(57)【要約】化学合成、又はカゼインを加水分解することによって得られるＭｅｔ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏからなるペプチドを、アンジオテンシン変換酵素阻害剤又は血圧降下剤の有効成分とする。【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｍｅｔ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏからなるペプチド。
【請求項２】
Ｍｅｔ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏからなるペプチドを有効成分として含有するアンジオテンシン変換酵素阻害剤。
【請求項３】
Ｍｅｔ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏからなるペプチドを有効成分として含有する血圧降下剤。
【発明の詳細な説明】
技術分野
本発明は、新規なペプチド及び同ペプチドを含有するアンジオテンシン変換酵素阻害剤に関する。アンジオテンシン変換酵素阻害剤は、食品、飼料、及び医薬として利用することができる。
背景技術
アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）は、レニンによる切断によりアンジオテンシノーゲンから生じるアンジオテンシンＩに働き、Ｃ末端の２個のアミノ酸を遊離させて、アンジオテンシンＩＩに変換する酵素である。アンジオテンシン変換酵素は強い昇圧作用を有するアンジオテンシンＩＩを生成させるとともに、降圧作用を有するブラジキニンを不活性化する作用も有している。このような作用から、アンジオテンシン変換酵素阻害剤は、高血圧の治療薬として使用されており、カプトプリル（三共）、レニベース（萬有製薬）などが市販薬として知られている。また、アンジオテンシン変換酵素阻害剤は、心肥大退縮効果があることも知られている。
一方、アンジオテンシン変換酵素阻害作用を有するペプチドが、天然物中に、又はカゼイン、ゼラチン等の動物性蛋白質、コムギ、コメ、トウモロコシ等の植物性蛋白質、及び、イワシ等の魚類蛋白質等の酵素分解物から見出されている。例えば、天然物中に見出されるペプチドとして、テプロタイド（ノナペプチド，ＳＱ２０８８１）等や、ストレプトミセス属に属する放線菌の代謝産物ＩＳ８３（特開昭５８−１７７９２０号公報）が知られている。また、酵素分解物としては、カゼインをトリプシンにより分解して得たペプチド類（特開昭５８−１０９４２５号、同５９−４４３２３号、同５９−４４３２４号、同６１−３６２２６号、同６１−３６２２７号）、カゼインをサーモライシンにより分解して得たペプチド類（特開平６−２７７０９０号、同６−２７７０９１号、同６−２７９４９１号、同７−１０１９８２号、同７−１０１９８５号）、カゼイン等を乳酸菌あるいは、プロテイナーゼとペプチダーゼの組み合わせにより分解して得たペプチド類（特開平６−１９７７８６号、同６−４０９４４号、特開２００１−１３６９９５号。以下、それぞれ「参考文献１〜３」という。）等が知られている。参考文献１〜３のペプチド類は、血圧降下作用を有する特定保健用食品として利用されている。
上記のペプチド類の中で、前記特開平７−１０１９８２号公報（以下、「参考文献４」という）記載のペプチドが、最もアンジオテンシン変換酵素阻害活性が高く、かつトリペプチドという比較的単純な構造を有している。
発明の開示
上記のように、種々のアンジオテンシン変換酵素阻害ペプチドが知られているが、これらのペプチド類では、未だ食品中の機能として、アンジオテンシン変換酵素阻害活性は不十分である。よって、天然物由来で、一層高いアンジオテンシン変換酵素阻害活性を有し、かつ単純な構造を有するペプチドの取得と、その食品又は医薬等への応用が望まれているところである。
本発明者らは、前記課題を解決するために鋭意検討を行った結果、カゼインを特定の酵素で加水分解することにより、加水分解物中に高いアンジオテンシン変換酵素阻害活性を有する新規なペプチドが存在し、さらに同ペプチドがＭｅｔ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏで表される配列を有するペプチドであることを見出し、本発明を完成するに至った。
