(57)【要約】  本発明は、タンパク質チロシンキナーゼ阻害活性を有する新規フルオロ置換３,５−ジシアノ−４−（１Ｈ−インダゾール−５−イル）−２,６−ジメチル−１,４−ジヒドロピリジン誘導体、それらの製造方法、並びに、ｃ−Ｍｅｔに媒介される疾患またはｃ−Ｍｅｔに媒介される症状、特に癌および他の増殖性障害の処置のためのそれらの使用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）
【化１】
2013506699.tif 000076
［式中、
Ｒ１は、水素、フルオロ、メチルまたはエチルであり、
Ｒ２は、メチル、ジフルオロメチルまたはトリフルオロメチルであり、
Ｒ３は、水素またはフルオロであり、
Ｒ４は、水素、メチルまたはエチルであり、
Ｒ５は、水素またはメチルである］
の化合物、またはその医薬的に許容し得る塩、水和物もしくは溶媒和物。
【請求項２】
Ｒ５が水素である、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物、またはその医薬的に許容し得る塩、水和物もしくは溶媒和物。
【請求項３】
Ｒ１が水素またはフルオロである、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物、またはその医薬的に許容し得る塩、水和物もしくは溶媒和物。
【請求項４】
式中、
Ｒ１が、水素またはフルオロであり、
Ｒ２が、メチルまたはジフルオロメチルであり、
Ｒ３が、水素またはフルオロであり、
Ｒ４が、水素またはメチルであり、
Ｒ５が、水素である、
請求項１、請求項２または請求項３に記載の式（Ｉ）の化合物、またはその医薬的に許容し得る塩、水和物もしくは溶媒和物。
【請求項５】
化合物が、
ｒａｃ−２−メチル−４−（３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）−６−（トリフルオロメチル）−１,４−ジヒドロピリジン−３,５−ジカルボニトリル；
（４Ｒ）−２−メチル−４−（３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）−６−（トリフルオロメチル）−１,４−ジヒドロピリジン−３,５−ジカルボニトリル；
（４Ｓ）−２−メチル−４−（３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）−６−（トリフルオロメチル）−１,４−ジヒドロピリジン−３,５−ジカルボニトリル；
ｒａｃ−２−（ジフルオロメチル）−４−（６−フルオロ−３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）−６−メチル−１,４−ジヒドロピリジン−３,５−ジカルボニトリル；
（４Ｒ）−２−（ジフルオロメチル）−４−（６−フルオロ−３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）−６−メチル−１,４−ジヒドロピリジン−３,５−ジカルボニトリル；
（４Ｓ）−２−（ジフルオロメチル）−４−（６−フルオロ−３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）−６−メチル−１,４−ジヒドロピリジン−３,５−ジカルボニトリル；
２,６−ビス（ジフルオロメチル）−４−（３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）−１,４−ジヒドロピリジン−３,５−ジカルボニトリル；
２,６−ビス（ジフルオロメチル）−４−（６−フルオロ−３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）−１,４−ジヒドロピリジン−３,５−ジカルボニトリル；
および
ｒａｃ−４−（６−フルオロ−１Ｈ−インダゾール−５−イル）−２−メチル−６−（トリフルオロメチル）−１,４−ジヒドロピリジン−３,５−ジカルボニトリル；
からなる群から選択される、請求項１、請求項２、請求項３または請求項４に記載の式（Ｉ）の化合物、またはその医薬的に許容し得る塩、水和物もしくは溶媒和物。
【請求項６】
式（Ｉ−Ａ）
【化２】
2013506699.tif 000077
［式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は請求項１ないし請求項５のいずれかに記載の意味を有し、
Ｑ＋は、アルカリ金属陽イオンまたは四級アンモニウム陽イオンである］
の請求項１ないし請求項５のいずれかに記載の塩、またはその水和物もしくは溶媒和物。
【請求項７】
Ｑ＋がナトリウムもしくはカリウム陽イオンまたは２−ヒドロキシエチルトリメチルアンモニウム（コリン）陽イオンである、請求項６に記載の式（Ｉ−Ａ）の塩、またはその水和物もしくは溶媒和物。
【請求項８】
Ｑ＋が２−ヒドロキシエチルトリメチルアンモニウム（コリン）陽イオンである、請求項６または請求項７に記載の式（Ｉ−Ａ）の塩、またはその水和物もしくは溶媒和物。
【請求項９】
請求項１ないし請求項５のいずれかに記載の式（Ｉ）の化合物または請求項６ないし８のいずれかに記載の式（Ｉ−Ａ）の塩の製造方法であって、式（ＩＩ）
【化３】
2013506699.tif 000078
（式中、Ｒ３およびＲ４は、請求項１ないし請求項５のいずれかに記載の意味を有する）
のインダゾリルアルデヒドを、まず、式（ＩＩＩ）
【化４】
2013506699.tif 000079
のケトニトリルまたはそのナトリウムエノラート（式中、Ｒ２は請求項１ないし請求項５のいずれかに記載の意味を有する）と、酸、酸／塩基の組合せおよび／または脱水剤の存在下で反応させ、式（ＩＶ）
【化５】
2013506699.tif 000080
（式中、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、請求項１ないし請求項５のいずれかに記載の意味を有する）
の化合物を得、次いで、後者を、式（Ｖ）
【化６】
2013506699.tif 000081
（式中、Ｒ１は、請求項１ないし請求項５のいずれかに記載の意味を有する）
のエナミノニトリル、または、式（ＶＩ）
【化７】
2013506699.tif 000082
（式中、Ｒ１は、請求項１ないし請求項５のいずれかに記載の意味を有する）
のケトニトリルと、酢酸アンモニウムなどのアンモニア供給源の存在下で縮合させ、式（Ｉ−Ｂ）
【化８】
2013506699.tif 000083
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、請求項１ないし請求項５のいずれかに記載の意味を有する）
の化合物を得、場合により、続いて、
［Ａ］式（ＶＩＩ）
ＣＨ３−Ｘ    （ＶＩＩ）
（式中、Ｘは、ハロゲン、メシレート、トリフレート、トシレートまたはサルフェートなどの脱離基を表す）
の化合物を塩基の存在下で用いてジヒドロピリジンＮ−メチル化を行い、式（Ｉ−Ｃ）
【化９】
2013506699.tif 000084
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、請求項１ないし請求項５のいずれかに記載の意味を有する）
の化合物を得るか、
または、
［Ｂ］式（ＶＩＩＩ）
Ｑ＋Ｚ−    （ＶＩＩＩ）
（式中、Ｑ＋は、請求項６ないし請求項８のいずれかに記載の意味を有し、
Ｚ−は、ヒドロキシド、炭酸または重炭酸などの塩基性陰イオンを表す）
の物質で処理することによりジヒドロピリジン塩形成を行い、式（Ｉ−Ａ）
【化１０】
2013506699.tif 000085
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、請求項１ないし請求項５のいずれかに記載の意味を有し、Ｑ＋は、請求項６ないし請求項８のいずれかに記載の意味を有する）
の１,４−ジヒドロピリジニド塩を得、
場合により、続いて、必要に応じて、（ｉ）好ましくはクロマトグラフィーの方法を使用して、化合物（Ｉ−Ｂ）および（Ｉ−Ｃ）をそれらの各々のエナンチオマーに分離する、および／または、（ｉｉ）対応する溶媒での処理により、化合物（Ｉ−Ｂ）および（Ｉ−Ｃ）または塩（Ｉ−Ａ）をそれらの各々の水和物または溶媒和物に変換することを特徴とする、方法。
【請求項１０】
疾患の処置または予防のための、請求項１ないし請求項５のいずれかに記載の化合物または請求項６ないし請求項８のいずれかに記載の塩。
【請求項１１】
細胞増殖性障害の処置または予防用の医薬組成物を製造するための、請求項１ないし請求項５のいずれかに記載の化合物または請求項６ないし請求項８のいずれかに記載の塩の使用。
【請求項１２】
細胞増殖性障害が癌である、請求項１１に記載の使用。
【請求項１３】
請求項１ないし請求項５のいずれかに記載の化合物または請求項６ないし請求項８のいずれかに記載の塩またはその水和物もしくは溶媒和物、および、医薬的に許容し得る補助剤を含む、医薬組成物。
【請求項１４】
１種またはそれ以上のさらなる治療剤をさらに含む、請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
さらなる治療剤が抗腫瘍剤である、請求項１４に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
細胞増殖性障害の処置または予防のための、請求項１３ないし請求項１５のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項１７】
哺乳動物の細胞増殖性障害の処置または予防方法であって、それを必要としている哺乳動物に、治療的に有効な量の１種またはそれ以上の請求項１ないし請求項５のいずれかに記載の化合物、または、１種またはそれ以上の請求項６ないし請求項８のいずれかに記載の塩、または、請求項１３ないし請求項１５のいずれかに記載の医薬組成物を投与することを含む方法。
【請求項１８】
細胞増殖性障害が癌である、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
癌が、乳房、呼吸器、脳、生殖器官、消化管、尿路、眼、肝臓、皮膚、頭頸部、甲状腺、副甲状腺の癌、または、固形腫瘍の遠隔転移である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
請求項１ないし請求項５のいずれかに記載の化合物、または、請求項６ないし請求項８のいずれかに記載の塩、または、請求項１３ないし請求項１５のいずれかに記載の医薬組成物が、外科手術または放射線療法と併せて投与される、請求項１８に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、タンパク質チロシンキナーゼ阻害活性を有する新規フルオロ置換３,５−ジシアノ−４−（１Ｈ−インダゾール−５−イル）−２,６−ジメチル−１,４−ジヒドロピリジン誘導体、それらの製造方法、並びに、ｃ−Ｍｅｔに媒介される疾患またはｃ−Ｍｅｔに媒介される症状、特に癌および他の増殖性障害の処置のためのそれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
癌は、最も一般的な広まった疾患の１つである。２００２年には、世界中で４４０万人を超える人々が、乳癌、大腸癌、卵巣癌、肺癌または前立腺癌と診断され、２５０万人を超える人々がこれらの破壊的な疾患により死亡した（Globocan 2002 Report; http://www-dep.iarc.fr/globocan/downloads.htm）。２００５年には、合衆国単独で、１２５万を超える新たな症例および５０００００を超える癌による死亡数が予測された。これらの新たな症例の大多数は、大腸（〜１０００００）、肺（〜１７００００）、乳房（〜２１００００）および前立腺（〜２３００００）の癌であると予測された。癌の発病率および罹患率は、１.４％の平均増加率を反映して、両方とも今後１０年にわたって約１５％増加すると予測されている（American Cancer Society, Cancer Facts and Figures 2005; http://www.cancer.org/docroot/STT/content/STT_ 1x_Cancer_Facts_Figures_2007.asp）。
【０００３】
癌が発生し得る道筋は多数存在し、これが、それらの治療が困難である理由の１つである。１つの道筋は、腫瘍性タンパク質による細胞の形質転換であり、これは、正常な細胞タンパク質から、これらのタンパク質の非生理的活性化をもたらす遺伝子の突然変異により生じる。数々の腫瘍性タンパク質が派生するタンパク質の１つのファミリーは、チロシンキナーゼ（例えば、ｓｒｃキナーゼ）、および、特に、受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）である。過去２０年間に、多数の研究手段により、哺乳動物細胞の増殖制御における、受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）に媒介されるシグナル伝達の重要性が立証されてきた。最近、抗腫瘍性物質としてチロシンキナーゼの選択的低分子阻害剤を用いて、臨床で成果が得られた。
【０００４】
ｃ−Ｍｅｔ受容体も、受容体チロシンキナーゼである。その発癌能力は１９８０年代の初期に同定され、そのとき、突然変異したＭｅｔが化学的に誘導されたヒト骨肉腫細胞株から単離され、それは、そのＮ末端の二量体化ドメインに融合したＭｅｔ遺伝子のキナーゼドメインを含んでいた［C.S. Cooper et al., Nature 311: 29-33 (1984)]。
【０００５】
細胞のＭｅｔタンパク質は、一本鎖の１９０ｋｄの前駆体として合成されるヘテロ二量体の膜貫通タンパク質である［G.A. Rodrigues et al., Mol. Cell Biol. 11: 2962-70 (1991)］。この前駆体は、細胞内でアミノ酸残渣３０７の後で切断され、ジスルフィド架橋により結合した５０ｋｄのα鎖および１４５ｋｄのβ鎖を形成する。α鎖は完全に細胞外にあるのに対し、β鎖は細胞膜を貫通する。β鎖はＮ末端のセマ（sema）ドメインを含み、それは、α鎖と共にリガンド結合を媒介する。β鎖の外部ドメインの残りの部分は、システインに富むドメインおよび４個の免疫グロブリンドメインを含み、続いて膜貫通領域および細胞内ドメインを含む。細胞内ドメインは、ジャクスタメンブレンドメイン、キナーゼドメインおよびＣ末端ドメインを含有し、それは、下流のシグナル伝達を媒介する。リガンドが結合すると、受容体の二量体化が誘導され、ジャクスタメンブレン領域（Ｙ１００３）、キナーゼの活性化ループ（Ｙ１２３４およびＹ１２３５）およびカルボキシ末端ドメイン（Ｙ１３４９およびＹ１３５６）のチロシン自己リン酸化段階のカスケードによりキナーゼドメインが活性化される。リン酸化されたＹ１３４９およびＹ１３５６は、下流のｃ−Ｍｅｔシグナル伝達に必要なアダプタータンパク質を結合するための多基質の結合部位を含む [C. Ponzetto et al., Cell 77: 261-71 (1994)]。ｃ−Ｍｅｔシグナル伝達に最も重要な基質の一つは、足場となるアダプタータンパク質のＧａｂ１であり、それは、Ｙ１３４９またはＹ１３５６のいずれかに、変わったホスホチロシン結合部位（ｍｂｓ：ｍｅｔ結合部位と呼ばれる）を介して結合し、それは、独特の長い細胞内シグナルを引き起こす。もう１つの重要な基質は、アダプタータンパク質のＧｒｂ２である。細胞の中身に応じて、これらのアダプターは、ＥＲＫ／ＭＡＰＫ、ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ、Ｒａｓ、ＪＮＫ、ＳＴＡＴ、ＮＦκＢおよびβ−カテニンを介してシグナル伝達するものなどの様々な細胞内シグナル伝達経路の活性化を媒介する。
【０００６】
ｃ−Ｍｅｔは、散乱因子としても知られている肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）およびそのスプライスバリアントによりユニークに活性化され、それは、その唯一の既知の生物学的に活性なリガンドである［L. Naldini et al., Oncogene 6: 501-4 (1991)］。ＨＧＦは、プラスミノーゲンファミリーのプロテイナーゼとの類似性を示す明瞭な構造を有する。それは、アミノ末端ドメイン、続いて４個のクリングルドメイン、および、酵素的に活性ではないセリンプロテアーゼ相同ドメインを含む。ｃ−Ｍｅｔと同様に、ＨＧＦは、不活性な一本鎖前駆体（ｐｒｏ−ＨＧＦ）として合成され、それは、セリンプロテアーゼ（例えば、プラスミノーゲンの活性化因子および凝固因子）により細胞外で切断され、ジスルフィド結合した活性のあるαおよびβ鎖のヘテロ二量体に変換される。ＨＧＦは、ヘパラン硫酸プロテオグリカンに高い親和性で結合し、それは、ＨＧＦを主に細胞外マトリックスと結合させ続け、その拡散を制限する。結晶構造分析は、ＨＧＦが二量体を形成し、ｃ−Ｍｅｔへの結合の際に、受容体の二量体化を誘導することを示す。
【０００７】
ＨＧＦは、間葉系細胞により発現され、特に上皮細胞で広く発現されるｃ−ＭｅｔへのＨＧＦの結合は、上皮、内皮、神経および造血細胞を含む様々な組織で多面的な作用をもたらす。その作用は、一般的に、以下の現象の１つまたは全てを含む：ｉ）有糸分裂誘発の刺激；ＨＧＦは、肝細胞に対する分裂促進活性により同定された；ｉｉ）浸潤および遊走の刺激；独立した実験アプローチにおいて、ＨＧＦは、細胞運動（「散乱」）の誘導に基づき、散乱因子として同定された；および、ｉｉｉ）形態形成（管形成）の刺激。ＨＧＦは、コラーゲンマトリックス中でイヌの腎臓細胞から分岐した細管の形成を誘導する。さらに、遺伝子改変マウスおよび細胞培養実験からの証拠は、ｃ−Ｍｅｔが生存受容体として作用し、細胞をアポトーシスから保護することを示す［N. Tomita et al., Circulation 107: 1411-1417 (2003); S. Ding et al., Blood 101: 4816-4822 (2003); Q. Zeng et al., J. Biol. Chem. 277: 25203-25208 (2002); N. Horiguchi et al., Oncogene 21: 1791-1799 (2002); A. Bardelli et al., Embo J. 15: 6205-6212 (1996); P. Longati et al., Cell Death Differ. 3: 23-28 (1996); E.M. Rosen, Symp. Soc. Exp. Biol. 47: 227-234 (1993)］。ＨＧＦによるこれらの生物学的過程の調和した実行は、「浸潤性増殖」と呼ばれる特異的な遺伝子的プログラムをもたらす。
【０００８】
正常な状態では、ｃ−ＭｅｔおよびＨＧＦは、マウスの胚発生に、特に胎盤および肝臓の発生に、そして、四肢の体節からの筋芽細胞の方向性のある遊走に必須である。ｃ−ＭｅｔまたはＨＧＦ遺伝子の遺伝子的破壊は、同一の現象をもたらし、このことは、それらの独特の相互作用を示す。成体の生物におけるｃ−Ｍｅｔ／ＨＧＦの生理的役割はあまり理解されていないが、実験的証拠は、それらが創傷治癒、組織再生、造血および組織の恒常性維持に関与することを示唆する。
【０００９】
腫瘍性タンパク質ＴＰＲ−ＭＥＴの同定は、ｃ−Ｍｅｔが腫瘍形成において役割を果たし得ることの最初のヒントであった。さらなる実質的な証拠は、数々の異なる実験アプローチに由来する。ヒトおよびマウス細胞株におけるｃ−ＭｅｔまたはＨＧＦの過剰発現は、ヌードマウスで発現されると、腫瘍形成能および転移性形質を誘導する。遺伝子導入によるｃ−ＭｅｔまたはＨＧＦの過剰発現は、マウスで腫瘍形成を誘導する。
【００１０】
最も興味深いことに、ｃ−Ｍｅｔのミスセンス変異または受容体を活性化する突然変異が、孤発性および遺伝性乳頭状腎癌（ＨＰＲＣ）、並びに、肺、胃、肝臓、頭頸部、卵巣および脳の癌などの他の癌のタイプにおいて同定された。重要なことに、ＨＰＲＣの家系における特異的ｃ−Ｍｅｔ突然変異は疾患と共に分離しており、ｃ−Ｍｅｔ活性化とヒトの癌の因果関係を形成している［L. Schmidt et al., Nat. Genet. 16: 68-73 (1997); B. Zbar et al., Adv. Cancer Res. 75: 163-201 (1998）］。最強の形質転換活性を有する活性化突然変異は、活性化ループ（Ｄ１２２８Ｎ／ＨおよびＹ１２３０Ｈ／Ｄ／Ｃ）および隣接するＰ＋１ループ（Ｍ１２５０Ｔ）に位置する。それより弱いさらなる突然変異が、触媒ループ近傍およびキナーゼドメインのＡローブ内に見出された。さらに、ｃ−Ｍｅｔのジャクスタメンブレンドメインのいくつかの突然変異が肺の腫瘍で観察され、それは、キナーゼを直接活性化しないが、ユビキチン化および後続の分解に対する耐性を与えることにより、タンパク質を安定化する［M. Kong-Beltran et al., Cancer Res. 66: 283-9 (2006); T.E. Taher et al., J. Immunol. 169: 3793-800 (2002); P. Peschard et al., Mol. Cell 8: 995-1004 (2001)]。興味深いことに、ｃ−Ｍｅｔの体細胞突然変異は、様々な癌における攻撃性の増加および広範な転移と関連する。生殖系および体細胞突然変異の頻度は低いが（５％未満）、パラ分泌または自己分泌メカニズムによる、突然変異なしでｃ−Ｍｅｔシグナル伝達の調節解除を導く他の主要なメカニズムが観察された。骨肉腫または横紋筋肉腫などの生理的にＨＧＦを産生する間葉系細胞に由来する腫瘍において、そして、外胚葉由来の神経膠芽腫および乳癌において、パラ分泌の活性化が観察された。
