【事件の表示】
　特願２００１−１９８８６５「ヘモグロビン類の測定方法」拒絶査定不服審判事件〔平成１５年　１月１５日出願公開、特開２００３−　１４７１４〕について、次のとおり審決する。
【結　論】
　本件審判の請求は、成り立たない。
【理　由】
第１　手続の経緯
　本件は、平成１３年６月２９日に出願された特許出願（２００１年特許願第１９８８６５号。以下、「本件出願」という。）につき、平成２３年７月４日付けで同年４月４日付けの手続補正についての補正却下の決定がなされるとともに、同日付けで拒絶査定（発送日：同年同月１３日）がなされたところ、これに対し、同年１０月１２日に拒絶査定不服審判が請求されるとともに、同日付けで手続補正がなされたものである。
　
第２　平成２３年１０月１２日付けの手続補正についての補正却下の決定
　１　補正却下の決定の結論
　平成２３年１０月１２日付けの手続補正を却下する。
　　
　２　補正却下の決定の理由
　（１）平成２３年１０月１２日付けの手続補正書による手続補正（以下、「本件補正」という。）の内容
　本件補正は、本件出願の明細書の特許請求の範囲の請求項１を以下のとおり補正することを含むものである。
　　　　　　　　
ア．本件補正前の請求項１（平成２２年９月１０日付け手続補正書）
　
　「【請求項１】　カチオン交換液体クロマトグラフィーによるヘモグロビン類の測定方法において、血液検体を溶血させる際に用いるｐＨが５．０〜１０．０の溶血試薬、および、ヘモグロビンＡ０よりも前に溶出するヘモグロビン類を溶出させるための溶離液ＡとヘモグロビンＡ０を溶出させるための溶離液Ｂとの少なくとも２種類の溶離液を用い、上記溶血試薬および上記溶離液Ａにアジ化物イオンが含有され、かつ、上記溶離液Ａにカオトロピックイオンが含有され、上記溶離液ＢのｐＨが溶離液ＡのｐＨより０．１〜８．０高く、かつ、上記溶離液Ｂの塩濃度が溶離液Ａの塩濃度より１０〜１０００ｍＭ高いことを特徴とするヘモグロビン類の測定方法。」
　
イ．本件補正後の請求項１
　「【請求項１】　カチオン交換液体クロマトグラフィーによるヘモグロビン類の測定方法において、血液検体を溶血させる際に用いるｐＨが５．０〜１０．０の溶血試薬、および、ヘモグロビンＡ０よりも前に溶出するヘモグロビン類を溶出させるための溶離液ＡとヘモグロビンＡ０を溶出させるための溶離液Ｂとの少なくとも２種類の溶離液を用い、上記溶血試薬および上記溶離液Ａにアジ化物イオンが含有され、かつ、上記溶離液Ａにカオトロピックイオンが含有され、上記溶離液ＢのｐＨが溶離液ＡのｐＨより０．１〜８．０高く、かつ、上記溶離液Ｂの塩濃度が溶離液Ａの塩濃度より１０〜１０００ｍＭ高いことを特徴とするヘモグロビン
Ｆ、不安定型ヘモグロビンＡ１ｃ及び安定型ヘモグロビンＡ１ｃ
　（下線部が補正箇所である）
　　
　（２）　本件補正の適否について
　本件補正は、本件補正前の請求項１に係る発明において、
　「ヘモグロビン類」を、「ヘモグロビンＦ、不安定型ヘモグロビンＡ１ｃ及び安定型ヘモグロビンＡ１ｃ」と補正することにより、ヘモグロビンの種類を限定し、特定する補正であるから、特許請求の範囲を減縮するものである。
　そうすると、本件補正は特許請求の範囲を減縮する補正を含む補正であり、平成１８年法律第５５号改正附則第３条第１項によりなお従前の例とされる同法による改正前（以下、単に「平成１８年改正前」という。）の特許法第１７条の２第４項第２号に規定する特許請求の範囲の減縮を目的とするものに該当する。
　 　
　（３）　独立特許要件について
　そこで、本件補正後の特許請求の範囲の請求項１に係る発明（以下、「本願補正発明」という）が、特許出願の際独立して特許を受けることができるものであるか（平成１８年改正前の特許法第１７条の２第５項において準用する同法第１２６条第５項の規定に適合するか）について以下に検討する。
　
　（ア）引用刊行物記載の発明
（３Ａ）原査定の拒絶の理由に引用され、本件出願前に頒布された特開２０００−１４６９４１号公報（以下、「引用刊行物Ａ」という。）には、図面とともに次の事項が記載されている。（下線は当審で付与したものである。以下、同様である。）
　
（３Ａ−１）「【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、
液体クロマトグラフィーによるヘモグロビン類の測定方法
　　
（３Ａ−２）「【０００４】液体クロマトグラフィー法によるＨｂＡ１ｃの測定は、主にカチオン交換液体クロマトグラフィー法により行われている（特公平８−７１９７号公報など）。
溶血液試料をカチオン交換液体クロマトグラフィーにより分離すると、
ＨｂＡ１ａ
及び
ＨｂＡ１ｂ
ＨｂＦ
不安定型ＨｂＡ１ｃ、安定型ＨｂＡ１ｃ並びに
ＨｂＡ０
などのピークが出現する
　　
（３Ａ−３）「【００１２】（カチオン交換液体クロマトグラフィーによるＨｂ類の測定方法）本発明においては、公知のカチオン交換液体クロマトグラフィーを用いることができる。すなわち、充填剤としては、公知のカチオン交換液体クロマトグラフィー用充填剤が用いられ、官能基として、カルボキシル基、リン酸基、スルホン酸基などのカチオン交換基を有するものが、素材としては、例えば、シリカ系のような公知の無機系充填剤、ポリマー系のような公知の有機系充填剤などが用いられ、形状としては、平均粒径０．５〜１００μｍのものが好ましく、更には、１〜２０μｍのものが好ましい。 粒径のばらつきは、変動係数値（ＣＶ値）（標準偏差÷平均粒径×１００）が、４０％以下が好ましい。 粒径のばらつきが上記範囲内となるように、必要に応じて、 公知の乾式あるいは湿式の分級法により分級してもよい。
【００１３】本発明で用いられる溶離液としては、有機酸又は無機酸、及びこれらの塩類などからなる公知の緩衝液が好ましく、一般にイオン交換クロマトグラフィーに用いられる緩衝液類すべてが使用可能である。塩濃度としては１〜１０００ｍＭが好ましく、ｐＨは４〜１２が好ましい。また、水と水溶性有機溶媒（例えば、メタノール、エタノール、イソプロパノール、アセトニトリルなど）との混合液も使用可能である。この場合、有機溶媒は０〜５０重量％の範囲で添加するのが好ましい。
【００１４】本発明で用いられる溶離条件としては、複数種の溶離液を用いてもよく、その場合は、リニアグラジエント法でもステップグラジエント法でもよい。流速は０．０５〜５ｍｌ／分が好ましい。
【００１５】本発明において、検出には、４１５ｎｍ付近の可視光による検出が好ましい。また、バックグラウンド補正のためなどに他の波長でも同時に測定してもよい。
【００１６】本発明において使用される液体クロマトグラフは、公知のものでよく、例えば、送液ポンプ、試料注入装置、上記の充填剤を充填したカラム、検出器などを備えた公知の装置が挙げられる。この装置には、その他の一般的な付属装置（カラム恒温槽、デガッサ、グラジエンタ、データ処理装置など）が適宜具備されてもよい。
【００１７】本発明において使用される試料としては、溶血液が用いられる。通常、１０〜５００倍に希釈して用いるのが好ましい。溶血には、血液に公知の界面活性剤を、０．００１〜１重量％添加して行うのが好ましい。液体クロマトグラフへの試料注入量としては、０．５〜５００μｌが好ましい。
【００１８】（安定型ＨｂＡ１ｃと不安定型ＨｂＡ１ｃを分離する条件）公知の測定条件、例えば、特公平８−７１９７号公報に記載された充填剤及びリン酸塩を含む緩衝液を溶離液として用いる測定条件において、以下のパラメータを最適化することにより、安定型ＨｂＡ１ｃと不安定型ＨｂＡ１ｃとを分離することが可能である。すなわち、最適化するパラメータとしては、充填剤における粒径、イオン交換容量など；溶離液における組成、溶離液数、ｐＨ、塩濃度など；その他としてはカラム温度、流速、グラジエントなどが挙げられる。
【００１９】（好ましい溶離液）本発明で用いられる
溶離液は、カオトロピックイオンを含有し
塩を含むのがより好ましい
【００２０】上記カオトロピックイオンとは、化合物が水溶液に溶解したときに解離により生じたイオンであり、水の構造を破壊し、疎水性物質と水が接触したときに起こる水のエントロピー減少を抑制するものである。
【００２１】陰イオンの
カオトロピックイオンとしては
過塩素酸イオン
が挙げられる
