(57)【要約】【解決課題】高純度のレバウジオシドＤとその適用【解決手段】本発明は、ステビア・レバウディアナ・ベルトーニ植物の抽出物から、レバウジオシドＡと共に、レバウジオシドＤを精製する方法を提供する。この方法は、高純度のレバウジオシドＡとレバウジオシドＤを生産するのに有用である。本発明は、更に、精製されたレバウジオシドＤを含有している生成物を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ステビア抽出物からレバウジオシドＤを精製する方法であって，
ａ．  ステビア・レバウディアナ・ベルトーニ植物の抽出物を提供する工程と，
ｂ．  前記抽出物を第１の有機溶媒の水溶液に溶かしステビオール配糖体の第一の混合物をつくる工程と，
ｃ．  前記第１の混合物で結晶化を誘起する工程と，
ｄ．  第１の沈澱物と第１の濾過液を得るために前記第１の混合物を濾過する工程と，
ｅ．  前記第１の沈澱物を第２の有機溶媒の水溶液に溶かし第２の混合物をつくる工程と，
ｆ．  前記第２の混合物で結晶化を誘起する工程と，
ｇ．  第２の沈澱物と第２の濾過液を得るために前記第２の混合物を濾過する工程と，
ｈ．  前記第２の沈澱物を第３の有機溶媒の水溶液に溶かし第３の混合物をつくる工程と，
ｉ．  前記第３の混合物で結晶化を誘起する工程と，
ｊ．  第３の沈澱物と第３の濾過液を得るために前記第３の混合物を濾過する工程と，
を含み，
それにより，前記第３の沈澱物を乾燥することで，精製されたレバウジオシドＤを生成する，方法。
【請求項２】
前記第１の有機溶媒の水溶液が７５−９９％のエタノールを有するエタノール水溶液である請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記第２の有機溶媒の水溶液が７０−８０％のエタノールを有するエタノール水溶液である請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記第３の有機溶媒の水溶液が１０−８０％のエタノールを有するエタノール水溶液である請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記工程ｃ．の結晶化において，結晶化を促進するために前記第１の混合物に，高純度のレバウジオシドＡを加えることを含む請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記有機溶媒がメタノール，エタノール，１−プロパノール，イソプロパノール，又はそれらの混合物からなる群から選択される請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記第１の濾過液がステビオール配糖体混合物へ濃縮される請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記第２の濾過液は，レバウジオシドＡの結晶化を促進するために高純度のレバウジオシドＡが加えられたものであり，乾燥基準で９７−９９重量％の純度を有するレバウジオシドＡを生成するために，結晶化されたレバウジオシドＡが回収される請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記工程ｉ．の結晶化において，結晶化を促進するために，前記第３の混合物に高純度レバウジオシドＤを加えることを含む，請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記第３の沈澱物を第４の有機溶媒の水溶液に溶かし，第４の混合物をつくる工程と，
前記第４の混合物で結晶化を誘起する工程と，
第４の沈殿物を得るために前記第４の混合物を濾過する工程と，
をさらに含み，
それにより，前記第４の沈澱物を乾燥させることで，９５％より大きい純度を有するレバウジオシドＤを生成する，請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記第４の有機溶媒の水溶液がメタノール−水溶液である請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記メタノールが１０−８０％である請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
前記第４の混合物で結晶化を誘起する工程において，結晶化を促進するために前記第４の混合物に高純度レバウジオシドＤを加えることを含む，請求項１０に記載の方法。
【請求項１４】
前記精製されたレバウジオシドＤの組成物が，乾燥基準でおよそ８０重量％より大きい純度のレバウジオシドＤを含む，請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
前記精製されたレバウジオシドＤの組成物が，乾燥基準でおよそ９０重量％より大きい純度のレバウジオシドＤを含む，請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
前記精製されたレバウジオシドＤの組成物が，乾燥基準でおよそ９５重量％より大きい純度のレバウジオシドＤを含む，請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
前記精製されたレバウジオシドＤの組成物が，乾燥基準でおよそ９７重量％より大きい純度のレバウジオシドＤを含む，請求項１に記載の方法。
【請求項１８】
前記精製されたレバウジオシドＤの組成物が，乾燥基準でおよそ９８重量％より大きい純度のレバウジオシドＤを含む，請求項１に記載の方法。
【請求項１９】
前記精製されたレバウジオシドＤの組成物が，乾燥基準でおよそ９９重量％より大きい純度のレバウジオシドＤを含む，請求項１に記載の方法。
【請求項２０】
少なくとも１０％の純度のレバウジオシドＤを含む甘味組成物を含む製品であって，
前記製品は，食物，飲料，医薬品組成物，タバコ，機能性食品，口腔衛生組成物又は化粧品からなる群から選択される，
製品。
【請求項２１】
前記甘味組成物が
天然高甘味度甘味料，合成又は人工の高甘味度甘味料，天然甘味サプレッサー，うま味味覚エンハンサー，アミノ酸，ポリアミノ酸添加物，ポリオール又は糖アルコール，低カロリー甘味料，炭水化物，糖酸，香味料，香り成分，ヌクレオチド添加物，有機の酸性添加物，有機の酸性塩添加物，無機の酸性塩添加物，苦み成分添加物，人工又は天然の甘さエンハンサー，ポリマー添加物，タンパク質又はタンパク質加水分解物添加物，界面活性剤添加物，フラボノイド添加物，アルコール添加物，渋み化合物添加物，ビタミン，食物繊維，抗酸化剤，脂肪酸又は塩，からなる群から選択される成分を更に含む，請求項２０に記載の製品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明はステビア・レバウディアナ・ベルトーニ植物の抽出物からの個々の甘味配糖体の単離と精製のための方法に関する。特に、ステビア・レバウディアナ・ベルトーニ植物の抽出物からのレバウジオシドＤの単離と精製と、更に高甘味度甘味料に関する。
【背景技術】
【０００２】
甘味料は、食物供給において重要な成分である。健康的な低カロリーの飲料や食品の需要は、甘味料の消費の増加につながる。従って、甘味料によって提供されるカロリーを減らす必要がある。この目的は、高甘味度甘味料を用いて達成され得る。
【０００３】
高甘味度甘味料は、スクロースの何倍もの甘さレベルを有している。それらは、本質的にカロリーゼロであり、ダイエット食やカロリーを減らした食品を製造する際に広く用いられている。スクロース、フラクトースやブドウ糖のような天然のカロリー甘味料は消費者に最も望ましい味覚を提供するが、それらは高カロリーである。高甘味度甘味料は、血糖値に影響を及ぼさなくて、ほとんど栄養価を提供しない。
【０００４】
しかし、スクロース代用品として一般に用いられる高甘味度甘味料は、異なる、経時特性、最大応答、風味特性、口あたりや砂糖以上の適合ふるまいを有する、甘味味覚のような、砂糖と異なる味覚特徴を備えている。例えば、一部の高い効能を有する甘味料の甘みは、砂糖よりも、初期において緩慢であり、長期間にわたる。従って、食品組成の味覚バランスを変える。これらの違いのため、食品や飲料における砂糖のようなバルク甘味料を取り替えることによる、高い効能を有する甘味料の利用は、片寄った経時特性や風味特性を引き起こす。高い効能を有する甘味料の味覚特性が、望まれる味覚特徴を与えるために修正され得るならば、それは消費者にとってより望ましい味覚特徴を有する低カロリーの飲料と食品を提供することができる。
【０００５】
一方、高い効能を有する甘味料は、砂糖と比較して、いくらかの費用と機能面での利点を有し得る。砂糖と非砂糖の高い効能を有する甘味料間の競争は、それらの使用と生産が許される国と砂糖価格が過大評価されている国での清涼飲料産業において、激烈である。
【０００６】
現在、高甘味度甘味料が、世界中で用いられている。それらは、合成物と天然物の両方であり得る。
【０００７】
合成甘味料の限定されない例は、スクラロース、カリウム・アセスルファム、アスパルテーム、アリターム、サッカリン、ネオヘスペリジンジヒドロカルコン合成物誘導体類、シクラマート、ネオテーム、ズルシトール、スオサン、Ｎ−［Ｎ−［３−（３−ヒドロキシ−４−メトキシフェニル）プロピル］−Ｌ−α−アスパルチル］−Ｌ−フェニルアラニン・１−メチルエステル、Ｎ−［Ｎ−［３−（３−ヒドロキシ−４−メトキシフェニル）−３−メチルブチル］−Ｌ−α−アスパルチル］−Ｌ−フェニルアラニン・１−メチルエステル、Ｎ−［Ｎ−［３−（３−メトキシ−４−ヒドロキシフェニル）プロピル］−Ｌ−α−アスパルチル］−Ｌ−フェニルアラニン・１−メチルエステル、及びそれらの塩類などを含み、更に、それらの組合せを含む。
【０００８】
天然の高甘味度甘味料の限定されない例は、ステビオシド、レバウジオシドＡ、レバウジオシドＢ、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＥ、レバウジオシドＦ、ステビオールビオシド、ズルコシドＡ、ルブソシド、モグロサイド類、ブラゼイン、ネオヘスペリジン・ジヒドロカルコン（ＮＨＤＣ）、グリチルリジン酸とその塩類、タウマチン、ペリラルチン、ペルナンヅルシン（ｐｅｒｎａｎｄｕｌｃｉｎ）、ムクロジオシド類、バイユノシド、フロミソシド‐Ｉ、ジメチル−ヘキサヒドロフルオレン−ジカルボン酸、アブルソシド類、ペリアンドリン、カルノシフロシド類、シクロカリオシド、プテロカリオシド類、ポリポドシドＡ、ブラジリン、ヘルナンズルシン、フィロズルシン、グリシフィリン、フロリジン、トリロバチン、ジヒドロフラボノール、ジヒドロクエルセチン−３−アセテート、ネオアスティリビン（ｎｅｏａｓｔｉｌｉｂｉｎ）、トランス‐桂皮アルデヒド、モナチンとその塩類、セリゲアインＡ、ヘマトキシリン、モネリン、オスラジン、プテロカリオシドＡ、プテロカリオシドＢ、マビンリン、ペンタジン、ミラキュリン、クルクリン、ネオクリン、クロロゲン酸、シナリン、シアメノシド、及びその他である。
【０００９】
高甘味度甘味料は、天然の高甘味度甘味料の修飾で誘導され得る。たとえば、発酵や酵素の処理や誘導体化によってである。
【００１０】
現在、およそ１１の高甘味度甘味料が、世界中で使われている。これらは、アセスルファム‐Ｋ、アリターム、アスパルテーム、チクロ、グリチルリジン、ＮＨＤＣ、サッカリン、ステビオシド、スクラロース、タウマチン、ネオテーム、及びレバウジオシドＡである。
【００１１】
高甘味度甘味料は、三世代に分類され得る。チクロやグリチルリジンやサッカリンによって代表される第一世代は、食品において長い利用の歴史を有する。第二世代は、アセスルファム‐Ｋ、アスパルテーム、ＮＨＤＣやタウマチンを含む。アリターム、ネオテーム、スクラロース、ステビオシドやレバウジオシドＡは、第三世代に属する。
【００１２】
各々の高甘味度甘味料に関する標準甘味力は、表１に与えられる。しかし、それらが混合物で使われるとき、甘味力はかなり変わり得る。
【００１３】
【表１】
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【００１４】
一方、『天然』と『有機』の食品と飲料は、食品産業の「最もホットな分野」になってきている。消費者の欲求、食品工学の進歩、ダイエットと病気や病気予防に関連する新しい研究の組合せは、食習慣と生活様式を通じて、公衆衛生に取り組む先例のない機会を創出してきている。
【００１５】
ますます多くの消費者は、現在の健康を増進することや将来の病気に対して予防線を張ることによる、健康をコントロールする能力を認識している。このことは、増進された特徴を有する、健康効果に関連する食品、特に「総体的健康解決策（ホール・ヘルス・ソリューション）」生活様式への食品と消費者市場動向に対する需要を創出している。用語「天然」は、甘味料の分野で非常に感情に訴えるものであり、「全粒穀物」、「心臓にやさしい」、「低塩分」とともに、信頼の鍵となるものの１つと見なされてきている。用語『天然』は、『より健康的』と密接に関係している。
【００１６】
この点で、天然の高甘味度甘味料は、より良い商業ベースの可能性を有している。
【００１７】
スクロース、フルクトースやブドウ糖のような天然の高カロリーの糖は、それらの心地よい味覚により、飲料や食品の産業、歯や口の衛生と化粧の産業で、かなり利用されている。特に、スクロースは、消費者に望ましい味覚を与えている。スクロースは優れた甘さ特徴を与えるが、それは高カロリーである。カロリーが適当な身体機能のために必要である一方で、体を動かさない生活様式をもつ消費者や、カロリーを気にかける消費者に対して、砂糖様の味覚を有する、代用品としての、カロリーゼロ又は低カロリー甘味料を提供する需要が、市場にある。零又は低い糖の含有量での飲料や食品やドレッシング製品の新しい調合が望まれる。しかし、一般に、カロリーゼロあるいは低カロリー甘味料は、甘み開始の遅れ、長期に残る甘い後味、苦い味覚、金属的味覚、渋い味覚、冷たい味覚、甘草のような味覚等のような、消費者に好ましくない味に関係している。天然及び合成の高い効能を有する甘味料の味覚特性が、特に望まれる、砂糖様の味覚特徴を与えるために修正されるならば、その甘味料で調合されてよい組成物の型と多様性はかなり拡大されるであろう。従って、天然及び合成の高い効能を有する甘味料の味覚特徴を選択的に修正することが望まれる。糖尿病用の（砂糖なしでの）又はカロリーを減じた製品が、従来の品目と極力少ない違いを有することが、非常に重要でもある。
【００１８】
新しい配合組成の開発、例えば、甘味料、フレーバー剤、味を増進する作用物質、膨らませる作用物質などを利用することは、関連する苦さや他の異味や質感に取り組むことにおいて、挑戦すべき課題である。加えて、そのような挑戦は、同じ質感特徴を保っている改善された特徴や風味特性のために開発される配合組成において、典型的に、与えられている。また、栄養作用や味や貯蔵寿命等の目的を含む対象の組合せを満足に満たすことができる新しい配合組成の必要性もある。
【００１９】
本発明の目的は、素晴らしい味覚と物理的特性を有している生産物を提供することである。生産物は、認識できる甘味を提供するのに十分な量で、少なくとも１つの非栄養の天然の甘味料を含む。その組成は、レバウジオシドＤのような新しい天然の高甘味度甘味料を使うことにより砂糖様の甘さ特性を与える。
【００２０】
ステビア・レバウディアナ・ベルトーニは、南アメリカの特定の地域原産のキク科（学名：Ａｓｔｅｒａｃｅａｅ、保留名：Ｃｏｍｐｏｓｉｔａｅ）の多年生の潅木である。その植物の葉は１０から２０％のジテルペン配糖体を含んでおり、それは砂糖よりおよそ１５０〜４５０倍甘い。その葉は、現地の茶や薬を甘くするために、パラグアイとブラジルで何百年もの間、伝統的に使われてきている。
【００２１】
現在、強い甘味の性質を有する２３０以上のステビア種がある。その植物は、原産の亜熱帯地方から冷い北の緯度まで広範囲にわたる条件の下で成功裡に育ってきている。
【００２２】
ステビオール配糖体は零カロリーであり、砂糖が使われるところで利用され得る。それらは、糖尿病用や低カロリー食に理想的である。その上、甘いステビオール配糖体は、多くの高い効能を有する甘味料よりもすぐれた機能と感覚特性を備えている。
【００２３】
ステビア・レバウディアナ植物の抽出物は、１塩基を持っているステビオールであり、位置Ｃ１３とＣ１９での炭水化物残基の存在によって異なる甘味ジテルペン配糖体の混合物を含んでいる。これらの配糖体はステビアの葉に蓄積し、全乾燥重量のおよそ１０％から２０％を構成する。一般的に、ステビアの葉に見出される、４つの主要な配糖体は、乾燥重量基準で、ズルコシドＡ（０．３％）、レバウジオシドＣ（０．６％）、レバウジオシドＡ（３．８％）とステビオシド（９．１％）である。ステビア抽出物で特定される他の配糖体は、レバウジオシドＢ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆとステビオールビオシドとルブソシドを含む（図１）。ステビオール配糖体の中で、ステビオシドとレバウジオシドＡだけは、商業上の規模で利用できる。
【００２４】
ステビア・レバウディアナ・ベルトーニのジテルペン配糖体の化学構造は、図２に示される。
【００２５】
物理的及び知覚上の特性は、ステビオシドとレバウジオシドＡについてのみよく研究されている。ステビオシドの甘さ能力は、スクロースよりおよそ２１０倍高く、レバウジオシドＡは、２００倍から４００倍高く、レバウジオシドＣとズルコシドＡはおよそ３０倍高い。レバウジオシドＡは、４つの主要なステビオール配糖体の内、最も好ましい知覚上の特質を持つと考えられる（表２）。
【００２６】
葉からの配糖体は、水もしくは有機溶媒の抽出法を使って抽出され得る。超臨界流体抽出法と蒸気蒸留は、同様に記述された。膜技術と、水又はメタノールやエタノールのような有機溶媒を用いた、ステビア・レバウディアナからのジテルペンの甘味配糖体の回収のための方法も記述される。
【００２７】
【表２】
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【００２８】
いくつかの個々のステビオール配糖体の精製に関して、いくつかの発表がある。
【００２９】
一般に、抽出物の生産は、水又は水−有機溶媒混合液を用いた植物材料の抽出、高い分子量の物質の沈殿、脱イオン化、脱色、特定の多孔質高分子吸着剤での精製、濃縮、乾燥から構成される。
【００３０】
米国特許第３，７２３，４１０号は、ステビア・レバウディアナ・ベルトーニからステビオシドの抽出法を公開している。この方法は、沸騰温度で１５０時間以上クロロホルムで処理し、沸騰温度で２時間炭酸カルシウム存在下ジオキサンで３回処理することによって、ステビアの葉を脱脂することを含むものであった。濾過の後、ジオキサン濾過液はまとめられ、５０℃で減圧下でシロップ状態にまで濃縮された。それから、等量のメタノールがそのシロップに加えられ、その溶液は、結晶化させるために一晩放置された。結晶は濾過によって集められて、氷のように冷たいメタノールで完全に洗われた。残留溶液は濃縮され、等量のメタノールが加えられ、そして、混合物は結晶させるために一晩放置された。結晶は濾過によって除去され、１００℃で真空中で乾燥された。空気乾燥された葉からのステビオシドの収率は６．５％であった。この方法は、有毒な有機溶媒の使用で、非常に難しい。ステビオシドの精製に関する情報がないが、記述されている条件では、レバウジオシドがステビオシドとともに沈殿するであろう。この方法は、商業上の規模で利用するのが難しい。
【００３１】