【００１１】
しかしながら、最も頻繁な症例は、大腸、膵臓、胃、乳房、前立腺、卵巣および肝臓の癌腫で観察されるように、ｃ−Ｍｅｔが過剰発現される癌腫である。過剰発現は、例えば、胃および肺の腫瘍細胞株で観察されるように、遺伝子の増幅により生じ得る。ごく最近、ｃ−Ｍｅｔの過剰発現が、ＥＧＦ受容体阻害への耐性を獲得した肺腫瘍細胞株で検出された［J.A. Engelmann et al., Science 316: 1039-1043 (2007)]。ｃ−Ｍｅｔを過剰発現するいくつかの上皮腫瘍は、ＨＧＦも共発現し、自己分泌のｃ−Ｍｅｔ／ＨＧＦ刺激ループをもたらし、それにより間質性細胞に由来するＨＧＦの必要性を回避する。
【００１２】
一般に、ヒトの癌におけるｃ−Ｍｅｔの異常な活性化は、特定のメカニズムに拘わらず、典型的には予後不良と関連することが見出された［J.G. Christensen et al., Cancer Lett. 225: 1-26 (2005)]。
【００１３】
まとめると、ｃ−Ｍｅｔを重要な癌の標的として実証する多数のインビトロおよびインビボの研究が行われ、総合的なリストを http://www.vai.org/met で見ることができる[C. Birchmeier et al., Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 4: 915-25 (2003)］。ヒトの腫瘍における異常なＭｅｔシグナル伝達を弱めるためのいくつかの戦略が続き、それには、とりわけ、ＨＧＦアンタゴニストおよび低分子阻害剤が含まれる。ＡＲＱ−１９７（Arqule）、フェレチニブ（foretinib）（ＸＬ−８８０、Exelixis/GSK）およびＰＨ−２３４１０６６（Pfizer）などの数々の低分子阻害剤が現在臨床開発中である；それらは、最近論評された［J.J. Cui, Expert Opin. Ther. Patents 17: 1035-45 (2007)]。
【００１４】
ＷＯ２００６／０６６０１１−Ａ２では、アリールまたはヘテロアリール基を４位に有するハロアルキル置換３−シアノ−１,４−ジヒドロピリジン誘導体は、ステロイド受容体およびカルシウムチャネルの活性の両方のモジュレーターとして記載され、従って、心血管疾患の処置に特に有用である。４−フェニル−１,４−ジヒドロピリジン誘導体を使用するアルツハイマー病の処置方法は、ＷＯ２００６／０７４４１９−Ａ２で特許請求された。
【００１５】
ｃ−Ｍｅｔキナーゼ阻害活性を有する様々に置換された３−シアノ−４−ヘテロアリール−１,４−ジヒドロピリジン類が、最近ＷＯ２００８／０７１４５１−Ａ１で開示された。しかしながら、このｃ−Ｍｅｔ阻害剤の新規構造クラスのさらなる研究中に、候補化合物は不満足な経口バイオアベイラビリティーにより頻繁に損なわれることが明らかになり、それは、ラットの血液クリアランス測定から最初に予測されたものよりも有意に低いと判明した。経口バイオアベイラビリティーは化合物がどのくらい良好に吸収されるかにも依存するので、これらの化合物の薬物動態および物理化学的プロフィールを前提に、低い溶解性および／または不適切な胃腸管の透過性がこのような吸収の限定を導き得るという仮説が立てられた。
【発明の概要】
【００１６】
従って、本発明によって解決されるべき技術的課題は、溶解性および／または透過性の増加を示し、続いてこれらの化合物の経口投与後に吸収される割合の増加を導く、強力なｃ−Ｍｅｔキナーゼ阻害活性を有する代替的化合物を同定することにあると思われる。
【００１７】
驚くべきことに、この度、２位および６位のメチル基の少なくとも１個がジフルオロメチルまたは置換ジフルオロメチル基で置き換えられているある種の３,５−ジシアノ−４−（１Ｈ−インダゾール−５−イル）−２,６−ジメチル−１,４−ジヒドロピリジン誘導体が、有意に改善されたインビトロの透過特性を示し、これは、また、ラットのインビボ研究における薬物動態により確認される通り、そのような化合物の経口バイオアベイラビリティーの増加につながることが見出された。
【００１８】
従って、ある態様では、本発明は、一般式（Ｉ）
【化１】
2013506699.tif 000002
［式中、
Ｒ１は、水素、フルオロ、メチルまたはエチルであり、
Ｒ２は、メチル、ジフルオロメチルまたはトリフルオロメチルであり、
Ｒ３は、水素またはフルオロであり、
Ｒ４は、水素、メチルまたはエチルであり、
Ｒ５は、水素またはメチルである］
のフルオロ置換３,５−ジシアノ−４−（１Ｈ−インダゾール−５−イル）−２,６−ジメチル−１,４−ジヒドロピリジン誘導体に関する。
【００１９】
好ましい実施態様では、本発明は、式中、Ｒ５が水素である式（Ｉ）の化合物に関する。
他の好ましい実施態様では、本発明は、式中、Ｒ１が水素またはフルオロである式（Ｉ）の化合物に関する。
【００２０】
さらに好ましい実施態様では、本発明は、式中、
Ｒ１が、水素またはフルオロであり、
Ｒ２が、メチルまたはジフルオロメチルであり、
Ｒ３が、水素またはフルオロであり、
Ｒ４が、水素またはメチルであり、
Ｒ５が水素である、
式（Ｉ）の化合物に関する。
【００２１】
特に好ましい実施態様では、本発明は、以下の化合物からなる群から選択される式（Ｉ）の化合物に関する；
ｒａｃ−２−メチル−４−（３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）−６−（トリフルオロメチル）−１,４−ジヒドロピリジン−３,５−ジカルボニトリル；
（４Ｒ）−２−メチル−４−（３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）−６−（トリフルオロメチル）−１,４−ジヒドロピリジン−３,５−ジカルボニトリル；
（４Ｓ）−２−メチル−４−（３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）−６−（トリフルオロメチル）−１,４−ジヒドロピリジン−３,５−ジカルボニトリル；
ｒａｃ−２−（ジフルオロメチル）−４−（６−フルオロ−３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）−６−メチル−１,４−ジヒドロピリジン−３,５−ジカルボニトリル；
（４Ｒ）−２−（ジフルオロメチル）−４−（６−フルオロ−３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）−６−メチル−１,４−ジヒドロピリジン−３,５−ジカルボニトリル；
（４Ｓ）−２−（ジフルオロメチル）−４−（６−フルオロ−３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）−６−メチル−１,４−ジヒドロピリジン−３,５−ジカルボニトリル；
２,６−ビス（ジフルオロメチル）−４−（３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）−１,４−ジヒドロピリジン−３,５−ジカルボニトリル；
２,６−ビス（ジフルオロメチル）−４−（６−フルオロ−３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）−１,４−ジヒドロピリジン−３,５−ジカルボニトリル；
および
ｒａｃ−４−（６−フルオロ−１Ｈ−インダゾール−５−イル）−２−メチル−６−（トリフルオロメチル）−１,４−ジヒドロピリジン−３,５−ジカルボニトリル。
【００２２】
さらに、非置換ジヒドロピリジン窒素原子［式（Ｉ）中のＲ５＝Ｈ］を含有する本発明の化合物は、穏やかな塩基性条件下で安定な塩の形態に変換でき、脱プロトン化された窒素原子を有する十分に定義された１,４−ジヒドロピリジニド類をもたらすことが、予想外に見出された。これらの先例のない知見は、溶解性を高め、吸収特性に有利に影響を与えるためのさらなる選択肢を提供する。
【００２３】
従って、第２の態様では、本発明は、一般式（Ｉ−Ａ）
【化２】
2013506699.tif 000003
［式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は上記の意味を有し、
Ｑ＋は、アルカリ金属陽イオンまたは四級アンモニウム陽イオンである］
を有するフルオロ置換３,５−ジシアノ−４−（１Ｈ−インダゾール−５−イル）−２,６−ジメチル−１,４−ジヒドロピリジン類の塩に関する。
【００２４】
好ましい実施態様では、本発明は、式中、Ｑ＋がナトリウムまたはカリウム陽イオンまたは２−ヒドロキシエチルトリメチルアンモニウム（コリン）陽イオンである式（Ｉ−Ａ）のジヒドロピリジン塩に関する。
特に好ましい実施態様では、本発明は、式中、Ｑ＋が２−ヒドロキシエチルトリメチルアンモニウム（コリン）陽イオンである式（Ｉ−Ａ）のジヒドロピリジン塩に関する。
【００２５】
本発明による化合物および塩は、水和物または溶媒和物の形態でも存在できる。
本発明の目的上、塩は、好ましくは本発明による化合物の医薬的に許容し得る塩である（例えば、S. M. Berge et al., "Pharmaceutical Salts", J. Pharm. Sci. 1977, 66, 1-19 参照）。
【００２６】
本発明の化合物または塩の水和物は、水と化合物または塩の化学量論組成物、例えば、半、一または二水和物である。
本発明の化合物または塩の溶媒和物は、溶媒と化合物または塩の化学量論組成物である。
【００２７】
四級アンモニウム陽イオンは、本発明に関して、窒素原子に結合した４個の同一であるかまたは異なる直鎖または分枝鎖のアルキル基（ここで、各アルキル基は１個ないし６個の炭素原子を有し、各アルキル基は、ヒドロキシ基でさらに置換されていてもよい）を有するテトラアルキルアンモニウム陽イオンを表す。好ましく挙げられる例は、テトラメチルアンモニウム、テトラエチルアンモニウム、テトラ−ｎ−ブチルアンモニウムおよび２−ヒドロキシエチルトリメチルアンモニウム（コリン）である。
【００２８】
本発明の化合物および塩は、不斉中心の性質または回転の制限により、異性体（エナンチオマー、ジアステレオマー）の形態で存在し得る。不斉中心が（Ｒ）−、（Ｓ）−または（Ｒ,Ｓ）−立体配置である異性体が存在し得る。
【００２９】
本発明の化合物の異性体は全て、分離されているか、純粋であるか、部分的に純粋であるか、または、ジアステレオマーもしくはラセミ混合物のいずれであろうと、本発明の範囲内に包含される。純粋なジアステレオマーおよび純粋なエナンチオマーが好ましい実施態様であることが理解されよう。該異性体の精製および該異性体混合物の分離は、当分野で知られている標準的技法により達成し得る。例えば、ジアステレオマー混合物は、クロマトグラフィー処理または結晶化により個々の異性体に分離され得、ラセミ体は、キラル相でのクロマトグラフィー処理または分割により、各々のエナンチオマーに分離できる。
さらに、上記の化合物および塩のすべての可能な互変異性体も、本発明に従って包含される。
【００３０】
他の実施態様では、本発明は一般式（Ｉ）の化合物および／または一般式（Ｉ−Ａ）のジヒドロピリジン塩の製造方法に関し、式（ＩＩ）
【化３】
2013506699.tif 000004
（式中、Ｒ３およびＲ４は、上記の意味を有する）
のインダゾリルアルデヒドを、まず、式（ＩＩＩ）
【化４】
2013506699.tif 000005
のケトニトリルまたはそのナトリウムエノラート（式中、Ｒ２は上記の意味を有する）と、酸、酸／塩基の組合せおよび／または脱水剤の存在下で反応させ、式（ＩＶ）
【化５】
2013506699.tif 000006
（式中、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、上記の意味を有する）
の化合物を得、
【００３１】
次いで、後者を、式（Ｖ）
【化６】
2013506699.tif 000007
（式中、Ｒ１は、上記の意味を有する）
のエナミノニトリル、または、式（ＶＩ）
【化７】
2013506699.tif 000008
（式中、Ｒ１は、上記の意味を有する）
のケトニトリルと、酢酸アンモニウムなどのアンモニア供給源の存在下で縮合させ、式（Ｉ−Ｂ）
【化８】
2013506699.tif 000009
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、上記の意味を有する）
の化合物を得、場合により、続いて、
【００３２】
［Ａ］式（ＶＩＩ）
ＣＨ３−Ｘ    （ＶＩＩ）
（式中、Ｘは、ハロゲン、メシレート、トリフレート、トシレートまたはサルフェートなどの脱離基を表す）
の化合物を塩基の存在下で用いてジヒドロピリジンＮ−メチル化を行い、式（Ｉ−Ｃ）
【化９】
2013506699.tif 000010
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、上記の意味を有する）
の化合物を得るか、
または、
［Ｂ］式（ＶＩＩＩ）
Ｑ＋Ｚ−    （ＶＩＩＩ）
（式中、Ｑ＋は、上記の意味を有し、
Ｚ−は、ヒドロキシド、炭酸または重炭酸などの塩基性陰イオンを表す）
の物質で処理することによりジヒドロピリジン塩形成を行い、式（Ｉ−Ａ）
【化１０】
2013506699.tif 000011
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＱ＋は、上記の意味を有する）
の１,４−ジヒドロピリジニド塩を得、
場合により、続いて、必要に応じて、（ｉ）好ましくはクロマトグラフィーの方法を使用して、化合物（Ｉ−Ｂ）および（Ｉ−Ｃ）をそれらの各々のエナンチオマーに分離する、および／または、（ｉｉ）対応する溶媒での処理により、化合物（Ｉ−Ｂ）および（Ｉ−Ｃ）または塩（Ｉ−Ａ）をそれらの各々の水和物または溶媒和物に変換することを特徴とする。
【００３３】
連続工程（ＩＩ）＋（ＩＩＩ）→（ＩＶ）、（ＩＶ）＋（Ｖ）→（Ｉ−Ｂ）は、上記の通り２つの別個の段階で、または、ワンポットの手順を使用して、即ち、中間体化合物（ＩＶ）を明確に単離せずに、実施し得る；いくつかの場合では、個々の反応成分の反応性に依存して、化合物（ＩＩ）、（ＩＩＩ）および（Ｖ）の１フラスコ／３成分の縮合反応を実施することも可能であり得る［一般的な１,４−ジヒドロピリジン類の合成には、例えば、D.M. Stout, A.I. Meyers, Chem. Rev. 1982, 82, 223-243; H. Meier et al., Liebigs Ann. Chem. 1977, 1888; H. Meier et al., ibid. 1977, 1895; H. Meier et al., ibid. 1976, 1762; F. Bossert et al., Angew. Chem. 1981, 93, 755 参照］。
工程（ＩＩ）＋（ＩＩＩ）→（ＩＶ）および（ＩＶ）＋（Ｖ）／（ＶＩ）→（Ｉ−Ｂ）は、一般的に、不活性溶媒中、＋２０℃ないし溶媒の沸点の範囲の温度で、大気圧下で実施する。
【００３４】
この目的に適する溶媒は、例えば、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール、ｔｅｒｔ−ブタノールまたはｎ−ペンタノールなどのアルコール類、ヘキサン、シクロヘキサン、ベンゼン、トルエンまたはキシレンなどの炭化水素類、ジクロロメタン、トリクロロメタン、テトラクロロメタン、トリクロロエタン、１,２−ジクロロエタン、クロロベンゼンまたはクロロトルエンなどのハロ炭化水素類、テトラヒドロフラン、１,４−ジオキサンまたは１,２−ジメトキシエタンなどのエーテル類、または、アセトニトリルまたは酢酸などの他の溶媒である。これらの溶媒の混合物を使用することも可能である。反応（ＩＩ）＋（ＩＩＩ）→（ＩＶ）は、好ましくは、ジクロロメタン、トルエン、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノールまたはｎ−ペンタノール中、各々の還流温度で、大気圧下で実施し、反応（ＩＶ）＋（Ｖ）／（ＶＩ）→（Ｉ−Ｂ）は、好ましくは、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール、ｎ−ペンタノール、キシレンまたは酢酸中、こちらも還流温度で、大気圧下で実施する。
【００３５】
反応（ＩＩ）＋（ＩＩＩ）→（ＩＶ）は、酸または酸／塩基の組合せ、および、場合により脱水剤、例えば、モレキュラー・シーブの存在下で、有利に実施し得る。適する酸触媒の例は、酢酸、トリフルオロ酢酸、メタンスルホン酸またはｐ−トルエンスルホン酸である；適する塩基は、特に、ピペリジンまたはピリジンである。成分の反応性に依存して、変換（ＩＶ）＋（Ｖ）→（Ｉ−Ｂ）は、さらなる補助物質なしで実施し得るか、または、酸、例えば酢酸により、または、三級アミン塩基、例えばトリエチルアミンまたはピリジンにより、補助され得る。反応（ＩＶ）＋（ＶＩ）→（Ｉ−Ｂ）は、通常、酸の存在下で実施する；好ましくは、酢酸を酸触媒および溶媒または共溶媒の両方として使用する。
【００３６】
反応（ＩＶ）＋（ＶＩ）→（Ｉ−Ｂ）の適するアンモニア供給源は、例えば、ギ酸アンモニウム、酢酸アンモニウム、塩化アンモニウムまたは硫酸水素アンモニウムである；好ましいのは、酢酸アンモニウムである。
【００３７】
メチル化反応（Ｉ−Ｂ）＋（ＶＩＩ）→（Ｉ−Ｃ）用の不活性溶媒は、例えば、ジエチルエーテル、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル、テトラヒドロフラン、１,４−ジオキサンまたは１,２−ジメトキシエタンなどのエーテル類、ベンゼン、トルエン、キシレン、ヘキサンまたはシクロヘキサンなどの炭化水素類、ジクロロメタン、トリクロロメタン、テトラクロロメタン、１,２−ジクロロエタン、トリクロロエタン、テトラクロロエタン、クロロベンゼンまたはクロロトルエンなどのハロ炭化水素類、または、アセトニトリル、Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、Ｎ,Ｎ'−ジメチルプロピレンウレア（ＤＭＰＵ）、Ｎ−メチルピロリジノン（ＮＭＰ）またはピリジンなどの他の溶媒である。これらの溶媒の混合物を使用することも可能である。好ましくは、ジクロロメタン、テトラヒドロフラン、Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミドまたはこれらの混合物を用いる。
【００３８】
工程（Ｉ−Ｂ）＋（ＶＩＩ）→（Ｉ−Ｃ）に適する塩基は、特に、炭酸リチウム、ナトリウム、カリウム、カルシウムまたはセシウムなどのアルカリ金属またはアルカリ土類金属の炭酸塩、水素化ナトリウムまたはカリウムなどのアルカリ金属水素化物、ナトリウムまたはカリウムｔｅｒｔ−ブトキシドなどの立体障害のあるアルカリアルコキシド類、リチウム、ナトリウムまたはカリウムビス（トリメチルシリル）アミドまたはリチウムジイソプロピルアミドなどの立体障害のあるアルカリアミド類、または、トリエチルアミン、Ｎ−メチルモルホリン、Ｎ−メチルピペリジン、Ｎ,Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンまたはピリジンなどの有機アミン類である。炭酸カリウム、炭酸セシウムまたは水素化ナトリウムを好ましくは使用する。
反応（Ｉ−Ｂ）＋（ＶＩＩ）→（Ｉ−Ｃ）は、一般的に、大気圧下、−２０℃ないし＋１００℃、好ましくは０℃ないし＋５０℃の温度範囲で実施する。
【００３９】
塩形成反応（Ｉ−Ｂ）＋（ＶＩＩＩ）→（Ｉ−Ａ）では、物質（ＶＩＩＩ）を、通常、水性溶液として用い、変換は、好ましくは、エタノールまたはテトラヒドロフランなどの水混和性溶媒中、＋２０℃ないし溶媒の沸点の温度範囲で、大気圧下で実施する。
【００４０】
Ｒ１が水素であり、Ｒ２がジフルオロメチルであるか、または、Ｒ１がフルオロであり、Ｒ２がトリフルオロメチルである式（Ｉ）の化合物［即ち、対称性のジヒドロピリジン２,６−二置換を有する式（Ｉ）の化合物］および対応する式（Ｉ−Ａ）の塩は、代替的に、式（ＩＩ）
【化１１】
2013506699.tif 000012
（式中、Ｒ３およびＲ４は、上記の意味を有する）
のインダゾリルアルデヒドを、２当量の式（Ｖ−Ａ）
【化１２】
2013506699.tif 000013
（式中、Ｒ１Ａは、水素またはフルオロを表す）
のエナミノニトリルと、酸および場合により脱水剤の存在下で縮合し、式（Ｉ−Ｄ）
【化１３】
2013506699.tif 000014
（式中、Ｒ１Ａ、Ｒ３およびＲ４は、上記の意味を有する）
の化合物を得ることにより製造でき、次いで、これを、式（Ｉ−Ｅ）
【化１４】
2013506699.tif 000015
（式中、Ｒ１Ａ、Ｒ３およびＲ４は、上記の意味を有する）
のＮ−メチル化誘導体、または、式（Ｉ−Ｆ）
【化１５】
2013506699.tif 000016
