(57)【要約】本発明は、ヒドロキシ脂肪酸、ヒドロキシ脂肪酸誘導体、及びヒドロキシ脂肪酸誘導体の加水分解生成物からなる群より選択される少なくとも１つを含む培地にて、カンジダ・ソルボフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｏｒｂｏｐｈｉｌａ）を培養し、生産されたラクトン類を該培地から採取することを含む、ラクトン類の製造法に関する。本発明はまた、ヒドロキシ脂肪酸、ヒドロキシ脂肪酸誘導体、及びヒドロキシ脂肪酸誘導体の加水分解生成物からなる群より選択される少なくとも１つを含む培地にて、カンジダ・ソルボフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｏｒｂｏｐｈｉｌａ）を培養し、該培地中に生産されたラクトン前駆体ヒドロキシ脂肪酸をラクトン化することを含む、ラクトン類の製造法にも関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒドロキシ脂肪酸、ヒドロキシ脂肪酸誘導体、及びヒドロキシ脂肪酸誘導体の加水分解生成物からなる群より選択される少なくとも１つを含む培地にて、カンジダ・ソルボフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｏｒｂｏｐｈｉｌａ）を培養し、生産されたラクトン類を該培地から採取することを含む、ラクトン類の製造法。
【請求項２】
ヒドロキシ脂肪酸、ヒドロキシ脂肪酸誘導体、及びヒドロキシ脂肪酸誘導体の加水分解生成物からなる群より選択される少なくとも１つを含む培地にて、カンジダ・ソルボフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｏｒｂｏｐｈｉｌａ）を培養し、該培地中に生産されたラクトン前駆体ヒドロキシ脂肪酸をラクトン化することを含む、ラクトン類の製造法。
【請求項３】
カンジダ・ソルボフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｏｒｂｏｐｈｉｌａ）が、カンジダ・ソルボフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｏｒｂｏｐｈｉｌａ）ＡＴＣＣ７４３６２株、カンジダ・ソルボフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｏｒｂｏｐｈｉｌａ）ＡＴＣＣ６０１３０株、カンジダ・ソルボフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｏｒｂｏｐｈｉｌａ）ＩＦＯ１５８３株、及び受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−８３８８として寄託されているカンジダ・ソルボフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｏｒｂｏｐｈｉｌａ）ＦＣ５８株からなる群より選択される少なくとも１つである、請求項１又は２に記載の製造法。
【請求項４】
ラクトン類が、一般式（１）
2004003213.tif 000030
（式中、環Ａはラクトン環を示し、Ｒ１は水素原子、炭化水素基、置換炭化水素基、ヘテロ環基又は置換ヘテロ環基を示し、Ｒ２は水素原子、炭化水素基又は置換炭化水素基を示す。尚、環ＡとＲ２とが結合して環を形成してもよい。）で表されるラクトンである、請求項１又は２に記載の製造法。
【請求項５】
ラクトン類が光学活性ラクトン類である請求項１又は２に記載の製造法。
【請求項６】
ヒドロキシ脂肪酸が、一般式（２）
2004003213.tif 000031
（式中、Ｒ１は水素原子、炭化水素基、置換炭化水素基、ヘテロ環基又は置換ヘテロ環基を示し、Ｒ２は水素原子、炭化水素基又は置換炭化水素基を示し、Ｒ３は炭素鎖４以上の置換基を有していてもよい２価の炭化水素基を示す。尚、Ｒ２とＲ３とが結合して環を形成してもよい。）で表されるヒドロキシ脂肪酸である、請求項１又は２に記載の製造法。
【請求項７】
ヒドロキシ脂肪酸誘導体が、ヒドロキシ脂肪酸アルキルエステル又はヒドロキシ脂肪酸グリセリドである、請求項１又は２に記載の製造法。
【請求項８】
ヒドロキシ脂肪酸アルキルエステルが、一般式（３）
2004003213.tif 000032
（式中、Ｒ１は水素原子、炭化水素基、置換炭化水素基、ヘテロ環基又は置換ヘテロ環基を示し、Ｒ２は水素原子、炭化水素基又は置換炭化水素基を示し、Ｒ３は炭素鎖４以上の置換基を有していてもよい２価の炭化水素基を示し、Ｒ４はアルキル基を示す。尚、Ｒ２とＲ３とが結合して環を形成してもよい。）で表されるヒドロキシ脂肪酸アルキルエステルである、請求項７に記載の製造法。
【請求項９】
ヒドロキシ脂肪酸グリセリドが、一般式（４）
2004003213.tif 000033
［式中、Ｒ６〜Ｒ８は夫々独立して水素原子又は一般式（６）
2004003213.tif 000034
（式中、Ｒ１は水素原子、炭化水素基、置換炭化水素基、ヘテロ環基又は置換ヘテロ環基を示し、Ｒ２は水素原子、炭化水素基又は置換炭化水素基を示し、Ｒ３は炭素鎖４以上の置換基を有していてもよい２価の炭化水素基を示し、Ｒ４はアルキル基を示す。尚、Ｒ２とＲ３とが結合して環を形成してもよい。）で表される基を示す。但し、Ｒ６〜Ｒ８の少なくとも１つは前記一般式（６）で示される基である。］で表されるヒドロキシ脂肪酸グリセリドである、請求項７に記載の製造法。
【請求項１０】
ヒマシ油、ヒマシ油の加水分解生成物、リシノール酸、１１−ヒドロキシパルミチン酸、レスクエラ酸、１０−ヒドロキシステアリン酸、１０−ヒドロキシパルミチン酸及び１１−ヒドロキシパルミチン酸エチルからなる群より選択される少なくとも１つを含む培地にて、カンジダ・ソルボフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｏｒｂｏｐｈｉｌａ）を培養することを特徴とする、請求項１又は２に記載の製造法。
【請求項１１】
ラクトン前駆体ヒドロキシ脂肪酸が、４位又は５位に水酸基をもつ炭素数４以上のヒドロキシ脂肪酸である、請求項２に記載の製造法。
【請求項１２】
ラクトン類が、γ−デカラクトン、γ−バレロラクトン、γ−ヘキサラクトン、γ−ヘプタラクトン、γ−オクタラクトン、γ−ノナラクトン、γ−ウンデカラクトン、γ−ドデカラクトン、γ−トリデカラクトン、γ−テトラデカラクトン、δ−デカラクトン、δ−ヘキサラクトン、δ−ヘプタラクトン、δ−オクタラクトン、δ−ノナラクトン、δ−ウンデカラクトン、δ−ドデカラクトン、δ−トリデカラクトン及びδ−テトラデカラクトンからなる群より選択されるいずれか１つである、請求項１又は２に記載の製造法。
【請求項１３】
ヒドロキシ脂肪酸、ヒドロキシ脂肪酸誘導体、及びヒドロキシ脂肪酸誘導体の加水分解生成物からなる群より選択される少なくとも１つを含む培地にて、カンジダ・ソルボフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｏｒｂｏｐｈｉｌａ）を培養する、ラクトン前駆体ヒドロキシ脂肪酸の製造法。
【請求項１４】
ヒマシ油、ヒマシ油の加水分解生成物、リシノール酸及びレスクエラ酸からなる群より選択される少なくとも１つを含む培地にて、カンジダ・ソルボフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｏｒｂｏｐｈｉｌａ）を培養し、生産されたγ−デカラクトンを該培地から採取することを含む、γ−デカラクトンの製造法。
【請求項１５】
ヒマシ油、ヒマシ油の加水分解生成物、リシノール酸及びレスクエラ酸からなる群より選択される少なくとも１つを含む培地にて、カンジダ・ソルボフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｏｒｂｏｐｈｉｌａ）を培養し、該培地中に生産されるγ−ヒドロキシデカン酸をラクトン化することを含む、γ−デカラクトンの製造法。
【請求項１６】
γ−デカラクトンが、光学活性γ−デカラクトンである請求項１４又は１５に記載の製造法。
【請求項１７】
ヒマシ油、ヒマシ油の加水分解生成物、リシノール酸及びレスクエラ酸からなる群より選択される少なくとも１つがヒマシ油及び／又はヒマシ油の加水分解生成物である、請求項１４又は１５に記載の製造法。
【請求項１８】
１１−ヒドロキシパルミチン酸及び／又は１１−ヒドロキシパルミチン酸エチルを含む培地にて、カンジダ・ソルボフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｏｒｂｏｐｈｉｌａ）を培養し、生産されたδ−デカラクトンを該培地から採取することを含む、δ−デカラクトンの製造法。
【請求項１９】
１１−ヒドロキシパルミチン酸及び／又は１１−ヒドロキシパルミチン酸エチルを含む培地にて、カンジダ・ソルボフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｏｒｂｏｐｈｉｌａ）を培養し、該培地中に生産されるδ−ヒドロキシデカン酸をラクトン化することを含む、δ−デカラクトンの製造法。
【請求項２０】
δ−デカラクトンが、光学活性δ−デカラクトンである請求項１８又は１９に記載の製造法。
【請求項２１】
カンジダ・ソルボフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｏｒｂｏｐｈｉｌａ）が、カンジダ・ソルボフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｏｒｂｏｐｈｉｌａ）ＡＴＣＣ７４３６２株、カンジダ・ソルボフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｏｒｂｏｐｈｉｌａ）ＡＴＣＣ６０１３０株、カンジダ・ソルボフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｏｒｂｏｐｈｉｌａ）ＩＦＯ１５８３株、及び受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−８３８８として寄託されているカンジダ・ソルボフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｏｒｂｏｐｈｉｌａ）ＦＣ５８株からなる群より選択される少なくとも１つである、請求項１４、１５、１８又は１９に記載の製造法。
【請求項２２】
カンジダ・ソルボフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｏｒｂｏｐｈｉｌａ）の、ラクトン類の製造のための使用。
【請求項２３】
カンジダ・ソルボフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｏｒｂｏｐｈｉｌａ）ＦＥＲＭ  ＢＰ−８３８８菌株。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】  本発明は、香料や医薬中間体等として有用なラクトン類の、微生物を用いた製造法に関する。
【背景技術】  香料はその原料あるいは製法によって化学的合成品の香料（いわゆる「合成香料」）と化学的合成品以外の香料（いわゆる「天然香料」）の二つに大別される。そして近年の消費者は、「合成品」を避け「天然品」を好む傾向がある。しかしながら、例えば天然食品フレーバーを構成する上で重要な物質である光学活性体γ−デカラクトン（Ｒ−γ−デカラクトン、Ｓ−γ−デカラクトン）やδ−デカラクトンは、天然物に存在する量が極めて微量であることから、これらを高光学純度で抽出あるいはその他の操作によって分離することは、技術的及び経済的な見地より有利ではない。したがって現状では「合成品」が一般的に安価にかつ大量に供給されており、一方「天然品」の製造規模は小さく、かつ高価なものが多い。
そこで、上記「天然香料」を、現在使用されている「合成香料」と同程度に安価にかつ大量に供給する方法が望まれている。かかる供給方法として提案されている方法の中では、一切化学的手法を使わず生物学的手法および物理学的手法のみを用いて、天然物原料あるいはその分解物から天然Ｒ−γ−デカラクトンを生産する方法であるとして、微生物を用いる発酵法が注目を浴びている。