【００２２】上記カオトロピックイオンの中でも、陰イオンとして、トリブロモ酢酸イオン、トリクロロ酢酸イオン、チオシアン酸イオン、ヨウ化物イオン、過塩素酸イオン、ジクロロ酢酸イオン、硝酸イオン、臭化物イオン等を、陽イオンとして、バリウムイオン、カルシウムイオン、マグネシウムイオン、リチウムイオン、セシウムイオン、グアニジンイオン等を用いるのが好ましい。さらに、より好ましくは、チオシアン酸イオン、過塩素酸イオン、硝酸イオン、グアニジンイオン等が用いられる。
【００２３】上記溶離液中のカオトロピックイオンの濃度が、０．１ｍＭより低いとヘモグロビン類の測定において、分離効果が低下するおそれがあり、また、３０００ｍＭよりも高いと、ヘモグロビン類の分離効果はそれ以上向上しないので、０．１ｍＭ〜３０００ｍＭが好ましく、１ｍＭ〜１０００ｍＭがより好ましく、更に、１０ｍＭ〜５００ｍＭが好ましい。
【００２４】また、カオトロピックイオンは複数種混合して用いても良い。上記カオトロピックイオンは、測定試料と接触する液、例えば、溶血試薬、試料希釈液等に添加しても良い。
【００２５】本発明においては、溶離液に用いる緩衝能を有する物質として、無機酸、有機酸またはこれらの塩が含まれるのがより好ましい。上記無機酸としては、例えば、炭酸、リン酸等が挙げられる。上記有機酸としては、例えば、カルボン酸、ジカルボン酸、カルボン酸誘導体、ヒドロキシカルボン酸、アミノ酸、カコジル酸、ピロリン酸等が挙げられる。
【００２６】上記カルボン酸としては、例えば、酢酸、プロピオン酸等が挙げられる。上記ジカルボン酸としては、例えば、マロン酸、コハク酸、グルタル酸、アジピン酸、マレイン酸、フマル酸、フタル酸等が挙げられる。上記カルボン酸誘導体としては、例えば、β、β−ジメチルグルタル酸、バルビツール酸、アミノ酪酸等が挙げられる。上記ヒドロキシカルボン酸としては、例えば、クエン酸、酒石酸、乳酸等が挙げられる。上記アミノ酸としては、例えば、アスパラギン酸、アスパラギン等が挙げられる。
【００２７】上記無機酸または有機酸の塩としては、公知のもので良く、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩等が挙げられる。
【００２８】上記無機酸、有機酸またはこれらの塩は、複数種混合して用いても良く、無機酸と有機酸を混合して用いても良い。
【００２９】上記無機酸、有機酸及び／またはこれらの塩の溶離液中の濃度、複数種用いる場合には複数種の合計の濃度は、溶離液のｐＨを４．０〜６．８にする緩衝作用があれば良く、１〜１０００ｍＭが好ましく、１０〜５００ｍＭが特に好ましい。
【００３０】上記溶離液のｐＨは、４．０〜６．８であるのが好ましく、より好ましくは４．５〜５．８である。溶離液のｐＨが４未満であると、ヘモグロビン類が変性する可能性があり、ｐＨが６．８を超えると、ヘモグロビン類のプラス荷電が減少し、陽イオン交換基に保持されにくくなり、ヘモグロビン類の分離が悪くなる。」
　
（３Ａ−４）「【００３１】上記
溶離液には、以下の物質を添加しても良い
・・・
【００３５】（４）
アジ化ナトリウム
の防腐剤を添加しても良い
　
（３Ａ−５）「【００４１】（ヘモグロビンＡ０の溶出）本発明においては、ＨｂＡ０を溶出するために、カラムに流入する際のｐＨがヘモグロビンの等電点と等しいか、または等電点よりアルカリ側になる溶離液を用いるのが好ましい。この条件を実現するには、ｐＨがヘモグロビンの等電点よりアルカリ側であるひとつの溶離液を送液する方法や、ｐＨの異なる２種以上の溶離液を用いる方法がある。上記溶離液は、 カオトロピックイオンを含有することがより好ましい。 このカオトロピックイオンとその濃度等については、上述のものと同様である。また、溶離液には、上記同様に、無機塩類、ｐＨ調節剤、水溶性有機溶媒、防腐剤、ヘモグロビン安定剤等を添加しても良い。
【００４２】ヘモグロビンはｐＨが等電点より酸性側からアルカリ側になると、総荷電がプラスからマイナスに変わるため、充填剤の陽イオン交換基との「電気的反発力によってＨｂＡ０成分を溶出」させることができる。
【００４３】なお、理化学辞典（第４版、１９８７年９月、岩波書店、久保亮五ら編集）、１１７８頁に記載されているように、ヘモグロビンの等電点はｐＨ６．８〜７．０である。そのため、ＨｂＡ０成分を溶出するために、カラムに流入する際の溶離液のｐＨを６．８以上にすることがより好ましい。
【００４４】この条件を満たすため、測定に用いる溶離液の内、少なくともひとつの溶離液のｐＨが６．８以上であることが必要である。本溶離液のｐＨは望ましくは７．０〜１２．０であり、７．５〜１１．０がより好ましく、更には８．０〜９．５が好ましい。溶離液のｐＨが６．８未満になるとＨｂＡ０成分の溶出が不十分となる。溶離液のｐＨは、用いる充填剤の分解が起こらない範囲に設定すれば良い。
【００４５】ＨｂＡ０成分の溶出に好適に用いられる、ｐＨが６．８以上で緩衝能をもつ溶離液としては、例えば、リン酸、ホウ酸、炭酸等の無機酸または、その塩；クエン酸等のヒドロキシカルボン酸、β、β−ジメチルグルタル酸等のカルボン酸誘導体、マレイン酸等のジカルボン酸、カコジル酸、等の有機酸または、その塩からなる緩衝液が挙げられる。その他、２−（Ｎ−モリホリノ）エタンスルホン酸（ＭＥＳ）、Ｎ−２−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ’−エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）、ビス（２−ヒドロキシエチル）イミノトリス−（ヒドロキシメチル）メタン（Ｂｉｓｔｒｉｓ）、Ｔｒｉｓ、ＡＤＡ、ＰＩＰＥＳ、Ｂｉｓｔｒｉｓｐｒｏｐａｎｅ、ＡＣＥＳ、ＭＯＰＳ、ＢＥＳ、ＴＥＳ、ＨＥＰＥＳ、ＨＥＰＰＳ、Ｔｒｉｃｉｎｅ、Ｂｉｃｉｎｅ、グリシルグリシン、ＴＡＰＳ、ＣＡＰＳ等の一般にグッド（Ｇｏｏｄ）の緩衝液といわれるものも使用できる。また、ＢｒｉｔｔｏｎとＲｏｂｉｎｓｏｎの緩衝液；ＧＴＡ緩衝液も使用できる。また、イミダゾール等のイミダゾール類；エチレンジアミン、メチルアミン、エチルアミン、トリエチルアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン等のアミン類；グリシン、β−アラニン、アスパラギン酸、アスパラギン等のアミノ酸類；等の有機物も使用できる。
【００４６】また、無機酸；有機酸；無機酸または有機酸の塩；有機物は、複数混合して用いても良く、また、有機酸、無機酸及び有機物を混合しても良い。」
　
（３Ａ−６）「【００５０】（測定試料）健常人（イ）及び（ロ）の２名から、フッ化ナトリウム採血し以下の試料を調製した。
ａ１）無処理：上記の健常人血１ｍｌに、
溶血希釈液
（トリトンＸ−１００）
を含む１０ｍＭリン酸緩衝液溶液（ｐＨ５．８）
を、
血に対して
溶血希釈して試料ａ１
ｂ１）ＣＨｂ含有試料：上記の健常人血１０ｍｌに、０．３重量％のシアン酸ナトリウムの生理食塩水溶液１ｍｌを添加し、３７℃で３時間反応させ、次いで、溶血希釈液Ｘを、全血に対して１５０倍希釈となるように添加して溶血希釈して試料ｂ１とした。
ｃ１）ＡＨｂ含有試料：上記の健常人血１０ｍｌに、０．３重量％のアセトアルデヒドの生理食塩水溶液１ｍｌを添加し、室温で３時間反応させ、次いで、溶血希釈液Ｘを、全血に対して１５０倍希釈となるように添加して溶血希釈して試料ｃ１とした。」
　
（３Ａ−７）「【００５４】また、以下のようにして不安定型ＨｂＡ１ｃ除去試料ａ５、ｂ５、ｃ５を調製した。
ａ５）上記の試料ａ１調製の項における、（１）
溶血希釈液Ｘの代わりに、以下に示す溶血希釈液Ｙ５を用いた
溶血希釈液Ｙ５：０．１重量％の濃度でポリエチレングリコール−モノ−４−オクチルフェニルエーテル（トリトンＸ−１００）（東京化成社製）を含む５０ｍＭセミカルバジド水溶液（ｐＨ５．０）
ｂ５）上記の試料ｂ１調製の項における、（１）溶血希釈液Ｘの代わりに、溶血希釈液Ｙ５を用いたこと、及び（２）溶血希釈液Ｙ５を添加後、３７℃で３０分間加温したことの他は、上記の試料ｂ１調製の項と同様に行って、試料ｂ５を調製した。
ｃ５）上記の試料ｃ１調製の項における、（１）溶血希釈液Ｘの代わりに、溶血希釈液Ｙ５を用いたこと、及び（２）溶血希釈液Ｙ５を添加後、３７℃で３０分間加温したことの他は、上記の試料ｃ１調製の項と同様に行って、試料ｃ５を調製した。
【００５５】また、以下のようにして不安定型ＨｂＡ１ｃ除去試料ａ６、ｂ６、ｃ６を調製した。
ａ６）上記の試料ａ１調製の項における、（１）
溶血希釈液Ｘの代わりに、以下に示す溶血希釈液Ｙ６を用いた
