(57)【要約】本発明は、糖尿病治療剤の製造原料として有用な新規結晶を提供する。（Ｒ）−２−（２−アミノチアゾール−４−イル）−４’−［２−［（２−ヒドロキシ−２−フェニルエチル）アミノ］エチル］酢酸アニリドのα型結晶及びβ型結晶に関する。当該α型結晶は吸湿性を示さず、医薬品として使用可能な安定性を有し、工業生産における大量合成に有用である。β型結晶も比較的吸湿性を示さず、α型結晶の製造中間体としても有用である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
（Ｒ）−２−（２−アミノチアゾール−４−イル）−４’−［２−［（２−ヒドロキシ−２−フェニルエチル）アミノ］エチル］酢酸アニリドのα型結晶。
【請求項２】
ＤＳＣ分析で１４２〜１４６℃に熱吸収ピークを有する、（Ｒ）−２−（２−アミノチアゾール−４−イル）−４’−［２−［（２−ヒドロキシ−２−フェニルエチル）アミノ］エチル］酢酸アニリドのα型結晶。
【請求項３】
粉末Ｘ線回折で２θ（°）５．３２，８．０８，１５．２８，１７．８８，１９．０４，２０．２０，２３．１６及び２４．３４付近に主ピークを有する、（Ｒ）−２−（２−アミノチアゾール−４−イル）−４’−［２−［（２−ヒドロキシ−２−フェニルエチル）アミノ］エチル］酢酸アニリドのα型結晶。
【請求項４】
ＤＳＣ分析で１４２〜１４６℃に熱吸収ピークを有し、粉末Ｘ線回折で２θ（°）５．３２，８．０８，１５．２８，１７．８８，１９．０４，２０．２０，２３．１６及び２４．３４付近に主ピークを有する、（Ｒ）−２−（２−アミノチアゾール−４−イル）−４’−［２−［（２−ヒドロキシ−２−フェニルエチル）アミノ］エチル］酢酸アニリドのα型結晶。
【請求項５】
請求の範囲１記載の（Ｒ）−２−（２−アミノチアゾール−４−イル）−４’−［２−［（２−ヒドロキシ−２−フェニルエチル）アミノ］エチル］酢酸アニリドのα型結晶と、製薬学的に許容される担体とを含有する医薬組成物。
【請求項６】
請求の範囲１記載の（Ｒ）−２−（２−アミノチアゾール−４−イル）−４’−［２−［（２−ヒドロキシ−２−フェニルエチル）アミノ］エチル］酢酸アニリドのα型結晶と、製薬学的に許容される担体とを含有する糖尿病治療剤。
【請求項７】
（Ｒ）−２−（２−アミノチアゾール−４−イル）−４’−［２−［（２−ヒドロキシ−２−フェニルエチル）アミノ］エチル］酢酸アニリドのβ型結晶。
【請求項８】
ＤＳＣ分析で９０〜１１０℃及び１４２〜１４６℃に熱吸収ピークを有する、（Ｒ）−２−（２−アミノチアゾール−４−イル）−４’−［２−［（２−ヒドロキシ−２−フェニルエチル）アミノ］エチル］酢酸アニリドのβ型結晶。
【請求項９】
粉末Ｘ線回折で２θ（°）９．６８，１９．７６，２０．７２，２２．１０及び２３．５２付近に主ピークを有する、（Ｒ）−２−（２−アミノチアゾール−４−イル）−４’−［２−［（２−ヒドロキシ−２−フェニルエチル）アミノ］エチル］酢酸アニリドのβ型結晶。
【請求項１０】
ＤＳＣ分析で９０〜１１０℃及び１４２〜１４６℃に熱吸収ピークを有し、粉末Ｘ線回折で２θ（°）９．６８，１９．７６，２０．７２，２２．１０及び２３．５２付近に主ピークを有する、（Ｒ）−２−（２−アミノチアゾール−４−イル）−４’−［２−［（２−ヒドロキシ−２−フェニルエチル）アミノ］エチル］酢酸アニリドのβ型結晶。
【請求項１１】
請求の範囲７記載の（Ｒ）−２−（２−アミノチアゾール−４−イル）−４’−［２−［（２−ヒドロキシ−２−フェニルエチル）アミノ］エチル］酢酸アニリドのβ型結晶と、製薬学的に許容される担体とを含有する医薬組成物。
【請求項１２】
請求の範囲７記載の（Ｒ）−２−（２−アミノチアゾール−４−イル）−４’−［２−［（２−ヒドロキシ−２−フェニルエチル）アミノ］エチル］酢酸アニリドのβ型結晶と、製薬学的に許容される担体とを含有する糖尿病治療剤。
