(57)【要約】本発明は、天然のレバウジオシドＡ（ＲｅｂＡ）、レバウジオシドＢ（ＲｅｂＢ）、およびレバウジオシドＤ（ＲｅｂＤ）、これらの対応合成物、および／または該天然物あるいは該合成物の誘導体を含む混合物を処理して、これらグリコシドの１種または複数種を高純度化する方法を提供する。多くの態様では、ステビア植物等の天然源から少なくとも一部が得られるグリコシド混合物を処理するために本発明を用いることができる。例えば、これにより、ＲｅｂＢ材料またはＲｅｂＤ材料に対してＲｅｂＡ材料をより高純度に含む生成物を回収することが可能となる。精製されたＲｅｂＡ材料に代えて、あるいはそれに加えて、ＲｅｂＡ材料に対してＲｅｂＢ材料および／またはＲｅｂＤ材料を高純度に含む生成物を得ることもできる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＲｅｂＡ材料、ＲｅｂＢ材料、またはＲｅｂＤ材料の少なくとも１種の高純度での回収促進のための、ＲｅｂＡ材料、およびＲｅｂＢ材料またはＲｅｂＤ材料の少なくとも１種を含むグリコシド混合物の処理方法であって、以下の工程を含む：
ａ）少なくともレバウジオシドＡ材料と、レバウジオシドＢ材料およびレバウジオシドＤ材料の少なくとも１種とを含むグリコシド混合物を含むスラリーを用意する工程であって、該スラリーが固相と液相を含む該工程、
ｂ）各温度が約４０℃より高い１つまたは複数の温度で、レバウジオシドＡ材料、Ｂ材料およびＤ材料の少なくとも１種が固相でより高純度になるのに十分な時間をかけてスラリーを熟成する工程、
ｃ）加熱された上記の混合物を濾過して固相と液相に分離する工程であって、濾過の少なくとも一部の時間において上記の混合物の温度が少なくとも４０℃である該工程、および
ｄ）固相または液相の少なくとも一方から少なくとも１種のグリコシドを回収する工程。
【請求項２】
工程（ｄ）が、ＲｅｂＡ材料を含む固相を回収することを含む請求項１記載の方法。
【請求項３】
工程（ｄ）が、ＲｅｂＢ材料およびＲｅｂＤ材料の少なくとも１種を含む液相を回収することを含む請求項１記載の方法。
【請求項４】
ＲｅｂＢ材料およびＲｅｂＤ材料の少なくとも１種を含む固相を回収するために、液相を処理する工程をさらに含む請求項３記載の方法。
【請求項５】
工程（ａ）で用意するスラリーが、ＲｅｂＡ材料を約２０重量％〜約９６重量％含む請求項１記載の方法。
【請求項６】
工程（ａ）で用意するスラリーが、ＲｅｂＢ材料とＲｅｂＤ材料とを合わせて少なくとも約３重量％含む請求項１記載の方法。
【請求項７】
工程（ａ）で用意するスラリーが、ＲｅｂＢ材料とＲｅｂＤ材料とを合わせて少なくとも約６重量％含む請求項１記載の方法。
【請求項８】
スラリーを工程（ｂ）で処理するに際し、工程（ｃ）で得られる固相が少なくとも８０重量％のＲｅｂＡ材料を含むような条件で行う請求項１記載の方法。
【請求項９】
スラリーを工程（ｂ）で処理するに際し、工程（ｃ）で得られる固相が少なくとも９０重量％のＲｅｂＡ材料を含むような条件で行う請求項１記載の方法。
【請求項１０】
スラリーを工程（ｂ）で処理するに際し、工程（ｃ）で得られる固相が少なくとも９６重量％のＲｅｂＡ材料を含むような条件で行う請求項１記載の方法。
【請求項１１】
スラリーを工程（ｂ）で処理するに際し、工程（ｃ）で得られる固相が、レバウジオシドＢ材料とレバウジオシドＤ材料とを合わせて最大約３重量％含む結晶相を含むような条件で行う請求項１記載の方法。
【請求項１２】
工程（ａ）から（ｄ）の少なくとも１つにおける液相が少なくとも１種のアルコールを含む請求項１記載の方法。
【請求項１３】
アルコールが含水アルコールである請求項１２記載の方法。
【請求項１４】
工程（ａ）から（ｄ）の少なくとも１つにおける液相が、エタノール、イソプロパノール、メタノール、ｎ−ブタノール、およびそれらの組み合わせから選択されるアルコールを含む請求項１記載の方法。
【請求項１５】
アルコールが含水アルコールである請求項１４記載の方法。
【請求項１６】
工程（ａ）から（ｄ）の少なくとも１つにおける液相が水を含む請求項１記載の方法。
【請求項１７】
工程（ａ）で用意されるスラリーが、ＲｅｂＡ材料、ＲｅｂＢ材料、およびＲｅｂＤ材料の少なくとも１種のアルコール結晶形を含む請求項１記載の方法。
【請求項１８】
熟成の温度が少なくとも５０℃である請求項１記載の方法。
【請求項１９】
熟成の温度が少なくとも７０℃である請求項１記載の方法。
【請求項２０】
熟成の温度が少なくとも７０℃であり、かつ圧力が大気圧より大きい請求項１記載の方法。
【請求項２１】
熟成の圧力が、約１．１ａｔｍ〜約３０ａｔｍの絶対圧の範囲である請求項１記載の方法。
【請求項２２】
熟成の圧力が、約１．１ａｔｍ〜約１０ａｔｍの絶対圧の範囲である請求項１記載の方法。
【請求項２３】
熟成の圧力が、約１．１ａｔｍ〜約５ａｔｍの絶対圧の範囲である請求項１記載の方法。
【請求項２４】
混合物のバルク温度よりも低い温度にある冷表面の存在下で、混合して熟成させる請求項１記載の方法。
【請求項２５】
冷表面の少なくとも一部の温度が、約４０℃より低い請求項２４記載の方法。
【請求項２６】
ＲｅｂＡ材料、ＲｅｂＢ材料、またはＲｅｂＤ材料の少なくとも１種の高純度での回収促進のための、ＲｅｂＡ材料、ＲｅｂＢ材料、またはＲｅｂＤ材料の２種またはそれより多種を含むグリコシド混合物の処理方法であって、以下の工程を含む：
ａ）少なくともレバウジオシドＡ材料、レバウジオシドＢ材料およびレバウジオシドＤ材料を含むグリコシドを含むスラリーを用意する工程であって、該スラリーが固相と液相を含む該工程、および
ｂ）各温度が約８５℃より高い１つまたは複数の温度で、（i）ＲｅｂＢ材料およびＲｅｂＤ材料の少なくとも一方よりもＲｅｂＡ材料が固相で高純度になる；および／または（ii）ＲｅｂＡ材料よりも、ＲｅｂＢ材料およびＲｅｂＤ材料の少なくとも一方が液相で高純度になる、の少なくとも一方を達成するに十分な時間および条件下でスラリーを熟成する工程。
【請求項２７】
熟成後、固相のＲｅｂＡ材料を回収する工程をさらに含む請求項２６記載の方法。
【請求項２８】
熟成後、液相のＲｅｂＢ材料およびＲｅｂＤ材料の少なくとも一方を回収する工程をさらに含む請求項２６記載の方法。
【請求項２９】
ＲｅｂＢ材料およびＲｅｂＤ材料の少なくとも一方を含む固相を回収するために液相を処理する工程をさらに含む請求項２８記載の方法。
【請求項３０】
熟成の圧力が、大気圧より高い絶対圧である請求項２６記載の方法。
【請求項３１】
熟成の圧力が、約１．１ａｔｍ〜約３０ａｔｍの絶対圧の範囲である請求項２６記載の方法。
【請求項３２】
熟成の圧力が、約１．１ａｔｍ〜約１０ａｔｍの絶対圧の範囲である請求項２６記載の方法。
【請求項３３】
熟成の圧力が、約１．１ａｔｍ〜約５ａｔｍの絶対圧の範囲である請求項２６記載の方法。
【請求項３４】
工程（ａ）で用意されるスラリーが、スラリー中のグリコシドの全重量に対して約６０重量％未満のＲｅｂＡ材料を含み、および液相がエタノールを含む請求項２６記載の方法。
【請求項３５】
工程（ａ）で用意されるスラリーが、スラリー中のグリコシドの全重量に対して約４５重量％未満のＲｅｂＡ材料を含み、および液相がエタノールを含む請求項２６記載の方法。
【請求項３６】
工程（ａ）で用意されるスラリーが、スラリー中のグリコシドの全重量に対して約３０重量％未満のＲｅｂＡ材料を含み、および液相がエタノールを含む請求項２６記載の方法。
【請求項３７】
工程（ａ）で用意されるＲｅｂＡ材料の少なくとも一部が非晶質である請求項２６記載の方法。
【請求項３８】
工程（ａ）で用意されるスラリーが、スラリー中のグリコシドの全重量に対して約４５重量％未満のＲｅｂＡ材料と少なくとも１０重量％のステビオシド材料を含み、および液相がエタノールを含む請求項２６記載の方法。
【請求項３９】
工程（ａ）で用意されるスラリーが、スラリー中のグリコシドの全重量に対して約４５重量％未満のＲｅｂＡ材料と少なくとも２０重量％のステビオシド材料を含み、および液相がエタノールを含む請求項２６記載の方法。
【請求項４０】
混合物のバルク温度よりも低い温度にある冷表面の存在下で、混合して熟成させる請求項２６記載の方法。
【請求項４１】
冷表面の少なくとも一部の温度が、約４０℃より低い請求項２４記載の方法。
【請求項４２】
ＲｅｂＡ材料、ＲｅｂＢ材料、またはＲｅｂＤ材料の少なくとも１種の高純度での回収促進のための、ＲｅｂＡ材料、およびＲｅｂＢ材料またはＲｅｂＤ材料の２種またはそれより多種を含むグリコシド混合物の処理方法であって、以下の工程を含む：
ａ）少なくともレバウジオシドＡ材料、Ｂ材料およびＤ材料を含むグリコシドを含むスラリーを用意する工程であって、該スラリーが固相と液相を含む該工程；
ｂ）各温度が約４０℃より高い１つまたは複数の温度で、レバウジオシドＡ材料、Ｂ材料およびＤ材料の少なくとも１種が、固相および／または液相の少なくとも一方で高純度になるのに十分な時間をかけてスラリーを熟成する工程；および
ｃ）熟成の少なくとも一部の時間、加熱したスラリーを撹拌し、加熱したスラリーの一部を絶えず冷表面に接触させる工程。
【請求項４３】
熟成後、固相のＲｅｂＡ材料を回収する工程をさらに含む請求項４２記載の方法。
【請求項４４】
熟成後、液相のＲｅｂＢ材料およびＲｅｂＤ材料の少なくとも一方を回収する工程をさらに含む請求項４２記載の方法。
【請求項４５】
ＲｅｂＢ材料およびＲｅｂＤ材料の少なくとも一方を含む固相を回収するために液相を処理する工程をさらに含む請求項４４記載の方法。
【請求項４６】
攪拌されたスラリーがバルク温度を有し、冷表面の少なくとも一部の温度が、攪拌されるスラリーのバルク温度より低い請求項４２記載の方法。
【請求項４７】
冷表面の少なくとも一部の温度が、約４０℃より低い請求項４２記載の方法。
【請求項４８】
冷表面の少なくとも一部の温度が、約３０℃より低い請求項４２記載の方法。
【請求項４９】
