(57)【要約】本発明は、皮膚における活性酸素種の生成に起因するか又は皮膚における活性酸素種の生成に関連する皮膚の疾患又は状態の治療に使用するためのガラクトマンナンとＮ−アセチルシステインとの組み合わせを含む抗酸化組成物、該組み合わせを含有するヒドロゲル、該ヒドロゲルを含む創傷被覆材、並びにその潰瘍、創傷、火傷及び湯傷の治癒における使用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象者の皮膚における活性酸素種の生成に起因する皮膚の疾患若しくは病態又は対象者の皮膚における活性酸素種の生成を伴う皮膚の疾患若しくは病態の治療的又は予防的処置で使用するための、ガラクトマンナンとＮ−アセチルシステインとを含む抗酸化組成物。
【請求項２】
前記ガラクトマンナンがローカストビーンガムである、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記活性酸素種の生成が、対象者の日光照射、化学物質、放射線治療又は化学療法への曝露に起因する、請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項４】
前記対象者の皮膚における活性酸素種の生成に起因する皮膚の疾患又は病態が、日焼け、光線過敏症、免疫抑制、早期老化、乾癬、並びに基底細胞癌、扁平上皮癌及び悪性黒色腫から選択される皮膚癌、免疫性疾患、限局性又は広汎性炎症、細菌又は真菌感染、皮膚発疹、全身性酸化ストレス、並びに日光角化症から選択される、請求項１〜３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５】
前記対象者の皮膚における活性酸素種の生成を伴う皮膚の疾患又は病態が、急性の外科的創傷及び外傷性創傷、火傷、湯傷、瘻孔、静脈潰瘍、動脈潰瘍、褥瘡、糖尿病性潰瘍、複数の病因による潰瘍、その他の慢性又は壊死性創傷、並びにその他の炎症性の病変及び障害から選択される、請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項６】
クルクミンを追加の抗酸化成分として更に含む、請求項１〜５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項７】
ガラクトマンナンとＮ−アセチルシステインとクルクミンとを含む抗酸化組成物。
【請求項８】
医薬品として使用するための、請求項７に記載の抗酸化組成物。
【請求項９】
ガラクトマンナンとＮ−アセチルシステインとを含み、該ガラクトマンナンが架橋マトリックスの形態であり、該Ｎ−アセチルシステインが該ガラクトマンナンの架橋マトリックス中に組み込まれている、ヒドロゲル。
【請求項１０】
前記ガラクトマンナンがローカストビーンガムである、請求項９に記載のヒドロゲル。
【請求項１１】
前記ガラクトマンナンマトリックスが、その中に組み込まれたクルクミンを更に含む、請求項９又は１０に記載のヒドロゲル。
【請求項１２】
細胞を更に含む、請求項９〜１１のいずれか１項に記載のヒドロゲル。
【請求項１３】
前記細胞が、線維芽細胞、ケラチノサイト、内皮細胞、分化又は未分化の間葉幹細胞、角膜細胞、上皮細胞、白血球系由来の細胞、造血系由来の細胞、分化又は未分化の幹細胞、軟骨形成細胞、骨芽細胞、筋細胞、脂肪細胞、及び末梢若しくは中枢神経系由来の神経又は他の細胞からなる群より選択される、請求項１２に記載のヒドロゲル。
【請求項１４】
（ａ）前記ガラクトマンナンを水溶液に溶解させる工程と、
（ｂ）架橋剤を該ガラクトマンナンの水溶液に加えることによって該ガラクトマンナンに化学架橋を行い、架橋グルコマンナンマトリックスを含むヒドロゲルを得る工程と、
（ｃ）Ｎ−アセチルシステインと任意によりクルクミンとを該架橋グルコマンナンマトリックス中に組み込む工程と、
を具える、請求項９〜１３のいずれか１項に記載のヒドロゲルの調製方法。
【請求項１５】
Ｎ−アセチルシステインと任意によりクルクミンとを架橋グルコマンナンマトリックス中に組み込む工程が、
（１）前記工程（ｂ）で得られたヒドロゲルを乾燥させてキセロゲルを形成する工程と、
（２）該キセロゲルをＮ−アセチルシステインと任意によりクルクミンとを含む水溶液中に導入することによって再水和させて、該Ｎ−アセチルシステインと任意によるクルクミンとを該架橋グルコマンナンマトリックス中に組み込んだヒドロゲルを形成する工程と、
（３）工程（２）で得られたヒドロゲルをある程度乾燥させる工程と
を具える、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
医薬品として使用するための、請求項９〜１３のいずれか１項に記載のヒドロゲル。
【請求項１７】
急性の外科的創傷及び外傷性創傷、火傷、湯傷、瘻孔、静脈潰瘍、動脈潰瘍、褥瘡、糖尿病性潰瘍、複数の病因による潰瘍、その他の慢性若しくは壊死性創傷、並びにその他の炎症性の病変及び障害の治療並びに／又は治癒に使用するための、請求項９〜１３のいずれか１項に記載のヒドロゲル。
【請求項１８】
請求項９〜１３のいずれか１項に記載のヒドロゲルを具えた創傷被覆材。
【請求項１９】
ガラクトマンナンとＮ−アセチルシステインとを含む化粧品組成物。
【請求項２０】
クルクミンを更に含む、請求項１９に記載の化粧品組成物。
【請求項２１】
加齢性皮膚損傷の処置のための請求項１９又は２０に記載の化粧品組成物の使用。
【請求項２２】
ＵＶ放射保護剤としての請求項１９又は２０に記載の化粧品組成物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗酸化組成物と、皮膚に影響を及ぼす疾患、障害及び病態、特に光老化及び他の加齢性皮膚損傷のようなヒトの皮膚における活性酸素種の生成に関与する皮膚病態の治療におけるその使用とに関する。また本発明は、創傷被覆材と、特に創傷へ活性薬剤を送達するための組成物とに関する。
【背景技術】
【０００２】
高齢化や高血圧又は糖尿病のような慢性代謝疾患の増加は、近年の慢性潰瘍の存在を助長している。
【０００３】
時折、患者の健康状態（糖尿病）のせいで、又は組織における大きな損傷の存在（重篤な火傷）のせいで、治癒のために起こる一連の過程を慢性潰瘍の発症を起こすように変える現象が生じ得る。  
【０００４】
慢性潰瘍の形成は、治癒で起こる炎症過程の調節に関与するシグナル伝達分子の合成を変化させる過剰な炎症過程に関連する。最近の研究は、傷害領域の炎症促進性環境の結果として創傷床に酸化ストレスが存在するという慢性潰瘍の生理病理学に直接関わる。
【０００５】
酸化ストレスが起こる場合、生物は発生した過剰な活性酸素種を制御することができる解毒メカニズムを有し、対照的に、生物の解毒能力と創傷床に存在するフリーラジカルとの間の調整が不足する場合、治癒過程は遅くなって慢性潰瘍を引き起こす。
【０００６】
活性酸素代謝物の解毒メカニズムにおける調整の不足は、潰瘍の慢性化の主な原因の一つである。
【０００７】
慢性創傷の治癒は、過剰な活性酸素種と特異的に反応して酸化ストレスのレベルを低下させる抗酸化創傷被覆材の使用により誘導することができる。本分野では、治癒目的用の様々な材料の例が記述されている。
【０００８】
例えば、米国特許第６４０６７１２号には、乾いた親水コロイドポリマーと水とを互いに切り離しながら一包装で保存することができるような一時的な又は手動で除去可能な障壁を有する密封包装内に収容された乾いた親水コロイドポリマー粉末と水とを混合することにより形成される創傷被覆材材料が記載されている。  
【０００９】
別の国際公開第０１／４９２５８号公報の特許出願の開示は、易感染性組織部位で最適な酸素分圧を提供又は維持することができる独立気泡様材料の内部に酸素を捕捉する一方、過剰な体液を吸収し、微小環境を最適化して、必要に応じて組織修復や再生を促進する、グアーガムのような非ゲル化多糖を含む生体適合性ポリマーのような組織接触材料を包含する。
【００１０】
欧州特許出願公開第０７８１５５０号公報は、酢酸ビニルとポリビニルピロリドンとのコポリマーと、特にローカストビーンガムのような付加成分とによって構成された、有効成分、特に抗潰瘍剤の制御された遊離のための生体接着性医薬組成物を開示する。
【００１１】
また、ＵＶＡ放射にさらされた系の脂質過酸化の低減に際したガラクトマンナン類の抗酸化活性も最近報告されている。様々なヒドロゲル混合物の弾性を増加させるそれらの能力や、水を吸収し治癒過程に必要な必須水分含量を創傷床に提供できるそれらの能力も知られている。
【００１２】
国際公開第２００５／０８４６５０号公報の国際出願は、創傷治癒目的で皮膚に用いるための医薬有効成分用の保存安定性の乾燥した有効成分送達システムについて特許を請求する。該送達システムは、ゲル形成材料が例えばガラクトマンナン誘導体といった多糖であるキセロゲルを含む。キセロゲルは液体と接触するときに再水和されてヒドロゲルを形成し、よって、施された有効成分を溶解しヒドロゲルから制御速度で放出して、局所的な高濃度をもたらす。
【００１３】
創傷被覆材として用いるための固形の生体吸収性材料が欧州特許出願第０７９２６５３号で開示されており、そこでは、キサンタンとグアーガム又はローカストビーンガムのような少なくとも１種のガラクトマンナンとの混合物によってかかる固形物が形成される。また該材料は、中でもグリコサミノグリカンのような創傷治癒を促進するものが特に好ましい治療薬も含む。
【００１４】
