(57)【要約】抗癌組成物を提供すること。より詳しくは、β１，３／１，６グルカン構造を有する酵母由来成分ＮＢＧ又はイミュトール（商品名）を含有する組成物が、従来にない効果的なＩＬ−１２誘導剤であることを新規に見出し、さらにβ１，３／１，６グルカン構造を有する酵母由来成分イミュトール（商品名）の経口投与により、ＮＫ細胞活性化能、ＮＫＴ細胞活性化能、腫瘍新生血管阻害能を期待しうる抗癌組成物であることを新規に見出し、本発明からなる抗癌組成物の提供に成功した。【特許請求の範囲】
【請求項１】
β１，３／１，６グルカン構造を有する酵母由来成分ＮＢＧ又はイミュトール（商品名）を含有するＩＬ−１２誘導剤。
【請求項２】
β１，３／１，６グルカン構造を有する酵母由来成分イミュトール（商品名）を含有するＮＫ細胞及び／又はＮＫＴ細胞活性化剤。
【請求項３】
生体への摂取量としてβ１，３／１，６グルカン構造を有する酵母由来成分ＮＢＧ又はイミュトールを１０ｍｇ〜２０００ｍｇ／体重ｋｇ／日で経口摂取する請求項１の誘導剤又は請求項２の活性化剤。
【請求項４】
請求項１〜３記載の経口摂取用健康補助食品製剤。
【請求項５】
β１，３／１，６グルカン構造を有する酵母由来成分イミュトール（商品名）を含有するＩＬ−１２誘導能、ＮＫ細胞活性化能、ＮＫＴ細胞活性化能、及び／又は腫瘍新生血管阻害能を期待しうる抗癌組成物。
【請求項６】
経口で投与する形態であることを特徴とする請求項５の組成物を含むガンの治療剤。
【請求項７】
ＩＬ−１２誘導能を治療マーカーとして、β１，３／１，６グルカン構造を有する酵母由来成分イミュトール（商品名）を摂取させることを特徴とするガンの治療方法。
【請求項８】
ＮＫ細胞及び／又はＮＫＴ細胞の活性化能を治療マーカーとして、β１，３／１，６グルカン構造を有する酵母由来成分イミュトール（商品名）を摂取させることを特徴とするガンの治療方法。
【請求項９】
腫瘍新生血管阻害能を治療マーカーとして、β１，３／１，６グルカン構造を有する酵母由来成分イミュトール（商品名）を摂取させることを特徴とするガンの治療方法。
【請求項１０】
ＩＬ−１２誘導能、腫瘍新生血管阻害能、ＮＫ細胞活性化能、及び／又はＮＫＴ細胞活性化能を治療マーカーとして、β１，３／１，６グルカン構造を有する酵母由来成分イミュトール（商品名）を摂取させることを特徴とするガンの治療方法。
【請求項１１】
請求項６〜１０の情報を自然法則を利用した媒体に担持した商業用媒体。
【請求項１２】
請求項１１の商業用媒体を利用した商業方法。
【発明の詳細な説明】
本出願は、参照によりここに援用されるところの、日本特許出願番号２００１−３４１１１５、２００２−０４６６９４、２００２−１９１４７４からの優先権を請求する。
技術分野
本発明は、新規な抗癌組成物の提供に関する。より詳しくは、β１，３／１，６グルカン構造を有する酵母由来成分ＮＢＧ又はイミュトール（商品名）を含有するＩＬ−１２誘導剤に関する。さらに、β１，３／１，６グルカン構造を有する酵母由来成分イミュトール（商品名）の経口投与により、ＮＫ細胞活性化能、ＮＫＴ細胞活性化能、腫瘍新生血管阻害能を期待しうる抗癌組成物に関する。
背景技術
がん（ｍａｌｉｇｎａｎｔ  ｎｅｏｐｌａｓｍｓ）（ｃａｎｃｅｒ）の予防又は治療のために有用な物質の選別には、従来、がん細胞へのその直接的作用が重要視されていた。免疫賦活剤ががん治療に有用であることは認められていたが、免疫賦活剤として得られた化合物はいずれもその抗がん効果が微弱であり、免疫療法単独又は化学療法との併用治療によってもがんの十分な治療効果は達成されていない。
本発明者の医学博士、八木田は、先にがん治療における画期的な手法として、インターロイキン１２（ＩＬ−１２）を生体内で誘発する物質の有用性に着目し、椎茸菌糸体加工物がその機能を有することを発見し、新免疫療法（Ｎｏｖｅｌ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  ｃａｎｃｅｒ）（ＮＩＴＣ）ともいうべきがん治療法を確立した。従来ＩＬ−１２は、抗がん効果があるものの生体内にＩＬ−１２自体を直接投与した場合には副作用を生じるために患者が治療に耐えられないという事実があり、それ自体を抗がん剤として使用できなかった。しかし、八木田が報告した椎茸菌糸体加工物を含む製剤は、がんの治療において著しい治癒・延命効果を達成した。つまり八木田は、ＩＬ−１２を生体内で誘発できる有効量の椎茸菌糸体加工物を投与することにより、がんの治療目的を達成した（特開平１０−１３９６７０号公報）。
ＩＬ−１２は、ＴＮＦα→ＩＦＮＹ→ＩＬ−１２→ＣＴＬ活性というルートでキラーＴ細胞の活性化効果と増強効果をもつ。つまりＩＬ−１２の産生増強は、キラーＴ細胞の活性化と増強により抗がん効果が期待される。
