【事件の表示】
　特許第６２８０８６９号発明「工業的な医薬用途に適合する拡張可能なレンチウイルスベクター製造システム」の特許異議申立事件について、次のとおり決定する。
【結　論】
　特許第６２８０８６９号の特許請求の範囲を訂正請求書に添付された訂正特許請求の範囲のとおり、訂正後の請求項〔１−１８〕、〔１９−２０〕について訂正することを認める。
　特許第６２８０８６９号の請求項１−２０に係る特許を維持する。
【理　由】
第１　手続の経緯
　特許第６２８０８６９号の請求項１〜２０に係る特許についての出願は、平成２４年１１月２６日（パリ条約による優先権主張　２０１１年１１月２４日　欧州特許庁（ＥＰ）、２０１１年１１月２４日　アメリカ合衆国（ＵＳ））に出願され、平成３０年１月２６日にその特許権の設定登録がされ、平成３０年２月１４日に特許掲載公報が発行された。
　本件特許異議の申立ての経緯は、次のとおりである。
平成３０年　８月１４日 ： 特許異議申立人 櫻井 洋 による
　　　　　　　　　　　　　請求項１〜２０に係る特許に対する
　　　　　　　　　　　　　特許異議の申立て
平成３０年　８月１４日 ： 特許異議申立人 オックスフォード　バイオ
　　　　　　　　　　　　　メディカ（ユーケー）リミテッドによる
　　　　　　　　　　　　　請求項１〜２０に係る特許に対する
　　　　　　　　　　　　　特許異議の申立て
平成３０年１１月　２日付け： 取消理由通知書
平成３１年　３月　７日 ： 特許権者による意見書
平成３１年　４月１９日 ： 取消理由通知書（決定の予告）
令和　１年　７月２３日 ： 特許権者による訂正請求書及び意見書
令和　１年　８月１９日付け ： 訂正請求があった旨の通知書
　　　　　　　　　　　　　（特許法１２０条の５第５項）
令和　１年　９月２４日 ： 特許異議申立人 櫻井 洋 による意見書
令和　１年１０月１０日 ： 特許異議申立人 オックスフォード　バイオ
　　　　　　　　　　　　　メディカ（ユーケー）リミテッドによる意見書
第２　訂正の適否
１．訂正の内容
（１）訂正事項１
　特許請求の範囲の請求項１において「−無血清培地で浮遊状態で、レンチウイルスベクターの製造に適合した少なくとも１つのプラスミドでトランスフェクトされた、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞である哺乳類細胞を培養することであって、培養は少なくとも５０Ｌの容量で実施される；」とあるのを、「
−少
無血清培地で
、ここでプラスミドはレンチウイルスベクターの製造に適合したものであり、
無血清培地で浮遊状態で、
（２）訂正事項２
　特許請求の範囲の請求項１において「実施される；」と「−製造された」の間に「
−培地を変えずに、培地に酪酸ナトリウムを添加すること；
（３）訂正事項３
　特許請求の範囲の請求項１の末尾の「製造方法」を、「製造方法
であって、濃縮がない状態で、少なくとも１０
７
の感染ゲノム／ｍＬが製造される、ものである、製造方法
　
（４）訂正事項４
　特許請求の範囲の請求項１６の「少なくとも１０７の感染性ゲノム／ｍＬが製造される、」を、「
ＰＰ／ＩＰ比が１００〜２５０である、
（５）訂正事項５
　特許請求の範囲の請求項１８において「少なくとも１つのプラスミドでトランスフェクトされた」を、「少なくとも１つのプラスミドで
無血清培地で
（６）訂正事項６
　特許請求の範囲の請求項１８において「細胞培養装置」を、「
請求項１〜１７のいずれか１項に記載の方法に用いられる
（７）訂正事項７
　特許請求の範囲の請求項１９において「製造に必要なプラスミドでトランスフェクトされた」を、「製造に必要なプラスミドで
無血清培地で
（８）訂正事項８
　特許請求の範囲の請求項１９の末尾の「方法。」を、「方法
であって、濃縮がない状態で、少なくとも１０
７
の感染ゲノム／ｍＬが製造される、ものである、方法
　
２．訂正の目的の適否、新規事項の有無、及び特許請求の範囲の拡張・変更の存否
（１）訂正事項１
　訂正事項１は「無血清培地で浮遊状態で」の記載が「培養」にかかり、そのうち「無血清培地で」の記載は「トランスフェクト」にもかかり、「レンチウイルスベクターの製造に適合した」の記載が「プラスミド」にかかることことを明らかにしようとするものであるから、訂正事項１は、特許法第１２０条の５第２項ただし書第３号に規定する明瞭でない記載の釈明を目的とするものに該当する。
　また、上記「無血清培地で」の記載が「トランスフェクト」にかかることを明らかにする訂正は、特許法第１２０条の５第２項ただし書第１号に規定する特許請求の範囲の減縮を目的とするものにも該当する。
　そして、願書に添付した明細書の発明の詳細な説明の段落【００３７】には細胞培養に用いられる培地とトランスフェクトに用いられる培地が同じであることが記載されており、実施例にはＨＥＫ２９３Ｔ細胞を無血清培地でトランスフェクトしたこと（段落【００７１】〜【００７３】）が記載されているから、訂正事項１は、願書に添付した明細書に記載した範囲内の訂正であると認められ、実質上特許請求の範囲を拡張又は変更するものでもないから、同法１２０条の５第９項で準用する同法１２６条第５項及び第６項に適合するものである。
（２）訂正事項２
　訂正事項２は、訂正前の請求項１に係る発明に、「培地を変えずに、培地に酪酸ナトリウムを添加する」工程を追加するものであり、訂正事項２は、特許法第１２０条の５第２項ただし書第１号に規定する特許請求の範囲の減縮を目的とするものである。
　そして、願書に添付した明細書の発明の詳細な説明の段落【００１１】には「培地を変えずに、培地に酪酸ナトリウムを添加する」ことについて記載されており、訂正事項２は願書に添付した明細書に記載した範囲内の訂正であると認められ、また、訂正事項２は、実質上特許請求の範囲を拡張又は変更するものでもない。
　したがって、訂正事項２は、同法１２０条の５第９項で準用する同法１２６条第５項及び第６項に適合するものである。
（３）訂正事項３
　訂正事項３は、訂正前の請求項１に係る発明に、訂正前の請求項１６の要件を組み込むとともに、その測定条件を「濃縮がない状態」とすることで、請求項１に係る発明を減縮しようとするものであるから、訂正事項３は、特許法第１２０条の５第２項ただし書第１号に規定する特許請求の範囲の減縮を目的とするものである。
　そして、願書に添付した明細書の発明の詳細な説明にはレンチウイルスベクター回収時の濃縮について何ら記載されていないから、「少なくとも１０７の感染性ゲノム／ｍＬ」は濃縮を行っていない状態での力価を規定していることは明らかであり、訂正事項３は願書に添付した明細書に記載した範囲内の訂正であると認められ、また、訂正事項３は、実質上特許請求の範囲を拡張又は変更するものでもない。
