(57)【要約】本発明は、紫外線照射後の日焼け皮膚の美白、また日焼け等によるしみ、そばかす、肝斑等の皮膚の色素沈着の予防、改善及び治療に有効な物質及びこれを含有する組成物を提供することを目的とする。課題を解決するためにとった手段は、エゴノール誘導体からなるメラニン生成抑制剤、美白剤である。また、前記エゴノール誘導体を含有するメラニン生成抑制剤、美白剤である。されに、前記エゴノール誘導体を含有するメラニン生成抑制用組成物、美白用組成物である。また、前記エゴノール誘導体を含有する化粧料、医薬、皮膚外用剤、メラニン生成抑制用食品、美白用食品である。さらに、前記エゴノール誘導体及び前記エゴノール誘導体以外の美白剤成分を含有する前記組成物、化粧料、医薬、皮膚外用剤、メラニン生成抑制用食品、美白用食品である。本発明によれば、新規なメラニン生成抑制剤、美白剤並びにメラニン生成抑制作用及び美白作用を有した化粧料、医薬、皮膚外用剤、食品等の組成物が得られる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の式（１）
2003047565.tif 000034
で示されるエゴノール誘導体からなるメラニン生成抑制剤。
【請求項２】
式（１）で示されるエゴノール誘導体からなる美白剤。
【請求項３】
式（１）で示されるエゴノール誘導体を含有するメラニン生成抑制剤。
【請求項４】
式（１）で示されるエゴノール誘導体を含有する美白剤。
【請求項５】
式（１）で示されるエゴノール誘導体を含有するメラニン生成抑制用組成物。
【請求項６】
式（１）で示されるエゴノール誘導体を含有する美白用組成物。
【請求項７】
式（１）で示されるエゴノール誘導体を含有する化粧料。
【請求項８】
メラニン生成抑制用である、請求の範囲第７項記載の化粧料。
【請求項９】
美白用である、請求の範囲第７項記載の化粧料。
【請求項１０】
式（１）で示されるエゴノール誘導体を含有する医薬。
【請求項１１】
メラニン生成抑制用である、請求の範囲第１０項記載の医薬。
【請求項１２】
美白用である、請求の範囲第１０項記載の医薬。
【請求項１３】
式（１）で示されるエゴノール誘導体を含有する皮膚外用剤。
【請求項１４】
メラニン生成抑制用である、請求の範囲第１３項記載の皮膚外用剤。
【請求項１５】
美白用である、請求の範囲第１３項記載の皮膚外用剤。
【請求項１６】
式（１）で示されるエゴノール誘導体を含有するメラニン生成抑制用食品。
【請求項１７】
式（１）で示されるエゴノール誘導体を含有する美白用食品。
【請求項１８】
さらに、前記式（１）で示されるエゴノール誘導体以外の美白剤成分を含有することを特徴とする請求の範囲第５乃至１７項のいずれか一項に記載の組成物、化粧料、医薬、皮膚外用剤又は食品。
【発明の詳細な説明】
技術分野
本発明はエゴノール誘導体からなるメラニン生成抑制剤及び美白剤、並びにエゴノール誘導体を含有する組成物、特に化粧料、医薬、皮膚外用剤、食品に関する。さらに詳細には、メラノサイトにおけるメラニン生成を抑制し、紫外線照射後の日焼け皮膚の美白、また、日焼け等によるしみ、そばかす、肝班等の皮膚の色素沈着を予防、改善及び治療することができるメラニン生成抑制剤及び美白剤、並びに組成物、特に化粧料、医薬、皮膚外用剤、食品に関する。
背景技術
日焼け等によるしみ、そばかす、肝班等の皮膚の色素沈着は加齢に伴って発生し、加齢に伴って増加、あるいは消失しにくくなるため、中高年齢層にとって悩みとなっている。これらの色素沈着の発症機構は未だ明確にされていないが、太陽光線（特に紫外線）による日焼け等によって、表皮細胞に存在するメラノサイト内のメラノソームとよばれるメラニン生成顆粒においてメラニン色素が産生され、生成したメラニン色素が隣接細胞へ拡散することによって生じると考えられている。
