(57)【要約】本願発明は、ポリビニルピロリドンを含む材料をカチオン性ポリマーを含む水溶液に湿潤させた状態で放射線処理を施すことを特徴とする親水性材料の製造方法に係る。本願発明により血小板の付着を抑制する血液処理用材料を製造することができる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ポリビニルピロリドンを含む材料をカチオン性ポリマーを含む水溶液で湿潤させた状態で放射線処理を施すことを特徴とする親水性材料の製造方法。
【請求項２】
該水溶液における該カチオン性ポリマーの濃度が０．０１重量％以上である請求項１に記載の親水性材料の製造方法。
【請求項３】
カチオン性ポリマーが、アミノ基含有ポリマーであることを特徴とする請求項１に記載の親水性材料の製造方法。
【請求項４】
アミノ基含有ポリマーがポリエチレンイミン、ジエチルアミノエチルデキストランおよびその誘導体から選ばれる１種以上を用いる請求項３に記載の親水性材料の製造方法。
【請求項５】
該ポリビニルピロリドンを含む材料が、ポリビニルピロリドンとポリスルホン系ポリマーとを含む請求項１に記載の親水性材料の製造方法。
【請求項６】
中空糸膜の形態を有する請求項１に記載の親水性材料の製造方法。
【請求項７】
人工腎臓用分離膜である請求項１に記載の親水性材料の製造方法。
【請求項８】
ポリビニルピロリドンを含む材料とカチオン性ポリマーから主としてなることを特徴とする親水性材料。
【請求項９】
ポリビニルピロリドンを含む材料とカチオン性ポリマーが水に不溶化されていることを特徴とする親水性材料。
【請求項１０】
請求項１に記載の方法で製造された親水性材料。
【請求項１１】
請求項１０に記載の親水性材料を内蔵してなる人工腎臓。
【発明の詳細な説明】
背景技術
本発明は、親水性材料及びそのの製造方法に関し、特に抗血小板付着性を有する親水性材料及びその製造方法に関する。また、カチオン性ポリマーが付与されており、カチオン性ポリマーの特長を生かした用途に好適に使われる。
従来の技術
現在、様々な高分子材料が医療分野で使用されているが、人工血管、カテーテル、血液バッグ、人工腎臓などの直接血液の接触する用具においては血漿蛋白や血小板などの血液成分の付着、およびこれに起因する血栓の形成は大きな問題である。たとえば血液浄化に使用される分離膜では、血小板の活性化は分離膜に血液が残る残血現象を引き起こす可能性がある。したがって、これらの問題を改善するために、血小板付着の少ない親水性材料が望まれている。
従来、血液浄化用材料の素材としては、セルロース、セルロースアセテート、セルローストリアセテート、ポリオレフィン、ポリイミド、ポリカーボネート、ポリアリレート、ポリエステル、ポリアクリロニトリル、ポリメタクリル酸メチル、ポリアミド、ポリスルホン系ポリマーなどの高分子化合物が用いられてきた。その中でもポリスルホン系ポリマーは耐熱性に優れており、透析膜をはじめとして種々の分離膜やフィルムなどに用いられている。また血液浄化用材料として使用されるときは、血液適合性を付与するためにポリビニルピロリドンなどの親水性高分子をブレンドして用いられている。
発明の目的
しかし、ポリビニルピロリドンなどの親水性高分子のブレンドだけでは、血小板活性化の抑制が不十分であった。本発明の目的は、かかる従来技術の欠点を改良し、血小板の付着を抑制する親水性材料の製造方法を提供することにある。
発明の開示
上記課題を解決するため、本発明は次の構成をとる。すなわち本発明は、ポリビニルピロリドンを含む材料をカチオン性ポリマーを含む水溶液に湿潤させた状態で放射線処理を施すことを特徴とする親水性材料の製造方法およびポリビニルピロリドンを含む材料とカチオン性ポリマーからなることを特徴とする親水性材料である。
発明を実施するための最良の形態