　したがって、訂正事項３は、同法１２０条の５第９項で準用する同法１２６条第５項及び第６項に適合するものである。
　
（４）訂正事項４
　訂正事項４は、訂正前の請求項１６に係る発明に特定されていた「少なくとも１０７の感染性ゲノム／ｍＬ」が訂正後の請求項１に特定されたことからこの特定を削除し、代わりに「ＰＰ／ＩＰ比が１００〜２５０である」ことを規定することで、請求項１６に係る発明を限定するものであるから、訂正事項４は、特許法第１２０条の５第２項ただし書第１号に規定する特許請求の範囲の減縮を目的とするもの、及び、同法同条同項ただし書第３号に規定する明瞭でない記載の釈明を目的とするものである。
　そして、願書に添付した明細書の発明の詳細な説明の段落【００７９】には「ＰＰ／ＩＰ比が１００〜２５０である」ことについて記載されているから、訂正事項４は願書に添付した明細書に記載した範囲内の訂正であると認められ、また、訂正事項４は、実質上特許請求の範囲を拡張又は変更するものでもない。
　したがって、訂正事項４は、同法１２０条の５第９項で準用する同法１２６条第５項及び第６項に適合するものである。
　
（５）訂正事項５
　訂正事項５は、訂正前の請求項１８に係る発明において、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞のトランスフェクトが無血清培地で行われることを限定するものであり、訂正事項５は、特許法第１２０条の５第２項ただし書第１号に規定する特許請求の範囲の減縮を目的とするものである。
　そして、上記（１）で述べたとおり、願書に添付した明細書の発明の詳細な説明の段落【００３７】、【００７１】〜【００７３】にはトランスフェクトが無血清培地で行われることについて記載されており、訂正事項５は願書に添付した明細書に記載した範囲内の訂正であると認められ、また、訂正事項５は、実質上特許請求の範囲を拡張又は変更するものでもない。
　したがって、訂正事項５は、同法１２０条の５第９項で準用する同法１２６条第５項及び第６項に適合するものである。
（６）訂正事項６
　訂正事項６は、訂正前の請求項１８に係る発明において、培養装置を「請求項１〜１７のいずれか１項に記載の方法」に用いられるものに限定するものであり、訂正事項６は、特許法第１２０条の５第２項ただし書第１号に規定する特許請求の範囲の減縮を目的とするものである。
　そして、訂正事項６は、願書に添付した明細書に記載した範囲内の訂正であると認められ、実質上特許請求の範囲を拡張又は変更するものでもないから、同法１２０条の５第９項で準用する同法１２６条第５項及び第６項に適合するものである。
（７）訂正事項７
　訂正事項７は、訂正前の請求項１９に係る発明において、トランスフェクトが無血清培地で行われることを限定するものであり、訂正事項７は、特許法第１２０条の５第２項ただし書第１号に規定する特許請求の範囲の減縮を目的とするものである。
　そして、上記（１）で述べたとおり、願書に添付した明細書の発明の詳細な説明の段落【００３７】、【００７１】〜【００７３】にはトランスフェクトが無血清培地で行われることについて記載されており、訂正事項７は願書に添付した明細書に記載した範囲内の訂正であると認められ、また、訂正事項７は、実質上特許請求の範囲を拡張又は変更するものでもない。
　したがって、訂正事項７は、同法１２０条の５第９項で準用する同法１２６条第５項及び第６項に適合するものである。
（８）訂正事項８
　訂正事項８は、訂正前の請求項１９に係る発明に、訂正前の請求項１６の要件を組み込むとともに、その測定条件を「濃縮がない状態」とすることで、請求項１９に係る発明を減縮しようとするものであるから、訂正事項８は、特許法第１２０条の５第２項ただし書第１号に規定する特許請求の範囲の減縮を目的とするものである。
　そして、願書に添付した明細書の発明の詳細な説明にはレンチウイルスベクター回収時の濃縮について何ら記載されていないから、「少なくとも１０７の感染性ゲノム／ｍＬ」は濃縮を行っていない状態での力価を規定していることは明らかであり、訂正事項８は願書に添付した明細書に記載した範囲内の訂正であると認められ、また、訂正事項８は、実質上特許請求の範囲を拡張又は変更するものでもない。
　したがって、訂正事項８は、同法１２０条の５第９項で準用する同法１２６条第５項及び第６項に適合するものである。
　
３．小括
　以上のとおりであるから、本件訂正請求による訂正は、特許法第１２０条の５第２項ただし書第１号及び第３号に掲げる事項を目的とするものであり、かつ、同条第９項において準用する同法第１２６条第５項及び第６項の規定に適合する。
　したがって、特許請求の範囲を、訂正請求書に添付された訂正特許請求の範囲のとおり、訂正後の請求項〔１−１８〕、〔１９−２０〕について訂正することを認める。
　
　
第３　訂正後の本件発明
　本件訂正請求により訂正された請求項１〜２０に係る発明（以下「本件発明１」などという。また、本件発明１〜２０をまとめて「本件発明」という。）は、訂正特許請求の範囲の請求項１〜２０に記載された次の事項により特定されるとおりのものである。
【請求項１】
　−少なくとも１つのプラスミドで無血清培地でトランスフェクトされた、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞である哺乳類細胞を培養すること、ここでプラスミドはレンチウイルスベクターの製造に適合したものであり、培養は無血清培地で浮遊状態で、少なくとも５０Ｌの容量で実施される；
−培地を変えずに、培地に酪酸ナトリウムを添加すること；
−製造された組換えレンチウイルスベクターを培地から回収すること、
を含む、組換えレンチウイルスベクターの製造方法であって、
濃縮がない状態で、少なくとも１０７の感染ゲノム／ｍＬが製造される、ものである、
製造方法。
【請求項２】
　回収段階が、１回のレンチウイルス回収からなる、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
　トランスフェクションが一過的なトランスフェクションであり、１回の回収段階がトランスフェクション後４８から７２時間の間で実行される、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
　細胞がポリエチレンイミン（ＰＥＩ）およびプラスミドでトランスフェクトされる、トランスフェクション段階を含む、請求項１または２に記載の方法。
【請求項５】
