(57)【要約】  【課題】多数のマイクロチャンバー内部に溶液を容易に注入して注入段階にかかる時間を画期的に減らすことができ、前記マイクロチャンバー間に溶液が混入されないようにして、注入部と光学測定部を一体化させて構造が簡単であり、分析の正確度を高めることのできるマイクロチャンバープレートおよびその製造方法を提供しようとする。【解決手段】本発明は、マイクロチャンバープレートに係り、さらに詳しくは、多数の核酸を含んでいる生物学的な試料溶液を分析するためにそれぞれの核酸に選択的に反応するプライマーまたはプローブを含む多数の反応液が交差汚染なしに反応して蛍光値をリアルタイムにて測定及び分析することのできる分析用チャンバープレートに関する。また、本発明は、前記分析用チャンバープレートの製造方法に関する。さらに、本発明は、前記分析用チャンバープレートの製造に用いられる試料内蔵マイクロチャンバープレートの製造方法に関する。さらにまた、本発明は、前記試料内蔵マイクロチャンバープレートを製造する装置セットに関する。  【選択図】  図１９
2013538559.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
上開放口付きマイクロチャンバープレート収容部（２００）に試料注入用マイクロチャンバープレート（１００）を載置する試料注入用マイクロチャンバープレートの載置段階（Ｓ２０）と、
一時貯留部（３１２）と、前記一時貯留部（３１２）に連設され、補助蓋体部貫通孔（３１４−１）が形成された補助蓋体部（３１４）とを有するマイクロチャンバープレート収容部蓋体（３１０）を、前記マイクロチャンバープレート収容部（２００）の上開放口を覆うように配設する蓋体部の配設段階（Ｓ３０）と、
前記マイクロチャンバープレート収容部蓋体（３１０）が配設された前記マイクロチャンバープレート収容部（２００）を真空印加可能な遠心分離器に入れ、遠心力を加えて前記マイクロチャンバープレート収容部（２００）に連通するように前記一時貯留部（３１２）に形成された容器連通部を介して前記一時貯留部（３１２）に一時的に貯留された試料溶液を前記試料注入用マイクロチャンバープレート（１００）に注入して試料内蔵マイクロチャンバープレート（１００Ａ）を製造する試料内蔵マイクロチャンバープレートの製造段階（Ｓ４０）と、
を含むことを特徴とする試料内蔵マイクロチャンバープレートの製造方法。
【請求項２】
前記試料内蔵マイクロチャンバープレートの製造段階（Ｓ４０）は、
前記遠心分離器に真空を印加し、前記遠心分離器内の真空印加状態で第１の遠心力を発生する真空及び遠心力印加段階（Ｓ４１）と、
前記遠心分離器によって前記第１の遠心力よりも大きな第２の遠心力を発生した状態で前記遠心分離器内の真空を解放して前記試料溶液を前記試料注入用マイクロチャンバープレート（１００）に注入する真空解放及び遠心力印加段階（Ｓ４２）と、
を含むことを特徴とする請求項１に記載の試料内蔵マイクロチャンバープレートの製造方法。
【請求項３】
前記第１の遠心力は、前記遠心分離器内の真空印加状態で前記試料溶液のバンピングを抑え得る遠心力であることを特徴とする請求項２に記載の分析用マイクロチャンバープレートの製造方法。
【請求項４】
前記容器連通部は、外力によって拡開されるように前記一時貯留部（３１２）に形成された切り込み（３１２−１）であり、
前記第２の遠心力は、前記切り込み（３１２−１）が拡開可能な大きさの遠心力であることを特徴とする請求項３に記載の試料内蔵マイクロチャンバープレートの製造方法。
【請求項５】
請求項１から４のいずれかに記載の方法によって製造された試料内蔵マイクロチャンバープレートを用いた分析用マイクロチャンバープレートの製造方法であって、
前記試料内蔵マイクロチャンバープレート（１００Ａ）を前記遠心分離器から取り出した後、前記試料内蔵マイクロチャンバープレート（１００Ａ）の分離膜（１３０）を密封した分析用マイクロチャンバープレートを製造する分析用マイクロチャンバープレートの製造段階（Ｓ５０）
を含むことを特徴とする分析用マイクロチャンバープレートの製造方法。
【請求項６】
一時貯留部（１３１２）と、前記一時貯留部（１３１２）に連設され、補助蓋体部貫通孔（１３１４−１）が形成された補助蓋体部（１３１４）とを有するマイクロチャンバープレート収容部蓋体（１３１０）の下端を試料注入用マイクロチャンバープレート（１００）の上面に密着して、前記試料注入用マイクロチャンバープレート（１００）上面との間に試料溶液貯留空間を形成する試料溶液貯留空間の形成段階（Ｓ２００）と、
前記試料溶液貯留空間が形成されるように互いに密着された前記試料注入用マイクロチャンバープレート（１００）及び前記マイクロチャンバープレート収容部蓋体（１３１０）を真空印加可能な遠心分離器に入れて遠心力を加えて前記一時貯留部（１３１２）に一時的に貯留された試料溶液を前記試料溶液貯留空間に連通するように前記一時貯留部（１３１２）に形成された容器連通部を介して前記試料注入用マイクロチャンバープレート（１００）に注入して試料内蔵マイクロチャンバープレート（１００Ａ）を製造する試料内蔵マイクロチャンバープレートの製造段階（Ｓ３００）と、
を含むことを特徴とする試料内蔵マイクロチャンバープレートの製造方法。
【請求項７】
前記試料内蔵マイクロチャンバープレートの製造段階（Ｓ３００）は、
前記遠心分離器に真空を印加し、前記遠心分離器内の真空印加状態で第１の遠心力を発生する真空及び遠心力印加段階と、
前記遠心分離器によって前記第１の遠心力よりも大きな第２の遠心力を発生した状態で前記遠心分離器内の真空を解放して前記試料溶液を前記試料注入用マイクロチャンバープレート（１００）に注入する真空解放及び遠心力印加段階と、
を含むことを特徴とする請求項６に記載の試料内蔵マイクロチャンバープレートの製造方法。
【請求項８】
前記第１の遠心力は、前記遠心分離器内の真空印加状態で前記試料溶液のバンピングを抑え得る遠心力であることを特徴とする請求項７に記載の試料内蔵マイクロチャンバープレートの製造方法。
【請求項９】
前記容器連通部は、外力によって拡開されるように前記一時貯留部（１３１２）に形成された切り込み（１３１２−１）であり、
前記第２の遠心力は、前記切り込み（１３１２−１）が拡開可能な大きさの遠心力であることを特徴とする請求項８に記載の試料内蔵マイクロチャンバープレートの製造方法。
【請求項１０】
請求項６から９のいずれかに記載の方法によって製造された試料内蔵マイクロチャンバープレートを用いた分析用マイクロチャンバープレートの製造方法であって、
前記試料内蔵マイクロチャンバープレート（１００Ａ）を前記遠心分離器から取り出した後、前記試料内蔵マイクロチャンバープレート（１００Ａ）の分離膜（１３０）を密封した分析用マイクロチャンバープレートを製造する分析用マイクロチャンバープレートの製造段階（Ｓ５０）
を含むことを特徴とする分析用マイクロチャンバープレートの製造方法。
【請求項１１】
下面に胴体密閉部（１２０）が形成され、上面に密封済み分離膜が形成され、核酸分析のための特異成分（１４０）及び核酸入り試料溶液が内蔵された単位数のチャンバー孔（１１２）が形成された分析用マイクロチャンバープレートにおいて、
前記胴体密閉部（１２０）は光を反射する材質から形成され、
前記密封済み分離膜は、多孔性材質の分離膜（１３０）が高分子性オイルにより塗布されて前記多孔性材質の分離膜（１３０）の表面の光学透明度が増して密封されたことを特徴とする分析用マイクロチャンバープレート。
【請求項１２】
上開放口付きマイクロチャンバープレート収容部（２００）と、
開閉自在であり、開放時に前記マイクロチャンバープレート収容部（２００）に連通する容器連通部が形成された一時貯留部（３１２）と、前記一時貯留部（３１２）に連設され、補助蓋体部貫通孔（３１４−１）が形成された補助蓋体部（３１４）とを有し、前記マイクロチャンバープレート収容部（２００）の上開放口を覆うマイクロチャンバープレート収容部蓋体（３１０）と、
を備えることを特徴とする試料内蔵マイクロチャンバープレートの製造装置セット。
【請求項１３】
前記補助蓋体部貫通孔（３１４−１）を外部に露出させ、前記一時貯留部（３１２）の一部を密閉する一時貯留部蓋体（３２０）を備えることを特徴とする請求項１２に記載の試料内蔵マイクロチャンバープレートの製造装置セット。
【請求項１４】
前記一時貯留部（３１２）の下面は前記マイクロチャンバープレート収容部（２００）に引き込まれ、
前記一時貯留部（３１２）の上端及び前記補助蓋体部（３１４）は前記マイクロチャンバープレート収容部（２００）の上端に配設されることを特徴とする請求項１３に記載の試料内蔵マイクロチャンバープレートの製造装置セット。
【請求項１５】
前記補助蓋体部貫通孔（３１４−１）の上端及び前記一時貯留部（３１２）の上端を覆う一時貯留部蓋体（３２０）を備えるが、
前記一時貯留部蓋体（３２０）は、気体は通過させ、前記試料溶液は通過させないメンブレインフィルターであることを特徴とする請求項１２に記載の試料内蔵マイクロチャンバープレートの製造装置セット。
【請求項１６】
前記容器連通部は、外力によって拡開される切り込み（３１２−１）であることを特徴とする請求項１２から１５のいずれかに記載の試料内蔵マイクロチャンバープレートの製造装置セット。
【請求項１７】
一時貯留部（１３１２）と、前記一時貯留部（１３１２）に連設され、補助蓋体部貫通孔（１３１４−１）が形成された補助蓋体部（１３１４）とを有し、試料注入用マイクロチャンバープレート（１００）の上面との間に試料溶液貯留空間（Ｓ）が形成されるように係合手段によって下端が前記試料注入用マイクロチャンバープレート（１００）の上面に密着されるマイクロチャンバープレート収容部蓋体（１３１０）
を備えるが、