すなわち本発明は、Ｍｅｔ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏからなるペプチド（以下、「本発明のペプチド」ともいう）である。
また本発明は、Ｍｅｔ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏからなるペプチドを有効成分として含有するアンジオテンシン変換酵素阻害剤を提供する。
Ｍｅｔ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏからなるペプチドを有効成分として含有する血圧降下剤。
以下、本発明を詳細に説明する。
本発明のペプチドは、Ｍｅｔ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏで表される配列を有する。また、本発明のペプチドは、このペプチドの塩類であってもよい。本発明において、ＭｅｔはＬ−メチオニン残基、ＬｙｓはＬ−リジン残基、ＰｒｏはＬ−プロリン残基を示す。
本発明のペプチドは、例えば、カゼイン等の蛋白質を適当な加水分解酵素で加水分解することによって、製造することができる。以下に、蛋白質を加水分解酵素で加水分解する方法を例示する。
蛋白質を酵素で加水分解するには、蛋白質の性状により処法は異なるが、可溶性の場合には、原料蛋白質を水又は温湯に分散し、溶解する。難溶性の場合には熱水に蛋白質を混合し、強力な撹拌でホモジナイズする。
蛋白質としては、Ｍｅｔ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏで表される配列を含み、適当な加水分解酵素で消化したときに本発明のペプチドが生成するものであれば特に制限されず、動物由来や微生物由来のもの等が任意に用いられる。特に好適な蛋白質は、大量に入手可能なカゼインである。
前記蛋白質を含有する溶液を７０〜９０℃で１５秒間〜１０分間程度加熱殺菌することが、雑菌汚染による変敗防止の点から望ましい。
次いで、前記蛋白質を含有する溶液にアルカリ剤又は酸剤を添加し、ｐＨを使用する加水分解酵素の至適ｐＨ又はその付近に調整することが好ましい。本発明の方法に使用するアルカリ剤又は酸剤は、食品又は医薬品に許容されるものであれば如何なるアルカリ剤又は酸剤であってもよい。具体的には、アルカリ剤としては、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸カリウム等を、酸剤としては、塩酸、クエン酸、リン酸、酢酸等を例示することができる。
次に、蛋白質溶液に所定量の加水分解酵素を加え、温度１０〜８５℃程度で０．１〜４８時間反応を行う。
加水分解酵素としては、蛋白質を加水分解し、本発明のペプチドを生成させ得るするものであれば特に制限されないが、エンドペプチダーゼであることが好ましい。エンドペプチダーゼとしては、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属細菌由来のプロテアーゼ及び動物膵臓由来のプロテアーゼ等が挙げられる。これらの酵素は市販されており、バチルス属細菌由来のプロテアーゼとしてはビオプラーゼｓｐ−２０（長瀬生化学工業社製）、プロテアーゼＮ（天野エンザイム社製）等が、動物膵臓由来のプロテアーゼとしてはＰＴＮ６．０Ｓ（ノボザイムズ・ジャパン社製）等が好ましいものとして例示できる。バチルス属細菌由来のプロテアーゼは、蛋白質１ｇ当たり１００〜５０００活性単位の割合で添加するのが望ましい。また、動物膵臓由来のプロテアーゼは、蛋白質１ｇ当たり３０００  〜８０００活性単位の割合で添加するのが望ましい。
本発明において用いる加水分解酵素は１種でもよく、２種以上用いてもよい。２種以上の酵素を用いる場合は、それぞれの酵素反応は同時に行ってもよく、別々に行ってもよい。本発明においては、ビオプラーゼｓｐ−２０、プロテアーゼＮ、及びＰＴＮ６．０Ｓを混合して使用することが特に好ましい。
酵素を添加した溶液を、酵素の種類に応じて適当な温度、例えば３０〜６０℃、望ましくは４５〜５５℃に保持して蛋白質の加水分解を開始する。加水分解反応時間は、酵素反応の分解率をモニターしながら、好ましい分解率に達するまで反応を続ける。本発明のペプチドを得るためには、分解率は２０〜３０％が望ましい。