（式中、Ｒ１Ａ、Ｒ３、Ｒ４およびＱ＋は、上記の意味を有する）
の１,４−ジヒドロピリジニド塩に、各々、上記の変形［Ａ］および［Ｂ］と同様に、変換し得る。
【００４１】
工程（ＩＩ）＋（Ｖ−Ａ）→（Ｉ−Ｄ）は、通常、アルコールなど、例えば、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール、ｔｅｒｔ−ブタノールまたはｎ−ペンタノール、または、酢酸などのプロトン性有機溶媒中で実施する。これらの溶媒の混合物を使用することも可能である。有利には、この反応は、さらなる添加物として、酸触媒、例えば、酢酸、トリフルオロ酢酸、メタンスルホン酸またはｐ−トルエンスルホン酸、場合により、脱水剤、例えばモレキュラー・シーブの存在下で行う。好ましくは、酢酸を同時に溶媒および酸触媒として使用する。
【００４２】
反応（ＩＩ）＋（Ｖ−Ａ）→（Ｉ−Ｄ）は、一般に、＋２０℃ないし各溶媒の大気圧下での沸点の温度範囲で、好ましくは＋６０℃ないし＋１２０℃で実施する。
変形（Ｉ−Ｄ）→（Ｉ−Ｅ）および（Ｉ−Ｄ）→（Ｉ−Ｆ）には、同様の溶媒、塩基および温度などの反応条件を、同様の変換（Ｉ−Ｂ）→（Ｉ−Ｃ）および（Ｉ−Ｂ）→（Ｉ−Ａ）について上記した通りに、各々適用する。
【００４３】
式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（Ｖ）、（Ｖ−Ａ）、（ＶＩ）、（ＶＩＩ）および（ＶＩＩＩ）の化合物は、購入できるか、文献から知られているか、または、文献に記載の標準的方法の適用により、容易に入手できる出発物質から製造できる（さらなる参考のために、下記の実験のセクションを参照）。
【００４４】
本発明の化合物の製造は、下記の合成スキームを用いて例示説明できる。より詳細な手順は、実施例を記載する実験のセクションで後述する。
スキーム１
【化１６】
2013506699.tif 000017
【００４５】
スキーム２
【化１７】
2013506699.tif 000018
【００４６】
スキーム３
【化１８】
2013506699.tif 000019
【００４７】
以下では、簡潔にするために、「本発明の化合物」、「式（Ｉ）の化合物」などの表現は、一般的に、それに由来する式（Ｉ−Ａ）のジヒドロピリジン塩も含むことを意図する。
【００４８】
使用方法
本発明の化合物は、受容体チロシンキナーゼ類、特にｃ−Ｍｅｔ受容体チロシンキナーゼの活性または発現の強力な阻害剤である。さらに、本発明の化合物は、腸上皮細胞における高い透過性を特徴とし、経口投与後のこれらの化合物の有意に改善されたバイオアベイラビリティー（即ち、吸収される割合の増加）をもたらす。従って、式（Ｉ）の化合物は、治療剤として非常に価値あるものであると期待される。
【００４９】
従って、別の実施態様において、本発明は、上記の式（Ｉ）の化合物の有効量を患者に投与することを含む、処置を必要としている患者における、ｃ−Ｍｅｔキナーゼ活性に関連するか、またはそれにより媒介される障害の処置方法を提供する。ある種の実施態様では、ｃ−Ｍｅｔキナーゼ活性に関連する障害は、細胞増殖性障害、特に癌である。
【００５０】
本文書全体で述べられる用語「処置する」または「処置」は、慣用的に使用されており、例えば、疾患または障害、例えば癌腫の症状と戦うか、それを緩和、縮小、軽減、改善することを目的とする対象の管理またはケアである。
【００５１】
「対象」または「患者」の用語は、細胞増殖性障害に罹患し得るか、またはその他の方法で本発明の化合物の投与から利益を得ることができる生物、例えばヒトおよびヒト以外の動物を包含する。好ましいヒトには、本明細書に記載の細胞増殖性障害または関連状態に罹患しているかまたは罹患し易いヒトの患者が含まれる。用語「ヒト以外の動物」には、脊椎動物、例えば哺乳動物、例えばヒト以外の霊長類、ヒツジ、ウシ、イヌ、ネコおよび齧歯類、例えばマウス、および、非哺乳動物、例えばニワトリ、両生類、爬虫類などが含まれる。
【００５２】
用語「ｃ−Ｍｅｔに関連するか、またはそれにより媒介される障害」は、ｃ−Ｍｅｔ活性と関連または関係する疾患、例えば、ｃ−Ｍｅｔの機能亢進、および、これらの疾患に伴う症状を含む。「ｃ−Ｍｅｔに関連するか、またはそれにより媒介される障害」の例には、異常に多量のｃ−Ｍｅｔまたはｃ−Ｍｅｔの突然変異によるｃ−Ｍｅｔの過剰刺激に起因する障害、または、異常に多量のｃ−Ｍｅｔまたはｃ−Ｍｅｔの突然変異による異常に多量のｃ−Ｍｅｔ活性に起因する障害が含まれる。
【００５３】
用語「ｃ−Ｍｅｔの機能亢進」は、通常はｃ−Ｍｅｔを発現しない細胞におけるｃ−Ｍｅｔ発現、または、通常は活性なｃ−Ｍｅｔを持たない細胞によるｃ−Ｍｅｔ活性、または、望まれない細胞増殖を導くｃ−Ｍｅｔ発現の増加、または、ｃ−Ｍｅｔの構成的活性化を導く突然変異を表す。
【００５４】
用語「細胞増殖性障害」は、細胞の望ましくないか、または制御されない増殖を伴う障害を含む。本発明の化合物は、細胞増殖および／または細胞分裂の防止、阻害、遮断、縮小、低減、制御等、および／または、アポトーシスの誘発に利用できる。この方法は、本発明の化合物またはその医薬的に許容し得る塩、異性体、多形、代謝物、水和物または溶媒和物の、障害の処置または予防に有効な量を、ヒトを含む哺乳動物を含む、それを必要としている対象に投与することを含む。
【００５５】
本発明に関して、細胞増殖性または過増殖性障害には、例えば乾癬、ケロイドおよび他の皮膚を侵す過形成、骨格障害、血管新生または血管増殖性障害、肺高血圧、線維性障害、メサンギウム細胞増殖性障害、結腸ポリープ、多のう胞性腎疾患、良性前立腺肥大症（ＢＰＨ）および固形腫瘍、例えば乳房、呼吸器、脳、生殖器官、消化管、尿路、眼、肝臓、皮膚、頭頸部、甲状腺、副甲状腺の癌、およびそれらの遠隔転移が含まれるが、これらに限定されない。また、これらの障害には、リンパ腫、肉腫および白血病も含まれる。
【００５６】
乳癌の例には、浸潤性乳管癌、浸潤性小葉癌、非浸潤性乳管癌および非浸潤性小葉癌が含まれるが、これらに限定されない。
呼吸器の癌の例には、小細胞肺癌および非小細胞肺癌、並びに気管支腺腫および胸膜肺芽腫が含まれるが、これらに限定されない。
脳の癌の例には、脳幹および視床下部（hypophtalmic）のグリオーマ、小脳および大脳の星状細胞腫、膠芽腫、髄芽腫、上衣腫、並びに、神経外胚葉および松果体の腫瘍が含まれるが、これらに限定されない。
雄性生殖器の腫瘍には、前立腺および精巣の癌が含まれるが、これらに限定されない。雌性生殖器の腫瘍には、子宮内膜、子宮頸、卵巣、膣および外陰部の癌、並びに、子宮の肉腫が含まれるが、これらに限定されない。
【００５７】
消化器の腫瘍には、肛門、結腸、結腸直腸、食道、胆嚢、胃、膵臓、直腸、小腸および唾液腺の癌が含まれるが、これらに限定されない。
泌尿器の腫瘍には、膀胱、陰茎、腎臓、腎盂、尿管、尿道、並びに、遺伝性および孤発性乳頭状腎癌が含まれるが、これらに限定されない。
眼の癌には、眼球内黒色腫および網膜芽細胞腫が含まれるが、これらに限定されない。
肝臓癌の例には、肝細胞癌（線維層状の変化（fibrolamellar variant）が有る、または無い、肝細胞癌腫）、胆管癌（肝臓内の胆管の癌腫）および混合型の肝細胞性胆管癌が含まれるが、これらに限定されない。
【００５８】
皮膚癌には、扁平上皮癌、カポジ肉腫、悪性黒色腫、メルケル細胞皮膚癌および非黒色腫皮膚癌が含まれるが、これらに限定されない。
頭頸部の癌には、喉頭、下咽頭、鼻咽頭、口咽頭の癌、口唇および口腔の癌および扁平上皮癌が含まれるが、これらに限定されない。
リンパ腫には、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、ホジキン病および中枢神経系のリンパ腫が含まれるが、これらに限定されない。
肉腫には、軟部組織の肉腫、骨肉腫、悪性線維性組織球腫、リンパ肉腫および横紋筋肉腫が含まれるが、これらに限定されない。
白血病には、急性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病および有毛細胞白血病が含まれるが、これらに限定されない。
【００５９】
本発明の化合物および方法で処置され得る線維性増殖障害、即ち、細胞外マトリックスの異常形成には、肺線維症、アテローム性動脈硬化症、再狭窄、肝硬変およびメサンギウム細胞増殖性障害が含まれ、糸球体腎炎、糖尿病性ネフロパシー、悪性腎硬化症、血栓性微小血管疾患症候群、移植拒絶および糸球体症などの腎疾患が含まれる。
【００６０】
本発明の化合物の投与により処置され得るヒトまたは他の哺乳動物における他の症状には、腫瘍増大、網膜症（糖尿病性網膜症、虚血性網膜静脈閉塞、未熟児網膜症および加齢性黄斑変性を含む）、関節リウマチ、乾癬、および、表皮下水疱形成を伴う水疱性疾患（類天疱瘡、多形性紅斑および疱疹状皮膚炎を含む）が含まれる。
【００６１】
本発明の化合物はまた、気道および肺の疾患、消化管の疾患並びに膀胱および胆管の疾患の予防および処置に使用され得る。
【００６２】
上記の障害は、ヒトでは十分に特徴付けられているが、哺乳動物を含む他の動物においても類似の病因で存在し、本発明の医薬組成物を投与することにより処置され得る。
【００６３】
式（Ｉ）の化合物は、単一の医薬物質として、または、１種またはそれ以上のさらなる治療剤と組み合わせて投与され得、ここで、その組合せは許容し得ない有害作用を引き起こさない。この併用療法には、式（Ｉ）の化合物および１種またはそれ以上のさらなる治療剤を含む単一の医薬投与製剤の投与、並びに、式（Ｉ）の化合物およびさらなる治療剤の各々の個別医薬投与製剤での投与が含まれる。例えば、式（Ｉ）の化合物および治療剤は、錠剤またはカプセル剤などの単一の経口投与組成物で一体となって患者に投与され得るか、または、各物質は個別の投与製剤で投与され得る。
【００６４】
個別投与製剤を使用する場合、式（Ｉ）の化合物および１種またはそれ以上のさらなる治療剤は、本質的に同じ時間に（例えば、同時に）、または、少しずつ時間をずらして（例えば、連続的に）投与され得る。
【００６５】
特に、本発明の化合物は、他の抗腫瘍剤、例えば、アルキル化剤、代謝拮抗物質、植物由来の抗腫瘍剤、ホルモン療法剤、トポイソメラーゼ阻害剤、カンプトテシン誘導体、キナーゼ阻害剤、標的化された薬剤、抗体、インターフェロンおよび／または生物応答修飾剤、抗血管新生化合物および他の抗腫瘍剤との固定または分離した組み合わせとして使用され得る。これに関して、以下のものは、本発明の化合物と組み合わせて使用し得る第２の物質の例の非限定的なリストである：
【００６６】
・アルキル化剤には、限定されるわけではないが、ナイトロジェンマスタードＮ−オキシド、シクロホスファミド、イフォスファミド、チオテパ、ラニムスチン、ニムスチン、テモゾロミド、アルトレタミン、アパジコン、ブロスタリシン、ベンダムスチン、カルムスチン、エストラムスチン、フォテムスチン、グルフォスファミド、マフォスファミド、ベンダムスチンおよびミトラクトールがある；白金が配位したアルキル化化合物には、限定されるわけではないが、シスプラチン、カルボプラチン、エプタプラチン、ロバプラチン、ネダプラチン、オキサリプラチンおよびサトラプラチンが含まれる；
【００６７】
・代謝拮抗物質には、限定されるわけではないが、メトトレキサート、６−メルカプトプリンリボシド、メルカプトプリン、５−フルオロウラシル単独またはロイコボリンとの組み合わせ、テガフール、ドキシフルリジン、カルモフール、シタラビン、シタラビンオクホスファート、エノシタビン、ゲムシタビン、フルダラビン、５−アザシチジン、カペシタビン、クラドリビン、クロファラビン、デシタビン、エフロルニチン、エチニルシチジン、シトシンアラビノシド、ヒドロキシ尿素、メルファラン、ネララビン、ノラトレキセド、オクフォスファイト、ペメトレキセド（premetrexed）二ナトリウム、ペントスタチン、ペリトレキソール、ラルチトレキセド、トリアピン、トリメトレキサート、ビダラビン、ビンクリスチンおよびビノレルビンが含まれる；
【００６８】
・ホルモン療法剤には、限定されるわけではないが、エキセメスタン、ルプロン（Lupron）、アナストロゾール、ドキセルカルシフェロール、ファドロゾール、ホルメスタン、１１−ベータヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ１阻害剤、１７−アルファヒドロキシラーゼ／１７,２０リアーゼ阻害剤、例えば酢酸アビラテロン、５−アルファレダクターゼ阻害剤、例えばフィナステリドおよびエプリステリド、抗エストロゲン類、例えばクエン酸タモキシフェンおよびフルベストラント、トレルスター（Trelstar）、トレミフェン、ラロキシフェン、ラソフォキシフェン、レトロゾール、抗アンドロゲン類、例えばビカルタミド、フルタミド、ミフェプリストン、ニルタミド、カソデックス（Casodex）、および抗プロゲステロン類およびそれらの組み合わせが含まれる；
【００６９】
・植物由来の抗腫瘍物質には、例えば有糸分裂阻害剤から選択されるもの、例えばエポチロン類、例えばサゴピロン、イキサベピロンおよびエポチロンＢ、ビンブラスチン、ビンフルニン、ドセタキセルおよびパクリタキセルが含まれる；
【００７０】
・細胞傷害性トポイソメラーゼ阻害剤には、限定されるわけではないが、アクラルビシン、ドキソルビシン、アモナフィド、ベロテカン、カンプトテシン、１０−ヒドロキシカンプトテシン、９−アミノカンプトテシン、ジフロモテカン、イリノテカン、トポテカン、エドテカリン、エピムビシン、エトポシド、エキサテカン、ギマテカン、ルルトテカン、ミトキサントロン、ピラムビシン、ピキサントロン、ルビテカン、ソブゾキサン、タフルポシドおよびそれらの組み合わせが含まれる；
【００７１】
・免疫学的作用物質には、インターフェロン、例えばインターフェロンアルファ、インターフェロンアルファ−２ａ、インターフェロンアルファ−２ｂ、インターフェロンベータ、インターフェロンガンマ−１ａおよびインターフェロンガンマ−ｎ１、および、他の免疫促進剤、例えばＬ１９−ＩＬ２および他のＩＬ２誘導体、フィルグラスチム、レンチナン、シゾフィラン、セラシス（TheraCys）、ウベニメクス、アルデスロイキン、アレムツズマブ、ＢＡＭ−００２、ダカルバジン、ダクリズマブ、デニロイキン、ゲムツズマブ、オゾガミシン、イブリツモマブ、イミキモド、レノグラスチム、レンチナン、黒色腫ワクチン（Corixa）、モルグラモスチム、サルグラモスチム、タソネルミン、テクロイキン、チマラシン、トシツモマブ、ビムリジン（Vimlizin）、エプラツズマブ、ミツモマブ、オレゴボマブ、ペムツモマブおよびプロベンジ（Provenge）が含まれる；
【００７２】
・生物応答修飾剤は、生物の防御機構または生物学的応答、例えば、組織細胞の生存、増殖または分化を改変し、それらが抗腫瘍活性を有するように導く物質である；そのような物質には、例えばクレスチン、レンチナン、シゾフィラン、ピシバニル、プロムン（ProMune）およびウベニメクスが含まれる；
【００７３】
・抗血管新生化合物には、限定されるわけではないが、アシトレチン、アフリベルセプト、アンギオスタチン、アプリジン、アセンタール、アキシチニブ、ベバシズマブ、ブリバニブ・アラニナト、シレングチド、コンブレタスタチン、エンドスタチン、フェンレチニド、ハロフギノン、パゾパニブ、ラニビズマブ、レビマスタット、レセンチン、レゴラフェニブ（regorafenib）、レモバブ、レブリミド、ソラフェニブ、スクアラミン、スニチニブ、テラチニブ、サリドマイド、ウクライン、バタラニブおよびビタキシンが含まれる；
【００７４】
・抗体には、限定されるわけではないが、トラスツズマブ、セツキシマブ、ベバシズマブ、リツキシマブ、チシリムマブ、イピリムマブ、ルミリキシマブ、カツマキソマブ、アタシセプト、オレゴボマブおよびアレムツズマブが含まれる；
【００７５】
・ＶＥＧＦ阻害剤、例えば、ソラフェニブ、レゴラフェニブ、ベバシズマブ、スニチニブ、レセンチン、アキシチニブ、アフリベルセプト、テラチニブ、ブリバニブ・アラニネート、バタラニブ、パゾパニブおよびラニビズマブ；
・ＥＧＦＲ（ＨＥＲ１）阻害剤、例えば、セツキシマブ、パニツムマブ、ベクチビクス、ゲフィチニブ、エルロチニブおよびザクチマ（Zactima）；
・ＨＥＲ２阻害剤、例えば、ラパチニブ、トラスツズマブ（tratuzumab）およびペルツズマブ；
・ｍＴＯＲ阻害剤、例えば、テムシロリムス、シロリムス／ラパマイシンおよびエベロリムス；
【００７６】
・ｃＭｅｔ阻害剤；
・ＰＩ３ＫおよびＡＫＴ阻害剤；
・ＣＤＫ阻害剤、例えばレスコビチンおよびフラボピリドール；
・紡錘体形成チェックポイント阻害剤および標的化された有糸分裂阻害剤、例えば、ＰＬＫ阻害剤、オーロラ阻害剤（例えば、ヘスペラジン（Hesperadin））、チェックポイントキナーゼ阻害剤およびＫＳＰ阻害剤；
【００７７】
・ＨＤＡＣ阻害剤、例えば、パノビノスタット、ボリノスタット、ＭＳ２７５、ベリノスタットおよびＬＢＨ５８９；
・ＨＳＰ９０およびＨＳＰ７０阻害剤；
・プロテアソーム阻害剤、例えば、ボルテゾミブおよびカーフィルゾミブ；
・ＭＥＫ阻害剤およびＲａｆ阻害剤を含むセリン／スレオニンキナーゼ阻害剤、例えばソラフェニブ；
・ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤、例えばチピファルニブ；
【００７８】
・チロシンキナーゼ阻害剤、例えば、ダサチニブ、ニロチニブ（nilotibib）、レゴラフェニブ、ボスチニブ、ソラフェニブ、ベバシズマブ、スニチニブ、セジラニブ、アキシチニブ、アフリベルセプト、テラチニブ、イマチニブメシレート、ブリバニブ・アラニネート、パゾパニブ、ラニビズマブ、バタラニブ、セツキシマブ、パニツムマブ、ベクチビックス、ゲフィチニブ、エルロチニブ、ラパチニブ、トラスツズマブ（tratuzumab）、ペルツズマブおよびｃ−Ｋｉｔ阻害剤；
【００７９】
・ビタミンＤ受容体アゴニスト；
・Ｂｃｌ−２タンパク質阻害剤、例えば、オバトクラクス、オブリメルセンナトリウムおよびゴシポール；
・分化抗原群２０受容体アンタゴニスト、例えばリツキシマブ；
・リボヌクレオチドレダクターゼ阻害剤、例えばゲムシタビン；
・腫瘍壊死アポトーシス誘導リガンド受容体１アゴニスト、例えばマパツムマブ；
【００８０】
・５−ヒドロキシトリプタミン受容体拮抗物質、例えば、ｒＥＶ５９８、キサリプロド、塩酸パロノセトロン、グラニセトロン、Zindol およびＡＢ−１００１；
・アルファ５−ベータ１インテグリン阻害剤を含むインテグリン阻害剤、例えば、Ｅ７８２０、ＪＳＭ６４２５、ボロシキシマブおよびエンドスタチン；
【００８１】
・アンドロゲン受容体拮抗物質、例えば、ナンドロロンデカノエート、フルオキシメステロン、アンドロイド（Android）、プロスト−エイド（Prost-aid）、アンドロムスチン、ビカルタミド、フルタミド、アポ−シプロテロン、アポ−フルタミド、酢酸クロルマジノン、アンドロクール（Androcur）、タビ（Tabi）、酢酸シプロテロンおよびニルタミド；
・アロマターゼ阻害剤、例えば、アナストロゾール、レトロゾール、テストラクトン、エキセメスタン、アミノグルテチミドおよびホルメスタン；
【００８２】
・マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤；
・他の抗癌剤、例えば、アリトレチノイン、アンプリゲン、アトラセンタン・ベキサロテン、ボルテゾミブ、ボセンタン、カルシトリオール、エキシスリンド、フォテムスチン、イバンドロン酸、ミルテフォシン、ミトキサントロン、Ｉ−アスパラギナーゼ、プロカルバジン、ダカルバジン、ヒドロキシカルバミド、ペガスパルガーゼ、ペントスタチン、タザロテン、ベルケード、硝酸ガリウム、カンフォスファミド、ダリナパルシンおよびトレチノイン。
【００８３】
好ましい実施態様では、本発明の化合物は、化学療法（即ち、細胞傷害剤）、抗ホルモン剤、および／または、他のキナーゼ阻害剤（例えば、ＥＧＦＲ阻害剤）、ｍＴＯＲ阻害剤および血管新生阻害剤などの標的化療法と組み合わせて使用され得る。
【００８４】
また、本発明の化合物は放射線療法および／または外科的介入と併せて、癌の処置において用いられ得る。
さらに、式（Ｉ）の化合物は、それ自体または組成物として、研究および診断で、または、分析基準の標準物質としてなど利用され得、これは当分野で周知である。
【００８５】
医薬組成物および処置方法
別の態様では、本発明は、上記の式（Ｉ）の化合物を、医薬的に許容し得る担体と共に含む医薬組成物を提供する。
【００８６】
さらに別の態様において、本発明は、医薬組成物の製造方法を提供する。その方法は、少なくとも１種の上記の式（Ｉ）の化合物を少なくとも１種の医薬的に許容し得る担体と組み合わせ、得られる組合せを適する投与形にすることを含む工程を含む。
【００８７】
式（Ｉ）の活性化合物は、全身的および／または局所的に作用し得る。この目的で、それは、適する方法で、例えば経口で、非経腸で、肺に、鼻腔に、舌下に、舌に、頬側に、直腸に、経皮で、結膜に、耳に、または、インプラントもしくはステントとして、適用され得る。
これらの投与経路のために、式（Ｉ）の活性化合物を適する投与形で投与し得る。
【００８８】
有用な経口適用形には、活性成分を迅速に、かつ／または、改変された形態で放出する投与形、例えば、錠剤（非被覆および被覆錠剤、例えば腸溶性被覆によるもの）、カプセル剤、糖衣錠、顆粒剤、ペレット剤、散剤、乳剤、懸濁剤、液剤およびエーロゾルが含まれる。
