(57)【要約】Ａｎｉｂａ  ｇａｒｄｎｅｒｉまたはそれらの抽出物もしくは分画物、またはこれらに含有される化合物もしくはその誘導体を含む健康食品、医薬組成物及び化粧料である。アレルギー症状を緩和する作用を有する健康食品、及び活性酸素の産生を抑制する作用を有し、活性酸素に関連する疾病を予防するための健康食品、抗アレルギー剤としてのまたは活性酸素に関連する疾病の予防または治療のための医薬組成物、並びに肌の老化防止または肌質改善のための化粧料を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ａｎｉｂａ  ｇａｒｄｎｅｒｉ、それらの抽出物もしくは分画物、またはこれらに含有される化合物もしくはその誘導体を含む健康食品。
【請求項２】
前記抽出物が、超臨界流体による抽出物、または水、有機溶媒もしくはその混合物による抽出物である請求の範囲第１項記載の健康食品。
【請求項３】
前記分画物が、前記Ａｎｉｂａ  ｇａｒｄｎｅｒｉの超臨界流体による抽出物、または水、有機溶媒もしくはその混合物による抽出物をクロマトグラフィー精製して１００％メタノール画分として得られる分画物である請求の範囲第１項記載の健康食品。
【請求項４】
前記化合物もしくはその誘導体が、次式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶまたはＶで表される化合物である請求の範囲第１項記載の健康食品。
2003073870.tif 000018
（式中、Ｒ１、Ｒ１１、Ｒ２１、Ｒ３１及びＲ４１は水素原子、炭素原子数１〜５のアルキル基または炭素原子数１〜５のアルケニル基を表し、Ｒ２、Ｒ１２、Ｒ２２、Ｒ３２、Ｒ４２は水素原子または炭素原子数１〜５のアルキル基を表し、Ｒ３、Ｒ１３、Ｒ２３、Ｒ３３、Ｒ４３は次式ＶＩまたはＶＩＩ：
2003073870.tif 000019
で表される基を表し、Ｒ４〜Ｒ６、Ｒ１４〜Ｒ１６、Ｒ２４〜Ｒ２６、Ｒ３４〜Ｒ３７、Ｒ４４〜４７、Ｒ５１〜Ｒ５６は各々独立に水素原子、水酸基、炭素原子数１〜５のアルキル基または炭素原子数１〜５のアルコキシ基を表す）
【請求項５】
アレルギー症状を緩和するための請求の範囲第１項に記載の健康食品。
【請求項６】
活性酸素に起因する疾病の予防のための請求の範囲第１項に記載の健康食品。
【請求項７】
Ａｎｉｂａ  ｇａｒｄｎｅｒｉ、それらの抽出物もしくは分画物、またはこれらに含有される化合物もしくはその誘導体を含む医薬組成物。
【請求項８】
前記抽出物が、超臨界流体による抽出物、または水、有機溶媒もしくはその混合物による抽出物である請求の範囲第７項記載の医薬組成物。
【請求項９】
前記分画物が、前記Ａｎｉｂａ  ｇａｒｄｎｅｒｉの超臨界流体による抽出物、または水、有機溶媒もしくはその混合物による抽出物をクロマトグラフィー精製して１００％メタノール画分として得られる分画物である請求の範囲第７項記載の医薬組成物。
【請求項１０】
前記化合物もしくはその誘導体が、前記式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶまたはＶで表される化合物である請求の範囲第７項記載の医薬組成物。
【請求項１１】
抗アレルギー剤である請求の範囲第７項に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
活性酸素に起因する疾病の予防剤または治療剤である請求の範囲第７項に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
Ａｎｉｂａ  ｇａｒｄｎｅｒｉ、それらの抽出物もしくは分画物、またはこれらに含有される化合物もしくはその誘導体を含む化粧料。
【請求項１４】
前記抽出物が、超臨界流体による抽出物、または水、有機溶媒もしくはその混合物による抽出物である請求の範囲第１３項記載の化粧料。
【請求項１５】
前記分画物が、前記Ａｎｉｂａ  ｇａｒｄｎｅｒｉの超臨界流体による抽出物、または水、有機溶媒もしくはその混合物による抽出物をクロマトグラフィー精製して１００％メタノール画分として得られる分画物である請求の範囲第１３項記載の化粧料。
【請求項１６】
前記化合物もしくはその誘導体が、前記式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶまたはＶで表される化合物である請求の範囲第１３項記載の化粧料。
【請求項１７】
次式で表される化合物またはその塩。
2003073870.tif 000020
（式中、Ｒは各々独立に水素原子、炭素原子数１〜５のアルキル基または炭素原子数１〜５のアルキルカルボニル基を表し、Ｒ’は水素原子、水酸基または炭素原子数１〜５のアルコキシ基を表す）
【請求項１８】
Ａｎｉｂａ  ｇａｒｄｎｅｒｉ、それらの抽出物もしくは分画物、またはこれらに含有される化合物もしくはその誘導体を用いるアレルギー疾患の治療方法。
【請求項１９】
Ａｎｉｂａ  ｇａｒｄｎｅｒｉ、それらの抽出物もしくは分画物、またはこれらに含有される化合物もしくはその誘導体を用いる活性酸素に起因する疾病の予防または治療方法。
【発明の詳細な説明】
技術分野
本発明は健康食品及び医薬組成物に関する。
背景技術
抗アレルギー作用を有する化合物として、種々の化合物が開発されている。アレルギー疾患の症状は長期にわたることが多いため、服用期間も長くなる傾向がある。従って、できるだけ副作用の少ない医薬が望まれている。植物由来の生薬または植物由来の化合物には、穏やかな作用を有し、副作用が少ないものが多い。
また、近年、血液中の活性酸素と疾病との関連が報告されている。そのような疾病として動脈硬化症、悪性腫瘍、虚血性疾患、炎症、パーキンソン病及びアルツハイマー症等の神経変性疾患、クローン病、潰瘍性大腸炎等が挙げられる。活性酸素の作用を抑えたり、活性酸素を除去したりすることにより、それらの疾病を予防することができると考えられている。
また、活性酸素は肌の老化とも関連があり、これを除去することにより肌の老化を抑えることが提案されている。
しかしながら、アレルギー性疾患は多様であり、その症状には個人差も大きい。また医薬の効果についても症状や個人の体質により様々である。従って、アレルギー症状の緩和のためには、患者の症状及び体質にあった成分を選択する必要があり、新たな抗アレルギー剤の開発が望まれている。
また、活性酸素を抑制し、活性酸素に関連する疾病を予防する効果を有する医薬または健康食品の開発に対する要望がある。
本発明の発明者は、種々の植物につき鋭意研究を重ねた結果、Ａｎｉｂａ  ｇａｒｄｎｅｒｉが抗アレルギー作用を有する成分を含むことを見出し、本発明を完成させた。また、この植物が活性酸素の産生を抑制する作用を有する成分を含有し、活性酸素に起因する疾病の予防に有効であることを見出した。さらに、本発明の発明者は、Ａｎｉｂａ  ｇａｒｄｎｅｒｉの成分が、活性酸素の産生を抑制し、皮膚の老化を防止する作用を有することを見出した。
Ａｎｉｂａ  ｇａｒｄｎｅｒｉは、クスノキ科の植物であり、南米等において、利尿作用を有する生薬として市販されている。しかしながら、Ａｎｉｂａ  ｇａｒｄｎｅｒｉが、抗アレルギー作用を有すること、及び活性酸素産生抑制作用を有することは知られていなかった。
発明の開示
第１に、本発明は、下記の健康食品に関する。
（１）Ａｎｉｂａ  ｇａｒｄｎｅｒｉ、それらの抽出物もしくは分画物、またはこれらに含有される化合物もしくはその誘導体を含む健康食品。
（２）前記抽出物が、超臨界流体による抽出物、または水、有機溶媒もしくはその混合物による抽出物である（１）の健康食品。
（３）前記分画物が、前記Ａｎｉｂａ  ｇａｒｄｎｅｒｉの超臨界流体による抽出物、または水、有機溶媒もしくはその混合物による抽出物をクロマトグラフィー精製して１００％メタノール画分として得られる分画物である（１）の健康食品。