本発明で用いられるポリビニルピロリドンとしては、その重量平均分子量は特に限定されるものではないが、２０００〜２００００００が好ましく、１００００〜１５０００００がより好ましい。入手の容易さの点からは、市販されている重量平均分子量１１０万、４．５万、２．９万、９０００、２９００のものが好適に用いられる。なお、ここで記したポリビニルピロリドンの重量平均分子量は、材料に使用する原料段階での分子量である。作製された親水性材料においては、放射線架橋などの手段を用いた場合にはポリビニルピロリドンの分子量は、原料段階での分子量より大きなものとなっている。
ポリビニルピロリドンの商品例としては、“コリドン”１２ＰＦ、同１７ＰＦ、同２５，同３０、同９０（ＢＡＳＦ社製）、“ルビスコール”Ｋ１７、同Ｋ３０、同Ｋ８０、同Ｋ９０（ＢＡＳＦ社製）、“プラスドン”Ｋ−２９／３２、同Ｋ−２５、同Ｋ−９０、同Ｋ−９０Ｄ、同Ｋ９０−Ｍ（ＩＳＰ社製）等のポリビニルピロリドンが挙げられる。
本発明で用いられるポリビニルピロリドンは、ホモポリマーが好適であるが、本発明の効果を妨げない範囲で他のモノマーと共重合されたものであってもかまわない。ここで、他の共重合モノマーの量は特に限定するものではないが、８０重量％以下であることが好ましい。
ポリビニルピロリドン共重合体の商品例としては、“コリドン”ＶＡ６４、（ＢＡＳＦ社製）、“ルビスコール”ＶＡ６４（ＢＡＳＦ社製）、“ルビテック”ＶＰＩ５５Ｋ１８Ｐ、同ＶＰＩ５５Ｋ７２Ｗ、同Ｑｕａｔ７３Ｗ、同ＶＰＭＡ９１Ｗ、同ＶＰＣ５５Ｋ６５Ｗ（ＢＡＳＦ社製）、“プラスドン”Ｓ−６３０（ＩＳＰ社製）等のポリビニルピロリドン共重合体が挙げられる。
本発明の親水性材料は、ポリビニルピロリドンを含むものであるが、ポリビニルピロリドンを材料形態として安定に保持し、大量に溶出したり、変形したり、崩壊したりするのを防ぐために、ポリビニルピロリドンの支持体となる素材を複合させて用いることが好ましい。ポリビニルピロリドンと前記支持体となる素材との構成・複合方法は特に限定されるものではなく、支持体となる素材とポリビニルピロリドンが積層されていても良いが、混合または相溶されている方が好ましい。
また、支持体となる素材としては特に限定されるものではないが、有機高分子ポリマーであることが好ましい。かかる有機高分子ポリマーとしてはポリスルホン系ポリマーが好ましく用いられる。
本発明の親水性材料に含まれるポリビニルピロリドンの量としては特に限定しないが多くのばあい支持体にある程度の強度が必要であるため、好ましくは０．１重量％以上５０重量％以下、さらに好ましくは１重量％以上１０重量％以下であることが好ましい。この含有量は元素分析、ＮＭＲなどの公知の方法を単独もしくは組み合わせて確認すればよい。
本発明で親水性材料の素材として好ましく用いられるポリスルホン系ポリマーとしては、主鎖に芳香環、スルフォニル基およびエーテル基をもつもので、例えば、次の化学式１、化学式２で示されるポリスルホンが好適に使用されるが、本発明ではこれらに限定されない。ここで、式中のｎは重合度を示す整数であり、好ましくは５０〜８０の範囲の整数である。
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ポリスルホンの商品例としては、“ユーデル”Ｐ−１７００、同Ｐ−３５００
（テイジンアモコ社製）、“ウルトラゾーン”Ｓ３０１０、同Ｓ６０１０（ＢＡＳＦ社製）、“ビクトレックス”（住友化学）、“レーデル”Ａ−２００Ａ、同Ａ−３００、“レーデル”Ｒ−５０００、同Ｒ−５８００（テイジンアモコ社製）、“ウルトラゾーン”Ｅ（ＢＡＳＦ社製）、“スミカエクセル”（住友化学工業社製）等のポリスルホンが挙げられる。
本発明で用いられるポリスルホンは、上記した化学式１及び／又は化学式２で表される繰り返し単位のみからなるポリマーが好適であるが、本発明の効果を妨げない範囲で他のモノマーと共重合したものであっても良い。他の共重合モノマーの添加量は特に限定するものではないが、１０重量％以下であることが好ましい。
