(57)【要約】カントンニンジンまたはその抽出物を含有することを特徴とし、紫外線によるシミ・ソバカスを予防又は改善する美白剤が開示されている。本発明により、メラニンの生成を効果的に抑え、シミ・ソバカスの予防または改善に有効でかつ安全性の高い美白剤を提供することができる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
カントンニンジンまたはその抽出物を有効成分とする美白剤。
【請求項２】
請求の範囲第１項記載の美白剤を含有する皮膚外用剤組成物。
【請求項３】
請求の範囲第１項記載の美白剤を含有する化粧料組成物。
【請求項４】
請求の範囲第１項記載の美白剤を含有する内服剤組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】  本発明は、美白剤に関する。詳しくは、メラニン産生を抑制することにより、シミ・ソバカスを予防又は改善する美白剤またはそれを含有する医薬品、医薬部外品、化粧料及び食品に関する。
【背景技術】  皮膚のシミ・ソバカスは、日光の紫外線による刺激やホルモンの異常等が原因でメラノサイトが活性化され、そのメラノサイトで産生されたメラニン色素が皮膚内に沈着することにより発生すると一般に認識されている。このシミ・ソバカスは重大な肌の悩みとされている。このため、シミ・ソバカスを予防又は改善する薬物や化粧料などが数多く開発されている。例えば、アスコルビン酸及びその誘導体、アルブチンプラセンタエキス、コウジ酸及びその誘導体などが美白化粧料の中に配合され、使用されてきた。しかし、これらは効果が十分でなく満足のいくものではなかった。医療分野で使用されているハイドロキノンについては効果が認められるが、安全性の点で問題がある。このような状況のもと、シミ・ソバカスの予防改善効果が高く、しかも安全性も高い美白剤の開発が望まれていた。
従来の美白剤は、チロシナーゼ酵素阻害作用や培養メラノーマを用いたメラニン産生抑制作用等を評価してきた。これらの方法では、紫外線のような外的要因によるメラニン産生抑制効果を適切に評価するのが困難である。
近年、紫外線により皮膚で産生されるメラニン細胞刺激ホルモン（α−ｍｅｌａｎｏｃｙｔｅ  ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ  ｈｏｒｍｏｎｅ、以下「α−ＭＳＨ」という）が、シミ・ソバカスの原因となることが知られるようになった。このα−ＭＳＨは、メラノサイト活性化因子のひとつであり、メラノサイト上のレセプターＭＣ１Ｒ（ｍｅｌａｎｏｃｏｒｔｉｎ−１  ｒｅｃｅｐｔｏｒ）を介してメラニン合成を促進する（Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｓｃｉ．１０５．１０７９−１０８４，（１９９３）、Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｓｃｉ．１０７．２０５−２１１（１９９４）Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１５９，１９１−１９７（１９８６）、Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｓｃｉ．１０７．２０５−２１１（１９９４）Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１５９，１９１−１９７（１９８６）、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９２．１７９２−１７９３（１９９５））。また、α−ＭＳＨの産生及びＭＣ１Ｒの発現は紫外線照射により増加することが確認されている（Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ．１３１３，１３０−１３８（１９９６）、Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊ．Ｄａｒｍａｔｏｌ，１３９．２１６−２２４（１９９８））。これらの知見から、α−ＭＳＨによるメラノサイト活性化を阻害する作用を有するものは、細胞外から効率的に働きかけることができると考えられ、高い美白効果を発揮すると考えられる。
上記事実を踏まえ、本発明は、安全性の高い素材から、α−ＭＳＨによるメラノサイト活性化を阻害するものを見出し、当該素材を配合した紫外線によるシミ・ソバカスを予防または改善する安全性の高い美白剤を提供するを課題とする。
【発明の開示】