溶血希釈液Ｙ６：０．４重量％の濃度でフィチン酸（Ａｌｄｒｉｃｈ社製）を、及び０．１重量％の濃度でポリエチレングリコール−モノ−４−オクチルフェニルエーテル（トリトンＸ−１００）（東京化成社製）を含む１０ｍＭリン酸緩衝液溶液（ｐＨ６．３）
ｂ６）上記の試料ｂ１調製の項における、（１）溶血希釈液Ｘの代わりに、溶血希釈液Ｙ６を用いたこと、及び（２）溶血希釈液Ｙ６を添加後、２５℃で１０分間加温したことの他は、上記の試料ｂ１調製の項と同様に行って、試料ｂ６を調製した。
ｃ６）上記の試料ｃ１調製の項における、（１）溶血希釈液Ｘの代わりに、溶血希釈液Ｙ６を用いたこと、及び（２）溶血希釈液Ｙ６を添加後、２５℃で１０分間加温したことの他は、上記の試料ｃ１調製の項と同様に行って、試料ｃ６を調製した。
【００５６】［ヘモグロビン類の測定］
（１）参考例１〜１２、実施例１〜２０、比較例１〜４
（測定条件）得られた各試料を以下の条件により測定した。
液体クロマトグラフシステム：
送液ポンプ：ＬＣ−９Ａ（島津製作所社製）
オートサンプラ：ＡＳＵ−４２０（積水化学社製）
検出器：ＳＰＤ−６ＡＶ（島津製作所社製）
カラム：Ｍｉｃｒｏｎｅｘ  Ａ１ｃ  ＨＳ−II（積水化学社製）
溶離液：溶離液Ａ：１００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ５．８）
溶離液Ｂ：２５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．２）
溶離条件：溶離液Ａ及び溶離液Ｂのステップグラジエント溶出法。測定開始より０〜１．２分の間は溶離液Ａを流し、１．２〜１．３分の間は溶離液Ｂを流し、１．３〜２分の間は溶離液Ａを流した。
流速：１．５ｍｌ／分
検出波長：４１５ｎｍ
試料注入量：１０μｌ
【００５７】参考例１〜４
上記測定条件により、健常人（イ）より採血した血液から得られた、試料ａ１を測定して得られたクロマトグラムを図１（イ）（参考例１）に示し、試料ａ２を測定して得られたクロマトグラムを図１（ロ）（参考例２）に示した。上記測定条件により、健常人（ロ）より採血した血液から得られた、試料ａ１を測定して得られたクロマトグラムを図２（イ）（参考例３）に示し、試料ａ２を測定して得られたクロマトグラムを図２（ロ）（参考例４）に示した。
【００５８】ピーク１はＨｂＡ１ａ、ピーク２はＨｂＡ１ｂ、ピーク３はＨｂＦ、ピーク４は不安定型ＨｂＡ１ｃ、ピーク５は安定型ＨｂＡ１ｃ、ピーク６はＨｂＡ０を示す。また、それぞれのピーク面積の、全溶出ピークの総面積値を１００とした場合の相対割合（％）（測定値）を表１に示した。
・・・
【００６０】図１（イ）及び図２（イ）より、不安定型ＨｂＡ１ｃと安定型ＨｂＡ１ｃが良好に分離されていることがわかる。健常人（イ）と健常人（ロ）では、不安定型ＨｂＡ１ｃの測定値が異なる（健常人（イ）＝０．８％、健常人（ロ）＝１．２％）が、いずれも不安定型ＨｂＡ１ｃ除去操作により、不安定型ＨｂＡ１ｃが良好に除去されたことがわかる。」
　
（３Ａ−８）「【００７４】（２）参考例１３〜２４、実施例２１〜４０、比較例５〜８
（測定条件）得られた各試料を以下の条件により測定した。
液体クロマトグラフシステム：
送液ポンプ：ＬＣ−９Ａ（島津製作所社製）
オートサンプラ：ＡＳＵ−４２０（積水化学社製）
検出器：ＳＰＤ−６ＡＶ（島津製作所社製）
カラム：Ｍｉｃｒｏｎｅｘ  Ａ１ｃ  ＨＳ−II（積水化学社製）
溶離液：
溶離液Ａ：５０ｍＭの過塩素酸を含有する５０ｍＭリン酸緩衝液
ｐＨ５．３
溶離液Ｂ：２００ｍＭの過塩素酸を含有する
０ｍＭリン酸緩衝液
ｐＨ８．０
溶離条件：溶離液Ａ及び溶離液Ｂのステップグラジエント溶出法。測定開始より０〜１．２分の間は溶離液Ａを流し、１．２〜１．３分の間は溶離液Ｂを流し、１．３〜２分の間は溶離液Ａを流した。
流速：１．５ｍｌ／分
検出波長：４１５ｎｍ
試料注入量：１０μｌ
【００７５】参考例１３〜１６
上記測定条件により、健常人（イ）より採血した血液から得られた、試料ａ１（参考例１３）及びａ２（参考例１４）を測定して得られたクロマトグラムは、それぞれ図１（イ）及び図１（ロ）と同様であった。上記測定条件により、健常人（ロ）より採血した血液から得られた、試料ａ１（参考例１５）及びａ２（参考例１６）を測定して得られたクロマトグラムは、それぞれ図２（イ）及び図２（ロ）と同様であった。また、それぞれのピーク面積の、全溶出ピークの総面積値を１００とした場合の相対割合（％）（測定値）は、参考例１〜４と同様であった。」
　
（３Ａ−９）「【００８１】（３）参考例２５〜３６、実施例４１〜６０、比較例９〜１２
（測定条件）得られた各試料を以下の条件により測定した。
液体クロマトグラフシステム：
送液ポンプ：ＬＣ−９Ａ（島津製作所社製）
オートサンプラ：ＡＳＵ−４２０（積水化学社製）
検出器：ＳＰＤ−６ＡＶ（島津製作所社製）
カラム：Ｍｉｃｒｏｎｅｘ  Ａ１ｃ  ＨＳ−II（積水化学社製）
溶離液：
溶離液Ａ：５５ｍＭの過塩素酸を含有する２０ｍＭコハク酸−２０ｍＭリン酸緩衝液
ｐＨ５．３
溶離液Ｂ：２００ｍＭの過塩素酸を含有する
０ｍＭコハク酸−２０ｍＭリン酸緩衝液
ｐＨ８．０
溶離条件：溶離液Ａ及び溶離液Ｂのステップグラジエント溶出法。
測定開始より０〜１．２分の間は溶離液Ａを流
流速：１．５ｍｌ／分
検出波長：４１５ｎｍ
試料注入量：１０μｌ
【００８２】参考例２５〜２８
上記測定条件により、健常人（イ）より採血した血液から得られた、
試料ａ１（参考例２５
を測定して得られたクロマトグラムは
図１（イ）
　
（３Ａ−１０）図１の（イ）には、ＨｂＡ１ａ１及びＨｂＡ１ｂ２、ＨｂＦ３、不安定型ＨｂＡ１ｃ４、安定型ＨｂＡ１ｃ５並びにＨｂＡ０６の順にピークが出現するとともに、ＨｂＦ３が他のヘモグロビン類と良好に分離されることが描かれている。　
　
　上記引用刊行物Ａの摘記事項（３Ａ−１）〜（３Ａ−１０）、特に（３Ａ−９）の記載を参照すると、上記引用刊行物Ａには、
「カチオン交換液体クロマトグラフィーによるヘモグロビン類の測定方法において、
　血に対して溶血希釈液（トリトンＸ−１００）を含む、ｐＨ５．８の１０ｍＭリン酸緩衝液溶液で溶血希釈した試料ａ１と、
　測定開始時に最初に流すための、５５ｍＭの過塩素酸を含有するｐＨ５．３の２０ｍＭコハク酸−２０ｍＭリン酸緩衝液からなる溶離液Ａと、
　２００ｍＭの過塩素酸を含有するｐＨ８．０の２０ｍＭコハク酸−２０ｍＭリン酸緩衝液からなる溶離液Ｂと用いるとともに、
　溶離液は、カオトロピックイオンを含有するとともに、防腐剤としてアジ化ナトリウムの添加が可能であるヘモグロビン類の測定方法。」
　の発明（以下、「引用発明」という。）が記載されているものと認める。
　
（３Ｂ）原査定の拒絶の理由に引用され、本件出願前に頒布された特開２００１−１５９６２５号公報（以下、「引用刊行物Ｂ」という。）には、図面とともに次の事項が記載されている。　
　
（３Ｂ−１）「【特許請求の範囲】
【請求項１】  カチオン交換液体クロマトグラフィーによる、ヘモグロビン混合物からのヘモグロビンＡ２の分離方法において、
ヘモグロビンＡ０よりも前に溶出するヘモグロビン類を溶出させるための溶離液（以下「溶離液Ａ」という）と、ヘモグロビンＡ０以降に溶出するヘモグロビン類を溶出させるための溶離液（以下「溶離液Ｂ」という）の少なくとも２種の溶離液を用い、前記溶離液ＡのｐＨが４．０〜６．０であって、前記溶離液ＢのｐＨが、前記溶離液ＡのｐＨより０．５以上高いことを特徴とするヘモグロビンＡ２の分離方法。
・・・
【請求項１０】  請求項１〜９のいずれか一項に記載のヘモグロビンＡ２の分離方法であって、
前記溶離液Ａ〜Ｈのうち少なくとも一種の溶離液、及び／または、溶血液に、アジ化物イオンが含有されることを特徴とするヘモグロビンＡ２の分離方法。」
　
（３Ｂ−２）「【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、カチオン交換液体クロマトグラフィーによるヘモグロビンＡ２の分離方法に関する。」
　
（３Ｂ−３）「【００４３】本発明２においては、カオトロピックイオンが含有され、かつｐＨ４．０〜６．８で緩衝能を持つ無機酸、有機酸及び／またはこれらの塩が含有される溶離液（本明細書においては、「溶離液Ｅ」という）と、ｐＨ６．５〜８．０で緩衝能を持つ無機酸、有機酸及び／またはこれらの塩が含有される溶離液（本明細書においては、「溶離液Ｆ」という）の少なくとも２種の溶離液を用いる。
