(57)【要約】カルパイン阻害活性を有する、下記一般式（Ｉ）2004009537.tif 000016［式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３はそれぞれ低級アルキル基を示す。］で表される化合物を提供する。
2004009537.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（Ｉ）
2004009537.tif 000011
［式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３はそれぞれ低級アルキル基を示す。］で表される化合物。
【請求項２】
Ｒ１、Ｒ２およびＲ３がそれぞれ炭素数３または４のアルキル基である請求の範囲１記載の化合物。
【請求項３】
（３Ｓ）−Ｎ−ブチル−３−（（２Ｓ）−２−（（（４−フルオロフェニル）スルホニル）アミノ）−３−メチルブタノイルアミノ）−５−メチル−２−オキソヘキサナミド。
【請求項４】
一般式（Ｉ）
2004009537.tif 000012
［式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３はそれぞれ低級アルキル基を示す。］で表される化合物を含有する医薬。
【請求項５】
カルパイン阻害剤である請求の範囲４記載の医薬。
【請求項６】
カルパインが関与する疾患の予防または治療剤である請求の範囲４記載の医薬。
【請求項７】
一般式（Ｉ）
2004009537.tif 000013
［式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３はそれぞれ低級アルキル基を示す。］で表される化合物および製薬学的に許容される担体を含有する医薬組成物。
【請求項８】
カルパイン阻害剤である請求の範囲７記載の医薬組成物。
【請求項９】
カルパインが関与する疾患を治療する方法であって、治療を必要とする哺乳動物に有効量の一般式（Ｉ）
2004009537.tif 000014
［式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３はそれぞれ低級アルキル基を示す。］で表される化合物を投与することからなる方法。
【請求項１０】
カルパイン阻害剤としての一般式（Ｉ）
2004009537.tif 000015
［式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３はそれぞれ低級アルキル基を示す。］で表される化合物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】  本発明はカルパイン阻害活性を有する新規α−ケトアミド誘導体に関する。また、本発明は新規α−ケトアミド誘導体を含有する医薬に関する。
【背景技術】  カルパインは生体内に広く分布する細胞質内のタンパク分解酵素の一つであり、カルシウムイオンで活性化される。現在では、このカルパインの異常な活性化が脳卒中、クモ膜下出血、アルツハイマー病、虚血性疾患、筋ジストロフィー、白内障、血小板凝集、関節炎などの種々の疾患に関与していることが明らかとなっている［Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１５巻，４１２頁（１９９４年）］。一方、カルパイン阻害剤は水晶体培養による実験的白内障モデルにおいて、水晶体の透明維持に効果があり［Ｃｕｒｒ．Ｅｙｅ  Ｒｅｓ．，１０巻，６５７〜６６６頁（１９９４年）］、白内障治療剤（ＷＯ９３／２３０３２）などとして有用であることが分ってきている。これまで報告されているカルパイン阻害剤としては、ペプチドハロメタン誘導体（特公平６−２９２２９）、ペプチドジアゾメタン誘導体［Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．，２５３巻，７５１〜７５８頁（１９８８年）、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，３５巻，２１６〜２２０頁（１９９２年）］、ペプチジルアルデヒド誘導体（ＥＰ０７７１５６５、ＵＳＰ６０５７２９０など）などが挙げられるが、これらの阻害剤は、未だ実用化されていないのが現状である。
【発明の開示】
本発明者らは、カルパイン阻害活性を有する化合物を提供すべく鋭意努力した結果、強いカルパイン阻害活性を有するα−ケトアミド誘導体を創製し、さらに研究を進めて本発明を完成した。
すなわち、本発明は、
（１）一般式（Ｉ）
2004009537.tif 000003
［式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３はそれぞれ低級アルキル基を示す。］で表される化合物、