発明者は、上記課題を達成するため鋭意検討した結果、カントンニンジンがα−ＭＳＨによるメラノサイト活性化に対し高い阻害効果を有することを見出し、本発明を完成した。
すなわち本発明は、カントンニンジンまたはその抽出物を含有することを特徴とし、紫外線によるシミ・ソバカスを予防または改善する美白剤である。
日本国特開平２−１１１７１０号公報、日本国特開平８−９２０５５号公報、日本国特開平８−９２０５６号公報及び日本国特開平１０−２７３４１６号公報では、ニンジンを配合した化粧料が開示してある。しかし、ここで用いられているニンジンはオタネニンジン（朝鮮人参、高麗人参）といわれるもので本発明で使用するカントンニンジンとは異なるものである。また、日本国特開２０００−２６１５７０号公報や日本国特開２００１−３３５４２２号公報ではニンジンエキスを配合した化粧品が開示されている。しかし、カントンニンジンを示唆する記載は一切ない。
本発明に用いるカントンニンジン（Ａｍｅｒｉｃａｎ  ｇｉｎｓｅｎｇ）とは、ウコギ科（Ａｒａｌｉａｃｅａｅ）のＰａｎａｘ  ｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｓをその基源植物とし、西洋ニンジンまたはアメリカニンジンの別名を有する。従来オタネニンジンと同様に使用され、特に慢性炎症など熱感を伴った虚弱症状に対して用いられている。また、民間療法に広く使用されており、安全性の高いものである。
本発明で用いるカントンニンジンは、乾燥後粉砕して使用することができる。または、そのまま或いは粉砕後、溶媒にて抽出したものを用いる。
抽出溶媒は、発明の効果を奏する限り特に限定されない。例えば水、メタノール、エタノール等の低級アルコール類、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール等の多価アルコール類、アセトン等のケトン類、クロロホルム、ベンゼン等の有機溶媒を、単独或いは２種類以上を任意に組み合わせて使用することができる。本発明に使用する抽出液は、抽出液をそのまま使用するほか、乾燥エキスも使用することができる。
本発明で用いるカントンニンジンの配合量は、内服剤組成物として使用する場合、１日服用あたり０．１ｇ〜２０ｇ（原生薬換算）であり、１日２回ないし３回に分けて服用することができる。また、外用剤組成物として使用する場合は、製剤全体に対し０．０１〜１０質量％（原生薬換算）、好ましくは、１〜３質量％（原生薬換算）である。
本発明の美白剤は、各種内服剤組成物、外用剤組成物製剤として使用することができる。具体的に内服剤組成物では、錠剤、粉末、散剤、顆粒剤、カプセル剤及び経口液剤等として使用できる。外用剤組成物では、液剤、ローション剤、軟膏、パック及びクリーム剤等として使用できる。
本発明の美白剤は、さらに美白作用を高めるために、医薬品、医薬部外品、化粧品および食品分野における慣用の美白成分を併用することができる。たとえば、システイン、アルブチン、ビタミンＡおよびその誘導体およびビタミンＥおよびその誘導体の他、美白作用を有する生薬およびその抽出液等を使用できる。
本発明品は上記剤形の形態で医薬品類、医薬部外品類、化粧料及び食品として使用することができる。
本発明の内服剤組成物は、発明の効果を損なわない質的及び量的範囲で、ビタミン、生薬、天然物、賦形剤、ｐＨ調整剤、清涼化剤、懸濁化剤、粘稠剤、溶解補助剤、崩壊剤、結合剤、滑沢剤、抗酸化剤、コーティング剤、着色剤、矯味剤、界面活性剤、可塑剤、香料などを混合して常法で製造することができる。本発明の外用剤組成物は、発明の効果を損なわない質的及び量的範囲で、１，３−ブチレングリコール、エタノール、メタノール及び精製水等の溶媒、パラベン等保存剤、ヒノキチオール等の殺菌剤、白色ワセリン、スクワラン及びパラフィン等の油分、イソオクタン酸セチル、カプリン酸セチル及びモノオレイン酸グリセリン等のエステル、シリコーン樹脂及びシリコーンオイル等のシリコーン誘導体、ポリオキシエチレン硬化ひまし油等の界面活性剤、カルボキシビニルポリマー、ポリビニルアルコール等のゲル化剤、ｐＨ調整剤、抗酸化剤、着色剤等を混合して常法にて製造することができる。
【図面の簡単な説明】  第１図は、各種ニンジンエキス及びアルブチンがＢ１６Ｆ１細胞の細胞数に及ぼす影響を示した図である。
第２図は、各種ニンジンエキス及びアルブチンがＢ１６Ｆ１細胞のメラニン産生に及ぼす影響を示した図である。
第３図は、ＮＨＥＭ細胞の細胞数に及ぼすカントンニンジンの影響を示した図である。
第４図は、ＮＥＥＭ細胞のメラニン産生に及ぼすカントンニンジンの影響を示した図である。
