(57)【要約】新規な血管内皮の血管張力調節機能を改善するための医薬組成物であって、式（１）：2003087080.tif 000007（式中、Ｒ１は、水素原子、アシル基、またはアリールアルキルオキシカルボニル基であり；Ｒ２およびＲ３は、同一でも異なっていてもよく、置換されていてもよいアルキル基、置換されていてもよいアルケニル基または置換されていてもよいアルキニル基であるか、またはＲ２およびＲ３は、一緒になって、シクロアルキル基を形成してもよい。）で表される化合物を含んでなる組成物を提供する。
2003087080.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
血管内皮の血管張力調節機能を改善するための医薬組成物であって、式（１）：
2003087080.tif 000004
（式中、
Ｒ１は、水素原子、アシル基、またはアリールアルキルオキシカルボニル基であり；
Ｒ２およびＲ３は、同一でも異なっていてもよく、置換されていてもよいアルキル基、置換されていてもよいアルケニル基または置換されていてもよいアルキニル基であるか、または
Ｒ２およびＲ３は、一緒になって、シクロアルキル基を形成してもよい。）
で表される化合物またはその薬学的に許容できる塩を有効成分として含んでなる組成物。
【請求項２】
Ｒ１が水素原子である、請求項１記載の組成物。
【請求項３】
Ｒ２およびＲ３が置換されていてもよいアルキル基である、請求項２記載の組成物。
【請求項４】
置換されていてもよいアルキル基が、ｎ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、ｎ−ヘキシル基またはｎ−ヘプチル基である、請求項３記載の組成物。
【請求項５】
式（１）で表される化合物が４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｎ−ペンチル−２，３−ジヒドロベンゾフランである、請求項１記載の組成物。
【請求項６】
血管内皮の血管張力調節機能の改善を必要とする状態が、高血圧、糖尿病および慢性閉塞性動脈硬化症からなる群から選択される疾病によってもたらされる、請求項１記載の組成物。
【請求項７】
血管内皮の血管張力調節機能の改善を必要とする状態が間欠性跛行である、請求項６記載の組成物。
【請求項８】
血管内皮の血管張力調節機能を改善するための方法であって、そのような必要性のある患者に、有効量の式（１）：
2003087080.tif 000005
（式中、
Ｒ１は、水素原子、アシル基、またはアリールアルキルオキシカルボニル基であり；
Ｒ２およびＲ３は、同一でも異なっていてもよく、置換されていてもよいアルキル基、置換されていてもよいアルケニル基または置換されていてもよいアルキニル基であるか、または
Ｒ２およびＲ３は、一緒になって、シクロアルキル基を形成してもよい。）
で表される化合物またはその薬学的に許容できる塩を投与することを含んでなる方法。
【請求項９】
Ｒ１が水素原子である、請求項８記載の方法。
【請求項１０】
Ｒ２およびＲ３が置換されていてもよいアルキル基である、請求項９記載の方法。
【請求項１１】
置換されていてもよいアルキル基が、ｎ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、ｎ−ヘキシル基またはｎ−ヘプチル基である、請求項１０記載の方法。
【請求項１２】
式（１）で表される化合物が４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｎ−ペンチル−２，３−ジヒドロベンゾフランである、請求項８記載の方法。
【請求項１３】
血管内皮の血管張力調節機能の改善を必要とする状態が、高血圧、糖尿病および慢性閉塞性動脈硬化症からなる群から選択される疾病によってもたらされる、請求項８記載の方法。
【請求項１４】
血管内皮の血管張力調節機能の改善を必要とする状態が間欠性跛行である、請求項１３記載の方法。
【請求項１５】
血管内皮の血管張力調節機能を改善するための医薬組成物の製造における、式（１）：
2003087080.tif 000006
（式中、
Ｒ１は、水素原子、アシル基、またはアリールアルキルオキシカルボニル基であり；
