【事件の表示】
　特願２００３−３６９９４５「三次元細胞培養担体、三次元細胞培養方法および三次元動物または植物細胞」拒絶査定不服審判事件〔平成１７年　５月２６日出願公開、特開２００５−１３０７５９〕について、次のとおり審決する。
【結　論】
　本件審判の請求は、成り立たない。
【理　由】
第１　手続の経緯　
　本願は、平成１５年１０月３０日の出願であって、平成２１年１１月２７日付けで拒絶査定がなされ、これに対し、平成２２年３月９日に拒絶査定不服審判の請求がなされるとともに、同日付けで手続補正がなされたものである。
　
第２　平成２２年３月９日付けの手続補正についての補正の却下の決定
　
［補正の却下の決定の結論］
　　平成２２年３月９日付けの手続補正を却下する。
　
［理由］
　
１　補正後の本願発明
　本件補正により、特許請求の範囲の請求項１は、
「【請求項１】
三次元細胞培養担体を収容したバイオリアクターによる細胞の三次元培養方法であって、
該三次元細胞培養担体が、
水酸化フラーレン（Ｃ
60
(ＯＨ)
n
）または多孔質フラーレン
（下線は、補正箇所を示す。）と補正された。　
　
　上記補正は、審判請求人も平成２２年３月９日に提出された審判請求書の「補正の趣旨」の項において「（１）補正の第１は、請求項４により限定し、請求項１，２の「フラーレン」を「水酸化フラーレン（Ｃ60(ＯＨ)n）または多孔質フラーレン」に限定した点にある。」と主張するように、願書に最初に添付した特許請求の範囲の請求項１に記載した発明を特定するために必要な事項である「フラーレン、カーボンナノチューブおよびピーポットからなる群より選択される少なくとも一種の炭素ナノ材料」について、フラーレンの下位概念である「水酸化フラーレン（Ｃ60(ＯＨ)n）または多孔質フラーレンからなる群」とすることにより、「水酸化フラーレン（Ｃ60(ＯＨ)n）または多孔質フラーレンからなる群より選択される少なくとも一種の炭素ナノ材料」に限定したものであって、平成１８年法律第５５号改正附則第３条第１項によりなお従前の例によるとされる同法による改正前の特許法第１７条の２第４項第２号の特許請求の範囲の減縮を目的とするものに該当する。
　そこで、本件補正後の前記請求項１に記載された発明（以下、「本願補正発明」という。）が特許出願の際に、独立して特許を受けることができるものであるか（平成１８年法律第５５号改正附則第３条第１項によりなお従前の例によるとされる同法による改正前の特許法第１７条の２第５項において準用する同法第１２６条第５項の規定に適合するか）について、以下に検討する。
　
２　引用刊行物とその記載事項
　原査定の拒絶の理由に引用された本願出願前に頒布された刊行物１には以下の事項が記載されている。なお、下線は当審が付した。
　
（１）刊行物１：米国特許第５３１０６６９号明細書の記載事項
　
（１ａ）「1. A substrate comprising a fullerene-coated surface having a biological substance attached to the fullerene-coated surface.
・・・中略・・・
4. A cell culture substrate comprising a surface coated with fullerene sufficient to support the attachment and growth of cells.
5. A cell culture substrate of claim 4 wherein the fullerene comprises C60, C70 or a derivative of C60 or C70.    　
6. A cell culture substrate of claim 4 wherein the fullerene comprises a mixture of C60 and C70.
7. A cell culture substrate of claim 6 wherein the substrate comprises a ceramic, a polymer, or a carbon matrix.
・・・中略・・・     　
11. A cell culture substrate of claim 7 wherein the substrate is selected from the group consisting of a cell-culture flask, a cell culture dish, cell culture microcarriers, cell culture macrocarriers, cell culture films and cell culture fibers.
12. A cell culture substrate of claim 4 wherein the fullerene is selected from the group consisting of C60, C70, C76, C78 and C84 or mixtures thereof.
・・・中略・・・    　
14. A cell culture substrate of claim 4 further comprising a substance attached to the fullerene-coated surface for interaction with cells attached to the fullerene-coated surface.
