(57)【要約】  本発明は、i）ペプチド活性医薬成分、ii）多糖類賦形剤及び/又はアルブミン、並びiii）オリゴ糖賦形剤を含む固体の圧縮医薬組成物に関する。多糖類賦形剤は、ヒアルロン酸、又はそのカリウム塩とすることができ、オリゴ糖賦形剤はトレハロースとすることができる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
i）ペプチド活性医薬成分、
ii）多糖類賦形剤及び/又はアルブミン、並びに
iii）オリゴ糖賦形剤、
を含む、固体の圧縮医薬組成物。
【請求項２】
前記オリゴ糖賦形剤が非還元糖である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記オリゴ糖賦形剤が二糖である、請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項４】
前記オリゴ糖賦形剤がトレハロースである、請求項１〜３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５】
前記多糖類賦形剤が陰イオンである、請求項１〜４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項６】
前記多糖類賦形剤がそのカリウム塩の形態で存在する、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
前記多糖類賦形剤が非硫酸である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項８】
前記多糖類賦形剤がグリコサミノグリカンである、請求項１〜７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項９】
前記多糖類賦形剤がヒアルロン酸、又はその塩である、請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
前記多糖類賦形剤がヒアルロン酸のカリウム塩である、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
前記組成物が、１又は２以上のさらなる医薬的に許容される賦形剤を含む、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１２】
前記１又は２以上のさらなる医薬的に許容される賦形剤がアルブミンを含む、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
前記組成物がカリウムイオンを含む、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１４】
前記カリウムイオンが、カリウム塩、例えば、カリウム緩衝塩等として存在する、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
前記組成物が無菌である、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１６】
前記ペプチド活性医薬成分、多糖類賦形剤及び/又はアルブミン、並びオリゴ糖賦形剤が、任意には、カリウム塩、任意には、カリウム緩衝塩の存在下で、凍結乾燥される、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１７】
前記ペプチド活性医薬成分、多糖類賦形剤及び/又はアルブミン並びにオリゴ糖賦形剤が、共に凍結乾燥される、請求項１６に記載の組成物。
【請求項１８】
錠剤の形態である、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１９】
前記ペプチド活性医薬成分が、約0.5kDa〜約250kDaの分子量を有する、請求項１〜１８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２０】
前記ペプチド活性医薬成分が、抗体又はその抗原結合断片である、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２１】
前記抗体が抗VEGF抗体、例えば、ベバシズマブ等である、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２２】
前記組成物がコーティングされている、請求項１〜２１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２３】
移植に適している、請求項１〜２２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２４】
ペプチド活性医薬成分、及びカリウムイオン、好ましくはカリウム塩を含む圧縮医薬組成物。
【請求項２５】
前記カリウム塩が、ヒアルロン酸のカリウム塩を含む、請求項２４に記載の組成物。
【請求項２６】
前記組成物がさらにアルブミンを含む、請求項２４又は２５に記載の組成物。
【請求項２７】
１又は２以上のさらなる活性医薬成分を含む、請求項１〜２６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２８】
治療における使用のための、請求項１〜２７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２９】
腫瘍性疾患、黄斑部変性、糖尿病性網膜症、角膜血管形成の治療における使用、又は緑内障濾過手術後の瘢痕の予防のための、請求項２１に記載の組成物。
【請求項３０】