Ｒ２およびＲ３は、同一でも異なっていてもよく、置換されていてもよいアルキル基、置換されていてもよいアルケニル基または置換されていてもよいアルキニル基であるか、または
Ｒ２およびＲ３は、一緒になって、シクロアルキル基を形成してもよい。）
で表される化合物またはその薬学的に許容できる塩の使用。
【請求項１６】
Ｒ１が水素原子である、請求項１５記載の使用。
【請求項１７】
Ｒ２およびＲ３が置換されていてもよいアルキル基である、請求項１５記載の使用。
【請求項１８】
置換されていてもよいアルキル基が、ｎ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、ｎ−ヘキシル基またはｎ−ヘプチル基である、請求項１７記載の使用。
【請求項１９】
式（１）で表される化合物が４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｎ−ペンチル−２，３−ジヒドロベンゾフランである、請求項１５記載の使用。
【請求項２０】
血管内皮の血管張力調節機能の改善を必要とする状態が、高血圧、糖尿病および慢性閉塞性動脈硬化症からなる群から選択される疾病によってもたらされる、請求項１５記載の使用。
【請求項２１】
血管内皮の血管張力調節機能の改善を必要とする状態が間欠性跛行である、請求項２０記載の使用。
【発明の詳細な説明】
技術分野
本発明は、血管内皮の血管張力調節機能を改善するための医薬組成物および方法、ならびにそのような組成物の製造における一定の化合物の使用に関する。より特定すると、本発明は、高血圧、糖尿病および慢性閉塞性動脈硬化症などの成人病によってもたらされる血管内皮の血管張力調節機能の低下を改善するための医薬組成物および方法に関する。
背景技術
高齢化社会を背景に、高血圧、糖尿病、動脈硬化および慢性閉塞性動脈硬化症などの成人病が年々増加し続けている。これら成人病に共通する特徴の一つは、発病に伴って血管病変が持続的に進行していく点である。こうした血管病変は穏やかに悪化してゆき、心筋梗塞のような深刻な疾病を発症させるリスクを増大させてゆく。この血管病変の進行過程で殊に注目されるのが、血管内皮細胞の障害による血管内皮の機能低下である。
血管内皮細胞は、血管の内腔を覆っている細胞である。それら細胞は、血管への物質透過を選択的に制御するだけでなく、血圧調節や抗血栓においても重要な役割を果たしていることが、近年明らかにされている。また、内皮細胞から分泌される血管内皮由来弛緩因子（Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｕｍ−ｄｅｒｉｖｅｒｅｄ  ｒｅｌａｘｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒ：ＥＤＲＦ）の存在が、血管内皮の血管張力調節機能に重要であることが最近明らかにされている。例えば、運動等により組織の酸素消費が増加した場合、その組織への酸素供給を増やす必要が生じるが、それは、その組織内の血管張力が弱められて、すなわち、血管内皮が弛緩されて、動脈血の流入が増加することにより達成される。ＥＤＲＦは、こうした場合に、血管内皮細胞から多く分泌されて、血管内皮の弛緩を促進していると考えられる。
したがって、高血圧や糖尿病などの成人病に伴う血管内皮細胞の障害により同細胞のＥＤＲＦ分泌能力が低下すると、血管内皮の血管張力調節機能が害されることになる。その結果、高血圧、糖尿病、動脈硬化および慢性閉塞性動脈硬化症などの進行とともに、緊張した状態のまま弛緩できない血管が体内に多くなり、慢性的な狭窄または閉塞が起こるようになって心筋梗塞などが発症し易くなる。下肢動脈においてそうした慢性的な狭窄または閉塞が起こって発症する代表的な病態は間欠性跛行である。また、ＥＤＲＦ分泌能力の低下は、間欠性跛行以外の血管病変の病態生理にも重要な役割を演じている。このことは、種々の成人病においてＥＤＲＦ分泌能力の低下が報告されていることから明らかである。従って、血管内皮細胞のＥＤＲＦ分泌能力の低下を抑制できれば、高血圧、糖尿病、動脈硬化および慢性閉塞性動脈硬化症などの進行に伴う心筋梗塞や間欠性跛行のほか、他の血管病変を予防または治療することができる。
