(57)【要約】  本発明は、一般式（Ｉ）の化学化合物ならびにそれらの使用および調製のための方法に関する。特に、本発明は、増殖性疾患を処置するのに用いることができる置換ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン系化合物、治療の方法および医薬の製造におけるこれらの化合物の使用、ならびにこれらの化合物を含有する組成物に関する。
2013529649.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（Ｉ）：
【化１】
2013529649.tif 000154
［式中、Ｒ１は、水素、任意に置換されているアルキル、−（ＳＯ２）−任意に置換されているアリール、−（ＳＯ２）−任意に置換されているヘテロアリール、任意に置換されているヘテロアリール、任意に置換されているヘテロシクリル、任意に置換されているアリール、およびＣ（＝Ｘ）−Ｒ６であり；
Ｒ２は、水素およびＣ１−Ｃ３アルキルから選択され；
Ｒ３およびＲ４は独立して、Ｃ１−Ｃ３アルキルであり；
Ｌは、結合、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ（Ｒ９）−、任意に置換されているアルキレン、−Ｎ（Ｒ９）Ｃ（Ｘ’）−Ｎ（Ｒ９’）−（式中、Ｒ９およびＲ９’の各々は独立して、水素またはＣ１−Ｃ４アルキルである）から選択され；
Ｒ５は、任意に置換されているアリール、任意に置換されているヘテロアリール、任意に置換されているヘテロシクリルおよび任意に置換されているシクロアルキルから選択され；
ＸおよびＸ’は、Ｏ、ＳおよびＮＲ７から独立して選択され；
Ｒ６は、任意に置換されているＣ１−Ｃ６アルキル、任意に置換されているＣ１−Ｃ６アルコキシ、任意に置換されているＣ２−Ｃ６アルケニル、任意に置換されているＣ２−Ｃ６アルキニル、任意に置換されているヘテロアリール、任意に置換されているヘテロシクリル、任意に置換されているアリール、任意に置換されているシクロアルキル、任意に置換されているシクロアルケニル、任意に置換されているアミノ、任意に置換されているアシルアミノ、任意に置換されているアリールアシル、任意に置換されているヘテロアリールアシル、任意に置換されているヘテロシクリルアシル、任意に置換されているシクロアルキルアシルおよび、トリハロメチルから選択され；
Ｒ７は、水素、シアノ、任意に置換されているＣ１−Ｃ６アルキル、任意に置換されているアリール、Ｓ（Ｏ）２Ｒ８および、任意に置換されているアミノアシルから選択され；
Ｒ８は、任意に置換されているＣ１−Ｃ６アルキルおよび任意に置換されているアリールから選択される。］
の化合物またはその塩。
【請求項２】
Ｌは、結合またはＣＨ２である、請求項１に記載の一般式（Ｉ）の化合物またはその塩。
【請求項３】
Ｌは結合であり、Ｒ５は、ハロ、水酸基、アシル、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルケニルオキシ、アミノ、オキシアシルアミノ、Ｃ１−Ｃ８アルコキシ、アリール、アリールオキシ、カルボキシル、シクロアルキル、シクロアルキルオキシ、シアノ、スルファート、ホスファート、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルオキシ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、トリハロメチル、およびトリアルキルシリル、好ましくは、Ｃ１−Ｃ４アルキル、ヒドロキシ、オキシアシルアミノ、ヘテロアリール、アリールオキシおよびハロから独立して選択される置換基で１または２回置換されているフェニル基である、請求項１または２に記載の一般式（Ｉ）の化合物またはその塩。
【請求項４】
−ＬＲ５は、
【化２】
2013529649.tif 000155
から選択される、請求項１に記載の一般式（Ｉ）の化合物またはその塩。
【請求項５】
一般式（Ｉａ）：
【化３】
2013529649.tif 000156
［式中、Ｒ１は、水素、任意に置換されているアルキル、−（ＳＯ２）−任意に置換されているアリール、−（ＳＯ２）−任意に置換されているヘテロアリール、任意に置換されているヘテロアリール、任意に置換されているヘテロシクリル、任意に置換されているアリール、およびＣ（＝Ｘ）−Ｒ６から選択され；
Ｒ２は、水素およびＣ１−Ｃ３アルキルから選択され；
Ｒ３およびＲ４は独立して、Ｃ１−Ｃ３アルキルであり；
Ｒ１０は、水素、ハロ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ２−Ｃ４アルキニル、Ｃ２−Ｃ４アルケニル、アリールアルキル、ＯＲ１（式中、Ｒ１はＨ、Ｃ１−Ｃ３アルキルまたはアリールである）、ＣＯＯＲ２（式中、Ｒ２はＨ、Ｃ１−Ｃ３アルキルまたはアリールである）、ニトロ、シアノ、アミノ、トリハロメチル、チオ、およびチオＣ１−Ｃ３アルキルから選択され；
Ｘは、Ｏ、ＳおよびＮＲ７から選択され；
Ｒ６は、任意に置換されているＣ１−Ｃ６アルキル、任意に置換されているＣ１−Ｃ６アルコキシ、任意に置換されているＣ２−Ｃ６アルケニル、任意に置換されているＣ２−Ｃ６アルキニル、任意に置換されているヘテロアリール、任意に置換されているヘテロシクリル、任意に置換されているアリール、任意に置換されているシクロアルキル、任意に置換されているシクロアルケニル、任意に置換されているアミノ、任意に置換されているアシルアミノ、任意に置換されているアリールアシル、任意に置換されているヘテロアリールアシル、任意に置換されているヘテロシクリルアシル、任意に置換されているシクロアルキルアシル、およびトリハロメチルから選択され；
Ｒ７は、水素、シアノ、任意に置換されているＣ１−Ｃ６アルキル、任意に置換されているアリール、Ｓ（Ｏ）２Ｒ８、および任意に置換されているアミノアシルから選択され；
Ｒ８は、任意に置換されているＣ１−Ｃ６アルキル、および任意に置換されているアリールから選択される］
の化合物またはその塩。
【請求項６】
一般式（Ｉｂ)：
【化４】
2013529649.tif 000157
［式中、Ｒ１は、水素、任意に置換されているアルキル、−（ＳＯ２）−任意に置換されているアリール、−（ＳＯ２）−任意に置換されているヘテロアリール、任意に置換されているヘテロアリール、任意に置換されているヘテロシクリル、任意に置換されているアリール、およびＣ（＝Ｘ）−Ｒ６から選択され；
Ｒ２は、水素およびＣ１−Ｃ３アルキルから選択され；
Ｒ３およびＲ４は独立して、Ｃ１−Ｃ３アルキルであり；
Ｒ１０は、Ｃ１−Ｃ４アルキルまたはハロであり；
Ｘは、Ｏ、ＳおよびＮＲ７から選択され；
Ｒ６は、任意に置換されているＣ１−Ｃ６アルキル、任意に置換されているＣ１−Ｃ６アルコキシ、任意に置換されているＣ２−Ｃ６アルケニル、任意に置換されているＣ２−Ｃ６アルキニル、任意に置換されているヘテロアリール、任意に置換されているヘテロシクリル、任意に置換されているアリール、任意に置換されているシクロアルキル、任意に置換されているシクロアルケニル、任意に置換されているアミノ、任意に置換されているアシルアミノ、任意に置換されているアリールアシル、任意に置換されているヘテロアリールアシル、任意に置換されているヘテロシクリルアシル、任意に置換されているシクロアルキルアシル、およびトリハロメチルから選択され；
Ｒ７は、水素、シアノ、アシル、任意に置換されているＣ１−Ｃ６アルキル、任意に置換されているアリール、Ｓ（Ｏ）２Ｒ８、および任意に置換されているアミノアシルから選択され；
Ｒ８は、任意に置換されているＣ１−Ｃ６アルキル、および任意に置換されているアリールから選択される］
の化合物またはその塩。
【請求項７】
一般式（Ｉｃ）：
【化５】
2013529649.tif 000158
［式中、Ｒ１は、水素、任意に置換されているアルキル、−（ＳＯ２）−任意に置換されているアリール、−（ＳＯ２）−任意に置換されているヘテロアリール、任意に置換されているヘテロアリール、任意に置換されているヘテロシクリル、任意に置換されているアリール、およびＣ（＝Ｘ）−Ｒ６から選択され；
Ｒ２は、水素およびＣ１−Ｃ３アルキルから選択され；
Ｒ３およびＲ４は独立して、Ｃ１−Ｃ３アルキルであり；
Ｘは、Ｏ、ＳおよびＮＲ７から選択され；
Ｒ６は、任意に置換されているＣ１−Ｃ６アルキル、任意に置換されているＣ１−Ｃ６アルコキシ、任意に置換されているＣ２−Ｃ６アルケニル、任意に置換されているＣ２−Ｃ６アルキニル、任意に置換されているヘテロアリール、任意に置換されているヘテロシクリル、任意に置換されているアリール、任意に置換されているシクロアルキル、任意に置換されているシクロアルケニル、任意に置換されているアミノ、任意に置換されているアシルアミノ、任意に置換されているアリールアシル、任意に置換されているヘテロアリールアシル、任意に置換されているヘテロシクリルアシル、任意に置換されているシクロアルキルアシルおよびトリハロメチルから選択され；
Ｒ７は、水素、シアノ、任意に置換されているＣ１−Ｃ６アルキル、任意に置換されているアリール、Ｓ（Ｏ）２Ｒ８、および任意に置換されているアミノアシルから選択され；
Ｒ８は、任意に置換されているＣ１−Ｃ６アルキル、および任意に置換されているアリールから選択される］
の化合物またはその塩。
【請求項８】
Ｒ３およびＲ４は、Ｃ１−Ｃ２アルキルから独立して選択され、好ましくはメチルである、請求項１〜７のいずれかに記載の化合物またはその塩。
【請求項９】
Ｒ２は水素またはメチルである、請求項１〜８のいずれかに記載の化合物またはその塩。
【請求項１０】
一般式（Ｉｅ)：
【化６】
2013529649.tif 000159
［式中、Ｒ１は、水素、任意に置換されているアルキル、−（ＳＯ２）−任意に置換されているアリール、−（ＳＯ２）−任意に置換されているヘテロアリール、任意に置換されているヘテロアリール、任意に置換されているヘテロシクリル、任意に置換されているアリール、およびＣ（＝Ｘ）−Ｒ６から選択され；
Ｘは、Ｏ、ＳおよびＮＲ７から選択され；
Ｒ６は、任意に置換されているＣ１−Ｃ６アルキル、任意に置換されているＣ１−Ｃ６アルコキシ、任意に置換されているＣ２−Ｃ６アルケニル、任意に置換されているＣ２−Ｃ６アルキニル、任意に置換されているヘテロアリール、任意に置換されているヘテロシクリル、任意に置換されているアリール、任意に置換されているシクロアルキル、任意に置換されているシクロアルケニル、任意に置換されているアミノ、任意に置換されているアシルアミノ、任意に置換されているアリールアシル、任意に置換されているヘテロアリールアシル、任意に置換されているヘテロシクリルアシル、任意に置換されているシクロアルキルアシル、およびトリハロメチルから選択され；
Ｒ７は、水素、シアノ、任意に置換されているＣ１−Ｃ６アルキル、任意に置換されているアリール、Ｓ（Ｏ）２Ｒ８、および任意に置換されているアミノアシルから選択され；
Ｒ８は、任意に置換されているＣ１−Ｃ６アルキル、および任意に置換されているアリールから選択される］
の化合物またはその塩。
【請求項１１】
Ｒ１は、
ａ）ハロゲン；
ｂ）任意に置換されているＣ１−Ｃ６アルキル、より好ましくは、Ｃ１−Ｃ６アルキル；
ｃ）−（ＳＯ２）−任意に置換されているアリールもしくは−（ＳＯ２）−任意に置換されているヘテロアリール；または
ｄ）Ｃ（＝Ｘ）−Ｒ６［式中、ＸはＯ、ＳおよびＮＲ７であり、Ｒ６は、任意に置換されているアルキル、任意に置換されているアリール、任意に置換されているヘテロアリール、任意に置換されているアリール−Ｃ１−３アルキル、任意に置換されているヘテロアリール−Ｃ１−３アルキル、任意に置換されているアリール−Ｃ１−３アルコキシ、任意に置換されているヘテロアリール−Ｃ１−３アルコキシ、トリフルオロアルキル、ＮＲ’Ｒ”（式中、Ｒ’は水素もしくはＣ１−３アルキルであり、Ｒ”は水素、任意に置換されているアルキル、もしくは任意に置換されているアリールアシルである）、Ｒ７は、水素、任意に置換されているアリール、もしくは任意に置換されているＣ１−３アルキルである］
から選択される、請求項１〜１０のいずれかに記載の化合物またはその塩。
【請求項１２】
Ｒ１は、
【化７】
2013529649.tif 000160
［式中、ヘテロアリールは、好ましくは、
（ｉ）  ピロール、２Ｈ−ピロール、フラン、ピラゾール、チオフェン、イソチアゾール、チアゾール、１，２，３−トリアゾール、１，２，４−トリアゾール、１，２，３−オキサジアゾール、１，２，５−オキサジアゾール、１，３，４−チアジアゾール、テトラゾール、イミダゾール、オキサゾール、およびイソオキサゾールから選択される５員ヘテロアリール基；または