例えば、ヒマシ油（カスターオイル）またはその加水分解生成物を原料とする微生物を用いたγ−デカラクトンの生産方法としては、特開昭５９−８２０９０号公報にアスペルギルス・オリザエ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ）、カンジダ・ルゴザ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｒｕｇｏｓａ）、ゲオトリクム・ケレバーニー（Ｇｅｏｔｒｉｃｈｕｍ  ｋｌｅｂａｎｎｉｉ）、ヤロウィア・リポリチカ（Ｙａｒｒｏｗｉａ  ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ）等の微生物を用いてγ−ヒドロキシデカン酸を生産せしめ、これに塩酸等を加え酸性にした後、加熱することによってラクトン化してγ−デカラクトンを製造する方法が開示されている。また、特開昭６３−５６２９５号公報およびＫ．Ａ．ＭＡＵＭＥらの報告［Ｂｉｏｃａｔａｌｙｓｉｓ，Ｖｏｌ．５，７９−９７（１９９１）］には、スポロボロミセス・オドラス（Ｓｐｏｒｏｂｏｌｏｍｙｃｅｓ  ｏｄｏｒｕｓ）またはロドトルラ・グルチニス（Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ  ｇｌｕｔｉｎｉｓ）を用いてリシノール酸源からγ−ヒドロキシデカン酸を得、同様にラクトン化してγ−デカラクトンを生産する方法が開示されている。また特開平２−１７４６８５号公報ではアスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）等の微生物を用いて、特開平３−１１７４９４号公報ではサッカロミセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）等の微生物を用いて、ヒマシ油またはリシノール酸からγ−ヒドロキシデカン酸を経てγ−デカラクトンを生産する方法が開示されている。さらにこれらの技術に先行してＳ．Ｏｋｕｉらはカンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属に属する数種の菌株を用いて、リシノール酸の酸化分解過程においてγ−ヒドロキシデカン酸およびγ−デカラクトンが中間体として存在することを報告している［Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，Ｖｏｌ．５４，Ｎｏ．６，５３６−５４０（１９６３）］。その他にもヨーロツパ特許公開９９７５３３ではヤロウィア・リポリチカ（Ｙａｒｒｏｗｉａ  ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ）を用いてヒマシ油からγ−デカラクトンを１２ｇ／Ｌにて生産する方法が開示されているが、その生産方法では培養時に乳化剤やｐＨ調整剤を使用する必要があり、また原料となるヒマシ油の培養系への添加量が０．０２４７ｋｇ／Ｌと添加比率が小さいことから、製造上はなはだ非効率的である。さらにこれらの公報等に開示されている微生物は、いずれも本発明で用いる微生物とは別の種に属しており、また菌体と生産物の分離が困難であったり生成量が経済的観点から見て充分でなかったりと必ずしも実用化には適していない。
一方、ヒマシ油およびヒマシ油の加水分解生成物以外の成分を炭素源とする方法としては、スポロボロミセス・オドラス（Ｓｐｏｒｏｂｏｌｏｍｙｃｅｓ  ｏｄｏｒｕｓ）［Ｓ．Ｔａｑｈａｒａら，Ａｇｒｉｃ．Ｂｉｏｌ．ｃｈｅｍ．，Ｖｏｌ．３６，Ｎｏ．１３，２５８５−２５８７（１９７２）；Ｎ．Ｊｏｕｒｄａｉｎら，″Ｔｏｐ．Ｆｌａｖｏｕｒ  Ｒｅｓ．，Ｐｒｏｃ．Ｉｎｔ．Ｃｏｎｆ″，Ｈ．Ｅｉｃｈｈｏｒｎ刊，４２７−４４１（１９８５）］やフザリウム・ポアエ（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｐｏａｅ）［Ｊ．Ｓａｒｒｉｓら，Ａｇｒｉｃ．Ｂｉｏｌ．ｃｈｅｍ．，Ｖｏｌ．４９，Ｎｏ．１１，３２２７−３２３０（１９８５）］を用いて、糖基質からγ−デカラクトンを生産する方法が報告されているが、これらの方法ではγ−デカラクトンの生産量が極微量であるため工業的規模での生産には適していない。
従って、乳化剤やｐＨ調整剤を使用せず、かつ原料であるヒマシ油及び／又はヒマシ油の加水分解生成物を高濃度で添加しても、γ−ヒドロキシデカン酸及びγ−デカラクトンを効率良く生産できる製造法が望まれていた。
一方、天然γ−デカラクトン中における鏡像体の存在比について、Ｒ−γ−デカラクトンが過剰であるとも報告されている［Ａ．Ｂｅｒｎｒｅｕｔｈｅｒら、Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，４８１，３６３（１９８９）］。このようなＲ−γ−デカラクトンの純粋光学活性体の製造法としては特開平４−１０８７８２号公報での化学合成による方法が知られている。
またＲ−γ−デカラクトンは天然物中より抽出することにより得られるラセミ体混合物から、当業者に公知の方法によりＲ−γ−デカラクトンを選択的に分離する方法によって製造することもできる。しかしこの場合、天然物中に存在するＲ−γ−デカラクトンの量が極めて微量であることと、Ｒ−γ−デカラクトンを他の揮発性化合物から分離することは物理的に困難であるため天然物中より抽出することは経済的な方法ではない。したがって前述のような天然化合物に対する高い需要に応えるために、Ｒ−γ−デカラクトンの化学合成法又はラセミ体混合物からの分離法とは異なる方法による、効率のよい天然Ｒ−γ−デカラクトン製造法の開発が求められていた。
一方、微生物を用いたδ−デカラクトンの製造法としては、真菌類、特に酵母の還元能を利用した製造法等が提案されている。例えば、特開平３−１５５７９２号公報には、サッカロミセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）がもつ還元力を利用して、天然の２−デセン−１，５−オライドから５−デカノライドを製造する方法、また、特開平６−２２５７８１号公報には、サッカロミセス・デルブルエキイ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ）等の酵母を用いて、デルターデカノリド、デルタードデカノリドまたはそれらの混合物を、対応する不飽和ラクトンであるデルタ−デセン−２−オリド、デルタ−ドデセン−２−オリドまたはそれらの混合物を含有する基質から生物水素化により製造する方法等が提案されている。しかしながら、酵母の還元能を利用した物質転換法は、高い基質濃度での作用が困難であること、目的物質を得るのに長時間を要すること等の問題点を有している。
【発明の開示】
本明細書は、本願の優先権の基礎となる特願２００２−１９０６１６号の明細書に記載された内容を包含する。
本発明は上記の問題を鑑みてなされたものであり、微生物を用いる、天然のラクトン類、例えば光学活性γ−デカラクトン、光学活性δ−デカラクトン等の光学活性ラクトン類のより効率的な製造法を提供することを目的とする。
本発明者らは、上記課題を解決するために、ヒマシ油及び／又はヒマシ油の加水分解生成物を炭素源として、培地中にγ−ヒドロキシデカン酸を高濃度で蓄積することのできる微生物を公知の菌株および自然界から広く探索した。その結果、カンジダ・ソルボフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｏｒｂｏｐｈｉｌａ）を用いることにより、乳化剤やｐＨ調整剤を使用せず、かつヒマシ油、ヒマシ油の加水分解生成物、リシノール酸及びレスクエラ酸からなる群より選択される少なくとも１つを原料として高濃度で添加した場合に、γ−ヒドロキシデカン酸及び／又は光学活性。γ−デカラクトンを非常に効率よく培地中に生産及び蓄積させることができることを見出した。さらに、そのようにして得られるγ−ヒドロキシデカン酸を酸性条件下で加熱処理することにより、容易に光学活性γ−デカラクトンを製造することができることも見出した。また、そのようにして製造した光学活性γ−デカラクトンは、非常に高い生産性で回収された。更にまた、上記カンジダ・ソルボフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｏｒｂｏｐｈｉｌａ）が、種々のヒドロキシ脂肪酸を炭素源として種々の光学活性ラクトンを製造することを見出した。
本発明は以上の知見に基づいて完成されたものであり、即ち以下の通りである。
［１］  ヒドロキシ脂肪酸、ヒドロキシ脂肪酸誘導体、及びヒドロキシ脂肪酸誘導体の加水分解生成物からなる群より選択される少なくとも１つを含む培地にて、カンジダ・ソルボフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｏｒｂｏｐｈｉｌａ）を培養し、生産されたラクトン類を該培地から採取することを含む、ラクトン類の製造法。
［２］  ヒドロキシ脂肪酸、ヒドロキシ脂肪酸誘導体、及びヒドロキシ脂肪酸誘導体の加水分解生成物からなる群より選択される少なくとも１つを含む培地にて、カンジダ・ソルボフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｏｒｂｏｐｈｉｌａ）を培養し、該培地中に生産されたラクトン前駆体ヒドロキシ脂肪酸をラクトン化することを含む、ラクトン類の製造法。
［３］  カンジダ・ソルボフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｏｒｂｏｐｈｉｌａ）が、カンジダ・ソルボフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｏｒｂｏｐｈｉｌａ）ＡＴＣＣ７４３６２株、カンジダ・ソルボフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｏｒｂｏｐｈｉｌａ）ＡＴＣＣ６０１３０株、カンジダ・ソルボフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｏｒｂｏｐｈｉｌａ）ＩＦＯ１５８３株、及び受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−８３８８として寄託されているカンジダ・ソルボフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｏｒｂｏｐｈｉｌａ）ＦＣ５８株からなる群より選択される少なくとも１つである、上記［１］又は［２］に記載の製造法。
［４］  ラクトン類が、一般式（１）
2004003213.tif 000002
（式中、環Ａはラクトン環を示し、Ｒ１は水素原子、炭化水素基、置換炭化水素基、ヘテロ環基又は置換ヘテロ環基を示し、Ｒ２は水素原子、炭化水素基又は置換炭化水素基を示す。尚、環ＡとＲ２とが結合して環を形成してもよい。）で表されるラクトンである、上記［１］又は［２］に記載の製造法。
［５］  ラクトン類が光学活性ラクトン類である上記［１］又は［２］に記載の製造法。
［６］  ヒドロキシ脂肪酸が、一般式（２）
2004003213.tif 000003
（式中、Ｒ１は水素原子、炭化水素基、置換炭化水素基、ヘテロ環基又は置換ヘテロ環基を示し、Ｒ２は水素原子、炭化水素基又は置換炭化水素基を示し、Ｒ３は炭素鎖４以上の置換基を有していてもよい２価の炭化水素基を示す。尚、Ｒ２とＲ３とが結合して環を形成してもよい。）で表されるヒドロキシ脂肪酸である、上記［１］又は［２］に記載の製造法。
［７］  ヒドロキシ脂肪酸誘導体が、ヒドロキシ脂肪酸アルキルエステル又はヒドロキシ脂肪酸グリセリドである、上記［１］又は［２］に記載の製造法。
［８］  ヒドロキシ脂肪酸アルキルエステルが、一般式（３）
2004003213.tif 000004
（式中、Ｒ１は水素原子、炭化水素基、置換炭化水素基、ヘテロ環基又は置換ヘテロ環基を示し、Ｒ２は水素原子、炭化水素基又は置換炭化水素基を示し、Ｒ３は炭素鎖４以上の置換基を有していてもよい２価の炭化水素基を示し、Ｒ４はアルキル基を示す。尚、Ｒ２とＲ３とが結合して環を形成してもよい。）で表されるヒドロキシ脂肪酸アルキルエステルである、上記［７］に記載の製造法。
