(57)【要約】本発明の方法は、反芻動物から乳のサンプル中の、デノボ合成から誘導される少なくとも１つの脂肪酸（ＡＧ）の重量を少なくとも測定することを含み、かつ次の式によりメタンの量を評価することを特徴とする：ＣＨ４＝  ａ＊（デノボ  ＡＧ）＋ｙ＊（ＢＨ  ＡＧ）＋ｚ：ここで、「ＣＨ４」は前記反芻動物による乳１キログラム又は１リットル当たり生成されるメタンのグラム数で表した量であり、「デノボ  ＡＧ」とは、前記サンプル中で測定された、それ自体又は他のデノボ脂肪酸の前記少なくとも測定された量との組み合わせて取得された乳１キログラム当たり又は１リットル当たりのグラム数で表された少なくとも前記脂肪酸の前記サンプル中での量であり；「ＢＨ  ＡＧ」とは、前記サンプル中で測定された、それ自体又は他の腸内生体水素化から誘導される他の脂肪酸の前記少なくとも測定された量との組み合わせて取得された乳１キログラム当たり又は１リットル当たりのグラム数で表された少なくとも前記脂肪酸の前記サンプル中での量である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
畜産反芻動物により生成されるメタン量を評価するための方法であり、前記方法は、
前記反芻動物からの乳のサンプル中の、デノボ合成から誘導される、少なくとも１つの脂肪酸の重量（ＡＧ）を測定することを含み、及び
次式：ＣＨ４＝ａ＊（デノボ  ＡＧ）＋ｙ＊（ＢＨ  ＡＧ）＋ｚ：
によりメタンの量を評価すること；を含むことを特徴とし、
ここで、
−  「ＣＨ４」は、前記反芻動物による乳１キログラム又は１リットル当たり生成されるメタンのグラム数で表した量であり、
−  「デノボ  ＡＧ」は、前記サンプル中で測定された、それ自体又は他のデノボ脂肪酸の前記少なくとも測定された量との組み合わせて取得された乳１キログラム当たり又は１リットル当たりのグラム数で表された少なくとも前記脂肪酸の前記サンプル中での量であり；
−  「ＢＨ  ＡＧ」は、前記サンプル中で測定された、それ自体又は他の腸内生体水素化から誘導される他の脂肪酸の前記少なくとも測定された量との組み合わせて取得された乳１キログラム当たり又は１リットル当たりのグラム数で表された少なくとも前記脂肪酸の前記サンプル中での量であり；
−  ａは、ｙはゼロである場合−２から２、又はｙがゼロとは異なる場合には０．１と１０の間の数であり；
−  ｙは、ａがゼロではない場合には−１０から＋１０、又はａがゼロの場合には−５０から−０．１の間の数であり；
−  ａ及びｙが共に同時にゼロではなく；
−  ｚは−１００と＋１００の間の数を含む、方法。
【請求項２】
請求項１に記載の方法であり、「デノボＡＧ」は次の定義：
（ａ）４から１４炭素原子を持つ飽和脂肪酸の量（ＡＧＳ）；
（ｂ）４から１６炭素原子を持つ飽和脂肪酸の量；
（ｃ）Ｃ１２及びＣ１４飽和脂肪酸の量；
（ｄ）Ｃ４、Ｃ６、Ｃ８、Ｃ１０、Ｃ１２、Ｃ１４及びＣ１６飽和脂肪酸の量の単独又はこれらの少なくとも２つの組み合わせ、から選択される、ことを特徴とする、方法。
【請求項３】
請求項２に記載の方法であり、ｙがゼロであり、前記メタンの量が次の式：
ＣＨ４＝（１．０７±０．５）＊Ｃ４からＣ１４飽和脂肪酸の和＋（４．８±３）
で与えられることを特徴とする、方法。
【請求項４】
請求項１又は２のいずれか一項に記載の方法であり、ｙがゼロではなく、「ＢＨ  ＡＧ」が次の定義：
（ａ）不飽和脂肪酸の全量（ＡＧＩ）；
（ｂ）少なくとも１８炭素原子を含む不飽和脂肪酸（ＡＧＩ）の全量；
（ｃ）少なくとも１８炭素原子を含む不飽和脂肪酸（ＡＧＩ）の全量、但Ｃ１８：１ｎ−９、Ｃ１８：２ｎ−６及びＣ１８：３ｎ−３不飽和脂肪酸を除く；