レバウジオシドＡの更なる単離を含むステビア抽出物の生産のための方法は、米国特許第４，０８２，８５８号で開発されている。空気乾燥されたステビアの葉は熱水で抽出され、抽出物は真空中で乾燥された。その結果である混合物はメタノールで抽出され、そして、集められた抽出物から、メタノールが減圧下での蒸留によって除去された。得られたシロップは、移動相としてｎ−プロパノールと水と酢酸エチルの混合物を使っているシリカゲル・カラム上で、クロマトグラフィ分離にかけられた。この方法は、研究室規模だけにおいて有用であって、商業上の規模の上ではいろいろな不都合を有する。
【００３２】
米国特許第４，１７１，４３０号は、ステビア抽出物からステビオシドの精製を公開している。その方法は、水でステビアの葉を抽出し、溶液を濃縮し、メタノールで抽出すつことを含んでいた。ステビオシドはメタノール溶液から結晶化されて、移動相としてテトラヒドロフランを用い、スチレン型ゲル上で精製された。この方法は、研究室規模だけにおいて有用である。この過程は、商業上の規模の上で利用するのが難しい。
【００３３】
米国特許第４，３６１，６９７号は、ステビア・レバウディアナからジテルペン配糖体の抽出と分離と回収を公開している。その過程は、中程度の極性を有する溶媒（例えばクロロホルム）で最初に植物原料を抽出し、そして、それから引き続く、高い極性を有する第２の溶媒（例えばメタノール）での抽出を含むものであった。結果として生じる抽出物は、液体クロマトグラフィー分離にかけられた。ステビオール配糖体は、メタノール分留に置かれた。その主な欠点は、甘い配糖体を抽出して加工するためにいろいろな有害な溶媒を利用することであった。配糖体の最終的な精製は、定常相としてシリカゲルのような吸着剤を使って、カラムを通して２つの溶媒を引き続いて流してカラムから溶離させるカラムクロマトグラフィーによって成し遂げられた。過程は、環境にやさしくなく、大規模に実行するのが難しい。
【００３４】
イオン交換やクロマトグラフィ・カラムのような特別な分離装置の利用を必要としない、ステビア・レバウディアナ・ベルトーニ植物からのステビオール配糖体の回収のための改善された方法が、米国特許第４，５９９，４０３号に記載された。その抽出は、水を用いて行われた。結果として生じる水溶性の抽出物は、金属や他の不純物を除去すると共に、およそ３．０までｐＨを下げるために、クエン酸で処理された。混合物はセライトを通して濾過され、そして、濾過液のｐＨは酸化カルシウムによって１０．５にまで調節された。形成された沈殿物は、濾過にて除去された。濾過液は濃縮されて、ｎ−ブタノールを用いて抽出された。それから、精製されたステビオシドの結晶が、溶媒の抽出段階から得られる水層を冷却することによって回収された。この方法の主な欠点は、ｎ−ブタノールによる抽出の間の配糖体の損失と、更には、水溶液からのステビオシドの結晶の低収率である。最終生成物の塩含有量は、高くなり得る。ステビオシドの最終的な純度については、データがない。この方法は、商業上の規模で利用するのが難しい。
【００３５】
米国特許第４，８９２，９３８号と日本特許出願公開第０１−１３１１９１号は、植物の抽出物が、撹拌しながら室温からおよそ６５ｏＣまでの温度で水での処理とその後の濾過と遠心分離を通して得られた、精製方法を公開している。この抽出物は水酸化カルシウムで処理され、そして、その沈殿物は濾過又は遠心分離によって除去された。この濾過液は、強酸性イオン交換樹脂で処理され、そして、引き続き、弱アルカリ性イオン交換樹脂で処理された。甘味配糖体は水中に残留し、水の蒸発によって回収された。この不都合は、最終生成物が全く低い純度を有することである。最終生成物の甘味配糖体含有量は、わずかおよそ７０％であった。
【００３６】
米国特許第５，１１２，６１０号は、ステビア・レバウディアナに基づく天然の甘味料調製方法を公開している。この方法は有機溶媒でステビア・レバウディアナの植物原料を抽出して、望ましくなく、味覚を損なっている成分を含まない残渣を得るために溶液を超臨界ガス（ＣＯ２）にさらすことを含んでいた。一般的に言えば、この方法は、ステビア葉又は抽出物からの、外皮ワックス、葉緑素、他の色素と特に味覚を損なわせる構成物の除去に、関係していた。しかし、葉の直接的処理は、大量の原料を必要とし、抽出の前にペレットの中へ押し進むことによって、あるいは、乾燥された、又は、粉砕された葉のバルクの密度を増加させるときでさえも葉の利用は非経済的であった。従来の方法によって葉から得られた、粉末状の抽出物の処理は、味覚を損なっている構成要素の除去を、ほんのわずかな程度だけ、もたらし、そして、添加溶媒（低分子量のアルコール類、適当な炭化水素又はそれら溶媒の混合物）を使用することなしに、まったく満足な結果を成し遂げるというわけではない。その上、抽出物の実際の純度に関する定量化されたデータがない。この方法は、商用の規模で利用するのが難しい。
【００３７】
米国特許第５，９６２，６７８号は、ステビア・レバウディアナ植物からレバウジオシドＡの多段階抽出法と精製過程を公開している。その植物の抽出物は、撹拌下、室温からおよそ６５℃までの温度での水中での処理と、その後の濾過と、遠心分離によって、得られた。この抽出物は、水酸化カルシウムで処理され、その沈殿物は濾過又は遠心分離によって除去された。この濾過液は、強酸性イオン交換樹脂で処理され、その後、弱アルカリ性イオン交換樹脂で処理された。甘味配糖体は水の中に残留し、水の蒸発によって回収された。この段階での抽出物におけるステビオール配糖体の含有量は、わずか７０％であった。更なる精製のために、その生産物は、ステビオール配糖体を吸着することができるアンバーライトＸＡＤ−７を有するカラムに通された。水で洗浄した後に、その配糖体はメタノールで脱着された。抽出物の純度は、かなりの量のいわゆる黄色油の含有によりおよそ９５％であった。個々のステビオシドとレバウジオシドＡを単離するために、乾燥固体は無水メタノール溶液で還流されて、純度の９１．６％でステビオシドを沈殿させるために冷却された。しかし、ステビオシドの収率は、６０％のステビオシドを含んでいるステビア抽出物からわずか１５％であった。ステビオシドは、メタノール−水溶液でそれを還流することによって、更に精製されることができる。その生成物の純度は、およそ９９％であった。
【００３８】
より精製された生成物は、米国特許第５，９７２，１２０で記述されているように、微量濾過、限外濾過、及びナノ濾過の組み合わせた利用によって生産され得る。その抽出は、連続フローカラムで間断なく行われた。葉の最適平均粒子径は、およそ２０ｍｍでなければならなかった。より小さな粒子では、カラムが詰まるにつれ、濾過率がかなり低下した。初期の水は、乾いた葉の１つの部分につき、（重さで）０．０５の部分の量、加えられた。カラムの温度は４℃までにセットされ、抽出は、（リン酸で調節した）２．０−４．０のｐＨの範囲での水で行われた。低温と低ｐＨで、より選択的な抽出が行われ、ほとんど無色の溶液が得られた。そして、抽出物は管状セラミック膜を通して濾過され、それから、限外濾過膜を通して濾過された。生成された濾過液は、高い温度でナノ膜上で低分子不純物から分離された。
【００３９】
ステビア抽出物の調製方法は、米国特許第６，０３１，１５７号と６，０８０，５６１号に記載されている。乾いた葉は、数回、１０〜２０倍の水で抽出された。結果として生じる抽出物は統合され、陽イオン交換樹脂で満たされたカラムにゆっくり通され、そして、陰イオン交換樹脂で満たされたカラムに通された。それから、処理された溶液は、甘味成分を吸着するために、樹脂（アンバーライトＸＡＤ−２）で詰められたカラムに通され、その後、水で洗浄された。水がカラムから排出された後、甘味成分を単離するために３容量のメタノールで溶出された。その溶出物は濃縮され、減圧中で更に乾燥され、淡黄色の粉末を得た。この方法の主な欠点は、抽出物の低い品質である。イオン交換体と特定の吸着剤との処理だけでは、白色及びステビオール配糖体の高い含有量を有する高品質ステビア抽出物にはならない。
【００４０】
米国特許出願公開第２００６／０１４２５５５号は、ステビア・レバウディアナ植物からステビオシドの生産のための方法を公開している。この方法は、抽出器への直接の蒸気注入とその後の水溶性の抽出物を得るための濾過と沈殿物の形で不純物を除去させるための水酸化カルシウム処理による、植物粉末の抽出法を含んでいた。濾過液は、強陽イオン交換樹脂で処理され、その後、弱塩基陰イオン交換樹脂で処理された。ステビオシドを含んでいる水溶性の溶出液は濃縮され、最終生成物において４５．４７−６５．５％のステビオシド含有量を有する精製されたステビオシドを得た。提供された方法はステビオシドのいろいろな含有量を有するステビア抽出物の生産のために適しているが、高く精製されたステビオール配糖体のためには適していない
【００４１】
米国特許出願公開第２００６／００８３８３８号は、市販のステビア・レバウディアナ出発原料からレバウジオシドＡを単離して精製する方法を報告している。この方法は、（１）選択されたエタノール溶媒を調製するエタノール調製段階、（２）ステビア出発原料を用いる最初の還流段階と還流された混合物又は撹拌された洗浄混合物から単離される残留物を用いる任意選択的な追加還流段階、（３）任意選択的に、１回又は数回撹拌される洗浄段階、（４）エタノールの排出と乾燥段階、を含む。低品質ステビア出発原料を使った実施形態において、第２の還流段階は、レバウジオシドＡの最終生成物の純度を最大にするために撹拌洗浄段階の前に、通常、加えられた。報告された方法では、エタノール調製段階は、還流段階での利用のため、望まれる還流溶媒と調製するために、実行された。一般的に、還流溶媒は、エタノールと容積でおよそ５％〜１５％の水を混ぜた混合液であった。この方法は、更に、約１時間、およそ８９℃〜９０℃の温度で一般に実行される、一つ以上のエネルギー集約型の還流段階を含んでいた。報告によると、この方法は１００％の純粋な水溶性のレバウジオシドＡを生産した。
【００４２】
米国特許出願第２００６／０１３４２９２号は、ステビア・レバウディアナ植物物質から甘味配糖体を回収するための方法を報告している。乾燥されて粉末にされた葉は、ペクチナーゼ、セルラーゼ、及びα−アミラーゼの存在下で水で処理された。そのような酵素の利用は、かなり抽出率を増加させ、精製の次の段階を容易にすることが報告された。結果として生じる抽出物は、水酸化カルシウムとの処理と限外濾過で洗浄された。濾過液はベントナイトを詰めたカラムに通されて、真空中でシロップ状態にまで濃縮された。エタノールによる処理は、実質的に純粋なレバウジオシドＡを混合物から分離するのを可能にした。高純度のレバウジオシドＡは、エタノールの８８−９５％で結晶を洗った後に得られた。
【００４３】
米国特許出願第２００７／００８２１０３号は、ステビア抽出物と高い純度のステビオシドとレバウジオシドＡを調製する方法を報告している。乾燥され粉末にされた葉は水抽出にさらされ、そして、結果としての抽出物は水酸化カルシウムのような塩基との処理、その後の塩化鉄との処理を利用して精製された。濾過液はイオン交換樹脂を用いて脱イオン化されて、真空中で濃縮されて、噴霧乾燥された。高純度のレバウジオシドＡとステビオシドは、メタノールで抽出物を溶かし、ステビオシドを沈殿させることによって、得られた。ステビオシドの単離後、残留溶液は乾燥され、そして、レバウジオシドＡはエタノールとの処理によって単離された。レバウジオシドＡの最終的な精製は、エタノール水溶液での処理によって行われた。純度は、少なくとも９８％であった。
【００４４】
米国特許出願公開第２００７／０２９２５８２号は、レバウジオシドＡの精製法を公開している。この方法は、粗製のレバウジオシドＡと水溶性の有機溶媒を統合させて、レバウジオシドＡ溶液、即ち、およそ１０重量％からおよそ２５重量％までの量の水を含んでいる水溶性の有機溶液を作り、そして、粗製のレバウジオシドＡ溶液から、一回のステップで、結晶化させて、９５％より純度の高い、かなり純粋なレバウジオシドＡを形成させる複数のステップを含んでいた。エタノール−メタノール−水混合物の場合において、９７％より高い純度を有するレバウジオシドＡの収率は、７７．４％のレバウジオシドＡを含む出発原料からでは、３２．５％であった。８０．３７％のレバウジオシドＡを含む出発原料からの収率は、５４．６−７２．０％の範囲であった。酢酸エチル、１−ブタノール、２‐ブタノール、ｔｅｒｔ−ブタノール、ｓｅｃ−ブタノール、アセトニトリル、イソプロパノール、１−プロパノールのような、エタノールと共に使われる他の共存溶媒は、９７％を超える純度を有するレバウジオシドＡの生産のために適していなかった。結晶化溶媒のとしてのいろいろな量の水とのエタノールの利用の場合において、レバウジオシドＡの収率は、８０．３７％のレバウジオシドＡを含有する出発原料から、３９．６％−７６．４％の範囲であった。この方法は、２つの有機溶媒の混合物を使っており、その大規模スケールでの回収と精製は非常に複雑であった。更に、商用の規模において、遠心分離に比較的長い時間がかかるかもしれないため、ステビオシドとレバウジオシドＣとレバウジオシドＤの共同沈殿が、起こってしまうかもしれない。
【００４５】
米国特許出願第２００８／０３００４０２号と中国特許第１０１２００４８０号は、移動相として酢酸エチル、エタノール、及び水の混合物を用いた、シリカゲルを詰めたクロマトグラフィカラムでレバウジオシドＡの分離のステップを含む、精製されたレバウジオシドＡを生産するための方法を報告している。レバウジオシドＡの分留は統合されて、乾燥された。その固体は２〜１０％の含水エタノールで処理され、レバウジオシドＡは−２０℃で混合物を冷やすことによって結晶化された。レバウジオシドＡの純度は、９９％より高くに到達し得る。レバウジオシドＡの精製のために、ステビオシドの分離後の濾過液は、濃縮されて、およそ１６時間一晩中０℃まで冷やされた。結果として生じるレバウジオシドＡの沈殿物は濾過されて、少量の冷えたメタノールで洗われて、乾燥されて、最初の抽出物から３．３％の収率で７９．０％の純度のレバウジオシドＡを得た。この粗製のレバウジオシドＡは、更に、無水メタノール又はメタノール−水混合物で還流することによって、清浄された。レバウジオシドＡの９０．２％を含有する出発原料から、生成物の産出は、純度９８．６％でおよそ６７％であった。しかし、７９％から９０．２％までのレバウジオシドＡの純度を改善する方法は、利用可能でない。この方法の主な欠点は、最終的な高純度生成物の低い収率であり。そして、それはこの方法を、高い純度のステビオシドとレバウジオシドＡの商用の生産のために適したものにしていない。
【００４６】
種々の日本の特許も、ステビア・レバウディアナ・ベルトーニからの抽出物の調製に関する。
【００４７】
日本特許出願公開第５２−１００５００号は、高い脱色能力を有する特定のイオン交換樹脂を用いた抽出物の処理と、その後のアンバーライトＸＡＤ型の特定の吸着剤で処理による、水溶性のステビオシド抽出物の精製と濃縮を記載している。イオン交換体を用いた処理と吸着／脱着だけでは、高品質の抽出物を導くことはできない。
【００４８】
日本特許出願公開第５２−１３６２００号は、熱水又は含水アルコールでの抽出とそれに続く膜分離によるステビオシド溶液の調製を公開している。甘味配糖体とステレビンの分子量は、非常に近く、膜系は、これらの混合物の満足のいく分離を結果として起こさせることができず、そのことは、抽出物の純度に影響を及ぼすであろう。最終生成物中の塩類の含有量は高いであろう。
【００４９】
日本特許出願公開第５２−００５８００号は、抽出と陽イオン交換樹脂での処理による、ステビア・レバウディアナの葉から、精製されたステビオシドの調製の方法を公開している。そのような処理は、甘味配糖体の明らかに低い含有量を有する黄色粉末に帰着するであろう。
【００５０】
日本特許出願公開第５４−０３０１９９号は、ステビア・レバウディアナ・ベルトーニの葉を水で抽出して、抽出物を非極性合成吸着樹脂で処理し、その後の脱離と、更にイオン交換樹脂と処理することによって、特徴的なにおいや苦味がないステビア甘味代用品の調製のための方法を公開している。この方法は、従来の中国の技術と非常に類似しており、わずか８５−８６％のステビオール配糖体含有量を有するステビア抽出物を生産するのを可能にする。
【００５１】
日本特許出願公開第第５４−１３２５９９号は、熱水でステビア葉を抽出して、抽出物を非極性合成吸着剤で処理して、水酸化カルシウム水溶液で樹脂を洗浄して、そして親水性有機溶媒又は含水親水性有機溶媒で樹脂からステビオシドを溶出することによる、ステビオシドの分離と精製を公開している。無極性合成吸着剤だけによる処理では、高品質抽出物をもたらすことはできず、生成物の残余の塩と色に対する対策がない。
【００５２】
日本特許出願公開第５５−１５９７７０号は、水又は含水アルコールでステビア葉を抽出することによる、ステビオシドの抽出と精製に関する。抽出物は、１０から５０％の固形物に濃縮され、塩化カルシウム０．１−５．０％を加えられて、抽出物中に存在しているコロイド状不純物を沈殿させて凝固させた。塩化カルシウムを用いている濃縮液から、不純物の大部分は除去されることができない。脱塩や脱色の段階がない。
【００５３】
日本特許出願公開第５５−１６２９５３号は、６０−８０℃で１０−１５容積の水でステビア葉を抽出することによる、ステビオシドの調製に関する。抽出物は、通気で水酸化カルシウムを用いて処理され、そして、懸濁液のｐＨは硫黄又はクエン酸を加えることによっておよそ８．０に調整された。結果として生じるわずかに可溶性である塩は濾過して取り除かれ、そして、それから、濾過液はポリアミド樹脂で処理され、不純物が除去された。濾過液は更にｎ−ブタノールで抽出され、そして、その有機相は真空中で蒸留され、白い結晶としてのステビオシドを回収した。そのような生成物での塩の含有量は高いであろう。ｎ−ブタノール抽出法を用いる精製方法は、商用の規模で利用するのが難しい。
【００５４】
日本特許出願公開第５５−０８１５６７号は、ステビオシドの抽出法と精製を記載している。水、あるいは、含水アルコールの抽出によって調製されたステビア葉の抽出物は濃縮され、そして、ＣａやＦｅやＡｌとエタノール又はアセトンのような水溶性有機溶媒の水溶性塩の一つ以上は型が濃縮物に加えられ、コロイド状不純物を沈殿させて除去された。ｐＨ３−７を有する、結果として生じる液体は、強陽イオン交換樹脂と弱陰イオン交換樹脂に通された。得られた溶液は、特定の吸着剤に通された。ステビオシドの分留は、統合された。この方法は従来の中国の技術と類似しており、それは、わずか８５−８６％のステビオール配糖体含有量を有する黄色の粉末をもたらすことができる。
【００５５】
日本特許出願公開第５５−１２０７７０号は、ステビオシド溶液の精製に関する。ステビア・レバウディアナ・ベルトーニの葉と茎は、水又はアルコール溶液で抽出され、そして、それに対して、塩化スズ、硫酸第一スズ、スズ硫酸塩等のような、水溶性のスズの塩が加えられ、溶かされた。水酸化ナトリウムかライムのようなアルカリ物質は、およそｐＨ５−１０の値に調節するために、結果として生じる溶液に加えられた。形成された沈殿物は分離された。この方法は、塩と他の低分子量の不純物を含まない抽出物をもたらすことができない。
【００５６】
日本特許出願公開第５５−１３８３７２号は、ステビオシド溶液の精製を記載している。ステビオシドは、水、熱水又は含水アルコールでステビア・レバウディアナの葉と茎から抽出され、そして、その抽出物又はその濃縮物は水酸化カルシウム又は石灰乳を混ぜ合わせられた。それから、その混合物は濾過されて、等モルの量の水溶性の鉄化合物、例えば硫酸鉄（ＩＩ）、を混ぜ合わせられ、やや溶けにくい水酸化物として鉄イオンを沈殿させるために撹拌され、そして、それはそれの上に吸着した着色物質で取り除かれた。この方法は、塩と他の低分子量の不純物を含まない抽出物をもたらすことができない。
【００５７】
