【事件の表示】
　特願２０００−６０３３５３「α−ガラクトシダーゼＡ欠乏症の治療」拒絶査定不服審判事件〔平成１２年　９月１４日国際公開、ＷＯ００／５３７３０、平成１４年１１月１２日国内公表、特表２００２−５３８１８３〕について、次のとおり審決する。
【結　論】
　本件審判の請求は、成り立たない。
【理　由】
第１　手続の経緯
　本願は、２０００年３月９日（パリ条約による優先権主張１９９９年３月１１日、米国）を国際出願日とする出願であって、平成２１年６月１日を受付日とする意見書及び手続補正書が提出されたが、平成２２年５月１９日付けで拒絶査定がなされ、同年９月２７日に拒絶査定不服審判が請求されたものである。
　
第２　本願発明
　本願の請求項１〜３６に係る発明は、平成２１年６月１日を受付日とする手続補正書の特許請求の範囲１〜３６に記載された事項により特定されたものであるところ、そのうち請求項１に係る発明（以下、「本願発明」という。）は、以下のとおりである。なお、手続補正書で付されている下線は省略した。
　「【請求項１】　ヒトα−ガラクトシダーゼＡ（α-Gal A）糖タンパク質調製物を含有するα-Gal A欠乏症を治療するための医薬組成物であって、該ヒトα-Gal A糖タンパク質調製物の全グリカンの少なくとも50％がコンプレックスグリカンであり、該組成物が体重１kgあたり0.1-0.3mgの単位用量のヒトα-Gal A糖タンパク質調製物を含有することを特徴とする医薬組成物。」
　
第３　刊行物の記載
　これに対し、原査定の拒絶の理由に引用された、本願優先日前に頒布された刊行物である国際公開第９８／１１２０６号（以下、「引用例」という。）には、次の事項が記載されている。
　なお、引用例は英文であるため訳文を示し、下線は当審で付した。
　
　１　「１０．（ａ）
異種シグナルペプチドに結合されたヒトα−ｇａｌ Ａを含むポリペプチドをコード
１１．
繊維芽細胞である請求項１０記載の細胞。
１９．前記ＤＮＡ分子から
ヒトα−ｇａｌ Ａを発現
請求項１１記載の細胞を培養する段階
　
該培養培地からグリコシル化ヒトα−ｇａｌ Ａを単離する段階
２０．
請求項１９記載の方法によって製造された精製グリコシル化ヒトα−ｇａｌ Ａ。
２５．
α−ｇａｌ Ａ欠乏症
　
請求項２０記載の精製グリコシル化ヒトα−ｇａｌ Ａを該患者に投与する段階とを含む治療方法。
……（略）……
２７．
請求項２０記載の精製ヒトα−ｇａｌ Ａと薬学的に許容される賦形剤とを含む治療用組成物。
　
　２　「細胞によるα−ｇａｌ Ａの産生は、ある遺伝子操作によって最大にできる。例を挙げると、
α−ｇａｌ ＡをコードするＤＮＡ分子は
異型シグナルペプチドをコードすることもできる。
シグナルペプチドをコードするＤＮＡ配列はｈＧＨ遺伝子の第１イントロンのようなイントロンを含んでいてもよく
ＤＮＡ分子は少なくとも６個のヌクレオチド長の３’非翻訳配列（ＵＴＳ）を含んでいてもよい
　
　３　「α−ｇａｌ Ａについての前後関係で本明細書で用いられているような
「異種シグナルペプチド」という用語は、ヒトα−ｇａｌ Ａシグナルペプチド
ではないシグナルペプチドを意味する。
　
　４　「
実施例Ｉ．α−ｇａｌ Ａを輸送し発現するように設計された構築物の調製及び利用
　
二つの発現プラスミドであるｐＸＡＧ−１６及びｐＸＡＧ−２８を構築した。
これらのプラスミドには
ｈＧＨシグナルペプチド
が含まれる。
　　
Ａ．完全なα−ｇａｌ ＡのｃＤＮＡのクローニング及びα−ｇａｌ Ａ
発現プラスミドｐＸＡＧ−１６の構築
　ヒトα−ｇａｌ ＡのｃＤＮＡは、次のように構築したヒト繊維芽細胞のｃＤＮＡライブラリーからクローニングした。……（略）……
……（略）……
　フラグメント１（ＢａｍＨＩとＮａｅＩを用いて切断されている）、フラグメント２（ＰｖｕＩＩとＮｈｅＩを用いて切断されている）、及びフラグメント３を、ｎｅｏ遺伝子とＣＭＶ ＩＥプロモーターを含むｐＸＡＧ−１３の６．５ｋｂのＢａｍＨＩ−ＥｃｏＲＩフラグメントと混合し、
プラスミドｐＸＡＧ−１６（図４）