このような色素沈着を正常皮膚色にまで回復することが可能な物質の開発が強く望まれており、これまでに多くの物質が商品化されてきている。例えば、Ｌ−アスコルビン酸、コウジ酸、あるいはハイドロキノンなどが知られている。
しかし、Ｌ−アスコルビン酸は安定性に難があり、コウジ酸は一応効果が認められているものの、その効果は弱い。一方、ハイドロキノンも一応効果が認められているが、刺激性およびアレルギー性を有し、安全性に問題があり、薬剤として配合することには問題がある。したがって、充分な色素沈着予防および改善効果を有する物質は未だ知られていないのが現状である。
本発明に係る化合物は既知の物質であるが、メラニン生成を抑制する効果を有し、皮膚美白効果を持つことは知られていない（例えば、タカナシ等（Ｔａｋａｎａｓｈｉ  Ｍ．，Ｔａｋｉｚａｗａ  Ｙ．）、フィトケミストリィ（Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）（英国）、１９８８年、２７巻、ｐ．１２２４〜ｐ．１２２６、アニル（Ａｎｉｌ  Ｈ．）、フィトケミストリィ（Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）（英国）、１９８０年、１９巻、ｐ．２７８４〜ｐ．２７８６参照。）。
本発明は上記事情に鑑みてなされたもので、その目的は、紫外線照射後の日焼け皮膚の美白、また日焼け等によるしみ、そばかす、肝斑等の皮膚の色素沈着の予防、改善及び治療に有効な物質及びこれを含有する組成物を提供することにある。
発明の開示
本発明者らは上記課題を解決するために鋭意研究を行った結果、特定構造を有するエゴノール誘導体が強いメラニン生成抑制作用及び美白作用を有し、上記課題が解決されることを見出し、本発明を完成するに至った。
すなわち、本発明は、下記の式（１）
2003047565.tif 000002
で示されるエゴノール誘導体からなるメラニン生成抑制剤及び美白剤である。
また、本発明は、前記式（１）で示されるエゴノール誘導体を含有するメラニン生成抑制剤、美白剤である。
また、本発明は、前記式（１）で示されるエゴノール誘導体を含有するメラニン生成抑制用組成物、美白用組成物である。
また、本発明は、前記式（１）で示されるエゴノール誘導体を含有する化粧料であり、この化粧料はメラニン生成抑制用及び美白用であることができる。
また、本発明は、前記式（１）で示されるエゴノール誘導体を含有する医薬であり、この医薬はメラニン生成抑制用及び美白用であることができる。
また、本発明は、前記式（１）で示されるエゴノール誘導体を含有する皮膚外用剤であり、この皮膚外用剤はメラニン生成抑制用及び美白用であることができる。
また、本発明は、前記式（１）で示されるエゴノール誘導体を含有するメラニン生成抑制用食品及び美白用食品である。
さらに、本発明においては、前記式（１）で示されるエゴノール誘導体を含有する、メラニン生成抑制用組成物、美白用組成物、メラニン生成抑制用，美白用等の化粧料、メラニン生成抑制用，美白用等の医薬、メラニン生成抑制用，美白用等の皮膚外用剤、メラニン生成抑制用食品、美白用食品等の組成物に、前記式（１）で示されるエゴノール誘導体以外の美白剤成分をさらに含有することができる。該美白剤成分と前記式（１）で示されるエゴノール誘導体との併用配合により、メラニン生成抑制効果、美白効果を相乗的に向上させることができる。
発明を実施するための最良の形態
以下、本発明の実施形態について詳述する。
本発明において用いられる下記の式（１）
2003047565.tif 000003
