(57)【要約】  本発明はＩＬ−１β結合蛋白質、ＩＬ−１βと結合するキメラ抗体、ＣＤＲ移植抗体及びヒト化抗体を記載する。本発明の結合蛋白質はＩＬ−１βに対する親和性が高く、ＩＬ−１β活性を中和させる。本発明の結合蛋白質は全長抗体、あるいはそのＩＬ−１β結合部分であり得る。本発明の結合蛋白質の作製方法と使用方法も記載する。本発明のＩＬ−１β結合蛋白質はＩＬ−１β活性が有害である疾患又は障害に罹患したヒト対象等においてＩＬ−１βを検出するため、及びＩＬ−１β活性を阻害するために有用である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＩＬ−１βと結合することが可能な抗体又はその抗原結合部分であって、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９及び配列番号４０から構成される群から選択されるアミノ酸配列を含むＩＬ−１βと結合することが可能な前記抗体又はその抗原結合部分。
【請求項２】
ＩＬ−１βと結合することが可能な抗体又はその抗原結合部分であって、配列番号２６の残基３１〜３５（ＣＤＲ−Ｈ１）、配列番号２６の残基５０〜６５（ＣＤＲ−Ｈ２）、配列番号２６の残基９８〜１１１（ＣＤＲ−Ｈ３）、配列番号２７の残基２４〜３４（ＣＤＲ−Ｌ１）、配列番号２７の残基５０〜５６（ＣＤＲ−Ｌ２）、及び配列番号２７の残基８９〜９７（ＣＤＲ−Ｌ３）から構成される群から選択されるアミノ酸配列を含む少なくとも１個のＣＤＲを含む前記抗体又はその抗原結合部分。
【請求項３】
少なくとも３個のＣＤＲを含む請求項２に記載の結合蛋白質。
【請求項４】
少なくとも３個のＣＤＲが可変ドメインＣＤＲセットから選択され、前記可変ドメインＣＤＲセットが、配列番号２６の残基３１〜３５（ＣＤＲ−Ｈ１）、配列番号２６の残基５０〜６５（ＣＤＲ−Ｈ２）及び配列番号２６の残基９８〜１１１（ＣＤＲ−Ｈ３）を含むＶＨＣＤＲセットと、配列番号２７の残基２４〜３４（ＣＤＲ−Ｌ１）、配列番号２７の残基５０〜５６（ＣＤＲ−Ｌ２）及び配列番号２７の残基８９〜９７（ＣＤＲ−Ｌ３）を含むＶＬＣＤＲセットから構成される群から選択される請求項３に記載の結合蛋白質。
【請求項５】
少なくとも２個の可変ドメインＣＤＲセットを含む請求項４に記載の結合蛋白質。
【請求項６】
少なくとも２個の可変ドメインＣＤＲセットが、配列番号２６の残基３１〜３５（ＣＤＲ−Ｈ１）、配列番号２６の残基５０〜６５（ＣＤＲ−Ｈ２）及び配列番号２６の残基９８〜１１１（ＣＤＲ−Ｈ３）を含むＶＨＣＤＲセットと、配列番号２７の残基２４〜３４（ＣＤＲ−Ｌ１）、配列番号２７の残基５０〜５６（ＣＤＲ−Ｌ２）及び配列番号２７の残基８９〜９７（ＣＤＲ−Ｌ３）を含むＶＬＣＤＲセットである請求項５に記載の結合蛋白質。
【請求項７】
更にヒトアクセプターフレームワークを含む請求項６に記載の結合蛋白質。
【請求項８】
ヒトアクセプターフレームワークが配列番号１０〜１７及び配列番号１８〜２５から構成される群から選択されるアミノ酸配列を含む請求項７に記載の結合蛋白質。
【請求項９】
前記ヒトアクセプターフレームワークが少なくとも１カ所のフレームワーク領域アミノ酸置換を含み、前記フレームワークのアミノ酸配列がヒトアクセプターフレームワークの配列と少なくとも６５％一致しており、ならびにヒトアクセプターフレームワークと一致する少なくとも７０個のアミノ酸残基を含む請求項７又は８に記載の結合蛋白質。
【請求項１０】
ヒトアクセプターフレームワークがキー残基に少なくとも１カ所のフレームワーク領域アミノ酸置換を含み、前記キー残基がＣＤＲに隣接する残基、グリコシル化部位残基、希少残基、ヒトＩＬ−１βと相互作用することが可能な残基、ＣＤＲと相互作用することが可能な残基、カノニカル残基、重鎖可変領域と軽鎖可変領域の間の接触残基、バーニアゾーン内の残基、及びＣｈｏｔｈｉａの定義による重鎖可変領域ＣＤＲ１とＫａｂａｔの定義による第１番目の重鎖フレームワークの間でオーバーラップする領域における残基から構成される群から選択される請求項８に記載の結合蛋白質。
【請求項１１】
キー残基が、キー残基を含んでいてもよく、前記キー残基が１Ｈ、１２Ｈ、２４Ｈ、２７Ｈ、２９Ｈ、３７Ｈ、４８Ｈ、４９Ｈ、６７Ｈ、７１Ｈ、７３Ｈ、７６Ｈ、７８Ｈ、９４Ｈ、１Ｌ、２Ｌ、３Ｌ、４Ｌ、４３Ｌ、４９Ｌ、６４Ｌ及び８３Ｌから構成される群から選択されるから構成される群から選択される請求項１０に記載の結合蛋白質。
【請求項１２】
コンセンサスヒトアクセプターを含む請求項１１に記載の結合蛋白質。
【請求項１３】
配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２及び配列番号３３から構成される群から選択されるアミノ酸配列を含む可変重鎖ポリペプチドと、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９及び配列番号４０から構成される群から選択されるアミノ酸配列を含む可変軽鎖ポリペプチドを含む請求項１に記載の結合蛋白質。
【請求項１４】
前記結合蛋白質が配列番号３０と配列番号３６、配列番号３０と配列番号３７、配列番号３０と配列番号３９、配列番号３０と配列番号４０、配列番号３３と配列番号３６、配列番号３３と配列番号３７、配列番号３３と配列番号３９、配列番号３３と配列番号４０から構成される群から選択される夫々のアミノ酸配列を含む可変重鎖ポリペプチドと可変軽鎖ポリペプチドを含む請求項１３の結合蛋白質。
【請求項１５】
免疫グロブリン分子、ジスルフィド結合Ｆｖ、モノクローナル抗体、ｓｃＦｖ、キメラ抗体、シングルドメイン抗体、ＣＤＲ移植抗体、ダイアボディ、ヒト化抗体、多重特異性抗体、Ｆａｂ、二重特異性抗体、ＤＶＤ−Ｉｇ蛋白質、Ｆａｂ’、二特異性抗体、Ｆ（ａｂ’）２及びＦｖから構成される群から選択される請求項１の結合蛋白質。
【請求項１６】
ヒトＩｇＭ定常ドメイン、ヒトＩｇＧ４定常ドメイン、ヒトＩｇＧ１定常ドメイン、ヒトＩｇＥ定常ドメイン、ヒトＩｇＧ２定常ドメイン、ヒトＩｇＧ３定常ドメイン及びヒトＩｇＡ定常ドメインから構成される群から選択される重鎖免疫グロブリン定常領域を含む請求項１の結合蛋白質。
【請求項１７】
更に配列番号２及び配列番号３から構成される群から選択されるアミノ酸配列をもつ重鎖定常領域を含む請求項１の結合蛋白質。
【請求項１８】
更に配列番号４及び配列番号５から構成される群から選択されるアミノ酸配列をもつ軽鎖定常領域を含む請求項１の結合蛋白質。
【請求項１９】
ヒトＩＬ−１βの生物学的機能を変調させることが可能である請求項１の結合蛋白質。
【請求項２０】
ヒトＩＬ−１βを中和させることが可能である請求項１の結合蛋白質。
【請求項２１】
表面プラズモン共鳴法により測定した場合に前記ターゲットに対して少なくとも約１０２Ｍ−１ｓ−１、少なくとも約１０３Ｍ−１ｓ−１、少なくとも約１０４Ｍ−１ｓ−１、少なくとも約１０５Ｍ−１ｓ−１、及び少なくとも約１０６Ｍ−１ｓ−１から構成される群から選択されるオン速度定数（Ｋｏｎ）をもつ請求項１の結合蛋白質。
【請求項２２】
表面プラズモン共鳴法により測定した場合に前記ターゲットに対して最大で約１０−３ｓ−１、最大で約１０−４ｓ−１、最大で約１０−５ｓ−１、及び最大で約１０−６ｓ−１から構成される群から選択されるオフ速度定数（Ｋｏｆｆ）をもつ請求項１の結合蛋白質。
【請求項２３】
前記ターゲットに対して最大で約１０−７Ｍ、最大で約１０−８Ｍ、最大で約１０−９Ｍ、最大で約１０−１０Ｍ、最大で約１０−１１Ｍ、最大で約１０−１２Ｍ、及び最大で約１０−１３Ｍから構成される群から選択される解離定数（ＫＤ）をもつ請求項１の結合蛋白質。
【請求項２４】
ＩＬ−１αに対して約１．３１×１０−１０Ｍ、約１．４７×１０−１０Ｍ、約１．６１×１０−１０Ｍ、約１．８６×１０−１０Ｍ、約２．０２×１０−１０Ｍ、約２．０６×１０−１０Ｍ、約２．３×１０−１０Ｍ、及び約２．８４×１０−１０Ｍから構成される群から選択される解離定数（ＫＤ）をもつ請求項２３の結合蛋白質。
【請求項２５】
更に免疫接着分子、イメージング剤、治療剤及び細胞傷害性物質から構成される群から選択される作用剤を含む請求項１の結合蛋白質。
【請求項２６】
前記作用剤が放射性ラベル、酵素、蛍光ラベル、発光ラベル、生物発光ラベル、磁気ラベル及びビオチンから構成される群から選択されるイメージング剤である請求項２５の結合蛋白質。
【請求項２７】
前記イメージング剤が３Ｈ、１４Ｃ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１７７Ｌｕ、１６６Ｈｏ及び１５３Ｓｍから構成される群から選択される放射性ラベルである請求項２５の結合蛋白質。
【請求項２８】
前記作用剤が代謝拮抗剤、アルキル化剤、抗生物質、成長因子、サイトカイン、抗血管新生剤、抗有糸分裂剤、アントラサイクリン、毒素及びアポトーシス誘導剤から構成される群から選択される治療剤又は細胞傷害性物質である請求項２５の結合蛋白質。
【請求項２９】
ヒトグリコシル化パターンをもつ請求項１の結合蛋白質。
【請求項３０】
結晶化結合蛋白質である請求項１の結合蛋白質。
【請求項３１】
前記結晶化結合蛋白質が無担体薬剤制御放出結晶化結合蛋白質である請求項３０の結合蛋白質。
【請求項３２】
可溶性対応物よりも長いインビボ半減期をもつ請求項３１の結合蛋白質。
【請求項３３】
生物活性を保持する請求項３１の結合蛋白質。
【請求項３４】
請求項１の結合蛋白質アミノ酸配列をコードする単離核酸。
【請求項３５】
請求項１の結合蛋白質アミノ酸配列をコードする単離核酸を含むベクター。
【請求項３６】
ｐｃＤＮＡ、ｐＴＴ、ｐＴＴ３、ｐＥＦＢＯＳ、ｐＢＶ、ｐＪＶ、ｐＨｙｂＥ及びｐＢＪから構成される群から選択される請求項３５のベクター。
【請求項３７】
請求項３５のベクターを含む宿主細胞。
【請求項３８】
原核細胞である請求項３７の宿主細胞。
【請求項３９】
大腸菌である請求項３８の宿主細胞。
【請求項４０】
真核細胞である請求項３７の宿主細胞。
【請求項４１】
前記真核細胞が原生生物細胞、動物細胞、植物細胞及び真菌細胞から構成される群から選択される請求項４０の宿主細胞。
【請求項４２】
前記真核細胞が哺乳動物細胞、鳥類細胞及び昆虫細胞から構成される群から選択される動物細胞である請求項４０の宿主細胞。
【請求項４３】
ＣＨＯ又はＣＯＳ細胞である請求項４０の宿主細胞。
【請求項４４】
ＨＥＫ２９３−６Ｅ細胞である請求項４１の宿主細胞。
【請求項４５】
酵母細胞である請求項４０の宿主細胞。
【請求項４６】
前記酵母細胞がサッカロミセス・セルビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）である請求項４５の宿主細胞。
【請求項４７】
昆虫Ｓｆ９細胞である請求項４０の宿主細胞。
【請求項４８】
ＩＬ−１βと結合することが可能な蛋白質の作製方法であって、ＩＬ−１βと結合することが可能な結合蛋白質を産生させるために十分な条件下で請求項３７の宿主細胞を培養培地で培養する段階を含む前記方法。
【請求項４９】
請求項４８の方法により作製された蛋白質。
【請求項５０】
結合蛋白質の放出用組成物であって、
（ａ）請求項３０の結晶化結合蛋白質と成分を含有する製剤；及び
（ｂ）少なくとも１種のポリマー担体
を含む前記組成物。
【請求項５１】
前記ポリマー担体がポリ（アクリル酸）、ポリ（シアノアクリレート）、ポリ（アミノ酸）、ポリ（酸無水物）、ポリ（デプシペプチド）、ポリ（エステル）、ポリ（乳酸）、ポリ（乳酸・グリコール酸コポリマー）ないしＰＬＧＡ、ポリ（ｂ−ヒドロキシブチレート）、ポリ（カプロラクトン）、ポリ（ジオキサノン）、ポリ（エチレングリコール）、ポリ［（ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド］、ポリ［（オルガノ）ホスファゼン］、ポリ（オルトエステル）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリ（ビニルピロリドン）、マレイン酸無水物・アルキルビニルエーテルコポリマー、プルロニックポリオール、アルブミン、アルギン酸塩、セルロース及びセルロース誘導体、コラーゲン、フィブリン、ゼラチン、ヒアルロン酸、オリゴ糖、グリコサミノグリカン及び硫酸化多糖、並びにそのブレンド及びコポリマーから構成される群から選択されるポリマーである請求項５０の組成物。
【請求項５２】
前記成分がアルブミン、スクロース、トレハロース、ラクチトール、ゼラチン、ヒドロキシプロピル−ｂ−シクロデキストリン、メトキシポリエチレングリコール及びポリエチレングリコールから構成される群から選択される請求項５０の組成物。
【請求項５３】
有効量の請求項５０の組成物を哺乳動物に投与する段階を含む哺乳動物の治療方法。
【請求項５４】
請求項１の結合蛋白質と、医薬的に許容可能な担体を含有する医薬組成物。
【請求項５５】
前記医薬的に許容可能な担体が前記結合蛋白質の吸収又は分散を強化するために有用なアジュバントとして機能する請求項５４の医薬組成物。
【請求項５６】
前記アジュバントがヒアルロニダーゼである請求項５５の医薬組成物。
【請求項５７】
更にＩＬ−１β活性が有害である障害を治療するための少なくとも１種の別の作用剤を含有する請求項５４の医薬組成物。
【請求項５８】
前記別の作用剤が治療剤、イメージング剤、細胞傷害性物質、血管新生阻害剤、キナーゼ阻害剤、共刺激分子遮断薬、接着分子遮断薬、抗サイトカイン抗体又はその機能的フラグメント、メトトレキサート、シクロスポリン、ラパマイシン、ＦＫ５０６、検出可能なラベル又はレポーター、ＴＮＦアンタゴニスト、抗リウマチ薬、筋肉弛緩剤、麻薬、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、鎮痛剤、麻酔剤、鎮静剤、局所麻酔剤、神経筋遮断薬、抗微生物薬、乾癬治療薬、コルチコステロイド、アナボリックステロイド、エリスロポエチン、免疫化、免疫グロブリン、免疫抑制剤、成長ホルモン、ホルモン補充薬、放射性薬剤、抗鬱剤、抗精神病薬、刺激剤、喘息薬、βアゴニスト、吸入ステロイド、経口ステロイド、エピネフリン又はそのアナログ、サイトカイン及びサイトカインアンタゴニストから構成される群から選択される請求項５７の医薬組成物。
【請求項５９】
ヒトＩＬ−１β活性を低下させる方法であって、ヒトＩＬ−１β活性を低下させるように請求項１の結合蛋白質とヒトＩＬ−１βを接触させる段階を含む前記方法。
【請求項６０】
ＩＬ−１β活性が有害である障害に罹患したヒト対象におけるヒトＩＬ−１β活性を低下させる方法であって、ヒト対象におけるヒトＩＬ−１β活性を低下させるように請求項１の結合蛋白質をヒト対象に投与する段階を含む前記方法。
【請求項６１】
治療を実現するように請求項１の結合蛋白質を対象に投与することにより、ＩＬ−１β活性が有害である疾患又は障害に対して対象を治療する方法。
【請求項６２】
前記障害が関節リウマチ、変形性関節症、若年性慢性関節炎、敗血症性関節炎、ライム関節炎、乾癬性関節炎、反応性関節炎、脊椎関節症、全身性エリテマトーデス、クローン病、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患、インスリン依存性糖尿病、甲状腺炎、喘息、アレルギー疾患、乾癬、強皮症皮膚炎、移植片対宿主病、臓器移植拒絶反応、臓器移植に伴う急性又は慢性免疫疾患、サルコイドーシス、アテローム性動脈硬化症、播種性血管内凝固症候群、川崎病、グレーブス病、ネフローゼ症候群、慢性疲労症候群、ウェグナー肉芽腫症、シェーンライン・ヘノッホ紫斑病、腎臓の顕微鏡的血管炎、慢性活動性肝炎、ブドウ膜炎、敗血症性ショック、毒素性ショック症候群、敗血症症候群、悪液質、感染症、寄生虫症、後天性免疫不全症候群、急性横断性脊髄炎、ハンチントン舞踏病、パーキンソン病、アルツハイマー病、脳卒中、原発性胆汁性肝硬変、溶血性貧血、悪性腫瘍、心不全、心筋梗塞、アジソン病、散発性Ｉ型多腺性内分泌不全症及びＩＩ型多腺性内分泌不全症、シュミット症候群、成人（急性）呼吸窮迫症候群、脱毛症、先天性脱毛症、血清反応陰性関節症、関節症、ライター病、乾癬性関節症、潰瘍性大腸炎性関節症、腸病性滑膜炎、クラミジア、エルシニア及びサルモネラ関連関節症、脊椎関節症、アテローム性疾患／動脈硬化症、アトピー性アレルギー、自己免疫性水疱症、尋常性天疱瘡、落葉状天疱瘡、類天疱瘡、線状ＩｇＡ病、自己免疫性溶血性貧血、クームス陽性溶血性貧血、後天性悪性貧血、若年性悪性貧血、筋痛性脳炎／ロイヤルフリー病、慢性粘膜皮膚カンジダ症、巨細胞性動脈炎、原発性硬化性肝炎、特発性自己免疫性肝炎、後天性免疫不全症候群、後天性免疫不全症関連疾患、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、分類不能型免疫不全症（分類不能型低ガンマグロブリン血症）、拡張型心筋症、女性不妊症、卵巣不全、早発卵巣不全、線維性肺疾患、特発性線維化性肺胞炎、炎症後間質性肺疾患、間質性肺炎、結合組織病関連間質性肺疾患、混合性結合組織病関連肺疾患、全身性硬化症関連間質性肺疾患、関節リウマチ関連間質性肺疾患、全身性エリテマトーデス関連肺疾患、皮膚筋炎／多発性筋炎関連肺疾患、ショーグレン病関連肺疾患、強直性脊椎炎関連肺疾患、血管炎性びまん性肺疾患、ヘモジデリン沈着症関連肺疾患、薬物誘発性間質性肺疾患、線維症、放射線線維症、閉塞性細気管支炎、慢性好酸球性肺炎、リンパ球浸潤性肺疾患、感染後間質性肺疾患、通風性関節炎、自己免疫性肝炎、１型自己免疫性肝炎（古典的自己免疫性肝炎ないしルポイド肝炎）、２型自己免疫性肝炎（抗ＬＫＭ抗体肝炎）、自己免疫介在性低血糖症、黒色表皮腫を伴うＢ型インスリン抵抗性、副甲状腺機能低下症、臓器移植に伴う急性免疫疾患、臓器移植に伴う慢性免疫疾患、変形性関節症、原発性硬化性胆管炎、１型乾癬、２型乾癬、特発性白血球減少症、自己免疫性好中球減少症、腎疾患ＮＯＳ、糸球体腎炎、腎臓の顕微鏡的血管炎、ライム病、円板状エリテマトーデス、特発性ないしＮＯＳ男性不妊症、精子自己免疫、多発性硬化症（全サブタイプ）、交感性眼炎、結合組織病続発性肺高血圧症、グッドパスチャー症候群、結節性多発動脈炎の肺症状、急性リウマチ熱、リウマチ性脊椎炎、スティル病、全身性硬化症、ショーグレン症候群、高安病／動脈炎、自己免疫性血小板減少症、特発性血小板減少症、自己免疫性甲状腺疾患、甲状腺機能亢進症、甲状腺腫性自己免疫性甲状腺機能低下症（橋本病）、萎縮性自己免疫性甲状腺機能低下症、原発性粘液水腫、水晶体起因性ブドウ膜炎、原発性血管炎、白斑急性肝疾患、慢性肝疾患、アルコール性肝硬変、アルコール誘発性肝傷害、胆汁鬱滞症、特異体質性肝疾患、薬物誘発性肝炎、非アルコール性脂肪肝炎、アレルギー及び喘息、Ｂ群連鎖球菌（ＧＢＳ）感染症、精神障害（例えば鬱病及び統合失調症）、Ｔｈ２型及びＴｈ１型細胞介在性疾患、急性及び慢性疼痛（各種疼痛）、癌（例えば肺癌、乳癌、胃癌、膀胱癌、結腸癌、膵臓癌、卵巣癌、前立腺癌及び直腸癌）及び血液悪性疾患（白血病及びリンパ腫）、無βリポ蛋白血症、先端チアノーゼ、急性及び慢性寄生虫又は感染プロセス、急性白血病、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性又は慢性細菌感染症、急性膵炎、急性腎不全、腺癌、心房異所性拍動、エイズ痴呆合併症、アルコール誘発性肝炎、アレルギー性結膜炎、アレルギー性接触皮膚炎、アレルギー性鼻炎、同種移植片拒絶反応、α１アンチトリプシン欠損症、筋萎縮性側索硬化症、貧血、狭心症、前角細胞変性、抗ＣＤ３抗体療法、抗リン脂質抗体症候群、抗受容体過敏反応、大動脈及び末梢動脈瘤、大動脈解離、動脈性高血圧、動脈硬化症、動静脈瘻、運動失調症、心房細動（持続性又は発作性）、心房粗動、房室ブロック、Ｂ細胞リンパ腫、骨移植拒絶反応、骨髄移植（ＢＭＴ）拒絶反応、脚ブロック、バーキットリンパ腫、火傷、心不整脈、心臓性失神症候群、心臓腫瘍、心筋症、心肺バイパス炎症反応、軟骨移植拒絶反応、小脳皮質変性、小脳障害、無秩序型ないし多源性心房頻拍、化学療法関連障害、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性アルコール依存症、慢性炎症性疾患、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、慢性サリチル酸中毒、結腸直腸癌、鬱血性心不全、結膜炎、接触皮膚炎、肺性心、冠動脈疾患、クロイツェルフェルト・ヤコブ病、培養陰性敗血症、嚢胞性線維症、サイトカイン療法関連障害、拳闘家痴呆、脱髄疾患、デング出血熱、皮膚炎、皮膚疾患、糖尿病、真性糖尿病、糖尿病性動脈硬化症、びまん性レビー小体病、拡張型鬱血性心筋症、基底核障害、中高年ダウン症候群、ＣＮＳドーパミン受容体を遮断する薬物により誘発される薬物誘発性運動障害、薬物過敏症、湿疹、脳脊髄炎、心内膜炎、内分泌障害、喉頭蓋炎、エプスタイン・バールウイルス感染症、肢端紅痛症、錐体外路及び小脳障害、家族性血球貪食リンパ組織球症、胎児胸腺移植拒絶反応、フリードリヒ運動失調症、機能性末梢動脈障害、真菌性敗血症、ガス壊疽、胃潰瘍、糸球体腎炎、任意臓器又は組織の移植片拒絶反応、グラム陰性菌敗血症、グラム陽性菌敗血症、細胞内生物による肉芽腫、ヘアリー細胞白血病、ハレルフォルデン・スパッツ病、橋本甲状腺炎、花粉症、心臓移植拒絶反応、ヘモクロマトーシス、血液透析、溶血性尿毒症症候群／血栓性血小板減少性紫斑病、出血、Ａ型肝炎、ヒス束不整脈、ＨＩＶ感染症／ＨＩＶ神経障害、ホジキン病、運動過多性運動障害、過敏反応、過敏性肺炎、高血圧、運動��下性運動障害、視床下部−下垂体−副腎軸評価、特発性アジソン病、特発性肺線維症、抗体介在性細胞傷害、無力症、小児脊髄性筋萎縮症、大動脈炎症、Ａ型インフルエンザ、電離放射線被爆、虹彩毛様体炎／ブドウ膜炎／視神経炎、虚血再潅流傷害、虚血性脳卒中、若年性関節リウマチ、若年性脊髄性筋萎縮症、カポジ肉腫、腎移植拒絶反応、レジオネラ症、リーシュマニア症、ハンセン病、皮質脊髄系傷害、脂肪性浮腫、肝移植拒絶反応、リンパ水腫、マラリア、悪性リンパ腫、悪性組織球症、悪性メラノーマ、髄膜炎、髄膜炎菌血症、代謝性／特発性偏頭痛、ミトコンドリア多系統疾患、混合性結合組織病、モノクローナル免疫グロブリン血症、多発性骨髄腫、多系統変性症（Ｍｅｎｃｅｌ  Ｄｅｊｅｒｉｎｅ−Ｔｈｏｍａｓ  Ｓｈｉ−Ｄｒａｇｅｒ及びＭａｃｈａｄｏ−Ｊｏｓｅｐｈ）、重症筋無力症、マイコバクテリウム・アビウム・イントラセルラーレ菌感染症、ヒト型結核菌感染症、骨髄異形成症候群、心筋梗塞、心筋虚血障害、上咽頭癌、新生児慢性肺疾患、腎炎、ネフローゼ、神経変性疾患、Ｉ型神経原性筋委縮症、好中球減少時の発熱、非ホジキンリンパ腫、腹部大動脈とその分枝の閉塞、閉塞性動脈障害、ＯＫＴ３（登録商標）療法、精巣炎／副睾丸炎、精巣炎／精管切除再吻合術、臓器腫大、骨粗鬆症、膵臓移植拒絶反応、膵臓癌、腫瘍随伴症候群／悪性腫瘍による高カルシウム血症、副甲状腺移植拒絶反応、骨盤内炎症性疾患、通年性鼻炎、心膜疾患、末梢アテローム性動脈硬化性疾患、末梢血管障害、腹膜炎、悪性貧血、ニューモシスチス・カリニ肺炎、肺炎、ＰＯＥＭＳ症候群（多発ニューロパシー、臓器腫大、内分泌障害、モノクローナル免疫グロブリン血症及び皮膚変化症候群）、潅流後症候群、ポストポンプ症候群、ＭＩ心膜切開後症候群、子癇前症、進行性核上性麻痺、原発性肺高血圧症、放射線療法、レイノー現象、レイノー病、レフサム病、規則的で狭いＱＲＳ幅の頻拍、腎血管性高血圧症、再潅流傷害、拘束型心筋症、肉腫、強皮症、老人性舞踏病、レビー小体型老人性痴呆症、血清反応陰性関節症、ショック、鎌状赤血球貧血、皮膚同種移植片拒絶反応、皮膚変化症候群、小腸移植拒絶反応、充実性腫瘍、特異的不整脈、脊髄性運動失調症、脊髄小脳変性症、連鎖球菌性筋炎、小脳の構造傷害、亜急性硬化性汎脳炎、失神、心血管系梅毒、全身性アナフィラキシー、全身性炎症反応症候群、全身型発症若年性関節リウマチ、Ｔ細胞性ないしＦＡＢ  ＡＬＬ、毛細血管拡張症、閉塞性血栓性血管炎、血小板減少症、中毒症、移植、外傷／出血、ＩＩＩ型過敏反応、ＩＶ型過敏反応、不安定狭心症、尿毒症、尿路性敗血症、蕁麻疹、心臓弁膜症、静脈瘤、血管炎、静脈疾患、静脈血栓症、心室細動、ウイルス及び真菌感染症、ウイルス性脳炎／無菌性髄膜炎、ウイルス関連血球貪食症候群、ウェルニッケ・コルサコフ症候群、ウィルソン病、任意臓器又は組織の異種移植片拒絶反応、急性冠症候群、急性特発性多発性神経炎、急性炎症性脱髄性多発根神経炎、急性虚血、成人スティル病、円形脱毛症、アナフィラキシー、抗リン脂質抗体症候群、再生不良性貧血、動脈硬化症、アトピー性湿疹、アトピー性皮膚炎、自己免疫性皮膚炎、連鎖球菌感染に伴う自己免疫疾患、自己免疫性腸症、��己免疫性聴力低下、自己免疫性リンパ球増殖症候群（ＡＬＰＳ）、自己免疫性心筋炎、自己免疫性早発卵巣不全、眼瞼炎、気管支拡張症、水疱性類天疱瘡、心臓血管疾患、劇症型抗リン脂質抗体症候群、セリアック病、頸椎症、慢性虚血、瘢痕性類天疱瘡、多発性硬化症の危険を伴う最初のエピソードからなる症候群（ＣＩＳ）、結膜炎、小児期発症型精神障害、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、涙嚢炎、皮膚筋炎、糖尿病網膜症、真性糖尿病、椎間板ヘルニア、椎間板脱出、薬物誘発性免疫性溶血性貧血、心内膜炎、子宮内膜炎、眼内炎、上強膜炎、多形性紅斑、重症多形性紅斑、妊娠性類天疱瘡、ギラン・バレー症候群（ＧＢＳ）、花粉症、ヒューズ症候群、特発性パーキンソン病、特発性間質性肺炎、ＩｇＥ介在型アレルギー、免疫性溶血性貧血、封入体筋炎、感染性眼炎症性疾患、炎症性脱髄疾患、炎症性心疾患、炎症性腎疾患、ＩＰＦ／ＵＩＰ、虹彩炎、角膜炎、乾性角結膜炎、クスマウル病ないしクスマウル・マイヤー病、ランドリー麻痺、ランゲルハンス細胞組織球症、網状皮斑、黄斑変性症、顕微鏡的多発血管炎、ベヒテレフ病、運動ニューロン障害、粘膜類天疱瘡、多臓器不全、重症筋無力症、骨髄異形成症候群、心筋炎、神経根障害、神経障害、非Ａ非Ｂ肝炎、視神経炎、骨溶解症、少関節型ＪＲＡ、末梢動脈閉塞性疾患（ＰＡＯＤ）、末梢血管疾患（ＰＶＤ）、末梢動脈疾患（ＰＡＤ）、静脈炎、結節性多発動脈炎（ないし結節性動脈周囲炎）、多発性軟骨炎、リウマチ性多発筋痛症、白毛症、多関節型ＪＲＡ、多腺性内分泌不全症候群、多発性筋炎、リウマチ性多発筋痛症（ＰＭＲ）、ポストポンプ症候群、原発性パーキンソン病、前立腺炎、純赤血球形成不全症、原発性副腎不全、再発性視神経脊髄炎、再狭窄、リウマチ性心臓病、ＳＡＰＨＯ（滑膜炎、座瘡、膿疱症、骨化症及び骨炎）、強皮症、続発性アミロイドーシス、ショック肺、強膜炎、座骨神経痛、続発性副腎不全、シリコン関連結合組織病、スネッドン・ウィルキンソン皮膚病、強直性脊椎炎、スティーブンス・ジョンソン症候群（ＳＪＳ）、全身性炎症反応症候群、側頭動脈炎、トキソプラズマ性網膜炎、中毒性表皮壊死、横断性脊髄炎、ＴＲＡＰＳ（腫瘍壊死因子１型受容体（ＴＮＦＲ）関連周期性症候群）、黒色表皮症を伴うＢ型インスリン抵抗性、１型アレルギー反応、ＩＩ型糖尿病、蕁麻疹、通常型間質性肺炎（ＵＩＰ）、血管炎、春季カタル、ウイルス性網膜炎、フォ
ークト・小柳・原田症候群（ＶＫＨ症候群）、滲出型黄斑変性症、並びに創傷治癒から構成される群から選択される請求項６１の方法。
【請求項６３】
ＩＬ−１βが有害である障害に罹患した患者の治療方法であって、第２の作用剤の投与前、投与と同時又は投与後に請求項１の結合蛋白質を投与する段階を含み、前記第２の作用剤がＴＮＦアンタゴニスト；ＴＮＦ受容体の可溶性フラグメント；ＥＮＢＲＥＬ（登録商標）；ＴＮＦ酵素アンタゴニスト；ＴＮＦ変換酵素（ＴＡＣＥ）阻害剤；ムスカリン受容体アンタゴニスト；ＴＧＦ−βアンタゴニスト；インターフェロンγ；ピルフェニドン；化学療法剤、メトトレキサート；レフルノミド；シロリムス（ラパマイシン）又はそのアナログ、ＣＣＩ−７７９；ＣＯＸ２又はｃＰＬＡ２阻害剤；ＮＳＡＩＤ；免疫調節剤；ｐ３８阻害剤；ＴＰＬ−２、ＭＫ−２及びＮＦｋＢ阻害剤；ブデノシド；上皮成長因子；コルチコステロイド；シクロスポリン；スルファサラジン；アミノサリチル酸塩；６−メルカプトプリン；アザチオプリン；メトロニダゾール；リポキシゲナーゼ阻害剤；メサラミン；オルサラジン；バルサラジド；抗酸化剤；トロンボキサン阻害剤；ＩＬ−１受容体アンタゴニスト；抗ＩＬ−１ｂ抗体；抗ＩＬ−６抗体；成長因子；エラスターゼ阻害剤；ピリジニルイミダゾール化合物；ＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１４、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−１９、ＩＬ−２０、ＩＬ−２１、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３、ＩＬ−２４、ＩＬ−２５、ＩＬ−２６、ＩＬ−２７、ＩＬ−２８、ＩＬ−２９、ＩＬ−３０、ＩＬ−３１、ＩＬ−３２、ＩＬ−３３、ＥＭＡＰ−ＩＩ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦ又はＰＤＧＦの抗体又はアゴニスト；ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ９０又はそのリガンドの抗体；ＦＫ５０６；ラパマイシン；ミコフェノール酸モフェチル；イブプロフェン；プレドニゾロン；ホスホジエステラーゼ阻害剤；アデノシンアゴニスト；抗血栓剤；補体阻害剤；アドレナリン作動薬；ＩＲＡＫ、ＮＩＫ、ＩＫＫ、ｐ３８又はＭＡＰキナーゼ阻害剤；ＩＬ−１ｂ変換酵素阻害剤；ＴＮＦａ変換酵素阻害剤；Ｔ細胞シグナル伝達阻害剤；メタロプロテイナーゼ阻害剤；６−メルカプトプリン；アンギオテンシン変換酵素阻害剤；可溶性サイトカイン受容体；可溶性ｐ５５ＴＮＦ受容体；可溶性ｐ７５ＴＮＦ受容体；ｓＩＬ−１ＲＩ；ｓＩＬ−１ＲＩＩ；ｓＩＬ−６Ｒ；抗炎症性サイトカイン；並びにＴＧＦｂから構成される群から選択される前記方法。
【請求項６４】
対象に投与する前記段階が非経口、皮下、筋肉内、静脈内、関節内、気管支内、腹腔内、関節包内、軟骨内、体腔内、腔内、小脳内、脳室内、結腸内、子宮頸管内、胃内、肝内、心筋内、骨内、骨盤内、心膜内、腹膜内、胸膜内、前立腺内、肺内、直腸内、腎内、網膜内、脊髄内、滑膜内、胸腔内、子宮内、膀胱腔内、ボーラス、膣、直腸、口腔、舌下、鼻腔内及び経皮から選択される少なくとも１種の方法により実施される請求項６１の方法。
【請求項６５】
サンプル中のヒトＩＬ−１βの検出方法であって、
（ｉ）サンプルを請求項１に記載のＩＬ−１β結合蛋白質又はそのＩＬ−１β結合部分と接触させる段階と；
（ｉｉ）抗ＩＬ−１β結合蛋白質又はその結合部分とサンプル中のＩＬ−１βの複合体の形成を検出する段階であって、サンプル中の複合体の形成が対照サンプル中又は初期時点で採取した別の試験サンプル中の複合体の形成に比較して統計的に有意に変化していることが、サンプル中にヒトＩＬ−１βが存在することを示す、段階
を含む前記方法。
【請求項６６】
サンプルが全血、血漿、血清、尿、唾液及び組織生検から構成される群から選択される請求項６５に記載の方法。
【請求項６７】
ヒト被験者におけるヒトＩＬ−１βの検出方法であって、
（ｉ）請求項１に記載のＩＬ−１β結合蛋白質又はそのＩＬ−１β結合部分をヒトＩＬ−１βと結合させる条件下で前記ＩＬ−１β結合蛋白質又はそのＩＬ−１β結合部分を試験被験者又は対照被験者に投与する段階と；
（ｉｉ）結合蛋白質又はその結合部分とＩＬ−１βの複合体の形成を検出する段階であって、試験被験者における複合体の形成が対照被験者又は初期時点の試験被験者における複合体の形成に比較して統計的に有意に変化していることが、ＩＬ−１βが存在することを示す段階
を含む前記方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はＩＬ−１結合蛋白質、特にＩＬ−１介在性疾患の予防及び／又は治療におけるその使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
インターロイキン１（ＩＬ−１）や腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）等のサイトカインは炎症プロセスのメディエーターである単球やマクロファージ等の各種細胞により産生される分子である。インターロイキン１は発熱、（例えば線維芽細胞、筋肉細胞及び内皮細胞における）プロスタグランジン合成、Ｔリンパ球活性化、及びインターロイキン２産生を含む多様な生物学的及び生理的作用をもつサイトカインである。
【０００３】
インターロイキン１スーパーファミリー：ＩＬ−１スーパーファミリーの当初のメンバーはＩＬ−１α、ＩＬ−１β及びＩＬ−１受容体アンタゴニスト（ＩＬ−１ＲＡ）である。ＩＬ−１α及びβは感染に対する免疫防御に関与する炎症誘発性サイトカインである。ＩＬ−１Ｒαは受容体結合に関してＩＬ−１α及びＩＬ−１βと競合し、免疫活性化におけるそれらの役割を妨害する分子である。近年では、ＩＬ−１８（Ｄｉｎａｒｅｌｌｏ（１９９４）ＦＡＳＥＢ  Ｊ．８（１５）：１３１４−３２２５；Ｈｕｉｓｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（２００４）Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８（５）：３９５−４１３参照）や、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β又はＩＬ−１ＲＡに対して構造相同性をもつ他の６種類の遺伝子を含む他の分子もＩＬ−１スーパーファミリーに加えられている。後者の６種類のメンバーはＩＬ１Ｆ５、ＩＬ１Ｆ６、ＩＬ１Ｆ７、ＩＬ１Ｆ８、ＩＬ１Ｆ９及びＩＬ１Ｆ１０と呼ばれる。これに伴い、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β及びＩＬ−１ＲＡは夫々ＩＬ−１Ｆ１、ＩＬ−１Ｆ２及びＩＬ−１Ｆ３と改名されるようになった（Ｓｉｍｓ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｔｒｅｎｄｓ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２２（１０）：５３６−５３７；Ｄｕｎｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｔｒｅｎｄｓ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２２（１０）：５３３−５３６参照）。ＩＬ−３３又はＩＬ−１Ｆ１１と呼ばれるＩＬ−１ファミリーの別の推定メンバーも記載されているが、この名称はＨＧＮＣ遺伝子ファミリー名称データベースで公式に採用されていない。
【０００４】
ＩＬ−１α及びＩＬ−１βはいずれもマクロファージ、単球及び樹状細胞により産生される。これらは感染に対する生体の炎症応答の重要な部分を形成する。これらのサイトカインは内皮細胞上の接着因子の発現を増加し、病原体と戦う細胞である白血球を感染部位に移動させ、視床下部体温調節中枢をリセットさせ、発熱として発現される体温上昇をもたらす。従って、ＩＬ−１は内因性発熱物質と呼ばれる。体温上昇は生体の免疫系が感染と戦うのに役立つ。ＩＬ−１は造血の調節にも重要である。ＩＬ−１αは各種免疫応答、炎症プロセス及び造血に関与する多面的サイトカインである。ＩＬ−１αは活性化されたマクロファージにより産生され、ＩＬ−２放出、Ｂ細胞成熟及び増殖、並びに線維芽細胞増殖因子活性を誘導することにより胸腺細胞増殖を刺激する。ＩＬ−１α蛋白質は炎症応答に関与しており、内因性発熱物質とみなされ、滑膜細胞からのプロスタグランジンとコラゲナーゼの放出を刺激すると報告されている。この蛋白質はプロ蛋白質として産生され、カルパインにより蛋白質分解プロセシングされ、未だ十分に研究されていないメカニズムで放出される。この遺伝子と他の８種類のインターロイキン１ファミリー遺伝子は染色体２上にサイトカイン遺伝子クラスターを形成する。ＩＬ−１αとその疾患誘発作用はＩｂｅｌｇａｕｆｔｓ，Ｌｅｘｉｋｏｎ  Ｚｙｔｏｋｉｎｅ（Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ），Ｍｅｄｉｋｏｎ  Ｖｅｒｌａｇ，Ｍｕｎｉｃｈ  １９９２とその引用文献に詳細に記載されている。ＩＬ−１αの望ましくない作用についても、例えばＯｐｐｅｎｈｅｉｍ  ｅｔ  ａｌ．（１９８６）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ  ７：４５−５６、Ｄｕｒｕｍ  ｅｔ  ａｌ．（１９８５）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３：２６３−２８７及びＳｙｎｎｏｎｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９）Ｌｙｍｐｈｏｋｉｎｅ  Ｒｅｓ．８：３６５−３７２に記載されている。ＩＬ−１αは軟骨吸収を促進するのに効果があることから当初は「カタボリン」と呼ばれたが、滑膜細胞でコラゲナーゼとプロスタグランジンに刺激作用を与えることから「単核球細胞因子」（ＭＣＦ）とも呼ばれ、急性期反応に刺激作用を与える「白血球内因性因子」（ＬＥＭ）とも呼ばれる。更に、ＩＬ−１αは単球、マクロファージ、線維芽細胞、内皮細胞及びリンパ球等の多数の異なる細胞により合成され、多くの細胞はＩＬ−１αに特異的な受容体をもつため、ＩＬ−１αは広範な生物活性をもつ。従って、ＩＬ−１αは各種障害及び障害の症状の誘因として中心的な位置を占める。これらの障害は治療法が殆ど又は全く存在しない重度の障害が大半である。これらの遺伝子の多型は関節リウマチとアルツハイマー病に関係があることが示唆されている。ＩＬ−１全般は関節炎、肺線維症、中枢神経系疾患、糖尿病及び所定の心血管疾患を含む多数のヒト疾患に関係があるとされている。
【０００５】