日本特許出願公開第５５−０３９７３１号は、ステビオシドの抽出法に関する。ステビア・レバウディアナの１ｋｇの乾燥葉が、３−１０容量の水又は含水アルコールで抽出された。抽出物は１０−５０％の固形状の含有量にまで濃縮され、そして、金属塩化物、例えば塩化カルシウム、塩化アルミニウム又は塩化鉄、の０．１−５％が加えられた。不純物の沈殿物は、濾過によって除去された。イオン交換樹脂や吸着剤や限外濾過膜によるその後の精製工程が、更に実施され得る。不純物のほとんどは、塩を用いている濃縮溶液から取り除かれることができない。低分子量の不純物の含有量は、高くなり得る。
【００５８】
日本特許出願公開第５６−１６０９６２号は、ステビア葉を水で抽出して、得られた抽出物を２５−５０％の固体含有量にまで濃縮して、その濃縮物に低分子量の脂肪族アルコールを混ぜて、そしてその混合物から沈殿した不純物を除去することによる、ステビオシド含有溶液の精製法を公開している。アルコールの量は、水溶性の抽出物の少なくとも５倍容量又は濃縮物の３−６倍容量であった。その処理は、低分子量の不純物を除去するのに適していない。脱色する段階がない。方法は、商用の規模で利用するのが難しい。
【００５９】
日本特許出願公開第５６−１０９５６８号は、水又は親水性有機溶媒でステビア葉を抽出することによる、ステビア甘味物質の精製法を公開している。抽出物は、４−８Ｃエーテル、４−７Ｃエステル、及び１−４Ｃ有機塩素化合物からなる群から選択される有機溶媒で処理され、そして、その溶媒に可溶性の成分が分離された。ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、酢酸エチル、塩化メチル、四塩化炭素等が、精製溶媒として挙げられてよい。苦味は、同時に脱色することで、効果的に取り除かれ得る。しかし、用いられた危険な溶媒は、最終生成物の中に残り得る。方法は、商用の規模で利用するのが難しい。
【００６０】
日本特許出願公開第５６−０９９７６８号は、ステビオール配糖体の調製に関する。ステビオール配糖体含有溶液、例えばステビア・レバウディアナ・ベルトーニの水溶性抽出物、は、不純物、例えば色素又はタンパク質を吸着するために、ケイ酸アルミニウムマグネシウムで処理された。しかし、最終生成物における塩含有量は、高くなり得る。脱色や更なる精製段階がない。最終生成物におけるステビオール配糖体含有量は、低くなり得る。
【００６１】
日本特許出願公開第５７−００２６５６号は、ステビア抽出物の脱色と精製に関する。ステビア抽出物は、水に容易に溶けるバリウム化合物の水溶液で処理され、それから硫酸で中和された。水酸化バリウムは、ｐＨが７−９になるまで加えられ、そして、その懸濁液は、再び、ｐＨ３−４になるまで硫酸で処理された。その沈殿物は分離された。その主な欠点は、最終生成物の塩含有量が高くなり得、脱色や更なる精製段階がないことであり、その結果として、最終生成物のステビオール配糖体含有量が低くなり得る。
【００６２】
日本特許出願公開第５７−００５６６３号は、抽出による、ステビオシドの精製に関する。水又は含水アルコールにより抽出されたステビア葉の溶液は、固体含有量１０−５０％まで濃縮された。カルシウム、鉄、又はアルミニウムの塩又は塩基が加えられ、そして、その沈殿物は濾過によって除去された。その濾過液のｐＨは５−７の間で調製され、そして、形成された沈殿物は除去された。その濾過液は、陽イオン交換樹脂と陰イオン交換樹脂で処理され、乾燥されるまで蒸発された。この方法の主な欠点は、抽出物の低い品質である。アルカリとイオン交換体による処理だけでは、ステビオール配糖体の高い含有量を有する白色のステビア抽出物を生産するのに十分でない。
【００６３】
日本特許出願公開第５７−０４６９９８号は、ステビオシドの調製に関する。ステビア・レバウディアナの生葉は１０−２０倍容量の水で抽出され、そして、その濾過液は生葉の重量の１０−３０％の量の水酸化カルシウムで処理された。その後、その懸濁液のｐＨは、硫酸又はクエン酸を用いて４−６に調整された。濾過後、その抽出物は、配糖体を吸着して、不純物を除去するために、ポリアミドカラムに通された。その後、精製された抽出物は減圧中で濃縮され、ｐＨはアンモニア水を用いて８−９に調節され、粗製のステビオシドを産出するためにｎ−ブタノールで抽出され、そして、それはメタノールから再結晶された。しかし、残渣の塩の含有量は、高くなり得り、脱色段階がなく、ｎ−ブタノールでの抽出とメタノールからの再結晶は、商業的に育ち得るものでない。
【００６４】
日本特許出願公開第５７−０７５９９２号は、ステビオシドの精製に関する。ステビア・レバウディアナ・ベルトーニの水抽出物は、コロイド状不純物を凝集して除去するために、凝集剤（例えばアルミニウム又はポリ塩化アルミニウム）と混合させられて、そして、その後、甘味物質を吸着するために、非極性樹脂（例えばデュオライトＥＳ−８６１）で処理された。吸着された物質は有機溶媒（例えば、メタノール、アセトン等）で溶出され、そして、その溶液は、脱色されて、活性炭や活性粘土で精製された。活性炭は水溶液からしっかりとステビオシドを吸収することができ、活性炭の脱色と精製効果は活性粘土との組み合わせた利用によって促進させられ得る。しかし、危険な溶媒が使われており、それは最終生成物において存在し得る。方法は、商用の規模で利用するのが難しい。
【００６５】
日本特許出願公開第５７−０８６２６４号は、ステビアの主要な甘味成分の単離に関する。ステビアの乾燥茎と葉は、冷水、熱水、含水アルコール等で抽出された。その抽出物は吸着剤で凝固され又は沈殿され、そして、その沈殿物は、甘味成分を含有している透明な液体を得るために、濾過又は遠心分離によって除去された。その構成成分は合成ポリマー吸着剤に吸着され、８０−９０％の純度にまで精製され、濃縮され、乾燥され、そして、３−８倍容量の高温のメタノール又は高温のエタノールに溶かされた。ステビオシドとレバウジオシドＡは、同時に溶液から結晶化された。溶媒を完全に除去した後に、その混晶は３−６倍容量のアルコールと共に熱され、そして、高温濾過によって溶液部と固形部に分離された。ステビオシドはその溶液から得られることができ、そして、レバウジオシドＡは固形状の部分を洗浄して乾燥することによって調製されることができる。方法は、精製されたステビオシドとレバウジオシドＡをもたらし得るが、抽出物の品質は、脱イオン化と脱色段階の欠如のため、低くなり得る。低分子量の不純物の含有量は、高くなり得る。
【００６６】
日本特許出願公開第５８−２１２７５９号と日本特許出願公開第５８−２１２７６０号は、ステビア甘味物質の精製法を記載した。ステビア・レバウディアナ・ベルトーニの葉は、ｐＨ４で水又はアルコールで抽出された。その抽出物は水酸化カルシウムで処理され、そして、形成された沈殿物は濾過して取り除かれた。メタノールのような水溶解性の有機溶媒がその濾過液に加えられ、そして、沈殿物が除去された。その水溶性有機溶媒の量は、その濾過液を基準として５％から５０％まであった。得られた濾過液は、イオン交換樹脂又は吸着樹脂によって精製された。その主な欠点は危険な溶媒が用いられることであり、それが最終生成物で存在し得る。方法は、商用の規模で利用するのが難しい。
【００６７】
日本特許出願公開第５８−０２８２４６号は、ステビオシドの調製を記載した。ステビアの生葉は、水、熱水又は水−アルコール混合物で抽出され、そして、必要に応じて、その抽出物はその後濃縮された。その抽出物における固形状の含有量の０．５−２．０倍の量の塩化カルシウムと水酸化カルシウムの混合物が、望ましくはガス状の二酸化炭素を吹きつけている間に、抽出物又は濃縮された抽出物に加えられた。その不純物は、コロイド物質の形状で沈殿され、それは濾過によって分離された。しかし、抽出物の品質は、塩と低分子量化合物の高い含有量のため、低くなり得る。
【００６８】
日本特許出願公開第５８−０２８２４７号は、ステビオシド溶液の精製方法に関する。ステビアの生葉は、水、熱水又は水−アルコール混合物で抽出され、そして、その抽出物は濃縮された。水酸化カルシウムと抽出物における固形状の含有量の１−２．５倍の量の水溶性高分子凝集剤、例えばポリアクリルアミド高重合体が抽出物又は濃縮された抽出物に加えられ、不純物を沈殿させ、それは濾過して除去された。透明でほとんど無色のステビオシド溶液が得られた。しかし、抽出物の品質は、塩と低分子量化合物の高い含有量のため、低くなり得る。
【００６９】
日本特許出願公開第５９−０４５８４８号は、レバウジオシドＡの高い含有量を有するステビア甘味料の調製に関する。ステビオシドより１．５７倍多くのレバウジオシドＡを含有しているステビア種の乾燥葉が、水又は含水溶媒で抽出された。調製された抽出溶液は、陽イオン交換樹脂と陰イオン交換樹脂で処理された。その溶液は吸着樹脂上で吸着され、親水性溶媒で溶出され、そして、その溶液は天然の甘味料を産するために濃縮された。この方法は、伝統的な中国の技術と類似しており、それは、わずか８５−８６％のステビオール配糖体含有量を有する黄色粉末をもたらし得る。
【００７０】
日本特許出願公開第６２−１６６８６１号は、ステビアの乾燥葉からの甘味料成分の抽出と精製に関する。ステビア・レバウディアナ・ベルトーニの乾燥葉は、撹拌下、３−６時間５０−７０℃で水の７−１４倍容量で抽出され、２−３％の全固形物と０．７−０．８％のステビオシドを含有する茶色の液体抽出物が得られた。その抽出物は、減圧中で約６０℃で７−８倍濃縮された。その濃縮された液体は、綿状沈殿物としての不純物を分離するために、０．５−２％の塩化カルシウムで処理された。その溶液は、活発な撹拌のもと、４０−５５℃で１５−２０％の固形状の含有量に相当する量の酸化アルミニウムと酸化マグネシウムで処理された。その後、その沈殿物は濾過によって除去された。ステビオシドは、更に、特定の吸着剤上で精製され得る。しかし、この方法は商業化するのが難しい。なぜなら、抽出物の精製のために使われる塩の量が高く、そして、脱イオン化と脱色の段階がないからである。低分子量化合物の含有量は、高くなり得る。
【００７１】
日本特許出願公開第０６−００７１０８号は、ステビア・レバウディアナ・ベルトーニの甘味物質を抽出して分離する方法に関する。ステビア・レバウディアナ・ベルトーニの葉は、メタノールのような水溶性アルコールで抽出された。抽出された溶液は水と混合されて、２０−１５０ｋＤａ（キロダルトン）の透過能力を有する限外濾過膜に通され、そして、その後、１−１０ｋＤａ（キロダルトン）の透過能力を有する限外濾過膜に通された。しかし、危険な溶媒が用いられており、それが最終生成物に存在し得る。方法は、商用の規模で利用するのが難しい。
【００７２】
日本特許出願公開第５２−０８３７３１号は、シリカゲル上でのカラム・クロマトグラフィーによるレバウジオシドＡとレバウジオシドＢの単離と精製を取り扱っている。更なる精製は、メタノール又はエタノールのような有機溶媒から結晶化によって行われる。
【００７３】
日本特許出願公開第５５−０９２４００号は、ステビオシドの調製に関する。ステビオシドを含有している水溶液が、１Ｈ、１Ｈ、５Ｈ−オクタフルオロ−１−ペンタノールを用いて抽出された。分離後に、溶媒は蒸留され、そして、その残渣は乾燥された。その沈殿物は、メタノールから再結晶された。ステビオシドの純度は、９５％より高かった。
【００７４】
日本特許出願公開第５６−１２１４５３号、日本特許出願公開第５６−１２１４５４号、及び日本特許出願公開第５６−１２１４５５号は、ステビオシドとレバウジオシドＡの分離に関する。ステビア・レバウディアナ・ベルトーニの葉から抽出されるステビオシドとレバウジオシドＡの混合物は、７５％のメタノール水溶液と混ぜられて、およそ３時間室温で保たれた。６５％のステビオシドと２５．２％のレバウジオシドＡを含有する、その結果としての結晶は、濾過によって分離され、乾燥された。９０％のエタノール水溶液の適用の場合において、最終混合物は、５７．４％のステビオシドと３１．９％のレバウジオシドＡを含有する。９０％のエタノール水溶液からの更なる再結晶化は、レバウジオシドＡのより高い含有量を有する生成物をもたらした。その生成物の純度はおよそ８０％であった。ステビオシドは、更に、追加で水で洗浄されて、８６．１％まで精製され得る。ステビオシドのβ型結晶とレバウジオシドＡのα型結晶が得られた。
【００７５】
日本特許出願公開第５７−０４６９９８号は、ステビオシドの調製に関する。ステビア・レバウディアナの生葉は、１０−２０倍容量の水で抽出され、そして、その濾過液は生葉の重量の１０−３０％の量の水酸化カルシウムで処理された。それから、懸濁液のｐＨは、硫酸又はクエン酸で４−６に調整された。濾過後、その抽出物は、ポリアミドカラムに通され、配糖体を吸着させ、不純物が除去された。その後、精製された抽出物は、減圧中で濃縮され、ｐＨはアンモニア水で８−９に調整され、ｎ−ブタノールで抽出され、粗製のステビオシドが与えられ、それはメタノールから再結晶された。
【００７６】
日本特許出願公開第５７−０８６２６４号は、ステビアの主要な甘味成分の単離に関する。ステビアの乾燥茎と葉は、冷水、熱水、含水アルコール等を用いて抽出された。その抽出物は吸着剤で固められ又は沈殿させられ、そして、その沈殿物は、濾過又は遠心分離によって除去され、甘味成分を含有している純粋の液体が得られた。その成分は合成ポリマー吸着剤上で吸着され、８０−９０％の純度にまで精製され、濃縮され、乾燥され、そして、高温のメタノール又は高温のエタノールの３−８倍容量で溶解された。ステビオシドとレバウジオシドＡは、同時に溶液から結晶化された。溶媒の完全な除去後、その混晶はアルコールの３−６倍容量と共に熱され、そして、その固体が熱濾過によって溶液から分離された。ステビオシドはその溶液から得られ、そして、レバウジオシドＡは固形状の部分を洗浄して、乾燥することによって調製され得る。
【００７７】
日本特許出願公開第０６−１９２２８３号及び日本特許出願公開第０８−０００２１４号は、Ｔｏｙｏ  Ｐｅａｒｌ  ＨＷ−４０上でのゲル濾過によるレバウジオシドＡの精製を公開している。レバウジオシドＣとズルコシドは、ＨＰＬＣによって得られた。方法は、研究室規模においてのみ有用である。
【００７８】
日本特許出願公開第Ｓ６３−１７３５３１号は、ステビア・レバウディアナ植物から甘味配糖体を抽出する方法を記載している。この方法の第一段階は、ステビア・レバウディアナ植物から甘味配糖体の液体溶液を抽出することであった。第２段階で、甘味配糖体の液体溶液は、非極性多孔質樹脂に通され、水溶性有機溶媒、望ましくはメタノールで溶出された。第３段階で、溶出された溶液は濃縮され、そして、粉末状の物質を与えるために乾燥された。この手順は甘味配糖体の混合物を単離するが、レバウジオシドＡのような単一の純粋な甘味配糖体を単離するものではない。
【００７９】
日本特許出願公開第０７−１４３８６０号は、メタノール水溶液１０−２０％からの結晶化と再結晶化を通じてのレバウジオシドＡの精製を公開している。レバウジオシドＡの純度は、およそ９０％であった。
【００８０】
日本特許出願公開第０７−１７７８６２号は、レバウジオシドＡとステビオシドの精製を公開している。精製されたステビア抽出物は、アルコールの低い濃度で処理され、ステビオシドとレバウジオシドＡのおよそ７５％の含有量を有する結晶が得られた。その結晶は水から更に再結晶され、ステビオシドとレバウジオシドＡの１：２（質量／質量）の比率を有する、わずかに水溶性の甘味料を与えた。
【００８１】
日本特許出願公開第２００２−２６２８２２号は、ステビア植物の乾燥葉から抽出される甘味料とその抽出方法を公開している。この方法は、乾燥葉からステビア配糖体を抽出するために、水又は水溶性溶媒を用いた。得られた生成物において、レバウジオシドＡの含有量は、ステビオシドの量の２．５６倍である。
【００８２】
ステビオールビオシド、レバウジオシドＡ、レバウジオシドＢの単離は、１９７６年にＫｏｈｄａ等によって実行された。乾燥葉は高温のメタノールで抽出され、そして、濾過液は乾燥するまで濃縮された。残渣はｎ−ブタノールで抽出され、そして、乾燥後に、残渣はメタノールから再結晶された。母液は、移動相としてクロロホルム−メタノール−水混合液を用いて、シリカゲル上でのクロマトグラフィ分離にさらされた。更なる精製は、薄層クロマトグラフィによって実行された。この方法は、上述の甘味配糖体の少量の生産のために、研究室規模においてのみ利用され得る。
【００８３】
ズルコシドＡとＢは、単離されて、メタノール・エタノール混合液から結晶化を用いて同定されて、シリカゲル上で、クロマトグラフィーによって更に精製された（Ｋｏｂａｙａｓｈｉ等、１９７７年）。
【００８４】
限外濾過、透析濾過、逆浸透とイオン交換処理の組合せが、ステビア抽出物の精製のために用いられた（ＦｕｈとＣｈｉａｎｇ、１９９０年）。限外濾過膜の分離能力は、２５，０００ダルトンと１００，０００ダルトンであった。強及び弱の陽イオン交換樹脂と陰イオン交換樹脂の混合物が、イオン交換体として用いられた。全ステビオール配糖体の回収は、およそ９０％であったが、最終版生成物の純度は、わずか４６％であった。
【００８５】
膜技術によるステビオール配糖体の精製方法は、Ｌｉｕ等（１９９１）とＺｈａｎｇ等（２０００）によって記載されている。乾燥葉は標準的なガラスカラムに置かれ、そして、抽出は逆浸透水で実行された。その抽出物は、セラミックの管状膜、そして、透析濾過方式の限外濾過膜で前処理された。濾過液は、高温度で透析濾過方式でのナノ濾過膜によって低分子量不純物を除外して洗浄された。石灰や他の綿状代用物の限外濾過供給への追加は、かなり流れを改善した。この方法は、比較的高純度の甘味料の濃縮をもたらすことができた。しかし、抽出物の純度とステビオール配糖体の回収についてのデータがない。抽出法のために用いられる低いｐＨ値は、特別な酸耐性反応装置を必要とした。抽出の間の低温は、生産の操作上のコストを増加させた。これら両方（低温と低ｐＨ）は、大量の、希釈初期抽出物をもたらした。また、抽出物の希釈は、微量濾過と限外濾過の間に起こった。最終精製のために、イオン交換処理が必要である。これらの要因は、かなり生産コストを増加させ、時間あたりの、最終生成物の収率を減少させている。初期投資は、同様に高い。
【００８６】
カルボニル基を有するポリスチレンをベースとする一連の極性樹脂が、ステビオール配糖体の吸着とステビオシドとレバウジオシドＡの部分的な分離のため用いられた（Ｃｈｅｎ等、１９９８年及び１９９９年）。レバウジオシドＡとステビオシドの比は、０．７２から２．２４まで増加し得る。
【００８７】
ステビオール配糖体へのピリジル基を有する新規吸着剤の吸着力と選択性が、１９９９年にＣｈｅｎ等によって研究された。選択性に関する吸着剤の極性と物理構造の効果が、詳細に研究された。２つの分離方法は、レバウジオシドＡの増加において利用された。それらは、溶媒としてメタノール又はエタノール溶液を用いる選択的な溶出であり、高い選択性でピリジル樹脂を使ったダイナミックなクロマトグラフィ分離であった。結果は、クロマトグラフィ分離方法がステビオシドの高い含有量でステビア抽出物からレバウジオシドＡを効果的に豊富にすることができることを示している。レバウジオシドとステビオシドの比は、０．７５から３．９４まで増加し得る。レバウジオシドＡの更なる精製は、メタノールから結晶化によって可能であった。
【００８８】
修飾ゼオライトを用いるステビア抽出物の浄化方法が、Ｍｏｒａｅｓ等（２００１）とＭｏｎｔｏｖａｎｅｌｉ等（２００４）によって記載されている。合成又は天然のゼオライトはカルシウムやバリウムイオンとの処理によって修飾され、前処理なしのステビア抽出物が修飾ゼオライトと接触された。それは、バッチで７０−８０％の純度、連続条件で５５−６０％の純度をもたらした。浄化方法は、甘みをもたらす配糖体ではなく、抽出物を褐色がかったようにする色素を吸着することを意味した。明らかに、この処理法だけが、特に、浄化された抽出物に残る、多糖類、重金属とステレビンのため、高い純度の抽出物をもたらすわけではない。更に、方法が連続状況で実行されるとき、非常に重要であるキャリヤーの半減期と吸着力についてのデータがない。
【００８９】