瘢痕、腫瘍増殖及び/又は腫瘍転移、血管増殖疾患、例えば、血管新生、血管内皮細胞増殖、血管形成、毛細血管拡張又は微細動脈瘤を含む疾患、糖尿病性網膜症、網膜静脈閉塞症、未熟児の網膜症、黄斑部毛細血管拡張、加齢性黄斑変性症及び脈絡血管新生から選択される眼疾患から選択される疾患の治療又は予防における使用、又は脳腫瘍、乳腫瘍、腎腫瘍、結腸直腸腫瘍、肺腫瘍、前立腺腫瘍、頭部及び頸部腫瘍、胃腫瘍、膵臓腫瘍、皮膚腫瘍、頚部腫瘍、骨腫瘍、卵巣腫瘍、精巣腫瘍及び肝臓腫瘍から選択することができる腫瘍の治療のための、血管新生抑制効果を有するペプチド活性医薬成分を含む、請求項１〜２７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３１】
瘢痕、腫瘍増殖及び/又は腫瘍転移、血管増殖疾患、例えば、血管新生、血管内皮細胞増殖、血管形成、毛細血管拡張又は微細動脈瘤を含む疾患、糖尿病性網膜症、網膜静脈閉塞症、未熟児の網膜症、黄斑部毛細血管拡張、加齢性黄斑変性症及び脈絡血管新生から選択される眼疾患から選択される疾患の治療又は予防、又は脳腫瘍、乳腫瘍、腎腫瘍、結腸直腸腫瘍、肺腫瘍、前立腺腫瘍、頭部及び頸部腫瘍、胃腫瘍、膵臓腫瘍、皮膚腫瘍、頚部腫瘍、骨腫瘍、卵巣腫瘍、精巣腫瘍及び肝臓腫瘍から選択することができる腫瘍の治療のための方法であって、該治療又は予防を必要としている対象の適した部位への請求項１〜２７のいずれか１項に記載の組成物の移植を含む、方法。
【請求項３２】
腫瘍性疾患、黄斑部変性、糖尿病性網膜症、若しくは角膜血管形成の治療、又は緑内障濾過手術後の瘢痕の予防のための方法であって、該治療又は予防を必要としている対象の適した部位への請求項２１に記載の組成物の移植を含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願は、組成物に関する。特に本願は、ポリペプチド治療薬を含む医薬組成物に関するが、それに限定されない。
【背景技術】
【０００２】
ポリペプチドを含む治療薬は、製剤化及びその作用部位への送達に関して度々問題を示す。その化学及び物理的不安定性、及びその低い生物学的利用率のために、ポリペプチドは典型的にはインジェクションによって投与される。結果的に、それは一般的にインジェクションのための再構成用溶液又は凍結乾燥固体として製剤される。斯かる溶液が非経口で（例えば、皮下インジェクションによって）投与される場合、通常それは投与部位に短時間（すなわち、数分〜数時間）残存するだけで、その後血液系に分散する。身体の関連部位のみが治療薬に曝露され、全身性副作用が回避されるように、治療薬を局所的に送達することが望ましい。原理上は、斯かるストラテジーは、治療効果を供するのに必要な投与量を最小化するための手段を供する。さらに、治療用量での薬剤の局所放出を延長することが可能である最終用量形態を使用して局在投与が達成され得る場合、さらなる利点が生じ得る。斯かる状況が達成され得る場合、インジェクション部位における用量ダンピング（dose dumping）を回避することが可能となる。治療薬の局所放出を延長することによって、さらに治療投与量をより長期間維持し有効性を改良することが可能となる。治療薬を（例えば、生物学的組織中に置くことができる）固体用量形態として供する場合、身体に送達される任意の治療上の活性薬剤が、治療を可能にするための十分に長時間達成される活性薬剤の治療上有効濃度を可能にするのに適した溶解特性を有することは重要である。
【０００３】
国際公開第2009/063222号において、モノクローナル抗体、｛（市販のアバスチン（登録商標）から得られる｝ベバシズマブ、及びヒアルロン酸から成る固体用量形態（錠剤）が記載される。賦形剤不含有のベバシズマブ錠剤もまた記載される。錠剤の調製に先立ち、アバスチン（登録商標）生成物由来の全ての当初の賦形剤（トレハロース二水和物、ポリソルベート20及びリン酸ナトリウム）は除去された。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本願の第一態様によれば、i）ペプチド活性医薬成分、ii）多糖類賦形剤及び/又はアルブミン、並びにiii）オリゴ糖賦形剤を含む固体の圧縮医薬組成物が供される。
【０００５】
本願は、国際公開第2009/063222号に記載される抗体組成物が、オリゴ糖及び多糖類（並びに/又はアルブミン）で抗体を製剤化することによって顕著に改良され得る驚くべき発見に基づく。国際公開第2009/063222号において、オリゴ糖、トレハロースは、多糖類、ヒアルロン酸の添加に先立ち、特異的に組成物から除去される。これらの賦形剤がいずれも存在する（又は、一部の実施形態においては、アルブミンと取り換えられた又はそれを追加した多糖類と共に存在する）場合、抗体は化学及び物理的安定性が改善され、一方で、圧縮組成物は依然としてタンパク質の治療形態の望ましい薬剤放出特性を示すことが今回分かった。トレハロースは乾燥工程中のペプチドへのダメージを防ぐと考えられるので、凍結乾燥ペプチドベースの医薬に添加されることが知られている。しかしながら、オリゴ糖、例えば、トレハロース等が多糖類賦形剤と相互作用し圧縮ペプチド製剤の安定性及び放出特性を改善することは予想外であった。固体の圧縮用量形態は多くの治療環境において特に望ましい。例えば、用量形態が（例えば、移植手術後の）外科手術手技中に扱われる場合、固体組成物は溶液又はゲル組成物より使用が容易である。
【０００６】