【００８９】
非経腸投与は、吸収段階を回避して（静脈内、動脈内、心臓内、脊髄内または腰椎内）、または、吸収を含めて（筋肉内、皮下、皮内、経皮または腹腔内）実施され得る。有用な非経腸投与形には、液剤、懸濁剤、乳剤、凍結乾燥剤および滅菌粉末剤の形態の注射および点滴製剤が含まれる。
【００９０】
他の投与経路に適する形態には、例えば、吸入医薬形態（粉末吸入器、噴霧器を含む）、点鼻薬、液またはスプレー、舌、舌下または頬側に投与される錠剤またはカプセル剤、坐剤、耳および眼用製剤、膣用カプセル剤、水性懸濁剤（ローション、振盪混合物）、親油性懸濁剤、軟膏、クリーム、ミルク、ペースト、散布用粉末剤（dusting powders）、インプラントまたはステントが含まれる。
【００９１】
好ましい実施態様では、上記の式（Ｉ）の化合物を含む医薬組成物は、経口投与に適する形態で提供される。別の好ましい実施態様では、上記の式（Ｉ）の化合物を含む医薬組成物は、静脈内投与に適する形態で提供される。
【００９２】
式（Ｉ）の活性成分は、それ自体公知の方法で、列挙した投与形に変換できる。これは、不活性で非毒性の医薬的に適する補助剤を使用して実施する。これらには、とりわけ、担体（例えば結晶セルロース）、溶媒（例えば液体ポリエチレングリコール類）、乳化剤（例えばドデシル硫酸ナトリウム）、分散剤（例えばポリビニルピロリドン）、合成および天然生体高分子（例えばアルブミン）、安定剤（例えば酸化防止剤、例えばアスコルビン酸）、着色剤（例えば無機色素、例えば酸化鉄）または風味および／または臭気の矯正剤が含まれる。
【００９３】
別の実施態様では、本発明は、上記の式（Ｉ）の化合物の有効量を患者に投与することを含む、処置を必要としている患者における細胞増殖性障害の処置方法を提供する。ある実施態様では、細胞増殖性障害は癌である。
【００９４】
さらに別の態様では、本発明は、細胞増殖性障害の処置または予防用の医薬組成物を製造するための、上記の式（Ｉ）の化合物の使用を提供する。ある実施態様では、細胞増殖性障害は癌である。
【００９５】
本発明の化合物を医薬としてヒトおよび動物に投与するとき、それらは、それ自体で、または、医薬的に許容し得る担体と組み合わせて、例えば０.１ないし９９.５％（より好ましくは、０.５ないし９０％）の有効成分を含有する医薬組成物として、与えられ得る。
【００９６】
選択された投与経路とは関係なく、適する水和形態で使用され得る本発明の化合物、および／または本発明の医薬組成物は、当業者に知られている常套の方法により、医薬的に許容し得る投与形に製剤化される。
【００９７】
本発明の医薬組成物における有効成分の実際の投薬レベルおよび投与時間経過を変えて、患者に毒性ではなく、特定の患者、組成物および投与様式について所望の治療応答を達成するのに有効な、有効成分の量を得ることが可能である。例示的な用量範囲は、１日当たり０.０１ないし１００ｍｇ／ｋｇまたは１日当たり０.１ないし１５０ｍｇ／ｋｇである。
【００９８】
ある実施態様では、本発明の化合物は、常套の癌化学療法剤との併用療法で使用できる。白血病および他の腫瘍についての常套の治療計画は、放射線、薬物または両者の組み合わせを含む。
【００９９】
本発明の化合物の治療的に有効な抗増殖量または予防的に有効な抗増殖量の決定は、当業者としての医師または獣医師（「担当医」）により、既知技術の使用および類似環境下で得られる結果の観察により、容易になされ得る。投薬量は、担当医の判断における患者の要求、処置されている症状の重症度および用いられている特定の化合物により異なり得る。治療的に有効な抗増殖量または用量、および、予防的に有効な抗増殖量または用量の決定において、数々の要因が担当医により考慮され、これには、関与する特定の細胞増殖性障害、特定の物質の薬物動態的特徴およびその投与様式および経路、所望の処置の時間経過、哺乳動物の種、その大きさ、年齢および全般的健康状態、関与する特定の疾患、関与の程度または疾患の重症度、個々の患者の応答、投与される特定の化合物、投与方式、投与される製剤のバイオアベイラビリティーの特徴、選択された投薬計画、同時処置の種類（即ち、他の同時投与される治療剤と本発明の化合物との相互作用）および他の関連する状況が含まれるが、これらに限定されるわけではない。
【０１００】
処置は、化合物の最適用量より少ない、少量から開始され得る。その後、環境下で最適な効果に達するまで、投薬量を少量ずつ漸増させ得る。便宜上、所望により総一日量を分割し、１日の間に分けて投与し得る。本発明の化合物の治療的に有効な抗増殖量および予防的に有効な抗増殖量は、１日に体重１ｋｇにつき約０.０１ｍｇ（ｍｇ／ｋｇ／日）ないし約１００ｍｇ／ｋｇ／日の範囲で変動すると予測され得る。
【０１０１】
本発明の場合、本発明の化合物の好ましい用量は、患者が耐容し得、深刻な副作用を起こさない最大量である。実例として、本発明の化合物は、約０.０１ｍｇ／体重ｋｇないし約１００ｍｇ／体重ｋｇ、約０.０１ｍｇ／体重ｋｇないし約１０ｍｇ／体重ｋｇ、または、約０.１ｍｇ／体重ｋｇないし約１０ｍｇ／体重ｋｇの用量で投与される。上記で列挙した値の間の範囲も本発明の一部であると企図する。
【０１０２】
断りのない限り、下記の試験および実施例における百分率は、重量に基づく；部は重量部である。液体／液体溶液について報告する溶媒比、希釈率および濃度は、各々体積に基づく。
【実施例】
【０１０３】
Ａ. 実施例
略語および頭字語：
【表１】
2013506699.tif 000020
【０１０４】
ＬＣ−ＭＳおよびＧＣ−ＭＳの方法：
方法１（ＬＣ−ＭＳ）：
装置：HPLC Waters Alliance 2795 を備えた Micromass ZQ；カラム：Phenomenex Synergi 2.5μ MAX-RP 100A Mercury, 20 mm x 4 mm；溶離剤Ａ：水１Ｌ＋５０％ギ酸０.５ｍＬ、溶離剤Ｂ：アセトニトリル１Ｌ＋５０％ギ酸０.５ｍＬ；グラジエント：０.０分９０％Ａ→０.１分９０％Ａ→３.０分５％Ａ→４.０分５％Ａ→４.０１分９０％Ａ；流速：２ｍＬ／分；オーブン：５０℃；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【０１０５】
方法２（ＬＣ−ＭＳ）：
装置：HPLC Waters UPLC Acquity を備えた Micromass Quattro Premier；カラム：Thermo Hypersil GOLD 1.9μ, 50 mm x 1 mm；溶離剤Ａ：水１Ｌ＋５０％ギ酸０.５ｍＬ、溶離剤Ｂ：アセトニトリル１Ｌ＋５０％ギ酸０.５ｍＬ；グラジエント：０.０分９０％Ａ→０.１分９０％Ａ→１.５分１０％Ａ→２.２分１０％Ａ；オーブン：５０℃；流速：０.３３ｍＬ／分；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【０１０６】
方法３（ＬＣ−ＭＳ）：
装置：HPLC Agilent 1100 Series を備えた Micromass Quattro Micro；カラム：Thermo Hypersil GOLD 3μ, 20 mm x 4 mm；溶離剤Ａ：水１Ｌ＋５０％ギ酸０.５ｍＬ、溶離剤Ｂ：アセトニトリル１Ｌ＋５０％ギ酸０.５ｍＬ；グラジエント：０.０分１００％Ａ→３.０分１０％Ａ→４.０分１０％Ａ→４.０１分１００％Ａ（流速２.５ｍＬ／分）→５.００分１００％Ａ；オーブン：５０℃；流速：２ｍＬ／分；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【０１０７】
方法４（ＬＣ−ＭＳ）：
装置：Waters Acquity SQD UPLC System；カラム：Waters Acquity UPLC HSS T3 1.8μ, 50 mm x 1 mm；溶離剤Ａ：水１Ｌ＋９９％ギ酸０.２５ｍＬ、溶離剤Ｂ：アセトニトリル１Ｌ＋０.２５ｍＬ９９％ギ酸；グラジエント：０.０分９０％Ａ→１.２分５％Ａ→２.０分５％Ａ；オーブン：５０℃；流速：０.４０ｍＬ／分；ＵＶ検出：２１０−４００ｎｍ。
【０１０８】
方法５（ＧＣ−ＭＳ）：
装置：Micromass GCT, GC 6890；カラム：Restek RTX-35, 15 m x 200 μm x 0.33 μm；ヘリウムの一定流速：０.８８ｍＬ／分；オーブン：７０℃；入口：２５０℃；グラジエント：７０℃、３０℃／分→３１０℃（３分間維持）。
【０１０９】
出発物質および中間体：
実施例１Ａ
３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボアルデヒド
【化１９】
2013506699.tif 000021
テトラヒドロフラン（６００ｍｌ）を、アルゴン雰囲気下で−７８℃に冷却した。この温度で、ｎ−ペンタン中の１.７Ｍ ｔｅｒｔ−ブチルリチウム溶液（２００ｍｌ）を滴下して添加した。−７８℃で１５分後、ＴＨＦ（３００ｍｌ）中の５−ブロモ−３−メチル−１Ｈ−インダゾール２２.４ｇ（１０６.１ｍｍｏｌ）の溶液を、溶液の温度が−７０℃を超えない速度で滴下して添加した。混合物を３０分間撹拌し、その後、Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミド（２４.５ｍｌ）を滴下して添加した。２０分後、冷却浴を除去し、撹拌を１時間継続し、水（２５０ｍｌ）を注意深く添加した。混合物を酢酸エチル（５００ｍｌ）で数回抽出した。合わせた有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮し、粗製の３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボアルデヒド１８.５ｇを得、これをさらに精製せずに次の段階で使用した。
1H-NMR (DMSO-d6): δ = 13.13 (br. s, 1H), 10.01 (s, 1H), 8.40 (s, 1H), 7.81 (d, 1H), 7.58 (d, 1H), 2.56 (s, 3H) ppm.
【０１１０】
実施例２Ａ
（２Ｅ）−２−［（３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）メチリデン］−３−オキソブタンニトリル
【化２０】
2013506699.tif 000022
４Åモレキュラー・シーブを含む乾燥ジクロロメタン（２５０ｍｌ）中の３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボアルデヒド（実施例１Ａ）５.０ｇ（３１.２ｍｍｏｌ）、ナトリウム（１Ｚ）−１−シアノプロプ−１−エン−２−オラート３.６１ｇ（３４.３ｍｍｏｌ）、酢酸２.２３ｍｌ（３９ｍｍｏｌ）およびピペリジン０.３１ｍｌ（３.１２ｍｍｏｌ）の混合物を、還流下で１２時間撹拌した。冷却すると、沈殿が形成され、それを濾過により回収し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液および水で洗浄した。固体をエタノールに溶解し、モレキュラー・シーブを濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、残渣を酢酸エチルおよび飽和炭酸ナトリウム水溶液で処理した。有機層を水で洗浄し、乾燥させ、減圧下で濃縮し、表題化合物（３.５ｇ、理論値の５０％）を、淡黄色固体として得、これをさらに精製せずに次の段階で使用した。
LC-MS (方法 1): Rt = 1.32 分; MS (ESIpos): m/z = 226 (M+H)+
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 13.18 (br. s, 1H), 8.52 (s, 1H), 8.49 (s, 1H), 8.19 (d, 1H), 7.69 (d, 1H), 2.55 (br. m, 6H) ppm.
【０１１１】
実施例３Ａ
６−フルオロ−３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボアルデヒド
【化２１】
2013506699.tif 000023
ＴＨＦ（５２５ｍｌ）中の５−ブロモ−６−フルオロ−３−メチル−１Ｈ−インダゾール［ＷＯ２００５／０８５２２７−Ａ１、実施例１０４ｃ）に記載の製造；購入することもできる。ＣＡＳ Ｒｅｇ.−Ｎｏ.８６４７７３−６６−０］の３０ｇ（１３１ｍｍｏｌ）の溶液を、−４５℃に冷却した。ＴＨＦ（３Ｍ；５０.２ｍｌ、１５１ｍｍｏｌ）中のメチルマグネシウムクロリドの溶液を−４５℃で滴下して添加し、得られた溶液を４０分間この温度で撹拌した。投入ポンプ（dosing pump）を使用して、温度が−４０℃を超えないように２−ブチルリチウム溶液（１.４Ｍ、シクロヘキサン中）２５３ｍｌ（３５４ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を３０分間−４０℃で撹拌し、次いで、温度を−４０℃に維持しながら、Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミド３０.２ｍｌ（３９３ｍｍｏｌ）を滴下して添加した。得られた混合物を３０分間−４０℃で撹拌し、次いで室温に温まらせ、５℃に冷却（氷水浴）した２Ｎ塩酸２.８Ｌにゆっくりと注いだ。混合物を酢酸エチルで数回抽出した。合わせた有機層を塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をジクロロメタンに溶解し、シリカゲルクロマトグラフィー（溶離剤：ペンタン／酢酸エチル６：４ｖ／ｖ）により精製し、表題化合物１９.６ｇ（理論値の７８％）を淡黄色固体として得た。
MS (ESIpos): m/z = 179 (M+H)+
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 13.14 (s, 1H), 10.17 (s, 1H), 8.33 (d, 1H), 7.37 (d, 1H), 2.54 (s, 3H) ppm.
【０１１２】
実施例４Ａ
（２Ｅ）−２−［（６−フルオロ−３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）メチリデン］−３−オキソブタンニトリル
【化２２】
2013506699.tif 000024
実施例２Ａについて記載した手順に従い表題化合物を製造し、６−フルオロ−３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボアルデヒド（実施例３Ａ）２.７４ｇ（１５.５ｍｍｏｌ）およびナトリウム（１Ｚ）−１−シアノプロプ−１−エン−２−オラート２.６ｇ（２４.８ｍｍｏｌ）を使用して、粗生成物１.６ｇ（理論値の４２％）を得、これをさらに精製せずに次の段階で使用した。
LC-MS (方法 4): Rt = 0.83 分; MS (ESIpos): m/z = 244 (M+H)+.
【０１１３】
実施例５Ａ
６−フルオロ−１Ｈ−インダゾール−５−カルボアルデヒド
【化２３】
2013506699.tif 000025
無水トルエン（１５０ｍｌ）中の６−フルオロ−１Ｈ−インダゾール−５−カルボニトリル［購入できる；ＥＰ１５１０５１６−Ａ１に記載の製造（製造例８２）］４.８ｇ（３０ｍｍｏｌ）のスラリーを、−４０℃に冷却した。不活性ガス雰囲気下、ジイソブチルアルミニウムヒドリド溶液（１.５Ｍ、トルエン中）４８ｍｌ（７２ｍｍｏｌ）を３０分間かけて添加し、得られた混合物を−４０℃で３時間撹拌した。次いで、酢酸エチル（３０ｍｌ）を添加し、混合物をさらに２０分間−４０℃で撹拌し、続いて、水性酒石酸（１Ｍ、３０ｍｌ）を滴下して添加した。混合物を０℃に温まらせ、この温度で濾過した。濾液を酢酸エチルで数回抽出し、続いて、合わせた有機相を、飽和水性炭酸水素ナトリウムで、そして塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。かくして得られた粗生成物（２.６０ｇ、理論値の５３％）を、さらに精製せずに次の段階で使用した。
LC-MS (方法 4): Rt = 0.59 分; MS (ESIpos): m/z = 165 (M+H)+.
【０１１４】
実施例６Ａ
（２Ｅ）−２−［（６−フルオロ−１Ｈ−インダゾール−５−イル）メチリデン］−３−オキソブタンニトリル
【化２４】
2013506699.tif 000026
６−フルオロ−１Ｈ−インダゾール−５−カルボアルデヒド（実施例５Ａ）３.７ｇ（純度８０％、１８.０ｍｍｏｌ）およびナトリウム（１Ｚ）−１−シアノプロプ−１−エン−２−オラート２.０８ｇ（１９.８４ｍｍｏｌ）から、実施例２Ａに記載の方法と同様に表題化合物を製造し、生成物２.５ｇ（理論値の６１％）を得、それをさらに精製せずに後続の段階で使用した。
LC-MS (方法 2): Rt = 0.71 分; MS (ESIpos): m/z = 230 (M+H)+
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 13.90 (s, 1H), 8.59 (s, 1H), 8.46 (s, 1H), 8.23 (d, 1H), 7.80 (d, 1H), 2.5 (br. s, 3H) ppm.
【０１１５】
実施例７Ａ
１−（５−ブロモ−２−フルオロフェニル）−１−プロパノール
【化２５】
2013506699.tif 000027
ジエチルエーテル（１００ｍｌ）中の５−ブロモ−２−フルオロベンズアルデヒド１５ｇ（７３.９ｍｍｏｌ）の溶液を、０℃で、エチルマグネシウムブロミド溶液（３Ｍ、ジエチルエーテル中）２７.１ｍｌ（８１.３ｍｍｏｌ）にゆっくりと添加した。０℃で３時間撹拌した後、水（２０ｍｌ）を注意深く添加し、その際、白色沈殿が形成された。固体を濾過し、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテルで洗浄した。合わせた濾液を塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮した。かくして得られた粗製の表題化合物（１６.１ｇ、理論値の９３％）を、さらに精製せずに次の段階で使用した。
GC-MS (方法 5): Rt = 4.54 分; MS (EIpos): m/z = 232 (M)+.
【０１１６】
実施例８Ａ
１−（５−ブロモ−２−フルオロフェニル）−１−プロパノン
【化２６】
2013506699.tif 000028
ジクロロメタン（１００ｍｌ）中の１−（５−ブロモ−２−フルオロフェニル）−１−プロパノール（実施例７Ａ）１０ｇ（４２.９ｍｍｏｌ）、中性酸化アルミニウム８.７５ｇ（８５.８ｍｍｏｌ）およびピリジニウムクロロクロメート１８.５ｇ（８５.８ｍｍｏｌ）の混合物を、室温で４時間撹拌した。次いで、混合物をシリカゲル（０.０６−０.２ｍｍ、２００ｇ）で濾過し、それを徹底的にジクロロメタン（１０００ｍｌ）で洗浄した。合わせた濾液を塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮した。かくして得られた粗製の表題化合物（８.６ｇ、理論値の８７％）を、さらに精製せずに次の段階で使用した。
GC-MS (方法 5): Rt = 4.30 分; MS (EIpos): m/z = 230 (M)+.
【０１１７】
実施例９Ａ
５−ブロモ−３−エチル−１Ｈ−インダゾール
【化２７】
2013506699.tif 000029
１−メチル−２−ピロリジノン（ＮＭＰ；１００ｍｌ）中の１−（５−ブロモ−２−フルオロフェニル）−１−プロパノン（実施例８Ａ）７.５０ｇ（３２.５ｍｍｏｌ）の溶液を、ヒドラジン水和物３.２５ｇ（３.１６ｍｌ、６４.９ｍｍｏｌ）で処理し、還流温度で１６時間撹拌した。冷却の際に、混合物を氷と水の混合物に注いだ。沈殿を濾過により回収し、水で徹底的に洗浄し、表題化合物４.５６ｇ（理論値の６２％）をベージュ色の固体として得た。
LC-MS (方法 4): Rt = 1.00 分; MS (ESIpos): m/z = 225 (M+H)+.
【０１１８】
実施例１０Ａ
３−エチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボアルデヒド
【化２８】
2013506699.tif 000030
ＴＨＦ（３００ｍｌ）中の５−ブロモ−３−エチル−１Ｈ−インダゾール（実施例９Ａ）６.９０ｇ（３０.７ｍｍｏｌ）の溶液を、−７８℃に冷却した。この温度で、ｔｅｒｔ−ブチルリチウム溶液（１.７Ｍ、ｎ−ペンタン中）６３.１ｍｌ（１０７ｍｍｏｌ）をゆっくりと添加した。混合物を−７８℃で３０分間撹拌し、その後、Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミド（８０.０ｍｌ）をゆっくりと添加した。冷却浴を除去し、室温に達するまで撹拌を継続した。次いで、水（２５０ｍｌ）を注意深く添加した。混合物を酢酸エチル（５００ｍｌ）で数回抽出した。合わせた有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮し、粗製の表題化合物４.５ｇ（理論値の８４％）を得、これをさらに精製せずに次の段階で使用した。
LC-MS (方法 4): Rt = 0.73 分; MS (ESIpos): m/z = 175 (M+H)+.