15. A cell culture substrate of claim 14 wherein the substance is selected from the group consisting of a cytokine, a lectin, a hormone, a growth factor, an oncogene product, a monoclonal antibody, an ion channel complex, an antigen receptor, DNA, RNA, polyethylene glycol, glycogen, a drug, an aromatic molecule, a steroid, a phospholipid, a long chain aliphatic substance and an attachment factor.
16. A cell culture substrate of claim 4 further comprising cells attached to the fullerene coated surface.」（第１３欄下から１３行から第１４欄最終行）
（日本語訳：1．生物学的物質がフラーレンで被覆された表面に付着したフラーレンで被覆された表面を有する基板。
・・・中略・・・
4.　
細胞の接着および成長をサポートするのに十分なフラーレンで被覆された表面を含む細胞培養基板
5.　
フラーレンがC
60
、C
70
あるいはC
60
またはC
70
の誘導体を含む、クレーム4の細胞培養基板
6.　フラーレンがC60とC70の混合物を含む、クレーム4の細胞培養基板。
7.　基板がセラミック、ポリマー、あるいは炭素マトリックスを含む、クレーム6の細胞培養基板。
・・・中略・・・
11.　
基板が、細胞培養フラスコ、細胞培養皿、細胞培養マイクロキャリア、細胞培養マクロキャリア、細胞培養フィルムおよび細胞培養ファイバーから成るグループから選ばれる
12.　フラーレンが、C60、C70、C76、C78およびC84から成るグループあるいはその混合から選ばれる、クレーム4の細胞培養基板。
・・・中略・・・
14.　フラーレンで被覆された表面に接着した細胞との相互作用のためにフラーレンで被覆された表面に接着した物質を含むクレーム4の細胞培養基板
15.　物質が、サイトカイニン、レクチン、ホルモン、成長因子、癌遺伝子プロダクト、モノクローナル抗体、イオンチャネル複合体、抗原受容体、DNA、RNA、ポリエチレングリコール、グリコーゲン、薬、芳香性分子、ステロイド、リン脂質、長連鎖脂肪族化合物物質および接着因子から成るグループから選ばれる、クレーム14の細胞培養基板。
16.　フラーレンで被覆された表面に接着した細胞をさらに含む、クレーム4の細胞培養基板）
　
（１ｂ）「SUMMARY OF THE INVENTION
This invention pertains to substrates having a surface coated with fullerene and to the use of such substrates for immobilization and/or manipulation of substances on the surface. The fullerene-coated surface can be used to immobilize a wide variety of biological materials such as cells, macromolecules and drugs. In one embodiment, a surface of a substrate is coated with fullerene and used for attachment and growth of cells. Cell culture substrates having a fullerene-coated surface are useful in methods of growing cells on the fullerene-coated surface. Methods of preparing cell culture substrates for cell attachment and growth by coating a surface with fullerene are disclosed. Cell culture substrates having a fullerene-coated surface can be conditioned for cell attachment and growth by growing a first population of cells on the fullerene-coated surface and exposing the cells to a solvent, such as sulfolane combined with 7% perchloric acid and 3% water, designated herein as SPCA, to remove the cells from the fullerene-coated surface. Subsequently, cell material and solvent is removed from the surface to produce a regenerated fullerene-coated surface. A second population of cells can then be grown on the regenerated fullerene-coated surface and maintained under conditions appropriate for cell growth. Alternatively, the fullerene-coated surface can be conditioned for cell attachment and growth by coating the fullerene-coated surface with a cell attachment factor.