八木田は、ＩＬ−１２の産生増強の系とは別にＮＫＴ細胞の活性化が抗ガン効果に有用であることを報告している。谷口等は、ＮＫＴ細胞が有するＶα２４Ｖβ１１という特異的なＴ細胞抗原受容体（ＴＣＲ）が認識する特異的な糖脂質抗原を発見し、この抗原が、αガラクトシルセラミドであることを報告している。更に、αガラクトシルセラミドを投与した担ガンマウスでは、ＮＫＴ細胞が活性化され、ガンの消失はみられないものの転移が抑制されることを証明した。
ＮＫＴ細胞には、もう一つの受容体としてＮＫ細胞抗原受容体（ＮＫＲ−Ｐ１；ナチュラルキラー受容体Ｐ１）があることは報告されている（特集  ＮＫＴ細胞の基礎と臨床：最新医学５５巻４号２０００年８１８〜８２３ページ）。ＮＫＲ−Ｐ１もＮＫＴ細胞の活性化に関与し、この活性化が抗ガン効果をより優位であることを八木田は見出している。
ＮＫ細胞についても生体の抗ガン作用に係わるという報告がなされているが、これまでＮＫ細胞の活性と臨床的な抗ガン効果とが相関せず、ＩＬ−１２の産生誘発量とＮＫ細胞の活性とが完全な逆相関を示すことが八木田により証明されており、ヒトにおける抗ガン作用についてのＮＫ細胞の関与は疑問視されていた。
これまでに医学博士八木田は、種々のＩＬ−１２生体内で誘発剤の検討を進め、癌周期との関係を考慮したしま万年茸菌糸体由来の新規なＩＬ−１２誘発剤を見出している（ＩＬＹ登録商標：株式会社オリエントキャンサーセラピー商品名）。医学博士八木田は、β１，３／１，６グルカンを含有するキノコ菌糸体に抗腫瘍効果があり、その抗腫瘍性がＴｈｌ系免疫を総合的に活性化するサイトカイン（ＩＬ−１２）に起因するものであることを見出し、商品名ＡＨＣＣ、ＩＬＸ、ＩＬＹ、クレスチン、ＳＰＧ等の製品の新用途に関する特許出願をしてきた。
発明の開示
本発明は、さらに有用なＩＬ−１２誘発剤、特にガンの進行度の重篤（進行性癌、末期癌）な場合にも、より効果的なＩＬ−１２誘発剤を提供すること、さらに、β１，３／１，６グルカン構造を有する酵母由来成分イミュトール（商品名）の経口投与により、ＮＫ細胞活性化能、ＮＫＴ細胞活性化能、腫瘍新生血管阻害能を期待しうる抗癌組成物を提供することを課題とする。
本発明は、新規な材料として酵母の検討を進め、β１，３／１，６グルカン構造を有する酵母由来成分ＮＢＧ又はイミュトールを含有する組成物が、従来にない効果的なＩＬ−１２誘導剤であることを新規に見出し、さらにβ１，３／１，６グルカン構造を有する酵母由来成分イミュトール（商品名）の経口投与により、ＮＫ細胞活性化能、ＮＫＴ細胞活性化能、腫瘍新生血管阻害能を期待しうる抗癌組成物であることを新規に見出し、本発明からなる抗癌組成物の提供に成功した。
すなわち本発明は、
１．β１，３／１，６グルカン構造を有する酵母由来成分ＮＢＧ又はイミュトール（商品名）を含有するＩＬ−１２誘導剤。
２．β１，３／１，６グルカン構造を有する酵母由来成分イミュトール（商品名）を含有するＮＫ細胞及び／又はＮＫＴ細胞活性化剤。
３．生体への摂取量としてβ１，３／１，６グルカン構造を有する酵母由来成分ＮＢＧ又はイミュトールを１０ｍｇ〜２０００ｍｇ／体重ｋｇ／日で経口摂取する前項１の誘導剤又は前項２の活性化剤。
４．前項１〜３記載の経口摂取用健康補助食品製剤。
５．β１，３／１，６グルカン構造を有する酵母由来成分イミュトール（商品名）を含有するＩＬ−１２誘導能、ＮＫ細胞活性化能、ＮＫＴ細胞活性化能、及び／又は腫瘍新生血管阻害能を期待しうる抗癌組成物。
６．経口で投与する形態であることを特徴とする前項５の組成物を含むガンの治療剤。
７．ＩＬ−１２誘導能を治療マーカーとして、β１，３／１，６グルカン構造を有する酵母由来成分イミュトール（商品名）を摂取させることを特徴とするガンの治療方法。
８．ＮＫ細胞及び／又はＮＫＴ細胞の活性化能を治療マーカーとして、β１，３／１，６グルカン構造を有する酵母由来成分イミュトール（商品名）を摂取させることを特徴とするガンの治療方法。
９．腫瘍新生血管阻害能を治療マーカーとして、β１，３／１，６グルカン構造を有する酵母由来成分イミュトール（商品名）を摂取させることを特徴とするガンの治療方法。
１０．ＩＬ−１２誘導能、腫瘍新生血管阻害能、ＮＫ細胞活性化能、及び／又はＮＫＴ細胞活性化能を治療マーカーとして、β１，３／１，６グルカン構造を有する酵母由来成分イミュトール（商品名）を摂取させることを特徴とするガンの治療方法。
１１．前項６〜１０の情報を自然法則を利用した媒体に担持した商業用媒体。
１２．前項１１の商業用媒体を利用した商業方法。
からなる。
発明を実施するための最良の形態
本発明の主成分ＮＢＧ又はイミュトールは、β１，３／１，６グルカン構造を有している酵母である。詳しくは、パン酵母（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）由来の商品名ＮＢＧ（ＮＢＧ：Ｎｏｒｗｅｇｉａｎ  Ｂｅｔａ  ＧｌｕｃａｎＴＭ）又はイミュトール（β１，３／１，６グルカン、マンノース不含、酵母細胞壁蛋白由来物不含：製造元ＩｍｍｕｎｏＣｏｒｐ）である。検討の結果、β１，３／１，６グルカン構造を有している酵母は、強力なＩＬ−１２誘導剤であり、特に進行性、末期性ガンにおける強力なＩＬ−１２誘導剤であることを見出した。さらに、β１，３／１，６グルカン構造を有する酵母由来成分イミュトール（商品名）の経口投与により、ＮＫ細胞活性化能、ＮＫＴ細胞活性化能、腫瘍新生血管阻害能を期待しうる抗癌組成物であることを新規に見出した。
