(57)【要約】本発明は、結晶状態の生理活性物質および生体適合性の静電凝集抑制物質からなり、安全性、安定性に優れ、優れた肺内送達性を達成した吸入用粉末医薬組成物を簡便な方法により提供することを可能とした点において顕著な効果を奏するものである。また更に疎水性物質を選択することにより、生理活性物質の特性に合わせた徐放性の付与も可能となった。【特許請求の範囲】
【請求項１】
粒子径が０．５μｍ−８μｍである結晶状態の生理活性物質を、融点および／または相転移温度が４０℃以上である生体適合性の静電凝集抑制物質で被覆してなる、粒子径が０．５−８μｍであることを特徴とする吸入用粉末医薬組成物。
【請求項２】
融点および／または相転移温度が４０℃以上である生体適合性の静電凝集抑制物質が水素添加レシチン、ジステアロイルホスファチジルコリン、コレステロール、パルミチン酸コレステロールエステル、ステアリン酸コレステロールエステル、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレングリコール、ポリエチレングリコール４０００，ポリエチレングリコール６０００、ポリエチレングリコール２００００、Ｌ−シスチンからなる群より選択される１種または２種以上である請求の範囲１に記載の吸入用粉末医薬組成物。
【請求項３】
融点および／または相転移温度が４０℃以上である生体適合性の静電凝集抑制物質が水素添加レシチン、コレステロール、ジステアロイルホスファチジルコリン、ポリエチレングリコール４０００からなる群より選択される１種または２種以上である請求の範囲２に記載の吸入用粉末医薬組成物。
【請求項４】
融点および／または相転移温度が４０℃以上である生体適合性の静電凝集抑制物質が水素添加レシチン、コレステロールのうち、１種または２種である請求の範囲３に記載の吸入用粉末医薬組成物。
【請求項５】
生理活性物質０．０５−９５重量％と融点および／または相転移温度が４０℃以上である生体適合性の静電凝集抑制物質５−９９．９５重量％とを含有し、前記生理活性物質に該物質を被覆してなる幾何学的粒子径が０．５−８μｍであることを特徴とする請求の範囲２に記載の吸入用粉末医薬組成物。
【請求項６】
粒子径が０．５μｍ−８μｍである結晶状態の生理活性物質を、融点および／または相転移温度が４０℃以上である生体適合性の静電凝集抑制物質で被覆してなる、粒子径が０．５−８μｍであることを特徴とする吸入用粉末医薬組成物の製造方法。
【請求項７】
融点および／または相転移温度が４０℃以上である生体適合性の静電凝集抑制物質が水素添加レシチン、ジステアロイルホスファチジルコリン、コレステロール、パルミチン酸コレステロールエステル、ステアリン酸コレステロールエステル、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレングリコール、ポリエチレングリコール４０００，ポリエチレングリコール６０００、ポリエチレングリコール２００００、Ｌ−シスチンからなる群より選択される１種または２種以上である請求の範囲６に記載の吸入用粉末医薬組成物の製造方法。
【請求項８】
融点および／または相転移温度が４０℃以上である生体適合性の静電凝集抑制物質が水素添加レシチン、コレステロール、ジステアロイルホスファチジルコリン、ポリエチレングリコール４０００からなる群より選択される１種または２種以上である請求の範囲７に記載の吸入用粉末医薬組成物の製造方法。
【請求項９】
融点および／または相転移温度が４０℃以上である生体適合性の静電凝集抑制物質が水素添加レシチン、コレステロールのうち、１種または２種である請求の範囲８に記載の吸入用粉末医薬組成物の製造方法。
【請求項１０】
生理活性物質０．０５−９５重量％と融点および／または相転移温度が４０℃以上である生体適合性の静電凝集抑制物質５−９９．９５重量％とを含有し、前記生理活性物質に該物質を被覆してなる幾何学的粒子径が０．５−８μｍであることを特徴とする請求の範囲７に記載の吸入用粉末医薬組成物の製造方法。
【発明の詳細な説明】
技術分野
本発明は、肺内送達性が改善された吸入用粉末医薬組成物およびその製造方法に関する。特に本発明は、結晶状態の微小な生理活性物質に特定の静電凝集抑制物質を被覆してなる優れた肺内送達性を示す吸入用粉末医薬組成物およびその製造方法に関する。
背景技術
粉末吸入剤は、微細化した生理活性物質粒子を直接肺に送達することが可能なため、従来より喘息などの肺局所疾患の治療剤形として広く利用されてきた。吸入剤の分野で扱う粉末粒子は、肺内（気管支、細気管支、肺胞）への送達を目的とするため、一般に経口剤の分野で扱う粉末や製剤（数十μｍ−数百μｍ）に比べて非常に微小（１０μｍ以下）である。しかしながら、このような微小な粉末粒子は、粒子同士の付着凝集を惹起し、気相中における分散性に劣るため、十分な肺内送達が達成されないことが懸念される。また仮に良好な肺内送達性が得られた場合でも、品質保持の観点から、保存下において経時的に付着凝集を起こさないことが望まれる。
近年においては、全身性すなわち血中への吸収を目的としたペプチドやタンパクの吸入剤による肺内送達製剤化の検討も盛んに行われている。しかしながら、吸入投与は吸収性が優れている反面、その粉末粒子が非常に微小であるため生理活性物質の溶出が早く、それに続く優れた肺粘膜吸収により、生理活性物質の薬効の作用時間が短く、頻回投与を余儀なくされる場合がある。更にその優れた吸収性のため、強い作用を示す生理活性物質の場合には全身性の副作用発現が懸念される。
従って、粉末吸入剤の開発においては、生理活性物質を含有する吸入用粉末医薬組成物の肺内送達性を改善するだけでなく、安全性が高く、経時的な安定性に優れ，また場合により，適用する生理活性物質に応じて作用時間を延長するための徐放性の付与が可能な製剤の開発が切望されている。
従来より肺内送達性改善を目的とした検討が種々試みられており、Ｍｏｋｈｔａｒらは、生体内分解性基剤であるポリ乳酸を用いた徐放性の吸入用マイクロスフェアーを調製し、その肺内送達性などについて報告している（【非特許文献１】Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．１７５，１３５−１４５（１９９８））。また、タッピング充填した時のかさ密度を示すタップ密度が０．４ｇ／ｃｍ３未満の生分解性粒子を含む肺への送達のための粒子系であって、５μｍと３０μｍとの間の質量平均直径を有する系に関する発明が報告されている（【特許文献１】国際公開パンフレットＷＯ９８／３１３４６（対応日本特許出願、特表２００１−５２６６３４号公報））。特に、特定の空気力学的直径を有する粒子とするために特定のタップ密度および特定の平均直径を有する粒子に設計することにより十分に軽い粒子となし、粒子凝集を回避して肺への送達性を改善したことが開示されている。また、生理活性物質の肺内での放出が制御可能であること、およびコレステロールを配合することにより、その徐放能が高められる旨の記載もされている。
しかしながら、これら吸入用マイクロスフェアーは、良好な肺内送達性を示すものの、生理活性物質を溶解する工程が採用されているために、生理活性物質によっては、その安定性が確保されず、経時的に微粒子の凝集等を惹起し、肺内送達性の低下が懸念される。さらに、後者の明細書、特にＦｉｇ．６に示されたｉｎ  ｖｉｔｒｏの溶出試験結果によれば、該技術の組成物は、試験開始後初期に４０％以上もの生理活性物質の一挙放出を示すため、十分な溶出制御を達成するには至っておらず、徐放性付与の点においても改善の余地がある。