【０１１９】
実施例１１Ａ
（２Ｅ）−２−［（３−エチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）メチリデン］−３−オキソブタンニトリル
【化２９】
2013506699.tif 000031
４Åモレキュラー・シーブを含む乾燥ジクロロメタン（２５ｍｌ）中の３−エチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボアルデヒド（実施例１０Ａ）０.５０ｇ（２.８７ｍｍｏｌ）、ナトリウム（１Ｚ）−１−シアノプロプ−１−エン−２−オラート０.３３ｇ（３.１６ｍｍｏｌ）、酢酸０.２１ｍｌ（３.６ｍｍｏｌ）およびピペリジン０.０２８ｍｌ（０.２９ｍｍｏｌ）の混合物を、還流下で１６時間撹拌した。冷却の際に、沈殿が形成され、それを濾過により回収し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液および水で洗浄した。固体をエタノールに溶解し、モレキュラー・シーブを濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、残渣を酢酸エチルおよび飽和炭酸ナトリウム水溶液で処理した。有機層を水で洗浄し、乾燥させ、減圧下で濃縮し、表題化合物（０.６０ｇ、理論値の８８％）を淡黄色固体として得、これをさらに精製せずに後続の段階で使用した。
LC-MS (方法 1): Rt = 1.50 分; MS (ESIpos): m/z = 240 (M+H)+
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 13.17 (br. s, 1H), 8.59 (s, 1H), 8.51 (s, 1H), 8.17 (d, 1H), 7.67 (d, 1H), 2.97 (q, 2H), 2.55 (br. m, 3H), 1.36 (t, 3H) ppm.
【０１２０】
実施例１２Ａ
（２Ｅ）−２−（１Ｈ−インダゾール−５−イルメチリデン）−３−オキソブタンニトリル
【化３０】
2013506699.tif 000032
乾燥ジクロロメタン（５００ｍｌ）中の１Ｈ−インダゾール−５−カルボアルデヒド［製造はＵＳ２００５／０２２７９６８−Ａ１（中間体１）に記載］１０ｇ（６８.４ｍｍｏｌ）、７.９１ｇ（７５.２ｍｍｏｌ）ナトリウム（１Ｚ）−１−シアノプロプ−１−エン−２−オラート、酢酸４.８９ｍｌ（８５.５ｍｍｏｌ）およびピペリジン０.６８ｍｌ（６.８４ｍｍｏｌ）を、逆水分離装置（inverse water separator）を使用して、還流温度で７時間撹拌した。冷却すると沈殿が形成され、それを濾過により回収し、ジクロロメタンで洗浄した。固体を真空で乾燥させ、粗製の表題化合物（１９ｇ、ＬＣ−ＭＳにより純度７５％、理論値の９６％）を得、これをさらに精製せずに後続の段階で使用した。
LC-MS (方法 2): Rt = 0.82 分; MS (ESIpos): m/z = 212 (M+H)+.
【０１２１】
実施例１３Ａ
４,４−ジフルオロ−３−オキソヘキサンニトリル
【化３１】
2013506699.tif 000033
炎で乾燥させたフラスコに、乾燥ＴＨＦ（１４ｍｌ）中のｎ−ブチルリチウム溶液（１.６Ｍ、ヘキサン中）２.９ｍｌ（４.６ｍｍｏｌ）を不活性ガス雰囲気下で入れ、−７８℃に冷却した。次に、アセトニトリル０.２１３ｍｌ（４.０６ｍｍｏｌ）をゆっくりと添加し、得られた混合物を１時間−７０℃で撹拌した。次いで、メチル２,２−ジフルオロブタノエート０.４０ｇ（２.９ｍｍｏｌ）をゆっくりと５分間かけて添加し、温度を−６９℃より低く維持した。反応混合物を２時間−４５℃で撹拌し、次いで、２Ｎ塩酸（４.８ｍｌ）の添加によりクエンチし、その間、温度を−２０℃より低く維持した。得られた澄んだ溶液を室温に温まらせ、次いで、減圧下で濃縮した。かくして得られた粗生成物（２.５ｇ、純度１７％、理論値の９８％）を−２１℃で保存し、さらに精製せずに次の段階で使用した。
GC-MS (方法 5): Rt = 1.94 分; MS (EIpos): m/z = 147 (M)+.
【０１２２】
実施例１４Ａ
４,４−ジフルオロ−３−オキソブタンニトリル
【化３２】
2013506699.tif 000034
炎で乾燥させたフラスコに、乾燥ＴＨＦ（１９ｍｌ）中のｎ−ブチルリチウム溶液（１.６Ｍ、ヘキサン中）３.８ｍｌ（６.１ｍｍｏｌ）を不活性雰囲気下で入れ、−７８℃に冷却した。次に、アセトニトリル０.２８ｍｌ（５.３ｍｍｏｌ）をゆっくりと添加し、得られた混合物を１時間−７０℃で撹拌した。次いで、エチルジフルオロアセテート０.４ｍｌ（３.８ｍｍｏｌ）を５分間かけてゆっくりと添加し、温度を−６９℃より低く維持した。反応混合物を２時間−４５℃で撹拌し、次いで、塩酸（２Ｍ、４.８ｍｌ）の添加によりクエンチし、その間、温度を−２０℃より低く維持した。得られた澄んだ溶液を室温に温まらせ、次いで、減圧下で濃縮した。かくして得られた粗生成物（１.０ｇ、純度４６％、理論値の９９％）を、−２１℃で保存し、さらに精製せずに次の段階で使用した。
GC-MS (方法 5): Rt = 1.49 分; MS (EIpos): m/z = 119 (M)+.
【０１２３】
製造実施例：
実施例１
ｒａｃ−２−（ジフルオロメチル）−６−メチル−４−（３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）−１,４−ジヒドロピリジン−３,５−ジカルボニトリル
【化３３】
2013506699.tif 000035
２−プロパノール（２０ｍｌ）およびトリエチルアミン（０.２１ｍｌ）中の（２Ｅ）−２−［（３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）メチリデン］−３−オキソブタンニトリル（実施例２Ａ）３.４２ｇ（１５.２ｍｍｏｌ）および３−アミノ−４,４−ジフルオロブト−２−エンニトリル［アセトニトリルの２,２−ジフルオロアセトニトリルとのソープ反応により入手可能、Org. React. 15, 1 (1967), ibid. 31, 1 (1984) 参照］７.２７ｇ（６０.７ｍｍｏｌ）の懸濁液を、還流温度で終夜撹拌した。冷却後、沈殿を濾過により集め、冷２−プロパノールで２回洗浄した。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル／エタノールグラジエント、最終混合物９４：６ｖ／ｖ）により精製し、ラセミの表題化合物０.３６ｇ（理論値の７％）を淡黄色固体として得た。
LC-MS (方法 2): Rt = 0.91 分; MS (ESIpos): m/z = 326 (M+H)+
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 12.73 (s, 1H), 10.07 (s, 1H), 7.58 (s, 1H), 7.53 (d, 1H), 7.29 (d, 1H), 6.81 (t, 1H, 2JHF = 52.09 Hz), 4.70 (s, 1H), 2.54 (s, 3H), 2.12 (s, 3H) ppm.
【０１２４】
実施例２および実施例３
２−（ジフルオロメチル）−６−メチル−４−（３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）−１,４−ジヒドロピリジン−３,５−ジカルボニトリル（エナンチオマー１および２）
【化３４】
2013506699.tif 000036
実施例１のラセミ化合物を、キラル相のＨＰＬＣクロマトグラフィーによりエナンチオマーに分離した［カラム：Daicel Chiralpak IB-H, 5 μm, 250 mm x 20 mm；溶離剤：ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル／アセトニトリル＋０.２％ジエチルアミン９０：１０ｖ／ｖ；流速：１５ｍｌ／分；温度：３０℃；ＵＶ検出：２２０ｎｍ］：
実施例２（エナンチオマー１）：
＞９９％ｅｅ
Ｒｔ＝４.７８分［カラム：Daicel Chiralpak IB-H, 5 μm, 250 mm x 4.6 mm；溶離剤：ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル／アセトニトリル９０：１０；流速：１ｍｌ／分；温度：４０℃；ＵＶ検出：２２０ｎｍ］。
DSC: 融点 305℃, ΔH 57 J/g
FT-IR (固体): 3345, 3194, 3095, 2201 (CN), 1665, 1630, 1530, 1512, 1388, 1328, 1291, 1279, 1134, 1095, 1065, 1050, 1022, 995, 844, 770, 737, 666 cm-1.  
実施例３（エナンチオマー２）：
＞９８％ｅｅ
Ｒｔ＝５.７８分［カラム：Daicel Chiralpak IB-H, 5 μm, 250 mm x 4.6 mm；溶離剤：ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル／アセトニトリル９０：１０；流速：１ｍｌ／分；温度：４０℃；ＵＶ検出：２２０ｎｍ］。
DSC: 融点 307℃, ΔH 48 J/g
FT-IR (固体): 3344, 3193, 3094, 2202 (CN), 1666, 1630, 1530, 1512, 1383, 1329, 1291, 1279, 1134, 1095, 1065, 1050, 1022, 995, 844, 771, 737, 666 cm-1.  
【０１２５】
実施例４
ｒａｃ−２−メチル−４−（３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）−６−（トリフルオロメチル）−１,４−ジヒドロピリジン−３,５−ジカルボニトリル
【化３５】
2013506699.tif 000037
２−プロパノール（２７ｍｌ）およびトリエチルアミン（０.３３ｍｌ）中の（２Ｅ）−２−［（３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）メチリデン］−３−オキソブタンニトリル（実施例２Ａ）５.４ｇ（２４.０ｍｍｏｌ）および３−アミノ−４,４,４−トリフルオロブト−２−エンニトリル［製造: A.W. Lutz, US Patent 3,635,977; C.G. Krespan, J. Org. Chem. 34, 42 (1969)] １３.０５ｇ（９５.９ｍｍｏｌ）の懸濁液を、還流温度で１５時間撹拌した。冷却後、沈殿を濾過により回収し、冷２−プロパノールで２回洗浄し、高真空下で乾燥させ、ラセミの表題化合物５.９８ｇ（理論値の７２％）を黄褐色固体として得た。
LC-MS (方法 4): Rt = 0.87 分; MS (ESIpos): m/z = 344 (M+H)+
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 12.75 (s, 1H), 10.27 (s, 1H), 7.62 (s, 1H), 7.54 (d, 1H), 7.31 (d, 1H), 4.79 (s, 1H), 2.49 (s, 3H), 2.13 (s, 3H) ppm.
【０１２６】
実施例５および実施例６
２−メチル−４−（３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）−６−（トリフルオロメチル）−１,４−ジヒドロピリジン−３,５−ジカルボニトリル（エナンチオマー１および２）
【化３６】
2013506699.tif 000038
実施例４のラセミ化合物を、キラル相のＨＰＬＣクロマトグラフィーによりエナンチオマーに分離した［カラム：セレクターポリ（Ｎ−メタクリロイル−Ｌ−ロイシン−ｔｅｒｔ−ブチルアミド）をベースとするキラルシリカゲル相（ＥＰ０３７９９１７、ＥＰ０７８０４０８参照）、10 μm, 600 mm x 40 mm；ラセミ体１ｇを、ジエチルアミン２.５ｍｌを含むアセトニトリル４０ｍｌに溶解した；溶離剤：酢酸エチル；流速：９０ｍｌ／分；温度：２０℃；ＵＶ検出：２６５ｎｍ］：
実施例５（エナンチオマー１）：
＞９９％ｅｅ
Ｒｔ＝４.８１分［カラム：セレクターポリ（Ｎ−メタクリロイル−Ｌ−ロイシン−ｔｅｒｔ−ブチルアミド）をベースとするキラルシリカゲル相、10 μm, 250 mm x 4.6 mm; 溶離剤：酢酸エチル；流速：１.５ｍｌ／分；温度：２５℃；ＵＶ検出：２６０ｎｍ］。
DSC: 融点 298℃, ΔH 43 J/g (続いて明白な発熱性崩壊がある)
FT-IR (固体): 3306, 3105, 2210 (CN), 1669, 1547, 1364, 1328, 1285, 1203, 1181, 1150, 1099, 992, 880, 786, 674 cm-1.
実施例６（エナンチオマー２）：
＞９９％ｅｅ
Ｒｔ＝７.５７分［カラム：セレクターポリ（Ｎ−メタクリロイル−Ｌ−ロイシン−ｔｅｒｔ−ブチルアミド）をベースとするキラルシリカゲル相、10 μm, 250 mm x 4.6 mm；溶離剤：酢酸エチル；流速：１.５ｍｌ／分；温度：２５℃；ＵＶ検出：２６０ｎｍ］。
DSC: 融点 315℃, ΔH 130 J/g (続いて明白な発熱性崩壊がある)
FT-IR (固体): 3304, 3105, 2210 (CN), 1669, 1546, 1364, 1328, 1285, 1203, 1181, 1149, 1099, 992, 880, 786, 674 cm-1.
単結晶Ｘ線構造分析により、このエナンチオマーのＣ＊−原子でのＳ−立体配置が明らかになった。
【０１２７】
実施例７
ｒａｃ−２−（ジフルオロメチル）−４−（６−フルオロ−３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）−６−メチル−１,４−ジヒドロピリジン−３,５−ジカルボニトリル
【化３７】
2013506699.tif 000039
実施例１について記載した方法に従って、（２Ｅ）−２−［（６−フルオロ−３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）メチリデン］−３−オキソブタンニトリル（実施例４Ａ）１００ｍｇ（０.４１１ｍｍｏｌ）を３−アミノ−４,４−ジフルオロブト−２−エンニトリルで処理した。粗生成物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（アセトニトリル／水＋０.１％ＴＦＡグラジエント、最終混合物９０：１０ｖ／ｖ）により精製し、ラセミの表題化合物５０ｍｇ（理論値の３５％）を得た。
LC-MS (方法 4): Rt = 0.83 分; MS (ESIpos): m/z = 344 (M+H)+
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 12.82 (br. s, 1H), 10.10 (s, 1H), 7.69 (d, 1H), 7.32 (d, 1H), 6.81 (t, 1H, 2JHF = 52.09 Hz), 4.93 (s, 1H), 2.54 (s, 3H), 2.10 (s, 3H) ppm.
【０１２８】
実施例８および実施例９
２−（ジフルオロメチル）−４−（６−フルオロ−３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）−６−メチル−１,４−ジヒドロピリジン−３,５−ジカルボニトリル（エナンチオマー１および２）
【化３８】
2013506699.tif 000040
実施例７のラセミ化合物を、キラル相のＨＰＬＣクロマトグラフィーによりエナンチオマーに分離した［カラム：セレクターポリ（Ｎ−メタクリロイル−Ｌ−ロイシン−［（＋）−３Ｓ−ピナニルメチル］アミド）をベースとするキラルシリカゲル相（ＥＰ０３７９９１７、ＥＰ０７８０４０８参照）、10 μm, 250 mm x 20 mm；溶離剤：ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル＋０.２％ジエチルアミン／メタノール９５：５ｖ／ｖ；流速：１５ｍｌ／分；温度：３０℃；ＵＶ検出：２２０ｎｍ］：
実施例８（エナンチオマー１）：
＞９９％ｅｅ
Ｒｔ＝５.３３分［カラム：セレクターポリ（Ｎ−メタクリロイル−Ｌ−ロイシン−［（＋）−３Ｓ−ピナニルメチル］アミド）をベースとするキラルシリカゲル相、10 μm, 250 mm x 4.6 mm; 溶離剤：ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル＋０.２％ジエチルアミン／メタノール９５：５；流速：１ｍｌ／分；温度：２５℃；ＵＶ検出：２３５ｎｍ］。
実施例９（エナンチオマー２）：
＞９８％ｅｅ
Ｒｔ＝７.０２分［カラム：セレクターポリ（Ｎ−メタクリロイル−Ｌ−ロイシン−［（＋）−３Ｓ−ピナニルメチル］アミド）をベースとするキラルシリカゲル相、10 μm, 250 mm x 4.6 mm; 溶離剤：ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル＋０.２％ジエチルアミン／メタノール９５：５；流速：１ｍｌ／分；温度：２５℃；ＵＶ検出：２３５ｎｍ］。
【０１２９】
実施例１０
ｒａｃ−４−（６−フルオロ−３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）−２−メチル−６−（トリフルオロメチル）−１,４−ジヒドロピリジン−３,５−ジカルボニトリル
【化３９】
2013506699.tif 000041
実施例４について記載した方法に従って、（２Ｅ）−２−［（６−フルオロ−３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）メチリデン］−３−オキソブタンニトリル（実施例４Ａ）２５０ｍｇ（０.４１１ｍｍｏｌ）を３−アミノ−４,４,４−トリフルオロブト−２−エンニトリルで処理した。粗生成物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（アセトニトリル／水グラジエント、最終混合物９０：１０ｖ／ｖ）により精製し、ラセミの表題化合物１５９ｍｇ（理論値の４２％）を得た。
LC-MS (方法 2): Rt = 0.98 分; MS (ESIpos): m/z = 362 (M+H)+
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 12.34 (br. s, 1H), 10.31 (s, 1H), 7.74 (d, 1H), 7.35 (d, 1H), 5.01 (s, 1H), 2.54 (s, 3H), 2.11 (s, 3H) ppm.
【０１３０】
実施例１１および実施例１２
４−（６−フルオロ−３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）−２−メチル−６−（トリフルオロメチル）−１,４−ジヒドロピリジン−３,５−ジカルボニトリル（エナンチオマー１および２）
【化４０】
2013506699.tif 000042
実施例１０のラセミ化合物を、キラル相のＨＰＬＣクロマトグラフィーによりエナンチオマーに分離した［カラム：Daicel Chiralpak IB-H, 5 μm, 250 mm x 20 mm；溶離剤：ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル／アセトニトリル＋０.２％ジエチルアミン９０：１０ｖ／ｖ；流速：１５ｍｌ／分；温度：３０℃；ＵＶ検出：２２０ｎｍ］：
実施例１１（エナンチオマー１）：
＞９９％ｅｅ
Ｒｔ＝３.９０分［カラム：セレクターポリ（Ｎ−メタクリロイル−Ｌ−ロイシン−［（＋）−３Ｓ−ピナニルメチル］アミド）をベースとするキラルシリカゲル相、10 μm, 250 mm x 4.6 mm; 溶離剤：ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル＋０.２％ジエチルアミン／メタノール９５：５；流速：１ｍｌ／分；温度：２５℃；ＵＶ検出：２３５ｎｍ］。
実施例１２（エナンチオマー２）：
＞９８％ｅｅ
Ｒｔ＝６.３５分［カラム：セレクターポリ（Ｎ−メタクリロイル−Ｌ−ロイシン−［（＋）−３Ｓ−ピナニルメチル］アミド）をベースとするキラルシリカゲル相、10 μm, 250 mm x 4.6 mm；溶離剤：ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル＋０.２％ジエチルアミン／メタノール９５：５；流速：１ｍｌ／分；温度：２５℃；ＵＶ検出：２３５ｎｍ］。
【０１３１】
実施例１３
２,６−ビス（ジフルオロメチル）−４−（３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）−１,４−ジヒドロピリジン−３,５−ジカルボニトリル
【化４１】
2013506699.tif 000043
粉末状４Åモレキュラー・シーブを含有する酢酸（０.５ｍｌ）中の３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボアルデヒド（実施例１Ａ）８０ｍｇ（０.５０ｍｍｏｌ）および３−アミノ−４,４−ジフルオロブト−２−エンニトリル［アセトニトリルの２,２−ジフルオロアセトニトリルとのソープ反応により入手可能、Org. React. 15, 1 (1967), ibid. 31, 1 (1984) 参照］１３０ｍｇ（１.１０ｍｍｏｌ）の溶液を、還流温度に３.５時間加熱した。冷却後、反応混合物をメタノール／ジクロロメタンで希釈し、濾過した。濾液を蒸発させ、残渣を分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（アセトニトリル／水＋０.１％ＴＦＡグラジエント）により精製し、表題化合物６１ｍｇ（理論値の３４％）を得た。
LC-MS (方法 2): Rt = 0.94 分; MS (ESIpos): m/z = 362 (M+H)+
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 12.80 (br. s, 1H), 10.70 (s, 1H), 7.62 (s, 1H), 7.58 (d, 1H), 7.30 (d, 1H), 6.84 (t, 2H), 4.89 (s, 1H), 2.49 (s, 3H) ppm.
FT-IR (固体): 3348, 3116, 2805, 2209 (CN), 1668, 1630, 1548, 1513, 1417, 1339, 1275, 1259, 1131, 1058, 1043, 996, 890, 856, 776, 666 cm-1.  
DSC: 融点 289℃, ΔH 27 J/g (続いて明白な発熱性崩壊がある)
【０１３２】
実施例１４
２,６−ビス（ジフルオロメチル）−４−（６−フルオロ−３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）−１,４−ジヒドロピリジン−３,５−ジカルボニトリル
【化４２】
2013506699.tif 000044
粉末状４Åモレキュラー・シーブを含有する酢酸（０.５４ｍｌ）中の６−フルオロ−３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボアルデヒド（実施例３Ａ）１００ｍｇ（０.５６ｍｍｏｌ）および３−アミノ−４,４−ジフルオロブト−２−エンニトリル［アセトニトリルの２,２−ジフルオロアセトニトリルとのソープ反応により入手可能、Org. React. 15, 1 (1967), ibid. 31, 1 (1984) 参照］１４６ｍｇ（１.２４ｍｍｏｌ）の溶液を、還流温度に５時間加熱した。冷却後、反応混合物をＴＨＦで希釈し、濾過した。濾液を分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（アセトニトリル／水＋０.１％ＴＦＡグラジエント）により直接精製し、表題化合物１３６ｍｇ（理論値の６４％）を得た。
LC-MS (方法 4): Rt = 0.86 分; MS (ESIpos): m/z = 380 (M+H)+
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 12.89 (br. s, 1H), 10.73 (s, 1H), 7.76 (d, 1H), 7.38 (d, 1H), 6.82 (t, 2H), 5.12 (s, 1H), 2.49 (s, 3H) ppm.
