(57)【要約】  本発明「親水性活性物質のためのコロイド状ナノスケールキャリア及びその製造方法」は、医学的調製品、歯学的調製品、又は衛生調製品の分野に関し、非親水性相及び成分に対して親和性を有する界面活性剤でコーティングされている親水性活性物質を含有する親水性ポリマーにより形成され、親水性活性物質の組み込み及び制御送達を可能にする逆エマルションを形成し、分解プロセスからの保護、最終生成物における製剤の他の成分との適合性の改善、対象となる媒体における活性物質の利用能及び／又は生物学的利用能の上昇（生物学的材料における透過プロセスの改善、並びに活性物質の前記媒体への曝露及び揮散の低減を含む）、及び活性物質の制御放出等の性質を付与することを特徴とする。この方法により得られるナノスケールキャリアは、コロイド状ナノスケールキャリア（ＮＣ）と呼ばれ、医薬（皮膚医薬を含む）、化粧品、パーソナル衛生製品、獣医学的医薬、農薬及び肥料、食品産業等の非常に多様な分野で用いることができる。本発明は、二相（分散媒及び被包剤）に対して親和性を有する界面活性剤の存在下で、非水性溶媒に乳化されているポリマーによって形成されるナノスケールキャリアからなる有効なナノスケール構造を有する動力学的に安定な系を提案する。この系は、界面活性剤を含有する非親水性（親油性又は親シリコーン性）相に乳化されている親水性ポリマーの水相のナノ乳化により得られ、逆ナノスケールエマルション及びポリマーナノ粒子の生成を含む２つの概念の実施を特徴とする。この製剤は、非親水性相に懸濁している親水性分子を送達するためのナノスケール構造を有するポリマー賦形剤を提供して、ナノスケール粒子の粒径を制御し、プロセスパラメータを用いてコロイドの安定性を調節することを可能にするという新規技術的効果を有する。【選択図】図３
2013530168.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
親水性活性物質を含有する親水性ポリマーによって形成される構造を含み、非親水性相と前記親水性ポリマーに誘引される界面活性剤とによって取り囲まれて逆エマルションを形成することを特徴とする親水性活性物質のためのコロイド状ナノキャリア。
【請求項２】
親水性ポリマーが、多糖類、天然起源のタンパク質、キトサン、アラビアガム、キサンタンガム、グアーガム、カラギーナンガム、カシューガム、タラガム、トラガカントガム、カラヤガム、ガッティガム；カルボキシメチルセルロース、カルボキシエチルセルロース等のセルロース誘導体；ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、ポリアクリレート、ポリメタクリレート、ポリアクリルアミド、又はポリビニルカプロラクタムである請求項１に記載の親水性活性物質のためのコロイド状ナノキャリア。
【請求項３】
非親水性相が、親油性又は親シリコーン性の液体を含む請求項１に記載の親水性活性物質のためのコロイド状ナノキャリア。
【請求項４】
非親水性相が、ジメチコンである請求項３に記載の親水性活性物質のためのコロイド状ナノキャリア。
【請求項５】
補助安定剤が、無機塩である請求項１に記載の親水性活性物質のためのコロイド状ナノキャリア。
【請求項６】
補助安定剤が、一価又は二価の塩化物である請求項５に記載の親水性活性物質のためのコロイド状ナノキャリア。
【請求項７】
補助安定剤が、塩化ナトリウムである請求項６に記載の親水性活性物質のためのコロイド状ナノキャリア。
【請求項８】
３つの工程を含む親水性活性物質のためのナノキャリアを製造する製造方法であって、第１の工程が、外相中に内相を分散させることにより予備乳化物を形成する工程であって、前記内相が、ポリマーと無機塩を含有する水溶液と水溶性親水性活性物質とを含み、前記外相が、親水性成分と非特異的乳化剤とを含み；第２の工程が、高エネルギーを用いて破壊する混合系において前記第１の工程で形成された予備乳化物をホモジナイズすることを含むナノ乳化工程であり；第３の工程が、内部の水相を抽出してコロイド状ナノキャリアを形成する工程であることを特徴とする製造方法。
【請求項９】
第１の工程が、１０℃〜１００℃の温度で、１００ｒｐｍ〜２２，０００ｒｐｍで撹拌しながら、大気圧下で実施される請求項８に記載の製造方法。
【請求項１０】
第１の工程が、２５．０℃の温度で、１，０００ｒｐｍで撹拌しながら実施される請求項９に記載の製造方法。
【請求項１１】
第２の工程が、ホモジナイズする圧力を変化させることにより、１０℃〜１００℃の温度で、少なくとも１０ｂａｒの圧力下にて、最低１サイクル実施される請求項８に記載の製造方法。
【請求項１２】
第２の工程が、２５℃の温度で、９００ｂａｒの圧力下にて、最高２０サイクル実施される請求項１１に記載の製造方法。
【請求項１３】
第３の工程が、２０℃〜５０℃の温度で、１０−７ｍｍＨｇ〜７６０ｍｍＨｇの圧力下にて、少なくとも１５分間実施される請求項８に記載の製造方法。
【請求項１４】
第３の工程が、５０℃の温度で、２８０ｍｍＨｇの圧力下にて、５時間実施される請求項８に記載の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、医療目的（医薬、化粧品、及びパーソナルケアを含む）のための調製物の分野に関し、また、組み込みを可能にし且つ活性物質の制御送達系として機能するポリマーコロイド状ナノキャリアを得、分解に対する保護、系の安定性、最終生成物における製剤の他の成分との適合性改善、対象となる媒体中における活性物質の利用能及び／又は生物学的利用能の上昇（生物学的媒体への透過、並びに活性物質の前記媒体への曝露及び揮散の低減の観点におけるプロセスの改善を含む）、及び活性物質の制御放出等の親水性特性を付与するためのプロセスを用いて機能する技術的態様、具体的にはナノテクノロジーを特徴とするコロイド化学及び分野に関与する化学的プロセスに適用される。このプロセスにより得られるナノキャリアは、医薬（皮膚医薬を含む）、化粧品、トイレタリー、獣医学的商品、農薬及び肥料、食品等の非常に多様な分野に適用することができる。
【０００２】
親水性活性物質の組み込み及び制御配置を可能にするポリマーコロイド状ナノキャリア生成物及びその製造方法。
【背景技術】
【０００３】
品質、有効性、及び安全性の基準を満たす送達系又は適切なビヒクルの合理的な開発においては、多型等の活性物質の物理化学的性質、加工及び保存中の他の製剤成分との適合性、系の安定性に加えて、投与経路（経口、局所、非経口）及び放出形態（即時放出、制御放出、持続放出）についても理解することが重要である。そのためには、製剤の理想化、活性物質及び賦形剤の特徴の同定、ストレス条件（極端なｐＨ及び温度条件）下における安定性の検証、及び適合性試験を網羅する予備製剤試験が必須である。
【０００４】
放出を制御しながら適切な時点で正確且つ確実に薬剤を配置し、且つ作用部位において治療効果を最大限発揮させるためには、新規薬物送達系の設計及び開発が必要である。部位特異的放出の概念は、まさにリスク−便益パラメータを最小化するという考えに依る。様々な形態のナノキャリアは、薬物送達に関して無限の機会を提供する可能性を有しているので、その可能性を役立てるために活発に研究が行われるようになっている（非特許文献１）。
【０００５】
しかし、部位特異的ナノキャリアの製剤化における成功とは、標的に到達するだけではなく、薬物をその分子の形態で輸送して、薬理学的活性を維持し且つ受容体と相互作用させることである。薬物の放出又は分解によるキャリアの損失、標的における吸収の低下、又はタンパク質の能動吸収の熱力学的活性の低下等の要因を無視することはできない。さもなければ、系は、十分な量及び放出速度で作用部位に到達することができず、最適濃度以下で薬物が拡散してしまい、必要な治療効果を促進することができない場合がある（非特許文献２）。
【０００６】
ナノキャリアは、表面積が広いので、治療剤の薬物動態及び生体内分布が改善されて、作用部位に選択的に蓄積されることにより毒性が最小化される。疎水性化合物の溶解度を改善して、非経口投与に対して適したものにしたり、またペプチド、特にオリゴヌクレオチド等の様々な治療剤の安定性を上昇させたり（非特許文献１、３及び４）、作用部位における薬物の生物学的利用能を改善し、細胞内移行を促進したりすることができる（非特許文献５）。
【０００７】
更に、ナノキャリアの重要な利点の１つはその大きさであるので、直径の初期設計を変化させる何らかの事象が生じると、特異性に関する問題が生じ、標的に到達する能力が低下する可能性がある（非特許文献２）。
【０００８】
固体脂質ナノ粒子及びナノ構造化液体キャリア