冷表面は熱交換器により形成され、容器から取り出された攪拌されたスラリーの一部はその中を通って容器に戻る、請求項４２記載の方法。
【請求項５０】
ＲｅｂＡ材料の高純度での回収促進のための、ＲｅｂＡ材料、およびＲｅｂＢ材料またはＲｅｂＤ材料の２種またはそれより多種を含むグリコシド混合物の処理方法であって、以下の工程を含む：
ａ）少なくともレバウジオシドＡ材料、レバウジオシドＢ材料およびレバウジオシドＤ材料を含む第１のスラリーを用意する工程であって、該スラリーが固相と液相を含み、該液相が第１の溶媒を含む該工程；
ｂ）ＲｅｂＡ材料が固相で高純度になるのに十分な時間をかけて第１のスラリーを熟成する工程；
ｃ）工程（ｂ）で得られた固相の少なくとも一部を第２のスラリーに加える工程であって、該第２のスラリーが固相と液相を含み、該液相が第１の溶媒とは異なる組成を有する第２の溶媒を含む該工程；および
ｄ）ＲｅｂＡ材料が固相で高純度になるのに十分な時間をかけて第２のスラリーを熟成する工程。
【請求項５１】
第１の溶媒がアルコールを含み、第２の溶媒が少なくとも約８０重量％の水を含む請求項５０記載の方法。
【請求項５２】
アルコールがエタノールである請求項５１記載の方法。
【請求項５３】
アルコールが含水アルコールである請求項５２記載の方法。
【請求項５４】
第１の溶媒が少なくとも約８０重量％の水を含み、第２の溶媒が少なくとも約８０重量％のアルコールを含む請求項５０記載の方法。
【請求項５５】
ＲｅｂＢ材料またはＲｅｂＤ材料の少なくとも１種の高純度での回収促進のための、ＲｅｂＡ材料と、ＲｅｂＢ材料またはＲｅｂＤ材料の少なくとも１種とを含むグリコシド混合物の処理方法であって、以下の工程を含む：
ａ）少なくともレバウジオシドＡ材料、Ｂ材料およびＤ材料を含む第１のスラリーを用意する工程であって、該スラリーが固相と液相を含み、該液相が第１の溶媒を含む該工程；
ｂ）ＲｅｂＢ材料またはＲｅｂＤ材料の少なくとも１種が液相で高純度になるのに十分な時間をかけて第１のスラリーを熟成する工程；
ｃ）工程（ｂ）で得られた液相の少なくとも一部を、第２のスラリーに加える工程であって、該第２のスラリーが固相と液相を含み、該液相が第１の溶媒とは異なる組成を有する第２の溶媒を含む該工程；および
ｄ）ＲｅｂＢ材料またはＲｅｂＤ材料の少なくとも１種が液相で高純度になるのに十分な時間をかけて第２のスラリーを熟成する工程。
【請求項５６】
不純物を含むレバウジオシドＡ組成物の精製方法であって、以下の工程を含む：
ａ）少なくともレバウジオシドＡ材料と、レバウジオシドＢ材料とレバウジオシドＤ材料からなる群から選択された少なくとも１種の不純物を含むレバウジオシドＡ組成物を用意する工程であって、レバウジオシドＡ材料の少なくとも一部が第１の結晶形にある該工程；
ｂ）レバウジオシドＡ組成物の少なくとも一部を、第１の結晶形から第２の結晶形に変換する工程；および
ｃ）レバウジオシドＡ組成物の第２の結晶形の少なくとも一部を、第１の結晶形と同じであってもよい第３の結晶形に変換する工程。
【請求項５７】
第１および第２の結晶形の少なくとも一方が、アルコール結晶形であり、他方が水結晶形である請求項５６記載の方法。
【請求項５８】
第１の結晶形がアルコール結晶形である請求項５６記載の方法。
【請求項５９】
第１の結晶形がアルコール結晶形であり、第２の結晶形が水結晶形である請求項５６記載の方法。
【請求項６０】
水結晶形が、四水和物である請求項５７または５９記載の方法。
【請求項６１】
請求項１，２６，４２，５０，５５，または５６のいずれか一つの方法により製造された甘味料組成物。
【請求項６２】
請求項６１記載の甘味料組成物を含む食品製品または飲料製品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１０年１月２８日に出願され、名称が「レバウジオシドＡ組成物からのレバウジオシドＢおよびレバウジオシドＤの精製方法」である、米国仮出願番号６１／２９９，１６０号の利益を主張するものであり、該出願のすべての内容は出典明示により本明細書に組み入れられる。
【０００２】
本発明の方法は、レバウジオシド（rebaudioside）Ａ材料、レバウジオシドＢ材料、およびレバウジオシドＤ材料を含む混合物をより純粋な状態に分離する処理に関する。例えば、レバウジオシドＡ、Ｂ、およびＤの混合物を分離して、一方でＲｅＡ、他方で、および／またはＲｅｂＢおよび／またはＲｅｂＤをより純粋な状態に分離することができる。さらに詳しくは、該処理は、１種または複数種の再結晶化方法を単独で、あるいは、そのグリコシド混合物の精製と組み合わせて用いる。
【背景技術】
【０００３】
ステビアレバウディアナ（ステビア）は、数多くの研究および開発の対象であり、その研究および開発は、ノンカロリー甘味料としての可能性を有する、特定の天然の甘いステビアグリコシドの精製に向けられてきた。甘いグリコシド（ステビオールグリコシドとも呼ばれる。）はステビアから抽出することができ、６種のレバウジオシド（すなわち、レバウジオシドＡからＦ）、ステビオシド（野生のステビアからの抽出物中の主要なグリコシド）、ダルコシド、およびステレビンを含んでいる。
【０００４】
レバウジオシドＡ（ＲｅｂＡ）は、ステビアの甘味グリコシド成分であり、スクロースの約２５０〜４５０倍の甘さを持っている。好ましい甘味プロファイル、監督規制承認（regulatory）、顧客満足度、および最小限の苦みの後味により、レバウジオシドＡはノンカロリー甘味料として用いることが好ましい。レバウジオシドＢ（ＲｅＢ）およびＤ（ＲｅｂＤ）も、その甘さ特性が関心を持たれている、ステビアの甘味グリコシド成分である。
【０００５】
その何らかの処理物およびまたは対応する合成物だけでなく、ステビアの天然抽出物は、グリコシドの混合物を通常含んでいる。これらの混合物を精製して、１種または複数種のこれらグリコシドをより純度の高い状態で得ることが望まれている。例えば、ある混合物が、他の成分の中で、ＲｅｂＡ、ＲｅｂＢ、およびＲｅｂＤの組み合わせを含む場合がある。いくつかの例では、これらの混合物を処理して、ＲｅｂＢおよび・またはＤの含有量を減らしながら、より純度の高い状態のＲｅｂＡを含む生成物を回収することが望まれている。他の例では、これらの混合物を処理して、ＲｅｂＡの含有量を減らしながら、ＲｅｂＢおよび／またはＲｅｂＤをより純度の高い状態で含む生成物を回収することが望まれている。さらに他の例では、生成物を組み合わせたものを回収するために、これらの混合物を処理する。例えば、混合物を処理して、ＲｅｂＢおよびＲｅｂＤの含有量を減らしながらＲｅｂＡの純度を高くした混合物成分を回収する場合、ＲｅｂＡの含有量を減らしながらＲｅｂＢおよび／またはＲｅｂＤの純度を高くした、処理された混合物の別の成分を回収することができる。
【０００６】
レバウジオシドＡを含む粗ステビア抽出物からのレバウジオシドＡの精製について多くの方法が報告されている。
【０００７】
特開昭５６−１２１４５４号公報は、結晶化により、ステビオシドとレバウジオシドを高純度かつ高収率で分離する方法を報告している。その方法では、ステビアリバウジアナベルトーニの葉と茎から従来の方法で、ステビオシドとレバウジオシドの混合物を抽出している。この抽出物を７０％以上のエタノール水溶液に溶解し、その溶液からレバウジオシドＡを選択的に結晶化させている。
【０００８】
特開昭６３−１７３５３１号公報には、ステビアレバウジアナ植物から甘いグリコシドを抽出する方法が記載されている。その方法の第１工程では、ステビアレバウジア植物から甘いグリコシドの液状溶液を抽出する。第２工程では、甘いグリコシドのその液状溶液を非極性多孔質樹脂の中を通過させ、水溶液有機溶媒、好ましくはメタノールで溶出させる。第３工程では、その溶出溶液を濃縮し、乾燥して粉末物質を得る。この操作により、甘いグリコシドの混合物を分離できるが、レバウジオシド等の単一の純粋な甘いグリコシドを分離することはできない。
【０００９】
米国特許出願公開第２００６／００８３８３８号は、商業的に入手できるステビアレバウジアナを出発材料として、レバウジオシドＡを分離および精製する方法を報告している。その方法は、次の工程を含む：（１）選択したエタノール（ＥｔＯＨ）溶媒を調製するエタノール調製工程；（２）ステビアを出発物質として用いる第１の還流工程；および必要により、還流された混合物または撹拌された洗浄混合物から分離された残留分（retentate）を用いる追加の還流工程；（３）必要により、１回または複数回の撹拌洗浄工程；および（４）エタノール除去および乾燥工程。その報告された方法では、ＥｔＯＨ調製工程は、還流工程に用いる望ましい還流溶媒を調製するために行われる。通常、還流溶媒は、水を約５〜１５体積％含むエタノールと水の混合物である。還流工程は、通常、還流溶媒の中にグリコシド混合物を入れること、混合物を約１時間還流すること、収量を増加させるために冷却すること、および濾過すること、を含んでいる。その方法は、さらに１回または複数回のエネルギー集約型の還流工程を含み、その工程は通常、約７９〜８０℃の温度で約１時間で行われる。撹拌洗浄工程は、通常、還流工程からのグリコシドと純粋エタノールから成る溶媒との混合物を用意すること、室温で約１５分間その混合物撹拌すること、および濾過を含んでいる。その方法では、１００％純粋な水溶性のレバウジオシドＡが得られるとのことである。
【００１０】
