(57)【要約】ポリプレニルカルボン酸（例えば３，７，１１，１５−テトラメチル−２，４，６，１０，１４−ヘキサデカペンタエン酸）などのポリプレニル系化合物を有効成分として含むＴＧＦ−α発現抑制剤、並びに肝炎及び／又は肝硬変細胞の形質転換抑制剤。肝臓における癌の発症、再発（二次発癌）、又は悪性化の抑制剤として用いることができる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ポリプレニル系化合物を有効成分として含むＴＧＦ−α発現抑制剤。
【請求項２】
ポリプレニル系化合物がポリプレニルカルボン酸である請求の範囲第１項に記載のＴＧＦ−α発現抑制剤。
【請求項３】
ポリプレニルカルボン酸が３，７，１１，１５−テトラメチル−２，４，６，１０，１４−ヘキサデカペンタエン酸である請求の範囲第２項に記載のＴＧＦ−α発現抑制剤。
【請求項４】
ポリプレニルカルボン酸が（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ，１０Ｅ）−３，７，１１，１５−テトラメチル−２，４，６，１０，１４−ヘキサデカペンタエン酸である請求の範囲第２項に記載のＴＧＦ−α発現抑制剤。
【請求項５】
肝炎及び／又は肝硬変細胞の形質転換抑制のために用いる請求の範囲第１項ないし第４項のいずれか１項に記載のＴＧＦ−α発現抑制剤。
【請求項６】
肝癌の発症、再発（二次発癌）、又は悪性化の抑制のために用いる請求の範囲第１項ないし第４項のいずれか１項に記載のＴＧＦ−α発現抑制剤。
【請求項７】
薬学的に許容されうる製剤担体を含有する医薬組成物の形態である請求の範囲第１項ないし第６項のいずれか１項に記載のＴＧＦ−α発現抑制剤。
【請求項８】
経口投与のための医薬組成物である請求の範囲第７項に記載のＴＧＦ−α発現抑制剤。
【請求項９】
ポリプレニル系化合物を有効成分として含む肝炎細胞及び／又は肝硬変細胞の形質転換抑制剤。
【請求項１０】
ポリプレニル系化合物がポリプレニルカルボン酸である請求の範囲第９項に記載の形質転換抑制剤。
【請求項１１】
ポリプレニルカルボン酸が３，７，１１，１５−テトラメチル−２，４，６，１０，１４−ヘキサデカペンタエン酸である請求の範囲第９項に記載の形質転換抑制剤。
【請求項１２】
ポリプレニルカルボン酸が（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ，１０Ｅ）−３，７，１１，１５−テトラメチル−２，４，６，１０，１４−ヘキサデカペンタエン酸である請求の範囲第９項に記載の形質転換抑制剤。
【請求項１３】
薬学的に許容されうる製剤担体を含有する医薬組成物の形態である請求の範囲第９項ないし第１１項のいずれか１項に記載の形質転換抑制剤。
【請求項１４】
経口投与のための医薬組成物である請求の範囲第１３項に記載の形質転換抑制剤。
【発明の詳細な説明】
技術分野
本発明は、ポリプレニル系化合物を有効成分とするトランスフォーミング（形質転換）増殖因子−α（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ−α；ＴＧＦ−α：以下、本明細書において「ＴＧＦ−α」と記載する場合がある。）発現抑制剤に関するものであり、該発現抑制による肝炎細胞又は肝硬変細胞の形質転換抑制剤、並びに肝癌の発症、再発（二次発癌）又は悪性化抑制剤に関するものである。
背景技術
平成１１年の悪性新生物による死亡数は２９万６千人で死因の１位を占め、そのうち肝細胞癌による死者は３万人を超えている。その数は年々増えており、ここ２０年間で約３倍に増加している。わが国で発生する肝細胞癌の主な原因として、９０％以上はＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ：以下、本明細書において「ＨＢＶ」と記載する場合がある。）又はＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ：以下、本明細書において「ＨＣＶ」と記載する場合がある。）の持続感染（慢性肝炎）によるといわれている。また、肝癌はその治療後、年率約２０〜２５％の再発（二次発癌）が認められ、予後不良の疾患である。そのため、肝癌の早期発見、早期治療と共に、今後の重要な課題として慢性肝炎からの肝発癌の抑制並びに肝癌治療後の再発の抑制が挙げられる。