末梢組織におけるＩＬ−１β産生は発熱を伴う痛覚過敏（疼痛感覚増大）にも関係があるとされている（Ｍｏｒｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００４）Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ．１０２２（１−２）：９６−１００）。大半の場合、これらの２種類のＩＬ−１は同一の細胞受容体と結合する。この受容体は所定の他の受容体とほぼ共通の経路を介して細胞内シグナルを伝達する２つの同一ではないが、近縁のサブユニットから構成される。これらはＴｏｌｌファミリーの先天性免疫受容体とＩＬ−１８の受容体を含む。ＩＬ−１α及びＩＬ−１βは更に、発熱、徐波睡眠及び好中球増加症の誘導、Ｔリンパ球及びＢリンパ球活性化、線維芽細胞増殖、所定細胞に対する細胞傷害性、コラゲナーゼの誘導、肝臓における急性期蛋白質の合成、並びにコロニー刺激因子及びコラーゲンの産生増加を含む同様の生物学的性質をもつ。
【０００６】
これらの２種類の異なるＩＬ−１をコードするｃＤＮＡが単離・発現されており、これらのｃＤＮＡはＩＬ−１β（Ａｕｒｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８１：７９０９）及びＩＬ−１α（Ｌｏｍｅｄｉｃｏ  ｅｔ  ａｌ．（１９８４）Ｎａｔｕｒｅ  ３１２：４５８）と呼ばれる２種類の異なる遺伝子産物に相当する。ＩＬ−１βはｍＲＮＡレベル及び蛋白質レベルの両者でヒト単球により産生される優勢形態である。これらの２種類のヒトＩＬ−１のアミノ酸相同度は２６％に過ぎない。これらの２種類のＩＬ−１はポリペプチド配列が異なるが、構造類似性があり（Ａｕｒｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８５）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２：１６９）、アミノ酸相同性はＩＬ−１分子の不連続領域に限定される。
【０００７】
ＩＬ−１α及びＩＬ−１βは前駆体ペプチドとして産生される。換言するならば、これらは長い蛋白質として産生された後、プロセシングされ、成熟蛋白質と呼ばれる短い活性分子を放出する。例えば成熟型ＩＬ−１βはカスパーゼ１又はインターロイキン１変換酵素（ＩＣＥ）と呼ばれるカスパーゼファミリー蛋白質の所定のメンバーによる開裂後にＰｒｏ−ＩＬ−１βから放出される。ヒトＩＬ−１スーパーファミリーの各メンバーの成熟形の三次元構造は樽型蛋白質を形成する１２〜１４本のβ鎖から構成される。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Ｄｉｎａｒｅｌｌｏ（１９９４）ＦＡＳＥＢ  Ｊ．８（１５）：１３１４−３２２５
【非特許文献２】Ｈｕｉｓｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（２００４）Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８（５）：３９５−４１３
【非特許文献３】Ｓｉｍｓ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｔｒｅｎｄｓ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２２（１０）：５３６−５３７
【非特許文献４】Ｄｕｎｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｔｒｅｎｄｓ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２２（１０）：５３３−５３６
【非特許文献５】Ｉｂｅｌｇａｕｆｔｓ，Ｌｅｘｉｋｏｎ  Ｚｙｔｏｋｉｎｅ（Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ），Ｍｅｄｉｋｏｎ  Ｖｅｒｌａｇ，Ｍｕｎｉｃｈ  １９９２
【非特許文献６】Ｏｐｐｅｎｈｅｉｍ  ｅｔ  ａｌ．（１９８６）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ  ７：４５−５６
【非特許文献７】Ｄｕｒｕｍ  ｅｔ  ａｌ．（１９８５）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３：２６３−２８７
【非特許文献８】Ｓｙｎｎｏｎｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９）Ｌｙｍｐｈｏｋｉｎｅ  Ｒｅｓ．８：３６５−３７２
【非特許文献９】Ｍｏｒｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００４）Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ．１０２２（１−２）：９６−１００
【非特許文献１０】Ａｕｒｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８１：７９０９
【非特許文献１１】Ｌｏｍｅｄｉｃｏ  ｅｔ  ａｌ．（１９８４）Ｎａｔｕｒｅ  ３１２：４５８
【非特許文献１２】Ａｕｒｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８５）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２：１６９
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
ＩＬ−１β関連疾患に対する新規治療用途と、サンプル及び組織中におけるＩＬ−１βの検出用途において、ＩＬ−１βと結合する改良型抗体が当分野で必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明はヒトＩＬ−１βと結合することができる蛋白質、高い親和性で結合することができる蛋白質、及びＩＬ−１βと結合してこれを中和させることができる蛋白質である新規ファミリーの結合蛋白質を提供し、モノクローナル抗体（ｍＡｂ）、ＣＤＲ移植抗体、ヒト化抗体、親和性成熟抗体及びそのフラグメントを含む。本発明はヒトＩＬ−１βを阻害するための治療手段を提供し、更に、ＩＬ−１β濃度上昇を伴う疾患及び障害、特に炎症性障害を治療するための組成物及び方法を提供する。本発明は更にＩＬ−１βと結合することが可能な抗体又はその抗原結合部分を提供し、ＩＬ−１βと結合することが可能な前記抗体又はその抗原結合部分は配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９及び配列番号４０から構成される群から選択されるアミノ酸配列を含む。別の実施形態において、本発明はサンプル、混合物及び組織中のヒトＩＬ−１βの検出及び／又は測定手段を提供する。
【００１１】
本発明の１態様において、単離結合蛋白質はヒトＩＬ−１βと結合することができ、配列番号２６の残基３１〜３５（ＣＤＲ−Ｈ１）、配列番号２６の残基５０〜６５（ＣＤＲ−Ｈ２）、配列番号２６の残基９８〜１１１（ＣＤＲ−Ｈ３）、配列番号２７の残基２４〜３４（ＣＤＲ−Ｌ１）、配列番号２７の残基５０〜５６（ＣＤＲ−Ｌ２）、及び配列番号２７の残基８９〜９７（ＣＤＲ−Ｌ３）から構成される群から選択されるアミノ酸配列を含む少なくとも１個のＣＤＲを含む。
【００１２】
別の実施形態において、結合蛋白質は可変ドメインＣＤＲセットから選択される少なくとも３個のＣＤＲを含み、前記可変ドメインＣＤＲセットは配列番号２６の残基３１〜３５（ＣＤＲ−Ｈ１）、配列番号２６の残基５０〜６５（ＣＤＲ−Ｈ２）、及び配列番号２６の残基９８〜１１１（ＣＤＲ−Ｈ３）を含むＶＨＣＤＲセットと、配列番号２７の残基２４〜３４（ＣＤＲ−Ｌ１）、配列番号２７の残基５０〜５６（ＣＤＲ−Ｌ２）、及び配列番号２７の残基８９〜９７（ＣＤＲ−Ｌ３）を含むＶＬＣＤＲセットから構成される群から選択される。
【００１３】
１実施形態において、結合蛋白質は３個のＣＤＲからなる重鎖可変領域（ＶＨ）セットと、３個のＣＤＲからなる軽鎖可変領域（ＶＬ）セットを含む。
【００１４】
本発明の別の実施形態において、上記１個以上のＣＤＲを含むＩＬ−１β結合蛋白質は更に対応するヒト重鎖アクセプターフレームワーク配列（ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２及びＣＤＲ−Ｈ３配列の場合）及び／又は対応するヒト軽鎖アクセプターフレームワーク配列（ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２及びＣＤＲ−Ｌ３配列の場合）を含む。１実施形態において、本発明の結合蛋白質のヒト重鎖アクセプターフレームワーク配列は表３のヒト重鎖アクセプターフレームワーク配列のいずれかから選択され、本発明の結合蛋白質のヒト軽鎖アクセプターフレームワーク配列は表４のヒト軽鎖アクセプターフレームワーク配列のいずれかから選択される。従って、１実施形態において、本発明の結合蛋白質のヒトアクセプターフレームワーク配列は配列番号１０〜１７（ヒト重鎖アクセプターフレームワーク配列）及び配列番号１８〜２５（ヒト軽鎖アクセプターフレームワーク配列）から構成される群から選択される。１実施形態において、ヒトアクセプターフレームワーク配列は配列番号１０〜１３（重鎖）、１４〜１７（重鎖）、１８〜２１（軽鎖）、及び２２〜２５（軽鎖）から構成される群から選択される。
【００１５】
ＩＬ−１β結合蛋白質は少なくとも１カ所のフレームワーク領域（ＦＲ）アミノ酸置換を含むヒトアクセプターフレームワークを含むことができ、前記フレームワークのアミノ酸配列は前記ヒトアクセプターフレームワークの配列と少なくとも６５％一致し、前記ヒトアクセプターフレームワークと一致する少なくとも７０個のアミノ酸残基を含む。
【００１６】
別の実施形態において、本発明のＩＬ−１β結合蛋白質はヒトアクセプターフレームワークを含み、前記アクセプターフレームワークはキー残基に少なくとも１カ所のフレームワーク領域アミノ酸置換を含み、前記キー残基は、
ＣＤＲに隣接する残基；
グリコシル化部位残基；
希少残基（ｒａｒｅ  ｒｅｓｉｄｕｅ）；
ヒトＩＬ−１βと相互作用することが可能な残基；
ＣＤＲと相互作用することが可能な残基；
カノニカル残基；
重鎖可変領域と軽鎖可変領域の間の接触残基（ｃｏｎｔａｃｔ  ｒｅｓｉｄｕｅ）；
バーニアゾーン内の残基；及び
Ｃｈｏｔｈｉａの定義による重鎖可変領域ＣＤＲ１とＫａｂａｔの定義による最初の重鎖フレームワークの間でオーバーラップする領域における残基
から構成される群から選択される。
【００１７】
１実施形態において、ＩＬ−１β結合蛋白質はキー残基を含むことができ、前記キー残基は１Ｈ、１２Ｈ、２４Ｈ、２７Ｈ、２９Ｈ、３７Ｈ、４８Ｈ、４９Ｈ、６７Ｈ、７１Ｈ、７３Ｈ、７６Ｈ、７８Ｈ、９４Ｈ、１Ｌ、２Ｌ、３Ｌ、４Ｌ、４３Ｌ、４９Ｌ、６４Ｌ、８３Ｌ（いずれもＫａｂａｔナンバリング）から構成される群から選択される。更に別の実施形態において、本発明のＩＬ−１β結合蛋白質は本願に記載するコンセンサスヒト可変ドメインであるコンセンサスヒト可変ドメインを含む。別の態様において、本発明は配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９及び配列番号４０から構成される群から選択されるアミノ酸配列を含む少なくとも１個の可変ドメインを含むＩＬ−１β結合蛋白質を提供する。
【００１８】
別の態様において、本発明は配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２及び配列番号３３から構成される群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ポリペプチドを含むＩＬ−１β結合蛋白質を提供し、前記結合蛋白質はヒトＩＬ−１βと結合することができる。別の態様において、本発明は配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９及び配列番号４０から構成される群から選択されるアミノ酸配列を含む可変軽鎖ポリペプチドを含むＩＬ−１β結合蛋白質を提供し、前記結合蛋白質はヒトＩＬ−１βと結合することができる。
【００１９】
更に別の態様において、本発明は配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２及び配列番号３３から構成される群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ポリペプチドと、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９及び配列番号４０から構成される群から選択されるアミノ酸配列を含む可変軽鎖ポリペプチドを含む結合蛋白質を提供し、前記結合蛋白質はヒトＩＬ−１βと結合することができる。
【００２０】
更に別の態様において、結合蛋白質は配列番号３０と配列番号３６、配列番号３０と配列番号３７、配列番号３０と配列番号３９、及び配列番号３０と配列番号４０から構成される群から選択される重鎖可変領域ポリペプチドと軽鎖可変領域ポリペプチドを含む。
【００２１】
更に別の態様において、結合蛋白質は配列番号３３と配列番号３６、配列番号３３と列番号３７、配列番号３３と配列番号３９、及び配列番号３３と配列番号４０から構成される群から選択される可変重鎖ポリペプチドと可変軽鎖ポリペプチドを含む。
【００２２】
別の態様において、本発明は上記結合蛋白質を提供し、前記結合蛋白質は免疫グロブリン分子、ジスルフィド結合Ｆｖ、モノクローナル抗体、ｓｃＦｖ、キメラ抗体、シングルドメイン抗体、ＣＤＲ移植抗体、ダイアボディ、ヒト化抗体、多重特異性抗体、Ｆａｂ、二重特異性抗体、ＤＶＤ−Ｉｇ（登録商標）結合蛋白質、Ｆａｂ’、二特異性抗体、Ｆ（ａｂ’）２及びＦｖである。
【００２３】
別の態様において、上記結合蛋白質はヒトＩｇＭ定常ドメイン、ヒトＩｇＧ４定常ドメイン、ヒトＩｇＧ１定常ドメイン、ヒトＩｇＥ定常ドメイン、ヒトＩｇＧ２定常ドメイン、ヒトＩｇＧ３定常ドメイン及びヒトＩｇＡ定常ドメインから構成される群から選択される重鎖免疫グロブリン定常領域を含む。更に別の態様において、本発明の結合蛋白質は更に配列番号２及び配列番号３から構成される群から選択されるアミノ酸配列をもつ重鎖定常領域を含み、更に配列番号４及び配列番号５から構成される群から選択されるアミノ酸配列をもつ軽鎖定常領域を含む。
【００２４】
本発明の別の態様において、本発明の結合蛋白質はヒトＩＬ−１βの生物学的機能を変調させることができ、更にヒトＩＬ−１βを中和させることができる。
【００２５】
本発明の１態様において、本発明の結合蛋白質は表面プラズモン共鳴法により測定した場合に前記ターゲットに対して少なくとも約１０２Ｍ−１ｓ−１、少なくとも約１０３Ｍ−１ｓ−１、少なくとも約１０４Ｍ−１ｓ−１、少なくとも約１０５Ｍ−１ｓ−１、及び少なくとも約１０６Ｍ−１ｓ−１から構成される群から選択されるオン速度定数（Ｋｏｎ）をもつ。
【００２６】
別の態様において、本発明のＩＬ−１β結合蛋白質は表面プラズモン共鳴法により測定した場合に前記ターゲットに対して最大で約１０−３ｓ−１、最大で約１０−４ｓ−１、最大で約１０−５ｓ−１、及び最大で約１０−６ｓ−１から構成される群から選択されるオフ速度定数（Ｋｏｆｆ）をもつ。
【００２７】
更に別の態様において、本発明のＩＬ−１β結合蛋白質はＩＬ−１βターゲット分子に対して最大で約１０−７Ｍ、最大で約１０−８Ｍ、最大で約１０−９Ｍ、最大で約１０−１０Ｍ、最大で約１０−１１Ｍ、最大で約１０−１２Ｍ、及び最大で約１０−１３Ｍから構成される群から選択される解離定数（ＫＤ）をもつ。更に、結合蛋白質はＩＬ−１βに対して約１．３１×１０−１０Ｍ、約１．４７×１０−１０Ｍ、約１．６１×１０−１０Ｍ、約１．８６×１０−１０Ｍ、約２．０２×１０−１０Ｍ、約２．０６×１０−１０Ｍ、約２．３×１０−１０Ｍ、及び約２．８４×１０−１０Ｍから構成される群から選択される解離定数（ＫＤ）をもつ。
【００２８】
本発明の別の態様において、本発明の結合蛋白質は更に免疫接着分子、イメージング剤、治療剤及び細胞傷害性物質から構成される群から選択される作用剤を含む。イメージング剤は当分野で公知の任意イメージング剤とすることができ、限定されないが、放射性ラベル（限定されないが、３Ｈ、１４Ｃ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１７７Ｌｕ、１６６Ｈｏ及び１５３Ｓｍが挙げられる）、酵素、蛍光ラベル、発光ラベル、生物発光ラベル、磁気ラベル又はビオチン分子が挙げられる。治療剤又は細胞傷害性物質としては、代謝拮抗剤、アルキル化剤、抗生物質、成長因子、サイトカイン、抗血管新生剤、抗有糸分裂剤、アントラサイクリン、毒素及びアポトーシス誘導剤が挙げられる。
【００２９】
別の態様において、本発明のＩＬ−１β結合蛋白質はグリコシル化されている。１実施形態において、グリコシル化はヒトグリコシル化パターンである。
【００３０】
本発明の１態様において、ＩＬ−１β結合蛋白質は結晶である。１実施形態において、結晶は無担体薬剤制御放出結晶である。別の実施形態において、結晶化結合蛋白質はその可溶性対応物よりもインビボ半減期が長い。更に別の実施形態において、結晶化結合蛋白質は結晶化後に生物活性を保持する。
【００３１】
本発明の１態様は上記に開示した結合蛋白質のいずれか１種又はその抗原結合部分をコードする単離核酸に関する。１実施形態において、本発明は本願に記載するＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２及び／又はＣＤＲ−Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含むポリペプチド；本願に記載するＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２及び／又はＣＤＲ−Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含むポリペプチド；あるいは両者ポリペプチドの組合せから構成される群から選択されるポリペプチドをコードする単離核酸を提供する。
【００３２】
本発明の別の実施形態は上記に開示した単離核酸を含むベクターを提供し、前記ベクターはｐｃＤＮＡ、ｐＴＴ（Ｄｕｒｏｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．３０（２ｅ９）：１−９）、ｐＴＴ３（ｐＴＴに多重クローニング部位を付加したもの）、ｐＥＦＢＯＳ（Ｍｉｚｕｓｈｉｍａ  ａｎｄ  Ｎａｇａｔａ（１９９０）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１８（１７）：５３２２）、ｐＢＶ、ｐＪＶ、ｐＢＪ及びｐＨｙｂＥから構成される群から選択される。
【００３３】
別の態様では、本願に開示するベクターで宿主細胞を形質転換する。１実施形態において、宿主細胞は原核細胞であり、限定されないが、大腸菌が挙げられる。別の実施形態において、宿主細胞は真核細胞であり、限定されないが、原生生物細胞、動物細胞、植物細胞及び真菌細胞が挙げられる。別の実施形態において、宿主細胞は哺乳動物細胞（限定されないが、ＣＨＯ細胞及びＣＯＳ細胞が挙げられる）、又は真菌細胞（例えばサッカロミセス・セルビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ））、又は昆虫細胞（例えばＳｆ９）である。
【００３４】
別の態様において、本発明はＩＬ−１βと結合する結合蛋白質の作製方法として、ＩＬ−１βと結合する結合蛋白質を産生させるために十分な条件下で上記に開示した宿主細胞のいずれか１種を培養培地で培養する段階を含む方法を提供する。別の実施形態において、本発明は本願に開示する方法により作製された結合蛋白質を提供する。
【００３５】
１実施形態において、本発明は結合蛋白質の放出用組成物を提供し、前記組成物は本願に開示する結晶化結合蛋白質、結晶化抗体構築物又は結晶化抗体コンジュゲート及び成分を含有する製剤と、少なくとも１種のポリマー担体を含む。１実施形態において、ポリマー担体はポリ（アクリル酸）、ポリ（シアノアクリレート）、ポリ（アミノ酸）、ポリ（酸無水物）、ポリ（デプシペプチド）、ポリ（エステル）、ポリ（乳酸）、ポリ（乳酸・グリコール酸コポリマー）ないしＰＬＧＡ、ポリ（ｂ−ヒドロキシブチレート）、ポリ（カプロラクトン）、ポリ（ジオキサノン）、ポリ（エチレングリコール）、ポリ［（ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド］、ポリ［（オルガノ）ホスファゼン］、ポリ（オルトエステル）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリ（ビニルピロリドン）、マレイン酸無水物・アルキルビニルエーテルコポリマー、プルロニックポリオール、アルブミン、アルギン酸塩、セルロース及びセルロース誘導体、コラーゲン、フィブリン、ゼラチン、ヒアルロン酸、オリゴ糖、グリコサミノグリカン、硫酸化多糖、そのブレンド及びコポリマーから構成される群から選択される１種以上のポリマーである。別の態様において、成分はアルブミン、スクロース、トレハロース、ラクチトール、ゼラチン、ヒドロキシプロピル−ｂ−シクロデキストリン、メトキシポリエチレングリコール及びポリエチレングリコールから構成される群から選択される。別の実施形態において、本発明は有効量の本願に開示する組成物を哺乳動物に投与する段階を含む哺乳動物の治療方法を提供する。
【００３６】
本発明は更に本願に開示するＩＬ−１β結合蛋白質（又はそのＩＬ−１β結合部分）と、医薬的に許容可能な担体を含有する医薬組成物を提供する。このような本発明の医薬組成物は更に少なくとも１種の別の作用剤を含有することができる。特定実施形態において、本発明の医薬組成物はＩＬ−１β活性が有害である障害を治療するための少なくとも１種の別の作用剤を含有する。別の実施形態において、別の作用剤は治療剤、イメージング剤、細胞傷害性物質、血管新生阻害剤、キナーゼ阻害剤、共刺激分子遮断薬、接着分子遮断薬、抗サイトカイン抗体、抗サイトカイン抗体の機能的フラグメント、メトトレキサート、シクロスポリン、ラパマイシン、ＦＫ５０６、検出可能なラベル又はレポーター、ＴＮＦアンタゴニスト、抗リウマチ薬、筋肉弛緩剤、麻薬、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、鎮痛剤、麻酔剤、鎮静剤、局所麻酔剤、神経筋遮断薬、抗微生物薬、乾癬治療薬、コルチコステロイド、アナボリックステロイド、エリスロポエチン、免疫、免疫グロブリン、免疫抑制剤、成長ホルモン、ホルモン補充薬、放射性薬剤、抗鬱剤、抗精神病薬、刺激剤、喘息薬、βアゴニスト、吸入ステロイド、経口ステロイド、エピネフリン又はそのアナログ、サイトカイン及びサイトカインアンタゴニストから構成される群から選択される。
【００３７】
別の態様において、本発明はヒトＩＬ−１β活性の阻害方法として、ヒトＩＬ−１β活性を阻害するようにヒトＩＬ−１βを本願に開示する結合蛋白質と接触させる段階を含む方法を提供する。別の態様において、本発明はヒトＩＬ−１β活性が有害である障害に罹患したヒト対象におけるヒトＩＬ−１β活性の阻害方法として、ヒト対象におけるヒトＩＬ−１β活性を阻害し、治療を達成するように、本願に開示する結合蛋白質をヒト対象に投与する段階を含む方法を提供する。
【００３８】
別の態様において、本発明は対象におけるＩＬ−１β関連障害の治療（例えば治癒、抑制、改善、阻害、遅延、又は発症予防もしくは再発ないし回帰予防）方法を提供する。１実施形態において、前記方法はＩＬ−１β関連障害を治療又は予防するために十分な量の本願に記載するＩＬ−１β結合蛋白質（例えば抗ＩＬ−１β抗体又はそのフラグメント等のＩＬ−１βアンタゴニスト）を対象に投与する段階を含む。ＩＬ−１βアンタゴニストは対象に単独で投与してもよいし、本願に記載する他の治療手段と併用投与してもよい。
【００３９】
本発明の１態様では、所望標的抗原（又はそのエピトープ）を検出するために抗体を利用する当分野で入手可能な各種抗体系免疫検出システムの任意のものを使用してヒトＩＬ−１βを検出するためにＩＬ−１β結合蛋白質又はその結合部分を利用することができる。このような免疫検出システムとしては、限定されないが、免疫沈降法、イムノブロッティング（ウェスタンブロット、イムノドットブロット）、酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）、放射免疫測定法（ＲＩＡ）、組織免疫組織化学法、表面プラズモン共鳴法（ＳＰＲ）、サンドイッチイムノアッセイ、アフィニティー法（例えばアフィニティービーズ、アフィニティーカラム）、免疫競合アッセイ、（シリコンチップに固定化した結合蛋白質を利用する）イムノチップアッセイ、及び蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）が挙げられる。所定の免疫検出システムでは、固定化した結合蛋白質が特定の免疫検出システムで使用中にヒトＩＬ−１βと結合するその能力を保持するように、抗体分子を固体支持体に固定化するために当分野で利用可能な方法を使用して本願に記載するＩＬ−１β結合蛋白質（又はその結合部分）を固体支持体に固定化する。このような固体支持体としては、限定されないが、セルロース濾紙（例えばセルロース、ニトロセルロース、酢酸セルロースフィルター）、ナイロンフィルター又はメンブレン、（例えばマイクロタイタープレート又はディップスティックの）プラスチック表面、ガラス支持体（例えばビーズ、スライド、グラスウール）、ポリマー粒子（例えばアガロース、ポリアクリルアミド）及びシリコンチップが挙げられる。
【００４０】
別の態様において、本発明はインビトロサンプル（例えば全血、血清、血漿、尿、唾液、組織生検等の生体サンプル）中のＩＬ−１βの存在の検出方法を提供する。前記方法は疾患又は障害（例えば免疫細胞関連障害）を診断するために使用することができる。前記方法は、（ｉ）試験サンプル又は対照サンプルを本願に記載するＩＬ−１α結合蛋白質（又はその結合部分）と接触させる段階と；（ｉｉ）結合蛋白質又はその結合部分と試験サンプル又は対照サンプルの複合体の形成を検出する段階であり、試験サンプル中の複合体の形成が対照サンプル中又は初期時点で採取した別の試験サンプル中の複合体の形成に比較して統計的に有意に変化していることが、サンプル中にＩＬ−１βが存在することを示す、段階を含む。
【００４１】
更に別の態様において、本発明はインビボでのＩＬ−１βの存在の検出（例えば対象におけるインビボイメージング）方法を提供する。前記方法は疾患又は障害（例えばＩＬ−１β関連障害）を診断するために使用される。前記方法は、（ｉ）本願に記載するＩＬ−１β結合蛋白質又はその結合部分をＩＬ−１βと結合させる条件下で前記結合蛋白質又はその結合部分を試験被験者又は対照被験者に投与する段階と；（ｉｉ）結合蛋白質又はその結合部分とＩＬ−１βの複合体の形成を検出し、試験被験者における複合体の形成が対照被験者又は初期時点の試験被験者における複合体の形成に比較して統計的に有意に変化した場合には、ＩＬ−１βが存在すると判定する段階を含む。
【００４２】
別の態様において、本発明の結合蛋白質は関節リウマチ、変形性関節症、若年性慢性関節炎、敗血症性関節炎、ライム関節炎、乾癬性関節炎、反応性関節炎、脊椎関節症、全身性エリテマトーデス、クローン病、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患、インスリン依存性糖尿病、甲状腺炎、喘息、アレルギー疾患、乾癬、強皮症皮膚炎、移植片対宿主病、臓器移植拒絶反応、臓器移植に伴う急性又は慢性免疫疾患、サルコイドーシス、アテローム性動脈硬化症、播種性血管内凝固症候群、川崎病、グレーブス病、ネフローゼ症候群、慢性疲労症候群、ウェグナー肉芽腫症、シェーンライン・ヘノッホ紫斑病、腎臓の顕微鏡的血管炎、慢性活動性肝炎、ブドウ膜炎、敗血症性ショック、毒素性ショック症候群、敗血症症候群、悪液質、感染症、寄生虫症、後天性免疫不全症候群、急性横断性脊髄炎、ハンチントン舞踏病、パーキンソン病、アルツハイマー病、脳卒中、原発性胆汁性肝硬変、溶血性貧血、悪性腫瘍、心不全、心筋梗塞、アジソン病、散発性Ｉ型多腺性内分泌不全症及びＩＩ型多腺性内分泌不全症、シュミット症候群、成人（急性）呼吸窮迫症候群、脱毛症、先天性脱毛症、血清反応陰性関節症、関節症、ライター病、乾癬性関節症、潰瘍性大腸炎性関節症、腸病性滑膜炎、クラミジア、エルシニア及びサルモネラ関連関節症、脊椎関節症、アテローム性疾患／動脈硬化症、アトピー性アレルギー、自己免疫性水疱症、尋常性天疱瘡、落葉状天疱瘡、類天疱瘡、線状ＩｇＡ病、自己免疫性溶血性貧血、クームス陽性溶血性貧血、後天性悪性貧血、若年性悪性貧血、筋痛性脳炎／ロイヤルフリー病、慢性粘膜皮膚カンジダ症、巨細胞性動脈炎、原発性硬化性肝炎、特発性自己免疫性肝炎、後天性免疫不全症候群、後天性免疫不全症関連疾患、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、分類不能型免疫不全症（分類不能型低ガンマグロブリン血症）、拡張型心筋症、女性不妊症、卵巣不全、早発卵巣不全、線維性肺疾患、特発性線維化性肺胞炎、炎症後間質性肺疾患、間質性肺炎、結合組織病関連間質性肺疾患、混合性結合組織病関連肺疾患、全身性硬化症関連間質性肺疾患、関節リウマチ関連間質性肺疾患、全身性エリテマトーデス関連肺疾患、皮膚筋炎／多発性筋炎関連肺疾患、ショーグレン病関連肺疾患、強直性脊椎炎関連肺疾患、血管炎性びまん性肺疾患、ヘモジデリン沈着症関連肺疾患、薬物誘発性間質性肺疾患、線維症、放射線線維症、閉塞性細気管支炎、慢性好酸球性肺炎、リンパ球浸潤性肺疾患、感染後間質性肺疾患、通風性関節炎、自己免疫性肝炎、１型自己免疫性肝炎（古典的自己免疫性肝炎ないしルポイド肝炎）、２型自己免疫性肝炎（抗ＬＫＭ抗体肝炎）、自己免疫介在性低血糖症、黒色表皮腫を伴うＢ型インスリン抵抗性、副甲状腺機能低下症、臓器移植に伴う急性免疫疾患、臓器移植に伴う慢性免疫疾患、変形性関節症、原発性硬化性胆管炎、１型乾癬、２型乾癬、特発性白血球減少症、自己免疫性好中球減少症、腎疾患ＮＯＳ、糸球体腎炎、腎臓の顕微鏡的血管炎、ライム病、円板状エリテマトーデス、特発性ないしＮＯＳ男性不妊症、精子自己免疫、多発性硬化症（全サブタイプ）、交感性眼炎、結合組織病続発性肺高血圧症、グッドパスチャー症候群、結節性多発動脈炎の肺症状、急性リウマチ熱、リウマチ性脊椎炎、スティル病、全身性硬化症、ショーグレン症候群、高安病／動脈炎、自己免疫性血小板減少症、特発性血小板減少症、自己免疫性甲状腺疾患、甲状腺機能亢進症、甲状腺腫性自己免疫性甲状腺機能低下症（橋本病）、萎縮性自己免疫性甲状腺機能低下症、原発性粘液水腫、水晶体起因性ブドウ膜炎、原発性血管炎、白斑急性肝疾患、慢性肝疾患、アルコール性肝硬変、アルコール誘発性肝傷害、胆汁鬱滞症、特異体質性肝疾患、薬物誘発性肝炎、非アルコール性脂肪肝炎、アレルギー及び喘息、Ｂ群連鎖球菌（ＧＢＳ）感染症、精神障害（例えば鬱病及び統合失調症）、Ｔｈ２型及びＴｈ１型細胞介在性疾患、急性及び慢性疼痛（各種疼痛）、癌（例えば肺癌、乳癌、胃癌、膀胱癌、結腸癌、膵臓癌、卵巣癌、前立腺癌及び直腸癌）及び血液悪性疾患（白血病及びリンパ腫）、無βリポ蛋白血症、先端チアノーゼ、急性及び慢性寄生虫又は感染プロセス、急性白血病、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性又は慢性細菌感染症、急性膵炎、急性腎不全、腺癌、心房異所性拍動、エイズ痴呆合併症、アルコール誘発性肝炎、アレルギー性結膜炎、アレルギー性接触皮膚炎、アレルギー性鼻炎、同種移植片拒絶反応、α１アンチトリプシン欠損症、筋萎縮性側索硬化症、貧血、狭心症、前角細胞変性、抗ＣＤ３抗体療法、抗リン脂質抗体症候群、抗受容体過敏反応、大動脈及び末梢動脈瘤、大動脈解離、動脈性高血圧、動脈硬化症、動静脈瘻、運動失調症、心房細動（持続性及び発作性）、心房粗動、房室ブロック、Ｂ細胞リンパ腫、骨移植拒絶反応、骨髄移植（ＢＭＴ）拒絶反応、脚ブロック、バーキットリンパ腫、火傷、心不整脈、心臓性失神症候群、心臓腫瘍、心筋症、心肺バイパス炎症反応、軟骨移植拒絶反応、小脳皮質変性、小脳障害、無秩序型ないし多源性心房頻拍、化学療法関連障害、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性アルコール依存症、慢性炎症性疾患、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、慢性サリチル酸中毒、結腸直腸癌、鬱血性心不全、結膜炎、接触皮膚炎、肺性心、冠動脈疾患、クロイツェルフェルト・ヤコブ病、培養陰性敗血症、嚢胞性線維症、サイトカイン療法関連障害、拳闘家痴呆、脱髄疾患、デング出血熱、皮膚炎、皮膚疾患、糖尿病、真性糖尿病、糖尿病性動脈硬化症、びまん性レビー小体病、拡張型鬱血性心筋症、基底核障害、中高年ダウン症候群、ＣＮＳドーパミン受容体を遮断する薬物により誘発される薬物誘発性運動障害、薬物過敏症、湿疹、脳脊髄炎、心内膜炎、内分泌障害、喉頭蓋炎、エプスタイン・バールウイルス感染症、肢端紅痛症、錐体外路及び小脳障害、家族性血球貪食リンパ組織球症、胎児胸腺移植拒絶反応、フリードリヒ運動失調症、機能性末梢動脈障害、真菌性敗血症、ガス壊疽、胃潰瘍、糸球体腎炎、任意臓器又は組織の移植片拒絶反応、グラム陰性菌敗血症、グラム陽性菌敗血症、細胞内生物による肉芽腫、ヘアリー細胞白血病、ハレルフォルデン・スパッツ病、橋本甲状腺炎、花粉症、心臓移植拒絶反応、ヘモクロマトーシス、血液透析、溶血性尿毒症症候群／血栓性血小板減少性紫斑病、出血、Ａ型肝炎、ヒス束不整脈、ＨＩＶ感染症／ＨＩＶ神経障害、ホジキン病、運動過多性運動障害、過敏反��、過敏性肺炎、高血圧、運動低下性運動障害、視床下部−下垂体−副腎軸評価、特発性アジソン病、特発性肺線維症、抗体介在性細胞傷害、無力症、小児脊髄性筋萎縮症、大動脈炎症、Ａ型インフルエンザ、電離放射線被爆、虹彩毛様体炎／ブドウ膜炎／視神経炎、虚血再潅流傷害、虚血性脳卒中、若年性関節リウマチ（ＪＲＡ）、若年性脊髄性筋萎縮症、カポジ肉腫、腎移植拒絶反応、レジオネラ症、リーシュマニア症、ハンセン病、皮質脊髄系傷害、脂肪性浮腫、肝移植拒絶反応、リンパ水腫、マラリア、悪性リンパ腫、悪性組織球症、悪性メラノーマ、髄膜炎、髄膜炎菌血症、代謝性／特発性偏頭痛、ミトコンドリア多系統疾患、混合性結合組織病、モノクローナル免疫グロブリン血症、多発性骨髄腫、多系統変性症（Ｍｅｎｃｅｌ  Ｄｅｊｅｒｉｎｅ−Ｔｈｏｍａｓ  Ｓｈｉ−Ｄｒａｇｅｒ及びＭａｃｈａｄｏ−Ｊｏｓｅｐｈ）、重症筋無力症、マイコバクテリウム・アビウム・イントラセルラーレ菌感染症、ヒト型結核菌感染症、骨髄異形成症候群、心筋梗塞、心筋虚血障害、上咽頭癌、新生児慢性肺疾患、腎炎、ネフローゼ、神経変性疾患、Ｉ型神経原性筋委縮症、好中球減少時の発熱、非ホジキンリンパ腫、腹部大動脈とその分枝の閉塞、閉塞性動脈障害、ＯＫＴ３（登録商標）療法、精巣炎／副睾丸炎、精巣炎／精管切除再吻合術、臓器腫大、骨粗鬆症、膵臓移植拒絶反応、膵臓癌、腫瘍随伴症候群／悪性腫瘍による高カルシウム血症、副甲状腺移植拒絶反応、骨盤内炎症性疾患、通年性鼻炎、心膜疾患、末梢アテローム性動脈硬化性疾患、末梢血管障害、腹膜炎、悪性貧血、ニューモシスチス・カリニ肺炎、肺炎、ＰＯＥＭＳ症候群（多発ニューロパシー、臓器腫大、内分泌障害、モノクローナル免疫グロブリン血症及び皮膚変化症候群）、潅流後症候群、ポストポンプ症候群、ＭＩ心膜切開後症候群、子癇前症、進行性核上性麻痺、原発性肺高血圧症、放射線療法、レイノー現象、レイノー病、レフサム病、規則的で狭いＱＲＳ幅の頻拍、腎血管性高血圧症、再潅流傷害、拘束型心筋症、肉腫、強皮症、老人性舞踏病、レビー小体型老人性痴呆症、血清反応陰性関節症、ショック、鎌状赤血球貧血、皮膚同種移植片拒絶反応、皮膚変化症候群、小腸移植拒絶反応、充実性腫瘍、特異的不整脈、脊髄性運動失調症、脊髄小脳変性症、連鎖球菌性筋炎、小脳の構造傷害、亜急性硬化性汎脳炎、失神、心血管系梅毒、全身性アナフィラキシー、全身性炎症反応症候群、全身型発症若年性関節リウマチ、Ｔ細胞性ないしＦＡＢ  ＡＬＬ、毛細血管拡張症、閉塞性血栓性血管炎、血小板減少症、中毒症、移植、外傷／出血、ＩＩＩ型過敏反応、ＩＶ型過敏反応、不安定狭心症、尿毒症、尿路性敗血症、蕁麻疹、心臓弁膜症、静脈瘤、血管炎、静脈疾患、静脈血栓症、心室細動、ウイルス及び真菌感染症、ウイルス性脳炎／無菌性髄膜炎、ウイルス関連血球貪食症候群、ウェルニッケ・コルサコフ症候群、ウィルソン病、任意臓器又は組織の異種移植片拒絶反応、急性冠症候群、急性特発性多発性神経炎、急性炎症性脱髄性多発根神経炎、急性虚血、成人スティル病、円形脱毛症、アナフィラキシー、抗リン脂質抗体症候群、再生不良性貧血、動脈硬化症、アトピー性湿疹、アトピー性皮膚炎、自己免疫性皮膚炎、連鎖球菌感��に伴う自己免疫疾患、自己免疫性腸症、自己免疫性聴力低下、自己免疫性リンパ球増殖症候群（ＡＬＰＳ）、自己免疫性心筋炎、自己免疫性早発卵巣不全、眼瞼炎、気管支拡張症、水疱性類天疱瘡、心臓血管疾患、劇症型抗リン脂質抗体症候群、セリアック病、頸椎症、慢性虚血、瘢痕性類天疱瘡、多発性硬化症の危険を伴う最初のエピソードからなる症候群（ＣＩＳ）、結膜炎、小児期発症型精神障害、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、涙嚢炎、皮膚筋炎、糖尿病網膜症、真性糖尿病、椎間板ヘルニア、椎間板脱出、薬物誘発性免疫性溶血性貧血、心内膜炎、子宮内膜炎、眼内炎、上強膜炎、多形性紅斑、重症多形性紅斑、妊娠性類天疱瘡、ギラン・バレー症候群（ＧＢＳ）、花粉症、ヒューズ症候群、特発性パーキンソン病、特発性間質性肺炎、ＩｇＥ介在型アレルギー、免疫性溶血性貧血、封入体筋炎、感染性眼炎症性疾患、炎症性脱髄疾患、炎症性心疾患、炎症性腎疾患、ＩＰＦ／ＵＩＰ、虹彩炎、角膜炎、乾性角結膜炎、クスマウル病ないしクスマウル・マイヤー病、ランドリー麻痺、ランゲルハンス細胞組織球症、網状皮斑、黄斑変性症、顕微鏡的多発血管炎、ベヒテレフ病、運動ニューロン障害、粘膜類天疱瘡、多臓器不全、重症筋無力症、骨髄異形成症候群、心筋炎、神経根障害、神経障害、非Ａ非Ｂ肝炎、視神経炎、骨溶解症、少関節型ＪＲＡ、末梢動脈閉塞性疾患（ＰＡＯＤ）、末梢血管疾患（ＰＶＤ）、末梢動脈疾患（ＰＡＤ）、静脈炎、結節性多発動脈炎（ないし結節性動脈周囲炎）、多発性軟骨炎、リウマチ性多発筋痛症、白毛症、多関節型ＪＲＡ、多腺性内分泌不全症候群、多発性筋炎、リウマチ性多発筋痛症（ＰＭＲ）、ポストポンプ症候群、原発性パーキンソン病、前立腺炎、純赤血球形成不全症、原発性副腎不全、再発性視神経脊髄炎、再狭窄、リウマチ性心臓病、ＳＡＰＨＯ（滑膜炎、座瘡、膿疱症、骨化症及び骨炎）、強皮症、続発性アミロイドーシス、ショック肺、強膜炎、座骨神経痛、続発性副腎不全、シリコン関連結合組織病、スネッドン・ウィルキンソン皮膚病、強直性脊椎炎、スティーブンス・ジョンソン症候群（ＳＪＳ）、全身性炎症反応症候群、側頭動脈炎、トキソプラズマ性網膜炎、中毒性表皮壊死、横断性脊髄炎、ＴＲＡＰＳ（腫瘍壊死因子１型受容体（ＴＮＦＲ）関連周期性症候群）、黒色表皮症を伴うＢ型インスリン抵抗性、１型アレルギー反応、ＩＩ型糖尿病、蕁麻疹、通常型間質性肺炎（ＵＩＰ）、血管