尚、蛋白質の分解率の算出方法は、ケルダール法（日本食品工業学会編、「食品分析法」、第１０２頁、株式会社光琳、昭和５９年）により試料の全窒素量を測定し、ホルモール滴定法（満田他編、「食品工学実験書」、上巻、第５４７ページ、養賢堂、１９７０年）により試料のホルモール態窒素量を測定し、これらの測定値から分解率を次式により算出する。
分解率（％）＝（ホルモール態窒素量／全窒素量）×１００
酵素反応の停止は、例えば、加水分解液中の酵素の失活により行われ、常法による加熱失活処理により実施することができる。加熱失活処理の加熱温度と保持時間は、使用した酵素の熱安定性を考慮し、十分に失活できる条件を適宜設定することができるが、例えば、８０〜１３０℃の温度範囲で３０分間〜２秒間の保持時間で行うことができる。
上記加水分解液物から、好ましくは本発明のペプチドを単離、精製する。ペプチドの精製は、通常、オリゴペプチドの精製に用いられているのと同様の手法、例えばイオン交換クロマトグラフィー、吸着クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー、分配クロマトグラフィー、ゲル濾過クロマトグラフィー等の各種クロマトグラフィー、溶媒沈殿、塩析、２種の液相間での分配等の方法を適宜組み合わせることによって、行うことができる。本発明のペプチドの精製に際しては、目的物質を含む画分は、後述するアンジオテンシン変換酵素阻害作用を指標として決定することができ、それらの画分の活性成分は質量分析法により同定することができる。
また、本発明のペプチドは、化学合成によっても製造することができる。本発明のペプチドの化学合成は、オリゴペプチドの合成に通常用いられている液相法または固相法によって行うことができる。合成されたペプチドは、必要に応じて脱保護され、未反応試薬、副生物等を除去する。このようなペプチドの合成は、市販のペプチド合成装置を用いて行うことができる。目的とするペプチドが得られたことは、アンジオテンシン変換酵素阻害作用を指標として確認することができる
本発明のペプチドは、アンジオテンシン変換酵素阻害剤の有効成分として使用することができる。本発明のペプチドは、アンジオテンシン変換酵素阻害作用及びブラジキニン不活性化抑制作用を有し、血圧降下作用を示す。したがって、高血圧に由来する種々の疾患、例えば脳出血、脳梗塞、狭心症、心筋梗塞、腎不全等に対する予防剤又は治療剤、具体的には血圧降下剤等として使用することができる。また、アンジオテンシン変換酵素阻害剤は、原因不明の本態性高血圧にも効果があることが知られており、本発明のペプチドも本態性高血圧に対する治療又は予防効果を示すことが期待される。その他、アンジオテンシン変換酵素阻害剤が有効であることが知られている心肥大、狭心病等の疾患に対しても、治療、予防薬として使用することができる。
本発明のアンジオテンシン変換酵素阻害剤は、経口投与、非経口投与のいずれによって投与されてもよいが、経口投与が好ましい。非経口投与としては、静注、直腸投与、吸入等が挙げられる。経口投与の剤型としては、錠剤、カプセル剤、トローチ剤、シロップ剤、顆粒剤、散剤、軟膏等が挙げられる。製剤化に際して、乳清蛋白加水分解物の他に、通常製剤化に用いられている賦形剤、ｐＨ調整剤、着色剤、矯味剤等の成分を用いることができる。また、公知の、もしくは将来的に見出されるアンジオテンシン変換酵素阻害作用を有する薬剤を併用することもできる。
また、本発明のペプチドを有効成分として食品中に含有させ、アンジオテンシン変換酵素阻害剤の一態様として、アンジオテンシン変換酵素阻害作用を有する食品として加工することも可能である。このような食品としては、液状、ペースト状、固体、粉末等の形態を問わず、錠菓、流動食、飼料（ペット用を含む）等のほか、例えば、パン、マカロニ、スパゲッティ、めん類、ケーキミックス、から揚げ粉、パン粉等の小麦粉製品；即席めん、カップめん、レトルト・調理食品、調理缶詰め、電子レンジ食品、即席スープ・シチュー、即席みそ汁・吸い物、スープ缶詰め、フリーズ・ドライ食品、その他の即席食品等の即席食品類；  農産缶詰め、果実缶詰め、ジャム・マーマレード類、漬物、煮豆類、農産乾物類、シリアル（穀物加工品）等の農産加工品；  