【００４４】上記溶離液Ｅには、カオトロピックイオンが含有される。このカオトロピックイオンとは、水溶液に解離して生じたイオンにより、水の構造が破壊され、疎水性物質と水が接触したときに起こる、水のエントロピー減少を抑制するもので、具体的には、陰イオンとしては、トリブロモ酢酸イオン、トリクロロ酢酸イオン、チオシアン酸イオン、ヨウ化物イオン、過塩素酸イオン、ジクロロ酢酸イオン、硝酸イオン、臭化物イオン、塩化物イオン、酢酸イオン等が挙げられ、またその他に尿素等が挙げられる。また、陽イオンとしては、バリウムイオン、カルシウムイオン、マグネシウムイオン、リチウムイオン、セシウムイオン、カリウムイオン、グアニジンイオン等が挙げられる。」
　
（３Ｂ−４）「【００７５】また、本発明においては、上記溶離液Ａ〜Ｈの少なくとも一種の溶離液にアジ化物イオンを添加するのがより好ましい。また、溶血液にアジ化物イオンを添加することもできる。アジ化物イオンは、溶離液または溶血液の少なくとも一方に含有されていれば良く、また両方に含有されていても良い。このアジ化物イオンの添加に際しては、水溶液中で解離してアジ化物イオンを生成する塩を用いれば良く、例えば、公知のアジ化物塩等が用いられ、好ましくは、アジ化ナトリウム、アジ化バリウム等が用いられる。
【００７６】また、上記アジ化物イオンの溶離液あるいは溶血液中の濃度は、０．００１〜０．５重量％であることが好ましく、より好ましくは、０．００５〜０．４重量％である。上記濃度が、０．００１重量％より少ないと、分離能向上の効果がなく、また０．５重量％より多くても分離能は向上しないためである。」
　
（３Ｂ−５）「【０１０２】（測定試料１）健常人血を採血し、抗血液凝固剤としてフッ化ナトリウム１０ｍｇ／ｍｌを添加した。これに、１５０倍量の溶血液（０．１重量％ポリエチレングリコールモノ−４−オクチルフェニルエーテル（トリトンＸ−１００、東京化成社製）と２０ｍＭリン酸緩衝溶液からなる溶血液（ｐＨ７．０））を添加して溶血し、測定試料とした。
（測定試料２）ライホチェックＨｂＡ２コントロール・レベル２（バイオラッド社製）を１ｍＬの水に溶解させ、１００倍量で希釈し、測定試料とした。」
　
（３Ｂ−６）「【０１０９】［実施例３］溶離液及び溶出条件を下記のようにした以外は、実施例１と同様の条件で試料１の測定を行った。
溶離液：溶離液Ａ１：４５ｍＭの過塩素酸を含有する５０ｍＭのリン酸緩衝液（ｐＨ５．３）
溶離液Ａ２：５５ｍＭの過塩素酸を含有する５０ｍＭのリン酸緩衝液（ｐＨ５．３）
溶離液Ｂ：２５ｍＭのリン酸緩衝液（ｐＨ７．２）
溶離液Ｄ：１２５ｍＭのリン酸緩衝液（ｐＨ５．７）
溶離液Ｈ：３００ｍＭのリン酸緩衝液（ｐＨ８．５）
測定開始より０〜１分の間は溶離液Ａ１を流し、１〜１．５分の間は溶離液Ａ２を流し、１．５〜２．１分の間は溶離液Ｂを流し、２．１〜２．５分の間は溶離液Ｄを流し、２．５〜２．７分の間は溶離液Ｈを流し、２．７〜３．５分の間は溶離液Ａ１を流した。
・・・
【０１１０】得られたクロマトグラムを図６に示す。その結果ＨｂＡ２（ピーク１６）と共に安定型ＨｂＡ１ｃ（ピーク１４）も良好に分離されていることがわかる。」
　
（３Ｂ−７）「【０１３５】［実施例１５］溶離液を以下の組成としたこと以外は、実施例５と同様の条件で下記測定試料７・８について、ヘモグロビンＡ２の分離を行った。
溶離液：溶離液Ｅ：５０ｍＭの過塩素酸、０．０３重量％アジ化ナトリウムを含有する２５ｍＭコハク酸−２０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ５．３）
溶離液Ｆ：０．０３重量％アジ化ナトリウムを含有する１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．１）
溶離液Ｇ：０．０３重量％アジ化ナトリウムを含有する９０ｍＭの過塩素酸を含有する５ｍＭコハク酸−１５ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ５．３）
溶離液Ｈ：２５０ｍＭの過塩素酸を含有する２０ｍＭコハク酸−２０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ８．４）
測定開始より０〜１．７分の間は溶離液Ｅを流し、１．７〜３．０分の間は溶離液Ｆを流し、３．０〜３．５分の間は溶離液Ｇを流し、３．５〜３．６分の間は溶離液Ｈを流し、３．６〜４．０分の間は溶離液Ｅを流した。
・・・
【０１３６】（測定試料７）Ｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎ Ａ２ Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｌｅｖｅｌ２（ＢＩＯ  ＲＡＤ社製）を添付文書に従って、水１ｍｌで溶解し、更に、これを、６０倍量の溶血液（界面活性剤として０．１重量％ポリエチレングリコールモノ−４−オクチルフェニルエーテル（トリトンＸ−１００、東京化成社製）を含有するリン酸緩衝溶液（ｐＨ７））を添加希釈して、測定試料７とした。
【０１３７】（測定試料８）Ｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎ ＡＦＳＣ  ＨＥＭＯ Ｃｏｎｔｒｏｌ（ＨｅｌｅｎａＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社製）を、６０倍量の溶血液（界面活性剤として０．１重量％ポリエチレングリコールモノ−４−オクチルフェニルエーテル（トリトンＸ−１００、東京化成社製）を含有するリン酸緩衝溶液（ｐＨ７））を添加希釈して、測定試料８とした。
【０１３８】（測定結果）実施例１５で得られたクロマトグラムを図１６・１７に示した。測定試料７の結果を図１６に、測定試料８の結果を図１７に示した。図１６・１７から明らかのようにＨｂＦ、安定型ＨｂＡ１ｃ、ＨｂＡ２、ＨｂＳ、ＨｂＣを良好に分離出来た。また、表５に示すように、測定精度も良好であった。
【０１３９】
【表５】
・・・
【０１４０】［実施例１６］実施例１５における溶離液Ｅを以下の組成としたこと以外は、実施例１５と同様の条件でヘモグロビン類の測定を行った。
溶離液Ｅ：５０ｍＭの過塩素酸を含有する２５ｍＭコハク酸−２０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ５．３）
【０１４１】（測定結果）実施例１６で得られたクロマトグラムを図１８・１９に示した。測定試料７の結果を図１８に、測定試料８の結果を図１９に示した。図１８・１９から、ＨｂＡ２、ＨｂＳ、ＨｂＣは良好に分離出来るが、ＨｂＦについては分離が悪いことが分かる。」
　
（３Ｂ−８）図１６には、ＨｂＦ１２、不安定型Ｈｂ１ｃ１３、安定型Ｈｂ１ｃ１４が良好に分離されていることが描かれており、図１８には、不安定型Ｈｂ１ｃ１３は分離されているものの、ＨｂＦ１２は、Ｈｂ１ａ及びｂ１１との分離が悪く、安定型Ｈｂ１ｃ１４が溶出されていないことが描かれている。
　
（イ）本願補正発明と引用発明との対比・判断
　（イ−１）本願補正発明と引用発明とを対比する。
（i）引用発明の「カチオン交換液体クロマトグラフィーによるヘモグロビン類の測定方法」は、その構成・機能からみて、本願補正発明の「カチオン交換液体クロマトグラフィーによるヘモグロビン類の測定方法」に相当する。
　
（ii）引用発明の「血に対して溶血希釈液（トリトンＸ−１００）を含む、ｐＨ５．８の１０ｍＭリン酸緩衝液溶液で溶血希釈した試料ａ１」は、ヘモグロビン類を分離するための試料であるから、引用発明の「血に対して溶血希釈液（トリトンＸ−１００）を含む、ｐＨ５．８の１０ｍＭリン酸緩衝液溶液で溶血希釈した試料ａ１」と、本願補正発明の「血液検体を溶血させる際に用いるｐＨが５．０〜１０．０の溶血試薬」とは、「血液検体を溶血させる際に用いるｐＨが所定の値を有する溶血試薬」である点で共通する。
　
（iii）上記引用刊行物Ａの摘記事項（３Ａ−５）に、
「【００４１】（
ヘモグロビンＡ０の溶出
ＨｂＡ０を溶出するために、カラムに流入する際のｐＨがヘモグロビンの等電点と等しいか、または等電点よりアルカリ側になる溶離液を用いるのが好ましい
の条件を実現するには、ｐＨがヘモグロビンの等電点よりアルカリ側であるひとつの溶離液を送液する方法や、ｐＨの異なる２種以上の溶離液を用いる方法がある
【００４２】
