ１ではなく、（Ｘ１）ｎは存在するか存在せず；（Ｘ２）ｎはＦｃ領域を含まず、（Ｘ２）ｎは存在するか存在しない）からなる第２及び第４ポリペプチド鎖を構築するステップ；ｅ）第１、第２、第３及び第４ポリペプチド鎖を発現させるステップ；を含む。
【０２３１】
さらに別の実施形態では、本発明は、所望特性を有する２つの抗原に結合し得る二重可変ドメイン免疫グロブリンを作成する方法を提供し、その方法は、所望特性を有する第１及び第２抗原に結合し得る二重可変ドメイン免疫グロブリンが作成されるように、ａ）第１抗原に結合し得、二重可変ドメイン免疫グロブリンにより示される少なくとも１つの所望特性を有する第１親抗体またはその抗原結合部分を得るステップ；ｂ）第２抗原に結合し得、二重可変ドメイン免疫グロブリンにより示される少なくとも１つの所望特性を有する第２親抗体またはその抗原結合部分を得るステップ；ｃ）ＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎ（ここで、ＶＤ１は第１親抗体またはその抗原結合部分から得られる第１重鎖可変ドメインであり；ＶＤ２は第２親抗体またはその抗原結合部分から得られる第２重鎖可変ドメインであり；Ｃは重鎖定常ドメインであり；（Ｘ１）ｎはリンカーであり、ただしＣＨ１ではなく、（Ｘ１）ｎは存在するか存在せず；（Ｘ２）ｎはＦｃ領域であり、（Ｘ２）ｎは存在するか存在しない）からなる第１及び第３ポリペプチド鎖を構築するステップ；ｄ）ＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎ（ここで、ＶＤ１は第１親抗体またはその抗原結合部分から得られる第１軽鎖可変ドメインであり；ＶＤ２は第２親抗体またはその抗原結合部分から得られる第２軽鎖可変ドメインであり；Ｃは軽鎖定常ドメインであり；（Ｘ１）ｎはリンカーであり、ただしＣＨ１ではなく（Ｘ１）ｎは存在するか存在せず；（Ｘ２）ｎはＦｃ領域を含まず、（Ｘ２）ｎは存在するか存在しない）からなる第２及び第４ポリペプチド鎖を構築するステップ；ｅ）第１、第２、第３及び第４ポリペプチド鎖を発現させるステップ；を含む。
【０２３２】
１つの実施形態では、本明細書中に開示されている第１及び第２ポリペプチド鎖のＶＤ１は同一親抗体またはその抗原結合部分から得られる。別の実施形態では、本明細書中に開示されている第１及び第２ポリペプチド鎖のＶＤ１は異なる親抗体またはその抗原結合部分から得られる。別の実施形態では、本明細書中に開示されている第１及び第２ポリペプチド鎖のＶＤ２は同一親抗体またはその抗原結合部分から得られる。別の実施形態では、本明細書中に開示されている第１及び第２ポリペプチド鎖のＶＤ２は異なる親抗体またはその抗原結合部分から得られる。
【０２３３】
１つの実施形態では、第１親抗体またはその抗原結合部分及び第２親抗体またはその抗原結合部分は同一抗体である。別の実施形態では、第１親抗体またはその抗原結合部分及び第２親抗体またはその抗原結合部分は異なる抗体である。
【０２３４】
１つの実施形態では、第１親抗体またはその抗原結合部分は第１抗原に結合し、第２親抗体またはその抗原結合部分は第２抗原に結合する。特定実施形態では、第１及び第２抗原は同一抗原である。別の実施形態では、親抗体は同一抗原上の異なるエピトープに結合する。別の実施形態では、第１及び第２抗原は異なる抗原である。別の実施形態では、第１親抗体またはその抗原結合部分は、第２親抗体またはその抗原結合部分が第２抗原に結合する力価とは異なる力価で第１抗原に結合する。さらに別の実施形態では、第１親抗体またはその抗原結合部分は、第２親抗体またはその抗原結合部分が第２抗原に結合する親和性とは異なる親和性で第１抗原に結合する。
【０２３５】
別の実施形態では、第１親抗体またはその抗原結合部分及び第２親抗体またはその抗原結合部分は、ヒト抗体、ＣＤＲグラフト化抗体及びヒト化抗体からなる群から選択される。実施形態では、抗原結合部分は、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、ヒンジ領域でジスルフィド架橋により連結される２つのＦａｂ断片からなる二価断片、ＶＨ及びＣＨ１ドメインから構成されるＦｄ断片、抗体のシングルアームのＶＬ及びＶＨドメインから構成されるＦｖ断片、ｄＡｂ断片、単離相補性決定領域（ＣＤＲ）、一本鎖抗体及びダイアボディからなる群から選択される。
【０２３６】
別の実施形態では、本発明の結合タンパク質は、第１親抗体またはその抗原結合部分、または第２親抗体またはその抗原結合部分により示される少なくとも１つの所望特性を有する。或いは、第１親抗体またはその抗原結合部分及び第２親抗体またはその抗原結合部分は、二重可変ドメイン免疫グロブリンにより示される少なくとも１つの所望特性を有する。実施形態では、所望特性は１つ以上の抗体パラメーターから選択される。別の実施形態では、抗体パラメーターは、抗原特異性、抗原に対する親和性、力価、生物学的機能、エピトープ認識、安定性、可溶性、産生効率、免疫原性、薬物動態、バイオアベイラビリティー、組織交差反応性及びオルトロガス抗原結合からなる群から選択される、実施形態では、結合タンパク質は多価である。別の実施形態では、結合タンパク質は多重特異性である。本明細書中に記載されている多価及び／または多重特異性結合タンパク質は特に治療上の観点から望ましい特性を有している。例えば、多価及び／または多重特異性結合タンパク質は、（１）抗体が結合する抗原を発現する細胞により二価抗体よりも速く内部化（及び／または異化）され得；（２）アゴニスト抗体であり得；及び／または多価抗体が結合し得る抗原を発現する細胞の細胞死及び／またはアポトーシスを誘導し得る。多価及び／または多重特異性結合タンパク質の少なくとも１つの抗原結合特異性を与える「親抗体」は、抗体が結合する抗原を発現する細胞により内部化（及び／または異化）されるものであり得、及び／またはアゴニスト、細胞死誘導及び／またはアポトーシス誘導抗体であり得、本明細書中に記載されている多価及び／また多重特異性結合タンパク質は前記特性の１つ以上の改善を示し得る。更に、親抗体は前記特性の１つ以上を欠いていてもよいが、本明細書中に記載されている多価結合タンパク質として構築したときこれらの特性が付与され得る。
【０２３７】
別の実施形態では、本発明の結合タンパク質は、表面プラズモン共鳴により測定して、１つ以上の標的に対して少なくとも約１０２Ｍ−１ｓ−１、少なくとも約１０３Ｍ−１ｓ−１、少なくとも約１０４Ｍ−１ｓ−１、少なくとも約１０５Ｍ−１ｓ−１、及び少なくとも約１０６Ｍ−１ｓ−１からなる群から選択されるオン速度定数（Ｋｏｎ）を有する。実施形態では、本発明の結合タンパク質は、表面プラズモン共鳴により測定して、１つ以上の標的に対して１０２Ｍ−１ｓ−１〜１０３Ｍ−１ｓ−１、１０３Ｍ−１ｓ−１〜１０４Ｍ−１ｓ−１、１０４Ｍ−１ｓ−１〜１０５Ｍ−１ｓ−１、または１０５Ｍ−１ｓ−１〜１０６Ｍ−１ｓ−１の範囲のオン速度定数（Ｋｏｎ）を有する。
【０２３８】
別の実施形態では、結合タンパク質は、表面プラズモン共鳴により測定して、１つ以上の標的に対して多くとも約１０−３ｓ−１、多くとも約１０−４ｓ−１、多くとも約１０−５ｓ−１、及び多くとも約１０−６ｓ−１からなる群から選択されるオフ速度定数（Ｋｏｆｆ）を有する。実施形態では、本発明の結合タンパク質は、表面プラズモン共鳴により測定して、１つ以上の標的に対して１０−３ｓ−１〜１０−４ｓ−１、１０−４ｓ−１〜１０−５ｓ−１、または１０−５ｓ−１〜１０−６ｓ−１のオフ速度定数（Ｋｏｆｆ）を有する。
【０２３９】
別の実施形態では、結合タンパク質は、１つ以上の標的に対して多くとも約１０−７Ｍ、多くとも約１０−８Ｍ、多くとも約１０−９Ｍ、多くとも約１０−１０Ｍ、多くとも約１０−１１Ｍ、多くとも約１０−１２Ｍ、及び多くとも１０−１３Ｍからなる群から選択される解離定数（ＫＤ）を有している。実施形態では、本発明の結合タンパク質は、その標的に対して１０−７Ｍ〜１０−８Ｍ、１０−８Ｍ〜１０−９Ｍ、１０−９Ｍ〜１０−１０Ｍ、１０−１０〜１０−１１Ｍ、１０−１１Ｍ〜１０−１２Ｍ、または１０−１２Ｍ〜１０−１３Ｍの解離定数（ＫＤ）を有している。
【０２４０】
別の実施形態では、本明細書中に記載されている結合タンパク質は免疫接着分子、イメージング剤、治療薬及び細胞傷害薬からなる群から選択される物質を更に含むコンジュゲートである。実施形態では、イメージング剤は、放射性標識、酵素、蛍光標識、発光標識、生物発光標識、磁気標識及びビオチンからなる群から選択される。別の実施形態では、イメージング剤は３Ｈ、１４Ｃ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５１、１３１Ｉ、１７７Ｌｕ、１６６Ｈｏ及び１５３Ｓｍからなる群から選択される標識である。さらに別の実施形態では、治療薬または細胞傷害薬は代謝拮抗物質、アルキル化剤、抗生物質、増殖因子、サイトカイン、抗血管新生薬、抗有糸分裂剤、アントラサイクリン、毒素及びアポトーシス剤からなる群から選択される。
【０２４１】
別の実施形態では、本明細書中に記載されている結合タンパク質は結晶化結合タンパク質であり、結晶として存在する。実施形態では、結晶は担体を含まない医薬徐放性結晶である。さらに別の実施形態では、結晶化結合タンパク質は該結合タンパク質の可溶性相当物に比して長いインビボ半減期を有する。さらに別の実施形態では、結晶化結合タンパク質は生物活性を保持している。
【０２４２】
別の実施形態では、本明細書中に記載されている結合タンパク質はグリコシル化されている。例えば、グリコシル化はヒトグリコシル化パターンである。
【０２４３】
本発明の１つの態様は、本明細書中に開示されている結合タンパク質の１つをエンコードする単離核酸に関する。更なる実施形態は本明細書中に開示されている単離核酸を含むベクターを提供し、前記ベクターはｐｃＤＮＡ、ｐＴＴ（Ｄｕｒｏｃｈｅｒら，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００２，Ｖｏｌ．３０，Ｎｏ．２）、ｐＴＴ３（追加の複数のクローニング部位を有するｐＴＴ）、ｐＥＦＢＯＳ（Ｍｉｚｕｓｈｉｍａ，Ｓ．  ａｎｄ  Ｎａｇａｔａ，Ｓ．，（１９９０）Ｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｖｏｌ．１８，Ｎｏ．１７）、ｐＢＶ、ｐＪＶ、ｐｃＤＮＡ３．１  ＴＯＰＯ、ｐＥＦ６  ＴＯＰＯ及びｐＢＪからなる群から選択される。実施形態では、ベクターは米国特許出願Ｎｏ．６１／０２１，２８２に開示されているベクターである。
【０２４４】
別の態様では、宿主細胞は本明細書中に開示されているベクターを用いて形質転換される。実施形態では、宿主細胞は原核細胞である。別の実施形態では、宿主細胞は大腸菌である。関連する実施形態では、宿主細胞は真核細胞である。別の実施形態では、真核細胞は原生生物、動物細胞、植物細胞及び真菌細胞からなる群から選択される。さらに別の実施形態では、宿主細胞は哺乳動物細胞（これには、ＣＨＯ、ＣＯＳ;ＮＳ０、ＳＰ２、ＰＥＲ．Ｃ６が含まれるが、これらに限定されない）、真菌細胞（例えば、サッカロミセス・セリビシアエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ））、または昆虫細胞（例えば、Ｓｆ９）である。
【０２４５】
実施形態では、例えば異なる特異性を有する２つ以上のＤＶＤ−Ｉｇを単一の組換え宿主細胞において産生させる。例えば、抗体の混合物の発現はＯ１ｉｇｏｃｌｏｎｉｃｓ（商標）（オランダ国のＭｅｒｕｓ  Ｂ．Ｖ．）米国特許Ｎｏｓ．７，２６２，０２８及び７，４２９，４８６と呼称されている。
【０２４６】
本発明の別の態様は、本明細書中に開示されている宿主細胞の１つを結合タンパク質を産生させるのに十分な条件下で培養培地で培養することを含む本明細書中に開示されている結合タンパク質の産生方法を提供する。実施形態では、この方法により産生された結合タンパク質の５０％〜７５％は二重特異性四価結合タンパク質である。特定実施形態では、この方法により産生された結合タンパク質の７５％〜９０％は二重特異性四価結合タンパク質である。特定実施形態では、産生された結合タンパクの質９０％〜９５％は二重特異性四価結合タンパク質である。
【０２４７】
１つの実施形態は結合タンパク質を放出するための組成物を提供し、その組成物は本明細書中に開示されている結晶化結合タンパク質、成分及び少なくとも１つのポリマー担体を含む処方物からなる。例えば、ポリマー担体は、ポリ（アクリル酸）、ポリ（シアノアクリレート）、ポリ（アミノ酸）、ポリ（無水物）、ポリ（デプシペプチド）、ポリ（エステル）、ポリ（乳酸）、ポリ（乳酸−コ−グリコール酸）すなわちＰＬＧＡ、ポリ（ｂ−ヒドロキシブチレート）、ポリ（カプロラクトン）、ポリ（ジオキサノン）、ホリ（エチレングリコール）、ポリ（（ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド、ポリ［（有機）ホスファゼン］、ポリ（オルトエステル）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリ（ビニルピロリドン）、無水マレイン酸−アルキルビニルエーテルコポリマー、プルーロニックポリオール、アルブミン、アルギネート、セルロース及びセルロース誘導体、コラーゲン、フィブリン、ゼラチン、ヒアルロン酸、オリゴ糖、グリカミノグリカン、硫酸化多糖、そのブレンド及びコポリマーからなる群の１つ以上から選択されるポリマーである。例えば、成分は、アルブミン、スクロース、トレハロース、ラクチトール、ゼラチン、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、メトキシポリエチレングリコール及びポリエチレングリコールからなる群から選択される。別の実施形態は、哺乳動物に対して有効量の本明細書中に開示されている組成物を投与するステップを含む哺乳動物を治療するための方法を提供する。
【０２４８】
本発明は本明細書中に開示されている結合タンパク質及び医薬的に許容され得る担体を含む医薬組成物をも提供する。更なる実施形態では、医薬組成物は障害を治療するために少なくとも１つの追加治療薬を含む。例えば、追加物質は治療薬、イメージング剤、細胞傷害薬、血管新生抑制剤（抗ＶＥＧＦ抗体またはＶＥＧＦ−ｔｒａｐが含まれるが、これらに限定されない）、キナーゼ阻害剤（ＫＤＲ及びＴＩＥ−２阻害剤が含まれるが、これらに限定されない）、共刺激分子ブロッカー（抗Ｂ７．１、抗Ｂ７．２、ＣＴＬＡ４−Ｉｇ、抗ＣＤ２０が含まれるが、これらに限定されない）、接着分子ブロッカー（抗ＬＦＡ−１抗体、抗Ｅ／Ｌセレクチン抗体、低分子インヒビターが含まれるが、これらに限定されない）、抗サイトカイン抗体またはその機能性断片（抗ＩＬ−１８、抗ＴＮＦ及び抗ＩＬ−６／サイトカイン受容体抗体が含まれるが、これらに限定されない）、メトトレキサート、シクロスポリン、ラパマイシン、ＦＫ５０６、検出可能な標識またはレポーター、ＴＮＦアンタゴニスト、抗リウマチ薬、筋弛緩薬、麻薬、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、鎮痛薬、麻酔薬、鎮静薬、局所麻酔薬、神経筋ブロッカー、抗微生物剤、抗乾癬剤、コルチコステロイド、タンパク同化ステロイド、エリスロポエチン、免疫化、免疫グロブリン、免疫抑制薬、成長ホルモン、ホルモン補充薬、放射線医薬品、抗うつ薬、抗精神病薬、興奮薬、喘息薬物療法、β−ゴニスト、吸入ステロイド、エピネフリンまたはアナログ、サイトカイン及びサイトカインアンタゴニストからなる群から選択される。
【０２４９】
別の態様では、本発明は、本明細書中に開示されている結合タンパク質により結合され得る１つ以上の標的が有害である障害を患っているヒト被験者を治療するための方法を提供し、その方法はヒト被験者中の１つ以上の標的の活性が阻害され、１つ以上の症状が緩和され、または治療が達成されるようにヒト被験者に対して本明細書中に開示されている結合タンパク質を投与することを含む。例えば、疾患は、関節リウマチ、骨関節症、若年性慢性関節炎、敗血症性関節炎、ライム関節炎、乾癬性関節炎、反応性関節炎、脊椎関節症、全身性エリテマトーデス、クローン病、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患、インスリン依存性糖尿病、甲状腺炎、喘息、アレルギー性疾患、乾癬、皮膚炎、強皮症、移植片対宿主病、臓器移植拒絶反応、臓器移植に関連する急性または慢性免疫疾患、サルコイドーシス、アテローム性動脈硬化症、播種性血管内凝固、川崎病、グレーヴス病、ネフローゼ症候群、慢性疲労症候群、ウェジナー肉芽腫症、ヘノッホ−シェーンライン紫斑病、腎臓の顕微鏡的血管炎、慢性活動型肝炎、ブドウ膜炎、敗血症性ショック、毒素性ショック症候群、敗血症症候群、悪液質、感染性疾患、寄生虫疾患、後天性免疫不全症候群、急性横断性脊髄炎、ハンチントン舞踏病、パーキンソン病、アルツハイマー病、卒中、原発性胆汁性肝硬変、溶血性貧血、悪性腫瘍、心不全、心筋梗塞、アジソン病、散在性、Ｉ型多腺性自己免疫症及びＩＩ型多腺性自己免疫症、シュミット症候群、成人（急性）呼吸窮迫症候群、脱毛症、円形脱毛症、血清反応陰性関節症、関節症、ライター病、乾癬性関節症、潰瘍性腸炎性関節症、腸炎性滑膜炎、クラミジア、エルシニア及びサルモネラ関連関節症、脊椎関節症、アテローム性疾患／動脈硬化症、アトピー性アレルギー、自己免疫性水疱性疾患、尋常性天疱瘡、落葉状天疱瘡、類天疱瘡、線状ＩｇＡ病、自己免疫性溶血性貧血、クームズ試験陽性溶血性貧血、後天性悪性貧血、若年性悪性貧血、筋痛性脳炎／ローヤルフリー病、慢性皮膚粘膜カンジダ症、巨細胞動脈炎、原発性硬化性肝炎、特発性自己免疫性肝炎、後天性免疫不全症症候群、後天性免疫不全症関連疾患、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、分類不能型免疫不全症（分類不能型低ガンマグロブリン血症）、拡張型心筋症、女性不妊症、卵巣機能不全、早発性卵巣機能不全、線維性肺疾患、特発性線維性肺胞炎、炎症後間質性肺疾患、間質性肺炎、結合組織病関連間質性肺疾患、混合結合組織病関連肺疾患、全身性硬化症関連間質性肺疾患、関節リウマチ関連間質性肺疾患、全身性エリテマトーデス関連肺疾患、皮膚筋炎／多発性筋炎関連肺疾患、シェーグレン病関連肺疾患、強直性脊椎炎関連肺疾患、血管炎性びまん性肺疾患、ヘモジデリン沈着症関連肺疾患、薬物誘発性間質性肺疾患、線維症、放射線線維症、閉塞性細気管支炎、慢性好酸球性肺炎、リンパ球性浸潤性肺疾患、感染後間質性肺疾患、痛風性関節炎、自己免疫性肝炎、１型自己免疫性肝炎（古典的自己免疫性またはルポイド肝炎）、２型自己免疫性肝炎（抗ＬＫＭ抗体肝炎）、自己免疫媒介低血糖症、黒色表皮腫を伴うＢ型インスリン抵抗性、副甲状腺機能低下症、臓器移植に関連する急性免疫疾患、臓器移植に関連する慢性免疫疾患、変形性関節症、原発性硬化性胆管炎、１型乾癬、２型乾癬、特発性白血球減少症、自己免疫性好中球減少症、腎疾患ＮＯＳ、糸球体腎炎、腎臓の顕微鏡的血管炎、ライム病、円板状エリテマトーデス、特発性またはＮＯＳ男性不妊症、精子自己免疫、多発性硬化症（すべてのサブタイプ）、交感性眼炎、結合組織病に続発する肺性高血圧、グッドパスチャー症候群、結節性多発性動脈炎の肺症状、急性リウマチ熱、リウマチ様脊椎炎、スチル病、全身性硬化症、シェーグレン症候群、高安病／動脈炎、自己免疫性血小板減少症、特発性血小板減少症、自己免疫性甲状腺疾患、甲状腺機能亢進症、甲状腺腫様自己免疫性甲状腺機能低下症（橋本病）、萎縮性自己免疫性甲状腺機能低下症、原発性粘液水腫、水晶体原性ブドウ膜炎、原発性血管炎、白斑性急性肝疾患、慢性肝疾患、アルコール性肝硬変、アルコール誘発性肝損傷、胆汁鬱滞、特異体質性肝疾患、薬物誘発性肝炎、非アルコール性脂肪肝、アレルギー及び喘息、Ｂ群連鎖球菌（ＧＢＳ）感染、精神障害（例えば、うつ病及び統合失調症）、Ｔｈ２型及びＴｈ１型媒介疾患、急性及び慢性疼痛（いろいろな形の疼痛）、並びに癌（例えば、肺癌、乳癌、胃癌、膀胱癌、大腸癌、膵臓癌、卵巣癌、前立腺癌及び腎臓癌）及び造血性悪性腫瘍（白血病及びリンパ腫）、無βリポタンパク血友症、先端チアノーゼ、急性及び慢性寄生虫または感染性プロセス、急性白血病、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性または慢性細菌感染、急性膵炎、急性腎不全、腺癌、航空機異所性拍動、エイズ認知症複合、アルコール誘発性肝炎、アレルギー性結膜炎、アレルギー性接触皮膚炎、アレルギー性鼻炎、同種移植片拒絶反応、α−１−アンチトリプシン欠損症、筋萎縮側索硬化症、貧血、狭心症、前角細胞変性、抗ｃｄ３治療、抗リン脂質症候群、抗受容体過敏反応、大動脈瘤及び末梢動脈瘤、大動脈解離、動脈性高血圧、動脈硬化症、動静脈フィステル、運動失調症、心房細動（持続性または発作性）、心房粗動、房室ブロック、Ｂ細胞リンパ腫、移植骨片拒絶反応、骨髄移植（ＢＭＴ）拒絶反応、脚ブロック、バーキットリンパ腫、火傷、心臓不整脈、心臓失神症候群、心臓腫瘍、心筋症、心肺バイパス炎症応答、軟骨移植拒絶反応、小脳皮質変性、小脳障害、無秩序または多源性心房頻拍、化学療法関連障害、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性アルコール中毒、慢性炎症性病理、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、慢性サリチル酸中毒、大腸癌、鬱血性心不全、結膜炎、接触皮膚炎、肺性心、冠動脈疾患、クロイツフェルト−ヤコブ病、培養陰性敗血症、膿疱性線維症、サイトカイン治療関連障害、拳闘家認知症、脱髄疾患、デング出血熱、皮膚炎、皮膚症状、糖尿病、真性糖尿病、糖尿病性アテローム性疾患、びまん性レヴイ小体病、拡張性鬱血性心筋症、脳幹神経節の障害、中年のダウン症候群、ＣＮＳドーパミン受容体をブロックする薬物による薬物誘発性運動障害、薬物過敏、湿疹、脳脊髄炎、心内膜炎、内分泌病、喉頭蓋炎、エプスタイン−バーウイルス感染、先端紅痛症、錐体外路性脳障害、家族性血球貪食リンパ組織球症、胎児性胸腺移植拒絶反応、フリードライヒ運動失調症、機能性末梢動脈障害、真菌性敗血症、ガス壊疽、胃��瘍、糸球体腎炎、臓器または組織の移植片拒絶反応、グラム陰性敗血症、グラム陽性敗血症、細胞内生物による肉芽腫、毛様細胞白血病、ハラーホルデン−スパッツ病、橋本甲状腺炎、枯草熱、心臓移植拒絶反応、血色素症、血液透析、溶血性尿毒症症候群／血栓溶解性血小板減少性紫斑病、出血、肝炎（Ａ）、ヒス束不整脈、ＨＩＶ感染／ＨＩＶ神経障害、ホジキン病、運動過多性運動障害、過敏反応、過敏性肺炎、高血圧、運動減少性運動障害、視床下部−下垂体−副腎軸評価、特発性アジソン病、特発性肺線維症、抗体媒介細胞毒性、無力症、乳児脊髄性筋萎縮症、大動脈の炎症、インフルエンザＡ、電離放射線暴露、虹彩毛様体炎／ブドウ膜炎／視神経炎、虚血−再潅流障害、虚血性発作、若年性関節リウマチ、若年性脊髄性筋萎縮症、カポジ肉腫、腎移植拒絶反応、レジオネラ、リーシュマニア症、ライ病、皮質脊髄系の病巣、脂肪浮腫、肝移植拒絶反応、リンパ水腫、マラリア、悪性リンパ腫、悪性組織球症、悪性メラノーマ、髄膜炎、骨髄炎菌血症、代謝性／特発性、片頭痛、ミトコンドリア多系統障害、混合結合組織病、単クローン性免疫グロブリン血症、多発性骨髄腫、多系統変性（メンセル・ドゥジュリーヌ−トーマス・シードレーガー及びマシャド−ジョセフ）、重症筋無力症、マイコバクテリウム・アビウム・イントラセルラーレ、結核菌、骨髄異形成症候群、心筋梗塞、心筋虚血障害、鼻咽頭癌、新生児慢性肺疾患、腎炎、ネフローゼ、神経変性疾患、神経原性Ｉ筋萎縮症、好中球減少性発熱、非ホジキンリンパ腫、腹部動脈及びその枝の閉塞、閉塞性動脈障害、ｏｋｔ３治療、睾丸炎／副睾丸炎、睾丸炎／精管復元術、臓器巨大症、骨粗しょう症、膵臓移植拒絶反応、膵臓癌、腫瘍随伴症候群／悪性腫瘍の高カルシウム血症、上皮小体移植拒絶反応、骨盤内炎症性疾患、多年性鼻炎、心膜疾患、末梢アテローム性疾患、末梢血管疾患、腹膜炎、悪性貧血、ニューモシスティス・カリニ肺炎、肺炎、ＰＯＥＭＳ症候群（多発性神経障害、臓器巨大症、内分泌症、単クローン性免疫グロブリン血症、及び皮膚症状症候群）、輸血後症候群、ポストポンプ症候群、ＭＩ後心臓切開術症候群、子癇前症、進行性核上麻痺、原発性肺性高血圧、放射線治療、レイノー現象及び病、レイノー病、レフサム病、狭いＱＲＳの規則正しい頻脈、腎血管性高血圧、再潅流障害、拘束型心筋症、肉腫、強皮症、老人性舞踏病、レヴイ小体型老人性認知症、血清反応陰性関節症、ショック、鎌状赤血球貧血、皮膚同種片拒絶反応、皮膚症状症候群、小腸移植拒絶反応、充実性腫瘍、特異的不整脈、脊髄性運動失調症、脊髄小脳変性、連鎖球菌性筋炎、小脳の構造的病巣、亜急性硬化性汎脳炎、失神、心血管系の梅毒、全身性アナフィラクシー、全身性炎症応答症候群、全身性若年性関節リウマチ、Ｔ細胞またはＦＡＢ  ＡＬＬ、毛細管拡張症、閉塞性血栓血管炎、血小板減少症、毒性、移植片、外傷／出血、ＩＩＩ型過敏症、ＩＶ型過敏症、不安定狭心症、尿毒症、尿路敗血症、じんま疹、心臓弁膜症、静脈瘤、血管炎、静脈病、静脈血栓症、心室細動、ウイルス性及び真菌性感染、ウイルス性脳炎／無菌性髄膜炎、ウイルス関連血球貪食症候群、ウェルニッケ−コルサコフ症候群、ウィルソン病、臓器または組織の異種片移植拒絶反応、急性冠動脈症候群、急性特発性多発性神経炎、急性炎症性脱髄性多発性神経根ニューロパシー、急性虚血、成人スチル病、円形脱毛症、アナフィラキシー、抗リン脂質抗体症候群、再生不良性貧血、動脈硬化症、アトピー性湿疹、アトピー性皮膚炎、自己免疫性皮膚炎、ストレプトコッカス感染に関連する自己免疫性障害、自己免疫性腸疾患、自己免疫性難聴、自己免疫性リンパ組織増殖性症候群（ＡＬＰＳ）、自己免疫性心筋炎、自己免疫性早発性卵巣機能不全、眼瞼炎、気管支拡張症、水疱性類天疱瘡、心血管疾患、難治性抗リン脂質症候群、セリアック病、頸椎症、慢性虚血、瘢痕性類天疱瘡、多発性硬化症のリスクのある最初のエピソードからなる症候群（ｃｉｓ）、結膜炎、小児期発症精神病、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、涙嚢炎、皮膚筋炎、糖尿病性網膜症、真性糖尿病、椎間板ヘルニア、椎間板脱出、薬物誘引性免疫溶血性貧血、心内膜炎、子宮内膜炎、内眼球炎、上強膜炎、多形滲出性紅斑、重症多形紅斑、妊娠性類天疱瘡、ギランバレー症候群（ＧＢＳ）、枯草熱、ヒューズ症候群、特発性パーキンソン病、特発性間質性肺炎、ＩｇＥ媒介アレルギー、免疫溶血性貧血、封入体筋炎、感染性眼炎症性疾患、炎症性脱髄疾患、炎症性心疾患、炎症性腎疾患、ＩＰＦ／ＵＩＰ、虹彩炎、角膜炎、乾性角結膜炎、クスウマル病またはクスウマル−マイエル病、ランドリー麻痺、ランゲルハンス細胞組織球症、網状皮斑、黄斑変性、顕微鏡的多発性血管炎、ベヒテレフ病、運動ニューロン障害、粘膜類天疱瘡、多臓器不全、重症筋無力症、骨髄異形成症候群、心筋炎、神経根障害、神経障害、非Ａ非Ｂ肝炎、視神経炎、骨溶解、卵巣癌、小関節ＪＲＡ、末梢動脈閉塞性疾患（ＰＡＯＤ）、末梢血管疾患（ＰＶＤ）、末梢動脈疾患（ＰＡＤ）、静脈炎、結節性多発性動脈炎（または、結節性動脈周囲炎）、多発性軟骨炎、リウマチ性多発性筋痛、白髪、多関節性ＪＲＡ、多内分泌欠乏症候群、多発性筋炎、リウマチ性多発性筋痛（ＰＭＲ）、ポスト−ポンプ症候群、原発性パーキンソン症候群、前立腺及び腎臓癌、及び造血性悪性腫瘍（白血病及びリンパ腫）、乾癬、真性赤血球系無形成症、原発性副腎機能不全、再発性視神経脊髄炎、再狭窄症、リウマチ性心疾患、ｓａｐｈｏ（滑膜炎、ニキビ、膿庖症、骨増殖症及び骨炎）、強皮症、続発性アミロイドーシス、ショック肺、強膜炎、坐骨神経痛、続発性副腎機能不全、シリコーン関連結合組織病、
スネドン−ウィルキンソン皮膚病、強直性脊椎炎、スチーブンス−ジョンソン症候群（ＳＪＳ）、全身性炎症性応答症候群、側頭動脈炎、トキソプラズマ網膜炎、中毒性表皮融解、横断性脊髄炎、ＴＲＡＰＳ（腫瘍壊死因子受容体）、１型アレルギー反応、ＩＩ型糖尿病、じんま疹、通常型間質性肺炎（ＵＩＰ）、血管炎、春季カタル、ウイルス性網膜炎、フォークト−小柳−原田症候群（ＶＫＨ症候群）、滲出型黄斑変性、損傷治癒、エルシニア及びサルモネラ関連関節症からなる群から選択される。
【０２５０】
実施形態では、本発明の組成物及び方法を用いて治療または診断され得る疾患には、乳房、結腸、直腸、肺、中咽頭、下咽頭、食道、胃、膵臓、肝臓、胆嚢及び胆管、小腸、尿路（腎臓、膀胱及び尿路上皮を含む）、女性性器管（頸管、子宮及び卵巣、並びに絨毛癌及び妊娠性絨毛性疾患を含む）、男性性器管（前立腺、精嚢、精巣及び胚細胞腫瘍を含む）、内分泌腺（甲状腺、副腎及び下垂体を含む）及び皮膚の癌を含めた原発性及び転移性癌；並びに血管腫、メラノーマ、肉腫（骨及び軟組織から生ずる肉腫、並びにカポジ肉腫を含む）、脳、神経、眼及び髄膜の腫瘍（アストロチトーム、グリオーム、膠芽腫、網膜芽腫、神経腫、神経芽腫、神経線維腫及び髄膜腫を含む）、白血病のような造血性悪性疾患から生ずる充実性腫瘍、及びリンパ腫（ホジキン及び非ホジキンリンパ腫を含む）が含まれるが、これらに限定されない。
【０２５１】
実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合部分は、単独でまたは放射線療法及び／または他の化学療法剤と一緒に使用したとき、本明細書中に記載されている癌を治療するためまたは本明細書中に記載されている腫瘍の転移を予防するために使用される。
【０２５２】
別の態様では、本発明は、本明細書中で検討されている第２物質を投与する前、同時またはその後に本明細書中に開示されている結合タンパク質の１つを投与するステップを含む障害を患っている患者の治療方法を提供する。特定実施形態で、第２物質は、ブデノシド、上皮増殖因子、コルチコステロイド、シクロスポリン、スルファサラジン、アミノサリチル酸塩、６−メルカプトプリン、アザチオプリン、メトロニダゾール、リポキシゲナーゼ阻害剤、メサラミン、オルサラジン、バルサラジド、抗酸化剤、トロンボキサン阻害剤、ＩＬ−１受容体アンタゴニスト、抗ＩＬ−１β  ｍＡｂ、抗ＩＬ−６またはＩＬ−６受容体ｍＡｂ、増殖因子、エラスターゼ阻害剤、ピリジニル−イミダゾール化合物、ＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１８、ＩＬ−２３、ＥＭＡＰ−ＩＩ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦ及びＰＤＧＦの抗体またはアゴニスト、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ−１９、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ９０またはそのリガンドの抗体、メトトレキサート、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノール酸モフェチル、レフルノミド、ＮＳＡＩＤ、イブプロフェン、コルチコステロイド、プレドニゾロン、ホスホジエステラーゼ阻害剤、アデノシンアゴニスト、抗血栓薬、補体インヒビター、アドレナリン作動薬、ＩＲＡＫ、ＮＩＫ、ＩＫＫ、ｐ３８、ＭＡＰキナーゼ阻害剤、ＩＬ−１β変換酵素阻害剤、ＴＮＦα変換酵素阻害剤、Ｔ細胞シグナリングインヒビター、メタロプロテイナーゼ阻害剤、スルファサラジン、アザチオプリン、６−メルカプトプリン、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、可溶性サイトカイン受容体、可溶性ｐ５５  ＴＮＦ  受容体、可溶性ｐ７５  ＴＮＦ受容体、ｓＩＬ−１ＲＩ、ｓＩＬ−ｌＲＩＩ、ｓＩＬ−６Ｒ、抗炎症性サイトカイン、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１３及びＴＧＦβからなる群から選択される。
【０２５３】
特定実施形態では、本明細書中に開示されている医薬組成物は、患者に対して非経口、皮下、筋肉内、静脈内、関節内、気管支内、腹腔内、包内、軟骨内、腔内、脳質、小脳内、脳・脳質内、結腸内、子宮頸管内、胃内、肝内、心筋内、骨内、骨盤内、心膜内、腹腔内、胸膜内、前立腺内、肺内、直腸内、腎内、網膜内、髄腔内、滑液嚢内、胸内、子宮内、膀胱内、ボーラス、直腸、頬側、舌下、鼻腔内及び経皮的から選択される少なくとも１つのモードにより投与される。
【０２５４】
本発明の１つの態様は、本発明の少なくとも１つの結合タンパク質に対する少なくとも１つの抗イディオタイプ抗体を提供する。抗イディオタイプ抗体には、免疫グロブリン分子の少なくとも一部を含むタンパク質またはペプチド含有分子が含まれ、これらには例えば本発明の結合タンパク質に取り込まれ得る重鎖または軽鎖の少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）、或いはそのリガンド結合部分、重鎖または軽鎖可変領域、重鎖または軽鎖定常領域、フレームワーク領域またはその一部があるが、これらに限定されない。
【０２５５】
本発明は、（ａ）改変前の結合タンパク質の特性を測定するステップ；（ａ）重鎖及び／または軽鎖の（Ｘ１）１の長さ及び／または配列を改変して、改変重鎖及び／または軽鎖を与えるステップ；及び（ｂ）改変重鎖及び軽鎖を含む改変結合タンパク質の改良された特性を測定するステップ；を含む結合タンパク質の特性を改良するための方法を提供する。本発明は、（ａ）改変前の結合タンパク質の特性を測定するステップ；（ｂ）ＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎがＶＤ２−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ１−Ｃ−（Ｘ２）ｎに変化するように第１及び第２ポリペプチド鎖を改変して、改変重鎖及び軽鎖を与えるステップ；及び（ｃ）改変重鎖及び軽鎖を含む改変結合タンパク質の改良された特性を測定するステップ；を含む結合タンパク質の特性を改良するための方法をも提供する。
【０２５６】
別の態様では、本発明は、結合タンパク質の特性を改良するための方法を提供し、この方法は、（ａ）改変前の結合タンパク質の特性を測定するステップ；（ｂ）重鎖及び／または軽鎖のＶＤ１またはＶＤ２の１つのみの配列が変化するように第１及び／または第２ポリペプチド鎖を改変するスフップ；及び（ｃ）改変重鎖及び軽鎖を含む改変結合タンパク質の特性を測定するステップ；を含む。実施形態では、特性は標的抗原に対する結合、宿主細胞からの発現収率、インビトロ半減期、インビボ半減期、安定性、可溶性及び改良されたエフェクター機能からなる群から選択される。別の実施形態では、改変重鎖の（Ｘ１）１の長さを長くする。別の実施形態では、改変重鎖の（Ｘ１）１の長さを短くする。別の実施形態では、改変軽鎖の（Ｘ１）１の長さを長くする。別の実施形態では、改変軽鎖の（Ｘ１）１の長さを短くする。別の実施形態では、改変重鎖の（Ｘ１）１は配列番号２１または２２からなる群から選択されるアミノ酸を含む。別の実施形態では、改変軽鎖の（Ｘ１）１は配列番号１３または１４からなる群から選択されるアミノ酸を含む。別の実施形態では、改変重鎖の（Ｘ１）１は配列番号２２であり、改変軽鎖の（Ｘ１）１は配列番号１４である。別の実施形態では、改変重鎖の（Ｘ１）１は配列番号２１であり、改変軽鎖の（Ｘ１）１は配列番号１４である。別の実施形態では、改変重鎖の（Ｘ１）１は配列番号２２であり、改変軽鎖の（Ｘ１）１は配列番号１３である。別の実施形態では、改変重鎖の（Ｘ１）１は配列番号２１であり、改変軽鎖の（Ｘ１）１は配列番号１３である。
【図面の簡単な説明】
【０２５７】
【図１】Ａ  二重可変ドメイン（ＤＶＤ）−Ｉｇ構築物の概略図であり、２つの親抗体からＤＶＤ−Ｉｇを作成するための戦略を示す。Ｂ  構築物ＤＶＤ１−Ｉｇ、ＤＶＤ２−Ｉｇ、並びにハイブリドーマクローン２Ｄ１３．Ｅ３（抗ＩＬ−ｌα）及び１３Ｆ５．Ｇ５（抗ＩＬ−１β）からの２つのキメラ単一特異性抗体の概略図である。
【発明を実施するための形態】
【０２５８】
本発明は、２つ以上の抗原に結合し得る多価及び／または多重特異性結合タンパク質に関する。具体的には、本発明は、二重可変ドメイン免疫グロブリン（ＤＶＤ−Ｉｇ）及びその医薬組成物、並びに核酸、組換え発現ベクター及び前記ＤＶＤ−Ｉｇを作成するための宿主細胞に関する。インビトロまたはインビボで特定抗原を検出するための本発明のＤＶＤ−Ｉｇの使用方法も本発明に包含される。
【０２５９】
本明細書中に別途定義されていない限り、本発明に関連して使用されている科学的及び技術的用語は当業者が通常理解している意味を有する。用語の意味及び範囲は明らかでなければならないが、潜在的に曖昧な場合には本明細書に記載されている定義が辞書または非本質的な定義に優先する。更に、別の文脈が要求されない限り、単数の用語は複数を含み、複数の用語は単数を含む。本明細書中、「または」の使用は別段の記述がない限り「及び／または」を意味する。更に、用語「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」及び「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」や「含まれる（ｉｎｃｌｕｄｅｄ）」のような他の形態は限定的でない。また、別段の記述がない限り、「要素」または「成分」のような用語は、１つの単位を含む複数の要素及び複数の成分、並びに１つ以上のサブユニットを含む複数の要素及び複数の成分を包含する。
【０２６０】
通常、本明細書に記載されている細胞及び組織培養、分子生物学、免疫学、微生物学、遺伝学、タンパク質及び核酸化学及びハイブリダイゼーションに関連して使用されている専門用語は当業界で公知であり、一般的に使用されているものである。別段の指示がない限り、本発明の方法及び技術は、通常当業界で公知であり、本明細書を通して引用され、検討されている各種一般文献及びより具体的な文献に記載されている慣用方法に従って実施される。酵素反応及び精製技術は、当業界で通常実行されているかまたは本明細書中に記載されているように製造業者の仕様書に従って実施される。本明細書に記載されている分析化学、合成有機化学、並びに医学的及び医薬化学に関連して使用されている専門用語並びにそれらの実験室的手順及び技術は当業界で公知であり、一般的使用されているものである。化学合成、化学分析、製薬、処方及びデリバリー、並びに患者の治療のためには標準技術が使用される。
【０２６１】
本発明はより容易に理解され得る。特定の用語を以下に定義する。
【０２６２】
本明細書中で使用されている用語「ポリペプチド」はアミノ酸のポリマー鎖を指す。用語「ペプチド」及び「タンパク質」は用語「ポリペプチド」と互換可能に使用されており、アミノ酸のポリマー鎖を指す。用語「ポリペプチド」は天然または人工タンパク質、タンパク質断片、及びタンパク質配列のポリペプチドアナログを包含する。ポリペプチドはモノマーまたはポリマーであり得る。本明細書中での「ポリペプチド」の使用は、文脈上別の解釈がない限りポリペプチド、及びその断片及びバリアント（バリアントの断片を含む）を包含すると意図される。抗原性ポリペプチドの場合、ポリペプチドの断片は場合によりポリペプチドの少なくとも１つの連続または非線形エピトープを含む。少なくとも１つのエピトープ断片の正確な境界は当業界の通常の技術を用いて確認され得る。断片は少なくとも約５個の連続アミノ酸、例えば少なくとも約１０個の連続アミノ酸、少なくとも約１５個の連続アミノ酸、または少なくとも約２０個の連続アミノ酸を含む。ポリペプチドのバリアントは本明細書に記載されている通りである。
【０２６３】
用語「単離タンパク質」または「単離ポリペプチド」は、誘導されるその起源またはソースによって天然状態で付属している天然結合成分を結合しておらず；同一種由来の他のタンパク質を実質的に含まず；異なる種由来の細胞により発現され；または天然に存在しないタンパク質またはポリペプチドである。よって、化学的に合成されるかまたは天然に由来する細胞とは異なる細胞系において合成されるポリペプチドは天然結合成分から単離されている。タンパク質は当業界で公知のタンパク質精製技術を用いて天然結合成分を実質的に含まないようにし得る。
【０２６４】
本明細書中で使用されている用語「回収する」は、ポリペプチドのような化学種を単離により、例えば当業界で公知のタンパク質精製技術を用いて天然結合成分を実質的に含まないようにするプロセスを指す。
【０２６５】
本明細書中で使用されている「生物活性」は、（インビボで見られるように天然に存在する、或いは組換え手段により与えられるかまたは可能になる）分子の１つ以上の固有の生物学的特性を指す。生物学的特性には、受容体への結合、細胞増殖の誘導、細胞増殖の抑制、他のサイトカインの誘導、アポトーシスの誘導及び酵素活性が含まれるが、これらに限定されない。生物活性はＩｇ分子の活性をも含む。
【０２６６】
抗体、タンパク質またはペプチドの第２化学種との相互作用に関連して、本明細書中で使用されている用語「特異的結合」または「特異的に結合する」は、該相互作用が化学種上の特定構造（例えば、抗原決定基、すなわちエピトープ）の存在に依存することを意味する。例えば、抗体は一般的にタンパク質よりむしろ特定のタンパク質構造を認識し、結合する。抗体がエピトープ“Ａ”に対して特異的であるならば、標識されている“Ａ”及び抗体を含む反応におけるエピトープＡ（すなわち、遊離の非標識Ａ）含有分子の存在により抗体に結合される標識Ａの量が減少する。
【０２６７】
本明細書中で使用されている用語「抗体」は、広義にはＩｇ分子の本質的エピトープ結合要件を保持している４本のポリペプチド鎖、２本の重（Ｈ）鎖と２本の軽（Ｌ）鎖からなる免疫グロブリン（Ｉｇ）分子、或いはその機能的断片、ミュータント、バリアントまたは誘導体を指す。前記したミュータント、バリアントまたは誘導体抗体フォーマットは当業界で公知である。その非限定的実施形態を以下に検討する。
【０２６８】
完全長抗体において、各重鎖は重鎖可変領域（本明細書中、ＨＣＶＲまたはＶＨと略す）及び重鎖定常領域からなる。重鎖定常領域は３つのドメインＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３からなる。各軽鎖は軽鎖可変領域（本明細書中、ＬＣＶＲまたはＶＬと略す）及び軽鎖定常領域からなる。軽鎖定常領域は１つのドメインＣＬからなる。ＶＨ及びＶＬ領域は更に相補性決定領域（ＣＤＲ）と称される高度可変性の領域に分割され得、ＣＤＲにはフレームワーク領域（ＦＲ）と称されるより保存性の領域が点在している。ＶＨ及びＶＬの各々は、アミノ末端からカルボキシ末端にＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順で配置されている３つのＣＤＲ及び４つのＦＲから構成されている。免疫グロブリン分子は任意のタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ及びＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２）またはサブクラスを有し得る。
【０２６９】
用語「Ｆｃ領域」は、完全抗体のパパイン消化により生じ得る免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を規定するために使用される。Ｆｃ領域は未変性配列Ｆｃ領域またはバリアントＦｃ領域であり得る。免疫グロブリンのＦｃ領域は通常２つの定常ドメインのＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメインを含み、場合によりＣＨ４ドメインを含む。抗体エフェクター機能を変化させるためにＦｃ部分中のアミノ酸残基を置換することは当業界で公知である（Ｗｉｎｔｅｒら，米国特許Ｎｏｓ．５，６４８，２６０及び５，６２４，８２１）。抗体のＦｃ部分は幾つかの重要なエフェクター機能、例えばサイトカイン誘導、ＡＤＣＣ、食作用、補体依存性細胞障害（ＣＤＣ）、並びに抗体及び抗原−抗体複合体の半減期／クリアランス速度を媒介する。幾つかの場合ではこれらのエフェクター機能は治療用抗体のために望ましいが、他の場合には治療目的に応じて不必要であったり、有害でさえある。あるヒトＩｇＧアイソタイプ、特にＩｇＧ１及びＩｇＧ３は、それぞれＦｃγＲ及び補体Ｃ１ｑを介してＡＤＣＣ及びＣＤＣを媒介する。新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）は抗体の循環半減期を決める重要な成分である。さらに別の実施形態では、抗体のエフェクター機能が変化するように抗体の定常領域（例えば、抗体のＦｃ領域）中の少なくとも１つのアミノ酸残基が置換されている。免疫グロブリンの２つの同一重鎖のダイマー化はＣＨ３ドメインのダイマー化により媒介され、ヒンジ領域内のジスルフィド結合により安定化される（Ｈｕｂｅｒら，Ｎａｔｕｒｅ，２６４：４１５−２０；Ｔｈｉｅｓら，１９９９，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２９３：６７−７９）。重鎖−重鎖ジスルフィド結合を防止するためにヒンジ領域内のシステイン残基を変異させると、ＣＨ３ドメインのダイマー化を不安定にする。ＣＨ３ダイマー化に関与する残基は同定されている（Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ，１９９８，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，３７：９２６６−７３）。従って、一価の半Ｉｇを作成することが可能である。驚くことに、ＩｇＧ及びＩｇＡサブクラスの両方に対して一価の半Ｉｇが天然で見つかっている（Ｓｅｌｉｇｍａｎ，１９７８，Ａｎｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１２９：８５５−７０；Ｂｉｅｗｅｎｇａら，１９８３，Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，５１：３９５−４００）。ＦｃＲｎ：Ｉｇ  Ｆｃ領域の化学量論は２：１であると判明しており（Ｗｅｓｔら，２０００，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，３９：９６９８−７０８）、半ＦｃはＦｃＲｎ結合を媒介するのに十分である（Ｋｉｍら，１９９４，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２４：５４２−５４８）。ＣＨ３ダイマー化のために重要な残基がＣＨ３  ｂシート構造の内側界面上にあり、ＦｃＲｎ結合に関与する領域はＣＨ２−ＣＨ３ドメインの外側界面上にあるので、ＣＨ３ドメインのダイマー化を中断させるための突然変異はＦｃＲｎ結合に対して大きな悪影響を有し得ない。しかしながら、半Ｉｇ分子は規則抗体よりもサイズが小さいために組織浸透の点である利点を有し得る。１つの実施形態では、重鎖のダイマー化が中断されて半ＤＶＤ  Ｉｇ分子が生ずるように、本発明の結合タンパク質の定常領域（例えば、Ｆｃ領域）中の少なくとも１つのアミノ酸残基が置���されている。ＩｇＧの抗炎症活性はＩｇＧ  Ｆｃ断片のＮ連結グリカンのシアリル化に完全に依存している。適切なＩｇＧ１  Ｆｃ断片を作成し、これにより大きく高められた力価を有する完全組換えシアリル化ＩｇＧ１  Ｆｃが生じ得るように、抗炎症活性のための正確なグリカン要件は解明されている（Ａｎｔｈｏｎｙ，Ｒ．Ｍ．ら（２００８）Ｓｃｉｅｎｃｅ，３２０：３７３−３７６）。
【０２７０】
本明細書中で使用されている用語抗体の「抗原結合部分」（または、単に「抗体部分」）は、抗原に対して特異的に結合する能力を保持している抗体の１つ以上の断片を指す。抗体の抗原−結合機能が完全長抗体の断片により実施され得ることは判明している。抗体の実施形態は双特異性、二重特異性または多重特異性フォーマット；２つ以上の異なる抗原に対する特異的結合であり得る。用語抗体の用語「抗原結合部分」内に包含される結合断片の例には、（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ及びＣＨ１ドメインから構成される一価断片であるＦａｂ断片；（ｉｉ）ヒンジ領域でジスルフィド架橋により連結されている２つのＦａｂ断片からなる二価断片であるＦ（ａｂ’）２断片；（ｉｉｉ）ＶＨ及びＣＨ１ドメインから構成されるＦｄ断片；（ｉｖ）抗体のシングルアームのＶＬ及びＶＨドメインから構成されるＦｖ断片；（ｖ）単一可変ドメインを含むｄＡｂ断片（参照により本明細書に組み入れるＷａｒｄら（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ，３４１：５４４−５４６；Ｗｉｎｔｅｒら，ＰＣＴ公開ＷＯ  ９０／０５１４４  Ａ１）；及び（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）が含まれる。更に、Ｆｖ断片の２つのドメインＶＬ及びＶＨは別の遺伝子によりコードされるが、これらは組換え方法により、ＶＬ及びＶＨ領域が対になって一価分子（一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として公知；例えば、Ｂｉｒｄら（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４２：４２３−４２６；及びＨｕｓｔｏｎら（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８５：５８７９−５８８３）を参照されたい）を形成する単一タンパク質鎖として作成できる合成リンカーにより連結され得る。一本鎖抗体も用語抗体の「抗原結合部分」に包含されると意図される。ダイアボディのような他の形態の一本鎖抗体も包含される。ダイアボディは、ＶＨ及びＶＬドメインが単一ポリペプチド鎖上で発現されるが、同一鎖上の２つのドメイン上で対を形成するには余りに短いリンカーを用いてドメインは別の鎖の相補性ドメインと対を形成し、２つの抗原結合部位を形成する二価の双特異性抗体である（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ，Ｐ．ら（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：６４４４−６４４８；Ｐｏｌｊａｋ、Ｒ．Ｊ．ら（１９９４）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，２：１１２１−１１２３を参照されたい）。前記抗体結合部分は当業界で公知である（Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ  ａｎｄ  Ｄｕｂｅｌ編，Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ（２００１）Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，７９０ｐｐ（ＩＳＢＮ  ３−５４０−４１３５４−５）。加えて、一本鎖抗体には、相補性軽鎖ポリペプチドと一緒に抗原結合領域の対を形成するタンデムＦｖセグメントの対（ＶＨ−ＣＨ１−ＶＨ−ＣＨ１）からなる「線状抗体」（Ｚａｐａｔａら，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．，８（１０）：１０５７−１０６２（１９９５）、及び米国特許Ｎｏ．５，６４１，８７０）も含まれる。
【０２７１】
用語「多価結合タンパク質」は、明細書を通じて２つ以上の抗原結合部位を含む結合タンパク質を指すべく使用されている。実施形態では、多価結合タンパク質は３つ以上の抗原結合部位を有するように工学操作されており、通常天然抗体ではない。用語「多重特異性結合タンパク質」は、２つ以上の関連または非関連標的に結合し得る結合タンパク質を指す。本発明の二重可変ドメイン（ＤＶＤ）結合タンパク質は２つ以上の抗原結合部位を含み、四価または多価結合タンパク質である。ＤＶＤは１つの抗原に結合し得る単一特異性であり得、または２つ以上の抗原に結合し得る多重特異性であり得る。２つの重鎖ＤＶＤポリペプチド及び２つの軽鎖ＤＶＤポリペプチドを含むＤＶＤ結合タンパク質をＤＶＤ−Ｉｇと称する。ＤＶＤ−Ｉｇの各々半分は１つの重鎖ＤＶＤポリペプチドと１つの軽鎖ＤＶＤポリペプチド及び２つの抗原結合部位を含む。各結合部位は重鎖可変ドメインと軽鎖可変ドメインを含み、１つの抗原結合部位あたり全部で６つのＣＤＲが抗原結合に関与している。
【０２７２】
本明細書中で使用されている用語「双特異性抗体」は、１つのみが機能性双特異性抗体である複数の異なる免疫グロブリン種が生ずるように、クアドローマ技術（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｃ．  ａｎｄ  Ａ．Ｃ．Ｃｕｅｌｌｏ，Ｎａｔｕｒｅ，１９８３，３０５（５９３４）：ｐ．５３７−４０を参照されたい）により、２つの異なるモノクローナル抗体の化学コンジュゲーション（Ｓｔａｅｒｚ，Ｕ．Ｄ．ら，Ｎａｔｕｒｅ，１９８５，３１４（６０１２），ｐ．６２８−３１を参照されたい）により、またはＦｃ領域に突然変異を導入するノブとホール（ｋｎｏｂ−ｉｎｔｏ−ｈｏｌｅ）または類似のアプローチ（Ｈｏｌｌｉｇｅｒ，Ｐ．Ｔ．Ｐｒｏｓｐｅｒｏ，ａｎｄ  Ｇ．Ｗｉｎｔｅｒ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９９３，９０（１４）：ｐ．６４４４−８．１８を参照されたい）により作成される完全長抗体を指す。分子機能により、双特異性抗体は２つの結合アームの１つ（ＨＣ／ＬＣの１つの対）上の１つの抗原（または、エピトープ）に結合し、第２アーム（ＨＣ／ＬＣの異なる対）上の異なる抗原（または、エピトープ）に結合する。この定義により、双特異性抗体は（特異性及びＣＤＲ配列の両方の点で）２つの別個の抗原結合アームを有し、抗体が結合している抗原毎に一価である。
【０２７３】
本明細書中で使用されている用語「二重特異性抗体」は、２つの結合アーム（ＨＣ／ＬＣの対）の各々中の２つの異なる抗原（または、エピトープ）に結合することができる完全長抗体を指す（ＰＣＴ公開ＷＯ  ０２／０２７７３を参照されたい）。従って、二重特異性結合タンパク質は、同一の特異性及び同一のＣＤＲ配列を有する２つの同一抗原結合アームを有し、そのタンパク質が結合している抗原毎に二価である。
【０２７４】
結合タンパク質の「機能性抗原結合部位」は標的抗原に結合し得るものである。抗原結合部位の抗原結合親和性は必ずしも抗原結合部位が誘導される親抗体ほど強くないが、抗原に結合する能力は抗原に対する抗体結合を評価するために公知の各種方法の１つを用いて測定されなければならない。更に、本発明の多価抗体の抗原結合部位の各々の抗原結合親和性は定量的に同一である必要はない。
【０２７５】
用語「サイトカイン」は、１つの細胞集団により放出され、他の細胞集団に対して細胞内メディエーターとして作用するタンパク質に対する一般用語である。サイトカインの例はリンホカイン、モノカイン及び従来のポリペプチドホルモンである。サイトカインの中には、成長ホルモン、例えばヒト成長ホルモン、Ｎ−メチオニルヒト成長ホルモン及びウシ成長ホルモン；副甲状腺ホルモン；チロキシン；インスリン；プロインスリン；レラキシン；プロレラキシン；糖タンパク質ホルモン、例えば卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）及び黄体形成ホルモン（ＬＨ）；肝増殖因子；線維芽増殖因子；プロラクチン；胎盤ラクトゲン；腫瘍壊死因子−α及び−β；ミュラー管抑制因子；マウスゴナドトロピン関連ペプチド；インヒビン；アクチビン；血管内皮増殖因子；インテグリン；トロンボポエチン（ＴＰＯ）；神経成長因子、例えばＮＧＦ−α；血小板増殖因子；胎盤増殖因子、形質転換増殖因子（ＴＧＦ）、例えばＴＧＦ−α及びＴＧＦ−β；インスリン様成長因子−１及び−１１；エリスロポエチン（ＥＰＯ）；骨形成誘導因子；インターフェロン、例えばインターフェロン−α、−β及び−γ；コロニー刺激因子（ＣＳＦ）、例えばマクロファージ−ＣＳＦ（Ｍ−ＣＳＦ）、顆粒球−マクロファージ−ＣＳＦ（ＧＭ−ＣＳＦ）及び顆粒球−ＣＳＦ（Ｇ−ＣＳＦ）；インターロイキン（ＩＬ）、例えばＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１８、ＩＬ−２１、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３、ＩＬ−３３；腫瘍壊死因子、例えばＴＮＦ−αまたはＴＮＦ−β；並びにＬＩＦ及びキットリガンド（ＫＬ）を含めた他のポリペプチド因子が含まれる。本明細書中で使用されている用語「サイトカイン」には、天然ソースまたは組換え細胞培養物由来のタンパク質及び未変性配列サイトカインの生物活性均等物が含まれる。
【０２７６】
用語「リンカー」は、ペプチド結合により連結される２つ以上のアミノ酸残基を含むポリペプチドを指すために使用され、１つ以上の抗原結合部分を連結するために使用される。リンカーポリペプチドは当業界で公知である（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ，Ｐ．ら（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：６４４４−６４４８；Ｐｏｌｊａｋ、Ｒ．Ｊ．ら（１９９４）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，２：１１２１−１１２３を参照されたい）。リンカーの例には、ＡＫＴＴＰＫＬＥＥＧＥＦＳＥＡＲ（配列番号１）、ＡＫＴＴＰＫＬＥＥＧＥＦＳＥＡＲＶ（配列番号２）、ＡＫＴＴＰＫＬＧＧ（配列番号３）、ＳＡＫＴＴＰＫＬＧＧ（配列番号４）、ＳＡＫＴＴＰ（配列番号５）、ＲＡＤＡＡＰ（配列番号６）、ＲＡＤＡＡＰＴＶＳ（配列番号７）、ＲＡＤＡＡＡＡＧＧＰＧＳ（配列番号８）、ＲＡＤＡＡＡＡ（Ｇ４Ｓ）４（配列番号９）、ＳＡＫＴＴＰＫＬＥＥＧＥＦＳＥＡＲＶ（配列番号１０）、ＡＤＡＡＰ（配列番号１１）、ＡＤＡＡＰＴＶＳＩＦＰＰ（配列番号１２）、ＴＶＡＡＰ（配列番号１３）、ＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰ（配列番号１４）、ＱＰＫＡＡＰ（配列番号１５）、ＱＰＫＡＡＰＳＶＴＬＦＰＰ（配列番号１６）、ＡＫＴＴＰＰ（配列番号１７）、ＡＫＴＴＰＰＳＶＴＰＬＡＰ（配列番号１８）、ＡＫＴＴＡＰ（配列番号１９）、ＡＫＴＴＡＰＳＶＹＰＬＡＰ（配列番号２０）、ＡＳＴＫＧＰ（配列番号２１）、ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰ（配列番号２２）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２３）、ＧＥＮＫＶＥＹＡＰＡＬＭＡＬＳ（配列番号２４）、ＧＰＡＫＥＬＴＰＬＫＥＡＫＶＳ（配列番号２５）、ＧＨＥＡＡＡＶＭＱＶＱＹＰＡＳ（配列番号２６）が含まれるが、これらに限定されない。
【０２７７】
「免疫グロブリン定常ドメイン」は重鎖または軽鎖定常ドメインを指す。ヒトＩｇＧ重鎖及び軽鎖定常ドメインアミノ酸配列は当業界で公知である。
【０２７８】
本明細書中で使用されている用語「モノクローナル抗体」または「ｍＡｂ」は、実質的に均質の抗体の集団から得られる抗体を指す。すなわち、微量で存在し得る可能性ある天然に存在する突然変異を除いて集団を構成する個々の抗体は同一である。モノクローナル抗体は非常に特異的であり、単一抗原に対して指向される。更に、典型的には各種決定基（エピトープ）に対する各種抗体を含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、各ｍＡｂは抗原上の単一決定基に対して指向される。修飾語「モノクローナル」は特定方法による抗体の産生を必要とすると見なされない。
【０２７９】
本明細書中で使用されている用語「ヒト抗体」は、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列に由来する可変及び定常領域を有する抗体を含むと意図される。本発明のヒト抗体は、例えばＣＤＲ、特にＣＤＲ３においてヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列（例えば、インビトロでランダムまたは部位特異的変異誘発により、またはインビボで体細胞突然変異により誘導される突然変異）によりエンコードされないアミノ酸残基を含み得る。しかしながら、本明細書中で使用されている用語「ヒト抗体」は、別の哺乳動物種（例えば、マウス）の生殖細胞系由来のＣＤＲ配列がヒトフレームワーク配列にグラフト化されている抗体を含むと意図されない。
【０２８０】
本明細書中で使用されている用語「組換えヒト抗体」は、組換え手段により産生、発現、作成または単離されるすべてのヒト抗体、例えば宿主細胞にトランスフェクトした組換え発現ベクターを用いて発現させた抗体（以下のセクションＩＩに更に記載されている）；組換えコンビナトリアルヒト抗体ライブラリーから単離した抗体（Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  Ｈ．Ｒ．（１９９７）ＴＩＢ  Ｔｅｃｈ．，１５：６２−７０；Ａｚｚａｚｙ  Ｈ．  ａｎｄ  Ｈｉｇｈｓｍｉｔｈ  Ｗ．Ｅ．（２００２）Ｃｌｉｎ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，３５：４２５−４４５；Ｇａｖｉｌｏｎｄｏ  Ｊ．Ｖ．  ａｎｄ  Ｌａｒｒｉｃｋ  Ｊ．Ｗ．（２００２）ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，２９：１２８−１４５；Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  Ｈ．  ａｎｄ  Ｃｈａｍｅｓ  Ｐ．（２０００）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｔｏｄａｙ，２１：３７１−３７８）；ヒト免疫グロブリン遺伝子に対してトランスジェニックな動物（例えば、マウス）から単離した抗体（Ｔａｙｌｏｒ、Ｌ．Ｄ．ら（１９９２）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，２０：６２８７−６２９５；Ｋｅｌｌｅｒｍａｎｎ  Ｓ−Ａ．  ａｎｄ  Ｇｒｅｅｎ  Ｌ．Ｌ．（２００２）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１３：５９３−５９７；Ｌｉｔｔｌｅ  Ｍ．ら（２０００）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｔｏｄａｙ，２１：３６４−３７０を参照されたい）；またはヒト免疫グロブリン遺伝子配列の他のＤＮＡ配列へのスプライシングを含む他の手段により作成、発現、作成または単離される抗体を含むと意図される。組換えヒト抗体はヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列由来の可変及び定常領域を有する。しかしながら、ある実施形態では、組換えヒト抗体をインビトロ変異誘発にかけ（または、ヒトＩｇ配列に対してトランスジェニックな動物を使用するときにはインビボ体細胞変異誘発）、よって組換え抗体のＶＨ及びＶＬ領域のアミノ酸配列はヒト生殖細胞系ＶＨ及びＶＬ配列に由来し、関連しているが、インビボでヒト抗体生殖細胞系レパートリー内に本来存在していないことがある配列である。
【０２８１】
「親和性成熟された」抗体は、その１つ以上のＣＤＲに１つ以上の改変がなされており、これらの改変を持たない親抗体と比較して抗原に対する抗体の親和性が改善された抗体である。親和性成熟された抗体の例は標的抗原に対してナノモルまたはピコモルすらの親和性を有する。親和性成熟された抗体は当業界で公知の手法により産生される。Ｍａｒｋｓら，ＢｉｄｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１０：７７９−７８３（１９９２）はＶＨ及びＶＬドメインシャフリングによる親和性成熟を記載している。ＣＤＲ及び／またはフレームワーク残基のランダム変異誘発はＢａｒｂａｓら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９１：３８０９−３８１３（１９９４）；Ｓｃｈｉｅｒら，Ｇｅｎｅ，１６９：１４７−１５５（１９９５）；Ｙｅｌｔｏｎら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５５：１９９４−２００４（１９９５）；Ｊａｃｋｓｏｎら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５４（７）：３３１０−９（１９９５）；Ｈａｗｋｉｎｓら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２６：８８９−８９６（１９９２）に記載されており、活性強化アミノ酸残基を用いる選択的変異誘発位置、接触または過剰変異位置での選択的変異誘発は米国特許ＵＳ  ６９１４１２８Ｂ１に記載されている。
【０２８２】
用語「キメラ抗体」は、１つの種由来の重鎖及び軽鎖可変領域配列及び別の種由来の定常領域配列を含む抗体、例えばヒト定常領域に連結させたマウス重鎖及び軽鎖可変領域を有する抗体を指す。
【０２８３】
用語「ＣＤＲグラフト化抗体」は、１つの種由来の重鎖及び軽鎖可変領域配列を含むが、ＶＨ及び／またはＶＬの１つ以上のＣＤＲ領域の配列が別の種のＣＤＲ配列で置換されている抗体、例えば１つ以上のマウスＣＤＲ（例えば、ＣＤＲ３）がヒトＣＤＲ配列で置換されているマウス重鎖及び軽鎖可変領域を有している抗体を指す。
【０２８４】
用語「ヒト化抗体」は、非ヒト種（例えば、マウス）由来の重鎖及び軽鎖可変領域配列を含むが、ＶＨ及び／またはＶＬ配列の少なくとも一部がより「ヒト様」であるように、すなわちヒト生殖細胞系可変配列により類似するように改変されている抗体を指す。ヒト化抗体の１つのタイプは、対応する非ヒトＣＤＲ配列を置換するためにヒトＣＤＲ配列が非ヒトＶＨ及びＶＬ配列に導入されているＣＤＲグラフト化抗体である。また、「ヒト化抗体」は、当該抗原に免疫特異的に結合し、実質的にヒト抗体のアミノ酸配列を有するフレームワーク（ＦＲ）領域及び実質的に非ヒト抗体のアミノ酸配列を有する相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む抗体、或いはそのバリアント、誘導体、アナログまたは断片である。ＣＤＲの関連で、本明細書中で使用されている用語「実質的に」は、非ヒト抗体ＣＤＲのアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を有するＣＤＲを指す。ヒト化抗体は、ＣＤＲ領域のすべてまたは実質的にすべてが非ヒト免疫グロブリン（すなわち、ドナー抗体）のものに相当し、フレームワーク領域のすべてまたは実質的にすべてがヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のものである少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメイン（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ＦａｂＣ、Ｆｖ）の実質的にすべてを含む。実施形態では、ヒト化抗体は免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的にはヒト免疫グロブリンの定常領域の少なくも一部をも含む。幾つかの実施形態では、ヒト化抗体は軽鎖及び重鎖の少なくとも可変ドメインの両方を含む。抗体は重鎖のＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、ＣＨ３及びＣＨ４領域をも含み得る。幾つかの実施形態では、ヒト化抗体はヒト化軽鎖のみを含む。幾つかの実施形態では、ヒト化抗体はヒト化重鎖のみを含む。特定実施形態では、ヒト化抗体は軽鎖のヒト化可変ドメイン及び／またはヒト化重鎖のみを含む。
【０２８５】
用語「カバットナンバリング」、「カバット定義」及び「カバットラベリング」は本明細書中で互換可能に使用される。当業界で認識されているこれらの用語は、抗体またはその抗原結合部分の重鎖及び軽鎖可変領域中の他のアミノ酸残基よりもより可変性（すなわち、高度可変性）であるアミノ酸残基をナンバリングするシステムを指す（Ｋａｂａｔら（１９７１）Ａｎｎ．ＮＹ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，１９０：３８２−３９１及びＫａｂａｔ，Ｅ．Ａ．ら（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，第５版，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２）。重鎖可変領域の場合、高度可変領域はＣＤＲ１についてアミノ酸位置３１〜３５、ＣＤＲ２についてアミノ酸位置５０〜６５、及びＣＤＲ３についてアミノ酸位置９５〜１０２の範囲である。軽鎖可変領域の場合、高度可変領域はＣＤＲ１についてアミノ酸位置２４〜３４、ＣＤＲ２についてアミノ酸位置５０〜５６、及びＣＤＲ３についてアミノ酸位置８９〜９７の範囲である。
【０２８６】
本明細書中で使用されている用語「ＣＤＲ」は、抗体可変配列内の相補性決定領域を指す。重鎖及び軽鎖の可変領域の各々に可変領域が各々ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３と称されている３つのＣＤＲがある。本明細書中で使用されている用語「ＣＤＲ組」は、抗原を結合し得る単一可変領域中に存在する３つのＣＤＲの群を指す。これらのＣＤＲの正確な境界は各種システムに従って相違的に規定される。Ｋａｂａｔが記載しているシステム（Ｋａｂａｔら，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ(１９８７）及び（１９９１））は、抗体の可変領域に対して適用可能な明白な残基ナンバリングを与えるだけでなく、３つのＣＤＲを規定する正確な残基境界も与える。これらのＣＤＲはカバットＣＤＲと称され得る。Ｃｈｏｔｈｉａ及び同僚（Ｃｈｏｔｈｉａ  ＆  Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９６：９０１−９１７（１９８７）及びＣｈｏｔｈｉａら，Ｎａｔｕｒｅ，３４２：８７７−８８３（１９８９））は、アミノ酸配列のレベルで大きな相違があるにもかかわらず、カバットＣＤＲ内のあるサブ部分はほぼ同一のペプチド骨格コンフォメーションを採用していることを知見した。これらのサブ部分はＬ１、Ｌ２及びＬ３、またはＨ１、Ｈ２及びＨ３と称され、ここで“Ｌ”及び“Ｈ”はそれぞれ軽鎖及び重鎖領域を示す。これらの領域はコチアＣＤＲと称され得、カバットＣＤＲと重複する境界を有している。カバットＣＤＲと重複するＣＤＲを規定する他の境界は、Ｐａｄｌａｎ（ＦＡＳＥＢ  Ｊ．，９：１３３−１３９（１９９５））及びＭａｃＣａｌｌｕｍ（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２６２（５）：７３２−４５（１９９６））により記載されている。さらに他のＣＤＲ境界規定は本明細書中のシステムの１つに厳密に従わなくてもよいが、それでもカバットＣＤＲと重複しており、特定の残基、残基の群、または全ＣＤＲすら抗原結合に有意な影響を与えないという予想または実験的所見にてらして短縮または延長させることができる。ある実施形態はカバットまたはコヒト定義のＣＤＲを使用しているが、本明細書中で使用される方法はこれらのシステムのいずれかに従って規定されるＣＤＲを利用し得る。
【０２８７】
本明細書中で使用されている用語「フレームワーク」または「フレームワーク配列」は、可変領域からＣＤＲを差し引いた残りの配列を指す。ＣＤＲ配列の正確な定義は各種システムにより決定され得るが、フレームワーク配列の意味は対応して異なって解釈される。６つのＣＤＲ（軽鎖のＣＤＲ−Ｌ１、−Ｌ２及び−Ｌ３、並びに重鎖のＣＤＲ−Ｈ１、−Ｈ２及び−Ｈ３）は軽鎖及び重鎖上のフレームワーク領域を各々の鎖上の４つのサブ領域（ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３及びＦＲ４）に分割し、ＣＤＲ１はＦＲ１とＦＲ２の間に位置し、ＣＤＲ２はＲ２とＦＲ３の間に位置し、ＣＤＲ３はＦＲ３とＦＲ４の間に位置する。特定のサブ領域をＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３またはＦＲ４と特定しないが、他の方法により称されるフレームワーク領域は単一の天然に存在する免疫グロブリン鎖の可変領域内の合わさったＦＲを表す。本明細書中で使用されているＦＲは４つのサブ領域の１つを表し、ＦＲはフレームワーク領域を構成する４つのサブ領域の２つ以上を表す。
【０２８８】
本明細書中で使用されている用語「生殖細胞系抗体遺伝子」または「遺伝子断片」は、特定免疫グロブリンの発現のために遺伝子再配列及び成熟をもたらす成熟プロセスを受けていない非リンパ様細胞によりエンコードされる免疫グロブリン配列を指す（例えば、Ｓｈａｐｉｒｏら，Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２２（３）：１８３−２００（２００２）；Ｍａｒｃｈａｌｏｎｉｓら，Ａｄｖ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．，４８４：１３−３０（２００１）を参照されたい）。本発明の各種実施形態により与えられる作用効果の１つは、生殖細胞系抗体遺伝子は成熟抗体遺伝子よりも種の中の個体の必須アミノ酸配列構造特性を保存しそうであり、よってその種中で治療のために使用する場合外来ソース由来と認識されにくいという認識から生ずる。
【０２８９】
本明細書中で使用されている用語「中和する」は、結合タンパク質が抗原に特異的に結合するとき抗原の生物活性を相殺することを指す。実施形態では、中和結合タンパク質はサイトカインに結合し、その生物活性を少なくとも約２０％、４０％、６０％、８０％、８５％またはそれ以上低下させる。
【０２９０】
用語「活性」は、ＤＶＤ−Ｉｇの２つ以上の抗原に対する結合特異性及び親和性のような活性を含む。
【０２９１】
用語「エピトープ」は、免疫グロブリンまたはＴ細胞受容体に対して特異的に結合し得るポリペプチド決定基を含む。ある実施形態では、エピトープ決定基は分子（例えば、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリルまたはスルホニル）の化学的に活性な表面基を含み、ある実施形態では特定の３次元構造特性及び／または特定の電荷特性を有し得る。エピトープは抗体により結合される抗原の領域である。ある実施形態では、抗体はタンパク質及び／またはマクロ分子の複合混合物中のその標的抗原を認識すると抗原に特異的に結合すると言われている。抗体が交差競合する（１つの抗体が他の抗体の結合またはモジュレート作用を妨げる）ならば、抗体は「同一エピトープに結合する」と言われている。加えて、エピトープの構造定義（重複、類似、同一）は情報を与えるが、機能定義は構造（結合）及び機能（モジュレーション、競合）パラメーターを含んでいるのでしばしばより適切である。
【０２９２】
本明細書中で使用されている用語「表面プラズモン共鳴」は、バイオセンサーマトリックス内のタンパク質濃度の変化を例えばＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）システム（ＢＩＡｃｏｒｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ＡＢ，ａ  ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  ｃｏｍｐａｎｙ，スウェーデン国ウプサラ及びニュージャージー州ピスカタウェイ）を用いて検出することによりリアルタイム生物特異的相互作用を分析することができる光学現象を指す。更なる説明のために、Ｊｏｎｓｓｏｎ，Ｕ．ら（１９９３）Ａｎｎ．Ｂｉｏｌ．Ｃｌｉｎ．，５１：１９−２６；Ｊｏｎｓｓｏｎ，Ｕ．ら(１９９１）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，１１：６２０−６２７；Ｊｏｈｎｓｓｏｎ，Ｂ．ら（１９９５）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｒｅｃｏｇｎｉｔ．，８：１２５−１３１；及びＪｏｈｎｎｓｏｎ，Ｂ．ら（１９９１）Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１９８：２６８−２７７を参照されたい。
【０２９３】
本明細書中で使用されている用語「Ｋｏｎ」は、当業界で公知のように例えば抗体／抗原複合体を形成するための結合タンパク質（例えば、抗体）の抗原に対する会合に対するオン速度定数を指す。「Ｋｏｎ」は、本明細書中で互換可能に使用されている用語「会合速度定数」、すなわち「ｋａ」によっても公知である。抗体のその標的抗原に対する結合速度または抗体と抗原間の複合体形成速度を示すこの値は以下の式によっても示される：
抗体（“Ａｂ”）＋抗原（“Ａｇ”）→Ａｂ−Ａｇ
本明細書中で使用されている用語「Ｋ０ｆｆ」は、当業界で公知のように例えば抗体／抗原複合体からの結合タンパク質（例えば、抗体）の解離に対するオフ速度定数、すなわち「解離速度定数」を指す。この値は、抗体のその標的抗原からの解離速度、または以下の式：
Ａｂ＋Ａｇ←Ａｂ−Ａｇ
により示すＡｂ−Ａｇ複合体の遊離抗体及び抗原への経時的分離を示す。
【０２９４】
本明細書中で使用されている用語「ＫＤ」は「平衡解離定数」を指すと意図され、平衡状態での滴定測定で得られる値または解離速度定数（ｋｏｆｆ）を会合速度定数（ｋｏｎ）で割ることにより得られる値を指す。会合速度定数、解離速度定数及び平衡解離定数は、抗体の抗原に対する結合親和性を表すために使用されている。会合速度定数及び解離速度定数の測定方法は当業界で公知である。蛍光に基づく技術を用いると、高い感受性及び平衡状態の生理学的バッファー中のサンプルを試験する能力が与えられる。他の実験アプローチ及び器具、例えばＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）（生体分子相互作用分析）アッセイを使用することができる（例えば、スウェーデン国ウプサラに所在のＢＩＡｃｏｒｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ＡＢ，ａ  ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  ｃｏｍｐａｎｙから入手可能な計器）。加えて、Ｓａｐｉｄｙｎｅ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ（アイダホ州ボイジ）から入手可能なＫｉｎＥｘＡ（登録商標）（Ｋｉｎｅｔｉｃ  Ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ  Ａｓｓａｙ）アッセイも使用できる。
【０２９５】
「標識」及び「検出可能な標識」は、例えば特異的結合対のメンバー（例えば、抗体及びアナライト）間の反応を検出可能とするように特異的結合パートナー（例えば、抗体またはアナライト）に結合している部分を意味し、このように標識された特異的結合パートナー（例えば、抗体またはアナライト）は「検出可能に標識されている」と称される。よって、本明細書中で使用されている用語「標識された結合タンパク質」は、結合タンパク質の同定を与える組み込んだ標識を有するタンパク質を指す。実施形態では、標識は目視または器具、例えば放射標識されたアミノ酸の取り込みまたはマークしたアビジン（例えば、光学または比色方法により検出され得る蛍光マーカーまたは酵素活性を含有するストレプトアビジン）により検出され得るビオチニル部分のポリペプチドへの結合により検出可能なシグナルを生じ得る検出可能なマーカーである。ポリペプチドに対する標識の例には、放射性同位元素または放射性核種（例えば、３Ｈ、１４Ｃ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１７７Ｌｕ、１６６Ｈｏまたは１５３Ｓｍ）；色素原、蛍光標識（例えば、ＦＩＴＣ、ローダミン、ランタニドリン）、酵素標識（例えば、ホースラディッシュペルオキシダーゼ、ルシフェラーゼ、アルカリホスファターゼ）；化学発光マーカー；ビオチニル基；第２リポーター（例えば、ロイシンジッパー対配列、第２抗体に対する結合部位、金属結合ドメイン、エピトープタグ）により認識される前決定したポリペプチドエピトープ；及び磁気物質（例えば、ガドリニウムキレート）が含まれるが、これらに限定されない。イムノアッセイのために一般的に使用されている標識の代表例は、アクリジニウム化合物のように光を発する部分、フルオレセインのような蛍光を発する部分を含む。他の標識は本明細書中に記載されている。これに関して、部分それ自体は検出可能に標識されていなくてもよいが、別の部分と反応すると検出可能になり得る。「検出可能に標識されている」の使用は後者のタイプの検出可能な標識を包含すると意図される。
【０２９６】
用語「コンジュゲート」は、第２化学部分（例えば、治療薬または細胞傷害薬）に化学的に連結している結合タンパク質（例えば、抗体）を指す。用語「剤（薬、物質）」は、化合物、化合物の混合物、生物学的マクロ分子、または生物学的材料から作成される抽出物を指すべく本明細書において使用されている。実施形態では、治療薬または細胞傷害薬には、百日咳毒素、タキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１−デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロパノロール及びピューロマイシン、並びにそのアナログまたはホモログが含まれるが、これらに限定されない。イムノアッセイの関連で使用する場合、コンジュゲート抗体は検出抗体として使用する検出可能に標識された抗体であり得る。
【０２９７】
本明細書中で使用されている用語「結晶」及び「結晶化されている」は、結晶の形態で存在している結合タンパク質（例えば、抗体）またはその抗原結合部分を指す。結晶は非晶質固体状態または液晶状態のような他の形態と区別される固体状態の１つの形態である。結晶は原子、イオン、分子（例えば、抗体のようなタンパク質）または分子アセンブリ（例えば、抗原／抗体複合体）の規則的、反復、三次元アレーから構成される。これらの三次元アレーは当分野で十分理解されている特定の数学的関係に従って配置される。結晶中で反復される基本的単位、すなわち構成ブロックは非対称単位と呼ばれる。所与の十分に規定された結晶学的対称に一致する配置中の非対称単位の反復により、結晶の「単位セル」が与えられる。すべての三次元での規則的移動による単位セルの反復により、結晶が生ずる。Ｇｉｅｇｅ，Ｒ．  ａｎｄ  Ｄｕｃｒｕｉｘ，Ａ．Ｂａｒｒｅｔｔ，Ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ、ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，２ｎｄ  ｅａ．，ｐ．２０  １−１６，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９９９）を参照されたい。
【０２９８】
用語「ポリヌクレオチド」は、リボヌクレオチドまたはデオキシヌクレオチドのいずれでかの２つ以上のヌクレオチドのポリマー形態、または各タイプのヌクレオチドの修飾形態を意味する。この用語はＤＮＡの一本鎖及び二本鎖形態を含む。
【０２９９】
用語「単離ポリヌクレオチド」は、（例えば、ゲノム、ｃＤＮＡまたは合成起源、或いはその幾つかかの組合せの）ポリヌクレオチドを意味し、その起源により「単離ポリヌクレオチド」は「単離ポリヌクレオチド」が天然で存在するポリヌクレオチドの全部または一部と結合しておらず；天然で連結していないポリヌクレオチドに機能し得る形で連結しており；または、大きな配列の一部として天然に存在していない。
【０３００】
用語「ベクター」は、連結されている別の核酸を輸送することができる核酸分子を指すと意図される。１つのタイプのベクターは、追加ＤＮＡセグメントが連結され得る環状二本鎖ＤＮＡループを指す「プラスミド」である。別のタイプのベクターは、追加のＤＮＡセグメントがウイルスゲノムに連結され得るウイルスベクターである。あるベクターは、該ベクターが導入されている宿主細胞において自律複製し得る（例えば、複製の細菌起源を有する細菌ベクター及びエピソーム哺乳動物ベクター）。他のベクター（例えば、非エピソーム哺乳動物ベクター）は宿主細胞に導入したときその宿主細胞のゲノムに組み込まれ得、よって宿主細胞ゲノムに沿って複製される。更に、あるベクターは機能し得る形で連結された遺伝子の発現を指向させることができる。前記ベクターを本明細書では「組換え発現ベクター」（または、単に「発現ベクター」）と称する。通常、組換えＤＮＡ技術において有用な発現ベクターはしばしばプラスミドの形態を有している。本明細書中、「プラスミド」及び「ベクター」は互換可能に使用され得、プラスミドは最も一般的に使用されているベクターの形態である。しかしながら、本発明は、均等の機能を発揮する他の形態の発現ベクター、例えばウイルスベクター（例えば、複製欠陥レトロウイルス、アデノウイルス及びアデノ随伴ウイルス）を含むと意図される。
【０３０１】
用語「機能し得る形で連結された」は、記載されている成分が意図する様式で機能し得る関係にある並置を指す。コード配列に「機能し得る形で連結された」制御配列は、コード配列の発現が制御配列と適合性の条件下で達成されるように連結されている。「機能し得る形で連結された」配列には、当該遺伝子に連続する発現制御配列及び当該遺伝子を制御するようにトランスでまたは少し離れて作用する発現制御配列が含まれる。本明細書中で使用されている用語「発現制御配列」は、連結されているコード配列の発現及びプロセッシングを生起するために必要なポリヌクレオチド配列を指す。発現制御配列には、適切な転写開始、終結、プロモーター及びエンハンサー配列；効率的なＲＮＡプロセッシングシグナル、例えばスプライシング及びポリアデニル化シグナル；細胞質ｍＲＮＡを安定化させる配列；翻訳効率を高める配列（すなわち、コザックのコンセンサス配列）；タンパク質安定性を高める配列；及び所望ならば、タンパク質分泌を高める配列が含まれる。制御配列の種類は宿主生物に依存して異なる。原核生物では、制御配列は通常プロモーター、リボソーム結合部位及び転写終結配列を含む。真核生物では、制御配列は通常プロモーター及び転写終結配列を含む。用語「制御配列」はその存在が発現及びプロセッシングのために必須である成分を含むと意図され、その存在が有利である追加の成分、例えばリーダー配列及び融合パートナー配列をも含み得る。