【発明の詳細な説明】
技術分野
本発明は、糖尿病治療剤として有用な（Ｒ）−２−（２−アミノチアゾール−４−イル）−４’−［２−［（２−ヒドロキシ−２−フェニルエチル）アミノ］エチル］酢酸アニリドのα型結晶又はβ型結晶、及びそれらを含有する医薬、特に糖尿病治療剤に関する。
背景技術
本発明者等は、下記化学構造式で示される、（Ｒ）−２−（２−アミノチアゾール−４−イル）−４’−［２−［（２−ヒドロキシ−２−フェニルエチル）アミノ］エチル］酢酸アニリドの２塩酸塩が、インスリン分泌促進作用とインスリン感受性増強作用を併せ持ち、さらに選択的β３受容体刺激作用に基づく抗肥満作用及び抗高脂血症作用を有し、糖尿病の治療に有用な化合物であることを報告している（国際公開ＷＯ９９／２０６０７号：実施例４１）。
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しかしながら、この２塩酸塩には強い吸湿性があり不安定であるため、医薬品としての使用には今なお問題があった。
医薬品は、湿度、温度、光等に長期間安定であるほか、製剤化工程における安定性も求められる。医薬品が強い吸湿性を有すると物理的化学的性質が変化したり、ロットによって水分量が異なるといった不都合を生じるので、常に乾燥室に保存したり、乾燥工程を設けることが必要となり工業的使用に好ましくない。
発明の開示
この様な技術水準下、本発明者等は、国際公開ＷＯ９９／２０６０７号の実施例４１に記載されている上記化合物につき鋭意検討し、新規な（Ｒ）−２−（２−アミノチアゾール−４−イル）−４’−［２−［（２−ヒドロキシ−２−フェニルエチル）アミノ］エチル］酢酸アニリドのα型結晶（以下単に「α型結晶」という）及びβ型結晶（以下単に「β型結晶」という）を見出した。これら２種の新規結晶はどちらもフリー体であり、粉末Ｘ線回折スペクトル及びＤＳＣ分析により区別される。先に取得していた２塩酸塩結晶は、相対湿度８０％以上において急激に吸湿性が上昇し、相対湿度９０％で約１４％の水分を保持し強い吸湿性があり不安定な結晶であった。
これに対し本発明の「α型結晶」は、相対湿度５％から９５％の全範囲において、水分保持量は０．２％以下であり吸湿性を示さない安定型結晶であり、医薬品としての使用に適している。また、「β型結晶」は相対湿度約２０％から重量の増加が認められ、約３％の水分を保持し弱い吸湿性を有するものの、準安定型結晶であり医薬品として使用することができる。また「β型結晶」は「α型結晶」の製造中間体として有用である。
α型結晶及びβ型結晶はそれぞれ下記の粉末Ｘ線回折スペクトルの結晶格子間隔［２θ（°）］及びＤＳＣ分析の熱吸収ピークにより特徴付けられる。なお、粉末Ｘ線回折はデータの性質上、結晶の同一性認定においては結晶格子間隔や全体的なパターンが重要であり、相対強度は結晶成長の方向、粒子の大きさ、測定条件によって多少は変わり得るものであるから、厳密に解されるべきではない。
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また、ＤＳＣ分析で、α型結晶は１４２〜１４６℃に、β型結晶は９０〜１１０℃及び１４２〜１４６℃にそれぞれ熱吸収ピークを有した。
粉末Ｘ線回折の測定には、ＭＡＣ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ＭＸＰ１８ＴＡＨＦ２２を用い、管球：Ｃｕ、管電流：４０ｍＡ、管電圧：４０ｋＶ、サンプリング幅：０．０２０°、走査速度：３°／ｍｉｎ、波長：１．５４０５６Å、測定回折角範囲（２θ）：５〜４０°の条件で測定した。
熱分析（ＤＳＣ及びＴＧＡ）はそれぞれ次の条件で測定した。