本発明の親水性材料には、前記ポリビニルピロリドンおよび支持体となる素材（例えば、ポリスルホン）以外のポリマーや添加剤などが、本発明の効果を妨げない範囲で混合されていても良い。ポリビニルピロリドンおよび支持体となる素材以外の添加量は特に限定されるわけではないが、１０重量％以下であることが好ましい。
本発明の親水性材料の形態は特に限定されるものではなく、たとえば、チューブ状、ビーズ、編み地、不織布、カットファイバー、平膜、中空糸膜などの形態で用いられる。また、親水性材料を溶媒に溶解してある特定の形に成型したもの、コーティングしたものでもよい。しかし、人工腎臓機能を兼ねたり、処理効率すなわち血液と接触する表面積の確保などを考慮すると、中空糸膜であることが好ましい。
また、本発明の親水性材料が分離膜である場合の膜厚は１０〜８０μｍが好ましく、２０〜５０μｍがより好ましい。又、膜の平均孔径については、１％アルブミン透過率が０．５％以上であることが好ましく、１％以上がより好ましい。中空糸膜の場合は中空糸の内径は１００〜３００μｍであることが好ましく、１５０〜２００μｍがより好ましい。
中空糸膜の形態とする場合、その中空糸膜の製造方法としては、従来知られている方法を使用することができるが、好ましい方法としてつぎのような方法がある。
すなわち、ポリスルホン系ポリマーに、ポリビニルピロリドンを溶媒で混和溶解した溶液を製膜原液として用いることを特徴とする分離膜の製造方法である。
ここで、ポリスルホン系ポリマーとポリビニルピロリドンの重量比率は、２０：１〜１：５が好ましく、５：１〜１：１がより好ましい。
また、ポリスルホン系ポリマーとポリビニルピロリドンを混和溶解するための良溶媒としては、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、ジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミド、Ｎ−メチルピロリドン、ジオキサンなどが好ましく用いられる。ポリスルホン系ポリマーの濃度は、１０〜３０重量％が好ましく、１５〜２５重量％がより好ましい。
前記製膜原液を用いて製膜する方法は特に限定されず、公知の方法を用いることができる。たとえば、二重環状口金から製膜原液を吐出する際に内側に注入液を流し、乾式部を走行させた後、凝固浴へ導く方法を用いることができる。この際、乾式部の湿度が影響を与えるために、乾式部走行中に膜外表面からの水分補給によって、外表面近傍での乾燥による過度の緻密化を防ぎ、結果として透析の際の透過・拡散抵抗を減らすことも可能である。ただし、相対湿度が高すぎると水分により外表面で緻密層が形成されやすく、結果として透析の際の透過・拡散抵抗を増大する傾向がある。そのため、乾式部の相対湿度としては６０〜９０％が好適である。また、注入液の組成としては、プロセス適性から、製膜原液に用いた溶媒を基本とする組成からなるものを用いることが好ましい。ここで、注入液の濃度としては、例えばジメチルアセトアミドを用いたときは、４５〜８０重量％が好ましく、より好ましくは６０〜７５重量％の水溶液が好適に用いられる。
ここでいうカチオン性ポリマーとは特に限定されないが、窒素原子を含有するポリマー、すなわち１級、２級、３級アミノ基、４級アンモニウム塩のいずれか１種以上を有するアミノ基含有ポリマー、イミノ基含有ポリマー、アミド基含有ポリマーなどが好ましく用いられる。これらのポリマーを構成する原料成分の共重合体またはノニオン、アニオン性化合物との共重合体なども好ましく使用される。ここで、該カチオン性ポリマーは直鎖状、分岐状、環状のいずれであってもよい。また、分子量は好ましくは６００以上１０００万以下である。
アミノ基含有ポリマーの例としては、ポリアルキレンイミン、ポリアリルアミン、ポリビニルアミン、ジアルキルアミノアルキルデキストラン、キトサン、ポリオルニチン、ポリリジンおよびそれらに置換基の導入されたもの、およびこれらを構成するモノマー単位からなる共重合体などが挙げられる。