FT-IR (固体): 3140, 2360, 2216 (CN), 1634, 1515, 1393, 1266, 1144, 1052, 1009, 893, 837, 742 cm-1.  
DSC: 融点 282℃, ΔH 138 J/g.
【０１３３】
実施例１５
２,６−ビス（ジフルオロメチル）−４−（６−フルオロ−１Ｈ−インダゾール−５−イル）−１,４−ジヒドロピリジン−３,５−ジカルボニトリル
【化４３】
2013506699.tif 000045
粉末状４Åモレキュラー・シーブを含有する酢酸（０.５ｍｌ）中の６−フルオロ−１Ｈ−インダゾール−５−カルボアルデヒド（実施例５Ａ）１５０ｍｇ（０.５５ｍｍｏｌ）および３−アミノ−４,４−ジフルオロブト−２−エンニトリル［アセトニトリルの２,２−ジフルオロアセトニトリルとのソープ反応により入手可能、Org. React. 15, 1 (1967), ibid. 31, 1 (1984) 参照] １４２ｍｇ（１.２１ｍｍｏｌ）の溶液を還流温度に５時間加熱した。冷却後、反応混合物をＴＨＦで希釈し、濾過した。濾液を分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（アセトニトリル／水＋０.１％ＴＦＡグラジエント）により直接精製し、表題化合物１４７ｍｇ（理論値の７２％）を得た。
LC-MS (方法 4): Rt = 0.83 分; MS (ESIpos): m/z = 366 (M+H)+
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 12.80 (br. s, 1H), 10.76 (s, 1H), 8.20 (s, 1H), 7.83 (d, 1H), 7.48 (d, 1H), 6.82 (t, 2H), 5.15 (s, 1H) ppm.
【０１３４】
実施例１６
ｒａｃ−２−（ジフルオロメチル）−４−（６−フルオロ−１Ｈ−インダゾール−５−イル）−６−メチル−１,４−ジヒドロピリジン−３,５−ジカルボニトリル
【化４４】
2013506699.tif 000046
２−プロパノール（１ｍｌ）中の（２Ｅ）−２−［（６−フルオロ−１Ｈ−インダゾール−５−イル）メチリデン］−３−オキソブタンニトリル（実施例６Ａ）２００ｍｇ（０.８７ｍｍｏｌ）および３−アミノ−４,４−ジフルオロブト−２−エンニトリル［アセトニトリルの２,２−ジフルオロアセトニトリルとのソープ反応により入手可能、Org. React. 15, 1 (1967), ibid. 31, 1 (1984) 参照］４１９ｍｇ（３.４９ｍｍｏｌ）の懸濁液を、還流温度で終夜撹拌した。冷却後、混合物を減圧下で濃縮し、残渣をｐ−キシレン（３ｍｌ）に懸濁した。少量のｐ−トルエンスルホン酸および粉末状４Åモレキュラー・シーブを添加し、混合物を還流温度で１６時間撹拌した。冷却の際に、混合物をアセトニトリルで希釈し、濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、粗生成物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（アセトニトリル／水グラジエント、最終混合物９：１ｖ／ｖ）により精製し、ラセミの表題化合物８１ｍｇ（理論値の２８％）を淡黄色固体として得た。
LC-MS (方法 2): Rt = 0.89 分; MS (ESIpos): m/z = 330 (M+H)+
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 13.24 (s, 1H), 10.14 (s, 1H), 8.15 (s, 1H), 7.79 (d, 1H), 7.42 (d, 1H), 6.82 (t, 1H, 2JHF = 51.84 Hz), 4.95 (s, 1H), 2.11 (s, 3H) ppm.
【０１３５】
実施例１７および実施例１８
２−（ジフルオロメチル）−４−（６−フルオロ−１Ｈ−インダゾール−５−イル）−６−メチル−１,４−ジヒドロピリジン−３,５−ジカルボニトリル（エナンチオマー１および２）
【化４５】
2013506699.tif 000047
実施例１６のラセミ化合物をキラル相のＨＰＬＣクロマトグラフィーによりエナンチオマーに分離した［カラム：Daicel Chiralpak IB-H, 5 μm, 250 mm x 20 mm；溶離剤：ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル／アセトニトリル９０：１０ｖ／ｖ；流速：１５ｍｌ／分；温度：３０℃；ＵＶ検出：２２０ｎｍ］：
実施例１７（エナンチオマー１）：
＞９９％ｅｅ
Ｒｔ＝６.１５分［カラム：Daicel Chiralpak IB-H, 5 μm, 250 mm x 4.6 mm；溶離剤：ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル／アセトニトリル９０：１０；流速：１ｍｌ／分；温度：４０℃；ＵＶ検出：２２０ｎｍ］。
実施例１８（エナンチオマー２）：
＞９８.５％ｅｅ
Ｒｔ＝７.８８分［カラム：Daicel Chiralpak IB-H, 5 μm, 250 mm x 4.6 mm；溶離剤：ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル／アセトニトリル９０：１０；流速：１ｍｌ／分；温度：４０℃；ＵＶ検出：２２０ｎｍ］。
【０１３６】
実施例１９
ｒａｃ−４−（６−フルオロ−１Ｈ−インダゾール−５−イル）−２−メチル−６−（トリフルオロメチル）−１,４−ジヒドロピリジン−３,５−ジカルボニトリル
【化４６】
2013506699.tif 000048
実施例４について記載した方法に従って、（２Ｅ）−２−［（６−フルオロ−１Ｈ−インダゾール−５−イル）メチリデン］−３−オキソブタンニトリル（実施例６Ａ）２００ｍｇ（０.８７ｍｍｏｌ）を、３−アミノ−４,４,４−トリフルオロブト−２−エンニトリルで処理した。粗生成物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（アセトニトリル／水グラジエント、最終混合物９０：１０ｖ／ｖ）により精製し、ラセミの表題化合物１１５ｍｇ（理論値の４０％）を得た。
LC-MS (方法 3): Rt = 1.83 分; MS (ESIpos): m/z = 348 (M+H)+
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 13.27 (s, 1H), 10.34 (s, 1H), 8.16 (s, 1H), 7.84 (d, 1H), 7.44 (d, 1H), 5.03 (s, 1H), 2.12 (s, 3H) ppm.
【０１３７】
実施例２０
ｒａｃ−４−（１Ｈ−インダゾール−５−イル）−２−メチル−６−（トリフルオロメチル）−１,４−ジヒドロピリジン−３,５−ジカルボニトリル
【化４７】
2013506699.tif 000049
１−ペンタノール（２.５ｍｌ）および酢酸（０.１５ｍｌ）中の１Ｈ−インダゾール−５−カルボアルデヒド２５０ｍｇ（１.７１ｍｍｏｌ）、ナトリウム１−シアノプロプ−１−エン−２−オラート１８０ｍｇ（１.７１ｍｍｏｌ）および３−アミノ−４,４,４−トリフルオロブト−２−エンニトリル［製造: A.W. Lutz, US Patent 3,635,977; C.G. Krespan, J. Org. Chem. 34, 42 (1969)］９３１ｍｇ（６.８４ｍｍｏｌ）の混合物を、１０５℃に終夜加熱した。冷却後、反応混合物をＴＨＦで希釈し、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（アセトニトリル／水＋０.１％ＴＦＡグラジエント）により直接精製し、ラセミの表題化合物１３１ｍｇ（理論値の２３％）を得た。
LC-MS (方法 2): Rt = 0.93 分; MS (ESIpos): m/z = 330 (M+H)+
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 13.19 (br. s, 1H), 10.30 (s, 1H), 8.12 (s, 1H), 7.71 (s, 1H), 7.63 (d, 1H), 7.32 (d, 1H), 4.79 (s, 1H), 2.12 (s, 3H) ppm.
【０１３８】
実施例２１および実施例２２
４−（１Ｈ−インダゾール−５−イル）−２−メチル−６−（トリフルオロメチル）−１,４−ジヒドロピリジン−３,５−ジカルボニトリル（エナンチオマー１および２）
【化４８】
2013506699.tif 000050
実施例２０（９０ｍｇ）のラセミ化合物を、キラル相のＨＰＬＣクロマトグラフィーによりエナンチオマーに分離した［カラム：セレクターポリ（Ｎ−メタクリロイル−Ｌ−ロイシン−ｔｅｒｔ−ブチルアミド）をベースとするキラルシリカゲル相（ＥＰ０３７９９１７、ＥＰ０７８０４０８参照）、10 μm, 240 mm x 20 mm；溶離剤：イソヘキサン／酢酸エチル１０：９０ｖ／ｖ；流速：４０ｍｌ／分；温度：２５℃；ＵＶ検出：２６０ｎｍ］：
実施例２１（エナンチオマー１）：
収量：２４ｍｇ（９９.５％ｅｅ）
Ｒｔ＝５.５４分［カラム：セレクターポリ（Ｎ−メタクリロイル−Ｌ−ロイシン−ｔｅｒｔ−ブチルアミド）をベースとするキラルシリカゲル相、 250 mm x 4 mm；溶離剤：イソヘキサン／酢酸エチル２０：８０ｖ／ｖ；流速：２ｍｌ／分；ＵＶ検出：２６０ｎｍ］。
実施例２２（エナンチオマー２）：
収量：２１ｍｇ（９９％ｅｅ）
Ｒｔ＝８.６７分［カラム：セレクターポリ（Ｎ−メタクリロイル−Ｌ−ロイシン−ｔｅｒｔ−ブチルアミド）をベースとするキラルシリカゲル相、 250 mm x 4 mm；溶離剤：イソヘキサン／酢酸エチル２０：８０ｖ／ｖ；流速：２ｍｌ／分；ＵＶ検出：２６０ｎｍ］。
【０１３９】
実施例２３
ｒａｃ−４−（３−エチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）−２−メチル−６−（トリフルオロメチル）−１,４−ジヒドロピリジン−３,５−ジカルボニトリル
【化４９】
2013506699.tif 000051
エタノール／２−プロパノール（８：１ｖ／ｖ、１.０ｍｌ）中の（２Ｅ）−２−［（３−エチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）メチリデン］−３−オキソブタンニトリル（実施例１１Ａ）３００ｍｇ（１.２５ｍｍｏｌ）および３−アミノ−４,４,４−トリフルオロブト−２−エンニトリル［製造：A.W. Lutz, US Patent 3,635,977; C.G. Krespan, J. Org. Chem. 34, 42 (1969)］８５３ｍｇ（６.２７ｍｍｏｌ）の懸濁液を還流温度で２４時間撹拌した。冷却後、反応混合物を減圧下で濃縮し、残渣を分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（アセトニトリル／水＋０.１％ＴＦＡグラジエント）により精製し、ラセミの表題化合物５９ｍｇ（理論値の１３％）を得た。
LC-MS (方法 4): Rt = 0.91 分; MS (ESIpos): m/z = 358 (M+H)+
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 12.74 (s, 1H), 10.25 (s, 1H), 7.62 (s, 1H), 7.55 (d, 1H), 7.30 (d, 1H), 4.78 (s, 1H), 2.93 (q, 2H), 2.13 (s, 3H), 1.32 (t, 3H) ppm.
【０１４０】
実施例２４
２,６−ビス（ジフルオロメチル）−４−（１Ｈ−インダゾール−５−イル）−１,４−ジヒドロピリジン−３,５−ジカルボニトリル
【化５０】
2013506699.tif 000052
酢酸（０.５３ｍｌ）中の１Ｈ−インダゾール−５−カルボアルデヒド８０ｍｇ（０.５５ｍｍｏｌ）、３−アミノ−４,４−ジフルオロブト−２−エンニトリル［アセトニトリルの２,２−ジフルオロアセトニトリルとのソープ反応により入手可能、Org. React. 15, 1 (1967), ibid. 31, 1 (1984) 参照］１４２ｍｇ（１.２１ｍｍｏｌ）および痕跡量の粉末状４Åモレキュラー・シーブの混合物を、還流温度に５時間加熱した。冷却後、反応混合物をＴＨＦで希釈し、濾過した。濾液を分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（アセトニトリル／水＋０.１％ＴＦＡグラジエント）により直接精製し、表題化合物９５ｍｇ（理論値の４８％）を得た。
LC-MS (方法 4): Rt = 0.81 分; MS (ESIpos): m/z = 348 (M+H)+
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 13.21 (br. s, 1H), 10.70 (s, 1H), 8.16 (s, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.66 (d, 1H), 7.32 (d, 1H), 6.82 (t, 2H), 4.90 (s, 1H) ppm.
【０１４１】
実施例２５
２,６−ビス（ジフルオロメチル）−４−（３−エチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）−１,４−ジヒドロピリジン−３,５−ジカルボニトリル
【化５１】
2013506699.tif 000053
酢酸（０.４４ｍｌ）中の３−エチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボアルデヒド（実施例１０Ａ）８０ｍｇ（０.４６ｍｍｏｌ）、３−アミノ−４,４−ジフルオロブト−２−エンニトリル［アセトニトリルの２,２−ジフルオロアセトニトリルとのソープ反応により入手可能、Org. React. 15, 1 (1967), ibid. 31, 1 (1984) 参照］１１９ｍｇ（１.２１ｍｍｏｌ）および痕跡量の粉末状４Åモレキュラー・シーブの混合物を還流温度に４時間加熱した。冷却後、反応混合物をＴＨＦ／メタノールで希釈し、濾過した。濾液を分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（アセトニトリル／水＋０.１％ＴＦＡグラジエント）により２回精製し、表題化合物９９ｍｇ（理論値の５７％）を得た。
LC-MS (方法 4): Rt = 0.88 分; MS (ESIpos): m/z = 376 (M+H)+
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 12.79 (br. s, 1H), 10.69 (s, 1H), 7.68 (s, 1H), 7.59 (d, 1H), 7.30 (d, 1H), 6.84 (t, 2H), 4.88 (s, 1H), 2.93 (q, 2H), 1.32 (t, 3H) ppm.
【０１４２】
実施例２６
４−（３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）−２,６−ビス（トリフルオロメチル）−１,４−ジヒドロピリジン−３,５−ジカルボニトリル
【化５２】
2013506699.tif 000054
酢酸（０.３０ｍｌ）中の３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボアルデヒド（実施例１Ａ）５０ｍｇ（０.３１ｍｍｏｌ）、３−アミノ−４,４,４−トリフルオロブト−２−エンニトリル［製造：A.W. Lutz, US Patent 3,635,977; C.G. Krespan, J. Org. Chem. 34, 42 (1969)］１０６ｍｇ（０.７８ｍｍｏｌ）および痕跡量の粉末状４Åモレキュラー・シーブの混合物を還流温度に２時間加熱した。冷却後、反応混合物をメタノール／ジクロロメタンで希釈し、濾過した。濾液を蒸発させ、残渣を分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（アセトニトリル／水＋０.１％ＴＦＡグラジエント）により精製し、表題化合物１９ｍｇ（理論値の１５％）を得た。
LC-MS (方法 4): Rt = 0.92 分; MS (ESIpos): m/z = 398 (M+H)+
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 12.80 (br. s, 1H), 7.62 (s, 1H), 7.59 (d, 1H), 7.31 (d, 1H), 4.87 (s, 1H), 2.49 (s, 3H) ppm.
【０１４３】
以下の化合物を、実施例２６に記載の方法と同様に製造した；メタノール／水＋０.１％ＴＦＡグラジエントを使用する分取ＲＰ−ＨＰＬＣにより精製を実施した：
【表２】
2013506699.tif 000055
【０１４４】
実施例３０
ｒａｃ−２−（１,１−ジフルオロプロピル）−６−メチル−４−（３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）−１,４−ジヒドロピリジン−３,５−ジカルボニトリル
【化５３】
2013506699.tif 000056
２−プロパノール（３３４μｌ）および酢酸（１７０μｌ）中の（２Ｅ）−２−［（３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）メチリデン］−３−オキソブタンニトリル（実施例２Ａ）１１３ｍｇ（０.５０ｍｍｏｌ）および４,４−ジフルオロ−３−オキソヘキサンニトリル（実施例１３Ａ）４３２ｍｇ（純度１７％に基づいて０.５０ｍｍｏｌ）の溶液を、酢酸アンモニウム１１６ｍｇ（１.５ｍｍｏｌ）で処理し、２０分間９０℃で、マイクロ波条件下で撹拌した。冷却後、混合物を減圧下で濃縮し、残渣をｐ−キシレン（１.５ｍｌ）に懸濁した。少量のｐ−トルエンスルホン酸および粉末状４Åモレキュラー・シーブを添加し、混合物を還流温度で４８時間撹拌した。冷却の際に混合物をアセトニトリルで希釈し、濾過し、減圧下で濃縮した。粗生成物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（アセトニトリル／水グラジエント、最終混合物９：１ｖ／ｖ）により、続いて分取的薄層シリカゲルクロマトグラフィー（トルエン／エタノール５：１ｖ／ｖ）により精製し、ラセミの表題化合物７.２ｍｇ（理論値の４％）を淡黄色固体として得た。
LC-MS (方法 2): Rt = 1.00 分; MS (ESIpos): m/z = 354 (M+H)+
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 12.73 (s, 1H), 9.68 (s, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.53 (d, 1H), 7.28 (d, 1H), 4.64 (s, 1H), 2.54 (s, 3H), 2.24 (m, 2H), 2.13 (s, 3H), 1.00 (t, 3H) ppm.
【０１４５】
実施例３１
２−ヒドロキシ−Ｎ,Ｎ,Ｎ−トリメチルエタンアミニウム３,５−ジシアノ−２−メチル−４−（３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）−６−（ジフルオロメチル）−４Ｈ−ピリジン−１−イド（エナンチオマー１）
【化５４】
2013506699.tif 000057
エタノール（１.６ｍｌ）中の２−（ジフルオロメチル）−６−メチル−４−（３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）−１,４−ジヒドロピリジン−３,５−ジカルボニトリル（エナンチオマー１；実施例２）７５ｍｇ（０.２３ｍｍｏｌ）の懸濁液に、アルゴン雰囲気下で２−ヒドロキシ−Ｎ,Ｎ,Ｎ−トリメチルエタンアミニウム炭酸水素塩溶液（重炭酸コリン、水中８０％）３２.６μｌ（０.２３ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を還流温度で１時間撹拌した。続いて、溶液を蒸発させ、残渣を真空で乾燥させた。沈殿をＴＨＦ１.５ｍｌに３日間撹拌し、次いで遠心分離し、表題化合物５６ｍｇ（理論値の５６％）を黄色固体として得た。
LC-MS (方法 4): Rt = 0.82 分; MS (ESIpos): m/z = 326 (M-C5H14NO+2H)+
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 12.55 (s, 1H), 7.43 (d, 1H), 7.32 (s, 1H), 7.27 (d, 1H), 6.12 (t, 1H, 2JHF = 55.0 Hz), 5.30 (s, 1H), 4.42 (s, 1H), 3.82 (m, 2H), 3.38 (m, 2H), 3.10 (s, 9H), 2.46 (s, 3H), 1.88 (s, 3H) ppm.
FT-IR (固体): 3329, 3012, 2169 (CN), 1583, 1513, 1378, 1350, 1281, 1238, 1130, 1089, 1030, 1002, 952, 936, 884, 870, 853, 764, 735 cm-1.  
DSC: 182℃ (明白な発熱性崩壊), ΔH -884 J/g.
【０１４６】
実施例３２
２−ヒドロキシ−Ｎ,Ｎ,Ｎ−トリメチルエタンアミニウム３,５−ジシアノ−２−メチル−４−（３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）−６−（ジフルオロメチル）−４Ｈ−ピリジン−１−イド（エナンチオマー２）
【化５５】
2013506699.tif 000058
エタノール（１.４ｍｌ）中の２−（ジフルオロメチル）−６−メチル−４−（３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）−１,４−ジヒドロピリジン−３,５−ジカルボニトリル（エナンチオマー２；実施例３）６７ｍｇ（０.２１ｍｍｏｌ）の懸濁液に、アルゴン雰囲気下、２−ヒドロキシ−Ｎ,Ｎ,Ｎ−トリメチルエタンアミニウム炭酸水素塩溶液（重炭酸コリン、水中８０％）２８.９μｌ（０.２１ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を還流温度で１時間撹拌した。続いて、溶液を蒸発させ、残渣を真空で乾燥させた。沈殿をＴＨＦ１.５ｍｌ中で３日間撹拌し、次いで遠心分離し、表題化合物４８ｍｇ（理論値の５４％）を黄色固体として得た。
LC-MS (方法 4): Rt = 0.82 分; MS (ESIpos): m/z = 326 (M-C5H14NO+2H)+
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 12.55 (s, 1H), 7.43 (d, 1H), 7.32 (s, 1H), 7.27 (d, 1H), 6.12 (t, 1H, 2JHF = 55.0 Hz), 5.30 (s, 1H), 4.42 (s, 1H), 3.82 (m, 2H), 3.38 (m, 2H), 3.10 (s, 9H), 2.46 (s, 3H), 1.88 (s, 3H) ppm.
FT-IR (固体): 3328, 2861, 2169 (CN), 1591, 1512, 1378, 1350, 1280, 1238, 1129, 1089, 1031, 1002, 952, 936, 884, 869, 853, 764, 735 cm-1.  
DSC: 176℃ (明白な発熱性崩壊), ΔH -747 J/g.