固体脂質ナノ粒子（ＮＬＳ）は、ナノスケール（５０ｎｍ〜１，０００ｎｍ）に分類され、特に、局所適用のための有望な系として提案された（非特許文献６及び７）。脂質−水により形成される１以上の同心膜を含むラメラ構造を形成し得るリポソーム（二層のリン脂質小胞）とは異なり、ＮＬＳは単層で形成される（非特許文献８）。ＮＬＳは、皮膚に対する耐容性に優れた賦形剤で構成され、医薬製剤及び化粧製剤で一般的に用いられる原材料をこれら系で使用することができる（非特許文献９）。用いられる物質としては、トリグリセリド、グリセリド、脂肪酸（例えば、ステアリン酸）、及びワックス（例えば、パルミチン酸セチル）が挙げられる。固体脂質と液体脂質との混合物を用いる新たな種類の脂質ナノ粒子に関する研究が行われている（ナノ構造化脂質キャリア−ＣＬＮ）。得られる脂質粒子は、液体脂質（油）により形成される凹部を有するナノ微粒子固体構造を有する（非特許文献１０）。これら系を調製するために、超音波及び高圧ホモジナイザー（コールド又はホットプロセス）、乳化及び溶媒蒸発及びマイクロ乳化を用いる技術が使用される（非特許文献１１）。ＣＬＮは、不安定な成分を化学的分解から保護する能力、固体状態の脂質マトリクスを通して物質を制御放出する能力、皮膚上に膜を形成する能力、及び閉鎖性等の利点を有する（非特許文献１０）。Ｊｅｎｎｉｎｇｓ及び共同研究者らは、被包物質と角質層との接触を促進し、結果的に、生存している皮膚に透過できる量を増やすための、表面積の大きな小粒径ナノ粒子で行き詰まっている（非特許文献１２及び１３）。
【０００９】
ＮＬＳは、従来のエマルション又はマイクロ粒子と比べて閉鎖効果がより高い。閉鎖は、経皮的な水の喪失を低減することにより皮膚に塗布された後に膜を形成することに基づく（非特許文献１４）。皮膚における含水率を増加させると、アトピー性皮膚炎の症状を緩和することができ、皮膚の健康に寄与する。閉鎖性の上昇は、ＮＬＳを油／水エマルションに添加したときの包括的な水和効果の上昇により確認することができる（非特許文献１５）。また、閉鎖性の程度は、粒径及び脂質濃度等の要因にも依存する（非特許文献１６）。
【００１０】
ＮＬＳ及びＣＬＮ中で輸送される物質の物理化学的安定性は、全体的に、ＮＬＳ及びＣＬＮ中で輸送されない物質（遊離形態）とは異なる場合がある。関連する構造の物理化学的性質に対する製剤の効果は、徐々に研究されて、各場合に適した製剤の開発が可能になるはずである（非特許文献１７）。例えば、レチノール及びコエンザイムＱ１０に関する研究では、これら活性物質を組み込むことによりＮＬＳの固体マトリクスは、これら物質の化学的分解を減少させることが実証されている（非特許文献９）。これら研究により、更に、局所投与に適したビヒクルに組み込んだときにこれら系の物理的安定性を維持できることが示されている。増粘剤、保湿剤、及び界面活性剤は、製剤の安定化及びＮＬＳからの物質の持続放出の調節に寄与する（非特許文献１２及び１８）。
【００１１】
結晶性二重エマルション
結晶性二重エマルションは、従来の二重エマルション（油相に乳化されている水性内相及び他の相に再乳化された水相）の概念から設計されるマイクロリザーバの動力学的に安定な系を形成し、この場合、二相が膜によって分離される。図１に示す通り、水相は、室温では脂質成分の固体からなる。固体成分の物理化学的性質は、系の崩壊する時間及び被包能に影響を与える。
【００１２】
例えば、水性内相及び水性外相の浸透圧、粒子間の相互作用（結晶性油の表面電荷、相互作用、球状）、表面特性、及び油相により得られる立体構造等の幾つかの要因が、この種の系の安定性に影響を与える。特に冷却及び油相のレオロジー的進化後（非特許文献１９）、結晶性二重エマルションアレイは、水に対する透過性を有し、且つ被包することができる親水性物質に対する透過性を有するが、一方、脂質コアは、固体状態の半透過性膜である。
【００１３】
浸透圧条件により、活性物質の被包及び放出の性質を正確に制御することが可能になる。等張圧下では活性物質の拡散が緩徐であるが、中〜低浸透圧では、放出が迅速であり、その後、材料が分解される。放出プロセスの反応速度は、固体状態における膜の組織化、脂質マトリクスの初期分布、及び収縮又は拡張する能力により制御される。これらパラメータは、結晶性油の選択により調整することができ、また、複合材の熱履歴を変化させることによっても調整することができる（非特許文献１９）。
【００１４】
ナノエマルション
ナノエマルションは、動力学的に安定である５０ｎｍ〜２００ｎｍの範囲内の透明又は半透明の系であるが、長期安定性（明らかな凝集又は合一がみられない）により、ナノエマルションは、ある程度の熱力学的安定性を有する異なる系であると特徴付けられる（非特許文献２０）。ナノエマルションの高いコロイド状安定性は、乳化剤の濃度及び液滴の半径により影響を受けることに加えて、（非イオン性乳化剤及びポリマーを用いて）球形が安定であると考えることにより理解することができる。更に、液滴サイズがナノスケールであることにより、重力が大きく低下し、ブラウン運動がこの力を上回る場合、保存中の沈降又はクリーミングを防ぐことができる。また、サイズが小さいことにより、合一及び凝集プロセスが妨げられるが、その理由は、液滴が非変形性であり、且つ表面における変動を阻害するためである。（液滴半径に対する）界面活性剤の膜厚は、層間の液体の弱化又は破裂を防ぐ（非特許文献２０）。
【００１５】
これら系は、局所用製品の配置にとって非常に魅力的であるが、その理由は、表面積が大きいことにより活性物質が迅速に透過し、また粒径が小さいことにより、より低濃度の乳化マイクロエマルションを用いて、活性物質の皮膚透過の改善を促進することができるナノエマルションを調製することができ、これは、透明性を有し、且つ流動性の観点で優れた適用を促進する（非特許文献２０）。局所適用するための、プラスミドＤＮＡ（非特許文献３）、セラミド（非特許文献２１）、シトロネラ油（非特許文献２２）、カンファー、メタノール、及びサリチル酸メチル（非特許文献２３）を含有するナノエマルションが報告されている。
【００１６】
逆ナノエマルション（油中水型）
ナノ構造を配置するための皮膚に局所的に適用する医薬に関して、ナノスケールで逆ナノエマルション（油中水型）を製造するという提案は、安定性を改善し、分解の可能性を低減し、且つ生物学的利用能を改善するためにｐＨを操作することが可能である内相に残存する分子の観点に基づいて、親水性活性物質のためのナノキャリアとして理想的な候補である。文献による報告は、逆エマルション中で輸送される巨大分子は、小胞を介して又は経皮的に（界面活性剤により引き起こされる角質層の透過性の崩壊により実現される）輸送され得ることを示す（非特許文献２４）。この研究では、Ｗｕ及び共同研究者ら（２００１年）は、標準的な獣脂（皮膚の皮脂腺により生成される）と適合するＨＬＢ値（親水性−親油性バランス）を有するエマルションは、小胞を介して主に媒介される共輸送の促進により、親水性分子を輸送し得ることを示した。
【００１７】
このプロセスは、通常高温（室温超）で実施される混合工程及び乳化工程に関して制限を受ける。溶液中の活性物質の分解は、温度上昇とともに加速されるので、エマルションの形成のプロセスにおいて加熱を必要としない材料及び液体を用いて機能することが必要である。
【００１８】
無水ナノエマルション
上述の系の中でも新規であると考えられる別の送達ストラテジーは、無水ナノエマルションの開発である。これは、１つのナノ構造化系であり、水相において分解し得る親水性活性物質を可溶化するために非水性溶媒を使用する。かかる系は、水の存在を避けなければならない従来のエマルションに置き換わり得る可能性があり、ナノ粒子の調製のために、またマイクロ構造ケイ酸塩を形成するためのテンプレートとして用いられている（非特許文献２５）。
【００１９】
非水性系における興味深い現象は、イオン対を形成して、異なる物理的特徴のイオンを有する構造を形成することである。イオン対は、イオン対形成を介してこれら活性物質がある程度の電気的中性及び親油性を得ることができるという仮説に基づいて、イオン化された活性物質の疎水性膜を介する透過を促進する。非水性系において形成されるイオン対は、膜の孔及び分割機構を透過することができ、これは、活性物質のイオン化可能な疎水性膜の透過を促進する可能性を示す（非特許文献２６）。
【００２０】
しかし、これら系の主な問題点は、非水性媒体に対する親水性剤の溶解度、非水性媒体の選択であり、またナノメートルの範囲でこれら系を得るためのプロセスである。
【００２１】
ポリマーナノ粒子
ポリマーコーティングを有するナノ粒子の開発も、親水性分子を安定的に被包し、被包効率及び生物学的利用能を高めるための別の選択肢として考えられる。この場合、１つのストラテジーは、コーティング剤としての親水性ポリマー又は乳化プロセス及び溶媒の拡散により形成されるマトリクスを用いてカプセル化することである（非特許文献２７）。しかし、ナノ粒子が懸濁し続けている製剤では、分解を引き起こす可能性がある活性物質の分散媒への移動を確実に防ぐことが重要である。また、ポリマーナノ粒子を得るためのプロセスの選択は、熱及び溶媒を使用しても活性物質の活性が保たれることを保証するはずである。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００２２】
【非特許文献１】Ｍｉｓｈｒａ；Ｂｈａｖｅｓｈ，Ｓａｎｊａｙ，２００９
【非特許文献２】Ｒｕｅｎｒａｒｏｅｎｇｓａｋ，ａｎｄ  Ｆｌｏｒｅｎｃｅ  Ｃｏｏｋ，２０１０
【非特許文献３】Ｗｕ  ｅｔ  ａｌ．２００１ａ
【非特許文献４】Ａｒｒｕｅｂｏ  ｅｔ  ａｌ．，２００７
【非特許文献５】Ｔｏｒｃｈｉｌｉｎ，２００９
【非特許文献６】Ｍｕｅｈｌｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８