炎、春季カタル、ウイルス性網膜炎、フォークト・小柳・原田症候群（ＶＫＨ症候群）、滲出型黄斑変性症、並びに創傷治癒から構成される群から選択される障害の治療に有用である。
【００４３】
１態様において、本発明の結合蛋白質は関節リウマチ、変形性関節症、クローン病、多発性硬化症、インスリン依存性糖尿病及び乾癬を治療するために使用される。別の態様において、本発明の結合蛋白質は自己免疫疾患、特に炎症を伴う自己免疫疾患（例えば強直性脊椎炎、アレルギー、自己免疫性糖尿病、自己免疫性ブドウ膜炎）に罹患したヒトを治療するためにも使用される。
【００４４】
別の態様において、本発明はヒトＩＬ−１βが有害である障害に罹患した患者の治療方法として、上記のように、第２の作用剤の投与前、投与と同時又は投与後に上記結合蛋白質のいずれか１種を投与する段階を含む方法を提供する。別の実施形態において、１種以上のＩＬ−１βアンタゴニスト（例えば抗ＩＬ−１β抗体又はそのフラグメント）と併用投与及び／又は合剤化することができる別の治療剤としては、限定されないが、ＴＮＦアンタゴニスト；ＴＮＦ受容体の可溶性フラグメント；ＥＮＢＲＥＬ（登録商標）（エタネルセプト）；ＴＮＦ酵素アンタゴニスト；ＴＮＦ変換酵素（ＴＡＣＥ）阻害剤；ムスカリン受容体アンタゴニスト；ＴＧＦ−βアンタゴニスト；インターフェロンγ；ピルフェニドン；化学療法剤、メトトレキサート；レフルノミド；シロリムス（ラパマイシン）又はそのアナログ、ＣＣＩ−７７９；ＣＯＸ２又はｃＰＬＡ２阻害剤；ＮＳＡＩＤ；免疫調節剤；ｐ３８阻害剤；ＴＰＬ−２、ＭＫ−２及びＮＦｋＢ阻害剤；ブデノシド；上皮成長因子；コルチコステロイド；シクロスポリン；スルファサラジン；アミノサリチル酸塩；６−メルカプトプリン；アザチオプリン；メトロニダゾール；リポキシゲナーゼ阻害剤；メサラミン；オルサラジン；バルサラジド；抗酸化剤；トロンボキサン阻害剤；ＩＬ−１受容体アンタゴニスト；抗ＩＬ−１β抗体；抗ＩＬ−６抗体；成長因子；エラスターゼ阻害剤；ピリジニルイミダゾール化合物；ＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１４、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−１９、ＩＬ−２０、ＩＬ−２１、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３、ＩＬ−２４、ＩＬ−２５、ＩＬ−２６、ＩＬ−２７、ＩＬ−２８、ＩＬ−２９、ＩＬ−３０、ＩＬ−３１、ＩＬ−３２、ＩＬ−３３、ＥＭＡＰ−ＩＩ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦ又はＰＤＧＦの抗体又はアゴニスト；ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ９０又はそのリガンドの抗体；ＦＫ５０６；ラパマイシン；ミコフェノール酸モフェチル；イブプロフェン；プレドニゾロン；ホスホジエステラーゼ阻害剤；アデノシンアゴニスト；抗血栓剤；補体阻害剤；アドレナリン作動薬；ＩＲＡＫ、ＮＩＫ、ＩＫＫ、ｐ３８又はＭＡＰキナーゼ阻害剤；ＩＬ−１β変換酵素阻害剤；ＴＮＦα変換酵素阻害剤；Ｔ細胞シグナル伝達阻害剤；メタロプロテイナーゼ阻害剤；６−メルカプトプリン；アンギオテンシン変換酵素阻害剤；可溶性サイトカイン受容体；可溶性ｐ５５ＴＮＦ受容体；可溶性ｐ７５ＴＮＦ受容体；ｓＩＬ−１ＲＩ；ｓＩＬ−１ＲＩＩ；ｓＩＬ−６Ｒ；抗炎症性サイトカイン；ＩＬ−４；ＩＬ−１０；ＩＬ−１１；並びにＴＧＦが挙げられる。
【００４５】
１実施形態において、本願に開示する医薬組成物は非経口、皮下、筋肉内、静脈内、関節内、気管支内、腹腔内、関節包内、軟骨内、体腔内、腔内、小脳内、脳室内、結腸内、子宮頸管内、胃内、肝内、心筋内、骨内、骨盤内、心膜内、腹膜内、胸膜内、前立腺内、肺内、直腸内、腎内、網膜内、脊髄内、滑膜内、胸腔内、子宮内、膀胱腔内、ボーラス、膣、直腸、口腔、舌下、鼻腔内及び経皮経路から構成される群から選択される少なくとも１種の方法により対象に投与される。
【００４６】
本発明の１態様は本発明の少なくとも１種のＩＬ−１β結合蛋白質に対する少なくとも１種のＩＬ−１β抗イディオタイプ抗体を提供する。前記抗イディオタイプ抗体は、限定されないが、重鎖もしくは軽鎖の少なくとも１個の相補性決定領域（ＣＤＲ）もしくはそのリガンド結合部分、重鎖もしくは軽鎖可変領域、重鎖もしくは軽鎖定常領域、フレームワーク領域、又は本発明の結合蛋白質に組込むことができるその任意部分等の免疫グロブリン分子の少なくとも一部を含む任意蛋白質又はペプチド含有分子を含む。
【発明を実施するための形態】
【００４７】
本発明はヒトＩＬ−１βと結合するＩＬ−１β結合蛋白質、特に抗ＩＬ−１β抗体又はその抗原結合部分に関する。本発明の各種態様は抗体及び抗体フラグメントとその医薬組成物、並びに前記抗体及びそのＩＬ−１β結合部分を作製するための核酸、組換え発現ベクター及び宿主細胞に関する。ヒトＩＬ−１βを検出するため、インビトロ又はインビボヒトＩＬ−１β活性を阻害するため、及び遺伝子発現を調節するために本発明の結合蛋白質を使用する方法も本発明に含まれる。
【００４８】
本願で特に定義しない限り、本発明に関連して使用する科学技術用語は当業者に広く理解されている意味である。用語の意味と範囲は明瞭であるが、潜在的に曖昧な場合には、辞書又は外部の定義よりも本願に記載する定義を優先する。更に、内容からそうでないと判断される場合を除き、単数形の用語は複数形を含み、複数形の用語は単数形を含む。本願では、特に指定しない限り、「又は」なる用語は「及び／又は」を包含する。更に、「含む」なる用語と他の語形（例えば「含んでいる」や「含まれる」）の使用は非限定的である。また、特に指定しない限り、「要素」又は「成分」等の用語は１単位からなる要素及び成分と、２個以上のサブユニットからなる要素及び成分の両者を意味する。
【００４９】
一般に、本願に記載する細胞及び組織培養、分子生物学、免疫学、微生物学、遺伝学、蛋白質及び核酸化学並びに核酸ハイブリダイゼーションに関連して使用する術語とその技術は当分野で周知であり、広く使用されている。特に指定しない限り、本発明の方法及び技術は当分野で周知の慣用方法に従い、本明細書の随所に引用及び説明する各種一般資料及び特定資料に記載されているように一般に実施される。酵素反応及び精製技術は製造業者の指示に従うか、当分野で広く実施されている方法に従うか、又は本願の記載に従って実施される。本願に記載する分析化学、有機合成化学、及び医薬化学に関連して使用する術語とその実験手順及び技術は当分野で周知であり、広く使用されている。化学合成、化学分析、医薬製造、製剤化及び送達並びに患者の治療には標準技術を使用する。
【００５０】
本発明を理解し易くするために、選択用語を以下に定義する。
【００５１】
「ポリペプチド」なる用語はアミノ酸の任意ポリマー鎖を意味する。「ペプチド」及び「蛋白質」なる用語はポリペプチドなる用語と同義に使用し、同様にアミノ酸のポリマー鎖を意味する。「ポリペプチド」なる用語は天然又は人工蛋白質、蛋白質フラグメント及び蛋白質配列のポリペプチドアナログを包含する。ポリペプチドはモノマーでもポリマーでもよい。
【００５２】
「単離蛋白質」又は「単離ポリペプチド」なる用語はその起源又は由来源によりその天然状態でこれに結合している天然結合成分と結合していない蛋白質又はポリペプチド、同一種に由来する他の蛋白質を実質的に含まない蛋白質又はポリペプチド、別の種に由来する細胞により発現される蛋白質又はポリペプチド、あるいは自然界に存在しない蛋白質又はポリペプチドを意味する。従って、化学的に合成されるポリペプチド又はその天然由来源である細胞とは異なる細胞系で合成されるポリペプチドはその天然結合成分から「単離」される。当分野で周知の蛋白質精製技術を使用して、単離により蛋白質が天然結合成分を実質的に含まないようにすることもできる。
【００５３】
「回収」なる用語は例えば当分野で周知の蛋白質精製技術を使用して、単離によりポリペプチド等の化学種が天然結合成分を実質的に含まないようにする方法を意味する。
【００５４】
「ヒトＩＬ−１β」（本願ではｈＩＬ−１β又はＩＬ−１βと略称する）なる用語は各種免疫応答、炎症プロセス及び造血に関与する多面的サイトカインを包含する。ヒトＩＬ−１βなる用語は標準組換え発現法により作製することができる組換えヒトＩＬ−１β（ｒｈＩＬ−１β）を包含する。
【００５５】
【表１】
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【００５６】
「生物活性」とはＩＬ−１βの固有の全生物学的性質を意味する。ＩＬ−１βの生物学的性質としては限定されないが、ＩＬ−１受容体との結合が挙げられる（他の例としては、発熱、徐波睡眠及び好中球増加症の誘導、Ｔリンパ球及びＢリンパ球活性化、線維芽細胞増殖、所定細胞に対する細胞傷害性、コラゲナーゼの誘導、肝臓における急性期蛋白質の合成、並びにコロニー刺激因子及びコラーゲンの産生増加が挙げられる）。
【００５７】
抗体、蛋白質又はペプチドと第２の化学種の相互作用に関する「特異的結合」又は「特異的に結合する」なる用語は相互作用が化学種上の特定構造（例えば抗原決定基又はエピトープ）の存在に依存することを意味し、例えば、抗体は蛋白質一般ではなく特定蛋白質構造を認識してこれと結合する。抗体がエピトープ「Ａ」に特異的である場合、標識した「Ａ」と抗体を含有する反応混合物中にエピトープＡ（即ち遊離した未標識のＡ）を含む分子が存在するならば、標識したＡの抗体結合量は減少する。
【００５８】
「抗体」なる用語は２本の重（Ｈ）鎖と２本の軽（Ｌ）鎖の４本のポリペプチド鎖から構成される任意の免疫グロブリン（Ｉｇ）分子、又はＩｇ分子の本質的なエピトープ結合特徴を保持するその任意の機能的フラグメント、突然変異体、変異体もしくは誘導体を広義に意味する。このような突然変異体、変異体又は誘導体抗体フォーマットは当分野で公知であり、その非限定的な実施形態について以下に記載する。
【００５９】
全長抗体において、各重鎖は重鎖可変領域（本願ではＨＣＶＲ又はＶＨと略称する）と重鎖定常領域から構成される。重鎖定常領域はＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３の３個のドメインから構成される。各軽鎖は軽鎖可変領域（本願ではＬＣＶＲ又はＶＬと略称する）と軽鎖定常領域から構成される。軽鎖定常領域は１個のドメインＣＬから構成される。ＶＨ及びＶＬ領域は更に相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変領域とその間に配置されたフレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる保存度の高い領域に区分することができる。各ＶＨ及びＶＬはアミノ末端からカルボキシ末端に向かってＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順に配置された３個のＣＤＲと４個のＦＲから構成される。免疫グロブリン分子は任意型（例えばＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ及びＩｇＹ）、クラス（例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２）又はサブクラスとすることができる。
【００６０】
抗体の「抗原結合部分」なる用語は抗原（例えばｈＩＬ−１α）と特異的に結合する能力を保持する抗体の１個以上のフラグメントを意味する。抗体の抗原結合機能は全長抗体のフラグメントにより実施可能である。このような抗体の実施形態は更に２種以上の異なる抗原と特異的に結合する二特異性、二重特異性又は多重特異性フォーマットでもよい。抗体の「抗原結合部分」なる用語に含まれる結合フラグメントの例としては、（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ及びＣＨ１ドメインから構成される１価フラグメントであるＦａｂフラグメント；（ｉｉ）ヒンジ領域でジスルフィド橋により結合した２個のＦａｂフラグメントからなる２価フラグメントであるＦ（ａｂ’）２フラグメント；（ｉｉｉ）ＶＨドメインとＣＨ１ドメインから構成されるＦｄフラグメント；（ｉｖ）抗体の単一アームのＶＬドメインとＶＨドメインから構成されるＦｖフラグメント；（ｖ）単一可変ドメインから構成されるｄＡｂフラグメント（Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ  ３４１：５４４−５４６，ＰＣＴ公開第ＷＯ９０／０５１４４号）；並びに（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）が挙げられる。更に、Ｆｖフラグメントの２個のドメインＶＬ及びＶＨは別々の遺伝子によりコードされるが、組換え法を使用して合成リンカーにより結合し、ＶＬ領域とＶＨ領域が対合して１価分子を形成する単一蛋白鎖として作製することができる（１本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）と言う；例えばＢｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４２６；及びＨｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：５８７９−５８８３参照）。このような１本鎖抗体（ｓｃＦｖ）も抗体の「抗原結合部分」なる用語に含むものとする。ダイアボディ等の他の形態の１本鎖抗体も含む。ダイアボディはＶＨ領域とＶＬ領域が１本のポリペプチド鎖上で発現される２価の二特異性抗体であるが、非常に短いリンカーを使用するため、同一鎖上の２領域間で対合することができず、これらの領域は別の鎖の相補性領域と対合し、２個の抗原結合部位を形成する（例えばＨｏｌｌｉｇｅｒ，ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：６４４４−６４４８；Ｐｏｌｊａｋ，ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ２：１１２１−１１２３参照）。このような抗体結合部分は当分野で公知である（Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ  ａｎｄ  Ｄｕｂｅｌ  ｅｄｓ．，Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ（２００１）Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ．Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ．７９０  ｐｐ．（ＩＳＢＮ  ３−５４０−４１３５４−５））。
【００６１】
「抗体構築物」なる用語はリンカーポリペプチド又は免疫グロブリン定常領域に結合した１個以上の本発明の抗原結合部分を含むポリペプチドを意味する。リンカーポリペプチドはペプチド結合により結合した２個以上のアミノ酸残基を含み、１個以上の抗原結合部分と結合するために使用される。このようなリンカーポリペプチドは当分野で周知である（例えばＨｏｌｌｉｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：６４４４−６４４８；Ｐｏｌｊａｋ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ２：１１２１−１１２３参照）。免疫グロブリン定常領域とは重鎖又は軽鎖定常領域を意味する。ヒトＩｇＧ重鎖（γ）及び軽鎖（κ及びδ）定常領域アミノ酸配列は当分野で公知であり、表２に示す。
【００６２】
【表２】
2013507929.tif 000003
【００６３】
更に、抗体又はその抗原結合部分は抗体又はその抗原結合部分と１種以上の他の蛋白質又はペプチドの共有的又は非共有的結合により形成される大きな免疫接着分子の一部でもよい。このような免疫接着分子の例としてはストレプトアビジンコア領域を使用して形成される四量体ｓｃＦｖ分子（Ｋｉｐｒｉｙａｎｏｖ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）Ｈｕｍａｎ  Ａｎｔｉｂｏｄ．ａｎｄ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ  ６：９３−１０１）や、システイン残基、マーカーペプチド及びＣ末端ポリヒスチジンタグを使用して形成される２価ビオチン化ｓｃＦｖ分子（Ｋｉｐｒｉｙａｎｏｖ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３１：１０４７−１０５８）が挙げられる。Ｆａｂ及びＦ（ａｂ’）２フラグメント等の抗体の抗原結合部分は夫々全長抗体のパパイン又はペプシン消化等の慣用技術を使用して全長抗体から作製することができる。更に、抗体、その抗原結合部分及び免疫接着分子は本願に記載するような標準組換えＤＮＡ技術を使用して取得することができる。
【００６４】
「単離抗体」とは異なる抗原特異性をもつ他の抗体を実質的に含まない抗体を意味する（例えばｈＩＬ−１βと特異的に結合する単離抗体はｈＩＬ−１β以外の抗原と特異的に結合する抗体を実質的に含まない）。しかし、ｈＩＬ−１βと特異的に結合する単離抗体は他の抗原（例えば他の種に由来するＩＬ−１β分子）と交差反応性をもつ場合がある。更に、単離抗体は他の細胞材料及び／又は化学物質を実質的に含まない場合がある。
【００６５】
「ヒト抗体」なる用語はヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域と定常領域をもつ抗体を包含するものとする。本発明のヒト抗体はヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列によりコードされないアミノ酸残基（例えばランダムもしくは部位特異的突然変異誘発によりインビトロで導入される突然変異又は体細胞突然変異によりインビボで導入される突然変異）を例えばＣＤＲ、特にＣＤＲ３に含んでいてもよい。他方、「ヒト抗体」なる用語は別の哺乳動物種（例えばマウス）の生殖細胞系列に由来するＣＤＲ配列をヒトフレームワーク配列に移植した抗体を包含しない。
【００６６】
「組換えヒト抗体」なる用語は組換え手段により作製、発現、創製又は単離された全ヒト抗体を包含し、例えば、宿主細胞にトランスフェクトした組換え発現ベクターを使用して発現させた抗体（下記セクションＩＩ  Ｃに詳述）、組換えコンビナトリアルヒト抗体ライブラリーから単離された抗体（Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ（１９９７）Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１５：６２−７０；Ａｚｚａｚｙ  ａｎｄ  Ｈｉｇｈｓｍｉｔｈ（２００２）Ｃｌｉｎ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．３５：４２５−４４５；Ｇａｖｉｌｏｎｄｏ  ａｎｄ  Ｌａｒｒｉｃｋ（２０００）ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ２９：１２８−１４５；Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ａｎｄ  Ｃｈａｍｅｓ（２０００）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｔｏｄａｙ  ２１：３７１−３７８）、ヒト免疫グロブリン遺伝子にトランスジェニックな動物（例えばマウス）から単離された抗体（例えばＴａｙｌｏｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２０：６２８７−６２９５；Ｋｅｌｌｅｒｍａｎｎ  ａｎｄ  Ｇｒｅｅｎ（２００２）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１３：５９３−５９７；Ｌｉｔｔｌｅ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ  ２１：３６４−３７０参照）、あるいはヒト免疫グロブリン遺伝子配列を他のＤＮＡ配列にスプライシングする他の任意手段により作製、発現、創製又は単離された抗体が挙げられる。このような組換えヒト抗体はヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域と定常領域をもつ。しかし、所定実施形態において、このような組換えヒト抗体はインビトロ突然変異誘発（又は、ヒトＩｇ配列にトランスジェニックな動物を使用する場合には、インビボ体細胞突然変異誘発）を受け、従って、組換え抗体のＶＨ領域とＶＬ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖細胞系列ＶＨ及びＶＬ配列に由来し、これらの配列に近縁の配列であるが、天然ではヒト抗体生殖細胞系列レパートリー内にインビボで存在しない場合もある配列である。
【００６７】
「キメラ抗体」なる用語はある種に由来する重鎖及び軽鎖可変領域配列と、別の種に由来する定常領域配列を含む抗体（例えばマウス重鎖及び軽鎖可変領域をヒト定常領域に融合した抗体）を意味する。
【００６８】
「ＣＤＲ移植抗体」なる用語はある種に由来する重鎖及び軽鎖可変領域を含むが、ＶＨ及び／又はＶＬ領域のＣＤＲ領域の１個以上の配列を別の種のＣＤＲ配列で置換した抗体（例えばヒトＣＤＲの１個以上（例えばＣＤＲ３）を例えばヒトＩＬ−１βに対するマウスモノクローナル抗体から得られるようなマウスＣＤＲ配列で置換したヒト重鎖及び軽鎖可変領域をもつ抗体）を意味する。
【００６９】
「ＣＤＲ」なる用語は抗体可変領域配列内の相補性決定領域を意味する。重鎖及び軽鎖可変領域の各々に３個のＣＤＲが存在し、可変領域の各々についてＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３と呼ばれる。「ＣＤＲセット」なる用語は抗原結合部位の単一可変領域（即ちＶＨ又はＶＬ）に存在する３個１組のＣＤＲを意味する。これらのＣＤＲの厳密な境界は種々のシステムにより種々に定義されている。Ｋａｂａｔにより記載されているシステム（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９８７，１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍａｒｙｌａｎｄ）は抗体の任意可変領域に適用可能な明確な残基ナンバリングシステムを規定するのみならず、３個のＣＤＲを定義する厳密な残基境界を規定する。これらのＣＤＲをＫａｂａｔ  ＣＤＲと言う場合がある。Ｃｈｏｔｈｉａら（Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７及びＣｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７７−８８３）はＫａｂａｔ  ＣＤＲ内の所定のサブ部分がアミノ酸配列レベルでは多様性に富んでいるにも拘わらず、ほぼ同一のペプチド主鎖構造をとることを見いだした。これらのサブ部分はＬ１、Ｌ２及びＬ３又はＨ１、Ｈ２及びＨ３と呼ばれ、ここで「Ｌ」及び「Ｈ」は夫々軽鎖領域と重鎖領域を表す。これらの領域をＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲと呼ぶ場合があり、その境界はＫａｂａｔ  ＣＤＲとオーバーラップする。Ｋａｂａｔ  ＣＤＲとオーバーラップするＣＤＲを定義する他の境界はＰａｄｌａｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）ＦＡＳＥＢ  Ｊ．９：１３３−１３９及びＭａｃＣａｌｌｕｍ（１９９６）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２（５）：７３２−７４５に記載されている。上記システムの１種に厳密には従わないとしても、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲとオーバーラップする更に他のＣＤＲ境界定義もあり、特定残基もしくは残基群又はＣＤＲ全体が抗原結合に有意に影響を与えないという予想又は実験結果に基づいて短くしたものや長くしたものがある。本願で使用する方法はこれらのシステムのいずれに従って定義されたＣＤＲも使用することができるが、所定実施形態はＫａｂａｔ又はＣｈｏｔｈｉａの定義によるＣＤＲを使用する。
【００７０】
「Ｋａｂａｔナンバリング」、「Ｋａｂａｔ定義」及び「Ｋａｂａｔラベリング」なる用語を本願では同義に使用する。これらの用語は当分野で認識されている通り、抗体又はその抗原結合部分の重鎖及び軽鎖可変領域において他のアミノ酸残基よりも可変度の高い（即ち超可変性）アミノ酸残基のナンバリングシステムを意味する（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９７１）Ａｎｎ．ＮＹ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．１９０：３８２−３９１及びＫａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２）。重鎖可変領域の場合、超可変領域はＣＤＲ１のアミノ酸３１〜３５位、ＣＤＲ２のアミノ酸５０〜６５位、及びＣＤＲ３のアミノ酸９５〜１０２位に位置する。軽鎖可変領域の場合、超可変領域はＣＤＲ１のアミノ酸２４〜３４位、ＣＤＲ２のアミノ酸５０〜５６位、及びＣＤＲ３のアミノ酸８９〜９７位に位置する。
【００７１】
過去２０年間にわたる重鎖及び軽鎖可変領域のアミノ酸配列の広範な公共データベースの発展と分析の結果、可変領域配列内のフレームワーク領域（ＦＲ）配列とＣＤＲ配列の典型的境界が解明され、当業者はＫａｂａｔナンバリング、Ｃｈｏｔｈｉａナンバリング又は他のシステムに従ってＣＤＲを正確に決定できるようになった。例えばＭａｒｔｉｎ，Ｉｎ  Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ  ａｎｄ  Ｄｕｂｅｌ，ｅｄｓ．，Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｂｅｒｌｉｎ，２００１），ｃｈａｐｔｅｒ  ３１，ｐａｇｅｓ  ４３２−４３３参照。重鎖可変領域（ＶＨ）と軽鎖可変領域（ＶＬ）のアミノ酸配列内のＫａｂａｔ  ＣＤＲのアミノ酸配列の有用な決定方法を以下に挙げる。
【００７２】
ＣＤＲ−Ｌ１アミノ酸配列を同定するためには、
ＶＬ領域のアミノ末端から約２４番目のアミノ酸残基から出発する；
ＣＤＲ−Ｌ１配列の前の残基は常にシステイン（Ｃ）である；
ＣＤＲ−Ｌ１配列の後の残基は常にトリプトファン（Ｗ）残基であり、典型的にはＴｒｐ−Ｔｙｒ−Ｇｌｎ（Ｗ−Ｙ−Ｑ）であるが、Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ（Ｗ−Ｌ−Ｑ）、Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ（Ｗ−Ｆ−Ｑ）及びＴｒｐ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ（Ｗ−Ｙ−Ｌ）でもよい；
長さは典型的には１０〜１７アミノ酸残基である。
【００７３】
ＣＤＲ−Ｌ２アミノ酸配列を同定するためには、
常にＣＤＲ−Ｌ１の末端から１６番目の残基から出発する；
ＣＤＲ−Ｌ２配列の前の残基は一般にＩｌｅ−Ｔｙｒ（Ｉ−Ｙ）であるが、Ｖａｌ−Ｔｙｒ（Ｖ−Ｙ）、Ｉｌｅ−Ｌｙｓ（Ｉ−Ｋ）及びＩｌｅ−Ｐｈｅ（Ｉ−Ｆ）でもよい；
長さは常に７アミノ酸残基である。
【００７４】
ＣＤＲ−Ｌ３アミノ酸配列を同定するためには、
常にＣＤＲ−Ｌ２の末端から３３番目のアミノ酸から出発する；
ＣＤＲ−Ｌ３アミノ酸配列の前の残基は常にシステイン（Ｃ）である；
ＣＤＲ−Ｌ３配列の後の残基は常にＰｈｅ−Ｇｌｙ−Ｘ−Ｇｌｙ（Ｆ−Ｇ−Ｘ−Ｇ）（配列番号６）であり、ここでＸは任意アミノ酸である；
長さは典型的には７〜１１アミノ酸残基である。
【００７５】
ＣＤＲ−Ｈ１アミノ酸配列を同定するためには、
ＶＨ領域のアミノ末端から約３１番目のアミノ酸残基で常にシステイン（Ｃ）から９番目の残基から出発する；
ＣＤＲ−Ｈ１配列の前の残基は常にＣｙｓ−Ｘ−Ｘ−Ｘ−Ｘ−Ｘ−Ｘ−Ｘ−Ｘ（配列番号７）であり、ここでＸは任意アミノ酸である；
ＣＤＲ−Ｈ１配列の後の残基は常にＴｒｐ（Ｗ）であり、典型的にはＴｒｐ−Ｖａｌ（Ｗ−Ｖ）であるが、Ｔｒｐ−Ｉｌｅ（Ｗ−Ｉ）及びＴｒｐ−Ａｌａ（Ｗ−Ａ）でもよい；
長さは典型的には５〜７アミノ酸残基である。
【００７６】
ＣＤＲ−Ｈ２アミノ酸配列を同定するためには、
常にＣＤＲ−Ｈ１の末端から１５番目のアミノ酸残基から出発する；
ＣＤＲ−Ｈ２配列の前の残基は典型的にはＬｅｕ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｉｌｅ−Ｇｌｙ（Ｌ−Ｅ−Ｗ−Ｉ−Ｇ）（配列番号８）であるが、他の変形でもよい；
ＣＤＲ−Ｈ２配列の後の残基はＬｙｓ／Ａｒｇ−Ｌｅｕ／Ｉｌｅ／Ｖａｌ／Ｐｈｅ／Ｔｈｒ／Ａｌａ−Ｔｈｒ／Ｓｅｒ／Ｉｌｅ／Ａｌａ（Ｋ／Ｒ−Ｌ／Ｉ／Ｖ／Ｆ／Ｔ／Ａ−Ｔ／Ｓ／Ｉ／Ａ）である；
長さは典型的には１６〜１９アミノ酸残基である。
【００７７】
ＣＤＲ−Ｈ３アミノ酸配列を同定するためには、
常にＣＤＲ−Ｈ２の末端から３３番目のアミノ酸残基で常にシステイン（Ｃ）から３番目の残基から出発する；
ＣＤＲ−Ｈ３配列の前の残基は常にＣｙｓ−Ｘ−Ｘ（Ｃ−Ｘ−Ｘ）（ここでＸは任意アミノ酸である）であり、典型的にはＣｙｓ−Ａｌａ−Ａｒｇ（Ｃ−Ａ−Ｒ）である；
ＣＤＲ−Ｈ３配列の後の残基は常にＴｒｐ−Ｇｌｙ−Ｘ−Ｇｌｙ（Ｗ−Ｇ−Ｘ−Ｇ）（配列番号９）であり、ここでＸは任意アミノ酸である；
長さは典型的には３〜２５アミノ酸残基である。
【００７８】
「アクセプター」及び「アクセプター抗体」なる用語はフレームワーク領域の１個以上のアミノ酸配列の少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は１００％を提供又はコードする抗体又は核酸配列を意味する。所定実施形態において、「アクセプター」なる用語は定常領域を提供又はコードする抗体アミノ酸又は核酸配列を意味する。更に別の実施形態において、「アクセプター」なる用語はフレームワーク領域と定常領域の１個以上を提供又はコードする抗体アミノ酸又は核酸配列を意味する。特定実施形態において、「アクセプター」なる用語はフレームワーク領域の１個以上のアミノ酸配列の少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は１００％を提供又はコードするヒト抗体アミノ酸又は核酸配列を意味する。この実施形態によると、アクセプターはヒト抗体の１個以上の特定位置に存在しない少なくとも１個、少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、又は少なくとも１０個のアミノ酸残基を含むことができる。アクセプターフレームワーク領域及び／又はアクセプター定常領域は例えば生殖細胞系列抗体遺伝子、成熟抗体遺伝子、機能的抗体（例えば当分野で周知の抗体、開発中の抗体又は市販抗体）から入手又は取得することができる。
【００７９】
「カノニカル」残基なる用語はＣｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７；Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：７９９により定義されているように特定カノニカルＣＤＲ構造を定義するＣＤＲ又はフレームワークにおける残基を意味する。Ｃｈｏｔｈｉａらによると、多くの抗体のＣＤＲの必須部分はアミノ酸配列レベルでは多様性に富んでいるにも拘わらず、ほぼ同一のペプチド主鎖構造をとる。各カノニカル構造はループを形成するアミノ酸残基の連続セグメントについて主に１組のペプチド主鎖ねじれ角を指定する。
【００８０】
「ドナー」及び「ドナー抗体」なる用語は１個以上のＣＤＲを提供する抗体を意味する。１実施形態において、ドナー抗体はフレームワーク領域の取得源又は入手源である抗体とは異なる種に由来する抗体である。ヒト化抗体に関連して「ドナー抗体」なる用語は１個以上のＣＤＲを提供する非ヒト抗体を意味する。
【００８１】
「フレームワーク」又は「フレームワーク配列」なる用語は可変領域からＣＤＲを除いた残りの配列を意味する。ＣＤＲ配列の厳密な定義は種々のシステムにより決定することができるので、フレームワーク配列の意味は相応に種々に解釈される。６個のＣＤＲ（軽鎖のＣＤＲ−Ｌ１、Ｌ２及びＬ３と重鎖のＣＤＲ−Ｈ１、Ｈ２及びＨ３）は軽鎖及び重鎖のフレームワーク領域を更に各鎖で４個のサブ領域（ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３及びＦＲ４）に分割し、ＣＤＲ１はＦＲ１とＦＲ２の間、ＣＤＲ２はＦＲ２とＦＲ３の間、ＣＤＲ３はＦＲ３とＦＲ４の間に位置する。個々のサブ領域をＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３又はＦＲ４と特定せずに、単にフレームワーク領域と言う場合もあるが、その場合には、１本の天然に存在する免疫グロブリン鎖の可変領域内のＦＲ全体を意味する。ＦＲとは４個のサブ領域の１個を意味し、ＦＲｓとはフレームワーク領域を構成する４個のサブ領域の２個以上を意味する。
【００８２】
ヒト重鎖及び軽鎖アクセプター配列は当分野で公知である。本発明の１実施形態において、ヒト重鎖及び軽鎖アクセプター配列は表３及び表４に記載する配列から選択される。
【００８３】
【表３】
2013507929.tif 000004
【００８４】
【表４】
2013507929.tif 000005
【００８５】
「生殖細胞系列抗体遺伝子」又は「遺伝子フラグメント」なる用語は特定の免疫グロブリンの発現のために遺伝子再構成と突然変異を誘導する成熟プロセスを受けていない非リンパ細胞によりコードされる免疫グロブリン配列を意味する（例えばＳｈａｐｉｒｏ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２２（３）：１８３−２００；Ｍａｒｃｈａｌｏｎｉｓ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ａｄｖ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．４８４：１３−３０参照）。本発明の各種実施形態により提供される利点の１つは生殖細胞系列抗体遺伝子が成熟抗体遺伝子よりも種における個体の必須アミノ酸配列構造特徴を保存する傾向が強く、従ってこの種で治療に使用した場合に外来源に由来するとみなしにくいという認識に起因する。
【００８６】
「キー」残基なる用語は抗体、特にヒト化抗体の結合特異性及び／又は親和性に強く影響する可変領域内の所定の残基を意味する。キー残基としては限定されないが、ＣＤＲに隣接する残基、潜在グリコシル化部位残基（Ｎ−グリコシル化部位でもＯ−グリコシル化部位でもよい）、希少残基、抗原と相互作用することが可能な残基、ＣＤＲと相互作用することが可能な残基、カノニカル残基、重鎖可変領域と軽鎖可変領域の間の接触残基、バーニアゾーン内の残基、及びＣｈｏｔｈｉａの定義による重鎖可変領域ＣＤＲ１とＫａｂａｔの定義による最初の重鎖フレームワークの間でオーバーラップする領域における残基の１種以上が挙げられる。
【００８７】