本発明者は、ＩＬ−１２産生誘発剤には、ＡＨＣＣのように初期癌の患者に特に効果的にＩＬ−１２産生誘発をおこす物質の他に、本発明からなるβ１，３／１，６グルカン構造を有している酵母由来物のように進行性の癌又は末期癌の患者にも特徴的にＩＬ−１２産生誘発効果を発揮する物質の存在を見出した。
本発明の組成物又は経口摂取用健康補助食品製剤は、肺癌、肺腺腫、胸腺腫、甲状腺癌、膀胱癌、結腸癌、直腸癌、盲腸癌、尿管癌、乳癌、子宮頸癌、脳腫瘍、舌癌、咽頭癌、鼻腔癌、喉頭癌、胃癌、肝癌、胆管癌、精巣癌、卵巣癌、子宮体癌、悪性黒色腫、脂肪肉腫等の治療に有効であるが、これらの癌に限定されない。とくに、ＡＨＣＣ（株式会社アミノアップ）等のＩＬ−１２産生誘発剤を投与してもＩＬ−１２量が低値（例えば７．８ｐｇ／ｍｌ以下）の者に好適に投与される。
本発明に係るＩＬ−１２産生誘導剤、ＮＫ活性化剤、ＮＫＴ活性化剤は、免疫測定法による結果を指標として、その活性化を誘導または増強し、さらに活性化を維持できる処方にて用いられる。すなわち、指標をもとに、その活性化を誘導または増強し、さらに活性化を維持できる投与量、ならびに投与期間を選択して用いられる。当該ＩＬ−１２産生誘導剤、ＮＫ活性化剤、ＮＫＴ活性化剤は、好適には経口摂取される。無論、投与量を減少させ、これらを非経口に耐え得る品質に調製することで、非経口摂取（静脈内または筋肉内投与などを含む）も可能である。
また、イミュトール投与による、該投与前後の免疫に与える影響を以下のマーカーを用いて測定、検討した。
▲１▼血管新生阻害作用
血管新生阻害作用は、血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）〔−ＶＥＧＦ：ＶＥＧＦ（血管新生増生因子）の反数（ＶＥＧＦ測定数値にマイナス１を掛けて算出したパラメーター数値）〕を測定することでその効果は判定が可能であり、ＶＥＧＦ値のマイナス（負）値（−ＶＥＧＦ）で評価できる。このＶＥＧＦ値の替わりにＦＧＦ、ＨＧＦなどのその他の血管増殖因子を用いることも血管新生阻害能を評価することが可能である。
またＶＥＧＦの替わりに血管新生阻害作用の正数値でもその評価が可能である（例えばエンドスタチン値）。
▲２▼ＩＬ−１２産生能力
ＣＴＬ活性はＣＤ８（＋）パーフォリン産生能力で判定が可能であるが、このＣＤ８（＋）パーフォリン値には細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）と免疫抑制性Ｔ細胞（ＳＴＣ；Ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ  Ｔ  ｃｅｌｌ）とがあり、前者はガン細胞を障害し、後者の活性化は結果的にガンの増殖につながる。したがってその絶対値では評価はできない。しかし前者はＩＦＮＹが１０ＩＵ／ｍｌ以上かもしくはＩＬ−１２値が７．８ｐｇ／ｍｌ以上であればＣＴＬであり、ＩＦＮＹとＩＬ−１２が低値であればＳＴＣと判定される。そこでＣＴＬ活性は、ＩＦＮＹ産生能力（ＩＦＮＹ値）もしくはＩＬ−１２産生能力（ＩＬ−１２値）で評価が可能である。
▲３▼ＮＫとＮＫＴ細胞活性化能
ＮＫとＮＫＴ細胞とはＮＫＲ−Ｐ１（ＮＫ細胞受容体ＣＤ１６１（＋））を共有しており、前者はＣＤ３（−）ＣＤ１６１（＋）の表面マーカーでＮＫ細胞数は測定可能であり、その活性化はＣＤ３（−）ＣＤ１６１（＋）パーフォリン産生能力で判定が可能である。一方後者のＮＫＴ細胞はＣＤ３（＋）ＣＤ１６１（＋）でその細胞数は測定が可能となり、そのパーフォリン産生能力でＮＫＴ細胞の活性化は測定可能である。
したがってガン治療における新免疫療法（ＮＩＴＣ）であっても一般的な免疫療法であっても以下の測定項目でそれぞれのｅｆｆｅｃｔｏｒ細胞もしくは血管新生阻害作用を評価することが可能である。具体的には、ＣＴＬ活性はＩＦＮＹあるいはＩＬ−１２の誘導産生能力で評価が可能である。ＮＫ細胞の活性化はＣＤ３（−）ＣＤ１６１（＋）もしくはＣＤ３（−）ＣＤ１６１（＋）パーフォリン値でも評価可能である。ＮＫＴ細胞の活性化はＣＤ３（＋）ＣＤ１６１（＋）もしくはＣＤ３（＋）ＣＤ１６１（＋）パーフォリン値でも評価が可能である。
細胞および各マーカーの測定方法を以下に例示する。
（ＮＫＴ細胞の測定）（ＮＫ細胞の測定）（ＣＤ８の測定）
ＮＫＲ−Ｐ１を有するＮＫＴ細胞の測定は、ＮＫＴ細胞の細胞表面に特異的に存在する細胞表面抗原（ＣＤ３およびＣＤ１６１）の測定により行うことができる。具体的には、末梢血中のリンパ球について、ＣＤ３が陽性でかつＣＤ１６１が陽性（ＣＤ３（＋）ＣＤ１６１（＋））の細胞を検定する。つまり、ＮＫＴ細胞の細胞表面抗原であるＣＤ３およびＣＤ１６１を、モノクローナル抗体を用いてフローサイトメトリーを使用するＴｗｏ  Ｃｏｌｏｒ検査により測定する。ここでＮＫＴ細胞が活性化されているとは、リンパ球の中でＣＤ３（＋）ＣＤ１６１（＋）ＮＫＴ細胞の割合が１０％以上、より好ましくは１６％以上であることをいう。ＮＫＴ細胞活性化能とは、ＮＫＴ細胞の割合を１０％以上、より好ましくは１６％以上に増加せしめる機能、またはある物質を投与する前のＮＫＴ細胞の割合より更に増強せしめる機能を意味する。