【０１４７】
実施例３３
２−ヒドロキシ−Ｎ,Ｎ,Ｎ−トリメチルエタンアミニウム（４Ｓ）−３,５−ジシアノ−２−メチル−４−（３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）−６−（トリフルオロメチル）−４Ｈ−ピリジン−１−イド
【化５６】
2013506699.tif 000059
エタノール（２.４３ｍｌ）中の（４Ｓ）−２−メチル−４−（３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）−６−（トリフルオロメチル）−１,４−ジヒドロピリジン−３,５−ジカルボニトリル（実施例６）１０１ｍｇ（０.３０ｍｍｏｌ）の懸濁液に、アルゴン雰囲気下、２−ヒドロキシ−Ｎ,Ｎ,Ｎ−トリメチルエタンアミニウム炭酸水素塩溶液（重炭酸コリン、水中８０％）５２μｌ（０.３０ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を還流温度で４０分間撹拌した。続いて、溶液を蒸発させ、残渣を真空で乾燥させた。沈殿をＴＨＦ／ペンタン（９：１ｖ／ｖ）１.５ｍｌ中で７日間撹拌し、次いで遠心分離し、表題化合物７０ｍｇ（理論値の５１％）を固体として得た。
LC-MS (方法 3): Rt = 1.81 分; MS (ESIpos): m/z = 344 (M-C5H14NO+2H)+
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 12.58 (s, 1H), 7.44 (d, 1H), 7.32 (s, 1H), 7.25 (d, 1H), 5.29 (s, 1H), 4.42 (s, 1H), 3.85-3.80 (m, 2H), 3.39-3.35 (m, 2H), 3.10 (s, 9H), 2.46 (s, 3H), 1.90 (s, 3H) ppm.
FT-IR (固体): 3418, 3097, 3021, 2865, 2175 (CN), 1592, 1516, 1486, 1376, 1330, 1283, 1210, 1170, 1150, 1120, 1088, 998, 956, 935, 888, 864, 844, 819, 764, 732, 710, 685 cm-1.  
DSC: 182℃ (明白な発熱性崩壊), ΔH -814 J/g.
【０１４８】
実施例３４
ナトリウム（４Ｓ）−３,５−ジシアノ−２−メチル−４−（３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）−６−（トリフルオロメチル）−４Ｈ−ピリジン−１−イド
【化５７】
2013506699.tif 000060
ＴＨＦ（６ｍｌ）中の（４Ｓ）−２−メチル−４−（３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）−６−（トリフルオロメチル）−１,４−ジヒドロピリジン−３,５−ジカルボニトリル（実施例６）２００ｍｇ（０.５８３ｍｍｏｌ）の懸濁液に、アルゴン雰囲気下、１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液６１２μｌ（０.６１２ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を弱いアルゴン気流下で３日間室温で撹拌した。得られた水中の固体をわずかなアルゴン気流下でさらに３日間乾燥するまで撹拌することにより生成物を結晶化し、表題化合物２１２ｍｇ（理論値の１００％）を固体として得た。
LC-MS (方法 4): Rt = 0.86 分; MS (ESIpos): m/z = 344 (M-Na+2H)+
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 12.58 (s, 1H), 7.44 (d, 1H), 7.32 (s, 1H), 7.25 (d, 1H), 4.42 (s, 1H), 2.46 (s, 3H), 1.90 (s, 3H) ppm.
FT-IR (固体): 3302, 2870, 2183 (CN), 1631, 1587, 1508, 1438, 1378, 1329, 1284, 1205, 1180, 1150, 1125, 1055, 995, 880, 821, 786, 764, 729, 675, 657 cm-1. 
DSC: 227℃ (発熱性崩壊), ΔH -150 J/g.
【０１４９】
実施例３５
カリウム（４Ｓ）−３,５−ジシアノ−２−メチル−４−（３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）−６−（トリフルオロメチル）−４Ｈ−ピリジン−１−イド
【化５８】
2013506699.tif 000061
ＴＨＦ（６ｍｌ）中の（４Ｓ）−２−メチル−４−（３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）−６−（トリフルオロメチル）−１,４−ジヒドロピリジン−３,５−ジカルボニトリル（実施例６）６０ｍｇ（０.１７５ｍｍｏｌ）の懸濁液に、アルゴン雰囲気下、１Ｎ水酸化カリウム水溶液１７５μｌ（０.１７５ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を弱いアルゴン気流下で５日間室温で撹拌した。得られた沈殿を真空で乾燥させ、表題化合物６６ｍｇ（理論値の１００％）を固体として得た。
LC-MS (方法 4): Rt = 0.87 分; MS (ESIpos): m/z = 344 (M-K+2H)+
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 12.58 (s, 1H), 7.44 (d, 1H), 7.32 (s, 1H), 7.25 (d, 1H), 4.42 (s, 1H), 2.46 (s, 3H), 1.90 (s, 3H) ppm.
FT-IR (固体): 3296, 2876, 2173 (CN), 1631, 1588, 1510, 1436, 1379, 1330, 1285, 1205, 1180, 1149, 1124, 1054, 996, 882, 821, 786, 764, 729, 704, 665 cm-1. 
DSC: 199℃ (発熱性崩壊), ΔH -93 J/g.
【０１５０】
実施例３６
２−ヒドロキシ−Ｎ,Ｎ,Ｎ−トリメチルエタンアミニウム（４Ｒ）−３,５−ジシアノ−２−メチル−４−（３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）−６−（トリフルオロメチル）−４Ｈ−ピリジン−１−イド
【化５９】
2013506699.tif 000062
エタノール（２.１ｍｌ）中の（４Ｒ）−２−メチル−４−（３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）−６−（トリフルオロメチル）−１,４−ジヒドロピリジン−３,５−ジカルボニトリル（実施例５）１００ｍｇ（０.２９ｍｍｏｌ）の懸濁液に、アルゴン雰囲気下、２−ヒドロキシ−Ｎ,Ｎ,Ｎ−トリメチルエタンアミニウム炭酸水素塩溶液（重炭酸コリン、水中８０％）４１μｌ（０.２９ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を還流温度で４０分間撹拌した。続いて、溶液を蒸発させ、残渣を真空で乾燥させた。沈殿をＴＨＦ／ペンタン（９：１ｖ／ｖ）１.５ｍｌ中で３日間撹拌し、次いで遠心分離し、表題化合物８４ｍｇ（理論値の６４％）を固体として得た。
LC-MS (方法 4): Rt = 0.88 分; MS (ESIpos): m/z = 344 (M-C5H14NO+2H)+
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 12.56 (s, 1H), 7.44 (d, 1H), 7.34 (s, 1H), 7.26 (d, 1H), 5.29 (s, 1H), 4.42 (s, 1H), 3.85-3.80 (m, 2H), 3.39-3.35 (m, 2H), 3.10 (s, 9H), 2.46 (s, 3H), 1.90 (s, 3H) ppm.
FT-IR (固体): 3419, 2867, 2175 (CN), 1592, 1517, 1487, 1377, 1330, 1285, 1212, 1171, 1150, 1122, 1095, 999, 956, 935, 864, 819, 764, 732, 710, 688 cm-1.  
DSC: 197℃ (明白な発熱性崩壊), ΔH -744 J/g.
【０１５１】
実施例３７
ナトリウム（４Ｒ）−３,５−ジシアノ−２−メチル−４−（３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）−６−（トリフルオロメチル）−４Ｈ−ピリジン−１−イド
【化６０】
2013506699.tif 000063
ＴＨＦ（１ｍｌ）中の（４Ｒ）−２−メチル−４−（３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）−６−（トリフルオロメチル）−１,４−ジヒドロピリジン−３,５−ジカルボニトリル（実施例５）４１ｍｇ（０.１２ｍｍｏｌ）の懸濁液に、アルゴン雰囲気下、１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液１３１μｌ（０.１３ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を弱いアルゴン気流下で５日間室温で撹拌した。得られた沈殿を真空で乾燥させ、表題化合物４４ｍｇ（理論値の１００％）を固体として得た。
LC-MS (方法 4): Rt = 0.86 分; MS (ESIpos): m/z = 344 (M-Na+2H)+
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 12.58 (s, 1H), 7.44 (d, 1H), 7.32 (s, 1H), 7.25 (d, 1H), 4.42 (s, 1H), 2.46 (s, 3H), 1.90 (s, 3H) ppm.
【０１５２】
実施例３８
カリウム（４Ｒ）−３,５−ジシアノ−２−メチル−４−（３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）−６−（トリフルオロメチル）−４Ｈ−ピリジン−１−イド
【化６１】
2013506699.tif 000064
ＴＨＦ（２ｍｌ）中の（４Ｒ）−２−メチル−４−（３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）−６−（トリフルオロメチル）−１,４−ジヒドロピリジン−３,５−ジカルボニトリル（実施例５）３９ｍｇ（０.１１ｍｍｏｌ）の懸濁液に、アルゴン雰囲気下、１Ｎ水酸化カリウム水溶液１２６μｌ（０.１２ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を弱いアルゴン気流下で５日間室温で撹拌した。得られた沈殿を真空で乾燥させ、表題化合物４４ｍｇ（理論値の１００％）を固体として得た。
LC-MS (方法 4): Rt = 0.87 分; MS (ESIpos): m/z = 344 (M-K+2H)+
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 12.58 (s, 1H), 7.44 (d, 1H), 7.32 (s, 1H), 7.25 (d, 1H), 4.42 (s, 1H), 2.46 (s, 3H), 1.90 (s, 3H) ppm.
【０１５３】
実施例３９
ナトリウム３,５−ジシアノ−２,６−ビス（ジフルオロメチル）−４−（６−フルオロ−３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）−４Ｈ−ピリジン−１−イド
【化６２】
2013506699.tif 000065
エタノール（０.２５ｍｌ）中の２,６−ビス（ジフルオロメチル）−４−（６−フルオロ−３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）−１,４−ジヒドロピリジン−３,５−ジカルボニトリル（実施例１４）１００ｍｇ（０.２８ｍｍｏｌ）の懸濁液に、アルゴン雰囲気下、１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液２９０μｌ（０.２９ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を弱いアルゴン気流下で４日間室温で撹拌した。得られた沈殿を真空で乾燥させ、表題化合物１１０ｍｇ（理論値の１００％）を固体として得た。
LC-MS (方法 3): Rt = 1.82 分; MS (ESIpos): m/z = 380 (M-Na+2H)+
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 12.69 (s, 1H), 7.46 (d, 1H), 7.21 (d, 1H), 6.22 (t, 2H), 4.82 (s, 1H), 2.44 (s, 3H) ppm.
【０１５４】
実施例４０
２−ヒドロキシ−Ｎ,Ｎ,Ｎ−トリメチルエタンアミニウム３,５−ジシアノ−２,６−ビス（ジフルオロメチル）−４−（６−フルオロ−３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）−４Ｈ−ピリジン−１−イド
【化６３】
2013506699.tif 000066
エタノール（１.５２ｍｌ）中の２,６−ビス（ジフルオロメチル）−４−（６−フルオロ−３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）−１,４−ジヒドロピリジン−３,５−ジカルボニトリル（実施例１４）１００ｍｇ（０.２６ｍｍｏｌ）の懸濁液に、アルゴン雰囲気下、２−ヒドロキシ−Ｎ,Ｎ,Ｎ−トリメチルエタンアミニウム炭酸水素塩溶液（重炭酸コリン、水中８０％）４７μｌ（０.２６ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を還流温度で１時間撹拌した。続いて、弱いアルゴン気流を溶液混合物上に導入した。得られた沈殿を真空で乾燥させ、表題化合物１３０ｍｇ（理論値の１００％）を固体として得た。
LC-MS (方法 4): Rt = 0.86 分; MS (ESIpos): m/z = 380 (M-C5H14NO+2H)+
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 12.69 (br. s, 1H), 7.46 (d, 1H), 7.21 (d, 1H), 6.22 (t, 2H), 5.82 (br. s, 1H), 4.82 (s, 1H), 3.82 (br. s, 2H), 3.40 (br. s, 2H), 3.11 (s, 9H), 2.44 (s, 3H) ppm.
FT-IR (固体): 3388, 2870, 2183 (CN), 1633, 1595, 1525, 1487, 1390, 1360, 1285, 1270, 1123, 1030, 952, 822, 703 cm-1.  
DSC: 171℃ (明白な発熱性崩壊), ΔH -573 J/g.
【０１５５】
実施例４１
２−ヒドロキシ−Ｎ,Ｎ,Ｎ−トリメチルエタンアミニウム３,５−ジシアノ−２,６−ビス（ジフルオロメチル）−４−（３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）−４Ｈ−ピリジン−１−イド
【化６４】
2013506699.tif 000067
エタノール（１.５２ｍｌ）中の２,６−ビス（ジフルオロメチル）−４−（３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）−１,４−ジヒドロピリジン−３,５−ジカルボニトリル（実施例１３）８０ｍｇ（０.２２ｍｍｏｌ）の懸濁液に、アルゴン雰囲気下、２−ヒドロキシ−Ｎ,Ｎ,Ｎ−トリメチルエタンアミニウム炭酸水素塩溶液（重炭酸コリン、水中８０％）３１μｌ（０.２２ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を還流温度で１時間撹拌した。続いて、弱いアルゴン気流を溶液混合物上に導入した。粗生成物をＴＨＦ（１.５ｍｌ）で処理し、２日間アルゴン下で撹拌した。得られた沈殿を遠心分離により回収し、真空で乾燥させ、表題化合物５７ｍｇ（理論値の５４％）を黄色固体として得た。
LC-MS (方法 4): Rt = 0.85 分; MS (ESIpos): m/z = 361 (M-C5H14NO+2H)+
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 12.6 (s, 1H), 7.47 (d, 1H), 7.39 (s, 1H), 7.26 (d, 1H), 6.22 (t, 2H), 5.26 (t, 1H), 4.52 (s, 1H), 3.82 (br. m, 2H), 3.40 (m, 2H), 3.11 (s, 9H), 2.46 (s, 3H) ppm.
FT-IR (固体): 3422, 2360, 2183 (CN), 1601, 1524, 1387, 1364, 1275, 1270, 1131, 1032, 1009, 958, 893, 866, 769 cm-1.  
DSC: 161℃ (明白な発熱性崩壊), ΔH -779 J/g.
【０１５６】
実施例４２
ｒａｃ−１,２−ジメチル−４−（３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）−６−（トリフルオロメチル）−１,４−ジヒドロピリジン−３,５−ジカルボニトリル
【化６５】
2013506699.tif 000068
ＤＭＦ（１１.５ｍｌ）中の２−メチル−４−（３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）−６−（トリフルオロメチル）−１,４−ジヒドロピリジン−３,５−ジカルボニトリル（実施例４）３７５ｍｇ（１.０９ｍｍｏｌ）の溶液を、０℃に冷却した。炭酸セシウム５３４ｍｇ（１.６４ｍｍｏｌ）をこの温度で添加し、１５分後にヨウ化メチル４８μｌ（０.７７ｍｍｏｌ）を室温で滴下して添加した。終夜室温で撹拌した後、さらなるヨウ化メチル（２０μｌ）および少量の炭酸セシウムを添加し、反応混合物を室温でさらに３時間撹拌し、その後、水およびメタノールを添加した。得られた溶液を分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（アセトニトリル／水＋０.１％ＴＦＡグラジエント）により直接精製し、ラセミの表題化合物７５ｍｇ（理論値の１９％）を得た。
LC-MS (方法 4): Rt = 0.94 分; MS (ESIpos): m/z = 358 (M+H)+
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 12.77 (br. s, 1H), 7.58 (s, 1H), 7.54 (d, 1H), 7.28 (d, 1H), 4.69 (s, 1H), 3.30 (s, 3H), 2.49 (s, 3H), 2.32 (s, 3H) ppm.
【０１５７】
実施例４３および実施例４４
１,２−ジメチル−４−（３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）−６−（トリフルオロメチル）−１,４−ジヒドロピリジン−３,５−ジカルボニトリル（エナンチオマー１および２）
【化６６】
2013506699.tif 000069
実施例４２（７４ｍｇ）のラセミ化合物を、キラル相のＨＰＬＣクロマトグラフィーによりエナンチオマーに分離した［カラム：Daicel Chiralpak AD-H, 5 μm, 250 mm x 20 mm；溶離剤：イソヘキサン／エタノール７５：２５ｖ／ｖ；流速：１５ｍｌ／分；温度：３０℃；ＵＶ検出：２２０ｎｍ］：
実施例４３（エナンチオマー１）：
収量：２１ｍｇ（化学的純度＞９９％、＞９９％ｅｅ）
Ｒｔ＝６.０９分［カラム：Daicel Chiralpak AD-H, 5 μm, 250 mm x 4.6 mm；溶離剤：イソヘキサン／エタノール７０：３０＋０.２％ＴＦＡ＋１％水；流速：１ｍｌ／分；温度：３５℃；ＵＶ検出：２２０ｎｍ］。
実施例４４（エナンチオマー２）：
収量：２０ｍｇ（化学的純度＞９９％、＞９５％ｅｅ）
Ｒｔ＝６.６５分［カラム：Daicel Chiralpak AD-H, 5 μm, 250 mm x 4.6 mm；溶離剤：イソヘキサン／エタノール７０：３０＋０.２％ＴＦＡ＋１％水；流速：１ｍｌ／分；温度：３５℃；ＵＶ検出：２２０ｎｍ］。
【０１５８】
実施例４５
２,６−ビス（ジフルオロメチル）−１−メチル−４−（３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）−１,４−ジヒドロピリジン−３,５−ジカルボニトリル
【化６７】
2013506699.tif 000070
ＤＭＦ（１.５ｍｌ）中の２,６−ビス（ジフルオロメチル）−４−（３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）−１,４−ジヒドロピリジン−３,５−ジカルボニトリル（実施例１３）１００ｍｇ（０.２７７ｍｍｏｌ）の溶液を、０℃に冷却し、炭酸セシウム１０８ｍｇ（０.３３ｍｍｏｌ）をこの温度で添加した。３０分間撹拌した後、ヨウ化メチル２１μｌ（０.３３ｍｍｏｌ）を室温で滴下して添加し、混合物を室温で終夜撹拌した。この後、さらなるヨウ化メチル（２０μｌ）を添加し、室温での撹拌をさらに４８時間継続した。次いで、反応混合物を濾過し、濾液を分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（アセトニトリル／水＋０.１％ＴＦＡ、均一濃度、４０：６０ｖ／ｖ）により直接精製し、表題化合物１２ｍｇ（理論値の１１％）を得た。
LC-MS (方法 4): Rt = 0.96 分; MS (ESIpos): m/z = 376 (M+H)+
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 12.8 (br. s, 1H), 7.62 (s, 1H), 7.57 (d, 1H), 7.30 (d, 1H), 7.11 (t, 2H), 4.83 (s, 1H), 3.40 (s, 3H), 2.50 (s, 3H) ppm.
【０１５９】
実施例４６
ｒａｃ−２−（ジフルオロメチル）−４−（３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）−６−（トリフルオロメチル）−１,４−ジヒドロピリジン−３,５−ジカルボニトリル
【化６８】
2013506699.tif 000071
４Åモレキュラー・シーブを含有する乾燥ジクロロメタン（４ｍｌ）中の３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボアルデヒド（実施例１Ａ）１５０ｍｇ（０.９３６ｍｍｏｌ）、４,４−ジフルオロ−３−オキソブタンニトリル（実施例１４Ａ）２７３ｍｇ（１.０３ｍｍｏｌ）、酢酸０.０６７ｍｌ（１.１７ｍｍｏｌ）およびピペリジン９.３μｌ（０.０９４ｍｍｏｌ）の混合物を、還流下で１２時間撹拌した。次いで、混合物を濾過し、濾液を減圧下で濃縮した。残渣を２−プロパノール（２ｍｌ）および酢酸（１ｍｌ）にアルゴン下で溶解し、３−アミノ−４,４,４−トリフルオロブト−２−エンニトリル［製造：A.W. Lutz, US Patent 3,635,977; C.G. Krespan, J. Org. Chem. 34, 42 (1969)］５１０ｍｇ（３.７５ｍｍｏｌ）を添加した。溶液を還流下で６時間撹拌した。冷却の際に、混合物を蒸発乾固し、少量のｐ−トルエンスルホン酸を含有するトルエン（４ｍｌ）で残渣を処理した。混合物を還流下でさらに１２時間撹拌した。冷却の際に、混合物を再度蒸発乾固し、残渣を酢酸エチルに溶解した。有機相を飽和炭酸水素ナトリウム溶液および水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮した。残渣を分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（メタノール／水＋０.１％ＴＦＡグラジエント）により精製し、ラセミの表題化合物３９ｍｇ（理論値の１１％）を得た。
LC-MS (方法 3): Rt = 1.90 分; MS (ESIpos): m/z = 380 (M+H)+
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 12.82 (br. s, 1H), 10.93 (br. s, 1H), 7.68 (s, 1H), 7.58 (d, 1H), 7.33 (d, 1H), 6.81 (t, 1H, 2JHF = 52 Hz), 4.96 (s, 1H), 2.50 (s, 3H) ppm.