「ヒト化抗体」なる用語は非ヒト種（例えばマウス）に由来する重鎖及び軽鎖可変領域配列を含むが、ＶＨ及び／又はＶＬ配列の少なくとも一部が「ヒト類似性」を増すように、即ちヒト生殖細胞系列可変配列との類似性を増すように改変された抗体を意味する。ヒト化抗体の１例は対応する非ヒトフレームワーク（ＦＲ）配列に置換するように非ヒトＣＤＲ配列をヒトＶＨ及びＶＬ配列に導入したＣＤＲ移植抗体である。例えば、「ヒト化抗体」は目的抗原と免疫特異的に結合し、実質的にヒト抗体のアミノ酸配列をもつフレームワーク（ＦＲ）領域と、実質的に非ヒト抗体のアミノ酸配列をもつ相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む抗体又はその変異体、誘導体、アナログもしくはフラグメントである。ＣＤＲに関連して「実質的に」なる用語は非ヒト抗体ＣＤＲのアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％一致するアミノ酸配列をもつＣＤＲを意味する。ヒト化抗体はＣＤＲ領域の全部又は実質的に全部が非ヒト免疫グロブリン（即ちドナー抗体）のＣＤＲ領域に対応し、フレームワーク領域の全部又は実質的に全部がヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のフレームワーク領域である少なくとも１個、典型的には２個の可変ドメイン（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ＦａｂＣ、Ｆｖ）の実質的に全部を含む。１実施形態において、ヒト化抗体は更に免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的にはヒト免疫グロブリンの定常領域の少なくとも一部を含む。所定実施形態において、ヒト化抗体は軽鎖と重鎖の少なくとも可変ドメインを含む。抗体は更に重鎖のＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、ＣＨ３及びＣＨ４領域を含むことができる。所定実施形態において、ヒト化抗体はヒト化軽鎖のみを含む。所定実施形態において、ヒト化抗体はヒト化重鎖のみを含む。特定実施形態において、ヒト化抗体は軽鎖のヒト化可変ドメイン及び／又はヒト化重鎖のみを含む。
【００８８】
ヒト化抗体はＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＡ及びＩｇＥを含む任意クラスの免疫グロブリンと、限定されないが、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４を含む任意アイソタイプから選択することができる。ヒト化抗体は２種以上のクラス又はアイソタイプに由来する配列を含むことができ、当分野で周知の技術を使用して所望エフェクター機能を最適化するように特定定常領域を選択することができる。
【００８９】
ヒト化抗体のフレームワーク領域とＣＤＲ領域は親配列に厳密に対応する必要はなく、例えばその部位のＣＤＲ又はフレームワーク残基がドナー抗体又はコンセンサスフレームワークのいずれにも対応しないように少なくとも１個のアミノ酸残基の置換、挿入及び／又は欠失によりドナー抗体ＣＤＲ又はコンセンサスフレームワークを突然変異誘発してもよい。しかし、１実施形態において、このような突然変異は広範にならない。通常では、ヒト化抗体残基の少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％が親ＦＲ及びＣＤＲ配列に対応する。「コンセンサスフレームワーク」なる用語はコンセンサス免疫グロブリン配列中のフレームワーク領域を意味する。「コンセンサス免疫グロブリン配列」なる用語は近縁免疫グロブリン配列のファミリーに最高頻度で存在するアミノ酸（又はヌクレオチド）から形成される配列を意味する（例えばＷｉｎｎａｋｅｒ（１９８７）Ｆｒｏｍ  Ｇｅｎｅｓ  ｔｏ  Ｃｌｏｎｅｓ（Ｖｅｒｌａｇｓｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ，Ｗｅｉｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ参照）。従って、「コンセンサス免疫グロブリン配列」は「コンセンサス可変ドメイン」及び／又は「コンセンサス定常ドメイン」を含むことができる。更に、「コンセンサス可変ドメイン」は１個以上の「コンセンサスフレームワーク領域」及び／又は１個以上の「コンセンサスＣＤＲ」を含むことができる。免疫グロブリンファミリーにおいて、コンセンサス配列における各位置はこのファミリーでこの位置に最高頻度で存在するアミノ酸により占有される。２種類のアミノ酸が等頻度で存在する場合には、どちらをコンセンサス配列に加えてもよい。
【００９０】
「バーニア」ゾーンなる用語はＦｏｏｔｅ  ａｎｄ  Ｗｉｎｔｅｒ（１９９２）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２４：４８７−４９９に記載されているようにＣＤＲ構造を調整することができ、抗原に合わせて微調整することができるフレームワーク残基のサブセットを意味する。バーニアゾーン残基はＣＤＲの基層を形成し、ＣＤＲの構造と抗体の親和性に影響を与える可能性がある。
【００９１】
「多価結合蛋白質」なる用語は本明細書では２個以上の抗原結合部位を含む結合蛋白質の意味で使用される。多価結合蛋白質は３個以上の抗原結合部位をもつように構築され、一般に天然抗体以外のものである。「多重特異性結合蛋白質」なる用語は２種以上の近縁又は非近縁ターゲットと結合することが可能な結合蛋白質を意味する。二重可変ドメイン（ＤＶＤ）結合蛋白質は２個以上の抗原結合部位を含む結合蛋白質であり、４価以上の多価結合蛋白質である。このようなＤＶＤ結合蛋白質は単一特異性、即ち１種類の抗原と結合可能でもよいし、多重特異性、即ち２種類以上の抗原と結合可能でもよい。２本の重鎖ＤＶＤポリペプチドと２本の軽鎖ＤＶＤポリペプチドを含むＤＶＤ結合蛋白質をＤＶＤ−Ｉｇ（登録商標）分子と言う。ＤＶＤ−Ｉｇ分子の各半分は重鎖ＤＶＤ−Ｉｇポリペプチドと、軽鎖ＤＶＤポリペプチドと、２個の抗原結合部位を含む。各結合部位は重鎖可変ドメインと軽鎖可変ドメインを含み、抗原結合部位当たり合計６個のＣＤＲが抗原結合に関与する。ＤＶＤ結合蛋白質とＤＶＤ結合蛋白質の作製方法は本願に組込まれる米国特許第７，６１２，１８１号に開示されている。
【００９２】
本発明の１態様はヒトＩＬ−１βと結合することが可能な結合蛋白質を含むＤＶＤ結合蛋白質に関する。別の態様において、ＤＶＤ結合蛋白質はＩＬ−１βと第２のターゲットとに結合することが可能である。１実施形態において、ＤＶＤ結合蛋白質はＩＬ−１αとＩＬ−１βとに結合することが可能である。
【００９３】
「中和」なる用語は結合蛋白質がサイトカインと特異的に結合する場合のサイトカインの生物活性の中和を意味する。１実施形態において、中和結合蛋白質はｈＩＬ−１βと結合することによりｈＩＬ−１βの生物活性を阻害する中和抗体である。中和結合蛋白質はｈＩＬ−１βと結合し、ｈＩＬ−１βの生物活性を少なくとも約２０％、少なくとも約４０％、少なくとも約６０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、又は少なくとも約１００％低下させることが好ましい。中和結合蛋白質によるｈＩＬ−１βの生物活性の阻害は当分野で周知のｈＩＬ−１β生物活性の１種以上の指標を測定することにより判定することができる。
【００９４】
「エピトープ」なる用語は免疫グロブリン又はＴ細胞受容体と特異的に結合することが可能な任意ポリペプチド決定基を包含する。所定実施形態において、エピトープ決定基はアミノ酸、糖側鎖、ホスホリル又はスルホニル等の化学的に活性な表面分子群を含み、所定実施形態では、特異的三次元構造特徴及び／又は特異的電荷特徴をもつ場合がある。エピトープは抗体と結合する抗原の１領域である。従って、エピトープは特異的結合パートナー上の相補的部位と結合することが分かっている抗原（又はそのフラグメント）の１領域のアミノ酸残基から構成される。抗原フラグメントは２個以上のエピトープを含むことができる。所定実施形態において、抗体は蛋白質及び／又は巨大分子の複雑な混合物中でそのターゲット抗原を認識するときに抗原と特異的に結合すると言う。抗体が交差競合する（一方が他方の結合又は変調作用を妨害する）場合に抗体は「同一エピトープと結合する」と言う。更に、エピトープの構造定義（オーバーラップ、類似、一致）も有益であるが、機能定義のほうが構造（結合）パラメータと機能（変調、競合）パラメータを含むため、適切であることが多い。
【００９５】
「表面プラズモン共鳴」なる用語は例えばＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）システム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅの子会社であるＢｉａｃｏｒｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ＡＢ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ及びＰｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ）を使用してバイオセンサーマトリックス内の蛋白質濃度の変化の検出によりリアルタイム生体特異的相互作用の分析を可能にする光学現象を意味する。更に詳細については、Ｊｏｎｓｓｏｎ，Ｕ．ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ａｎｎ．Ｂｉｏｌ．Ｃｌｉｎ．５１：１９−２６；Ｊｏｎｓｓｏｎ，Ｕ．ｅｔ  ａｌ．（１９９１）ＢｉｏＴｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  １１：６２０−６２７；Ｊｏｈｎｓｓｏｎ，Ｂ．ｅｔ  ａｌ．（１９９５）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｒｅｃｏｇｎｉｔ．８：１２５−１３１；及びＪｏｈｎｓｓｏｎ，Ｂ．ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９８：２６８−２７７参照。
【００９６】
「Ｋｏｎ」なる用語は当分野で公知の通り、結合蛋白質（例えば抗体）が抗原と会合して例えば抗体／抗原複合体を形成するオン速度定数を意味する。「Ｋｏｎ」は「オン速度定数」又は「ｋａ」の用語でも呼ばれ、本願では同義に使用する。抗体とその標的抗原の結合速度ないし抗体と抗原の間の複合体形成速度を表すこの数値は式：
抗体（「Ａｂ」）＋抗原（「Ａｇ」）→Ａｂ−Ａｇ
でも示される。
【００９７】
「Ｋｏｆｆ」なる用語は当分野で公知の通り、結合蛋白質（例えば抗体）が例えば抗体／抗原複合体から解離するオフ速度定数を意味する。「Ｋｏｆｆ」は「オフ速度定数」又は「ｋｄ」の用語でも呼ばれ、本願では同義に使用する。この数値は下式：
Ａｂ＋Ａｇ←Ａｂ−Ａｇ
により示されるように、抗体がその標的抗原から解離する速度ないしＡｂ−Ａｇ複合体が経時的に遊離抗体及び抗原に分離する速度を表す。
【００９８】
「平衡解離定数」又は「ＫＤ」なる用語は本願では同義に使用し、平衡状態における滴定測定で得られる数値又はオフ速度定数（ｋｏｆｆ）をオン速度定数（ｋｏｎ）で割ることにより得られる数値を意味する。オン速度定数、オフ速度定数及び平衡解離定数は抗原に対する抗体の結合親和性を表すために使用される。オン速度定数とオフ速度定数の測定方法は当分野で周知である。蛍光技術を使用すると、高感度が得られ、平衡状態の生理的緩衝液中のサンプルを試験することができる。ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）（生体分子相互作用分析）アッセイ等の他の実験アプローチ及び機器（例えばＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅの子会社であるＢｉａｃｏｒｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ＡＢ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎから市販されている機器）も使用できる。更に、Ｓａｐｉｄｙｎｅ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ（Ｂｏｉｓｅ，Ｉｄａｈｏ）から市販されているＫｉｎＥｘＡ（登録商標）（動的排除アッセイ）も使用することができる。
【００９９】
「標識結合蛋白質」なる用語は結合蛋白質を識別できるようにラベルを付加した蛋白質を意味する。１態様において、ラベルは検出可能なマーカーであり、例えば放射性標識アミノ酸を付加する方法や、標識アビジン（例えば蛍光マーカー又は光学的方法もしくは比色法により検出可能な酵素活性を付加したストレプトアビジン）により検出可能なビオチニル部分をポリペプチドに結合する方法が挙げられる。ポリペプチドのラベルの例としては限定されないが、放射性同位体ないし放射性核種（例えば３Ｈ、１４Ｃ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１７７Ｌｕ、１６６Ｈｏ、及び１５３Ｓｍ）、蛍光ラベル（例えばＦＩＴＣ、ローダミン及びランタニド蛍光体）、酵素ラベル（例えば西洋ワサビペルオキシダーゼ、ルシフェラーゼ、アルカリホスファターゼ）、化学発光マーカー、ビオチニル基、二次レポーターにより認識される所定ポリペプチドエピトープ（例えばロイシンジッパー対配列、二次抗体の結合部位、金属結合ドメイン及びエピトープタグ）及び磁性物質（例えばガドリニウムキレート）が挙げられる。
【０１００】
「抗体コンジュゲート」なる用語は第２の化学部分（例えば治療剤や細胞傷害性物質）と化学的に結合した結合蛋白質（例えば抗体）を意味する。「作用剤」なる用語は化合物、化合物の混合物、生体巨大分子又は生体材料から作製された抽出物を意味する。１態様において、治療剤又は細胞傷害性物質としては限定されないが、百日咳毒素、タキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１−デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール及びピューロマイシン並びにそのアナログ又はホモログが挙げられる。
【０１０１】
「結晶」及び「結晶化」なる用語は結晶形態で存在する抗体又はその抗原結合部分を意味する。結晶は物質の固体状態の１形態であり、アモルファス固体状態や液体結晶状態等の他の形態から区別される。結晶は原子、イオン、分子（例えば抗体等の蛋白質）、又は分子集合体（例えば抗原／抗体複合体）の規則的な反復三次元配列から構成される。これらの三次元配列は当分野で周知の特定の数学的関係に従って配置されている。結晶中で反復している基本単位ないし構成単位を非対称単位と言う。所定の明確な結晶対称性に一致する配置で非対称単位が反復することにより、結晶の「単位格子」を構成する。単位格子が全３方向に規則的変換により反復することにより、結晶を構成する。Ｇｉｅｇｅ  ａｎｄ  Ｄｕｃｒｕｉｘ（１９９９）Ｃｈａｐｔｅｒ  １，Ｉｎ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，２ｎｄ  ｅｄ．，（Ｄｕｃｒｕｉｘ  ａｎｄ  Ｇｉｅｇｅ，ｅｄｓ．）（Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９９）ｐｐ．１−１６参照。
【０１０２】
「ポリヌクレオチド」なる用語はリボヌクレオチドもしくはデオキシヌクレオチドのいずれか又はこれらのいずれかの型のヌクレオチドの修飾物の２個以上のヌクレオチドのポリマー形態を意味する。この用語は１本鎖形態と２本鎖形態のＤＮＡ又はＲＮＡを含むが、１実施形態では２本鎖ＤＮＡである。
【０１０３】
「単離ポリヌクレオチド」なる用語は自然界で結合しているポリヌクレオチド、自然界で機能的に連結しているポリヌクレオチド、又はより長い配列の一部として自然界に存在するポリヌクレオチドの全部又は一部と結合していない（例えばゲノム、ｃＤＮＡもしくは合成由来又はその組合せの）ポリヌクレオチドを意味する。
【０１０４】
「ベクター」なる用語はこれに連結した別の核酸を輸送することが可能な核酸分子を意味する。ベクターの１例は別のＤＮＡセグメントをライゲーションすることができる環状２本鎖ＤＮＡループを意味する「プラスミド」である。ベクターの別の例は別のＤＮＡセグメントをウイルスゲノムにライゲーションすることができるウイルスベクターである。所定のベクターはこれらのベクターを導入する宿主細胞で自律複製することができる（例えば細菌複製起点をもつ細菌ベクターやエピソーム哺乳動物ベクター）。他のベクター（例えば非エピソーム哺乳動物ベクター）も宿主細胞に導入後に宿主細胞のゲノムに組込むことができ、宿主ゲノムと共に複製される。更に、所定のベクターはこれらのベクターを機能的に連結した遺伝子の発現を誘導することができる。このようなベクターを本願では「組換え発現ベクター」（又は単に「発現ベクター」）と言う。一般に、組換えＤＮＡ技術で有用な発現ベクターはプラスミド形態であることが多い。プラスミドは最も広く使用されている形態のベクターであるので、本明細書では、「プラスミド」と「ベクター」を同義に使用する場合がある。しかし、本発明はウイルスベクター（例えば複製欠損型レトロウイルス、アデノウイルス及びアデノ随伴ウイルス）等の同等機能をもつこのような他の形態の発現ベクターも包含するものとする。
【０１０５】
「機能的に連結」なる用語は成分をその目的通りに機能できるように配置することを意味する。コーディング配列と「機能的に連結」された制御配列は制御配列に適合可能な条件下でコーディング配列の発現が達成されるようにライゲーションされている。「機能的に連結」された配列としては、目的遺伝子に隣接するように配置された発現制御配列と、イントランスで作用する発現制御配列、即ち目的核酸とは異なる核酸分子に配置されているが、目的核酸に対する制御機能を発揮する発現制御配列と、目的核酸と同一の核酸分子上ではあるが、目的核酸から所定の距離を隔てて配置された発現制御配列が挙げられる。「発現制御配列」なる用語はこの配列がライゲーションされたコーディング配列の発現とプロセシングを行うために必要なポリヌクレオチド配列を意味する。発現制御配列としては、適切な転写開始配列、終結配列、プロモーター配列及びエンハンサー配列；効率的なＲＮＡプロセシングシグナル（例えばスプライシングシグナルやポリアデニル化シグナル）；細胞質ｍＲＮＡを安定化させる配列；翻訳効率を向上させる配列（即ちコザックコンセンサス配列）；蛋白質安定性を増加する配列；更には所望により、蛋白質分泌を増加する配列が挙げられる。このような制御配列の種類は宿主生物により異なり、原核生物では、このような制御配列としては一般にプロモーター、リボソーム結合部位及び転写終結配列が挙げられ、真核生物では、一般にこのような制御配列としてはプロモーターと転写終結配列が挙げられる。「制御配列」なる用語はその存在が発現とプロセシングに必須である成分を包含するものとし、更に存在していると有利である別の成分（例えばリーダー配列や融合パートナー配列）も包含することができる。
【０１０６】
「形質転換」とは外来ＤＮＡが宿主細胞に導入される任意プロセスを意味する。形質転換は外来核酸配列を例えば原核又は真核宿主細胞に挿入するために当分野で周知の各種方法を使用して天然又は人工条件下に実施することができる。方法は形質転換する宿主細胞に基づいて選択され、限定されないが、ウイルス感染、エレクトロポレーション、リポフェクション及び粒子撃ち込みが挙げられる。このような「形質転換」細胞としては、挿入されたＤＮＡが自律複製プラスミド又は宿主染色体の一部として複製できる安定型形質転換細胞が挙げられる。更に、挿入されたＤＮＡ又はＲＮＡを限定期間だけ一過的に発現する細胞も挙げられる。
【０１０７】
「組換え宿主細胞」（又は単に「宿主細胞」）なる用語は外来ＤＮＡが導入された細胞を意味する。当然のことながら、このような用語は特定対象細胞のみならず、このような細胞の子孫も意味する。後続世代には突然変異又は環境影響により所定の変異が生じる場合があるので、このような子孫は実際には親細胞と同一でない場合もあるが、「宿主細胞」なる用語の範囲に含まれる。１態様において、宿主細胞としては生物界の任意のものから選択される原核細胞と真核細胞が挙げられる。真核細胞としては原生生物細胞、真菌細胞、植物細胞及び動物細胞が挙げられる。別の実施形態において、宿主細胞としては限定されないが、原核細胞株である大腸菌；哺乳動物細胞株であるＣＨＯ、ＨＥＫ２９３及びＣＯＳ；昆虫細胞株であるＳｆ９；並びに真菌細胞であるサッカロミセス・セルビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）が挙げられる。
【０１０８】
組換えＤＮＡ、オリゴヌクレオチド合成、並びに組織培養及び形質転換（例えばエレクトロポレーション及びリポフェクション）には標準技術を使用することができる。酵素反応及び精製技術は製造業者の指示に従うか、当分野で広く実施されている方法に従うか、又は本願の記載に従って実施することができる。上記技術及び手順は当分野で周知の慣用方法に従い、本明細書の随所に引用及び説明する各種一般資料及び特定資料に記載されているように一般に実施することができる。例えばＳａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，２ｄ  ｅｄ．（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  １９８９）参照。
【０１０９】
「トランスジェニック生物」なる用語は細胞にトランスジーンを導入した生物を意味し、生物（又は生物の祖先）に導入されたトランスジーンはこの生物で天然には発現されないポリペプチドを発現する。「トランスジーン」はトランスジェニック生物の発生源である細胞のゲノムに安定的且つ機能的に組込まれ、トランスジェニック生物の１種以上の細胞種又は組織においてコードされる遺伝子産物の発現を誘導するＤＮＡ構築物である。
【０１１０】
「調節」及び「変調」なる用語は同義に使用し、目的分子の活性（例えばｈＩＬ−１βの生物活性）の変更又は改変を意味する。変調は目的分子の所定活性又は機能の強さの増減とすることができる。分子の典型的な活性及び機能としては限定されないが、結合特性、酵素活性、細胞受容体活性化及びシグナル伝達が挙げられる。
【０１１１】
これに対応して、「モジュレーター」なる用語は目的分子の活性又は機能（例えばｈＩＬ−１αの生物活性）を変更又は改変することが可能な化合物である。例えば、モジュレーターはモジュレーターの不在下で観察される活性又は機能の強さに比較して分子の所定活性又は機能の強さを増減させることができる。所定実施形態において、モジュレーターは分子の少なくとも１種の活性又は機能の強さを低下させる阻害剤である。典型的な阻害剤としては限定されないが、蛋白質、ペプチド、抗体、ペプチボディ、糖質又は有機小分子が挙げられる。ペプチボディは例えばＰＣＴ公開第ＷＯ０１／８３５２５号に記載されている。
【０１１２】
「アゴニスト」なる用語は目的分子と接触した場合に、アゴニストの不在下で観察される活性又は機能の強さに比較して分子の所定活性又は機能の強さを増加するモジュレーターを意味する。特定の目的アゴニストとしては限定されないが、ＩＬ−１βポリペプチド又はｈＩＬ−１βと結合するポリペプチド、核酸、糖質もしくは他の任意分子が挙げられる。
【０１１３】
「アンタゴニスト」又は「阻害剤」なる用語は目的分子と接触した場合に、アンタゴニストの不在下で観察される活性又は機能の強さに比較して分子の所定活性又は機能の強さを低下させるモジュレーターを意味する。アンタゴニストとしては、ＩＬ−１βの生物活性又は免疫活性を阻害又は変調させるものが挙げられる。ＩＬ−１βのアンタゴニスト及び阻害剤としては限定されないが、ＩＬ−１βと結合する蛋白質、核酸、糖質又は他の任意分子が挙げられる。
【０１１４】
「有効量」なる用語は障害又はその１種以上の症状の重篤度及び／又は持続期間を低減又は改善するため、障害の進行を予防するため、障害の軽減を誘導するため、障害に関連する１種以上の症状の再発、発現、発症又は進行を予防するため、障害を検出するため、あるいは別の療法（例えば予防剤又は治療剤）の予防又は治療効果を強化又は改善するために十分な療法の量を意味する。
【０１１５】
「サンプル」なる用語はその最も広義な意味で使用する。「生体サンプル」としては限定されないが、生体又はかつての生体に由来する任意量の物質が挙げられる。このような生体としては限定されないが、ヒト、マウス、ラット、サル、イヌ、ウサギ及び他の動物が挙げられる。このような物質としては限定されないが、血液、血清、尿、滑液、細胞、臓器、組織、骨髄、リンパ節及び脾臓が挙げられる。
【０１１６】
Ｉ．ヒトＩＬ−１αと結合する抗体
本発明の１態様は高い親和性でＩＬ−１βと結合し、オフ速度が低く、中和能が高い単離モノクローナル抗体又はその抗原結合部分を提供する。本発明の第２の態様はＩＬ−１βと結合するキメラ抗体を提供する。本発明の第３の態様はＩＬ−１βと結合するＣＤＲ移植抗体又はその抗原結合部分を提供する。本発明の第４の態様はＩＬ−１βと結合するヒト化抗体又はその抗原結合部分を提供する。１実施形態において、抗体又はその部分は単離抗体である。１実施形態において、本発明の抗体は中和ヒト抗ＩＬ−１β抗体である。
【０１１７】
Ａ．抗ＩＬ−１β抗体の作製方法
本発明の抗体は当分野で公知の多数の技術の任意のものにより作製することができる。
【０１１８】
１．ハイブリドーマ技術を使用した抗ＩＬ−１βモノクローナル抗体
モノクローナル抗体はハイブリドーマ技術、組換え技術及びファージディスプレイ技術又はその組合せの使用を含む当分野で公知の多様な技術を使用して作製することができる。例えば、モノクローナル抗体は例えばＨａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，２ｄ  ｅｄ．，（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，１９８８）；Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，“Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｔ−Ｃｅｌｌ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ，”Ｉｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｍｏｎｏｇｒａｐｈｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，ｖｏｌ．３（Ｊ．Ｌ．Ｔｕｒｋ，Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｅｄｉｔｏｒ）（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８１）ｐｐ．５６３−５８７に教示されている当分野で公知の技術等のハイブリドーマ技術を使用して産生させることができる。「モノクローナル抗体」なる用語はハイブリドーマ技術により産生される抗体に限定されない。「モノクローナル抗体」なる用語は任意真核、原核又はファージクローン等の単一クローンに由来する抗体を意味し、その産生方法に限定されない。
【０１１９】
ハイブリドーマ技術を使用した特定対抗体の産生及びスクリーニング方法は当分野で常法であり、周知である。１実施形態において、本発明はモノクローナル抗体の作製方法と、本発明の抗体を分泌するハイブリドーマ細胞を培養する段階を含む方法により産生された抗体を提供し、前記ハイブリドーマは本発明の抗原を免疫したマウスから単離した脾細胞を骨髄腫細胞と融合した後に、本発明のポリペプチドと結合することが可能な抗体を分泌するハイブリドーマクローンについて融合から得られたハイブリドーマをスクリーニングすることにより作製される。要約すると、マウスにＩＬ−１β抗原を免疫すればよい。特定実施形態では、免疫応答を刺激するためのアジュバントと共にＩＬ−１α抗原を投与する。このようなアジュバントとしては完全もしくは不完全フロイントアジュバント、ＲＩＢＩ（ムラミルジペプチド）又はＩＳＣＯＭ（免疫刺激複合体）が挙げられる。このようなアジュバントはポリペプチドを局所堆積層に隔離することにより迅速分散を防ぐものでもよいし、マクロファージや免疫系の他の成分に対して化学走化性の因子を分泌するように宿主を刺激する物質を含有するものでもよい。１実施形態において、ポリペプチドを投与する場合には、免疫スケジュールは数週間にわたってポリペプチドを２回以上投与する。
【０１２０】
動物にＩＬ−１β抗原を免疫後、動物から抗体及び／又は抗体産生細胞を採取することができる。動物から採血又は動物を屠殺することにより抗ＩＬ−１β抗体を含有する血清を採取する。血清は動物から採取したまま使用してもよいし、血清から免疫グロブリンフラクションを採取してもよいし、血清から抗ＩＬ−１β抗体を精製してもよい。こうして得られた血清又は免疫グロブリンはポリクローナルであるので、不均質な一連の特性をもつ。
【０１２１】
免疫応答が検出されたら（例えば抗原ＩＬ−１βに特異的な抗体がマウス血清中に検出されたら）マウス脾臓を抽出し、脾細胞を単離する。次に脾細胞を周知技術により任意の適切な骨髄腫細胞（例えばＡＴＣＣから入手可能な細胞株ＳＰ２０に由来する細胞）と融合する。ハイブリドーマを選択し、限界希釈法によりクローニングする。次に、ＩＬ−１βと結合することが可能な抗体を分泌する細胞についてハイブリドーマクローンを当分野で公知の方法によりアッセイする。陽性ハイブリドーマクローンをマウスに免疫することにより、一般に高濃度の抗体を含有する腹水を作製することができる。
【０１２２】
別の実施形態では、免疫した動物から抗体産生不死化ハイブリドーマを作製することができる。免疫後に動物を屠殺し、脾臓Ｂ細胞を当分野で周知のように不死化骨髄腫細胞と融合する。（例えばＨａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ，前出参照）。特定実施形態において、骨髄腫細胞は免疫グロブリンポリペプチドを分泌しない（非分泌型細胞株）。融合及び抗体選択後、ＩＬ−１βもしくはその一部又はＩＬ−１β発現細胞を使用してハイブリドーマをスクリーニングする。特定実施形態では、酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）又は放射免疫測定法（ＲＩＡ）を使用して初期スクリーニングを実施する。ＥＬＩＳＡスクリーニング法の１例はＰＣＴ公開第ＷＯ００／３７５０４号に記載されている。
【０１２３】
抗ＩＬ−１β抗体を産生するハイブリドーマを選択し、クローニングし、以下に詳述するように活発なハイブリドーマ増殖、高い抗体産生及び望ましい抗体特性を含む望ましい特性について更にスクリーニングする。ハイブリドーマを培養し、同系動物、免疫系を欠損する動物（例えばヌードマウス）でインビボ増殖させるか、あるいは細胞培養でインビトロ増殖させる。ハイブリドーマの選択、クローニング及び増殖方法は当業者に周知である。
【０１２４】
１実施形態において、ハイブリドーマはマウスハイブリドーマである。別の実施形態において、ハイブリドーマは非ヒト非マウス種（例えばラット、ヒツジ、ブタ、ヤギ、ウシ又はウマ）で産生される。更に別の実施形態において、ハイブリドーマは抗ＩＬ−１β抗体を発現するヒト細胞にヒト非分泌型骨髄腫を融合したヒトハイブリドーマである。
【０１２５】
特定エピトープを認識する抗体フラグメントは公知技術により作製することができる。例えば、本発明のＦａｂ及びＦ（ａｂ’）２フラグメントは（Ｆａｂフラグメントを作製するためには）パパイン又は（Ｆ（ａｂ’）２フラグメントを作製するためには）ペプシン等の酵素を使用して免疫グロブリン分子の蛋白質分解開裂により作製することができる。Ｆ（ａｂ’）２フラグメントは可変領域と、軽鎖定常領域と、重鎖のＣＨ１ドメインを含む。
【０１２６】
２．ＳＬＡＭを使用した抗ＩＬ−１βモノクローナル抗体
本発明の別の態様では、米国特許第５，６２７，０５２号、ＰＣＴ公開第ＷＯ９２／０２５５１号及びＢａｂｃｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．（１９９６）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９３：７８４３−７８４８に記載されているように、選択的リンパ球抗体法（ＳＬＡＭ）と当分野で呼ばれる手順を使用して単一単離リンパ球から組換え抗体を作製する。この方法では、抗原特異的溶血プラークアッセイを使用して目的抗体を分泌する単一細胞（例えば免疫動物に由来するリンパ球）をスクリーニングし、リンカー（例えばビオチン）を使用して抗原ＩＬ−１β又はそのフラグメントをヒツジ赤血球と共役し、これを使用してＩＬ−１βに対して特異性の抗体を分泌する単一細胞を同定する。目的の抗体分泌細胞の同定後、重鎖及び軽鎖可変領域ｃＤＮＡを逆転写酵素−ＰＣＲにより細胞からレスキューした後、これらの可変領域をＣＯＳ又はＣＨＯ細胞等の哺乳動物宿主細胞で適切な免疫グロブリン定常領域（例えばヒト定常領域）のコンテキストにおいて発現させることができる。インビボ選択したリンパ球に由来する増幅免疫グロブリン配列をトランスフェクトした宿主細胞をその後、例えばトランスフェクトした細胞をパニングすることにより更にインビトロ解析及び選択し、ＩＬ−１βに対する抗体を発現する細胞を単離することができる。増幅した免疫グロブリン配列をＰＣＴ公開第ＷＯ９７／２９１３１号及びＷＯ００／５６７７２号に記載されている方法等のインビトロ親和性成熟法等により更にインビトロ操作することができる。
【０１２７】
３．トランスジェニック動物を使用した抗ＩＬ−１βモノクローナル抗体
本発明の別の実施形態では、ヒト免疫グロブリン遺伝子座の一部又は全部を含む非ヒト動物にＩＬ−１β抗原を免疫することにより抗体を産生させる。１実施形態において、非ヒト動物はヒト免疫グロブリン遺伝子座の大きなフラグメントを含み且つマウス抗体産生を欠損する遺伝子組換えマウス系列であるＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）トランスジェニックマウスである。例えば、Ｇｒｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔ．７：１３  ２１並びに米国特許第５，９１６，７７１号；５，９３９，５９８号；５，９８５，６１５号；５，９９８，２０９号；６，０７５，１８１号；６，０９１，００１号；６，１１４，５９８号及び６，１３０，３６４号参照。更にＰＣＴ公開第ＷＯ９１／１０７４１号；ＷＯ９４／０２６０２号；ＷＯ９６／３４０９６号；ＷＯ９６／３３７３５号；ＷＯ９８／１６６５４号；ＷＯ９８／２４８９３号；ＷＯ９８／５０４３３号；ＷＯ９９／４５０３１号；ＷＯ９９／５３０４９号；ＷＯ００／０９５６０号；及びＷＯ００／３７５０４号も参照。ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）トランスジェニックマウスは完全ヒト抗体の成人様ヒトレパートリーを産生し、抗原特異的ヒトヒトモノクローナル抗体を産生する。ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）トランスジェニックマウスはヒト重鎖遺伝子座とχ軽鎖遺伝子座のメガベースサイズの生殖細胞系列構成ＹＡＣフラグメントの導入によりヒト抗体レパートリーの約８０％を含む。Ｍｅｎｄｅｚ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７）Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔ．１５：１４６−１５６及びＧｒｅｅｎ  ａｎｄ  Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ（１９９８）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８８：４８３−４９５参照。
【０１２８】
４．組換え抗体ライブラリーを使用した抗ＩＬ−１βモノクローナル抗体
抗体ライブラリーをスクリーニングして所望の結合特異性をもつ抗体を同定するインビトロ法を使用して本発明の抗体を作製することもできる。組換え抗体ライブラリーのこのようなスクリーニング方法は当分野で周知であり、例えば米国特許第５，２２３，４０９号；ＰＣＴ公開第ＷＯ９２／１８６１９号、ＷＯ９１／１７２７１号、ＷＯ９２／２０７９１号、ＷＯ９２／１５６７９号、ＷＯ９３／０１２８８号、ＷＯ９２／０１０４７号、ＷＯ９２／０９６９０号、ＷＯ９７／２９１３１号；Ｆｕｃｈｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ９：１３６９−１３７２；Ｈａｙ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｈｕｍ．Ａｎｔｉｂｏｄ．Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ  ３：８１−８５；Ｈｕｓｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４６：１２７５−１２８１；ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．（１９９０）Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２−５５４；Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）ＥＭＢＯ  Ｊ．１２：７２５−７３４；Ｈａｗｋｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２６：８８９−８９６；Ｃｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４−６２８；Ｇｒａｍ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９：３５７６−３５８０；Ｇａｒｒａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ９：１３７３−１３７７；Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１９：４１３３−４１３７；Ｂａｒｂａｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８８：７９７８−７９８２及び米国特許公開第２００３／０１８６３７４号に記載されている方法が挙げられる。