ポリエチレンイミンには、分子量６００以上１０００万以下の直鎖状、分岐状のものが好ましく用いられる。
また、ポリエチレンイミン誘導体としては、ポリエチレンイミンをアルキル化、カルボキシル化、フェニル化、リン酸化、スルホン化など、所望の割合で誘導体化したものが挙げられる。
カチオン性ポリマーの中でも毒性の低さ、入手のしやすさ、取り扱いのしやすさなどから、分岐状のポリエチレンイミンやジエチルアミノエチルデキストランが特に好適に用いられる。
本発明においては、ポリビニルピロリドンを含む材料とカチオン性ポリマーが必要構成要件であり、かつ両者が簡単には水に溶けない状態になっていることが必要である。ここでいう簡単には水に溶けない状態すなわち不溶化状態とは、親水性材料を水に入れたときの溶解度が１％以下であることをいう。この溶解度は親水性材料を材料重量の９倍量の３７℃の水に１時間浸漬した後にピンセット等で引き上げ、残った水を５０℃以下で真空乾燥させた後に残った固形分の重量の浸漬前の材料重量に対する割合である。不溶化されていない場合は、実際に使用する場合の溶出物が多くなる危険性があり、安全上好ましくない。両者を不溶化させるには、水不溶性の支持体とこれらを分子レベルまで混錬させることによっても達成できるが、ある形態に成型した後に熱もしくは放射線などのエネルギーを用いて不溶化させることが出来る。特に、放射線を用いた処理はポリビニルピロリドンを容易に架橋させるので好ましい。
ポリビニルピロリドン含有材料を湿潤させるカチオン性ポリマーを含む水溶液中の該ポリマーの濃度は、０．０１重量％以上、好ましくは０．０５重量％以上、より好ましくは０．１重量％以上であることが、血小板付着抑制効果を上げる点で好ましい。
本発明では使用する放射線処理とは、その機序は明確ではないが、材料中のポリビニルピロリドンを架橋することに効果がある。放射線処理の方法は特に限定されず、放射線で材料中にブレンドされたポリビニルピロリドンを処理する方法、また、ポリスルホンを成形後に全体または表面にポリビニルピロリドンやビニルピロリドンモノマーをコーティングした後、放射線照射によりポリビニルピロリドンを処理し、ポリスルホン支持体と結合させる方法などを用いることができる。放射線処理としては、ポリビニルピロリドン含有材料をカチオン性ポリマーを含む水溶液に湿潤状態でγ線・電子線などを照射すればよい。
このようにカチオン性ポリマーを含む水溶液中に湿潤状態で放射線を照射することにより、カチオン性ポリマーがポリビニルピロリドン含有材料に導入されると同時に、ポリビニルピロリドンの過度の架橋が抑制され、ポリビニルピロリドンの親水性が保持されることにより、抗血小板付着性が付与されると考えられる。
ここでいう湿潤状態とは、水溶液中またはポリビニルピロリドン含有材料を浸漬していた水溶液を除去して乾燥させない状態のことを言う。すなわちポリビニルピロリドン含有材料に水が含まれる状態を言う。その程度は特に限定されるものではないが、通常、ポリビニルピロリドン含有材料がその重量に対して１重量％以上の水分を含んでいることが好ましい。また、ポリビニルピロリドン含有材料が水溶液に浸漬された状態でもよい。放射線の吸収線量は湿潤状態で１０〜５０ｋＧｙ程度が好ましく、２０ｋＧｙを超える線量を照射した場合は、滅菌処理を同時に行うことも可能である。この際、吸収線量は線量測定ラベルをモジュールの表面に貼り付けるなどして測定することができる。
滅菌線量が不足する場合は、放射線照射してポリビニルピロリドンを処理した後、蒸気滅菌などを行えばよい。
放射線の１０ｋＧｙ未満ではポリビニルピロリドンが処理されにくい。また、５０ｋＧｙより照射量が多くなると支持体であるポリスルホンやケースなどの他の素材への劣化の影響が大きくなることがある。
本発明の製造方法で製造された親水性材料は、血液浄化用などに好適に使用することができる。