ペプチド活性医薬成分は、薬理活性（例えば、生物学的受容体結合活性（アゴニスト又はアンタゴニスト）、リガンド結合活性、酵素活性、酵素抑制活性又は抗原結合活性）を有する、任意のペプチド、ポリペプチド又はタンパク質、又はそれらの誘導体とすることができる。ペプチド活性医薬成分は、治療上使用可能な任意の内因性又は非内因性ペプチドを含むことができる。非内因性タンパク質は、薬理活性を示す切断抗体断片及びタンパク質スキャフォールドを含む。本明細書において、用語「ペプチド」は、例えば、ペプチドに基づく天然に生じるL-アミノ酸、１又は２以上のD-アミノ酸を含むペプチド、１又は２以上の誘導体化アミノ酸を含むペプチド、合成アミノ酸を含むペプチド、１又は２以上の非ペプチド部分、例えば、糖類又はポリ（アルキレングリコール）基（例えば、グリコシル化又はペグ化部分）等を有する誘導体化ペプチド、抗体及びその断片、並びに融合ペプチドもまた含む。
【０００７】
特定の実施形態において、オリゴ糖賦形剤は非還元糖である。特定の例において、オリゴ糖賦形剤は二糖である。好ましい実施形態において、オリゴ糖賦形剤はトレハロースである。
【０００８】
代表的な実施形態において、多糖類賦形剤は組成物の成分（ii）として使用される。特定の実施形態において、多糖類賦形剤は陰イオンである。陰イオン多糖類は、そのカリウム塩の形態で存在することができる。多糖類賦形剤の分子量は、特定の実施形態において、約1〜約10 MDa、例えば、約3〜約6 MDa、特に、約4又は5 MDa等とすることができる。特定の実施形態において、多糖類賦形剤は非硫酸化型である。多糖類賦形剤は、グリコサミノグリカンとすることができる。好ましい多糖類賦形剤はヒアルロン酸、又はその塩である。
【０００９】
特に有用な実施形態において、多糖類賦形剤は、陰イオン多糖類、例えば、ヒアルロン酸等のカリウム塩である。今回、ヒアルロン酸ナトリウムのそのカリウム塩での置換が、本発明の組成物の安定性のさらなる改良につながることが見い出された。特に、ペプチド、例えば、抗体等の組成物からの放出後に水媒体中で凝集する傾向は、顕著に減少される。あるいは、又はさらに、本発明の組成物はカリウムイオン、例えば、カリウム塩、例えば、カリウム緩衝塩（すなわち、弱酸のカリウム塩; 例えば、カリウムリン酸塩）等を含むことができる。今回、カリウムイオンの存在が、凝集に対してペプチドの安定性の改良につながり得ることが見いだされた。
【００１０】
特定の実施形態において、本発明の組成物は１又は２以上のさらなる、医薬的に許容される賦形剤を含む。さらなる医薬賦形剤は、アルブミン、例えば、ヒト血清アルブミン等を含むことができる。アルブミンは、組換えアルブミンとすることができる。アルブミンは、本発明の組成物の多糖類及びオリゴ糖成分の凝集抑制効果をさらに増強することが分かっている。他の実施形態において、多糖類賦形剤の代わりに、アルブミンを利用できる。驚いたことに、アルブミンは多糖類賦形剤、例えば、ヒアルロン酸等と同様の安定性増強効果に繋がり得ることが見いだされた。他の実施形態において、組成物は、さらなる賦形剤を含まない（すなわち、多糖類及びオリゴ糖、又はアルブミン並びにオリゴ糖以外含まない）。
【００１１】
好ましい実施形態において、組成物は無菌である。斯かる実施形態において、無菌製造手法が典型的には好ましいが、組成物は製造後に（例えば、ガンマ又はベータ線によって）滅菌することができる。
【００１２】
特定の例において、ペプチド活性医薬成分、多糖類賦形剤（及び/又はアルブミン）及びオリゴ糖賦形剤は、（任意には、カリウム塩を含む緩衝剤の存在下で）凍結乾燥される。特に、ペプチド活性医薬成分、多糖類賦形剤（及び/又はアルブミン）及びオリゴ糖賦形剤の２又は３以上、任意には３つ全て、一緒に凍結乾燥することができる。斯かる態様における組成物成分のまとめての凍結乾燥は、固体分散と同種の凍結乾燥物（lyophilisate）の生成につながる。斯かるアプローチは、増強安定性及び放出特性につながり得る。上記の通り、圧縮固体組成物の使用は、典型的に溶液又はゲル（例えば、ヒアルロン酸ゲル）の形態である先行技術の組成物と比較して、（例えば、手術環境において）取扱いに関して顕著な利点を提供する。
【００１３】
本発明の組成物は、圧縮形態である。本明細書において、用語「圧縮」とは、組成物の固体内容物（例えば、粉末又は凍結乾燥物）が物理的圧縮力に供される少なくとも１つの工程を含む方法を使用して、組成物が調製され、これにより組成物の容積が減少され固体内容物の接着が生じていることを意味する。斯かる定義は、鋳型における組成物の固体内容物からの溶媒（例えば、水）の除去によって容積減少が生じる方法（例えば、凍結乾燥）を含む。結果として生じる容積減少組成物は、好ましくは単位用量形態である。例えば、好ましい実施形態において、組成物は錠剤、例えば、錠剤化パンチ及びダイスを使用した調製形態とすることができる。他の実施形態において、組成物は注射可能ロッドの形態である。
【００１４】
ペプチド活性医薬成分は、任意には、分子量約0.5kDa〜約250kDa、好ましくは1kDa 〜約250kDaを有することができる。
【００１５】
特定の実施形態において、ペプチド活性医薬成分は、抗体又はその抗原結合断片である。任意の抗体分子を使用することができる。用語「抗体分子」は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体又はその抗原結合断片、例えば、Fv、Fab、F（ab’）2断片及び単鎖Fv断片等を含む。好ましくは抗体分子は、凍結乾燥された抗体分子である。斯かる抗体の標的抗原は、抗体の治療活性を決定する。多数の治療抗体は、当業者に周知である。
【００１６】
特定の実施形態において、抗体はベバシズマブである。他の実施形態において、抗体はルセンティス（登録商標）として販売される製品に含まれるFab断片である。
【００１７】