他の技術として、生理活性物質と生体内分解性物質を含有し、生体適合粒子からなるタップ密度が０．４ｇ／ｃｍ３未満で、幾何学的粒子径が５−３０μｍ、空力学的粒子径が１−５μｍの特性を有する肺内送達用微粒子組成物が開示されている（【特許文献２】国際公開ＷＯ９７／４４１０３号パンフレット（対応日本特許特表２０００−５１１１８９号公報））。該発明も前記発明と同様、生理活性物質を溶解させる工程を採用しているために、その安定性向上が望まれる。
また、肺送達のための医薬の製造における界面活性剤の使用であって、該医薬は、生理活性剤を含むエアロゾル化医薬を提供するための吸入デバイスを使用してエアロゾル化された複数の多孔性微細構造を含み、該エアロゾル化医薬は、少なくとも該エアロゾル化医薬を必要とする患者の鼻または肺の気道の一部分への投与形態である使用に関する発明が開示されている（【特許文献３】国際公開ＷＯ９９／１６４１９号パンフレット（対応日本特許特表２００１−５１７６９１号公報））。該発明によれば、標準的な粒子径で、低かさ密度で、中空あるいは多孔性微細構造物とすることにより、安定な分散性を有し、粒子間の引力を低減し、粉末吸入剤の使用について適合する比較的低い凝集力を示す粉末の提供を可能にしたことが開示されている。しかしながら、該エアロゾル化医薬のごとく多孔性の微細構造を成すためには、揮発性の物質を加える等、特殊な製造方法および製造条件が必要である。加えて、医薬を溶解する製造法ゆえ、薬物が非晶質化する恐れがあり、過酷条件下における保存時に薬物自身の安定性だけでなく、粒子間凝集を引き起こすことが懸念される。
上記の如く、粉末吸入剤分野において、粉末粒子の肺内送達性を改善する試みは種々行われているが、安全性が高く、経時的な安定性に優れ、優れた肺内送達性を示し、また場合により，生理活性物質に応じた徐放性の付与が可能で、簡便な方法により調製可能な吸入用粉末医薬組成物については、改善の余地がある。
発明の開示
このような状況下において、本発明者らは前記課題の克服を目的として鋭意研究した結果、コレステロール、水素添加レシチン等の静電凝集を抑制し、相転移温度および／または融点が４０℃以上である、特定の物質を選択し、微小な結晶状態の生理活性物質粉末に前記特定物質を被覆した際には、その被覆を施していない結晶生理活性物質、あるいは結晶状態にない生理活性物質を含む前記特定物質により被覆した粉末粒子よりも粉末同士の凝集性が改善され、良好な肺内送達性を示すこと、高温条件下に経時的に保存した後においても優れた肺内送達性を示すことを知った。さらに該特定物質の中でも疎水性物質を用いた場合、被覆粒子は、後述の溶出試験法において試験開始初期の溶出を十分に抑制した徐放性の溶出を示すことを知見して、本発明を完成するに至った。
本発明によって肺内送達性が著しく改善される機構は、未だ明らかとはなっていないが、微小な結晶状態の生理活性物質に前記特定物質を被覆したことによって、粉末粒子同士が接触する部位に生理活性物質が顕在しておらず、粒子同士の付着性が低下した結果によるものと推察される。また徐放性に関しては、非晶質の生理活性物質が顕在している技術（非晶質の生理活性物質を含むマトリックス技術）に比較して、溶出液に晒される生理活性物質の部分が少ないため、より疎水的な環境がつくられ、溶出液の浸透の遅延等が起こった結果、徐放性を達成したものと推察される。溶出試験開始初期の生理活性物質の溶出が抑制されたのも、非晶質状態の生理活性物質が顕在していないことによるものと推察される。
粒子を微小とする場合、表面積の増大により、通常は溶出が速くなるところ、微小な結晶状態の生理活性物質を用いた上においても、徐放性が達成され、かつ安定性、肺内送達性も達成できたことは、予想し得ない結果であった。
なお薬物を滑沢剤とともに高分子水溶液中に懸濁させた状態で微細化し、続いて噴霧乾燥することにより得た粉末吸入剤の開示がされている（【特許文献３】特開平１１−７９９８５号公報）。当該技術は、滑沢剤を薬物上に高分子で接着し、滑沢剤を薬物の表面上に点在させることで粉末分散装置への付着量を減じ、気相中での分散性を改善しようとしたものであり、その滑沢剤の添加量が１−３％重量であることから、生理活性物質の被覆を目的とする本発明の技術的手段と相違するものである。またこの技術においては接着基剤としての高分子物質の使用が必須であり、使用されているヒドロキシプロピルセルロースなどは生体内で分解されないので肺内蓄積も懸念される。
すなわち、本発明は、
１．粒子径が０．５μｍ−８μｍである結晶状態の生理活性物質を、融点および／または相転移温度が４０℃以上である生体適合性の静電凝集抑制物質で被覆してなる、粒子径が０．５−８μｍであることを特徴とする吸入用粉末医薬組成物、
２．融点および／または相転移温度が４０℃以上である生体適合性の静電凝集抑制物質が水素添加レシチン、ジステアロイルホスファチジルコリン、コレステロール、パルミチン酸コレステロールエステル、ステアリン酸コレステロールエステル、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレングリコール、ポリエチレングリコール４０００，ポリエチレングリコール６０００、ポリエチレングリコール２００００、Ｌ−シスチンからなる群より選択される１種または２種以上である上記１に記載の吸入用粉末医薬組成物、
３．融点および／または相転移温度が４０℃以上である生体適合性の静電凝集抑制物質が水素添加レシチン、コレステロール、ジステアロイルホスファチジルコリン、ポリエチレングリコール４０００からなる群より選択される１種または２種以上である上記２に記載の吸入用粉末医薬組成物、
４．融点および／または相転移温度が４０℃以上である生体適合性の静電凝集抑制物質が水素添加レシチン、コレステロールのうち、１種または２種である上記３に記載の吸入用粉末医薬組成物、
５．生理活性物質０．０５−９５重量％と融点および／または相転移温度が４０℃以上である生体適合性の静電凝集抑制物質５−９９．９５重量％とを含有し、前記生理活性物質に該物質を被覆してなる幾何学的粒子径が０．５−８μｍであることを特徴とする上記２に記載の吸入用粉末医薬組成物、
６．粒子径が０．５μｍ−８μｍである結晶状態の生理活性物質を、融点および／または相転移温度が４０℃以上である生体適合性の静電凝集抑制物質で被覆してなる、粒子径が０．５−８μｍであることを特徴とする吸入用粉末医薬組成物の製造方法、
７．融点および／または相転移温度が４０℃以上である生体適合性の静電凝集抑制物質が水素添加レシチン、ジステアロイルホスファチジルコリン、コレステロール、パルミチン酸コレステロールエステル、ステアリン酸コレステロールエステル、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレングリコール、ポリエチレングリコール４０００，ポリエチレングリコール６０００、ポリエチレングリコール２００００、Ｌ−シスチンからなる群より選択される１種または２種以上である上記６に記載の吸入用粉末医薬組成物の製造方法、
８．融点および／または相転移温度が４０℃以上である生体適合性の静電凝集抑制物質が水素添加レシチン、コレステロール、ジステアロイルホスファチジルコリン、ポリエチレングリコール４０００からなる群より選択される１種または２種以上である上記７に記載の吸入用粉末医薬組成物の製造方法、