（２）Ｒ１、Ｒ２およびＲ３がそれぞれ炭素数３または４のアルキル基である上記（１）記載の化合物、
（３）（３Ｓ）−Ｎ−ブチル−３−（（２Ｓ）−２−（（（４−フルオロフェニル）スルホニル）アミノ）−３−メチルブタノイルアミノ）−５−メチル−２−オキソヘキサナミド、
（４）一般式（Ｉ）
2004009537.tif 000004
［式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３はそれぞれ低級アルキル基を示す。］で表される化合物を含有する医薬、
（５）カルパイン阻害剤である上記（４）記載の医薬、
（６）カルパインが関与する疾患の予防または治療剤である上記（４）記載の医薬、
（７）一般式（Ｉ）
2004009537.tif 000005
［式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３はそれぞれ低級アルキル基を示す。］で表される化合物および製薬学的に許容される担体を含有する医薬組成物、
（８）カルパイン阻害剤である上記（７）記載の医薬組成物、
（９）カルパインが関与する疾患を治療する方法であって、治療を必要とする哺乳動物に有効量の一般式（Ｉ）
2004009537.tif 000006
［式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３はそれぞれ低級アルキル基を示す。］で表される化合物を投与することからなる方法、
（１０）カルパイン阻害剤としての一般式（Ｉ）
2004009537.tif 000007
［式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３はそれぞれ低級アルキル基を示す。］で表される化合物の使用に関する。
上記一般式（Ｉ）中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３で表される低級アルキル基としては、炭素数１〜６の直鎖状または分枝状アルキル基が好ましく、具体的にはメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ｔｅｒｔ−ペンチル、１−メチルブチル、２−メチルブチル、１，２−ジメチルプロピル、ヘキシル、１−メチルペンチル、２−メチルペンチル、３−メチルペンチル、４−メチルペンチル、１，１−ジメチルブチル、１，２−ジメチルブチル、１，３−ジメチルブチル、２，２−ジメチルブチル、２，３−ジメチルブチル、３，３−ジメチルブチル、１−エチルブチル、２−エチルブチル、１−エチル−２−メチルプロピル、１，１，２−トリメチルプロピルが挙げられる。より好ましくは炭素数３または４の直鎖状または分枝状アルキル基である。Ｒ１で表される低級アルキル基としてはイソプロピルが、Ｒ２で表される低級アルキル基としてはイソブチルが、Ｒ３で表される低級アルキル基としてはブチルが特に好ましい。
さらに、本発明は、本発明化合物（Ｉ）および本発明化合物（Ｉ）の各種の溶媒和や結晶多形の物質ならびにプロドラッグをも包含する。
本発明の化合物は、例えば下記反応式
2004009537.tif 000008
［式中、各記号は前記と同意義を有する。］により製造することができる。
例えばＥＰ０７７１５６５号公報またはＵＳＰ６０５７２９０号公報記載の方法により合成される一般式（ＩＩ）で表されるペプチジルアルデヒド化合物［以下、化合物（ＩＩ）と記載することもある。］と一般式（ＩＩＩ）で表されるイソシアニド試薬［以下、化合物（ＩＩＩ）と記載することもある。］を通常使用される有機溶媒に溶解し、トリフルオロ酢酸およびピリジンの存在下、Ｐａｓｓｅｒｉｎｉ反応［Ｏｒｇ．Ｌｅｔｔ．，２巻，２７６９−２７７２頁（２０００年）］に付すことにより、一般式（ＩＶ）で表される化合物［以下、化合物（ＩＶ）と記載することもある。］を得ることができる。通常使用される有機溶媒としては、例えばジクロロメタン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、テトラヒドロフラン、メタノール、エタノール、ベンゼン、トルエン、酢酸エチルなどのような反応に悪影響をおよぼさない慣用の溶媒またはそれらの混合溶媒が挙げられるが、好ましくはジクロロメタンである。イソシアニド試薬の使用量は化合物（ＩＩ）に対して約１〜約１０倍モル当量で、好ましくは約１〜約２倍モル当量である。トリフルオロ酢酸の使用量は化合物（ＩＩ）に対して約１〜約２０倍モル当量で、好ましくは約１〜約３倍モル当量である。ピリジンの使用量は化合物（ＩＩ）に対して約１〜約２０倍モル当量で、好ましくは約３〜約５倍モル当量である。反応温度は、好ましくない副反応が起こらない範囲であれば特に限定されず、通常冷却下、室温または加温下で行われるが、好ましくは氷冷下から室温の範囲である。