で示されるエゴノール誘導体（以下、単にエゴノール誘導体という。）は既知の物質であり、例えば、菌類から単離することができる。エゴノール誘導体の生成にはエゴノール誘導体を含むあらゆる菌類を用いることができるが、例えばマスタケ（Ｌａｅｔｉｐｏｒｕｓ  ｓｕｌｐｈｕｒｅｕｓ）を用いるのが好都合である。また、化学合成によって調製することも可能である。エゴノール誘導体を含む菌類からのエゴノール誘導体の単離は次のようにして行うことができる。すなわち、菌類の子実体または菌糸、胞子等の部分的個所を好ましくは粉砕した後、抽出溶媒中に浸漬するかまたは抽出溶媒中で加熱還流し、次いでろ過、遠心分離等により不溶物を除去して得られる抽出溶液を場合によって濃縮した後、公知の分離精製手段によって単離する。
抽出に用いる溶媒は、通常菌類、植物等の抽出に用いられる溶媒でよく、例えば、メタノール、エタノール等のアルコール、アセトン、酢酸エチル等の有機溶媒、水を単独であるいは組み合わせて用いることができる。抽出方法は通常の方法でよく、一般的には、抽出温度は、０〜１００℃、好ましくは４０〜７０℃の範囲であり、抽出時間は、１〜１６８時間、好ましくは２４〜７２時間である。抽出溶液からの単離は、例えば、逆相クロマトグラフィー、ゲルろ過カラムクロマトグラフィー、液体クロマトグラフィー等のクロマトグラフィーによって行うことができる。
以下に、エゴノール誘導体の生成の具体例を挙げる。
［精製例（菌類からの単離）］
栽培したマスタケの子実体を粉砕した後、メタノールに浸漬し、４０℃で７２時間抽出を行った。次いで、ろ過により不溶物を除去し、得られた抽出溶液を濃縮した後、逆相クロマトグラフィーにより精製した。精製物の構造は、質量分析ガスクロマトグラフィーとＮＭＲにより決定した。その化合物は、前記式（１）に示す、５−（３−ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐｙｌ）−７−ｍｅｔｈｏｘｙ−２−（３，４−ｍｅｔｈｙｌｅｎｅｄｉｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）ｂｅｎｚｏｆｕｒａｎであり、エゴノールの誘導体であった。
本発明の前記エゴノール誘導体は、後述するようにメラニン生成抑制作用及び美白作用を有する。したがって、メラニン生成抑制剤及び美白剤として用いることができる。さらに、エゴノール誘導体を含有するメラニン生成抑制剤及び美白剤に応用することができる。これらのメラニン生成抑制剤及び美白剤は、メラノサイトにおけるメラニン生成を抑制し、紫外線照射後の日焼け皮膚の美白、また、日焼け等によるしみ、そばかす、肝班等の皮膚の色素沈着を予防、改善及び治療することができる。また、組成物として、エゴノール誘導体を含有する、メラニン生成抑制用組成物及び美白用組成物、さらに、エゴノール誘導体を含有する、化粧品，医薬品，食品分野における各種化粧料、医薬、皮膚外用剤、メラニン生成抑制用食品、美白用食品等に応用することができる。前記化粧料、医薬、皮膚外用剤は、前記エゴノール誘導体の機能を有したメラニン生成抑制用及び美白用としての応用が好ましい。前記組成物は、前記メラニン生成抑制及び美白に関連する症状等の予防、処置のための組成物である。
本発明の組成物は、経口用（内用）又は非経口用（外用）の両形態をとることができる。経口用の場合は、本発明の組成物を、例えば医薬または食品等の形態に調製することができる。また、非経口用の場合には、化粧料、医薬部外品、医薬、皮膚外用剤等の形態に調製することができる。
エゴノール誘導体の本発明の組成物への配合に際しては、エゴノール誘導体の純品が配合されるが、エゴノール誘導体を含有する植物、菌類等の抽出物または抽出エキスの形で配合しても構わない。
本発明における、前記エゴノール誘導体を含有する組成物、すなわちメラニン生成抑制用組成物、美白用組成物、メラニン生成抑制用，美白用等の化粧料、メラニン生成抑制用，美白用等の医薬、メラニン生成抑制用，美白用等の皮膚外用剤、メラニン生成抑制用食品、美白用食品等の組成物には、さらに前記エゴノール誘導体以外の美白剤成分（以下、単に美白剤成分ということがある。）を含有することができ、前記エゴノール誘導体と美白剤成分との併用配合により、メラニン生成抑制効果、美白効果を相乗的に向上させることができる。