水産缶詰め、魚肉ハム・ソーセージ、水産練り製品、水産珍味類、つくだ煮類等の水産加工品；畜産缶詰め・ペースト類、畜肉ハム・ソーセージ等の畜産加工品；加工乳、乳飲料、ヨーグルト類、乳酸菌飲料類、チーズ、アイスクリーム類、調製粉乳類、クリーム、その他の乳製品等の乳・乳製品；バター、マーガリン類、植物油等の油脂類；しょうゆ、みそ、ソース類、トマト加工調味料、みりん類、食酢類等の基礎調味料；調理ミックス、カレーの素類、たれ類、ドレッシング類、めんつゆ類、スパイス類、その他の複合調味料等の複合調味料・食品類；素材冷凍食品、半調理冷凍食品、調理済冷凍食品等の冷凍食品；キャラメル、キャンディー、チューインガム、チョコレート、クッキー、ビスケット、ケーキ、パイ、スナック、クラッカー、和菓子、米菓子、豆菓子、デザート菓子、その他の菓子などの菓子類；炭酸飲料、天然果汁、果汁飲料、果汁入り清涼飲料、果肉飲料、果粒入り果実飲料、野菜系飲料、豆乳、豆乳飲料、コーヒー飲料、お茶飲料、粉末飲料、濃縮飲料、スポーツ飲料、栄養飲料、アルコール飲料、その他の嗜好飲料等の嗜好飲料類、ベビーフード、ふりかけ、お茶潰けのり等のその他の市販食品等が挙げられる。
本発明のアンジオテンシン変換酵素阻害剤において、本発明のペプチドの配合量は、アンジオテンシン変換酵素阻害剤の最終組成物に対し少なくとも０．００１重量％であることが好ましい。
本発明のアンジオテンシン変換酵素阻害剤の投与量は、年齢、症状等により異なるが、通常、０．００１〜３０００ｍｇ／日、好ましくは０．０１〜３０ｍｇ／日であり、１日１回から３回に分けて投与してもよい。
発明を実施するための最良の形態
次に、実施例を挙げて本発明を更に具体的に説明する。
実施例１  カゼインの酵素分解によるペプチドの製造
＜１＞カゼインの酵素分解
市販のカゼイン（ニュージーランドデーリーボード製）１００ｇに水９００ｇを加え、よく分散させ、水酸化ナトリウムを添加して溶液のｐＨを７．０に調整し、カゼインを完全に溶解し、濃度約１０％のカゼイン水溶液を調製した。該カゼイン水溶液を８５℃で１０分間加熱殺菌し、５０℃に温度調整し、水酸化ナトリウムを添加してｐＨを９．５に調整した後、ビオプラーゼｓｐ−２０（長瀬生化学工業社製）１００，８００活性単位（蛋白質１ｇ当り１，２００活性単位）、プロテアーゼＮ（天野エンザイム社製）１６８，０００活性単位（蛋白質１ｇ当り２，０００活性単位）、及びＰＴＮ６．０Ｓ（ノボザイムズ・ジャパン社製）５８８，０００活性単位（蛋白質１ｇ当り７，０００活性単位）を添加して、加水分解反応を開始した。カゼインの分解率が２４．１％に達した時点で、８０℃で６分間加熱して酵素を失活させて酵素反応を停止し、１０℃に冷却した。この加水分解液を分画分子量３，０００の限外ろ過膜（旭化成社製）で限外ろ過し、濃縮後凍結乾燥し、凍結乾燥品８５ｇを得た。
＜２＞ＨＰＬＣによるペプチドの分離
逆相ＨＰＬＣで上記カゼイン加水分解物の分離を行った。このＨＰＬＣ条件は下記ＨＰＬＣ条件１に示した。
〔ＨＰＬＣ条件１〕
カラム  ：カプセルパックＣ１８（ＵＧ１２０、５μｍ）
２０ｍｍＩ．Ｄ．×２５０ｍｍ（資生堂）
検  出  ：ＵＶ  ２１５ｎｍ
流  速  ：１６ｍｌ／分
溶離液Ａ：０．０５％  ＴＦＡを含む１％アセトニトリル水溶液
溶離液Ｂ：０．０５％  ＴＦＡを含む２５％アセトニトリル水溶液
溶離液Ａ  １００％から、４０分後に溶離液Ｂ  １００％になるような直線グラジエント条件で、加水分解物を分離した。溶出画分について、後述する方法でアンギオテンシン変換酵素阻害能を測定したところ、アンジオテンシン変換酵素阻害能を持つペプチドは、リテンションタイム２２分に溶出された。さらに、このペプチドを精製するため、さらにＨＰＬＣで精製した。  このときの条件を下記ＨＰＬＣ条件２に示した。
〔ＨＰＬＣ条件２〕
カラム  ：カプセルパックＣ１８（ＵＧ３００、５μｍ）
２．０ｍｍＩ．Ｄ．×２５０ｍｍ（資生堂）
検  出  ：ＵＶ  ２１５ｎｍ
流  速  ：０．２ｍｌ／分
溶離液Ａ：０．０５％  ＴＦＡを含む１％アセトニトリル水溶液
溶離液Ｂ：０．０５％  ＴＦＡを含む１０％アセトニトリル水溶液
溶離液Ａ  １００％から１５分後に溶離液Ｂ  １００％になるような直線グラジエント条件で、リテンションタイム１３分のピークに強いアンジオテンシン変換酵素阻害能が認められた。このピークのアンジオテンシンＩ変換酵素阻害能は、ＩＣ５０［アンジオテンシン変換酵素の活性を５０％阻害するために必要な試料濃度（μｇ／ｍｌ）］＝０．１８μｇ／ｍｌであった。