（４）前記化合物もしくはその誘導体が、次式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶまたはＶで表される化合物である（１）の健康食品。
2003073870.tif 000002
（式中、Ｒ１、Ｒ１１、Ｒ２１、Ｒ３１及びＲ４１は水素原子、炭素原子数１〜５のアルキル基または炭素原子数１〜５のアルケニル基、好ましくは−ＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ２を表し、Ｒ２、Ｒ１２、Ｒ２２、Ｒ３２、Ｒ４２は水素原子または炭素原子数１〜５のアルキル基を表し、Ｒ３、Ｒ１３、Ｒ２３、Ｒ３３、Ｒ４３は次式ＶＩまたはＶＩＩ：
2003073870.tif 000003
で表される基を表し、Ｒ４〜Ｒ６、Ｒ１４〜Ｒ１６、Ｒ２４〜Ｒ２６、Ｒ３４〜Ｒ３７、Ｒ４４〜４７、Ｒ５１〜Ｒ５６は各々独立に水素原子、水酸基、炭素原子数１〜５のアルキル基または炭素原子数１〜５のアルコキシ基を表す）
（５）アレルギー症状を緩和するための（１）〜（４）のいずれかに記載の健康食品。
（６）活性酸素に起因する疾病の予防のための（１）〜（４）のいずれかに記載の健康食品。
また、本発明は、下記の医薬組成物に関する。
（７）Ａｎｉｂａ  ｇａｒｄｎｅｒｉ、それらの抽出物もしくは分画物、またはこれらに含有される化合物もしくはその誘導体を含む医薬組成物。
（８）前記抽出物が、超臨界流体による抽出物、または水、有機溶媒もしくはその混合物による抽出物である（７）の医薬組成物。
（９）前記分画物が、前記Ａｎｉｂａ  ｇａｒｄｎｅｒｉの超臨界流体による抽出物、または水、有機溶媒もしくはその混合物による抽出物をクロマトグラフィー精製して１００％メタノール画分として得られる分画物である（７）の医薬組成物。
（１０）前記化合物もしくはその誘導体が、前記式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶまたはＶで表される化合物である（７）の医薬組成物。
（１１）抗アレルギー剤である（７）〜（１０）のいずれかに記載の医薬組成物。
（１２）活性酸素に起因する疾病の予防剤または治療剤である（７）〜（１０）のいずれかに記載の医薬組成物。
さらに、本発明は、下記の化粧料に関する。
（１３）Ａｎｉｂａ  ｇａｒｄｎｅｒｉ、それらの抽出物もしくは分画物、またはこれらに含有される化合物もしくはその誘導体を含む化粧料。
（１４）前記抽出物が、超臨界流体による抽出物、または水、有機溶媒もしくはその混合物による抽出物である（１３）の化粧料。
（１５）前記分画物が、前記Ａｎｉｂａ  ｇａｒｄｎｅｒｉの超臨界流体による抽出物、または水、有機溶媒もしくはその混合物による抽出物をクロマトグラフィー精製して１００％メタノール画分として得られる分画物である（１３）の化粧料。
（１６）前記化合物もしくはその誘導体が、前記式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶまたはＶで表される化合物である（１３）の化粧料。
また、本発明は、上記健康食品、医薬組成物、化粧料の製造のための使用に関する。
さらに、本発明は次式で表される新規化合物またはその塩に関する。
2003073870.tif 000004
（式中、Ｒは各々独立に水素原子、炭素原子数１〜５のアルキル基または炭素原子数１〜５のアルキルカルボニル基を表し、Ｒ’は水素原子、水酸基または炭素原子数１〜５のアルコキシ基を表す）
また、本発明は、Ａｎｉｂａ  ｇａｒｄｎｅｒｉ、それらの抽出物もしくは分画物、またはこれらに含有される化合物もしくはその誘導体、好ましくはＡｎｉｂａ  ｇａｒｄｎｅｒｉの超臨界流体による抽出物、または水、有機溶媒もしくはその混合物による抽出物；またはＡｎｉｂａ  ｇａｒｄｎｅｒｉの超臨界流体による抽出物、または水、有機溶媒もしくはその混合物による抽出物をクロマトグラフィー精製して１００％メタノール画分として得られる分画物；または前記式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶまたはＶで表される化合物を用いるアレルギー疾患の治療方法及び活性酸素に起因する疾病の予防または治療方法に関する。
発明を実施するための最良の形態
本明細書において使用される「Ａｎｉｂａ  ｇａｒｄｎｅｒｉ」は、Ａｎｉｂａ  ｇａｒｄｎｅｒｉの茎、葉、根、茎の皮、根皮等であり得る。
Ａｎｉｂａ  ｇａｒｄｎｅｒｉは、生のまたは乾燥させた植物を、所望により用途に応じて適当な大きさに切断または粉砕して用いることができる。
ここで、「乾燥」は、天日乾燥、風乾、乾燥炉による乾燥、熱風乾燥、凍結乾燥、スプレードライ等またはそれらの組み合わせにより行い得る。乾燥の程度は、目的にもよるが、水分含有量０〜５０重量％、好ましくは０〜１０重量％となるまで乾燥する。
本明細書において、「抽出物」は、上記生または乾燥させたＡｎｉｂａ  ｇａｒｄｎｅｒｉから、所望により適当な大きさに切断したものを、水、有機溶媒等の溶媒中での冷浸、温浸、還流冷却下での加熱等の適当な抽出方法、または超臨界流体抽出により抽出されたものである。超臨界流体としては、例えば二酸化炭素、ペンタン等を使用し得る。抽出は所望により超音波をかけながら行ってもよい。抽出は、連続式で行ってもバッチ式で行ってもよく、例えば常温から溶媒の沸点の範囲の温度で、加圧、常圧または減圧下で行う。抽出時間は、抽出方法、抽出溶媒等に応じて、適宜決定し得る。例えば、室温での抽出の場合、１〜１０日間、好ましくは１〜３日間、特に１〜１２時間であり、溶媒の沸点付近の温度での抽出の場合、１０分間〜１０時間、好ましくは１０分間〜５時間、特に１〜３時間である。
ここで、水、有機溶媒等の溶媒は、例えば、水、メタノール、エタノール、ｎ−もしくはイソプロパノール、ｎ−、イソ、第二もしくは第三ブタノール、ｎ−、イソ、第二もしくは第三ペンタノール、ｎ−、イソ、第二もしくは第三ヘキサノール等のアルコール類、アセトン、メチルエチルケトン等のケトン類、酢酸メチル、酢酸エチル、酢酸プロピル等のエステル類、クロロホルム、塩化メチレン等のハロゲン化炭化水素、ジエチルエーテル等のエーテル類、ヘキサン、ペンタン等の炭化水素、またはこれらの混合物であり得る。
抽出後、溶媒を常圧または減圧下で留去して濃縮または乾固するか、凍結乾燥する。
抽出物は、そのまま健康食品、医薬品組成物または化粧料の原料として使用してもよいが、濃縮または乾固した後、水、エタノール等の溶媒に溶解し、不溶物を濾去して使用してもよい。この場合、濾液はそのまま、または所望により濃縮、乾固または凍結乾燥した後、健康食品、医薬品組成物または化粧料の原料として使用することができる。
「分画物」は、前記抽出操作後の抽出溶媒中の成分、または抽出操作後、溶媒を留去し、残留物をさらに他の溶媒に溶解した溶液中の成分を、クロマトグラフィーにより分画し、集められた画分を所望により濃縮、乾固または凍結乾燥したものであり得る。クロマトグラフィーは、カラムクロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィーであり得る。充填剤は、シリカゲル、ＯＤＳまたはＨＰ−２０等のポリマーであり、溶出溶媒は、水、有機溶媒、例えばメタノール、エタノール等のアルコール類またはそれらの混合物であり得る。
本発明の分画物は、好ましくは、充填剤として例えばＨＰ−２０を使用し、水−メタノール混合溶媒により、メタノールの濃度を増しながら展開し、メタノール９０〜１００％、特にメタノール１００％で得られる画分である。
前記抽出物及び分画物は、所望により滅菌した後に、健康食品、医薬品組成物または化粧料の原料として使用し得る。
（化合物）