【０１２９】
組換え抗体ライブラリーはＩＬ−１β又はＩＬ−１βの一部を免疫した対象に由来することができる。あるいは、組換え抗体ライブラリーはナイーブ対象、即ちＩＬ−１βを免疫していない対象に由来するもの（例えばヒトＩＬ−１βを免疫していないヒト対象に由来するヒト抗体ライブラリー）でもよい。ヒトＩＬ−１βを含むペプチドで組換え抗体ライブラリーをスクリーニングし、ＩＬ−１βを認識する抗体を選択することにより本発明の抗体を選択する。このようなスクリーニング及び選択を実施するための方法は前段落に挙げた資料に記載されているように当分野で周知である。ｈＩＬ−１βに対する特定の結合親和性をもつ本発明の抗体（例えば特定のｋｏｆｆ速度定数でヒトＩＬ−１βから解離する抗体）を選択するためには、当分野で公知の表面プラズモン共鳴法を使用して所望のｋｏｆｆ速度定数をもつ抗体を選択することができる。ｈＩＬ−１βに対する特定の中和活性をもつ本発明の抗体（例えば特定のＩＣ５０をもつ抗体）を選択するためには、ｈＩＬ−１β活性の阻害を判定するための当分野で公知の標準方法を使用することができる。
【０１３０】
１態様において、本発明はヒトＩＬ−１βと結合する単離抗体又はその抗原結合部分に関する。特定実施形態において、抗体は中和抗体である。各種実施形態において、抗体は組換え抗体又はモノクローナル抗体である。
【０１３１】
例えば、本発明の抗体は当分野で公知の各種ファージブィスプレイ法を使用して作製することもできる。ファージディスプレイ法では、機能的抗体ドメインをコードするポリヌクレオチド配列を保持するファージ粒子表面にこれらのドメインを提示させる。特に、このようなファージを利用してレパートリー又はコンビナトリアル抗体ライブラリー（例えばヒト又はマウス）から発現される抗原結合ドメインを提示させることができる。抗原（例えば標識抗原又は固体表面もしくはビーズに固定化もしくは捕捉した抗原）を使用して、目的抗原と結合する抗原結合ドメインを発現するファージを選択又は同定することができる。これらの方法で使用されるファージは典型的にはファージ遺伝子ＩＩＩ又は遺伝子ＶＩＩＩ蛋白質と組換え融合したＦａｂ、Ｆｖ又はジスルフィド安定化Ｆｖ抗体ドメインをもつファージから発現されるｆｄ及びＭ１３結合ドメインを含む線維状ファージである。本発明の抗体を作製するために使用することができるファージディスプレイ法の例としては、Ｂｒｉｎｋｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  １８２：４１−５０；Ａｍｅｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  １８４：１７７−１８６；Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：９５２−９５８；Ｐｅｒｓｉｃ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７）Ｇｅｎｅ  １８７  ９−１８；Ｂｕｒｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ａｄｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．５７：１９１−２８０；ＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＧＢ９１／０１１３４号；ＰＣＴ公開第ＷＯ９０／０２８０９号；ＷＯ９１／１０７３７号；ＷＯ９２／０１０４７号；ＷＯ９２／１８６１９号；ＷＯ９３／１１２３６号；ＷＯ９５／１５９８２号；ＷＯ９５／２０４０１号；並びに米国特許第５，６９８，４２６号；５，２２３，４０９号；５，４０３，４８４号；５，５８０，７１７号；５，４２７，９０８号；５，７５０，７５３号；５，８２１，０４７号；５，５７１，６９８号；５，４２７，９０８号；５，５１６，６３７号；５，７８０，２２５号；５，６５８，７２７号；５，７３３，７４３号及び５，９６９，１０８号に開示されている方法が挙げられる。
【０１３２】
ファージ選択後、ファージに由来する抗体コーディグ領域を単離し、これを使用してヒト抗体又は他の任意の所望抗原結合フラグメントを含む全長抗体を作製し、例えば本願に詳述するように、哺乳動物細胞、昆虫細胞、植物細胞、酵母及び細菌等の任意の所望宿主で発現させることができる。例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ９２／２２３２４号；Ｍｕｌｌｉｎａｘ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  １２（６）：８６４−８６９；Ｓａｗａｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｐｒｏｄ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３４：２６−３４；及びＢｅｔｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４０：１０４１−１０４３に開示されている方法等の当分野で公知の方法を使用してＦａｂ、Ｆａｂ’及びＦ（ａｂ’）２フラグメントを組換え作製するための技術を利用することもできる。１本鎖Ｆｖ及び抗体を作製するために使用することができる技術の例としては、米国特許第４，９４６，７７８号及び５，２５８，４９８号；Ｈｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．２０３：４６−８８；Ｓｈｕ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：７９９５−７９９９；並びにＳｋｅｒｒａ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４０：１０３８−１０４１に記載されている技術が挙げられる。
【０１３３】
ファージディスプレイ法により組換え抗体ライブラリーをスクリーニングする代わりに、大規模コンビナトリアルライブラリーをスクリーニングするための当分野で公知の他の方法を本発明の二重特異性抗体の同定に適用することもできる。代替発現システムの１例はＰＣＴ公開第ＷＯ９８／３１７００号及びＲｏｂｅｒｔｓ  ａｎｄ  Ｓｚｏｓｔａｋ（１９９７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９４：１２２９７−１２３０２に記載されているように、組換え抗体ライブラリーをＲＮＡ−蛋白質融合体として発現させるシステムである。このシステムでは、ペプチドアクセプター抗生物質であるピューロマイシンをその３’末端に付加した合成ｍＲＮＡのインビトロ翻訳により、ｍＲＮＡとこのｍＲＮＡによりコードされるペプチド又は蛋白質の共有結合的融合体を形成する。従って、コードされるペプチド又は蛋白質（例えば抗体又はその部分）の特性（例えば二重特異性抗原と抗体又はその部分の結合）に基づいてｍＲＮＡの複雑な混合物（例えばコンビナトリアルライブラリー）から特定ｍＲＮＡを集積させることができる。このようなライブラリーのスクリーニングから回収された抗体又はその部分をコードする核酸配列を上記のような組換え手段により（例えば哺乳動物宿主細胞で）発現させることができ、更に、最初に選択した配列に突然変異を導入したｍＲＮＡ−ペプチド融合体のスクリーニングラウンドの追加又は上記のような組換え抗体の他のインビトロ親和性成熟法により更に親和性成熟させることができる。
【０１３４】
別のアプローチでは、当分野で公知の酵母ディスプレイ法を使用して本発明の抗体を作製することもできる。酵母ディスプレイ法では、遺伝子法を使用して抗体ドメインを酵母細胞壁に結合した後に酵母表面に提示させる。特に、このような酵母はレパートリー又はコンビナトリアル抗体ライブラリー（例えばヒト又はマウス）から発現される抗原結合ドメインを提示させるために利用することができる。本発明の抗体を作製するために使用することができる酵母ディスプレイ法の例としては、米国特許第６，６９９，６５８号に開示されている方法が挙げられる。
【０１３５】
Ｂ．組換えＩＬ−１β抗体の産生
本発明の抗体は当分野で公知の多数の技術の任意のものにより産生させることができる。例えば、重鎖と軽鎖をコードする発現ベクターを標準技術により宿主にトランスフェクトして宿主細胞から発現させる。「トランスフェクション」なる用語の各種語形は原核又は真核宿主細胞に外来ＤＮＡを導入するために広く使用されている多様な技術（例えばエレクトロポレーション、リン酸カルシウム共沈法、ＤＥＡＥ−デキストラントランスフェクション等）を包含するものとする。原核宿主細胞でも真核宿主細胞でも本発明の抗体を発現させることができるが、真核細胞（特に哺乳動物細胞）のほうが原核細胞よりも正しく折り畳まれた免疫学的に活性な抗体を組立・分泌し易いので、真核細胞で抗体を発現させることが好ましく、哺乳動物宿主細胞で発現させることが最も好ましい。
【０１３６】
本発明の組換え抗体を発現させるための典型的な哺乳動物宿主細胞としては、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ細胞）（例えばＫａｕｆｍａｎ  ａｎｄ  Ｓｈａｒｐ（１９８２）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５９：６０１−６２１に記載されているようなＤＨＦＲ選択マーカーと併用されるＵｒｌａｕｂ  ａｎｄ  Ｃｈａｓｉｎ，（１９８０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７７：４２１６−４２２０に記載のｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞を含む）、ＮＳ０骨髄腫細胞、ＣＯＳ細胞及びＳＰ２細胞が挙げられる。抗体遺伝子をコードする組換え発現ベクターを哺乳動物宿主細胞に導入する場合には、宿主細胞で抗体を発現させるため、又は宿主細胞を増殖させる培養培地中に抗体を分泌させるために十分な時間にわたって宿主細胞を培養することにより抗体を産生させる。標準蛋白質精製法を使用して培養培地から抗体を回収することができる。
【０１３７】
ＦａｂフラグメントやｓｃＦｖ分子等の機能的抗体フラグメントを作製するために宿主細胞を使用することもできる。当然のことながら、上記手順の変法も本発明の範囲に含まれる。例えば、本発明の抗体の軽鎖及び／又は重鎖の機能的フラグメントをコードするＤＮＡを宿主細胞にトランスフェクトすることが望ましい場合がある。目的抗原との結合に不要な軽鎖及び重鎖の一方又は両方をコードするＤＮＡの一部又は全部を除去するために組換えＤＮＡ技術を使用してもよい。このような短縮型ＤＮＡ分子から発現される分子も本発明の抗体に含まれる。更に、標準化学架橋法により本発明の抗体を第２の抗体に架橋することにより、一方の重鎖と一方の軽鎖が本発明の抗体であり、他方の重鎖と軽鎖が他のヒトＩＬ−１β抗原に特異的である二機能性抗体を作製することもできる。
【０１３８】
本発明の抗体又はその抗原結合部分の特定の組換え発現システムでは、抗体重鎖と抗体軽鎖の両者をコードする組換え発現ベクターをリン酸カルシウムトランスフェクションによりｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞に導入する。組換え発現ベクター内で、抗体重鎖及び軽鎖遺伝子は遺伝子の高レベル転写を誘導するように各々ＣＭＶエンハンサー／ＡｄＭＬＰプロモーター調節エレメントと機能的に連結されている。組換え発現ベクターは更に、メトトレキサート選択／増幅を使用してベクターをトランスフェクトしたＣＨＯ細胞の選択を可能にするＤＨＦＲ遺伝子を保持する。選択された形質転換宿主細胞を培養し、抗体重鎖及び軽鎖を発現させ、無傷の抗体を培養培地から回収する。標準分子生物学技術を使用して組換え発現ベクターを作製し、宿主細胞にトランスフェクトし、形質転換細胞を選択し、宿主細胞を培養し、培養培地から抗体を回収する。更に、本発明は本発明の組換え抗体が合成されるまで適切な培養培地で本発明の宿主細胞を培養することにより本発明の組換え抗体を合成する方法を提供する。本方法は更に培養培地から組換え抗体を単離する段階を含むことができる。
【０１３９】
１．抗ＩＬ−１β抗体
表５は本発明のマウス抗ｈＩＬ−１βモノクローナル抗体（ｍＡｂ）のＶＨ領域とＶＬ領域のアミノ酸配列を示す。
【０１４０】
【表５】
2013507929.tif 000006
【０１４１】
２．抗ＩＬ−１βキメラ抗体
キメラ抗体は抗体の異なる部分が異なる動物種に由来する分子であり、例えばマウスモノクローナル抗体に由来する可変領域とヒト免疫グロブリン定常領域をもつ抗体が挙げられる。キメラ抗体の作製方法は当分野で公知であり、下記実施例に記載する。例えば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：１２０２−１２０７；Ｏｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９８６）ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ４：２１４−２２１；Ｇｉｌｌｉｅｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  １２５：１９１−２０２；並びに米国特許第５，８０７，７１５号；４，８１６，５６７号；及び４，８１６，３９７号参照。更に、適切な抗原特異性のマウス抗体分子に由来する遺伝子を適切な生物活性のヒト抗体分子に由来する遺伝子とスプライシングすることにより「キメラ抗体」を作製するために開発された技術も使用できる（Ｍｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８１：６８５１−６８５５；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９８４）Ｎａｔｕｒｅ  ３１２：６０４−６０８；及びＴａｋｅｄａ  ｅｔ  ａｌ．（１９８５）Ｎａｔｕｒｅ  ３１４：４５２−４５４）。
【０１４２】
３．抗ＩＬ−１β  ＣＤＲ移植抗体
本発明のＣＤＲ移植抗体はヒト抗体に由来する重鎖及び軽鎖可変領域配列を含み、ＶＨ及び／又はＶＬのＣＤＲ領域の１個以上が本発明のマウス抗体のＣＤＲ配列で置換されている。任意ヒト抗体に由来するフレームワーク配列をＣＤＲ移植の鋳型として使用することができる。しかし、このようなフレームワークに直接鎖置換すると、抗原に対する結合親和性が多少低下することが多い。元のマウス抗体に対するヒト抗体の相同性が高いほど、マウスＣＤＲとヒトフレームワークの結合によりＣＤＲに歪みが導入されて親和性が低下する可能性は低くなる。従って、１実施形態において、ＣＤＲ以外のマウス可変領域フレームワークに置換するために選択されるヒト可変領域フレームワークはマウス抗体可変領域フレームワークに対して少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、約１００％の配列一致度をもつ。ＣＤＲ移植抗体の作製方法は当分野で公知であり、実施例にはこのようなＣＤＲ移植抗体のヒト化と共に詳細に記載しており（ＥＰ特許第ＥＰ  ０  ２３９  ４００号；ＰＣＴ公開第ＷＯ９１／０９９６７号；米国特許第５，２２５，５３９号；５，５３０，１０１号；及び５，５８５，０８９号も参照）、更にベニアリング又はリサーフェシング（ＥＰ特許第ＥＰ  ０  ５９２  １０６号及びＥＰ  ０  ５１９  ５９６号；Ｐａｄｌａｎ（１９９１）Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８（４／５）：４８９−４９８；Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．７（６）：８０５−８１４；Ｒｏｇｕｓｋａ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９１：９６９−９７３）やチェーンシャフリング（米国特許第５，５６５，３５２号）も記載されている。
【０１４３】
４．抗ＩＬ−１βヒト化抗体
ヒト化抗体は非ヒト種に由来する１個以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）とヒト免疫グロブリン分子に由来するフレームワーク領域をもつ抗体分子である。公知ヒトＩｇ配列は例えばｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｅｎｔｒｅｚ−／ｑｕｅｒｙ．ｆｃｇｉ；ｗｗｗ．ａｔｃｃ．ｏｒｇ／ｐｈａｇｅ／ｈｄｂ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｓｃｉｑｕｅｓｔ．ｃｏｍ／；ｗｗｗ．ａｂｃａｍ．ｃｏｍ／；ｗｗｗ．ａｎｔｉｂｏｄｙｒｅｓｏｕｒｃｅ．ｃｏｍ／ｏｎｌｉｎｅｃｏｍｐ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｐｕｂｌｉｃ．ｉａｓｔａｔｅ．ｅｄｕ／．ａｂｏｕｔ．ｐｅｄｒｏ／ｒｅｓｅａｒｃｈ＿ｔｏｏｌｓ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｍｇｅｎ．ｕｎｉ−ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ．ｄｅ／ＳＤ／ＩＴ／ＩＴ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｗｈｆｒｅｅｍａｎ．ｃｏｍ／ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ／ＣＨ−０５／ｋｕｂｙ０５．ｈｔｍ；ｗｗｗ．ｌｉｂｒａｒｙ．ｔｈｉｎｋｑｕｅｓｔ．ｏｒｇ／１２４２９／Ｉｍｍｕｎｅ／Ａｎｔｉｂｏｄｙ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｈｈｍｉ．ｏｒｇ／ｇｒａｎｔｓ／ｌｅｃｔｕｒｅｓ／１９９６／ｖｌａｂ／；ｗｗｗ．ｐａｔｈ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／．ａｂｏｕｔ．ｍｒｃ７／ｍ−ｉｋｅｉｍａｇｅｓ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ａｎｔｉｂｏｄｙｒｅｓｏｕｒｃｅ．ｃｏｍ／；ｍｃｂ．ｈａｒｖａｒｄ．ｅｄｕ／ＢｉｏＬｉｎｋｓ／Ｉｍｍｕｎｏ−ｌｏｇｙ．ｈｔｍｌ．ｗｗｗ．ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙｌｉｎｋ．ｃｏｍ／；ｐａｔｈｂｏｘ．ｗｕｓｔｌ．ｅｄｕ／．ａｂｏｕｔ．ｈｃｅｎｔｅｒ／ｉｎｄｅｘ．−ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｂｉｏｔｅｃｈ．ｕｆｌ．ｅｄｕ／．ａｂｏｕｔ．ｈｃｌ／；ｗｗｗ．ｐｅｂｉｏ．ｃｏｍ／ｐａ／３４０９１３／３４０９１３．ｈｔｍｌ−；ｗｗｗ．ｎａｌ．ｕｓｄａ．ｇｏｖ／ａｗｉｃ／ｐｕｂｓ／ａｎｔｉｂｏｄｙ／；ｗｗｗ．ｍ．ｅｈｉｍｅ−ｕ．ａｃｊｐ／．ａｂｏｕｔ．ｙａｓｕｈｉｔｏ−／Ｅｌｉｓａ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｂｉｏｄｅｓｉｇｎ．ｃｏｍ／ｔａｂｌｅ．ａｓｐ；ｗｗｗ．ｉｃｎｅｔ．ｕｋ／ａｘｐ／ｆａｃｓ／ｄａｖｉｅｓ／ｌｉｎ−ｋｓ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｂｉｏｔｅｃｈ．ｕｆｌ．ｅｄｕ／．ａｂｏｕｔ．ｆｃｃｌ／ｐｒｏｔｏｃｏｌ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｉｓａｃ−ｎｅｔ．ｏｒｇ／ｓｉｔｅｓ＿ｇｅｏ．ｈｔｍｌ；ａｘｉｍｔｌ．ｉｍｔ．ｕｎｉ−ｍａｒｂｕｒｇ．ｄｅ／．ａｂｏｕｔ．ｒｅｋ／ＡＥＰ−Ｓｔａｒｔ．ｈｔｍｌ；ｂａｓｅｒｖ．ｕｃｉ．ｋｕｎ．ｎｌ／．ａｂｏｕｔ．ｊｒａａｔｓ／ｌｉｎｋｓｌ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｒｅｃａｂ．ｕｎｉ−ｈｄ．ｄｅ／ｉｍｍｕｎｏ．ｂｍｅ．ｎｗｕ．ｅｄｕ／；ｗｗｗ．ｍｒｃ−ｃｐｅ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／ｉｍｔ−ｄｏｃ／ｐｕ−ｂｌｉｃ／ＩＮＴＲＯ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｉｂｔ．ｕｎａｍ．ｍｘ／ｖｉｒ／Ｖ＿ｍｉｃｅ．ｈｔｍｌ；ｉｍｇｔ．ｃｎｕｓｃ．ｆｒ：８１０４／；ｗｗｗ．ｂｉｏｃｈｅｍ．ｕｃｌ．ａｃ．ｕｋ／．ａｂｏｕｔ．ｍａｒｔｉｎ／ａｂｓ／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍｌ；ａｎｔｉｂｏｄｙ．ｂａｔｈ．ａｃ．ｕｋ／；ａｂｇｅｎ．ｃｖｍ．ｔａｍｕ．ｅｄｕ／ｌａｂ／ｗｗｗａｂｇｅｎ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｕｎｉｚｈ．ｃｈ／．ａｂｏｕｔ．ｈｏｎｅｇｇｅｒ／ＡＨＯｓｅｍ−ｉｎａｒ／Ｓｌｉｄｅ０１．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｃｒｙｓｔ．ｂｂｋ．ａｃ．ｕｋ／．ａｂｏｕｔ．ｕｂｃｇ０７ｓ／；ｗｗｗ．ｎｉｍｒ．ｍｒｃ．ａｃ．ｕｋ／ＣＣ／ｃｃａｅｗｇ／ｃｃａｅｗｇ．ｈｔｍ；ｗｗｗ．ｐａｔｈ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／．ａｂｏｕｔ．ｍｒｃ７／ｈ−ｕｍａｎｉｓａｔｉｏｎ／ＴＡＨＨＰ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｉｂｔ．ｕｎａｍ．ｍｘ／ｖｉｒ／ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ／ｓｔａｔ＿ａｉｍ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｂｉｏｓｃｉ．ｍｉｓｓｏｕｒｉ．ｅｄｕ／ｓｍｉｔｈｇｐ／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｃｒｙｓｔ．ｂｉｏｃ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／．ａｂｏ−ｕｔ．ｆｍｏｌｉｎａ／Ｗｅｂ−ｐａｇｅｓ／Ｐｅｐｔ／ｓｐｏｔｔｅｃｈ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｊｅｒｉｎｉ．ｄｅ／ｆｒ  ｒｏｄｕｃｔｓ．ｈｔｍ；ｗｗｗ．ｐａｔｅｎｔｓ．ｉｂｍ．ｃｏｍ／ｉｂｍ．ｈｔｍｌ．Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．Ｈｅａｌｔｈ（１９８３）に開示されている。このようなインポート配列を使用して免疫原性を低下させたり、結合、親和性、オン速度、オフ速度、アビディティ、特異性、半減期、又は当分野で公知の他の適切な任意特性を低下、増加又は改変することができる。
【０１４４】
抗原結合を改変、例えば改善するためには、ヒトフレームワーク領域のフレームワーク残基をＣＤＲドナー抗体に由来する対応する残基で置換すればよい。これらのフレームワーク置換は当分野で周知の方法により同定され、例えば抗原結合に重要なフレームワーク残基を同定するにはＣＤＲ残基とフレームワーク残基の相互作用のモデル化を使用し、特定位置の異常なフレームワーク残基を同定するには配列比較を使用する。（例えば米国特許第５，５８５，０８９号及びＲｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２７参照）。三次元免疫グロブリンモデルは広く入手可能であり、当業者に周知である。選択された候補免疫グロブリン配列の推定三次元配座構造を図解表示するコンピュータープログラムも入手可能である。これらの表示を精査すると、候補免疫グロブリン配列の機能に残基が果たす可能性のある役割を分析することができ、即ち候補免疫グロブリンがその抗原と結合する能力に影響を与える残基を分析することができる。こうして、標的抗原に対する親和性の増加等の所望抗体特性が得られるようにコンセンサス配列とインポート配列からＦＲ残基を選択し、組み合わせることができる。一般に、ＣＤＲ残基は抗原結合への影響に直接且つ最も実質的に関与している。当分野で公知の各種技術を使用して抗体をヒト化することができ、限定されないが、Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２−５２５；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：１５３４−１５３６；Ｓｉｍｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６−２３０８；Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７；Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９：４２８５−４２８９；Ｐｒｅｓｔａ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２６２３−２６３２；Ｐａｄｌａｎ（１９９１）Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８（４／５）：４８９−４９８；Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．７（６）：８０５−８１４；Ｒｏｇｕｓｋａ．ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９１：９６９−９７３；ＰＣＴ公開第ＷＯ９１／０９９６７号、ＷＯ９９／０６８３４号（ＰＣＴ／ＵＳ９８／１６２８０）、ＷＯ９７／２００３２号（ＰＣＴ／ＵＳ９６／１８９７８）、ＷＯ９２／１１２７２号（ＰＣＴ／ＵＳ９１／０９６３０）、ＷＯ９２／０３４６１号（ＰＣＴ／ＵＳ９１／０５９３９）、ＷＯ９４／１８２１９号（ＰＣＴ／ＵＳ９４／０１２３４）、ＷＯ９２／０１０４７号（ＰＣＴ／ＧＢ９１／０１１３４）、ＷＯ９３／０６２１３号（ＰＣＴ／ＧＢ９２／０１７５５）、ＷＯ９０／１４４４３号、ＷＯ９０／１４４２４号及びＷＯ９０／１４４３０号；ヨーロッパ公開第ＥＰ  ０５９２１０６号、ＥＰ  ０５１９５９６号及びＥＰ  ０２３９４００号；米国特許第５，５６５，３３２号；５，７２３，３２３号；５，９７６，８６２号；５，８２４，５１４号；５，８１７，４８３号；５，８１４，４７６号；５，７６３，１９２��；５，７２３，３２３号；５，７６６，８８６号；５，７１４，３５２号；６，２０４，０２３号；６，１８０，３７０号；５，６９３，７６２号；５，５３０，１０１号；５，５８５，０８９号；５，２２５，５３９号；及び４，８１６，５６７号に記載されている技術が挙げられる。
【０１４５】
Ｃ．抗体産生及び抗体産生細胞株
１実施形態において、本発明の抗ＩＬ−１β抗体は例えば当分野で公知の数種のインビトロ及びインビボアッセイのいずれか１種により判定した場合に、ＩＬ−１β活性を低下又は中和させる高い能力を示す。１実施形態において、本発明の抗ＩＬ−１β抗体は更にＩＬ−１β活性を低下又は中和させる高い能力を示す。
【０１４６】
特定実施形態において、単離抗体又はその抗原結合部分はヒトＩＬ−１βと結合し、前記抗体又はその抗原結合部分は表面プラズモン共鳴法により測定した場合に約０．１ｓ−１以下のｋｏｆｆ速度定数でヒトＩＬ−１βから解離するか、又は約１×１０−６Ｍ以下のＩＣ５０でヒトＩＬ−１β活性を阻害する。あるいは、抗体又はその抗原結合部分は表面プラズモン共鳴法により測定した場合に約１×１０−２ｓ−１以下のｋｏｆｆ速度定数でヒトＩＬ−１βから解離することができるか、又は約１×１０−７Ｍ以下のＩＣ５０でヒトＩＬ−１β活性を阻害することができる。あるいは、抗体又はその抗原結合部分は表面プラズモン共鳴法により測定した場合に約１×１０−３ｓ−１以下のｋｏｆｆ速度定数でヒトＩＬ−１βから解離することができるか、又は約１×１０−８Ｍ以下のＩＣ５０でヒトＩＬ−１βを阻害することができる。あるいは、抗体又はその抗原結合部分は表面プラズモン共鳴法により測定した場合に約１×１０−４ｓ−１以下のｋｏｆｆ速度定数でヒトＩＬ−１βから解離することができるか、又は約１×１０−９Ｍ以下のＩＣ５０でＩＬ−１β活性を阻害することができる。あるいは、抗体又はその抗原結合部分は表面プラズモン共鳴法により測定した場合に約１×１０−５ｓ−１以下のｋｏｆｆ速度定数でヒトＩＬ−１βから解離することができるか、又は約１×１０−１０Ｍ以下のＩＣ５０でＩＬ−１β活性を阻害することができる。あるいは、抗体又はその抗原結合部分は表面プラズモン共鳴法により測定した場合に約１×１０−５ｓ−１以下のｋｏｆｆ速度定数でヒトＩＬ−１βから解離することができるか、又は約１×１０−１１Ｍ以下のＩＣ５０でヒトＩＬ−１β活性を阻害することができる。
【０１４７】
所定実施形態において、抗体はＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＭ又はＩｇＤ定常領域等の重鎖定常領域を含む。１実施形態において、重鎖定常領域はＩｇＧ１重鎖定常領域又はＩｇＧ４重鎖定常領域である。更に、抗体はκ軽鎖定常領域又はλ軽鎖定常領域のいずれかである軽鎖定常領域を含むことができる。１実施形態において、抗体はκ軽鎖定常領域を含む。あるいは、抗原結合部分は例えばＦａｂフラグメント又は１本鎖Ｆｖフラグメントとすることができる。
【０１４８】
抗体エフェクター機能を改変するためにＦｃ部分のアミノ酸残基を置換することは当分野で公知である（米国特許第５，６４８，２６０号及び５，６２４，８２１号）。抗体のＦｃ部分は数種の重要なエフェクター機能（例えばサイトカイン誘導、抗体依存性細胞介在性細胞傷害作用（ＡＤＣＣ）、貪食作用、補体依存性細胞傷害作用（ＣＤＣ）及び抗体と抗原−抗体複合体の半減期／クリアランス率）を提供する。これらのエフェクター機能は治療目的に応じて治療用抗体に望ましい場合もあるが、不要又は有害な場合もある。所定のヒトＩｇＧアイソタイプ、特にＩｇＧ１及びＩｇＧ３は夫々ＦｃγＲ及び補体Ｃ１ｑとの結合を介してＡＤＣＣ及びＣＤＣを提供する。新生児型Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）は抗体の循環半減期を決定する必須成分である。更に別の実施形態では、抗体のエフェクター機能を改変するように、抗体の定常領域（例えば抗体のＦｃ領域）の少なくとも１個のアミノ酸を置換する。
【０１４９】
１実施形態は本発明の抗体又はその抗原結合部分を誘導体化又は別の機能的分子（例えば別のペプチド又は蛋白質）と結合した標識結合蛋白質を提供する。例えば、別の抗体（例えば二特異性抗体又はダイアボディ）、検出可能な物質、細胞傷害性物質、薬剤、及び／又は抗体もしくはその抗原結合部分と別の分子（例えばストレプトアビジンコア領域又はポリヒスチジンタグ）との結合を媒介することができる蛋白質もしくはペプチド等の１個以上の他の分子種と本発明の抗体又はその抗原結合部分を（化学的カップリング、遺伝子融合、非共有的結合又は他の方法により）機能的に連結することにより、本発明の標識結合蛋白質を誘導することができる。
【０１５０】
本発明の抗体又はその抗原結合部分を誘導体化することができる有用な検出可能な物質としては蛍光化合物が挙げられる。典型的な検出可能な蛍光物質としてはフルオレセイン、イソチオシアン酸フルオレセイン、ローダミン、５−ジメチルアミン−１−ナフタレンスルホニルクロリド、フィコエリスリン等が挙げられる。アルカリホスファターゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、グルコースオキシダーゼ等の検出可能な酵素で抗体を誘導体化することもできる。検出可能な酵素で抗体を誘導体化する場合には、検出可能な反応生成物を生成するために酵素により使用される他の試薬を加えることにより検出する。例えば、検出可能な物質として西洋ワサビペルオキシダーゼを使用する場合には、過酸化水素とジアミノベンジジンを加えると、検出可能な着色反応生成物が得られる。抗体をビオチンで誘導体化し、アビジン又はストレプトアビジン結合の間接測定により検出することもできる。
【０１５１】
本発明の別の実施形態は結晶化結合蛋白質を提供する。１実施形態において、本発明は本願に開示する全長抗ＩＬ−１β抗体及びそのフラグメントの結晶と、前記結晶を含有する製剤及び組成物に関する。１実施形態において、結晶化結合蛋白質は結合蛋白質の可溶性対応物よりもインビボ半減期が長い。別の実施形態において、結合蛋白質は結晶化後に生物活性を保持する。
【０１５２】
本発明の結晶化結合蛋白質は当分野で公知の方法に従い、ＰＣＴ公開第ＷＯ０２／７２６３６号に開示されているように作製することができる。
【０１５３】
本発明の別の実施形態は抗体又はその抗原結合部分が１個以上の糖質残基を含むグリコシル化結合蛋白質を提供する。初期インビボ蛋白質産生は更に翻訳後修飾と呼ばれるプロセシングを受ける場合がある。特に、糖質（グリコシル）残基が酵素により付加される場合があり、このプロセスをグリコシル化と言う。その結果として得られる蛋白質は共有結合したオリゴ糖側鎖をもち、グリコシル化蛋白質又は糖蛋白質と呼ばれる。蛋白質グリコシル化は目的蛋白質のアミノ酸配列と、蛋白質が発現される宿主細胞に依存する。生物によって異なるグリコシル化酵素（例えばグリコシルトランスフェラーゼやグリコシダーゼ）が産生され、利用可能な基質（例えばヌクレオチド糖）も異なる。このような因子により、蛋白質グリコシル化パターンとグリコシル残基の組成は特定蛋白質が発現される宿主系により異なる。本発明で有用なグリコシル残基としては限定されないが、グルコース、ガラクトース、マンノース、フコース、ｎ−アセチルグルコサミン及びシアル酸が挙げられる。１実施形態において、グリコシル化結合蛋白質はグリコシル化パターンがヒトであるようなグリコシル残基を含む。
【０１５４】
蛋白質グリコシル化の相違の結果、蛋白質特性が相違することは当業者に知られている。例えば、酵母等の微生物宿主で産生され、酵母内在経路を利用してグリコシル化された治療用蛋白質の効力はＣＨＯ細胞株等の哺乳動物細胞で発現される同一蛋白質の効力よりも低いと思われる。このような糖蛋白質はヒトでも免疫原性の可能性があり、投与後のインビボ半減期が短いと思われる。ヒト及び他の動物における特定受容体は特定グリコシル残基を認識し、血流からの蛋白質の迅速なクリアランスを促進する場合がある。他の有害な作用としては、蛋白質フォールディング、溶解度、プロテアーゼ感受性、トラフィキング、輸送、区画化、分泌、他の蛋白質もしくは因子による認識、抗原性又はアレルゲン性の変化が挙げられる。従って、医師は特定のグリコシル化組成及びパターン（例えばヒト細胞又は所期対象動物の種特異的細胞で産生されるものと同一又は少なくとも同様のグリコシル化組成及びパターン）をもつ治療用蛋白質を選択すると思われる。
【０１５５】
異種グリコシル化酵素を発現するように宿主細胞を遺伝子改変することにより、宿主細胞と異なるグリコシル化蛋白質を発現させることができる。当分野で公知の技術を使用して医師はヒト蛋白質グリコシル化を示す抗体又はその抗原結合部分を作製することができる。例えば、酵母株で産生されるグリコシル化蛋白質（糖蛋白質）が動物細胞、特にヒト細胞と同一の蛋白質グリコシル化を示すように、非天然グリコシル化酵素を発現するように酵母株が遺伝子改変されている（米国特許第７，４４９，３０８号及び７，０２９，８７２号）。
【０１５６】
更に、当業者に自明の通り、ライブラリーのメンバー宿主細胞が変異グリコシル化パターンをもつ目的蛋白質を産生するように、各種グリコシル化酵素を発現するように遺伝子改変した宿主細胞ライブラリーを使用して目的蛋白質を発現させることもできる。その後、医師は特定の新規グリコシル化パターンをもつ目的蛋白質を選択・単離することができる。１実施形態において、特に選択された新規グリコシル化パターンをもつ蛋白質は生物学的性質が改善又は改変されている。
【０１５７】
Ｄ．抗ＩＬ−１β抗体の使用