特定の実施形態において、組成物はペプチド活性医薬成分に加えて、複数の活性医薬成分、例えば、複数のペプチド活性医薬成分、又は１若しくは２以上の非ペプチド活性医薬成分等を含むことができる。このタイプの組合せ組成物中の１又は２以上のペプチド活性医薬成分は、抗体、又はその抗原結合断片とすることができる。本発明の組成物は、複数の成分（例えば、２又は３以上の抗体）の投与量及び放出速度を互いから独立して制御できる。斯かる制御は、従来のペプチド活性医薬成分の製剤では不可能である。実施形態において、斯かる組合せ組成物は、複数の層（任意には、各層に異なる活性医薬成分）を有する錠剤、又は錠剤又はペレットの複数の集合を含む、任意には、異なる活性成分を含む各集合によるカプセル剤の形態とすることができる。
【００１８】
ペプチド活性医薬成分は、薬物動態及び/又はその薬力の変更が可能である１又は２以上のさらなる部分を有する複合物の形態で組成物に存在することができる。例えば、ペプチド活性医薬成分は、親水性部分、例えば、グリコール部分、例えば、ポリエチレングリコール（PEG; 例えば、PEG-抗体断片複合物）等に、又は生体適合性重合体部分、糖類部分又は脂質部分に結合させることができる。さらに、本発明の組成物は、生体分子等の送達の強化に薬物送達分野で周知の物質、例えば、リポソーム又は架橋結合重合体マトリックス、例えば、架橋結合多糖類（例えば、架橋結合ヒアルロン酸等）を包含することができる。斯かる多糖類は、上述の本発明の組成物中に必要とされる多糖類賦形剤、又は他の多糖類とすることができる。
【００１９】
好ましくは、本発明の組成物はインビボ（in vivo）での移植に適する。組成物は、例えば、眼内（ocularly）、眼周囲又は眼球内植え込み型とすることができる。例えば、移植は結膜下腔、又は眼の他の部位、例えば、後眼部又は角膜等に行うことができる。さらなる例として、組成物は皮下に植え込むことができる。組成物の寸法は、例えば、国際公開第2009/063222号の用量に関して記載される寸法とすることができる。
【００２０】
特定の実施形態において、組成物はコーティングされる。例えば、組成物はコーティング錠剤とすることができる。コーティングは、１又は２以上の重合体成分、例えば、圧縮用量形態の製剤の当業者に周知のセルロース誘導体等を含むことができる。コーティングは、放出速度に関してさらなる多用途性を供し、保管中の組成物の安定性もまた増強する。
【００２１】
第二の態様によれば、本願は、ペプチド活性医薬成分、及びカリウムイオン、例えば、カリウム塩、例えば、陰イオン多糖類、例えば、ヒアルロン酸のカリウム塩等を含む固体圧縮医薬組成物を供する。
【００２２】
上記の通り、驚いたことに、ヒアルロン酸のカリウム塩がペプチド薬を含む製剤において顕著な改良を生じることが見いだされた。ペプチドの安定性、特に凝集に対する安定性は、斯かる態様で改善され得る。他のカリウム塩（例えば、緩衝塩）はまた、ペプチドに安定性増強効果を有すると考えられる。組成物は、好ましくは植え込み型である。
【００２３】
特定の実施形態において、第二の態様の組成物は、多糖類賦形剤、例えば、陰イオン多糖類、例えば、ヒアルロン酸等を含むことができる。多糖類は、そのカリウム塩の形態で含むことができる。一部の実施形態において、第二の態様の組成物は、アルブミンを含むことができる。アルブミンは、さらに、又は多糖類賦形剤の代わりに、含むことができる。アルブミンの含有に関する利点は、上記の概要の通りである。
【００２４】
本発明の組成物は、好ましくは単位用量形態である。
【００２５】
特定の実施形態において、本発明の組成物は１又はさらなる活性医薬成分を含むことができる。さらなる活性医薬成分は、ペプチド又は非ペプチドとすることができ、また同一の疾患又は異なる疾患用のペプチド活性医薬成分として示される物とすることができる。
【００２６】
一部の実施形態において、本発明の組成物は、0.1 mm3〜1.5 cm3（例えば、0.1〜100 mm3、又は0.1〜20 mm3等）の容積、及び/又は5 mm又はそれ以下の最大寸法、及び/又は10 mg又はそれ以下の重量を有する。斯かる制限により、組成物をインビボ（in vivo）で広く多様な部位に移植することが可能である。
【００２７】
他の態様において、本願はまた、治療における使用のための第一又は第二の態様に定義される組成物を供する。
【００２８】
本発明の組成物は、ヒト又は動物体内の多種多様の部位における移植のために製造することができる。眼内使用は、特に本明細書中で詳細に検討されるが、組成物は、液体がペプチドの放出に使用可能である任意の腔、例えば、腹膜、肺又は頭蓋内の移植に適合させることができる。非液体充満の腔の移植、例えば、皮下送達等もまた、組織液に生じるペプチドの溶解によって可能である。組成物が注射可能なロッド（rod）の形態である実施形態において、投与は針ベース又は針不使用インジェクションによって行うことができ、これにより移植を達成するための外科的処置の必要性を回避できる。
【００２９】
ペプチド活性医薬成分が抗血管新生薬（例えば、ベバシズマブ等）である場合、組成物は様々な部位において血管増殖性（vasculoproliferative）疾患の治療に使用できる。斯かる疾患はヒト又は動物体の眼内部位で（例えば、黄斑部変性）、又は他の部位に広範囲に顕在化し得る。黄斑変性症にアバスチン（登録商標）又はルセンティス（登録商標）を、斯かる製品の溶液の眼内へのインジェクションによって使用することが知られている。しかしながら、活性成分は急速に眼から洗い流されるので、インジェクションは頻繁に繰り返さなければならない。一方本発明の組成物は、単独移植によって活性成分の送達が可能であり、活性成分の緩徐な放出につながり、頻繁なインジェクションの必要性を除去する。
【００３０】