ＤＳＣ：Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ  Ｐｙｒｉｓ  １、２５℃〜２５０℃（１０℃／ｍｉｎ）、Ｎ２（２０ｍｌ／ｍｉｎ）、アルミニウム製サンプルパン。ＴＧＡ：Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ  ＴＧＡ  ７、２５℃〜２５０℃（１０℃／ｍｉｎ）、Ｎ２（２０ｍｌ／ｍｉｎ）、白金製サンプルパン。
核磁気共鳴スペクトル（ＮＭＲ）は、ＪＥＯＬ  ＪＮＭ−ＬＡ４００及びＪＥＯＬ  ＪＮＭ−Ａ５００を用いて測定し、内部標準としてテトラメチルシラン（ＴＭＳ）を使用した。
質量分析スペクトルはＪＥＯＬ  ＤＸ−３００及びＪＥＯＬ  ＬＸ−２０００を用いて測定した。
更に、本発明は、（Ｒ）−２−（２−アミノチアゾール−４−イル）−４’−［２−［（２−ヒドロキシ−２−フェニルエチル）アミノ］エチル］酢酸アニリドのα型結晶又はβ型結晶を含有する医薬、特に抗肥満作用及び抗高脂血症作用を併せ持つ糖尿病治療剤に関する。
本発明の結晶を医薬品の製造原料とする医薬は錠剤、丸剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤等による経口投与、あるいは吸入剤等による非経口投与のいずれの形態であってもよい。経口投与のための固体組成物としては、錠剤、散剤、顆粒剤等が用いられる。このような固体組成物においては、一つ又はそれ以上の活性物質が、少なくとも一つの不活性な賦形剤、例えば乳糖、マンニトール、ブドウ糖、ヒドロキシプロピルセルロース、微結晶セルロース、デンプン、ポリビニルピロリドン、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム等と混合される。組成物は、常法に従って、不活性な添加剤、例えばステアリン酸マグネシウム等の滑沢剤やカルボキシメチルスターチナトリウム等の崩壊剤、溶解補助剤を含有していてもよい。錠剤又は丸剤は必要により糖衣又は胃溶性若しくは腸溶性コーティング剤で被膜してもよい。投与量は症状、投与対象の年齢、性別等を考慮して個々の場合に応じて適宜決定されるが、通常経口投与の場合成人１日当たり０．０１ｍｇ／ｋｇ乃至１００ｍｇ／ｋｇ程度であり、これを１回で、あるいは２〜４回に分けて投与する。
（製造法）
α型結晶は、（Ｒ）−２−（２−アミノチアゾール−４−イル）−４’−［２−［（２−ヒドロキシ−２−フェニルエチル）アミノ］エチル］酢酸アニリドのβ型結晶に、再結晶溶媒（エタノール水溶液３７％〜５０％）を加え、約７０〜８０℃に加熱溶解後、およそ１時間に１０℃程度で、ゆっくりと冷却することにより得ることができる。工業生産における大スケールでの製造で晶析しやすいが、α型結晶を接種することで優先的に晶析させることができる。
β型結晶は、（Ｒ）−２−［［２−（４−アミノフェニル）エチル］アミノ］−１−フェニルエタノール一塩酸塩、２−アミノチアゾール−４−イル酢酸、濃塩酸及び水の混合液に１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド一塩酸塩を室温にて加え、その酸性溶液を中和しβ型結晶のウェットケーキを得ることができる。（ウェットケーキとは結晶が溶媒で湿っている状態を表す。）
また、本β型結晶に再結晶溶媒（エタノール水溶液３７％〜５０％）を加え、約７０〜８０℃にて加熱溶解後、外温を２０℃に設定し、急激に冷却しβ型結晶を得ることもできる。また、β型結晶を接種することで優先的に晶析させることもできる。
上述した通り、単離したβ型結晶は、加熱溶解後再度α型結晶へと変換することができることから、β型結晶は、α型結晶の製造中間体としても有用である。
発明を実施するための最良の形態