ヘモグロビンはｐＨが等電点より酸性側からアルカリ側になると
ＨｂＡ０成分を溶出』させることができる
【００４３】・・・
ヘモグロビンの等電点はｐＨ６．８〜７．０である。そのため、ＨｂＡ０成分を溶出するために、カラムに流入する際の溶離液のｐＨを６．８以上にすることがより好ましい
【００４４】
この条件を満たすため、測定に用いる溶離液の内、少なくともひとつの溶離液のｐＨが６．８以上であることが必要である。本溶離液のｐＨは望ましくは７．０〜１２．０であり、７．５〜１１．０がより好ましく、更には８．０〜９．５が好ましい。溶離液のｐＨが６．８未満になるとＨｂＡ０成分の溶出が不十分となる。
　と記載されていることから、引用発明の「２００ｍＭの過塩素酸を含有するｐＨ８．０の２０ｍＭコハク酸−２０ｍＭリン酸緩衝液からなる溶離液Ｂ」が、本願補正発明の「ヘモグロビンＡ０を溶出させるための溶離液Ｂ」に相当することは明らかである。
　また、上記引用刊行物Ａの摘記事項（３Ａ−５）に、
「
溶離液のｐＨが６．８未満になるとＨｂＡ０成分の溶出が不十分となる
　と記載され、さらに、同摘記事項（３Ａ−１０）に、
「図１の（イ）には、
ＨｂＡ１ａ１及びＨｂＡ１ｂ２、ＨｂＦ、不安定型ＨｂＡ１ｃ、安定型ＨｂＡ１ｃ並びにＨｂＡ０の順にピークが出現する
　と記載されていることを考慮すると、引用発明の「測定開始時に最初に流すための、５５ｍＭの過塩素酸を含有するｐＨ５．３の２０ｍＭコハク酸−２０ｍＭリン酸緩衝液からなる溶離液Ａ」のｐＨは、６．８未満であり、ＨｂＡ０成分の溶出が不十分となるから、本願補正発明の「ヘモグロビンＡ０よりも前に溶出するヘモグロビン類を溶出させるための溶離液Ａ」に相当する。
　そして、「測定開始時に最初に流すための、５５ｍＭの過塩素酸を含有するｐＨ５．３の２０ｍＭコハク酸−２０ｍＭリン酸緩衝液からなる溶離液Ａと、２００ｍＭの過塩素酸を含有する ｐＨ８．０の２０ｍＭコハク酸−２０ｍＭリン酸緩衝液からなる溶離液Ｂと用いる」ことは、本願補正発明の「ヘモグロビンＡ０よりも前に溶出するヘモグロビン類を溶出させるための溶離液ＡとヘモグロビンＡ０を溶出させるための溶離液Ｂとの少なくとも２種類の溶離液を用い」る構成のうちの、「ヘモグロビンＡ０よりも前に溶出するヘモグロビン類を溶出させるための溶離液ＡとヘモグロビンＡ０を溶出させるための溶離液Ｂとの２種類の溶離液を用い」ることに相当する。
　
（iv）上記引用刊行物Ａの摘記事項（３Ａ−３）に、
「【００１９】（好ましい溶離液）本発明で用いられる
溶離液は、カオトロピックイオンを含有し、かつ、ｐＨ４．０〜６．８
を含むのがより好ましい
【００２０】上記カオトロピックイオンとは、化合物が水溶液に溶解したときに解離により生じたイオンであり、水の構造を破壊し、疎水性物質と水が接触したときに起こる水のエントロピー減少を抑制するものである。
【００２１】陰イオンの
カオトロピックイオンとしては
過塩素酸イオン
が挙げられる
　と記載されており、さらに、摘記事項（３Ａ−８）に、
「【００８１】（３）参考例２５〜３６、実施例４１〜６０、比較例９〜１２
（測定条件）得られた各試料を以下の条件により測定した。
  ・・・
  溶離液：
溶離液Ａ：５５ｍＭの過塩素酸を含有する
２０ｍＭコハク酸−２０ｍＭリン酸緩衝液
ｐＨ５．３
          
溶離液Ｂ：２００ｍＭの過塩素酸を含有する
０ｍＭコハク酸−２０ｍＭリン酸緩衝液
ｐＨ８．０
  ・・・
【００８２】参考例２５〜２８
上記測定条件により、健常人（イ）より採血した血液から得られた、
試料ａ１（参考例２５
を測定して得られたクロマトグラムは
図１（イ）
　と記載されていることを考慮すると、引用発明の「測定開始時に最初に流すための、５５ｍＭの過塩素酸を含有するｐＨ５．３の２０ｍＭコハク酸−２０ｍＭリン酸緩衝液からなる溶離液Ａ」が、ｐＨ４．０〜６．８の範囲内のｐＨ５．３を有することから、本願補正発明と同様に、「上記溶離液Ａにカオトロピックイオンが含有され」ていることは明らかである。
　
（v）引用発明の溶離液ＡのｐＨは５．３であり、また、溶離液ＢのｐＨは８．０であるから、引用発明の溶離液ＢのｐＨは溶離液ＡのｐＨよりも高いことは明らかである。
　そうすると、引用発明の「ｐＨ５．３」の「溶離液Ａ」及び「ｐＨ８．０」の「溶離液Ｂ」と、本願補正発明の「上記溶離液ＢのｐＨが溶離液ＡのｐＨより０．１〜８．０高」いこととは、「上記溶離液ＢのｐＨが溶離液ＡのｐＨより高」い点で共通する。
　
（vi）上記引用刊行物Ａの摘記事項（３Ａ−３）に、
「【００１３】本発明で用いられる
溶離液としては
有機酸又は無機酸、及びこれらの塩類などからなる
緩衝液が好ましく
塩濃度としては１〜１０００ｍＭが好ましく
・・・
【００１９】（好ましい溶離液）本発明で用いられる
溶離液は、カオトロピックイオンを含有し
塩を含むのがより好ましい
・・・
【００２１】陰イオンの
カオトロピックイオンとしては
過塩素酸イオン
が挙げられる
・・・
【００２５】本発明においては、
溶離液に用いる緩衝能を有する物質として
無機酸、有機酸またはこれらの塩が含まれるのがより好ましい
リン酸
挙げられる
上記有機酸としては
カルボン酸
挙げられる
【００２６】上
記カルボン酸としては
コハク酸
が挙げられる
　と記載され、さらに摘記事項（３Ａ−５）に、
「【００４１】（
ヘモグロビンＡ０の溶出
ＨｂＡ０を溶出するために
アルカリ側になる溶離液を用いるのが好ましい
溶離液は、 カオトロピックイオンを含有することがより好ましい。 このカオトロピックイオンとその濃度等については、上述のものと同様である
・・・
【００４５】
ＨｂＡ０成分の溶出に好適に用いられる、ｐＨが６．８以上で緩衝能をもつ溶離液として
リン酸
その塩
　と記載されていることから、引用発明の溶離液に含まれる、過塩素酸、リン酸、コハク酸の少なくとも１種類を塩で構成することは明らかである。
　そして、例えば、過塩素酸を過塩素酸塩で構成した場合に、「測定開始時に最初に流すための、５５ｍＭの過塩素酸を含有するｐＨ５．３の２０ｍＭコハク酸−２０ｍＭリン酸緩衝液からなる溶離液Ａ」と、「２００ｍＭの過塩素酸を含有する ｐＨ８．０の２０ｍＭコハク酸−２０ｍＭリン酸緩衝液からなる溶離液Ｂ」とを比較すると、２００ｍＭの過塩素酸を含有する溶離液Ｂの方が、５５ｍＭの過塩素酸を含有する溶離液Ａよりも塩濃度が高いことは明らかである。
　そうすると、例えば、過塩素酸を過塩素酸塩で構成した場合、引用発明の「５５ｍＭの過塩素酸を含有する」「溶離液Ａ」及び「２００ｍＭの過塩素酸を含有する」「溶離液Ｂ」と、本願補正発明の「上記溶離液Ｂの塩濃度が溶離液Ａの塩濃度より１０〜１０００ｍＭ高い」こととは、「上記溶離液Ｂの塩濃度が溶離液Ａの塩濃度より高い」点で共通する。
　
（vii）上記引用刊行物Ａの摘記事項（３Ａ−７）に、
「【００６０】
図１（イ）
不安定型ＨｂＡ１ｃと安定型ＨｂＡ１ｃが良好に分離されていることがわかる
　と記載され、さらに、摘記事項（３Ａ−１０）に、
「
図１の（イ）には、
ＨｂＦ３が他のヘモグロビン類と良好に分離される
　ことが記載されていることから、引用発明の「ヘモグロビン類の測定方法」は、少なくとも、ＨｂＦ、不安定型ＨｂＡ１ｃ、安定型ＨｂＡ１ｃを有効に分離して、各ヘモグロビン類を測定していることは明らかである。
　そうすると、引用発明の「ヘモグロビン類の測定方法」が、本願補正発明の「ヘモグロビンＦ、不安定型ヘモグロビンＡ１ｃ及び安定型ヘモグロビンＡ１ｃの測定方法」に相当する。
　
　そうすると、本願補正発明と引用発明とは、
「カチオン交換液体クロマトグラフィーによるヘモグロビン類の測定方法において、
　血液検体を溶血させる際に用いるｐＨが所定の値を有する溶血試薬、
　および、
　ヘモグロビンＡ０よりも前に溶出するヘモグロビン類を溶出させるための溶離液ＡとヘモグロビンＡ０を溶出させるための溶離液Ｂとの２種類の溶離液を用い、かつ、上記溶離液Ａにカオトロピックイオンが含有され、上記溶離液ＢのｐＨが溶離液ＡのｐＨより高く、かつ、上記溶離液Ｂの塩濃度が溶離液Ａの塩濃度より高いヘモグロビンＦ、不安定型ヘモグロビンＡ１ｃ及び安定型ヘモグロビンＡ１ｃの測定方法。」である点で一致し、以下の、相違点（あ）〜相違点（え）で相違する。
　
・相違点（あ）
　溶血試薬が、本願補正発明では「ｐＨが５．０〜１０．０」の溶血試薬であるのに対して、引用発明では、ｐＨが５．８の試料ａ１である点。
　
・相違点（い）