本発明は、上記分画物の画分をさらに分離、精製し、単離された活性成分、または該活性成分の構造解析をすることにより解明される構造を有する化合物及びその誘導体を含む健康食品、医薬品組成物及び化粧料にも関する。
該化合物は、例えば、上記式Ｉ〜Ｖで表される化合物である。
特に好ましいのは、上記式Ｉ中、Ｒ１が−ＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ２を表し、Ｒ２が炭素原子数１〜５のアルキル基を表し、Ｒ３が上記式ＶＩで表される基を表し、Ｒ４、Ｒ５及びＲ５１が各々独立に水素原子、水酸基または炭素原子数１〜５のアルコキシ基を表し、Ｒ６、Ｒ５２及びＲ５３が水素原子を表す化合物である。
本発明は、特に、下記の構造式で表される化合物、その誘導体及びそれらの薬理学的に許容される塩に関する。下記の構造式で表される化合物は、Ａｎｉｂａ  ｇａｒｄｎｅｒｉの成分であり、Ａｎｉｂａ  ｇａｒｄｎｅｒｉから、抽出、分画、単離精製により得られる。
2003073870.tif 000005
2003073870.tif 000006
本明細書において、「誘導体」は、例示した化合物から当業者に周知の方法により合成でき、例示した化合物とほぼ同等の効果を有する化合物を意味する。
上記式において、Ｒ、Ｒ’、Ｒ１〜Ｒ５６としての炭素原子数１〜５のアルキル基またはアルコキシ基もしくはアルキルカルボニルオキシ基のアルキル部分は、直鎖でも分岐鎖状でもよく、例として、メチル基、エチル基または各々直鎖または分岐鎖のプロピル基、ブチル基、ペンチル基が挙げられる。
上記で列挙した化合物は、Ａｎｉｂａ  ｇａｒｄｎｅｒｉの極性有機溶媒抽出液、例えばエタノール抽出液を分画し、精製することにより得られる。Ａｎｉｂａ  ｇａｒｄｎｅｒｉとしては、例えば南米等で市販されている乾燥させた茎皮、根皮等を使用することができる。
分画は、カラムクロマトグラフィーにより、例えば展開溶媒として水と極性有機溶媒の混合物、例えば水−メタノール混合物を用いて行うことができる。
本発明の一般式Ｉ〜Ｖで表される化合物は、上記で列挙した化合物から当業者に周知の方法により誘導することができる。例えば、−ＯＣＨ３基を慣用の試薬により加水分解することができる。
本発明で用いるＡｎｉｂａ  ｇａｒｄｎｅｒｉの活性成分は、高活性及び低毒性なので医療に安全に用いることができる。
本発明は、また、上記Ａｎｉｂａ  ｇａｒｄｎｅｒｉから単離精製された活性物質の構造解析をすることにより解明された構造を有する新規化合物にも関する。
（健康食品）
本発明の「健康食品」は、Ａｎｉｂａ  ｇａｒｄｎｅｒｉ、それらの抽出物もしくは分画物、またはこれらに含有される抗アレルギー作用または活性酸素産生抑制作用を有する化合物もしくはその誘導体、例えば上記で説明した化合物（以下、場合により、本発明の活性成分と記す）を有効成分とするエキス剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、錠剤、液剤、浸剤、煎剤、トローチ剤、流エキス剤等の形態であってもよい。これらは当該分野で知られている方法により製剤化することができる。これらの製剤の形態の健康食品は、下記で医薬組成物について列挙した補助剤を含有することができる。
また、本発明の健康食品は、一般加工食品等の食品に、本発明の活性成分を添加した食品、いわゆる機能性食品であってもよい。そのような食品としては、例えば、上記本発明の活性成分を添加した飴、ガム、ゼリー、ビスケット、クッキー、煎餅、パン、麺、魚肉・畜肉練製品、茶、清涼飲料、コーヒー飲料、乳飲料、乳清飲料、乳酸菌飲料、ヨーグルト、アイスクリーム、プリン等が挙げられる。さらに、本発明の健康食品は、前記Ａｎｉｂａ  ｇａｒｄｎｅｒｉ及びその他の材料を飲用アルコールに漬けた健康酒をも含む。また、Ａｎｉｂａ  ｇａｒｄｎｅｒｉを生、乾燥、また加熱した状態で含む健康食品も含まれる。
そのような機能性食品である場合は、各々の食品原料に上記本発明の活性成分の所要量を添加すること以外は、その加工食品の通常の製造方法により製造することができる。この場合、本発明の活性成分の配合量は、添加する食品により異なるが、乾燥重量として例えば０．００１〜２０重量％、好ましくは０．０１〜１０重量％である。また、Ａｎｉｂａ  ｇａｒｄｎｅｒｉの抽出物または分画物として配合する場合の配合量は、例えば０．００１〜５重量％、好ましくは０．０１〜０．１重量％である。また、化合物もしくはその誘導体として配合する場合は、例えば０．００１〜１０重量％、好ましくは０．０１〜５重量％である。
本発明の健康食品が健康茶の形態で提供される場合は、半乾燥または乾燥Ａｎｉｂａ  ｇａｒｄｎｅｒｉを、長さ５ｃｍ以下、好ましくは２ｃｍ以下の大きさに切断したもの、または粉末化したものである。この場合、緑茶、紅茶、ウーロン茶、プーアール茶、ハトムギ茶、ドクダミ茶、クワ茶、ムギ茶、ハブ茶等の他の茶葉、健康茶またはその他の材料の一種類またはそれ以上が配合されていてもよい。
（医薬組成物）
本発明の「医薬組成物」は、有効成分として、Ａｎｉｂａ  ｇａｒｄｎｅｒｉ、それらの抽出物もしくは分画物、またはこれらに含有される抗アレルギー作用または活性酸素産生抑制作用を有する化合物もしくはその誘導体、例えば上記で説明した化合物を含む。剤形は特に限定されないが、例えばエキス剤、カプセル剤、顆粒剤、溶液、乳濁液、懸濁液、散剤、錠剤、液剤、浸剤、煎剤、トローチ剤、流エキス剤、点眼剤、点鼻液、軟膏、クリーム、ローション剤、注射剤、座薬等であり得る。本発明の医薬組成物へのＡｎｉｂａ  ｇａｒｄｎｅｒｉまたはそれらの抽出物もしくは分画物、またはその活性成分もしくはその誘導体の配合量は剤形により異なる。例えば、Ａｎｉｂａ  ｇａｒｄｎｅｒｉの抽出物または分画物として配合する場合の配合量は、例えば０．００１〜５重量％、好ましくは０．０１〜０．１重量％である。また、化合物もしくはその誘導体として配合する場合は、例えば０．００１〜１０重量％、好ましくは０．０１〜５重量％である。
これらの製剤は、常法に従って主薬に賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、安定剤、矯味矯臭剤、溶解補助剤、懸濁剤、コーティング剤、希釈剤などの医薬の製剤技術分野において通常使用し得る既知の補助剤を用いて製剤化される。
投与量は、患者の年齢、体重、状態及び投与経路によるが、例えば成人に経口的に投与する場合の投与量は、例えば、一日に１〜５回、一回当り有効成分量が約１０ｍｇから約１０００ｍｇとなる量である。
本発明の化合物を含有する医薬用組成物は、通常、常法に従って調製され、目的に適する形態で製剤化される。医薬品組成物は、本発明の化合物と、医薬の製剤技術分野で使用し得るとして知られている補助剤を含有し得る。
固形の製剤は、例えば、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、糖衣錠等であり、有効成分としての本発明の化合物と、希釈剤（例えば乳糖、デキストロース、ショ糖、セルロース、コーンスターチ、馬鈴薯澱粉等）、滑沢剤（例えばシリカ、タルク、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ポリエチレングリコール等）、結合剤（例えば澱粉類、アラビアゴム、ゼラチン、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドン等）、離散剤（例えば澱粉、アルギン酸、アルギン酸塩等）、飽和剤、着色料、甘味料、湿潤剤（例えばレシチン、ポリソルベート、硫酸ラウリル塩等）等を含有することができる。これらは、既知の方法例えば混合、粒状化、錠剤化、糖衣化等の方法により製剤化することができる。
液状の製剤は、例えばシロップ、溶液、乳濁液及び懸濁液の形態とすることができる。