（ｄ）Ｃ１８飽和脂肪酸（Ｃ１８：０）の量；
（ｅ）トランス脂肪酸又はその一部の量、から選択されることを特徴とする、方法。
【請求項５】
請求項４に記載の方法であり、前記メタンの量が以下の式：
ＣＨ４＝（１．１４±０．４）＊Ｃ４からＣ１４飽和脂肪酸の和−（０．０７±０．３）＊［ＡＧＩ−（Ｃ１８：１ｎ−９＋Ｃ１８：２ｎ−６＋Ｃ１８：３ｎ−３）］＋（４．７±０．５）、
ここで、［ＡＧＩ−（Ｃ１８：１ｎ−９＋Ｃ１８：２ｎ−６＋Ｃ１８：３ｎ−３）］は、Ｃ１８：１ｎ−９を除く不飽和脂肪酸の全量を表す、で与えられることを特徴とする方法。
【請求項６】
請求項１乃至５のいずれか一項に記載の方法であり、前記デノボ合成から誘導される脂肪の量が、赤外線スペクトル法、好ましくは中赤外線領域のスペクトル法で測定されることを特徴とする方法。
【請求項７】
請求項１乃至６のいずれか一項に記載の方法であり、
（ａ）前記方法は標準乳として知られるいくつかのサンプル乳を用いて繰り返され
（ｂ）それぞれの標準サンプルの測定されたＣＨ４の量が、それぞれの赤外線吸収スペクトルと関連付けられる；
（ｃ）試験される新たなサンプルの赤外線吸収スペクトルが記録される；
（ｄ）前記スペクトルを前記標準サンプルのスペクトルと比較される；
（ｅ）前記新たなサンプルに関連付けられるＣＨ４の量を、標準サンプルのスペクトルと比較することで導き出す、ことを特徴とする方法。
【請求項８】
請求項７に記載の方法であり、ステップ（ｄ）で、前記比較を数学的統計学的モデルを用いて行い、かつステップ（ｅ）で、ステップ（ｄ）のモデルで得られた評価式を用いて行うことを特徴とする方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、酪農反芻動物により生成されるメタンの量を評価する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
腸内メタン（ＣＨ４）は反芻動物内でおくびで放出されるガスである。メタンはこれらの動物のルーメン（第１胃）内で飼料の発酵の際に形成されこれは前記動物のエネルギー損失を表す。しかしメタンはまた、強力な温室効果ガスでもある。
【０００３】
地球規模では、畜産は温室効果ガスの全放出量の１８％であり得る（ＦＡＯ、２００６）。反芻動物の腸内発酵により放出されるＣＨ４は、地球全体の温室効果ガス放出量全体の３から５％を占めることが示される。
【０００４】
大気中ではその寿命はほんの１２年（二酸化炭素の１００年に比較して）であるが、前記腸内メタンの放出を低減するための技術を実現することは非常に興味が持たれている。
【０００５】
反芻動物からの腸内メタン放出を削減することは、従って、経済性と環境問題との２重の課題に一致する。
【０００６】
種々の技術がこれまで、反芻動物、特に酪農反芻動物から腸内メタン放出を削減するために提案されてきた。
【０００７】
しかし、これらの技術で有効な測定をすることは、ルーチン測定を可能にする簡単な方法が開発されるべきであるという点でなお問題として残されている。
【０００８】
腸内メタン放出は反芻動物の発酵に特徴的であり、生成される乳１キログラム当たりのメタンの量は前記乳牛の生産性、摂取飼料、ルーメン生態系などに関して大きく変動する。
【０００９】
この点にかかる科学的文献によりデータは、乳キログラム当たりの非常に広い範囲にわたる変動が示されている。事実、約メタン７から２５グラムが、生成される乳１キログラム当たり放出され得る。
【００１０】
前記乳の「メタンフットプリント」は、酪農の際に１匹の乳牛により毎日放出されるメタン量を一日当たり生産される乳のキログラム数で割り算して定められる。これは、乳１キログラム当たりメタン（ＣＨ４）のグラム数で表現される。
