(57)【要約】  治療有効量のヒドロキシクロロキンを対象に投与することを含む、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）関連疾患を処置する方法。対象においてＨＣＶ誘導自食作用の阻害に十分な、治療有効量のヒドロキシクロロキンが開示される。抗ウイルス剤は、ヒドロキシクロロキンと共投与されることができる。ヒドロキシクロロキンと抗ウイルス剤の相乗的組み合わせを利用する方法が開示される。ヒドロキシクロロキンと抗ウイルス剤を含む組成物、並びにＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）関連疾患を処置のためのヒドロキシクロロキンおよびその使用がさらに開示される。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗ウイルス剤に対して抵抗性のＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）遺伝子型によって誘発されるＨＣＶ関連疾患を処置の必要性のある対象において処置する方法であって、治療有効量のヒドロキシクロロキンまたはその医薬的に許容され得る塩と、治療有効量の抗ウイルス剤とを対象に共投与し、それにより、ＨＣＶ関連疾患を処置することを含む方法。
【請求項２】
前記ヒドロキシクロロキンの治療有効量は、ＨＣＶ誘導自食作用を対象において阻害するのに十分である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ヒドロキシクロロキンの治療有効量は４００〜２０００ｍｇ／日の範囲にある、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記ヒドロキシクロロキンの治療有効量は５００〜１０００ｍｇ／日の範囲にある、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記ＨＣＶ誘導自食作用は、ＵＬＫ１、ＡＭＢＲＡ１、ＡＴＧ２Ａ、ＧＡＢＡＲＡＰＬ１、ＦＯＸ０３、ＳＱＳＴＭ１、ＰＩＫ３Ｃ３およびＭＡＰ１ＬＣ３Ｂからなる群から選択されるタンパク質のレベルの増大を特徴とする、請求項２に記載の方法。
【請求項６】
前記抗ウイルス剤はＨＣＶ誘導自食作用を阻害しない、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記抗ウイルス剤は、リバビリン、ビラミジン、ボセプレビル、テラプレビル、ＮＭ−１０７、バロピシタビンおよびアリスポリビルならびにそれらの任意の組合せからなる群から選択される、請求項１〜６のいずれかに記載の方法。
【請求項８】
前記方法はさらに、追加の抗ウイルス剤を前記対象に共投与することを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記追加の抗ウイルス剤は、インターフェロン、ウイルスプロテアーゼ阻害剤、ＮＳ４Ａ阻害剤、ＮＳ５Ａ阻害剤、ウイルスポリメラーゼ阻害剤、シクロフィリン阻害剤、ヘリカーゼ阻害剤、グリコシル化阻害剤および抗リン脂質抗体ならびにそれらの任意の組合せからなる群から選択される、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記追加の抗ウイルス剤はインターフェロン−αである、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記ＨＣＶ遺伝子型は、遺伝子型１のＨＣＶおよび遺伝子型４のＨＣＶからなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
抗ウイルス剤に対して抵抗性のＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）遺伝子型により誘発されるＨＣＶ関連疾患の処置において前記抗ウイルス剤と併用されるヒドロキシクロロキン。
【請求項１３】
抗ウイルス剤に対して抵抗性のＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）遺伝子型により誘発されるＨＣＶ関連疾患の処置において前記抗ウイルス剤と併用される医薬の製造におけるヒドロキシクロロキンの使用。
【請求項１４】
前記処置は、ヒドロキシクロロキンを、ＨＣＶ誘導自食作用の阻害に十分な量で投与することを含む、請求項１２または１３に記載のヒドロキシクロロキンまたは使用。
【請求項１５】
前記処置は、４００〜２０００ｍｇ／日のヒドロキシクロロキンを投与することを含む、請求項１２または１３に記載のヒドロキシクロロキンまたは使用。
【請求項１６】
前記処置は、５００〜１０００ｍｇ／日のヒドロキシクロロキンを投与することを含む、請求項１５に記載のヒドロキシクロロキンまたは使用。
【請求項１７】
前記抗ウイルス剤はＨＣＶ誘導自食作用を阻害しない、請求項１２または１３に記載のヒドロキシクロロキンまたは使用。
【請求項１８】
前記抗ウイルス剤はリバビリンである、請求項１７に記載のヒドロキシクロロキンまたは使用。
【請求項１９】
前記ＨＣＶ遺伝子型は、遺伝子型１のＨＣＶおよび遺伝子型４のＨＣＶからなる群から選択される、請求項１２または１３に記載のヒドロキシクロロキンまたは使用。
【請求項２０】
処置の必要性のある対象においてＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）関連疾患を処置する方法であって、治療有効量のヒドロキシクロロキンまたはその医薬的に許容され得る塩を対象に投与し、それにより、ＨＣＶ関連疾患を処置することを含み、前記治療有効量は、ＨＣＶ誘導自食作用を対象において阻害するのに十分な量である、方法。
【請求項２１】
前記治療有効量は４００〜２０００ｍｇ／日の範囲にある、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記ＨＣＶ誘導自食作用は、ＵＬＫ１、ＡＭＢＲＡ１、ＡＴＧ２Ａ、ＧＡＢＡＲＡＰＬ１、ＦＯＸ０３、ＳＱＳＴＭ１、ＰＩＫ３Ｃ３およびＭＡＰ１ＬＣ３Ｂからなる群から選択されるタンパク質のレベルの増大を特徴とする、請求項２０に記載の方法。
【請求項２３】
前記疾患は、抗ウイルス剤に対して抵抗性であるＨＣＶ遺伝子型によって誘発される、請求項２０に記載の方法。
【請求項２４】
前記ＨＣＶ遺伝子型は、遺伝子型１のＨＣＶおよび遺伝子型４のＨＣＶからなる群から選択される、請求項２０に記載の方法。
【請求項２５】
前記方法はさらに、治療有効量の抗ウイルス剤を対象に共投与することを含む、請求項２０に記載の方法。
【請求項２６】
前記抗ウイルス剤は、リバビリン、ビラミジン、インターフェロン、ウイルスプロテアーゼ阻害剤、ＮＳ４Ａ阻害剤、ＮＳ５Ａ阻害剤、ウイルスポリメラーゼ阻害剤、シクロフィリン阻害剤、ヘリカーゼ阻害剤、グリコシル化阻害剤および抗リン脂質抗体ならびにそれらの任意の組合せからなる群から選択される、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記抗ウイルス剤は、インターフェロン−α、リバビリン、ビラミジン、ボセプレビル、テラプレビル、ＮＭ−１０７、バロピシタビンおよびアリスポリビルならびにそれらの任意の組合せからなる群から選択される、請求項２５に記載の方法。
【請求項２８】
前記抗ウイルス剤はＨＣＶ誘導自食作用を阻害しない、請求項２５に記載の方法。
【請求項２９】
前記抗ウイルス剤は、リバビリン、ビラミジン、ボセプレビル、テラプレビル、ＮＭ−１０７、バロピシタビンおよびアリスポリビルならびにそれらの任意の組合せからなる群から選択される、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記方法はさらに、治療有効量のインターフェロン−αを対象に共投与することを含む請求項２８または２９に記載の方法。
【請求項３１】
ＨＣＶ誘導自食作用の阻害に十分な量でのＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）関連疾患の処置における使用のために特定されるヒドロキシクロロキン。
【請求項３２】
ＨＣＶ誘導自食作用の阻害に十分な量でヒドロキシクロロキンをその必要のある対象に投与することを含むＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）関連疾患の処置において使用される医薬の製造におけるヒドロキシクロロキンの使用。
【請求項３３】
前記ＨＣＶ誘導自食作用の阻害に十分な量は４００〜２０００ｍｇ／日の範囲にある、請求項３１または３２に記載のヒドロキシクロロキンまたは使用。
【請求項３４】
前記ＨＣＶ誘導自食作用は、ＵＬＫ１、ＡＭＢＲＡ１、ＡＴＧ２Ａ、ＧＡＢＡＲＡＰＬ１、ＦＯＸ０３、ＳＱＳＴＭ１、ＰＩＫ３Ｃ３およびＭＡＰ１ＬＣ３Ｂからなる群から選択されるタンパク質のレベルの増大を特徴とする、請求項３１または３２に記載のヒドロキシクロロキンまたは使用。
【請求項３５】
前記ＨＣＶ遺伝子型は、遺伝子型１のＨＣＶおよび遺伝子型４のＨＣＶからなる群から選択される、請求項３１または３２に記載のヒドロキシクロロキンまたは使用。
【請求項３６】
前記処置はさらに、治療有効量の抗ウイルス剤を共投与することを含む、請求項３１または３２に記載のヒドロキシクロロキンまたは使用。
【請求項３７】
処置の必要性のある対象においてＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）関連疾患を処置する方法であって、治療有効量のヒドロキシクロロキンまたはその医薬的に許容され得る塩と、治療有効量の抗ウイルス剤とを対象に共投与し、それにより、ＨＣＶ関連疾患を処置することを含み、前記抗ウイルス剤はＨＣＶ誘導自食作用を阻害しない、方法。
【請求項３８】
前記ヒドロキシクロロキンの治療有効量は、ＨＣＶ誘導自食作用を対象において阻害するのに十分である、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記ヒドロキシクロロキンの治療有効量は４００〜２０００ｍｇ／日の範囲にある、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記ヒドロキシクロロキンの治療有効量は５００〜１０００ｍｇ／日の範囲にある、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
前記抗ウイルス剤は、リバビリン、ビラミジン、ボセプレビル、テラプレビル、ＮＭ−１０７、バロピシタビンおよびアリスポリビルからなる群から選択される、請求項３７に記載の方法。
【請求項４２】
前記方法はさらに、治療有効量の追加の抗ウイルス剤を対象に共投与することを含む、請求項３７に記載の方法。
【請求項４３】
前記追加の抗ウイルス剤は、インターフェロン、ウイルスプロテアーゼ阻害剤、ＮＳ４Ａ阻害剤、ＮＳ５Ａ阻害剤、ウイルスポリメラーゼ阻害剤、シクロフィリン阻害剤、ヘリカーゼ阻害剤、グリコシル化阻害剤および抗リン脂質抗体からなる群から選択される、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
前記追加の抗ウイルス剤はインターフェロンである、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
前記インターフェロンはインターフェロン−αである、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
前記抗ウイルス剤はリバビリンである、請求項３７に記載の方法。
【請求項４７】
前記リバビリンの治療有効量は５０〜１２００ｍｇ／日の範囲にある、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
ＨＣＶ誘導自食作用を阻害しない抗ウイルス剤と組み合わせてＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）関連疾患の処置に使用されるヒドロキシクロロキン。
【請求項４９】
ＨＣＶ誘導自食作用を阻害しない抗ウイルス剤と組み合わせてＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）関連疾患の処置に使用される医薬の製造におけるヒドロキシクロロキンの使用。
【請求項５０】
前記疾患は、前記抗ウイルス剤抵抗性のＨＣＶ遺伝子型により誘発される、請求項３７〜４９のいずれかに記載の方法、ヒドロキシクロロキンまたは使用。
【請求項５１】
前記ＨＣＶは、遺伝子型１のＨＣＶおよび遺伝子型４のＨＣＶからなる群から選択される、請求項３７〜４９のいずれかに記載の方法、ヒドロキシクロロキンまたは使用。
【請求項５２】
Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）関連疾患を処置の必要性のある対象において処置する方法であって、治療有効量のヒドロキシクロロキンまたはその医薬的に許容され得る塩を治療有効量の抗ウイルス剤との併用で対象に共投与し、それにより、ＨＣＶ関連疾患を処置することを含み、前記ヒドロキシクロロキンの治療有効量および前記抗ウイルス剤の治療有効量は、ヒドロキシクロロキンおよび前記抗ウイルス剤が相乗的に作用するように選択される、方法。
【請求項５３】
前記ヒドロキシクロロキンの治療有効量は、ＨＣＶ誘導自食作用を阻害するのに十分である、請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
前記ヒドロキシクロロキンの治療有効量は４００〜２０００ｍｇ／日の範囲にある、請求項５２に記載の方法。
【請求項５５】
前記ヒドロキシクロロキンの治療有効量は５００〜１０００ｍｇ／日の範囲にある、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
前記抗ウイルス剤はウイルスプロテアーゼ阻害剤である、請求項５２に記載の方法。
【請求項５７】
前記ウイルスプロテアーゼ阻害剤はボセプレビルである、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
前記抗ウイルス剤はウイルスポリメラーゼ阻害剤である、請求項５２に記載の方法。
【請求項５９】
前記ウイルスポリメラーゼ阻害剤は、ＮＭ−１０７およびバロピシタビンからなる群から選択される、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
前記抗ウイルス剤はインターフェロンである、請求項５２に記載の方法。
【請求項６１】
前記インターフェロンはインターフェロン−αである、請求項６０に記載の方法。
【請求項６２】
前記インターフェロン−αはＰＥＧ化インターフェロン−αである、請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
前記インターフェロンの治療有効量は５０〜２５０μｇ／週の範囲にある、請求項６０に記載の方法。
【請求項６４】
Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）関連疾患を処置の必要性のある対象において処置する方法であって、４００〜２０００ｍｇ／日のヒドロキシクロロキンまたはその医薬的に許容され得る塩を５０〜２５０μｇ／週のインターフェロンと組み合わせて対象に共投与し、それにより、ＨＣＶ関連疾患を処置することを含み、前記ヒドロキシクロロキンおよび前記インターフェロンは相乗的に作用する、方法。
【請求項６５】
前記インターフェロンはインターフェロン−αである、請求項６４に記載の方法。
【請求項６６】
前記インターフェロン−αはＰＥＧ化インターフェロン−αである、請求項６５に記載の方法。
【請求項６７】
Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）関連疾患を処置の必要のある対象において処置する方法であって、４００〜２０００ｍｇ／日のヒドロキシクロロキンまたはその医薬的に許容され得る塩を治療有効量のウイルスプロテアーゼ阻害剤と組み合わせて対象に共投与し、それにより、ＨＣＶ関連疾患を処置することを含み、前記ヒドロキシクロロキンおよび前記ウイルスプロテアーゼ阻害剤は相乗的に作用する、方法。
【請求項６８】
前記ウイルスプロテアーゼ阻害剤はボセプレビルである、請求項６７に記載の方法。
【請求項６９】
Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）関連疾患を処置の必要性のある対象において処置する方法であって、４００〜２０００ｍｇ／日のヒドロキシクロロキンまたはその医薬的に許容され得る塩を治療有効量のウイルスポリメラーゼ阻害剤と組み合わせて対象に共投与し、それにより、ＨＣＶ関連疾患を処置することを含み、前記ヒドロキシクロロキンおよび前記ウイルスポリメラーゼ阻害剤は相乗的に作用する、方法。
【請求項７０】
前記ウイルスポリメラーゼ阻害剤は、ＮＭ−１０７およびバロピシタビンからなる群から選択される、請求項６９に記載の方法。
【請求項７１】
前記方法はさらに、治療有効量の追加の抗ウイルス剤を対象に共投与することを含む、請求項５２〜７０のいずれかに記載の方法。
【請求項７２】
ヒドロキシクロロキンおよび抗ウイルス剤が相乗的に作用するＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）関連疾患の処置における前記抗ウイルス剤との併用のために特定されるヒドロキシクロロキン。
【請求項７３】
ヒドロキシクロロキンおよび抗ウイルス剤が相乗的に作用するＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）関連疾患の処置における前記抗ウイルス剤との併用のために特定される医薬の製造におけるヒドロキシクロロキンの使用。
【請求項７４】
前記処置は、４００〜２０００ｍｇ／日のヒドロキシクロロキンを投与することを含む、請求項７２または７３に記載のヒドロキシクロロキンまたは使用。
【請求項７５】
前記抗ウイルス剤はインターフェロンである、請求項７２または７３に記載のヒドロキシクロロキンまたは使用。
【請求項７６】
前記インターフェロンはインターフェロン−αである、請求項７５に記載のヒドロキシクロロキンまたは使用。
【請求項７７】
前記インターフェロン−αはＰＥＧ化インターフェロン−αである、請求項７６に記載のヒドロキシクロロキンまたは使用。
【請求項７８】
前記処置は、前記インターフェロンを５０〜２５０μｇ／週の範囲における用量で投与することを含む、請求項７５に記載のヒドロキシクロロキンまたは使用。
【請求項７９】
前記処置はさらに、治療有効量の追加の抗ウイルス剤を共投与することを含む、請求項７２または７３に記載のヒドロキシクロロキンまたは使用。
【請求項８０】
ヒドロキシクロロキンまたはその医薬的に許容され得る塩、抗ウイルス剤、および、医薬的に許容され得る担体を含む医薬組成物。
【請求項８１】
前記組成物は、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）関連疾患の処置用に特定される、請求項８０に記載の組成物。
【請求項８２】
前記疾患は、前記抗ウイルス剤抵抗性のＨＣＶ遺伝子型により誘発される、請求項８１に記載の組成物。
【請求項８３】
前記組成物は経口投与用に製剤化される、請求項８０に記載の組成物。
【請求項８４】
前記組成物は固体形態である、請求項８３に記載の組成物。
【請求項８５】
前記組成物は前記組成物の単位用量形態である、請求項８０に記載の組成物。
【請求項８６】
ヒドロキシクロロキンまたはその医薬的に許容され得る塩、抗ウイルス剤、および、医薬的に許容され得る担体を含む医薬組成物単位用量形態。
【請求項８７】
前記単位用量形態は、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）関連疾患の処置用に特定される、請求項８６に記載の単位用量形態。
【請求項８８】
前記疾患は、前記抗ウイルス剤抵抗性のＨＣＶ遺伝子型により誘発される、請求項８７に記載の単位用量形態。
【請求項８９】
前記単位用量形態は経口投与用に製剤化される、請求項８６に記載の単位用量形態。
【請求項９０】
前記単位用量形態は固体形態である、請求項８９に記載の単位用量形態。
【請求項９１】
前記単位用量形態は、ＨＣＶ誘導自食作用の阻害に十分な量のヒドロキシクロロキンを含む、請求項８５〜９０のいずれかに記載の単位用量形態。
【請求項９２】
前記ヒドロキシクロロキンの量は、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）を前記抗ウイルス剤に対して感作するのに十分なものである、請求項８５〜９０のいずれかに記載の単位用量形態。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、そのいくつかの実施形態において、治療法に関連し、限定的ではないが、より具体的には、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）関連疾患（例えば、慢性ＨＣＶ感染など）を処置するための方法および組成物に関連する。
【背景技術】
【０００２】
ＨＣＶは、フラビウイルス科において独立した属として分類されているプラス鎖ＲＮＡウイルスである。フラビウイルス科のウイルスは全て、単一の中断されていない読み取り枠の翻訳によりすべての公知ウイルス特異的タンパク質をコードするプラス鎖ＲＮＡゲノムを含有する包膜ビリオンを有する。この一本鎖ＨＣＶ  ＲＮＡゲノムは長さがおよそ９５００ヌクレオチドであり、約３０００のアミノ酸からなる単一の大きなポリタンパク質をコードする単一の読み取り枠（ＯＲＦ）を有する。感染細胞において、このポリタンパク質が細胞およびウイルスのプロテアーゼによって多数の部位で切断されて、構造タンパク質および非構造（ＮＳ）タンパク質をもたらす。ＨＣＶの場合、成熟した非構造タンパク質（ＮＳ２、ＮＳ３、ＮＳ４Ａ、ＮＳ４Ｂ、ＮＳ５ＡおよびＮＳ５Ｂ）の生成が２つのウイルスプロテアーゼによって行われる。第１のプロテアーゼはＮＳ２−ＮＳ３接合部を切断し、第２のプロテアーゼは、ＮＳ３のＮ末端領域内に含まれるセリンプロテアーゼであり、ＮＳ３の下流における後続の切断のすべてを、ＮＳ３−ＮＳ４Ａの切断部位ではシス作用、残るＮＳ４Ａ−ＮＳ４Ｂ部位、ＮＳ４Ｂ−ＮＳ５Ａ部位、ＮＳ５Ａ−ＮＳ５Ｂ部位ではトランス作用の両方で伝達する。ＮＳ４Ａタンパク質は、ＮＳ３プロテアーゼのための補因子として作用し、また、場合によっては、ＮＳ３および他のウイルスレプリカーゼ成分の膜局在化を助けるなど、複数の機能を果たすと思われる。ＮＳ３タンパク質はまた、ヌクレオシドトリホスファターゼ活性およびＲＮＡヘリカーゼ活性を示す。ＮＳ５Ｂは、ＨＣＶの複製に関与するＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼである。
【０００３】
Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）による感染はヒトにおける切実な医療問題である。ＨＣＶは非Ａ非Ｂ型肝炎のほとんどの症例についての病原体として認識されており、ヒトの血清有病率が世界全体で３％であると推定される。合衆国だけでもほぼ４００万人が感染している可能性がある。ＨＣＶに初めてさらされると、感染者の約２０％のみが臨床的急性肝炎を発症し、他の感染者は感染を自然消散させると思われる。しかしながら、ほぼ７０％の場合において、ウイルスは、何十年間にもわたって持続する慢性感染を確立する。この結果、通常の場合、再発性の、徐々に悪化する肝臓の炎症が生じ、その炎症により、より重篤な疾患状態（例えば、肝硬変および肝細胞癌など）に至ることが多い。
【０００４】
ペグ化インターフェロン（例えば、ｐｅｇ−ＩＦＮアルファ−２ａ／ｂ）と、リバビリン（抗ウイルス剤）の１日２回経口用量の併用が、慢性ＨＣＶ感染を処置するための現行の標準治療である。ｐｅｇ−ＩＦＮとリバビリンの併用治療に対して持続性ウイルス陰性化を最終的に達成する患者では、通常、ＨＣＶ−ＲＮＡレベルの急激な減少が治療開始後に現れ、レベルは４週間〜２４週間のうちに検出不能になる。肝臓酵素のレベルは正常になり、また、組織学的所見は顕著に改善する。上述の併用療法では、ＨＣＶの遺伝子型２または遺伝子型３に感染する患者のおよそ７５％〜８０％、および、遺伝子型１に感染する患者の４０％〜５０％が持続性ウイルス陰性化（ＳＶＲ）を達成する［Ｓｈｅｒｍａｎ  Ｋ．Ｅ．、新しいＨＣＶ剤の臨床的必要性および治療標的、Ｔｈｅ  Ｆｕｔｕｒｅ  ｏｆ  ＨＣＶ：Ｓｍａｌｌ  ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ｉｎ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｆｏｒ  Ｃｈｒｏｎｉｃ  Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃａｒｅ  Ｏｐｔｉｏｎｓ  ＬＬＣ、２００７］。
【０００５】
しかしながら、この併用療法の成功率は、その結果が、感染しているＨＣＶの遺伝子型により大きく異なるため限定的である。この処置は、ＨＣＶの遺伝子型１または遺伝子型４（すなわち、欧州および米国における最も代表的な遺伝子型）に感染する患者の５０％未満において有効である。多くの場合、無応答は、宿主の生得的なインターフェロン駆動免疫応答の活性化を損なう宿主因子またはウイルス因子に関係づけられる。
【０００６】
他の患者は、ウイルスの減少を治療期間中に達成し得るが、血球減少症、疲労、または、処置の他の副作用のために、完全な治療用量または十分な処置継続期間に耐えることができない。実際、これらの理由による用量変更が、処置を受ける患者の３５％〜４２％で必要となり、また、これらの患者のおよそ３分の１が最終的には処置を完全に中断する。これらの用量減少、一時的な中断および中断された処置過程により、ＳＶＲを達成する機会が減少する。
【０００７】
最後に、ｐｅｇ−ＩＦＮおよびリバビリンの併用は、抗ＨＣＶ治療を必要としている多くの患者において完全に禁忌である。治療のための禁忌には、重症の血球減少症、肝臓の代償不全、腎不全、十分に抑制されない自己免疫疾患、重症の心肺疾患、および、能動的な心理学的問題が含まれる［Ｄａｖｉｓ  Ｇ．Ｌ．、慢性Ｃ型肝炎の処置のための研究中の小分子薬剤、Ｔｈｅ  Ｆｕｔｕｒｅ  ｏｆ  ＨＣＶ：Ｓｍａｌｌ  ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ｉｎ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｆｏｒ  Ｃｈｒｏｎｉｃ  Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃａｒｅ  Ｏｐｔｉｏｎｓ  ＬＬＣ、２００７］。
【０００８】
Ｂｒｉｏｌａｎｔら［Ａｎｔｉｖｉｒａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、６１（２００４）、１１１〜１１７］は、ＩＦＮ−α２ｂおよびリバビリンの組合せがＣＨＩＫＶおよびＳＦＶに対する亜相乗的な抗ウイルス効果を有することを教示している。
【０００９】
ＨＣＶ関連疾患を処置するための代替治療法が開発されている。米国特許第６８４９２５４号は、リバビリンに関連した溶血を改善するために十分な期間抗酸化剤を配合した形での、ＨＣＶ−ＲＮＡを低下させるのに十分な期間にわたるインターフェロンアルファおよびリバビリンの投与を含む併用療法を開示している。
【００１０】
米国特許第７１１５５７８号は、治療有効量のリバビリン誘導体および治療有効量のインターフェロン−アルファを投与することを含む併用療法を開示している。米国特許第７４１０９７９号は、ＨＣＶ感染に対する、ジハロアセトアミド化合物と、インターフェロンまたはリバビリンとの相乗効果的な併用療法を開示している。米国特許第７６７１０１７号は、ＨＣＶを処置するための、シクロスポリンおよびペグ化インターフェロンの使用を開示している。