さらに、化合物（ＩＶ）を酸化反応に付することにより、化合物（Ｉ）を得ることができる。該酸化方法としては、例えばクロム酸酸化に分類される二クロム酸ピリジニウム（ＰＤＣ）酸化、クロロクロム酸ピリジニウム（ＰＣＣ）酸化、ジョーンズ（Ｊｏｎｅｓ）酸化、コリンズ（Ｃｏｌｌｉｎｓ）酸化、またはジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）酸化に分類されるスワン（Ｓｗｅｒｎ）酸化、ＤＭＳＯ−三酸化硫黄ピリジン錯体による酸化、ＤＭＳＯ−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）による酸化、ＤＭＳＯ−塩化オキサリルによる酸化、またはデス−マーチン試薬（Ｄｅｓｓ−Ｍａｒｔｉｎ  ｐｅｒｉｏｄｉｎａｎｅ）を用いるデス−マーチン酸化、次亜ハロゲン酸による酸化、Ｎ−ハロゲノカルボン酸アミドによる酸化など、自体公知の方法を使用することができるが、とりわけデス−マーチン酸化が好ましい。デス−マーチン酸化を用いて酸化する場合は、化合物（ＩＶ）を通常使用される有機溶媒に溶解し、デス−マーチン試薬を加えることで行うことができる。通常使用される有機溶媒としては、例えばジクロロメタン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、テトラヒドロフラン、メタノール、エタノール、ベンゼン、トルエン、酢酸エチルなどのような反応に悪影響をおよぼさない慣用の溶媒またはそれらの混合溶媒が挙げらるが、好ましくはジクロロメタンである。デス−マーチン試薬の使用量は化合物（ＩＶ）に対して約１〜約２０倍モル当量で、好ましくは約１〜約３倍モル当量である。反応温度は、好ましくない副反応が起こらない範囲であれば特に限定されず、通常冷却下、室温または加温下で行われるが、好ましくは氷冷下から室温の範囲である。このようにして得られるケトアミド誘導体は公知の分離精製手段、例えば濃縮、減圧濃縮、溶媒抽出、晶出、再結晶、転溶、クロマトグラフィーなどにより単離精製することができる。
上記の方法によって製造される一般式（Ｉ）で表される化合物としては、例えば（３Ｓ）−Ｎ−ブチル−３−（（２Ｓ）−２−（（（４−フルオロフェニル）スルホニル）アミノ）−３−メチルブタノイルアミノ）−５−メチル−２−オキソヘキサナミドなどが挙げられる。
本発明化合物は文献未載の新規化合物であり、後記試験例に示すように優れたカルパイン阻害活性を有するため、それらを有効成分として、必要により後記の担体等を組み合わせることにより、カルパイン阻害剤としての医薬として有用である。
本発明化合物を含有する医薬は、哺乳動物（例えばヒト、ラット、マウス、ウサギ、ウシ、ブタ、イヌ、ネコなど）のカルパインが関与する疾患、例えば虚血性疾患、免疫疾患、アルツハイマー病、骨粗鬆症、脳組織障害による疾患、白内障、緑内障、網脈絡膜疾患、光凝固による眼球後眼部合併症（例えば黄斑部浮腫、網膜剥離、視神経炎、視野異常、光覚異常、色覚異常など）、血管新生を伴う疾患などの予防または治療剤として有用である。また、本発明化合物は組織移行性および吸収性に優れ、かつ毒性も非常に低く安全性にも優れている。
本発明化合物を含有する医薬は全身的または局所的に投与される。全身的には経口投与の他、静脈内注射、皮下注射、筋肉内注射など非経口的にも投与される。局所的には、皮膚、粘膜、鼻内、眼内などに投与される。
本発明化合物を含有する医薬の製剤形態としては、粉末、顆粒、錠剤、カプセル剤、坐剤などの固形剤、およびシロップ剤、注射剤、点眼剤、点鼻剤などの液剤などが挙げられる。顆粒および錠剤として製造する場合には、例えば賦形剤（乳糖、白糖、ブドウ糖、デンプン、結晶セルロースなど）、滑沢剤（ステアリン酸マグネシウム、タルク、ステアリン酸、ステアリン酸カルシウムなど）、崩壊剤（デンプン、カルメロースナトリウム、炭酸カルシウムなど）、結合剤（デンプン糊液、ヒドロキシプロピルセルロース液、カルメロース液、アラビアゴム液、ゼラチン液、アルギン酸ナトリウム液など）などを用いることにより任意の剤形を製造することができる。また、顆粒剤および錠剤には、適当なコーティング剤（ゼラチン、白糖、アラビアゴム、カルナバロウなど）、腸溶性コーティング剤（例えば酢酸フタル酸セルロース、メタアクリル酸コポリマー、ヒドロキシプロピルセルロースフタレート、カルボキシメチルエチルセルロースなど）などで剤皮を施してもよい。
