(57)【要約】本発明は、薬物として使用するための、少なくとも１種のポリフェノール、少なくとも１種のポリエチレングリコールおよび／または機能的等価物、ならびに少なくとも１種のグリコールエーテルおよび／または機能的等価物を含有する組成物に関する。本発明による組成物は、また、食品サプリメントまたは機能性食品として使用することができる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ．少なくとも１種のポリフェノール；
ｂ．少なくとも１種のポリエチレングリコールおよび／または機能的等価物；ならびに
ｃ．少なくとも１種のグリコールエーテルおよび／または機能的等価物
を含む、医薬品として適用するための組成物。
【請求項２】
糖尿病などの代謝性疾患の処置に使用するための、請求項１記載の組成物。
【請求項３】
メトホルミン、スルホニル尿素、グリコシダーゼ阻害剤、グリプチンなどのＤＰＰ４阻害剤、チアゾリジンジオンまたはスルファミドなどの、少なくとも１種の他の活性主薬を含有することを特徴とする、請求項２記載の組成物。
【請求項４】
ＤＰＰ４阻害剤が、シタグリプチン、ビルダグリプチン、サキサグリプチン、アログリプチン、またはＧＬＰ−１分解の直接もしくは間接阻害に関連づけられている他の分子であることを特徴とする、請求項３記載の組成物。
【請求項５】
ＤＰＰ４阻害剤がシタグリプチンであることを特徴とする、請求項４記載の組成物。
【請求項６】
関節リウマチなどの炎症性疾患、脊椎症、クローン病、関節疾患、変形性膝関節症などの関節症の処置に使用するための、請求項１記載の組成物。
【請求項７】
アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、白質希薄化、進行性核上性麻痺、多発性硬化症または筋萎縮性側索硬化症などの神経変性疾患の処置に使用するための、請求項１記載の組成物。
【請求項８】
心血管代謝リスク因子の管理、および高血圧、アテローム性動脈硬化症、心筋梗塞、心不全または動脈瘤などの心血管疾患の処置に使用するための、請求項１記載の組成物。
【請求項９】
プレバイオティックとして使用するための、請求項１記載の組成物。
【請求項１０】
ポリフェノールがレスベラトロールであることを特徴とする、請求項１〜７記載の組成物。
【請求項１１】
ポリエチレングリコールが、式Ｈ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎＯＨ［式中、ｎは３よりも大きい］に対応するポリマーであることを特徴とする、請求項１〜８記載の組成物。
【請求項１２】
グリコールエーテルが、ジエチレングリコールエーテル、好ましくはジエチレングリコールアルキルエーテル、特に（Ｃ１−Ｃ４）ジエチレングリコールアルキルエーテル、さらに詳細にはモノ（Ｃ１−Ｃ４）ジエチレングリコールアルキルエーテル、好都合にはジエチレングリコールモノエチルエーテルより選択されることを特徴とする、請求項１〜９記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の技術分野：
本発明は、医薬品として適用するための、少なくとも１種のポリフェノール、少なくとも１種のポリエチレングリコールおよび／または機能的等価物、ならびに少なくとも１種のグリコールエーテルおよび／または機能的等価物を含有する組成物に関する。
【０００２】
先行技術：
疎水性分子であるポリフェノールは、種子植物に分類される植物、特にブドウ中に自然に存在する化合物である。そのような化合物、例えばレスベラトロールは、ブドウおよびワイン中から見出される。
【０００３】
ポリフェノールの中に、ヒドロキシスチルベンがある。先行技術においてヒドロキシスチルベンは、とりわけ色素脱失剤として（JP87-192040）、血管拡張剤として（EP96-830517）、抗血栓剤として（JP05016413）、様々な心血管障害の処置に（CA2187990）、突然変異誘発および発ガンの阻害剤として（JP06024967）使用され、または抗酸化剤としても記載されている。
【０００４】
レスベラトロール（３，４’，５−トリヒドロキシスチルベン）は、ポリフェノール性フィトアレキシンである。この化合物は、植物によって合成され、感染（Botrytis cinerea）に対して抗真菌物質として作用する。レスベラトロールは、針葉樹、ピーナッツ、赤ブドウの果皮、ある種のマメ科植物およびPolygonum cuspidatumなどの様々な植物中に存在する。
【０００５】
レスベラトロールは、中国および日本の伝統医学で長い間知られてきた治療有益性を有する。レスベラトロールは、「フレンチパラドックス」と呼ばれる、心血管リスク減少の原因として関係づけられている。実際に、高レベルのレスベラトロールを含有する赤ワインの消費と冠動脈疾患の減少の間に相関が確立されている。レスベラトロールがアリール炭化水素およびダイオキシンのレセプター（ＡｈＲ）のアンタゴニストであることが数多くの科学的研究で実証されている（Casper, R. F. et al., Mol. Pharmacol. 1999, 56, 784-790）。