【非特許文献７】ＧＯＹＭＡＮＮ−ＭＵＬＬＥＲ，２００４
【非特許文献８】ＬＩＭＡ−Ｋｅｄｏｒ  ａｎｄ  Ｈａｃｋｍａｎｎ，１９９４
【非特許文献９】Ｍｕｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．２０００
【非特許文献１０】Ｍｕｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．２００２
【非特許文献１１】ＭＥＨＮＥＲＴ  ａｎｄ  ＭＡＤＥＲ，２００１
【非特許文献１２】Ｊｅｎｎｉｎｇｓ  ｅｔ  ａｌ．２０００
【非特許文献１３】ＭＡＩＡ  ｅｔ  ａｌ．２０００
【非特許文献１４】Ｗｉｓｓｉｎｇ  ａｎｄ  Ｍｕｅｌｌｅｒ，２００１
【非特許文献１５】Ｗｉｓｓｉｎｇ  ａｎｄ  ＭＵＬＬＥＲ，２００２ａ
【非特許文献１６】Ｗｉｓｓｉｎｇ  ａｎｄ  Ｍｕｌｌｅｒ，２００２ｂ
【非特許文献１７】ＬＩＭ  ａｎｄ  Ｋｉｍ，２００２
【非特許文献１８】ＬＩＰＰＡＣＨＥＲ  ｅｔ  ａｌ．２００１
【非特許文献１９】ＧＵＥＲＹ，Ｊ．，２００６
【非特許文献２０】Ｔａｄｒｏｓ  ｅｔ  ａｌ．２００４
【非特許文献２１】ＹＩＬＭＡＺ  ａｎｄ  Ｂｏｒｃｈｅｒｔ，２００５
【非特許文献２２】ＳＡＫＵＬＫＵ  ｅｔ  ａｌ．２００９
【非特許文献２３】ＭＯＵ  ｅｔ  ａｌ．２，００８
【非特許文献２４】Ｗｕ  ｅｔ  ａｌ．２００１ｂ
【非特許文献２５】ＳＵＩＴＴＨＩＭＥＡＴＨＥＧＯＲＮ  ｅｔ  ａｌ．２００５
【非特許文献２６】Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．１９８８
【非特許文献２７】ＮＡＧＡＲＷＡＬ  ｅｔ  ａｌ．２００９
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２３】
本発明「親水性活性物質のためのコロイド状ナノスケールキャリア及びその製造方法」は、ナノ構造において動力学的に安定であり且つ有効である系、即ち、二相（分散剤と被包剤とが半分ずつ）間で引力を有する界面活性剤の存在下で非水性媒体中に乳化しているポリマーで形成されるナノキャリアについて記載する。この新規系は、特に、ナノエマルション及び逆ポリマーナノ粒子の生成を含む２つの概念を適用することにより、界面活性剤を含有する非親水性相（親油性又は親シリコーン性）に乳化している、親水性ポリマーを含有する水相のナノ乳化により得られる。ナノエマルション及び逆ポリマーナノ粒子の概念に基づいて製剤化することにより、非親水性相に懸濁している親水性分子を機能させ、ナノメートルの範囲で粒径を制御することができ、且つプロセスパラメータを用いてコロイド状安定性を調節することができるというナノ構造化ポリマーキャリアの新規技術的効果が生じる。
【課題を解決するための手段】
【００２４】
コロイド状ナノキャリア（ＮＣ）と呼ばれるこの系は、高圧ホモジナイズを用いるナノ乳化工程と内相の水内容物の部分的に抽出する工程とを組み合わせるプロセスを使用して得られ、後者は、モジュール式の系の特徴を有効にすることにより製剤の安定性における相の因子であるとみなされる。
【００２５】
本明細書に例証するＮＣから、親水性分子を配置するのに適した特徴を有し、系の物理的性質を再現し（粘度、平均粒径、形態、及び安定性がプラセボと一致する）、更に、高い被包効率及び制御放出／維持放出プロファイルを有する製剤が得られる。親水性モデルを含有する系の挙動から、ポリマーマトリクスとの相互作用の活性型であるＮＣの形成機序をより深く理解し、試験する２つのモデルについて物理的差（特に、形状）及び化学的差（被包効率及び放出プロファイル）を同定することが可能になる。
【００２６】
本発明のこれら新規系について、ＮＣは、親水性活性物質を機能させるのに有望であり、水の量が少ない媒体中でＮＣを安定化する可能性があり、幾つかの適用特性を改善するのに有望である。この新規キャリア系は、医薬（皮膚医薬を含む）、化粧品、トイレタリー、獣医学、農薬、及び食品等の様々な分野における対象となる活性剤の投与及び送達の新規形態の導入及び創出に寄与する。
【図面の簡単な説明】
【００２７】
【図１Ａ】図１は、二重結晶性液体エマルション対（出典Ｇｕｅｒｙ，２００６）に関して、エマルションの利点を示す概略断面図である。図１Ａは、液体油性相を通じて拡散すると共に、セルの界面において内相の液滴が合一している二重液体エマルションを示す。
【図１Ｂ】図１Ｂは、固体膜に対する透過性が低いので、界面において内相の液滴が合一しない結晶性二重エマルションを示す。
【図２】図２は、ＮＣの製造方法の３工程を示すＮＣの製造方法の概略図である。
【図３】図３は、ＦＥＧ−ＳＥＭにより得られる実施例１の生成物の電子走査顕微鏡写真であり、球形の形態及び平滑且つ規則的な表面を有する多分散性の低いナノキャリアの形成を示す。顕微鏡写真の特徴は、写真上に記載する。
【図４Ａ】図４Ａは、粒径の関数としてのＰＶＰのＮＣの内相の水抽出プロファイル、即ち、ナノキャリア中に存在する含水率の関数としての粒径の変化をグラフで示す。
【図４Ｂ】図４Ｂは、ＮＣの後方散乱に基づく、３時間水抽出プロセスを行ったＰＶＰのグラフであり、後方散乱が全く変化しない、即ち、サンプルが７日間安定であることを示す。全て、実施例２で得られるＮＣに関する。
【図５Ａ】図５Ａは、ＦＥＧ−ＳＥＭにより得られたキトサンを原料とするＮＣの顕微鏡写真を示す。顕微鏡写真の特徴は、写真上に記載する。
【図５Ｂ】図５Ｂは、粒径の関数としてキトサンＮＣの内相の水抽出プロファイルのグラフである。
【図５Ｃ】図５Ｃは、３時間及び５時間水抽出プロセスを行った、キトサンを原料とするＮＣの動力学的安定性のグラフである。全て、実施例３で得られるＮＣに関する。
【図６Ａ】図６Ａは、ＦＥＧ−ＳＥＭにより得られる、親水性活性物質モデルとしてサリチル酸ナトリウムを含有するデンプンを原料とするＮＣの顕微鏡写真である。顕微鏡写真の特徴は、写真上に記載する。
【図６Ｂ】図６Ｂは、ＦＥＧ−ＳＥＭにより得られる親水性活性物質モデルとしてサリチル酸ナトリウムを含有するデンプンＮＣを更に拡大した顕微鏡写真である。顕微鏡写真の特徴は、写真上に記載する。全て、実施例４で得られるＮＣに関する。
【図７】図７は、ＮＣの動力学的安定性のグラフであり、ＮＣとは、３時間又は５時間水抽出プロセスを行った、Ｓａｎａを含有するＰＶＰを原料とする実施例５のＮＣを指す。
【図８】図８は、ＦＥＧ−ＳＥＭにより得られる、親水性活性物質モデルとしてシアノコバラミンを含有するデンプンを原料とする実施例６のＮＣの顕微鏡写真である。顕微鏡写真の特徴は、写真上に記載する。
【図９】図９は、実施例４及び６に係るサリチル酸ナトリウムを含有するデンプンを原料とするＮＣの放出プロファイルのグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
安定性を改善し且つ生物学的利用能を高めるためのナノ構造化活性物質の送達系を開発することは、部位特異的作用を有する薬物の配置から、親水性化合物の皮膚透過、分子の細胞内移行まで及ぶ多数の用途を網羅するコロイド科学の課題である。これら課題に直面していることから、近年多くの系が検討されているが、その多くは、所与の用途について作用強度及び安定性に関する制約を有する。
【００２９】
ナノ粒子は、活性成分を保持し、その放出を調節することができる固体マトリクスを有するという利点を有する。これら物質が固体状態であると、含有している物質の透過性が低下する。更に、脂質系固体粒子は、毒性の問題に起因する任意の制約を緩和する。これら物質は、疎水性分子の被包にはある程度有効であるが、親水性物質を確実に輸送したり、水性内部成分を必要とする任意の用途に用いたりすることは制限されている。
【００３０】
また、結晶性二重エマルション系は、調製中の昇温問題及びポリマーナノ粒子に関する制約を有する親水性活性物質の配置に非常に有効である。
【００３１】
ナノ粒子は、対象となる用途に対する理想的な候補として出現したが、親水性分子を組み込む場合は水性媒体中で分解するので、分解を避けるために逆エマルション又は更には無水エマルションにする必要があった。
【００３２】
したがって、本明細書で論じるナノキャリアは、ナノ構造において動力学的に安定であり且つ有効な新規系の設計から得られる。この新規ナノキャリアは、親水性活性物質を含有する親水性ポリマーによって形成される構造からなり、非親水性相と前記親水性ポリマーに誘引される界面活性剤とによって取り囲まれており、二相（分散媒及び被包剤）間で引力を有する界面活性剤の存在下で非水性媒体に乳化しているポリマーにより形成される逆エマルションを形成する。水相に溶解し且つ界面活性剤を含有する非水性相に乳化している親水性ポリマーを使用することにより、この設計は、両方の概念を組み合わせ、ナノエマルション及び逆ポリマーナノ粒子の生成を含む。
【００３３】
新規系は、コロイド状ナノキャリア（ＮＣ）と呼ばれ、非水性外相に配合された親水性活性物質の制御配置及び組み込みを可能にするポリマーコロイド状ナノキャリアからなる。
【００３４】