【００１１】
クロロキンは、リソソームに送達された積み荷の分解に対するそのｐＨ依存的阻害作用のために、すなわち、自食作用経路のこの最終段階を効果的に無力化するために、抗ウイルス治療および抗腫瘍効果の点で、現在、多くの期待を集めている公知リソソーム作用剤である。
【００１２】
ヒドロキシクロロキン（ＨＣＱ）は、エチル基の代わりにヒドロキシエチル基を特徴とするクロロキン（ＣＱ）の化学誘導体である。
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【００１３】
ＨＣＱは、効果的な抗マラリア薬剤としてこれまで分類されてきたが、全身性エリテマトーデスならびに慢性関節リウマチおよびシェーグレン症候群の処置における効力を示している。ＨＣＱは、かなりの間、リソソームのｐＨを抗原提示細胞において増大させることが知られてきたが、炎症状態におけるその作用機構が解明されたのはごく最近のことであり、その作用機構は、形質細胞様樹状細胞（ＰＤＣ）上のｔｏｌｌ様受容体の活性化の阻止を伴う。
【００１４】
ＣＱおよびＨＣＱの治療効果の直接比較はかなり困難であるが、ヒドロキシクロロキンは、リウマチ性疾患の処置において、有効性がクロロキンの２分の１〜３分の２であり、毒性が２分の１であることが示唆されている［Ｓｃｈｅｒｂｅｌ  ＡＬら、Ｃｌｅｖｅ  Ｃｌｉｎ  Ｑ、１９５８、２５：９５］。クロロキンの方が、かなり強い網膜毒性を有すると思われるので、ヒドロキシクロロキンの頻用が増えている［Ｒｙｎｅｓ  Ｒ．Ｉ．、Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ、１９９７、３６：７９９〜８０５］。
【００１５】
Ｃｈａｎｄｒａｍｏｈａｎ  Ｍ．ら［Ｉｎｄｉａｎ  Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ、２００６、６８：５３８〜４０］は、クロロキンおよびヒドロキシクロロキンをＨｕｈ５−２細胞においてＨＣＶに対する潜在的なインビトロ抗ウイルス活性についてスクリーニングしたことを報告しており、クロロキンは、１０．７５μＭの濃度で非処理対照に関して、ウイルスＲＮＡを７％未満まで減少させることができ、かつ、細胞成長を９１％超まで促進させること、および、ヒドロキシクロロキンは、６．６μＭの濃度で非処理対照に関して、ウイルスＲＮＡを７％未満まで減少させることができ、かつ、細胞成長を８１％超まで促進させることを示した。Ｃｈａｎｄｒａｍｏｈａｎ  Ｍ．らは、ＨＣＱが、ＨＣＶ関連疾患を処置するために抗ウイルス剤と併用され得ることを明らかにしておらず、また、そのような組合せの効果（アンタゴニスト、相加的または相乗的）について特性確認していない。
【００１６】
Ｆｒｅｉｂｅｒｇら［Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ（２０１０）、９１、７６５〜７７２］は、クロロキンの抗ウイルス効力を、ゴールデンハムスターのモデルを使用したインビボ実験におけるＮｉＶ感染およびＨｅＶ感染の処置において、個々に、または、リバビリンとの併用において評価しており、両方の薬剤が、ウイルスの拡大をインビトロで阻害することにおいて強力な抗ウイルス活性を示す一方で、それらはインビボモデルにおいて保護的でないことが判明したことを報告している。リバビリンはＮｉＶ感染ハムスターにおいてウイルス疾患による死亡をおよそ５日遅らせたが、ＨｅＶ感染ハムスターにおける顕著な効果は何ら認められなかった。クロロキンは、個々に投与されたとき、または、リバビリンとの併用で投与されたときのどちらでもハムスターを保護せず、後者は、好都合な薬剤−薬剤相互作用の欠如を示した。
【００１７】
Ｚｕｃｋｅｒｍａｎら［ＢｉｏＤｒｕｇｓ、２００１、１５（９）、ｐｐ．５７４〜５８４］は、ＨＣＱ、コルチコステロイドおよび他の抗炎症剤などの薬剤の経口投与が、ＨＣＶ関連関節炎を抑制するために抗ウイルス治療と併用され得ることを示唆している。
【００１８】
Ｍｉｚｕｉら［Ｊ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．、２０１０（２月）、４５（２）：１９５〜２０３。Ｅｐｕｂ、２００９年９月１７日］は、ＨＣＶレプリコンでトランスフェクションされた細胞のクロロキンによる処置がＨＣＶレプリコンの複製を用量依存的に抑制することを後に報告している。クロロキン（自食作用の公知阻害剤）およびインターフェロン−アルファによる処置がインターフェロンの抗ウイルス効果を高め、それにより、ＨＣＶレプリコンの再伝播を妨げることが示された。ＭｉｚｕｉらはＣＱ／インターフェロンアルファの組合せの相乗効果または相加効果を何ら明らかにしておらず、また、ＨＣＶ併用療法用の想定薬剤としてＨＣＱを関連づけることもなかった。
【００１９】
ＪＦＨ１  ＨＣＶ感染Ｈｕｈ７細胞の遺伝子発現プロファイリングの近年の取り組みにより、感染が、いくつかの細胞プロセス（例えば、ＥＲストレス応答、アポトーシス、ｐ５３シグナル伝達、解毒、細胞内脂質代謝、タンパク質の合成および分解、翻訳後プロセスまたは細胞骨格組織化など）に関与する宿主遺伝子の発現を明らかに調節していることが示された。
【００２０】
自食作用（細胞死における細胞ストレスの役割に応じた細胞生存のための機構）と、ウイルス複製との関係は、ＨＣＶ感染の場合を含めて、現在、研究中である。
【００２１】
自食作用、すなわち、構成成分の自己分解に至る細胞経路は、ウイルス感染後に開始されるＥＲストレスを含めて、ストレスに応答して活性化されることが知られている。自食作用は様々な感染からの保護をもたらし、また、自然免疫応答の一成分として報告されているが、いくつかの細菌およびウイルス（ＨＣＶを含む）は、自食作用プロセスを妨害して、自身の複製を容易にするための戦略を発達させている［ＳｃｈｍｉｄおよびＭｕｎｚ、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ、２００７、２７：１１〜２１；Ｗｉｌｅｍａｎ、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２００６、３１２：８７５〜８７８］。自食作用関連遺伝子のサイレンシングにより、ＨＣＶの複製が顕著に弱まること［Ｍｉｚｕｉら、２０１０、上掲］、また、感染性ＨＣＶ粒子の産生が低下することが見出された。ＨＣＶによる自食作用の誘導は自然免疫応答を損ない、また、ＨＣＶ感染肝細胞における自食作用の乱れはインターフェロンのシグナル伝達経路を活性化し、自然免疫応答を高めることが示唆されている［Ｓｈｒｉｖａｓｔａｖａら、Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ、２０１１、５３：４０６〜４１４］。
【００２２】
ＨＣＶ感染により、インビトロおよびインビボにおいて、ＥＲストレスが誘導され、自食作用が、下流側のＩＲＥ１シグナル伝達経路、ＡＴＦ６シグナル伝達経路およびＥＩＦ２ＡＫ３／ＰＥＲＫシグナル伝達経路を含む小胞体ストレス応答（ＵＰＲ）の誘導を介して誘発される［Ｓｉｒら、Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ、２００８、４８：１０５４〜１０６１］。しかしながら、ＨＣＶにより誘導される自食作用プロセスは、タンパク質の分解を引き起こさないので、不完全であると考えられた［Ｓｉｒら、Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ、２００８、４８：１０５４〜１０６１］。
【００２３】
Ｋｅ  ＰＹ．らは、完成した自食作用プロセスにより、生得的な抗ウイルス性免疫が、ＨＣＶ  ＲＮＡの複製を可能にする内因性ＩＦＮ応答の阻止を介して完全に抑制されることを報告している。
【００２４】
主な自食作用タンパク質は、進入するＨＣＶ  ＲＮＡの翻訳、したがって、ＨＣＶ複製の開始に要求されるプロウイルス因子であると思われるが、感染が確立されると、自食作用が要求されないことが示唆されている［例えば、Ｄｒｅｕｘら、ＰＮＡＳ、２００９、１０６：１４０４６〜１４０５１を参照のこと］。
【００２５】
しかしながら、ＨＣＶ感染に対する応答に関わる宿主分子機構、または、ＣＱの抗ウイルス活性および自食作用とのその相互作用の分子的基礎はいずれも、これまでのところ明確には解明されていない。
【００２６】
近年、自食作用が、化学療法（例えば、ＤＮＡ損傷化学療法など）、放射線療法および分子標的療法によって誘導されるように、癌治療にも関与すること、また、クロロキン誘導体（例えば、ＨＣＱなど）が、化学療法により誘導される自食作用の防止に使用され得ることが示唆されている［Ｒａｖｉ  Ｋ．Ａｍａｒａｖａｄｉ、Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．、２００８、１１８（１２）：３８３７〜３８４０］。
【００２７】
追加の背景技術は、Ｊａｃｋｓｏｎら［ＰＬｏＳ  Ｂｉｏｌ  ２００５，３：ｅ１５６］，Ｗｏｎｇら［Ｊ  Ｖｉｒｏｌ  ２００８，８２：９１４３−９１５３］，Ｋｈａｋｐｏｏｒら［Ｊ  Ｇｅｎ  Ｖｉｒｏｌ  ２００９，９０：１０９３−１１０３］，Ｌｅｅら［Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  ２００８，３７８：２４０−２４８］，Ｐｒｅｎｔｉｃｅら［Ｊ  Ｂｉｏ  Ｃｈｅｍ  ２００４，２７９：１０１３６−１０１４１］，およびＫｒｏｅｍｅｒら［Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ  ２００８，９：１００４−１０１０］を含む。
【発明の概要】
【００２８】
本発明のいくつかの実施形態の一実施態様によれば、処置の必要性のある対象においてＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）関連疾患を処置する方法であって、治療有効量のヒドロキシクロロキンまたはその医薬的に許容され得る塩を対象に投与すること（この治療有効量は、ＨＣＶ誘導自食作用を対象において阻害するのに十分な量である）によりＨＣＶ関連疾患を処置することを含む方法が提供される。
【００２９】
本発明のいくつかの実施形態の一実施態様によれば、ＨＣＶ誘導自食作用の阻害に十分な量でのＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）関連疾患の処置における使用のために特定されるヒドロキシクロロキンが提供される。
【００３０】
本発明のいくつかの実施形態の一実施態様によれば、ＨＣＶ誘導自食作用の阻害に十分な量でヒドロキシクロロキンをその必要のある対象に投与することを含むＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）関連疾患の処置において使用される医薬の製造におけるヒドロキシクロロキンの使用が提供される。
【００３１】
本発明のいくつかの実施形態の一実施態様によれば、処置の必要性のある対象においてＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）関連疾患を処置する方法であって、治療有効量のヒドロキシクロロキンまたはその医薬的に許容され得る塩と、治療有効量の抗ウイルス剤とを対象に共投与し（ただし、この抗ウイルス剤はＨＣＶ誘導自食作用を阻害しない）、それにより、ＨＣＶ感染を処置することを含む方法が提供される。
【００３２】
本発明のいくつかの実施形態の一実施態様によれば、ＨＣＶ誘導自食作用を阻害しない抗ウイルス剤と組み合わせてＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）関連疾患の処置に使用されるヒドロキシクロロキンが提供される。
【００３３】
本発明のいくつかの実施形態の一実施態様によれば、ＨＣＶ誘導自食作用を阻害しない抗ウイルス剤と組み合わせてＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）関連疾患の処置に使用される医薬の製造におけるヒドロキシクロロキンの使用が提供される。
【００３４】
本発明のいくつかの実施形態の一実施態様によれば、抗ウイルス剤に対して抵抗性のＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）遺伝子型によって誘発されるＨＣＶ関連疾患を処置の必要性のある対象において処置する方法であって、治療有効量のヒドロキシクロロキンまたはその医薬的に許容され得る塩と、治療有効量の前記抗ウイルス剤とを対象に共投与し、それにより、ＨＣＶ関連疾患を処置することを含む方法が提供される。
【００３５】
本発明のいくつかの実施形態の一実施態様によれば、抗ウイルス剤に対して抵抗性のＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）遺伝子型により誘発されるＨＣＶ関連疾患の処置において前記抗ウイルス剤と併用されるヒドロキシクロロキンが提供される。
【００３６】
本発明のいくつかの実施形態の一実施態様によれば、抗ウイルス剤に対して抵抗性のＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）遺伝子型により誘発こされるＨＣＶ関連疾患の処置において前記抗ウイルス剤と併用される医薬の製造におけるヒドロキシクロロキンの使用が提供される。
【００３７】
本発明のいくつかの実施形態の一実施態様によれば、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）関連疾患を処置の必要性のある対象において処置する方法であって、治療有効量のヒドロキシクロロキンまたはその医薬的に許容され得る塩を治療有効量の抗ウイルス剤との併用で対象に共投与し（ただし、この場合、ヒドロキシクロロキンの治療有効量および抗ウイルス剤の治療有効量は、ヒドロキシクロロキンおよび抗ウイルス剤が相乗的に作用するように選択される）、それにより、ＨＣＶ関連疾患を処置することを含む方法が提供される。
【００３８】
本発明のいくつかの実施形態の一実施態様によれば、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）関連疾患を処置の必要性のある対象において処置する方法であって、４００〜２０００ｍｇ／日のヒドロキシクロロキンまたはその医薬的に許容され得る塩を５０〜２５０μｇ／週のインターフェロンと組み合わせて対象に共投与し（ただし、この場合、ヒドロキシクロロキンおよびインターフェロンは相乗的に作用する）、それにより、ＨＣＶ関連疾患を処置することを含む方法が提供される。
【００３９】
本発明のいくつかの実施形態の一実施態様によれば、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）関連疾患を処置の必要のある対象において処置する方法であって、４００〜２０００ｍｇ／日のヒドロキシクロロキンまたはその医薬的に許容され得る塩を治療有効量のウイルスプロテアーゼ阻害剤と組み合わせて対象に共投与し（ただし、ヒドロキシクロロキンおよびウイルスプロテアーゼ阻害剤は相乗的に作用する）、それにより、ＨＣＶ関連疾患を処置することを含む方法が提供される。
【００４０】
本発明のいくつかの実施形態の一実施態様によれば、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）関連疾患を処置の必要性のある対象において処置する方法であって、４００〜２０００ｍｇ／日のヒドロキシクロロキンまたはその医薬的に許容され得る塩を治療有効量のウイルスポリメラーゼ阻害剤と組み合わせて対象に共投与し（ただし、ヒドロキシクロロキンおよびウイルスポリメラーゼ阻害剤は相乗的に作用する）、それにより、ＨＣＶ関連疾患を処置することを含む方法が提供される。
【００４１】
本発明のいくつかの実施形態の一実施態様によれば、ヒドロキシクロロキンおよび抗ウイルス剤が相乗的に作用するＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）関連疾患の処置における抗ウイルス剤との併用のために特定されるヒドロキシクロロキンが提供される。
【００４２】
本発明のいくつかの実施形態の一実施態様によれば、ヒドロキシクロロキンおよび抗ウイルス剤が相乗的に作用するＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）関連疾患の処置における抗ウイルス剤との併用のために特定される医薬の製造におけるヒドロキシクロロキンの使用が提供される。
【００４３】
本発明のいくつかの実施形態の一実施態様によれば、ヒドロキシクロロキンまたはその医薬的に許容され得る塩、抗ウイルス剤、および、医薬的に許容され得る担体を含む医薬組成物が提供される。
【００４４】
本発明のいくつかの実施形態の一実施態様によれば、ヒドロキシクロロキンまたはその医薬的に許容され得る塩、抗ウイルス剤、および、医薬的に許容され得る担体を含む医薬組成物単位用量形態が提供される。
【００４５】
本発明のいくつかの実施形態によれば、ヒドロキシクロロキンの治療有効量は４００〜２０００ｍｇ／日の範囲にある。
【００４６】
本発明のいくつかの実施形態によれば、ＨＣＶ誘導自食作用は、ＵＬＫ１、ＡＭＢＲＡ１、ＡＴＧ２Ａ、ＧＡＢＡＲＡＰＬ１、ＦＯＸ０３、ＳＱＳＴＭ１、ＰＩＫ３Ｃ３およびＭＡＰ１ＬＣ３Ｂからなる群から選択されるタンパク質のレベルの増大を特徴とする。
【００４７】
本発明のいくつかの実施形態によれば、疾患は、抗ウイルス剤抵抗性のＨＣＶ遺伝子型により誘発される。
【００４８】
本発明のいくつかの実施形態によれば、ＨＣＶは、遺伝子型１のＨＣＶおよび遺伝子型４のＨＣＶからなる群から選択される。
【００４９】
本発明のいくつかの実施形態によれば、方法はさらに、治療有効量の抗ウイルス剤を対象に共投与することを含む。
【００５０】
本発明のいくつかの実施形態によれば、抗ウイルス剤は、リバビリン、ビラミジン、インターフェロン、ウイルスプロテアーゼ阻害剤、ＮＳ４Ａ阻害剤、ＮＳ５Ａ阻害剤、ウイルスポリメラーゼ阻害剤、シクロフィリン阻害剤、ヘリカーゼ阻害剤、グリコシル化阻害剤および抗リン脂質抗体ならびにそれらの任意の組合せからなる群から選択される。
【００５１】
本発明のいくつかの実施形態によれば、抗ウイルス剤は、インターフェロン−α、リバビリン、ビラミジン、ボセプレビル、テラプレビル、ＮＭ−１０７、バロピシタビンおよびアリスポリビルならびにそれらの任意の組合せからなる群から選択される。
【００５２】
本発明のいくつかの実施形態によれば、抗ウイルス剤はＨＣＶ誘導自食作用を阻害しない。
【００５３】
本発明のいくつかの実施形態によれば、抗ウイルス剤は、リバビリン、ビラミジン、ボセプレビル、テラプレビル、ＮＭ−１０７、バロピシタビンおよびアリスポリビルならびにそれらの任意の組合せからなる群から選択される。
【００５４】
本発明のいくつかの実施形態によれば、方法はさらに、治療有効量のインターフェロン−αを対象に共投与することを含む。
【００５５】
本発明のいくつかの実施形態によれば、ＨＣＶ誘導自食作用の阻害に十分なヒドロキシクロロキンの量は４００〜２０００ｍｇ／日の範囲にある。
【００５６】
本発明のいくつかの実施形態によれば、処置はさらに、治療有効量の抗ウイルス剤を共投与することを含む。
【００５７】
本発明のいくつかの実施形態によれば、ヒドロキシクロロキンの治療有効量は、ＨＣＶ誘導自食作用を対象において阻害するのに十分である。
【００５８】
本発明のいくつかの実施形態によれば、ヒドロキシクロロキンの治療有効量は５００〜１０００ｍｇ／日の範囲にある。
【００５９】
本発明のいくつかの実施形態によれば、方法はさらに、治療有効量の追加の抗ウイルス剤を対象に共投与することを含む。
【００６０】
本発明のいくつかの実施形態によれば、追加の抗ウイルス剤は、インターフェロン、ウイルスプロテアーゼ阻害剤、ＮＳ４Ａ阻害剤、ＮＳ５Ａ阻害剤、ウイルスポリメラーゼ阻害剤、シクロフィリン阻害剤、ヘリカーゼ阻害剤、グリコシル化阻害剤および抗リン脂質抗体からなる群から選択される。
【００６１】
本発明のいくつかの実施形態によれば、リバビリンの治療有効量は５０〜１２００ｍｇ／日の範囲にある。
【００６２】
本発明のいくつかの実施形態によれば、疾患は、抗ウイルス剤に対して抵抗性であるＨＣＶ遺伝子型によって誘発される。
【００６３】
本発明のいくつかの実施形態によれば、方法はさらに、追加の抗ウイルス剤を対象に共投与することを含む。
【００６４】
本発明のいくつかの実施形態によれば、追加の抗ウイルス剤は、インターフェロン、ウイルスプロテアーゼ阻害剤、ＮＳ４Ａ阻害剤、ＮＳ５Ａ阻害剤、ウイルスポリメラーゼ阻害剤、シクロフィリン阻害剤、ヘリカーゼ阻害剤、グリコシル化阻害剤および抗リン脂質抗体ならびにそれらの任意の組合せからなる群から選択される。
【００６５】
本発明のいくつかの実施形態によれば、処置は、ヒドロキシクロロキンを、ＨＣＶ誘導自食作用の阻害に十分な量で投与することを含む。
【００６６】
本発明のいくつかの実施形態によれば、処置は、４００〜２０００ｍｇ／日のヒドロキシクロロキンを投与することを含む。
【００６７】
本発明のいくつかの実施形態によれば、処置は、５００〜１０００ｍｇ／日のヒドロキシクロロキンを投与することを含む。
【００６８】
本発明のいくつかの実施形態によれば、抗ウイルス剤はウイルスプロテアーゼ阻害剤である。
【００６９】
本発明のいくつかの実施形態によれば、ウイルスプロテアーゼ阻害剤はボセプレビルである。
【００７０】
本発明のいくつかの実施形態によれば、抗ウイルス剤はウイルスポリメラーゼ阻害剤である。
【００７１】
本発明のいくつかの実施形態によれば、ウイルスポリメラーゼ阻害剤は、ＮＭ−１０７およびバロピシタビンからなる群から選択される。
【００７２】
本発明のいくつかの実施形態によれば、抗ウイルス剤はインターフェロンである。
【００７３】
本発明のいくつかの実施形態によれば、インターフェロンはインターフェロン−αである。
【００７４】
本発明のいくつかの実施形態によれば、インターフェロン−αはＰＥＧ化インターフェロン−αである。
【００７５】
本発明のいくつかの実施形態によれば、インターフェロンの治療有効量は５０〜２５０μｇ／週の範囲にある。
【００７６】
本発明のいくつかの実施形態によれば、処置は、ヒドロキシクロロキンを４００〜２０００ｍｇ／日の用量で投与することを含む。
【００７７】
本発明のいくつかの実施形態によれば、処置は、インターフェロンを５０〜２５０μｇ／週の範囲における用量で投与することを含む。
【００７８】
本発明のいくつかの実施形態によれば、処置はさらに、治療有効量の追加の抗ウイルス剤を共投与することを含む。
【００７９】
本発明のいくつかの実施形態によれば、組成物は、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）関連疾患の処置用に特定される。
【００８０】
本発明のいくつかの実施形態によれば、組成物は経口投与用に製剤化される。
【００８１】
本発明のいくつかの実施形態によれば、組成物は固体形態である。
【００８２】
本発明のいくつかの実施形態によれば、組成物は当該組成物の単位用量形態である。
【００８３】
本発明のいくつかの実施形態によれば、単位用量形態は、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）関連疾患の処置用に特定される。
【００８４】
本発明のいくつかの実施形態によれば、単位用量形態は経口投与用に製剤化される。
【００８５】
本発明のいくつかの実施形態によれば、単位用量形態は固体形態である。
【００８６】
本発明のいくつかの実施形態によれば、単位用量形態は、ＨＣＶ誘導自食作用の阻害に十分な量のヒドロキシクロロキンを含む。
【００８７】
本発明のいくつかの実施形態によれば、ヒドロキシクロロキンの量は、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）を抗ウイルス剤に対して感作するのに十分なものである。
【００８８】
別途定義されない限り、本明細書で使用されるすべての技術的用語および／または科学的用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書に記載される方法および材料と類似または同等である方法および材料を本発明の実施または試験において使用することができるが、例示的な方法および／または材料が下記に記載される。矛盾する場合には、定義を含めて、本特許明細書が優先する。加えて、材料、方法および実施例は例示にすぎず、限定であることは意図されない。
【図面の簡単な説明】
【００８９】
本明細書では本発明のいくつかの実施形態を単に例示し添付の図面を参照して説明する。特に詳細に図面を参照して、示されている詳細が例示として本発明の実施形態を例示考察することだけを目的としていることを強調するものである。この点について、図面について行う説明によって、本発明の実施形態を実施する方法は当業者には明らかになるであろう。
【００９０】
【図１】図１は、細胞株Ｈｕｈ７のＨＣＶ  ＲＮＡレプリコンの構造を示す図である。
【００９１】
【図２】図２は、０、０．２２、０．６６、２、６または１８μＭのヒドロキシクロロキンと、０、０．４１、１．２３、３．７、１１．１、３３．３、１００または３００ＩＵ／ｍｌのインターフェロン−α（ＩＦＮαＡ）との組合せによる７２時間の処理の後のレプリコン細胞におけるＨＣＶ  ＲＮＡのレベルを示すグラフである。
【００９２】
【図３Ａ−３Ｂ】図３Ａおよび図３Ｂは、０、０．２２、０．６６、２、６または１８μＭのヒドロキシクロロキンと、０、０．４１、１．２３、３．７、１１．１、３３．３、１００または３００ＩＵ／ｍｌのインターフェロン−α（ＩＦＮａ）との組合せの測定された抗ウイルス効果と、相加効果のＰｒｉｃｈａｒｄ−Ｓｈｉｐｍａｎモデルに従って予想される理論的抗ウイルス効果との差を示すグラフである（正の値は相乗作用を示し、負の値は拮抗作用を示す）。データは３次元的（図３Ａ）および２次元的（図３Ｂ）スキームで示される。
【００９３】
【図４】図４は、５０％の抗ウイルス性阻害（ＥＤ５０）、７５％の抗ウイルス性阻害（ＥＤ７５）および９０％の抗ウイルス性阻害（ＥＤ９０）をもたらす、インターフェロン−α（ＩＦＮａ）およびヒドロキシクロロキンの濃度（実験的に求められる場合（データ点）および相加効果についての理論的モデルによって計算される場合（点線））を示すアイソボログラムを示す。
【００９４】
【図５】図５は、０、０．２２、０．６６、２、６または１８μＭのヒドロキシクロロキンと、０、０．４１、１．２３、３．７、１１．１、３３．３、１００または３００ＩＵ／ｍｌのインターフェロン−α（ＩＦＮαＡ）との組合せによる７２時間の処理の後のＨＣＶレプリコン細胞における生存能を示すグラフである。
【００９５】
【図６】図６は、０、０．６６、２、６または１８μＭのクロロキンと、０、０．４１、１．２３、３．７、１１．１、３３．３または１００ＩＵ／ｍｌのインターフェロン−α（ＩＦＮ−αＡ）との組合せの測定された抗ウイルス効果と、相加効果のＰｒｉｃｈａｒｄ−Ｓｈｉｐｍａｎモデルに従って予想される理論的な抗ウイルス効果との差を示すグラフである（正の値は相乗作用を示し、負の値は拮抗作用を示す）。
【００９６】
【図７】図７は、０、０．５、１または１０μＭのヒドロキシクロロキン（ＨＣＱ）の組合せによる７２時間の処理の後のレプリコン細胞におけるＨＣＶ  ＲＮＡのレベル（レプリコンにより運ばれるネオマイシン遺伝子産物（ＮＰＴＩＩ）の定量によって求められた）を示すグラフである。
【００９７】
【図８】図８は、Ｈｕｈ７レプリコン細胞の、０．５μＭまたは１μＭのヒドロキシクロロキン（ＨＣＱ）による４８時間の処理後または無処理（ＮＴ）の場合におけるＨＣＶコアタンパク質およびＨＣＶ  ＮＳ５Ａタンパク質のレベルを示すウエスタンブロットの画像である（α−アクチンは負荷対照としての役割を果たす）。
【００９８】