カプセル剤として製造する場合には、適当な賦形剤、例えば流動性と滑沢性を向上させるためのステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、タルク、軽質無水ケイ酸など、また加圧流動性のための結晶セルロースや乳糖などの他、上記崩壊剤などを適宜添加したものを均等に混和または粒状もしくは粒状としたものに適当なコーティング剤で剤皮を施したものを充填するか、適当なカプセル基剤（ゼラチンなど）にグリセリンまたはソルビトールなど加えて塑性を増したカプセル基剤で被包成形することもできる。これらカプセル剤には必要に応じて、着色剤、保存剤［二酸化イオウ、パラベン類（パラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸エチル、パラオキシ安息香酸プロピル）］などを加えることができる。カプセル剤は通常のカプセルの他、腸溶性コーティングカプセル、胃内抵抗性カプセル、放出制御カプセルとすることもできる。腸溶性カプセルとする場合、腸溶性コーティング剤でコーティングした化合物または化合物に上記の適当な賦形剤を添加したものを通常のカプセルに充填または、カプセル自身を腸溶性コーティング剤でコーティング、もしくは腸溶性高分子を基剤として成形することができる。
坐剤として製造する場合には坐剤基剤（例えばカカオ脂、マクロゴールなど）を適宜選択して使用することができる。
シロップ剤として製造する場合、例えば安定剤（エデト酸ナトリウムなど）、懸濁化剤（アラビアゴム、カルメロースなど）、矯味剤（単シロップ、ブドウ糖など）、芳香剤などを適宜選択して使用することができる。
注射剤、点眼剤または点鼻剤として製造する場合、医薬上許容される添加物、例えば等張化剤（塩化ナトリウム、塩化カリウム、グリセリン、マンニトール、ソルビトール、ホウ酸、ホウ砂、ブドウ糖、プロピレングリコールなど）、緩衝剤（リン酸緩衝液、酢酸緩衝液、ホウ酸緩衝液、炭酸緩衝液、クエン酸緩衝液、トリス緩衝液、グルタミン酸緩衝液、イプシロンアミノカプロン酸緩衝液など）、保存剤（パラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸エチル、パラオキシ安息香酸プロピル、クロロブタノール、ベンジルアルコール、塩化ベンザルコニウム、デヒドロ酢酸ナトリウム、エデト酸ナトリウム、ホウ酸、ホウ砂など）、増粘剤（ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリビニルアルコール、ポリエチレングリコールなど）、安定化剤（亜硫酸水素ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、エデト酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、アスコルビン酸、ジブチルヒドロキシトルエンなど）、ｐＨ調整剤（塩酸、水酸化ナトリウム、リン酸、酢酸など）などを適宜添加した溶液に溶解または分散することによって製造することができる。
上記シロップ剤、注射剤、点眼剤および点鼻剤における添加剤の添加量は、添加する添加剤の種類、用途などによって異なるが、添加剤の目的を達成し得る濃度を添加すればよく、等張化剤は、通常、浸透圧が約２２９〜約３４３ｍＯｓｍとなるよう、約０．５〜約５．０ｗ／ｖ％を添加する。また、緩衝剤は約０．０１〜約２．０ｗ／ｖ％程度、増粘剤は約０．０１〜約１．０ｗ／ｖ％程度、安定化剤は約０．００１〜約１．０ｗ／ｖ％程度添加する。ｐＨ調整剤は、適宜添加し、通常ｐＨ約３〜約９、好ましくは約４〜約８になるように添加する。
本発明化合物の投与量は対象となる疾患、症状、投与対象、投与方法などにより異なるが、例えば内服剤として成人に投与する場合は、１日数回、１回量約１〜約２００ｍｇ、好ましくは約１０〜１００ｍｇである。また、注射剤として成人に投与する場合は、１日１回、約０．１〜約５０ｍｇ、好ましくは約１〜約３０ｍｇである。また、局所的に目に使用する場合には、本発明化合物を通常約０．００１〜約１．０ｗ／ｖ％、好ましくは約０．０１〜約０．５ｗ／ｖ％含有する点眼液を、１回約２０〜約５０μＬ、１日数回点眼するのがよい。
【発明を実施するための最良の形態】  本発明を以下の参考例、実施例、試験例および製剤例に従いさらに詳細に説明するが、本発明はこれらにより何ら限定されるものではない。
なお、実施例で述べる化合物の分析値において、融点はＹａｎａｃｏ社製ＭＰ−５００Ｖ型（補正なし）を用いて測定した。核磁気共鳴スペクトル（ＮＭＲ）は日本電子製ＪＮＭ−ＧＳＸ２７０型（２７０ＭＨｚ）およびＶａｒｉａｎ製Ｇｅｍｉｎｉ２０００型（３００ＭＨｚ）を用いて測定した。比旋光度（［α］Ｄ）はＨｏｒｉｂａ製ＳＥＰＡ−２０００型を用いて測定した。元素分析はＰｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ製ＣＨＮＳ／Ｏ２４００型を用いて測定した。