ナノ粒子及びキャリアを用いる幾つかの発明が特許されているが、大部分は、例えばブロックコポリマー等の疎水性被包マトリクスを用い、更に様々なプロセスを使用して疎水性分子のためのキャリアを開発及び実施することに関するものであり、いずれの場合も、逆エマルションナノ粒子を得るために用いられるものではない。これは、基本的に、本願の目的である親水性活性物質用のコロイド状ナノキャリア及びその製造方法における新規性及び進歩性を示すものである。
【００３５】
国際公開第２００９／１２３７６８号パンフレット「Ｎａｎｏｃａｒｒｉｅｒ  ａｎｄ  Ｎａｎｏｇｅｌ  Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ」には、疎水性を有する治療剤に（本明細書に開示する発明とは異なる方法で）結合している水性溶媒又はコポリマーに懸濁しているブロックコポリマーからなるナノメートル範囲のキャリアの分類について記載されており、特に、試験した実施例では、インドメタシン、ドキソルビシン、及びブデソニドが使用された。
【００３６】
複雑な技術のみを用いて、被包のために両親媒性分子、特に部位特異的タンパク質を使用することによりナノキャリアを得る方法について記載されている国際公開第２００７／０４１２０６号パンフレット「Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｎａｎｏｃａｒｒｉｅｒｓ  Ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｂｙ  Ｐｈａｓｅ  Ｌａｎｄｓｃａｐｅ」には、別の組成物が提示されている。キャリアは、標的部位に特異的且つ選択的に結合するように選択されたペプチドリンカーを示すタンパク質を含有する相タンパク質により形成され、これは放出される。しかし、この発明は、非親水性分子を含む特定のタンパク質又はポリマーマトリクスを使用するナノキャリアとして請求されているのみである。
【００３７】
韓国特許第１００８６８７２４号明細書「Ｍｅｔｈｏｄ  ｆｏｒ  Ｐｒｅｐａｒｉｎｇ  Ｓｅｌｆ−Ａｇｇｒｅｇａｔｉｎｇ  Ｎａｎｏｃａｒｒｉｅｒ  Ｐａｒｔｉｃｌｅｓ  Ｈａｖｉｎｇ  Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ  Ｄｅｐｅｎｄｉｎｇ  Ｐｒｏｐｅｒｔｙ」及び国際公開第２００９／１２３９３４号パンフレット「Ｂｒａｎｃｈｅｄ  Ｍｕｌｔｉｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  Ｕｓｅ」も、疎水性剤のためのキャリアナノ粒子について記載している。前者（韓国特許第１００８６８７２４号明細書）では、発明者らは、薬剤を組み込むために温度感受性であるブロックコポリマーを使用し、温度を用いて粒子形成を制御している。関与するプロセスは、重合工程を含み、ポリ（Ｎ，Ｎ−ジメチルアクリルアミド）、ポリ（Ｎ−イソプロピルアクリルアミド）又はこれらの混合物の群を含有する感受性ポリマーを使用する。国際公開第２００９／１２３９３４号パンフレットでは、マトリクスは、疎水性剤とカップリングされている、インビボ条件で特定の作用「マウント及びアンマウント（ｍｏｕｎｔ  ａｎｄ  ｕｎｍｏｕｎｔ）」を有する分岐ポリマーポリグリセロールで構成される。これら系は、癌モデル等の画像化及び診断手順において使用されることが多い。
【００３８】
国際公開第２００９／０５５７９４号パンフレット「Ｍｅｔｈｏｄ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  Ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  Ｐｏｌｙｍｅｒ  ｎａｎｏｃａｒｒｉｅｒｓ」は、被包及びタンパク質送達のための二重エマルションプロセスにより得られる疎水性のブロックコポリマーにより形成されるナノキャリアの方法及び組成物について記載している。この出願は、診断及び治療用の繊維状及び球形のナノ粒子の使用を含む。
【００３９】
国際公開第２００９／１４１１７０号パンフレット「Ｓｕｉｔａｂｌｅ  Ｎａｎｏｃａｒｒｉｅｒｓ  ｆｏｒ  Ａｃｔｉｖｅ  Ａｇｅｎｔｓ  ａｎｄ  Ｔｈｅｉｒ  Ｕｓｅ」は、残基としての式アミンにより定義される基を構造中に有するキャリア本体について開示している。本発明は、ヌクレオチド、ヌクレオシド、オリゴヌクレオチド、直鎖又は円形の一重又は二重のオリゴマー分子（これらは全て疎水性分子である）のためのキャリア等の化合物であって、ポリグリセロール及び／又は誘導体からなるシェルを有する化合物に関する。対象となる主な分野は、ジーンサイレンシングである。非ナノキャリアを得るためのプロセスは、本明細書に開示する発明等の逆エマルションではなく、疎水性活性物質が空気に曝露される従来のエマルション（油／水）からなる。
【００４０】
本発明に類似する幾つかの態様を提示する先行技術は、米国特許出願公開第２００９／０２５８０７８号明細書「Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ  Ｐｏｌｙｍｅｒ  Ｎａｎｏｃａｒｒｉｅｒｓ  ｆｏｒ  Ｕｓｅ  ｉｎ  Ｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇ  Ｏｘｉｄａｔｉｖｅ  Ｉｎｊｕｒｙ」であり、これは、０℃未満の温度でホモジナイズすることにより調製されるタンパク質を被包して、酵素活性を維持するためのキャリアポリマーの存在を特徴とする。生体外解毒酵素及び抗酸化剤を使用してもよく、これらはプロテアーゼによる分解から保護されるので、寿命が長くなる。１つの利点は、この系が物質に対して透過性であり、且つ被包されている酵素を放出することなくその効果を発揮することができる点である。
【００４１】
本発明「親水性活性物質のためのコロイド状ナノスケールキャリア及びその製造方法」は、非水性媒体に懸濁している（タンパク質ではない）親水性分子のためのナノキャリアを使用し、二重エマルションプロセスを用いて、３つの工程：内相（溶媒）の予備乳化、抽出、及びナノ乳化を含む方法により得られる。また、親水性剤のために形成されるナノキャリアは、分解を防ぎ、また水性媒体中における分解及び米国特許出願公開第２００９／０２５８０７８号明細書に記載の非酵素的作用を受けやすい内包分子を保護することができる。更に、被包されているタンパク質がキャリアと結合したままでその機能を発揮し、放出されない前述の発明とは異なり、使用される活性剤の機能として調節され得るコロイド状ナノキャリアの制御放出プロファイルが提供される。
【００４２】
本発明「親水性活性物質のためのコロイド状ナノスケールキャリア及びその製造方法」は、ポリマーナノキャリア系の形成及び明確に画定されている構造、並びに本明細書に提示される全ての研究で見出される制約に対して特別に開発された製造プロセスを提示する。これは、（二重エマルションを使用することなく）単一乳化プロセスで簡便に親水性剤を被包するものであり、場合によっては、更に生分解性の不活性物質を用いる。
【００４３】
ＮＣ調製物の製造プロセスは、３つの工程を含む。図２に示す通り、工程１は、予備乳化工程であり、工程２及び工程３は、内相のナノ乳化及び抽出である。本明細書に開示されるＮＣは、親水性ポリマーを含有する水溶液と対象となる活性成分とを乳化することにより得られる。このようなポリマーは、選択されていない特定の親水性相と適合する乳化剤を含有しない親水性相中における多糖類、動物又は植物起源のタンパク質、キトサン、ガム（アラビアガム、キサンタンガム、グアーガム、カラギーナンガム、カシューガム、タラガム、トラガカントガム、カラヤガム、ガッティガム（ｇａｔｉ  ｇｕｍ））、セルロース誘導体（カルボキシメチルセルロース、カルボキシエチルセルロース等）、ポリビニルピロリドン、ポリアクリレート、ポリアクリルアミド、ポリビニルカプロラクタムである。この相は、親油性又は親シリコーン性の液体のいずれによっても親水化することはできない。乳化プロセスは、機械的撹拌、ｃｏｗｌｌｅｓ、ｕｌｔｒａｔｕｒｒａｘ、高圧ホモジナイザー、超音波、又は非水性環境における水相の乳化を促進する任意の他の技術等の様々な従来の技術により実施することができる。
【００４４】
工程１：機械的撹拌下で外相に内相を分散させ、添加完了後、従来の撹拌機を使用することによる予備乳化物の形成
この最初の工程では、内相と外相との間で予備乳化物が形成される。前記内相は、ポリマー及び無機塩（水溶性塩）を含有する水溶液で構成され、これらは、親水性活性物質及び補助安定剤として機能する。一方、前記外相は、非親水性成分と、シリコーン変性ポリオキシエチレン（ｐｏｌｉｏｘｙｄｅｔｙｌｅｎｅ）（ＳＦ１５４０、Ｍｏｍｅｎｔｉｖｅ（登録商標））又は他の常用されている適合性乳化剤等の特定の乳化剤とを含有する。
【００４５】
プロセスのこの工程で使用される温度は、１０℃〜１００℃であってよく、好ましくは２５．０℃である。混合物は、１００ｒｐｍ〜２２，０００ｒｐｍで変化してよく、好ましくは１，０００ｒｐｍで撹拌しながら、大気圧下で保持される。用いられる塩は、水溶性でなければならず、好ましくは一価又は二価の塩化物である。
