(57)【要約】【課題】血栓形成抑制剤を提供する。【解決手段】本発明の血栓形成抑制剤は、有効成分としてトリフルサル及びクロピドグレル二硫酸塩を含む。トリフルサルとクロピドグレル二硫酸塩との質量比は、（１００〜６５０）：（３０〜１５０）であり、好ましくは、（１〜２０）：１であり、さらに好ましくは、（３〜６）：１であり、最も好ましくは、３：１又は６：１である。【選択図】図１【特許請求の範囲】
【請求項１】
有効成分がトリフルサル及びクロピドグレル二硫酸塩であり、前記トリフルサルと前記クロピドグレル二硫酸塩との質量比が（１００〜６５０）：（３０〜１５０）であることを特徴とする血栓形成抑制剤。
【請求項２】
前記薬剤の有効成分中、前記トリフルサルと前記クロピドグレル二硫酸塩との質量比が（１００〜６００）：（３０〜１００）であり、好ましくは、（１００〜６００）：（５０〜１００）であることを特徴とする請求項１に記載の血栓形成抑制剤。
【請求項３】
前記薬剤の有効成分中、前記トリフルサルと前記クロピドグレル二硫酸塩との質量比が（１００〜６００）：（９２〜１０４）であり、好ましくは、（３００〜６００）：（９２〜１０４）であることを特徴とする請求項１に記載の血栓形成抑制剤。
【請求項４】
前記薬剤の有効成分中、前記トリフルサルと前記クロピドグレル二硫酸塩との質量比が（２５０〜６５０）：（５０〜１５０）であることを特徴とする請求項１に記載の血栓形成抑制剤。
【請求項５】
前記薬剤の有効成分中、前記トリフルサルと前記クロピドグレル二硫酸塩との質量比が（２８５〜３１５）：（９５〜１０５）であることを特徴とする請求項１に記載の血栓形成抑制剤。
【請求項６】
前記薬剤の有効成分中、前記トリフルサルと前記クロピドグレル二硫酸塩との質量比が（５７０〜６３０）：（９５〜１０５）であることを特徴とする請求項１に記載の血栓形成抑制剤。
【請求項７】
前記薬剤の有効成分中、前記トリフルサルと前記クロピドグレル二硫酸塩との質量比が（１〜２０）：１であり、好ましくは、（３〜６）：１であり、最も好ましくは、３：１又は６：１であることを特徴とする請求項１に記載の血栓形成抑制剤。
【請求項８】
前記薬剤の有効成分中、前記トリフルサルと前記クロピドグレル二硫酸塩との質量比が（３００〜６００）：９８±５％であり、好ましくは、３００：９７．８７５又は６００：９７．８７５であることを特徴とする請求項１に記載の血栓形成抑制剤。
【請求項９】
単位投与量における前記薬剤中、１３０ｍｇ〜８００ｍｇの前記有効成分を含み、好ましくは、１３０ｍｇ〜７００ｍｇの前記有効成分を含むことを特徴とする請求項１から８に記載の血栓形成抑制剤。
【請求項１０】
単位投与量における前記薬剤中、１００ｍｇ〜６００ｍｇのトリフルサル及び３０ｍｇ〜１００ｍｇのクロピドグレル二硫酸塩を含み、好ましくは、１００ｍｇ〜６００ｍｇのトリフルサル及び５０ｍｇ〜１００ｍｇのクロピドグレル二硫酸塩を含むことを特徴とする請求項９に記載の血栓形成抑制剤。
【請求項１１】
単位投与量における前記薬剤中、１００ｍｇ〜６００ｍｇのトリフルサル及び９２ｍｇ〜１０４ｍｇのクロピドグレル二硫酸塩を含み、好ましくは、３００ｍｇ〜６００ｍｇのトリフルサル及び９２ｍｇ〜１０４ｍｇのクロピドグレル二硫酸塩を含むことを特徴とする請求項９に記載の血栓形成抑制剤。
【請求項１２】
単位投与量における前記薬剤中、２８５ｍｇ〜３１５ｍｇのトリフルサル及び９５ｍｇ〜１０５ｍｇのクロピドグレル二硫酸塩を含み、好ましくは、３００ｍｇのトリフルサル及び１００ｍｇのクロピドグレル二硫酸塩を含むことを特徴とする請求項９に記載の血栓形成抑制剤。
【請求項１３】
単位投与量における前記薬剤中、５７０ｍｇ〜６３０ｍｇのトリフルサル及び９５ｍｇ〜１０５ｍｇのクロピドグレル二硫酸塩を含み、好ましくは、６００ｍｇのトリフルサル及び１００ｍｇのクロピドグレル二硫酸塩を含むことを特徴とする請求項９に記載の血栓形成抑制剤。