懸濁液及び乳濁液は、担体として、例えば天然ゴム、寒天、アルギン酸ナトリウム、ペクチン、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ポリビニルアルコール等を含有することができる。
筋肉内注射用懸濁液又は溶液は、薬理学的に許容され得る担体として、例えば滅菌水、オリーブ油、オレイン酸エチル、グリコール類、例えばプロピレングリコール、及び必要に応じて適量のリドカイン塩酸塩を含有することができる。静脈注射もしくは注入用溶液は、担体として例えば滅菌水を含有することができるが、好ましくは滅菌等張食塩水溶液の形である。
座薬は、薬理学的に許容され得る担体として、例えばココアバター、ポリエチレングリコール、レシチン等を含有することができる。
本発明の健康食品及び医薬組成物は、アレルギー症状の緩和または活性酸素に起因する疾病の予防または治療に使用されるものである。アレルギー症状としては、特に花粉症、喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎等の即時型アレルギーのＩ型に分類されるアレルギー症状が挙げられる。活性酸素に起因する疾病としては、例えば、動脈硬化、悪性腫瘍、虚血性疾患、炎症、パーキンソン病及びアルツハイマー症等の神経変性疾患、クローン病、潰瘍性大腸炎等が挙げられる。なお、本発明の健康食品及び医薬組成物は、さらに、抗アレルギー作用を有する他の生薬または化合物を含んでいてもよく、さらに、抗アレルギー作用以外の作用を有する成分を含んでいてもよい。
（化粧料）
本発明は、有効成分として、Ａｎｉｂａ  ｇａｒｄｎｅｒｉ、それらの抽出物もしくは分画物、またはこれらに含有される抗アレルギー作用または活性酸素産生抑制作用を有する化合物もしくはその誘導体、例えば上記で説明した化合物を含有する化粧料にも関する。
本発明の化粧料としては、例えば、洗顔料、クリーム、乳液等の顔、手足用の基礎化粧料；整髪料、ヘアトリートメント等の頭髪化粧料；ファンデーション、白粉、ほほ紅、アイシャドウ、口紅等のメーキャップ化粧料が挙げられる。
本発明の化粧料中における有効成分の配合量は、０．０００１〜１０重量％、特に好ましくは０．００１〜１．０重量％であり、これに、目的に応じて通常使用される他の化粧料成分を配合することもできる。このような化粧料成分としては、例えば油脂、ロウ、炭化水素、脂肪酸、アルコール、エステル、ラノリン、シリコーン油等の油剤原料、白色顔料、着色顔料、体質顔料等の粉体原料、金属石ケン、界面活性剤、多価アルコール、水溶性高分子、水、酸化防止剤、紫外線吸収剤、防腐剤、色素、香料、保湿剤等の他の化粧料用有効成分等が挙げられる。
実施例
以下、本発明を実施例によりさらに詳細に説明する。しかしながら、これらは本発明を限定するものではない。なお、実施例中の化合物の番号は、上記で具体的に列挙したＡｎｉｂａ  ｇａｒｄｎｅｒｉ成分の構造式で表される化合物の番号に対応する。なお、下記実施例において、抗アレルギー作用はマスト細胞のモデルであるラット好塩基球白血病細胞（ＲＢＬ−２Ｈ３）からの、ロイコトリエン遊離抑制試験及びβ−ヘキソサミニダーゼ遊離抑制試験を指標に検討した。
実施例１：
Ａｎｉｂａ  ｇａｒｄｎｅｒｉ地上部２．１ｋｇを粉砕した後、超音波をかけながら、２０リットルのエタノールによる抽出を行った。抽出液をろ過し、ろ液を減圧濃縮して、１１５ｇの粗エタノール抽出物を得た。この粗エタノール抽出物をＨＰ−２０カラムクロマトグラフィーに付し、４０％、６０％、８０％のメタノール水溶液、１００％メタノール及び及びアセトンをこの順に用いて分画し、濃縮して、画分１〜５を得た。１００％メタノール画分である画分４（４７．２ｇ）を、シリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し、ｎ−ヘキサン・酢酸エチル混合物（ｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝５０：１、１０：１、１：１）、クロロホルム、クロロホルム・メタノール混合物（クロロホルム：メタノール＝２０：１、１０：１、１：１）をこの順で用いて溶出し、分画し、濃縮して、画分６〜２０を得た。溶媒を留去し、画分６，９，１１及び１２をさらに精製した。
逆相高速液体クロマトグラフィー（ｒｐＨＰＬＣ）用カラム
カラムＡ：ＳＨＩＳＥＩＤＯ  ＣＡＰＣＥＬＬ  ＰＡＫ  Ｐｈ  ２０φ×２５０ｍｍ
カラムＢ：ＳＨＩＳＥＩＤＯ  ＣＡＰＣＥＬＬ  ＰＡＫ  Ｐｈ  １０φ×２５０ｍｍ
カラムＣ：ＳＨＩＳＥＩＤＯ  ＣＡＰＣＥＬＬ  ＰＡＫ  Ｃ１８  ２０φ×２５０ｍｍ
画分６（１３．５ｇ）をシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し、ｎ−ヘキサン・酢酸エチル混合物（ｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝４０：１、１０：１、５：１、酢酸エチル・メタノール混合物を用いて、画分２１〜２７に分画した。画分２４（２．２９ｇ）をｒｐＨＰＬＣ（カラムＡ，溶出液：６５％アセトニトリル）により精製し、化合物（１）（１０１ｍｇ）を得た。画分２５（７９８ｍｇ）をｒｐＨＰＬＣ（カラムＡ，溶出液：８０％メタノール）により画分２８〜３２に分画した後、画分２８をｒｐＨＰＬＣ（カラムＣ，溶出液：６５％アセトニトリル）により精製し、化合物（２）（６ｍｇ）を得た。画分２６（１．９５ｇ）はｒｐＨＰＬＣ（カラムＣ，溶出液：６５％アセトニトリル）により画分３３〜３５に分画した。画分３６（８０１ｍｇ）をｒｐＨＰＬＣ（カラムＢ，溶出液：７５％メタノール）により精製し、化合物（３）（６７０ｍｇ）を得た。画分３７（４７ｍｇ）をｒｐＨＰＬＣ（カラムＢ，溶出液：５５％アセトニトリル）により精製し、化合物（４）（１４ｍｇ）を得た。画分４０（４３ｍｇ）をｒｐＨＰＬＣ（カラムＢ，溶出液：５５％アセトニトリル）により精製し、化合物（５）（７ｍｇ）を得た。画分４１をｒｐＨＰＬＣ（カラムＢ，溶出液５５％アセトニトリル）により精製し、化合物（６）（１５ｍｇ）及び化合物（７）（７ｍｇ）を得た。画分４２をｒｐＨＰＬＣ（カラムＢ，溶出液５５％アセトニトリル）により精製し、化合物（８）（５ｍｇ）及び化合物（９）（１２ｍｇ）を得た。
画分９（３．８ｇ）をｒｐＨＰＬＣ（カラムＣ、５５％メタノール）により画分４４〜４９に分画し、さらに画分４４（１０９ｍｇ）をｒｐＨＰＬＣ（カラムＢ、５５％メタノール）により画分５０〜５２に分画した後、画分５０（７５ｍｇ）をｒｐＨＰＬＣ（カラムＢ、４５％アセトニトリル）により精製し、化合物（１０）（２１ｍｇ）を得た。画分５１（７５ｍｇ）をｒｐＨＰＬＣ（カラムＢ、４５％アセトニトリル）により精製し、化合物（１０）（１ｍｇ）及び化合物（１１）（２ｍｇ）を得た。画分４５（４４ｍｇ）をｒｐＨＰＬＣ（カラムＢ、６５％メタノール）により画分５３〜５４に分画した後、画分５３（２６ｍｇ）をｒｐＨＰＬＣ（カラムＢ、４５％アセトニトリル）により精製し、化合物（１０）（１ｍｇ）及び（１２）（１５ｍｇ）を得た。画分４６（２１ｍｇ）をｒｐＨＰＬＣ（カラムＢ、４５％アセトニトリル）により精製し、化合物（１０）（１ｍｇ）及び（１３）（２１ｍｇ）を得た。
画分１１（２．５ｇ）をｒｐＨＰＬＣ（カラムＣ、６０％メタノール）により画分５５〜６１に分画し、さらに画分５６（３３４ｍｇ）をｒｐＨＰＬＣ（カラムＡ、６０％アセトニトリル）により精製し、化合物（１４）（２１２ｍｇ）を得るとともに画分６２〜６４に分画した。画分６２（６０ｍｇ）をｒｐＨＰＬＣ（カラムＢ、６０％メタノール）により精製し、化合物（１５）（３５ｍｇ）を得た。画分５８（７２１ｍｇ）をｒｐＨＰＬＣ（カラムＡ，４５％アセトニトリル）により精製し、化合物（１６）（４５０ｍｇ）を得た。