前記一時貯留部（１３１２）には、開閉自在であり、開放時に前記試料溶液貯留空間に連通する容器連通部が形成されることを特徴とする試料内蔵マイクロチャンバープレートの製造装置セット。
【請求項１８】
前記係合手段は、
前記試料注入用マイクロチャンバープレート（１００）が載置されるマイクロチャンバープレート収容部（１２００）と、
上面に前記補助蓋体部貫通孔（１３１４−１）及び前記一時貯留部（１３１２）を外部と連通させるケース貫通孔（１４２４）が形成され、前記マイクロチャンバープレート収容部蓋体（１３１０）の上端を押し付けて前記マイクロチャンバープレート収容部（１２００）に係合される係合ケース（１４００）と、
を備えることを特徴とする請求項１７に記載の試料内蔵マイクロチャンバープレートの製造装置セット。
【請求項１９】
前記容器連通部は、外力によって拡開される切り込み（１３１２−１）であることを特徴とする請求項１７又は１８に記載の試料内蔵マイクロチャンバープレートの製造装置セット。
【請求項２０】
前記係合ケース（１４００）には、前記補助蓋体部貫通孔（１３１４−１）は外部に露出させ、前記一時貯留部（１３１２）の一部を密閉するように前記ケース貫通孔（１４２４）を覆うケース蓋体（１５００）が取り付けられることを特徴とする請求項１７又は１８に記載の試料内蔵マイクロチャンバープレートの製造装置セット。
【請求項２１】
前記係合ケース（１４００）には、前記ケース貫通孔（１４２４）を覆うケース蓋体（１５００）が取り付けられるが、
前記ケース蓋体（１５００）は、気体は通過させ、前記試料溶液は通過させないメンブレインフィルターであることを特徴とする請求項１７又は１８に記載の試料内蔵マイクロチャンバープレートの製造装置セット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、マイクロチャンバープレートに係り、さらに詳しくは、多数の核酸入り生物学的な試料溶液を分析するためにそれぞれの核酸に選択的に反応するプライマーまたはプローブ入り多数の反応液が交差汚染なしに反応して蛍光値をリアルタイムにて測定及び分析することのできる分析用チャンバープレートに関する。
【０００２】
また、本発明は、前記分析用チャンバープレートの製造方法に関する。
【０００３】
さらに、本発明は、前記分析用チャンバープレートの製造に用いられる試料内蔵マイクロチャンバープレートの製造方法に関する。
【０００４】
さらにまた、本発明は、前記試料内蔵マイクロチャンバープレートを製造する装置セットに関する。
【背景技術】
【０００５】
マイクロチャンバーとは数マイクロリットル以下の微細な反応が起きる容器であって、シリコンウェーハ、ガラス、金属、又はプラスチックなどで形成でき、前記マイクロチャンバープレートとは前記マイクロチャンバーが２次元的に配列されてなるプレートであって、一般に、一方の側面は、試料が注入されて密封可能な構造を有する。
【０００６】
また、遺伝子の量を測定する方法としてポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ：Polymerase Chain
Reaction）を行いながらリアルタイムで遺伝子の量に比例して増加される蛍光値を測定することができるリアルタイムポリメラーゼ連鎖反応（Real-Time ＰＣＲ）方法が開発された。
【０００７】
前記リアルタイムポリメラーゼ連鎖反応方法はポリメラーゼ連鎖反応を行うことによりポリメラーゼ連鎖反応の産物から生じられる蛍光値を各サイクル毎に測定し、一定量以上の蛍光値が生じられるサイクルを確認することにより試料の特定遺伝子の初期濃度を定量的に分析することができる。
【０００８】
前記リアルタイムポリメラーゼ連鎖反応方法は前記ポリメラーゼ連鎖反応後に電気泳動過程が必要でなく、ポリメラーゼ連鎖反応を行うと共に反応された産物を定量的に測定して試料の内部のそれぞれの特定塩基配列を有する遺伝子の濃度を１０9以上の範囲において決定することができるという利点がある（"A-Z of Quantitative PCR" edited by Stephen A. Bustin
2004-2006 International University, "Realtime PCR" edited by M.
Tevfik Dorak 2006 Taylor & Francis Group）。
【０００９】
前記リアルタイムポリメラーゼ連鎖反応方法を行うリアルタイムポリメラーゼ連鎖反応機器は種々提案されており、多数の試料を分析することができるリアルタイムポリメラーゼ連鎖反応機器として標準９６ウェル、３８４ウェルプレートを用いて９６個又は３８４個の遺伝子を分析することができる機器が提案されている（Roche社製のLight
cycler 480, ABI 7500, 7900）。
【００１０】
前記Roche社製のリアルタイムポリメラーゼ連鎖反応機器は反応試料の量が１０乃至５０μｌのものであって、割と多量の試料が必要となり、しかも、多数の遺伝子を分析することができないという問題点がある。
【００１１】
前記問題点を解決するためにＭＥＭＳ（Micro Electro Mechanical Systems）技術を用いて反応試料の量を減らすことにより短時間内に多量の試料を同時に分析するための多様な方法が提示され、これに伴い、マイクロチャンバーアレイプレートを用いた方法もまた提案されている。
【００１２】
マイクロチャンバーアレイプレートを使用する方法は、大きく前記マイクロチャンバーに反応試料を注入する段階、マイクロチャンバー間の反応溶液を密封させる段階、反応及び分析段階の３段階で構成され、初番目に、個別的に前記マイクロチャンバーに試料溶液を加える方法として、透明な細胞培養用マイクロチャンバープレートに半透過性膜を覆ってマイクロチャンバーを隔離させてそれぞれのマイクロチャンバーに一つの細胞を培養して培養液を除去した後、タクマン（Taqman）反応溶液を加えて蒸発防止のために透明オイルで密封して温度サイクルをしながらプレートの底で蛍光値を測定するマイクロチャンバーアレイプレートが提案されている（YASUDA, Kenji
EP 1,541,678 A1, JP 2002245900 NUCLEIC ACID ANALYSIS CHIP AND NUCLEIC ACID
ANALYZER）。
【００１３】
前記方式はそれぞれのマイクロチャンバーに合い異なる溶液をマイクロピペットで吸入し加えるため長時間がかかり、特に１、５３６個以上のマイクロチャンバーに試料を注入するために微細自動分注器を使用しなければならないが、それぞれ異なる溶液を加える前に洗浄する過程に長時間がかかって現実的に３８４プレート以上は使用が難しいという問題点がある。
【００１４】
第二番目に、初番目の方法を解決するためにシリコンウェーハをフォトリソグラフィと化学エッチング方式でマイクロチャンバーアレイを構成した反応機がE. Tamiy教授グループのHidenori Nagaiらによって提示されている（Anal. Chem.
2001 73, 1043-1047, Development of a Micro-chamber Array for Picoliter PCR）。
【００１５】
前記反応機はポリメラーゼ連鎖反応溶液の蒸発を防止するために顕微鏡スライドカバーガラスを用いるが、前記カバーガラスを覆うときと離すときに反応液の交差汚染が誘発されることにつれて撥水性膜をカバーガラスとウェーハとの間に差し込んで、先ず前記カバーガラスを除去してから反応溶液を乾燥させた後に撥水性膜を除去して分析しなければならないという煩雑さがあり、リアルタイムの遺伝子定量増幅に使用できないという問題点があった。
【００１６】
第三番目に、定量増幅の問題点を解決するために、同じ研究室でY. Matsubaraらはウェーハ上の凹んだマイクロチャンバーにそれぞれのプライマーをマイクロアレイ装備を用いて加えた後に乾燥させたマイクロチャンバーアレイを開発した（7th
International Conference on Miniaturized Chemical and Biochemical Analysis
Systems October 5-9, 2003, Squaw Valley California USA）。
【００１７】
前記マイクロチャンバーアレイはチップの上部にミネラルオイルを加えてマイクロチャンバーを完全に覆った後、ここにポリメラーゼ連鎖反応の反応液をナノジェット分注器を用いて反応機のミネラルオイル上で点滴する方法を使用した。この方法は１インチ×３インチのシリコンウェーハをフォトリソグラフィと化学エッチング方式で５０ナノリットルの体積（０．６５×０．６５×０．２ｍｍ）を有する１，２４８個のマイクロチャンバーアレイチップを製造した後、マイクロチャンバーにプライマーとタクマン（Taqman）プローブ溶液をナノリットル分注器で点滴してこれを乾燥させ、全体をミネラルオイルでコーティングしてそれぞれのマイクロチャンバーを隔離密封した。
【００１８】
前記第三番目の方法を用いて製造されたマイクロチャンバーアレイはナノリットル分注器を用いてＴａｑ ＤＮＡ重合酵素と試料ＤＮＡの混合液をミネラルオイルの上層部から噴射してそれぞれのマイクロチャンバーに分注することによって成功的にマイクロチャンバーでそれぞれの反応成分が交差汚染無くポリメラーゼ連鎖反応を行うことができるという長所がある。
【００１９】
しかしながら、前記方法は溶液を注入するときに別途のマイクロアレイ用ナノリットル分注装備が必要となり、分注をするための時間が長くかかり、プレートの移動時にミネラルオイルの流動で反応液の相互間の交差汚染の危険性が高いという問題点がある。また、温度サイクル反応時に、高温でバブルが発生され、オイルと水溶液の疎水性効果によって水溶液が球状となってレンズ効果を起こすことにつれて光学測定時に励起光と発光が散乱、分散されて測定誤差を大きくする問題点がある。
【００２０】