［９］  ヒドロキシ脂肪酸グリセリドが、一般式（４）
2004003213.tif 000005
［式中、Ｒ６〜Ｒ８は夫々独立して水素原子又は一般式（６）
2004003213.tif 000006
（式中、Ｒ１は水素原子、炭化水素基、置換炭化水素基、ヘテロ環基又は置換ヘテロ環基を示し、Ｒ２は水素原子、炭化水素基又は置換炭化水素基を示し、Ｒ３は炭素鎖４以上の置換基を有していてもよい２価の炭化水素基を示し、Ｒ４はアルキル基を示す。尚、Ｒ２とＲ３とが結合して環を形成してもよい。）で表される基を示す。但し、Ｒ６〜Ｒ８の少なくとも１つは前記一般式（６）で示される基である。］
で表されるヒドロキシ脂肪酸グリセリドである、上記［７］に記載の製造法。
［１０］  ヒマシ油、ヒマシ油の加水分解生成物、リシノール酸、１１−ヒドロキシパルミチン酸、レスクエラ酸、１０−ヒドロキシステアリン酸、１０−ヒドロキシパルミチン酸及び１１−ヒドロキシパルミチン酸エチルからなる群より選択される少なくとも１つを含む培地にて、カンジダ・ソルボフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｏｒｂｏｐｈｉｌａ）を培養することを特徴とする、上記［１］又は［２］に記載の製造法。
［１１］  ラクトン前駆体ヒドロキシ脂肪酸が、４位又は５位に水酸基をもつ炭素数４以上のヒドロキシ脂肪酸である、上記［２］に記載の製造法。
［１２］  ラクトン類が、γ−デカラクトン、γ−バレロラクトン、γ−ヘキサラクトン、γ−ヘプタラクトン、γ−オクタラクトン、γ−ノナラクトン、γ−ウンデカラクトン、γ−ドデカラクトン、γ−トリデカラクトン、γ−テトラデカラクトン、δ−デカラクトン、δ−ヘキサラクトン、δ−ヘプタラクトン、δ−オクタラクトン、δ−ノナラクトン、δ−ウンデカラクトン、δ−ドデカラクトン、δ−トリデカラクトン及びδ−テトラデカラクトンからなる群より選択されるいずれか１つである、上記［１］又は「２］に記載の製造法。
［１３］  ヒドロキシ脂肪酸、ヒドロキシ脂肪酸誘導体、及びヒドロキシ脂肪酸誘導体の加水分解生成物からなる群より選択される少なくとも１つを含む培地にて、カンジダ・ソルボフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｏｒｂｏｐｈｉｌａ）を培養する、ラクトン前駆体ヒドロキシ脂肪酸の製造法。
［１４］  ヒマシ油、ヒマシ油の加水分解生成物、リシノール酸及びレスクエラ酸からなる群より選択される少なくとも１つを含む培地にて、カンジダ・ソルボフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｏｒｂｏｐｈｉｌａ）を培養し、生産されたγ−デカラクトンを該培地から採取することを含む、γ−デカラクトンの製造法。
［１５］  ヒマシ油、ヒマシ油の加水分解生成物、リシノール酸及びレスクエラ酸からなる群より選択される少なくとも１つを含む培地にて、カンジダ・ソルボフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｏｒｂｏｐｈｉｌａ）を培養し、該培地中に生産されるγ−ヒドロキシデカン酸をラクトン化することを含む、γ−デカラクトンの製造法。
［１６］  γ−デカラクトンが、光学活性γ−デカラクトンである上記［１４］又は［１５］に記載の製造法。
［１７］  ヒマシ油、ヒマシ油の加水分解生成物、リシノール酸及びレスクエラ酸からなる群より選択される少なくとも１つがヒマシ油及び／又はヒマシ油の加水分解生成物である、上記［１４］又は［１５］に記載の製造法。
［１８］  １１−ヒドロキシパルミチン酸及び／又は１１−ヒドロキシパルミチン酸エチルを含む培地にて、カンジダ・ソルボフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｏｒｂｏｐｈｉｌａ）を培養し、生産されたδ−デカラクトンを該培地から採取することを含む、δ−デカラクトンの製造法。
［１９］  １１−ヒドロキシパルミチン酸及び／又は１１−ヒドロキシパルミチン酸エチルを含む培地にて、カンジダ・ソルボフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｏｒｂｏｐｈｉｌａ）を培養し、該培地中に生産されるδ−ヒドロキシデカン酸をラクトン化することを含む、δ−デカラクトンの製造法。
［２０］  δ−デカラクトンが、光学活性δ−デカラクトンである上記［１８］又は［１９］に記載の製造法。
［２１］  カンジダ・ソルボフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｏｒｂｏｐｈｉｌａ）が、カンジダ・ソルボフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｏｒｂｏｐｈｉｌａ）ＡＴＣＣ７４３６２株、カンジダ・ソルボフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｏｒｂｏｐｈｉｌａ）ＡＴＣＣ６０１３０株、カンジダ・ソルボフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｏｒｂｏｐｈｉｌａ）ＩＦＯ１５８３株、及び受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−８３８８として寄託されているカンジダ・ソルボフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｏｒｂｏｐｈｉｌａ）ＦＣ５８株からなる群より選択される少なくとも１つである、上記［１４］、［１５］、［１８］又は［１９］に記載の製造法。
［２２］  カンジダ・ソルボフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｏｒｂｏｐｈｉｌａ）の、ラクトン類の製造のための使用。
［２３］  カンジダ・ソルボフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｏｒｂｏｐｈｉｌａ）ＦＥＲＭ  ＢＰ−８３８８菌株。
本発明におけるラクトン類の製造は、ヒドロキシ脂肪酸、ヒドロキシ脂肪酸誘導体、及びヒドロキシ脂肪酸誘導体の加水分解生成物からなる群より選択される少なくとも１つを含む培地中でカンジダ・ソルボフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｏｒｂｏｐｈｉｌａ）によりラクトン類を生産させて、そのラクトン類を該培地から採取することによって行う。
本発明におけるラクトン類の製造はまた、ヒドロキシ脂肪酸、ヒドロキシ脂肪酸誘導体、及びヒドロキシ脂肪酸誘導体の加水分解生成物からなる群より選択される少なくとも１つを含む培地中でカンジダ・ソルボフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｏｒｂｏｐｈｉｌａ）によりラクトン前駆体ヒドロキシ脂肪酸を生産させて、そのラクトン前駆体ヒドロキシ脂肪酸をラクトン化することによっても行う。
以下では、本発明のラクトン類の製造法の詳細について説明する。
（１）カンジダ・ソルボフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｏｒｂｏｐｈｉｌａ）
本発明において用いるカンジダ・ソルボフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｏｒｂｏｐｈｉｌａ）の具体例としては、カンジダ・ソルボフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｏｒｂｏｐｈｉｌａ）ＦＣ５８株、カンジダ・ソルボフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｏｒｂｏｐｈｉｌａ）ＡＴＣＣ７４３６２株、カンジダ・ソルボフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｏｒｂｏｐｈｉｌａ）ＡＴＣＣ６０１３０株、カンジダ・ソルボフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｏｒｂｏｐｈｉｌａ）ＩＦＯ１５８３株等が挙げられるが、これらの例に限定されるものではない。カンジダ・ソルボフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｏｒｂｏｐｈｉｌａ）ＦＣ５８株は、２００２年６月１０日付（原寄託日）で、独立行政法人  産業技術総合研究所  特許生物寄託センター（日本国茨城県つくば市東１丁目１番地１  中央第６）に、受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−８３８８として寄託されており、この寄託については２００３年５月２８日に原寄託よりブダペスト条約に基づく寄託への移管請求が受領されている。
上記カンジダ・ソルボフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｏｒｂｏｐｈｉｌａ）ＦＣ５８株は、神奈川県下の一般的な土壌から常法に従って分離し、菌学的性質を同定し、それらの性質を分類学の参考書である［Ｋｕｒｔｚｍａｎ，Ｃ．Ｐ．ら，″Ｔｈｅ  Ｙｅａｓｔｓ，Ａ  Ｔａｘｏｎｏｍｉｃ  Ｓｔｕｄｙ″４ｔｈｅｄｉｔｉｏｎ（１９９８）Ｅｌｓｅｖｉｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｂ．Ｖ．；Ｂａｒｎｅｔｔ，Ｊ．Ａ．ら，″Ｙｅａｓｔｓ：Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ  ａｎｄ  ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ″３ｒｄ  ｅｄ］に従って確認したところ、カンジダ・ソルボフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｏｒｂｏｐｈｉｌａ）に属する微生物であることが判明した。そこで、この自然界から分離した微生物は、カンジダ・ソルボフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｏｒｂｏｐｈｉｌａ）ＦＣ５８株（以降、「ＦＣ５８株」と略記する）と命名された。
本発明において好適に用いることができるＦＣ５８株の菌学的性質は、以下の通りである。
（１）ＹＭ液体培地における生育：２４〜２７℃、２４時間後に形状は主として球形から卵形となる。
（２）ＹＭ寒天培地における生育：２４〜２７℃、２〜３日後に白色〜クリーム色で湿っている。
（３）形態：球形から卵形であり、多極出芽で増殖する。偽菌糸の形成およびアダムス、ゴロドコバ、麦芽、ＹＭ、Ｖ−８、ポテトデキストロースの各培地での生育における子嚢胞子の形成は認められない。
（４）最適生育条件：２４〜２７℃、ｐＨ５．５〜６．０、
（５）生育の最高温度：３５〜３７℃
（６）ビタミンの要求性：ビタミン欠乏培地での生育は認められない。ビオチン、ピリドキシン、チアミンを要求する。
（７）発酵性：グルコース（−）、ガラクトース（−）、シュークロース（−）、マルトース（−）、ラクトース（−）、ラフィノース（−）、トレハロース（−）
（８）資化性：ガラクトース（＋）、ソルボース（＋）、シュークロース（−）、マルトース（−）、トレハロース（−）、ラクトース（−）、ラフィノース（−）、セロビオース（−）、メリビオース（−）、メレチトース（−）、スターチ（−）、Ｄ−キシロース（−）、Ｌ−アラビノース（−）、Ｄ−リボース（−）、Ｄ−ラムノース（−）、Ｄ−グルコサミン（−）、Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン（−）、グリセロール（微弱）、エリスリトール（−）、リビトール（−）、Ｄ−マンニトール（＋）、乳酸塩（微弱）、クエン酸塩（−）、イノシトール（−）
