(57)【要約】  本発明は、疾患の治療及び予防に有用な新規化合物に関する。Ｘがハロゲンであり、独立して塩素及びフッ素から選択され、ｎが０、１又は２である式（Ｉ）の化合物及び薬学上許容可能なその塩は、ミクログリアの活性化が原因となる疾患、特にアルツハイマー病の治療及び予防に有用である。  【化１】2013507339.tif 000017【選択図】なし
2013507339.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の化合物又は薬学上許容可能なその塩：
【化１】
2013507339.tif 000015
（式中、Ｘはハロゲンであり、フッ素及び塩素から選択され、ｎは０、１又は２である）。
【請求項２】
Ｘがフッ素である請求項１に記載の化合物又は薬学上許容可能なその塩。
【請求項３】
ｎが１又は２である請求項１又は２のいずれかに記載の化合物又は薬学上許容可能なその塩。
【請求項４】
ｎが０である請求項１又は２のいずれかに記載の化合物又は薬学上許容可能なその塩。
【請求項５】
Ｘが、３位、４位又は３位と４位にある請求項１〜３のいずれかに記載の化合物又は薬学上許容可能なその塩。
【請求項６】
Ｘが、４位又は３位と４位にある請求項５に記載の化合物又は薬学上許容可能なその塩。
【請求項７】
Ｘが、４位にある請求項５に記載の化合物又は薬学上許容可能なその塩。
【請求項８】
【化２】
2013507339.tif 000016
から成る群から選択される上記請求項のいずれかに記載の化合物又は薬学上許容可能なその塩。
【請求項９】
薬学上許容可能なキャリア又は希釈剤との組み合わせで式（Ｉ）の化合物又は薬学上許容可能なその塩を含む医薬組成物。
【請求項１０】
抗炎症性化合物（たとえば、ＮＳＡＩＤＳ）、アルツハイマー病の治療に好適な化合物（たとえば、β−アミロイド凝集阻害剤、γ−セクレターゼ阻害剤、γ−セクレターゼ調節剤、又はβ−セクレターゼ阻害剤）又はパーキンソン病の治療のための化合物から選択される１以上の化合物をさらに含む請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
同時に、逐次に、又は別々に使用するための１以上の追加の治療用化合物と一緒に請求項１に記載の化合物を含む組成物。
【請求項１２】
追加の治療用化合物が、抗炎症性化合物（たとえば、ＮＳＡＩＤＳ）、アルツハイマー病の治療に好適な化合物（たとえば、β−アミロイド凝集阻害剤、γ−セクレターゼ阻害剤、γ−セクレターゼ調節剤、又はβ−セクレターゼ阻害剤）又はパーキンソン病の治療のための化合物から選択される請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
治療法における請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物又は薬学上許容可能なその塩の使用。
【請求項１４】
それを必要とする患者に治療上有効な量の請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物又は薬学上許容可能なその塩を投与することを含む、ミクログリアの活性化が関与する疾患の治療方法。
【請求項１５】
ミクログリアの活性化が関与する疾患がアルツハイマー病である請求項１４に記載の治療方法。
【請求項１６】
ミクログリアの活性化が関与する疾患の治療のための薬物の製造における請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物又は薬学上許容可能なその塩の使用。
【請求項１７】
ミクログリアの活性化が関与する疾患がアルツハイマー病である請求項１６に記載の使用。
【請求項１８】
ミクログリアの活性化が関与する疾患の治療のための請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物又は薬学上許容可能なその塩
【請求項１９】
アルツハイマー病の治療のための請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物又は薬学上許容可能なその塩。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、疾患の治療と予防に有用な新規化合物に関する。特に、本発明は、特にその活性化がβ−アミロイドのようなアミロイドタンパク質によって引き起こされるミクログリアの活性化を原因とする疾患の治療と予防に有用な化合物を提供する。
【背景技術】
【０００２】
薬学上活性のある化合物の開発において、改善された活性（たとえば、標的部位にて又はモデル系において）を持つ化合物の提供は重要である。しかしながら、活性のある化合物が有用な薬物動態の、薬力学上の及び毒性学上の特性を有することも重要である。その結果として場合によっては、高い活性は、たとえば、生体利用効率、生体内での半減期、細胞透過性、代謝に対する適切な耐性、及び他の薬剤との有害な相互作用の低い可能性のようなそのほかの特性との釣り合いを保ち得る。有害な相互作用は、たとえば、薬剤の１つが代謝性酵素との相互作用を介して別の薬剤の代謝を遅らせる場合に生じ得る。従って、チトクロームＰ４５０、特に薬剤代謝に関与するものに対する低い親和性も重要である。このことは、治療される対象がさらなる薬剤によって治療される追加の症状に悩まされている場合特にそうである。
【０００３】