【００１１】
従って、信頼性のある方法で、乳１キログラム当たりのメタン放出量を、その乳の成分に関連させて評価でき、メタンフットプリント、言い換えると乳１キログラムあたりのメタン生成量を低減又は最小化する畜産技術を見出しかつ促進することは興味が持たれるものである。
【００１２】
科学的文献は、腸内メタン放出を低減するために多くの可能な方法を記載している。
【００１３】
網羅されるものではないが、次の方法が留意され得る：
−  生産性（乳牛１頭１日当たり生産される乳のキログラム）の増加が、乳牛１頭１日当たり生産されるメタンの放出量を増加させるが、しかし、乳１リットル当たりのメタンの量が減少する（前記用語「乳牛」はここでは、最も広く畜産反芻動物として飼育されているからことから使用されている）；
−  前記ルーメン内で発酵されない食用油の摂取；
−  前記ルーメンのある微生物集団への毒物：抗生物質、エッセンシャルオイル、野菜抽出物、脂肪酸などの使用であり、メタンへの経路を阻害して前記プロピオン酸塩経路により水素の使用を増加させる；
−  プロピオン酸塩前駆体（マレイン酸塩、フマル酸塩など）の使用であり、これはまたメタン経路を阻害してプロピオン酸塩経路を優位にする；
−  前記方法の組み合わせ、などである。
【００１４】
これらの効果を説明する刊行物には測定方法として：
（ａ）インビトロ技術：これらは常にインビボを表すものではない。
（ｂ）短時間の実験期間でのインビボ技術：これらは前記効果が全期間で維持されることを保証するものではない、の使用を開示する。
これらは常に実行が難しく実験的制限がある。
【００１５】
最も広く知られている方法は：
−  「カロリメトリックチャンバ」及び
−  「ＳＦ６方法」、即ち、おくびガスサンプル収集後重量でメタン放出量を読み取り、インビボで動物のルーメン内に導入された定量化拡散器から誘導された既知量のＳＦ６ガスと比較する方法である。
（ｃ）「レーザー検出装置」方法：最近の技術であり、シンシチュ（その場）でレーザー放射によりメタン放出を測定できるが、最初の刊行物からは高い信頼性が得られない。
（ｄ）摂取飼料の消化量及び種類から予測する：多くの式が異なる著者から提案されている。これらは正確なものではなく、定常的に測定可能ではないか一般には知られていない多くに基準に依存している（例えば、乳牛の摂取、飼料の発酵など）。
（ｅ）乳牛の生産生からの予測：乳牛がより多く乳を生産するほど、乳１キログラム当たりのメタン放出量は低くなる。
【００１６】
生産性との関連付けは飼料摂取のタイプと関連付けされた違いを統合化せず、参考文献を注意深く読むと、メタンの放出が異なる摂取飼料で測定される場合に、同じ生産性レベルでも大きな相違が見られる、ということを示す。
【００１７】
本発明者の仏国特許第０８５４２３０号明細書では、信頼性の高い簡単な方法が記載され、これは一方では同時に乳牛の生産性と、ルーメンの脂肪酸、乳の脂肪酸及びメタンの間の化学量論的関係により前記腸内発酵の方向とが統合化されている。
【００１８】
最近の刊行物（Ｍａｒｔｉｎ  ２００８、Ｃｈｉｌｌｉａｒｄ  ２００９．）ではこの関連付けが確認されている。
【００１９】
それにもかかわらず、この方法を実施するためには：
−  この乳牛の生産性を知ること、及び
−  前記乳の脂肪酸プロフィルを実施することが必要であり、これは：
−  前記乳の脂肪酸の抽出及び
−  ガス相クロマトグラフが必要である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００２０】
【特許文献１】仏国特許第０８５４２３０号明細書