尚、上記ＡＴＣＣ及びＩＦＯとは、それぞれ「Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ」及び「Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ，Ｏｓａｋａ，Ｊａｐａｎ（財団法人発酵研究所）」の略であり、「ＡＴＣＣ」又は「ＩＦＯ」を付された番号は、それぞれの菌株のカタログ番号を表す。「ＡＴＣＣ」又は「ＩＦＯ」を付された番号で示した上記カンジダ・ソルボフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｏｒｂｏｐｈｉｌａ）はいずれも、これらのカタログ番号に基づいてそれぞれの機関が保存している菌株から入手して、用いることができる。
本発明で用いられるカンジダ・ソルボフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｏｒｂｏｐｈｉｌａ）は、ヒドロキシ脂肪酸、ヒドロキシ脂肪酸誘導体、及び／又はヒドロキシ脂肪酸誘導体の加水分解生成物を含む培地中で培養すると、β酸化によってラクトン前駆体ヒドロキシ脂肪酸を生産し、あるいはそのラクトン前駆体ヒドロキシ脂肪酸をラクトン化することによりラクトン類を生産して、それらを培地中に蓄積することができる。本発明において用いられるカンジダ・ソルボフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｏｒｂｏｐｈｉｌａ）は、適切な培養条件等に基づいてヒドロキシ脂肪酸誘導体を含む培地中で培養すると、そのヒドロキシ脂肪酸誘導体を加水分解し、次いでその加水分解生成物をβ酸化することによりラクトン前駆体ヒドロキシ脂肪酸を生産し、それを培地中に蓄積する。この場合、培地中に生産及び蓄積されたラクトン前駆体ヒドロキシ脂肪酸をラクトン化することによって、所望のラクトン類を得ることができる。
本発明で用いられるカンジダ・ソルボフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｏｒｂｏｐｈｉｌａ）は、例えば、ヒマシ油を含む培地中で培養すると、該ヒマシ油を加水分解することができ、さらにそのヒマシ油の加水分解生成物をβ酸化することによりγ−ヒドロキシデカン酸及び／又はγ−デカラクトンを培地中に生産及び蓄積することができる。
（２）ラクトン類を製造するための培地
本発明においては、ラクトン類を製造するための培地として、ヒドロキシ脂肪酸、ヒドロキシ脂肪酸誘導体、及びヒドロキシ脂肪酸誘導体の加水分解生成物がらなる群より選択される少なくとも１つを炭素源として含み、かつカンジダ・ソルボフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｏｒｂｏｐｈｉｌａ）が増殖可能な培地を使用する。
本発明において用いるヒドロキシ脂肪酸又はヒドロキシ脂肪酸誘導体の加水分解生成物は、カンジダ・ソルボフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｏｒｂｏｐｈｉｌａ）がそれをβ酸化してラクトン前駆体ヒドロキシ脂肪酸を生産できる限り、特に限定されるものではない。また本発明において用いるヒドロキシ脂肪酸誘導体は、カンジダ・ソルボフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｏｒｂｏｐｈｉｌａ）がそのヒドロキシ脂肪酸誘導体を加水分解し、その加水分解生成物からβ酸化によりラクトン前駆体ヒドロキシ脂肪酸を生産できる限り、特に限定されるものではない。
本発明において用いるヒドロキシ脂肪酸としては、カルボキシル基の炭素原子から数えて少なくとも６位、好ましくは６〜２０位に水酸基をもつ、炭素数６以上、好ましくは６〜２５、より好ましくは６〜２０を有するヒドロキシ脂肪酸が好ましい。
ヒドロキシ脂肪酸の具体例としては、例えば、一般式（２）
2004003213.tif 000007
（式中、Ｒ１は水素原子、炭化水素基、置換炭化水素基、ヘテロ環基又は置換ヘテロ環基を示し、Ｒ２は水素原子、炭化水素基又は置換炭化水素基を示し、Ｒ３は炭素鎖４以上の置換基を有していてもよい２価の炭化水素基を示す。尚、Ｒ１とＲ２又はＲ２とＲ３とが結合して環を形成してもよい。）
上記一般式（２）中の各基を説明する。
炭化水素基としては、例えば、アルキル基、不飽和結合を有するアルキル基、アリール基、アラルキル基等が挙げられる。
アルキル基としては、直鎖状でも、分岐状でも或いは環状でもよい、例えば、炭素数１以上、好ましくは炭素数１〜２０、より好ましくは炭素数１〜１５、更に好ましくは炭素数１〜１０のアルキル基が挙げられる。その具体例としては、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、２−プロピル基、ｎ−ブチル基、２−ブチル基、イソブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、２−ペンチル基、ｔｅｒｔ−ペンチル基、２−メチルブチル基、３−メチルブチル基、２，２−ジメチルプロピル基、ｎ−ヘキシル基、２−ヘキシル基、３−ヘキシル基、ｔｅｒｔ−ヘキシル基、２−メチルペンチル基、３−メチルペンチル基、４−メチルペンチル基、２−メチルペンタン−３−イル基、ｎ−ヘプチル基、ｎ−オクチル基、ｎ−ノニル基、ｎ−デシル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基等が挙げられる。
不飽和結合を有するアルキル基としては、前記アルキル基の鎖中に二重結合等の不飽和結合を少なくとも１個有するアルキル基が挙げられ、その具体例としては、アルケニル基、アルカジエニル基、アルカトリエニル基等が挙げられる。
アルケニル基としては、前記アルキル基の鎖中に二重結合を１個有する、直鎖状でも分岐状でも或いは環状でもよい、例えば、炭素数２以上、好ましくは炭素数２〜２０、より好ましくは炭素数２〜１５、更に好ましくは炭素数２〜１０のアルケニル基が挙げられる。その具体例としては、エテニル基、プロペニル基、ブテニル基、ペンテニル基、ヘキセニル基、オクテニル基、ノナニル基、デセニル基等が挙げられる。
アルカジエニル基としては、前記アルキル基の鎖中に二重結合を２個有する、直鎖状でも分岐状でも或いは環状でもよい、例えば、炭素数４以上、好ましくは炭素数４〜２０、より好ましくは炭素数４〜１５、更に好ましくは炭素数４〜１０のアルカジエニル基が挙げられる。その具体例としては、１，３−ブタジエニル基、２，４−ブタジエニル基、２，３−ジメチル−１，３ブタジエニル基等が挙げられる。
アリール基としては、例えば炭素数６〜１４のアリール基が挙げられ、具体的にはフェニル基、ナフチル基、アントリル基、ビフェニル基等が挙げられる。
アラルキル基としては、前記アルキル基の少なくとも１個の水素原子が前記アリール基で置換された基が挙げられ、例えば炭素数７〜１２のアラルキル基が好ましく、具体的にはベンジル基、２−フェニルエチル基、１−フェニルプロピル基、３−ナフチルプロピル基等が挙げられる。
ヘテロ環基としては、例えば、脂肪族複素環基、芳香族複素環基等が挙げられる。
脂肪族複素環基としては、例えば、炭素数２〜１４で、異種原子として少なくとも１個、好ましくは１〜３個の例えば窒素原子、酸素原子、硫黄原子等のヘテロ原子を含んでいる、５〜８員、好ましくは５又は６員の単環の脂肪族複素環基、多環又は縮合環の脂肪族複素環基が挙げられる。脂肪族複素環基の具体例としては、例えば、ピロリジル−２−オン基、ピペリジノ基、ピペラジニル基、モルホリノ基、テトラヒドロフリル基、テトラヒドロピラニル基等が挙げられる。
芳香族複素環基としては、例えば、炭素数２〜１５で、異種原子として少なくとも１個、好ましくは１〜３個の窒素原子、酸素原子、硫黄原子等の異種原子を含んでいる、５〜８員、好ましくは５又は６員の単環式ヘテロアリール基、多環式又は縮合環式のヘテロアリール基が挙げられ、具体的にはフリル基、チエニル基、ピリジル基、ピリミジル基、ピラジル基、ピリダジル基、ピラゾリル基、イミダゾリル基、オキサゾリル基、チアゾリル基、ベンゾフリル基、ベンゾチエニル基、キノリル基、イソキノリル基、キノキサリル基、フタラジル基、キナゾリル基、ナフチリジル基、シンノリル基、ベンゾイミダゾリル基、ベンゾオキサゾリル基、ベンゾチアゾリル基等が挙げられる。
置換炭化水素基としては、上記炭化水素基の少なくとも１個の水素原子が置換基で置換された、置換アルキル基、置換不飽和結合を有するアルキル基、置換アリール基、置換アラルキル基等が挙げられる。
前記置換基としては、炭化水素基、置換炭化水素基、ヘテロ環基、ヘテロ環基、アルコキシ基、アリールオキシ基、アラルキルオキシ基、アルコキシカルボニル基、アリールオキシカルボニル基、アラルキルオキシカルボニル基、アシル基、アシルオキシ基、アルキルチオ基、アラルキルチオ基、アリールチオ基、ハロゲン原子、アルキレンジオキシ基、アミノ基、置換アミノ基、ヒドラジノ基、シアノ基、ニトロ基、ヒドロキシル基、保護基で置換されたヒドロキシル基、カルボキシル基、スルホニルアミノ基、スルホ基、リン酸アミド基、置換シリル基等が挙げられる。
これらＲ１で示される基は、中でもアルキル基又は不飽和結合を有するアルキル基が好ましい。
置換基を有していてもよい炭素鎖４以上の２価の炭化水素基は、炭素鎖４以上の２価の炭化水素基、炭素鎖４以上の２価の置換炭化水素基が挙げられる。炭素鎖４以上の２価の炭化水素基としては、アルキレン基、不飽和結合を有するアルキレン基、２価の芳香族基等が挙げられ、夫々炭素鎖が少なくとも４であればよい。
炭素鎖４以上のアルキレン基としては、炭素鎖が少なくとも４であればよく、好ましくは炭素鎖４〜２０、より好ましくは炭素鎖４〜１５の、直鎖状でも分岐状でも或いは環状でもよい、アルキレン基が挙げられる。その具体例としては、テトラメチレン基、ペンタメチレン基、ヘキサメチレン基、ヘプタメチレン基、オクタメチレン基、ノナメチレン基、デカメチレン基、−（ＣＨ２）ｍ−ｏ−Ｃ６Ｈ１０−（ＣＨ２）ｎ−（ｍ及びｎは夫々独立して０又は自然数を示し、ｍ＋ｎ≧２である。）等が挙げられる。
炭素鎖４以上の不飽和結合を有するアルキレン基は、前記炭素鎖４以上のアルキレン基の鎖中に二重結合等の不飽和結合を少なくとも１個有する炭素鎖４以上のアルキレン基が挙げられる。炭素鎖４以上の不飽和結合を有するアルキレン基としては、炭素鎖が少なくとも４であればよく、好ましくは炭素鎖４〜２０、より好ましくは炭素鎖４〜１５の、直鎖状でも分岐状でも或いは環状でもよい炭素鎖４以上の不飽和結合を有するアルキレン基が挙げられ、その具体例としては、ブテニレン基、ペンテニレン基、ヘキセニレン基等のアルケニレン基が挙げられる。
炭素鎖４以上の２価の芳香族基としては、炭素鎖が少なくとも４であればよく、好ましくは炭素鎖４〜２０、より好ましくは炭素鎖４〜１５の、炭素鎖４以上の２価の芳香族基が挙げられ、その具体例としては、−（ＣＨ２）ｐ−ｏ−Ｃ６Ｈ４−（ＣＨ２）ｑ−（ｐ及びｑは夫々独立して０又は自然数を示し、ｐ＋ｑ≧２である。）等が挙げられる。
炭素鎖４以上の２価の置換炭化水素基としては、前記炭素鎖４以上の２価の炭化水素基中の少なくとも１個の水素原子がヒドロキシル基以外の上記置換基で置換された２価の置換炭化水素基が挙げられる。
Ｒ１とＲ２又はＲ２とＲ３とが結合して環を形成する場合には、その環としては脂肪族環、芳香族環等が挙げられる。脂肪族環としては、シクロブタン環、シクロペンタン環、シクロヘキサン環、シクロヘキセン環等が挙げられる。芳香族環としては、ベンゼン環等が挙げられる。
ヒドロキシ脂肪酸の好適な例としては、リシノール酸、１１−ヒドロキシパルミチン酸、レスクエラ酸、１０−ヒドロキシステアリン酸、及び１０−ヒドロキシパルミチン酸、下記式で表されるラクトン前駆体ヒドロキシ脂肪酸等が挙げられる。
2004003213.tif 000008
2004003213.tif 000009
2004003213.tif 000010
2004003213.tif 000011
上記ヒドロキシ脂肪酸は、中でもリシノール酸、１１−ヒドロキシパルミチン酸、レスクエラ酸、１０−ヒドロキシステアリン酸、及び１０−ヒドロキシパルミチン酸等が好ましい。