ＥＰ１４３３４８０は中枢神経系の疾患の治療についてあるのピリミジン誘導体の使用を開示している。Ｕｒｙｕら、（２００２）Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，９４６（２），２９８−３０６及びＵｒｙｕら、（２００３）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍ．，３０３（１），３０２−３０５は、双方とも、ＥＰ１４３３４８０で言及された化合物ＲＳ−１１７８を考察している。
【０００４】
ＵＳ４００７１８９は、降圧剤として有用であると言われるピロロトリアゾロピリミジン誘導体を記載している。ＪＰ５２１１６４９７は、血管拡張剤及び降圧剤として有用であると言われるトリアゾロピリミジンを記載している。Ｙ．Ｓａｔｏら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．（１９８０），２３，９２７−９３７は、血管拡張剤として有用であると言われる複素環系に融合した１，２，４−トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジンを記載している。ＥＰ３４７２５２は、悪液質の治療に有用なトリアゾロ−及びピラゾロピロロピリミジンを記載している。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、ＥＰ１４３３４８０には開示されていない、マクロファージの活性化の強力な阻害剤であり、疾患の治療にて医薬有効成分として有用であり、従来技術の化合物と比べて改善された特性を提供する式（Ｉ）の特定の新規化合物を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
従って、本発明の第１の態様は、式（Ｉ）の化合物又は薬学上許容可能なその塩を提供し、
【化１】
2013507339.tif 000003
式中、Ｘはハロゲンであり、独立して塩素及びフッ素から選択され、
ｎは、０、１又は２である。
好ましくは、Ｘはフッ素である。ハロゲンＸは存在する場合、好ましくは３位、４位又は３位と４位にあり；好ましくは存在する場合、４位又は３位と４位にあり、最も好ましくは４位にある。好ましくは、ｎは０又は１のいずれかであり、特に１である。
【０００７】
本発明の好まれる化合物は、
【化２】
2013507339.tif 000004
である。
【０００８】
特に好ましいのは、以下の化合物１、２及び３であり、最も好ましくは化合物１及び２である。
【化３】
2013507339.tif 000005
【０００９】
好まれる薬学上許容可能な塩には、たとえば、塩酸、硫酸、リン酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、のような強酸、特に塩酸及びメタンスルホン酸と形成されるものが挙げられる。
【００１０】
本発明の第２の実施形態は、治療法における式（Ｉ）の化合物又は薬学上許容可能なその塩の使用を提供する。
【００１１】
式（Ｉ）の化合物は、リポ多糖類及びザイモサンが作用する（ＥＰ１４３３４８０）ものとは異なる経路を介した、試験管内でのマクロファージの活性化の強力な阻害剤である。この系をミクログリア活性化のモデルとして用いる（Uryu et al (2002) Brain
Research, 946(2), 298-306）。従って、本発明の化合物は、ミクログリアの活性化が役割を担う状態にて有用である。ミクログリアの活性化は、多数の哺乳類の神経変性状態、特に、アルツハイマー病、パーキンソン病（たとえば、Teisman and Schulz 2004）、ハンチントン舞踏病（たとえば、Bonifati and Kishore 2006）及びピック病（たとえば、Schofield et al 2003）で提案されている。式（Ｉ）の化合物は特に、アミロイドタンパク質によるマクロファージの活性化の阻害剤であることが示されているので、活性化がアミロイドタンパク質によって誘導される状態、特にパーキンソン病及びアルツハイマー病で特に有用である。
【００１２】
本発明の化合物は、組成物へのさらなる成分なしで使用されてよく、換言すれば、組成物は本質的に本発明の化合物から成るが、一般に薬学上許容可能な組成物として使用され、それは、任意で１以上の薬学上許容可能なキャリア又は希釈剤を含む。化合物は一般に、無菌であり、発熱物質を含まない組成物で提供される。
【００１３】
たとえば、経口、直腸内、鼻内、局所又は非経口のような一般に使用される投与経路のいずれかに好適な製剤は、製薬学の技術で周知の方法によって調製されてもよい。これらは、溶液、懸濁液、錠剤、丸薬、カプセル剤、粉剤、徐放性製剤などの形態を取ってもよい。
【００１４】
本発明の化合物の好適な用量は、体重ｋｇ当たり０．１ｍｇの化合物〜１００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは１ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ、さらに好ましくは１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇである。
【００１５】
本発明の第３の実施形態は、好ましくは、薬学上許容可能なキャリア又は希釈剤との組み合わせで式（Ｉ）の化合物又は薬学上許容可能なその塩を含む医薬組成物を提供する。
【００１６】
加えて、本発明の化合物は、１以上の追加の治療用化合物と共に投与されてもよい。たとえば、神経変性疾患の発症を遅らせることが示されている１以上の抗炎症性化合物（たとえば、ＮＳＡＩＤＳ）；アルツハイマー病の治療に好適な１以上の化合物（たとえば、β−アミロイド凝集阻害剤、γ−セクレターゼ阻害剤、γ−セクレターゼ調節剤、又はβ−セクレターゼ阻害剤）；又はパーキンソン病の治療のための化合物。従って、本発明の医薬製剤はさらにそのような化合物を含むことができる。しかしながら、当然、そのような化合物を別々に、本発明の化合物と同時に、又は逐次に投与することが可能である。