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２１】
本発明は、これらの困難性を解消することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００２２】
従って、本発明は、畜産反芻動物により生成されるメタン量を評価するための方法が提案され、前記方法は、前記反芻動物からの乳のサンプル中の、デノボ合成から誘導される、少なくとも１つの脂肪酸の重量（ＡＧ）を測定することを含み、及び次式：ＣＨ４＝ａ＊（デノボ  ＡＧ）＋ｙ＊（ＢＨ  ＡＧ）＋ｚ：
によりメタンの量を評価すること；を含みことを特徴とし、ここで、
−  「ＣＨ４」は前記反芻動物による乳１キログラム又は１リットル当たり生成されるメタンのグラム数で表した量であり、
−  「デノボ  ＡＧ」とは、前記サンプル中で測定された、それ自体又は他のデノボ脂肪酸の前記少なくとも測定された量との組み合わせて取得された乳１キログラム当たり又は１リットル当たりのグラム数で表された少なくとも前記脂肪酸の前記サンプル中での量であり；
−  「ＢＨ  ＡＧ」とは、前記サンプル中で測定された、それ自体又は他の腸内生体水素化から誘導される他の脂肪酸の前記少なくとも測定された量との組み合わせて取得された乳１キログラム当たり又は１リットル当たりのグラム数で表された少なくとも前記脂肪酸の前記サンプル中での量であり；
−  ａは、ｙはゼロである場合−２から２、又はｙがゼロとは異なる場合には０．１と１０の間の数であり；
−  ｙは、ａがゼロではない場合には−１０から＋１０、又はａがゼロの場合には−５０から−０．１の間の数であり；
−  ａ及びｙが共に同時にゼロではなく；
−  ｚは−１００と＋１００の間の数を含む。
【００２３】
この方法により、前記反芻動物の生産性に縛られることな、乳の簡単なサンプルを分析することでＣＨ４の量を決定することが可能となる。
【００２４】
さらに他の有利なかつ非限定的な特徴により：
−  「デノボ  ＡＧ」が次の定義から選択される：
（ａ）４から１４炭素原子を持つ飽和脂肪酸の量（ＡＧＳ）；
（ｂ）４から１６炭素原子を持つ飽和脂肪酸の量；
（ｃ）Ｃ１２及びＣ１４飽和脂肪酸の量；
（ｄ）Ｃ４、Ｃ６、Ｃ８、Ｃ１０、Ｃ１２、Ｃ１４及びＣ１６飽和脂肪酸の量；の単独又はこれらの少なくとも２つの組み合わせ。
−  前記メタン量は次の式で与えられる：
ＣＨ４＝（１．０７±０．５）＊Ｃ４からＣ１４飽和脂肪酸の和＋（４．８±３）。
−  「ＢＨ  ＡＧ」は次の定義から選択される：
（ａ）不飽和脂肪酸の全量（ＡＧＩ）；
（ｂ）少なくとも１８炭素原子を含む不飽和脂肪酸（ＡＧＩ）の全量；
（ｃ）少なくとも１８炭素原子を含む不飽和脂肪酸（ＡＧＩ）の全量、但Ｃ１８：１ｎ−９、Ｃ１８：２ｎ−６及びＣ１８：３ｎ−３不飽和脂肪酸を除く；
（ｄ）Ｃ１８飽和脂肪酸（Ｃ１８：０）の量；
（ｅ）トランス脂肪酸又はその一部の量。
−  メタンの前記量は以下の式で与えられる：
ＣＨ４＝（１．１４±０．４）＊Ｃ４からＣ１４飽和脂肪酸の和−（０．０７±０．３）＊［ＡＧＩ−（Ｃ１８：１ｎ−９＋Ｃ１８：２ｎ−６＋Ｃ１８：３ｎ−３）］＋（４．７±０．５）、ここで、［ＡＧＩ−（Ｃ１８：１ｎ−９＋Ｃ１８：２ｎ−６＋Ｃ１８：３ｎ−３）］は、Ｃ１８：１ｎ−９を除く不飽和脂肪酸の全量を表している。
−  前記デノボ合成から誘導される脂肪酸の量は、赤外線スペクトル法で、好ましくは中赤外線スペクトル法で測定する。
（ａ）前記方法は標準乳として知られるいくつかのサンプル乳を用いて繰り返される；
（ｂ）それぞれの標準サンプルの測定されたＣＨ４の量が、それぞれの赤外線吸収スペクトルと関連付けられる；