　ＰＥＩが、２０〜２５ｋＤの直鎖ＰＥＩである、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
　トランスフェクションが、少なくとも１．５μｇ／１０６細胞の総ＤＮＡ量で実施される、請求項４または５に記載の方法。
【請求項７】
　１０未満のＮ／Ｐ比に従って、ＰＥＩおよびプラスミドがトランスフェクションの前に混合される請求項４〜６のいずれか１項に記載の方法であって、Ｎ／Ｐがプラスミド中のリン酸基の数あたりのＰＥＩの窒素原子の数を示す、方法。
【請求項８】
　Ｎ／Ｐ比が６である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
　細胞培養への添加の前のＰＥＩおよびプラスミドの間の接触時間が、５〜３０分間の間である、請求項４〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
　細胞培養への添加の前のＰＥＩおよびプラスミドの間の接触時間が１０分である、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
　培地を変えずに、トランスフェクション後２４時間で培地に酪酸ナトリウムを添加する、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
　酪酸ナトリウムが２ｍＭから１２ｍＭの間の最終濃度で培地に添加される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
　酪酸ナトリウムが２ｍＭから１０ｍＭの間の最終濃度で培地に添加される、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
　酪酸ナトリウムが最終濃度５ｍＭで培地に添加される、請求項１２または１３に記載の方法。
【請求項１５】
　エンベロープタンパク質をコードするプラスミド（Ｅｎｖプラスミド）、レンチウイルスＧａｇおよびＰｏｌタンパク質をコードするプラスミド（Ｇａｇ−Ｐｏｌプラスミド）、レンチウイルスＲｅｖタンパク質をコードするプラスミド（Ｒｅｖプラスミド）およびレンチウイルス３’−ＬＴＲおよびレンチウイルス５’−ＬＴＲの間の対象の導入遺伝子（ＴＯＩ）発現カセットを含むプラスミド、を含む４つのプラスミドで細胞がトランスフェクトされる、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
　ＰＰ／ＩＰ比が１００〜２５０である、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
　−細胞が２９３Ｔ細胞であり；
−細胞のトランスフェクションがポリエチレンイミン（ＰＥＩ）およびＤＮＡの混合物で実施され；
−酪酸ナトリウムが、トランスフェクション後２４時間で、培地を変えずに添加され；および
−生産されたレンチウイルスベクターの１回の回収が行われる、
請求項１〜１６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１８】
　レンチウイルスベクターの製造に適応された少なくとも１つのプラスミドで無血清培地でトランスフェクトされたＨＥＫ２９３Ｔ細胞を含む、少なくとも５０Ｌ容量の無血清培地を含む、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の方法に用いられる細胞培養装置であって、該細胞は該培養装置で浮遊状態で増殖する、細胞培養装置。
【請求項１９】
　培養の培地を変えずに、トランスフェクション後２４時間で培地に酪酸ナトリウムを添加することを含む、製造に必要なプラスミドで無血清培地でトランスフェクトされた、無血清培地で浮遊状態で増殖するＨＥＫ２９３Ｔ細胞によるレンチウイルスベクター製造の最適化のための方法であって、
濃縮がない状態で、少なくとも１０７の感染ゲノム／ｍＬが製造される、ものである、
方法。
【請求項２０】
　酪酸ナトリウムが最終濃度５ｍＭで添加される、請求項１９に記載の方法。
　
　
第４　取消理由通知（決定の予告）に記載した取消理由について
１．取消理由の概要
　訂正前の請求項１〜２０に係る特許に対して、当審が平成３１年４月１９日に特許権者に通知した取消理由の要旨は、次のとおりである。　
　請求項１〜２０に係る発明は、下記引用例５に記載された公然知られた発明、及び、下記引用例１〜４、６、７に記載された発明に基づいて当業者が容易に発明をすることができたものである。
　したがって、請求項１〜２０に係る発明の特許は、特許法第２９条第２項の規定に違反してされたものであるから、同法第１１３条第２号に該当し、取り消されるべきものである。
（引用例）
引用例１：Gene Therapy, 2011 January, Vol.18, p.531-538（特許異議申立人 櫻井洋（以下「申立人Ａ」という。）の甲第２号証） 
引用例２：Current Gene Therapy, 2010, vol.10, p.474-486（申立人Ａの甲第１号証） 
引用例３：Biotechnology and Bioengineering, 2007, vol.98, p.789-799（申立人Ａの甲第４号証、特許異議申立人オックスフォード　バイオメディカ（ユーケー）　リミテッド（以下「申立人Ｂ」という。）の甲第３号証） 
引用例４：Journal of Gene Medicine, 2009, vol.11, p.868-876（申立人Ａの甲第６号証、申立人Ｂの甲第７号証） 
引用例５：Charlotte Parker et al, Development of a HEK293T Clonal Suspension Cell Line for the Production of High Titre EIAV Lentiviral Vector, P219, 29 October 2011, European Society of Gene and Cell Therapy British Society for Gene Therapy  Collaborative Congress 2011, The Brighton Centre, Brighton （申立人Ｂの甲第１号証） 
引用例６：国際公開第2011/097447号（申立人Ｂの甲第２号証） 
引用例７：Journal of Pharmaceutical Sciences, 2003, vol.92, p.1710-1722 （申立人Ｂの甲第８号証）