９．融点および／または相転移温度が４０℃以上である生体適合性の静電凝集抑制物質が水素添加レシチン、コレステロールのうち、１種または２種である上記８に記載の吸入用粉末医薬組成物の製造方法、
１０．生理活性物質０．０５−９５重量％と融点および／または相転移温度が４０℃以上である生体適合性の静電凝集抑制物質５−９９．９５重量％とを含有し、前記生理活性物質に該物質を被覆してなる幾何学的粒子径が０．５−８μｍであることを特徴とする上記７に記載の吸入用粉末医薬組成物の製造方法、
に関する。
本発明に用いる生理活性物質について、「微小」であるとはその幾何学的粒子径が０．５μｍ−８μｍ、好ましくは０．５μｍ−５μｍ、更に好ましくは０．５μｍ−３μｍである、微小化された生理活性物質を意味する。
ここで「幾何学的粒子径」とは、粉末の一次粒子の平均粒子径を示し、例えば、粒子が三次元的にランダムに配向しているものとして，一定の方向に粒子の寸法を測ることで得られる粒子径である定方向径の一つであるフェレー径を測定することにより求めることができる。フェレー径は、一定の方向に粒子の最大寸法を測ることで測定することができ、本発明においては、例えば電子顕微鏡（ＪＳＭ−５４００日本電子社製）の２０００倍の倍率の画像中にある粒子１００個のフェレー径を測定し、その平均値より求めた値を意味する。
「結晶状態」とは、本発明の生理活性物質が結晶として存在していることを意味し、一部非晶質（アモルファス）の状態として存在している形態も含むことができる。「一部」とは全体の重量に対して、約０％−約３０％、好ましくは約０％−約１５％、さらに好ましくは約０％−約１０％の重量割合を意味する。
また本発明における「融点」とは特に固相状態の物質が液相状態と平衡を保つ時の温度を、「相転移温度」とは、物質が異なる相に移る温度を意味し、例えば固体相から液体相に移る温度，あるいはガラス転移温度をいう。「融点および／または相転移温度」との記載は、融点、または相転移温度のいずれをも有する物質が存在するためである。例えばホスファチジルコリン（融点：約２３５℃、相転移温度：−１５〜−１７℃）は排除される。融点および／または相転移温度が４０℃以下の場合，該物質は排除される。
本発明における「生体適合性」とは、生体内に存在する物質、あるいは製薬学的に許容される生体内において溶解、分解する物質を意味する。例えば、日本薬局方（第十四改正、広川書店）、医薬品添加物辞典（厚生省薬務局審査課推薦、日本医薬品添加剤協会編集）、ＵＳＰ、ＥＰおよびＩＮＡＣＴＩＶＥ  ＩＮＧＲＥＤＩＥＮＴ  ＧＵＩＤ（ｂｙ  Ｄｒｕｇ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ）に掲載されているもの等を示し、特に吸入剤および注射剤用の賦形剤として用いられるものが好適な例である。
本発明における「静電凝集抑制物質」とは、例えば該物質を用いて結晶状態の微小な生理活性物質を被覆することにより得られた粉末の静電電荷量を、後記試験例に示すファラデーゲージ法により測定するとき、０以上３ｘ１０−９Ｑ以下を示す物質を意味する。
また本発明における「被覆」とは、微小な生理活性物質に静電凝集抑制物質を被覆することを意味する。すなわち本発明においては、生理活性物質全体を前記物質で覆う態様、或いは一部を覆う態様の両者を「被覆」と定義する。また本発明における「被覆」には、前記物質中に結晶状態の生理活性物質が分散、保持される態様（いわゆるマトリックス）も含むことができる。しかしながら、非晶質の生理活性物質を含むマトリックスの態様は含まない。用いる結晶状態の生理活性物質の粒子径により、得られる上記記載の態様が異なるため、得られた組成物には、結晶状態の生理活性物質を含有する上記各態様をすべて含むことも可能である。
本発明記載の「肺内送達率」とは空気力学的に肺内に送達可能とされる粉末の全粉末に対する割合を意味する。「空気力学的に」とは空気中における粒子の特性を意味する。具体的には、カスケードインパクター法（第２４版米国薬局方）に従い「肺内送達率」を測定した場合、カットオフ径が０．４３−５．８０μｍの範囲の各プレート上に補足された粉末の割合を意味する。また、Ｔｗｉｎ  Ｉｍｐｉｎｇｅｒ法（第２３版米国薬局方）に従い測定した場合には、Ｓｔａｇｅ２に送達した粉末の割合を意味する。特に本発明に記載の「優れた肺内送達性」とは、以下に定義する改善率が３０％以上であることを意味する。
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本発明に記載の「安定性に優れる」とは、特定の条件下、例えば４０°等で本発明の吸入用医薬粉末を保存した際にも粒子の凝集が認められないこと、または肺内送達率が低下しないことを意味する。
本発明をさらに詳細に説明する。
本発明における組成物の製造の際に供する生理活性物質の幾何学的粒子径としては、約０．５μｍ−約８μｍ、好ましくは約０．５μｍ−約５μｍ、更に好ましくは約０．５μｍ―約３μｍである。
また本発明粉末医薬組成物の幾何学的粒子径としては、約０．５−約８μｍであることが好ましく、約０．５−約５μｍであることがさらに好ましい。加えて、最適な幾何学粒子径は約０．５−約３μｍである。生理活性物質の幾何学的粒子径と粉末医薬組成物の幾何学的粒子径に差がないのは、生理活性物質が非常に薄い静電凝集抑制物質の皮膜によって覆われている態様、あるいは生理活性物質の一部のみが覆われている態様、双方を含み得る等の態様があることによる。
本発明の組成物は、生体適合性の静電凝集抑制物質で結晶状態の微小な生理活性物質を被覆した態様である。例えば、１種以上の生体適合性の静電凝集抑制物質で結晶状態の微小な生理活性物質を被覆した構造、結晶状態の微小な生理活性物質を複数の生体適合性の静電凝集抑制物質で多層に被覆した構造、あるいは複数の結晶状態の微小な生理活性物質を生体適合性の静電凝集抑制物質で被覆した構造などが挙げられる。さらに、所望の肺内送達性を達成するために、構造の異なる上記組成物を適切な割合で複数配合し、供することも可能である。
また、吸入剤の領域で一般に利用される幾何学的粒子径が２０μｍ以上の乳糖に代表される大きな粒子（以下キャリアーと記載する）と１種以上の生体適合性の静電凝集抑制物質で被覆した結晶状態の生理活性物質とを混合して供することも可能である。吸入剤の領域で一般に利用されるキャリアーには、具体的にはＤＭＶ社製の乳糖微粒子Ｐｈａｒｍａｔｏｓｅ  ３２５Ｍ（幾何学的平均粒子径、約６０μｍ）等が挙げられる。
本発明に用いられる生体適合性の静電凝集抑制物質としては、生体内に存在する物質、あるいは製薬学的に許容される生体内において溶解、分解するもので、粉末の生体適合性の静電凝集抑制物質であり、脂質、脂肪酸及びそのエステル、界面活性剤、ポリエチレングリコール、アミノ酸等が挙げられる。具体的にはリン脂質、テルペノイド、脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、アミノ酸等を挙げることができ、融点および／または相転移温度が４０℃以上のものである。４０度より低い場合、製造上取扱い難く、また本発明吸入用医薬組成物の経時的な安定化に寄与しない。
リン脂質としてはグリセロリン脂質およびスフィンゴリン脂質、あるいはこれらの混合物が好ましく、水素添加レシチン、ジステアロイルホスファチジルコリンが特に好ましい。水素添加レシチンには水素添加大豆レシチン、水素添加卵黄レシチン等が含まれる。
