(57)【要約】  本発明は概して、美容を目的とした栄養補助食品及び／又は食品製品の分野に関する。より詳細には、本発明は、皮膚の色素沈着過剰、しみなどの皮膚色の欠陥、及び異常な色素により特徴付けられる他の皮膚障害を予防及び／又は処置するための、カフタル酸及び／又は誘導体を含有する原材料を提供することを目的とする。本発明はまた、皮膚の色調を改善すること、並びに皮膚の明色化剤を提供することを目的とする。【選択図】図１【特許請求の範囲】
【請求項１】
皮膚色素障害及び／又は皮膚の欠陥を処置及び／又は予防するための経口栄養補助食品を調製するための活性薬剤としての、カフタル酸及び／又は誘導体を含有する有効量の少なくとも１種の原材料の美容のための使用。
【請求項２】
前記皮膚障害が、肝斑、そばかす、白斑、斑症、フェニルケトン尿症などにおいて観察されるもの、及び／又はしみであることを特徴とする、前記請求項のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３】
皮膚の色調及び／又は皮膚の色艶を改善するための、前記請求項のいずれか一項に記載の使用。
【請求項４】
皮膚の色調を明色化及び／又は美白するための経口栄養補助食品を調製するための活性薬剤としての、カフタル酸及び／又は誘導体を含有する有効量の少なくとも１種の原材料の美容のための使用。
【請求項５】
前記組成物が、皮膚の保湿をさらに改善する、前記請求項のいずれか一項に記載の使用。
【請求項６】
前記組成物が、皮膚のバリア機能をさらに改善する、前記請求項のいずれか一項に記載の使用。
【請求項７】
前記抽出物が、チコリ植物材料から溶媒を用いる抽出によって、特に水抽出又はアルコール／水抽出によって、例えばエタノール／水抽出によって得ることができる、前記請求項のいずれか一項に記載の使用。
【請求項８】
前記カフタル酸含有原材料が、レタス、チコリ、タンポポ、ブドウ、ブドウの絞りかすなどの天然食品、又はそれらの組み合わせ若しくは抽出物である、前記請求項のいずれか一項に記載の使用。
【請求項９】
前記製品が、チコリ又はその抽出物を、約０．１ｇ／ｌ〜１０ｇ／ｌの範囲、好ましくは０．５ｇ／ｌ〜３ｇ／ｌの範囲の量で含有する、前記請求項のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１０】
前記製品が、チコリ又はその抽出物を、０．０１ｇ〜１００ｇ、好ましくは０．２５ｇ〜１０ｇの日用量で含有する、前記請求項のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１１】
前記組成物が、死菌、生菌、又は半活性の形態の少なくとも１種の食品等級の微生物、特に、プロバイオティクスをさらに含む、前記請求項のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１２】
皮膚の保湿又は皮膚の老化を改善するための有効量の少なくとも１種の活性薬剤を組み合わせた、前記請求項のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１３】
皮膚色素障害及び／又は皮膚の欠陥を処置及び／又は予防するのに有用な美容処置方法であって、有効量のチコリ又はその抽出物を個体に投与する少なくとも１つのステップを含む、美容処置方法。
【請求項１４】
皮膚色素障害及び／又は皮膚の欠陥を処置及び／又は予防するキットであって、死菌、生菌、若しくは半活性の形態のプロバイオティクス微生物、又は保湿剤若しくは抗老化剤を任意選択により含有する経口又は局所用組成物を組み合わせた、チコリ又は抽出物を含有する栄養補助食品を用いる経口処置を含む、キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は概して、美容を目的とした栄養補助食品の分野に関する。より詳細には、本発明は、皮膚の色素沈着過剰、しみなどの皮膚色の欠陥、及び異常な色素により特徴付けられる他の皮膚障害などを予防及び／又は処置するための、カフタル酸及び／又は誘導体を含有する原材料を提供することを目的とする。本発明はまた、皮膚の色調を改善すること、並びに皮膚の明色化剤又は美白剤を提供することを目的とする。