　なお、引用例５が公知であることについては争いがあるが、本決定の結論には影響しないから、本決定において引用例５は、本件特許出願の優先日前である２０１１年１０月２９日に英国Brightonで開催された「European Society of Gene and Cell Therapy British Society for Gene Therapy Collaborative Congress 2011」において発表された内容が記載されたものであり、その記載事項は２０１１年１０月２９日に不特定の者の間で公知になった事項であるものとして取り扱うこととし、引用例５に記載された発明は、本件特許出願の優先日前に外国において公然知られた発明であるとする。
２．引用例の記載
（１）引用例１
　取消理由通知において引用した引用例１には以下の事項が記載されている。なお、英文であるから翻訳文を記載する。また、下線は当審が付したものである。
　
（１−１）「材料および方法
細胞培養
２９３Ｔ（ＨＥＫ）細胞（ＡＴＣＣ：ＣＲＬ−１１２６８）をＬＶ産生に使用した
バキュロウイルス
ＢＶは以前に記載２１されたように作製した； 
ＢＡＣトランスファー（導入遺伝子としてＧＦＰを発現）、ＢＡＣ−ｇａｇ−ｐｏｌ（ＧａｇおよびＰｏｌ遺伝子を発現）、ＢＡＣ−Ｒｅｖ（Ｒｅｖを発現）およびＢＡＣ−ＶＳＶ−Ｇ（偽ＶＳＶ−Ｇを発現）
６ウェルプレートにおけるＢＶ媒介ＬＶ産生の最適化
２９３Ｔ細胞をＥＸ−ＣＥＬＬ　２９３培地を用いて培養した。細胞を数種類の形質導入培地（１〜１０×１０６細胞／ｍｌ）に播種し、４時間後に４種類のハイブリッドＢＶ（ＭＯＩ ２．５−７５０、同じまたは異なる比率）で形質導入した。形質導入は３７℃で行った。さらに、形質導入もまた２６、３０および３４℃の温度で３時間行い、その後細胞を３７℃に戻した。形質導入の１６時間後に遠心分離（８００回転、５分間）により細胞を除去し、そして新鮮なＥＸ−ＣＥＬＬ　２９３を添加した。上澄み液を含むＬＶを４８−１４４時間に収集した。ベクター産生中の酪酸ナトリウム濃度は０−１０ｍＭであった。
ローラーボトルを用いた浮遊細胞におけるＢＶ媒介ＬＶ生産
２９３Ｔ懸濁細胞をＥＸ−ＣＥＬＬ　２９３培地を用いて培養した。形質導入日に、細胞をフリースタイル２９３発現培地（１％ウシ胎児血清）に播種し、４時間後に４つのＢＶで形質導入した（異なるＭＯＩを試験した）。形質導入時には、４９０ｃｍ
２
のローラーボトルの容量は３０ｍｌであり、８５０ｃｍ
２
のローラーボトルの容量は６０ｍｌであった。培地を１６時間後に遠心分離（８００ｒ．ｐ．ｍ．、５分）によって除去して、新鮮なＥＸ−ＣＥＬＬ　２９３培地を細胞に加えた（ローラーボトルの大きさに応じて６０または１２０ｍｌ）。ベクター製造中の酪酸ナトリウム濃度は０または５ｍＭであった
超遠心分離により１０００倍に濃縮した
プラスミドトランスフェクションによる接着細胞および懸濁細胞におけるＬＶ産生
ＧＦＰ発現ＬＶを、以前に記載されているように接着性２９３Ｔ細胞のリン酸カルシウムトランスフェクションによって三重フラスコ（Ｎｕｎｃ．Ｒｏｓｋｉｌｄｅ、デンマーク）において調製した。
　懸濁細胞を前の段落に記載の条件で培養した。トランスフェクションの日に、細胞をＦｒｅｅｓｔｙｌｅ　２９３　発現培地（５ｍＭ酪酸ナトリウム、１％ウシ胎児血清）に播種し（密度１．６〜２×１０６細胞/ｍｌ）、接着細胞中に使用したのと同じ４つのプラスミドで２時間後にトランスフェクションした。直鎖状２５ｋＤａ ＰＥＩ（Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｉｎｃ．、米国ペンシルバニア州ウォリントン）をトランスフェクション試薬として使用した。 ＰＥＩを滅菌水に希釈し、ＨＣｌで中和し、ｐＨをＮａＯＨで7に調整した。調製物中のＰＥＩ濃度は１μｇμｌ−１であった。 ＤＮＡ対ＰＥＩの質量比は１：４であった。１：１：１：２のプラスミド比が、トランスファー構築物がより大量に使用されたものである場合に使用された。トランスフェクションは前述のようにして行った１４。トランスフェクションの１６時間後に培地を新鮮な培地に交換し、ウイルスを７０時間で集めた。 Ｋａｉｋｋｏｎｅｎ　ｅｔ．ａｌ．４７に記載されているように、ウイルスを超遠心分離により１０００倍に濃縮した。」（５３６頁右欄１行〜５３７頁左欄２行）
（１−２）「この研究では、浮遊細胞でのＬＶ生産の拡張にＢＶを使用できることを初めて示した。これは、現在重要な問題となっている臨床試験用の大規模なＬＶ生産に向けた一歩である。ＰＥＩベースのプラスミドトランスフェクション法のみが、ＬＶ生産の拡大可能性においていくつかの有望性を証明した。」（５３６頁左欄第１段落２〜７行）
（１−３）「この研究における最終的な目標は、ローラーボトルと比較して、より撹拌されるウエーブバイオリアクターにスケールアップすることである。」（５３６頁左欄第２段落１８〜２１行）
（１−４）「ＬＶ力価は、製造条件が６−ウェルプレートでの実験に基づく場合の前濃度平均が５．０×１０５ＴＵ／ｍｌ、及び濃縮後平均が２．０×１０８ＴＵ／ｍｌであった。興味深いことに、６−ウェルプレートで観察されたことに反して、５ｍＭの酪酸ナトリウムを添加するとローラーボトル中でのＬＶ産生が増加し、それぞれ２．６×１０５ＴＵ／ｍｌ及び５．１×１０８ＴＵ／ｍｌの力価が得られた（図４）。」（５３２頁右欄第５段落６行〜５３３頁左欄第１段落３行）
（２）引用例２
　取消理由通知において引用した引用例２には以下の事項が記載されている。なお、英文であるから翻訳文を記載する。
　「１００Ｌ規模の大規模トランスフェクションが行われているが、ＰＥＩはリン酸カルシウム法の使用に関連する欠点を克服できるため、好ましい。それは、細胞の付着培養培地及び懸濁培養にも容易に使用でき、無血清培地にも適合し、かつ費用対効果が高い。」（第４７７頁右欄第１段落４〜９行）
（３）引用例３
　取消理由通知において引用した引用例３には以下の事項が記載されている。なお、英文であるから翻訳文を記載する。
（３−１）「このアプローチは、組換えタンパク質産生のために、本発明者らの実験室では、６０Ｌスケールで日常的に行われている。」（第７９８頁左欄６〜８行）
（３−２）「トランスフェクション複合体（ＤＮＡ−ＰＥＩ）は、培養培地（トランスフェクションされる培養物の総体積の１０％）で希釈したプラスミドＤＮＡにＰＥＩを添加することによって調製した。この混合物をボルテックスし、細胞培養物に添加する前に室温（ＲＴ）で１５分間インキュベートした。」（第７９１頁右欄６〜１１行）
（４）引用例４
　取消理由通知において引用した引用例４には以下の事項が記載されている。なお、英文であるから翻訳文を記載する。
（４−１）「実験は、総ＤＮＡ量１μｇ／１０６細胞のＰＥＩ−ＤＮＡ複合体（ポリプレックス）を用いて、常法に従って行われた」（第８７０頁左欄第４段落１２〜１４行）