血管内皮細胞のＥＤＲＦ分泌能力の低下を抑制することが報告されている薬剤に、高脂血症治療薬であるプロブコールがある。しかし、プロブコールを投与すると、高密度リポタンパク質コレステロール（ＨＤＬ−Ｃ）が低下し、また、心電図のＱＴ間隔が延長される。これら副作用は、虚血性心疾患および突然死に結びつくと考えられているので、そうした副作用を有さない、血管内皮細胞のＥＤＲＦ分泌能力の低下を抑制する薬物、引いては、血管内皮の血管張力調節機能を改善する薬物の開発が求められている。
発明の開示
本発明は、新規な血管内皮の血管張力調節機能を改善するための医薬組成物を提供することを目的とする。
本発明者らは、上記の課題を解決するために鋭意研究を重ねた結果、特定のジヒドロベンゾフラン化合物が、血管内皮の血管張力調節機能を改善することを見出した。
すなわち、本発明は、血管内皮の血管張力調節機能を改善するための医薬組成物であって、式（１）：
2003087080.tif 000003
（式中、
Ｒ１は、水素原子、アシル基、またはアリールアルキルオキシカルボニル基であり；
Ｒ２およびＲ３は、同一でも異なっていてもよく、置換されていてもよいアルキル基、置換されていてもよいアルケニル基または置換されていてもよいアルキニル基であるか、または
Ｒ２およびＲ３は、一緒になって、シクロアルキル基を形成してもよい。）
で表される化合物またはその薬学的に許容できる塩を有効成分として含んでなる組成物を提供する。
また、本発明は、血管内皮の血管張力調節機能を改善するための方法であって、そのような必要性のある患者に、有効量の式（１）で表される化合物またはその薬学的に許容できる塩を投与することを含んでなる方法も提供する。
さらに、本発明は、血管内皮の血管張力調節機能を改善するための医薬組成物の製造における、式（１）で表される化合物またはその薬学的に許容できる塩の使用も提供する。
好ましい態様において、式（１）で表される化合物は、４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｎ−ブチル−２，３−ジヒドロベンゾフラン、４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｎ−ペンチル−２，３−ジヒドロベンゾフラン、４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｎ−ヘキシル−２，３−ジヒドロベンゾフラン、または４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｎ−ヘプチル−２，３−ジヒドロベンゾフランである。
好ましい態様において、血管内皮の血管張力調節機能の改善を必要とする状態は、高血圧、糖尿病および慢性閉塞性動脈硬化症からなる群から選択される疾病によってもたらされるものである。
より好ましい態様において、血管内皮の血管張力調節機能の改善を必要とする状態は間欠性跛行である。
発明を実施するための最良の形態
本発明の式（１）で表される化合物は公知である。特開平６−２０６８４２号およびＷＯ９４／０８９３０号には、それら化合物が抗酸化作用を有することが記載されている。また、特開平１１−２１２３８号およびＷＯ９８／５００２５号には、それら化合物が粥状動脈硬化病変および黄色腫を抑制することが記載されている。しかしながら、本発明の式（１）の化合物が血管張力調節機能を改善することは知られていない。
本発明で用いられる式（１）で表される化合物は、たとえば、特開平６−２０６８４２号、それに対応する米国特許５，５７４，１７８号またはヨーロッパ特許第０６６５２０８号に記載の方法によって合成することができる。
本発明の式（１）において、Ｒ１についてのアシル基の例には、炭素数１〜１０の脂肪族アシル基および炭素数７〜１０の芳香族アシル基が含まれる。脂肪族アシル基の好ましい具体例には、ホルミル基、アセチル基、プロピオニル基、ヘキサノイル基などが含まれ、芳香族アシル基の具体例には、ベンゾイル基などが含まれる。アシル基としては、脂肪族アシル基が好ましく、炭素数１〜６の脂肪族アシル基がより好ましく、特にアセチル基が好ましい。Ｒ１についてのアリールアルキルオキシカルボニル基の例には、炭素数７〜１２のものが含まれる。好ましい例には炭素数７〜１１のものが含まれ、より好ましい具体例には、ベンジルオキシカルボニル基およびナフチルメトキシカルボニル基などが含まれる。