【図９Ａ】図９Ａは、ＪＦＨ／ＣｓＮ６Ａ４ウイルス粒子によるＨＣＶ感染の６、２４または４８時間後におけるＨｕｈ７細胞で調節（アップレギュレーションまたはダウンレギュレーション）される宿主遺伝子の割合（合計で１０２３８個の顕著に発現された遺伝子のうちの割合）を示す棒グラフである。
【００９９】
【図９Ｂ】図９Ｂは、ＪＦＨ／ＣｓＮ６Ａ４ウイルス粒子によるＨＣＶ感染の６、２４または４８時間後、あるいは、ＨＣＱによる処理（黄色棒）またはＣＱによる処理（青色棒）を伴うＨＣＶ感染の１２または４８時間後におけるＨｕｈ７細胞で調節された宿主遺伝子の発現プロファイルを示す。赤色はアップレギュレーションを示し、緑色はダウンレギュレーションを示し、黒色は、調節がないことを示す。
【０１００】
【図９Ｃ】図９Ｃは、ＨＣＱおよびＣＱ処理後４８時間に過剰発現またはダウンレギュレーション（発現の少なくとも２倍の調節）された、ＪＦＨ／ＣｓＮ６Ａ４ウイルス粒子によるＨＣＶ感染の４８時間後に調節（誘導または抑制）される１７３６個のうちの１１８個の遺伝子の調節を示す棒グラフである（それぞれの棒は、ＨＣＶ誘導遺伝子またはＨＣＶ抑制遺伝子中における処理により調節された遺伝子の割合を表す；白抜きは、処理によってダウンレギュレーションされた遺伝子の割合を示し、黒塗りは、処理によってアップレギュレーションされた遺伝子の割合を示す）。
【０１０１】
【図１０】図１０は、遺伝子調節ネットワークに関与する５７個の遺伝子のセット、ならびに、ＪＦＨ／ＣｓＮ６Ａ４ウイルス粒子による感染後４８時間でのＨｕｈ７細胞におけるＨＣＱ抑制（青色棒）およびＣＱ抑制（黄色棒）を示す（ＨＣＱまたはＣＱ処理が行われない場合の、感染後６時間、２４時間および４８時間での発現を比較のために示す。赤色棒は、インターフェロン−αにより処理された感染細胞における発現を示す）。
【０１０２】
【図１１】図１１は、ＨＣＶ誘導経路のＨＣＱ阻害を示す遺伝子ネットワークである。
【０１０３】
【図１２】図１２は、マイクロアレイ解析、ＳＹＢＲＧｒｅｅｎ  ｑＲＴ−ＰＣＲおよびＮａｎｏｓｔｒｉｎｇの技術によって求められた、感染細胞（Ｈｉ／Ｈ）およびＨＣＱ（ＨｉＣＱｄ／Ｈｉ）、ＣＱ（ＨｉＣＱ／Ｈｉ）またはインターフェロン−α（ＨｉＩＦＮ／Ｈｉ）で処理された感染細胞における例示的な調節された遺伝子の発現を示す。
【０１０４】
【図１３Ａ−１３Ｂ】図１３Ａおよび図１３Ｂは、０、０．２２、０．６６、２、６または１８μＭのヒドロキシクロロキンと、０、０．１１、０．３３、１、３．３または１０μＭのＮＭ−１０７との組合せの測定された抗ウイルス効果と、相加効果のＰｒｉｃｈａｒｄ−Ｓｈｉｐｍａｎモデルに従って予想される理論的な抗ウイルス効果との差を示すグラフである（正の値は相乗作用を示し、負の値は拮抗作用を示す）。データは３次元的（図１３Ａ）および２次元的（図１３Ｂ）スキームで示される。
【０１０５】
【図１４Ａ−１４Ｂ】図１４Ａおよび図１４Ｂは、０、０．２２、０．６６、２、６または１８μＭのヒドロキシクロロキンと、０、０．０４１、０．１２３、０．３７、１．１、３．３および１０μＭのボセプレビルとの組合せの測定された抗ウイルス効果と、相加効果のＰｒｉｃｈａｒｄ−Ｓｈｉｐｍａｎモデルに従って予想される理論的な抗ウイルス効果との差を示すグラフである（正の値は相乗作用を示し、負の値は拮抗作用を示す）。データは３次元的（図１４Ａ）および２次元的（図１４Ｂ）スキームで示される。
【発明を実施するための形態】
【０１０６】
本発明は、そのいくつかの実施形態において、治療法に関連し、限定的ではないが、より具体的には、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）関連疾患（例えば、慢性ＨＣＶ感染など）を処置するための方法および組成物に関連する。
【０１０７】
本発明の少なくとも１つの実施形態を詳細に説明する前に、本発明は、その適用において、下記の説明に示される細部、または、実施例によって例示される細部に必ずしも限定されないことを理解しなければならない。本発明は他の実施形態が可能であり、あるいは、様々な方法で実施、または、実行される。
【０１０８】
現行法に伴う非応答性および／または非寛容を未然に防ぐ、ＨＣＶ関連疾患、具体的には慢性ＨＣＶ感染を処置するための新規方法の探索において、本発明者らは驚くべきことに、ヒドロキシクロロキン（ＨＣＱ）が、単独あるいは、１つまたは複数の抗ウイルス剤との併用で、ＨＣＶ関連疾患を処置するための薬剤として使用され得ることを発見している。
【０１０９】
下記の実施例の節において明らかにされるように、本発明者らは、ＨＣＱが、様々な抗ウイルス剤（例えば、インターフェロン−α（ＩＦＮα）、ボセプレビルおよびＮＭ−１０７など）と相乗作用することにより、これらの薬剤の改善された治療効果をもたらし、かつ／または、より低用量の上記抗ウイルス剤（複数も可）の使用ですむことを示している。
【０１１０】
したがって、ＨＣＱおよびＩＦＮαの例示的な組合せは、様々な理論的モデルによって求められるように、相乗効果を示すことが本明細書中において明らかにされる（図２〜図４および表１）。加えて、ＨＣＱおよびＩＦＮαの例示的な組合せは、単独投与のときには抗ウイルス効果を示さないＨＣＱおよび／またはＩＦＮαの濃度においてさえ、抗ウイルス効果を示すことが明らかにされている（図２）。上述の相乗効果を示す例示的な組合せは非毒性であった（図５）。そのうえ、クロロキンは、ＨＣＱと同じ相乗効果を示さないことが明らかにされた（図６）。このことは、ＨＣＱの上述の好都合な特性がクロロキン関連化合物の一般的特性ではないことを示している。
【０１１１】
さらに、ＨＣＱおよび抗ウイルス剤（例えば、ボセプレビル（プロテアーゼ阻害剤）およびＮＭ−１０７（ＨＣＶポリメラーゼ阻害剤）など）の例示的な組合せは相乗効果を示すことが明らかにされている。
【０１１２】
細胞が約６μＭの濃度のＨＣＱにより処理されたとき、最高の相乗作用が達成されたことが示されている（例えば、図３Ａ〜図３Ｂおよび図１３Ａ〜図１４Ｂを参照のこと）。この用量は、公認の換算係数を使用した場合、体重が７０Ｋｇである平均的なヒトについての約９１０ｍｇの用量に言い換えることができる。
【０１１３】
ＨＣＱの作用機構を探求する一方で、本発明者らは、ＨＣＱ処理が、いくつかのＨＣＶ誘導によるＮＦ−κＢシグナル伝達、ＥＲストレス、自食作用およびｐ５３シグナル伝達経路の発現レベルを効果的に低下させることを明らかにしている。加えて、ＩＦＮおよびＨＣＱがこれらのＨＣＶ誘導による経路に対する類似した抑制効果を有することが明らかにされている。特定の理論にとらわれることなく、これらの発見は、ＨＣＶ活性化生物学的経路のＨＣＱ阻害的調節が、ＨＣＶの根絶を効率的に誘発する上流での抗ウイルス的事象の結果を反映するものであることを示唆している。
【０１１４】
予備分析では、ＨＣＱ処理が下記のことを同時にまねくことが明らかにされた：１）ＨＣＶ感染細胞の数の用量依存的減少（図７）、２）ＨＣＶのＮＳ５Ａタンパク質およびコアタンパク質のレベルの用量依存的減少（図８）、および、３）特に処理開始後２４時間でのいくつかのＮＦ−κＢ関連遺伝子についてのｍＲＮＡレベルの低下（表２〜表３）。ＮＳ５Ａタンパク質およびＨＣＶコアタンパク質レベルのＨＣＱ誘導による低下は、いくつかのＮＦ−κＢ関連遺伝子（例えば、ＲＥＬＢ、ＮＦＫＢ２、ＣＸＣＬ５およびＣＹＲ６１）の発現において認められる低下と一致している。
【０１１５】
興味深いことに、ＮＳ５Ａタンパク質およびＨＣＶコアタンパク質は、ＮＦ−κＢの活性化を、異なったシグナル伝達経路を介して、すなわち、小胞体（ＥＲ）ストレスから生じるＣａ２＋の乱れを介して、または、ＴＮＦシグナル伝達を介してそれぞれ引き起こし得ることが以前に報告されている。他の研究では、ＨＣＶ感染におけるＮＦ−κＢ経路活性化のいくつかの証拠がインビトロおよびインビボの両方で明らかにされている。したがって、ＨＣＶによるＮＦ−κＢの構成的活性化は、ＨＣＶ感染に伴う肝細胞癌を含む慢性肝臓疾患に関わっている可能性がある。
【０１１６】
ＪＦＨ１  ＨＣＶｃｃモデル（生理学的ＨＣＶ感染の正確なモデル）に対して行われたさらなる遺伝子発現解析では、ＨＣＶ感染は、予想されるように、いくつかのＮＦ−κＢ関連遺伝子の発現を増大させることが示された。そのうえ、ＨＣＶレプリコンモデルを使用する以前の発見と一致して、ＨＣＱによる処理は、これらのＨＣＶ誘導によるＮＦ−κＢ関連遺伝子の発現、例えば、ＲＥＬＢ、ＣＹＲ６１、ＣＸＣＬ５（これらは、ＨＣＶレプリコン細胞のＨＣＱ処理によって抑制されることが以前に見出された）、ＢＣＬ３、ＣＹ１ＰＡ１、ＮＦＫＢＩＡ、ＮＦＫＢＩＢ、ＮＦＫＢＩＥおよびＮＫＩＲＡＳ１などの発現をひどく低下させることが明らかにされた（図９Ｂおよび図１０）。まとめると、これらの発見は、ＨＣＱがＮＦ−κＢ関連遺伝子の発現レベルのＨＣＶ誘導による増大を打ち消すことを明らかにする。そのうえ、クロロキン処理後に得られる発現比と比較した場合、ＨＣＱは、ＨＣＶにより誘導されるこの増大を打ち消すことにおいてクロロキンよりも効果的であることが示された。
【０１１７】
加えて、包括的な遺伝子発現プロファイリングでは、ＨＣＶ感染により、ＥＲストレス／ＵＰＲ（小胞体ストレス応答）およびｐ５３シグナル伝達のアポトーシス細胞死、同様に、細胞周期および脂質代謝の経路を含めて、いくつかの他の経路が誘導されたことが明らかにされている（図９Ｂ）。興味深いことに、ＮＦ−κＢと同様に、すべてのこれらのプロセスについて、ＨＣＱ処理により、プロセスが、特に感染後４８時間および処置後において、ＨＣＶ感染がプロセスを調節したのとは逆の方法で調節された（図９Ａ〜図９Ｃ）。
【０１１８】
１１８個の遺伝子は、下記の両条件のもとでは、すなわち、ＨＣＶ感染と、ＨＣＱおよびヒドロキシクロロキンによる処理とのもとでは、４８時間後において少なくとも２倍の変化を被ることが明らかにされた。これらの遺伝子のほとんどは、発現がＨＣＶによってアップレギュレーションされ、ＨＣＱ処理によってダウンレギュレーションされる遺伝子であることが明らかにされた（図９Ｃおよび表５）。ＨＣＶレプリコンモデル（表２）およびＨＣＶｃｃモデル（表４〜表５）の両方を使用して得られる結果は、ＨＣＱが主として転写抑制因子として作用することを示しており、アップレギュレーションよりもかなり多くのダウンレギュレーションが認められることと一致していた。
【０１１９】
上述の１１８個の遺伝子のうち、５７個の遺伝子は、上述の２つの試験条件下において示差的に発現されたという点が特に顕著であることが見出されたか、または、ＰｒｅｄｉｃｔＳｅａｒｃｈ（商標）を使用して行われたテキストマイニングに基づく分析に従って顕著な遺伝子に機能的に関連づけられることが見出された（表６）。
【０１２０】
得られた結果に基づいて、ＪＦＨ１により誘導されるＨｕｈ７遺伝子発現調節に対するＨＣＱ処理の阻害効果を示す遺伝子調節ネットワークが構築された（図１１）。図１１に示されるように、ＨＣＱ処理の顕著な結果は、（上流ＮＦ−κＢ、ｐ５３およびＥＲストレス／ＵＰＲシグナル伝達の阻害の結果としての）自食作用経路の阻害であり、これにより、ＨＣＶの複製が妨害される。
【０１２１】
上記の発見は、ＨＣＶ関連疾患（例えば、ＨＣＶ感染など）の処置が、ＨＣＱを、ＨＣＶ誘導自食作用の阻害に十分な量で利用しながら有益に行われ得ることを示唆する。
【０１２２】
自食作用は、ＨＣＶ遺伝子型に無関係な経路であるので、これらの発見はさらに、他の点で現行治療に対する低い応答性を特徴とする抵抗性ＨＣＶ遺伝子型の処置におけるＨＣＱの役割を示している。そのうえ、これらの発見は、ＨＣＱおよび抗ウイルス剤（複数も可）の相加効果およびさらには相乗効果による、ならびに／または、ＨＣＶにより誘導される経路（例えば、ＨＣＶ誘導による自食作用など）の阻害によると推定されるが、ＨＣＶを抗ウイルス剤に対して感作することによる、抗ウイルス剤を用いた併用ＨＣＶ処置におけるＨＣＱについての役割を示唆している。
【０１２３】
ＨＣＱは、クロロキンのより低毒性の誘導体として知られていることはさらに特筆される。したがって、クロロキンと比較して、より高用量のＨＣＱを使用することができる。
【０１２４】
本発明のいくつかの実施形態の一実施態様によれば、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）関連疾患を処置の必要のある対象において処置する方法が提供される。本方法は、本発明のこの実施態様によれば、治療有効量のヒドロキシクロロキン（ＨＣＱ）またはその医薬的に許容され得る塩を対象に投与し（ただし、ＨＣＱの治療有効量は、ＨＣＶ誘導による自食作用を対象において阻害するのに十分な量である）、それにより、ＨＣＶ関連疾患を処置することによって行われる。
【０１２５】
本明細書全体で使用されるように、用語「Ｃ型肝炎ウイルス」は、ＨＣＶと略記され、ヒトにおけるＣ型肝炎の原因である、フラビウイルス科の、包膜プラス−センス型の一本鎖ＲＮＡウイルスであり、別途示されない限り、このウイルスのすべての遺伝子型を包含する。
【０１２６】
現在知られているＨＣＶ遺伝子型には、１型、２型、３型、４型、５型および６型の遺伝子型が含まれ、これらのうち、１型および４型の遺伝子型は既存の処置（例えば、インターフェロンおよびリバビリン）に対して比較的非応答性であり、これに対して、２型、３型、５型および６型の遺伝子型は処置に対してより応答性である。
【０１２７】
いくつかの実施形態において、ＨＣＶ関連疾患は、本明細書中で定義されるように、ＨＣＶ（ＨＣＶのすべての遺伝子型を含む）によって引き起こされる感染である。
【０１２８】
いくつかの実施形態において、ＨＣＶによって引き起こされる感染は急性感染であり、これは、ＨＣＶ感染のあらゆる急性期（例えば、感染後の最初の６ヶ月）を包含し、また、本明細書中およびこの分野では「急性ＨＣＶ感染」とも呼ばれる。
【０１２９】
したがって、「急性ＨＣＶ感染」は、排除されてしまった感染、すなわち、ウイルス複製がなくなっており、ウイルスが根絶されている場合も関連している。
【０１３０】
ウイルス複製が急性期のうちに首尾よく阻害されないならば、そのＨＣＶ感染は慢性感染と見なされる。
【０１３１】
いくつかの実施形態において、ＨＣＶによって引き起こされる感染は慢性感染であり、また、本明細書中およびこの分野では「慢性ＨＣＶ感染」とも呼ばれる。
【０１３２】
いくつかの実施形態において、ＨＣＶ感染を処置することは、急性ＨＣＶ感染を処置すること、および、急性ＨＣＶ感染が慢性ＨＣＶ感染と見なされることを防止することを包含する。
【０１３３】
本明細書全体を通して使用されるように、「ＨＣＶ関連疾患」という表現はまた、ＨＣＶ感染に伴うすべての疾患または障害を包含し、これには、急性ＨＣＶ感染に伴う症状、例えば、食欲減退、疲労、腹痛、黄疸、かゆみおよびインフルエンザ様症状などの症状、同様にまた、慢性ＨＣＶ感染に伴う症状、例えば、疲労、インフルエンザ様症状、関節痛、関節炎、多発性関節痛、皮膚白血球破砕性血管炎、神経障害、かゆみ、睡眠障害、食欲変化、悪心、うつ状態、肝硬変、腹水症、紫斑および／または出血傾向、静脈瘤、黄疸、肝性脳症、晩発性皮膚ポルフィリン症、クリオグロブリン血症、糸球体腎炎（例えば、膜性増殖性糸球体腎炎）、血小板減少症、扁平苔癬、真性糖尿病およびリンパ増殖性障害などの症状が含まれる。
【０１３４】
いくつかのタイプのＨＣＶ関連疾患は、比較的簡単な抗炎症治療によって処置され得る炎症状態（例えば、関節炎）である。しかしながら、他のタイプのＨＣＶ関連疾患は、処置することがより困難な場合がある。
【０１３５】
いくつかの実施形態において、「ＨＣＶ関連疾患」という表現は、上記炎症状態以外の（例えば、関節炎以外の）ＨＣＶ疾患を示す。
【０１３６】
加えて、抗ウイルス剤に対して抵抗性（抗ウイルス剤抵抗性）のＨＣＶ遺伝子型によって引き起こされる疾患は、首尾よく処置することが特に困難であり得る。
【０１３７】
現在知られている抵抗性ＨＣＶ遺伝子型には、遺伝子型１のＨＣＶおよび遺伝子型４のＨＣＶが含まれる。これらの遺伝子型は、ＨＣＶ関連疾患の処置に一般に使用される抗ウイルス剤に対する抵抗性を示すことがこの分野では知られている。
【０１３８】
いくつかの実施形態において、ＨＣＶ関連疾患は抗ウイルス剤抵抗性のＨＣＶ遺伝子型によって引き起こされる。
【０１３９】
抵抗性は生物にとって先天的であり得るか、または（例えば、抗ウイルス剤への暴露の結果、抗ウイルス剤に対して抵抗性である突然変異体遺伝子型について選抜される）後天的であり得る。抵抗性が抗ウイルス剤暴露時に獲得されるとき、この抵抗性はその抗ウイルス剤（および、場合により、非常に類似する抗ウイルス剤）に対して特異的であり得るか、または、獲得された抵抗性は、生物が暴露を受けなかった抗ウイルス剤を含めて、様々な抗ウイルス剤に対するものであり得る。
【０１４０】
本明細書中で使用される場合、「対象」は、本明細書中に記載されたＨＣＶ関連疾患に苦しむか、または、苦しんでいる疑いがあり、かつ／あるいは、本明細書中に記載される処置方法が所望される哺乳動物を包含するもので、これには、ヒト、ウシ、ウマ、イヌ、ネズミおよびネコである対象が含まれる。いくつかの実施形態において、対象はヒトである。
【０１４１】
いくつかの実施形態において、「（処置）の必要性のある対象」は、ＨＣＶ関連疾患を有するとして診断された対象である。ＨＣＶ関連疾患を明らかにすることは、ＨＣＶに対する抗体を検出するための血液検査、および、ＨＣＶの存在を検出するための分子的核酸検査（例えば、ポリメラーゼ連鎖反応法、転写伝達増幅法および／または分岐ＤＮＡ法）によって行うことができる。場合により、抗体検査および核酸検査の両方が、ＨＣＶ感染の存在を確認するために使用される。特定のＨＣＶ関連疾患は、どの症状が対象に存在するかにより、標準的な方法（例えば、身体検査、肝機能検査）を使用して医師によって決定され得る。
【０１４２】
いくつかの実施形態において、「（処置）の必要性のある対象」は、ＨＣＶ関連疾患（例えば、慢性ＨＣＶ感染など）に苦しむ対象であって、抗ウイルス剤または抗ウイルス剤の組合せにより処置されたが、処置に対して非応答性であるとして、または、処置に対して非寛容であるとして特定された対象である。
【０１４３】
本明細書中で使用される場合、用語「非応答性（の）」は、ＨＣＶ関連疾患の進行を止めるか、または、実質的に阻害するか、または、遅らせるか、または、覆すか、あるいは、ＨＣＶ関連疾患の臨床症状を実質的に改善するために、ＨＣＶに対してこの分野で使用される抗ウイルス治療（例えば、リバビリンとの併用でのＰＥＧ化インターフェロン−α−２ａまたはＰＥＧ化インターフェロン−α−２ｂによる処置）が不首尾であること、また、場合により、２つの上記抗ウイルス治療が不首尾であることを示す。
【０１４４】
いくつかの実施形態において、処置に対する非応答性は、治療に対して抵抗性であるＨＣＶ（例えば、ＨＣＶ遺伝子型）の結果である。他方、または、加えて、非応答性は対象に起因する（例えば、対象の生理機能、対象による順守が不十分であること）。いくつかの実施形態においては、非応答性の理由が不明である。
【０１４５】
本明細書中で使用される場合、用語「非寛容（の）」は、処置に起因すると医師によって判断される、処置された対象における１つまたは複数の有害な影響が現れることであり、この場合、そのような有害な影響は、（例えば、抗ウイルス治療の用量を減少させることによって、および／または、抗ウイルス治療を換えることによって）処置を終了または変更することを必要とするほどの重篤なものである。
【０１４６】
対象は処置に対して非応答性かつ非寛容であり得ることを理解しなければならない。したがって、例えば、対象は、この分野で使用される比較的高用量の抗ウイルス剤（例えば、様々な用量のＰＥＧ化インターフェロン−αおよび／またはリバビリン）に対して非寛容であるかもしれず、一方で、この分野で使用される比較的低用量の抗ウイルス剤に対してもまた非応答性であり、その結果、対象は抗ウイルス剤のすべての可能な用量に対して非寛容および／または非応答性となる。
【０１４７】
本明細書中で使用され、また、この分野で知られているように、用語「自食作用」は、リソソーム機構による細胞自身の成分の分解を伴う細胞生物学におけるプロセス（これはこの分野では「オートファゴサイトーシス」としてもまた知られている）を表す。
【０１４８】
表現「ＨＣＶ誘導（による）自食作用」は、ＨＣＶによる細胞の感染に起因する細胞における自食作用を表す。
【０１４９】
本明細書中で使用される場合、「ＨＣＶ誘導（による）自食作用の阻害に十分な量」および「ＨＣＶ誘導（による）自食作用を阻害する量」なる表現は互換的に使用され、ＨＣＶ誘導自食作用を少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、もしくは少なくとも９０％低下させるか、または、ＨＣＶ誘導自食作用を完全に無効にする（すなわち、自食作用のレベルを正常なレベルに回復させる）ＨＣＱまたはその塩の量を包含する。１０％〜１００％の間のいかなる整数でも、この事項では包含される。
【０１５０】
ＨＣＶ誘導による自食作用、同様にまた、ＨＣＶ誘導による自食作用の阻害は、例えば、感染細胞では生じるが、対応する非感染細胞では生じない自食作用または自食作用関連プロセスを特定することによって決定され得る。
【０１５１】
いくつかの実施形態において、ＨＣＶ誘導による自食作用は、自食作用に伴う１つまたは複数のタンパク質のレベルの増大を特徴とする。場合により、この増大は、標準的な技術（例えば、マイクロアレイ解析、ＲＴ−ＰＣＲおよび／またはＮａｎｏＳｔｒｉｎｇ（商標）遺伝子発現解析）を使用して測定される、上記の１つまたは複数のタンパク質の発現の少なくとも１００％の増大を特徴とする。ＨＣＶ誘導による自食作用に伴う例示的なタンパク質には、ＨＣＶ感染細胞においてアップレギュレーションされることが見出されたＵＬＫ１、ＡＭＢＲＡ１、ＡＴＧ２Ａ、ＧＡＢＡＲＡＰＬ１、ＦＯＸ０３、ＳＱＳＴＭ１、ＰＩＫ３Ｃ３およびＭＡＰ１ＬＣ３Ｂが含まれるが、これらに限定されない。
【０１５２】
いくつかの実施形態において、ＨＣＶ誘導による自食作用は、上述タンパク質のうちの少なくとも１つ、場合により少なくとも２つ、場合により少なくとも３つ、場合により少なくとも４つ、場合により少なくとも５つ、場合により少なくとも６つ、場合により少なくとも７つ、また、場合により８つすべてのレベルの増大（例えば、少なくとも１００％の増大）を特徴とする。
【０１５３】
いくつかの実施形態において、ＨＣＶ誘導による自食作用の阻害（例えば、１０％〜１００％の間での阻害）は、上述タンパク質のうちの少なくとも１つ、場合により少なくとも２つ、場合により少なくとも３つ、場合により少なくとも４つ、場合により少なくとも５つ、場合により少なくとも６つ、場合により少なくとも７つ、また、場合により８つすべてのレベルの増大における（例えば、少なくとも１００％の）低下を特徴とする。したがって、例えば、タンパク質レベルにおけるＨＣＶ誘導による１００％の増大の、処置により誘導される９０％の低下により、非感染かつ非処理の細胞におけるレベルに対して１０％の増大がもたらされる。
【０１５４】
いくつかの実施形態において、自食作用は、Ｋｌｉｏｎｓｋｙら［Ａｕｔｏｐｈａｇｙ、２００８、４：１５１〜１７５］（これについては、出典明示により本明細書中で援用する）に記載されるように、末梢組織における動静脈アミノ酸交換速度を測定することによって求められる。
【０１５５】
本明細書中で使用される場合、用語「ヒドロキシクロロキン」には、ラセミ体ヒドロキシクロロキン（これは、米国特許第２５４６６５８号に開示された２−［［４−［（７−クロロ−４−キノリニル）アミノ］ペンチル］エチルアミノ］エタノールである）、あるいは、米国特許第５３１４８９４号に開示された単一鏡像体の「（Ｓ）−（＋）ヒドロキシクロロキン」または「（Ｒ）−（−）ヒドロキシクロロキン」が含まれる。この用語は、ヒドロキシクロロキンの遊離形態またはその任意の医薬的に許容され得る塩（例えば、ヒドロキシクロロキン硫酸塩など）のどちらにも関連し得る。
【０１５６】
本明細書中において、用語「医薬的に許容され得る塩」は、親化合物の荷電化学種と、その対イオンとを示し、典型的には、投与化合物の生物学的活性および特性を取り消すことなく、親化合物の溶解特性を改変するために、かつ／または、親化合物による生物に対する何らかの著しい刺激を軽減するために使用される。医薬的に許容され得る塩の例には、限定されないが、アニオン（例えば、カルボン酸アニオンまたは硫酸アニオンなど）および／またはカチオン（例えば、アンモニウム、ナトリウムおよびカリウムなど、これらに限定されない）を含む塩が含まれる。好適な塩は、例えば、Ｂｉｒｇｅら［Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ、１９７７、６６：１〜１９］に記載されている。ヒドロキシクロロキンの医薬的に許容され得る塩の一例はヒドロキシクロロキン硫酸塩である。
【０１５７】
ヒドロキシクロロキン（ＨＣＱ）は現在、典型的には２００ｍｇまたは４００ｍｇの一日用量で、マラリア、紅斑性狼瘡、慢性関節リウマチ、ライム病後関節炎およびシェーグレン症候群の処置において使用される。
【０１５８】
クロロキンと比べて毒性が低いために、ＨＣＱの高いピークレベルが寛容できると見なされる。
【０１５９】
本明細書中で明らかにされるように、驚くべきことに、ＨＣＱは、自食作用に伴うＨＣＶ誘導プロセスを阻害し、かつ、上記プロセスの阻害においてクロロキンよりも効果的であり、また、抗ウイルス剤抵抗性ＨＣＶ遺伝子型のモデルにおいてもまた効果的であることが見出された。
【０１６０】
特定の理論によってとらわれることなく、ヒドロキシクロロキンは、ＨＣＶの複製を容易にするＨＣＶ誘導自食作用を阻害することによるＨＣＶ複製阻害において特に効果的であること、そして、ＨＣＱはそれにより、強い抗ウイルス効果をＨＣＶ感染対象において示し得ることが考えられる。
【０１６１】
本明細書中で使用される場合、用語「治療有効量」は、投与されたとき、処置されている状態の１つまたは複数の症状をある程度緩和する（単独または本明細書記載の化合物の組合せでの）本明細書記載の化合物の量を表す。
【０１６２】
本発明のいくつかの実施形態の関連において、「治療有効量」は、ＨＣＶ複製を根絶または低下させる量を表す。そのような量はまた、急性ＨＣＶ感染が慢性ＨＣＶ感染になることを防止する量として本明細書中では定義され得る。
【０１６３】
本明細書中に示されるように、本発明のこの実施態様の実施形態は、ＨＣＶ誘導による自食作用を阻害する量に関連する。そのような量は、例えば、ＨＣＶ感染対象における自食作用（例えば、本明細書記載）を所定量のＨＣＱの投与の前後で測定し、その結果、ＨＣＶ誘導自食作用の低下（例えば、本明細書記載の低下）が検出されるか否かを求めることによって決定され得る。
【０１６４】
いくつかの実施形態において、ＨＣＱまたはその塩の治療有効量は、１００ｍｇ／日と、２０００ｍｇ／日との間の範囲である（この範囲に含まれる整数はすべて含まれる）。
【０１６５】
いくつかの実施形態において、ＨＣＱまたはその塩の治療有効量は、１００ｍｇ／日である。
【０１６６】
いくつかの実施形態において、ＨＣＱまたはその塩の治療有効量は、２００ｍｇ／日である。
【０１６７】
いくつかの実施形態において、ＨＣＱまたはその塩の治療有効量は、３００ｍｇ／日である。
【０１６８】
いくつかの実施形態において、ＨＣＱまたはその塩の治療有効量は、４００ｍｇ／日である。
【０１６９】
いくつかの実施形態において、ＨＣＱまたはその塩の治療有効量は、５００ｍｇ／日である。
【０１７０】
いくつかの実施形態において、ＨＣＱまたはその塩の治療有効量は、６００ｍｇ／日である。
【０１７１】
いくつかの実施形態において、ＨＣＱまたはその塩の治療有効量は、７００ｍｇ／日である。
【０１７２】
いくつかの実施形態において、ＨＣＱまたはその塩の治療有効量は、８００ｍｇ／日である。
【０１７３】
いくつかの実施形態において、ＨＣＱまたはその塩の治療有効量は、９００ｍｇ／日である。
【０１７４】
いくつかの実施形態において、ＨＣＱまたはその塩の治療有効量は、１０００ｍｇ／日である。
【０１７５】
いくつかの実施形態において、ＨＣＱまたはその塩の治療有効量は、１１００ｍｇ／日である。