【背景技術】
【０００２】
皮膚色は、主に、皮膚内に存在する褐色の色素であるメラニンの量及び種類によって決まる。メラニンの量が少ないと明るい皮膚色になり、それに対して量が多いと濃い皮膚色になる。また、皮膚内の色素沈着過剰は、皮膚内のメラニンの過剰な発現又は蓄積によって引き起こされる。結果として、産生されるレベルを減少させるように、メラニン産生に関与する経路が多くの阻害剤にとっての標的となった。メラニン経路に関与する主要な酵素の１つは、チロシナーゼである。
【０００３】
メラニンの合成は、前駆体プロオピオメラノコルチンから生成されるメラノサイト刺激ホルモン（ＭＳＨ）及び副腎皮質刺激ホルモン（ＡＣＴＨ）ペプチドを含めた、ホルモンの制御下にあるプロセスによる。メラニンの合成は、紫外線Ｂによって引き起こされるＤＮＡ損傷によっても刺激される。
【０００４】
よって、時間をかけて太陽に曝露されると、多くの生化学反応が皮膚内で誘発され、例えば日光皮膚炎及び日焼けに至る可能性がある。太陽への曝露の他の影響は、時間とともに蓄積する。こうした変化により、しみが発生し、不均一な色むらのある皮膚の色調が生じることがある。残念なことに、現在の市場で市販されている製品の多くは、かろうじて有効であるに過ぎないか、又は、不安定であり最終的な製剤に組み込むとその効能を失う活性薬剤を含有するかのいずれかである。
【０００５】
皮膚内の色素含有量の発現を変える能力、皮膚の色調の均一性（ｅｖｅｎｎｅｓｓ  ｓｋｉｎ  ｔｏｎｅ）を促進する又は皮膚の色調を明色化する能力が、現在の社会で大いに所望されている。多くの人々が、自分の皮膚の色調を変えること、しみを減少させることなどを、純粋に美容上の理由で所望している。
【０００６】
結果として、有効な組成物を開発する努力は、チロシナーゼの活性を阻害する薬剤に重点を置いてきた。例えば、様々なチロシナーゼ阻害剤、中でも、ハイドロキノン、ビタミンＣ、システイン、コウジ酸、アルブチン及びグルタチオンなどが局所用組成物に提示されてきた。また、色素障害、例えば、肝斑、そばかす、白斑、斑症、フェニルケトン尿症などにおいて観察されるものなどの外観を改善するために、及び／又は美容目的のために、様々な皮膚科学的組成物が提案されてきた。
【０００７】
また、皮膚漂白組成物の使用が広範囲に広まっている。しかし、皮膚漂白組成物は、メラニンを破壊するか、又はメラニンの形成を阻害するかのいずれかである。皮膚漂白組成物の多くは、刺激の強い化学物質、例えば、過酸化物、酸若しくはホルムアルデヒドなど、又はチオール化材料を含有する。刺激が弱い療法には、他の不利な点がある。
【０００８】
局所用レチノイド及び局所用副腎皮質ステロイドが、レーザー処置及びケミカルピーリングを行うときの色素脱失剤として提案されたが、これらは望ましい応答には不十分である。
【０００９】
皮膚及び皮膚領域を漂白するために、又は色白の皮膚の外観を向上させるために、アジア又はヨーロッパで何世紀にも渡って場合によって使用されてきた天然材料の皮膚上への使用が、他の組成物により提案された。こうした使用には、レモン、オレンジ、キュウリ、銀杏、イナゴマメ、エイジツ、ゲンノショウコ、シナモン、スイートマジョラム、ローズマリーなどの使用が含まれる。
【００１０】
異常な色素に関連する障害と闘うために、又は皮膚の色調を明色化するために、皮膚に局所的に適用したときにチロシナーゼ活性を減少させ、結果的にメラニンの産生を制限することが可能な様々な化合物が、このように提示されてきた。残念なことに、現在利用可能な処置は、ある種の局所用薬剤に伴う刺激性の副作用などの、処置に付随することが多い副作用の点で特に、十分に満足のいくものではない。
【００１１】