第５図は、カントンニンジンの塗布による効果を確認した試験において、紫外線照射部位の皮膚明度変化を１％カントンニンジン溶液と溶媒とを比較した図である。
第６図は、カントンニンジンの塗布による効果を確認した試験において、紫外線照射部位の皮膚明度変化を３％カントンニンジン溶液と溶媒とを比較した図である。
第７図は、カントンニンジンの内服による効果を確認した試験において、治療効果判定側の皮膚明度変化を示した図である。
第８図は、カントンニンジンの内服による効果を確認した試験において、予防効果判定側の皮膚明度の変化を示した図である。
【発明を実施するための最良の形態】  以下、試験例により本発明をさらに詳細に説明する。
（試験例１）
Ｂ１６メラノーマ細胞の細胞数及びメラニン産生に及ぼす影響について試験を行った。
Ｂ１６メラノーマ細胞を、４０ｍＭ乳酸ナトリウムを含む１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）添加Ｅａｒｌ’ｓ  ＭＥＭ培地に分散し２×１０２  ｃｅｌｌ／ｍＬの懸濁液を調製した。これを６０Φシャーレに５ｍＬずつ播種し（１×１０３  ｃｅｌｌ／ｗｅｌｌ）３７℃で４日間培養した。０．１ｎＭのＮｌｅ４ｄ−Ｐｈｅ７−α−ｍｅｌａｎｏｃｙｔｅ  ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ  ｈｏｒｍｏｎｅ（ＮＤＰ−α−ＭＳＨ）及び１８０μｇ／ｍＬの生薬エキス、もしくは５０μＭアルブチンを含む培地（乳酸ナトリウムの除去）５ｍＬでシャーレ内を置換し、さらに３７℃で３日間培養した。生薬エキスは、５０％ＥｔＯＨ抽出物を原生薬換算で１８０ｍｇ／ｍＬとなるようジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に分散し、０．１ｎＭ  ＮＤＰ−α−ＭＳＨを含む培地で１０００倍希釈したものを用いた。細胞毒性の指標として、ｔｒｙｐｓｉｎではがした細胞の個数を血球計測板で測定した。また細胞はＰＢＳ洗浄し、１×１０６個の遠心残査につき１ｍＬの１Ｍ  ＮａＯＨを添加して溶解し、４７５ｎｍのメラニン吸収を測定した。
（結果１）
Ｂ１６メラノーマ細胞の細胞数に及ぼす影響について表１及び図１に示した。カントンニンジンは他のニンジンやアルブチンと同様に細胞数に差は認められなかった。これは、メラニン細胞を死滅させるという副作用がないことを示している。
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Ｂ１６メラノーマ細胞のメラニン産生に及ぼす影響について表２及び図２に示した。カントンニンジンが他のニンジンもしくはアルブチンと比較して、著しくメラニン産生を抑えていることが認められた。
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（試験例２）
ヒト正常メラノサイトの細胞数及びメラニン産生に及ぼす影響について試験を行った。本試験はヒトの細胞を用いるため、より正確な評価ができる。
ＨＭＧＳ（ヒト表皮メラニン細胞増殖添加剤）を添加したＨｕＭｅｄｉａ  ＫＢ２培地で維持したＮＨＥＭ細胞を、６０φシャーレに５×１０５個播種し、３７℃で２４時間培養した後、シャーレ内をＦＢＳ／ＢＰＥ／ＰＭＡ／ｈｅｐａｒｉｎ除去培地に置換し３日間培養した。１ｎＭのＮＤＰ−α−ＭＳＨ及び６００μｇ／ｍＬの生薬エキス、もしくは５０μＭアルブチンを含む同培地５ｍＬでシャーレ内を置換し、さらに３７℃で６日間培養した。培地は２日毎に交換した。生薬エキスは、５０％ＥｔＯＨ抽出物を原生薬換算で６００ｍｇ／ｍＬとなるようジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に分散し、０．１ｎＭ  ＮＤＰ−α−ＭＳＨを含む培地で１０００倍希釈したものを用いた。
細胞毒性の指標として、ｔｒｙｐｓｉｎではがした細胞の個数を血球計測板で測定した。また細胞はＰＢＳ洗浄し、１×１０６個の遠心残査につき１ｍＬの１Ｍ  ＮａＯＨを添加して溶解し、４７５ｎｍのメラニン吸収を測定した。
（結果２）
ＮＨＥＭ細胞の細胞数に及ぼす影響について表３及び図３に示した。カントンニンジンはアルブチンと同じように細胞毒性は認められなかった。
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ＮＥＥＭ細胞のメラニン産生に及ぼす影響について表４及び図４に示した。カントンニンジンの５０％ＥｔＯＨ抽出物には、ＮＤＰ−α−ＭＳＨによるメラニン産生を抑制する作用が認められた。その抑制率は５０μＭアルブチンよりも高かった。