【請求項１４】
前記薬剤は、経口剤であることを特徴とする請求項１〜１３に記載の血栓形成抑制剤。
【請求項１５】
前記薬剤は、タブレット剤、カプセル剤、顆粒剤又は乾燥懸濁剤であることを特徴とする請求項１４に記載の血栓形成抑制剤。
【請求項１６】
前記薬剤は、補助剤を含み、前記補助剤は、微結晶性セルロース、デンプングリコール酸ナトリウム、デキストリン、乳糖及びステアリン酸マグネシウム中の少なくとも１つを含むことを特徴とする請求項１から請求項１５に記載の血栓形成抑制剤。
【請求項１７】
前記薬剤は、心血管疾患及び脳血管疾患の治療に応用されることを特徴とする請求項１から請求項１６に記載の血栓形成抑制剤。
【請求項１８】
前記心血管疾患及び脳血管疾患は、血小板が凝集されることによって引き起こされる心血管疾患及び脳血管疾患であることを特徴とする請求項１７に記載の血栓形成抑制剤。
【請求項１９】
前記心血管疾患及び脳血管疾患は、狭心症、冠動脈血栓及び脳塞栓症中の少なくとも１つであることを特徴とする請求項１８に記載の血栓形成抑制剤。
【請求項２０】
前記薬剤は、血小板凝集及び／又は血栓形成の抑制に応用されることを特徴とする請求項１から請求項１６に記載の血栓形成抑制剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、血栓形成抑制剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
心筋梗塞、脳血栓などの血栓性疾患の発病率、障害発生率及び死亡率は、非常に高い。冠状動脈又は脳血管動脈の狭窄及び血栓形成は、血管が損傷し、アテローム性動脈硬化症になることによって引き起こされる。血管が損傷した際、露出した皮下組織に血小板が粘着し、血小板が内容物であるアデノシン二リン酸と、膜リン脂質の代謝によって形成されるトロンボキサンＡ２（ＴＸＡ２）と、を放出する。アデノシン二リン酸及びトロンボキサンＡ２は、循環中の血小板を活性化し、フィブリノゲンが参与することにより、血小板を凝集させる。これにより、血小板血栓が形成される。また、血管の損傷によって凝血システムが活性化される。この際、トロンビンが生成され、血小板を一層凝集させる。これにより、フィブリンが形成され、交差結合により、動脈血栓が安定的に固定される。抗血小板剤は、血小板の粘着、凝集及び解放を抑制することにより、血栓の形成を抑制するものである。従って、血栓性疾患の予防及び治療において、重要な薬剤である。
【０００３】
トリフルサルは、抗血小板剤に属する。トリフルサルは、血栓性疾患及び合併症の予防及び治療において、アセチルサリチル酸（アスピリン）よりも特殊な効果を有する。トリフルサルは、アスピリンと比較し、シクロオキシゲナーゼ及びサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼの活性を同時に抑制し、血小板の凝集を抑制する能力が高い。しかし、薬用量の場合、プロスタサイクリン生合成への影響が少なく、出血の危険性も少ない。研究により、末梢動脈閉塞性疾患（ＰＡＯＤ）患者に重篤な心血管の疾患が発生するのを予防することに対しては、トリフルサルとアスピリンとには、差がないが、重篤な出血性合併症の発生率は、アスピリンよりトリフルサルの方が顕著に低いことが示された。
【０００４】