　　
Ｂ．α−ｇａｌ Ａ発現プラスミドｐＸＡＧ−２８の構築
　ヒトコラーゲンＩα２プロモーターを次のようにα−ｇａｌ Ａ発現構築物ｐＸＡＧ−２８で利用すべく単離した。……（略）……
……（略）……
　……（略）……ｐＸＡＧ−２８は、ヒトβ−アクチン５’ＵＴＳに融合したヒトコラーゲンＩα２プロモーター、ｈＧＨシグナルペプチド（ｈＧＨ第１イントロンによって割り込まれている）、α−ｇａｌ Ａ酵素をコードするｃＤＮＡ、及びｈＧＨの３’ＵＴＳを含む。
完成した発現構築物のｐＸＡＧ−２８の地図が図５に示されている。
　　
Ｃ．α−ｇａｌ Ａ発現プラスミドを用いてエレクトロポレーション
　　
を行った繊維芽細胞のトランスフェクション及びセレクション
　繊維芽細胞においてα−ｇａｌ Ａを発現させるために、公開された方法にしたがって二次の繊維芽細胞を培養し、トランスフェクションした（Seldenらの国際公開第９３／０９２２２号）。
　
プラスミドｐＸＡＧ−１３、ｐＸＡＧ−１６及びｐＸＡＧ−２８をエレクトロポレーションによってヒトの包皮の繊維芽細胞にトランスフェクションすることで、安定してトランスフェクトされたクローン細胞株を発生させることができ
トランスフェクトされた繊維芽細胞は、表１に示されているような平均の発現レベルを示した。
表１：            平均のα−ｇａｌ Ａ発現レベル（＋／−標準偏差）
　
　
これらのデータは、三種すべての発現構築物がトランスフェクトされていない繊維芽細胞による発現の何倍もα−ｇａｌ Ａの発現を増加させる能力があることを示している。
　
トランスフェクトされた細胞を継代させるたびに分泌されたα−ｇａｌ Ａの活性を測定し、その細胞を計数して細胞密度を計算した。
α−ｇａｌ Ａ発現構築物ｐＸＡＧ−１６を用いて安定してトランスフェクトされた、表２及び３に示された細胞株から得られるデータは、α−ｇａｌ Ａの発現が連続的な継代にわたって安定して維持されているという事実を示している。
　
表２：    α−ｇａｌ Ａ発現構築物のｐＸＡＧ−１６を含む
　　　　　ＢＲＳ−１１細胞の成長及び発現
　
表３：    α−ｇａｌ Ａ発現構築物のｐＸＡＧ−１６を含む
　　　　　ＨＦ５０３−２４２細胞の成長及び発現
」（１５頁１９行〜２５頁８行）
　
　５　「
実施例ＩＩ．安定したトランスフェクトがなされたヒト細胞株の条件が整えられた培地から得られるα−ｇａｌ Ａの精製
　実施例ＩＩＡ−ＩＩＥには、α−ｇａｌ Ａを産生するように安定してトランスフェクトされた培養のヒト細胞株の条件付けられた培地からほぼ均質な状態でその酵素を精製できることが示されている。
　　
Ａ．α−ｇａｌ Ａの精製における第１工程としての
　　
ブチルセファロース（登録商標）クロマトグラフィーの使用
　
低温条件を整えた培地（１．３４リットル）
０．６６Ｍの硫酸アンモニウムを含む１０ｍＭのＭＥＳ−トリス、ｐＨ５．６（緩衝液Ａ）で平衡化された、ブチルセファロース（登録商標）の４ファストフローカラム（カラム容積は８１ｍｌ、２．５×１６．５ｃｍ；Pharmacia，Uppsala，Sweden）にかけた。
フラクションを４−ＭＵＦ−ｇａｌアッセイによってα−ｇａｌ Ａ活性について評価し、適当な酵素活性を含むフラクションを集めた。
　
表４：    安定してトランスフェクトされたヒト繊維芽細胞の
　　　　　条件を整えた培地から得られるα−ｇａｌ Ａの精製
　
　　
Ｂ．α−ｇａｌ Ａの精製のための工程として、ヘパリンセファロース
（登録商標）クロマトグラフィーの利用
　
ブチルセファロース（登録商標）カラムのピークフラクション
サンプルを、９ｍＭのＮａＣｌを含んだ１０ｍＭのＭＥＳ−トリス、ｐＨ５．６（緩衝液Ｂ）で平衡化したヘパリンセファロース（登録商標）６ファストフローのカラム（Pharmacia，Uppsala，Sweden;２９ｍｌのカラム容積、２．５×６ｃｍ）にかけた。
フラクションはα−ｇａｌ Ａ活性についてアッセイし、適当な活性を含むフラクションを集めた。
　
　　
Ｃ．α−ｇａｌ Ａを精製するための工程として、ハイドロキシ