本発明の斯かる組成物は、眼内部位、及び他の移植部位の瘢痕を防ぐためにも使用できる。よって、斯かる組成物は、様々な組織における創傷治癒中の瘢痕の予防のための広範囲の移植部位を有し得る。さらに、斯かる組成物は、腫瘍の成長及び/又は転移を防ぐために、腫瘍中に、又は腫瘍の近くに移植できる。実際、周知のアバスチン（登録商標）又はルセンティス（登録商標）製品が使用でき、それらが血管新生抑制効果を発揮する任意の疾患は、適した移植部位が使用できる場合、本発明の組成物を使用して治療介入の影響を受けやすくなり得る。
【００３１】
よって、本発明の組成物は、血管増殖疾患、例えば、血管新生、血管内皮細胞増殖、血管形成、毛細血管拡張又は微細動脈瘤を含む疾患の治療、糖尿病性網膜症、網膜静脈閉塞症、未熟児に網膜症、黄斑部毛細血管拡張（macular telangiectasia）、加齢性黄斑変性症又は脈絡血管新生から選択される眼の疾患の治療、脳腫瘍、乳腫瘍、腎腫瘍、結腸直腸腫瘍、肺腫瘍、前立腺腫瘍、頭部及び頚部腫瘍、胃腫瘍、膵臓腫瘍、皮膚腫瘍、頚部腫瘍、骨腫瘍、卵巣腫瘍、精巣腫瘍並びに肝臓腫瘍から選択することができる腫瘍の治療に、潜在的に使用できる。
【００３２】
本発明はまた、上記疾患から選択される疾患の治療又は予防における使用のための、第一又は第二の態様において定義され、且つ血管新生抑制効果を有するペプチド活性医薬成分を含む組成物を供する。
【００３３】
関連の態様において、本発明はまた、腫瘍性疾患、黄斑部変性、糖尿病性網膜症、角膜血管形成の治療における使用、又は例えば、緑内障濾過手術後の瘢痕の予防のための、第一又は第二の態様において定義され、且つベバシズマブを含む組成物を供する。
【００３４】
本発明はまた、上記疾患から選択される疾患の治療方法であって、斯かる治療又は予防を必要としている対象への、血管新生抑制効果を有するペプチド活性医薬成分を含む第一又は第二の態様の組成物の投与（例えば、斯かる対象の適した部位中への移植）を含む方法を供する。
【００３５】
同様に、本発明はまた、腫瘍性疾患、黄斑部変性、糖尿病性網膜症、又は角膜血管形成の治療、又は例えば、緑内障濾過手術後の瘢痕の予防方法であって、第一又は第二の態様の組成物であって抗VEGF抗体、例えば、ベバシズマブ等を含む組成物の斯かる治療又は予防を必要としている対象への投与（例えば、斯かる対象の適した部位中への移植）を含む方法を供する。
【００３６】
本発明はまた、上記疾患から選択される疾患の治療のための医薬の調製のための、第一又は第二の態様であり、血管新生抑制効果を有するペプチド活性医薬成分を含む組成物の使用を供する。
【００３７】
本発明はまた、腫瘍性疾患、黄斑部変性、糖尿病性網膜症、又は角膜血管形成の治療、又は例えば、緑内障濾過手術後の瘢痕の予防のための医薬の調製のための、第一又は第二の態様であり、抗VEGF抗体、例えば、ベバシズマブ等を含む組成物の使用を供する。
【００３８】
特定の実施形態において、組成物は眼内、眼周囲又は眼球内移植によって投与される。組成物は、結膜下腔に移植することができる。移植はまた、角膜内及び後眼部に可能である。
【００３９】
添付図面を参照しながら、本発明を実施例によってより詳細に記載する。
【図面の簡単な説明】
【００４０】
【図１】図１は、本発明のベバシズマブ錠剤で行った溶解試験の結果を示す。
【００４１】
【図２】図２は、本発明の錠剤から放出されたベバシズマブ及びアバスチン（登録商標）製剤由来のベバシズマブの分子量比較を示す。黒色線及びバー（挿入図）は、アバスチン（登録商標）製剤由来のベバシズマブを示し、一方破線及びバー（挿入図、右）は、組織錠剤由来のベバシズマブを示す。抗体の双方の試料は、76.8分に溶出し（UV、280nm）、同様の曲線下面積を示した（挿入図、上部）。分子量比較は、ゲル電気泳動（SDS-PAGE）によってもまた行った（挿入図、下部）。
【００４２】
【図３】図３は、本発明の錠剤から放出されたベバシズマブ及びアバスチン（登録商標）製剤由来のベバシズマブの結合親和性比較を示す（バイオセンサー、Biacore X-100、CM5チップ上でVEGF165を使用）。わずかに低いトレースは、組織錠剤由来の抗体の結合を示すが、２つのトレースは本質的に同一の全体結合応答を示す。
【００４３】
【図４】図４は、本発明の錠剤から放出されたベバシズマブ及びアバスチン（登録商標）製剤由来のベバシズマブとのインビトロ（in vitro）での生物学的効率（細胞増殖の抑制）の比較を示す。製剤は、VEGFに対して異なる抗体濃度で調製した｛媒体対照、2000:3 Ab:VEGFアバスチン（登録商標）、2000:3 Ab:VEGF錠剤、1000:3 Ab:VEGFアバスチン（登録商標）、1000:3 Ab:VEGF錠剤、100:3 Ab:VEGFアバスチン（登録商標）、100:3 Ab:VEGF錠剤、媒体+VEGF対照｝。
【図５】図５は、アバスチン（登録商標）及び本発明の錠剤由来のベバシズマブVEGF刺激血管形成への効果を比較した血管形成アッセイの結果を示す。グラフは、最も長い分岐の半分に達する分岐の数及び7日目の分岐の数を含む様々なパラメータを表す。左から、バーは、10:1 ベバシズマブ:VEGFアバスチン（登録商標）、10:1 ベバシズマブ: 発明のVEGF錠剤、1:2 ベバシズマブ:VEGFアバスチン（登録商標）、1:2 ベバシズマブ: 発明のVEGF錠剤; 及び媒体+VEGF対照を示す。
【００４４】
【図６】図６は、媒体+VEGF対照（上部）、アバスチン（登録商標）由来のベバシズマブ（中部）及び本発明のベバシズマブ錠剤（下部）の存在下での、VEGF刺激血管形成の顕微鏡試験の結果を示す。
【００４５】
【図７】図７は、ウサギにおける緑内障濾過手術中の結膜ポケットにおける（本発明の）ベバシズマブ組織錠剤の設置を示す。
【００４６】