（４−２）「酪酸ナトリウムの添加は、ＬＶの生産動力学の変化によりおよそ１５倍の生産量の改善を示した。」（第８７４頁右欄最下行〜第８７５頁左欄第２行）
（５）引用例５
　取消理由通知において引用した引用例５には以下の事項が記載されている。なお、英文であるから翻訳文を記載する。
（５−１）「高力価ＥＩＡＶレンチウイルスベクターの産生におけるＨＥＫ２９３Ｔクローン懸濁細胞株」（タイトル）
（５−２）「概要
　馬伝染性貧血ウイルス（ＥＩＡＶ）由来の多数の遺伝子治療用レンチウイルスベクター（ＬＶ）がＯｘｆｏｒｄ　ＢｉｏＭｅｄｉｃａによって開発されている。現在、ＥＩＡＶ　ＬＶ組成物は、ＬＶ産生のために必要な成分をコードする３つのプラスミドの、接着性ヒト胎児腎臓細胞（ＨＥＫ２９３Ｔ）細胞への一過的な共トランスフェクションによって製造される。しかしながら、この方法は煩雑であり、接着性成長モードによって制限されるので容易にスケールを大きくできるものではない。解決策の一つとして、ベクター産生のために必要な成分をコードする３つのプラスミドで一過的にトランスフェクトされ得るＨＥＫ２９３Ｔ細胞株懸濁液を開発することを挙げることができる。
　この方法によると、ＥＩＡＶ　ＬＶ産生が大規模（バイオリアクター）及び無血清（ＳＦ）環境で実施され得るため、現在の接着工程よりも有利となるであろう。形質転換された細胞型のすべてに見られるように、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞は、核型が顕著に変化する。現在のＨＥＫ２９３Ｔ細胞バンクからクローンを単離することにより、ＥＩＡＶ　ＬＶ産生にとって有利である核型クローンの同定を導く可能性がある。
　ここでは、高力価のＥＩＡＶ　ＬＶを産生することができる９０個のＨＥＫ２９３Ｔクローンの単離、及び、最善のクローンをＳＦ懸濁培養に適用することについて記載する。次いで、懸濁クローンは、ＥＩＡＶ　ＬＶを産生する能力についてスクリーニングされ、従来の接着性ＨＥＫ２９３Ｔの一過的共トランスフェクション工程を用いて産生されたＥＩＡＶ　ＬＶとの比較がされた。」（左上欄）
（５−３）「懸濁液に抵抗したＨＥＫ２９３ＴクローンのＬＶ産生
懸濁液モードにおいて増殖した細胞は、無血清培地中に大規模バイオリアクター内でＥＩＡＶ　ＬＶ産生を行うことが可能となる。
　・・・・
　適応が十分なされた時点で、懸濁液クローンと接着性の親ＨＥＫ２９３Ｔ細胞とにおける、ＰｒｏＳａｖｉｎ（登録商標）ＬＶ産生についての比較がなされた。
　ＬＶ力価は、ＦＡＣＳを用いて測定され、ＴＵ／細胞を算出した。
　・・・・
　懸濁液クローンのＴＵ／細胞値は、接着性の親ＨＥＫ２９３Ｔ細胞の二分の一であった。
　しかしながら、１０ｃｍのペトリ皿（６ｍｌ）と比較して、振とうフラスコ（２５ｍｌ）では、いずれも４倍以上のＬＶが産生された。
懸濁液トランスフェクション工程の最適化はＬＶ収率を改善するであろう。」（右中欄）
（５−４）「結論
　限界希釈によるクローニングは、より高い収量のＬＶを産生するために使用され得る代表的なＨＥＫ２９３Ｔ細胞株を作出した。さらに、これらの細胞系は、無血清懸濁液増殖においてＬＶの産生ができるように適応しているといえ、大規模製造にとって非常に望ましい特徴である。」（右下欄）
（６）引用例６
　取消理由通知において引用した引用例６には以下の事項が記載されている。なお、英文であるから翻訳文を記載する。
　
　「懸濁培養は、培地体積を増加させ、ウイルス産生の容易性をもたらし、ウイルス力価の実質的な増加をもたらすことがさらに実証されている。懸濁培養は、標準的な培養皿、ボトル、フラスコ、スピナーフラスコ、ウエーブバッグまたは当業者に公知の懸濁培養液中で維持することができる。いくつかの非限定的な例は、プレート、皿、ウエーブバッグ培養物、スピナーフラスコまたは懸濁培養を可能にする他の容器であり得る。いくつかの実施形態は、５００ｍＬを超える容量を有する懸濁培養を含む。
　本発明の一態様は、ウイルスの大規模生産に関する。大規模生産はまた、標準的なプロトコルと比較して大量の所望の生成物の生成を可能にする培養物を指すことができる。大規模な細胞培養物は、約５００ｍＬ〜約２０，０００Ｌの範囲であり得る。」（第５頁第１２行〜第２２行）
（７）引用例７
　取消理由通知において引用した引用例７には以下の事項が記載されている。なお、英文であるから翻訳文を記載する。
　「要約：本研究の主たる目的は、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）分子量及び構造（７５０ｋＤａ、２５ｋＤａ、２ｋＤａ　分岐、及び２５ｋＤａ直鎖ＰＥＩ）および窒素／リン酸（Ｎ／Ｐ）モル比の、ＰＥＩ／ＤＮＡ複合体の物理的及びトランスフェクション効率に対する影響を判定することである。・・・・２５ｋＤａ分岐及び直鎖ＰＥＩ複合体は、ＣＯＳ−７及びＣＨＯ−Ｋ１細胞それぞれでＮ／Ｐ比６：１で最も高いトランスフェクション効率を示した。」（要約１〜１２行）
　
２．引用発明
（引用例１に記載された発明）
　上記（１）（１−１）の記載によれば、引用例１には以下の発明が記載されていると認められる。
「ローラーボトルを用いた浮遊細胞におけるＢＶ媒介ＬＶ生産方法であって、
２９３Ｔ懸濁細胞をＥＸ−ＣＥＬＬ　２９３培地を用いて培養し、
形質導入日に、細胞をフリースタイル２９３発現培地（１％ウシ胎児血清）に播種し、
ＢＡＣトランスファー、ＢＡＣ−ｇａｇ−ｐｏｌ、ＢＡＣ−ＲｅｖおよびＢＡＣ−ＶＳＶ−Ｇを用いて製造された４つのＢＶ（バキュロウイルス）で形質転換し、
ローラーボトル中で、酪酸ナトリウムを０または５ｍＭの濃度で含む、懸濁細胞用細胞培養培地であるＥＸ−ＣＥＬＬ　２９３培地で培養し、ウイルスを超遠心分離により１０００倍に濃縮する、ＬＶ（レンチウイルス）を製造する方法。」
（引用例５に記載された公知発明）
　上記（５）の記載によれば、引用例５には以下の公知発明が記載されていると認められる。
　「ＨＥＫ２９３Ｔ細胞株に、必要な成分をコードする３つのプラスミドを一過的にトランスフェクトし、無血清培地で懸濁培養を行う、レンチウイルスベクターの産生方法。」
　
３．本件発明１と引用例１に記載された発明との対比
　本件発明１と引用例１に記載された発明を対比する。
　引用例１に記載された発明の「ＥＸ−ＣＥＬＬ　２９３培地」は本件発明１の「無血清培地」に相当し、引用例１に記載された発明の「ウイルスを超遠心分離により１０００倍に濃縮する」は、本件特許発明１の「組換えレンチウイルスベクターを培地から回収すること」に相当すると認められる。