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（試験例３）
有色モルモットの紫外線による色素沈着に対する塗布効果について試験を行った。
褐色モルモットの背部皮膚の左右２ヵ所（各２ｃｍ×２ｃｍ）に、ＳＥランプ（波長２５０〜３５０ｎｍ）を用いて最小紅斑量の紫外線を１日おきに３回照射した。初回照射日から１４日まで、上記照射部位の左右どちらか一方にカントンニンジンエキスを、他方に媒体（２０（ｖ／ｖ）％エタノール）をそれぞれ１００μＬ塗布した。カントンニンジンは、５０％ＥｔＯＨエキスを媒体で１％または３％となるよう希釈したものを用いた。色差計を用いて照射部位の明度（Ｌ値）を測定し、ΔＬ値（１４日目のＬ値−照射前のＬ値）により色素沈着の抑制効果を評価した。
（結果３）
照射部位の皮膚明度変化について表５及び第５図、第６図に示した。カントンニンジン塗布部位のΔＬ値は媒体塗布部位と比較し有意に高い値を示し、紫外線照射により生じる皮膚明度の低下を抑制することが示された。カントンニンジンには皮膚に塗布することで、紫外線による色素沈着を抑制する効果のあることが認められ、外用剤として有用であることが示された。
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（試験例４）
有色モルモットの紫外線による色素沈着に対する内服の効果について、治療・予防両面から試験を行った。
治療効果の検討では、有色モルモットの背部皮膚の左右どちらか１ヵ所に、ＳＥランプ（波長２５０〜３５０ｎｍ）を用いて最小紅斑量の紫外線を１日おきに３回照射し、初回照射２週間後より、媒体（０．２％ＣＭＣ−Ｎａ）またはカントンニンジンを１日２回、２．５ｍＬ／ｋｇで４週間経口投与した。カントンニンジンは５０％ＥｔＯＨエキスを３０または３００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙとなるよう投与した。予防効果の検討では上記動物を用い、その動物の使用していない反対側の背部皮膚に最小紅斑量の紫外線を投与開始後１週間から１日おきに３回照射した（この照射初日を０日とする）。色素沈着の評価は、色差計を用いて明度（Ｌ値）を測定し、ΔＬ値（観察日のＬ値−投与開始日のＬ値）により色素沈着の抑制効果を評価した。
（結果４）
治療効果判定側の皮膚明度変化について第７図に示した。
紫外線照射で生じた色素沈着部位のΔＬ値は、媒体投与群と比較してカントンニンジン投与群で高い値を示した。このことは、カントンニンジンを内服することにより、紫外線で生じた色素沈着の消失が早まったことを意味している。
予防効果判定側の皮膚明度の変化について第８図に示した。投与開始１週間後に紫外線を照射した場合も、カントンニンジン投与群の照射部位のΔＬ値は、媒体投与と比較し高い値を示した。このことはカントンニンジンを内服していた場合、紫外線で生じる色素沈着が緩和されたことを意味している。従って、本発明の美白剤は内服した場合に、皮膚色素沈着に対する治療予防効果があることが認められた。
また、治療効果側・予防効果側とも、カントンニンジンの効果には用量依存性が認められ、３００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ投与群では投与終了時のΔＬ値が媒体投与群と比較しいずれも有意に高かった。
なお、本実験において試験動物の一般状態の観察では、いづれの動物にも異常は認められず、体重推移も異常は認められなかった。よって、カントンニンジンを美白剤としての安全性も確認された。
【産業上の利用可能性】    本発明で得られる美白剤、つまりカントンニンジンまたはその抽出物を含有することを特徴とする組成物は、安全性の高いものであり、メラニンの生成を効果的に抑え、シミ・ソバカスの予防または改善に有効なものである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【手続補正書】
【提出日】平成16年6月11日(2004.6.11)
【手続補正００１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【書類名】特許請求の範囲
【請求項１】カントンニンジンまたはその抽出物を有効成分とする紫外線によるメラニン産生抑制剤。
【請求項２】請求の範囲第１項記載のメラニン産生抑制剤を含有する内服剤組成物。
【請求項３】（削除）
【請求項４】（削除）




【国際調査報告】
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