【０３０２】
「形質転換」は、外来性ＤＮＡを宿主細胞に入れるプロセスを指す。形質転換は当業界で公知の各種方法を用いて自然または人工条件下で起こり得る。形質転換は外来核酸配列を原核または真核宿主細胞に挿入するための公知方法に頼り得る。方法は形質転換される宿主細胞に基づいて選択され、その中にはウイルス感染、エレクトロポレーション、リポフェクション及び粒子衝突が含まれるが、これらに限定されない。「形質転換された」細胞には、挿入されたＤＮＡが自律複製プラスミドとしてまたは宿主染色体の一部として複製できる安定的に形質転換された細胞が含まれる。挿入されたＤＮＡまたはＲＮＡを限られた期間一時的に発現する細胞も含まれる。
【０３０３】
用語「組換え宿主細胞」（または、単に「宿主細胞」）は、外来性ＤＮＡが導入されている細胞を指すと意図される。この用語は特定の被験者細胞だけでなく、前記細胞の子孫を指すと意図されると理解されるべきである。突然変異または環境的影響のためにある修飾は次世代で起こり得るので、子孫は実際親細胞と同一でないことがあるが、なお本明細書中で使用されている用語「宿主細胞」の範囲に含まれる。実施形態では、宿主細胞には生物界から選択される原核及び真核細胞が含まれる。別の実施形態では、真核細胞には原生生物、真菌、植物及び動物細胞が含まれる。別の実施形態では、宿主細胞には原核細胞株大腸菌；哺乳動物細胞株ＣＨＯ、ＨＥＫ  ２９３、ＣＯＳ、ＮＳ０、ＳＰ２及びＰＥＲ．Ｃ６；昆虫細胞株Ｓｆ９；及び真菌細胞サッカロミセス・セリビシアエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ．）が含まれるが、これらに限定されない。
【０３０４】
組換えＤＮＡ、オリゴヌクレオチド合成、組織培養及び形質転換（例えば、エレクトロポレーション、リポフェクション）のために標準技術を使用し得る。酵素反応及び精製技術は製造業者の仕様書に従って、または当業界で通常実施されているかまたは本明細書中に記載されているように実施され得る。前記した技術及び手順は通常当業界で公知の慣用方法に従って、本明細書中に引用され、検討されている各種一般文献及びより具体的な文献に記載されているように実施され得る。例えば、参照により本明細書に組み入れるＳａｍｂｒｏｏｋら，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（第２版，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（１９８９））を参照されたい。
【０３０５】
当業界で公知の「トランスジェニック生物」は、トランスジーンを含む細胞を有する生物を指し、生物（または、生物の先祖）に導入されたトランスジーンは生物では本質的に発現しないポリペプチドを発現する。「トランスジーン」は、トランスジェニック生物の１つ以上の細胞型または組織におけるコード化遺伝子産物の発現を指向すべくトランスジェニック生物を発生させる細胞のゲノムに安定的に機能し得る形で組み込まれるＤＮＡ構築物である。
【０３０６】
用語「調節する」及び「モジュレートする」は互換可能に使用されており、本明細書中で使用されているこれらの用語は当該分子の活性（例えば、サイトカインの生物活性）の変化または改変を指す。モジュレーションは当該分子のある活性または機能の大きさの増加または低下であり得る。分子の活性及び機能の例には、結合特性、酵素活性、細胞受容体活性化及びシグナル伝達が含まれるが、これらに限定されない。
【０３０７】
相応して、用語「モジュレーター」は当該分子の活性または機能（例えば、サイトカインの生物活性）を変化または改変させることができる化合物である。例えば、モジュレーターは、分子のある活性または機能の大きさをモジュレーターの非存在下で観察される該活性または機能の大きさと比較して増加または低下させ得る。ある実施形態では、モジュレーターは分子の少なくとも１つの活性または機能の大きさを低下させるインヒビターである。インヒビターの例には、タンパク質、ペプチド、抗体、ペプチボディ、炭水化物または小さい有機分子が含まれるが、これらに限定されない。ペプチボディは、例えばＷＯ  ０１／８３５２５に記載されている。
【０３０８】
用語「アゴニスト」は、当該分子と接触したとき分子のある活性または機能の大きさをアゴニストの非存在下で観察される該活性または機能の大きさと比較して増加させるモジュレーターを指す。当該具体的アゴニストには、ポリペプチド、核酸、炭水化物、または抗原に結合する他の分子が含まれるが、これらに限定されない。
【０３０９】
用語「アンタゴニスト」または「インヒビター」は、当該分子と接触したとき分子のある活性または機能の大きさをアゴニストの非存在下で観察される該活性または機能の大きさと比較して低下させるモジュレーターを指す。当該具体的アンタゴニストには、抗原の生物学的または免疫学的活性をブロックするまたはモジュレートするものが含まれる。抗原のアンタゴニスト及びインヒビターには、タンパク質、核酸、炭水化物、または抗原に結合する他の分子が含まれるが、これらに限定されない。
【０３１０】
本明細書中で使用されている用語「有効量」は、障害またはその１つ以上の症状の重症度及び／または期間を軽減または改善させる、障害の進行を予防する、障害を後退させる、障害に関連する１つ以上の症状の再発、発生、発症または進行を予防する、障害を検出する、或いは別の治療（例えば、予防薬または治療薬）の１つ以上の予防または治療効果を強化または向上させるのに十分な治療の量を指す。
【０３１１】
「患者」及び「被験者」は、動物、例えば霊長類（例えば、ヒト、サル及びチンパンジー）、非霊長類（例えば、ウシ、ウマ、ラクダ、ラマ、ウマ、ヤギ、家兎、ヒツジ、ハムスター、モルモット、ネコ、イヌ、ラット、マウス、クジラ）を含めた哺乳動物、鳥類（例えば、アヒルまたはガチョウ）及びサメを指すべく本明細書において互換可能に使用され得る。好ましくは、患者または被験者はヒト、例えば疾患、障害または状態のために治療または評価しようとするヒト、疾患、障害または状態のリスクのあるヒト、疾患、障害または状態を有するヒト及び／または疾患、障害または状態のために治療を受けているヒトである。
【０３１２】
本明細書中で使用されている用語「サンプル」は広義に使用されている。本明細書中で使用されている「生体」サンプルには、ある量の生き物または以前生きていた物由来の物質の量が含まれるが、これらに限定されない。生き物には、ヒト、マウス、ラット、サル、イヌ、家兎及び他の動物が含まれるが、これらに限定されない。前記物質には、血液（例えば、全血）、血漿、血清、尿、羊水、滑液、内皮細胞、白血球、単球、他の細胞、臓器、組織、骨髄、リンパ節及び脾臓が含まれるが、これらに限定されない。
【０３１３】
「成分」、「複数の成分」及び「少なくとも１つの成分」は、通常捕捉抗体、検出またはコンジュゲート抗体、対照、カリブレーター、一連のカリブレーター、感受性パネル、容器、バッファー、希釈剤、塩、酵素、酵素に対する補因子、検出試薬、前処理試薬／溶液、基質（例えば、溶液として）、停止液、及び本明細書中に記載されている方法及び当業界で公知の他の方法に従って被験サンプル（例えば、患者の尿、血清または血漿サンプル）をアッセイするためのキット中に含まれ得るものを指す。よって、本発明の関連で「少なくとも１つの成分」、「成分」及び「複数の成分」には、場合により例えば抗アナライト（例えば、抗ポリペプチド）抗体に結合させることにより固体支持体上に固定化されている上記したポリペプチドまたは他のアナライト、例えばアナライト（例えば、ポリペプチド）を含む組成物が含まれ得る。幾つかの成分は溶解しているかまたはアッセイに使用すべく再構成するために凍結乾燥されている。
【０３１４】
「対照」は、アナライトでないことが公知の組成物（「ネガティブ対照」）またはアナライトを含んでいることが公知の組成物（「ポジティブ対照」）を指す。ポジティブ対照は公知濃度のアナライトを含み得る。「対照」、「ポジティブ対照」及び「カリブレーター」は、公知濃度のアナライトを含む組成物を指すべく本明細書において互換可能に使用され得る。「ポジティブ対照」は、アッセイ性能特性を確立するために使用され得、試薬（例えば、アナライト）の完全性の有用な指標である。
【０３１５】
「前決定したカットオフ」及び「前決定したレベル」は、通常前決定したカットオフ／レベルに対してアッセイ結果を比較することにより診断／予後／治療有効性の結果を評価するために使用されるアッセイカットオフ値を指し、前記した前決定したカットオフ／レベルは各種臨床パラメーター（例えば、疾患の重症度、進行／非進行／改善等）に既にリンクまたは関連している。本明細書は前決定したレベルの例を記載しているが、カットオフ値がイムノアッセイの種類（例えば、使用する抗体等）に依存して変動し得ることは公知である。更に、本明細書の開示に基づいて他のイムノアッセイに対するイムノアッセイ特異的カットオフ値を得るために本明細書の開示内容を他のアッセイに対して改作させることは当業者の技量の範囲内である。前決定したカットオフ／レベルの正確な値はアッセイ間で変動し得るが、本明細書中に記載されている相関関係（存在するならば）が通常適応され得る。
【０３１６】
本明細書中に記載されている診断アッセイにおいて使用される「前処理試薬」、例えば溶解、沈殿及び／または可溶化試薬は、被験サンプル中に存在する細胞を溶解する及び／またはアナライトを可溶化するものである。前処理は、本明細書中に更に記載するようにすべてのサンプルにとって必須でない。特に、アナライト（例えば、当該ポリペプチド）を可溶化すると、アナライトがサンプル中に存在する内因性結合タンパク質から放出し得る。前処理試薬は均質であっても（分離ステップを必要としない）、不均質であってもよい（分離ステップを必要とする）。不均質前処理試薬を使用する場合、被験サンプルから沈殿したアナライト結合タンパク質を除去した後、アッセイの次ステップにかける。
【０３１７】
本明細書中に記載されているイムノアッセイ及びキットの関連で、「品質コントロール試薬」には、カリブレーター、対照及び感受性パネル含まれるが、これらに限定されない。典型的には（例えば、１つ以上、例えば複数の）「カリブレーター」または「標準」がアナライト（例えば、抗体またはアナライト）の濃度を内挿するための較正曲線を作成するために使用される。或いは、前決定した正／負のカットオフに近い単一カリブレーターを使用してもよい。「感受性パネル」を構成するように複数のカリブレーター（すなわち、２つ以上のカリブレーターまたは異なる量の１つ以上のカリブレーター）を一緒に使用してもよい。
【０３１８】
「リスク」は、特定事象が現在または将来の幾つかの時点で生ずる可能性または見込みを指す。「リスク層化」は、医師が患者を特定の疾患、障害または状態を発症するリスクが低、中、高または最高であると分類できる公知の臨床リスク要因のアレイを指す。
【０３１９】
特異的結合対のメンバー（例えば、抗原（または、その断片）と抗体（または、その抗原反応性断片）間の相互作用の関連で、「特異的」及び「特異性」は相互作用の選択的反応性を指す。フレーズ「特異的に結合する」及び類似のフレーズは、抗体（または、その抗原反応性断片）がアナライト（または、その断片）に特異的に結合するが、他のものに特異的に結合しない能力を指す。
【０３２０】
「特異的結合パートナー」は特異的結合対のメンバーである。特異的結合対は相互に化学的または物理的手段を介して特異的に結合する２つの異なる分子からなる。従って、一般的なイムノアッセイの抗原−抗体特異的結合対に加えて、他の特異的結合対には、ビオチンとアビジン（または、ストレプトアビジン）、炭水化物とレクチン、相補的ヌクレオチド配列、エフェクターと受容体分子、補因子と酵素、酵素阻害剤と酵素、等が含まれ得る。更に、特異的結合対には、元の特異的結合メンバーのアナログ、例えばアナライトアナログであるメンバーが含まれ得る。免疫反応性の特異的結合メンバーには、単離されたまたは組換え産生された抗原、抗原断片、及びモノクローナル及びポリクローナル抗体を含めた抗体、並びにその複合体、断片及び（バリアントの断片を含めた）バリアントが含まれる。
【０３２１】
本明細書中で使用されている「バリアント」は、所与のポリペプチド（例えば、ＩＬ−１８、ＢＮＰ、ＮＧＡＬまたはＨＩＶポリペプチド、または抗ポリペプチド抗体）とはアミノ酸の付加（例えば、挿入）、欠失または保存的置換によりアミノ酸配列の点で異なるが、所与のポリペプチドの生物活性を保持しているポリペプチドを意味する（例えば、バリアントＩＬ−１８はＩＬ−１８に対する結合に関して抗ＩＬ−１８抗体と競合し得る）。
アミノ酸の保存的置換、すなわちアミノ酸の類似の特性（例えば、親水性及び荷電領域の分布度）を有する別のアミノ酸での置換は、典型的には当業界ではマイナーチェンジを伴うと認識されている。これらのマイナーチェンジは、一部には当業界で理解されているように（例えば、Ｋｙｔｅら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１５７：１０５−１３２（１９８２）を参照されたい）アミノ酸のハイドロパティー指標を考慮することにより同定され得る。アミノ酸のハイドロパティー指標は疎水性及び電荷の検討に基づいている。当業界では、類似のハイドロパティー指標を有するアミノ酸が置換されても、タンパク質機能は保持されることが公知である。１つの態様で、±２のハイドロパティー指標を有するアミノ酸を置換する。アミノ酸の親水性は生物学的機能を保持しているタンパク質を生ずる置換を明らかにするためにも使用され得る。ペプチドの関連で、アミノ酸の親水性を考慮すると、抗原性及び免疫原性とうまく相関していると報告されている（例えば、参照により本明細書に組み入れる米国特許Ｎｏ．４，５５４，１０１を参照されたい）有用な尺度であるペプチドの最大の局所平均親水性を計算することができる。類似の親水性値を有するアミノ酸を置換すると、当業界で理解されているように生物活性（例えば、免疫原性）を保持しているペプチドが得られ得る。１つの態様で、置換は相互に±２内の親水性値を有するアミノ酸を用いて実施される。アミノ酸のハイドロパティー指標及び親水性値の両方が該アミノ酸の特定側鎖により影響される。所見と一致して、生物学的機能と適合するアミノ酸置換は疎水性、親水性、電荷、サイズ及び他の特性により明らかにされるアミノ酸の相対的類似性、特にアミノ酸の側鎖に依存していると理解される。「バリアント」は、例えばタンパク質分解、リン酸化または他の翻訳後修飾によりさまざまにプロセッシングされたが、なおその生物活性または抗原反応性（例えば、ＩＬ−１８に対して結合する能力）を保持しているポリペプチドまたはその断片を指すためにも使用され得る。本明細書中の「バリアント」の使用は、他の点で文脈上矛盾しない限りバリアントの断片を包含すると意図される。
【０３２２】
Ｉ．ＤＶＤ結合タンパク質の作成
本発明は、１つ以上の標的に結合し得る二重可変ドメイン結合タンパク質及びその作成方法に関する。実施形態では、結合タンパク質は、ＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎ（ここで、ＶＤ１は第１可変ドメインであり、ＶＤ２は第２可変ドメインであり、Ｃは定常ドメインであり、ＸＩはアミノ酸またはポリペプチドを表し、Ｘ２はＦｃ領域を表し、ｎは０または１である）からなるポリペプチド鎖を含む。本発明の結合タンパク質は各種技術を用いて作成され得る。本発明は、発現ベクター、宿主細胞及び結合タンパク質の作成方法を提供する。
【０３２３】
Ａ．親モノクローナル抗体の作成
ＤＶＤ結合タンパク質の可変ドメインは、当該抗原に結合し得るポリクローナル及びｍＡｂを含めた親抗体から得られ得る。これらの抗体は天然に存在していても、または組換えテクノロジーにより作成してもよい。
【０３２４】
ＭＡｂは、ハイブリドーマ、組換え体及びファージディスプレーテクノロジー、またはその組合せの使用を含めた当業界で公知の各種技術を用いて作成され得る。例えば、ｍＡｂは、当業界で公知の技術及び例えばＨａｒｌｏｗら，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，第２版，１９８８）；Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇら，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｔ−Ｃｅｌｌ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ，５６３−６８１（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８１）（これらの文献は全文参照により本明細書に組み入れる）が教示している技術を含めたハイブリドーマ技術を用いて産生され得る。本明細書中で使用されている用語「モノクローナル抗体」はハイブリドーマテクノロジーにより産生される抗体に限定されない。用語「モノクローナル抗体」は、抗体を産生する方法ではなく、真核、原核またはファージクローンを含めた単クローンから誘導される抗体を指す。以下の実施例１で検討しているように、ハイブリドーマを選択し、クローニングし、ロバストなハイブリドーマ増殖、高い抗体産生及び望ましい抗体特性を含めた所望の特性について更にスクリーニングにかける。ハイブリドーマはインビボで同系動物において、免疫系を欠く動物（例えば、ヌードマウス）において、或いはインビトロで細胞培養で培養し、増殖され得る。ハイブリドーマを選択し、クローニングし、増殖させる方法は当業者に公知である。特定実施形態では、ハイブリドーマはマウスハイブリドーマである。別の実施形態では、ハイブリドーマは非ヒト非マウス種（例えば、ラット、ヒツジ、ブタ、ヤギ、ウシまたはウマ）において産生される。別の実施形態では、ハイブリドーマは、ヒト非分泌型ミエローマを特定抗原に結合し得る抗体を発現し得るヒト細胞に融合させたヒトハイブリドーマである。
【０３２５】
組換えｍＡｂは、単一単離リンパ球から米国特許Ｎｏ．５，６２７，０５２、ＰＣＴ公開ＷＯ  ９２／０２５５１及びＢａｂｃｏｃｋ，Ｊ．Ｓ．ら（１９９６）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９３：７８４３−７８４８に記載されている当業界で選択リンパ球抗体方法（ＳＬＡＭ）と称される手順を用いても作成される。この方法では、当該抗体を分泌する単一細胞、例えば免疫化動物から誘導したリンパ球を同定し、重鎖及び軽鎖可変領域ｃＤＮＡを細胞から逆転写酵素−ＰＣＲにより救出し、その後これらの可変領域を適切な免疫グロブリン定常領域（例えば、ヒト定常領域）に関連して哺乳動物宿主細胞（例えば、ＣＯＳまたはＣＨＯ細胞）において発現させ得る。次いで、インビボで選択したリンパ球から誘導した増幅免疫グロブリン配列をトランスフェクトした宿主細胞は、例えば当該抗原に対する抗体を発現する細胞を単離するためにトランスフェトした細胞をパンニングすることによりインビトロで更なる分析及び選択を受け得る。増幅免疫グロブリン配列は更にインビトロで、例えばＰＣＴ公開ＷＯ  ９７／２９１３１及びＰＣＴ公開ＷＯ  ００／５６７７２に記載されているようなインビトロ親和性成熟方法により操作され得る。
【０３２６】
モノクローナル抗体は、ヒト免疫グロブリン遺伝子座の一部または全部を含む非ヒト動物を当該抗原で免疫化することによっても産生される。実施形態では、非ヒト動物は、ヒト免疫グロブリン遺伝子座の大きな断片を含み且つマウス抗体産生に欠けている工学操作したマウス系統であるＸＥＮＯＭＯＵＳＥトランスジェニックマウスである。例えば、Ｇｒｅｅｎら，Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，７：１３−２１（１９９４）；並びに米国特許Ｎｏｓ．５，９１６，７７１、５，９３９，５９８、５，９８５，６１５、５，９９８，２０９、６，０７５，１８１、６，０９１，００１、６，１１４，５９８及び６，１３０，３６４を参照されたい。また、１９９１年７月２５日に公開されたＷＯ  ９１／１０７４１、１９９４年２月３日に公開されたＷＯ  ９４／０２６０２、いずれも１９９６年１０月３１に公開されたＷＯ  ９６／３４０９６及びＷＯ  ９６／３３７３５、１９９８年４月２３日に公開されたＷＯ  ９８／１６６５４、１９９８年６月１１日に公開されたＷＯ  ９８／２４８９３、１９９８年１１月１２日に公開されたＷＯ  ９８／５０４３３、１９９９年９月１０日に公開されたＷＯ  ９９／４５０３１、１９９９年１０月２１日に公開されたＷＯ  ９９／５３０４９、２０００年２月２４日に公開されたＷＯ  ００／０９５６０及び２０００年６月２９日に公開されたＷＯ  ００／０３７５０４も参照されたい。ＸＥＮＯＭＯＵＳＥトランスジェニックマウスは完全ヒト抗体の成人様ヒトレパートリーを産生し、抗原特異的ヒトモノクローナル抗体を作成する。ＸＥＮＯＭＯＵＳＥトランスジェニックマウスは、ヒト重鎖遺伝子座及びｘ軽鎖遺伝子座のメガ塩基サイズの生殖細胞系コンフィギュレーションＹＡＣ断片の導入によりヒト抗体レパートリーの約８０％を含む。開示内容を参照により本明細書に組み入れるＭｅｎｄｅｚら，Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，１５：１４６−１５６（１９９７）；Ｇｒｅｅｎ  ａｎｄ  Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１８８：４８３−４９５（１９９８）を参照されたい。
【０３２７】
所望の結合特異性を有する抗体を同定するために抗体ライブラリーをスクリーニングにかけるインビトロ方法も親抗体を作成するために使用され得る。組換え抗体ライブラリーをスクリーニングするための方法は当業界で公知であり、その中には例えば各々の開示内容を参照により本明細書に組み入れるＬａｄｎｅｒら，米国特許Ｎｏ．５，２２３，４０９；Ｋａｎｇら，ＰＣＴ公開ＷＯ  ９２／１８６１９；Ｄｏｗｅｒら，ＰＣＴ公開ＷＯ  ９１／１７２７１；Ｗｉｎｔｅｒら，ＰＣＴ公開ＷＯ  ９２／２０７９１；Ｍａｒｋｌａｎｄら，ＰＣＴ公開ＷＯ  ９２／１５６７９；Ｂｒｅｉｔｌｉｎｇら，ＰＣＴ公開ＷＯ  ９３／０１２８８；ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら，ＰＣＴ公開ＷＯ  ９２／０１０４７；Ｇａｒｒａｒｄら，ＰＣＴ公開ＷＯ  ９２／０９６９０；Ｆｕｃｈｓら（１９９１）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，９：１３７０−１３７２；Ｈａｙら（１９９２）Ｈｕｍ．Ａｎｔｉｂｏｄ．Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ，３：８１−８５；Ｈｕｓｅら（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４６：１２７５−１２８１；ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら，Ｎａｔｕｒｅ（１９９０）３４８：５５２−５５４；Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓら（１９９３）ＥＭＢＯ  Ｊ．，１２：７２５−７３４；Ｈａｗｋｉｎｓら（１９９２）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２６：８８９−８９６；Ｃｌａｃｋｓｏｎら（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４−６２８；Ｇｒａｍら（１９９２）ＰＮＡＳ，８９：３５７６−３５８０；Ｇａｒｒａｄら（１９９１）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，９：１３７３−１３７７；Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら（１９９１）Ｎｕｃ．Ａｃｉｄ  Ｒｅｓ．，１９：４１３３−４１３７；及びＢａｒｂａｓら（１９９１）ＰＮＡＳ，８８：７９７８−７９８２；米国特許出願公開２００３０１８６３７４及びＰＣＴ公開ＷＯ  ９７／２９１３１に記載されている方法が含まれる。
【０３２８】
本発明の親抗体は、当業界で公知の各種ファージディスプレー方法を用いても作成され得る。ファージディスプレー方法では、機能的抗体ドメインはこれらをエンコードするポリヌクレオチド配列を有するファージディスプレーの表面上にディスプレーされる。特に、ファージはレパートリーまたはコンビナトリアル抗体ライブラリー（例えば、ヒトまたはマウス）から発現させた抗原−結合ドメインをディスプレーするために使用され得る。当該抗原に結合する抗原結合ドメインを発現するファージは、例えば標識抗原、または固体表面またはビーズに結合または捕捉させた抗原を用いて選択または同定され得る。これらの方法で使用されるファージは、典型的にはファージ遺伝子ＩＩＩまたは遺伝子ＶＩＩＩタンパク質に組換え融合させたＦａｂ、Ｆｖまたはジスルフィド安定化Ｆｖ抗体ドメインを有するファージから発現させたｆｄ及びＭ１３結合ドメインを含めた繊維状ファージである。本発明の抗体を作成するために使用され得るファージディスプレー方法の例には、各々全文参照により本明細書に組み入れるＢｒｉｎｋｍａｎら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，１８２：４１−５０（１９９５）；Ａｍｅｓら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，１８４：１７７−１８６（１９９５）；Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈら，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２４：９５２−９５８（１９９４）；Ｐｅｒｓｉｃら，Ｇｅｎｅ，１８７，９−１８（１９９７）；Ｂｕｒｔｏｎら，Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，５７：１９１−２８０（１９９４）；ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＧＢ９１／０１１３４；ＰＣＴ公開ＷＯ  ９０／０２８０９；ＷＯ  ９１／１０７３７；ＷＯ  ９２／０１０４７；ＷＯ  ９２／１８６１９；ＷＯ  ９３／１１２３６；ＷＯ  ９５／１５９８２；ＷＯ  ９５／２０４０１；及び米国特許Ｎｏｓ．５，６９８，４２６、５，２２３，４０９、５，４０３，４８４、５，５８０，７１７、５，４２７，９０８、５，７５０，７５３、５，８２１，０４７、５，５７１，６９８、５，４２７，９０８、５，５１６，６３７、５，７８０、２２５、５，６５８、７２７、５，７３３，７４３及び５，９６９，１０８に開示されている方法が含まれる。
【０３２９】
本明細書の参考文献に記載されているように、ファージを選択した後、ファージ由来の抗体コード化領域を単離し、ヒト抗体を含めた全抗体または他の所望する抗原結合断片を作成するために使用し、例えば以下に詳記されているように哺乳動物細胞、昆虫細胞、植物細胞、酵母及び細菌を含めた所望の宿主において発現させる。例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’及びＦ（ａｂ’）２断片を組換え産生するための技術は、例えばＰＣＴ公開ＷＯ  ９２／２２３２４；Ｍｕｌｌｉｎａｘら，ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，１２（６）：８６４−８６９（１９９２）；Ｓａｗａｉら，ＡＪＲＩ，３４：２６−３４（１９９５）；及びＢｅｔｔｅｒら，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４０：１０４１−１０４３（１９８８）（これらの文献は全文参照により本明細書に組み入れる）に開示されているような当業界で公知の方法も使用され得る。一本鎖Ｆｖ及び抗体を産生するために使用され得る技術の例には、米国特許４，９４６，７７８及び５，２５８、４９８；Ｈｕｓｔｏｎら，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，２０３：４６−８８（１９９１）；Ｓｈｕら，ＰＮＡＳ，９０：７９９５−７９９９（１９９３）；及びＳｋｅｒｒａら，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４０：１０３８−１０４０（１９８８）に記載されている技術が含まれる。
【０３３０】
組換え抗体ライブラリーのファージディスプレーによるスクリーニングの代わりに、大きいコンビナトリアルライブラリーをスクリーニングするための当業界で公知の他の方法が親抗体の同定に対して適用され得る。代替発現系の１つのタイプは、Ｓｚｏｓｔａｋ  ａｎｄ  ＲｏｂｅｒｔｓによるＰＣＴ公開ＷＯ  ９８／３１７００及びＲｏｂｅｒｔｓ，Ｒ．Ｗ．  ａｎｄ  Ｓｚｏｓｔａｋ，Ｊ．Ｗ．（１９９７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９４：１２２９７−１２３０２に記載されている組換え抗体ライブラリーをＲＮＡ−タンパク質融合物として発現させるものである。この系では、３’末端にペフチジルアクセプター抗生物質のピューロマイシンを有している合成ｍＲＮＡのインビトロ翻訳によりｍＲＮＡとｍＲＮＡがコードするペフチドまたはタンパク質の間で共有結合融合物が生ずる。よって、特定ｍＲＮＡは、エンコードされるペプチドまたはタンパク質（例えば、抗体またはその一部）の特性、例えば抗体またはその部分の二重特異性抗原に対する結合に基づいてｍＲＮＡの複合体混合物（例えば、コンビナトリアルライブラリー）から濃縮され得る。前記ライブラリーのスクリーニングから回収した抗体またはその一部をエンコードする核酸配列を（例えば、哺乳動物宿主細胞において）本明細書中に記載されている組換え手段により発現させ得、更に本明細書に記載されているように突然変異を元々選択した配列に導入したｍＲＮＡ−ペプチド融合物を追加スクリーニングすることにより、または組換え抗体のインビトロでの他の親和性成熟方法により親和性成熟させることができる。
【０３３１】
別のアプローチでは、親抗体は当業界で公知の酵母ディスプレー方法を用いても作成され得る。酵母ディスプレー方法では、抗体ドメインを抗体細胞壁につなぎ、酵母の表面上でディスプレーするために遺伝的方法を使用する。特に、酵母はレパートリーまたはコンビナトリアル抗体ライブラリー（例えば、ヒトまたはマウス）から発現させた抗原−結合ドメインをディスプレーするために利用され得る。親抗体を作成するために使用され得る酵母ディスプレー方法の例には、参照により本明細書に組み入れるＷｉｔｔｒｕｐら．米国特許Ｎｏ．６，６９９，６５８に開示されている方法が含まれる。
【０３３２】
本明細書中に記載されている抗体は、ＣＤＲグラフト化及びヒト化親抗体を作成するために更に修飾され得る。ＣＤＲグラフト化親抗体はヒト抗体由来の重鎖及び軽鎖可変領域配列を含み、ＶＨ及び／またはＶＬの１つ以上のＣＤＲ領域は当該抗原に結合し得るマウス抗体のＣＤＲ配列で置換されている。ヒト抗体由来のフレームワーク配列はＣＤＲグラフト化のための鋳型として役立ち得る。しかしながら、前記フレームワーク上の直鎖置換はしばしば抗原に対する結合親和性を若干低下させる。ヒト抗体の元のマウス抗体に対する相同性が高いと、マウスＣＤＲをヒトフレームワークと組み合わせると親和性を低下させる変形がＣＤＲに導入される可能性が少なくなるであろう。従って、実施形態では、ＣＤＲとは別にマウス可変フレームワークを置換するために選択されるヒト可変フレームワークはマウス抗体可変領域フレームワークと少なくとも６５％の配列同一性を有する。実施形態では、ＣＤＲとは別にヒト及びマウス可変領域は少なくとも７０％の配列同一性を有する。特定実施形態では、ＣＤＲとは別にヒト及びマウス可変領域は少なくとも７５％の配列同一性を有する。別の実施形態では、ＣＤＲとは別にヒト及びマウス可変領域は少なくとも８０％の配列同一性を有する。前記抗体を産生するための方法は当業界で公知である（ＥＰ  ２３９，４００；ＰＣＴ公開ＷＯ  ９１／０９９６７；米国特許Ｎｏｓ．５，２２５，５３９、５，５３０，１０１及び５，５８５，０８９を参照されたい）、化粧張りまたは再舗装（ＥＰ  ５９２，１０６；ＥＰ  ５１９，５９６；Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２８（４／５）：４８９−４９８（１９９１）；Ｓｔｕｄｎｉｃｋａら，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，７（６）：８０５−８１４（１９９４）；Ｒｏｇｕｓｋａら，ＰＮＡＳ，９１：９６９−９７３（１９９４））及び鎖シャッフリング（米国特許Ｎｏ．５，５６５，３５２）；及び抗イディオタイプ抗体。
【０３３３】
ヒト化抗体は、非ヒト種由来の１つ以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）及びヒト免疫グロブリン分子由来のフレームワーク領域を有する所望の抗原に結合する非ヒト種抗体由来の抗体分子である。公知のヒトＩｇ配列は、例えば各々を全文参照により本明細書に組み入れる
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【０３３４】
ヒトフレームワーク領域中のフレームワーク残基をＣＤＲドナー抗体由来の対応する残基で置換して、抗原結合を改変（例えば、改善）してもよい。これらのフレームワーク置換は当業界で公知の方法により、例えばＣＤＲ及びフレームワーク残基の相互作用をモデル化して、抗原結合及び配列比較のために重要なフレームワーク残基を同定し、特定位置の異常なフレームワーク残基を同定することにより同定する（例えば、全文参照により本明細書に組み入れるＱｕｅｅｎら，米国特許Ｎｏ．５，５８５，０８９；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら，Ｎａｔｕｒｅ，３３２：３２３（１９８８）を参照されたい）。これらの三次元免疫グロブリンモデルは通常入手可能であり、当業者に知られている。選択した候補免疫グロブリン配列のありそうな三次元コンフォメーション構造を図示し、ディスプレイするコンピュータープログラムが入手可能である。これらのディスプレイを精査すると、候補免疫グロブリン配列の機能時の残基のありそうな役割の分析、すなわち候補免疫グロブリンがその抗原へ結合する能力に影響を与える残基の分析が可能となる。こうして、ＦＲ残基が選択され、所望の抗体特性（例えば、１つ以上の標的抗原に対する高い親和性）が達成するようにコンセンサスな重要な配列から合わせられる。通常、ＣＤＲ残基は直接、殆ど実質的に抗原結合の影響に関与する。抗体は当業界で公知の各種技術を用いてヒト化され得、これらの技術の例には、各々全文参照により本明細書に組み入れるＪｏｎｅｓら，Ｎａｔｕｒｅ，３２１：５２２（１９８６）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３９：１５３４（１９８８）；Ｓｉｍｓら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１：２２９６（１９９３）；Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９６：９０１（１９８７）；Ｃａｒｔｅｒら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，８９：４２８５（１９９２）；Ｐｒｅｓｔａら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１：２６２３（１９９３）；Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２８（４／５），４８９−４９８（１９９１）；Ｓｔｕｄｎｉｃｋａら，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，７（６）：８０５−８１４（１９９４）；Ｒｏｇｕｓｋａら，ＰＮＡＳ，９１：９６９−９７３（１９９４）；ＰＣＴ公開ＷＯ  ９１／０９９６７、ＰＣＴ／ＵＳ９８／１６２８０、ＵＳ９６／１８９７８、ＵＳ９１／０９６３０、ＵＳ９１／０５９３９、ＵＳ９４／０１２３４、ＧＢ８９／０１３３４、ＧＢ９１／０１１３４、ＧＢ９２／０１７５５；ＷＯ  ９０／１４４４３、ＷＯ９０／１４４２４、ＷＯ  ９０／１４４３０、ＥＰ  ２２９２４６、ＥＰ  ５９２，１０６、ＥＰ  ５１９，５９６、ＥＰ  ２３９，４００、米国特許Ｎｏｓ．５，５６５，３３２、５，７２３，３２３、５，９７６，８６２、５，８２４，５１４、５，８１７，４８３、５，８１４，４７６、５，７６３，１９２、５，７２３，３２３、５，７６６，８８６、５，７１４，３５２、６，２０４，０２３、６，１８０，３７０、５，６９３，７６２、５，５３０，１０１、５，５８５，０８９、５，２２５，５３９及び４，８１６，５６７及びこれらの中で引用されている参考文献に記��されている技術が含まれるが、これらに限定されない。
【０３３５】
Ｂ．親モノクローナル抗体を選択するための基準
本発明の実施形態は、ＤＶＤ−Ｉｇ分子において望まれる少なくとも１つ以上の特性を有する親抗体の選択に関する。実施形態では、所望特性は１つ以上の抗体パラメーターから選択される。他の実施形態では、抗体パラメーターは抗原特異性、抗原に対する親和性、力価、生物学的機能、エピトープ認識、安定性、可溶性、産生効率、免疫原性、薬物動態、バイオアベイラビリティー、組織交差反応性及びオルソロガス抗原結合からなる群から選択される。
【０３３６】
Ｂ１．  抗原に対する親和性
治療用ｍＡｂの所望の親和性は抗原の種類及び所望の治療のエンドポイントに依存し得る。実施形態では、サイトカイン−サイトカイン受容体相互作用は通常高親和性相互作用（例えば、＜ｐＭ〜＜ｎＭの範囲）であるので、前記相互作用をブロックしたときモクローナル抗体はより高い親和性（Ｋｄ＝０．０１〜０．５０ｐＭ）を有する。このような場合、その標的に対するｍＡｂ親和性は、サイトカイン（リガンド）のその受容体に対する親和性に等しいかまたはそれ以上でなければならない。一方、より低い親和性（＞ｎＭの範囲）を有するｍＡｂ（例えば、Ａ−βアミロイドの循環種に結合し、隔離し、浄化するモノクローナル抗体）は、例えば循環している潜在的に病原性のタンパク質を浄化する際に治療上有効である。他の場合には、既存の高親和性ｍＡｂの親和性を部位特異的突然変異によりまたはその標的に対して低い親和性を有するｍＡｂを用いて減ずることは、潜在的な副作用を避けるために使用され得る。例えば、高親和性ｍＡｂはその意図する標的のすべてを隔離／中和し得、よって標的タンパク質の１つ以上の機能を完全に減少／排除し得る。このシナリオでは、低親和性ｍＡｂは、疾患症状（病理的または過剰産生したレベル）に関与し得る標的を隔離／中和し、よって標的の機能はその１つ以上の正常な生理学的機能を発揮し続けることができる。従って、用量を調節し及び／または副作用を減らすべくＫｄを低下させることも可能であり得る。親ｍＡｂの親和性は、所望の治療結果を達成するために細胞表面分子を適切に標的化する際に役割を発揮し得る。例えば、標的が癌細胞上で高い密度で発現され、正常細胞では低い密度で発現されるならば、低親和性ｍＡｂは正常細胞よりも腫瘍細胞上の多数の標的に結合し、その結果腫瘍細胞はＡＤＣＣまたはＣＤＣを介して消失し、従って治療上望ましい効果を有する。よって、所望の親和性を有するｍＡｂを選択することは可溶性及び表面標的にとって適切であり得る。
【０３３７】
そのリガンドとの相互作用時の受容体を介するシグナリングは受容体−リガンド相互作用の親和性に依存し得る。同様に、ｍＡｂの表面受容体に対する親和性は細胞内シグナリングの種類及びｍＡｂがアゴニストまたはアンタゴニストシグナルを送達するかどうかを決定し得ることが考えられる。ｍＡｂ媒介シグナリングの親和性に基づく種類はその副作用プロフィールに影響を有し得る。従って、治療用モノクローナル抗体の所望の親和性及び所望の機能はインビトロ及びインビボ実験により注意深く決定されなければならない。
【０３３８】
結合タンパク質（例えば、抗体）の所望のＫｄは所望の治療結果に応じて実験的に決定され得る。実施形態では、特定抗原に対する親和性（Ｋｄ）がＤＶＤ−Ｉｇの同一抗原に対する所望の親和性に等しいまたはそれ以上の親抗体を選択する。抗原結合親和性及びカイネティックはＢｉａｃｏｒｅまたは別の類似技術により評価される。１つの実施形態では、各親抗体は、その抗原に対して多くとも約１０−７Ｍ、多くとも約１０−８Ｍ、多くとも約１０−９Ｍ、多くとも約１０−１０Ｍ、多くとも約１０−１１Ｍ、多くとも約１０−１２Ｍ、及び多くとも１０−１３Ｍからなる群から選択される解離定数（Ｋｄ）を有する。ＶＤ１を得る第１親抗体及びＶＤ２を得る第２親抗体はそれぞれの抗原に対して類似または異なる親和性（ＫＤ）を有し得る。各親抗体は、表面プラズモン共鳴により測定して、抗原に対して少なくとも約１０２Ｍ−１ｓ−１、少なくとも約１０３Ｍ−１ｓ−１、少なくとも約１０４Ｍ−１ｓ−１、少なくとも約１０５Ｍ−１ｓ−１、及び少なくとも約１０６Ｍ−１ｓ−１からなる群から選択されるオン速度定数（Ｋｏｎ）を有する。ＶＤ１を得る第１親抗体及びＶＤ２を得る第２親抗体はそれぞれの抗原に対して類似または異なるオフ速度定数（Ｋｏｆｆ）を有し得る。１つの実施形態では、各親抗体は、表面プラズモン共鳴により測定して、抗原に対して多くとも約１０−３ｓ−１、多くとも約１０−４ｓ−１、多くとも約１０−５ｓ−１、及び多くとも約１０−６ｓ−１からなる群から選択されるオフ速度定数（Ｋｏｆｆ）を有する。ＶＤ１を得る第１親抗体及びＶＤ２を得る第２親抗体はそれぞれの抗原に対して類似または異なるオフ速度定数（Ｋｏｆｆ）を有し得る。
【０３３９】
Ｂ２．  力価
親モノクローナル抗体の所望の親和性／力価は所望の治療結果に依存する。例えば、受容体−リガンド（Ｒ−Ｌ）相互作用に対して、親和性（ｋｄ）はＲ−Ｌ  ｋｄ（ｐＭの範囲）に等しいかまたはそれ以上である。病的循環タンパク質を簡単なクリアランス、例えば循環Ａ−βペプチドの各種種のクリアラスのためには、ｋｄは低いｎＭ範囲であり得る。加えて、ｋｄは標的が同一エピトープの複数のコピーを発現するかどうかにも依存する。例えば、ｍＡｂはＡβオリゴマー中のコンフォーメーションエピトープを標的とする。
【０３４０】
ＶＤ１及びＶＤ２が同一抗原に結合するが、異なるエピトープに結合する場合、ＤＶＤ−Ｉｇは同一抗原に対して４つの結合部位を含み、よってＤＶＤ−Ｉｇのアビディティーが上昇し、これによりＤＶＤ−Ｉｇの見かけｋｄが上昇する。実施形態では、ＤＶＤ−Ｉｇにおいて所望されるｋｄに等しいまたはそれ以上のｋｄを有する親抗体を選択する。親ｍＡｂの親和性の考慮は、ＤＶＤ−Ｉｇが４つ以上の同一抗原部位を含むかどうかにも依存し得る（すなわち、単一ｍＡｂ由来のＤＶＤ−Ｉｇ）。この場合、見かけｋｄはアビディティーのためにｍＡｂよりも大きい。このようなＤＶＤ−Ｉｇは表面受容体を架橋するために使用され得、中和力価を高め、病的タンパク質のクリアランスを高める等のために使用され得る。
【０３４１】
実施形態では、特定抗原に対する中和力価が同一抗原に対するＤＶＤ−Ｉｇの所望する中和能力に等しいかまたはそれ以上である親抗体を選択する。中和力価は、適当なタイプの細胞が標的刺激に応答して測定可能なシグナル（すなわち、増殖またはサイトカイン産生）を発生する標的依存性バイオアッセイにより評価され得、ｍＡｂによる標的中和は用量依存的にシグナルを減らし得る。
【０３４２】
Ｂ３．  生物学的機能
モノクローナル抗体は潜在的に幾つかの機能を発揮し得る。これらの機能の幾つかを表１にリストする。これらの機能はインビトロアッセイ（例えば、セルベース及び生化学アッセイ）及びインビボ動物モデルで評価され得る。
【０３４３】
【表１】
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【０３４４】
表１の例に記載されている異なる機能を有しているＭＡｂが所望の治療結果を達成するように選択され得る。次いで、２つ以上の選択した親モノクローナル抗体は、単一ＤＶＤ−Ｉｇ分子で２つの異なる機能を達成するためにＤＶＤ−Ｉｇフォーマットで使用して、使用され得る。例えば、特定サイトカインの機能を中和する親ｍＡｂを選択し、病的タンパク質のクリアランスを強化する親ｍＡｂを選択することによりＤＶＤ−Ｉｇを作成し得る。同様に、２つの異なる細胞表面受容体を認識する２つの親モノクローナル抗体、すなわち１つの受容体上でアゴニスト機能を有する１つのｍＡｂ及び異なる受容体上でアンタゴニスト機能を有する他のｍＡｂを選択することができる。各々が異なる機能を有するこれら２つの選択したモノクローナル抗体を使用して、単一分子において選択したモノクローナル抗体の２つの異なる機能（アゴニスト及びアンタゴニスト）を有する単一ＤＶＤ−Ｉｇ分子を構築することができる。同様に、各々がそれぞれの受容体リガンド（例えば、ＥＧＦ及びＩＧＦ）の結合をブロックする細胞表面受容体に対する２つの拮抗的モノクローナル抗体をＤＶＤ−Ｉｇフォーマットで使用することができる。逆に、ＤＶＤ−Ｉｇを作成するために、拮抗的抗受容体ｍＡｂ（例えば、抗ＥＧＦＲ）及び中和抗可溶性メディエーター（例えば、抗ＩＧＦ１／２）ｍＡｂを選択し得る。
【０３４５】
Ｂ４．  エピトープ認識
タンパク質の異なる領域は異なる機能を果たし得る。例えば、サイトカインの特定領域はサイトカイン受容体と相互作用して受容体活性化をもたらし、タンパク質の他の領域はサイトカインを安定化させるために必要であり得る。この場合、サイトカイン上の１つ以上の受容体相互作用領域に特異的に結合し、これによりサイトカイン−受容体相互作用をブロックするｍＡｂを選択し得る。幾つかの場合、例えば複数のリガンドに結合するあるケモカイン受容体の場合には、１つのリガンドのみと相互作用するエピトープ（ケモカイン受容体上の領域）に結合するｍＡｂを選択し得る。他の場合には、モノクローナル抗体はタンパク質の生理学的機能に直接関与しない標的上のエピトープに結合できるが、これらの領域に対するｍＡｂの結合は生理学的機能（立体障害）を干渉し得、またはタンパク質が機能できないようにタンパク質のコンフォメーションを改変し得る（どのリガンドも結合できないように受容体コンフォメーションを改変する複数のリガンドを有する受容体に対するｍＡｂ）。サイトカインのその受容体への結合をブロックしないが、シグナル伝達をブロックする抗サイトカインモノクローナル抗体（例えば、１２５−２Ｈ、抗ＩＬ−１８  ｍＡｂ）が同定された。
【０３４６】
エピトープ及びｍＡｂ機能の例には、受容体−リガンド（Ｒ−Ｌ）相互作用をブロックすること（Ｒ相互作用部位に結合する中和ｍＡｂ）、Ｒ結合を減少またはゼロとする立体障害が含まれるが、これらに限定されない。Ａｂは受容体結合部位以外の部位で標的に結合し得るが、コンフォメーション変化を誘導することにより標的の受容体結合及び機能を干渉し、機能を排除し（例えば、Ｘｏｌａｉｒ）、Ｒに結合するがシグナリングをブロックする（１２５−２Ｈ）。
【０３４７】
実施形態では、親ｍＡｂは最大有効性のために適切なエピトープを標的化しなければならない。エピトープはＤＶＤ−Ｉｇ中に保存されなければならない。ｍＡｂの結合エピトープは、共結晶学、ｍＡｂ−抗原複合体の限定されたタンパク質分解＋質量分光的ペプチドマッピング（Ｌｅｇｒｏｓ  Ｖ．ら，２０００，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉ．，９：１００２−１０）、ファージディスプレイペプチドライブラリー（Ｏ’Ｃｏｎｎｏｒ  ＫＨら，２００５，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，２９９：２１−３５）及び突然変異（Ｗｕ  Ｃ．ら，２００３，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１７０：５５７１−７）を含めた幾つかのアプローチにより決定され得る。
【０３４８】
Ｂ５．  生理化学的及び薬学的特性
抗体での治療処置はしばしば（典型的に高分子量の結果として質量基準で力価が低いために）高用量で、しばしば数ｍｇ／ｋｇの投与を必要とする。患者のコンプライアンスに適合させ、慢性疾患治療及び外来患者治療に十分取り組むために、治療用ｍＡｂの皮下（ｓ．ｃ．）または筋肉内（ｉ．ｍ．）投与が望ましい。例えば、ｓ．ｃ．投与のための最大の望ましい容量は〜１．０ｍＬであり、従って用量あたりの注射回数を制限するためには＞１００ｍｇ／ｍＬの濃度が望ましい。実施形態では、治療用抗体を１回用量で投与する。しかしながら、タンパク質−タンパク質相互作用（例えば、潜在的に免疫原性リスクを高める凝集物）により、プロセッシング及びデリバリー中の制限（例えば、粘度）により前記処方物の開発が制約される。従って、臨床有効性のために必要な大量及び関連する開発制約により、抗体処方物の能力及び高用量レジメンでのｓ．ｃ．投与の十分な開発が制約される。タンパク質分子及びタンパク質溶液の生理化学的及び薬学的特性（例えば、安定性、可溶性及び粘度要件）が最も重要であることは明らかである。
【０３４９】
Ｂ５．１  安定性
「安定な」抗体処方物は、該処方物中の抗体が本質的に保存時のその物理的安定性及び／または化学的安定性及び／または生物活性を保持しているものである。安定性は選択した期間選択した温度で調べられる。実施形態では、処方物中の抗体は室温（約３０℃）または４０℃で少なくとも１ヶ月間安定であり、及び／または約２〜８℃で少なくとも１年間、少なくとも２年間安定である。更に、実施形態では、処方物は処方物の凍結（例えば、−７０℃まで）及び融解（以後、「凍結／融解」サイクルと称する）後安定である。別の例では、「安定な」処方物は、タンパク質の約１０％未満、約５％未満しか処方物中に凝集物として存在していないものであり得る。
【０３５０】
インビトロで各種温度で長時間安定なＤＶＤ−Ｉｇが望ましい。このことは、インビトロで高温（例えば、４０℃）で２〜４週間安定な親ｍＡｂを迅速にスクリーニングした後、安定性を評価することにより達成し得る。２〜８℃での保存中、タンパク質は少なくとも１２ヶ月間（例えば、少なくとも２４ヶ月間）安定性を示す。安定性（モノマー完全分子の％）を各種技術（例えば、カチオン交換クロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）及び生理活性試験を用いて評価され得る。共有結合コンフォメーション修飾相を分析するために使用され得る分析技術のより包括的なリストについては、Ｊｏｎｅｓ，Ａ．Ｊ．Ｓ．（１９９３）Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｆｏｒｍｕａｌｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  ｄｅｌｉｖａｒｙ  ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｃｌｅｌａｎｄ，Ｊ．Ｌ．；Ｌａｎｇｅｒ，Ｒ．編，Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ，第１版，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，ＡＣＳ，ｐ．２２−４５；及びＰｅａｒｌｍａｎ，Ｒ．，Ｎｇｕｙｅｎ，Ｔ．Ｈ．（１９９０）Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｄｒｕｇｓ，Ｌｅｅ，Ｖ．ＦＬ編，Ｐｅｐｔｉｄｅ  ａｎｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ，第１版，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，ｐ．２４７−３０１を参照されたい。
【０３５１】
異質性及び凝集物形成：抗体の安定性は、処方物が約１０％未満、実施形態では約５％未満、他の実施形態では約２％未満、或いは実施形態では０．５％〜１．５％またはそれ未満の範囲でしかＧＭＰ抗体材料中に凝集物として存在しないことを示すような場合であり得る。サイズ排除クロマトグラフィーは、タンパク質凝集物の検出において高感度で再現性のある非常にロバストな方法である。
【０３５２】
低凝集物レベルに加えて、抗体は実施形態では化学的に安定でなければならない。化学的安定性はイオン交換クロマトグラフィー（例えば、カチオンまたはアニオン交換クロマトグラフィー）、疎水性相互作用クロマトグラフィーまたは他の方法（例えば、等電点分画またはキャピラリー電気泳動）により調べられ得る。例えば、抗体の化学的安定性は、２〜８℃で少なくとも１２ヶ月保存した後カチオン交換クロマトグラフィー中の未修飾抗体を表すピークが保存試験前の抗体溶液と比較して２０％以下、実施形態では１０％以下、または別の実施形態では５％以下しか増加する恐れがないような安定性であり得る。
【０３５３】
実施形態では、親抗体は構造保全性；正しいジスルフィド結合形成及び正しい折り畳みを示す。抗体の二次または三次構造の変化のため化学的に不安定になると抗体活性が影響され得る。例えば、抗体の活性により示される安定性は、２〜８℃で少なくとも１２ヶ月間保存後抗体の活性が保存試験前の抗体溶液と比較して５０％以下、実施形態では３０％以下、更には１０％以下、或いは実施形態では５％または１％以下であるような安定性であり得る。適当な抗原−結合アッセイが抗体活性を調べるために使用され得る。
【０３５４】
Ｂ５．２．  可溶性
ｍＡｂの「可溶性」は正しく折り畳まれたモノマーＩｇＧの産生に相関する。従って、ＩｇＧの可溶性はＨＰＬＣにより評価され得る。例えば、可溶性（モノマー）ＩｇＧはＨＰＬＣクロマトグラフ上に単一ピークを生じるのに対して、不溶性（例えば、マルチマーまたは凝集状態）は複数のピークを生ずる。従って、当業者はルーチンのＨＰＬＣ技術を用いてＩｇＧの可溶性の増加または減少を検出することができる。可溶性を分析するために使用され得る分析技術のより包括的なリストについては、Ｊｏｎｅｓ，Ａ．Ｇ．，Ｄｅｐ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｅｎｇ，Ｕｎｉｖ．Ｃｏｌｌ．Ｌｏｎｄｏｎ，Ｌｏｎｄｏｎ，ＵＫ．Ｅｄｉｔｏｒ（ｓ）：Ｓｈａｍｌｏｕ，Ｐ．Ａｙａｚｉ．，Ｐｒｏｃｅｓｓ．Ｓｏｌｉｄ−Ｌｉｑ．Ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎｓ（１９９３），９３−１１７，Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒ：Ｂｕｔｔｅｒｗｏｒｔｈ−Ｈｅｉｎｅｍａｎｎ，Ｏｘｆｏｒｄ，ＵＫ及びＰｅａｒｌｍａｎ，Ｒｏｄｎｅｙ；Ｎｇｕｙｅｎ，Ｔｕｅ  Ｈ，Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１９９０），４（Ｐｅｐｔ．Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ），２４７−３０１を参照された）。治療用ｍＡｂの可溶性は十分な投与のためにしばしば必要な高濃度に処方するために重要である。本明細書中に概説されているように、効率的な抗体投与に役立つためには＞１００ｍｇ／ｍＬの溶解度が必要であり得る。例えば、抗体可溶性は早期の研究段階では約５ｍｇ／ｍＬ以上であり得る。実施形態では、進んだプロセスサイエンス段階では約２５ｍｇ／ｍＬ以上であり得、実施形態では約１００ｍｇ／ｍＬ以上、または実施形態では約１５０ｍｇ／ｍＬ以上であり得る。タンパク質分子の固有の特性、タンパク質溶液の物理化学的特性（例えば、安定性、可溶性、粘度）が重要であることは当業者には自明である。しかしながら、当業者は、最終タンパク質処方物の特性に有利に影響するための添加剤として使用され得る広範囲の賦形剤が存在することを認識している。これらの賦形剤には、（ｉ）液体溶媒、共溶媒（例えば、エタノールのようなアルコール）、（ｉｉ）緩衝剤（例えば、リン酸、酢酸、クエン酸、アミノ酸バッファー）、（ｉｉｉ）糖または糖アルコール（例えば、スクロース、トレハロース、フルクトース、ラフィノース、マンニトール、ソルビトール、デキストラン）、（ｉｖ）界面活性剤（例えば、ポリソルベート２０、４０、６０、８０、ポロキサマー）、（ｖ）等張剤（例えば、ＮａＣｌのような塩、糖または糖アルコール）、及び（ｖｉ）他の物質、例えば保存剤、キレート化剤、抗酸化剤、キレート化物質（例えば、ＥＤＴＡ）、生分解性ポリマー、担体分子（例えば、ＨＳＡ、ＰＥＧ）が含まれ得る。
【０３５５】
粘度は、抗体製造及び抗体プロセッシング（例えば、透析濾過／限外濾過）、フィルフィニッシュプロセス（ポンピング相、濾過相）及びデリバリー相（注射可能性、洗練されたデバイスデリバリー）に関して非常に重要なパラメーターである。低粘度により、より高濃度を有する抗体の溶液が得られる。こうすると、同一用量をより少ない容量で投与し得る。少ない注射用量は注射感覚の痛みが少ないという利点を与え、溶液は必ずしも患者における注射の痛みを減らすために等張性でなきてもよい。抗体溶液の粘度は、１００（ｌ／ｓ）の剪断速度で抗体溶液粘度が２００ｍＰａｓ以下、実施形態では１２５ｍＰａｓ以下、他の実施形態では７０ｍＰａｓ以下、別の実施形態では２５ｍＰａｓ以下、さらに別の実施形態では１０ｍＰａｓ以下であるような粘度であり得る。
【０３５６】
Ｂ５．３  産生効率
哺乳動物細胞（例えば、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ））において効率的に発現するＤＶＤ−Ｉｇの作成は、実施形態ではそれ自体哺乳動物細胞において効率的に発現する２つの親モノクローナル抗体を必要とする。安定な哺乳動物細胞（すなわち、ＣＨＯ）からの産生収率は約０．５ｇ／Ｌ以上、実施形態では約１ｇ／Ｌ以上、他の実施形態では約２〜５ｇ／Ｌの範囲でなければならない（Ｋｉｐｒｉｙａｎｏｖ  ＳＭ，Ｌｉｔｔｌｅ  Ｍ．，１９９９，Ｍｏｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，１２：１７３−２０１；Ｃａｒｒｏｌｌ  Ｓ，Ａｌ−Ｒｕｂｅａｉ  Ｍ．，２００４，Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｌ．Ｔｈｅｒ．，４：１８２１−９）。
【０３５７】
哺乳動物細胞での抗体及びＩｇ融合タンパク質の産生は幾つかの要因により影響される。強いプロモーター、エンハンサー及び選択マーカーを取り込んだ発現ベクターを工学操作すると、組み込まれたベクターコピーからの当該遺伝子の転写を最大とし得る。高レベルの遺伝子転写を可能にするベクター組み込み部位の同定はベクターからのタンパク質発現を高め得る（Ｗｕｒｍら，２００４，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００４，Ｖｏｌ／Ｉｓｓ／Ｐｇ．２２／１１（１３９３−１３９８））。更に、産生レベルは抗体重鎖及び軽鎖の比及びタンパク質アセンブリ及び分泌のステップでの各種ステップにより影響される（Ｊｉａｎｇら，２００６，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｐｒｏｇｒｅｓｓ，Ｊａｎ−Ｆｅｂ，２００６，ｖｏｌ．２２，Ｎｏ．１，ｐ．３１３−８）。
【０３５８】
Ｂ６．  免疫原性
治療用ｍＡｂを投与すると、免疫応答（すなわち、治療用ｍＡｂに対する内因性抗体の形成）がある頻度で生じ得る。免疫原性を引き出す可能性ある要素を親モノクローナル抗体を選択する間に分析しなければならず、ＤＶＤ−Ｉｇを構築する前に親モノクローナル抗体を最適化するためにリスクを減らすステップを講じ得る。マウス由来抗体は患者において高度に免疫原性であることが判明した。マウス可変領域及びヒト定常領域を含むキメラ抗体の作成は治療用抗体の免疫原性を減らすための合理的な次ステップを与える（Ｍｏｒｒｉｓｏｎ  ａｎｄ  Ｓｃｈｌｏｍ，１９９０）。或いは、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら，１９８８が治療用抗体について記載しているように、マウスＣＤＲ配列をヒト抗体フレームワークに移す（再成形／ＣＤＲグラフト化／ヒト化）ことにより免疫原性を減らすことができる。別の方法は「再舗装」または「化粧張り」と称され、齧歯類可変軽鎖及び重鎖ドメインから出発して、ＣＤＲ及び埋め込まれているアミノ酸は親齧歯類抗体由来そのままにしながら、表面接近可能なフレームワークアミノ酸のみをヒトのアミノ酸に改変する（Ｒｏｇｕｓｋａら，１９９６）。別のタイプのヒト化では、全ＣＤＲをグラフト化する代わり、１つの技術は抗体のその標的に対する結合に関与するＣＤＲ残基の部分組として規定される「特異性決定領域」（ＳＤＲ）のみをグラフト化する（Ｋａｓｈｍｉｒｉら，２００５）。これは、標的と交差反応するかを調べるために抗体−標的複合体の利用可能な三元構造の解析または抗体ＣＤＲ残基の変異解析によるＳＤＲの同定を必要とする。或いは、完全ヒト抗体はマウス、キメラまたはヒト化抗体に比して少ない免疫原性を有し得る。
【０３５９】
治療用抗体の免疫原性を減らすための別のアプローチは、免疫原性があると予想される幾つかの特定配列を排除することである。１つのアプローチでは、第１世代バイオロジックをヒトで試験し、許容できないほどの免疫原性であると知見された後、Ｂ細胞エピトープをマッピングし、次いで免疫検出を避けるために改変し得る。別のアプローチは、可能性あるＴ細胞エピトープを予測し、除去するための方法を使用する。ＭＨＣタンパク質に結合する可能性があるバイオロジック治療薬のペプチド配列をスキャンし、同定するためにコンピューター方法が開発された（Ｄｅｓｍｅｔら，２００５）。或いは、可能性あるタンパク質アレルゲン中のＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープを同定するためにヒト樹状細胞をベースとする方法を使用し得る（Ｓｔｉｃｋｌｅｒら，２００５，Ｓ．Ｌ．Ｍｏｒｒｉｓｏｎ  ａｎｄ  Ｊ．Ｓｃｈｌｏｍ，Ｉｍｐｏｒｔａｎｔ  Ａｄｖ．Ｏｎｃｏｌ．（１９９０），ｐ．３−１８；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ，Ｌ．，Ｃｌａｒｋ，Ｍ．，Ｗａｌｄｍａｎｎ，Ｈ．  ａｎｄ  Ｗｉｎｔｅｒ，Ｇ．，“Ｒｅｓｈａｐｉｎｇ  ｈｕｍａｎ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅｒａｐｙ”，Ｎａｔｕｒｅ（１９８８），３３２：３２３−３２７；Ｒｏｇｕｓｋａ−Ｍ−Ａ，Ｐｅｄｅｒｓｅｎ−Ｊ−Ｔ，Ｈｅｎｒｙ−Ａ−Ｈ，Ｓｅａｒｌｅ−Ｓ−Ｍ，Ｒｏｊａ−Ｃ−Ｍ，Ａｖｅｒｙ−Ｂ，Ｈｏｆｆｅｅ−Ｍ，Ｃｏｏｋ−Ｓ，Ｌａｍｂｅｒｔ−Ｊ−Ｍ，Ｂｌａｔｔｌｅｒ−Ｗ−Ａ，Ｒｅｅｓ−Ａ−Ｒ，Ｇｕｉｌｄ−Ｂ−Ｃ．，Ａ  ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｏｆ  ｔｗｏ  ｍｕｒｉｎｅ  ｍＡｂ  ｈｕｍａｎｉｚｅｄ  ｂｙ  ＣＤＲ−ｇｒａｆｔｉｎｇ  ａｎｄ  ｖａｒｉａｂｌｅ  ｄｏｍａｉｎ  ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ，Ｐｒｏｔｅｉｎ  ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，｛Ｐｒｏｔｅｉｎ−Ｅｎｇ｝，１９９６，ｖｏｌ．９，ｐ．８９５−９０４；Ｋａｓｈｍｉｒｉ−Ｓｙｅｄ−Ｖ−Ｓ，Ｄｅ−Ｐａｓｃａｌｉｓ−Ｒｏｂｅｒｔｏ，Ｇｏｎｚａｌｅｓ−Ｎｏｒｅｅｎ−Ｒ，Ｓｃｈｌｏｍ−Ｊｅｆｆｒｅｙ，ＳＤＲ  ｇｒａｆｔｉｎｇ−ａ  ｎｅｗ  ａｐｐｒｏａｃｈ  ｔｏ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｈｕｍａｎｉｚａｔｉｏｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ），｛Ｍｅｔｈｏｄｓ｝，Ｍａｙ  ２００５，ｖｏｌ．３６，Ｎｏ．１，ｐ．２５−３４；Ｄｅｓｍｅｔ−Ｊｏｈａｎ，Ｍｅｅｒｓｓｅｍａｎ−Ｇｅｅｒｔ，Ｂｏｕｔｏｎｎｅｔ−Ｎａｔｈａｌｉｅ，Ｐｌｅｔｉｎｃｋｘ−Ｊｕｒｇｅｎ，Ｄｅ−Ｃｌｅｒｃｑ−Ｋｒｉｓｔａ，Ｄｅｂｕｌｐａｅｐ−Ｍａｊａ，Ｂｒａｅｃｋｍａｎ−Ｔｅｓｓａ，Ｌａｓｔｅｒｓ−Ｉｇｎａｃｅ，Ａｎｃｈｏｒ  ｐｒｏｆｉｌｅｓ  ｏｆ  ＨＬＡ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ：ａｎａｌｙｓｉｓ  ｂｙ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ａｆｆｉｎｉｔｙ  ｓｃｏｒｉｎｇ  ｍｅｔｈｏｄ  ａｎｄ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，２００５，ｖｏｌ．５８，ｐ．５３−６９；Ｓｔｉｃｋｌｅｒ−Ｍ−Ｍ，Ｅｓｔｅｌｌ−Ｄ−Ａ，Ｈａｒｄｉｎｇ−Ｆ−Ａ，ＣＤ４＋Ｔ−ｃｅｌｌ  ｅｐｉｔｏｐｅ  ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ  ｕｓｉｎｇ  ｕｎｅｘｐｏｓｅｄ  ｈｕｍａｎ  ｄｏｎｅｒ−ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  ｂｌｏｏｄ  ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ  ｃｅｌｌｓ，Ｊ���ｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｔｈｅｒａｐｙ，２０００，ｖｏｌ．２３，ｐ．５４−６０）。
【０３６０】
Ｂ７．  インビボ有効性
所望のインビボ有効性を有するＤＶＤ−Ｉｇ分子を作成するためには、一緒に与えたときに同様に所望のインビボ有効性を有するｍＡｂを作成し、選択することが重要である。しかしながら、幾つかの例では、ＤＶＤ−Ｉｇは２つの別々のｍＡｂの組合せで達成できないインビボ有効性を示し得る。例えば、ＤＶＤ−Ｉｇは２つの標的を非常に接近させ、よって２つの別々のｍＡｂの組合せで達成できない活性をもたらし得る。追加の所望する生物学的機能は本明細書のセクションＢ．３に記載されている。ＤＶＤ−Ｉｇ分子において所望され得る特性を有する親抗体は複数の要因（例えば、薬物動態ｔ１／２、組織分布、可溶性対細胞表面標的、及び標的濃度−可溶性／密度−表面）に基づいて選択され得る。
【０３６１】
Ｂ８．  インビボ組織分布
所望のインビボ組織分布を有するＤＶＤ−Ｉｇ分子を作成するためには、実施形態では類似の所望のインビボ組織分布プロフィールを有する親ｍＡｂを選択しなければならない。或いは、二重特異性標的化戦術のメカニズムに基づいて、一緒に与えたときに同様に所望のインビボ組織分布を有する親ｍＡｂを選択することがあるときには必要でないことがある。例えば、１つの結合成分を標的とするＤＶＤ−Ｉｇの場合、ＤＶＤ−Ｉｇは第２結合成分を同一標的部位に導くように特定部位に。例えば、ＤＶＤ−Ｉｇの１つの結合特異性は膵臓（島細胞）を標的とし、他の特異性はＧＬＰ１を膵臓に導いて、インスリンを誘導することができる。
【０３６２】
Ｂ９．  アイソタイプ
所望の特性（これらには、アイソタイプ、エフェクター機能及び循環半減期が含まれるが、これらに限定されない）を有するＤＶＤ−Ｉｇ分子を作成するためには、実施形態では治療有用性及び所望の治療のエンドポイントに応じて適切なＦｃ−エフェクター機能を有する親ｍＡｂを選択する。５つの主な重鎖クラスまたはアイソタイプがあり、このうちの幾つかは幾つかのサブタイプを有し、これらは抗体分子のエフェクター機能を決める。これらのエフェクター機能は抗体分子のヒンジ領域、ＣＨ２及びＣＨ３ドメインに残っている。しかしながら、抗体分子の他の部分中の残基もエフェクター機能に影響を有し得る。ヒンジ領域Ｆｃ−エフェクター機能には、（ｉ）抗体依存性細胞細胞傷害性、（ｉｉ）補体（Ｃ１ｑ）結合、活性化及び補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）、（ｉｉｉ）抗原−抗体複合体の食作用／クリアランス、及び（ｉｖ）幾つかの場合にはサイトカイン放出が含まれる。抗体分子のＦｃ−エフェクター機能はＦｃ領域と１組のクラス特異性細胞表面受容体との相互作用により媒介される。ＩｇＧ１アイソタイプの抗体が最も活性であり、ＩｇＧ２及びＩｇＧ４のエフェクター機能は最低であるか全くない。ＩｇＧ抗体のエフェクター機能は３つの構造的に相同な細胞Ｆｃ受容体タイプ（及びサブタイプ）（ＦｃｇＲＩ、ＦｃｇＲＩＩ及びＦｃｇＲＩＩＩ）との相互作用を介して媒介される。ＩｇＧ１のこれらのエフェクター機能は、ＦｃｇＲ及びＣ１ｑ結合のために必要な低ヒンジ領域（例えば、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ）中の特定のアミノ酸残基を変異させることにより排除され得る。Ｆｃ領域、特にＣＨ２−ＣＨ３ドメイン中のアミノ酸残基も抗体分子の循環半減期を決める。このＦｃ機能は、抗体分子を酸性リポソームから体循環系に戻すために関与する新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）へのＦｃ領域の結合を介して媒介される。
【０３６３】
ｍＡｂが活性または不活性アイソタイプを有するべきかどうかは抗体に対する所望する治療のエンドポイントに依存する。アイソタイプの使用及び所望の治療結果の幾つかの例を以下にリストする：
ａ）所望するエンドポイントが可溶性サイトカインの機能的中和であるならば、不活性アイソタイプを使用し得る；
ｂ）所望する結果が病的タンパク質のクリアランスであるならば、活性アイソタイプを使用し得る；
ｃ）所望する結果がタンパク質凝集物のクリアランスであるならば、活性アイソタイプを使用し得る；
ｄ）所望する結果が表面受容体を拮抗させることならば、不活性アイソタイプ（Ｔｙｓａｂｒｉ、ＩｇＧ４；ＯＫＴ３，突然変異ＩｇＧ１）を使用する；
ｅ）所望する結果が標的細胞を排除することならば、活性アイソタイプ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ，ＩｇＧ１（強化エフェクター機能を有する）を使用する；及び
ｆ）所望する結果がＣＮＳに入ることなく循環からタンパク質を浄化することならば（例えば、循環Ａｂペプチド種の浄化）、ＩｇＭアイソタイプを使用し得る。
親ｍＡｂのＦｃエフェクター機能は当業界で公知の各種インビトロ方法により調べられ得る。
【０３６４】
検討したように、アイソタイプ、よってエフェクター機能の選択は所望する治療のエンドポイントに依存する。循環標的の簡単な中和、例えば受容体−リガンド相互作用のブロッキングが所望される場合には、エフェクター機能が必要とされないことがある。そのような場合、エフェクター機能を排除する抗体のＦｃ領域におけるアイソタイプまたは突然変異が望ましい。標的細胞の排除（例えば、腫瘍細胞の排除）が治療のエンドポイントである他の場合には、エフェクター機能を強化するＦｃ領域におけるアイソタイプ、突然変異または脱フコシル化が望ましい（Ｐｒｅｓｔａ  ＧＬ，Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖ．，５８：６４０−６５６，２００６；Ｓａｔｏｈ  Ｍ，Ｉｉｄａ  Ｓ，Ｓｈｉｔａｒａ  Ｋ．，Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  Ｂｉｏｌ．Ｔｈｅｒ．，６：１１６１−１１７３，２００６）。同様に、治療有用性に依存して、抗体分子の循環半減期はＦｃ領域に特異的突然変異を導入することにより抗体−ＦｃＲｎ相互作用をモジュレートすることにより短縮／延長され得る（Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ  ＷＦ，Ｋｉｅｎｅｒ  ＰＡ，Ｗｕ  Ｈ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２８１：２３５１４−２３５２４，２００６；Ｐｅｔｋｏｖａ  ＳＢ，Ａｋｉｌｅｓｈ  Ｓ，Ｓｐｒｏｕｌｅ  ＴＪ．ら，Ｉｎｔｅｒｎａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１８：１７５９−１７６９，２００６；Ｖａｃｃａｒｏ  Ｃ，Ｂａｗｄｏｎ  Ｒ，Ｗａｎｊｉｅ  Ｓ．ら，ＰＮＡＳ，１０３：１８７０９−１８７１４，２００７）。
【０３６５】
通常の治療用ｍＡｂの異なるエフェクター機能に影響を与える各種残基の公表されている情報がＤＶＤ−Ｉｇについて確認する必要があり得る。ＤＶＤ−Ｉｇフォーマットでは、モノクローナル抗体エフェクター機能のモジュレーションのために同定されている以外の追加の（異なる）Ｆｃ領域残基が重要であり得る。
【０３６６】
全体として、Ｆｃエフェクター機能（アイソタイプ）が最終ＤＶＤ−Ｉｇフォーマットにおいて重要であるかどうかの決定は疾患適応、治療標的、所望する治療のエンドポイント及び安全性の考慮に依存する。非限定的に
。ＩｇＧ１−アロタイプ：Ｇｌｍｚ
。ＩｇＧ１ミュータント−Ａ２３４，Ａ２３５
。ＩｇＧ２−アロタイプ：Ｇ２ｍ（ｎ−）
。κ−Ｋｍ３
。λ
を含めた適切な重鎖及び軽鎖定常領域の例を以下にリストする。
【０３６７】
Ｆｃ受容体及びＣ１ｑ研究：細胞膜上の過剰表現した標的に対して抗体複合体化することによる望ましくない抗体依存性Ｔ細胞媒介細胞傷害性（ＡＤＣＣ）及び補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）の可能性は、（例えば、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ）ヒンジ領域突然変異により阻止され得る。ｍＡｂのＩｇＧ１ヒンジ領域中に存在する置換アミノ酸により、ＦｃｇＲ結合はＩｇＧ１ヒンジ領域上の重複部位内で生ずると考えられるのでｍＡｂのヒトＦｃ受容体（ＦｃＲｎではない）に対する結合が低下すると予想され得る。ｍＡｂのこの特徴により、安全性プロフィールが野生型ＩｇＧを含有する抗体よりも改善される。ｍＡｂのヒトＦｃ受容体に対する結合は、細胞株（例えば、ＴＨＰ−１、Ｋ５６２）及びＦｃｇＲＩＩｂ（または、他のＦｃｇＲｓ）を発現する工学操作したＣＨＯ細胞株を用いてフローサイトメトリー実験により調べられ得る。ＦｃｇＲＩＩｂに対する結合は影響されないが、ｍＡｂはＩｇＧ１対照モノクローナル抗体と比較してＦｃｇＲＩ及びＦｃｇＲＩＩａに対して低い結合を示す。Ｃ１ｑの抗原／ＩｇＧ免疫複合体による結合及び活性化は古典的補体カスケードをトリガーし、その結果炎症及び／または免疫調節応答が生ずる。ＩｇＧ上のＣ１ｑ結合部位はＩｇＧヒンジ領域内の残基に局在化された。高濃度のｍＡｂに対するＣ１ｑ結合をＣ１ｑ  ＥＬＩＳＡにより評価した。結果は、野生型対照ＩｇＧ１の結合と比較したときに予想されるようにｍＡｂはＣ１ｑに結合できないことを立証している。全体として、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａヒンジ領域突然変異はｍＡｂのＦｃｇＲＩ、ＦｃｇＲＩＩａ及びＣ１ｑへの結合を廃止するが、ｍＡｂのＦｃｇＲＩＩｂとの相互作用に影響を与えない。このデータから、インビボでミュータントＦｃを有するｍＡｂは通常抑制性ＦｃｇＲＩＩｂと相互作用するが、活性化ＦｃｇＲＩ及びＦｃｇＲＩＩａ受容体またはＣ１ｑとは相互作用できないだろうことが示唆される。
【０３６８】
ヒトＦｃＲｎ結合：新生児受容体（ＦｃＲｎ）は、ＩｇＧの胎盤を横切る輸送及びＩｇＧ分子の異化半減期のコントロールに関与する。有効性を改善し、投与の用量または頻度を減らし、または標的に対する局在化を改善するために抗体の終末半減期を延長させることが望ましい。或いは、逆にすること、すなわち全身暴露を減らすために終末半減期を短縮させること、または標的対非標的結合比を改善することが有利である。ＩｇＧとそのサルベージ受容体のＦｃＲｎ間の相互作用を取捨選択すると、ＩｇＧの終末半減期を延長または短縮する方法が与えられる。ＩｇＧを含めた循環中のタンパク質はある細胞（例えば、血管内皮の細胞）による微飲作用により流体相に取り上げられる。ＩｇＧは僅かに酸性（ｐＨ６．０〜６．５）の条件下でエンドソーム中のＦｃＲｎに結合し得、細胞表面に再循環され、そこで殆ど中性（ｐＨ７．０〜７．４）の条件下で放出される。Ｆｃ領域結合部位をＦｃＲｎ８０、１６、１７にマッピングすると、種にわたって保存される２つのヒスチジン残基Ｈｉｓ３１０及びＨｉｓ４３５がこの相互作用のｐＨ依存性に関与することが判明した。ファージ−ディスプレーテクノロジーを使用して、ＦｃＲｎへの結合を増加させ、マウスＩｇＧの半減期を延長させるマウスＦｃ領域突然変異が同定された（Ｖｉｃｔｏｒ，Ｇ．ら，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（１９９７），１５（７），６３７−６４０を参照されたい）。ｐＨ７．４ではなく、ｐＨ６．０でのＦｃＲｎに対するヒトＩｇＧの結合親和性を高めるＦｃ領域突然変異も同定された（Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ  Ｗｉｌｌｉａｍ  Ｆ．ら，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２００２），１６９（９），５１７１−８０を参照されたい）。更に、１つの場合には、結合の類似のｐＨ依存性上昇（最高２７倍）もアカゲザルＦｃＲｎの場合に観察され、これによりアカゲザルにおける血清半減期は親ＩｇＧに比して２倍上昇した（Ｈｉｎｔｏｎ，Ｐａｕｌ  Ｒ．ら，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（２００４），２７９（８），６２１３−６２１６を参照されたい）。これらの所見は、Ｆｃ領域のＦｃＲｎとの相互作用を取捨選択することにより抗体治療の血漿半減期を延長させることが実行可能であることを示す。逆に、ＦｃＲｎとの相互作用を減衰させるＦｃ領域突然変異は抗体半減期を短縮し得る。
【０３６９】
Ｂ１０．  薬物動態（ＰＫ）
所望の薬物動態プロフィールを有するＤＶＤ−Ｉｇ分子を作成するために、実施形態では同様に所望の薬物動態プロフィールを有する親ｍＡｂを選択する。１つの考慮すべきことは、モノクローナル抗体に対する免疫原性応答（すなわち、ＨＡＨＡ、ヒト抗ヒト抗体応答；ＨＡＣＡ、ヒト抗キメラ抗体応答）が更に治療薬の薬物動態を複雑にすることである。実施形態では、免疫原性が全くまたは少ししかないモノクローナル抗体は、生じたＤＶＤ−Ｉｇが免疫原性を全くまたは殆ど有していないようにＤＶＤ−Ｉｇ分子を構築するために使用される。ｍＡｂのＰＫを決定する要因の幾つかには、ｍＡｂの固有の特性（ＶＨアミノ酸配列）、免疫原性、ＦｃＲｎ結合及びＦｃ機能が含まれるが、これらに限定されない。
【０３７０】
選択した親モノクローナル抗体のＰＫプロフィールは、齧歯類におけるＰＫプロフィールがカニクイザル及びヒトにおけるモノクローナル抗体のＰＫプロフィールとうまく相関している（または、密接に予想する）ので齧歯類で簡単に調べられ得る。ＰＫプロフィーは実施例欄１．２．２．３．Ａに記載されているように調べられる。
【０３７１】
所望のＰＫ特性（及び、本明細書中で検討されている他の所望する機能特性）を有する親モノクローナル抗体を選択した後、ＤＶＤ−Ｉｇを構築する。ＤＶＤ−Ｉｇ分子は２つの親モノクローナル抗体由来の２つの抗原−結合ドメインを含んでいるので、ＤＶＤ−ＩｇのＰＫ特性も評価される。従って、ＤＶＤ−ＩｇのＰＫ特性を調べながら、２つの親モノクローナル抗体から誘導した抗原−結合ドメインの機能性に基づいてＰＫプロフィールを調べるＰＫアッセイを使用し得る。ＤＶＤ−ＩｇのＰＫプロフィールは実施例１．２．２．３．Ａに記載されているように調べられ得る。ＤＶＤ−ＩｇのＰＫプロフィールに影響を与え得る追加の要因には、抗原−結合ドメイン（ＣＤＲ）配向、リンカーサイズ及びＦｃ／ｃＲｎ相互作用が含まれる。親抗体のＰＫ特性は以下のパラメーター、すなわち吸収、分布、代謝及び排泄を評価することにより評価され得る。
【０３７２】
吸収：今まで、治療用モノクローナル抗体は非経口ルート（例えば、静脈内［ＩＶ］、皮下［ＳＣ］または筋肉内［ＩＭ］）を介して投与されている。ＳＣまたはＩＭ投与後のｍＡｂの間質腔から全身循環への吸収は主にリンパ経路を介する。飽和できる前全身タンパク質分解により、血管外投与後に変化し得る絶対バイオアベイラビリティーが生じ得る。通常、高用量での飽和タンパク質分解能力のためにモノクローナル抗体の用量の増加と共に絶対バイオアベイラビリティーが増加することが観察され得る。リンパ液がゆっくり血管系に流出するので、ｍＡｂの吸収プロセスは通常非常に遅く、吸収期間は数時間〜数日間にわたり得る。ＳＣ投与後のモノクローナル抗体の絶対バイオアベイラビリティーは通常５０％〜１００％の範囲である。
【０３７３】
分布：ＩＶ投与後、モノクローナル抗体は通常、迅速分布相から始まり、その後に遅い排出相が続く二相の血清（または、血漿）濃度−時間プロフィールに従う。一般的に、双指数関数薬物動態モデルがこの種の薬物動態プロフィールをうまく説明する。ｍＡｂの中心コンパートメント（Ｖｃ）中の分布容量は通常血漿容量（２〜３リッター）に等しいかまたは僅かに多い。血清（血漿）濃度−時間曲線の分布相は長い吸収部分により隠されるので、血清（血漿）濃度対時間プロフィールにおける明確な二相パターンは他の非経口投与ルート（例えば、ＩＭまたはＳＣ）では明らかでないことがある。生理化学的特性、部位特異的及び標的配向受容体により媒介される吸収、組織の結合能力及びｍＡｂ用量を含めた多くの要因がｍＡｂの生体分布に影響を与え得る。これらの要因の幾つかがｍＡｂの生体分布における非直線性に寄与し得る。
【０３７４】
代謝及び排泄：分子サイズのために、完全なモノクローナル抗体は腎臓を介して尿に排泄されない。これらの抗体は主に代謝（例えば、異化）により不活化される。ＩｇＧを主成分とする治療用モノクローナル抗体の場合、半減期は典型的には数時間または１〜２日間から２０日以上の範囲である。ｍＡｂの排除は多くの要因により影響され得るが、これらの要因にはＦｃＲｎ受容体に対する親和性、ｍＡｂの免疫原性、ｍＡｂのグリコシル化度、ｍＡｂのタンパク質分解に対する感受性及び受容体媒介排除が含まれるが、これらに限定されない。
【０３７５】
Ｂ１１．  ヒト及び毒性学種での組織交差反応性パターン
同一染色パターンから、可能性あるヒト毒性を毒性学種で評価することができることが示唆される。毒性学（ｔｏｘ）種は関連しない毒性が研究されている動物である。
【０３７６】
２つの基準、すなわち（１）抗体標的の公知の発現のために適した組織染色、及び（２）同一臓器からのヒト及び毒性学種組織間で類似の染色パターンを満たす個々の抗体を選択する。
【０３７７】
基準１：免疫化及び／または抗体選択は、典型的には組換えまたは合成した抗原（タンパク質、炭水化物または他の分子）を使用する。非関連抗原に対する天然相当物及びカウンタースクリーンへの結合はしばしば治療用抗体のためのスクリーニング漏斗の一部である。しかしながら、多数の抗原に対するスクリーニングはしばしば実際的でない。従って、すべての主要臓器からのヒト組織との組織交差反応性研究は、非関連抗原に対する抗体の望ましくない結合を除外するのに役立つ。
【０３７８】
基準２：ヒト及び毒性学種組織（カニクイザル、イヌ、可能ならば齧歯類等；ヒト研究と同一の３６または３７組織を試験する）を用いた比較組織交差反応性は毒性学種の選択を確認するために役立つ。凍結組織切片での典型的な組織交差反応性研究で、治療用抗体は公知抗原に対して予想される結合及び／または少ないが、低レベルの相互作用（非特異的結合、類似抗原に対する低レベル結合、低レベルの電荷をベースとする相互作用等）に基づく組織に対する結合を立証し得る。いずれの場合も、最も関連する毒性学動物種はヒト及び動物組織に対する結合の一致の程度が高いものである。
【０３７９】
組織交差反応性研究は、ＥＣ  ＣＰＭＰガイドライン１１１／５２７１／９４“Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｑｕａｌｉｔｙ  ｃｏｎｔｒｏｌ  ｏｆ  ｍＡｂ”及び１９９７  ＵＳ  ＦＤＡ／ＣＢＥＲ“Ｐｏｉｎｔｓ  ｔｏ  Ｃｏｎｓｉｄｅｒ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｅ  ａｎｄ  Ｔｅｓｔｉｎｇ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  ｆｏｒ  Ｈｕｍａｎ  Ｕｓｅ”を含めた適切な取り締まりガイドラインに従う。剖検または生検で得たヒト組織の低温切片（５μｍ）を対物レンズ上に固定し、乾燥させた。組織切片のペルオキシダーゼ染色をアビジン−ビオジン系を用いて実施した。ＦＤＡのガイダンス“Ｐｏｉｎｔｓ  ｔｏ  Ｃｏｎｓｉｄｅｒ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｅ  ａｎｄ  Ｔｅｓｔｉｎｇ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  ｆｏｒ  Ｈｕｍａｎ  Ｕｓｅ”。関連文献には、Ｃｌａｒｋｅ  Ｊ．，２００４、Ｂｏｏｎ  Ｌ．，２００２ａ、Ｂｏｏｎ  Ｌ．，２００２ｂ、Ｒｙａｎ  Ａ．，１９９９が含まれる。
【０３８０】
組織交差反応性研究は多くの場合２段階で実施する。第１段階は一人のヒトドナーからの３２個の低温組織（典型的には、副腎、胃腸管、前立腺、膀胱、心臓、骨格筋、血球、腎臓、皮膚、骨髄、肝臓、脊髄、乳房、肺、脾臓、小脳、リンパ節、睾丸、大脳皮質、卵巣、胸腺、結腸、膵臓、甲状腺、内皮、副甲状腺、尿管、眼、下垂体、子宮、卵管及び胎盤）を含む。第２相では、完全交差反応性研究を３人の関連しない成人からの最高３８の組織（副腎、血液、血管、骨髄、小脳、大脳、頸管、食道、眼、心臓、腎臓、大腸、肝臓、肺、リンパ節、乳腺、卵巣、卵管、膵臓、副甲状腺、末梢神経、下垂体、胎盤、前立腺、唾液腺、皮膚、小腸、脊髄、脾臓、胃、横紋筋、精巣、胸腺、甲状腺、扁桃、尿管、膀胱及び子宮を含む）で実施する。研究は典型的には少なくとも２つの用量レベルで実施する。