【０００６】
レスベラトロールは、また、抗酸化、抗炎症、および骨保護活性を有し、ある種のガンに予防効果を有する可能性がある。
【０００７】
レスベラトロールの吸収を研究するためにin vivoモデルが使用されている。ラットでは赤ワインの吸収後の異なる時点で動態研究が行われた。結果は、摂取の６０分後に吸収ピークが検出されることを示している。短時間後に、レスベラトロールは肝臓および腎臓で検出される（吸収１時間後にマイクロモル濃度のピーク）。優先的排出器官としての腎臓による排出は非常に迅速である。他の研究は、１５分後に血清レスベラトロールが出現し、３０分後に非常に迅速に減少することを示している。マウスにおいて類似の研究が行われた。レスベラトロールの最大の吸収は十二指腸で起こると思われ、レスベラトロールの排出は非常に迅速であって、吸収のピークは３０分である。
【０００８】
これらの研究から、レスベラトロールが非常に迅速に吸収され、腸肝循環の間に代謝され、排泄されることが分かる。
【０００９】
ex vivoおよびin vitroの数多くの研究が、レスベラトロール投与後の様々な器官におけるその局在および産生された代謝物を同定するために、レスベラトロールの吸収および代謝に焦点を当てている。
【００１０】
ex vivoモデルは、ラット小腸の潅流によって代表される。この種の研究は、レスベラトロールが小腸から４６％のレベルで抽出され、２１％が血管に、わずか２％が腸に局在することを示している。このレスベラトロールは、４０％が遊離型で、一方１１％がグルクロノ抱合型であり、３％が硫酸化型である。グルクロノシド型は、循環系に存在する形態であり、一方で硫酸化型は腸内腔に分泌される形態である。この同じ種類の研究が、潅流された回腸および結腸のモデルで実施されている。
【００１１】
その結果は、ごくわずかな比率のレスベラトロールだけが代謝されないことを示している。ヒト肝臓または腸の類似モデルを用いた研究もまた、レスベラトロールが非常に迅速に代謝されることを示している。したがって、レスベラトロールは、腸で吸収および代謝される。レスベラトロールが循環中を通過する場合、血清タンパク質によって大部分が担持される。
【００１２】
細胞系（腸細胞系ＣａＣｏ−２）を用いたin vitro研究は、潅流された腸モデルで得られた結果を確認するものであった。
【００１３】
最終的に、２００３年以来代謝およびバイオアベイラビリティーの研究がヒトで行われてきた。主要なデータは、レスベラトロールが３０分後に血清濃度のピークに達することを示している。３０分を超えると、非荷電で代謝されていないレスベラトロールが見出されることはまれである。最大の場合で、２％のレスベラトロールが血漿中に非荷電で見出される。
【００１４】
全てのこれらのデータは、治療薬としてのレスベラトロールの活性が、その腸吸収およびその代謝の迅速性に起因するそのバイオアベイラビリティーに密接に結びついていることを示唆している。
【００１５】
このように、レスベラトロールを用いて得られた結果が治療用医薬品としては不十分であるのは、本質的にそのバイオアベイラビリティーが不十分であることが原因である。
【００１６】
したがって、本発明者らは、上皮細胞を経由したレスベラトロールの吸収を増大させ、その結果そのバイオアベイラビリティーを増大させることのできる薬学的形態を使用した。
【００１７】
この特別な薬学的形態のレスベラトロールのおかげで、代謝性疾患または心血管疾患などの様々な障害において驚くべき目覚ましい結果を得ることが可能になった。
【００１８】
発明の概要
したがって、本発明は、少なくとも１種のポリフェノール、少なくとも１種のポリエチレングリコールおよび／または機能的等価物、ならびに少なくとも１種のグリコールエーテルおよび／または機能的等価物を含む医薬品として適用するための組成物に関する。
【００１９】
本発明による組成物は、好ましくは、代謝性疾患、炎症性疾患、神経変性疾患、心血管疾患を処置するために、およびプレバイオティック（prebiotic）として使用される。
【００２０】
発明の詳細な説明
組成物および治療的使用
本発明は、第一に、
ａ．少なくとも１種のポリフェノール；
ｂ．少なくとも１種のポリエチレングリコールおよび／または機能的等価物；ならびに
ｃ．少なくとも１種のグリコールエーテルおよび／または機能的等価物
を含む、医薬品として適用するための組成物に関する。
【００２１】
好ましい一態様では、本発明による組成物は、代謝性疾患を処置するために有用である。
【００２２】
「代謝性疾患」という用語は、正常な代謝を妨害する任意の種類の栄養疾患または症候群を意味する。好ましくは、本発明による代謝性疾患は、エネルギー代謝障害である。