よって、先行技術に記載された調製物の欠点のない、代替の調製物を得ることが大いに望ましいであろう。特に、皮膚の色調の均一性を促進する又は皮膚の色調を明色化するための、安定性及び有効性が改善された、経口経路を介して投与される美容のための栄養組成物を開発することが大いに望ましいであろう。
【００１２】
また、皮膚の色素沈着障害、特に、環境要因又は老化に起因するものを処置及び／又は予防するのに有効な活性薬剤に対する必要性が依然として存在する。
【００１３】
本発明の目的は、こうした必要性に応えることである。
【発明の概要】
【００１４】
本発明の発明者らは、カフタル酸及び／又は誘導体を含有する少なくとも１種の原材料を含む栄養補助食品組成物を提供することによって、この目的を達成することができた。
【００１５】
よって、第１の主題によれば、本発明は、皮膚の色素沈着障害を処置及び／又は予防する活性薬剤としての、カフタル酸及び／又は誘導体を含有する有効量の少なくとも１種の原材料の美容のための使用に関する。かかる皮膚障害は、特に年齢又は環境要因（例えば紫外線）に起因するもの、例えばしみなどである。肝斑、そばかす、白斑、斑症、フェニルケトン尿症などにおいて観察されるものも皮膚障害とすることができる。
【００１６】
本発明の発明者らは、抽出物がチロシナーゼ活性の阻害をほとんど又は全く示さないという事実にもかかわらず、カフタル酸及び誘導体が、メラニンの形成、すなわちメラノゲネシスを有効に抑制することを発見した。メラノゲネシスにおけるチロシナーゼの中心的役割及びこの酵素を阻害するための当技術分野での開発努力の重点を考えれば、この結果は驚くべきであり、予想外である。
【００１７】
本発明の目的のために、用語「皮膚」は、顔の又は体の皮膚を意味することを意図している。
【００１８】
本発明の目的のために、用語「有効量」は、予想された効果を得るために十分な量を意味することを意図している。
【００１９】
本発明の目的のために、用語「予防する」は、検討中の障害の徴候の出現のリスクを減少させるということを意味することを意図している。
【００２０】
本発明はまた、皮膚の色素の欠陥を処置及び／又は予防する活性薬剤としての、上述の原材料の美容のための使用を対象とする。結果として、色艶は、異常変色又は乾燥状態の部位を有することなく、より明るく均一になる。
【００２１】
本発明はまた、皮膚の色調を美白又は明色化する活性薬剤としての、本発明によるカフタル酸及び／又は誘導体を含有する有効量の少なくとも１種の原材料の美容のための使用を対象とする。
【００２２】
本発明の発明者らは、本発明による原材料が、保湿及び／又は皮膚のバリア機能をさらに改善することも発見した。
【００２３】
本発明による使用は、特に以下で記述するような、皮膚の保湿又は皮膚の老化をさらに改善する有効量の少なくとも１種の活性薬剤を組み合わせた、カフタル酸及び／又は誘導体を含有する少なくとも１種の原材料の使用も含むことができる。
【００２４】
本発明の別の態様によれば、本発明の主題は、個体における、皮膚の色調の欠陥及び色素沈着過剰に関連する障害、特に審美的障害を処置及び／又は予防する方法、特に美容方法であって、本発明によるカフタル酸及び／又は誘導体を含有する少なくとも１種の原材料を上記個体に投与する少なくとも１つのステップを含む方法である。
【００２５】
本発明による組成物は、経口的に投与可能である。これは、速やかで比較的制限のない投与様式によって、皮膚全体に全身的に、その深層（真皮、皮下組織）に作用するという利点を有する。詳細には、代謝産物及び他の活性な栄養素が、血流によって特に皮膚基質内に行き渡る。経口投与は、速やかで比較的制限のない投与様式であるという利点も有する。
【図面の簡単な説明】
【００２６】
【図１】対照（陽性／陰性）に対する、カフタル酸又はチコリ抽出物で前処理されたマウスメラノサイトの、メラニン産生を示す図である。
【図２】対照（陽性／陰性）に対する、カフタル酸又はチコリ抽出物で前処理されたマウスメラノサイトの、チロシナーゼ産生を示す図である。