【０３８１】
アビジン−ビオチン複合体（ＡＢＣ）検出のために、治療用抗体（すなわち、試験物）及びアイソタイプ適合対照抗体をビオチニル化し得る。他の検出方法には、ＦＩＴＣ（または、他の方法で）標識された試験物のための三元抗体検出、または非標識試験物のための標識された抗ヒトＩｇＧの前複合体形成が含まれ得る。
【０３８２】
簡単に説明すると、剖検または生検で得たヒト組織の低温切片（約５μｍ）を対物レンズ上に固定し、乾燥させる。組織切片のペルオキシダーゼ染色をアビジン−ビオチン系を用いて実施する。まず（前複合体形成検出システムの場合）、試験物を二次ビオチニル化抗ヒトＩｇＧとインキュベートし、免疫複合体を形成する。対物レンズ上の組織切片に免疫複合体を２及び１０ｇ／ｍＬ−試験物の最終濃度で添加した後、組織切片をアビジン−ビオチン−ペルオキシダーゼキットと３０分間反応させる。その後、組織染色のためにペルオキシダーゼ反応の基質であるＤＡＢ（３，３’−ジアミノベンジジン）を４分間適用した。抗原−セファロースをポジティブ対照組織切片として使用する。
【０３８３】
特異的染色は、当該標的抗原の公知発現に基づいて予測される（例えば、抗原発現と一致）または予期せぬ反応性であるかを判断する。特異的と判断された染色を強度及び頻度について評点する。抗原または血清競合またはブロッキング研究は観察された染色が特異的または非特異的であるかを判定する際に更に助け得る。
【０３８４】
２つの選択した抗体が選択基準、すなわち適切な組織染色、ヒト及び毒性学動物特異的組織間の染色の適合に合致していることが分かったならば、これらをＤＶＤ−Ｉｇ作成のために選択し得る。
【０３８５】
組織交差反応性試験を最終ＤＶＤ−Ｉｇ構築物で反復しなければならないが、結合が２つの親抗体に由来し得、明らかにされていない結合を複雑な抗原競合試験で確認しなければならないので、これらの試験は本明細書中に概説されているのと同一プロトコルに従いながら評価するためにはより複雑である。
【０３８６】
２つの親抗体を（１）予期せぬ組織交差反応性所見を欠くこと及び（２）対応するヒト及び毒性学動物種組織間の組織交差反応性所見の適切な類似性について選択したならば、ＤＶＤ−Ｉｇのような多重特異性分子での組織交差反応性試験の複雑な仕事が大いに簡素化されることはすぐに分かる。
【０３８７】
Ｂ１２．  特異性及び選択性
所望の特異性及び選択性を有するＤＶＤ−Ｉｇ分子を作成するためには、同様に所望の特異性及び選択性プロフィールを有する親ｍＡｂを作成し、選択しなければならない。
【０３８８】
ＤＶＤ−Ｉｇとの特異性及び選択性についての結合研究は、抗原毎に２つの結合部位で４つ以上の結合部位があるために複雑であり得る。簡単に説明すると、ＤＶＤ−Ｉｇ分子に対する１、２またはそれ以上の抗原の結合をモニターするためにＤＶＤ−ＩｇとのＥＬＩＳＡ、ＢＩＡｃｏｒｅ．ＫｉｎＥｘＡまたは他の相互作用を用いる結合研究が必要である。ＢＩＡｃｏｒｅテクノロジーは複数の抗原の逐次独立結合を解明することができるが、ＥＬＩＳＡのようなより一般的な方法またはＫｉｎＥｘＡのようなより現代的な技術はできない。従って、各親抗体を注意深く特徴づけることが重要である。各個別の抗体の特異性を特徴づけた後、ＤＶＤ−Ｉｇ中の個別の結合部位の特異性保持の確認が十分簡素化される。
【０３８９】
ＤＶＤ−Ｉｇに組み込む前に２つの親抗体を特異性について選択したならば、ＤＶＤ−Ｉｇの特異性を調べる複雑な仕事が非常に簡素化されることはすぐに分かる。
【０３９０】
抗原−抗体相互反応研究は、多くの古典的タンパク質−タンパク質相互反応研究を含めた多くの形態をとり得、その中にはＥＬＩＳＡ（酵素免疫測定法）、質量分光法、化学架橋、光散乱を伴うＳＥＣ、平衡透析、ゲル浸透、限外濾過、ゲルクロマトグラフィー、大ゾーン分析ＳＥＣ、ミクロ調製超遠心分離（沈降平衡）、分光的方法、滴定微小熱量測定、沈降平衡法（分析超遠心分離における）、沈降速度（分析遠心分離における）、表面プラズモン共鳴（ＢＩＡｃｏｒｅを含む）が含まれる。関連する文献には、“Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ”，Ｊｏｈｎ  Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ，Ｂｅｎ  Ｍ．Ｄｕｎｎ，Ｄａｖｉｄ  Ｗ．Ｓｐｅｉｃｈｅｒ，Ｐａｕｌ  Ｔ．，Ｗｉｎｇｆｉｅｌｄ（編），３巻，１９及び２０章，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ  Ｉｎｃ．発行及びその中に含まれる参考文献、及び“Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ”，Ｊｏｈｎ  Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ，Ｂａｒｂａｒａ  Ｅ．Ｂｉｅｒｅｒ，Ｄａｖｉｄ  Ｈ．Ｍａｒｇｕｌｉｅｓ，Ｅｔｈａｎ  Ｍ．Ｓｈｅｖａｃｈ，Ｗａｒｒｅｎ  Ｓｔｒｏｂｅｒ（編），Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ  Ｉｎｃ．発行及びその中に含まれる参考文献が含まれる。
【０３９１】
全血におけるサイトカイン放出：ｍＡｂのヒト血球との相互作用はサイトカイン放出アッセイにより研究され得る（Ｗｉｎｇ，Ｍ．Ｇ．，Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（１９９５），２（４），１８３−１９０；“Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ”，Ｓ．Ｊ．Ｅｎｎａ，Ｍｉｃｈａｅｌ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｊｏｈｎ  Ｗ．Ｆｅｒｋａｎｙ，Ｔｅｒｒｙ  Ｋｅｎａｋｉｎ，Ｐａｕｌ  Ｍｏｓｅｒ（編），Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ  Ｉｎｃ．発行；Ｍａｄｈｕｓｕｄａｎ，Ｓ．，Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（２００４），１０（１９），６５２８−６５３４；Ｃｏｘ，Ｊ．Ｍｅｔｈｏｄｓ（２００６），３８（４），２７４−２８２；Ｃｈｏｉ，Ｉ．，Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２００１），３１（１），９４−１０６）。簡単に説明すると、各種濃度のｍＡｂをヒト全血と２４時間インキュベートする。試験する濃度は患者中の典型的な血液レベルによく似た最終濃度を含めた広範囲（非限定例として、１００ｎｇ／ｍｌ〜１００μｇ／ｍｌが挙げられる）をカバーしなければならない。インキュベートした後、上清及び細胞ライゼートをＩＬ−１Ｒα、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１ｂ、ＩＬ−６及びＩＬ−８の存在について分析する。ｍＡｂに対して作成したサイトカイン濃度プロフィールをネガティブのヒトＩｇＧ対照及びポジティブのＬＰＳまたはＰＨＡ対照により生じたプロフィールと比較した。細胞上清及び細胞ライゼート由来のｍＡｂが示すサイトカインプロフィールは対照ヒトＩｇＧに匹敵した。実施形態では、モノクローナル抗体は炎症性サイトカインを自然に放出するようにヒト血球と相互作用しない。
【０３９２】
ＤＶＤ−Ｉｇについてのサイトカイン放出研究は、抗原毎に２つの結合部位で４つ以上の結合部位のために複雑であり得る。簡単に説明すると、本明細書中に記載されているサイトカイン放出研究は全ＤＶＤ−Ｉｇ分子の全血または他の細胞系に対する影響を調べるが、分子のどの部分がサイトカイン放出を引き起こすかを解明できる。サイトカイン放出が検出されたら、幾つかの精製細胞成分がそれ自身でサイトカイン放出を引き起こし得るのでＤＶＤ−Ｉｇ調製物の純度を確認しなければならない。純度が問題でないならば、ＤＶＤ−Ｉｇの断片化（これには、Ｆｃ部分の除去、結合部位の分離等が含まれるが、これらに限定されない）、所見を解析するために結合部位突然変異または他の方法を使用する必要があり得る。ＤＶＤ−Ｉｇに組み込む前に２つの親抗体をサイトカイン放出の欠乏について選択したならば、この複雑な仕事が非常に簡素化されることはすぐに分かる。
【０３９３】
Ｂ１３．  毒性学研究のための他の種に対する交差反応性
実施形態では、適切な毒性学種（例えば、カニクイザル）に対して十分な交差反応性を有する個々の抗体を選択した。親抗体はオルソロガス種標的（すなわち、カニクイザル）に結合し、適切な応答（モジュレーション、中和、活性化）を引き出さなければならない。実施形態では、オルソロガス種標的に対する交差反応性（親和性／力価）はヒト標的の１０倍以内でなければならない。実際、親抗体をマウス、ラット、イヌ、サル（及び他の非ヒト霊長類）を含めた複数の種及び疾患モデル種（すなわち、喘息モデルの場合ヒツジ）に対して評価する。親モノクローナル抗体からの毒性学種に対する許容され得る交差反応性により、同一種においてＤＶＤ−Ｉｇ−Ｉｇの更なる毒性研究をすることができる。このために、２つの親モノクローナル抗体は共通する毒性学種に対して許容され得る交差反応性を有していなければならず、従って同一種においてＤＶＤ−Ｉｇ−Ｉｇの更なる毒性学研究をすることができる。
【０３９４】
親ｍＡｂは特定標的に結合し得る当業界で公知の各種ｍＡｂから選択され得る。これらには、抗ＴＮＦ抗体（米国特許Ｎｏ．６，２５８，５６２）、抗ＩＬ−１２及び／または抗ＩＬ−１２ｐ４０抗体（米国特許Ｎｏ．６，９１４，１２８）；抗ＩＬ−１８抗体（ＵＳ  ２００５／０１４７６１０  Ａ１）、抗Ｃ５、抗ＣＢＬ、抗ＣＤ１４７、抗ｇｐ１２０、抗ＶＬＡ−４、抗ＣＤ１１ａ、抗ＣＤ１８、抗ＶＥＧＦ、抗ＣＤ４０Ｌ、抗ＣＤ−４０（例えば、ＷＯ  ２００７１２４２９９を参照されたい）、抗Ｉｄ、抗ＩＣＡＭ−１、抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＤ２、抗ＥＧＦＲ、抗ＴＧＦ−β２、抗ＨＧＦ、抗ｃＭｅｔ、抗ＤＬＬ−４、抗ＮＰＲ１、抗ＰＬＧＦ、抗ＥｒｂＢ３、抗Ｅ−セレクチン、抗Ｆａｃｔ  ＶＩＩ、抗Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、抗Ｆ  ｇｐ、抗ＣＤ１１／１８、抗ＣＤ１４、抗ＩＣＡＭ−３、抗ＲＯＮ、抗ＣＤ−１９、抗ＣＤ８０（例えば、ＷＯ  ２００３０３９４８６）、抗ＣＤ４、抗ＣＤ３、抗ＣＤ２３、抗β２−インテグリン、抗α４β７、抗ＣＤ５２、抗ＨＬＡ  ＤＲ、抗ＣＤ２２（例えば、米国特許Ｎｏ．５，７８９，５５４を参照されたい）、抗ＣＤ２０、抗ＭＩＦ、抗ＣＤ６４（ＦｃＲ）、抗ＴＣＲαβ、抗ＣＤ２、抗Ｈｅｐ  Ｂ、抗ＣＡ  １２５、抗ＥｐＣＡＭ、抗ｇｐ１２０、抗ＣＭＶ、抗ｇｐＩＩｂＩＩＩａ、抗ＩｇＥ、抗ＣＤ２５、抗ＣＤ３３、抗ＨＬＡ、抗ＩＧＦ１，２、抗ＩＧＦＲ、抗ＶＮＲインテグリン、抗ＩＬ−１α、抗ＩＬ−１β、抗ＩＬ−１受容体、抗ＩＬ−２受容体、抗ＩＬ−４、抗ＩＬ−４受容体、抗ＩＬ５、抗ＩＬ−５受容体、抗ＩＬ−６、抗ＩＬ−８、抗ＩＬ−９、抗ＩＬ−１３、抗ＩＬ−１３受容体、抗ＩＬ−１７及び抗ＩＬ−２３（Ｐｒｅｓｔａ  ＬＧ．，２００５，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，ｄｅｓｉｇｎ、ａｎｄ  ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ｏｆ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１１６：７３１−６、及びｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｐａｔｈ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／〜ｍｒｃ７／ｈｕｍａｎｉｓａｔｉｏｎ／ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．ｈｔｍｌを参照されたい）が含まれるが、これらに限定されない。
【０３９５】
親ｍＡｂは、使用が認可されている、臨床トライアル中、または臨床使用のために開発中の治療用抗体からも選択され得る。治療用抗体には、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標），ＩＤＥＣ／Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｒｏｃｈｅ）（例えば、米国特許Ｎｏ．５，７３６，１３７を参照されたい）、非ホジキンリンパ腫治療のために認可されているキメラ抗ＣＤ２０抗体；ＨｕＭａｘ−ＣＤ２０、現在Ｇｅｎｍａｂが開発している抗ＣＤ２０、米国特許Ｎｏ．５，５００，３６２に記載されている抗ＣＤ２０抗体、ＡＭＥ−１３３（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ）、ｈＡ２０（Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ，Ｉｎｃ．）、ＨｕｍａＬＹＭ（Ｉｎｔｒａｃｅｌ）及びＰＲＯ７０７６９（“Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  Ｖａｒｉａｎｔｓ  ａｎｄ  Ｕｓｅｓ  Ｔｈｅｒｅｏｆ”の発明の名称のＰＣＴ／ＵＳ２００３／０４０４２６）、トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標），Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）（例えば、米国特許Ｎｏ．５，６７７，１７１を参照されたい）、乳癌治療のために認可されているヒト化抗Ｈｅｒ２／ｎｅｕ抗体；現在Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈが開発しているパーツズマブ（ｒｈｕＭａｂ−２Ｃ４，Ｏｍｎｉｔａｒｇ（登録商標））；米国特許Ｎｏ．４，７５３，８９４に記載されている抗Ｈｅｒ２抗体；セツキシマブ（Ｅｒｂｉｔｕｘ（登録商標），Ｉｍｃｌｏｎｅ）（米国特許Ｎｏ．４，９４３，５３３；ＰＣＴ  ＷＯ  ９６／４０２１０）、各種癌に対して臨床トライアル中のキメラ抗ＥＧＦＲ抗体；現在Ａｂｇｅｎｉｘ−Ｉｍｍｕｎｅｘ−Ａｍｇｅｎが開発しているＡＢＸ−ＥＧＦ（米国特許Ｎｏ．６，２３５，８８３）；現在Ｇｅｎｍａｂが開発しているＨｕＭａｘ−ＥＧＦｒ（米国特許出願Ｎｏ．１０／１７２，３１７）；４２５，ＥＭＤ５５９００、ＥＭＤ６２０００及びＥＭＤ７２０００（Ｍｅｒｃｋ  ＫＧａＡ）（米国特許Ｎｏ．５，５５８，８６４；Ｍｕｒｔｈｙら，１９８７，Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．，２５２（２）：５４９−６０；Ｒｏｄｅｃｋら，１９８７，Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．，３５（４）：３１５−２０；Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈら，１９９１、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．，４（７）：７７３−８３）；ＩＣＲ６２（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）（ＰＣＴ  ＷＯ  ９５／２００４５；Ｍｏｄｊｔａｈｅｄｉら，１９９３，Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｐｈｙｓ．，１９９３，２２（１−３）：１２９−４６；Ｍｏｄｊｔａｈｅｄｉら，１９９３，Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ．，１９９３，６７（２）：２４７−５３；Ｍｏｄｊｔａｈｅｄｉら，１９９６，Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，７３（２）：２２８−３５；Ｍｏｄｊｔａｈｅｄｉら，２００３，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，１０５（２）：２７３−８０）；ＴｈｅｒａＣＩＭ  ｈＲ３（ＹＭ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｃａｎａｄａ  ａｎｄ  Ｃｅｎｔｒａ  ｄｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉａ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ，Ｃｕｂａ（米国特許Ｎｏ．５，８９１，９９６；米国特許Ｎｏ．６，５０６，８８３；Ｍａｔｅｏら，１９９７，Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，３（１）：７１−８１）；ｍＡｂ−８０６（Ｌｕｄｗｉｇ  Ｉｎｓｔｉｔｕ���  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｍｅｍｏｒｉａｌ  Ｓｌｏａｎ−Ｋｅｔｔｅｒｉｎｇ）（Ｊｕｎｇｂｌｕｔｈら，２００３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．，１００（２）：６３９−４４）；ＫＳＢ−１０２（ＫＳ  Ｂｉｏｍｅｄｉｘ）；ＭＲｌ−１（ＩＶＡＸ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）（ＰＣＴ  ＷＯ  ０１６２９３１  Ａ２）；及びＳＣ１００（Ｓｃａｎｃｅｌｌ）（ＰＣＴ  ＷＯ  ０１／８８１３８）；アレムツズマブ（Ｃａｍｐａｔｈ（登録商標），Ｍｉｌｌｅｎｉｕｍ）、Ｂ細胞慢性リンパ球性白血病治療のために現在認可されているヒト化ｍＡｂ；ムロモナブ−ＣＤ３（Ｏｒｔｈｏｃｌｏｎｅ  ＯＫＴ３（登録商標））、Ｏｒｔｈｏ  Ｂｉｏｔｅｃｈ／Ｊｏｈｎｓｏｎ  ＆  Ｊｏｈｎｓｏｎが開発している抗ＣＤ３抗体、イブリツモマブ・チウキセタン（Ｚｅｖａｌｉｎ（登録商標））、ＩＤＥＣ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ  ＡＧが開発している抗ＣＤ２０抗体、ゲムツズマブ・オゾガマイシン（Ｍｙｌｏｔａｒｇ（登録商標））、Ｃｅｌｌｔｅｃｈ／Ｗｙｅｔｈが開発している抗ＣＤ３３（ｐ６７タンパク質）抗体、アレファセプト（Ａｍｅｖｉｖｅ（登録商標））、Ｂｉｏｇｅｎが開発している抗ＬＦＡ−３  Ｆｃ融合物、Ｃｅｎｔｏｃｏｒ／Ｌｉｌｌｙが開発しているアブシキマブ（ＲｅｏＰｒｏ（登録商標））、Ｎｏｖａｒｔｉｓが開発しているバシリキシマブ（Ｓｉｍｕｌｅｃｔ（登録商標））、Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅが開発しているパリビズマブ（Ｓｙｎａｇｉｓ（登録商標））、インフリキシマブ（Ｒｅｍｉｃａｄｅ（登録商標））、Ｃｅｎｔｏｃｏｒが開発している抗ＴＮＦα抗体、アダリムマブ（Ｈｕｍｉｒａ（登録商標））、Ａｂｂｏｔｔが開発している抗ＴＮＦα抗体、Ｈｕｍｉｃａｄｅ（登録商標）、Ｃｅｌｌｔｅｃｈが開発している抗ＴＮＦα抗体、ゴリムマブ（ＣＮＴＯ−１４８）、Ｃｅｎｔｏｃｏｒが開発している完全ヒトＴＮＦ抗体、エタネルセプト（Ｅｎｂｒｅｌ（登録商標））、Ｉｍｍｕｎｅｘ／Ａｍｇｅｎが開発しているｐ７５  ＴＮＦ受容体Ｆｃ融合物、レネルセプト、既にＲｏｃｈｅが開発したｐ５５ＴＮＦ受容体Ｆｃ融合物、ＡＢＸ−ＣＢＬ、Ａｂｇｅｎｉｘが開発している抗ＣＤ１４７抗体、ＡＢＸ−ＩＬ８、Ａｂｇｅｎｉｘが開発している抗ＩＬ８抗体、ＡＢＸ−ＭＡ１、Ａｂｇｅｎｉｘが開発している抗ＭＵＣ１８抗体、ペムツモマブ（Ｒ１５４９，９０Ｙ−ｍｕＨＭＦＧ１）、Ａｎｔｉｓｏｍａが開発中の抗ＭＵＣ１、Ｔｈｅｒｅｘ（Ｒ１５５０）、Ａｎｔｉｓｏｍａが開発している抗ＭＵＣ１抗体、Ａｎｔｉｓｏｍａが開発しているＡｎｇｉｏＭａｂ（ＡＳ１４０５）、Ａｎｔｉｓｏｍａが開発しているＨｕＢＣ−１、Ａｎｔｉｓｏｍａが開発しているチオプラチン（ＡＳ１４０７）、Ａｎｔｅｇｒｅｎ（登録商標）（ナタリズマブ）、Ｂｉｏｇｅｎが開発している抗α−４−β−１（ＶＬＡ−４）及びα−４−β−７抗体、ＶＬＡ−１  ｍＡｂ、Ｂｉｏｇｅｎが開発している抗ＶＬＡ−１インテグリン抗体、ＬＴＢＲ  ｍＡｂ、Ｂｉｏｇｅｎが開発している抗リンホトキシンβ受容体（ＬＴＢＲ）抗体、ＣＡＴ−１５２、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙが開発している抗ＴＧＦ−２抗体��ＡＢＴ  ８７４（Ｊ６９５）、Ａｂｂｏｔｔが開発している抗ＩＬ−１２  ｐ４０抗体、ＣＡＴ−１９２、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ及びＧｅｎｚｙｍｅが開発している抗ＴＧＦβ１抗体、ＣＡＴ−２１３、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙａｎが開発している抗エオタキシン１抗体、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ及びＨｕｍａｎ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｉｎｃ．が開発しているＬｙｍｐｈｏＳｔａｔ−Ｂ（登録商標）抗Ｂｌｙｓ抗体、ＴＲＡＩＬ−Ｒ１ｍＡｂ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ及びＨｕｍａｎ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．が開発している抗ＴＲＡＩＬ−Ｒ１抗体、Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標）ベバシズマブ、ｒｈｕＭＡｂ−ＶＥＧＦ）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈが開発している抗ＶＥＧＦ抗体、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈが開発している抗ＨＥＲ受容体ファミリー抗体、抗組織因子（ＡＴＦ）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈが開発している抗組織因子抗体、Ｘｏｌａｉｒ（登録商標）（オマリズマブ）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈが開発している抗ＩｇＥ抗体、Ｒａｐｔｉｖａ（登録商標）（エファリズマブ）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ及びＸｏｍａが開発している抗ＣＤ１１ａ抗体、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ及びＭｉｌｌｅｎｉｕｍ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓが開発しているＭＬＮ−０２抗体（旧、ＬＤＰ−０２）、ＨｕＭａｘ  ＣＤ４、Ｇｅｎｍａｂが開発している抗ＣＤ４抗体、ＨｕＭａｘ−ＩＬ１５、Ｇｅｎｍａｂ及びＡｍｇｅｎが開発している抗ＩＬ１５抗体、Ｇｅｎｍａｂ及びＭｅｄａｒｅｘが開発しているＨｕＭａｘ−Ｉｎｆｌａｍ、ＨｕＭａｘ−Ｃａｎｃｅｒ、Ｇｅｎｍａｂ及びＭｅｄａｒｅｘ及びＯｘｆｏｒｄ  ＧｃｏＳｃｉｅｎｃｅｓが開発している抗ヘパラナーゼＩ抗体、Ｇｅｎｍａｂ及びＡｍｇｅｎが開発しているＨｕＭａｘ−Ｌｙｍｐｈｏｍａ、Ｇｅｎｍａｂが開発しているＨｕＭａｘ−ＴＡＣ、ＩＤＥＣ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓが開発しているＩＤＥＣ−１３１及び抗ＣＤ４０Ｌ抗体、ＩＤＥＣ−１５１（クレノリキシマブ）、ＩＤＥＣ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓが開発している抗ＣＤ４抗体、ＩＤＥＣ−１１４、ＩＤＥＣ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓが開発している抗ＣＤ８０抗体、ＩＤＥＣ−１５２、ＩＤＥＣ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓが開発している抗ＣＤ２３、ＩＤＥＣ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓが開発している抗マクロファージ遊走因子（ＭＩＦ）抗体、ＢＥＣ２、Ｉｍｃｌｏｎｅが開発している抗イディオタイプ抗体、ＩＭＣ−１Ｃ１１、Ｉｍｃｌｏｎｅが開発している抗ＫＤＲ抗体、ＤＣ１０１、Ｉｍｃｌｏｎｅが開発している抗ｆｌｋ−１抗体、Ｉｍｃｌｏｎｅが開発している抗ＶＥカドヘリン抗体、ＣＥＡ−Ｃｉｄｅ（登録商標）（ラベツズマブ）、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓが開発している抗癌胎児性抗原（ＣＥＡ）抗体、ＬｙｍｐｈｏＣｉｄｅ（登録商標）（エプラツズマブ）、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓが開発している抗ＣＤ２２抗体、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓが開発しているＡＦＰ−Ｃｉｄｅ、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓが開発しているＭｙｅｌｏｍａＣｉｄｅ、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄ��ｃｓが開発しているＬｋｏＣｉｄｅ、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓが開発しているＰｒｏｓｔａＣｉｄｅ、ＭＤＸ−０１０、Ｍｅｄａｒｅｘが開発している抗ＣＴＬＡ４抗体、ＭＤＸ−０６０、Ｍｅｄａｒｅｘが開発している抗ＣＤ３０抗体、Ｍｅｄａｒｅｘが開発しているＭＤＸ−０７０、Ｍｅｄａｒｅｘが開発しているＭＤＸ−０１８、Ｏｓｉｄｅｍ（登録商標）（ＩＤＭ−１）、及びＭｅｄａｒｅｘ及びＩｍｍｕｎｏ−Ｄｅｓｉｇｎｅｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓが開発している抗Ｈｅｒ２抗体、ＨｕＭａｘ（登録商標）−ＣＤ４、Ｍｅｄａｒｅｘ及びＧｅｎｍａｂが開発している抗ＣＤ４抗体、ＨｕＭａｘ−ＩＬ１５、Ｍｅｄａｒｅｘ及びＧｅｎｍａｂが開発している抗ＩＬ１５抗体、ＣＮＴＯ  １４８、Ｍｅｄａｒｅｘ及びＣｅｎｔｏｃｏｒ／Ｊ＆Ｊが開発している抗ＴＮＦα抗体、ＣＮＴＯ  １２７５、Ｃｅｎｔｏｃｏｒ／Ｊ＆Ｊが開発している抗サイトカイン抗体、ＭＯＲ１０１及びＭＯＲ１０２、ＭｏｒｐｈｏＳｙｓが開発している抗細胞内接着分子−１（ＩＣＡＭ−１）（ＣＤ５４）抗体、ＭＯＲ２０１、ＭｏｒｐｈｏＳｙｓが開発している抗線維芽細胞増殖因子受容体３（ＦＧＦＲ−３）抗体、Ｎｕｖｉｏｎ（登録商標）（ビシリズマブ）、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｅｓｉｇｎ  Ｌａｂｓが開発している抗ＣＤ３抗体、ＨｕＺＡＦ（登録商標）、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｅｓｉｇｎ  Ｌａｂｓが開発している抗γインターフェロン抗体、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｅｓｉｇｎ  Ｌａｂｓが開発している抗α５β１インテグリン、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｅｓｉｇｎ  Ｌａｂｓが開発している抗ＩＬ−１２、ＩＮＧ−１、Ｘｏｍａが開発している抗Ｅｐ−ＣＡＭ抗体、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ及びＮｏｖａｒｔｉｓが開発しているＸｏｌａｉｒ（登録商標）（オマリズマブ）ヒト化抗ＩｇＥ抗体及びＭＬＮ０１、Ｘｏｍａが開発している抗β２インテグリン抗体が含まれるが、これらに限定されず、この段落で引用した文献がすべて参照により本明細書に組み入れる。他の実施形態では、治療薬には、ＫＲＮ３３０（Ｋｉｒｉｎ）、ｈｕＡ３３抗体（Ａ３３，Ｌｕｄｗｉｇ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）、ＣＮＴＯ  ９５（αＶインテグリン，Ｃｅｎｔｏｃｏｒ）、ＭＥＤＩ−５２２（αＶβ３インテグリン，Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ）、ボロシキシマブ（αＶβ１インテグリン，Ｂｉｏｇｅｎ／
ＰＤＬ）、ヒトｍＡｂ  ２１６（Ｂ細胞グリコシル化エピトープ，ＮＣＩ）、ＢｉＴＥ  ＭＴ１０３（双特異性ＣＤ１９×ＣＤ３，Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ）、４Ｇ７×Ｈ２２（双特異性Ｂ細胞×ＦｃγＲ１，Ｍｅｄａｒｅｘ／Ｍｅｒｃｋ  ＫＧａ）、ｒＭ２８（双特異性ＣＤ２８×ＭＡＰＧ，米国特許Ｎｏ．ＥＰ１４４４２６８）、ＭＤＸ４４７（ＥＭＤ  ８２６３３）（双特異性ＣＤ６４×ＥＧＦＲ，Ｍｅｄａｒｅｘ）、カツマキソマブ（レモバブ）（双特異性ＥｐＣＡＭ×抗ＣＤ３，Ｔｒｉｏｎ／Ｆｒｅｓ）、エリツマキソマブ（双特異性ＨＥＲ２／ＣＤ３，Ｆｒｅｓｅｎｉｕｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）、オレゴボマブ（ＯｖａＲｅｘ）（ＣＡ−１２５，ＶｉＲｅｘｘ）、Ｒｅｎｃａｒｅｘ（登録商標）（ＷＸ  Ｇ２５０）（炭酸脱水酵素ＩＸ，Ｗｉｌｅｘ）、ＣＮＴＯ  ８８８（ＣＣＬ２、Ｃｅｎｔｏｃｏｒ）、ＴＲＣ１０５（ＣＤ１０５（エンドグリン），Ｔｒａｃｏｎ）、ＢＭＳ−６６３５１３（ＣＤ１３７アゴニスト，Ｂｒｙｓｔｏｌ  Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）、ＭＤＸ−１３４２（ＣＤ１９，Ｍｅｄａｒｅｘ）、シプリズマブ（ＭＥＤＩ−５０７）（ＣＤ２，Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ）、オフツムマブ（Ｈｕｍａｘ−ＣＤ２０）（ＣＤ２０、Ｇｅｎｍａｂ）、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ）（ＣＤ２０，Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ベルツズマブ（ｈＡ２０）（ＣＤ２０，Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ）、エプラツズマブ（ＣＤ２２、Ａｍｇｅｎ）、ルミリキシマブ（ＩＤＥＣ  １５２）（ＣＤ２３，Ｂｉｏｇｅｎ）、ムロモナブ−ＣＤ３（ＣＤ３，Ｏｒｔｈｏ）、ＨｕＭ２９１（ＣＤ３  ｆｃ受容体，ＰＤＬ  Ｂｉｏｐｈａｒｍａ）、ＨｅＦｉ−１，ＣＤ３０，ＮＣＩ）、ＭＤＸ−０６０（ＣＤ３０，Ｍｅｄａｒｅｘ）、ＭＤＸ−１４０１（ＣＤ３０，Ｍｅｄａｒｅｘ）、ＳＧＮ−３０（ＣＤ３０，Ｓｅａｔｔｌｅ  Ｇｅｎｅｎｔｉｃｓ）、ＳＧＮ−３３（リンツズマブ）（ＣＤ３３，Ｓｅａｔｔｌｅ  Ｇｅｎｅｎｔｉｃｓ）、ザノリムマブ（ＨｕＭａｘ−ＣＤ４）（ＣＤ４，Ｇｅｎｍａｂ）、ＨＣＤ１２２（ＣＤ４０，Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＳＧＮ−４０（ＣＤ４０，Ｓｅａｔｔｌｅ  Ｇｅｎｅｎｔｉｃｓ）、キャンパス１ｈ（アルメツズマブ）（ＣＤ５２，Ｇｅｎｚｙｍｅ）、ＭＤＸ−１４１１（ＣＤ７０，Ｍｅｄａｒｅｘ）、ｈＬＬ１（ＥＰＢ−１）（ＣＤ７４．３８，Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ）、ガリキシマブ（ＩＤＥＣ−１４４）（ＣＤ８０，Ｂｉｏｇｅｎ）、ＭＴ２９３（ＴＲＣ０９３／Ｄ９３）（切断コラーゲン、Ｔｒａｃｏｎ）、ＨｕＬｕｃ６３（ＣＳ１，ＰＤＬ  Ｐｈａｒｍａ）、イピリムマブ（ＭＤＸ−０１０）（ＣＴＬＡ４，Ｂｒｙｓｔｏｌ  Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）、トレメリムマブ（チシリムマブ，ＣＰ−６７５，２）（ＣＴＬＡ４，Ｐｆｉｚｅｒ）、ＨＧＳ−ＥＴＲ１（マパツムマブ）（ＤＲ４  ＴＲＡＩＬ−Ｒ１アゴニスト、Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ／Ｇｌａｘｏ  Ｓｍｉｔｈ  Ｋｌｉｎｅ）、ＡＭＧ−６５５（ＤＲ５，Ａｍｇｅｎ）、アポマブ（ＤＲ５、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ＣＳ−１００８（ＤＲ５，Ｄａｉｉｃｈｉ  Ｓａｎｋｙｏ）、ＨＧＳ−ＥＴＲ２（レキサツムマブ）（ＤＲ５  ＴＲＡＩＬ−Ｒ２アゴニスト，ＨＧＳ）、セツキシマプ（アービタックス（ＥＧＦＲ，Ｉｍｃｌｏ��ｅ）、ＩＭＣ−１１Ｆ８（ＥＧＦＲ，Ｉｍｃｌｏｎｅ）、ニモツズマブ（ＥＧＦＲ，ＹＭ  Ｂｉｏ）、パニツムマブ（Ｖｅｃｔａｂｉｘ）（ＥＧＦＲ，Ａｍｇｅｎ）、ザルツムマブ（ＨｕＭａｘＥＧＦｒ）（ＥＧＦＲ，Ｇｅｎｍａｂ）、ＣＤＸ−１１０（ＥＧＦＲｖＩＩＩ，ＡＶＡＮＴ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、アデカツムマブ（ＭＴ２０１）（Ｅｐｃａｍ，Ｍｅｒｃｋ）、エドレコロマブ（Ｐａｎｏｒｅｘ，１７−１Ａ）（Ｅｐｃａｍ，Ｇｌａｘｏ／Ｃｅｎｔｏｃｏｒ）、ＭＯＲＡｂ−００３（フォレート受容体ａ，Ｍｏｒｐｈｏｔｅｃｈ）、ＫＷ−２８７１（ガングリオシドＧＤ３，Ｋｙｏｗａ）、ＭＯＲＡｂ−００９（ＧＰ−９，Ｍｏｒｐｈｏｔｅｃｈ）、ＣＤＸ−１３０７（ＭＤＸ−１３０７）（ｈＣＧｂ，Ｃｅｌｌｄｅｘ）、トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ）（ＨＥＲ２，Ｃｅｌｌｄｅｘ）、ペルツズマブ（ｒｈｕＭＡｂ  ２Ｃ４）（ＨＥＲ２（ＤＩ），Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、アポリズマブ（ＨＬＡ−ＤＲβ鎖，ＰＤＬ  Ｐｈａｒｍａ）、ＡＭＧ−４７９（ＩＧＦ−ＩＲ，Ａｍｇｅｎ）、抗ＩＧＦ−１Ｒ  Ｒ１５０７（ＩＧＦ１−Ｒ，Ｒｏｃｈｅ）、ＣＰ  ７５１８７１（ＩＧＦ１−Ｒ，Ｐｆｉｚｅｒ）、ＩＭＣ−Ａ１２（ＩＧＦ１−Ｒ，Ｉｍｃｌｏｎｅ）、ＢＩＬＢ０２２（ＩＧＦ−ＩＲ，Ｂｉｏｇｅｎ）、Ｍｉｋ−β−１（ＩＬ−２Ｒｂ（ＣＤ１２２），Ｈｏｆｆｍａｎ  ＬａＲｏｃｈｅ）、ＣＮＴＯ  ３２８（ＩＬ６，Ｃｅｎｔｏｃｏｒ）、抗ＫＩＲ（１−７Ｆ９）（キラー細胞Ｉｇ様受容体（ＫＩＲ），Ｎｏｖｏ）、Ｈｕ３Ｓ１９３（Ｌｅｗｉｓ（ｙ），Ｗｙｅｔｈ，Ｌｕｄｗｉｇ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）、ｈＣＢＥ−１１（ＬＴβＲ，Ｂｉｏｇｅｎ）、ＨｕＨＭＦＧ１（ＭＵＣ１，Ａｎｔｉｓｏｍａ／ＮＣＩ）、ＲＡＶ１２（Ｎ連結炭水化物エピトープ，Ｒａｖｅｎ）、ＣＡＬ（副甲状腺ホルモン関連タンパク質（ＰＴＨ−ｒＰ），Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）、ＣＴ−０１１（ＰＤ１，ＣｕｒｅＴｅｃｈ）、ＭＤＸ−１１０６（ｏｎｏ−４５３８）（ＰＤ１，Ｍｅｄａｒｅｘ／Ｏｎｏ）、ＭＡｂ  ＣＴ−０１１（ＰＤ１，Ｃｕｒｅｔｅｃｈ）、ＩＭＣ−３Ｇ３（ＰＤＧＦＲａ，Ｉｍｃｌｏｎｅ）、バビツキシマブ（ホスファチジルコリン，Ｐｅｒｅｇｒｉｎｅ）、ｈｕＪ５９１（ＰＳＭＡ，Ｃｏｒｎｅｌｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ）、ｍｕＪ５９１（ＰＳＭＡ，Ｃｏｒｎｅｌｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ）、ＧＣ１００８（ＴＧＦｂ（ｐａｎ）インヒビター（ＩｇＧ４），Ｇｅｎｚｙｍｅ）、インフリキシマブ（Ｒｅｍｉｃａｄｅ）（ＴＮＦα，Ｃｅｎｔｏｃｏｒ）、Ａ２７．１５（トランスフェリン受容体，Ｓａｌｋ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，ＩＮＳＥＲＮ  ＷＯ  ２００５／１１１０８２）、Ｅ２．３（トランスフェリン受容体，Ｓａｌｋ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）、ベバシズマブ（アバスチン）（ＶＥＧＦ，Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ＨｕＭＶ８３３（ＶＥＧＦ，Ｔｓｕｋｕｂａ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂ−ＷＯ／２０００／０３４３３７，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｔｅｘａｓ）、ＩＭＣ−１８Ｆ１（ＶＥＧＦＲ１，Ｉｍｃｌｏｎｅ）、ＩＭＣ−１１２１（ＶＥＧＦＲ２、Ｉｍｃｌｏｎｅ）が含まれる。
【０３９６】
Ｂ．ＤＶＤ分子の構築
二重可変ドメイン免疫グロブリン（ＤＶＤ−Ｉｇ）分子は、２つの異なる親モノクローナル抗体由来の２つの異なる軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を直接または短リンカーを介して組換えＤＮＡ技術によりタンデムに連結した後、軽鎖定常ドメインにより連結されるように設計される。同様に、重鎖はタンデムに連結されている２つの異なる重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、その後に定常ドメインＣＨ１及びＦｃ領域を含む（図１Ａ）。
【０３９７】
可変ドメインは、本明細書中に記載されている方法の１つにより作成した親抗体から組換えＤＮＡ技術を用いて得られ得る。実施形態では、可変ドメインはマウス重鎖または軽鎖可変ドメインである。別の実施形態では、可変ドメインはＣＤＲグラフト化またはヒト化可変重鎖または軽鎖ドメインである。実施形態では、可変ドメインはヒト重鎖または軽鎖可変ドメインである。
【０３９８】
１つの実施形態では、第１及び第２可変ドメインを組換えＤＮＡ技術を用いて相互に直接連結する。他の実施形態では、可変ドメインをリンカー配列を介して連結する。実施形態では、２つの可変ドメインを連結する。３つ以上の可変ドメインを直接またはリンカー配列を介して連結させてもよい。可変ドメインは同一の抗原に結合させても、別の抗原に結合させてもよい。本発明のＤＶＤ分子は、１つの免疫グロブリン可変ドメイン及び１つの非免疫グロブリン可変ドメイン（例えば、受容体のリガンド結合ドメイン、酵素の活性ドメイン）を含み得る。ＤＶＤ分子は２つ以上の非Ｉｇドメインをも含み得る。
【０３９９】
リンカー配列は単一アミノ酸またはポリペプチド配列であり得る。実施形態では、リンカー配列は、ＡＫＴＴＰＫＬＥＥＧＥＦＳＥＡＲ（配列番号１）、ＡＫＴＴＰＫＬＥＥＧＥＦＳＥＡＲＶ（配列番号２）、ＡＫＴＴＰＫＬＧＧ（配列番号３）、ＳＡＫＴＴＰＫＬＧＧ（配列番号４）、ＳＡＫＴＴＰ（配列番号５）、ＲＡＤＡＡＰ（配列番号６）、ＲＡＤＡＡＰＴＶＳ（配列番号７）、ＲＡＤＡＡＡＡＧＧＰＧＳ（配列番号８）、ＲＡＤＡＡＡＡ（Ｇ４Ｓ）４（配列番号９）、ＳＡＫＴＴＰＫＬＥＥＧＥＦＳＥＡＲＶ（配列番号１０）、ＡＤＡＡＰ（配列番号１１）、ＡＤＡＡＰＴＶＳＩＦＰＰ（配列番号１２）、ＴＶＡＡＰ（配列番号１３）、ＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰ（配列番号１４）、ＱＰＫＡＡＰ（配列番号１５）、ＱＰＫＡＡＰＳＶＴＬＦＰＰ（配列番号１６）、ＡＫＴＴＰＰ（配列番号１７）、ＡＫＴＴＰＰＳＶＴＰＬＡＰ（配列番号１８）、ＡＫＴＴＡＰ（配列番号１９）、ＡＫＴＴＡＰＳＶＹＰＬＡＰ（配列番号２０）、ＡＳＴＫＧＰ（配列番号２１）、ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰ（配列番号２２）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２３）、ＧＥＮＫＶＥＹＡＰＡＬＭＡＬＳ（配列番号２４）、ＧＰＡＫＥＬＴＰＬＫＥＡＫＶＳ（配列番号２５）、ＧＨＥＡＡＡＶＭＱＶＱＹＰＡＳ（配列番号２６）からなる群から選択される。リンカー配列の選択は数個のＦａｂ分子の結晶構造分析に基づいている。Ｆａｂまたは抗体分子構造中の可変ドメインとＣＨ１／ＣＬ定常ドメインの間に天然可動性リンケージがある。この天然リンケージは、ＶドメインのＣ末端から４〜６個の残基及びＣＬ／ＣＨ１ドメインのＮ末端から４〜６個の残基により与えられるほぼ約１０〜１２個のアミノ酸残基からなる。本発明のＤＶＤ−Ｉｇは、ＤＶＤ−Ｉｇの軽鎖及び重鎖中のリンカーとしてそれぞれＣＬまたはＣＨ１のＮ末端の５〜６アミノ酸残基または１１〜１２アミノ酸残基を用いて作成した。ＣＬまたはＣＨ１ドメインのＮ末端残基、特に最初の５〜６アミノ酸残基は強い二次構造なしのループ構造を採用し、従って２つの可変ドメイン間の可動性リンカーとして作用し得る。ＣＬまたはＣＨ１ドメインのＮ末端残基は、Ｉｇ配列の一部であるので可変ドメインの天然延長であり、従って潜在的にリンカー及び接合部から生ずる免疫原性がかなりの程度まで抑えられる
他のリンカー配列はＣＬ／ＣＨ１ドメインの任意の長さの配列、例えばＣＬ／ＣＨ１ドメインの最初の５〜１２アミノ酸残基を含み得るが、ＣＬ／ＣＨ１ドメインのすべての残基を含まなくてもよい。軽鎖リンカーはＣκまたはＣλ由来であり得、重鎖リンカーはＣγ１、Ｃγ２、Ｃγ３、Ｃγ４、Ｃα１、Ｃα２、Ｃδ、Ｃε及びＣμを含めたアイソタイプのＣＨ１から誘導され得る。リンカー配列は他のタンパク質、例えばＩｇ−様タンパク質（例えば、ＴＣＲ、ＦｃＲ、ＫＩＲ）、Ｇ／Ｓに基づく配列（例えば、Ｇ４Ｓリピート）（配列番号２７）、ヒンジ領域由来配列、及び他のタンパク質由来の他の天然配列からも誘導され得る。
【０４００】
実施形態では、定常ドメインを組換えＤＮＡ技術を用いて２つの連結した可変ドメインに連結する。実施形態では、連結した重鎖可変ドメインを含む配列を重鎖定常ドメインに連結しており、連結した軽鎖可変ドメインを含む配列を軽鎖定常ドメインに連結する。実施形態では、定常ドメインはそれぞれヒト重鎖定常ドメイン及びヒト軽鎖定常ドメインである。実施形態では、ＤＶＤ重鎖は更にＦｃ領域に連結されている。Ｆｃ領域は未変性配列Ｆｃ領域またはバリアントＦｃ領域であり得る。別の実施形態では、Ｆｃ領域はヒトＦｃ領域である。別の実施形態では、Ｆｃ領域はＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥまたはＩｇＤ由来のＦｃ領域を含む。
【０４０１】
別の実施形態では、２つの重鎖ＤＶＤポリペプチド及び２つの軽鎖ＤＶＤポリペプチドを組合せて、ＤＶＤ−Ｉｇ分子を形成する。表２は、疾患を治療するために（例えば、癌を治療するために）有用な標的に対する例示的抗体のＶＨ及びＶＬ領域のアミノ酸配列をリストしている。実施形態では、本発明は、表２にリストされているＶＨ及び／またはＶＬ領域の少なくとも２つを任意の配向で含むＤＶＤを提供する。
【０４０２】
【表２】
2013507969.tif 000004
2013507969.tif 000005
2013507969.tif 000006
2013507969.tif 000007
2013507969.tif 000008
2013507969.tif 000009
2013507969.tif 000010
2013507969.tif 000011
2013507969.tif 000012
【０４０３】
特定の標的に結合し得る特異的ＤＶＤ−Ｉｇ分子及びその作成方法の詳細な説明は以下の実施例の欄に提示されている。
【０４０４】
Ｃ．ＤＶＤタンパク質の産生
本発明の結合タンパク質は当業界で公知の多数の技術により産生され得る。例えば、例えば、ＤＶＤ重鎖及びＤＶＤ軽鎖をエンコードする発現ベクターを標準技術により宿主細胞にトランスフェクトする宿主細胞からの発現。用語「トランスフェクション」の各種形態は、外来性ＤＮＡを原核または真核宿主細胞に導入するために通常使用されている種々の技術、例えばエレクトロポレーション、リン酸カルシウム沈降、ＤＥＡＥ−デキストラントランスフェクション等を包含すると意図される。本発明のＤＶＤタンパク質を原核または真核宿主細胞において発現させることができるが、真核細胞（及び、特に哺乳動物細胞）が原核細胞よりも正しく折り畳まれた免疫学的に活性なＤＶＤタンパク質を組立て、分泌しそうなので、ＤＶＤタンパク質を真核細胞、例えば哺乳動物宿主細胞において発現させる。
【０４０５】
本発明の組換え抗体を発現するための哺乳動物宿主細胞の例には、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ細胞）（Ｕｒｌａｕｂ  ａｎｄ  Ｃｈａｓｉｎ，（１９８０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７７：４２１６−４２２０に記載されており、例えばＲ．Ｊ．Ｋａｕｆｍａｎ  ａｎｄ  Ｐ．Ａ．Ｓｈａｒｐ（１９８２）Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１５９：６０１−６２１に記載されているＤＨＦＲ選択可能なマーカーと一緒に使用されるｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞が含まれる）、ＮＳ０ミエローマ細胞、ＣＯＳ細胞、ＳＰ２及びＰＥＲ．Ｃ６細胞が含まれる。ＤＶＤタンパク質をエンコードする組換え発現ベクターを哺乳動物宿主細胞を導入するとき、宿主細胞においてＤＶＤタンパク質を発現させ、または宿主細胞を増殖させる培養培地にＤＶＤタンパク質を分泌させるのに十分な時間宿主細胞を培養することによりＤＶＤタンパク質が産生される。ＤＶＤタンパク質は標準のタンパク質精製方法を用いて培養培地から回収され得る。
【０４０６】
本発明のＤＶＤタンパク質の組換え発現のための例示的系では、ＤＶＤ重鎖及びＤＶＤ軽鎖の両方をエンコードする組換え発現ベクターをリン酸カルシウム媒介トランスフェクションによりｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞に導入する。組換え発現ベクター内で、ＤＶＤ重鎖及び軽鎖遺伝子を高レベルで転写させるためにこれらの遺伝子は各々ＣＭＶエンハンサー／ＡｄＭＬＰプロモーター調節要素に機能し得る形で連結されている。組換え発現ベクターはＤＨＦＲ遺伝子をも有し、これによりメトトレキサート選択／増幅を用いてベクターをトランスフェクトしたＣＨＯ細胞を分泌させることができる。ＤＶＤ重鎖及び軽鎖を発現させるために選択した形質転換体宿主細胞を培養し、完全なＤＶＤタンパク質を培養培地から回収する。標準の分子生物学的技術を使用して、組換え発現ベクターを作成し、宿主細胞にトランスフェクトし、形質転換体を選択し、宿主細胞を培養し、培養培地からＤＶＤタンパク質を回収する。更に、本発明は、本発明のＤＶＤタンパク質が合成されるまで本発明の宿主細胞を適当な培養培地において培養することにより本発明のＤＶＤタンパク質を合成する方法を提供する。この方法は更にＤＶＤタンパク質を培養培地から単離することを含み得る。
【０４０７】
ＤＶＤ−Ｉｇの重要な特徴は、ＤＶＤ−Ｉｇが慣用の抗体と同様に産生され、精製され得ることである。ＤＶＤ−Ｉｇが産生されると、定常領域の配列修飾または任意の種類の化学的修飾なしに所望される二重特異性活性を有する均質な単一の重要産物が生ずる。「双特異性」、「多重特異性」及び「多重特異性多価」完全長結合タンパク質を作成するための他の公知方法によると、単一主要産物は生ぜず、代わりに異なる結合部位の組合せを有する組み合わされた不活性、単一特異性、多重特異性、多価完全長結合タンパク質の混合物の細胞内または分泌産生がもたらされる。例えば、Ｍｉｌｌｅｒ  ａｎｄ  Ｐｒｅｓｔａ（ＰＣＴ公開ＷＯ  ２００１／０７７３４２（Ａｌ）が記載した設計に基づいて、重鎖及び軽鎖の可能な組合せは１６個ある。従って、タンパク質の６．２５％のみが多分所望の活性形態であり、他の１５個の可能な組合せと比較して単一の重要な生成物または単一の主要な生成物として存在しない。典型的には大規模製造で使用される標準のクロマトグラフィー技術を用いて不活性及び部分的に不活性なタンパク質から所望の完全に活性な形態のタンパク質を分離することはまだ立証されていない。
【０４０８】
驚くことに、本発明の「二重特異性多価完全長結合タンパク質」の設計により、二重可変ドメイン軽鎖及び二重可変ドメイン重鎖が生じ、これらは主に所望の「二重特異性多価完全長結合タンパク質」に組み立てられる。
【０４０９】
組み立てられ、発現された二重可変ドメイン免疫グロブリン分子の少なくとも５０％、少なくとも７５％、少なくとも９０％は所望の二重特異性四価タンパク質である。本発明のこの態様は特に本発明の商業的有用性を高める。従って、本発明は、二重可変ドメイン軽鎖及び二重可変ドメイン重鎖を単一細胞において発現させて、「二重特異性四価完全長結合タンパク質」の単一主要産物をもたらす方法を包含する。
【０４１０】
本発明は、二重可変ドメイン軽鎖及び二重可変ドメイン重鎖を単一細胞において発現させて、「二重特異性四価完全長結合タンパク質」の「主要産物」をもたらす方法を提供し、「主要産物」は二重可変ドメイン軽鎖及び二重可変ドメイン重鎖からなるすべての組み立てられたタンパク質の５０％以上である。
【０４１１】
本発明は、二重可変ドメイン軽鎖及び二重可変ドメイン重鎖を単一細胞で発現させて、「二重特異性四価完全長結合タンパク質」の「主要産物」をもたらす方法を提供し、「主要産物」は二重可変ドメイン軽鎖及び二重可変ドメイン重鎖からなるすべての組み立てられたタンパク質の７５％以上である。
【０４１２】
本発明は、二重可変ドメイン軽鎖及び二重可変ドメイン重鎖を単一細胞で発現させて、「二重特異性四価完全長結合タンパク質」の「主要産物」をもたらす方法を提供し、「主要産物」は二重可変ドメイン軽鎖及び二重可変ドメイン重鎖からなるすべての組み立てられたタンパク質の９０％以上である。
【０４１３】
ＩＩ．誘導体化ＤＶＤ結合タンパク質
１つの実施形態は、本発明の結合タンパク質が別の機能分子（例えば、別のペプチドまたはタンパク質）に誘導体化または連結されている標識された結合タンパク質を提供する。例えば、本発明の標識された結合タンパク質は、本発明の結合タンパク質を１つ以上の他の分子実体、例えば結合タンパク質の別の分子（例えば、ストレプトアビジンコア領域またはポリヒスチジンタグ）との会合を媒介し得る別の抗体（例えば、双特異性抗体またはダイアボディ）、検出可能物質、細胞傷害薬、薬剤及び／またはタンパク質またはペプチドに（化学的カップリング、遺伝子融合、非共有結合または他の方法により）機能的に連結させることにより誘導され得る。
【０４１４】
本発明の結合タンパク質が誘導体化され得る有用な検出可能物質には蛍光化合物が含まれる。蛍光検出可能物質の例には、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、５−ジメチルアミン−１−ナフタレンスルホニルクロリド、フィコエリスリン等が含まれる。結合タンパク質は、検出可能な酵素（例えば、アルカリホスファターゼ、ホースラディッシュペルオキシダーゼ、グルコースオキシダーゼ等）でも誘導体化され得る。結合タンパク質を検出可能な酵素で誘導体化する場合、検出可能な反応生成物を生成するために前記酵素が使用する追加の試薬を添加することにより検出される。例えば、検出可能物質ホースラディッシュペルオキシダーゼが存在するときには、過酸化水素及びジアミノベンジジンを添加すると、検出可能な着色反応生成物が生ずる。結合タンパク質はビオチンでも誘導体化され、アビジンまたはストレプトアビジン結合を間接的に測定することにより検出され得る。
【０４１５】
本発明の別の実施形態は結晶化結合タンパク質、及び前記結晶を含む処方物及び組成物を提供する。１つの実施形態では、結晶化結合タンパク質は結合タンパク質の可溶性相当物よりも長いインビボ半減期を有する。別の実施形態では、結合タンパク質は結晶化後も生物活性を保持している。
【０４１６】
本発明の結晶化結合タンパク質は、当業界で公知の方法及び参照により本明細書に組み入れるＷＯ  ０２０７２６３６に開示されている方法に従って製造され得る。
【０４１７】
本発明の別の実施形態は、抗体またはその抗原結合部分が１つ以上の炭水化物残基を含んでいるグリコシル化結合タンパク質を提供する。新生インビボタンパク質産生は翻訳後修飾として公知の更なるプロセッシングを受け得る。特に、糖（グリコシル）残基を酵素的に、グリコシル化として公知のプロセスにより付加し得る。共有結合したオリゴ糖側鎖を有する生じたタンパク質はグリコシル化タンパク質または糖タンパク質として公知である。抗体は、Ｆｃドメイン及び可変ドメイン中に１つ以上の炭水化物残基を有する糖タンパク質である。Ｆｃドメイン中の炭水化物残基は、Ｆｃドメインのエフェクター機能に対して重要な影響を有するが、抗体の抗原結合または半減期に対する影響は小さい（Ｒ．Ｊｅｆｆｅｒｉｓ，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｐｒｏｇ．，２１（２００５），ｐ．１１−１６）。対照的に、可変ドメインのグリコシル化は抗体の抗原結合活性に対して影響を有し得る。可変ドメインでのグリコシル化は、多分立体障害のために抗体結合親和性に対して負の影響を有し得（Ｃｏ，Ｍ．Ｓ．ら，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９３），３０：１３６１−１３６７）、或いは抗原に対して高い親和性を生じ得る（Ｗａｌｌｉｃｋ，Ｓ．Ｃ．ら，Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．（１９８８），１６８：１０９９−１１０９；Ｗｒｉｇｈｔ、Ａ．ら，ＥＭＢＯ  Ｊ．（１９９１），１０：２７１７−２７２３）。
【０４１８】
本発明の１つの態様は、結合タンパク質のＯ−またはＮ−結合グリコシル化が変異されているグリコシル化部位ミュータントの作成に関する。当業者は前記ミュータントを標準の公知テクノロジーを用いて作成することができる。生物活性を保持しているが、増加または減少した結合活性を有しているグリコシル化部位ミュータントは本発明の別の目的である。
【０４１９】
さらに別の実施形態では、本発明の抗体または抗原結合部分のグリコシル化を修飾する。例えば、非グリコシル化抗体（すなわち、抗体はグリコシル化を欠く）を作成し得る。グリコシル化は、例えば抗体の抗原に対する親和性を高めるために改変され得る。炭水化物修飾は、例えば抗体配列内の１つ以上のグリコシル化部位を改変することによりなし得る。例えば、１つ以上の可変領域グリコシル化部位を排除して、その部位でのグリコシル化を排除する１つ以上のアミノ酸置換をなし得る。非グリコシル化は抗体の抗原に対する親和性を増加させ得る。前記アプローチは、各々が全文参照により本明細書に組み入れられるＰＣＴ公開ＷＯ  ２００３０１６４６６Ａ２、並びに米国特許Ｎｏｓ．５，７１４，３５０及び６，３５０，８６１に更に詳細に記載されている。
【０４２０】
加えてまたは或いは、改変タイプのグリコシル化を有する本発明の修飾結合タンパク質、例えば少ない量のフコシル残基を有する低フコシル化抗体（Ｋａｎｄａ，Ｙｕｔａｋａら，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（２００７），１３０（３），３００−３１０を参照されたい）または高い二等分ＧｌｃＮＡｃ構造を有する抗体が作成され得る。改変グリコシル化パターンは抗体のＡＤＣＣ能力を高めると立証されている。炭水化物修飾は、例えば改変グリコシル化機構を有する宿主細胞中で抗体を発現させることによりなし得る。改変グリコシル化機構を有する宿主細胞は当業界で公知であり、本発明の組換え抗体を発現させて改変グリコシル化を有する抗体を産生する宿主細胞として使用され得る。例えば、各々が全文参照により本明細書に組み入れられるＳｈｉｅｌｄｓ，Ｒ．Ｌ．ら，（２００２），Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７７：２６７３３−２６７４０；Ｕｍａｎａら，（１９９９），Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．，１７：１７６−１；並びに欧州特許ＥＰ  １，１７６，１９５、ＰＣＴ公開ＷＯ  ０３／０３５８３５、ＷＯ  ９９／５４３４２  ８０を参照されたい。
【０４２１】
タンパク質グリコシル化は、当該タンパク質のアミノ酸配列及びタンパク質を発現させる宿主細胞に依存する。生物が異なると、異なるグリコシル化酵素（例えば、グリコシルトランスフェラーゼ及びグリコシダーゼ）が産生し、利用可能な基質（ヌクレオチド糖）も異なる。これらの要因のために、タンパク質グリコシル化パターン及びグリコシル残基の組成は特定のタンパク質を発現させる宿主系に依存して異なり得る。本発明において有用なグリコシル残基には、グルコース、ガラクトース、マンノース、フコース、ｎ−アセチルグルコサミン及びシアル酸が含まれるが、これらに限定されない。実施形態では、グリコシル化結合タンパク質は、グリコシル化パターンがヒトであるようにグリコシル残基を含む。
【０４２２】
タンパク質グリコシル化が異なると異なるタンパク質特性が生じ得ることは当業者に公知である。例えば、微生物宿主（例えば、酵母）において産生され、酵母内因性経路を用いてグリコシル化した治療用タンパク質の有効性は、哺乳動物細胞（例えば、ＣＨＯ細胞株）において発現させた同一タンパク質の有効性に比して低いことがある。前記糖タンパク質はヒトにおいても免疫原性であリ得、投与後短いインビボ半減期を示し得る。ヒト及び他の動物中の特定受容体は特異的グリコシル残基を認識し、タンパク質の血流からの迅速なクリアランスを促進し得る。他の悪影響には、タンパク質ホールディング、可溶性、プロテアーゼに対する感受性、トラフィッキング、輸送、区画化、分泌、他のタンパク質または因子による認識、抗原性またはアレルゲン性の変化が含まれ得る。従って、専門家は特定の組成及びグリコシル化パターン、例えばヒト細胞または意図する被験動物の種特異的細胞において産生されるものと同一または少なくとも類似のグリコシル化組成及びパターンを有する治療用タンパク質を選択し得る。
【０４２３】
宿主細胞とは異なるグリコシル化タンパク質の発現は、異種グリコシル化酵素を発現させるために宿主細胞を遺伝的に修飾させることによりなし得る。当業界で公知の技術を用いて、専門家はヒトタンパク質グリコシル化を発現する抗体またはその抗原結合部分を作成し得る。例えば、酵母菌株において産生されるグリコシル化タンパク質（糖タンパク質）が動物細胞、特にヒト細胞のものと同一のタンパク質グリコシル化を示すように天然に存在しないグリコシル化酵素を発現させるべく酵母菌株を遺伝的に修飾させた（米国特許出願２００４００１８５９０及び２００２０１３７１３４、並びにＰＣＴ公開ＷＯ  ２００５１００５８４  Ａ２）。
【０４２４】
結合タンパク質に加えて、本発明は、本発明の結合タンパク質に対して特異的な抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体にも関する。抗Ｉｄ抗体は、通常別の抗体の抗原−結合領域に結合する独自の決定基を認識する抗体である。抗Ｉｄは、動物を結合タンパク質またはそのＣＤＲ含有領域を用いて免疫化することにより産生され得る。免疫化された動物は、免疫化抗体のイディオタイプ決定基を認識し、応答し、抗Ｉｄ抗体を産生し得る。ＤＶＤ−Ｉｇ分子に取り込んだ２つ以上の親抗体に対する抗イディオタイプ抗体を作成し、当業界で認識されている方法（例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ、ＥＬＩＳＡ）により結合研究を確認して、各親抗体のイディオタイプに対して特異的な抗イディオタイプ抗体がＤＶＤ−Ｉｇに関連してイディオタイプ（例えば、抗原結合部位）をも認識することを立証することがより容易であり得ることはすぐに分かる。ＤＶＤ−Ｉｇの２つ以上の抗原結合部位の各々に対して特異的な抗イディオタイプ抗体は、患者血清中のヒトＤＶＤ−ＩｇのＤＶＤ−Ｉｇ濃度を測定するための理想的な試薬を提供する。ＤＶＤ−Ｉｇ濃度アッセイは、固相（例えば、ＢＩＡｃｏｒｅアチップ、ＥＬＩＳＡプレート等）にコーティングし、濯ぎバッファーで濯ぎ、血清サンプルとインキュベートし、別に濯ぎ、最終的に結合反応の定量のためにそれ自体酵素で標記されている別の抗原結合部位に対する別の抗イディオタイプ抗体とインキュベートする第１抗原結合領域に対する抗体を用いる「サンドイッチアッセイＥＬＩＳＡフォーマット」を用いて確立され得る。実施形態では、２つ以上異なる結合部位を有するＤＶＤ−Ｉｇの場合、２つの最外結合部位（定常領域から最も遠い及び近い）に対する抗イディオタイプ抗体はヒト血清中のＤＶＤ−Ｉｇ濃度を測定するのに役立つだけでなく、インビボで分子の一体性を証明するのに役立つ。各抗Ｉｄ抗体は、別の動物で免疫応答を引き出して所謂抗−抗Ｉｄ抗体を産生するための「免疫原」としても使用され得る。
【０４２５】
更に、ライブラリーのメンバー宿主細胞が変異グリコシル化パターンを有する当該タンパク質を産生するように、当該タンパク質を各種グリコシル化酵素を発現するように遺伝子操作された宿主細胞のライブラリーを用いて発現し得ることは当業者によりは認識されている。その後、専門家は特別の新規グリコシル化パターンを有する当該タンパク質を選択し、単離し得る。実施形態では、特に選択された新規グリコシル化パターンを有するタンパク質は改良されたまたは改変した生物学的特性を示す。
【０４２６】
ＩＩＩ．ＤＶＤ−Ｉｇの使用
２つ以上の抗原に結合する能力を考えると、本発明の結合タンパク質は（例えば、血清または血漿のような生物学的サンプル中の）抗原を慣用のイムノアッセイ（例えば、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）または組織免疫組織化学）を用いて検出するために使用され得る。結合または非結合抗体の検出を容易とするためにＤＶＤ−Ｉｇを直接または間接的に検出可能物質で標識し得る。適当な検出可能物質には、各種酵素、補欠分子族、蛍光材料、発光材料及び放射性材料が含まれる。適当な酵素の例には、ホースラディッシュペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼまたはアセチルコリンエステラーゼが含まれる。適当な補欠分子族複合体の例には、ストレプトアビジン／ビオチン及びアビジン／ビオチンが含まれる。適当な蛍光材料の例には、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチアシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、ダンシルクロリドまたはフィコエリトリンが含まれる。発光材料の例にはルミノールが含まれる。適当な放射性材料の例には、３Ｈ、１４Ｃ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１７７Ｌｕ、１６６Ｈｏまたは１５３Ｓｍが含まれる。
【０４２７】
実施形態では、本発明の結合タンパク質はインビトロ及びインビボの両方で抗原の活性を中和し得る。従って、ＤＶＤ−Ｉｇは、例えば抗原を含有する細胞培養物において、本発明の結合タンパク質が交差反応する抗原を有しているヒト被験者または他の哺乳動物被験者において抗原活性を阻害するために使用され得る。別の実施形態では、本発明は、抗原活性が有害な疾患または障害を患っている被験者において抗原活性を低下させるための方法を提供する。本発明の結合タンパク質は治療目的でヒト被験者に対して投与され得る。
【０４２８】
本明細書中で使用されている用語「抗原活性が有害な障害」は、障害を患っている被験者中の抗原の存在が障害の病態生理に関与するまたは障害の悪化に寄与する因子であることが判明しているかまたは疑われる疾患及び他の障害を含むと意図される。従って、抗原活性が有害な障害は、抗原活性が低下すると障害の症状及び／または障害の進行が緩和すると予想される障害である。前記障害は、例えば障害を患っている被験者の生物学的流体中の抗原の濃度の増加（例えば、被験者の血清、血漿、滑液等中の抗原の濃度の増加）により証明され得る。本発明の結合タンパク質で治療され得る障害の非限定例には、以下に及び本発明の抗体の医薬組成物に関するセクションで検討されている障害が含まれる。
【０４２９】
本発明のＤＶＤ−Ｉｇは１つの抗原または複数の抗原に結合し得る。前記抗原には、参照により本明細書に組み入れる以下のデータベース中にリストされている標的が含まれるが、これらに限定されない。これらの標的データベースには、以下のリスト：
治療用標的（ｈｔｔｐ：／／ｘｉｎ．ｃｚ３．ｎｕｓ．ｅｄｕ．ｓｇ／ｇｒｏｕｐ／ｃｊｔｔｄ／ｔｔｄ．ａｓｐ）；
サイトカイン及びサイトカイン受容体（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｙｔｏｋｉｎｅｗｅｂｆａｃｔｓ．ｃｏｍ／，ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｏｐｅｗｉｔｈｃｙｔｏｋｉｎｅｓ．ｄｅ／ｃｏｐｅ．ｃｇｉ，及び
ｈｔｔｐ：／／ｃｍｂｉ．ｂｊｍｕ．ｅｄｕ．ｃｎ／ｃｍｂｉｄａｔａ／ｃｇｆ／ＣＧＦ＿Ｄａｔａｂａｓｅ／ｃｙｔｏｋｉｎｅ．ｍｅｄｉｃ．ｋｕｍａｍｏｔｏ−ｕ．ａｃ．ｊｐ／ＣＦＣ／ｉｎｄｅｘＲ．ｈｔｍｌ）；
ケモカイン（ｈｔｔｐ：／／ｃｙｔｏｋｉｎｅ．ｍｅｄｉｃ．ｋｕｍａｍｏｔｏ−ｕ．ａｃ．ｊｐ／ＣＦＣ／ＣＫ／Ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ．ｈｔｍｌ）；
ケモカイン受容体及びＧＰＣＲ（ｈｔｔｐ：／／ｃｓｐ．ｍｅｄｉｃ．ｋｕｍａｍｏｔｏ−ｕ．ａｃ．ｊｐ／ＣＳＰ／ｒｅｃｅｐｔｏｒ．ｈｔｍｌ、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｐｃｒ．ｏｒｇ／７ｔｍ／）；
嗅覚受容体（ｈｔｔｐ：／／ｓｅｎｓｅｌａｂ．ｍｅｄ．ｙａｌｅ．ｅｄｕ／ｓｅｎｓｅｌａｂ／ＯＲＤＢ／ｄｅｆａｕｌｔ．ａｓｐ）；
受容体（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｕｐｈａｒ−ｄｂ．ｏｒｇ／ｉｕｐｈａｒ−ｒｄ／ｌｉｓｔ／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍ）；
癌標的（ｈｔｔｐ：／／ｃｇｅｄ．ｈｇｃ．ｊｐ／ｃｇｉ−ｂｉｎ／ｉｎｐｕｔ．ｃｇｉ）；
潜在的抗体標的としての分泌タンパク質（ｈｔｔｐ：／／ｓｐｄ．ｃｂｉ．ｐｋｕ．ｅｄｕ．ｃｎ／）；
タンパク質キナーゼ（ｈｔｔｐ：／／ｓｐｄ．ｃｂｉ．ｐｋｕ．ｅｄｕ．ｃｎ／）；及び
ヒトＣＤマーカー（ｈｔｔｐ：／／ｃｏｎｔｅｎｔ．ｌａｂｖｅｌｏｃｉｔｙ．ｅｏｍ／ｔｏｏｌｓ／６／１２２６／ＣＤ＿ｔａｂｌｅ＿ｆｉｎａｌ＿ｌｏｃｋｅｄ．ｐｄｆ）及び（Ｚｏｌａ  Ｈ，２００５  ＣＤ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅ，２００５：ｈｕｍａｎ  ｃｅｌｌ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅ  Ｂｌｏｏｄ，１０６：３１２３−６）
が含まれる。
【０４３０】
ＤＶＤ−Ｉｇは、有効性／安全性を高め、及び／または患者適用範囲を広げるように２つの異なる標的を同時にブロックするための治療薬として有用である。前記標的には、可溶性標的（ＴＮＦ）及び細胞表面受容体標的（ＶＥＧＦＲ及びＥＧＦＲ）が含まれ得る。ＤＶＤ−Ｉｇは、癌治療のために腫瘍細胞とＴ細胞（Ｈｅｒ２及びＣＤ３）の間で、自己免疫疾患または移植のために自己反応性細胞とエフェクター細胞の間で、または所与の疾患において疾患誘発細胞を排除するために標的細胞とエフェクター細胞の間で再指向される細胞傷害性を誘発させるためにも使用され得る。
【０４３１】
加えて、ＤＶＤ−Ｉｇは、同一受容体上の２つの異なるエピトープを標的とするように設計されている場合には受容体クラスタリング及び活性化をトリガーするために使用され得る。これは主動的または拮抗的抗ＧＰＣＲ治療薬を作成する際に有用であり得る。この場合、ＤＶＤ−Ｉｇは、クラスタリング／シグナリング（２つの細胞表面分子）またはシグナリング（１つの分子上）のために１つの細胞上の２つの異なるエピトープ（ループ領域及び細胞外ドメインの両方上のエピトープを含む）を標的とするために使用され得る。同様に、ＤＶＤ−Ｉｇ分子は、ＣＴＬＡ−４細胞外ドメインの２つの異なるエピトープ（または、同一エピトープの２コピー）を標的として免疫応答をダウンレギュレーションすることによりＣＴＬＡ−４連結反応及び負のシグナルをトリガーするように設計され得る。ＣＴＬＡ−４は多数の免疫学的障害の治療上処置のための臨床上確認されている標的である。ＣＴＬＡ−４／Ｂ７相互作用は、細胞周期進行、ＩＬ−２産生及び活性化後のＴ細胞の増殖を減衰させることによりＴ細胞活性化を負に調節し、ＣＴＬＡ−４（ＣＤ１５２）参加はＴ細胞活性化をダウンレギュレートし、免疫寛容の誘導を促進し得る。しかしながら、ＣＴＬＡ−４のアゴニスト抗体参加によりＴ細胞活性化を減衰させる戦術は、ＣＴＬＡ−４活性化がライゲーションを必要とするので成功しなかった。血漿構造分析により立証されているように（Ｓｔａｍｐｅｒ，２００１，Ｎａｔｕｒｅ，４１０：６０８）、ＣＴＬＡ−４／Ｂ７の分子相互作用は「斜傾ジッパー」にある。しかしながら、抗ＣＴＬＡ−４  ｍＡｂを含めた現在入手可能なＣＴＬＡ−４結合試薬のいずれもがライゲーション特性を有していない。この問題を解決するために幾つかの試みがなされている。１つの試みでは、細胞メンバー結合一本鎖抗体を作成し、マウスにおいて同種拒絶反応を有意に抑制した（Ｈｗａｎｇ，２００２，ＪＩ，１６９：６３３）。別の試みでは、ＣＴＬＡ−４に対する人工のＡＰＣ表面連結された一本鎖抗体を作成し、Ｔ細胞応答を減衰させることが立証された（Ｇｒｉｆｆｉｎ，２０００，ＪＩ，１６４：４４３３）。いずれの試みも、ＣＴＬＡ−４ライゲーションを人工システムにおいて密接に局在化させたメンバー結合抗体により達成させた。これらの実験は、ＣＴＬＡ−４負のシグナリングをトリガーすることによる免疫ダウンレギュレーションについての概念実証を与えるが、これらのレポートで使用されている試薬は治療に使用するには適していない。このために、ＣＴＬＡ−４ライゲーションは、ＣＴＬＡ−４細胞外ドメインの２つの異なるエピトープ（または、同一エピトープの２コピー）を標的するＤＶＤ−Ｉｇ分子を用いることにより達成され得る。原理は、ＩｇＧの２つの結合部位に広がる距離約１５０〜１７０ÅはＣＴＬＡ−４の能動的ライゲーションのためには余りに大きい（２つのＣＴＬＡ−４ホモダイマー間は３０〜５０Å）。しかしながら、ＤＶＤ−Ｉｇ（１つのアーム）上の２つの結合部位間の距離は３０〜５０Åの範囲で非常に短く、ＣＴＬＡ−４を適切にライゲートすることができる。
【０４３２】
同様に、ＤＶＤ−Ｉｇは細胞表面受容体複合体の２つの異なるメンバー（例えば、ＩＬ−１２Ｒアルファ及びベータ）を標的とし得る。更に、ＤＶＤ−Ｉｇは、標的可溶性タンパク質／病原体を迅速に浄化するようにＣＲ１及び可溶性タンパク質／病原体を標的とし得る。
【０４３３】
加えて、本発明のＤＶＤ−Ｉｇは、細胞内デリバリー（内在化受容体及び細胞内分子を標的とする）、脳内部へのデリバリー（脳血液関門を横断するためにトランスフェリン受容体及びＣＮＳ疾患メディエーターを標的とする）を含めた組織特異的デリバリー（高い局所ＰＫ、よってより高い有効性及び／またはより低い毒性のために組織マーカー及び疾患メディエーターを標的とする）ために使用され得る。ＶＤ−Ｉｇは、抗原の非中和性エピトープへの結合を介して抗原を特定の場所にデリバリーし且つ抗原の半減期を延長させるために担体タンパク質としても役立ち得る。更に、ＤＶＤ−Ｉｇは、患者に移植した医療デバイスに物理的に接続させるかまたはこれらの医療デバイスを標的とするように設計され得る（Ｂｕｒｋｅ，Ｓａｎｄｒａ  Ｅ．，Ｋｕｎｔｚ，Ｒｉｃｈａｒｄ  Ｅ．，Ｓｃｈｗａｒｔｚ，Ｌｅｗｉｓ  Ｂ，Ｚｏｔａｒｏｌｉｍｕｓ  ｅｌｕｔｉｎｇ  ｓｔｅｎｔｓ，Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖｉｅｗｓ（２００６），５８（３），４３７−４４６；Ｓｕｒｆａｃｅ  ｃｏａｔｉｎｇｓ  ｆｏｒ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍｅｄｉｃａｌ  ｄｅｖｉｃｅｓ，Ｈｉｌｄｅｂｒａｎｄ，Ｈ．Ｆ．，Ｂｌａｎｃｈｅｍａｉｎ，Ｎ．，Ｍａｙｅｒ，Ｇ．，Ｃｈａｉ，Ｆ．，Ｌｅｆｅｂｖｒｅ，Ｍ．，Ｂｏｓｃｈｉｎ，Ｆ．，Ｓｕｒｆａｃｅ  ａｎｄ  Ｃｏａｔｉｎｇｓ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（２００６），２００（２２−２３），６３１８−６３２４；Ｄｒｕｇ／ｄｅｖｉｃｅ  ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ｌｏｃａｌ  ｄｒｕｇ  ｔｈｅｒａｐｉｅｓ  ａｎｄ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ｐｒｏｐｈｙｌａｘｉｓ，Ｗｕ，Ｐｅｎｇ，Ｇｒａｉｎｇｅｒ，Ｄａｖｉｄ  Ｗ，Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ（２００６），２７（１１），２４５０−２４６７；Ｍｅｄｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ｎｅｔｗｏｒｋ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｉｍｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｏｒｔｈｏｐｅｄｉｃ  ｄｅｖｉｃｅｓ，Ｍａｒｑｕｅｓ，Ａ．Ｐ．，Ｈｕｎｔ，Ｊ．Ａ．，Ｒｅｉｓ，Ｒｕｉ  Ｌ．，Ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  ｉｎ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ａｎｄ  Ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（２００５），３７７−３９７を参照されたい）。簡単に説明すると、適切な型の細胞を医療インプラントの部位に指向させると、治癒及び正常組織機能の回復が促進され得る。或いは、デバイスに接続したまたはデバイスを標的するＤＶＤによりデバイス移植時に放出されるメディエーター（非限定的に、サイトカインが含まれる）の抑制も提供される。例えば、ステントは閉塞した動脈を浄化し、心筋への血流を改善するために介入心臓病学において長年使用されてきた。しかしながら、従来の剥き出しのままの金属ステントは数人の患者で再狭窄（処理した領域の動脈が再び狭くなること）が生じ、血餅となる恐れがあることは公知である。最近、血液中を循環する内皮前駆細胞（ＥＰＣ）を捕捉することにより再狭窄を減らし、血餅が生ずるのを防ぐ抗ＣＤ３４抗体をコーティングしたステントが記載されている。内皮細胞は、血液をスムーズに流すように血管の内側を覆う��胞である。ＥＰＣは、ステントの硬質表面に接着して、治癒を促進するだけでなく、以前ステントの使用に関連していた合併症の再狭窄、血餅を予防する平滑な層を形成する（Ａｏｊｉら，２００５，Ｊ．Ａｍ．Ｃｏｌｌ．Ｃａｒｄｉｏｌ．，４５（１０）：１５７４−９）。ステントを必要とする患者の結果を改善することに加えて、心血管バイパス手術を必要とする患者にも関わりがある。例えば、抗ＥＰＣ抗体をコーティングした人工血管（人工動脈）は、バイパス手術グラフトのために患者の脚または腕から動脈を使用する必要がなくなる。こうすると、手術及び麻酔時間が短縮され、よって冠動脈手術の死亡が減る。ＤＶＤ−Ｉｇは、細胞動員を促進するために移植した機器上にコーティングした細胞表面マーカー（例えば、ＣＤ３４）及びタンパク質（または、非限定的にタンパク質、脂質及び多糖が含まれる任意の種類のエピトープ）に結合するように設計される。このアプローチは一般的に他の医療インプラントにも適用され得る。或いは、ＤＶＤ−Ｉｇは医療デバイス上にコーティングされ得、移植し、すべてのＤＶＤをデバイス（または、既に充填したＤＶＤ−Ｉｇの老化及び変性を含めて、新しいＤＶＤ−Ｉｇを追加する必要があり得る他の必要性）から放出させたら、新しいＤＶＤ−Ｉｇを患者に全身投与することによりデバイスに再充填させ得る。このＤＶＤ−Ｉｇは、１組の結合部位を有する当該標的（サイトカイン、ＣＤ３４のような細胞表面マーカー等）及び他の組でデバイス上ではコーティングされている標的（タンパク質、非限定的に脂質、多糖及びポリマーを含めた任意の種類のエピトープを含む）に結合するように設計される。このテクノロジーはコーティングしたインプラントの有用性を広げる利点を有する。
【０４３４】
Ａ．各種疾患におけるＤＶＤ−Ｉｇの使用
本発明のＤＶＤ−Ｉｇ分子は各種疾患を治療するための治療分子としても有用である。前記ＤＶＤ分子は特定疾患に関与する１つ以上の標的に結合し得る。各種疾患における前記標的の例を以下に記載する。
【０４３５】
１．ヒト自己免疫及び炎症応答
Ｃ５、ＣＣＬ１（１−３０９）、ＣＣＬ１１（エオタキシン）、ＣＣＬ１３（ｍｃｐ−４）、ＣＣＬ１５（ＭＩＰ−１ｄ）、ＣＣＬ１６（ＨＣＣ−４）、ＣＣＬ１７（ＴＡＲＣ）、ＣＣＬ１８（ＰＡＲＣ）、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２（ｍｃｐ−１）、ＣＣＬ２０（ＭＩＰ−３ａ）、ＣＣＬ２１（ＭＩＰ−２）、ＣＣＬ２３（ＭＰＩＦ−１）、ＣＣＬ２４（ＭＰＩＦ−２／エオタキシン−２）、ＣＣＬ２５（ＴＥＣＫ）、ＣＣＬ２６、ＣＣＬ３（ＭＩＰ−１ａ）、ＣＣＬ４（ＭＩＰ−１ｂ）、ＣＣＬ５（ＲＡＮＴＥＳ）、ＣＣＬ７（ｍｃｐ−３）、ＣＣＬ８（ｍｃｐ−２）、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ１０（ＩＰ−１０）、ＣＸＣＬ１１（Ｉ−ＴＡＣ／ＩＰ−９）、ＣＸＣＬ１２（ＳＤＦ１）、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１４、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ５（ＥＮＡ−７８／ＬＩＸ）、ＣＸＣＬ６（ＧＣＰ−２）、ＣＸＣＬ９、ＩＬ１３、ＩＬ８、ＣＣＬ１３（ｍｃｐ−４）、ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＸ３ＣＲ１、ＩＬ８ＲＡ、ＸＣＲ１（ＣＣＸＣＲ１）、ＩＦＮＡ２、ＩＬ１０、ＩＬ１３、ＩＬ１７Ｃ、ＩＬ１Ａ、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ１Ｆ１０、ＩＬ１Ｆ５、ＩＬ１Ｆ６、ＩＬ１Ｆ７、ＩＬ１Ｆ８、ＩＬ１Ｆ９、ＩＬ２２、ＩＬ５、ＩＬ８、ＩＬ９、ＬＴＡ、ＬＴＢ、ＭＩＦ、ＳＣＹＥ１（内皮単球活性化サイトカイン）、ＳＰＰ１、ＴＮＦ、ＴＮＦＳＦ５、ＩＦＮＡ２、ＩＬ１０ＲＡ、ＩＬ１０ＲＢ、ＩＬ１３、ＩＬ１３ＲＡ１、ＩＬ５ＲＡ、ＩＬ９、ＩＬ９Ｒ、ＡＢＣＦ１、ＢＣＬ６、Ｃ３、Ｃ４Ａ、ＣＥＢＰＢ、ＣＲＰ、ＩＣＥＢＥＲＧ、ＩＬ１Ｒ１、ＩＬ１ＲＮ、ＩＬ８ＲＢ、ＬＴＢ４Ｒ、ＴＯＬＬＩＰ、ＦＡＤＤ、ＩＲＡＫ１、ＩＲＡＫ２、ＭＹＤ８８、ＮＣＫ２、ＴＮＦＡＩＰ３、ＴＲＡＤＤ、ＴＲＡＦ１、ＴＲＡＦ２、ＴＲＡＦ３、ＴＲＡＦ４、ＴＲＡＦ５、ＴＲＡＦ６、ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ１Ｂ、ＡＣＶＲ２、ＡＣＶＲ２Ｂ、ＡＣＶＲＬ１、ＣＤ２８、ＣＤ３Ｅ、ＣＤ３Ｇ、ＣＤ３Ｚ、ＣＤ６９、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＮＲ１、ＣＴＬＡ４、ＣＹＳＬＴＲ１、ＦＣＥＲ１Ａ、ＦＣＥＲ２、ＦＣＧＲ３Ａ、ＧＰＲ４４、ＨＡＶＣＲ２、ＯＰＲＤ１、Ｐ２ＲＸ７、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、ＢＬＲ１、ＣＣＬ１、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ７、ＣＣＬ８、ＣＣＬ１１、ＣＣＬ１３、ＣＣＬ１５、ＣＣＬ１６、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１８、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ２３、ＣＣＬ２４、ＣＣＬ２５、ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＸ３ＣＬ１、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ５、ＣＸＣＬ６、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＲ４、ＧＰＲ２、ＳＣＹＥ１、ＳＤＦ２、ＸＣＬ１、ＸＣＬ２、ＸＣＲ１、ＡＭＨ、ＡＭＨＲ２、ＢＭＰＲ１Ａ、ＢＭＰＲ１Ｂ、ＢＭＰＲ２、Ｃ１９ｏｒｆ１０（ＩＬ２７ｗ）、ＣＥＲ１、ＣＳＦ１、ＣＳＦ２、ＣＳＦ３、ＤＫＦＺｐ４５１Ｊ０１１８、ＦＧＦ２、ＧＦＩ１、ＩＦＮＡ１、ＩＦＮＢ１、ＩＦＮＧ、ＩＧＦ１、ＩＬ１Ａ、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ１Ｒ１、ＩＬ１Ｒ２、ＩＬ２、ＩＬ２ＲＡ、ＩＬ２ＲＢ、ＩＬ２ＲＧ、ＩＬ３、ＩＬ４、ＩＬ４Ｒ、ＩＬ５、ＩＬ５ＲＡ、ＩＬ６、ＩＬ６Ｒ、ＩＬ６ＳＴ、ＩＬ７、ＩＬ８、ＩＬ８ＲＡ、ＩＬ８ＲＢ、ＩＬ９、ＩＬ９Ｒ、ＩＬ１０、ＩＬ１０ＲＡ、ＩＬ１０ＲＢ、ＩＬ１１、ＩＬ１１ＲＡ、ＩＬ１２Ａ、ＩＬ１２Ｂ、ＩＬ１２ＲＢ１、ＩＬ１２ＲＢ２、ＩＬ１３、ＩＬ１３ＲＡ１、ＩＬ１３ＲＡ２、ＩＬ１５、ＩＬ１５ＲＡ、ＩＬ１６、ＩＬ１７、ＩＬ１７Ｒ、ＩＬ１８、ＩＬ１８Ｒ１、ＩＬ１９、ＩＬ２０、ＫＩＴＬＧ、ＬＥＰ、ＬＴＡ、ＬＴＢ、ＬＴＢ４Ｒ、ＬＴＢ４Ｒ２、ＬＴＢＲ、ＭＩＦ、ＮＰＰＢ、ＰＤＧＦＢ、ＴＢＸ２１、ＴＤＧＦ１、ＴＧＦＡ、ＴＧＦＢ１、ＴＧＦＢ１ＩＩ、ＴＧＦＢ２、ＴＧＦＢ３、ＴＧＦＢ１、ＴＧＦＢＲ１、ＴＧＦＢＲ２、ＴＧＦＢＲ３、ＴＨ１Ｌ、ＴＮＦ、ＴＮＦＲＳＦ１Ａ、ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ、ＴＮＦＲＳＦ７、ＴＮＦＲＳＦ８、ＴＮＦＲＳＦ９、ＴＮＦＲＳＦ１１Ａ、ＴＮＦＲＳＦ２１、ＴＮＦＳＦ４、ＴＮＦＳＦ５、ＴＮＦＳＦ６、ＴＮＦＳＦ１１、ＶＥＧＦ、ＺＦＰＭ２及びＲＮＦ１１０（ＺＮＦ１４４）を含めた多くのンパク質が一般的に自己免疫及び炎症応答に関与している。１つの態様で、本明細書中にリストされている標的の１つ以上に結合し得るＤＶＤ−Ｉｇを提供する。
【０４３６】
２．喘息
アレルギー性喘息は、好酸球増加症の存在、杯細胞異形成、上皮細胞変化、気道反応性亢進（ＡＨＲ）、及びＴｈ２及びＴｈ１サイトカイン発現、並びに高い血清ＩｇＥレベルにより特徴づけられる。現在、気道炎症が炎症性細胞（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、好酸球、マスト細胞及びマクロファージ）とサイトカイン及びケモカインを含めたその分泌型メディエーターの複雑な相互作用を含めた喘息の病因の根底にある主たる要因であることは広く認められている。コルチコステロイドは今日喘息に対する最も重要な抗炎症治療である。しかしながら、この作用メカニズムは非特異的で、安全性の問題が特に若年性患者集団で存在する。従って、より特異性の標的化治療の開発が求められている。好酸球性炎症に関係なく、マウスにおいてＩＬ−１３がＡＨＲ、粘膜分泌過多及び気道線維化を含めた喘息の特徴の多くを真似ている証拠が増えつつある（Ｆｉｎｏｔｔｏら，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２００５），１７（８）、９９３−１００７；Ｐａｄｉｌｌａら，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２００５），１７４（１２），８０９７−８１０５）。
【０４３７】
ＩＬ−１３は、喘息に関連する病理学的応答を引き出すのに極めて重要な役割を有するとして関与している。肺におけるＩＬ−１３の作用を減らすための抗ＩＬ−１３  ｍＡｂ治療の開発は喘息に対する新規治療としてかなり有望である現存の新規アプローチである。しかしながら、異なる免疫学的経路の他のメディエーターも喘息病因に関与しており、ＩＬ−１３に加えてこれらのメディエーターをブロックすると追加の治療有用性が得られ得る。前記標的対には、ＩＬ−１３と炎症促進性サイトカイン（例えば、腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α））が含まれるが、これに限定されない。ＴＮＦ−αは喘息における炎症応答を増幅させ得、疾患の重症度にリンクし得る（ＭｃＤｏｎｎｅｌｌら，Ｐｒｏｇｒｅｓｓ  ｉｎ  Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（２００１），３１（Ｎｅｗ  Ｄｒｕｇｓ  ｆｏｒ  Ａｓｔｈｍａ、Ａｌｌｅｒｇｙ  ａｎｄ  ＣＯＰＤ），２４７−２５０）。このことは、ＩＬ−１３及びＴＮＦ−αの両方をブロックすることは特に重症な気道疾患で有利な作用を有し得ることを示唆している。別の実施形態では、本発明のＤＶＤ−Ｉｇは標的ＩＬ−１３及びＴＮＦαに結合し、喘息を治療するために使用される。
【０４３８】