The invention also provides methods of growing cells on fullerene-coated surfaces in the presence of a substance such as a cytokine, antigen, hormone or drug, and to evaluate the interaction between the substance and the cell. Methods for damaging the plasma membrane, for increasing cell membrane premability, and for introducing substances into a cell are also provided. Such methods comprise first attaching cells to a cell culture substrate having a fullerene-coated surface and maintaining the cells under conditions appropriate for cell growth. The cells are then illuminated with light in the presence of oxygen to damage the cell membrane and thereby increase cell membrane permeability. Subsequently, or prior to illumination, the cells are contacted with a substance to be introduced into the cells. The increased cell membrane permeability allows the substance to be introduced into the cell. The method is useful for transfecting a cell with, for example, a vector comprising DNA or RNA.」（第１欄〜第２欄「SUMMARY OF THE INVENTION」の欄）
（日本語訳：この発明は、フラーレンで被覆された表面を有する基板、および表面上の物質の固定および(または)操作のためのそのような基板の使用に関する。フラーレンが被覆された表面は、例えば、細胞、高分子や薬などの多種多様な生物学的材料、を固定するのに使用することができる。ある実施態様において、基板表面はフラーレンで被覆され、細胞の接着および成長に使用される。
フラーレンで被覆された表面を有する細胞培養基板は、フラーレンで被覆された表面上の細胞を成長させる方法に有益である
　この発明は、さらにサイトカイン、抗原、ホルモンあるいは薬のような物質の存在の下でフラーレンが被覆された表面上で細胞を成長させる方法を提供する。また、原形質膜に損傷を与える方法、細胞浸透性を高める方法、そして、細胞に物質を導入する方法も提供される。そのような方法はフラーレンが被覆された表面を有した細胞培養基板に最初に細胞を接着し、細胞増殖に適切な条件の下の細胞を維持することを含む。その後、細胞膜を破壊しそれによって細胞膜透過性を増加するために、細胞は酸素がある状態で光で照らされる。続いて、光照射に先立って、細胞は、細胞へ導入される物質と接触する。増加した細胞膜透過性は、物質が細胞へ導入されることを可能にする。方法は、例えばDNAまたはRNAを含むベクターで細胞に遺伝子導入するのに有益である。）
  　
（１ｃ）「Useful cell culture substrates include devices such as cell culture flasks, cell culture dishes, cell culture microcarriers, cell culture macrocarriers, cell culture films and cell culture fibers.」（第３欄４３行〜４７行）
（日本語訳：
有益な細胞培養基板は、細胞培養フラスコ、細胞培養皿、細胞培養マイクロキャリア、細胞培養マクロキャリア、細胞培養フィルムおよび細胞培養ファイバーのようなデバイスを含む
   　
（１ｄ）「Additional factors, such as extracellular matrix components (e.g., collagen, fibronectin, and polylysine) or attachment peptides (e.g., RGD; Arg-Gly-Asp) can be coated on the cell culture substrate to enhance cell adhesion and growth. 」（第３欄５７行〜６１行）
（日本語訳：更なる因子、例えば細胞外マトリクス成分（例えば、コラーゲン、フィブロネクチンやポリリシン）または接着ペプチド(例えばRGD;Arg-Gly-Asp)などで、細胞の接着と成長を強化するために、細胞培養基板上を被覆することができる。）