以下、実施例１〜４によって本発明を具体的に説明するが、これらは本発明の範囲を限定するものではない。原料化合物は、国際公開ＷＯ９９／２０６０７号に記載の方法とは異なる方法により製造したものもあるので参考例１〜３として示す。下記に参考例１〜３及び実施例１〜４の合成ルートを図示する。更に比較参考例として、（Ｒ）−２−（２−アミノチアゾール−４−イル）−４’−［２−［（２−ヒドロキシ−２−フェニルエチル）アミノ］エチル］酢酸アニリドの２塩酸塩結晶の製造方法を示す。
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参考例１
４−ニトロフェニルエチルアミン一塩酸塩５．９０ｋｇ、（Ｒ）−マンデル酸４．４３ｋｇ、トリエチルアミン２．９４ｋｇ及びＮ，Ｎ−ジメチルフォルムアミド２２ｌの混合物に対し、ヒドロキシベンズトリアゾール３．９３ｋｇ及び１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド一塩酸塩（ＥＤＣ）５．５８ｋｇを加え、室温付近にて２時間攪拌した。ＥＤＣ０．２８ｋｇをさらに加え、室温付近にて終夜攪拌した。反応液を１１０ｌの水で希釈し、酢酸エチル（６０ｌ，３０ｌ）で抽出した。有機層を１Ｍ塩酸水６０ｌ、２０％，炭酸カリウム水溶液６０ｌ及び水（６０ｌ，６０ｌ）にて順次洗浄し、１０〜１９℃にて減圧濃縮した。残渣をトルエン３５ｌにて加熱溶解（８７℃）後冷却し、２０℃にて終夜攪拌した。生じた結晶を濾取し、トルエン１０ｌにて洗浄した。真空乾燥し、（Ｒ）−２−ヒドロキシ−Ｎ−［２−（４−ニトロフェニル）エチル］−２−フェニルアセタミド７．６６ｋｇを淡黄色結晶として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）＝２．８７（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），３．３０−３．４６（２Ｈ，ｍ），４．８５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ），６．１２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ），７．２０−７．３３（５Ｈ，ｍ），７．４０（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），８．０４−８．１２（３Ｈ，ｍ）．ＦＡＢ−ＭＳ  ｍ／ｚ：３０１（Ｍ＋Ｈ）＋．
（別法）４−ニトロフェニルエチルアミン１／２硫酸塩を用いる製造方法
４−ニトロフェニルエチルアミン１／２硫酸塩９．７７ｇ、（Ｒ）−マンデル酸６．００ｇ、炭酸カリウム４．７０ｇ及びＮ，Ｎ−ジメチルフォルムアミド６０ｍｌの混合物に対し、ヒドロキシベンズトリアゾール６．１４ｇ及び１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド一塩酸塩（ＥＤＣ）８．７０ｇを加え、室温付近にて２時間攪拌した。ＥＤＣ０．８７ｇをさらに加え、室温付近にて終夜攪拌した。反応液を水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。有機層を１Ｍ塩酸水、２０％，炭酸カリウム水溶液及び水にて順次洗浄し、減圧濃縮した。残渣をトルエンにて再結晶し、（Ｒ）−２−ヒドロキシ−Ｎ−［２−（４−ニトロフェニル）エチル］−２−フェニルアセタミド１０．４ｇを淡黄色結晶として得た。
参考例２