炎症及びＡＨＲの両方を評価し得る動物モデル（例えば、ＯＶＡ誘導喘息マウスモデル）は当業界で公知であり、各種ＤＶＤ−Ｉｇ分子の喘息を治療する能力を調べるために使用され得る。喘息を研究するための動物モデルは、Ｃｏｆｆｍａｎら，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（２００５），２０１（１２），１８７５−１８７９；Ｌｌｏｙｄら，Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２００１），７７，２６３−２９５；Ｂｏｙｃｅら，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（２００５），２０１（１２），１８６９−１８７３；及びＳｎｉｂｓｏｎら，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｆｏｒ  Ａｌｌｅｒｇｙ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２００５），３５（２），１４６−５２に開示されている。これらの標的対のルーチンの安全性評価に加えて、免疫抑制の程度についての特別の試験が認可され得、最良の標的対を選択するのに有用であり得る（Ｌｕｓｔｅｒら，Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ（１９９４），９２（１−３），２２９−４３；Ｄｅｓｃｏｔｅｓら，Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｓ  ｉｎ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｓｔａｎｄａｒｄｉｚａｔｉｏｎ（１９９２），７７，９９−１０２；Ｈａｒｔら，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ａｌｌｅｒｇｙ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２００１），１０８（２），２５０−２５７を参照されたい）。
【０４３９】
本明細書に開示されており原理に基づき、有効性及び安全性についての同一評価モデルを使用して、ＤＶＤ−Ｉｇ分子に結合し、喘息を治療するために有用であり得る他の標的対が調べられ得る。実施形態では、標的には、ＩＬ−１３とＩＬ−１β（ＩＬ−１βは喘息における炎症応答にも関与する）；ＩＬ−１３と炎症に関与するサイトカイン及びケモカイン、例えばＩＬ−１３とＩＬ−９、ＩＬ−１３とＩＬ−４、ＩＬ−１３とＩＬ−５、ＩＬ−１３とＩＬ−２５、ＩＬ−１３とＴＡＲＣ、ＩＬ−１３とＭＤＣ、ＩＬ−１３とＭＩＦ、ＩＬ−１３とＴＧＦ−β、ＩＬ−１３とＬＨＲアゴニスト、ＩＬ−１３とＣＬ２５、ＩＬ−１３とＳＰＲＲ２ａ、ＩＬ−１３とＳＰＲＲ２ｂ、及びＩＬ−１３とＡＤＡＭ８が含まれるが、これらに限定されない。本発明は、喘息に関与するＣＳＦ１（ＭＣＳＦ）、ＣＳＦ２（ＧＭ−ＣＳＦ）、ＣＳＦ３（ＧＣＳＦ）、ＦＧＦ２、ＩＦＮＡ１、ＩＦＮＢ１、ＩＦＮＧ、ヒスタミン及びヒスタミン受容体、ＩＬ１Ａ、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ２、ＩＬ３、ＩＬ４、ＩＬ５、ＩＬ６、ＩＬ７、ＩＬ８、ＩＬ９、ＩＬ１０、ＩＬ１１、ＩＬ１２Ａ、ＩＬ１２Ｂ、ＩＬ１３、ＩＬ１４、ＩＬ１５、ＩＬ１６、ＩＬ１７、ＩＬ１８、ＩＬ１９、ＫＩＴＬＧ、ＰＤＧＦＢ、ＩＬ２ＲＡ、ＩＬ４Ｒ、ＩＬ５ＲＡ、ＩＬ８ＲＡ、ＩＬ８ＲＢ、ＩＬ１２ＲＢ１、ＩＬ１２ＲＢ２、ＩＬ１３ＲＡ１、ＩＬ１３ＲＡ２、ＩＬ１８Ｒ１、ＴＳＬＰ、ＣＣＬ１、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ７、ＣＣＬ８、ＣＣＬ１３、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１８、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ２４，ＣＸ３ＣＬ１、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＸＣＬ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＸ３ＣＲ１、ＧＰＲ２、ＸＣＲ１、ＦＯＳ、ＧＡＴＡ３、ＪＡＫ１、ＪＡＫ３、ＳＴＡＴ６、ＴＢＸ２１、ＴＧＦＢ１、ＴＮＦ、ＴＮＦＳＦ６、ＹＹ１、ＣＹＳＬＴＲ１、ＦＣＥＲ１Ａ、ＦＣＥＲ２、ＬＴＢ４Ｒ、ＴＢ４Ｒ２、ＬＴＢＲ及びキチナーゼからなる群から選択される１つ以上の標的に結合し得るＤＶＤ−Ｉｇをも提供する。
【０４４０】
３．関節リウマチ
全身疾患である関節リウマチ（ＲＡ）は関節の滑膜の慢性炎症反応により特徴づけられ、軟膏の変性及び傍関節骨の浸食を伴っている。ＴＮＦ、ケモカイン及び増殖因子を含めた多くの炎症促進性サイトカインが病的関節で発現している。抗ＴＮＦ抗体またはｓＴＮＦＲ融合タンパク質のＲＡのマウスモデルへの全身投与は抗炎症性であり、関節を保護することが分かった。ＲＡ患者におけるＴＮＦの活性が静脈内投与したイフリキシマブ（Ｈａｒｒｉｍａｎ  Ｇ，Ｈａｒｐｅｒ  ＬＫ，Ｓｃｈａｉｂｌｅ  ＴＦ，１９９９，Ｓｕｍｍａｒｙ  ｏｆ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｔｒｉａｌｓ  ｉｎ  ｒｈｅｍａｔｏｉｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ｕｓｉｎｇ  ｉｎｆｌｉｘｉｍａｂ、ａｎ  ａｎｔｉ−ＴＮＦａｌｐｈａ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ，Ａｎｎ．Ｒｈｅｕｍ．Ｄｉｓ．，５８，Ｓｕｐｐｌ．１：１６１−４）、キメラ抗ＴＮＦ  ｍＡｂでブロックされたという臨床研究は、ＴＮＦがＩＬ−６、ＩＬ−８、ＭＣＰ−１及びＶＥＧＦ産生、免疫及び臨床細胞の関節への動員、血管形成及びマトリックスメタロプロテアーゼ−１及び−３の血液レベルの低下を調節するという証拠を与えた。関節リウマチにおける炎症経路をより理解すると、関節リウマチに関与する他の治療標的が同定された。インターロイキン−６アンタゴニスト（Ｃｈｕｇａｉ，Ｒｏｃｈｅが開発したＩＬ−６受容体抗体ＭＲＡ；Ｎｉｓｈｉｍｏｔｏ，Ｎｏｒｉｈｉｒｏら，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（２００４），５０（６），１７６１−１７６９を参照されたい）、ＣＴＬＡ４Ｉｇ（アバタセプト；Ｇｅｎｏｖｅｓｅ  Ｍｃら，２００５，Ａｂａｔａｃｅｐｔ  ｆｏｒ  ｒｈｅｍａｔｏｉｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ  ｔｏ  ｔｕｍｏｒ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ  ｆａｃｔｏｒ  ａｌｐｈａ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．，３５３：１１１４−２３）及び抗Ｂ細胞治療（リツキシマブ；Ｏｋａｍｏｔｏ  Ｈ．，Ｋａｍａｔａｎｉ  Ｎ．，２００４，Ｒｉｔｕｘｉｍａｂ  ｆｏｒ  ｒｈｅｍａｔｏｉｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．，３５１：１９０９）のような将来有望な治療はすでに過去にランダム化比較トライアルにおいて試験されている。インターロイキン−１５（治療抗体ＨｕＭａｘ−ＩＬ＿１５，ＡＭＧ  ７１４；Ｂａｓｌｕｎｄ，Ｂｏら，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（２００５），５２（９），２６８６−２６９２を参照されたい）、インターロイキン−１７及びインターロイキン−１８を含めた他のサイトカインが同定され、動物モデルで有用であることが判明し、これらの物質の臨床トライアルは現在進行中である。抗ＴＮＦ及び別のメディエーターを組み合わせた二重特異性抗体治療は臨床効果及び／または患者適用範囲を向上させる点で高い可能性を有している。例えば、ＴＮＦ及びＶＥＧＦの両方をブロックすると、いずれもＲＡの病態生理に関与する炎症及び血管形成を潜在的に根絶し得る。ＲＡに関与する他の標的対を特異的ＤＶＤ  Ｉｇでブロックすることも考えられ、前記標的対にはＴＮＦとＩＬ−１８、ＴＮＦとＩＬ−１２、ＴＮＦとＩＬ−２３、ＴＮＦとＩＬ−１β、ＴＮＦとＭＩＦ、ＴＮＦとＩＬ−１７、ＴＮＦとＩＬ−１５が含まれるが、これら���限定されない。これらの標的対のルーチンな安全性評価に加えて、最良の標的対を選択する際に免疫抑制の程度についての特別の試験が認められ、有用であり得る（Ｌｕｓｔｅｒら，Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ（１９９４），９２（１−３），２２９−４３；Ｄｅｓｃｏｔｅｓら，Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｓ  ｉｎ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｓｔａｎｄａｒｄｉｚａｔｉｏｎ（１９９２），７７，９９−１０２；Ｈａｒｔら，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ａｌｌｅｒｇｙ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２００１），１０８（２），２５０−２５７を参照されたい）。ＤＶＤ  Ｉｇ分子が関節リウマチの治療のために有用であるかは、前臨床動物ＲＡモデル（例えば、コラーゲン誘発関節炎マウスモデル）を用いて評価され得る。他の有用なモデルも当業界で公知である（Ｂｒａｎｄ  ＤＤ，Ｃｏｍｐ  Ｍｅｄ．（２００５），５５（２）：１１４−２２を参照されたい）。ヒト及びマウスオルソログに対する親抗体の交差反応性（例えば、ヒト及びマウスＴＮＦ、ヒト及びマウスＩＬ−１５等に対する反応性）に基づいて、マウスＣＩＡモデルを用いる確認試験を「整合させた代理抗体」由来ＤＶＤ−Ｉｇ分子を用いて実施し得る。簡単に説明すると、２つ（または、それ以上）のマウス標的特異的抗体に基づくＤＶＤ−ＩｇをヒトＤＶＤ−Ｉｇ構築のために使用される親ヒトまたはヒト化抗体の特性（類似の親和性、類似の中和能力、類似の半減期等）にできるだけ整合させ得る。
【０４４１】
４．ＳＬＥ
ＳＬＥの免疫病因の特徴は、高グロブリン血症、自己抗体産生及び免疫複合体形成をもたらすポリクローナルＢ細胞活性化である。全身性Ｔ細胞調節異常のために機能異常はＴ細胞が禁止Ｂ細胞クローンを抑制できないようである。加えて、Ｂ及びＴ細胞相互作用は、第２シグナルを開始する幾つかのサイトカイン（例えば、ＩＬ−１０）及び共刺激分子（例えば、ＣＤ４０及びＣＤ４０Ｌ、Ｂ７及びＣＤ２８及びＣＴＬＡ−４）により促進される。免疫複合体及びアポトーシス材料の損なわれた食細胞作用クリアランスとの相互作用は免疫応答を永続させ、組織損傷が生ずる。以下の標的がＳＬＥに関与し得、治療介入のためのＤＶＤ−Ｉｇアプローチのために潜在的に使用され得る：Ｂ細胞標的化治療：ＣＤ−２０、ＣＤ−２２、ＣＤ−１９、ＣＤ２８、ＣＤ４、ＣＤ８０、ＨＬＡ−ＤＲＡ、ＩＬ１０、ＩＬ２、ＩＬ４、ＴＮＦＲＳＦ５、ＴＮＦＲＳＦ６、ＴＮＦＳＦ５、ＴＮＦＳＦ６、ＢＬＲ１、ＨＤＡＣ４、ＨＤＡＣ５、ＨＤＡＣ７Ａ、ＨＤＡＣ９、ＩＣＯＳＬ、ＩＧＢＰ１、ＭＳ４Ａ１、ＲＧＳ１、ＳＬＡ２、ＣＤ８１、ＩＦＮＢ１、ＩＬ１０、ＴＮＦＲＳＦ５、ＴＮＦＲＳＦ７、ＴＮＦＳＦ５、ＡＩＣＤＡ、ＢＬＮＫ、ＧＡＬＮＡＣ４Ｓ−６ＳＴ、ＨＤＡＣ４、ＨＤＡＣ５、ＨＤＡＣ７Ａ、ＨＤＡＣ９、ＩＬ１０、ＩＬ１１、ＩＬ４、ＩＮＨＡ、ＩＮＨＢＡ、ＫＬＦ６、ＴＮＦＲＳＦ７、ＣＤ２８、ＣＤ３８、ＣＤ６９、ＣＤ８０、ＣＤ８３、ＣＤ８６、ＤＰＰ４、ＦＣＥＲ２、ＩＬ２ＲＡ、ＴＮＦＲＳＦ８、ＴＮＦＳＦ７、ＣＤ２４、ＣＤ３７、ＣＤ４０、ＣＤ７２、ＣＤ７４、ＣＤ７９Ａ、ＣＤ７９Ｂ、ＣＲ２、ＩＬ１Ｒ２、ＩＴＧＡ２、ＩＴＧＡ３、ＭＳ４Ａ１、ＳＴ６ＧＡＬ１、ＣＤ１Ｃ、ＣＨＳＴ１０、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−ＤＲＡ及びＮＴ５Ｅ；共刺激シグナル：ＣＴＬＡ４またはＢ７．１／Ｂ７．２；Ｂ細胞生存の抑制：ＢｌｙＳ、ＢＡＦＦ；補体不活性化：Ｃ５；サイトカインモジュレーション：主たる原理は組織における正味の生物学的応答が炎症促進性または抗炎症性サイトカインの局所レベル間のバランスの結果であることである（Ｓｆｉｋａｋｉｓ  ＰＰら，２００５，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．，１７：５５０−７を参照されたい）。ＳＬＥは、血清ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−１０の上昇が証明されているＴｈ−２依存性疾患である。ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＦＮ−ａ及びＴＮＦ−αからなる群から選択される１つ以上の標的に結合し得るＶＤ  Ｉｇも考えられる。本明細書中で検討されている標的の組合せは多数のループス前臨床モデルで試験され得るＳＬＥに対する治療有効性を高める（Ｐｅｎｇ  ＳＬ（２００４），Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．，１０２：２２７−７２を参照されたい）。ヒト及びマウス種オルソログに対する親抗体の交差反応性（例えば、ヒト及びマウスＣＤ２０、ヒト及びマウスインターフェロンαに対する反応性）に基づいて、マウスループスモデルでの確認試験を「整合させた代理抗体」誘導ＤＶＤ−Ｉｇ分子を用いて実施し得る。簡単に説明すると、ＤＶＤ−Ｉｇに基づく２つ以上のマウス標的特異的抗体をヒトＤＶＤ−Ｉｇ構築のために使用される親ヒトまたはヒト化抗体の特性（類似の親和性、類似の中和能力、類似の半減期等）にできるだけ整合させ得る。
【０４４２】
５．多発性硬化症
多発性硬化症（ＭＳ）は、主に病因が未知の複雑なヒト自己免疫型疾患である。神経系全体でのミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）の免疫破壊が多発性硬化症の主たる病理である。ＭＳは、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞による浸潤及び中枢神経系内での応答を含む複雑な病理の疾患である。ＣＮＳ中でのサイトカイン、反応性窒素種及び共刺激分子の発現がＭＳにおいて記載されている。自己免疫の発生に寄与する免疫学的メカニズムが主に考えられている。特に、他のＴ細胞（例えば、Ｔｈｌ及びＴｈ２細胞）のバランスを助ける／モジュレートする抗原発現、サイトカイン及びリンパ球の相互作用及び調節Ｔ細胞が治療標的同定のための重要な分野である。
【０４４３】
ＩＬ−１２は、ＡＰＣにより産生され、Ｔｈ１エフェクター細胞の分化を促進する炎症促進性サイトカインである。ＩＬ−１２はＭＳ患者及びＥＡＥ罹患動物の発生している病巣中で産生されている。以前、ＩＬ−１２経路を干渉すると齧歯類においてＥＡＥは効果的に防止され、抗ＩＬ−１２  ｍＡｂを用いたＩＬ−１２ｐ４０のインビボ中和はコモンマーモセットのミエリン誘導ＥＡＥモデルにおいて有利な効果を有することが判明した。
【０４４４】
ＴＷＥＡＫは、細胞型に応じて炎症促進性、増殖性またはアポトーシス作用を有する中枢神経系（ＣＮＳ）において構成的に発現されるＴＮＦファミリーのメンバーである。その受容体Ｆｎ１４は内皮細胞、反応性アストロサイト及びニューロンによりＣＮＳにおいて発現される。ＴＷＥＡＫ及びＦｎ１４  ｍＲＮＡ発現は実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）の間脊髄中で増加した。Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおいてミエリン希突起膠細胞糖タンパク質（ＭＯＧ）誘発ＥＡＥを抗ＴＷＥＡＫ抗体で治療すると、プライミング相後マウスを治療したとき疾患の重症度及びリンパ球浸潤が減少した。
【０４４５】
本発明の１つの態様は、ＩＬ−１２、ＴＷＥＡＫ、ＩＬ−２３、ＣＸＣＬ１３、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＩＬ−１８、ＶＥＧＦ、ＶＬＡ−４、ＴＮＦ、ＣＤ４５ＲＢ、ＣＤ２００、ＩＦＮガンマ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦ、Ｃ５、ＣＤ５２及びＣＣＲ２からなる群から選択される１つ以上（例えば、２つ）の標的に結合し得るＤＶＤ  Ｉｇ分子に関する。実施形態は、ＭＳの治療のために有益な治療薬としての二重特異性抗ＩＬ−１２／Ｔ  ＷＥＡＫＤＶＤ  Ｉｇを含む。
【０４４６】
ＭＳを治療するためのＤＶＤ分子の有用性を評価するための幾つかの動物モデルは当業界で公知である（Ｓｔｅｉｎｍａｎ  Ｌ．ら，（２００５），Ｔｒｅｎｄｓ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２６（１１）：５６５−７１；Ｌｕｂｌｉｎ  ＦＤら，（１９８５），Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｓｅｍｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ．，８（３）：１９７−２０８；Ｇｅｎａｉｎ  ＣＰら，（１９９７），Ｊ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．，７５（３）：１８７−９７；Ｔｕｏｈｙ  ＶＫら，（１９９９），Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１８９（７）：１０３３−４２；Ｏｗｅｎｓ  Ｔ．ら，（１９９５），Ｎｅｕｒｏｌ．Ｃｌｉｎ．，１３（１）：５１−７３；及びｔ’Ｈａｒｔ  ＢＡら，（２００５），Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１７５（７）：４７６１−８を参照されたい）。ヒト及び動物種オルソログに対する親抗体の交差反応性（例えば、ヒト及びマウスＩＬ−１２、ヒト及びマウスＴＷＥＡＫ等に対する反応性）に基づいて、マウスＥＡＥモデルでの確認試験を「整合させた代理抗体」誘導ＤＶＤ−Ｉｇ分子を用いて実施し得る。簡単に説明すると、（１つ以上の）マウス標的特異的抗体に基づくＤＶＤ−ＩｇをヒトＤＶＤ−Ｉｇ構築のために使用される親ヒトまたはヒト化抗体の特性（類似の親和性、類似の中和能力、類似の半減期等）にできるだけ整合させ得る。同一のコンセプトが他の非齧歯類の動物モデルに当てはまり、「整合させた代理抗体」誘導ＤＶＤ−Ｉｇ分子は予想される薬理学及び潜在的な安全性研究のために選択される。これらの標的対のルーチンの安全性評価に加えて、免疫抑制の程度についての特別の試験が最良の標的対を選択する際に認められ、有用であり得る（Ｌｕｓｔｅｒら，Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ（１９９４），９２（１−３），２２９−４３；Ｄｅｓｃｏｔｅｓら，Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｓ  ｉｎ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｓｔａｎｄａｒｄｉｚａｔｉｏｎ（１９９２），７７，９９−１０２；Ｊｏｎｅｓ  Ｒ．，２０００，Ｒｏｖｅｌｉｚｕｍａｂ（ＩＣＯＳ  Ｃｏｒｐ），ＩＤｒｕｇｓ，３（４）：４４２−６を参照されたい）。
【０４４７】
６．敗血症
敗血症の病態生理は、グラム陰性生物の外膜成分（リポ多糖類［ＬＰＳ］、脂質Ａ、エンドトキシン）及びグラム陽性生物の外膜成分（リポテイコ酸、ペプチドグリカン）の両方により開始する。これらの外膜成分は単球の表面上のＣＤ１４受容体に結合できる。最近記載されているトール様受容体によって、シグナルは細胞に伝達されて、最終的には炎症促進性サイトカイン腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）及びインターロイキン−１（ＩＬ−１）が産生される。圧倒的な炎症及び免疫応答は敗血症性ショックの本質的特徴であり、敗血症により誘発される組織損傷、多臓器不全及び死亡の病因の中心部分の役割を発揮する。サイトカイン、特に腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）及びインターロイキン（ＩＬ−１）は敗血症性ショックの重要なメディエーターであることが判明している。これらのサイトカインは組織に対して直接的な毒性作用を有し、またホスホリパーゼＡ２を活性化する。これらの作用及び他の作用により、血小板活性化因子の濃度が上昇し、酸化窒素シンターゼ活性は助長され、好中球による組織浸潤は助長され、好中球活性が助長される。
【０４４８】
敗血症及び敗血症性ショックの治療には臨床的難問が残っており、炎症応答に向けられる生物学的応答モディファイヤー（すなわち、抗ＴＮＦ、抗ＭＩＦ）を用いる最近の将来有望なトライアルは適度の臨床的有用性しか示さなかった。最近、免疫抑制の随伴期間を逆戻りさせることを目的とした治療に興味が変わった。実験動物及び臨床的に病的な患者の研究で、リンパ器官及び幾つかの実質組織の高いアポトーシスがこの免疫抑制、アネルギー及び臓器系機能不全に寄与している。敗血症症候群の間、リンパ球アポトーシスはＩＬ−２の不在により、またはグルココルチコイド、グランザイムまたは所謂「死」サイトカイン：腫瘍壊死因子αまたはＦａｓリガンドの放出によりトリガーされ得る。アポトーシスは、Ｂｃｌ−２ファミリーのプロ−及び抗アポトーシスメンバーにより影響を受ける恐れがある細胞ゾル及び／またはミトコンドリアカスパーゼの自己活性化を介して進行する。実験動物では、アポトーシス抑制剤を用いる治療はリンパ系細胞アポトーシスを予防し得るだけでなく、結果も改善し得る。抗アポトーシス剤での臨床トライアルは、大部分がその投与及び組織標的化に関連する技術的困難のために隔たったままであるが、リンパ球アポトーシスの抑制は敗血症性患者に対する魅力的な治療標的に相当する。同様に、炎症メディエーター及びアポトーシスメディエーターの両方を標的とする二重特異的物質は付加された有用性を有し得る。本発明の１つの態様は、敗血症に関与するＴＮＦ、ＩＬ−１、ＭＩＦ、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１８、ＩＬ−１２、ＩＬ−２３、ＦａｓＬ、ＬＰＳ、トール様受容体、ＴＬＲ−４、組織因子、ＭＩＰ−２、ＡＤＯＲＡ２Ａ、ＣＡＳＰ１、ＣＡＳＰ４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１Ｂ、ＮＦＫＢ１、ＰＲＯＣ、ＴＮＦＲＳＦ１Ａ、ＣＳＦ３、ＣＣＲ３、ＩＬ１ＲＮ、ＭＩＦ、ＮＦＫＢ１、ＰＴＡＦＲ、ＴＬＲ２、ＴＬＲ４、ＧＰＲ４４、ＨＭＯＸ１、ミッドカイン、ＩＲＡＫ１、ＮＦＫＢ２、ＳＥＲＰＩＮＡ１、ＳＥＲＰＩＮＥ１及びＴＲＥＭ１からなる群から選択される１つ以上の標的（実施形態では、２つの標的）に結合し得るＤＶＤ  Ｉｇに関する。前記ＤＶＤ  Ｉｇの敗血症に対する有効性は当業界で公知の前臨床動物モデルを用いて評価され得る（Ｂｕｒａｓ  ＪＡら，（２００５），Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ．，４（１０）：８５４−６５及びＣａｌａｎｄｒａ  Ｔ．ら，（２０００），Ｎａｔ．Ｍｅｄ．，６（２）：１６４−７０を参照されたい）。
【０４４９】
７．神経障害
（７．１．神経変性疾患）
慢性神経変性疾患は、通常ニューロン機能の段階的喪失（ニューロン細胞死、脱髄）、可動性の喪失及び記憶喪失を特徴とする年齢依存性疾患である。慢性神経変性疾患（例えば、アルツハイマー病）の根底にあるメカニズムの新しい知識は複雑な病因を示し、各種要因、例えば年齢、血糖状態、アミロイド産生及びマルチマー化、その受容体ＲＡＧＥ（ＡＧＥに対する受容体）に結合する終末糖化産物（ＡＧＥ）の蓄積、高い脳酸化ストレス、少ない脳血流、炎症サイトカイン及びケモカインの放出を含めた神経炎症、ニューロン機能不全及びミクログリア活性化がその発症及び進行に寄与することが認識されている。よって、これらの慢性神経変性疾患は複数の細胞型及びメディエーター間の複雑な相互作用に相当する。前記疾患の治療戦略は限られており、大部分は非特異的抗炎症剤（例えば、コルチコステロイド、ＣＯＸインヒビター）またはニューロン損失及び／またはシナプス機能の予防薬のいずれかを用いて炎症プロセスをブロックしている。これらの治療は疾患の進行を停止できない。最近の研究は、（Ａ−ｂオリゴマー形態を含めた）可溶性Ａ−ｂペプチドに対する抗体のようなより標的化される治療は疾患の進行を停止するのを助けるだけでなく、記憶の維持も助けることを示唆している。これらの予備所見は、１つの疾患メディエーター（例えば、Ａ−ｂ、及びＴＮＦのようなプロ炎症サイトカイン）よりも多くを標的とする特異的治療は１つの疾患メカニズムを標的として観察される疾患よりも慢性神経変性疾患に対してより良好な治療効果を与え得ることさえあることを示唆している（例えば、可溶性Ａ−バロン）（Ｃ．Ｅ．Ｓｈｅｐｈｅｒｄら，Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ  Ａｇｉｎｇ，２００５，Ｏｃｔ．２４；Ｎｅｌｓｏｎ  ＲＢ．，Ｃｕｒｒ．Ｐｈａｒｍ．Ｄｅｓ．，２００５，１１：３３３５；Ｗｉｌｌｉａｍ  Ｌ．Ｋｌｅｉｎ；Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．  Ｉｎｔ．，２００２，４１：３４５；Ｍｉｃｈｅｌｌｅ  Ｃ．Ｊａｎｅｌｓｉｎｓら，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ，２００５，２：２３；Ｓｏｌｏｍａｎ  Ｂ．，Ｃｕｒｒ．Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ  Ｒｅｓ．，２００４，１：１４９；Ｉｇｏｒ  Ｋｌｙｕｂｉｎら，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．，２００５，１１：５５６−６１；Ａｒａｎｃｉｏ  Ｏ．ら．，ＥＭＢＯ  Ｊｏｕｒｎａｌ（２００４），１−１０；Ｂｏｒｎｅｍａｎｎ  ＫＤら，Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．，２００１，１５８：６３；Ｄｅａｎｅ  Ｒ．ら，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．，２００３，９：９０７−１３；及びＥｌｉｅｚｅｒ  Ｍａｓｌｉａｈら，Ｎｅｕｒｏｎ．，２００５，４６：８５７を参照されたい）。
【０４５０】
本発明のＤＶＤ−Ｉｇ分子は、慢性神経変性疾患（例えば、アルツハイマー病）に関与する１つ以上の標的に結合し得る。前記標的には、ＡＤ病因に関与する可溶性または細胞表面メディエーター、例えばＡＧＥ（Ｓ１００Ａ、アムホテリン）、炎症促進性サイトカイン（例えば、ＩＬ−１）、ケモカイン（例えば、ＭＣＰ  １）、神経再生を抑制する分子（例えば、Ｎｏｇｏ、ＲＧＭ  Ａ）、神経突起成長を強化する分子（ニューロトロフィン）が含まれるが、これらに限定されない。ＤＶＤ−Ｉｇ分子の有効性は前臨床動物モデル、例えばアミロイド前駆体タンパク質またはＲＡＧＥを過剰発現し、アルツハイマー病様症状を発症しているトランスジェニックマウスにおいて確認され得る。加えて、ＤＶＤ−Ｉｇ分子を構築し、動物モデルで有効性について試験することができ、最良の治療用ＤＶＤ−Ｉｇはヒト患者において試験するために選択され得る。ＤＶＤ−Ｉｇ分子は他の神経変性疾患（例えば、パーキンソン病）の治療のためにも使用され得る。α−シヌクレインはパーキンソン病の病理に関与している。α−シヌクレイン及び炎症メディエーター（例えば、ＴＮＦ、ＩＬ−１、ＭＣＰ−１）を標的とし得るＤＶＤ−Ｉｇはパーキンソン病のための効果的な治療を与えることができ、本発明において考えられる。
【０４５１】
（７．２．ニューロン再生及び脊髄損傷）
病理メカニズムの知識は増えているが、脊髄損傷（ＳＣＩ）はなお破壊的状態であり、高度の医療ニーズを特徴とする医学的適応に相当する。多くの脊髄損傷は挫傷または圧迫損傷であり、原発性損傷の後に、初期損傷を悪化させ、病巣域を有意に、ときには１０倍以上に広げる続発性損傷メカニズム（サイトカインやケモカインのような炎症メディエーター）が生ずる。ＳＣＩにおけるこれらの原発性及び続発性メカニズムは他の手段（例えば、卒中）に起因する脳損傷におけるメカニズムに非常に類似している。満足な治療は存在せず、損傷後８時間の狭い時間枠内に大量のメチルプレドニゾロン（ＭＰ）をボーラス注射することが唯一使用されている治療である。しかしながら、この治療も機能を大きく回復させることなく続発性損傷を予防することを意図しているだけである。絶対的な有効性の不足及び重症の副作用（例えば、その後の感染及び重症の組織病理的筋変性を伴う免疫抑制）についてかなり批評されている。内因性再生ポテンシャルを刺激する他の薬物、生物学または低分子は認可されていないが、有望な治療原理及び薬物候補が最近ＳＣＩ動物モデルで有効であることが判明した。かなりの程度まで、ヒトＳＣＩにおいて機能回復の不足は病巣部位、瘢痕組織、ミエリンまたは損傷関連細胞において神経突起伸長を抑制する因子に起因する。これらの因子はミエリン関連タンパク質ＮｏｇｏＡ、ＯＭｇｐ及びＭＡＧ、ＲＧＭ  Ａ、瘢痕関連ＣＳＰＧ（硫酸コンドロイチンプロテオグリカン）及び反応性星状膠細胞上の抑制因子（幾つかのセマホリン及びエフリン）である。しかしながら、病巣部位では、成長抑制分子だけでなく、神経突起伸長刺激因子（例えば、ニューロトロフィン、ラミニン、ＬＩ等）が見られる。神経突起伸長抑制及び増殖促進分子の両方から、抑制影響の低下がバランスを伸長抑制から伸長促進へ移行させ得るので、齧歯類ＳＣＩモデルで単一因子（例えば、ＮｏｇｏＡまたはＲＧＭ  Ａ）をブロックすると有意な機能回復が生ずることを説明することができる。しかしながら、１つの神経突起伸長抑制分子をブロックして観察される回復は完全でなかった。より速く且つより顕著な回復を得るためには、２つの神経突起伸長抑制分子（例えば、Ｎｏｇｏ及びＲＧＭ  Ａ）をブロックすること；神経突起伸長抑制分子をブロックし、神経突起伸長強化分子（例えば、Ｎｏｇｏ及びニューロトロフィン）の機能を強化すること；または神経突起伸長抑制分子（例えば、Ｎｏｇｏ）及び炎症促進性分子（例えば、ＴＮＦ）をブロックすることが望ましいことがある（ＭｃＧｅｅ  ＡＷら，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．，２００３，２６：１９３；Ｍａｒｃｏ  Ｄｏｍｅｎｉｃｏｎｉら，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｌ．Ｓｃｉ．，２００５，２３３：４３；Ｍｉｌａｎ  Ｍａｋｗａｎａｌら，ＦＥＢＳ  Ｊ．，２００５，２７２：２６２８；Ｂａｒｒｙ  Ｊ．Ｄｉｃｋｓｏｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００２，２９８：１９５９；Ｆｅｌｉｃｉａ  Ｙｕ  Ｈｓｕａｎ  Ｔｅｎｇら，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｒｅｓ．，２００５，７９：２７３；Ｔａｒａ  Ｋａｒｎｅｚｉｓら，Ｎａｔｕｒｅ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ，２００４，７，７３６；Ｇａｎｇ  Ｘｕら，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．，２００４；９１；１０１８を参照されたい）。
【０４５２】
１つの態様で、ＮｇＲとＲＧＭ  Ａ、ＮｏｇｏＡとＲＧＭ  Ａ；ＭＡＧとＲＧＭ  Ａ；ＯＭＧｐとＲＧＭ  Ａ；ＲＧＭ  ＡとＲＧＭ  Ｂ；ＣＳＰＧとＲＧＭ  Ａ；アグレカン、ミッドカイン、ニューロカン、ベルシカン、ホスファカン、Ｔｅ３８とＴＮＦ−α；ＡＢグロブロマー特異的抗体と樹状突起及び軸索出芽を促進する抗体の組合せのような標的対に結合し得るＤＶＤ−Ｉｇを提供する。樹状突起病理はＡＤの非常に早期のサインであり、ＮＯＧＯ  Ａが樹状突起伸長を制限することは公知である。前記タイプのａｂとＳＣＩ候補（ミエリン−タンパク質）Ａｂを組み合わせることができる。他のＤＶＤ−Ｉｇ標的には、ＮｇＲ−ｐ７５、ＮｇＲ−Ｔｒｏｙ、ＮｇＲ−Ｎｏｇｏ６６（Ｎｏｇｏ）、ＮｇＲ−Ｌｉｎｇｏ、Ｌｉｎｇｏ−Ｔｒｏｙ、Ｌｉｎｇｏ−ｐ７５、ＭＡＧまたはＯｍｇｐの組合せが含まれ得る。加えて、標的は神経突起の抑制に関与する可溶性または細胞表面のメディエーター、例えばＮｏｇｏ、Ｏｍｐｇ、ＭＡＧ、ＲＧＭ  Ａ、セマフォリン、エフリン、可溶性Ａ−ｂ、炎症促進性サイトカイン（例えば、ＩＬ−１）、ケモカイン（例えば、ＭＩＰ１ａ）、神経再生を抑制する分子をも含み得る。抗ｎｏｇｏ／抗ＲＧＭ  Ａまたは類似のＤＶＤ−Ｉｇ分子の有効性は脊髄損傷の前臨床モデルにおいて確認され得る。加えて、これらのＤＶＤ−Ｉｇ分子は構築され得、動物モデルで有効性を試験し得、ヒト患者で試験するために最良の治療用ＤＶＤ−Ｉｇを選択することができる。加えて、１つの受容体、例えば３つのリガンドＮｏｇｏ、Ｏｍｐｇ及びＭＡＧを結合するＮｏｇｏ受容体、及びＡ−ｂ及びＳ１００Ａを結合するＲＡＧＥ上の２つの異なるリガンド結合部位を標的とするＤＶＤ−Ｉｇ分子が構築され得る。更に、神経突起伸長抑制剤、例えばｎｏｇｏ及びｎｏｇｏ受容体は、多発性硬化症のような免疫学的疾患における神経再生を防止する役割をも発揮する。ｎｏｇｏ−ｎｏｇｏ受容体相互作用の抑制が多発性硬化症の動物モデルで回復を強化することが判明した。従って、１つの免疫メディエーター（例えば、ＩＬ−１２のようなサイトカイン）及び神経突起伸長抑制分子（例えば、ｎｏｇｏまたはＲＧＭ）の機能をブロックし得るＤＶＤ−Ｉｇ分子は、免疫または神経突起伸長抑制分子のみをブロックした場合よりも速く且つ高い有効性を与え得る。
【０４５３】
８．腫瘍性障害
モノクローナル抗体治療は癌に対する重要な治療モダリティーとして出現した（ｖｏｎ  Ｍｅｈｒｅｎ  Ｍ．ら，２００３，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  ｃａｎｃｅｒ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｍｅｄ．，５４：３４３−６９）。抗体は、アポトーシス、再指向した細胞傷害性を誘導し、リガンド−受容体相互作用を干渉し、または新生物表現型にとって重要なタンパク質の発現を防止することにより抗腫瘍作用を発揮し得る。加えて、抗体は、腫瘍関連血管系の形成のような生命構造を混乱させる腫瘍微小環境の成分を標的とし得る。抗体は、そのリガンドが増殖因子である受容体（例えば、上皮増殖因子受容体）をも標的とし得る。よって、抗体は結合から標的化腫瘍細胞への細胞増殖を刺激する天然リガンドを阻害する。或いは、抗体は抗イディオタイプネットワーク、補体媒介細胞傷害性または抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を誘発し得る。２つの別の腫瘍メディエーターを標的とする二重特異性抗体を使用すると、多分単一特異性治療に比して追加の有用性が得られる。腫瘍性疾患を治療するために以下の標的対に結合し得るＤＶＤ  Ｉｇも考えられる：ＩＧＦ１とＩＧＦ２、ＩＧＦ１／２とＨＥＲ−２、ＶＥＧＦＲとＥＧＦＲ、ＣＤ２０とＣＤ３、ＣＤ１３８とＣＤ２０、ＣＤ３８とＣＤ２０、ＣＤ３８とＣＤ１３８、ＣＤ４０とＣＤ２０、ＣＤ１３８とＣＤ４０、ＣＤ３８とＣＤ４０、ＣＤ−２０とＣＤ−１９、ＣＤ−２０とＥＧＦＲ、ＣＤ−２０とＣＤ−８０、ＣＤ−２０とＣＤ−２２、ＣＤ−３とＨＥＲ−２、ＣＤ−３とＣＤ−１９、ＥＧＦＲとＨＥＲ−２、ＥＧＦＲとＣＤ−３、ＥＧＦＲとＩＧＦ１，２、ＥＧＦＲとＩＧＦ１Ｒ、ＥＧＦＲとＲＯＮ、ＥＧＦＲとＨＧＦ、ＥＧＦＲとｃ−ＭＥＴ、ＨＥＲ−２とＩＧＦ１，２、ＨＥＲ−２とＩＧＦ１Ｒ、ＲＯＮとＨＧＦ、ＶＥＧＦとＥＧＦＲ、ＶＥＧＦとＨＥＲ−２、ＶＥＧＦとＣＤ−２０、ＶＥＧＦとＩＧＦ１，２、ＶＥＧＦとＤＬＬ４、ＶＥＧＦとＨＧＦ、ＶＥＧＦとＲＯＮ、ＶＥＧＦとＮＲＰ１、ＣＤ２０とＣＤ３、ＶＥＧＦとＰＬＧＦ、ＤＬＬ４とＰＬＧＦ、ＥｒｂＢ３とＥＧＦＲ、ＨＧＦとＥｒｂＢ３、ＨＥＲ−２とＥｒｂＢ３、ｃ−ＭｅｔとＥｒｂＢ３、ＨＥＲ−２とＰＬＧＦ、及びＨＥＲ−２とＨＥＲ−２。
【０４５４】
他の実施形態では、本発明のＤＶＤは、ＶＥＧＦとホスファチジルコリン、ＶＥＧＦとＥｒｂＢ３、ＶＥＧＦとＰＬＧＦ、ＶＥＧＦとＲＯＢＯ４、ＶＥＧＦとＢＳＧ２、ＶＥＧＦとＣＤＣＰ１、ＶＥＧＦとＡＮＰＥＰ、ＶＥＧＦとｃ−ＭＥＴ、ＨＥＲ−２とＥＲＢ３、ＨＥＲ−２とＢＳＧ２、ＨＥＲ−２とＣＤＣＰ１、ＨＥＲ−２とＡＮＰＥＰ、ＥＧＦＲとＣＤ６４、ＥＧＦＲとＢＳＧ２、ＥＧＦＲとＣＤＣＰ１、ＥＧＦＲとＡＮＰＥＰ、ＩＧＦ１ＲとＰＤＧＦＲ、ＩＧＦ１ＲとＶＥＧＦ、ＩＧＦ１ＲとＣＤ２０、ＣＤ２０とＣＤ７４、ＣＤ２０とＣＤ３０、ＣＤ２０とＤＲ４、ＣＤ２０とＶＥＧＦＲ２、ＣＤ２０とＣＤ５２、ＣＤ２０とＣＤ４、ＨＧＦとｃ−ＭＥＴ、ＨＧＦとＮＲＰ１、ＨＧＦとホスファチジルセリン、ＥｒｂＢ３とＩＧＦ１Ｒ、ＥｒｂＢ３とＩＧＦ１，２、ｃ−ＭｅｔとＨｅｒ−２、ｃ−ＭｅｔとＮＲＰ１、ｃ−ＭｅｔとＩＧＦ１Ｒ、ＩＧＦ１，２とＰＤＧＦＲ、ＩＧＦ１，２とＣＤ２０、ＩＧＦ１，２とＩＧＦ１Ｒ、ＩＧＦ２とＥＧＦＲ、ＩＧＦ２とＨＥＲ２、ＩＧＦ２とＣＤ２０、ＩＧＦ２とＶＥＧＦ、ＩＧＦ２とＩＧＦ１Ｒ、ＩＧＦ１とＩＧＦ２、ＰＤＧＦＲａとＶＥＧＦＲ２、ＰＤＧＦＲａとＰＬＧＦ、ＰＤＧＦＲａとＶＥＧＦ、ＰＤＧＦＲａとｃ−Ｍｅｔ、ＰＤＧＦＲａとＥＧＦＲ、ＰＤＧＦＲｂとＶＥＧＦＲ２、ＰＤＧＦＲｂとｃ−Ｍｅｔ、ＰＤＧＦＲｂとＥＧＦＲ、ＲＯＮとｃ−Ｍｅｔ、ＲＯＮとＭＴＳＰ１、ＲＯＮとＭＳＰ、ＲＯＮとＣＤＣＰ１、ＶＧＦＲ１とＰＬＧＦ、ＶＧＦＲ１とＲＯＮ、ＶＧＦＲ１とＥＧＦＲ、ＶＥＧＦＲ２とＰＬＧＦ、ＶＥＧＦＲ２とＮＲＰ１、ＶＥＧＦＲ２とＲＯＮ、ＶＥＧＦＲ２とＤＬＬ４、ＶＥＧＦＲ２とＥＧＦＲ、ＶＥＧＦＲ２とＲＯＢＯ４、ＶＥＧＦＲ２とＣＤ５５、ＬＰＡとＳＩＰ、ＥＰＨＢ２とＲＯＮ、ＣＴＬＡ４とＶＥＧＦ、ＣＤ３とＥＰＣＡＭ、ＣＤ４０とＩＬ６、ＣＤ４０とＩＧＦ、ＣＤ４０とＣＤ５６、ＣＤ４０とＣＤ７０、ＣＤ４０とＶＥＧＦＲ１、ＣＤ４０とＤＲ５、ＣＤ４０とＤＲ４、ＣＤ４０とＡＰＲＩＬ、ＣＤ４０とＢＣＭＡ、ＣＤ４０とＲＡＮＫＬ、ＣＤ２８とＭＡＰＧ、ＣＤ８０とＣＤ４０、ＣＤ８０とＣＤ３０、ＣＤ８０とＣＤ３３、ＣＤ８０とＣＤ７４、ＣＤ８０とＣＤ２、ＣＤ８０とＣＤ３、ＣＤ８０とＣＤ１９、ＣＤ８０とＣＤ４、ＣＤ８０とＣＤ５２、ＣＤ８０とＶＥＧＦ、ＣＤ８０とＤＲ５、ＣＤ８０とＶＥＧＦＲ２、ＣＤ２２とＣＤ２０、ＣＤ２２とＣＤ８０、ＣＤ２２とＣＤ４０、ＣＤ２２とＣＤ２３、ＣＤ２２とＣＤ３３、ＣＤ２２とＣＤ７４、ＣＤ２２とＣＤ１９、ＣＤ２２とＤＲ５、ＣＤ２２とＤＲ４、ＣＤ２２とＶＥＧＦ、ＣＤ２２とＣＤ５２、ＣＤ３０とＣＤ２０、ＣＤ３０とＣＤ２２、ＣＤ３０とＣＤ２３、ＣＤ３０とＣＤ４０、ＣＤ３０とＶＥＧＦ、ＣＤ３０とＣＤ７４、ＣＤ３０とＣＤ１９、ＣＤ３０とＤＲ５、ＣＤ３０とＤＲ４、ＣＤ３０とＶＥＧＦＲ２、ＣＤ３０とＣＤ５２、ＣＤ３０とＣＤ４、ＣＤ１３８とＲＡＮＫＬ、ＣＤ３３とＦＴＬ３、ＣＤ３３とＶＥＧＦ、ＣＤ３３とＶＥＧＦＲ２、ＣＤ３３とＣＤ４４、ＣＤ３３とＤＲ４、ＣＤ３３とＤＲ５、ＤＲ４とＣＤ１３７、ＤＲ４とＩＧＦ１，２、ＤＲ４とＩＧＦ１Ｒ、ＤＲ４とＤＲ５、ＤＲ５とＣＤ４０、ＤＲ５とＣＤ１３７、ＤＲ５とＣＤ２０、ＤＲ５とＥＧＦＲ、ＤＲ５とＩＧＦ１，２、ＤＲ５とＩＧＦＲ、ＤＲ５とＨＥＲ−２、ＥＧＦＲとＤＬＬ４に結合し得る。他の標的組合せには、ＥＧＦ／ｅｒｂ−２／ｅｒｂ−３ファミリーの１つ以上のメンバーが含まれる。ＤＶＤ  Ｉｇが結合し得る腫瘍性疾患に関与する（１つ以上の）他の標的には、ＣＤ５２、ＣＤ２０、ＣＤ１９、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＢＭＰ６、ＩＬ１２Ａ、ＩＬ１Ａ、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ２、ＩＬ２４、ＩＮＨＡ、ＴＮＦ、ＴＮＦＳＦ１０、ＢＭＰ６、ＥＧＦ、ＦＧＦ１、ＦＧＦ１０、ＦＧＦ１１、ＦＧＦ１２、ＦＧＦ１３、ＦＧＦ１４、ＦＧＦ１６、ＦＧＦ１７、ＦＧＦ１８、ＦＧＦ１９、ＦＧＦ２、ＦＧＦ２０、ＦＧＦ２１、ＦＧＦ２２、ＦＧＦ２３、ＦＧＦ３、ＦＧＦ４、ＦＧＦ５、ＦＧＦ６、ＦＧＦ７、ＦＧＦ８、ＦＧＦ９、ＧＲＰ、ＩＧＦ１、ＩＧＦ２、ＩＬ１２Ａ、ＩＬ１Ａ、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ２、ＩＮＨＡ、ＴＧＦＡ、ＴＧＦＢ１、ＴＧＦＢ２、ＴＧＦＢ３、ＶＥＧＦ、ＣＤＫ２、ＦＧＦ１０、ＦＧＦ１８、ＦＧＦ２、ＦＧＦ４、ＦＧＦ７、ＩＧＦ１Ｒ、ＩＬ２、ＢＣＬ２、ＣＤ１６４、ＣＤＫＮ１Ａ、ＣＤＫＮ１Ｂ、ＣＤＫＮ１Ｃ、ＣＤＫＮ２Ａ、ＣＤＫＮ２Ｂ、ＣＤＫＮ２Ｃ、ＣＤＫＮ３、ＧＮＲＨ１、ＩＧＦＢＰ６、ＩＬ１Ａ、ＩＬ１Ｂ、ＯＤＺ１、ＰＡＷＲ、ＰＬＧ、ＴＧＦＢ１Ｉ１、ＡＲ、ＢＲＣＡ１、ＣＤＫ３、ＣＤＫ４、ＣＤＫ５、ＣＤＫ６、ＣＤＫ７、ＣＤＫ９、Ｅ２Ｆ１、ＥＧＦＲ、ＥＮＯ１、ＥＲＢＢ２、ＥＳＲ１、ＥＳＲ２、ＩＧＦＢＰ３、ＩＧＦＢＰ６、ＩＬ２、ＩＮＳＬ４、ＭＹＣ、ＮＯＸ５、ＮＲ６Ａ１、ＰＡＰ、ＰＣＮＡ、ＰＲＫＣＱ、ＰＲＫＤ１、ＰＲＬ、ＴＰ５３、ＦＧＦ２２、ＦＧＦ２３、ＦＧＦ９、ＩＧＦＢＰ３、ＩＬ２、ＩＮＨＡ、ＫＬＫ６、ＴＰ５３、ＣＨＧＢ、ＧＮＲＨ１、ＩＧＦ１、ＩＧＦ２、ＩＮＨＡ、ＩＮＳＬ３、ＩＮＳＬ４、ＰＲＬ、ＫＬＫ６、ＳＨＢＧ、ＮＲ１Ｄ１、ＮＲ１Ｈ３、ＮＲ１Ｉ３、ＮＲ２Ｆ６、ＮＲ４Ａ３、ＥＳＲ１、ＥＳＲ２、ＮＲ０Ｂ１、ＮＲ０Ｂ２、ＮＲ１Ｄ２、ＮＲ１Ｈ２、ＮＲ１Ｈ４、ＮＲ１Ｉ２、ＮＲ２Ｃ１、ＮＲ２Ｃ２、ＮＲ２Ｅ１、ＮＲ２Ｅ３、ＮＲ２Ｆ１、ＮＲ２Ｆ２、ＮＲ３Ｃ１、ＮＲ３Ｃ２、ＮＲ４Ａ１、ＮＲ４Ａ２、ＮＲ５Ａ１、ＮＲ５Ａ２、ＮＲ６Ａ１、ＰＧＲ、ＲＡＲＢ、ＦＧＦ１、ＦＧＦ２、ＦＧＦ６、ＫＬＫ３、ＫＲＴ１、ＡＰＯＣ１、ＢＲＣＡ１、ＣＨＧＡ、ＣＨＧＢ、ＣＬＵ、ＣＯＬ１Ａ１、ＣＯＬ６Ａ１、ＥＧＦ、ＥＲＢＢ２、ＥＲＫ８、ＦＧＦ１、ＦＧＦ１０、ＦＧＦ１１、ＦＧＦ１３、ＦＧＦ１４、ＦＧＦ１６、ＦＧＦ１７、ＦＧＦ１８、ＦＧＦ２、ＦＧＦ２０、ＦＧＦ２１、ＦＧＦ２２、ＦＧＦ２３、ＦＧＦ３、ＦＧＦ４、ＦＧＦ５、ＦＧＦ６、ＦＧＦ７、ＦＧＦ８、ＦＧＦ９、ＧＮＲＨ１、ＩＧＦ１、ＩＧＦ２、ＩＧＦＢＰ３、ＩＧＦＢＰ６、ＩＬ１２Ａ、ＩＬ１Ａ、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ２、ＩＬ２４、ＩＮＨＡ、ＩＮＳＬ３、ＩＮＳＬ４、ＫＬＫ１０、ＫＬＫ１２、ＫＬＫ１３、ＫＬＫ１４、ＫＬＫ１５、ＫＬＫ３、ＫＬＫ４、ＫＬＫ５、ＫＬＫ６、ＫＬＫ９、ＭＭＰ２、ＭＭＰ９、ＭＳＭＢ、ＮＴＮ４、ＯＤＺ１、ＰＡＰ、ＰＬＡＵ、ＰＲＬ、ＰＳＡＰ、ＳＥＲＰＩＮＡ３、ＳＨＢＧ、ＴＧＦＡ、ＴＩＭＰ３、ＣＤ４４、ＣＤＨ１、ＣＤＨ１０、ＣＤ���１９、ＣＤＨ２０、ＣＤＨ７、ＣＤＨ９、ＣＤＨ１、ＣＤＨ１０、ＣＤＨ１３、ＣＤＨ１８、ＣＤＨ１９、ＣＤＨ２０、ＣＤＨ７、ＣＤＨ８、ＣＤＨ９、ＲＯＢＯ２、ＣＤ４４、ＩＬＫ、ＩＴＧＡ１、ＡＰＣ、ＣＤ１６４、ＣＯＬ６Ａ１、ＭＴＳＳ１、ＰＡＰ、ＴＧＦＢ１Ｉ１、ＡＧＲ２、ＡＩＧ１、ＡＫＡＰ１、ＡＫＡＰ２、ＣＡＮＴ１、ＣＡＶ１、ＣＤＨ１２、ＣＬＤＮ３、ＣＬＮ３、ＣＹＢ５、ＣＹＣ１、ＤＡＢ２ＩＰ、ＤＥＳ、ＤＮＣＬ１、ＥＬＡＣ２、ＥＮＯ２、ＥＮＯ３、ＦＡＳＮ、ＦＬＪ１２５８４、ＦＬＪ２５５３０、ＧＡＧＥＢ１、ＧＡＧＥＣ１、ＧＧＴ１、ＧＳＴＰ１、ＨＩＰ１、ＨＵＭＣＹＴ２Ａ、ＩＬ２９、Ｋ６ＨＦ、ＫＡＩ１、ＫＲＴ２Ａ、ＭＩＢ１、ＰＡＲＴＩ、ＰＡＴＥ、ＰＣＡ３、ＰＩＡＳ２、ＰＩＫ３ＣＧ、ＰＰＩＤ、ＰＲ１、ＰＳＣＡ、ＳＬＣ２Ａ２、ＳＬＣ３３Ａ１、ＳＬＣ４３Ａ１、ＳＴＥＡＰ、ＳＴＥＡＰ２、ＴＰＭ１、ＴＰＭ２、ＴＲＰＣ６、ＡＮＧＰＴ１、ＡＮＧＰＴ２、ＡＮＰＥＰ、ＥＣＧＦ１、ＥＲＥＧ、ＦＧＦ１、ＦＧＦ２、ＦＩＧＦ、ＦＬＴ１、ＪＡＧ１、ＫＤＲ、ＬＡＭＡ５、ＮＲＰ１、ＮＲＰ２、ＰＧＦ、ＰＬＸＤＣ１、ＳＴＡＢ１、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＣ、ＡＮＧＰＴＬ３、ＢＡＩ１、ＣＯＬ４Ａ３、ＩＬ８、ＬＡＭＡ５、ＮＲＰ１、ＮＲＰ２、ＳＴＡＢ１、ＡＮＧＰＴＬ４、ＰＥＣＡＭ１、ＰＦ４、ＰＲＯＫ２、ＳＥＲＰＩＮＦ１、ＴＮＦＡＩＰ２、ＣＣＬ１１、ＣＣＬ２、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ５、ＣＸＣＬ６、ＣＸＣＬ９、ＩＦＮＡ１、ＩＦＮＢ１、ＩＦＮＧ、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ６、ＭＤＫ、ＥＤＧ１、ＥＦＮＡ１、ＥＦＮＡ３、ＥＦＮＢ２、ＥＧＦ、ＥＰＨＢ４、ＦＧＦＲ３、ＨＧＦ、ＩＧＦ１、ＩＴＧＢ３、ＰＤＧＦＡ、ＴＥＫ、ＴＧＦＡ、ＴＧＦＢ１、ＴＧＦＢ２、ＴＧＦＢＲ１、ＣＣＬ２、ＣＤＨ５、ＣＯＬ１８Ａ１、ＥＤＧ１、ＥＮＧ、ＩＴＧＡＶ、ＩＴＧＢ３、ＴＨＢＳ１、ＴＨＢＳ２、ＢＡＤ、ＢＡＧ１、ＢＣＬ２、ＣＣＮＡ１、ＣＣＮＡ２、ＣＣＮＤ１、ＣＣＮＥ１、ＣＣＮＥ２、ＣＤＨ１（Ｅ−カドヘリン）、ＣＤＫＮ１Ｂ（ｐ２７Ｋｉｐ１）、ＣＤＫＮ２Ａ（ｐ１６ＩＮＫ４ａ）、ＣＯＬ６Ａ１、ＣＴＮＮＢ１（ｂ−カテニン）、ＣＴＳＢ（カテプシンＢ）、ＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ−２）、ＥＳＲ１、ＥＳＲ２、Ｆ３（ＴＦ）、ＦＯＳＬ１（ＦＲＡ−１）、ＧＡＴＡ３、ＧＳＮ（ゲルソリン）、ＩＧＦＢＰ２、ＩＬ２ＲＡ、ＩＬ６、ＩＬ６Ｒ、ＩＬ６ＳＴ（糖タンパク質１３０）、ＩＴＧＡ６（ａ６インテグリン）、ＪＵＮ、ＫＬＫ５、ＫＲＴ１９、ＭＡＰ２Ｋ７（ｃ−Ｊｕｎ）、ＭＫＩ６７（Ｋｉ−６７）、ＮＧＦＢ（ＮＧＦ）、ＮＧＦＲ、ＮＭＥ１（ＮＭ２３Ａ）、ＰＧＲ、ＰＬＡＵ（ｕＰＡ）、ＰＴＥＮ、ＳＥＲＰＩＮＢ５（マスピン）、ＳＥＲＰＩＮＥ１（ＰＡＩ−１）、ＴＧＦＡ、ＴＨＢＳ１（トロンボスポンジン−１）、ＴＩＥ（Ｔｉｅ−１）、ＴＮＦＲＳＦ６（Ｆａｓ）、ＴＮＦＳＦ６（ＦａｓＬ）、ＴＯＰ２Ａ（トポイソメラーゼＩｉａ）、ＴＰ５３、ＡＺＧＰ１（亜鉛−ａ−糖タンパク質）、ＢＰＡＧ１（プレクチン）、ＣＤＫＮ１Ａ（ｐ２１Ｗａｐ１／Ｃｉｐ１）、ＣＬＤＮ７（クラウジン−７）、ＣＬＵ（クラステリン）、ＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ−２）、ＦＧＦ１、ＦＬＲＴ１（フィブロネ���チン）、ＧＡＢＲＰ（ＧＡＢＡａ）、ＧＮＡＳ１、ＩＤ２、ＩＴＧＡ６（ａ６インテグリン）、ＩＴＧＢ４（ｂ４インデリン）、ＫＬＦ５（ＧＣ  Ｂｏｘ  ＢＰ）、ＫＲＴ１９（ケラチン１９）、ＫＲＴＨＢ６（毛髪特異性タイプＩＩケラチン）、ＭＡＣＭＡＲＣＫＳ、ＭＴ３（メタロチオネクチン−ＩＩＩ）、ＭＵＣ１（ムチン）、ＰＴＧＳ２（ＣＯＸ−２）、ＲＡＣ２（ｐ２１Ｒａｃ２）、Ｓ１００Ａ２、ＳＣＧＢ１Ｄ２（リポフィリンＢ）、ＳＣＧＢ２Ａ１（マンマグロビン２）、ＳＣＧＢ２Ａ２（マンマグロビン１）、ＳＰＲＲＩＢ（Ｓｐｒ１）、ＴＨＢＳ１、ＴＨＢＳ２、ＴＨＢＳ４及びＴＮＦＡＩＰ２（Ｂ９４）、ＲＯＮ、ｃ−Ｍｅｔ、ＣＤ６４、ＤＬＬ４、ＰＬＧＦ、ＣＴＬＡ４、ホスファチジルセリン、ＲＯＢＯ４、ＣＤ８０、ＣＤ２２、ＣＤ４０、ＣＤ２３、ＣＤ２８、ＣＤ８０、ＣＤ５５、ＣＤ３８、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ３０、ＣＤ１３８、ＣＤ５６、ＣＤ３３、ＣＤ２、ＣＤ１３７、ＤＲ４、ＤＲ５、ＲＡＮＫＬ、ＶＥＧＦＲ２、ＰＤＧＦＲ、ＶＥＧＦＲ１、ＭＴＳＰ１、ＭＳＰ、ＥＰＨＢ２、ＥＰＨＡ１、ＥＰＨＡ２、ＥｐＣＡＭ、ＰＧＥ２、ＮＫＧ２Ｄ、ＬＰ／Ａ、ＳＩＰ、ＡＰＲＩＬ、ＢＣＭＡ、ＭＡＰＧ、ＦＬＴ３、ＰＤＧＦＲα、ＰＤＧＦＲβ、ＲＯＲ１、ＰＳＭＡ、ＰＳＣＡ、ＳＣＤ１及びＣＤ５９からなる群から選択されるものが含まれるが、これらに限定されない。
【０４５５】
ＩＶ．医薬組成物
本発明は、本発明の結合タンパク質及び医薬的に許容され得る担体を含む医薬組成物をも提供する。本発明の結合タンパク質を含む医薬組成物は、障害の診断、検出またはモニターする際、障害または１つ以上のその症状の予防、治療、管理または改善する際及び／または研究において使用されるが、これらに限定されない。特定実施形態では、組成物は１つ以上の本発明の結合タンパク質を含む。別の実施形態では、医薬組成物は１つ以上の本発明の結合タンパク質及び本発明の結合タンパク質以外の障害を治療するための１つ以上の予防または治療薬を含む。実施形態では、予防または治療薬は障害または１つ以上のその症状の予防、治療、管理または改善のために有用であることが公知であり、または障害または１つ以上のその症状の予防、治療、管理または改善において使用されたかまたは現在使用されている。これらの実施形態では、組成物は更に担体、希釈剤または賦形剤を含み得る。
【０４５６】
本発明の結合タンパク質は、被験者に投与するのに適した医薬組成物中に配合され得る。典型的には、医薬組成物は本発明の結合タンパク質及び医薬的に許容され得る担体を含む。本明細書中で使用されている「医薬的に許容され得る担体」には、生理学的に適合し得るすべての溶媒、分散媒体、コーティング、抗細菌剤、抗真菌剤、等張剤及び吸収遅延剤等が含まれる。医薬的に許容され得る担体の例には、１つ以上の水、食塩液、リン酸緩衝食塩液、デキストロース、グリセロール、エタノール等、及びその組合せが含まれる。幾つかの実施形態では、等張剤、例えば糖、ポリアルコール（例えば、マンニトール）、ソルビトールまたは塩化ナトリウムが組成物中に配合される。医薬的に許容され得る担体は、更に抗体または抗体部分の保存寿命または有効性を高める補助物質、例えば湿潤または乳化剤、保存剤またはバッファーを少量含み得る。
【０４５７】
各種のデリバリーシステムが公知であり、本発明の１つ以上の抗体または本発明の１つ以上の抗体の組合せ及び障害または１つ以上のその症状を予防、管理、治療または改善するために有用な予防薬または治療薬を投与するために、例えばリポソームへのカプセル化、ミクロ粒子、ミクロカプセル、抗体または抗体断片を発現できる組換え細胞、受容体媒介エンドサイトーシス（例えば、Ｗｕ  ａｎｄ  Ｗｕ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６２：４４２９−４４３２（１９８７）を参照されたい）、レトロウイルスまたは他のベクターの一部としての核酸の構築等が使用され得る。本発明の予防または治療薬の投与方法には、非経口投与（例えば、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内及び皮下）、硬膜外投与、腫瘍内投与及び粘膜投与（例えば、鼻腔内及び口腔ルート）が含まれるが、これらに限定されない。加えて、例えば吸入器またはネブライザー及びエアロゾル化剤を含む処方物を用いることにより肺内投与が使用され得る。例えば、各々が全文参照により本明細書に組み入れる米国特許Ｎｏｓ．６，０１９，９６８、５，９８５，３２０、５，９８５，３０９、５，９３４，２７２、５，８７４，０６４、５，８５５，９１３、５，２９０，５４０及び４，８８０，０７８；及びＰＣＴ公開ＷＯ  ９２／１９２４４、ＷＯ  ９７／３２５７２、ＷＯ  ９７／４４０１３、ＷＯ  ９８／３１３４６及びＷＯ  ９９／６６９０３を参照されたい。１つの実施形態では、本発明の結合タンパク質、併用治療または本発明の組成物はＡｌｋｅｒｍｅｓ  ＡＩＲ（登録商標）肺内ドラッグデリバリーテクノロジー（Ａｌｋｅｒｍｅｓ，Ｉｎｃ．，マサチューセッツ州ケンブリッジ）を用いて投与される。特定実施形態では、本発明の予防または治療薬は筋肉内、静脈内、腫瘍内、経口、鼻腔内、肺内または皮下投与される。予防または治療薬は任意の便利なルートにより、例えば注入またはボーラス注射により、上皮または粘膜皮膚裏層（例えば、口腔粘膜、直腸及び腸粘膜等）を介する吸収により投与され得、他の生理活性物質と一緒に投与され得る。投与は全身または局所でもよい。
【０４５８】
実施形態では、腫瘍細胞を標的とするためにインビトロで腫瘍細胞に対する抗体結合カーボンナノチューブ（ＣＮＴ）の特異的結合及びその後の近赤外（ＮＩＲ）光での非常に特異的なアブレーションが使用され得る。例えば、ビオチニル化極性脂質を使用して、安定な生体適合性で非細胞傷害性のＣＮＴ分散物を調製した後、該分散物を１つ以上の腫瘍抗原（例えば、ＣＤ２２）に対する１つまたは２つの異なるニュートラライトアビジン誘導体化ＤＶＤ−Ｉｇに付着させる（Ｃｈａｋｒａｖａｒｔｙ，Ｐ．ら（２００８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０５：８６９７−８７０２）。
【０４５９】
特定実施形態では、本発明の予防または治療薬を治療を要する区域に局所的に投与することが望ましいことがある。これは、非限定例として局所注入により、注射により、またはインプラントを用いて達成され得る。前記インプラントは、膜またはマトリックスを含めた多孔質または非孔質材料、例えばシラスティック膜、ポリマー、繊維質マトリックス（例えば、Ｔｉｓｓｕｅｌ（登録商標））またはコラーゲンマトリックスである。１つの実施形態では、障害またはその症状を予防、治療、管理及び／または改善するために有効量の１つ以上の本発明の抗体を被験者の罹患区域に局所投与する。別の実施形態では、障害または１つ以上のその症状を予防、治療、管理及び／または改善するために有効量の本発明の１つ以上の抗体を有効量の本発明の結合タンパク質以外の１つ以上の治療薬（例えば、１つ以上の予防または治療薬）と一緒に被験者の罹患区域に局所投与する。
【０４６０】
別の実施形態では、予防または治療薬は制御放出または徐放システムでデリバリーされ得る。１つの実施形態では、制御放出または徐放を達成するためにポンプが使用され得る（上掲したＬａｎｇｅｒ；Ｓｅｆｔｏｎ，１９８７，ＣＲＣ  Ｃｒｉｔ．Ｒｅｆ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｅｎｇ．，１４：２０；Ｂｕｃｈｗａｌｄら，１９８０，Ｓｕｒｇｅｒｙ，８８：５０７；Ｓａｕｄｅｋら，１９８９，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．，３２１，５７４を参照されたい）。別の実施形態では、本発明の治療薬の制御放出または徐放を達成するためにポリマー材料が使用され得る（例えば、Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，Ｌａｎｇｅｒ  ａｎｄ  Ｗｉｓｅ（ｅｄｓ．），ＣＲＣ  Ｐｒｅｓ，Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，Ｆｌａ（１９７４）；Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ，Ｄｒｕｇ  Ｐｒｏｄｕｃｔ  Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ，Ｓｍｏｌｅｎ  ａｎｄ  Ｂａｌｌ（ｅｄｓ．），Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８４）；Ｒａｎｇｅｒ  ａｎｄ  Ｐｅｐｐａｓ，１９８３，Ｊ，Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｓｃｉ．Ｒｅｖ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２３：６１を参照されたい。また、Ｌｅｖｙら，１９８５，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２８：１９０；Ｄｕｒｉｎｇら，１９８９，Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．，２５：３５１；Ｈｏｗａｒｄら，１９８９，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．，７  １：１０５）；米国特許Ｎｏ．５，６７９，３７７；米国特許Ｎｏ．５，９１６，５９７；米国特許Ｎｏ．５，９１２，０１５；米国特許Ｎｏ．５，９８９，４６３；米国特許Ｎｏ．５，１２８，３２６；ＰＣＴ公開ＷＯ  ９９／１５１５４；及びＰＣＴ公開ＷＯ  ９９／２０２５３を参照されたい）。徐放性処方物中に使用されるポリマーの例には、ポリ（２−ヒドロキシエチルメタクリレート）、ポリ（メタクリル酸メチル）、ポリ（アクリル酸）、ポリ（エチレン−コ−酢酸ビニル）、ポリ（メタクリル酸）、ポリグリコリド（ＰＬＧ）、ポリ無水物、ポリ（Ｎ−ビニルピロリドン）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリアクリルアミド、ポリ（エチレングリコール）、ポリアクチド（ＰＬＡ）、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）（ＰＬＧＡ）及びポリオルトエステルが含まれるが、これらに限定されない。実施形態では、徐放性処方物中に使用されるポリマーは不活性であり、滲出する恐れがある不純物を含まず、保存時に安定であり、無菌であり、生物分解性である。さらに別の実施形態では、制御放出または徐放システムは、全身用量の分数しか必要としないように予防または治療標的の近くに配置し得る（例えば、Ｇｏｏｄｓｏｎ，Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，ｓｕｐｒａ，ｖｏｌ．２，ｐ．１１５−１３８（１９８４）を参照されたい）。
【０４６１】
徐放システムはＬａｎｇｅｒ（１９９０，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４９：１５２７−１５３３）による概説の中で検討されている。１つ以上の本発明の治療薬を含む徐放性処方物を製造するために当業者に公知の技術が使用され得る。例えば、各々を全文参照により本明細書に組み入れる米国特許Ｎｏ．４，５２６、９３８；ＰＣＴ公開ＷＯ  ９１／０５５４８；ＰＣＴ公開ＷＯ  ９６／２０６９８；Ｎｉｎｇら，１９９６，“Ｉｎｔｒａｔｕｍｏｒａｌ  Ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｈｙ  ｏｆ  ａ  Ｈｕｍａｎ  Ｃｏｌｏｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｘｅｎｏｇｒａｆｔ  Ｕｓｉｎｇ  ａ  Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ−Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｇｅｌ”，Ｒａｄｉｏｔｈｅｒａｐｙ  ＆  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，３９：１７９−１８９；Ｓｏｎｇら，１９９５，“Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｍｅｄｉａｔｅｄ  Ｌｕｎｇ  Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｏｆ  Ｌｏｎｇ−Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ  Ｅｍｕｌｓｉｏｎｓ”，ＰＤＡ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ＆  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，５０：３７２−３９７；Ｃｌｅｅｋら，１９９７，“Ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ  ｆｏｒ  ａ  ｂＦＧＦ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｆｏｒ  Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ”，Ｐｒｏ．Ｉｎｔ’ｌ．Ｓｙｍｐ．Ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｒｅｌ．Ｂｉｏａｃｔ．Ｍａｔｅｒ．，２４：８５３−８５４；及びＬａｍら，１９９７，“Ｍｉｃｒｏｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｆｏｒ  Ｌｏｃａｌ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ”，Ｐｒｏｃ．Ｉｎｔ’ｌ．Ｓｙｍｐ．Ｃｏｎｔｒｏｌ  Ｒｅｌ．Ｂｉｏａｃｔ．Ｍａｔｅｒ．，２４：７５９−７６０を参照されたい。
【０４６２】
特定実施形態では、本発明の組成物が予防または治療薬をエンコードする核酸の場合、エンコード化予防または治療薬の発現を促進するために、核酸を適当な核酸発現ベクターの一部として構築し、例えばレトロウイルスベクター（米国特許Ｎｏ．４，９８０，２８６を参照されたい）を使用することにより、直接注射により、ミクロ粒子衝撃（例えば、遺伝子銃；Ｂｉｏｌｉｓｔｉｃ，Ｄｕｐｏｎｔ）を使用することにより細胞内になるように投与することにより；または脂質、細胞表面受容体または形質移入剤でコーティングすることにより；または核に進入することが公知のホメオボックス様ペプチドへ結合させて投与することにより（例えば、Ｊｏｌｉｏｔら，１９９１，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８８：１８６４−１８６８を参照されたい）、核酸をインビボで投与し得る。或いは、核酸を細胞内に導入し、相同組換えによる発現のために宿主細胞ＤＮＡ内に取り込んでもよい。
【０４６３】
本発明の医薬組成物は意図する投与ルートと適合するように処方される。投与ルートの例には、非経口、例えば、静脈内、皮内、皮下、経口、鼻腔内（例えば、吸入）、経皮（例えば、局所）、経粘膜及び直腸投与が含まれるが、これらに限定されない。特定実施形態では、組成物はヒトに対して静脈内、皮下、筋肉内、経口、鼻腔内または局所投与するのに適した医薬組成物としてルーチンの手順に従って処方される。典型的には、静脈内投与のための組成物は滅菌等張性水性バッファー中の溶液である。必要により、組成物は可溶化剤及び注射部位の痛みを軽くするために局所麻酔薬（例えば、リグノカイン）をも含み得る。
【０４６４】
本発明の組成物を局所する投与するつもりならば、組成物は軟膏剤、クリーム剤、経皮パッチ、ローション剤、ゲル剤、シャンプー、スプレー剤、エアロゾル剤、溶液剤、エマルジョン剤の形態、または当業者の公知の他の形態で処方され得る。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ａｎｄ  Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ，第１９版，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂ．Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ（１９９５）を参照されたい。実施形態では、非スプレー式局所投与形態の場合、担体または局所適用に適合しており且つ水よりも高い動的粘度を有する１つ以上の賦形剤を含む粘性〜半固体または固体形態が使用される。適当な処方物には、非限定的に溶液剤、懸濁液剤、エマルジョン剤、クリーム剤、軟膏剤、粉末剤、リニメント剤、軟膏剤等が含まれ、これらは所望により殺菌されており、または各種特性（例えば、浸透圧）に影響を与えるための補助剤（例えば、保存剤、安定化剤、湿潤剤、バッファーまたは塩）と混合される。他の適当な局所投与形態には、活性成分（実施形態では固体または液体不活性担体と組み合わせて）が加圧揮発物質（例えば、フレオンのような気体状噴射剤）との混合物で、または絞り出し式容器中に包装されているスプレー式エアロゾル製剤が含まれる。所望ならば、湿潤剤または保湿剤を医薬組成物及び剤形に添加してもよい。前記追加成分は当業界で公知である。
【０４６５】
本発明の方法が組成物の鼻腔内投与を含むならば、組成物はエアロゾル形態、スプレー、ミストまたは滴剤の形態で処方され得る。特に、本発明に従って使用するための予防または治療薬を適当な噴射剤（例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素または他の適当な気体）を用いて加圧パックまたはネブライザーからエアロゾルスプレー状の形態でデリバリーすることが好都合であり得る。加圧エアロゾルの場合、投与単位は定量をデリバリーするために弁を備えることにより決定され得る。吸入器または吹き入れ器中に使用するための化合物及び適当な粉末基剤（例えば、ラクトースまたは澱粉）の粉末ミックスを収容している（例えば、ゼラチンから構成される）カプセル剤及びカートリッジが処方され得る。
【０４６６】
本発明の方法が経口投与を含むならば、組成物は錠剤、カプセル剤、カシェ剤、ゲルキャップ剤、溶液剤、懸濁液剤等の形態で経口的に処方され得る。錠剤またはカプセル剤は、医薬的に許容され得る賦形剤、例えば結合剤（例えば、アルファ化トウモロコシ澱粉、ポリビニルピロリドンまたはヒドロキシプロピルメチルセルロース）、増量剤（例えば、ラクトース、結晶セルロースまたはリン酸水素カルシウム）、滑沢剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルクまたはシリカ）、崩壊剤（例えば、ジャガイモ澱粉またはナトリウム澱粉グリコレート）、または湿潤剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム）を用いて慣用の手段により製造され得る。錠剤を当業界で公知の方法によりコーティングしてもよい。経口投与用液体製剤は、非限定的に溶液剤、シロップ剤または懸濁液剤の形態をとり得、または使用前に水または他の適当なビヒクルで構成するための乾燥製品として提供され得る。液体製剤は医薬的に許容され得る添加剤、例えば懸濁化剤（例えば、ソルビトールシロップ、セルロース誘導体または硬化油）、乳化剤（例えば、レシチンまたはアカシア）、非水性ビヒクル（例えば、アーモンド油、油状エステル、エチルアルコールまたは分画化植物油）、及び保存剤（例えば、メチルまたはプロピル−ｐ−ヒドロキシベンゾエートまたはソルビン酸）を用いて慣用方法により製造される。製剤は、適当ならばバッファー塩、着香料、着色料及び甘味料をも含有し得る。経口投与用製剤は、適当には予防または治療薬の徐放、制御放出または持続放出のために処方され得る。
【０４６７】
本発明の方法は、エアロゾル化剤と共に処方した組成物の例えば吸入器またはネブライザーを用いた肺内投与を含み得る。例えば、各々全文参照により本明細書に組み入れる米国特許Ｎｏｓ．６，０１９，９６８、５，９８５，３２０、５，９８５，３０９、５，９３４，２７２、５，８７４，０６４、５，８５５，９１３、５，２９０，５４０及び４，８８０，０７８；並びにＰＣＴ公開ＷＯ  ９２／１９２４４、ＷＯ  ９７／３２５７２、ＷＯ  ９７／４４０１３、ＷＯ  ９８／３１３４６及びＷＯ  ９９／６６９０３を参照されたい。特定実施形態では、本発明の結合タンパク質、併用治療及び／または本発明の組成物はＡｌｋｅｒｍｅｓ  ＡＩＲ（登録商標）肺内ドラッグデリバリーテクノロジー（Ａｌｋｅｒｍｅｓ，Ｉｎｃ，マサチューセッツ州ケンブリッジ）を用いて投与される。
【０４６８】
本発明の方法は、非経口投与用に処方された組成物の注射（例えば、ボーラス注射または連続注入）による投与を含み得る。注射用処方物は、保存剤を添加した単位投与形態（例えば、アンプルまたは複数回投与容器）で提供され得る。組成物は油性または水性ビヒクル中の懸濁液、溶液またはエマルジョンのような形態をとり得、製剤化剤（例えば、懸濁化剤、安定化剤及び／または分散剤）を含み得る。或いは、活性成分は使用前に適当なビヒクル（例えば、滅菌発熱物質非含有の水）を用いて構成するための粉末形態であり得る。
【０４６９】
本発明の方法は、更にデポ剤として処方される組成物の投与を含み得る。長時間作用する処方物は移植（例えば、皮下または筋肉内）により、または筋肉内注射により投与され得る。よって、例えば、組成物は適当な高分子または疎水性材料（例えば、許容され得る油中のエマルジョンとして）またはイオン交換樹脂と共に、或いは難溶性誘導体として（例えば、難溶性塩として）処方され得る。
【０４７０】
本発明の方法は、中性または塩の形態として処方された組成物の投与を包含する。医薬的に許容され得る塩には、アニオン（例えば、塩酸、リン酸、酢酸、シュウ酸、酒石酸等から誘導されるアニオン）で形成される塩及びカチオン（例えば、ナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、水酸化第二鉄、イソプロピルアミン、トリエチルアミン、２−エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカイン等から誘導されるカチオン）で形成される塩が含まれる。
【０４７１】
一般的に、組成物の成分は、別々にまたは単位投与形態で一緒に混合して、例えば活性物質の量が示されている密閉容器（例えば、アンプルまたはサッシェ）中の凍結乾燥粉末または水非含有濃厚物の形態として供給される。投与モードが注入の場合、組成物は滅菌医薬グレードの水または食塩液を収容している注入ボトルを用いて分配され得る。投与モードが注射による場合、投与前に成分が混合され得るように注射用滅菌水または食塩液のアンプルを用意してもよい。
【０４７２】
特に、本発明は、物質の量が示されている密閉容器（例えば、アンプル、サッシェ）中に包装されている１つ以上の本発明の予防または治療薬、或いは医薬組成物を提供する。１つの実施形態では、１つ以上の本発明の予防または治療薬、或いは医薬組成物は密閉容器中に乾燥凍結乾燥粉末または水非含有濃厚物として供給され得、被験者に投与するために適当な濃度に（例えば、水または食塩液を用いて）再構成され得る。実施形態では、１つ以上の本発明の予防または治療薬、或いは医薬組成物は少なくとも５ｍｇ、少なくとも１０ｍｇ、少なくとも１５ｍｇ、少なくとも２５ｍｇ、少なくとも３５ｍｇ、少なくとも４５ｍｇ、少なくとも５０ｍｇ、少なくとも７５ｍｇ、または少なくとも１００ｍｇの単位用量で密閉容器中に乾燥滅菌凍結乾燥粉末として供給される。本発明の凍結乾燥した予防または治療薬、或いは医薬組成物はその元の容器中に２℃〜８℃で保存されなければならず、本発明の凍結乾燥した予防または治療薬、或いは医薬組成物は再構成してから１週間以内、例えば５日以内、７２時間以内、４８時間以内、２４時間以内、１２時間以内、６時間以内、５時間以内、３時間以内または１時間以内に投与されなければならない。代替実施形態では、１つ以上の本発明の予防または治療薬、或いは医薬組成物は物質の量及び濃度が示されている密閉容器中に液体形態で供給される。実施形態では、液体形態の投与される組成物は少なくとも０．２５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも０．５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも１ｍｇ／ｍｌ、少なくとも２．５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも８ｍｇ／ｍｌ、少なくとも１０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも１５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも２５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも５０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも７５ｍｇ／ｍｌ、または少なくとも１００ｍｇ／ｍｌで密閉容器中に供給される。液体形態はその元の容器中に２℃〜８℃で保存されなければならない。
【０４７３】
本発明の結合タンパク質は非経口投与に適した医薬組成物中に配合され得る。実施形態では、抗体または抗体部分は０．１〜２５０ｍｇ／ｍｌの結合タンパク質を含有する注射液として製造され得る。注射液は、フリントまたはアンバーバイアル、アンプルまたは充填済み注射器中の液体または凍結乾燥投与形態から構成され得る。バッファーはｐＨ５．０〜７．０（最適には、ｐＨ６．０）でＬ−ヒスチジン（１〜５０ｍＭ）、最適には５〜１０ｍＭであり得る。他の適当なバッファーには、コハク酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、リン酸ナトリウムまたはリン酸カリウムが含まれるが、これらに限定されない。溶液の毒性を調節するために塩化ナトリウムが０〜３００ｍＭ（最適には、液体投与形態の場合１５０ｍＭ）の濃度で使用され得る。凍結乾燥投与形態に対して凍結防止剤、原則０〜１０％  スクロース（最適には、０．５〜１．０％）を配合し得る。他の適当な凍結防止剤にはトレハロース及びラクトースが含まれる。凍結乾燥投与形態に対して増量剤、原則１〜１０％  マンニトール（最適には、２〜４％）を配合し得る。安定化剤は液体及び凍結乾燥投与形態の両方で、原則１〜５０ｍＭ  Ｌ−メチオニン（最適には、５〜１０ｍＭ）を使用し得る。他の適当な増量剤にはグリシン、アルギニンが含まれ、０〜０．０５％  ポリソルベート−８０（最適には、０．００５〜０．０１％）として配合され得る。追加の界面活性剤には、ポリソルベート２０及びＢＲＩＪ界面活性剤が含まれるが、これらに限定されない。非経口投与のための注射液として製造される本発明の結合タンパク質を含む医薬組成物は、更にアジュバントとして有用な物質、例えば治療用タンパク質（例えば、抗体）の吸収または分散を改善するために使用される物質を含み得る。特に有用なアジュバントはヒアルロニダーゼ、例えばＨｙｌｅｎｅｘ（登録商標）（組換えヒトヒアルロニダーゼ）である。注射液中にヒアルロニダーゼを添加すると、非経口投与後、特に皮下投与後のヒトバイオアベイラビリティーが改善される。痛み及び不快が少なく、注射部位反応の頻度が最小でより多い容量（すなわち、１ｍｌ以上）を注射することができる（参照により本明細書に組み入れるＷＯ  ２００４０７８１４０及びＵＳ  ２００６１０４９６８を参照されたい）。
【０４７４】
本発明の組成物は各種形態であり得る。これらには、例えば液体溶液剤（例えば、注射可能及び注入可能な溶液剤）、分散または懸濁液剤、錠剤、ピル剤、散剤、リポソーム剤及び座剤のような液体、半固体及び固体の剤形が含まれる。選択される形態は意図する投与モード及び治療用途に依存する。典型的な組成物は注射可能または注入可能な溶液剤、例えばヒトを他の抗体で受動免疫化するために使用されている組成物に類似の組成物の形態である。選択される投与モードは非経口（例えば、静脈内、皮下、腹腔内、筋肉内）である。実施形態では、抗体は静脈内注入または注射により投与される。別の実施形態では、抗体は筋肉内または皮下注射により投与される。
【０４７５】
治療用組成物は、典型的には製造及び保存条件下で無菌であり、安定でなければならない。組成物は溶液、ミクロエマルジョン、分散液、リポソーム、または高い薬物濃度に適した他の秩序構造として処方され得る。滅菌注射液は、適当な溶媒中に必要な量の活性化合物（すなわち、抗体または抗体部分）を所要により本明細書中に列挙されている１つ以上の成分と共に配合した後、濾過滅菌することにより製造され得る。通常、分散液は、基本分散媒体及び本明細書中に列記されている成分からの必要な他の成分を含む滅菌ビヒクル中な活性成分を配合することにより製造される。滅菌注射液を調製するための滅菌凍結乾燥粉末の場合、製造方法は既に滅菌濾過されている溶液から活性成分及び追加の所望成分の粉末を生ずる真空乾燥及び凍結乾燥である。溶液の適切な流動性は、例えばコーティング（例えば、レシチン）を使用することにより、分散液の場合には所要の粒度を維持することにより、界面活性剤を使用することにより維持され得る。注射用組成物の長期間吸収は、組成物中に吸収を遅らす物質（例えば、モノステアレート塩及びゼラチン）を配合することによりもたらし得る。
【０４７６】
本発明の結合タンパク質は当業界で公知の各種方法により投与され得るが、多くの治療用途の場合には、実施形態では投与ルート／モードは皮下注射、静脈内注射または注入である。当業者には自明のように、投与ルート／モードは所望の結果に依存して異なる。ある実施形態では、活性化合物は、化合物が迅速放出するのを保護する担体を用いて、例えばインプラント、経皮パッチ及びマイクロカプセル化デリバリーシステムを含めた制御放出性処方物として製造され得る。生物分解性・生物適合性ポリマー、例えばエチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル及びポリ酪酸が使用され得る。前記処方物を製造するための多くの方法は特許されており、または当業者に一般的に知られている。例えば、Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ  ａｎｄ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｊ．Ｒ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，ｅｄ．，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９７８を参照されたい。
【０４７７】
ある実施形態では、本発明の結合タンパク質は、例えば不活性希釈剤または吸収性食用担体と共に経口投与され得る。化合物（及び、所望ならば他の成分）を硬または軟ゼラチンカプセル中に封入しても、錠剤に圧縮しても、または被験者の食事に直接取り込んでよい。経口治療投与の場合、化合物は賦形剤と共に配合され、摂取可能錠剤、バッカル錠、トローチ剤、カプセル剤、エリキシル剤、懸濁液剤、シロップ剤、カシェ剤等の形態で使用され得る。本発明の化合物を非経口投与以外で投与するためには、化合物にその不活化を防止するための材料をコーティングしても、または化合物を該材料と一緒に投与してもよい。
【０４７８】
補助活性化合物も組成物に配合し得る。ある実施形態では、本発明の結合タンパク質は、本発明の結合タンパク質で障害を治療するために有用な１つ以上の追加治療薬と共処方しても及び／または共投与してもよい。例えば、本発明の結合タンパク質を他の標的（例えば、他のサイトカインに結合する抗体または細胞表面分子に結合する抗体）に結合する１つ以上の追加抗体と共処方しても及び／または共投与してもよい。更に、本発明の１つ以上の抗体は２つ以上の上記治療薬と併用され得る。前記併用治療は、有利には投与する治療薬の用量を低下させ、よって各種単独治療に関連する起こり得る毒性または合併症を避けることができる。
【０４７９】
ある実施形態では、結合タンパク質を当業界で公知の半減期を延長させるビヒクルにリンクさせる。前記ビヒクルには、Ｆｃドメイン、ポリエチレングリコール及びデキストランが含まれるが、これらに限定されない。これらのビヒクルは、参照により本明細書に組み入れる米国特許出願Ｎｏ．０９／４２８，０８２及び公開されたＰＣＴ出願ＷＯ  ９９／２５０４４に記載されている。
【０４８０】
特定実施形態では、障害または１つ以上のその症状を遺伝子治療により治療、予防、管理または改善するために、本発明の結合タンパク質或いは本発明の別の予防または治療薬をエンコードする核酸配列を投与する。遺伝子治療は、被験者に対して発現させたまたは発現可能な核酸を投与することにより実施される治療を指す。本発明のこの実施形態では、核酸は予防または治療効果を媒介する本発明のコード化抗体、或いは予防または治療薬を産生する。
【０４８１】
当業界で利用可能な遺伝子治療のための方法が本発明に従って使用され得る。遺伝子治療の方法の概説については、Ｇｏｌｄｓｐｉｅｌら，１９９３，Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，１２：４８８−５０５；Ｗｕ  ａｎｄ  Ｗｕ，１９９１、Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ，３：８７−９５；Ｔｏｌｓｔｏｓｈｅｖ，１９９３，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．，３２：５７３−５９６；Ｍｕｌｌｉｇａｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２６０：９２６−９３２（１９９３）；及びＭｏｒｇａｎ  ａｎｄ  Ａｎｄｅｒｓｏｎ，１９９３，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，６２：１９１−２１７，Ｍａｙ，１９９３，ＴＩＢＴＥＣＨ  １１（５）：１５５−２１５を参照されたい。使用され得る組換えＤＮＡテクノロジーの業界で一般的に知られている方法は、Ａｕｓｕｂｅｌら（ｅｄｓ．），Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，ＮＹ（１９９３）；及びＫｒｉｅｇｌｅｒ，Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  ａｎｄ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ（１９９０）に記載されている。遺伝子治療の各種方法の詳細説明は参照により本明細書に組み入れるＵＳ  ２００５００４２６６４  Ａ１に開示されている。
【０４８２】