テルペノイドとしてはステロールが好ましく、コレステロールが特に好ましい。
脂肪酸エステルとしては、コレステロールの脂肪酸エステルが好ましく、パルミチン酸コレステロールエステル、ステアリン酸コレステロールエステル、これらの混合物が挙げられる。
ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレングリコールとしては、ポリオキシエチレン（１６０）−ポリオキシプロピレン（３０）グリコール（商品名：プルロニックＦ６８、旭電化工業社製）が好適である。
ポリエチレングリコールとしては、ポリエチレングリコール４０００，ポリエチレングリコール６０００、ポリエチレングリコール２００００が好ましい。
アミノ酸としてはＬ−シスチンが好適である。
上記生体適合性の静電凝集抑制物質の１種又は２種以上を適宜組み合わせ用いることも可能である。
徐放性の性質を付与させる場合には、生体適合性の静電凝集抑制物質として疎水性物質を選択する。ここで「疎水性」とは、２０±５℃で５分ごとに強く３０秒間振り混ぜるとき、３０分以内に溶ける度合いのうち、溶質１ｇを溶かすのに１０００ｍＬ以上の水あるいは崩壊試験液第２液（日本薬局方（第十四改正、広川書店））を要する性質を意味し、日本薬局方通則記載の溶解性を示す用語である、「極めて溶けにくい」もしくは「ほとんど溶けない」、を意味する。
「徐放性」とは、肺内体液量等を想定した少量の溶出液を用いたｉｎ  ｖｉｔｒｏ溶出試験方法で該組成物の溶出を測定するとき、２時間、好ましくは６時間、さらに好ましくは１２時間持続的な溶出を示すことを意味する。さらにまた好ましくは、試験開始３０分後の溶出率が０−３０％、かつ試験開始１２０分後の溶出率が０−５０％であることを意味する。
疎水性物質としては、例えば、テルペノイド、リン脂質、脂肪酸エステル、アミノ酸等が挙げられる。具体的な疎水性物質としては、コレステロール、水素添加レシチン、コレステロールの脂肪酸エステル、例えばパルミチン酸コレステロールエステル、ステアリン酸コレステロールエステル、Ｌ−シスチン等を挙げることができる。もちろん、上記生体適合性の疎水性物質の１種または２種以上を適宜組み合わせ用いることも可能である。
さらに生体適合性の静電凝集抑制物質の配合量は、通常結晶状態の生理活性物質あるいは医薬用途（適応症）に合わせ適宜選定されるが、好ましくは組成物全体の３−９９．９５重量％、また好ましくは５から９９．９５重量％、さらに好ましくは７．５−９９．５重量％、さらにまた好ましくは１０−９５重量％である。
本発明の粉末に適応できる生理活性物質としては、局所適用あるいはあるいは全身適用の吸入薬として有用な生理活性物質であって、結晶状態となりうるものであれば、特に限定されない。また、１種又は２種以上の生理活性物質を適宜組み合わせて用いることも可能である。
例えば、局所適用として、特に喘息、慢性閉塞性呼吸器疾患（ＣＯＰＤ）、感染症に有用であり、副腎皮質ホルモン類、β２アドレノ受容体アゴニスト、抗コリン作動性気管支拡張剤、抗アレルギー剤、抗ヒスタミン剤、ロイコトリエン拮抗薬／阻害薬、トロンボキサン拮抗薬／阻害薬、ロイコトリエン・トロンボキサン拮抗薬／阻害薬、５−リポキシオキシゲナーゼ阻害薬、ホスホジエステラーゼＩＶ阻害薬、ホスホリパーゼＡ２阻害剤、Ｃａ２＋ｒｅｌｅａｓｅ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ  Ｃａ２＋チャンネル阻害薬、アデノシンＡ２アゴニスト、エンドセリンＡ拮抗薬、抗ウイルス薬、嚢胞性肺疾患治療薬、去痰剤、肺サーファクタント等が挙げられる。
副腎皮質ホルモン類としては、フルチカゾン、ベクロメタゾン、トリアムシノロン、フルニソリド、ブデソニド、ベタメタゾン、デキサメタゾン、フルオシノロンロフレポニド、モメタゾン等およびこれらの塩が挙げられる。
β２アドレノ受容体アゴニストとしては、ホルモテロール、サルブタモール、テルブタリン、イソプロテレノール、フェノテロール、アドレナリン、ピルブテロール、サルメテロール、プロカテロール、プロキサテロール等およびこれらの塩が挙げられる。
抗コリン作動性気管支拡張剤としては、（＋）−（１Ｓ，３’Ｒ）−ｑｕｉｎｕｃｌｉｄｉｎ−３’−ｙｌ１−ｐｈｅｎｙｌ−１，２，３，４−ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｉｓｏｑｕｉｎｏｌｉｎｅ−２−ｃａｒｂｏｘｙｌａｔｅ、イプラトロピウム、チオトロピウム等およびこれらの塩が挙げられる。
抗アレルギー剤としては、クロモグリク酸、ネドクロミル等およびこれらの塩が挙げられる。
抗ヒスタミン剤としては、ケトチフェン、アゼラスチン、テルフェナジン等およびこれらの塩が挙げられる。
ロイコトリエン拮抗薬／阻害薬としては、プランルカスト、ザフィルカスト、モンテルカスト等およびこれらの塩が挙げられる。
トロンボキサン拮抗薬／阻害薬としては、セラトロダスト、オザグレル等およびこれらの塩が挙げられる。
ロイコトリエン・トロンボキサン拮抗薬／阻害薬としては、Ｎ−［５−［３−［（４−ｃｈｌｏｒｏｐｈｅｎｙｌ）ｓｕｌｆｏｎｙｌ］ｐｒｏｐｙｌ］−２−（１Ｈ−ｔｅｔｒａｚｏｌ−５−ｙｌｍｅｔｈｏｘｙ）ｐｈｅｎｙｌ］−３−［［４−（１，１−ｄｉｍｅｔｈｙｌｅｔｈｙｌ）−２−ｔｈｉａｚｏｌｙｌ］ｍｅｔｈｏｘｙ］ｂｅｎｚａｍｉｄｅ等およびその塩が挙げられる。
５−リポキシオキシゲナーゼ阻害薬としては、ザイリュートン等およびその塩が挙げられる。
ホスホジエステラーゼＩＶ阻害薬としては、３−［４−（３−ｃｈｌｏｒｏｐｈｅｎｙｌ）−１−ｅｔｈｙｌ−７−ｍｅｔｈｙｌ−２−ｏｘｏ−１，２−ｄｉｈｙｄｒｏ−１，８−ｎａｐｈｔｈｙｒｉｄｉｎ−３−ｙｌ］ｐｒｏｐａｎｏｉｃ  ａｃｉｄ、ロフルミラスト、シロミラスト等およびこれらの塩が挙げられる。
Ｃａ２＋ｒｅｌｅａｓｅ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ  Ｃａ２＋チャンネル阻害薬としては、４−ｍｅｔｈｙｌ−４’−［３，５−ｂｉｓ（ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｙｌ）−１Ｈ−ｐｙｒａｚｏｌ−１−ｙｌ］−１，２，３−ｔｈｉａｄｉａｚｏｌｅ−５−ｃａｒｂｏｘａｎｉｌｉｄｅ等およびその塩が挙げられる。
エンドセリンＡ拮抗薬としては、
Ｎ−６−ｍｅｔｈｏｘｙ−５−（２−ｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｏｘｙ）−２−（ｐｙｒｉｍｉｄｉｎ−２−ｙｌ）ｐｙｒｉｍｉｄｉｎ−４−ｙｌ］−２−ｐｈｅｎｙｌｅｔｈｅｎｅｓｕｌｆｏｎａｍｉｄａｔｅ）等およびその塩が挙げられる。
抗ウイルス薬としては、ザナミビル、Ｏｓｅｌｔａｍｉｖｉｒ等およびこれらの塩が挙げられる。
嚢胞性肺疾患治療薬として、ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ｈｕｍａｎ  ｄｅｏｘｙｒｉｂｏｎｕｃｌｅａｓｅ  Ｉ（ｒｈＤＮＡａｓｅ  Ｉ）等が挙げられる。
去痰剤として、アンブロキソール等およびその塩が挙げられる。
肺サーファクタントとしては、天然（抽出物）、及び人工肺サーファクタント等が挙げられる。