前記美白剤成分としては、特に限定されるものではなく、例えば、アスコルビン酸及びその誘導体並びにそれらの塩（例えば、アスコルビン酸、アスコルビン酸２−グルコシド、アスコルビン酸リン酸エステルマグネシウム塩、アスコルビン酸ナトリウム、ステアリン酸アスコルビル、パルミチン酸アスコルビル、ジパルミチン酸アスコルビル、テトライソパルミチン酸アスコルビル、アスコルビン酸マグネシウム、キトサンアスコルベート、アスコルビルメチルシラノールペクチネート、アスコルビン酸ポリペプチド、ジアゼライン酸アスコルビル、アスコルビン酸ポリリン酸エステル、アスコルビン酸ポリオキシエチレン誘導体、リシノール酸アスコルビル、アスコルビン酸−２−硫酸エステルナトリウム塩等）、ハイドロキノン及びその誘導体並びにそれらの塩（例えば、アルブチン等）、システイン及びその誘導体並びにそれらの塩（例えば、Ｌ−システイン、Ｎ，Ｎ’−ジアセチルシスチンジメチル等）、プラセンタエキス、コウジ酸及びその誘導体、ルシノール、エラグ酸及びその誘導体、グルコサミン及びその誘導体、アゼライン及びその誘導体、ヒドロキシケイヒ酸及びその誘導体、グルタチオン、植物抽出物（カミツレ抽出物、アルニカ抽出物、オウゴン抽出物、センキュウ抽出物、ソウハクヒ抽出物、サイコ抽出物、ボウフウ抽出物、ハマボウフウ抽出物、ギムネマ抽出物、シナノキ抽出物、モモ葉抽出物、クジン抽出物、チュ抽出物、トウキ抽出物、ヨクイニン抽出物、カキ葉抽出物、ダイオウ抽出物、ボタンピ抽出物、ハマメリス抽出物、マロニエ抽出物、オトギリソウ抽出物、オドリコソウ抽出物、カンゾウ抽出物、センプクカ抽出物、ケイケットウ抽出物、サンペンズ抽出物、イブキトラノオ抽出物、クララ抽出物、サンザシ抽出物、シラユリ抽出物、ホップ抽出物、ノイバラ抽出物等）、グラブリジン、グラブレン、リクイリチン、イソリクイリチン、カンゾウ疎水性フラボノイド、リコカルコンＡ、胎盤抽出物等が挙げられる。美白剤成分は、１種または２種以上が任意に選択されて配合することができる。美白剤成分を配合する場合の美白剤成分の配合量（含有量）は前記組成物全量中０．０００１〜１０重量％が好ましく、さらに好ましくは０．００１〜５重量％である。なお、抽出物の場合は抽出液から溶媒を除去した乾燥物重量に換算した量である。
以下、エゴノール誘導体を含有した本発明の具体的な組成物を用途別にさらに詳述する。
本発明の第一の用途である化粧料は、例えば、軟膏剤、溶液、クリーム、乳液、化粧水、ローション、ジェル、エッセンス（美容液）、ファンデーション、パック・マスク、口紅、スティック、入浴剤等の皮膚外用剤等として医薬部外品を含む広い範囲で適用可能である。
また、化粧料の剤型も、溶液系、可溶化系、乳化系、粉末系、粉末分散系、油液系、ゲル系、軟膏系、エアゾール系、水−油２層系、水−油−粉末３層系等、幅広い剤型を採り得る。
本発明の化粧料へのエゴノール誘導体の配合量は、化粧料全量中０．００１〜２０重量％が好ましく、より好ましくは０．０１〜１６重量％、さらに好ましくは０．１〜１２重量％である。１〜１０重量％が最も好ましい。本発明の化粧料は、メラニン生成抑制作用及び美白作用を有するので、メラニン生成抑制用化粧料及び美白用化粧料として使用される。また、本発明の化粧料は、特に皮膚外用剤としての用途に好ましく応用できるので、メラニン生成抑制用皮膚外用剤及び美白用皮膚外用剤として使用される。
本発明の第二の用途である医薬は、経口投与、非経口投与いずれの投与方法をも採用することができ、それぞれに適した医薬製剤の形態とすることができる。医薬製剤としては、例えば、液剤、シロップ剤、注射剤、吸入剤、乳剤等の液状剤、錠剤、粉剤、顆粒剤、カプセル剤、吸入剤等の固形剤、軟膏等の皮膚外用剤、座剤等の外用剤等を挙げることができる。