【図８】図８は、インビボ（in vivo）のウサギ瘢痕モデルの結果を示す。次の５つの群（n=6）; a）ベバシズマブ（アバスチン（登録商標））インジェクション、b）水スポンジ、c）マイトマイシン-C（クリニックにおける現在の代表的な治療）、d）IgG組織錠剤、e）ベバシズマブ組織錠剤（本発明）を試験した。ベバシズマブ組織錠剤は、小疱の残存において統計上顕著な増加を示した（Kaplan-Meier生存曲線）。これは、本発明の顕著な抗瘢痕効果を示す。
【００４７】
【図９】図９は、緑内障濾過手術後の様々な時点における小疱（図7及び8の瘢痕モデル由来）を示す。黒線は小疱を強調し、一方、消失小疱は、黒色の点で示される。
【００４８】
【図１０】図１０は、本願の錠剤の調製方法の略図を示す。
【００４９】
【図１１】図１１は、溶液中で調製した組換えヒトインスリンとの、本発明の錠剤（上部トレース）から放出された組換えヒトインスリンの分子量比較（SEC）を示す。
【００５０】
【図１２】図１２は、溶液中で調製したアスパラギナーゼ（レーン2）との、本発明の錠剤（レーン1）から放出された抗癌剤アスパラギナーゼの分子量比較（SDS-PAGE）を示す。
【００５１】
【図１３】図１３は、溶液中で調製した組換えヒトアルブミンとの、本発明の錠剤から放出された組換えヒトアルブミン（低いピークトレース）の分子量比較（SEC）を示す。アルブミンは、本発明の組成物の広範囲の適用性を説明するためのモデルペプチドとして使用される。
【００５２】
【図１４】図１４は、溶液中で調製した組換えヒトアルブミン（レーン2）との、本発明の錠剤から放出された組換えヒトアルブミン（レーン1）の分子量比較（SDS-PAGE）を示す。
【００５３】
【図１５】図１５は、溶液中で調製したホロトランスフェリンとの、本発明の錠剤から放出されたホロトランスフェリン（低いピークトレース）の分子量比較（SEC）を示す。
【００５４】
【図１６】図１６は、溶液中で調製したホロトランスフェリン（レーン1）との、本発明の錠剤から放出されたホロトランスフェリン（レーン2）の分子量比較（SDS-PAGE）を示す。
【００５５】
【図１７】図１７は、溶液中で調製したアポトランスフェリンとの、本発明の錠剤から放出されたアポトランスフェリン（低いピークトレース）の分子量比較（SEC）を示す。
【００５６】
【図１８】図１８は、溶液中で調製したホロトランスフェリン（レーン2）との、本発明の錠剤から放出されたアポトランスフェリン（レーン1）分子量比較（SDS-PAGE）を示す。
【００５７】
【図１９】図１９は、溶液中で調製したリゾチームとの、本発明の錠剤から放出されたリゾチーム（低いピークトレース）の分子量比較（SEC）を示す。
【００５８】
【図２０】図２０は、溶液中で調製したリゾチーム（レーン2）との、本発明の錠剤から放出されたリゾチーム（レーン1）の分子量比較（SDS-PAGE）を示す。
【００５９】
【図２１】図２１は、本発明の錠剤のから放出されたトラスツズマブ、市販のハーセプチン（登録商標）に由来するトラスツズマブの分子量測定（SEC）を示す。
【００６０】
【図２２】図２２は、本発明の錠剤から放出されたトラスツズマブ、市販のハーセプチン（登録商標）に由来するトラスツズマブの分子量測定（SDS-PAGE）を示す。
【００６１】
【図２３】図２３は、溶液中で調製したリボヌクレアーゼとの、本発明の錠剤から放出されたリボヌクレアーゼ酵素（低いピークトレース）の分子量比較（SEC）を示す。
【００６２】
【図２４】図２４は、本発明の錠剤から放出されたリボヌクレアーゼ酵素の分子量測定（SDS-PAGE）を示す。
【００６３】
【図２５】図２５は、本発明の一連の錠剤から放出された抗体断片（Fab）ラニビズマブ（レーン2-5）の、溶液中のラニビズマブ、市販のルセンティス（登録商標）に由来する錠剤中のラニビズマブ、及び供給され再構成される市販品の溶液との分子量比較（SDS-PAGE）を示す。
【００６４】
【図２６】図２６は、本発明の錠剤から放出されたラニビズマブ、市販のルセンティス（登録商標）に由来するラニビズマブの分子量測定及び定量化（SECによる）を示す。様々な溶出した種の溶出時間及び割合｛総AUC（曲線下面積）の%｝を図中の表に表す。91分に溶出している非凝集ペプチドは、存在するペプチドの93 %以上占める。
【００６５】
結膜下腔中に注入される医薬は、斯かる組織から迅速なクリアランスを示す。これらの局所の短い半減期のため、大用量注入しなければならず、用量ダンピング（dose dumping）及び各投与用量間で標的組織における最適以下の薬物濃縮を生じることを意味する。よって斯かる状況は、医薬の治療上有効濃度を維持するために頻繁なインジェクションを必要とする。病院で現在使用される多くの活性成分もまた限られた治療指数を有し、大用量を使用することが度々不可能である。上記の通り、国際公開第2009/063222号は、植え込み型錠剤を、これらの環境において活性成分の緩徐放出のために使用できることを示す。さらなる広範囲な実験後、組織移植のための錠剤（「組織錠剤」と呼ぶことができる）を作るために、ペプチド、例えば、抗体等の使用において、顕著な改良がされた。よって、抗体活性又は抗体凝集のエビデンスの減少なく長期間抗体を放出できる、抗体組織錠剤が開発された。
【００６６】
新規組織錠剤は、主として不十分な溶解性の活性医薬成分のために開発され、国際公開第2009/063222号に記載された組織錠剤に対して驚くべき改良を有する。抗体は繊細な分子であり、その物理化学的環境における変化は活性及び凝集の減少を容易に生じ得る。国際公開第2009/063222号に記載される錠剤において、一部凝集が生じ得る。賦形剤の組合せ及び/又は製剤の調製中の異なる緩衝剤の使用は、錠剤の製造及び使用中に抗体を保護するために使用されている。特に、錠剤を作るために使用される賦形剤中のカリウムのナトリウムとの置換は、凝集が観察されない実質的により良好な組織錠剤につながることが見いだされた。抗体の機能性は、インビトロ（in vitro）及びインビボ（in vivo）で維持される。