【００１７】
従って、第４の態様では、本発明は、同時に、逐次に又は別々に使用するための１以上の追加の治療用化合物と一緒に本発明の化合物を含む組成物を提供する。１以上の追加の化合物は上記で議論した例から選択することができる。
【００１８】
本発明の第５の態様は、それを必要とする患者に治療上有用な量の式（Ｉ）の化合物又は薬学上許容可能なその塩を投与することを含む、ミクログリアの活性化が関与する（特にアミロイドタンパク質によってミクログリアが活性化される）疾患の治療方法を提供する。
【００１９】
本発明の第６の態様は、ミクログリアの活性化が関与する（特にアミロイドタンパク質によってミクログリアが活性化される）疾患の治療のための薬物の製造における式（Ｉ）の化合物又は薬学上許容可能なその塩の使用を提供する。
【００２０】
本発明の第７の態様は、ミクログリアの活性化が関与する（特にアミロイドタンパク質によってミクログリアが活性化される）疾患の治療のための式（Ｉ）の化合物又は薬学上許容可能なその塩を提供する。
【００２１】
以下の実施例、スキーム及び図の助けを借りて本発明をさらに説明する。本発明の範囲内にあるさらなる実施形態は、これらの観点で熟練者に明らかになるであろう。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
一般的な合成経路
Ｘ及びＹが独立してＨ、Ｃｌ又はＦである化合物の合成は、市販のトリフルオロメチルケトン（７）から出発するスキーム１に示す経路を介して容易に達成される。アルコール（８）のトリフル酸塩（９）の２級アミン（１０）との反応はラセミ類似体を提供する。
【化４】
2013507339.tif 000006
キラル合成は、１−（Ｒ）−メチル−ＣＢＳ−オキサザボロリジン触媒又は１−（Ｓ）−ＣＢＳ−オキサザボロリジン触媒（それぞれスキーム２ａと２ｂ）と共にカテコールボランを用いて適当なトリフルオロメチルケトンのキラル還元を介して達成される。最終的なキラル精製はＣＨＩＲＡＬＰＡＫ（登録商標）ＡＤ−Ｈ  ＨＰＬＣを用いた最終工程の後達成され、高いエナンチオマー過剰（ｅｅ）の物質が得られる。
【化５】
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【化６】
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合成実施例
【００２３】
実施例１．（Ｒ）−５−メチル−８−［２，２，２−トリフルオロ−１−フェニルエチル］−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピロロ［３，２ｅ］［１，２，４］−トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン［化合物１］
【化７】
2013507339.tif 000009
中間体（Ａ）はＹ．Ｓａｔｏら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．（１９８０）２３，９２７−９３７の方法によって合成されてもよい。
【００２４】
１．６−（２−ヒドロキシエチル）−５−メチル［１，２，４］トリアゾロ［１，５−α］ピリミジン−７（４Ｈ）−オン
ＩＭＳ（２．８Ｌ）にて３−アミノトリアゾール（３５０ｇ、４．１モル）とα−アセチル−γ−ブチロラクトン（５２４．８ｇ、４．１モル）の混合物を撹拌し、ＢＦ３．Ｅｔ２Ｏ（８５ｍＬ、０．６モル）を１５分間かけて加えた。常温で３日間撹拌した後、濾過によって固形物を回収し、濾紙上で乾燥させた。
１Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ）δ１３．６（１Ｈ，ｂｒ），１０．３７（１Ｈ，ｓ），８．４０（１Ｈ，ｓ），４．３０（２Ｈ，ｔ），２．８８（２Ｈ，ｔ）及び２．５０（３Ｈ，ｓ）
【００２５】
水（１．７Ｌ）にて固形物を撹拌し、トリエチルアミン（４２２ｍＬ、４．１モル）を加え、その後、固形物を溶解した。常温で２日間撹拌した後、酢酸（１当量、９０ｍＬ）を加えた。混合物を１時間撹拌し、固形物を濾過し、濾紙上にて及び４０℃での真空下にて４時間乾燥させて、白色固形物、４３０ｇ、２．２モル（５４％）としてジヒドロキシ化合物を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ）δ８．１６（１Ｈ，ｓ），３．４８（２Ｈ，ｔ），２．６２（２Ｈ，ｔ）及び２．３６（３Ｈ，ｓ）．ＥＳ＋１９５（１００％），Ｍ＋Ｈ＋
【００２６】
２．７−クロロ−６−（２−クロロエチル）−５−メチル［１，２，４］トリアゾロ［１，５−α］ピリミジン
６−（２−ヒドロキシエチル）−５−メチル［１，２，４］トリアゾロ［１，５−α］ピリミジン−７（４Ｈ）−オン（１１１ｇ、０．５７モル）にＰＯＣｌ３（１３０ｍＬ）を一気に加え（発熱を生じる）、混合物を撹拌し、４０℃ずつ段階的に１２０℃に加熱した（７０〜８０℃にて固形物はすべて溶解した）。５時間後、加熱を止め、混合物を一晩冷却した。真空下で一部残留のＰＯＣｌ３を取り除き、残留物をよく撹拌した水（１Ｌ）に４０分かけて加えた。添加の際、温度が上昇したが、氷を定期的に加えて２５℃未満を保ち、注意して水の下にゴムが溜まるのを回避した。混合物を氷槽で冷却し、撹拌し、アンモニア水でｐＨを約７に合わせ、固形物を回収した。固形物をジクロロメタン（１５０ｍＬ）に入れ、分離した水を取り除き、固形物を濾過によって取り除き、有機溶液をＭｇＳＯ４上で乾燥させた。濃縮の後、シリカを介した真空下の溶出（溶離液：１．５〜２％のメタノール／ジクロロメタン）によって粗精製物質を精製して白色固形物（６２ｇ、０．２７モル）としてジクロロ化合物を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ）δ８．６６（１Ｈ，ｓ），３．９０（２Ｈ，ｔ），３．３３（２Ｈ，ｔ）及び２．７５（３Ｈ，ｓ）．ＥＳ＋２３１（１００％），Ｍ＋Ｈ＋