　　
アパタイトクロマトグラフィーの利用
　
ヘパリンのプールを濾過し、１ｍＭの燐酸ナトリウム、ｐＨ６．０（緩衝液Ｄ）で平衡化したセラミックハイドロキシアパタイトＨＣ（４０μｍ；American International Chemical，Ntick，MA；１２ｍｌのカラム容量、１．５×６．８ｃｍ）からなるカラムに直接かけた。
フラクションはα−ｇａｌ Ａ活性についてアッセイし、適当な活性を含むフラクションを集めた。
　
　　
Ｄ．α−ｇａｌ Ａを精製するための工程として、Ｑセファロース
　　
（登録商標）アニオン交換クロマトグラフィーの利用
　
ハイドロキシアパタイトのプール
そのサンプルを、１０％の緩衝液Ｇ／９０％の緩衝液Ｆで平衡化したＱセファロース（登録商標）ＨＰ（Pharmacia，Uppsala，Sweden；５．１ｍｌのカラム容量、１．５×２．９ｃｍ）からなるカラムに直接かけた。
α−ｇａｌは工程３及び４の間におもに溶出した。適当な活性を含むフラクションを集めた（「Ｑプール」）。
　
　　
Ｅ．α−ｇａｌ Ａを精製するための工程として、スーパーデックス
　　
（登録商標）−２００ゲル濾過クロマトグラフィーの利用
　
Ｑプール
スーパーデックス（登録商標）２００（Pharmacia，Uppsala，Sweden；１８９ｍｌのカラム容量、１．６×９４ｃｍ）からなるカラムにかけた。
フラクションをα−ｇａｌ Ａ活性についてアッセイして適当な活性を含むフラクションを集めた。
α−ｇａｌ Ａの最終収率は出発物質の活性の５９％であり、また精製した産物の比活性は２．９２×１０
6
ユニット／ｍｇ蛋白質であった。
　
　６　「
実施例ＩＶ．ヒト細胞株によって産生したα−ｇａｌ Ａは、α−ｇａｌ Ａ欠損症を治療するのに適当である。
　本発明により調製した精製ヒトα−ｇａｌ Ａの構造的及び機能的特徴を、この明細書に記載されたＤＮＡ分子とトランスフェクトしたヒト細胞株によって産生された対応する発現糖蛋白質とがそれぞれ遺伝子治療または酵素置換治療で利用可能であることを証明するために調べた。
　　
Ａ．培養中の安定してトランスフェクトされたヒト細胞により
　　
産生したα−ｇａｌ Ａのサイズ
　
α−ｇａｌ Ａの分子質量
ダイマーの分子質量が１０２，３５３Ｄａであり、これに対してモノマーの分子質量が５１，００２Ｄａであることが証明された。
モノマーについて予測された分子質量は４５，４００Ｄａ
酵素の炭水化物含有量は５，６００Ｄａまでの分子量であるとの計算が推測
　精製した蛋白質に対して行った標準的なアミノ酸分析の結果は、トランスフェクトしたヒト細胞によって産生された蛋白質がヒト組織から精製した蛋白質にアミノ酸レベルで同一であるという推断と一致している。」（３３頁１〜２４行）
　
　７　「
Ｄ．安定してトランスフェクトされたヒト細胞によって
　　
産生されたα−ｇａｌ Ａの炭水化物の修飾
　
本発明により産生されたα−ｇａｌ Ａのグリコシル化パターンも評価した。
　安定してトランスフェクトされた細胞によって産生したα−ｇａｌＡのサンプルを、A．urafaciensから単離したノイラミニダーゼで処理すること（Boehringer-Mnnheim，Indianapolis，IN）によりシアル酸を除去した。この反応は、５μｇのα−ｇａｌ Ａを１０ｍＵのノイラミニダーゼとともに室温で一晩、全体で１０μｌの酢酸緩衝塩溶液（ＡＢＳ、２０ｍＭの酢酸ナトリウム、ｐＨ５．２、１５０ｍＭのＮａＣｌ）中で処理することによって進行させた。
　安定してトランスフェクトされた細胞によって産生した精製α−ｇａｌ Ａも、アルカリホスファターゼ（子ウシ小腸のアルカリホスファターゼ、Boehringer-Mnnheim，Indianapolis，IN）を用いて脱リン酸化したが、それは５μｇのα−ｇａｌ Ａを、ＡＢＳ（１ＭのトリスでｐＨを７．５に上昇させた）中に入れた１５Ｕのアルカリホスファターゼを用いて室温で一晩処理することによって行った。