同様に（ＣＤ３（−）ＣＤ１６１（＋））とはＣＤ３が陰性でかつＣＤ１６１が陽性の細胞を検定することである。この方法が本発明ではＮＫ細胞の測定に有用であることを確認した。
さらにＣＤ８（＋）とはＣＤ８が陽性の細胞を検定することである。この方法が本発明ではＣＴＬ活性の測定に有用であることを確認した。
実施例ではガン患者の血液を用いて、血中細胞について細胞表面抗原であるＣＤ３、ＣＤ１６１、ＣＤ８について陽性・陰性で区別し、各細胞の割合を、フローサイトメトリーを用いたＴｗｏ  Ｃｏｌｏｒ検査により常法通り測定した。このときＣＤ３、ＣＤ１６１、ＣＤ８に対するモノクローナル抗体は、それぞれコールター社製又はベクトンディッキンソン社製ものを使用した。
（パーフォリン産生細胞の測定）
末梢血中のリンパ球について、細胞表面抗原であるＣＤ３、ＣＤ８、ＣＤ１６１のうち２者とパーフォリンについてフローサイトメトリーを用いたＴｈｒｅｅ  Ｃｏｌｏｒ検査により常法通り測定する。具体的には、採取した血液に固定液を加えて細胞を固定し、膜透過液を添加後抗パーフォリン抗体（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ社製）を添加して反応させ、さらにＰＲＥ−Ｃｙ５標識二次抗体（ＤＡＫＯ社製）を添加して反応させ、ついで抗ＣＤ３−ＰＥ（Ｃｏｕｌｔｅｒ  ６６０４６２７）抗体および抗ＣＤ１６１−ＦＩＴＣ（Ｂ−Ｄ）抗体を添加して反応させ、その後フローサイトメトリーで測定する。図中での略語はＰＥＲＦと表示した。
（サイトカインを測定するための試料の調製）
まず、血液より単核球画分を分離調製する。ヘパリン加末梢血をリン酸緩衝生理食塩水（Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  Ｂｕｆｆｅｒｅｄ  Ｓａｌｉｎｅ）（ＰＢＳ）で２倍に希釈して混和した後、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｃｏｎｒａｙ液（比重１．０７７）上に重層し、４００Ｇで２０分間遠沈後、単核球画分を採取する。洗浄後、１０％牛胎児血清（ＦＢＳ）を加えたＲＰＭＩ−１６４０培地を加え、細胞数を１×１０６個となるように調製する。得られた細胞浮遊液２００μｌにフィトヘマグルチニン（Ｐｈｙｔｏｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ）（ＤＩＦＣＯ社製）を２０μｇ／ｍｌの濃度となるように加え、９６穴マイクロプレートにて５％ＣＯ２存在下、３７℃で２４時間培養し、該培養した細胞溶液中のサイトカインを測定する試料とする。
（ＩＬ−１２量の測定）
誘発されるＩＬ−１２量の測定は、後述するマウスを用いた実験例では血清中に十分なＩＬ−１２量の誘発があり、ヒトにおけるような間接的な測定をすること無しに直接酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）による測定キットで測定可能である。マウスを用いたこの系では、経口によりＩＬ−１２産生誘発物質を継続的に摂取させ、その後の血中ＩＬ−１２量の増加によりＩＬ−１２産生誘発能を検定できる。
なおヒトにおいては、血中における阻害剤の存在により、直接血液中のＩＬ−１２量は測定できず、例えば癌患者において誘発されるＩＬ−１２量の測定は、該癌患者の血液から分離調製した末梢血単核球に刺激物質を与えて培養した後の遠沈して細胞を除いた培養液に対して行う。培養に用いる細胞の数は０．５×１０６個／ｍｌ〜１×１０７個／ｍｌであり、好ましくは１×１０６個／ｍｌである。また、細胞を刺激する物質としては、従来使用されているマイトージェンであるフィトヘマグルチニン（ＰＨＡ）を、終濃度０．１〜１００μｇ／ｍｌ、好ましくは１〜２０μｇ／ｍｌとなるように加えて培養する。細胞を刺激する物質としては、ＰＨＡに限定されるものではなく、本発明の目的を達成するため、細胞を刺激して免疫生理活性物質を産生させることができる物質であれば良く、ＰＭＡ（Ｐｈｏｒｂｏｌ  １２−Ｍｙｒｉｓｔａｔｅ−１３−Ａｃｅｔａｔｅ）、ＰＭＡ＋Ｉｏｎｏｍｙｃｉｎ、ＬＰＳ（Ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ）、ＰＷＭ（Ｐｏｋｅ  Ｗｅｅｄ  Ｍｉｔｏｇｅｎ）などが挙げられる。ＩＬ−１２量の測定は自体公知の臨床、生化学的検査を利用できるが、Ｒ＆Ｄ  ＳＹＳＴＥＭＳ社やＭＢＬ社より入手することのできる酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）による測定キットが使用される。ここでＩＬ−１２産生誘発能とは、末梢血単核球が刺激により産生するＩＬ−１２量を、７．８ｐｇ／ｍｌ以上に増強せしめる機能、又はある物質を投与する前のＩＬ−１２産生量より増強せしめる機能を意味する。