画分１２（１．７ｇ）をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにかけ、ｎ−ヘキサンと酢酸エチルの混合溶媒（ｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝３：１、２：１、１：１）、酢酸エチル、メタノールを用いて順次溶出し、画分６５〜６９に分画した。画分６６（１９１ｍｇ）をｒｐＨＰＬＣ（カラムＣ、６０％メタノール）により精製し、化合物（１４）（３３ｍｇ）、化合物（１７）（１８ｍｇ）、化合物（１６）（６６ｍｇ）及び化合物（１８）（１５ｍｇ）を得た。画分６７（４６７ｍｇ）をｒｐＨＰＬＣ（カラムＣ、５５％メタノール）により精製し化合物（１９）（１６ｍｇ）及びＸＸ（２９３ｍｇ）と画分７０を得た。画分７０をｒｐＨＰＬＣ（カラムＢ、４５％アセトニトリル）により精製し、化合物（１５）（１９ｍｇ）を得た。画分６８（８６０ｍｇ）をｒｐＨＰＬＣ（カラムＣ、６５％アセトニトリル）により精製し、化合物（２０）（３３９ｍｇ）、化合物（２１）（２８ｍｇ）及び化合物（２２）（６０ｍｇ）を得た。
得られた化合物のうち、化合物（３）、（６）、（７）、（８）、（９）、（１５）及び（１９）は新規化合物である。
各新規化合物のデータを下記に示す。
化合物（３）
2003073870.tif 000007
非晶質粉末
ＨＲ−ＥＩＭＳ  ｍ／ｚ；３６０．１５７３（Ｃ２０Ｈ２４Ｏ６の計算値：３６０．１５７３）
［α］Ｄ＋３９．３°（ｃ＝１．０，ＭｅＯＨ）
ＵＶ  λｍａｘ（ＭｅＯＨ）２０５ｎｍ（ε２４８００），２３５ｎｍ（ε５５００），２８６ｎｍ（ε４１００）
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，δ  ｉｎ  ＣＤＣｌ３）；０．９４（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，Ｈ−９），１．７３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１４．５，８．５Ｈｚ，Ｈ−２’ａ），１．９１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１４．５，２．５Ｈｚ，Ｈ−２’ｂ），２．２１（３Ｈ，ｓ，Ｈ−５’），２．３２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１４．０，８．５Ｈｚ，Ｈ−７’ａ），２．４２（１Ｈ，ｄｑ，Ｊ＝１０．５，７．０Ｈｚ，Ｈ−８），２．７０（ｄｄ，Ｊ＝１４，６．０Ｈｚ，Ｈ−７’ｂ），３．４２（３Ｈ，ｓ，Ｈ−２’），３．９９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．５，２．５Ｈｚ，Ｈ−３’），４．８２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０．５Ｈｚ，Ｈ−７），５．１５（２Ｈ，ｍ，Ｈ−９’），５．６０（１Ｈ，ｍ，Ｈ−８’），６．７８（３Ｈ，ｍ，Ｈ−２，５，６）
１３Ｃ−ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，δ  ｉｎ  ＣＤＣｌ３）；９．２（Ｃ−９），２５．７（Ｃ−５’），３２．４（Ｃ−２’），３９．４（Ｃ−７’），４６．３（Ｃ−８），４８．５（Ｃ−１’），５８．１（Ｃ−２”），８３．３（Ｃ−３’），８４．５（Ｃ−７），１０１．３（Ｃ−１”），１０６．５（Ｃ−２），１０８．２（Ｃ−５），１１９．９（Ｃ−９’），１２０．６（Ｃ−６），１３１．３（Ｃ−１），１３３．０（Ｃ−８’），１４８．１（Ｃ−３，４），１７８．７（Ｃ−６’），２１０．０（Ｃ−４’）
化合物（６）
2003073870.tif 000008
油状物質
ＨＲ−ＥＩＭＳ  ｍ／ｚ；３４４．１６３１７（Ｃ２０Ｈ２４Ｏ５の計算値：３４４．１６２３５）
［α］Ｄ＋１１．１°（ｃ＝１．３９，ＣＨＣｌ３）
ＵＶ  λｍａｘ（ＭｅＯＨ）２０６ｎｍ（ε２６６００），２３７ｎｍ（ε６６００），２８７ｎｍ（ε４９００）
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，δ  ｉｎ  ＣＤＣｌ３）；０．９２（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，Ｈ−９），１．５４（Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１０．５，１２．６Ｈｚ，Ｈ−６’ａ），２．０８（Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝５．１２，１２．６Ｈｚ，Ｈ−６’ｂ），２．２９（Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．８，１４．３Ｈｚ，Ｈ−７’ａ），２．４２（Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ，Ｈ−８），２．４４（Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．１，１４．３Ｈｚ，Ｈ−７’ｂ），２．５４（Ｈ，ｓ，−ＯＨ），３．４１（３Ｈ，ｓ，Ｈ−２”），４．０４（Ｈ，ｍ，Ｈ−５’），４．５３（Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ，Ｈ−７），５．１０（２Ｈ，ｍ，Ｈ−９’），５．７１（Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０．３Ｈｚ，Ｈ−３’），５．９０（Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０．３Ｈｚ，Ｈ−４’），５．９４（２Ｈ，ｓ−Ｈ−１”），５．９９（Ｈ，ｍ，Ｈ−８’，６．７５（Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，Ｈ−５），６．８１（Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１．７，８．１Ｈｚ，Ｈ−６），７．０１（Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．７，Ｈ−２）
１３Ｃ−ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，δ  ｉｎ  ＣＤＣｌ３）；９．９（Ｃ−９），３０．８（Ｃ−６’），３８．６（Ｃ−７’），４９．７（Ｃ−８），５０．３（Ｃ−１’），５６．０（Ｃ−２”），７３．６（Ｃ−５’），８７．５（Ｃ−７），１０１．０（Ｃ−１”），１０３．４（Ｃ−２’），１０７．４（Ｃ−２），１０７．８（Ｃ−５），１１７．５（Ｃ−９’），１２０．９（Ｃ−６），１２９．３８（Ｃ−３’），１２９．４３（Ｃ−４’），１３５．３５（Ｃ−８’），１３５．４３（Ｃ−１），１４７．３（Ｃ−４），１４７．９（Ｃ−３）
化合物（７）
2003073870.tif 000009
油状物質
ＨＲ−ＥＩＭＳ  ｍ／ｚ；３５８．１７７７８（Ｃ２ＩＨ２６Ｏ５の計算値：３５８．１７８００）
［α］Ｄ−１２．１°（ｃ＝０．６，ＣＨＣｌ３）
ＵＶ  λｍａｘ（ＭｅＯＨ）２０５ｎｍ（ε２０４００），２３７ｎｍ（ε３３００），２８７ｎｍ（ε２６００）