　本願補正発明では、「上記溶血試薬および上記溶離液Ａにアジ化物イオンが含有され」ているのに対して、引用発明では、溶離液に、防腐剤としてアジ化ナトリウムの添加が可能である点。
　
・相違点（う）
　本願補正発明では、溶離液ＢのｐＨが溶離液ＡのｐＨより「０．１〜８．０」高いのに対して、引用発明では、溶離液ＢのｐＨが溶離液ＡのｐＨよりも２．７高い点。
　
・相違点（え）
　本願補正発明では、上記溶離液Ｂの塩濃度が溶離液Ａの塩濃度より「１０〜１０００ｍＭ」高いのに対して、引用発明では、溶離液Ｂの塩濃度が溶離液Ａの塩濃度より高いけれども、その値が不明である点。
　　
（イ−２）当審の判断
　そこで、上記相違点（あ）〜相違点（え）について判断する。
　
・相違点（あ）について
　引用発明では、ｐＨが５．８の試料ａ１を用いており、本願補正発明の「ｐＨが５．０〜１０．０」の溶血試薬のうちの、ｐＨが５．８の溶血試薬の場合は、引用発明と実質的な差異はないものである。
　また、上記引用刊行物Ａの摘記事項（３−Ａ６）に、
「【００５４】・・・
ａ５）上記の試料ａ１調製の項における、（１）
溶血希釈液Ｘの代わりに、以下に示す溶血希釈液Ｙ５を用いた
溶血希釈液Ｙ５：０．１重量％の濃度でポリエチレングリコール−モノ−４−オクチルフェニルエーテル（トリトンＸ−１００）（東京化成社製）を含む５０ｍＭセミカルバジド水溶液（ｐＨ５．０）
・・・
【００５５】・・・
ａ６）上記の試料ａ１調製の項における、（１）
溶血希釈液Ｘの代わりに、以下に示す溶血希釈液Ｙ６を用いた
溶血希釈液Ｙ６：０．４重量％の濃度でフィチン酸（Ａｌｄｒｉｃｈ社製）を、及び０．１重量％の濃度でポリエチレングリコール−モノ−４−オクチルフェニルエーテル（トリトンＸ−１００）（東京化成社製）を含む１０ｍＭリン酸緩衝液溶液（ｐＨ６．３）
　と記載され、また、上記引用刊行物Ｂの摘記事項（３Ｂ−４）に、
「【０１０２】（測定試料１）
健常人血を採血し、抗血液凝固剤としてフッ化ナトリウム１０ｍｇ／ｍｌを添加した
これに
１５０倍量の溶血液
溶血液（ｐＨ７．０）
測定試料とした
　と記載されているように、ヘモグロビン類の測定方法において、使用する試料のｐＨを変えることは周知であるといえることから、引用発明のヘモグロビン類の測定方法において、使用する試料ａ１のｐＨを５．８を含む範囲で適宜変えてヘモグロビン類の測定することは当業者が必要に応じて適宜なし得るものである。
　そして、本件出願明細書の発明の詳細な説明には、試料のｐＨを５．０〜１０．０することに格別の臨界的意義があることが記載されていないことから、本願補正発明のごとく、溶血試薬が「ｐＨが５．０〜１０．０」の溶血試薬であるようにすることは、ヘモグロビン類の測定する際に、当業者が必要に応じて適宜範囲を設定する設計的事項にすぎないものである。
　
・相違点（い）について
　上記引用刊行物Ｂの摘記事項（３Ｂ−２）、（３Ｂ−３）、（３Ｂ−７）、及び（３Ｂ−８）には、それぞれ、
「【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、
カチオン交換液体クロマトグラフィーによるヘモグロビン
分離方法に関す
　こと、
「【００４３】本発明２においては、
カオトロピックイオンが含有され、かつｐＨ４．０〜６．８で緩衝能を持つ無機酸、有機酸及び／またはこれらの塩が含有される溶離液
溶離液Ｅ
【００４４】上記溶
離液Ｅには、カオトロピックイオンが含有される
このカオトロピックイオンとは
過塩素酸イオン
が挙げられる
　こと、
「【０１３５】［
実施例１５
溶離液：
溶離液Ｅ：５０ｍＭの過塩素酸、０．０３重量％アジ化ナトリウムを含有する２５ｍＭコハク酸−２０ｍＭリン酸緩衝液
ｐＨ５．３
溶離液Ｆ：０．０３重量％アジ化ナトリウムを含有する１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．１）
溶離液Ｇ：０．０３重量％アジ化ナトリウムを含有する９０ｍＭの過塩素酸を含有する５ｍＭコハク酸−１５ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ５．３）
溶離液Ｈ：２５０ｍＭの過塩素酸を含有する２０ｍＭコハク酸−２０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ８．４）
測定開始より
は溶離液Ｅを流
 ・・・
【０１３６】（測定試料７）Ｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎ Ａ２ Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｌｅｖｅｌ２（ＢＩＯ  ＲＡＤ社製）を添付文書に従って、水１ｍｌで溶解し、更に、これを、６０倍量の溶血液（界面活性剤として０．１重量％ポリエチレングリコールモノ−４−オクチルフェニルエーテル（トリトンＸ−１００、東京化成社製）を含有するリン酸緩衝溶液（ｐＨ７））を添加希釈して、
測定試料７とした
・・・
【０１３８】（測定結果）実施例１５で得られたクロマトグラムを図１６・１７に示した。
測定試料７の結果を図１６に
示した
ＨｂＦ
安定型ＨｂＡ１ｃ
良好に分離出来た
測定精度も良好であった
・・・
【０１４０】［実施例１６］
実施例１５における溶離液Ｅを以下の組成としたこと以外は、実施例１５と同様の条件でヘモグロビン類の測定を行っ
溶離液Ｅ：５０ｍＭの過塩素酸を含有する２５ｍＭコハク酸−２０ｍＭリン酸緩衝液
ｐＨ５．３
【０１４１】（測定結果）実施例１６で得られたクロマトグラムを図１８・１９に示した。測定試料７の結果を図１８に、測定試料８の結果を図１９に示した。図１８・１９から、ＨｂＡ２、ＨｂＳ、ＨｂＣは良好に分離出来るが、
ＨｂＦについては分離が悪いことが分かる
　こと、及び　
「図１６には、
ＨｂＦ１２、不安定型Ｈｂ１ｃ１３、安定型Ｈｂ１ｃ１４が良好に分離されている・・・
ＨｂＦ１２は、Ｈｂ１ａ及びｂ１１との分離が悪く、安定型Ｈｂ１ｃ１４が溶出されていない
　ことが記載されていることから、上記引用刊行物Ｂには、
「カチオン交換液体クロマトグラフィーによるヘモグロビン類の測定方法において、
　測定開始時に最初に流す過塩素酸を含有するコハク酸−酸緩衝液からなる溶離液Ｅにアジ化ナトリウムを添加させると、アジ化ナトリウムを含有させない溶離液よりも、ＨｂＦ、不安定型Ｈｂ１ｃ、安定型Ｈｂ１ｃが良好に分離され、測定精度も良好となる」
　ことが記載されていることになる。
　そして、上記「（イ−１）」の（vii）において検討したように、引用発明の「ヘモグロビン類の測定方法」は、少なくとも、ＨｂＦ、不安定型ＨｂＡ１ｃ、安定型ＨｂＡ１ｃを有効に分離して、各ヘモグロビン類を測定するものであり、また、引用発明においても、ＨｂＦ、不安定型ＨｂＡ１ｃ、安定型ＨｂＡ１ｃを、より有効に分離して、測定精度を上げようとする課題を有することは自明であることから、引用発明のカチオン交換液体クロマトグラフィーによるヘモグロビン類の測定方法において、ＨｂＦ、不安定型ＨｂＡ１ｃ、安定型ＨｂＡ１ｃを、より有効に分離して、測定精度を上げようとする課題を解決するために、測定開始時に最初に流すための、５５ｍＭの過塩素酸を含有するｐＨ５．３の２０ｍＭコハク酸−２０ｍＭリン酸緩衝液からなる溶離液Ａを、そのまま流すのではなく、上記引用刊行物Ｂに記載された発明のごとく、溶離液Ａにアジ化ナトリウムを添加して流そうとすることは当業者であれば容易に想到できることである。
　さらに、上記引用刊行物Ｂの摘記事項（３Ｂ−４）に、
「【００７５】また、本発明においては、
上記溶離液Ａ〜Ｈの少なくとも一種の溶離液にアジ化物イオンを添加するのがより好ましい
アジ化物イオンは、溶離液
溶血液の
両方に含有されていても良い
【００７６】また、上記
アジ化物イオンの溶離液あるいは溶血液中の濃度は、０．００１〜０．５重量％であることが好ましく
記濃度が、０．００１重量％より少ないと、分離能向上の効果がなく、また０．５重量％より多くても分離能は向上しないためである
　と記載されており、この記載によれば、溶離液および溶血液（試料）のどちらか一方、又は両方にアジ化物イオンを添加すると、各ヘモグロビン類の分離の向上の効果があることから、アジ化物イオンを添加して各ヘモグロビン類の分離の向上の図る際、溶離液および溶血液（試料）のどちらか一方にアジ化物イオンを添加するか、又は両方にアジ化物イオンを添加するかは当業者が必要に応じて適宜選択し得る事項であるといえ、本願補正発明のごとく、「上記溶血試薬および上記溶離液Ａにアジ化物イオンが含有され」ている構成にすることは、単なる当業者が必要に応じて適宜選択し得る設計的事項にすぎないものである。