米国特許第５９６２６７８号（ペイザンら）は、ステビアレバウジアナ植物から選択された甘いグリコシドの抽出方法を報告している。その報告された方法では、甘いグリコシドはステビア植物から抽出され、多段階の工程で処理され、個々の成分が得られる。最初に、混合状態の甘いグリコシドを含む水溶液を抽出するためにステビア植物が処理される。一連のイオン交換樹脂を用いて、混合状態の甘いグリコシドから不純物である甘くないグリコシドが分離され、乾燥される。これらの乾燥した混合状態の甘いグリコシドは、まだ不純物を含んでいるが、次に水溶性有機溶媒、例えば無水メタノールに溶解して溶液とする。その溶液を還流し、冷却して第１の甘いグリコシド成分を沈殿させる。この最初の甘いグリコシド成分は、通常ステビオシドであり、濾過で回収され、第２の成分について記載された方法でさらに精製される。最初に沈殿した甘いグリコシドの結晶化からの濾過液を、加熱により濃縮することにより第２の甘いグリコシド成分が得られる。その溶液を冷却すると、第２の甘いグリコシド成分は沈殿し、回収される。この第２の甘いグリコシド成分は通常レバウジオシドＡである。それを、水溶性有機溶媒、例えば少量の水を必要に応じて含んでもよいメタノールに溶解してさらに精製することができる。その溶液を還流し、最後の冷却することにより第２の甘いグリコシド成分を高純度で沈殿させる。その沈殿物は濾過により回収することができる。所望の純度を有する最終結晶化固体が得られるまで、この精製工程を繰り返すことができる。その方法によれば、レバウジオシドＡの純度が、９０％またはそれより大あるいは９５％またはそれより大であることが報告されている。
【００１１】
米国特許第４３６１６９７号（ドーベルシュタインら）は、ステビアレバウジアナ植物からのジテルペングリコシドの回収方法を報告している。その方法は、植物材料（material）を連続的に抽出する工程と、該工程では、グリコシドの液体クロマトグラフィーによる分離を阻害する植物物質（substance）を抽出するために、中間極性を有する第１の溶媒で植物材料（material）を抽出し、次いで高極性の第２の溶媒でグリコシドを抽出し、および抽出したグリコシドを液体クロマトグラフィーカラムの上に導入して該グリコシドをクロマトグラフィーにより分離する工程とを含むものであり、該液体クロマトグラフィーカラムは、無機支持体にケイ素原子を介して共有結合した酸素含有有機固定相の充填物を有している。グリコシドは、第１の溶媒より極性が高く第２の溶媒よりは極性が低い溶媒を用いて溶離される。
【００１２】
米国特許第４８９２９３８号（ジオバネット）は、抽出および精製により、ステビアレバウジアナベルトーニの乾燥植物材料からステビオシドを回収する方法を報告している。抽出物は、室温から約６５℃の温度で水中で撹拌し、次いで濾過し、および遠心分離することにより得られる。この抽出物を水酸化カルシウムで処理し、濾過または遠心分離することにより沈殿が回収できる。この沈殿を強酸性イオン交換樹脂、次いで弱塩基性イオン交換樹脂で処理し、濾過し、乾燥する。
【００１３】
米国特許第４０８２８５８号（デュボア）は、ステビアレバウジアナ植物の葉からレバウジオシドＡを回収する方法を報告している。最終精製として、液体クロマトグラフィー、それに続く、水と、炭素数１から３のアルカノール、好ましくはメタノールとを用いた最初の抽出を行う。水を最初の溶媒として用いることも開示されている。この工程での好ましい溶媒は、炭素数１から４の液体ハロアルカンである。好ましい第２の溶媒は、炭素数１から３のアルカノールであるが、好ましい第３の溶媒は、炭素数１から４のアルカノールであり、必要に応じて少量の水を含んでもよい。
【００１４】
米国特許出願公開第２００６／０１３４２９２号（アベリアンら）は、ステビアレバウジアナ植物材料から甘いグリコシドを回収する方法を報告している。乾燥され粉末化された葉は、ペクチナーゼ、セルラーゼ、α―アミラーゼの存在下で水で処理される。それら酵素の使用により抽出速度が顕著に増加し、次の精製工程が促進されることが報告されている。得られた抽出物を水酸化カルシウムを用いて処理し、超濾過して精製する。透過物をベントナイトを充填したカラムに通し、減圧下でシロップ状態になるまで濃縮する。エタノールを用いて処理すると、混合物から実質的に純粋なレバウジオシドを分離することができる。結晶を８８〜９５％エタノールで洗浄することにより、高純度のレバウジオシドＡが得られる。
【００１５】
他の技術は、例えば、味の素社に譲渡された、特開昭５６−１２１４５４号公報、特開昭５６−１２１４５５号公報、特開昭５２−０６２３００号公報、および特開昭５６−１２１４５３号公報、ハイリン・ステビア・レバウジウム・シュガーに譲渡された中国特許公開第１２４３８３５号にも報告されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１６】
【特許文献１】特開昭５６−１２１４５４号公報
【特許文献２】特開昭６３−１７３５３１号公報
【特許文献３】米国特許出願公開第２００６／００８３８３８号明細書
【特許文献４】米国特許第５９６２６７８号明細書
【特許文献５】米国特許第４３６１６９７号明細書
【特許文献６】米国特許第４８９２９３８号明細書
【特許文献７】米国特許第４０８２８５８号明細書
【特許文献８】米国特許出願公開第２００６／０１３４２９２号明細書
【特許文献９】特開昭５６−１２１４５４号公報
【特許文献１０】特開昭５６−１２１４５５号公報
【特許文献１１】特開昭５２−０６２３００号公報
【特許文献１２】特開昭５６−１２１４５３号公報
【特許文献１３】中国特許公開第１２４３８３５号明細書
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１７】
ノンカロリー甘味料として価値があるため、ＲｅｂＡ、ＲｅｂＢおよび／またはＲｅｂＤ等のグリコシドを精製するための利用可能な方法を改良することが望まれている。特に、レバウジオシドＢおよび・またはレバウジオシドＤを含む組成物からレバウジオシドＡを分離できる方法が強く望まれている。その方法は、より高純度のＲｅｂＡを含む生成物、より高純度のＲｅｂＢおよび／またはＤを含む生成物、あるいはその両方を含む生成物を回収することを可能とする。
【課題を解決するための手段】
【００１８】
本発明は、天然のレバウジオシドＡ、ＢおよびＤ、それらの対応合成物、および／またはその天然物またはその合成物の誘導体を含む混合物からこれらの１種または複数種のグリコシドをより高純度で得るための処理方法を提供する。多くの態様において、本発明を用いて、少なくとも一部がステビア植物等の天然物から得られるグリコシド混合物を処理することができる。これにより、例えば、ＲｅｂＢまたはＲｅｂＤに対してＲｅｂＡを高純度で含む生成物を回収することができる。高純度のＲｅｂＡの回収に代えてあるいはそれに加えて、ＲｅｂＡに対してＲｅｂＢおよび／またはＤをより高純度に含む生成物を得ることもできる。
【００１９】
本発明の原則によれば、これらのグリコシドを高純度で得ることができ優れた精製を可能とする。従来は、高純度を得るためには、収率等を犠牲にしていた。高レベルの収率と純度の両方を提供できる方法を提供することは、工業規模において特に大きな利点となる。
【００２０】
本発明の処理は、他の精製方法と組み合わせて用いることができる。その組み合わせでは、本発明の方法は、該他の方法を用いる前および／または後で実施することができる。いくつかの実施方法では、その組み合わせは、１回または複数回追加して繰り返すことができる。
【００２１】
１つの態様では、本発明は、ＲｅｂＡ材料、ＲｅｂＢ材料、またはＲｅｂＤ材料の少なくとも１種の高純度での回収促進のための、ＲｅｂＡ材料、およびＲｅｂＢ材料またはＲｅｂＤ材料の少なくとも１種を含むグリコシド混合物の処理方法に関し、以下の工程を含む：
ａ）少なくともＲｅｂＡ材料と、ＲｅｂＢ材料およびＲｅｂＤ材料の少なくとも１種を含むグリコシド混合物を含みスラリーを用意する工程であって、該スラリーが固相と液相を含む該工程；
ｂ）各温度が約４０℃より高い１つまたは複数の温度で、レバウジオシドＡ材料、Ｂ材料およびＤ材料の少なくとも１種が固相でより高純度になるのに十分な時間をかけてスラリーを熟成する工程；
ｃ）濾過の少なくとも１部の時間において上記の混合物の温度が少なくとも４０℃となるように、加熱された上記の混合物を濾過して固相と液相に分離する工程；および
ｄ）固相または液相の少なくとも一方から少なくとも１種のグリコシドを回収する工程。
【００２２】
別の態様では、本発明は、ＲｅｂＡ材料、ＲｅｂＢ材料、またはＲｅｂＤ材料の少なくとも１種の高純度での回収促進のための、ＲｅｂＡ材料、およびＲｅｂＢ材料またはＲｅｂＤ材料の少なくとも１種を含むグリコシド混合物の処理方法に関し、以下の工程を含む：
ａ）少なくともＲｅｂＡ材料、ＲｅｂＢ材料およびＲｅｂＤ材料を含むグリコシド混合物を含むスラリーを用意する工程であって、該スラリーが固相と液相を含む該工程；および
ｂ）各温度が約８５℃より高い１つまたは複数の温度で、（i）ＲｅｂＢ材料およびＲｅｂＤ材料の少なくとも一方よりもＲｅｂＡ材料が固相で高純度になる；および／または（ii）ＲｅｂＡ材料よりも、ＲｅｂＢ材料およびＲｅｂＤ材料の少なくとも一方が液相で高純度になる、の少なくとも一方を達成するのに十分な時間および条件下でスラリーを熟成する工程。
【００２３】
別の態様では、本発明は、ＲｅｂＡ材料、ＲｅｂＢ材料、またはＲｅｂＤ材料の少なくとも１種の高純度での回収促進のための、ＲｅｂＡ材料、およびＲｅｂＢ材料またはＲｅｂＤ材料の少なくとも１種を含むグリコシド混合物の処理方法に関し、以下の工程を含む：
ａ）少なくともレバウジオシドＡ材料、Ｂ材料およびＤ材料を含むグリコシドを含むスラリーを用意する工程であって、該スラリーが固相と液相を含む該工程；
ｂ）各温度が約４０℃より高い１つまたは複数の温度で、レバウジオシドＡ材料、Ｂ材料およびＤ材料の少なくとも１種が、固相および／または液相の少なくとも一方で高純度になるのに十分な時間をかけてスラリーを熟成する工程；および
ｃ）熟成の少なくとも一部の時間、加熱したスラリーを撹拌し、加熱したスラリーの一部を絶えず冷表面に接触させる工程。
【００２４】
別の態様では、本発明は、ＲｅｂＡ材料の高純度での回収促進のための、ＲｅｂＡ材料、およびＲｅｂＢ材料またはＲｅｂＤ材料の２種またはそれより多種を含むグリコシド混合物の処理方法に関し、以下の工程を含む：