クロピドグレルは、頻繁に使用される抗血小板剤である。そのメカニズムは、ＡＤＰレセプタであるＰ２Ｙ１２に不可逆変化を発生させ、ＡＤＰが誘導する血小板凝集を選択的に抑制するものである。また、コラーゲン及びトロンビンによって誘導される血小板凝集も抑制することができる。一般に、クロピドグレルの効果は、アスピリンよりも若干優れるとされる。しかし、その他の有効性に関しては、統計学的な差異がない。また、如何なる専門家もクロピドグレルがアスピリンより優れることを示す依拠を開示していない。しかし、高危険度の冠状脳血管疾患又は末梢血管疾患の患者中、低薬量のアスピリンの禁忌者にとって、クロピドグレル（７５ｍｇ／ｄ）は、好適な代替薬剤である。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明の目的は、血栓形成抑制剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
上述の課題を解決するために、請求項１の発明は、有効成分がトリフルサル及びクロピドグレル二硫酸塩（ｃｌｏｐｉｄｏｇｒｅｌ  ｂｉｓｕｌｆａｔｅ）であり、トリフルサルとクロピドグレル二硫酸塩との質量比が（１００〜６５０）：（３０〜１５０）であることを特徴とする血栓形成抑制剤である。
【０００７】
請求項２の発明は、薬剤の有効成分中、トリフルサルとクロピドグレル二硫酸塩との質量比が（１００〜６００）：（３０〜１００）であり、好ましくは、（１００〜６００）：（５０〜１００）であることを特徴とする請求項１に記載の血栓形成抑制剤である。
【０００８】
請求項３の発明は、薬剤の有効成分中、トリフルサルとクロピドグレル二硫酸塩との質量比が（１００〜６００）：（９２〜１０４）であり、好ましくは、（３００〜６００）：（９２〜１０４）であることを特徴とする請求項１に記載の血栓形成抑制剤である。
【０００９】
請求項４の発明は、薬剤の有効成分中、トリフルサルとクロピドグレル二硫酸塩との質量比が（２５０〜６５０）：（５０〜１５０）であることを特徴とする請求項１に記載の血栓形成抑制剤である。
【００１０】
請求項５の発明は、薬剤の有効成分中、トリフルサルとクロピドグレル二硫酸塩との質量比が（２８５〜３１５）：（９５〜１０５）であることを特徴とする請求項１に記載の血栓形成抑制剤である。
【００１１】
請求項６の発明は、薬剤の有効成分中、トリフルサルとクロピドグレル二硫酸塩との質量比が（５７０〜６３０）：（９５〜１０５）であることを特徴とする請求項１に記載の血栓形成抑制剤である。
【００１２】
請求項７の発明は、薬剤の有効成分中、トリフルサルとクロピドグレル二硫酸塩との質量比が（１〜２０）：１であり、好ましくは、（３〜６）：１であり、最も好ましくは、３：１又は６：１であることを特徴とする請求項１に記載の血栓形成抑制剤である。
【００１３】
請求項８の発明は、薬剤の有効成分中、トリフルサルとクロピドグレル二硫酸塩との質量比が（３００〜６００）：９８±５％であり、好ましくは、３００：９７．８７５又は６００：９７．８７５であることを特徴とする請求項１に記載の血栓形成抑制剤である。
【００１４】
請求項９の発明は、単位投与量における薬剤中、１３０ｍｇ〜８００ｍｇの有効成分を含み、好ましくは、１３０ｍｇ〜７００ｍｇの有効成分を含むことを特徴とする請求項１から８に記載の血栓形成抑制剤である。
【００１５】
請求項１０の発明は、単位投与量における薬剤中、１００ｍｇ〜６００ｍｇのトリフルサル及び３０ｍｇ〜１００ｍｇのクロピドグレル二硫酸塩を含み、好ましくは、１００ｍｇ〜６００ｍｇのトリフルサル及び５０ｍｇ〜１００ｍｇのクロピドグレル二硫酸塩を含むことを特徴とする請求項９に記載の血栓形成抑制剤である。
【００１６】
請求項１１の発明は、単位投与量における薬剤中、１００ｍｇ〜６００ｍｇのトリフルサル及び９２ｍｇ〜１０４ｍｇのクロピドグレル二硫酸塩を含み、好ましくは、３００ｍｇ〜６００ｍｇのトリフルサル及び９２ｍｇ〜１０４ｍｇのクロピドグレル二硫酸塩を含むことを特徴とする請求項９に記載の血栓形成抑制剤である。
【００１７】
請求項１２の発明は、単位投与量における薬剤中、２８５ｍｇ〜３１５ｍｇのトリフルサル及び９５ｍｇ〜１０５ｍｇのクロピドグレル二硫酸塩を含み、好ましくは、３００ｍｇのトリフルサル及び１００ｍｇのクロピドグレル二硫酸塩を含むことを特徴とする請求項９に記載の血栓形成抑制剤である。