上記のものと同様な手法の治癒目的の創傷被覆材が国際公開第９９／２５３９５号公報の国際出願により特許を請求されており、そのマトリックスは、１種以上の有効成分、例えば増殖因子、ムコ多糖及びタンパク質のような治療薬に加えて、生体適合性架橋ポリマーや非ゲル化多糖、ガラクトマンナンを含む。
【００１５】
他の種類の創傷治癒被覆材が国際公開第２００４／１１２８５０号公報及び第２００５／０４９１０１号公報の国際出願により開示されており、概して、その材料は、活性酸素種と反応することができ、よって創傷での酸化ストレスのレベルを低減する抗酸化性色素で染色された、ガラクトマンナンであってもよい生体吸収性基材によって形成される。
【００１６】
Ｎ−アセチルシステインも細胞内グルタチオン（ＧＳＨ）の合成を増加させることによって作用する抗酸化分子として知られる。ＧＳＨの低減効果は、活性酸素種を直接除去することや、既に使用した抗酸化剤を再生利用することにも寄与する。その慢性潰瘍における使用は、酸化ストレスを低減し、よってその治癒を促す（Ｍａｎｉｋａｎｄａｎ, Ｐ. ｅｔ ａｌ, Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ａｎｄ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ, ２００６, ２９０, ８７−９６； Ｒａｎｉ Ｔｈａａｋｕｒ, Ｓ. ｅｔ ａｌ,Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙｏｎｌｉｎｅ,２００９,１,３６９−３７６）。
【００１７】
クルクミンの抗酸化活性も知られている。クルクミンは、東南アジアで主に栽培される植物で皮膚関連疾患の治療用の伝統的な医薬に広く使用されるターメリック根の生抽出物の精製した状態である。Ｇｏｐｉｎａｔｈ,Ｄ.（Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ, ２００４, ２５, １９１１−１９１７）は、再生組織用の支持マトリックスとしても役立つコラーゲンマトリックスに組み込まれた場合のクルクミン抗酸化剤による創傷治癒能力の向上を実証する。
【００１８】
ガラクトマンナン類やＮ−アセチルシステインの抗酸化特性は先行技術文献でよく報告されているが、両成分の組み合わせによって与えられる特別な利点について、特に、広範な酸化ストレスを受けている細胞培養物に対して抗酸化相乗効果が提供されることに関しては示されていない。
【発明の概要】
【００１９】
本発明者らは、ガラクトマンナンとＮ−アセチルシステインとの組み合わせが、両成分の抗酸化能力に相乗効果を提供し、対象者の皮膚における活性酸素種の生成に起因する疾患若しくは病態又は対象者の皮膚における活性酸素種の生成を伴う疾患若しくは病態の治療での使用に予期せぬ利点をもたらすことを見出した。
【００２０】
実験的な試験は、ローカストビーンガムのようなガラクトマンナンとＮ−アセチルシステインとの組み合わせを培養細胞に投与した場合、酸化ストレスを受けたヒト皮膚細胞（線維芽細胞）が細胞生存能力／保存の増加を経験することを示している。
【００２１】
また更なる実験は、前記組み合わせが、ローカストビーンガム又はＮ−アセチルシステイン単独と比較した場合、酸素過酸化物の存在下で酸化ストレスを受けた線維芽細胞培養物における活性酸素代謝物の細胞内レベルの著しい低減をもたらすことも明らかにしている。
【００２２】
更に、クルクミン（又はターメリック）をガラクトマンナンとＮ−アセチルシステインとの組み合わせに加えた場合、一層高い相乗効果が観察されている。
【００２３】
従って、本発明の第１態様は、対象者の皮膚における活性酸素種の生成に起因する疾患若しくは病態又は対象者の皮膚における活性酸素種の生成を伴う疾患若しくは病態の治療的又は予防的処置で使用するためのガラクトマンナンとＮ−アセチルシステインとを含む抗酸化剤組成物に関する。
【００２４】
特に好ましいのは、本発明で使用する組成物においてガラクトマンナンとしてローカストビーガムを使用することである。
【００２５】
特定の実施形態では、上で定義した抗酸化組成物が追加の抗酸化成分としてクルクミン（ターメリック）を更に含む。
【００２６】
本発明はまた、ガラクトマンナンとＮ−アセチルシステインとを含む組成物を治療上有効量投与する工程を具える、対象者の皮膚における活性酸素種の生成に起因する疾患若しくは病態又は対象者の皮膚における活性酸素種の生成を伴う疾患若しくは病態の治療的又は予防的処置の方法にも関する。
【００２７】
本発明の別の態様は、ガラクトマンナンとＮ−アセチルシステインとクルクミンとを含む抗酸化組成物に関する。
【００２８】
本発明の別の態様は、医薬品として使用するための上記抗酸化組成物に関する。
【００２９】
本発明の別の態様は、ガラクトマンナンが架橋マトリックスの形態であり、Ｎ−アセチルシステインが該ガラクトマンナンの架橋マトリックス中に組み込まれている、ガラクトマンナンとＮ−アセチルシステインとを含むヒドロゲルに関する。特定の実施形態では、ガラクトマンナンが架橋剤により架橋されており、好ましくは架橋剤がグルタルアルデヒドである。
【００３０】
別の態様では、本発明は、ガラクトマンナンマトリックスが、その中に組み込まれたクルクミンを更に含む上記ヒドロゲルに関する。
【００３１】
加えて、本発明はまた、細胞を更に含む上記ヒドロゲルに関する。線維芽細胞、ケラチノサイト、内皮細胞、分化又は未分化の間葉幹細胞、角膜細胞、上皮細胞、白血球（ｌｅｕｃｏｃｉｔａｒｙ）系由来の細胞、造血系由来の細胞、分化又は未分化の幹細胞、軟骨形成細胞、骨芽細胞、筋細胞、脂肪細胞、及び末梢若しくは中枢神経系由来の神経又は他の細胞からなる群より選択される細胞が特に好ましい。
【００３２】
本発明の追加の態様は、
（ａ）ガラクトマンナンを水溶液に溶解させる工程と、
（ｂ）架橋剤を該ガラクトマンナンの水溶液に加えることによって該ガラクトマンナンに化学架橋を行い、架橋グルコマンナンマトリックスを含むヒドロゲルを得る工程と、
（ｃ）Ｎ−アセチルシステインと任意によりクルクミンとを該架橋グルコマンナンマトリックス中に組み込む工程と、
を具える、上記ヒドロゲルの調製方法に関する。
【００３３】
本発明の別の態様は、上記ヒドロゲルを具える創傷被覆材に関する。
【００３４】
本発明の追加の態様は、医薬品として使用するための上記ヒドロゲルに関する。
【００３５】
本発明の別の態様は、急性の外科的創傷及び外傷性創傷、火傷、湯傷、瘻孔、静脈潰瘍、動脈潰瘍、褥瘡（あるいは褥瘡性潰瘍としても知られる）、糖尿病性潰瘍、複数の病因による潰瘍、その他の慢性又は壊死性創傷、並びにその他の炎症性の病変及び障害の治療並びに／又は治癒に使用するための上記ヒドロゲルに関する。
【００３６】
本発明の追加の態様は、ガラクトマンナンとＮ−アセチルシステインとを含む化粧品組成物に関する。
【００３７】
別の態様では、本発明はクルクミンを更に含む上記化粧品組成物に関する。
【００３８】
本発明の別の態様は、加齢性皮膚損傷の処置のための上記化粧品組成物の使用に関する。
【００３９】
本発明の別の態様は、ＵＶ放射保護剤としての上記化粧品組成物の使用に関する。
【図面の簡単な説明】
【００４０】
【図１】(ａ)様々な濃度のＮＡＣを用いた、ＭＴＴ比色分析による線維芽細胞の細胞増殖の結果と、(ｂ)コントロールに対するＩＣ５０値とを示す。
【図２】(ａ)様々な濃度のターメリックを用いた、ＭＴＴ比色分析による線維芽細胞の細胞増殖の結果と、(ｂ)コントロールに対するＩＣ５０値とを示す。
【図３】線維芽細胞培養物を酸化環境にさらした場合並びにそれを１％ＬＢＧ、１ｍＭのＮＡＣ、１μＭのターメリック及びそれらの組み合わせと接触させて置いた場合のＭＴＴ比色分析に相当する結果を示す。
【図４】プローブである２’,７’−ジクロロフルオレセインジアセテートでの標識で得られた蛍光単位による、１ｍＭのＨ２Ｏ２を用いた酸化環境にさらした、また線維芽細胞を１％ＬＢＧ、５ｍＭのＮＡＣ、５μＭのターメリック及びそれらの組み合わせと接触させて置く場合の線維芽細胞の細胞内ＲＯＭレベルを示す。
【図５】(ａ)０重量％、(ｂ)０．５重量％、(ｃ)１重量％及び(ｄ)２．５重量％のグルタルアルデヒドで架橋したローカストビーンガムのヒドロゲルを走査電子顕微鏡（ＳＥＭ）で撮影した写真を示す。
【図６】ブタの治癒動物モデルの背部領域で外科的に形成させた皮膚損傷の１０日間の進展（ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ）の生検の顕微鏡像を示す。
【図７】ブタの治癒動物モデルの背部領域で外科的に形成させた皮膚損傷の３日間の進展の写真を示す。
【発明を実施するための形態】
【００４１】
本発明で使用する抗酸化剤組成物は２つの抗酸化剤、すなわちガラクトマンナンとＮ−アセチルシステインとを含む。これら成分を、いかなる化学的結合又は相互作用によっても結合させることなく組成物中で物理的に混合する。
【００４２】
実験的試験で示されるように、イナゴマメローカストビーンガムのようなガラクトマンナンとＮ−アセチルシステインとの組み合わせは、酸化ストレスにさらされた線維芽細胞培養物に抗酸化剤の相乗効果を提供し、細胞生存能力を向上させ、同時に活性酸素代謝物の細胞内レベルを低減する。
【００４３】