　
（１ｅ）「The fullerene surface can be chemically modified to present specifically reactive groups to the cell membrane, e.g., oxidants or reductants. Attachment of different molecules to a fullerene surface could be manipulated to result in a surface which favors attachment of specific molecular or cell types, such as epithelial cells, fibroblasts, primary explants, or T-cell subpopulations by use of, for example, T-cell antigen receptors or antibody bound to the fullerene-coated surface.」（第５欄２８行〜３７行）
（日本語訳：細胞膜に特別な反応基を提供するためにフラーレン表面は化学修飾することができる（例えば、酸化剤や還元剤）。例えばフラーレンを被覆した表面へのＴ細胞抗原受容体または抗体の使用による、
上皮細胞、線維芽細胞、始原始原外植片
Ｔ細胞
　
（１ｆ）「EXAMPLE 2: CELL CULTURE AND ILLUMINATION OF CELLS ON FULLERENE COATED SURFACES」（例２　フラーレンで被覆した表面の上の細胞の細胞培養と照明）の欄には、
A Chinese Hamster Ovary (CHO) cell line （チャイニーズハムスター卵巣細胞系列）
  
３　対比・判断
　刊行物１には、細胞の接着および成長をサポートするのに十分なフラーレンで被覆された表面を含む細胞培養基板が記載され（1a）、また、フラーレンで被覆された表面を有する細胞培養基板は、フラーレンで被覆された表面上の細胞を成長させる方法に有益である旨（1b）が記載されている。
　そうすると、刊行物１の上記記載事項（特に上記（1a），（1b））から、刊行物１には、
「細胞の接着および成長をサポートするのに十分なフラーレンで被覆された表面を含む細胞培養基板の、フラーレンで被覆された表面上の細胞を成長させる方法」の発明（以下、「刊行物１発明」という。）が記載されていると認められる。
　
　そこで、本願補正発明と刊行物１発明とを比較する。
　
（ア）刊行物１発明の「細胞の接着および成長をサポートするのに十分なフラーレンで被覆された表面を含む細胞培養基板」は、「フラーレンで被覆された表面」上の細胞を成長させるものであって、フラーレンで被覆された表面上に細胞を保持して成長、つまり培養させる「細胞培養担体」に相当するものである。
　そして、本願補正発明の「三次元細胞培養担体」は「水酸化フラーレン（Ｃ60(ＯＨ)n）または多孔質フラーレンからなる群より選択される少なくとも一種の炭素ナノ材料を含有する材料」であって、「水酸化フラーレン（Ｃ60(ＯＨ)n）または多孔質フラーレン」はフラーレンの一種といえる。
　そうすると、刊行物１発明の「細胞培養基板」が「細胞の接着および成長をサポートするのに十分なフラーレンで被覆された表面を含む」ことと、本願補正発明の「該三次元細胞培養担体が、水酸化フラーレン（Ｃ60(ＯＨ)n）または多孔質フラーレンからなる群より選択される少なくとも一種の炭素ナノ材料を含有する材料である」こととは、「細胞培養担体が、フラーレンからなる群より選択される少なくとも一種の炭素ナノ材料を含有する材料である」点で共通する。
  　
（イ）刊行物１発明の「細胞」について、刊行物１を参照すると、上皮細胞、線維芽細胞、始原始原外植片、Ｔ細胞（1e）や、チャイニーズハムスター卵巣細胞系列（1f）が例示されていることから、刊行物１発明の「細胞」は、本願補正発明の「ヒト由来細胞、動物細胞または植物細胞」に相当する。
　　
　したがって、両者の間には、以下の一致点及び相違点がある。
　
（一致点）
細胞の培養方法であって、
細胞培養担体が、フラーレンからなる群より選択される少なくとも一種の炭素ナノ材料を含有する材料である、
ヒト由来細胞、動物細胞または植物細胞の細胞培養方法　
　
（相違点１）
　細胞の培養方法が、本願補正発明では「細胞培養担体」として「三次元細胞培養担体」を用い、「三次元細胞培養担体を収容したバイオリアクターによる細胞の三次元培養方法」であるのに対し、刊行物１発明では「細胞培養担体」として、「三次元」細胞培養のためのものであるか特に規定しておらず、また、細胞の三次元の培養方法であるかについても特に規定していない点。　
　
（相違点２）
　フラーレンからなる群が、本願補正発明では、「水酸化フラーレン（Ｃ60(ＯＨ)n）または多孔質フラーレンからなる群」であるのに対し、刊行物１発明では「フラーレン」の種類については特に規定していない点。
　
　そこで、上記各相違点について検討する。
　
（相違点１について）