（ｃ）試験される新たなサンプルの赤外線吸収スペクトルが記録される；
（ｄ）前記スペクトルを前記標準サンプルのスペクトルと比較される；
（ｅ）前記新たなサンプルに関連付けられるＣＨ４の量を、標準サンプルのスペクトルと比較することで導き出す。
−  好ましくは、ステップ（ｄ）で、前記比較を数学的統計学的モデルを用いて行い、かつステップ（ｅ）で、ステップ（ｄ）のモデルで得られた評価式を用いて行う。
【００２５】
本発明の他の特徴及び利点は以下の詳細な記載を参照することで明らかとなる。
【００２６】
本出願を通じて次の表現は以下のように定義される。
−  「デノボ脂質生成」：乳腺上皮細胞による脂肪酸合成；
−  「デノボ脂肪酸」：乳腺上皮細胞による脂肪酸で、１６以下の炭素原子を含む脂肪酸；
−  「ＢＨ脂肪酸」又は「腸内生体水素化から誘導される脂肪酸」：腸内発酵の過程で少なくとも１つの水素化を経た１８炭素原子を持つ飽和脂肪酸。
これらはゼロ、１又はそれ以上の不飽和性を持つ。
【００２７】
最後に、用語「組み合わせる」とは、加える、差し引く、掛け合わす又は割ることを意味する。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
［１］：  メタン及びＡＧＶ（揮発性脂肪酸）関係−ルーメンとメタン生成
ルーメン中でのＡＧＶの生産とメタンの生成との関連付けは知られており多年研究されている。
【００２９】
従って、ルーメン中での酢酸塩及び酪酸塩の生成は水素を放出し、メタン生成に有利であり、一方でプロピオン酸塩の生成は水素の使用を可能にし従ってメタン生成を抑制する。このことは次の式で表される：
１グルコース（Ｃ６）は、２ピルビン酸塩（Ｃ３）［＋４Ｈ］を与え、
１ピルビン酸塩（Ｃ３）＋Ｈ２Ｏ＝１酢酸塩＋ＣＯ２［＋２Ｈ］であり、及び
１ピルビン酸塩＝１プロピオン酸塩（Ｃ３）［−４Ｈ］。
【００３０】
従って、予想式がＭＯｓｓら（２０００）の刊行物により開発され、ＣＨ４の生成がＡＧＣの生成から予想される。従って、ルーメンでの発酵がＣ２（酢酸塩）及び酪酸塩（Ｃ４）をより生成すると、ＣＨ４の生成がより多くなる。
【００３１】
逆に、ルーメンでのＣ３（プロピオン酸塩）の発酵が多いと、ＣＨ４の生成は減少する。
【００３２】
これから確かな合成式は次のようである（Ｍｏｓｓの式）：
［ＣＨ４］＝０．４５［酢酸塩］＋０．４０［酪酸塩］−０．２７５［プロピオン酸塩］、ここで、［ｘ］＝ｘの量を全ＡＧＶに対する％で表す。
【００３３】
前記デノボ脂肪酸合成とメタン合成との関連付けはここで明らかである、というのはＣ２とＣ４は乳頭で合成されるデノボ脂肪酸（デノボ  ＡＧ）の前駆体だからである。
【００３４】
ルーメンの発酵によりＣ２及びＣ４がより多く存在するほど、前記乳のデノボ脂肪酸合成に利用可能な材料が多く存在することとなる。
【００３５】
［２］：  乳頭及び脂質合成
ルーメン発酵から由来するＣ２及びＣ４のＡＧＶはその後乳腺上皮細胞に取り込まれデノボＡＧ合成の材料として供される。
【００３６】
ＡＧＶ材料の利用可能性が、これらの合成を制限するファクタである場合には（これは極めて普通である）、腸内ＣＨ４の放出と、前記乳中のデノボ合成から由来するＡＧの排泄には関連があり、以下の表に示される。
2013543122.tif 000002
乳腺内皮細胞でデノボＡＧの合成は、Ｍ上で開発されたＭｏｓｓ式が示唆するように、「メタンフットプリント」を持ちルーメン発酵から由来するＣ２とＣ４基質からほとんど生じる。
【００３７】
その後次の飽和脂肪酸の合成で終了する：Ｃ４：０、Ｃ６：０、Ｃ８：０、Ｃ１０：０、Ｃ１２：０、Ｃ１４：０、１６：０。