本発明の結合抗体（例えば抗ＩＬ−１β抗体）及びその抗原結合部分はヒトＩＬ−１βと結合することができるので、当分野で入手可能な多様な抗体系免疫検出システムの任意のものを使用して（例えば全血、血清、血漿、尿、唾液、組織サンプル等の生体サンプル中で）ＩＬ−１βを検出するために使用することができる。このような免疫検出システムとしては、限定されないが、免疫沈降法、イムノブロッティング（ウェスタンブロット）、酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）、放射免疫測定法（ＲＩＡ）、組織免疫組織化学法、表面プラズモン共鳴法（ＳＰＲ）、サンドイッチイムノアッセイ、抗体系アフィニティー法（例えばアフィニティービーズ、アフィニティーカラム）、免疫競合アッセイ、イムノチップアッセイ（結合蛋白質をシリコンチップに固定化）、及び蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）が挙げられる。所定の免疫検出システムでは、固定化した結合蛋白質が特定の免疫検出システムで使用中にヒトＩＬ−１βと結合するその能力を保持するように、抗体分子を固体支持体に固定化するために当分野で利用可能な方法を使用して本発明のＩＬ−１β結合蛋白質（又はその結合部分）（又はその部分）を固体支持体に固定化する。このような固体支持体としては、限定されないが、セルロース濾紙（例えばセルロース、ニトロセルロース、酢酸セルロース）、ナイロンフィルター、プラスチック表面（例えばマイクロタイタープレート、抗体ディップスティック）、ガラス支持体（例えばフィルター、ビーズ、スライド、グラスウール）、ポリマー粒子（例えばアガロース、ポリアクリルアミド）及びシリコンチップが挙げられる。例えば、インビトロサンプル（例えば全血、血清、血漿、組織、尿、唾液、組織生検等の生体サンプル）中のＩＬ−１βの存在の検出方法で免疫検出システムを使用することができる。このような方法は疾患又は障害（例えば免疫細胞関連障害）を診断するために使用することができる。前記方法は、（ｉ）試験サンプル又は対照サンプルを本願に記載するＩＬ−１β結合蛋白質又はそのＩＬ−１β結合部分と接触させる段階と；（ｉｉ）試験サンプル又は対照サンプル中で抗ＩＬ−１β結合蛋白質（又はその結合部分）とＩＬ−１βの複合体の形成を検出し、対照サンプル中に比較して（又は初期時点で採取した別の試験サンプル中の複合体の形成に比較して）試験サンプル中の複合体の形成が統計的に有意に変化した場合には、サンプル中にＩＬ−１βが存在すると判定する段階を含む。
【０１５８】
別の例として、インビボでのヒトＩＬ−１βの存在の検出（例えば対象におけるインビボイメージング）方法を使用することができる。前記方法は疾患又は障害（例えばＩＬ−１β関連障害）を診断するために使用することができる。前記方法は、（ｉ）本願に記載するＩＬ−１β結合蛋白質又はそのＩＬ−１β結合部分をＩＬ−１βと結合させる条件下で前記結合蛋白質又はそのＩＬ−１β結合部分を試験被験者又は対照被験者に投与する段階と；（ｉｉ）結合蛋白質又はその結合部分とＩＬ−１βの複合体の形成を検出し、試験被験者における複合体の形成が対照被験者又は初期時点の試験被験者における複合体の形成に比較して統計的に有意に変化した場合には、ＩＬ−１βが存在すると判定する段階を含む。
【０１５９】
本発明によるサンプル（例えば生体サンプル）中のＩＬ−１βの検出方法は、サンプルを本願に記載するＩＬ−１β結合蛋白質（又はそのＩＬ−１β結合部分）と接触させる段階と、ＩＬ−１βに結合した結合蛋白質（又はその結合部分）又は結合していない結合蛋白質（又は結合していないその結合部分）を検出することにより、サンプル中のＩＬ−１βを検出する段階を含む。結合した結合蛋白質又は結合していない結合蛋白質（又はその部分）の検出を容易にするために結合蛋白質（又はその部分）を検出可能な物質で直接又は間接的に標識する。このような検出可能な物質は当分野で公知であり、非限定的な例として、各種酵素、補欠分子族、蛍光材料、発光材料及び放射性材料が挙げられる。適切な酵素の例としては西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ又はアセチルコリンエステラーゼが挙げられる。適切な補欠分子族複合体の例としてはストレプトアビジン／ビオチンとアビジン／ビオチンが挙げられる。適切な蛍光材料の例としてはウンベリフェロン、フルオレセイン、イソチオシアン酸フルオレセイン、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、ダンシルクロリド又はフィコエリスリンが挙げられる。発光材料の１例としてはルミノールが挙げられる。適切な放射性材料の例としては放射性同位体３Ｈ、１４Ｃ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１７７Ｌｕ、１６６Ｈｏ及び１５３Ｓｍが挙げられる。
【０１６０】
抗体を標識する代わりに、検出可能な物質で標識した組換えヒト（ｒｈ）ＩＬ−１β標準と未標識ＩＬ−１β結合蛋白質（又はそのＩＬ−１β結合部分）を利用する競合イムノアッセイによりサンプル（例えば生物体液）中でヒトＩＬ−１βをアッセイすることもできる。このアッセイでは、サンプルと標識ｒｈＩＬ−１β標準とＩＬ−１β結合蛋白質を混合し、未標識結合蛋白質に結合した標識ｒｈＩＬ−１β標準の量を測定する。サンプル中のヒトＩＬ−１βの量はＩＬ−１β結合蛋白質に結合した標識ｒｈＩＬ−１β標準の量に反比例する。同様に、検出可能な物質で標識したｒｈＩＬ−１β標準と本願に記載する未標識ＩＬ−１β結合蛋白質を利用する競合イムノアッセイによりサンプル中でヒトＩＬ−１βをアッセイすることもできる。
【０１６１】
１実施形態において、本発明のＩＬ−１β結合蛋白質とそのＩＬ−１β結合部分はインビトロ及びインビボの両者でＩＬ−１β活性を中和させることができる。従って、本発明のこのような結合蛋白質とそのＩＬ−１β結合部分は、例えばＩＬ−１βを含有する細胞培養液や、本発明の結合蛋白質と交差反応するＩＬ−１βをもつヒト対象又は他の哺乳動物対象においてＩＬ−１β活性を阻害するために使用することができる。１実施形態において、本発明はＩＬ−１β活性の阻害方法として、ＩＬ−１β活性を阻害するようにＩＬ−１βを本発明の結合蛋白質又はその結合部分と接触させる段階を含む方法を提供する。例えば、ＩＬ−１βを含有するか又は含有する疑いのある細胞培養液において、培養液中のＩＬ−１β活性を阻害するために本発明の結合蛋白質（又はその結合部分）を培養培地に添加することができる。
【０１６２】
別の実施形態において、本発明は対象、有利にはＩＬ−１β活性が有害である疾患又は障害に罹患した対象におけるＩＬ−１β活性を低下させる方法を提供する。本発明は前記疾患又は障害に罹患した対象におけるＩＬ−１β活性を低下させる方法として、対象におけるＩＬ−１β活性を低下させるように本発明の結合蛋白質又はその抗原結合部分を対象に投与する段階を含む方法を提供する。１実施形態において、ＩＬ−１βはヒトＩＬ−１βであり、対象はヒト対象である。あるいは、対象は本発明の結合蛋白質が結合することができるＩＬ−１βを発現する哺乳動物でもよい。更に、対象は（例えばＩＬ−１βの投与又はＩＬ−１βトランスジーンの発現により）ＩＬ−１βを導入した哺乳動物でもよい。本発明の結合蛋白質は治療目的でヒト対象に投与することができる。更に、本発明の結合蛋白質は結合蛋白質が獣医学的目的のため又はヒト疾患の動物モデルとして結合することができるＩＬ−１βを発現する非ヒト哺乳動物に投与することもできる。後者に関して、このような動物モデルは本発明の抗体の治療効力の評価（例えば投与量及び投与時間の試験）に有用であると思われる。
【０１６３】
「ＩＬ−１β活性が有害である障害」なる用語はこの障害に罹患した対象におけるＩＬ−１βの存在が障害の病態生理の原因であるか又は障害の増悪に寄与する因子であることが分かっているか又はその疑いのある疾患及び他の障害を包含する。従って、ＩＬ−１β活性が有害である障害はＩＬ−１β活性の低下が障害の症状及び／又は進行を緩和すると予想される障害である。このような障害は例えば障害に罹患した対象の体液中のＩＬ−１β濃度の上昇（例えば対象の血清、血漿、滑液等におけるＩＬ−１β濃度の上昇）により判断することができ、例えば上記のような抗ＩＬ−１β結合蛋白質を使用して検出することができる。本発明の結合蛋白質で治療することができる障害の非限定的な例としては、本発明の結合蛋白質の医薬組成物に関する下記セクションに記載する障害が挙げられる。
【０１６４】
Ｅ．医薬組成物
本発明は本発明の結合蛋白質（例えば抗体又はその抗原結合部分）と医薬的に許容可能な担体を含有する医薬組成物も提供する。本発明の結合蛋白質を含有する医薬組成物は限定されないが、障害の診断、検出もしくは監視、障害もしくはその１種以上の症状の予防、治療、抑制、管理もしくは改善、及び／又は研究に利用される。特定実施形態において、組成物は１種以上の本発明の結合抗体を含有する。別の実施形態において、医薬組成物は１種以上の本発明の結合蛋白質と、ＩＬ−１β活性が有害である障害を治療するための１種以上の本発明の結合蛋白質以外の１種以上の予防剤又は治療剤を含有する。特に、予防剤又は治療剤は障害又はその１種以上の症状の予防、治療、管理又は改善に有用であることが知られているか又は従来からもしくは現在使用されているものとする。これらの実施形態によると、組成物は更に担体、希釈剤又は賦形剤から構成することができる。
【０１６５】
本発明の結合蛋白質は対象に投与するのに適した医薬組成物に配合することができる。典型的には、医薬組成物は本発明の結合蛋白質（例えば抗体又はその抗原結合部分）と医薬的に許容可能な担体を含有する。「医薬的に許容可能な担体」なる用語は生理的に適合可能な全溶媒、分散媒、コーティング、抗細菌剤及び抗真菌剤、等張剤及び吸収遅延剤等を包含する。医薬的に許容可能な担体の例としては水、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノール等の１種以上とその組み合わせが挙げられる。例えば糖類、多価アルコール（例えばマンニトール、ソルビトール）、又は塩化ナトリウム等の等張剤を組成物に加えることが好ましい場合もある。医薬的に許容可能な担体としては更に抗体又はその抗原結合部分の保存期間又は効力を増す微量の助剤（例えば湿潤剤、乳化剤、防腐剤又は緩衝剤）も挙げられる。
【０１６６】
各種送達システムが公知であり、１種以上の本発明の結合蛋白質あるいは１種以上の本発明の抗体と障害又はその１種以上の症状を予防、管理、治療又は改善するために有用な予防剤又は治療剤の併用剤を投与するために使用することができ、例えばリポソーム、微粒子、マイクロカプセル封入、抗体又は抗体フラグメントを発現することが可能な組換え細胞、受容体介在型エンドサイトーシス（例えばＷｕ  ａｎｄ  Ｗｕ（１９８７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：４４２９−４４３２参照）、レトロウイルス又は他のベクターの一部としての核酸の構築等が挙げられる。本発明の予防剤又は治療剤の投与方法としては限定されないが、非経口投与（例えば皮内、筋肉内、腹膜内、静脈内及び皮下）、硬膜外投与、腫瘍内投与及び粘膜投与（例えば鼻腔内及び経口経路）が挙げられる。更に、例えばインヘラー又はネブライザーの使用やエアロゾル化剤の配合により、肺投与を利用することもできる。例えば米国特許第６，０１９，９６８号；５，９８５，３２０号；５，９８５，３０９号；５，９３４，２７２号；５，８７４，０６４号；５，８５５，９１３号；５，２９０，５４０号；及び４，８８０，０７８号；並びにＰＣＴ公開第ＷＯ９２／１９２４４号；ＷＯ９７／３２５７２号；ＷＯ９７／４４０１３号；ＷＯ９８／３１３４６号；及びＷＯ９９／６６９０３号参照。１実施形態では、Ａｌｋｅｒｍｅｓ  ＡＩＲ（登録商標）薬物肺送達技術（Ａｌｋｅｒｍｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ）を使用して本発明の結合蛋白質、併用療法剤又は本発明の組成物を投与する。予防剤又は治療剤は任意の適切な経路、例えば輸液又はボーラス注射、上皮又は皮膚粘膜内壁（例えば口腔粘膜、直腸及び腸粘膜等）吸収により投与することができ、他の生物活性剤と共に投与することができる。投与は全身でも局所でもよい。
【０１６７】
特定実施形態では、処置を必要とする領域に本発明の予防剤又は治療剤を例えば局所輸液、注射又はインプラントにより局所投与することが望ましい場合がある。インプラントは多孔性材料でも無孔性材料でもよく、例えばシラスチック膜、ポリマー、繊維性マトリックス（例えばＴＩＳＳＵＥＬ（登録商標））又はコラーゲンマトリックス等の膜及びマトリックスが挙げられる。１実施形態では、障害又はその症状を予防、治療、管理及び／又は改善するために有効量の１種以上の本発明の抗体であるアンタゴニストを対象の患部に局所投与する。別の実施形態では、障害又はその１種以上の症状を予防、治療、管理及び／又は改善するために有効量の１種以上の本発明の抗体を本発明の結合蛋白質以外の有効量の１種以上の療法（例えば１種以上の予防剤又は治療剤）と患部に局所併用投与する。
【０１６８】
別の実施形態では、予防剤又は治療剤を制御放出又は持続放出システムで送達することができる。１実施形態では、制御又は持続放出を実現するためにポンプを使用することができる（Ｌａｎｇｅｒ（１９９０）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：１５２７−１５３３；Ｓｅｆｔｏｎ（１９８７）ＣＲＣ  Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｅｎｇ．１４：２０１−２４０；Ｂｕｃｈｗａｌｄ  ｅｔ  ａｌ．（１９８０）Ｓｕｒｇｅｒｙ  ８８：５０７−５１６；Ｓａｕｄｅｋ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９）Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３２１：５７４−５７９参照）。別の実施形態では、本発明の療法剤の制御又は持続放出を実現するためにポリマー材料を使用することができる（例えばＭｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，（Ｌａｎｇｅｒ  ａｎｄ  Ｗｉｓｅ，ｅｄｓ．）（ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，１９８４）；Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ，Ｄｒｕｇ  Ｐｒｏｄｕｃｔ  Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ，（Ｓｍｏｌｅｎ  ａｎｄ  Ｂａｌｌ，ｅｄｓ．）（Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８４）；Ｌａｎｇｅｒ  ａｎｄ  Ｐｅｐｐａｓ（１９８３）Ｊ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｓｃｉ．Ｒｅｖ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．Ｐｈｙｓ．Ｃ２３：６１−１２６参照；更にＬｅｖｙ  ｅｔ  ａｌ．（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２８：１９０−１９２；Ｄｕｒｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９）Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．２５：３５１−３５６；Ｈｏｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．７１：１０５−１１２）；米国特許第５，６７９，３７７号；５，９１６，５９７号；５，９１２，０１５号；５，９８９，４６３号；及び５，１２８，３２６号；並びにＰＣＴ公開第ＷＯ９９／１５１５４号及びＷＯ９９／２０２５３号も参照）。持続放出製剤で使用されるポリマーの例としては限定されないが、ポリ（２−ヒドロキシエチルメタクリレート）、ポリ（メチルメタクリレート）、ポリ（アクリル酸）、ポリ（エチレン・酢酸ビニルコポリマー）、ポリ（メタクリル酸）、ポリグリコリド（ＰＬＧ）、ポリ酸無水物、ポリ（Ｎ−ビニルピロリドン）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリアクリルアミド、ポリ（エチレングリコール）、ポリラクチド（ＰＬＡ）、ポリ（ラクチド・グリコリドコポリマー）（ＰＬＧＡ）及びポリオルトエステルが挙げられる。１実施形態において、持続放出製剤で使用されるポリマーは不活性であり、浸出性不純物を含まず、保存安定性であり、無菌であり、生分解性である。更に別の実施形態では、制御又は持続放出システムを予防又は治療ターゲットに近接配置し、全身投与量のごく一部で済ますことができる（例えば、Ｇｏｏｄｓｏｎ，Ｊ．Ｍ．，Ｃｈａｐｔｅｒ  ６，Ｉｎ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，Ｖｏｌ．ＩＩ，Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ，（Ｌａｎｇｅｒ  ａｎｄ  Ｗｉｓｅ，ｅｄｓ．）（ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，１９８４），ｐｐ．１１５−１３８参照）。
【０１６９】
制御放出システムはＬａｎｇｅｒ（１９９０）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：１５２７−１５３３に記載されている。１種以上の本発明の治療剤を含有する持続放出製剤を製造するためには、当業者に公知の任意技術を使用することができる。例えば米国特許第４，５２６，９３８号；ＰＣＴ公開第ＷＯ９１／０５５４８号及びＷＯ９６／２０６９８号；並びにＮｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（１９９６）Ｒａｄｉｏｔｈｅｒ．Ｏｎｃｏｌ．３９：１７９−１８９；Ｓｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（１９９６）ＰＤＡ  Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．５０：３７２−３７７；Ｃｌｅｅｋ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７）Ｐｒｏｃｅｅｄ  Ｉｎｔ’ｌ．Ｓｙｍｐ．Ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｒｅｌ．Ｂｉｏａｃｔ．Ｍａｔｅｒ．２４：８５３−８５４；及びＬａｍ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７）Ｐｒｏｃｅｅｄ．Ｉｎｔ’ｌ．Ｓｙｍｐ．Ｃｏｎｔｒｏｌ  Ｒｅｌ．Ｂｉｏａｃｔ．Ｍａｔｅｒ．２４：７５９−７６０参照。
【０１７０】
本発明の組成物が予防剤又は治療剤をコードする核酸である特定実施形態では、適切な核酸発現ベクターの一部として核酸を構築し、例えばレトロウイルスベクターの使用（米国特許第４，９８０，２８６号参照）、又は直接注射、又は微粒子撃ち込みの使用（例えば遺伝子銃；Ｂｉｏｌｉｓｔｉｃ，Ｄｕｐｏｎｔ）、又は脂質もしくは細胞表面受容体もしくはトランスフェクト剤のコーティングにより細胞内に取込むように投与するか、あるいは核に侵入することが知られているホメオボックス様ペプチドに結合して投与することにより、核酸によりコードされる予防剤又は治療剤の発現を促進するように核酸をインビボ投与することができる（例えばＪｏｌｉｏｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８８：１８６４−１８６８参照）。あるいは、核酸を細胞内に導入し、相同組換えにより発現させるために宿主細胞ＤＮＡ内に組込むこともできる。
【０１７１】
本発明の医薬組成物はその所期投与経路に適合可能に製剤化される。投与経路の例としては限定されないが、非経口（例えば静脈内、皮内、皮下）、経口、鼻腔内（例えば吸入）、経皮（例えば局所）、経粘膜及び直腸投与が挙げられる。特定実施形態において、組成物はヒトに静脈内、皮下、筋肉内、経口、鼻腔内又は局所投与するのに適した医薬組成物として常法に従って製剤化される。典型的には、静脈内投与用組成物は滅菌等張水性緩衝液に溶解した溶液である。必要に応じて、溶解補助剤や、注射部位の痛みを緩和するための局所麻酔剤（例えばリドカイン）を組成物に更に添加してもよい。
【０１７２】
本発明の組成物を局所投与する場合には、組成物は軟膏、クリーム、経皮パッチ、ローション、ジェル、シャンプー、スプレー、エアゾール、溶液、エマルション又は当業者に周知の他の剤形に製剤化することができる。例えばＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ａｎｄ  Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ，１９ｔｈ  ｅｄ．，（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ，１９９５）参照。非スプレー型の局所剤形には、局所塗布に適合可能な担体又は１種以上の賦形剤を含有しており、好ましくは水よりも動粘度の高い粘性〜半固体又は固体剤形が典型的に利用される。他の適切な製剤としては限定されないが、懸濁液剤、散剤、リニメント剤、膏剤等が挙げられる。１実施形態では、このような製剤を滅菌するか又は各種性質（例えば浸透圧）に影響を与えるための助剤（例えば防腐剤、安定剤、湿潤剤、緩衝剤又は塩）と混合する。他の適切な局所剤形としては、活性成分を例えば固体又は液体不活性担体と共に加圧揮発性物質（例えばＦＲＥＯＮ（登録商標）等のガス噴射剤）との混合物又はスクイーズボトルにパッケージングしたスプレー型エアゾール製剤が挙げられる。所望により、モイスチャライザーやヒューメクタントも医薬組成物及び製剤に添加してもよい。このような補助成分の例は当分野で周知である。
【０１７３】
本発明の方法が組成物の鼻腔内投与を含む場合には、組成物はエアゾール形態、スプレー、ミスト又は滴剤として製剤化することができる。特に、本発明に従って使用する予防剤又は治療剤は適切な噴射剤（例えばジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素又は他の適切なガス）を利用して加圧パック又はネブライザーからエアゾールスプレー製剤として簡便に送達することができる。加圧エアゾールの場合には、一定量を送達するためのバルブを配置することにより用量単位を定量することができる。化合物と適切な粉末基剤（例えばラクトースや澱粉）の粉末混合物を充填したインヘラー又はインサフレーター用の（例えばゼラチンから構成される）カプセル及びカートリッジとして製剤化することもできる。
【０１７４】
本発明の方法が経口投与を含む場合には、錠剤、カプセル剤、カシェ剤、ゲルカップ剤、溶液剤、懸濁液剤等の剤形に組成物を経口製剤化することができる。錠剤又はカプセル剤は結合剤（例えばプレゲル化トウモロコシ澱粉、ポリビニルピロリドン又はヒドロキシプロピルメチルセルロース）、増量剤（例えばラクトース、微結晶セルロース又はリン酸水素カルシウム）、ジャガイモ澱粉又は繊維素グリコール酸ナトリウム）、又は湿潤剤（例えばラウリル硫酸ナトリウム）等の医薬的に許容可能な賦形剤と共に慣用手段により製造することができる。錠剤は当分野で周知の方法によりコーティングしてもよい。経口投与用液体製剤は限定されないが、溶液剤、シロップ剤又は懸濁液剤の形態をとることができ、あるいは使用前に水又は他の適切な溶媒で再構成する乾燥製剤の形態でもよい。このような液体製剤は懸濁剤（例えばソルビトールシロップ、セルロース誘導体又は水素化食用脂肪）、乳化剤（例えばレシチン又はアラビアガム）、非水性溶媒（例えばアーモンド油、油性エステル、エチルアルコール又は分留植物油）、及び防腐剤（例えばｐ−ヒドロキシ安息香酸メチル、ｐ−ヒドロキシ安息香酸プロピル又はソルビン酸）等の医薬的に許容可能な助剤と共に慣用手段により製造することができる。製剤には更に緩衝塩類、香味剤、着色剤及び甘味剤を適宜添加してもよい。経口投与用製剤は予防剤又は治療剤を遅延放出、制御放出又は持続放出するように製剤化すると適切な場合がある。
【０１７５】
本発明の方法は例えばインヘラー又はネブライザー、エアロゾル化剤を配合した組成物の使用による肺投与を含むことができる。例えば米国特許第６，０１９，９６８号；５，９８５，３２０号；５，９８５，３０９号；５，９３４，２７２号；５，８７４，０６４号；５，８５５，９１３号；５，２９０，５４０号；及び４，８８０，０７８号；並びにＰＣＴ公開第ＷＯ９２／１９２４４号、ＷＯ９７／３２５７２号、ＷＯ９７／４４０１３号、ＷＯ９８／３１３４６号及びＷＯ９９／６６９０３号参照。特定実施形態では、Ａｌｋｅｒｍｅｓ  ＡＩＲ（登録商標）薬物肺送達技術（Ａｌｋｅｒｍｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ）を使用して本発明の抗体、併用療法剤及び／又は本発明の組成物を投与する。
【０１７６】
本発明の方法は（例えばボーラス注射又は連続輸液による）注射による非経口投与用に製剤化された組成物の投与を含むことができる。注射用製剤は防腐剤を添加した単位用量形態（例えばアンプル又はマルチドーズ容器）とすることができる。組成物は油性又は水性媒体中の懸濁液、溶液又はエマルション等の形態をとることができ、懸濁剤、安定剤及び／又は分散剤等の助剤を添加することができる。あるいは、活性成分は使用前に適切な溶媒（例えば滅菌パイロジェンフリー水）で再構成する粉末状でもよい。
【０１７７】
本発明の方法は更にデポー製剤として製剤化された組成物の投与も含むことができる。このような長時間作用型製剤は（例えば皮下又は筋肉内）移植又は筋肉内注射により投与することができる。従って、例えば、組成物は（例えば許容可能な油中のエマルションとして）適切なポリマーもしくは疎水性材料又はイオン交換樹脂を使用して製剤化してもよいし、難溶性誘導体として（例えば難溶性塩として）製剤化してもよい。
【０１７８】
本発明の方法は中性又は塩形態として製剤化された組成物の投与を含む。医薬的に許容可能な塩としては塩酸、リン酸、酢酸、蓚酸、酒石酸等から誘導される塩等のアニオンと共に形成される塩と、ナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、水酸化第２鉄、イソプロピルアミン、トリエチルアミン、２−エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカイン等から誘導される塩等のカチオンと共に形成される塩が挙げられる。
【０１７９】
一般に、組成物の成分は単位用量形態（例えば活性剤の量を指示するアンプル又はサシェット等の密封容器に収容した乾燥凍結乾燥粉末又は無水濃縮物）で別々又は混合物として提供される。投与方法が輸液の場合には、滅菌医薬グレード水又は生理食塩水を充填した輸液ボトルにより組成物を分配することができる。投与方法が注射の場合には、成分を投与前に混合できるように注射用滅菌水又は生理食塩水のアンプルを提供することができる。
【０１８０】
特に、本発明は薬剤の量を指示するアンプル又はサシェット等の密封容器に本発明の予防剤又は治療剤又は医薬組成物の１種以上をパッケージングすることも提案する。１実施形態では、密封容器に収容した乾燥滅菌凍結乾燥粉末又は無水濃縮物として本発明の予防剤又は治療剤又は医薬組成物の１種以上を提供し、対象に投与するのに適した濃度まで（例えば水又は生理食塩水で）再構成することができる。１実施形態では、密封容器に収容した乾燥滅菌凍結乾燥粉末として本発明の予防剤又は治療剤又は医薬組成物の１種以上を少なくとも５ｍｇ、少なくとも約１０ｍｇ、少なくとも約１５ｍｇ、少なくとも約２５ｍｇ、少なくとも約３５ｍｇ、少なくとも約４５ｍｇ、少なくとも約５０ｍｇ、少なくとも約７５ｍｇ、又は少なくとも約１００ｍｇの単位用量で提供する。本発明の凍結乾燥予防剤又は治療剤又は医薬組成物はその当初の容器に約２℃〜約８℃で保存すべきであり、本発明の予防剤又は治療剤又は医薬組成物は再構成後１週間以内、５日以内、７２時間以内、４８時間以内、２４時間以内、１２時間以内、６時間以内、５時間以内、３時間以内、又は１時間以内に投与すべきである。代替実施形態では、薬剤の量と濃度を指示する密封容器に本発明の予防剤又は治療剤又は医薬組成物の１種以上を液体形態で提供する。１実施形態では、投与する組成物の液体形態を密封容器に少なくとも約０．２５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約０．５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約２．５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約８ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約２５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約５０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約７５ｍｇ／ｍｌ又は少なくとも約１００ｍｇ／ｍｌで提供する。液体形態はその当初の容器に約２℃〜約８℃で保存すべきである。
【０１８１】
本発明の結合蛋白質は非経口投与に適した医薬組成物に配合することができる。１態様では、抗体約０．１〜約２５０ｍｇ／ｍｌを含有する注射溶液として結合蛋白質を製造する。注射溶液はフリント又はアンバーバイアル、アンプル又はプレフィルドシリンジに収容した液体又は凍結乾燥剤形から構成することができる。緩衝液はＬ−ヒスチジン（約１〜約５０ｍＭ）とすることができ、最適値約５〜約１０ｍＭ，ｐＨ５．０〜７．０（最適値約ｐＨ６．０）とすることができる。他の適切な緩衝液としては限定されないが、琥珀酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、リン酸ナトリウム又はリン酸カリウムが挙げられる。約０〜約３００ｍＭ（例えば液体剤形では約１５０ｍＭ）の濃度の溶液の毒性を調節するためには塩化ナトリウムを使用することができる。凍結乾燥剤形には凍害保護剤として主に約０〜約１０％スクロース（例えば約０．５〜約１．０％）を添加することができる。他の適切な凍害保護剤としてはトレハロースとラクトースが挙げられる。凍結乾燥剤形にはバルク剤として主に約１〜約１０％マンニトール（例えば約２〜約４％）を添加することができる。液体及び凍結乾燥剤形の両者で安定剤として主に約１〜約５０ｍＭ  Ｌ−メチオニン（最適値約５〜約１０ｍＭ）を使用することができる。他の適切なバルク剤としてはグリシン、アルギニンが挙げられ、約０〜約０．０５％ポリソルベート８０（最適値約０．００５〜約０．０１％）として添加することができる。その他の界面活性剤としては限定されないが、ポリソルベート２０及びＢＲＩＪ界面活性剤が挙げられる。
【０１８２】
本発明の組成物は各種形態を取ることができる。これらの形態としては、例えば液体、半固体及び固体剤形が挙げられ、例えば溶液剤（例えば注射溶液及び輸液溶液）、分散液剤、懸濁液剤、錠剤、ピル、散剤、リポソーム及び座剤が挙げられる。特定剤形は所期投与方法及び治療用途により異なる。典型的な組成物は他の抗体をヒトに受動免疫するために使用されている組成物と同様の組成物等の注射溶液又は輸液溶液の形態である。投与方法は非経口投与（例えば静脈内、皮下、腹膜内、筋肉内）である。１実施形態では、静脈内輸液又は注射により抗体を投与する。別の実施形態では、筋肉内又は皮下注射により抗体を投与する。
【０１８３】
治療用組成物は典型的には製造及び保存条件下で無菌安定でなければならない。組成物は溶液、マイクロエマルション、分散液、リポソーム、又は高薬剤濃度に適した他の注文構造として製剤化することができる。滅菌注射溶液は必要量の活性化合物（例えば抗体又はその抗原結合部分）を必要に応じて上記成分の１種又はその組み合わせと共に適切な溶媒に加えた後に濾過滅菌することにより製造することができる。一般に、分散液は塩基性分散媒と上記から選択される必要な他の成分を含有する滅菌媒体に活性化合物を加えることにより製造される。滅菌注射溶液の調製用滅菌凍結乾燥粉末の場合には、典型的な製造方法は真空乾燥と噴霧乾燥であり、活性成分と乾燥前の滅菌濾過溶液からの任意の他の所望成分の粉末を得る。例えばレシチン等のコーティングの使用、分散液の場合には必要な粒度の維持及び界面活性剤の使用により、溶液の適正な流動性を維持することができる。吸収を遅らせる物質（例えばモノステアリン酸塩やゼラチン）を組成物に加えることにより、注射用組成物の長期吸収を実現できる。
【０１８４】
本発明の結合蛋白質は当分野で公知の各種方法により投与することができるが、多くの治療用途に典型的な投与経路／方法は皮下注射、静脈内注射又は輸液である。当業者に自明の通り、投与経路及び／又は方法は所望結果により異なる。所定実施形態では、化合物の迅速な放出を防止する担体を活性化合物に配合することができ、例えばインプラント、経皮パッチ及びマイクロカプセル送達システム等の制御放出製剤が挙げられる。エチレン酢酸ビニル、ポリ酸無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル及びポリ乳酸等の生分解性生体適合性ポリマーを使用することができる。このような製剤の多数の製造方法が特許登録されており、あるいは一般に当業者に公知である。例えば、Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ  ａｎｄ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｊ．Ｒ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，ｅｄ．，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９７８参照。
【０１８５】
所定実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合部分を例えば不活性希釈剤又は同化性可食性担体と共に経口投与することができる。化合物（及び所望により他の成分）をハード又はソフトシェルゼラチンカプセルに封入してもよいし、錠剤に圧縮してもよいし、対象の食事に直接添加してもよい。経口治療投与には、化合物に賦形剤を添加し、内服錠、口腔錠、トローチ剤、カプセル剤、エリキシル剤、懸濁液剤、シロップ剤、ウェハース剤等の形態で使用することができる。本発明の化合物を非経口投与以外の方法で投与するためには、その不活性化を防止するための材料を化合物にコーティングしたり、化合物と併用投与することが必要な場合がある。
【０１８６】
補助活性化合物も組成物に添加することができる。所定実施形態では、ＩＬ−１β活性が有害である障害の治療に有用な１種以上の別の治療剤と本発明の結合蛋白質（例えば抗体）又はその抗原結合部分を合剤化及び／又は併用投与する。例えば、他のターゲットと結合する１種以上の別の抗体（例えば他のサイトカインと結合するか又は細胞表面分子と結合する抗体）と本発明の抗ｈＩＬ−１β結合蛋白質又はその抗原結合部分を合剤化及び／又は併用投与することができる。更に、１種以上の本発明の結合蛋白質を上記治療剤の２種以上と併用することもできる。このような併用療法は治療剤の投与用量を減らし、各種単独療法に伴う可能性のある毒性や合併症を避けることができるという利点がある。
【０１８７】
所定実施形態では、本願に記載するＩＬ−１β結合蛋白質又はそのＩＬ−１β結合部分を当分野で公知の半減期延長用担体に結合する。このような担体としては、限定されないが、Ｆｃドメイン、ポリエチレングリコール及びデキストランが挙げられる。このような担体は例えば米国特許第６，６６０，８４３号及びＰＣＴ公開第ＷＯ９９／２５０４４号に記載されている。
【０１８８】
特定実施形態では、遺伝子治療により障害又はその１種以上の症状を治療、予防、管理又は改善するために、本発明の結合蛋白質又は本発明の別の予防剤もしくは治療剤の１種以上のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸配列を投与する。遺伝子治療とは、発現された核酸又は発現可能な核酸を対象に投与することにより実施される治療を意味する。本発明のこの実施形態において、核酸はこれらの核酸によりコードされるポリペプチドであって、予防効果又は治療効果をもたらす本発明の結合蛋白質又は予防剤もしくは治療剤の結合ポリペプチドを産生する。
【０１８９】