第四番目に、前記第三番目のような化学的なエッチング方式によって製造されたマイクロチャンバーであるが、前記第三番目の方式よりも遥かに多数の反応をさせることができるものとしてピコタイタープレートが開発されている（John H. Leamon
et al., A massively parallel PicoTiterPlate based platform for discrete
pico-liter-scale polymerase chain reactions. Electrophoresis 2003, 24,
3769-3777）。
【００２１】
前記第四番目の方式は３９．５ｐｌの量で３００、０００個の独立したポリメラーゼ連鎖反応をさせることができるが、プライマー／プローブを固定化した担体が無ければならないため、均一な光学特性が要求されるリアルタイム定量ポリメラーゼ連鎖反応に適用することができない。
【００２２】
第五番目に、微量試料を反応させるために、米国特許第５９４８６７３号には、「フィルム反応機（又はＤＮＡカード）」という反応機が開示されている。
【００２３】
前記フィルム反応機は３層の非常に薄いフィルムからなり、具体的に、下層フィルムは反応機の底面を形成し、中層フィルムは反応機の側面を形成し、上層フィルムは試料注入口を形成する。前記フィルム反応機にピペットを用いて微量の試料溶液を注入した後に反応を行うためには反応注入口を完全に密封しなければならないが、完璧に密封されていない場合はポリメラーゼ連鎖反応時に反応溶液が全て蒸発する問題点があり、前記フィルム反応機は数千個の試料を扱うためには構造的にあまりにも複雑であるため、現実的に製造が不可能である。
【００２４】
第六番目に、標準ＥＬＩＳＡプレートサイズで１、５３６種類の蛍光分析反応を行うことができる反応プレートがＷＯ ０２／４０１５８とＵＳ ６，２３２，１１４に開示されている。
【００２５】
前記第六番目の方法はプレートに多数の貫通孔を形成し、蛍光量が少ない透明なフィルムを融着して多数の反応容器を形成し、ここに試薬を入れた後に透明フィルムで密封して反応を行う容器を用いる方法である。前記反応プレートは上面及び下面が透明に形成され、一方の側面において励起光を加えて他方の一側において蛍光を測定することができる長所がある。
【００２６】
しかしながら、前記第六番目の方法もまた、多数の遺伝子を分析するためには各々のマイクロチャンバー毎にそれぞれ異なるプライマーとプローブが入らなければならないが、多数の試料を分析するプレートは数千個の異なる溶液を微細なマイクロチャンバーに入れなければならないため、このために従来のナノリットル分注器のような特殊な分注装備が必要であり、長時間がかかる作業でありながらも試料注入時に不良が生じる問題点をそのまま有しているようになる。また、マイクロチャンバー内に溶液を完全に満たすことができないという問題によって、気泡が生じ、加温される場合、マイクロチャンバーの上部に水蒸気が結霜してスキャッタリングにより光学測定を妨害する問題点もある。
【００２７】
第七番目に、本発明者らは、一方の側面に試料注入のための多孔性膜が形成され、他方の側面に光学測定部が形成されたマイクロチャンバープレートを用いた反応プレートをＰＣＴ出願（ＰＣＴ／ＫＲ２００８／００５６３５）している。
【００２８】
前記第七番目の方法は、プレートに多数の貫通孔を形成し、一方の側面に蛍光量が少ない透明なフィルムを融着して多数の反応容器を形成し、ここに試料を入れた後に他方の側面に試料溶液が注入可能な多孔性膜で密封して反応を行う容器を用いる方法である。前記反応プレートは、多孔性膜を介して試料溶液を注入した後、注入面にミネラルオイルを点滴して密封し、他方の側面に形成された光学測定部に励起光を印加して測定する方法である。
【００２９】
しかしながら、前記第七番目の方法は、注入部と光学測定部が別途に形成されているため構造が複雑であり、注入部に形成されたミネラルオイル層が透明になって底面のしみの状態に応じて測定結果にばらつきが生じることがある。なお、反応及び測定のためにミネラルオイルが点滴された注入部が下方に向くことがあるが、このとき、試料に比べて相対的に密度が低いミネラルオイルがマイクロチャンバーの内部に流入してスキャッタリングを引き起こすという問題点もある。
【００３０】
第八番目に、国際出願された「THE MICRO-CHAMBER
PLATE、MANUFACTURING METHOD THEREOF；国際出願番号：ＰＣＴ／ＫＲ２００８／００５６３５」が公開されている。
【００３１】
しかしながら、前記第八番目の方法は、注入のための試料を多孔性膜に直接的に印加するような構造となっており、１）真空による試料注入方法を用いる場合に、真空印加時に試料の沸騰を防ぐために遠心力を加えることになるが、このとき、多孔性膜の気孔を介した気体の排出が試料の表面張力と遠心力によって妨げられ、２）遠心力によってマイクロチャンバー内の気体が圧着されて体積が縮小されることにより、注入過程中に膜を介して抜け出る程度の浮力を受けず、小さな気泡状に残存していて大気圧状態の測定条件下でさらに膨張して測定を妨げるという問題点がある。
【００３２】
したがって、多数のマイクロチャンバーに簡単に試料を注入し、各反応液間の交差汚染が起きず、光学測定部の試料などによる汚染の可能性がないことから、試料から発せられる光をリアルタイムで正確に測定することのできるマイクロチャンバープレートが望まれている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００３３】
本発明は、リアルタイムポリメラーゼ連鎖反応、定温酵素反応、又はＬＣＲ（Ligase Chain
Reaction）に要求される多数個のマイクロチャンバー内部に溶液が蒸発されることを防止し、溶液を容易に注入して注入段階にかかる時間を画期的に減らすことができ、前記マイクロチャンバー間に溶液が混入されないようにして、注入部と光学測定部を一体化させて構造が簡単であり、光学測定部に微細気泡が発生しないことから、蛍光値を一層正確に測定することができて分析の正確度を高めることのできるマイクロチャンバープレートおよびその製造方法を提供することを目的としている。
【課題を解決するための手段】
【００３４】
本発明は、上開放口付きマイクロチャンバープレート収容部２００に試料注入用マイクロチャンバープレート１００を載置する試料注入用マイクロチャンバープレートの載置段階（Ｓ２０）と、一時貯留部３１２と、前記一時貯留部３１２に連設され、補助蓋体部貫通孔３１４−１が形成された補助蓋体部３１４とを有するマイクロチャンバープレート収容部蓋体３１０を、前記マイクロチャンバープレート収容部２００の上開放口を覆うように配設する蓋体部の配設段階（Ｓ３０）と、前記マイクロチャンバープレート収容部蓋体３１０が配設された前記マイクロチャンバープレート収容部２００を真空印加可能な遠心分離器に入れ、遠心力を加えて前記マイクロチャンバープレート収容部２００に連通するように前記一時貯留部３１２に形成された容器連通部を介して前記一時貯留部３１２に一時的に貯留された試料溶液を前記試料注入用マイクロチャンバープレート１００に注入して試料内蔵マイクロチャンバープレート１００Ａを製造する試料内蔵マイクロチャンバープレートの製造段階（Ｓ４０）と、を含むことを特徴とする試料内蔵マイクロチャンバープレートの製造方法に関する。
【００３５】
また、本発明は、一時貯留部１３１２と、前記一時貯留部１３１２に連設され、補助蓋体部貫通孔１３１４−１が形成された補助蓋体部１３１４とを有するマイクロチャンバープレート収容部蓋体１３１０の下端を試料注入用マイクロチャンバープレート１００の上面に密着して、前記試料注入用マイクロチャンバープレート１００上面との間に試料溶液貯留空間を形成する試料溶液貯留空間の形成段階（Ｓ２００）と、前記試料溶液貯留空間が形成されるように互いに密着された前記試料注入用マイクロチャンバープレート１００及び前記マイクロチャンバープレート収容部蓋体１３１０を真空印加可能な遠心分離器に入れて遠心力を加えて前記一時貯留部１３１２に一時的に貯留された試料溶液を前記試料溶液貯留空間に連通するように前記一時貯留部１３１２に形成された容器連通部を介して前記試料注入用マイクロチャンバープレート１００に注入して試料内蔵マイクロチャンバープレート１００Ａを製造する試料内蔵マイクロチャンバープレートの製造段階（Ｓ３００）と、を含むことを特徴とする試料内蔵マイクロチャンバープレートの製造方法に関する。
【００３６】
本発明において、前記試料内蔵マイクロチャンバープレートの製造段階（Ｓ４０、Ｓ３００）は、前記遠心分離器に真空を印加し、前記遠心分離器内の真空印加状態で第１の遠心力を発生する真空及び遠心力印加段階と、前記遠心分離器によって前記第１の遠心力よりも大きな第２の遠心力を発生した状態で前記遠心分離器内の真空を解放して前記試料溶液を前記試料注入用マイクロチャンバープレートに注入する真空解放及び遠心力印加段階と、を含んでいてもよいが、前記第１の遠心力は、前記遠心分離器内の真空印加状態で前記試料溶液のバンピングを抑え得る遠心力であってもよく、前記容器連通部は、外力によって拡開されるように前記一時貯留部１３１２に形成された切り込み１３１２−１であり、前記第２の遠心力は、前記切り込み１３１２−１が拡開可能な大きさの遠心力であってもよい。
【００３７】
さらに、本発明は、上記のいずれかに記載の方法によって製造された試料内蔵マイクロチャンバープレートを用いた分析用マイクロチャンバープレートの製造方法であって、前記試料内蔵マイクロチャンバープレート１００Ａを前記遠心分離器から取り出した後、前記試料内蔵マイクロチャンバープレート１００Ａの分離膜１３０を密封した分析用マイクロチャンバープレートを製造する分析用マイクロチャンバープレートの製造段階（Ｓ５０）を含むことを特徴とする分析用マイクロチャンバープレートの製造方法に関する。