【００２７】
５−メチル−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピロロ［３，２−ｅ］［１，２，４］トリアゾロ［１，５−α］ピリミジン（１）
エタノール（７５ｍＬ）中の７−クロロ−６−（２−クロロエチル）−５−メチル［１，２，４］トリアゾロ［１，５−α］ピリミジン（３．５０ｇ、０．０１５モル）と塩酸アセトアミジン（１．４ｇ、０．０１５モル）と炭酸ナトリウム（４．８ｇ、０．０４５モル）の混合物を９０℃にて８時間加熱した。移動相としてジクロロメタン：メタノール（８：２）を用いたＴＬＣによって反応をモニターした。混合物を濾過し、濃縮した。溶離液としてジクロロメタン：メタノール（８：２）を用いたシリカ上のカラムクロマトグラフィによって粗生成物を精製し、黄色の固形物（１．３ｇ、４９％）として５−メチル−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピロロ［３，２−ｅ］［１，２，４］トリアゾロ［１，５−α］ピリミジンを得た。
Ｍａｓｓ：（ＥＳ＋）１７６（Ｍ＋Ｈ）＋
【００２８】
（Ｓ）−（＋）−１，１，１−トリフルオロ−２−ヒドロキシ−２−フェニルエタン、トリフル酸塩
ジクロロメタン（２ｍＬ）中の（Ｓ）−（＋）−１，１，１−トリフルオロ−２−ヒドロキシ−２−フェニルエタン（０．１８ｇ、１．０ミリモル、ｅｅ９７％）と２，６−ルチジン（０．２１ｇ、２ミリモル）の氷冷溶液に無水トリフルオロメタンスルホン酸（０．３０ｍＬ）、１．８ミリモル）を一滴ずつ加えた。冷却しながら混合物を１０分間撹拌し、ジエチルエーテルに注ぎ、塩酸水溶液（ｐＨ＝５）及びブラインで迅速に洗浄した。溶液を乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、加熱することなく減圧下で溶媒を除いた。不安定なピンクの油（０．５８ｇ）として粗精製のトリフル酸塩を得、直ちに次の工程で使用した。
【００２９】
（Ｒ）−５−メチル−８−［２，２，２−トリフルオロ−１−フェニルエチル］−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピロロ［３，２ｅ］［１，２，４］−トリアゾロ［１，５−α］ピリミジン
ＤＭＦ（４ｍＬ）中の水素化ナトリウム（鉱物油中６０％懸濁液、１７ｍｇ、０．４３ミリモル）の撹拌した懸濁液に５−メチル−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピロロ［３，２−ｅ］［１，２，４］トリアゾロ［１，５−α］ピリミジン（７５ｍｇ、０．４３ミリモル）を加えた。３０分後、トリフル酸塩（１９８ｍｇ、０．６４ミリモル）を加え、混合物を室温で一晩撹拌した。混合物を酢酸エチルで希釈し、水及びブラインで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、減圧下で溶媒を除いた。シリカゲルでのカラムクロマトグラフィ（酢酸エチル／メタノール）によって粗生成物を精製し、薄茶色の固形物（２４ｍｇ、１７％）として表題の化合物を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ２．４４（３Η，ｓ），３．０１−３．１２（１Η，ｍ），３．１６−３．２４（１Η，ｍ），３．６４（１Η，ｍ），４．０１−４．０８（１Η，ｍ），７．３８−７．４６（５Η，ｍ），７．６２（１Η，ｑ）及び８．３７（１Η，ｓ）．ＬＣＭＳ（ＥＳ＋）：３３４（ＭＨ＋，１００％）
【００３０】
実施例２．（Ｒ）−５−メチル−８−［２，２，２−トリフルオロ−１−（４−フルオロフェニル）エチル］−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピロロ［３，２ｅ］［１，２，４］トリアゾロ［１，５−α］ピリミジン［化合物２］
【化８】
2013507339.tif 000010
中間体（Ａ）は、Ｙ．Ｓａｔｏら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．（１９８０）２３，９２７−９３７の方法によって合成されてもよい。
【００３１】
（Ｓ）−２，２，２−トリフルオロ−１−（４−フルオロフェニル）エタノール
５０ｍＬの三口丸底フラスコに、２，２，２，４’−テトラフルオロアセトフェノン（０．５ｇ、２．６０ミリモル）と無水ジクロロメタン（１０ｍＬ）を加えた。フラスコを窒素で洗い流し、−７８℃に冷却した。得られた溶液に２−（Ｒ）−メチル−ＣＢＳ−オキサザボロリジン（０．５ｍＬ、０．５２ミリモル、トルエン中１Ｍ）を加えた。内部温度を−７５℃未満に維持しながら、カテコールボラン（１．１ｍＬ、１０．４１ミリモル）を一滴ずつ加えた。添加が完了した後、反応混合物を−７５℃で一晩撹拌した。移動相として酢酸エチル：ヘキサン（３：７）を用いたＴＬＣによって反応をモニターした。内部温度を−７５℃未満に維持しながら、１，４−ジオキサン（０．４ｍＬ）中の４ＮのＨＣｌをゆっくり加えることによって反応混合物の反応を止めた。氷槽を取り外し、反応混合物を室温に温めた。反応混合物を水で急冷し、酢酸エチルで抽出し、水及びブラインで洗浄した。有機相を乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、減圧下で溶媒を除いた。酢酸エチル：ヘキサン（３：７）を用いたカラムクロマトグラフィによって粗生成物を精製し、無色の液体（０．９７ｇ、９６％）として（Ｓ）−２，２，２−トリフルオロ−１−（４−フルオロフェニル）エタノールを得た。キラルＨＰＬＣ：９２．７％（ｅｅ８５．４％）。