（ｉｉ）  ピリジン、ピリミジン、ピラジン、および１，３，５−トリアジンから選択される６員ヘテロアリール基を表わし、
ヘテロシクリルは、好ましくは、
（ｉ）  １−ピロリン、２−ピロリン、３−ピロリン、ピロリジン、テトラヒドロフラン、テトラヒドロチオフェン、２−ピラゾリン、３−ピラゾリン、２−イミダゾリン、ピラゾリジン、イミダゾリジン、３−ジオキソラン、チアゾリジン、およびイソオキサゾリジンから選択される５員ヘテロシクリル基；または
（ｉｉ）  ２Ｈ−ピラン、４Ｈ−ピラン、３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン、ピペリジン、１，４−オキサジン、１，４−ジオキシン、ピペラジン、モルホリン、１，４−ジオキサン、１，４−タジン、チオモルホリン、１，４−オキサチアン（oxathane）、１，４−ジチアン（dithane）、１，３，５−トリオキサン、６Ｈ−１，２，５−チアジアジン、２Ｈ−１，５，２−ジチアジン、および１，３，５−トリチアンから選択される６員ヘテロシクリル基を表わし、
好ましくは、アリールは、フェニル、ナフチルおよびアントラセニルから選択され；
前記ヘテロアリール、ヘテロシクリルまたはアリール基は、ヒドロキシル、アシル、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルケニルオキシ、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニルオキシ、−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−ＯＨ、−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−ＯＣ１−Ｃ３アルキル、−（ＣＨ２）ｎ−アミノ、−（ＣＨ２）ｎ−ジＣ１−Ｃ３アルキルアミノ、−（ＣＨ２）ｎ−アミノアシル、−（ＣＨ２）ｎ−チオ、アリールアルキル、−（ＣＨ２）ｎ−アリールアルコキシ、−（ＣＨ２）ｎ−アリール、−（ＣＨ２）ｎ−アリールオキシ、−（ＣＨ２）ｎ−カルボキシル、−（ＣＨ２）ｎ−シクロアルキル、シアノ、ハロゲン、ニトロ、スルファート、ホスファート、−（ＣＨ２）ｎ−ヘテロシクリル、−（ＣＨ２）ｎ−ヘテロアリール、−（ＣＨ２）ｎ−トリハロメチル、および−（ＣＨ２）ｎ−トリアルキルシリル（式中、ｎは０〜６の整数である）からなる基によって、１〜４回置換されていてもよい］
から選択される、請求項１〜１０のいずれかに記載の化合物またはその塩。
【請求項１３】
Ｒ１はＣ（Ｏ）Ｒ６であり、Ｒ６は請求項１に定義されるとおりである、請求項１〜１２のいずれかに記載の化合物またはその塩。
【請求項１４】
一般式（Ｉｆ）：
【化８】
2013529649.tif 000161
の化合物またはその塩。
【請求項１５】
前記任意に置換されているヘテロアリール基は、ピリジルまたはチアゾリルである、請求項１４に記載の化合物またはその塩。
【請求項１６】
下記一般式：
【化９】
2013529649.tif 000162
【化１０】
2013529649.tif 000163
【化１１】
2013529649.tif 000164
【化１２】
2013529649.tif 000165
のうち１つによって表わされる化合物。
【請求項１７】
少なくとも１つの医薬上許容されるアジュバント、キャリアまたは希釈剤とともに、請求項１〜１７のいずれかに記載の化合物またはその塩を含有する医薬組成物。
【請求項１８】
有効な量の請求項１〜１７のいずれかに記載の化合物またはその塩を、それを必要とする患者に投与するステップを含む、細胞増殖を特徴とする病気または症状を処置する方法。
【請求項１９】
細胞過剰増殖を含む、細胞増殖を特徴とする病気または症状の処置のための医薬の製造における、請求項１〜１７のいずれかに記載の化合物またはその塩の使用。
【請求項２０】
細胞過剰増殖を含む、細胞増殖を特徴とする病気または症状の処置のための、請求項１〜１７のいずれかに記載の化合物またはその塩の使用。
【請求項２１】
細胞増殖を特徴とする前記病気または症状は、腫瘍である、請求項１８〜２０のいずれかに記載の方法または使用。
【請求項２２】
前記腫瘍は結腸癌である、請求項２１に記載の方法または使用。
【請求項２３】
前記腫瘍は乳癌である、請求項２１に記載の方法または使用。
【請求項２４】
細胞増殖を特徴とする前記病気または症状は、乾癬、免疫調節（移植片拒絶）、アテローム動脈硬化、関節リウマチ、急性および慢性炎症症状、ならびにクローン病から選択される、請求項１８〜２０のいずれかに記載の方法または使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は、一般的に、化合物、ならびにそれらの使用および調製のための方法に関する。特に、本発明は、増殖性疾患を処置する際に用いられ得るピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン系化合物、治療の方法および医薬の製造におけるこれらの化合物の使用、ならびに、これらの化合物を含有する組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
チロシンプロテインキナーゼ（ＴＰＫｓ）は、アデノシン三リン酸の末端リン酸の、タンパク質基質中のチロシン残基への転移を触媒することができる。ＴＰＫは、酵素のより大きなプロテインキナーゼクラスのサブグループである。酵素のリン酸化能力は、細胞活性の調節のための情報伝達に重要な機構である。細胞増殖は、ＴＫＲｓに（少なくともある程度までは）依存すると考えられる。突然変異は、いくつかのＴＰＫｓを恒常的活性型にする場合があり、この異常活性は、癌などの増殖性疾患の発症または進行に寄与すると考えられてきた。したがって、細胞の増殖を特徴とする病気および症状の処置に関連して、酵素のＴＰＫサブグループは興味深い標的である。
【０００３】
ここでＳＦＫｓ（Ｓｒｃファミリーキナーゼ）と呼ぶ、癌原遺伝子性ＴＰＫｓのファミリーは、通常正常な細胞のシグナル伝達が破壊された病気の状態としての癌の機構について、研究者により良い理解を与えた。ＳＦＫｓは、腫瘍発生の間、細胞接着、細胞浸潤、細胞増殖、細胞生存および血管形成において重大な役割を果たすことが認められている。
【０００４】
ＳＦＫｓは、同様の構造および機能を共有する９つのファミリーメンバーを含む。９つのファミリーメンバーとは、ｃ−Ｓｒｃ、Ｙｒｋ、Ｙｅｓ、Ｆｙｎ、Ｆｇｒ、Ｌｙｎ、Ｌｃｋ、ＨｃｋおよびＢｌｋである。これらのＳＦＫｓの過剰発現または高活性化は、多くの腫瘍中で認められている。
【０００５】
ＳＦＫｓは、ＥＧＦＲおよびＶＥＧＦ受容体などのチロシンキナーゼ受容体と相互作用し得る。ＳＦＫｓは、Ｒａｓ／ＥＲＫ／ＭＡＰＫ経路を通って細胞増殖に影響すると考えられ、ＳＴＡＴ分子などの転写因子を介して遺伝子発現を調節し得る。いくつかの他のＴＰＫｓのように、ＳＦＫは細胞接着および細胞移動にも影響し得る。ＳＦＫｓは、インテグリン、アクチン、ＧＴＰａｓｅ活性化タンパク質、ｐ１３０ＣＡＳおよびパキシリンなどの足場タンパク質、ならびに接着斑キナーゼなどのキナーゼとの相互作用を介して作用すると考えられる。さらに、ＳＦＫｓは、ＶＥＧＦ、インターロイキン８および線維芽細胞成長因子などの血管新生成長因子の遺伝子発現を介して血管形成を調節することも証明されている。
【０００６】
このような認識および、ＴＰＫｓ全般、特にＳＦＫｓによって果たされている役割についてのより良い理解により、癌などの過剰増殖性疾患の処置のために小分子ＳＦＫ阻害剤が開発されている。しかしながら、現段階では、多くの有望なＳＦＫ阻害剤（たとえば、下に示されるようなボスチニブ（Bosutinib）、ＡＺ０５３０およびダサチニブ（Desatinib）など）のうち、ダサチニブしか承認されておらず、他のものは現在まだ臨床試験中であるため、（現在認識されている化合物に基づく）何らかの更なる許容可能なＳＦＫ阻害剤が市販されるという保証は全くない。
【０００７】
【化１】
2013529649.tif 000003
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００８】
一局面では、本発明は、一般式（Ｉ）：
【０００９】
【化２】
2013529649.tif 000004
【００１０】
［式中、Ｒ１は、水素、任意に置換されているアルキル、−（ＳＯ２）−任意に置換されているアリール、−（ＳＯ２）−任意に置換されているヘテロアリール、任意に置換されているヘテロアリール、任意に置換されているヘテロシクリル、任意に置換されているアリール、およびＣ（＝Ｘ）−Ｒ６であり；
Ｒ２は、水素およびＣ１−Ｃ３アルキルから選択され；
Ｒ３およびＲ４は独立して、Ｃ１−Ｃ３アルキルであり；
Ｌは、結合、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ（Ｒ９）−、任意に置換されているアルキレン、−Ｎ（Ｒ９）Ｃ（Ｘ’）−Ｎ（Ｒ９’）−（式中、Ｒ９およびＲ９’の各々は独立して、水素またはＣ１−Ｃ４アルキルである）から選択され；
Ｒ５は、任意に置換されているアリール、任意に置換されているヘテロアリール、任意に置換されているヘテロシクリルおよび任意に置換されているシクロアルキルから選択され；
ＸおよびＸ’は、Ｏ、ＳおよびＮＲ７から独立して選択され；
Ｒ６は、任意に置換されているＣ１−Ｃ６アルキル、任意に置換されているＣ１−Ｃ６アルコキシ、任意に置換されているＣ２−Ｃ６アルケニル、任意に置換されているＣ２−Ｃ６アルキニル、任意に置換されているヘテロアリール、任意に置換されているヘテロシクリル、任意に置換されているアリール、任意に置換されているシクロアルキル、任意に置換されているシクロアルケニル、任意に置換されているアミノ、任意に置換されているアシルアミノ、任意に置換されているアリールアシル、任意に置換されているヘテロアリールアシル、任意に置換されているヘテロシクリルアシル、任意に置換されているシクロアルキルアシルおよび、トリハロメチルから選択され；
Ｒ７は、水素、シアノ、任意に置換されているＣ１−Ｃ６アルキル、任意に置換されているアリール、Ｓ（Ｏ）２Ｒ８および、任意に置換されているアミノアシルから選択され；
Ｒ８は、任意に置換されているＣ１−Ｃ６アルキルおよび任意に置換されているアリールから選択される。］
の化合物またはその塩を提供する。
【００１１】
更なる局面では、本発明は、少なくとも１つの医薬上許容されるアジュバント、キャリアまたは希釈剤とともに、一般式（Ｉ）の化合物またはその塩を含有する医薬組成物を提供する。
【００１２】
更なる局面では、本発明は、有効な量の一般式（Ｉ）の化合物またはその塩を、それを必要とする患者に投与するステップを含む、細胞増殖を特徴とする病気または症状を処置する方法を提供する。
【００１３】
また更なる局面では、本発明は、細胞過剰増殖を含む、細胞増殖を特徴とする病気または症状の処置のための医薬の製造における、一般式（Ｉ）の化合物またはその塩の使用を提供する。
【００１４】
より更なる局面では、本発明は、細胞過剰増殖を含む、細胞増殖を特徴とする病気または症状の処置のための、一般式（Ｉ）の化合物またはその塩の使用も提供する。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
発明の詳細な説明
ここで用いられる「アルキル」という用語は、直鎖または分枝鎖であり、好ましくは１〜１０個の炭素原子を有し、より好ましくは１〜６個の炭素原子を有し、最も好ましくは１〜４個の炭素原子を有し得る、一価のアルキル基を指す。該アルキル基の例は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソ−プロピル、ｎ−ブチル、イソ−ブチルなどを含む。
【００１６】
ここで用いられる「アルキレン」という用語は、二価のアルキル基を指す。該アルキレン基の例は、メチレン（−ＣＨ２−）、エチレン（−ＣＨ２ＣＨ２−）、およびプロピレン異性体（たとえば、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−および−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２−）などを含む。
【００１７】