また、全身適用としては、各種の疾患に有用と考えられるが、糖尿病薬（インスリン及びその誘導体等）、鎮痛薬（モルヒネ、アセトアミノフェン等）、抗パーキンソン薬（レボドパ等）、抗関節炎薬（セレコキシブ、バルデコキシブ等）、抗菌剤（アムフォテリシンＢ、ファロペネムナトリウム）、肺高血圧症薬（プロスタグランジンＥ１、プロスタグランジンＩ２（ベラプロストナトリウム等）、およびその誘導体等）、化学療法剤（インターフェロン、シスプラチン、ドキソルビシン、メソトレキセート、塩酸ダウノルビシン、フルオロウラシル等）、免疫抑制剤（シクロスポリン、タクロリムス等）、鎮咳薬（コデイン、ジヒドロコデイン、エフェドリン、メチルエフェドリン等）、ワクチン剤（肺炎球菌ワクチン等）等が挙げられる。
さらにこれらに、ペプチド・タンパク類（インスリン、ＬＨＲＨ、グルカゴン、ヒト成長ホルモン等）、サイトカイン類（インターフェロン、インターロイキン等）、遺伝子薬類（Ｐｌａｓｍｉｄ  ＤＮＡ等）、ベクター類（ウイルスベクター、非ウイルス性ベクター、リポソーム）、アンチセンス類（アデノシンＡ１受容体のアンチセンス等）等も含まれる。
なお、生理活性物質成分は、生理活性物質の合剤でもあり得る。
また好ましい化合物として、以下の化合物Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅをあげることができる。化合物Ａは、Ｎ−［５−［３−［（４−ｃｈｌｏｒｏｐｈｅｎｙｌ）ｓｕｌｆｏｎｙｌ］ｐｒｏｐｙｌ］−２−（１Ｈ−ｔｅｔｒａｚｏｌ−５−ｙｌｍｅｔｈｏｘｙ）ｐｈｅｎｙｌ］−３−［［４−（１，１−ｄｉｍｅｔｈｙｌｅｔｈｙｌ）−２−ｔｈｉａｚｏｌｙｌ］ｍｅｔｈｏｘｙ］ｂｅｎｚａｍｉｄｅ、化合物Ｂは、４−ｍｅｔｈｙｌ−４’−［３，５−ｂｉｓ（ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｙｌ）−１Ｈ−ｐｙｒａｚｏｌ−１−ｙｌ］−１，２，３−ｔｈｉａｄｉａｚｏｌｅ−５−ｃａｒｂｏｘａｎｉｌｉｄｅ、化合物Ｃは、３−［４−（３−ｃｈｌｏｒｏｐｈｅｎｙｌ）−１−ｅｔｈｙｌ−７−ｍｅｔｈｙｌ−２−ｏｘｏ−１，２−ｄｉｈｙｄｒｏ−１，８−ｎａｐｈｔｈｙｒｉｄｉｎ−３−ｙｌ］ｐｒｏｐａｎｏｉｃ  ａｃｉｄ、化合物Ｄは、（＋）−（１Ｓ，３’Ｒ）−ｑｕｉｎｕｃｌｉｄｉｎ−３’−ｙｌ１−ｐｈｅｎｙｌ−１，２，３，４−ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｉｓｏｑｕｉｎｏｌｉｎｅ−２−ｃａｒｂｏｘｙｌａｔｅ  ｍｏｎｏｓｕｃｃｉｎａｔｅ、化合物Ｅは、ｐｏｔａｓｓｉｕｍ（Ｅ）−Ｎ−［６−ｍｅｔｈｏｘｙ−５−（２−ｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｏｘｙ）−２−（ｐｙｒｉｍｉｄｉｎｅ−２−ｙｌ）ｐｙｒｉｍｉｄｉｎｅ−４−ｙｌ］−２−ｐｈｅｎｙｌｅｔｈｅｎｅｓｕｌ  ｆｏｎａｍｉｄａｔｅである。
結晶状態の生理活性物質の配合量は、通常生理活性物質あるいは医薬用途（適応症）に合わせ、治療学的に有効な量あるいは予防学的に有効な量が適宜選定され、一概には規定することはできないが、例えば、組成物全体の０．０５から９９．９５重量％、好ましくは０．０５から９９．５重量％、より好ましくは、０．０５から９９重量％、さらに好ましくは、０．０５から９５重量％を選択することができる。
本発明の組成物を吸入投与する方法については、特に限定されないが、通常の吸入剤と同様に、本発明の組成物を適当なカプセルあるいはブリスターに充填し、適当な吸入デバイスにより吸入することができる。あるいは本発明の組成物を適当な溶剤に分散し、ネブライザーにより吸入することもできる。また、加圧下に液化可能な塩素フリーのフルオロ炭化水素ＨＦＡ等の噴射剤ガスに分散し、汎用されている定量噴霧式吸入器ＭＤＩ（Ｍｅｔｅｒ  Ｄｏｓｅ  Ｉｎｈａｌｅｒ）として吸入することも可能である。
さらに、本発明の組成物の製剤形態としては、吸入デバイス等で分散後、肺内に到達可能な粉末となるものが選択できる。すなわち、適切な手段により、投与時に粉末あるいは１次粒子として存在し得る微粒子となる製剤の態様をとればよい。例えば、本発明の組成物は、カプセル充填すべく粉末の流動性をさらに改善するため、固形剤の分野で一般的な造粒物の態様をとることもできる。また、キャリアーに本発明の組成物を適当量混合した態様をとることも可能である。
本発明の組成物の製剤化に際しては、その肺内送達特性に影響を及ぼさない範囲で、固形製剤化の公知の方法が利用でき、従来から使用されている添加剤の１種及び／または２種以上を適宜組み合わせて使用できる。このような添加剤としては、結合剤、増量剤、賦形剤、滑沢剤、やく味剤、香料などを挙げることができる。具体的には、結合剤としては例えば乳糖、マンニトール、果糖、ブドウ糖、フマル酸、デンプン、ゼラチンが挙げられ、賦形剤としては、例えば乳糖、マルトース、マンニトール、キシリトール、グリシン、アスパラギン酸、デンプン、ゼラチン、デキストラン、クエン酸が挙げられる。滑沢剤としては、乳糖、デンプン、ゼラチン、フマル酸、リン酸、やく味剤としては、乳糖、マルトース、マンニトール、果糖、キシリトール、クエン酸を具体的な例として挙げることができる。
「肺内送達特性に影響を及ぼさない範囲で」とは、吸入時に、当初の組成物の肺内送達性を損なわないことを意味する。
なお本発明において使用することができる結合剤は、本発明の静電凝集抑制物質を生理活性物質に付着する目的で使用することはない。
本発明の組成物は、簡便な製造方法で調製しうる。例えばコレステロール等の生体適合性の静電凝集抑制物質を溶解した適当な溶剤に、幾何学的粒子径が５μｍ以下に製した結晶状態の生理活性物質を懸濁した懸濁液をスプレードライヤーによる噴霧乾燥法等により溶媒を留去し、結晶状態の生理活性物質を生体適合性の静電凝集抑制物質で被覆した組成物を製することも可能である。幾何学的粒子径が５μｍ以下の粒子の製造法としては、公知の方法が利用でき、ジェットミル、マイクロフルイダイザー等による微粉砕法、あるいはスプレードライヤー、二酸化炭素等の超臨界流体を用いた手法（超臨界流体法）等による微粒子製造法を用いることが出来る。
生体適合性の静電凝集抑制物質を溶解する適当な溶剤として、エタノール，メタノール等の有機溶媒，また水，ＣＯ２等の超臨界流体等をあげることができる。これら溶剤の中から、生理活性物質に応じて、生理活性物質を溶解せず、静電凝集抑制物質を溶解するものが選択される。また生理活性物質および静電凝集抑制物質の双方を溶解する溶剤であっても、異なる溶剤の混合，超臨界流体と溶剤の混合，またその条件等を調整することによって静電凝集抑制物質のみを溶解することも可能となる。本発明の製造方法は、これらの製造方法により限定的に解釈されるものではない。
次に本発明吸入用粉末医薬組成物の製造方法を説明する。
結晶状態の生理活性物質をジェットミル粉砕機（ホソカワミクロン社製スパイラルジェットミル５０ＡＳ）にて、粉砕エアー圧力５．０ｂ、供給エアー圧力５．５ｂで粉砕し、幾何学的粒子径が５μｍ以下の微粒子を調製する。次に例えばコレステロール（日油リポソーム社製）をエタノール及び精製水の混液に溶解させた後、該ジェットミル粉砕微粒子を加え、超音波処理を５分間行い、懸濁液を調製する。この懸濁液を例えばスプレードライヤー（例えばヤマト社製、ＤＬ−４１）にて、適切な条件により、本発明吸入用粉末医薬組成物を得る。