トランスフォーミング（形質転換）増殖因子−α（ＴＧＦ−α）は、肝発癌及び肝癌細胞の悪性化（プロモーション／プログレッション）に深く関与していると考えられている増殖因子である。肝でのＴＧＦ−α発現レベルは、ウイルス性肝炎における炎症の重篤度に関連しており、また、肝炎ウイルスによる肝硬変でのＴＧＦ−αの過剰発現が肝炎ウイルスの複製に関係があることも報告されている。実際、ＨＢＶ及びＨＣＶの感染による慢性肝疾患患者の肝組織では、健常人に比べてＴＧＦ−αの発現が高まっていることが確認されており、また、肝癌患者における癌組織及び癌周囲の非癌部組織でもＴＧＦ−αの高い発現が認められることから、肝炎ウイルス感染から肝癌の発症・発達における過程でＴＧＦ−αが極めて重要な役割を果たしている可能性が示唆されている。
実験的には、ラット肝細胞のトランスフォーメーション（形質転換）はＴＧＦ−αの発現亢進に関連しており、肝化学発癌物質及び肝炎ウイルスにより形質転換した肝細胞でＴＧＦ−αが高レベルに発現することが確認されている。また、ＴＧＦ−αを過剰発現させたトランスジェニックマウスでは、自然発生的に肝癌が高率に発症すると共に、本マウスにおいては化学発癌物質及び癌遺伝子による肝発癌の劇的な亢進が認められる。
このように、ＴＧＦ−αは肝発癌及び肝癌細胞の悪性化に深く関与していることから、ＴＧＦ−αを標的にして新しい肝癌治療戦略が成り立つことが提唱されている。
ウイルス性慢性肝炎患者から肝癌が発症する正確なメカニズムは明らかにされていないが、肝幹細胞（ｏｖａｌ  ｃｅｌｌ：以下、本明細書においてｏｖａｌ  ｃｅｌｌと記載する場合がある。）が重要な役割を担っている可能性が指摘されている。すなわち、ｏｖａｌ  ｃｅｌｌは慢性肝炎もしくは肝硬変の患者において増殖が見られ、肝病変が重篤になる程にｏｖａｌ  ｃｅｌｌの数が多くなることが確認されている。これは、肝炎ウイルスが肝における慢性炎症を引き起こしてｏｖａｌ  ｃｅｌｌの分裂増殖活性を高めることによるが、肝炎ウイルスは同時にｏｖａｌ  ｃｅｌｌに対して発癌イニシエーターとしても作用している。これらのことより、肝炎ウイルスによりイニシエーションを受けたｏｖａｌ  ｃｅｌｌが、慢性炎症によって分裂増殖活性が亢進し（プロモーション）、癌化（発癌）するメカニズムが示唆されている。
また、動物を用いた多くの肝化学発癌実験においても、肝癌が脱分化した肝細胞に由来していることを示す報告がある一方で、肝癌細胞のフェノタイプがｏｖａｌ  ｃｅｌｌと類似していることからｏｖａｌ  ｃｅｌｌを発生源とする肝発癌の可能性が指摘されている。
ｏｖａｌ  ｃｅｌｌとＴＧＦ−αとの関連についての研究報告も多い。ＴＧＦ−αはｏｖａｌ  ｃｅｌｌの細胞分裂促進物質（ｍｉｔｏｇｅｎ）であり、ｏｖａｌ  ｃｅｌｌ自身あるいは周囲肝組織で産生されたＴＧＦ−αがそのレセプターである上皮増殖因子レセプター（ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ；ＥＧＦＲ）を介してｏｖａｌ  ｃｅｌｌの増殖を刺激する。また、ヒトにおけるウイルス性慢性肝炎で著明に認められるｏｖａｌ  ｃｅｌｌは、肝炎ウイルス感染の標的細胞であると同時にＴＧＦ−αの発現亢進を伴うことが確認されており、肝炎ウイルスが発癌の初期段階に作用（イニシエーション）し、ＴＧＦ−αがその後のプロモーターとして関与することにより、ｏｖａｌ  ｃｅｌｌ自身が肝癌細胞へと移行する可能性が考えられる。