参考例１  Ｎ−（（４−フルオロフェニル）スルホニル）−Ｌ−バリル−Ｌ−ロイシナール（参考化合物１）
ステップ１：バリン（１１．７ｇ，１００ｍｍｏｌ）を１Ｍ水酸化ナトリウム水溶液（１００ｍＬ）に溶解し、さらに精製水（１５０ｍＬ）とテトラヒドロフラン（１００ｍＬ）を加え、氷冷下で撹拌しながら、１Ｍ水酸化ナトリウム水溶液（１００ｍＬ）と４−フルオロベンゼンスルホニルクロリド（１７．５ｇ，９０ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン溶液（１００ｍＬ）を同時に滴下した。この溶液を室温で１８時間撹拌し、反応させた。反応終了後、反応液をｐＨ２〜３に調整して酢酸エチルで抽出した。抽出液を希塩酸、飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで脱水した。酢酸エチルを減圧留去して、残渣をヘキサン−酢酸エチル混液（酢酸エチル１容量に対しヘキサンを約１０〜約２０容量の割合で混合した溶液、以下ヘキサン−酢酸エチル混液というときは同様である。）で洗浄し、Ｎ−（（４−フルオロフェニル）スルホニル）−Ｌ−バリン（１５．５ｇ，５６％）を白色結晶として得た。
ステップ２：Ｎ−（（４−フルオロフェニル）スルホニル）−Ｌ−バリン（１５．０ｇ，５５ｍｍｏｌ）とＮ−ヒドロキシコハク酸イミド（７．６ｇ，６６ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（２００ｍＬ）に溶解し、氷冷下で撹拌しながら１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（１２．６ｇ，６６ｍｍｏｌ）のジクロロメタン溶液（２００ｍＬ）をゆっくりと加えた。この溶液を室温で約４時間撹拌し、反応させた。反応終了後、溶媒を減圧留去して残渣を酢酸エチルに溶解し、希塩酸、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで脱水した。酢酸エチルを減圧留去して、残渣をヘキサン−酢酸エチル混液で洗浄し、Ｎ−（（４−フルオロフェニル）スルホニル）−Ｌ−バリンＮ−ヒドロキシコハク酸イミドエステル（１７．６ｇ，８７％）を白色結晶として得た。
ステップ３：Ｎ−（（４−フルオロフェニル）スルホニル）−Ｌ−バリンＮ−ヒドロキシコハク酸イミドエステル（２．０ｇ，５．４ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（５０ｍＬ）に溶解し、ロイシノール（０．８２ｇ，７．０ｍｍｏｌ）を加えた。この溶液を２時間撹拌し、反応させた。反応終了後、希塩酸、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで脱水した。ジクロロメタンを減圧留去して、残渣をヘキサン−酢酸エチル混液で洗浄し、Ｎ−（（４−フルオロフェニル）スルホニル）−Ｌ−バリル−Ｌ−ロイシノール（１．９ｇ，９４％）を白色結晶として得た。
ステップ４：Ｎ−（（４−フルオロフェニル）スルホニル）−Ｌ−バリル−Ｌ−ロイシノール（１．８ｇ，４．８ｍｍｏｌ）をジメチルスルホキシド（２０ｍＬ）とジクロロメタン（１０ｍＬ）に溶解しジイソプロピルエチルアミン（２．５ｇ，１９ｍｍｏｌ）を加えた。この溶液を室温で撹拌しながら三酸化硫黄ピリジン錯体（３．１ｇ，１９ｍｍｏｌ）のジメチルスルホキシド溶液（１５ｍＬ）を加え、さらに４０分間撹拌した。反応終了後、酢酸エチルを加え、希塩酸、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで脱水した。溶媒を減圧留去して、残渣を酢酸エチルから再結晶を行い、参考化合物１（１．１ｇ，６０％）を白色結晶として得た。
ｍｐ  １５７℃．１Ｈ−ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：０．７４（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝５．９Ｈｚ），０．８０（ｄ，６Ｈ，Ｊ＝６．４Ｈｚ），０．８５（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），１．１４−１．４６（ｍ，３Ｈ），１．８１−１．９３（ｍ，１Ｈ），３．５６−３．６２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．６，９．５Ｈｚ），３．８０−３．８８（ｍ，１Ｈ），７．３３−７．４２（ｍ，２Ｈ），７．７９−７．８６（ｍ，２Ｈ），７．９６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．８Ｈｚ），８．２７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），９．１４（ｓ，１Ｈ）．Ａｎａｌ．Ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ１７Ｈ２５ＦＮ２Ｏ４Ｓ：Ｃ，５４．８２；Ｈ，６．７７；Ｎ，７．５２．Ｆｏｕｎｄ：Ｃ，５４．８２；Ｈ，６．７６；Ｎ，７．５７．［α］Ｄ２５＋８．９９°（ｃ＝０．２０，ＤＭＳＯ）．