ここで用いられる「アリール」という用語は、好ましくは６〜１４個の炭素原子を有する、単環（たとえばフェニル）または複数の縮合環（たとえばナフチルまたはアントリル）を有する不飽和芳香族炭素環基を指す。アリール基の例は、フェニル、ナフチルなどを含む。
【００１８】
「アシル」という用語は、Ｈ−Ｃ（Ｏ）−基、アルキル−Ｃ（Ｏ）−基、シクロアルキル−Ｃ（Ｏ）−基、アリール−Ｃ（Ｏ）−基、ヘテロアリール−Ｃ（Ｏ）−基およびヘテロシクリル−Ｃ（Ｏ）−基を指し、アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリールおよびヘテロシクリルはここに記載されるとおりである。
【００１９】
ここで用いられる「アリールアシル」という用語は、−Ｃ（Ｏ）アリール基を指し、アリール基は上に記載されるとおりである。
【００２０】
ここで用いられる「アルケニル」という用語は、直鎖または分枝鎖であり、好ましくは２〜１０個の炭素原子、より好ましくは２〜６個の炭素原子、最も好ましくは２〜４個の炭素原子を有し、かつ、少なくとも１個、好ましくは１〜２個の炭素−炭素二重結合を有し得る、一価のアルケニル基を指す。例は、エテニル（−ＣＨ＝ＣＨ２）、ｎ−プロペニル（−ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２）、イソ−プロペニル（−Ｃ（ＣＨ３）＝ＣＨ２）、ブタ−２−エニル（−ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨＣＨ３）などを含む。
【００２１】
ここで用いられる「アルキニル」という用語は、直鎖または分枝鎖であり、好ましくは、２〜１０個の炭素原子、より好ましくは２〜６個の炭素原子、最も好ましくは２〜４個の炭素原子を有し、かつ、少なくとも１個、好ましくは１〜２個の炭素−炭素三重結合を有し得る、一価のアルキニル基を指す。アルキニル基の例は、エチニル（−Ｃ≡ＣＨ）、プロパルギル（−ＣＨ２Ｃ≡ＣＨ）、ペンタ−２−イニル（−ＣＨ２Ｃ≡ＣＣＨ２−ＣＨ３）などを含む。
【００２２】
ここで用いられる「アミノ」という用語は、−ＮＲ＊Ｒ＊基を指し、各Ｒ＊は独立して、水素、アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリールおよびヘテロシクリルであり、アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリールおよびヘテロシクリルの各々はここに記載されるとおりである。
【００２３】
ここで用いられる「アミノアシル」という用語は、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ＊Ｒ＊基を指し、各Ｒ＊は独立して、水素、アルキル、シクロアルキルおよびアリールであり、アルキル、アリールおよびシクロアルキルの各々はここに記載されるとおりである。
【００２４】
「アシルアミノ」は、−ＮＲ＊Ｃ（Ｏ）Ｒ＊基を指し、各Ｒ＊は独立して、水素、アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリールおよびヘテロシクリルであり、アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリールおよびヘテロシクリルの各々はここに記載されるとおりであり、好ましくは水素およびＣ１−Ｃ４アルキルである。
【００２５】
「オキシアシルアミノ」は、−ＮＲ＊Ｃ（Ｏ）ＯＲ＊基を指し、各Ｒ＊は独立して、水素、アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリールおよびヘテロシクリルであり、アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリールおよびヘテロシクリルの各々はここに記載されるとおりであり、好ましくは、水素およびＣ１−Ｃ４アルキルである。
【００２６】
ここで用いられる「シクロアルキル」という用語は、好ましくは３〜８個の炭素原子を取り込んだ、単環または複数の縮合環を有する、環状アルキル基を指す。該シクロアルキル基は、例示的に、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロオクチルなどの単環構造および、アダマンタンイル（adamantanyl）などの多環構造を含む。
【００２７】
「シクロアルケニル」は、好ましくは４〜８個の炭素原子を取り込んだ、単環および、少なくとも１箇所の内部不飽和を有する、環状アルケニル基を指す。好適なシクロアルケニル基の例は、たとえば、シクロブタ−２−エニル、シクロペンタ−３−エニル、シクロヘキサ−４−エニル、シクロオクタ−３−エニルなどを含む。
【００２８】
ここで用いられる「ハロ」または「ハロゲン」という用語は、フルオロ、クロロ、ブロモおよびヨードを指す。
【００２９】
「ヘテロアリール」は、環内に、好ましくは２〜１０個の炭素原子と、酸素、窒素および硫黄から選択される１〜４個のヘテロ原子とを有する、一価の芳香族炭素環基を指す。最も好ましいヘテロ原子は、窒素、酸素および硫黄である。該ヘテロアリール基は、単環（たとえば、ピリジル、ピロリル、イミジダゾリル（imididazolyl）、チエニル、もしくはフラニル）、または複数の縮合環（たとえば、インドリジニルもしくはベンゾチエニル）を有し得る。
【００３０】
「ヘテロアリールアシル」は、−Ｃ（Ｏ）ヘテロアリール基を指し、ヘテロアリールには上に述べる意味が与えられる。
【００３１】
ここで用いられる「ヘテロアリールチオ」は、−Ｓ−ヘテロアリール基を指し、ヘテロアリール基は上に記載されるとおりである。
【００３２】
ここで用いられる「ヘテロシクリル」は、環内に、好ましくは１〜８個の炭素原子と、窒素、硫黄、酸素、セレニウムまたは亜リン酸から選択される１〜４個のヘテロ原子との単環または複数の縮合環を有する一価の飽和または不飽和基を指す。最も好ましいヘテロ原子は、窒素および酸素である。ヘテロシクリル基の例は、モルホリニル、ピペリジニルおよびピペラジニルを含む。
【００３３】
ここで用いられる「ヘテロシクリルアシル」は、−Ｃ（Ｏ）ヘテロシクリル基を指し、ヘテロシクリルには上に述べる意味が与えられる。
【００３４】
本明細書では、「任意に置換されている」という用語は、ある基が、１以上の基でさらに置換または（縮合多環基を形成するように）縮合されていてもいなくてもよいことを意味するとしてみなされる。置換基は、ヒドロキシル、アシル、アルキル、アルコキシ、アルケニル、アルケニルオキシ、アルキニル、アルキニルオキシ、アミノ、アミノアシル、オキシアシルアミノ、チオ、アリールアルキル、アリールアルコキシ、アリール、アリールオキシ、カルボキシル、シクロアルキル、シアノ、ハロゲン、ニトロ、スルファート、ホスファート、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、ヘテロシクリルオキシ、ヘテロアリールオキシ、トリハロメチルおよびトリアルキルシリルから選択されてもよい。
【００３５】
一実施形態では、Ｌは−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ（Ｒ９）−、任意に置換されているアルキレン（好ましくはＣ１−Ｃ３アルキレン）または−Ｎ（Ｒ９）Ｃ（Ｘ’）−Ｎ（Ｒ９）−であり、式中、Ｒ９およびＲ９’の各々は独立して、水素またはＣ１−Ｃ４アルキルである。
【００３６】
一実施形態では、Ｌは結合である。
一実施形態では、Ｌは結合であり、Ｒ５は、任意に置換されているアリール、任意に置換されているヘテロアリール、任意に置換されているヘテロシクリル、および任意に置換されているシクロアルキルから選択される。
【００３７】
一実施形態では、Ｌは結合であり、Ｒ５は任意に置換されているアリールまたは任意に置換されているヘテロアリールである。
【００３８】
一実施形態では、Ｌは結合であり、Ｒ５は任意に置換されているフェニルである。
一実施形態では、Ｌは結合であり、Ｒ５は、ハロ、ヒドロキシル、アシル、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルケニルオキシ、アミノ、オキシアシルアミノ、Ｃ１−Ｃ８アルコキシ、アリール、アリールオキシ、カルボキシル、シクロアルキル、シクロアルキルオキシ、シアノ、スルファート、ホスファート、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルオキシ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、トリハロメチル、およびトリアルキルシリルから独立して選択される置換基で１〜３回置換されているフェニル基である。
【００３９】
一実施形態では、Ｌは結合であり、Ｒ５は、ハロ、ヒドロキシル、アシル、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルケニルオキシ、アミノ、オキシアシルアミノ、Ｃ１−Ｃ８アルコキシ、アリール、アリールオキシ、カルボキシル、シクロアルキル、シクロアルキルオキシ、シアノ、スルファート、ホスファート、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルオキシ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、トリハロメチル、およびトリアルキルシリル、好ましくは、Ｃ１−Ｃ４アルキル、ヒドロキシ、オキシアシルアミノ、ヘテロアリール、アリールオキシおよびハロから独立して選択される置換基で１または２回置換されているフェニル基である。
【００４０】
一実施形態では、Ｌは結合であり、Ｒ５はヒドロキシルで置換されているフェニル基である。
【００４１】
【化３】
2013529649.tif 000005
【００４２】
一実施形態では、Ｌは結合であり、Ｒ５はＣ１−Ｃ４アルコキシおよび−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＣ１−Ｃ４アルキルで置換されているフェニル基である。
【００４３】
【化４】
2013529649.tif 000006
【００４４】
一実施形態では、Ｌは結合であり、Ｒ５はハロおよびヒドロキシで置換されているフェニル基である。
【００４５】
【化５】
2013529649.tif 000007
【００４６】
一実施形態では、Ｌは結合であり、Ｒ５はヘテロアリール基である。
【００４７】
【化６】
2013529649.tif 000008
【００４８】
一実施形態では、Ｌは結合であり、Ｒ５はアリールオキシで置換されているフェニル基である。
【００４９】
【化７】
2013529649.tif 000009
【００５０】
一実施形態では、Ｌは−ＣＨ２−であり、Ｒ５は、ハロ、ヒドロキシおよびＣ１−Ｃ３アルキルで置換されているフェニル基である。
【００５１】
一実施形態では、Ｌは−ＣＨ２−であり、Ｒ５はヒドロキシで置換されているフェニル基である。
【００５２】
【化８】
2013529649.tif 000010
【００５３】
一実施形態では、Ｌは−ＣＨ２−であり、Ｒ５はＣ１−Ｃ３アルキルで置換されているフェニル基である。
【００５４】
【化９】
2013529649.tif 000011
【００５５】
一実施形態では、Ｌは−ＣＨ２−であり、Ｒ５はクロロおよびＣ１−Ｃ４アルキルで置換されているフェニル基である。
【００５６】
【化１０】
2013529649.tif 000012
【００５７】
一実施形態では、−ＬＲ５はフェニルである。
一実施形態では、Ｌは結合であり、Ｒ５は、ハロ、ヒドロキシル、アシル、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルケニルオキシ、アミノ、Ｃ１−Ｃ８アルコキシ、アリール、アリールオキシ、カルボキシル、シクロアルキル、シクロアルキルオキシ、シアノ、スルファート、ホスファート、ヘテロシクリル、トリハロメチルおよびトリアルキルシリルから選択される置換基で置換されているフェニル基である。
【００５８】
好ましい実施形態では、Ｌが結合であり、Ｒ５がフェニル基である場合、置換基は、存在する場合、パラ位にある。
【００５９】
したがって、更なる局面では、本発明は、一般式（Ｉａ）：
【００６０】
【化１１】
2013529649.tif 000013
【００６１】