【００１８】
請求項１３の発明は、単位投与量における薬剤中、５７０ｍｇ〜６３０ｍｇのトリフルサル及び９５ｍｇ〜１０５ｍｇのクロピドグレル二硫酸塩を含み、好ましくは、６００ｍｇのトリフルサル及び１００ｍｇのクロピドグレル二硫酸塩を含むことを特徴とする請求項９に記載の血栓形成抑制剤である。
【００１９】
請求項１４の発明は、薬剤は、経口剤であることを特徴とする請求項１〜１３に記載の血栓形成抑制剤である。
【００２０】
請求項１５の発明は、薬剤は、タブレット剤、カプセル剤、顆粒剤又は乾燥懸濁剤であることを特徴とする請求項１４に記載の血栓形成抑制剤である。
【００２１】
請求項１６の発明は、薬剤は、補助剤を含み、補助剤は、微結晶性セルロース、デンプングリコール酸ナトリウム、デキストリン、乳糖及びステアリン酸マグネシウム中の少なくとも１つを含むことを特徴とする請求項１から請求項１５に記載の血栓形成抑制剤である。
【００２２】
請求項１７の発明は、薬剤は、心血管疾患及び脳血管疾患の治療に応用されることを特徴とする請求項１から請求項１６に記載の血栓形成抑制剤である。
【００２３】
請求項１８の発明は、心血管疾患及び脳血管疾患は、血小板が凝集されることによって引き起こされる心血管疾患及び脳血管疾患であることを特徴とする請求項１７に記載の血栓形成抑制剤である。
【００２４】
請求項１９の発明は、心血管疾患及び脳血管疾患は、狭心症、冠動脈血栓及び脳塞栓症中の少なくとも１つであることを特徴とする請求項１８に記載の血栓形成抑制剤である。
【００２５】
請求項２０の発明は、薬剤は、血小板凝集及び／又は血栓形成の抑制に応用されることを特徴とする請求項１から請求項１６に記載の血栓形成抑制剤である。
【発明の効果】
【００２６】
本発明は、心血管疾患及び脳血管疾患の治療薬を提供するものである。本発明の提供する薬剤の有効成分は、トリフルサル及びクロピドグレル二硫酸塩であり、両者は協同作用を有する。実験結果から、トリフルサルとクロピドグレル二硫酸塩との混合薬剤は、トリフルサルとクロピドグレルとの混合薬剤（対照薬剤）より、血栓形成及び血小板凝集の抑制効果が高いことが示された。また、本発明のトリフルサルとクロピドグレル二硫酸塩との混合薬剤は、トリフルサル単体の薬剤及びクロピドグレル二硫酸塩単体の薬剤より、血栓形成及び血小板凝集の抑制効果が遥かに高いことが示された。また、６ヶ月間の安定性試験から、トリフルサルとクロピドグレル二硫酸塩との混合薬剤は、トリフルサルとクロピドグレルとの混合薬剤（対照薬剤）より、安定性が高いことが示された。
【図面の簡単な説明】
【００２７】
【図１】薬剤ＩＩのスペクトル図である。
【図２】対照薬剤ＩＩのスペクトル図である。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
本発明の目的、特徴および効果を示す実施形態を図面に沿って詳細に説明する。以下に示す実施例中の実験方法は、特に説明がない限り、従来の実験方法である。以下に示す実施例中の実験材料は、特に説明がない限り、一般の生化学試薬の販売業者から購入可能なものである。以下の実施例中の％は、特に説明がない限り、含有量の重量パーセントである。
【００２９】
実験に使用したトリフルサル、クロピドグレル及びクロピドグレル二硫酸塩は、大連天宇海浜製薬有限公司の新薬研究開発センターから購入した。
【００３０】
（実施例１）
１．ラットに対する血栓形成抑制作用
体重が３００ｇ〜４００ｇのＳＤラット１３０匹を雄雌各半数ずつ準備した。それをランダムに１３群に分け（各群１０匹ずつ）、投薬状況の違いに応じ、第１群〜第１３群とした。第１群〜第１３群の投薬内容を以下に示す。
【００３１】