本発明の結合タンパク質は、結合タンパク質により認識される標的が有害である各種疾患を治療する際に有用である。前記疾患には、関節リウマチ、骨関節症、若年性慢性関節炎、敗血症性関節炎、ライム関節炎、乾癬性関節炎、反応性関節炎、脊椎関節症、全身性エリテマトーデス、クローン病、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患、インスリン依存性糖尿病、甲状腺炎、喘息、アレルギー性疾患、乾癬、皮膚炎、強皮症、移植片対宿主病、臓器移植拒絶反応、臓器移植に関連する急性または慢性免疫疾患、サルコイドーシス、アテローム性動脈硬化症、播種性血管内凝固、川崎病、グレーヴス病、ネフローゼ症候群、慢性疲労症候群、ウェジナー肉芽腫症、ヘノッホ−シェーンライン紫斑病、腎臓の顕微鏡的血管炎、慢性活動型肝炎、ブドウ膜炎、敗血症性ショック、毒素性ショック症候群、敗血症症候群、悪液質、感染性疾患、寄生虫疾患、後天性免疫不全症候群、急性横断性脊髄炎、ハンチントン舞踏病、パーキンソン病、アルツハイマー病、卒中、原発性胆汁性肝硬変、溶血性貧血、悪性腫瘍、心不全、心筋梗塞、アジソン病、散在性、Ｉ型多腺性自己免疫症及びＩＩ型多腺性自己免疫症、シュミット症候群、成人（急性）呼吸窮迫症候群、脱毛症、円形脱毛症、血清反応陰性関節症、関節症、ライター病、乾癬性関節症、潰瘍性腸炎性関節症、腸炎性滑膜炎、クラミジア、エルシニア及びサルモネラ関連関節症、脊椎関節症、アテローム性疾患／動脈硬化症、アトピー性アレルギー、自己免疫性水疱性疾患、尋常性天疱瘡、落葉状天疱瘡、類天疱瘡、線状ＩｇＡ病、自己免疫性溶血性貧血、クームズ試験陽性溶血性貧血、後天性悪性貧血、若年性悪性貧血、筋痛性脳炎／ローヤルフリー病、慢性皮膚粘膜カンジダ症、巨細胞動脈炎、原発性硬化性肝炎、特発性自己免疫性肝炎、後天性免疫不全症症候群、後天性免疫不全症関連疾患、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、分類不能型免疫不全症（分類不能型低ガンマグロブリン血症）、拡張型心筋症、女性不妊症、卵巣機能不全、早発性卵巣機能不全、線維性肺疾患、特発性線維性肺胞炎、炎症後間質性肺疾患、間質性肺炎、結合組織病関連間質性肺疾患、混合結合組織病関連肺疾患、全身性硬化症関連間質性肺疾患、関節リウマチ関連間質性肺疾患、全身性エリテマトーデス関連肺疾患、皮膚筋炎／多発性筋炎関連肺疾患、シェーグレン病関連肺疾患、強直性脊椎炎関連肺疾患、血管炎性びまん性肺疾患、ヘモジデリン沈着症関連肺疾患、薬物誘発性間質性肺疾患、線維症、放射線線維症、閉塞性細気管支炎、慢性好酸球性肺炎、リンパ球性浸潤性肺疾患、感染後間質性肺疾患、痛風性関節炎、自己免疫性肝炎、１型自己免疫性肝炎（古典的自己免疫性またはルポイド肝炎）、２型自己免疫性肝炎（抗ＬＫＭ抗体肝炎）、自己免疫媒介低血糖症、黒色表皮腫を伴うＢ型インスリン抵抗性、副甲状腺機能低下症、臓器移植に関連する急性免疫疾患、臓器移植に関連する慢性免疫疾患、変形性関節症、原発性硬化性胆管炎、１型乾癬、２型乾癬、特発性白血球減少症、自己免疫性好中球減少症、腎疾患ＮＯＳ、糸球体腎炎、腎臓の顕微鏡的血管炎、ライム病、円板状エリテマトーデス、特発性またはＮＯＳ男性不妊症、精子自己免疫、多発性硬化症（すべてのサブタイプ）、交感性眼炎、結合組織病に続発する肺性高血圧、グッドパスチャー症候群、結節性多発性動脈炎の肺症状、急性リウマチ熱、リウマチ様脊椎炎、スチル病、全身性硬化症、シェーグレン症候群、高安病／動脈炎、自己免疫性血小板減少症、特発性血小板減少症、自己免疫性甲状腺疾患、甲状腺機能亢進症、甲状腺腫様自己免疫性甲状腺機能低下症（橋本病）、萎縮性自己免疫性甲状腺機能低下症、原発性粘液水腫、水晶体原性ブドウ膜炎、原発性血管炎、白斑性急性肝疾患、慢性肝疾患、アルコール性肝硬変、アルコール誘発性肝損傷、胆汁鬱滞、特異体質性肝疾患、薬物誘発性肝炎、非アルコール性脂肪肝、アレルギー及び喘息、Ｂ群連鎖球菌（ＧＢＳ）感染、精神障害（例えば、うつ病及び統合失調症）、Ｔｈ２型及びＴｈ１型媒介疾患、急性及び慢性疼痛（いろいろな形の疼痛）、並びに癌（例えば、肺癌、乳癌、胃癌、膀胱癌、大腸癌、膵臓癌、卵巣癌、前立腺癌及び腎臓癌）及び造血性悪性腫瘍（白血病及びリンパ腫）、無βリポタンパク血友症、先端チアノーゼ、急性及び慢性寄生虫または感染性プロセス、急性白血病、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性または慢性細菌感染、急性膵炎、急性腎不全、腺癌、航空機異所性拍動、エイズ認知症複合、アルコール誘発性肝炎、アレルギー性結膜炎、アレルギー性接触皮膚炎、アレルギー性鼻炎、同種移植片拒絶反応、α−１−アンチトリプシン欠損症、筋萎縮側索硬化症、貧血、狭心症、前角細胞変性、抗ｃｄ３治療、抗リン脂質症候群、抗受容体過敏反応、大動脈瘤及び末梢動脈瘤、大動脈解離、動脈性高血圧、動脈硬化症、動静脈フィステル、運動失調症、心房細動（持続性または発作性）、心房粗動、房室ブロック、Ｂ細胞リンパ腫、移植骨片拒絶反応、骨髄移植（ＢＭＴ）拒絶反応、脚ブロック、バーキットリンパ腫、火傷、心臓不整脈、心臓失神症候群、心臓腫瘍、心筋症、心肺バイパス炎症応答、軟骨移植拒絶反応、小脳皮質変性、小脳障害、無秩序または多源性心房頻拍、化学療法関連障害、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性アルコール中毒、慢性炎症性病理、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、慢性サリチル酸中毒、大腸癌、鬱血性心不全、結膜炎、接触皮膚炎、肺性心、冠動脈疾患、クロイツフェルト−ヤコブ病、培養陰性敗血症、膿疱性線維症、サイトカイン治療関連障害、拳闘家認知症、脱髄疾患、デング出血熱、皮膚炎、皮膚症状、糖尿病、真性糖尿病、糖尿病性アテローム性疾患、びまん性レヴイ小体病、拡張性鬱血性心筋症、脳幹神経節の障害、中年のダウン症候群、ＣＮＳドーパミン受容体をブロックする薬物による薬物誘発性運動障害、薬物過敏、湿疹、脳脊髄炎、心内膜炎、内分泌病、喉頭蓋炎、エプスタイン−バーウイルス感染、先端紅痛症、錐体外路性脳障害、家族性血球貪食リンパ組織球症、胎児性胸腺移植拒絶反応、フリードライヒ運動失調症、機能性末梢動脈障害、真菌性敗血症、ガス壊疽、胃潰瘍、糸球体腎炎、臓器または組織の移植片拒絶反応、グラム陰性敗血症、グラム陽性敗血症、細胞内生物による肉芽腫、毛様細胞白血病、ハラーホルデン−スパッツ病、橋本甲状腺炎、枯草熱、心臓移植拒絶反応、血色素症、血液透析、溶血性尿毒症症候群／血栓溶解性血小板��少性紫斑病、出血、肝炎（Ａ）、ヒス束不整脈、ＨＩＶ感染／ＨＩＶ神経障害、ホジキン病、運動過多性運動障害、過敏反応、過敏性肺炎、高血圧、運動減少性運動障害、視床下部−下垂体−副腎軸評価、特発性アジソン病、特発性肺線維症、抗体媒介細胞毒性、無力症、乳児脊髄性筋萎縮症、大動脈の炎症、インフルエンザＡ、電離放射線暴露、虹彩毛様体炎／ブドウ膜炎／視神経炎、虚血−再潅流障害、虚血性発作、若年性関節リウマチ、若年性脊髄性筋萎縮症、カポジ肉腫、腎移植拒絶反応、レジオネラ、リーシュマニア症、ライ病、皮質脊髄系の病巣、脂肪浮腫、肝移植拒絶反応、リンパ水腫、マラリア、悪性リンパ腫、悪性組織球症、悪性メラノーマ、髄膜炎、骨髄炎菌血症、代謝性／特発性、片頭痛、ミトコンドリア多系統障害、混合結合組織病、単クローン性免疫グロブリン血症、多発性骨髄腫、多系統変性（メンセル・ドゥジュリーヌ−トーマス・シードレーガー及びマシャド−ジョセフ）、重症筋無力症、マイコバクテリウム・アビウム・イントラセルラーレ、結核菌、骨髄異形成症候群、心筋梗塞、心筋虚血障害、鼻咽頭癌、新生児慢性肺疾患、腎炎、ネフローゼ、神経変性疾患、神経原性Ｉ筋萎縮症、好中球減少性発熱、非ホジキンリンパ腫、腹部動脈及びその枝の閉塞、閉塞性動脈障害、ｏｋｔ３治療、睾丸炎／副睾丸炎、睾丸炎／精管復元術、臓器巨大症、骨粗しょう症、膵臓移植拒絶反応、膵臓癌、腫瘍随伴症候群／悪性腫瘍の高カルシウム血症、上皮小体移植拒絶反応、骨盤内炎症性疾患、多年性鼻炎、心膜疾患、末梢アテローム性疾患、末梢血管疾患、腹膜炎、悪性貧血、ニューモシスティス・カリニ肺炎、肺炎、ＰＯＥＭＳ症候群（多発性神経障害、臓器巨大症、内分泌症、単クローン性免疫グロブリン血症、及び皮膚症状症候群）、輸血後症候群、ポストポンプ症候群、ＭＩ後心臓切開術症候群、子癇前症、進行性核上麻痺、原発性肺性高血圧、放射線治療、レイノー現象及び病、レイノー病、レフサム病、狭いＱＲＳの規則正しい頻脈、腎血管性高血圧、再潅流障害、拘束型心筋症、肉腫、強皮症、老人性舞踏病、レヴイ小体型老人性認知症、血清反応陰性関節症、ショック、鎌状赤血球貧血、皮膚同種片拒絶反応、皮膚症状症候群、小腸移植拒絶反応、充実性腫瘍、特異的不整脈、脊髄性運動失調症、脊髄小脳変性、連鎖球菌性筋炎、小脳の構造的病巣、亜急性硬化性汎脳炎、失神、心血管系の梅毒、全身性アナフィラクシー、全身性炎症応答症候群、全身性若年性関節リウマチ、Ｔ細胞またはＦＡＢ  ＡＬＬ、毛細管拡張症、閉塞性血栓血管炎、血小板減少症、毒性、移植片、外傷／出血、ＩＩＩ型過敏症、ＩＶ型過敏症、不安定狭心症、尿毒症、尿路敗血症、じんま疹、心臓弁膜症、静脈瘤、血管炎、静脈病、静脈血栓症、心室細動、ウイルス性及び真菌性感染、ウイルス性脳炎／無菌性髄膜炎、ウイルス関連血球貪食症候群、ウェルニッケ−コルサコフ症候群、ウィルソン病、臓器または組織の異種片移植拒絶反応が含まれるが、これらに限定されない（Ｐｅｒｉｔｔら，ＰＣＴ公開ＷＯ  ２００２０９７０４８Ａ２；Ｌｅｏｎａｒｄら，ＰＣＴ公開ＷＯ  ９５２４９１８  Ａ及びＳａｌｆｅｌｄら，ＰＣＴ公開ＷＯ  ００／５６７７２Ａ１を参照されたい）。
【０４８３】
本発明の結合タンパク質は自己免疫疾患、特に関節リウマチ、脊椎炎、アレルギー、自己免疫性糖尿病、自己免疫性ブドウ膜炎を含めた炎症を伴う自己免疫疾患を患っているヒトを治療するために使用され得る。実施形態では、本発明の結合タンパク質またはその抗原結合部分は関節リウマチ、クローン病、多発性硬化症、インスリン依存性糖尿病及び乾癬を治療するために使用される。
【０４８４】
実施形態では、本発明の組成物及び方法で治療または診断され得る疾患には、乳房、結腸、直腸、肺、中咽頭、下咽頭、食道、胃、膵臓、肝臓、胆嚢及び胆管、小腸、尿路（腎臓、膀胱及び尿路上皮を含む）、女性性器管（頸管、子宮及び卵巣、並びに絨毛癌及び妊娠性絨毛性疾患を含む）、男性性器管（前立腺、精嚢、精巣及び胚細胞腫瘍を含む）、内分泌腺（甲状腺、副腎及び下垂体を含む）及び皮膚の癌を含めた原発性及び転移性癌；並びに血管腫、メラノーマ、肉腫（骨及び軟組織から生ずる肉腫、並びにカポジ肉腫を含む）、脳、神経、眼及び髄膜の腫瘍（アストロチトーム、グリオーム、膠芽腫、網膜芽腫、神経腫、神経芽腫、神経線維腫及び髄膜腫を含む）、白血病のような造血性悪性疾患から生ずる充実性腫瘍、及びリンパ腫（ホジキン及び非ホジキンリンパ腫を含む）が含まれるが、これらに限定されない。
【０４８５】
実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合部分は、単独で、または放射線療法剤及び／または他の化学療法剤と組合せて使用するときに本明細書中に記載されている癌を治療するために、または本明細書中に記載されている腫瘍からの転移を予防するために使用される。
【０４８６】
本発明の抗体またはその抗原結合部分は物質と組み合わされ得、前記物質には抗新生物薬、放射線療法剤、化学療法剤、例えばＤＮＡアルキル化剤、シスプラチン、カルボプラチン、抗チューブリン剤、パクリタクセル、ドセタキセル、タキソール、ドキソルビシン、ゲムシタビン、ジェムザール、アントラサイクリン、アドリアマイシン、トポイソメラーゼＩ阻害剤、トポイソメラーゼＩＩ阻害剤、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、ロイコボリン、イリノテカン、受容体チロシンキナーゼ阻害剤（例えば、エルロチニブ、ゲフィチニブ）、ＣＯＸ−２インヒビター（例えば、エレコキシブ）、キナーゼ阻害剤及びｓｉＲＮＡが含まれるが、これらに限定されない。
【０４８７】
本発明の結合タンパク質は、各種疾患の治療において有用な１つ以上の追加治療薬と一緒に投与され得る。
【０４８８】
本発明の結合タンパク質は前記疾患を治療するために単独でまたは組合せて使用され得る。結合タンパク質は単独で、または治療薬のような追加物質と一緒に使用され得、追加物質は意図する目的のために当業者により選択されると理解されるべきである。例えば、追加物質は、本発明の抗体により治療される疾患または状態を治療するために有用であると当業界で認識されている治療薬であり得る。追加物質は、治療用組成物に対して有利な属性を付与する物質、例えば組成物の粘度に影響を与える物質であり得る。
【０４８９】
更に、本発明に包含される組合せは意図する目的のために有用な組合せであると理解されるべきである。下記する物質は例示であり、限定すると意図されない。本発明の一部である組合せは本発明の抗体及び以下のリストから選択される少なくとも１つの追加物質であり得る。形成された組成物がその意図する機能を遂行するように組み合わされるならば、組合せには１つ以上の追加物質、例えば２つまたは３つの追加物質をも含み得る。
【０４９０】
自己免疫及び炎症疾患を治療するための組合せは、イブプロフェンのような薬物を含めたＮＳＡＩＤＳとも称される非ステロイド系抗炎症剤である。他の組合せは、プレドニゾロンを含めたコルチコステロイドである。ステロイド使用の公知の副作用は、本発明のＤＶＤ  Ｉｇと組み合わせて患者を治療するとき必要とされるステロイド用量を徐々に減らすことにより減少または解消すらし得る。本発明の抗体または抗体部分と組み合わされ得る関節リウマチのための治療薬の非限定例には、サイトカイン抑制性抗炎症薬（ＣＳＡＩＤ）、他のヒトサイトカインまたは増殖因子（例えば、ＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１８、ＩＬ−２１、ＩＬ−２３、インターフェロン、ＥＭＡＰ−ＩＩ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦ及びＰＤＧＦ）に対する抗体またはこれらのアンタゴニストが含まれる。本発明の結合タンパク質またはその抗原結合部分は、細胞表面分子（例えば、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ８０（Ｂ７．１）、ＣＤ８６（Ｂ７．２）、ＣＤ９０、ＣＴＬＡ）、またはＣＤ１５４（ｇｐ３９またはＣＤ４０Ｌ）を含めたそのリガンドに対する抗体と組み合わされ得る。
【０４９１】
治療薬の組合せは、自己免疫及びその後の炎症カスケードのいろいろな時点で干渉し得る。その例には、ＴＮＦアンタゴニスト、例えばキメラ、ヒト化またはヒトＴＮＦ抗体、ＡＤＡＬＩＭＵＭＡＢ（ＰＣＴ公開ＷＯ  ９７／２９１３１）、ＣＡ２（Ｒｅｍｉｃａｄｅ（商標））、ＣＤＰ５７１、及び可溶性ｐ５５またはｐ７５  ＴＮＦ受容体、その誘導体（ｐ７５ＴＮＦＲｌｇＧ（Ｅｎｂｒｅｌ（商標））またはｐ５５ＴＮＦＲｌｇＧ（Ｌｅｎｅｒｃｅｐｔ）、及びＴＮＦα変換酵素（ＴＡＣＥ）阻害剤が含まれる。また、ＩＬ−１インヒビター（インターロイキン−１変換酵素阻害剤、ＩＬ−１ＲＡ等）が同じ理由で有効であり得る。他の組合せには、インターロイキン１１が含まれる。さらに別の組合せには、ＩＬ−１２機能と平行して、ＩＬ−１２機能に依存して、またはＩＬ−１２機能とて協力して作用し得る自己免疫応答の主要プレーヤーが含まれる。特に、ＩＬ−１８抗体または可溶性ＩＬ−１８受容体、またはＩＬ−１８結合タンパク質を含めたＩＬ−１８アンタゴニストである。ＩＬ−１２及びＩＬ−１８は重複しているが別個の機能を有し、これらに対するアンタゴニストの組合せはより有効であり得る。さらに別の組合せは非消耗性抗ＣＤ４インヒビターである。さらに他の組合せには、抗体、可溶性受容体または拮抗性リガンドを含めた共刺激経路ＣＤ８０（Ｂ７．１）またはＣＤ８６（Ｂ７．２）のアンタゴニストが含まれる。
【０４９２】
本発明の結合タンパク質は、メトトレキサート、６−ＭＰ、アザチオプリンスルファサラジン、メサラジン、オルサラジン、クロロキニン／ヒドロキシクロロキン、ペニシラミン、オーロチオマレート（筋肉内及び経口）、アザチオプリン、コルヒチン、コルチコステロイド（経口、吸入及び局所注射）、β−２アデレナリン作動性受容体アゴニスト（サルブタモール、テルフタリン、サルメテロール）、キサンチン（テオフィリン、アミノフィリン）、クロモグリケート、ネドクロミル、ケトチフェン、イプラトピウム及びオキシトロピウム、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノール酸モフェチル、レフルノミド、ＮＳＡＩＤ（例えば、イブプロフェン）、コルチコステロイド（例えば、プレドニゾロン）、ホスホジエステラーゼ阻害剤、アデノシンアゴニスト、抗血栓剤、補体インヒビター、アドレナリン作動薬、炎症促進性サイトカイン（例えば、ＴＮＦ−αまたはＩＬ−１）によるシグナリングを干渉する物質（例えば、ＩＲＡＫ、ＮＩＫ、ＩＫＫ、ｐ３８またはＭＡＰキナーゼ阻害剤）、ＩＬ−１β変換酵素阻害剤、ＴＮＦα変換酵素（ＴＡＣＥ）阻害剤、Ｔ細胞シグナリングインヒビター（例えば、キナーゼ阻害剤）、メタロプロテアーゼ阻害剤、スルファサラジン、アザチオプリン、６−メルカプトプリン、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、可溶性サイトカイン受容体及びその誘導体（例えば、可溶性ｐ５５またはｐ７５  ＴＮＦ受容体及び誘導体ｐ７５ＴＮＦＲＩｇＧ（Ｅｎｂｒｅｌ（商標）及びｐ５５ＴＮＦＲＩｇＧ（レネルセプト））、ｓＩＬ−１ＲＩ、ｓＩＬ−１ＲＩＩ、ｓＩＬ−６Ｒ）、抗炎症サイトカイン（例えば、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１３及びＴＧＦ）、セレコキシブ、葉酸、硫酸ヒドロキシクロロキン、ロフェコキシブ、エタネルセプト、インフリキシマブ、ナプロキセン、バルデコキシブ、スルファサラジン、メチルプレドニゾロン、メロキシカム、酢酸メチルプレドニゾロ、金チオリンゴ酸ナトリウム、アスピリン、トリアムシノロンアセトニド、ナプシル酸プロポキシフェン／アセトアミノフェン、フォレート、ナブメトン、ジクロフェナク、ピロキシカム、エトドラク、ジクロフェナクナトリウム、オキサプロジン、オキシコドン塩酸塩、酒石酸ヒドロコドン／アセトアミノフェン、ジクロフェナクナトリウム／ミソプロストール、フェンタニル、アナキンラ、ヒト組換え体、トラマドール塩酸塩、サルサラート、スリンダク、シアノコバラミン／ｆａ／ピリドキシン、アセトアミノフェン、アレンドロン酸ナトリウム、プレドニゾロン、硫酸モルヒネ、塩酸リドカイン、インドメタシン、硫酸グルコサミン／コンドロイチン、アミトリプチリン塩酸塩、スルファジアジン、オキシコドン塩酸塩／アセトアミノフェン、オロパタジン塩酸塩、ミソプロストール、ナプロキセンナトリウム、オメプラゾール、シクロホスファミド、リツキシマブ、ＩＬ−１  ＴＲＡＰ、ＭＲＡ、ＣＴＬＡ４−ＩＧ、ＩＬ−１８  ＢＰ、抗ＩＬ−１８、抗ＩＬ−１５、ＢＩＲＢ−７９６、ＳＣＩＯ−４６９、ＶＸ−７０２、ＡＭＧ−５４８、ＶＸ−７４０、ロフルミラスト、ＩＣ−４８５、ＣＤＣ−８０１及びメソプラムのような物質とも組み合わされ得る。組合せには���メトトレキサートまたはレフルノミド、中症及び重症関節リウマチの症例ではシクロスポリンが含まれる。
【０４９３】
関節リウマチを治療するために結合タンパク質と一緒に使用され得る非限定的追加物質には、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、サイトカイン抑制性抗炎症薬（ＣＳＡＩＤ）、ＣＤＰ−５７１／ＢＡＹ−１０−３３５６（ヒト化抗ＴＮＦα抗体；Ｃｅｌｌｔｅｃｈ／Ｂａｙｅｒ）、ｃＡ２／インフリキシマブ（キメラ抗ＴＮＦα抗体；Ｃｅｎｔｏｃｏｒ）、７５ｋｄ  ＴＮＦＲ−ＩｇＧ／エタネルセプト（７５ｋＤ  ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合タンパク質，Ｉｍｍｕｎｅｘ，例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９４），Ｖｏｌ．３７，Ｓ２９５；Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｍｅｄ．（１９９６），Ｖｏｌ．４４，２３５Ａを参照されたい）、５５ｋｄ  ＴＮＦ−ＩｇＧ（５５ｋＤ  ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合タンパク質；Ｈｏｆｆｍａｎｎ−ＬａＲｏｃｈｅ）、ＩＤＥＣ−ＣＥ９．１／ＳＢ  ２１０３９６（非消耗霊長類化抗ＣＤ４抗体；ＩＤＥＣ／ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ；例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９５），Ｖｏｌ．３８，Ｓ１８５を参照されたい）、ＤＡＢ  ４８６−ＩＬ−２及び／またはＤＡＢ  ３８９−ＩＬ−２（ＩＬ−２融合タンパク質；Ｓｅｒａｇｅｎ；例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９３），Ｖｏｌ．３６，１２２３）、抗Ｔａｃ（ヒト化抗ＩＬ−２Ｒα；Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｅｓｉｇｎ  Ｌａｂｓ／Ｒｏｃｈｅを参照されたい）、ＩＬ−４（抗炎症サイトカイン；ＤＮＡＸ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ）、ＩＬ−１０（ＳＣＨ  ５２０００；組換えＩＬ−１０，抗炎症サイトカイン；ＤＮＡＸ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ）、ＩＬ−４、ＩＬ−１０及び／またはＩＬ−４アゴニスト（例えば、アゴニスト抗体）、ＩＬ−１ＲＡ（ＩＬ−１受容体アンタゴニスト；Ｓｙｎｅｒｇｅｎ／Ａｍｇｅｎ）、アナキンラ（Ｋｉｎｅｒｅｔ（登録商標）／Ａｍｇｅｎ）、ＴＮＦ−ｂｐ／ｓ−ＴＮＦ（可溶性ＴＮＦ結合タンパク質；例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ），Ｓ２８４；Ａｍｅｒ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．−Ｈｅａｒｔ  ａｎｄ  Ｃｉｒｃｕｌａｔｏｒｙ  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ（１９９５）Ｖｏｌ．２６８，ｐ．３７−４２を参照されたい）、Ｒ９７３４０１（ホスホジエステラーゼタイプＩＶ阻害剤；例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ），Ｓ２８２を参照されたい）、ＭＫ−９６６（ＣＯＸ−２インヒビター；例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ），Ｓ８１を参照されたい）、イロプロスト（例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ），Ｓ８２を参照されたい）、メトトレキサート、サリドマイド（例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ），Ｓ２８２を参照されたい）及びサリドマイド関連薬物（例えば、セルガン）、レフルノミド（抗炎症及びサイトカインインヒビター；例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９���）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ），Ｓ１３１；Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（１９９６）Ｖｏｌ．４５，ｐ．１０３−１０７を参照されたい）、トラムキサム酸（プラスミノーゲン活性化のインヒビター；例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ），Ｓ２８４を参照されたい）、Ｔ−６１４（サイトカインインヒビター；例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ），Ｓ２８２を参照されたい）、プロスタグランジンＥ１（例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ），Ｓ２８２を参照されたい）、テニダップ（非ステロイド系抗炎症薬；例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ），Ｓ２８０を参照されたい）、ナプロキセン（非ステロイド系抗炎症薬；例えば、Ｎｅｕｒｏ．Ｒｅｐｏｒｔ（１９９６）Ｖｏｌ．７，ｐ．１２０９−１２１３を参照されたい）、メロキシカム（非ステロイド系抗炎症薬）、イブプロフェン（非ステロイド系抗炎症薬）、ピロキシカム（非ステロイド系抗炎症薬）、ジクロフェナク（非ステロイド系抗炎症薬）、インドメタシン（非ステロイド系抗炎症薬）、スルファサラジン（例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ），Ｓ２８１を参照されたい）、アザチオプリン（例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ），Ｓ２８１を参照されたい）、ＩＣＥインヒビター（酵素インターロイキン−１β変換酵素の阻害剤）、ｚａｐ−７０及び／またはｌｃｋインヒビター（チロシンキナーゼｚａｐ−７０またはｌｃｋのインヒビター）、ＶＥＧＦインヒビター及び／またはＶＥＧＦ−Ｒインヒビター（血管内皮細胞増殖因子または血管内皮細胞増殖因子受容体のインヒビター；血管形成のインヒビター）、コルチコステロイド抗炎症薬（例えば、ＳＢ２０３５８０）、ＴＮＦ変換酵素阻害剤、抗ＩＬ−１２抗体、抗ＩＬ−１８抗体、インターロイキン−１１（例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ）、Ｓ２９６を参照されたい）、インターロイキン−１３（例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ），Ｓ３０８を参照されたい）、インターロイキン−１７インヒビター（例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ），Ｓ１２０を参照されたい）、金、ペニシラミン、クロロキン、クロラムブシル、ヒドロキシクロロキン、シクロスポリン、シクロホスファミド、全身リンパ節照射法、抗胸腺細胞グロブリン、抗ＣＤ４抗体、ＣＤ５トキシン、経口投与されるペプチド及びコラーゲン、ロベンザリット二ナトリウム、サイトカイン調節剤（ＣＲＡ）ＨＰ２２８及びＨＰ４６６（Ｈｏｕｇｈｔｅｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．）、ＩＣＡＭ−１アンチセンスホスホロチオエートオリゴ−デオキシヌクレオチド（ＩＳＩＳ  ２３０２；Ｉｓｉｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．）、可溶性補体受容体１（ＴＰ１０；Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．）、プレドニゾン、オルゴテイン、グリコサミノグリカンポリスルフェート、ミノサイクリン、抗ＩＬ２Ｒ抗体、海産及び植物脂質（魚類及び植物種子脂肪酸；例えば、ＤｅＬｕｃａら，（１９９５）Ｒｈｅｕｍ．Ｄｉｓ．Ｃｌｉｎ．Ｎｏｒｔｈ  Ａｍ．，２１：７５９−７７７を参照されたい）、オーラノフィン、フェニルブタゾン、メクロフェナム酸、フルフェナム酸、静注用免疫グロブリン、ザイリューロン、アザリビン、マイコフェノール酸（ＲＳ−６１４４３）、タクロリムス（ＦＫ−５０６）、シロリムス（ラパマイシン）、アミプリロース（テラフェクチン）、クラドリビン（２−クロロデオキシアデノシン）、メトトレキサート；ｂｃｌ−２インヒビター（Ｂｒｕｎｃｋｏ，Ｍｉｌａｎら，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（２００７），５０（４），６４１−６６２を参照されたい）、抗ウイルス剤及び免疫調節剤が含まれるが、これらに限定されない。
【０４９４】
１つの実施形態では、結合タンパク質またはその抗原結合部分は以下の関節リウマチ治療薬の１つと一緒に投与される：ＫＤＲの低分子インヒビター、Ｔｉｅ−２の低分子インヒビター、メトトレキサート、プレドニゾン、セレコキシブ、葉酸、硫酸ヒドロキシクロロキン、ロフェコキシブ、エタネルセプト、インフリキシマブ、レフルノミド、ナプロキセン、バルデコキシブ、スルファサラジン、メチルプレドニゾロン、イブプロフェン、メロキシカフム、酢酸メチルプレドニゾロン、金チオリンゴ酸ナトリウム、アスピリン、アザチオプリン、トリアムシノロンアセトニド、プロポキシフェンナプシレート／アセトアミノフェン、フォレート、ナブメトン、ジクロフェナク、ピロキシカム、エトドラク、ジクロフェナクナトリウム、オキサプロジン、オキシコドン塩酸塩、酒石酸ヒドロコドン／アセトアミノフェン、ジクロフェナクナトリウム／ミソプロストール、フェンタニル、アナキンラ、ヒト組換え体、トラマドール塩酸塩、サルサラート、スリンダク、シアノコバラミン／ｆａ／ピリドキシン、アセトアミノフェン、アレンドロン酸ナトリウム、プレドニゾロン、硫酸モルヒネ、塩酸リドカイン、インドメタシン、硫酸グロコサミン／コンドロイチン、シクロスポリン、アミトリプチリン塩酸塩、スルファジアジン、オキシコドン塩酸塩／アセトアミノフェン、オロパタジン塩酸塩、ミソプロストール、ナプロキセンナトリウム、オメプラゾール、ミコフェノール酸モフェチル、シクロホスファミド、リツキシマブ、ＩＬ−１  ＴＲＡＰ、ＭＲＡ；ＣＴＬＡ４−ＩＧ、ＩＬ−１８  ＢＰ、ＩＬ−１２／２３、抗ＩＬ−１８、抗ＩＬ−１５、ＢＩＲＢ−７９６、ＳＣＩＯ−４６９、ＶＸ−７０２、ＡＭＧ−５４８、ＶＸ−７４０、ロフルミラスト、ＩＣ−４８５、ＣＤＣ−８０１及びメソプラム。
【０４９５】
本発明の結合タンパク質と組み合わされ得る炎症性腸疾患のための治療薬の非限定例には、ブデソニド、上皮増殖因子、コルチコステロイド、シクロスポリン、スルファサラジン、アミノサリチレート、６−メルカプトプリン、アザチオプリン、メトロニダゾール、リポキシゲナーゼ阻害剤、メサラミン、オルサラジン、バルサラジド、抗酸化剤、トロンボキサンインヒビター、ＩＬ−１受容体アンタゴニスト、抗ＩＬ−１β  ｍＡｂ、抗ＩＬ−６  ｍＡｂ、増殖因子、エラスターゼ阻害剤、ピリジニル−イミダゾール化合物、他のヒトサイトカインまたは増殖因子（例えば、ＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＥＭＡＰ−ＩＩ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦ及びＰＤＧＦ）に対する抗体またはこれらのアンタゴニストが含まれる。本発明の抗体またはその抗原結合部分は、細胞表面分子（例えば、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ９０）またはそのリガンドに対する抗体と組み合わされ得る。本発明の抗体またはその抗原結合部分は、メトトレキサート、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノール酸モフェチル、レフルノミド、ＮＳＡＩＤ（例えば、イブプロフェン）、コルチコステロイド（例えば、プレドニゾロン）、ホスホジエステラーゼ阻害剤、アデノシンアゴニスト、抗血栓剤、補体インヒビター、アドレナリン作動薬、ＴＮＦαまたはＩＬ−１のような炎症促進性サイトカインによるシグナリングを干渉する物質（例えば、ＩＲＡＫ、ＮＩＫ、ＩＫＫ、ｐ３８またはＭＡＰキナーゼイ阻害剤）、ＩＬ−１β変換酵素阻害剤、ＴＮＦα変換酵素阻害剤、Ｔ細胞シグナリングインヒビター（例えば、キナーゼ阻害剤）、メタロプロテアーゼ阻害剤、スルファサラジン、アザチオプリン、６−メルカプトプリン、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、可溶性サイトカイン受容体及びその誘導体（例えば、可溶性ｐ５５またはｐ７５  ＴＮＦ受容体、ｓＩＬ−１ＲＩ、ｓＩＬ−１ＲＩＩ、ｓＩＬ−６Ｒ）、抗炎症サイトカイン（例えば、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１３及びＴＧＦβ）及びｂｃｌ−２インヒビターのような物質と組み合わされ得る。
【０４９６】
本発明の結合タンパク質と組み合わされ得るクローン病のための治療薬の例には、ＴＮＦアンタゴニスト、例えば抗ＴＮＦ抗体ＡＤＡＬＩＭＵＭＡＢ（ＰＣＴ公開ＷＯ  ９７／２９１３１；ＨＵＭＩＲＡ）、ＣＡ２（ＲＥＭＩＣＡＤＥ）、ＣＤＰ  ５７１、ＴＮＦＲ−Ｉｇ構築物（ｐ７５ＴＮＦＲＩｇＧ（ＥＮＢＲＥＬ）及びｐ５５ＴＮＦＲＩｇＧ（ＬＥＮＥＲＣＥＰＴ））インヒビター及びＰＤＥ４インヒビターが含まれる。本発明の抗体またはその抗原結合部分はコルチコステロイド（例えば、ブデノシド及びデキサメタゾン）と組み合わされ得る。本発明の結合タンパク質またはその抗原結合部分は、スルファサラジン、５−アミノサリチル酸及びオルサラジン、並びに炎症促進性サイトカイン（例えば、ＩＬ−１）の合成または作用を干渉する物質（例えばＩＬ−１β変換酵素阻害剤及びＩＬ−１ｒａ）のような物質と組み合わされ得る。本発明の抗体またはその抗原結合部分は、Ｔ細胞シグナリングインヒビター（例えば、チロシンキナーゼ阻害剤６−メルカプトウリン）と共に使用され得る。本発明の結合タンパク質またはその抗原結合部分はＩＬ−１１と組み合わされ得る。本発明の結合タンパク質またはその抗原結合部分は、メサラミン、プレドニゾン、アザチオプリン、メルカプトプリン、インフリキシマブ、コハク酸メチルプレドニゾロンナトリウム、ジフェノキシレート／硫酸アトロピン、塩酸ロペラミド、メトトレキサート、オメプラゾール、フォレート、シプロフロキサシン／デキストロース−水、酒石酸ヒドロコドン／アセトアミノフェン、塩酸テトラサイクリン、フルオシノニド、メトロニダゾール、チメロサール／ホウ酸、コレスチラミン／スクロース、塩酸シプロフロキサシン、硫酸ヒヨスチアミン、塩酸メペリジン、塩酸ミダゾラム、オキシコドン塩酸塩／アセトアミノフェン、塩酸プロメタジン、リン酸ナトリウム、スルファメトキサゾール／トリメトプリム、セレコキシブ、ポリカルボフィル、ナプシル酸プロポキシフェン、ヒドロコルチゾン、マルチビタミン、バルサラジドジナトリウム、リン酸コデイン／アセトアミノフェン、コレセルバム塩酸塩、シアノコバラミン、葉酸、レボフロキサシン、メチルプレドニゾロン、ナタリズマブ及びインターフェロン−γと組み合わされ得る。
【０４９７】
本発明の結合タンパク質と組み合わされ得る多発性硬化症のための治療薬の非限定例には、コルチコステロイド、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、アザチオプリン、シクロホスファミド、シクロスポリン、メトトレキサート、４−アミノピリジン、チザニジン、インターフェロンβ−１ａ（ＡＶＯＮＥＸ；Ｂｉｏｇｅｎ）、インターフェロンβ−１ｂ（ＢＥＴＡＳＥＲＯＮ；Ｃｈｉｒｏｎ／Ｂｅｒｌｅｘ）、インターフェロンα−ｎ３（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ／Ｆｕｊｉｍｏｔｏ）、インターフェロン−α（Ａｌｆａ  Ｗａｓｓｅｒｍａｎｎ／Ｊ＆Ｊ）、インターフェロンβ−１Α−１Ｆ（Ｓｅｒｏｎｏ／Ｉｎｈａｌｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ペグインターフェロンα−２ｂ（Ｅｎｚｏｎ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ−Ｐｌｏｕｇｈ）、コポリマー１（Ｃｏｐ−１；ＣＯＰＡＸＯＮＥ；Ｔｅｖａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．）、高圧酸素、静脈内免疫グロブリン、クラドリビン、他のヒトサイトカインまたは増殖因子及び受容体（例えば、ＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−２３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１８、ＥＭＡＰ−ＩＩ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦ及びＰＤＧＦ）に対する抗体またはこれらのアンタゴニストが含まれる。本発明の結合タンパク質は、細胞表面分子（例えば、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ９０）またはそのリガンドに対する抗体と組み合わされ得る。本発明の結合タンパク質は、メトトレキサート、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノール酸モフェチル、レフルノミド、ＮＳＡＩＤ（例えば、イブプロフェン）、コルチコステロイド（例えば、プレドニゾロン）、ホスホジエステラーゼ阻害剤、アデノシンアゴニスト、抗血栓剤、補体インヒビター、アドレナリン作動薬、炎症促進性サイトカイン（例えば、ＴＮＦαまたはＩＬ−１）によるシグナリングを干渉する物質（例えば、ＩＲＡＫ、ＮＩＫ、ＩＫＫ、ｐ３８またはＭＡＰキナーゼ阻害剤）、ＩＬ−１β変換酵素阻害剤、ＴＡＣＥインヒビター、Ｔ細胞シグナリングインヒビター（例えば、キナーゼ阻害剤）、メタロプロテアーゼ阻害剤、スルファサラジン、アザチオプリン、６−メルカプトプリン、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、可溶性サイトカイン受容体及びその誘導体（例えば、可溶性ｐ５５またはｐ７５  ＴＮＦ受容体、ｓＩＬ−１ＲＩ、ｓＩＬ−１ＲＩＩ、ｓＩＬ−６Ｒ）、抗炎症サイトカイン（例えば、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３及びＴＧＦ）及びｂｃｌ−２インヒビターのような物質とも組み合わされ得る。
【０４９８】
本発明の結合タンパク質と組み合わされ得る多発性硬化症のための治療薬の例には、インターフェロン−β（例えば、ＩＦＮβ１ａ及びＩＦＮβ１ｂ）、コパキソン、コルチコステロイド、カスパーゼ阻害剤（例えば、カスパーゼ−１の阻害剤）、ＩＬ−１インヒビター、ＴＮＦインヒビター、及びＣＤ４０リガンド及びＣＤ８０に対する抗体が含まれる。
【０４９９】
本発明の結合タンパク質は、アレムツズマブ、ドロナビノール、ユニメド、ダクリズマブ、ミトキサントロン、塩酸キサリプロデン、ファムプリジン、酢酸グラチラマー、ナタリズマブ、シンナビドール、ａ−イムノカインＮＮＳＯ３、ＡＢＲ−２１５０６２、ＡｎｅｒｇｉＸ．ＭＳ、ケモカイン受容体アンタゴニスト、ＢＢＲ−２７７８、カラグアリン、ＣＰＩ−１１８９、ＬＥＭ（リポソームカプセル化ミトキサントロン）、ＴＨＣ．ＣＢＤ（カンナビノイドアゴニスト）ＭＢＰ−８２９８、メソプラム（ＰＤＥ４インヒビター）、ＭＮＡ−７１５、抗ＩＬ−６受容体抗体、ニューロバクス、ピルフェニドン・アロトラップ１２５８（ＲＤＰ−１２５８）、ｓＴＮＦ−Ｒ１、タランパネル、テリフルノミド、ＴＧＦ−β２、チプリモチド、ＶＬＡ−４アンタゴニスト（例えば、ＴＲ−１４０３５、ＶＬＡ４  Ｕｌｔｒａｈａｌｅｒ、Ａｎｔｅｇｒａｎ−ＥＬＡＮ／Ｂｉｏｇｅｎ）、インターフェロンγアンタゴニスト、ＩＬ−４アゴニストのような物質と組み合わされ得る。
【０５００】
本発明の結合タンパク質と組み合わされ得る狭心症のための治療薬の非限定例には、アスピリン、ニトログリセリン、硝酸イソソルビド、コハク酸メトプロロール、アテノロール、酒石酸メトプロロール、ベシル酸アムロジピン、塩酸ジルチアゼム、硝酸イソソルビド、硫酸クロピドグレル、ニフェジピン、アトロバスタチンカルシウム、塩化カリウム、フロセミド、シンバスタチン、ベラパミル塩酸塩、ジゴキシン、塩酸プロプラノロール、カルベジロール、リシノプリル、スピロノラクトン、ヒドロクロロチアジド、マレイン酸エナラプリル、ナドロール、ラミプリル、エノキサパリンナトリウム、ヘパリンナトリウム、バルサルタン、塩酸ソタロール、フェノフィブレート、エゼチミベ、ブメタニド、ロサルタンカリウム、リシノプリル／ヒドロクロロチアジド、フェロジビン、カプトプリル、フマル酸ビソプロロールが含まれる。
【０５０１】
本発明の結合タンパク質と組み合わされ得る強直性脊椎炎のための治療薬の非限定例には、イブプロフェン、ジクロフェナク及びミソプロストール、ナプロキセン、メロキシカム、インドメタシン、ジクロフェナク、セレコキシブ、ロフェコキシブ、スルファサラジン、メトトレキサート、アザチオプリン、ミノサイクリン、プレドニゾン、エタネルセプト、インフリキシマブが含まれる。
【０５０２】
本発明の結合タンパク質と組み合わされ得る喘息のための治療薬の非限定例には、アルブテロール、サルメテロール／フルチカゾン、モンテルカストナトリウム、プロピオン酸フルチカゾン、ブデソニド、プレドニゾン、キシナホ酸サルメテロール、レバルブテロール塩酸塩、硫酸アルブテロール／イプラトピウム、リン酸プレドニゾロンナトリウム、トリアムシノロンアセトニド、プロピオン酸ベクロメタゾン、臭化イプラトロピウム、アジトロマイシン、酢酸ピルブテロール、プレドニゾロン、無水テオフィリン、コハク酸メチルプレドニゾロンナトリウム、クラリスロマイシン、ザフィルルカスト、フマル酸ホルモテロール、インフルエンザウイルスワクチン、メチルプレドニゾロン、アモキシシリン三水和物、フルニソリド、アレルギー注射、クロモリンナトリウム、塩酸フェキソフェナジン、フルニソリド／メントール、アモキシシリン／クラブラネート、レボフロキサシン、吸入器保持デバイス、グアイフェネシン、リン酸デキサメタゾンナトリウム、モキシフロキサシン塩酸塩、ドキシサイクリンハイクレート、グアイフェネシン／ｄ−メトルファン、ｐ−エフェドリン／コデイン／クロルフェニラミン、ガチフロキサシン、塩酸セチリジン、フランカルボン酸モメタゾン、キシナホ酸サルメテロール、ベンゾナタート、セファレキシン、ｐｅ／ヒドロコドン／クロルフェニラミン、セチリジン塩酸塩／シュードエフェドリン、フェニレフリン／コデイン／プロメタジン、コデイン／プロメタジン、セフプロジル、デキサメタゾン、グアイフェネシン／シュードエフェドリン、クロルフェニラミン／ヒドロコドン、ネドクロミルナトリウム、硫酸テルブタリン、エピネフリン、メチルプレドニゾロン、硫酸メタプロテレノールが含まれる。
【０５０３】
本発明の結合タンパク質と組み合わされ得るＣＯＰＤのための治療薬の非限定例には、硫酸アルブテロール／イプラトピウム、臭化イプラトロピウム、サルメテロール／フルチカゾン、アルブテロール、キシナホ酸サルメテロール、プロピオン酸フルチカゾン、プレドニゾン、無水テオフィリン、コハク酸メチルプレドニゾロンナトリウム、モンテルカストナトリウム、ブデソニド、フマル酸ホルモテロール、トリアムシノロンアセトニド、レボフロキサシン、グアイフェネシン、アジトロマイシン、プロピオン酸ベクロメタゾン、レバルブテロール塩酸塩、フルニソリド、セフトリアキソンナトリウム、アモキシシリン三水和物、ガチフロキサシン、ザフィルルカスト、アモキシシリン／クラブラネート、フルニソリド／メントール、クロルフェニラミン／ヒドロコドン、硫酸メタプロテレノール、メチルプレドニゾロン、フランカルボン酸モメタゾン、ｐ−エフェドリン／コデイン／クロルフェニラミン、酢酸ピルブテロール、ｐ−エフェドリン／ロラタジン、硫酸テルブタリン、臭化チオトロピウム、（Ｒ，Ｒ）−ホルモテロール、ＴｇＡＡＴ、シロミラスト、ロフルミラストが含まれる。
【０５０４】
本発明の結合タンパク質と組み合わされ得るＨＣＶのための治療薬の非限定例には、インターフェロン−α−２ａ、インターフェロン−α−２ｂ、インターフェロン−α  ｃｏｎｌ、インターフェロン−α−ｎｌ、ペグ化インターフェロン−α−２ａ、ペグ化インターフェロン−α−２ｂ、リバビリン、ペグインターフェロンα−２ｂ＋リバビリン、ウルソデオキシコール酸、グリチルリチン酸、チマルファシン、マクサミン、ＶＸ−４９７、及び以下の標的、すなわちＨＣＶポリメラーゼ、ＨＣＶプロテアーゼ、ＨＣＶヘリカーゼ、ＨＣＶ  ＩＲＥＳ（内部リボソーム導入部位）との介入を介してＨＣＶを治療するために使用される化合物が含まれる。
【０５０５】
本発明の結合タンパク質と組み合わされ得る特発性肺線維症のための治療薬の非限定例には、プレドニゾン、アザチオプリン、アルブテロール、コルヒチン、硫酸アルブテロール、ジゴキシン、γ−インターフェロン、コハク酸メチルプレドニゾロンナトリウム、ロラゼパム、フロセミド、リシノプリル、ニトログリセリン、スピロノラクトン、シクロホスファミド、臭化イプラトロピウム、アクチノマイシンＤ、アルテプラーゼ、プロピオン酸フルチカゾン、レボフロキサシン、硫酸メタプロテレノール、硫酸モルヒネ、オキシコドン塩酸塩、塩化カリウム、トリアムシノロンアセトニド、無水タクロリムス、カルシウム、インターフェロン−α、メトトレキサート、ミコフェノール酸モフェチル、インターフェロン−γ−１βが含まれる。
【０５０６】
本発明の結合タンパク質と組み合わされ得る心筋梗塞のための治療薬の非限定例には、アスピリン、ニトログリセリン、酒石酸メトプロロール、エノキサパリンナトリウム、ヘパリンナトリウム、硫酸クロピドグレル、カルベジロール、アテノロール、硫酸モルヒネ、コハク酸メトプロロール、ワルファリンナトリウム、リシノプリル、硝酸イソソルビド、ジゴキシン、フロセミド、シンバスタチン、ラミプリル、テネクテプラーゼ、マレイン酸エナラプリル、トルセミド、レタバーゼ、ロサルタンカリウム、キナプリル塩酸塩／炭酸マグネシウム、ブメタニド、アルテプラーゼ、エナラプリラート、塩酸アミオダロン、チロフィバン塩酸塩一水和物、塩酸ジルチアゼム、カプトプリル、イルベサルタン、バルサルタン、塩酸プロプラノロール、フォシノプリルナトリウム、塩酸リドカイン、エプチフィバチド、セファゾリンナトリウム、硫酸アトロピン、アミノカプロン酸、スピロノラクトン、インターフェロン、塩酸ソタロール、塩化カリウム、ドキュセートナトリウム、ドブタミン塩酸塩、アルプラゾラム、プラバスタチンナトリウム、アトルバスタチンカルシウム、塩酸ミダゾラム、塩酸メペリジン、硝酸イソソルビド、エピネフリン、塩酸ドーパミン、ビバリルジン、ロスバスタチン、エゼチミブ／シンバスタチン、アバシミベ、カリポリドが含まれる。
【０５０７】
本発明の結合タンパク質と組み合わされ得る乾癬のための治療薬の非限定例には、ＫＤＲの低分子インヒビター、Ｔｉｅ−２の低分子インヒビター、カルシポトリエン、プロピオン酸クロベタゾール、トリアムシノロンアセトニド、プロピオン酸ハロベタゾール、タザロテン、メトトレキサート、フルオシノニド、増量プロピオン酸ベタメタゾン、フルオシノロンアセトニド、アシトレチン、タールシャンプー、吉草酸ベタメタゾン、フランカルボン酸モメタゾン、ケトコナゾール、プラモキシン／フルオシノロン、吉草酸ヒドロコルチゾン、フルランドレノリド、尿素、ベタメタゾン、プロピオン酸クロベタゾール／皮膚軟化薬、プロピオン酸フルチカゾン、アジトロマイシン、ヒドロコルチゾン、モイスチャライジング処方物、葉酸、デソニド、ピメクロリムス、コールタール、酢酸ジフロラゾン、葉酸エタネルセプト、乳酸、メトキサレン、ｈｃ／次没食子酸ビスマス／酸化亜鉛／レゾルシノール、酢酸メチルプレドニゾロン、プレドニゾン、日焼け止め剤、ハルシノニド、サリチル酸、アントラリン、ピバル酸クロコルトロン、コール抽出物、コールタール／サリチル酸、コールタール／サリチル酸／硫黄、デソキシメタゾン、ジアゼパム、皮膚軟化薬、フルオシノニド／皮膚軟化薬、鉱油／ヒマシ油／乳酸ナトリウム、鉱油／落花生油、石油／ミリスチン酸イソプロピル、プソラレン、サリチル酸、石鹸／トリブロムサラン、チメロサール／ホウ酸、セレコキシブ、インフリキシマブ、シクロスポリン、アレファセプト、エファリズマブ、タクロリムス、ピメクロリムス、ＰＵＶＡ、ＵＶＢ、スルファサラジンが含まれる。
【０５０８】
本発明の結合タンパク質と組み合わされ得る乾癬性関節炎のための治療薬の非限定例には、メトトレキサート、エタネルセプト、ロフェコキシブ、セレコキシブ、葉酸、スルファサラジン、ナプロキセン、レフルノミド、酢酸メチルプレドニゾロン、インドメタシン、硫酸ヒドロキシクロロキン、プレドニゾン、スリンダク、増量プロピオン酸ベタメタゾン、インフリキシマブ、メトトレキサート、フォレート、トリアムシノロンアセトニド、ジクロフェナク、ジメチルスルホキシド、ピロキシカム、ジクロフェナクナトリウム、ケトプロフェン、メロキシカム、メチルプレドニゾロン、ナブメトン、トルメチンナトリウム、カルシポトリエン、シクロスポリン、ジクロフェナクナトリウム／ミソプロストール、フルオシノニド、硫酸グロコサミン、金チオリンゴ酸ナトリウム、酒石酸ヒドロコドン／アセトアミノフェン、イブプロフェン、リセドロネートナトリウム、スルファジアジン、チオグアニン、バルデコキシブ、アレファセプト、エファリズマブ及びｂｃｌ−２インヒビターが含まれる。
【０５０９】
本発明の結合タンパク質と組み合わされ得る再狭窄のための治療薬の非限定例には、シロリムス、パクリタクセル、エベロリムス、タクロリムス、ゾタロリムス、アセトアミノフェンが含まれる。
【０５１０】
本発明の結合タンパク質と組み合わされ得る坐骨神経痛のための治療薬の非限定例には、酒石酸ヒドロコドン／アセトアミノフェン、ロフェコキシブ、シクロベンザプリン塩酸塩、メチルプレドニゾロン、ナプロキセン、イブプロフェン、オキシコドン塩酸塩／アセトアミノフェン、セレコキシブ、バルデコキシブ、酢酸メチルプレドニゾロン、プレドニゾン、リン酸コデイン／アセトアミノフェン、トラマドール塩酸塩／アセトアミノフェン、メタクサロン、メロキシカム、メトカルバモル、塩酸リドカイン、ジクロフェナクナトリウム、ギャバペンチン、デキサメタゾン、カリソプロドール、ケトロラックトロメタミン、インドメタシン、アセトアミノフェン、ジアゼパム、ナブメトン、オキシコドン塩酸塩、チザニジン塩酸塩、ジクロフェナクナトリウム／ミソプロストール、ナプシル酸プロポキシフェン／アセトアミノフェン、ＡＳＡ／オキシコドン／酒石酸オキシコドン、イブプロフェン／酒石酸ヒドロコドン、トラマドール塩酸塩、エトドラク、プロポキシフェン塩酸塩、アミトリプチリン塩酸塩、カリソプロドール／リン酸コデイン／ＡＳＡ、硫酸モルヒネ、マルチビタミン、ナプロキセンナトリウム、クエン酸オルフェナドリン、テマゼパムが含まれる。
【０５１１】
本発明の結合タンパク質と組み合わされ得るＳＬＥ（ループス）のための治療薬の例には、ＮＳＡＩＤ、例えばジクロフェナク、ナプロキセン、イブプロフェン、ピロキシカム、インドメタシン；ＣＯＸ２インヒビター、例えばセレコキシブ、ロフェコキシブ、バルデコキシブ；抗マラリア薬、例えばヒドロキシクロロキン；ステロイド、例えばプレドニゾン、プレドニゾロン、ブデノシド、デキサメタゾン；細胞傷害薬、例えばアザチオプリン、シクロホスファミド、ミコフェノール酸モフェチル、メトトレキサート；ＰＤＥ４のインヒビターまたはプリン合成インヒビター、例えばセルセプトが含まれ得る。本発明の結合タンパク質は、スルファサラジン、５−アミノサリチル酸、オルサラジン、イムランのような物質；または炎症促進性サイトカイン（例えば、ＩＬ−１）の合成、産生または作用を干渉する物質、例えばＩＬ−１β変換酵素阻害剤及びＩＬ−１ｒａのようなカスパーゼ阻害剤とも組み合わされ得る。また、本発明の結合タンパク質は、Ｔ細胞シグナリングインヒビター、例えばチロシンキナーゼ阻害剤；またはＴ細胞活性化分子を標的とする分子、例えばＣＴＬＡ−４−ＩｇＧ、または抗Ｂ７ファミリー抗体、抗ＰＤ−１ファミリー抗体と一緒に使用され得る。本発明の結合タンパク質は、ＩＬ−１１または抗サイトカイン抗体、例えばフォントリズマブ（抗ＩＦＮｇ抗体）；または抗受容体受容体抗体、例えば抗ＩＬ−６受容体抗体及びＢ−細胞表面分子に対する抗体と組み合わされ得る。本発明の抗体またはその抗原結合部分は、ＬＪＰ  ３９４（アベチムス）；Ｂ細胞を消耗または不活性化させる物質、例えばリツキシマブ（抗ＣＤ２０抗体）、リンフォスタットＢ（抗ＢｌｙＳ抗体）；ＴＮＦアンタゴニスト、例えば抗ＴＮＦ抗体、アダリムマブ（ＰＣＴ公開ＷＯ  ９７／２９１３１；ＨＵＭＩＲＡ）、ＣＡ２（ＲＥＭＩＣＡＤＥ）、ＣＤＰ５７１、ＴＮＦＲ−Ｉｇ構築物、（ｐ７５ＴＮＦＲＩｇＧ（ＥＮＢＲＥＬ）及びｐ５５ＴＮＦＲＩｇＧ（ＬＥＮＥＲＣＥＰＴ））、並びにトランスジェニックマウスでのｂｃｌ−２過剰発現はループス様表現型を引き起こすことが立証され（Ｍａｒｑｕｉｎａ，Ｒｅｇｉｎａら，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２００４），１７２（１１），７１７７−７１８５を参照されたい）、従って抑制が治療効果を有すると予想されるのでｂｃｌ−２インヒビターと一緒に使用され得る。
【０５１２】
本発明の医薬組成物は、「治療有効量」または「予防有効量」の本発明の結合タンパク質を含み得る。「治療有効量」は、必要な用量で及び期間に所望の治療結果を達成するのに有効な量を指す。結合タンパク質の治療有効量は当業者により決定され得、複数の要因、例えば個人の病的状態、年齢、性別及び体重、並びに個人において結合タンパク質の所望の応答を引き出す能力に従って変更可能である。治療有効量も、治療上有用な作用が抗体または抗体部分の中毒または有害作用を上回る量である。「予防有効量」は、必要な用量で及び期間に所望の予防結果を達成するのに有効な量を指す。典型的には、予防用量は疾患の発症前またはより早期段階に被験者において使用されるので、予防有効量は治療有効量よりも少ない。
【０５１３】
投与レジメンは、最適の所望応答（例えば、治療または予防応答）を与えるために調節され得る。例えば、１回のボーラスを投与しても、複数の分割用量を時間をかけて投与しても、または用量を治療状況の緊急度により示されるように比例して減少または増加させてもよい。投与の容易さ及び用量の均一性のために非経口組成物を単位投与形態で処方することが特に有利である。本明細書中で使用されている「単位投与形態」は治療しようとする哺乳動物被験者に対する１回用量として適した物理的にばらばらの単位を指す。各単位は、所望治療効果を生ずるように計算した所定量を活性化合物を所要の医薬担体と一緒に含有している。本発明の投与単位形態の仕様は、（ａ）活性化合物の独自の特性及び達成しようとする具体的治療または予防効果、及び（ｂ）個人における感受性の治療のために活性化合物をコンパウンドする業界に固有の制限により指示され、直接依存する。
【０５１４】
本発明の結合タンパク質の治療または予防有効量の例示的非限定範囲は０．１〜２０ｍｇ／ｋｇ、例えば１〜１０ｍｇ／ｋｇである。用量の値は緩和しようとする状態のタイプ及び重症度により変更され得ることに留意されたい。更に、特定被験者に対する具体的容量レジメンは個人の必要性及び組成物を投与する人またはそれを監督する人の専門的判断に従って経時的に調節されなければならないこと、及び本明細書中に記載されている用量は例示にすぎず、特許請求されている組成物の範囲または実施を限定する意図はないことを理解すべきである。
【０５１５】
本明細書中に記載されている本発明の方法の他の適当な修飾及び改変は自明であり、本発明の範囲または本明細書中に記載されている実施形態を逸脱することなく適当な均等物を用いてなし得ることは当業者はすぐに分かるであろう。本発明を詳細に記載してきたが、例示の目的のみで提示されており、本発明を限定すると意図しない以下の実施例を参照することにより本発明はより明確に理解されるであろう。
【０５１６】
Ｖ．診断
本発明は診断用途も提供する。以下、これを更に説明する。
【０５１７】
（Ｉ．アッセイ方法）
本発明は、被験サンプル中のアナライト（または、その断片）の存在、量または濃度を本明細書中に記載されている少なくとも１つのＤＶＤ−Ｉｇを用いて測定するための方法をも提供する。この方法では当業界で公知の適当なアッセイを使用し得る。その例には、イムノアッセイ、例えば放射同位元素検出（ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ））及び酵素検出（酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）または酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）（例えば、Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅ  ＥＬＩＳＡアッセイ，Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，ミネソタ州ミネアポリス））を含めたサンドイッチイムノアッセイ（例えば、モノクローナル、ポリクローナル及び／またはＤＶＤ−Ｉｇサンドイッチイムノアッセイ、或いはその変形（例えば、モノクローナル／ＤＶＤ−Ｉｇ、ＤＶＤ−Ｉｇ／ポリクローナル等）、競合阻害イムノアッセイ（例えば、前進及び逆）、蛍光偏光イムノアッセイ（ＦＰＩＡ）、競合的酵素免疫分析法（ＥＭＩＴ）、生物発光共鳴エネルギー移動（ＢＲＥＴ）及び均質化学発光アッセイ等が含まれるが、これらに限定されない。ＳＥＬＤＩに基づくイムノアッセイでは、当該アナライト（または、その断片）に特異的に結合する捕捉試薬を質量分析プローブ（例えば、予め活性化したタンパク質チップアレー）の表面に結合させる。次いで、アナライト（または、その断片）をバイオチップに特異的に捕捉し、捕捉したアナライト（または、その断片）を質量分析法により検出する。或いは、アナライト（または、その断片）を捕捉試薬から溶出させ、従来のＭＡＬＤＩ（マトリックス支援レーザー脱離／イオン化法）またはＳＥＬＤＩにより検出してもよい。化学発光ミクロ粒子イムノアッセイ、特にＡＲＣＨＩＴＥＣＴ（登録商標）自動アナライザー（Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，イリノイ州アボットパーク）を用いるものが好ましいイムノアッセイの例である。
【０５１８】
本発明の実施において、例えば本明細書中に記載されているＤＶＤ−Ｉｇを免疫学的診断試薬として及び／またはアナライトイムノアッセイキットにおいて使用するときに、尿、血液、血清及び血漿、並びに他の体液を採取し、取り扱い、処理するための当業界で公知の方法が使用される。被験サンプルは、当該アナライトに加えて追加の成分、例えば抗体、抗原、ハプテン、ホルモン、薬物、酵素、受容体、タンパク質、ペプチド、ポリペプチド、オリゴヌクレオチド及び／またはポリヌクレオチドを含み得る。例えば、サンプルは被験者から得た全血サンプルであり得る。本明細書中に記載されているイムノアッセイの前に、被験サンプル、特に全血を例えば前処理試薬を用いて処理することが必要であったり、所望されることがある。前処理が必要でない場合でも（例えば、多くの尿サンプル）、場合により前処理を（例えば、市販プラットフォームのレジメンの一部として）実施してもよい。
【０５１９】
前処理試薬は本発明のイムノアッセイ及びキットと一緒に使用するのに適した任意の試薬であり得る。前処理は、場合により（ａ）１つ以上の溶媒（例えば、メタノール及びエチレングリコール）と場合により塩、（ｂ）１つ以上の溶媒及び塩と場合により洗剤、（ｃ）洗剤、または（ｄ）洗剤及び塩を含む。前処理試薬は当業界で公知であり、前記前処理は文献（例えば、Ｙａｔｓｃｏｆｆら，Ａｂｂｏｔｔ  ＴＤｘ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ａｓｓａｙ  Ｅｖａｌｕａｔｅｄ  ｆｏｒ  Ｍｅａｓｕｒｉｎｇ  Ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅ  ｉｎ  Ｗｈｏｌｅ  Ｂｌｏｏｄ，Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．，３６：１９６９−１９７３（１９９０）；及びＷａｌｌｅｍａｃｑら，Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎｅｗ  ＡｘＳＹＭ  Ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅ  Ａｓｓａｙ：Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｗｉｔｈ  ＴＤｘ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ｗｈｏｌｅ  Ｂｌｏｏｄ  ａｎｄ  ＥＭＩＴ  Ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅ  Ａｓｓａｙｓ，Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．，４５：４３２−４３５（１９９９）を参照されたい）に記載されているように及び／または市販されているように例えばＡｂｂｏｔｔ  ＴＤｘ，ＡｘＳＹＭ（登録商標）及びＡＲＣＨＩＴＥＣＴ（登録商標）アナライザー（Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，イリノイ州アボットパーク）を用いるアッセイのために使用され得る。加えて、前処理はＡｂｂｏｔｔの米国特許Ｎｏ．５，１３５，８７５、欧州特許出願公開Ｎｏ．０  ４７１  ２９３、２００６年１２月２６日に出願された米国特許仮出願６０／８７８，０１７及び米国特許出願公開Ｎｏ．２００８／００２０４０１（前処理に関する教示のために全文参照により本明細書に組み入れる）に記載されているように実施され得る。前処理試薬は不均質試薬または均質試薬であり得る。
【０５２０】
不均質前処理試薬を使用する場合、前処理試薬はサンプル中に存在する結合タンパク質（例えば、アナライトまたはその断片に結合できるタンパク質）を沈殿させる。前処理ステップは、サンプルに前処理試薬を添加することにより形成された混合物の上清から沈殿したアナライト結合タンパク質を分離することによりアナライト結合タンパク質を除去することを含む。このアッセイでは、結合タンパク質が存在しない混合物の上清をアッセイにおいて使用し、直接抗体捕捉ステップにかける。
【０５２１】
均質前処理試薬を使用する場合には、上記した分離ステップがない。被験サンプル及び前処理試薬の全混合物をアナライト（または、その断片）に対する標識された特異的結合パートナー、例えば標識された抗アナライト抗体（または、その抗原反応性断片）と接触させる。典型的には第１特異的結合パートナーによる捕捉の前またはその間に、このアッセイのために使用される前処理試薬を前処理した被験サンプル混合物で希釈する。希釈しても、ある量の前処理試薬が捕捉中被験サンプル混合物中になお存在している（または、残存している）。本発明によれば、標識された特異的結合パートナーはＤＶＤ−Ｉｇ（または、その断片、バリアント、またはバリアントの断片）であり得る。
【０５２２】
不均質フォーマットでは、被験サンプルを被験者から採取した後、第１混合物を調製する。混合物はアナライト（または、その断片）について評価しようとする被験サンプル及び第１特異的結合パートナーを含み、第１特異的結合パートナー及び被験サンプル中に含まれているアナライトは第１特異的結合パートナー−アナライト複合体を形成する。好ましくは、第１特異的結合パートナーは抗アナライト抗体またはその断片である。第１特異的結合パートナーは本明細書中に記載されているＤＶＤ−Ｉｇ（または、その断片、バリアント、またはバリアントの断片）であり得る。混合物を形成するために被験サンプル及び第１特異的結合パートナーを添加する順序は重要でない。好ましくは、第１特異的結合パートナーを固相上に固定化する。（第１特異的結合パートナーと場合により第２特異的結合パートナーに対する）イムノアッセイにおいて使用される固相は当業界で公知の任意の固相であり得、例えば磁気粒子、ビーズ、試験管、微量測定プレート、キュベット、膜、足場分子、フィルム、濾紙、ディスク及びチップであるが、これらに限定されない。
【０５２３】
第１特異的結合パートナー−アナライト複合体を含有している混合物を形成したら、非結合アナライトを複合体から当業界で公知の技術を用いて除去する。例えば、非結合アナライトは洗浄により除去され得る。しかしながら、被験サンプル中に存在するすべてのアナライトが第１特異的結合パートナーにより結合されるように、第１特異的結合パートナーを被験サンプル中に存在するアナライトより過剰に存在させることが望ましい。
【０５２４】
非結合アナライトを除去したら、混合物に第２特異的結合パートナーを添加して、第１特異的結合パートナー−アナライト−第２特異的結合パートナー複合体を形成する。第２特異的結合パートナーは、好ましくは第１特異的結合パートナーにより結合されるアナライト上のエピトープとは異なるアナライト上のエピトープに結合する抗アナライト抗体である。更に、第２特異的結合パートナーを上記した検出可能な標識で標識するかまたは含有していることも好ましい。第２特異的結合パートナーは本明細書中に記載されているＤＶＤ−Ｉｇ（または、その断片、バリアント、またはバリアントの断片）であり得る。
【０５２５】
当業界で公知の適当な検出可能な標識が使用され得る。例えば、検出可能な標識は、放射性標識（例えば、３Ｈ、１２５Ｉ、３５Ｓ、１１Ｃ、３２Ｐ及び３３Ｐ）、酵素標識（例えば、ホースラディッシュペルオキシダーゼ、アルカリペルオキシダーゼ、グルコース６−ホスフェートデヒドロゲナーゼ等）、化学発光標識（例えば、アクリジニウムエステル、チオエステルまたはスルホンアミド、ルミノール、イソルミノール、フェナントリジニウムエステル等）、蛍光標識（例えば、フルオレセイン（例えば、５−フルオレセイン、６−カルボキシフルオレセイン、３’６−カルボキシフルオレセイン、５（６）−カルボキシフルオレセイン、６−ヘキサクロロ−フルオレセイン、６−テトラクロロフルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート等））、ローダミン、フィコビリタンパク質、Ｒ−フィコエリスリン、量子ドット（例えば、硫化亜鉛をキャップしたセレン化カドミウム）、温度測定標識またはイムノ−ポリメラーゼ連鎖反応標識であり得る。標識の導入、標識化手順及び標識の検出はＰｏｌａｋ  ａｎｄ  Ｖａｎ  Ｎｏｏｒｄｅｎ，Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，第２版，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｖｅｒｌａｇ，Ｎ．Ｙ．（１９９７）、及びオレゴン州ユージーンに所在のＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．が発行のハンドブック及びカタログであるＨａｕｇｌａｎｄ，Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ  Ｐｒｏｂｅｓ  ａｎｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ（１９９６）中に見つけられる。ＦＰＩＡでは、蛍光標識（例えば、全文参照により本明細書に組み入れる米国特許Ｎｏｓ．５，５９３，８９６、５，５７３，９０４、５，４９６，９２５、５，３５９，０９３及び５，３５２，８０３を参照されたい）が使用され得る。均質または不均質化学発光アッセイでは、アクリジニウム化合物が検出可能な標識として使用され得る（例えば、Ａｄａｍｃｚｙｋら，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．，１６：１３２４−１３２８（２００６）；Ａｄａｍｃｚｙｋら，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．，４：２３１３−２３１７（２００４）；Ａｄａｍｃｚｙｋら，Ｂｉｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．，１４：３９１７−３９２１（２００４）；及びＡｄａｍｃｚｙｋら，Ｏｒｇ．Ｌｅｔｔ．，５：３７７９−３７８２（２００３）を参照されたい）。
【０５２６】
好ましいアクリジニウム化合物はアクリジニウム−９−カルボキサミドである。アクリジニウム９−カルボキサミドの製造方法は、Ｍａｔｔｉｎｇｌｙ，Ｊ．Ｂｉｏｌｕｍｉｎ．Ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎ．，６：１０７−１１４（１９９１）；Ａｄａｍｃｚｙｋら，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，６３：５６３６−５６３９（１９９８）；Ａｄａｍｃｚｙｋら，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，５５：１０８９９−１０９１４（１９９９）；Ａｄａｍｃｚｙｋら，Ｏｒｇ．Ｌｅｔｔ．，１：７７９−７８１（１９９９）；Ａｄａｍｃｚｙｋら，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．，１１：７１４−７２４（２０００）；Ｍａｔｔｉｎｇｌｙら，Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ；Ｄｙｋｅ，Ｋ．Ｖ．Ｅｄ．；ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ：Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，ｐ．７７−１０５（２００２）；Ａｄａｍｃｚｙｋら，Ｏｒｇ．Ｌｅｔｔ．，５：３７７９−３７８２（２００３）；並びに米国特許Ｎｏｓ．５，４６８，６４６、５，５４３，５２４及び５，７８３，６９９（各々を前記方法に関する教示のために全文参照により本明細書に組み入れる）に記載されている。別の好ましいアクリジニウム化合物はアクリジニウム−９−カルボキシレートアリールエステルである。アクリジニウム−９−カルボキシレートアリールエステルの例は１０−メチル−９−（フェノキシカルボニル）アクリジニウムフルオロスルホネート（ミシガン州アナーバーのＣａｙｍａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌから入手可能）である。アクリジニウム９−カルボキシレートアリールエステルの製造方法は、ＭｃＣａｐｒａら，Ｐｈｏｔｏｃｈｅｍ．Ｐｈｏｔｏｂｉｏｌ．，４：１１１１−２１（１９６５）；Ｒａｚａｖｉら，Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ，１５：２４５−２４９（２０００）；Ｒａｚａｖｉら，Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ，１５：２３９−２４４（２０００）；及び米国特許Ｎｏ．５，２４１，０７０（各々を前記方法に関する教示のために全文参照により本明細書に組み入れる）に記載されている。更に、アクリジニウム−９−カルボキシレートアリールエステル及びその使用に関する詳細はＵＳ  ２００８−０２４８４９３に記載されている。
【０５２７】
化学発光アッセイ（例えば、上記したアクリジニウムまたは他の化学発光剤を用いる）はＡｄａｍｃｚｙｋら，Ａｎａｌ．Ｃｈｉｍ．Ａｃｔａ，５７９（１）：６１−６７（２００６）に記載されている方法に従って実施され得る。適当なアッセイフォーマットが使用され得るが、ミクロプレート・ケミルミノメーター（Ｍｉｔｈｒａｓ  ＬＢ−９４０，Ｂｅｒｔｈｏｌｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｕ．Ｓ．Ａ．，ＬＬＣ，テネシー州オークリッジ）は少容量の複数のサンプルを迅速にアッセイすることができる。
【０５２８】
化学発光アッセイのための混合物を形成するために被験サンプル及び特異的結合パートナーを添加する順序は重要でない。第１特異的結合パートナーが化学発光剤（例えば、アクリジニウム化合物）で検出可能に標識されているならば、検出可能に標識された第１特異的結合パートナー−アナライト複合体が形成される。或いは、第２特異的結合パートナーを使用し、第２特異的結合パートナーが化学発光剤（例えば、アクリジニウム化合物）で検出可能に標識されているならば、検出可能に標識された第１特異的結合パートナー−アナライト−第２特異的結合パートナー複合体が形成される。標識されていても標識されていなくても、非結合特異的結合パートナーは混合物から当業界で公知の技術（例えば、洗浄）を用いてから除去され得る。
【０５２９】
上記アクリジニウム化合物を添加する前、同時またはその後に、過酸化水素を混合物中でその場で生成させても、または混合物に導入または供給してもよい（例えば、過酸化水素源は過酸化水素を含有していることが公知の１つ以上のバッファーまたは他の溶液である）。過酸化水素は当業者に自明な多数の方法でその場で生成され得る。
【０５３０】
少なくとも１つの塩基性溶液をサンプルに添加すると同時にまたはその後に、アナライトの存在を示す検出可能なシグナル、すなわち化学発光シグナルが発生する。塩基性溶液は少なくとも１つの塩基を含有し、１０以上、好ましくは１２以上のｐＨを有する。塩基性溶液の例には、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウム、水酸化アンモニウム、水酸化マグネシウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、水酸化カルシウム、炭酸カルシウム及び炭酸水素カルシウムが含まれるが、これらに限定されない。サンプルに添加する塩基性溶液の量は塩基性溶液の濃度に依存する。使用する塩基性溶液の濃度に基づいて、当業者はサンプルに添加する塩基性溶液の量を容易に決定することができる。
【０５３１】
発生した化学発光シグナルは当業者に公知のルーチン技術により検出され得る。発生したシグナルの強度に基づいて、サンプル中のアナライトの量を定量することができる。具体的には、サンプル中のアナライトの量は発生したシグナルの強度に比例する。存在するアナライトの量は、発生した光の量をアナライトについての標準曲線と比較することにより、または参照標準と比較することにより定量することができる。標準曲線はアナライトの公知濃度の連続希釈物または溶液を用いて質量分析法、重量測定法及び当業界で公知の他の技術により作成され得る。化学発光剤としてアクリジニウム化合物の使用を強調して記載してきたが、当業者はこの記載を他の化学発光剤の使用に対して容易に適応させることができる。
【０５３２】
アナライトイムノアッセイは通常当業界で公知のフォーマット（非限定例として、サンドイッチフォーマット）を用いて行い得る。具体的には、１つのイムノアッセイフォーマットでは、少なくとも２つの抗体がサンプル中のアナライト（例えば、ヒトアナライト）またはその断片を分離し、定量するために使用される。より具体的には、少なくとも２つの抗体はアナライト（または、その断片）上の別々のエピトープに結合して、「サンドイッチ」と称される免疫複合体を形成する。通常、イムノアッセイでは、１つ以上の抗体が被験サンプル中のアナライト（または、その断片）を捕捉するために使用され得（これらの抗体はしばしば「捕捉」抗体と称される）、１つ以上の抗体が検出可能な（すなわち、定量可能な）標識をサンドイッチに結合させるために使用され得る（これらの抗体はしばしば「検出抗体」、「コンジュゲート」または「複数のコンジュゲート」と称される）。よって、サンドイッチイムノアッセイフォーマットの関連で、本明細書中に記載されているＤＶＤ−Ｉｇ（または、その断片、バリアント、またはバリアントの断片）は捕捉抗体、検出抗体またはその両方として使用され得る。例えば、アナライト（または、その断片）上の第１エピトープに結合できるドメインを有する１つのＤＶＤ−Ｉｇが捕捉抗体として使用され得、及び／またはアナライト（または、その断片）上の第２エピトープに結合できるドメインを有する別のＤＶＤ−Ｉｇが検出抗体として使用され得る。この点で、アナライト（または、その断片）上の第１エピトープに結合できる第１ドメイン及びアナライト（または、その断片）上の第２エピトープに結合できる第２ドメインを有するＤＶＤ−Ｉｇは捕捉抗体及び／または検出抗体として使用され得る。或いは、第１アナライト（または、その断片）上のエピトープに結合できる第１ドメイン及び第２アナライト（または、その断片）上のエピトープに結合できる第２ドメインを有する１つのＤＶＤ−Ｉｇは２つ以上のアナライトを検出し、場合により定量するための捕捉抗体及び／または検出抗体として使用され得る。アナライトがサンプル中にモノマー形態及びホモマーまたはヘテロマーであり得るダイマー／マルチマー形態のような２つ以上の形態で存在する場合には、モノマー形態にさらされているエピトープに結合できるドメインを有する１つのＤＶＤ−Ｉｇ及びダイマー／マルチマー形態の異なる部分上のエピトープに結合できるドメインを有する別のＤＶＤ−Ｉｇが捕捉抗体及び／または検出抗体として使用され得、これにより所与のアナライトの異なる形態を検出、場合により定量することができる。更に、単一ＤＶＤ−Ｉｇ内及び／またはＤＶＤ−Ｉｇ間で異なる親和性を有するＤＶＤ−Ｉｇを使用するとアビジティーの効果が得られ得る。本明細書中に記載されているイムノアッセイの関連で、ＤＶＤ−Ｉｇの構造内に１つ以上のリンカーを導入することが通常便利であったり望ましいことがある。存在させる場合、リンカーは最適にはエピトープの内部ドメインによる結合及び別のエピトープの外部ドメインによる結合を可能にする十分な長さ及び構造的融通性を有していなければならない。この点で、ＤＶＤ−Ｉｇが２つの異なるアナライトに結合でき、１つのアナライトが他よりも大きいならば、大きいアナライトが外部ドメインにより結合されることが望ましい。
【０５３３】
概して、（例えば、含有していると疑われる）アナライト（または、その断片）について試験しようとするサンプルを少なくとも１つの捕捉抗体（または、複数の抗体）及び少なくとも１つの検出抗体（例えば捕捉及び／または検出抗体が複数の抗体を含む場合のように、第２検出抗体または第３検出抗体、或いは第４以降の抗体であり得る）と同時にまたは任意の順序で逐次接触させ得る。例えば、被験サンプルをまず少なくとも１つの捕捉抗体と接触させ、次いで（逐次）少なくとも１つの検出抗体と接触させる。或いは、被験サンプルをまず少なくとも１つの検出抗体と接触させ、次いで（逐次）少なくとも１つの捕捉抗体と接触させる。さらに別の代替例では、被験サンプルを捕捉抗体及び検出抗体と同時に接触させてもよい。
【０５３４】
サンドイッチアッセイフォーマットでは、アナライト（または、その断片）を含有していると疑われるサンプルをまず第１抗体／アナライト複合体の形成を可能にする条件下で少なくとも１つの第１捕捉抗体と接触させる。２つ以上の捕捉抗体を使用する場合には、２つ以上の捕捉抗体を含む第１捕捉抗体／アナライト複合体が形成される。サンドイッチアッセイでは、抗体、好ましくは、少なくとも１つの捕捉抗体を被験サンプル中で予想される最大量のアナライト（または、その断片）のモル過剰量で使用する。例えば、約５μｇ〜約１ｍｇの抗体／ｍＬ−バッファー（例えば、マイクロ粒子コーティングバッファー）を使用し得る。
【０５３５】
競合阻害イムノアッセイは小アナライトを調べるためにしばしば使用されているが、１つの抗体のみによる結合が必要なので、このイムノアッセイは逐次及び古典的フォーマットを含む。逐次競合阻害イムノアッセイでは、当該アナライトに対する捕捉抗体を微量分析プレートのウェルまたは他の固体支持体上にコーティングする。当該アナライトを含有するサンプルをウェルに添加したとき、当該アナライトは捕捉抗体に結合する。洗浄後、公知量の標識（例えば、ビオチンまたはホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ））アナライトをウェルに添加する。シグナルを発生させるためには酵素標識に対する基質が必要である。ＨＲＰに対する適当な基質の例は３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）である。洗浄後、標識アナライトより発生したシグナルを測定し、これはサンプル中のアナライトの量と逆比例する。古典的競合阻害イムノアッセイでは、当該アナライトに対する抗体を固体支持体（例えば、微量測定プレートのウェル）上にコーティングする。しかしながら、逐次競合阻害イムノアッセイとは異なり、サンプル及び標識アナライトをウェルに同時に添加する。サンプル中のアナライトは捕捉抗体に対する結合について標識アナライトと競合する。洗浄後、標識アナライトより発生したシグナルを測定し、これはサンプル中のアナライトの量に逆比例する。
【０５３６】
場合により、被験サンプルを少なくとも１つの捕捉抗体（例えば、第１捕捉抗体）と接触させる前に、少なくとも１つの捕捉抗体を固体支持体に結合させてもよい。こうすると、第１抗体／アナライト（または、その断片）複合体の被験サンプルからの分離が容易となる。捕捉抗体が結合する基質は捕捉抗体−アナライト複合体のサンプルからの分離を容易とする適当な固体支持体または固相であり得る。
【０５３７】
例には、プレート（例えば、微量測定プレート）のウェル、試験管、多孔質ゲル（例えば、シリカゲル、アガロース、デキストリンまたはゼラチン）、ポリマーフィルム（例えば、ポリアクリルアミド）、ビーズ（例えば、ポリスチレンビーズまたは磁気ビーズ）、フィルター／膜（例えば、ニトロセルロースまたはナイロン）のストリップ、ミクロ粒子（例えば、ラテックス粒子、磁化可能ミクロ粒子（例：酸化鉄または酸化クロムのコア及びホモ−またはヘテロ−ポリマーコーティングを有する約１〜１０ミクロンの半径のミクロ粒子）が含まれる。基質を、抗原を結合させるように適当な表面親和性及び検出抗体が接近できるように十分な多孔性を有する適当な多孔質材料から構成してもよい。水和状態のゼラチン状材料を使用し得るが、微孔質材料が通常好ましい。約０．０１〜約０．５ｍｍ、好ましくは約０．１ｍｍの厚さを有するシートの形態の多孔質基質が好ましい。孔径はかなり異なり得るが、孔径は好ましくは約０．０２５〜約１５ミクロン、より好ましくは約０．１５〜約１５ミクロンである。抗体を基質に対して共有結合させる化学的プロセスにより基質の表面を活性化してもよい。抗原または抗体を基質に対する不可逆結合が通常疎水力を介する吸着により生ずる。或いは、結合が抗体のアナライトに結合する能力を干渉しない限り、抗体を基質に対して共有結合させるために化学カップリング剤または他の手段を使用し得る。或いは、予めストレプトアビジン（例えば、ＤＹＮＡＬ（登録商標）磁気ビーズ，Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，カリフォルニア州カールズバッド）、ビオチン（例えば、Ｐｏｗｅｒ−ＢｉｎｄＴＭ−ＳＡ−ＭＰストレプトアビジンをコーティングした（Ｓｅｒａｄｙｎ，インディアナ州インディアナポリス）を用いる）または抗種特異性モノクローナル抗体でコーティングしたミクロ粒子で抗体を結合させてもよい。所要により、抗体上の各種官能基と反応させることができるように基質を誘導体化させてもよい。誘導体化ではあるカップリング剤を使用しなければならず、その例には無水マレイン酸、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド及び１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミドが含まれるが、これらに限定されない。所望ならば、各々が１つ以上のアナライトに対して特異的な１つ以上の捕捉試薬（例えば、抗体またはその断片）を異なる物理的または指向可能な位置で固相に結合させてもよい（例えば、バイオチップコンフィギュレーション（例えば、米国特許Ｎｏ．６，２２５，０４７；国際特許出願公開ＷＯ  ９９／５１７７３；米国特許Ｎｏ．６，３２９，２０９；国際特許出願公開ＷＯ  ００／５６９３４；及び米国特許Ｎｏ．５，２４２，８２８を参照されたい）の場合のように）。捕捉試薬を質量分析プローブに固体支持体として結合させるならば、プローブに結合したアナライトの量はレーザー脱離イオン化質量分析法により検出され得る。或いは、単カラムに１つ以上の捕捉試薬を用いて誘導体化した別のビーズを充填させてもよく、これによりアナライトが１箇所で捕捉される（抗体誘導体化ビースに基づくテクノロジー、例えばＬｕｍｉｎｅｘ（テキサス州オースチン）のｘＭＡＰテクノロジーを参照されたい）。
【０５３８】
アナライト（または、その断片）についてアッセイしようとする被験サンプルを少なくとも１つの捕捉抗体（例えば、第１捕捉抗体）と接触させたら、混合物をインキュベートして、第１抗体（または、複数の抗体）−アナライト（または、その断片）複合体を形成する。インキュベーションは約４．５〜約１０．０のｐＨ、約２℃〜約４５℃の温度及び少なくとも約１分間〜約１８時間、好ましくは約１〜約２４分間、最も好ましくは約４〜約１８分間実施する。本明細書中に記載されているイムノアッセイは１ステップ（被験サンプル、少なくとも１つの捕捉抗体及び少なくとも１つの検出抗体のすべてを逐次または同時に反応容器に添加することを意味する）または２つ以上のステップ（例えば、２ステップ、３ステップ等）で行われる。
【０５３９】
（第１または複数の）捕捉抗体／アナライト（または、その断片）複合体を形成した後、複合体を少なくとも１つの検出抗体と（第１または複数の）捕捉抗体／アナライト（または、その断片）／第２検出抗体複合体を形成できる条件下で接触させる。明瞭のために「第２」抗体（例えば、第２検出抗体）として捕捉されるが、実際捕捉及び／または検出のために複数の抗体を使用している場合には少なくとも１つの検出抗体はイムノアッセイで使用される第２、第３、第４等の抗体であり得る。捕捉抗体／アナライト（または、その断片）複合体を２つ以上の検出抗体と接触させると、（第１または複数の）捕捉抗体／アナライト（または、その断片）／（複数の）検出抗体複合体が形成される。捕捉抗体（例えば、第１捕捉抗体）の場合のような少なくとも１つの（例えば、第２及びその後の）検出抗体を捕捉抗体／アナライト（または、その断片）複合体と接触させるとき、上記したと同様の条件下でのインキュベーション時間が（第１または複数の）捕捉抗体／アナライト（または、その断片）／（第２または複数の）検出抗体複合体の形成のために必要とされる。好ましくは、少なくとも１つの検出抗体は検出可能な標識を含有している。（第１または複数の）捕捉抗体／アナライト（または、その断片）／（第２または複数の）検出抗体複合体を形成する前、同時またはその後に、検出可能な標識を少なくとも１つの検出抗体（例えば、第２検出抗体）に結合させ得る。当業界で公知の検出可能な標識を使用し得る（Ｐｏｌａｋ  ａｎｄ  Ｖａｎ  Ｎｏｏｒｄｅｎ（１９９７）及びＨａｕｇｌａｎｄ（１９９６）文献を含めた先の検討を参照されたい）。
【０５４０】
検出可能な標識は直接またはカップリング剤を介して抗体に結合され得る。使用され得るカップリング剤の例は、ミズーリ州セントルイスに所在のＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈから市販されているＥＤＡＣ（１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩）である。使用され得る他のカップリング剤は当業界で公知である。抗体に対して検出可能な標識を結合させるための方法は当業界で公知である。加えて、抗体に対する検出可能な標識のカップリングを容易にする末端基を既に含有している多くの検出可能な標識、例えばＣＰＳＰ−アクリジニウムエステル（すなわち、９−［Ｎ−トシル−Ｎ−（３−カルボキシプロピル）］−１０−（３−スルホプロピル）アクリジニウムカルボキサミド）またはＳＰＳＰ−アクリジニウムエステル（すなわち、Ｎ１０−（３−スルホプロピル）−Ｎ−（３−スルホプロピル）−アクリジニウム−９−カルボキサミド）が購入され得るかまたは合成され得る。
【０５４１】
標識を定量する前に、（第１または複数の）捕捉抗体／アナライト／（第２または複数の）検出抗体複合体を被験サンプルの残りから分離し得るが、分離しなくてもよい。例えば、少なくとも１つの捕捉抗体（例えば、第１捕捉抗体）を固体支持体（例えば、ウェルまたはビーズ）に結合させたならば、固体支持体との接触から（被験サンプルの）流体を除去することにより分離が達成され得る。或いは、少なくとも第１捕捉抗体を固体支持体に結合させたならば、アナライト含有サンプル及び少なくとも１つの第２検出抗体を同時に接触させて第１（複数の）抗体／アナライト／第２（複数の）抗体複合体を形成した後、固体支持体との接触から流体（被験サンプル）を除去する。少なくとも１つの第１捕捉抗体が固体支持体に結合しないならば、標識の量を定量するために（第１または複数の）捕捉抗体／アナライト／（第２または複数の）検出抗体複合体を被験サンプルから除去しなくてもよい。
【０５４２】
標識された捕捉抗体／アナライト／検出抗体複合体（例えば、第１捕捉抗体／アナライト／第２検出抗体複合体）を形成した後、複合体中の標識の量を当業界で公知の技術を用いて定量する。例えば、酵素標識を使用するならば、標識された複合体を定量可能な反応（例えば、発色）を与える標識に対する基質と反応させる。標識が放射性標識ならば、標識を適切な手段（例えば、シンチレーションカウンター）を用いて定量する。標識が蛍光標識ならば、標識を１つの色の光（「励起波長」として公知である）で刺激し、刺激に応答して標識より発せられる別の色（「放出波長」として公知である）を検出することにより標識を定量する。標識が化学発光標識ならば、発せられる光を目視により、またはルミノメーター、Ｘ線フィルム、高速写真フィルム、ＣＣＤカメラ等を用いて検出することにより標識を定量する。複合体中の標識の量を定量したら、被験サンプル中のアナライトまたはその断片の濃度を適切な手段により、例えば公知濃度を有するアナライトまたはその断片の連続希釈物を用いて作成した標準曲線を用いることにより測定される。アナライトまたはその断片の連続希釈物を用いる以外、標準曲線は重量分析により、質量分析法により、及び他の当業界で公知の技術により作成され得る。
【０５４３】
ＡＲＣＨＩＴＥＣＴ（登録商標）アナライザーを使用する化学発光ミクロ粒子アッセイでは、コンジュゲート希釈剤ｐＨは約６．０±０．２でなければならず、ミクロ粒子コーティングバッファーはほぼ室温（すなわち、約１７〜約２７℃）に維持されなければならず、ミクロ粒子コーティングバッファーｐＨは約６．５±０．２でなければならず、ミクロ粒子希釈剤ｐＨは約７．８±０．２でなければならない。固体は、好ましくは約０．２％未満、例えば約０．１５％、約０．１４％未満、約０．１３％未満、約０．１２％未満、または約０．１１％未満（例えば、約０．１０％）である。
【０５４４】