【０１７６】
いくつかの実施形態において、ＨＣＱまたはその塩の治療有効量は、１２００ｍｇ／日である。
【０１７７】
いくつかの実施形態において、ＨＣＱまたはその塩の治療有効量は、１３００ｍｇ／日である。
【０１７８】
いくつかの実施形態において、ＨＣＱまたはその塩の治療有効量は、１４００ｍｇ／日である。
【０１７９】
いくつかの実施形態において、ＨＣＱまたはその塩の治療有効量は、１５００ｍｇ／日である。
【０１８０】
いくつかの実施形態において、ＨＣＱまたはその塩の治療有効量は、１６００ｍｇ／日である。
【０１８１】
いくつかの実施形態において、ＨＣＱまたはその塩の治療有効量は、１７００ｍｇ／日である。
【０１８２】
いくつかの実施形態において、ＨＣＱまたはその塩の治療有効量は、１９００ｍｇ／日である。
【０１８３】
いくつかの実施形態において、ＨＣＱまたはその塩の治療有効量は、２０００ｍｇ／日である。
【０１８４】
いくつかの実施形態において、自食作用の阻害に十分なＨＣＱの量は、マラリア、紅斑性狼瘡、関節リウマチ、ライム病後関節炎およびシェーグレン症候群の処置において治療上有効であることが今日までに知られている量を含めて、また、ＨＣＶ感染の処置に有効であると見なされる量を含めて、現在知られている治療効果を発揮させるために要求されるＨＣＱの量よりも多い。
【０１８５】
いくつかの実施形態において、自食作用の阻害に十分なＨＣＱの量は、現在知られている治療効果を発揮させるために要求されるＨＣＱの量よりも少なくとも１０％高く、例えば、１０％〜約５０％、または、約１０％〜約１００％、または、さらには２００％高いものであり得る。
【０１８６】
いくつかの実施形態において、自食作用の阻害に十分なＨＣＱの量は、現在知られている治療効果を発揮させるために要求されるＨＣＱの量よりも２０％高い。
【０１８７】
いくつかの実施形態において、自食作用の阻害に十分なＨＣＱの量は、現在知られている治療効果を発揮させるために要求されるＨＣＱの量よりも３０％高い。
【０１８８】
いくつかの実施形態において、自食作用の阻害に十分なＨＣＱの量は、現在知られている治療効果を発揮させるために要求されるＨＣＱの量よりも４０％高い。
【０１８９】
いくつかの実施形態において、自食作用の阻害に十分なＨＣＱの量は、現在知られている治療効果を発揮させるために要求されるＨＣＱの量よりも５０％高い。
【０１９０】
いくつかの実施形態において、自食作用の阻害に十分なＨＣＱの量は、現在知られている治療効果を発揮させるために要求されるＨＣＱの量よりも６０％高い。
【０１９１】
いくつかの実施形態において、自食作用の阻害に十分なＨＣＱの量は、現在知られている治療効果を発揮させるために要求されるＨＣＱの量よりも７０％高い。
【０１９２】
いくつかの実施形態において、自食作用の阻害に十分なＨＣＱの量は、現在知られている治療効果を発揮させるために要求されるＨＣＱの量よりも８０％高い。
【０１９３】
いくつかの実施形態において、自食作用の阻害に十分なＨＣＱの量は、現在知られている治療効果を発揮させるために要求されるＨＣＱの量よりも９０％高い。
【０１９４】
いくつかの実施形態において、自食作用の阻害に十分なＨＣＱの量は、現在知られている治療効果を発揮させるために要求されるＨＣＱの量よりも１００％高い。
【０１９５】
いくつかの実施形態において、自食作用の阻害に十分なＨＣＱの量は、現在知られている治療効果を発揮させるために要求されるＨＣＱの量よりも１１０％高い。
【０１９６】
いくつかの実施形態において、自食作用の阻害に十分なＨＣＱの量は、現在知られている治療効果を発揮させるために要求されるＨＣＱの量よりも１２０％高い。
【０１９７】
いくつかの実施形態において、自食作用の阻害に十分なＨＣＱの量は、現在知られている治療効果を発揮させるために要求されるＨＣＱの量よりも１５０％高い。
【０１９８】
いくつかの実施形態において、自食作用の阻害に十分なＨＣＱの量は、現在知られている治療効果を発揮させるために要求されるＨＣＱの量よりも２００％高い。
【０１９９】
いくつかの実施形態において、自食作用の阻害に十分なＨＣＱの量は、現在知られている治療効果を発揮させるために要求されるＨＣＱの量よりも３００％高い。
【０２００】
いくつかの実施形態において、自食作用の阻害に十分なＨＣＱの量は、現在知られている治療効果を発揮させるために要求されるＨＣＱの量よりも４００％高い。
【０２０１】
いくつかの実施形態において、自食作用の阻害に十分なＨＣＱの量は、現在知られている治療効果を発揮させるために要求されるＨＣＱの量よりも５００％高い。
【０２０２】
いくつかの実施形態において、ＨＣＶ自食作用の阻害に十分なＨＣＱの量は、少なくとも４００ｍｇ／日である。
【０２０３】
いくつかの実施形態において、ＨＣＶ自食作用の阻害に十分なＨＣＱの量は、少なくとも５００ｍｇ／日である。
【０２０４】
いくつかの実施形態において、ＨＣＶ自食作用の阻害に十分なＨＣＱの量は、少なくとも６００ｍｇ／日である。
【０２０５】
いくつかの実施形態において、ＨＣＶ自食作用の阻害に十分なＨＣＱの量は、少なくとも７００ｍｇ／日である。
【０２０６】
いくつかの実施形態において、ＨＣＶ自食作用の阻害に十分なＨＣＱの量は、少なくとも８００ｍｇ／日である。
【０２０７】
いくつかの実施形態において、ＨＣＶ自食作用の阻害に十分なＨＣＱの量は、少なくとも９００ｍｇ／日である。
【０２０８】
いくつかの実施形態において、ＨＣＶ自食作用の阻害に十分なＨＣＱの量は、少なくとも１０００ｍｇ／日である。
【０２０９】
いくつかの実施形態において、ＨＣＶ自食作用の阻害に十分なＨＣＱの量は、少なくとも５００ｍｇ〜１５００ｍｇ／日である。
【０２１０】
いくつかの実施形態において、ＨＣＶ自食作用の阻害に十分なＨＣＱの量は、少なくとも６００ｍｇ〜１２００ｍｇ／日である。
【０２１１】
いくつかの実施形態において、ＨＣＶ自食作用の阻害に十分なＨＣＱの量は、少なくとも８００ｍｇ／〜１２００ｍｇ／日である。
【０２１２】
いくつかの実施形態において、ＨＣＶ自食作用の阻害に十分なＨＣＱの量は、少なくとも６００ｍｇ／〜１０００ｍｇ／日である。
【０２１３】
いくつかの実施形態において、ＨＣＶ自食作用の阻害に十分なＨＣＱの量は、少なくとも８００ｍｇ／〜１０００ｍｇ／日である。
【０２１４】
いくつかの実施形態において、ＨＣＶ自食作用の阻害に十分なＨＣＱの量は、少なくとも９００ｍｇ／〜１１００ｍｇ／日である。
【０２１５】
いくつかの実施形態において、ＨＣＶ自食作用の阻害に十分なＨＣＱの量は、少なくとも８５０ｍｇ〜９５０ｍｇ／日である。
【０２１６】
上記で示された範囲の間における整数はすべて包含される。
【０２１７】
本明細書中を通して、ある量のＨＣＱが示される場合は常に、これは、本明細書記載の量と同じＨＣＱの医薬的に許容され得る塩の量、または、ＨＣＱの医薬的に許容され得る塩の当モル量を包含する。
【０２１８】
本明細書中を通して、ＨＣＱまたはその塩の量が１日あたりの量として示される場合は常に、この量を、１日に１回、２回、３回、また、さらには４回で投与することができる。
【０２１９】
いくつかの実施形態において、方法は、治療有効量のＨＣＱまたはその塩を１日に１回投与することによって行われる。
【０２２０】
いくつかの実施形態において、方法は、治療有効量のＨＣＱまたはその塩を１日に１回投与することによって行われる。
【０２２１】
１日に２回以上（例えば、１日に２回または３回）投与されるとき、上記の量はそれぞれの投与回数に応じて分けられる。
【０２２２】
例えば、方法が、１日あたり９００ｍｇである量のＨＣＱを投与することによって行われ、１日２回の投与を含む実施形態では、４５０ｍｇのＨＣＱがそれぞれの投与において使用される。別法として、１回の投与は４００ｍｇであり、もう１回の投与は５００ｍｇである。そのような１日用量が１日に３回投与されることになるならば、一例として、３００ｍｇのＨＣＱを各投与時に使用することができる。
【０２２３】
方法が、１日あたり６００ｍｇである量のＨＣＱを投与することによって行われる実施形態では、３００ｍｇのＨＣＱが１日２回の投与のそれぞれにおいて使用される。別法として、１回の投与は２００ｍｇであり、もう１回の投与は４００ｍｇである。別法として、２００ｍｇのＨＣＱを１日３回の投与のそれぞれにおいて使用することができる。
【０２２４】
方法が、１日あたり８００ｍｇである量のＨＣＱを投与することによって行われ、１日２回の投与を含む実施形態では、４００ｍｇのＨＣＱがそれぞれの投与において使用される。別法として、１回の投与は２００ｍｇであり、もう１回の投与は６００ｍｇである。別法として、２００ｍｇのＨＣＱを１日４回の投与のそれぞれにおいて使用することができる。
【０２２５】
方法が、１日あたり１０００ｍｇである量のＨＣＱを投与することによって行われ、１日２回の投与を含む実施形態では、５００ｍｇのＨＣＱがそれぞれの投与において使用される。別法として、１回の投与は４００ｍｇであり、もう１回の投与は６００ｍｇである。別法として、方法は、１日３回の投与を含み、例えば、そのうち２回は４００ｍｇであり、１回は２００ｍｇである。別法として、方法は、１日４回の投与を含み、例えば、それぞれの投与は２５０ｍｇである。
【０２２６】
本明細書記載の方法は、本明細書中に記載されるように、ＨＣＱまたはその塩を投与することによってＨＣＶ関連疾患を処置するために利用され得る。しかしながら、ＨＣＶ関連疾患の処置におけるＨＣＱの治療効果、および、ＨＣＶ誘導による自食作用の阻害におけるＨＣＱの効果の一方または両方を、ＨＣＱまたはその塩が１つまたは複数の抗ウイルス剤と併用される併用療法においてさらに利用することができる。
【０２２７】
本明細書中において明らかにされるように、そのような併用療法では、本明細書中下記においてさらに詳しく記載されるように、両薬剤によって示される相加的な治療効果が少なくとももたらされ、また、いくつかの実施形態においては、相乗的な治療効果がもたらされる。
【０２２８】
いくつかの実施形態において、そのような併用療法では、抗ウイルス剤の効果が、ＨＣＶ誘導自食作用の阻害を介して高められる。
【０２２９】
特定の理論によってとらわれることなく、様々なＨＣＶモデルにおいて本明細書中で立証されたアップレギュレーションされた自食作用は抗ウイルス剤の治療効果を低下させ、したがって、ＨＣＶ誘導自食作用の阻害は、抗ウイルス剤の治療効果を増大させ、かつ、さらには少なくともいくつかの場合には、ＨＣＶを抗ウイルス剤に対して感作すると見なすことさえできることが示唆されている。
【０２３０】
したがって、いくつかの実施形態において、本明細書中に記載される方法はさらに、本明細書中上記で示される量でのＨＣＱまたはその塩と、治療有効量の抗ウイルス剤とを対象に共投与することによって行われる。
【０２３１】
本明細書中において、用語「抗ウイルス剤」は、ウイルス（具体的にはＨＣＶ）に対して活性である活性化合物または活性化合物の混合物のすべてを包含し、リバビリンならびにその誘導体およびプロドラッグ（例えば、ビラミジン）；各種インターフェロン（例えば、インターフェロン−α）；ウイルスプロテアーゼ阻害剤（例えば、ボセプレビル、ＳＣＨ５０３０３４、テラプレビル、ＩＴＭＮ  Ｂ、ＢＩＬＮ２０６１、ＳＣＨ６）；ＮＳ４Ａ阻害剤（例えば、ＧＳ−９１３２）；ＮＳ５Ａ阻害剤；ウイルスポリメラーゼ阻害剤、これには、ヌクレオシド系および非ヌクレオシド系のポリメラーゼ阻害剤（例えば、ＮＭ−１０７およびそのプロドラッグのバロピシタビン（ＮＭ−２８３）、Ｒ１６２６／Ｒ１４７９、ＨＣＶ−７９６、ＢＩＬＢ１９４１、Ｒ７１２８／ＰＳＩ６１３０、ＧＳＫ６２５４３３、Ａ−８４８８３７、ＢＣＸ−４６７８、ＧＬ５９７２８、ＧＬ６０６６７、ＮＶ−００８、ＨＣＶ−０８６、Ｒ８０３、ＪＴＫ００３、ＸＴＬ−２１２５）が含まれる；シクロフィリンＢ阻害剤（例えば、アリスポリビル（ＤＥＢＩＯ−０２５）、ＮＩＭ８１１）；ヘリカーゼ阻害剤（例えば、ＱＵ６６５）；グリコシル化阻害剤（例えば、セルゴシビル（ＭＸ−３２５３））；抗リン脂質抗体（例えば、バビツキシマブ）；ならびにそれらの任意の組合せを包含するが、これらに限定されない。
【０２３２】
用語「抗ウイルス剤」は、本明細書中で使用される場合、本明細書中に記載される例示的薬剤のいずれかのプロドラッグ、医薬的に許容され得る塩、水和物、溶媒和物および医薬活性誘導体のすべてを包含する。
【０２３３】
本発明の実施形態による使用に好適である抗ウイルス剤の例には、下記のものが含まれる：
ＰＥＧ化インターフェロンアルファ−２ａ（例えば、ＰＥＧＡＳＹＳ（登録商標））；インターフェロンアルファコン−１（例えば、ＩＮＦＥＲＧＥＮ（登録商標））；天然インターフェロン（例えば、ＯＭＮＩＦＥＲＯＮ（登録商標））；ＡＬＢＵＦＥＲＯＮ（登録商標）；インターフェロンベータ−１ａ（例えば、ＲＥＢＩＦ（登録商標））；オメガインターフェロン（ＢｉｏＭｅｄｉｃｉｎｅから入手可能）；経口用インターフェロンアルファ（Ａｍａｒｉｌｌｏ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓから入手可能）；インターフェロンガンマ−１ｂ（ＩｎｔｅｒＭｕｎｅから入手可能）；ＩＰ−５０１（Ｉｎｔｅｒｎｅｕｒｏｎから入手可能）；メリメドジブ（Ｍｅｒｉｍｅｄｏｄｉｂ）  ＶＸ−４９７（Ｖｅｒｔｅｘ）；アマンタジン；ＩＤＮ−６５５６（Ｉｄｕｎ  Ｐｈａｒｍａ．）；ＸＴＬ−００２（ＸＴＬ）；ＨＣＶ／ＭＦ５９（Ｃｈｉｒｏｎ）；Ｃｉｖａｃｉｒ（ＮＡＢＩ）；ビラミジン（ＩＣＮ）；チモシンアルファ−１（例えば、ＺＡＤＡＸＩＮ）（Ｓｃｉ  Ｃｌｏｎｅ）；ヒスタミン二塩酸塩（ＣＥＰＬＥＮＥ）（Ｍａｘｉｍ）；ＶＸ９５０／ＬＹ５７０３１０（Ｖｅｒｔｅｘ／Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ）；ＩＳＩＳ１４８０３（Ｉｓｉｓ）；ＩＤＮ−６５５６（Ｉｄｕｎ  Ｐｈａｒｍａ．）；ＪＴＫ００３（ＡＫＲＯＳ  Ｐｈａｒｍａ）；タルバシン（Ｐｅｒｅｇｒｉｎｅ）；ＨＣＶ−７９６（ＶｉｒｏＰｈａｒｍａ）；ＣＨ−６（Ｓｃｈｅｒｉｎｇ）；ＡＮＡ９７１（ＡＮＡＤＹＳ）；ＡＮＡ２４５（ＡＮＡＤＹＳ）；ＣＰＧ１０１０１（ＡＣＴＩＬＯＮ）（Ｃｏｌｅｙ）；リツキシマブ；バロピシタビン；ＨｅｐＸ（商標）−Ｃ抗体（ＸＴＬ）；ＩＣ４１（Ｉｎｔｅｒｃｅｌｌ）；Ｍｅｄｕｓａ  Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ（Ｆｌａｍｅｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）；Ｅ−１（Ｉｎｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ）；Ｍｕｌｔｉｆｅｒｏｎ（Ｖｉｒａｇｅｎ）；およびＢＩＬＮ２０６１（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ−ｍａｎｎｈｅｉｍ）。
【０２３４】
いくつかの実施形態において、抗ウイルス剤は、本明細書中で定義されるように、そのプロドラッグを含めて、インターフェロン−αである。
【０２３５】
いくつかの実施形態において、抗ウイルス剤はリバビリンまたはそのプロドラッグ（例えば、ビラミジン）である。
【０２３６】
いくつかの実施形態において、抗ウイルス剤はボセプレビルまたはそのプロドラッグである。
【０２３７】
いくつかの実施形態において、抗ウイルス剤はテラプレビルである。
【０２３８】
いくつかの実施形態において、抗ウイルス剤はアリスポリビルである。
【０２３９】
いくつかの実施形態において、抗ウイルス剤はＮＭ−１０７またはそのプロドラッグである。
【０２４０】
用語「プロドラッグ」は、生体内で活性化合物（活性親薬物）に変換される薬剤を示す。プロドラッグは典型的には、親薬物の投与を容易にするために有用である。プロドラッグは、例えば、親薬物とは違って、経口投与により生物学的利用が可能となる場合がある。プロドラッグはまた、医薬組成物において親薬物と比較してすぐれた溶解性を有することができる。プロドラッグはまた、活性化合物の持続放出を生体内で達成するために使用されることが多い。
【０２４１】
用語「溶媒和物」は、溶質（本発明の化合物）および溶媒によって形成される一定でない化学量論（例えば、２、３、４、５、６など）の複合体（ただし、、溶媒は溶質の生物学的活性を妨げない）を示す。好適な溶媒には、例えば、エタノールおよび酢酸などが含まれる。
【０２４２】
用語「水和物」は、溶媒が水である、本明細書中上記で定義された溶媒和物を示す。
【０２４３】
本明細書中で使用される場合、用語「共投与する」は、２つの薬剤を処置期間中に対象に投与することを表す。この用語は、ＨＣＱまたはその塩を投与する前に、あるいは、その投与と同時に、あるいは、その投与の後で抗ウイルス剤を投与することを包含する。この用語はまた、２つの薬剤を同じ投与経路により、または、異なる投与経路により投与することを包含する。この用語はさらに、本明細書中下記でさらに詳述されるように、２つの薬剤を１つの医薬組成物に含めて投与すること、または、単１薬剤をそれぞれが含む２つの別々の医薬組成物で投与することを包含する。
【０２４４】
いくつかの実施形態において、共投与は、ＨＣＱの効力域および抗ウイルス剤の効力域が実質的に重なるように行われる。
【０２４５】
この分野では広く知られているように、薬剤の効力域は、様々な要因（例えば、全身吸収速度、最高血漿中濃度到達時間、および／または、クリアランス速度など）により異なる。
【０２４６】
１つの化合物がＨＣＶを第２の化合物に対して感作するとき、および／または、これらの化合物が相乗作用するときには、ＨＣＶ関連疾患に罹患する対象を、抗ウイルス効果を示す２つ以上の化合物で処置することにより、ウイルスに対して、２つ以上の抗ウイルス機構を介して同時に作用するようにすることが多くの場合に望ましい。
【０２４７】
２つ以上の薬剤の同時作用は、これらの薬剤がその効果を同じ時間域の中で示すならば、達成され得る。
【０２４８】
本明細書中で使用される場合、表現「効力域」は、活性な薬剤が、投与時に、所望される薬理学的効果（例えば、抗ウイルス効果など）を示す時間域を表す。別の言い方をすれば、この表現は、活性な薬剤の血漿中濃度がその最小薬理学的有効濃度と同等以上である期間を表す。
【０２４９】
活性な薬剤の効力域に関する表現「実質的に重なる」は、本明細書中に記載される２つの薬剤（例えば、ＨＣＱおよび抗ウイルス剤）を投与したときの特定の期間中に、両薬剤が、ある程度までは所望される薬理学的効果を示すこと、すなわち、各薬剤の血漿中濃度が薬剤の最小薬理学的有効濃度と同等以上であることを意味する。活性な薬剤の効力域は、例えば、５分間、１０分間、１５分間、２０分間、２５分間、３０分間、１時間、２時間、３時間、また、さらにはそれより長期間、重なることができる。活性な薬剤の効力域は、重なる期間中において、両薬剤が最大効力を示すように、または、一方の薬剤が最大効力を示し、他方の薬剤が部分的効力を示すように、または、両薬剤が部分的効力を示すように重なることができる。
【０２５０】
いくつかの実施形態において、抗ウイルス剤はインターフェロンである。
【０２５１】
いくつかの実施形態において、抗ウイルス剤は、インターフェロンと、本明細書中に記載される少なくとも１つの他の抗ウイルス剤（例えば、ＨＣＶ誘導による自食作用を阻害しない抗ウイルス剤）とを含む。場合により、ＨＣＱは、インターフェロンおよびリバビリンと共投与されてもよい。
【０２５２】
本明細書中で使用される場合、用語「インターフェロン」は、ウイルスの複製および細胞の増殖を阻害し、かつ、免疫応答を調節する高相同性の種特異的タンパク質の一群に含まれるタンパク質を示す。本明細書中において、用語「インターフェロン」は、天然に存在するタンパク質の誘導体を包含し、これには、限定されないが、天然に存在するインターフェロンの突然変異体形態、ならびに、天然に存在するインターフェロンの誘導体（例えば、コンジュゲート）、例えば、ＰＥＧ化インターフェロン（インターフェロンのポリエチレングリコール修飾コンジュゲート）、および、別のタンパク質に結合されたインターフェロン（例えば、融合タンパク質）などが含まれる。
【０２５３】
ヒトインターフェロンは、それらの細胞起源および抗原性に基づいて３つのクラスに分類される：インターフェロン−α（白血球）、インターフェロン−β（線維芽細胞）およびインターフェロン−γ（Ｂ細胞）、これらのそれぞれは、本明細書中で用語「インターフェロン」に包含される。各群の組換え形態が開発され、市販されている。各群におけるサブタイプは抗原性／構造上の特徴に基づいている。
【０２５４】
例示的な実施形態において、インターフェロンはインターフェロン−αである。
【０２５５】
本明細書中で使用される場合、用語「インターフェロン−α」はインターフェロンの１つのクラスを示す。異なったアミノ酸配列を有する少なくとも２４形態のインターフェロン−α（これらはＡ〜Ｈのサブタイプに分けられる）は、これらのペプチドをコードするＤＮＡを単離し、配列決定することによって同定されている。天然に存在するインターフェロン−αと、組換えインターフェロン−α（コンセンサス・インターフェロンを含む）との両方を本発明の実施において使用することができる。本明細書中に記載される本発明の実施形態に好適なインターフェロン−αには、組換えインターフェロンアルファ−２ｂ、例えば、ＩＮＴＲＯＮ（登録商標）−ＡインターフェロンおよびＶＩＲＡＦＥＲＯＮ（登録商標）など；組換えインターフェロンアルファ−２ａ、例えば、ＲＯＦＥＲＯＮ（登録商標）インターフェロンなど；組換えインターフェロンアルファ−２ｃ例えば、ＢＥＲＯＦＯＲ（登録商標）アルファ−２インターフェロンなど；インターフェロンアルファ−ｎ１、天然アルファインターフェロンの精製ブレンド、例えば、ＳＵＭＩＦＥＲＯＮ（登録商標）またはＷＥＬＬＦＥＲＯＮ（登録商標）のインターフェロンアルファ−ｎ１（ＩＮＳ）など；または、コンセンサス・アルファインターフェロン、例えば、米国特許第４８９７４７１号および同第４６９５６２３号に記載されたもの；または、インターフェロンアルファ−ｎ３、天然アルファインターフェロンの混合物、例えば、ＡＬＦＥＲＯＮ（登録商標）などが含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、インターフェロン−αは、インターフェロンアルファ−２ａおよびインターフェロンアルファ−２ｂからなる群から選択される。インターフェロンアルファ２ｂの製造は米国特許第４５３０９０１号に記載されている。
【０２５６】
用語「インターフェロン−α」はさらに、インターフェロン誘導体、例えば、インターフェロン−α、場合により、インターフェロンアルファ−２ａおよびインターフェロンアルファ−２ｂのＰＥＧ化類似体などを包含するものとする。本発明の実施形態において使用され得るＰＥＧ化インターフェロン−αには、例えば、ＰＥＧ化インターフェロンアルファ−２ａ、ＰＥＧ化インターフェロンアルファ−２ｂ、ＰＥＧ化コンセンサス・インターフェロンおよびＰＥＧ化精製インターフェロンアルファ生成物がある。ＰＥＧ化インターフェロンアルファ−２ａは、例えば、欧州特許第ＥＰ０５９３８６８号に記載され、例えば、ＰＥＧＡＳＹＳ（登録商標）（Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ  Ｒｏｃｈｅ）の商品名で市販されている。ＰＥＧ化インターフェロンアルファ−２ｂは、例えば、米国特許第５９０８６２１号および国際公開第９８／４８８４０号に記載され、例えば、ＰＥＧＩＮＴＲＯＮ（登録商標）Ａ（Ｓｃｈｅｒｉｎｇ  Ｐｌｏｕｇｈ）の商品名で市販されている。ＰＥＧ化コンセンサス・インターフェロンは国際公開第９６／１１９５３号に記載されている。用語「インターフェロン−α」はさらに、インターフェロン−αを水溶性ポリマーにカップリングすることによって調製され得る他のインターフェロン−αコンジュゲートを包含する。上記ポリマーの非限定的な例には、他のポリアルキレンオキシドホモポリマーが含まれ、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール、ポリオキシエチレン化ポリオール、それらのコポリマーおよびそれらのブロックコポリマーなどが含まれる。ポリアルキレンオキシド系ポリマーに対する代替として、事実上非抗原性の材料、例えば、デキストラン、ポリビニルピロリドン、ポリアクリルアミド、ポリビニルアルコールおよび炭水化物系ポリマーなどを使用することができる。そのようなインターフェロン−α−ポリマーコンジュゲートは、米国特許第４７６６１０６号、米国特許第４９１７８８８号、欧州特許出願第０２３６９８７号、欧州特許出願第０５１０３５６号、同第０５９３８６８号および同第０８０９９９６号（ＰＥＧ化インターフェロンアルファ−２ａ）、ならびに、国際公開第ＷＯ９５／１３０９０号に記載されている。
【０２５７】
用語「インターフェロン−α」はさらに、インターフェロン−αの融合タンパク質を包含し、例えば、インターフェロン−α−２ａ、インターフェロン−α−２ｂ、コンセンサス・インターフェロンまたは精製インターフェロン−α生成物の融合タンパク質など（これらのそれぞれが別のタンパク質と融合される）を包含する。ある種の好ましい融合タンパク質は、米国特許第６９７２３２２号ならびに国際特許出願公開第ＷＯ２００５／００３２９６号および同第ＷＯ２００５／０７７０４２号に記載されたインターフェロン（例えば、インターフェロン−α−２ｂ）およびアルブミンを含む。所望によりヒトアルブミンにコンジュゲートされていてもよいインターフェロンは、アルブミン融合技術を使用して作製される、インターフェロン−αの長時間作用形態であるＡＬＢＵＦＥＲＯＮ（登録商標）である。ＡＬＢＵＦＥＲＯＮ（登録商標）は、ヒトアルブミンおよびインターフェロン−αの遺伝子融合から生じる。また、コンセンサス・インターフェロン、例えば、ＩＮＦＥＲＧＥＮ（登録商標）も含まれる。
【０２５８】
下記の実施例の節で立証されるように、ＨＣＱおよびインターフェロン−αは相乗作用し得ることが示されている。
【０２５９】
「相乗作用」とは、併用で投与されたときの化合物の効果が、単独薬剤として単独投与されたときの化合物の相加効果よりも大きいことを意味する。
【０２６０】
下記の実施例において例示されるように、相乗作用は、例えば、ＰｒｉｃｈａｒｄおよびＳｈｉｐｍａｎ［Ａｎｔｉｖｉｒａｌ  Ｒｅｓ、１９９０、１４：１８１〜２０５］によって記載された方法に従って測定され得、この場合、理論的な相加効果は下記の等式によって個々の化合物の用量応答曲線から計算される：Ｚ＝Ｘ＋Ｙ（１−Ｘ）、式中、ＸおよびＹは、個々の化合物によってもたらされる阻害を表し、Ｚは、化合物の組合せによってもたらされる効果を表す。Ｚよりも大きい（場合により２０％大きい、また、場合により３０％大きい）化合物組合せの効果は、相乗作用を示す。
【０２６１】
下記の実施例においてさらに例示されるように、相乗作用は、ＣｈｏｕおよびＴａｌａｌａｙ［Ｔｒｅｎｄｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｓｃｉ、１９８３、４：４５０〜４５４；Ａｄｖ  Ｅｎｚｙｍｅ  Ｒｅｇｕｌ、１９８４、２２：２７］によって記載される方法に従って、および／または、アイソボログラム、例えば、Ｔａｌｌａｒｉｄａ［Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｅｘｐ  Ｔｈｅｒａｐ、２００１、２９８：８６５〜８７２］によって記載されるようなアイソボログラムを使用して測定され得る。
【０２６２】
いくつかの実施形態において、相乗効果は、ＰｒｉｃｈａｒｄおよびＳｈｉｐｍａｎの上記方法に従って求められる。例示的ないくつかの実施形態において、相乗効果は、上記方法のそれぞれに従って求められる。
【０２６３】
したがって、いくつかの実施形態において、本明細書記載の方法は、対象（本明細書中で定義される通り）に、本明細書中で定義された量のＨＣＱと、本明細書中で定義された治療有効量のインターフェロンとを共投与することによって行われる。
【０２６４】