（Ｒ）−２−ヒドロキシ−Ｎ−［２−（４−ニトロフェニル）エチル］−２−フェニルアセタミド７．５１ｋｇ、１，３−ジメチル−２−イミダゾリジノン２３ｌ及びテトラヒドロフラン２３ｌの混合物を−１８℃に冷却し、１Ｍボラン−テトラヒドロフラン溶液４９．４ｋｇを−７℃以下にて滴下した。その後、７０℃に昇温し、５時間攪拌した。反応混合物を−１２℃に冷却し、メタノール２．９ｋｇ及び濃塩酸５．９ｋｇを５℃以下にて加えた。６８℃にて１時間攪拌後、内容量が５０ｌになるように減圧濃縮した。３０％Ｋ２ＣＯ３水溶液６０ｋｇ及び水６ｌを加え、酢酸エチル７５ｌにて抽出した。有機層を７５ｌにて洗浄し、減圧濃縮した。残渣にイソプロパノール７５ｌを加え４０℃にて溶解し、濃塩酸２．４６ｋｇを加え結晶化し、２３℃にて終夜攪拌した。結晶を濾取し、イソプロパノール３８ｌにて洗浄した。真空乾燥し、（Ｒ）−２−［［２−（４−ニトロフェニル）エチル］アミノ］−１−フェニルエタノール一塩酸塩７．２９ｋｇを得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）＝３．００−３．０８（１Ｈ，ｍ），３．１５−３．３０（５Ｈ，ｍ），５．００−５．０５（１Ｈ，ｍ），６．２３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ），７．２９−７．３５（１Ｈ，ｍ），７．３６−７．４３（４Ｈ，ｍ），７．５７（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ），８．２１（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ），９．１２（２Ｈ，ｂｒ）．ＦＡＢ−ＭＳ  ｍ／ｚ：２８７（Ｍ＋Ｈ）＋．
参考例３
（Ｒ）−２−［［２−（４−ニトロフェニル）エチル］アミノ］−１−フェニルエタノール一塩酸塩１１．０ｋｇ、メタノール１１０ｌ及びウェット１０％パラジウム−炭素（ウェット率５４．２％）１．２０ｋｇの混合物を、水素雰囲気下にて、水素の吸入が停止するまで攪拌した。反応液を濾過し、濾液を減圧濃縮した。残渣にメタノール４０ｌを加え４０℃にて溶解し、ジイソプロピルエーテル２２０ｌを加え結晶化し、２０℃にて終夜攪拌した。結晶を濾取し、ジイソプロピルエーテル３０ｌにて洗浄した。真空乾燥し、（Ｒ）−２−［［２−（４−アミノフェニル）エチル］アミノ］−１−フェニルエタノール一塩酸塩９．４３ｋｇを得た。
（別法）晶析溶媒として酢酸エチルを使用する方法
（Ｒ）−２−［［２−（４−ニトロフェニル）エチル］アミノ］−１−フェニルエタノール一塩酸塩１５．０ｇ、メタノール９０ｍｌ及びウェット１０％パラジウム−炭素（ウェット率５４．２％）６５５ｍｇの混合物を、水素雰囲気下にて、水素の吸入が停止するまで攪拌し、反応液を濾過した。濾液を加熱しメタノール溶液を濃縮しつつ、断続的に酢酸エチルを加え、スラリー化した。生じた結晶を濾取し、酢酸エチルにて洗浄した。真空乾燥し、（Ｒ）−２−［［２−（４−アミノフェニル）エチル］アミノ］−１−フェニルエタノール一塩酸塩１２．９ｇを得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）＝２．７６−２．９０（２Ｈ，ｍ），２．９５−３．１６（４Ｈ，ｍ），４．９５−５．１１（３Ｈ，ｍ），６．２０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ），６．５３（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ），６．８９（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ），７．２８−７．４３（５Ｈ，ｍ），８．９７（１Ｈ，ｂｒ），９．２９（１Ｈ，ｂｒ）．ＦＡＢ−ＭＳ  ｍ／ｚ：２５７（Ｍ＋Ｈ）＋．
実施例１（β型結晶の製造）