【００４６】
工程２：脱凝集のための高エネルギー混合系における、工程１で形成された予備乳化物のホモジナイズ
高圧ホモジナイズの使用は、望ましい粒径を得るために必要な量まで最低１サイクルのホモジナイズを使用しなければならず、一般的には２０サイクル未満である。この工程で使用される温度は、１０℃〜１００℃であってよく、好ましくは２５．０℃である。機器の圧力は、少なくとも１０ｂａｒ〜加圧装置の最大能力でなければならず、好ましくは９００ｂａｒである。
【００４７】
工程３：水性内相の抽出及びＮＣの形成のために、得られたナノエマルションを、凝縮器に接続されている、減圧され、温度制御され、且つ穏やかに撹拌されている反応器内に入れる
内相の溶媒を抽出するこの工程は、少なくとも１５分間〜望ましい脱湿に必要な時間実施しなければならず、通常５時間実施される。印加される圧力は、１０−７ｍｍＨｇ〜７６０ｍｍＨｇであってよく、好ましくは２８０ｍｍＨｇである。この工程における反応器の温度は、２０℃〜１５０℃であってよく、好ましい温度は５０℃である。
【実施例】
【００４８】
本発明の幾つかの実施形態及びＮＣの潜在的用途を例証するために、様々な親水性活性物質を使用する例、並びに放出プロファイル及び被包効率を含む得られる生成物の主な特徴を示す。
【００４９】
含水率、屈折率、平均粒径、多分散性、粘度、動的濁度、及び形態について、ＮＣの特性評価を行った。
【００５０】
実施例１：シリコーン中でデンプンを原料とするＮＣを得る
５００ｍＬのビーカー内で、乳化剤としてシリコーン変性ポリオキシエチレン（ＳＦ１５４０、Ｍｏｍｅｎｔｉｖｅ（登録商標））１４０ｇを含有するジメチコン濃度３％ｍ／ｍの溶液を調製した。デンプン９ｇ及びＮａＣｌ  ０．６ｇを脱イオン水５１ｇに溶解させることにより別の溶液を調製した。デンプン水溶液を、１，０００ｒｐｍの機械的撹拌下で非親水性相に乳化させた。この乳化後、混合物を、圧力９００ｂａｒで５サイクルの高圧ホモジナイズに付した。最後に、エマルションをジャケット付ガラス反応器に移して、圧力２８０ｍｍＨｇで真空蒸留することにより水を除去した。５０℃で３時間及び５時間脱湿することにより、水の除去を実施した。平均粒径（ＤＰ）、多分散性指数（ＰＩ）、残留含水率（ＴＡ）、粘度（Ｖｉｓｃ）、濁度、及び動的形態についてＮＣを特性評価した。結果を表１に示す。
【００５１】
【表１】
2013530168.tif 000003
【００５２】
表１に報告するＤＰ、ＩＰ、及びＴＡの結果は、３時間及び５時間の水抽出プロセスで得られたＮＣに関するものであり、多分散性指数が比較的低く且つ時間の関数として含水率が低下するというナノメートルキャリア系の性質を証明するものである。更に、前記系からは、表に記載されている低粘度から分かる通り、特徴的な流体が生成された。
【００５３】
得られた球形及び平滑な表面を有する規則的なＮＣを図３に示すことができる。
【００５４】
実施例２：シリコーン中でポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）を原料とするＮＣを得る
５００ｍＬのビーカー内で、乳化剤としてシリコーン変性ポリオキシエチレン（ＳＦ１５４０、Ｍｏｍｅｎｔｉｖｅ（登録商標））を含有するジメチコン濃度３質量％の溶液１４０ｇを調製した。ＰＶＰ９ｇ及びＮａＣｌ  ０．６ｇを脱イオン水５１ｇに溶解させることにより別の溶液を調製した。ＰＶＰ水溶液を、１，０００ｒｐｍの機械的撹拌下で非親水性相に乳化させた。この乳化後、混合物を、圧力９００ｂａｒで５サイクルの高圧ホモジナイズに付した。最後に、エマルションをジャケット付ガラス反応器に移して、真空蒸留（２８０ｍｍＨｇ）することにより水を除去した。温度５０℃の場合、３時間及び５時間水の除去を実施した。平均粒径（ＤＰ）、多分散性指数（ＩＰ）、残留含水率（ＴＡ）、粘度（Ｖｉｓｃ）、屈折率（ＩＲ）、動的濁度、及び含水率の関数としての粒径の減少プロファイルについて、この実施例で得られたＮＣを特性評価した。結果を表２に示す。
【００５５】
【表２】
2013530168.tif 000004
【００５６】
ＰＶＰを原料とするＮＣの結果は、実施例１に示したデンプンＮＣについて記載した結果と類似していた。表２に記載するＤＰ、及びＴＡ、ＰＩの値は、３時間及び５時間の水抽出プロセスで得られたＮＣに関するものであり、多分散性指数が比較的低く且つ時間の関数として含水率が低下するというＰＶＰを含むナノメートルキャリア系の性質を確認するものである。更に、表に記載されている低粘度から分かる通り、生成された系は特徴的な流体を有する。図４Ａに示す通り、内相から水を抽出する工程を制御することにより、形成されるナノキャリアの粒径を調節して、望ましい粒径レベルに到達させることが可能であることを強調する。この結果は、ナノ構造化系を得るために所与の水量を得ることが必須であることを示す。前記ナノ構造化は、粒径が更に著しく変動することはない。粒径が著しく変動すると、物理的安定性に干渉する場合がある。前記物理的安定性は、図４Ｂに示す通り、動的濁度により観察することができる。３時間の脱湿を行って得られたＰＶＰを原料とするＮＣを、調製後７日間、（動的濁度により）後方散乱プロファイルについて分析したところ、高い物理的安定性を示した。
【００５７】
実施例３：シリコーン中でキトサンを原料とするＮＣを得る
以下の通り、キトサンを原料とするＮＣを得た。５００ｍＬのビーカー内で、乳化剤としてシリコーン変性ポリオキシエチレン（ＳＦ１５４０、Ｍｏｍｅｎｔｉｖｅ（登録商標））を含有するジメチコン濃度３％ｍ／ｍの溶液１４０ｇを調製した。キトサン１．２ｇ及びＮａＣｌ  ０．６ｇを脱イオン水５１ｇに溶解させることにより別の溶液を調製した。キトサン水溶液を、１，０００ｒｐｍの機械的撹拌下で非親水性相に乳化させた。この乳化後、混合物を、圧力９００ｂａｒで５サイクルの高圧ホモジナイズに付した。最後に、エマルションをジャケット付ガラス反応器に移して、２８０ｍｍＨｇで真空蒸留することにより水を除去した。５０℃で３時間〜５時間、水の除去を実施した。表３に示す通り、平均粒径（ＤＰ）、多分散性指数（ＩＰ）、残留含水率（ＴＡ）、粘度（Ｖｉｓｃ）、動的濁度、外形の形態、及び含水率の関数としての粒径減少について、この実施例で得られたＮＣを特性評価した。
【００５８】
【表３】
2013530168.tif 000005
【００５９】
粒径に関するキトサンを原料とするＮＣの特性評価は、ナノメートルスケールの、多分散性指数が低く、且つ５時間抽出したときの含水率が１．０％未満である系が得られたことを示す。得られた系は、低粘度に起因する高い流動性を特徴とする。この実施例では、図５Ａに示す通り、規則的な表面を有する球形ナノキャリア構造の形成も観察された。
【００６０】
これにより、ナノキャリア中に存在する含水率の関数として粒径が調節される可能性が確認される。図５Ｂから分かる通り、分散は、ナノメートルスケールのレベルでさえも、後に粒径の大きな減少が生じないことを示す。この調節は、懸濁液のナノキャリアの物理的安定性に関連する。３時間の抽出プロセスを用いると、動力学的に安定であり、５時間では含水率が低下する。ナノメートルの性質は維持されるが、相分離を示す。しかし、これは容易に再分散する。図５Ｃは、３時間及び５時間の脱湿プロセスを用いたときの生成物の物理的安定性のプロファイルを示す。表４は、濁度分析により得られる動的安定性のレベルを示す。ここでは、指数が低いほど、系の物理的安定性が高い。
【００６１】
【表４】
2013530168.tif 000006
【００６２】
実施例４：親水性活性物質モデルとしてサリチル酸ナトリウムを含有する、デンプンを原料とするＮＣバインダーを得る
活性物質モデル（サリチル酸ナトリウム−ＳＡＮＡ）を含有する、デンプンを原料とするＮＣを以下の通り得た。５００ｍＬのビーカー内で、乳化剤としてシリコーン変性ポリオキシエチレン（ＳＦ１５４０、Ｍｏｍｅｎｔｉｖｅ（登録商標））を含有するジメチコン濃度３％ｍ／ｍの溶液１４０ｇを調製した。デンプン９ｇ及びＮａＣｌ  ０．６ｇ及びサリチル酸ナトリウム２ｇを脱イオン水４９ｇに溶解させることにより別の溶液を調製した。デンプン及び活性物質の水溶液を、１，０００ｒｐｍの機械的撹拌下で非親水性相に乳化させた。この乳化後、混合物を、圧力９００ｂａｒで５サイクルの高圧ホモジナイズに付した。最後に、エマルションをジャケット付ガラス反応器に移して、２８０ｍｍＨｇで真空蒸留することにより水を除去した。５０℃の温度で３時間及び５時間抽出プロセスを実施することにより、水の除去を実施した。表５に示す通り、平均粒径（ＤＰ）、多分散性指数（ＩＰ）、残留含水率（ＴＡ）、粘度（Ｖｉｓｃ）、被包効率（ＥＥ）、動的濁度、及び形態について、この実施例で得られたＮＣを特性評価した。
【００６３】
【表５】
2013530168.tif 000007
【００６４】