−Ｎ＋（ＣＨ３）３基を有する高分子吸着剤が、ステビオール配糖体の精製とレバウジオシドＡの増加のために設計され、適用された（Ｓｈｉ等、２００２年）。一連の５つのカラムにおいて、レバウジオシドＡの含有量は、最初のカラム生成物から第五番目のカラム生成物まで増加した。同時に、吸着剤は脱色能力を示した。
【００９０】
レバウジオシドＦは、Ｓｔａｒｒａｔｔ等によって、２００２年に、３−アミノプロピルで官能化されたシリカゲル上での液体クロマトグラフィーによって単離された。レバウジオシドＣとレバウジオシドＦが豊富だった留分は、合わせられて、アセトニトリルと水の線形勾配で、水溶性炭水化物カラム上でのＨＰＬＣによって分離された。
【００９１】
超臨界流体によるステビア抽出物の調製が、２００３年にＹｏｄａ等によって記載されている。（ｉ）２００バールと３０℃でのＣＯ２抽出法と（ｉｉ）ＣＯ２と水での抽出法の二段階方法である。ＣＯ２に溶ける化合物のおよそ７２％が回収され、そして、主要な化合物はアウストロイヌリンであった。ステビア‐ＣＯ２−水系は、初期のステビオシドのおよそ５０％とレバウジオシドＡのおよそ７２％を取り除くことができた。この方法の主な欠点は、高圧の必要性と甘味化合物の低い抽出率である。その上、マイナーな化合物の含有量と最終抽出物における全ステビオール配糖体の含有量に関する情報がない。この方法は、商用の規模で利用するのが難しい。
【００９２】
水又はメタノールを用いる加圧流体抽出法は、ステビア・レバウディアナ・ベルトーニからのステビオシドの抽出に使用された（Ｐｏｌ等、２００７年）。１１０℃の温度が、水かメタノールを用いる、ステビア・レバウディアナ葉からのステビオシドの抽出に、最適であると決定された。増加させた温度は、両方の溶媒の媒質中でのステビオシドのかなりの分解、又は、水での抽出率の低下をもたらした。両方の溶媒は非常に類似した再現性を有するステビオシド抽出を示し、そして、提案された抽出パラメータは両方の方法で同じである。水は、より環境を気づかったものであり、メタノールにより安い代用品である。
【００９３】
ステビア抽出物の調製と精製の方法は、Ｋｏｖｙｌｙａｅｖａ等によって２００７年に記載されている。この方法は、沸騰温度で１時間１４倍容量の蒸留水での乾燥葉の抽出と濾過と濾過液のシロップ状態までの濃縮を含んでいた。シロップは薄められ、ＡｌＣｌ３・６Ｈ２Ｏが加えられ、それが溶けるまで撹拌された。混合物は撹拌されて、ＮａＯＨの水溶液で処理された。沈殿物は濾過され、そして、濾過液はＡｌ２Ｏ３が詰められたカラムに通された。そのカラムは、蒸留水で溶出され、薄茶色の溶液が得られた。ステビオシドとレバウジオシドＡとレバウジオシドＣの更なる精製は、ｎ−ブタノールを用いた抽出とＡｌ２Ｏ３とシリカゲル上でのカラム・クロマトグラフィーによって行われた。この方法では、高純度ステビア抽出物をもたらすことができない。多量の塩が、前処理のために使われる。精製法は、商用の規模の上で利用するのが難しい。
【００９４】
ステビオシドとレバウジオシドＡの効果的なマイクロ波支援抽出方法が、Ｂａｎｄｎａ等によって記載されている（２００９年）。Ｓ．レバウディアナの乾燥した粉末の葉は従来の超音波とマイクロ波支援抽出技術によって、単一溶媒としてのエタノールと水、及び、バイナリの混合物でのエタノールと水を用いて、抽出された。従来の冷却抽出は、１２時間２５℃で実行され、一方で、超音波抽出は３０分間３５℃±５の温度で実行された。マイクロ波支援抽出は、５０℃で１分間８０Ｗの電力レベルで実行された。結果として、マイクロ波支援抽出は、ステビオシドとレバウジオシドＡをそれぞれ、８．６４％と２．３４％を与えた。その一方で、従来技術及び超音波技術は、ステビオシドとレバウジオシドＡをそれぞれ、６．５４と１．２０％及び４．２０と１．９８％を与えていた。
【００９５】
ステビオール配糖体の効率的な単離は、加圧した熱水抽出法を使用することによっても達成された（Ｔｅｏ等、２００９年）。
【００９６】
すべての既存の方法は、初期の抽出物からの１つ又はその他のステビオール配糖体の単理と精製に関しており、残渣溶液の更なる処理方法やマイナーな化合物の精製方法を示していない。従って、ステビア・レバウディアナ・ベルトーニ植物から作り出される抽出物の包括的な再処理のための効率的で経済的な方法が必要である。
【００９７】
しかし、素晴らしい知覚上の性質を備えているレバウジオシドＤの商用の単離と精製に関する公知のデータはない。
【００９８】
抽出物におけるレバウジオシドＤの含有量は非常に低く、そして、そのため、その精製は非常に難しい。
【００９９】
従って、食物、飲料、医薬、化粧品と他の産業の甘味料として使われることができる、高純度レバウジオシドＤの調製のための効率的で経済的な方法が必要である。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０１００】
【非特許文献１】Ｋｏｖｙｌｙａｅｖａ，  Ｇ．Ｉ．，  Ｂａｋａｌｅｉｎｉｋ，  Ｇ．Ａ．，  Ｓｔｒｏｂｙｋｉｎａ，  Ｉ．Ｙ．，  Ｇｕｂｓｋａｙａ，  Ｖ．Ｉ．，  Ｓｈａｒｉｐｏｖａ，  Ｒ．Ｒ．，  Ａｌｆｏｎｓｏｖ，  Ｖ．Ａ．，  Ｋａｔａｅｖ，  Ｖ．Ｅ．，  ａｎｄ  Ｔｏｌｓｔｉｋｏｖ，  Ａ．Ｇ．  ２００７．  ステビア・レバウディアナからの配糖体（Ｇｌｙｃｏｓｉｄｅｓ  ｆｒｏｍ  Ｓｔｅｖｉａ  ｒｅｂａｕｄｉａｎａ．）  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｎａｔｕｒａｌ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ．  Ｖ．４３，  Ｎｏ．１，  ８１−８５．
【非特許文献２】Ｋｏｈｄａ，  Ｈ．，  Ｋａｓａｉ，  Ｒ．，  Ｙａｍａｚａｋｉ，  Ｋ．，  Ｍｕｒａｋａｍｉ，  Ｋ．，  ａｎｄ  Ｔａｎａｋａ，  Ｏ．  １９７６．  ステビア・レバウディアナからの新しい甘味ジテルペングルコシド（Ｎｅｗ  ｓｗｅｅｔ  ｄｉｔｅｒｐｅｎｅ  ｇｌｕｃｏｓｉｄｅｓ  ｆｒｏｍ  Ｓｔｅｖｉａ  ｒｅｂａｕｄｉａｎａ．）  Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．  Ｖ．１５，  ９８１−９８３．
【非特許文献３】Ｓｔａｒｒａｔｔ，  Ａ．Ｎ．，  Ｋｉｒｂｉ，  Ｃ．Ｗ．，  Ｐｏｃｓ，  Ｒ．，  ａｎｄ  Ｂｒａｎｄｌｅ  Ｊ．Ｅ．  ２００２．  レバウディオサイドF、ステビア・レバウディアナからのジテルペン配糖体（Ｒｅｂａｕｄｉｏｓｉｄｅ  Ｆ，  ａ  ｄｉｔｅｒｐｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｓｉｄｅ  ｆｒｏｍ  Ｓｔｅｖｉａ  ｒｅｂａｕｄｉａｎａ．）  Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．  Ｖ．５９，  ３６７−３７０．
【非特許文献４】Ｋｏｂａｙａｓｈｉ，  Ｍ．，  Ｈｏｒｉｋａｗａ，  Ｓ．，  Ｄｅｒｇａｎｄｉ，  Ｉ．Ｈ．，  Ｕｅｎｏ，  Ｊ．，  ａｎｄ  Ｍｉｔｓｕｈａｓｈｉ，  Ｈ．  １９７７．  ズルコシドＡとB、ステビア・レバウディアナからの新規ジテルペン配糖体（Ｄｕｌｃｏｓｉｄｅ  Ａ  ａｎｄ  Ｂ，  Ｎｅｗ  ｄｉｔｅｒｐｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｓｉｄｅｓ  ｆｒｏｍ  Ｓｔｅｖｉａ  ｒｅｂａｕｄｉａｎａ．）  Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．  Ｖ／１６．  １４０５−１４０８．
【非特許文献５】Ｓｈｉ，  Ｒ．，  Ｘｕ，  Ｍ．，  Ｓｈｉ，  Ｚ．，  Ｆａｎ，  Ｙ．，  Ｇｕｏ，  Ｘ．，  Ｌｉｕ，  Ｙ．，  Ｗａｎｇ，  Ｃ．，  ａｎｄ  Ｈｅ，  Ｂ．  ２００２．  二官能基重合吸着剤の合成とステビア配糖体の精製におけるその適用（Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  ｂｉｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ  ａｄｓｏｒｂｅｎｔ  ａｎｄ  ｉｔｓ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｓｔｅｖｉａ  ｇｌｙｃｏｓｉｄｅｓ．）  Ｒｅａｃｔｉｖｅ  ＆  Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ｐｏｌｙｍｅｒｓ．  Ｖ．５０．  １０７−１１６
【非特許文献６】Ｃｈｅｎ，  Ｔ．，  Ｚｈａｎｇ，  Ｙ．，  Ｌｉｕ，  Ｘ．，  Ｓｈｉ，  Ｚ．，  Ｓｕｎ，  Ｊ．  ａｎｄ  Ｈｅ，  Ｂ．  １９９８．  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ｉｎ  Ｃｈｉｎａ．  Ｖ．４１．  Ｎｏ．４．  ４３６−４４１．
【非特許文献７】Ｃｈｅｎ，  Ｔ．，  Ｚｈａｎｇ，  Ｙ．，  Ｌｉｕ，  Ｘ．，  Ｓｈｉ，  Ｚ．，  Ｓｕｎ，  Ｊ．  ａｎｄ  Ｈｅ，  Ｂ．  １９９９．  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ｉｎ  Ｃｈｉｎａ．  Ｖ．４２．  Ｎｏ．３．  ２７７−２８２．
【非特許文献８】Ｆｕｈ，  Ｗ−Ｓ．，  Ｃｈｉａｎｇ，  Ｂ−Ｈ．  １９９０．  膜とイオン交換方法によるステビオシドの精製（Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｔｅｖｉｏｓｉｄｅｓ  ｂｙ  ｍｅｍｂｒａｎｅ  ａｎｄ  ｉｏｎ  ｅｘｃｈａｎｇｅ  ｐｒｏｃｅｓｓ．）  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｆｏｏｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅ．  Ｖ．５５．  Ｎｏ．５．  １４５４−１４５７．
【非特許文献９】Ｚｈａｎｇ，  Ｓ．Ｑ．，  Ｋｕｍａｒ，  Ａ．，  Ｋｕｔｏｗｙ，  Ｏ．  ２０００．  ステビア葉から甘味料を加工処理するための膜に基づく分離スキーム（Ｍｅｍｂｒａｎｅ−ｂａｓｅｄ  ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ  ｓｃｈｅｍｅ  ｆｏｒ  ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ  ｓｗｅｅｔｅｎｅｒ  ｆｒｏｍ  Ｓｔｅｖｉａ  ｌｅａｖｅｓ．）  Ｆｏｏｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ．  Ｖ．３３．  ６１７−６２０．［参考文献１０］  Ｌｉｕ，  Ｙ．，  Ｙｉｍｉｎｇ，  Ｃ．，  Ｌｉｎｉｎｇ，  Ｗ．，  ａｎｄ  Ｊ．Ｊｉａｎｈｕａ．  １９９１．  膜分離方法によるステビオシド調製の研究（Ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｓｔｅｖｉｏｓｉｄｅ  ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  ｂｙ  ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ  ｐｒｏｃｅｓｓ．）  Ｄｅｓａｌｉｎａｔｉｏｎ．  Ｖ．８３．  ３７５−３８２．
【非特許文献１１】Ｃｈｅｎ，  Ｔ．，  Ｚｈａｎｇ，  Ｙ．，  Ｌｉｕ，  Ｘ．，  ａｎｄ  Ｈｅ，  Ｂ．  １９９９．  レバウジオシドA上のカルボニル基での極性樹脂の吸着選択性に関する研究（Ｓｔｕｄｉｅｓ  ｏｎ  ｔｈｅ  ａｄｓｏｒｐｔｉｖｅ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｐｏｌａｒ  ｒｅｓｉｎ  ｗｉｔｈ  ｃａｒｂｏｎｙｌ  ｇｒｏｕｐ  ｏｎ  ｒｅｂａｕｄｉｏｓｉｄｅ  Ａ．）  Ａｃｔａ  Ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ  Ｓｃｎｉｃａ．  Ｎｏ．４．  ３９８−４０３．
【非特許文献１２】Ｍｏｒａｅｓ，  Ｅ．，  Ｍａｃｈａｄｏ．，  Ｎ．Ｒ．  ２００１．  ステビア・レバウディアナ・ベルトーニ抽出物の修飾されたゼオライトにおける吸着による精製法（Ｃｌａｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｓｔｅｖｉａ  ｒｅｂａｕｄｉａｎａ  （Ｂｅｒｔ．）  Ｂｅｒｔｏｎｉ  ｅｘｔｒａｃｔ  ｂｙ  ａｄｓｏｒｐｔｉｏｎ  ｉｎ  ｍｏｄｉｆｉｅｄ  ｚｅｏｌｉｔｅｓ．）  Ａｃｔａ  Ｓｃｉｅｎｔｉａｒｕｍ．  Ｖ．２３．  Ｎｏ．６．  １３７５−１３８０．
【非特許文献１３】Ｍｏｎｔｏｖａｎｅｌｉ，  Ｉ．Ｃ．Ｃ．，  Ｆｅｒｒｅｔｔｉ，  Ｅ．Ｃ．，  Ｓｉｍｘｅｓ，  Ｍ．Ｒ．，  ａｎｄ  Ｃ．  Ｓｉｌｖａ．  ２００４．  ゼオライトを有する固定床式カラムでの水溶性のステビア-抽出物の精製に対する温度と流量の効果（Ｔｈｅ  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ  ａｎｄ  ｆｌｏｗ  ｒａｔｅ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｃｌａｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ａｑｕｅｏｕｓ  Ｓｔｅｖｉａ−ｅｘｔｒａｃｔ  ｉｎ  ｆｉｘｅｄ−ｂｅｄ  ｃｏｌｕｍｎ  ｗｉｔｈ  ｚｅｏｌｉｔｅｓ．）  Ｂｒａｚｉｌｉａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ．  Ｖ．２１．  Ｎｏ．３．  ４４９−４５８．
【非特許文献１４】Ｐｏｌ，  Ｊ．，  Ｏｓｔｒａ，  Ｅ．Ｖ．，  Ｋａｒａｓｅｋ，  Ｐ．，  Ｒｏｔｈ，  Ｍ．，  Ｂｅｎｅｓｏｖａ，  Ｋ．，  Ｋｏｔｌａｒｉｋｏｖａ，  Ｐ．，  ａｎｄ  Ｊ．Ｃａｓｌａｖｓｋｙ．  ２００７．  Ｖ．３８８．  １８４７−１８５７．
【非特許文献１５】Ｂａｎｄｎａ，  Ｖ．Ｊ．，  Ｓｉｎｇｈ，  Ｂ．，  ａｎｄ  Ｖ．Ｋ．Ｋａｕｌ．  ２００９．  ステビア・レバウディアナ（ベルトーニ）からのステビオシドとレバウジオシドAの効果的なマイクロ波利用抽出方法（Ａｎ  ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ  ｍｉｃｒｏｗａｖｅ−ａｓｓｉｓｔｅｄ  ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ  ｐｒｏｃｅｓｓ  ｏｆ  ｓｔｅｖｉｏｓｉｄｅ  ａｎｄ  ｒｅｂａｕｄｉｏｓｉｄｅ  Ａ  ｆｒｏｍ  Ｓｔｅｖｉａ  ｒｅｂａｕｄｉａｎａ  （Ｂｅｒｔｏｎｉ）．）  Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ａｎａｌｙｓｉｓ．  Ｖ．２０．  ２４０−２４５．
【非特許文献１６】Ｔｅｏ，  Ｃ．Ｃ．，  Ｔａｎ，  Ｓ．Ｎ．，  Ｙｏｎｇ，  Ｊ．Ｗ．Ｈ．，  Ｈｅｗ，  Ｃ．Ｓ．，  ａｎｄ  Ｅ．Ｓ．Ｏｎｇ．  ２００９．  グリーン溶媒抽出と クロマトグラフィック化学フィンガープリントの組み合わせによるステビア・レバウディアナ・ベルトーニの品質評価の検証（Ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｇｒｅｅｎ−ｓｏｌｖｅｎｔ  ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ  ｃｏｍｂｉｎｅｄ  ｗｉｔｈ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ  ｃｈｅｍｉｃａｌ  ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔ  ｔｏ  ｅｖａｌｕａｔｅ  ｑｕａｌｉｔｙ  ｏｆ  Ｓｔｅｖｉａ  ｒｅｂａｕｄｉａｎａ  Ｂｅｒｔｏｎｉ．）  Ｊ．Ｓｅｐ．Ｓｃｉ．  Ｖ．３２．  ６１３−６２２．
【非特許文献１７】Ｙｏｄａ，  Ｓ．Ｋ．，  Ｍａｒｑｕｅｓ，  Ｍ．Ｏ．Ｍ．，  Ａｄｅｍｉｒ  Ｊ．  Ｐｅｔｅｎａｔｅ，  Ａ．Ｊ．，  ａｎｄ  Ｍ．  Ａ．  Ｍｅｉｒｅｌｅｓ．  ２００３．  ＣＯ２とＣＯ２＋水を使うステビア・レバウディアナ・ベルトーニからの超臨界流体抽出法：抽出キネティクスと抽出成分の同定（Ｓｕｐｅｒｃｒｉｔｉｃａｌ  ｆｌｕｉｄ  ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ  ｆｒｏｍ  Ｓｔｅｖｉａ  ｒｅｂａｕｄｉａｎａ  Ｂｅｒｔｏｎｉ  ｕｓｉｎｇ  ＣＯ２  ａｎｄ  ＣＯ２＋  ｗａｔｅｒ：  ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ  ｋｉｎｅｔｉｃｓ  ａｎｄ  ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｅｘｔｒａｃｔｅｄ  ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ．）  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｆｏｏｄ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ．  Ｖ．５７．  １２５−１３４．
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０１０１】
本発明は、ステビア・レバウディアナ・ベルトーニ植物からの個々の甘味配糖体の単離と精製のための方法、及び、特にレバウジオシドＤ単離と精製のための方法及びその甘味料としての適用に関する。
【０１０２】
解決される主な技術的問題及び本発明の主な目的は、ステビア抽出物からの異なるステビオール配糖体、特にレバウジオシドＤを単離する及び精製する、高効率な方法を提供することである。
【０１０３】
本発明は、個々の高純度の甘味配糖体、特にレバウジオシドＤの単離と精製を用いた、ステビア・レバウディアナ・ベルトーニ植物の抽出物の再処理方法を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０１０４】
高純度のレバウジオシドＤのみ、又は他の甘味料やほかの成分との組み合わせは、飲料類、菓子類、パン類、クッキー類、チューイングガム類等のような、食用で噛むことのできる組成物においてカロリーゼロの甘味料として有用である。
【０１０５】
本発明によれば、レバウジオシドＤの単離と精製は、ステビア抽出物から開発された。一実施形態において、レバウジオシドＤの単離と精製のための方法は、ステビア抽出物を第一のアルコール又はアルコール水溶液で処理して第一の混合物をつくり、その第一の混合物からレバウジオシドＡとレバウジオシドＤを含有している第一の沈殿物を得て、その第一の沈殿物を第二のアルコール又はアルコール水溶液で処理して第二の混合物から得て、その第二の混合物から、高純度のレバウジオシドＡを含有する第二の沈殿物と高いレバウジオシドＤ含有量を有する濾過液を得ることを含む。ここで、第二の沈殿物は高純度レバウジオシドＡを生産するために乾燥され、そして、濾過液は高純度レバウジオシドＤを生産するために濃縮されている。任意選択的に、この方法は、更に、高純度のレバウジオシドＤを第三のアルコール又はアルコール水溶液で処理して高純度のレバウジオシドＤを精製することを含む。