第１群：対照群である。生理食塩水を与えた。
【００３２】
第２群：トリフルサルとクロピドグレルとの混合薬剤の対照群である。トリフルサルとクロピドグレルとの混合薬剤を投与した。トリフルサルとクロピドグレルとの重量比は、１：１である。
【００３３】
第３群：トリフルサルとクロピドグレル二硫酸塩との混合薬剤を投与した。トリフルサルとクロピドグレル二硫酸塩との重量比は、２０：１である。
【００３４】
第４群：トリフルサルとクロピドグレル二硫酸塩との混合薬剤を投与した。トリフルサルとクロピドグレル二硫酸塩との重量比は、１２：１である。
【００３５】
第５群：トリフルサルとクロピドグレル二硫酸塩との混合薬剤を投与した。トリフルサルとクロピドグレル二硫酸塩との重量比は、６：１である。
【００３６】
第６群：トリフルサルとクロピドグレル二硫酸塩との混合薬剤を投与した。トリフルサルとクロピドグレル二硫酸塩との重量比は、３：１である。
【００３７】
第７群：トリフルサルとクロピドグレル二硫酸塩との混合薬剤を投与した。トリフルサルとクロピドグレル二硫酸塩との重量比は、１：１である。
【００３８】
第８群：トリフルサルのみを投与した。
【００３９】
第９群：クロピドグレル二硫酸塩のみを投与した。
【００４０】
第１０群：トリフルサルとクロピドグレルとの混合薬剤を投与した。トリフルサルとクロピドグレルとの重量比は、２０：１である。
【００４１】
第１１群：トリフルサルとクロピドグレルとの混合薬剤を投与した。トリフルサルとクロピドグレルとの重量比は、１２：１である。
【００４２】
第１２群：トリフルサルとクロピドグレルとの混合薬剤を投与した。トリフルサルとクロピドグレルとの重量比は、６：１である。
【００４３】
第１３群：トリフルサルとクロピドグレルとの混合薬剤を投与した。トリフルサルとクロピドグレルとの重量比は、３：１である。
【００４４】
実験方法：各群に薬剤を胃内投与した。対照群には、同質量の生理食塩水を与えた。１日１回、毎回、体重１ｋｇあたり１０ｍｇの薬剤（混合薬剤の場合、１０ｍｇは、混合薬剤の質量）を５日間投与した。
【００４５】
ラットへの投薬５日目の最後の投薬から１時間後に、ラットの体重を測定し、３％のペントバルビタール麻酔を注射した（体重１ｋｇあたり１ｍｌ）。その後、ラットを仰臥位で固定し、頚部中央を切開し、気管、両側の頚動脈及び静脈を分離した。ポリエチレン管内に６ｃｍの絹糸を通し、ポリエチレン管内をヘパリン生理食塩水で充満させた。ポリエチレン管の一方の端部を左側の頚静脈に挿入した後、凝集を阻害するために、ポリエチレン管からヘパリンを正確に注入し、ポリエチレン管の他方の端部を右側の頚動脈に挿入した。その後、動脈鉗子を開け、Ａ−Ｖバイパスを形成した。血流を１５分間開放し、ポリエチレン管を取り出し、絹糸（血栓を含む）を引き出した。絹糸を重量を測定した小型ペトリ皿中に置き、化学天秤で血栓の湿重量を測定した。総重量から絹糸の重量を引いたものが血栓の重量である。血栓形成抑制率（％）＝（生理食塩水対照群の血栓重量−投薬群の血栓重量）／生理食塩水対照群の血栓重量×１００％である。結果を表１に示す。
【００４６】
（表１）各投薬群の血栓重量比較（χ±ｓ）
2013507400.tif 000002
注：生理食塩水対照群との比較  ＊＊Ｐ＜０．０１
実験結果から以下に示すことが分かった。トリフルサルとクロピドグレル又はクロピドグレル二硫酸塩とは、血栓形成阻害に対して協同作用がある。質量比が１：１であるトリフルサル及びクロピドグレル二硫酸塩の群（第７群）の血栓形成抑制作用は、質量比が１：１であるトリフルサル及びクロピドグレルの群（第２群）より優れる。他の質量比の薬剤においても、トリフルサル及びクロピドグレル二硫酸塩の群の血栓形成抑制作用は、トリフルサル及びクロピドグレルの群より優れる。トリフルサル及びクロピドグレル二硫酸塩の群中、６：１及び３：１の質量比が優れる。また、トリフルサル及びクロピドグレル二硫酸塩の群は、トリフルサル単体の群及びクロピドグレル二硫酸塩単体の群より優れる。