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，δ  ｉｎ  ＣＤＣｌ３）；０．８８（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，Ｈ−９），１．５３（Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１０．７，１２．４Ｈｚ，Ｈ−６’ａ），２．０６（Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝５．０，１２．４Ｈｚ，Ｈ−６’ｂ），２．２６（Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．８，１４．６Ｈｚ，Ｈ−７’ａ），２．４１（Ｈ，ｍ，Ｈ−７’ｂ），２．４６（Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝６．８，１０．０Ｈｚ，Ｈ−８），３．４１（３Ｈ，ｓ，Ｈ−２”），３．４３（３Ｈ，ｓ，Ｈ−３”），４．０２（Ｈ，ｍ，Ｈ−５’），４．５３（Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ，Ｈ−７），５．０７（２Ｈ，ｍ，Ｈ−９’），５．９９（Ｈ，ｍ，Ｈ−８’），６．０７（Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０．３Ｈｚ，Ｈ−３’），５．９３（Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０．３Ｈｚ），５．９５（２Ｈ，ｓ，Ｈ−１”），６．７６（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．７Ｈｚ，Ｈ−５，６），６．８８（Ｈ，ｓ，Ｈ−２）
１３Ｃ−ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，δ  ｉｎ  ＣＤＣｌ３）；１０．１（Ｃ−９），３０．９（Ｃ−６’），３８．５（Ｃ−７’），４８．９（Ｃ−３”），４９．１２（Ｃ−８），５０．８（Ｃ−１’），５６．０（Ｃ−２”），７３．６（Ｃ−５’），８７．７８（Ｃ−７），１０１．０（Ｃ−１”），１０５．７（Ｃ−２’），１０７．７（Ｃ−２），１０７．８（Ｃ−５），１１７．１（Ｃ−９’），１２１．５（Ｃ−６），１２３．５（Ｃ−３’），１３０．３（Ｃ−４’），１３５．４（Ｃ−１），１３５．８（Ｃ−８’），１４７．３（Ｃ−４），１４７．９（Ｃ−３）
化合物（８）
2003073870.tif 000010
油状物質
ＨＲ−ＥＩＭＳ  ｍ／ｚ；３７４．１７１８５（Ｃ２１Ｈ２６Ｏ６の計算値：３７４．１７２９１）
「α］Ｄ＋１０．４８°（ｃ＝０．２７，ＣＨＣｌ３）
ＵＶ  λｍａｘ（ＭｅＯＨ）２０６ｎｍ（ε３０３００），２３３ｎｍ（ε１２６００），２８３ｎｍ（ε５３００）
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，δ  ｉｎ  ＣＤＣｌ３）；１．２６（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，Ｈ−９），１．６４（Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．８，１２．８Ｈｚ，Ｈ−７’ａ），１．９０（Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．０，７．０Ｈｚ，Ｈ−８），１．９８（Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝４．９，１２．８Ｈｚ，Ｈ−７’ｂ），２．０８（Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．５，１５．４Ｈｚ，Ｈ−６’ａ），２．６０（Ｈ，ｍ，Ｈ−６’ｂ），３．３３（３Ｈ，ｓ，Ｈ−２”），３．５４（Ｈ，ｓ，−ＯＨ），３．６６（３Ｈ，ｓ，Ｈ−３”），４．０１（Ｈ，ｍ，Ｈ−５’），４．７２（Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，Ｈ−７），４．９１（Ｈ，ｂｒ，ｓ，Ｈ−４’），５．１０（Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０．３Ｈｚ，Ｈ−９’ａ），５．１５（Ｈ，ｄ，Ｊ＝１７．１Ｈｚ，Ｈ−９’ｂ），５．８５（Ｈ，ｍ，Ｈ−８’），５．９３（２Ｈ，ｓ，Ｈ−１”），６．７２（Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，Ｈ−５），６．８３（Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１．７，８．７Ｈｚ，Ｈ−６），６．８８（Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．７Ｈｚ，Ｈ−２）
１３Ｃ−ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，δ  ｉｎ  ＣＤＣｌ３）；１６．７（Ｃ−９），３２．９（Ｃ−６’），３７．８（Ｃ−７’），４９．７（Ｃ−１’），４９．９（Ｃ−８），５５．１（Ｃ−３”），５５．６（Ｃ−２”），７３．６（Ｃ−５’），８７．１（Ｃ−７），９７．５（Ｃ−４’），１００．９（Ｃ−１”），１０３．５（Ｃ−２’），１０６．４（Ｃ−２），１０８．０（Ｃ−５），１１７．５（Ｃ−９’），１１９．２（Ｃ−６），１３５．５（Ｃ−８’），１３６．０（Ｃ−１），１４６．８（Ｃ−４），１４７．５（Ｃ−３），１５２．９（Ｃ−３’）
化合物（９）
2003073870.tif 000011
非晶質粉末
ＨＲ−ＥＩＭＳ  ｍ／ｚ；３７４．１７２６３（Ｃ２１Ｈ２６Ｏ６の計算値：３７４．１７２９１）
［α］Ｄ−８．６°（ｃ＝１．０５，ＣＨＣｌ３）
ＵＶ  λｍａｘ（ＭｅＯＨ）２０５ｎｍ（ε２４４００），２３６ｎｍ（ε４８００），２８６ｎｍ（ε４０００）
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，δ  ｉｎ  ＣＤＣｌ３）；０．８９（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，Ｈ−９），１．６５（Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１３．４，１３．０Ｈｚ，Ｈ−６’ａ），２．１４（Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝５．９，１３．４Ｈｚ，Ｈ−６’ｂ），２．５７（４Ｈ，ｍ，Ｈ−８，３’ａ，７’），３．０６（Ｈ，ｄ，Ｊ＝１４．１Ｈｚ，Ｈ−３’ｂ），３．３０（３Ｈ，ｓ，Ｈ−３”），３．４８（３Ｈ，ｓ，Ｈ−２”），４．１４（Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝５．９，１３．０Ｈｚ，Ｈ−５’），４．４２（Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．８Ｈｚ，Ｈ−７），５．１７（Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ，Ｈ−９’ａ），５．２５（Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６．８Ｈｚ，Ｈ−９’ｂ），５．９５（２Ｈ，ｓ，Ｈ−１”），６．０９（Ｈ，ｍ，Ｈ−８’），６．７３（Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．２２Ｈｚ，Ｈ−２），６．７４（Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．２２Ｈｚ，Ｈ−５），６．８３（Ｈ，ｓ，Ｈ−６）