本発明において用いるヒドロキシ脂肪酸誘導体としては、上記ヒドロキシ脂肪酸の誘導体が好ましい。そのようなヒドロキシ脂肪酸誘導体の好適な例としては、ヒドロキシ脂肪酸アルキルエステル及びヒドロキシ脂肪酸グリセリド等が挙げられる。
ヒドロキシ脂肪酸アルキルエステルの具体例としては、例えば、一般式（３）
2004003213.tif 000012
（式中、Ｒ４はアルキル基を示し、Ｒ１〜Ｒ３は前記と同じ。）で表される。
Ｒ４で示されるアルキル基としては、直鎖状でも分岐状でもよい、例えば、炭素数１以上、好ましくは炭素数１〜１０、より好ましくは炭素数１〜６、更に好ましくは炭素数１〜３のアルキル基が挙げられる。その具体例としては、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、２−プロピル基等が挙げられる。
本発明において好適なヒドロキシ脂肪酸アルキルエステルとしては、アルキルエステル部分の炭素数が１〜３のヒドロキシ脂肪酸アルキルエステル（例えば、メチルエステル、エチルエステル及びプロピルエステル等）が挙げられ、例えば、１１−ヒドロキシパルミチン酸エチル、リシノール酸エチル、レスクエラ酸エチル、１０−ヒドロキシステアリン酸エチル、及び１０−ヒドロキシパルミチン酸エチル等が挙げられる。
ヒドロキシ脂肪酸グリセリドとしては、ヒドロキシ脂肪酸モノグリセリド、ヒドロキシ脂肪酸ジグリセリド及びヒドロキシ脂肪酸トリグリセリド等が挙げられ、その具体例としては、例えば、一般式（４）
2004003213.tif 000013
［式中、Ｒ６〜Ｒ８は夫々独立して水素原子又は一般式（６）
2004003213.tif 000014
（式中、Ｒ１〜Ｒ３は前記と同じ。）で表される基を示す。但し、Ｒ６〜Ｒ８の少なくとも１つは前記一般式（６）で示される基である。］で表される。
上記一般式（４）で表されるヒドロキシ脂肪酸グリセリドは、グリセリンと上記一般式（２）で表されるヒドロキシ脂肪酸が縮合して得られたものが挙げられる。
本発明において好適なヒドロキシ脂肪酸グリセリドとしては、例えばヒマシ油等が挙げられる。
本発明において用いるヒドロキシ脂肪酸誘導体の加水分解生成物は、前記のヒドロキシ脂肪酸誘導体を加水分解することにより製造することができる。例えば、ヒドロキシ脂肪酸グリセリド又はヒドロキシ脂肪酸アルキルエステルを、化学的又は酵素的に加水分解処理することにより、例えばリパーゼ等の加水分解酵素による処理、アルカリ処理、高圧スチーム処理等に供することにより製造することができる。ヒドロキシ脂肪酸誘導体の加水分解生成物としては、限定するものではないが、例えば、ヒマシ油の加水分解生成物、１１−ヒドロキシパルミチン酸エチルの加水分解生成物等が挙げられる。
本発明において用いるヒドロキシ脂肪酸及びヒドロキシ脂肪酸誘導体は、Ｒ体又はＳ体の光学活性体であってもラセミ体であってもよい。例えば、本発明において、上記一般式（２）で表されるヒドロキシ脂肪酸として、例えば、一般式（２−１）
2004003213.tif 000015
（式中、＊は不斉炭素を示し、Ｒ１〜Ｒ３は前記と同じ。）で表される光学活性ヒドロキシ脂肪酸を用いれば、得られるラクトン類は、光学活性ラクトン類が得られる。ここで、Ｒ１及びＲ２が同一の基である場合は、Ｒ１とＲ２が結合している炭素原子は不斉炭素とはならない。
また、ヒドロキシ脂肪酸誘導体として、光学活性ヒドロキシ脂肪酸誘導体を用いれば、得られるラクトン類は、光学活性ラクトン類が得られる。
例えば、上記一般式（３）で表されるヒドロキシ脂肪酸アルキルエステルとして一般式（３−１）
2004003213.tif 000016
（式中、Ｒ１〜Ｒ４及び＊は前記と同じ。）で表される光学活性ヒドロキシ脂肪酸アルキルエステル、また、上記一般式（４）で表されるヒドロキシ脂肪酸グリセリドとして一般式（４−１）
2004003213.tif 000017
［式中、Ｒ９〜Ｒ１１は夫々独立して水素原子又は一般式（６−１）
2004003213.tif 000018
（式中、Ｒ１〜Ｒ３及び＊は前記と同じ。）で表される基を示す。但し、Ｒ９〜Ｒ１１の少なくとも１つは前記一般式（６−１）で示される基である。］で表される光学活性ヒドロキシ脂肪酸グリセリドを用いれば、得られるラクトン類は、光学活性ラクトン類が得られる。
光学活性ヒドロキシ脂肪酸グリセリドは、光学活性ヒドロキシ脂肪酸モノグリセリド、光学活性ヒドロキシ脂肪酸ジグリセリド及び光学活性ヒドロキシ脂肪酸トリグリセリド等が挙げられる。
更にまた、本発明においてヒドロキシ脂肪酸誘導体の加水分解生成物を用いる場合の加水分解するヒドロキシ脂肪酸誘導体として光学活性ヒドロキシ脂肪酸誘導体を用いても同様である。
即ち、ヒドロキシル基が結合している炭素原子がＲ体であれば、得られる光学活性ラクトン類はＲ−ラクトン類であり、Ｓ体であれば、得られる光学活性ラクトン類はＳ−ラクトン類である。
上記一般式（２−１）で表される光学活性ヒドロキシ脂肪酸の好適な例としては、上記ヒドロキシ脂肪酸の好適な例として例示したヒドロキシ脂肪酸の光学活性体が挙げられ、中でも光学活性リシノール酸、光学活性１１−ヒドロキシパルミチン酸、光学活性レスクエラ酸、光学活性１０−ヒドロキシステアリン酸、及び光学活性１０−ヒドロキシパルミチン酸等が好ましい。
上記一般式（３−１）で表される光学活性ヒドロキシ脂肪酸アルキルエステルの好適な例としては、光学活性１１−ヒドロキシパルミチン酸エチル、光学活性リシノール酸エチル、光学活性レスクエラ酸エチル、光学活性１０−ヒドロキシステアリン酸エチル、及び光学活性１０−ヒドロキシパルミチン酸エチル等が挙げられる。
一般式（４−１）で表される光学活性ヒドロキシ脂肪酸グリセリドの好適な例としては、例えば光学活性なヒマシ油等が挙げられる。
本発明の製造法によりラクトン類としてγ−デカラクトンを製造するためには、ヒドロキシ脂肪酸、ヒドロキシ脂肪酸誘導体又はヒドロキシ脂肪酸誘導体の加水分解生成物として、限定するものではないが、ヒマシ油、ヒマシ油の加水分解生成物、リシノール酸及びレスクエラ酸からなる群より選択される少なくとも１つを用いることが好ましい。また本発明の製造法によるδ−デカラクトンの製造のためには、ヒドロキシ脂肪酸、ヒドロキシ脂肪酸誘導体又はヒドロキシ脂肪酸誘導体の加水分解生成物として、限定するものではないが、１１−ヒドロキシパルミチン酸及び／又は１１−ヒドロキシパルミチン酸エチルを用いることが好ましい。
本発明において用いるヒドロキシ脂肪酸、ヒドロキシ脂肪酸誘導体又はヒドロキシ脂肪酸誘導体の加水分解生成物は、市販品であっても天然物からの抽出物であってもよく、あるいは適宜製造したものであってもよい。本発明の製造法において天然のラクトン類を得るためには、ヒドロキシ脂肪酸、ヒドロキシ脂肪酸誘導体又はヒドロキシ脂肪酸誘導体の加水分解生成物としては、化学的な合成手段以外の手法により得られたものを使用することが好ましい。例えば、天然のδ−デカラクトンを製造するために使用可能な１１−ヒドロキシパルミチン酸としては、ヤラッパやサツマイモから抽出されたものを好適に使用することが可能である。また、本発明の製造法において光学活性ラクトン類を得るためには、ヒドロキシ脂肪酸、ヒドロキシ脂肪酸誘導体又はヒドロキシ脂肪酸誘導体の加水分解生成物は、上記したように光学活性体を使用することが好ましい。
本発明における、ラクトン類を製造するための培地は、上記のヒドロキシ脂肪酸、ヒドロキシ脂肪酸誘導体及びヒドロキシ脂肪酸誘導体の加水分解生成物からなる群より選択される少なくとも１つを、培地１Ｌに対して、１０〜５０％（ｗ／ｖ）、好ましくは１５〜２５％（ｗ／ｖ）の濃度で含有する。
本発明における、ラクトン類を製造するための培地は、上記のヒドロキシ脂肪酸、ヒドロキシ脂肪酸誘導体及びヒドロキシ脂肪酸誘導体の加水分解生成物からなる群より選択される少なくとも１つに、細胞培養のために通常用いられる他の成分（例えば、窒素源等）を適宜加えることにより調製することができる。培地に加える他の成分としては、限定するものではないが、酵母エキス、尿素、コーンスティープリカー、硫酸アンモニウム及びリン酸水素二アンモニウム等を含む窒素源、麦芽エキス、ポリペプトン及びグルコース等の糖類を含む追加の炭素源、硫酸マンガン、塩化カルシウム、塩化第二鉄、硫酸第一鉄、硫酸第二鉄、硫酸亜鉛、硫酸銅、硫酸マグネシウム、塩化コバルト、モリブデン酸ナトリウム、ホウ素及びヨウ化カリウム等の無機塩類、フラビンモノヌクレオチド（ＦＭＮ）、フラビンアデニンジヌクレオチド（ＦＡＤ）、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ）、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸（ＮＡＤＰ）及びコエンザイムＡ（ＣｏＡ）等の補酵素群、アデノシン三リン酸（ＡＴＰ）等のヌクレオチド、Ｌ−カルニチン等のビタミン類、並びに滅菌水等が挙げられる。無機塩類、補酵素群及びビタミン類等の補因子は、ラクトン前駆体ヒドロキシ脂肪酸及び／又はラクトン類の生産量を一層増大させることができるが、その添加量は通常は微量でよい。当業者であれば、カンジダ・ソルボフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｏｒｂｏｐｈｉｌａ）が増殖可能である培地を調製するために添加するこのような他の成分を、必要に応じて容易に決定することができる。
（３）カンジダ・ソルボフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｏｒｂｏｐｈｉｌａ）を用いた光学活性ラクトンの製造
本発明においては、上記（１）で説明したカンジダ・ソルボフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｏｒｂｏｐｈｉｌａ）を、上記（２）で説明したラクトン類を製造するための培地で培養することにより、カンジダ・ソルボフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｏｒｂｏｐｈｉｌａ）がラクトン前駆体ヒドロキシ脂肪酸及び／又はラクトン類を培地中に生産するようにすることができる。
カンジダ・ソルボフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｏｒｂｏｐｈｉｌａ）によって生産されたラクトン前駆体ヒドロキシ脂肪酸は、ラクトン化することによりラクトン類に変換することができる。ラクトン前駆体ヒドロキシ脂肪酸のラクトン化は、当業者に公知の任意の方法によって行うことができるが、例えば、酸性条件下での加熱処理等によって行うことができる。具体的には例えば、ラクトン前駆体ヒドロキシ脂肪酸を含む培養物を、ｐＨ３〜５の条件で１００℃で２０分加熱することによって、その培養物中のラクトン前駆体ヒドロキシ脂肪酸をラクトン化することができる。このラクトン前駆体ヒドロキシ脂肪酸がラクトン化された化合物は、本発明に係るラクトン類である。本発明においては、ｐＨ調整剤を使用する必要がなく、ラクトン化することができる。
上記に従って生産される、ラクトン前駆体ヒドロキシ脂肪酸のラクトン化により得られるラクトン類、又はカンジダ・ソルボフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｏｒｂｏｐｈｉｌａ）によって生産されるラクトン類は、当業者に公知の方法により採取及び／又は単離精製することができる。
本明細書において、「ラクトン前駆体ヒドロキシ脂肪酸」とは、ラクトン化することが可能なヒドロキシ脂肪酸を意味する。本発明における「ラクトン前駆体ヒドロキシ脂肪酸」は、好ましくは、カルボキシル基の炭素原子から数えて４位又は５位に水酸基をもつ炭素数４以上、好ましくは炭素数５〜２２、好ましくは炭素数５〜１７、より好ましくは炭素数５〜１２のヒドロキシ脂肪酸である。
ラクトン前駆体ヒドロキシ脂肪酸の具体例としては、例えば、一般式（５）
2004003213.tif 000019
（式中、Ｒ５は置換基を有していてもよい炭素鎖が２又は３の２価の炭化水素基を示し、Ｒ１及びＲ２は前記と同じ。尚、Ｒ２とＲ５とが結合して環を形成してもよい。）で表されるヒドロキシ脂肪酸が挙げられる。