表４に示すＤＰデータは、Ｓａｎａが埋め込まれているデンプンを原料とするＮＣがナノメートルスケールであることを確認するものである。前記ＤＰは、活性物質を含まないデンプンＮＣ（実施例１）と同一の粒径範囲である。このことは、分子が存在してもナノキャリアの粒径特性は変化しないことを示す。それにもかかわらず、多分散性指数は低く、また、３時間及び５時間の脱湿プロセスにおける含水率は、活性物質を含まないＮＣ（実施例１）の含水率と同様であり、５時間抽出したときの含水率は１．０％未満の値に減少している。また、この系からも流体が生成され、これは低粘度によって確認される。この実施例で得られる生成物では、Ｓａｎａのデンプンマトリクスへの被包効率は、９３．７０％の値を示した。これは、親水性活性物質の被包にＮＣを使用できる可能性があることを示す。
【００６５】
図６Ａ及び６Ｂでは、デンプン及び活性物質モデルとして含有されるＳａｎａを含むＮＣが、顆粒状活性物質と同様に、粒子の表面上に複数の突起を有する不規則な表面を示すことが観察される。この形態は、恐らく活性物質がポリマーマトリクス中に分布する状態で被包されており、マトリクスの最外部分に活性物質が分布しやすいことを示す。真空抽出プロセスにより内相を除去している間、水に対する溶解度の高いＳＡＮＡは、粒子の表面に移動し、最外層により多く捕捉され、最終的に含有されている水（１．０％未満）を固化し、小さなビーズ状に見えるものを形成する。
【００６６】
実施例５：親水性活性物質モデルとしてサリチル酸ナトリウムを含有する、ポリビニルピロリドンを原料とするＮＣバインダーを得る
活性物質モデル（サリチル酸ナトリウム−ＳＡＮＡ）を含有する、ＰＶＰを原料とするＮＣを以下の通り得た。５００ｍＬのビーカー内で、乳化剤としてシリコーン変性ポリオキシエチレン（ＳＦ１５４０、Ｍｏｍｅｎｔｉｖｅ（登録商標））を含有するジメチコン濃度３％ｍ／ｍの溶液１４０ｇを調製した。ＰＶＰ９ｇ及びＮａＣｌ  ０．６ｇを脱イオン水４９ｇに溶解させることにより別の溶液を調製した。ＰＶＰ及び活性物質の水溶液を、１，０００ｒｐｍの機械的撹拌下で非親水性相に乳化させた。この乳化後、混合物を、圧力９００ｂａｒで５サイクルの高圧ホモジナイズに付した。最後に、エマルションをジャケット付ガラス反応器に移して、２８０ｍｍＨｇで真空蒸留することにより水を除去した。水の除去は、５０℃で３時間〜５時間実施した（ＮＣ５−３ｈ及びＮＣ５−５ｈ）。平均粒径（ＤＰ）、多分散性指数（ＩＰ）、残留含水率（ＴＡ）、粘度（Ｖｉｓｃ）、動的濁度、及び被包効率（ＥＥ）について、この実施例で得られたＮＣを特性評価した。結果を表６に示す。
【００６７】
【表６】
2013530168.tif 000008
【００６８】
前述の実施例と同様に、活性物質としてＳＡＮＡを含有するＰＶＰを原料とするＮＣのＤＰモデルは、ナノスケールの、多分散性指数が低く、且つ抽出プロセスの時間まで含水率が低下し、５時間抽出したときの値が１．０％未満である系が得られたことを示す。低粘度であることにより、系の流動性が示される。
【００６９】
図７は、３時間及び５時間水抽出プロセス行ったときの生成物の物理的安定性のプロファイルを示す。表７は、時間の関数として後方散乱を変化させることにより得られる安定性指数（動的濁度により得られるデータ）を示す。３時間抽出プロセスを行ったＮＣは、５時間抽出プロセスを行ったと比べて遥かに低い安定性指数を示す（安定性がより高い）。これは、含水率により系の物理的安定性が変化することを示す。
【００７０】
【表７】
2013530168.tif 000009
【００７１】
被包効率も高い値（８４．６０％）を示した。これは、親水性分子の組み込みにおけるアレイナノキャリアの性能を示す。
【００７２】
実施例６：親水性活性物質モデルとしてシアノコバラミンモデルを含有する、デンプンを原料とするＮＣを得る
活性物質モデル（シアノコバラミン）を含有するデンプンを原料とするＮＣを以下の通り得た。５００ｍＬのビーカー内で、乳化剤としてシリコーン変性ポリオキシエチレン（ＳＦ１５４０、Ｍｏｍｅｎｔｉｖｅ（登録商標））を含有するジメチコン濃度３％ｍ／ｍの溶液１４０ｇを調製した。デンプン８．１ｇ及びＮａＣｌ  ０．６ｇ及びサリチル酸ナトリウム０．９ｇを５１ｇの脱イオン水に溶解させることにより別の溶液を調製した。デンプン及び活性物質の水溶液を、１，０００ｒｐｍの機械的撹拌下で非親水性相に乳化させた。この乳化後、混合物を、圧力９００ｂａｒで５サイクルの高圧ホモジナイズに付した。最後に、エマルションをジャケット付ガラス反応器に移して、２８０ｍｍＨｇで真空蒸留することにより水を除去した。水の除去は、５０℃で３時間〜５時間実施した。平均粒径（ＤＰ）、多分散性指数（ＩＰ）、残留含水率（ＴＡ）、屈折率（ＩＲ）、粘度（Ｖｉｓｃ）、動的濁度、及び形態について、この実施例で得られたＮＣを特性評価した。結果を表８に示す。
【００７３】
【表８】
2013530168.tif 000010
【００７４】
この実施例は、食品、医薬、及び獣医学的分野で、デンプンを原料とするＮＣにおいて親水性活性物質の組み込みを使用できることを示す。この実施例の実験条件で得られた生成物のＤＰは、ナノスケールの、多分散性指数が低く、脱湿プロセスの時間と共に含水率が低下し、５時間抽出したときの値が１．０％未満である系が得られたことを示す。低粘度であることは、系の流動性を示す。
【００７５】
カプセル化効率も高い値（約８９％）を示した。これは、親水性分子の組み込みにおけるアレイナノキャリアの性能を示す。
【００７６】
実施例７：ＮＣの活性物質モデルの制御放出のプロファイル
シアノコバラミン及びサリチル酸ナトリウムについて２３２ｎｍ〜３０１ｎｍの波長におけるＵＶ吸光度を測定することにより、実施例４〜６に係るＮＣの活性物質モデルの制御放出のプロファイルを４８時間モニタリングした。
【００７７】
約１５０ｇの質量の製剤を膜に塗布し、水を１００．０ｍＬ添加した密閉フラスコに浸漬した。系を穏やかに撹拌（５０ｒｐｍ）しながら保持し、３７℃に加熱した。所定の時間間隔で３．０ｍＬのアリコートを収集し、ＵＶ吸光度により濃度をモニタリングした。放出される活性物質の割合を、標準偏差と共に時間（時）に対してプロットした。図９から分かる通り、放出アッセイは三連で実施し、吸光度の読み取りは五連で行った。
【００７８】
サリチル酸ナトリウムを含有するＮＣは、シアノコバラミンを含有するＮＣよりも迅速な放出プロファイルを示すことが観察される。これら放出プロファイルの差は、各々のポリマーマトリクスとの相互作用に加えて、分子構造及び水に対する分子（親水性活性物質）の溶解度の差に起因する可能性がある。
【００７９】
参照文献
１．  ＡＲＲＵＥＢＯ，Ｍ．，ＦＥＲＮＡＮＤＥＺ  ＰＡＣＨＥＣＯ，Ｒ．，ＩＢＡＲＲＡ，ＭＲ；ＳＡＮＴＡＭＡＲＩＡ，Ｊ．Ｍａｇｎｅｔｉｃ  ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ  ｆｏｒ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ，Ｎａｎｏ  Ｔｏｄａｙ，ｖ．２，ｐ．２２−３２，Ｊｕｎｅ  ２００７．
２．  ＧＵＥＲＹ，Ｊ．Ｄｏｕｂｌｅ  ｅｍｕｌｓｉｏｎｓ  ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｂｌｅ：Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ，Ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｒｅｌｅａｓｅ．２００６．１７７  ｆ．ＰｈＤ−ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ  ＰＡＲＩＳ  ＶＩ−Ｇｒａｄｕａｔｅ  Ｓｃｈｏｏｌ  ｏｆ  Ｐｈｙｓｉｃｓ  ａｎｄ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｍａｔｅｒｉａｌｓ，２００６．
３．  ＪＥＮＮＩＮＧ，Ｖ．；ＳＣＨＡＦＥＲ−ＫＯＲＴＩＮＧ，Ｍ．；ＧＯＨＬＡ，Ｓ．Ｖｉｔａｍｉｎ  Ａ−ｌｏａｄｅｄ  ｓｏｌｉｄ  ｌｉｐｉｄ  ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ  ｆｏｒ  ｔｏｐｉｃａｌ  ｕｓｅ  ｄｒｕｇ  ｒｅｌｅａｓｅ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，ｖ．６６，ｐ．１  １５−１２６，Ｍａｙ  ２０００．
４．  韓国特許第１００８６８７２４号明細書「Ｍｅｔｈｏｄ  ｆｏｒ  Ｐｒｅｐａｒｉｎｇ  Ｓｅｌｆ−Ａｇｇｒｅｇａｔｉｎｇ  Ｎａｎｏｃａｒｒｉｅｒ  Ｐａｒｔｉｃｌｅｓ  Ｈａｖｉｎｇ  Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ  Ｄｅｐｅｎｄｉｎｇ  Ｐｒｏｐｅｒｔ」
５．  ＬＥＥ，Ｓ．；ＫＵＲＩＨＡＲＡ−ＢＥＲＧＳＴＲＯＭ，Ｔ．；ＫＩＭ，Ｓ．Ｎｏｎａｑｕｅｏｕｓ  ｄｒｕｇ  ｐｅｒｍｅａｔｉｏｎ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  ｍｅｍｂｒａｎｅｓ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，ｖ．５，ｐ．２５３−２６２，１９８８．