１３Ｃ−ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，δ  ｉｎ  ＣＤＣｌ３）；１０．０（Ｃ−９），３３．３（Ｃ−６’），３８．７（Ｃ−７’），４４．２（Ｃ−３’），４８．８（Ｃ−８），４９．０（Ｃ−３”），５０．８（Ｃ−１’），５８．２（２”），８０．３（Ｃ−５’），８６．８（Ｃ−７），１０１．１（Ｃ−１”），１０７．８１（Ｃ−６），１０７／８３（Ｃ−５），１１０．５（Ｃ−２’），１１８．４（Ｃ−９’），１２１．９（Ｃ−２），１３４．３（Ｃ−１），１３４．９（Ｃ−８’），１４７．４（Ｃ−４），１４７．９（Ｃ−３），２０４．１（Ｃ−４’）
化合物（１５）
2003073870.tif 000012
非晶質粉末
ＨＲ−ＥＩＭＳ  ｍ／ｚ；３８８．１８８８（Ｃ２２Ｈ２８Ｏ６の計算値：３８８．１８８６）
［α］Ｄ−４３．９°（ｃ＝０．７，ＭｅＯＨ）
ＵＶ  λｍａｘ（ＭｅＯＨ）２０５ｎｍ（ε１８２００），２２９ｎｍ（ε１７０００），２７３ｎｍ（ε１５０００）
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，δ  ｉｎ  ＣＤＣｌ３）；１．１８（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，Ｈ−９），２．２５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１３．０，５．５Ｈｚ，Ｈ−６’ａ），２．４３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１４．０，９．０Ｈｚ，Ｈ−７’ａ），２．８５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１４．０，６．０Ｈｚ，Ｈ−７’ｂ），２．８６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１３．０，１０．０Ｈｚ，Ｈ−６’ｂ），３．４２（３Ｈ，ｓ，Ｈ−４”），３．６３（３Ｈ，ｓ，Ｈ−３”），３．９０（３Ｈ，ｓ，Ｈ−１”），３．９４（３Ｈ，ｓ，Ｈ−２”），４．１１（１Ｈ，ｑ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，Ｈ−８），４．４０（１Ｈ，ｍ，Ｈ−５’），５．１７（２Ｈ，ｍ，Ｈ−９’），５．７２（１Ｈ，ｍ，Ｈ−８’），５．８０（１Ｈ，ｂｒｓ，Ｈ−４’），６．８８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，Ｈ−５），７．４５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，Ｈ−２），７．５９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．０，２．０Ｈｚ，Ｈ−６）
１３Ｃ−ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，δ  ｉｎ  ＣＤＣｌ３）；１２．６（Ｃ−９），３４．７（Ｃ−６’），３９．１（Ｃ−７’），４２．５（Ｃ−８），５０．５（Ｃ−１’），５５．１（Ｃ−３”），５５．８（Ｃ−４”），５５．９（Ｃ−１”），５６．０（Ｃ−２”），７２．９（Ｃ−５’），１０９．９（Ｃ−５），１１０．９（Ｃ−２），１１４．０（Ｃ−４’），１１８．７（Ｃ−９’），１２２．９（Ｃ−６），１３０．０（Ｃ−１），１３３．０（Ｃ−８’），１４８．９（Ｃ−３），１５２．９（Ｃ−４）１５０．０（Ｃ−３’），１９６．６（Ｃ−２’），２０２．４（Ｃ−７）
化合物（１９）
2003073870.tif 000013
非晶質粉末
ＨＲ−ＥＩＭＳ  ｍ／ｚ；３７２．１５８７（Ｃ２１Ｈ２４Ｏ６の計算値：３７２．１５７２）
［α］Ｄ−６０．３°（ｃ＝１．４，ＭｅＯＨ）
ＵＶ  λｍａｘ（ＭｅＯＨ）２０５ｎｍ（ε１６５００），２２９ｎｍ（ε１４２００），２７５ｎｍ（ε１６８００）
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，δ  ｉｎ  ＣＤＣｌ３）；１．２３（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，Ｈ−９），２．４８（２Ｈ，ｍ，Ｈ−７’），２．６５，３．７０（ｅａｃｈ  ２Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６．５Ｈｚ，Ｈ−６’），３．７７（３Ｈ，ｓ，Ｈ−３”），３．９０（３Ｈ，ｓ，Ｈ−１”），３．９５（３Ｈ，ｓ，Ｈ−２”），４．１２（１Ｈ，ｑ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，Ｈ−８），５．１５（２Ｈ，ｍ，Ｈ−９’），５．６０（１Ｈ，ｍ，Ｈ−８’），６．０５（１Ｈ，ｂｒｓ，Ｈ−４’），６．９０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，Ｈ−５），７．４２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，Ｈ−２），７．５９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．０，２．０Ｈｚ，Ｈ−６）
１３Ｃ−ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，δ  ｉｎ  ＣＤＣｌ３）；１２．４（Ｃ−９），４３．２（Ｃ−７’），４４．４（Ｃ−８），４５．２（Ｃ−６’），５２．０（Ｃ−１’），５５．９（Ｃ−２”），５６．１（Ｃ−１”），５６．４（Ｃ−３”），１１０．１（Ｃ−５），１１０．８（Ｃ−２），１１２．３（Ｃ−４’），１２０．１（Ｃ−９’），１２３．１（Ｃ−６），１２９．２（Ｃ−１），１３１．４（Ｃ−８’），１４９．１（Ｃ−３），１５３．５（Ｃ−４），１６１．４（Ｃ−３’），１９６．４（Ｃ−２’），１９７．０（Ｃ−５’），２０２．５（Ｃ−７）
実施例２：ロイコトリエンの放出抑制試験
抗ＤＮＰ  ＩｇＥ（抗体）を有する細胞（ＲＢＬ（ｒａｔ  ｂａｓｏｐｈｉｌｉｃ  ｌｅｕｋｅｍｉａ）−２Ｈ３）の入った２４穴プレートに、実施例１で得られた化合物のうち、化合物（１６）及び化合物（２０）を各々２０ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ／ＤＭＥＭに溶解して表１に示す濃度で調製した溶液１８０μｌを入れ、３７℃で３０分間インキュベートした後、ＤＮＰ−ＢＳＡ（抗原）２０μｌ（終濃度：１μｇ／ｍｌ）を加えた。これを再び３７℃で３０分間インキュベーションした後、ロイコトリエンを測定した。ロイコトリエンの定量は、Ｌｅｕｋｏｔｒｉｅｎｅ  Ｃ４ＥＩＡ  Ｋｉｔ（Ｃａｙｍａｎ社製）を用いて次のように行った。
ロイコトリエンＥＬＩＳＡプレートをＬＴ  ＥＩＡ  ｗａｓｈ  ｂｕｆｆｅｒ（ロイコトリエン酵素免疫アッセー洗浄バッファー）で２回洗浄した後、各ウェルに上記試料溶液をＰＢＳで三倍希釈した溶液またはＬＴ標準溶液５０μｌとＬＴＣ４ＡｃｈＥ（ロイコトリエンＣ４アセチルコリン酵素）５０μｌを加えて１８時間振盪した。その後、ＬＴ  ＥＩＡ洗浄バッファーで５回洗浄した後、Ｅｌｌｍａｎ’ｓ試薬と一時間反応させた。ＡｃｈＥで分解されたコリンとＥｌｌｍａｎ’ｓ試薬との反応によって生成した物質（黄色）を吸光度４１５ｎｍで測定した。
濃度既知の標準溶液を用いて検量線を作成し、試料溶液中のロイコトリエン濃度を求めた。
結果を下記の表１に示す。
2003073870.tif 000014
表１より、化合物（１６）及び（２０）が高いロイコトリエン放出抑制効果を有することが明らかである。
実施例３：ロイコトリエンの放出抑制試験