【００２３】
「エネルギー代謝障害」という用語は、エネルギーを供給する栄養素（炭水化物、脂質、タンパク質）の代謝が妨害される栄養疾患または症候群を意味する。これらの随伴性栄養疾患および症候群は、例えば糖尿病、任意の高血糖症候群、肥満、体重過多、栄養不良、栄養失調、悪液質である。
【００２４】
なおより好ましい一態様では、本発明による組成物は、少なくとも１種の他の活性主薬を含有することがある。
【００２５】
この活性主薬は、メトホルミン、スルホニル尿素、グリコシダーゼ阻害剤、グリプチンなどのＤＰＰ４阻害剤、チアゾリジンジオンまたはスルファミドなどの経口抗糖尿病薬のことがある。
【００２６】
好ましい一態様では、ＤＰＰ４阻害剤は、シタグリプチン、ビルダグリプチン、サキサグリプチン、アログリプチン、またはＧＬＰ−１分解の直接もしくは間接阻害に関与する他の分子である。
【００２７】
別の好ましい態様では、本発明による組成物は、炎症性疾患を処置するために有用である。
【００２８】
「炎症性疾患」という用語は、例えば関節リウマチ、脊椎症、クローン病、関節疾患、変形性膝関節症などの関節症を意味する。本発明による組成物は、また、例えばプロテーゼ装着後の、術後炎症に有用なことがある。
【００２９】
別の好ましい態様では、本発明による組成物は、神経変性疾患を処置するために有用である。
【００３０】
「神経変性疾患」という用語は、例えばアルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、白質希薄化、進行性核上性麻痺、多発性硬化症または筋萎縮性側索硬化症を意味する。
【００３１】
別の好ましい態様では、本発明による組成物は、記憶障害および認知障害を処置するために有用である。この組成物は、記憶および認知機能を喪失するリスクを予防するために高齢者に使用することができる。
【００３２】
別の好ましい態様では、本発明による組成物は、心血管疾患を処置するために有用である。
【００３３】
「心血管疾患」という用語は、例えば高血圧、アテローム性動脈硬化症、心筋梗塞、心不全または動脈瘤を意味する。
【００３４】
別の好ましい態様では、本発明による組成物は、心血管代謝リスク因子の管理に有用である。
【００３５】
「心血管代謝リスク」という用語は、健康被験者の標準値に対する全形態の脂質、すなわちＬＤＬ、ＨＤＬ、トリグリセリド、遊離脂肪酸、脂質粒子形態のもの、グルコース、炎症分子、酸化促進分子、血小板凝集、一酸化窒素および誘導体の循環濃度における変化を意味する。
【００３６】
別の好ましい態様では、本発明による組成物は、プレバイオティックとして有用である。
【００３７】
「プレバイオティック」という用語は、健康に有益効果を発揮するように腸内微生物叢を改変する分子を意味する。プレバイオティックは、特に代謝性疾患および心血管疾患、結腸ガンのリスク、ビタミン欠乏症、骨脱灰に作用する。腸内微生物叢の変化は、特にプレバイオティックに応答したBifidobacterium属およびLactobacterium属の菌数の増加によって特徴づけられる。
【００３８】
好ましい一態様では、本発明による組成物は、代謝性疾患および心血管疾患などの疾患の予防に使用することができる。
【００３９】
好ましい一態様では、本発明による組成物は、神経筋疾患を処置するために有用である。
【００４０】
「神経筋疾患」という用語は、例えば筋障害および筋萎縮を意味する。
【００４１】
別の好ましい態様では、本発明による組成物は、食品サプリメントまたは機能性食品として使用することができる。
【００４２】
「食品サプリメント」という用語は、栄養または生理学的効果を有し、硬および軟カプセル、トローチ剤、錠剤、アンプル、輸液または経口液剤の形態で販売される、日常のヒトの食物を補充することを目的とする食料品を意味する。
【００４３】
「機能性食品」という用語は、基本的な栄養学的特徴とは独立して、健康上の有益性（健康と同様に疾患リスクの減少）を提供する生理活性食物成分を有する製品を意味する。
【００４４】
好ましい一態様では、本発明による組成物は、天然ポリフェノールまたは合成ポリフェノールでありうる少なくとも１種のポリフェノールを含有する。
【００４５】
「合成ポリフェノール」という用語は、より具体的には、生物学的材料（植物）からの抽出ではなく化学合成によって得られた任意のポリフェノール、および天然構造に対する原子の置換または付加によって改変された、天然ポリフェノールの任意の誘導体を意味する。好都合には、これらの置換は、ハロゲン（Ｃｌ−、ＣＦ３−）または一般構造Ｒ−Ｏ−の基である［式中、Ｒは脂肪族鎖または芳香環またはニトロ化された基である］。
【００４６】
好ましい一態様では、本発明による組成物は、式（Ｉ）
【００４７】
【化１】
2013518034.tif 000002