Ｒ５は置換基を有していてもよい炭素鎖が２又は３の２価の炭化水素基は、炭素鎖が２又は３の２価の炭化水素基、炭素鎖が２又は３の２価の置換炭化水素基が挙げられる。
炭素鎖が２又は３の２価の炭化水素基としては、エチレン基又はトリメチレン基の炭素鎖が２又は３のアルキレン基、エテニレン基又はプロペニレン基の炭素鎖が２又は３のアルケニレン基等が挙げられる。
炭素鎖が２又は３の２価の置換炭化水素基としては、前記炭素鎖が２又は３の２価の炭化水素基の少なくとも１個の水素原子がヒドロキシル基以外の上記置換基で置換された基が挙げられる。炭素鎖が２又は３の２価の置換炭化水素基の具体例としては、プロピレン基等が挙げられる。Ｒ２とＲ５とが結合して環を形成する場合には、その環としては脂肪族環、芳香族環等が挙げられる。脂肪族環としては、シクロブタン環、シクロペンタン環、シクロヘキサン環、シクロヘキセン環等が挙げられる。芳香族環としては、ベンゼン環等が挙げられる。
本発明に係るラクトン前駆体ヒドロキシ脂肪酸において、上記一般式（５）中のＲ５が炭素鎖２の炭化水素基であるラクトン前駆体ヒドロキシ脂肪酸の具体例としては、γ−ヒドロキシデカン酸、下記式で表されるヒドロキシ脂肪酸等が挙げられる。
2004003213.tif 000020
2004003213.tif 000021
また、上記一般式（５）中のＲ５が炭素鎖３の炭化水素基であるラクトン前駆体ヒドロキシ脂肪酸の具体例としては、δ−ヒドロキシデカン酸、下記式で表されるヒドロキシ脂肪酸等が挙げられる。
2004003213.tif 000022
本発明の方法において、ヒドロキシ脂肪酸、ヒドロキシ脂肪酸誘導体、又はヒドロキシ脂肪酸誘導体の加水分解生成物として光学活性体を用いれば、得られるラクトン前駆体ヒドロキシ脂肪酸は、一般式（５−１）
2004003213.tif 000023
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ５及び＊は前記と同じ。）で表される光学活性ラクトン前駆体ヒドロキシ脂肪酸である。本発明においては、ラクトン前駆体ヒドロキシ脂肪酸として、光学活性ラクトン前駆体ヒドロキシ脂肪酸を用いることが好ましい。
本発明の製造法により得られるラクトン類としては、例えば、一般式（１）
2004003213.tif 000024
（式中、環Ａはラクトン環を示し、Ｒ１は及びＲ２前記と同じ。尚、環ＡとＲ２とが結合して環を形成してもよい。）で表される。
一般式（１）において、環Ａで示されるラクトン環としては、下記式（７）で表されるγ−ラクトン環又は（８）で表されるδ−ラクトン環等が挙げられる。また、環Ａは、置換基を有していてもよい。
2004003213.tif 000025
環ＡとＲ２とが結合して環を形成する場合の具体例としては、例えば下記式で表される環等が挙げられる。
2004003213.tif 000026
本発明の製造法により得られるラクトン類の具体例としては、限定するものではないが、炭素数４以上のラクトン類が挙げられ、具体的には、γ−デカラクトン、γ−バレロラクトン、γ−ヘキサラクトン、γ−ヘプタラクトン、γ−オクタラクトン、γ−ノナラクトン、γ−ウンデカラクトン、γ−ドデカラクトン、γ−トリデカラクトン、γ−テトラデカラクトン、δ−デカラクトン、δ−ヘキサラクトン、δ−ヘプタラクトン、δ−オクタラクトン、δ−ノナラクトン、δ−ウンデカラクトン、δ−ドデカラクトン、δ−トリデカラクトン、δ−テトラデカラクトン、アンゲリカラクトン、ウイスキーラクトン、γ−ジャスモラクトン、ジャスミンラクトン、シスジャスモンラクトン、メチルγ−デカラクトン、ジャスモラクトン、メンタラクトン、ｎ−ブチルフタリド、プロピリデンフタリド、ブチリデンフタリド、４，６，６，（４，４，６）−トリメチルテトラヒドロピラン−２−オン、δ−２−デセノラクトン、クマリン、ジヒドロクマリン、シクロヘキシルラクトン、６−メチルクマリン、及び下記式で表されるラクトン類等が挙げられる。
2004003213.tif 000027
2004003213.tif 000028
上記式中、Ｒは保護基を示す。
上記ラクトン類としては、中でもγ−デカラクトン、γ−バレロラクトン、γ−ヘキサラクトン、γ−ヘプタラクトン、γ−オクタラクトン、γ−ノナラクトン、γ−ウンデカラクトン、γ−ドデカラクトン、γ−トリデカラクトン、γ−テトラデカラクトン、δ−デカラクトン、δ−ヘプタラクトン、δ−ヘキサラクトン、δ−オクタラクトン、δ−ノナラクトン、δ−ウンデカラクトン、δ−ドデカラクトン、δ−トリデカラクトン及びδ−テトラデカラクトン等の炭素数５〜１２のラクトン類が好ましい。
本発明の製造法において、ヒドロキシ脂肪酸、ヒドロキシ脂肪酸誘導体、又はヒドロキシ脂肪酸誘導体の加水分解生成物として光学活性体を用いれば、得られる上記ラクトン類は光学活性ラクトン類である。
光学活性ラクトン類としては、例えば、一般式（１−１）
2004003213.tif 000029
（式中、環Ａ、Ｒ１、Ｒ２及び＊は前記と同じ。）で表される。
本明細書において、「光学活性ラクトン」とは、光学活性体（例えば、Ｒ体、Ｓ体）であるラクトンを意味する。本発明の方法により製造される光学活性ラクトンは、カンジダ・ソルボフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｏｒｂｏｐｈｉｌａ）によりヒドロキシ脂肪酸から生産されるラクトン前駆体ヒドロキシ脂肪酸のラクトン化により生成されるものであるか、又はカンジダ・ソルボフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｏｒｂｏｐｈｉｌａ）によりヒドロキシ脂肪酸から生産されるものである。
本発明の製造法により得られる光学活性ラクトン類としては、限定するものではないが、炭素数５以上、好ましくは炭素数５〜１２の光学活性ラクトン類が挙げられ、例えば、上記の具体例として例示したラクトン類の光学活性体が挙げられ、好ましくは、光学活性γ−デカラクトン、光学活性γ−バレロラクトン、光学活性γ−ヘキサラクトン、光学活性γ−ヘプタラクトン、光学活性γ−オクタラクトン、光学活性γ−ノナラクトン、光学活性γ−ウンデカラクトン、光学活性γ−ドデカラクトン、光学活性γ−トリデカラクトン、光学活性γ−テトラデカラクトン、光学活性δ−デカラクトン、光学活性δ−ヘキサラクトン、光学活性δ−ヘプタラクトン、光学活性δ−オクタラクトン、光学活性δ−ノナラクトン、光学活性δ−ウンデカラクトン、光学活性δ−ドデカラクトン、光学活性δ−トリデカラクトン及び光学活性δ−テトラデカラクトン等が挙げられる。
（４）本発明の方法による光学活性γ−デカラクトンの製造
以下に、本発明の光学活性ラクトンの製造法について、光学活性γ−デカラクトンの製造を例にとってさらに詳細に説明する。本発明の光学活性ラクトンの製造は、原則としてこの光学活性γ−デカラクトンの製造法の記載と同様の実験操作によって行うことができる。
ａ）光学活性γ−ヒドロキシデカン酸及び／又は光学活性γ−デカラクトンを生産するための培養（本培養）に用いる培地
本発明における光学活性γ−ヒドロキシデカン酸及び／又は光学活性γ−デカラクトンを生産するための培養（実施例中では本培養に相当する）においては、ヒマシ油、ヒマシ油の加水分解生成物、リシノール酸及びレスクエラ酸からなる群より選択される少なくとも１つを、培地の炭素源として用いる。本発明において、ヒマシ油の加水分解生成物とは、ヒマシ油を化学的又は酵素的に加水分解することにより得られる混合物を意味する。ヒマシ油の加水分解生成物としては、リパーゼによりヒマシ油を加水分解して得た加水分解物（以下、「リパーゼによる加水分解物」という）が挙げられる。なお、ヒマシ油をリパーゼにより加水分解して得た加水分解物の主成分はリシノール酸である。したがって、ヒマシ油の加水分解生成物は、例えば、ヒマシ油の主要構成脂肪酸であるリシノール酸を主成分として含むものである。
ヒマシ油の加水分解に用いるリパーゼとしては、リシノール酸を生産するものであれば特に限定されずに使用可能である。該リパーゼとしては、例えば（名糖産業株式会社）：リパーゼＯＦ、リパーゼＭＹ、（天野エンザイム株式会社）：ニューラーゼＦ３Ｇ、リパーゼＡ「アマノ」６、リパーゼＡＹ「アマノ」３０Ｇ、リパーゼＦ−ＡＰ１５、リパーゼＧ「アマノ」５０、リパーゼＭ「アマノ」１０、リパーゼＲ「アマノ」Ｇ等が挙げられる。リパーゼによる加水分解物は、ヒマシ油からリシノール酸を主成分とする加水分解生成物を製造する条件、例えば、リパーゼをヒマシ油１００ｇ当たり０．５ｇ添加し、３０℃で２４時間インキュベートすることにより、得られる。このようにして得られたリパーゼによる加水分解物は、混合物の状態でそのまま使用することができる。
ヒマシ油の加水分解生成物を本発明の本培養培地に含ませる場合には、リパーゼによる加水分解物を、培地に添加することが好ましい。但し、本発明の製造法においては、培地中にヒマシ油が含まれていれば、培養後にはリパーゼによる加水分解物は培地中に含まれることになる。これは、本発明の製造法においては、本発明で用いられるカンジダ・ソルボフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｏｒｂｏｐｈｉｌａ）により培地中のヒマシ油から加水分解生成物が生成されるためである。従って、培地中にヒマシ油を添加しておけば、さらにリパーゼによる加水分解物を添加することは任意工程となる。
本発明においては、ヒマシ油、ヒマシ油の加水分解生成物、リシノール酸及びレスクエラ酸からなる群より選択される少なくとも１つを用いればよく、ヒマシ油、ヒマシ油の加水分解生成物、リシノール酸又はレスクエラ酸は、それぞれ単独で用いても２つ以上適宜組み合わせて用いてもよい。これらヒマシ油、ヒマシ油の加水分解生成物又は、リシノール酸又はレスクエラ酸としては、中でもヒマシ油及び／又はヒマシ油の加水分解生成物が好ましい。
ヒマシ油、ヒマシ油の加水分解生成物、リシノール酸及びレスクエラ酸からなる群より選択される少なくとも１つを培地に添加する濃度は、培地１Ｌに対して、通常１０〜５０％（ｗ／ｖ）、好ましくは１５〜２５％（ｗ／ｖ）程度である。
本発明で使用する培地には、必要に応じて、酵母エキス、麦芽エキス、ポリペプトン、グルコース等の成分をさらに添加してもよく、そのような追加成分を添加した培地を栄養培地として、本発明に係るγ−ヒドロキシデカン酸及び／又は本発明の光学活性γ−デカラクトンの生産に用いることができる。
ここで、酵母エキス、尿素、コーンスティープリカー、硫酸アンモニウム、リン酸水素二アンモニウム等は、窒素源として上記培地に含有させて使用することができる。また、麦芽エキス、ポリペプトン、グルコース等の糖類は、追加炭素源として上記培地に含有させて使用することができる。
一方、培地として、ヒマシ油、ヒマシ油の加水分解生成物、リシノール酸又はレスクエラ酸からなる群より選択される少なくとも１つを唯一の炭素源として含む合成培地を使用してもよい。但し、この合成培地に、さらに上記の追加窒素源又は炭素源などの追加成分を添加してもよい。
さらにこれらの培地に、必要に応じて種々の補因子を添加することにより光学活性γ−ヒドロキシデカン酸及び／又は光学活性γ−デカラクトンの生産量をより一層増加させることが可能である。
補因子としては、例えば、硫酸マンガン、塩化カルシウム、塩化第二鉄、硫酸第一鉄、硫酸第二鉄、硫酸亜鉛、硫酸銅、硫酸マグネシウム、塩化コバルト、モリブデン酸ナトリウム、ホウ素、ヨウ化カリウム等の無機塩類、フラビンモノヌクレオチド（ＦＭＮ）、フラビンアデニンジヌクレオチド（ＦＡＤ）、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ）、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸（ＮＡＤＰ）、コエンザイムＡ（ＣｏＡ）等の補酵素群、アデノシン三リン酸（ＡＴＰ）等のヌクレオチド、Ｌ−カルニチン等のビタミン類等が挙げられる。補因子の添加量は微量でよい。
本発明で用いられる本培養培地としては、例えばＹＭ培地、ポテトデキストロース培地又はポテトスクロース培地等にヒマシ油、ヒマシ油の加水分解生成物、リシノール酸又はレスクエラ酸からなる群より選択される少なくとも１つを加えた培地、あるいはそれらの培地に上記の追加成分を任意に添加した培地が挙げられる。