（血管新生阻害能の測定）
（血管内皮細胞増殖因子、ＶＥＧＦと塩基性繊維芽細胞増殖因子、ｂＦＧＦ及び血管新生阻害因子エンドスタチン、ｅｎｄｏｓｔａｔｉｎの測定）
市販キットの各酵素免疫固相法（ＥＬＩＳＡ：ｅｎｚｙｍｅ  ｌｉｎｋｅｄ  ｉｍｍｕｎｏ  ｓｏｒｂｅｎｔ  ａｓｓａｙ）（ＡＣＣＵＣＹＴＥ  Ｈｕｍａｎ  ＶＥＧＦ，ＡＣＣＵＣＹＴＥ  Ｈｕｍａｎ  ｂＦＧＦ，ＡＣＣＵＣＹＴＥ  Ｈｕｍａｎ  Ｅｎｄｏｓｔａｔｉｎ：ＣＹＴＩＭＭＵＮＥ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｉｎｃ．）で血清中濃度を測定した。
本発明の経口摂取用組成物は、ＩＬ−１２産生誘発能を有する活性成分としてＮＢＧ又はイミュトールを含有し、それはβ１，３／１，６グルカン構造を有している酵母由来成分である。
本発明のＩＬ−１２産生を誘発せしめる活性成分としてβ１，３／１，６グルカン構造を有している酵母由来成分ＮＢＧ又はイミュトールを含有する経口摂取用組成物は、癌の各進行段階におけるＩＬ−１２産生誘発能において公知のＡＨＣＣと大きな差異を有する。本発明のβ１，３／１，６グルカン構造を有している酵母由来成分を有効成分とするものは、癌の初期段階においても十分なＩＬ−１２産生誘発能を示し、特徴的には進行した末期癌においても同等もしくはより強力なＩＬ−１２産生誘発能を発揮する。一方、ＡＨＣＣは、癌の初期段階において特徴的なＩＬ−１２産生誘発能を発揮するが、癌の進行とともにその誘発能は減衰していく。
本発明の経口摂取用組成物の投与量は、１日当たり１〜２０００ｍｇ／ｋｇ体重、より好ましくは１０〜２０００ｍｇ／ｋｇ体重程度であり、１０日〜１ヶ年、１〜数回／日で、好適には経口摂取される。無論、投与量を減少させ、化合物を非経口に耐えうる品質に調製することで、非経口摂取も可能である。
本発明の主成分であるβ１，３／１，６グルカン構造を有している酵母由来成分ＮＢＧ又はイミュトールは、食品素材として公知である。例えばＮＢＧ又はイミュトール（ＩｍｍｕｎｏＣｏｒｐ）等が例示される。なお、本発明では、市販品をサンプルとした。
経口製剤は、錠剤、散剤、カプセル剤、シロップ剤等に調製される。製剤は、無論既知の賦形剤、崩壊剤、結合剤、滑沢剤等必要な添加物を配合し、常套手段を使用することでも製剤化できる。さらに必要に応じて、矯味剤、着色料、香料、安定剤、殺菌剤、防腐剤等の添加も可能である。
以上説示したように本発明は、β１，３／１，６グルカン構造を有している酵母由来成分ＮＢＧ又はイミュトールを有効成分とする経口摂取用組成と癌の進行段階によるＩＬ−１２産生誘発能との関係を明らかにし、また、β１，３／１，６グルカン構造を有する酵母由来成分イミュトール（商品名）の投与とＩＬ−１２産生能増強、血管新生阻害作用、ＮＫ細胞及び／又はＮＫＴ細胞活性化との関係を明らかにしたものであるから、これらのことを商業的媒体に担持させれば、当該製品の価値について差別化手段となる。従って、これら情報を商業的媒体に担持させた物は、極めて有用性の高いものである。そのうえ、これら情報を商業的に利用すれば、当該製品の価値について差別化手段となるから、これら情報を利用した商業方法は、極めて有用性の高いものである。
以上のような情報は、自然法則を利用した媒体に担持すれば有用な商業用媒体となり、またその商業用媒体は有用な商業方法を提供する。
実施例
以下に、実施例を用いて本発明を具体的に説明するが、本発明は本実施例に限定されるものではない。
（実施例１）
β１，３／１，６グルカンを有するパン酵母（アルペンローゼ実用パン酵母（３００ｍｇ／ｋｇ）およびノルウェー産パン酵母抽出物（ＮＢＧ１０ｍｇ／ｋｇ））で免疫学的抗腫瘍作用とＩＬ−１２産生能力を検討した。尚、それぞれの投与量は各群においβ１，３／１，６グルカンの含有量が同量になるように調整して投与した。
実験は、Ｂ１０マウス（Ｃ５７ＢＬ／１０）に３ＬＬ腫瘍を２×１０６ｃｅｌｌｓ／ｍｏｕｓｅ移植し１３日目腫瘍体積およびＩＬ−１２産生量で比較した。
腫瘍移植後水の強制経口投与のｃｏｎｔｒｏｌ（Ａ）が２３９．４１±１５０ｍｍ３に対し、普通パン酵母・乾燥酵母（Ｂ）（３００ｍｇ／ｋｇ）ではｃｏｎｔｒｏｌに比較し、増大傾向が認められた。
ＮＢＧ（１０ｍｇ／ｋｇ）投与例は（７１．８８７±４４．５９２ｍｍ３）と有意に縮小していた（Ｐ＜０．０３９３）。図１及び図２。
血中ＩＬ−１２濃度に関してはＮＢＧ（１０ｍｇ／ｋｇ）はｃｏｎｔｒｏｌ（Ａ）に対して有意なＩＬ−１２濃度の増加を認めた。ＩＬ−１２濃度はＡｍｅｒｓｈａｍ  ＰｈａｒｍａｃｉａのＢｉｏｔｒａｋ  ＲＰＮ２７０２Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１２ｔｏｔａｌ｛（ｍ）ＩＬ−１２｝、（ｐ４０ａｎｄｐ７０），ｍｏｕｓｅＥＬＩＳＡ  ｓｙｓｔｅｍキットで計った。