［式中、ｎは０以上４以下の整数であり、ｍは０以上５以下の整数である］で示されるヒドロキシスチルベンである少なくとも１種のポリフェノールを含有する。これらの化合物は、cisまたはtrans形態でありうる。本発明によれば、ヒドロキシスチルベンという用語は、式Ｉで示される化合物と、それらのヒドロキシアルキル化誘導体との両方を包含する。
【００４８】
ヒドロキシスチルベンの中で、本発明者らは、モノヒドロキシスチルベン、ジヒドロキシスチルベン、トリヒドロキシスチルベン、テトラヒドロキシスチルベン、ペンタヒドロキシスチルベン、ヘキサヒドロキシスチルベン、ヘプタヒドロキシスチルベン、オクタヒドロキシスチルベン、およびノナヒドロキシスチルベン、またはそれらのヒドロキシアルキル化誘導体、例えば４’−ヒドロキシスチルベン、２’，４’−ジヒドロキシスチルベン、３’，４’−ジヒドロキシスチルベン、４，４’−ジヒドロキシスチルベン、２’，４’，４−トリヒドロキシスチルベン、３’，４’，４−トリヒドロキシスチルベン、２，４，４’−トリヒドロキシスチルベン、３，４，４’−トリヒドロキシスチルベン、３，４’，５−トリヒドロキシスチルベン、２’，３，４−トリヒドロキシスチルベン、２，３’，４−トリヒドロキシスチルベン、２’，２，４’−トリヒドロキシスチルベン、２，４，４’，５−テトラヒドロキシスチルベン、２’，３，４’，５−テトラヒドロキシスチルベン、２，２’，４，４’−テトラヒドロキシスチルベン、３，３’，４’，５−テトラヒドロキシスチルベン、２，３’，４，４’−テトラヒドロキシスチルベン、３，３’，４，４’−テトラヒドロキシスチルベン、３，３’，４’，５、５’−ペンタヒドロキシスチルベン、２，２’，４，４’，６−ペンタヒドロキシスチルベン、２，３’，４，４’，６−ペンタヒドロキシスチルベン、２，２’，４，４’，６，６’−ヘキサヒドロキシスチルベンなどを挙げることができる。
【００４９】
好ましくは、本発明による組成物は、３，４’，５−トリヒドロキシスチルベンまたはレスベラトロールを含有する。
【００５０】
別の好ましい態様では、本発明による組成物は、少なくとも１種のポリエチレングリコールおよび／または機能的等価物を含有する。
【００５１】
本発明によれば、「機能的等価物」という用語は、ポリフェノール化合物と混合された場合に、後者に対してポリエチレングリコールおよび／またはグリコールエーテルと同じ効果を発揮する化合物を意味する。
【００５２】
したがって本発明によれば、ポリエチレングリコールの機能的等価物としてポリソルベートを含む製剤を使用することが可能である。
【００５３】
「ポリエチレングリコール」という用語は、式Ｈ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎＯＨ［式中、ｎは３よりも大きい］に対応する任意のポリマーを意味する。これに関して本発明者らは、一例として平均分子量が約１００から２００００の間、好ましくは平均分子量が約４００から約１００００の間、非常に好ましくは平均分子量が約４００から約６００の間のポリエチレングリコールを挙げることができる。
【００５４】
本発明によれば、所与の分子量のポリエチレングリコールは、単独で、または１種もしくは複数種の異なる分子量の他のポリエチレングリコールもしくは他の機能的等価物とあらゆる比率で混合して使用することができる。
【００５５】
本発明に関連して使用されるポリエチレングリコールは、その分子量に応じて室温で液体形態または半固体形態のいずれかのことがある。結果として、これらのポリマーは、本発明によるポリフェノールの吸収を改善することを目的とする製剤が液体形態であるべきか、または逆に半固体形態であるべきかに応じて適切に選択される。
【００５６】
本発明による組成物は、ポリエチレングリコールおよび／またはその機能的等価物、例えばポリソルベートをその組成物の合計重量に対して２０から９７ｗｔ％の間、好ましくは４０から９７ｗｔ％の間の比率で含むことができる。
【００５７】
別の好ましい態様では、本発明による組成物は、少なくとも１種のグリコールエーテルおよび／または機能的等価物を含有する。
【００５８】
本発明によれば、グリセロールまたはポリグリセリル−３−ジオレエート（脂肪酸のポリグリセリルエステルまたはその等価物）は、グリコールエーテルの機能的等価物として使用することができる。
【００５９】
本発明によれば、グリコールエーテルは、例えばジエチレングリコールアルキルエーテルなどのジエチレングリコールエーテル、特にジエチレングリコールのメチルエーテル、ジエチレングリコールのエチルエーテル、ジエチレングリコールのプロピルエーテルまたはジエチレングリコールのブチルエーテルより選択されるジエチレングリコールの（Ｃ１−Ｃ４）アルキルエーテル、さらに詳細にはジエチレングリコールのモノメチルエーテル、ジエチレングリコールのモノエチルエーテル、ジエチレングリコールのモノプロピルエーテルまたはジエチレングリコールのモノブチルエーテルより選択されるジエチレングリコールのモノ−（Ｃ１−Ｃ４）アルキルエーテルより選択することができる。