６．  ＬＩＭ，Ｓ．Ｊ．；ＫＩＭ，Ｃ．Ｋ．Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ  ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ  ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ  ｔｈｅ  ｐｈｙｓｉｃｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ  ｏｆ  ｓｏｌｉｄ  ｌｉｐｉｄ  ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ  ｌｏａｄｅｄ  ｗｉｔｈ  ａｌｌ−ｔｒａｎｓ  ｒｅｔｉｎｏｉｃ  ａｃｉｄ，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，ｖ．２４３，ｐ．１３５−１４６，Ａｕｇ  ２００２．
７．  ＬＩＭＡ，Ｅ．；ＫＥＤＯＲ−ＨＡＣＫＭＡＮＮ，Ｅ．Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｕｔｉｌｉｔｙ  ｏｆ  ｌｉｐｏｓｓｏｍｅｓ，Ｒｅｖｉｓｔａ  Ｂｒａｓｉｌｅｉｒａ  ｄｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎａ，ｖ．５１，ｐ．５８５−５９０，Ｍａｙ  １９９４．
８．  ＬＩＰＰＡＣＨＥＲ，Ａ．；ＭＵＬＬＥＲ，Ｒ．Ｈ．；ＭＡＤＥＲ，Ｋ．Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｅｍｉｓｏｌｉｄ  ｄｒｕｇ  ｃａｒｒｉｅｒｓ  ｆｏｒ  ｔｏｐｉｃａｌ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｂａｓｅｄ  ｏｎ  ｓｏｌｉｄ  ｌｉｐｉｄ  ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，ｖ．２１４，ｐ．９−１２，Ｆｅｂ．２００１．
９．  ＭＡＩＡ，Ｃ．Ｓ．；ＭＥＨＮＥＲＴ，Ｗ．；ＳＣＨＡＦＥＲ−ＫＯＲＴＩＮＧ，Ｍ．Ｓｏｌｉｄ  ｌｉｐｉｄ  ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ  ａｓ  ｄｒｕｇ  ｃａｒｒｉｅｒｓ  ｆｏｒ  ｔｏｐｉｃａｌ  ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄｓ，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，ｖ．１９６，ｐ．１６５−１６７，Ｍａｒ．２０００．
１０．  ＭＥＨＮＥＲＴ，Ｗ．；ＭＡＤＥＲ，Ｋ．Ｓｏｌｉｄ  ｌｉｐｉｄ  ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ−Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖｉｅｗｓ，ｖ．４７，ｐ．１６５−１９６，Ａｐｒ．２００１．
１１．  ＭＩＳＨＲＡ  Ｂ，ＢＰ  ＢＨＡＶＥＳＨ，ＡＮＤ  Ｔ  ＳＡＮＪＡＹ．Ｃｏｌｌｏｉｄａｌ  ｎａｎｏｃａｒｒｉｅｒｓ：ａ  ｒｅｖｉｅｗ  ｏｎ  ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ｔｙｐｅｓ  ａｎｄ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｔｏｗａｒｄ  ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ．Ｎａｎｏｍｅｄｉｃｉｎｅ：Ｎａｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，１８  Ｍａｙ  ２００９．
１２．  ＭＯＵ，Ｄ．Ｓ．；ＣＨＥＮ，Ｈ．Ｂ．；ＤＵ，Ｄ．Ｒ．；ＭＡＯ，Ｃ．Ｗ．；ＷＡＮ，Ｈ．Ｌ；ＸＵ，Ｈ．Ｂ．；ＹＡＮＧ，Ｘ．Ｌ．Ｈｙｄｒｏｇｅｌ−ｔｈｉｃｋｅｎｅｄ  ｎａｎｏｅｍｕｌｓｉｏｎ  ｓｙｓｔｅｍ  ｆｏｒ  ｔｏｐｉｃａｌ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  ｌｉｐｏｐｈｉｌｉｃ  ｄｒｕｇｓ，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，ｖ．３５３，ｐ．２７０−２７６，Ａｐｒ．２００８．
１３．  ＭＵＨＬＥＮ，Ａ．；ＳＣＨＷＡＲＺ，Ｃ；ＭＥＨＮＥＲＴ，Ｗ．Ｓｏｌｉｄ  ｌｉｐｉｄ  ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ（ＳＬＮ）  ｆｏｒ  ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ−Ｄｒｕｇ  ｒｅｌｅａｓｅ  ａｎｄ  ｒｅｌｅａｓｅ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍ，Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，ｖ．４５，ｐ．１４９−１５５，Ｍａｒ  １９９８．
１４．  ＭＵＬＬＥＲ，Ｒ．Ｈ．；ＭＡＤＥＲ，Ｋ．；ＧＯＨＬＡ，Ｓ．Ｓｏｌｉｄ  ｌｉｐｉｄ  ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ（ＳＬＮ）  ｆｏｒ  ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ−ａ  ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｓｔａｔｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ａｒｔ，Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，ｖ．５０，ｐ．１６１−１７７，Ｊｕｌｙ  ２０００．
１５．  ＭＵＬＬＥＲ，Ｒ．Ｈ．；ＲＡＤＴＫＥ，Ｍ．；ＷＩＳＳＩＮＧ，Ｓ．Ａ．Ｓｏｌｉｄ  ｌｉｐｉｄ  ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ（ＳＬＮ）  ａｎｄ  ｎａｎｏｓｔｒｕｃｔｕｒｅｄ  ｌｉｐｉｄ  ｃａｒｒｉｅｒｓ（ＮＬＣ）  ｉｎ  ｃｏｓｍｅｔｉｃ  ａｎｄ  ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｉｃａｌ  ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓ，Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖｉｅｗｓ，ｖ．５４，ｐ．Ｓ１３１−Ｓ１５５，Ｎｏｖ  ２００２．
１６．  ＭＵＬＬＥＲ−ＧＯＹＭＡＮＮ，Ｃ．Ｃ．Ｐｈｙｓｉｃｏｃｈｅｒｎｉｃａｌ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｏｌｌｏｉｄａｌ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｓｙｓｔｅｍｓ  ｓｕｃｈ  ａｓ  ｒｅｖｅｒｓｅ  ｍｉｃｅｌｌｅｓ，ｖｅｓｉｃｌｅｓ，ｌｉｑｕｉｄ  ｃｒｙｓｔａｌｓ  ａｎｄ  ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ  ｆｏｒ  ｔｏｐｉｃａｌ  ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ，Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，ｖ．５８，ｐ．３４３−３５６，Ｓｅｐｔ  ２００４．
１７．  ＮＡＧＡＲＷＡＬ，Ｒ．Ｃ；ＫＡＮＴ，Ｓ．；ＳＩＮＧＨ，Ｐ．Ｎ．；ＭＡＩＴＩ，Ｐ．；ＰＡＮＤＩＴ，Ｊ．Ｋ．Ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ  ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｕｌａｔｅ  ｓｙｓｔｅｍ：Ａ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ａｐｐｒｏａｃｈ  ｆｏｒ  ｏｃｕｌａｒ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，ｖ．１３６，ｐ．２−１３，Ｍａｙ２００９．
１８．  ＲＵＥＮＲＡＲＯＥＮＧＳＡＫ，Ｐ．；ＣＯＯＫ，Ｊ．Ｍ．；ＦＬＯＲＥＮＣＥ，Ａ．Ｔ．Ｎａｎｏｓｙｓｔｅｍ  ｄｒｕｇ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ：Ｆａｃｉｎｇ  ｕｐ  ｔｏ  ｃｏｍｐｌｅｘ  ｒｅａｌｉｔｉｅｓ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，ｖ．１４１，ｎ．ｐ．２６５−７６，２０１０．