［式中、Ｒ１は、水素、任意に置換されているアルキル、−（ＳＯ２）−任意に置換されているアリール、−（ＳＯ２）−任意に置換されているヘテロアリール、任意に置換されているヘテロアリール、任意に置換されているヘテロシクリル、任意に置換されているアリール、およびＣ（＝Ｘ）−Ｒ６から選択され；
Ｒ２は、水素およびＣ１−Ｃ３アルキルから選択され；
Ｒ３およびＲ４は独立して、Ｃ１−Ｃ３アルキルであり；
Ｒ１０は、水素、ハロ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ２−Ｃ４アルキニル、Ｃ２−Ｃ４アルケニル、アリールアルキル、ＯＲ１（式中、Ｒ１はＨ、Ｃ１−Ｃ３アルキルまたはアリールである）、ＣＯＯＲ２（式中、Ｒ２はＨ、Ｃ１−Ｃ３アルキルまたはアリールである）、ニトロ、シアノ、アミノ、トリハロメチル、チオ、およびチオＣ１−Ｃ３アルキルから選択され；
Ｘは、Ｏ、ＳおよびＮＲ７から選択され；
Ｒ６は、任意に置換されているＣ１−Ｃ６アルキル、任意に置換されているＣ１−Ｃ６アルコキシ、任意に置換されているＣ２−Ｃ６アルケニル、任意に置換されているＣ２−Ｃ６アルキニル、任意に置換されているヘテロアリール、任意に置換されているヘテロシクリル、任意に置換されているアリール、任意に置換されているシクロアルキル、任意に置換されているシクロアルケニル、任意に置換されているアミノ、任意に置換されているアシルアミノ、任意に置換されているアリールアシル、任意に置換されているヘテロアリールアシル、任意に置換されているヘテロシクリルアシル、任意に置換されているシクロアルキルアシル、およびトリハロメチルから選択され；
Ｒ７は、水素、シアノ、任意に置換されているＣ１−Ｃ６アルキル、任意に置換されているアリール、Ｓ（Ｏ）２Ｒ８、および任意に置換されているアミノアシルから選択され；
Ｒ８は、任意に置換されているＣ１−Ｃ６アルキル、および任意に置換されているアリールから選択される］
の化合物またはその塩を提供する。
【００６２】
一般式（Ｉ）および（Ｉａ）の化合物を参照して、好ましくは、Ｒ１０はＣ１−Ｃ４アルキルまたはハロである。
【００６３】
更なる好ましい実施形態では、一般式（Ｉ）および（Ｉａ）の化合物を参照して、Ｒ３およびＲ４は独立して、Ｃ１−Ｃ３アルキルであり、Ｒ１０はＣ１−Ｃ４アルキルまたはハロである。
【００６４】
更なる局面では、本発明は、一般式（Ｉｂ)：
【００６５】
【化１２】
2013529649.tif 000014
【００６６】
［式中、Ｒ１は、水素、任意に置換されているアルキル、−（ＳＯ２）−任意に置換されているアリール、−（ＳＯ２）−任意に置換されているヘテロアリール、任意に置換されているヘテロアリール、任意に置換されているヘテロシクリル、任意に置換されているアリール、およびＣ（＝Ｘ）−Ｒ６から選択され；
Ｒ２は、水素およびＣ１−Ｃ３アルキルから選択され；
Ｒ３およびＲ４は独立して、Ｃ１−Ｃ３アルキルであり；
Ｒ１０は、Ｃ１−Ｃ４アルキルまたはハロであり；
Ｘは、Ｏ、ＳおよびＮＲ７から選択され；
Ｒ６は、任意に置換されているＣ１−Ｃ６アルキル、任意に置換されているＣ１−Ｃ６アルコキシ、任意に置換されているＣ２−Ｃ６アルケニル、任意に置換されているＣ２−Ｃ６アルキニル、任意に置換されているヘテロアリール、任意に置換されているヘテロシクリル、任意に置換されているアリール、任意に置換されているシクロアルキル、任意に置換されているシクロアルケニル、任意に置換されているアミノ、任意に置換されているアシルアミノ、任意に置換されているアリールアシル、任意に置換されているヘテロアリールアシル、任意に置換されているヘテロシクリルアシル、任意に置換されているシクロアルキルアシル、およびトリハロメチルから選択され；
Ｒ７は、水素、シアノ、アシル、任意に置換されているＣ１−Ｃ６アルキル、任意に置換されているアリール、Ｓ（Ｏ）２Ｒ８、および任意に置換されているアミノアシルから選択され；
Ｒ８は、任意に置換されているＣ１−Ｃ６アルキル、および任意に置換されているアリールから選択される］
の化合物またはその塩を提供する。
【００６７】
一実施形態では、一般式（Ｉａ）または（Ｉｂ）を参照して、Ｒ１０はメチルまたはクロロである。
【００６８】
更なる実施形態では、一般式（Ｉａ）または（Ｉｂ）を参照して、Ｒ１０はメチルである。
【００６９】
したがって、更なる局面では、本発明は、一般式（Ｉｃ）：
【００７０】
【化１３】
2013529649.tif 000015
【００７１】
［式中、Ｒ１は、水素、任意に置換されているアルキル、−（ＳＯ２）−任意に置換されているアリール、−（ＳＯ２）−任意に置換されているヘテロアリール、任意に置換されているヘテロアリール、任意に置換されているヘテロシクリル、任意に置換されているアリール、およびＣ（＝Ｘ）−Ｒ６から選択され；
Ｒ２は、水素およびＣ１−Ｃ３アルキルから選択され；
Ｒ３およびＲ４は独立して、Ｃ１−Ｃ３アルキルであり；
Ｘは、Ｏ、ＳおよびＮＲ７から選択され；
Ｒ６は、任意に置換されているＣ１−Ｃ６アルキル、任意に置換されているＣ１−Ｃ６アルコキシ、任意に置換されているＣ２−Ｃ６アルケニル、任意に置換されているＣ２−Ｃ６アルキニル、任意に置換されているヘテロアリール、任意に置換されているヘテロシクリル、任意に置換されているアリール、任意に置換されているシクロアルキル、任意に置換されているシクロアルケニル、任意に置換されているアミノ、任意に置換されているアシルアミノ、任意に置換されているアリールアシル、任意に置換されているヘテロアリールアシル、任意に置換されているヘテロシクリルアシル、任意に置換されているシクロアルキルアシルおよびトリハロメチルから選択され；
Ｒ７は、水素、シアノ、任意に置換されているＣ１−Ｃ６アルキル、任意に置換されているアリール、Ｓ（Ｏ）２Ｒ８、および任意に置換されているアミノアシルから選択され；
Ｒ８は、任意に置換されているＣ１−Ｃ６アルキル、および任意に置換されているアリールから選択される］
の化合物またはその塩を提供する。
【００７２】
一実施形態では、一般式（Ｉ）、（Ｉａ）、（Ｉｂ）または（Ｉｃ）を参照して、Ｒ３およびＲ４は独立してＣ１−Ｃ２アルキルから選択される。
【００７３】
更なる実施形態では、一般式（Ｉ）、（Ｉａ）、（Ｉｂ）または（Ｉｃ）を参照して、Ｒ３およびＲ４はメチルである。
【００７４】
したがって、更なる局面では、本発明は、一般式（Ｉｄ）：
【００７５】
【化１４】
2013529649.tif 000016
【００７６】
［式中、Ｒ１は、水素、任意に置換されているアルキル、−（ＳＯ２）−任意に置換されているアリール、−（ＳＯ２）−任意に置換されているヘテロアリール、任意に置換されているヘテロアリール、任意に置換されているヘテロシクリル、任意に置換されているアリールおよびＣ（＝Ｘ）−Ｒ６から選択され；
Ｒ２は、水素およびＣ１−Ｃ３アルキルから選択され；
Ｘは、Ｏ、ＳおよびＮＲ７から選択され；
Ｒ６は、任意に置換されているＣ１−Ｃ６アルキル、任意に置換されているＣ１−Ｃ６アルコキシ、任意に置換されているＣ２−Ｃ６アルケニル、任意に置換されているＣ２−Ｃ６アルキニル、任意に置換されているヘテロアリール、任意に置換されているヘテロシクリル、任意に置換されているアリール、任意に置換されているシクロアルキル、任意に置換されているシクロアルケニル、任意に置換されているアミノ、任意に置換されているアシルアミノ、任意に置換されているアリールアシル、任意に置換されているヘテロアリールアシル、任意に置換されているヘテロシクリルアシル、任意に置換されているシクロアルキルアシルおよびトリハロメチルから選択され；
Ｒ７は、水素、シアノ、任意に置換されているＣ１−Ｃ６アルキル、任意に置換されているアリール、Ｓ（Ｏ）２Ｒ８および任意に置換されているアミノアシルから選択され；
Ｒ８は、任意に置換されているＣ１−Ｃ６アルキルおよび任意に置換されているアリールから選択される］
の化合物またはその塩を提供する。
【００７７】
一実施形態では、一般式（Ｉ）、（Ｉａ）、（Ｉｂ）、（Ｉｃ）または（Ｉｄ）を参照して、Ｒ２は水素またはメチルである。
【００７８】
更なる実施形態では、一般式（Ｉ）、（Ｉａ）、（Ｉｂ）、（Ｉｃ）または（Ｉｄ）を参照して、Ｒ２は水素である。
【００７９】
したがって、更なる局面では、本発明は、一般式（Ｉｅ)：
【００８０】
【化１５】
2013529649.tif 000017
【００８１】
［式中、Ｒ１は、水素、任意に置換されているアルキル、−（ＳＯ２）−任意に置換されているアリール、−（ＳＯ２）−任意に置換されているヘテロアリール、任意に置換されているヘテロアリール、任意に置換されているヘテロシクリル、任意に置換されているアリール、およびＣ（＝Ｘ）−Ｒ６から選択され；
Ｘは、Ｏ、ＳおよびＮＲ７から選択され；
Ｒ６は、任意に置換されているＣ１−Ｃ６アルキル、任意に置換されているＣ１−Ｃ６アルコキシ、任意に置換されているＣ２−Ｃ６アルケニル、任意に置換されているＣ２−Ｃ６アルキニル、任意に置換されているヘテロアリール、任意に置換されているヘテロシクリル、任意に置換されているアリール、任意に置換されているシクロアルキル、任意に置換されているシクロアルケニル、任意に置換されているアミノ、任意に置換されているアシルアミノ、任意に置換されているアリールアシル、任意に置換されているヘテロアリールアシル、任意に置換されているヘテロシクリルアシル、任意に置換されているシクロアルキルアシル、およびトリハロメチルから選択され；
Ｒ７は、水素、シアノ、任意に置換されているＣ１−Ｃ６アルキル、任意に置換されているアリール、Ｓ（Ｏ）２Ｒ８、および任意に置換されているアミノアシルから選択され；
Ｒ８は、任意に置換されているＣ１−Ｃ６アルキル、および任意に置換されているアリールから選択される］
の化合物またはその塩を提供する。
【００８２】
更なる実施形態では、一般式（Ｉ）、（Ｉａ）、（Ｉｂ）、（Ｉｃ）、（Ｉｄ）または（Ｉｅ）を参照して、Ｒ１は、次の好ましい基：
ａ）ハロゲン；
ｂ）任意に置換されているＣ１−Ｃ６アルキル、より好ましくは、Ｃ１−Ｃ６アルキル；
ｃ）−（ＳＯ２）−任意に置換されているアリールもしくは−（ＳＯ２）−任意に置換されているヘテロアリール； 
ｄ）Ｃ（＝Ｘ）−Ｒ６［式中、ＸはＯ、ＳおよびＮＲ７であり、Ｒ６は、任意に置換されているアルキル、任意に置換されているアリール、任意に置換されているヘテロアリール、任意に置換されているアリール−Ｃ１−３アルキル、任意に置換されているヘテロアリール−Ｃ１−３アルキル、任意に置換されているアリール−Ｃ１−３アルコキシ、任意に置換されているヘテロアリール−Ｃ１−３アルコキシ、トリフルオロアルキル、ＮＲ’Ｒ”（式中、Ｒ’は水素もしくはＣ１−３アルキルであり、Ｒ”は水素、任意に置換されているアルキル、もしくは任意に置換されているアリールアシルである）、Ｒ７は、水素、任意に置換されているアリール、もしくは任意に置換されているＣ１−３アルキルである］
から選択される。
【００８３】
また更なる実施形態では、一般式（Ｉ）、（Ｉａ）、（Ｉｂ）、（Ｉｃ）、（Ｉｄ）または（Ｉｅ）を参照して、Ｒ１は、次の好ましい基：
【００８４】
【化１６】
2013529649.tif 000018
【００８５】
［式中、ヘテロアリールは、好ましくは、
（ｉ）  ピロール、２Ｈ−ピロール、フラン、ピラゾール、チオフェン、イソチアゾール、チアゾール、１，２，３−トリアゾール、１，２，４−トリアゾール、１，２，３−オキサジアゾール、１，２，５−オキサジアゾール、１，３，４−チアジアゾール、テトラゾール、イミダゾール、オキサゾール、およびイソオキサゾールから選択される５員ヘテロアリール基；または
（ｉｉ）  ピリジン、ピリミジン、ピラジン、および１，３，５−トリアジンから選択される６員ヘテロアリール基を表わし、
ヘテロシクリルは、好ましくは、
（ｉ）  １−ピロリン、２−ピロリン、３−ピロリン、ピロリジン、テトラヒドロフラン、テトラヒドロチオフェン、２−ピラゾリン、３−ピラゾリン、２−イミダゾリン、ピラゾリジン、イミダゾリジン、３−ジオキソラン、チアゾリジン、およびイソオキサゾリジンから選択される５員ヘテロシクリル基；または
（ｉｉ）  ２Ｈ−ピラン、４Ｈ−ピラン、３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン、ピペリジン、１，４−オキサジン、１，４−ジオキシン、ピペラジン、モルホリン、１−４−ジオキサン、１，４−タジン、チオモルホリン、１，４−オキサチアン（oxathane）、１，４−ジチアン（dithane）、１，３，５−トリオキサン、６Ｈ−１，２，５−チアジアジン、２Ｈ−１，５，２−ジチアジン、および１，３，５−トリチアンから選択される６員ヘテロシクリル基を表わし、