【００６０】
ジエチレングリコールアルキルエーテルの中で、メチルエーテルおよびエチルエーテル、特にジエチレングリコールモノエチルエーテルが好ましい。
【００６１】
本発明によれば、グリコールエーテルは、単独で、または１種もしくは複数種の他のグリコールエーテルもしくは他の機能的等価物とあらゆる比率で組み合わせて使用することができる。
【００６２】
本発明による組成物は、グリコールエーテル、および／またはその機能的等価物、例えばグリセロールもしくはポリグリセリル−３−ジオレエート（脂肪酸のポリグリセロールエステルもしくはその等価物）を、その組成物の合計重量に対して２から７９ｗｔ％の間、好ましくは２から５９ｗｔ％の間の比率で含むことができる。
【００６３】
特に好ましい本発明による組成物は、５０から９３％の間のポリエチレングリコールおよび／またはその機能的等価物、例えばポリソルベート、３から４６％の間のグリコールエーテルおよび／またはその機能的等価物、例えばグリセロールまたはポリグリセリル−３−ジオレエート（脂肪酸のポリグリセロールエステルまたはその等価物）、ならびに１００％に達するように十分な量の水を含む。
【００６４】
別の好ましい態様では、本発明による組成物は、さらに、少なくとも１種の乳化剤を含むことができる。好都合には本発明によれば、乳化剤は、ポリソルベート、なおより好都合にはポリソルベート２０（Tween 20またはポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレート）、ポリソルベート４０（Tween 40またはポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノパルミテート）、ポリソルベート６０（Tween 60またはポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノステアレート）、またはポリソルベート８０（Tween 80またはポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエート）より選択されるポリソルベートであってよい。
【００６５】
別の好ましい態様では、本発明による組成物は、経口経路、経鼻経路または直腸経路による投与に適する。
【００６６】
したがって、本発明による組成物は、糖衣丸剤、硬もしくは軟カプセル剤、ゲル剤、乳剤、錠剤の形態、または経口投与用の何か他の薬学的形態でありうる。本発明による組成物は、また、点鼻スプレーまたは坐剤の形態であってもよい。これらの形態は、当業者に公知の通常の方法によって製造される。
【００６７】
本発明の特定の一形態によれば、本発明による組成物は、有効期間を顕著に改善するように、封入された形態で製剤化することができる。
【００６８】
本発明の他の特徴および利点は、例示および非限定の目的で示された以下の実施例から、よりはっきりと理解されよう。
【図面の簡単な説明】
【００６９】
【図１】糖耐性に及ぼす本発明によるレスベラトロール含有組成物の効果を示す図である。ＮＣは、対照に対応する。本発明によるレスベラトロール含有組成物を含まない糖尿病誘発食をこれらのマウスに給餌した。ＲＳＶは、本発明によるレスベラトロール含有組成物を補充された糖尿病誘発食を給餌されたマウスに対応する。
【図２Ａ】ＧＬＰ−１合成に及ぼす本発明によるレスベラトロール含有組成物の効果を示す図である。ＨＦＤは、対照に対応する。本発明によるレスベラトロール含有組成物を含まない糖尿病誘発食をこれらのマウスに給餌した。ＨＦＤ  ＲＳＶは、本発明によるレスベラトロール含有組成物を補充された糖尿病誘発食を給餌されたマウスに対応する。図２Ａは、結腸中の活性ＧＬＰ−１のｍＲＮＡの分析に対応する。
【図２Ｂ】ＧＬＰ−１合成に及ぼす本発明によるレスベラトロール含有組成物の効果を示す図である。ＨＦＤは、対照に対応する。本発明によるレスベラトロール含有組成物を含まない糖尿病誘発食をこれらのマウスに給餌した。ＨＦＤ  ＲＳＶは、本発明によるレスベラトロール含有組成物を補充された糖尿病誘発食を給餌されたマウスに対応する。図２Ｂは、結腸中の活性ＧＬＰ−１タンパク質の分析に対応する。
【図２Ｃ】ＧＬＰ−１合成に及ぼす本発明によるレスベラトロール含有組成物の効果を示す図である。ＨＦＤは、対照に対応する。本発明によるレスベラトロール含有組成物を含まない糖尿病誘発食をこれらのマウスに給餌した。ＨＦＤ  ＲＳＶは、本発明によるレスベラトロール含有組成物を補充された糖尿病誘発食を給餌されたマウスに対応する。図２Ｃは、肝門脈中の活性ＧＬＰ−１のモル濃度の分析に対応する。
【図３】活性ＧＬＰ−１レセプターについてのノックアウトマウスにおける糖耐性に及ぼす本発明のレスベラトロール含有組成物の効果を示す図である。ＨＦＤは、対照に対応する。本発明によるレスベラトロール含有組成物を含まない糖尿病誘発食をこれらのマウスに給餌した。ＨＦＤ  ＲＳＶは、本発明によるレスベラトロール含有組成物を補充された糖尿病誘発食を給餌されたマウスに対応する。