参考例２  （３Ｓ）−Ｎ−ブチル−３−（（２Ｓ）−２−（（（４−フルオロフェニル）スルホニル）アミノ）−３−メチルブタノイルアミノ）−２−ヒドロキシ−５−メチルヘキサナミド（参考化合物２）
参考化合物１（４．０ｇ，１１ｍｍｏｌ）、ｎ−ブチルイソシアニド（１．０ｇ，１２ｍｍｏｌ）およびピリジン（３．４ｇ，４３ｍｍｏｌ）のジクロロメタン溶液（１００ｍＬ）に氷冷下でトリフルオロ酢酸（２．４ｇ，２１ｍｍｏｌ）を滴下した。この溶液を室温で１８時間攪拌した。減圧濃縮後、残渣を酢酸エチルに溶解し、この溶液を１Ｍ塩酸、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液および飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで脱水後、減圧濃縮した。この残渣をＨＰＬＣシステム（カラム；ＹＭＣ  Ｐａｃｋ  ＯＤＳ−Ａ  ２５０×２０ｍｍＩ．Ｄ．，移動相；アセトニトリル／水／トリフリオロ酢酸＝４０：６０：０．１）で精製を行い、参考化合物２（１．０ｇ，２０％）を無色結晶として得た。
ｍｐ  １９２．３−１９４．２℃．１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：０．６９（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．９Ｈｚ），０．７０（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝５．４Ｈｚ），０．７５（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），０．７９（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），０．８５（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．４Ｈｚ），０．９４（ｍ，１Ｈ），１．０５−１．０９（ｍ，２Ｈ），１．１８−１．２７（ｍ，２Ｈ），１．３０−１．３９（ｍ，２Ｈ），１．８２（ｍ，１Ｈ），２．９２−３．０７（ｍ，２Ｈ），３．６３（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．２，５．７Ｈｚ），３．７２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．０，２．６Ｈｚ），３．９３（ｍ，１Ｈ），５．６５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），７．３１−７．３６（ｍ，３Ｈ），７．５３（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝５．９Ｈｚ），７．５９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．２Ｈｚ），７．８０−７．８５（ｍ，２Ｈ）．
実施例１  （３Ｓ）−Ｎ−ブチル−３−（（２Ｓ）−２−（（（４−フルオロフェニル）スルホニル）アミノ）−３−メチルブタノイルアミノ）−５−メチル−２−オキソヘキサナミド（化合物１）
2004009537.tif 000009
参考化合物２（１．０ｇ，２．１ｍｍｏｌ）のジクロロメタン溶液（１００ｍＬ）にデス−マーチン試薬（Ｄｅｓｓ−Ｍａｒｔｉｎ  ｐｅｒｉｏｄｉｎａｎｅ）（１．３ｇ，３．２ｍｍｏｌ）を加えた。この溶液を室温で１８時間攪拌した。さらに、１０％チオ硫酸ナトリウム水溶液（５０ｍＬ）および１０％炭酸水素ナトリウム水溶液（５０ｍＬ）を加え、１０分間攪拌した。有機層を分離し、１Ｍ塩酸、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液および飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで脱水後、減圧濃縮した。残渣をヘキサン／酢酸エチル溶液から結晶化し化合物１（０．８０ｇ，８０％）を無色結晶として得た。