このように、ｏｖａｌ  ｃｅｌｌにおけるウイルスの存在とＴＧＦ−α発現の相互作用が、ｏｖａｌ  ｃｅｌｌを癌化に導くための重要な因子であると考えられる。同時に、ｏｖａｌ  ｃｅｌｌ周囲の肝炎／肝硬変組織で過剰発現しているＴＧＦ−αも、レセプターを介してｏｖａｌ  ｃｅｌｌの癌化を促進させている可能性が高い。これらのことより、ウイルス性慢性肝炎で認められるｏｖａｌ  ｃｅｌｌ内のＴＧＦ−α発現を低下させると共に、肝炎／肝硬変組織におけるＴＧＦ−α発現を抑制することは、肝癌の先駆細胞としてのｏｖａｌ  ｃｅｌｌを沈静化させて肝発癌の制御に結びつく、極めて重要なメカニズムと考えられる。
以上述べたように、ＴＧＦ−αは肝炎及び肝硬変細胞の形質転換、並びに肝臓における発癌及び肝癌細胞の悪性化に密接に関連しており、肝臓中の肝組織細胞及びｏｖａｌ  ｃｅｌｌにおいて過剰発現状態にあるＴＧＦ−αを制御することが、肝炎及び肝硬変細胞の形質転換抑制、並びに肝臓における発癌及び肝癌細胞の悪性化抑制に繋がる可能性が高い。
ポリプレニル系化合物の一つである（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ，１０Ｅ）−３，７，１１，１５−テトラメチル−２，４，６，１０，１４−ヘキサデカペンタエン酸（開発コード「ＮＩＫ−３３３」）は、レチノイン酸結合蛋白及びレチノイン酸受容体に対して親和性を示すことや、肝癌細胞における分化誘導作用及びアポトーシス誘導作用が知られている。臨床においては、ＮＩＫ−３３３は一年間の長期投与により肝癌根治治療後の再発を有意に抑制したことから、肝癌再発抑制作用を有することが確認されている。さらに、上記の投与中、肝機能障害及び他のレチノイドに見られる副作用は殆ど認められず、安全な薬剤である（引用文献：Ｎ．Ｅｎｇ．Ｊ．Ｍｅｄ．３３４、１５６１−１５６７（１９９６））。
ポリプレニル系化合物が株化肝癌細胞のＴＧＦ−αの発現を抑制することは既に報告されている（引用文献：Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２１９、１００−１０４（１９９６））。しかしながら、ポリプレニル系化合物が生体肝組織において、肝化学発癌物質投与により肝組織中で発現亢進したＴＧＦ−αを抑制すること、並びに肝癌の先駆細胞と考えられているｏｖａｌ  ｃｅｌｌにおけるＴＧＦ−α発現を抑制することは全く知られていない。
発明の開示
従って、本発明はＴＧＦ−αの発現抑制による肝炎及び／又は肝硬変細胞の形質転換抑制剤、並びに肝臓における発癌抑制剤及び癌悪性化抑制剤等を提供することを目的とするものである。
本発明者らは、肝炎及び／又は肝硬変細胞の形質転換抑制剤（肝炎又は肝硬変の悪性化抑制剤）、並びに肝臓における発癌抑制剤及び癌悪性化抑制剤を見出すべく種々研究を重ねてきた。その結果、ポリプレニル系化合物が、肝化学発癌物質により形質転換した肝組織細胞におけるＴＧＦ−αの発現を抑制し、さらに肝癌の先駆細胞としての可能性が強く示唆されているｏｖａｌ  ｃｅｌｌにおけるＴＧＦ−αの発現を抑制することを見出し、本発明を完成するに至った。
すなわち、本発明は、ポリプレニル系化合物を有効成分とするＴＧＦ−αの発現抑制剤に関するものであり、ポリプレニル系化合物を有効成分として含む肝炎及び／又は肝硬変細胞の形質転換抑制剤（肝炎又は肝硬変の悪性化抑制剤）に関するものである。さらに、本発明は、ポリプレニル系化合物を有効成分として含むＴＧＦ−αの発現抑制による肝炎細胞又は肝硬変細胞の形質転換抑制剤、並びに肝癌の発症、再発（二次発癌）、又は悪性化の抑制剤に関するものである。
別の観点からは、上記の医薬の製造のためのポリプレニル系化合物の使用；ヒトを含む哺乳類動物においてＴＧＦ−αの発現抑制により肝炎細胞又は肝硬変細胞の形質転を抑制する方法であって、並びにＴＧＦ−αの発現抑制により肝臓における発癌又は癌細胞の悪性化を抑制する方法であって、ポリプレニル系化合物の有効量をヒトを含む哺乳類動物に投与する工程を含む方法；並びに肝炎細胞又は肝硬変細胞の形質転換を抑制する方法であって、並びに肝臓における癌の発症、再発（二次発癌）、又は悪性化を抑制する方法であって、抑制を必要とするヒトを含む哺乳類動物にポリプレニル系化合物の抑制有効量を投与する工程を含む方法が本発明により提供される。