（Ｒ）−２−［［２−（４−アミノフェニル）エチル］アミノ］−１−フェニルエタノール一塩酸塩８．００ｇ、２−アミノチアゾール−４−イル酢酸４．３２ｇ、濃塩酸２．６４ｇ及び水１２０ｍｌの混合液に１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド一塩酸塩（ＥＤＣ）５．７６ｇを室温にて加え１時間攪拌した。水酸化ナトリウム２．４０ｇ及び水４０ｍｌの混合液を反応液に滴下を行い結晶化した。生じた結晶を濾取し、水にて洗浄後、真空乾燥し、（Ｒ）−２−（２−アミノチアゾール−４−イル）−４’−［２−［（２−ヒドロキシ−２−フェニルエチル）アミノ］エチル］酢酸アニリド９．９３ｇのβ型結晶を得た。
実施例２（β型結晶のウェットケーキを経由したβ型結晶の製造）
（Ｒ）−２−［［２−（４−アミノフェニル）エチル］アミノ］−１−フェニルエタノール一塩酸塩１３．５０ｋｇ、２−アミノチアゾール−４−イル酢酸７．２９ｋｇ、濃塩酸４．４６ｋｇ及び水２７０ｌの混合液に１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド一塩酸塩（ＥＤＣ）９．７３ｋｇを１５℃にて加え、１時間攪拌した。水酸化ナトリウム４．１０ｋｇ及び水１１０ｌの混合液を反応液に滴下を行い結晶化し、生じた結晶を濾取した。水にて洗浄し、（Ｒ）−２−（２−アミノチアゾール−４−イル）−４−［２−［（２−ヒドロキシ−２−フェニルエチル）アミノ］エチル］酢酸アニリド２６．２ｋｇのβ型結晶のウェットケーキを得た。この結晶はウェットのまま再結晶に用いた。
β型結晶のウェットケーキ２６．２ｋｇに水１８０ｌ及びエタノール１４０ｌを加え、約８０℃にて加熱溶解後、外温を２０℃に設定し、急激に冷却した。生じた結晶を濾過後、乾燥し、（Ｒ）−２−（２−アミノチアゾール−４−イル）−４’−［２−［（２−ヒドロキシ−２−フェニルエチル）アミノ］エチル］酢酸アニリド１５．４０ｋｇのβ型結晶を得た。
β型結晶の粉末Ｘ線回折図及び熱分析図を図１及び図２に示す。
（別法）（β型結晶の接種による再結晶）
β型結晶７．５４ｇ、エタノール６０ｍｌ、水９０ｍｌの混合物を加熱溶解後、冷却し、４５℃にてβ型結晶３８０ｍｇを加えた。その後、氷冷下１５分攪拌した。結晶を濾過後乾燥し、β型結晶６．９３ｇを得た。
実施例３（β型結晶からα型結晶の製造）
（Ｒ）−２−（２−アミノチアゾール−４−イル）−４’−［２−［（２−ヒドロキシ−２−フェニルエチル）アミノ］エチル］酢酸アニリドのβ型結晶１５．３０ｋｇ、水１８０ｌ及びエタノール１２０ｌの混合物を約８０℃にて加熱溶解後、冷却し、５０℃にてα型結晶１５．０ｇを加えた。その後、２０℃まで冷却した。結晶を濾過後、乾燥し、（Ｒ）−２−（２−アミノチアゾール−４−イル）−４’−［２−［（２−ヒドロキシ−２−フェニルエチル）アミノ］エチル］酢酸アニリドのα型結晶１４．２４Ｋｇを得た。
α型結晶の粉末Ｘ線回折図を図３に示す。
実施例４（β型結晶のウェットケーキからα型結晶の製造）
実施例２と同様に、（Ｒ）−２−［［２−（４−アミノフェニル）エチル］アミノ］−１−フェニルエタノール一塩酸塩６．６６ｋｇから（Ｒ）−２−（２−アミノチアゾール−４−イル）−４’−［２−［（２−ヒドロキシ−２−フェニルエチル）アミノ］エチル］酢酸アニリド２３．４２ｋｇのβ型結晶のウェットケーキを得た。このケーキに水９２ｌ及びエタノール７６ｌを加え、約８０℃にて加熱溶解後、およそ１時間に１０℃の割合で冷却し、５５℃にてα型結晶８．４ｇを加えた。その後、２０℃まで冷却した。結晶を濾過後、乾燥し、（Ｒ）−２−（２−アミノチアゾール−４−イル）−４’−［２−［（２−ヒドロキシ−２−フェニルエチル）アミノ］エチル］酢酸アニリドのα型結晶６．５６ｋｇを得た。