医薬製剤へのエゴノール誘導体の配合量は医薬製剤全量中０．００１〜３０重量％が好ましい。さらに好ましくは、０．０１〜２０重量％、最も好ましくは０．１〜１０重量％である。投与量は、患者の年齢及び体重、適用経路、疾病の進行度及び並行して行われている処置に基づいて適宜変えられるものであり、特定されるものではないが、一般的には１日当たり４〜１０ｍｌ程度で、１日に１回又は２〜３回に分けて投与することができるが、これに限られるものではない。本発明の医薬は、メラニン生成抑制作用及び美白作用を有するので、メラニン生成抑制用医薬及び美白用医薬として使用される。また、本発明の医薬は、特に皮膚外用剤としての用途に好ましく応用できるので、メラニン生成抑制用皮膚外用剤及び美白用皮膚外用剤として使用される。
本発明の第三の用途である食品は、いわゆる健康機能食品への用途として有用であり、例えば、菓子、清涼飲料等の飲料、野菜又は果実加工品、畜肉製品、調味料等として広く適用可能である。その形態としては、粉末、固形製品、溶液等である。食品へのエゴノール誘導体の配合量は、目的や製品形態等に応じて適宜変更することができる。一般的には、ドリンク剤等溶液の場合、例えば３０ｍｌ中、０．００１〜１０ｍｇであり、好ましくは０．０１〜５ｍｇ、さらに好ましくは０．１５〜１ｍｇである。また、タブレット等粉末固形製品の場合は、例えば３００ｍｇ中、０．００１〜１０ｍｇであり、好ましくは０．０１〜５ｍｇ、さらに好ましくは０．１〜１ｍｇである。本発明の食品は、メラニン生成抑制作用及び美白作用を有するので、メラニン生成抑制用食品及び美白用食品として使用される。
本発明の化粧料、医薬、食品等の組成物には、本発明の効果を損なわない範囲で上記したエゴノール誘導体の他に通常化粧料、医薬、皮膚外用剤、食品等に用いられる他の成分を配合することができる。
例えば、化粧料としては、油分、粉末、界面活性剤、保湿剤、増粘剤、低級アルコール、皮膜剤、紫外線吸収剤、金属イオン封鎖剤、有機アミン類、ｐＨ調整剤、薬効成分、糖類、防腐剤、ビタミン類、酸化防止剤、香料、水等が挙げられる。
油分の例としては、ホホバ油、オリーブ油、アボガド油、ヒマシ油、ヤシ油、牛脂、硬化油、液状ラノリン等の天然油脂及びその誘導体、カルナウバロウ、ミツロウ、ラノリン等のロウ類、流動パラフィン、マイクロクリスタリンワックス、スクワラン、ワセリン等の炭化水素類、ステアリン酸等の高級脂肪酸類、セチルアルコール、ステアリルアルコール等の高級アルコール類、グリセリンモノステアリン酸エステル、トリオクタン酸グリセリル、グリセリンモノオレート、ミリスチン酸イソプロピル、リンゴ酸ジイソステアリル、ジ２−ヘプチルウンデカン酸グリセリン、トリ２−エチルヘキシル酸トリメチロールプロパン、トリオクタン酸トリメチロールプロパン、セバチン酸ジ２−エチルヘキシル等のエステル類、ハッカ油、、ローズ油、シトロネラール等の精油類、ジメチルポリシロキサン、デカメチルシクロペンタシロキサン等のシリコーン油類等が挙げられる。油分の化粧料中の配合量は、化粧料の形態、剤型等に応じて適宜選定されるが、通常、化粧料全量中０．１〜９５重量％とすることができる。
粉末の例としては、タルク、マイカ、カオリン、シリカ、亜鉛華、雲母チタン、酸化チタン、酸化鉄、ナイロン粉末等が挙げられる。
界面活性剤の例としては、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリオキシエチレンソルビトール脂肪酸エステル、ポリオキシアルキレン変性ポリシロキサン等の非イオン界面活性剤、パルミチン酸ナトリウム等のアニオン界面活性剤、塩化ステアリルトリメチルアンモニウム等のカチオン界面活性剤、ベタイン、アミドベタイン、スルホベタイン、イミダゾリニウム等の両性界面活性剤が挙げられる。
保湿剤の例としては、グリセリン、１，３−ブチレングリコール、ポリエチレングリコール、ジプロピレングリコール、ソルビトール等が挙げられる。