ＦＰＩＡは競合結合イムノアッセイ原理に基づいている。蛍光標識された化合物は、直接偏光により励起されたとき回転角度に逆比例する偏光度を有する蛍光を発する。蛍光標識されたトレーサー−抗体複合体を直線偏光により励起すると、蛍光基は光が吸収される時間と光が発せられる時間の間の回転から拘束されるので発せられた光は高度に偏光されたままである。「遊離」トレーサー化合物（すなわち、抗体に結合しない化合物）を直線偏光により励起させると、その回転は競合結合イムノアッセイにおいて産生される対応するトレーサー−抗体コンジュゲートよりも非常に速い。特殊な取り扱い及び廃棄を必要とする放射性物質がないので、ＦＰＩＡはＲＩＡよりも有利である。加えて、ＦＰＩＡは容易且つ迅速に実施され得る均質アッセイである。
【０５４５】
上記にてらし、被験サンプル中のアナライト（または、その断片）の存在、量または濃度を調べる方法を提供する。この方法は、（ｉ）（ｉ’）抗体、アナライトに結合できる抗体の断片、アナライトに結合できる抗体のバリアント、アナライトに結合できる抗体のバリアントの断片、及びアナライトに結合できるＤＶＤ−Ｉｇ（または、その断片、バリアント、またはバリアントの断片）の少なくとも１つ及び（ｉｉ’）少なくとも１つの検出可能な標識を使用し、（ｉｉ）被験サンプル中のアナライト（または、その断片）の存在、量または濃度の直接または間接指標としての検出可能な標識より発生したシグナルを対照またはカリブレーター中のアナライト（または、その断片）の存在、量または濃度の直接または間接指標としての発生したシグナルと比較することにより被験サンプルをアナライト（または、その断片）についてアッセイすることを含む。場合により、カリブレーターはカリブレーターの各々がアナライトの濃度により他のカリブレーターとは異なる一連のカリブレーターの一部である。
【０５４６】
方法は、（ｉ）被験サンプルを抗体、アナライトに結合できる抗体の断片、アナライトに結合できる抗体のバリアント、アナライトに結合できる抗体のバリアントの断片、及びアナライトに結合できるＤＶＤ−Ｉｇ（または、その断片、バリアント、またはバリアントの断片）からなる群から選択されるアナライト（または、その断片）に対する少なくとも１つの第１特異的結合パートナーと接触させて、第１特異的結合パートナー／アナライト（または、その断片）複合体を形成し、（ｉｉ）第１特異的結合パートナー／アナライト（または、その断片）複合体を抗アナライト抗体、検出可能に標識されたアナライトに結合できる抗アナライト抗体の断片、検出可能に標識されたアナライトに結合できる抗アナライト抗体のバリアント、検出可能に標識されたアナライトに結合できる抗アナライト抗体のバリアントの断片及び検出可能に標識されたＤＶＤ−Ｉｇ（または、その断片、バリアント、またはバリアントの断片）からなる群から選択されるアナライト（または、その断片）に対する少なくとも１つの第２特異的結合パートナーと接触させて、第１特異的結合パートナー／アナライト（または、その断片）／第２特異的結合パートナー複合体を形成し、（ｉｉｉ）（ｉｉ）で形成された第１特異的結合パートナー／アナライト（または、その断片）／第２特異的結合パートナー複合体中の検出可能な標識より発生したシグナルを検出または測定することにより被験サンプル中のアナライトの存在、量また濃度を調べることを含み得る。アナライト（または、その断片）に対する少なくとも１つの第１特異的結合パートナー及び／またはアナライト（または、その断片）に対する少なくとも１つの第２特異的結合パートナーは本明細書中に記載されているＤＶＤ−Ｉｇ（または、その断片、バリアント、またはバリアントの断片）である方法が好ましい。
【０５４７】
或いは、方法は、被験サンプルを抗体、アナライトに結合できる抗体の断片、アナライトに結合できる抗体のバリアント、アナライトに結合できる抗体のバリアントの断片及びＤＶＤ−Ｉｇ（または、その断片、バリアント、またはバリアントの断片）からなる群から選択されるアナライト（または、その断片）に対する少なくとも１つの第１特異的結合パートナーと接触させ、同時にまたは逐次任意の順序で被験サンプルを少なくとも１つの第１特異的結合パートナーに対する結合に対してアナライト（または、その断片）と競合し且つ検出可能に標識されたアナライト、検出可能に標識された第１特異的結合パートナーに結合できるアナライトの断片、検出可能に標識された第１特異的結合パートナーに結合できるアナライトのバリアント及び検出可能に標識された第１特異的結合パートナーに結合できるアナライトのバリアントの断片からなる群から選択される少なくとも１つの第２特異的結合パートナーと接触させることを含み得る。被験サンプル中に存在するアナライト（または、その断片）及び少なくとも１つの第２特異的結合パートナーは相互に競合して、それぞれ第１特異的結合パートナー／アナライト（または、その断片）複合体及び第１特異的結合パートナー／第２特異的結合パートナー複合体を形成する。方法は、更に（ｉｉ）で形成された第１特異的結合パートナー／第２特異的結合パートナー複合体中の検出可能な標識より発生したシグナルを検出または測定することにより被験サンプル中のアナライトの存在、量また濃度を調べることを含み、第１特異的結合パートナー／第２特異的結合パートナー複合体中の検出可能な標識より発生したシグナルは被験サンプル中のアナライトの量または濃度に逆比例する。
【０５４８】
上記方法は、更に被験サンプルを採取した患者の治療／予防的処置の有効性を診断、予測または評価することを含み得る。方法が更に被験サンプルを採取した患者の治療／予防的処置の有効性の評価を含むならば、この方法は場合により更に有効性を向上させるために所要により患者の治療／予防的処置を修飾することを含む。方法は自動システムまたは半自動システムにおいて使用するために改作され得る。
【０５４９】
アッセイ方法（及び、そのためのキット）に関して、市販されている抗アナライト抗体または文献に記載されている抗アナライトの産生方法を使用することができる。各種抗体の市販業者には、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｃ．（カリフォルニア州サンタクルーズ）、ＧｅｎＷａｙ  Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．（カリフォルニア州サンジェゴ）及びＲ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（ＲＤＳ；ミズーリ州ミネアポリス）が含まれるが、これらに限定されない。
【０５５０】
通常、例えば疾患または疾患のリスクを検出するために、前決定したレベルが被験サンプルをアナライトまたはその断片についてアッセイして得た結果を評価するためのベンチマークとして使用される。通常、比較する場合、前決定したレベルは、アナライトの存在、量または濃度の疾患、障害または状態の特定ステージまたはエンドポイントとの関連または相関、或いは特定の臨床指標との関連または相関が得られ得るように十分な数の時間及び適切な条件下で特定アッセイを実施することにより得られる。典型的には、前決定したレベルは、参照被験者（または、被験者の集団）をアッセイして得られる。測定されるアナライトには、その断片、その分解生成物及び／またはその酵素開裂産物が含まれ得る。
【０５５１】
特に、疾患の進行及び／または治療をモニターするために使用される前決定したレベルに関して、アナライトまたはその断片の量または濃度は「未変化」、「プラス」（または、「プラスに変化した」）、または「マイナス」（または、「マイナスに変化した」であり得る。「上昇した」または「増加した」は、被験サンプル中の量または濃度が典型的または正常なレベルまたは範囲（例えば、前決定したレベル）よりも高い、または別の参照レベルまたは範囲（例えば、前のまたは基準サンプル）よりも高いことを指す。用語「低下した」または「減少した」は、被験サンプル中の量または濃度が典型的または正常なレベルまたは範囲（例えば、前決定したレベル）よりも低い、または別の参照レベルまたは範囲（例えば、前のまたは基準サンプル）よりも低いことを指す。用語「変化した（ａｌｔｅｒｅｄ）」は、サンプル中の量または濃度が典型的または正常なレベルまたは範囲（例えば、前決定したレベル）または別の参照レベルまたは範囲（例えば、前のまたは基準サンプル）に比して変化している（増加または減少している）ことを指す。
【０５５２】
アナライトに対する典型的または正常なレベルまたは範囲は標準プラクティスに従って規定される。幾つかの場合にはアナライトのレベルが非常に低いので、所謂変化したレベルまたは変化は、実験誤差またはサンプル変動では説明できない典型的または正常なレベルまたは範囲、或いは参照レベルまたは範囲と比較して正味の変化があるときに生ずると見なされ得る。よって、特定サンプルで測定したレベルを所謂正常被験者由来の類似サンプルで測定したレベルまたはレベルの範囲と比較する。これに関連して、「正常被験者」は例えば検出され得る疾患を持たない個人であり、「正常」（ときどき、「対照」と呼ばれる）患者または集団は例えばそれぞれ検出され得る疾患を示さない患者または集団である。更に、アナライトがヒト集団の大部分で高レベルで日常的に存在していないとすると、「正常被験者」は実質的に検出可能な増加または上昇した量または濃度のアナライトを有さない個人と見なされ得、「正常」（ときどき、「対照」と呼ばれる）患者または集団は実質的に検出可能な増加または上昇した量または濃度のアナライトを示さない患者または集団である。「見かけ正常な被験者」は、アナライトをまだ評価したことがないかまたは現在評価している被験者である。アナライトが通常検出され得ない（例えば、正常レベルは０であるかまたは正常集団の約２５〜約７５百分位数の範囲である）が被験サンプル中で検出されたとき、または被験サンプル中にアナライトが正常レベルよりも高いレベルで存在しているとき、アナライトのレベルは「上昇している」と言われる。よって、特に、本発明は、特定の疾患、障害または状態を有しているかまたはそのリスクがある被験者のスクリーニング方法を提供する。このアッセイ方法は他のマーカー等のアッセイをも含み得る。
【０５５３】
従って、本明細書中に記載されている方法は、被験者が所与の疾患、障害または状態を有しているかまたは発症するリスクがあるかどうかを調べるために使用され得る。具体的には、前記方法は、
（ａ）被験者由来の被験サンプル中のアナライト（または、その断片）の濃度または量を（例えば、本明細書中に記載されている方法または当業界で公知の方法を用いて）測定するステップ；及び
（ｂ）ステップ（ａ）で測定したアナライト（または、その断片）の濃度または量を前決定したレベルと比較するステップ；
を含み得、ステップ（ａ）で測定したアナライトの濃度または量が前決定したレベルに対してプラスならば、被験者は所与の疾患、障害または状態を有していないかまたはそのリスクがないと判定される。しかしながら、ステップ（ａ）で測定したアナライトの濃度または量が前決定したレベルに対してマイナスならば、被験者は所与の疾患、障害または状態を有しているかまたはそのリスクがあると判定される。
【０５５４】
加えて、本発明では被験者における疾患の進行をモニターする方法を提供する。最適には、前記方法は、
（ａ）被験者由来の被験サンプル中のアナライトの濃度または量を測定するステップ；
（ｂ）その後の被験者由来の被験サンプル中のアナライトの濃度または量を測定するステップ；及び
（ｃ）ステップ（ｂ）で測定したアナライトの濃度または量をステップ（ａ）で測定したアナライトの濃度または量と比較するステップ；
を含み、ステップ（ｂ）で測定した濃度または量がステップ（ａ）で測定したアナライトの濃度または量と比較して未変化またはマイナスならば、被験者において疾患は継続、進行または悪化していると判断される。対照的に、ステップ（ｂ）で測定したアナライトの濃度または量がステップ（ａ）で測定したアナライトの濃度または量と比較してプラスならば、被験者において疾患は停止、回復または改善していると判断される。
【０５５５】
場合により、方法は、更にステップ（ａ）で測定したアナライトの濃度または量を例えば前決定したレベルと比較することを含む。更に、場合により、方法は、例えばステップ（ｂ）で測定したアナライトの濃度または量が前決定したレベルに対してマイナスに変化しているならば、被験者を１つ以上の医薬組成物で一時期治療することを含む。
【０５５６】
なお更に、方法は１つ以上の医薬組成物での治療を受けている被験者における治療をモニターするために使用され得る。具体的には、前記方法は、被験者に１つ以上の医薬組成物を投与する前に被験者由来の第１被験サンプルを用意することを含む。次いで、被験者由来の第１被験サンプル中のアナライトの濃度または量を（例えば、本明細書中に記載されている方法または当業界で公知の方法を用いて）測定する。アナライトの濃度または量を測定した後、場合によりそのアナライトの濃度または量を前決定したレベルと比較する。第１被験サンプル中の測定したアナライトの濃度または量が前決定したレベルより低いならば、被験者を１つ以上の医薬組成物で治療しない。しかしながら、第１被験サンプル中の測定したアナライトの濃度または量が前決定したレベルより高いならば、被験者を１つ以上の医薬組成物で一時期治療する。被験者を１つ以上の医薬組成物で治療する期間は当業者により決定され得る（例えば、期間は約７日間〜約２年間、好ましくは約１４日間〜約１年間であり得る）。
【０５５７】
１つ以上の医薬組成物での治療の経過中、第２及びその後の被験サンプルを被験者から採取する。被験サンプルの数及びその被験サンプルを被験者から採取する時間は重要でない。例えば、第２被験サンプルは被験者に最初に１つ以上の医薬組成物を投与してから７日後に採取し得、第３被験サンプルは被験者に最初に１つ以上の医薬組成物を投与してから２週間後に採取し得、第４被験サンプルは被験者に最初に１つ以上の医薬組成物を投与してから３週間後に採取し得、第５被験サンプルは被験者に最初に１つ以上の医薬組成物を投与してから４週間後に採取し得る。
【０５５８】
第２または後続の被験サンプルの各々を被験者から採取した後、第２または後続の被験サンプル中のアナライトの濃度または量を（例えば、本明細書中に記載されている方法または当業界で公知の方法を用いて）測定する。第２または後続の被験サンプルの各々で測定したアナライトの濃度または量を第１被験サンプル（例えば、元々場合により前決定したレベルと比較した被験サンプル）で測定したアナライトの濃度または量と比較する。ステップ（ｃ）で測定したアナライトの濃度または量がステップ（ａ）で測定したアナライトの濃度または量と比較してプラスであるならば、被験者における疾患は停止、回復または改善していると判断され、被験者にはステップ（ｂ）の医薬組成物の１つの投与を継続しなければならない。しかしながら、ステップ（ｃ）で測定したアナライトの濃度または量がステップ（ａ）で測定したアナライトの濃度または量と比較して未変化またはマイナスならば、被験者における疾患は継続、進行または悪化していると判断され、ステップ（ｂ）において被験者に対して投与した１つ以上の医薬組成物で高濃度で被験者を治療しなければならず、またはステップ（ｂ）において被験者に対して投与した１つ以上の医薬組成物とは異なる１つ以上の医薬組成物で被験者を治療しなければならない。具体的には、被験者は、被験者のアナライトレベルを減少または低下させるために被験者が以前受けた１つ以上の医薬組成物とは異なる１つ以上の医薬組成物で治療され得る。
【０５５９】
一般的に、反復検査をなし得る（例えば、疾患進行及び／または治療に対する応答をモニターする）アッセイの場合、第２または後続の被験サンプルは第１被験サンプルを被験者から採取してからある時間後採取する。具体的には、被験者由来の第２被験サンプルは第１被験サンプルを被験者から採取してから数分間、数時間、数日間、数週間または数年後に採取し得る。例えば、第２被験サンプルは、第１被験サンプルを被験者から採取してから約１分、約５分、約１０分、約１５分、約３０分、約４５分、約６０分、約２時間、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約７時間、約８時間、約９時間、約１０時間、約１１時間、約１２時間、約１３時間、約１４時間、約１５時間、約１６時間、約１７時間、約１８時間、約１９時間、約２０時間、約２１時間、約２２時間、約２３時間、約２４時間、約２日、約３日、約４日、約５日、約６日、約７日、約２週間、約３週間、約４週間、約５週間、約６週間、約７週間、約８週間、約９週間、約１０週間、約１１週間、約１２週間、約１３週間、約１４週間、約１５週間、約１６週間、約１７週間、約１８週間、約１９週間、約２０週間、約２１週間、約２２週間、約２３週間、約２４週間、約２５週間、約２６週間、約２７週間、約２８週間、約２９週間、約３０週間、約３１週間、約３２週間、約３３週間、約３４週間、約３５週間、約３６週間、約３７週間、約３８週、約３９週、約４０週間、約４１週間、約４２週間、約４３週間、約４４週間、約４５週間、約４６週間、約４７週間、約４８週間、約４９週間、約５０週間、約５１週間、約５２週間、約１．５年、約２年、約２．５年、約３．０年、約３．５年、約４．０年、約４．５年、約５．０年、約５．５年、約６．０年、約６．５年、約７．０年、約７．５年、約８．０年、約８．５年間、約９．０年、約９．５年または約１０．０年後に被験者から採取し得る。
【０５６０】
疾患進行をモニターするために使用する場合、上記アッセイは急性状態を患っている被験者における疾患の進行をモニターするために使用され得る。救急治療状態としても公知の急性状態は、例えば心血管系または排泄系を含めた急性の生命を脅かす疾患または他の救急医学的状態を指す。典型的には、救急治療状態は、病院施設（非限定的に、救急ルーム、集中治療室、外傷センターまたは他の緊急治療施設を含む）での急性医学的介入または救急医療士または他の現場医療関係者による投与を必要とする状態を指す。救急治療状態の場合、反復モニタリングは通常短い時間枠で、すなわち数分間、数時間または数日間（例えば、約１分間、約５分間、約１０分間、約１５分間、約３０分間、約４５分間、約６０分間、約２時間、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約７時間、約８時間、約９時間、約１０時間、約１１時間、約１２時間、約１３時間、約１４時間、約１５時間、約１６時間、約１７時間、約１８時間、約１９時間、約２０時間、約２１時間、約２２時間、約２３時間、約２４時間、約２日間、約３日間、約４日間、約５日間、約６日間または約７日間）以内に実施され、最初のアッセイも同様に通常疾患または状態の発症から短い時間枠で、例えば約数分間、数時間または数日間以内に実施される。
【０５６１】
アッセイは、慢性、すなわち非急性状態を患っている被験者における疾患の進行をモニターするためにも使用され得る。非救急治療または非急性状態は、例えば心血管系または排泄系を含めた急性の生命を脅かす疾患または他の救急医学的状態以外の状態を指す。典型的には、非急性状態には、長期間または長く続く状態が含まれる。非急性状態の場合、反復モニタリングは通常長い時間枠で、例えば数時間、数日間、数週間、数ヶ月間または数年間（例えば、約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約７時間、約８時間、約９時間、約１０時間、約１１時間、約１２時間、約１３時間、約１４時間、約１５時間、約１６時間、約１７時間、約１８時間、約１９時間、約２０時間、約２１時間、約２２時間、約２３時間、約２４時間、約２日間、約３日間、約４日間、約５日間、約６日間、約７日間、約２週間、約３週間、約４週間、約５週間、約６週間、約７週間、約８週間、約９週間、約１０週間、約１１週間、約１２週間、約１３週間、約１４週間、約１５週間、約１６週間、約１７週間、約１８週間、約１９週間、約２０週間、約２１週間、約２２週間、約２３週間、約２４週間、約２５週間、約２６週間、約２７週間、約２８週間、約２９週間、約３０週間、約３１週間、約３２週間、約３３週間、約３４週間、約３５週間、約３６週間、約３７週間、約３８週間、約３９週間、約４０週間、約４１週間、約４２週間、約４３週間、約４４週間、約４５週間、約４６週間、約４７週間、約４８週間、約４９週間、約５０週間、約５１週間、約５２週間、約１．５年間、約２年間、約２．５年間、約３．０年間、約３．５年間、約４．０年間、約４．５年間、約５．０年間、約５．５．年間、約６．０年間、約６．５年間、約７．０年間、約７．５年間、約８．０年間、約８．５年間、約９．０年間、約９．５年間または約１０．０年間）以内に実施され、最初のアッセイは通常同様に疾患または状態の発症から長い時間枠で、例えば約数時間、数日間、数ヶ月間または数年間以内に実施される。
【０５６２】
更に、上記アッセイは被験者から採取した第１被験サンプルを用いて実施され得、第１被験サンプルは１つのソース（例えば、尿、血清または血漿）から採取される。場合により、上記アッセイはその後被験者から採取した第２被験サンプルを用いて繰り返され得、第２被験サンプルは別のソースから採取される。例えば、第１被験サンプルを尿から採取したならば、第２被験サンプルは血清または血漿から採取され得る。第１被験サンプル及び第２被験サンプルを用いてアッセイから得た結果を比較し得る。比較は被験者における疾患または状態のステータスを評価するために使用され得る。
【０５６３】
更に、本発明は、所与の疾患、障害または状態の素因があるまたは患っている被験者が治療の恩恵を受けているかどうかを調べる方法にも関する。特に、本発明はアナライトコンパニオン診断方法及び製品に関する。よって、更に最適に本明細書中に記載されている「被験者における疾患の治療のモニタリング方法」は治療のための候補者を選択または同定することをも包含する。
【０５６４】
よって、特定実施形態では、本発明は、所与の疾患、障害または状態を有しているかまたはそのリスクのある被験者が治療に対する候補者であるかを決定する方法をも提供する。一般的に、被験者は所与の疾患、障害または状態の幾つかの症状を経験している、または所与の疾患、障害または状態を有しているかまたはそのリスクがあると実際診断された、及び／または本明細書中に記載されているアナライトまたはその断片の好ましくない濃度または量を示すものである。
【０５６５】
方法は、場合により本明細書中に記載されているアッセイを含み、アナライトは被験者を１つ以上の医薬組成物（例えば、アナライトが関与する作用メカニズムに関連する医薬）で、または免疫抑制治療または免疫吸着治療により治療する前及びその後に評価され、或いはアナライトは前記治療後に評価され、アナライトの濃度または量を前決定したレベルと比較する。治療後観察されたアナライトの濃度または量が好ましくないと被験者が更なる治療または治療の継続の恩恵を受けないことが確認される。一方、治療後観察されたアナライトの濃度または量が好ましいと、被験者が更なる治療または治療の継続の恩恵を受けることが確認される。この確認は臨床研究の管理及び改良された患者ケアの提供を助ける。
【０５６６】
本明細書中のある実施形態は本明細書中で検討されている所与の疾患、障害または状態を評価するために使用する場合に有利であるが、アッセイ及びキットは他の疾患、障害及び状態におけるアナライトを評価するために使用され得ることは言うまでもない、。
【０５６７】
アッセイ方法は、所与の疾患、障害または状態を改善する化合物を同定するためにも使用され得る。例えば、アナライトを発現する細胞を候補化合物と接触させ得る。化合物と接触させた細胞中のアナライトの発現レベルは本明細書中に記載されているアッセイ方法を用いて対照細胞の発現レベルと比較され得る。
【０５６８】
（ＩＩ．キット）
被験サンプル中のアナライト（または、その断片）の存在、量また濃度について被験サンプルをアッセイするためのキットも提供する。キットは、被験サンプルをアナライト（または、その断片）についてアッセイするための少なくとも１つの成分及び被験サンプルをアナライト（または、その断片）についてアッセイするための使用説明書を含む。被験サンプルをアナライト（または、その断片）についてアッセイするための少なくとも１つの成分には、場合により固相上に固定化した抗アナライトＤＶＤ−Ｉｇ（または、その断片、バリアント、またはバリアントの断片）を含む組成物が含まれ得る。
【０５６９】
キットは、被験サンプルをアナライトについてイムノアッセイ（例えば、化学発光ミクロ粒子イムノアッセイ）によりアッセイするための少なくとも１つの成分及び被験サンプルをアナライトについてイムノアッセイ（例えば、化学発光ミクロ粒子イムノアッセイ）によりアッセイするための使用説明書を含む。例えば、キットはアナライトに対する少なくとも１つの特異的結合パートナー（例えば、抗アナライト、モノクローナル／ポリクローナル抗体（または、アナライトに結合できるその断片、アナライトに結合できるそのバリアント、またはアナライトに結合できるバリアントの断片））または抗アナライトＤＶＤ−Ｉｇ（または、その断片、バリアント、またはバリアントの断片）を含み得、いずれも検出可能に標識されていてもよい。或いはまたは加えて、キットは、抗アナライト、モノクローナル／ポリクローナル抗体（または、アナライトに結合できるその断片、アナライトに結合できるそのバリアント、またはアナライトに結合できるバリアントの断片）または抗アナライトＤＶＤ−Ｉｇ（または、その断片、バリアント、またはバリアントの断片）に対する結合に対して被験サンプル中のアナライトと競合し得る検出可能に標識されたアナライト（または、抗アナライト、モノクローナル／ポリクローナル抗体または抗アナライトＤＶＤ−Ｉｇ（または、その断片、バリアント、またはバリアントの断片））を含み得、いずれも固体支持体上に固定化されていてもよい。キットはカリブレーターまたは対照（例えば、単離または精製されたアナライト）を含み得る。キットは、アッセイを実施するための少なくとも１つの容器（例えば、第１特異的結合パートナーで既にコーティングされているチューブ、微量測定プレートまたはストリップ）及び／またはバッファー（例えば、アッセイバッファーまたは洗浄バッファー）を含み得、前記バッファーのいずれか１つは濃厚溶液、検出可能な標識（例えば、酵素標識）に対する基質溶液または停止溶液として提供され得る。好ましくは、キットはアッセイを実施するために必要なすべての成分、すなわち試薬、標準、バッファー、希釈剤等を含む。使用説明書はペーパー形式またはコンピューターで読み込み可能な形式（例えば、ディスク、ＣＤ、ＤＶＤ等）であり得る。
【０５７０】
抗体（例えば、抗アナライト抗体または抗アナライトＤＶＤ−Ｉｇ）またはトレーサーが本明細書中に記載されている検出可能な標識（例えば、蛍光基、放射活性部分、酵素、ビオチン／アビジン標識、発色団、化学発光標識等）を組み込んでもよく、またはキットが検出可能な標識を実施するための試薬を含んでいてもよい。抗体、カリブレーター及び／または対照を別々の容器に用意しても、適当なアッセイフォーマット（例えば、微量測定プレート）に前もって取り付けてもよい。
【０５７１】
場合により、キットは品質コントロール成分（例えば、感受性パネル、カリブレーター及びポジティブ対照）を含む。品質コントロール試薬の調製は当業界で公知であり、各種の免疫診断製品の添付文書に記載されている。場合により、感受性パネルメンバーがアッセイ性能特性を確立するために使用されており、更に場合によりイムノアッセイキット試薬の完全性及びアッセイの標準化の有用な指標である。
【０５７２】
キットは、場合により診断アッセイを行うためまたは品質コントロール評価を容易にするために必要な他の試薬、例えばバッファー、塩、酵素、酵素補因子、酵素基質、検出試薬等をも含み得る。他の成分、例えばバッファー及び被験サンプルの単離及び／または処理のための溶液（例えば、前処理試薬）をもキットに含み得る。キットは更に１つ以上の他の対照を含み得る。キットの成分の１つ以上を凍結乾燥してもよく、この場合キットは更に凍結乾燥成分を再構成するのに適した試薬を含み得る。
【０５７３】
場合により、キットの各種成分は所要により適当な容器（例えば、微量測定プレート）中に備えられる。キットは更にサンプルを保持または保存するための容器（例えば、尿サンプルのための容器またはカートリッジ）を含み得る。適切ならば、キットは、場合により反応容器、混合容器、及び試薬または被験サンプルの調製を容易にする他の成分をも含み得る。キットは被験サンプルを得るのを補助する１つ以上の器具（例えば、注射針、ピペット、鉗子、計量スプーン等）をも含み得る
検出可能な標識が少なくとも１つのアクリジニウム化合物であるならば、キットは少なくとも１つのアクリジニウム−９−カルボキサミド、少なくとも１つのアクリジニウム−９−カルボキシレートアリールエステルまたはその組合せを含み得る。検出可能な標識が少なくとも１つのアクリジニウム化合物であるならば、キットは過酸化水素源（例えば、バッファー、溶液及び／または少なくとも１つの塩基性溶液）をも含み得る。所望ならば、キットは固相（例えば、磁気粒子、ビーズ、試験管、微量測定プレート、キュビット、膜、足場分子、フィルム、濾紙、ディスクまたはチップ）を含有し得る。
【０５７４】
（ＩＩＩ．キット及び方法の改作）
キット（または、その成分）及び被験サンプル中のアナライトの存在、量また濃度をアッセイ（例えば、本明細書中に記載されているイムノアッセイ）により測定する方法は、例えば米国特許Ｎｏｓ．５，０８９，４２４及び５，００６，３０９に記載されており、例えばＡｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｐｒｉｅｓ（イリノイ州アボットパーク）よりＡＲＣＨＩＴＥＣＴ（登録商標）として市販されている各種の自動及び半自動システム（固相がミクロ粒子からなるシステムを含む）において使用するために改作され得る。
【０５７５】
非自動システム（例えば、ＥＬＩＳＡ）と比較した自動または半自動システム間の差の幾つかには、第１特異的結合パートナー（例えば、抗アナライト、モノクローナル／ポリクローナル抗体（または、その断片、そのバリアントまたはそのバリアントの断片）または抗アナライトＤＶＤ−Ｉｇ（または、その断片、そのバリアント、またはそのバリアントの断片）が結合している基質；どちらにしても、サンドイッチ形成及びアナライト反応性が影響され得る）、及び捕捉、検出及び／または任意の洗浄ステップの長さ及びタイミングが含まれる。ＥＬＩＳＡのような非自動フォーマットではサンプル及び捕捉試薬とのインキュベーション時間を比較的長くしなければならない（例えば、約２時間）が、自動または半自動フォーマット（例えば、ＡＲＣＨＩＴＥＣＴ（登録商標），Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｐｒｉｅｓ）は比較的短いインキュベーション時間（例えば、ＡＲＣＨＩＴＥＣＴ（登録商標）の場合約１８分間）を有し得る。同様に、ＥＬＩＳＡのような非自動フォーマットは検出抗体（例えば、コンジュゲート試薬）を比較的長いインキュベーション時間（例えば、約２時間）インキョベートし得るが、自動または半自動フォーマット（例えば、ＡＲＣＨＩＴＥＣＴ（登録商標））は比較的短いインキュベーション時間（例えば、ＡＲＣＨＩＴＥＣＴ（登録商標）の場合約４分間）を有し得る。
【０５７６】
Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｐｒｉｅｓから入手し得る他のプラットフォームには、ＡｘＳＹＭ（登録商標），ＩＭｘ（登録商標）（例えば、全文参照により本明細書に組み入れる米国特許Ｎｏ．５，２９４，４０４）、ＰＲＩＳＭ（登録商標），ＥＩＡ（ビーズ）及びＱｕａｎｔｕｍ（商標）ＩＩ、並びに他のプラットフォームが含まれるが、これらに限定されない。加えて、アッセイ、キット及びキット成分は他のフォーマット、例えば電気化学または他のハンドヘルドまたはポイントオブケアシステムで使用され得る。本発明は、例えばサンドイッチイムノアッセイを実施する市販のＡｂｂｏｔｔ  Ｐｏｉｎｔ  ｏｆ  Ｃａｒｅ（ｉ−ＳＴＡＴ（登録商標），Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｐｒｉｅｓ）電気化学イムノアッセイシステムに対して適用可能である。イムノセンサー、その製造方法及び使い捨てテストデバイスにおける操作は、例えばそれらに関する教示のために全文参照によりを組み入れる米国特許Ｎｏ．５，０６３，０８１、米国特許出願公開Ｎｏ．２００３／０１７０８８１、米国特許出願公開Ｎｏ．２００４／００１８５７７、米国特許出願公開Ｎｏ．２００５／００５４０７８及び米国特許出願公開Ｎｏ．２００６／０１６０１６４に記載されている。
【０５７７】
特に、アナライトアッセイのＩ−ＳＴＡＴ（登録商標）システムに対する改作に関して、以下のコンフィギュレーションが好ましい。微細作製したシリコンチップを金電流滴定型作用電極及び銀−塩化銀参照電極の対を用いて作製する。作用電極の１つの上で、固定化抗アナライト、モノクローナル／ポリクローナル抗体（または、その断片、そのバリアント、またはそのバリアントの断片）または抗アナライトＤＶＤ−Ｉｇ（または、その断片、そのバリアントまたはそのバリアントの断片）を有するポリスチレンビーズ（直径０．２ｍｍ）を電極上のパターン化ポリビニルアルコールのポリマーコーティングに付着させる。このチップをイムノアッセイに適した流体工学フォーマットでＩ−ＳＴＡＴ（登録商標）カートリッジに組み込む。カートリッジのサンプル保持チャンバの壁の一部には、検出可能に標識され得るアナライトに対する特異的結合パートナー、例えば抗アナライト、モノクローナル／ポリクローナル抗体（または、アナライトに結合できるその断片、そのバリアントまたはそのバリアントの断片）または抗アナライトＤＶＤ−Ｉｇ（または、アナライトに結合できるその断片、そのバリアントまたはそのバリアントの断片）を含む層がある。カートリッジの流体パウチ内にはｐ−アミノフェノールホスフェートを含む水性試薬が入っている。
【０５７８】
操作に際し、アナライトを含有すると疑われるサンプルを試験カートリッジの保持チャンバに添加し、カートリッジをＩ−ＳＴＡＴ（登録商標）リーダーに挿入する。アナライトに対する特異的結合パートナーをサンプル中に溶解した後、カートリッジ内のポンプ素子によりサンプルをチップを収容している管に押しやる。ここで、サンドイッチの形成を促進すべく振動させる。アッセイの最後から２番目のステップでは、流体をパウチから押し出し、サンプルをチップから洗い出すために管、洗浄チャンバに押し入れる。アッセイの最終ステップでは、アルカリホスファターゼ標識をｐ−アミノフェノールホスフェートと反応させて、ホスフェート基を開裂させ、遊離したｐ−アミノフェノールを作用電極で電気化学的に酸化させる。測定した電流に基づいて、リーダーは組み込み型アルゴリズム及び現場で作成した較正曲線を用いてサンプル中のアナライトの量を計算することができる。
【０５７９】
更に、本明細書中に記載されている方法及びキットが必ずイムノアッセイを実施するための他の試薬及び方法を含むことは言うまでもない。例えば、当業界で公知である及び／または例えば洗浄のためにコンジュゲート希釈剤、ミクロ粒子希釈剤及び／またはカリブレーターとして使用されるように容易に調製または最適化され得るような各種バッファーが含まれる。コンジュゲート希釈剤の例は、あるキット（Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｐｒｉｅｓ，イリノイ州アボットパーク）中で使用されており、２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸（ＭＥＳ）、塩、タンパク質ブロッカー、抗微生物剤及び洗剤を含有しているＡＲＣＨＩＴＥＣＴ（登録商標）コンジュゲート希釈剤である。カリブレーター希釈剤の例は、あるキット（Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｐｒｉｅｓ，イリノイ州アボットパーク）中で使用されており、ＭＥＳを含有するバッファー、他の塩、タンパク質ブロッカー及び抗微生物剤を含むＡＲＣＨＩＴＥＣＴ（登録商標）ヒトカリブレーター希釈剤である。加えて、２００８年１２月３１日に出願された米国特許出願Ｎｏ．６１／１４２，０４８に記載されているように、例えばＩ−Ｓｔａｔカートリッジフォーマットにおいてシグナルアンプリファイアとしてシグナル抗体に連結させた核酸配列を用いて改善されたシグナル発生が得られ得る。
【実施例】
【０５８０】
［実施例１］
ＤＶＤ−Ｉｇの設計、構築及び分析
実施例１．１：親抗体及びＤＶＤ−Ｉｇを同定し、特徴づけるために使用されるアッセイ
別段の記載がない限り、以下のアッセイを親抗体及びＤＶＤ−Ｉｇを同定し、特徴づけるために実施例を通して使用した。
【０５８１】
実施例１．１．１：親抗体及びＤＶＤ−Ｉｇのその標的抗原に対する結合及び親和性を測定するために使用されるアッセイ
実施例１．１．１Ａ：直接結合ＥＬＩＳＡ
所望の標的抗原に結合する抗体をスクリーニングするための酵素結合免疫吸着アッセイは以下のように実施した。高結合ＥＬＩＳＡプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｃｏｓｔａｒ，＃３３６９，マサチューセッツ州アクトン）をリン酸緩衝食塩液（１０×ＰＢＳ，Ａｂｂｏｔｔ  Ｂｉｏｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｅｎｔｅｒ，Ｍｅｄｉａ  Ｐｒｅｐ，＃ＭＰＳ−０７３，マサチューセッツ州ウォーセスター）中１０μｇ／ｍｌの所望の標的抗原（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，ミネソタ州ミネアポリス）、所望の標的抗原細胞外ドメイン／ＦＣ融合タンパク質（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，ミネソタ州ミネアポリス）、またはモノクローナルマウス抗ポリヒスチジン抗体（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，＃ＭＡＢ０５０，ミネソタ州ミネアポリス）（１００μＬ／ウェル）で４℃で一晩コーティングした。プレートを０．０２％  トゥイーン２０を含有するＰＢＳで４回洗浄した。ブロッキング溶液（脱脂粉乳，各種小売業者，ＰＢＳで２％に希釈）（３００μＬ／ウェル）を添加することによりプレートを室温で３０分間ブロックした。ブロッキング後、プレートを０．０２％  トゥイーン２０を含有するＰＢＳで４回洗浄した。
【０５８２】
或いは、上記したようにモノクローナルマウス抗ポリヒスチジン抗体をコーティングしたプレートに１０μｇ／ｍｌのヒスチジン（Ｈｉｓ）タグを付けた所望の標的抗原（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，ミネソタ州ミネアポリス）（１００μＬ／ウェル）を添加し、室温で１時間インキュベートした。ウェルを０．０２％  トゥイーン２０を含有するＰＢＳで４回洗浄した。
【０５８３】
上記したように作成した所望の標的抗原プレート、所望の標的抗原／ＦＣ融合プレート、または抗ポリヒスチジン抗体／Ｈｉｓタグを付けた所望の標的抗原プレートに上記したブロッキング溶液で希釈した抗体またはＤＶＤ−Ｉｇ調製物（１００μＬ）を添加し、室温で１時間インキュベートした。ウェルを０．０２％  トゥイーン２０を含有するＰＢＳで４回洗浄する。
【０５８４】
所望の標的抗原プレートまたは抗ポリヒスチジン抗体／ヒスチジンタグを付けた所望の標的抗原プレートの各ウェルに１０ｎｇ／ｍＬのヤギ抗ヒトＩｇＧ−ＦＣ特異的ＨＲＰコンジュゲート抗体（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ，＃２０４０−０５，アラバマ州バーミンガム）（１００μＬ）を添加した。或いは、所望の標的抗原／ＦＣ融合プレートの各ウェルに１０ｎｇ／ｍＬのヤギ抗ヒトＩｇＧ−κ軽鎖特異的ＨＲＰコンジュゲート抗体（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ，＃２０６０−０５，アラバマ州バーミンガム）（１００μＬ）を添加し、室温で１時間インキュベートした。プレートを０．０２％  トゥイーン２０を含有するＰＢＳで４回洗浄した。
【０５８５】
各ウェルに増強ＴＭＢ溶液（Ｎｅｏｇｅｎ  Ｃｏｒｐ．，＃３０８１７７，Ｋ  Ｂｌｕｅ，ケンタッキー州レキシントン）（１００μＬ）を添加し、室温で１０分間インキュベートした。１Ｎ  硫酸（５０μＬ）を添加することにより反応を停止した。プレートを４５０ｎｍの波長で分光光度的に測定した。
【０５８６】
表３は、直接結合アッセイで使用した抗原のリストを含む。
【０５８７】
表４は、直接結合ＥＬＩＳＡアッセイで試験した抗体及びＤＶＤ−Ｉｇ構築物のＥＣ５０（ｎＭ）で表示した結合データを含む。
【０５８８】
直接結合ＥＬＩＳＡでは、多分標的抗原上の抗体結合部位が「隠された」、またはプラスチック表面にコーティングしたときに抗原が「歪められた」ために、結合がときどき観察されなかった。ＤＶＤ−Ｉｇがその標的に結合できなかったのは、直接結合ＥＬＩＳＡフォーマットによりＤＶＤ−Ｉｇに加えられる立体制限のためでもあり得る。直接結合ＥＬＩＳＡフォーマットで結合しなかった親抗体及びＤＶＤ−Ｉｇは他のＥＬＩＳＡフォーマット（例えば、ＦＡＣＳ、Ｂｉａｃｏｒｅまたはバイオアッセイ）では標的抗原に結合した。ＤＶＤ−Ｉｇの非結合は、先に示されているようにＤＶＤ−Ｉｇの２つの可変ドメイン間のリンカー長さを調節することによっても回復した。
【０５８９】
【表３】
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【０５９０】
【表４】
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すべてのＤＶＤ−Ｉｇ構築物の結合は維持され、親抗体の結合に匹敵した。すべてのＮ末端可変ドメイン並びにＤＶＤ−Ｉｇ構築物ＤＶＤ００９、ＤＶＤ０１６、ＤＶＤ０１８、ＤＶＤ０２２、ＤＶＤ０２４、ＤＶＤ０３５、ＤＶＤ３７、ＤＶＤ０４３、ＤＶＤ０４４、ＤＶＤ４９、ＤＶＤ２５７、ＤＶＤ２５８及びＤＶＤ２５９のＣ末端可変ドメインは親抗体に類似の高親和性で結合した。
【０５９１】
表５及び６は、３個のＶＥＧＦ親抗体、並びに親ＶＥＧＦ参照抗体（Ｒｅｆ．Ａｂ．）ＡＢ０１４−ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）、ＡＢ０７１−ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）及びＡＢ０７０−ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）の可変ドメインから誘導されるＣ末端（Ｃ−ｔｅｒｍ．）またはＮ末端（Ｎ−ｔｅｒｍ．）可変ドメインのいずれかを有する９６個のＤＶＤ−Ｉｇ構築物についてのＶＥＧＦ直接結合ＥＬＩＳＡデータを含む。これらの可変ドメインは、４個のＤＬＬ−４  Ｒｅｆ．Ａｂ．（ＡＢ０１５−ＤＬＬ−４（ｓｅｑ．１）、ＡＢ０６９−ＤＬＬ−４（ｓｅｑ．２）、ＡＢ０７３−ＤＬＬ−４（ｓｅｑ．３）及びＡＢ０７２−ＤＬＬ−４（ｓｅｑ．４））から誘導される４個のＤＬＬ−４可変ドメインと対形成した。ＤＶＤ−Ｉｇ可変ドメインを２つのリンカー長さ（重鎖（ＨＣリンカー）及び／または軽鎖（ＬＣリンカー）で短い及び長い）により連結すると、４つの考えられるリンカー組合せ、すなわち短−短、長−長、短−長及び長−短が生ずる。これらの５つの要因（３つのＶＥＧＦ配列×２つの配向×２つのＨＣリンカー×２つのＬＣリンカー×４つのＤＬＬ−４配列）を組み合わせると、９６個のＤＶＤの全要因実験が生ずる。
【０５９２】
【表５】
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すべてのＤＶＤ−Ｉｇ構築物のＶＥＧＦに対する結合は維持され、親抗体の結合に匹敵した。すべてのＮ末端可変ドメインが親抗体に類似の高親和性で結合した。重鎖及び軽鎖のリンカー長さの幾つかの特別の組合せは、親抗体に比してＣ末端ドメインの結合親和性を改善した。特に、軽鎖の短いリンカーよりも長いリンカーを有するＣ末端ドメインの親和性は統計上有意に（ｐ＝０．０１９）改善される。
【０５９３】
【表６】
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すべてのＤＶＤ−Ｉｇ構築物のＤＬＬ４に対する結合は維持され、親抗体の結合に匹敵した。すべてのＮ末端可変ドメインが親抗体に類似の高親和性で結合した。重鎖及び軽鎖のリンカー長さの幾つかの特別の組合せは、親抗体に比してＣ末端ドメインの結合親和性を改善した。特に、重鎖及び軽鎖が共に短いリンカーよりも重鎖及び／または軽鎖の長いリンカーを有するＣ末端ドメインの親和性が改善される傾向にある。
【０５９４】
【表７】
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【０５９５】
【表８】
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【０５９６】
【表９】
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【０５９７】
【表１０】
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ｍＡｂドメイン配向及びリンカー長さの異なるＤＶＤ−Ｉｇを作成するために、ＨＥＲ２の２つの異なるエピトープ（ドメインＩＩ及びドメインＩＶ）を標的とする２つのｍＡｂを使用した。直接ＥＬＩＳＡ及びＢｉａｃｏｒｅアッセイにおいてこれらのＤＶＤ−Ｉｇを標的結合機能について試験した。
【０５９８】
【表１１】
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すべてのＤＶＤ−Ｉｇ構築物のＨＥＲ−２に対する結合は維持され、親抗体の結合に匹敵した。Ｎ末端可変ドメインのすべてのＨＥＲ−２ドメインＩＶは親抗体に類似の高いまたは改良された親和性で結合した。重鎖及び軽鎖のリンカー長さの幾つかの特別の組合せは親抗体よりも良好な結合親和性を改善した。
【０５９９】
実施例１．１．１．Ｂ：再指向細胞傷害性（ｒＣＴＬ）アッセイ
再指向細胞傷害性（ｒＣＴＬ）アッセイは、ＤＶＤ−ＩｇがＴ細胞及び腫瘍細胞を近接させてＴ細胞が腫瘍細胞を死滅させることができるかを調べる。
【０６００】
ＦＡＣＳに基づくアッセイ（１）：ヒトＣＤ３＋Ｔ細胞を予め凍結単離したＰＢＭＣからネガティブ選択濃縮カラム（Ｒ＆Ｄ，カタログ番号ＨＴＣＣ−５２５）により単離する。完全ＲＰＭＩ培地（Ｌ−グルタミン，５５ｍＭ  β−ΜΕ，Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ，１０％ＦＣＳ）中１０μｇ／ｍＬの抗ＣＤ３（ＯＫＴ−３，ＢＤ）及び２μｇ／ｍＬの抗ＣＤ２８（ＣＤ２８．２，Ａｂｅａｍ）をコーティングしたフラスコにおいてＴ細胞を４日間刺激する。Ｔ細胞を３０Ｕ／ｍＬのＩＬ−２（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ）中に一晩静置した後、アッセイに使用する。ＤｏＨＨ２またはＲａｊｉ標的細胞を製造業者の使用説明書に従ってＰＫＨ２６（Ｓｉｇｍａ）で標識する。ｒＣＴＬアッセイを通じてＬ−グルタミン及び１０％  ＦＢＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）を含有するＲＰＭＩ  １６４０培地（フェノールなし，Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用する。
【０６０１】
エフェクターＴ細胞（Ｅ）及び標的（Ｔ）をそれぞれ９６ウェルプレート（Ｃｏｓｔａｒ，＃３７９９）において１０５及び１０４個の細胞／ウェルで平板培養して、１０：１のＥ：Ｔ比を得る。濃度依存滴定曲線を得るためにＤＶＤ−Ｉｇ分子を適切に希釈する。一晩インキュベートした後、細胞を平板培養し、ＰＢＳで１回洗浄し、次いで０．１％  ＢＳＡ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）及び０．５μｇ／ｍＬ  ヨウ化プロピジウム（ＢＤ）を含有するＰＢＳ中に再懸濁する。ＦＡＣＳデータをＦＡＣＳＣａｎｔｏマシン（ＢＤ）に集め、Ｆｌｏｗｊｏ（Ｔｒｅｅｓｔａｒ）で分析する。
【０６０２】
全標的（対照，非処理）のパーセントで割ったＤＶＤ−Ｉｇ処理サンプル中の生標的のパーセントを計算して、特異的溶解％を調べる。データをグラフで表し、ＩＣ５０をＰｒｉｓｍ（Ｇｒａｐｈｐａｄ）で計算する。
【０６０３】
インピーダンスに基づく（２）：Ｔ細胞を先のように作成する。ＥＧＦＲ発現標的細胞をＡＣＥＡ  ＲＴ−ＣＥＳ  ９６ウェルプレート（ＡＣＥＡ  Ｂｉｏ，サンジェゴ）に一晩接着させる。次いで、エフェクターＴ細胞（Ｅ）及び標的（Ｔ）を２×１０５及び２×１０４個の細胞／ウェルで平板培養して、１０：１のＥ：Ｔ比を得る。濃度依存滴定曲線を作成するためにＤＶＤ−Ｉｇ分子を適切に希釈する。ＤＶＤ−Ｉｇ処理サンプル中の標的の細胞指数を対照標的（処理なし）の細胞指数で割って、特異的溶解％を計算する。データをグラフで表し、ＩＣ５０をＰｒｉｓｍ（Ｇｒａｐｈｐａｄ）で計算する（Ｄｒｅｉｅｒ，Ｔ．（２００２）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，１００：６９０−６９７；Ｚｈｕ，Ｊ．（２００６）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，３０９：２５−３３）。このＣＤ３／ＣＤ２０  ＤＶＤ−Ｉｇの配列は米国特許出願Ｎｏ．２００７００７１６７５に開示されている。
【０６０４】
【表１２】
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【０６０５】
ＤＶＤ−Ｉｇ  ＩＤ８５７の有効性をＤｏＨＨ−２  Ｂ細胞リンパ腫早期脇腹腫瘍モデルにおいて立証した。スキッドマウスの側腹にＤｏＨＨ２腫瘍細胞のみまたは１０：１の比のＤｏＨＨ２腫瘍細胞＋末梢血から精製したＣＤ３＋Ｔ細胞を注入した。Ｔ細胞の非存在下で８０ｕｇのリツキサンを１日目にｉｖ投与した。ＤｏＨＨ２細胞のみまたはＤｏＨＨ２細胞＋Ｔ細胞の両方を与えたマウスに対して８０ｕｇのＤＶＤ−Ｉｇ  ＩＤ８５７を１〜５日目に毎日ｉｖ投与した。３２日目に、Ｔ細胞またはＤＶＤ−Ｉｇ  ８５７を受けたＤｏＨＨ−２群はそれぞれ６３及び５５の％ＴＧＩでＤｏＨＨ−２増殖に対して有意な影響を有していた。リツキシマブで処理したＤｏＨＨ−２（％ＴＧＩ＝９４）は、ＤｏＨＨ２対照群と比較して有意な有効性（ｐ≦０．０００１）を示した。［Ｔ細胞＋ＤＶＤ−Ｉｇ  ＩＤ８５７］は、ＤｏＨＨ２対照群と比較してそれぞれ９５及び９８の％ＴＧＩ（ｐ≦０．０００１）でリツキシマブ群に等しい有効性を示した。５２日目に、リツキシマブ及び［ＤＶＤ−Ｉｇ  ＩＤ８５７＋Ｔ細胞］群には相互に有意な差がなかった。カプラン・マイヤー生存グラフ（ｌｃｃエンドポイトン）。ログランク（マンテル・コックス）統計は、ＤｏＨＨ−２対照群に比してリツキシマブ及び［ＤＶＤ−Ｉｇ  ＩＤ８５７＋Ｔ細胞］で処理した群における生存の統計上（ｐ≦０．０００１）の増加を示した。リツキシマブ及び［ＤＶＤ−Ｉｇ  ＩＤ８５７＋Ｔ細胞］群には相互に有意な差がなかった。
【０６０６】
ＣＤ３及びＣＤ１９  ＤＶＤ−ＩｇをそれぞれＡｂ００２及びＡＢ００６由来の可変ドメインを用いて作成した。ヒトＣＤ３に対するＤＶＤ−ＩｇのＩＣ５０をＪｕｒｋａｔ細胞でのＯＫＴ３−ＰＥ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，カタログ番号１２−００３７）競合ＦＡＣＳ分析を用いて調べた。ＥＣ９０でのＯＫＴ３−ＰＥ及び各種濃度のＤＶＤ−Ｉｇを一緒に混合し、９６ウェル丸底プレート（ｃｏｒｎｉｎｇ，＃３３６５）において０．５×１０ｅ６個のＪｕｒｋａｔ細胞／ウェルで氷上で１時間インキュベートした。サンプルをＦＡＣＳ  Ｃａｌｉｂｕｒ（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を用いて獲得し、Ｆｌｏ  Ｊｏ（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を用いて分析した。ヒトＣＤ１９に対するＤＶＤ−ＩｇのＩＣ５０を、メソスケールディスカバリーを用いてヒトＣＤ１９を安定的にトランスフェクトした２９３細胞でスルホタグ付きＡＢ００６を用いて調べた。ＥＣ９０でのスルホタグ付きＡＢ００６を各種濃度のＤＶＤ−Ｉｇと混合し、９６ウェル高結合プレート（Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ，＃Ｌ１１ＸＢ−３）において２５，０００個の細胞／ウェルで２９３  ｈＣＤ１９細胞に添加した。サンプルをＳｅｃｔｏｒ  Ｉｍａｇｅ  ６０００（Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）で読み取った。
【０６０７】
【表１３】
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【０６０８】
実施例１．１．１．Ｃ：捕捉ＥＬＩＳＡ−ＶＥＧＦ
ＥＬＩＳＡプレート（Ｎｕｎｃ，ＭａｘｉＳｏｒｐ，ニューヨーク州ロチェスター）を抗ヒトＦｃ抗体（ＰＢＳ中５μｇ／ｍｌ，Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ，ペンシルベニア州ウェストグローブ）と４℃で一晩インキュベートした。プレートを洗浄バッファー（０．０５％  トゥイーン２０を含有するＰＢＳ）で３回洗浄し、ブロッキングバッファー（１％  ＢＳＡを含有するＰＢＳ）を用いて２５℃で１時間ブロックした。ウェルを３回洗浄し、０．１％  ＢＳＡを含有するＰＢＳ中の各抗体またはＤＶＤ−Ｉｇの連続希釈物をウェルに添加し、２５℃で１時間インキュベートした。ウェルを３回洗浄し、ビオチニル化ＶＥＧＦ（２ｎＭ）をプレートに添加し、２５℃で１時間インキュベートした。ウェルを３回洗浄した後、ストレプトアビジン−ＨＲＰ（ＫＰＬ，＃４７４−３０００，メリーランド州ゲーサーズバーグ）と２５℃で１時間インキュベートした。ウェルを３回洗浄し、１００μｌ／ウェルのＵＬＴＲＡ−ＴＭＢ  ＥＬＩＳＡ（Ｐｉｅｒｃｅ，イリノイ州ロックフォード）を添加した。発色後、反応を１Ｎ  ＨＣｌで停止し、吸光度を４５０ｎＭで測定した。ＶＥＧＦ捕捉ＥＬＩＳＡデータを表１４に示す。
【０６０９】
実施例１．１．１．Ｄ：ＩｇＧ−Ｆｃ捕捉ＥＬＩＳＡ−ＲＯＮ
９６ウェルＮｕｎｃ−ＩｍｍｕｎｏプレートをＰＢＳ（Ｇｉｂｃｏ，＃１００１０−０２３，ニューヨーク州グランドアイランドのＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中２μｇ／ｍＬのヤギ−抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃ特異的抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ，＃１０９−０５５−０９８，ペンシルベニア州ウェストグローブ、５μＬ／ウェル）でコーティングし、４℃で一晩インキュベートした。プレートを洗浄バッファー（ＰＢＳ，０．０５％  トゥイーン２０）で３回洗浄し、次いで１００ｕＬ／ウェルのブロッキングバッファー（ＰＢＳ，２％  ＢＳＡ）を用いて室温で１時間ブロックした。プレートを３回洗浄し、適切な抗体またはＤＶＤ−Ｉｇの１μｇ／ｍＬ溶液（５０μ１／ウェル）と室温で１時間インキュベートした。１時間インキュベートした後、プレートを３回洗浄し、５０ｕＬ／ウェルのｈｉｓタグ付き組換えＲＯＮタンパク質（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，＃１９４７−ＭＳ，ミネソタ州ミネアポリス，１０００ｎΜ〜０ｎＭの最終用量範囲）と室温で１時間インキュベートした。プレートを３回洗浄し、５０μＬ／ウェルの家兎−抗Ｈｉｓタグ−ＨＲＰ抗体（Ａｂｃａｍ  ａｂｌ１８７，マサチューセッツ州ケンブリッジ，２％  ＢＳＡ／ＰＢＳ溶液で１：１０，０００希釈）を添加し、プレートを室温で１時間インキュベートした。最終洗浄後、５０μＬ／ウェルのＴＭＢ基質（Ｐｉｅｒｃｅ，＃３４０２８，イリノイ州ロックフォード）を添加し、５分後反応を５０ｕＬ／ウェルの２Ｎ  Ｈ２ＳＯ４で停止した。吸光度を４５０ｎＭで読み取った（Ｓｐｅｃｔｒａ  Ｍａｘ  Ｐｌｕｓプレートリーダー，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓリーダー，カリフォルニフ州サニーベール）。ＥＣ５０をＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ４．０３で計算した。ＲＯＮ捕捉ＥＬＩＳＡデータを表１４に示す。
【０６１０】
実施例１．１．１．Ｅ：捕捉ＥＬＩＳＡ−ＩＧＦ１，２
９６ウェルＮｕｎｃ−ＩｍｍｕｎｏプレートをＤ−ＰＢＳ（Ｇｉｂｃｏ，＃１４１９０，カリフォルニア州サンディエゴ）中５μｇ／ｍｌのヒトＩｇＧに対する抗体（Ｆｅｙ断片特異的，Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ，ペンシルベニア州ウェストグローブ，＃１０９−００５−０９８、１００μｌ／ウェル）でコーティングし、４℃で一晩インキュベートした。ＥＬＩＳＡプレートを洗浄バッファー（ＰＢＳ，０．０５％  トゥイーン２０）で３回洗浄した後、２００μＬ／ウェルのブロッキングバッファー（Ｄ−ＰＢＳ，１％  ＢＳＡ）を用いて２５℃で１時間ブロックした。次いで、プレートを洗浄し、１００μＬ／ウェルの抗体またはＤＶＤ−Ｉｇ（ブロッキングバッファー中０．０１μｇ／ｍＬ〜１００μｇ／ｍＬ）と３７℃で１時間インキュベートした。次いで、プレートを３回洗浄し、ビオチン標識したヒトＩＧＦ１またはＩＧＦ２（ブロッキングバッファー中０．０２ｎＭ〜１００ｎＭの用量範囲，１００μＬ／ウェル）と３７℃で１時間インキュベートした。プレートを３回洗浄し、ＨＲＰをコンジュゲートしたストレプトアビジン（ＫＰＬ，＃４７４−３０００，メリーランド州ゲーサーズバーグ，ブロッキングバッファーで１：１０，０００希釈，１００μＬ／ウェル）と２５℃で１時間インキュベートした。最終洗浄後、プレートを１００μＬ／ウェルのＥＬＩＳＡ基質（１−Ｓｔｅｐ  Ｕｌｔｒａ  ＴＭＢ−ＥＬＩＳＡ，Ｐｉｅｒｃｅ，＃３４０２８０，イリノイ州ロックフォード）とインキュベートした。５分後、反応を２５℃で１００μＬ／ウェルの２Ｎ  Ｈ２ＳＯ４を用いて停止し、吸光度を４５０ｎＭで読み取った。ＩＧＦ１，２捕捉ＥＬＩＳＡデータを表１４に示す。
【０６１１】
実施例１．１．１．Ｆ：捕捉ＥＬＩＳＡ−ＤＬＬ４
９６ウェルＮｕｎｃ−Ｉｍｍｕｎｏプレート（＃４３９４５４，ニューヨーク州ロチェスター）をＤ−ＰＢＳ（Ｇｉｂｃｏ，＃１４１９０，ニューヨーク州グランドアイランド）中５μｇ／ｍｌのヒトＩｇＧに対する抗体（Ｆｃγ断片特異的，Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ，ペンシルベニア州ウェストグローブ，＃１０９−００５−０９８，１００μ１／ウェル）でコーティングし、４℃で一晩インキュベートした。ＥＬＩＳＡプレートを洗浄バッファー（ＰＢＳ，０．０５％  トゥイーン２０）で３回洗浄した後、２００μＬ／ウェルのブロッキングバッファー（Ｄ−ＰＢＳ，１％  ＢＳＡ，１ｍＭ  ＣａＣｌ２，０．０５％  トゥイーン２０）を用いて２５℃で１時間ブロックした。プレートを３回洗浄し、１００μ１／ウェルのＤＬＬ４抗体（０．０００１〜１００ｎＭ，ブロッキングバッファーで１０倍連続希釈）と２５℃で１時間インキュベートした後、再び３回洗浄した。捕捉したＤＬＬ４  Ａｂを含有するプレートをビオチン標識したヒトＤＬＬ４細胞外ドメイン（ブロッキングバッファー中１０ｎＭ，１００μＬ／ウェル）と２５℃で１時間インキュベートし、３回洗浄し、ＨＲＰをコンジュゲートしたストレプトアビジン（ＫＰＬ，＃４７４−３０００Ｃ）とインキュベーし、３回洗浄し、ＨＲＰをコンジュゲートしたストレプトアビジン（ＫＰＬ，＃４７４−３０００，メリーランド州ゲーサーズバーグ，ブロッキングバッファーで１：１０，０００希釈，１００μＬ／ウェル）と２５℃で１時間インキュベートした。最終洗浄後、プレートを１００μＬ／ウェルのＥＬＩＳＡ基質（１−Ｓｔｅｐ  Ｕｌｔｒａ  ＴＭＢ−ＥＬＩＳＡ，Ｐｉｅｒｃｅ，＃３４０２８０，イリノイ州ロックフォード）とインキュベートした。２分後、反応を１００μＬ／ウェルの２Ｎ  Ｈ２ＳＯ４を用いて２５℃で停止し、吸光度を４５０ｎＭで読み取った。ＤＬＬ４捕捉ＥＬＩＳＡデータを表１４に示す。
【０６１２】
実施例１．１．１．Ｇ：捕捉ＥＬＩＳＡ−ＥｒｂＢ３またはＥＧＦＲ
９６ウェルＥＬＩＳＡプレートを３３ｎＭの濃度でヤギ抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃ（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ，ペンシルベニア州）でコーティングし、４℃で一晩インキュベートした。プレートを０．０５％  トゥイーン２０を含有するＰＢＳで３回洗浄し、２００μＬ／ウェルの１％  ＢＳＡ／ＰＢＳを用いて室温で１時間ブロックした。各ウェルに５０μＬの５ｎＭ  ＤＶＤ−Ｉｇまたは抗体を添加し、室温で１時間インキュベートした。プレートを洗浄した後、５０μｌ／ウェルの各種濃度のビオチニル化ＥｒｂＢ３またはビオチニル化ＥＧＦＲと室温で１時間インキュベートした。プレートを再び洗浄した後、５０μＬ／ウェルのＨＲＰをコンジュゲートしたストレプトアビジン（ＫＰＬ，＃４７４−３０００，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，メリーランド州）と室温で１時間インキュベートした。ウェルを３回洗浄し、１００μｌ／ウェルのＵＬＴＲＡ−ＴＭＢ  ＥＬＩＳＡ（Ｐｉｅｒｃｅ，イリノイ州ロックフォード）を添加した。発色後、１Ｎ  ＨＣｌを用いて反応を停止させ、４５０ｎＭで吸光度を測定した。
【０６１３】
表１４は、ＶＥＧＦ、ＲＯＮ、ＥＧＦＲ、ＩＧＦＲ、ＩＧＦ−１，２、ＨＥＲ−２、ＤＬＬ４及びＥｒｂＢ３における親抗体及びＤＶＤ−Ｉｇ構築物のＥＣ５０（ｎＭ）で表示した親和性を含む。
【０６１４】
【表１４】
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【０６１５】
すべてのＤＶＤ−Ｉｇ構築物の可溶性抗原に対する結合は維持され、親抗体に匹敵した。すべてのＮ末端可変ドメイン並びにＤＶＤ０２２、ＤＶＤ０３８、ＤＶＤ０４３、ＤＶＤ０４８、ＤＶＤ５０及びＤＶＤ２６０のＣ末端可変ドメインは親抗体に類似の高親和性で結合した。
【０６１６】
【表１５】
2013507969.tif 000045
【０６１７】
すべてのＤＶＤ−Ｉｇ構築物のＤＬＬ４抗原に対する結合は維持され、親抗体に匹敵した。すべてのＮ末端可変ドメイン並びにＤＶＤ４７０、ＤＶＤ４７６、ＤＶＤ４８２、ＤＶＤ４７４及びＤＶＤ４８６のＣ末端可変ドメインは親抗体に類似の高親和性で結合した。
【０６１８】
【表１６】
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【０６１９】
すべてのＤＶＤ−Ｉｇ構築物のＶＥＧＦ抗原に対する結合は維持され、親抗体に匹敵した。すべてのＮ末端可変ドメインは、親抗体並びにＤＶＤ４７０、ＤＶＤ４７６、ＤＶＤ４８２、ＤＶＤ４７４及びＤＶＤ４８６のＣ末端可変ドメインに類似の高親和性で結合した。
【０６２０】
実施例１．１．１．Ｈ：親ＥｒｂＢ３抗体、ＥＧＦＲ抗体及びＤＶＤ−Ｉｇ構築物によるインビトロでのリガンド非依存性ＥｒｂＢ３及びＥＧＦＲリン酸化の抑制
Ａ４３１細胞を９６ウェルプレートにおいて４０，０００個の細胞／ウェルで平板培養し、３７℃、５％  ＣＯ２で１８〜２４時間インキュベートした。インキュベートした後、細胞を１×Ｄ−ＰＢＳで２回洗浄し、無血清培地中で一晩欠乏させた。翌日、細胞を６０μΜのモノクローナル抗体またはＤＶＤ−Ｉｇを含有する無血清培地（５０μｌ）と３７℃で４時間インキュベートした。抗体をインキュベートした後、細胞を氷冷Ｄ−ＰＢＳで２回洗浄し、１０μｌのＨＡＬＴ（登録商標）ホスファターゼ阻害剤カクテル（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、イリノイ州ロックフォード）、１個のＣｏｍｐｌｅｔｅ（登録商標）ＥＤＴＡ非含有プロテアーゼ阻害剤錠（１錠／１０ｍｌ，Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ，独国マンハイム）及びＰＭＳＦを含有する細胞抽出バッファー（Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，カリフォルニア州カールズバッド）（１１０μｌ）中で収集した。細胞ライゼートを氷上で断続的に渦状に攪拌しながら３０分間インキュベートし、遠心（１０分間，１４，０００ｒｐｍ，４℃）により予め清澄化し、ＥＬＩＳＡ分析のために処理した。Ｈｕｍａｎ  Ｐｈｏｓｐｈｏ−ＥｒｂＢ３検出キット（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，＃ＤＹＣ１７６９，ミネソタ州ミネアポリス）を製造業者のプロトコルに従って用いることによりリン光体−ＥｒｂＢ３を検出した。リン光体−ＥＧＦＲは、Ｈｕｍａｎ  Ｐｈｏｓｐｈｏ−ＥＧＦＲ  ＤｕｏＳｅｔキット（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，＃ＤＹＣ１０９５，ミネソタ州ミネアポリス）を製造業者のプロトコルに従って用いて検出した。
【０６２１】
【表１７】
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【０６２２】
実施例１．１．１．Ｉ：ＥｒｂＢ３またはＥＧＦＲモノクローナル抗体またはＤＶＤ−Ｉｇのインビトロでの増殖抑制効果
９６ウェルプレートにおいてＡ４３１細胞にＤ−ＰＢＳ−ＢＳＡ（ダルベッコリン酸緩衝食塩液＋０．１％  ＢＳＡ）で希釈したＥｒｂＢ３、ＥＧＦＲモノクローナル抗体またはＤＶＤ−Ｉｇを１８０ｕＬ中２．４及び２１．６ｎＭの最終濃度で添加した。プレートを加湿した５％  ＣＯ２雰囲気中３７℃で３日間インキュベートした。ＡＴＰｌｉｔｅキット（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ，マサチューセッツ州ウォルサム）を製造業者の使用説明書に従って使用してＡＴＰレベルを評価することにより細胞生存／増殖を間接的に調べた。抗体処理のないウェルを０％抑制の対照として使用し、細胞なしのウェルは１００％抑制を示すとみなされた。
【０６２３】
【表１８】
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【０６２４】
実施例１．１．１．Ｊ：ＢＩＡＣＯＲＥテクノロジーを用いる親和性測定
【０６２５】
【表１９】
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【０６２６】
ＢＩＡＣＯＲＥ方法
ＢＩＡＣＯＲＥアッセイ（Ｂｉａｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．，ニュージャージー州ピスカタウェイ）はオン速度定数及びオフ速度定数のカイネティック測定で抗体またはＤＶＤ−Ｉｇの親和性を調べる。抗体またはＤＶＤ−Ｉｇの標的抗原（例えば、精製組換え標的抗原）に対する結合を２５℃でランニングＨＢＳ−ＥＰ（１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ［ｐＨ７．４］，１５０ｍＭ  ＮａＣｌ，３ｍＭ  ＥＤＴＡ及び０．００５％  界面活性剤Ｐ２０）を用い、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）１０００または３０００計器（Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）ＡＢ，スウェーデン国ウプサラ）での表面プラズモン共鳴に基づく測定により調べた。すべての化学物質はＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）ＡＢ（スウェーデン国ウプサラ）またはテキスト中に記載されている別のソースから入手する。例えば、１０ｍＭ  酢酸ナトリウム（ｐＨ４．５）で希釈したヤギ抗マウスＩｇＧ、（Ｆｃγ）、断片特異的ポリクローナル抗体（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｃ．，イリノイ州ロックフォード）（約５０００ＲＵ）を２５μｇ／ｍｌで標準アミンカップリングキットを製造業者の使用説明書及び手順に従って用いてＣＭ５研究グレードのバイオセンサーチップ上に直接固定化する。バイオセンサー上の未反応部分をエタノールアミンでブロックする。フローセル２及び４中の変性カルボキシメチルデキストラン表面を反応表面として使用する。フローセル１及び３中のヤギ抗マウスＩｇＧを含まない未変性カルボキシメチルデキストランを参照表面として使用する。カイネティック分析のために、１：１ラングミュア結合モデルから誘導した速度式をＢｉａｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ４．０．１ソフトウェアを用いて８個すべての注入の会合及び解離相に同時に（グローバルフィット分析により）フィットさせる。ヤギ抗マウスＩｇＧ特異的反応表面を捕捉するために精製抗体またはＤＶＤ−ＩｇをＨＥＰＥＳ緩衝食塩液で希釈する。リガンド（２５μｇ／ｍｌ）として捕捉しようとする抗体またはＤＶＤ−Ｉｇを５μＬ／分の流速で反応マトリックスに注入する。会合及び解離速度定数ｋｏｎ（Ｍ−１ｓ−１）及びｋｏｆｆ（ｓ−１）を２５μＬ／分の連続流速で測定する。速度定数は、１０〜２００ｎＭの範囲の異なる抗原濃度でカイネティック結合を測定することにより誘導される。次いで、抗体またはＤＶＤ−Ｉｇと標的抗原との間の反応の平行解離定数（Ｍ）を以下の式；ＫＤ＝ｋｏｆｆ／ｋｏｎによりカイネティック速度定数から計算する。結合は時間の関数として記録し、カイネティック速度定数を計算する。このアッセイでは、１０６Ｍ−１ｓ−１くらい速いオン速度及び１０−６ｓ−１くらい遅いオフ速度を測定し得る。
【０６２７】
【表２０】
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Ｂｉａｃｏｒｅテクノロジーにより特徴づけられるすべてのＤＶＤ−Ｉｇ構築物の結合は維持され、親抗体の結合に匹敵した。すべてのＮ末端可変ドメイン並びにＤＶＤ−Ｉｇ構築物のＤＶＤ０２２、ＤＶＤ０１６、ＤＶＤ０４２、ＤＶＤ０４４、ＤＶＤ０４３、ＤＶＤ０３８、ＤＶＤ０４９、ＤＶＤ２６０、ＤＶＤ２９９及びＤＶＤ３０５のＣ末端可変ドメインは親抗体に類似の高親和性で結合した。
【０６２８】
【表２１】
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Ｂｉａｃｏｒｅテクノロジーにより特徴づけられる６個のＤＶＤ−Ｉｇ構築物の結合は親抗体の結合に匹敵するかまたはそれ以上であった。Ｎ末端可変ドメインでのすべてのＨＥＲ−２ドメインＩＶは親抗体よりも１０〜４０倍高い親和性で結合し、ＤＶＤ−Ｉｇ構築物のＣ末端可変ドメインでのすべてのＨＥＲ−２ドメインＩＶは親抗体に匹敵する親和性を示す。
【０６２９】
【表２２】
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Ｂｉａｃｏｒｅテクノロジーにより特徴づけられるＶＥＧＦ／ＤＬＬ４  ＤＶＤ−Ｉｇ構築物のＤＬＬ４に対する結合は親抗体の結合に匹敵した。すべてのＮまたはＣ末端可変ドメインは親抗体に匹敵する親和性でＤＬＬ４に結合した。
【０６３０】
【表２３】
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Ｂｉａｃｏｒｅテクノロジーにより特徴づけられるＶＥＧＦ／ＤＬＬ４  ＤＶＤ−Ｉｇ構築物のＶＥＧＦに対する結合は親抗体の結合に匹敵した。すべてのＮまたはＣ末端可変ドメインは親抗体に匹敵する親和性でＶＥＧＦに結合した。
【０６３１】
実施例１．１．２：親抗体及びＤＶＤ−Ｉｇの機能活性を測定するために使用されるアッセイ
実施例１．１．２．Ａ：サイトカインバイオアッセイ
抗サイトカインまたは抗増殖因子親抗体、或いは抗サイトカインまたは抗増殖因子配列を含有するＤＶＤ−Ｉｇの標的サイトカインまたは増殖因子生理活性を抑制または中和する能力を抗体またはＤＶＤ−Ｉｇの抑制ポテンシャルを測定することにより分析する。例えば、抗ＩＬ−４抗体のＩＬ−４媒介ＩｇＥ産生を抑制する能力を使用し得る。例えば、ヒト未変性Ｂ細胞をそれぞれ末梢血の軟膜からＦｉｃｏｌｌプラーク密度遠心した後、ヒトｓｌｇＤ  ＦＩＴＣ標識ヤギＦ（ａｂ）２抗体に対して特異的なＭＡＣＳビーズ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ，独国ベルギッシュグラッドバッハ）、次いで抗ＦＩＴＣ  ＭＡＣＳビーズを用いて磁気分離することにより単離する。磁気的に選別した未変性Ｂ細胞をＸＶ１５で３×１０５個の細胞／ｍｌに調節し、５％  ＣＯ２の存在下３７℃で１０日間培養中ＰＢＳ充填ウェルで包囲したプレートの中心に６×６アレーで９６ウェルプレートに１００μＬ／ウェルで沈着させた。３ウェルずつの非誘導及び誘導対照、並びに４倍濃度予備希釈物（５０μ１）に添加した７μｇ／ｍｌから出発して、２９ｎｇ／ｍｌの最終濃度まで３倍希釈で流した抗体滴定の５つ一組のリピートから構成される試験しようとする抗体あたり１つのプレートの各々を作成する。ＩｇＥ産生を誘導するために、２０ｎｇ／ｍｌのｒｈＩＬ−４及び０．５ｇ／ｍｌの最終濃度の抗ＣＤ４０モノクローナル抗体（Ｎｏｖａｒｔｉｓ，スイス国バーゼル）を５０μＬずつ各ウェルに添加し、ＩｇＥ濃度を培養期間の終わりに標準サンドイッチＥＬＩＳＡ方法により測定する。
【０６３２】
実施例１．１．２．Ｂ：サイトカイン放出アッセイ
親抗体またはＤＶＤ−Ｉｇのサイトカイン放出を引き起こす能力を分析する。３人の健康人ドナーから末梢血を静脈穿刺によりヘパリン処理したバキュティナチューブに採取する。全血をＲＰＭＩ−１６４０培地で１：５希釈し、２４ウェル組織培養プレートに０．５ｍＬ／ウェルで入れる。抗サイトカイン抗体（例えば、抗ＩＬ−４）をＲＰＭＩ−１６４０で希釈し、２００、１００、５０、１０及び１μｇ／ｍＬの最終濃度を与えるようにプートに０．５ｍＬ／ウェルで入れる。培養プレート中の全血の最終希釈は１：１０である。サイトカイン放出のためのポジティブ対照として、ＬＰＳ及びＰＨＡを２μｇ／ｍＬ及び５μｇ／ｍＬの最終濃度で別々のウェルに添加する。ポリクローナルヒトＩｇＧをネガティブ対照抗体として使用する。実験は２回実施する。プレートを３７℃、５％  ＣＯ２でインキュベートする。２４時間後、ウェルの内容物を試験管に移し、１２００ｒｐｍで５分間回転させる。サイトカインアッセイのために細胞非含有上清を集め、凍結させる。細胞をプレート上に放置し、管中の細胞を溶解溶液（０．５ｍＬ）で溶解させ、−２０℃に置き、融解させる。（容量を細胞非含有上清サンプルと同じレベルとするために）培地（０．５ｍＬ）を添加し、サイトカインアッセイのために細胞調製物を集め、凍結させる。細胞非含有上清及び細胞ライゼートのサイトカインレベルを例えばＩＬ−８、ＩＬ−６、ＩＬ−１β、ＩＬ−１ＲＡまたはＴＮＦ−αのレベルについてアッセイする。
【０６３３】
実施例１．１．２．Ｃ：サイトカイン交差反応性研究
抗サイトカイン親抗体または当該サイトカインに対するＤＶＤ−Ｉｇの他のサイトカインと交差反応する能力を分析する。親抗体またはＤＶＤ−ＩｇをＢｉａｃｏｒｅバイオセンサーマトリックス上に固定する。まずマトリッス上のカルボキシ基を１００ｍＭ  Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）及び４００ｍＭ  Ｎ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）で活性化することにより抗ヒトＦｃ  ｍＡｂを遊離アミン基を介してデキストランマトリックスに共有結合させる。酢酸ナトリウム（ｐＨ４．５）で希釈した２５μｇ／ｍＬの濃度の各抗体またはＤＶＤ−Ｉｇ調製物（約５０μＬ）を活性化バイオセンサーに注入し、タンパク質上の遊離アミンを活性化カルボキシ基に直接結合させる。典型的には、５０００共鳴単位（ＲＵ）を固定化する。１Ｍ  エタノールアミンを注入することにより未反応マトリックスＥＤＣエステルを失活させる。参照基準として、ヒトＩｇＧｌ／Ｋを標準アミンカップリングキットを用いて固定化することにより第２フローセルを作成する。ＣＭバイオセンサーチップを用いてＳＰＲ測定を実施する。バイオセンサー表面上の分析しようとするすべての抗原を０．０１％  Ｐ２０を含有するＨＢＳ−ＥＰランニングバッファーで希釈する。
【０６３４】
サイトカイン結合特異性を試験するために、過剰の当該サイトカイン（１００μΜ，例えば可溶性組換えヒト）を抗サイトカイン親抗体またはＤＶＤ−Ｉｇ固定化バイオセンサー表面に注入する（接触時間５分）。当該サイトカインの注入前及びその直後に、ＨＢＳ−ＥＰバッファーのみを各フローセルに流す。基準とサイトカイン注入が完了してから約３０秒に相当する時点の間のシグナルの正味の差を最終結合値を表すために求める。再び、共鳴を共鳴単位で測定する。結合事象が観察された場合には、次のサンプルを注入する前にバイオセンサーマトリックスを１０ｍＭ  ＨＣｌを用いて再生し、さもなければランニングバッファーをマトリックスに注入する。非特異的結合バックグラウンドを記録するために、ヒトサイトカイン（例えば、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−１９、ＩＬ−２０、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３、ＩＬ−２７、ＴＮＦ−α、ＴＮＦ−β及びＩＦＮ−γ）を同時に固定化マウスＩｇＧ１／Ｋ参照表面上に固定する。参照及び反応表面を作成することにより、Ｂｉａｃｏｒｅは自動的に反応表面データから参照表面データを差し引いて屈折率変化及び注入ノイズの大部分を排除する。こうして、抗サイトカイン抗体またはＤＶＤ−Ｉｇ結合反応に起因する真の結合共鳴を確認することができる。
【０６３５】
当該サイトカインを固定化抗サイトカイン抗体に注入すると、有意な結合が観察される。１０ｍＭ  ＨＣｌ再生すると共有結合していないタンパク質のすべてが完全に除去される。センサーグラムの検査は、可溶性サイトカインに対する固定化抗サイトカイン抗体またはＤＶＤ−Ｉｇ結合は強く、ロバストであることを示している。当該サイトカインでの予想される結果を確認した後、残りの組換えヒトサイトカインのパネルを各抗体またはＤＶＤ−Ｉについて別々に試験する。注入サイクル毎に抗サイトカイン抗体またはＤＶＤ−Ｉｇ結合または非結合サイトカインの量を記録する。３つの独立した実験の結果を使用して、各抗体またはＤＶＤ−Ｉｇの特異性プロフィールを調べる。予想されるように当該サイトカインに対して結合するが、他のサイトカインに対して結合しない抗体またはＤＶＤ−Ｉｇを選択する。
【０６３６】
実施例１．１．２．Ｄ：組織交差反応性
組織交差反応性研究を３段階で行い、下記するように第１段階には３２個の組織の低温切片を含め、第２段階には最高３８個の組織を含め、第３段階には３人の非関連生体からの追加組織を含める。典型的には、研究を２つの用量レベルで行う。
【０６３７】
第１段階：ヒト組織（一人のヒトドナーから剖検または生検時に得た３２個の組織（典型的には、副腎、胃腸管、前立腺、膀胱、心臓、骨格筋、血球、腎臓、皮膚、骨髄、肝臓、脊髄、乳房、肺、脾臓、小脳、リンパ節、精巣、大脳皮質、卵巣、胸腺、結腸、膵臓、甲状腺、内皮、副甲状腺、尿管、眼、下垂体、子宮、卵管及び胎盤）の低温切片（約５μｍ）を対物レンズ上に固定し、乾燥させる。組織切片のペルオキシダーゼ染色をアビジン−ビオチン系を用いて実施する。
【０６３８】
第２段階：ヒト組織（３人の関連のない成人から剖検または生検時に得た（副腎、血液、血管、骨髄、小脳、大脳、頸部、食道、眼、心臓、腎臓、大腸、肝臓、肺、リンパ節、乳腺、卵巣、卵管、膵臓、副甲状腺、末梢神経、下垂体、胎盤、前立腺、唾液腺、皮膚、小腸、脊髄、脾臓、胃、横紋筋、精巣、胸腺、甲状腺、扁桃、尿管、膀胱及び子宮を含めた３８個の組織）の低温切片（約５μｍ）を対物レンズ上に固定し、乾燥させる。組織切片のペルオキシダーゼ染色をアビジン−ビオチン系を用いて実施する。
【０６３９】
第３段階：カニクイザル組織（３匹の関連のない成体サルから剖検または生検時に得た３８個の組織（副腎、血液、血管、骨髄、小脳、大脳、頸部、食道、眼、心臓、腎臓、大腸、肝臓、肺、リンパ節、乳腺、卵巣、卵管、膵臓、副甲状腺、末梢神経、下垂体、胎盤、前立腺、唾液腺、皮膚、小腸、脊髄、脾臓、胃、横紋筋、精巣、胸腺、甲状腺、扁桃、尿管、膀胱及び子宮を含む））の低温切片（約５μｍ）を対物レンズ上に固定し、乾燥させる。組織切片のペルオキシダーゼ染色をアビジン−ビオチン系を用いて実施する。
【０６４０】
抗体またはＤＶＤ−Ｉｇを第２ビオチニル化抗ヒトＩｇＧとインキュベートし、免疫複合体を得る。免疫複合体を２及び１０ｇ／ｍＬの抗体またはＤＶＤ−Ｉｇの最終濃度で対物レンズ上の組織切片に添加した後、組織切片をアビジン−ビオチン−ペルオキシダーゼキットと３０分間反応させる。その後、組織染色のためにペルオキシダーゼ反応の基質であるＤＡＢ（３，３’−ジアミノベンジジン）を４分間適用する。抗原−セファロースビーズを組織切片として使用する。標的抗原及びヒト血清ブロッキング研究は追加の対照として役立つ。２及び１０ｇ／ｍＬの抗体またはＤＶＤ−Ｉｇの最終濃度の免疫複合体を標的抗原（１００μｇ／ｍｌの最終濃度）またはヒト血清（１０％の最終濃度）と３０分間プレインキュベートした後、対物レンズ上の組織切片に添加し、次いで組織切片をアビジン−ビオチン−ペルオキシダーゼキットと３０分間反応させる。その後、組織染色のためにペルオキシダーゼ反応の基質であるＤＡＢ（３，３’−ジアミノベンジジン）を４分間適用する。
【０６４１】
当該標的抗原の公知発現に基づいて特異的染色が予想される（例えば、抗原発現と一致する）または予期せぬ反応性であるかを判断する。特異的と判断された染色について強度及び頻度を採点する。第２段階（ヒト組織）及び第３段階（カニクイザル組織）間の組織染色が類似しているか異なっているかを判断する。
【０６４２】
実施例１．１．２．Ｅ：ＶＥＧＦ親抗体及びＤＶＤ−Ｉｇ構築物によるＨＵＶＥＣ増殖／生存の抑制
アッセイのために平板培養する前に、正常ヒト臍帯血管内皮細胞またはＨＵＶＥＣ（継代２〜６）をＥＧＭ−２  ＳｉｎｇｌｅＱｕｏｔｓ（Ｌｏｎｚａ−Ｃｌｏｎｅｔｉｃｓ，メリーランド州ウォーカーズビル，＃ＣＣ−４１７６）を補充したＥＢＭ−２（Ｌｏｎｚａ−Ｃｌｏｎｅｔｉｃｓ、メリーランド州ウォーカーズビル）において維持した。ＨＵＶＥＣ細胞をコラーゲンをコーティングした黒色９６ウェルプレートにおいて増殖因子を存在させずに０．１％  ＦＢＳを加えたＥＭＢ−２（１００μｌ）中１０，０００個の細胞／ウェルで平板培養した。翌日、培地を増殖因子を存在させずに０．１％  ＦＢＳと交換した。翌日、培地を（増殖因子も血清も含まない）ＥＭＢ−２（１００μｌ）と交換し、４時間インキュベートした後、ＶＥＧＦ及び抗体／ＤＶＤ−Ｉｇを添加した。（６７ｎＭ、６．７ｎＭ及び０．６７ｎＭの最終濃度の）抗ＶＥＧＦモノクローナル抗体またはＤＶＤ−Ｉｇを０．１％  ＢＳＡを含むＥＭＢ−２で希釈し、５０μ１で２５℃で組換えヒトＶＥＧＦ１６５（５０ｎｇ／ｍｌ）と１時間プレインキュベートした。次いで、細胞に抗体／ＤＶＤ−Ｉｇ及びＶＥＧＦ混合物（５０μ１）を添加し、プレートを加湿した５％  ＣＯ２雰囲気中３７℃で７２時間インキュベートした。ＡＴＰｌｉｔｅキット（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ，マサチューセッツ州ウォルサム）を製造業者の使用説明書に従って使用してＡＴＰレベルを評価することにより細胞生存／増殖を間接的に測定した。表２２はＨＵＶＥＣ増殖／生存の抑制を示すデータを提示する。
【０６４３】
【表２４】
2013507969.tif 000062
ＡＢ０１４由来のＶＤを含有するＤＶＤ−ＩｇはすべてＶＥＧＦに起因するＨＵＶＥＣ細胞増殖を抑制した。ＤＶＤ０４４、ＤＶＤ０４８、ＤＶＤ０４０、ＤＶＤ０５０は６７ｎＭ濃度のＤＶＤ−ＩｇでＨＵＶＥＣ細胞増殖を＞９０％抑制した。
【０６４４】
【表２５】
2013507969.tif 000063
ＡＢ０１４、ＡＢ０７１及びＡＢ０７１由来のＶＤを含有するＤＶＤ−ＩｇはすべてＶＥＧＦに起因するＨＵＶＥＣ細胞増殖を抑制した。ＤＶＤ４７０、ＤＶＤ４７６、ＤＶＤ４８２、ＤＶＤ４７４、４８６、４８５及び４７１は親ｍＡｂに匹敵するＩＣ５０でＨＵＶＥＣ細胞増殖を抑制した。
【０６４５】
実施例１．１．２．Ｆ：ＩＧＦ１，２モノクローナル抗体またはＤＶＤ−Ｉｇのインビトロでの腫瘍細胞増殖抑制効果
Ｄ−ＰＢＳ−ＢＳＡ（０．１％  ＢＳＡを含むダルベッコリン酸緩衝食塩液）（２０μｌ）で希釈したＩＧＦ１，２モノクローナル抗体またはＤＶＤ−Ｉｇを２００μｌ中０．０１μｇ／ｍＬ〜１００μｇ／ｍＬの最終濃度でヒト腫瘍細胞に添加した。プレートを加湿した５％  ＣＯ２雰囲気中で３７℃で３日間インキュベートした。各ウェル中の生きている細胞の数をＭＴＳ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ，ウイスコンシン州マディソン）を製造業者の使用説明書に従って使用して定量して、腫瘍増殖抑制の％を調べた。抗体処理のないウェルを０％抑制の対照として使用し、細胞なしのウェルは１００％抑制を示すと見なされた。
【０６４６】
【表２６】
2013507969.tif 000064
ＡＢ０３３、ＡＢ００４、ＡＢ０１１またはＡＢ０１０由来のＶＤをＮ末端またはＣ末端位に含有するＤＶＤ−ＩｇＡはすべてＡ４３１細胞増殖アッセイにおいて抑制を示した。
【０６４７】
実施例１．１．２．Ｇ：ＥＧＦＲモノクローナル抗体またはＤＶＤ−Ｉｇのインビトロでの増殖抑制効果
Ｄ−ＰＢＳ−ＢＳＡ（０．１％  ＢＳＡを含むダルベッコリン酸緩衝食塩液）（２０μｌ）で希釈したＥＧＦＲモノクローナル抗体またはＤＶＤ−Ｉｇを１８０ｕＬ中０．０１μｇ／ｍＬ〜１００μｇ／ｍＬの最終濃度でヒト腫瘍細胞に添加した。プレートを加湿した５％  ＣＯ２雰囲気中３７℃で３日間インキュベートした。各ウェル中の生きている細胞の数をＭＴＳ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ，ウイスコンシン州マディソン）を製造業者の使用説明書に従って定量して、腫瘍増殖抑制の％を調べた。抗体処理のないウェルを０％抑制の対照として使用し、細胞なしのウェルは１００％抑制を示すと見なされた。