α型結晶の粉末Ｘ線回折図及び熱分析図を図４及び図５に示す。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，５００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）＝１．６０（１Ｈ，ｓ），２．５９−２．６６（４Ｈ，ｍ），２．６８−２．８０（２Ｈ，ｍ），３．４５（２Ｈ，ｓ），４．５９（１Ｈ，ｂｒ），５．２１（１Ｈ，ｂｒ），６．３０（１Ｈ，ｓ），６．８９（２Ｈ，ｓ），７．１１（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），７．１９−７．２３（１Ｈ，ｍ），７．２７−７．３３（４Ｈ，ｍ），７．４９（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），９．９９（１Ｈ，ｓ）．ＦＡＢ−ＭＳ  ｍ／ｚ：３９７（Ｍ＋Ｈ）＋．
比較参考例（二塩酸塩の製造）
（Ｒ）−２−（２−アミノチアゾール−４−イル）−４’−［２−［（２−ヒドロキシ−２−フェニルエチル）アミノ］エチル］酢酸アニリド２０．０ｇを１，４−ジオキサンに溶解し、濃塩酸８．４１ｍｌを加えた。生じた結晶を濾取し、（Ｒ）−２−（２−アミノチアゾール−４−イル）−４’−［２−［（２−ヒドロキシ−２−フェニルエチル）アミノ］エチル］酢酸アニリド二塩酸塩２５．０ｇを得た。
２塩酸塩結晶の粉末Ｘ線回折図を図６に示す。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）＝２．９０−３．０８（３Ｈ，ｍ），３．１０−３．２１（３Ｈ，ｍ），３．７５（２Ｈ，ｓ），４．９９−５．０３（１Ｈ，ｍ），６．６９（１Ｈ，ｓ），７．２０（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ），７．２８−７．４３（５Ｈ，ｍ），７．５９（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ），８．９４（１Ｈ，ｂｒｓ），９．１７（２Ｈ，ｂｒ），９．４０（１Ｈ，ｂｒｓ）．ＦＡＢ−ＭＳ  ｍ／ｚ：３９７（Ｍ＋Ｈ）＋．
産業上の利用可能性
本発明のα型結晶は吸湿性を示さず安定であるため医薬品として使用することができ、医薬品として有用である。本発明のβ型結晶は弱い吸湿性を示すものの安定であり、α型結晶の製造中間体として有用である。また、これらの結晶はインスリン分泌促進作用とインスリン感受性増強作用を併せ持ち、糖尿病の治療に有用である。これら結晶の医薬品としての有用性は、以下の吸湿性試験及び血糖低下試験により確認した。
１．吸湿性試験
吸湿性の測定には、ＶＴＩ  ＳＧＡ−１００を用い、温度：２５℃、測定範囲：相対湿度５〜９５％、測定間隔：相対湿度５％の条件で測定した。
その結果、（Ｒ）−２−（２−アミノチアゾール−４−イル）−４’−［２−［（２−ヒドロキシ−２−フェニルエチル）アミノ］エチル］酢酸アニリドの２塩酸塩結晶は、相対湿度約８０％から急激な重量の増加を示し、相対湿度９０％では約１４％の水分を保持し、強い吸湿性を示した（図７参照）。一方、本発明のα型結晶は、相対湿度５％から９５％の全範囲において、水分保持量は０．２％以下であり吸湿性を示さなかった（図９参照）。また、β型結晶は相対湿度約２０％から重量の増加が認められ、約３％の水分を保持し弱い吸湿性を示した（図８参照）。
上記の（Ｒ）−２−（２−アミノチアゾール−４−イル）−４’−［２−［（２−ヒドロキシ−２−フェニルエチル）アミノ］エチル］酢酸アニリドの２塩酸塩結晶は強い吸湿性を示し、結晶の物理的化学的性質や物性が変化し不安定である。それに対し本発明のα型結晶は吸湿性を示さず安定性に優れ、医薬品の製造原料として好適である。「β型結晶」は弱い吸湿性を有するものの、準安定型結晶であり医薬品として使用することができる。