いくつかの実施形態において、インターフェロン（例えば、ＰＥＧ化インターフェロン）の治療有効量は（場合により１週間あたり）５０μｇから２５０μｇの範囲である。
【０２６５】
いくつかの実施形態において、インターフェロンの治療有効量は、（場合により１週間あたり）１回の投与につき、３０００〜１００００００単位の範囲にあり、場合により１００００〜１００００００単位の範囲にある。
【０２６６】
インターフェロン投与の頻度は、少なくとも部分的には当該インターフェロンの体内半減期により異なり得る。ＰＥＧ化インターフェロンは、典型的にはより長い半減期を有しており、したがって、他のインターフェロンより少ない頻度で投与される。
【０２６７】
いくつかの実施形態において、インターフェロン（例えば、非ＰＥＧ化インターフェロン）は、１週間あたり２回〜４回、場合により１週間あたり３回投与される。
【０２６８】
いくつかの実施形態において、ＰＥＧ化インターフェロンは１週間あたり１回投与される。
【０２６９】
いくつかの実施形態において、方法は、本明細書中に記載されるような量のＨＣＱと、治療有効量のリバビリン（またはそのプロドラッグ）とを対象に共投与することによって行われる。
【０２７０】
いくつかの実施形態において、方法は、本明細書中に記載されるような量のＨＣＱと、治療有効量のボセプレビルとを対象に共投与することによって行われる。
【０２７１】
いくつかの実施形態において、方法は、本明細書中に記載されるような量のＨＣＱと、治療有効量テラプレビルとを対象に共投与することによって行われる。
【０２７２】
ＨＣＶ関連疾患の現行の標準的処置は、リバビリンをインターフェロン−α（例えば、ＰＥＧ化インターフェロン−α）と共投与することを含む。
【０２７３】
従って、いくつかの実施形態において、方法は、本明細書中に記載されるような量のＨＣＱと、治療有効量のリバビリンと、治療有効量のインターフェロン−α（例えば、ＰＥＧ化インターフェロン−α）とを対象に共投与することによって行われる。
【０２７４】
いくつかの実施形態において、方法は、本明細書中に記載されるような量のＨＣＱと、治療有効量のリバビリンと、治療有効量のボセプレビルとを対象に共投与することによって行われる。
【０２７５】
いくつかの実施形態において、方法は、本明細書中に記載されるような量のＨＣＱと、治療有効量のリバビリンと、治療有効量のテラプレビルとを対象に共投与することによって行われる。
【０２７６】
いくつかの実施形態において、方法は、本明細書中に記載されるような量のＨＣＱと、治療有効量のリバビリンと、治療有効量のインターフェロン−αと、治療有効量のボセプレビルとを対象に共投与することによって行われる。
【０２７７】
いくつかの実施形態において、方法は、本明細書中に記載されるような量のＨＣＱと、治療有効量のリバビリンと、治療有効量のインターフェロン−αと、治療有効量のテラプレビルとを対象に共投与することによって行われる。
【０２７８】
いくつかの実施形態において、方法は、本明細書中に記載されるような量のＨＣＱと、治療有効量のリバビリンと、治療有効量のインターフェロン−αと、治療有効量のＮＳ５Ｂ阻害剤とを対象に共投与することによって行われる。
【０２７９】
いくつかの実施形態において、方法は、本明細書中に記載されるような量のＨＣＱと、治療有効量のリバビリンと、治療有効量のインターフェロン−αと、治療有効量のシクロフィリン阻害剤（例えば、本明細書中に記載されるようなシクロフィリン阻害剤）とを対象に共投与することによって行われる。
【０２８０】
いくつかの実施形態において、方法は、本明細書中に記載されるような量のＨＣＱと、治療有効量のリバビリンと、治療有効量のインターフェロン−αと、治療有効量のＮＳ５Ａ阻害剤とを対象に共投与することによって行われる。
【０２８１】
本明細書中に記載されるように、ＨＣＶ関連疾患に罹患する対象を、相補的な効果を示す２つ以上の化合物により処置することが多くの場合に望ましい。
【０２８２】
したがって、いくつかの実施形態において、ＨＣＶ誘導による自食作用を阻害するＨＣＱは、異なる機構によりＨＣＶに対して作用する抗ウイルス剤と共投与され、例えば、この場合抗ウイルス剤はＨＣＶ誘導による自食作用を阻害しない。
【０２８３】
ＨＣＶ誘導による自食作用を阻害しない好適な抗ウイルス剤の例には、限定されないが、ポリメラーゼ阻害剤（例えば、ＮＭ−１０７、バロピシタビン）、リバビリン、ビラミジン、ボセプレビル、テラプレビルおよびアリスポリビルが含まれる。リバビリンは例示的な抗ウイルス剤である。いくつかの実施形態では、リバビリンのプロドラッグ（例えば、ビラミジン）が使用される。
【０２８４】
特定の理論によってとらわれることなく、自食作用のＨＣＱによる阻害により、第２の抗ウイルス効果（例えば、ＨＣＱと共投与される抗ウイルス剤の抗ウイルス効果）に対するＨＣＶの感受性をかなり高める程度までＨＣＶの生活周期が乱され、その結果、ＨＣＱはＨＣＶ（例えば、抗ウイルス剤に対して部分的または完全に抵抗性であるＨＣＶ）を抗ウイルス剤に対して感作し得るものと考えられる。
【０２８５】
さらに、本発明のいくつかの実施形態の一実施態様によれば、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）関連疾患を、ＨＣＶ誘導自食作用の阻害に十分な量（本明細書中で定義される通り）で処置する際での使用に特定されるヒドロキシクロロキンが提供される。
【０２８６】
本発明のこの実施態様の実施形態によれば、上記ＨＣＱは、本明細書中に記載されるようにＨＣＶ関連疾患の処置で使用されるためのものであり、この処置は、処置の必要性のある対象（本明細書中に記載される通り）に、ＨＣＶ誘導自食作用の阻害に十分な量のＨＣＱ（本明細書中で定義される通り）を投与することによって行われる。
【０２８７】
さらに、本発明のいくつかの実施形態の一実施態様によれば、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）関連疾患の処置において使用される医薬の製造におけるヒドロキシクロロキンの使用が提供される。いくつかの実施形態において、医薬は、ＨＣＶ関連疾患を、ＨＣＶ誘導自食作用の阻害に十分な量（本明細書中で定義される通り）でヒドロキシクロロキンを処置の必要性のある対象に投与することによって処置する際での使用のために特定される。
【０２８８】
本発明のこの実施態様のいくつかの実施形態において、医薬は、治療有効量のＨＣＱまたはその塩を含むか、あるいは、医薬は、本明細書中に示されるような量のＨＣＱを対象に投与するための説明書を含む。
【０２８９】
ＨＣＶ誘導自食作用の阻害に十分なＨＣＱの量は、場合により、本明細書中の他の箇所で記載された任意の量または量の任意の範囲であってもよい（例えば、１日あたり４００〜２０００ｍｇ）。
【０２９０】
ＨＣＶ誘導による自食作用は、場合により、本明細書中の他の箇所の記載にしたがい特徴確認されてもよく、また、場合により、（例えば、本明細書中に記載されるように）ＵＬＫ１、ＡＭＢＲＡ１、ＡＴＧ２Ａ、ＧＡＢＡＲＡＰＬ１、ＦＯＸ０３、ＳＱＳＴＭ１、ＰＩＫ３Ｃ３およびＭＡＰ１ＬＣ３Ｂからなる群から選択されるタンパク質のレベルの増大によって特徴確認されてもよい。
【０２９１】
いくつかの実施形態において、疾患は、（例えば、本明細書中の他の箇所に記載された）抗ウイルス剤抵抗性ＨＣＶによって引き起こされ、また、場合により、遺伝子型１のＨＣＶおよび／または遺伝子型４のＨＣＶによって引き起こされる。
【０２９２】
上述の処置は、本明細書記載の方法のいずれかに従って行うことができ、また、場合によりさらに、治療有効量の抗ウイルス剤（例えば、ＨＣＱとの共投与について本明細書中に記載される任意の個々の抗ウイルス剤またはそのような抗ウイルス剤の任意の組合せ）を共投与することを含む。
【０２９３】
本明細書中で検討されるように、自食作用のＨＣＱによる阻害により、異なる抗ウイルス効果（例えば、自食作用の阻害を伴わない抗ウイルス効果）に対するＨＣＶの感受性をかなり高める程度までＨＣＶの生活周期が乱され、その結果、ＨＣＱは、ＨＣＶを抗ウイルス剤（具体的には、ＨＣＱ誘導による自食作用を阻害しない抗ウイルス剤）に対して感作し得るものと考えられる。
【０２９４】
したがって、本発明のいくつかの実施形態の一実施態様によれば、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）関連疾患、例えば、本明細書中で定義されるようなＨＣＶ感染などを処置の必要性のある対象において処置する方法であって、治療有効量のヒドロキシクロロキンまたはその医薬的に許容され得る塩と、治療有効量の抗ウイルス剤とを対象に共投与し（ただし、抗ウイルス剤はＨＣＶ誘導による自食作用を阻害しない）、それにより、ＨＣＶ感染を処置することによって行われる方法が提供される。
【０２９５】
いくつかの実施形態において、ヒドロキシクロロキンの治療有効量は、ＨＣＶ誘導による自食作用を対象において阻害するのに十分である。本発明のいくつかの実施形態による好適な量は本明細書中の他の箇所で記載されている。
【０２９６】
ＨＣＶ誘導による自食作用を阻害しない好適な抗ウイルス剤の例には、限定されないが、リバビリン、ビラミジン、ボセプレビル、テラプレビルおよびアリスポリビルが含まれる。リバビリンは典型的な抗ウイルス剤である。いくつかの実施形態では、リバビリンのプロドラッグ（例えば、ビラミジン）が使用される。
【０２９７】
いくつかの実施形態において、方法はさらに、治療有効量の追加の抗ウイルス剤を対象に共投与し、その結果、少なくとも３つの化合物、すなわち、ＨＣＱおよび少なくとも２つの抗ウイルス剤（すなわち、ＨＣＶ誘導による自食作用を阻害しない上記抗ウイルス剤、および、上述の追加の抗ウイルス剤）が共投与されるようにすることを含む。
【０２９８】
追加の抗ウイルス剤は、例えば、本明細書記載の任意の抗ウイルス剤であってもよく（ただし、追加の抗ウイルス剤は、ＨＣＶ誘導による自食作用を阻害しない上述の抗ウイルス剤と同一でない）、また、追加の抗ウイルス剤は、ＨＣＶ誘導による自食作用を阻害する能力を有してもよく、または、有しなくてもよい。したがって、例えば、追加の抗ウイルス剤は、（例えば、本明細書中の他の箇所で記載されるような）インターフェロン、ウイルスプロテアーゼ阻害剤、ＮＳ４Ａ阻害剤、ＮＳ５Ａ阻害剤、ウイルスポリメラーゼ阻害剤、シクロフィリン阻害剤、ヘリカーゼ阻害剤、グリコシル化阻害剤および抗リン脂質抗体のいずれか１つであり得る。
【０２９９】
ＨＣＱおよび２つの抗ウイルス剤（ただし、少なくとも１つの抗ウイルス剤はＨＣＶ誘導による自食作用を阻害しない）の特定の組合せの共投与は本明細書中の他の箇所で記載されており、本発明のこの実施態様のいくつかの実施形態による使用に適している。
【０３００】
いくつかの実施形態において、追加の抗ウイルス剤はインターフェロン（例えば、本明細書中に記載されるインターフェロン）である。場合により、インターフェロンはインターフェロン−αであり、場合により、ＰＥＧ化インターフェロン−α（例えば、本明細書中に記載されるインターフェロン−α）である。
【０３０１】
いくつかの実施形態において、上述のインターフェロンはリバビリンと共投与され、その結果、方法は、ＨＣＱ、インターフェロンおよびリバビリンの共投与を含むことになる。リバビリンの治療有効量は場合により、１日あたり５０〜１２００ｍｇの範囲にある（場合により１日あたり５０〜１５０ｍｇ、また、場合により１日あたり４００〜１２００ｍｇの範囲にある）。
【０３０２】
さらに、本発明のいくつかの実施形態の一実施態様によれば、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）関連疾患（本明細書中で定義される通り）を、ＨＣＶ誘導による自食作用を阻害しない抗ウイルス剤（本明細書中で定義される通り）との併用で処置する際の使用のために特定されるヒドロキシクロロキンが提供される。
【０３０３】
本発明のこの実施態様の実施形態によれば、上記ＨＣＱは、処置の必要性のある対象（これは本明細書中に記載される通りである）に、ＨＣＱを、ＨＣＶ誘導自食作用を阻害しない抗ウイルス剤（本明細書中で定義される通り）との併用で投与することによって行われる、本明細書中に記載されるようなＨＣＶ関連疾患の処置において使用されるためのものである。
【０３０４】
処置は、本明細書中下記でさらに詳述されように、これら２つの薬剤を別々に共投与することによって、または、単一の医薬組成物中に共配合して行われ得る。
【０３０５】
さらに、本発明のいくつかの実施形態の一実施態様によれば、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）関連疾患の処置で使用される医薬の製造におけるヒドロキシクロロキンの使用が提供される。いくつかの実施形態において、医薬は、ＨＣＶ誘導による自食作用を阻害しない抗ウイルス剤（本明細書中で定義される通り）との併用でヒドロキシクロロキンを処置の必要性のある対象に投与することによるＨＣＶ関連疾患の処置における使用のために特定される。
【０３０６】
本発明のこの実施態様のいくつかの実施形態では、医薬は、治療有効量のＨＣＱまたはその塩を含むか、あるいは、医薬は、本明細書中に示されるような量のＨＣＱを対象に投与するための説明書を含む。
【０３０７】
いくつかの実施形態において、医薬はさらに、ＨＣＶ誘導による自食作用を阻害しない抗ウイルス剤の治療有効量を含むか、または、医薬は、ＨＣＶ誘導による自食作用を阻害しない抗ウイルス剤の量（本明細書中に示される通り）を対象に共投与するための説明書を含む。
【０３０８】
いくつかの実施形態において、医薬は、本明細書中下記でさらに詳述されるように、単一の医薬組成物に共配合されるＨＣＱおよび本明細書記載の抗ウイルス剤を含む。
【０３０９】
本発明のこの実施態様のいくつかの実施形態によるＨＣＱの治療有効量は、本明細書中の他の箇所で記載されるＨＣＱの量またはＨＣＱの量の範囲である（例えば、１日あたり４００ｇ〜２０００ｍｇ）。
【０３１０】
ＨＣＱを１つまたは複数の抗ウイルス剤と共投与することに関連する本明細書記載の本発明の実施態様のいずれかのいくつかの実施形態において、処置されるべき疾患は抗ウイルス剤抵抗性ＨＣＶによって引き起こされ、場合により、ＨＣＱと共投与される抗ウイルス剤（例えば、ＨＣＶ誘導による自食作用を阻害しない抗ウイルス剤（本明細書中で定義される通り））に対して抵抗性であるＨＣＶ遺伝子型によって引き起こされる。いくつかの実施形態において、疾患は遺伝子型１のＨＣＶおよび／または遺伝子型４のＨＣＶによって引き起こされる。
【０３１１】
上述の処置は、本明細書中に記載される方法のいずれかに従って行うことができ、また、場合によりさらに、治療有効量の抗ウイルス剤（例えば、ＨＣＱとの共投与について本明細書中に記載される任意の個々の抗ウイルス剤またはそのような抗ウイルス剤の任意の組合せ）を共投与することを含んでもよい。
【０３１２】
本明細書中上記で検討されているように、ＨＣＱは、例えば、ＨＣＶがＨＣＱの非存在下では抵抗性である抗ウイルス剤に対してＨＣＶを感作することを含めて、抗ウイルス剤の効力を高め得る効果（例えば、ＨＣＶ誘導による自食作用の阻害）を示す。
【０３１３】
したがって、本発明のいくつかの実施形態の一実施態様によれば、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）関連疾患を処置の必要性のある対象において処置する方法であって、疾患が、抗ウイルス剤に対して抵抗性であるＨＣＶ遺伝子型によって引き起こされる方法が提供される。この方法は、本発明の実施形態のこの実施態様によれば、治療有効量のヒドロキシクロロキンまたはその医薬的に許容され得る塩と、治療有効量の抗ウイルス剤とを対象に共投与することによって行われ、この場合、この抗ウイルス剤に対して、ＨＣＶ遺伝子型は抵抗性であるものとする。
【０３１４】
本明細書中において、「抗ウイルス剤に対して抵抗性の（である）ＨＣＶ遺伝子型」および「抗ウイルス剤に対して抵抗性の（である）Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）遺伝子型」なる表現は、所与の抗ウイルス剤に対して抵抗性であることが、ａ）この抗ウイルス剤による対象の先行処置（この場合、対象は処置に対して非応答性であった）、および／または、ｂ）ＨＣＶの遺伝子型の同定（この場合、遺伝子型は、上記ＨＣＶ遺伝子型に感染したほとんど（５０％超）の対象がこの抗ウイルス剤による処置に対して非応答性である遺伝子型として同定される）によって明らかにされた、感染対象におけるＨＣＶ遺伝子型を示す。「抗ウイルス剤に対して抵抗性の（である）」なる表現には、抗ウイルス剤の用量を、単に対象により依然として許容されるさらなる高用量まで上げることによって克服され得る抵抗性は含まれない。
【０３１５】
いくつかの実施形態において、疾患は遺伝子型１のＨＣＶおよび／または遺伝子型４のＨＣＶによって引き起こされる。
【０３１６】
いくつかの実施形態において、本明細書記載の方法によって処置可能である対象は、抵抗性遺伝子型のＨＣＶに苦しむものとして特定された、ＨＣＶに苦しむ対象、ならびに／あるいは、１サイクルまたは複数サイクルの抗ウイルス治療を受けたが、ウイルス感染の根絶が全く認められないか、もしくは不完全であるという点から、および／または、ウイルス感染に伴う症状の緩和が不十分であるという点から、この治療に対して非応答性であることが見出された、ＨＣＶに苦しむ対象である。
【０３１７】
本発明の実施形態のこの実施態様に従って共投与される抗ウイルス剤の治療有効量は場合により、非抵抗性のＨＣＶ遺伝子型の処置に有効な量であってもよい。別法として、または、加えて、治療有効量は、ＨＣＱと共投与されたとき、所望される治療効果を発揮する量である。場合により、治療有効量は、対象によって許容されるように選択される。
【０３１８】
本発明のこの実施態様による実施形態は、抗ウイルス剤に対するＨＣＶ遺伝子型の感作を含み、その結果、抗ウイルス剤が、本明細書中に記載されるように、ＨＣＱと共投与されたときにはＨＣＶに対する臨床的に顕著な抗ウイルス効果を発揮し、ＨＣＱを伴うことなく投与されたときには、そのような抗ウイルス効果が発揮されないことになるものとする。
【０３１９】
ＨＣＱの治療有効量は、感作有効量としてみなされ得る。
【０３２０】
本明細書中において、「感作有効量」は、抗ウイルス剤に対して抵抗性であるＨＣＶ遺伝子型（本明細書中で定義される通り）を、共投与される量の抗ウイルス剤に対して感受性にする（すなわち、もはや抵抗性でない）ＨＣＱの量を示す。
【０３２１】
いくつかの実施形態において、ヒドロキシクロロキンの治療有効量は、本明細書中の他の箇所で記載されているように、ＨＣＶ誘導による自食作用（本明細書中で定義される通り）を対象において阻害するのに十分である。
【０３２２】
本発明のいくつかの実施形態による好適な治療有効量は本明細書中の他の箇所で記載されている。
【０３２３】
いくつかの実施形態において、抗ウイルス剤はＨＣＶ誘導による自食作用を阻害しない。そのような抗ウイルス剤の好適な例は本明細書中の他の箇所で記載されている。
【０３２４】
いくつかの実施形態において、抗ウイルス剤はリバビリンである。いくつかの実施形態において、抗ウイルス剤はリバビリンのプロドラッグ（例えば、ビラミジン）である。
【０３２５】
いくつかの実施形態において、方法はさらに、本明細書中の他の箇所でより詳しく記載されているように、治療有効量の追加の抗ウイルス剤を対象に共投与し、その結果、少なくとも３つの化合物、すなわち、ＨＣＱおよび少なくとも２つの抗ウイルス剤（すなわち、ＨＣＶ誘導による自食作用を阻害しない上記抗ウイルス剤、および、上述の追加の抗ウイルス剤）が共投与されるようにすることを含む。
【０３２６】
さらに、本発明のいくつかの実施形態の一実施態様によれば、（本明細書中で定義されるような）抗ウイルス剤に対して抵抗性のＨＣＶ遺伝子型によって引き起こされるＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）関連疾患の処置における抗ウイルス剤との併用のために特定されるヒドロキシクロロキンが提供される。
【０３２７】
本発明のこの実施態様の実施形態によれば、そのようなＨＣＱは、処置の必要性のある対象（本明細書中に記載される通り）に、ＨＣＱを抗ウイルス剤との併用で投与することによって行われる、本明細書中に記載されるようなＨＣＶ関連疾患の処置において使用されるためのものであり、この場合、疾患は、本明細書中で定義されるように、抗ウイルス剤に対して抵抗性のＨＣＶ遺伝子型によって引き起こされるものとする。
【０３２８】
さらに、本発明のいくつかの実施形態の一実施態様によれば、本明細書中で定義されるように、抗ウイルス剤に対して抵抗性のＨＣＶ遺伝子型によって引き起こされるＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）関連疾患の処置において使用される医薬の製造におけるヒドロキシクロロキンの使用が提供される。いくつかの実施形態において、医薬は、ＨＣＶ関連疾患を、ヒドロキシクロロキンを上述の抗ウイルス剤との併用で処置の必要性のある対象に投与することによって処置する際の使用のために特定される。
【０３２９】
抗ウイルス剤は場合により、本明細書中に記載される抗ウイルス剤の組合せを含めて、本明細書記載のいかなる抗ウイルス剤であってもよい。いくつかの実施形態において、ＨＣＶ遺伝子型がインターフェロン−αおよび／またはリバビリンに対して抵抗性であるように、抗ウイルス剤はインターフェロン−αおよび／またはリバビリンである。
【０３３０】
本発明のこの実施態様のいくつかの実施形態において、医薬は、治療有効量（例えば、本明細書中で定義されるような感作有効量）のＨＣＱまたはその塩を含み、あるいは、医薬は、本明細書中に示されるような治療有効量のＨＣＱを対象に投与するための説明書を含む。
【０３３１】
いくつかの実施形態において、上述の処置は、ＨＣＱを、本明細書中の他の箇所で記載されるように、ＨＣＶ誘導による自食作用の阻害に十分な量で投与することを含む。
【０３３２】
上述の処置は、本明細書中に記載される方法に従って行うことができる。
【０３３３】
本発明のこの実施態様のいくつかの実施形態によるＨＣＱの治療有効量は、本明細書中の他の箇所で記載されるＨＣＱの量またはＨＣＱの量の範囲である（例えば、１日あたり４００〜２０００ｍｇ）。
【０３３４】
場合により、抗ウイルス剤は、本明細書中の他の箇所で記載されるように、ＨＣＶ誘導による自食作用を阻害しない抗ウイルス剤（例えば、リバビリン）である。
【０３３５】
いくつかの実施形態において、疾患は、遺伝子型１のＨＣＶおよび／または遺伝子型４のＨＣＶによって引き起こされる。
【０３３６】
下記の実施例の節において例示されるように、ＨＣＱは、別の抗ウイルス剤との併用であるときには相乗的な抗ウイルス効果を示すが、そのような相乗効果は驚くべきことに、構造が類似するクロロキンによって示されることはない。そのような相乗効果は、ＨＣＱおよび抗ウイルス剤の両方の治療可能性を高め、したがって、より効果的な抗ウイルス処置をいかなる所与の薬物用量についても可能にし、かつ／または、寛容性を改善し、有害な影響を減らす、より低用量での処置を可能にする。
【０３３７】
したがって、本発明の実施形態の別の実施態様によれば、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）関連疾患を処置の必要性のある対象において処置する方法であって、治療有効量のヒドロキシクロロキンまたはその医薬的に許容され得る塩を治療有効量の抗ウイルス剤との併用で対象に共投与することを含み、ただし、この場合、ヒドロキシクロロキンの治療有効量および抗ウイルス剤の治療有効量が、本明細書中で定義されるように、ヒドロキシクロロキンおよび抗ウイルス剤が相乗作用するように選択される方法が提供される。
【０３３８】
相乗作用する組合せはまた、本明細書中では相乗的組合せとして示される。
【０３３９】
相乗作用をもたらす治療有効量は、実施例の節において例示されるように、ＨＣＱおよび抗ウイルス剤の種々の組合せの効果を（場合により、ＨＣＱ単独および／または抗ウイルス剤単独の効果を含めて）求めることによって選択され得る。
【０３４０】
いくつかの実施形態では、相乗作用は、１日あたり少なくとも４００ｍｇである量（例えば、１日あたり４００〜２０００ｍｇの範囲にある量）、好ましくは、１日あたり少なくとも５００ｍｇである量（例えば、１日あたり５００〜１０００ｍｇの範囲にある量）、場合により１日あたり少なくとも６００ｍｇである量、また、場合により１日あたり少なくとも８００ｍｇ（例えば、８００〜１０００ｍｇ／日、８５０〜９５０ｍｇ／日、９００ｍｇ／日）である量のＨＣＱを使用して達成される。１日あたり少なくとも６００ｍｇおよび１日あたり少なくとも８００ｍｇの好適な範囲は本明細書中の他の箇所で記載されている。
【０３４１】
相乗作用をＨＣＱとの併用で示す抗ウイルス剤は場合により、本明細書中に記載される任意の抗ウイルス剤または抗ウイルス剤の任意の組合せであってもよい。
【０３４２】
いくつかの実施形態において、相乗作用をＨＣＱとの併用で示す抗ウイルス剤はウイルスプロテアーゼ阻害剤（例えば、本明細書中に記載されるプロテアーゼ阻害剤）である。
【０３４３】
いくつかの実施形態において、相乗作用をＨＣＱとの併用で示す抗ウイルス剤はウイルスポリメラーゼ阻害剤（例えば、本明細書中に記載されるポリメラーゼ阻害剤）である。
【０３４４】
いくつかの実施形態において、相乗作用をＨＣＱとの併用で示す抗ウイルス剤はインターフェロンである。例示的な実施形態において、インターフェロンは、インターフェロン−α（例えば、ＰＥＧ化インターフェロン−α）である。
【０３４５】
いくつかの実施形態において、インターフェロンの治療有効量は、本明細書中の他の箇所で記載されるように、（場合により１週間あたり）１回の投与につき５０〜２５０μｇの範囲にある。
【０３４６】
いくつかの実施形態によれば、方法は、（例えば、本明細書中に記載されるように）、１日あたり４００〜２０００ｍｇのＨＣＱ（またはその医薬的に許容され得る塩）を５０〜２５０μｇのインターフェロンとの併用で共投与することを含む。
【０３４７】
いくつかの実施形態において、ヒドロキシクロロキンの治療有効量は、相乗作用を示すことに加えて、本明細書中に記載されるように、ＨＣＶ誘導による自食作用を阻害するのに十分である。
【０３４８】
場合により、方法はさらに、治療有効量の追加の抗ウイルス剤（例えば、本明細書中に記載される抗ウイルス剤）（これは相乗作用を示してもよく、または示さなくてもよい）を共投与することを含み、その結果、少なくとも３つの化合物、すなわち、ＨＣＱおよび少なくとも２つの抗ウイルス剤（ただし、それらのうちの少なくとも１つは、本明細書中に記載されるように、ＨＣＱとの併用で相乗作用を示す）が共投与されることになる。場合により、追加の抗ウイルス剤はリバビリン（またはそのプロドラッグ）である。
【０３４９】
さらに、本発明のいくつかの実施形態の一実施態様によれば、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）関連疾患の処置における抗ウイルス剤との併用のために特定されるヒドロキシクロロキンが提供され、この場合、上記ＨＣＱおよび抗ウイルス剤は、（例えば、本明細書中に記載されるように共投与されるとき）、疾患の処置に際し（本明細書中で定義されるように）相乗作用するものとする。
【０３５０】
本発明のこの実施態様の実施形態によれば、上記ＨＣＱは、処置の必要性のある対象（本明細書中に記載される通り）に、ＨＣＱを抗ウイルス剤との併用で投与することによって行われる、本明細書中に記載されるようなＨＣＶ関連疾患の処置において使用されるためのものであり、この場合、上記ＨＣＱおよび抗ウイルス剤は、本明細書中に記載されるように、疾患の処置に際し相乗作用するものとする。
【０３５１】
これらの実施形態によれば、処置は、本明細書中で定義されるように、ＨＣＱおよび抗ウイルス剤の相乗的組合せを含む。
【０３５２】