　このサンプルを、α−ｇａｌ Ａ特異性抗体を用いたウエスターンブロットにより分析した。……（略）……
　
ノイラミニダーゼを用いてα−ｇａｌ Ａを処理すると分子質量にわずかなシフト（約１５００〜２０００ダルトンまたは４〜６シアル酸／モノマー）が起こるが、これはシアル酸によりα−ｇａｌ Ａが広範囲に修飾されたことを示唆している。
　α−ｇａｌ Ａのシアル酸とマンノース−６−燐酸による修飾を調べるために用いられる別の方法としては等電点分離法（ＩＥＦ）があり、それではサンプルが等電点（ＰＩ）または正味の電荷に基づいて分離される。こうしてα−ｇａｌ Ａから得られるシアル酸や燐酸のようなチャージした残基が除去されると、ＩＥＦシステムにおいて蛋白質の移動度が変わって来ると予測される。
　……（略）……
　安定してトランスフェクトしたヒト繊維芽細胞によって産生したα−ｇａｌ Ａは、約４．４〜４．６５の範囲のｐＩを持つ三種の主要なイソ型からなる。これらの値はα−ｇａｌ Ａの血しょうの型及び胎盤の型のｐＩと同じである（Bishopらの、J．Biol．Chem．256:1307，1981）。
酵素のノイラミニダーゼ処理によって三種すべてのイソ型のｐＩが増加したが、このことは全てがサリチル酸によってある程度修飾されていることを示している。
ノイラミニダーゼ処理したα−ｇａｌ Ａをアルカリホスファターゼ処理すると、蛋白質の部分のｐＩが約５．０〜５．１にまでさらに増加したが、このことは酵素が一つまたはそれ以上のマンノース−６−ホスフェート残基を有していることを示している。この修飾は、標的細胞によってα−ｇａｌ Ａの効率のよいインターナリゼーションが起こるために必要である点で重要である。
　
　８　「
Ｆ．マンノースまたはマンノース−６−ホスフェートが
　　
仲介するα−ｇａｌ Ａのインターナリゼーション
　
安定したトランスフェクトがなされた細胞によって産生されるα−ｇａｌ Ａがα−ｇａｌ Ａ欠損症の有効な治療薬となるためには、その酵素は影響を受けた細胞によってインターナリゼーションされなくてはならない。
　Ｍ６Ｐ−仲介型のα−ｇａｌ Ａのインターナリゼーションを証明するために、
ファブリー病の患者から得られる皮膚の繊維芽細胞（NIGMS Human Genetic Mutant Cell Repository）を、増加させた濃度の本発明の精製α−ｇａｌ Ａが存在するところで一晩培養した。そのサンプルのいくつかは５ｍＭの可溶性Ｍ６Ｐを含んでおり、それはマンノース−６−ホスフェート受容体への結合を競合的に阻害し、結果的にその受容体によるインターナリゼーションを競合的に阻害した。
ファブリー繊維芽細胞におけるα−ｇａｌ Ａのインターナリゼーションはマンノース−６−ホスフェート受容体によって仲介されるが、マンノース受容体によっては仲介されない。
　またα−ｇａｌ Ａは、内皮細胞、即ちファブリー病の治療で重要な標的となる細胞によってもインビトロでインターナリゼーションされる。ヒトの臍の緒の血管の内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）を、７５００ユニットのα−ｇａｌ Ａとともに一晩培養した。ウェルのいくつかはＭ６Ｐを含んでいた。インキュベート期間を終えてから細胞を採集し、上記に記載したようにα−ｇａｌ Ａをアッセイした。α−ｇａｌ Ａのみとともにインキュベートした細胞は、コントロール（α−ｇａｌ Ａとともにインキュベートしなかった）の細胞の酵素レベルのほとんど１０倍もの酵素レベルであった。Ｍ６Ｐはα−ｇａｌ Ａの細胞内の蓄積を阻害するが、このことはＨＵＶＥＣによるα−ｇａｌ ＡのインターナリゼーションがＭ６Ｐ受容体によって仲介されることを示唆している。したがって
本発明のヒトα−ｇａｌ Ａは、臨床的に関連する細胞によってインターナリゼーションされる。