【００６７】
本発明の組成物の緩徐な放出特性は、医薬ベースのタンパク質の結膜下腔からの及び眼の他の領域内の迅速なクリアランスを克服するのに役立ち得る。よって、本願の製剤は角膜及び後眼部血管形成並びに緑内障濾過手術を含む多くの疾患に利点があることが期待できる。特に、本発明の組成物は、例えば、黄斑変性症及び糖尿病性網膜症等の疾患のための、タンパク質ベースの医薬を眼の後眼部に送達するための手段を供し得る。
【００６８】
抗体組織錠剤は、複数の眼疾患において植え込み型装置として使用できる。モノクローナル抗体の使用は眼疾患の治療のための臨床的に証明されたアプローチであり、本発明の組織錠剤はインジェクション（現在唯一利用できる方法）によるものよりも良好な有効性を有する眼の異なる区画へ斯かる薬剤を送達するための手段となり得る。医薬の組織錠剤送達のこの新規且つ驚くべき方法は、よって抗体及び他のペプチドのためのインジェクション経路と置き換わることができる。これは特に、現在顕著な商業的関心がある、眼の前眼部及び後眼部、角膜及び結膜領域への抗体並びにその断片を含むタンパク質ベースの薬剤の送達に重要である。
【００６９】
さらに、多くの癌に関して、タンパク質ベースの医薬の局所高濃度が望ましい。繰り返しになるが、本発明の組成物は、これを達成するための手段を供することができる。
【００７０】
本発明は特定の抗体を含む組成物によって本明細書中で例示されるが、当然のことながら、原理上このアプローチを使用して、多くのタンパク質ベースの医薬を局所的に送達できる。
【実施例】
【００７１】
実施例1 - 抗体組織錠剤の製造
次の物質を使用した（説明される量は、一組織錠剤の製造用の量である）:
1- アバスチン（登録商標）（Genentech、25mg/mL） = 50μL（1.25 mgに相当） 
2- ヒーロン GV（AMO、14mg/mL） = 125μL（1.75 mgに相当） 
3- 緩衝剤（K2HPO4、10 mM、pH 6.2） -リン酸でpH調節
ヒアルロン酸ナトリウム（ヒーロンGV）、1.25 μlを、スピンカラム（Vivalspin 6 mL、10000ダルトンのカットオフ膜）中に置き、各実行において4000 rpmで20-25分間遠心機を使用して、緩衝剤で7-8回洗浄した。続いて、ヒアルロン酸をガラス製バイアル（28 mL、2.5 cm直径）に移送した。容積を2.5 mLに調節した。約30分後、溶液をボルテックスし、均質であることを確認した。アバスチン（登録商標）（50 μL）を緩衝剤で1 mLまで希釈し、ガラス製バイアルをボルテックス（穏やかな撹拌と共に）に置いて液滴で添加した。
【００７２】
バイアルを凍結乾燥のために凍結乾燥機に移送した。棚温度を環境温度から-30°Cまで徐々に低下させた。溶液が完全に凍結するまで、棚温度を-30°Cに維持した（約1-2時間）。続いて最初の乾燥を、次の条件: 圧力 100-110 マイクロバール、棚温度-20°C、冷却器温度約 -70°Cで48-72時間行った（試料の数に依存）。過程を図10で模式的に説明する。
【００７３】
第二の乾燥を20°Cで少なくとも2時間行った。
【００７４】
その後、ハンドプレス、並びに約 3 mmのパンチ及びダイスを使用して、凍結乾燥した粉末を圧縮し、植え込み型錠剤を形成した。約8バーの圧縮力を10秒間適用した。ダイスからの除去後、錠剤は直径約3mm、及び厚さ約0.87mmを有した。
【００７５】
実施例2 - 植え込み型組織錠剤の物理化学的特徴
2.1 - ペプチド放出
実施例1で調製した錠剤からのベバシズマブの放出を、（国際公開第2009/063222号に記載されるように）結膜下腔における移植部位（小疱）の容積及び斯かる部位を通過する流量を再現するために設計されたフローリグ（flow rig）を使用して測定した。リグは200 μLのフローチャンバー容積、及び流速2μL/分を有する。溶出媒体はpH 7.4のリン酸緩衝食塩水（PBS）であった。放出されたタンパク質を含むフローリグからの試料を採取し、タンパク質濃度をマイクロBCAアッセイによって測定した。
【００７６】
図 1に結果を示す。組織錠剤は、最長150時間の長時間（検出限界1μg/mL）、ベバシズマブを放出することが分かった。総放出に関して、95.9%のベバシズマブが錠剤から放出されたことを測定した。一次速度論に近似したもの（Near first order kinetics）が最初の約50時間観察された（図1）。
【００７７】
アバスチン（登録商標）溶液としてのベバシズマブは、2時間未満に放出された（図示なし）。
【００７８】
2.2 - ペプチド分子量/安定性
サイズ排除クロマトグラフィー（SEC-HPLC）及びゲル電気泳動（SDS-PAGE、ビストリス4-12 %ゲル）を、高分子量種及び凝集の存在を評価するために使用した。次のSEC-HPLC条件; Superdex（登録商標）200 prep gradカラム、移動相としてNaCl（150mM）を加えたNaH2PO4（5mM、pH 6.2）、280nmのUV波長、1.0 mLのインジェクション容積、130分の実行時間、を使用した。SEC-HPLCによる溶出時間又は曲線下面積において変化はなかった（n=3、図2）。これは、ペプチドの凝集のないことを示す。さらに、高分子量種中にSDS-PAGEによって観察されたものはない（図2、クマシーブルーによって着色、挿入図）。
【００７９】
実施例3 -植え込み型組織錠剤の機能的及び生物学的特性
3.1 -抗原結合評価