【図４】循環インスリン濃度に及ぼす本発明によるレスベラトロール含有組成物の効果を示す図である。ＮＣは、対照に対応する。本発明によるレスベラトロール含有組成物を含まない糖尿病誘発食をこれらのマウスに給餌した。ＲＳＶは、本発明によるレスベラトロール含有組成物を補充された糖尿病誘発食を給餌されたマウスに対応する。
【図５Ａ】ＩＬ１０の分泌に及ぼす本発明によるレスベラトロール含有組成物の効果を示す図である。ＮＣは、対照に対応する。本発明によるレスベラトロール含有組成物を含まない炎症性糖尿病誘発食をこれらのマウスに給餌した。ＨＦＤ  ＲＳＶまたはＲＳＶは、本発明によるレスベラトロール含有組成物を補充された炎症性糖尿病誘発食を給餌されたマウスに対応する。図５Ａは、結腸中ＩＬ１０のｍＲＮＡの分析に対応する。
【図５Ｂ】ＩＬ１０の分泌に及ぼす本発明によるレスベラトロール含有組成物の効果を示す図である。ＮＣは、対照に対応する。本発明によるレスベラトロール含有組成物を含まない炎症性糖尿病誘発食をこれらのマウスに給餌した。ＨＦＤ  ＲＳＶまたはＲＳＶは、本発明によるレスベラトロール含有組成物を補充された炎症性糖尿病誘発食を給餌されたマウスに対応する。図５Ｂは、結腸中ＩＬ１０のタンパク質の分析に対応する。
【図５Ｃ】ＩＬ１０の分泌に及ぼす本発明によるレスベラトロール含有組成物の効果を示す図である。ＮＣは、対照に対応する。本発明によるレスベラトロール含有組成物を含まない炎症性糖尿病誘発食をこれらのマウスに給餌した。ＨＦＤ  ＲＳＶまたはＲＳＶは、本発明によるレスベラトロール含有組成物を補充された炎症性糖尿病誘発食を給餌されたマウスに対応する。図５Ｃは、肝臓中のＩＬ１０のｍＲＮＡの分析に対応する。
【図６】視床下部中のＰＡＩ−１に及ぼす本発明によるレスベラトロール含有組成物の効果を示す図である。ＮＣは、対照に対応する。本発明によるレスベラトロール含有組成物を含まない炎症性糖尿病誘発食をこれらのマウスに給餌した。ＲＳＶは、本発明によるレスベラトロール含有組成物を補充された炎症性糖尿病誘発食を給餌されたマウスに対応する。
【図７】視床下部中のＩＬ１０に及ぼす本発明によるレスベラトロール含有組成物の効果を示す図である。ＮＣは、対照に対応する。本発明によるレスベラトロール含有組成物を含まない炎症性糖尿病誘発食をこれらのマウスに給餌した。ＲＳＶは、本発明によるレスベラトロール含有組成物を補充された炎症性糖尿病誘発食を給餌されたマウスに対応する。
【図８】Ｙ字型迷路での試験を示す図である。ＹＭは、若齢マウス（４ヶ月）に対応し、ＥＭは高齢マウス（２２ヶ月）に対応する。記号＋は、本発明によるレスベラトロール含有組成物を投与されたマウスに対応する。記号−は、本発明によるレスベラトロール含有組成物を投与されなかったマウスに対応する。
【図９】心血管および代謝リスクに関連する脂質リスク因子のパラメーターに及ぼす本発明によるレスベラトロール含有組成物の効果を示す図である。ＮＣは、対照に対応する。本発明によるレスベラトロール含有組成物を含まない炎症性糖尿病誘発食をこれらのマウスに給餌した。ＲＳＶは、本発明によるレスベラトロール含有組成物を補充された炎症性糖尿病誘発食を給餌されたマウスに対応する。
【図１０Ａ】本発明によるレスベラトロール含有組成物のプレバイオティック効果を示す図である。図１０Ａにおいて、ＮＣは、対照に対応する。本発明によるレスベラトロール含有組成物を含まない標準的な実験室食をこれらのマウスに給餌した。ＨＦＤは、炎症性糖尿病誘発食のみを給餌されたマウスに対応する。
【図１０Ｂ】本発明によるレスベラトロール含有組成物のプレバイオティック効果を示す図である。図１０Ｂにおいて、ＨＦＤは、対照に対応する。これらのマウスに本発明によるレスベラトロール含有組成物を含まない炎症性糖尿病誘発食を給餌した。ＨＦＤ  ＲＳＶは、本発明によるレスベラトロール含有組成物を含む炎症性糖尿病誘発食を給餌されたマウスに対応する。
【図１１Ａ】高脂肪食でマウスに誘導された糖尿病モデルにおいて糖耐性を改善させる、ジペプチジルペプチダーゼ−４阻害剤であるシタグリプチンとＢｉｏＡ−ＲＳＶ（最適化された薬学的形態のレスベラトロール）との同時投与を示す図である。Ａ）ＢｉｏＡ−ＲＳＶ（四角）またはシタグリプチンと組み合わせたＢｉｏＡ−ＲＳＶ（三角）で５週間処置された糖尿病マウスの血糖プロファイル（ｍｇ／ｄＬ）。データは、１群あたり８匹のマウスでの平均値＋ＳＥＭとして表現する。＊および＊＊＊は、Studentのｔ検定を適用後にそれぞれｐ＜０．０５およびｐ＜０．００１で群間で有意差があることを示す。