生理活性物質が結晶状態にあるか否かは、Ｘ線回折、示差走査熱量測定法（ＤＳＣ：Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  Ｓｃａｎｎｉｎｇ  Ｃａｌｏｒｉｍｅｔｒｙ）等の方法を採用し確認することができる。
本発明は、結晶状態の生理活性物質および生体適合性の静電凝集抑制物質からなり、安全性、安定性に優れ、優れた肺内送達性を達成した吸入用粉末医薬組成物を簡便な方法により提供することを可能とした点において顕著な効果を奏するものである。
また更に疎水性物質を選択することにより、生理活性物質の特性に合わせた徐放性の付与も可能となった。
発明を実施するための最良の形態
下記に、本発明の内容を例を挙げて説明するが、これにより本発明が限定的に解釈されるものではない。
実施例１．化合物Ａ（フリー体）微粉末にコレステロールを２５重量％被覆した吸入用粉末医薬組成物の調製
コレステロール（日油リポソーム社製）０．６ｇ、エタノール４００ｇ及び精製水１９７ｇを混合した溶液に、比較例１で製した化合物Ａ（フリー体）ジェットミル粉砕品を２．４ｇを加え、超音波処理を５分間行い、固形物濃度０．５ｗ／ｗ％なる懸濁液を調製した。この懸濁液をスプレードライヤー（ヤマト社製、ＤＬ−４１）にて、噴霧液量４ｇ／ｍｉｎ、ａｔｏｍｉｚｉｎｇ  ａｉｒ  ３ｋｇｆ／ｃｍ２、Ｄｒｙｉｎｇ  ａｉｒ  ０．８ｍ３／ｍｉｎ、吸気温度７０℃にて噴霧乾燥し、本発明吸入用粉末医薬組成物を得た。
実施例２．化合物Ａ（フリー体）微粉末にコレステロールを１１．５重量％コーチングした吸入用粉末医薬組成物の調製
コレステロール（日油リポソーム社製）０．３ｇ、エタノール２００ｇ及び精製水１００ｇを混合した溶液に、比較例１で製した化合物Ａ（フリー体）ジェットミル粉砕品を２．７ｇを加え、超音波処理５ｍｉｎを行い、固形物濃度１．０ｗ／ｗ％なる懸濁液を調製した。この懸濁液をスプレードライヤー（ヤマト社製、ＤＬ−４１）にて、噴霧液量２ｇ／ｍｉｎ、ａｔｏｍｉｚｉｎｇ  ａｉｒ  ３ｋｇｆ／ｃｍ２、Ｄｒｙｉｎｇ  ａｉｒ  ０．８ｍ３／ｍｉｎ、吸気温度６７℃にて噴霧乾燥し、本発明吸入用粉末医薬組成物を得た。
実施例３．化合物Ａ（フリー体）微粉末にコレステロールを５．３重量％コーチングした吸入用組成物の調製
コレステロール（日油リポソーム社製）０．１５ｇ、エタノール２００ｇ及び精製水１００ｇを混合した溶液に、比較例１で製した化合物Ａ（フリー体）ジェットミル粉砕品を２．８５ｇを加え、超音波処理５ｍｉｎを行い、固形物濃度１．０ｗ／ｗ％なる懸濁液を調製した。この懸濁液をスプレードライヤー（ヤマト社製、ＤＬ−４１）にて、噴霧液量２ｇ／ｍｉｎ、ａｔｏｍｉｚｉｎｇ  ａｉｒ  ３ｋｇｆ／ｃｍ２、Ｄｒｙｉｎｇ  ａｉｒ  ０．８ｍ３／ｍｉｎ、吸気温度６５℃にて噴霧乾燥し、本発明吸入用粉末医薬組成物を得た。
実施例４．化合物Ａ（フリー体）微粉末に水素添加レシチンを２５重量％コーチングした吸入用組成物の調製
水素添加大豆レシチン（日油リポソーム社製）０．６ｇをエタノール４００ｇに溶解し、精製水１９７ｇを混合後、約５０℃に加温する。比較例１で製した化合物Ａ（フリー体）ジェットミル粉砕品を２．４ｇを加え、約５０℃に加温しながら、超音波処理５ｍｉｎを行い、固形物濃度０．５ｗ／ｗ％なる懸濁液を調製した。約５０℃のこの懸濁液をスプレードライヤー（ヤマト社製、ＤＬ−４１）にて、噴霧液量４ｇ／ｍｉｎ、ａｔｏｍｉｚｉｎｇ  ａｉｒ  ３ｋｇｆ／ｃｍ２、Ｄｒｙｉｎｇ  ａｉｒ  ０．８ｍ３／ｍｉｎ、吸気温度７０℃にて噴霧乾燥し、本発明吸入用粉末医薬組成物を得た。
実施例５．化合物Ａ（フリー体）微粉末にポリエチレングリコール４０００を２５％コーティングした吸入用組成物の調製
ポリエチレングリコール４０００（関東化学社製）０．６ｇ、エタノール２００ｇ及び精製水３９７ｇを混合した溶液に、比較例１で製した化合物Ａ（フリー体）ジェットミル粉砕品を２．４ｇを加え、超音波処理５ｍｉｎを行い、固形物濃度０．５ｗ／ｗ％なる懸濁液を調製した。この懸濁液をスプレードライヤー（ヤマト社製、ＤＬ−４１）にて、噴霧液量４ｇ／ｍｉｎ、ａｔｏｍｉｚｉｎｇ  ａｉｒ  ３ｋｇｆ／ｃｍ２、Ｄｒｙｉｎｇ  ａｉｒ  ０．８ｍ３／ｍｉｎ、吸気温度７０℃にて噴霧乾燥し、本発明吸入用粉末医薬組成物を得た。
実施例６．化合物Ａ（フリー体）微粉末にプルロニックＦ６８を２５％コーティングした吸入用組成物の調製
プルロニックＦ６８（旭電化工業社製）０．４ｇ、エタノール２６７ｇ及び精製水１３１ｇを混合した溶液に、比較例１で製した化合物Ａ（フリー体）ジェットミル粉砕品を１．６ｇを加え、超音波処理を５分間行い、固形物濃度０．５ｗ／ｗ％なる懸濁液を調製した。この懸濁液をスプレードライヤー（ヤマト社製、ＤＬ−４１）にて、噴霧液量４ｇ／ｍｉｎ、ａｔｏｍｉｚｉｎｇ  ａｉｒ  ３ｋｇｆ／ｃｍ２、Ｄｒｙｉｎｇ  ａｉｒ  ０．８ｍ３／ｍｉｎ、吸気温度７０℃にて噴霧乾燥し、本発明吸入用粉末医薬組成物を得た。
実施例７．化合物Ａ（フリー体）微粉末にＬ−シスチンを１１．５重量％コーチングした吸入用粉末医薬組成物の調製
Ｌ−シスチン（日本理化学社製）０．２ｇを０．０１Ｎ−ＮａＯＨ溶液２５０ｇに溶解し、エタノール１３５ｇを加え混合した。０．１Ｎ−ＨＣｌを約１５ｍｌ加え、弱アルカリに中和させた。化合物Ａ（フリー体）ジェットミル粉砕品を１．８ｇを加え、超音波処理を５分間行い、固形物濃度０．５ｗ／ｗ％なる懸濁液を調製し、スプレードライヤー（ヤマト社製、ＤＬ−４１）にて、噴霧液量４ｇ／ｍｉｎ、ａｔｏｍｉｚｉｎｇ  ａｉｒ  ３ｋｇｆ／ｃｍ２、Ｄｒｙｉｎｇ  ａｉｒ  ０．８ｍ３／ｍｉｎ、吸気温度７０℃にて噴霧乾燥し、本発明吸入用粉末医薬組成物を得た。
実施例８．化合物Ａ（フリー体）微粉末にジステアロイルホスファチジルコリンを２５重量％被覆した吸入用粉末医薬組成物の調製
ジステアロイルホスファチジルコリン（日油リポソーム社製）０．６ｇ、エタノール４２０ｇ及び精製水１９７ｇを混合した溶液に、比較例１で製した化合物Ａ（フリー体）ジェットミル粉砕品２．４ｇを加え、超音波処理を５分間行い、固形物濃度０．５ｗ／ｗ％なる懸濁液を調製した。この懸濁液をスプレードライヤー（ヤマト社製、ＤＬ−４１）にて、噴霧液量８ｇ／ｍｉｎ、ａｔｏｍｉｚｉｎｇ  ａｉｒ  ３ｋｇｆ／ｃｍ２、Ｄｒｙｉｎｇ  ａｉｒ  ０．８ｍ３／ｍｉｎ、吸気温度８０℃にて噴霧乾燥し、本発明吸入用粉末医薬組成物を得た。
実施例９．化合物Ｂ微粉末にポリエチレングリコール４０００を２５％コーティングした吸入用粉末医薬組成物の調製
ポリエチレングリコール４０００（関東化学社製）０．６ｇ、エタノール２００ｇ及び精製水３９７ｇを混合した溶液に、比較例２で製した化合物Ｂジェットミル粉砕品を２．４ｇを加え、超音波処理５ｍｉｎを行い、固形物濃度０．５ｗ／ｗ％なる懸濁液を調製した。この懸濁液をスプレードライヤー（ヤマト社製、ＤＬ−４１）にて、噴霧液量４ｇ／ｍｉｎ、ａｔｏｍｉｚｉｎｇ  ａｉｒ  ３ｋｇｆ／ｃｍ２、Ｄｒｙｉｎｇ  ａｉｒ  ０．８ｍ３／ｍｉｎ、吸気温度７０℃にて噴霧乾燥し、本発明吸入用粉末医薬組成物を得た。
実施例１０．化合物Ａ（フリー体）微粉末に水素添加レシチンを２５重量％コーチングした組成物（実施例４）を乳糖キャリアーに混合して製した吸入用粉末医薬組成物の調製
実施例４で製した組成物５０ｍｇと吸入剤用乳糖微粒子Ｐｈａｒｍａｔｏｓｅ  ３２５Ｍ（ＤＭＶ社製）２００ｍｇを共栓付きガラス製遠沈管内で５分間混合し、吸入用粉末医薬組成物を得た。
実施例１１