【００３８】
さらにまた、本発明は、下面に胴体密閉部１２０が形成され、上面に密封済み分離膜が形成され、核酸分析のための特異成分１４０及び核酸入りの試料溶液が内蔵された単位数のチャンバー孔１１２が形成された分析用マイクロチャンバープレートにおいて、前記胴体密閉部１２０は光を反射する材質から形成され、前記密封済み分離膜は、多孔性材質の分離膜１３０が高分子性オイルにより塗布されて前記多孔性材質の分離膜１３０の表面の光学透明度が増して密封されたことを特徴とする分析用マイクロチャンバープレートに関する。
【００３９】
さらにまた、本発明は、上開放口付きマイクロチャンバープレート収容部２００と、開閉自在であり、開放時に前記マイクロチャンバープレート収容部２００に連通する容器連通部が形成された一時貯留部３１２と、前記一時貯留部３１２に連設され、補助蓋体部貫通孔３１４−１が形成された補助蓋体部３１４とを有し、前記マイクロチャンバープレート収容部２００の上開放口を覆うマイクロチャンバープレート収容部蓋体３１０と、を備えることを特徴とする試料内蔵マイクロチャンバープレートの製造装置セットに関する。
【００４０】
本発明において、前記補助蓋体部貫通孔３１４−１を外部に露出させ、前記一時貯留部３１２の一部を密閉する一時貯留部蓋体３２０を備えていてもよく、前記一時貯留部３１２の下面は前記マイクロチャンバープレート収容部２００に引き込まれ、前記一時貯留部３１２の上端及び前記補助蓋体部３１４は前記マイクロチャンバープレート収容部２００の上端に配設されていてもよく、前記補助蓋体部貫通孔３１４−１の上端及び前記一時貯留部３１２の上端を覆う一時貯留部蓋体３２０を備えるが、前記一時貯留部蓋体３２０は、気体は通過させ、前記試料溶液は通過させないメンブレインフィルターであってもよく、前記容器連通部は、外力によって拡開される切り込み３１２−１であってもよい。
【００４１】
さらにまた、本発明は、一時貯留部１３１２と、前記一時貯留部１３１２に連設され、補助蓋体部貫通孔１３１４−１が形成された補助蓋体部１３１４とを有し、試料注入用マイクロチャンバープレート１００の上面との間に試料溶液貯留空間Ｓが形成されるように係合手段によって下端が前記試料注入用マイクロチャンバープレート１００の上面に密着されるマイクロチャンバープレート収容部蓋体１３１０を備えるが、前記一時貯留部１３１２には、開閉自在であり、開放時に前記試料溶液貯留空間に連通する容器連通部が形成されることを特徴とする試料内蔵マイクロチャンバープレートの製造装置セットに関する。
【００４２】
本発明において、前記係合手段は、前記試料注入用マイクロチャンバープレート１００が載置されるマイクロチャンバープレート収容部１２００と、上面に前記補助蓋体部貫通孔１３１４−１及び前記一時貯留部１３１２を外部と連通させるケース貫通孔１４２４が形成され、前記マイクロチャンバープレート収容部蓋体１３１０の上端を押し付けて前記マイクロチャンバープレート収容部１２００に係合される係合ケース１４００と、を備えていてもよく、前記容器連通部は、外力によって拡開される切り込み１３１２−１であってもよく、前記係合ケース１４００には、前記補助蓋体部貫通孔１３１４−１は外部に露出させ、前記一時貯留部１３１２の一部を密閉するように前記ケース貫通孔１４２４を覆うケース蓋体１５００を備えていてもよく、前記係合ケース１４００には、前記ケース貫通孔１４２４を覆うケース蓋体１５００が取り付けられるが、前記ケース蓋体１５００は、気体は通過させ、前記試料溶液は通過させないメンブレインフィルターであってもよい。
【発明の効果】
【００４３】
本発明は、核酸入り試料溶液の注入部である分離膜を光学測定部として用いることにより、構造が簡単であり、汚染による光学測定部の測定の誤差を発生させず、分析用マイクロチャンバープレートをコンパクト化できて温度が調節し易く、これにより、分析にかかる時間を画期的に短縮することができるというメリットがある。
【００４４】
本発明は、チャンバー孔の内部に核酸入り試料溶液を注入する場合に真空によってチャンバー孔の内部の気体を先ず除去した後に分離膜を介して注入が行われることから、短時間内に残存気体無しに完全な注入が行えてチャンバー孔の内部の残留気体によって光学測定値が正しく測定されないという問題を防ぐことができ、分離膜を高分子性オイルであるミネラルオイルまたはシリコンオイルなどで密封することによりチャンバー孔間の溶液の混入に伴う交差汚染の問題を防ぐことができ、これにより分析の正確度を高めることができるというメリットがある。
【００４５】
本発明は、複数の分析用マイクロチャンバープレートが一体に形成可能であることから、種々の試料を同時に分析及び比較することにより、分析にかかる時間を画期的に短縮することができるというメリットがある。
【００４６】
また、本発明の分析用マイクロチャンバープレートは、分離膜及び光学測定部の裏面が分析用マイクロチャンバープレートと一体に形成可能であることから、アルミニウム圧縮成形などの方法により製作可能であり、生産工程及び製作コストを画期的に短縮することができるというメリットがある。
【図面の簡単な説明】
【００４７】
【図１】実施形態１のフローチャートである。
【図２】図１の試料注入用マイクロチャンバープレートの製造段階において製造される試料注入用マイクロチャンバープレートの斜視図である。
【図３】図２のＡＡ’の断面図である。
【図４】図２の主部の分解斜視図である。
【図５】図１の原マイクロチャンバー胴体の製造段階において製造される原マイクロチャンバー胴体の斜視図である。
【図６】図５の原マイクロチャンバー胴体の断面図である。
【図７】図１のコーティング段階及びカップリング段階を説明するための断面図である。
【図８】図１の胴体密閉部の取り付け段階を説明するための断面図である。
【図９】図１の特異成分注入段階を説明するための断面図である。
【図１０】図１の試料注入用マイクロチャンバープレート載置段階、蓋体部配設段階及び試料内蔵マイクロチャンバープレートの製造段階を説明するための分解斜視図である。
【図１１】図１０の結合斜視図である。
【図１２】試料注入用マイクロチャンバープレートが載置された図１１のＢＢ’の断面図である。
【図１３】図１０のマイクロチャンバープレート収容部蓋体の拡大図である。
【図１４】図１０の一時貯留部蓋体の拡大図である。
【図１５】図１０のマイクロチャンバープレート収容部蓋体と一時貯留部蓋体とが組み合わせられた蓋体部の斜視図である。
【図１６】図１０のマイクロチャンバープレート収容部の拡大図である。
【図１７】図３に対応する試料内蔵マイクロチャンバープレートの断面図である。
【図１８】実施形態５のフローチャートである。
【図１９】図１８の試料溶液貯留空間の形成段階及び試料内蔵マイクロチャンバープレートの製造段階を説明するための分解斜視図である。
【図２０】図１９の結合斜視図である。
【図２１】図２０のＡＡ’の断面図である。
【発明を実施するための形態】
【００４８】
以下、添付図面に基づき、本発明の一実施形態について詳述する。
【００４９】
実施形態１
【００５０】
実施形態１は、本発明に係る分析用マイクロチャンバープレートの製造方法に関する。
【００５１】
図１を参照すると、実施形態１は、試料注入用マイクロチャンバープレートの製造段階（Ｓ１０）と、試料注入用マイクロチャンバープレートの載置段階（Ｓ２０）と、蓋体部配設段階（Ｓ３０）と、試料内蔵マイクロチャンバープレートの製造段階（Ｓ４０）及び分析用マイクロチャンバープレートの製造段階（Ｓ５０）を含む。
【００５２】
１．試料注入用マイクロチャンバープレートの製造段階（Ｓ１０）
【００５３】
図２から図４を参照すると、試料注入用マイクロチャンバープレートの製造段階（Ｓ１０）では、プライマーやプローブ入り核酸の分析のための特異成分１４０が内蔵される試料注入用マイクロチャンバープレート１００が製造される。試料注入用マイクロチャンバープレート１００は、マイクロチャンバー胴体１１０と、胴体密閉部１２０及び分離膜１３０を備える。
【００５４】
このため、図１から図４を参照すると、試料注入用マイクロチャンバープレートの製造段階（Ｓ１０）は、マイクロチャンバー胴体１１０を製造するマイクロチャンバー胴体の製造段階（Ｓ１１）と、マイクロチャンバー胴体１１０の下面に胴体密閉部１２０を形成する胴体密閉部の取り付け段階（Ｓ１２）と、特異成分１４０を注入する特異成分注入段階（Ｓ１３）及びマイクロチャンバー胴体１１０の上面に分離膜１３０を形成する分離膜貼着段階（Ｓ１４）を含む。
【００５５】
また、図１を参照すると、マイクロチャンバー胴体製造段階（Ｓ１１）は、原マイクロチャンバー胴体の製造段階（Ｓ１１−１）と、コーティング段階（Ｓ１１−２）及びカップリング段階（Ｓ１１−３）を含む。
【００５６】
図５及び図６を参照すると、原マイクロチャンバー胴体の製造段階（Ｓ１１−１）では、上下面を貫通する単位数の原チャンバー孔１１０−１Ｈが形成された原マイクロチャンバー胴体１１０−１が製造される。原マイクロチャンバー胴体１１０−１は、ポリメラーゼ鎖反応（ＰＣＲ）やその他の分析反応において加えられる熱に対して耐久性を有する材料から製造されることが好ましいが、特に、０℃〜１００℃において変形が起こり難い材料から製造されることが好ましい。このため、原マイクロチャンバー胴体１１０−１は、アルミニウム、シリコンウェーハ、ガラス、金属、またはプラスチックであってもよい。なお、原マイクロチャンバー胴体１１０−１は、継ぎ目片（図示せず）によって互いに連結され、多数形成されてもよい。図面符号１１０−１Ｓは、原マイクロチャンバー胴体１１０−１が多数連結されてなる原マイクロチャンバー胴体セットを示す。
【００５７】