発明を実施するための最良の形態
本発明に使用されるポリプレニル系化合物としては、ポリプレニルカルボン酸である３，７，１１，１５−テトラメチル−２，４，６，１０，１４−ヘキサデカペンタエン酸、ゲラニルゲラノイン酸（ＧＧＡ：ｇｅｒａｎｙｌ  ｇｅｒａｎｏｉｃ  ａｃｉｄ）、フィタン酸（ｐｈｙｔａｎｉｃ  ａｃｉｄ）などを挙げることができ、更にポリプレニルカルボン酸エステル、ビタミンＫ１、ビタミンＫ２などを挙げることができる。好ましい化合物としてはポリプレニルカルボン酸、特に３，７，１１，１５−テトラメチル−２，４，６，１０，１４−ヘキサデカペンタエン酸を挙げることができ、最も好ましい化合物として（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ，１０Ｅ）−３，７，１１，１５−テトラメチル−２，４，６，１０，１４−ヘキサデカペンタエン酸（ＮＩＫ−３３３）を挙げることができる。
本発明で使用されるポリプレニル系化合物は、公知の方法（日本国特許公報昭６３−３２０５８号、Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．（Ｃ），２１５４項，１９６６年）により合成することができる。
本発明のＴＧＦ−α発現抑制剤は、通常、ポリプレニル系化合物を含む医薬組成物を調製し、経口又は非経口のいずれか適当な投与方法により投与することができる。経口投与に適する医薬組成物の形態としては、例えば、錠剤、顆粒剤、カプセル剤、軟カプセル剤、丸剤、散剤、液剤などが挙げられ、非経口投与に適する医薬組成物の形態としては、例えば、注射剤、坐剤などが挙げられる。これらの医薬組成物は、ポリプレニル系化合物又はその薬理学上許容し得る塩と通常の製剤担体の１種又は２種以上とを用いて常法により調製することができる。
例えば、経口投与に適する医薬の場合には、製剤担体として、乳糖、ブドウ糖、コーンスターチ、ショ糖などの賦形剤、カルボキシメチルセルロースカルシウム、ヒドロキシプロピルセルロースなどの崩壊剤、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ポリエチレングリコール、硬化油などの滑沢剤、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ポリビニルアルコール、ゼラチン、アラビアゴムなどの結合剤、グリセリン、エチレングリコールなどの湿潤剤、その他必要に応じて界面活性剤、矯味剤などを使用して所望の医薬組成物を調製することができる。
また、非経口投与に適する医薬の場合には、製剤担体として、水、エタノール、グリセリン、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油、寒天、トラガラントガムなどの希釈剤を用いて、必要に応じて溶解補助剤、懸濁化剤、乳化剤、安定剤、緩衝剤、等張化剤、保存剤、無痛化剤などを使用することができる。
本発明のＴＧＦ−α発現抑制剤の投与量は、特に限定されないが、例えば、成人１日あたり経口投与の場合には５０〜１２００ｍｇ、好ましくは３００〜９００ｍｇ、非経口の場合は１日１〜１２００ｍｇ、好ましくは５〜９００ｍｇの範囲である。上記の投与量をそれぞれ１日１〜３回に分けて投与することにより所望の抑制効果が期待できる。
実施例
以下に実施例を挙げて本発明を更に詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。以下の実施例では、ポリプレニル系化合物として（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ，１０Ｅ）−３，７，１１，１５−テトラメチル−２，４，６，１０，１４−ヘキサデカペンタエン酸（以下、「ＮＩＫ−３３３」と呼ぶ。）を用いた。
実施例１