ガラクトマンナンは、ガラクトース側鎖を持つマンノース骨格、より具体的にはα−Ｄ−ガラクトースに結合した６位の分岐点、すなわち、１−６結合α−Ｄ−ガラクトピラノースを持つ（１−４）結合β−Ｄ−マンノピラノース骨格を含有する多糖である。ガラクトマンナンガムとしては、ローカストビーンガム（ＬＢＧ）、グアーガム、カシアガム、タラガム、メスキートガム及びフェヌグリークガムが挙げられる。
【００４４】
特定の実施形態では、ガラクトマンナンをグアーガム、ローカストビーンガム、カシアガム、タラガム、メスキートガム、フェヌグリークガム及びホワイトクローバービーンガムからなる群より選択する。より好ましくは、ガラクトマンナンがローカストビーンガムである。ローカストビーンガムはα−Ｄ−ガラクトース残基に結合した６位の分岐点を有するマンノピラノース骨格からなるガラクトマンナン多糖である。ローカストビーンガムはガラクトース残基ごとに約４個のマンノース残基を有する（約４のマンノース／ガラクトース比）。
【００４５】
ガラクトマンナンは組換え体に由来しても合成供給源に由来してもよい。例えば、ガラクトマンナンを、酵素のマンナンシンテターゼ及びガラクトシルトランスフェラーゼによりＧＤＰ−マンノース及びＵＤＰ-ガラクトースから生体内で合成してもよい。これらタンパク質をコードするＤＮＡは単離され特徴付けられており（米国出願公開第２００４／０１４３８７１号）、これら酵素で形質転換した組換え植物は上昇したレベルのガラクトマンナンを発現することが示されている。加えて、マンノピラノース骨格のガラクトシル化の程度は生体内のα−ガラクトシダーゼの存在（又は不存在）によって影響され得る（Ｅｄｗａｒｄｓら、Ｐｌａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ(２００４)１３４：１１５３−１１６２を参照）。α−ガラクトシダーゼはマンノピラノース骨格からガラクトース残基を除去する。例えば、低度のガラクトシル化を有するガラクトマンナンを天然に発現する種子は、それら植物種でマンノピラノース骨格からガラクトース部分を除去するα−ガラクトシダーゼを発現（又はより多く発現）し得る。α−ガラクトシダーゼ酵素は、天然に存在するガラクトマンノースガムの特性の実験室操作において、天然に存在するガラクトマンノースガムのマンノピラノース骨格上のガラクトースの存在を低減するのに用いることができる。本発明の実施形態は、α−ガラクトシダーゼで処理してマンノピラノース骨格に対するガラクトースの存在を低減したガラクトマンナンを包含する。本発明の実施形態は、α−ガラクトシダーゼ又は他の酵素若しくは化学処理で処理してガラクトマンナンガムを「調整」して該ガムに細胞培養表面のような所望の特性を与えるガラクトマンナンガムを包含する。
【００４６】
本発明の組成物中のガラクトマンナンの重量割合は、組成物の総重量に対して１〜５％にわたる。
【００４７】
Ｎ−アセチルシステインは、細胞内で遊離酸素ラジカルを直接除去することと既に使用された抗酸化剤を再生利用することとに寄与する化合物である細胞内グルタチオンの合成に介在する抗酸化分子である。
【００４８】
Ｎ−アセチルシステインは、本発明の組成物中に好ましくは１〜１０ｍＭ、より好ましくは１〜５ｍＭの濃度で存在する。
【００４９】
好ましい実施形態では、本発明で用いる抗酸化組成物が皮膚に対する局所適用に適する。局所抗酸化組成物は多種多様な形態のいずれかを取ることができ、例えば、被覆材、ローション、溶液、スプレー、クリーム、ゲル、軟膏などが挙げられる。
【００５０】
ローションは、摩擦無しに皮膚表面に施される製剤であり、典型的には、有効成分を含む固形粒子が水又はアルコール基剤中に存在する液体又は半液体の製剤である。ローションは、通常個体の懸濁液であり、好ましくは、水中油型の液状油性エマルションを含む。ローションは、より多くの液体組成物を施すのが容易であるため、広い身体面積を処置するのに好ましい剤形である。ローション中の不溶物（ヒドロゲル）が細かく分配されることが一般に好ましい。ローションは約０．００１％〜約３０％の有効成分と１％〜２５％の皮膚軟化剤と適量の水とを含有する。皮膚軟化剤の例は、鉱物油、ワセリン、パラフィン、セレシン、微結晶ワックス、ポリエチレン及びペルヒドロスクアレンのような炭化水素ワックス及び炭化水素油；ジメチルポリシロキサン、メチルフェニルポリシロキサン及び水溶性且つアルコール可溶性のグリコール−シリコーンコポリマーのようなシリコーン油；動物性及び植物性の油脂のようなトリグリセリド；１０〜２０個の炭素原子を有する脂肪酸のアルキルエステル、１０〜２０個の炭素原子を有する脂肪酸のアルケニルエステル；ぺラルゴン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、イソステアリン酸、ヒドロキシステアリン酸、オレイン酸、リノール酸、リシノール酸、アラキドン酸、ベヘン酸及びエルカ酸のような１０〜２０個の炭素原子を有する脂肪酸；１０〜２０個の炭素原子を有する脂肪アルコール（ラウリルアルコール、ミリストイルアルコール、パルミトイルアルコール、ステアリルアルコール、イソステアリルアルコール、ヒドロキシステアリルアルコール、オレイルアルコール、リシノレイルアルコール、ベヘニルアルコール、エルシルアルコール及び２−オクチルドデカノールアルコールなどが適当な脂肪アルコールの例である）；１〜５０個のエチレンオキシド基又は１〜５０個のプロピレンオキシド基が結合しているラウリルアルコール、セチルアルコール、ステアリルアルコール、イソステアリルアルコール、オレイルアルコール及びコレステロールアルコール等の、エトキシ化した１０〜２０個の炭素原子を有する脂肪アルコールのような脂肪アルコールエステル；ラノリン及び誘導体；蜜蝋、鯨蝋、ミリスチン酸ミリストイル及びステアリン酸ステアリルのようなワックス；ポリオキシエチレンソルビトール蜜蝋誘導体のような蜜蝋誘導体；限定しないがカルナウバロウ及びキャンデリラロウ等の、植物性ワックス；レシチン及び誘導体のようなリン脂質；コレステロール及びコレステロールのアシルエステルのようなステロール；並びに、脂肪酸アミド、エトキシル化アシルアミド及び固形脂肪酸アルカノールアミドのようなアミドである。
【００５１】
本発明のローションは１％〜３０％の乳化剤を更に含有し得る。乳化剤は陰イオン性、陽イオン性又は非イオン性とすることができる。非イオン性乳化剤の例としては、限定しないが、１０〜２０個の炭素原子を有する脂肪アルコール、２〜２０モルのエチレンオキシド若しくはプロピレンオキシドと縮合した１０〜２０個の炭素原子を有する脂肪アルコール、２〜２０モルのエチレンオキシドと縮合しアルキル鎖に６〜１２個の炭素を有するアルキルフェノール、エチレングリコールのモノ及びジアシルエステルであって脂肪酸が１０〜２０個の炭素を含有するもの、脂肪酸が１０〜２０個の炭素を含有するモノグリセリド、ジエチレングリコール、分子量２００〜６０００のポリエチレングリコール、分子量２００〜３０００のポリプロピレングリコール、グリセロール、ソルビトール、ソルビタン、ポリオキシエチレンソルビトール、ポリオキシエチレンドルビタン並びに疎水性ワックスエステルが挙げられる。適切な陰イオン性乳化剤としては、限定しないが、カリウム、ナトリウム又はトリエタノールアミンで鹸化した脂肪酸（石けん）であって脂肪酸が１０〜２０個の炭素を含有するものが挙げられる。他の適切な陰イオン性乳化剤としては、限定しないが、アルカリ金属、アンモニウム又は硫酸アルキルで置換したアンモニウム、アルキル鎖に１０〜３０個の炭素を有し１〜５０個のエチレンオキシド単位を有する、アルキルアリールスルホネート及びアルキルエトキシエーテルスルホネートが挙げられる。適切な陽イオン性乳化剤としては、四級アンモニウム化合物とモルホリニウム化合物とピリジニウム化合物とが挙げられる。
【００５２】
組成物の差分は水である。全ての成分を一緒に単純に混合することによってローションを形成する。好ましくは、有効成分を皮膚軟化剤に溶解させて、生じた混合物を水に加える。
【００５３】
また、本発明の組成物は液剤の形態で形成してもよい。液剤は、溶解した成分の分子が溶媒の分子の中に分散するように有効成分を液体に溶解させることによって調製される均質な混合物である。液剤は０．００１％〜３０％の抗酸化有効成分と適量の有機溶媒とを含有する。溶媒として有用な有機物質は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、グリセリン、ソルビトールエステル、１,２,６−ヘキサントリオール、エタノール、イソプロパノール、ジエチルタータレート、ブタンジオール、及びそれらの混合物である。かかる溶媒系は水を含有することもできる。
【００５４】
これら組成物を液剤の形態で皮膚に塗布するか、又は液剤をエアロゾルの形態に調剤してスプレーとして皮膚に塗布する。
【００５５】
エアロゾルの形態の組成物は、加えて２５％〜８０％の適切な噴霧剤を含有する。噴霧剤の例としては、限定しないが、塩素化、フッ素化又はフルオロ塩素化低分子量炭化水素が挙げられる。また、亜酸化窒素及び二酸化炭素を噴霧剤ガスとして用いる。カートリッジの中身を発射するのに充分な量を用いる。
【００５６】
また本発明の組成物はクリームの形態で調剤してもよい。例えば、医薬品製剤及び化粧品製剤の分野で周知されているようなクリームは、粘性液又は水中油型もしくは油中水型の半固形エマルションである。クリーム基剤は、水洗性であり、油相と乳化剤と水相とを含有する。油相は一般にワセリンと、セチルアルコール若しくはステアリルアルコールのような脂肪アルコールとで構成される。水相は、必須ではないが大抵は容量で油相を超え、一般に保湿剤を含有する。クリーム製剤中の乳化剤は、一般に非イオン性、陰イオン性、陽イオン性又は両性の界面活性剤であり、ローションについて上述した乳化剤又はそれらの混合物から選択することができる。