増粘剤の例としては、カルボキシビニルポリマー、カルボキシメチルセルロース、ポリビニルアルコール等の水溶性高分子、ベントナイト等の粘土鉱物が挙げられる。
紫外線吸収剤の例としては、パラアミノ安息香酸（以下ＰＡＢＡと略す）、グリセリルＰＡＢＡ、エチルジヒドロキシプロピルＰＡＢＡ、オクチルメトキシシンナメート、２−エトキシエチル−ｐ−メトキシシンナメート、２，４−ジヒドロキシベンゾフェノン、２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン、２−ヒドロキシ−４−メトキシ−４−メチルベンゾフェノン、２−ヒドロキシ−４−メトキシ−４−メチルベンゾフェノンスルホン酸塩、ウロカニン酸エチルエステル、２−フェニル−５−メチルベンゾキサゾール、４−メトキシ−４−ｔ−ブチルジベンゾイルメタン、パラメトキシケイ皮酸エチルヘキシル等が挙げられる。
金属イオン封鎖剤の例としては、エデト酸四ナトリウム、クエン酸等が挙げられる。低級アルコールの例としては、エタノール等が挙げられる。有機アミン類の例としては、モノエタノールアミン、トリエタノールアミン等が挙げられる。ｐＨ調整剤の例としては、乳酸−乳酸ナトリウム、クエン酸−クエン酸ナトリウム等の緩衝剤が挙げられる。
薬効成分の例としては、パントテニールエチルエーテル、グリチルリチン酸塩等が挙げられる。ビタミン類の例としては、ビタミンＥ又はその誘導体等が挙げられる。酸化防止剤の例としては、トコフェロール類、ジブチルヒドロキシトルエン、没食子酸プロピル等が挙げられる。
糖類の例としては、エリスリトール、ショ糖、ヒアルロン酸等が挙げられる。防腐剤の例としては、エチルパラベン、ブチルパラベン、安息香酸ナトリウム等が挙げられる。その他、後記医薬及び食品に配合し得る成分の中から選択され配合することもできる。
次に、医薬としては、賦形剤、安定剤、湿潤剤、乳化剤、吸収促進剤、ｐＨ調整剤、界面活性剤、稀釈剤、担体等の種々の添加成分を配合することができる。これらの添加成分の具体例としては、例えば、でん粉、乳糖のような糖類、硫酸マグネシウム、タルク、ゼラチン、ヒドロキシプロピルセルロースのようなセルロース誘導体、大豆油、ゴマ油のような植物油、動物油若しくは合成油、ゴム、生理食塩水等のような水、エタノール、１，３−ブチレングリコール、ポリアルキレングリコール等のようなアルコール類等を挙げることができる。その他、前記化粧料及び後記食品に配合し得る成分の中から選択され配合することもできる。
次に、食品としては、甘味料、酸味料、保存料、香料、着色剤、賦形剤、安定剤、湿潤剤、乳化剤、吸収促進剤、ｐＨ調整剤、界面活性剤、稀釈剤、担体等の種々の添加成分を配合することができる。これらの添加成分の具体例としては、例えば、キノコ抽出液、人参抽出液、ショウガ抽出液、ハチミツのような各種食品抽出エキス溶液、液状食品、糖類として、環状オリゴ糖、還元麦芽糖、トレハロース、乳糖、ショ糖脂肪酸エステル等を挙げることができる。その他、前記化粧料、医薬に配合し得る成分の中から選択され配合することもできる。
本発明の前記組成物は、本発明の必須成分と前記任意配合成分の１種または２種以上とを混合して、常法により任意の形態、剤型に調製することができる。
以下実施例を挙げて本発明を具体的に説明する。組成物の配合量中、特に記載のないものは重量％である。
［実施例１］メラニン生成抑制効果
［Ｂ１６メラノーマ細胞におけるメラニン生成抑制作用］