　また、引用例１に記載された発明の「４つのＢＶ（バキュロウイルス）」は、本件特許発明１の「少なくとも１つのプラスミド」と「少なくとも１つのベクター」である点で共通すると認められる。
　そして、引用例１に記載された発明の「４つのＢＶ（バキュロウイルス）」はレンチウイルスベクターの製造に適合していると認められ、また、引用例１に記載された発明において形質転換された「２３９Ｔ懸濁細胞」は浮遊状態で培養されていると認められる。
　したがって、両者は、
「−少なくとも１つのベクターでトランスフェクトされた、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞である哺乳類細胞を培養すること、ここでベクターはレンチウイルスベクターの製造に適合したものであり、培養は無血清培地で浮遊状態で実施されること；
−製造された組換えレンチウイルスベクターを培地から回収すること、
を含む、組換えレンチウイルスベクターの製造方法。」である点で一致し、以下の点で相違すると認められる。
（相違点１）
　トランスフェクトに用いるベクターが、本件発明１では「プラスミド」であるのに対して、引用例１に記載された発明においては「バキュロウイルスベクター」である点。
（相違点２）
　培養について、本件発明１においては「少なくとも５０Ｌの容量で実施される」のに対して、引用例１に記載された発明においては実施される容量について特定されていない点。
（相違点３）
　「ＨＥＫ２９３Ｔ細胞である哺乳類細胞」のトランスフェクトの条件について、本件発明１では「無血清培地でトランスフェクト」するのに対して、引用例１に記載された発明では「形質導入日に、細胞をフリースタイル２９３発現培地（１％ウシ胎児血清）に播種」、すなわち、血清含有培地でトランスフェクトするものであり、また、トランスフェクトされた細胞の培養条件について、本件発明１では「培地を変えずに、培地に酪酸ナトリウムを添加」すること、及び製造方法について「濃縮がない状態で、少なくとも１０７の感染ゲノム／ｍＬが製造される」ことが特定されているのに対して、引用例１に記載された発明ではこれらについて特定されていない点。
４．判断
（相違点１）について
　引用例１に記載された発明と同じく、ＨＥＫ２９３Ｔの懸濁培養によりレンチウイルスベクターを製造することに関する引用例５には、レンチウイルスベクターを産生するために、必要な成分をコードするプラスミドを用いることが記載されているから、引用例１に記載された発明において、バキュロウイルスベクターに変えてプラスミドベクターを用いることは当業者が容易になし得ることである。
（相違点２）について
　引用例１には、ポリエチレンイミンによりプラスミドを導入した細胞を浮遊培養する方法は、規模を拡大したレンチウイルスベクターの製造に用いることができることが示唆されている（１−２）。そして、浮遊細胞を用いてレンチウイルスベクターを製造する際に、その容量を１００Ｌ、６０Ｌ、２０，０００Ｌとすることが、引用例２、引用例３（３−１）、引用例６にそれぞれ記載されているのであるから、引用例１に記載された発明において、規模を拡大すること、すなわち、「培養は少なくとも５０Ｌの容量で実施される」と特定することは当業者が容易になし得ることである。 
（相違点３）について
　引用例１に記載された発明は血清含有培地でトランスフェクトするものであり、引用例１に血清含有培地に替えて無血清培地でトランスフェクトすることが示唆されているとはいえない。また、本件発明１は「培地を変えずに」培養することが特定されているから、トランスフェクトに用いた無血清培地をそのまま用いて培養するものと認められるが、引用例１に記載された発明では血清含有培地でトランスフェクトするから、仮に、培地を変えずに培地に酪酸ナトリウムを添加した場合、トランスフェクトした細胞を血清含有培地で培養することになり、無血清培地で培養する引用例１に記載された発明とは矛盾することになる。
　そして、引用例１〜４、６、７の記載から「濃縮がない状態で、少なくとも１０７の感染ゲノム／ｍＬが製造される」ことを予測できるともいえない。
　したがって、相違点３を当業者が容易になし得るとはいえない。
　よって、本件発明１は引用例１〜４、６、７に記載された発明に基づいて当業者が容易に発明をすることができたものとはいえない。
　さらに、特許異議申立人Ａ及びＢが示した他の証拠を併せて検討しても、引用例１に記載の発明に相違点３に係る事項を適用することができず、本件発明１を当業者が容易に発明をすることができたとはいえない。
　
５．本件発明２〜２０について  
（本件発明２〜１８）
　本件発明２〜１８は請求項１を引用して特定するものであるから、本件発明１と同様に、引用例１〜４、６、７に記載された発明に基づいて当業者が容易に発明をすることができたものとはいえない。
（本件発明１９、２０）
　本件発明１９には、「無血清培地でトランスフェクト」されたＨＥＫ２９３Ｔ細胞を、「培養の培地を変えずに、トランスフェクション後２４時間で培地に酪酸ナトリウムを添加することを含む」ことが特定されており、これらの点は、上記４．の「（相違点３）について」において検討したとおり、引用例１に無血清培地でトランスフェクトし、トランスフェクションの後、無血清培地である培地を変えずに、培地に酪酸ナトリウムを添加することが容易想到であるとはいえない。
　また、本件発明２０に特定される「濃縮がない状態で、少なくとも１０７の感染ゲノム／ｍＬが製造される」ことを引用例１〜４、６、７の記載から当業者が予測できるとはいえない。
　したがって、本件発明１９、２０は引用例１〜４、６、７に記載された発明に基づいて当業者が容易に発明をすることができたものとはいえない。
　さらに、特許異議申立人Ａ及びＢが示した他の証拠を併せて検討しても、引用例１に記載の発明において、無血清培地でトランスフェクトし、トランスフェクションの後、無血清培地である培地を変えずに、培地に酪酸ナトリウムを添加することができるとはいえないから、本件発明１９、２０を当業者が容易に発明をすることができたとはいえない。
　
６．本件特許発明１と引用例５に記載された公知発明との対比
　本件特許発明１と引用例５に記載された公知発明を対比する。
　引用例５には、産生されたレンチウイルスベクターを培地から回収することについては明記されていないが、引用例５にはＬＶ力価を測定したことが記載されているから、引用例５に記載された公知発明は、本件発明１と同様に「製造された組換えレンチウイルスベクターを培地から回収する」工程を有していると認められる。