さらに、本発明のいくつかの実施形態の一実施態様によれば、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）関連疾患の処置において使用される医薬の製造におけるヒドロキシクロロキンの使用が提供される。いくつかの実施形態において、医薬は、ＨＣＶ関連疾患を、処置の必要性のある対象に、（例えば、本明細書中に記載されるように）ＨＣＱと相乗作用する抗ウイルス剤との併用でヒドロキシクロロキンを投与することによって処置する際の使用のために特定される。
【０３５３】
これらの実施形態によれば、処置は、本明細書中で定義されるように、ＨＣＱおよび抗ウイルス剤の相乗的組合せを含む。
【０３５４】
相乗作用を達成するための好適な抗ウイルス剤および（ＨＣＱおよび抗ウイルス剤の）好適な用量は本明細書中に記載されている。
【０３５５】
治療有効量の追加の抗ウイルス剤は場合により、本明細書中の他の箇所で記載されているように、ＨＣＱ、および、ＨＣＱと相乗作用する抗ウイルス剤と共投与され得る。
【０３５６】
本発明の様々な実施態様による本明細書記載の方法および処置は、ヒドロキシクロロキンまたはその医薬的に許容され得る塩、抗ウイルス剤、ならびに、場合により、少なくとも１つの医薬的に許容され得る担体、希釈剤、賦形剤および／または添加剤を含む単一医薬組成物が投与される段階を含む。別法として、本発明の方法は、上記で挙げられた有効成分のうちの少なくとも１つをその１つまたは複数の許容され得る担体と一緒に含む別個の組成物が実質的に同時または連続的に投与される段階を含むことができる。
【０３５７】
本発明の組合せ剤は好ましくは経口投与され得る。現行治療で用いられる活性併用薬剤化合物は、錠剤、カプセル剤、丸薬、散剤、顆粒剤、エリキシル剤、チンキ剤、懸濁液、シロップ剤および乳化剤（これらに限定されない）を含めて、様々な経口用形態で投与され得る。活性薬剤化合物は、任意の医薬的に許容され得る経路によって、また、任意の医薬的に許容され得る用量形態で送達され得るものとする。これらには、経口用の慣用的迅速放出型、徐放性および遅延放出型の医薬用量形態の使用が含まれるが、これらに限定されない。活性薬剤成分は、好適な医薬用の希釈剤、賦形剤または担体（これらはまとめて、本明細書中では、意図された投与形態に関して好適に選択される「担体」材料として示される）との混合物で投与され得る。示されるように、経口投与が事実上用いられ得るものとする。したがって、錠剤、カプセル剤およびシロップ剤など、同様にまた、慣用的製薬実務と合致する他の様式を用いることができる。
【０３５８】
別の実施形態によれば、本発明によって使用される有効成分またはその組合せを含む組成物は、任意の投与方法を介して投与され得る。例えば、経口投与、静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与、腹腔内投与、非経口投与、経皮投与、膣内投与、鼻腔内投与、粘膜投与、舌下投与、局所投与、直腸投与または皮下投与、あるいは、それらの任意の組合せなど。
【０３５９】
経口投与が錠剤またはカプセル剤の形態をとる場合、活性薬剤成分を、非毒性の医薬的に許容され得る不活性担体（例えば、ラクトース、デンプン、スクロース、グルコース、修飾糖、修飾デンプン、メチルセルロースおよびその誘導体、リン酸二カルシウム、硫酸カルシウム、マンニトール、ソルビトール、ならびに、他の還元糖および非還元糖、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、フマル酸ステアリルナトリウム、ベヘン酸グリセリルおよびステアリン酸カルシウムなど）と組み合わせることができる。液体形態での経口投与の場合、活性薬剤成分を、非毒性の医薬的に許容され得る不活性担体（例えば、エタノール、グリセリンおよび水など）と組み合わせることができる。所望または要求されるときには、好適な結合剤、滑沢剤、崩壊剤、ならびに、着色剤および調味料もまた、混合物に取り込むことができる。安定剤（例えば、酸化防止剤、没食子酸プロピル、アスコルビン酸ナトリウム、クエン酸、メタ重亜硫酸カルシウム、ヒドロキノンおよび７−ヒドロキシクマリンなど）もまた、用量形態を安定させるために添加され得る。他の好適な化合物には、ゼラチン、甘味剤、天然ゴムおよび合成ゴム（例えば、アラビアゴム、トラガカントまたはアルギン酸塩など）、カルボキシメチルセルロース、ポリエチレングリコール、ならびに、ワックスなどが含まれ得る。
【０３６０】
別法として、本発明の組合せ剤はまた、放出制御型製剤（例えば、徐放性または速放性製剤など）で投与され得る。本発明の組合せ剤の上記放出制御型製剤は、当業者に公知の方法を使用して調製され得る。投与方法は、対象の状態および要件を評価した後で主治医または当業者によって決定されることになる。
【０３６１】
本発明の組み合わされた化合物は一般には、本発明の両化合物を医薬的に許容され得る担体または希釈剤と一緒に含む医薬組成物形態で投与される。したがって、本発明によって使用される化合物は、キットにおいて個々に、あるいは、任意の慣用的経口、非経口または経皮用量形態において一緒に投与され得る。
【０３６２】
より具体的には、本発明は、別々に投与され得る有効成分の組合せを用いた疾患および状態の処置に関連するため、本発明はまた、さらなる実施態様として、別々の医薬組成物をキット形態で組み合わせることに関連する。キットは、２つの別々の医薬組成物、すなわち、ヒドロキシクロロキンまたはその医薬的に許容され得る塩と、インターフェロンアルファとを含む。キットは、両方の別々の医薬組成物を含有するための容器手段（例えば、分割ボトルまたは分割ホイルパケットなど）を含むが、これら個別の組成物はまた、１つの非分割容器に含有されてもよい。典型的には、キットは、個別成分を投与するための使用説明書を含む。これら個別成分が好ましくは、異なる用量形態（例えば、経口用および非経口用）で投与され、または、異なる投薬間隔で投与されるとき、あるいは、組合せ剤の個々の成分の滴定が処方医によって所望されるとき、キット形態は特に有利である。
【０３６３】
キットは、本明細書記載の処置方法のいずれかを行うためのものであり得、場合により、その方法をいかにして行うかを記載する使用説明書を伴い得る。
【０３６４】
キットの両方の成分、すなわち、第１用量形態でのヒドロキシクロロキンおよび第２用量形態での抗ウイルス剤は同時に投与され得るものとする。
【０３６５】
別法として、前記第１の化合物または用量形態および前記第２の化合物または用量形態は、どちらの順序であれ、連続して投与される。
【０３６６】
本明細書中上記の方法および使用のいずれにおいても、ＨＣＱおよび場合により別の１つまたは複数の抗ウイルス剤の投与は、処置すべきＨＣＶ関連疾患によって、場合により１ヶ月から生涯、場合により２４週間からから生涯、また、場合により２４週間から１年に及ぶ期間にわたって行われる。
【０３６７】
一般に、投与は、ウイルスが対象から見出される限り、かつ／または、疾患に伴う症状の少なくとも１つが緩和されるまで行われる。
【０３６８】
ＨＣＶ関連（疾患）が慢性である実施形態において、処置は、本明細書中に記載されるように、少なくとも２４週間にわたって行われる。
【０３６９】
本発明のいくつかの実施形態のさらなる実施態様によれば、医薬用キットが提供される。
【０３７０】
いくつかの実施形態において、ＨＣＱおよび抗ウイルス剤を含むキット（ただし、それぞれがキット内に個々に包装される）であって、ＨＣＱを、本明細書中で定義されるように、ＨＣＶ誘導による自食作用の阻害に十分な量で使用するための説明書を含むキットが提供される。
【０３７１】
本明細書中に記載される方法、使用およびキットのいずれにおいても、ＨＣＱまたはその塩および抗ウイルス剤は、利用されるならば、それ自体で利用され得るか、あるいは、本明細書中で定義されるように、医薬的に許容され得る担体をさらに含む医薬組成物の一部を形成し得るかのどちらかである。
【０３７２】
本明細書中に記載される方法および使用のいずれにおいても、ＨＣＱまたはその塩が抗ウイルス剤と併用されるか、あるいは、抗ウイルス剤と共投与されるときは常に、ＨＣＱおよび抗ウイルス剤は単一の医薬組成物に製剤化され得る。
【０３７３】
本発明の実施形態のさらなる実施態様によれば、ＨＣＱ（またはその医薬的に許容され得る塩）および抗ウイルス剤（例えば、ＨＣＱと共投与されるときには有用であるとして本明細書中に記載される抗ウイルス剤）、ならびに、医薬的に許容され得る担体を含む医薬組成物が提供される。
【０３７４】
いくつかの実施形態において、組成物は２つ以上の抗ウイルス剤を含む。そのような組成物は、ＨＣＱおよび少なくとも２つの抗ウイルス剤の共投与を含む本明細書中に記載される処置方法を行うのに好適であるように製剤化され得る。
【０３７５】
いくつかの実施形態において、組成物は、本明細書中の他の箇所でより詳細に検討されているように、ＨＣＱの自食作用阻害特性を、異なる機構を介して作用する抗ウイルス剤と組み合わせるように製剤化される。したがって、組成物における抗ウイルス剤は、（例えば、本明細書中に記載されるように）ＨＣＶ誘導による自食作用を阻害しない抗ウイルス剤である。場合により、組成物は、ＨＣＶ関連疾患の処置用において使用するために（例えば、包装材の中または表面において）特定される。
【０３７６】
いくつかの実施形態において、組成物は、本明細書中の他の箇所でより詳細に検討されているように、抗ウイルス剤に対して抵抗性のＨＣＶ遺伝子型によって引き起こされるＨＣＶ関連疾患を、（例えば、ＨＣＶを抗ウイルス剤に対して感作することによって）処置するために製剤化される。したがって、組成物における抗ウイルス剤は、（例えば、本明細書中に記載されるように）、ＨＣＶ遺伝子型が抵抗性である抗ウイルス剤である。場合により、組成物は、抗ウイルス剤に対して抵抗性のＨＣＶ遺伝子型によって引き起こされるＨＣＶ関連疾患の（本明細書中に記載されるように）処置用において使用するために（例えば、包装材の中または表面において）特定される。
【０３７７】
いくつかの実施形態において、組成物は、本明細書中の他の箇所でより詳細に検討されているように、ＨＣＱと、抗ウイルス剤との間における相乗効果を提供するように製剤化される。したがって、組成物における抗ウイルス剤は、（例えば、本明細書中に記載されるように）ＨＣＱとの相乗作用する抗ウイルス剤である。場合により、組成物は、ＨＣＶ関連疾患の処置用において使用するために（例えば、包装材の中または表面において）特定される。
【０３７８】
組成物は好ましくは、ＨＣＱおよび抗ウイルス剤の両方について好適な経路による投与用に製剤化される。
【０３７９】
本明細書中で検討されているように、ＨＣＱは経口投与に好適である。そのうえ、経口投与は、比較的好都合な投与経路である。
【０３８０】
したがって、いくつかの実施形態において、組成物は経口投与用に製剤化される。抗ウイルス剤は好ましくは、経口投与に好適であるように選択される。
【０３８１】
所与の抗ウイルス剤について、好適な投与経路は典型的には、当業界では公知である。例えば、リバビリンは、経口投与に好適であることが知られており、これに対して、インターフェロンは、経口投与に好適であると見なされていない。
【０３８２】
いくつかの実施形態において、抗ウイルス剤は、（例えば、インターフェロンとは対照的に）小分子である。場合により、そのような小分子は、１５００Ｄａ未満、場合により１０００Ｄａ未満、場合により８００Ｄａ未満、場合により６００Ｄａ未満、また、場合により４００Ｄａ未満の分子量を特徴とする。一般に、小分子は、経口投与については、より大きな分子（例えば、ポリマー）よりもかなり適している。
【０３８３】
いくつかの実施形態において、組成物は、追加の抗ウイルス剤との使用のために特定される。場合により、組成物および追加の抗ウイルス剤の共投与は、（例えば、本明細書中に記載されるように）、ＨＣＱおよび少なくとも２つの抗ウイルス剤の共投与を含む処置方法を行うためのものである。
【０３８４】
いくつかの実施形態において、追加の抗ウイルス剤は、組成物に含めることに適しておらず、したがって、別々に投与される。追加の抗ウイルス剤は場合により、組成物の投与経路に適していないことがあり得、例えば、組成物が経口投与用に製剤化され、追加の抗ウイルス剤が経口投与に適していない（例えば、インターフェロン）場合がある。別法として、または、加えて、追加の抗ウイルス剤は場合により、組成物の投与頻度に適していないことがあり得、例えば、組成物が１日１回投与用に製剤化され、追加の抗ウイルス剤が１週間あたり１回の投与により適している（例えば、ＰＥＧ化インターフェロン−α）場合がある。
【０３８５】
組成物は、例えば、液体、半固体（例えば、ゲル）または固体の形態であってもよい。
【０３８６】
いくつかの実施形態において、組成物は固体形態である。組成物用の固体形態の例には、限定されないが、錠剤、カプセル剤（例えば、封入固体を含む）、カプレット剤、散剤、ミクロスフェロイドおよび顆粒剤が含まれる。
【０３８７】
組成物は好ましくは、組成物の意図された投与頻度に従って製剤化される。これは結果的には、活性薬剤の特性に左右される。本明細書中で検討されているように、ＨＣＱは、例えば、１日あたり１回投与され得るが、同様に、他の頻度（例えば、１日に２回または３回）でも投与され得る。したがって、意図された投与頻度は、ＨＣＱと共投与される抗ウイルス剤の特性に左右される。
【０３８８】
したがって、例えば、抗ウイルス剤が１日あたり１回の投与に好適である実施形態において、組成物は必要に応じて、１日あたり１回の投与用に製剤化され、抗ウイルス剤が１日あたり２回の投与に好適である実施形態では、組成物は必要に応じて、１日あたり２回の投与用に製剤化される。他の場合についても同様である。
【０３８９】
いくつかの実施形態において、抗ウイルス剤は、事実上様々な頻度で投与され得る（例えば、１日あたり１回、１日あたり２回、および、１日あたり３回）。典型的には、他の要因が同等であるとき、対象にとって、組成物は１日あたり１回投与されることの方が、１日あたり２回投与されるよりも好都合であるはずであり、また、組成物が１日あたり２回投与されることの方が、１日あたり３回以上投与されるよりも好都合であるはずであり、また、組成物が１日あたり一定の回数で投与されることの方が、日毎に異なる回数で投与されるよりも好都合であるはずである。
【０３９０】
任意の所与の抗ウイルス剤について、薬剤の最適な投与頻度（例えば、最も治療有効的および／または最も好都合な投与頻度）は、典型的には、当業者には知られているはずである。
【０３９１】
活性薬剤は、組成物を適切に製剤化することによって、例えば、組成物を組成物中の活性薬剤の放出遅延用に製剤化することによって、より低頻度の投与（例えば、１日あたり２回以上の代わりに、特に好都合であるような１日あたり１回）により適するようにされ得るものとする。
【０３９２】
徐放性の調製物は典型的には、徐放性の生分解性担体を含む。様々な徐放性の生分解性担体が当業界では広く知られている。これらは、活性化合物（複数も可）を内部に捕らえ、好適な環境（例えば、水性、酸性、塩基性など）のもとでゆっくり分解／溶解させ、それによって、体液中で分解／溶解し、そこで活性化合物を放出することができる粒子を形成し得る物質である。粒子は好ましくはナノ粒子である（すなわち、ナノメートル範囲にあり、例えば、直径が約１〜約５００ｎｍの範囲、好ましくは、直径が約５０〜２００ｎｍの範囲、最も好ましくは、直径が約１００ｎｍである）。
【０３９３】
薬剤が放出される速度は一般には、用量形態が崩壊または溶解する速度に左右される。崩壊は、ＧＩ液と接触している薬剤表面積を大きく増大させ、それにより、薬剤の溶解および吸収を促進させる。崩壊剤および他の賦形剤（例えば、希釈剤、滑沢剤、界面活性剤、結合剤、分散剤）は、多くの場合、これらのプロセスを容易にするために製造時に加えられる。界面活性剤は、溶解速度を、薬剤の湿潤性、溶解性および分散性を増大させることによって増大させる。固体形態の崩壊を、錠剤化手順の期間中に加えられる過度な圧力によって、または、錠剤を消化管の消化プロセスから保護するために施される特殊コーティングによって遅らせることができる。疎水性の滑沢剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム）は活性薬剤に結合し、その生物学的利用能を低下させることができる。
【０３９４】
溶解速度により、吸収に関する薬剤の利用能が決定される。溶解が吸収よりも遅いときには、溶解は律速段階になる。全体的な吸収を、製剤化を操作することによって制御することができる。例えば、粒子サイズを小さくすることにより、薬剤の表面積が増大し、したがって、遅い溶解によって通常の場合にはその吸収が制限される薬剤のＧＩ吸収の速度および程度が大きくなる。溶解速度は、薬剤が、塩、結晶または水和物の形態であるかどうかに影響される。
【０３９５】
経口用の徐放性形態は多くの場合、治療的薬剤濃度を１２時間超にわたって維持するために設計される。吸収速度は、薬剤粒子をワックスまたは他の水不溶性物質により被覆することによって、あるいは、薬剤を、ＧＩ管通過中に薬剤をゆっくり放出させるマトリックスに包埋することによって、あるいは、薬剤をイオン交換樹脂と複合体化することによって制御することができる。
【０３９６】
したがって、例えば、錠剤形態での徐放性製剤は、消化液と接触して膨潤して、ゲルを形成し、これにより、錠剤をコーティングするバリアを生じさせる親水性ポリマーの使用に基づき得る。バリアにより、錠剤の内部と、周囲の媒体との間における物理的交換が制限される。結果として、水が錠剤マトリックスに向かって侵入すること、および、薬剤の拡散が遅くなることによって、薬剤は制御された形で遅延放出され得る。
【０３９７】
様々なタイプのポリマーを、薬剤の遅延放出用マトリックスとして使用することができ、例えば、ポリ塩化ビニル、ポリエチレンポリアミド、エチルセルロース、シリコーン、ポリ（メタクリル酸ヒドロキシエチル）、他のアクリル酸コポリマーおよびポリ酢酸ビニル−ポリ塩化ビニルコポリマーなどを使用することができる。
【０３９８】
いくつかの実施形態において、組成物は単位用量形態（例えば、経口投与のために製剤化された単位用量形態）である。
【０３９９】
用語「単位用量形態物」は、本明細書中で使用される場合、（例えば、固体形態での）物理的個別単位（ただし、それぞれの単位は、所望される治療効果を生じさせるために計算された所定量のＨＣＱおよび抗ウイルス剤を、（例えば、本明細書中に記載されるように）少なくとも１つの医薬的に許容され得る担体、希釈剤、賦形剤またはそれらの組合せと共に含有する）を表す。
【０４００】
組成物におけるＨＣＱおよび抗ウイルス剤の量は場合により、（例えば、本明細書中の他の箇所で記載されるように）１日あたりの適切な量の各活性薬剤を提供するように調節されていてもよい。場合により、ＨＣＱの量は、（例えば、本明細書中の他の箇所で記載されるように）ＨＣＶ誘導による自食作用を阻害するのに十分であり、かつ／または、ＨＣＶを（例えば、本明細書中の他の箇所で記載されるように）、組成物に含まれる抗ウイルス剤に対して感作するのに十分なものである。
【０４０１】
場合により、各単位用量形態は、１日について好適である本明細書中上記で記載されるようなＨＣＱの治療有効量（例えば、４００〜２０００ｍｇ、５００〜１０００ｍｇ、など）を含む。場合により、そのような医薬組成物はさらに、１日あたり１回の投与用に特定される。
【０４０２】
別法として、各単位用量形態は、１日について好適である本明細書中上記で記載されるようなＨＣＱの治療有効量の半分（例えば、２００〜１０００ｍｇ、２５０〜５００ｍｇ、など）を含む。場合により、そのような医薬組成物はさらに、１日あたり２回の投与用に特定される。
【０４０３】
本明細書中に記載される単位用量形態は、本明細書中に記載される個別単位用量形態を包装材で一緒に包装された形で含むキットにおいて一緒に提供され得る。
【０４０４】
薬物の配合および投与のための技術が「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ、最新版）に見出されることができ、これは参考として本明細書中に組み込まれる。
【０４０５】
本発明の実施形態の医薬組成物は、この分野で十分に知られているプロセスによって、例えば、従来の混合、溶解、造粒、糖衣錠作製、研和、乳化、カプセル化、包括化または凍結乾燥のプロセスによって製造されることができる。
【０４０６】
従って、本発明に従って使用される医薬組成物は、医薬品として使用されることができる調製物への有効成分（ＨＣＱおよび本明細書中に記載される抗ウイルス剤）の加工を容易にする賦形剤および補助剤を含む１つまたは複数の生理学的に許容され得る担体を使用して従来の様式で配合されることできる。適正な配合は、選ばれた投与経路に依存する。
【０４０７】
注射の場合、本発明の実施形態の医薬組成物の有効成分は、水溶液において、好ましくは生理学的に適合しうる緩衝液（例えば、ハンクス溶液、リンゲル溶液、または生理学的な食塩緩衝液など）において、プロピレングリコールやポリエチレングリコールなどの有機溶媒と共にまたはかかる有機溶媒なしで配合されることができる。
【０４０８】
経粘膜投与の場合、浸透剤が配合において使用される。そのような浸透剤は、この分野では一般に知られている。
【０４０９】
経口投与の場合、有効成分は、本明細書中に記載される有効成分をこの分野でよく知られている医薬的に許容され得る担体と組み合わせることによって容易に配合されることができる。そのような担体は、有効成分が、患者によって経口摂取される錠剤、ピル、糖衣錠、カプセル、液剤、ゲル、シロップ、スラリー剤および懸濁物などとして配合されることを可能にする。経口使用される薬理学的調製物は、固体の賦形剤を使用し、得られた混合物を場合により粉砕し、錠剤または糖衣錠コアを得るために、望ましい好適な補助剤を添加した後、顆粒の混合物を加工して作製されることができる。好適な賦形剤は、特に、ラクトース、スクロース、マンニトールまたはソルビトールを含む糖などの充填剤；セルロース調製物、例えば、トウモロコシデンプン、コムギデンプン、コメデンプン、ジャガイモデンプン、ゼラチン、トラガカントゴム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ナトリウムカルボメチルセルロースなど；および／またはポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）などの生理学的に許容され得るポリマーである。もし望むなら、架橋されたポリビニルピロリドン、寒天、またはアルギン酸もしくはその塩（例えば、アルギン酸ナトリウムなど）などの崩壊剤が加えられることができる。
【０４１０】
糖衣錠コアには、好適なコーティングが施される。この目的のために、高濃度の糖溶液を使用することができ、この場合、糖溶液は、場合により、アラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、カルボポールゲル、ポリエチレングリコール、二酸化チタン、ラッカー溶液、および好適な有機溶媒または溶媒混合物を含有しうる。色素または顔料は、活性化合物の量を明らかにするために、または活性化合物の量の種々の組合せを特徴づけるために、錠剤または糖衣錠コーティングに加えられることができる。
【０４１１】
経口使用されうる医薬組成物としては、ゼラチンから作製されたプッシュ・フィット型カプセル、ならびに、ゼラチンおよび可塑剤（例えば、グリセロールまたはソルビトールなど）から作製された軟いシールされたカプセルが挙げられる。プッシュ・フィット型カプセルは、充填剤（例えば、ラクトースなど）、結合剤（例えば、デンプンなど）、滑剤（例えば、タルクまたはステアリン酸マグネシウムなど）、および場合により安定化剤との混合で有効成分を含有することができる。軟カプセルでは、本明細書中に記載される有効成分は、好適な液体（例えば、脂肪油、流動パラフィンまたは液状のポリエチレングリコールなど）に溶解または懸濁されることができる。さらに、安定化剤が加えられることができる。経口投与される配合物はすべて、選ばれた投与経路について好適な投薬形態でなければならない。
【０４１２】
口内投与の場合、組成物は、従来の方法で配合された錠剤またはトローチの形態を取ることができる。
【０４１３】
鼻吸入による投与の場合、本発明の実施形態による使用のための有効成分は、好適な噴射剤（例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタンまたは二酸化炭素）の使用により加圧パックまたはネブライザーからのエアロゾルスプレー提示物（これは、典型的には、粉末化された、液状化された、および／または気体状の担体を含む）の形態で都合よく送達される。加圧されたエアロゾルの場合、投与量は、計量された量を送達するためのバルブを備えることによって決定されることができる。吸入器において使用される、例えば、ゼラチン製のカプセルおよびカートリッジは、有効成分および好適な粉末基剤（例えば、ラクトースまたはデンプンなどであるが、これらに限定されない）の粉末混合物を含有して配合されることができる。
【０４１４】
本明細書中に記載される有効成分は、例えば、ボーラス注射または持続注入による非経口投与のために製剤化され得る。注射用製剤は、単位用量形態で、例えば、場合により、保存剤が加えられたアンプルまたは多回用量容器での単位用量形態で与えられ得る。組成物は、油性または水性賦形剤における懸濁液、溶液または乳化液であってもよく、また、製剤化剤（例えば、懸濁剤、可溶化剤および／または分散剤など）を含有することができる。
【０４１５】
非経口投与用の医薬組成物は、有効成分の水溶液を含む。加えて、有効成分の懸濁液を油性の適切な注射用の懸濁液および乳化液（例えば、油中水型、水中油型または油中油中水型の乳化液）として調製することができる。好適な親油性溶媒または親油性賦形剤には、油脂類（例えば、ゴマ油など）、あるいは、合成脂肪酸エステル（例えば、オレイン酸エチルなど）、トリグリセリドまたはリポソームが含まれる。水性の注射用懸濁液は、懸濁液の粘稠度を増大させる物質、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトールまたはデキストランなどを含有することができる。場合により、懸濁液はまた、高濃度溶液の調製に備えるために有効成分の溶解性を増大させる好適な安定剤または薬剤を含有することができる。
【０４１６】
別法として、有効成分は、好適な賦形剤（例えば、無菌の発熱物質不含有水）を用いて使用前に構成されるための粉末形態であってもよい。
【０４１７】
本発明の実施形態の有効成分はまた、例えば、慣用的坐薬基剤（例えば、カカオ脂または他のグリセリドなど）を使用して直腸用組成物（例えば、坐薬または停留浣腸剤など）に製剤化され得る。
【０４１８】
本明細書中に記載される医薬組成物はまた、ゲル相担体または賦形剤の好適な固体を含むことができる。そのような担体または賦形剤の例には、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、様々な糖、デンプン、セルロース誘導体、ゼラチンおよびポリマー（例えば、ポリエチレングリコールなど）が含まれるが、これらに限定されない。
【０４１９】
本発明の組成物は、所望されるならば、有効成分を含有する１つまたは複数の単位投薬形態物を含有し得るパックまたはディスペンサーデバイス（例えば、ＦＤＡ承認キットなど）で提供され得る。パックは、例えば、金属ホイルまたはプラスチックホイルを含むことができる（例えば、ブリスターパックなど）。パックまたはディスペンサーデバイスには、投与のための説明書が付随し得る。パックまたはディスペンサーデバイスはまた、医薬品の製造、使用または販売を規制する政府当局によって定められた形式で、容器に関連した通知によって適応させることがあり、この場合、そのような通知は、組成物の形態、あるいはヒトまたは動物への投与の当局による承認を反映する。そのような通知は、例えば、処方薬物について米国食品医薬品局によって承認されたラベル書きであり得るか、または、承認された製品添付文書であり得る。
【０４２０】