Ｒ１は、水素原子またはアシル基であるのが好ましく、水素原子およびアセチル基がより好ましく、水素原子が特に好ましい。
Ｒ２およびＲ３についてのアルキル基には、炭素数１〜２０の直鎖もしくは分枝鎖状のアルキル基が含まれる。具体的には、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓ−ブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、イソペンチル、ｓｅｃ−ペンチル、ｔ−ペンチル、ネオペンチル、ｎ−ヘキシル、イソヘキシル、エチルブチル、ｎ−ヘプチル、イソヘプチル、エチルペンチル、ｎ−オクチル、エチルヘキシル、プロピルペンチル、ノニル、デシル、ペンタデシル、ステアリル基などが含まれる。アルキル基は、好ましくは、炭素数１〜１０の直鎖もしくは分枝鎖状のアルキル基であり、より好ましくは、炭素数３〜８の直鎖状のアルキル基である。
Ｒ２およびＲ３についてのアルケニル基には、炭素数２〜２０の直鎖もしくは分枝鎖状のアルキル基が含まれる。具体的には、エテニル、プロペニル、イソプロペニル、ブテニル、イソブテニル、ペンテニル、イソペンテニル、ヘキセニル、イソヘキセニル、エチルブテニル、ヘプテニル、イソヘプテニル、エチルペンテニル、オクテニル、ノネニル、デセニル、ペンタデセニル基などが含まれる。アルケニル基は、好ましくは、炭素数２〜１０の直鎖もしくは分枝鎖状のアルケニル基であり、より好ましくは、炭素数３〜８の直鎖状のアルケニル基である。
Ｒ２およびＲ３についてのアルキニル基には、炭素数２〜２０の直鎖もしくは分枝鎖状のアルキル基が含まれる。具体的には、エチニル、プロピニル、イソプロピニル、ブチニル、イソブチニル、ペンチニル、イソペンチニル、ヘキシニル、イソヘキシニル、エチルブチニル、ヘプチニル、イソヘプチニル、エチルペンチニル、オクチニル、ノニニル、デシニル、ペンタデシニル基などが含まれる。アルキニル基は、好ましくは、炭素数２〜１０の直鎖もしくは分枝鎖状のアルキニル基であり、より好ましくは、炭素数３〜８の直鎖状のアルキニル基である。
Ｒ２およびＲ３が形成するシクロアルキル基には、炭素数３〜１０のシクロアルキル基が含まれる。具体的には、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基、シクロヘプチル基、シクロオクチル基、シクロノニル基、シクロデシル基などが含まれる。シクロアルキル基は、好ましくは、炭素数５〜８のシクロアルキル基であり、さらに好ましくは、炭素数４〜７のシクロアルキル基である。
Ｒ２およびＲ３についての置換されていてもよいアルキル基、置換されていてもよいアルケニル基および置換されていてもよいアルキニル基の置換基には、例えば、ハロゲン、低級アルキル基、低級アルケニル基、低級アルキニル基、ヒドロキシ基、アミノ基、モノまたはジアルキルアミノ基、カルボキシ基、アシル基、シアノ基、アルコキシ基、アリールオキシ基、ニトロ基、ハロゲノアルキル基、アリール基、ヘテロアリール基が含まれ、ハロゲン、低級アルコキシ基、ヒドロキシ基、アミノ基、ニトロ基およびトリフルオロメチル基が好ましい。
特に好ましいＲ２およびＲ３は、炭素数３〜８の直鎖状の未置換アルキル基であり、具体的には、ｎ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、ｎ−ヘキシル基、ｎ−ヘプチル基またはｎ−オクチル基であり、とりわけＲ２およびＲ３のいずれもがｎ−ペンチル基であるのが好ましい。
本発明の式（１）で表される化合物の薬学的に許容できる塩は、式（１）の化合物がＲ２またはＲ３において酸または塩基と付加塩を形成できる基を有する場合に形成され得る。酸付加塩の形成に使用される酸には、例えば、塩酸、臭化水素酸、硝酸、硫酸およびリン酸のような無機酸、および、例えば、酢酸、乳酸、シュウ酸、グリコール酸、酒石酸、りんご酸およびクエン酸のような有機酸が含まれる。また、塩基付加塩の形成に使用される塩基には、メチルアミン、エチルアミン、エタノールアミン、ピリジン、ピペリジン、モルホリンおよびトリエチルアミンのような塩基が含まれる。