【図１１Ｂ】高脂肪食でマウスに誘導された糖尿病モデルにおいて糖耐性を改善させる、ジペプチジルペプチダーゼ−４阻害剤であるシタグリプチンとＢｉｏＡ−ＲＳＶ（最適化された薬学的形態のレスベラトロール）との同時投与を示す図である。Ｂ）門脈血中の活性ＧＬＰ−１濃度（ｐＭ）。データは、１群あたり８匹のマウスでの平均値＋ＳＥＭとして表現する。＊および＊＊＊は、Studentのｔ検定を適用後にそれぞれｐ＜０．０５およびｐ＜０．００１で群間で有意差があることを示す。
【図１１Ｃ】高脂肪食でマウスに誘導された糖尿病モデルにおいて糖耐性を改善させる、ジペプチジルペプチダーゼ−４阻害剤であるシタグリプチンとＢｉｏＡ−ＲＳＶ（最適化された薬学的形態のレスベラトロール）との同時投与を示す図である。Ｃ）ＢｉｏＡ−ＲＳＶ（黒棒線）およびシタグリプチンと組み合わせたＢｉｏＡ−ＲＳＶ（水玉棒線）で５週間処置された糖尿病マウスにおけるｍＲＮＡの相対発現レベル（ＲＥＬ）。データは、１群あたり８匹のマウスでの平均値＋ＳＥＭとして表現する。＊および＊＊＊は、Studentのｔ検定を適用後にそれぞれｐ＜０．０５およびｐ＜０．００１で群間で有意差があることを示す。
【００７０】
実施例：
実施例１：代謝性疾患への本発明による組成物の適用
Ａ  糖耐性に及ぼす効果：
材料および方法
マウスに炎症性糖尿病誘発食を５週間供し、２型糖尿病を誘導する。次に、レスベラトロールを補充されたまたは補充されていない本発明による組成物でそれらのマウスを処置し、糖尿病状態の指標である糖耐性を試験するために経口経路でマウスにグルコースを注入する。
【００７１】
結果
図１に、レスベラトロールを補充された本発明による組成物により血糖が大きく減少することを示す。
【００７２】
Ｂ  ＧＬＰ−１合成に及ぼす効果：
材料および方法
マウスに炎症性糖尿病誘発食を５週間供し、２型糖尿病を誘導する。次に、レスベラトロール補充されたまたは補充されていない本発明による組成物でそれらのマウスを処置する。
【００７３】
結果
図２に、ＧＬＰ−１合成に及ぼす本発明によるレスベラトロール含有組成物の効果を示す。ＧＬＰ−１は、食事中に分泌される腸管ホルモンであり、インスリンの分泌を増加させ、高血糖を低下させる。ｍＲＮＡおよびＧＬＰ１タンパク質は、結腸中で大きく増加し（図２Ａおよび２Ｂ）、活性ＧＬＰ１のモル濃度もまた、肝門脈中で増加する（図２Ｃ）。
【００７４】
図３に、活性ＧＬＰ−１に特異的なレセプターが遺伝子操作によって遺伝的に除去されたマウスでは、本発明によるレスベラトロール含有組成物の治療効果が得られないことを示す。したがって、ＲＳＶの抗糖尿病誘発効果は、ＧＬＰ−１がそのレセプターに及ぼす作用を必要とする。
【００７５】
図４に、本発明によるレスベラトロール含有組成物がインスリンの分泌を増加させることを示す。この効果はＧＬＰ−１を必要とする。
【００７６】
実施例２：炎症性疾患への本発明による組成物の適用
材料および方法
マウスに、本発明によるレスベラトロール含有組成物を補充されたまたは補充されていない脂肪食（０．０４％Ｗ／Ｗ）を供する。５週間後にマウスを屠殺し、結腸および肝臓中での主要な抗炎症性サイトカインＩＬ１０に対応するｍＲＮＡおよびタンパク質を測定し、視床下部中のマーカーＰＡＩ−１のｍＲＮＡを測定する。
【００７７】
結果
インターロイキン１０は、ある種の血液細胞（単球など）によって分泌される抗炎症分子である。図５Ａおよび５Ｂに、結腸中のＩＬ１０のｍＲＮＡおよびタンパク質の増加を示す。図５Ｃに、肝臓中のＩＬ１０のｍＲＮＡの増加を示す。これらの結果は、本発明によるレスベラトロール含有組成物の抗炎症効果を実証している。
【００７８】
図６に、視床下部中のＰＡＩ１に及ぼす本発明によるレスベラトロール含有組成物の効果を示す。ＰＡＩ−１は、代謝性疾患（糖尿病、肥満など）における炎症についての最良のマーカーである。ＰＡＩ−１は、炎症促進性マーカーと見なされている。したがって、本発明によるレスベラトロール含有組成物は、視床下部中のＰＡＩ−１のｍＲＮＡを減少させることを可能にする。
【００７９】
実施例３：神経変性疾患への本発明による組成物の適用
Ａ  ＩＬ１０の合成に及ぼす効果：
材料および方法
炎症状態および糖尿病を誘導し、神経変性を促進する効果を有する炎症誘導性糖尿病誘発食を８週齢のマウスに５週間供する。代謝炎症反応の対照として視床下部を用いて、抗炎症性ＩＬ１０をコードするｍＲＮＡを測定した。
【００８０】
結果
図７に、視床下部でのＩＬ１０のｍＲＮＡの増加を示す。したがって、これらの結果は、本発明によるレスベラトロール含有組成物の抗炎症効果を実証している。
【００８１】
Ｂ  Ｙ字型迷路での試験：
材料および方法
神経変性を発症しやすい高齢マウスをこのために使用する。本発明によるレスベラトロール含有組成物を補充されたまたは補充されていない標準食をこれらのマウスに給餌する。
【００８２】
図８に、Ｙ字型迷路での試験に及ぼす本発明によるレスベラトロール含有組成物の効果を示す。高齢マウスへのこの組成物の投与によって、進入率に統計的に有意な増加が生じ（ｐ＜０．０５）、これは、記憶および認知の改善を示唆している。