【００３８】
しかし留意すべきことは、第２相において、前記デノボ合成から由来の前記飽和ＡＧ（ＡＧＳ）が不飽和化される、ということである。
【００３９】
従って、一方では前記二重関係（Ｃ２＋Ｃ４）とＣＨ４（メタン）を用い、及び乳頭で飽和デノボＡＧの合成の前駆体として（Ｃ２＋Ｃ４）を用いて、前記合成されたデノボＡＧの量から放出されるメタンの量を予想しようとするように見える。
【００４０】
乳の脂質はまた、ＡＧＶ基質を用いるデノボ合成から誘導される奇数飽和ＡＧを含みが、またＣ３から誘導されるものも含み、これはメタン生成の影響はない。
従って、奇数ＡＧについて、乳中のこれらの重量とこれらの「メタンフットプリント」との関連性は低いと考えられる。
【００４１】
しかし、ある偶数飽和ＡＧは外因性起源を持ち得るものであり、特にＣ１６：０はこれ自体全乳のＡＧのほとんど１／３であり、種々の起源から派生し、例えば脂肪細胞又は外因性植物油（例えばパーム油）などの保存領域の転移から由来する。
【００４２】
従って、乳１キログラム当たりのメタンフットプリントと、ＡＧの重量との信頼性のある関係を確立するためには、第１に必要なことは、乳１キログラム当たりの重量の信頼性のある測定が可能である、ということである。
【００４３】
［３］：  乳中に存在するデノボＡＧの量の評価
合成メカニズムは次に乳腺中での偶数飽和脂肪酸のエステル化であり、これは多くの経路が交差している。
【００４４】
また、乳中の偶数飽和ＡＧ間の強い関係を見出すことが合理的である。次の表（Ｍｏａｔｅら、２００７）は、この論文で刊行されるメタ分析後の乳中の偶数Ｃ４からＣ１６間の統計的関係を与える。
2013543122.tif 000003
これらのＡＧの全てがお互いに相当な割合で合成経路で関連付けされており、乳中でのこれらの濃度はお互いに関連している、ということが明らかである。
【００４５】
脂肪酸Ｃ１６：０は、他の偶数の短鎖長のＡＧＳよりも、短及び中間的鎖長を持つＡＧＳと弱い関係があるように見えるが、これは部分的に外因性起源によると考えられる。
【００４６】
脂肪酸Ｃ４：０はまた、他の「デノボ」ＡＧよりも関連性が弱いように見えるが、これは他のＡＧとは異なる合成経路及びエステル化経路（乳のトリグリセリド）によるものと考えられ、又は分析困難性によるものと考えられる。
【００４７】
従って、Ｃ２及びＣ４基質として、前記それぞれのＡＧの和又は組み合わせを用いてデノボ合成のマーカーとして使用することと同等であるように思われる。
【００４８】
好ましい方法では、Ｃ１６：０（外因性起源であり得る）を除いて、全ての短鎖長又は中間長ＡＧ（Ｃ４：０からＣ１４：０）の重量和が最も信頼性のある関係であるように思われる。
【００４９】
しかしながら、偶数Ｃ４からＣ１６ＡＧはそれのみ、又は前記ＡＧの少なくとも２つの和又は組み合わせは多かれ少なかれ、デノボ合成について、従って腸内メタン合成について、Ｃ２及びＣ４基質の使用の信頼性のある評価を与える。
【００５０】
従って、乳１キログラム当たり、又は乳１リットル当たりに放出されたＣＨ４量を決定するために、次の式が使用される。
ＣＨ４（ｇ／ｋｇ）＝ａ＊デノボＡＧ＋ｚ
ここでデノボＡＧは重量（ｇ／ｋｇ乳）であり、式中、ａは−２から＋２の間の数、及びｚは−１００から＋１００の間の数である。
【００５１】
前記デノボＡＧは、好ましくは、乳中の４から１４炭素原子の飽和ＡＧ（ＡＧＳ）含有量により評価され得る。
【００５２】
この式は、乳腺不飽和化の過程後４から１６炭素原子のモノ不飽和ＡＧの合成のために使用されるＣ２及びＣ４脂質の量を過小評価するが、しかし奇数飽和ＡＧでのＣ２及びＣ４の共有をやや過大評価する。
【００５３】