本発明の式（１）で表される化合物の好ましい具体例は以下の通りである。
４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジメチル−２，３−ジヒドロベンゾフラン；
４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジエチル−２，３−ジヒドロベンゾフラン；
４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｎ−プロピル−２，３−ジヒドロベンゾフラン；
４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−イソプロピル−２，３−ジヒドロベンゾフラン；
４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｎ−ブチル−２，３−ジヒドロベンゾフラン；
４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｓ−ブチル−２，３−ジヒドロベンゾフラン；
４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｔ−ブチル−２，３−ジヒドロベンゾフラン；
４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｎ−ペンチル−２，３−ジヒドロベンゾフラン；
４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−イソペンチル−２，３−ジヒドロベンゾフラン；
４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｔ−ペンチル−２，３−ジヒドロベンゾフラン；
４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ネオペンチル−２，３−ジヒドロベンゾフラン；
４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｎ−ヘキシル−２，３−ジヒドロベンゾフラン；
４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｎ−ヘプチル−２，３−ジヒドロベンゾフラン；
４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｎ−オクチル−２，３−ジヒドロベンゾフラン；
４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｎ−ノニル−２，３−ジヒドロベンゾフラン；および
４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｎ−デシル−２，３−ジヒドロベンゾフラン
である。
特に好ましい式（１）で表される具体的化合物は、４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｎ−ペンチル−２，３−ジヒドロベンゾフランである。
本発明の式（１）で表される化合物は、血管張力調節機能の障害に対して優れた改善作用を示すので、例えば、高血圧、糖尿病および慢性閉塞性動脈硬化症などの成人病による血管内皮細胞の障害によって、血管内皮の血管張力調節機能が低下した場合に有用である。理論に拘束されることを望まないが、この血管張力調節機能の改善作用は、式（１）で表される化合物が、血管内皮細胞のＥＤＲＦ分泌能力の低下を抑制する能力を有することによるものであろう。血管内皮の血管張力調節機能が低下した状態としては、特に下肢動脈において慢性的な血管狭窄または閉塞が起こった場合にみられる間欠性跛行が挙げられる。