【００４７】
２．ラットの血小板凝集に対する影響（比濁法）
体重が３００ｇ〜４００ｇのＳＤラット１３０匹を雄雌各半数ずつ準備した。それをランダムに１３群に分け（各群１０匹ずつ）、投薬状況の違いに応じ、第１群〜第１３群とした。第１群〜第１３群の投薬内容を以下に示す。
【００４８】
第１群：対照群である。生理食塩水を与えた。
【００４９】
第２群：トリフルサルとクロピドグレルとの混合薬剤の対照群である。トリフルサルとクロピドグレルとの混合薬剤を投与した。トリフルサルとクロピドグレルとの重量比は、１：１である。
【００５０】
第３群：トリフルサルとクロピドグレル二硫酸塩との混合薬剤を投与した。トリフルサルとクロピドグレル二硫酸塩との重量比は、２０：１である。
【００５１】
第４群：トリフルサルとクロピドグレル二硫酸塩との混合薬剤を投与した。トリフルサルとクロピドグレル二硫酸塩との重量比は、１２：１である。
【００５２】
第５群：トリフルサルとクロピドグレル二硫酸塩との混合薬剤を投与した。トリフルサルとクロピドグレル二硫酸塩との重量比は、６：１である。
【００５３】
第６群：トリフルサルとクロピドグレル二硫酸塩との混合薬剤を投与した。トリフルサルとクロピドグレル二硫酸塩との重量比は、３：１である。
【００５４】
第７群：トリフルサルとクロピドグレル二硫酸塩との混合薬剤を投与した。トリフルサルとクロピドグレル二硫酸塩との重量比は、１：１である。
【００５５】
第８群：トリフルサルのみを投与した。
【００５６】
第９群：クロピドグレル二硫酸塩のみを投与した。
【００５７】
第１０群：トリフルサルとクロピドグレルとの混合薬剤を投与した。トリフルサルとクロピドグレルとの重量比は、２０：１である。
【００５８】
第１１群：トリフルサルとクロピドグレルとの混合薬剤を投与した。トリフルサルとクロピドグレルとの重量比は、１２：１である。
【００５９】
第１２群：トリフルサルとクロピドグレルとの混合薬剤を投与した。トリフルサルとクロピドグレルとの重量比は、６：１である。
【００６０】
第１３群：トリフルサルとクロピドグレルとの混合薬剤を投与した。トリフルサルとクロピドグレルとの重量比は、３：１である。
【００６１】
実験方法：各群に薬剤を胃内投与した。対照群には、同質量の生理食塩水を与えた。１日１回、毎回、体重１ｋｇあたり１０ｍｇの薬剤（混合薬剤の場合、１０ｍｇは、混合薬剤の質量）を７日間投与した。
【００６２】
ラットへの投薬７日目の最後の投薬から３０分後に、ラットの眼部後部の動脈から採血し、凝固を阻止するために、０．１３％のクエン酸ナトリウムを添加した（血液と抗凝血剤との容積比は、９：１）。血液をシリコン試験管に注入し、プラスチックフィルムでシリコン試験管口に蓋をした。シリコン試験管を３回から４回転倒混和し、血液と抗凝血剤とを十分に混合させた。清潔なろ紙を用いて管壁に残留した血液を取り除き、シリコン試験管の蓋をきつく閉めた。次に、１０００ｒ／ｍｉｎの速度で１０分間遠心処理し、上層の血漿（ＰＲＰ）を取り出した。残った血漿を３０００ｒ／ｍｉｎの速度で２０分間遠心処理した。下層の透明液体がＰＰＰである。ＰＲＰ中の血小板数を計数し、ＰＰＰを用いてＰＲＰ中の血小板を２００×１０９／Ｌに調整した。次に、シリコン処理されたピペットを用いて、ＰＰＰ及びＰＲＰを４５０ｕｌずつ不透明管内に入れた。測定時、まず、ＰＰＰ標本により、記録計器の透光度を１００に調整した。その後、ＰＲＰ標本を測定孔に入れ、透光度を１０に調節し、磁気撹拌棒を加え、３７℃で３分間予熱した。記録計器を開け、ＰＲＰ中に血小板凝集を誘導するアデノシン二リン酸（ＡＤＰ）を加えた。ＣＨＲＯＮＤ−Ｌｏｇ血小板凝集測定装置（米国製）を用いて、凝集曲線から血小板の最大凝集率Ａｍａｘ（％）を算出した。Ａｍａｘ＝ｈ１／ｈ０×１００％である。血小板凝集抑制率＝[（生理食塩水群のＡｍａｘ−投薬群のＡｍａｘ）／生理食塩水群のＡｍａｘ]×１００％である。