【００５７】
ゲルは半固形の懸濁型の系である。単相ゲルは、典型的には水性であるが好ましくはアルコール及び任意で油も含有する担体液中に実質的に均一に分布した有機巨大分子を含有する。好ましい有機巨大分子、すなわちゲル化剤は、架橋アクリル酸ポリマー、例えば「カルボマー」一族のポリマー、例えば、カーボポール(登録商標)の商標名で市販されていることがあるカルボキシポリアルキレンのような化学架橋ポリマーであり得る。また、ポリエチレンオキシド、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンコポリマー及びポリビニルアルコールのような親水性ポリマー；ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース及びメチルセルロースのようなセルロース系ポリマー；トラガカント及びキサンタンガムのようなガム；アルギン酸ナトリウム；並びにゼラチンも好まれ得る。
【００５８】
当分野でも周知のような軟膏は、典型的にはワセリン又は他のワセリン誘導体に基づく半固形製品である。用いられる具体的な軟膏基剤は、当業者にも認知されているであろうように、幾つかの望ましい特徴、例えば皮膚軟化性などを提供するであろうものである。軟膏基剤は、四つの部類：油脂性基剤、乳化性基剤、乳剤性基剤及び水溶性基剤にグループ分けすることができる。油脂性軟膏基剤としては、例えば、植物油、動物から得られる脂肪、及びワセリンから得られる半固形炭化水素が挙げられる。吸収性軟膏基剤としても知られる乳化性基剤は、わずかな水を含有するか又は水を含有せず、例えば、硫酸ヒドロキシステアリン、無水ラノリン及び親水性ワセリンが挙げられる。乳剤性軟膏基剤は、油中水型エマルションか水中油型エマルションであり、例えば、セチルアルコール、モノステアリン酸グリセリル、ラノリン及びステアリン酸が挙げられる。好ましい水溶性軟膏基剤は様々な分子量のポリエチレングリコールから調製する。
【００５９】
また医薬として許容されるビヒクルを組成物に組み込んでもよく、当分野で慣習的に用いられるいずれかのビヒクルとすることができる。例としては、水、低級アルコール、高級アルコール、多価アルコール、単糖、二糖、多糖、炭化水素油、ワックス、脂肪酸、シリコーン油、非イオン性界面活性剤、イオン性界面活性剤、シリコーン界面活性剤、並びに前記ビヒクルの水性混合物及びエマルション性混合物が挙げられる。
【００６０】
上記局所組成物は、処置が必要な皮膚領域へ所望の結果を達成するのに必要な頻度及び量で定期的に施すことができる。処置の頻度は、皮膚の疾患又は病態の性質、すなわち、皮膚におけるＲＯＳ生成に起因する皮膚の疾患又は病態や、皮膚の損傷又は劣化の程度に左右される。
【００６１】
ガラクトマンナンとＮ−アセチルシステインとの組み合わせの抗酸化特性のため、その組み合わせを、対象者の皮膚における活性酸素種の生成に起因する皮膚の疾患若しくは病態又は対象者の皮膚における、特に皮膚の線維芽細胞及びケラチノサイトにおける活性酸素種の生成を伴う皮膚の疾患若しくは病態を治療又は予防するのに用いることができる。
【００６２】
この処置は、対象者の皮膚を本明細書中に記載した局所製剤と対象者及び／又は対象者の皮膚組織及び／又は１若しくは複数の細胞に影響を及ぼす様式で皮膚に直接施すことによって接触させ、所望の薬理的効果及び／又は生理的効果を得ることを包含する。その効果は、皮膚における活性酸素種の生成に起因するか若しくは皮膚における活性酸素種の生成を伴う病態のような疾患若しくは傷害又はそれらの兆候若しくは症状を完全に又は部分的に予防する点で予防的であってもよく、並びに／又はその効果は、症状若しくは兆候を取り除くか又はかかる傷害若しくは疾患に部分的な若しくは完全な治癒をもたらす及び／又は該傷害若しくは疾患に起因する悪影響を実質的に弱める点で治療的であってもよい。
【００６３】
関連する実施形態は、例として次のことを期待する：
（i）該疾患若しくは傷害（例えば、活性酸素種の生成に起因するか若しくは活性酸素種の生成を伴う皮膚の病態）にかかり易い場合があるが未だ罹患していると診断されていない対象者に、該疾患若しくは傷害が起こるのを予防すること；
（ii）該疾患若しくは傷害を抑制すること、すなわち、その進行を阻止すること；又は
（iii）疾患若しくは傷害を軽減する又は改善すること、すなわち、退行を引き起こすこと。
【００６４】
特定の実施形態では、活性酸素種の生成に起因する皮膚の疾患又は病態の処置が、皮膚の損傷部位で損傷した又は傷害された組織又は細胞の修復及び再生を含む。この損傷は、日光放射（光損傷）、化学物質（合剤、医薬品若しくは化粧品化合物のような他の局所薬など）、放射線療法又は化学療法のような皮膚における活性酸素種の生成を促進し得る酸化ストレス源に対する対象者の曝露の結果であり得る。また、このような損傷を、例えば、ＵＶ放射、化学物質（合剤、医薬品若しくは化粧品化合物のような他の局所薬など）のような皮膚における活性酸素種の生成を促進し得る酸化ストレス源に対する対象者の曝露に先立って又は放射線療法若しくは化学療法に先立って予防する、予防的処置も含まれる。
【００６５】
より具体的には、皮膚の疾患又は病態が、日光、より具体的にはＵＶＡ型、ＵＶＢ型及びＵＶＣ型のＵＶ放射への曝露に起因する。このような放射への曝露の直接的若しくは間接的な結果である（又は、このような放射への曝露により悪化したか若しくはそれを危険因子として含む）病態は、直接的影響と即時的影響の双方及び長期的影響、並びに直接的損傷から生じた長期にわたる合併症及び後遺症を包含する。
【００６６】
ＵＶ放射は直接的メカニズムと間接的メカニズムの双方により皮膚に影響を与えると考えられる。直接的損傷は放射への即時曝露に際して受けるものであり、一方で間接的影響は、損傷した生体分子の発生とその後他の生物学的過程及び病理過程を始動させる高度に活性な酸素種の発生とに続くものを包含する。活性酸素種は、それが発生した皮膚のような直近の場所で、又はかかる活性種が更に広範な全身的影響を有し得る遠隔部位で、いわゆる「酸化ストレス」として現れ得るように悪影響を有し得る。従って、活性種のレベルを効果的に低減することによって抗酸化効果を有する治療介入は、幅広い範囲の疾患の進行を遅くし、改善し、又は停止させることができる。
【００６７】
ＵＶ放射への曝露に関連する健康問題は皮膚の病態若しくは疾患を伴うが、また、更に広範な全身的病態も起こり得るか又はその病態が該皮膚の病態若しくは疾患の結果として登場する合併症の一部ともなり得る。従って、このような病態は、全体として、日焼け、光線過敏症、免疫抑制、早期老化、乾癬、様々な種類の皮膚癌及び様々な免疫性疾患、限局性又は広汎性炎症、様々な細菌又は真菌感染、皮膚発疹、並びにＵＶ放射曝露及び食事により引き起こされた全身性酸化ストレスを包含し得る。例えば、日光角化症は長年の日光曝露後に現れる前癌病変である。例えば、多形日光疹は日光曝露によって誘導された発疹であり、皮膚の局所性アレルギーを伴うものと理解されている。日光曝露に関係した皮膚癌の種類としては、重篤度が増す順に、基底細胞癌、扁平上皮癌及び悪性黒色腫が挙げられる。
【００６８】
別の特定の実施形態では、対象者の皮膚における活性酸素種の生成を伴う皮膚の疾患又は病態が、急性の外科的創傷及び外傷性創傷、火傷、湯傷、瘻孔、静脈潰瘍、動脈潰瘍、褥瘡（あるいは褥瘡性潰瘍としても知られる）、糖尿病性潰瘍、複数の病因による潰瘍、その他の慢性又は壊死性創傷、並びにその他の炎症性の病変及び障害から選択される。
【００６９】
本発明の特定の実施形態では、本発明の抗酸化組成物が追加の有効成分としてクルクミンを更に含む。本明細書中に提示した実施例に示すように、ガラクトマンナンとＮ−アセチルシステイン及びクルクミンとの組み合わせは一層高い相乗的抗酸化効果を提供することが見出された。
【００７０】
ターメリックとしても知られるクルクミンは、天然に存在する下記式のｏ−メトキシフェノール誘導体である。
【化１】
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【００７１】
これはクルクマ・ロンガの根茎から得られる黄色い色素であり、様々な炎症病態の治療用民間薬で数世紀のあいだ用いられている。クルクミンは、脂質の過酸化及び酸化的ＤＮＡ損傷を阻害するフリーラジカル捕捉剤及び抗酸化剤としても作用する。
【００７２】
クルクミンは、本発明の組成物中に好ましくは１〜約７．５μＭ、より好ましくは１〜５μＭの濃度で存在する。
【００７３】
従って、本発明の別の態様は、ガラクトマンナンとＮ−アセチルシステインとクルクミンとを含む抗酸化組成物に関する。
【００７４】
また前記抗酸化組成物は、皮膚への局所適用にも適し、例えば、上述するもののような被覆材、ローション、液剤、スプレー、クリーム、ゲル、軟膏などを含む多種多様な形態のいずれをとってもよい。
【００７５】
加えて、本発明は、ガラクトマンナンとＮ−アセチルシステインとクルクミンとを含む医薬品として使用するための抗酸化組成物に関する。
【００７６】
この抗酸化組成物は、上述するもののような、対象者の皮膚における活性酸素種の生成に起因する皮膚の疾患若しくは病態又は対象者の皮膚における活性酸素種の生成を伴う皮膚の疾患若しくは病態を治療又は予防することにも用いることができる。