【００３２】
（Ｓ）−２，２，２−トリフルオロ−１−（４−フルオロフェニル）エタノール、トリフル酸塩
ジクロロメタン（５ｍＬ）中の（Ｓ）−２，２，２−トリフルオロ−１−（４−フルオロフェニル）エタノール（０．５ｇ、２．５７ミリモル）と２，６−ルチジン（０．６０ｍＬ、５．１５ミリモル）の氷冷溶液に無水トリフルオロメタンスルホン酸（０．７８ｍＬ、４．６３ミリモル）を一滴ずつ加えた。冷却のもとで混合物を１０分間撹拌し、次いでジエチルエーテルに注ぎ、塩酸水溶液（ｐＨ＝５）及びブラインで迅速に洗浄した。溶液を乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、加熱することなく減圧下で溶媒を除いた。不安定なピンクの油（１．７ｇ）として粗精製のトリフル酸塩を得、直ちに次の工程で使用した。
【００３３】
（Ｒ）−５−メチル−８−［２，２，２−トリフルオロ−１−（４−フルオロフェニル）エチル］−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピロロ［３，２ｅ］［１，２，４］トリアゾロ［１，５−α］ピリミジン
ＤＭＦ（２０ｍＬ）中の水素化ナトリウム（鉱物油中６０％懸濁液、０．０７ｍｇ、０．６７ミリモル）の撹拌した懸濁液に５−メチル−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピロロ［３，２−ｅ］［１，２，４］トリアゾロ［１，５−α］ピリミジン（０．３ｍｇ、１．７２ミリモル）を加えた。３０分後、粗精製のトリフル酸塩（０．８４ｍｇ、２．５７ミリモル）を加え、混合物を室温で一晩撹拌した。移動相としてジクロロメタン：メタノール（９：１）を用いたＴＬＣによって反応をモニターした。混合物を酢酸エチルで希釈し、水及びブラインで洗浄し、乾燥させた（ＭｇＳＯ４）。減圧下で溶媒を除いた。ジクロロメタン：メタノール（９：１）を用いたカラムクロマトグラフィによって粗生成物を精製し、薄茶色の固形物として（Ｒ）−５−メチル−８−［２，２，２−トリフルオロ−１−（４−フルオロフェニル）エチル］−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピロロ［３，２ｅ］［１，２，４］トリアゾロ［１，５−α］ピリミジンを得た。次いでキラル分取用ＨＰＬＣ精製に化合物を供した。
カラム：ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ  ＡＤ、２５０×１０ｍｍ、ＩＤ  １０ミクロン
流速：１２．０ｍＬ／分
波長：２２５ｎｍ
試料調製：３〜４滴のＭｅＯＨ：ｎ−ヘキサン：イソプロピルアルコール（９７：３）にて８ｍｇ／ｍＬ
注入容量：１．０ｍＬ
移動相（定組成）：ｎ−ヘキサン：イソプロピルアルコール（９７：３）
実行時間：３２分間
純粋なエナンチオマーの収量：２３ｍｇ
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ２．４５（３Ｈ，ｓ），３．０３−３．１５（１Ｈ，ｍ），３．１６−３．２６（１Ｈ，ｍ），３．６４（１Ｈ，ｍ），４．０５（１Ｈ，ｍ），７．１３（２Ｈ，ｔ），７．４５−７．５０（２Ｈ，ｍ），７．６２（１Ｈ，ｑ）及び８．３８（１Ｈ，ｓ）．Ｍａｓｓ：（ＥＳ＋）３５２（Ｍ＋Ｈ）＋
キラル分取用ＨＰＬＣ：９９．８％（ｅｅ９９．６％）
【００３４】
実施例３．（Ｒ）−５−メチル−８−［２，２，２−トリフルオロ−１−（３，４−ジフルオロフェニル）エチル］−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピロロ［３，２ｅ］［１，２，４］トリアゾロ［１，５−α］ピリミジン［化合物３］
この化合物は、（Ｓ）−２，２，２−トリフルオロ−１−（３，４−ジフルオロフェニル）エタノールトリフル酸塩を用いた実施例２で用いたのと同じ方法によって調製した。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ２．４０（３Ｈ，ｓ），３．００−３．１０（１Ｈ，ｍ），３．１２−３．２３（１Ｈ，ｍ），３．６０（１Ｈ，ｍ），３．９８（１Ｈ，ｍ），７．１３−７．２０（２Ｈ，ｍ），７．２８（１Ｈ，ｍ），７．５５（１Ｈ，ｑ）及び８．３０（１Ｈ，ｓ）．Ｍａｓｓ：（ＥＳ＋）３７０（Ｍ＋Ｈ）＋
キラル分取用ＨＰＬＣ：９９．４％（ｅｅ９８．８％）
【００３５】
実施例４．（Ｓ）−８−［１−（フェニル）エチル］−５−メチル−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピロロ［３，２ｅ］［１，２，４］トリアゾロ［１，５−α］ピリミジン［化合物５］