ｍｐ  １０７．６−１０９．９℃．１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：０．７３（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝５．７Ｈｚ），０．７９−０．８８（ｍ，１２Ｈ），１．１５−１．４５（ｍ，７Ｈ），１．８２（ｍ，１Ｈ），３．０４−３．１１（ｍ，２Ｈ），３．５９（ｍ，１Ｈ），４．７５（ｍ，１Ｈ），７．３３−７．３９（ｍ，２Ｈ），７．７８−７．８３（ｍ，２Ｈ），７．８８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．３Ｈｚ），８．１５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．３Ｈｚ），８．６５（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝５．９Ｈｚ）．Ａｎａｌ．Ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ２２Ｈ３４Ｎ３Ｏ５ＳＦ：Ｃ，５６．０３；Ｈ，７．２７；Ｎ，８．９１．Ｆｏｕｎｄ：Ｃ，５５．９９；Ｈ，７．００；Ｎ，８．９１．
試験例１  μ−カルパインおよびｍ−カルパイン阻害活性の測定
μ−およびｍ−カルパインの阻害活性は文献［Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．ｖｏｌ．２０８，３８７−３９２（１９９３）］に記載された方法に準じて測定した。すなわち、種々の濃度の被験薬を含むジメチルスルホキシド溶液（２．５μＬ）に、０．５ｍｇ／ｍＬのカゼイン、５０ｍＭのトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．４）、２０ｍＭのジチオスレイトールおよび１．０ｎｍｏｌのμ−カルパイン（ヒト赤血球由来、Ｃｏｓｍｏ  Ｂｉｏ社製）またはｍ−カルパイン（ブタ腎臓由来、Ｃｏｓｍｏ  Ｂｉｏ社製）を含む反応液（２００μＬ）を９６ウェルプレート上で加えた。そこへ、２０ｍＭの塩化カルシウム水溶液（５０μＬ）を加え、３０℃で６０分間反応させた。この反応液（１００μＬ）を別の９６ウェルプレートに移し、精製水（５０μＬ）と５０％のＰｒｏｔｅｉｎ  Ａｓｓａｙ  Ｄｙｅ  Ｒｅａｇｅｎｔ（ＢＩＯ−ＲＡＤ  Ｃａｔａｌｏｇ  ５００−０００６）水溶液（１００μＬ）を加えて室温で１５分間放置した後、５９５ｎＭで吸光度を測定した。被験薬を含まず同様に処理したものをコントロール値、２０ｍＭ塩化カルシウム水溶液の代わりに１ｍＭ  ＥＤＴＡ水溶液（５０μＬ）を加え同様に処理したものをブランク値とし、５０％阻害に必要な量（ＩＣ５０）を求めた。
阻害率（％）＝｛１−（測定値−ブランク値）／（コントロール値−ブランク値）｝×１００
試験結果１
その結果を表１に示した。
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その結果、本発明化合物には、優れたカルパイン阻害活性が認められた。
試験例２  Ｃａｃｏ−２を用いた透過性試験
Ｃａｃｏ−２細胞（ＡＴＣＣ  ＨＴＢ−３７；Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ，ＵＳＡ）をＴｒａｎｓｗｅｌｌ（Ｃｏｓｔａｒ社製、ポリカーボネートフィルター、孔径０．４μｍ、培養面積０．３３ｃｍ２）に０．５×１０６ｃｅｌｌ／ｃｍ２になるよう播種した。細胞単層膜はダルベッコ改変イーグル最小必須培地（ＤＭＥＭ、Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）中、２１日から３０日間培養することにより作成した（３７℃、５％ＣＯ２、９５％ＲＨ）。細胞のコンフルエント化は細胞上下間抵抗（ＴＥＥＲ）を測定することにより確認した。頂端膜側に化合物１が１０μＭとなるよう添加したＨａｎｋ’ｓ  Ｂａｌａｎｃｅｄ  Ｓａｌｔ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（ＨＢＳＳ、Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）を、基底膜側にＨＢＳＳを加え、３０分および６０分後の基底膜側の化合物１濃度および６０分後の頂端膜側の化合物１濃度を高速液体クロマトグラム法（ＨＰＬＣ）で定量した。ＨＰＬＣによる定量結果から、見かけの透過係数（Ｐａｐｐ）を下記の式より算出した。
Ｐａａｐ＝（δＱ／δｔ）×（１／６０ＡＣ０）
ＰａａＰ：見かけの透過係数（ｃｍ／ｓｅｃ）
δＱ／δｔ：透過速度（ｐｍｏｌ／ｍｉｎ）
Ａ：細胞単層膜面積＝０．３３（ｃｍ２）
Ｃ０：頂端膜側の初濃度（ｐｍｏｌ／ｍＬ）
試験結果２
化合物１の見かけの透過係数（Ｐａｐｐ）は１．７×１０−５（ｃｍ／ｓｅｃ）であった。
製剤例１  錠剤
化合物１                                          ５ｇ