【００７７】
別の特定の実施形態において、本発明は、ガラクトマンナンとＮ−アセチルシステインとを含み、該ガラクトマンナンが架橋マトリックスの形態であり、該Ｎ−アセチルシステインが該ガラクトマンナンの架橋マトリックス中に組み込まれているヒドロゲルに関する。
【００７８】
「ヒドロゲル」という用語は、水不溶性であるが水膨潤性である、すなわち、水が分散媒である架橋ガラクトマンナン鎖を含むポリマー鎖のネットワークを指す。
【００７９】
本発明のヒドロゲルは、信頼性があり効果的な、創傷、潰瘍、火傷又は湯傷のような対象部位へのＮ−アセチルシステインの送達手段を提供し、同時にこの有効成分の抗酸化特性及び治癒特性を向上させる。実際に、実験的試験は、線維芽細胞培養物に対してローカストビーンガムのようなガラクトマンナンとＮ−アセチルシステインとの組み合わせにより抗酸化相乗効果が誘導され、細胞生存能力を向上させ、同時に活性酸素代謝物の細胞内レベルを低減することを示している。またヒドロゲルは、創傷治癒を促進する非常に良好な水分調節能力も提供する。
【００８０】
本発明のヒドロゲルはガラクトマンナンの重合鎖を含み、ガラクトマンナンを水不溶性であるが水膨潤性にするためにガラクトマンナンの該鎖を架橋する。架橋度は、ヒドロゲルのレオロジー特性及びその膨潤特性を決定し、Ｎ−アセチルシステインの制御送達を促す多孔性を得ることを可能にする。
【００８１】
特に、ガラクトマンナンをグアーガム、ローカストビーンガム、カシアガム、タラガム、メスキートガム、フェヌグリークガム及びホワイトクローバービーンガムからなる群より選択する。より好ましくは、ガラクトマンナンがローカストビーンガムである。
【００８２】
特定の実施形態では、ガラクトマンナンを架橋剤により架橋する。ホウ砂（ナトリウムボロハイドレート）、グルタルアルデヒド及びエポキシ誘導体のような化学物質を用いることができる。特に、もっとも好ましい架橋剤はグルタルアルデヒドである。
【００８３】
架橋剤含量は、マトリックスの孔サイズを決定し、よって、その中に組み込まれる有効成分の送達特性を決定する。
【００８４】
ガラクトマンナンは本発明のヒドロゲル中にヒドロゲルの総重量に対して少なくとも５０重量％、好ましくは少なくとも７５重量％の量で存在することができる。より好ましくは、ヒドロゲルの少なくとも９０重量％がガラクトマンナンからなる。
【００８５】
ヒドロゲルの差分は水（最大２０重量％）と有効成分（Ｎ−アセチルシステイン）と、任意で塩又はヒドロゲルのレオロジー特性を改善する他の構造化合物とを含む。
【００８６】
ヒドロゲル中に任意で存在することができる構造化合物の中でも、コラーゲン、フィブロネクチン、ラミニン、エラスチン又はそれらの組み合わせのようなタンパク質、及びヒアルロン酸、ヘパリン硫酸又はコンドロイチンのようなグルコサミノグリカンが好ましい。
【００８７】
好ましくは、本発明のヒドロゲルが、水又は創傷液を吸収することによって、湿潤となるか、膨潤するか、又はゼラチン状の塊となるが、その中に自発的に溶解又は分散しない。低い溶解度は、このような材料を創傷液から活性酸素種を除去する創傷被覆剤としての使用に特に適するものとする。
【００８８】
Ｎ−アセチルシステインを架橋ガラクトマンナンマトリックス中に直接組み込んでもよい。この有効成分は、マトリックスによる該薬剤の吸収によって、又は架橋に先立ってマトリックス用の最初の配合物中に該薬剤を加えることによって、組み込むことができる。
【００８９】
本発明の好ましい実施形態では、Ｎ−アセチルシステインのガラクトマンナンマトリックスへの組み込みをキセロゲルの形成により行う。
【００９０】
「キセロゲル」という用語は、妨げられない収縮を伴った乾燥によりヒドロゲルから形成される固形基材を指す。これは、非常に小さい孔サイズ（１〜１０ｎｍ）とともに高い空隙率（少なくとも２５％）と巨大な表面積（１５０〜９００ｍ２／ｇ）とを保持する。
【００９１】
得られたキセロゲルを、Ｎ−アセチルシステインを含む水溶液に導入し、次いで、この有効成分を平衡に達するまでマトリックスの孔の中へ徐々に組み込むか又はその中へ分散させる。
【００９２】
Ｎ−アセチルシステインは、ヒドロゲル中に好ましくは１〜１０ｍＭ、より好ましくは１〜５ｍＭの濃度で存在する。
【００９３】
本発明の別の態様は、ガラクトマンナンのマトリックス中に組み込まれる追加の有効成分としてクルクミンを更に含む上記ヒドロゲルに関する。ローカストビーンガムのようなガラクトマンナンとＮ−アセチルシステイン及びクルクミンとの組み合わせが一層高い相乗抗酸化効果を提供することを見出した。
【００９４】
Ｎ−アセチルシステインの場合のように、クルクミンも、ガラクトマンナンマトリックスによるこの化合物の吸収によるか、又はガラクトマンナンの架橋に先立ってガラクトマンナンマトリックスの初期形成でＮ−アセチルシステインと一緒に加えることにより、ガラクトマンナンマトリックス中に組み込むことが出来る。
【００９５】
しかしながら、クルクミンとＮ−アセチルシステインとを、両有効成分を含む溶液中にガラクトマンナンのキセロゲルを導入することによって組み込み、よってガラクトマンナンのマトリックス中へのそれらの段階的な組み込みを可能にすることも好ましい。
【００９６】
クルクミンは、ヒドロゲル中に好ましくは約１〜約７．５μＭ、より好ましくは１〜５μＭの濃度で存在する。
【００９７】
これら有効成分をヒドロゲル中に組み込むことで、これら薬剤はヒドロゲルから直接放出され、更に経皮的又は経粘膜的経路により送達されることが理解される。組み込まれた薬剤は、創傷治癒を促進するために長期間かけて放出してもよい。
【００９８】
特定の実施形態では、有効成分をガラクトマンナンのマトリックス全体に組み込み分散させると、該薬剤の一部は該マトリックス中に存在し、該薬剤の他の一部は自由液体相中に溶解されて該マトリックスの中を自由に移動する。薬剤が自由液体相中に溶解するため、ヒドロゲルのマトリックスと創傷自体の水分との間に該活性薬剤の濃度勾配が作られる。従って、ヒドロゲルが開放創のような湿った表面上に置かれた場合、該可溶性薬剤が自由液体相を介し薬剤を含まない創傷水分へ移動し、創傷への薬剤の送達をもたらす。この可溶性薬剤の移動は、可溶性薬剤と不溶性薬剤との間の平衡を更に乱し、より多くの薬剤を自由液体相中へ溶解させ、よってより多くの薬剤が創傷に送達される。
【００９９】
有効成分の送達は、マトリックス中の架橋の程度によって制御してもよい。架橋された鎖の組み合わせは、有効成分がカプセル化される微小空洞を一緒に形成する。架橋剤の量及びガラクトマンナン鎖の長さを制御することによって、ガラクトマンナンマトリックスの微小空洞のサイズを調節することが可能である。低度の架橋によって生成した大きな微小空洞は活性薬剤のより自由な移動とより迅速な送達とを可能にし、一方で小さな微小空洞は送達時間を増やす。
【０１００】
本発明のヒドロゲルの調製方法は、
（ａ）ガラクトマンナンを水溶液に溶解させる工程と、
（ｂ）該ガラクトマンナンの水溶液に架橋剤を加えることによって該ガラクトマンナンに化学架橋を行い、架橋グルコマンナンマトリックスを含むヒドロゲルを得る工程と、
（ｃ）Ｎ−アセチルシステインと任意によりクルクミンとを該架橋グルコマンナンマトリックス中に組み込む工程とを具える。
【０１０１】
好ましくは、ガラクトマンナンを室温にて蒸留水に溶液の総重量に対して１重量％〜５重量％の量で溶解させる。この溶液を撹拌しながらおよそ２〜３時間維持する。ガラクトマンナン次第で、その溶解を促進するために温度を上げることを必要とし得る。
【０１０２】
特定の実施形態では、ガラクトマンナンがローカストビーンガムである。この場合、溶解を１１０〜１２０℃の温度で行うべきである。
【０１０３】
三次元マトリックス構造体を形成する目的で架橋工程を行い、有効成分が組み込まれるであろう孔又は空洞を三次元マトリックス構造体に提供する。架橋法としては、ＵＶ誘導架橋及び化学架橋が挙げられる。ホウ砂（ナトリウムボロハイドレート）、グルタルアルデヒド、エポキシ誘導体のような化学薬品及び当分野で既知の他の方法を用いることができる。ＵＶ架橋法はＵＶ放射の曝露に際してゲル化又は架橋の過程を開始する光開始剤を必要とする。
【０１０４】
架橋度は溶液に加えられる架橋剤の量に左右され、その量は水溶液の総重量に対して約１重量％〜約５重量％である。好ましくは、架橋剤がグルタルアルデヒドである。
【０１０５】
特定の実施形態では、ガラクトマンナンと架橋剤との溶液を撹拌しながら少なくとも３０分間維持する。続いて、その溶液を型に注入し、ヒドロゲルが形成されるまでその中で維持する。未反応の架橋剤を数回の洗浄により除去する。
【０１０６】
Ｎ−アセチルシステインの組み込み及びこの有効成分がヒドロゲルの形成中に存在する場合のクルクミンの組み込みは、マトリックスによる該薬剤の吸収によって行ってもよい。あるいは、ガラクトマンナンの架橋の前に、有効成分をガラクトマンナンの水溶液に加えてもよい。
【０１０７】
本発明の好ましい実施形態では、Ｎ−アセチルシステインと任意によるクルクミンとの組み込みは、
（１）工程（ｂ）で得られたヒドロゲルを乾燥させてキセロゲルを形成する工程と、
（２）該キセロゲルをＮ−アセチルシステインと任意によりクルクミンとを含む水溶液中に導入することによって再水和させて、該Ｎ−アセチルシステインと任意によるクルクミンとが該架橋グルコマンナンマトリックス中に組み込まれたヒドロゲルを形成する工程と、
（３）工程（２）で得られたヒドロゲルをある程度乾燥させる工程とを具える。