化合物５は、Ｕｒｙｕら、（２００２）Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，９４６（２），２９８−３０６及びＵｒｙｕら、（２００３）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍ．，３０３（１），３０２−３０５にて以前議論されたＲＳ−１１７８の（Ｓ）−エナンチオマーである。この化合物の一般的な合成経路はＳａｔｏら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．（１９８０），２３，９２７−９３７に開示されている。化合物５は、（Ｓ）−４−フルオロ−α−メチルベンジルアミンの代わりに（Ｓ）−α−メチルベンジルアミン（ｅｅ＞９９．０％）を使用することを除いて（Ｓ）−８−［１−（４−フルオロフェニル）エチル］−５−メチル−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピロロ［３，２ｅ］［１，２，４］トリアゾロ［１，５−α］ピリミジンの調製で使用されるのと同じ方法によって調製した。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ１．７１（３Η，ｄ），２．３５（３Η，ｓ），３．１０（２Η，ｍ），３．５０（１Η，ｍ），４．００（１Η，ｍ），６．７３（１Η，ｑ），７．３０−７．４５（５Η，ｍ）及び８．４８（１Η，ｓ）
ＭＳ（ＥＳ＋）：２８０（ＭＨ＋，１００％）
【００３６】
実施例５．（Ｒ）−８−［１−（フェニル）エチル］−５−メチル−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピロロ［３，２ｅ］［１，２，４］トリアゾロ［１，５−α］ピリミジン［化合物６］
化合物６は、Ｕｒｙｕら、（２００２）Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，９４６（２），２９８−３０６及びＵｒｙｕら、（２００３）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍ．，３０３（１），３０２−３０５にて以前議論されたＲＳ−１１７８の（Ｒ）−エナンチオマーである。この化合物の一般的な合成経路はＳａｔｏら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．（１９８０），２３，９２７−９３７に開示されている。化合物６は、（Ｓ）−α−メチルベンジルアミンの代わりに（Ｒ）−α−メチルベンジルアミン（ｅｅ＞９９．０％）を使用することを除いて（Ｓ）−８−［１−（４−フェニル）エチル］−５−メチル−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピロロ［３，２ｅ］［１，２，４］トリアゾロ［１，５−α］ピリミジンの調製で使用されるのと同じ方法によって調製した。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ１．７１（３Η，ｄ），２．３５（３Η，ｓ），３．１０（２Η，ｍ），３．５０（１Η，ｍ），４．００（１Η，ｍ），６．７３（１Η，ｑ），７．３０−７．４５（５Η，ｍ）及び８．４８（１Η，ｓ）
ＭＳ（ＥＳ＋）：２８０（ＭＨ＋，１００％）
【００３７】
実施例６．（Ｓ）−８−［１−（４−フルオロフェニル）エチル］−５−メチル−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピロロ［３，２ｅ］［１，２，４］トリアゾロ［１，５−α］ピリミジン［化合物７］
エタノール（５ｍＬ）中の中間体７−クロロ−６−（２−クロロエチル）−５−メチル［１，２，４］トリアゾロ［１，５−α］ピリミジン（３９０ｍｇ、１．７ミリモル）と（Ｓ）−４−フルオロ−α−メチルベンジルアミン（３７８ｍｇ、２．７ミリモル、ｅｅ９９％）と炭酸ナトリウム（３２４ｍｇ、３．０ミリモル）の混合物を還流下で５時間加熱した。混合物を室温に冷却し、濾過し、濾液から溶媒を除いた。ジイソプロピルエーテルによって粗生成物を粉末化し、黄色の固形物（４３０ｍｇ、８５％）として８−［（Ｓ）−１−（４−フルオロフェニル）エチル］−５−メチル−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピロロ［３，２ｅ］［１，２，４］トリアゾロ［１，５−α］ピリミジンを得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ１．７１（３Η，ｄ），２．３９（３Η，ｓ），３．０６（２Η，ｍ），３．４４（１Η，ｍ），３．８４（１Η，ｍ），６．８５（１Η，ｑ），７．０３（２Η，ｍ），７．３４（２Η，ｍ）及び８．３０（１Η，ｓ）
ＬＣＭＳ（ＥＳ＋）：２９８（ＭＨ＋，１００％）
【００３８】
実施例７．（Ｒ）−５−メチル−８−［２，２，２−トリフルオロ−１−フェニルエチル］−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピロロ［３，２ｅ］［１，２，４］−トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン［化合物１、代替方法］
【化９】
2013507339.tif 000011
２’，２’，２’−トリフルオロアセトフェノンオキシム
２’，２’，２’−トリフルオロアセトフェノン（１５００ｇ）と塩酸ヒドロキシルアミン（１０９５ｇ）と酢酸ナトリウム（１６１３ｇ）と水（５．８Ｌ）とエタノール（３Ｌ）の混合物を７５℃に加熱し、２４時間撹拌した。混合物を元々の容積の半分に蒸発させ、一晩静置して結晶化させた。次いでそれを濾過し、冷水、その後ヘキサンで洗浄した。結晶性固形物を２０℃にてトレイで２日間乾燥させた。得られた固形２’，２’，２’−トリフルオロアセトフェノンオキシム（１６６０ｇ）をそのまま次の工程に使用した。
【００３９】
ラセミ２，２，２−トリフルオロ−１−フェニルエチルアミン