好ましくは、アリールは、フェニル、ナフチルおよびアントラセニルから選択され；
前記ヘテロアリール、ヘテロシクリルまたはアリール基は、ヒドロキシル、アシル、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルケニルオキシ、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニルオキシ、−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−ＯＨ、−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−ＯＣ１−Ｃ３アルキル、−（ＣＨ２）ｎ−アミノ、−（ＣＨ２）ｎ−ジＣ１−Ｃ３アルキルアミノ、−（ＣＨ２）ｎ−アミノアシル、−（ＣＨ２）ｎ−チオ、アリールアルキル、−（ＣＨ２）ｎ−アリールアルコキシ、−（ＣＨ２）ｎ−アリール、−（ＣＨ２）ｎ−アリールオキシ、−（ＣＨ２）ｎ−カルボキシル、−（ＣＨ２）ｎ−シクロアルキル、シアノ、ハロゲン、ニトロ、スルファート、ホスファート、−（ＣＨ２）ｎ−ヘテロシクリル、−（ＣＨ２）ｎ−ヘテロアリール、−（ＣＨ２）ｎ−トリハロメチル、および−（ＣＨ２）ｎ−トリアルキルシリル（式中、ｎは０〜６の整数である）からなる基によって、１〜４回置換されていてもよい］
から選択される。
【００８６】
一実施形態では、−Ｃ（Ｏ）−任意に置換されているＣ１−Ｃ６アルキルは、
−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｎ置換基
（式中、ｎは１〜６の整数である）を含み、
置換基は、
ａ）  −ＮＣ（Ｏ）Ｏ−任意に置換されているフェニル；
ｂ）  −Ｃ（Ｏ）Ｃ１−Ｃ３アルキル；
ｃ）  −ＯＣ１−Ｃ３アルキル；
ｄ）  −Ｏ−任意に置換されているフェニル；
ｅ）  −任意に置換されているフェニル；
ｆ）  −ＣＮ；
ｇ）  −Ｏ−Ｃ１−Ｃ３アルキレン−任意に置換されているフェニル；および
ｈ）  −アミノ
から選択される。
【００８７】
更なる実施形態では、一般式（Ｉ）、（Ｉａ）、（Ｉｂ）、（Ｉｃ）または（Ｉｅ）を参照して、Ｒ１はＣ（Ｏ）Ｒ６であり、Ｒ６は、上に定義されるとおりである。
【００８８】
更なる実施形態では、本発明は、一般式（Ｉｆ）：
【００８９】
【化１７】
2013529649.tif 000019
【００９０】
の化合物を提供する。
好ましくは、一般式（Ｉｆ）の化合物を参照して、任意に置換されているヘテロアリール基は、任意に置換されているピリジルまたは任意に置換されているチアゾリルから選択される。存在する場合、好ましい置換基は、−（ＣＨ２）ｎ−ヘテロシクリル、任意に置換されているＣ１−Ｃ４アルコキシ、および任意に置換されているフェニル（式中、ｎは０〜４の整数である）を含む。
【００９１】
本発明の代表的な化合物は、
【００９２】
【化１８】
2013529649.tif 000020
【００９３】
【化１９】
2013529649.tif 000021
【００９４】
【化２０】
2013529649.tif 000022
【００９５】
【化２１】
2013529649.tif 000023
【００９６】
を含む。
本発明の化合物は、以下のスキームに描かれる一般的な反応順序により調製され得る。
【００９７】
【化２２】
2013529649.tif 000024
【００９８】
スキーム１で概説されるステップの好ましい条件は、次のステップを含む。
ステップＡ：保護されたカルバゼート（２）への２，２−ジ置換ニトロエテン（１）の添加は、水性溶媒系中で（好ましくは等モル量の）出発物質を混合をすることによって促進され得る。好ましくは、溶媒系は１：１水／アセトニトリルである。好ましくは、反応は室温で行なわれる。反応進行は、層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）［たとえば、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ  ９０：１０など］によってモニターできる。
【００９９】
ステップＢ：第一級アミン（４）への還元（３）は、ＦｅＣｌ３など、当該技術分野で既知の任意の好適な還元剤、および亜ジチオン酸ナトリウムによって促進され得る。還元は、触媒としてパラジウム（Ｐｄ）またはラネーニッケルを用いた水素添加によって促進され得る。より好ましくは、還元プロセスは、メタノールなどの極性プロトン性溶媒中、ギ酸アンモニウムの存在下で１０％Ｐｄ／Ｃによって触媒される。この反応は、好ましくは室温で行なわれ、反応進行は、ＴＬＣ［たとえば、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ  ９５：５）によってモニターされ得る。粗反応生成物は、ろ過により触媒から分離され、更なる精製なしに、次のステップで用いられ得る。
【０１００】
【数１】
2013529649.tif 000025
【０１０１】
ステップＥ：好ましい実施形態では、ステップＤからの反応生成物（６）は精製されず、２−（メトキシ−任意に置換されているアリール−メチレン）−マロニトリル（７）と（インシトゥで（in situ））直接反応されて、置換ピラゾール（８）を与える。この環化ステップは、好適な非求核塩基（ヒューニッヒ塩基（Hunigs base）またはＴＥＡなど）の使用により促進され得る。反応は、好ましくは高温（たとえば、５０〜７０℃の間）で行なわれる。
【０１０２】
ステップＦ：ピラゾール−［３，４，ｄ］−ピリミジン（９）を調製するための次の環形成ステップは、高温（たとえば１１０〜１６０℃）で、（８）と（モル過剰の）ホルムアミドまたは酢酸ホルムアミジン（ＨＮ＝ＣＨＮＨ２・ＣＨ３ＣＯＯＨ）とを反応させることによって、促進され得る。反応を完了まで進行させるためには、更なる量の酢酸ホルムアミジンが反応の間に必要となり得る。
【０１０３】
【数２】
2013529649.tif 000026
【０１０４】
【化２３】
2013529649.tif 000027
【０１０５】
【化２４】
2013529649.tif 000028
【０１０６】
【化２５】
2013529649.tif 000029
【０１０７】
一実施形態では、反応は高温で行なわれ、好ましくは１３０〜１６０℃の間で行なわれる。
【０１０８】
更なる実施形態では、反応は、溶媒としてメトキシエタノールを用いて高温で行なわれる。
【０１０９】
【化２６】
2013529649.tif 000030
【０１１０】
一実施形態では、脱保護ステップは、一般式（１０）の化合物を、好ましくはＨＢｒまたはＨＣｌから選択される無機酸、より好ましくはＨＢｒの水溶液である、酸で処理することを伴う。
【０１１１】
手元の（１０）で、たとえば、従来の求核化学を用いて、まず塩（９）を好適な非求核塩基（たとえばヒューニッヒ塩基（Hunigs base）またはＴＥＡ）で処理し、次に、所望の求電子基（たとえば、置換された無水物）と反応させることによって、可変のＲ１基およびＲ２基を有する一般式（Ｉ）の化合物を調製してもよい。
【０１１２】
【化２７】
2013529649.tif 000031
【０１１３】
化合物を調製するための他の方法は、次のプロセスステップを含んでもよい。
【０１１４】
【化２８】
2013529649.tif 000032
【０１１５】
ステップＡ’：おそらく、還流下にあるＥｔＯＨ中の塩基の存在下で、ヒドラジンまたはその塩を用いる。
【０１１６】
ステップＢ’：出発物質をホルムアミド中でたとえば１８０℃で熱するか、または、１２０℃のエトキシエタノール中で酢酸ホルムアミジンと反応させる。他の典型的なピラゾロピリミジン（pyrrazolopyrimidine）の合成方法を用いることもできる。
【０１１７】
ステップＣ’：出発物質および置換されたニトロアルケンを、たとえば、９５℃のＤＭＦ中で４８時間撹拌する。
【０１１８】
ステップＤ’：脂肪族ニトロの還元法をここで適用する。この作業には、水素下のＭｅＯＨ中で、Ｚｎ、６Ｍ  ＨＣｌ、ＥｔＯＨまたはＰｄ（ＯＨ）２が用いられる。
【０１１９】
【化２９】
2013529649.tif 000033
【０１２０】
ステップＡ”：通常のヨウ素化法。方法は、８０℃のＤＭＦ中でのＮ−ヨードスクシンイミドを用いる。
【０１２１】
ステップＢ”：鈴木または根岸カップリング反応などの金属で媒介されるカップリング反応をここで適用できる。たとえば、ボロン酸およびＰｄ（Ｐｈ３）４をマイクロ波リアクタ中で１８０℃のジオキサン中に１０分間；または、パラジウム触媒とともに、アリール−もしくはアルキル−トリフルオロホウ酸カリウム塩である。
【０１２２】
ステップＣ”およびＤ”：上記ステップＣ’およびＤ’と同様。
別のバリエーションは、生成物の置換基を追加、除去または修飾して、本発明の化合物の範囲内にある新たな誘導体を形成することである。このことは、Ｒ．Ｃ．ラロック著、「総合有機変換：官能基調製の手引き（”Comprehensive Organic Transformations: a guide to functional group preparations”）」、ニューヨーク、ＶＣＨ出版社、１９８９年、に記載されるもののように、当該産業で周知である官能基相互変換の標準技術を用いることによって、ここでも達成され得る。
【０１２３】
可能な官能基相互変換の例は、ＣＨ３ＯＨ中で、たとえばＮａＣＮなどの触媒の金属シアン化物とともにまたは無しで、ＨＮＲＲ’を加熱することによる−ＣＯ２ＣＨ３からの−Ｃ（Ｏ）ＮＲＲ’；ピリジン中、たとえばＣｌＣ（Ｏ）Ｒ’とともに−ＯＨからの−ＯＣ（Ｏ）Ｒ；イソチオシアン酸アルキルまたはチオシアン酸とともに−ＮＨＲからの−ＮＲ−Ｃ（Ｓ）ＮＲ’Ｒ”；クロロギ酸アルキルとともに−ＮＨＲからの−ＮＲＣ（Ｏ）ＯＲ；たとえばＨＮ＝Ｃ＝ＯまたはＲＮ＝Ｃ＝Ｏなどのイソシアネートとの処理による−ＮＨＲからの−ＮＲＣ（Ｏ）ＮＲ’Ｒ”；ピリジン中でのＣｌＣ（Ｏ）Ｒ’との処理による−ＮＨＲからの−ＮＲＣ（Ｏ）Ｒ’；アルコール中で加熱することによる、Ｈ３ＮＲ＋ＯＡｃ−とともに−Ｃ（ＮＲ’Ｒ”）ＳＲ’’’からの−Ｃ（＝ＮＲ）ＮＲ’Ｒ”；たとえばアセトンなどの不活性溶媒中でのＲ−Ｉとともに−Ｃ（Ｓ）ＮＲ’Ｒ”からの−Ｃ（ＮＲ’Ｒ”）ＳＲ；ＨＮＲ’Ｒ”とともに−Ｃ（Ｓ）ＮＨ２からの−Ｃ（Ｓ）ＮＲ’Ｒ”（式中、Ｒ’またはＲ”は水素でない）；無水アルコール中で加熱することによる、ＮＨ２ＣＮとともに−Ｃ（＝ＮＲ’Ｒ”）−ＳＲからの−Ｃ（＝ＮＣＮ）−ＮＲ’Ｒ”、代替的には、ＥｔＯＨ中でＢｒＣＮおよびＮａＯＥｔとともに処理することによる−Ｃ（＝ＮＨ）−ＮＲ’Ｒ”からの−Ｃ（＝ＮＣＮ）−ＮＲ’Ｒ”；（ＲＳ）２Ｃ＝ＮＣＮとともに処理することによる、−ＮＨＲ’からの−ＮＲ−Ｃ（＝ＮＣＮ）ＳＲ；ピリジン中で加熱することによる、ＣＩＳＯ２Ｒとともに処理することによる−ＮＨＲ’からの−ＮＲ”ＳＯ２Ｒ；ローソン（Ｌａｗｅｓｓｏｎ）試薬［２，４−ビス（４−メトキシフェニル）−１，３，２，４−ジチアジホスフェタン−２，４−ジスルフィド］とともに処理することによる−ＮＲ’Ｃ（Ｏ）Ｒからの−ＮＲ’Ｃ（Ｓ）Ｒ；無水トリフル酸および塩基とともに−ＮＨＲからの−ＮＲＳＯ２ＣＦ３、Ｎａ（Ｈｇ）およびＨＣｌ／ＥｔＯＨとともに−ＣＨ（ＮＨ２）Ｃ（Ｏ）ＯＲ’からの−ＣＨ（ＮＨ２）ＣＨＯ；ＳＯＣｌ２、次にＣＨ２Ｎ２、次にＨ２Ｏ／Ａｇ２Ｏとともに処理することによる−Ｃ（Ｏ）ＯＨからの−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＯＨ；ＰｈＭｇＸ／ＨＸ、次に無水酢酸、次にＣｒＯ３とともに処理することによる、−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ３からの−Ｃ（Ｏ）ＯＨ；Ｒ”ＣＯ３ＨによるＲＣ（Ｏ）Ｒ’からのＲ−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’；Ｎａ／Ｒ’ＯＨとともに−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’からの−ＣＣＨ２ＯＨ；チュガーエフ反応による−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨからの−ＣＨＣＨ２；クルチウス反応による−Ｃ（Ｏ）ＯＨからの−ＮＨ２；ＴｓＣｌ／塩基の次に、Ｈ２Ｏとともに−Ｃ（Ｏ）ＮＨＯＨからの−ＮＨ２；デス−マーチンペルヨージナン試薬またはＣｒＯ３／Ｈ２ＳＯ４水溶液／アセトンを用いることによる−ＣＨＣＨＯＨＣＨＲからの−ＣＨＣ（Ｏ）ＣＨＲ；ＣｒＯ２Ｃｌ２とともに−Ｃ６Ｈ５ＣＨ３からの−Ｃ６Ｈ５ＣＨＯ；ＳｎＣｌ２／ＨＣｌとともに−ＣＮからの−ＣＨＯ；ＰＣｌ５とともに−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲからの−ＣＮ；Ｎ２Ｈ４／ＫＯＨとともに−Ｃ（Ｏ）Ｒからの−ＣＨ２Ｒ；ｍＣＰＢＡとともに−ＳＲからの−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、である。