【０１０６】
本発明の目的は、優れた味覚と物理的特性を有する生成物を提供することである。その生成物は、知覚できる甘味を提供するのに十分な量での少なくとも１つの非栄養の天然甘味料を含む。その組成物は、知覚できる甘味を提供するのに十分な量の非栄養の天然甘味料としてのレバウジオシドＤの利用のための、より砂糖類似の味覚特性を提供する。
【０１０７】
前述の一般的な説明と以下の詳細な説明の両方が、模範的及び解説的であり、請求される発明の更なる説明を提供することを目的とすることが理解されるべきである。
【０１０８】
添付の図面は、発明の更なる理解を提供するために含められている。図面は発明の実施形態を例示して、記述と共に、発明の実施形態の原理を説明するのに役立つ。
【図面の簡単な説明】
【０１０９】
【図１】図１は、ステビア・レバウディアナ・ベルトーニ葉に存在するステビオール及びステビオール配糖体の化学構造を示している。
【図２Ａ】図２は、ステビア・レバウディアナ・ベルトーニに存在するステビオール配糖体の化学構造を示している。
【図２Ｂ】図２は、ステビア・レバウディアナ・ベルトーニに存在するステビオール配糖体の化学構造を示している。
【図２Ｃ】図２は、ステビア・レバウディアナ・ベルトーニに存在するステビオール配糖体の化学構造を示している。
【図２Ｄ】図２は、ステビア・レバウディアナ・ベルトーニに存在するステビオール配糖体の化学構造を示している。
【図２Ｅ】図２は、ステビア・レバウディアナ・ベルトーニに存在するステビオール配糖体の化学構造を示している。
【図２Ｆ】図２は、ステビア・レバウディアナ・ベルトーニに存在するステビオール配糖体の化学構造を示している。
【図３】図３は、本発明の１つの実施形態に従う、エタノール水系を用いるレバウジオシドＡの１段階精製スキームを示す。
【図４】図４は、精製のいろいろな段階でレバウジオシドＤのＨＰＬＣのチャートを示している。
【図５】図５は、本発明の１つの実施形態に従う、レバウジオシドＤの精製スキームを示している。
【図６】図６は、レバウジオシドＤのＦＴＩＲスペクトルを示している。
【発明を実施するための形態】
【０１１０】
本発明は、ステビア・レバウディアナ・ベルトーニ植物抽出物からの個々の甘味配糖体の単離と精製のための、そして、特にステビア・レバウディアナ・ベルトーニ植物抽出物からのレバウジオシドＤの単離と精製のための方法と、いろいろな生成物におけるその応用を提供する。
【０１１１】
本発明の長所は、後述の詳しい説明からより明らかになる。しかし、詳しい説明と特定の例は、発明の好ましい実施形態を示す一方で、実例として挙げられるだけである、なぜなら、発明の精神及び分野中のいろいろな変更及び改変がこの詳しい記述から当業者にとって明らかになるからであることを理解すべきである。
【０１１２】
ステビアの中に存在している甘味配糖体の中で、ステビオシドとレバウジオシドＡだけは、８０％より少ない純度では低価で利用可能であり、そして、８０％より高い純度では、高い費用を必要とする。商用の生成物の最も高い純度は、通常９７％より大きい。市場では、レバウジオシドＢ、レバウジオシドＤとレバウジオシドＣの商用の量がない。マイナーな量でのレバウジオシドＥとＦの分析標準は、まだ利用できていない。
【０１１３】
レバウジオシドＤは、図２に示される化学構造を有する、高い能力を持つジテルペノイド配糖体甘味料である。
【０１１４】
レバウジオシドＤは、日本、台湾、マレーシア、韓国、中国、イスラエル、インド、ブラジル、オーストラリアとパラグアイで現在商業的に栽培されている、ステビア・レバウディアナ・ベルトーニ植物（「ステビア」）から、他のステビオール配糖体と一緒に、単離されて、抽出される。それは、多くの高い能力を有する甘味料よりも機能的にも知覚的にも優れた性質を有する、理想的なカロリーゼロの甘味料である。ステビアの処理された形式は、砂糖より３０〜４００倍の能力があり得る。ステビアの甘味ジテルペノイド配糖体中で、レバウジオシドＤはあまり苦くなく、最も持続性すくない後味を有する。
【０１１５】
現在、レバウジオシドＤの単離と精製に関係する公表された商用技術はなく、そして、確かに、ステビア抽出物からの、個々の甘味配糖体の包括的な単離と精製のための効率的で経済的な方法の必要性がある。
【０１１６】
本発明は、ステビア抽出物からの高純度のレバウジオシドＤの生産の方法とその後の利用の方法を提供する。
【０１１７】
以下、用語「高純度」は、乾燥重量ベースで、少なくともおよそ９１％〜１００％のレバウジオシドＤの量を含む、レバウジオシドＤの組成を表す。
【０１１８】
この発明の例示的な実施形態は、以下に詳細に記述され、図３−６で図示される。
【０１１９】
しかし、詳細な説明において、本発明の特定の例示的な実施形態だけが示されて、実例として記述される。当業者が認めるように、発明は多くの異なる形態で実施されることができて、ここで述べられる実施形態に限られているものとして解釈されるべきでない。
【０１２０】
甘味物質を含むジテルペン配糖体は、Ｓ．レバウディアナ・ベルトーニ植物の茎、種と葉で見つけられ、葉において最も高い濃度で存在している。葉は、それゆえに、甘味配糖体の回収のための好ましい出発原料である。
【０１２１】
レバウジオシドＤの精製は、商用のステビア抽出物から始まって開発されている。抽出物のレバウジオシドＤの含有量は、抽出物調製のステビア植物多様性又は技術的スキームに応じて変化し得る。
【０１２２】
ステビオシド２５．４０％、レバウジオシドＡ−５９．１４％、レバウジオシドＣ−９．７１％、レバウジオシドＤ−２．０３％、レバウジオシドＢ−０．５６％、レバウジオシドＥ−０．６８％、レバウジオシドＦ−１．０２％、ステビオールビオシド−０．１１％、ズルコシドＡ−１．３５％を含有しているステビア抽出物は高純度レバウジオシドＢの精製を例示して、例示的な出発原料として用いられた。
【０１２３】
図３では、本発明の１つの実施形態に従った、比較的高い純度のレバウジオシドＤを有するレバウジオシドＡの一段階の精製法が与えられている。を例示して、が例示的な始まっている物質として使われた。ステビア抽出物は、５０−７０℃、望ましくは５５−６０℃で、およそ１０−３０分、望ましくは１５−２０分、第一のエタノール水溶液に溶かされ、そして、それから、１５−４０℃、望ましくは２０−２２℃、およそ１８−４８時間、望ましくは２０−２４時間、撹拌されて溶かされた。温度が２２℃に達したとき、高純度のレバウジオシドＡの１−２％（質量／体積）が、結晶化を始める種結晶として、その反応混合物に加えられた。抽出物と第一のエタノール水溶液の割合は、マイナーな配糖体の含有量に依存して、１．０：２．５−１．０：１０．０質量／体積の間、望ましくは１．０：３．０−５．０質量／体積の間であった。
【０１２４】
この時間の間に、第一の沈殿物が形成され、そして、それは濾過又は遠心分離によって分離された。
【０１２５】
第一のエタノール水溶液中のエタノール濃度は、７５−９９％の間、望ましくは８２−８８％の間である。第一の沈殿物におけるレバウジオシドＡとレバウジオシドＤは、それぞれ、７９−９９％の間と０．８−４．０％の間の範囲である。
【０１２６】
レバウジオシドＡの純度と収率は、エタノールとエタノール水溶液の割合と、エタノールの濃度に依存した。エタノールのいろいろな濃度でのデータが、表３にまとめられている。抽出物：メタノールの比率は、１：３．０（質量／体積）であった。
【０１２７】
８８％のエタノール溶液のいろいろな容量のレバウジオシドＡの精製レベルと産出が、表４にまとめられている。
【０１２８】
【表３】
2013507914.tif 000004
【０１２９】
【表４】
2013507914.tif 000005
【０１３０】
レバウジオシドＤの含有量は、８８−９０％まで、エタノールの濃度の増加と共に増加し、エタノール水溶液の抽出物に対する割合の減少と共に増加する。同時に、レバウジオシドＡの純度は、より希釈されたエタノール溶液で増加し、抽出するエタノール水溶液の抽出物に対するより高い比率で、増加した。
【０１３１】
レバウジオシドのいろいろな含有量を有するステビア抽出物についての、８８％のエタノールの１：３（質量／体積）による処理後の段階の生成物の収率が、表５にまとめられている。予想され得るとおり、生成物の収率は、最初の抽出物においてレバウジオシドＡの含有量の増加と共に増加する。
【０１３２】
【表５】
2013507914.tif 000006
【０１３３】
沈殿物は、濾過又は遠心分離によって分離されて、およそ２倍容量の無水エタノールで洗浄され、乾燥された。さまざまな遠心分離機又は濾過系のような、液体からの沈殿物の分離を可能にする、どんな型の装置でも、この段階で使われてよい。回転真空型乾燥機、流動床乾燥機、ロータリートンネル型乾燥機又はプレート型乾燥機のような、異なる型の乾燥機が、粉末の形状で精製されたステビオール配糖体を生産するために適している。
【０１３４】
最初の抽出物がレバウジオシドＢとレバウジオシドＤの高い量を含有する場合において、レバウジオシドＡの精製と後のレバウジオシドＤ精製のために、エタノールのより低い濃度とエタノール−水溶液の抽出物に対するより高い比率の利用が、より望ましい（表６、表７）。この一連の実験において、最初の抽出物におけるレバウジオシドＡの含有量は、４８．７％であった。
【０１３５】
レバウジオシドＡとレバウジオシドＤの高い含有量を有する生成物の収率は、沈殿後のエタノール利用によって増加され得る。その目的のために、結晶化の最後に、初期の固体に対して、無水エタノールの０．５−１．０体積／質量、望ましくは０．５−０．８体積／質量が、混合物に加えられ、そして、その過程はもう２−３時間続けられた。４８．７％のレバウジオシドＡ含有量を有する抽出物からの生成物の収率と純度は、表８にまとめられている。
【０１３６】
【表６】
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【０１３７】
【表７】
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【０１３８】
【表８】
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【０１３９】
高純度のレバウジオシドＡを生産するために、この方法は、冷却段階なしで３０−５０℃で実行されてよい。レバウジオシドＡの純度がより高かったが、それは生成物の低い収率をもたらした。生成物の品質は、より高い浄化温度で、向上した。２４時間後１部の抽出物に対して３．５倍容量の８５％のエタノールを用いて得られた、沈殿後段階及び沈殿後段階なしでの結果は、表９にまとめられている。
【０１４０】
【表９】
2013507914.tif 000010
【０１４１】
最終生成物におけるレバウジオシドＡの含有量が、主にレバウジオシドＢやレバウジオシドＤの高い含有量のために、９７％未満だったとき、生成物はエタノールの水溶液で更に洗浄された。そのために、沈殿後に得られたレバウジオシドＡは、３０−４０分間、室温でエタノール水混合液に懸濁された。均一な懸濁液が得られた後、温度は３５−５０℃にまで、望ましくは３８−４２℃にまで上げられ、そして、１０−２０時間、望ましくは、１２−１５時間、撹拌され、そして、その後、およそ３−２０時間、望ましくは５−１０時間、１０−２５℃で、望ましくは、２０−２２℃で、撹拌された。レバウジオシドＡとエタノールの割合は、１．０：２．０から１．０：５．０（質量／体積）、望ましくは１．０：２．５から１．０：４．０（質量／体積）であった。エタノールの濃度は、８５−９３％、望ましくは８８−９０％であった。
【０１４２】
レバウジオシドＡの純度が、ステビオシドの高い含有量のために、９７％未満であった場合においては、その生成物は、レバウジオシドＢとレバウジオシドＤの汚染された生成物について上で記述されたのと同じ方法によって、無水エタノールで洗浄された。レバウジオシドＡとエタノールの割合は、１．０：２．０から１．０：５．０（質量／体積）、望ましくは１．０：２．５−４．０（質量／体積）であった。
【０１４３】
図５において、本発明の１つの実施形態に従って、レバウジオシドＡとレバウジオシドＤの精製のための機能的なフローチャートが提供されている。
【０１４４】
それぞれ、およそ７５−８０％と２．０−３．５％のレバウジオシドＡとレバウジオシドＤの含有量を有する結晶や沈殿物からのレバウジオシドＤの精製は、以下のように実行された。注意されるべき点は、レバウジオシドＡとレバウジオシドＤを有する結晶が、図３に関連して記述されたような方法から得られ得ることである。
【０１４５】
レバウジオシドＡとレバウジオシドＤの高い含有量を有する沈殿物は、第２のエタノール水溶液と混合させられて、２−６時間、望ましくは３−４時間、４５−６５℃で、望ましくは５０−５５℃で、撹拌下、保温された。それから、その混合物は、１−３時間、望ましくは０．５−１．０時間、室温まで冷却された。その沈殿物は、濾過によって分離された。
【０１４６】
固体とエタノール水溶液の好ましい比は、１〜５（質量／体積）であり、そして、エタノールの最適濃度は７８％であった。しかし、エタノール濃度は、７０−８０％の限定値と比率１：２．５−１．７（質量／体積）でもよい。
【０１４７】
高いレバウジオシドＤの沈殿物の濾過を容易にするために、０．５−３．０体積％、望ましくは１．０−１．５体積％の活性化されたカーボンが、濾過前に混合物に加えられた。その後、その沈殿物は３−５倍容量の３０−５０％のメタノールで混ぜ合わせられた。その懸濁液は、１−５時間、望ましくは２−３時間、４５−６５℃で、望ましくは５７−６２℃で、撹拌下、保持されて、濾過にかけられた。活性化されたカーボンに吸着された配糖体の溶出は、メタノールを用いて実行された。
【０１４８】
カーボン適用あり及びカーボン適用なしで得られた両沈殿物は、最適条件で、レバウジオシドＤの１９−２２．１％を含有している（表１０）。
【０１４９】
【表１０】
2013507914.tif 000011
【０１５０】
原則として、メタノールの適用量がより高い程、より速い溶出過程であり得る。この過程は、メタノール水溶液が用いられたとき、より短い時間で完了され得る。
【０１５１】
メタノール分留は、乾燥するまで蒸発された。
【０１５２】
９５．６％のレバウジオシドＡと３．５％のレバウジオシドＤ（図４ａ）を含有している最初の原料が、７８．０％エタノールの３．５容量を混ぜ合わせられたとき、混合物は１０−１５分の間沸騰され、そして、溶解していない原料は、熱濾過によって分離され、沈殿物の収率は、レバウジオシドＡとレバウジオシドＤ（図４ｂ）含有量、それぞれ、５２−５３．０％と４３−４５．０％を有する、６−７．０％の範囲にあった。
【０１５３】
更なる精製のために、沈殿物は、１：２（質量／体積）の比率の５０％のエタノールで、３０−４０℃で、望ましくは３３−３７℃で懸濁され、２−１５時間、望ましくは１０−１２時間、撹拌下で、維持された。懸濁液は濾過されて、乾燥された。およそ１５−１７．０％のレバウジオシドＡと８０−８２％のレバウジオシドＤの含有量を有する沈殿物の収率は、４２−４６．０％の範囲であった。原則として、最高５容量のエタノール水溶液は、この段階で利用され得る。エタノールの濃度は、１０−８０％の範囲、望ましくは４５−５２％の範囲になり得る。
【０１５４】
その沈殿物は、類似した処理にさらされた。その沈殿物は濾過によって分離されて、およそ２容量の無水メタノールで洗浄されて、乾燥された。種々の型の遠心分離機又は濾過系のような、液体から沈殿物を分離することを可能にする、いずれの型の装置が、この段階で用いられてよい。回転真空型乾燥機、流動床乾燥機、ロータリートンネル型乾燥機又はプレート型乾燥機のような、異なる型の乾燥機が、粉末の形状で精製されたレバウジオシドＤを生産するために適している。
【０１５５】
レバウジオシドＤの純度は、およそ９５−９９％の含有量であった（図４ｃ）。生成物の収率は、およそ５８−６０％であった。
【０１５６】
レバウジオシドＤの単離後に残留する、統合された溶液は、結晶化のための結晶種としての少量のレバウジオシドＡと混ぜ合わせられ、２０−２４時間、２０−２２℃で結晶化のため放置された。結晶におけるレバウジオシドＡの含有量は、９７．７−９９．４％の範囲であった。
【０１５７】
第一の沈殿物からの残留溶液は、レバウジオシドＡの単離又はステビオール配糖体の高純度混合物のために用いられ得る。
【０１５８】
本発明において得られる高純度レバウジオシドＤは、分子量１１２９．１５、分子式Ｃ５０Ｈ８０Ｏ２８、図２に示される構造を有し、白色で無臭の粉末形状である。この化合物は、１０％のスクロース溶液と比較されるとき、砂糖よりおよそ１８０−２００倍甘い。赤外吸収スペクトルは、図６に示されている。レバウジオシドＤは、１７３０ｃｍ−１周辺で特徴的な吸収極大を示す。純粋なレバウジオシドＤの他の性質は、以下の通りである。
【０１５９】
融点：２４８−２４９℃
【０１６０】
比旋光度：５０％エタノール（Ｃ＝１．０）中で［ａ］Ｄ２５=２９．５°
【０１６１】
水中での溶解性は、およそ０．２％であり、それは温度の増加と共に増加する。それは、溶液を冷却すると再び沈殿する。クロマトグラフィ分離段階の間、及び、結晶する前は、非常に溶解性は高い。  
【０１６２】
メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノールの希釈溶液に可溶である。
【０１６３】
アセトン、ベンゼン、クロロホルム、エーテルに不溶である。
【０１６４】
本発明において得られるレバウジオシドＤは、熱とｐＨに対して安定である。
【０１６５】
本発明によれば、得られるレバウジオシドＤは、食品、飲料、医薬品組成物、化粧品、チューイングガム、食卓用製品、穀物、酪農製品、歯みがき粉、その他の口腔組成物等における、高甘味度天然甘味料として取り入れられてよい。後に示す例は、使用され得る代表的な部分を示す。
【０１６６】
加えて、レバウジオシドＤは、人間の消費のために貢献する飲物や食品や他の製品のためのだけでなく、改善された特徴を有する動物用の食物や飼料においての甘味料として、用いられ得る。
【０１６７】
食品、飲物、医薬、化粧品、食卓用製品、チューインガムの製造の間、混合、練合、溶解、酸洗浄、浸透、透水、灌水、微粒化、浸出等の方法が、使われ得る。
【０１６８】
本発明において得られる甘味料は、乾燥又は液体の形状で使われ得る。それは、食品の熱処理の前後に加えられてよい。甘味料の量は、使用の目的に依る。それは、単独で又は他の化合物との組合せで加えられてよい。
【０１６９】
本発明の１つの特定の実施形態において、一甘味化合物としてのレバウジオシドＤは、唯一の甘味料として使用されてよい、又は他の天然に存在する高甘味度甘味料と共に用いられてよい。
【０１７０】
ここで用いられているように、「天然の高甘味度甘味料」というフレーズは、天然で見つけられる、及び、スクロース、フルクトース、又はブドウ糖より高い甘さ能力を有する、あらゆる組成物を表す。
【０１７１】
天然の高甘味度甘味料の非限定的な例は、ステビオシド、レバウジオシドＡ、レバウジオシドＢ、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＥ、レバウジオシドＦ、ステビオールビオシド、ズルコシドＡ、ルブソシド、モグロサイド、ブラゼイン、グリチルリジン酸とその塩分（タウマチン、ペリラルチン、ペルナンヅルシン（ｐｅｒｎａｎｄｕｌｃｉｎ）、ムクロジオシド、バイユノシド、フロミソシドＩ、ジメチル−ヘキサヒドロフルオレン−ジカルボン酸、アブルソシド、ペリアンドリン、カルノシフロシド、シクロカリオシド、プテロカリオシド、ポリポドシドＡ、ブラジリン、ヘルナンズルシン、フィロズルシン、グリシフィリン、フロリジン、トリロバチン、ジヒドロフラボノール、ジヒドロクエルセチン−３−アセテート、ネオアスチリビン（ｎｅｏａｓｔｉｌｉｂｉｎ）、トランス桂皮アルデヒド、モナチンとその塩分）を含む。そして、セリゲアインがＡ、ヘマトキシリン、モネリン、オスラジン、プテロカリオシドＡ、プテロカリオシドＢ、マビンリン、ペンタジン、ミラキュリン、クルクリン、ネオクリン、クロロゲン酸、シナリン、ルオハングオ甘味料、シアメノシド等と、それらの組合せである。