すなわち、水強制経口投与ｃｏｎｔｒｏｌ（Ａ’）に比較し、試験群はいずれもＩＬ−１２は高値を示し、ＮＢＧは有意にＩＬ−１２濃度の増加があった（図３及び図４）。
臨床例
以下に、臨床例を用いて本発明を具体的に説明するが、本発明は本臨床例に限定されるものではない。また用いた療法の有効性を、日本国厚生省のＧＣＰに基づく抗がん剤の効果判定基準（Ｓｔａｎｄａｒｄ  ｆｏｒ  ｊｕｄｇｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｏｆ  ａｎｔｉ−ｃａｎｃｅｒ  ａｇｅｎｔ  ｕｎｄｅｒ  ＧＣＰ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｊａｐａｎ  Ｍｉｎｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｗｅｌｆａｒｅ）に則って、完全治癒（ＣＲ）、部分治癒（ＰＲ）、無反応（がんの進展無し）（ＮＣ：Ｎｏ  Ｃｈａｎｇｅ）、または無効（ＰＤ：Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ  Ｄｉｓｅａｓｅ）として表した。
（臨床例１）
Ｉ．Ｙ．  ６０ｙ．ｏ．  直腸癌、肝転移、肺転移
患者は、直腸癌で肝転移と肺転移が認められている。２００Ｘ年９月１２日よりベターシャークＭＣとＩＬＸ（登録商標）６．０ｇ／日、ＩＬＹ（登録商標）３．０ｇ／日、クレスチン３．０ｇ／隔日でキノコ菌子体のβ−１，３グルカン投与を開始した。この治療法は八木田がＮＩＴＣとなずけている。ＮＩＴＣを開始して５ヶ月間はＮＣの状態が維持されたが６ヶ月目に入り腫瘍マーカーのほとんどが上昇した。
そこで酵母由来のβ−１，３グルカンであるイミュトール６Ｔ／日の投与を開始した。イミュトール開始後２ヶ月でＩＦＮγとＩＬ−１２は著増し、腫瘍マーカーも減少に転じた。投与３ヶ月目でも腫瘍マーカーはさらに改善しＰＲの状態を維持している。本症例もキノコ菌子体ではＮＣそしてＰＤとなった症例に酵母β−１，３グルカンを追加投与することで腫瘍の縮小に誘導することが可能となった。
詳細データは、図５に示した。
（臨床例２）
Ｎ．Ｈ．  ５６ｙ．ｏ．  乳癌、腋窩リンパ節転移
患者は、５０歳の女性で２００＆年７月２１日に右乳癌で乳房切除と腋窩リンパ節転移巣切除を受けている（癌研にて）。２００＆年１１月、肝転移が出現し、２００Ｘ年３月２６日の肝部分切除を受けた。２００Ｘ年４月２０日よりＮＩＴＣを開始した。平成２００Ｘ年６月１２日には肝切除断端に多数の肝転移と両肺転移が認められた。そこでＩＬＹ３．０ｇ／隔日投与を開始する。７月１３日よりＩＬＹ３．０ｇ／毎日に変更する。１ヶ月後の８月４日の腫瘍マーカーはＣＥＡが７７３ｎｇ／ｍｌ、ＮＣＣ  １３Ｕ／ｍｌ、Ｉ  ＣＴＰ７．７ｎｇ／ｍｌと一部のマーカーが低下している。ＨＥＲ−２が（＋＋＋）であったため癌研で８月７日より（パクリタキセル＋ハーセプチン）の毎週の投与を開始する。以後ＣＥＡは順調に低下し２００Ｘ年１１月には４．３ｎｇ／ｍｌ、ＳＬＸ−１も３０Ｕ／ｍｌといずれも正常値となりＣＲと判定された。しかしそれ以後ＣＥＡ値は漸増したためタキソールを中止してハーセプチン単独とした。
免疫活性力を強化するためにイミュトール４Ｔ／日を２００Ｙ年３月２３日より開始する。
その後ＣＥＡ値は１ヵ月後の８１．８ｎｇ／ｍｌと上昇したが２ヵ月後に５５．７ｎｇ／ｍｌ、３ヵ月後に２７．４ｎｇ／ｍｌと低下しＰＲと判定された。
この事実はキノコ菌子体のＩＬＸ６．０ｇ／日、クレスチン３．０ｇ／隔日にＩＬＹを追加投与し、さらにタキソールとハーセプチンの追加投与で腫瘍マーカーは著減し、一時ＣＲとなったが２００Ｙ年１月から再上昇しＰＤと判定された。
そこで酵母β−１，３グルカンのイミュトール４Ｔ／日を追加投与したが腫瘍マーカーは著明に低下しＰＲと判定された。
この事実は酵母β−１，３グルカンの免疫活性によるものと考えられた。
詳細データは、図６に示した。
（臨床例３）
Ｍ．Ｈ．  ４３歳、肺腺癌、肝転移
患者は、右肺腺癌で肝に３個の転移が認められて免疫療法を希望して来院する。２００Ｘ年７月２７日から血管新生阻害剤のベターシャークＭＣとキノコ菌子体β−１，３グルカンのＩＬＸ（６．０ｇ／日）、ＩＬＹ（３．０ｇ／日）、クレスチン（３．０ｇ／隔日）の服用を開始した。腫瘍マーカーのＣＥＡが９．２ｎｇ／ｍｌと高値を示し、Ｅｃｈｏ（エコー）検査と胸部ＣＴでも肝転移３個、右肺に３ｃｍ大の肺腺癌が認められた。９月２１日までは、ＩＬ−１２が上昇しＣＥＡ値も低下傾向を示したが、２００Ｙ年の１月１１日にＳＣＣが８．０と異常値を示したので、酵母のイミュトール（６Ｔ／日）投与を開始した。その後ＣＥＡ値とＳＣＣ値は低下し続け２００Ｙ年６月８日にはすべての腫瘍マーカーは正常値を示し、肝転移も肺腺癌も消失しＣＲと判定された。この事実はキノコ菌子体のＩＬＸ、ＩＬＹおよびクレスチンで腫瘍の進行は停止したものの充分な免疫活性化が得られなかったが酵母（β−１，３グルカン）を投与することでＮＣからＣＲに誘導することが可能となったことを示す。