【０１２４】
先に述べたように、本発明の好ましい化合物は、チロシンキナーゼ、特に、Ｓｒｃキナーゼの阻害剤であるため、治療の方法に有用であり得る。本発明の化合物はまた、セリン／トレオニンプロテインキナーゼ、特に、ＲＩＰＫ２およびＭＥＫ５を標的とすることも認められた。したがって、これらの化合物は腫瘍を処置するために用いられてもよい。ここで用いられる「腫瘍」という用語は、いかなる悪性癌成長も定義するように広く用いられ、白血病、黒色腫、結腸、肺、卵巣、皮膚、胸、前立腺、ＣＮＳおよび腎臓癌、ならびに他の癌を含んでもよい。
【０１２５】
Ｓｒｃキナーゼ阻害活性を有する本発明の化合物は、腫瘍、特に、結腸癌の処置に用いられてもよい。
【０１２６】
本発明はまた、腫瘍、特に、結腸癌を処置するための医薬の製造における、一般式（Ｉ）、（Ｉａ）、（Ｉｂ）、（Ｉｃ）、（Ｉｄ）、（Ｉｅ）または（Ｉｆ）の化合物の使用も提供する。
【０１２７】
さらに、有効な量の一般式（Ｉ）、（Ｉａ）、（Ｉｂ）、（Ｉｃ）、（Ｉｄ）、（Ｉｅ）または（Ｉｆ）を、それを必要とする対象に投与するステップを含む、腫瘍（特に、結腸癌）の処置の方法も提供される。
【０１２８】
別の実施形態では、腫瘍は乳癌である。
しかしながら、本発明の化合物は、異常ＴＰＫ活性、より特定的には、セリン／トレオニンプロテインキナーゼおよび／またはＳｒｃキナーゼ活性によって発症および／または進行する細胞増殖（細胞過剰増殖を含む）を特徴とする病気または症状を治療するのに用いることができることが、理解されるであろう。特に、本化合物は、乾癬、免疫調節（移植片拒絶）、アテローム動脈硬化、関節リウマチ、急性および慢性炎症症状、クローン病などを処置するのにも用いることができる。
【０１２９】
（米国特許第５，５９３，９９７号に開示されるような）既知の関連するピラゾロピリミジンであるＰＰ１およびＰＰ２
【０１３０】
【化３０】
2013529649.tif 000034
【０１３１】
は、ＳＦＫの強力な阻害剤として報告されているが、このキナーゼファミリーのメンバー間の区別がなされていない。それらは、ＥＧＦ−Ｒなどの他のチロシンキナーゼも阻害する。このような活性は治療上有用と思われるであろうが、ＰＰ１およびＰＰ２は難溶性であるため、これらの化合物は「薬のようなもの」としては見られない。驚くべきことに、本発明の化合物は、（特に酸性条件下で）改善された溶解性および薬のようなプロファイルを有するとともに、強力な阻害活性を保持することが見出された。
【０１３２】
Ｓｒｃキナーゼ阻害活性などの生物活性を所有する本発明の化合物は、医薬上許容される添加物とともに、組成物、特に医薬組成物として製剤化することができる。
【０１３３】
本発明の化合物は、処置に有効な量で対象に投与される。ここで用いられる処置に有効な量とは、所望の効果を少なくとも部分的に実現すること、または、処置している特定の病気もしくは（of）症状（たとえば結腸癌）の発病を遅らせること、または、その進行を阻害すること、または、その発病もしくは進行を完全に停止もしくは覆すことを含むよう意図される。
【０１３４】
ここで用いられる「有効な量」という用語は、所望の投与レジメンに従って投与されるときに所望の治療活性を与える化合物の量に関する。投与は、分、時間、日、週、月もしくは年おきに、または、これらの期間のいずれか一つの間連続的に行われてもよい。好適な用量は、１用量当たり、体重１ｋｇ当たり約０．１ｎｇ〜体重１ｋｇ当たり１ｇの範囲内であってもよい。典型的な用量は、１用量当たり、体重１ｋｇ当たり１μｇ〜１ｇの範囲内であり、たとえば、１用量当たり、体重１ｋｇ当たり１ｍｇ〜１ｇの範囲内である。一実施形態では、用量は、１用量当たり、体重１ｋｇ当たり１ｍｇ〜５００ｍｇの範囲内であってよい。別の実施形態では、用量は、１用量当たり、体重１ｋｇ当たり１ｍｇ〜２５０ｍｇの範囲内であってよい。さらに別の実施形態では、用量は、１用量当たり、体重１ｋｇ当たり１ｍｇ〜１００ｍｇの範囲内であってよく、たとえば、１用量当たり、体重１ｋｇ当たり５０ｍｇ以下であってよい。
【０１３５】
好適な投与量および投与レジメンは、主治医によって決めることができ、処置している特定の症状、該症状の重症度、ならびに、対象の一般的な年齢、健康および体重に依存してもよい。
【０１３６】
有効成分は、単回投与または一連の投与で投与されればよい。有効成分は単独で投与することができるが、組成物として、好ましくは医薬組成物として提示することが好ましい。このような組成物の製剤化は当業者には周知である。組成物は、いかなる好適なキャリア、希釈剤または賦形剤を含有してもよい。これらは、すべての従来の溶媒、分散媒体、増量剤、固体キャリア、コーティング、殺菌剤および抗菌剤、皮膚浸透剤（dermal penetration agents）、界面活性剤、等張剤および吸着剤などを含む。本発明の組成物は、他の補足的な生理活性剤を含んでもよいことが理解されるであろう。
【０１３７】
キャリアは、組成物の他の成分と適合性があり、かつ対象に有害でないという意味で、医薬上「許容され」なければならない。組成物は、経口投与、直腸内投与、鼻腔投与、局所（頬側および舌下を含む）投与、膣投与または非経口（皮下、筋肉内、静脈内および皮内を含む）投与に好適なものを含む。組成物は、単位投与形態で簡便に提示され、薬学分野で周知の任意の方法によって調製されればよい。このような方法は、１以上の副成分を構成するキャリアと有効成分とを合わせるステップを含む。一般的に、組成物は、液状キャリアまたは微細に割った固体キャリアまたはその両方と、有効成分とを均一かつ緊密に合わせて、次に、必要に応じて生成物を形付けることによって調製する。
【０１３８】
経口投与に好適な本発明の組成物は、散剤もしくは顆粒剤として；水性もしくは非水性の液体中の溶液もしくは懸濁液として；または、水中油型乳濁液もしくは油中水型乳濁液として、各々が所定量の有効成分を含有するカプセル剤、サシェ剤または錠剤などの個別単位として提示されてもよい。有効成分は、ボーラス、舐剤またはペーストとして提示されてもよい。
【０１３９】
錠剤は、任意に１以上の副成分とともに、圧縮または成形によって作られてもよい。圧縮錠剤は、任意に結合剤（たとえば不活性希釈剤、保存剤、崩壊剤（たとえば、グリコール酸ナトリウムデンプン、架橋ポリビニルピロリドン、架橋カルボキシルメチルセルロースナトリウム）、表面活性または分散剤などが混合されている、散剤または顆粒剤などの自由流体形態の有効成分を、好適な機械で圧縮することによって調製されてもよい。湿製錠剤は、不活性液状希釈剤で湿らせた粉末状化合物の混合物を、好適な機械で成形することによって作られてもよい。錠剤は、任意にコーティングまたは割線（scored）が設けられてもよく、所望の放出プロファイルを与えるように、たとえばヒドロキシプロピルメチルセルロースをさまざまな割合で用いて、その中の有効成分の徐放または制御放出を与えるように製剤化されてもよい。錠剤は、胃以外の腸の部分中に放出を与えるように、腸溶コーティングが任意に設けられてもよい。
【０１４０】
口内の局所投与に好適な組成物は、通常スクロースおよびアカシアゴムまたはトラガカントゴムである、香味づけた基剤中に有効成分を含有するトローチ（lozenges）；ゼラチンおよびグリセリン、またはスクロースおよびアカシアゴムなどの不活性基剤中に有効成分を含有するパステル剤；および好適な液状キャリア中に有効成分を含有する口内洗浄液を含む。
【０１４１】
皮膚への局所投与に好適な組成物は、任意の好適なキャリアまたは基剤に溶解または懸濁された化合物を含有してもよく、ローション、ゲル、クリーム、ペースト、軟膏剤などの形態であってもよい。好適なキャリアは、鉱油、プロピレングリコール、ポリオキシエチレン、ポリオキシプロピレン、乳化蝋、ソルビタンモノステアレート、ポリソルベート６０、セチルエステル蝋、セテアリルアルコール（cetearyl alcohol）、２−オクチルドデカノール、ベンジルアルコールおよび水を含む。経皮貼付剤も、本発明の化合物を投与するために用いられ得る。
【０１４２】
直腸内投与用組成物は、たとえば、カカオバター、グリセリン、ゼラチンまたはポリエチレングリコールなどを含有する、好適な基剤を有する坐剤として提示されてもい。
【０１４３】
膣投与に好適な組成物は、有効成分に加えて、当該技術分野で適切であると知られているキャリアを含有する、ペッサリー、タンポン、クリーム、ゲル、ペースト、泡または噴霧製剤として提示されてもよい。
【０１４４】
非経口投与に好適な組成物は、対象とする宿主の血液により組成物を等張性にする酸化防止剤、緩衝剤、殺菌剤および溶質を含有してもよい、水性および非水性等張無菌注射液、ならびに、懸濁化剤および増粘剤を含んでもよい、水性および非水性無菌懸濁液を含む。組成物は、たとえば、アンプルおよびバイアルなどの単位投与または複数回投与封入容器中に提示されてもよく、使用の直前に、たとえば注射用水などの無菌液状キャリアの添加のみを必要とする、フリーズドライされた（凍結乾燥された）状態で保存されてもよい。即席注射液および懸濁液は、先に記載された種類の無菌散剤、顆粒剤および錠剤から調製されてもよい。
【０１４５】
好ましい単位投与組成物は、有効成分の、ここで上に記載したような日用量または日単位、日副用量（daily sub-dose）、またはその適切なフラクションを含有するものである。
【０１４６】
特に上に述べた有効成分に加えて、本発明の組成物は、当該組成物の種類に関して、当該技術分野の従来の他の薬剤を含んでもよく、たとえば、経口投与に好適なものとしては、結合剤、甘味料、増粘剤、香味剤、崩壊剤、コーティング剤、保存剤、滑沢剤および／または遅延剤（time delay agents）などが含まれることが理解されるべきである。好適な甘味料は、スクロース、ラクトース、グルコース、アスパルテームまたはサッカリンを含む。好適な崩壊剤は、コーンスターチ、メチルセルロース、ポリビニルピロリドン、キサンタンガム、ベントナイト、アルギン酸または寒天を含む。好適な香味剤は、ハッカ油、冬緑油、チェリー、オレンジまたはラズベリー香味を含む。好適なコーティング剤は、アクリル酸および／またはメタクリル酸(niethacrylic acid)のポリマーまたはコポリマー、および／またはこれらのエステル、蝋類、脂肪族アルコール、ゼイン、セラックまたはグルテンを含む。好適な保存剤は、安息香酸ナトリウム、ビタミンＥ、α−トコフェロール、アスコルビン酸、メチルパラベン、プロピルパラベンまたは亜硫酸水素ナトリウムを含む。好適な滑沢剤は、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、オレイン酸ナトリウム、塩化ナトリウムまたはタルクを含む。好適な遅延剤は、モノステアリン酸グリセリンまたはジステアリン酸グリセリンを含む。
【０１４７】
本発明の新規な生物活性化合物は、その医薬上許容される塩として対象に投与されることができる。しかしながら、医薬上許容されない塩は、医薬上許容される塩の調製において中間体として有用であり得るため、これらも本発明の範囲内に該当することが分かるであろう。好適な医薬上許容される塩は、塩酸、硫酸、リン酸、硝酸、炭酸、ホウ酸、スルファミン酸および臭化水素酸などの医薬上許容される無機酸の塩、または、酢酸、プロピオン酸、酪酸、酒石酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、フマル酸、マレイン酸、クエン酸、乳酸、ムチン酸、グルコン酸、安息香酸、コハク酸、シュウ酸、フェニル酢酸、メタンスルホン酸、トルエンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、サリチル酸（salicyclic）  スルファニル酸、アスパラギン酸、グルタミン酸、エデト酸、ステアリン酸、パルミチン酸、オレイン酸、ラウリン酸、パントテン酸、タンニン酸、アスコルビン酸および吉草酸などの医薬上許容される有機酸の塩を含むが、これらに限定されない。