ｂ）本培養に基づく光学活性γ−ヒドロキシデカン酸及び／又は光学活性γ−デカラクトンの生産
本発明では、本発明に係るカンジダ・ソルボフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｏｒｂｏｐｈｉｌａ）を上記ａ）の培地にて培養することにより、培地中にγ−ヒドロキシデカン酸及び／又は光学活性γ−デカラクトンを生産及び蓄積させることができる。
本発明に係るカンジダ・ソルボフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｏｒｂｏｐｈｉｌａ）は、上記ａ）の培地に直接接種して培養しても良いが、好ましくは、そのカンジダ・ソルボフィラを予め通常の培地で種培養したものを上記ａ）の培地に接種又は播種して培養する。この種培養の培養条件は、γ−ヒドロキシデカン酸及び／又は光学活性γ−デカラクトンの生産を行う培養（本培養）と同一でもよいが、使用するカンジダ・ソルボフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｏｒｂｏｐｈｉｌａ）株が増殖可能な条件であれば、特に限定されない。種培養の際に使用する通常の培地は、固体培地でも液体培地でも良く、またヒマシ油、ヒマシ油の加水分解生成物、リシノール酸又はレスクエラ酸からなる群より選択される少なくとも１つを含有する必要はないが、含有していてもよい。種培養に用いる培地としては、例えばＹＭ斜面寒天培地又はポテトデキストロース斜面寒天培地等が挙げられる。種培養物を本培養のために培地に添加する量は、特に限定されない。しかしながら、例えば種培養物が液体培養物である場合には、吸光度ＯＤ  ６１０で３０の濃度程度の培養物を本培養時の培地量の１〜３％量添加することが好ましい。また、種培養を行った後、前培養を行ってから、上記ａ）の培地における本培養を行ってもよい。このような二段階の培養は大規模生産に好適であり、工業生産においては特に有用である。前培養の培養条件は、本培養と同一でもよいが、使用するカンジダ・ソルボフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｏｒｂｏｐｈｉｌａ）株が増殖可能な条件であれば、特に限定されない。種培養の際に使用する培地には、ヒマシ油、ヒマシ油の加水分解生成物、リシノール酸又はレスクエラ酸からなる群より選択される少なくとも１つを含有する必要はないが、含有していてもよい。
本発明の製造法において、使用する培養条件は好気的条件とする。培養温度は通常２０〜３５℃、好ましくは２４〜３０℃の範囲から適宜選択される。培地のｐＨは通常５〜７、好ましくは５．５〜６．５の範囲から適宜選択される。また、培養は、例えば振とうフラスコ中あるいは発酵槽（例えば撹拌及び通気装置付きの発酵槽）中で振とう培養を行う。
本培養の培養時間は、光学活性γ−ヒドロキシデカン酸及び／又は光学活性γ−デカラクトンを生産するのに十分な時間であれば特に限定されないが、好ましくは光学活性γ−ヒドロキシデカン酸及び／又は光学活性γ−デカラクトンの生産量が最大に達する時間を選択する。この光学活性γ−ヒドロキシデカン酸及び／又は光学活性γ−デカラクトンの生産量が最大に達する時間は、培地組成、基質として添加するヒマシ油、ヒマシ油の加水分解生成物、リシノール酸又はレスクエラ酸からなる群より選択される少なくとも１つの添加量、用いる培養装置に応じた通気・撹拌効率等により変化する。上記培養時間としては、例えば培養装置として振とうフラスコを用いた培養では、通常１時間〜３０日、好ましくは１２時間〜２５日の範囲から適宜選択すればよい。また、発酵槽を用いた培養では、通常１日〜２０日、好ましくは３〜１０日の範囲から適宜選択すればよい。発酵槽の使用は、比較的短時間の培養で済むので生産効率上の見地から好ましい。
また、上記培養時間の決定は、培地中に生産された光学活性γ−デカラクトンを経時的にサンプリングし、或いは培地中に生産されたγ−ヒドロキシデカン酸を経時的にサンプリングし、これをラクトン化して、得られる光学活性γ−デカラクトンの生産量をガスクロマトグラフィー（ＧＣ）、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）、ガスクロマトグラフィー／質量分析法（ＧＣ−ＭＳ）により測定し、さらに場合により標準品との比較等を行って、適切な光学活性γ−デカラクトンの生産量をもたらす時間を選択すればよい。
ｃ）光学活性γ−ヒドロキシデカン酸からの光学活性−γ−デカラクトンの製造
このようにして培地中に光学活性γ−ヒドロキシデカン酸が生産される場合には、そのまま医薬中間体等として用いることができるが、本発明では、該γ−ヒドロキシデカン酸をさらにラクトン化により光学活性γ−デカラクトンに変換して、該光学活性γ−デカラクトンを製造するために使用する。
ラクトン化は、通常公知の任意のラクトン化方法により行えばよい。本発明の光学活性γ−ヒドロキシデカン酸のラクトン化は、上記の培地中に生産されたγ−ヒドロキシデカン酸を常法により回収してから行ってもよく、また培養終了後の培地を直接ラクトン化処理することにより、培地中に光学活性γ−ヒドロキシデカン酸が含まれたままの状態で行ってもよい。
上記ラクトン化には、例えば、従来より行われている培養液中でのラクトン化を用いることができる。その具体例としては、培養終了後の培養液に希塩酸や希硫酸等の酸を加えて当該培養液のｐＨを酸性化することによって行う方法が挙げられる。
本発明においては、より天然に近い状態の化合物として光学活性γ−デカラクトンを得るために、ラクトン化を、培養液のｐＨを酸性化することなくそのままの状態で行う方法を用いることが好ましい。本発明においては培養終了時の培養液のｐＨがすでに３．０〜４．５の範囲で酸性側に傾いているため、培養液のｐＨを酸性化することなく、酸性条件の培養液を得ることができる。この酸性条件の培養液は、ｐＨを酸性化する処理を行うことなく、通常１０分〜１時間程度、好ましくは１０〜３０分間程度加熱することによって、該培養液中に含まれる光学活性γ−ヒドロキシデカン酸のラクトン化を達成することができる。この加熱温度は、７０〜１３０℃程度、好ましくは９０〜１２０℃程度の温度範囲に設定される。また本発明においてラクトン化を行う際は、培地が酸性条件下であればよく、好ましくはｐＨ２〜５である。
本発明においては、このような光学活性γ−ヒドロキシデカン酸のラクトン化によって、光学活性γ−ヒドロキシデカン酸を光学活性γ−デカラクトンに変換することができる。
かくして得られる光学活性γ−デカラクトンは、遠心分離等の方法により培養液から菌体を分離および除去した後、溶剤抽出および蒸留等の常法によって当該培養液中から回収及び精製すればよい。
本発明の光学活性γ−デカラクトンの製造法は、Ｒ−γ−デカラクトンを高光学純度で得ることができる。
本発明の製造法により得られるラクトン類は、香料、医薬中間体等に用いることができる。例えば、Ｒ−γ−デカラクトンは飲料、チューインガム、果汁、タバコ製品、医薬品製剤、香料、香料入り製品などへの官能性の付加あるいは強化・高揚に用いることができ、またＲ−γ−デカラクトンはＳ−γ−デカラクトンと比較し香りの強度が強く、キャラクターとしてよりナチュラルなフルーツ感を持つという利点を有する［（Ａ．Ｍｏｓａｎｄｌｅら、Ｊ．Ａｇｒｉｃ．Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍ，．３７，４１３（１９８９）］。
（５）まとめ
本発明の製造法は、カンジダ・ソルボフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｏｒｂｏｐｈｉｌａ）を用いることを特徴とする。本発明の製造法に従えば、Ｒ−γ−デカラクトンやＲ−δ−デカラクトン等の光学活性ラクトン類を高光学純度で得ることができる。また本発明の光学活性γ−デカラクトン製造法においては、Ｒ−γ−デカラクトンの生産効率が高い。本発明の製造法によって、このようにＲ−γ−デカラクトンの高い生産効率を達成できるのは、おそらく本発明の製造系においてカンジダ・ソルボフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｏｒｂｏｐｈｉｌａ）が得られたＲ−γ−デカラクトンを崩壊させにくいという特徴を示すためであり、特に、カンジダ・ソルボフィラがＲ−γ−アカラクトンを分解しないことが原因であると考えられる。但し本発明の範囲は、このような仮説理論に基づいて制限されるものではない。
本発明の方法を用いれば、純度の高い光学活性ラクトンを効率良く製造することが容易になり、工業生産における作業性を向上させることができる。
【発明を実施するための最良の形態】  以下に、実施例を挙げて本発明を詳細に説明するが、本発明の範囲はこれらの実施例によって何ら限定されるものではない。
なお、以下の実施例において、ガスクロマトグラフィー（ＧＣ）分析は、以下の条件で行った。
機器：ヒューレットパッカード製  ５８９０型
カラム：ＢＣ−ＷＡＸ（ＧＬサイエンス社製）直径０．２５ｍｍ×長さ３０ｍ
内部標準試料：１．０ｖ／ｖ％デカン酸エチル
各実施例で生産されたラクトン類の光学純度はＧＣ分析により測定した。（機器：Ｇ３０００（日立製）、カラム：ＣＨＩＲＡＳＩＬ−ＤＥＸ−ＣＢ、直径０．２５ｍｍ×長さ２５ｍ）。
【実施例１】  ＦＣ５８株を、ＹＭ斜面寒天培地に接種して、２７℃で３日間培養して活性化した。また、前培養のための培地として、３００ｍＬ容三角フラスコに酵母エキス０．０９ｇ、麦芽エキス０．０９ｇ、ポリペプトン０．１５ｇ及びグルコース０．３ｇを入れ、蒸留水を加えて総量３０ｍＬ、ｐＨ６としたものを、オートクレーブで１２１℃にて１５分間滅菌して調製した。冷却した該培地に、上記の通り活性化したＦＣ５８株を接種し、回転式振とう培養装置を用いて２７℃にて１５０ｒｐｍで２４時間振とう培養を行ったものを、前培養液とした。さらに、続いて行う本培養のための本培養培地を調製した。すなわち、５００ｍＬ容坂口フラスコに酵母エキス０．３ｇ、麦芽エキス０．３ｇ及びポリペプトン０．５ｇを入れ、蒸留水を加えて総量１００ｍＬ、ｐＨ６とし、さらにヒマシ油２０ｇを添加したものを、オートクレーブで１２１℃にて１５分間滅菌して調製した。次いで、冷却した該本培養培地に、上記の前培養液を２ｍＬ接種し、２７℃にて１５０ｒｐｍで振とう培養することにより、本培養を行った。培養中のｐＨ調整は行わなかった。なお培養後の培養液のｐＨは４．０６であった。培養開始後３日目から経時的に培養液を無菌的に５ｍＬずつサンプリングし、サンプリングした培養液（試料）をそれぞれ１００℃で２０分間加熱することによりγ−ヒドロキシデカン酸のラクトン化を行った。このようなラクトン化処理後、この試料を酢酸エチルで抽出し、分離した有機層を内票法（内部標準試料としてデカン酸エチルを使用）によるガスクロマトグラフィー（ＧＣ）分析で定量した。この結果、培養開始後１４日目の培養液について、生産されるＲ−γ−デカラクトンの量が最大となった。このような培養開始後１４日目の培養液から得られたＲ−γ−デカラクトンの生産量は、本培養培地１Ｌ当たり８．４１ｇであった。光学純度は９９％ｅｅ以上であった。
【実施例２】  ヒマシ油２０ｇの代わりにリシノール酸（純度８０％以上；和光純薬工業（株）製）２０ｇを用いた以外は、実施例１と同様にしてＲ−γ−デカラクトンの製造を行った。その結果、培養開始後２０日目の培養液について、生産されるＲ−γ−デカラクトンの量が最大となった。このような培養開始後２０日目の培養液から得られたＲ−γ−デカラクトンの生産量は、本培養培地１Ｌ当たり２１．８９ｇであった。光学純度は９９％ｅｅ以上であった。