ラットでの肝化学発癌物質３’−メチル−４−ジメチルアミノアゾベンゼン（３’−Ｍｅｔｈｙｌ−４−ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏａｚｏｂｅｎｚｅｎｅ：３’−ＭｅＤＡＢ）によるＴＧＦ−α陽性のｏｖａｌ  ｃｅｌｌ誘発に対する効果
動物はＦｉｓｃｈｅｒ系雄性ラット（Ｆ３４４／Ｎ  Ｓｌｃ、６週齢）を用い、肝化学発癌物質３’−ＭｅＤＡＢを固型飼料に０．０６％の割合に調製した飼料を４週間投与し、ｏｖａｌ  ｃｅｌｌを誘発した。ＮＩＫ−３３３はダイズ油に懸濁し、８０ｍｇ／ｋｇの用量を３’−ＭｅＤＡＢと併行して４週間（１回／日）経口投与した。なお、対照群にはダイズ油（５ｍＬ／ｋｇ）を経口投与した。３’−ＭｅＤＡＢ投与開始４週間後に麻酔下にて肝臓を摘出し１０％ホルマリン固定後パラフィン包埋を行い、抗ＴＧＦ−α抗体を用いた免疫組織染色を施し、ＴＧＦ−α発現の程度を顕微鏡で観察した。
第１図〜第３図は、３’−ＭｅＤＡＢの４週間投与により誘発されたＴＧＦ−α陽性のｏｖａｌ  ｃｅｌｌ誘発に対し、ＮＩＫ−３３３の８０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙを４週間同時投与した場合の抑制効果を示した写真である（抗ＴＧＦ−α抗体による免疫組織学的染色）。なお、同様な所見は同時に行われた他の動物においても得られている。
第１図は、無処置動物の肝組織を示す。ＴＧＦ−α陽性を示すｏｖａｌ  ｃｅｌｌの発現は全く認められない。
第２図は、対照群（３’−ＭｅＤＡＢのみを投与）の肝組織に発現したｏｖａｌ  ｃｅｌｌにおける細胞質内の強いＴＧＦ−α陽性所見を示す。
第３図は、３’−ＭｅＤＡＢにより発現したｏｖａｌ  ｃｅｌｌが、ＮＩＫ−３３３  ８０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ投与によりＴＦＧ−α弱陽性を呈し、ＴＧＦ−α発現が低下していることを示す。
上記と同一の試験における別の部位の写真撮影を行い、第１０図〜第１２図に示す結果を得た。
第１０図は、無処置動物の肝組織を示す。ＴＧＦ−α陽性を示すｏｖａｌ  ｃｅｌｌの発現は認められない。
第１１図は、３’−ＭｅＤＡＢ投与により対照群の肝組織に発現したｏｖａｌ  ｃｅｌｌにおける細胞質内の強いＴＧＦ−α陽性所見を示す。
第１２図は、３’−ＭｅＤＡＢにより発現したＴＧＦ−α強陽性のｏｖａｌ  ｃｅｌｌの数が、ＮＩＫ−３３３  ８０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ投与により減少していることを示す。
実施例２
ラットでの肝化学発癌物質Ｎ−ニトロソジエチルアミン（Ｎ−Ｎｉｔｒｏｓｏｄｉｅｔｈｙｌ−ａｍｉｎｅ：ＤＥＮ）投与後の非腫瘍部肝組織におけるＴＧＦ−α発現に対する効果
動物はＦｉｓｃｈｅｒ系雄性ラット（Ｆ３４４／Ｎ  Ｓｌｃ、６週齢）を用い、肝化学発癌物質ＤＥＮを５週間飲水投与（濃度：４０ｐｐｍ）し、その後１５週間通常の飲水で飼育し肝細胞癌を誘発した。ＮＩＫ−３３３はダイズ油に懸濁し、８０ｍｇ／ｋｇの用量をＤＥＮ投与終了１週間後より１４週間（１回／日）経口投与した。なお、対照群にはダイズ油（５ｍＬ／ｋｇ）を経口投与した。ＤＥＮ投与開始２０週間後に麻酔下にて肝臓を摘出し、１０％ホルマリン固定後パラフィン包埋を行い、抗ＴＧＦ−α抗体を用いた免疫組織染色を施し、ＴＧＦ−α発現の程度を顕微鏡で観察した。
第４図〜第６図は、ＤＥＮの５週間処置後に１週間休薬し、続いてＮＩＫ−３３３  ８０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙを１４週間投与した場合の非腫瘍部肝組織におけるＴＧＦ−α発現に対する抑制効果を示す写真である（抗ＴＧＦ−α抗体による免疫組織染色）。なお、同様な所見は同時に行われた他の動物においても得られている。
第４図は、無処置動物の肝組織を示す。ＴＧＦ−αの発現は殆ど認められない。