本発明の医薬組成物は、有効成分である式（１）で表される化合物に、投与経路に応じて、生理的に許容される固体または液体の製剤担体を配合することで、各種の剤形に調製することができる。投与経路には、経口投与、静脈注射などの非経口投与、徐放性製剤による徐放性投与、および局所投与カテーテルなどによる局所投与が含まれる。製剤担体には、通常用いられる賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、被覆剤、溶解補助剤、乳化剤、懸濁化剤、安定化剤、油脂および溶剤が含まれる。剤形には、例えば、経口投与用、例えば、静脈内、筋肉内または皮下のような非経口投与用、口腔投与用、鼻内投与用、もしくは肛門投与用、または吸入もしくは吹き入れ用の剤形が含まれ、具体的には、例えば、錠剤、丸剤、カプセル剤、顆粒剤、水剤、シロップ剤、懸濁剤、乳濁剤、注射剤およびエアゾール剤が含まれる。
本発明の式（１）で表される化合物の投与量は、患者の年齢、症状の重篤度、投与経路などによって適宜選択されるが、一日あたり成人で、例えば１〜１０００ｍｇ、好ましくは１０〜５００ｍｇ、そしてより好ましくは５０〜４００ｍｇである。この量は、１回に纏めて投与しても、数回に分けて投与してもよい。
以下に実施例をあげて本発明をより詳細に説明するが、本発明は、それら実施例に限定されるものではないことが理解されなければならない。
実  施  例
試験例１：酸化ＬＤＬにより障害を受けた血管内皮の血管張力調節機能の本発明化合物による改善作用（１）
酸化低密度リポタンパク質（酸化ＬＤＬ）により障害を受けたラット血管横断標本について、アセチルコリンによる血管内皮依存性の弛緩応答を本発明化合物の存在下で測定し、血管内皮の血管張力調節機能を改善する本発明の化合物の能力を評価した。
酸化ＬＤＬは、生体内物質である低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）が酸化ストレスを受けて変化したものであるが、血管内皮細胞の障害発生メカニズムに関与することが報告されている（Ｔａｎｎｅｒ  ＦＣ，Ｎｏｌｌ  Ｇ，Ｂｏｕｌａｎｇｅｒ  ＣＭ，Ｌｕｓｃｈｅｒ  ＴＦ，Ｏｘｉｄｉｚｅｄ  ｌｏｗ  ｄｅｎｓｉｔｙ  ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｉｎｈｉｂｉｔ  ｒｅｌａｘａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｐｏｒｃｉｎｅ  ｃｏｒｎａｒｙ  ａｒｔｅｒｉｅｓ．Ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｓｃａｖｅｎｇｅｒ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｎｄ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｕｍ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｎｉｔｒｉｃ  ｏｘｉｄｅ．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ．１９９１，８３：２０１２−２０）。この試験に使用される酸化ＬＤＬは、Ｈａｖｅｌらの方法（Ｈａｖｅｌ  Ｒ．Ｊ．ｅｔ  ａｌ，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，３４，１３４５（１９５５））に従って調製されたリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）中の２００μｇ／ｍＬのウサギＬＤＬを、５μＭのＣｕＳＯ４とともに３７℃で２４時間インキュベーションすることにより作製されたものである。
まず、二酸化炭素の吸入により安楽死させたラットの腸間膜動脈を、Ｋｒｅｂｓ緩衝液（１１８．０ｍＭ  ＮａＣｌ、４．７ｍＭ  ＫＣｌ、２５．０ｍＭ  ＮａＣＯ３、２２．５ｍＭ  ＣａＣｌ、１．５ｍＭ  ＭｇＳＯ４および１０ｍＭグルコースを含有する）中に採取し、その動脈を幅２ｍｍのリング状横断片になるように切断した。次いで、その切片をマグヌス装置に懸垂して、３ｍＮの張力で６０分間平衡させた。平衡後、切片をＫｒｅｂｓ緩衝液中の５μＭフェニレフィリン溶液で収縮させた。