１９．  ＳＡＫＵＬＫＵ，Ｕ．；ＮＵＣＨＵＣＨＵＡ，Ｏ．；ＵＡＷＯＮＧＹＡＲＴ，Ｎ．；ＰＵＴＴＩＰＩＰＡＴＫＨＡＣＨＯＲＮ，Ｓ．；ＳＯＯＴＴＩＴＡＮＴＡＷＡＴ，Ａ．；ＲＵＫＴＡＮＯＮＣＨＡＩ，Ｕ．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｍｏｓｑｕｉｔｏ  ｒｅｐｅｌｌｅｎｔ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ｃｉｔｒｏｎｅｌｌａ  ｏｉｌ  ｎａｎｏｅｍｕｌｓｉｏｎ，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，ｖ．３７２，ｐ．１０５−１１１，Ｍａｙ  ２００９．
２０．  ＳＵＩＴＴＨＩＭＥＡＴＨＥＧＯＲＮ，Ｏ．；ＪＡＩＴＥＬＹ，Ｖ．；ＦＬＯＲＥＮＣＥ，Ａ．Ｔ．Ｎｏｖｅｌ  ａｎｈｙｄｒｏｕｓ  ｅｍｕｌｓｉｏｎｓ：Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ  ａｓ  ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｒｅｌｅａｓｅ  ｖｅｈｉｃｌｅｓ，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，ｖ．２９８，ｐ．３６７−３７１，Ｊｕｌｙ  ２００５．
２１．  ＴＡＤＲＯＳ，Ｔ．；ＩＺＱＵＩＥＲＤＯ，Ｒ．；ＥＳＱＵＥＮＡ，Ｊ．；ＳＯＬＡＮＳ，Ｃ．Ｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｓｔａｂｉｌｉｔｙ  ｏｆ  ｎａｎｏ−ｅｍｕｌｓｉｏｎｓ，Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｃｏｌｌｏｉｄ  ａｎｄ  Ｉｎｔｅｒｆａｃｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，ｖ．１０８−０９，ｐ．３０３−３１８，Ｍａｙ  ２００４．
２２．  ＴＯＲＣＨＩＬＩＮ，Ｖ．Ｍｕｌｔｉｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ａｎｄ  ｓｔｉｍｕｌｉ−ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ  ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ｎａｎｏｃａｒｒｉｅｒｓ，Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，ｖ．７１，ｐ．４３１−４４４，Ｍａｒ  ２００９．
２３．  ＷＩＳＳＩＮＧ，Ｓ．Ａ．；ＭＵＬＬＥＲ，Ｒ．Ｈ．Ａ  ｎｏｖｅｌ  ｓｕｎｓｃｒｅｅｎ  ｓｙｓｔｅｍ  ｂａｓｅｄ  ｏｎ  ｔｏｃｏｐｈｅｒｏｌ  ａｃｅｔａｔｅ  ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｅｄ  ｉｎｔｏ  ｓｏｌｉｄ  ｌｉｐｉｄ  ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｏｓｍｅｔｉｃ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，ｖ．２３，ｐ．２３３−２４３，Ａｕｇ  ２００１．
２４．  ＷＩＳＳＩＮＧ，Ｓ．Ａ．；ＭＵＬＬＥＲ，Ｒ．Ｈ．Ｓｏｌｉｄ  ｌｉｐｉｄ  ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ  ａｓ  ｃａｒｒｉｅｒ  ｆｏｒ  ｓｕｎｓｃｒｅｅｎｓ：ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ｒｅｌｅａｓｅ  ａｎｄ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｓｋｉｎ  ｐｅｎｅｔｒａｔｉｏｎ，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，ｖ．８，ｐ．２２５−２３３，Ｊｕｎｅ  ２００２ａ．
２５．  ＷＩＳＳＩＮＧ，Ｓ．Ａ．；ＭＵＬＬＥＲ，Ｒ．Ｈ．Ｔｈｅ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ａｎ  ｉｍｐｒｏｖｅｄ  ｃａｒｒｉｅｒ  ｓｙｓｔｅｍ  ｆｏｒ  ｓｕｎｓｃｒｅｅｎ  ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ  ｂａｓｅｄ  ｏｎ  ｃｒｙｓｔａｌｌｉｎｅ  ｌｉｐｉｄ  ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，ｖ．２４２，ｐ．３７３−３７５，Ａｕｇ  ２００２ｂ．
２６．  国際公開第２００７／０４１２０６号パンフレット「Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｎａｎｏｃａｒｒｉｅｒｓ  Ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｂｙ  Ｌａｎｄｓｃａｐｅ  Ｐｈａｇｅ」
２７．  国際公開第２００９／１２３７６８号パンフレット「Ｎａｎｏｃａｒｒｉｅｒ  ａｎｄ  Ｎａｎｏｇｅｌ  Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ」，
２８．  国際公開第２００９／１２３９３４号パンフレット「Ｂｒａｎｃｈｅｄ  Ｍｕｌｔｉｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  Ｕｓｅ」
２９．  ＷＵ，Ｈ．Ｌ；ＲＡＭＡＣＨＡＮＤＲＡＮ，Ｃ；ＢＩＥＬＩＮＳＫＡ，Ａ．Ｕ．；ＫＩＮＧＺＥＴＴ，Ｋ．；ＳＵＮ，Ｒ．；ＷＥＩＮＥＲ，Ｎ．Ｄ．；ＲＯＥＳＳＬＥＲ，Ｂ．Ｊ．Ｔｏｐｉｃａｌ  ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ  ｕｓｉｎｇ  ｐｌａｓｍｉｄ  ＤＮＡ  ｉｎ  ａ  ｗａｔｅｒ−ｉｎ−ｏｉｌ  ｎａｎｏｅｍｕｌｓｉｏｎ，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，ｖ．２２１，ｐ．２３−３４，Ｊｕｎｅ２００１ａ．
３０．  ＷＵ，Ｈ．Ｌ；ＲＡＭＡＣＨＡＮＤＲＡＮ，Ｃ；ＷＥＩＮＥＲ，Ｎ．Ｄ．；ＲＯＥＳＳＬＥＲ，Ｂ．Ｊ．Ｔｏｐｉｃａｌ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔ  ｏｆ  ｈｙｄｒｏｐｈｉｌｉｃ  ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ  ｕｓｉｎｇ  ｗａｔｅｒ−ｉｎ−ｏｉｌ  ｎａｎｏｅｍｕｌｓｉｏｎｓ，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，ｖ．２２０，ｐ．６３−７５，Ｊｕｎｅ  ２００１ｂ．
３１．  ＹＩＬＭＡＺ，Ｅ．；ＢＯＲＣＨＥＲＴ，Ｈ．Ｈ．Ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  ａ  ｐｈｙｔｏｓｐｈｉｎｇｏｓｉｎｅ−ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ，ｐｏｓｉｔｉｖｅｌｙ−ｃｈａｒｇｅｄ  ｎａｎｏｅｍｕｌｓｉｏｎ  ａｓ  ａ  ｃｏｌｌｏｉｄａｌ  ｃａｒｒｉｅｒ  ｓｙｓｔｅｍ  ｆｏｒ  ｄｅｒｍａｌ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｅｒａｍｉｄｅｓ，Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，ｖ．６０，ｐ．９１−９８，Ｍａｙ  ２００５．
【図１Ａ】
2013530168.tif 000011
【図１Ｂ】
2013530168.tif 000012
【図３】
2013530168.tif 000013
【図５Ａ】
2013530168.tif 000014
【図６Ａ】
2013530168.tif 000015
【図６Ｂ】
2013530168.tif 000016
【図８】
2013530168.tif 000017
【図２】
2013530168.tif 000018
【図４Ａ】
2013530168.tif 000019
【図４Ｂ】
2013530168.tif 000020
【図５Ｂ】
2013530168.tif 000021
【図５Ｃ】
2013530168.tif 000022
【図７】
2013530168.tif 000023
【図９】
2013530168.tif 000024
【国際調査報告】
2013530168.tif 000025
2013530168.tif 000026
2013530168.tif 000027
2013530168.tif 000028
2013530168.tif 000029
2013530168.tif 000030