ａ）少なくともレバウジオシドＡ材料、Ｂ材料およびＤ材料を含む第１のスラリーを用意する工程であって、該スラリーが固相と液相を含み、該液相が第１の溶媒を含む該工程；
ｂ）ＲｅｂＡ材料が固相で高純度になるのに十分な時間をかけて第１のスラリーを熟成する工程；
ｃ）工程（ｂ）で得られた固相の少なくとも一部を第２のスラリーに加える工程であって、該第２のスラリーが固相と液相を含み、該液相が第１の溶媒とは異なる組成を有する第２の溶媒を含む該工程；および
ｄ）ＲｅｂＡ材料が固相で高純度になるのに十分な時間をかけて第２のスラリーを熟成する工程。
【００２５】
別の態様では、本発明は、ＲｅｂＢ材料またはＲｅｂＤ材料の少なくとも１種の高純度での回収促進のための、ＲｅｂＡ材料、およびＲｅｂＢ材料またはＲｅｂＤ材料の２種またはそれより多種を含むグリコシド混合物の処理方法に関し、以下の工程を含む：
ａ）少なくともレバウジオシドＡ材料、Ｂ材料およびＤ材料を含む第１のスラリーを用意する工程であって、該スラリーが固相と液相を含み、該液相が第１の溶媒を含む該工程；
ｂ）ＲｅｂＢ材料またはＲｅｂＤ材料の少なくとも１種が液相で高純度になるのに十分な時間をかけて第１のスラリーを熟成する工程；
ｃ）工程（ｂ）で得られた液相の少なくとも一部を、第２のスラリーに加える工程であって、該第２のスラリーが固相と液相を含み、該液相が第１の溶媒とは異なる組成を有する第２の溶媒を含む該工程；および
ｄ）ＲｅｂＢ材料またはＲｅｂＤ材料の少なくとも１種が液相で高純度になるのに十分な時間をかけて第２のスラリーを熟成する工程。
【００２６】
別の態様では、本発明は、不純物を含むレバウジオシドＡ組成物の精製方法に関し、以下の工程を含む：
ａ）少なくともレバウジオシドＡ材料と、レバウジオシドＢ材料とレバウジオシドＤ材料からなる群から選択された少なくとも１種の不純物を含むレバウジオシドＡ組成物を用意する工程であって、レバウジオシドＡ材料の少なくとも一部が第１の結晶形にある該工程；
ｂ）レバウジオシドＡ組成物の少なくとも一部を、第１の結晶形から第２の結晶形に変換する工程；および
ｃ）レバウジオシドＡ組成物の第２の結晶形の少なくとも一部を、第１の結晶形と同じであってもよい第３の結晶形に変換する工程。
【００２７】
別の態様では、本発明は、ＲｅｂＡ材料の高純度での回収促進のための、ＲｅｂＡ材料、およびステビオシド材料、ＲｅｂＢ材料またはＲｅｂＤ材料の少なくとも１種を含むグリコシド混合物の処理方法に関し、以下の工程を含む：
ａ）少なくともステビオシド、レバウジオシドＡ材料、Ｂ材料およびＤ材料を含むスラリーを用意する工程であって、該スラリーは固相と液相を含み、該スラリーは、該スラリー中のグリコシドの全重量に対してＲｅｂＡ材料を約６０重量％より少ない量含み、該液相がエタノールを含む該工程；および
ｂ）各温度が約８５℃より高い１つまたは複数の温度で、ステビオシド、ＲｅｂＢ材料およびＲｅｂＤ材料の少なくとも１種に対してＲｅｂＡ材料が、固相で高純度になるのに十分な時間および条件下でスラリーを熟成する工程。
【００２８】
本発明に基づいて精製された、精製グリコシド組成物は、甘味料組成物、甘味付けされた食物および飲料に有用である。食物および飲料組成物の例には、炭酸飲料、非炭酸飲料（例えば、スポーツドリンクやドライビバリッジミックス）、アイスクリーム、チューイングガム、キャンディ、ジュース、ジャム、ゼリー、ピーナッツバター、ヨーグルト、またはコールドシリアルが含まれる。
【図面の簡単な説明】
【００２９】
【図１】レバウジオシドＡの化学構造式である。
【図２】レバウジオシドＢの化学構造式である。
【図３】レバウジオシドＤの化学構造式である。
【図４ａ】本発明に有用な、レバウジオシドＡのエタノール結晶形を示す粉末Ｘ線回折パターンである。
【図４ｂ】本発明に有用な、レバウジオシドＡのエタノール結晶形を示す粉末Ｘ線回折パターンのピークリストである。
【図５ａ】本発明に有用な、レバウジオシドＡの水結晶形を示す粉末Ｘ線回折パターンである。
【図５ｂ】本発明に有用な、レバウジオシドＡの水結晶形を示す粉末Ｘ線回折パターンのピークリストである。
【発明を実施するための形態】
【００３０】
以下に記載された本発明の態様は、以下の詳細な説明に開示された具体的な内容にまで本発明を絞り込まれ、または限定されるものではない。むしろ、当業者が本発明の原理および実例を評価しかつ理解できるように、態様は選択されかつ記載されている。本明細書で引用された、すべての特許、係属中の特許出願、発行された特許出願、および技術文献は、すべての目的のために、それぞれすべて出典明示により本明細書に組み入れられる。
【００３１】
本発明は、レバウジオシドＡ、Ｂ、およびＤ、これらの１種または複数種の誘導体、および／またはこれらの天然物および／または誘導体の１種または複数種の対応合成物の処理方法であって、これらグリコシドの少なくとも１種を高純度で回収するための処理方法を提供する。これらのグリコシドに加えて、該混合物は、必要により、１種または複数種の他のグリコシドを含んでもよい。他のグリコシシドの例として、ステビオールグリコシド、これらの誘導体、または対応合成物が挙げられる。天然物から得られるＲｅｂＡ、Ｂ、およびＤの混合物は、他のステビオールグリコシドを含むこともある。
【００３２】
本発明は、これらの混合物から、少なくともＲｅｂＢ材料とＲｅｂＤ材料に対してＲｅｂＡ材料を高純度で得るためには特に有用である。よって、本発明の原理を用いて得られた精製組成物は、出発組成物よりは、ＲｅｂＡ材料を大きなパーセントで含み、ＲｅｂＢ材料および／またはＲｅｂＤ材料を少ないパーセントで含んでいる。よって、１つの態様では、本発明は、不純物を含むレバウジオシドＡ組成物からレバウジオシドＢおよびレバウジオシドＤのような不純物を除去する方法を提供する。
【００３３】
本発明の原理は、ＲｅｂＢ材料からＲｅｂＡ材料を分離するために用いることができる一方で、および／またはＲｅｂＤ材料から分離するために用いることもできるので、本発明の原理を用いて得られた精製組成物は、出発組成物よりは、ＲｅｂＢ材料および／またはＲｅｂＤ材料を大きなパーセントで含み、ＲｅｂＡ材料をより少ないパーセントで含む。よって、別の態様では、本発明は、不純物を含むＲｅｂＢおよび／またはＲｅｂＤ組成物からＲｅｂＡ等の不純物を除去する方法を提供する。
【００３４】
本明細書で用いる用語、「レバウジオシドＡ」または「ＲｅｂＡ」は、図１に示す化学構造式を有する化合物を意味する。本明細書で用いる、グリコシドについての用語「材料」は、グリコシド、そのグリコシドの誘導体、そのグリコシドに相当する合成物またはその誘導体を意味する。よって、「ＲｅｂＡ材料」は、ＲｅｂＡ，ＲｅｂＡ誘導体、および／またはＲｅｂＡまたはＲｅｂＡ誘導体に対応する合成物を意味する。
【００３５】
詳細な説明で用いる用語、「レバウジオシドＢ」または「ＲｅｂＢ」は図２に示す化学構造式を有する化合物を意味する。本明細書では、「ＲｅｂＢ材料」は、ＲｅｂＢ、ＲｅｂＢ誘導体、および／またはＲｅｂＢまたはＲｅｂＢ誘導体に対応する合成物を意味する。
【００３６】
詳細な説明で用いる用語、「レバウジオシドＤ」または「ＲｅｂＤ」は図３に示す化学構造式を有する化合物を意味する。本明細書では、「ＲｅｂＤ材料」は、ＲｅｂＤ、ＲｅｂＤ誘導体、および／またはＲｅｂＤまたはＲｅｂＤ誘導体に対応する合成物を意味する。
【００３７】
本明細書で用いる、グリコシド分子の誘導体は、１つまたは複数の部分の除去、１つまたは複数の部分の付加、１つまたは複数の部分の１つまたは複数の他の部分による置換、１つまたは複数の部分の保護、不飽和の付加または除去、分子の他の位置への不飽和の生成、これらの組み合わせ等によるグリコシドの修飾により得られるグリコシド生成物を含むが、誘導体は、炭水化物部分に含まれ、グリコシドのアグリコン部に結合していた、結合している、または結合する糖単位の数を変化させる（例えば、増加または減少）修飾、あるいは糖単位の１種（例えば、代表的な環境におけるマンノース単位）を糖単位の別の１種（例えば、代表的な環境におけるグルコース単位）で置換する修飾を受けた分子は含まない。誘導体は、糖単位の種類と数が修飾の結果変化しなくても、いくらかでも修飾が存在すれば、糖単位に対する修飾を含むものである。
【００３８】
例えば、天然のエステル結合を介してアグリコンに結合しているＲｅｂＡ炭水化物への糖部分の付加は、ＲｅｂＡをＲｅｂＤに変換する。炭水化物鎖は、１つの糖単位から２つの糖単位へと増加する。その修飾により、ＲｅｂＤが生成し、ＲｅｂＡの誘導体は生成しない。同様に、ＲｅｂＡから糖部分を除去するとＲｅｂＡ誘導体ではなくＲｅｂＢが生成し、ＲｅｂＡの位置にはもはや炭水化物鎖は存在しない。
【００３９】
対応する合成物は、その対応合成物が天然物ではなく化学合成により得られるという点以外は、天然グリコシドまたは天然グリコシド誘導体と実質的に同じである分子を意味する。合成分子の立体化学は、対応する天然物のそれと同じであっても異なっていてもよい。多くの光学活性中心がある場合、合成物とその対応する天然物との間でそれらのいくつかが同じでそれ以外は異なっていてもよい。混合物のグリコシドは種々の形態および物理的状態で提供可能である。例えば、個々のグリコシドを結晶形、一部結晶形、および／または非晶質状態で提供可能である。グリコシドは乾燥状態で提供可能であり、またはペースト、スラリー等の成分として提供可能である。他の例では、グリコシドの少なくとも一部を溶解させ、溶液、ゲル等の状態で提供することも可能である。
【００４０】
１つの具体例として、グリコシドの少なくとも一部が結晶であり、アルコールからの結晶として提供可能である。通常、これは、１種のアルコールを少なくとも８０％、さらに少なくとも９０％、さらに少なくとも９５％、さらに少なくとも実質的に１００％を含む液体媒体の中でグリコシドが結晶化されることを意味し、該アルコールは、メタノール、エタノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール、これらの組み合わせである。水は、その具体例に用いる共溶媒の一例である。水性アルコールは、好ましくは、少なくとも約８０重量％、さらに少なくとも約９０重量％、さらに少なくとも約９５重量％のアルコールを含む。いくつかの態様では、スラリーの調製に使用されるエタノールは１９０プルーフのエタノール（９３〜９５重量％エタノール）を含む。エタノールの他の等級（例えば、１８０プルーフまたは２００プルーフのエタノール）も有用である。