【０１０８】
乾いたキセロゲル又は被膜マトリックスは、当業者に公知の方法に従って凍結乾燥法又は対流乾燥法によりヒドロゲルから得ることができる。好ましい実施形態では、乾いたキセロゲルを蒸発乾燥法、好ましくは風乾、真空乾燥又は対流乾燥によってヒドロゲルから形成する。
【０１０９】
続いて、キセロゲルを再水和させて、適当な放出運動性を達成するヒドロゲルを形成し、同時に、高濃度の有効成分をガラクトマンナンマトリックスの放出側に組み込む。
【０１１０】
最後に、対象部位への後の適用のため、ヒドロゲルをある程度乾燥させる。
【０１１１】
本発明の特定の実施形態では、ヒドロゲルが、ガラクトマンナンのマトリックス中に又はその表面に組み込まれた細胞を更に含む。細胞の組み込みは、この生体材料が損傷した組織に存在するものと同じ種類の健常な細胞を含有するため、高度に損傷したか又は患者由来の現場の細胞貢献の可能性が無い組織において、ヒドロゲルの再生活性及び組織修復過程を高める。
【０１１２】
好ましくは、ヒドロゲルに組み込まれる細胞を、線維芽細胞、ケラチノサイト、内皮細胞、分化又は未分化の間葉幹細胞、角膜細胞、上皮細胞、白血球系由来の細胞、造血系由来の細胞、分化又は未分化の幹細胞、軟骨形成細胞、骨芽細胞、筋細胞、脂肪細胞、及び末梢若しくは中枢神経系由来の神経又は他の細胞からなる群より選択する。
【０１１３】
本発明の特定の実施形態では、ヒドロゲルを創傷被覆材に組み込む。従って、本発明の別の態様は、本発明のヒドロゲルを具えた創傷被覆材に関する。創傷被覆材は、好ましくはシート形状であり、本発明のヒドロゲルの活性層を具える。活性層は通常使用にあたって創傷接触層となるが、幾つかの実施形態では、液体浸透性の表面シートによって活性層を創傷から離すことができる。
【０１１４】
創傷被覆材は他の成分を含んでもよい。例えば、創傷被覆材材料の浸透性を低減するため、水分損失制御剤を加えてもよい。創傷被覆材材料の浸透性の低減は、創傷からの体液の損失を制御する。好ましい水分損失制御剤は、糖脂質、セラミド、遊離脂肪酸、コレステロール、トリグリセリド、ステアリルエステル及びシリコーン油である。
【０１１５】
必要に応じて、可塑剤を創傷被覆材に加えてもよい。目下好ましい可塑剤はグリセロール及び水であるが、プロピレングリコール及びブタノールも用いることができる。
【０１１６】
必要に応じて、水和制御剤を創傷被覆材に組み込んでもよい。好ましい水和制御剤はイソプロピルアルコールであるが、エタノール、グリセロール、ブタノール及びプロピレングリコールも用いることができる。
【０１１７】
好ましくは、創傷被覆材が、活性層の創傷対面側と逆の活性層上に広がる裏打ちシートを更に具える。好ましくは、辺縁部が活性層の周囲に広がって、いわゆる島状被覆材を形成するように、裏打ちシートが活性層より広い。このような場合、裏打ちシートを、少なくともその辺縁部において感圧医療グレード接着剤でコーティングするのが好ましい。
【０１１８】
好ましくは、裏打ちシートが、水蒸気に対して浸透性であるが、液体水又は創傷滲出液に対しては浸透性でない。好ましくは、裏打ちシートが微生物不浸透性でもある。これは、創傷を取り囲む皮膚をふやかすことなく、被覆材材料の下の創傷が湿潤条件下で治癒することを可能にする。  
【０１１９】
裏打ちシートを形成するのに適するポリマーとしては、独国特許出願公開第１２８０６３１号に開示されるようなポリウレタン、ポリアルコキシアルキルアクリレート及びポリアルコキシアルキルメタクリレートが挙げられる。
【０１２０】
接着剤（存在する場合）層は、水蒸気透過性である及び／又はそれによる水蒸気の通過を可能にするように作られるべきである。接着剤層は、好ましくは、例えば、独国特許出願公開第１２８０６３１号で開示されるようなアクリレートエステルコポリマー、ポリビニルエチルエーテル及びポリウレタンに基づく感圧接着剤といった、島状型の創傷被覆材に通常用いられる種類の連続的水蒸気透過性の感圧接着剤層である。
【０１２１】
被覆剤の創傷接面を、好ましくは取り外し可能なカバーシートにより保護する。カバーシートは通常、可撓性の熱可塑性材料から形成される。適切な材料としてはポリエステル及びポリオレフィンが挙げられる。好ましくは、カバーシートの接着剤接面が放出表面である。つまり、表面が活性層及び裏打ちシート上の接着剤に対して弱く付着するのみで、カバーシートからの接着剤層の剥離を助ける。例えば、カバーシートは、フルオロポリマーのような非接着性プラスチックから形成してもよく、又はシリコーン若しくはフルオロポリマー放出コーティングのような放出コーティングを設けてもよい。
【０１２２】
典型的に、本発明の創傷被覆材は無菌であり微生物不浸透性容器に包装される。
【０１２３】
従って、本発明のヒドロゲルは、体液及び分泌物の制御及び管理が所望される場合、負傷した組織上で体液排液法に用いることができる。「体液」という用語は、限定しないが、唾液、歯肉分泌物、脳脊髄液、胃腸液、粘液、泌尿生殖器分泌物、滑液、血液、血清、血漿、尿、嚢胞液、リンパ液、腹水、胸水、間質液、細胞内液、眼液、精液、乳腺分泌物、硝子体液及び鼻汁を包含する。
【０１２４】
特に、ヒドロゲルが好ましくは、蓄積している滲出水分の制御、創傷床及び周囲の組織の支持のため、滲出している急性及び慢性の創傷上での使用に適用可能である。
【０１２５】
従って、追加の態様において、本発明は、急性の外科的創傷及び外傷性創傷、火傷、湯傷、瘻孔、静脈潰瘍、動脈潰瘍、褥瘡（あるいは褥瘡性潰瘍として知られる）、糖尿病性潰瘍、複数の病因による潰瘍、その他の慢性若しくは壊死性創傷、並びにその他の炎症性の病変及び障害の治療並びに／又は治癒に使用するための本発明のヒドロゲルを提供する。
【０１２６】
本発明のヒドロゲルは、感染性創傷及び非感染性創傷（つまり、感染の臨床的兆候を示さない創傷）の両方の処置用に意図する。好ましくは、創傷が慢性又は壊死性創傷である。より好ましくは、慢性創傷が、静脈潰瘍、動脈潰瘍、複数の病因による潰瘍、褥瘡性潰瘍又は糖尿病性潰瘍からなる群より選択される。好ましくは、ヒドロゲルを、創傷環境における酸化ストレスを低減することによって創傷治癒を促進する抗酸化剤として用いる。
【０１２７】
使用にあたり、ヒドロゲル又はそれを含有する創傷被覆材を、創傷床に直接接触させて置く。必要に応じて、ヒドロゲルを上述したような創傷被覆材でその位置に固定してもよい。必要ならば、創傷被覆材及びヒドロゲルを取り外すことにより、蓄積した壊死組織及び滲出物を取り除く。ヒドロゲルを新鮮なヒドロゲル及び他の適切な創傷被覆材によって置き換えてもよい。
【０１２８】
ヒドロゲルは、滲出水分を吸収するときに膨潤作用を受ける場合があるが、溶解しないであろう。膨潤作用は、創傷表面から壊死物質を移動させ、壊死物質をヒドロゲルのマトリックス中に押し込む。水分を多く含む内容物及びヒドロゲルにより創傷床付近に保持された水分は、自己融解デブリードマン過程の刺激に寄与することにより、身体自体の酵素が壊死組織及び細胞残屑を分解する。
【０１２９】
本発明の別の態様は、ガラクトマンナンとＮ−アセチルシステインとを含む化粧品組成物に関する。
【０１３０】
該化粧品組成物は、ガラクトマンナンとＮ−アセチルシステインとの組み合わせを含み、局所投与用のゲル、クリーム、軟膏若しくはバームの形態である、あらゆる液状組成物又は組成物を包含する。該組成物は、いかなる美容上の関連する活性分子を有さない場合でも、皮膚軟化特性、保護特性及び治癒特性を有することで特徴付けられる。
【０１３１】
本発明の変型では、化粧品組成物が活性分子を組み込んでもよいが、活性分子は、いかなる治療効果も有さず、化粧品薬剤としての特性を有する。抗酸化組成物中に組み込むことができる活性分子の中では、皮膚軟化剤、保存剤、芳香物質、抗ニキビ剤、抗真菌剤、抗酸化剤、デオドラント、制汗剤、フケ防止剤、脱色剤、抗脂漏薬、色素、日焼けローション、ＵＶ光吸収剤、酵素、芳香物質等を挙げることができる。
【０１３２】
化粧品組成物は、組成物のｐＨが５より下の値に下がるのを避ける、例えば緩衝剤などのｐＨ制御剤や、組成物中の重大な構造的変化を避ける保存剤を更に含んでもよい。当業者は、必要ならば、どの付加成分を使用できるか決定することができ、多くの付加成分が化粧品組成物で慣用されている。
【０１３３】
本発明の化粧品組成物は加齢性皮膚損傷の処置に用いることができる。
【０１３４】
加齢性皮膚損傷は、酸素フリーラジカルによって引き起こされる損傷に大抵起因する内因性老化及び／若しくは外因性老化に関連する、それらにより引き起こされる、又はそれらにより影響される皮膚のあらゆる状態又は障害を指す。酸素フリーラジカルは、細胞に損傷を与え、加齢性疾患を促進すると考えられる。加齢性皮膚損傷は、長年の日焼けによる損傷、栄養不足、高いストレスレベル、環境汚染への曝露、並びに喫煙、アルコール又は薬物の乱用のようなある種の生活様式の選択肢によっても引き起こされ得る。
【０１３５】
加齢性皮膚状態は、例えば、しわ、しみ、日焼けによる損傷（特に、ＵＶ放射誘導性酸化ストレス）、傷、色素過剰な皮膚、皮膚の厚みの増加、皮膚の弾性及びコラーゲン含量の低下、並びに／又は乾燥肌に関し得る。
【０１３６】
別の態様では、本発明は、上記化粧品組成物のＵＶ放射保護剤としての使用に関する。
【０１３７】
本発明は、本発明の範囲に制限を課すものと決して解釈すべきでない下記実施例によって更に説明される。
【実施例】
【０１３８】
［実施例１：ＮＡＣ及びターメリックの限界濃度の見積もり］