　また、引用例５に記載された公知発明の「必要な成分をコードする３つのプラスミド」はレンチウイルスベクターの産生に使用されるものであるから、レンチウイルスベクターの製造に適合していると認められ、引用例５に記載された公知発明の「無血清培地で懸濁培養を行う」は、本件発明１の「培養は無血清培地で浮遊状態で・・・実施される」に相当すると認められる。
　
　したがって、両者は、
「−少なくとも１つのプラスミドでトランスフェクトされた、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞である哺乳類細胞を培養すること、ここでプラスミドはレンチウイルスベクターの製造に適合したものであり、培養は無血清培地で浮遊状態で実施される；
−製造された組換えレンチウイルスベクターを培地から回収すること、
を含む、組換えレンチウイルスベクターの製造方法。」である点で一致し、以下の点で相違すると認められる。
（相違点４）
　培養について、本件発明１においては「少なくとも５０Ｌの容量で実施される」のに対して、引用例５に記載された公知発明においては実施される容量について特定されていない点。
（相違点５）
　「ＨＥＫ２９３Ｔ細胞である哺乳類細胞」のトランスフェクトの条件について、本件発明１では「無血清培地でトランスフェクト」するのに対して、引用例５に記載された公知発明では特定されておらず、また、トランスフェクトされた細胞の培養条件について、本件発明１では「無血清培地で・・・実施されること」、「培地を変えずに、培地に酪酸ナトリウムを添加」すること、及び製造方法について「濃縮がない状態で、少なくとも１０７の感染ゲノム／ｍLが製造される」ことが特定されているのに対して、引用例５に記載された公知発明ではこれらについても特定されていない点。
　　
７．判断
（相違点４）について
　引用例５の概要の項には、無血清培地で懸濁培養が可能なＨＥＫ２９３Ｔ細胞株を用いる方法によって、ＥＩＡＶ　ＬＶ産生が大規模で実施され得ることが記載されているから、引用例５に記載された公知発明を大規模化すること、その際に「培養は少なくとも５０Ｌの容量で実施される」と特定することは当業者が容易になし得たことである。 
  
（相違点５）について
　本件発明１の「培地を変えずに」にいう『培地』とは、トランスフェクトに使用した『無血清培地』を指していると認められるから、本件発明１は、無血清培地でトランスフェクトし、その後トランスフェクトに用いた培地を変えずにその後の培養を行うこと（ア）、及び培地に酪酸ナトリウムを添加すること（イ）を特定していると認められる。
　しかしながら、引用例５には、無血清培地でトランスフェクトし、その後トランスフェクトに用いた培地を変えずにその後の培養を行うこと（ア）、及び培地に酪酸ナトリウムを添加すること（イ）は記載も示唆もされていない。培地に酪酸ナトリウムを添加すること（イ）だけなら引用例４に記載されていると認められるが、引用例２〜４、６、７の記載をみても、無血清培地でトランスフェクトし、その後トランスフェクトに用いた培地を変えずにその後の培養を行うこと（ア）、及び培地に酪酸ナトリウムを添加すること（イ）を当業者が容易に想到するといえる根拠があるとは認められない。
また、引用例２〜７の記載から「濃縮がない状態で、少なくとも１０７の感染ゲノム／ｍＬが製造される」ことを予測できるともいえない。
　したがって、相違点５を当業者が容易になし得るとはいえない。
　よって、本件発明１は引用例５に記載された公知発明及び引用例２〜４、６、７に記載された発明に基づいて当業者が容易に発明をすることができたものとはいえない。
　さらに、特許異議申立人Ａ及びＢが示した他の証拠を併せて検討しても、本件発明１を当業者が容易に発明をすることができたとはいえない。
８．本件発明２〜２０について  
（本件発明２〜１８）
　本件発明２〜１８は請求項１を引用して特定するものであるから、本件発明１と同様に、引用例５に記載された公知発明及び引用例２〜４、６、７に記載された発明に基づいて当業者が容易に発明をすることができたものとはいえない。
（本件発明１９、２０）
　本件発明１９には、「無血清培地でトランスフェクト」されたＨＥＫ２９３Ｔ細胞を、「培養の培地を変えずに、トランスフェクション後２４時間で培地に酪酸ナトリウムを添加することを含む」ことが特定されており、この点は、上記７．の「（相違点５）について」において検討したとおり、無血清培地でトランスフェクトし、トランスフェクションの後、無血清培地である培地を変えずに、培地に酪酸ナトリウムを添加することが容易想到であるとはいえない。
　また、本件発明２０に特定される「濃縮がない状態で、少なくとも１０７の感染ゲノム／ｍLが製造される」ことを引用例２〜４、６、７の記載から当業者が予測できるとはいえない。
　したがって、本件発明１９、２０は引用例５に記載された公知発明及び引用例２〜４、６、７に記載された発明に基づいて当業者が容易に発明をすることができたものとはいえない。
。
　さらに、特許異議申立人Ａ及びＢが示した他の証拠を併せて検討しても、引用例５に記載された公知発明において、無血清培地でトランスフェクトし、トランスフェクションの後、無血清培地である培地を変えずに、培地に酪酸ナトリウムを添加することができるとはいえないから、本件発明１９、２０を当業者が容易に発明をすることができたとはいえない。
　
第５　取消理由通知（決定の予告）に記載しなかった特許異議申立理由について
１．「培養は少なくとも５０Ｌの容量」である点
　特許異議申立人Ａ、Ｂは、本件発明１に「培養は少なくとも５０Ｌの容量で実施される」と特定されており、容量の上限が特定されていないが、本件特許明細書には５０Ｌを超える容量での実施例は記載されていないから、実施可能要件（特許法第３６条第４項第１号）及びサポート要件（同法第３６条第６項第１号）に違反すると主張している。
２．「濃縮がない状態で、少なくとも１０７の感染ゲノム／ｍＬが製造される」点
　特許異議申立人Ａは、本件発明１に「濃縮がない状態で、少なくとも１０７の感染ゲノム／ｍＬが製造される」と特定されており、本件発明１の効果の上限が特定されていないから、実施可能要件（特許法第３６条第４項第１号）に違反すると主張している。
３．明確性要件違反
　特許異議申立人Ａは、本件発明は明確性要件（特許法第３６条第６項第２号）に違反する旨を主張している。
　上記の主張について検討する。
１．の主張について