【００４１】
エタノールからの結晶物が好ましい。出発混合物に存在するであろうＲｅｂＢ材料およびＲｅｂＤ材料に対してＲｅｂＡ材料をより高純度で得ることが望まれている態様においては特に好ましい。少なくともＲｅｂＡの一部がエタノールからの結晶物である場合、グリコシド混合物に対する処理においてはＲｅｂＡの純度が高くなることをデータは示している。別の具体例では、グルコシドの少なくとも一部が水による結晶物として提供される。通常、このことは、少なくとも８０％、さらに少なくとも９０％、さらに少なくとも９５％、またはさらに少なくとも実質的に１００％の水を含む液体媒体でグリコシドが結晶化されることを意味している。
【００４２】
限定されるものではないが、エタノールと水からの有用な結晶形の例が、本発明の譲受人に譲渡された、出願日が２００９年４月９日であり、名称が「高溶解性のレバウジオシドＡを含む甘味料組成物およびその製造方法」である、米国仮出願第６１／１６８０７２、およびその対応ＰＣＴ出願であるＰＣＴ国際公開ＷＯ２０１０／１１８２１８Ａ１に記載されており、出典明示によりその内容はすべて本明細書に組み入れられる。
【００４３】
グリコシドが結晶化された液体媒体の特性に応じてグリコシドの結晶形は異なる。例えば、ＲｅｂＡのアルコール結晶形は水結晶形とは異なる。エタノール結晶形は、例えば、図４ａに示すＸ線回折パターンを持つことで特徴付けられる。水結晶形は、例えば、図５ａに示すＸ線回折パターンを持つことで特徴付けられる。
【００４４】
いくつかの具体例では、本発明の原理は、グリコシドの連続的な結晶形に適用される。
よって、本発明の原則は、処理の第１段階でグリコシドに対して適用され、そこではグリコシドの少なくとも一部は第１の結晶形である。例として、グリコシドの少なくとも一部が第１の段階ではエタノール結晶形である。次の処理段階では、グリコシドの少なくとも一部が第２の結晶形である場合には、本発明の原則がグリコシドに適用される。例として、次の段階では、グリコシドの少なくとも一部は水結晶形である。第１および／または第２の段階は必要により繰り返すことができる。
【００４５】
グリコシドの連続的な結晶形に適用される本発明の原則のそれら具体例は、本明細書では形変換精製（form transition purification）を意味する。この用語の指摘するところは、グリコシドの結晶形は処理の過程で少なくとも１回の結晶形変換を受けるということである。データによれば、精製処理に形変換の方法を組み入れることにより、ＲｅｂＡ等のグリコシド生成物の純度を高めることができる。限定されるものではないが、結晶性グリコシドが液体媒体に溶解し、次いで変換過程で新しい結晶形に再結晶すると考えられる。したがって、結晶格子に取り込まれている不純物や他の成分は、より容易に放出および／または分離されるが、これは、結晶変換が１つの固相から直接別の固相へと変化する機構と比べると、結晶が溶解することによる。
【００４６】
形変換精製を組み入れた具体例が、実施例を含めて以下にさらに記載されている。
【００４７】
本発明では、処理するグリコシド混合物を、少なくとも１種の固相と少なくとも１種の液相を含むスラリーの中に加える。固相には非晶質および／または結晶性を用いることができる。スラリーは、少なくとも処理する該混合物と適切な液体媒体を含む成分から通常得られる。
【００４８】
スラリーに加えるグリコシド混合物の量は広い範囲で変化させることができる。スラリー中のグリコシド混合物の濃度を変化させてもよく、それにより精製速度を変化させる。例えば、不純物を含むレバウジオシドＡ組成物からレバウジオシドＢとレバウジオシドＤの除去は、この濃度の影響を受ける。一般的に、スラリーの濃度が増加すると（すなわち、溶解固形分が増加する）、一方ではＲｅｂＢ材料からのＲｅｂＡ材料の分離速度、他方ではＲｅｂＤ材料からのＲｅｂＡ材料の分離速度が低下する。固形分量が多すぎると、処理過程において、スラリーの撹拌と濾過もより困難となる。一方、固形分量が少なすぎると、収量、コスト、および効率が低下する。実施上の問題点を考量し、具体的なスラリーの態様では、スラリーの全重量に対して、グリコシドは約５重量％から約５０重量％、好ましくは約１０重量％から約４０重量％、さらに好ましくは約１５重量％から約３０重量％である。
【００４９】
スラリーを、室温以上の少なくとも１つの高温で加熱し、該高温で熟成させる。（i）グリコシドの少なくとも１種（例えばＲｅｂＡ材料）に対して結晶相がより高純度になること、および／または（ii）他のグリコシドの少なくとも１種（例えば、ＲｅｂＢ材料およびＲｅｂＤ材料の少なくとも１種）に対して液相がより高純度になること、のいずれか１つが得られるのに十分な期間をかけて熟成を行う。長く熟成を行うと、より高純度となる。よって、スラリーを長く熟成させると、不純物を含むレバウジオシドＡ組成物の、レバウジオシドＢ材料とレバウジオシドＤ材料の除去量を増加させることができる。熟成の期間は、主に実際上の制限により決められる。例えば、ある期間経過後は、精製量は大きく減少するので、経済的には実用的ではない。いくつかの態様におけるそれらの問題を考量し、スラリーの熟成は、約１時間またはそれより長時間、例えば約１時間から約２４時間の期間が好ましい。好ましい態様として、スラリーは、約３時間〜約８時間、さらには約４時間〜約６時間の期間熟成させる。
【００５０】
液体媒体は、水、アルコール、またはそれらの組み合わせを含むことが好ましい。アルコールの具体例としては、メタノール、エタノール、イソプロパノール、ｎ−プロパノール、ｎ−ブタノール、イソブタノール、ｔ−ブタノール、それらの組み合わせ等を挙げることができる。本明細書で説明しているように、アルコールは含水でもよい。いくつかの態様では、スラリーの調製に用いるエタノールは、１９０プルーフエタノール（９３〜９５重量％エタノール）である。他の等級のエタノール（例えば、１８０プルーフまたは２００プルーフのエタノール）を用いることもできる。
【００５１】
処理は、広い範囲の高温で行うことができる。液体媒体の沸騰および還流は避けることが望ましい。熱により、リバイジオシドＡ材料からのレバウジオシドＢ材料およびレバウジオシドＤ材料の分離速度および分離量は増加する。限定されるものではないが、１種または複数のグリコシドは、分離を伴う形態的またはその他の転換を起こすことが考えられる。そのような態様では、スラリーを、少なくとも約４０℃、好ましくは少なくとも約５０℃、より好ましくは少なくとも約７０℃、さらに好ましくは少なくとも９５℃に加熱する。加熱の上限の温度は、約２００℃、好ましくは約１５０℃、より好ましくは約１２０℃である。１つの実施例としては、加熱は１００℃が適切である。
【００５２】
混合物を十分に混合すると、バルク温度は混合物全体で均一である。その十分に混合した混合物では、バルク温度はその温度範囲にあることが望ましい。混合物が十分に混合されていない場合、温度勾配が存在し、混合物の少なくとも一部、好ましくは少なくとも約５体積％、より好ましくは少なくとも約３０体積％、さらに好ましくは少なくとも約５０体積％がその温度範囲にあることが望ましい。
【００５３】
処理はある圧力範囲でも行うことができる。例えば、処理を、大気圧下または大気圧よりも高い高圧下で行うことができる。高圧下で、該高圧における液体の沸点以下に維持しながらスラリーを高温に加熱してもよい。大気圧からの絶対圧の例として、約３０ａｔｍ
まで、さらには約１．１ａｔｍ〜約３０ａｔｍ、好ましくは約１．１ａｔｍ〜約１５ａｔｍ、より好ましくは約１．１ａｔｍ〜約１０ａｔｍ、さらに好ましくは約１．１ａｔｍ〜約５ａｔｍである。少なくとも９０重量％のエタノールを含む液体媒体を用いるいくつかの実施例では、約３ａｔｍの圧力が適切である。それらの態様では、高圧にすればより高温とすることができ、圧力は所望の温度の溶媒の蒸気圧より高いことが好ましい。高温は、グリコシド間の分離を促進するので好ましい。例えば、高温にすると、一般的に、一方では、ＲｅｂＡ材料とＲｅｂＢ材料の分離が促進され、他方では、ＲｅｂＡ材料とＲｅｂＤ材料の分離が促進される。
【００５４】
いくつかの態様では、処理の間、スラリーを撹拌する。撹拌は、一般的に精製の程度を向上させる。例えば、ＲｅｂＡ材料、ＲｅｂＢ材料、およびＲｅｂＤ材料を含むスラリーを熟成すると、レバウジオシドＡ材料からのリバイジオシドＢ材料とリバイジオシドＤ材料の分離速度および分離量を増加させる。代表的には撹拌は、例えば、バッフル付きの混合容器（例えば、５リットルのバッフル付きの混合容器）の中で、インペラーで高速（例えば、２００ｒｐｍ）で混合する。
【００５５】
スラリーは熟成されているので、グリコシド成分は、液相と固相の間に選択的に分配される。ＲｅｂＡ材料、ＲｅｂＢ材料およびＲｅｂＤ材料の間では、ＲｅｂＡ材料は固相で安定であるのに対し、ＲｅｂＢ材料およびＲｅｂＤ材料は液相で安定である。このことは、固相でより高純度のＲｅｂＡ材料が得られ、液相ではより高純度のＲｅｂＢ材料およびＲｅｂＤ材料が得られることを意味している。得られた固相は、結晶性成分も含む。
【００５６】
２つの相は、所望の精製された材料を回収するために、濾過を含む種々の方法を用いて容易に分離することができる。純度の高いＲｅｂＡ材料が必要な時は、結晶をロ別し、洗浄し、乾燥し、さらに処理する。ＲｅｂＢ材料およびＲｅｂＤ材料が必要な時は、液体を処理してＲｅｂＢ材料およびＲｅｂＤ材料を、乾燥生成物、ディスパーション、溶液等の形で回収する。噴霧乾燥、炉乾燥、真空乾燥、それらの組み合わせ等の種々の乾燥方法を用いることができる。