水素添加レシチン（日油リポソーム社製）０．４ｇ、コレステロール（日油リポソーム社製）０．２ｇ、エタノール４００ｇ及び精製水１９７ｇを混合し約５０℃に加温する。化合物Ａ（フリー体）ジェットミル粉砕品（幾何学的粒子径２．２μｍ）２．４ｇを加え、約５０℃に加温しながら、超音波処理５ｍｉｎを行い、固形物濃度０．５ｗ／ｗ％なる懸濁液を調製した。約５０℃のこの懸濁液をスプレードライヤー（ヤマト社製、ＤＬ−４１）にて、噴霧液量８ｇ／ｍｉｎ、ａｔｏｍｉｚｉｎｇ  ａｉｒ  ３ｋｇｆ／ｃｍ２、Ｄｒｙｉｎｇ  ａｉｒ  ０．８ｍ３／ｍｉｎ、吸気温度８０℃にて噴霧乾燥し、本発明徐放性吸入用医薬組成物を得た。
実施例１２．化合物Ｃ微粉末にポリエチレングリコール４０００を２５％コーティングした吸入用粉末医薬組成物の調製
ポリエチレングリコール４０００（関東化学社製）０．６ｇ、エタノール１００ｇ及び精製水４９７ｇを混合した溶液に、比較例６で製した化合物Ｃジェットミル粉砕品を２．４ｇを加え、超音波処理５ｍｉｎを行い、固形物濃度０．５ｗ／ｗ％なる懸濁液を調製した。この懸濁液をスプレードライヤー（ヤマト社製、ＤＬ−４１）にて、噴霧液量８ｇ／ｍｉｎ、ａｔｏｍｉｚｉｎｇ  ａｉｒ  ３ｋｇｆ／ｃｍ２、Ｄｒｙｉｎｇ  ａｉｒ  ０．７ｍ３／ｍｉｎ、吸気温度８５℃にて噴霧乾燥し、本発明吸入用粉末医薬組成物を得た。
比較例１．化合物Ａ（フリー体）ジェットミル粉砕してなる吸入用粉末の調製
化合物Ａ（フリー体）８０ｇをジェットミル粉砕機（ホソカワミクロン社製スパイラルジェットミル５０ＡＳ）にて、粉砕エアー圧力５．０ｂ、供給エアー圧力５．５ｂで粉砕し、吸入用粉末を得た。
比較例２．化合物Ｂジェットミル粉砕してなる吸入用粉末の調製
化合物Ｂ８０ｇをジェットミル粉砕機（ホソカワミクロン社製スパイラルジェットミル５０ＡＳ）にて、粉砕エアー圧力５．０ｂ、供給エアー圧力５．５ｂで粉砕し、吸入用粉末を得た。
比較例３．化合物Ａ（フリー体）微粉末に相転移温度が４０℃より低い卵黄レシチンを５％コーティングした吸入用粉末の調製
卵黄レシチン（日油リポソーム社製）０．１５ｇ、エタノール４００ｇ及び精製水１９７ｇを混合した溶液に、化合物Ａ（フリー体）ジェットミル粉砕品（粒子径２．７μｍ）を２．８５ｇを加え、超音波処理５ｍｉｎを行い、固形物濃度０．５ｗ／ｗ％なる懸濁液を調製した。この懸濁液をスプレードライヤー（ヤマト社製、ＤＬ−４１）にて、噴霧液量４．５ｇ／ｍｉｎ、ａｔｏｍｉｚｉｎｇ  ａｉｒ  ３ｋｇｆ／ｃｍ２、Ｄｒｙｉｎｇ  ａｉｒ  ０．８ｍ３／ｍｉｎ、吸気温度６０℃にて噴霧乾燥し、吸入用粉末を得た。
比較例４．化合物Ａ（フリー体）ジェットミル粉砕品と乳糖キャリアーを混合して製してなる吸入用粉末の調製
比較例１で製した化合物Ａ（フリー体）微粉末５０ｍｇと乳糖微粒子（ＤＭＶ社製、Ｐｈａｒｍａｔｏｓｅ  ３２５Ｍ）２００ｍｇを共栓付きガラス製遠沈管内で５分間混合し、吸入用粉末を得た。
比較例５．化合物Ａ（フリー体）／コレステロール（８／２）からなる非晶質の化合物Ａを含むマトリックス状吸入用粉末の調製
化合物Ａ（フリー体）２．４ｇ、コレステロール（日油リポソーム社製）０．６ｇ、エタノール５０７ｇ及び精製水９０ｇを混合し、固形物濃度０．５重量％なる溶液を調製した。この溶液をスプレードライヤー（ヤマト社製、ＤＬ−４１）にて、噴霧液量６ｇ／ｍｉｎ、ａｔｏｍｉｚｉｎｇ  ａｉｒ  １．５ｋｇｆ／ｃｍ２、Ｄｒｙｉｎｇ  ａｉｒ  ０．８ｍ３／ｍｉｎ、吸気温度７０℃にて噴霧乾燥し、吸入用粉末を得た。
比較例６  化合物Ｃをジェットミル粉砕してなる吸入用粉末の調製
化合物Ｃ８０ｇをジェットミル粉砕機（ホソカワミクロン社製スパイラルジェットミル５０ＡＳ）にて、粉砕エアー圧力４．５ｂ、供給エアー圧力６．２ｂで粉砕し、吸入用粉末を得た。
比較例７ジパルミトイルフォスファチジルコリンＤＰＰＣ（日本精化社製）
０．６ｇ、エタノール４００ｇ及び精製水１９７ｇを混合した溶液に、化合物Ａ（フリー体）ジェットミル粉砕品（幾何学的粒子径２．２μｍ）を２．４ｇを加え、加温、超音波処理を５分間行い、固形物濃度０．５ｗ／ｗ％なる懸濁液を調製した。この懸濁液をスプレードライヤー（ヤマト社製、ＤＬ−４１）にて、噴霧液量４ｇ／ｍｉｎ、ａｔｏｍｉｚｉｎｇ  ａｉｒ  ３ｋｇｆ／ｃｍ２、Ｄｒｙｉｎｇ  ａｉｒ  ０．８ｍ３／ｍｉｎ、吸気温度６５℃にて噴霧乾燥し、吸入用粉末を得た。
比較例８
化合物Ａ（フリー体）１０．０ｇ、メタノール４９５ｇ及びジクロロメタン４９５ｇを混合し、固形物濃度１．０ｗ／ｗ％なる溶液を調製した。この溶液をスプレードライヤー（ヤマト社製、ＤＬ−４１）にて、噴霧液量１０ｇ／ｍｉｎ、ａｔｏｍｉｚｉｎｇ  ａｉｒ  １．０ｋｇｆ／ｃｍ２、Ｄｒｙｉｎｇ  ａｉｒ  ０．８ｍ３／ｍｉｎ、吸気温度７０℃にて噴霧乾燥して、吸入用粉末を得た。
試験例１．走査型顕微鏡による吸入用粉末医薬組成物および吸入用粉末の観察
実施例１−５、７、８、９、１２の吸入用粉末医薬組成物および比較例１−３、５、６で調製した吸入用粉末を、走査型電子顕微鏡（日本電子社製ＪＳＭ−５４００）にて観察をした。いずれの組成物および粉末も粒子径は約０．５−５μｍであり、吸入用として適する粒子径であった。
2003077891.tif 000003
試験例２．吸入用粉末医薬組成物および吸入用粉末の静電電荷量および肺内送達率
実施例１、３、４、５、７、８、９、１２で調製した吸入用粉末医薬組成物および比較例１、２、６で調製した吸入用粉末の静電電荷量はファラデーケージ法により測定した。組成物および粉末をＩＷＡＫＩポリプロピレン製遠沈管（旭テクノグラス社製）内で激しく振とうした後、１ｇの静電電荷量を静電電荷量計（春日電機社製；ＫＱ−４３１Ｂ）にて測定した。
さらに、肺内送達率を、カスケードインパクター法（第２４版米国薬局方）に則り測定した。吸入用粉末をＨＰＭＣ２号カプセルに適量充填し、吸入デバイス（ユニシアジェックス社製ＪｅｔｈａｌｅｒＴＭ）に装填した。デバイスをカスケードインパクターに装着し吸入（２８．３ｍｌ／ｍｉｎ、１０ｓｅｃ．）させた場合に、カットオフ径が０．４３−５．８０μｍの範囲の各プレート上に補足された粒子の重量を測定した。カプセル充填量に対する上記カットオフ径の各プレート上の粒子総重量を肺内送達率とした。
2003077891.tif 000004
静電凝集抑制物質で被覆された吸入用粉末医薬組成物の静電電荷量は、比較例に示す被覆されていない吸入用粉末に比べ著しく減少し、その肺内送達性は有意に改善された（表２）。また静電電荷量が０以上３ｘ１０−９Ｑ以下の時、２０％以上の良好な肺内送達率を示した。
試験例３．乳糖キャリアーを用い製した吸入用粉末医薬組成物の肺内送達率
実施例１０の吸入用粉末医薬組成物および比較例４で調製した吸入用粉末の肺内送達率を、Ｔｗｉｎ  Ｉｍｐｉｎｇｅｒ法（第２３版米国薬局方）に則り測定した。吸入用粉末医薬組成物をＨＰＭＣ２号カプセルに適量充填し、吸入デバイス（ユニシアジェックス社製ＪｅｔｈａｌｅｒＴＭ）に装填した。デバイスをＴｗｉｎ  Ｉｍｐｉｎｇｅｒにて、吸入（６０ｍｌ／ｍｉｎ、４ｓｅｃ．）させた場合のＳｔａｇｅ２に送達した化合物Ａ量をＨＰＬＣ法にて測定した。カプセル充填量に対するＳｔａｇｅ２送達量を肺内送達率とした。