安定した収縮が得られることが確認された後、灌流液を２０μＭの被験化合物を含むＫｒｅｂｓ緩衝液に置き換えた。被験化合物は、本発明化合物の４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｎ−ペンチル−２，３−ジヒドロベンゾフラン、ならびに比較化合物としてのプロブコールおよびαトコフェロールであった。プロブコールは、血管内皮細胞のＥＤＲＦ分泌能力の低下を抑制することで血管内皮の血管張力調節機能を改善することが報告されている化合物である。また、αトコフェロールは、ＬＤＬの酸化を抑制することが知られている生体内脂溶性抗酸化物質である。
３０分間灌流した後、１００μｇ／ｍＬの濃度の酸化ＬＤＬを加えた。
この酸化ＬＤＬを含む灌流液中で６０分間平衡させた後、アセチルコリン（ＡＣｈ）を１×１０−１０Ｍから１×１０−５Ｍの濃度まで累積添加した。一定のＡＣｈ濃度毎に切片の長さを測定し、弛緩前の切片の長さと弛緩後の長さの差を弛緩前の長さで除することにより弛緩度（％）を算出した。この弛緩は、アセチルコリンによる血管内皮細胞からのＥＤＲＦの放出の結果起こる現象である。
以上の実験に加えて、被験化合物を含むＫｒｅｂｓ緩衝液中での灌流も酸化ＬＤＬを加えて平衡させる操作も行わなかった以外は、上記と同じように行った実験（コントロール実験）、および被験化合物を含むＫｒｅｂｓ緩衝液中での灌流は行わずに、酸化ＬＤＬを加えて平衡させる操作を行った以外は、上記と同じように行った実験（酸化ＬＤＬ実験）も行った。
図１から、本発明化合物は、酸化ＬＤＬ実験より低い濃度のＡＣｈで酸化ＬＤＬ実験と同程度の弛緩度を達成するので、血管内皮の血管張力調節機能を改善したと云える。例えば、５０％の弛緩度は、酸化ＬＤＬ実験では３４５ｎＭのＡＣｈで達成されたのに対して、本発明化合物では１２６ｎＭで達成された。ちなみに、コントロール実験では２８ｎＭ、プロブコールでは１２１ｎＭ、そしてαトコフェロールでは２６１ｎＭのＡＣｈで５０％の弛緩度が達成された。
一方、αトコフェロールは、酸化ＬＤＬ実験と同程度の弛緩度しか示さないので、この実験のＡＣｈ濃度範囲では血管内皮の血管張力調節機能を改善しないと云える。このことは、ＬＤＬの酸化を抑制する能力を有するαトコフェロールでも、酸化ＬＤＬによる血管内皮細胞の障害の阻止やその障害によって低下した血管張力調節機能を改善することができないことを意味する。そして、そのことは、本発明化合物が有する血管張力調節機能の改善作用が、ＬＤＬの酸化の抑制により酸化ＬＤＬから血管内皮細胞への障害性を奪い去ることによって表面的に血管内皮の血管張力調節機能を改善したように見えるに過ぎないのではなく、実際に酸化ＬＤＬによる血管内皮の血管張力調節機能の障害を抑制したことを裏付けるものである。
試験例２：酸化ＬＤＬにより障害を受けた血管内皮の血管張力調節機能の本発明化合物による改善作用（２）
被験化合物の濃度を２０μからＭ５０μＭに高めた以外は、試験例１と同じようにして行った。
図２から、本発明化合物は、その溶液濃度を高めることにより、試験例１の場合より低いＡＣｈ濃度で高い弛緩度を達成することが分かる。特に、そのＡＣｈ濃度と弛緩度の関係がコントロールに近似したものであることは、酸化ＬＤＬによる血管内皮細胞への障害による血管張力調節機能への悪影響が完全に取り払われたことを意味する。
産業上の利用の可能性
本発明の化合物は、血管内皮細胞のＥＤＲＦ分泌能力の低下を抑制することが報告されているプロブコールよりも安全性が高いので、高血圧、糖尿病、動脈硬化および慢性閉塞性動脈硬化症などの成人病に伴う、心筋梗塞の発症のリスクや間欠性跛行のような、血管張力調節機能が低下した状態の改善に極めて有用である。
【図面の簡単な説明】
図１は、２０μＭの被験化合物の溶液中に浸漬してから酸化ＬＤＬにより障害を受けたラット血管横断標本についてのアセチルコリンによる血管内皮依存性の弛緩応答を示したグラフである。
図２は、５０μＭの被験化合物の溶液中に浸漬してから酸化ＬＤＬにより障害を受けたラット血管横断標本についてのアセチルコリンによる血管内皮依存性の弛緩応答を示したグラフである。
【図１】
2003087080.tif 000008
【図２】
2003087080.tif 000009
【国際調査報告】
2003087080.tif 000010
2003087080.tif 000011
2003087080.tif 000012
2003087080.tif 000013