【００５７】
好ましい態様では、処理で得られる固相と液相を、濾過により分離する。好ましくは、濾過の一部の時間で、生成混合物の温度は、少なくとも約５０℃、好ましくは少なくとも約７０℃である。ＲｅｂＡ材料、ＲｅｂＢ材料およびＲｅｂＤ材料を含む混合物において、ＲｅｂＡ材料からＲｅｂＢ材料およびＲｅｂＤ材料の分離は熱濾過により促進される。
【００５８】
限定されるものではないが、濾過の少なくとも一部の時間では高温で分離を行うことが好ましく、それは温度に依存する溶解度差だけでなく形態変化も含む要因によるものと考えられる。室温では、ＲｅｂＡで飽和した９４重量％エタノール溶液中の、ＲｅｂＢの溶解度は溶媒１００ｇに対して約０．３ｇであり、ＲｅｂＤの溶解度は溶媒１００ｇに対して約０．０１ｇである。１００℃では、ＲｅｂＤの濃度は最大で０．２ｇ/１００ｇであることが認められ、ＲｅｂＢの濃度は最大で０．５ｇ/１００ｇであることが認められた。９４重量％エタノール中のＲｅｂＡの溶解度の変化は、非常に少ない。
【００５９】
スラリーを高温で熟成させると、ＲｅｂＢ材料およびＲｅｂＤ材料の溶液中の濃度は増加し、それに対応して、固相中のＲｅｂＢ材料およびＲｅｂＤ材料の量が減少する。熱濾過によれば、ＲｅｂＢ材料およびＲｅｂＤ材料の高い溶解度を維持しながら固体と液体を分離できるので、ＲｅｂＡ材料からＲｅｂＢ材料およびＲｅｂＤ材料を容易に分離することができる。一方、冷却濾過は、液体中のＲｅｂＢ材料およびＲｅｂＤ材料の濃度が室温における溶解度に近づくので、ＲｅｂＢ材料およびＲｅｂＤ材料の沈殿が生成するという危険がある。これは、固相にＲｅｂＢ材料およびＲｅｂＤ材料をより多く存在させることになるので、固相中のＲｅｂＡ材料の純度が低下する。よって、冷却濾過は、処理の早い段階で得られた精製利得を低下させる。濾過の前に冷却する必要がある場合には、スラリーは必要な範囲のみで冷やすことが好ましい。一例として、濾過前の１００℃から７０℃の冷却は、濾過に伴う危険を減らしながら、精製方法を実施することができる。
【００６０】
理論に拘束されるものではないが、液相と固相の両方の存在により、精製の少なくとも一部は溶媒を介した結晶化により起こるものと考えられる。固相と液相が存在するスラリーでは、結晶化と溶解は同時に起きる。このことは、時間のある時点において、グリコシドの一部のみが結晶相であり、残部は液相に溶解していることが真実であることを意味している。しかしながら、実質的にすべての存在するグリコシドは、溶解と結晶化に関与し、グリコシドの異なる部分は、他の部分が１種または複数種の可溶状態に変換される一方、１種または複数種の不溶性状態に連続的に関与しているものと考えられる。要約すると、あるグリコシドのみがある時点では１つの相または他の相に存在し、実質的にすべてのグリコキシドは結晶化と溶解を時間とともに繰り返している。連続的な部分は溶解および結晶化するので、相間に分配され、その結果、純度が高められる。このプロセスは動的であり、時間とともに純度と形状に変化をもたらす。
【００６１】
いくつかの態様では、溶解と結晶化は一般的に実質的に同じ速度で起き、２つの相間の全体的な分配については実質的な変化はほとんどない。すなわち、結晶相の分子の溶解と、液相の分子の結晶化は実質的に同じ速度で進む。
【００６２】
いくつかの態様では、特に加熱処理時に混合物を撹拌する場合、処理される混合物のバルク温度より低い温度にある１つまたは複数の冷表面の存在下で熱処理を行うことが好ましい。すなわち、混合物が撹拌され、それにより混合物が熱処理の過程で混合されている場合、混合物の連続する部分が冷表面と接触する。混合は、混合物のバルクを概ね均一のバルク温度にするが、その冷表面の存在下で混合物を加熱すると、純度を高くできることが見出された。これに対し、加熱した混合物を加熱と冷却の繰り返しサイクルに供しても、同様の純度向上効果は認められなかった。
【００６３】
限定されるものではないが、冷表面の存在下での加熱の利点を説明できる可能性のある理論を提案する。混合物における熱表面および冷表面の両方の存在は、冷表面の近傍では結晶化し易く、熱表面近傍またはより熱いバルク混合物中では溶解し易い。混合物の中に冷表面を保持することにより、結晶の冷領域から熱領域への対流とともに結晶化と溶解が頻繁に発生し、その結果、少なくとも結晶性出発材料については純度が高くなる。結晶性材料または非晶質材料のいずれかを用いた場合には、冷表面と熱表面の両方が粒径を大きくする。それは、粒径の小さい粒子は、表面積/体積比が高いためにより速やかに溶解するからである。高い純度は、混合物中の小粒径部分が減少したことによるためと考えられる。熱混合物中で冷表面を用いることにより、非晶質出発材料および結晶性出発材料の両方の精製速度を増加させることもできる。
【００６４】
通常、冷表面の温度は、約４０℃より低い１つまたは複数の温度であり、好ましくは約３５℃以下、さらに好ましくは約３０℃以下である。冷表面は種々の方法で形成することができる。一態様では、混合物の中に浸漬したコイルの表面で冷表面を形成し、その中に冷却流体を流す。その具体例では、流体は、最初の温度が、例えば、約３０℃以下、さらに約２０℃以下、さらに約１５℃以下である、コイルの浸漬した部分に入り、熱移動により高温となった、例えば５℃またはそれより暖かい温度、さらに１０℃またはそれより暖かい温度、あるいは１５℃またはそれより暖かい温度であるコイルの浸漬した部分から出る。別の態様では、冷表面は外部の熱交換器により形成され、加熱容器から取り出されたスラリーの一部はその中を通って加熱容器に戻り循環する。
【００６５】
本態様の好ましい形態では、高温で処理し易くするために、上述したように大気圧より高い圧力下でスラリーを加熱することができる。加圧下で、高温で処理を行うと、一方でＲｅｂＡとＲｅｂＢの分離が、他方でＲｅｂＡとＲｅｂＤの分離が促進されることが見出された。
【００６６】
本発明の方法で出発材料として用いられるグルコシド混合物は、レバウジオシドＡを主成分として含んでいる。主成分とは、少なくとも２０重量％を意味する。典型的には、グルコシド混合物は、グルコシド全重量に対して、ＲｅｂＡ材料を約２０重量％から約９６重量％、好ましくは約３０重量％から約９６重量％、より好ましくは約４０重量％から約９６重量含んでいる。混合物中のレバウジオシドＢ材料とレバウジオシドＤ材料の両方の全量は変化する。多くの態様では、ＲｅｂＢ材料とＲｅｂＤ材料の全量は、グルコシド全量に対して最大で約６重量％である。例えば、いくつかの態様では、混合物は、レバウジオシドＡを約９０重量％から約９６重量％、レバウジオシドＢを約１重量％から約４重量％、およびレバウジオシドＤを約１重量％から約４重量％含んでいる。本発明の原理を用いて得られた結晶性生成物は、ＲｅｂＡを、少なくとも約８０重量％、さらに少なくとも約９０重量％、またはさらに少なくとも約９６重量％含むことができる。
【００６７】
約６０重量％以下、さらに４５重量％以下、あるいはさらに３０重量％以下のＲｅｂＡ材料を含むグリコシド混合物中のＲｅｂＡ材料の純度を高めるために本発明を用いることは非常に有効である。特に、その混合物中のステビオシドの量が、全グリコシドの少なくとも約１０重量％、または全グリコシドの少なくとも約２０重量％、あるいはいくつかの態様ではＲｅｂＡ材料の量よりも多い場合に有効である。その組成物中のＲｅｂＡ材料は結晶性または非晶質でもよく、通常、少なくとも一部が非晶質である。グリコシド混合物中にＲｅｂＡ材料の含有量のレベルがそのように少ない場合、従来の多くの方法では、ＲｅｂＡ材料が水やエタノール等の溶媒に非常に溶解し易いため、適切に結晶化および精製するのが困難である。好ましくは、その態様に用いられるスラリーの液相は、エタノールを含み、スラリーに含まれる溶媒の全重量に対して、好ましくは少なくとも約８０重量％のエタノール、あるいがさらに少なくとも約９０重量％のエタノール、あるいはさらに少なくとも９５重量％のエタノールを含む。
【００６８】
限定されるものではないが、その混合物は、特に天然物から得られたものである場合、比較的多い量のステビオシド材料を含む傾向がある。ステビオシドはＲｅｂＡ材料を溶解し易い。本発明の溶媒を介した結晶化処理は、必要に応じて形変換結晶化と組み合わせることができ、従来の経験からすれば技術的な障害になるであろうステビオシド材料の溶解力にも拘わらず、ＲｅｂＡ材料を結晶相の中に選択的に分配することができる。理論に拘束されるものではないが、高温、特に８５℃以上、好ましくは９０℃以上、より好ましくは１００℃以上の高温は、ステビオールグリコシドの形態変化をもたらし、そのような好ましくない状況でも、ＲｅｂＡ材料の結晶化を促進する。
【００６９】
純度を高めるまたはすでに高純度であるＲｅｂＡの純度を高めるために本発明を用いることは非常に有効である。例えば、従来の方法では、約９０重量％〜約９５重量％のＲｅｂＡ材料を含む結晶を製造することができる。その結晶は、多くの適用基準に準じておりＲｅｂＡ材料に関しては高純度であるが、より高純度のＲｅｂＡ材料が必要される基準がある。本発明は、そのような結晶にも適用することができ、ＲｅｂＡの純度を９６重量％、さらに９６重量％から９９重量％まで高めることができる。
【００７０】
本発明の１つの好ましい態様では、不純物を含むレバウジオシドＡの３０重量％スラリーの１９０プルーフのエタノール溶液を７０℃に加熱し、約１時間撹拌する。この後、リバウジシドＡ結晶を含む残留生成物を濾過により回収し、残留物を１９０プルーフのエタノールで洗浄する（例えば、約２ケーキ重量（2 cake weight）の溶媒）。その方法により、不純物を含むレバウジオシドＡから、約３０％のレバウジオシドＢと、約５０％のレバウジオシドＤを除去できる。レバウジオシドＡの収率は、典型的には約９５重量％である。
【００７１】