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表３に示すように、表面改質された粉末はキャリアーを用い製した吸入用粉末においても、表面改質を施さない生理活性物質微粒子に比し、高い肺内送達率を示した。比較例４においては、生理活性物質微粒子のキャリアー表面への付着力が非常に強く、吸入デバイスでの粉末分散時に生理活性物質粒子がキャリアー表面から脱着できず、低い肺送達率を示したと考えられた。一方、実施例１０の組成物においては生理活性物質微粒子が表面改質されたことにより、キャリアーへの付着力が低減し、その分離分散性が高まったためと考えられた。
試験例４．過酷条件化保存時の安定性試験結果（実施例４ｖｓ比較例３）
相転移温度が５５℃の水素添加レシチンを被覆した吸入用粉末医薬組成物（実施例４）と相転移温度が−１５℃の卵黄レシチンを被覆した吸入用粉末（比較例３）をそれぞれＨＰＭＣ２号カプセルに適量充填し、４０℃にて１週間保存後の形態を走査型電子顕微鏡（ＳＥＭ）（日本電子社製ＪＳＭ−５４００）にて観察した。図１に示すように相転移温度が５５℃の水素添加レシチンをコーチングした吸入用粉末医薬組成物では、保管前と保管後の微粒子の状態に変化は認められなかった。しかしながら、図２に示すように相転移温度が４０℃より低い卵黄レシチンをコーチングした吸入用粉末では４０℃保存後に微粒子の凝集が発生していた。
試験例５．吸入用粉末医薬組成物および吸入用粉末の結晶状態（実施例１ｖｓ比較例１、５）
粉末Ｘ線回折法により、吸入用粉末医薬組成物および吸入用粉末の結晶状態を試験した。ジェットミル粉砕により製した化合物Ａ（フリー体）吸入用粉末（比較例１）を適量、粉末Ｘ線回折装置（理学電機（株）製ＲＩＮＴ−１４００）に装填し、測定条件（管球：Ｃｕ、管電圧：４０ＫＶ、管電流：４０ｍＡ、走査速度：３．０°／ｍｉｎ、波長：１．５４０５６Å）で測定した。図３に示すように、化合物Ａ（フリー体）の結晶に基づくｐｅａｋが認められ、結晶状態であることが確認された。
同様に、化合物Ａジェットミル粉砕組成物にコレステロールを被覆した吸入用粉末医薬組成物（実施例１）について試験したところ、図４に示すように、比較例１同様のｐｅａｋが確認され、コレステロールの被覆によっても結晶状態が変化していないことが確認された。さらに、化合物Ａとコレステロールからなる吸入用粉末（比較例５）についても試験したところ、図５に示すように、化合物Ａ結晶由来のｐｅａｋは認められず、化合物Ａは組成物中に非晶質状態で存在していた。
試験例６．過酷条件化保存時の安定性試験結果（実施例１ｖｓ比較例５）
結晶性の化合物Ａにコレステロールをコーチングした吸入用粉末医薬組成物（実施例１）と非晶質の化合物Ａがコレステロール中に分散した吸入用粉末（比較例５）をそれぞれ４０℃、７５％条件下にて７日間保存した。保存前後の状態を走査型電子顕微鏡（ＳＥＭ）（日本電子社製ＪＳＭ−５４００）にて観察した。図６に示すように結晶性の生理活性物質にコレステロールを被覆した吸入用粉末医薬組成物（実施例１）では、保管前と保管後の微粒子の形態に変化は認められず、その粒子径もほとんど変化しなかった。一方、非晶質の生理活性物質からなる吸入用粉末（比較例５）は、図７に示すように、過酷条件下に保存後、粒子間に凝集が生じ、粒子径が著しく増大した。
さらに、各々の組成物をＨＰＭＣ２号カプセルに適量充填し、その肺内送達率を、試験例２同様、カスケードインパクター法（第２４版米国薬局方）に則り測定した。
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表４に示すように、結晶性の生理活性物質にコレステロールを被覆した吸入用粉末医薬組成物（実施例１）では過酷条件下に保存後もその肺内送達率の減少は低く、良好な肺内送達性を示した。一方、非晶質の生理活性物質からなる吸入用粉末（比較例５）では、過酷条件下に保存後、粒子径増大を反映しその肺内送達率は著しく低下しており、吸入剤として適していなかった。
試験例７．ｉｎ  ｖｉｔｒｏ溶出試験方法と徐放性吸入用組成物および吸入用粉末の溶出試験結果
実施例１−５、７、比較例１、７、８で調製された徐放性吸入用組成物および吸入用粉末からの化合物Ａの溶出挙動は、村西式坐剤放出試験器ディソリーズＴＤＳ−３０Ｐ（富山産業社製）を用い評価した。試験条件は下記の通り。
溶出試験液：０．２％Ｔｗｅｅｎ８０含有ｐＨ７リン酸緩衝液  ２５０ｍｌ
ドナー側液量：２ｍｌ
攪拌速度：１００ｒｐｍ
人工膜：ろ紙Ｎｏ．１（アドバンテック東洋社製）
実施例１−５、７、比較例１、７、８で調製された吸入用組成物の溶出試験を実施した。結晶状態の化合物Ａ微粉末を疎水性基剤でコーチングした吸入用組成物の溶出試験開始後３０分および１２０分における生理活性物質の溶出率は、実施例１でそれぞれ１３％、２８％、実施例２で、９％、２９％、実施例３で、１８％、４６％、実施例４で、１６％、４２％、実施例７で２０％、３９％であり、持続的な溶出を示した。一方、コーチングを施さない結晶状態の組成物（比較例１、試験開始後３０分および１２０分における生理活性物質の溶出率は、それぞれ３２％、６６％）および非晶質の組成物（比較例８、試験開始後３０分および１２０分における生理活性物質の溶出率は、それぞれ４１％、７５％）では、速やかな溶出を示した。また、親水性物質ポリエチレングリコール４０００でコーチングした吸入用組成物（実施例５、試験開始後３０分および１２０分における生理活性物質の溶出率は、２６％、５７％）では、溶出を十分に制御することは出来なかった。さらに、リン脂質の中でも水素添加レシチンを被覆した吸入用組成物（実施例４）では、試験開始後３０分および１２０分における生理活性物質の溶出率は、それぞれ１６％、４２％であり、持続的な溶出が達成されたが、ＤＰＰＣで被覆した吸入用組成物（比較例７）では試験開始後３０分および１２０分における生理活性物質の溶出率は、それぞれ４０％、６５％であり、溶出を充分に制御することが出来なかった。これらの結果はまったくの意外な結果であった。
産業上の利用可能性
本発明は、結晶状態の生理活性物質をファラデーゲージにより測定した組成物の静電電荷が０以上３×１０−９Ｑ以下である生体適合性の静電凝集抑制物質で被覆してなり、安全性、肺内送達性の経時的安定性に優れた、吸入用粉末医薬組成物を簡便な方法により提供することを可能にした点において有用である。
【図面の簡単な説明】
図１は、走査型電子顕微鏡（ＳＥＭ）により観察した、実施例４で製した吸入用粉末医薬組成物の粒子の保存前後における状態である。
図２は、走査型電子顕微鏡（ＳＥＭ）により観察した、比較例３で製した吸入用粉末医薬組成物の粒子の保存前後における状態である。
図３は、ジェットミルにより製した吸入用粉末（比較例１）の粉末Ｘ線回折結果である。
図４は、化合物Ａジェットミル粉砕組成物にコレステロールを被覆した吸入用粉末医薬組成物（実施例１）の粉末Ｘ線回折結果である。
図５は、化合物Ａおよびコレステロールをともに溶解し製した吸入用粉末（比較例５）の粉末Ｘ線回折結果である。
図６は、走査型電子顕微鏡（ＳＥＭ）により観察した、実施例１で製した吸入用粉末医薬組成物の粒子の保存前後における状態である。
図７は、走査型電子顕微鏡（ＳＥＭ）により観察した、比較例５で製した吸入用粉末医薬組成物の粒子の保存前後における状態である。
図８は、実施例１および比較例１の溶出試験結果を示すグラフである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【国際調査報告】
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