【０１７２】
別の特定の実施形態において、甘味化合物としてのレバウジオシドＤは、合成又は人工の高甘味度甘味料と共に使われてよい。
【０１７３】
ここで用いられているように、「合成」あるいは「人工高甘味度甘味料」というフレーズは、天然で見つけられない、又は、スクロース、フルクトース、ブドウ糖より高い甘さ能力を有する、あらゆる組成物を参照している。
【０１７４】
合成あるいは人工の高甘味度甘味料の非限定的な例は、スクラロース、カリウム・アセスルファム、アスパルテーム、アリターム、サッカリン、ネオヘスペリジン・ジヒドロカルコン、チクロ、ネオテーム、ズルシトール、スオサン、Ｎ−［Ｎ−［３−（３−ヒドロキシ−４−メトキシフェニル）プロピル］−Ｌ−ａ−アスパルチル］−Ｌ−フェニルアラニン１−メチル・エステル、Ｎ−［Ｎ−［３−（３−ヒドロキシ−４−メトキシフェニル）−３−メチルブチル］−Ｌ−α−アスパルチル］−Ｌ−フェニルアラニン１−メチル・エステル、Ｎ−［Ｎ−［３−（３メトキシ４−ヒドロキシフェニル）プロピル］−Ｌ−ａ−アスパルチル］−Ｌ−フェニルアラニン１−メチル・エステル、それらの塩、などを含み、そして、それらの組合せも含む。
【０１７５】
１つの実施形態において、レバウジオシドＤは、ギムネム酸、ホズルチン、ジジフィン、ラクチソール等のような天然の甘味料抑圧因子との組合せで使われ得る。
【０１７６】
別の実施形態において、レバウジオシドＤは、いろいろなうま味味覚促進剤と組み合わされることができる。
【０１７７】
特定の実施形態において、レバウジオシドＤは、アスパラギン酸、アルギニン、グリシン、グルタミン酸、プロリン、スレオニン、テアニン、システイン、シスチン、アラニン、バリン、チロシン、ロイシン、イソロイシン、アスパラギン、セリン、リシン、ヒスチジン、オルニチン、メチオニン、カミチン、アミノ酪酸（α−、β−、γ−）、グルタミン、ヒドロキシプロリン、タウリン、ノルバリン、サルコシンや、ナトリウム又はカリウム塩又は酸性塩のような、それらの塩の形態と、処方され得る。アミノ酸付加体も、Ｌ−体又はＤ−体であってよく、同じ又は異なるアミノ酸の、モノ‐、ジ−、トリ‐体であってもよい。その上、適切であるならば、アミノ酸は、α−、β−、γ−、δ−、ε−異性体であってよい。前述のアミノ酸やそれらの対応する塩（例えば、それらの、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム塩類、又は、他のアルカリ又はアルカリ土類金属塩、又は酸性塩）の組合せも、適した添加物である。アミノ酸は天然でも合成でもよい。アミノ酸も修飾されてもよい。修飾されたアミノ酸は、少なくともある一つの原子が加えられたり、取り除かれたり、置換されたりした、どんなアミノ酸でも、又はそれらの組合せ（例えば、Ｎ−アルキル・アミノ酸、Ｎ−アシル・アミノ酸又はＮ−メチル・アミノ酸）を参照している。修飾されたアミノ酸の非限定的な例は、トリメチル・グリシン、Ｎメチル−グリシンとＮメチル−アラニンのようなアミノ酸誘導体を含む。ここで用いられているように、アミノ酸は、修飾されたアミノ酸と修飾されていないアミノ酸の両方を含む。ここで用いられているように、修飾されたアミノ酸は、グルタチオンとＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンのようなペプチドとポリペプチド（例えば、ジペプチド、トリペプチド、テトラペプチドとペンタペプチド）を含んでいてもよい。
【０１７８】
１つの特定の実施形態において、レバウジオシドＤは、ポリ−Ｌ−アスパラギン酸、ポリ‐Ｌ‐リジン（例えば、ポリ−Ｌ−α−リシン又はポリ−Ｌ−ε−リシン）、ポリ−Ｌ−オルニチン（例えば、ポリ−Ｌ−α−オルニチン又はポリ−Ｌ−ε−オルニチン）、ポリ−Ｌ−アルギニン、他のアミノ酸の重合体、そして、それらの塩（例えば、Ｌ−グルタミン酸一ナトリウム塩のような、マグネシウム、カルシウム、カリウム又はソーダ塩）を含むポリアミノ酸添加剤と処方されてよい。ポリアミノ酸添加物は、Ｄ−体又はＬ−体であってもよい。更に、適切であるならば、ポリアミノ酸は、α−、β−、γ−、δ−、ε−異性体であってもよい。前述のポリアミノ酸とそれらの対応する塩（例えば、それらの、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム塩、又は他のアルカリ又はアルカリ土類金属塩、又は酸性塩）の組合せは、本発明の実施形態では、添加物を改善する適した甘味味覚でもある。また、ここで記述されるポリアミノ酸は、異なるアミノ酸の共重合体含んでいてもよい。ポリアミノ酸は天然物あるいは合成物であってよい。ポリアミノ酸は修飾されてもよく、それらは、少なくとも１つの原子が加えられたり、取り除かれたり、置換されたり、又はそれらの組合せである（例えば、Ｎ−アルキルポリアミノ酸又はＮ−アシルポリアミノ酸）。ここで用いられているように、ポリアミノ酸は修飾されたポリアミノ酸と修飾されていないポリアミノ酸の両方を含む。特定の実施形態によれば、修飾されたポリアミノ酸が含まれ、１，５００分子量、６，０００分子量、２５，２００分子量、６３，０００分子量、８３，０００分子量、又は３００，０００分子量を有するポリ−Ｌ−α−リジンのような、いろいろな分子量（ＭＷ）のポリアミノ酸に限定されていない。
【０１７９】
別の特定の実施形態において、レバウジオシドＤは、多価アルコール又は糖アルコール類と組み合わされてよい。用語「多価アルコール」は、１つ以上の水酸基を含有する分子を指す。多価アルコールは、ジオール、トリオール又はテトラオールであってよく、それらは、それぞれ、２つ、３つ、あるいは４つの水酸基を含有する。ポリオールも、ペンタオール、ヘキサオール、ヘプタオール等のように、４つより多くの水酸基を含有してよい。そして、それは、それぞれ、５つの、６つの又は、７つのヒドロキシル基を含有する。その上、ポリオールは、糖アルコール、多価アルコール又はポリアルコールであってもよく、それは、カルボニル基（アルデヒド又はケトン、還元糖）が第一又は第二ヒドロキシル基に還元された、炭水化物の還元型である。
【０１８０】
ポリオールの非限定的な例は,エリスリトール、マルチトール、マンニトール、ソルビット、ラクチトール、キシリトール、イノシトール、イソマルト、プロピレングリコール、グリセリン、トレイトール、ガラクチトール、水素化されたイソマルツロース、還元されたイソマルト−オリゴ糖、還元されたキシロ−オリゴ糖、還元されたゲンチオ−オリゴ糖、還元されたマルトースシロップ、還元されたグルコースシロップ、水素化された澱粉加水分解物、ポリグリチトール、糖アルコール、あるいは、甘味料組成物の味覚に悪影響を与えない、還元され得る、他の炭水化物、を含む。
【０１８１】
１つの特定の実施形態において、レバウジオシドＤは、Ｄ−タガトース、Ｌ−糖類、Ｌ−ソルボース、Ｌ−アラビノース等とそれらの組合せのような、減じられたカロリー甘味料と組み合わされてよい。
【０１８２】
別の特定の実施形態において、レバウジオシドＤは、いろいろな炭水化物と組み合わされ得る。用語「炭水化物」は、一般的な化学式（ＣＨ２Ｏ）ｎの（ここで、「ｎ」は３−３０である）、複数の水酸基で置換したアルデヒド又はケトン化合物及びそれらのオリゴマーやポリマーを一般に指す。本発明の炭水化物は、そのうえ、一つ以上の位置で置換又は脱酸素化されてよい。ここで用いられているように、炭水化物は、修飾されていない炭水化物、炭水化物誘導体、置換された炭水化物、修飾された炭水化物を含む。ここで用いられているように、フレーズ「炭水化物誘導体」、「置換された炭水化物」、「修飾された炭水化物」は同義である。修飾された炭水化物は、少なくとも１つの原子が、加えられ、取り除かれたいずれの炭水化物又はそれらの組合せを意味する。従って、炭水化物誘導体又は置換された炭水化物は、置換された又は置換されていない、単糖類、二糖類、オリゴ糖類、多糖類を含む。炭水化物誘導体、あるいは、置換された炭水化物は、任意選択的に、いずれかの炭素位置で、炭水化物誘導体又は置換された炭水化物が甘味組成物の甘味を改善する機能を示すことを条件として、脱酸素化されたり、ハロゲン、ハロアルキル、カルボキシル、アシル、アシロキシ、アミノ、アミド、カルボキシル誘導体、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アリールアミノ、アルコキシ、アリールオキシ、ニトロ、シアノ、スルホ、メルカプト、イミノ、スルホニル、スルフェニル、スルフィニル、スルファモイル、カルボアルコキシ、カルボキシアミド、ホスホニル、ホスフィニル、ホスホリル、ホスフィノ、チオエステル、チオエーテル、オキシイミノ、ヒドラジノ、カルバミル、ホスホ、ホスホナトやその他の官能基のような一つ以上の部位で置換されてよい。
【０１８３】
本発明の実施形態において、炭水化物の非限定的な例は、タガトース、トレハロース、ガラクトース、ラムノース、いろいろなシクロデクストリン、環状オリゴ糖類、さまざまなマルトデキストリン、デキストラン、スクロース、ブドウ糖、リブロース、フルクトース、トレオース、アラビノース、キシロース、リキソース、アロース、アルトロース、マンノース、イドース、ラクトース、マルトース、転化糖、イソトレハロース、ネオトレハロース、イソマルツロース、エリスロース、デオキシリボース、グロース、イドース、タロース、エリトルロース、キシルロース、プシコース、ツラノース、セロビオース、アミロペクチン、グルコサミン、マンノサミン、フコース、グルクロン酸、グルコン酸、グルコノラクトン、アベクオース、ガラクトサミン、ビート・オリゴ糖類、イソマルト−オリゴ糖類（イソマルトース、イソマルトトリオース、パノースなど）、キシロ・オリゴ糖類（キシロトリオース、キシロビオースなど）、キシロ末端オリゴ糖類、ゲンチオ−オリゴ糖類（などゲンチオビオース、ゲンチオトリオース、ゲンチオテトラオース）、ソルボース、ニゲロ−オリゴ糖類、パラチノース・オリゴ糖類、フルクトオリゴ糖（ケストース、ニストースなど）含む、マルトテトラオール、マルトトリオール、マルトオリゴ糖（マルトトリオース、マルトテトラオース、マルトペンタオース、マルトヘキサオース、マルトヘプタオースなど）、澱粉、イヌリン、イヌロ−オリゴ糖、ラクツロース、メリビオース、ラフィノース、リボース、異性化された液糖（例えば高いフラクトース・コーンシロップ）、カップリングシュガーと大豆オリゴ糖である。その上、ここで使われる炭水化物は、Ｄ−体又はＬ−体でもあってよい。配合組成において、化合物のどんな組合せも、用いられてよい。
【０１８４】
特定の実施形態において、レバウジオシドＤは、糖酸と調合されてよく、そしてそれはアルドン酸、ウロン酸、アルダル酸、アルギン酸、グルコン酸、グルクロン酸、グルカル酸、ガラクタル酸、ガラクツロン酸とそれらの塩類（例えば、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム塩類又は他の生理的に許容できる塩類）、そしてそれらの組み合わせを含むが、これらに限定されるものではない。
【０１８５】
特定の実施形態において、レバウジオシドＤは、いろいろな生理活性物質又は機能性成分との組合せで用いられてよい。機能性成分は、カロテノイド、食物繊維、脂肪酸、サポニン、抗酸化剤、機能性食品、フラボノイド、イソチオシアネート、フェノール、フィトステロール、スタノール（フィトステロールとフィトステロール）、多価アルコール、プレバイオティクス、プロバイオティックス、フィトエストロゲン、大豆タンパク質、硫化物やチオール、アミノ酸、タンパク質、ビタミン、そして、鉱物のような、カテゴリに一般に分類される。機能性成分は、心血管、コレステロール減少、消炎のような、それらの健康効果に基づいて、分類されてもよい。
【０１８６】
レバウジオシドＤを有する組成物は、天然又は人工の起源の香料を含んでいてよい。ここで用いられているように、特に明記しない限り、用語「香味料」は、食品に望まれた味を提供するために本組成物に加えられてよい、どんな食品グレード物質を意味する。本発明において有用な香味料は、たとえば、植物又は果物から誘導される油のような精油、薄荷油、スペアミント油、他のミント油、丁字油、ケイ皮油、ウィンターグリーン油、月桂樹、タイム、スギの葉、ナツメグ、オールスパイス、セージ、メース、アーモンドを含む。香料は、リンゴ、バナナ、スイカ、西洋ナシ、桃、ブドウ、イチゴ、キイチゴ、サクランボ、深紫、パイナップル、アプリコットやそれらの混合物のような植物エキス又は果物エッセンスであってよい。香味料は、レモン、ライム、オレンジ、タンジェリン、グレープフルーツ、シトロン、又はキンカンの抽出物、エッセンス又は油のような、柑橘類の味であってよい。本発明において有用な味は、クリーム、ヘイゼルナッツ、バニラ、チョコレート、シナモン、ペカン、レモン、ライム、キイチゴ、桃、マンゴー、バニリン、バター、バタースカッチ、お茶、オレンジ、タンジェリン、キャラメル、イチゴ、バナナ、ブドウ、深紫、サクランボ、ブルーベリー、パイナップル、エルダベリー
、スイカ、バブルガム、カンタロープ、グァバ、キーウィ、パパイア、ココナッツ、ミント、スペアミント、派生物とそれらの組合せを含んでよい。
【０１８７】
レバウジオシドＤを有する組成物は、香り成分を含んでもよい。ここで用いられているように、特に明記しない限り、用語「香り成分」は、例えば、食品と混ぜ合わせられるとき、望まれる香りを生じさせるために使用されてよい、どんな食物グレードの揮発性物質を意味する。本発明において有用な香りは、たとえば、精油（柑橘類の油）、エクスプレスドオイル（オレンジ油）、蒸留油（ばら油）、抽出物（果物）、アネトール（カンゾウ、アニス種子、ウゾー、ウイキョウ）、アニソール（アニス種子）、ベンズアルデヒド（マジパン、アーモンド）、ベンジルアルコール（マジパン、アーモンド）、樟脳（クスノキ）、ケイ皮アルデヒド（シナモン）、シトラール（シトロネラ油、レモン油）、ｄ−リモネン（オレンジ）エチル・ブタノエート（パイナップル）を含む、オイゲノール（丁字油）、フラネオール（イチゴ）、フルフラール（キャラメル）、リナロール（コリアンダー、バラの木）、メントール（ハッカ）、メチル・ブタノエート（リンゴ、パイナップル）、サリチル酸メチル（ウィンターグリーン油）、ネラール（オレンジ花）、ネロリン（オレンジ花）、ペンチル・ブタノエート（西洋ナシ、アプリコット）、ペンチル・ペンタノアート（リンゴ、パイナップル）、ソトロン（メープルシロップ、カレー、フェヌグリーク）、ストロベリーケトン（イチゴ）、２−エトキシ−３−イソプロピルピラジンや２−メトキシ−３−ｓｅｃ−ブチルピラジンや２−メトキシ−３−メチルピラジンのような置換されたピラジン（コロハ、クミン、コリアンダーの炙り種）、ツジョン（ビャクシン、コモンセージ、アラスカヒノキ、ニガヨモギ）、チモール（樟脳に類似）、トリメチルアミン（魚）、バニリン（バニラ）とそれらの組合せを含む。本発明によれば、望まれる香り成分は、精油（柑橘類の油）、エクスプレスドオイル（オレンジ油）、蒸留油（バラ油）、抽出物（果物）、ベンズアルデヒド、ｄ−リモネン、フルフラール、メントール、メチルブタノエート、ペンチルブタノエート、塩、は生物とそれらの組合せを含む。
【０１８８】
レバウジオシドＤを有する組成物は、この発明の実施形態で利用するために、ヌクレオチド付加物を含んでいてよい。それらは、イノシン・モノリン酸塩、グアノシン一リン酸、アデノシン一リン酸、シトシン・モノリン酸塩、ウラシル・モノリン酸塩、イノシン二リン酸塩、グアノシン二リン酸、アデノシン二リン酸、シトシン二リン酸塩、ウラシル二リン酸塩、イノシン三リン酸塩、グアノシン三リン酸、アデノシン三リン酸、シトシン三リン酸塩、ウラシル三リン酸塩とそれらのアルカリ塩、アルカリ土類金属塩とそれらの組合せを含むが、これらに限定されない。また、ここで記載されているヌクレオチドは、ヌクレオシド又は核酸塩基（例えば、グアニン、シトシン、アデニン、チミン、ウラシル）のような、ヌクレオチド関連の付加物も含んでいてよい。
【０１８９】
レバウジオシドＤを有する組成物は、有機酸付加物を含んでいてよい。有機酸は、−ＣＯＯＨ部分を含む化合物である。本発明の実施形態に用いられるのに適した有機酸付加物は、Ｃ２−Ｃ３０のカルボン酸、置換されたヒドロキシ基を含むＣ１−Ｃ３０カルボン酸、安息香酸、置換された安息香酸（例えば２，４−ジヒドロキシ安息香酸）、置換された桂皮酸、ヒドロキシ酸、置換されたヒドロキシ安息香酸、置換されたシクロヘキシルカルボン酸、タンニン酸、乳酸、酒石酸、クエン酸、グルコン酸、グルコヘプトン酸、アジピン酸、ヒドロキシクエン酸、リンゴ酸、フルータリック酸（リンゴ酸、フマル酸、酒石酸の混合物）、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、クロロゲン酸、サリチル酸、クレアチン、塩酸グルコサミン、グルコノデルタラクトン、コーヒー酸、胆汁酸、酢酸、アスコルビン酸、アルギン酸、クリソルビック（ｃｒｙｔｈｏｒｂｉｃ）酸、ポリグルタミン酸とそれらのアルカリ塩又はアルカリ土類金属塩の派生物を含むが、これに限定されない。加えて、有機酸付加物は、Ｄ−体又はＬ−体であってもよい。
【０１９０】
レバウジオシドＤを有する組成物は、有機酸性塩添加物を含んでいてよい。それらは、クエン酸、リンゴ酸、酒石酸、フマル酸、乳酸（例えば、乳酸ナトリウム）、アルギン酸（例えば、アルギン酸ナトリウム）、アスコルビン酸（例えば、アスコルビン酸ナトリウム）、安息香酸（例えば、安息香酸ナトリウム又は安息香酸カリウム）とアジピン酸の塩のような、すべての有機酸のナトリウム、カルシウム、カリウム、マグネシウム塩を含むが、これに限定されない。記載されている有機酸塩添加物を改善している甘味の例は、任意選択的に、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロゲン、ハロアルキル、カルボキシル、アシル、アシロキシ、アミノ、アミド、カルボキシル誘導体、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アリールアミノ、アルコキシ、アリールオキシ、ニトロ、シアノ、スルホ、チオール、イミン、スルホニル、スルフェニル、スルフィニル、スルファミル、カルボキシアルコキシ、カルボキシアミド、ホスホニル、ホスフィニル、ホスホリル、ホスフィノ、チオエステル、チオエーテル、無水物、オキシイミノ、ヒドラジノ、カルバミル、ホスホ、ホスホナト、及び他のあらゆる存在可能な官能基からなる群から選択される以下の部分の一つ以上で、置換された有機酸塩が甘味組成物の甘味を改善するのに機能することを条件として、置換されてよい。
【０１９１】
レバウジオシドＤを有する組成物は、本発明の実施形態で使用するために、無機酸性添加物を含んでいてよい。それらは、リン酸、亜リン酸、ポリリン酸、塩酸、硫酸、炭酸、リン酸二水素ナトリウムとそれらに対応するアルカリ塩又はアルカリ土類金属塩（例えば、イノシトール六リン酸マグネシウムやイノシトール六リン酸カルシウム）を含むが、これらに限定されない。
【０１９２】
レバウジオシドＤを有する組成物は、本発明の実施形態で使用するために、苦い化合物添加物を含んでいてよく、カフェイン、キニーネ、尿素、橙皮油、ナリンギン、苦木とそれらの塩に限定されない。
【０１９３】
レバウジオシドＤを有する組成物は、人工又は天然の甘味促進剤及びそれらの組合せを含んでいてよい。
【０１９４】