【０６４８】
【表２７】
2013507969.tif 000065
ＡＢ０３３、ＡＢ００４、ＡＢ０１１、ＡＢ０１０、ＡＢ０１４由来のＶＤをＮ末端またはＣ末端位に含有するＤＶＤ−ＩｇはＡ４３１細胞増殖アッセイにおいて抑制を示した。
【０６４９】
【表２８】
2013507969.tif 000066
ＡＢ０３３、ＡＢ００４、ＡＢ０１１、ＡＢ０１０、ＡＢ０１４由来のＶＤをＮ末端またはＣ末端位に含有するＤＶＤ−ＩｇはＧＥＯ細胞増殖アッセイにおいて抑制を示した。
【０６５０】
実施例１．１．２．Ｈ：ＨＥＲ２親抗体またはＤＶＤ−Ｉｇ構築物のインビトロでの腫瘍細胞増殖抑制効果
Ｄ−ＰＢＳ−ＢＳＡ（０．１％  ＢＳＡを含むダルベッコリン酸緩衝食塩液）（２０μｌ）で希釈したＨＥＲ２モノクローナル抗体またはＤＶＤ−Ｉｇを０．０１μｇ／ｍＬ〜１００μｇ／ｍＬ（１８０μｌ）の最終濃度でＨＥＲ２発現ヒト腫瘍細胞（ＢＴ４７４）に添加した。プレートを加湿した５％  ＣＯ２雰囲気中３７℃で３日間インキュベートした。各ウェル中の生きている細胞の数をＭＴＳ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ，ウイスコンシン州マディソン）を製造業者の使用説明書に従って使用して定量して、腫瘍増殖抑制の％を調べた。抗体処理のないウェルを０％抑制の対照として使用し、細胞なしのウェルは１００％抑制を示すと見なされた。
【０６５１】
【表２９】
2013507969.tif 000067
ＡＢ００４由来のＶＤをＮ末端またはＣ末端位に含有するＤＶＤ−ＩｇはＢＴ４７４細胞増殖アッセイにおいて抑制を示した。
【０６５２】
実施例１．１．２．１：Ｅａｈｙ．９２６細胞におけるＳｖｅｇｆｒｌ（Ｓｆｌｔｌ）のＤＬＬ４親抗体及びＤＶＤ−Ｉｇ構築物のによる組換えＤＬＬ４依存性増加の抑制
９６ウェル組織培養プレートをＤ−ＰＢＳ（Ｇｉｂｃｏ，＃１４１９０，ニューヨーク州グランドアイランド）中５μｇ／ｍｌのヒトＤＬＬ４細胞外ドメイン（１００μＬ／ウェル）でコーティングし、４℃で一晩インキュベートした。プレートをＤ−ＰＢＳで１回洗浄し、抗体またはＤＶＤ−Ｉｇの存在または非存在下で４０００個のＥＡ．ｈｙ９２６細胞／ウェルを接種した。細胞増殖をその後４日間ＣｙＱＵＡＮＴ細胞増殖アッセイキット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，＃Ｃ３５００７，オレゴン州ユージーン）を用いて調べた。ならし培地中のｓＶＥＧＦＲ１発現をＥＬＩＳＡキットにより製造業者（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，＃ＤＶＲ１００Ｂ，ミネソタ州ミネアポリス）の推奨に従って検出した。細胞増殖の差を説明するためにｓＶＥＧＦＲ１のレベルをＣｙＱＵＡＮＴアッセイにより測定したＲＦＵに正規化した。
【０６５３】
【表３０】
2013507969.tif 000068
ＡＢ０１５由来のＶＤをＮ末端またはＣ末端位に含有するＤＶＤ−ＩｇはＥａｈｙ．９２６細胞由来のＤＬＬ４により誘導されるｓＦＬＴ放出の用量依存的抑制を示した。
【０６５４】
【表３１】
2013507969.tif 000069
ＡＢ０１５由来のＶＤをＮ末端またはＣ末端位に含有するＤＶＤ−ＩｇはＥａｈｙ．９２６細胞からのＤＬＬ４により誘導されるｓＦＬＴ１放出の用量依存的抑制を示した。
【０６５５】
実施例１．１．２．Ｊ：親またはＤＶＤ−Ｉｇ抗体のインビトロでの殺腫瘍効果
腫瘍細胞上の標的抗原に結合する親抗体またはＤＶＤ−Ｉを殺腫瘍活性について分析し得る。簡単に説明すると、親抗体またはＤＶＤ−ＩｇをＤ−ＰＢＳ−ＢＳＡ（０．１％  ＢＳＡを含むダルベッコリン酸緩衝食塩液）で希釈し、２００μＬ中０．０１μｇ／ｍＬ〜１００μｇ／ｍＬの最終濃度でヒト腫瘍細胞に添加する。プレートを加湿した５％  ＣＯ２雰囲気中３７℃で３日間インキュベートする。各ウェル中の生きている細胞の数をＭＴＳ試薬を製造業者（Ｐｒｏｍｅｇａ，ウイスコンシン州マディソン）の説明書に従って使用して定量して、腫瘍増殖抑制の％を調べる。抗体処理のないウェルを０％抑制の対照として使用し、細胞なしのウェルは１００％抑制を示すと見なされた。
【０６５６】
アポトーシスを評価するために、カスパーゼ−３活性化を以下のプロトコルに従って調べた。９６ウェルプレートにおいて抗体処理細胞を１×溶解バッファー（１．６７ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ（ｐＨ７．４），７ｍＭ  ＫＣｌ，０．８３ｍＭ  ＭｇＣｌ２，０．１１ｍＭ  ＥＤＴＡ，０．１１ｍＭ  ＥＧＴＡ，０．５７％  ＣＨＡＰＳ，１ｍＭ  ＤＴＴ，１×プロテアーゼ阻害剤カクテル錠；ＥＤＴＡ非含有；Ｒｏｃｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，ニュージャージー州ナットリー）（１２０μＬ）を用いて室温で振とうさせながら２０分間溶解させる。細胞溶解後、カスパーゼ−３反応バッファー（４８ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ（ｐＨ７．５），２５２ｍＭ  スクロース，０．１％  ＣＨＡＰＳ，４ｍＭ  ＤＴＴ及び２０μΜ  Ａｃ−ＤＥＶＤ−ＡＭＣ基質；Ｂｉｏｍｏｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｓ，Ｉｎｃ．，ペンシルベニア州プリマス・ミーティング）（８０μＬ）を添加し、プレートを３７℃で２時間インキュベートする。プレートを１４２０  ＶＩＣＴＯＲ  Ｍｕｌｔｉｌａｂｅｌ  Ｃｏｕｎｔｅｒ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，イリノイ州ダウナーズグローヴ）で励起＝３６０／４０、発光＝４６０／４０の設定を用いて読み取る。イソタイプ抗体対照処理細胞に対する抗体処理細胞からの蛍光単位の増加がアポトーシスを示す。
【０６５７】
実施例１．１．２．Ｋ：ＨＧＦ親抗体及びＤＶＤ−Ｉｇ構築物によるＵ８７−ＭＧ腫瘍細胞増殖の抑制
Ｕ８７−ＭＧヒトグリオーマ腫瘍細胞を９６ウェル皿において５％ウシ胎児血清を補充したＲＰＭＩ培地中１００μＬ中２，０００個の細胞／ウェルで平板培養し、３７℃、５％ＣＯ２で一晩インキュベートした。翌日、細胞を抗体またはＤＶＤ−Ｉｇの連続希釈物（０．０１３ｎＭ〜１３３ｎＭの用量範囲）で処理し、加湿した５％  ＣＯ２雰囲気中３７℃で５日間インキュベートした。ＡＴＰｌｉｔｅキット（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ、マサチューセッツ州ウォルサム）を製造業者の使用説明書に従って使用してＡＴＰレベルを評価することにより細胞生存／増殖を間接的に調べた。
【０６５８】
【表３２】
2013507969.tif 000070
ＡＢ０１２由来のＶＤをＣ末端位またはＮ末端位に含有するＤＶＤ−ＩｇはＵ８７−ＭＧ腫瘍細胞増殖を抑制した。
【０６５９】
実施例１．１．２．Ｌ：インビトロでのＭＳＰ１とのＲＯＮ相互作用のＲＯＮ親抗体及びＤＶＤ−Ｉｇ構築物による抑制
９６ウェルプレートを抗ＭＳＰα鎖抗体（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，＃ＭＡＢ３５２，ミネソタ州ミネアポリス，２μｇ／ｍＬ）（５０μｌ／ウェル）でコーティングし、プレートを４℃で一晩インキュベートした。プレートを洗浄バッファー（０．０５％  トゥイーン２０を含有するＰＢＳ）で３回洗浄した後、ブロッキングバッファー（２％  ＢＳＡを含有するＰＢＳ）（１００ｕｌ／ウェル）を用いて２５℃で１時間ブロックした。次いで、プレートを３回洗浄し、組換えヒトＭＳＰ１（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，＃３５２−ＭＳ，ミネソタ州ミネアポリス）の１０ｎＭ溶液（５０μｌ／ウェル）と２５℃で１時間インキュベートした。プレートをインキュベートしている間、試験しようとする抗体の連続１０倍希釈物（０ｎＭ〜１０００ｎＭの用量範囲）を１０ｎＭ  組換えＨｉｓ−ＲＯＮ部分ＥＣＤ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，＃１９４７−ＭＳ，ミネソタ州ミネアポリス）と２５℃で１時間プレインキュベートした。組換えヒトＭＳＰ１とインキュベートしたプレートを３回洗浄した後、抗体／Ｈｉｓ−ＲＯＮ複合体（５０μｌ／ウェル）を３回添加した。２５℃で１時間インキュベートした後、プレートを洗浄し、ＴＭＢ基質（Ｐｉｅｒｃｅ，＃３４０２８，イリノイ州ロックフォード）（５０μｌ／ウェル）を添加し、２５℃で５分間インキュベートした。５分後、反応を２Ｎ  Ｈ２ＳＯ４（５０μｌ／ウェル）を用いて停止した。吸光度を４５０ｎＭ（Ｓｐｅｃｔｒａ  Ｍａｘ  Ｐｌｕｓプレートリーダー，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ，カリフォルニフ州サニーベール）で読み取った。ＥＣ５０をＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ４．０３を用いて計算した。
【０６６０】
実施例１．１．２．Ｍ：ＶＥＧＦ親抗体及びＤＶＤ−Ｉｇ構築物はＶＥＧＦ１６５のＶＥＧＦＲ１との相互作用を防止する
ＥＬＩＳＡプレート（Ｎｕｎｃ，ＭａｘｉＳｏｒｐ，ニューヨーク州ロチェスター）を組換えＶＥＧＦＲ１細胞外ドメイン−ＦＣ融合タンパク質（５μｇ／ｍｌ，Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，ミネソタ州ミネアポリス）を含有するＰＢＳ（１００μ１）と４℃で一晩インキュベートした。プレートを洗浄バッファー（０．０５％  トゥイーン２０を含有するＰＢＳ）で３回洗浄し、ブロッキングバッファー（１％  ＢＳＡを含有するＰＢＳ）を用いて２５℃で１時間ブロックした。０．１％  ＢＳＡを含有するＰＢＳ中の各抗体／ＤＶＤ−Ｉｇの連続希釈物を２ｎＭ  ビオチニル化ＶＥＧＦ（５０μ１）と２５℃で１時間インキュベートした。次いで、抗体／ＤＶＤ−Ｉｇ−ビオチニル化ＶＥＧＦ混合物（１００μｌ）をＶＥＧＦＲ１−Ｆｃコーティングしたウェルに添加し、２５℃で１０分間インキュベートした。ウェルを３回洗浄した後、ストレプトアビジン−ＨＲＰ（ＫＰＬ，＃４７４−３０００、メリーランド州ゲーサーズバーグ）（１００μｌ）と２５℃で１時間インキュベートした。ウェルを３回洗浄し、ＵＬＴＲＡ−ＴＭＢ  ＥＬＩＳＡ（Ｐｉｅｒｃｅ，イリノイ州ロックフォード）（１００μｌ／ウェル）を添加した。発色後、反応をＩＮ  ＨＣｌで停止し、吸光度を４５０ｎＭで測定した。結果を下表３１に提示する。
【０６６１】
【表３３】
2013507969.tif 000071
ＡＢ０１４及びＡＢ０７１由来のＶＤをＮ末端またはＣ末端位に含有するＤＶＤ−Ｉｇはすべてリガンド（ＶＥＧＦ）のその受容体（ＶＥＧＦＲ１）への結合の抑制を示した。ＤＶＤ−ＩｇのＮ末端ドメイン及び親抗体はリガンド−受容体相互作用をブロックした。
【０６６２】
実施例１．１．２．Ｎ：インビトロでのＮｏｔｃｈ−１とのＤＬＬ４相互作用のＤＬＬ４親抗体及びＤＶＤ−Ｉｇ構築物による抑制
９６ウェルＮｕｎｃ−Ｉｍｍｕｎｏプレート（Ｎｕｎｃ，＃４３９４５４，ニューヨーク州ロチェスター）を１６ｎＭ  ヒトＮｏｔｃｈ−１（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，＃３６４７−ＴＫ，ミネソタ州ミネアポリス，Ｄ−ＰＢＳ中１００μＬ／ウェル）でコーティングし、４℃で一晩インキュベートした。次いで、プレートを洗浄バッファー（ＰＢＳ、０．０５％  トゥイーン２０）で１回洗浄し、ブロッキングバッファー（Ｄ−ＰＢＳ，１％  ＢＳＡ，１ｍＭ  ＣａＣｌ２，０．０５％  トゥイーン２０）（２００μＬ／ウェル）を用いて２５℃で１時間ブロックした。ブロッキングの間、ビオチン標識したヒトＤＬＬ４細胞外ドメイン（１４ｎＭ）（３００μＬ）を抗体またはＤＶＤ−Ｉｇ（３．４ｐＭ〜６６ｎＭ，ブロッキングバッファーで３倍連続希釈）と２５℃で１時間混合した。ブロッキング後、アッセイプレートを洗浄し、ＤＬＬ４抗体またはＤＶＤ−Ｉｇ混合物（１００μＬ／ウェル）と２５℃で１時間インキュベートした。プレートを再び洗浄し、ＨＲＰをコンジュゲートしたストレプトアビジン（ＫＰＬ，＃４７４−３０００，メリーランド州ゲーサーズバーグ，ブロッキングバッファーで１：１０，０００希釈）（１００μＬ／ウェル）を２５℃で１時間添加した。最終洗浄後、プレートを基質（１−Ｓｔｅｐ  Ｕｌｔｒａ  ＴＭＢ−ＥＬＩＳＡ，Ｐｉｅｒｃｅ，＃３４０２８０，イリノイ州ロックフォード）（１００μＬ／ウェル）を用いて展開し、２５℃で１０〜２０分間インキュベートした後、２Ｎ  Ｈ２ＳＯ４（１００μＬ／ウェル）を用いて反応を停止し、吸光度を４５０ｎＭで読み取った。結果を下表３２に提示する。
【０６６３】
【表３４】
2013507969.tif 000072
ＡＢ０１５由来のＶＤをＮ末端またはＣ末端位に含有するＤＶＤ−Ｉｇはすべてその受容体（Ｎｏｔｃｈｌ）に対するリガンド（ＤＬＬ４）の抑制を示した。ＤＶＤ−ＩｇのＮ末端ドメイン及び親抗体はリガンド−受容体相互作用をブロックした。
【０６６４】
【表３５】
2013507969.tif 000073
【０６６５】
実施例１．１．２．Ｏ：ｃ−ＭｅｔとのＨＧＦ相互作用のＨＧＦ親抗体及びＤＶＤ−Ｉｇ構築物による抑制
ＥＬＩＳＡプレート（Ｎｕｎｃ，ＭａｘｉＳｏｒｐ）を組換えヒトＨＧＦ（ＰＢＳ中２μｇ／ｍｌのＨＧＦ，Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）（１００μＬ／ウェル）で４℃で一晩コーティングした。各抗体／ＤＶＤ−Ｉｇの連続希釈物及び２ｎＭ  可溶性ｃ−Ｍｅｔ  Ｆｃ融合（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）（５０μ１）を共インキュベートし、ＨＧＦコーティングしたウェルに添加した。ｃ−Ｍｅｔ結合をビオチニル化抗ｃ−Ｍｅｔ（ＢＡＦ３５８，Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）及びストレプトアビジン−ＨＲＰ（ＫＰＬ）（１００μｌ）で検出した。ウェルをＰＢＳＴ（０．０５％  トゥイーン２０を含有するＰＢＳ）で３回洗浄し、ＵＬＴＲＡ−ＴＭＢ  ＥＬＩＳＡ（Ｐｉｅｒｃｅ）（１００μｌ／ウェル）を添加した。発色後、反応を１Ｎ  ＨＣｌで停止し、吸光度を４５０ｎＭで測定した。データを最大シグナル（対照抗体または抗体を添加せず）と比較した抑制％を計算することにより評価し、ＩＣ５ｏ値を計算した。
【０６６６】
下表は、上記したＲＯＮ、ＶＥＧＦ、ＤＬＬ４及びＨＧＦに対するリガンド−受容体結合競合ＥＬＩＳＡアッセイにおける親抗体及びＤＶＤ−Ｉｇ構築物のＩＣ５０（ｎＭ）で表示した親和性データを含む。
【０６６７】
【表３６】
2013507969.tif 000074
ＡＢ００５、ＡＢ０１５、ＡＢ０１５、ＡＢ０１２由来のＶＤをＮ末端またはＣ末端位に含有するＤＶＤ−Ｉｇはすべてその受容体に対するリガンドの抑制を示した。ＤＶＤ−ＩｇのＮ末端ドメイン及び親抗体はリガンド−受容体相互作用をブロックした。
【０６６８】
【表３７】
2013507969.tif 000075
ＡＢ０４７由来のＶＤをＮ末端またはＣ末端位に含有するＤＶＤ−Ｉｇはすべてその受容体（ＶＥＧＦＲ１）に対するリガンドの抑制を示した。ＤＶＤ−ＩｇのＮ末端ドメイン及び親抗体はリガンド−受容体相互作用をブロックした。
【０６６９】
実施例１．１．２．Ｐ：インビトロでのＩＧＦ誘導ＩＧＦＲリン酸化の親抗体またはＤＶＤ−Ｉｇ構築物による抑制
ヒト癌細胞を９６ウェルプレートにおいて無血清培地（ＤＭＥＭ＋０．１％  ＢＳＡ）（１８０μ１）中４０，０００個の細胞／ウェルで平板培養し、３７℃、５％  ＣＯ２で一晩インキュベートした。Ｃｏｓｔａｒ  ＥＩＡプレート（マサチューセッツ州ローウェル）をＩＧＦＲ捕捉Ａｂ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，カタログ番号ＭＡＢ３９１，ミネソタ州ミネアポリス，４μｇ／ｍｌの最終濃度）（１００μＬ／ウェル）でコーティングし、室温で振とうしながら一晩インキュベートした。翌日、ＩＧＦＲ抗体コーティングしたＥＬＩＳＡプレートをＰＢＳＴ（ＰＢＳ中０．０５％  トゥイーン２０，ｐＨ７．２〜７．４）で３回洗浄し、ブロッキング溶液（ＰＢＳ中１％  ＢＳＡ，０．０５％  ＮａＮ３，ｐＨ７．２〜７．４）（２００μ１）を添加して、ロッカーを用いて室温で２時間ブロックした。ヒト腫瘍細胞を抗体またはＤＶＤ−Ｉｇ及びＩＧＦリガンドと共インキュベートした。Ｄ−ＰＢＳ−ＢＳＡ（０．１％  ＢＳＡを含むダルベッコリン酸緩衝食塩液）で希釈したＩＧＦ１，２モノクローナル抗体またはＤＶＤ−Ｉｇをヒト癌細胞に０．０１μｇ／ｍＬ〜１００μｇ／ｍＬの最終濃度で添加した。増殖因子（ＩＧＦ１及びＩＧＦ２）を同時に１〜１００ｎｇ／ｍＬの濃度（２００μＬ）で細胞に添加し、細胞を加湿した５％ＣＯ２雰囲気中３７℃で１時間インキュベートした。細胞を冷細胞抽出バッファー（１０ｍＭ  トリス（ｐＨ７．４），１００ｍＭ  ＮａＣｌ，１ｍＭ  ＥＤＴＡ，１ｍＭ  ＥＧＴＡ，１ｍＭ  ＮａＦ，１ｍＭ  オルトバナジン酸ナトリウム，１％  トリトンＸ−１００，１０％  グリセロール，０．１％  ＳＤＳ及びプロテアーゼ阻害剤カクテル）（１２０μｌ／ウェル）中に溶解し、振とうしながら４℃で２０分間インキュベートした。細胞ライゼート（１００μｌ）をＥＬＩＳＡプレートに添加し、やさしく振とうしながら４℃で一晩インキュベートした。翌日、ＥＬＩＳＡプレートを洗浄し、ｐＴｙｒ−ＨＲＰ検出Ａｂ（ｐ−ＩＧＦ１Ｒ  ＥＬＩＳＡキット，Ｒ＆Ｄシステム，＃ＤＹＣ１７７０，ミネソタ州ミネアポリス）（１００μＬ／ウェル）を添加し、プレートを暗所２５℃で２時間インキュベートした。リン光体−ＩＧＦ１Ｒを調べるために、プレートを製造業者の使用説明書に従って展開した。結果を表３６及び３７に示す。
【０６７０】
【表３８】
2013507969.tif 000076
ＡＢ０１０由来のＶＤをＮ末端またはＣ末端位に含有するＤＶＤ−ＩｇはＩＧＦ１誘導ＩＧＦ１Ｒ受容体リン酸化の抑制を示した。ＤＶＤ−ＩｇのＮ末端位のＡＢ０１０のＶＤ及び親抗体ＡＢ０１０は受容体リン酸化をブロックした。
【０６７１】
【表３９】
2013507969.tif 000077
ＡＢ０１０由来のＶＤをＮ末端またはＣ末端位に含有するＤＶＤ−ＩｇはＩＧＦ２誘導ＩＧＦ１Ｒ受容体リン酸化の抑制を示した。ＤＶＤ−ＩｇのＮ末端位のＡＢ０１０のＶＤ及び親抗体ＡＢ０１０は受容体リン酸化をブロックした。
【０６７２】
実施例１．１．２．Ｑ：ＡｋｔのＨＧＦ媒介リン酸化のＨＧＦ親抗体及びＤＶＤ−Ｉｇ構築物による抑制
Ｈ１２９９非小細胞肺腫瘍細胞を９６ウェルプレートにおいて２０，０００個の細胞／ウェル（１００μｌの全容量）で平板培養し、５％  ＣＯ２、３７℃で１８時間血清欠乏させた。抗ＨＧＦモノクローナル抗体またはＤＶＤ−Ｉｇ（６７ｎＭ、６．７ｎＭ及び０．６７ｎＭの最終濃度）を０．１％  ＢＳＡを含有するダルベッコ最小必須培地で希釈し、５０μ中組換えヒトＨＧＦ（５０ｎｇ／ｍｌ）と２５℃で１時間プレインキュベートした。次いで、これらの抗体／ＤＶＤ−Ｉｇ及びＨＧＦ混合物（５０μ１）を細胞に添加し、プレートを加湿した５％  ＣＯ２雰囲気中３７℃で約１５分間インキュベートした。次いで、各ウェルに等容量の７．６％  ホルムアルデヒドを添加することにより細胞を固定し、プレートを２５℃で１５分間インキュベートした。固定後、細胞を０．１％  トリトンＸ−１００を含有するＰＢＳで５回洗浄した。次いで、細胞をＬＩ−ＣＯＲ  Ｏｄｙｓｓｅｙブロッキングバッファー（Ｌｉ−Ｃｏｒ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，ネブラスカ州リンカーン）（１５０μ１／ウェル）で処理し、適度に振とうしながら室温で９０分間インキュベートした。ブロッキングバッファーを除去し、細胞をブロッキングバッファー（Ｐｈｏｓｐｈｏ  Ｓｅｒ４７３−Ａｋｔの１：３００希釈物，Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，＃４０６０，マサチューセッツ州ボストン）で希釈した一次抗体と４℃で一晩インキュベートした。次いで、ウェルを０．１％  トゥイーン２０を含有するＰＢＳで５回洗浄した後、二次抗体（１×ＰＢＳ＋０．２％  トゥイーン２０）中抗家兎ＩＲＤｙｅ（商標）６８０ＣＷ  ＬＩ−ＣＯＲ（Ｌｉ−Ｃｏｒ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，ネブラスカ州リンカーン）の１：４００希釈物）と２５℃で１時間インキュベートした。細胞を０．１％  トゥイーン２０を含有するＰＢＳで５回洗浄し、Ｏｄｙｓｓｅｙ赤外イメージングシステムを用いて画像処理した。
【０６７３】
【表４０】
2013507969.tif 000078
ＡＢ０１２由来のＶＤをＮ末端またはＣ末端位に含有するＤＶＤ−ＩｇはＨＧＦ誘導Ａｋｔリン酸化の抑制を示した。ＤＶＤ−ＩｇのＮ末端位のＡＢ０１２のＶＤ及び親抗体ＡＢ０１２はＡｋｔリン酸化をブロックした。
【０６７４】
実施例１．１．２．Ｒ：ＶＥＧＦＲ２（ＫＤＲ）リン酸化のＶＥＧＦ親抗体及びＤＶＤ−Ｉｇ構築物による抑制
ヒトＶＥＧＦＲ２（ＫＤＲ）を発現するＮＩＨ３Ｔ３細胞を９６ウェルプレートにおいて１０％  ＦＢＳを補充したＤＭＥＭ（１００μｌ）中２０，０００個の細胞／ウェルで平板培養した。翌日、細胞をＤＭＥＭで２回洗浄し、ＦＢＳを含まないＤＭＥＭ中で３時間血清欠乏させた。ＤＭＥＭ＋０．１％  ＢＳＡで希釈した抗ＶＥＧＦ親抗体またはＤＶＤ−Ｉｇ（６７ｎＭ、６．７ｎＭ及び０．６７ｎＭの最終濃度）を組換えヒトＶＥＧＦ１６５（５０ｎｇ／ｍｌ）と２５℃で１時間プレインキュベートした。次いで、これらの抗体／ＤＶＤ−Ｉｇ及びＶＥＧＦ混合物を細胞に添加し、プレートを加湿した５％  ＣＯ２雰囲気中３７℃で１０分間インキュベートした。細胞を氷冷ＰＢＳで２回洗浄し、０．１％  ＮＰ４０を補充した細胞溶解バッファー（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ，マサチューセッツ州ボストン）（１００μｌ／ウェル）を添加することにより溶解した。２つのサンプルをプールし、１７０μ１を予め抗ＶＥＧＦＲ２抗体（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，ＡＦ３５７，ミネソタ州ミネアポリス）をコーティングしたＥＬＩＳＡプレートのウェルに添加し、やさしく振とうしながら２５℃で２時間インキュベートした。ウェルを洗浄バッファー（０．０５％  トゥイーン２０を含有するＰＢＳ）で５回洗浄し、ビオチニル化抗ホスホチロシン抗体（４Ｇ１０；Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，マサチューセッツ州ビレリカ）の１：２０００希釈物（５０μ１）と２５℃で１時間インキュベートした。ウェルを０．０５％  トゥイーン２０を含有するＰＢＳで５回洗浄した後、ストレプトアビジン−ＨＲＰ（ＫＰＬ，＃４７４−３０００，メリーランド州ゲーサーズバーグ）と２５℃で１時間インキュベートした。ウェルをストレプトアビジン−ＨＲＰ（ＫＰＬ，＃４７４−３０００，メリーランド州ゲーサーズバーグ）で３回洗浄した。ウェルを０．０５％  トゥイーン２０を含有するＰＢＳで３回洗浄し、ＵＬＴＲＡ−ＴＭＢ  ＥＬＩＳＡ（Ｐｉｅｒｃｅ，イリノイ州ロックフォード）（１００μｌ／ウェル）を添加した。発色後、反応を１Ｎ  ＨＣｌで停止し、吸光度を４５０ｎＭで測定した。結果を表３９に示す。
【０６７５】
【表４１】
2013507969.tif 000079
ＡＢ０１４由来のＶＤをＮ末端またはＣ末端位に含有するＤＶＤ−ＩｇはＶＥＧＦ誘導ＫＤＲリン酸化の良好な抑制を示した。ＤＶＤ−ＩｇのＮ末端位のＡＢ０１４のＶＤ及び親抗体ＡＢ０１４はＫＤＲリン酸化をブロックした。
【０６７６】
実施例１．１．２．Ｓ：インビトロでのＥＧＦ誘導ＥＧＦＲリン酸化のＥＧＦＲ親抗体またはＤＶＤ−Ｉｇ構築物による抑制
Ｄ−ＰＢＳ−ＢＳＡ（ダルベッコリン酸緩衝食塩液＋０．１％  ＢＳＡ）で希釈したＥＧＦＲモノクローナル抗体またはＤＶＤ−Ｉｇをヒト癌細胞に０．０１μｇ／ｍＬ〜１００μｇ／ｍＬ（１８０μＬ）の最終濃度で添加した。プレートを加湿した５％  ＣＯ２雰囲気中３７℃で１時間インキュベートした。１〜ｌ００ｎｇ／ｍＬの最終濃度の増殖因子（ＥＧＦ）（２０μＬ）を細胞に５〜１５分間添加して、受容体（ＥＧＦＲ）自己リン酸化を刺激した。抗体処理のないウェルを０％抑制の対照として使用し、増殖因子刺激なしのウェルは１００％抑制を示すと見なされた。細胞ライゼートは、細胞抽出バッファー（１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．４），１００ｍＭ  ＮａＣｌ，１ｍＭ  ＥＤＴＡ，１ｍＭ  ＥＧＴＡ，１ｍＭ  ＮａＦ，１ｍＭ  オルトバナジン酸ナトリウム，１％  トリトンＸ−１００，１０％  グリセロール，０．１％  ＳＤＳ及びプロテアーゼ阻害剤カクテル）とインキュベートすることにより作成した。これらの細胞ライゼート中のＰｈｏｓｐｈｏ−ＥＧＦＲをＲ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（＃ＤＹＣ１０９５，ミネソタ州ミネアポリス）製ｐ−ＥＧＦＲ  ＥＬＩＳＡキットを製造業者の使用説明書に従って用いて測定した。結果を表４０及び４１に示す。
【０６７７】
【表４２】
2013507969.tif 000080
ＡＢ０３３由来のＶＤをＮ末端またはＣ末端位に含有するＤＶＤ−ＩｇはＥＧＦ誘導ＥＧＦＲリン酸化の良好な抑制を示した。ＤＶＤ−Ｉｇ（ＤＶＤ０１５、ＤＶＤ０２１）のＮ末端位のＡＢ０３３のＶＤ及び親抗体ＡＢ０３３はリン酸化をブロックした。
【０６７８】
【表４３】
2013507969.tif 000081
ＡＢ０３３由来のＶＤをＮ末端またはＣ末端位に含有するＤＶＤ−ＩｇはＥＧＦ誘導ＥＧＦＲリン酸化の良好な抑制を示した。ＤＶＤ−Ｉｇ（ＤＶＤ０２３）のＮ末端位のＡＢ０３３のＶＤ及び親抗体ＡＢ０３３ＥＧＦＲはリン酸化をブロックした。
【０６７９】
実施例１．１．２．Ｔ：インビトロでのＭＳＰ１誘導ＥＲＫ１／２及びＡＫＴリン酸化の親ＲＯＮ抗体及びＤＶＤ−Ｉｇ構築物による抑制
１０％  ＦＢＳ／最小必須培地で増殖させたサブコンフルエントなＤＵ１４５結腸腫瘍細胞をトリプシン処理し、６ウェル組織培養プレート（０．２５×１０６個の細胞／２ｍｌの最終容量）に接種し、５％  ＣＯ２、３７℃で１８〜２４時間インキュベートした。インキュベートした後、細胞を１×Ｄ−ＰＢＳで２回洗浄し、無血清培地において一晩欠乏させた。翌日、細胞を１μΜのモノクローナル抗体またはＤＶＤ−Ｉｇを含有する無血清培地（９００μ１）において３７℃で１時間インキュベートした。抗体をインキュベートした後、細胞を１３ｎＭ  ＭＳＰ１で処理した（３７℃，３０分間）。細胞を氷冷したＤ−ＰＢＳで２回洗浄し、１００μｌのＨＡＬＴ（登録商標）ホスファターゼ阻害剤カクテル（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，イリノイ州ロックフォード）、１個のＣｏｍｐｌｅｔｅ（登録商標）ＥＤＴＡ非含有プロテアーゼ阻害剤錠（１錠／１０ｍｌ，Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ，ドイツ国マンハイム）及びＰＭＳＦを含有する細胞抽出バッファー（Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，カリフォルニア州カールズバッド）（１５０μ１）中に収集した。細胞ライゼートをときどき渦状に攪拌しながら氷上で３０分間インキュベーし、遠心（１０分間，１４，０００ｒｐｍ，４℃）により予め清澄化し、ウェスタンブロット分析のために処理した。全部で１５μｇの細胞ライゼートを４〜１２％  ＮｕＰａｇｅ  Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓゲル上で１×ＭＯＰＳランニングバッファー（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，カリフォルニア州カールズバッド）を用いるＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分割した。タンパク質をニトロセルロース膜（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，カリフォルニア州カールズバッド）に移し、ＴＢＳ−Ｔ（１×ＴＢＳ／０．１％  トゥイーン２０）中５％  脱脂乳を用いて室温で１時間ブロックした。ブロックした後、膜を家兎ポリクローナルホスホ−ｐ４４／４２  ＭＡＰＫ（Ｔｈｒ２０２／Ｔｙｒ２０４）抗体（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ，マサチューセッツ州ダンバース）または家兎モノクローナルホスホ−ＡＫＴ（Ｓｅｒ４７３）抗体（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ，マサチューセッツ州ダンバース）の１：１０００希釈物と４℃で一晩インキュベートした。ブロットを３回洗浄し（１×ＴＢＳ−Ｔ，１５分間）、抗家兎ＩｇＧ、ＨＲＰコンジュゲートした二次ヤギ抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ，ペンシルベニア州ウェストグローブ）の５％  脱脂乳／ＴＢＳ−Ｔ溶液中１：５０００希釈物と室温で１時間インキュベートした。ブロットを３回洗浄し（１×ＴＢＳ−Ｔ，１５分間）、ペルオキシダーゼをコンジュゲートした二次抗体をＳｕｐｅｒＳｉｇｎａｌ  Ｗｅｓｔ  Ｄｕｒａ  Ｌｕｍｉｎｏｌ／Ｅｎｈａｎｃｅｒ溶液（登録商標）（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，カリフォルニア州テメキュラ）と５分間インキュベートすることにより活性化し、化学発光をＬｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔイメージアナライザーＬＡＳ−３０００（ＦＵＪＩＦｉｌｍ，日本国東京）を用いて検出し、定量した。バンド密度をＭｕｌｔｉＧａｕｇｅソフトウェア（ＦＵＪＩＦｉｌｍ，日本国東京）を用いて測定し、バンド毎の全化学発光シグナルを定量した。全ＥＲＫ１／２及びＡＫＴレベルを測定するために、膜を１×Ｒｅｂｌｏｔ  Ｐｌｕｓ  Ｓｔｒｏｎｇ溶液（登録商標）（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，イリノイ州ロックフォード）を用いて１５分間ストリッピングし、家兎ポリクローナルｐ４４／４２  ＭＡＰＫ抗体（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ，マサチューセッツ州ダンバース）または家兎モノクローナルＡＫＴ抗体（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ，マサチューセッツ州ダンバース）の１：１０００希釈物を用いて再プローブし、ホスホ−抗体について上記したように処理した。Ｐｈ−ＥＲＫ及びｐｈ−Ａｋｔレベルをそれぞれ全ＥＲＫまたは全Ａｋｔに対して標準化した。
【０６８０】
【表４４】
2013507969.tif 000082
ＡＢ００５由来のＶＤをＮ末端位に含有するＤＶＤ−ＩｇはＭＳＰ１誘導ＥＲＫ１／２リン酸化の十分な抑制を示した。ＤＶＤ０２４及びＤＶＤ０３３の抑制プロフィールは親抗体ＡＢ００５の抑制プロフィールに類似していた。
【０６８１】
実施例１．１．２．Ｕ：ヒト癌皮下脇腹異種移植片の増殖に対するＤＶＤ−Ｉｇの有効性
Ａ−４３１ヒト上皮癌細胞を組織培養フラスコにおいて９９％  生存度、８５％  コンフルエンスまでインビトロで増殖させた。研究０日目に、１９〜２５ｇのＳＣＩＤ雌マウス（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒｓ  Ｌａｂｓ，マサチューセッツ州ウィルミントン）の右脇腹に１×１０６個のヒト腫瘍細胞（１：１マトリゲル）を皮下注射した。マウスを約２００〜３２０ｍｍ３の平均腫瘍容積を有するマウスの群にサイズ適合させた後、ヒトＩｇＧ対照またはＤＶＤ−Ｉｇの投与（ＩＰ，ＱＤ，３×／週）を開始した。腫瘍細胞注入から約１０日後から腫瘍を週２回測定した。
【０６８２】
ＥＧＦＲ＋ＩＧＦ１／２  ＤＶＤ−Ｉｇを投与された動物において対照ＩｇＧのみを投与された動物における腫瘍に比して腫瘍容積の減少が見られた。２つの異なるＥＧＦＲ＋ＩＧＦ１／２  ＤＶＤ−Ｉｇ構築物の場合、３週投与相の終了から４日後に測定して％ＴＧＩは６９及び６４であった。
【０６８３】
実施例１．１．２．Ｖ：フローサイトメトリーにより評価したモノクローナル抗体のヒト腫瘍細胞株の表面への結合
細胞表面当該抗原またはヒト腫瘍細胞株を過剰発現する安定な細胞株を組織培養フラスコから収集し、５％  ウシ胎児血清（ＰＢＳ／ＦＢＳ）を含有するリン酸緩衝食塩液（ＰＢＳ）中に再懸濁した。染色する前に、ヒト腫瘍細胞を氷上でヒトＩｇＧ（１００μｌ）とＰＢＳ／ＦＣＳ中５μｇ／ｍｌでインキュベートした。１〜５×１０５個の細胞を氷上でＰＢＳ／ＦＢＳ中抗体またはＤＶＤ−Ｉｇ（２μｇ／ｍＬ）と３０〜６０分間インキュベートした。細胞を２回洗浄し、Ｆ（ａｂ’）２ヤギ抗ヒトＩｇＧ、Ｆｃγ−フィコエリスリン（ＰＢＳ中１：２００希釈物）（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ、ペンシルベニア州ウェストグローブ，カタログ番号１０９−１１６−１７０）（１００μｌ）を添加した。氷上で３０分間インキュベートした後、細胞を２回洗浄し、ＰＢＳ／ＦＢＳ中に再懸濁した。蛍光をＢｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、カリフォルニア州サンホセ）を用いて測定した。
【０６８４】
表４３はＤＶＤ−Ｉｇ構築物についてのＦＡＣＳデータを示す。幾何平均はｎ個の蛍光シグナル（ａ１×ａ２×ａ３．．．ａｎ）の乗法産物のｎ根である。対数変換データを用いて、データ分布の重みづけを正規するために幾何平均を使用する。下表は親抗体及びＤＶＤ−Ｉｇ構築物のＦＡＣＳ幾何平均を含む。
【０６８５】
【表４５】
2013507969.tif 000083
2013507969.tif 000084
すべてのＤＶＤがその細胞表面標的への結合を示した。ＤＶＤのＮ末端ドメインは細胞表面上のその標的に親抗体と同等またはそれ以上に結合した。リンカー長さを調節することにより結合は回復または改善され得る。
【０６８６】
実施例１．１．２．Ｗ：フローサイトメトリーにより評価した親ＥＧＦＲ抗体及びＤＶＤ−Ｉｇ構築物のヒト腫瘍細胞株の表面への結合
細胞表面ＥＧＦＲまたはヒト腫瘍細胞株を過剰発現する安定な細胞株を組織培養フラスコから収集し、１％  ウシ胎児血清を含有するダルベッコリン酸緩衝食塩液（ＤＰＢＳ）（ＤＰＢＳ／ＦＣＳ）中に再懸濁した。１〜５×１０５個の細胞をＤＰＢＳ／ＦＣＳ中の抗体またはＤＶＤ−Ｉｇ（１０ｕｇ／ｍＬ）（１００μｌ）と氷上で３０〜６０分間インキュベートした。細胞を２回洗浄し、ヤギ抗ヒトＩｇＧ−フィコエリスリン（ＤＰＢＳ／ＢＳＡ中１：５０希釈物）（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，アラバマ州バーミンガム，カタログ番号２０４０−０９）（５０μ１）を添加した。氷上で３０〜４５分間インキュベートした後、細胞を２回洗浄し、ＤＰＢＳ／ＦＣＳ中１％  ホルムアルデヒド中に１２５ｕＬ／ウェルで再懸濁した。蛍光をＢｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  ＬＳＲＩＩ（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，カリフォルニア州サンホセ）を用いて測定した。
【０６８７】
【表４６】
2013507969.tif 000085
すべてのＤＶＤがその細胞表面標的に結合した。ＤＶＤのＮ末端ドメイン及び親抗体は細胞表面上のその標的に結合した。
【０６８８】
【表４７】
2013507969.tif 000086
すべてのＤＶＤがその細胞表面標的に結合した。ＤＶＤのＮ末端ドメイン及び親抗体は細胞表面上のその標的に結合した。
【０６８９】
【表４８】
2013507969.tif 000087
すべてのＤＶＤがその細胞表面標的（ＤＬＬ４）に結合した。ＤＶＤのＮ及びＣ末端ＤＬＬ４結合ドメイン及び親抗体は細胞表面上のその標的に結合した。
【０６９０】
実施例１．２：当該ヒト抗原に対する親モノクローナル抗体の作成
当該ヒト抗原に対して結合し且つ中和することができる親マウスｍＡｂ及びそのバリアントを以下のようにして得る。
【０６９１】
実施例１．２．Ａ：マウスの当該ヒト抗原での免疫化
１日目に、完全フロイントアジュバントまたはＩｍｍｕｎｏｅａｓｙアジュバント（Ｑｉａｇｅｎ，カリフォルニア州バレンシア）と混合した組換え精製ヒト抗原（例えば、ＩＧＦ１，２）（２０μｇ）を５匹の６〜８週齢Ｂａｌｂ／Ｃ、５匹のＣ５７Ｂ／６マウス及び５匹のＡＪマウスに皮下注射する。２４、３８及び４９日目に、不完全フロイントアジュバントまたはＩｍｍｕｎｏｅａｓｙアジュバントと混合した組換え精製ヒト抗原バリアント（２０μｇ）を同じマウスに皮下注射する。８４、１１２または１４４日目に、マウスに当該組換え精製ヒト抗原（１μｇ）を静脈注射する。
【０６９２】
実施例１．２．Ｂ：ハイブリドーマの作成
実施例１．２．Ａに記載した免疫化マウスから得た脾臓細胞をＫｏｈｌｅｒ，Ｇ．  ａｎｄ  Ｍｉｌｓｔｅｉｎ（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５に記載されている確立されている方法に従ってＳＰ２／Ｏ−Ａｇ−１４細胞と５：１の比で融合して、ハイブリドーマを作成する。融合産物を９６ウェルプレートにおいてアザセリン及びヒポキサンチンを含有する選択培地を用いて２．５×１０６個の脾臓細胞／ウェルの密度で平板培養する。融合から７〜１０日後、肉眼で見えるハイブリドーマコロニーが観察される。ハイブリドーマコロニーを含む各ウェルからの上清を（実施例１．１．１．Ａに記載されているように）当該抗原に対する抗体の存在についてＥＬＩＳＡにより試験する。次いで、抗原特異性活性を示す上清を（実施例１．１．２のアッセイにおいて記載した）活性、例えば実施例１．１．２．１に記載されているバイオアッセイにおいて当該抗原を中和する能力について試験する。
【０６９３】
実施例１．２．Ｃ：当該ヒト標的抗原に対する親モノクローナル抗体の同定及び特徴づけ
実施例１．２．Ｃ．１：親モノクローナル抗体中和活性の分析
ハイブリドーマ上清を、実施例１．２．Ａ及び１．２．Ｂに従って作成した当該抗原に結合し、当該抗原のバリアント（“抗原バリアント”）にも結合できる親抗体の存在についてアッセイする。次いで、両アッセイでポジティブの抗体を有する上清をその抗原中和能力について、例えば実施例１．１．２．１のサイトカインバイオアッセイで試験する。バイオアッセイで１０００ｐΜ未満、実施形態では１００ｐΜ未満のＩＣ５０値を有する抗体を産生するハイブリドーマをスケールアップし、限界希釈によりクローン化する。ハイブリドーマ細胞を１０％  低ＩｇＧウシ胎児血清（Ｈｙｃｌｏｎｅ，＃ＳＨ３０１５１，ユタ州ローガン）を含有する培地に広げる。Ｈａｒｌｏｗ，Ｅ．  ａｎｄ  Ｌａｎｅ，Ｄ．，１９８８，“Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ”に記載されているように、平均して２５０ｍＬの（クローン集団に由来する）各ハイブリドーマ上清を収集し、濃縮し、プロテインＡアフィニティークロマトグラフィーにより精製する。精製したｍＡｂがその標的抗原の活性を阻害する能力も例えば実施例１．１．２．１に記載されているサイトカインバイオアッセイを用いて調べる。
【０６９４】
実施例１．２．Ｃ．２：親モノクローナル抗体の当該カニクイザル抗原に対する交差反応性の分析
本明細書中に記載されている選択したｍＡｂが当該カニクイザル標的を認識するかどうかを調べるために、ＢＩＡＣＯＲＥ分析を組換えカニクイザル標的抗原を用いて本明細書（実施例１．１．１．Ｇ）中に記載されているように実施する。加えて、ｍＡｂの当該組換えカニクイザル抗原に対する中和能力もサイトカインバイオアッセイ（実施例１．１．２．１）で調べ得る。良好なカニクイザル交差反応性（実施形態では、ヒト抗原に対する反応性の５倍以内）を有するＭＡｂを更なる特徴づけのために選択する。
【０６９５】
実施例１．２．Ｄ：各マウス抗ヒトモノクローナル抗体の可変領域のアミノ酸配列の決定
ｃＤＮＡの単離、発現及び組換え抗ヒトマウスｍＡｂの特徴づけを以下のように実施する。各アミノ酸配列決定のために、約１×１０６個のハイブリドーマ細胞を遠心により単離し、トリゾール（Ｇｉｂｃｏ  ＢＲＬ／Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，カリフォルニア州カールズバッド）を製造業者の使用説明書に従って用いてプロセッシングして、全ＲＮＡを単離する。全ＲＮＡをＳｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ一本鎖合成（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，カリフォルニア州カールズバッド）を製造業者の使用説明書に従って使用して一本鎖ＤＮＡ合成にかける。オリゴ（ｄＴ）を使用して一本鎖合成を開始して、ポリ（Ａ）＋ＲＮＡについて選択する。次いで、一本鎖ｃＤＮＡ産物をマウス免疫グロブリン可変領域の増幅のために設計されたプライマー（Ｉｇ−Ｐｒｉｍｅｒ  Ｓｅｔｓ，Ｎｏｖａｇｅｎ，ウイスコンシン州マディソン）を用いてＰＣＲにより増幅させる。ＰＣＲ産物をアガロースゲルを用いて分離し、切り出し、精製した後、ＴＯＰＯクローニングキットを用いてｐＣＲ２．１−ＴＯＰＯベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，カリフォルニア州カールズバッド）にサブクローン化し、ＴＯＰ１０ケミカルコンピテント大腸菌（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，カリフォルニア州カールズバッド）に形質転換する。形質転換体に対してコロニーＰＣＲを実施して、インサートを含むコロニーを同定する。インサートを含むコロニーからＱＩＡｐｒｅｐ  Ｍｉｎｉｐｒｅｐキット（Ｑｉａｇｅｎ，カリフォルニア州バレンシア）を用いてプラスミドＤＮＡを単離する。プラスミド中のインサートの両鎖をＭ１３順方向プライマー及びＭ１３逆方向プライマー（Ｆｅｒｍｅｎｔａｓ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，メリーランド州ハノーバー）を用いて配列決定して、可変重鎖または可変軽鎖ＤＮＡ配列を決定する。ｍＡｂの可変重鎖及び可変軽鎖配列を同定する。実施形態では、次ステップ開発（ヒト化）のためのリードｍＡｂのパネルについての選択基準には次のものが含まれる：
・抗体は、ＣＨ２中の標準のものを除いて、Ｎ−連結グリコシル化部位（ＮＸＳ）を含んでいない
・抗体は、すべての抗体中の通常システインに加えて余分のシステインを含んでいない。
・抗体配列はＶＨ及びＶＬに対して最も近いヒト生殖細胞配列とアラインし、異常なアミノ酸について他の天然ヒト抗体で存在しているかをチェックすべきである。
・抗体の活性に悪影響を与えないならば、Ｎ末端グルタミン（Ｑ）をグルタミン酸（Ｅ）に変化させる。これにより、Ｑの環化のために不均一性が減る。
・効率的なシグナル配列開裂を質量分光法により確認する。これはＣＯＳ細胞または２９３細胞材料を用いてなし得る。
・タンパク質配列を活性を低下させる恐れがあるＡｓｎの脱アミド化のリスクについてチェックする。
・抗体は低い凝集レベルを有する。
・抗体は＞５〜１０ｍｇ／ｍｌ（研究フェーズで）；＞２５ｍｇ／ｍｌの可溶性を有する。
・抗体は動的光散乱（ＤＬＳ）により通常サイズ（５〜６ｎＭ）を有する。
・抗体は低い電荷不均一性を有する。
・抗体はサイトカイン放出を欠く（実施例１．１．２．Ｂを参照されたい）。
・抗体は意図するサイトカインに対して特異性を有する（実施例１．１．２．Ｃを参照されたい）。
・抗体は予期せぬ組織交差反応性を欠く（実施例１．１．２．Ｄを参照されたい）。
・抗体はヒト及びカニクイザル組織交差反応性の間で類似性を有する（実施例１．１．２．Ｄを参照されたい）。
【０６９６】
実施例１．２．２：組換えヒト化親抗体
実施例１．２．２．１：組換えキメラ抗ヒト親抗体の構築及び発現
マウス抗ヒト親ｍＡｂの重鎖定常領域をエンコードするＤＮＡを、細菌での相同組換えにより２ヒンジ領域アミノ酸変異を含むヒトＩｇＧ１定常領域をエンコードするｃＤＮＡ断片で置換する。これらの変異は２３４位（ＥＵナンバリング）でのロイシンのアラニンへの変化及び２３５位でのロイシンのアラニンへの変化である（Ｌｕｎｄら，１９９１，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７：２６５７）。これらの抗体の各々の軽鎖定常領域はヒトκ定常領域により置換されている。完全長キメラ抗体を、ｐＢＯＳ発現プラスミドに結合させたキメラ重鎖及び軽鎖ｃＤＮＡの同時トランスフェクションによりＣＯＳ細胞において一時的に発現させる（Ｍｉｚｕｓｈｉｍａ  ａｎｄ  Ｎａｇａｔａ，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９９０，Ｖｏ．１８，ｐ．５３２２）。組換えキメラ抗体を含む細胞上清をプロティンＡセファロースクロマトグラフィーにより精製し、結合した抗体を酸性バッファーを添加することにより溶離する。抗体を中和し、ＰＢＳに透析する。
【０６９７】
キメラｍＡｂをエンコードする重鎖ｃＤＮＡをそのキメラ軽鎖ｃＤＮＡ（いずれもｐＢＯＳベクターに結合されている）と共にＣＯＳ細胞に同時トランスフェクトする。組換えキメラ抗体を含む細胞上清をプロティンＡセファロースクロマトグラフィーにより精製し、結合した抗体を酸性バッファーを添加することにより溶離する。抗体を中和し、ＰＢＳに透析する。
【０６９８】
次いで、精製したキメラ抗ヒト親ｍＡｂを例えば実施例１．１．１．Ｇ及び１．１．２．Ｂに記載されているように（Ｂｉａｃｏｒｅによる）結合に対する能力及びＩｇＥのサイトカイン誘導産生を抑制するための機能的活性について試験する。親ハイブリドーマｍＡｂの活性を維持しているキメラｍＡｂを更なる開発のために選択する。
【０６９９】
実施例１．２．２．２：ヒト化抗ヒト親抗体の構築及び発現
実施例１．２．２．２．Ａ：ヒト抗体フレームワークの選択
各マウス可変重鎖及び可変軽鎖遺伝子配列を別々に４４個のヒト免疫グロブリン生殖細胞可変重鎖配列または４６個の生殖細胞可変軽鎖配列（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｉｇｂｌａｓｔ／ｒｅｔｒｉｅｖｅｉｇ．ｈｔｍｌ．のＮＣＢＩ  Ｉｇ  Ｂｌａｓｔウェブサイトから得る）に対してベクターＮＴＩソフトウェアを用いてアラインさせる。
【０７００】
ヒト化は、アミノ酸配列相同性、ＣＤＲクラスター分析、発現ヒト抗体中での使用頻度、及びヒト抗体の結晶構造に基づく利用可能な情報に基づいている。抗体結合に対する起こり得る影響、ＶＨ−ＶＬ対形成及び他の要因を考慮して、幾つかの例外はあるが、マウス及びヒトフレームワーク残基に違いがあるマウス残基をヒト残基に変異させる。追加のヒト化戦略は、マウス抗体可変領域の実際のアミノ酸配列に対して高い相同度、すなわち配列類似性を有するヒト生殖細胞抗体配列またはそのサブグループの分析に基づいて設計する。
【０７０１】
相同性モデリングは、抗体結合部位ＣＤＲの構造にとって重要であると予想されるマウス抗体配列に対して独自の残基を同定するために使用する。相同性モデリングは、タンパク質に対して概ねの三次元座標を作成する計算方法である。その更なる細分化のための初期座標のソース及びガイダンスは、三次元座標が公知であり、その配列が第１タンパク質の配列に関連している第２タンパク質、すなわち参照タンパク質である。２つのタンパク質の配列の間の関連性を使用して、参照タンパク質と座標が望ましいタンパク質、すなわち標的タンパク質間の対応性が得られる。参照及び標的タンパク質の主な配列を参照タンパク質から標的タンパク質に直接移動する２つのタンパク質の同一部分の座標とアラインさせる。例えば残基の変異、挿入または欠失に由来する２つのタンパク質のミスマッチ部分の座標を既に移動したモデル座標との適合性を保証するように改良した遺伝子構造テンプレート及びエネルギーから構築する。この計算タンパク質構造は更に改良またはモデリング研究で直接使用され得る。モデル構造の質は、参照及び標的タンパク質を関連させるコンテンョンの精度及び配列アラインメントを構築する正確さにより決定される。
【０７０２】
マウスｍＡｂの場合、適当な参照構造を同定するためにＢＬＡＳＴサーチング及び外観検査の組合せを使用する。参照及び標的アミノ酸配列間の２５％の配列同一性は、相同性モデリング実行を試みるために必要な最小であると見なされる。配列アラインメントは手動で構築され、モデル座標をプログラムＪａｃｋａｌ（Ｐｅｔｒｅｙ，Ｄ．ら（２００３）Ｐｒｏｔｅｉｎ，５３（Ｓｕｐｐ１．６）：４３０−４３５を参照されたい）を用いて作成する。
【０７０３】
選択した抗体のマウス及びヒトフレームワーク領域の主な配列は有意な同一性を共有している。異なる残基位置は、マウス抗体の観察された結合能力を保持するためにヒト化配列中にマウス残基を導入するための候補である。ヒト及びマウス配列間で異なるフレームワーク残基のリストを手動で構築する。表４７はこの研究のために選択したフレームワーク配列を示す。
【０７０４】
【表４９】
2013507969.tif 000088
所与のフレームワーク残基が抗体の結合特性に影響を与える可能性はＣＤＲ残基に対するその近接に依存する。従って、モデル構造を用いて、マウスとヒト配列間で異なる残基をＣＤＲ中の原子からの距離に従ってランク付けする。ＣＤＲ原子の４．５Åの範囲内の残基が最も重要であると同定され、ヒト化抗体中のマウス残基の保持（すなわち、復帰突然変異）のための候補であると推奨される。
【０７０５】
インシリコ構築されるヒト化抗体をオリゴタクレオチドを用いて構築する。可変領域ｃＤＮ毎に、各々６０〜８０ヌクレオチドの６オリゴヌクレンチドを各オリゴヌクレンチドの５’及び／または３’末端で２０ヌクレオチドだけ相互に重複するように設計する。アニーリング反応で、全６オリゴヌクレンチドを合わせ、煮沸し、ｄＮＴＰの存在下でアニーリングする。重複オリゴヌクレンチド間の約４０ｂｐ間隙を埋めるためにＤＮＡポリメラーゼＩ、大（クレノウ）断片（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ，＃Ｍ０２１０，マサチューセッツ州ビバリー）を添加する。ＰＣＲを修飾ｐＢＯＳベクター中の複数のクローニング部位に対して相補的な重複配列を含む２つの最外プライマーを用いて実施して、全可変領域遺伝子を増幅させる（Ｍｉｚｕｓｈｉｍａ，Ｓ．  ａｎｄ  Ｎａｇａｔａ，Ｓ．（１９９０）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，１８：１７）。各ｃＤＮＡアセンブリから誘導したＰＣＲ産物をアガロースゲルを用いて分離し、予想される可変領域ｃＤＮＡサイズに相当するバンドを切り出し、精製する。可変重鎖領域を、２ヒンジ領域アミノ酸突然変異を含むヒトＩｇＧ１定常領域をエンコードするｃＤＮＡ断片に細菌中での相同組換えによりインフレームで挿入する。これらの突然変異は、２３４位（ＥＵナンバリング）でのロイシンのアラニンへの変化及び２３５位でのロイシンのアラニンへの変化である（Ｌｕｎｄら（１９９１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７：２６５７）。可変軽鎖領域を相同組換えによりヒトκ定常領域とインフレームで挿入する。細菌コロニーを単離し、プラスミドＤＮＡを抽出する。ｃＤＮＡインサートの全体を配列決定する。各抗体に相当する正しいヒト化重鎖及び軽鎖をＣＯＳ細胞に同時トランスフェクトして、完全長ヒト化抗ヒト抗体を一時的に産生する。組換えキメラ抗体を含む細胞上清をプロティンＡセファロースクロマトグラフィーにより精製し、結合した抗体を酸性バッファーを用いて溶離させる。抗体を中和し、ＰＢＳに透析する。
【０７０６】
実施例１．２．２．３：ヒト化抗体の特徴づけ
精製ヒト化抗体の機能活性を抑制する能力を、例えば実施例１．１．２．Ａに記載されているサイトカインバイオアッセイを用いて調べる。ヒト化抗体の組換えヒト抗原に対する結合親和性を実施例１．１．１．Ｂに記載されている表面プラズモン共鳴（Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標））測定を用いて調べる。バイオアッセイからのＩＣ５０値及びヒト化抗体の親和性をランク付けする。親ハイブリドーマｍＡｂの活性を完全に維持するヒト化ｍＡｂを将来の開発のための候補として選択する。上２〜３個の最も有利なヒト化ｍＡｂを更に特徴づける。
【０７０７】
実施例１．２．２．３．Ａ：ヒト化抗体の薬物動態分析
薬物動態研究をＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット及びカニクイザルで実施する。雄及び雌のラット及びカニクイザルに４ｍｇ／ｋｇ  ｍＡｂの１回量で静脈内または皮下投与し、サンプルを抗原捕捉ＥＬＩＳＡを用いて分析し、薬物動態パラメーターを非コンパートメント分析により調べる。簡単に説明すると、ＥＬＩＳＡプレートをヤギ抗ビオチン抗体（５ｍｇ／ｍｌ，４℃，一晩）でコーティングし、Ｓｕｐｅｒｂｌｏｃｋ（Ｐｉｅｒｃｅ）でブロックし、ビオチニル化ヒト抗原と１０％  Ｓｕｐｅｒｂｌｏｃｋ  ＴＴＢＳ中５０ｎｇ／ｍｌで室温で２時間インキュベートする。血清サンプルを連続希釈し（ＴＴＢＳ中０．５％  血清，１０％  Ｓｕｐｅｒｂｌｏｃｋ）、プレート上で室温で３０分間インキュベートする。ＨＲＰ標識したヤギ抗ヒト抗体を用いて検出を実施し、濃度を４パラメーターロジスティクフィットを用いて標準曲線により調べる。薬物動態パラメーターの値は非コンパートメントモデルによりＷｉｎＮｏｎｌｉｎソフトウェア（Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，カリフォルニア州マウンテンビュー）を用いて調べる。良好な薬物動態プロフィール（低クリアランス及び優れたバイオアベイラビリティー５０〜１００％で、Ｔ１／２が８〜１３日またはそれより良好）を有するヒト化ｍＡｂを選択する。
【０７０８】
実施例１．２．２．３．Ｂ：ヒト化モノクローナル抗体の物理化学的及びインビトロでの安定性分析
（サイズ排除クロマトグラフィー）
抗体を水で２．５ｍｇ／ｍＬに希釈し、２０ｍＬをＴＳＫゲルＧ３０００  ＳＷＸＬカラム（Ｔｏｓｏｈ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，カタログ番号ｋ５５３９−０５ｋ）を用いてＳｈｉｍａｄｚｕ  ＨＰＬＣシステムで分析する。サンプルをカラムから２１１ｍＭ  硫酸ナトリウム、９２ｍＭ  リン酸ナトリウム（ｐＨ７．０）を０．３ｍＬ／分の流速で用いて溶離させる。ＨＰＬＣシステム運転条件は以下の通りである：
移動相：２１１ｍＭ  Ｎａ２ＳＯ４，９２ｍＭ  Ｎａ２ＨＰＯ４・７Ｈ２Ｏ（ｐＨ７．０）
勾配：無勾配
流速：０．３ｍＬ／分
検出波長：２８０ｎＭ
オートサンプラークーラー温度：４℃
カラムオーブン温度：周囲温度
保持時間：５０分間。
【０７０９】
表４８は、上記プロトコルにより測定したモノマー（予想される分子量を有する非凝集タンパク質）％として表示する親抗体及びＤＶＤ−Ｉｇ構築物の純度データを含む。
【０７１０】
【表５０】
2013507969.tif 000089
2013507969.tif 000090
2013507969.tif 000091
ＤＶＤ−Ｉｇは優れたＳＥＣプロフィールを示し、殆どのＤＶＤ−Ｉｇは＞９０％モノマーを示した。このＤＶＤ−Ｉｇプロフィールは親抗体で観察されたプロフィールに類似している。
【０７１１】
【表５１】
2013507969.tif 000092
ＤＶＤ−Ｉｇは優れたＳＥＣプロフィールを示し、殆どのＤＶＤ−Ｉｇは＞９０％モノマーを示した。このＤＶＤ−Ｉｇプロフィールは親抗体で観察されたプロフィールに類似している。
【０７１２】
（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）
抗体を還元及び非還元条件下でドデシル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）により分析する。アダリムマブ（ロットＡＦＰ０４Ｃ）を対照として使用する。還元条件の場合、サンプルを１００ｍＭ  ＤＴＴを含む２×トリスグリシンＳＤＳ−ＰＡＧＥサンプルバッファー（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，カタログ番号ＬＣ２６７６，ロット番号１３２３２０８）と１：１で混合し、６０℃で３０分間加熱する。非還元条件の場合には、サンプルをサンプルバッファーと１：１で混合し、１００℃で５分間加熱する。還元サンプル（１０ｍｇ／レーン）を１２％  プレキャストトリスグリシンゲル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ番号ＥＣ６００５ｂｏｘ，ロット番号６１１１０２１）に充填し、非還元サンプル（１０ｍｇ／レーン）を８％〜１６％プレキャストトリスグリシンゲル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，カタログ番号ＥＣ６０４５ｂｏｘ，ロット番号６１１１０２１）に充填する。ＳｅｅＢｌｕｅ  Ｐｌｕｓ  ２（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，カタログ番号ＬＣ５９２５，ロット番号１３５１５４２）を分子量マーカーとして使用する。ゲルをＸＣｅｌｌ  ＳｕｒｅＬｏｃｋミニセルゲルボックス（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，カタログ番号ＥＩ０００１）に流し、まずサンブルをゲル中に積み重ねるために７５の電圧を印加した後、染料の先端がゲルの底部に達するまで１２５の定電圧を印加することによりタンパク質を分離する。使用したランニングバッファーは、１０×トリスグリシンＳＤＳバッファー（ＡＢＣ，ＭＰＳ−７９−０８０１０６））から作成した１×トリスグリシンＳＤＳバッファーである。ゲルをコロイド状青色ステイン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，カタログ番号４６−７０１５，４６−７０１６）で一晩染色し、バックグラウンドが透明になるまでミリＱ水を用いて脱染する。次いで、染色したゲルをＥｐｓｏｎ発現スキャナー（モデル１６８０，Ｓ／Ｎ  ＤＡＳＸ００３６４１）を用いてスキャンする。
【０７１３】
（沈降速度分析）
抗体を３つの標準２セクターのカーボンエポンセンターピースの各々のサンプルチャンバに充填する。これらのセンターピースは１．２ｃｍの光路長を有し、サファイヤ窓をつけて構成する。参照バッファーに対してＰＢＳを使用し、各チャンバは１４０μＬを含んでいる。すべてのサンプルをＢｅｃｋｍａｎ  ＰｒｏｔｅｏｍｅＬａｂ  ＸＬ−Ｉ分析用超遠心機械（シリアル番号ＰＬ１０６Ｃ０１）において４ホール（ＡＮ−６０Ｔｉ）ローターを用いて同時に分析する。
【０７１４】
ラン条件をプログラムし、遠心コントロールをＰｒｏｔｅｏｍｅＬａｂ（ｖ５．６）を用いて実施する。サンプル及びローターを１時間熱的に平衡化した後、分析する（２０．０±０．１℃）。適切なセル充填の確認を３０００ｒｐｍで実施し、セル毎に１回スキャンを記録する。沈降速度条件は、
サンプルセル容量：４２０ｍＬ
参照セル容量：４２０ｍＬ
温度：２０℃
ローター速度：３５，０００ｒｐｍ
時間：８：００時間
ＵＶ波長：２８０ｎＭ
ラジアルステップサイズ：０．００３ｃｍ
データ収集：シグナル平均化なしに１ステップにつき１データポイント
全スキャン回数：１００
である。
【０７１５】
（完全抗体のＬＣ−ＭＳ分子量測定）
完全抗体の分子量をＬＣ−ＭＳにより分析する。各抗体を水で約１ｍｇ／ｍＬまで希釈する。脱塩するためにタンパク質マイクロトラップ（Ｍｉｃｈｒｏｍ  Ｂｉｏｒｅｓｏｕｒｃｅｓ，Ｉｎｃ．，カタログ番号００４／２５１０９／０３）を備えた１１００  ＨＰＬＣ（Ａｇｉｌｅｎｔ）システムを使用し、サンプル（５ｍｇ）をＡＰＩ  Ｑｓｔａｒ  ｐｕｌｓａｒ  ｉ質量分光計（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）に導入する。短い勾配を使用してサンプルを溶離させる。勾配は移動相Ａ（ＨＰＬＣ水中０．０８％  ＦＡ、０．０２％  ＴＦＡ）及び移動相Ｂ（アセトニトリル中０．０８％  ＦＡ及び０．０２％  ＴＦＡ）を用いて５０ｍＬ／分の流速で流す。質量分光計を４．５ｋｖｏｌｔｓスプレー電圧及び２０００〜３５００の質量電荷比のスキャン範囲で運転する。
【０７１６】
（抗体軽鎖及び重鎖のＬＣ−ＭＳ分子量測定）
抗体軽鎖（ＬＣ）、重鎖（ＨＣ）及び脱グリコシル化ＨＣの分子量測定をＬＣ−ＭＳにより分析する。抗体を水で１ｍｇ／ｍＬに希釈し、サンプルを１０ｍＭ  ＤＴＴの最終濃度で３７℃で３０分間でＬＣ及びＨＣに還元する。抗体を脱グリコシル化するために、抗体（１００ｍｇ）をＰＮＧアーゼＦ（２ｍＬ）、１０％  Ｎ−オクチルグルコシド（５ｍＬ）と１００ｍＬの全容量で３７℃で一晩インキュベートする。脱グリコシル化後、サンプルを１０ｍＭ  ＤＴＴの最終濃度で３７℃で３０分間還元する。脱塩するためにＣ４カラム（Ｖｙｄａｃ，カタログ番号２１４ＴＰ５１１５，Ｓ／Ｎ  ０６０２０６５３７２０４０６９）を備えたＡｇｉｌｅｎｔ  １１００  ＨＰＬＣシステムを使用し、サンプル（５ｍｇ）をＡＰＩ  Ｑｓｔａｒ  ｐｕｌｓａｒ  ｉ質量分光計（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）に導入する。短い勾配を使用してサンプルを溶離させる。勾配は移動相Ａ（ＨＰＬＣ水中０．０８％  ＦＡ及び０．０２％  ＴＦＡ）及び移動相Ｂ（アセトニトリル中０．０８％  ＦＡ及び０．０２％  ＴＦＡ）を用いて５０ｍＬ／分の流速で流す。質量分光計を４．５ｋｖｏｌｔｓスプレー電圧及び８００〜３５００の質量電荷比のスキャン範囲で運転する。
【０７１７】
（ペプチドマッピング）
抗体を７５ｍＭ  炭酸水素アンモニウム中６Ｍ  塩酸グアニジンの最終濃度で室温で１５分間変性させる。変性したサンプルを１０ｍＭ  ＤＴＴの最終濃度で３７℃で６０分間還元した後、暗所３７℃で５０ｍＭ  ヨード酢酸（ＩＡＡ）を用いて３０分間アルキル化する。アルキル化後、サンプルを１０ｍＭ  炭酸水素アンモニウム（４Ｌ）に対して４℃で一晩透析する。透析したサンプルを１０ｍＭ  炭酸水素アンモニウム（ｐＨ７．８）で１ｍｇ／ｍＬに希釈し、抗体（１００ｍｇ）をトリプシン（Ｐｒｏｍｅｇａ，カタログ番号Ｖ５１１１）またはＬｙｓ−Ｃ（Ｒｏｃｈｅ，カタログ番号１１  ０４７  ８２５  ００１）で１：２０（ｗ／ｗ）トリプシン／Ｌｙｓ−Ｃ：抗体比で用いて３７℃で４時間消化する。消化を１Ｎ  ＨＣｌ（１ｍＬ）でクエンチする。質量分光的検出を含むペプチドマッピングのために、消化物（４０ｍＬ）をＡｇｉｌｅｎｔ  １１００  ＨＰＬＣシステムでＣ１８カラム（Ｖｙｄａｃ，カタログ番号２１８ＴＰ５１，Ｓ／Ｎ  ＮＥ９６０６  １０．３．５）を用いる逆相高速液体クロマトグラフィー（ＲＰＨＰＬＣ）により分離する。ペプチド分離は移動相Ａ（ＨＰＬＣグレードの水中０．０２％  ＴＦＡ及び０．０８％  ＦＡ）及び移動相Ｂ（アセトニトリル中０．０２％  ＴＦＡ及び０．０８％  ＦＡ）を用い、５０ｍＬ／分の流速で勾配的に実施する。ＡＰＩ  ＱＳＴＡＲ  Ｐｕｌｓａｒ  ｉ質量分光計を４．５ｋｖｏｌｔｓスプレー電圧及び８００〜２５００の質量電荷比のスキャン範囲で陽イオンモードで運転する。
【０７１８】
（ジスルフィド結合マッピング）
抗体を変性させるために、抗体（１００ｍＬ）を１００ｍＭ  炭酸水素アンモニウム中８Ｍ  グアニジンＨＣｌ（３００ｍＬ）と混合する。７〜８の範囲にあることを確かめるためにｐＨをチェックし、サンプルを６Ｍ  グアニジンＨＣｌの最終濃度で室温で１５分間変性させる。変性させたサンプルの一部（１００ｍＬ）をミリＱ水で６００ｍＬまで希釈して、１Ｍの最終グアニジン−ＨＣｌ濃度とする。サンプル（２２０ｍｇ）をトリプシン（Ｐｒｏｍｅｇａ，カタログ番号Ｖ５１１１，ロット番号２２２６５９０１）またはＬｙｓ−Ｃ（Ｒｏｃｈｅ，カタログ番号１１０４７８２５００１，ロット番号１２８０８０００）で１：５０  トリプシンまたは１：５０  Ｌｙｓ−Ｃ：抗体（ｗ／ｗ）比で用いて（４．４ｍｇの酵素：２２０ｍｇのサンプル）３７℃で約１６時間消化する。サンプルに追加（５ｍｇ）のトリプシンまたはＬｙｓ−Ｃを添加し、消化を３７℃で更に２時間実施する。各サンプルにＴＦＡ（１ｍＬ）を添加することにより消化を停止する。消化したサンプルをＡｇｉｌｅｎｔ  ＨＰＬＣシステムでＣ１８カラム（Ｖｙｄａｃ，カタログ番号２１８ＴＰ５１  Ｓ／Ｎ  ＮＥ０２０６３０−４−１Ａ）を用いるＲＰＨＰＬＣにより分離する。分離は移動相Ａ（ＨＰＬＣグレードの水中０．０２％  ＴＦＡ及び０．０８％  ＦＡ）及び移動相Ｂ（アセトニトリル中０．０２％  ＴＦＡ及び０．０８％  ＦＡ）を５０ｍＬ／分の流速で用いて、ペプチドマッピングのために使用したのと同じ勾配を用いて実施する。ＨＰＬＣ運転条件はペプチドマッピングのために使用した条件と同一である。ＡＰＩ  ＱＳＴＡＲ  Ｐｕｌｓａｒ  ｉ質量分光計を４．５ｋｖｏｌｔｓスプレー電圧及び８００〜２５００の質量電荷比のスキャン範囲で陽イオンモードで運転する。ジスルフィド結合をペプチドの実測ＭＷをジスルフィド結合により結合したトリプシンまたはＬｙｓ−Ｃペプチドの予測ＭＷと照合させることにより帰属させる。
【０７１９】
（遊離スルフヒドリル測定）
抗体中の遊離システインを定量するために使用される方法は、特徴的な発色生成物５−チオ−（２−ニトロ安息香酸）（ＴＮＢ）を生ずるエルマン試薬５，５’−ジチオ−ビス（２−ニトロ安息香酸）（ＤＴＮＢ）とスルフヒドリル基（ＳＨ）の反応に基づいている。この反応は以下の式で示される。
ＤＴＮＢ＋ＲＳＨ（登録商標）ＲＳ−ＴＮＢ＋ＴＮＢ−＋Ｈ＋
【０７２０】
ＴＮＢ−の吸光度を４１２ｎＭでＣａｒｙ  ５０分光光度計を用いて測定する。吸光度曲線を遊離ＳＨ標準として２−メルカプトエタノール（ｂ−ＭＥ）の希釈物を用いてプロットし、タンパク質中の遊離スルフヒドリル基の濃度をサンプルの４１２ｎＭでの吸光度から求める。
【０７２１】
ｂ−ＭＥ標準ストックは、１４．２Ｍ  ｂ−ＭＥを０．１４２ｍＭの最終濃度までＨＰＬＣグレードの水で連続希釈することにより調製する。各濃度につき３つの標準物を調製する。抗体をアミコンウルトラ１０，０００  ＭＷＣＯ遠心フィルター（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，カタログ番号ＵＦＣ８０１０９６，ロット番号Ｌ３ＫＮ５２５１）を用いて１０ｍｇ／ｍＬに濃縮し、バッファーをアダリムマブのために使用した処方バッファー（５．５７ｍＭ  リン酸第一ナトリウム，８．６９ｍＭ  リン酸水素二ナトリウム，１０６．６９ｍＭ  ＮａＣｌ，１．０７ｍＭ  クエン酸ナトリウム，６．４５ｍＭ  クエン酸，６６．６８ｍＭ  マンニトール（ｐＨ５．２），０．１％（ｗ／ｖ）  トゥイーン）に交換する。サンプルを振とう機を用いて室温で２０分間混合する。次いで、各サンプル及び標準に１００ｍＭ  トリスバッファー（ｐＨ８．１）（１８０ｍＬ）を添加した後、１０ｍＭ  リン酸バッファー（ｐＨ８．１）中２ｍＭ  ＤＴＮＢ（３００ｍＬ）を添加する。十分混合した後、サンプル及び標準の吸光度をＣａｒｙ  ５０分光光度計を用いて４１２ｎＭで測定する。遊離ＳＨの量及びｂ−ＭＥ標準のＯＤ４１２ｎＭをプロットすることにより標準曲線を作成する。サンプルの遊離ＳＨ含量をブランクを差し引いた後この曲線に基づいて計算する。
【０７２２】
（弱カチオン交換クロマトグラフィー）
抗体を１０ｍＭ  リン酸ナトリウム（ｐＨ６．０）で１ｍｇ／ｍＬに希釈する。電荷不均一性をＷＣＸ−１０  ＰｒｏＰａｃ分析カラム（Ｄｉｏｎｅｘ，カタログ番号０５４９９３，Ｓ／Ｎ  ０２７２２）を備えたＳｈｉｍａｄｚｕ  ＨＰＬＣシステムを用いて分析する。サンプルを８０％  移動相Ａ（１０ｍＭ  リン酸ナトリウム，ｐＨ６．０）及び２０％  移動相Ｂ（１０ｍＭ  リン酸ナトリウム，５００ｍＭ  ＮａＣｌ，ｐＨ６．０）でカラムに充填し、１．０ｍＬ／分の流速で溶離させる。
【０７２３】
（オリゴ糖プロファイリング）
抗体をＰＮＧアーゼＦ処理した後放出されたオリゴ糖を２−アミノベンズアミド（２−ＡＢ）標識試薬を用いて誘導体化する。蛍光標識したオリゴ糖を順相高速液体クロマトグラフィー（ＮＰＨＰＬＣ）により分離し、各種形態のオリゴ糖を公知標準との保持時間比較に基づいて特徴づける。
【０７２４】
抗体をまずＰＮＧアーゼＦで消化して、重鎖のＦｃ部分からＮ連結オリゴ糖を切断する。抗体（２００ｍｇ）をＰＮＧアーゼＦ（２ｍＬ）及び１０％  Ｎ−オクチルグルコシド（３ｍＬ）と一緒に５００ｍＬ容量のエッペンドルフチューブに入れる。リン酸緩衝食塩液を添加して６０ｍＬの最終容量とする。サンプルを７００ｒｐｍに設定したエッペンドルフサーモミキサーにおいて３７℃で一晩インキュベートする。対照として、アドリムマブ（ロットＡＦＰ０４Ｃ）もＰＮＧａアーゼＦで消化する。
【０７２５】
ＰＮＧアーゼＦ処理後、サンプルを７５０ｒｐｍに設定したエッペンドルフサーモミキサーにおいて９５℃で５分間インキュベートしてタンパク質を沈殿させた後、サンプルをエッペンドルフ遠心機に１０，０００ｒｐｍで２分間置いて、沈殿したタンパク質を遠心沈殿させる。オリゴ糖を含む上清を５００ｍＬ容量のエッペンドルフチューブに移し、スピードバックにおいて６５℃で乾燥させる。
【０７２６】
オリゴ糖をＰｒｏｚｙｍｅから購入した２ＡＢ標識キット（カタログ番号ＧＫＫ−４０４，ロット番号１３２０２６）を用いて２ＡＢで標識する。標識試薬は製造業者の使用説明書に従って調製する。（キット中に備えられている）ＤＭＳＯバイアルに酢酸（１５０ｍＬ，キット中に備えられている）を添加し、溶液に数回上下にピペット操作を加えることにより混合する。酢酸／ＤＭＳＯ混合物（１００ｍＬ）を２−ＡＢ染料のバイアルに移し（使用直前に）、染料が十分に溶解するまで混合する。次いで、染料溶液を還元剤のバイアル（キット中に備えられている）に添加し、十分に混合する（標識試薬）。標識試薬（５ｍＬ）を各乾燥したオリゴ糖サンプルバイアルに添加し、十分混合する。反応バイアルを６５℃及び７００〜８００ｒｐｍに設定したエッペンドルフサーモミキサーに２時間の反応の間置く。
【０７２７】
標識反応後、過剰の蛍光染料をＰｒｏｚｙｍｅ製ＧｌｙｃｏＣｌｅａｎ  Ｓカートリッジ（カタログ番号ＧＫＩ−４７２６）を用いて除去する。サンプルを添加する前に、カートリッジをミリＱ水（１ｍＬ）で洗浄し、次いで３０％  酢酸溶液（１ｍＬ）で５回洗浄する。サンプルを添加する直前に、カートリッジにアセトニトリル（Ｂｕｒｄｉｃｋ  ａｎｄ  Ｊａｃｋｓｏｎ，カタログ番号ＡＨ０１５−４）（１ｍＬ）を添加する。
【０７２８】
すべてのアセトニトリルがカートリッジを通過した後、サンプルを洗浄したての皿の中央に置き、皿上に１０分間吸着させる。皿をアセトニトリル（１ｍＬ）で洗浄した後、９６％  アセトニトリル（１ｍＬ）で５回洗浄する。カートリッジを１．５ｍＬ容量のエッペンドルフチューブに入れ、２−ＡＢ標識したオリゴ糖をミリＱ水（１回洗浄あたり４００ｍＬ）で３回洗浄する。
【０７２９】
オリゴ糖をＳｈｉｍａｄｚｕ  ＨＰＬＣシステムに接続したＧｌｙｃｏｓｅｐ  Ｎ  ＨＰＬＣ（カタログ番号ＧＫＩ−４７２８）カラムを用いて分離する。Ｓｈｉｍａｄｚｕ  ＨＰＬＣシステムはシステムコントローラー、脱ガス器、バイナリポンプ、サンプル冷却器を有するオートサンプラー及び蛍光検出器から構成されている。
【０７３０】
（高温での安定性）
抗体のバッファーは５．５７ｍＭ  リン酸第一ナトリウム、８．６９ｍＭ  リン酸水素二ナトリウム、１０６．６９ｍＭ  ＮａＣｌ、１．０７ｍＭ  クエン酸ナトリウム、６．４５ｍＭ  クエン酸、６６．６８ｍＭ  マンニトール、０．１％（ｗ／ｖ）トゥィーン（ｐＨ５．２）；または１０ｍＭ  ヒスチジン、１０ｍＭ  メチオニン、４％  マンニトール（ｐＨ５．９）であり、Ａｍｉｃｏｎ超遠心フィルターを用いる。抗体の最終濃度を適当なバッファーを用いて２ｍｇ／ｍＬに調節する。次いで、抗体溶液を濾過殺菌し、０．２５ｍＬのアリコートを滅菌条件下で調製する。アリコートを−８０℃、５℃、２５℃または４０℃で１、２または３週間放置する。インキュベーション期間後、サンプルをサイズ排除クロマトグラフィー及びＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分析する。
【０７３１】
サンプルの安定性を還元及び非還元条件下でＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分析する。使用した手順は本明細書中に記載されているのと同じである。ゲルをコロイド状青色ステイン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，カタログ番号４６−７０１５，４６−７０１６）で一晩染色し、バックグラウンドが透明になるまでミリＱ水を用いて脱染する。次いで、染色したゲルをＥｐｓｏｎ発現スキャナー（モデル１６８０，Ｓ／Ｎ  ＤＡＳＸ００３６４１）を用いてスキャンする。より高い感度を得るために、同一ゲルを銀染色キット（Ｏｗｌ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いて染色し、製造業者が勧める手順を使用する。
【０７３２】
実施例１．２．２．３．Ｃ：単独または化学療法と組み合わせたヒト化モノクローナル抗体のヒト癌異種移植片増殖に対する有効性
ヒト癌細胞をインビトロで組織培養フラスコにおいて９９％  生存度、８５％  コンフルエンスまで増殖させる。１９〜２５ｇのＳＣＩＤ雌または雄マウス（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒｓ  Ｌａｂｓ）の耳にタグを付け、毛を剃る。次いで、実験０日目に、マウスの右脇腹に２×１０６個のヒト腫瘍細胞（１：１マトリゲル）（０．２ｍｌ）を皮下接種する。マウスを約１５０〜２００ｍｍ３の平均腫瘍容積でマウスの別のケージにサイズ整合させたら、ビヒクル（ＰＢＳ）、ヒト化抗体及び／または化学療法の投与（ＩＰ，Ｑ３Ｄ／週）を開始する。接種後１０日目から始めて週２回腫瘍を１対のカリバスにより測定し、腫瘍容積を式Ｖ＝Ｌ×Ｗ２／２（Ｖ：容積（ｍｍ３）、Ｌ：長さ（ｍｍ）、Ｗ：幅（ｍｍ））に従って計算する。単独または化学療法と組み合わせたｍＡｂで処置した動物では、ビヒクルまたはイソタイプ対照ｍＡｂのみを与えられた動物における腫瘍に比して腫瘍容積の減少が見られる。
【０７３３】
実施例１．４：ＤＶＤ−Ｉｇの作成
２つの抗原に結合し得るＤＶＤ−Ｉｇ分子を、１つがヒト抗原Ａに対する親モノクローナル抗体及び他がヒト抗原Ｂに対する親モノクローナル抗体である本明細書中に記載されている２つの親モノクローナル抗体を用いて構築する。
【０７３４】
実施例１．４．１：２つのリンカー長さを有するＤＶＤ−Ｉｇの作成
ＡＤＣＣ／ＣＤＣエフェクター機能を排除するために２３４及び２３５に変異を有するμＬ  Ｆｃを含む定常領域を使用する。２つは短リンカー、２つは長リンカーを有し、各々が２つの異なるドメイン配向：ＶＡ−ＶＢ−Ｃ及びＶＢ−ＶＡ−Ｃ（表５０を参照されたい）にある４つの異なる抗Ａ／Ｂ  ＤＶＤ−Ｉｇ構築物を作成する。ヒトＣ１／ＣｋまたはＣＨ１ドメインのＮ末端配列から誘導されるリンカー配列は以下の通りである：
ＤＶＤＡＢ構築物の場合：
軽鎖（抗Ａがλを有するならば）：短リンカー：ＱＰＫＡＡＰ；長リンカー：ＱＰＫＡＡＰＳＶＴＬＦＰＰ
軽鎖（抗Ａがκを有するならば）：短リンカー：ＴＶＡＡＰ；長リンカー：ＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰ
重鎖（γｌ）：短リンカー：ＡＳＴＫＧＰ；長リンカー：ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰ。
【０７３５】
ＤＶＤＢＡ構築物の場合：
軽鎖（抗Ｂがλを有するならば）：短リンカー：ＱＰＫＡＡＰ；長リンカー：ＱＰＫＡＡＰＳＶＴＬＦＰＰ
軽鎖（抗Ｂがκを有するならば）：短リンカー：ＴＶＡＡＰ；長リンカー：ＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰ
重鎖（γｌ）：短リンカー：ＡＳＴＫＧＰ；長リンカー：ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰ。
【０７３６】
重鎖及び軽鎖構築物をｐＢＯＳ発現ベクターにサブクローニングし、ＣＯＳ細胞において発現させた後、プロティンＡクロマトグラフィーにより精製する。精製した材料をＳＤＳ−ＰＡＧＥ及びＳＥＣ分析にかける。
【０７３７】
表５０は、各抗Ａ／Ｂ  ＤＶＤ−Ｉｇタンパク質を発現させるために使用した重鎖及び軽鎖構築物を示す。
【０７３８】
【表５２】
2013507969.tif 000093
【０７３９】
実施例１．４．２：ＤＶＤＡＢＳＬ及びＤＶＤＡＢＬＬに対するＤＮＡ構築物の分子クローニング
重鎖構築物ＤＶＤＡＢＨＣ−ＬＬ及びＤＶＤＡＢＨＣ−ＳＬを作成するために、Ａ抗体のＶＨドメインを特定プライマー（３’プライマーはそれぞれＳＬ／ＬＬ構築物に対して短／長リンカー配列を含む）を用いてＰＣＲ増幅し、Ｂ抗体のＶＨドメインを特定プライマー（５’プライマーはそれぞれＳＬ／ＬＬ構築物に対して短／長リンカー配列を含む）を用いて増幅する。両ＰＣＲ反応を標準のＰＣＲ技術及び手順に従って実施する。２つのＰＣＲ産物をゲル精製し、その後の重複ＰＣＲ反応のための重複鋳型として一緒に使用する。重複ＰＣＲ産物を標準の相同組換えアプローチを用いることによりＳｒｆ  Ｉ及びＳａｌ  Ｉ二重消化したｐＢＯＳ−ｈＣγｌ，ｚ  ｎｏｎ−ａ哺乳動物発現ベクター（Ａｂｂｏｔｔ）にサブクローニングした。
【０７４０】
軽鎖構築物ＤＶＤＡＢＬＣ−ＬＬ及びＤＶＤＡＢＬＣ−ＳＬを作成するために、Ａ抗体のＶＬドメインを特定プライマー（３’プライマーはそれぞれＳＬ／ＬＬ構築物に対して短／長リンカー配列を含む）を用いてＰＣＲ増幅し、Ｂ抗体のＶＬドメインを特定プライマー（５’プライマーそれぞれＳＬ／ＬＬ構築物短／長リンカー配列を含む）を用いて増幅する。両ＰＣＲ反応を標準のＰＣＲ技術及び手順に従って実施する。２つのＰＣＲ産物をゲル精製し、その後の標準のＰＣＲ条件を用いる重複ＰＣＲ反応のための重複鋳型として一緒に使用する。重複ＰＣＲ産物を標準の相同組換えアプローチを用いることによりＳｒｆ  Ｉ及びＮｏｔ  Ｉ二重消化したｐＢＯＳ−ｈＣｋ哺乳動物発現ベクター（Ａｂｂｏｔｔ）にサブクローニングした。下記するように、ＤＶＤＢＡＳＬ及びＤＶＤＢＡＬＬを作成するために同様のアプローチを使用した。
【０７４１】
実施例１．４．３：ＤＮＡ構築物のＤＶＤＢＡＳＬ及びＤＶＤＢＡＬＬに対する分子クローニング
重鎖構築物ＤＶＤＢＡＨＣ−ＬＬ及びＤＶＤＢＡＨＣ−ＳＬを作成するために、抗体ＢのＶＨドメインを特定プライマー（３’プライマーはそれぞれＳＬ／ＬＬ構築物に対して短／長リンカー配列を含む）を用いてＰＣＲ増幅し、抗体ＡのＶＨドメインを特定プライマー（５’プライマーはそれぞれＳＬ／ＬＬ構築物に対して短／長リンカー配列を含む）を用いて増幅する。両ＰＣＲ反応を標準のＰＣＲ技術及び手順に従って実施する。２つのＰＣＲ産物をゲル精製し、標準のＰＣＲ条件を用いるその後の重複ＰＣＲ反応のための重複鋳型として一緒に使用する。重複ＰＣＲ産物を標準の相同組み換えアプローチを用いてＳｒｆ  Ｉ及びＳａｌ  ＩＩ二重消化したｐＢＯＳ−ｈＣγｌ，ｚ  ｎｏｎ−ａ哺乳動物発現ベクター（Ａｂｂｏｔｔ）にサブクローニングする。
【０７４２】
軽鎖構築物ＤＶＤＢＡＬＣ−ＬＬ及びＤＶＤＢＡＬＣ−ＳＬを作成するために、抗体ＢのＶＬドメインを特定プライマー（３’プライマーはそれぞれＳＬ／ＬＬ構築物に対して短／長リンカー配列を含む）を用いてＰＣＲ増幅し、抗体ＡのＶＬドメインは特定プライマー（５’プライマーはそれぞれＳＬ／ＬＬ構築物に対して短／長リンカー配列を含む）を用いて増幅する。両ＰＣＲ反応を標準のＰＣＲ技術及び手順に従って実施する。２つのＰＣＲ産物をゲル精製し、標準のＰＣＲ条件を用いるその後の重複ＰＣＲ反応のための重複鋳型として一緒に使用する。重複ＰＣＲ産物を標準の相同組み換えアプローチを用いてＳｒｆ  Ｉ及びＮｏｔ  Ｉ二重消化したｐＢＯＳ−ｈＣｋ哺乳動物発現ベクター（Ａｂｂｏｔｔ）にサブクローニングする。
【０７４３】
実施例１．４．４：追加のＤＶＤ−Ｉｇの構築及び発現
実施例１．４．４．１：ＤＶＤ−Ｉｇベクター構築物の作成
ＤＶＤ−Ｉｇに取り込むための特定抗原またはそのエピトープを認識する特定抗体に対する親抗体アミノ酸配列は、上記したようにハイブリドーマを作成することにより得ることができ、または公知の抗体タンパク質または核酸を配列決定することにより得ることができる。加えて、公知の配列は文献から得ることができる。配列は、細胞で発現させるために標準のＤＮＡ合成または増幅テクノロジーを用い、所望の抗体断片を標準の組換えＤＮＡテクノロジーを用いて発現ベクターに組み立てることにより核酸を合成するために使用され得る。
【０７４４】
例えば、核酸コドンをアミノ酸配列から決定し、オリゴヌクレオチドＤＮＡを米国ワシントン州ボセルに所在のＢｌｕｅ  Ｈｅｒｏｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．（ｗｗｗ．ｂｌｕｅｈｅｒｏｎｂｉｏ．ｃｏｍ）により合成した。オリゴヌクレオチドを３００〜２，０００塩基対の二本鎖ＤＮＡ断片に組立て、プラスミドベクターにクローニングし、配列を確認した。クローン化断片を酵素プロセスを用いて組立てて完全遺伝子を得、発現ベクターにサブクローニングした（７，３０６，９１４、７，２９７，５４１、７，２７９，１５９、７，１５０，９６９、２００８０１１５２４３、２００８０１０２４７５、２００８００８１３７９、２００８００７５６９０、２００８００６３７８０、２００８００５０５０６、２００８００３８７７７、２００８００２２４２２、２００７０２８９０３３、２００７０２８７１７０、２００７０２５４３３８、２００７０２４３１９４、２００７０２２５２２７、２００７０２０７１７１、２００７０１５０９７６、２００７０１３５６２０、２００７０１２８１９０、２００７０１０４７２２、２００７００９２４８４、２００７００３７１９６、２００７００２８３２１、２００６０１７２４０４、２００６０１６２０２６、２００６０１５３７９１、２００３０２１５４５８、２００３０１５７６４３を参照されたい）。
【０７４５】
親抗体及びＤＶＤ−Ｉｇクローニングのために１群のｐＨｙｂＥベクター（米国特許出願Ｎｏ．６１／０２１，２８２）を使用した。ｐＪＰ１８３；ｐＨｙｂＥ−ｈＣｇｌ，ｚ，ｎｏｎ−ａ  Ｖ２から誘導したＶ１を野生型定常領域を有する抗体及びＤＶＤ重鎖をクローニングするために使用した。ｐＪＰ１９１；ｐＨｙｂＥ−ｈＣｋ  Ｖ２から誘導したＶ２をκ定常領域を有する抗体及びＤＶＤ軽鎖をクローニングするために使用した。ｐＪＰ１９２；ｐＨｙｂＥ−ｈＣｌ  Ｖ２から誘導したＶ３をλ定常領域を有する抗体及びＤＶＤ軽鎖をクローニングするために使用した。λシグナルペプチド及びκ定常領域を有する構築したＶ４をλ−κハイブリッドＶドメインを有するＤＶＤ軽鎖をクローニングするために使用した。κシグナルペプチド及びλ定常領域を有する構築したＶ５はκ−λハイブリッドＶドメインを有するＤＶＤ軽鎖をクローニングするために使用した。ｐＪＰ１８３；ｐＨｙｂＥ−ｈＣｇｌ，ｚ，ｎｏｎ−ａ  Ｖ２から誘導したＶ７を（２３４，２３５  ＡＡ）ミュータント定常領域を有する抗体及びＤＶＤ重鎖をクローニングするために使用した。
【０７４６】
表５１を参照すると、多数のベクターが親抗体及びＤＶＤ−Ｉｇ  ＶＨ及びＶＬ鎖のクローニングにおいて使用された。
【０７４７】
【表５３】
2013507969.tif 000094
2013507969.tif 000095
2013507969.tif 000096
2013507969.tif 000097
2013507969.tif 000098
2013507969.tif 000099
2013507969.tif 000100
2013507969.tif 000101
2013507969.tif 000102
2013507969.tif 000103
【０７４８】
実施例１．４．４．２：２９３細胞におけるトランスフェクション及び発現
ＤＶＤ−Ｉｇのタンパク質を産生するためにＤＶＤ−Ｉｇベクター構築物を２９３細胞にトランスフェクトする。使用する２９３一過性トランスフェクション手順はＤｕｒｏｃｈｅｒら（２００２）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，３０（２）：Ｅ９及びＰｈａｍら（２００５）Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，９０（３）：３３２−４４で公開されている方法の修飾である。トランスフェクションで使用した試薬は、
・１３０ｒｐｍ、３７℃及び５％  ＣＯ２に設定した加湿したインキュベーターにおいて使い捨て三角フラスコ中で培養したＨＥＫ  ２９３−６Ｅ細胞（ＥＢＮＡ１を安定的に発現するヒト胚腎臓細胞株；Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｏｕｎｃｉｌ  Ｃａｎａｄａから入手）；