　刊行物１発明の「細胞培養基板」について、刊行物１を参照すると、細胞培養フラスコ、細胞培養皿、細胞培養マイクロキャリア、細胞培養マクロキャリア、細胞培養フィルムおよび細胞培養ファイバーから成るグループから選ばれることが記載されている（1a，1c）。このうち、特に細胞培養ファイバーについて、ファイバーから構成される細胞培養のための足場は、チャンバーや容器などのバイオリアクタに収容され、三次元の細胞培養に用いられることは、例えば、特表２００３−５２５６０２号公報（【００３４】【００３５】【００３７】）、特表平１１−５０６６１１号公報（第１５頁最終行〜第１６頁１行、第１７頁３行〜１７行）、特開２００１−１２０２５５号公報（【０００４】）、特開平７−２９８８７６号公報（第３欄１２行〜３０行）に記載のとおり本願出願前の周知技術である。
　そうすると、細胞培養ファイバーを細胞培養基板として用いて細胞を培養させた刊行物１に記載された発明は、三次元細胞培養担体を収容したバイオリアクター用いて細胞の三次元培養を行う方法を含むものであるといえるし、あるいは、細胞培養基板として細胞培養ファイバーを選択し、これをバイオリアクタに収容して細胞の三次元培養を行うことは、本願出願前の周知技術から当業者が容易になし得たことである。　
　
（相違点２について）
　刊行物１発明の「フラーレン」について、刊行物１を参照すると、フラーレンとしてC60、C70、あるいはC60またはC70の誘導体が記載され（1a）、さらに、細胞膜に特別な反応基を提供するためにフラーレン表面は化学修飾することができる旨、記載されている（1e）。
　そして、主にバイオ関連の技術分野で研究されているフラーレンの誘導体であって、フラーレンに複数の水酸基を付加した水酸化フラーレンは、例えば特開２００２−７５４２０号公報（【００４２】）、特開２００２−８０４１４号公報（【０００４】）に記載されたとおり、本願出願前の周知の技術である。
　そうすると、刊行物１発明のフラーレンとして、細胞との接着性を考慮し、フラーレンの誘導体の1つである、バイオ関連の技術分野でよく知られた水酸基を付加した水素化フラーレンを採用することも、刊行物１の記載及び周知技術を参照して当業者が容易になし得たことである。
　
（発明の効果について）　
　本願補正発明の、動植物細胞の三次元的でかつ高密度培養を可能とする培養方法および培養担体を提供することができるとの効果は、刊行物１に記載された事項および周知技術から当業者が予測し得た程度のものである。
　
　したがって、本願補正発明は、刊行物１に記載された発明及び周知技術に基いて、当業者が容易に発明をすることができたものであるから、特許法第２９条第２項の規定により特許出願の際独立して特許を受けることができないものである。　
　
４　むすび　
　以上のとおり、本件補正は、特許法第１７条の２第５項で準用する同法第１２６条第５項の規定に違反するものであり、特許法第１５９条第１項で読み替えて準用する特許法第５３条第１項の規定により却下されるべきものである。　
　
第３　本願発明について　
１　本願発明　
　平成２２年３月９日付けの手続補正は上記のとおり却下されることとなったので、本願の請求項１ないし１０に係る発明は、願書に添付された特許請求の範囲の請求項１ないし１０に記載された事項により特定されるとおりのものと認められ、その請求項１に係る発明は以下のとおりのものである。　
　
　「三次元細胞培養担体を収容したバイオリアクターによる細胞の三次元培養方法であって、該三次元細胞培養担体が、フラーレン、カーボンナノチューブおよびピーポットからなる群より選択される少なくとも一種の炭素ナノ材料を含有する材料であることを特徴とするヒト由来細胞、動物細胞または植物細胞の三次元細胞培養方法。」　
（以下、「本願発明」という。）
　
２　引用刊行物の記載事項
　原査定の拒絶の理由に引用された刊行物１及びその記載事項は、前記「第２　２」に記載したとおりである。
　
３　対比・判断
　本願発明は、前記「第２」で検討した本願補正発明の「水酸化フラーレン（Ｃ60(ＯＨ)n）または多孔質フラーレンからなる群より選択される少なくとも一種の炭素ナノ材料」について、「水酸化フラーレン（Ｃ60(ＯＨ)n）または多孔質フラーレン」の上位概念である「フラーレン」に加え「カーボンナノチューブおよびピーポット」を追加した群とし、「フラーレン、カーボンナノチューブおよびピーポットからなる群より選択される少なくとも一種の炭素ナノ材料」としたものである。　
　そうすると、本願発明の構成要件を全て含んだ本願補正発明が、前記「第２　３」に記載したとおり、刊行物１に記載された発明及び周知技術に基いて、当業者が容易に発明をすることができたものであるから、本願発明も、同様の理由により、刊行物１に記載された発明及び周知技術に基いて、当業者が容易に発明をすることができたものである。　
　
４　むすび
　以上のとおり、本願発明は、刊行物１に記載された発明及び周知技術に基いて、当業者が容易に発明をすることができたものであるから、特許法第２９条第２項の規定により特許を受けることができない。　
　したがって、その他の請求項に係る発明についての判断を示すまでもなく本願は拒絶すべきものである。　
　よって、結論のとおり審決する。