本発明によると、当分野で入手可能な任意遺伝子治療法を使用することができる。遺伝子治療法の一般論については、Ｇｏｌｄｓｐｉｅｌ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍ．１２：４８８−５０５；Ｗｕ  ａｎｄ  Ｗｕ（１９９１）Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ  ３：８７−９５；Ｔｏｌｓｔｏｓｈｅｖ（１９９３）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．３２：５７３−５９６；Ｍｕｌｌｉｇａｎ（１９９３）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６０：９２６−９３２；及びＭｏｒｇａｎ  ａｎｄ  Ａｎｄｅｒｓｏｎ（１９９３）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６２：１９１−２１７；Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，Ｃ．（１９９３）Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１１（５）：１５５参照。使用することができ、組換えＤＮＡ技術分野で広く知られている方法はＡｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９３）；及びＫｒｉｅｇｌｅｒ，Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  ａｎｄ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，（Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９０）に記載されている。各種遺伝子治療法の詳細な記載はＵＳ２００５／００４２６６４に開示されている。
【０１９０】
ＩＬ−１βは免疫及び炎症要素を伴う各種疾患に関連する病理に重要な役割を果たす。これらの疾患としては、限定されないが、後天性免疫不全症候群、後天性免疫不全症関連疾患、後天性悪性貧血、急性冠症候群、急性及び慢性疼痛（各種疼痛）、急性特発性多発性神経炎、臓器移植に伴う急性免疫疾患、臓器移植に伴う急性又は慢性免疫疾患、急性炎症性脱髄性多発根神経炎、急性虚血、急性肝疾患、急性リウマチ熱、急性横断性脊髄炎、アジソン病、成人（急性）呼吸窮迫症候群、成人スティル病、アルコール性肝硬変、アルコール誘発性肝傷害、アレルギー疾患、アレルギー、脱毛症、円形脱毛症、アルツハイマー病、アナフィラキシー、強直性脊椎炎、強直性脊椎炎関連肺疾患、抗リン脂質抗体症候群、再生不良性貧血、動脈硬化症、関節症、喘息、アテローム性疾患／動脈硬化症、アテローム性動脈硬化症、アトピー性アレルギー、アトピー性湿疹、アトピー性皮膚炎、萎縮性自己免疫性甲状腺機能低下症、自己免疫性水疱症、自己免疫性皮膚炎、自己免疫性糖尿病、連鎖球菌感染に伴う自己免疫疾患、自己免疫性腸症、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性聴力低下、自己免疫性リンパ球増殖症候群（ＡＬＰＳ）、自己免疫介在性低血糖症、自己免疫性心筋炎、自己免疫性好中球減少症、自己免疫性早発卵巣不全、自己免疫性血小板減少症（ＡＩＴＰ）、自己免疫性甲状腺疾患、自己免疫性ブドウ膜炎、閉塞性細気管支炎、ベーチェット病、眼瞼炎、気管支拡張症、水疱性類天疱瘡、悪液質、心臓血管疾患、劇症型抗リン脂質抗体症候群、セリアック病、頸椎症、クラミジア感染症、胆汁鬱滞症、慢性活動性肝炎、慢性好酸球性肺炎、慢性疲労症候群、臓器移植に伴う慢性免疫疾患、慢性虚血、慢性肝疾患、慢性粘膜皮膚カンジダ症、瘢痕性類天疱瘡、多発性硬化症の危険を伴う最初のエピソードからなる症候群（ＣＩＳ）、分類不能型免疫不全症（分類不能型低ガンマグロブリン血症）、結合組織病関連間質性肺疾患、結膜炎、クームス陽性溶血性貧血、小児期発症型精神障害、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、クローン病、特発性自己免疫性肝炎、特発性線維化性肺胞炎、涙嚢炎、鬱病、強皮症皮膚炎、皮膚筋炎、皮膚筋炎／多発性筋炎関連肺疾患、糖尿病網膜症、真性糖尿病、拡張型心筋症、円板状エリテマトーデス、椎間板ヘルニア、椎間板脱出、播種性血管内凝固症候群、薬物誘発性肝炎、薬物誘発性間質性肺疾患、薬物誘発性免疫性溶血性貧血、心内膜炎、子宮内膜炎、眼内炎、腸病性滑膜炎、上強膜炎、多形性紅斑、重症多形性紅斑、女性不妊症、線維症、線維性肺疾患、妊娠性類天疱瘡、巨細胞性動脈炎（ＧＣＡ）、糸球体腎炎、甲状腺腫性自己免疫性甲状腺機能低下症（橋本病）、グッドパスチャー症候群、通風性関節炎、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、グレーブス病、Ｂ群連鎖球菌（ＧＢＳ）感染症、ギラン・バレー症候群（ＢＧＳ）、ヘモジデリン沈着症関連肺疾患、花粉症、心不全、溶血性貧血、シェーンライン・ヘノッホ紫斑病、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、ヒューズ症候群、ハンチントン舞踏病、甲状腺機能亢進症、副甲状腺機能低下症、特発性白血球減少症、特発性血小板減少症、特発性パーキンソン病、特発性間質性肺炎、特異体質性肝疾患、ＩｇＥ介在型アレルギー、免疫���溶血性貧血、封入体筋炎、感染症、感染性眼炎症性疾患、炎症性腸疾患、炎症性脱髄疾患、炎症性心疾患、炎症性腎疾患、インスリン依存性糖尿病、間質性肺炎、ＩＰＦ／ＵＩＰ、虹彩炎、若年性慢性関節炎、若年性悪性貧血、若年性関節リウマチ（ＪＲＡ）、川崎病、角膜炎、乾性角結膜炎、クスマウル病ないしクスマウル・マイヤー病、ランドリー麻痺、ランゲルハンス細胞組織球症、線状ＩｇＡ病、網状皮斑、ライム関節炎、リンパ球浸潤性肺疾患、黄斑変性症、特発性ないしＮＯＳ男性不妊症、悪性腫瘍、腎臓の顕微鏡的血管炎、顕微鏡的多発血管炎、混合性結合組織病関連肺疾患、ベヒテレフ病、運動ニューロン障害、粘膜類天疱瘡、多発性硬化症（全サブタイプ：一次性進行型、二次性進行型、再発寛解型等）、多臓器不全、筋痛性脳炎／ロイヤルフリー病、重症筋無力症、骨髄異形成症候群、心筋梗塞、心筋炎、ネフローゼ症候群、神経根障害、神経障害、非アルコール性脂肪肝炎、非Ａ非Ｂ肝炎、視神経炎、臓器移植拒絶反応、変形性関節症、骨溶解症、卵巣癌、卵巣不全、膵炎、寄生虫症、パーキンソン病、少関節型ＪＲＡ、類天疱瘡、落葉状天疱瘡、尋常性天疱瘡、末梢動脈閉塞性疾患（ＰＡＯＤ）、末梢血管疾患（ＰＶＤ）、末梢動脈疾患（ＰＡＤ）、水晶体起因性ブドウ膜炎、静脈炎、結節性多発動脈炎（ないし結節性動脈周囲炎）、多発性軟骨炎、リウマチ性多発筋痛症、白毛症、多関節型ＪＲＡ、多腺性内分泌不全症候群、多発性筋炎、Ｉ型多腺性内分泌不全症及びＩＩ型多腺性内分泌不全症、リウマチ性多発筋痛症（ＰＭＲ）、感染後間質性肺疾患、炎症後間質性肺疾患、ポストポンプ症候群、早発卵巣不全、原発性胆汁性肝硬変、原発性粘液水腫、原発性パーキンソン病、原発性硬化性胆管炎、原発性硬化性肝炎、原発性血管炎、前立腺癌及び直腸癌及び血液悪性疾患（白血病及びリンパ腫）、前立腺炎、乾癬、１型乾癬、２型乾癬、乾癬性関節炎、乾癬性関節症、結合組織病続発性肺高血圧症、結節性多発動脈炎の肺症状、純赤血球形成不全症、原発性副腎不全、放射線線維症、反応性関節炎、ライター病、再発性視神経脊髄炎、腎疾患ＮＯＳ、再狭窄、関節リウマチ、関節リウマチ関連間質性肺疾患、リウマチ性心臓病、ＳＡＰＨＯ（滑膜炎、座瘡、膿疱症、骨化症及び骨炎）、サルコイドーシス、統合失調症、シュミット症候群、強皮症、続発性アミロイドーシス、ショック肺、強膜炎、座骨神経痛、続発性副腎不全、敗血症症候群、敗血症性関節炎、敗血症性ショック、血清反応陰性関節症、シリコン関連結合組織病、ショーグレン病関連肺疾患、ショーグレン症候群、スネッドン・ウィルキンソン皮膚病、精子自己免疫、脊椎関節症、強直性脊椎炎、スティーブンス・ジョンソン症候群（ＳＪＳ）、スティル病、脳卒中、交感性眼炎、全身性炎症反応症候群、全身性エリテマトーデス、全身性エリテマトーデス関連肺疾患、全身性硬化症、全身性硬化症関連間質性肺疾患、高安病／動脈炎、側頭動脈炎、Ｔｈ２型及びＴｈ１型細胞介在性疾患、甲状腺炎、毒素性ショック症候群、トキソプラズマ性網膜炎、中毒性表皮壊死、横断性脊髄炎、ＴＲＡＰＳ（腫瘍壊死因子１型受容体（ＴＮＦＲ）関連周期性症候群）、黒色表皮症を伴うＢ型インスリン抵抗性、１型アレルギー反応、１型自己���疫性肝炎（古典的自己免疫性肝炎ないしルポイド肝炎）、２型自己免疫性肝炎（抗ＬＫＭ抗体肝炎）、ＩＩ型糖尿病、潰瘍性大腸炎性関節症、潰瘍性大腸炎、蕁麻疹、通常型間質性肺炎（ＵＩＰ）、ブドウ膜炎、血管炎性びまん性肺疾患、血管炎、春季カタル、ウイルス性網膜炎、白斑、フォークト・小柳・原田症候群（ＶＫＨ症候群）、ウェグナー肉芽腫症、滲出型黄斑変性症、創傷治癒、エルシニア及びサルモネラ関連関節症が挙げられる。
【０１９１】
特定実施形態において、本発明のＩＬ−１β結合蛋白質又はその抗原結合部分は関節リウマチ、変形性関節症、クローン病、多発性硬化症、インスリン依存性糖尿病及び乾癬を治療するために使用される。
【０１９２】
本発明のＩＬ−１β結合蛋白質及びその抗原結合部分は自己免疫疾患、特に炎症を伴う自己免疫疾患（例えば強直性脊椎炎、アレルギー、自己免疫性糖尿病及び自己免疫性ブドウ膜炎）に罹患したヒトを治療するために使用することもできる。
【０１９３】
本発明のＩＬ−１β結合蛋白質又はその抗原結合部分は自己免疫性疾患及び炎症性疾患の治療に有用な１種以上の別の治療剤と併用投与することもできる。
【０１９４】
本発明のＩＬ−１β結合蛋白質又はその抗原結合部分はこのような疾患を治療するために単独又は組み合わせて使用することができる。当然のことながら、本発明の結合蛋白質又はその抗原結合部分は単独で使用してもよいし、別の作用剤（例えば治療剤）と併用してもよく、前記別の作用剤はその所期目的に合わせて当業者により選択される。例えば、別の作用剤は本発明の抗体により治療される疾患又は病態を治療するために有用であると当分野で認められている治療剤とすることができる。別の作用剤は治療用組成物に有益な属性を付与する作用剤（例えば組成物の粘性に作用する作用剤）でもよい。
【０１９５】
本発明の併用剤は本願に記載するＩＬ−１β結合蛋白質又はその抗原結合フラグメントと、以下に挙げる少なくとも１種の別の作用剤を含有する。形成される組成物がその所期機能を実施できるように併用するのであれば、併用剤は２種以上の別の作用剤、例えば２種又は３種の別の作用剤を含有することもできる。
【０１９６】
典型的な併用剤は本願に記載するＩＬ−１β結合蛋白質又はその抗原結合フラグメントと、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）（例えばイブプロフェン）を含有する。他の典型的な併用剤は本願に記載する抗体又はその抗原結合フラグメントと、プレドニゾロン等のコルチコステロイドを含有する。患者に本発明の抗ＩＬ−１β結合蛋白質と併用投与する際に必要なステロイド用量を徐々に減らすことによりステロイド使用の副作用を減らすか又はなくすことができる。本発明の抗体又は抗体部分と併用することができる関節リウマチ治療剤の非限定的な例としては、サイトカイン抑制性抗炎症薬（ＣＳＡＩＤ）、他のヒトサイトカイン又は成長因子（例えばＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ−１α、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１８、ＩＬ−２１、インターフェロン、ＥＭＡＰ−ＩＩ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦ及びＰＤＧＦ）の抗体又はアンタゴニストが挙げられる。本発明の抗体又はその抗原結合部分は細胞表面分子（例えばＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ８０（Ｂ７．１）、ＣＤ８６（Ｂ７．２）、ＣＤ９０、ＣＴＬＡ）又はそのリガンド（例えばＣＤ１５４（ｇｐ３９又はＣＤ４０Ｌ））に対する抗体と併用することができる。
【０１９７】
本発明のＩＬ−１ａ結合蛋白質又はその抗原結合フラグメントと併用する典型的な治療剤は自己免疫とそれに続く炎症カスケードの種々の点に介入し、このような治療剤としては、例えば、キメラ、ヒト化又はヒトＴＮＦ抗体、Ｄ２Ｅ７（ＰＣＴ公開第ＷＯ９７／２９１３１号）、ＣＡ２（ＲＥＭＩＣＡＤＥ（登録商標））、ＣＤＰ５７１、及び可溶性ｐ５５又はｐ７５ＴＮＦ受容体、その誘導体（ｐ７５ＴＮＦＲＩｇＧ（ＥＮＢＲＥＬ（登録商標））又はｐ５５ＴＮＦＲＩｇＧ（レネルセプト））等のＴＮＦアンタゴニストが挙げられ、更にＴＮＦａ変換酵素（ＴＡＣＥ）阻害剤及び他のＩＬ−１阻害剤（インターロイキン１変換酵素阻害剤、ＩＬ−１ＲＡ等）も挙げられる。抗体及びその抗原結合フラグメントと併用する他の作用剤としては、インターロイキン１１、ＩＬ−１ａ機能に平行、依存又は協調して作用する作用剤（例えばＩＬ−１８アンタゴニスト（例えばＩＬ−１８結合蛋白質、例えば抗体又は可溶性ＩＬ−１８受容体又はその抗原結合フラグメント）が挙げられる。抗体及びその抗原結合フラグメントと併用する他の作用剤としては、非枯渇性抗ＣＤ４阻害剤、共刺激経路ＣＤ８０（Ｂ７．１）又はＣＤ８６（Ｂ７．２）のアンタゴニスト（例えば抗体、可溶性受容体、拮抗性リガンド又はその抗原結合フラグメント）が挙げられる。
【０１９８】
本発明の結合蛋白質又はその抗原結合部分は例えばメトトレキサート、６−ＭＰ、アザチオプリンスルファサラジン、メサラジン、オルサラジン、クロロキン／ヒドロキシクロロキン、ペンシラミン、金チオリンゴ酸塩（筋肉内及び経口）、アザチオプリン、コルヒチン、コルチコステロイド（経口、吸入及び局所注射）、β２アドレナリン受容体アゴニスト（サルブタモール、テルブタリン、サルメテロール）、キサンチン（テオフィリン、アミノフィリン）、クロモグリケート、ネドクロミル、ケトチフェン、イプラトロピウム及びオキシトロピウム、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノール酸モフェチル、レフルノミド、ＮＳＡＩＤ（例えばイブプロフェン）、コルチコステロイド（例えばプレドニゾロン）、ホスホジエステラーゼ阻害剤、アデノシンアゴニスト、抗血栓剤、補体阻害剤、アドレナリン作動薬、炎症誘発性サイトカイン（例えばＴＮＦα又はＩＬ−１）によるシグナル伝達を妨害する作用剤（例えばＩＲＡＫ、ＮＩＫ、ＩＫＫ、ｐ３８又はＭＡＰキナーゼ阻害剤）、ＩＬ−１β変換酵素阻害剤、ＴＮＦα変換酵素（ＴＡＣＥ）阻害剤、Ｔ細胞シグナル伝達阻害剤（例えばキナーゼ阻害剤）、メタロプロテイナーゼ阻害剤、スルファサラジン、アザチオプリン、６−メルカプトプリン、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、可溶性サイトカイン受容体とその誘導体（例えば可溶性ｐ５５又はｐ７５ＴＮＦ受容体と誘導体ｐ７５ＴＮＦＲＩｇＧ（ＥＮＢＲＥＬ（登録商標））及びｐ５５ＴＮＦＲＩｇＧ（レネルセプト）、ｓＩＬ−１ＲＩ、ｓＩＬ−１ＲＩＩ、ｓＩＬ−６Ｒ）、抗炎症性サイトカイン（例えばＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１３及びＴＧＦ）、セレコキシブ、葉酸、硫酸ヒドロキシクロロキン、ロフェコキシブ、エタネルセプト、インフリキシマブ、ナプロキセン、バルデコキシブ、スルファサラジン、メチルプレドニゾロン、メロキシカム、酢酸メチルプレドニゾロン、金チオリンゴ酸ナトリウム、アスピリン、トリアムシノロンアセトニド、ナプシル酸プロポキシフェン／アセトアミノフェン、葉酸塩、ナブメトン、ジクロフェナク、ピロキシカム、エトドラク、ジクロフェナクナトリウム、オキサプロジン、塩酸オキシコドン、重酒石酸ヒドロコドン／アセトアミノフェン、ジクロフェナクナトリウム／ミソプロストール、フェンタニル、アナキンラ（ヒト組換え）、塩酸トラマドール、サルサレート、スリンダク、シアノコバラミン／葉酸／ピリドキシン、アセトアミノフェン、アレンドロン酸ナトリウム、プレドニゾロン、硫酸モルヒネ、塩酸リドカイン、インドメタシン、硫酸グルコサミン／コンドロイチン、塩酸アミトリプチリン、スルファジアジン、塩酸オキシコドン／アセトアミノフェン、塩酸オロパタジン、ミソプロストール、ナプロキセンナトリウム、オメプラゾール、シクロホスファミド、リツキシマブ、ＩＬ−１  ＴＲＡＰ、ＭＲＡ、ＣＴＬＡ４−ＩＧ、ＩＬ−１８  ＢＰ、抗ＩＬ−１８、抗ＩＬ１５、ＢＩＲＢ−７９６、ＳＣＩＯ−４６９、ＶＸ−７０２、ＡＭＧ−５４８、ＶＸ−７４０、ロフルミラスト、ＩＣ−４８５、ＣＤＣ−８０１及びメソプラム等の関節リウマチ治療剤と併用することもできる。
【０１９９】
本発明のＩＬ−１β結合蛋白質（例えば抗体）又はその抗原結合部分と併用することができる炎症性腸疾患治療剤の非限定的な例としては、ブデソニド、上皮成長因子、コルチコステロイド、シクロスポリン、スルファサラジン、アミノサリチル酸塩、６−メルカプトプリン、アザチオプリン、メトロニダゾール、リポキシゲナーゼ阻害剤、メサラミン、オルサラジン、バルサラジド、抗酸化剤、トロンボキサン阻害剤、ＩＬ−１受容体アンタゴニスト、抗ＩＬ−１βモノクローナル抗体、抗ＩＬ−６モノクローナル抗体、成長因子、エラスターゼ阻害剤、ピリジニルイミダゾール化合物、他のヒトサイトカイン又は成長因子（例えばＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＥＭＡＰ−ＩＩ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦ及びＰＤＧＦ）の抗体又はアンタゴニストが挙げられる。本発明の抗体又はその抗原結合部分はＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ９０等の細胞表面分子及びそのリガンドの抗体と併用することができる。本発明の結合蛋白質又はその抗原結合部分はメトトレキサート、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノール酸モフェチル、レフルノミド、ＮＳＡＩＤ（例えばイブプロフェン）、コルチコステロイド（例えばプレドニゾロン）、ホスホジエステラーゼ阻害剤、アデノシンアゴニスト、抗血栓剤、補体阻害剤、アドレナリン作動薬、炎症誘発性サイトカイン（例えばＴＮＦα又はＩＬ−１）によるシグナル伝達を妨害する作用剤（例えばＩＲＡＫ、ＮＩＫ、ＩＫＫ、ｐ３８又はＭＡＰキナーゼ阻害剤）、ＩＬ−１β変換酵素阻害剤、ＴＮＦα変換酵素阻害剤、Ｔ細胞シグナル伝達阻害剤（例えばキナーゼ阻害剤）、メタロプロテイナーゼ阻害剤、スルファサラジン、アザチオプリン、６−メルカプトプリン、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、可溶性サイトカイン受容体とその誘導体（例えば可溶性ｐ５５又はｐ７５ＴＮＦ受容体、ｓＩＬ−１ＲＩ、ｓＩＬ−１ＲＩＩ、ｓＩＬ−６Ｒ）及び抗炎症性サイトカイン（例えばＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１３及びＴＧＦβ）等の作用剤と併用することもできる。
【０２００】
本願に記載するＩＬ−１β結合蛋白質又はその抗原結合部分と併用することができるクローン病治療剤の典型例としては、ＴＮＦアンタゴニスト（例えば抗ＴＮＦ抗体、Ｄ２Ｅ７（ＰＣＴ公開第ＷＯ９７／２９１３１号；ＨＵＭＩＲＡ（登録商標））、ＣＡ２（ＲＥＭＩＣＡＤＥ（登録商標））、ＣＤＰ５７１、ＴＮＦＲ−Ｉｇ構築物（ｐ７５ＴＮＦＲＩｇＧ（ＥＮＢＲＥＬ（登録商標））及びｐ５５ＴＮＦＲＩｇＧ（レネルセプト））阻害剤及びＰＤＥ４阻害剤）が挙げられる。本発明の結合蛋白質又はその抗原結合部分はコルチコステロイド（例えばブデソニド及びデキサメタゾン）と併用することができる。本発明の結合蛋白質又はその抗原結合部分はスルファサラジン、５−アミノサリチル酸及びオルサラジン等の作用剤や、炎症誘発性サイトカイン（例えばＩＬ−１）の合成又は作用を妨害する作用剤（例えばＩＬ−１β変換酵素阻害剤及びＩＬ−１ＲＡ）と併用することもできる。本発明の結合蛋白質又はその抗原結合部分はＴ細胞シグナル伝達阻害剤（例えばチロシンキナーゼ阻害剤）、６−メルカプトプリンと併用することもできる。本発明の結合蛋白質又はその抗原結合部分はＩＬ−１１と併用することもできる。本発明の結合蛋白質又はその抗原結合部分はメサラミン、プレドニゾン、アザチオプリン、メルカプトプリン、インフリキシマブ、琥珀酸メチルプレドニゾロンナトリウム、ジフェノキシレート／硫酸アトロピン、塩酸ロペラミド、メトトレキサート、オメプラゾール、葉酸塩、シプロフロキサシン／デキストロース−水、重酒石酸ヒドロコドン／アセトアミノフェン、塩酸テトラサイクリン、フルオシノニド、メトロニダゾール、チメロサール／硼酸、コレスチラミン／スクロース、塩酸シプロフロキサシン、硫酸ヒオスシアミン、塩酸メペリジン、塩酸ミダゾラム、塩酸オキシコドン／アセトアミノフェン、塩酸プロメタジン、リン酸ナトリウム、スルファメトキサゾール／トリメトプリム、セレコキシブ、ポリカルボフィル、ナプシル酸プロポキシフェン、ヒドロコルチゾン、マルチビタミン、バルサラジド２ナトリウム、リン酸コデイン／アセトアミノフェン、塩酸コレセベラム、シアノコバラミン、葉酸、レボフロキサシン、メチルプレドニゾロン、ナタリズマブ及びインターフェロンγと併用することができる。
【０２０１】
本発明のＩＬ−１β結合蛋白質又は抗原結合部分と併用することができる多発性硬化症治療剤の非限定的な例としては、コルチコステロイド、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、アザチオプリン、シクロホスファミド、シクロスポリン、メトトレキサート、４−アミノピリジン、チザニジン、インターフェロンβ１ａ（ＡＶＯＮＥＸ（登録商標）；Ｂｉｏｇｅｎ）、インターフェロンβ１ｂ（ＢＥＴＡＳＥＲＯＮ（登録商標）；Ｃｈｉｒｏｎ／Ｂｅｒｌｅｘ）、インターフェロンαｎ３（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ／Ｆｕｊｉｍｏｔｏ）、インターフェロンα（Ａｌｆａ  Ｗａｓｓｅｒｍａｎｎ／Ｊ＆Ｊ）、インターフェロンβ１Ａ−ＩＦ（Ｓｅｒｏｎｏ／Ｉｎｈａｌｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ペグインターフェロンα２ｂ（Ｅｎｚｏｎ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ−Ｐｌｏｕｇｈ）、コポリマー１（Ｃｏｐ−１；ＣＯＰＡＸＯＮＥ（登録商標）；Ｔｅｖａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ、Ｉｎｃ．）、高圧酸素、静脈内免疫グロブリン、クラドリビン、他のヒトサイトカイン又は成長因子とその受容体（例えばＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１Ａ、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１８、ＥＭＡＰ−ＩＩ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦ及びＰＤＧＦ）の抗体又はアンタゴニストが挙げられる。本発明の抗体又はその抗原結合部分はＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ９０等の細胞表面分子又はそのリガンドに対する抗体と併用することができる。本発明の抗体又はその抗原結合部分はＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノール酸モフェチル、レフルノミド、ＮＳＡＩＤ（例えばイブプロフェン）、ホスホジエステラーゼ阻害剤、アデノシンアゴニスト、抗血栓剤、補体阻害剤、アドレナリン作動薬、炎症誘発性サイトカイン（例えばＴＮＦα又はＩＬ−１）によるシグナル伝達を妨害する作用剤（例えばＩＲＡＫ、ＮＩＫ、ＩＫＫ、ｐ３８又はＭＡＰキナーゼ阻害剤）、ＩＬ−１ｂ変換酵素阻害剤、ＴＡＣＥ阻害剤、Ｔ細胞シグナル伝達阻害剤（例えばキナーゼ阻害剤）、メタロプロテイナーゼ阻害剤、スルファサラジン、アザチオプリン、６−メルカプトプリン、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、可溶性サイトカイン受容体とその誘導体（例えば可溶性ｐ５５又はｐ７５ＴＮＦ受容体、ｓＩＬ−１ＲＩ、ｓＩＬ−１ＲＩＩ、ｓＩＬ−６Ｒ）、抗炎症性サイトカイン（例えばＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３及びＴＧＦ）、ＣＯＰＡＸＯＮＥ（登録商標）、及びカスパーゼ阻害剤（例えばカスパーゼ１の阻害剤）等の作用剤と併用することもできる。
【０２０２】
本発明のＩＬ−１β結合蛋白質又はその抗原結合部分はアレムツズマブ、ドロナビノール、Ｕｎｉｍｅｄ、ダクリズマブ、ミトキサントロン、塩酸キサリプロデン、ファムプリジン、酢酸グラチラマー、ナタリズマブ、シンナビドール、ａ−イムノカインＮＮＳ０３、ＡＢＲ−２１５０６２、ＡｎｅｒｇｉＸ．ＭＳ、ケモカイン受容体アンタゴニスト、ＢＢＲ−２７７８、カラグアリン、ＣＰＩ−１１８９、ＬＥＭ（リポソーム封入ミトキサントロン）、ＴＨＣ、ＣＢＤ（カンナビノイドアゴニスト）、ＭＢＰ−８２９８、メソプラム（ＰＤＥ４阻害剤）、ＭＮＡ−７１５、抗ＩＬ−６受容体抗体、ニューロバクス、ピルフェニドン・アロトラップ１２５８（ＲＤＰ−１２５８）、ｓＴＮＦ−Ｒ１、タラムパネル、テリフルノミド、ＴＧＦ−β２、チプリモチド、ＶＬＡ−４アンタゴニスト（例えばＴＲ−１４０３５、ＶＬＡ４  Ｕｌｔｒａｈａｌｅｒ、Ａｎｔｅｇｒａｎ−ＥＬＡＮ／Ｂｉｏｇｅｎ）、インターフェロンγアンタゴニスト、ＩＬ−４アゴニスト等の作用剤と併用することもできる。
【０２０３】
本発明のＩＬ−１β結合蛋白質又はその抗原結合部分と併用することができる狭心症の治療又は予防用治療剤の非限定的な例としては、アスピリン、ニトログリセリン、一硝酸イソソルビド、琥珀酸メトプロロール、アテノロール、酒石酸メトプロロール、ベシル酸アムロジピン、塩酸ジルチアゼム、二硝酸イソソルビド、重硫酸クロピドグレル、ニフェジピン、アトルバスタチンカルシウム、塩化カリウム、フロセミド、シンバスタチン、塩酸ベラパミル、ジゴキシン、塩酸プロプラノロール、カルベジロール、リシノプリル、スピロノラクトン、ヒドロクロロチアジド、マレイン酸エナラプリル、ナドロール、ラミプリル、エノキサパリンナトリウム、ヘパリンナトリウム、バルサルタン、塩酸ソタロール、フェノフィブラート、エゼチミブ、ブメタニド、ロサルタンカリウム、リシノプリル／ヒドロクロロチアジド、フェロジピン、カプトプリル及びフマル酸ビソプロロールが挙げられる。
【０２０４】
本発明の結合蛋白質又はその抗原結合部分と併用することができる強直性脊椎炎の治療又は予防用治療剤の非限定的な例としては、イブプロフェン、ジクロフェナク・ミソプロストール合剤、ナプロキセン、メロキシカム、インドメタシン、ジクロフェナク、セレコキシブ、ロフェコキシブ、スルファサラジン、メトトレキサート、アザチオプリン、ミノサイクリン、プレドニゾン、エタネルセプト及びインフリキシマブが挙げられる。
【０２０５】
本発明のＩＬ−１β結合蛋白質又はその抗原結合部分と併用することができる喘息の治療又は予防用治療剤の非限定的な例としては、アルブテロール、サルメテロール／フルチカゾン、モンテルカストナトリウム、プロピオン酸フルチカゾン、ブデソニド、プレドニゾン、キシナホ酸サルメテロール、塩酸レバルブテロール、硫酸アルブテロール／イプラトロピウム、リン酸プレドニゾロンナトリウム、トリアムシノロンアセトニド、ジプロピオン酸ベクロメタゾン、臭化イプラトロピウム、アジスロマイシン、酢酸ピルブテロール、プレドニゾロン、テオフィリン無水物、琥珀酸メチルプレドニゾロンナトリウム、クラリスロマイシン、ザフィルルカスト、フマル酸ホルモテロール、インフルエンザウイルスワクチン、メチルプレドニゾロン、アモキシシリン三水和物、フルニソリド、アレルギー注射、クロモリンナトリウム、塩酸フェキソフェナジン、フルニソリド／メントール、アモキシシリン／クラブラン酸塩、レボフロキサシン、インヘラー補助器具、グアイフェネシン、デキサメタゾンリン酸ナトリウム、塩酸モキシフロキサシン、塩酸ドキシサイクリン、グアイフェネシン／ｄ−メトルファン、ｐ−エフェドリン／コデイン／クロルフェニラミン、ガチフロキサシン、塩酸セチリジン、フランカルボン酸モメタゾン、キシナホ酸サルメテロール、ベンゾナテート、セファレキシン、ｐ−エフェドリン／ヒドロコドン／クロルフェニラミン、塩酸セチリジン／プソイドエフェドリン、フェニレフリン／コデイン／プロメタジン、コデイン／プロメタジン、セフプロジル、デキサメタゾン、グアイフェネシン／プソイドエフェドリン、クロルフェニラミン／ヒドロコドン、ネドクロミルナトリウム、硫酸テルブタリン、エピネフリン、メチルプレドニゾロン及び硫酸メタプロテレノールが挙げられる。
【０２０６】
本発明のＩＬ−１β結合蛋白質又はその抗原結合部分と併用することができるＣＯＰＤの治療又は予防用治療剤の非限定的な例としては、硫酸アルブテロール／イプラトロピウム、臭化イプラトロピウム、サルメテロール／フルチカゾン、アルブテロール、キシナホ酸サルメテロール、プロピオン酸フルチカゾン、プレドニゾン、テオフィリン無水物、琥珀酸メチルプレドニゾロンナトリウム、モンテルカストナトリウム、ブデソニド、フマル酸ホルモテロール、トリアムシノロンアセトニド、レボフロキサシン、グアイフェネシン、アジスロマイシン、ジプロピオン酸ベクロメタゾン、塩酸レバルブテロール、フルニソリド、セフトリアキソンナトリウム、アモキシシリン三水和物、ガチフロキサシン、ザフィルルカスト、アモキシシリン／クラブラン酸塩、フルニソリド／メントール、クロルフェニラミン／ヒドロコドン、硫酸メタプロテレノール、メチルプレドニゾロン、フランカルボン酸モメタゾン、ｐ−エフェドリン／コデイン／クロルフェニラミン、酢酸ピルブテロール、ｐ−エフェドリン／ロラタジン、硫酸テルブタリン、臭化チオトロピウム、（Ｒ，Ｒ）−ホルモテロール、ＴｇＡＡＴ、シロミラスト及びロフルミラストが挙げられる。
【０２０７】
本発明のＩＬ−１β結合蛋白質又はその抗原結合部分と併用することができるＨＣＶの治療又は予防用治療剤の非限定的な例としては、インターフェロンα２ａ、インターフェロンα２ｂ、インターフェロンαｃｏｎ１、インターフェロンαｎ１、ペグ化インターフェロンα２ａ、ペグ化インターフェロンα２ｂ、リバビリン、ペグインターフェロンα２ｂ＋リバビリン、ウルソデオキシコール酸、グリチルリチン酸、チマルファシン、マキサミン、ＶＸ−４９７並びにＨＣＶポリメラーゼ、ＨＣＶプロテアーゼ、ＨＣＶヘリカーゼ、ＨＣＶ  ＩＲＥＳ（内部リボソーム進入部位）をターゲットとする介入によりＨＣＶを治療するために使用される任意化合物が挙げられる。
【０２０８】
本発明の結合蛋白質又はその抗原結合部分と併用することができる特発性肺線維症の治療又は予防用治療剤の非限定的な例としては、プレドニゾン、アザチオプリン、アルブテロール、コルヒチン、硫酸アルブテロール、ジゴキシン、γインターフェロン、琥珀酸メチルプレドニゾロンナトリウム、ロラゼパム、フロセミド、リシノプリル、ニトログリセリン、スピロノラクトン、シクロホスファミド、臭化イプラトロピウム、アクチノマイシンｄ、アルテプラーゼ、プロピオン酸フルチカゾン、レボフロキサシン、硫酸メタプロテレノール、硫酸モルヒネ、塩酸オキシコドン、塩化カリウム、トリアムシノロンアセトニド、タクロリムス無水物、カルシウム、インターフェロンα、メトトレキサート、ミコフェノール酸モフェチル及びインターフェロンγ１ｂが挙げられる。
【０２０９】
本発明のＩＬ−１β結合蛋白質又はその抗原結合部分と併用することができる心筋梗塞の治療又は予防用治療剤の非限定的な例としては、アスピリン、ニトログリセリン、酒石酸メトプロロール、エノキサパリンナトリウム、ヘパリンナトリウム、重硫酸クロピドグレル、カルベジロール、アテノロール、硫酸モルヒネ、琥珀酸メトプロロール、ワルファリンナトリウム、リシノプリル、一硝酸イソソルビド、ジゴキシン、フロセミド、シンバスタチン、ラミプリル、テネクテプラーゼ、マレイン酸エナラプリル、トルセミド、レタバーゼ、ロサルタンカリウム、塩酸キナプリル／炭酸マグネシウム、ブメタニド、アルテプラーゼ、エナラプリラート、塩酸アミオダロン、塩酸チロフィバンｍ水和物、塩酸ジルチアゼム、カプトプリル、イルベサルタン、バルサルタン、塩酸プロプラノロール、フォシノプリルナトリウム、塩酸リドカイン、エプチフィバチド、セファゾリンナトリウム、硫酸アトロピン、アミノカプロン酸、スピロノラクトン、インターフェロン、塩酸ソタロール、塩化カリウム、ドクサートナトリウム、塩酸ドブタミン、アルプラゾラム、プラバスタチンナトリウム、アトルバスタチンカルシウム、塩酸ミダゾラム、塩酸メペリジン、二硝酸イソソルビド、エプネフリン、塩酸ドーパミン、ビバリルジン、ロスバスタチン、エゼチミブ／シンバスタチン、アバシミブ及びカリポリドが挙げられる。
【０２１０】
本発明のＩＬ−１β結合蛋白質又はその抗原結合部分と併用することができる乾癬の治療又は予防用治療剤の非限定的な例としては、カルシポトリエン，プロピオン酸クロベタゾール、トリアムシノロンアセトニド、プロピオン酸ハロベタゾール、タザロテン、メトトレキサート、フルオシノニド、高用量ジプロピオン酸ベタメタゾン、フルオシノロンアセトニド、アシトレチン、タールシャンプー、吉草酸ベタメタゾン、フランカルボン酸モメタゾン、ケトコナゾール、プラモキシン／フルオシノロン、吉草酸ヒドロコルチゾン、フルランドレノリド、尿素、ベタメタゾン、プロピオン酸クロベタゾール／エモリエント、プロピオン酸フルチカゾン、アジスロマイシン、ヒドロコルチゾン、保湿剤、葉酸、デソニド、ピメクロリムス、コールタール、二酢酸ジフロラゾン、葉酸エタネルセプト、乳酸、メトクスサレン、ヒドロコルチゾン／次没食子酸ビスマス／酸化亜鉛／レゾルシノール、酢酸メチルプレドニゾロン、プレドニゾン、日焼け止め剤、ハルシノニド、サリチル酸、アントラリン、ピバル酸クロコルトロン、石炭抽出物、コールタール／サリチル酸、コールタール／サリチル酸／硫黄、デゾキシメタゾン、ジアゼパム、エモリエント、フルオシノニド／エモリエント、鉱油／ひまし油／乳酸ナトリウム、鉱油／ピーナッツ油、石油／ミリスチン酸イソプロピル、プソラレン、サリチル酸、石鹸／トリブロムサラン、チメロサール／硼酸、セレコキシブ、インフリキシマブ、シクロスポリン、アレファセプト、エファリズマブ、タクロリムス、ピメクロリムス、ＰＵＶＡ、ＵＶＢ及びスルファサラジンが挙げられる。
【０２１１】
本発明のＩＬ−１β結合蛋白質又はその抗原結合部分と併用することができる乾癬性関節炎の治療又は予防用治療剤の非限定的な例としては、メトトレキサート、エタネルセプト、ロフェコキシブ、セレコキシブ、葉酸、スルファサラジン、ナプロキセン、レフルノミド、酢酸メチルプレドニゾロン、インドメタシン、硫酸ヒドロキシクロロキン、プレドニゾン、スリンダク、高用量ジプロピオン酸ベタメタゾン、インフリキシマブ、メトトレキサート、葉酸塩、トリアムシノロンアセトニド、ジクロフェナク、ジメチルスルホキシド、ピロキシカム、ジクロフェナクナトリウム、ケトプロフェン、メロキシカム、メチルプレドニゾロン、ナブメトン、トルメチンナトリウム、カルシポトリエン、シクロスポリン、ジクロフェナクナトリウム／ミソプロストール、フルオシノニド、硫酸グルコサミン、金チオリンゴ酸ナトリウム、重酒石酸ヒドロコドン／アセトアミノフェン、イブプロフェン、リセドロン酸ナトリウム、スルファジアジン、チオグアニン、バルデコキシブ、アレファセプト及びエファリズマブが挙げられる。
【０２１２】
本発明のＩＬ−１β結合蛋白質又はその抗原結合部分と併用することができる再狭窄の治療又は予防用治療剤の非限定的な例としては、シロリムス、パクリタキセル、エベロリムス、タクロリムス、ＡＢＴ−５７８及びアセトアミノフェンが挙げられる。
【０２１３】
本発明のＩＬ−１β結合蛋白質又はその抗原結合と併用することができる座骨神経痛の治療又は予防用治療剤の非限定的な例としては、重酒石酸ヒドロコドン／アセトアミノフェン、ロフェコキシブ、塩酸シクロベンザプリン、メチルプレドニゾロン、ナプロキセン、イブプロフェン、塩酸オキシコドン／アセトアミノフェン、セレコキシブ、バルデコキシブ、酢酸メチルプレドニゾロン、プレドニゾン、リン酸コデイン／アセトアミノフェン、塩酸トラマドール／アセトアミノフェン、メタキサロン、メロキシカム、メトカルバモール、塩酸リドカイン、ジクロフェナクナトリウム、ガバペンチン、デキサメタゾン、カリソプロドール、ケトロラクトロメタミン、インドメタシン、アセトアミノフェン、ジアゼパム、ナブメトン、塩酸オキシコドン、塩酸チザニジン、ジクロフェナクナトリウム／ミソプロストール、ナプシル酸プロポキシフェン／アセトアミノフェン、アスピリン／オキシコドン／テレフタル酸オキシコドン、イブプロフェン／重酒石酸ヒドロコドン、塩酸トラマドール、エトドラク、塩酸プロポキシフェン、塩酸アミトリプチリン、カリソプロドール／リン酸コデイン／アスピリン、硫酸モルヒネ、マルチビタミン、ナプロキセンナトリウム、クエン酸オルフェナドリン及びテマゼパムが挙げられる。
【０２１４】
本発明のＩＬ−１β結合蛋白質又はその抗原結合部分と併用することができる全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）の治療又は予防用治療剤の非限定的な例としては、ＮＳＡＩＤ（例えばジクロフェナク、ナプロキセン、イブプロフェン、ピロキシカム、インドメタシン）、ＣＯＸ２阻害剤（例えばセレコキシブ、ロフェコキシブ、バルデコキシブ）、抗マラリア剤（例えばヒドロキシクロロキン）、細胞傷害性物質（例えばアザチオプリン、シクロホスファミド、ミコフェノール酸モフェチル、メトトレキサート）、ＰＤＥ４阻害剤又はプリン合成阻害剤（例えばＣＥＬＬＣＥＰＴ（登録商標））が挙げられる。本発明の結合蛋白質又はその抗原結合部分はスルファサラジン、５−アミノサリチル酸、オルサラジン、イムラン及び炎症誘発性サイトカイン（例えばＩＬ−１）の合成、産生又は作用を妨害する物質（例えばＩＬ−１β変換酵素阻害剤等のカスパーゼ阻害剤やＩＬ−１ｒａ）等の作用剤と併用することもできる。本発明の結合蛋白質又はその抗原結合部分はＴ細胞シグナル伝達阻害剤（例えばチロシンキナーゼ阻害剤）又はＴ細胞活性化分子をターゲットとする分子（例えばＣＴＬＡ−４−ＩｇＧ又は抗Ｂ７ファミリー抗体、及び抗ＰＤ−１ファミリー抗体）と併用することもできる。本発明の結合蛋白質又はその抗原結合部分はＩＬ−１１又は抗サイトカイン抗体（例えばフォントリズマブ（抗ＩＦＮｇ抗体））又は抗受容体受容体抗体（例えば抗ＩＬ−６受容体抗体やＢ細胞表面分子に対する抗体）と併用することができる。本発明の結合蛋白質又はその抗原結合部分はＬＪＰ３９４（アベチムス）、Ｂ細胞を枯渇化又は不活性化させる作用剤（例えばリツキシマブ（抗ＣＤ２０抗体）、リンフォスタットＢ（抗ＢｌｙＳ抗体））、ＴＮＦアンタゴニスト（例えば抗ＴＮＦ抗体、Ｄ２Ｅ７（ＰＣＴ公開第ＷＯ９７／２９１３１号；ＨＵＭＩＲＡ（登録商標））、ＣＡ２（ＲＥＭＩＣＡＤＥ（登録商標））、ＣＤＰ５７１、ＴＮＦＲ−Ｉｇ構築物（ｐ７５ＴＮＦＲＩｇＧ（ＥＮＢＲＥＬ（登録商標））及びｐ５５ＴＮＦＲＩｇＧ（レネルセプト）））と併用することもできる。