Ｎ−アセチルシステイン（ＮＡＣ）、ローカストビーンガム（ＬＢＧ）及びクルクミン（ターメリック又はＴｕｒ）はシグマ社から購入した。
【０１３９】
ヒト線維芽細胞の生体外の細胞毒性及び増殖アッセイの後に、ＮＡＣ及びターメリックの使用における限界濃度をＮＡＣについて０．５ｍＭ〜２０ｍＭの範囲内、ターメリックについて０．５μＭ〜５０μＭの範囲内と評価した。  
【０１４０】
ＭＴＴ比色分析法（ロシュ社、製品番号１１４６５００７００１）を用いて、増殖アッセイを行った。ＭＴＴは活性細胞内でホルマザン結晶を形成する黄色のテトラゾリウム塩である。ホルマザン結晶を可溶化して、生じた色を分光光度法により５５０ｎｍで定量した。
【０１４１】
線維芽細胞を９６ウェルプレートに１ウェルあたり４０００細胞の密度で播種した。この細胞を培養ストーブ内で３７℃にて維持した。翌日、１ウェルあたり２００μＬの容量を用いてＮＡＣ及びターメリックの処理剤を細胞培養物に加えた。細胞培養物を放置して２４時間、４８時間及び７２時間インキュベートした。
【０１４２】
各インキュベーション時間の後、２０μＬのＭＴＴ（０．５ｍｇ／ｍＬの最終濃度）を各ウェルに加えた。ホルマザン結晶を形成させるため、このプレートを培養ストーブ内で４時間維持した。続いて、１００μＬの可溶化剤を各ウェルに加え、プレートを翌日まで培養ストーブ内に放置した。次いで、５５０ｎｍでの吸光度のデータを測定した。
【０１４３】
図１ａ及び２ａは、異なる濃度のＮＡＣ及びターメリックを用いた、ＭＴＴ比色分析法による細胞毒性及び増殖アッセイの結果を示す。
【０１４４】
各成分のＩＣ５０、すなわち、コントロールに対して５０％細胞死を引き起こす濃度を毒性限界として評価した（図１ｂ及び２ｂ）。
【０１４５】
ＮＡＣの場合には、研究したいずれの濃度も７２時間でＩＣ５０に達しなかったが、１０ｍＭ及び２０ｍＭの濃度はコントロールに対して細胞増殖を次第に低下させた。ＮＡＣ濃度の上限を１０ｍＭと評価した。実験で得られた結果に基づき、線維芽細胞の増殖速度の向上をもたらしたことから１ｍＭ及び５ｍＭのＮＡＣ濃度を選択した。
【０１４６】
ターメリック濃度の上限の研究の場合、２０μＭ及び５０μＭの濃度が最初の２４時間からＩＣ５０限界を超える毒性を有することが観察された。１０μＭの濃度は７２時間で限界を超え、７．５μＭの濃度は７２時間でＩＣ５０に達する。従って、７．５μＭの濃度を混合物におけるターメリックの使用の上限として評価することができる。
【０１４７】
毒性効果が全く観察されなかったことから、１μＭ及び５μＭのターメリック濃度を実験のために選択した。
【０１４８】
［実施例２：ヒト線維芽細胞の生存率に対する本発明の組成物の成分及びそれらの組み合わせの効果］
このアッセイの目的は、ＬＢＧ、ＮＡＣ、ターメリック及びそれらの組み合わせによって引き起こされる、創傷床における細胞の生存能力のような、悪環境における細胞の生存能力に対する効果を決定することである。
【０１４９】
そのため、線維芽細胞を、過酸化水素を用いた酸化環境に１時間さらし、ＬＢＧ、ＮＡＣ、ターメリック及びそれらの組み合わせと接触させておいた。上記のＭＴＴ比色分析法により、培養物中の線維芽細胞の細胞生存率を分析した。
【０１５０】
［アッセイのための細胞播種］
アッセイの前日、線維芽細胞を９６ウェルプレートに１ウェルあたり１１５００細胞の密度で播種した。全てのアッセイを３連で行った。
【０１５１】
［アッセイ］
処理剤は実験の当日に調製し、過酸化水素はアッセイの直前に加えた。
【０１５２】
（１％ローカストビーンガムを含む通常細胞増殖培地の調製）
蒸留水に１％のローカストビーンガムを含む溶液を調製し、該ガムの溶解が完了するまで１００℃を超えて加熱した。次いで、その溶液を２０分間４０００ｒｐｍで遠心分離し、混合物から不純物を除去した。そのローカストビーンガムの溶液を凍結乾燥させた。その凍結乾燥物を細胞増殖培地（ＤＭＥＭ＋１０％ＦＢＳ）中に１％の濃度で溶解させた。
【０１５３】
（ＮＡＣ及びクルクミン処理剤並びに過酸化水素の調製）
ＮＡＣ及びクルクミン処理剤と過酸化水素とをアッセイの開始直前に調製した。クルクミンストックを調製するため、利用可能なターメリックバッチの純度を知り、計算を再調整して必要な濃度を加えることが必要である。
【０１５４】
処理剤と過酸化水素とを同時に加えて放置し１時間インキュベートした。
【０１５５】
インキュベーションの後、処理剤を細胞及び通常増殖培地から除去し、１０％のＭＴＴを加えた。可溶化剤を４時間後に加えた。
【０１５６】
次いで、５５０ｎｍでの吸光度のデータを測定した。
【０１５７】
成分の組み合わせの相乗効果又は相加効果を研究するため、特別にデザインした式を適用することにより結果を分析して、これらのパラメータを研究した。
【０１５８】
Ａ．組み合わせ係数（ＣＦ）と呼ぶ、用量修飾係数（ＤＭＦ）の改変式
元の式は、単独で及び組み合わせて投与された２種の薬物によって引き起こされる細胞阻害の比率をデータとして扱い、用量修飾係数を分析する（Ｔｈｒａｌｌ ＢＤ ｅｔ ａｌ. Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ ｍｕｒｉｎｅ ｍｅｌａｎｏｃｙｔｅｓ ａｎｄ ｍｅｌａｎｏｍａ ｃｅｌｌｓ ｔｏ ｂｕｔｈｉｏｎｉｎｅ ｓｕｌｆｏｘｉｍｉｎｅ ａｎｄ ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ ｄｒｕｇｓ. Ｃｅｌｌ. Ｒｅｓ. １９９１；４：２３７−９）。前記式は、我々の研究グループの後続の国際論文で用いられ発表されている。
【０１５９】
ここに提示する式は、酸化コントロールに対する生存細胞の比率の増加を基準として、上で示した式から改変されており、下記の通りである。    
【数１】
2013533234.tif 000003
【数２】
2013533234.tif 000004
【０１６０】
Ｂ．複合指数（ＣＩ）と呼ぶオリジナル式
ここで提示する式は、本願明細書の著者の１人（Ｔ．Ｐａｌｏｍａｒｅｓ）のオリジナル式であり、酸化コントロールの生存細胞の数を差し引くことによって、元の細胞の数について、単独の又は他のものと組み合わせた薬剤の存在下での生存細胞の比率を分析する。このように、処理せず且つ酸化剤に曝露しなかった細胞に対する生存細胞の数の増加を分析する。その式は下記の通りである。
【数３】
2013533234.tif 000005
Ｃｏｘ：酸化コントロール
Ｃｓ：酸化を行わない最初のコントロールに対する生存細胞
【０１６１】
両方の式において、１より大きい値は相乗効果を示し（有意性が高くなるにつれて前記値は大きくなる）、１より小さい値は相加効果を示し、より高い値を有するにつれて１に近づく。
【０１６２】
適当な数値検証が行われると、両方の式で同一の結果が得られる。
【０１６３】
細胞を酸化環境（１ｍＭのＨ２Ｏ２）にさらして１％のＬＢＧ、１ｍＭのＮＡＣ、１ｍＭのターメリック及びそれらの組み合わせで処理した実験の分析に相当する結果を図３に示す。実験データは酸化１時間後に得た。これらのデータは、ＬＢＧ＋ＮＡＣ＋Ｔｕｒの３剤の組み合わせがコントロールのレベルに達する最高の保護効果を生じることを示す。ＬＢＧ＋ＮＡＣの組み合わせも、酸化コントロールに対して、またＬＢＧ処理、ＮＡＣ処理、Ｔｕｒ処理、ＬＢＧ＋Ｔｕｒ処理及びＮＡＣ＋Ｔｕｒ処理に対して細胞生存率を高めた。
【０１６４】
表１は、非酸化コントロール群に対する、酸化ストレスにさらした細胞の生存率を示す。
【０１６５】
【表１】
2013533234.tif 000006
【０１６６】
表２は、式Ａ及びＢを適用することによって得られた指数を示し、ＬＢＧ＋ＮＡＣの組み合わせ及びＬＢＧ＋ＮＡＣ＋ターメリックの３剤の組み合わせで相乗効果があると結論付けられる。
【０１６７】
【表２】
2013533234.tif 000007
【０１６８】
結果は、ＬＢＧと、ＮＡＣ又はＮＡＣ＋Ｔｕｒのどちらかとの組み合わせが、酸化ストレス状況下で細胞生存率の上昇に相乗効果を引き起こすことを指し示している。しかしながら、ＬＢＧ＋Ｔｕｒの組み合わせ及びＮＡＣ＋Ｔｕｒの組み合わせは、予測した相加効果を生じた。
【０１６９】
最も著しい保護効果の分析は、３剤の組み合わせが最大の保護効果（１００％の生存細胞）をもたらすことを示す。３剤の組み合わせはＬＢＧ＋ＮＡＣでの処理（７７．７７％）よりも１．３倍大きな効果を示す。
【０１７０】
［実施例３：酸化環境にさらされたヒト線維芽細胞で発生した活性酸素代謝物の低減に対する、本発明の組成物の成分の単独で又は組み合わせでの効果］
活性酸素代謝物（ＲＯＭ）の増加は、創傷の治癒を妨げる主な原因の一つである。この影響は、細胞の増殖能力の喪失と、形成される新たな皮膚マトリックスを分解し治癒を妨げるメタロプロテアーゼの発現の増加とに寄与する。
【０１７１】
ＬＢＧ、ＮＡＣ及びターメリックのＲＯＭ低減又は抗酸化能力を定量するため、線維芽細胞培養物の高濃度の過酸化水素での酸化に際して発生したＲＯＭの生成を測定した。
【０１７２】
蛍光プローブ２’,７’−ジクロロフルオレセインジアセテート（分子プローブＤ３９９）で標識することによって、細胞内ＲＯＭを定量した。このプローブは、活性酸素代謝物で酸化された場合、５３８ｎｍで蛍光を放射することができる。細胞の酸化は１ｍＭの過酸化水素で行った。
【０１７３】
［アッセイのための細胞播種］
アッセイの前日、線維芽細胞を９６ウェルプレートに１ウェルあたり１１５００細胞の密度で播種した。全てのアッセイを３連で行った。