２．ｋｋマウス（インスリン抵抗性モデル：肥満、高血糖）における血糖低下試験
雄性ｋｋマウス（血糖値２００ｍｇ／ｄｌ以上）を用いて、摂食下で血糖値を測定後、無作為に群分けした。被験薬物は１日１回、７日間強制経口投与し、最終投与後１５〜１８時間後の血糖値を投与前値と比較した（ｎ＝６）。血糖値はマウスの尾静脈より、ガラス毛細管（ヘパリン処理済み）を用いて採血し、除タンパク処理後、上清中のグルコース量（ｍｇ／ｄｌ）をグルコースオキシターゼ法により比色定量した。更に、血糖値を被験薬物投与前値より３０％減少させる用量をＥＤ３０値として表した。
その結果α型結晶は経口投与のＥＤ３０値が３．５ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ以下という、強い活性を示した。
３．β型結晶の製造中間体としての有用性
β型結晶はα型結晶の製造中間体としても有用である。β型結晶は工業生産において、急冷することで確実にかつ簡便に得られる。α型結晶と比較して、再結晶溶媒（エタノール水溶液３７％〜５０％）に溶解性が高いことから、β型結晶を再結晶させてα型結晶を容易に得ることができる。
【図面の簡単な説明】
図１：（Ｒ）−２−（２−アミノチアゾール−４−イル）−４’−［２−［（２−ヒドロキシ−２−フェニルエチル）アミノ］エチル］酢酸アニリドのβ型結晶の粉末Ｘ線回折図。（本発明結晶）
図２：（Ｒ）−２−（２−アミノチアゾール−４−イル）−４’−［２−［（２−ヒドロキシ−２−フェニルエチル）アミノ］エチル］酢酸アニリドのβ型結晶の熱分析図。（本発明結晶）
図３：（Ｒ）−２−（２−アミノチアゾール−４−イル）−４’−［２−［（２−ヒドロキシ−２−フェニルエチル）アミノ］エチル］酢酸アニリドのα型結晶の粉末Ｘ線回折図。（本発明結晶）
図４：（Ｒ）−２−（２−アミノチアゾール−４−イル）−４’−［２−［（２−ヒドロキシ−２−フェニルエチル）アミノ］エチル］酢酸アニリドのα型結晶の粉末Ｘ線回折図。（本発明結晶）
図５：（Ｒ）−２−（２−アミノチアゾール−４−イル）−４’−［２−［（２−ヒドロキシ−２−フェニルエチル）アミノ］エチル］酢酸アニリドのα型結晶の熱分析図。（本発明結晶）
図６：（Ｒ）−２−（２−アミノチアゾール−４−イル）−４’−［２−［（２−ヒドロキシ−２−フェニルエチル）アミノ］エチル］酢酸アニリドの２塩酸塩結晶の粉末Ｘ線回折図。
図７：（Ｒ）−２−（２−アミノチアゾール−４−イル）−４’−［２−［（２−ヒドロキシ−２−フェニルエチル）アミノ］エチル］酢酸アニリドの２塩酸塩結晶の吸湿性曲線図。
図８：（Ｒ）−２−（２−アミノチアゾール−４−イル）−４’−［２−［（２−ヒドロキシ−２−フェニルエチル）アミノ］エチル］酢酸アニリドのβ型結晶の吸湿性曲線図。（本発明結晶）
図９：（Ｒ）−２−（２−アミノチアゾール−４−イル）−４−［２−［（２−ヒドロキシ−２−フェニルエチル）アミノ］エチル］酢酸アニリドのα型結晶の吸湿性曲線図。（本発明結晶）
図中、Ｉｎｔｅｎｓｉｔｙは強度を、Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅは温度を、Ｈｅａｔ  Ｆｌｏｗ  Ｅｎｄｏ  Ｕｐは吸熱をＷｅｉｇｈｔは重量を、Ａｄｓｏｒｐｔｉｏｎは吸着を、Ｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎは脱着を、Ｉｓｏｔｈｅｒｍは曲線を、ＲＨは相対湿度を表す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【国際調査報告】
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