詳細データは、図７に示した。
（臨床例４）
Ｔ．Ｋ．  ６６歳、男性  肺腺癌
６６歳の男性で肺腺癌の診断を受け２００Ｘ年１０月３日からＮＩＴＣ（ＩＬＸ６．０ｇ／日、ＩＬＹ３．０ｇ／日、ベターシャークＬＯ２０ｇ／日）を開始する。
１ヶ月後にＣＥＡ（５．０ｎｇ／ｍｌ以下が正常値）が１３．２ｎｇ／ｍｌと上昇したが以後６ヶ月目までＣＥＡ値は一定であった。
しかし９ヶ月目からＣＥＡ値は上昇し１０ヶ月間上昇しこの間はＰＤと判定された。
そこで酵母製剤であるイミュトール６カプセル（１．２ｇ）／日  分３で経口投与が開始された。
以後ＣＥＡ値は漸減しつづけ、ＩＬ−１２の高い産生能力は維持されづづけるとともにＮＫ細胞（ＣＤ３−ＣＤ１６１＋）とＮＫＴ細胞（ＣＤ３＋ＣＤ１６１＋）も細胞数の増加とともに活性の増強も得られた。
詳細データは、図８に示した。
（臨床例５）
Ｉ．Ｙ．  ７２歳、男性  肺腺癌
７２歳の男性で肺腺癌の症例である。
２００Ｘ年６月３日よりＮＩＴＣ（ＩＬＸ６．０ｇ／日、ＩＬＹ３．０ｇ／日、ベターシャークＬＯ２０ｇ／日）を開始する。
以後５ヶ月間はＣＥＡをはじめ各種腫瘍マーカーは漸増しＰＤと判定された。
その後９ヶ月目まではマーカーは不変でＮＣと判定されたがその後４ヶ月間はＰＲであった。その後１４ヶ月目から２０ヶ月目までＰＤとなった。
２０ヶ月目からイミュトール３ＣＡＰ（０．６ｇ）／日  分３の追加投与がなされたが腫瘍マーカーが上昇したためイミュトールを６ＣＡＰ（１．２ｇ）／日  分３に増量した。
その後腫瘍マーカーは漸減しつづけている。
イミュトールの至適量は３ＣＡＰよりも６ＣＡＰと推定された。
免疫力はイミュトールの増量によりＩＬ−１２産生能力の増強が認められている。
詳細データは、図９に示した。
（臨床例６）
Ｔ．Ｆ．  ５２歳、女性  上行結腸癌
５２歳の女性で、上行結腸癌で肝臓と肺に転移があり、２００Ｙ年５月２１日よりＮＩＴＣ（ＩＬＸ６．０ｇ／日、ＩＬＹ３．０ｇ／日、ベターシャークＬＯ２０ｇ／日）が開始された。
６ヶ月間のＮＣ状態がつづいたが８ヶ月と９ヶ月目に腫瘍マーカーが上昇しＰＤと判定された。
そこでイミュトール６ＣＡＰ（１．２ｇ）／日  分３の投与が開始された。イミュトール６ＣＡＰ／日投与後２ヶ月目でＩＬ−１２産生能力の上昇とともにＮＫ細胞の数と活性も維持され、ＣＥＡ、Ｃａ１９−９、Ｓｐａｎ−１のいずれも正常値内に入りＣＲと判定された。
詳細データは、図１０に示した。
（試験例）
イミュトール投与による免疫に与える影響
臨床例と同様な方法で、イミュトール投与前後において各マーカーの値の変化を測定、検討した。また、ＩＬ−１２産生能力をカテゴリー別（イミュトール投与による効果別）において評価した。
図１１は、イミュトール投与前後における、ＩＬ−１２生産能力の変化を表したものである（投与前２６１例、投与後２４８例）。全体では治療前の値２７．９０±２．６５ｐｇ／ｍｌに比較し、治療後の値３２．４３±２．５３ｐｇ／ｍｌと上昇傾向を認められた（ｐ＝０．２０４）が、有意差は認められなかった。
図１２は、カテゴリー別のイミュトール投与前後における、ＩＬ−１２生産能力の変化を表したものである。効果アリグループ（１０１例  イミュトール投与により改善）の治療前２７．０６０７±２．７８３５ｐｇ／ｍｌに比較し、治療後の値３９．２０３８±４．８１１３ｐｇ／ｍｌと有意な上昇を示した（ｐ＜０．０１）。
図１３は、イミュトール投与前後における、ＮＫ細胞数の変化を表したものである（投与前２４４例、投与後２３４例）。治療前の値１２．３９±０．４２％に比較し、治療後の値は１５．４８±０．４８％と有意の改善が認められた（ｐ＜０．００１）。
図１４は、イミュトール投与前後における、ＮＫＴ細胞数の変化を表したものである（投与前２６１例、投与後２４７例）。治療前の値１２．０９±０．２９％に比較し、治療後の値は１３．０３±０．３２％と有意の改善が認められた（ｐ＜０．００１）。
図１５は、イミュトール投与前後における、血管内皮細胞増生因子（ＶＥＧＦ）の変化を表したものである（投与前２５９例、投与後２５５例）。治療前の値４２６．１２±２６．０６ｐｇ／ｍｌに比較し、治療後の値は３８０．７９±１９．１６ｐｇ／ｍｌと有意に低下していた（ｐ＜０．０５）。
以上の結果から、β１，３／１，６グルカン構造を有する酵母由来成分イミュトール（商品名）の投与が臨床において有効であることを確認した。また、β１，３／１，６グルカン構造を有する酵母由来成分イミュトール（商品名）の投与とＩＬ−１２産生能増強、腫瘍新生血管阻害能、ＮＫ細胞活性化能、及び／又はＮＫＴ細胞活性化能に相関がみられた。この結果、ＩＬ−１２誘導能、腫瘍新生血管阻害能、ＮＫ細胞活性化能、及び／又はＮＫＴ細胞活性化能を治療マーカーとして、β１，３／１，６グルカン構造を有する酵母由来成分イミュトール（商品名）を摂取させることがガン治療に有効であることを確認した。