【０１７４】
［アッセイ］
処理剤は実験の当日に調製し、過酸化水素はアッセイ直前に加えた。
【０１７５】
（１％ローカストビーンガムを含む通常細胞増殖培地の調製）
蒸留水に１％のローカストビーンガムを含む溶液を調製し、該ガムの溶解が完了するまで１００℃を超えて加熱した。
【０１７６】
次いで、その溶液を２０分間４０００ｒｐｍで遠心分離して、混合物から不純物を除去した。そのローカストビーンガムの溶液を凍結乾燥させた。その凍結乾燥物を細胞増殖培地（ＤＭＥＭ＋１０％ＦＢＳ）に１％の濃度で溶解させた。
【０１７７】
（蛍光プローブでの細胞の標識）
処理剤及び過酸化水素を加える前に、細胞を暗闇の中５０μＭの濃度の蛍光プローブで３０分間標識した。
【０１７８】
（ＮＡＣ及びターメリック処理剤の調製並びに過酸化水素の調製）
ＮＡＣ及びターメリック処理剤と過酸化水素とをアッセイの開始直前に調製した。ターメリックストックを調製するため、利用可能なターメリックバッチの純度を知り、計算を再調整して必要な濃度を加えることが必要である。
【０１７９】
細胞を標識した後、抗酸化処理剤と過酸化水素とを加えた。
【０１８０】
酸化の開始２０分後に、プローブにより５３８ｎｍで放射された蛍光を収集した。
【０１８１】
図４は、プローブ２’,７’−ジクロロフルオレセインジアセテートでの標識で得られた蛍光単位により、１ｍＭのＨ２Ｏ２を用いた酸化環境にさらされた線維芽細胞の細胞内ＲＯＭレベルと、線維芽細胞をまた１％のＬＢＧ、５ｍＭのＮＡＣ、５μＭのターメリック及びそれらの組み合わせと接触させてもおいた場合の細胞内ＲＯＭレベルとを示す。  
【０１８２】
表３は、細胞を１ｍＭの過酸化水素にさらし且つ本発明の組成物の成分と接触させた場合の、酸化コントロールに対するＲＯＭの低減率のデータを示す。
【０１８３】
【表３】
2013533234.tif 000008
【０１８４】
観察できるように、ＬＢＧ、ＮＡＣ、ターメリック及びそれらの組み合わせと接触させた細胞における細胞内ＲＯＭレベルが有意に低減する。
【０１８５】
ＬＢＧの溶液へのＮＡＣの添加は、ＬＢＧ単独に対して細胞内ＲＯＭレベルの著しい低減を引き起こす。
【０１８６】
しかしながら、ＬＢＧ＋ＮＡＣ＋Ｔｕｒの３剤の組み合わせは、コントロール群（酸化せず）のものと同様に、細胞内ＲＯＭレベルの低減に関して最高の利益をもたらす。
【０１８７】
異なる成分の組み合わせの相乗効果又は相加効果を検証するため、実施例２で述べた式Ａ及びＢを適用することによって、結果を分析した。しかしながら、この場合では、細胞内ＲＯＭレベルの低減を酸化コントロールに対する基準とした。
【０１８８】
その結果を表４に示す。
【０１８９】
【表４】
2013533234.tif 000009
【０１９０】
式Ａ及びＢの適用は、細胞内ＲＯＳ低減に関して、ＬＢＧ＋ＮＡＣの組み合わせ及びＬＢＧ＋ＮＡＣ＋Ｔｕｒの組み合わせによって相乗効果が生じ、一方でＬＢＧ＋ＮＡＣの組み合わせ及びＮＡＣ＋Ｔｕｒの組み合わせが相加効果を生じたことを明らかに示す。
【０１９１】
［実施例４：Ｎ−アセチルシステインが組み込まれたローカストビーンガムのヒドロゲルの調製］
秤量したローカストビーンガムを蒸留水に分散させて、１〜５ｗｔ％のローカストビーンガムを含有する溶液を作った。ヒドロゲルの合成を促すため、ローカストビーンガムの水酸基をプロトン化する目的で、ｐＨ２を得るまで硫酸を溶液に加えた。この溶液を室温で２〜３時間撹拌し、続いて、温度を１００〜１２０℃まで上昇させた。この温度で、この溶液を少なくとも３０分間撹拌した。
【０１９２】
混合物中の不純物を除去するため、この溶液を２０分間４０００ｒｐｍで遠心分離した。こうして、純粋なローカストビーンガム溶液が上清に存在し、不純物がペレット状に沈殿する。
【０１９３】
架橋剤としてグルタルアルデヒドを用いて、ローカストビーンガム溶液に化学架橋工程を行った。この目的のため、グルタルアルデヒドをローカストビーンガムの溶液に少なくとも３０分間撹拌しながら加えた。グルタルアルデヒドの量は、所望するヒドロゲルの最終特性に左右される。Ｎ−アセチルシステインの迅速な送達を必要とする場合、低い架橋度を得るために、少ない量の架橋剤をローカストビーンガムの溶液に加える。反対に、Ｎ−アセチルシステインの送達時間の増加を必要とする場合、高い架橋度を得るために、多い量の架橋剤をローカストビーンガムの溶液に加える。図５ａ〜５ｄは、架橋剤の濃度を０重量％から２．５重量％まで増やしたときの３重量％のローカストビーンガムのヒドロゲルの空隙率の度合いの増加を示す走査電子顕微鏡（ＳＥＭ）で撮影した写真に相当する。
【０１９４】
ローカストビーンガムとグルタルアルデヒドとの混合物をペトリ皿の上に置いた。架橋反応を３７℃で行った。
【０１９５】
ヒドロゲルが形成したら、未反応のグルタルアルデヒドを除去するために、５％の硫酸水素ナトリウム（シグマ社製品番号１３４３８）で洗浄し、次いで蒸留水で洗浄した。続いて、ヒドロゲルを６５℃のオーブン中で乾燥させて、キセロゲルを形成させた。
【０１９６】
Ｎ−アセチルシステインをローカストビーンガムの構造体中に組み込むため、Ｎ−アセチルシステインとＰＢＳとの飽和溶液中へ導入することによって、キセロゲルを再水和させた。最後に、得られたヒドロゲルをその後の使用のため、ある程度乾燥させた。
【０１９７】
［実施例５：ブタ皮膚における創傷治癒過程に対する、ＬＢＧ、ＬＢＧ＋ＮＡＣ及びＬＢＧ＋ＮＡＣ＋Ｔｕｒを含有するヒドロゲルの効果の評価］
２５〜３５ｋｇの体重の４頭の雌ブタを選んだ。処置を開始する前に、動物に１週間の馴化期間を受けさせた。
【０１９８】
手術前に、動物をアザペロン（４ｍｇ／ｋｇ）＋ケタミン（１０ｍｇ／ｋｇ）の筋肉注射で鎮静させて気管内に挿管し、ブプレノルフィン（０．０１ｍｇ／ｋｇ）の静脈注射で鎮痛を誘導した。プロポフォール（４ｍｇ／ｋｇ）、イソフルラン（１．５〜２％、酸素）で麻酔を導入し維持した。セファロチン（２２ｍｇ／ｋｇ）の静脈注射で術前抗生物質治療を行った。
【０１９９】
それぞれのブタの背の領域に４箇所の皮膚損傷を外科的に形成した。３つの異なる生体材料マトリックスの組み合わせ（ＬＢＧ、ＬＢＧ＋ＮＡＣ、ＬＢＧ＋ＮＡＣ＋Ｔｕｒ）を４箇所の損傷のうち３箇所に施し、コントロールの損傷に生理食塩水を施した。創傷を清潔にして被覆材を変える場合、被覆材を３日毎に取替えた。
【０２００】
術後期間に、実験全体について、組織治癒の顕微鏡的評価を行った。損傷形成５日後、１０日後及び１５日後に、組織学的評価用の生検材料を得た。全ての皮膚生検試料を、組織学的研究のために、１０％中性緩衝ホルマリン中で固定し、通常通り処理して、ヘマトキシリン及びエオシン（Ｈ＆Ｅ）で染色した。処置領域及びコントロール領域で組織学的評価を行った。表皮の再上皮化、皮膚の炎症の存在、並びに肉芽組織形成及び化膿の段階のようなパラメータを評価した。
【０２０１】
この結果は、主としてＬＢＧ＋ＮＡＣ処置した損傷及びＬＢＧ＋ＮＡＣ＋Ｔｕｒ処置した損傷で、初期の数日からより速い進展を示す。更に、顕微鏡分析は、コントロールの損傷に対し、この組織の肉芽組織形成及び化膿における改善を示した。
【０２０２】
図６は、処置群で新たな組織形成の増加を観察できるが、ＬＢＧ＋ＮＡＣ＋Ｔｕｒで処置した群で特に観察できる、１０日間の進展の生検の顕微鏡図を示す。
【０２０３】
該３群で創傷表面の算定を行って、該３群で創傷閉鎖能力の向上が示された。しかしながら、この効果はＬＮＧ＋ＮＡＣ群で増し、ＬＢＧ＋ＮＡＣ＋Ｔｕｒ群でより高い効果が観察された。
【０２０４】
表５は、異なる処置群で見積もった損傷面積と、これらの群により提示された損傷低減能力を示す指数とを示す。該指数は、ＬＢＧ＋ＮＡＣ＋Ｔｕｒ処置により高い効果が達成されたことも示す。
【０２０５】
【表５】
2013533234.tif 000010
【０２０６】
図７は、ＬＢＧ＋ＮＡＣでの処置及びＬＢＧ＋ＮＡＣ＋Ｔｕｒでの処置を確立されたコラーゲン処置と比較した３日間の進展の写真を示す。観察できるように、コントロール群及びコラーゲン処置群に対してＬＢＧ＋ＮＡＣ群とＬＢＧ＋ＮＡＣ＋Ｔｕｒ群の両方で損傷面積が減少し、更にＬＢＧ＋ＮＡＣ＋Ｔｕｒは、より大きな面積の減少と最上級の治癒過程を提示した。
【図１】
2013533234.tif 000011
【図２】
2013533234.tif 000012
【図３】
2013533234.tif 000013
【図４】
2013533234.tif 000014
【図５（ａ）】
2013533234.tif 000015
【図５（ｂ）】
2013533234.tif 000016
【図５（ｃ）】
2013533234.tif 000017
【図５（ｄ）】
2013533234.tif 000018
【図６】
2013533234.tif 000019
【図７】
2013533234.tif 000020
【手続補正書】
【提出日】平成25年2月25日(2013.2.25)
【手続補正１】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図５】
2013533234.tif 000021
【国際調査報告】
2013533234.tif 000022
2013533234.tif 000023
2013533234.tif 000024
2013533234.tif 000025
2013533234.tif 000026
2013533234.tif 000027