　マンノース受容体を発現することがわかっている培養ヒト細胞株はほとんどない。しかしながらマンノース受容体を有する、マンノース−６−ホスフェート受容体をほとんど有しないマウスのマクロファージ様細胞系（Ｊ７７４．Ｅ）を、本発明の精製α−ｇａｌ Ａがマンノース受容体を経てインターナリゼーションされるかどうかを調べるために用いることができる（DimentらのJ．Leukocyte Biol．42:485-490，1987）。Ｊ７７４．Ｅ細胞を１０，０００ユニット／α−ｇａｌ Ａのｍｌが存在するところで一晩培養した。選択したサンプルも２ｍＭのＭ６Ｐを含んでいたが、他のものは１００μｇ／ｍｌのマンナンを含んでいた。その細胞を洗浄してから上記に記載したように収集し、それぞれのサンプルの全蛋白質とα−ｇａｌ Ａの活性を決定した。その結果が表６に示されている。Ｍ６Ｐはこれらの細胞によるα−ｇａｌ Ａの取り込みを阻害しないが、マンナンは蓄積されたα−ｇａｌ Ａのレベルを７５％まで減少させた。したがって
本発明のα−ｇａｌ Ａは、マンノース受容体、即ちこの特定の細胞表面受容体を発現する細胞型にあるマンノース受容体によってインターナリゼーションされうる。
表６．　Ｊ７７４．Ｅ細胞によるα−ｇａｌ Ａのインターナリゼーション
　　α−ｇａｌ Ａ活性（ユニット／全蛋白質のｍｇ）
　
　これらの実験は、安定してトランスフェクトしたヒト細胞によって産生されたα−ｇａｌ Ａがマンノースまたはマンノース−６−ホスフェート受容体を介して細胞によってインターナリゼーションされうることを証明している。」（３７頁２３行〜４０頁９行）
　
　９　「
Ｊ．α−ｇａｌ Ａ蛋白質の通常の投与のための製薬配合剤
　
安定してトランスフェクトした（または別の方法で遺伝的に修飾した）ヒト細胞によって発現して分泌され、そして本明細書に記載したように精製されるα−ｇａｌ Ａ蛋白質を、α−ｇａｌＡ蛋白質産生が不十分または欠乏している患者に投与することができる。
典型的には、α−ｇａｌ Ａは０．０１〜１００ｍｇ／体重１ｋｇの用量で投与されるであろう。この蛋白質を調節しながら繰り返し投薬することは、患者の生涯にわたって必要であろう。
　
　１０　図４、図５（α−ｇａｌ Ａ発現プラスミドであるｐＸＡＧ−１６及びｐＸＡＧ−２８の概略図が示されている。）
　
第４　引用発明の認定、対比
　１　引用発明
　（１）　特許請求の範囲の記載
　上記第３の摘示事項１には、「請求項２０記載の精製ヒトα−ｇａｌ Ａと薬学的に許容される賦形剤とを含む治療用組成物。」（請求項２７）と記載されている。これを他の請求項を引用しない形式で記載すると、以下のようになる。
「（ａ）異種シグナルペプチドに結合されたヒトα−ｇａｌ Ａを含むポリペプチドをコードし、かつ（ｂ）細胞における該ポリペプチドの発現を可能にする、ＤＮＡ分子を含む培養ヒト繊維芽細胞を、
前記ＤＮＡ分子からヒトα−ｇａｌ Ａを発現させ、細胞の培養培地にグリコシル化ヒトα−ｇａｌ Ａが分泌されるような条件下で培養する段階と、該培養培地からグリコシル化ヒトα−ｇａｌ Ａを単離する段階とを含むグリコシル化ヒトα−ｇａｌ Ａを製造する方法によって製造された、
精製グリコシル化ヒトα−ｇａｌ Ａと薬学的に許容される賦形剤とを含む治療用組成物。」
　また、上記第３の摘示事項１には、請求項２０記載の精製ヒトα−ｇａｌ Ａをα−ｇａｌ Ａ欠乏症患者に投与する治療方法が記載されていることから、請求項２０記載の精製ヒトα−ｇａｌ Ａはα−ｇａｌ Ａ欠乏症の治療に用いられるものといえ、上記精製ヒトα−ｇａｌ Ａを含む、請求項２７記載の治療用組成物についても同様に、α−ｇａｌ Ａ欠乏症の治療に用いられるものといえる。
　（２）　発明の詳細な説明の記載
　ア　α−ｇａｌ Ａ