メラニン生成抑制作用は、マウス由来のメラニン生成細胞であるＢ１６  １０Ｆ７メラノーマ細胞（入手先：秋田県総合食品研究所より移譲）を用い、前記精製例で精製したエゴノール誘導体を培養液で稀釈した溶液を細胞に作用させメラニンの生成を観察し評価した。Ｂ−１６細胞は７０％コンフルエントの細胞をＰＢＳにて洗いトリプシンを加え剥離し、トリプシンと同量の血清入り培地（Ｅ−ＭＥＭ＋１０％ＦＢＳ）を加え細胞を集め遠心した（８００ｒｐｍ，５ｍｉｎ．）。細胞数をカウントし、約１０４ｃｅｌｌｓ／ｍｌ（Ｅ−ＭＥＭ＋１０％ＦＢＳ）に調整した。エゴノール誘導体溶液の稀釈は、細胞培養プレート（接着細胞用）に２０μＬの滅菌ＰＢＳを分注し、エゴノール誘導体溶液を２０μＬ取り倍々稀釈した（培養液中の最終濃度１００μｇ／ｍＬ〜０．００１２μｇ／ｍＬ）。コントロールとしてアルブチン（培養液中の最終濃度１４０μｇ／ｍＬ〜０．２２μｇ／ｍＬ）、メタノールも同様に稀釈した。
この稀釈液の入ったプレートに細胞浮遊液を８０μＬずつ分注した。さらに、３７℃、ＣＯ２インキュベーターにて７２時間培養し、顕微鏡により、細胞におけるメラニン生成を観察した。さらに、メラニンが生成されている場合、培地を除き３００μＬの１Ｎ、ＮａＯＨで、メラニンを溶かし、４７０ｎｍの紫外線吸収を測定することでメラニン生成量を評価した。溶媒であるメタノールを反応させた値を１００％とし、エゴノール誘導体、アルブチンを用量変化させ、もっとも低濃度でメラニン合成阻害を示す濃度を求めた。この結果を表１に示す。
2003047565.tif 000004
表１から分かるように、エゴノール誘導体はメラノーマＢ１６細胞に対し、メラニン生成抑制剤であるアルブチンと同程度のメラニン生成抑制作用（美白作用）を示しており、メラニン生成抑制剤、美白剤として有用であることが明らかである。
なお、エゴノール誘導体の場合、顕微鏡写真によっても、アルブチンの場合と同程度Ｂ−１６細胞の黒色が抑えられており、優れたメラニン生成抑制効果及び美白効果を有していることが確認された。
［実施例２〜３、比較例１〜２］美白効果の測定
2003047565.tif 000005
（製法）上記組成物の処方中の、水相、アルコール相をそれぞれ調製後、両者を混合、可溶化し、組成物（ローション）を得た。
（試験方法）
パネラー２０名を夏期の午前１１時から午後１時までの時間、２日間にわたり太陽光に計４時間さらした。さらされたパネラーの上腕内側部皮膚を対象とし、太陽光にさらされた日から５日後より、上記組成物（ローション）を朝夕１回ずつ５週間塗布した。
（評価方法）
使用後の試験結果を以下の判定基準で評価した。
（判定基準）
著効：色素沈着がほとんど目立たなくなった。
有効：色素沈着が非常にうすくなった。
やや有効：色素沈着がうすくなった。
無効：変化なし。
（判定）
◎：パネラーのうち１６人以上が有効以上の効果を示した。
○：パネラーのうち１１〜１５人が有効以上の効果を示した。
△：パネラーのうち６〜１０人が有効以上の効果を示した。
×：パネラーのうち５人以下が有効以上の効果を示した。
評価結果を表２に示す。
2003047565.tif 000006
表２から明らかなように、エゴノール誘導体を含有する組成物（ローション）はメラニン色素の沈着を防ぎ、メラニン生成抑制作用、美白作用が見られた。一方、試験化合物が無添加の場合（比較例１）、ハイドロキノンを配合した場合（比較例２）は、いずれも効果が見られなかった。
［実施例４〜７、比較例３〜４］美白効果の測定
以下の成分と配合量の乳化組成物を常法にて製造した。なお、エゴノール誘導体の配合量と併用した美白剤成分の成分名及び配合量については表３に記載した。
2003047565.tif 000007
2003047565.tif 000008
（試験方法）
明らかにしみ、そばかすのある健常人ボランティア３０名を５名ずつの６群に分け、実施例４〜７、比較例３〜４の組成物を１日２回朝及び就寝前に塗布させた。そして、化粧をしない状態で試験開始日及び４週間後にカラー写真を撮影し、試験開始日に比べた色の状態を目視で比較判定した。
（結果）
判定結果を表４に示した。表４には判定により各判定項目に該当する人の人数を示している。