図７を参照すると、コーティング段階（Ｓ１１−２）及びカップリング段階（Ｓ１１−３）が行われることによりマイクロチャンバー胴体１１０が製造されるが、マイクロチャンバー胴体１１０には、単位数の原チャンバー孔１１０−１Ｈに対応する単位数のチャンバー孔１１２が形成される。チャンバー孔１１２は、０．３〜３ｍｍの幅を有し、且つ、０．５〜５ｍｍの深さを有するように形成されてもよい。実施形態１の場合、チャンバー孔１１２は一つのマイクロチャンバー胴体１１０に複数形成されるため同時に多数の核酸を定量的に分析することができ、チャンバー孔１１２が浅くて熱伝導性能が良好であり、分析時間を短縮し、しかも、分析の正確度を高めることができる。
【００５８】
図７を参照すると、コーティング段階（Ｓ１１−２）では、原マイクロチャンバー胴体１１０−１を高分子溶液に浸漬して原マイクロチャンバー胴体１１０−１の表面及び単位数の原チャンバー孔１１０−１Ｈ（図６参照）の内面に高分子コーティング層１１０−２を形成する。
【００５９】
本願の発明者は、（株）ベースコリアのポリエステル系樹脂である製品名ＥＳ−１２０ｓ（複合芳香族ジカルボン酸と複合脂肪族ジオールとの反応により得られた共重合ポリエステル系）樹脂がトルエン（４、toluene）とＭＥＫ（１、ＭＥＫ）に５０％で希釈された樹脂溶液をトルエンを用いて５〜２０ｖｏｌ％に希釈して粘度を調節した後、１回から３回まで浸漬回数を変えて原マイクロチャンバー胴体１１０−１をコーティングした。本願の発明者は、原チャンバー孔１１０−１Ｈが閉塞されることなく均一な高分子コーティング層１１０−２を形成する粘度としては５ｖｏｌ％〜１０ｖｏｌ％が最適であり、浸漬回数は２回が最適であることを確認した。なお、原マイクロチャンバー胴体１１０−１の材質がアルミニウムである場合にはコーティング段階（Ｓ１１−２）を行う前に原マイクロチャンバー胴体１１０−１の表面をホワイトアノダイジングするホワイトアノダイジング段階を行うことが好ましい。
【００６０】
図７を参照すると、カップリング段階（Ｓ１１−３）では、高分子コーティング層１１０−２の表面をカップリングする。カップリングは、ポリエステル系樹脂内に存在する官能基であるカルボン酸を除去するものである。
【００６１】
本願の発明者は、１−エチル−３−［３−ジメチルアミノプロピル］カルボジイミドヒドロクロリド（ＥＤＣ）と４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）を用いてエタノール溶媒下でカップリングを行った。まず、０．２５Ｍ濃度のＥＤＣとＤＭＡＰをそれぞれ製造し、これをそれぞれ５０ｍｌおよび９ｍｌずつ混合して常温下で１２時間以上反応させた。次いで、エタノールおよび蒸留水で３回ずつ洗浄した後に乾燥させてカップリングを完了した。
【００６２】
本発明において用いられるポリエステル系樹脂は、アルミニウム表面への接着性に非常に優れていて安定した高分子コーティング層１１０−２を形成し、無色透明であることから使用に非常に適しているものと評価された。
【００６３】
図８を参照すると、胴体密閉部の取り付け段階（Ｓ１２）では、カップリング段階（Ｓ１１−３）を行った後に単位数のチャンバー孔１１２の下開放口をそれぞれ胴体密閉部１２０によって密閉する。胴体密閉部１２０は、胴体密閉部の取り付け段階（Ｓ１２）において高分子コーティング層１１０−２に接触されて高温状態で加圧されることにより高分子コーティング層１１０−２に取り付けられる。胴体密閉部１２０は、分離膜１３０（図１７参照）を用いた光学測定時に照射光と試料からの励起光が測定し易いように、分離膜１３０（図１７参照）に向かって光を反射する材質から形成されていてもよい。このため、単位数のチャンバー孔１１２の下開放口が透明材質のフィルムにより密閉される場合には、胴体密閉部１２０は、前記透明材質のフィルムに加えて、前記透明材質のフィルムの外側に貼り付けられる反射材質のフィルムをさらに備えていてもよい。なお、胴体密閉部１２０が透明な材質のフィルムであるか、あるいは、光を反射しない材質のフィルムである場合には、チャンバー孔１１２の下開放口側に位置する面に反射層をさらに形成してもよい。なお、胴体密閉部１２０としては、核酸入り試料溶液の流出を遮断する材質のものを用いる。
【００６４】
本願の発明者は、胴体密閉部１２０として透明若しくは不透明な白色の高分子フィルム状の製品を使用したが、（株）ＫＭ産業のポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）材質の厚さ４０μｍの透明なフィルムと不透明な白色フィルム（製品名：ＳＴ−ＤＦ５０Ｗ）を両方とも使用した。これにより、本願の発明者は、一層正確な光学測定値が得られることを確認した。
【００６５】
図９を参照すると、特異成分注入段階（Ｓ１３）では、下開放口が胴体密閉部１２０によって密閉された単位数のチャンバー孔１１２のそれぞれにプライマーやプローブ入り核酸の分析のための特異成分１４０を注入する。特異成分１４０は、核酸分析のための蛍光分析試薬及び必要に応じて核酸増幅酵素、ＤＮＡ構成化合物（ｄＮＴＰ）、バッファーまたは安定化剤（反応溶液、プライマー、酵素などと分子的に上手く混合されてこれらを安定化させ、容器内の吸着を減らす役割を果たす物質であり、ポリオール、炭水化物、ウシアルブミン、ＰＥＧなどが挙げられる）をさらに含んでいてもよい。特異成分１４０は、その組成に応じて、乾燥、半乾燥、または液状の状態で用いられる。
【００６６】
図３を参照すると、分離膜貼着段階（Ｓ１４）では、マイクロチャンバー胴体１１０の上面に分離膜１３０を貼り付ける。すなわち、分離膜貼着段階（Ｓ１４）では、分離膜１３０が単位数のチャンバー孔１１２の上端に貼り付けられて特異成分１４０が注入された単位数のチャンバー孔１１２の上開放口を覆うことになる。分離膜１３０は、特異成分１４０は通過させず、核酸入り試料溶液は通過させるように形成される。このため、特異成分１４０はチャンバー孔１１２の内部から分離膜１３０を介して外部に流出することなく、核酸入り試料溶液はチャンバー孔１１２の外部から分離膜１３０を介してチャンバー孔１１２に流入する。このため、分離膜１３０は、特異成分１４０は通過させず、核酸入り試料溶液は通過させる多孔性材質から形成されてもよい。分離膜１３０が多孔性材質である場合、高分子性オイルにより塗布されて密封されることにより、分離膜１３０の光学透明度が増してチャンバー孔１１２の内部の試料に対する光学測定が容易になる。前記高分子性オイルは、ミネラルオイル、シリコンオイル、ハイドロカーボンオイルまたはパラフィンワックスオイルなどであってもよい。多孔性材質の分離膜１３０はマイクロポア状であってもよく、網目状であってもよく、不織布状であってもよく、多孔性材質のポア径は０．１〜１００μｍ以内であることが好ましい。多孔性材質の分離膜１３０は、高分子材質メンブレインであってもよい。なお、分離膜１３０は、高分子コーティング層１１０−２に接触されて高温状態で加圧されることにより、高分子コーティング層１１０−２に貼り付けられる。
【００６７】
本願の発明者は、分離膜１３０として無数の一定直径の気孔を有する多孔性材質を使用した。より具体的には、ポア径１２μｍのポリカーボネート（ＰＣ）材質のワットマン社製品を選択した。これは、ポア径が大きくて試料が注入し易く、高分子性オイルであるミネラルオイルによって完全に透明になって光学測定が可能であるためである。
【００６８】
なお、他の実施形態の場合、分離膜１３０は穿孔可能なフィルムであってもよい。前記フィルム状の分離膜は、テフロン（登録商標）、ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリエステルまたはポリ塩化ビニルからなり、１本のチャンバー孔１１２あたりに１〜１０個の中空部を有していてもよく、内蔵された特異成分１４０の離脱を防ぎ、且つ、核酸入り試料溶液が注入し易いように前記穿孔された部分の幅は１０μｍ〜１ｍｍ以内に形成するが、１００〜５００μｍであってもよい。なお、前記フィルム状の分離膜は光学透明度が高くて光学測定が行えるものであってもよい。
【００６９】
２．試料注入用マイクロチャンバープレートの載置段階（Ｓ２０）
【００７０】
図１０から図１２を参照すると、試料注入用マイクロチャンバープレートの載置段階（Ｓ２０）では、上開放口付きマイクロチャンバープレート収容部２００に試料注入用マイクロチャンバープレート１００が載置される。図面符号２００Ｓは、マイクロチャンバープレート収容部２００が互いに連結されてなる多数のマイクロチャンバープレート収容部セットを示す。
【００７１】
３．蓋体部配設段階（Ｓ３０）
【００７２】
図１を参照すると、蓋体部配設段階（Ｓ３０）は、マイクロチャンバープレート収容部蓋体の製造段階（Ｓ３１）と、一時貯留部蓋体の製造段階（Ｓ３２）と、一時貯留部蓋体の取り付け段階（Ｓ３３）及び試料溶液の一時貯留段階（Ｓ３４）を含む。
【００７３】
図１３を参照すると、マイクロチャンバープレート収容部蓋体の製造段階（Ｓ３１）では、一時貯留部３１２と補助蓋体部３１４とが一体に形成されたマイクロチャンバープレート収容部蓋体３１０が製造される。図面符号３１０Ｓは、マイクロチャンバープレート収容部蓋体３１０が互いに連結されてなる多数のマイクロチャンバープレート収容部蓋体セットを示す。
【００７４】
図１３を参照すると、一時貯留部３１２は、核酸入り試料溶液が一時的に貯留される容器であって、その下面に容器連通部が形成される。容器連通部は、外力によって拡開される切り込み３１２−１であってもよい。このため、一時貯留部３１２の下面に外力が作用しない場合に、一時貯留部３１２に一時的に貯留された核酸入り試料溶液は切り込み３１２−１を介して一時貯留部３１２の外部に流出されなくなる。一時貯留部３１２は、シリコン材質から形成されてもよい。なお、切り込み３１２−１の形状は、「＋」状であってもよく、「＜」状であってもよく、「＝」状であってもよく、「×」状であってもよい。