８つの等量部分にて２’，２’，２’−トリフルオロアセトフェノンオキシム（３３２０ｇ）を水素化した。テトラヒドロフラン（２．１Ｌ）と酢酸（１５９ｇ）の混合物に各部分（４１５ｇ）を溶解し、触媒として炭素上５％のパラジウム（３０ｇ、Ｊｏｈｎｓｏｎ  Ｍａｔｔｈｅｙ型８７Ｌペースト、５７％水）を用いてパーシェーカーにて５０ｐｓｉ、６０℃にて水素化した。反応をいったん６０℃にて設定し、混合物を８５℃に発熱させた。８５℃の温度で反応を２０〜３０分間維持した後、冷却した（水素の取り込みも完了する）。混合物を６０℃でさらに１時間水素化し、確実に完了させた。次いでセライトを介して濾過し、蒸発させてほとんどのテトラヒドロフランを取り除いた。８つの部分すべてを合わせた後、氷（４ｋｇ）と水（４Ｌ）を加えた。撹拌した混合物を３２％の水酸化ナトリウム溶液（約２．８Ｌ必要とした）によってｐＨ１４に調整した。メチル−ｔｅｒｔ−ブチルエーテル（１０Ｌ、次いで５Ｌで２回）で混合物を抽出した。合わせた抽出物を無水炭酸カリウムと硫酸ナトリウムの混合物上で乾燥させ、溶媒を蒸発させて薄茶色の油（２５８０ｇ、ＧＣ＞９９％）を得た。蒸留することなくこの物質をそのまま次の工程に使用した。
【００４０】
Ｒ−（−）−２，２，２−トリフルオロ−１−フェニルエチルアミン
ラセミ２，２，２−トリフルオロ−１−フェニルエチルアミン（２５８０ｇ）とＬ−酒石酸（２２５５ｇ）とイソプロパノール（４５Ｌ）の混合物を加熱し（２０Ｌのフランジフラスコを用いて３つの等量部分で）、７０℃にて溶液を形成した。一晩室温にゆっくり冷却する間、反応混合物を静置した。得られた固体の塩を濾過し、冷却プロパノール（約３Ｌ）で洗浄し、合わせた。（Ｓ）−異性体を主として含有する母液を別にした。湿気のある固体塩をイソプロパノール（３５Ｌ）から一晩再結晶化した。得られた材料塩をイソプロパノール（各再結晶化で２０Ｌ）から３回再結晶化した。この段階で小さな試料を後処理し、アミンを含まない塩基を提供した。キラルＨＰＬＣはそれが９１％ｅｅを有することを示した。この物質をイソプロパノール（各再結晶化で１８Ｌ）から２回再結晶化した。この段階で小さな試料を後処理し、アミンを含まない塩基を提供した。キラルＨＰＬＣはそれが９９．５％ｅｅを有することを示した。循環空気キャビネットでこの物質を乾燥させ、酒石酸塩（１４７６ｇ）を得た。これを氷（約２ｋｇ）に加え、撹拌しながら、３２％の水酸化ナトリウム溶液（１１３８ｍＬ）を加えた。ジエチルエーテル（２Ｌで３回）で混合物を抽出した。合わせたエーテル層を無水炭酸カリウムと硫酸ナトリウムの混合物上で乾燥させ、溶媒を蒸発させて、静置して結晶化する無色の油（７３２ｇ、２８％）としてＲ−（−）−２，２，２−トリフルオロ−１−フェニルエチルアミンを得た（キラルＨＰＬＣは９９．２％ｅｅを示した
【００４１】
５−メチル−８−（Ｒ−２，２，２−トリフルオロ−１−フェニル−エチル）−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピロロ［３，２−ｅ］［１，２，４］トリアゾロ［１，５−α］ピリミジン
７−クロロ−６−（２−クロロエチル）−５−メチル−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−α］ピリミジン（１２５ｇ）とＲ−（−）−２，２，２−トリフルオロ−１−フェニルエチルアミン（１０５ｇ、８８．２％ｅｅ）の混合物をＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（３Ｌ）に溶解し、窒素雰囲気下で１２５℃にて１８時間撹拌した。上部の黄色／橙色の溶液と下部の濃黒色の油による２相混合物が出来た。黒色の油から熱いＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンを捨て、真空下で蒸発させて橙色の半固体を得た。１２５℃で３０分間撹拌することによってＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン蒸留物を再利用して黒色の油を再び抽出し、その後再び捨てて、蒸発させた。黒色の油の抽出は合計３回繰り返した。合わせた橙色の半固体抽出物をヘキサンで洗浄し、粘着性固形物として粗生成物を得た。
【００４２】
３５０ｇの７−クロロ−６−（２−クロロエチル）−５−メチル−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−α］ピリミジンから合計１２５ｇの粗精製５−メチル−８−（Ｒ−２，２，２−トリフルオロ−１−フェニル−エチル）−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピロロ［３，２−ｅ］［１，２，４］トリアゾロ［１，５−α］ピリミジンを調製した。ジクロロメタン中１％のメタノールで溶出するシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィ（Ｂｉｏｔａｇｅ）を用いて粗生成物を精製した。生成物を含有する分画を蒸発させ、固形物を得た。この固形物をジクロロメタン（約３００ｍＬ）とヘキサン（約３００ｍＬ）の混合物に溶解し、固形物をまさに形成し始めるまで真空下で蒸発させた。ヘキサン（約３００ｍＬ）を加え、濃厚なスラリーが形成するまで真空下で再び混合物を蒸発させた。この物質を濾過し、冷却ヘキサンで洗浄し、５０℃にて一晩真空乾燥して、黄色固形物（６７ｇ、１３％）として５−メチル−８−（Ｒ−２，２，２−トリフルオロ−１−フェニル−エチル）−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピロロ［３，２−ｅ］［１，２，４］トリアゾロ［１，５−α］ピリミジンを得た。