第５図は、対照群（ＤＥＮのみを投与）の非腫瘍部肝組織におけるＴＧＦ−α発現を示す。中心静脈周囲の肝組織にＴＧＦ−αの強い陽性所見が認められる。
第６図は、ＤＥＮにより中心静脈周囲の肝組織に発現したＴＧＦ−αが、ＮＩＫ−３３３  ８０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ投与によりほぼ陰性化した結果を示す。
上記と同一の試験における別の部位の写真撮影を行い、第７図〜第９図に示す結果を得た。
第７図は、無処置動物の肝組織を示す。ＴＧＦ−αの発現は殆ど認められない。
第８図は、ＤＥＮ投与による対照群の非腫瘍部肝組織におけるＴＧＦ−α発現を示す。中心静脈周囲の肝組織にＴＧＦ−αの強い陽性所見が認められる。
第９図は、ＤＥＮにより中心静脈周囲の肝組織に発現したＴＧＦ−αが、ＮＩＫ−３３３  ８０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ投与によりほぼ陰性化した結果を示す。
実施例３
ラットでのＤ−ガラクトサミン塩酸塩により誘発したｏｖａｌ  ｃｅｌｌにおけるＴＧＦ−α発現に対する効果
動物はＳＤ系雄性ラット（Ｃｒｊ／ＣＤ（ＳＤ）、６週齢）を用い、生理食塩水で２００ｍｇ／ｍＬに調製したＤ−ガラクトサミン塩酸塩５ｍＬ／ｋｇを１回腹腔内投与し、ｏｖａｌ  ｃｅｌｌを誘発した。ＮＩＫ−３３３はダイズ油に懸濁し、２００ｍｇ／ｋｇの用量を１〜６日間経口投与した。なお、対照群にはダイズ油（２ｍＬ／ｋｇ）を経口投与した。投薬開始翌日より７日目まで経時的に麻酔下にて肝臓を摘出し、１０％ホルマリン固定後パラフィン包埋を行い、抗ＴＧＦ−α抗体を用いた免疫組織染色を施し、ＴＧＦ−α発現の程度を顕微鏡で観察した。
第１３図〜第１５図は、Ｄ−ガラクトサミン塩酸塩の１回投与により誘発されたｏｖａｌ  ｃｅｌｌにおけるＴＧＦ−α発現に対し、ＮＩＫ−３３３の２００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙを４日間投与した場合の抑制効果を示す写真である（抗ＴＧＦ−α抗体による免疫組織染色）。なお、同様な所見は同時に行われた他の動物においても得られている。
第１３図は、無処置動物の肝組織を示す。明らかなＴＧＦ−α陽性所見を示す細胞は認められない。
第１４図は、Ｄ−ガラクトサミン塩酸塩投与により対照群の肝組織に発現したｏｖａｌ  ｃｅｌｌにおいて、細胞質内に強いＴＧＦ−α陽性が認められた結果を示す。
第１５図は、Ｄ−ガラクトサミン塩酸塩により発現したｏｖａｌ  ｃｅｌｌが、ＮＩＫ−３３３  ２００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ投与によりＴＧＦ−α弱陽性を呈し、ＴＧＦ−α発現が低下している結果を示す。
産業上の利用可能性
ポリプレニル系化合物は、肝炎細胞又は肝硬変細胞の形質転換、あるいは肝臓における発癌又は癌細胞の悪性化に関与しているＴＧＦ−αを抑制することから、肝炎又は肝硬変細胞の形質転換抑制として、例えば肝炎細胞又は肝硬変の悪性化抑制剤として用いることができ、並びに肝臓における癌の発症、再発（二次発癌）、又は悪性化の抑制剤として有用である。
【図面の簡単な説明】
第１図は、無処置動物の肝組織の写真を示す。ＴＧＦ−α陽性を示すｏｖａｌ  ｃｅｌｌの発現は全く認められない。
第２図は、対照群（肝化学発癌物質３’−ＭｅＤＡＢのみを投与）の肝組織に発現したｏｖａｌ  ｃｅｌｌが、細胞質内に強いＴＧＦ−α陽性所見（濃褐色の染色部分はＴＧＦ−αが発現していることを示す）を示す写真である。
第３図は、３’−ＭｅＤＡＢにより発現したｏｖａｌ  ｃｅｌｌがＮＩＫ−３３３  ８０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ投与によりＴＧＦ−α弱陽性を呈し（濃褐色の染色部分が第２図に比べて少ないことを示す）、ＴＧＦ−α発現が低下していることを示す写真である。
第４図は、無処置動物の肝組織の写真を示す。ＴＧＦ−αの発現は殆ど認められない。