・培養培地：ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ  ２９３発現培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  １２３３８−０１８）＋２５μｇ／ｍＬ  ゲネティシン（Ｇ４１８）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  １０１３１−０２７）及び０．１％  プルーロニックＦ−６８（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  ２４０４０−０３２）；
・トランスフェクション培地：ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ  ２９３発現培地＋１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  １５６３０−０８０）；
・ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）ストック：直線２５ｋＤａ  ＰＥＩ（Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ）で調製し、−１５℃未満で保存した１ｍｇ／ｍＬの滅菌ストック溶液（ｐＨ７．０）；
・トリプトン供給培地：ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ  ２９３発現培地中トリプトンＮ１（Ｏｒｇａｎｏｔｅｃｈｎｉｅ，１９５５４）の５％  ｗ／ｖ  滅菌ストック；
を含んでいた。
【０７４９】
トランスフェクションのための細胞作成：トランスフェクションの約２〜４時間前に、ＨＥＫ  ２９３−６Ｅ細胞を遠心により収集し、約１００万個の生菌／ｍｌの細胞密度で培養培地中に再懸濁する。トランスフェクション毎に、４０ｍＬの細胞懸濁液を使い捨て２５０ｍＬ容量の三角フラスコに移し、２〜４時間インキュベートする。
【０７５０】
トランスフェクション：トランスフェクション培地及びＰＥＩストックを予め室温（ＲＴ）まで加温する。トランスフェクション毎に、プラスミドＤＮＡ（２５μｇ）及びポリエチレンイミン（ＰＥＩ）（５０μｇ）をトランスフェクション培地（５ｍＬ）中で合わせ、室温で１５〜２０分間インキュベーして、ＤＮＡ：ＰＥＩ複合体を形成する。ＢＲ３−Ｉｇトランスフェクションのために、１回のトランスフェクションにつき２５μｇのＢＲ３−Ｉｇプラスミドを使用する。各５ｍＬのＤＮＡ：ＰＥＩ複合体混合物を予め調製した培養物（４０ｍＬ）に添加し、１３０ｒｐｍ、３７℃及び５％  ＣＯ２に設定した加湿したインキュベーターに戻す。２０〜２８時間後、トリプトン供給培地（５ｍＬ）を各トランスフェクションに添加し、培養を６日間続ける。
【０７５１】
表５２は、２９３細胞における親抗体またはＤＶＤ−Ｉｇ構築物の収率データ（ｍｇ／Ｌで表示）を含む。
【０７５２】
【表５４】
2013507969.tif 000104
2013507969.tif 000105
2013507969.tif 000106
2013507969.tif 000107
すべてのＤＶＤが２９３細胞においてうまく発現した。ＤＶＤはプロティンＡカラムを用いて容易に精製することができた。多くの場合、＞５ｍｇ／Ｌの精製ＤＶＤ−Ｉｇが２９３細胞の上清から容易に得ることができた。
【０７５３】
【表５５】
2013507969.tif 000108
2013507969.tif 000109
2013507969.tif 000110
すべてのＤＶＤが２９３細胞においてうまく発現した。ＤＶＤはプロティンＡカラムを用いて容易に精製することができた。多くの場合、＞５ｍｇ／Ｌの精製ＤＶＤ−Ｉｇが２９３細胞の上清から容易に得ることができた。
【０７５４】
実施例１．４．５：Ａ／Ｂ  ＤＶＤ−Ｉｇの特徴づけ及び誘導選択
タンパク質Ａ及びタンパク質Ｂに対する抗Ａ／Ｂ  ＤＶＤ−Ｉｇの結合親和性をＢｉａｃｏｒｅを用いて分析する。ＤＶＤ−Ｉｇの四価特性をＢｉａｃｏｒｅを用いる複数の結合研究により試験する。一方、タンパク質Ａ及びタンパク質Ｂに対するＤＶＤ−Ｉｇの中和力価をそれぞれ本明細書中に記載されているバイオアッセイにより評価する。元の親ｍＡｂの親和性及び力価を最もうまく保持しているＤＶＤ−Ｉｇ分子を各ｍＡｂについて本明細書中に記載されている徹底的な生理化学的及び生化学分析（ｒａｔ  ＰＫ）特徴づけのために選択する。分析収集に基づいて、最終誘導ＤＶＤ−ＩｇはＣＨＯ安定細胞株発生に進み、ＣＨＯ誘導材料をカニクイザルにおける安定性、薬物動態及び有効性研究、並びに予備処方活性において使用する。
【０７５５】
［実施例２］
二重可変ドメイン免疫グロブリン（ＤＶＤ−Ｉｇ）の作成及び特徴づけ
二重可変ドメイン免疫グロブリン（ＤＶＤ−Ｉｇ）を、公知のアミノ酸配列を有する親抗体を用いて実施例１．４．４．１に従ってＤＶＤ−Ｉｇ可変重鎖及びＤＶＤ−Ｉｇ可変軽鎖配列をエンコードするポリヌクレオチド断片を合成し、その断片をｐＨｙｂＣ−Ｄ２ベクターにクローン化することにより作成した。ＤＶＤ−Ｉｇ構築物を実施例１，４．４．２に記載されているように２９３細胞にクローン化し、発現させた。ＤＶＤ−Ｉｇタンパク質を標準方法に従って精製した。機能的特性を指示されているように実施例１．１．１及び１．１．２に記載されている方法に従って測定した。本発明のＤＶＤ−ＩｇのためのＤＶＤ−ＩｇＶＨ及びＶＬ鎖を以下に示す。
【０７５６】
実施例２．１：ＣＤ−２０及びＣＤ−１９  ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０７５７】
【表５６】
2013507969.tif 000111
【０７５８】
実施例２．２：ＣＤ−２０及びＣＤ−３（ｓｅｑ．１）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０７５９】
【表５７】
2013507969.tif 000112
【０７６０】
実施例２．３：ＣＤ−２０及びＣＤ−８０  ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０７６１】
【表５８】
2013507969.tif 000113
2013507969.tif 000114
【０７６２】
実施例２．４：ＣＤ−２０及びＣＤ−２２  ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０７６３】
【表５９】
2013507969.tif 000115
【０７６４】
実施例２．５：ＣＤ−２０及びＣＤ−４０  ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０７６５】
【表６０】
2013507969.tif 000116
2013507969.tif 000117
【０７６６】
実施例２．６：ＣＤ−３（ｓｅｑ．１）及びＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０７６７】
【表６１】
2013507969.tif 000118
【０７６８】
実施例２．７：ＣＤ−３（ｓｅｑ．１）及びＣＤ−１９  ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０７６９】
【表６２】
2013507969.tif 000119
【０７７０】
実施例２．８：ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）及びＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０７７１】
【表６３】
2013507969.tif 000120
2013507969.tif 000121
実施例２．９：ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）及びＣＤ−３（ｓｅｑ．１）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０７７２】
【表６４】
2013507969.tif 000122
【０７７３】
実施例２．１０：ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）及びＩＧＦ１，２  ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０７７４】
【表６５】
2013507969.tif 000123
2013507969.tif 000124
【０７７５】
実施例２．１１：リンカー組１を用いるＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）及びＩＧＦ１Ｒ（ｓｅｑ．１）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０７７６】
【表６６】
2013507969.tif 000125
【０７７７】
実施例２．１２：リンカー組２を用いるＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）及びＩＧＦ１Ｒ（ｓｅｑ．１）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０７７８】
【表６７】
2013507969.tif 000126
2013507969.tif 000127
【０７７９】
実施例２．１３：リンカー組３を用いるＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）及びＩＧＦ１Ｒ（ｓｅｑ．１）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０７８０】
【表６８】
2013507969.tif 000128
2013507969.tif 000129
【０７８１】
実施例２．１４：リンカー組４を用いるＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）及びＩＧＦ１Ｒ（ｓｅｑ．１）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０７８２】
【表６９】
2013507969.tif 000130
【０７８３】
実施例２．１５：リンカー組１を用いるＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）及びＩＧＦ１Ｒ（ｓｅｑ．２）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０７８４】
【表７０】
2013507969.tif 000131
2013507969.tif 000132
【０７８５】
実施例２．１６：リンカー組２を用いるＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）及びＩＧＦ１Ｒ（ｓｅｑ．２）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０７８６】
【表７１】
2013507969.tif 000133
【０７８７】
実施例２．１７：リンカー組３を用いるＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）及びＩＧＦ１Ｒ（ｓｅｑ．２）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０７８８】
【表７２】
2013507969.tif 000134
【０７８９】
実施例２．１８：リンカー組４を用いるＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）及びＩＧＦ１Ｒ（ｓｅｑ．２）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０７９０】
【表７３】
2013507969.tif 000135
2013507969.tif 000136
【０７９１】
実施例２．１９：リンカー組１を用いるＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）及びＩＧＦ１Ｒ（ｓｅｑ．３）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０７９２】
【表７４】
2013507969.tif 000137
【０７９３】
実施例２．２０：リンカー組２を用いるＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）及びＩＧＦ１Ｒ（ｓｅｑ．３）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０７９４】
【表７５】
2013507969.tif 000138
2013507969.tif 000139
【０７９５】
実施例２．２１：リンカー組３を用いるＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）及びＩＧＦ１Ｒ（ｓｅｑ．３）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０７９６】
【表７６】
2013507969.tif 000140
2013507969.tif 000141
【０７９７】
実施例２．２２：リンカー組４を用いるＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）及びＩＧＦ１Ｒ（ｓｅｑ．３）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０７９８】
【表７７】
2013507969.tif 000142
【０７９９】
実施例２．２３：リンカー組１を用いるＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）及びＲＯＮ（ｓｅｑ．１）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０８００】
【表７８】
2013507969.tif 000143
2013507969.tif 000144
【０８０１】
実施例２．２４：リンカー組２を用いるＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）及びＲＯＮ（ｓｅｑ．１）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０８０２】
【表７９】
2013507969.tif 000145
【０８０３】
実施例２．２５：リンカー組３を用いるＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）及びＲＯＮ（ｓｅｑ．１）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０８０４】
【表８０】
2013507969.tif 000146
【０８０５】
実施例２．２６：リンカー組４を用いるＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）及びＲＯＮ（ｓｅｑ．１）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０８０６】
【表８１】
2013507969.tif 000147
【０８０７】
実施例２．２７：ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．１）及びＨＧＦ（ｓｅｑ．１）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０８０８】
【表８２】
2013507969.tif 000148
【０８０９】
実施例２．２８：ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）及びｃ−ＭＥＴ  ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０８１０】
【表８３】
2013507969.tif 000149
2013507969.tif 000150
【０８１１】
実施例２．２９：ＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）及びＩＧＦ１，２  ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０８１２】
【表８４】
2013507969.tif 000151
【０８１３】
実施例２．３０：ＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）及びＩＧＦ１Ｒ  ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０８１４】
【表８５】
2013507969.tif 000152
【０８１５】
実施例２．３１：ＲＯＮ（ｓｅｑ．１）及びＨＧＦ（ｓｅｑ．１）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０８１６】
【表８６】
2013507969.tif 000153
2013507969.tif 000154
【０８１７】
実施例２．３２：ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）及びＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０８１８】
【表８７】
2013507969.tif 000155
【０８１９】
実施例２．３３：ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）及びＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０８２０】
【表８８】
2013507969.tif 000156
2013507969.tif 000157
【０８２１】
実施例２．３４：ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）及びＣＤ−２０  ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０８２２】
【表８９】
2013507969.tif 000158
【０８２３】
実施例２．３５：ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）及びＩＧＦ１，２  ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０８２４】
【表９０】
2013507969.tif 000159
【０８２５】
実施例２．３６：ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）及びＤＬＬ４（ｓｅｑ．１）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０８２６】
【表９１】
2013507969.tif 000160
2013507969.tif 000161
【０８２７】
実施例２．３７：リンカー組１を用いるＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）及びＨＧＦ（ｓｅｑ．１）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０８２８】
【表９２】
2013507969.tif 000162
【０８２９】
実施例２．３８：リンカー組２を用いるＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）及びＨＧＦ（ｓｅｑ．１）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０８３０】
【表９３】
2013507969.tif 000163
2013507969.tif 000164
【０８３１】
実施例２．３９：リンカー組３を用いるＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）及びＨＧＦ（ｓｅｑ．１）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０８３２】
【表９４】
2013507969.tif 000165
【０８３３】
実施例２．４０：リンカー組４を用いるＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）及びＨＧＦ（ｓｅｑ．１）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０８３４】
【表９５】
2013507969.tif 000166
【０８３５】
実施例２．４１：ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）及びＲＯＮ（ｓｅｑ．１）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０８３６】
【表９６】
2013507969.tif 000167
2013507969.tif 000168
【０８３７】
実施例２．４２：ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）及びＮＰＰ１（ｓｅｑ．１）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０８３８】
【表９７】
2013507969.tif 000169
【０８３９】
実施例２．４３：ＨＧＦ（ｓｅｑ．１）及びＲＯＮ（ｓｅｑ．２）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０８４０】
【表９８】
2013507969.tif 000170
2013507969.tif 000171
【０８４１】
実施例２．４４：ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）及びＲＯＮ（ｓｅｑ．２）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０８４２】
【表９９】
2013507969.tif 000172
【０８４３】
実施例２．４５：ＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）及びＲＯＮ（ｓｅｑ．２）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０８４４】
【表１００】
2013507969.tif 000173
【０８４５】
実施例２．４６：ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）及びＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０８４６】
【表１０１】
2013507969.tif 000174
2013507969.tif 000175
【０８４７】
実施例２．４７：ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．１）及びＣＤ３（ｓｅｑ．１）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０８４８】
【表１０２】
2013507969.tif 000176
【０８４９】
実施例２．４８：ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．１）及びＩＧＦ１Ｒ  ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０８５０】
【表１０３】
2013507969.tif 000177
2013507969.tif 000178
【０８５１】
実施例２．４９：ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．１）及びＲＯＮ（ｓｅｑ．１）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０８５２】
【表１０４】
2013507969.tif 000179
【０８５３】
実施例２．５０：ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．１）及びＲＯＮ（ｓｅｑ．２）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０８５４】
【表１０５】
2013507969.tif 000180
【０８５５】
実施例２．５１：ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．１）及びＨＧＦ（ｓｅｑ．１）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０８５６】
【表１０６】
2013507969.tif 000181
2013507969.tif 000182
【０８５７】
実施例２．５２：ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．１）及びｃ−ＭＥＴ  ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０８５８】
【表１０７】
2013507969.tif 000183
【０８５９】
実施例２．５３：ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．１）及びＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０８６０】
【表１０８】
2013507969.tif 000184
2013507969.tif 000185
【０８６１】
実施例２．５４：ＮＲＰ１（ｓｅｑ．２）及びＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０８６２】
【表１０９】
2013507969.tif 000186
2013507969.tif 000187
【０８６３】
実施例２．５５：ＣＤ３（ｓｅｑ．２）及びＣＤ−２０  ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０８６４】
【表１１０】
2013507969.tif 000188
【０８６５】
実施例２．５６：ＣＤ−３（ｓｅｑ．２）及びＨＥＲ−２（ｓｅｑ．１）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０８６６】
【表１１１】
2013507969.tif 000189
2013507969.tif 000190
【０８６７】
実施例２．５７：ＣＤ−３（ｓｅｑ．２）及びＣＤ−１９  ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０８６８】
【表１１２】
2013507969.tif 000191
【０８６９】
実施例２．５８：ＣＤ−３（ｓｅｑ．２）及びＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０８７０】
【表１１３】
2013507969.tif 000192
2013507969.tif 000193
【０８７１】
実施例２．５９：ＣＤ−３（ｓｅｑ．２）及びＥＧＦＲ（ｓｅｑ．１）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０８７２】
【表１１４】
2013507969.tif 000194
【０８７３】
実施例２．６０：ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．１）及びＩＧＦ１，２  ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０８７４】
【表１１５】
2013507969.tif 000195
【０８７５】
実施例２．６１：ＤＬＬ−４（ｓｅｑ．１）及びＰＬＧＦ（ｓｅｑ．１）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０８７６】
【表１１６】
2013507969.tif 000196
2013507969.tif 000197
【０８７７】
実施例２．６２：リンカー組１を用いるＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）及びＰＬＧＦ（ｓｅｑ．１）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０８７８】
【表１１７】
2013507969.tif 000198
【０８７９】
実施例２．６３：リンカー組２を用いるＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）及びＰＬＧＦ（ｓｅｑ．１）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０８８０】
【表１１８】
2013507969.tif 000199
2013507969.tif 000200
【０８８１】
実施例２．６４：リンカー組３を用いるＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）及びＰＬＧＦ（ｓｅｑ．１）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０８８２】
【表１１９】
2013507969.tif 000201
【０８８３】
実施例２．６５：リンカー組４を用いるＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）及びＰＬＧＦ（ｓｅｑ．１）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０８８４】
【表１２０】
2013507969.tif 000202
【０８８５】
実施例２．６６：リンカー組１を用いるＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）及びＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．１）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０８８６】
【表１２１】
2013507969.tif 000203
2013507969.tif 000204
【０８８７】
実施例２．６７：リンカー組２を用いるＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）及びＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．１）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０８８８】
【表１２２】
2013507969.tif 000205
【０８８９】
実施例２．６８：リンカー組３を用いるＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）及びＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．１）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０８９０】
【表１２３】
2013507969.tif 000206
2013507969.tif 000207
【０８９１】
実施例２．６９：リンカー組４を用いるＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）及びＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．１）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０８９２】
【表１２４】
2013507969.tif 000208
【０８９３】
実施例２．７０：ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．１）及びＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．１）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０８９４】
【表１２５】
2013507969.tif 000209
【０８９５】
実施例２．７１：ＨＧＦ（ｓｅｑ．１）及びＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．１）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０８９６】
【表１２６】
2013507969.tif 000210
【０８９７】
実施例２．７２：リンカー組１を用いるＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）及びＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．２）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０８９８】
【表１２７】
2013507969.tif 000211
【０８９９】
実施例２．７３：リンカー組２を用いるＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）及びＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．２）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０９００】
【表１２８】
2013507969.tif 000212
2013507969.tif 000213
【０９０１】
実施例２．７４：リンカー組３を用いるＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）及びＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．２）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０９０２】
【表１２９】
2013507969.tif 000214
【０９０３】
実施例２．７５：リンカー組４を用いるＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）及びＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．２）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０９０４】
【表１３０】
2013507969.tif 000215
2013507969.tif 000216
【０９０５】
実施例２．７６：ＥＧＦＲ（ｓｅｑ．１）及びＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．２）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０９０６】
【表１３１】
2013507969.tif 000217
【０９０７】
実施例２．７７：ＨＧＦ（ｓｅｑ．１）及びＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．２）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０９０８】
【表１３２】
2013507969.tif 000218
【０９０９】
実施例２．７８：リンカー組１を用いるＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）及びＤＬＬ４（ｓｅｑ．２）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０９１０】
【表１３３】
2013507969.tif 000219
2013507969.tif 000220
【０９１１】
実施例２．７９：リンカー組２を用いるＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）及びＤＬＬ４（ｓｅｑ．２）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０９１２】
【表１３４】
2013507969.tif 000221
【０９１３】
実施例２．８０：リンカー組３を用いるＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）及びＤＬＬ４（ｓｅｑ．２）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０９１４】
【表１３５】
2013507969.tif 000222
2013507969.tif 000223
【０９１５】
実施例２．８１：リンカー組４を用いるＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）及びＤＬＬ４（ｓｅｑ．２）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０９１６】
【表１３６】
2013507969.tif 000224
【０９１７】
実施例２．８２：リンカー組１を用いるＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）及びＤＬＬ４（ｓｅｑ．２）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０９１８】
【表１３７】
2013507969.tif 000225
【０９１９】
実施例２．８３：リンカー組２を用いるＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）及びＤＬＬ４（ｓｅｑ．２）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０９２０】
【表１３８】
2013507969.tif 000226
2013507969.tif 000227
【０９２１】
実施例２．８４：リンカー組３を用いるＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）及びＤＬＬ４（ｓｅｑ．２）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０９２２】
【表１３９】
2013507969.tif 000228
【０９２３】
実施例２．８５：リンカー組４を用いるＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）及びＤＬＬ４（ｓｅｑ．２）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０９２４】
【表１４０】
2013507969.tif 000229
2013507969.tif 000230
【０９２５】
実施例２．８６：リンカー組１を用いるＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）及びＤＬＬ４（ｓｅｑ．２）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０９２６】
【表１４１】
2013507969.tif 000231
【０９２７】
実施例２．８７：リンカー組２を用いるＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）及びＤＬＬ４（ｓｅｑ．２）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０９２８】
【表１４２】
2013507969.tif 000232
2013507969.tif 000233
【０９２９】
実施例２．８８：リンカー組３を用いるＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）及びＤＬＬ４（ｓｅｑ．２）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０９３０】
【表１４３】
2013507969.tif 000234
【０９３１】
実施例２．８９：リンカー組４を用いるＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）及びＤＬＬ４（ｓｅｑ．２）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０９３２】
【表１４４】
2013507969.tif 000235
【０９３３】
実施例２．９０：リンカー組１を用いるＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）及びＤＬＬ４（ｓｅｑ．１）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０９３４】
【表１４５】
2013507969.tif 000236
2013507969.tif 000237
【０９３５】
実施例２．９１：リンカー組２を用いるＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）及びＤＬＬ４（ｓｅｑ．１）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０９３６】
【表１４６】
2013507969.tif 000238
【０９３７】
実施例２．９２：リンカー組３を用いるＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）及びＤＬＬ４（ｓｅｑ．１）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０９３８】
【表１４７】
2013507969.tif 000239
2013507969.tif 000240
【０９３９】
実施例２．９３：リンカー組４を用いるＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）及びＤＬＬ４（ｓｅｑ．１）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０９４０】
【表１４８】
2013507969.tif 000241
【０９４１】
実施例２．９４：リンカー組１を用いるＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）及びＤＬＬ４（ｓｅｑ．１）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０９４２】
【表１４９】
2013507969.tif 000242
【０９４３】
実施例２．９５：リンカー組２を用いるＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）及びＤＬＬ４（ｓｅｑ．１）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０９４４】
【表１５０】
2013507969.tif 000243
2013507969.tif 000244
【０９４５】
実施例２．９６：リンカー組３を用いるＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）及びＤＬＬ４（ｓｅｑ．１）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０９４６】
【表１５１】
2013507969.tif 000245
【０９４７】
実施例２．９７：リンカー組４を用いるＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）及びＤＬＬ４（ｓｅｑ．１）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０９４８】
【表１５２】
2013507969.tif 000246
2013507969.tif 000247
【０９４９】
実施例２．９８：リンカー組１を用いるＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）及びＤＬＬ４（ｓｅｑ．１）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０９５０】
【表１５３】
2013507969.tif 000248
【０９５１】
実施例２．９９：リンカー組２を用いるＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）及びＤＬＬ４（ｓｅｑ．１）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０９５２】
【表１５４】
2013507969.tif 000249
【０９５３】
実施例２．１００：リンカー組３を用いるＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）及びＤＬＬ４（ｓｅｑ．１）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０９５４】
【表１５５】
2013507969.tif 000250
【０９５５】
実施例２．１０１：リンカー組１を用いるＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）及びＤＬＬ４（ｓｅｑ．３）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０９５６】
【表１５６】
2013507969.tif 000251
【０９５７】
実施例２．１０２：リンカー組２を用いるＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）及びＤＬＬ４（ｓｅｑ．３）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０９５８】
【表１５７】
2013507969.tif 000252
【０９５９】
実施例２．１０３：リンカー組３を用いるＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）及びＤＬＬ４（ｓｅｑ．３）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０９６０】
【表１５８】
2013507969.tif 000253
【０９６１】
実施例２．１０４：リンカー組４を用いるＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）及びＤＬＬ４（ｓｅｑ．３）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０９６２】
【表１５９】
2013507969.tif 000254
【０９６３】
実施例２．１０５：リンカー組１を用いるＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）及びＤＬＬ４（ｓｅｑ．３）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０９６４】
【表１６０】
2013507969.tif 000255
【０９６５】
実施例２．１０６：リンカー組２を用いるＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）及びＤＬＬ４（ｓｅｑ．３）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０９６６】
【表１６１】
2013507969.tif 000256
【０９６７】
実施例２．１０７：リンカー組３を用いるＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）及びＤＬＬ４（ｓｅｑ．３）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０９６８】
【表１６２】
2013507969.tif 000257
2013507969.tif 000258
【０９６９】
実施例２．１０８：リンカー組４を用いるＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）及びＤＬＬ４（ｓｅｑ．３）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０９７０】
【表１６３】
2013507969.tif 000259
【０９７１】
実施例２．１０９：リンカー組１を用いるＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）及びＤＬＬ４（ｓｅｑ．３）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０９７２】
【表１６４】
2013507969.tif 000260
【０９７３】
実施例２．１１０：リンカー組２を用いるＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）及びＤＬＬ４（ｓｅｑ．３）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０９７４】
【表１６５】
2013507969.tif 000261
【０９７５】
実施例２．１１１：リンカー組３を用いるＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）及びＤＬＬ４（ｓｅｑ．３）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０９７６】
【表１６６】
2013507969.tif 000262
【０９７７】
実施例２．１１２：リンカー組４を用いるＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）及びＤＬＬ４（ｓｅｑ．３）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０９７８】
【表１６７】
2013507969.tif 000263
2013507969.tif 000264
【０９７９】
実施例２．１１３：リンカー組１を用いるＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）及びＤＬＬ４（ｓｅｑ．４）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０９８０】
【表１６８】
2013507969.tif 000265
【０９８１】
実施例２．１１４：リンカー組２を用いるＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）及びＤＬＬ４（ｓｅｑ．４）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０９８２】
【表１６９】
2013507969.tif 000266
2013507969.tif 000267
【０９８３】
実施例２．１１５：リンカー組３を用いるＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）及びＤＬＬ４（ｓｅｑ．４）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０９８４】
【表１７０】
2013507969.tif 000268
【０９８５】
実施例２．１１６：リンカー組４を用いるＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）及びＤＬＬ４（ｓｅｑ．４）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０９８６】
【表１７１】
2013507969.tif 000269
【０９８７】
実施例２．１１７：リンカー組１を用いるＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）及びＤＬＬ４（ｓｅｑ．４）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０９８８】
【表１７２】
2013507969.tif 000270
2013507969.tif 000271
【０９８９】
実施例２．１１８：リンカー組２を用いるＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）及びＤＬＬ４（ｓｅｑ．４）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０９９０】
【表１７３】
2013507969.tif 000272
【０９９１】
実施例２．１１９：リンカー組３を用いるＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）及びＤＬＬ４（ｓｅｑ．４）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０９９２】
【表１７４】
2013507969.tif 000273
2013507969.tif 000274
【０９９３】
実施例２．１２０：リンカー組４を用いるＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）及びＤＬＬ４（ｓｅｑ．４）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０９９４】
【表１７５】
2013507969.tif 000275
【０９９５】
実施例２．１２１：リンカー組１を用いるＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）及びＤＬＬ４（ｓｅｑ．４）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０９９６】
【表１７６】
2013507969.tif 000276
【０９９７】
実施例２．１２２：リンカー組２を用いるＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）及びＤＬＬ４（ｓｅｑ．４）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【０９９８】
【表１７７】
2013507969.tif 000277
2013507969.tif 000278
【０９９９】
実施例２．１２３：リンカー組３を用いるＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）及びＤＬＬ４（ｓｅｑ．４）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【１０００】
【表１７８】
2013507969.tif 000279
【１００１】
実施例２．１２４：リンカー組４を用いるＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）及びＤＬＬ４（ｓｅｑ．４）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【１００２】
【表１７９】
2013507969.tif 000280
2013507969.tif 000281
【１００３】
実施例２．１２５：リンカー組１を用いるＨＥＲ２（ｓｅｑ．１）及びＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．１）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【１００４】
【表１８０】
2013507969.tif 000282
【１００５】
実施例２．１２６：リンカー組２を用いるＨＥＲ２（ｓｅｑ．１）及びＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．１）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【１００６】
【表１８１】
2013507969.tif 000283
【１００７】
実施例２．１２７：リンカー組３を用いるＨＥＲ２（ｓｅｑ．１）及びＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．１）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【１００８】
【表１８２】
2013507969.tif 000284
2013507969.tif 000285
【１００９】
実施例２．１２８：リンカー組４を用いるＨＥＲ２（ｓｅｑ．１）及びＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．１）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【１０１０】
【表１８３】
2013507969.tif 000286
【１０１１】
実施例２．１２９：リンカー組１を用いるＨＥＲ２（ｓｅｑ．１）及びＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．２）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【１０１２】
【表１８４】
2013507969.tif 000287
2013507969.tif 000288
【１０１３】
実施例２．１３０：リンカー組２を用いるＨＥＲ２（ｓｅｑ．１）及びＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．２）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【１０１４】
【表１８５】
2013507969.tif 000289
【１０１５】
実施例２．１３１：リンカー組３を用いるＨＥＲ２（ｓｅｑ．１）及びＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．２）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【１０１６】
【表１８６】
2013507969.tif 000290
【１０１７】
実施例２．１３２：リンカー組４を用いるＨＥＲ２（ｓｅｑ．１）及びＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．２）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【１０１８】
【表１８７】
2013507969.tif 000291
【１０１９】
実施例２．１３３：リンカー組１を用いるＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）及びＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．３）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【１０２０】
【表１８８】
2013507969.tif 000292
【１０２１】
実施例２．１３４：リンカー組２を用いるＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）及びＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．３）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【１０２２】
【表１８９】
2013507969.tif 000293
2013507969.tif 000294
【１０２３】
実施例２．１３５：リンカー組３を用いるＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）及びＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．３）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【１０２４】
【表１９０】
2013507969.tif 000295
【１０２５】
実施例２．１３６：リンカー組４を用いるＥＧＦＲ（ｓｅｑ．２）及びＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．３）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【１０２６】
【表１９１】
2013507969.tif 000296
【１０２７】
実施例２．１３７：リンカー組１を用いるＨＥＲ２（ｓｅｑ．１）及びＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．３）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【１０２８】
【表１９２】
2013507969.tif 000297
【１０２９】
実施例２．１３８：リンカー組２を用いるＨＥＲ２（ｓｅｑ．１）及びＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．３）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【１０３０】
【表１９３】
2013507969.tif 000298
【１０３１】
実施例２．１３９：リンカー組３を用いるＨＥＲ２（ｓｅｑ．１）及びＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．３）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【１０３２】
【表１９４】
2013507969.tif 000299
2013507969.tif 000300
【１０３３】
実施例２．１４０：リンカー組４を用いるＨＥＲ２（ｓｅｑ．１）及びＥｒｂＢ３（ｓｅｑ．３）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【１０３４】
【表１９５】
2013507969.tif 000301
【１０３５】
実施例２．１４１：リンカー組１を用いるＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）及びＰＬＧＦ（ｓｅｑ．２）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【１０３６】
【表１９６】
2013507969.tif 000302
2013507969.tif 000303
【１０３７】
実施例２．１４２：リンカー組２を用いるＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）及びＰＬＧＦ（ｓｅｑ．２）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【１０３８】
【表１９７】
2013507969.tif 000304
【１０３９】
実施例２．１４３：リンカー組３を用いるＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）及びＰＬＧＦ（ｓｅｑ．２）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【１０４０】
【表１９８】
2013507969.tif 000305
【１０４１】
実施例２．１４４：リンカー組４を用いるＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）及びＰＬＧＦ（ｓｅｑ．２）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【１０４２】
【表１９９】
2013507969.tif 000306
【１０４３】
実施例２．１４５：リンカー組１を用いるＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）及びＰＬＧＦ（ｓｅｑ．２）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【１０４４】
【表２００】
2013507969.tif 000307
【１０４５】
実施例２．１４６：リンカー組２を用いるＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）及びＰＬＧＦ（ｓｅｑ．２）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【１０４６】
【表２０１】
2013507969.tif 000308
2013507969.tif 000309
【１０４７】
実施例２．１４７：リンカー組３を用いるＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）及びＰＬＧＦ（ｓｅｑ．２）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【１０４８】
【表２０２】
2013507969.tif 000310
【１０４９】
実施例２．１４８：リンカー組４を用いるＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）及びＰＬＧＦ（ｓｅｑ．２）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【１０５０】
【表２０３】
2013507969.tif 000311
【１０５１】
実施例２．１４９：リンカー組１を用いるＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）及びＰＬＧＦ（ｓｅｑ．２）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【１０５２】
【表２０４】
2013507969.tif 000312
【１０５３】
実施例２．１５０：リンカー組２を用いるＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）及びＰＬＧＦ（ｓｅｑ．２）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【１０５４】
【表２０５】
2013507969.tif 000313
【１０５５】
実施例２．１５１：リンカー組３を用いるＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）及びＰＬＧＦ（ｓｅｑ．２）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【１０５６】
【表２０６】
2013507969.tif 000314
2013507969.tif 000315
【１０５７】
実施例２．１５２：リンカー組４を用いるＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）及びＰＬＧＦ（ｓｅｑ．２）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【１０５８】
【表２０７】
2013507969.tif 000316
【１０５９】
実施例２．１５３：リンカー組１を用いるＨＥＲ２（ｓｅｑ．１）及びＰＬＧＦ（ｓｅｑ．２）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【１０６０】
【表２０８】
2013507969.tif 000317
2013507969.tif 000318
【１０６１】
実施例２．１５４：リンカー組２を用いるＨＥＲ２（ｓｅｑ．１）及びＰＬＧＦ（ｓｅｑ．２）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【１０６２】
【表２０９】
2013507969.tif 000319
【１０６３】
実施例２．１５５：リンカー組３を用いるＨＥＲ２（ｓｅｑ．１）及びＰＬＧＦ（ｓｅｑ．２）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【１０６４】
【表２１０】
2013507969.tif 000320
【１０６５】
実施例２．１５６：リンカー組４を用いるＨＥＲ２（ｓｅｑ．１）及びＰＬＧＦ（ｓｅｑ．２）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【１０６６】
【表２１１】
2013507969.tif 000321
【１０６７】
実施例２．１５７：リンカー組１を用いるＰＬＧＦ（ｓｅｑ．１）及びＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【１０６８】
【表２１２】
2013507969.tif 000322
【１０６９】
実施例２．１５８：リンカー組２を用いるＰＬＧＦ（ｓｅｑ．１）及びＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【１０７０】
【表２１３】
2013507969.tif 000323
2013507969.tif 000324
【１０７１】
実施例２．１５９：リンカー組３を用いるＰＬＧＦ（ｓｅｑ．１）及びＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【１０７２】
【表２１４】
2013507969.tif 000325
【１０７３】
実施例２．１６０：リンカー組４を用いるＰＬＧＦ（ｓｅｑ．１）及びＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【１０７４】
【表２１５】
2013507969.tif 000326
【１０７５】
実施例２．１６１：リンカー組１を用いるＰＬＧＦ（ｓｅｑ．１）及びＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【１０７６】
【表２１６】
2013507969.tif 000327
【１０７７】
実施例２．１６２：リンカー組２を用いるＰＬＧＦ（ｓｅｑ．１）及びＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【１０７８】
【表２１７】
2013507969.tif 000328
【１０７９】
実施例２．１６３：リンカー組３を用いるＰＬＧＦ（ｓｅｑ．１）及びＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【１０８０】
【表２１８】
2013507969.tif 000329
2013507969.tif 000330
【１０８１】
実施例２．１６４：リンカー組４を用いるＰＬＧＦ（ｓｅｑ．１）及びＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【１０８２】
【表２１９】
2013507969.tif 000331
【１０８３】
実施例２．１６５：リンカー組１を用いるＨＥＲ２（ｓｅｑ．１）及びＰＬＧＦ（ｓｅｑ．１）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【１０８４】
【表２２０】
2013507969.tif 000332
2013507969.tif 000333
【１０８５】
実施例２．１６６：リンカー組２を用いるＨＥＲ２（ｓｅｑ．１）及びＰＬＧＦ（ｓｅｑ．１）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【１０８６】
【表２２１】
2013507969.tif 000334
【１０８７】
実施例２．１６７：リンカー組３を用いるＨＥＲ２（ｓｅｑ．１）及びＰＬＧＦ（ｓｅｑ．１）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【１０８８】
【表２２２】
2013507969.tif 000335
【１０８９】
実施例２．１６８：リンカー組４を用いるＨＥＲ２（ｓｅｑ．１）及びＰＬＧＦ（ｓｅｑ．１）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【１０９０】
【表２２３】
2013507969.tif 000336
【１０９１】
実施例２．１６９：リンカー組１を用いるＨＧＦ（ｓｅｑ．１）及びＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【１０９２】
【表２２４】
2013507969.tif 000337
【１０９３】
実施例２．１７０：リンカー組２を用いるＨＧＦ（ｓｅｑ．１）及びＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【１０９４】
【表２２５】
2013507969.tif 000338
2013507969.tif 000339
【１０９５】
実施例２．１７１：リンカー組３を用いるＨＧＦ（ｓｅｑ．１）及びＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【１０９６】
【表２２６】
2013507969.tif 000340
【１０９７】
実施例２．１７２：リンカー組４を用いるＨＧＦ（ｓｅｑ．１）及びＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【１０９８】
【表２２７】
2013507969.tif 000341
【１０９９】
実施例２．１７３：リンカー組１を用いるＨＧＦ（ｓｅｑ．１）及びＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【１１００】
【表２２８】
2013507969.tif 000342
【１１０１】
実施例２．１７４：リンカー組２を用いるＨＧＦ（ｓｅｑ．１）及びＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【１１０２】
【表２２９】
2013507969.tif 000343
【１１０３】
実施例２．１７５：リンカー組３を用いるＨＧＦ（ｓｅｑ．１）及びＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【１１０４】
【表２３０】
2013507969.tif 000344
2013507969.tif 000345
【１１０５】
実施例２．１７６：リンカー組４を用いるＨＧＦ（ｓｅｑ．１）及びＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【１１０６】
【表２３１】
2013507969.tif 000346
【１１０７】
実施例２．１７７：リンカー組１を用いるＨＧＦ（ｓｅｑ．２）及びＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【１１０８】
【表２３２】
2013507969.tif 000347
【１１０９】
実施例２．１７８：リンカー組２を用いるＨＧＦ（ｓｅｑ．２）及びＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【１１１０】
【表２３３】
2013507969.tif 000348
【１１１１】
実施例２．１７９：リンカー組３を用いるＨＧＦ（ｓｅｑ．２）及びＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【１１１２】
【表２３４】
2013507969.tif 000349
【１１１３】
実施例２．１８０：リンカー組４を用いるＨＧＦ（ｓｅｑ．２）及びＶＥＧＦ（ｓｅｑ．１）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【１１１４】
【表２３５】
2013507969.tif 000350
2013507969.tif 000351
【１１１５】
実施例２．１８１：リンカー組１を用いるＨＧＦ（ｓｅｑ．２）及びＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【１１１６】
【表２３６】
2013507969.tif 000352
【１１１７】
実施例２．１８２：リンカー組２を用いるＨＧＦ（ｓｅｑ．２）及びＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【１１１８】
【表２３７】
2013507969.tif 000353
【１１１９】
実施例２．１８３：リンカー組３を用いるＨＧＦ（ｓｅｑ．２）及びＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【１１２０】
【表２３８】
2013507969.tif 000354
【１１２１】
実施例２．１８４：リンカー組４を用いるＨＧＦ（ｓｅｑ．２）及びＶＥＧＦ（ｓｅｑ．２）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【１１２２】
【表２３９】
2013507969.tif 000355
【１１２３】
実施例２．１８５：リンカー組１を用いるＨＧＦ（ｓｅｑ．２）及びＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【１１２４】
【表２４０】
2013507969.tif 000356
2013507969.tif 000357
【１１２５】
実施例２．１８６：リンカー組２を用いるＨＧＦ（ｓｅｑ．２）及びＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【１１２６】
【表２４１】
2013507969.tif 000358
【１１２７】
実施例２．１８７：リンカー組３を用いるＨＧＦ（ｓｅｑ．２）及びＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【１１２８】
【表２４２】
2013507969.tif 000359
2013507969.tif 000360
【１１２９】
実施例２．１８８：リンカー組４を用いるＨＧＦ（ｓｅｑ．２）及びＶＥＧＦ（ｓｅｑ．３）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【１１３０】
【表２４３】
2013507969.tif 000361
【１１３１】
実施例２．１８９：リンカー組１を用いるＨＥＲ２（ｓｅｑ．１）及びＨＥＲ２（ｓｅｑ．２）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【１１３２】
【表２４４】
2013507969.tif 000362
【１１３３】
実施例２．１９０：リンカー組２を用いるＨＥＲ２（ｓｅｑ．１）及びＨＥＲ２（ｓｅｑ．２）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【１１３４】
【表２４５】
2013507969.tif 000363
【１１３５】
実施例２．１９１：リンカー組３を用いるＨＥＲ２（ｓｅｑ．１）及びＨＥＲ２（ｓｅｑ．２）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【１１３６】
【表２４６】
2013507969.tif 000364
【１１３７】
実施例２．１９２：リンカー組４を用いるＨＥＲ２（ｓｅｑ．１）及びＨＥＲ２（ｓｅｑ．２）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【１１３８】
【表２４７】
2013507969.tif 000365
2013507969.tif 000366
【１１３９】
実施例２．１９３：リンカー組１を用いるＣＤ３（ｓｅｑ．２）及びＣＤ−１９（ｓｅｑ．２）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【１１４０】
【表２４８】
2013507969.tif 000367
【１１４１】
実施例２．１９４：リンカー組１を用いるＣＤ３（ｓｅｑ．３）及びＣＤ−１９（ｓｅｑ．２）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【１１４２】
【表２４９】
2013507969.tif 000368
【１１４３】
実施例２．１９５：リンカー組１を用いるＣＤ３（ｓｅｑ．２）及びＣＤ−１９（ｓｅｑ．３）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【１１４４】
【表２５０】
2013507969.tif 000369
【１１４５】
実施例２．１９６：リンカー組１を用いるＣＤ３（ｓｅｑ．３）及びＣＤ−１９（ｓｅｑ．３）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【１１４６】
【表２５１】
2013507969.tif 000370
【１１４７】
実施例２．１９７：リンカー組１を用いるＣＤ３（ｓｅｑ．２）及びＣＤ−１９（ｓｅｑ．１）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【１１４８】
【表２５２】
2013507969.tif 000371
2013507969.tif 000372
【１１４９】
実施例２．１９８：リンカー組１を用いるＣＤ３（ｓｅｑ．３）及びＣＤ−１９（ｓｅｑ．１）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【１１５０】
【表２５３】
2013507969.tif 000373
【１１５１】
実施例２．１９９：リンカー組１を用いるＣＤ３（ｓｅｑ．４）及びＣＤ−１９（ｓｅｑ．２）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【１１５２】
【表２５４】
2013507969.tif 000374
【１１５３】
実施例２．２００：リンカー組１を用いるＣＤ３（ｓｅｑ．４）及びＣＤ−１９（ｓｅｑ．３）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【１１５４】
【表２５５】
2013507969.tif 000375
【１１５５】
実施例２．２０１：リンカー組１を用いるＣＤ３（ｓｅｑ．４）及びＣＤ−１９（ｓｅｑ．１）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【１１５６】
【表２５６】
2013507969.tif 000376
【１１５７】
実施例２．２０２：リンカー組２を用いるＣＤ３（ｓｅｑ．４）及びＣＤ−１９（ｓｅｑ．１）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【１１５８】
【表２５７】
2013507969.tif 000377
【１１５９】
実施例２．２０３：リンカー組２を用いるＣＤ３（ｓｅｑ．２）及びＣＤ−１９（ｓｅｑ．２）ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【１１６０】
【表２５８】
2013507969.tif 000378
【１１６１】
実施例２．２０４：リンカー組１を用いるｍＣＤ３及びｍＣＤ−１９  ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【１１６２】
【表２５９】
2013507969.tif 000379
2013507969.tif 000380
【１１６３】
実施例２．２０５：リンカー組２を用いるｍＣＤ３及びｍＣＤ−１９  ＤＶＤ−Ｉｇの作成
【１１６４】
【表２６０】
2013507969.tif 000381
【１１６５】
実施例２．２０６：親抗体及びＤＶＤ−Ｉｇ配列をクローン化するために使用されるクローニングベクター配列
【１１６６】
【表２６１】
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【１１６７】
本発明は、分子生物学及びドラッグデリバリーの分野で公知の技術を全部参照により組み入れる。これらの技術には、以下の刊行物に記載されている技術が含まれるが、これらに限定されない。
【１１６８】
【表２６２】
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【１１６９】
参照による組み入れ
本出願を通して引用され得る（文献、特許、特許出願及びウェブサイトを含めた）すべての引用文献の内容は本明細書中に引用されている文献のように全文参照により明らかに組み入れられる。別段の指示がない限り、本発明の実施は当業界で公知の免疫学、分子生物学及び細胞生物学の一般的技術を使用する。
【１１７０】
均等
本発明は、その趣旨または必須要件を逸脱しない限り他の特別な形態で具体化され得る。従って、上記実施形態は、すべての面で本明細書中に記載されている発明を限定するよりむしろ例示と見なされる。よって、本発明の範囲は先の記載よりもむしろ添付されている特許請求の範囲により示され、従って特許請求の範囲の均等の意味及び範囲に入るすべての変化が本発明に包含されると意図される。
【図１】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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