【００８３】
実施例４：心血管疾患および心血管代謝リスク因子の予防への本発明による組成物の適用
材料および方法
糖尿病および炎症を誘導する脂肪食をマウスに５週間供する。トリグリセリドおよびＬＤＬコレステロールのレベルならびに血糖を測定する。
【００８４】
結果
図９に、本発明によるレスベラトロール含有組成物の効果を示す。心血管リスクに関連する様々なパラメーター（血糖、トリグリセリドおよびＬＤＬコレステロール）は、かなり減少する。このように、心血管疾患を発症するリスクは大きく低下する。血糖、すなわち糖尿病になるリスクは減少する。
【００８５】
実施例５：プレバイオティックとしての本発明による組成物の適用
材料および方法
本発明によるレスベラトロール含有組成物を含むまたは含まない、糖尿病および炎症を誘導する脂肪食をマウスに供するかまたは供さない。
【００８６】
５週間後にマウスを屠殺し、結腸の細菌ＤＮＡ１６Ｓを抽出する。ＰＣＲおよび変性勾配ゲルを使用して、腸内に存在する異なる細菌種の多様性を実証する。Pearsonのツリー解析により、多様な種に対応するクラスターを形成させ、それらのメタゲノム類似性（細菌ゲノム）の近接度に関して個体を位置付けることが可能になる。
【００８７】
腸内微生物叢の多様性の観点から最も類似している個体が、Pearsonのツリー上で最も接近している。
【００８８】
結果
図１０Ａに、２群のマウスが形成されることを示す。Pearsonのツリー解析によってクラスターが形成するときに、標準的な実験室食を給餌された全ての対照マウスが結合した。したがって、脂肪食を給餌されたマウスに同じことが当てはまる。したがって、脂肪食は、各群の腸内微生物叢の特徴の変化を誘導することから、このＰＣＲ分析によって同定可能である。
【００８９】
図１０Ｂに、２群のマウスが形成されることを示す。Pearsonのツリー解析によってクラスターが形成するときに、本発明によるレスベラトロール含有組成物を補充されていない脂肪食を給餌された全ての対照マウスが結合した。したがって、本発明によるレスベラトロール含有組成物を補充された脂肪食を給餌されたマウスに同じことが当てはまる。したがって、補充は確かに腸内微生物叢の変化を誘導する。したがって、腸内微生物叢が変化することから、明らかにプレバイオティック効果があり、これは健康に有益である。
【００９０】
実施例６：ジペプチジルペプチダーゼ−４阻害剤と組み合わせた本発明による組成物の適用
材料および方法
８週齢の雄性Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス（Charles River, L’Arbresle, France）を、厳密な衛生状態（無菌）で明暗サイクル（１２／１２）（点灯１０ＰＭ／消灯１０ＡＭ）を与えて飼育した。マウスに水および食物を自由摂取させる。マウスに５週間正常食または高脂肪食を供する。この高脂肪食は、肥満の前に糖尿病を誘導する。シタグリプチン（飼料中に１日５mg）を混合してまたは混合せずに活性薬学的形態のレスベラトロール（ＢｉｏＡ−ＲＳＶ）を１群のマウスに供した。全ての動物実験は、ToulouseのRangueil CHU（University Hospital Centre）の地域倫理委員会によって承認されたものである。
【００９１】
結果
本発明者らの結果から、グルコースの経口投与の３０分後にレスベラトロール単独を投与するよりも、レスベラトロールおよびシタグリプチンの組み合わせを投与する方が血糖を効果的に減少させることが可能であることが示される（図１１Ａ）。ＧＬＰ−１の門脈濃度（図１１Ｂ）およびＧＬＰ−１のプログルカゴン前駆体の腸内濃度（図１１Ｃ）に関して同じことが当てはまる。
【図８】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【図３】
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【図４】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図５Ｃ】
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【図６】
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【図７】
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【図９】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１１Ｃ】
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【国際調査報告】
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