デンプン                                        １２ｇ
乳糖                                        ２７．２ｇ
ステアリン酸マグネシウム                      ０．４ｇ
化合物１、乳糖およびデンプンを加えてよく混和し、湿性錠剤調整法に準じて打錠用顆粒とする。ステアリン酸マグネシウムを加えて打錠し、錠剤４００錠とする。錠剤は、必要に応じて、腸溶性コーティング剤（メタアクリル酸コポリマー）でコーティングする。
製剤例２  点眼剤
化合物１                                      １００ｍｇ
ホウ酸                                        ７００ｍｇ
ホウ砂                                          適量
塩化ナトリウム                                ５００ｍｇ
エデト酸ナトリウム                          ０．０５ｍｇ
塩化ベンザルコニウム                    ０．０００５ｍｇ
滅菌精製水                        全量        １００ｍＬ
以上の成分を常法により無菌的に混和して点眼剤とする。
製剤例３  注射剤
化合物１                                      １００ｍｇ
塩化ナトリウム                                ９００ｍｇ
１Ｎ水酸化ナトリウム                            適量
注射用蒸留水                          全量    １００ｍＬ
以上の成分を常法により無菌的に混和して注射剤とする。
【産業上の利用可能性】  本発明の一般式（Ｉ）で表される化合物は、優れたカルパイン阻害活性を有しているため、カルパインが関与する種々の疾患、例えば虚血性疾患、免疫疾患、アルツハイマー病、骨粗鬆症、脳組織障害による疾患、白内障、緑内障、網膜疾患、網脈絡膜疾患、光凝固による眼球後眼部合併症、血管新生を伴う疾患などの予防および治療薬として有用である。
以上、本発明の具体的な態様のいくつかを詳細に説明したが、当業者であれば示された特定の態様には、本発明の新規な教示と利点から実質的に逸脱しない範囲で色々な修正と変更をなし得ることは可能であるので、そのような修正および変更も、全て後記の特許請求の範囲で定義される本発明の精神と範囲内に含まれるものである。
本出願は、日本で出願された特願２００２−２１２２８８号を基礎としており、その内容は本明細書に全て包含されるものである。
【手続補正書】
【提出日】平成17年2月1日(2005.2.1)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（Ｉ）
【化１】
2004009537.tif 000017
［式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３はそれぞれ低級アルキル基を示す。］で表される化合物。
【請求項２】
Ｒ１、Ｒ２およびＲ３がそれぞれ炭素数３または４のアルキル基である請求項１記載の化合物。
【請求項３】
（３Ｓ）−Ｎ−ブチル−３−（（２Ｓ）−２−（（（４−フルオロフェニル）スルホニル）アミノ）−３−メチルブタノイルアミノ）−５−メチル−２−オキソヘキサナミド。
【請求項４】
一般式（Ｉ）
【化２】
2004009537.tif 000018
［式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３はそれぞれ低級アルキル基を示す。］で表される化合物を含有する医薬。
【請求項５】
カルパイン阻害剤である請求項４記載の医薬。
【請求項６】
カルパインが関与する疾患の予防または治療剤である請求項４記載の医薬。
【請求項７】
一般式（Ｉ）
【化３】
2004009537.tif 000019
［式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３はそれぞれ低級アルキル基を示す。］で表される化合物および製薬学的に許容される担体を含有する医薬組成物。
【請求項８】
カルパイン阻害剤である請求項７記載の医薬組成物。
【国際調査報告】
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2004009537.tif 000021
2004009537.tif 000022
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