【図３】対照（陽性／陰性）に対する、カフタル酸又はチコリ抽出物で前処理されたヒト初代表皮ケラチノサイトの、フィラグリン合成を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００２７】
カフタル酸及び／又は誘導体を含有する原材料
カフタル酸は
【００２８】
【化１】
2013530996.tif 000002
であり、その誘導体には、ＯＨ基及び／又はＣＯ２Ｈ基の少なくとも１つがＣ１−Ｃ３アルキル化された化合物が含まれる。例えば、フェノールのＯＨ基は、両方ともアルキル化されていてもよい。代替的及び／又は追加的に、カルボキシル基が両方とも、対応するアルキルエステルに変換されていてもよい。一実施形態では、全てのＯＨ基及び全てのＣＯ２Ｈ基がアルキル化されている。
【００２９】
典型的な誘導体は、フェノールのＯＨ基が両方ともメチル化された化合物、及び／又はカルボキシル基が両方ともメチル化された化合物である。
【００３０】
さらなる典型的な誘導体には、次式を有する化合物が含まれる。
【００３１】
【化２】
2013530996.tif 000003
【００３２】
式中、Ｒ１及び／又はＲ２は、Ｈ、ＣＨ３、アリール（例えば、フェニル、ベンジル、トリル、ｏ−キシリルアルキル（ｏ−ｘｙｌｙｌａｌｋｙｌ）など）、Ｃ１−Ｃ３アシル、アミノ酸及び単糖からなる群から選択される。Ｒ１及び／又はＲ２は、同一であってもよいし、互いに異なっていてもよい。
【００３３】
カフタル酸の一誘導体は、次の化合物である。
【００３４】
【化３】
2013530996.tif 000004
【００３５】
カフタル酸及び／又はその誘導体を含有する原材料は、カフタル酸及び／又はその誘導体を天然に又は添加された形態で含有するいかなる原材料であってもよいが、好ましくは、レタス、チコリ、タンポポ、ブドウ、ブドウの絞りかすなどの天然食品、又はそれらの組み合わせ若しくは抽出物である。
【００３６】
好ましい実施形態では、植物材料は、チコリ又はその抽出物の形態である。チコリ抽出物は、例えば、根、果肉など、又はそれらの組み合わせを含めた、植物材料の任意の適切な部分から作製することができる。
【００３７】
本発明の目的のために適切なチコリの抽出物としては、Ｌｅｒｏｕｘ  ＭＳ５５（フランス、Ｌｅｒｏｕｘから市販されている）などの市販の抽出物もある。
【００３８】
本発明の特に好ましい実施形態では、適切なチコリの抽出物を、当技術分野で知られている任意の手段によって、例えば、水蒸気抽出、溶媒抽出、蒸留、圧搾又は粉砕によって調製することができる。特に、該抽出物は、チコリ植物材料から溶媒を用いる抽出によって、すなわち、水抽出又はアルコール／水抽出、例えば、エタノール／水抽出又はメタノール／水抽出によって得ることができる。該抽出物は、液体の形態（例えば、Ｌｅｒｏｕｘ  ＭＳ５５、Ｌｅｒｏｕｘ  ＭＳ７０）として、又は粉末の形態（例えば、Ｌｅｒｏｕｘ  Ｓｏｌ  Ｂ）として使用することができる。
【００３９】
取扱いを容易にするために、植物材料は、乾燥した、粉砕された又は粉末の形態であることが好ましい。後述するように、プロセスは、乾燥した粉砕チコリ及び／又はその抽出物を利用する。しかし、任意の適切な植物材料を任意の適切な形態で使用して、本発明による製品に添加することができることが理解されるべきである。
【００４０】
抽出物は、その香味を増強することができるように加工される。例えば、チコリなどの植物材料に典型的に伴う苦味を、植物を抽出物に加工することによって取り除くことができる。抽出物を、最終的な抽出物製品中の生物活性剤の量を望ましく制御できるように調製することもできる。
【００４１】
植物材料は、様々な異なる適切な方法で加工され、抽出物を形成することができることが認識されるべきである。一般に、チコリの根などの植物材料は、粉砕されているか、粉末化されているか、又は任意の適切な形態で提供される。該植物材料を、次いで幾つもの異なる段階でさらに加工して製品抽出物を製造することができる。一実施形態では、植物材料に脱脂操作を行って、植物材料から取り出した脂に由来する抽出物を製造することができる。脱脂操作は、任意の適切な脱脂プロセス条件の下で、例えばヘキサンを含めた任意の適切な種類及び量の溶媒を用いて行うことができる。