以下、本発明の親水性材料が中空糸膜であるときの血小板付着実験方法を記載する。
中空糸分離膜を３０本束ね、中空糸中空部を閉塞しないようにエポキシ系ポッティング剤で両末端をガラス管モジュールケースに固定し、ミニモジュールを作成する。該ミニモジュールの直径は約７ｍｍ、長さは約１０ｃｍである。該ミニモジュールの血液入口と透析液出口をシリコーンチューブで繋ぎ、血液出口から蒸留水１００ｍｌを１０ｍｌ／分の流速で流し、中空糸およびモジュール内部を洗浄した後、生理食塩水を充填し、透析液入口、出口をキャップする。次に、中空糸側を０．５９ｍｌ／分の流速で、２時間生理食塩水プライミングした後、３．２％クエン酸三ナトリウム２水和物水溶液と家兎新鮮血を１：９（容積比）で混合した血液７ｍｌを０．５９ｍｌ／分の流速で１時間灌流する。その後、生理食塩水で１０ｍｌシリンジにて洗浄し、３％グルタルアルデヒド水溶液を中空糸側、透析液側に充填し、一晩以上置き、グルタルアルデヒド固定を行う。その後、蒸留水にて、グルタルアルデヒドを洗浄し、ミニモジュールから中空糸膜を切り出して減圧乾燥を５時間以上行った。中空糸膜を走査型電子顕微鏡の試料台に両面テープで貼り付けた後、長手方向にスライスし、内表面を露出させた。その後、スパッタリングにより、Ｐｔ−Ｐｄの薄膜を試料に形成させた。走査型電子顕微鏡（日立社製Ｓ８００）にて中空糸膜の内表面を走査型電子顕微鏡にて３０００倍で観察し、１．０×１０３μｍ２の面積中の付着血小板を数えた。付着血小板数は、少ない方が優れた分離膜である。
つぎに本発明の親水性材料がフィルムであるときの血小板付着実験方法を記載する。
フィルム状の成型体を１８ｍｍφのポリスチレン製の円筒管の底に平板状に設置し、生理食塩水で満たした。３．２％クエン酸三ナトリウム２水和物水溶液と家兎新鮮血を１：９（容積比）で混合した血液を１０００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、上清を取り出した（血漿１とする）。その後、上清を取り出したあとの血液を３０００ｒｐｍで１０分間再度遠心分離し、上清を取り出した（血漿２とする）。血漿１に血漿２を添加することで希釈（血漿２は血漿１に比べて血小板の濃度が低い）し、血小板数２０×１０６個／ｍｌの富血小板血漿（ＰＲＰ）を調製した。準備した円筒管の生理食塩水を捨てた後ＰＲＰを１．０ｍｌ入れて３７℃にて１時間振盪させた。その後、生理食塩水で３回洗浄し、３％グルタルアルデヒド水溶液で血液成分の固定を行い、蒸留水にて洗浄した後、減圧乾燥を５時間以上行った。このフィルムを走査型電子顕微鏡の試料台に両面テープで貼り付けた。その後、スパッタリングにより、Ｐｔ−Ｐｄの薄膜を試料に形成させた。走査型電子顕微鏡（日立社製Ｓ８００）にて試料表面を観察し（フィルムと円筒管の接着部は血液が溜まりやすいので、主としてフィルム中央部を３０００倍で観察した）、１．０×１０３μｍ２の面積中の付着血小板を数えた。
本発明で得られた親水性材料は優れた血液適合性を有するが、カチオン性のポリマーが付与されていることにより、過酸化脂質やエンドトキシンなどの吸着性能を親水性材料に付与することが可能である。過酸化脂質（酸化ＬＤＬ）吸着の性能評価は以下の通りである。
（１）抗酸化ＬＤＬ抗体の作製
板部らが作製したものを用いた（Ｈ．Ｉｔａｂｅ  ｅｔａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９：１５２７４、１９９４）。すなわち、ヒト粥状硬化病巣ホモジェネートをマウスに注射して免疫、そのマウスの脾臓からハイブリドーマを作製し、硫酸銅処理ＬＤＬと反応するものを選別した。抗体クラスは、マウスＩｇＭで、未処理ＬＤＬ、アセチルＬＤＬ、マロンジアルデヒドＬＤＬとは反応しない。フォスファチジルコリンのアルデヒド誘導体やヒドロペルオキシドを含めていくつかのフォスファチジルコリン過酸化反応生成物と反応する。１５０ｍＭのＮａＣｌを含む１０ｍＭほう酸緩衝液（ｐＨ８．５）に溶解したものを用いた（蛋白濃度０．６０ｍｇ／ｍｌ）。