特に好ましい方法では、この量は式：
ＣＨ４（ｇ／ｋｇ）＝１．０７＊Ｃ４からＣ１４ＡＧＳの和＋４．８で評価される。
【００５４】
ここでＣ４からＣ１６ＡＧＳの和が乳１キログラム当たりのグラム数で表現されている。
【００５５】
しかし、Ｃ４からＣ１６ＡＧＳの和の代えて、次の変数を含む他の式を用いることも可能である：
−  全てのＡＧＳ、の和：これはしかし精度が低い、というのは前記ＡＧＳはまた外因性ＡＧ及びルーメン生体水素化から由来するＣ１８：０を含むからである。
−  ４から１６炭素原子の飽和ＡＧの和：Ｃ１６：０がいつでも知られるものではなく、これは外因性起源である。
−  Ｃ１２：０及びＣ１４：０の和。
−  Ｃ４：０、Ｃ６：０、Ｃ８：０、Ｃ１０：０、Ｃ１２：０、Ｃ１４：０、Ｃ１６：０の単独又は少なくとも２つの組み合わせ。
【００５６】
［４］  精度利得
本発明による方法は、前記のようにメタン合成と脂質合成との間の関連付けを十分考慮するものである。
【００５７】
しかし、メタンの放出の変化はここでは、メタン合成の経路とプロピオン酸塩合成の経路との間の水素の分配／競争へ関連付けされている。
【００５８】
また、メタン合成及びプロピオン酸塩合成以外の経路も水素利用について存在する。ほとんどは限定的であるが、ルーメンでの嫌気的発酵で生成される水素代謝物はまた、飼料摂取された多飽和ＡＧの水素化反応でも使用され得る。
【００５９】
従って、前記式はまた次のように表現される：
ＣＨ４（ｇ／ｋｇ）＝ａ＊デノボＡＧ＋ｙＢＨ  ＡＧ＊＋ｚ
＊ＢＨ  ＡＧは、ルーメン生体水素化式から誘導されるＡＧである：ここで、
−  ａは、ｙがゼロの場合に−２から２の間の数、又はｙがゼロではない場合には０．１から１０の間の数を持ち；
−  ｙはゼロと異なる場合には−１０と＋１０の間の数を持ち；
−  ａとｙとは同時にゼロとなることはなく；
−  ｚは−１００と＋１００の間の数である。
【００６０】
生体水素化由来のＡＧは、１８以上で外因性起源のものより少ない炭素原子を持つ全ＡＧの和を表す。
【００６１】
これは：
−  ステアリン酸（Ｃ１８：０）を含むが、これはまた外因性起源であり得る；
−  Ｃ１８：０の乳頭での不飽和化から誘導される場合オレイン酸（Ｃ１８：１ｎ−９）を含むが、しかしこれはまた外因性起源である得る；
−  外因性起源のリノール酸（Ｃ１８：２ｎ−６）及びアルファリノール酸（Ｃ１８：３ｎ−３）を除く２以上の不飽和を持つ全てのＡＧを含むが；
−  Ｃ２０：４ｎ−６、Ｃ２０：５ｎ−３、Ｃ２２：６ｎ−３又はより長鎖のＡＧを除外することが好ましい。
【００６２】
水素化との競争によりメタン放出の減少へのこれらの特異的寄与（前記デノボ合成から懸念されるルーメン発酵へのオイルの一般的効果とは異なる）は完全には無視できない。
【００６３】
実施例
−  ３６０ｇの食餌Ｃ１８：１ｎ−９（飼料摂取の２％）は、ルーメン内で８５％水素化され、乳１キログラムあたりのＣＨ４の０．４ｇの合成（ＣＨ４放出の約２％）に必要な水素を「消費」する。
−  ３６０ｇの食餌Ｃ１８：２ｎ−６は、ルーメン内で８５％水素化され、乳１キログラムあたりのＣＨ４の０．７ｇの合成（ＣＨ４放出の約４％）に必要な水素を「消費」する。
−  ３６０ｇの食餌Ｃ１８：３ｎ−３は、ルーメン内で８５％水素化され、乳１キログラムあたりのＣＨ４の１．１ｇの合成（ＣＨ４放出の約６％）に必要な水素を「消費」する。
【００６４】
生体水素化由来のＡＧの性質は複雑である。
【００６５】
１８炭素元素以上のＡＧにうち、Ｃ１８：１ｎ−９などは、内因性（Ｃ１８：０で水素化、その後Ｃ１８：１ｎ−９で不飽和化）又は外因性起源（例えばなたね油）を持つ。
【００６６】