第５図は、対照群（肝化学発癌物質ＤＥＮのみを投与）の非腫瘍部肝組織におけるＴＧＦ−α発現を示した写真である。中心静脈周囲の肝組織にＴＧＦ−αの強い陽性所見（濃褐色の染色部分はＴＧＦ−αが発現していることを示す）が認められる。
第６図は、ＤＥＮにより中心静脈周囲の肝組織に発現したＴＧＦ−αが、ＮＩＫ−３３３  ８０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ投与によりほぼ陰性化した像（濃褐色の染色部分が殆ど見られないことを示す）を示す写真である。
第７図は、無処置動物の肝組織の写真を示す。ＴＧＦ−αの発現は殆ど認められない。
第８図は、ＤＥＮ投与による対照群の非腫瘍部肝組織におけるＴＧＦ−α発現を示す写真である。中心静脈周囲の肝組織にＴＧＦ−αの強い陽性所見（濃褐色の染色部分はＴＧＦ−αが発現していることを示す）が認められる。
第９図は、ＤＥＮにより中心静脈周囲の肝組織に発現したＴＧＦ−αが、ＮＩＫ−３３３  ８０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ投与によりほぼ陰性化した像（濃褐色の染色部分が殆ど見られないことを示す）を示す写真である。
第１０図は、無処置動物の肝組織の写真を示す。ＴＧＦ−α陽性を示すｏｖａｌ  ｃｅｌｌの発現は認められない。
第１１図は、３’−ＭｅＤＡＢ投与により対照群の肝組織に発現したｏｖａｌ  ｃｅｌｌが、細胞質内に強いＴＧＦ−α陽性所見を示す像（濃褐色の染色部分はＴＧＦ−αが発現していることを示す）を示す写真である。
第１２図は、３’−ＭｅＤＡＢにより発現したＴＧＦ−α強陽性のｏｖａｌ  ｃｅｌｌの数が、ＮＩＫ−３３３  ８０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ投与により減少していることを示す像（濃褐色に染まる細胞の数が第１１図に比べて少ないことを示す）を示す写真である。
第１３図は、無処置動物の肝組織の写真を示す。明らかなＴＧＦ−α陽性所見を示す細胞は認められない。
第１４図は、Ｄ−ガラクトサミン塩酸塩投与により対照群の肝組織に発現したｏｖａｌ  ｃｅｌｌが、細胞質内に強いＴＧＦ−α陽性所見を示す像（濃褐色の染色部分はＴＧＦ−αが発現していることを示す）を示す写真である。
第１５図は、Ｄ−ガラクトサミン塩酸塩により発現したｏｖａｌ  ｃｅｌｌが、ＮＩＫ−３３３  ２００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ投与によりＴＧＦ−α弱陽性を呈する像（濃褐色の染色部分が第１４図に比べて少ないことを示す）を示す写真である。ＴＧＦ−α発現が低下していることを示す。
【図１】
2003097034.tif 000002
【図２】
2003097034.tif 000003
【図３】
2003097034.tif 000004
【図４】
2003097034.tif 000005
【図５】
2003097034.tif 000006
【図６】
2003097034.tif 000007
【図７】
2003097034.tif 000008
【図８】
2003097034.tif 000009
【図９】
2003097034.tif 000010
【図１０】
2003097034.tif 000011
【図１１】
2003097034.tif 000012
【図１２】
2003097034.tif 000013
【図１３】
2003097034.tif 000014
【図１４】
2003097034.tif 000015
【図１５】
2003097034.tif 000016
【国際調査報告】
2003097034.tif 000017
2003097034.tif 000018
2003097034.tif 000019
2003097034.tif 000020
2003097034.tif 000021
2003097034.tif 000022
2003097034.tif 000023