【００４２】
一実施形態では、脱脂操作から得られた抽出物を、酸加水分解を介してさらに加工して、本発明の栄養組成物に添加することができる別の種類の植物抽出物を製造することができる。酸加水分解操作は、任意の適切なプロセス条件の下で、例えば酢酸エチルを含めた任意の適切な種類及び量の溶媒を用いて行うことができる。
【００４３】
一実施形態では、脱脂操作の抽出物を、溶媒抽出操作を介してさらに加工することができる。溶媒抽出は、任意の適切なプロセス条件の下で、任意の適切な量及び種類の溶媒の存在下で実施することができる。一実施形態では、溶媒には、メタノール（「ＭｅＯＨ」）と水とを１：１の体積比で混合した溶液が含まれる。溶媒抽出操作から得られた溶液を、適切な条件の下で溶媒を蒸発させることによってさらに加工して、別の抽出物を製造することができる。或いは、得られた溶液をポリビニルポリピロリドンなどの吸着剤で処理して、ポリフェノールを捕集することができる。吸着剤処理は、任意の適切なプロセス条件の下で実施することができる。
【００４４】
製品中のカフタル酸及び／又はその天然源の量は、幾つかの因子、例えば、抽出物の性質、植物の状態、処置される人若しくは動物の年齢、状態、及び大きさ、製品が投与されることとなる頻度、並びに／又は処置若しくは予防する皮膚障害若しくは損傷の具体的な種類、又は所望の美容効果に応じて決まることとなろう。
【００４５】
本発明の発明者らは、本発明によるチコリ又はその抽出物の効力が一般的に用量依存的であり、用量反応曲線に従うことを見出した。一般に軽度の皮膚障害又は損傷を予防するのであり、製品を頻繁に使用するのであれば、所望の効果を実現するのにごく少量のチコリ又はその抽出物で十分であろう。重度の皮膚色素障害を処置するのであれば、少量でも効果が生じるであろうが、チコリ又はその抽出物の量が多い方がそれより妥当であろう。
【００４６】
一般に、原材料がカフタル酸及び／又はその誘導体に富んでいることが好ましい。例えば、原材料及び／又は組成物は、カフタル酸及び／又はその誘導体を、乾燥重量の０．００１〜９９．９９重量％、好ましくは乾燥重量の０．１〜５０重量％、最も好ましくは乾燥重量の０．１〜１０重量％の範囲の量で含んでもよい。原材料及び／又は組成物は、カフタル酸及び／又はその誘導体を加水分解して酒石酸及び／又はコーヒー酸を生じることが可能な乳酸菌を、乾燥重量の０．００１〜９９．９９重量％、好ましくは乾燥重量の０．１〜５０重量％、最も好ましくは乾燥重量の０．１〜１０重量％の範囲の量で含んでもよい。
【００４７】
別の実施形態では、製品は、チコリ又はその抽出物を、製品１ｌ当り約０．１ｇ／ｌ〜１０ｇ／ｌの範囲、好ましくは０．５ｇ／ｌ〜３ｇ／ｌの範囲の量で含有する。製品の総量をリットルで計量することができない場合には、製品が、チコリ又はその抽出物を、製品１ｋｇ当り約０．１ｇ／ｋｇ〜１０ｇ／ｋｇの範囲、好ましくは０．５ｇ／ｋｇ〜３ｇ／ｋｇの範囲の量で含有すれば好ましい。
【００４８】
好ましくは、製品はチコリ又はその抽出物を、０．０１ｇ〜１００ｇ、好ましくは０．２５ｇ〜１０ｇの日用量で含有する。
【００４９】
［経口組成物］
本発明による組成物は、選択した投与方法に通常使用可能な生薬の形態であれば、いかなる形態であってもよい。担体は、検討中の組成物の種類に応じて様々な性質であってもよい。
【００５０】
特に、チコリ又はその抽出物を、任意の形態の栄養補助食品に組み込んでもよい。
【００５１】
例えば、チコリ又はその抽出物は、カプセル剤、ゼラチンカプセル剤、軟カプセル剤、錠剤、糖衣錠、丸剤、ペースト剤、若しくはトローチ、ガム、又は飲用の液剤若しくは乳剤、シロップ、又はゲルで存在してもよい。かかる栄養補助食品は、甘味料、安定剤、酸化防止剤、添加剤、香味料、及び／又は着色料も含んでもよい。その製剤は、糖衣錠、ゲルカプセル剤、ゲル、徐放用ハイドロゲル、乳剤、錠剤、又はカプセル剤を製造する通常の方法によって実施される。