本発明の別の好ましい態様では、不純物を含むレバウジオシドＡの３０重量％スラリーの１９０プルーフエタノール溶液を７０℃に加熱し、約２４時間撹拌する。この後、リバウジシドＡ結晶を含む残留生成物を濾過により回収し、残留物を１９０プルーフエタノールで洗浄する（例えば、約２ケーキ重量の溶媒）。その方法により、不純物を含むレバウジオシドＡから、約５０％のレバウジオシドＢと、約５０％のレバウジオシドＤを除去できる。レバウジオシドＡの収率は、典型的には約９５重量％である。
【００７２】
代表的な精製されたレバウジオシドＡ組成物は、典型的には、レバウジオシドＡ材料を約９７重量％以上、レバウジオシドＢ材料を約２重量％以下、およびレバウジオシドＤ材料を約２重量％以下含んでいる。精製されたレバウジオシドＡ組成物に含まれる他の成分は、例えば、ステビオシド材料、レバウジオシドＣ材料、およびレバウジオシドＦ材料である。
【００７３】
本発明の特に好ましい態様は、一方ではＲｅｂＡ材料をＲｅｂＢ材料から分離し、および／または他方ではＲｅｂＡ材料をＲｅｂＤ材料から分離すること（分解ともいう）を含む。１つの態様では、本発明は、少なくとも一部は溶媒を介する結晶化により起きると信じられている効果を用いて、不純物含有レバウジオシドＡ組成物を精製する方法を提供する。不純物を含むレバウジオシドＡ組成物は、レバウジオシドＢ材料とレバウジオシドＤ材料から選択される少なくとも１種の不純物を含む。好ましくは、少なくともＲｅｂＡ材料はエタノールからの結晶形である。
【００７４】
他の態様では、ＲｅｂＡ材料は他の結晶形および／または非晶質である。その方法は、次の工程を含む：（ａ）レバウジオシドＡ材料と、レバウジオシドＢ材料およびレバウジオシドＤ材料から選択される少なくとも１種の不純物とを含む、不純物含有レバウジオシドＡ組成物を用意する工程；
（ｂ）エタノール等の適切な液体媒体を用いて不純物含有レバウジオシドＡ組成物のスラリーを調製する工程；
（ｃ）スラリーを約１時間またはそれより長い時間熟成する工程；
（ｄ）必要に応じて、熟成の少なくとも一部の時間、例えば約４５℃〜約１００℃にスラリーを加熱する工程；
（ｅ）必要に応じて、熟成の少なくとも一部の時間、スラリーを撹拌する工程；
（ｆ）熟成工程後、スラリーを濾過し、精製されたＲｅｂＡ材料を含む結晶（残留物）を回収し、残留物を洗浄して、精製されたレバウジオシド組成物を提供する。精製されたレバウジオシド組成物は、少なくとも１種の不純物の少なくとも一部が、不純物含有レバウジオシド組成物と比較して減少している。
【００７５】
いくつかの態様では、本発明は、不純物含有レバウジオシド組成物等のグルコキシド混合物の精製方法を提供し、その方法は形変換精製を含んでいる。その態様では、グリコシド混合物が提供され、少なくとも１種のグリコシドは第１の結晶形である。例えば、不純物含有レバウジオシド組成物は、レバウジオシドＡ材料と、レバウジオシドＢ材料とレバウジオシドＤ材料からなる群から選択される少なくとも１種の不純物とを含むものとして提供される。少なくともＲｅｂＡ材料は、エタノール結晶形等の第１の結晶形である。エタノール結晶形は上述のようにスラリー中で熟成され、ＲｅｂＡ材料の結晶の純度が向上する。混合物は次いで、グリコシドを第２の結晶形に変換するために処理される。例えば、これは、レバウジオシドＡ材料をエタノール結晶形から水結晶形に変換することを含む。水結晶形は、上述のようにスラリー中で熟成することができ、それによりＲｅｂＡ材料の結晶の純度が向上する。次いで、レバウジオシドＡ材料の水結晶形は、水結晶形からエタノール結晶形へと変換することができる。また、この形は上述の方法により熟成することができ、それにより純度が向上する。この一連の変換は、精製されたレバウジオシドＡ組成物を提供するのに寄与し、該組成物は、レバウジオシドＢ材料とレバウジオシドＤ材料から選択された少なくとも１種の不純物の量が減少している。
【００７６】
いくつかの態様では、エタノール結晶形を水結晶形へと変換させる工程は以下の工程を含む：（ａ）レバウジオシドＡ組成物を水と組み合わせて水系スラリーを調製する工程；および（ｂ）エタノール結晶形から水結晶形へと変換させるに十分な期間、水系スラリーを放置する工程。水結晶形は、レバウジオシドＡの４水和物多形として表すことができる。いくつかの態様では、水結晶形をエタノール結晶形へと変換させる工程は以下の工程を含む：（ａ）レバウジオシドＡ組成物をエタノールと組み合わせてエタノール系スラリーを調製する工程；および（ｂ）水結晶形からエタノール結晶形へと変換させるに十分な期間、エタノール系スラリーを放置する工程。固形分量、溶媒特性、撹拌、温度、圧力は、溶媒を介する結晶化技術に関し、上述のように選択できる。しかしながら、水形をエタノール形に変換するのに用いられるエタノールは、通常、約９３重量％エタノールよりも高濃度のものを含むが、他の濃度を用いることもできる。
【００７７】
形変換精製は、不純物含有レバウジオシドＡ組成物（すなわち、出発物質）から、レバウジオシドＢ、レバウジオシドＤ、またはその両方を除去する。いくつか態様では、形変換精製は、不純物含有レバウジオシドＡ組成物に存在する、レバウジオシドＢを最大約５０％、およびレバウジオシドＤ材料を最大約９５％除去する。
【００７８】
本発明の原則は、他の精製方法と組み合わせて用いることができる。例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ２００８/０９１５４７Ａ２は、溶媒／貧溶媒／溶媒の技術を用いてＲｅｂＡ等のグリコシドの精製方法を記載している。本発明は、その溶媒／貧溶媒／溶媒の技術の前および／または後で用いることができ、それにより精製されたＲｅｂＡをより効果的および／または効率的に得ることができる。ＰＣＴ公開第ＷＯ２００８/０９１５４７Ａ２は、すべての目的のためそのすべてが、出典明示により、本明細書に組み入れられる。
【実施例】
【００７９】
以下の限定されない実施例を参照して、本発明を説明する。
【００８０】
実施例１：
グリコシド材料の３個の試料は、ＲｅｂＡをそれぞれ９０％、９５％、９２％、ＲｅｂＤをそれぞれ２．９％、０．１％、１．０％、およびＲｅｂＢをそれぞれ０．０７％、３．０％、１．４％含むエタノール結晶形であり、それを水と混合して、１３％固形分を含む水スラリーを調製した。スラリーを一晩中室温で磁気撹拌子とスターラーを用い、すべての固形材料を懸濁状態にするように十分撹拌した。一晩熟成した後、材料を濾過した。材料は、ＲｅｂＡをそれぞれ９３％、９５％、９５％、ＲｅｂＤをそれぞれ２．４％、０％、０．６％、およびＲｅｂＢをそれぞれ０．５％、３．９％、２．５％含んでいた。各処理で、固相に回収された材料は、反応に供された全材料の、それぞれ８８％、９８％、および９８％であった。ロ液を真空乾燥器で乾燥したところ、ＲｅｂＡをそれぞれ７３％、７９％、７２％、ＲｅｂＤをそれぞれ９．６％、１．８％、８．４％、およびＲｅｂＢをそれぞれ０．４％、３．７％、０．５％含んでいた。
【００８１】
実施例２：
実施例１で製造した３種の各材料を、純粋エタノールを用い、固形分がそれぞれ３．３％、８．８％、６．０％であるスラリーとし、室温で一晩攪拌した。再度攪拌した後、材料をまた濾過し、２００プルーフのエタノールで洗浄し、乾燥した。濾過した各生成物は、ＲｅｂＡをそれぞれ９９％、９８％、９８％、ＲｅｂＤをそれぞれ１．１％、０．０％、０．１％、およびＲｅｂＢをそれぞれ０．１％、１．３％、１．０％含んでいた。実施例１の工程を含め、固相中の材料の全収率は、それぞれ６４％、８３％、および７３％であった。ロ液を真空乾燥器で乾燥したところ、ＲｅｂＡをそれぞれ８６％、４９％、７４％、ＲｅｂＤをそれぞれ３．０％、０．３６％、２．６％、およびＲｅｂＢをそれぞれ１．６％、１９％、１１％含んでいた。
【００８２】
実施例３：
実施例１で製造した３種の各材料を、１９０プルーフのエタノールを用い、固形分がそれぞれ６．９％、４．９％、７．２％であるスラリーとし、室温で一晩攪拌した。再度攪拌した後、材料をまた濾過し、１９０プルーフのエタノールで洗浄し、乾燥した。各生成物は、ＲｅｂＡをそれぞれ９９％、９９％、９９％、ＲｅｂＤをそれぞれ０．０％、０．３％、０．３％、およびＲｅｂＢをそれぞれ１．０％、０．１％、０．６％含んでいた。実施例１の工程を含め、固相中の材料の全収率は、それぞれ６８％、４５％、および７１％であった。ロ液を真空乾燥器で乾燥したところ、ＲｅｂＡをそれぞれ７４％、８１％、７３％、ＲｅｂＤをそれぞれ１０％、２．３％、９．７％、およびＲｅｂＢをそれぞれ０．５％、３．５％、０．５％含んでいた。
【００８３】
実施例４：
グリコシド材料の３個の試料は、ＲｅｂＡをそれぞれ９０％、９５％、９２％、ＲｅｂＤをそれぞれ２．９％、０．１％、１．０％、およびＲｅｂＢをそれぞれ０．０７％、３．０％、１．４％含むエタノール結晶形であり、それを実施例１と同様に処理した。処理後に回収した固体材料は、ＲｅｂＡをそれぞれ９７％、９５％、９５％、ＲｅｂＤをそれぞれ１．１％、０％、０．６５％、およびＲｅｂＢをそれぞれ０．９％、３．９％、２．９％含んでいた。３種の回収した各固体材料を、純粋エタノールを用い、固形分がそれぞれ５．１％、６．０％、５．３％であるスラリーとし、室温で一晩攪拌した。再度攪拌した後、材料をまた濾過し、純粋メタノールで洗浄し、乾燥した。各生成物は、ＲｅｂＡをそれぞれ９９％、９９％、９９％、ＲｅｂＤをそれぞれ０．２％、０．０％、０．２％、およびＲｅｂＢをそれぞれ０．２％、１．３％、０．７％含んでいた。水中での第１の処理工程を含め、固相中の材料の全収率は、それぞれ４１％、６４％、および５８％であった。ロ液を回収し、真空乾燥器で乾燥したところ、ＲｅｂＡをそれぞれ８３％、７９％、７２％、ＲｅｂＤをそれぞれ６．５％、２．７％、９．６％、およびＲｅｂＢをそれぞれ０．５％、４．０％、０．４％含んでいた。
【００８４】
実施例５：