【００７５】
図１３を参照すると、補助蓋体部３１４は、一時貯留部３１２の周面の上端に連なって水平方向に形成される板状のものである。補助蓋体部３１４には、上下面を貫通する補助蓋体部貫通孔３１４−１が形成される。
【００７６】
図１４を参照すると、一時貯留部蓋体の製造段階（Ｓ３２）では、上下面を貫通する一時貯留部蓋体貫通孔３２４が形成された一時貯留部蓋体３２０が製造される。一時貯留部蓋体３２０は、薄いフィルム状であってもよい。図面符号３２０Ｓは、一時貯留部蓋体３２０が互いに連結されてなる多数の一時貯留部蓋体セットを示す。
【００７７】
図１５を参照すると、一時貯留部蓋体３２０は、マイクロチャンバープレート収容部蓋体３１０の上端に取り付けられた場合に、補助蓋体部貫通孔３１４−１を外部に露出させ、一時貯留部３１２の上端の一部を密閉するように形成される。この場合、一時貯留部３１２の上端の残部は、一時貯留部蓋体貫通孔３２４を介して外部に露出される。
【００７８】
図１５を参照すると、一時貯留部蓋体の取り付け段階（Ｓ３３）では、一時貯留部蓋体３２０がマイクロチャンバープレート収容部蓋体３１０の上端に取り付けられる。一時貯留部蓋体３２０の取り付けのために、マイクロチャンバープレート収容部蓋体３１０に接着剤が予め塗布されてもよいが、接着剤は、高分子性接着剤または両面テープなどであってもよい。このため、一時貯留部３１２の上端の一部は密閉され、補助蓋体部貫通孔３１４−１及び一時貯留部３１２の上端の残部は一時貯留部蓋体貫通孔３２４を介して外部に露出される。一時貯留部蓋体の取り付け段階（Ｓ３３）が行われることにより蓋体部３００が形成される。
【００７９】
図１１、図１５及び図１６を参照すると、一時貯留部蓋体の取り付け段階（Ｓ３３）が行われると、蓋体部３００がマイクロチャンバープレート収容部２００の上開放口を覆いながらマイクロチャンバープレート収容部２００の上端に載置される。
【００８０】
図１２を参照すると、蓋体部３００がマイクロチャンバープレート収容部２００の上端に載置されると、一時貯留部３１２の下面はマイクロチャンバープレート収容部２００に引き込まれ、一時貯留部３１２の上端及び前記補助蓋体部３１４は前記マイクロチャンバープレート収容部２００の上端に配設される。
【００８１】
図１２を参照すると、蓋体部３００がマイクロチャンバープレート収容部２００の上端に載置されると、マイクロチャンバープレート収容部２００の内側は補助蓋体部貫通孔３１４−１及び一時貯留部蓋体貫通孔３２４を介して外部と連通され、一時貯留部３１２は一時貯留部蓋体貫通孔３２４を介して外部と連通される。
【００８２】
図１２を参照すると、試料溶液一時貯留段階（Ｓ３４）では、一時貯留部蓋体貫通孔３２４を介して一時貯留部３１２に核酸入り試料溶液が一時的に貯留される。
【００８３】
４．試料内蔵マイクロチャンバープレートの製造段階（Ｓ４０）
【００８４】
図１を参照すると、試料内蔵マイクロチャンバープレートの製造段階（Ｓ４０）は、真空及び遠心力印加段階（Ｓ４１）と、真空解放及び遠心力印加段階（Ｓ４２）と、を含む。
【００８５】
真空及び遠心力印加段階（Ｓ４１）では、先ず、蓋体部３００が配設されたマイクロチャンバープレート収容部２００を真空印加可能な遠心分離器の内部に載置する。この場合、図１１を参照すると、一時貯留部蓋体貫通孔３２４を上部に向かわせ、一時貯留部蓋体３２０を前記遠心分離器の回転中心方向に向かわせ、マイクロチャンバープレート収容部２００の下面を前記遠心分離器の回転中心の反対方向に向かわせる。次いで、前記遠心分離器に真空を印加し、前記遠心分離器を作動して蓋体部３００が配設されたマイクロチャンバープレート収容部２００に第１の遠心力を作用させる。真空印加状態で遠心力を加えなければ、核酸入り試料溶液の沸点が下がってバンピング現象が発生することにより汚染が引き起こされる。このため、前記第１の遠心力は、前記遠心分離器内に真空が印加された状態で前記試料溶液のバンピングが抑えられる遠心力である。また、前記第１の遠心力は、切り込み３１２−１が拡開されない大きさの遠心力である。これは、切り込み３１２−１が拡開されて前記試料溶液が分離膜１３０と接触することを防ぐためである。
【００８６】
真空解放及び遠心力印加段階（Ｓ４２）では、切り込み３１２−１が拡開されるように、前記遠心分離器によって発生される遠心力を、前記第１の遠心力よりも大きな第２の遠心力にする。次いで、前記遠心分離器内の真空を解放して、前記試料溶液を切り込み３１２−１及び分離膜１３０を介して試料注入用マイクロチャンバープレート１００に注入する。図１７を参照すると、これにより、チャンバー孔１１２に前記試料溶液が注入されて特異成分１４０（図３参照）と混合された試料内蔵マイクロチャンバープレート１００Ａが製造される。図面符号１５０は、特異成分１４０（図３参照）と前記試料溶液との混合溶液を示す。
【００８７】
本願の発明者は、真空及び遠心力印加段階（Ｓ４１）において前記第１の遠心力を４２ｇ以下にして、試料溶液のバンピングを抑えた。
【００８８】
真空解放及び遠心力印加段階（Ｓ４２）では、遠心力を漸増させて前記第２の遠心力を２４２ｇ以上に維持しながら真空を解放して試料注入用マイクロチャンバープレート１００に前記試料溶液を１分間注入した。この方法と同様にしてチャンバー孔１１２の内部に試料溶液を完全に注入した。
【００８９】
真空解放後に試料溶液を注入するといった方法が効果的である理由は、真空印加時に試料溶液と分離膜１３０とが接触すると、分離膜１３０の特性から、完全な注入が行えないという問題があるためである。
【００９０】
５．分析用マイクロチャンバープレートの製造段階（Ｓ５０）
【００９１】
分析用マイクロチャンバープレートの製造段階（Ｓ５０）では、先ず、試料内蔵マイクロチャンバープレート１００Ａ（図１７参照）を前記遠心分離器から取り出す。次いで、ポリメラーゼ鎖反応（ＰＣＲ）をはじめとする分析反応に際して試料内蔵マイクロチャンバープレート１００Ａ（図１７参照）に内蔵された前記試料溶液が外部に流出しないように、試料内蔵マイクロチャンバープレート１００Ａ（図１７参照）の分離膜１３０の表面を密封する。また、分離膜１３０の表面の密封は、分離膜１３０の光学透明度を増加させることにより、分離膜１３０を用いてチャンバー孔１１２の内部の試料に対する光学測定を行い易くするために行われる。分析用マイクロチャンバープレートの製造段階（Ｓ５０）が行われることにより、ポリメラーゼ鎖反応（ＰＣＲ）をはじめとする分析反応に使用可能な分析用マイクロチャンバープレートが製造される。
【００９２】
実施形態１による分析用マイクロチャンバープレートは、プライマーまたはプローブ入り特異成分１４０が内蔵されることにより、リアルタイムポリメラーゼ鎖反応（ＰＣＲ）に利用可能であり、これに加えて、定温酵素反応、またはＬＣＲ（Ligase
Chain Reaction）などの反応に利用可能であり、しかも、内部に内蔵される特異成分１４０などを変更することにより、これらの反応以外にも種々に利用可能である。
【００９３】
実施形態１の場合、分離膜１３０が多孔性材質であるため、試料内蔵マイクロチャンバープレート１００Ａの分離膜１３０の表面を高分子性オイルで塗布して密封する。高分子性オイルは、ミネラルオイル、シリコンオイル、ハイドロカーボンオイルまたはパラフィンワックスなどであってもよい。分離膜１３０がポリプロピレンメンブレインである場合に、ミネラルオイルにより塗布されて密封されてもよい。
【００９４】
ポリプロピレンメンブレインから形成された分離膜１３０がミネラルオイルにより塗布されて密封されると、親水−疎水効果によって疎水性であるポリプロピレンメンブレインに浸透されていた水入りの試料を疎水性を帯びるミネラルオイルが押し出し、その場に浸透することになる。なお、ミネラルオイルは相対的にポリプロピレンメンブレインとほとんど同じ密度を有するため、分離膜１３０の光学透明度が増してチャンバー孔１１２の内部の試料に対する光学測定が容易になり、ポリプロピレンメンブレインの気孔がミネラルオイルによって密封されるため、チャンバー孔１１２の内部の試料の流出及び蒸発が防がれる。
【００９５】
また、他の実施形態において、分離膜１３０として穿孔可能なフィルムを用いた場合に、試料内蔵マイクロチャンバープレート１００Ａ（図１７参照）の分離膜１３０の表面の密封は接着性フィルム（テープ）を用いて行われてもよい。
【００９６】
さらに、他の実施形態の場合一時貯留部蓋体３２０は、気体は通過させ、前記試料溶液は通過させないメンブレインフィルターであってもよい。一時貯留部蓋体３２０としてのメンブレインフィルターの取り付けのために、マイクロチャンバープレート収容部蓋体３１０に接着剤が予め塗布されていてもよいが、接着剤は、高分子性接着剤または両面テープなどであってもよい。一時貯留部蓋体３２０は、マイクロチャンバープレート収容部蓋体３１０の上端に取り付けられた場合に補助蓋体部貫通孔３１４−１の上端及び一時貯留部３１２の上端を覆うように形成される。この場合、試料溶液一時貯留段階（Ｓ３４）は、一時貯留部蓋体の取り付け段階（Ｓ３３）に先立って行われる
【００９７】
さらに、他の実施形態の場合、一時貯留部蓋体製造段階（Ｓ３２）及び一時貯留部蓋体の取り付け段階（Ｓ３３）を含んでいなくてもよい。この場合、蓋体部３００は、マイクロチャンバープレート収容部蓋体３１０であってもよい。したがって、遠心力印加段階（Ｓ４１）が行われる前には一時貯留部３１２の開放された上側を介して前記試料溶液が流出されないように、一時貯留部３１２の底面を下方（重力の作用方向）に向かわせる。遠心力印加段階（Ｓ４１）が行われることにより、一時貯留部３１２の開放された上面が前記遠心分離器の回転中心方向を向き、一時貯留部３１２の下面、すなわち、切り込み３１２−１の形成面が前記遠心分離器の回転中心の反対方向を向く。
【００９８】