（２）酸化ＬＤＬの調製
市販のＬＤＬ（フナコシ製）を脱塩した後、０．２ｍｇ／ｍｌとなるようにリン酸緩衝液（以下ＰＢＳという）で希釈後、０．５ｍＭ硫酸銅水溶液を１ｗｔ％添加し、３７℃で１６時間反応させた。２５ｍＭのエチレンジアミン四酢酸（以下ＥＤＴＡという）を１ｗｔ％、１０ｗｔ％アジ化ナトリウムを０．０２ｗｔ％となるように添加したものを酸化ＬＤＬ標品とした。
（３）吸着操作
健常者血漿（日本人、３０歳）に上記酸化ＬＤＬを２μｇ／ｍｌとなるように添加した。
内径２００μｍ、膜厚４０μｍの中空糸膜から、長さ１２ｃｍ、本数７０本のミニモジュール（内表面積５３ｃｍ２）を作成し、内径７ｍｍ（外径１０ｍｍ）、長さ２ｃｍのシリコーンチューブ（製品名ＡＲＡＭ）と異形コネクターを介して、内径０．８ｍｍ（外径１ｍｍ）のシリコーンチューブ（製品名ＡＲＡＭ、３７ｃｍのものを両端に２本）でつなぎ、上記血漿１．５ｍｌを０．５ｍｌ／分の流量で２５℃、４時間中空糸内に灌流した（中空糸膜内表面積１ｍ２あたりの血漿量は２．８×１０２ｍｌ／ｍ２）。
さらにミニモジュールをつけずにシリコーンチューブのみで灌流操作も行った。
灌流前後の血漿中の酸化ＬＤＬ、ＬＤＬ、ＨＤＬ濃度を定量することにより、それぞれの吸着除去率を下記式により算出した。
吸着除去率（％）＝ミニモジュールでの吸着除去率（％）−シリコーンチューブのみでの吸着除去率（％）
それぞれの吸着除去率（％）＝１００×（灌流前の濃度−灌流後の濃度）／灌流前の濃度
（４）酸化ＬＤＬ濃度の測定
抗酸化ＬＤＬ抗体をＰＢＳで５μｇ／ｍｌに希釈し、９６穴のプレートに１００μｌ／ウェルずつ分注し、室温で２時間震盪した後、４℃にて一晩以上壁に吸着させた。
ウェル中の抗体溶液を捨て、１ｗｔ％Ｂｏｖｉｎｅ  Ｓｅｒｕｍ  Ａｌｂｍｉｎ（ＢＳＡ、”フラクションＶ”、生化学工業）を含むトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ８．０）を２００μｌ／ウェルずつ分注し、室温で２時間震盪して壁をブロッキングした後、ウェル中のＢＳＡ溶液を捨て、酸化ＬＤＬを含んだ血漿および検量線作成用のスタンダード（０〜２μｇ／ｍｌの酸化ＬＤＬを含むＰＢＳ緩衝液）を１００μｌ／ウェルずつ分注した。その後、室温で３０分震盪した後、４℃で一晩放置した。
室温に戻し、ウェル中の溶液を捨て、０．０５ｗｔ％”トゥイーン−２０”（片山化学）を含むトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ８．０）でウェルを３回洗浄した。洗浄したウェルにＰＢＳで２０００倍に希釈したヒツジ抗アポＢ抗体（ＴＨＥＢＩＮＤＩＮＧ  ＳＩＴＥ）を１００μｌ／ウェルずつ分注し、室温で２時間震盪した後、ウェル中の抗アポＢ抗体を捨て、０．０５ｗｔ％”トゥイーン−２０”を含むトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ８．０）でウェルを３回洗浄した。洗浄したウェルに２ｗｔ％”ブロックエース”（大日本製薬）を含むトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ８．０）で２０００倍に希釈したアルカリ性フォスファターゼ標識ロバ抗ヒツジＩｇＧ抗体（ＣＨＥＭＩＣＯＮ）を１００μｌ／ウェルずつ分注し、室温で２時間震盪した。その後、ウェル中の標識抗体を捨て、０．０５ｗｔ％”トゥイーン−２０”を含むトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ８．０）でウェルを３回洗浄し、さらにトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ８．０）で２回洗浄した。続いて、ｐ−ニトロフェニルリン酸（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｍａｎｎｈｅｉｍ  ＧｍｂＨ）の１ｍｇ／ｍｌ溶液（０．０００５Ｍ  ＭｇＣｌ２、１Ｍジエタノールアミン緩衝液、ｐＨ９．８）を１００μｌ／ウェルずつ分注し、適当な時間室温で反応させた後、４１５ｎｍの吸光度をプレートリーダーで測定した。スタンダードの結果から検量線を引き、酸化ＬＤＬ濃度を決定した。