レバウジオシドＤの製剤は、本発明の実施形態において用いられるポリマー添加剤を含んでよく、キトサン、ペクチン、ペクチン酸、ペクチニン酸、ポリウロン酸、ポリガラクツロ酸、澱粉、食物親水コロイド、又はそれらの粗製の抽出物（例えば、アカシアセネガルゴム（商標Ｆｉｂｅｒｇｕｍ）、アカシアセヤルゴム、カラギーナン）、ポリ‐Ｌ‐リジン（例えば、ポリ−Ｌ−α−リシン又はポリ−Ｌ−ε−リシン）、ポリ−Ｌ−オルニチン（例えば、ポリ−Ｌ−α−オルニチン又はポリ−Ｌ−ε−オルニチン）、ポリアルギニン、ポリプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、ポリ（エチレングリコール・メチルエーテル）、ポリアスパラギン酸、ポリグルタミン酸、ポリエチレンイミン、アルギン酸、アルギン酸ナトリウム、アルギン酸プロピレングリコール、ヘキサメタリン酸ナトリウム（ＳＨＭＰ）とその塩類、及びポリエチレングリコールアルギン酸ナトリウム塩と他のカチオン性及びアニオン性のポリマー類に限定されない。
【０１９５】
レバウジオシドＤの製剤は、本発明の実施形態で使用するために、タンパク質又はタンパク質加水分解物の添加剤を含んでよく、ウシ血清アルブミン、ホエータンパク質（９０％の瞬時のホエータンパク質分離物、３４％のホエータンパク質、５０％の加水分解されたホエータンパク質、８０％のホエータンパク質濃縮物のような、留分又は濃縮物を含む）、可溶性米タンパク質、大豆タンパク質、タンパク質分離物、タンパク質加水分解物、タンパク質加水分解物の反応生成物、糖蛋白質やアミノ酸を含むプロテオグリーンズ（ｐｒｏｔｅｏｇｌｙｅａｎｓ）（例えば、グリシン、アラニン、センルネ（ｓｅｎｒｎｅ）、スレオニン、アスパラギン、グルタミン、アルギニン、バリン、イソロイシン、ロイシン、ノルバリン、メチオニン、プロリン、チロシン、ヒドロキシプロリン等）、コラーゲン（例えば、ゼラチン）、部分的に加水分解されたコラーゲン（例えば、加水分解された魚のコラーゲン）とコラーゲン加水分解物（例えば、豚のコラーゲンの加水分解物）に限定されない。
【０１９６】
レバウジオシドＤの製剤は、本発明の実施形態に用いられるために、界面活性剤の（添加剤を含んでよく、ポリソルベート（例えば、ポリオキシエチレン・ソルビタン・モノオレアート（ポリソルベート８０）、ポリソルベート２０、ポリソルベート６０）、ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム、ジオクチルスルホサクシネート、又はジオクチル・スルホサクシネート・ナトリウム、ドデシル硫酸ナトリウム、セチルピリジニウム塩化物（ヘキサデシルピリジニウムクロリド）、臭化ヘキサデシルトリメチルアンモニウム、コール酸ナトリウム、カルバモイル、塩化コリン、グリココール酸ナトリウム、タウロデオキシコール酸ナトリウム、ラウリン酸アルギネート、ステアロイルラクチル酸ナトリウム、タウロコール酸ナトリウム、レシチン、スクロースオレアートエステル、スクロースステアラートエステル、スクロースパルミタートエステル、スクロースラウリン酸エステル、と他の乳化剤等に限定されない。
【０１９７】
レバウジオシドＤの配合組成は、本発明の実施形態に用いられるために、フラボノイドの添加物を含んでよく、それは、一般に、フラボノール、フラボン、フラバノン、フラバン−３−オール、イソフラボン又はアントシアニジンに分類される。フラボノイド添加物の非限定的な例は、カテキン（例えば、緑茶抽出物）、ポリフェノール、ルチン、ネオヘスペリジン、ナリンギン、ネオヘスペリジンジヒドロカルコン、などを含む。
【０１９８】
この配合組成は、本発明の実施形態に用いられるために、アルコール添加物を含んでよく、エタノールに限定されない。
【０１９９】
この配合組成は、収斂剤化合物の添加物が含んでよく、タンニン酸、塩化ユウロピウム（ＥｕＣl３）、塩化ガドリニウム（ＧｄＣｌ３）、塩化テルビウム（ＴｂＣｌ３）、ミョウバン、タンニン酸、ポリフェノール（例えば、お茶ポリフェノール）に限定されない。
【０２００】
この配合組成は、ビタミンを含んでもよい。ビタミンは、人体が普通に機能するために少量必要とする有機化合物である。体は、炭水化物とタンパク質のような他の栄養分とは異なり、ビタミンを、壊すことなく利用する。実施形態に用いられるビタミンは、ビタミンＡ（レチノール、レチナールアルデヒド、レチノイン酸、レチノイド、レチナール、レチノイン酸）、ビタミンＤ（ビタミンＤ１−Ｄ５；コレカルシフェロール、ルミステロール、エルゴカルシフェロール、ジヒドロタキステロール、７−デヒドロコレステロール）、ビタミンＥ（エコフェロール（ｅｏｃｏｐｈｅｒｏｌ）、トコトリエノール）、ビタミンＫ（フィロキノン、ナフトキノン）、ビタミンＢ１（サイアミン）、ビタミンＢ２（リボフラビン、ビタミンＧ）、ビタミンＢ３（ナイアシン、ニコチン酸、ビタミンＰＰ）、ビタミンＢ５（パントテン酸）、ビタミンＢ６（ピリドキシン、ピリドキサール、ピリドキサミン）、ビタミンＢ７（ビオチン、ビタミンＨ）、ビタミンＢ９（葉酸、葉酸塩、ホラシン、ビタミンＭ、プテロイル−Ｌ−グルタミン酸）、ビタミンＢ１２（コバラミン、シアノコバラミン）、ビタミンＣ（アスコルビン酸）に限定されない。
【０２０１】
いろいろな他の化合物は、一部の関係機関によってビタミンと分類されてきた。これらの化合物は、シュードビタミンと呼ばれており、ユビキノン（コエンザイムＱ１０）、パンガミン酸、ジメチルグリシン、タエストリル、アミグダリン、フラバノイド、パラアミノ安息香酸、アデニン、アデニル酸、ｓ−メチルメチオニンのような化合物を含んでよく、これらに限定されない。
【０２０２】
レバウジオシドＤを有する配合組成は、食物繊維を含んでよい。バルク又は粗飼料とも呼ばれる食物繊維は、人間の消化酵素による加水分解に抵抗する食物の部分であり、一般に、消化系を通じて動いていき、蠕動に対して腸を刺激する植物物質の、消化しにくい部分を含む。
【０２０３】
組成と結合の両方においてかなりの構造の違いを有する多数の高分子炭水化物が、食物繊維の定義に入る。そのような化合物は当業者にはよく知られており、それの非限定的な例は、非でんぷん多糖類、リグニン、セルロース、メチルセルロース、ヘミセルロース、ｂ−グルカン、ペクチン、ゴム、粘質物、ワックス、イヌリン、オリゴ糖類、フルクトオリゴ糖、シクロデクストリン、キチン質とそれらの組合せを含む。
【０２０４】
食物繊維の食料源は、穀物、豆類、果物、野菜を含むが、これらに限定されない。食物繊維を提供している穀物は、オート麦、ライ麦、大麦、小麦を含むが、これらに限定されない。繊維を提供している豆類は、エンドウと大豆のような豆を含むが、これらに限定されない。繊維の源を提供している果物と野菜は、リンゴ、オレンジ、西洋ナシ、バナナ、ベリー、トマト、緑莢インゲン、ブロッコリー、カリフラワー、ニンジン、ジャガイモ、セロリを含むが、これらに限定されない。ぬか、ナッツ、種（例えば亜麻の種）のような肥料は、食物繊維の源でもある。食物繊維を提供している植物の部分は、茎、根、葉、種、パルプ、皮を含むが、これらに限定されない。
【０２０５】
食物繊維は、一般に、植物源に由来するが、キチン質のような消化しにくい動物性生成物も食物繊維と分類される。キチン質はβ（１−４）結合によってつなげられるアセチルグルコサミンの単位から成る多糖類であり、セルロースの結合と類似している。
【０２０６】
レバウジオシドＤを含有している配合組成は、酸化防止剤を含んでいてもよい。本発明の実施形態のために適した酸化防止剤の例は、ビタミン、ビタミン子ファクター、鉱物、ホルモン類、カロチノイド、カロチノイドテルペノイド、非カロチノイドテルペノイド、フラボノイド、フラボノイドポリフェノール（例えば、ビオフラボノイド）、フラボノール、フラボン、フェノール類、ポリフェノール類、フェノール類のエステル類、ポリフェノール類のエステル類、非フラボノイドフェノール樹脂、イソチオシアン酸塩とそれらの組合せを含むが、これらに限定されない。一部の実施形態において、抗酸化剤は、ビタミンＡ、ビタミンＣ、ビタミンＥ、ユビキノン、セレニウム鉱物、マンガン、メラトニン、α−カロチン、β−カロチン、リコペン、ゼアニシン（ｚｅａｎｔｈｉｎ）、クリポキサンチン（ｃｒｙｐｏｘａｎｔｈｉｎ）、レザーバトル、オイゲノール、ケルセチン、カテキン、ゴシポール、ヘスペレチン、クルクミン、フェルラ酸、チモール、ヒドロキシチロソール、ウコン、タイム、オリーブ油、リポ酸、グルタチオン、グルタミン、シュウ酸、トコフェロール派生化合物、ブチルヒドロキシアニソール、ブチル化ヒドロキシトルエン、エチレンジアミン四酢酸、ｔｅｒｔ−ブチルヒドロキノン、酢酸、ペクチン、トコトリエノール、トコフェロール、コエンザイムＱ１０、ゼアキサンチン、アスタキサンチン、カンタキサンチン、サポニン、リモノイド、カエムプデフォドロール（ｋａｅｍｐｆｅｄｒｏｌ）、ミリセチン、イソラムネチン、プロアントシアニジン、ケルセチン、ルチン、ルテオリン、アピゲニン、タンゲレチン、ヘスペレチン、ナリンゲニン、エロディクチオール（ｅｒｏｄｉｃｔｙｏｌ）、フラバン−３−オール（例えば、アントシアニジン）、ガロカテキン、エピカテキンとその没食子酸エステル体、エピガロカテキンとその没食子酸エステル体テアフラビンとその没食子酸エステル体、テアルビジン、イソトラボノン（ｉｓｏｔｌａｖｏｎｅ）フィトエストロゲン、ゲニステイン、ダイドゼイン、グリシタイン、アントシアニン、青化処理、デルフィニジン、マルビジン、ペラルゴニジン、ペオニジン、ペツニジン、エラグ酸、没食子酸、サリチル酸、ロスマリン酸、ケイ皮酸とその誘導体（例えば、フェルラ酸）、クロロゲン酸、チコリ酸、タンニン酸、エラジタンニン類、アントキサンチン類、ベタシアニン類と他の植物色素、シリマリン、クエン酸、リグナン、アンチニュートリエント類、ビリルビン、尿酸、Ｒ−α−リポ酸、Ｎ−アセチルシステイン、エンブリカニン、リンゴ抽出物、リンゴ皮抽出物（アップルフェノン）、ルイボス抽出物、赤ルイボス抽出物、緑サンザシベリー抽出物、アメリカアカミキイチゴ抽出物、緑ぼコーヒー抗酸化剤、海棠抽出物２０％のブドウ種抽出物、ココア抽出物、ホップ抽出物、マンゴスチン抽出物、マンゴスチン外皮抽出物、クランベリー抽出物、ザクロ抽出物、ザクロ外皮抽出物、ザクロの種の抽出物、サンザシベリー抽出物、ポメラザクロ抽出物、桂皮抽出物、ブドウ皮抽出物、コケモモ抽出物、マツ樹皮抽出物、ピクノジェノール、ニワトコの実抽出物、クワ根抽出物、スイカズラ（ゴジベリー）抽出物、ブラックベリー抽出物、ブルーベリー抽出物、ブルーベリーの葉抽出物、キイチゴ抽出物、ターメリック抽出物、柑橘類のビオフラボノイド、クロフサスグリ、ショウガ、アサイパウダー、緑のコーヒー豆抽出物、緑茶抽出物とフィチン酸、又はそれらの組合せを含んでよく、これらに限定されない。別の実施形態において、酸化防止剤は、たとえば、ブチルヒドロキシトルエン又はブチルヒドロキシアニソールのような、合成酸化防止剤を含んでいてよい。本発明の実施形態のための適した酸化防止剤の他の源としては、果物、野菜、茶、ココア、チョコレート、スパイス、ハーブ、米、家畜からの臓物、イースト、全粒穀物、又はシリアル穀物を含むが、これらに限定されない。
【０２０７】
一部の酸化防止剤は、フィトニュートリエント呼ばれるポリフェノール（別名「ポリフェノリクス」）の種類に属し、それは植物で見つけられる一群の化学物質であり、１分子につき１つ以上のフェノール基の存在によって特徴づけられる。ガン、心臓病、慢性炎症性病気の予防を含むいろいろな健康効果が、ポリフェノールから導かれ、精神的な強度と体力が改善される。本発明の実施形態のために適したポリフェノールは、カテキン、プロアントシアニジン、プロシアニジン、アントシアニン、ケルセチン、ルチン、リザーバトロル、イソフラボン、クルクミン、パニカラギン、エラジタンニン、ヘスペリジン、ナリンギン、柑橘類のフラボノイド、クロロゲン酸、他の類似した物質とそれらの組合せを含む。
【０２０８】
本発明の実施形態のためにカテキンの適した源は、緑茶、白茶、紅茶、ウーロン茶、チョコレート、ココア、赤ワイン、ブドウの種、赤いブドウ皮、紫のブドウ皮、赤いグレープジュース、紫のグレープジュース、ベリー類、ピクノジェノール、赤いリンゴの皮を含むが、これらに限定されない。本発明の実施形態のために、プロアントシアニジンやプロシアニジンのような酸化防止剤の適した源は、赤いブドウ、紫のブドウ、ココア、チョコレート、ブドウの種、赤ワイン、カカオ豆、クランベリー、リンゴの皮、深紫、ブルーベリー、クロフサスグリ、チョークベリー、緑茶、モロコシ、シナモン、大麦、赤いインゲンマメ、マダラインゲンマメ、ホップ、アーモンド、ヘイゼルナッツ、ペカン、ピスタチオ、ピクノジェノール、カラフルなベリーを含むが、これらに限定されない。本発明の実施形態のために、アントシアニンの適した源は、赤いベリー、ブルーベリー、コケモモ、クランベリー、キイチゴ、サクランボ、ザクロ、イチゴ、ニワトコの実、チョークベリー、赤いブドウ皮、紫のブドウ皮、ブドウの種、赤ワイン、クロフサスグリ、アカフサスグリ、ココア、深紫、リンゴの皮、桃、赤い西洋ナシ、赤キャベツ、赤いタマネギ、赤いオレンジ、ブラックベリーを含むが、これらに限定されない。本発明の実施形態のために、ケルセチンとルチンの適した源は、赤いリンゴ、タマネギ、ケール、沼コケモモ、リンゴンベリー、ザイフリボク、クランベリー、ブラックベリー、ブルーベリー、イチゴ、キイチゴ、クロフサスグリ、緑茶、紅茶、深紫、アプリコット、パセリ、ニラネギ、ブロッコリー、チリペッパー、ベリー酒、イチョウを含むが、これらに限定されない。本発明の実施形態のために、レスベラトロルの適した源は、赤いブドウ、ピーナッツ、クランベリー、ブルーベリー、コケモモ、クワ、日本のイタドリ茶、赤ワインを含むが、これらに限定されない。本発明の実施形態のために、イソフラボンの適した源は、大豆、大豆生成物、豆類、アルファルファ芽、ヒヨコマメ、ピーナッツ、アカツメクサを含むが、これらに限定されない。本発明の実施形態のために、クルクミンの適した源は、ターメリックとマスタードを含むが、これらに限定されない。本発明の実施形態のために、パニカラギンとエラジタンニンの適した源は、ザクロ、キイチゴ、イチゴ、クルミ、オーク熟成した赤ワインを含むが、これらに限定されない。本発明の実施形態のために、ヘスペリジン又はナリンギンのような柑橘類のフラボノイドの適した源は、オレンジ、グレープフルーツ、柑橘類のジュースを含むが、これらに限定されない。本発明の実施形態のために、クロロゲン酸の適した源は、緑のコーヒー、マテ茶、赤ワイン、ブドウの種、赤いブドウ皮、紫のブドウ皮、赤いグレープジュース、紫のグレープジュース、リンゴジュース、クランベリー、ザクロ、ブルーベリー、イチゴ、ヒマワリ、エキナセア、ピクノジェノール、リンゴの皮を含むが、これらに限定されない。
【０２０９】
レバウジオシドＤの組成物は、脂肪酸を含んでよい。ここで用いられている、「脂肪酸」は、いずれの直鎖モノカルボン酸をも意味しており、飽和脂肪酸、不飽和脂肪酸、長鎖脂肪酸、中鎖脂肪酸、短鎖脂肪酸、脂肪酸前駆体（オメガ−９の脂肪酸前駆体を含む）とエステル化された脂肪酸を含む。ここで用いられている、「長鎖高度不飽和脂肪酸」は、長い脂肪族の末尾を有する、いずれの不飽和高分子のカルボン酸又は有機酸を意味する。ここで用いられている、「オメガ−３脂肪酸」はその炭素鎖の末端のメチルから３番目の炭素ー炭素結合としての最初の二重結合を有する、いずれの不飽和高分子脂肪酸を意味する。特定の実施形態において、オメガ−３脂肪酸は長鎖オメガ−３脂肪酸を含んでいてよい。ここで用いられている、「オメガ−６脂肪酸」は、その炭素鎖の末端のメチルから６番目のの炭素−炭素結合としての最初の二重結合を有する、いずれの不飽和高分子脂肪酸を意味する。
【０２１０】
レバウジオシドＤを有する組成物は、塩を含んでもよい。用語「塩」は、本発明の組成物を改善する、甘味味覚の望ましい化学活性を保持しており、一般に許容できる範囲で人間や動物の消費にとって安全である複合体をも意味している。アルカリ金属（たとえば、ナトリウム又はカリウム）又はアルカリ土類金属（たとえば、カルシウム又はマグネシウム）塩が、作られてもよい。塩は、アルカリとアルカリ土類金属の組合せを含んでいてもよい。そのような塩の非限定的な例は、（ａ）無機酸でつくられる酸添加塩と有機酸でつくられる塩、（ｂ）カルシウム、ビスマス、バリウム、マグネシウム、アルミニウム、銅、コバルト、ニッケル、カドミウム、ナトリウム、カリウムなどのような金属陽イオン、又は、アンモニア、Ｎ，Ｎ−ジベンジルエチレンジアミン、Ｄ−グルコサミン、テトラエチルアンモニウム又はエチレンジアミンから作られる陽イオンで作られる塩基付加塩、又は（ｃ）（ａ）と（ｂ）の組合せ、である。従って、甘味味覚を改善する添加物の塩が、少なくとも一つの天然や合成の高い甘味能力を有する甘味料を含む甘味組成物の味覚に悪影響を及ぼさない限り、甘味味覚を改善する組成物から由来するいずれの塩体も、本発明の実施形態で用いられてよい。添加物の塩の態様は、それらの酸や塩基の態様と同じ量で、天然や合成の甘味組成物に加えられてよい。
【０２１１】
特定の実施形態において、実施形態に有用で適した無機塩は、塩化ナトリウム、塩化カリウム、硫酸ナトリウム、枸櫞酸カリウム、塩化ユーロピウム（ＥｕＣｌ３）、塩化ガドリニウム（ＧｄＣｌ３）、塩化テルビウム（ＴｂＣｌ３）、硫酸マグネシウム、ミョウバン、塩化マグネシウム
、リン酸のモノ‐、ジ‐、トリ‐塩基のナトリウム又はカリウム塩（例えば、無機リン酸塩）、塩酸の塩（例えば、無機の塩化物）、炭酸ナトリウム、重硫酸ナトリウム、重炭酸ナトリウムを含むが、これらに限定されない。更に、特定の実施形態において、甘味味覚を改善する添加物として有効で適した有機塩は、）塩化コリン、アルギン酸ナトリウム塩（アルギン酸ナトリウム）、グルコヘプトン酸性ナトリウム塩、グルコン酸ナトリウム塩（ナトリウムグルコネート）、グルコン酸カリウム塩（カリウムグルコン酸塩）、グアニジンＨＣｌ、グルコサミンＨＣｌ、アミロライドＨＣｌ、グルタミン酸ソーダ、アデノシン一リン酸塩、マグネシウムグルコン酸塩、カリウム酒石酸塩（一水和物）とナトリウム酒石酸塩（二水和物）を含むが、これらに限定されない。
【０２１２】
本発明によって得られるレバウジオシドＤの組成物は、改善された味覚特徴を有する零カロリー又は低カロリー又は糖尿病用の飲料と食物を作る高甘味度甘味料として、適用され得る。また、それは、糖を用いることができない、飲物、食品、医薬品、その他の生成物で、用いられ得る。
【０２１３】
その上、レバウジオシドＤの組成物は、人間の消費に貢献する飲物、食品、その他の生成物のためだけでなく、改善された特徴を有する動物用の食事と飼料においても、甘味料として、用いられ得る。
【０２１４】
レバウジオシドＤの組成物が、甘味化合物として使われる得る生成物の例は、ウォッカ、ワイン、ビール、酒等のアルコール飲料、天然のジュース、清涼飲料、炭酸入り清涼飲料、ダイエット飲物、零カロリー飲物、低カロリーの飲物や食品、ヨーグルト飲物、即席ジュース、インスタントコーヒー、粉末状の即席飲料、缶詰の生成物、シロップ、発酵大豆ペースト、醤油、酢、ドレッシング、マヨネーズ、ケチャップ、カレー、スープ、即席ブイヨン、粉末醤油、粉末酢、各種ビスケット、米ビスケット、クラッカー、パン、チョコレート、キャラメル、キャンディ、チューインガム、ゼリー、プリン、保存された果物と野菜、新鮮なクリーム、ジャム、マーマレード、花のペースト、粉乳、アイスクリーム、シャーベット、ボトルにパック詰めされた野菜と果物、缶詰で煮られた豆、甘みソースで煮られた肉と食材は、農業野菜の食品、シーフード、ハム、ソーセージ、魚ハム、魚ソーセージ、蒲鉾、揚げだし魚生成物、乾燥シーフード生成物、冷凍食品生成物、保存された海草、保存された肉、タバコ、薬の生成物、他多数、あり得る。原理的には、それには無制限の応用があり得る。
【０２１５】