９３．４％ＲｅｂＡ、２．４％ＲｅｂＤ、および１．５％ＲｅｂＢを含むエタノール結晶形を含む材料を１９０プルーフエタノールと混合して、固形分１０％を含むスラリーを調製した。スラリーを室温で攪拌した。１時間後、試料の材料を濾過し、１９０プルーフのエタノールで洗浄し、乾燥した。９６％ＲｅｂＡ、１．５％ＲｅｂＤ、および１．６％ＲｅｂＢを含む試料が固相として回収された。残りのスラリーを一晩放置した後、濾過し、１９０プルーフのエタノールで洗浄し、乾燥した。さらに最大で２４時間後、残留スラリーからの結晶性生成物は９６％ＲｅｂＡ、１．４％ＲｅｂＤ、および１．６％ＲｅｂＢを含み、残留スラリー中のグリコシド材料の８９％が固相として回収された。ロ液を回収し、真空乾燥器で乾燥したところ、ＲｅｂＡを８３％、ＲｅｂＤを１０．４％、およびＲｅｂＢを４．９％含んでいた。
【００８５】
実施例６：
９３．４％ＲｅｂＡ、２．４％ＲｅｂＤ、および１．５％ＲｅｂＢを含むエタノール結晶形を含む材料を１９０プルーフのエタノールと混合して、固形分３０％を含むスラリーを調製した。スラリーを７０℃に加熱し攪拌した。１時間後、試料を７０℃で濾過し、１９０プルーフのエタノールで洗浄し、乾燥した。試料は、９６％ＲｅｂＡ、１．８％ＲｅｂＤ、および１．７％ＲｅｂＢを含み、試料のグリコシド材料の９５％が固相として回収された。ロ液を回収し、真空乾燥器で乾燥したところ、ＲｅｂＡを８７％、ＲｅｂＤを７．０％、およびＲｅｂＢを３．９％含んでいた。このサンプリング後の残留スラリーを一晩放置し、濾過し、１９０プルーフのエタノールで洗浄し、乾燥した。さらに最大で２４時間後、残留スラリーの結晶性生成物は９８％ＲｅｂＡ、１．３％ＲｅｂＤ、および０．４％ＲｅｂＢを含み、残留スラリー中のグリコシド材料の９５％が固相として回収された。
【００８６】
実施例７：
９３．４％ＲｅｂＡ、２．４％ＲｅｂＤ、および１．５％ＲｅｂＢを含むエタノール結晶形を含む材料を１９０プルーフのエタノールと混合して、固形分３０％を含むスラリーを調製した。スラリーを７０℃に加熱し攪拌した。１時間後、試料を７０℃で濾過し、純粋エタノールで洗浄し、乾燥した。試料は９５％ＲｅｂＡ、２．３％ＲｅｂＤ、および１．５％ＲｅｂＢを含み、試料のグリコシド材料の９７％が固相として回収された。ロ液を回収し、真空乾燥器で乾燥したところ、ＲｅｂＡを７３％、ＲｅｂＤを７．７％、およびＲｅｂＢを１７％含んでいた。残留スラリーを一晩放置し、７０℃で濾過し、１９０プルーフのエタノールで洗浄し、乾燥した。さらに最大で２４時間後、残留スラリーの結晶性生成物は９８％ＲｅｂＡ、１．３％ＲｅｂＤ、および０．４％ＲｅｂＢを含み、残留スラリー中のグリコシド材料の９５％が固相として回収された。
【００８７】
実施例８：
５８ｇのステビオールグリコシドを９４重量％エタノールの中に加え、ステビオールグリコシドの２０重量％スラリーを調製した。攪拌機と表面積５８ｃｍ２の冷却ループを備えた２０ｐｓｉｇの５００ｍｌの圧力容器の中にスラリーを入れた。冷却ループは、単純なＵ字型のステンレス鋼製のループであり、全長が約４０ｃｍ、攪拌機を入れるために容器の中心から少しずらして配置されている。容器を窒素で置換した。次いでスラリーをバルク温度が１００℃になるまで１時間加熱し、そのまま１００℃で２時間維持した。１５℃の水を冷却ループに６０ｍｌ／分で供給した。冷却水は冷却ループを２５℃にした。圧力容器は１８０ｒｐｍで攪拌した。１００℃で２時間維持した後、混合物を７０℃で３０分間冷却し、７０℃でブフナー漏斗で濾過し、ブフナー漏斗の中で５７ｇのエタノールで洗浄した。固形物を回収し、乾燥し、ＨＰＬＣで分析した。１２ｇの材料が製造された。
【００８８】
【表１】
2013518118.tif 000002
【００８９】
実施例９：
９１ｇの非晶質ステビオールグリコシドを１００％エタノールの中に加え、ステビオールグリコシドの３０重量％スラリーを調製した。実施例８と同様に圧力容器の中にスラリーを入れ２０ｐｓｉｇとした。容器を窒素で置換し、次いで混合物をバルク温度が１００℃になるまで１時間加熱し、そのまま１００℃で２時間維持したが、その際、入口で１５℃の水を冷却ループに６０ｍｌ／分で冷却ループに流し、攪拌は１８０ｒｐｍとした。冷却水の出口の温度は２５℃であった。次いで、混合物を７０℃で３０分間冷却し、７０℃でブフナー漏斗で濾過し、ブフナー漏斗の中で６３ｇの純粋エタノールで洗浄した。固形物を回収し、乾燥し、ＨＰＬＣで分析した。８ｇの材料が製造された。
【００９０】
【表２】
2013518118.tif 000003
【００９１】
実施例１０：
５９ｇのエタノール結晶形ステビオールグリコシドを９４重量％エタノールの中に加え、ステビオールグリコシドの１９重量％スラリーを調製した。実施例８と同様に圧力容器の中にスラリーを入れ２０ｐｓｉｇとした。容器を窒素で置換した。次いでスラリーをバルク温度が１００℃になるまで１時間加熱し、そのまま１００℃で６時間維持したが、その際、入口で１５℃の水を冷却ループに６０ｍｌ／分で冷却ループに流し、攪拌は１８０ｒｐｍとした。冷却水の出口の温度は２５℃であった。次いで、混合物を７０℃で３０分間冷却し、７０℃で濾過し、１０７ｇの純粋エタノールで洗浄した。固形物を回収し、乾燥し、ＨＰＬＣで分析した。
【００９２】
【表３】
2013518118.tif 000004
【００９３】
実施例１１：
５９ｇの非晶質ステビオールグリコシドを９４重量％エタノールの中に加え、ステビオールグリコシドの１９重量％スラリーを調製した。実施例８と同様に圧力容器の中にスラリーを入れ２０ｐｓｉｇとした。容器を窒素で置換した。次いでスラリーをバルク温度が１００℃になるまで１時間加熱し、そのまま１００℃で２時間維持したが、その際、入口で１５℃の水を冷却ループに６０ｍｌ／分で冷却ループに流し、攪拌は１８０ｒｐｍとした。冷却水の出口の温度は２５℃であった。次いで、混合物を７０℃で３０分間冷却し、７０℃で濾過し、ブフナー漏斗の中で１３３ｇの純粋エタノールで洗浄した。固形物を回収し、乾燥し、ＨＰＬＣで分析した。３５ｇの材料が製造された。濾液を回収し、真空乾燥器で乾燥し、ＨＰＬＣで分析した。
【００９４】
【表４】
2013518118.tif 000005
【００９５】
実施例１２：
６０ｇの非晶質ステビオールグリコシドを純粋エタノールの中に加え、ステビオールグリコシドの１９重量％スラリーを調製した。実施例８と同様に圧力容器の中にスラリーを入れ２０ｐｓｉｇとした。容器を窒素で置換した。次いでスラリーをバルク温度が１００℃になるまで１時間加熱し、そのまま１００℃で２時間維持したが、その際、入口で１５℃の水を冷却ループに６０ｍｌ／分で冷却ループに流し、攪拌は１８０ｒｐｍとした。冷却水の出口の温度は２５℃であった。次いで、混合物を７０℃で３０分間冷却し、７０℃で濾過し、１４８ｇの純粋エタノールで洗浄した。固形物を回収し、乾燥し、ＨＰＬＣで分析した。４６ｇの材料が製造された。濾液を回収し、真空乾燥器で乾燥し、ＨＰＬＣで分析した。
【００９６】
【表５】
2013518118.tif 000006
【００９７】
実施例１３（冷却無しの実施例）：
８６ｇのアルコール結晶性ステビオールグリコシドを１９０プルーフのエタノールの中に加え、ステビオールグリコシドの１９重量％スラリーを調製した。実施例８と同様に圧力容器の中にスラリーを入れ２０ｐｓｉｇとした。容器を窒素で置換した。次いでスラリーを１００℃になるまで１時間加熱し、そのまま１００℃で２時間維持したが、その際、冷却水を冷却ループに流さなかった。容器は１８０ｒｐｍで攪拌した。次いで、混合物を７０℃に冷却し、７０℃で濾過し、２１６ｇの純粋エタノールで洗浄した。固形物を回収し、乾燥し、ＨＰＬＣで分析した。７５ｇの材料が製造された。濾液を回収し、真空乾燥器で乾燥し、ＨＰＬＣで分析した。
【００９８】
【表６】
2013518118.tif 000007
【００９９】
実施例１４（冷却有りの実施例）：
８６ｇのアルコール結晶性ステビオールグリコシドを１９０プルーフのエタノールの中に加え、ステビオールグリコシドの１９重量％スラリーを調製した。実施例８と同様に圧力容器の中にスラリーを入れ２０ｐｓｉｇとした。容器を窒素で置換した。次いでスラリーを１００℃になるまで１時間加熱し、そのまま１００℃で２時間維持したが、その際、入口で１５℃の水を冷却ループに６０ｍｌ／分で冷却ループに流した。冷却水の出口の温度は２５℃であった。容器は１８０ｒｐｍで攪拌した。次いで、混合物を７０℃に冷却し、７０℃で濾過し、２１６ｇの純粋エタノールで洗浄した。固形物を回収し、乾燥し、ＨＰＬＣで分析した。７５ｇの材料が製造された。濾液を回収し、真空乾燥器で乾燥し、ＨＰＬＣで分析した。
【０１００】
【表７】
2013518118.tif 000008
【０１０１】
本発明の他の態様は、本明細書を検討することにより、あるいは本明細書に開示された例から、当業者には明らかであろう。本明細書に記載された原則および態様に対する種々の省略、変形、および変更は、以下の特許請求の範囲に示された本発明の本来の範囲および精神から逸脱することのない範囲で当業者によりなされてもよい。本明細書で引用されたすべての特許、特許文献、および刊行物は、各文献を個々に組み入れるのと同じ限度で、出典明示により本明細書に組み入れられる。
【図１】
2013518118.tif 000009
【図２】
2013518118.tif 000010
【図３】
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【図４ａ】
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【図４ｂ】
2013518118.tif 000013
【図５ａ】
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【図５ｂ】
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【国際調査報告】
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