　通常、細胞を大規模に培養しようとする場合、例えば、まずフラスコ等を用いた小さいスケールでの培養で培養条件を検討し、次いでフラスコ等よりも大きなタンク等を用いて培養で培養条件を検討し、さらにより大きな規模で商業規模での培養条件を検討・決定するというように、段階的にスケールアップする手法が採用され、それぞれの段階ではその前の段階の培養条件に基づいてさらに培養条件を検討されることが技術常識であると認められるところ、本件発明１に特定される「少なくとも５０Ｌの容量」は、上記の例でいえば２番目の段階に該当すると認められ、そのような段階で用いられるタンク等の容量は当業者であれば明らかであるといえる。
　本件発明１では容量の上限が特定されてはいないが、本件特許明細書には、トランスフェクトした細胞を５０Ｌの容量で培養することに関して実施例及び図１３に示されており、上記の２番目の段階で使用される容量、例えば５０Ｌの数倍程度の容量のタンクを用いて培養した場合にも、５０Ｌの場合と同様の結果が得られることは当業者が予期し得るといえ、本件発明１にいう「少なくとも５０Ｌの容量」とはそのような容量を意味していると認められる。実際、特許権者が示した乙第７号証には、２００Ｌで培養した場合に、５０Ｌで培養した場合と同様の結果が得られたことが示されている。
　したがって、本件特許明細書の記載が実施可能要件を満足しないとはいえず、また、本件特許発明がサポート要件を満足しないともいえない。
　よって、特許異議申立人Ａ、Ｂの上記主張は採用できない。
２．の主張について
　「濃縮がない状態で、少なくとも１０７の感染ゲノム／ｍＬが製造される」と、数値限定の上限値が特定されていなくても、当業者であれば「少なくとも１０７の感染ゲノム／ｍＬ」がどの程度であるかは理解できるといえ、本件特許明細書には１０７の感染ゲノム／ｍＬの要件を満足する製造方法が具体的に記載されているから、当業者であればそのような具体的な記載事項に技術常識を加味することで、「濃縮がない状態で、少なくとも１０７の感染ゲノム／ｍＬが製造される」ことが特定される本件発明１を実施できるといえるから、本件特許明細書が実施可能要件を満足しないとはいえない。
　したがって、特許異議申立人Ａの上記主張は採用できない。
　
３．の主張について
　本件訂正請求による訂正により、本件発明は明確性要件を満足するものとなったと認められる。
　
　
第６　むすび
　以上のとおりであるから、取消理由通知に記載した取消理由及び特許異議申立書に記載した特許異議申立理由によっては、本件請求項１〜２０に係る特許を取り消すことはできない。
　また、他に本件請求項１〜２０に係る特許を取り消すべき理由を発見しない。
　よって、結論のとおり決定する。
【異議決定日】
令和１年１１月５日（２０１９．１１．５）
【訂正の要旨】
審決（決定）の【理由】欄参照。
（５７）【特許請求の範囲】
　【請求項１】
　
−少
無血清培地で
、ここで、プラスミドはレンチウイルスベクターの製造に適合したものであり、
無血清培地で浮遊状態で、
−培地を変えずに、培地に酪酸ナトリウムを添加すること；
−製造された組換えレンチウイルスベクターを培地から回収すること、
を含む、組換えレンチウイルスベクターの製造方法
であって、
濃縮がない状態で、少なくとも１０７の感染性ゲノム／ｍＬが製造される、ものである、
製造方法
　【請求項２】
　回収段階が、１回のレンチウイルス回収からなる、請求項１に記載の方法。
　【請求項３】
　トランスフェクションが一過的なトランスフェクションであり、１回の回収段階がトランスフェクション後４８から７２時間の間で実行される、請求項２に記載の方法。
　【請求項４】
　細胞がポリエチレンイミン（ＰＥＩ）およびプラスミドでトランスフェクトされる、トランスフェクション段階を含む、請求項１または２に記載の方法。
　【請求項５】
　ＰＥＩが、２０〜２５ｋＤの直鎖ＰＥＩである、請求項４に記載の方法。
　【請求項６】
　トランスフェクションが、少なくとも１．５μｇ／１０６細胞の総ＤＮＡ量で実施される、請求項４または５に記載の方法。
　【請求項７】
　１０未満のＮ／Ｐ比に従って、ＰＥＩおよびプラスミドがトランスフェクションの前に混合される請求項４〜６のいずれか１項に記載の方法であって、Ｎ／Ｐがプラスミド中のリン酸基の数あたりのＰＥＩの窒素原子の数を示す、方法。
　【請求項８】
　Ｎ／Ｐ比が６である、請求項７に記載の方法。
　【請求項９】
　細胞培養への添加の前のＰＥＩおよびプラスミドの間の接触時間が、５〜３０分間の間である、請求項４〜８のいずれか１項に記載の方法。
　【請求項１０】
　細胞培養への添加の前のＰＥＩおよびプラスミドの間の接触時間が１０分である、請求項９に記載の方法。
　【請求項１１】
　培地を変えずに、トランスフェクション後２４時間で培地に酪酸ナトリウムを添加する、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
　【請求項１２】
　酪酸ナトリウムが２ｍＭから１２ｍＭの間の最終濃度で培地に添加される、請求項１１に記載の方法。
　【請求項１３】
　酪酸ナトリウムが２ｍＭから１０ｍＭの間の最終濃度で培地に添加される、請求項１２に記載の方法。
　【請求項１４】
　酪酸ナトリウムが最終濃度５ｍＭで培地に添加される、請求項１２または１３に記載の方法。
　【請求項１５】
　エンベロープタンパク質をコードするプラスミド（Ｅｎｖプラスミド）、レンチウイルスＧａｇおよびＰｏｌタンパク質をコードするプラスミド（Ｇａｇ−Ｐｏｌプラスミド）、レンチウイルスＲｅｖタンパク質をコードするプラスミド（Ｒｅｖプラスミド）およびレンチウイルス３’−ＬＴＲおよびレンチウイルス５’−ＬＴＲの間の対象の導入遺伝子（ＴＯＩ）発現カセットを含むプラスミド、を含む４つのプラスミドで細胞がトランスフェクトされる、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の方法。
　【請求項１６】
　
ＰＰ／ＩＰ比が１００〜２５０であ
　【請求項１７】
　−細胞が２９３Ｔ細胞であり；
−細胞のトランスフェクションがポリエチレンイミン（ＰＥＩ）およびＤＮＡの混合物で実施され；
−酪酸ナトリウムが、トランスフェクション後２４時間で、培地を変えずに添加され；および
−生産されたレンチウイルスベクターの１回の回収が行われる、
請求項１〜１６のいずれか１項に記載の方法。
　【請求項１８】
　レンチウイルスベクターの製造に適応された少なくとも１つのプラスミドで
無血清培地で
請求項１〜１７のいずれか１項に記載の方法に用いられる
　【請求項１９】
　培養の培地を変えずに、トランスフェクション後２４時間で培地に酪酸ナトリウムを添加することを含む、製造に必要なプラスミドで
無血清培地で
であって、
濃縮がない状態で、少なくとも１０７の感染性ゲノム／ｍＬが製造される、ものである、
方法
　【請求項２０】
　酪酸ナトリウムが最終濃度５ｍＭで添加される、請求項１９に記載の方法。