化合物（１６）及び化合物（２０）の代わりに、化合物（１）及び化合物（４）を２０ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ／ＤＭＥＭに溶解して終濃度を表２及び３に示す濃度で調製した溶液を用いること、並びに、ＤＮＰ−ＢＳＡ（抗原）を終濃度：６２．５ｎｇ／ｍｌで用いること以外は、実施例２と同様の方法により、ロイコトリエンを測定した。結果を下記の表２及び３に示す。
2003073870.tif 000015
2003073870.tif 000016
表２及び３より、化合物（１）及び（４）が高いロイコトリエン放出抑制効果を有することが明らかである。
実施例４：β−ヘキソサミニダーゼ遊離抑制活性試験
抗ＩｇＥ（抗体）を有する細胞（ＲＢＬ（ｒａｔ  ｂａｓｏｐｈｉｌｉｃ  ｌｅｕｋｅｍｉａ）−２Ｈ３）の入った２４穴プレートに，Ｓｈｉｒａｇａｎｉａｎ  ｂｕｆｆｅｒ（＋）を１６０μｌ入れ、３７℃で１０分間インキュベートした後、実施例１で得られた化合物のうち，化合物（１）及び化合物（４）を各々Ｓｈｉｒａｇａｎｉａｎ  ｂｕｆｆｅｒ（−）に溶解して終濃度を表４に示す濃度で調整した溶液２０μｌを入れ，再び３７℃で１０分間インキュベートした。そこにＤＮＰ−ＢＳＡ（抗原）２０μｌ（終濃度：１０μｇ／ｍｌ）を添加後，更に３７℃で１０分間インキュベートし，氷上で１０分間冷やして反応を停止した。９６穴プレートに，この上清５０μｌと，０．１Ｍのｃｉｔｒａｔｅ  ｂｕｆｆｅｒ（ｐＨ４．５）に溶解した基質（１ｍＭ  ｐ−ｎｉｔｏｒｏｐｈｅｎｙｌ−Ｎ−ａｃｅｔｙｌ−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｉｄｅ）５０μｌを添加し，３７℃で１時間インキュベートを行った後反応停止薬（０．１Ｍ  Ｎａ２ＣＯ３／ＮａＨＣＯ３）２００μｌを加え，その吸光度を４０５ｎｍで測定し、遊離したｐ−ニトロフェノールの量からβ−ヘキソサミニダーゼ遊離抑制率を計算した。結果を表４に示す。
試薬としては下記のものを用いた：
０．１Ｍ  Ｃｉｔｒａｔｅ  Ｂｕｆｆｅｒ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ  ｐＨ４．８（Ａｌｄｒｉｃｈ社）
Ｓｏｄｉｕｍ  Ｃａｒｂｏｎａｔｅ  Ａｎｈｙｄｒｏｕｓ（ＩＣＮ社）
Ｂｏｖｉｎｅ  Ｓｅｒｕｍ  Ａｌｂｕｍｉｎ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）
Ｄ−（＋）−Ｇｌｕｃｏｓｅ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ（４５％），Ｃａｌｃｉｕｍ  Ｃｈｌｏｒｉｄｅ，Ｍａｇｎｅｓｉｕｍ  Ｃｈｌｏｒｉｄｅ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉ−Ｄｉｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｌ，ｐ−Ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｌ−Ｎ−Ａｃｅｔｙｌ−β−Ｄ−Ｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｉｄｅ，ＰＩＰＥＳ，Ｐｏｔａｓｓｉｕｍ  Ｃｈｌｏｒｉｄｅ，Ｓｏｄｉｕｍ  Ｂｉｃａｒｂｏｎａｔｅ，Ｓｏｄｉｕｍ  Ｃｈｌｏｒｉｄｅ  ５Ｍ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ，Ｓｏｄｉｕｍ  Ｈｙｄｒｏｘｉｄｅ  １．０Ｎ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ，Ｔｅｒｆｅｎａｄｉｎｅ（ＳＩＧＭＡ社）
Ｓｉｇａｒａｎｉａｎ  ｂｕｆｆｅｒ（−）の組成は下記のとおりである：
１１９ｍＭ  ＮａＣｌ，５ｍＭ  ＫＣｌ，０．４ｍＭ  ＭｇＣｌ２．２５ｍＭ  ｐｉｐｅｒａｚｉｎｅ−Ｎ，Ｎ’−ｂｉｓ（２−ｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）（ＰＩＰＥＳ），４０ｍＭ  ＮａＯＨ，ｐＨ７．２。
Ｓｉｇａｒａｎｉａｎ  ｂｕｆｆｅｒ（＋）の組成は下記のとおりである：
Ｓｉｇａｒａｎｉａｎ  ｂｕｆｆｅｒ（−）に５．６ｍＭグルコース、１ｍＭ  ＣａＣｌ２，０．１％ＢＳＡを加えたもの。
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実施例５：活性酸素産生抑制試験
上記化合物（１５）、（１６）、（２０）の２００ｍＭ  ＤＭＳＯ溶液を、ＨＢＳＳ（Ｈａｎｋｓ’  ｂａｌａｎｃｅｄ  ｓａｌｔ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ，日水製薬株式会社製）溶液で２５０μＭに調製した。抗ジニトロフェニル抗体（ＤＮＰ（モノクローナル抗体，ｍｏｕｓｅ，ＩｇＥ，ＳＩＧＭＡ製）付着処理をした細胞（ＲＢＬ−２Ｈ３）のＨＢＳＳ（Ｈａｎｋｓ’  ｂａｌａｎｃｅｄ  ｓａｌｔ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ）溶液（２ｘ１０６／ｍｌ）１８０μｌに、上記で調製した試料を各々２０μｌ添加し（最終濃度：２５μＭ）、室温で３０分間インキュベートした。
得られた懸濁液５０μｌを試験管に採取し、これにＨＢＳＳ１００μｌ及び２．５μＭのＭＣＬＡ（Ｓｕｐｅｒ  ｏｘｉｄｅ特異的検出試薬，２−Ｍｅｔｈｙｌ−６−［ｐ−ｎｉｔｒｏｘｙｐｈｅｎｏｌ］−３，７−ｄｉｈｙｄｒｏｉｍｉｄａｚｏ［１，２−ａ］ｐｙｒａｚｉｎｅ−３−ｏｎｅ，東京化成株式会社製）５０μｌを添加し、５分間静置した。その後、ルミノメーター（製品名：Ｌｕｍａｔ  ＬＢ９５０７，Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ製）で発光強度の測定（１０秒間隔）を開始し、値が安定しているのを確認してから、抗原ＤＮＰ−ＢＳＡ（ＤＮＰ−Ａｌｂｕｍｉｎ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ，Ｂｏｖｉｎｅ，ＣＡＬＢＩＯＣＨＥＭ製）を静かに加え、５分間測定した。対照として、本発明の化合物を添加しない以外は同じ方法で活性酸素を発生させ、発光強度を測定した。
化合物（１５）、（１６）及び（２０）について測定した、抗原添加直前の発光強度と抗原添加後の発光強度の最大値との差を、各々図１、図２及び図３のグラフに示した。これらのグラフに示した発光強度の変動値は、抗原による刺激を受けて発生する活性酸素の量と相関関係を有する。従って、培地のみを添加した場合の発光強度の変動値を０、化合物を添加せず抗原のみを添加した場合の発光強度の変動値を１００とした場合の発光強度の変動値の割合を活性酸素の抑制率と考えることができる。グラフより、化合物（１５）、（１６）及び（２０）のいずれも高い活性酸素産生抑制作用を有することが明らかである。
産業上の利用可能性
本発明により、アレルギー症状の緩和、活性酸素除去もしくは抑制、活性酸素に関連する疾病の予防及び治療、肌の老化防止または肌質改善に画期的な効果を奏する健康食品、医薬組成物及び化粧料が提供される。
【図面の簡単な説明】
第１図は、本発明の化合物の活性酸素産生抑制作用を示すグラフである。
第２図は、本発明の化合物の活性酸素産生抑制作用を示すグラフである。
第３図は、本発明の化合物の活性酸素産生抑制作用を示すグラフである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【国際調査報告】
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