実施例１
ポリスルホン（テイジンアモコ社製“ユーデル”Ｐ−３５００）１８部、ポリビニルピロリドン（ＢＡＳＦ社製“コリドン”３０）９部をＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミド７３部に加え、９０℃１４時間加熱溶解した。
この製膜原液を外径０．３ｍｍ、内径０．２ｍｍのオリフィス型二重円筒型口金より吐出し芯液としてジメチルアセトアミド５８部、水４２部からなる溶液を吐出させ、乾式長３５０ｍｍを通過した後、水１００％の凝固浴に導き中空糸膜を得た。得られた中空糸膜をポリエチレンイミン（和光純薬社製、分子量７万）１重量％を含む水溶液中でγ線照射した。γ線吸収線量は２８ｋＧｙであった。この中空糸は不溶化状態であった。この中空糸における血小板付着数を表１に示した。なお、本実施例１の親水性材料における酸化ＬＤＬ除去率は２４％であった。
実施例２
実施例１と同様にして得られた中空糸を用いて、ポリエチレンイミン（アルドリッチ試薬、分子量６００）１重量％を含む水溶液中でγ線照射した。γ線吸収線量は２９ｋＧｙであった。この中空糸における血小板付着数を表１に示した。
実施例３
実施例１と同様にして得られた中空糸を用いて、ジエチルアミノエチルデキストラン（ＳＩＧＭＡ社製  分子量５０万）１重量％を含む水溶液中でγ線照射した。γ線吸収線量は２９ｋＧｙであった。この中空糸における血小板付着数を表１に示した。
比較例１
実施例１と同様にして得られた中空糸を用いて、水中でγ線照射した。γ線吸収線量は２９ｋＧｙであった。この中空糸における血小板付着数を表１に示した。なお、本比較例１の材料における酸化ＬＤＬ除去率は１０％であった。
比較例２
実施例１と同様にして得られた中空糸を用いて、ポリビニルピロリドン（ＢＡＳＦ社製“コリドン”９０（分子量１２０万））０．２重量％を含む水溶液中でγ線照射した。γ線吸収線量は２９ｋＧｙであった。この中空糸における血小板付着数を表１に示した。
比較例３
実施例１と同様にして得られた中空糸を用いて、ポリエチレングリコール（和光純薬社製  分子量２万）０．２重量％を含む水溶液中でγ線照射した。γ線吸収線量は２９ｋＧｙであった。この中空糸における血小板付着数を表１に示した。
（ポリスルホンフィルム１の作製）
ポリスルホン（テイジンアモコ社製“ユーデル”Ｐ−３５００）１０重量部、ポリビニルピロリドン（ＢＡＳＦ社製“コリドン”９０）０．５重量部をＮ，Ｎ’−ジメチルアセトアミド８９．５重量部に加え、室温にて溶解し、製膜溶液とした。ホットプレートにて、表面温度が１００度になっているガラス板上で厚さ２０３μｍでキャストした。表面の温度は、接触式温度計により測定した。キャスト後、５分間ホットプレート上で放置し、溶媒を蒸発させた後、ガラス板ごと、水浴へ浸漬しポリスルホンフィルム１を得た。（水浴に浸漬させるのは、フィルムをガラス板からはがしやすくさせるためである。）
（ポリスルホンフィルム２の作製）
ポリスルホン（テイジンアモコ社製“ユーデル”Ｐ−３５００）１０重量部をＮ，Ｎ’−ジメチルアセトアミド９０重量部に加え、室温にて溶解し、製膜溶液とした。ポリスルホンフィルム１と同様にキャストを行いポリスルホンフィルム２を得た。
実施例４
ポリスルホンフィルム１をポリエチレンイミン（ＳＩＧＭＡ社製  分子量７５万）０．１重量％を含む水溶液中でγ線照射した。γ線吸収線量は２９ｋＧｙであった。このフィルムは不溶化状態であった。該フィルムを純水でリンスした後、８０℃の純水中で６０分間撹拌し、純水を入れ替え再び８０℃で６０分間撹拌した後、さらに純水を入れ替え８０℃で６０分間撹拌し、吸着しているわずかなポリエチレンイミンを取り除いた。このフィルムにおける血小板付着数を表１に示した。