【０１４８】
塩基塩は、ナトリウム、カリウム、リチウム、カルシウム、マグネシウム、アンモニウムおよびアルキルアンモニウムなどの医薬上許容されるカチオンとともに形成されたものを含むが、これらに限定されない。特に、本発明は、たとえば、ナトリウム塩もしくはカリウム塩、または、リン酸基のアルキルエステル（たとえば、メチル、エチル）などのカチオン塩を範囲内に含む。
【０１４９】
塩基性窒素含有基は、塩化、臭化およびヨウ化メチル、エチル、プロピルおよびブチルなどのハロゲン化低級アルキル；硫酸ジメチルおよび硫酸ジエチルなどの硫酸ジアルキル；ならびにその他などの試薬により、四級化（quartemised）されてもよい。
【０１５０】
一般式（Ｉ）、（Ｉａ）、（Ｉｂ）、（Ｉｃ）、（Ｉｄ）、（Ｉｅ）または（Ｉｆ）の化合物のプロドラッグである任意の化合物も本発明の範囲および趣旨内であることが分かるであろう。「プロドラッグ」という用語は、その最も広い意味で用いられ、インビボで本発明の化合物に変換される誘導体を包含する。このような誘導体は当業者には容易に思い浮かぶであろうが、たとえば、遊離水酸基が酢酸エステルもしくはリン酸エステルなどのエステルに変換される化合物、または、遊離アミノ基がアミド（たとえば、α−アミノ酸アミド）に変換される化合物を含む。本発明の化合物を、たとえばアシル化などのエステル化する手順は、当該技術分野で周知であり、該手順としては、好適な触媒または塩基の存在下での、無水物でも塩化物でもよい、適切なカルボン酸による化合物の処理を含んでもよい。
【０１５１】
本発明の化合物は、遊離化合物または溶媒和物（たとえば水和物）として結晶形態であってもよく、いずれの形態も本発明の範囲内であることが意図される。溶媒和の方法は、当該技術分野内で一般的に知られている。
【０１５２】
本発明の化合物は、不斉中心を所有し得るため、１を超える立体異性形態で存在可能であることも認識されるであろう。したがって、本発明は、たとえば、約９０％ｅｅより大きく、約９５％もしくは９７％ｅｅ、または９９％ｅｅより大きいなど、１以上の不斉中心で実質的に純粋な異性体形態にある化合物、および、そのラセミ混合物を含む混合物にも関する。このような異性体は、たとえばキラルの中間体を用いて不斉合成によって調製され得るか、または、混合物は、たとえばクロマトグラフィーなどの従来の方法もしくは分割剤の使用によって分割され得る。
【０１５３】
さらに、置換パターンに依存して、本発明の化合物は互変異性を生じることが可能であり得る。したがって、本発明の化合物のすべての可能な互変異性体は、本発明の範囲および趣旨内である。
【０１５４】
腫瘍などの増殖性疾患の様式は、多因子性である。このような疾患の処置では、異なる機構を有する薬を組合わせてもよい（すなわち、併用療法）。本発明の化合物は、たとえば、処置を他の化学療法処置または放射線処置と組合わせる、併用療法に特に有用であり得る。
【０１５５】
たとえば、本発明の化合物を用いて抗腫瘍処置を強化するために、５−ＦＵ、オキサリプラチン、パクリタキセル、ゲムシタビン、ドセタセル、シスプラチンおよびドキソルビシンを含む、１以上の他の細胞毒性化合物も投与してもよい。併用療法は、ＡＺＤ−０５３０（サラカチニブ（Saracatinib））、ダサチニブ（ＢＭＳ−３５４８２５もしくはスプリセル）およびボスチニブ（ＳＫＩ０６０６）などの他のＳｒｃキナーゼ阻害剤、または、ＡＺＤ６２４４、Ｕ０１２６、ＳＢ２０２１９０およびＰＦ−５６２２７１などのＥＲＫ５、ＭＥＫ５、ＲＩＰＫ５およびＦＡＫ（ＰＴＫ２）の阻害剤などの添加も含んでもよい。
【０１５６】
このような療法の組合せ相手は、ともに投与されても、一方の後に他方が投与されても、１つの組合わせた単位投与または別々の単位投与形態で別々に投与されてもよい。
【０１５７】
当業者は、ここに記載される発明には、具体的に記載されるもの以外のバリエーションおよび変更の余地があることを認識するであろう。本発明は、その趣旨および範囲内にあるすべてのバリエーションおよび変更を含むことが理解されるべきである。本発明はまた、本明細書中で述べられるか示されるステップ、特徴、組成物および化合物のすべてを個々にまたは集合的に含み、かつ、上記ステップまたは特徴の任意の２つ以上の、任意およびすべての組合せも含む。
【０１５８】
ここで、本発明のある実施例を次の実施例を参照して記載するが、次の実施例は、例証の目的のみで意図され、以上に記載した一般論の範囲を限定することを意図するものではない。
【０１５９】
実施例
合成例
実施例１
【０１６０】
【化３１】
2013529649.tif 000035
【０１６１】
１Ｂ：Ｎ’−（２−ベンジルオキシカルボニルアミノ−１，１−ジメチル−エチル）ヒドラジンカルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルの調製
【０１６２】
【化３２】
2013529649.tif 000036
【０１６３】
１Ｃ：［２−（５−アミノ−４−シアノ−３−フェニル−ピラゾール−１−イル）−２−メチル−プロピル］−カルバミン酸ベンジルエステルの調製
【０１６４】
【化３３】
2013529649.tif 000037
【０１６５】
１Ｄ：［２−（４−アミノ−３−フェニル−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）−２−メチル−プロピル］−カルバミン酸ベンジルエステルの調製
【０１６６】
【化３４】
2013529649.tif 000038
【０１６７】
１Ｅ：１−（２−アミノ−１，１−ジメチル−エチル）−３−フェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルアミンヒドロブロミドの調製
【０１６８】
【化３５】
2013529649.tif 000039
【０１６９】
実施例２
【０１７０】
【化３６】
2013529649.tif 000040
【０１７１】
実施例３
【０１７２】
【化３７】
2013529649.tif 000041
【０１７３】
実施例４
【０１７４】
【化３８】
2013529649.tif 000042
【０１７５】
【化３９】
2013529649.tif 000043
【０１７６】
【化４０】
2013529649.tif 000044
【０１７７】
実施例５
【０１７８】
【化４１】
2013529649.tif 000045
【０１７９】
【化４２】
2013529649.tif 000046
【０１８０】
実施例６
【０１８１】
【化４３】
2013529649.tif 000047
【０１８２】
【化４４】
2013529649.tif 000048
【０１８３】
実施例７
【０１８４】
【化４５】
2013529649.tif 000049
【０１８５】
実施例８
【０１８６】
【化４６】
2013529649.tif 000050
【０１８７】
実施例９
【０１８８】
【化４７】
2013529649.tif 000051
【０１８９】
実施例１０
【０１９０】
【化４８】
2013529649.tif 000052
【０１９１】
【化４９】
2013529649.tif 000053
【０１９２】
【化５０】
2013529649.tif 000054
【０１９３】
実施例１１
【０１９４】
【化５１】
2013529649.tif 000055
【０１９５】
実施例１２
【０１９６】
【化５２】
2013529649.tif 000056
【０１９７】
実施例１３
【０１９８】
【化５３】
2013529649.tif 000057
【０１９９】
【化５４】
2013529649.tif 000058
【０２００】
【化５５】
2013529649.tif 000059
【０２０１】
実施例１４
【０２０２】
【化５６】
2013529649.tif 000060
【０２０３】
同様に、対応する酸から次の実施例を調製した。
【０２０４】
【表１】
2013529649.tif 000061
【０２０５】
【表２】
2013529649.tif 000062
【０２０６】
【表３】
2013529649.tif 000063
【０２０７】
【表４】
2013529649.tif 000064
【０２０８】
実施例４０
【０２０９】
【化５７】
2013529649.tif 000065
【０２１０】
実施例４１
【０２１１】
【化５８】
2013529649.tif 000066
【０２１２】
実施例４２
【０２１３】
【化５９】
2013529649.tif 000067
【０２１４】
実施例４３
【０２１５】
【化６０】
2013529649.tif 000068
【０２１６】
実施例４４
【０２１７】
【化６１】
2013529649.tif 000069
【０２１８】
実施例４５
【０２１９】
【化６２】
2013529649.tif 000070
【０２２０】
実施例４６
【０２２１】
【化６３】
2013529649.tif 000071
【０２２２】
実施例４７
【０２２３】
【化６４】
2013529649.tif 000072
【０２２４】
実施例４８
【０２２５】
【化６５】
2013529649.tif 000073
【０２２６】
実施例４９
【０２２７】
【化６６】
2013529649.tif 000074
【０２２８】
実施例５０
【０２２９】
【化６７】
2013529649.tif 000075
【０２３０】
実施例５１
【０２３１】
【化６８】
2013529649.tif 000076
【０２３２】
実施例５２
【０２３３】
【化６９】
2013529649.tif 000077
【０２３４】
実施例５３
【０２３５】
【化７０】
2013529649.tif 000078
【０２３６】
実施例５４
【０２３７】
【化７１】
2013529649.tif 000079
【０２３８】
実施例５５
【０２３９】
【化７２】
2013529649.tif 000080
【０２４０】
実施例５６
【０２４１】
【化７３】
2013529649.tif 000081
【０２４２】
実施例５７
【０２４３】
【化７４】
2013529649.tif 000082
【０２４４】
実施例５８
【０２４５】
【化７５】
2013529649.tif 000083
【０２４６】
実施例５９
【０２４７】
【化７６】
2013529649.tif 000084
【０２４８】
実施例６０
【０２４９】
【化７７】
2013529649.tif 000085
【０２５０】
実施例６１
【０２５１】
【化７８】
2013529649.tif 000086
【０２５２】
実施例６２
【０２５３】
【化７９】
2013529649.tif 000087
【０２５４】
実施例６３
【０２５５】
【化８０】
2013529649.tif 000088
【０２５６】
実施例６４
【０２５７】
【化８１】
2013529649.tif 000089
【０２５８】
実施例６５
【０２５９】
【化８２】
2013529649.tif 000090
【０２６０】
実施例６６
【０２６１】
【化８３】
2013529649.tif 000091
【０２６２】
実施例６７
【０２６３】
【化８４】
2013529649.tif 000092
【０２６４】
実施例６８
【０２６５】
【化８５】
2013529649.tif 000093
【０２６６】
【化８６】
2013529649.tif 000094
【０２６７】
実施例６９
【０２６８】
【化８７】
2013529649.tif 000095
【０２６９】
【化８８】
2013529649.tif 000096
【０２７０】
【化８９】
2013529649.tif 000097
【０２７１】
実施例７０
【０２７２】
【化９０】
2013529649.tif 000098
【０２７３】
【化９１】
2013529649.tif 000099
【０２７４】
【化９２】
2013529649.tif 000100
【０２７５】
実施例７１
【０２７６】
【化９３】
2013529649.tif 000101
【０２７７】
実施例７２
【０２７８】
【化９４】
2013529649.tif 000102
【０２７９】
実施例７３
【０２８０】
【化９５】
2013529649.tif 000103
【０２８１】
実施例７４
【０２８２】
【化９６】
2013529649.tif 000104
【０２８３】
【化９７】