【実施例３】  本培養培地に硫酸マンガン（ＭｎＳＯ４・Ｈ２Ｏ）１．７ｍｇ、塩化カルシウム（ＣａＣｌ２・Ｈ２Ｏ）０．５５ｍｇ、塩化第二鉄（ＦｅＣｌ３・Ｈ２Ｏ）０．３７５ｍｇ、硫酸亜鉛（ＺｎＳＯ４・Ｈ２Ｏ）２．２ｍｇ、硫酸銅（ＣｕＳＯ４・Ｈ２Ｏ）０．４ｍｇ、硫酸マグネシウム（ＭｇＳＯ４・Ｈ２Ｏ）５．９ｍｇ、塩化コバルト（ＣｏＣｌ２・Ｈ２Ｏ）０．２８ｍｇ、モリブデン酸ナトリウム（Ｎａ２ＭｏＯ４・Ｈ２Ｏ）０．２６ｍｇ、ホウ素（Ｈ３ＢＯ３）０．４ｍｇ及びヨウ化カリウム（ＫＩ）０．０６ｍｇを添加して使用したこと以外は、実施例２と同様にしてＲ−γ−デカラクトンの製造を行った。その結果、培養開始後２０日目の培養液について、生産されるＲ−γ−デカラクトンの量が最大となった。このような培養開始後２０日目の培養液から得られたＲ−γ−デカラクトンの生産量は、本培養培地１Ｌ当たり２７．３７ｇであった。光学純度は９９％ｅｅ以上であった。
【実施例４】  ＦＣ５８株を、ＹＭ斜面寒天培地に接種して、２７℃で３日間培養して活性化した。また、前培養のための培地として、５００ｍＬ容坂口フラスコに酵母エキス０．３ｇ、麦芽エキス０．３ｇ、ポリペプトン０．５ｇ及びグルコース１．０ｇを入れ、蒸留水を加えて１００ｍｌ、ｐＨ６としたものを、オートクレーブで１２１℃にて１５分間滅菌して調製した。冷却した該培地に、上記の通り活性化したＦＣ５８株を接種し、回転式振とう培養装置を用いて２７℃で１５０ｒｐｍ、２４時間振とう培養を行ったものを、前培養液とした。さらに、続いて行う本培養のための本培養培地を調製した。すなわち、５Ｌ容ジャーファーメンターに酵母エキス６．０ｇ、麦芽エキス６．０ｇ、ポリペプトン１０．０ｇ、硫酸マンガン（ＭｎＳＯ４・Ｈ２Ｏ）３４ｍｇ、塩化カルシウム（ＣａＣｌ２・Ｈ２Ｏ）１１ｍｇ、塩化第二鉄（ＦｅＣｌ３・Ｈ２Ｏ）７．５ｍｇ、硫酸亜鉛（ＺｎＳＯ４・Ｈ２Ｏ）４４ｍｇ、硫酸銅（ＣｕＳＯ４・Ｈ２Ｏ）８．０ｍｇ、硫酸マグネシウム（ＭｇＳＯ４・Ｈ２Ｏ）１１８ｍｇ、塩化コバルト（ＣｏＣｌ２・Ｈ２Ｏ）５．６ｍｇ、モリブデン酸ナトリウム（Ｎａ２ＭｏＯ４・Ｈ２Ｏ）５．２ｍｇ、ホウ素（Ｈ３ＢＯ３）８．０ｍｇ及びヨウ化カリウム（ＫＩ）１．２ｍｇを入れ、蒸留水を加えて２０００ｍＬ、ｐＨ６とし、リシノール酸（純度８０％以上；和光純薬工業（株）製）４００ｇを添加したものを、オートクレーブで１２１℃にて１５分間滅菌して調製した。冷却した該本培養培地に上記の前培養液を４０ｍＬ接種し、撹拌羽根の回転数６００ｒｐｍ、エアー通気量１０００ｍＬ／分で２７℃にて培養を行うことにより、本培養を行った。培養中のｐＨ調整は行わなかった。なお培養後の培養液のｐＨは４．７５であった。培養開始後３日目から経時的に培養液を無菌的に５ｍＬずつサンプリングし、サンプリングした培養液（試料）をそれぞれ１００℃で２０分間加熱することによりγ−ヒドロキシデカン酸のラクトン化を行った。このようなラクトン化処理後、この試料を酢酸エチルで抽出し、分離した有機層を内票法（内部標準試料としてデカン酸エチルを使用）によるＧＣ分析で定量した。この結果、培養開始後１０日目の培養液について、生産されるＲ−γ−デカラクトンの量が最大となった。このような培養開始後１０日目の培養液から得られたＲ−γ−デカラクトンの生産量は、本培養培地１Ｌ当たり４９．９４ｇであった。光学純度は９９％ｅｅ以上であった。
【実施例５】  リシノール酸（純度８０％以上；和光純薬工業（株）製）４００ｇの代わりにヒマシ油６００ｇのリパーゼ（リパーゼＯＦ；名糖産業株式会社製）による加水分解物を用いた以外は、実施例４と同様にしてＲ−γ−デカラクトンの製造を行った。この結果、培養開始後５日目の培養液について、生産されるＲ−γ−デカラクトンの量が最大となった。このような培養開始後５日目の培養液から得られたＲ−γ−デカラクトンの生産量は、本培養培地１Ｌ当たり４０．５０ｇであった。光学純度は９９％ｅｅ以上であった。
【実施例６】  カンジダ・ソルボフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｏｒｂｏｐｈｉｌａ）ＦＣ５８株の代わりに、カンジダ・ソルボフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｏｒｂｏｐｈｉｌａ）ＡＴＣＣ７４３６２株、カンジダ・ソルボフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｏｒｂｏｐｈｉｌａ）ＡＴＣＣ６０１３０株又はカンジダ・ソルボフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｏｒｂｏｐｈｉｌａ）ＩＦＯ１５８３株を用いた以外は、実施例２と同様にして光学活性γ−デカラクトンの製造を行った。その結果、各菌種を用いた場合において、それぞれ培養開始後１９日目、１１日目、１１日目の培養液について、生産されるγ−デカラクトンの量が最大となった。このような生産量が最大量になった培養液から得られたγ−デカラクトンの生産量は、本培養培地１Ｌ当たりそれぞれ１３．７５ｇ、１２．９７ｇ、１２．９７ｇであった。
【実施例７】  サンプリングした培養液（試料）をそれぞれ加熱によるラクトン化処理を行わない以外は、実施例１と同様にしてＲ−γ−デカラクトンの製造を行った。この結果、培養開始後１４日目の培養液について、生産されるＲ−γ−デカラクトンの量が最大となった。このような培養開始後１４日目の培養液から得られたＲ−γ−デカラクトンの生産量は、本培養培地１Ｌ当たり８．４１ｇであった。光学純度は９９％ｅｅ以上であった。
【実施例８】  サンプリングした培養液（試料）をそれぞれ加熱によるラクトン化処理を行わない以外は、実施例２と同様にしてＲ−γ−デカラクトンの製造を行った。その結果、培養開始後２０日目の培養液について、生産されるＲ−γ−デカラクトンの量が最大となった。このような培養開始後２０日目の培養液から得られたＲ−γ−デカラクトンの生産量は、本培養培地１Ｌ当たり２１．８９ｇであった。光学純度は９９％ｅｅ以上であった。
【実施例９】  サンプリングした培養液（試料）をそれぞれ加熱によるラクトン化処理を行わない以外は、実施例３と同様にしてＲ−γ−デカラクトンの製造を行った。その結果、培養開始後２０日目の培養液について、生産されるＲ−γ−デカラクトンの量が最大となった。このような培養開始後２０日目の培養液から得られたＲ−γ−デカラクトンの生産量は、本培養培地１Ｌ当たり２７．３７ｇであった。光学純度は９９％ｅｅ以上であった。
【実施例１０】  サンプリングした培養液（試料）をそれぞれ加熱によるラクトン化処理を行わない以外は、実施例４と同様にしてＲ−γ−デカラクトンの製造を行った。この結果、培養開始後１０日目の培養液について、生産されるＲ−γ−デカラクトンの量が最大となった。このような培養開始後１０日目の培養液から得られたＲ−γ−デカラクトンの生産量は、本培養培地１Ｌ当たり４９．９４ｇであった。光学純度は９９％ｅｅ以上であった。
【実施例１１】  サンプリングした培養液（試料）をそれぞれ加熱によるラクトン化処理を行わない以外は、実施例５と同様にしてＲ−γ−デカラクトンの製造を行った。この結果、培養開始後５日目の培養液について、生産されるＲ−γ−デカラクトンの量が最大となった。このような培養開始後５日目の培養液から得られたＲ−γ−デカラクトンの生産量は、本培養培地１Ｌ当たり４０．５０ｇであった。光学純度は９９％ｅｅ以上であった。
【実施例１２】  サンプリングした培養液（試料）をそれぞれ加熱によるラクトン化処理を行わない以外は、実施例６と同様にしてＲ−γ−デカラクトンの製造を行った。その結果、各菌種を用いた場合において、それぞれ培養開始後１９日目、１１日目、１１日目の培養液について、生産されるＲ−γ−デカラクトンの量が最大となった。このような生産量が最大量になった培養液から得られたＲ−γ−デカラクトンの生産量は、本培養培地１Ｌ当たりそれぞれ１３．７５ｇ、１２．９７ｇ、１２．９７ｇであった。
【実施例１３】  ＦＣ５８株を、ＹＭ斜面寒天培地に接種して、２７℃で３日間培養して活性化した。また、前培養のための培地として、３００ｍＬ容三角フラスコに酵母エキス０．０９ｇ、麦芽エキス０．０９ｇ、ポリペプトン０．１５ｇ及びグルコース０．３ｇを入れ、蒸留水を加えて総量３０ｍＬ、ｐＨ６としたものを、オートクレーブで１２１℃にて１５分間滅菌して調製した。冷却した該培地に、上記の通り活性化したＦＣ５８株を接種し、回転式振とう培養装置を用いて２７℃にて１５０ｒｐｍで２４時間振とう培養を行ったものを、前培養液とした。
さらに続いて行う本培養のための本培養培地を調製した。すなわち、３００ｍＬ容坂口フラスコに酵母エキス０．０９ｇ、麦芽エキス０．０９ｇ及びポリペプトン０．１５ｇ、硫酸マンガン（ＭｎＳＯ４・Ｈ２Ｏ）０．５１ｍｇ、塩化カルシウム（ＣａＣｌ２・Ｈ２Ｏ）０．１７ｍｇ、塩化第二鉄（ＦｅＣｌ３・Ｈ２Ｏ）０．１１ｍｇ、硫酸亜鉛（ＺｎＳＯ４・Ｈ２Ｏ）０．６６ｍｇ、硫酸銅（ＣｕＳＯ４・Ｈ２Ｏ）０．１２ｍｇ、硫酸マグネシウム（ＭｇＳＯ４・Ｈ２Ｏ）１．７７ｍｇ、塩化コバルト（ＣｏＣｌ２・Ｈ２Ｏ）０．０８ｍｇ、モリブデン酸ナトリウム（Ｎａ２ＭｏＯ４・Ｈ２Ｏ）０．０８ｍｇ、ホウ素（Ｈ３ＢＯ３）０．１２ｍｇ及びヨウ化カリウム（ＫＩ）０．０２ｍｇを入れ、蒸留水を加えて総量３０ｍＬ、ｐＨ６とし、さらに１１−ヒドロキシパルミチン酸エチルエステル０．１３ｇを添加したものを、オートクレーブで１２１℃にて１５分間滅菌して調製した。次いで、冷却した該本培養培地に、上記の前培養液を２ｍＬ接種し、２７℃にて１５０ｒｐｍで振とう培養することにより、本培養を行った。培養中のｐＨ調整は行わなかった。培養開始後３日目から経時的に培養液を無菌的に５ｍＬずつサンプリングし、サンプリングした培養液（試料）をそれぞれ１００℃で２０分間加熱することによりδ−ヒドロキシデカン酸のラクトン化を行った。このようなラクトン化処理後、この試料を酢酸エチルで抽出し、分離した有機層を内票法（内部標準試料としてデカン酸エチルを使用）によるＧＣ分析で定量した。
この結果、培養開始後１１日目の培養液について、生産されるＳ−δ−デカラクトンの量が最大となった。このような培養開始後１１日目の培養液から得られたＳ−δ−デカラクトンの生産量は、本培養培地３０ｍｌ当たり０．０１９ｇであり、光学純度は９６％ｅｅ以上であった。
【実施例１４】  サンプリングした培養液（試料）をそれぞれ加熱によるラクトン化処理を行わない以外は、実施例１３と同様にしてＳ−δ−デカラクトンの製造を行った。その結果、培養開始後１１日目の培養液について、生産されるＳ−δ−デカラクトンの量が最大となった。このような培養開始後１１日目の培養液から得られたＳ−δ−デカラクトンの生産量は、本培養培地３０ｍｌ当たり０．０１９ｇであり、光学純度は９６％ｅｅ以上であった。
参考例１
ＦＣ５８株の代わりに、高いγ−デカラクトン生産能をもつとして一般的に知られているヤロウィア・リポリチカ（Ｙａｒｒｏｗｉａ  ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ）ＩＦＯ０７１７株を用いた以外は実施例２と同様にしてγ−デカラクトンの製造を行った。その結果、培養開始後６日目の倍溶液について、生産されるγ−デカラクトンの量が最大となった。このような培養開始後６日目の培養液から得られたγ−デカラクトンの生産量は本培養培地１Ｌ当たり４．９０ｇであった。しかしながら、その後経時的にγ−デカラクトンの生産量を追跡したところ６目目以降は本培養培地１Ｌ当たりのγ−デカラクトン量が減少しはじめ、培養開始後２３日目におけるγ−デカラクトンの生産量は本培養培地１Ｌ当たり３．１７ｇであった。
本明細書中で引用した全ての刊行物、特許及び特許出願はその全体を参照により本明細書中に組み入れるものとする。
【産業上の利用の可能性】
本発明によれば、ラクトン類、例えば光学活性γ−デカラクトン（Ｒ−γ−デカラクトン等）や光学活性δ−デカラクトン等の光学活性ラクトン類を、高い生産効率で容易に得ることができる。また、本発明の製造法の中間工程においてラクトン前駆体ヒドロキシ脂肪酸、例えばγ−ヒドロキシデカン酸やδ−ヒドロキシデカン酸を効率良く生産することができる。本発明の製造法は、培地に乳化剤やｐＨ調整剤を使用する必要がなく、また炭素源であるヒドロキシ脂肪酸、ヒドロキシ脂肪酸誘導体、及び／又はヒドロキシ脂肪酸誘導体の加水分解生成物を、大規模生産に有用な高濃度にて培地に添加して使用できることから、工業的生産において極めて有利に使用することができる。
【国際調査報告】
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