観察値：Ｃ５７．４３，Ｈ４．２１，Ｎ２０．８７％、Ｃ１６Ｈ１４Ｆ３Ｎ５はＣ５７．６６，Ｈ４．２３，Ｎ２１．０１％を要求する。
ＨＰＬＣ解析は、キラル純度が９８．５％であることを示し、キラルＨＰＬＣは＞９９．５％ｅｅを示した。融点：１５３〜１５５℃
【００４３】
実験実施例
１．β−アミロイドが誘導する活性化の阻害
細胞培地（１０％ＦＢＳと１％のＬ−グルタミンと１％のペニシリン／ストレプトマイシンを含有するＤＭＥＭ）にてＢＡＬＢ／ｃマウスの単球マクロファージＪ７７４．２，｛ＥＣＡＣＣ８５０１１４２８｝を増殖させ、継代培養した。９６穴プレートにて５０μＬの細胞培地に１００，０００個の細胞／ウェルでＪ７７４細胞を入れ、実験に先立って一晩、３７℃で５％ＣＯ２のインキュベータに入れた。
【００４４】
Ｂｉｏｔｅｋの精密２０００液体操作機器を用いてＡβ（１−４２）と化合物のＪ７７４細胞への添加を実施した。２９４μＬの細胞培地を含有する「娘プレート」に８μＭから６ｍＭに及ぶＤＭＳＯ中の化合物３μＬをピペットで入れ、十分に混合した。次いで４ｍＭでのＤＭＳＯ中のＡβ（１−４２）を３μＬ「娘プレート」に加え、十分に混合した。次いで「娘プレート」から５０μＬを取り出し、プレートに入れたＪ７７４細胞に加えた。１００μＬの細胞培地を含有するウェルにおける最終濃度は、１％ＤＭＳＯ中の２０μＭのＡβ（１−４２）と約４０ｎＭ〜３０μＭの範囲の化合物であり、また５０Ｕ／ｍＬのインターフェロンγが存在した。プレートを３７℃で５％ＣＯ２のインキュベータにて２４時間インキュベートした。２４時間のインキュベートの後、培地をウェルから回収し、試験に必要とされるまで−２０℃で保存した。
【００４５】
製造元の指示書を用いてＧｒｉｅｓｓアッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｇ２９３０）を用い、培地中の一酸化窒素のレベルを調べた。
【００４６】
製造元の指示書を用いて、ＴＮＦ−αＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  ＭＴＡ００）又はＭｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ＭＳ６０００マウスＰｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ−７キットを用い、培地におけるＴＮＦαのレベルを調べた。
【００４７】
２．試験管内のＡＤＭＥデータ
ａ）化合物の細胞透過性
ヒト結腸腺癌細胞株Ｃａｃｏ−２又はこの細胞株のサブクローンＴＣ７のいずれかを用いた、認められている試験管内の腸管上皮モデルを用いてこれらを測定した。見かけの透過性係数（Ｐａｐｐ）は、９６穴ポリカーボネート膜フィルターにて培養した細胞の単層を横切る頂点−基底外側（Ａ−Ｂ）及びＢ−Ａの方向で測定した。１％のＤＭＳＯ最終濃度にて化合物は１０μＭで調べた。穏やかに振盪しながらアッセイプレートを３７℃で６０分間インキュベートした。０時点で供給側から、及びインキュベートの終了時点で供給側と受取側の双方から試料を取った。ＨＰＬＣ−ＭＳ／ＭＳによって試料を解析した。次いで受取側での化合物の出現速度に基づいてＰａｐｐ値（１０−６ｃｍ／秒で表す）を算出した（Gres, M.C. et al. (1998)
Pharm. Res., 15, 726-733）。
【００４８】
ｂ）化合物の代謝
プールした肝臓ミクロソーム（０．３ｍｇ／ｍＬ）タンパク質と共に１μＭの試験化合物を３７℃にて６０分間インキュベートすることによってこれらを測定した。ＨＰＬＣ−ＭＳ／ＭＳによって試料を解析した（Kuhnz, W. and Gieschen, H.
(1998) Drug Metab. Dispos., 26, 1120-1127）。
【００４９】
ｃ）チトクロームｐ−５４０の阻害
ヒトの組換え酵素、ＣＹＰ１Ａ２、ＣＹＰ２Ｃ９、ＣＹＰ２Ｃ１９、ＣＹＰ２Ｄ６及びＣＹＰ３Ａ４及びＰ４５０−Ｇｌｏ（商標）のスクリーニング系（Ｐｒｏｍｅｇａ社）を用いて試験を実施した。手短には、白色不透明の９６穴プレートを用いて、最終反応容積の１／４の、必要な発光性基質を含有する４×チトクロームＰ４５０反応混合物を等容量の４×濃度の試験化合物（０．０３〜３０μＭ）又は既知の阻害剤対照と混ぜ合わせて最終反応容積の１／２を得た。１０分間の予備インキュベートを行った。次いで最終容量の１／２の、２×ＮＡＤＰＨ再生系を加え、ＣＶＰ反応を開始し、全成分を１×目標濃度とした。プレートを３７℃で３０分間インキュベートした。ルシフェリン検出試薬を加え、それでＣＹＰ反応を止め、発光を開始した。室温にて２０分間シグナルを安定化させ、次いで発光を読み取った。ＣＹＰを含有する反応から対照反応の平均発光を差し引くことによって正味のＣＹＰ依存性発光を算出した。試験化合物による反応に対する未処理のＣＹＰ反応の平均正味シグナルに由来する変化は、本化合物によるＣＹＰ活性の阻害を反映する。
【００５０】
【表１】
2013507339.tif 000012
一酸化窒素放出の阻害によって測定されるＩＣ５０（マイクロモル）
【００５１】
【表２】
2013507339.tif 000013
Ｎ．Ｄ．＝測定せず
＊Ａβ（１−４２）のみについてのＴＮＦのレベル：９６９９ｐｇ／ｍＬ
＊＊Ａβ（１−４２）のみについてのＴＮＦのレベル：１３１８４ｐｇ／ｍＬ
【００５２】
【表３】
2013507339.tif 000014
【００５３】
従って、化合物は、その部類の他の化合物に比べて改善されたＡＤＭＥ特性を有し、特に２Ｄ６及び３Ａ４のようなＣＹＰ４５０を阻害する能力が低減されている。
【国際調査報告】
2013507339.tif 000018
2013507339.tif 000019