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表４から明らかなように、エゴノール誘導体を、アスコルビン酸２−グルコシドまたはアスコルビン酸リン酸エステルマグネシウム塩と併用して配合することによってエゴノール誘導体の美白効果、すなわちメラニン生成抑制効果が相乗的に向上することが分かる。
以下、種々の処方の組成物を常法により調製した本発明の実施例を示す。なお、いずれの実施例においても優れたメラニン生成抑制効果、美白効果が見られた。
［実施例８］クリーム
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［実施例９］乳液
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［実施例１０］ジェル
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［実施例１１］ジェル
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［実施例１２］エッセンス
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［実施例１３］パック
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［実施例１４］化粧水
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［実施例１５］化粧水
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［実施例１６］軟膏
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［実施例１７］軟膏
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［実施例１８］ファンデーション
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［実施例１９］健康ドリンク
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［実施例２０］健康ドリンク
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［実施例２１］健康ドリンク
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［実施例２２］健康食品タブレット
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［実施例２３］健康食品タブレット
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［実施例２４］健康食品タブレット
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［実施例２５］健康食品タブレット
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産業上の利用可能性
以上、詳述したように本発明によれば、新規なメラニン生成抑制剤、美白剤並びにメラニン生成抑制作用及び美白作用を有した組成物が得られる。さらに、メラニン生成抑制作用及び美白作用を有し、紫外線照射後の日焼け皮膚の美白、また日焼け等によるしみ、そばかす、肝斑等の皮膚の色素沈着の予防、改善及び治療に優れた効果を有する化粧料、医薬、皮膚外用剤、食品が得られる。さらに、本発明の組成物は、エゴノール誘導体とともに美白剤成分を併用して配合することにより、メラニン生成抑制効果、美白効果を相乗的に向上させることができる。
【国際調査報告】
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