【００５２】
［使用］
本発明の製品は、例えばメラニンの産生を低下させることによって、皮膚の色素沈着障害を処置若しくは予防するために、又は美容のために皮膚の色調を明色化するために、効果的に使用することができる。実際に、カフタル酸及びチコリ抽出物は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでメラニンの合成を低下させることが示された（実施例１、図１）。チロシナーゼの産生も低下したがある程度までであり（図２）、それにより、メラニンの低下がチロシナーゼ阻害に起因していたのではなく、この酵素の上流又は下流に作用する機序に起因していたことが示唆される。
【００５３】
本発明による原材料は、皮膚バリアの強化及び皮膚の保湿の維持に対する有利な効果をさらに有する。
【００５４】
結果として、色素の欠陥が減少し、色艶は、異常変色又は乾燥状態の部位を有することなく、より明るく均一になる。
【００５５】
よって、一主題によると、本発明は、皮膚の色素沈着障害、特に年齢又は紫外線などの環境要因に起因するものを処置及び／又は予防する活性薬剤としての、カフタル酸及び／又は誘導体を含有する有効量の少なくとも１種の原材料の美容のための使用に関する。
【００５６】
本発明は、アジア人に特に望まれる、皮膚の色調を美白又は明色化する活性薬剤としての、カフタル酸及び／又は誘導体を含有する有効量の少なくとも１種の原材料の美容のための使用も対象としている。
【００５７】
本発明による使用は、特に以下で記述するような、皮膚の保湿又は皮膚の老化を改善する有効量の少なくとも１種の活性薬剤を組み合わせた、カフタル酸及び／又は誘導体を含有する少なくとも１種の原材料の使用も含むことができる。
【００５８】
本発明の別の態様によれば、本発明の主題は、個体における、色調の欠陥及び／又は色素沈着過剰に関連する皮膚の障害、特に審美的障害を処置及び／又は予防する方法、特に美容方法であって、本発明によるカフタル酸及び／又は誘導体を含有する少なくとも１種の原材料を上記個体に投与する少なくとも１つのステップを含む方法である。
【００５９】
本発明の美容処置方法は、本発明によるカフタル酸及び／又は誘導体を含有する少なくとも有効量の少なくとも１種の原材料を、特に経口で投与することによって実施することができる。経口投与は、上述の通りの経口組成物を１回又は複数の摂取で経口摂取することを含む。
【００６０】
投与は、単回の適用を含んでもよい。別の実施形態によれば、適用は、例えば、１日間又はそれ以上の間に１日に２〜３回、一般には、少なくとも４週間、又はさらには１〜１５週間持続した期間の間繰り返される。
【００６１】
加えて、本発明により定義された通りの原材料の活性を補足又は強化するために、処置と経口又は局所剤形との任意選択による組み合わせを予想することができる。
【００６２】
よって、別の活性原材料、特に、死菌、生菌、若しくは半活性の形態のプロバイオティクス微生物若しくは他のプロバイオティクス、又は保湿剤（ｈｙｄｒａｔｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）若しくは抗老化剤を任意選択により含有する経口又は局所用組成物を組み合わせた、本発明によるチコリ又はその抽出物を含有する組成物を用いた局所又は経口処置を、キットとして想定することができるであろう。
【００６３】
該原材料は、製剤化される前に当業者によって容易に決定される順序及び条件下で混合される。
【００６４】
本発明のさらなる利点及び特徴は、以下の実施例及び図から明らかである。よって、以下の実施例は、本発明の分野の非制限的例示として提示される。これらの実施例において、他に示さない限り、割合（％）は重量による割合（％）であり、「〜と〜の間」という形態で書かれた数値の範囲は、指定された上限及び下限を含む。
【実施例】
【００６５】