比較例４
ポリスルホンフィルム１をポリビニルピロリドン（ＢＡＳＦ社製“コリドン”Ｋ９０）０．１重量％を含む水溶液中でγ線照射した。γ線吸収線量は２７ｋＧｙであった。このフィルムは不溶化状態であった。該フィルムを純水でリンスした後、８０℃の純水中で６０分間撹拌し、純水を入れ替え再び８０℃で６０分間撹拌した後、さらに純水を入れ替え８０℃で６０分間撹拌し、吸着しているポリビニルピロリドンを取り除いた。このフィルムにおける血小板付着数を表１に示した。
比較例５
ポリスルホンフィルム１をポリエチレングリコール（和光純薬社製  分子量２００万）０．１重量％を含む水溶液中でγ線照射した。γ線吸収線量は２８ｋＧｙであった。該フィルムを純水でリンスした後、８０℃の純水中で６０分間撹拌し、純水を入れ替え再び８０℃で６０分間撹拌した後、さらに純水を入れ替え８０℃で６０分間撹拌し、吸着しているポリエチレングリコールを取り除いた。このフィルムにおける血小板付着数を表１に示した。
比較例６
ポリスルホンフィルム１を、水中でγ線照射した。γ線吸収線量は２８ｋＧｙであった。該フィルムを純水でリンスし、８０℃の純水中で６０分間撹拌し、純水を入れ替え再び８０℃で６０分間撹拌した後、さらに純水を入れ替え８０℃で６０分間撹拌した。このフィルムにおける血小板付着数を表１に示した。
実施例７
ポリスルホンフィルム２をポリエチレンイミン（ＳＩＧＭＡ社製  分子量７５万）０．１重量％を含む水溶液中でγ線照射した。γ線吸収線量は２８ｋＧｙであった。該フィルムを純水でリンスした後、８０℃の純水中で６０分間撹拌し、純水を入れ替え再び８０℃で６０分間撹拌した後、さらに純水を入れ替え８０℃で６０分間撹拌し、吸着しているポリエチレンイミンを取り除いた。このフィルムにおける血小板付着数を表１に示した。
比較例８
ポリスルホンフィルム２をポリビニルピロリドン（ＢＡＳＦ社製“コリドン”９０）０．１重量％を含む水溶液中でγ線照射した。γ線吸収線量は２８ｋＧｙであった。該フィルムを純水でリンスした後、８０℃の純水中で６０分間撹拌し、純水を入れ替え再び８０℃で６０分間撹拌した後、さらに純水を入れ替え８０℃で６０分間撹拌し、吸着しているポリビニルピロリドンを取り除いた。このフィルムにおける血小板付着数を表１に示した。
比較例９
ポリスルホンフィルム２をポリエチレングリコール（和光純薬社製  分子量２００万）０．１重量％を含む水溶液注γ線照射した。γ線吸収線量は２７ｋＧｙであった。該フィルムを純水でリンスした後、８０℃の純水中で６０分間撹拌し、純水を入れ替え再び８０℃で６０分間撹拌した後、さらに純水を入れ替え８０℃で６０分間撹拌し、吸着しているポリエチレングリコールを取り除いた。このフィルムにおける血小板付着数を表１に示した。
比較例１０
ポリスルホンフィルム２を、水中でγ線照射した。γ線吸収線量は２７ｋＧｙであった。該フィルムを純水でリンスし、８０℃の純水中で６０分間撹拌し、純水を入れ替え再び８０℃で６０分間撹拌した後、さらに純水を入れ替え８０℃で６０分間撹拌した。このフィルムにおける血小板付着数を表１に示した。
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表１から、実施例の血小板付着数は小さかったが、カチオン性ポリマーを使用しなかった比較例１および中性のポリビニルピロリドン、ポリエチレングリコールを使用した比較例２，３では血小板付着量が多かった。
産業上の利用可能性
本発明の親水性材料の製造方法は、血液浄化器などの用途に用いられ、特に血液適合性に優れた材料を提供でき、極めて有用な方法である。
【国際調査報告】
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