　（ア）　上記第３の摘示事項４及び１０には、（ｉ）α−ｇａｌ Ａを輸送し発現するように設計されたα−ｇａｌ Ａ発現プラスミドとして、図４及び５で表される構造を有する、α−ｇａｌ Ａシグナルペプチドを欠くヒトα−ｇａｌ Ａ酵素をコードする遺伝子を有するとともにｈＧＨシグナルペプチドのゲノムＤＮＡを含むｐＸＡＧ−１６及びｐＸＡＧ−２８を構築したこと、（ｉｉ）ｐＸＡＧ−１６及びｐＸＡＧ−２８をそれぞれヒトの包皮の繊維芽細胞にトランスフェクションすると、安定してトランスフェクトされたクローン細胞株が発生し、トランスフェクトされていない繊維芽細胞による発現の何倍もα−ｇａｌ Ａの発現を増加させる能力があること、及び、（ｉｉｉ）トランスフェクトされた細胞を継代すると、α−ｇａｌ Ａの発現が連続的な継代にわたって安定して維持され分泌されることが記載されている。そして、上記第３の摘示事項５には、（ｉｖ）「安定したトランスフェクトがなされたヒト細胞株の条件が整えられた培地から得られるα−ｇａｌ Ａの精製」方法として、培地に対し、ブチルセファロースクロマトグラフィー、ヘパリンセファロースクロマトグラフィー、ハイドロキシアパタイトクロマトグラフィー、Ｑセファロースアニオン交換クロマトグラフィー、及び、スーパーデックス−２００ゲル濾過クロマトグラフィーの順に適用したことが記載されている。
　上記第３の摘示事項２及び３の記載から、ｐＸＡＧ−１６及びｐＸＡＧ−２８において、ｈＧＨシグナルペプチドがヒトα−ｇａｌ自体のシグナルペプチドでないことは明らかであり、上記（１）の「異種シグナルペプチド」にあたる。また、上記ｈＧＨシグナルペプチドのゲノムＤＮＡと結合したα−ｇａｌ Ａシグナルペプチドを欠くヒトα−ｇａｌ Ａ酵素をコードする遺伝子は、細胞へのトランスフェクションを経てヒトα−ｇａｌ Ａ酵素の発現を可能にするものといえる。
　（イ）　そうすると、引用例のｐＸＡＧ−１６又はｐＸＡＧ−２８は、上記（１）の「（ａ）異種シグナルペプチドに結合されたヒトα−ｇａｌ Ａを含むポリペプチドをコードし、かつ（ｂ）細胞における該ポリペプチドの発現を可能にする、ＤＮＡ分子」にあたり、トランスフェクションされたヒトの包皮の繊維芽細胞は上記（１）の「培養ヒト繊維芽細胞」にあたり、トランスフェクトされた上記細胞におけるα−ｇａｌ Ａを発現する連続的な継代による培養は、上記（１）の「ＤＮＡ分子からヒトα−ｇａｌ Ａを発現させ、細胞の培養培地にグリコシル化ヒトα−ｇａｌ Ａが分泌されるような条件下で培養」にあたる。そして、上記５種のクロマトグラフィーを用いた精製方法は、上記（１）の「培養培地からグリコシル化ヒトα−ｇａｌ Ａを単離する」方法にあたり、そのような精製方法を経て得られたグリコシル化ヒトα−ｇａｌ Ａは、上記（１）の「精製グリコシル化ヒトα−ｇａｌ Ａ」にあたる。
　（ウ）　また、上記第３の摘示事項６〜８には、（ｖ）「培養中の安定してトランスフェクトされたヒト細胞により産生したα−ｇａｌ Ａ」の分子質量、（ｖｉ）「安定してトランスフェクトされたヒト細胞により産生されたα−ｇａｌ Ａ」のグリコシル化パターン、及び、（ｖｉｉ）マンノース又はマンノース−６−ホスフェートが仲介するα−ｇａｌ Ａのインターナリゼーションの程度に関する、試験方法及び結果が記載されているが、これらはいずれも引用例中に「本発明」により得られたα−ｇａｌ Ａであることが記載されているから、上記試験結果は、上記（ア）の方法により得られたα−ｇａｌ Ａが示す性質であるといえるとともに、「α−ｇａｌ Ａがα−ｇａｌ Ａ欠損症の有効な治療薬となるためには、その酵素は影響を受けた細胞によってインターナリゼーションされなくてはならない」（上記第３の摘示事項８）ところ、「本発明」により得られたα−ｇａｌ Ａはそのような性質を有するから、α−ｇａｌ Ａ欠損症の有効な治療薬として有用であるといえる。
　（３）　引用発明
　上記（２）で精製を経て得られたα−ｇａｌ Ａが、（１）における「精製グリコシル化ヒトα−ｇａｌ Ａ」を具体化したものであり、かつ、α−ｇａｌ Ａ欠損症の有効な治療薬として求められる性質を有するから、上記（１）、（２）の記載からみて、引用例には、以下の発明（以下、「引用発明」という。）が記載されたものといえる。
「ｐＸＡＧ−１６又はｐＸＡＧ−２８を含むヒトの包皮の繊維芽細胞を、