［実施例１：カフタル酸の皮膚色素沈着に対する効果］
皮膚の色素沈着の欠乏又は促進に対する原材料の潜在的な有益効果を評価するために、マウスのメラノサイト（Ｂ１６）の二次元培養を使用し、２種類の試験、すなわち、１−メラニン産生の評価、及び２−チロシナーゼ産生の評価を行った。
【００６６】
（１．細胞培養条件）
Ｂ１６細胞を、１０％ウシ胎児血清が補足された、フェノールレッドを含まないＤＭＥＭ（１ｇ／Ｌグルコース）中、５％ＣＯ２を含有する３７℃の加湿器内で培養した。
【００６７】
（２．Ｂ１６マウスメラノサイト細胞株によるメラニンの産生）
細胞を、選択した原材料又は試験用参照（コウジ酸、４００μｇ／ｍＬ）とともに、ＭＳＨの類似体であるＮＤＰ−ＭＳＨの存在又は非存在下で７２時間インキュベートした。メラニン（細胞外及び細胞内）の総量を、ＮＤＰ−ＭＳＨの存在又は非存在下におけるメラニン標準物に対する、各試料の４０５ｎｍでの光学濃度の測定値により評価した。
【００６８】
（３．Ｂ１６マウスメラノサイト細胞株によるチロシナーゼの産生）
細胞を、選択した原材料又は試験用参照（コウジ酸、４００μｇ／ｍＬ）とともに４８時間インキュベートした。チロシナーゼの産生を、免疫標識によって評価した。
【００６９】
原材料：
２種類のチコリ抽出物、ＭＳ−５５（コンセントレ（ｃｏｎｃｅｎｔｒｅ）  ＭＳ−５５  ＬＥＲＯＵＸ）及びＭＳ−７０（パテ（ｐａｔｅ）  ＭＳ−７０  ＬＥＲＯＵＸ）、並びにカフタル酸について試験した。試験濃度を、以下の表１に示す。
【００７０】
【表１】
2013530996.tif 000005
【００７１】
（結果）
結果を、対照に対する割合（％）で表す。試験用参照（コウジ酸）は、予想通りにメラニン産生の低下を誘発した。図１に、選択した原材料で７２時間処理したＢ１６メラノサイトによるメラニン産生を示す。
【００７２】
カフタル酸は、試験したチコリ抽出物ＭＳ−７０よりも効果的にｉｎ  ｖｉｔｒｏでのメラニンの産生を低下させた（図１）。チロシナーゼの産生もこれらの原材料によって低下したが、その程度は限られていた（図２）。これにより、メラニンの低下がチロシナーゼ阻害に起因していたのではなく、チロシナーゼの上流又は下流に作用する機序に起因していたことが示唆された。
【００７３】
［実施例２：皮膚バリア機能及び皮膚の保湿に対するカフタル酸の効果］
実施例１の抽出物の皮膚バリア機能及び皮膚の保湿に対する潜在的な有益効果を、ヒト初代表皮ケラチノサイトの二次元培養を使用して評価し、それらのフィラグリンの合成を判定した。
【００７４】
（細胞培養条件）
ヒト表皮ケラチノサイトを、対照ケラチノサイト−ＳＦＭ培地中、５％ＣＯ２を含有する３７℃の加湿器内で培養した。
【００７５】
（ヒト表皮ケラチノサイトによるフィラグリンの合成）
細胞を、選択した原材料又は試験用参照（ＣａＣｌ２、１．５ｍＭ）とともに１４４時間インキュベートした。フィラグリンの産生を、免疫標識によって評価した。
【００７６】
（結果）
チコリ抽出物（ＭＳ−５５及びＭＳ−７０）並びにカフタル酸は、いずれもフィラグリンの産生を増加させた（図２）。これにより、これらの化合物には皮膚バリアを強化する有利な効果があることが示唆された。皮膚バリアが強化されると、体が環境及び病原菌の攻撃から一層保護されることが確実になる。皮膚バリアの強化により表皮を通る水分の喪失も制限され、よって、妥当な皮膚の保湿が確実になる。
【００７７】
［実施例３：粉末スティック］
【００７８】
【表２】
2013530996.tif 000006
【００７９】
この種の糖衣錠は、１日に１〜３回服用することができる。
【図１】
2013530996.tif 000007
【図２】
2013530996.tif 000008
【図３】
2013530996.tif 000009
【国際調査報告】
2013530996.tif 000010
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