適合し得る医薬用担体に配合された、ＨＣＱおよび本明細書中に記載される抗ウイルス剤を含む組成物もまた、上で詳述されたように、ＨＣＶ関連疾患を処置するために調製され、包装材中に包装され、包装材中にまたは包装材の表面において特定され得る。
【０４２１】
本明細書中で使用される用語「約」は、±１０％を示す。
【０４２２】
用語「含む／備える（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ、ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ、ｉｎｃｌｕｄｅｓ、ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」、およびそれらの同根語は、「含むが、それらに限定されない（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ  ｂｕｔ  ｎｏｔ  ｌｉｍｉｔｅｄ  ｔｏ）」ことを意味する。
【０４２３】
用語「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｏｆ）」は、「含み、それらに限定される（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ  ａｎｄ  ｌｉｍｉｔｅｄ  ｔｏ）」ことを意味する。
【０４２４】
表現「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ）」は、さらなる成分、工程および／または部分が、主張される組成物、方法または構造の基本的かつ新規な特徴を実質的に変化させない場合にだけ、組成物、方法または構造がさらなる成分、工程および／または部分を含み得ることを意味する。
【０４２５】
用語「例示的」は、本明細書では「例（ｅｘａｍｐｌｅ，ｉｎｓｔａｎｃｅ又はｉｌｌｕｓｔｒａｔｉｏｎ）として作用する」ことを意味するために使用される。「例示的」として記載されたいかなる実施形態も必ずしも他の実施形態に対して好ましいもしくは有利なものとして解釈されたりかつ／または他の実施形態からの特徴の組み入れを除外するものではない。
【０４２６】
用語「任意選択的（場合により）」は、本明細書では、「一部の実施形態に与えられるが、他の実施形態には与えられない」ことを意味するために使用される。本発明のいかなる特定の実施形態も対立しない限り複数の「任意選択的（場合による）」な特徴を含むことができる。
【０４２７】
本明細書中で使用される場合、単数形態（「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」）は、文脈がそうでないことを明確に示さない限り、複数の参照物を包含する。例えば、用語「化合物（ａ  ｃｏｍｐｏｕｎｄ）」または用語「少なくとも１つの化合物」は、その混合物を含めて、複数の化合物を包含し得る。
【０４２８】
本開示を通して、本発明の様々な態様が範囲形式で提示され得る。範囲形式での記載は単に便宜上および簡潔化のためであり、本発明の範囲に対する柔軟性のない限定として解釈すべきでないことを理解しなければならない。従って、範囲の記載は、具体的に開示された可能なすべての部分範囲、ならびに、その範囲に含まれる個々の数値を有すると見なさなければならない。例えば、１〜６などの範囲の記載は、具体的に開示された部分範囲（例えば、１〜３、１〜４、１〜５、２〜４、２〜６、３〜６など）、ならびに、その範囲に含まれる個々の数値（例えば、１、２、３、４、５および６）を有すると見なさなければならない。このことは、範囲の広さにかかわらず、適用される。
【０４２９】
数値範囲が本明細書中で示される場合には常に、示された範囲に含まれる任意の言及された数字（分数または整数）を含むことが意味される。第１の示された数字および第２の示された数字「の範囲である／の間の範囲」という表現、および、第１の示された数字「から」第２の示された数「まで及ぶ／までの範囲」という表現は、交換可能に使用され、第１の示された数字と、第２の示された数字と、その間のすべての分数および整数とを含むことが意味される。
【０４３０】
本明細書中で使用される用語「方法（ｍｅｔｈｏｄ）」は、所与の課題を達成するための様式、手段、技術および手順を示し、これには、化学、薬理学、生物学、生化学および医学の技術分野の実施者に知られているそのような様式、手段、技術および手順、または、知られている様式、手段、技術および手順から、化学、薬理学、生物学、生化学および医学の技術分野の実施者によって容易に開発されるそのような様式、手段、技術および手順が含まれるが、それらに限定されない。
【０４３１】
本明細書で使用される場合、用語「治療する／処置する」には、状態の進行を取り消すこと、実質的に阻害すること、遅くすること、または、逆向きにすること、状態の臨床的症状または審美的症状を実質的に改善すること、あるいは、状態の臨床的症状または審美的症状の出現を実質的に防止することが含まれる。
【０４３２】
明確にするため別個の実施形態の文脈で説明されている本発明の特定の特徴が、単一の実施形態に組み合わせて提供されることもできることは分かるであろう。逆に、簡潔にするため単一の実施形態で説明されている本発明の各種の特徴は別個にまたは適切なサブコンビネーションで、あるいは本発明の他の記載される実施形態において好適なように提供することもできる。種々の実施形態の文脈において記載される特定の特徴は、その実施形態がそれらの要素なしに動作不能である場合を除いては、それらの実施形態の不可欠な特徴であると見なされるべきではない。
【０４３３】
本明細書中上記に描かれるような、および、下記の請求項の節において特許請求されるような本発明の様々な実施形態および態様のそれぞれは、実験的裏付けが下記の実施例において見出される。
【実施例】
【０４３４】
次に下記の実施例が参照されるが、下記の実施例は、上記の説明と一緒に、本発明を非限定様式で例示する。
【０４３５】
材料：
クロロキン二リン酸塩をＳｉｇｍａから得た；
ヒドロキシクロロキン硫酸塩をＳｉｇｍａから得た；
インターフェロン−α（ヒト、ＰＥＧ化体）（ペグインターフェロンアルファ−２ｂ）をＳｃｈｅｒｉｎｇ  Ｐｌｏｕｇｈから得た；
リバビリンをＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈから得た；
ボセプレビルおよびＮＭ−１０７を文献の記載の通りに合成した。
【０４３６】
インビトロＨＣＶレプリコンモデル：
Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）複製に関する研究は、レプリコンシステムとして知られている細胞培養モデルの開発によって大きく進んでいる。
【０４３７】
ヘパトーマ細胞株Ｈｕｈ７は細胞株９−１３由来のサブクローンである。ＨＣＶ遺伝子型１ｂのレプリコンＩ３７７／ＮＳ３−３’（受け入れ番号ＡＪ２４２６５２）を発現するＨｕｈ７細胞株がＬｏｈｍａｎｎらによって作製された［Ｌｏｈｍａｎｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、１９９９、２８５：１１０〜１１３］。ＧＳ４．３と称されるレプリコン含有細胞培養物を、Ｃｈｒｉｓｔｏｐｈ  Ｓｅｅｇｅｒ博士（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅｒａｃｈ、Ｆｏｘ  Ｃｈａｓｅ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｎｔｅｒ、フィラデルフィア、ペンシルベニア）から得て、Ｚｈｕら［Ｊ  Ｖｉｒｏｌ、２００３、７７：９２０４〜９２１０］に記載されるように調製した。
【０４３８】
図１に示されるように、レプリコンは、ＨＣＶ構造タンパク質をコードする遺伝子ユニットが、ネオマイシンホスホトランスフェラーゼＩＩ（ＮＰＴＩＩ）をコードする遺伝子によって置き換えられたサブゲノムＨＣＶ配列からなる。ＮＰＴＩＩの発現はＨＣＶの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）の制御下にあり、これに対して、（真の３’−ＵＴＲに至るまでの）ＨＣＶタンパク質のＮＳ３からＮＳ５までをもたらす領域の翻訳は脳心筋炎ウイルス（ＥＭＣＶ）の内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）によって制御される。ＮＳ３タンパク質はＨＣＶポリタンパク質を切断して、ＨＣＶ複製のために要求される成熟型のＮＳ３、ＮＳ４Ａ、ＮＳ４Ｂ、ＮＳ５ＡおよびＮＳ５Ｂタンパク質を放出する。
【０４３９】
この構築物は、細胞株９−１３に存在するレプリコンと類似しており、抗ウイルス剤のスクリーニングのための安定したＮＰＴＩＩ発現をもたらす。
【０４４０】
Ｈｕｈ７細胞の培養および処理：
Ｈｕｈ７細胞を、２ｍＭのＬ−グルタミン、非必須アミノ酸（ＮＥＡＡ）、１０％のウシ胎児血清（ＦＢＳ）および５００ｍｇ／ｍｌのジェネティシンが補充されたＤＭＥＭ（ダルベッコ改変イーグル培地）において５％ＣＯ２の雰囲気、および３７℃で維持した。細胞を２〜３日毎に１：３または１：４の比率で小分けした。アッセイの２４時間前に、Ｈｕｈ７細胞を集め、計数し、１００μｌの標準的な維持培地において９６ウエルプレートに７５００細胞／ウエルで置床し、上記条件でインキュベーションした。アッセイを開始するために、培養培地を除き、細胞をＰＢＳ（リン酸塩緩衝食塩水）により１回洗浄した。対照化合物のみについては、９０μｌのアッセイ培地（Ｌ−グルタミン、ＮＥＡＡおよび１０％ＦＢＳを含むＤＭＥＭ）を加えた。
【０４４１】
試験化合物をアッセイ培地における１０Ｘストック液として調製した。アッセイ培地における化合物の系列希釈物を１０μｌの総体積で加え、その後、プレートを揺すって混合し、上記のように７２時間インキュベーションした。
【０４４２】
ヒトインターフェロン−α（ペグインターフェロンアルファ−２ｂ）およびリバビリンは、ＲＮＡ複製を低下させるＣ型肝炎ウイルス阻害剤であり、陽性対照化合物として各実験に含めた。陽性対照化合物を、低い対照値および高い対照値を与えるために、２つの異なる濃度で、すなわち、インターフェロンについては１ｐＭおよび１ｎＭで、リバビリンについては１００μＭおよび２００μＭでデュプリケイトで加えた。
【０４４３】
ＨＣＶレベルの定量：
ＨＣＶのＲＮＡレベルを、ＴａｑＭａｎ（登録商標）ＲＴ−ＰＣＲを使用して測定した。総細胞ＲＮＡを単離し、ＨＣＶの遺伝子型１〜６を検出および定量するＲｅａｌＴｉｍｅ  ＨＣＶアッセイ（逆転写、ＰＣＲ増幅および検出／定量のためのｍ１０００（商標）Ａｕｔｏｍａｔｅｄ  Ｓａｍｐｌｅ  Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍおよびｍ２０００ｒｔ（商標）装置、Ａｂｂｏｔｔ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｎｃ．）を使用することによって増幅した。この分子的遺伝子型決定法はウイルスゲノムの５’非翻訳（ＵＴＲ）領域を標的とし（図１を参照のこと）、ウイルスゲノムの増幅に基づく。内部対照（これはＲＴ−ＰＣＲによって同時に増幅される）は、プロセスが各サンプルについて正しく進行したことを立証する役割を果たした。陰性対照、低い陽性対照および高い陽性対照もまた導入された。結果は国際単位／ｍｌ（ＩＵ／ｍｌ）で記録される：１ＩＵ／ｍｌ＝４．３コピー／ｍｌ。検出下限は９５％以上の確率により１２ＩＵ／ｍｌであった。アッセイのダイナミックレンジは１２から１００００００００ＩＵ／ｍｌにまで広がっていた。ＥＣ５０は、レプリコン細胞におけるＨＣＶ  ＲＮＡレベルが５０％低下する化合物の濃度として定義された。
【０４４４】
細胞毒性の定量：
細胞毒性効果を測定するために、化合物による７２時間の処理の後におけるレプリコン細胞の生存能を、ＭＴＳ（３−［４，５−ジメチルチアゾール−２−イル］−５−［３−カルボキシメトキシフェニル］−２−［４−スルホフェニル］−２Ｈ−テトラゾリウム内部塩）アッセイ（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ９６（登録商標）ＡＱｕｅｏｕｓ  Ｏｎｅ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ  Ｃｅｌｌ  Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  Ａｓｓａｙ；Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して求めた。ＣＣ５０は、細胞生存能を５０％低下させる化合物の濃度として定義された。
【０４４５】
抗ウイルス薬剤の組合せの分析：
抗ウイルスアッセイを、Ｈｕｈ７細胞について本明細書中上記で記載されたように、Ｈｕ７細胞を２つの化合物の組合せで処理することによって行った。薬剤の各組合せをトリプリケイトでアッセイした。
【０４４６】
薬剤組合せの効果を、ＰｒｉｃｈａｒｄおよびＳｈｉｐｍａｎ［Ａｎｔｉｖｉｒａｌ  Ｒｅｓ、１９９０、１４：１８１〜２０５］によって記載される方法に従って評価した。理論的な相加効果を下記の等式によって個々の化合物の用量応答曲線から計算した：Ｚ＝Ｘ＋Ｙ（１−Ｘ）（これは、Ｂｌｉｓｓ独立モデルとしてこの分野では示される等式である）、式中、ＸおよびＹは、個々の化合物によってもたらされる阻害を表し、Ｚは、化合物の組合せによってもたらされる理論的効果を表す。実験結果を、相加効果（すなわち、「Ｚ」）について予想される理論的結果に対して正規化し、その後、理論的な相加曲面を実際の実験曲面から引いて、薬剤間の相乗作用を表す水平曲面を得た。したがって、曲面がゼロ平面に等しいとき、組合せは、相乗的よりはむしろ相加的である。ゼロ平面の上側（例えば、少なくとも２０％）にある曲面は組合せの相乗効果を示し、ゼロ平面より低い（例えば、−２０％より低い）曲面は薬剤間の拮抗作用を示す。
【０４４７】
薬剤組合せの効果はまた、ＣｈｏｕおよびＴａｌａｌａｙ［Ｔｒｅｎｄｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｓｃｉ、１９８３、４：４５０〜４５４］によって記載される方法に基づくＣａｌｃｕＳｙｎソフトウエアを使用して、併用指数（ＣＩ）をＬｏｅｗｅ相加性モデルにおいて３つの異なる薬剤比率について計算することによって評価された。１未満、１および１超のＣＩ値は、相乗作用、相加効果および拮抗作用をそれぞれ示す。
【０４４８】
薬剤組合せの効果はまた、ＣａｌｃｕＳｙｎソフトウエアを使用して、標準的なアイソボログラム解析によって評価された。
【０４４９】
実施例１
ＨＣＶのＲＮＡ複製に対するインターフェロン−αとの併用でのヒドロキシクロロキンの効果
Ｈｕｈ７細胞を、本明細書中上記のように、様々な濃度（０、０．４１、１．２３、３．７、１１．１、３３．３、１００および３００ＩＵ／ｍｌ）のＰＥＧ化ヒトインターフェロン−α（ペグインターフェロンアルファ−２ｂ）との併用において様々な濃度（０、０．２２、０．６６、２、８および１８μＭ）のヒドロキシクロロキン硫酸塩（ＨＣＱ）により処理した。ＨＣＶ  ＲＮＡのレベルをＲＴ−ＰＣＲによって測定し、結果を、本明細書中上記のように、ＰｒｉｃｈａｒｄおよびＳｈｉｐｍａｎモデル、Ｃｈｏｕ−Ｔａｌａｌａｙモデルおよびアイソボログラムモデルに従って解析した。加えて、ＨＣＱおよびインターフェロン−α（ＩＦＮα）の試験された組合せの細胞毒性を本明細書中上記のように求めた。
【０４５０】
図２に示されるように、ＨＣＱおよびＩＦＮαはそれぞれが、単独および併用での両方で、ＨＣＶのＲＮＡ複製を用量依存的に阻害した。
【０４５１】
図３Ａおよび図３Ｂに示されるように、ＨＣＱおよびＩＦＮαは、Ｐｒｉｃｈａｒｄ−Ｓｈｉｐｍａｎモデルに従って求められたように、併用における相乗効果を示した。この相乗効果は３．７ＩＵ／ｍｌのＩＦＮαおよび６μＭのＨＣＱの組合せについて特に強く、これらについては、ＨＣＶの阻害が、相加効果について予想されるよりも３０％大きかった。
【０４５２】
表１は、Ｃｈｏｕ−Ｔａｌａｌａｙモデルに従って計算される、ヒドロキシクロロキン（ＨＣＱ）およびインターフェロン−α（ＩＦＮα）の組合せについての併用指数（ＣＩ）の値を示す。
【０４５３】
表１に示されるように、ＨＣＱおよびＩＦＮαは併用における相乗効果を示し、計算された併用指数はすべて、１よりもかなり低かった。
2013529627.tif 000003
【０４５４】
ＥＤ５０、ＥＤ７５およびＥＤ９０は、ウイルス活性の５０％阻害、７５％阻害および９０％阻害をもたらす薬剤の量を表す。
【０４５５】
図４に示されるように、ＨＣＱおよびＩＦＮαは、アイソボログラムに従って求められた場合、併用における相乗効果を示した。
【０４５６】
これらの様々なモデルの間における一致は、ヒドロキシクロロキンおよびインターフェロン−αが、併用投与されたとき、相当の相乗効果を示すことを示している。
【０４５７】
図５に示されるように、細胞生存能はＩＦＮαの試験用量によって影響されず、ＨＣＱの最大試験用量（１８μＭ）によってほんのわずかに低下しただけであった。
【０４５８】
これらの結果は、特に強い相乗作用を示した組合せを含めて、ＨＣＱおよびＩＦＮαの試験された組合せのほとんどが実質的に非毒性であることを示している。
【０４５９】
比較のために、クロロキン二リン酸塩を、ＨＣＱについて記載されたのと同じ手順を使用して、ＩＦＮαとの併用で試験した。クロロキンおよびＩＦＮαはそれぞれがＨＣＶのＲＮＡ複製を阻害した（データは示されず）。
【０４６０】
図６に示されるように、クロロキンは、Ｐｒｉｃｈａｒｄ−Ｓｈｉｐｍａｎモデルに従って求められた場合、認められるほどの相乗効果をＩＦＮαとの併用において何ら示さなかった。
【０４６１】
実施例２
機構的洞察
ＨＣＶレプリコン細胞におけるＮＦ−κＢシグナル伝達に対するヒドロキシクロロキンの効果：
Ｈｕｈ７保有レプリコンモデルを使用して、ＨＣＶ感染に対するヒドロキシクロロキン（ＨＣＱ）の効果を評価した。
【０４６２】
一組の実験において、ＨＣＶレプリコン−Ｈｕｈ−７／ｎｅｏ細胞を９６ウエルプレートに１６時間播種した。その後、細胞をいくつかの濃度のＨＣＱと７２時間インキュベーションした。ＨＣＶレプリコンの複製レベルを、レプリコンにより運ばれるネオマイシン遺伝子産物（ＮＰＴＩＩ）を定量すること（％ＮＴＰＩＩ）によって求めた。データを図７に示す。棒は、対照細胞と比較した場合の百分率として表されるデュプリケイトウエルの平均を表し、誤差は標準偏差（ＳＤ）を示している。差を、スチューデントｔ検定を使用して、ＨＣＱにより処理された状態について、対応する非処理の状態と比較した。基本的には、０．０５未満のｐ値を統計学的に有意であると見なし、星印（＊）によって表す。
【０４６３】
別の一組の実験において、ＨＣＶレプリコンを有するＨｕｈ７細胞を０．５μＭおよび１μＭのＨＣＱにより４８時間処理した。ＮＳ５Ａタンパク質およびＨＣＶコアタンパク質を検出するために行われる免疫ブロットアッセイは、同様に、ＨＣＱが、非処理の状態と比較した場合、図８に示されるように、ＨＣＶコアタンパク質およびＮＳ５ａタンパク質の両方のレベルを用量依存的に低下させ得ることを示した。α−アクチンのウエスタンブロッティングは、サンプルの同等の負荷を示した。
【０４６４】
ＮＳ５Ａタンパク質およびＨＣＶコアタンパク質は、細胞遺伝子の発現および／または活性化を調節することが示されているので、包括的遺伝子発現に対するＨＣＱの効果を評価した。Ｈｕｈ７保有レプリコン細胞を、１０μＭのＨＣＱにより、６時間、１２時間および２４時間処理した。それぞれの状態をデュプリケイトで行った。細胞から抽出された総ＲＮＡを、遺伝子発現解析のために、Ｗｈｏｌｅ  Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ａｇｉｌｅｎｔ  ４×４４Ｋにハイブリダイゼーションさせた。
【０４６５】
正規化後、相対強度値がバックグラウンドよりも大きかった、それぞれのデュプリケイトにおいてアノテーションされた遺伝子を選択した。調節を受けた遺伝子の数を、倍数変化（ＦＣ）に基づく選択に従った選別、すなわち、６時間、１２時間および２４時間における少なくとも２ＦＣに従った選別を使用して求めた。
【０４６６】
倍数変化を下記のように計算した：（デュプリケイトで行われた）１０μＭのＨＣＱにより処理されたＨｕｈ７保有レプリコン細胞において測定された遺伝子発現の正規化された値を、速度論的な６時間、１２時間および２４時間の各時点で、非処理細胞における対応する値によって除した。倍数変化（ＦＣ）のカットオフを１２時間および２４時間において、アップレギュレーションについては、ＦＣ≧２として設定し、ダウンレギュレーションについては、ＦＣ≦０．５として設定した。データを表２および表３に示す。
【０４６７】
表２に示されるように、調節を受けた遺伝子のほとんどはダウンレギュレーションされ、効果は２４時間の処理においてより顕著であった。
【０４６８】
表３に示されるように、２３個の調節された遺伝子の中で、３つだけがアップレギュレーションされることが見出され（ＦＣ≧２；太字）、一方、２０個が有意に抑制されている（ＦＣ≦０．５；斜体字）。
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2013529627.tif 000005
【０４６９】
興味深いことに、２つのダウンレギュレーションされた遺伝子は転写因子のＲＥＬＢおよびＮＦＫＢ２をコードする。そのうえ、ＮＦ−κＢ経路のいくつかの既知標的遺伝子はダウンレギュレーションされていることが同時に見出された：ＩＣＡＭ１、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ５およびＣＹＲ６１／ＣＣＮ１。他のダウンレギュレーションされた遺伝子（例えば、Ｃ８ｏｒｆ４、ＧＰＲ１０９Ｂ、ＮＲＧ１、ＰＨＬＤＡ１およびＲＨＯＢなど）はアポトーシスプロセスのＧＯ用語（ｔｅｒｍ）に機能的に関連づけられる。
【０４７０】
ＮＳ５Ａタンパク質およびＨＣＶコアタンパク質はＮＦ−κＢを活性化することが知られているので、関連した転写因子をコードする遺伝子のＨＣＱによるダウンレギュレーションはウイルスタンパク質発現の阻害の結果を反映し得る。
【０４７１】
ＨＣＶによって誘導される遺伝子発現調節に対するＨＣＱ処理の効果：
ＨＣＶレプリコンモデルは、ＨＣＶ複製の各段階の期間中に生じる細胞内調節を研究することを可能にするが、このモデルは、ＨＣＶ感染性粒子の産生を不完全なウイルス生活周期のために維持することができないことによって制限され、したがって、ＨＣＶ進入段階の期間中に生じる分子的事象を研究することができない。加えて、このモデルでは、急性感染から生じる分子内修飾を研究することができない。
【０４７２】
したがって、ＨＣＶ感染に対するＨＣＱの包括的影響を調べるために、感染性のＨＣＶ細胞培養（ＨＣＶｃｃ）系（これはレプリコンモデルよりも自然感染に近い）の遺伝子発現プロファイリングを行った。遺伝子発現解析を、感染の包括的影響を調べるためにＨＣＶ感染細胞およびＨＣＶ非感染細胞に対して行い、また、ＨＣＶによって前もって調節された宿主遺伝子発現に対するＨＣＱの効果を特定するために、ＨＣＱにより処理されたＨＣＶ感染細胞に対して行った。
【０４７３】
最初に、感染期間中に生じる遺伝子発現調節を、非感染Ｈｕｈ７細胞およびＪＦＨ１／ＣｓＮ６Ａ４感染Ｈｕｈ７細胞を感染後６時間、２４時間および４８時間の速度論的時点で比較することによって解析した。このモデルは抗ウイルス剤抵抗性ＨＣＶ遺伝子型についてのモデルであることが特筆される。
【０４７４】
発現が感染によって調節される遺伝子を、非感染の対照状態と比較して発現の少なくとも２倍の変化に基づくデータ選別に従って選択した。調節を受けた遺伝子の百分率を、１０２３８個の遺伝子との比較において、すなわち、意味のある遺伝子（バックグラウンドを超え、ＲｅｆＳｅｑ  ｍＲＮＡ  ＩＤによってアノテーションされた顕著に発現された遺伝子）の総数との比較において計算した。
【０４７５】
感染によって顕著に調節された遺伝子の各速度論的時点についての割合を図９Ａに例示する。６時間では、遺伝子の総数の１％未満が調節されていることが見出された（６個がダウンレギュレーションされ、１５個がアップレギュレーションされている）。２４時間では、約１３％の遺伝子（１３１９個の遺伝子）が調節され、それらの中で、約８％がアップレギュレーションされ、約５％がダウンレギュレーションされている。４８時間では、約１７％の遺伝子（１７３６個の遺伝子）がＨＣＶ感染によって調節され、それらの中で、約９％がアップレギュレーションされ、約８％がダウン抑制されている。
【０４７６】
ＨＣＶ感染によって誘導される転写調節の機能解析を、２つの相補的方法によって、すなわち、ＤＡＶＩＤデータベースからのＦｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ａｎｎｏｔａｔｉｏｎ  Ｃｌｕｓｔｅｒｉｎｇ（ＦＡＣ）を使用する包括的方法、および、ＰｒｅｄｉｃｔＳｅａｒｃｈソフトウエア（商標）を使用する、テキストマイニングに基づく方法によって並行して行った。
【０４７７】
ＦＡＣ  Ｄａｖｉｄツールを使用する包括的解析：
ＤＡＶＩＤ  ＦＡＣツールを使用して行われる包括的方法のために、解析を、４８時間の感染の後で調節された１７３６個の遺伝子に集中させた（それらの中で、８９５個がアップレギュレーションされ、８４２個がダウンレギュレーションされている）。ＦＡＣは、いくつかの機能的アノテーションがこのデータセットにおいて顕著に過剰提示されていることを示した。最も代表的な機能的クラスターは、図９Ｂに表されたヒートマップで示されている。
【０４７８】
これらの濃縮された機能的アノテーションの中で、下記のＧｅｎｅ  Ｏｎｔｏｌｏｇｙアノテーションに焦点を絞った：ＮＦ−κＢ、ウイルス複製、小胞体（ＥＲ）、ストレス／ＥＲストレス／ＵＰＲに対する細胞応答、リソソームおよび巨大分子異化プロセス。
【０４７９】
遺伝子発現解析を、１２時間から４８時間に至るまでの間４０μＭのＨＣＱにより処理された、または非処理のＪＦＨ１／ＣｓＮ６Ａ４感染Ｈｕｈ７細胞に対して行った。比較のために、また、シグナル対ノイズ比を低下させるために、遺伝子発現解析はまた、ＨＣＱの場合と同じ手順を使用して、クロロキン（ＣＱ）処理細胞に対しても行われた。
【０４８０】
表４は、発現が、ＪＦＨ１感染Ｈｕｈ７細胞において、ＨＣＱおよびＣＱの両方の処理によって１２時間から４８時間に至るまで調節される遺伝子の総数を示す。調節を受けた遺伝子の数を倍数変化（ＦＣ）に基づく選択に従って求めた。２ＦＣのカットオフを、ＨＣＱおよびＣＱにより処理された状態については、１２時間および４８時間で設定した。ＦＣ≧２は、アップレギュレーションされた遺伝子に対応し、ＦＣ≦０．５は、ダウンレギュレーションされた遺伝子についてである。
【０４８１】
表４に示されるように、また、遺伝子発現調節がＨＣＱおよびＣＱに関して共通していると見なすと、遺伝子の総数の１％未満（６２個の遺伝子）および約３％（２７１個の遺伝子）が、１２時間または４８時間のどちらの処理の後でも、顕著にアップレギュレーションおよびダウン調節されていることが認められた。
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【０４８２】
感染による１７３６個の調節された遺伝子に対応する発現データはまた、ＦＡＣにも含まれており、対応する発現プロフィルは、図９Ｂに示されたヒートマップで示されている。
【０４８３】
Ｈｕｈ７細胞をＪＦＨ１／ＣｓＮ６Ａ４ウイルス粒子に感染させた後６時間、２４時間および最大で４８時間において示差的に発現された宿主遺伝子の発現プロフィル（少なくとも２の倍数変化（ＦＣ）の調節）を、Ａｇｉｌｅｎｔ  ４×４４Ｋマイクロアレイ解析を使用して特徴確認した。試験された他の状態において得られた発現プロフィルもまた含まれた（すなわち、ＨＣＱおよびＣＱによる１２時間から４８時間に至るまでの処理の後で得られた発現プロフィル）。選択された遺伝子の各クラスターの階層的クラスター化（ＨＣＬ）を、ＴＭｅｖフリーソフトウエアを使用して行った。遺伝子発現におけるＦＣを、ＪＦＨ１感染Ｈｕｈ７における遺伝子発現を感染後の各時点で非感染Ｈｕｈ７細胞における遺伝子発現と比較することによって計算した。これらの遺伝子のＦＣはまた、ＨＣＱおよびＣＱにより処理された感染細胞を感染後の１２時間および４８時間の速度論的時点で非処理感染細胞における遺伝子発現と比較することによっても計算された。