さらにまた、他の実施形態の場合、一時貯留部蓋体３２０は、補助蓋体部貫通孔３１４−１及び一時貯留部３１２をそれぞれ覆うように形成されてもよい。この場合、一時貯留部蓋体３２０は、気体は通過させ、前記試料溶液は通過させないメンブレインフィルターから形成される。この場合、一時貯留部蓋体３２０には、一時貯留部蓋体貫通孔３２４が形成されない。
【００９９】
実施形態２
【０１００】
実施形態２は、本発明に係る試料内蔵マイクロチャンバープレートの製造方法に関する。
【０１０１】
実施形態２は、実施形態１で説明した試料注入用マイクロチャンバープレートの製造段階（Ｓ１０）と、試料注入用マイクロチャンバープレートの載置段階（Ｓ２０）と、蓋体部配設段階（Ｓ３０）及び試料内蔵マイクロチャンバープレートの製造段階（Ｓ４０）を含む。
【０１０２】
これらについての説明は、実施形態１における説明に準拠するものとする。
【０１０３】
実施形態３
【０１０４】
実施形態３は、本発明に係る分析用マイクロチャンバープレートに関する。分析用マイクロチャンバープレート（図示せず）は、試料内蔵マイクロチャンバープレート１００Ａ（図１７参照）と分離膜１３０の部分を除いては同様であるため、図１７を参照して説明する。
【０１０５】
図１７及び図６を参照すると、実施形態３は、単位数の原チャンバー孔１１０−１Ｈが上下に貫設される原マイクロチャンバー胴体１１０−１を有する。
【０１０６】
図１７及び図７を参照すると、原マイクロチャンバー胴体１１０−１の表面及び単位数の原チャンバー孔１１０−１Ｈ（図６参照）の内面には、高分子コーティング層１１０−２が形成される。高分子コーティング層１１０−２によって単位数の原チャンバー孔１１０−１Ｈ（図６参照）に対応する単位数のチャンバー孔１１２が生成される。
【０１０７】
図１７及び図８を参照すると、マイクロチャンバー胴体１１０の下面には、単位数のチャンバー孔１１２の下開放口を密閉するように胴体密閉部１２０が形成される。胴体密閉部１２０は、核酸入り試料溶液の流出を遮断するためのものである。なお、胴体密閉部１２０は、光を反射する材質から形成されるが、ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）から形成されてもよい。
【０１０８】
図１７を参照すると、マイクロチャンバー胴体１１０の上面には、単位数のチャンバー孔１１２の上開放口を覆う密封済み分離膜（図示せず）が形成される。前記密封済み分離膜（図示せず）は、多孔性材質の分離膜１３０が高分子性オイルにより塗布されて密封されることで形成される。前記高分子性オイルは、ミネラルオイル、シリコンオイル、ハイドロカーボンオイルまたはパラフィンワックスなどであってもよい。なお、多孔性材質の分離膜１３０は、ミネラルオイルにより塗布されることにより光学透明度が増して密封可能なポリプロピレンメンブレインであってもよい。
【０１０９】
図１７の単位数のチャンバー孔１１２のそれぞれには、プライマーやプローブ入り核酸の分析のための特異成分１４０と核酸入り試料溶液が内蔵される。図面符号１５０は、これらの混合液を表す。
【０１１０】
これらの他に、未説明事項は実施形態１における説明に準拠するものとする。
【０１１１】
実施形態４
【０１１２】
実施形態４は、本発明に係る試料内蔵マイクロチャンバープレートの製造装置セットに関する。
【０１１３】
図１０及び図１２を参照すると、実施形態４は、試料注入用マイクロチャンバープレート１００が載置可能なマイクロチャンバープレート収容部２００を有する。マイクロチャンバープレート収容部２００の上端には、試料注入用マイクロチャンバープレート１００を載置するための上開放口が形成される。
【０１１４】
図１０及び図１２を参照すると、マイクロチャンバープレート収容部２００の上部には、マイクロチャンバープレート収容部２００の上開放口を覆うマイクロチャンバープレート収容部蓋体３１０が載置される。
【０１１５】
図１２及び図１５を参照すると、マイクロチャンバープレート収容部蓋体３１０は、前記試料溶液が一時貯留可能な一時貯留部３１２と、一時貯留部３１２の周面に連設される板状の補助蓋体部３１４と、を備える。
【０１１６】
図１３を参照すると、一時貯留部３１２の下面には容器連通部が形成される。容器連通部は、外力によって拡開される切り込み３１２−１であってもよい。なお、補助蓋体部３１４には、上下面を貫通する補助蓋体部貫通孔３１４−１が形成される。
【０１１７】
図１１及び図１２を参照すると、一時貯留部３１２の下面はマイクロチャンバープレート収容部２００に引き込まれ、一時貯留部３１２の上端及び補助蓋体部３１４はマイクロチャンバープレート収容部２００の上端に配設される。
【０１１８】
図１２及び図１５を参照すると、マイクロチャンバープレート収容部蓋体３１０の上端には一時貯留部蓋体３２０が取り付けられる。一時貯留部蓋体３２０は、一時貯留部３１２の上端の一部は密閉し、一時貯留部蓋体貫通孔３２４を介して補助蓋体部貫通孔３１４−１及び一時貯留部３１２の上端の残部を外部に露出させるように取り付けられる。
【０１１９】
これらの他に、未説明事項は、実施形態１における説明に準拠するものとする。
【０１２０】
実施形態５
【０１２１】
実施形態５は、本発明に係る分析用マイクロチャンバープレートの製造方法に関する。
【０１２２】
図１８を参照すると、実施形態５は、試料注入用マイクロチャンバープレートの製造段階（Ｓ１００）と、試料溶液貯留空間の形成段階（Ｓ２００）と、試料内蔵マイクロチャンバープレートの製造段階（Ｓ３００）及び分析用マイクロチャンバープレートの製造段階（Ｓ４００）を含む。
【０１２３】
これらのうち、試料注入用マイクロチャンバープレートの製造段階（Ｓ１００）及び分析用マイクロチャンバープレートの製造段階（Ｓ４００）は、実施形態１における説明に準拠するものとする。
【０１２４】
１．試料溶液貯留空間の形成段階（Ｓ２００）
【０１２５】
図１８を参照すると、試料溶液貯留空間の形成段階（Ｓ２００）は、マイクロチャンバープレート収容部の製造段階（Ｓ２１０）と、マイクロチャンバープレート収容部蓋体の製造段階（Ｓ２２０）と、係合ケースの製造段階（Ｓ２３０）と、ケース係合段階（Ｓ２４０）及びケース蓋体の取り付け段階（Ｓ２５０）を含む。
【０１２６】
図１９及び図２１を参照すると、マイクロチャンバープレート収容部の製造段階（Ｓ２１０）では、マイクロチャンバープレート収容部１２００が形成される。マイクロチャンバープレート収容部１２００は、平らな板状に形成されてもよい。マイクロチャンバープレート収容部１２００は、試料注入用マイクロチャンバープレート１００を載置するためのものである。図面符号１２００Ｓは、マイクロチャンバープレート収容部１２００が多数一体に形成されたマイクロチャンバープレート収容部セットを示す。なお、マイクロチャンバープレート収容部セット１２００Ｓの側面には、収容部係合突起１２００Ｓ−１が突設される。
【０１２７】
図１９及び図２１を参照すると、マイクロチャンバープレート収容部蓋体の製造段階（Ｓ２２０）では、一時貯留部１３１２と補助蓋体部１３１４とが一体に形成されたマイクロチャンバープレート収容部蓋体１３１０が製造される。図１９の図面符号１３１０Ｓは、マイクロチャンバープレート収容部蓋体１３１０が互いに連結されてなる多数のマイクロチャンバープレート収容部蓋体セットを示す。
【０１２８】
図１９及び図２１を参照すると、一時貯留部１３１２は、核酸入り試料溶液が一時的に貯留される容器であって、その下面に容器連通部が形成される。容器連通部は、外力によって拡開される切り込み１３１２−１であってもよい。切り込み１３１２−１についての説明は、実施形態１における説明に準拠するものとする。
【０１２９】
図１９及び図２１を参照すると、補助蓋体部１３１４は、一時貯留部１３１２の周面に連なって水平方向に形成されるが、突起状であってもよく、実施形態１でのように板状であってもよい。補助蓋体部１３１４には、上下面を貫通する補助蓋体部貫通孔１３１４−１が形成される。
【０１３０】
図１９及び図２１を参照すると、マイクロチャンバープレート収容部蓋体１３１０の下周縁にはリング状の蓋体支持部１３１６が突設される。蓋体支持部１３１６は、補助蓋体部貫通孔１３１４−１の下端が蓋体支持部１３１６の内側に位置するように形成される。
【０１３１】
図１９及び図２１を参照すると、係合ケースの製造段階（Ｓ２３０）では、ケース貫通孔１４２４付き係合ケース１４００が形成される。ケース貫通孔１４２４は、係合ケース１４００がマイクロチャンバープレート収容部蓋体１３１０の上端に載置された場合に、補助蓋体部貫通孔１３１４−１及び一時貯留部１３１２とそれぞれ連通されるように形成される。図１９の１４００Ｓは、係合ケース１４００が互いに連結されてなる多数の係合ケースセットを示す。なお、係合ケースセット１４００Ｓの側面には、収容部係合突起１２００Ｓ−１が嵌まり込むケース係合溝１４００Ｓ−１が形成される。
【０１３２】
図１９及び図２１を参照すると、ケース係合段階（Ｓ２４０）では、係合ケース１４００がマイクロチャンバープレート収容部蓋体１３１０の上端を押し付けながらマイクロチャンバープレート収容部１２００に係合される。係合ケース１４００とマイクロチャンバープレート収容部１２００との係合は、収容部係合突起１２００Ｓ−１がケース係合溝１４００Ｓ−１に嵌まり込まれることにより行われる。係合ケース１４００がマイクロチャンバープレート収容部１２００に係合されることにより、蓋体支持部１３１６の下端が試料注入用マイクロチャンバープレート１００の上面に密着され、これにより、マイクロチャンバープレート収容部蓋体１３１０と試料注入用マイクロチャンバープレート１００の上面との間に試料溶液貯留空間Ｓが形成される。ケース係合段階（Ｓ２４０）が行われることにつれて、補助蓋体部貫通孔１３１４−１の下端は試料溶液貯留空間Ｓに連通され、ケース貫通孔１４２４は補助蓋体部貫通孔１３１４−１及び一時貯留部１３１２とそれぞれ連通される。