上記活性ピークの化合物を、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍ社のプロテイン・シーケンサー（Ｍｏｄｅｌ−４７３Ａ）で同定した。その結果、Ｍｅｔ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏという新規な構造をもつことがわかった。更に、サーモクエスト社製質量分析計ＬＣＱにより、分子量（Ｍ）は、３７４．２、ｍ／ｚ＝３７５．２（ＭＨ＋）を親イオンとするＭＳ／ＭＳ分析により、図１に示す通り、ｍ／ｚ＝２６０，２１５，１２９等の娘イオンが検出された。
こうして、アンジオテンシン変換酵素阻害能を有するペプチドの構造は、Ｈ−Ｍｅｔ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−ＯＨであることが明らかとなった。尚、上記凍結乾燥品８５ｇ中に、トリペプチドＭｅｔ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏは、４２．５ｍｇ含まれていた。
実施例２  ペプチドの化学合成
ペプチドシンセサイザー（Ｍｏｄｅｌ  ４３３Ａ型、アプライドバイオシステムズ社）を使用し、Ｆｍｏｃ−Ｌ−Ｍｅｔ（アプライドバイオシステムズ社）、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）（アプライドバイオシステムズ社）、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＴｒｔＡ−ＰＥＧ  Ｒｅｓｉｎ（渡辺化学工業（株））を原料に用いて、固相合成法によりトリペプチドＭｅｔ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏを合成した。操作はアプライドバイオシステムズ社のマニュアルに従って行った後、脱保護した。このペプチドは、上記ＨＰＬＣ条件１で精製した。この物質を用いてアンジオテンシン変換酵素阻害能を測定した結果、実施例１で得られたカゼイン分解物から抽出したものとほぼ同じ値（ＩＣ５０＝０．１９μｇ／ｍｌ）が得られた。
得られたトリペプチドは、質量分析により分子量（Ｍ）は３７４．２と測定され、ｍ／ｚ＝３７５．２（ＭＨ＋）を親イオンとするＭＳ／ＭＳ分析により、図１と同様のスペクトルが得られた。
実施例３  ペプチドのアンジオテンシン変換酵素阻害作用
アンジオテンシン変換酵素阻害の測定は、カッシュマンらの方法〔バイオケミカル・ファーマコロジー２０巻、１６３７〜１６４８頁（１９７１）〕に準じて行った。
試料として、実施例１及び実施例２で得られたペプチド（Ｍｅｔ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ）、参考文献１〜３に記載のペプチド（Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ、Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ）、及び参考文献４に記載のペプチド（Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｔｒｐ）を用いた。これらのペプチドは、いずれも実施例２と同様にして化学合成したものである。
試料を０．１Ｍホウ酸緩衝液（０．３Ｍ  ＮａＣｌを含む、ｐＨ８．３）に溶解し、試験管に０．０８ｍｌ入れた後、０．１Ｍホウ酸緩衝液（０．３Ｍ  ＮａＣｌを含む、ｐＨ８．３）で５ｍＭに調整した酵素基質（ヒプリルヒスチジルロイシン、シグマ社製）０．２ｍｌを添加し、３７℃で３分間保温した。次いで、蒸留水を添加して０．１Ｕ／ｍｌになるように調整したウサギ肺のアンジオテンシン変換酵素（シグマ社製）０．０２ｍｌを添加し、３７℃で３０分間反応させた。
その後、１Ｎ塩酸０．２５ｍｌを添加して反応を終了した後、１．７ｍｌの酢酸エチルを加え、２０秒間激しく撹件し、３０００ｒｐｍで１０分間遠心分離して、酢酸エチル層を１．４ｍｌ採取した。得られた酢酸エチル層を加熱して溶媒を除去した後、蒸留水を１．０ｍｌ添加し、抽出したヒプリル酸の吸収（２２８ｎｍの吸光度）を測定して、これを酵素活性とした。
次の式から、阻害活性を求め、ＩＣ５０［アンジオテンシン変換酵素の活性を５０％阻害するために必要な試料濃度（μｇ／ｍｌ、又はμＭ）］を決定した。結果を表１に示す。
阻害率＝（Ａ−Ｂ）／（Ａ−Ｃ）×１００％
Ａ：試料（ペプチド）を含まない場合の酵素活性（２２８ｎｍの吸光度）
Ｂ：試料添加の場合の酵素活性（２２８ｎｍの吸光度）