トランスフェクトされた上記細胞におけるα−ｇａｌ Ａを発現する連続的な継代によって培養する段階と、トランスフェクトされたヒトの細胞株を培養した培地に対し、ブチルセファロースクロマトグラフィー、ヘパリンセファロースクロマトグラフィー、ハイドロキシアパタイトクロマトグラフィー、Ｑセファロースアニオン交換クロマトグラフィー、及び、スーパーデックス−２００ゲル濾過クロマトグラフィーの順に適用して該培養培地からグリコシル化ヒトα−ｇａｌ Ａを単離する段階とを含む精製グリコシル化ヒトα−ｇａｌ Ａを製造する方法によって製造された、
精製グリコシル化ヒトα−ｇａｌ Ａと薬学的に許容される賦形剤とを含むα−ｇａｌ Ａ欠乏症を治療するための治療用組成物。」
　
　２　本願発明と引用発明との対比
　（１）　本願発明と引用発明とを対比する。
　ア　引用発明の「治療用組成物」は治療に用いられるものであり、本願発明の「医薬組成物」に相当することは明らかである。
　イ　本願明細書をみると、実施例１には、（ｉ）α−Ｇａｌ Ａを送達し、発現するように設計された発現プラスミドとして、図４及び５で表される構造を有する、α−ｇａｌ Ａシグナルペプチドを含まないヒトα−ｇａｌ Ａ酵素をコードする遺伝子を有するとともに、ｈＧＨシグナルペプチドのゲノムＤＮＡを含むｐＸＡＧ−１６及びｐＸＡＧ−２８が構築されること（１．１及び１．２）、（ｉｉ）これらのプラスミドを、それぞれエレクトロポレーションによってヒト包皮繊維芽細胞にトランスフェクトすることにより、安定的にトランスフェクトされたクローン細胞系が作出され、α−ｇａｌ Ａ発現レベルが、非トランスフェクト繊維芽細胞が分泌する場合の何倍にも増加していること、及び、（ｉｉｉ）トランスフェクトした細胞を継代すると、連続的な継代期間中、α−ｇａｌ Ａ発現レベルが安定的に維持されていたこと（１．３）が記載されている。また、実施例２には、（ｉｖ）安定的にトランスフェクトされて酵素を産生している培養ヒト細胞株のコンディションドメディウムからα−ｇａｌ Ａを精製する方法として、コンディションドメディウムを、ブチルセファロースクロマトグラフィー、ヘパリンセファロースクロマトグラフィー、ハイドロキシアパタイトクロマトグラフィー、Ｑセファロースアニオン交換クロマトグラフィー、及び、スーパーデックス−２００ゲル濾過クロマトグラフィーの順に適用したこと（２．１）が記載されている。
　ここで、（ｉ）α−Ｇａｌ Ａを得るために用いられたプラスミドは引用例、本願ともｐＸＡＧ−１６及びｐＸＡＧ−２８であり、（ｉｉ）これらのプラスミドをトランスフェクトされる細胞も両者ともヒト包皮繊維芽細胞であり、そして（ｉｉｉ）トランスフェクトされた細胞における平均のα−Ｇａｌ Ａの発現レベル、及び、トランスフェクトされた細胞を一定回数継代した場合の細胞の増殖及びα−Ｇａｌ Ａ発現の程度に関しても、両者とも同様の値を示している（本願の表２〜４、引用例の表１〜３）。また、（ｉｖ）α−Ｇａｌ Ａの精製に用いられる方法は、両者ともトランスフェクトされたヒトの細胞株を培養した培地に、ブチルセファロースクロマトグラフィー、ヘパリンセファロースクロマトグラフィー、ハイドロキシアパタイトクロマトグラフィー、Ｑセファロースアニオン交換クロマトグラフィー、及び、スーパーデックス−２００ゲル濾過クロマトグラフィーの順に適用するものであって、実際に行われた精製結果も両者とも同様の値を示している（本願の表５、引用例の表４）。さらに、（ｖ）両者で得られた精製ヒトα−ｇａｌ Ａの分子量として示された、ダイマー、モノマー、並びに、モノマー中のアミノ酸組成に基づく部分と炭水化物に基づく部分の値は両者とも同様であり、（ｖｉ）α−Ｇａｌ Ａのグリコシル化パターンも両者で同様の結果が示され、そして、（ｖｉｉ）マンノースまたはマンノース−６−ホスフェートを介したα−Ｇａｌ Ａの内部移行も両者で同様の結果が示されており、両者ともα−ｇａｌ Ａ欠損症の有効な治療薬として求められる性質を有するものといえる。このように、本願明細書に記載の実施例で得られた「ヒトα−ガラクトシダーゼＡ（α-Gal A）糖タンパク質」と、引用発明の「精製グリコシル化ヒトα−ｇａｌ Ａ」とは、その製造方法及び精製方法が同一であり、また、得られたα−Ｇａｌ Ａの性質も同様であるから、両者は同じものであるといえる。