【０１６０】
Ｂ. 生物活性の評価
本発明の化合物の活性の立証は、当分野で周知のインビトロ、エクスビボおよびインビボのアッセイを通して達成され得る。例えば、本発明の化合物の活性を立証するために、以下のアッセイを使用し得る。
【０１６１】
ｃ−Ｍｅｔ受容体チロシンキナーゼ活性のアッセイ（ＮＡＤＨ読み取り）：
組換えヒトｃ−Ｍｅｔタンパク質（Invitrogen, Carlsbad, California, USA）を使用する。キナーゼ反応の基質として、ペプチドＫＫＫＳＰＧＥＹＶＮＩＥＦＧ（JPT, Germany）を使用する。アッセイのために、５１倍に濃縮したＤＭＳＯ中の試験化合物の溶液１μＬを、白色３８４ウェルマイクロタイタープレートにピペットで加える (Greiner Bio-One, Frickenhausen, Germany）。アッセイバッファー［３−（Ｎ−モルホリノ）プロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）、５０ｍＭ、ｐＨ７；ＭｇＣｌ２、１０ｍＭ；ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、０.０１％；Triton X 100、０.０１％；ＤＴＴ、２ｍＭ］中のｃ−Ｍｅｔ（最終濃度３０ｎＭ）およびピルビン酸キナーゼ／乳酸デヒドロゲナーゼ（Roche Diagnostics, Mannheim, Germany；最終濃度８ｍｇ／Ｌ）の溶液２５μＬを添加し、混合物を５分間室温でインキュベートする。次いで、アッセイバッファー中のアデノシン三リン酸（ＡＴＰ、最終濃度３０μＭ）、基質（最終濃度１００μＭ）、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤＨ、最終濃度５０μＭ）およびジチオスレイトール（ＤＴＴ、最終濃度２ｍＭ）の溶液２５μＬの添加によりキナーゼ反応を開始させ、得られる混合物を、１００分間の反応時間にわたり、３２℃でインキュベートする。
【０１６２】
続いて、リン酸化された基質の量を、ＮＡＤＨ蛍光の減少の測定により評価する。従って、３４０ｎｍでの励起後の４６５ｎｍでの蛍光の放出を蛍光リーダー、例えば、Tecan Ultra (Tecan, Maennedorf, Switzerland）で測定する。データを標準化する（阻害剤なしの酵素反応＝０％阻害；全ての他のアッセイ成分であるが、酵素はない＝１００％阻害）。通常、試験化合物を同じマイクロタイタープレートで、１０μＭないし１ｎＭの範囲の９つの異なる濃度（１０μＭ、３.１μＭ、１.０μＭ、０.３μＭ、０.１μＭ、０.０３μＭ、０.０１μＭ、０.００３μＭ、０.００１μＭ；アッセイ前に、５１倍濃縮した原液のレベルで、連続１：３希釈により調製した連続希釈物）で、各濃度につきデュプリケート（duplicate）で試験し、自社のソフトウェアを使用して、ＩＣ５０値を算出する。
【０１６３】
いくつかの代表的ＩＣ５０値を、先行技術の構造的に関連する非フッ化化合物（ＷＯ２００８／０７１４５１参照）についての対応するデータと共に、下記の表１に挙げる：
表１
【表３】
2013506699.tif 000072
【０１６４】
ｃ−Ｍｅｔ受容体チロシンキナーゼの均一時間分解蛍光法（代替的フォーマット）：
ヒトｃ−ＭｅｔのＮ末端にＨｉｓ６−タグを有する組換えキナーゼドメイン（アミノ酸９６０−１３９０）を、昆虫細胞（ＳＦ２１）で発現させ、Ｎｉ−ＮＴＡ親和性クロマトグラフィーにより精製し、連続的サイズ排除クロマトグラフィー（Superdex 200）を使用する。あるいは、購入できるｃ−Ｍｅｔ（Millipore）を使用できる。キナーゼ反応の基質として、ビオチン化ポリ−Ｇｌｕ,Ｔｙｒ（４：１）コポリマー（# 61GT0BLC, Cis Biointernational, Marcoule, France) を使用する。
【０１６５】
アッセイのために、ＤＭＳＯ中の試験化合物の１００倍濃縮溶液５０ｎＬを、黒色低容積３８４ウェルマイクロタイタープレート（Greiner Bio-One, Frickenhausen, Germany）にピペットで加える。アッセイバッファー［２５ｍＭ Ｈｅｐｅｓ／ＮａＯＨ、ｐＨ７.５；５ｍＭ ＭｇＣｌ２；５ｍＭ ＭｎＣｌ２；２ｍＭジチオスレイトール；０.１％（ｖ／ｖ）Tween 20 (Sigma)；０.１％（ｗ／ｖ）ウシ血清アルブミン］中のｃ−Ｍｅｔの溶液２μＬを添加し、混合物を１５分間２２℃でインキュベートし、キナーゼ反応の開始前に試験化合物を酵素に予め結合させる。次いで、アッセイバッファー中のアデノシン三リン酸（ＡＴＰ、１６.７μＭ；アッセイ体積５μＬ中の最終濃度は１０μＭである）および基質（２.２７μｇ／ｍＬ、アッセイ体積５μＬ中の最終濃度は、１.３６μｇ／ｍＬ〜３０ｎＭである）の溶液３μＬの添加により、キナーゼ反応を開始させ、得られる混合物を、３０分間の反応時間にわたり、２２℃でインキュベートする。アッセイ中のｃ−Ｍｅｔの濃度を酵素ロットの活性に応じて調節し、アッセイが線形の範囲にあるように適当に選択する；典型的な酵素濃度は、約０.０３ｎＭ（アッセイ体積５μＬ中の最終濃度）の範囲にある。水性ＥＤＴＡ溶液［１００ｍＭ ＥＤＴＡ、０.２％（ｗ／ｖ）ウシ血清アルブミン、５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ／ＮａＯＨ中、ｐＨ７.５］中のＨＴＲＦ検出試薬［４０ｎＭストレプトアビジン−ＸＬｅｎｔおよび２.４ｎＭ ＰＴ６６−Ｅｕ−キレート（ユーロピウムキレートで標識された抗ホスホチロシン抗体（Perkin-Elmer）］の溶液５μＬの添加により、反応を停止させる。
【０１６６】
得られる混合物を、１時間２２℃でインキュベートし、ビオチン化されたリン酸化ペプチドのストレプトアビジン−ＸＬｅｎｔおよびＰＴ６６−Ｅｕ−キレートへの結合を可能にする。続いて、リン酸化基質の量を、ＰＴ６６−Ｅｕ−キレートからストレプトアビジン−ＸＬｅｎｔへの共鳴エネルギー移動の測定により評価する。従って、３５０ｎｍでの励起後の６２０ｎｍおよび６６５ｎｍでの蛍光の放出を、ＨＴＲＦリーダー、例えば、Rubystar（BMG Labtechnologies, Offenburg, Germany）または Viewlux（Perkin-Elmer）で測定する。６６５ｎｍおよび６２２ｎｍでの発光の比を、リン酸化基質の量の尺度として取る。データを標準化する（阻害剤なしの酵素反応＝０％阻害；全ての他のアッセイ成分であるが、酵素はない＝１００％阻害）。通常、試験化合物を同じマイクロタイタープレートで、２０μＭないし１ｎＭの範囲の１０個の異なる濃度（２０μＭ、６.７μＭ、２.２μＭ、０.７４μＭ、０.２５μＭ、８２ｎＭ、２７ｎＭ、９.２ｎＭ、３.１ｎＭおよび１ｎＭ；アッセイ前に、１００倍濃縮した原液のレベルで、連続１：３希釈により調製した連続希釈物）で、各濃度につきデュプリケートで試験し、自社のソフトウェアを使用して、４パラメーターフィットによりＩＣ５０値を算出する。
【０１６７】
いくつかの代表的ＩＣ５０値を、先行技術の構造的に関連する非フッ化化合物（ＷＯ２００８／０７１４５１参照）についての対応するデータと共に、下記の表２に挙げる：
表２
【表４】
2013506699.tif 000073
【０１６８】
ホスホ−ｃ−Ｍｅｔアッセイ：
これは、ＭＫＮ−４５腫瘍細胞（胃癌、ＡＴＣＣから購入）を増殖因子で刺激せずに使用する、細胞をベースとするＥＬＩＳＡ様アッセイ［Meso Scale Discovery (MSD), Gaithersburg, MD, USA］である。１日目に、細胞を９６ウェルプレート中の完全増殖培地に播く（１００００細胞／ウェル）。２日目に、無血清培地中での２時間の薬物処理の後、細胞を洗浄し、次いで溶解させ（６０μｌ／ウェル、ＭＳＤ推奨の溶解バッファーを使用する）、−８０℃で凍結させる。また、２日目に、ＭＳＤホスホ−Ｍｅｔプレートの非特異的抗体結合部位を MSD Blocking Solution A で、終夜４℃でブロックする。３日目に、凍結した溶解物を氷上で融かし、溶解物２５μｌをＭＳＤホスホ−Ｍｅｔプレートに移し、１時間振盪し、その後Ｔｒｉｓ−緩衝塩水＋０.０５％ Tween 20（ＴＢＳＴ）で１回洗浄する。非結合タンパク質を除去した後、ＭＳＤの Sulfa-TAG 抗Met抗体を、抗体希釈バッファー（ＭＳＤのプロトコールに従う）中の最終濃度５ｎＭでプレートに添加し、１時間振盪する。次いで、プレートをＴＢＳＴバッファーで３回洗浄し、その後 1x MSD Read Buffer を加える。次いで、プレートを MSD Discovery Workstation 装置で読む。参照化合物１０μＭのウェル（最小のシグナル）および薬物処理を行わないＤＭＳＯのウェル（最大のシグナル）を含む未加工のデータを、ＩＣ５０値の決定のために Analyze 5 プログラムに入力する。
【０１６９】
細胞のホスホ−ｃ−Ｍｅｔアッセイ：
３８４−ウェルのマイクロタイタープレートに播いたヒト胃腺腫細胞（ＭＫＮ４５、ＡＴＣＣから購入）（９０００細胞／ウェル）を、完全増殖培地２５μｌ中、２４時間、３７℃で、５％ＣＯ２でインキュベートする。２日目に、０.１％ＦＣＳを含有する低血清培地中、２時間の薬物処理の後、細胞を洗浄し、溶解させる。溶解物を、予め結合したｃ−Ｍｅｔ捕捉抗体［Mesoscale Discovery (MSD), Gaithersburg, MD, USAから購入］を有するＢＳＡでブロックしたプレートに移し、１時間震盪し、その後Ｔｒｉｓ緩衝塩水＋０.０５％ Tween 20（ＴＢＳＴ）で１回洗浄する。ＭＳＤのプロトコールに従い、Sulfa-TAG抗ホスホ-c-Met検出抗体を抗体希釈バッファー中の最終濃度５ｎＭでプレートに添加し、１時間室温で振盪する。ウェルをＴｒｉｓバッファーで洗浄した後、１ｘリーディングバッファーを添加し、プレートを Sector Imager 6000 (Mesoscale から購入) で測定する。Marquardt-Levenberg-Fit を使用して、用量応答曲線からＩＣ５０値を算出する。
【０１７０】
インビトロの腫瘍細胞増殖アッセイ：
本発明の化合物を試験するのに使用する接着性の腫瘍細胞増殖アッセイは、Promega により開発された Cell Titre-Glo と呼ばれる読み取りを含む [B.A. Cunningham, "A Growing Issue: Cell Proliferation Assays. Modern kits ease quantification of cell growth", The Scientist 2001, 15 (13), 26; S.P. Crouch et al., "The use of ATP bioluminescence as a measure of cell proliferation and cytotoxicity", Journal of Immunological Methods 1993, 160, 81-88］。発光シグナルの生成は、存在するＡＴＰの量に対応し、それは、代謝的に活性な（増殖している）細胞の数に直接比例する。
【０１７１】
Ｈ４６０細胞（肺癌、ＡＴＣＣから購入）を、９６ウェルプレートに、３０００細胞／ウェルで、１０％ウシ胎仔血清を含む完全培地中に播き、２４時間３７℃でインキュベートする。播種の２４時間後、試験化合物を連続希釈の１０ｎＭないし２０μＭの最終濃度範囲で、最終ＤＭＳＯ濃度０.２％で添加する。試験化合物の添加後、細胞を７２時間３７℃で、完全増殖培地中でインキュベートする。４日目に、Promega Cell Titre-Glo Luminescent（登録商標）アッセイキットを使用して、細胞を溶解させ、基質／バッファー混合物１００μｌを各ウェルに添加し、混合し、室温で８分間インキュベートする。サンプルをルミノメーターで読み、各ウェルの細胞溶解物中に存在するＡＴＰの量を測定し、それは、そのウェル中の生存可能な細胞の数に対応する。２４時間のインキュベーションで読まれた値を、０日目として差し引く。ＩＣ５０値の測定に、線形回帰分析を使用して、このアッセイフォーマットを使用する細胞増殖の５０％阻害をもたらす薬物濃度を判定することができる。このプロトコールを、ＣＡＫＩ−１、ＭＮＫ−４５、ＧＴＬ−１６、ＨＣＣ２９９８、Ｋ５６２、Ｈ４４１、Ｋ８１２、ＭＥＧ０１、ＳＵＰ１５およびＨＣＴ１１６を含むがこれらに限定されない様々な関心のある細胞株に適用できる。
【０１７２】
Ｃ. 薬物動態特性の評価
本発明の化合物の薬物動態（ＰＫ）プロフィールの評価のために、以下のアッセイを使用し得る：
試験化合物の静脈内投与後の薬物動態：
オスの Wistar ラット (Harlan Laboratories) を麻酔し、ラットの頸静脈にカテーテルを挿入する。翌日、規定用量の試験化合物を尾静脈への注射により液剤として投与する。次の２４時間（８−１１時点）で、血液サンプルを頸静脈カテーテルから採取する。血液をヘパリン管で遠心分離し、各血漿サンプルをタンパク質沈降のためにアセトニトリルで処理する。遠心分離後、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ方法を使用して上清中の試験化合物を定量する。測定された血漿濃度を、ＡＵＣ（時間経過に対する血漿濃度の下の面積）、Ｖｓｓ（定常条件下の分布容積）、Ｃｍａｘ（投与後の血漿で観察される試験化合物の最高濃度）、ｔ１／２（半減期）およびＣＬ（血漿からの試験化合物の総クリアランス）などの薬物動態パラメーターの算出に使用する。血液クリアランスの算出のために、ラットの血液中での試験化合物のインキュベーションにより、血液対血漿分布（blood to plasma partitioning）を測定する。血漿を遠心分離により分離した後、血漿濃度をＬＣ−ＭＳ／ＭＳ方法により測定する。試験化合物が完全に吸収されたと仮定して、達成し得るバイオアベイラビリティーの理論的最大値Ｆｍａｘ,ｃａｌｃは、式Ｆｍａｘ,ｃａｌｃ＝［１−ＣＬ血液／Ｑｈ］＊１００により算出され、ここで、ＣＬ血液は、総血液クリアランスであり、Ｑｈは、ラットの肝血流量４.２Ｌ／ｈ／ｋｇである。
【０１７３】
試験化合物の経口投与後の薬物動態：
オスの Wistar ラット(Harlan Laboratories) を麻酔し、ラットの頸静脈にカテーテルを挿入する。翌日、規定用量の試験化合物を経口投与する。次の２４時間（８−１１時点）で、血液サンプルを頸静脈カテーテルから採取する。血液をヘパリン管で遠心分離し、各血漿サンプルをタンパク質沈降のためにアセトニトリルで処理する。遠心分離後、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ方法を使用して上清中の試験化合物を定量する。測定された血漿濃度を、ＡＵＣ（時間経過に対する血漿濃度の下の面積）、Ｃｍａｘ（投与後の血漿で観察される試験化合物の最高濃度）、ｔ１／２（半減期）およびＦ（バイオアベイラビリティー）などの薬物動態パラメーターの決定に使用する。吸収された用量の割合（ｆａｂｓ,ｃａｌｃ）は、式ｆａｂｓ,ｃａｌｃ＝［Ｆ／Ｆｍａｘ,ｃａｌｃ］＊１００により算出し、ここで、Ｆは測定された経口投与後のバイオアベイラビリティーであり、Ｆｍａｘ,ｃａｌｃは、測定された血液クリアランスを考慮し、試験化合物が完全に吸収されると仮定して、理論的に最大の達成し得るバイオアベイラビリティーである。
【０１７４】
Ｃａｃｏ−２透過性アッセイ：
Ｃａｃｏ−２細胞単層を通過する試験化合物のインビトロ透過は、胃腸管からの透過性を予測するための十分に確立されたアッセイ系である [P. Artursson and J. Karlsson: Correlation between oral drug absorption in humans and apparent drug permeability coefficients in human intestinal epithelial (Caco-2) cells, Biochem. Biophys. 175 (3), 880-885 (1991)参照]。そのようなＣａｃｏ−２細胞での本発明の化合物の透過性を、下記の通りに測定した：
【０１７５】
ヒトｃａｃｏ−２細胞（ACC No. 169, DSMZ, German Collection of Microorganisms and Cell Cultures, Braunschweig, Germany）を、２４ウェルの挿入プレートに播き、１４−１６日間増殖させる。透過性の研究のために、試験化合物をＤＭＳＯに溶解し、輸送バッファー［ハンクス緩衝塩溶液、Gibco/ Invitrogen、さらにグルコース（最終濃度１９.９ｍＭ）およびＨＥＰＥＳ（最終濃度９.８ｍＭ）を添加］で２μＭの最終試験濃度に希釈する。頂端側から基底側への透過性（ＰａｐｐＡ−Ｂ）を測定するために、試験化合物溶液を細胞単層の頂端側に添加し、輸送バッファーを単層の基底側に添加する；基底側から頂端側への透過性（ＰａｐｐＢ−Ａ）を測定するために、試験化合物溶液を細胞単層の基底側に添加し、輸送バッファーを単層の頂端側に添加する。実験開始時にサンプルをドナー区画から取り、質量平衡を確かめる。２時間３７℃でインキュベートした後、サンプルを両方の区画から取る。サンプルをＬＣ−ＭＳ／ＭＳにより分析し、明確な透過率を算出する。ルシファーイエローの透過性を各細胞単層についてアッセイし、細胞単層の完全性を保証し、品質管理として各バッチのアテノロール（低透過性マーカー）およびスルファサラジン（能動的排出のマーカー）の透過性を測定する。
【０１７６】
これらのアッセイの代表的な結果を、先行技術の構造的に関連する非フッ化化合物（ＷＯ２００８／０７１４５１参照）についての対応するデータと共に、下記の表３に挙げる：
表３
【表５】
2013506699.tif 000074
［ＰＫパラメーターの意味および（適用できる場合）算出には、上記のアッセイの説明を参照せよ；ＡＵＣｎｏｒｍ＝用量および体重で標準化したＡＵＣ値（用量／ｋｇ体重で除したＡＵＣ）］。
【０１７７】
さらなる本発明の化合物の透過性のデータを、下表４に挙げる：
表４
【表６】
2013506699.tif 000075
【０１７８】
本発明を特定の実施態様を参照して開示したが、本発明の真の精神および範囲から逸脱することなく、本発明の他の実施態様および変形が他の当業者により考案され得ることは明白である。特許請求の範囲は、全てのそのような実施態様および等価の変形も包含すると解釈されることを企図している。
【０１７９】
Ｄ. 医薬組成物に関する実施例
本発明による医薬組成物は以下の通りに例示説明できる：
滅菌ｉ.ｖ.液剤：
本発明の所望の化合物の５ｍｇ／ｍｌ溶液を、注射可能滅菌水を使用して調製でき、必要であればｐＨを調節する。投与用に溶液を滅菌５％デキストロースで１〜２ｍｇ／ｍｌに希釈し、約６０分間にわたってｉ.ｖ.注入液として投与する。
【０１８０】
ｉ.ｖ.投与用凍結乾燥粉末剤：
滅菌調製物を、（ｉ）凍結乾燥粉末としての本発明の所望の化合物１００〜１０００ｍｇ、（ｉｉ）クエン酸ナトリウム３２〜３２７ｍｇ／ｍｌ、および（ｉｉｉ）３００〜３０００ｍｇのデキストラン４０により製造できる。この製剤を滅菌注射可能食塩水または５％デキストロースにより１０ないし２０ｍｇ／ｍｌの濃度に再構成し、さらにこれを食塩水または５％デキストロースで０.２ないし０.４ｍｇ／ｍｌに希釈し、ｉ.ｖ.ボーラスとして、または１５〜６０分間にわたるｉ.ｖ.注入により投与する。
【０１８１】
筋肉内懸濁剤：
次の液剤または懸濁剤を、筋肉内注射用に調製できる：
所望の水不溶性の本発明の化合物５０ｍｇ／ｍｌ、カルボキシメチルセルロースナトリウム５ｍｇ／ｍｌ、４ｍｇ／ｍＬのＴＷＥＥＮ８０、９ｍｇ／ｍｌの塩化ナトリウム、９ｍｇ／ｍｌのベンジルアルコール。
【０１８２】
ハードシェルカプセル剤：
粉末状有効成分１００ｍｇ、乳糖１５０ｍｇ、セルロース５０ｍｇおよびステアリン酸マグネシウム６ｍｇでそれぞれ標準的な２ピースのハードゼラチンカプセルを充填することにより、多数の単位カプセル剤を製造する。
【０１８３】
ソフトゼラチンカプセル剤：
大豆油、綿実油またはオリーブ油などの食用油中の有効成分の混合物を調製し、溶解ゼラチンへ容積移送式ポンプによって注入し、有効成分１００ｍｇを含むソフトゼラチンカプセルを形成する。カプセルを洗浄し、乾燥させる。有効成分をポリエチレングリコール、グリセリンおよびソルビトールの混合物に溶解し、水混和性医薬ミックスを調製できる。
【０１８４】
錠剤：
単位用量が、有効成分１００ｍｇ、コロイド状二酸化ケイ素０.２ｍｇ、ステアリン酸マグネシウム５ｍｇ、結晶セルロース２７５ｍｇ、澱粉１１ｍｇおよび乳糖９８.８ｍｇであるように、常套の方法により多数の錠剤を製造する。適切な水性および非水性被覆を適用し、嗜好性を高めるか、美しさ（elegance）と安定性を改善するか、または吸収を遅延させ得る。
【国際調査報告】
2013506699.tif 000086
2013506699.tif 000087