【０１３３】
図１９及び図２１を参照すると、ケース蓋体の取り付け段階（Ｓ２５０）では、ケース蓋体１５００が係合ケース１４００に取り付けられる。ケース蓋体１５００の取り付けのための係合ケース１４００には接着剤が予め塗布されていてもよいが、接着剤は、高分子性接着剤であってもよく、両面テープなどであってもよい。ケース蓋体１５００には、上下面を貫通するケース蓋体貫通孔１５２４が形成される。ケース蓋体の取り付け段階（Ｓ２５０）は、ケース蓋体貫通孔１５２４が補助蓋体部貫通孔１３１４−１は外部に露出させ、一時貯留部１３１２の一部は密閉するように行われる。図１９の１５００Ｓは、ケース蓋体１５００が互いに連結されてなる多数のケース蓋体セットを示す。
【０１３４】
なお、ケース蓋体の取り付け段階（Ｓ２５０）が行われた後には、ケース蓋体貫通孔１５２４を介して一時貯留部１３１２に核酸入り試料溶液が一時的に貯留される。
【０１３５】
２．試料内蔵マイクロチャンバープレートの製造段階（Ｓ３００）
【０１３６】
試料内蔵マイクロチャンバープレートの製造段階（Ｓ３００）は、実施形態１と同様に、真空及び遠心力印加段階と、真空解放及び遠心力印加段階と、を含む。
【０１３７】
真空及び遠心力印加段階では、先ず、互いに密着された試料注入用マイクロチャンバープレート１００及び前記マイクロチャンバープレート収容部蓋体１３１０を真空印加可能な遠心分離器の内部に載置する。この場合、図２１を参照すると、ケース蓋体貫通孔１５２４を上部に向かわせ、ケース蓋体１５００を前記遠心分離器の回転中心方向に向かわせ、一時貯留部３１２の底面を前記遠心分離器の回転中心の反対方向に向かわせる。これらの他の事項は、実施形態１における説明に準拠するものとする。
【０１３８】
また、他の実施形態の場合、係合ケース１４００にはケース貫通孔１４２４を覆うケース蓋体１５００が取り付けられる。ケース蓋体１５００は、気体は通過させ、前記試料溶液は通過させないメンブレインフィルターから形成される。この場合、ケース蓋体１５００にはケース貫通孔１４２４が形成されない。なお、ケース蓋体１５００であるメンブレインフィルターの取り付けのために、係合ケース１４００には接着剤が予め塗布されてもよいが、接着剤は、高分子性接着剤であってもよく、両面テープなどであってもよい。
【０１３９】
さらに、他の実施形態の場合、係合ケース１４００にはケース蓋体１５００が取り付けられていなくてもよい。
【０１４０】
その他の事項は、実施形態１における説明に準拠するものとする。
【０１４１】
実施形態６
【０１４２】
実施形態６は、本発明に係る試料内蔵マイクロチャンバープレートの製造方法に関する。
【０１４３】
実施形態６は、実施形態５において説明した試料注入用マイクロチャンバープレートの製造段階（Ｓ１００）と、試料溶液貯留空間の形成段階（Ｓ２００）及び試料内蔵マイクロチャンバープレートの製造段階（Ｓ３００）を含む。
これらについての説明は、実施形態５における説明に準拠するものとする。
【０１４４】
実施形態７
【０１４５】
実施形態７は、本発明に係る試料内蔵マイクロチャンバープレートの製造装置セットに関する。
【０１４６】
図１９及び図２１を参照すると、実施形態７は、マイクロチャンバープレート収容部１２００を備える。マイクロチャンバープレート収容部１２００は、平らな板状に形成されてもよい。マイクロチャンバープレート収容部１２００は、試料注入用マイクロチャンバープレート１００を載置するためのものである。図面符号１２００Ｓは、マイクロチャンバープレート収容部１２００が多数一体に形成されたマイクロチャンバープレート収容部セットを示す。なお、マイクロチャンバープレート収容部セット１２００Ｓの側面には、収容部係合突起１２００Ｓ−１が突設される。
【０１４７】
図１９及び図２１を参照すると、実施形態７は、一時貯留部１３１２と補助蓋体部１３１４とが一体に形成されたマイクロチャンバープレート収容部蓋体１３１０を備える。図１９の図面符号１３１０Ｓは、マイクロチャンバープレート収容部蓋体１３１０が互いに連結されてなる多数のマイクロチャンバープレート収容部蓋体セットを示す。
【０１４８】
図１９及び図２１を参照すると、一時貯留部１３１２は、核酸入り試料溶液が一時的に貯留される容器であって、その下面に容器連通部が形成される。容器連通部は、外力によって拡開される切り込み１３１２−１であってもよい。切り込み１３１２−１についての説明は、実施形態１における説明に準拠するものとする。
【０１４９】
図１９及び図２１を参照すると、補助蓋体部３１４は、一時貯留部３１２の周面に連なって水平方向に形成されるが、突起状であってもよく、実施形態１と同様に板状であってもよい。補助蓋体部３１４には、上下面を貫通する補助蓋体部貫通孔１３１４−１が形成される。
【０１５０】
図１９及び図２１を参照すると、マイクロチャンバープレート収容部蓋体１３１０の下周縁には、リング状の蓋体支持部１３１６が突設される。蓋体支持部１３１６は、補助蓋体部貫通孔１３１４−１の下端が蓋体支持部１３１６の内側に位置するように形成される。
【０１５１】
図１９及び図２１を参照すると、実施形態７は、係合ケース１４００を備える。係合ケース１４００には、上下面を貫通するケース貫通孔１４２４が形成される。ケース貫通孔１４２４は、係合ケース１４００がマイクロチャンバープレート収容部蓋体１３１０の上端に載置された場合に、補助蓋体部貫通孔１３１４−１及び一時貯留部１３１２とそれぞれ連通されるように形成される。図１９の１４００Ｓは、係合ケース１４００が互いに連結されてなる多数の係合ケースセットを示す。なお、係合ケースセット１４００Ｓの側面には、収容部係合突起１２００Ｓ−１が嵌まり込むケース係合溝１４００Ｓ−１が形成される。
【０１５２】
図１９及び図２１を参照すると、係合ケース１４００は、マイクロチャンバープレート収容部蓋体１３１０の上端を押し付けながらマイクロチャンバープレート収容部１２００に係合される。係合ケース１４００とマイクロチャンバープレート収容部１２００との係合は、収容部係合突起１２００Ｓ−１がケース係合溝１４００Ｓ−１に嵌まり込むことにより行われる。係合ケース１４００がマイクロチャンバープレート収容部１２００に係合されることにより、蓋体支持部１３１６の下端が試料注入用マイクロチャンバープレート１００の上面に密着され、これにより、マイクロチャンバープレート収容部蓋体１３１０と試料注入用マイクロチャンバープレート１００の上面との間に試料溶液貯留空間Ｓが形成される。係合ケース１４００がマイクロチャンバープレート収容部１２００と係合されることにより、補助蓋体部貫通孔１３１４−１の下端は試料溶液貯留空間Ｓに連通され、ケース貫通孔１４２４は補助蓋体部貫通孔１３１４−１及び一時貯留部１３１２とそれぞれ連通される。
【０１５３】
図１９及び図２１を参照すると、係合ケース１４００には、ケース蓋体１５００が取り付けられる。ケース蓋体１５００には、上下面を貫通するケース蓋体貫通孔１５２４が形成される。ケース蓋体貫通孔１５２４は、ケース蓋体１５００が係合ケース１４００に取り付けられた場合に、補助蓋体部貫通孔１３１４−１は外部に露出させ、一時貯留部１３１２の一部は密閉するように形成される。図１９の１５００Ｓは、ケース蓋体１５００が互いに連結されてなる多数のケース蓋体セットを示す。
【０１５４】
その他の未説明事項は、実施形態５における説明に準拠するものとする。
【符号の説明】
【０１５５】
１００：試料注入用マイクロチャンバープレート
１００Ａ：試料内蔵マイクロチャンバープレート
１１２：チャンバー孔
１２０：胴体密閉部
１３０：分離膜
１４０：特異成分
２００：マイクロチャンバープレート収容部
３００：蓋体部
３１０：マイクロチャンバープレート収容部蓋体
３１２：一時貯留部
３１２−１：切り込み
３１４：補助蓋体部
３１４−１：補助蓋体部貫通孔
３２０：一時貯留部蓋体
１２００：マイクロチャンバープレート収容部
１３１０：マイクロチャンバープレート収容部蓋体
１３１２：一時貯留部
１３１２−１：切り込み
１３１４：補助蓋体部
１３１４−１：補助蓋体部貫通孔
１４００：係合ケース
１４２４：ケース貫通孔
１５００：ケース蓋体
Ｓ：試料溶液貯留空間
【図１】
2013538559.tif 000003
【図２】
2013538559.tif 000004
【図３】
2013538559.tif 000005
【図４】
2013538559.tif 000006
【図５】
2013538559.tif 000007
【図６】
2013538559.tif 000008
【図７】
2013538559.tif 000009
【図８】
2013538559.tif 000010
【図９】
2013538559.tif 000011
【図１０】
2013538559.tif 000012
【図１１】
2013538559.tif 000013
【図１２】
2013538559.tif 000014
【図１３】
2013538559.tif 000015
【図１４】
2013538559.tif 000016
【図１５】
2013538559.tif 000017
【図１６】
2013538559.tif 000018
【図１７】
2013538559.tif 000019
【図１８】
2013538559.tif 000020
【図１９】
2013538559.tif 000021
【図２０】
2013538559.tif 000022
【図２１】
2013538559.tif 000023
【国際調査報告】
2013538559.tif 000024
2013538559.tif 000025
2013538559.tif 000026
2013538559.tif 000027