甘味を付与された組成物は、飲料を構成し、その非限定的な例は、無炭酸飲料と、コーラ、ジンジャーエール、ルートビア、サイダー、フルーツ味の清涼飲料（例えば、レモンライム又はオレンジのような柑橘類味の清涼飲料）、粉末清涼飲料などのような炭酸入り飲料、果物や野菜に由来するフルーツジュース、しぼられたジュース等を含む果物ジュース、果物の粒子を含有している果物ジュース、果物飲料、果物ジュース飲料、果物ジュースを含有している飲料、果物香味料を有する飲料、野菜ジュース、野菜を含有しているジュース、果物と野菜を含有している混合ジュース、スポーツ飲料類、栄養ドリンク類、ニアウオーター
とその類似飲料（例えば、天然又は合成の香味料を有する水）、コーヒー、ココア、紅茶、緑茶、ウーロン茶などのような茶種類型人気飲料、ミルク飲料、ミルク成分を含むコーヒー、カフェオレ、ミルク茶、フルーツミルク飲料、飲めるヨーグルト、乳酸菌飲料等のようなミルク成分を含有している飲料、乳製品を含む。
【０２１６】
一般に、甘味を付与された組成物の存在下の甘味料の量は、甘味を付与された組成物の特定の型とその望まれる甘さに依存する。当業者であれば、甘味料の適切な量を容易に見極めて、甘味を付与された組成物を入れることができる。
【０２１７】
詳細な説明では、本発明の特定の例示的な実施形態だけが示されて、例証として記述される。当業者が認めているように、発明は多くの異なる形に表現されることができ、ここで述べられる実施形態に限られているものとして解釈されてはならない。
【０２１８】
本発明で得られる甘味料は、乾燥もしくは液体の態様で使われ得る。それは、食品の熱処理の前後に加えられてよい。甘味料の量は、使用の目的に依存する。それは、単独で、又は、組合せで、他の化合物に加えられてよい。
【０２１９】
食品、飲物、医薬、化粧品、食卓生成物、チューインガムの製造の間、混合、練合、溶解、酸洗浄、浸透、透水、灌水、微粒化、浸出等の方法が、使われ得る。
【０２２０】
従って、本発明の組成物は、成分の同種の均一であるか均一な混合物を提供する、当業者に知られているどんな方法によってでも、なされることができる。これらの方法は、乾式混合、噴霧乾燥、凝集、湿式造粒法
、圧縮、共結晶化などを含む。
【０２２１】
固形形状において、本発明の甘味をつける組成物は、甘くされる食物に配送のために適した、小さい袋、箱、バルクバッグ又は箱、立方体、錠剤、霧、又は溶解性細片を含む、どんな形ででも消費者に提供されることができる。その組成物は、単位服用で、又は、バルクの形で、届けられ得る。
【０２２２】
液体の甘味料系と、流体、半流体、ペースト、クリーム形態の種類にわたる都合のよい組成物のために、どのような形や形態においても適当な梱包材料を用いる適当な梱包が開発され、それは、上記の甘味生成物又は上記で生成された生成物の混合物のいずれかを含む混合物を運び、又は分配し、又は保管し、又は移送することに都合がよい。
【０２２３】
実施された研究は、レバウジオシドＤと他のステビオール配糖体、天然の高甘味度甘味料、合成の高甘味度甘味料との混合物が、改善された味覚特性を有する甘味組成物を生み出すことを示した。
【０２２４】
レバウジオシドＤと他の高甘味度甘味料は、組成物の甘さにおけるレバウジオシドＤの寄与が１０％から９０％までのいろいろな混合で、混ぜ合わせられた。
【０２２５】
混合物におけるレバウジオシドＤの含有量がより高くなると、改善効果はかなり増した。
【０２２６】
この組成物は、いろいろな増量剤、機能性成分、着色剤、香味料を含んでもよい。  
【０２２７】
以下の例は、食品と医薬での、レバウジオシドＤの単離と精製と関連した化合物とそれらの利用のための本発明の好ましい実施形態を例示する。本発明は、例で述べられる物質、規模、条件、手順に限定されず、例示にすぎないことが理解されるであろう。
【０２２８】
例１  レバウジオシドＤの精製
ステビオシド−２５．４０％、レバウジオシドＡ−５９．１４％、レバウジオシドＣ−９．７１％、レバウジオシドＤ−２．０３％、レバウジオシドＢ−０．５６％、レバウジオシドＥ−０．６８％、レバウジオシドＦ−１．０２％、ステビオールビオシド−０．１１％、及びズルコシドＡ−１．３５％を含有しているステビア抽出物の１ｋｇが、９５％のエチルアルコール３０００ｍｌで溶かされて、３５分間８０℃で保持され、その後、１２時間１５℃で撹拌された。温度が２２℃に達したとき、高純度のレバウジオシドＡの１．０％が結晶化を始めるための結晶種として反応混合物に加えられた。
【０２２９】
沈殿物は濾過によって分離されて、およそ２容量の９９．５％エタノールで洗浄された。
【０２３０】
結晶物質の収率は、ステビオシド（８．８％）、レバウジオシドＡ（８１．７％）、レバウジオシドＣ（５．１％）、レバウジオシドＤ（３．３％）、レバウジオシドＢ（０．１％）、レバウジオシドＥ（０．３％）、レバウジオシドＦ（０．４％）、及びズルコシドＡ（０．３％）の含有量を有する４７．１％であった
【０２３１】
残留溶液は、ステビオシド（４０．２％）、レバウジオシドＡ（３９．１％）、レバウジオシドＣ（１３．８％）、レバウジオシドＤ（０．９％）、レバウジオシドＢ（１．０％）、レバウジオシドＥ（１．０％）、レバウジオシドＦ（１．６％）、ステビオールビオシド（０．２％）、及びズルコシドＡ（２．３％）を含み、レバウジオシドＡ又はステビオール配糖体の高純度混合物の単離のために用いられ得る。
【０２３２】
その沈澱物は、３．５容量の７７．７％エタノールで混ぜ合わせられて、３時間５０℃で撹拌下保温された。それから、混合物は室温まで冷却され、そして、その沈澱物は濾過によって分離された。結晶の収量はおよそ１４％であり、そして、６５．９ｇの生成物が、ステビオシド（１．４％）、レバウジオシドＡ（７２．８％）、レバウジオシドＣ（１．５％）、レバウジオシドＤ（２１．４％）、レバウジオシドＢ（０．１％）、レバウジオシドＥ（２．１％）、及びレバウジオシドＦ（０．７％）の含有量で得られた。
【０２３３】
濾過液におけるいろいろな配糖体の含有量は、ステビオシド（１０．０％）、レバウジオシドＡ（８３．１５％）、レバウジオシドＣ（５．６９％）、レバウジオシドＤ（０．３５％）、レバウジオシドＢ（０．１％）、レバウジオシドＥ（０．０１％）、レバウジオシドＦ（０．３５％）、及びズルコシドＡ（０．３５％）であった。
【０２３４】
レバウジオシドＤの更なる精製のために、沈澱物は１：２（質量／体積）比率で５０％エタノールで懸濁されて、１２時間３５℃で撹拌下で保持された。懸濁液は濾過され、そして、沈澱物は乾燥された。沈澱物の収率はおよそ２３％であり、そして、それはステビオシド（０．８％）、レバウジオシドＡ（１６．２％）、レバウジオシドＣ（０．７％）、レバウジオシドＤ（８１．６％）、レバウジオシドＥ（０．５％）とレバウジオシドＦ（０．２％）を含有する。およそ１５．２ｇの乾燥物質が、この段階で得られた。
【０２３５】
結果として得られた濾過液におけるいろいろな配糖体の含有量は、ステビオシド（１．６％）、レバウジオシドＡ（８９．７％）、レバウジオシドＣ（１．７％）、レバウジオシドＤ（３．４％）、レバウジオシドＢ（０．１％）、レバウジオシドＥ（２．６％）、及びレバウジオシドＦ（０．８％）であった。それは、前の段階からの濾過液と結合された。
【０２３６】
沈澱物は、５０％のエタノール溶液で類似の処理にさらされ、３．８％のレバウジオシドＡと９５．７％のレバウジオシドＤの含有量を有する生成物が得られた。その生成物は、おのおの０．１％のステビオシド、レバウジオシドＣ、及びレバウジオシドＦと０．２％のレバウジオシドＥも含有する。この生成物の収率はおよそ７５％であり、およそ１１．４ｇの結晶が得られた。
【０２３７】
この段階で、濾過液の量は、それぞれ３９．３％と５３．４％のレバウジオシドＤとレバウジオシドＡをそれぞれ含む、およそ３．８ｇであった。
【０２３８】
得られたレバウジオシドＤは２容量の３０％メタノールに溶かされ、３０分間６０℃で活性化されたカーボン０．３％で処理され、それから、熱濾過にさらされた。レバウジオシドＤは、濾過後、自発的に沈殿した。
【０２３９】
結晶は濾過によって分離され、１２時間８０℃で乾燥された。沈澱物の収率はおよそ８．８ｇであり、そして、それは乾燥基準で９８．４％のレバウジオシドＤを含有する。
【０２４０】
沈殿の２段階目及び３段階目から統合した濾過液は、４５５．８ｇで、ステビオシド（９．１％）、レバウジオシドＡ（８３．９％）、レバウジオシドＣ（５．２％）、レバウジオシドＤ（０．７％）、レバウジオシドＢ（０．１％）、レバウジオシドＥ（０．３％）、レバウジオシドＦ（０．４％）、及びズルコシドＡ（０．３％）を含有する。それは、結晶種として１％のレバウジオシドＡと混ぜ合わせられ、結晶化のため１２時間２２℃で放置された。結晶は濾過によって分離されて、およそ２容量のエタノールで洗浄された。結晶におけるレバウジオシドＡの含有量は、乾燥基準で９８．８％であった。この量は、乾燥後、２７３．５ｇであった。
【０２４１】
レバウジオシドＤの純度は、３０℃の温度でＺＯＲＢＡＸ  ＮＨ２カラム（１５０×４．６ｍｍ、５μｍ）を用いてを実行され、ＨＰＬＣを用いて測定された。移動相は、１．０ｍＬ／分の流量で、２０％の緩衝液（０．０１２５％の酢酸と０．０１２５％のアンモニウムアセテート）と８０％のアセトニトリルの溶液を含んだものであった。１２μＬの各々のサンプルは、複製されて注入され、そして、そのサンプルは２６０ｎｍ（１００ｎｍの帯域幅）の参照を用いて２１０ｎｍ（４ｎｍの帯域幅）でＵＶ検出器を使って分析された。その分析は、４０分から６０分の範囲の実行時間を必要とした。
【０２４２】
０．０１２５％の酢酸と０．０１２５％のアンモニウムアセテートの緩衝液は、１リットルの水に０．１２５ｇのアンモニウムアセテートと１２５μＬの氷酢酸を溶かすことによって調製された。レバウジオシドＢの滞留時間は、両方の合計０．０２５％を維持しつつ、アンモニウムアセテートと酢酸の比を変えることによって、調節された。酢酸の量の増加は、レバウジオシドＢの滞留時間の減少をもたらした。
【０２４３】
希釈溶液は、エチルアルコール５００ｍＬと緩衝液５００ｍＬを混ぜることによって、調製された。レバウジオシドＤの標準液は、およそ２５００ｍｇ／Ｌの標準液を作るため、レバウジオシドＤ標準（０．１ｍｇ単位で記録された）１０．０±０．５ｍｇを希釈溶液の４ｍＬで薄めることによって調製された。レバウジオシドＤ標準液は、１０．８、１１．４、１２．６及び１３．２μＬで注入された。含水量は、標準が調製されるたびに、カール・フィッシャー分析で測定され、そして、分析証明書に従い、溶媒の純度に基づき、修正がなされた。
【０２４４】
ステビオシド標準液は、およそ（湿気と純度に対して補正している）２５００ｍｇ／Ｌの標準液（調製液Ａ）を作るため、ステビオシド標準（０．１ｍｇ単位で記録された）１２．５±０．５ｍｇを希釈溶液５ｍＬによって薄めることによって調製された。それから、ステビオシド標準液は、２５０ｍｇ／Ｌの標準液（調製液Ｂ）を作るために、１ｍＬの調製液Ａを１０ｍＬの希釈液に対して使って薄められ、そして、標準調製液は２．５から５０ｍｇ／Ｌの範囲の最終的な濃度に薄められた。
【０２４５】
レバウジオシドＤの組成物のサンプルは、レバウジオシドＤの組成物の（０．１ｍｇ単位で記録された）１２５±２ｍｇを希釈溶液５０ｍＬで薄めることによって調製され、およそ（湿気に対して補正している）２５００ｍｇ／Ｌの試料溶液が作られた。個々に調製された複製サンプルは、１２μＬで注入された。サンプルがすぐに分析されないならば、それらは、窒素中で、上部空間なしで保存されて、乾燥された。
【０２４６】
表１１は、レバウジオシドＤと他のステビオール配糖体の滞留時間のガイドラインを提供している。しかし、当業者であれば、滞留時間が必要に応じて修正され得ることを理解すべきである。
【０２４７】
【表１１】
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【０２４８】
例２  低カロリーのオレンジジュース飲料
６０ｇの濃縮したオレンジ・ジュースは１．１ｇのクエン酸、０．２４ｇのビタミンＣ、１．０ｇのオレンジエッセンス、０．７６ｇのレバウジオシドＤ、及び水と混ぜ合わせられ、全量で１０００ｍＬの均一に溶かされた混合物が作られた。それから、その混合物は、従来方法によって作られたものと類似したオレンジジュースを調製するために、約９５℃で２０秒間低温殺菌された。その生成物には、優れた味覚特性があった。
【０２４９】
リンゴ、レモン、アプリコット、サクランボ、パイナップル等のような他の果物からのジュースは、同じやり方を使って調製され得る。
【０２５０】
例３  アイスクリーム
１．５０ｋｇの全乳が４５℃で熱せられ、３００グラムのミルククリーム、１００グラムのタガトース、９０グラムのソルビトール、スタビライザーとしての６グラムのカラゲーニン、乳化剤としての３グラムのポリソルベート−８０、及び１．０グラムのレバウジオシドＤが、例１０で示されるように、ミルクに加えられて、その成分が完全に溶けるまで、撹拌された。それから、その混合物は２５秒間８０℃の温度で低温殺菌された。均質化後、そのサンプルは、劣化プロセスを完了するために、２４時間４℃の温度に保たれた。バニラ香味料（混合物重量の１．０％）と着色剤（混合物重量の０．０２５％）は、劣化プロセス後に混合物に加えられる。その混合物は、それから、自動的にアイスクリームを生産するために、アイスクリーム製造機に移された。生産されたアイスクリームのサンプルは、密封容器に移されて、−１８℃の温度でフリーザーに保たれた。
【０２５１】
甘味料の適用は、アイスクリームの物理化学特性、ならびに、色、なめらかさ、表面の質感、空気隙間、バニラ香りの強さ、バニラ味覚、粉っぽさ、冷たさ、及び溶解速度の全体的な特性に悪影響を及ぼさない。
【０２５２】
例４  ヨーグルト
１ｋｇの脱脂乳中で、本発明によって調製された高純度レバウジオシドＤ０．８グラムが、溶かされた。２０分間８２℃で低温殺菌された後に、そのミルクは４０℃に冷却された。３０グラムの量のスターターが加えられ、そして、その混合物は６時間３７℃で保温された。それから、その発酵マスは、１２時間１０−１５℃で保持された。
【０２５３】
生成物は、異物の味覚や匂いのない、低カロリーで低齲蝕原性ヨーグルトである。
【０２５４】
例５  アイスレモン茶
飲料のための配合率 は、以下に示された。
【０２５５】
【表１２】
2013507914.tif 000013
【０２５６】
すべての成分は混合されて、水に溶かされて、低温殺菌された。生成物は、優れた味覚と風味を備えている。
【０２５７】
例６  パン
１ｋｇの小麦粉、３７．３８グラムのフルクトオリゴ糖シロップ、８０グラムのマーガリン、２０グラムの塩、２０グラムのイースト、及び０．２５グラムの発明によって得られた高純度レバウジオシドＤが、ブレンダーに入れられて、十分に混ぜられた。６００ｍｌの水がその混合物に注がれて、十分に練られた。練合過程の完了で、その生地は３０〜４５分間、成形されて、ふくらませられた。準備の整った生地はオーブンに置かれて、４５分間焼かれた。パンのサンプルは、クリームがかった白色と滑らかな質感をもつに至った。
【０２５８】
例７  ダイエットクッキー
小麦５０．０％、マーガリン３０．０％、フルクトース１０．０％、マルチトール８．０％、全乳１．０％、塩０．２％、ベーキングパウダー０．１５％、バニリン０．１％、本発明によって得られたレバウジオシドＤ０．５５％が、生地混合機械で十分にこねられた。その生地を成形した後に、クッキーは１５分間２００℃で焼かれた。
【０２５９】
その生成物は、優れた味覚と適切な甘さを有する低カロリーダイエットクッキーである。
【０２６０】
例８  醤油
レバウジオシドＤ０．８ｇが、１０００ｍｌの醤油に加えられて、均一に混ぜられた。その生成物は、優れた味覚と質感をもつに至った。
【０２６１】
例９  練り歯磨き
練り歯磨きは、リン酸カルシウム４５．０％、カルボキシメチルセルロース１．５％、カラゲーニン０．５％、グリセロール１８．０％、ポリオキシエチレンソルビタンモノエステル２．０％、β−シクロデクストリン１．５％、ラウロイルサルコシン酸ナトリウム０．２％、調味料１．０％、防腐剤０．１％、本発明によって得られたレバウジオシドＤ０．２％、１００％までの水を含む組成物を、通常の方法によって、こねることによって調製された。その生成物は、適切な甘さで良い発泡と洗浄能力を備えている。
【０２６２】
例１０  ケーキ
１２３ｇの雌鶏卵、４５ｇの砂糖、３４５ｇのソルビトール液体、２．０ｇのスクロース脂肪酸エステル、９５％の純度を有する０．３５ｇのレバウジオシドＤが、従来の方法に従ってケーキを調製するために、１００ｇの小麦粉と２００ｇの水と混ぜ合わせられた。その生成物は、最適甘味風味を有する優れた味覚をもつに至った。
【０２６３】
例１１  低カロリー炭酸飲物
飲料のための調合比率は、以下に示された。
【０２６４】
【表１３】
2013507914.tif 000014
【０２６５】
異なる甘味料で調製された飲料は、比較のために１０人の判断が与えられた。
以下の表は、その結果を示す。
【０２６６】
【表１４】
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【０２６７】
上記の結果は、飲料が、良い感覚刺激特徴を備えている高純度レバウジオシドＤを使って調製したことを示している。
【０２６８】
例１２  チョコレート
３０ｋｇのカカオ酒、１１．５ｋｇのココア脂、１４ｋｇの粉ミルク、４４ｋｇのソルビトール、０．１ｋｇの塩、０．１ｋｇの高純度レバウジオシドＤを含有している組成物がは十分にこねられて、そして、それから、混合物は２４時間その粒子サイズを減らすために精製機に置かれた。その後、含有量はコンチェに移され、３００グラムのレシチンは加えられ、そして、その組成物は４８時間５０℃でこねられた。それから、その含有物は、成形装置に置かれて、固められた。
【０２６９】
生成物は、優れた質感を有する低齲蝕原性で低カロリーチョコレートである。また、２０人の官能試験員で実施した感覚刺激テストは、残らないあと味を明らかにした。最も望ましいものは、純度の少なくとも９５％を有するレバウジオシドＤを有する生成物であった。
【０２７０】
例１３  食卓タブレット
５８．５％のラクトース、１０％のケイ酸カルシウム、５％のクロスカルメロース、５％のＬ−ロイシン、１％のエアゾール２００、０．５％のステアリン酸マグネシウム、２０％レバウジオシドＤからなる混合物は、十分に練られた。それから、その混合物は、６．２ｍｍの直径のパンチャーを備えている、錠剤にする機械を使って成形され、それぞれ７０ｍｇ、厚さ３．０ｍｍ、硬度１０±１ｋｇの錠剤ができた。
【０２７１】
この錠剤は、それらの適切な甘さのために、容易に投与され得る。しかし、レバウジオシドＤの低い等級を使用している配合組成は、２５℃で水中で約３−４分の可溶性で、いくぶんねばねばしたものであった。高純度レバウジオシドＤで調合された錠剤は、約２０−３０秒の可溶性で最高の特徴を示した。
【０２７２】
前述の説明とここで示される特定の実施形態は、単に本発明とその原理の最高方式の例証となるだけであり、そして、その変更・付加は、発明の精神及び範囲から逸脱せずに、当業者によって簡単になされ得ることを理解すべきである。そして、それゆえ、それは添付の特許請求の範囲によってのみ制限されると理解される。
【０２７３】
参考文献
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【図１】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【図２Ｄ】
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【図２Ｅ】
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【図２Ｆ】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【国際調査報告】
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