　
・相違点（う）について
　引用発明では、測定開始時に最初に流すための、５５ｍＭの過塩素酸を含有するｐＨ５．３の２０ｍＭコハク酸−２０ｍＭリン酸緩衝液からなる溶離液Ａと、２００ｍＭの過塩素酸を含有する ｐＨ８．０の２０ｍＭコハク酸−２０ｍＭリン酸緩衝液からなる溶離液Ｂを用いて、ヘモグロビン類の測定しているが、上記引用刊行物Ａの摘記事項（３Ａ−３）に、
「【００１９】（好ましい溶離液）本発明で用いられる
溶離液は、
ｐＨ４．０〜６．８で緩衝能を持つ
　と記載され、また、摘記事項（３Ａ−５）に、
「【００４３】・・・そのため、
ＨｂＡ０成分を溶出するために、カラムに流入する際の溶離液のｐＨを６．８以上にすることがより好ましい
【００４４】この条件を満たすため、測定に用いる溶離液の内、少なくともひとつの溶離液のｐＨが６．８以上であることが必要である。
本溶離液のｐＨは望ましくは７．０〜１２．０であり
　と記載されており、前者に記載されたｐＨ４．０〜６．８の溶離液が引用発明の溶離液Ａ（ｐＨ５．３）に相当し、後者に記載されたｐＨ７．０〜１２．０の溶離液が溶離液Ｂ（ｐＨ８．０）に相当することは明らかである。
　以上のことから、引用発明の溶離液Ａは、ｐＨ４．０〜６．８の範囲にあり、また、溶離液Ｂは、ｐＨ７．０〜１２．０の範囲あって、以下の計算により、溶離液ＢのｐＨが溶離液ＡのｐＨよりも「０．２〜８．０」高いことになる。
　
１２．０（溶離液Ｂの最大ｐＨ）−４．０（溶離液Ａの最小ｐＨ）＝８．０
　
７．０（溶離液Ｂの最小ｐＨ）−６．８（溶離液Ａの最大ｐＨ）＝０．２
　
　そうすると、引用発明の「０．２〜８．０」という範囲は、本願補正発明と引用の「０．１〜８．０」に包含される範囲であって、実質的に相違点とはいえない。
　仮に本願補正発明では、溶離液のｐＨのが溶離液ＡのｐＨより、下限値において「０．１」高いのに対して、引用発明では、溶離液ＢのｐＨが溶離液ＡのｐＨよりも下限値において「０．２」高い点で相違するとしても、上記引用刊行物Ａの摘記事項（３Ａ−５）に、
「【００４２】ヘモグロビンはｐＨが等電点より酸性側からアルカリ側になると、総荷電がプラスからマイナスに変わるため、充填剤の陽イオン交換基との『電気的反発力によってＨｂＡ０成分を溶出』させることができる。」
　と記載されているように、引用刊行物Ａには、ヘモグロビンの等電位をまたぐようにｐＨを変動させてヘモグロビンを分離するというカチオン変換クロマトグラフィーによる分離の原理が記載されている。
　そうすると、引用発明における溶離液Ａと溶離液ＢともｐＨの差は、分離しようとするヘモグロビンの等電位を考慮して、それを跨ぐ用に決めればよいのであって、引用発明において、容易液ＢのｐＨが溶離液ＡのｐＨよりも下限値において「０．１」高く設定する程度のことは当業者が適宜決め得る単なる設計的事項にすぎない。
　
・相違点（え）について
（え−１）上記引用刊行物Ａの摘記事項（３Ａ−３）に、
「【００１３】本発明で用いられる
溶離液としては、有機酸又は無機酸、及びこれらの塩類などからなる公知の緩衝液が好ましく
塩濃度としては１〜１０００ｍＭが好ましく
　と記載されており、さらに、上記「（イ−１）」の（vi）において検討したように、引用発明では、２００ｍＭの過塩素酸を含有する溶離液Ｂの方が、５５ｍＭの過塩素酸を含有する溶離液Ａより塩濃度が高いことは明らかであることを考慮すると、引用発明おいて、塩濃度の高い溶離液Ｂは２〜１０００ｍＭの塩濃度をとり、塩濃度の低い溶離液Ａは、１〜９９９ｍＭの塩濃度をとる可能性があることから、溶離液Ｂの塩濃度が溶離液Ａの塩濃度より「１〜９９９ｍＭ」高くできることは明らかである。
　
（え−２）ところで、例えば、特開平１０−２３９３０１号公報に、
「【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、液体クロマトグラフィーによる糖化ヘモグロビンの測定方法に関する。
・・・
【０００３】血液中の糖化ヘモグロビンの濃度の測定は、主にカチオン交換反応を利用した液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）法により行われている（特公平８−７１９８号公報参照）。血液中のＨｂＡ１ｃの濃度は、血液試料をＨＰＬＣにかけて得られるクロマトグラムにおける全ヘモグロビンピーク（糖化ヘモグロビンピーク＋非糖化ヘモグロビンピーク）面積に対するＨｂＡ１ｃピーク面積の割合（％）として表される。従って、クロマトグラムには全ヘモグロビンピークが正確に描かれていなければならない。また、
この測定方法は、近年では、測定時間の短縮化が進み、１検体あたり数分間で測定が行われている
【０００４】上記
糖化ヘモグロビンの濃度の測定のためのカチオン交換反応を利用したＨＰＬＣ法においては
溶離液Ａ通液時には、試料中の非糖化ヘモグロビンは充填剤に保持され、糖化ヘモグロビンは分離されて溶出する。そして、溶離液Ｂは溶出力が強いため、溶離液Ａの後に通液されることにより保持されていた非糖化ヘモグロビンが速やかに溶出する
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】血液中のＨｂＡ１ｃ濃度の正常値は、おおよそ４〜６％といわれている。一方、正常人レベルで非糖化ヘモグロビンの大部分（ヘモグロビンＡ０、以下、ＨｂＡ０という）は、９０％程度であり、ＨｂＡ１ｃのピーク面積の１０倍以上のピーク面積があるため、溶出に時間がかかる。測定時間の短縮化のためには、このＨｂＡ０の溶出時間の短縮が極めて重要である。また、従来の方法において、ＨｂＡ１ｃの分画は、他の前後するピークと極めて隣接しており、測定時間短縮のためにＨｂＡ１ｃ分画周辺の分離を改善することはむずかしい。
【０００６】また、
溶離液Ｂの溶出力を強める（ｐＨや塩濃度を溶離液Ａに比して大きくする）ことによりＨｂＡ０の溶出時間を短縮することができる
　と記載されているように、チオン交換液体クロマトグラフィーによるヘモグロビン類の測定分野において、溶離液Ｂの塩濃度と溶離液Ａの塩濃度との濃度差を大きくすればするほどＨｂＡ０の溶出時間を短縮することができ、逆に、溶離液Ｂの塩濃度と溶離液Ａの塩濃度との濃度差を小さくすればするほどＨｂＡ０の溶出時間が長くなることは、技術常識である。
　そして、上記特開平１０−２３９３０１号公報に、
「【０００３】血液中の糖化ヘモグロビンの濃度の測定は、主にカチオン交換反応を利用した液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）法により行われている・・・また、
この測定方法は、近年では、測定時間の短縮化が進み、１検体あたり数分間で測定が行われている
　と記載されているように、引用発明のカチオン交換液体クロマトグラフィーによるヘモグロビン類の測定方法においても、ヘモグロビン類の測定時間を短くする課題が存在することは明らかであるから、引用発明において、ヘモグロビン類の測定時間が長くならないようにする、すなわち測定時間を短くするために、上記（え−１）において検討した、溶離液Ｂの塩濃度が溶離液Ａの塩濃度より「１〜９９９ｍＭ」高くする構成のうちの下限値を、上記技術常識のごとく、ＨｂＡ０の溶出時間が長くならないように大きくして、測定時間を短くすることは当業者が容易になし得るものであり、さらに、どの程度短くするかは当業者が適宜なし得る設計的事項にすぎないものである。
　また、上記溶離液Ｂの塩濃度が溶離液Ａの塩濃度より高くした際の上限値として、９９９ｍＭを採用しても、本願補正発明の１０００ｍＭとの効果の差異は存在しないことから、本願補正発明のごとく、上記溶離液Ｂの塩濃度が溶離液Ａの塩濃度より「１０〜１０００ｍＭ」高くすることは、当業者が必要に応じて適宜なし得る設計的事項にすぎないものである。
　
　そして、本願補正発明によってもたらされる効果は、引用刊行物Ａ及び引用刊行物Ｂに記載された発明から予測される範囲内のものであって、格別のものではない。
　　　
　なお、請求人は、当審から通知した審尋に対する回答書において、