錠剤から放出された抗体を、バイオセンサー（表面プラズモン共鳴法）アプローチによって異なる時点で評価した。CM5チップは、およそ20000の相対応答が達成されるまで組換えヒトVEGF 165によって固定化した。ベバシズマブ組織錠剤を溶解し、医薬製剤（アバスチン、1.25 mg）由来の同様の量のベバシズマブで調べた。実験を実行緩衝剤としてヘペスを使用して環境温度で行った（n=3）。組織錠剤由来の溶解した抗体は、アバスチン（登録商標）製剤から放出された抗体とVEGF165への同様の結合を示した（図3）。
【００８０】
3.2 - 生物学的活性
生物学的試験｛HUVEC細胞増殖（アラマーブルーアッセイ）、及び共培養血管形成（HUVEC及びヒトテノン線維芽細胞（HTF））アッセイ｝は、錠剤とアバスチン製剤との間で同様の活性（顕著な違いはない）を示した（図4及び5）。共培養血管形成アッセイにおいて、HUVECをビーズ上に置き（ビーズごとにおおよそ400細胞）、続いてビーズをフィブリンゲル中に包埋した。HTF（20000細胞/ゲル）を上部に添加した。EGM2培地を、条件培地を作成するために使用した。条件培地の効果を7日目及び14日目に、1）最も長い分岐の長さ、2）分岐の数、3）最も長い分岐の半分の長さに達した分岐の数の測定によって調べた。
【００８１】
図4は、活性の減少が本発明以外の錠剤において生じ得ることを示す。
【００８２】
3D共培養血管形成試験（HTF及びHUVEC細胞を使用）において、錠剤とアバスチン製剤との間で顕著な違いはなかった（図6）。次のパラメータ:最も長い細胞分岐の長さ、最も長い長さの半分に達した分岐の数、及び分岐の総数を測定した。
【００８３】
結論として、本発明の組織錠剤は、インビトロ（in vitro）において活性抗体の緩慢な放出を示した。インビトロ（in vitro）における活性の顕著な減少も、顕著な凝集も見られなかった。
【００８４】
3.3 インビボ（in vivo）での評価
ウサギにおける緑内障濾過手術の臨床的に有効で且つ確立されたモデルを利用し、上記の通り製造したベバシズマブ組織錠剤の創傷治癒効果を調べた。ランダム且つ盲検試験において３０匹のウサギを使用した。ウサギを次の5つの処理群; a）ベバシズマブ（アバスチン（登録商標））インジェクション、b）水スポンジ、c）マイトマイシン-C（現在病院における代表的な処理）、d）IgG組織錠剤、e）ベバシズマブ組織錠剤（本発明）に分けた。角膜縁に沿って切開を行い、続いて結膜ポケットは鈍的切開を介して行った。強膜トンネルをブレードによって切開し、前房と結膜ポケットとの間に瘻孔を作った。続いて、接続を維持するためにカニューレを通し、縫合によって強膜に固定した。組織錠剤を投与したウサギに関して、これを結膜ポケットの内側に置いた（図7）。続いて、切開を閉じた。瘻孔を介した結膜ポケットへの房水のドレナージ後に小疱が形成された。手術後、小疱を様々な時点で、盲検（masked）オブザーバーによって臨床的に評価した。次の基準: a）小疱のサイズ（携帯型顕微鏡下で評価）、b）小疱の血管分布、c）前房の深度を使用して小疱機能を評価した。内障濾過手術後の様々な時点での小疱の画像を図 9に示す。カプランマイヤー生存曲線は、小疱の残存を示す（図8）。結果は、本発明の組織錠剤の顕著な抗瘢痕効果を示す。
【００８５】
実施例4 - さらなるペプチド組織錠剤の製造及び特徴
実施例1に記載される同一のプロトコールを使用して、次の表に列記するペプチドを含む組織錠剤を調製した。いずれの場合も、特定のペプチド（及びその量）を、実施例1のアバスチン溶液の代わりに使用した。ヒアルロン酸及びカリウムイオンを実施例1に記載されるように、表で規定のトレハロースと共に添加した。表はそれぞれの場合の単独の組織錠剤の内容物を列記する。ペプチドが市販品から得られる場合、斯かる製品に存在し組織錠剤に包含されたさらなる成分もまた特定した。
【００８６】
【表１】
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【００８７】
これらの組織錠剤の特徴は、図11〜26に示す。それぞれの場合において、結果は、ペプチド活性成分（及びそのモデルとしてのアルブミン）は、錠剤から放出された場合に顕著な凝集を生じなかったことを示す。錠剤組成物は、ペプチドの凝集傾向を増大することなく、インビボ（in vivo）での投与（例えば、移植）後の制御放出のためのペプチドの製剤化を可能にすると理解することができる。これらの結果は、異なるサイズ及び物理化学的特性の多種多様な範囲のペプチド（抗体、抗体断片、酵素、ホルモン及び血液学的タンパク質）で達成可能であることが示され、本発明によって具体化される製剤アプローチの広範囲の適用を説明している。ここで留意すべきは、この例としての文脈でモデルタンパク質として（しかしながら、本発明の組成物において、例えば、HAと適した割合で又はHAの代わりに賦形剤として使用できる）アルブミンが示されていることである。使用したアルブミンは、二量化の影響を非常に受けやすくする遊離のシステイン残基の天然配列を有する。しかしながら、上記の錠剤で得られる結果は、斯かるアルブミンが本発明の組成物において凝集しないことを示す。遊離のシステイン残基を有しないアルブミンの組換え誘導体によって、安定性はより良好になることが期待される。同様のことは、天然のアルブミンと比較して凝集傾向の減少を有する他のペプチドでも期待できる。
【００８８】
上記の全ての文献は、その全体が参照により本明細書中に組み込まれる。
【図１】
2013538865.tif 000003
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【国際調査報告】
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