Ｃ：酵素および試料を添加しない場合の酵素活性（２２８ｎｍの吸光度）
2003044044.tif 000002
実施例４  ペプチドの動物における血圧降下作用
＜１＞試験方法
１０週齢のＳＨＲ／Ｈｏｓ雄性ラット１２匹（日本エスエルシー株式会社より購入）を、１週間の予備飼育行い、ラットの血圧を小動物非観血式自動血圧計（ＭＫ−２０００，室町機械（株）社製）を用いて測定した。
収縮期血圧を指標とし、群毎の投与前の平均収縮期血圧がほぼ同じ値になるように、１群あたり６匹となるように２群に分けた後、約１６時間絶食し、試験群には実施例１の＜１＞項で得られたカゼインの酵素分解物を注射用水に溶解し、ラットに１０ｍＬ／体重ｋｇ（カゼインの酵素分解物として１００ｍｇ／体重ｋｇ、本発明のペプチド（Ｍｅｔ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ）として０．０５ｍｇ／体重ｋｇ。）の割合で経口投与し、投与２時間後に、ラットの血圧を測定した。対照群には、前記カゼインの酵素分解物水溶液の代わりに注射用水を同容量経口投与し、投与２時間後に、ラットの血圧を測定した。
＜２＞試験結果
結果を、表２に示す。表２から明らかなとおり、試験群において血圧降下が認められたものの、対照群では認められなかった。従って、本発明のペプチド（Ｍｅｔ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ）を含むカゼインの酵素分解物に、動物に対する血圧降下作用があることが判明した。
2003044044.tif 000003
実施例５  ペプチドのヒトにおける血圧降下作用
＜１＞試験方法
３０才以上５８才未満の男性志願者であって、摂取開始３週前のスクリーニング検査（医師による診察）時に収縮期血圧が１４０〜１６５ｍｍＨｇを示す軽症高血圧者で、かつ降圧薬による治療を受けていない９名を被験者とした。
スクリーニング検査時に測定した血圧値、喫煙の有無、及び年齢を考慮して、群間の平均化を図り、試験サンプル摂取群５名、対照群４名に割り振った。
試験サンプルとして、実施例１の＜１＞項で得られたカゼインの酵素分解物３ｇ（本発明のペプチド（Ｍｅｔ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ）として１．５ｍｇ含有）を、対照としてデキストリン３ｇを１日１回摂取させた。血圧測定（０〜３週）はほぼ同時刻に測定した。
得られた数値（収縮期血圧）を表３及び表４に示す。
得られた数値（収縮期血圧）を、統計解析ソフトウェアＳＰＳＳ（エス・ピー・エス・エス株式会社製）を使用して、有意差を危険率５％で一元配置分散分析法（例えば、市原清志著，「バイオサイエンスの統計学」，第５刷，株式会社南江堂，１９９１年１１月２０日，ｐ．１５０−１５１参照）により分析し、有意差のあったものについては、Ｄｕｎｎｅｔｔの多重比較法（例えば、竹内啓、外１３名編集，「統計学辞典」，東洋経済新報社，１９８９年１２月４日，ｐ．３９９参照）により平均値の比較を行った。
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＜２＞試験結果
統計解析ソフトウェアＳＰＳＳの分析結果として、対照群では、摂取前（０週）に対して、投与１、２及び３週後すべてで有意差は認められなかったが、試験サンプル摂取群では、２週及び３週後で有意な差がありとの結果が示された。従って、本発明のペプチド（Ｍｅｔ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ）を含むカゼインの酵素分解物に、ヒトに対する血圧降下作用があることが判明した。
産業上の利用の可能性
本発明により、アンジオテンシン変換酵素阻害剤として有用な新規ペプチドが提供される。本発明のペプチドは、天然物由来で、低毒性で安全性が高いことから、本発明のペプチドを有効成分として食品中に含有させ、血圧降下剤の一態様として血圧降下作用を有する食品として加工することも可能である。
【図面の簡単な説明】
図１は、本発明のペプチドのＭＳ／ＭＳ分析の結果を示す図である。
【図１】
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【国際調査報告】
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