（ａ）「引例２に記載された発明は、ヘモグロビンＡ０よりも後に溶出するヘモグロビンＡ２の分離性能を向上させるための発明であって、アジ化物イオンがヘモグロビンＡ２の分離性能に影響することは記載されているものの、ヘモグロビンＦ、不安定型ヘモグロビンＡ１ｃ及び安定型ヘモグロビンＡ１ｃの測定において、アジ化物イオンがこれらのヘモグロビン類の分離性能に影響することについての記載や示唆は全くありません。当然ながら、アジ化物イオンを溶離液及び溶血液の両方に含有させることで、ヘモグロビンＦの分離能がさらに向上することについては全く記載されておりません。従って、引例２に記載された発明からは、不安定型ヘモグロビンＡ１ｃの近くに溶出するヘモグロビンＦの分離性能をさらに向上させ、より高精度でヘモグロビンＦ、不安定型ヘモグロビンＡ１ｃ及び安定型ヘモグロビンＡ１ｃを測定しようとした場合に、溶離液及び溶血液の両方にアジ化物イオンを含有させるといった着想は得られません。」
　旨の主張、及び、
（ｂ）「参考例１，２のヘモグロビンＦのＣＶ値と、実施例３，４のヘモグロビンＦのＣＶ値とは、その測定値において差異が認められるのは明らかであります。即ち、溶離液Ａ及び溶血試薬の両方にアジ化物イオンを含有させた実施例３，４は、溶離液又は溶離試薬のいずれか一方にしかアジ化物イオンを含有させていない参考例１，２よりも、さらに優れた測定精度を示しているのは明らかであります。」
　旨の主張をしている。
　しかしながら、上記「（イ−２）」の「・相違点（い）について」において検討したように、上記引用刊行物Ｂ（引例２）には、
「カチオン交換液体クロマトグラフィーによるヘモグロビン類の測定方法において、
　測定開始時に最初に流す過塩素酸を含有するコハク酸−酸緩衝液からなる溶離液Ｅにアジ化ナトリウムを添加させると、アジ化ナトリウムを含有させない溶離液よりも、ＨｂＦ、不安定型Ｈｂ１ｃ、安定型Ｈｂ１ｃが良好に分離され、測定精度も良好となる」
　ことが記載されていることから、引用発明のカチオン交換液体クロマトグラフィーによるヘモグロビン類の測定方法においても、ＨｂＦ、不安定型ＨｂＡ１ｃ、安定型ＨｂＡ１ｃを、より有効に分離して、測定精度を上げようとする課題を解決するために、測定開始時に最初に流すための、５５ｍＭの過塩素酸を含有するｐＨ５．３の２０ｍＭコハク酸−２０ｍＭリン酸緩衝液からなる溶離液Ａを、そのまま流すのではなく、上記引用刊行物Ｂに記載された発明のごとく、溶離液Ａにアジ化ナトリウムを添加して流そうとすることは当業者であれば容易に想到できることであることである。（（ａ））
　さらに、上記引用刊行物Ｂの摘記事項（３Ｂ−４）に記載されているように、溶離液および溶血液（試料）のどちらか一方、又は両方にアジ化物イオンを添加すると、各ヘモグロビン類の分離の向上の効果があり、また、本件出願明細書の段落【００１０】には、
「【発明が解決しようとする課題】
　本発明の目的は、上記従来の問題点に鑑み、特に安定型ＨｂＡ１ｃを短時間で分離し、その比率を高精度で測定することができるヘモグロビン類の測定方法を提供することにある。」と記載されており、さらに、段落【０１０２】の【表１】のＨｂＡ１ｃの値をみると、参考例１、２（平成２２年９月１０日付け手続補正書で補正）及び実施例３のいずれも、３回の測定のうち１回が平均値と異なって、ＣＶ値が０．０８％であることを考慮すると、本願補正発明の目的からすれば、溶血試薬と溶離液Ａのいずれか一方にアジ化物イオンが添加されていても、溶血試薬および溶離液Ａの両方にアジ化物イオンが添加されていても、ＨｂＡ１ｃのＣＶ値は変わらないことから、溶血試薬と溶離液Ａのいずれか一方にアジ化物イオンが添加するか、溶血試薬および溶離液Ａの両方にアジ化物イオンが添加されするかは当業者が必要に応じて適宜選択し得る設計的事項にすぎないものである。
　そして、請求人は、上記（ｂ）において、
「参考例１，２のヘモグロビンＦのＣＶ値と、実施例３，４のヘモグロビンＦのＣＶ値とは、その測定値において差異が認められるのは明らかであります」
　と主張しているが、ＨｂＦ（ヘモグロビンＦ）を精度良く測定することが、本願補正発明の本来の目的ではないし、さらに、上記【表１】の参考例１，２、及び実施例３の標準偏差をみると、実施例３のＨｂＡ１ｃの標準偏差は０．０１であり、参考例１、２のＨｂＦの標準偏差は、それぞれ、０．０１、０．０２であり、さらに、測定値は、０．０１ずつ変化すること、及び測定時には必ず誤差が生じることを考慮すると、参考例１、２のＨｂＦの標準偏差の０．０１、０．０２の値は、実施例３のＨｂＡ１ｃの標準偏差の０．０１の値と比べてそれほど異なる値ではないし、ＨｂＦの平均値（２．００、２．０１）は、ＨｂＡ１ｃの平均値（７．０３、７．０４）に比べて小さいことから、同じ標準偏差の値であってもＨｂＦのＣＶ値が、ＨｂＡ１ｃのＣＶ値よりも大きくなることは明らかであるから、参考例１、２のＨｂＦのＣＶ値と実施例３のＨｂＦのＣＶ値に差異があったとしても、本願補正発明の「安定型ＨｂＡ１ｃを短時間で分離し、その比率を高精度で測定する」という目的からすれば、溶血試薬および溶離液Ａの両方にアジ化物イオンが添加された実施例３と、溶離液Ａ又は溶血試薬の何れか一方にアジ化物イオンが添加された参考例１、２とに格別の効果の差異が生ずるとは考えられない。（（ｂ））
　よって、請求人の主張は採用できないものである。
　　
　したがって、本願補正発明は、引用刊行物Ａ及び引用刊行物Ｂに記載された発明に基づいて当業者が容易に発明をすることができたものであるから、特許法第２９条第２項の規定により特許出願の際独立して特許を受けることができないものである。
　　
　（４）補正却下の決定についてのむすび
　以上のとおりであるから、本件補正は、平成１８年改正前の特許法第１７条の２第５項において準用する同法第１２６条第５項の規定に違反するものであり、同法第１５９条第１項において読み替えて準用する同法第５３条第１項の規定により却下しなければならないものである。　
　　　　　　　　　　　　　　
第３　本願発明について
　１．本願発明
　平成２３年１０月１２日付けの手続補正は上記のとおり却下されることとなったので、本願の請求項１〜２に係る発明は、平成２２年９月１０日付け手続補正書で補正された特許請求の範囲の請求項１〜２に記載された事項により特定されるとおりのものであって、その請求項１に係る発明（以下、「本願発明」という。）は、上記「第２　２　（１）」の「ア　本件補正前の請求項１（平成２３年２月９日付け手続補正書）」に記載したように、以下のとおりのものである。
　　　　　　　　　
「【請求項１】　カチオン交換液体クロマトグラフィーによるヘモグロビン類の測定方法において、血液検体を溶血させる際に用いるｐＨが５．０〜１０．０の溶血試薬、および、ヘモグロビンＡ０よりも前に溶出するヘモグロビン類を溶出させるための溶離液ＡとヘモグロビンＡ０を溶出させるための溶離液Ｂとの少なくとも２種類の溶離液を用い、上記溶血試薬および上記溶離液Ａにアジ化物イオンが含有され、かつ、上記溶離液Ａにカオトロピックイオンが含有され、上記溶離液ＢのｐＨが溶離液ＡのｐＨより０．１〜８．０高く、かつ、上記溶離液Ｂの塩濃度が溶離液Ａの塩濃度より１０〜１０００ｍＭ高いことを特徴とするヘモグロビン類の測定方法。」
　　　　　　
　２．引用刊行物の記載事項
　原査定の拒絶の理由に引用された引用刊行物の記載事項は上記「第２　２　（３）」の（ア）に記載したとおりである。
　　　　　　　　　
　３．本願発明と引用発明との対比・判断
　上記「第２　２　（３）」の（イ）で検討した本願補正発明は、「ヘモグロビン類」を、「ヘモグロビンＦ、不安定型ヘモグロビンＡ１ｃ及び安定型ヘモグロビンＡ１ｃ」と補正することにより、ヘモグロビンの種類を限定し、特定する補正であるから、特許請求の範囲を減縮するものである。
　そうすると、本願発明の構成要件を全て含み、さらに減縮したものに相当する本願補正発明が、上記「第２　２　（３）」の（イ）において検討したとおり、引用刊行物Ａ及び引用刊行物Ｂに記載された発明に基づいて当業者が容易に発明をすることができたものであることから、本願発明も同様の理由により、引用刊行物Ａ及び引用刊行物Ｂに記載された発明に基づいて当業者が容易に発明をすることができたものである。
　
　４．むすび
　以上のとおり、本願発明は特許法第２９条第２項の規定により特許を受けることができないものであるので、本件出願は、その余の請求項に係る発明について検討するまでもなく、拒絶をすべきものである。
　よって、結論のとおり審決する。