産業上の利用可能性
β１，３／１，６グルカン構造を有する酵母由来成分ＮＢＧ又はイミュトールを含有する組成物が、従来にない効果的なＩＬ−１２誘導剤であることを新規に見出し、さらにβ１，３／１，６グルカン構造を有する酵母由来成分イミュトール（商品名）の経口投与により、ＮＫ細胞活性化能、ＮＫＴ細胞活性化能、腫瘍新生血管阻害能を期待しうる抗癌組成物であることを新規に見出し、本発明からなる抗癌組成物の提供に成功した。
【図面の簡単な説明】
（図１）腫瘍体積への影響を示す。６ｄは、６日目の結果である。
（図２）腫瘍体積への影響を示す。９ｄ、１３ｄは、各９日目、１３日目の結果である。
（図３）ＩＬ−１２誘導量への影響を示す。７ｄは、７日目の結果である。
（図４）ＩＬ−１２誘導量への影響を示す。１０ｄ、１４ｄは、各１０日目、１４日目の結果である。
（図５）臨床例１
（図６）臨床例２
（図７）臨床例３
（図８）臨床例４
（図９）臨床例５
（図１０）臨床例６
（図１１）イミュトール投与前後における、ＩＬ−１２生産能力の変化を図式化した（投与前２６１例、投与後２４８例）。
（図１２）カテゴリー別のイミュトール投与前後における、ＩＬ−１２生産能力の変化を図式化した。効果アリはカテゴリーが上昇した症例に該当（例ＰＲ→ＣＲ、ＰＤ→ＮＣなど）。現状維持はカテゴリーが変化しない症例に該当（例ＣＲ→ＣＲ、ＮＣ→ＮＣなど）。効果ナシはカテゴリーが落ちた症例に該当（例ＣＲ→ＰＲ、ＮＣ→ＰＤ）。
（図１３）イミュトール投与前後における、ＮＫ細胞数（ＣＤ３−ＣＤ１６１＋）の変化を図式化した（投与前２４４例、投与後２３４例）。
（図１４）イミュトール投与前後における、ＮＫＴ細胞数（ＣＤ３＋ＣＤ１６１＋）の変化を図式化した（投与前２６１例、投与後２４７例）。
（図１５）イミュトール投与前後における、血管内皮細胞増生因子（ＶＥＧＦ）の変化を図式化した（投与前２５９例、投与後２５５例）。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【手続補正書】
【提出日】平成15年7月25日(2003.7.25)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＮＢＧ又はイミュトール（商品名）を含有するＩＬ−１２誘導剤。
【請求項２】
ＮＢＧ又はイミュトール（商品名）を含有するＮＫ細胞及び／又はＮＫＴ細胞活性化剤。
【請求項３】
削除
【請求項４】
削除
【請求項５】
削除
【請求項６】
経口で投与する形態であることを特徴とするＮＢＧ又はイミュトール（商品名）を含む進行性又は末期ガンの治療剤。
【請求項７】
ＩＬ−１２誘導能を治療マーカーとして、ＮＢＧ又はイミュトール（商品名）を摂取させることを特徴とする進行性又は末期ガンの治療剤。
【請求項８】
ＮＫ細胞及び／又はＮＫＴ細胞の活性化能を治療マーカーとして、ＮＢＧ又はイミュトール（商品名）を摂取させることを特徴とする進行性又は末期ガンの治療剤。
【請求項９】
腫瘍新生血管阻害能を治療マーカーとして、ＮＢＧ又はイミュトール（商品名）を摂取させることを特徴とする進行性又は末期ガンの治療剤。
【請求項１０】
ＩＬ−１２誘導能、腫瘍新生血管阻害能、ＮＫ細胞活性化能、及び／又はＮＫＴ細胞活性化能を治療マーカーとして、ＮＢＧ又はイミュトール（商品名）を摂取させることを特徴とする進行性又は末期ガンの治療剤。
【請求項１１】
請求項６〜１０の情報を自然法則を利用した媒体に担持した商業用媒体。
【請求項１２】
請求項１１の商業用媒体を利用した商業方法。
【請求項１３】
進行性の癌又は末期癌の患者に投与することを特徴とする、ＮＢＧ又はイミュトール（商品名）を含有するＩＬ−１２誘導剤。
【請求項１４】
進行性の癌又は末期癌の患者に投与することを特徴とする、ＮＢＧ又はイミュトール（商品名）を含有するＮＫ細胞及び／又はＮＫＴ細胞活性化剤。
【請求項１５】
進行性の癌又は末期癌の患者が、以下のいずれか１から選ばれる請求項１３の誘導剤。
１）直腸癌
２）肝癌
３）肺癌
４）乳癌
５）肺腺癌
６）肝臓癌
【請求項１６】
進行性の癌又は末期癌の患者が、以下のいずれか１から選ばれる請求項１４の活性化剤。
１）直腸癌
２）肝癌
３）肺癌
４）乳癌
５）肺腺癌
６）肝臓癌
【請求項１７】
生体への摂取量としてＮＢＧ又はイミュトールを１０ｍｇ〜２０００ｍｇ／体重ｋｇ／日で経口摂取する請求項１３又は１５に記載の誘導剤。
【請求項１８】
生体への摂取量としてＮＢＧ又はイミュトールを１０ｍｇ〜２０００ｍｇ／体重ｋｇ／日で経口摂取する請求項１４又は１６に記載の活性化剤。
【国際調査報告】
2003039567.tif 000017
2003039567.tif 000018
2003039567.tif 000019
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