【００６３】
実験結果を表２に示す。
【００６４】
（表２）各投薬群のラットの血小板凝集性への影響（χ±ｓ）
2013507400.tif 000003
注：生理食塩水対照群との比較  ＊＊Ｐ＜０．０１
実験結果から以下に示すことが分かった。トリフルサルとクロピドグレル二硫酸塩との混合薬剤の血小板凝集抑制率は、トリフルサル単体及びクロピドグレル二硫酸塩単体より高い。また、他の質量比の薬剤においても、トリフルサルとクロピドグレル二硫酸塩との混合薬剤の血小板凝集抑制率は、トリフルサルとクロピドグレルとの混合薬剤より高い。
【００６５】
３．本発明の薬剤の安定性
以下の薬剤Ｉ〜薬剤Ｖに示す比率で各種薬剤を調合した。
【００６６】
薬剤Ｉ：トリフルサルとクロピドグレル二硫酸塩との質量比が１：１
薬剤ＩＩ：トリフルサルとクロピドグレル二硫酸塩との質量比が３：１
薬剤ＩＩＩ：トリフルサルとクロピドグレル二硫酸塩との質量比が６：１
薬剤ＩＶ：トリフルサルとクロピドグレル二硫酸塩との質量比が１２：１
薬剤Ｖ：トリフルサルとクロピドグレル二硫酸塩との質量比が２０：１
対照薬剤Ｉ：トリフルサルとクロピドグレルとの質量比が１：１
対照薬剤ＩＩ：トリフルサルとクロピドグレルとの質量比が３：１
対照薬剤ＩＩＩ：トリフルサルとクロピドグレルとの質量比が６：１
対照薬剤ＩＶ：トリフルサルとクロピドグレルとの質量比が１２：１
対照薬剤Ｖ：トリフルサルとクロピドグレルとの質量比が２０：１
各１０ｇの薬剤を薬用プラスチック瓶内に装入した。温度が４０℃±２℃で、相対湿度が７５％±５％の条件下において、６ヶ月間放置した。０、１、３及び６ヶ月後に外観を観察し、有効成分を測定した。有効成分の測定には、高性能液体クロマトグラフィー法を用いた。クロマトグラフィーカラムは、シアノ基カラムであった。流動相は、メタノール−水−トリエチルアミン（体積比は、５００：５００：２であり、リン酸により、ｐｈを３．８に調整した）であった。流動速度は、１ｍｌ／ｍｉｎであった。検出波長は、２３５ｎｍであった。カラム温度は、３５℃であった。注入量は、２０μｌであった。実験の結果、クロピドグレル二硫酸塩とトリフルサルとを完全に分離させることができ、クロピドグレルとトリフルサルとを完全に分離させることができ、良好な分離性を有した。クロピドグレル二硫酸塩の１２．０ｍｇ／ｌ〜１００．０ｍｇ／ｌ内における質量濃度は、ピーク面積と良好な直線関係にあり、回帰方程式は、Ａ＝０．１７６Ｃ＋０．０４７４ｒ＝０．９９９５であった。クロピドグレルの９．２ｍｇ〜７５．９ｍｇ／ｌ内における質量濃度は、ピーク面積と良好な直線関係にあり、回帰方程式は、Ａ＝０．１９１Ｃ＋０．０５８４ｒ＝０．９９９７であった。トリフルサルの３８．４ｍｇ／ｌ〜３２０．０ｍｇ／ｌ内における質量濃度は、ピーク面積と良好な直線関係にあり、回帰方程式は、Ａ＝０．２９９１Ｃ＋０．９８８２ｒ＝０．９９９７であった。クロピドグレル二硫酸塩、クロピドグレル及びトリフルサルの平均回収率は、それぞれ、９９．７±１．８０％、９９．２±１．０１％及び１００．２±０．８１％であったため、クロピドグレル二硫酸塩、クロピドグレル及びトリフルサルの測定には、高速液体クロマトグラフィー法（ＨＰＬＣ法）が適用された。クロピドグレルの保持時間は、１５．１６５分間であった。トリフルサルの保持時間は、約７．６８２分間であった。クロピドグレル二硫酸塩の保持時間は、約１５．２９８分間であった。薬剤ＩＩのスペクトル図を図１に示し、対照薬剤ＩＩのスペクトル図を図２に示す。結果を表３及び表４に示す。
【００６７】