［ＡＧＩ−（Ｃ１８：１ｎ−９）−（Ｃ１８：２ｎ−６）−（Ｃ１８：３ｎ−３）］値は、具体的に水素化から由来するＡＧの量のよい指標である。
【００６７】
従って、前記式は有利には次のように表される。
ＣＨ４（ｇ／ｋｇ）＝１．１４＊（Ｃ４からＣ１４  ＡＧＳの和）−０．０７＊［ＡＧＩ−（Ｃ１８：１ｎ−９＋Ｃ１８：２ｎ−６＋Ｃ１８：３ｎ−３）］＋４．７
また、ＡＧＩ−（Ｃ１８：１ｎ−９＋Ｃ１８：２ｎ−６＋Ｃ１８：３ｎ−３）の代わりに、生体水素化の指標として次の変数が含まれる：
−  ＡＧＩの和；
−  Ｃ１８：０；
−  トランスＡＧ又はそれらの和。
【００６８】
前記のとおり、従来技術では、直接、迅速にかつ容易に実施することができない。現在最も正確な予想には、少なくとも前記乳中の脂質含有量及び前記牛の生産性を知ることが必要であり、この２つのファクタは通常は知り得ない。
【００６９】
本発明の方法は、１つの基準：１キログラムの乳中のグラムで表された前記乳中の脂肪酸の含有量から、乳１キログラム当たりのメタン放出量を評価することを可能にする（もはや最小３の基準でもない）。
【００７０】
［５］  本方法の実施
数年間、赤外線スペクトル方法により、１キログラム（又は１リットル）当たりの乳中のグラムでのＡＧの迅速測定技術が開発されてきている。
【００７１】
乳サンプルのデータベースから、これはそれぞれの乳中のサンプルについて、赤外線スペクトル方法で得られた光吸収スペクトルと標準分析（ガス相クロマトグラフなど）で得られたＡＧ（１リットル中のグラム）中の成分との関連付けを構成する。式（例えば較正）を利用する数学的及び統計学的方法により、前記測定の信頼性のレベルが満足できるものとなり、事前に決定された評価式を用いて、赤外線分析による全ての乳サンプルのＡＧを指揮により評価することが可能となる。
【００７２】
前記乳のＡＧとメタン放出との化学量論的関連付けが知られ、前記乳の「メタンフットプリント」を評価するために１キログラム（又は１リットル）当たりのグラム数で乳中のＡＧの直接読み出すことが試みられる。
【００７３】
牛の生産性又は前記乳の全脂質量を知ることが必要ではない。
【００７４】
赤外線スペクトル、特に好ましくは中赤外線を用いることで、乳１キログラム（又は１リットル）当たりのグラム数で直接、液体乳サンプルのＡＧ含有量を測定することが可能となる。
【００７５】
この方法の精度は、最近の刊行物に示されるようにますます信頼性が高くなってきている（Ｓｏｙｅｕｒｔら、２０１０）。
【００７６】
この技術的利点は本発明をより大きな施設で実施することを可能にする。
【００７７】
従って、液体抽出及びガスクロマトグラフの実行はもはや必要なく、乳の全脂質含有量も牛の生産性も知る必要はない。
【００７８】
本発明によれば、乳のそれぞれ１キログラムのメタンフットプリントの測定は、いつでも通常測定（ルーチン）で実施することが可能となる。
【００７９】
前記ＡＧを連続的に単独で又は組合せて取得して測定する代わりに、前記乳の赤外線スペクトル分析、次いでこれらのＡＧからのＣＨ４の分析により、赤外線スペクトル分析から前記ＣＨ４を直接推定することが想定され得る。
【００８０】
事実、デノボＡＧの量は、少なくとも、現在では中赤外線で非常によく決定されており、具体的に、識別される吸収スペクトルバンド、及びその光吸収に対応する波長に関連付けされている。従って、乳のＡＧの測定を行うことなく、前記同じスペクトルバンドを用いることで、スペクトル分析から乳サンプルのＣＨ４を直接決定することを可能にする。
【国際調査報告】
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