【０２１５】
本発明の医薬組成物は「治療有効量」又は「予防有効量」の本発明のＩＬ−１β結合蛋白質又はその抗原結合部分を含有することができる。「治療有効量」とは、必要な用量と期間で所望治療結果を達成するために有効な量を意味する。本願に記載する結合蛋白質又はその抗原結合部分の治療有効量は当業者が決定することができ、個体の疾患状態、年齢、性別及び体重や、抗体又はその抗原結合部分が個体に所望応答を誘発する能力等の因子により変動し得る。治療有効量は抗体又はその抗原結合部分の治療に有益な作用が毒性又は有害作用を上回る量でもある。「予防有効量」とは、必要な用量と期間で所望予防結果を達成するために有効な量を意味する。一般に、予防用量は初期疾患ステージ又はそれ以前の対象で使用するので、予防有効量は治療有効量よりも少なくなる。
【０２１６】
最適所望応答（例えば治療又は予防応答）が得られるように投与レジメンを調整することができる。例えば、単回ボーラスを投与してもよいし、時間をかけて数回に分けて投与してもよいし、治療状況の緊急性に応じて用量を相対的に増減してもよい。投与し易さと用量の均等性の点から非経口組成物を用量単位形態に製剤化すると特に有利である。本願で使用する用量単位形態とは、治療する哺乳動物対象に単位用量として投与するのに適した物理的に別個の単位を意味し、各単位は所望治療効果を生じるように計算された所定量の活性化合物を必要な医薬担体と共に含有する。本発明の用量単位形態の仕様は（ａ）活性化合物の固有特性及び達成すべき特定治療又は予防効果と、（ｂ）個体の過敏症の治療用としてこのような活性化合物を配合する技術に内在する問題により決定され、これらに直接依存する。
【０２１７】
本発明のＩＬ−１β結合蛋白質又はその抗原結合部分の治療有効量又は予防有効量の非限定的な範囲の１例は約０．１〜約２０ｍｇ／ｋｇ、約１〜約１０ｍｇ／ｋｇである。用量値は緩和しようとする病態の種類と重篤度により変動し得る。任意特定対象の特定投与レジメンは個体の必要と組成物の投与者又は投与監理者の専門的判断に従って時間と共に調整すべきである。本願に記載する用量範囲は例示に過ぎず、特許請求の範囲に記載する組成物の範囲又は実施を制限するものではない。
【０２１８】
当業者に容易に理解される通り、本願に記載する本発明の組成物及び方法の他の適切な変形及び応用も自明であり、本発明の範囲又は本願に開示する実施形態から逸脱せずに適切な等価物を使用して実施することができる。以下の実施例は例証のみを目的とし、本発明を限定するものではないが、本発明は以下の実施例を参照することにより更に明瞭に理解されよう。
【実施例】
【０２１９】
実施例１：抗ヒトＩＬ−１βモノクローナル抗体の作製
マウス抗ヒトＩＬ−１βモノクローナル抗体は以下のように得られる。
【０２２０】
実施例１．１：ヒトＩＬ−１β抗原によるマウスの免疫
組換え精製ヒトＩＬ−１β（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ，ＵＳＡ）２０μｇを完全フロイントアジュバント又はＩｍｍｕｎｏｅａｓｙアジュバント（Ｑｉａｇｅｎ，Ｖａｌｅｎｃｉａ，ＣＡ）と混合し、６〜８週齢Ｂａｌｂ／Ｃマウス５匹、Ｃ５７Ｂ／６マウス５匹、及びＡＪマウス５匹に１日目に皮下注射する。２４日目、３８日目、及び４９日目に、不完全フロイントアジュバント又はＩｍｍｕｎｏｅａｓｙアジュバントと混合した組換え精製ヒトＩＬ−１β変異体２０μｇを同一マウスに皮下注射する。８４日目、又は１１２日目、又は１４４日目に組換え精製ヒトＩＬ−１β変異体１μｇを静脈内注射する。
【０２２１】
実施例１．２：ハイブリドーマの作製
Ｋｏｈｌｅｒ，Ｇ．ａｎｄ  Ｍｉｌｓｔｅｉｎ（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５に記載されている慣用方法に従い、実施例１．１に記載した免疫マウスから得られた脾細胞をＳＰ２／０−Ａｇ−１４細胞と５：１の比で融合し、ハイブリドーマを作製する。９６ウェルプレートでアザセリンとヒポキサンチンを加えた選択培地に融合物を脾細胞２．５×１０６個／ウェルの密度で撒く。融合後７〜１０日に肉眼的ハイブリドーマコロニーが認められる。ハイブリドーマコロニーを含む各ウェルからの上清を（実施例３．１に記載するように）ＩＬ−１βに対する抗体の存在についてＥＬＩＳＡにより試験する。次にＩＬ−１β特異活性を示す上清を（実施例３．２に記載するように）ＩＬ−８に関するＭＲＣ−５バイオアッセイでＩＬ−１βを中和させる能力について試験する。
【０２２２】
実施例１．３：抗ヒトＩＬ−１βモノクローナル抗体の同定及び特性決定
ＩＬ−１βと結合し、ＩＬ−１βと特異的に結合することが可能な抗体、特にＭＲＣ−５バイオアッセイで５ｎＭ又は５ｎＭ未満のＩＣ５０値で結合することが可能な抗体を産生するハイブリドーマを増殖させ、限界希釈法によりクローニングする。
【０２２３】
１０％低ＩｇＧ胎仔ウシ血清（Ｈｙｃｌｏｎｅ  ＃ＳＨ３０１５１，Ｌｏｇａｎ，ＵＴ）を含有する培地でハイブリドーマ細胞を増殖させる。平均して（クローン集団に由来する）各ハイブリドーマ上清２５０ｍＬを回収し、濃縮し、標準方法によるプロテインＡアフィニティークロマトグラフィーにより精製する。実施例３．２に記載するようなＭＲＣ−５バイオアッセイを使用して精製ｍＡｂがＩＬ−１β活性を阻害する能力を判定する。
【０２２４】
実施例１．４：各マウス抗ヒトＩＬ−１βモノクローナル抗体の可変領域のアミノ酸配列の決定
各アミノ酸配列決定のために、ハイブリドーマ細胞約１０×１０６個を遠心により単離し、製造業者の指示に従ってＴｒｉｚｏｌ（Ｇｉｂｃｏ  ＢＲＬ／Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ．）で処理し、全長ＲＮＡを単離する。製造業者の指示に従ってＳｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ  Ｆｉｒｓｔ−Ｓｔｒａｎｄ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）を使用し、全長ＲＮＡを第１鎖ＤＮＡ合成に供する。Ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）を第１鎖合成のプライマーに使用し、ポリ（Ａ）＋ＲＮＡについて選択する。次にマウス免疫グロブリン可変領域の増幅用に設計されたプライマー（Ｉｇ−Ｐｒｉｍｅｒ  Ｓｅｔｓ，Ｎｏｖａｇｅｎ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を使用して第１鎖ｃＤＮＡ産物をＰＣＲにより増幅する。ＰＣＲ産物をアガロースゲル上で分離し、切り出し、精製後、ＴＯＰＯクローニングキットでｐＣＲ２．１−ＴＯＰＯベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）にクローニングし、化学的にコンピテントなＴＯＰ１０大腸菌（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）に形質転換する。形質転換細胞でコロニーＰＣＲを実施し、インサートを含むクローンを同定する。ＱＩＡｐｒｅｐ  Ｍｉｎｉｐｒｅｐキット（Ｑｉａｇｅｎ，Ｖａｌｅｎｃｉａ，ＣＡ）を使用してインサートを含むクローンからプラスミドＤＮＡを単離する。プラスミド内のインサートを両鎖でシーケンシングし、Ｍ１３フォワードプライマーとＭ１３リバースプライマー（Ｆｅｒｍｅｎｔａｓ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｈａｎｏｖｅｒ  ＭＤ）を使用して重鎖可変領域又は軽鎖可変領域ＤＮＡ配列を決定する。抗ＩＬ−１βモノクローナル抗体の重鎖可変領域配列と軽鎖可変領域配列を表５に示す。
【０２２５】
実施例２：組換え抗ヒトＩＬ−１β抗体
実施例２．１：組換えキメラ抗ヒトＩＬ−１β抗体の構築及び発現
マウス抗ヒトＩＬ−１βモノクローナル抗体１Ｂ１２．４Ｈ４の重鎖定常領域をコードするＤＮＡを、細菌中で相同組換えにより２カ所のヒンジ領域アミノ酸突然変異を含むヒトＩｇＧ１定常領域をコードするｃＤＮＡフラグメントで置換した。これらの突然変異は２３４位（ＥＵナンバリング）のロイシン→アラニン変異と２３５位のロイシン→アラニン変異である（Ｌｕｎｄ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：２６５７）。これらの抗体の各々の軽鎖定常領域をヒトκ定常領域で置換した。ｐＨｙｂＥ発現プラスミド（米国特許公開第ＵＳ２００９０２３９２５９号）にライゲーションしたキメラ重鎖及び軽鎖ｃＤＮＡのコトランスフェクションにより全長キメラ抗体をＨＥＫ２９３−６Ｅ細胞で一過的に発現させた。組換えキメラ抗体を含む細胞上清をプロテインＡセファロースクロマトグラフィーにより精製し、結合した抗体を酸緩衝液の添加により溶出させた。抗体を中和させ、ＰＢＳで透析した。
【０２２６】
キメラ１Ｂ１２．４Ｈ４をコードする重鎖ｃＤＮＡを１Ｂ１２．４Ｈ４キメラ軽鎖ｃＤＮＡと共に（どちらもｐＨｙｂＥベクターにライゲーションして）ＨＥＫ２９３−６Ｅ細胞にコトランスフェクションした。組換えキメラ抗体を含む細胞上清をプロテインＡセファロースクロマトグラフィーにより精製し、結合した抗体を酸緩衝液の添加により溶出させた。抗体を中和させ、ＰＢＳで透析した。次に実施例３．２に記載するようにＩＬ−１β誘導下のＭＲＣ−５細胞によるＩＬ−８の産生を阻害する能力について精製キメラ抗ヒトＩＬ−１βモノクローナル抗体を試験した。
【０２２７】
実施例２．２：ヒト化抗ヒトＩＬ−１β抗体の構築及び発現
実施例２．２．１：ヒト抗体フレームワークの選択
Ｈｕａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｍｅｔｈｏｄｓ  ３６：３５−４２の方法に従ってＶＨ及びＶＬＣＤＲのカノニカル構造を決定した。カノニカル構造によると、適切なアクセプターヒトＶＨフレームワーク配列は３−１３、３−５３、３−６６、４−３４及び４−５９であり、適切なアクセプターヒトＶＬフレームワーク配列はＶｋ１、一部のＶｋ３、Ｖｋ５及びＶｋ６サブグループを含んでいた。１Ｂ１２ＶＨ領域のアミノ酸１０９−１２２とｈＪＨ１−６配列のアラインメントに基づき、ｈＪＨ４をアクセプターヒトＦＲ４配列として選択した。
【０２２８】
ＣＤＲ又はフレームワーク残基を「Ｘ」で漸次置換することにより更に４種類のＶＨ配列（１Ｂ１２ＶＨｘ、−ｘｘ、−ｘｘｘ及び−ｘｘｘｘ）を作製した。１Ｂ１２ＶＨｓはＶＨ配列からＤ領域とＪ領域を除去したものである。５種類の配列を  ＮＴＩ（登録商標）ソフトウェア（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）のＡｌｉｇｎ  ＸプログラムでヒトＶＨ配列と整列させた。フレームワーク全体又はループコンフォメーションに重要な特定残基とＶＨ／ＶＬ境界のみに着目すると、ＶＨ４−５９が１Ｂ１２  ＶＨ配列と最良の総合相同度であった。１Ｂ１２  ＶＨＣＤＲ配列を移植するためのアクセプターヒト生殖細胞系列フレームワークとしてこのフレームワークを選択した。別のＶＨファミリーに由来する代替アクセプターヒトフレームワークとしてＶＨ３−５３を選択した。ＶＨ４配列を整列させ、ヒト化配列の免疫原性の可能性を最小限にするためにＶＨ４コンセンサス配列に変異させることができるＶＨ４−５９内のフレームワーク残基を同定した。ＶＨ４−５９の配列アラインメントの結果、ＶＨ４−５９をＶＨ４コンセンサス配列にするためにフレームワーク残基変異を導入する必要はないことが分かった。配列アラインメントの結果、アクセプターフレームワークとして使用するＶＨ４−５９配列はドミナントコンセンサスであることが分かった。同様に、全ＶＨ３配列を整列させ、免疫原性の可能性を最小限にするためにＶＨ３コンセンサス配列に変異させることができるＶＨ３−５３内のフレームワーク残基を同定した。２カ所のＶＨ３コンセンサス変異（Ｉ１２Ｖ及びＶ２９Ｆ）が同定された。アラインメントの結果、アクセプターフレームワークとして使用するＶＨ３−５３配列は３種類の公知ＶＨ３−５３多型に由来する最初の配列であることも分かった。免疫原性の可能性が低いか又はＶＨ４−５９生殖細胞系列配列に由来する天然ヒトＶＨ配列に対する総合一致度がより良好な他のヒト化１Ｂ１２  ＶＨ配列を作製するために、９種類の候補復帰突然変異のうちの１〜８種類をＱ１Ｅ変異の不在下又は任意組合せでその存在下に含む第１組の配列を作製することができる。
【０２２９】
ＶＨ４−５９に由来するヒト抗体における候補復帰突然変異の割合を調べるために、ＶＨ４−５９に由来するヒトＶＨ配列をＮＣＢＩ  ＩｇＢｌａｓｔデータベースからバッチファスタファイルにダウンロードし、ＣｌｕｓｔａｌＷにより整列させ、ロゴバーにより視覚化した。出力ｅｐｓファイルをＡｄｏｂｅ  Ｉｌｌｕｓｔｒａｔｏｒにより編集し、ギャップ、シグナルペプチド、ＣＤＲ３の大半及び定常領域配列を除去した。この分析は候補復帰突然変異とマウスＶＨＣＤＲ残基がＶＨ４−５９に由来する可能性のある８２５種類の天然ヒト抗体に出現するか否かを判断するために有用であった。９種類の候補復帰突然変異（Ｇ２７Ｆ、Ｉ２９Ｌ、Ｉ４８Ｌ、Ｖ６７Ｌ、Ｖ７１Ｋ、Ｔ７３Ｎ、Ｎ７６Ｓ、Ｆ７８Ｖ及びＲ９４Ｋ）のうち、Ｇ２７Ｆ、Ｉ２９Ｌ、Ｖ６７Ｌ、Ｎ７６Ｓ、Ｆ７８Ｖ及びＲ９４Ｋはこれらの配列のうちの１％を上回る配列で認められた。
【０２３０】
免疫原性の可能性が低いか又はＶＨ３−５３生殖細胞系列配列に由来する天然ヒトＶＨ配列に対する総合一致度がより良好な他のヒト化１Ｂ１２  ＶＨ配列を作製するために、１０種類の候補復帰突然変異のうちの１〜９種類をＩ１２Ｖ及びＶ２９Ｆの２種類のＶＨ３フレームワークコンセンサス変異のうちの０〜２種類と任意組合せで含む第２組の配列を作製することができる。ＶＨ３−５３に由来するヒトＶＨ配列をＮＣＢＩ  ＩｇＢｌａｓｔデータベースからバッチファスタファイルにダウンロードし、ＣｌｕｓｔａｌＷにより整列させ、ロゴバーにより視覚化した。出力ｅｐｓファイルをＡｄｏｂｅ  Ｉｌｌｕｓｔｒａｔｏｒにより編集し、ギャップ、シグナルペプチド及び定常領域配列を除去した。この分析は１０種類の候補復帰突然変異とマウスＶＨＣＤＲ残基がＶＨ３−５３に由来する可能性のある１７４種類の天然ヒト抗体に出現するか否かを判断するするために有用であった。１０種類の候補復帰突然変異（Ａ２４Ｖ、Ｆ２９Ｌ、Ｖ３７Ｉ、Ｖ４８Ｌ、Ｓ４９Ｇ、Ｆ６７Ｌ、Ｒ７１Ｋ、Ｎ７６Ｓ、Ｌ７８Ｖ及びＲ９４Ｋ）のうち、Ａ２４Ｖ、Ｆ２９Ｌ、Ｒ７１Ｋ、Ｎ７６Ｓ、Ｌ７８Ｖ及びＲ９４Ｋはこれらの配列のうちの１％を上回る配列で認められた。
【０２３１】
ＶＬ配列におけるループ構造とＶＨ／ＶＬ境界に対応する残基についてはＰＣＴ公開第ＷＯ２００８０２１１５６号にまとめられている。ＣＤＲ又はフレームワーク残基を「Ｘ」で漸次置換することにより更に４種類のＶＬ配列（１Ｂ１２ＶＬｘ、−ｘｘ、−ｘｘｘ及び−ｘｘｘｘ）を作製した。１Ｂ１２ＶＬｓはＶＬ配列からＪ領域を除去したものである。５種類の配列をＶｅｃｔｏｒ  ＮＴＩ（登録商標）ソフトウェアのＡｌｉｇｎ  ＸプログラムでヒトＶｋ配列と整列させた。２−１−１カノニカルＣＤＲ構造をもつヒトＶｋ生殖細胞系列配列のみに着目した。ヒトＶｋ生殖細胞系列１−３３／Ｏ１８を１Ｂ１２．４Ｈ４  ＶＬヒト化のアクセプターフレームワークとして選択した。別のサブグループに由来するヒト化のバックアップアクセプターフレームワークとしてヒトＶｋ生殖細胞系列６Ｄ４１／Ａ１４を選択した。全ヒトＶｋ１生殖細胞系列配列を整列させ、免疫原性の可能性を最小限にするためにＶｋ１コンセンサスに変異させるべき１−３３／Ｏ１８内の潜在的フレームワーク残基を同定した。２種類のＶｋ１コンセンサス変異（Ｆ７３Ｌ及びＩ８３Ｆ）が同定された。これらの変異はヒト化１Ｂ１２  ＶＬ配列の免疫原性の可能性を最小限にした。Ｖｋ６サブグループには異なる生殖細胞系列配列が２種類しか存在しなかったので、６Ｄ４１／Ａ１４には同一分析を実施しなかった。
【０２３２】
より良好なＩｇＧ機能を達成するため、又は免疫原性の可能性を低下させるため、又はＯ１８生殖細胞系列配列に由来する天然ヒトＶＬ配列に対する総合一致度をより良好にするために、７種類の候補復帰突然変異（Ｉ２Ｔ、Ｍ４Ｖ、Ａ４３Ｐ、Ｙ４９Ｓ、Ｇ６４Ｓ、Ｄ１Ｅ及びＱ３Ｔ）のうちの１〜６種類をＩ８３Ｆ  Ｖｋ１コンセンサス変異の不在下又は任意組合せでその存在下に含む第１組の他の配列を作製することができる。より良好なＩｇＧ機能を達成するため、又は免疫原性の可能性を低下させるため、又は６Ｄ４１／Ａ１４生殖細胞系列配列に由来する天然ヒトＶＬ配列に対する総合一致度をより良好にするために、７種類の候補復帰突然変異（Ｖ２Ｔ、Ｍ４Ｖ、Ａ４３Ｐ、Ｋ４９Ｓ、Ｇ６４Ｓ、Ｄ１Ｅ及びＶ３Ｔ）のうちの１〜６種類を任意組合せで含む第２組の他の配列を作製することができる。
【０２３３】
１−３３／Ｏ１８に由来するヒトＶｋ配列をＮＣＢＩ  ＩｇＢｌａｓｔデータベースから１個のバッチファスタファイルにダウンロードし、ＣｌｕｓｔａｌＷにより整列させ、ロゴバーにより視覚化した。出力ｅｐｓファイルをＡｄｏｂｅ  Ｉｌｌｕｓｔｒａｔｏｒにより編集し、ギャップ、シグナルペプチド及び定常領域配列を除去した。この分析は候補復帰突然変異とマウスＶＨＣＤＲ残基が１−３３／Ｏ１８に由来する可能性のある２６０種類の天然ヒト抗体に出現するか否かを判断するために有用であった。７種類の候補復帰突然変異のうち、Ｄ１ＥとＹ４９Ｓはこれらの配列のうちの１％を上回る配列で認められた。
【０２３４】
実施例２．２．２：抗ヒトＩＬ−１βモノクローナル抗体１Ｂ１２．４Ｈ４のヒト化
表５に示す抗ＩＬ−１β抗体１Ｂ１２．４Ｈ４＿からの重鎖ＣＤＲ配列を２種類のヒトフレームワークにインシリコ移植した。第１組はｍＡｂ  ｈ１Ｂ１２ＶＨ．１ｚ、ｈ１Ｂ１２ＶＨ．１及びｈ１Ｂ１２ＶＨ．１ａを含む。ｈ１Ｂ１２ＶＨ．１ｚはＶＨ４−５９及びＪＨ４フレームワーク配列を含むＣＤＲ移植ヒト化１Ｂ１２  ＶＨである。ｈ１Ｂ１２ＶＨ．１はＮ末端ピログルタミン酸形成を防ぐために更にＱ１Ｅフレームワーク変異を加えたヒト化デザインである。ｈ１Ｂ１２ＶＨ．１ａはＱ１Ｅ変異と可能な全フレームワーク復帰突然変異Ｇ２７Ｆ、Ｉ２９Ｌ、Ｉ４８Ｌ、Ｖ６７Ｌ、Ｖ７１Ｋ、Ｔ７３Ｎ、Ｎ７６Ｓ、Ｆ７８Ｖ及びＲ９４Ｋを含むヒト化デザインである。
【０２３５】
第２組はｍＡｂ  ｈ１Ｂ１２ＶＨ．２ｚ、ｈ１Ｂ１２ＶＨ．２及びｈ１Ｂ１２ＶＨ．２ａを含む。ｈ１Ｂ１２ＶＨ．２ｚはＶＨ３−５３及びｈＪＨ４フレームワーク配列を含むＣＤＲ移植ヒト化１Ｂ１２  ＶＨである。ｈ１Ｂ１２ＶＨ．２はＩ１２Ｖ及びＶ２９Ｆ  ＶＨ３フレームワークコンセンサス変異を含むヒト化デザインである。ｈ１Ｂ１２ＶＨ．２ａはＶＨ３フレームワークコンセンサス変異と可能な全フレームワーク復帰突然変異Ａ２４Ｖ、Ｆ２９Ｌ（ＦはＶＨ３コンセンサス配列である）、Ｖ３７Ｉ、Ｖ４８Ｌ、Ｓ４９Ｇ、Ｆ６７Ｌ、Ｒ７１Ｋ、Ｎ７６Ｓ、Ｌ７８Ｖ及びＲ９４Ｋを含むヒト化デザインである。これらの候補構築物にＮ結合型グリコシル化パターン（Ｎ−｛Ｐ｝−Ｓ／Ｔ）は認められなかった。全復帰突然変異が必要なわけではないと思われる。第１組のＩ４８Ｌ、Ｖ７１Ｋ及びＴ７３Ｎと、第２組のＦ２９Ｌ、Ｖ３７Ｉ、Ｖ４８Ｌ、Ｓ４９Ｇ及びＦ６７Ｌの復帰突然変異はヒト抗体では出現しない。必要に応じてその後の親和性成熟プロセス中に所定の復帰突然変異を除去してもよい。
【０２３６】
表５に示す抗ＩＬ−１β抗体１Ｂ１２．４Ｈ４＿からの軽鎖ＣＤＲ配列を２種類のヒトフレームワークにインシリコ移植した。第１組はｍＡｂ  ｈ１Ｂ１２ＶＬ．１ｚ、ｈ１Ｂ１２ＶＬ．１、ｈ１Ｂ１２ＶＬ．１ａ及びｈ１Ｂ１２ＶＬ．１ｂを含む。ｈ１Ｂ１２ＶＬ．１ｚはＯ１８及びＪｋ２フレームワーク配列を含む直接ＣＤＲ移植ヒト化１Ｂ１２  ＶＬである。ｈ１Ｂ１２ＶＬ．１はＩ８３Ｆ  Ｖｋ１フレームワークコンセンサス変異を含むヒト化デザインである。ｈ１Ｂ１２ＶＬ．１ａはコンセンサス変異と５種類のフレームワーク復帰突然変異（Ｉ２Ｔ、Ｍ４Ｖ、Ａ４３Ｐ、Ｙ４９Ｓ、Ｇ６４Ｓ）を含むヒト化デザインである。ｈ１Ｂ１２ＶＬ．１ｂはコンセンサス変異と７種類のフレームワーク復帰突然変異（上記５種類に加え、他の２種類のＮ末端復帰突然変異Ｄ１Ｅ及びＱ３Ｔ）を含むヒト化デザインである。第２組はｍＡｂ  ｈ１Ｂ１２ＶＬ．２、ｈ１Ｂ１２ＶＬ．２ａ及びｈ１Ｂ１２ＶＬ．２ｂを含む。ｈ１Ｂ１２ＶＬ．２はＡ１４及びＪｋ２フレームワーク配列を含む直接ＣＤＲ移植ヒト化１Ｂ１２  ＶＬである。ｈ１Ｂ１２ＶＬ．２ａは５種類のフレームワーク復帰突然変異（Ｖ２Ｔ、Ｍ４Ｖ、Ａ４３Ｐ、Ｋ４９Ｓ、Ｇ６４Ｓ）を含むヒト化デザインである。ｈ１Ｂ１２ＶＬ．２ｂは７種類のフレームワーク復帰突然変異（上記５種類に加え、他の２種類のＮ末端復帰突然変異Ｄ１Ｅ及びＶ３Ｔ）を含むヒト化デザインである。候補構築物にＮ結合型グリコシル化パターン（Ｎ−｛Ｐ｝−Ｓ／Ｔ）は認められなかった。全復帰突然変異が必要なわけではないと思われる。第１組の復帰突然変異Ｉ２Ｔ、Ｑ３Ｔ、Ｍ４Ｖ、Ａ４３Ｐ及びＧ６４Ｓはヒト抗体では出現しない。６Ｄ４１／Ａ１４生殖細胞系列配列に由来するヒト抗体は極僅かである。必要に応じてその後の親和性成熟プロセス中に所定の復帰突然変異を除去してもよい。
【０２３７】
表６は本発明のヒト化抗ｈＩＬ−１β抗体のＶＨ領域及びＶＬ領域のアミノ酸配列の一覧である。
【０２３８】
【表６】
2013507929.tif 000007
2013507929.tif 000008
【０２３９】
実施例２．２．３：ヒト化抗体の構築
標準ＤＮＡ合成又は増幅技術を使用して核酸を合成するために上記配列を使用し、細胞で発現させるために標準組換えＤＮＡ技術を使用して所望抗体フラグメントを発現ベクターに組立てることができる。例えば、核酸配列から核酸コドンを決定し、Ｂｌｕｅ  Ｈｅｒｏｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．（ｗｗｗ．ｂｌｕｅｈｅｒｏｎｂｉｏ．ｃｏｍ）Ｂｏｔｈｅｌｌ，ＷＡ  ＵＳＡによりオリゴヌクレオチドＤＮＡを合成する。オリゴヌクレオチドを３００〜２，０００塩基対２本鎖ＤＮＡフラグメントに組立て、プラスミドベクターにクローニングし、配列を確認する。クローニングしたフラグメントを酵素法により組立てて全長遺伝子を得、発現ベクターにサブクローニングする（７，３０６，９１４；７，２９７，５４１；７，２７９，１５９；７，１５０，９６９；２００８０１１５２４３；２００８０１０２４７５；２００８００８１３７９；２００８００７５６９０；２００８００６３７８０；２００８００５０５０６；２００８００３８７７７；２００８００２２４２２；２００７０２８９０３３；２００７０２８７１７０；２００７０２５４３３８；２００７０２４３１９４；２００７０２２５２２７；２００７０２０７１７１；２００７０１５０９７６；２００７０１３５６２０；２００７０１２８１９０；２００７０１０４７２２；２００７００９２４８４；２００７００３７１９６；２００７００２８３２１；２００６０１７２４０４；２００６０１６２０２６；２００６０１５３７９１；２００３０２１５４５８；及び２００３０１５７６４３参照）。
【０２４０】
例えば、インシリコ構築した上記ヒト化抗体をｐＨｙｂＥベクター（米国特許公開第ＵＳ２００９／０２３９２５９号）の多重クローニング部位に挿入することができる。細菌コロニーを単離し、プラスミドＤＮＡを抽出し、ｃＤＮＡインサートを完全にシーケンシングする。各抗体に対応する正しいヒト化重鎖及び軽鎖をＨＥＫ２９３−６Ｅ細胞にコトランスフェクションし、全長ヒト化抗ヒトＩＬ−１β抗体を一過的に産生させる。重鎖移植ｃＤＮＡと軽鎖移植ｃＤＮＡを含むｐＨｙｂＥベクターをＨＥＫ２９３−６Ｅ細胞にコトランスフェクションした。組換えキメラ抗体を含む細胞上清をプロテインＡセファロースクロマトグラフィーにより精製し、結合した抗体を酸緩衝液の添加により溶出させる。抗体を中和させ、ＰＢＳで透析する。ヒト化抗体を表７に示す。
【０２４１】
ＶＨ及びＶＬシャフリングに基づくヒト化１Ｂ１２抗体の各種組合せを表７に示す。
【０２４２】
【表７】
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【０２４３】
表８は機能的特性決定のためにＩｇＧ発現ベクターにクローニングしたマウスモノクローナル抗体１Ｂ１２のヒト化可変領域を示す。ＣＤＲを太字で示す。
【０２４４】
【表８】
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【０２４５】
実施例３：ヒトＩＬ−１β抗体の機能的特性決定
実施例３．１：ＩＬ−１β酵素免疫測定法プロトコル
抗ＩＬ−１βｍＡｂがヒトＩＬ−１βと結合するか否かを判定するために、Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｏａｔバッファー（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｗｅｓｔ  Ｇｒｏｖｅ，ＰＡ）で２μｇ／ｍｌに希釈した抗ヒトＦｃ抗体の存在下でＥＬＩＳＡプレート（Ｎｕｎｃ，ＭａｘｉＳｏｒｐ，Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ，ＮＹ）を一晩４℃にてインキュベートした。プレートを洗浄バッファー（０．０５％  Ｔｗｅｅｎ  ２０を添加したＰＢＳ）で５回洗浄し、ｓｕｐｅｒｂｌｏｃｋブロッキングバッファー（Ｔｈｅｒｍｏ  ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，＃３７５１５）２００μｌ／ウェルで２５℃にて１時間ブロックした。プレートをタッピングしてブロッキングバッファーを除去し、１０％  ｓｕｐｅｒｂｌｏｃｋ、０．５％  ｔｗｅｅｎ−２０を添加したＰＢＳ中各抗体２μｇ／ｍｌを各ウェルに１００μｌずつ加え、２５℃にて１時間インキュベートした。ウェルを１×ＰＢＳＴで５回洗浄し、１μｇ／ｍｌビオチン化抗原を（１０％  ｓｕｐｅｒｂｌｏｃｋ、０．０５％  ｔｗｅｅｎ  ２０を添加したＰＢＳ中にμｇ〜ｐｇの範囲で）６倍系列希釈で滴定した。次に抗原の各希釈液をプレートに加え、１時間２５℃にてインキュベートした。ウェルを１×ＰＢＳＴで５回洗浄し、ポリＨＲＰストレプトアビジン（ＫＰＬ  ＃４７４−３０００，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）の存在下で１時間２５℃にてインキュベートした。ウェルを１×ＰＢＳＴで５回洗浄し、ＵＬＴＲＡ−ＴＭＢ  ＥＬＩＳＡ（Ｐｉｅｒｃｅ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）１００μｌ／ウェルを加えた。発色後に１Ｎ  ＨＣＬで反応を停止し、４５０ｎＭの吸光度を測定した。結果を表９に示すが、数値からヒト抗ＩＬ−１β抗体はヒトＩＬ−１βと結合することが判る。
【０２４６】
【表９】
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【０２４７】
実施例３．２：ヒト化ＩＬ−１β抗体の中和能
本発明における抗ヒトＩＬ−１β抗体の機能的活性を試験するために、抗体がＩＬ−１β活性を阻害する能力を測定するＭＲＣ−５アッセイで抗体を使用した。ＭＲＣ−５細胞株は用量依存的にヒトＩＬ−１βに応答してＩＬ−８を産生するヒト肺線維芽細胞株である。ＭＲＣ−５細胞を先ずＡＴＣＣから入手し、１０％  ＦＢＳ完全ＭＥＭ中で継代培養し、５％  ＣＯ２インキュベーターで３７℃にて増殖させた。ＩＬ−１βに対する抗体の中和能を判定するために、抗体（５０ｕｌ）を９６ウェルプレートに加え（１×１０−７〜１×１０−１５Ｍの終濃度範囲）、ヒトＩＬ−１β（終濃度５０ｐｇ／ｍＬ）５０ｕｌと共に３７℃，５％  ＣＯ２下で１時間プレインキュベートした。次に（２４時間前に１Ｅ５／ｍｌの濃度で細胞１００ｕｌ／ウェルを撒いた）ＭＲＣ−５細胞に抗原抗体複合体（１００ｕＬ）を加えた。アッセイプレートを５％  ＣＯ２インキュベーターで３７℃にて一晩インキュベートした。ＩＬ−８産生を阻害するその能力により抗体力価を判定した。ヒトＩＬ−８産生を化学発光アッセイにより測定した。表１０はヒトＩＬ−１βに対する抗体力価をまとめる。
【０２４８】
【表１０】
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【０２４９】
実施例３．３：表面プラズモン共鳴法によるＩＬ−１β抗体の親和性測定
ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）アッセイ（Ｂｉａｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）はオン速度定数とオフ速度定数の動的測定により抗体の親和性を測定する。２５℃のランニングＨＢＳ−ＥＰ（１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ［ｐＨ７．４］，１５０ｍＭ  ＮａＣｌ，３ｍＭ  ＥＤＴＡ及び０．００５％界面活性剤Ｐ２０）を使用してＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）３０００計器（Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）ＡＢ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）で表面プラズモン共鳴法測定により組換え精製ヒトＩＬ−１βと抗体の結合を測定した。特に指定しない限り、全薬品はＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）ＡＢ（Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）から入手した。ヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｆｃγ）フラグメント特異的ポリクローナル抗体（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｃ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，Ｉｌｌｉｎｏｉｓ）約５０００ＲＵを１０ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ４．５）で希釈し、標準アミンカップリングキットを製造業者の指示と手順に従って２５μｇ／ｍｌで使用してＣＭ５研究グレードバイオセンサーチップに直接固定化した。バイオセンサー表面の未反応部分をエタノールアミンでブロックした。フローセル２及び４の修飾カルボキシメチルデキストラン表面を反応表面として使用した。フローセル１及び３のヤギ抗マウスＩｇＧを固定していない未修飾カルボキシメチルデキストランを参照表面として使用した。動的分析のために、Ｂｉａｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ４．０．１ソフトウェアを使用することにより（グローバルフィット分析を使用して）、１：１ラングミュア結合モデルから誘導した速度方程式を全８種の注入液の会合相と解離相に同時にフィットさせた。ヤギ抗マウスＩｇＧ特異的反応表面に固定するために精製抗体をＨＥＰＥＳ緩衝生理食塩水で希釈した。リガンドとして捕捉するマウス抗体（２５μｇ／ｍｌ）を反応マトリックスに流速５μｌ／分で注入した。２５μｌ／分の連続流量下にオン速度定数とオフ速度定数ｋｏｎ（単位Ｍ−１ｓ−１）及びｋｏｆｆ（単位ｓ−１）を測定した。速度定数は１０〜２００ｎＭの１０種の異なる抗原濃度で動的結合測定を行うことにより誘導した。次に、抗体と標的抗原の反応の平衡解離定数（単位Ｍ）を式ＫＤ＝ｋｏｆｆ／ｋｏｎにより動的速度定数から計算した。時間の関数として結合を記録し、動的速度定数を計算する。このアッセイでは、１０６Ｍ−１ｓ−１程度の高いオン速度と１０−６ｓ−１程度の低いオフ速度を測定することができる。表１１はヒト抗ＩＬ−１β抗体の親和性測定値を示す。
【０２５０】
【表１１】
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【０２５１】
本発明は分子生物学分野で周知の技術全体を組込む。これらの技術としては限定されないが、以下の刊行物に記載されている技術が挙げられる。
Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．ｅｄｓ．，Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  Ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（４ｔｈ  Ｅｄ．１９９９）Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，ＮＹ（ＩＳＢＮ  ０−４７１−３２９３８−Ｘ）．
Ｌｕ  ａｎｄ  Ｗｅｉｎｅｒ  ｅｄｓ．，Ｃｌｏｎｉｎｇ  ａｎｄ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｖｅｃｔｏｒｓ  ｆｏｒ  Ｇｅｎｅ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ  Ａｎａｌｙｓｉｓ（２００１）ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  Ｐｒｅｓｓ，Ｗｅｓｔｂｏｒｏｕｇｈ，ＭＡ，２９８  ｐｐ．（ＩＳＢＮ  １−８８１２９９−２１−Ｘ）．
Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ  ａｎｄ  Ｄｕｂｅｌ  ｅｄｓ．，Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ（２００１）Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，ＮＹ，７９０  ｐｐ．（ＩＳＢＮ  ３−５４０−４１３５４−５）．
Ｏｌｄ  ａｎｄ  Ｐｒｉｍｒｏｓｅ，Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｇｅｎｅ  Ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｏｎ：Ａｎ  Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｔｏ  Ｇｅｎｅｔｉｃ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ（３ｄ  Ｅｄ．１９８５）Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ．Ｓｔｕｄｉｅｓ  ｉｎ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ；Ｖ．２：４０９  ｐｐ．（ＩＳＢＮ  ０−６３２−０１３１８−４）．
Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，２ｄ  ｅｄ．（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ），Ｖｏｌｓ．１−３（ＩＳＢＮ  ０−８７９６９−３０９−６）．
Ｗｉｎｎａｃｋｅｒ，Ｆｒｏｍ  Ｇｅｎｅｓ  Ｔｏ  Ｃｌｏｎｅｓ：Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｔｏ  Ｇｅｎｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（１９８７）ＶＣＨ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，ＮＹ（ｔｒａｎｓｌａｔｅｄ  ｂｙ  Ｈｏｒｓｔ  Ｉｂｅｌｇａｕｆｔｓ），６３４  ｐｐ．（ＩＳＢＮ  ０−８９５７３−６１４−４）．
【０２５２】
参照による組込み
本願の随所に引用する場合もある全引用資料（文献、特許、特許出願及びウェブサイト）とその引用資料は全目的でその内容全体を特に本願に組込む。特に指定しない限り、本発明の実施には、当分野で周知の免疫学、分子生物学及び細胞生物学の慣用技術を利用する。
【０２５３】
等価物
本発明はその趣旨又は本質的特徴から逸脱せずに他の特定形態で実施することもできる。従って、上記実施形態はあらゆる点において例証とみなすべきであり、本願に記載する発明を限定するものではない。従って、本発明の範囲は上記記載ではなく、特許請求の範囲に指定され、従って、特許請求の範囲と等価の意味及び範囲内に該当する全変更も本願に含むものとする。
【配列表】
2013507929000001.app
【国際調査報告】
2013507929.tif 000019