（表３）各経過時間後における薬剤中のクロピドグレル二硫酸塩及びトリフルサルの残余質量
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（表４）各経過時間後における薬剤中のクロピドグレル及びトリフルサルの残余質量
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以上の結果から、各質量比におけるトリフルサルとクロピドグレル二硫酸塩との混合薬剤の室温における安定性は、トリフルサルとクロピドグレルとの混合薬剤より優れることが示された。
【００６８】
（実施例２）
心血管疾患及び脳血管疾患の治療薬（カプセル剤）の製造及び応用
１．トリフルサル及びクロピドグレル二硫酸塩のカプセル剤の製造
トリフルサル１００ｇとクロピドグレル二硫酸塩３０ｇとを均一に混合した後、ステアリン酸マグネシウム２ｇを加え、均一に混合した後、カプセル１０００粒に充填した。
【００６９】
２．トリフルサル及びクロピドグレル二硫酸塩のカプセル剤の製造
トリフルサル６００ｇとクロピドグレル二硫酸塩１００ｇとを均一に混合した後、デキストリンを適量加え、均一に混合した後、顆粒状にし、その後、カプセル１０００粒に充填した。
【００７０】
３．トリフルサル及びクロピドグレルのカプセル剤の製造
トリフルサル３００ｇ及びクロピドグレル７５ｇにカルボキシメチルデンプン１２０ｇ及びステアリン酸マグネシウム５ｇを加え、均一に混合した後、カプセル１０００粒に充填した。
【００７１】
４．トリフルサル及びクロピドグレルのカプセル剤の製造
トリフルサル６００ｇとクロピドグレル７５ｇとを均一に混合した後、デキストリンを適量加え、均一に混合した後、顆粒状にし、その後、カプセル１０００粒に充填した。
【００７２】
５．トリフルサル及びクロピドグレル二硫酸塩のカプセル剤の製造
トリフルサル３００ｇとクロピドグレル二硫酸塩９７．８７５ｇとカルボキシメチルデンプン１００ｇとステアリン酸マグネシウム２．１ｇとを均一に混合した後、カプセル１０００粒に充填した。
【００７３】
（実施例３）
心血管疾患及び脳血管疾患の治療薬（タブレット剤）の製造
１．トリフルサル６００ｍｇ及びクロピドグレル二硫酸塩９７．９ｍｇを含有するタブレット剤の製造
クロピドグレル二硫酸塩９７．９ｍｇと無水コロイド状二酸化ケイ素２ｍｇとを混合した後、膠化コーンスターチ３０ｍｇ及び無水乳糖２０ｍｇを加えて混合し、トリフルサル６００ｍｇ及び微結晶性セルロース３０ｍｇを加えた後、成形した。
【００７４】
２．トリフルサル及びクロピドグレル二硫酸塩の混合薬剤（タブレット剤）の製造
トリフルサル３００ｇとクロピドグレル二硫酸塩９７．８７５ｇとを均一に混合した後、微結晶性セルロース１５０ｇ及び架橋ポリビニルピロリドン１０ｇを加えた。その後、粉砕し、エタノールによって軟化させた。次に、６０メッシュの篩で篩った後、粒剤にし、５０℃で乾燥させた。次に、６０メッシュの篩で整粒し、カルボキシルメチルデンプンナトリウム１０ｇ、アスパルテーム２ｇ及びステアリン酸マグネシウム３０ｇを加えて均一に混合し、成形して１０００個のタブレット剤を製造した。
【００７５】
３．トリフルサル及びクロピドグレル二硫酸塩の混合薬剤（タブレット剤）の製造
トリフルサル６００ｇ及びクロピドグレル二硫酸塩９７．８７５ｇにデンプン及びステアリン酸マグネシウムを適量加え、直接成形して１０００個のタブレット剤を製造した。
【図１】
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【図２】
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【国際調査報告】
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