2013529649.tif 000105
【０２８４】
【化９８】
2013529649.tif 000106
【０２８５】
【化９９】
2013529649.tif 000107
【０２８６】
【化１００】
2013529649.tif 000108
【０２８７】
【化１０１】
2013529649.tif 000109
【０２８８】
実施例７５
【０２８９】
【化１０２】
2013529649.tif 000110
【０２９０】
実施例７６
【０２９１】
【化１０３】
2013529649.tif 000111
【０２９２】
実施例７７
【０２９３】
【化１０４】
2013529649.tif 000112
【０２９４】
実施例７８
【０２９５】
【化１０５】
2013529649.tif 000113
【０２９６】
実施例７９
【０２９７】
【化１０６】
2013529649.tif 000114
【０２９８】
【化１０７】
2013529649.tif 000115
【０２９９】
【化１０８】
2013529649.tif 000116
【０３００】
【化１０９】
2013529649.tif 000117
【０３０１】
【化１１０】
2013529649.tif 000118
【０３０２】
【化１１１】
2013529649.tif 000119
【０３０３】
【化１１２】
2013529649.tif 000120
【０３０４】
【化１１３】
2013529649.tif 000121
【０３０５】
実施例８０
【０３０６】
【化１１４】
2013529649.tif 000122
【０３０７】
実施例８１
【０３０８】
【化１１５】
2013529649.tif 000123
【０３０９】
実施例８２
【０３１０】
【化１１６】
2013529649.tif 000124
【０３１１】
【化１１７】
2013529649.tif 000125
【０３１２】
【化１１８】
2013529649.tif 000126
【０３１３】
【化１１９】
2013529649.tif 000127
【０３１４】
実施例８３
【０３１５】
【化１２０】
2013529649.tif 000128
【０３１６】
【化１２１】
2013529649.tif 000129
【０３１７】
【化１２２】
2013529649.tif 000130
【０３１８】
実施例８４
【０３１９】
【化１２３】
2013529649.tif 000131
【０３２０】
【化１２４】
2013529649.tif 000132
【０３２１】
【化１２５】
2013529649.tif 000133
【０３２２】
実施例８５
【０３２３】
【化１２６】
2013529649.tif 000134
【０３２４】
【化１２７】
2013529649.tif 000135
【０３２５】
【化１２８】
2013529649.tif 000136
【０３２６】
実施例８６
【０３２７】
【化１２９】
2013529649.tif 000137
【０３２８】
【化１３０】
2013529649.tif 000138
【０３２９】
実施例８７
【０３３０】
【化１３１】
2013529649.tif 000139
【０３３１】
【化１３２】
2013529649.tif 000140
【０３３２】
【化１３３】
2013529649.tif 000141
【０３３３】
【化１３４】
2013529649.tif 000142
【０３３４】
【化１３５】
2013529649.tif 000143
【０３３５】
【化１３６】
2013529649.tif 000144
【０３３６】
【化１３７】
2013529649.tif 000145
【０３３７】
実施例８８
【０３３８】
【化１３８】
2013529649.tif 000146
【０３３９】
実施例８９
【０３４０】
【化１３９】
2013529649.tif 000147
【０３４１】
【化１４０】
2013529649.tif 000148
【０３４２】
【化１４１】
2013529649.tif 000149
【０３４３】
生物学的データ
ＳＲＣキナーゼ阻害アッセイのプロトコール
次のアッセイで、インビトロ活性について本発明の化合物を試験した。
【０３４４】
基質としてビオチン標識ペプチドを用いた（アミノ酸配列：ビオチン−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｔｒｐ−Ｍｅｔ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−ＮＨ２）。Ｓｒｃ組換え酵素は、Ｎ−末端にＨｉｓ６タグをつけた全長ヒトタンパク質として購入した。１５μＬアッセイ反応は、グライナー（Greiner）ブランドのホワイト３８４ウェル  ローボリュームプレートで実行した。すべての反応は、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ  ｐＨ７．４、２５ｍＭのＮａＣｌ、１０ｍＭのＭｇＣｌ２、０．０１％（ｖ／ｖ）ツイーン２０、５０μＭのＮａ３ＶＯ４、０．０１％（ｗ／ｖ）鶏卵白からの０．０１％（ｗ／ｖ）アルブミン、１１１ｎＭのペプチド基質、８０μＭのＡＴＰ、および０．３ｎｇ／反応のＳｒｃ酵素を含み、該酵素は、陰性コントロール反応からは省略されている。ＤＭＳＯ中で構成された希釈系列から１００ｎＬの量で化合物を加え、陽性および陰性コントロール反応は、化合物なしで同じ量のＤＭＳＯを受けた。プレートを接着シールで密閉し、摂氏３０℃で９０分間インキュベートした。同時に加えた検出試薬で反応を停止した。ストレプトアビジンで被覆したドナービーズおよび抗ホスホチロシン（Ｐ−Ｔｙｒ−１００）アクセプタービーズを用いて、パーキンエルマ−（PerkinElmer）のAlphascreen（登録商標）ビーズ間の光化学ルミネセンスとして、生成物形成を定量化した。各反応に、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ  ｐＨ７．４、２５ｍＭのＮａＣｌ、１００ｍＭのＥＤＴＡ、０．０１％（ｖ／ｖ）のツイーン２０および６．２５μｇ／ｍＬの各ビーズタイプを含有する５μＬを加えた。プレートを５時間インキュベートした後、パーキンエルマーのEnVision（登録商標）プレートリーダー上でHTS Alphascreen（登録商標）モードで読み取った。同じプレート上のコントロールに対する各反応毎のパーセント阻害（％Ｉ）を計算し（％Ｉ＝（Ｉ−ＣＮ）／（ＣＰ−ＣＮ）（式中、ＣＮ／ＣＰはそれぞれ陰性／陽性反応の平均値である））、次に、％Ｉデータ対化合物濃度［Ｉ］を、％Ｉ＝（Ａ＋（（Ｂ−Ａ）／（１＋（（Ｃ／［Ｉ］）＾Ｄ））））（式中、Ａは下側の漸近線であり、Ｂは上側の漸近線であり、ＣはＩＣ５０値であり、Ｄは勾配係数である）にあてはめることによって、ＩＣ５０値が得られた。
【０３４５】
【表５】
2013529649.tif 000150
【０３４６】
【表６】
2013529649.tif 000151
【０３４７】
【表７】
2013529649.tif 000152
【０３４８】
細胞活性の例
Ａ．細胞、阻害剤およびインキュベーション
１．細胞株
ＬＩＭ１８９９結腸癌由来上皮細胞をＲＰＭＩ＋Ａｄｄｓ１＋１０％ＦＣＳ中で成長させた。
【０３４９】
２．９６ウェルプレート中での細胞平板培養。
アッセイ培地：ＲＰＭＩ＋Ａｄｄｓ＋５％ＦＣＳ
細胞をトリプシン処理し、アッセイ培地で一回洗浄し、下記のような所望の濃度とした。
【０３５０】
１ウェル当たり１００μＬ中の１ウェル当たり１０４細胞＝平板培養用に１ｍＬ当たり１０５細胞が必要となる
洗浄後、細胞を５ｍＬ中に再懸濁して、計数した（１×Ｔ７５フラスコは、１ｍＬ当たりおよそ２〜３×１０たとえば６を与える）。
【０３５１】
次に、細胞を１０５細胞／ｍＬに希釈した（１プレート当たり最低１０ｍＬが必要）。
たとえば、５ｍＬ中の細胞数は２５×１０５／ｍＬである。
【０３５２】
１０５／ｍＬでは、１ｍＬを２５ｍＬに希釈する。
多段階ピペットで１ウェル当たり１００μＬの細胞をプレート全体にわたって蒔いた。
【０３５３】
３７℃＋５％ＣＯ２インキュベータでプレートを一晩インキュベートした。
３．阻害剤ストック液
１０ｍＭのストック液用に阻害剤をＤＭＳＯに溶解した。ある化合物のＭＷおよび量を用いて、各々に必要な量を計算した。
【０３５４】
アッセイでの化合物の４×最高濃度を計算して、作業用ストック液を調製した。
アッセイでの、たとえば１番目のウェル最終濃度は１０μＭであった。
【０３５５】
したがって、作業用ストック液は４０μＭであった。
ストック溶液は１０ｍＭ→４０μＭ＝１．０ｍＬの作業用ストック液用のアッセイ培地中に４μｌである。
【０３５６】
４．プレートプラン：
列Ａ、Ｂ：阻害剤１
列Ｃ、Ｄ：阻害剤２
列Ｅ、Ｆ：阻害剤３
列Ｇ：ＲＰＭＩ＋Ａｄｄｓ＋５％ＦＣＳ（＝最高成長）
列Ｈ：ＲＰＭＩ＋Ａｄｄｓ無血清（＝最低成長）
５．阻害剤の滴定
９６ウェルプレートを用いて各アッセイプレートについての阻害剤を滴定した。
【０３５７】
１５０μＬのアッセイ培地を９６ウェルプレートの各ウェルに加えた。
１５０μＬの阻害剤１の作業用ストック溶液をウェルＡ１およびＢ１に加えた。
【０３５８】
阻害剤２〜Ｃ１およびＤ１で繰り返した
阻害剤３〜Ｅ１およびＦ１で繰り返した
段階１／２希釈を１５０μＬで、プレートにわたって、列Ａ〜Ｆ、左側から右側に行った。
【０３５９】
６．滴定した阻害剤を細胞アッセイプレートに移す：最終量２００μｌ
多チャネルピペットを用いて、１００μＬを滴定プレートの対応ウェルから細胞アッセイプレートへと列Ａ〜列Ｇに移した。
【０３６０】
列Ｈ：２００μＬチップで培地を細胞ウェルから注意して除去し、２００μＬの無血清培地に交換した。
【０３６１】
７．インキュベーション
５％ＣＯ２、３７℃で４日間プレートをインキュベートした。
【０３６２】
Ｂ．細胞増殖を測定するためのＭＴＴの使用
１．ＭＴＴ調製および保存
ＭＴＴ  シグマ（Ｓｉｇｍａ）Ｍ−２１２８  ５ｇ
５ｍｇ／ｍＬでＰＢＳに溶解した
１リットルのＰＢＳに５ｇのボトルを溶解した（若干の不純物は残存する）
ろ過滅菌し、５０ｍＬ管にアリコートし、−２０℃で保存した
必要に応じて、５０ｍＬ管を解凍し、５ｍＬ管にアリコートし、−２０℃で再保存した
４℃で１カ月安定している（解凍の間、３７℃で長すぎる時間放置すると不安定）
２．ＭＴＴ溶媒
ａ．１Ｍ  ＨＣｌ：
５００ｍＬのＤＤＷに４４．６ｍＬの濃縮ＨＣｌ（１１．２Ｍ）を混合した。
【０３６３】
ｂ．酸性化したイソプロパノール（０．０４ＮのＨＣｌ含有イソプロパノール）：
２０ｍＬの１Ｍ  ＨＣｌを４８０ｍＬのイソプロパノール（プロパノ−２−オール、イソ−プロピルアルコール）と混合した。
【０３６４】
３．ＭＴＴアッセイ
細胞インキュベーション（上記）の後：
１０μＬのＭＴＴを各ウェルに加えた。
【０３６５】
３７℃インキュベータ中で４時間インキュベートした。
プレートを１５００ｒｐｍで５分間回転させた。
【０３６６】
結晶を乱さないように注意して、培地をシンク内にはじき出した。
１ウェル当たり２００μＬの酸性イソプロパノールを加えた。
【０３６７】
速度６．５、室温で１０分〜３０分間プレートシェーカー上に置いた。
５６０／６９０ｎｍでThermo Multiskan ExによりプレートのＯＤを読み取った。
【０３６８】
１ＬＩＭ細胞株の培養のための添加物：１０μＭのチオグリセロール、０．０２５Ｕ／ｍＬのインシュリン、１μｇ／ｍＬのヒドロコルチゾン
参照文献
モスマン、Ｔ（Mosmann, T）、
「細胞成長および生存についての迅速比色アッセイ：増殖および細胞毒性アッセイへの適用」（"Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival: application to proliferation and cytotoxic assays"）．Journal of Immunological Methods (1983), 65:55-63．
細胞データの例の表
【０３６９】
【表８】
2013529649.tif 000153
【０３７０】
本発明の化合物は、特に、ＬＩＭ１２１５、ＬＩＭ２５３７およびＬＩＭ１８９９などの結腸癌細胞株中の腫瘍細胞株または形質転換細胞株の範囲に対する細胞活性を表示する。
【国際調査報告】
2013529649.tif 000166
2013529649.tif 000167
2013529649.tif 000168
2013529649.tif 000169