【０４８４】
発現プロフィルを、ＦＣが２を底として対数変換されたので、２ＦＣのスケールで図９Ｂに表す。赤色で示される遺伝子はアップレギュレーションされ、緑色で示される遺伝子はダウンレギュレーションされ、黒色で示される遺伝子は調節されなかった。
【０４８５】
各サンプルの発現プロフィルは縦列で表され、各ヒートマップの上部にカラーコードの水平の棒で表すことによってアノテーションされている。黒色の棒は感染状態に対応し、青色の棒は、ＣＱ処理された状態に対応し、黄色の棒は、ＨＣＱ処理された細胞に対応する。
【０４８６】
ＤＡＶＩＤ  ＦＡＣツールを使用して行われた、ＪＦＨ１／ＣｓＮ６Ａ４感染によって調節される選択された遺伝子の機能的アノテーションは、濃縮されたいくつかのＧＯアノテーション、例えば、転写調節、ストレス（ＥＲストレスを含む）に対する細胞応答、アポトーシス、細胞周期などを示した。いくつかの他のアノテーションは、一組のＨＣＶ調節遺伝子において顕著に濃縮されることが見出された（例えば、ウイルス複製、ＮＦ−κＢ経路または脂質生合成プロセスなど）。ＨＣＱ処理は、ＨＣＶ感染に応答して誘導される発現調節のほとんどを打ち消すことが示された。
【０４８７】
ＨＣＶ感染状態と、ＨＣＱまたはＣＱのどちらかにより処理された状態との間において認められる反対の遺伝子発現プロフィルによれば、ＨＣＱは、感染期間中に生じる遺伝子発現調節を打ち消すことが示唆される。
【０４８８】
遺伝子発現の調節の最大数は感染後４８時間の速度論的時点で生じているので、さらなる解析をこの時点において行った。
【０４８９】
したがって、ＨＣＶ感染細胞に対するＨＣＱの効果を例示する遺伝子調節ネットワークを確立するために、さらなる解析を、発現がＨＣＱおよびＣＱの両方の４８時間の処理によって少なくとも２倍の変化により調節されるＨＣＶ調節遺伝子に集中させた。１１８個のＨＣＶ調節遺伝子が選択された。それらの中で、表５および図９Ｃに示されるように、１２個は両化合物によってアップレギュレーションされ（ＦＣ≧２）、１０６個は両化合物によってダウンレギュレーションされる（ＦＣ≦０．５）。
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【０４９０】
得られた結果は、ＨＣＱが（表２に示されるデータと一致して）転写阻害剤として主に作用することを示唆している。さらに、発現がＨＣＱ処理によってダウンレギュレーションされる遺伝子のほとんどは、ＨＣＶ感染によってアップレギュレーションされることが見いだされ、また、逆もまた同様に、ＨＣＱ処理によってアップレギュレーションされる遺伝子は、ＨＣＶ感染によってダウンレギュレーションされることが見出された。この発見は、包括的ＦＡＣ方法により得られた以前の結果と一致している。
【０４９１】
ＰｒｅｄｉｃｔＳｅａｒｃｈ：
感染状態およびＨＣＱ処理状態の両方が発現により識別される１１８個の遺伝子のリストをＰｒｅｄｉｃｔＳｅａｒｃｈ（商標）ソフトウエアにかけた。ＰｒｅｄｉｃｔＳｅａｒｃｈ（商標）は、これらの遺伝子、機能的関連遺伝子および生物学的概念の間における相関関係を、テキストマイニング方法を使用して特定することを可能にする。テキストマイニング・アルゴリムにより、ＮＣＢＩデータベースにおいて利用可能な書誌データにおいて参照されるすべての概念の中で、処理にかけられた選択に関連づけられる適切なデータが取り出される。ほとんどの場合において、これらの追加の遺伝子は、おそらくは下記のためであると推定されるが、マイクロアレイデータでは顕著に転写調製されることが見出されない：（ｉ）遺伝子が、考慮されるどの生物学的状態においても、（本明細書中では感染および処理において）調節されないかもしれない；（ｉｉ）遺伝子が、調べられた速度論的時点に匹敵する遅延応答を有しているかもしれない；および／または（ｉｉｉ）発現調節が、トランスクリプトーム解析では認められ得ない転写後または翻訳後のレベルで生じている。
【０４９２】
ＰｒｅｄｉｃｔＳｅａｒｃｈ解析に基づいて選択される５７個の遺伝子の発現プロフィルを図１０に示す。試験された各状態において得られる遺伝子の発現プロフィルが含まれた。すなわち、感染後の各時点、および、ＨＣＱまたはＣＱまたはＩＦＮのいずれかによる感染細胞の４８時間の処理の後において得られる遺伝子の発現プロフィルが含まれた。これらの遺伝子は、ＥＲストレス応答、自食作用シグナル伝達、ＮＦ−κＢシグナルおよびｐ５３シグナル伝達経路などの経路に関与することが見出された。
【０４９３】
各サンプルの発現プロフィルは縦列に表され、各ヒートマップの上部にカラーコードの水平の棒で表すことによってアノテーションされる。黒色の棒は感染状態に対応し、青色の棒は、ＣＱ処理状態に対応し、黄色の棒は、ＨＣＱ処理細胞に対応し、オレンジ色の棒は、ＩＦＮ処理細胞に対応する。
【０４９４】
これらの結果は本明細書中上記の包括的ＦＡＣ解析と一致している。
【０４９５】
表６は、興味の対象である各状態においてこれら５７個の遺伝子について測定されるＦＣをまとめたものである。この機能的生物学的ネットワークの概略図を図１１に示す。このネットワークでは、ＨＣＶ感染細胞において過剰発現され、ＨＣＱ処理によって抑制される経路が強調されている。
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【０４９６】
ＨＣＶ誘導によるＮＦ−κＢシグナル伝達に対するヒドロキシクロロキンの効果：
選択された５７個の遺伝子の中で、ＮＦ−κＢの活性化または下流側のシグナル伝達に機能的に関連づけられる１６個の遺伝子が見出された：ＩＫＢＫＡＰ、ＮＦＫＢ１、ＮＦＫＢＩＡ、ＮＦＫＢＩＢ、ＮＦＫＢＩＥ、ＮＦＫＢＩＬ２、ＮＫＩＲＡＳ１、ＮＫＩＲＡＳ２、ＮＫＲＦ、ＴＡＮＫ、ＲＥＬＢ、ＣＹＰ１Ａ１およびＣＹＲ６１。これらの遺伝子のほとんどはＨＣＶ感染によってアップレギュレーションされることが見出された。
【０４９７】
これら１６個の遺伝子の中で、いくつかの遺伝子の発現はＨＣＶによってアップレギュレーションされ、その一方で、ＨＣＱおよびＣＱの両方によって明確に抑制されること（ＦＣ≦０．５）が見出された（ＣＹＰ１Ａ１およびＣＹＲ６１）。それ以外の遺伝子のほとんどは、感染によって、また、ＨＣＱによる４８時間の処理の後で示差的に発現され、その一方で、ＣＱによってわずかに調節される（０．６≦ＦＣ≦０．８）：ＮＦＫＢＩＡ、ＮＦＫＢＩＢ、ＮＦＫＢＩＥ、ＮＫＩＲＡＳ１およびＲＥＬＢ。顕著に調節されることがそれらの発現比に従って見出されなかったいくつかの他の遺伝子は、それらがこの経路に属するため、ネットワークに含まれていた：ＮＦＫＢ１、ＮＦＫＢＩＬ２、ＮＫＩＲＡＳ２、ＮＫＲＦおよびＴＡＮＫ。加えて、ＩＫＢＫＡＰはその発現プロフィルに従って含まれた。すなわち、ＩＫＢＫＡＰは感染によってダウンレギュレーションされ、ＨＣＱ処理によって増大した。ｐ５３シグナル伝達およびＮＦ−κＢシグナル伝達に関連づけられるＢＢＣ３およびＭＹＣもまた、両方の状態によって顕著に調節されることが見出された。すなわち、それらは感染によって高度に誘導され、両方の化合物によって重度に抑制された。そのうえ、ＢＢＣ３、ＭＹＣ、ＣＹＲ６１および他の遺伝子（例えば、ＣＸＣＬ５、ＩＣＡＭ１およびＢＣＬ３など）は、ＮＦ−κＢ転写因子遺伝子の直接転写標的である（例えば、ｗｗｗ．ｂｉｏｉｎｆｏ．ｌｉｆｌ．ｆｒ／ＮＦ−ＫＢ／を参照のこと）。ＣＸＣＬ５、ＩＣＡＭ１およびＢＣＬ３のｍＲＮＡ発現は感染期間中に増大し、ＨＣＱ処理によってわずかに抑制されるか（ＣＸＣＬ５およびＢＣＬ３）、または、変化しない（ＩＣＡＭ１）。
【０４９８】
以前の研究では、ＨＣＶ感染はいくつかのＮＫ−κＢ関連遺伝子の発現レベルを増大させることが示唆された。ＨＣＱ処理は、本明細書中上記のＨＣＶレプリコンに基づく結果と一致して、ＨＣＶにより誘導されるこのＮＦ−κＢ経路を打ち消すことが本明細書中において立証されている。
【０４９９】
ＨＣＶ誘導によるＥＲストレスおよび自食作用経路に対するヒドロキシクロロキンの効果：
最初の組の５７個の遺伝子の中で、感染によって正に調節され、ＨＣＱ処理によって顕著に抑制されることが見出された１２個の他の遺伝子は、ＥＲストレス応答およびその後のＵＰＲ活性化に機能的に関連づけられる：ＡＴＦ２、ＡＴＦ３、ＡＴＦ４、ＡＴＦ７ＩＰ、ＤＤＩＴ３、ＤＤＩＴ４、ＤＵＳＰ１、ＤＵＳＰ４、ＤＵＳＰ８、ＴＲＡＦ２、ＴＲＡＦ４、ＵＢＤ（表６ならびに図１０および図１１を参照のこと）。
【０５００】
ＡＴＦ２、ＡＴＦ３、ＡＴＦ４およびＡＴＦ７ＩＰは、哺乳類活性化転写因子／ｃＡＭＰ応答性エレメント結合（ＣＲＥＢ）タンパク質ファミリーのメンバーである。これらのＡＴＦ遺伝子の転写および翻訳はストレス状態（例えば、ＥＲストレスなど）において誘導性である。ＡＴＦ２によりコードされるタンパク質はｃ−Ｊｕｎとともに、ＣＲＥ依存的転写を刺激し、かつ、ＤＵＳＰ１、ＤＵＳＰ４およびＤＵＳＰ８の活性化を直接誘導して、ストレスキナーゼのＪＮＫおよびｐ３８の活性化を制限する。加えて、ＡＴＦ３は、いくつかの経路（例えば、ｐ５３依存的アポトーシスなど）およびＴヘルパー細胞タイプ（Ｔｈ）１の分化活性化に関与することが知られている。ＡＴＦ４は、小胞体ストレス応答（ＵＰＲ）に対する細胞の低酸素性応答の主要な転写調節因子であり、ＥＲストレスに応答した自食作用の調節において重要な役割を有している。ＡＴＦ４は、おそらくはＤＤＩＴ４を介して、ＵＰＲと、自食作用機構との間に直接の機構的連携を提供する。実際、増大したＡＴＦ４発現は、ＤＤＩＴ４のアップレギュレーションに要求されること、また、ＤＤＩＴ４のアップレギュレーションに十分であることが示されている。
【０５０１】
ＤＤＩＴ４およびＤＤＩＴ３は、ＤＮＡ損傷誘導性転写物であり、ＥＲストレスによって活性化され、同様にまたアップレギュレーションされ、自食作用の調節に関与する。ＤＤＩＴ３／ＣＨＯＰ（転写因子のＣ／ＥＢＰファミリーのメンバー）もまた、アポトーシスの促進および前炎症性ＮＦ−κＢに関与する。
【０５０２】
ＤＵＳＰ１、ＤＵＳＰ４およびＤＵＳＰ８は二重特異性のプロテインホスファターゼであり、環境ストレスに対するヒト細胞応答、同様にまた、細胞増殖の負の調節において重要な役割を果たしている。これらの遺伝子は、細胞の増殖および分化に関連する、マイトジェン活性化タンパク質（ＭＡＰ）キナーゼスーパーファミリーのメンバー（ＭＡＰＫ／ＥＲＫ、ＳＡＰＫ／ＪＮＫ、ｐ３８）を負に調節する。ＤＵＳＰ４／ＭＰＫ−２遺伝子産物は、ＥＲＫ１、ＥＲＫ２およびＪＮＫの遺伝子産物を不活性化する。ＤＵＳＰ８／ＭＰＫ−１の遺伝子産物はＳＡＰＫ／ＪＮＫおよびｐ３８を不活性化する。
【０５０３】
ＴＲＡＦ２遺伝子およびＴＲＡＦ４遺伝子はＴＮＦ受容体関連因子（ＴＲＡＦ）ファミリーのタンパク質メンバーをコードする。ＴＲＡＦ２はＭＡＰＫ８／ＪＮＫおよびＮＦ−カッパのＴＮＦ−アルファ伝達活性化に要求され、ＴＮＦ受容体からの抗アポトーシスシグナルの伝達物質として機能し、自食作用に関与する。ＴＲＡＦ４は、細胞死およびＮＦ−カッパＢ活性化の調節におけるその役割に加えて、ＭＡＰＫ８／ＪＮＫの酸化的活性化に関与すると考えられている。ＵＢＤ／ＦＡＴ１０は、免疫応答における推定上の役割を有する、ＴＮＦ−アルファ誘導性ユビキチン様タンパク質であり、ＴＮＦ−アルファ誘導性ＮＦ−カッパＢ活性化を伝達することが示された。
【０５０４】
自食作用経路に関与する１２個の他の遺伝子がネットワークに含まれた（表６ならびに図１０および図１１を参照のこと）。それらの中で、６個の遺伝子の発現はＨＣＶによって明確に正に調節され、ＨＣＱおよびＣＱの両方によって抑制される：ＵＬＫ１、ＡＭＢＲＡ１、ＡＴＧ２Ａ、ＧＡＢＡＲＡＰＬ１、ＦＯＸＯ３およびＳＱＳＴＭ１。１８個の中の２つの他の遺伝子はＨＣＱ処理によってそれほど強く抑制されない：ＰＩＫ３Ｃ３およびＭＡＰ１ＬＣ３Ｂ。４つの他の遺伝子もまた、自食経路におけるそれらの既知関与に従ってネットワークに含まれるが、顕著な転写調節は試験された両状態において全く測定されなかった：ＡＴＧ４Ｂ、ＡＴＧ７、ＡＴＧ１２およびＢＥＣＮ１。ＡＴＧ２Ａ、ＡＴＧ４Ｂ、ＡＴＧ７およびＡＴＧ１２は自食作用関連遺伝子（ＡＴＧ）ファミリーに属しており、自食作用プロセスの活性化を引き起こす逐次事象に関与する。このプロセスに関与する重要な遺伝子は、初期相についてはＵＬＫ１およびＫＩＡＡ０６５２／ＡＴＧ１３であり、小胞核形成段階についてはＵＶＲＡＧ、ＭＡＰ１ＬＣ３ＢおよびＳＱＳＴＭ１／Ｐ６２であり、後期の小胞拡大および完了段階についてはＡＴＧ１２およびＧＡＢＡＲＡＰＬ１である。
【０５０５】
ＭＡＰ１ＬＣ３Ｂ／ＬＣ３Ｂは、その発現がいくつかのストレス状態（例えば、ＥＲストレスなど）において誘導され、かつ、タンパク質ＭＡＰ１ＬＣ３Ｂがオートファゴソーム表面で高度に発現されるので、自食作用プロセス活性化のマーカーである。ＳＱＳＴＭ１はカーゴアダプターであり、ＭＡＰ１ＬＣ３Ｂと相互作用して、オートファゴリソソームにおいて消化されるカーゴタンパク質を補充する。
【０５０６】
ＰｒｅｄｉｃｔＳｅａｒｃｈソフトウエアはまた、アポトーシスのトリガーとしてだけでなく、自食作用のトリガーとしても機能するＦＯＸＯ３（転写因子のフォークヘッドファミリーのメンバー）を同定することを可能にした。ＵＬＫ１、ＡＴＧ１３、ＢＥＣＮ１、ＵＶＲＡＧ／ＶＰＳ３８、ＰＩＫ３Ｃ３、ＡＴＧ１２、ＧＡＢＡＲＡＰＬ１、ＡＴＧ４ＢおよびＭＡＰ１ＬＣ３Ｂなどの遺伝子の転写誘導におけるＦＯＸＯ３の自食作用的役割は、別の病理学的状態においても知られている。ＦＯＸＯ３の転写レベル自体は、ＳＥＳＮ２、ＳＴＫ１１、ＰＲＫＡＡ１およびＳＩＲＴ１を介するｐ５３下流シグナル伝達によって間接的に調節される。アセチル化ＳＩＲＴ１のレベルに従って、ＦＯＸＯ３の発現は増大する。
【０５０７】
以前の研究では、ＨＣＶ感染は、ＥＲストレス、および、ＵＰＲの後続活性化を誘導し、このことが自食作用経路の活性化を誘発することが示された。注目すべきことに、ＨＣＱ処理は、ＨＣＶ誘導によるＥＲストレス応答、ＵＰＲおよび自食作用経路を打ち消すことが本明細書中において立証されている。
【０５０８】
ＨＣＶ誘導によるｐ５３シグナル伝達経路に対するヒドロキシクロロキンの効果：
最初の組の５７個の遺伝子の中で、１７個のｐ５３標的遺伝子が同定された：ＢＢＣ３、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｂ、ＧＡＤＤ４５Ａ、ＧＡＤＤ４５Ｂ、ＧＡＤＤ４５Ｇ、ＤＡＰＫ３、ＨＲＫ、ＢＭＦ、ＰＤＲＧ１、ＭＹＣ、ＳＩＲＴ１、ＳＥＳＮ２、ＰＲＫＡＡ１、ＳＴＫ１１、ＴＳＣ２、ＴＳＣ１およびＪＵＮ（表６ならびに図１０および図１１を参照のこと）。ＨＲＫ、ＳＴＫ１１、ＴＳＣ２およびＴＳＣ１を除いて、これらすべての遺伝子の発現はＨＣＶ感染によってアップレギュレーションされる。
【０５０９】
ＳＩＲＴ１、ＰＲＫＡＡ１、ＴＳＣ１、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｂ、ＧＡＤＤ４５ＧおよびＰＤＲＧ１を除いて、これらの遺伝子のすべてはまた、ＨＣＱ処理によってダウンレギュレーションされることが見出された。ｐ５３によって転写調節される３つの遺伝子（ＴＳＣ２、ＰＲＫＡＡ１およびＳＥＳＮ２）は、ＮＦ−κＢ経路の活性化、Ｒｈｅｂ／ｍＴＯＲシグナル伝達の阻害、および、ＦＯＸＯ３の転写活性化に密接に関連している。ＳＴＫ１１、ＴＳＣ２およびＴＳＣ１はまた、ｐ５３経路におけるそれらの既知与に従ってネットワークに含まれるが、顕著な転写調節は両方の状態において全く測定されなかった。ｐ５３転写因子自体の発現が両方によって調節されることが示されなかったことは注目に値する。しかしながら、ｐ５３の転写活性はほとんどの場合、核または細胞質におけるその局在化によって調節されることが広く知られている。
【０５１０】
以前の研究では、ＨＣＶ感染はｐ５３シグナル伝達経路を誘導することが示されたが、ＨＣＱ処理はＨＣＶ誘導ｐ５３経路を打ち消すことが本明細書中において立証された。
【０５１１】
まとめると、本明細書中に立証された遺伝子調節ネットワークにより、ＨＣＶ感染およびＨＣＱ処理の両方によって調節される分子的事象が説明される。これらの転写調節の遺伝子発現解析により、ＨＣＱ処理は、ＨＣＶ誘導によるＮＦ−κＢシグナル伝達、ＥＲストレス、ＵＰＲ、自食作用シグナル伝達およびｐ５３シグナル伝達経路を強く減少させることが示された。このことは、ＨＣＱの抗ウイルス効果がこれらのＨＣＶ誘導による経路の抑制を介して伝達されることを示唆している。
【０５１２】
ＨＣＶ誘導によるＥＲストレス応答、自食作用、ＮＦ−κＢおよびｐ５３シグナル伝達経路に対するＨＣＱの効果
ＨＣＶ誘導によるシグナル伝達経路に対するこれらのＨＣＱ阻害効果がＨＣＱの直接的な標的化から生じるか、または、リソソームｐＨに対するＨＣＱの効果によって誘導されるウイルス根絶の結果であるかを明らかにするために、さらなる解析を行って、インターフェロンα（ＩＦＮ）による４８時間の処理の後で誘導される遺伝子発現調節を調べた。ＩＦＮは、慢性ＨＣＶ感染に対する標準治療としてリバビリン（ＲＢＶ）と現在併用されている抗ウイルス剤である。外因性ＩＦＮの投与によって誘導される抗ウイルス効果に関与する分子的機構は十分に報告されている。
【０５１３】
遺伝子発現プロファイリングを、１００ＩＵのＩＦＮにより４８時間にわたって処理されたＪＦＨ１／ＣｓＮ６Ａ４  ｈｕｈ７細胞に対して行った。
【０５１４】
予想されるように、ＨＣＶ感染細胞の外因性ＩＦＮ刺激は、ＩＦＮシグナル伝達に関与する以下の遺伝子の発現を顕著に増大させることが示された：ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ５、ＥＩＦ２ＡＫ２、ＩＣＡＭ１、ＩＣＡＭ２、ＩＦＩ３５、ＩＦＩＴ１、ＩＦＩＴＭ２、ＩＦＩＴＭ３、ＩＳＧ２０、ＰＭＬ、ＳＴＡＴ１、ＩＳＧ１５およびＷＡＲＳ。ＩＦＮによって調節されたこれらの遺伝子の中で、ＩＦＩＴ１を除いて、ＨＣＱによる４８時間の処理によって調節されることが見出されたものは無かった。
【０５１５】
選択された５７個の遺伝子に基づいて、ＩＦＮα処理の後で得られる遺伝子発現プロフィルを、ＨＣＱ処理後、４８時間の速度論的時点における以前に得られた遺伝子発現プロフィルと比較した。リストの各遺伝子について、ＦＣを計算した。結果を表６に示す。ＩＦＮ処理状態に対応する発現データは、図１０に示された階層的クラスター化に含まれた。
【０５１６】
ＨＣＱ（およびＣＱ）と同様に、ＩＦＮは、下記の経路に関与する、ＨＣＶ誘導による遺伝子の発現を抑制することが示された：ＮＦ−κＢシグナル伝達（ＮＦＫＢＩＡ、ＮＦＫＢＩＢ、ＮＦＫＢＩＥ、ＮＫＩＲＡＳ１、ＲＥＬＢ、ＣＹ１ＰＡ１、ＣＹＲ６１およびＢＣＬ３）、ＥＲ／ＵＰＲストレス応答シグナル伝達（ＡＴＦ２、ＡＴＦ３、ＡＴＦ４、ＡＴＦ７ＩＰ、ＤＤＩＴ３、ＤＤＩＴ４、ＤＵＳＰ１、ＤＵＳＰ４、ＤＵＳＰ８）、自食作用経路（ＵＬＫ１、ＡＭＢＲＡ１、ＡＴＧ２Ａ、ＧＡＢＡＲＡＰＬ１、ＦＯＸＯ３およびＳＱＳＴＭ１）およびｐ５３シグナル伝達（ＢＢＣ３、ＧＡＤＤ４５Ａ、ＧＡＤＤ４５Ｂ、ＤＡＰＫ３、ＢＭＦ、ＭＹＣ、ＪＵＮおよびＳＥＳＮ２）。
【０５１７】
５７個の選択された遺伝子の上記組に属するいくつかの他の遺伝子は、ＩＦＮおよびＨＣＱの処理によって異なるように調節されることが見出された。これらには、例えば、ＥＲ／ＵＰＲシグナル伝達に関与する遺伝子（ＴＲＡＦ２、ＴＲＡＦ４およびＵＢＤ）、自食作用経路に関与する遺伝子（ＰＩＫ３Ｃ３およびＭＡＰ１ＬＣ３Ｂ）、および、ｐ５３シグナル伝達に関与する遺伝子（ＳＩＲＴ１、ＰＲＫＡＡ１、ＳＴＫ１１、ＴＳＣ２、ＧＡＤＤ４５ＧおよびＨＲＫ）が含まれる。興味深いことに、ＰＩＫ３Ｃ３のＨＣＶによりわずかに誘導される発現（ＦＣ：１．８）はＩＦＮによって抑制されるが（ＦＣ：０．５）、この発現はＨＣＱ処理またはＣＱ処理によって大幅には調節されない（ＦＣ−ＣＱ：１、ＨＣＱ：０．７）。加えて、ＰＲＫＡＡ１およびＭＡＰ１ＬＣ３ＢのＨＣＶにより誘導される発現はＩＦＮによって明確に低下し（それぞれ、ＦＣ＝０．３および０．４）、ＣＱ（ＦＣ＝０．７および０．９）およびＨＣＱ（ＦＣ＝０．６および０．８）はそれらをよりわずかに低下させた。計算された発現比に基づいて、ＨＣＱおよびＩＦＮは、ＣＱよりも類似した大きな抑制効果を有することが注目され得る。
【０５１８】
結論として、ＨＣＶ感染細胞のＩＦＮ処理およびＨＣＱ処理は、ＨＣＶ誘導による経路（ＥＲストレス、ＵＰＲ、ＮＦＫＢ、自食作用およびｐ５３シグナル伝達）に対する類似した抑制効果を有することが本明細書中において示され、このことから、ＨＣＶにより誘導されるこれらの生物学的経路に対して認められるＨＣＱの阻害効果は、ＨＣＱ（またはＩＦＮ）の上流抗ウイルス直接効果に応答して生じるウイルス減少の結果であることが立証された。
【０５１９】
選択された宿主遺伝子発現のｑＲＴ−ＰＣＲおよびＮａｎｏＳｔｒｉｎｇによる検証：
ＳＹＢＲ−Ｇｒｅｅｎ  ｑＲＴ−ＰＣＲ法を使用し、また、ＮａｎｏＳｔｒｉｎｇ技術を使用するｍＲＮＡ定量を、マイクロアレイ解析により得られたデータを検証するために行った。ネットワーク（図１０を参照のこと）のいくつかの重要な遺伝子についての発現レベルを、４８時間の速度論的時点およびそれぞれの下記の状態において抽出されたＲＮＡにおいて調べた：感染細胞（Ｈｉ／Ｈ）、ＣＱにより処理された細胞（ＨｉＣＱ／Ｈｉ）またはＨＣＱにより処理された細胞（ＨｉＣＱｄ／Ｈｉ）またはＩＦＮにより処理された細胞（ＨｉＩＦＮ／Ｈｉ）。
【０５２０】
ＳＹＢＲＧｒｅｅｎ  ｑＲＴ−ＰＣＲおよびＮａｎｏＳｔｒｉｎｇによる定量を一般的手順に従って行った。比率を、ＲＴ−ＰＣＲの場合にはＲＰＬ１９およびＲＰＬ０に対して正規化された所与遺伝子の相対的シグナルに基づいて計算した。Ｎａｎｏｓｔｒｉｎｇシグナルの正規化を、さらなる３つの他の遺伝子（ＣＬＴＣ、ＰＯＬＲ１ＢおよびＲＰＬ１９）について測定された発現を使用して行った。発現比を、２を底として対数変換した。したがって、正の値は誘導比に対応し、負の値は抑制比に対応する。
【０５２１】
得られたデータを図１４に示す。得られたデータはさらに、マイクロアレイ、ＲＴ−ｑＰＣＲおよびＮａｎｏｓｔｒｉｎｇの各実験により、再現性のある遺伝子発現パターンが立証されたことを裏付けているが、より大きいＦＣ値が、試験された遺伝子のほとんどについてはＮａｎｏｓｔｒｉｎｇにより得られた。
【０５２２】
ＨＣＶにより誘導されるＮＦ−κＢ関連遺伝子ＣＹＲ６１のマイクロアレイ発現をＮａｎｏｓｔｒｉｎｇによって確認した。加えて、ＲＴ−ＰＣＲおよびＮａｎｏｓｔｒｉｎｇによる解析では、自食作用マーカー（例えば、ＵＬＫ１およびＭＡＰ１ＬＣ３Ｂ／ＬＣ３など）について測定されたマイクロアレイ相対的発現比が確認された。自食作用を誘引する重要な遺伝子（ＦＯＸＯ３およびＳＩＲＴ１）の発現もまた、ＰＲＫＡＡ１を除いて、検証された。
【０５２３】
マイクロアレイでの結果と感染状態においてＰＲＫＡＡ１のｍＲＮＡについて求められたＲＴ−ＰＣＲおよびＮａｎｏｓｔｒｉｎｇでの両比率との間に不一致が認められるが、ＰＲＫＡＡ１の発現は、感染によって誘導されるのではなく、むしろ、抑制されることが示唆され得る。
【０５２４】
ｐ５３シグナル伝達に関与する、ＨＣＶにより誘導される遺伝子（ＢＢＣ３およびＳＥＳＮ２）に対するＨＣＱの阻害効果もまた確認された。最後に、ＩＦＮシグナル伝達に関与する遺伝子（ＩＳＧ１５、ＳＴＡＴ１およびＷＡＲＳ）のマイクロアレイでの発現比もまた、Ｎａｎｏｓｔｒｉｎｇ技術によって確認された。
【０５２５】
実施例３
ＨＣＶ  ＲＮＡ複製に対するポリメラーゼ阻害剤およびプロテアーゼ阻害剤との併用でのヒドロキシクロロキンの効果
Ｈｕｈ７細胞を、組合せが相乗作用を示すかどうかを求めるために、様々な濃度の抗ウイルス剤ＮＭ−１０７およびボセプレビルとの併用において様々な濃度（０、０．２２、０．６６、２、６および１８μＭ）のヒドロキシクロロキン硫酸塩（ＨＣＱ）により処理した。手順は、ＨＣＱ＋ＩＦＮの組合せについて実施例１で記載された手順と同様であった。
【０５２６】
ＮＭ−１０７はウイルスポリメラーゼ阻害剤である。ＮＭ−１０７は、一薬剤としてよりも一般に、プロドラッグ形態で利用される（バロピシタビンはＮＭ−１０７のプロドラッグである）。ボセプレビルはウイルスプロテアーゼ阻害剤である。したがって、これら２つの化合物は、互いに関して、また、ＩＦＮに関しての両方で、抗ウイルス剤の異なる一群を代表する。
【０５２７】
０、０．１１、０．３３、１、３および９μＭのＮＭ−１０７をＨＣＱと組合せ、同様に、０、０．０４１、０．１２３、０．３７、１．１、３．３および１０μＭのボセプレビルをＨＣＱと組合せた。ＨＣＶのＲＮＡをＲＴ−ＰＣＲによって測定し、結果を、本明細書中上記のように、Ｐｒｉｃｈａｒｄ−Ｓｈｉｐｍａｎモデルに従って解析した。
【０５２８】
図１３Ａおよび図１３Ｂに示されるように、ＨＣＱおよびＮＭ−１０７は併用で相乗効果を示した。相乗効果は、およそ０．３３〜１μＭのＮＭ−１０７と、およそ２〜６μＭのＨＣＱとの組合せについて最も強く、これらについては、ＨＣＶの阻害が、相加効果について予想されるよりも２０％超えて大きかった。
【０５２９】
図１４Ａおよび図１４Ｂに示されるように、ＨＣＱおよびボセプレビルは、試験された濃度範囲の一部についてはほどほどの相乗効果を示し、他の濃度範囲については相加効果を示した。相乗効果は、およそ０．３７〜１．１μＭのボセプレビルと、およそ６μＭのＨＣＱとの組合せについて最も強かった。
【０５３０】
実施例１に示された結果を考え合わせると、これらの結果は、ＨＣＱが広範囲の様々な抗ウイルス剤との相乗的な抗ウイルス効果を呈することを示している。これらの結果はさらに、異なる抗ウイルス剤との相乗効果が、類似するＨＣＱ濃度（例えば、およそ６μＭのＨＣＱ）において最も強いことを示している。
【０５３１】
本発明はその特定の実施態様によって説明してきたが、多くの別法、変更および変形があることは当業者には明らかであることは明白である。従って、本発明は、本願の請求項の精神と広い範囲の中に入るこのような別法、変更および変形すべてを包含するものである。
【０５３２】
本明細書で挙げた刊行物、特許および特許出願はすべて、個々の刊行物、特許および特許出願が各々あたかも具体的にかつ個々に引用提示されているのと同程度に、全体を本明細書に援用するものである。さらに、本願で引用または確認したことは本発明の先行技術として利用できるという自白とみなすべきではない。節の見出しが使用されている程度まで、それらは必ずしも限定であると解釈されるべきではない。
【図１】
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【図４】
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【図９Ａ】
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【図９Ｃ】
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【図２】
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【図３Ａ−３Ｂ】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９Ｂ】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３Ａ−１３Ｂ】
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【図１４Ａ−１４Ｂ】
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【国際調査報告】
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