　そして、本願明細書には、α−Ｇａｌ Ａのグリコシル化パターンの結果について、「グリカンの６７％以上がシアリル化されており、……中性であったのは１６％以下であった」（段落【０１７９】）と記載されており、本願明細書の上記実施例により得られたα−Ｇａｌ Ａの全グリカンの少なくとも５０％がコンプレックスグリカンであったものといえる。そうすると、引用発明の「精製グリコシル化ヒトα−ｇａｌ Ａ」も、全グリカンの少なくとも５０％がコンプレックスグリカンであるといえる。
　したがって、本願発明に関する本願明細書記載の実施例で得られた「ヒトα−ガラクトシダーゼＡ（α-Gal A）糖タンパク質調製物」と、引用発明の「精製グリコシル化ヒトα−ｇａｌ Ａ」とは、同様のアミノ酸配列を有するタンパク質であって、かつ、同様のグリコシル化が行われたものといえ、全グリカンの少なくとも５０％がコンプレックスグリカンである点も含め、その構造に差異はないものといえる。
　よって、引用発明の
「ｐＸＡＧ−１６又はｐＸＡＧ−２８を含むヒトの包皮の繊維芽細胞を、
トランスフェクトされた上記細胞におけるα−ｇａｌ Ａを発現する連続的な継代によって培養する段階と、トランスフェクトされたヒトの細胞株を培養した培地に対し、ブチルセファロースクロマトグラフィー、ヘパリンセファロースクロマトグラフィー、ハイドロキシアパタイトクロマトグラフィー、Ｑセファロースアニオン交換クロマトグラフィー、及び、スーパーデックス−２００ゲル濾過クロマトグラフィーの順に適用して該培養培地からグリコシル化ヒトα−ｇａｌ Ａを単離する段階とを含む精製グリコシル化ヒトα−ｇａｌ Ａを製造する方法によって製造された、
精製グリコシル化ヒトα−ｇａｌ Ａ」
は、本願発明の「全グリカンの少なくとも50％がコンプレックスグリカンであ」る「ヒトα−ガラクトシダーゼＡ（α-Gal A）糖タンパク質調製物」に相当する。
　（２）　上記のとおりであるから、本願発明と引用発明とは、
「ヒトα−ガラクトシダーゼＡ（α-Gal A）糖タンパク質調製物を含有するα-Gal A欠乏症を治療するための医薬組成物であって、該ヒトα-Gal A糖タンパク質調製物の全グリカンの少なくとも50％がコンプレックスグリカンであることを特徴とする医薬組成物。」
である点で一致し、次の点で相違する。
＜相違点＞
　本願発明では、医薬組成物が「体重１kgあたり0.1-0.3mgの単位用量のヒトα-Gal A糖タンパク質調製物を含有することを特徴とする」のに対し、引用発明では上記単位用量に限定する記載がない点。
　
第５　相違点についての判断
　上記相違点について、以下、検討する。
　１　上記第３の摘示事項９には、α−ｇａｌ Ａ蛋白質産生が不十分または欠乏している患者に精製α−ｇａｌ Ａ蛋白質を投与する際の用量として「０．０１〜１００ｍｇ／体重１ｋｇの用量」を繰り返し投薬すること、すなわち、単位用量として体重１ｋｇあたり０．０１〜１００ｍｇが記載されている。
　投与量の設定に際し、明記された用量が示されている場合であれば、その範囲から好適な範囲を選択してみることは当業者が通常行う程度の事項であるとともに、製造に要する費用の低減化や大量服用の回避といった服用のしやすさを考慮して、単位用量中に使用されるα−ｇａｌ Ａ量を可能な範囲で少なくしようとすることも、当業者が当然に考慮する程度の事項といえる。
　そうすると、引用例に示された体重１ｋｇあたりの単位用量である「０．０１〜１００ｍｇ」との記載に基づき、引用発明の単位用量を「０．１〜０．３ｍｇ」とすることは、当業者にとり容易といえる。
　そして、その効果についても、引用例では「０．０１〜１００ｍｇ／体重１ｋｇの用量」とすることでα−ｇａｌ Ａ蛋白質産生が不十分または欠乏している患者を治療することが示唆されているのであるから、当業者の予測の範囲内にあるものといえる。
　
　２　この点に関し、請求人は意見書及び審判請求の理由（平成２２年１１月２５日に提出された手続補正書（方式）を参照のこと。）において、（ｉ）本願発明は、従来のものより顕著に少ない用量でα−ｇａｌ Ａ欠乏症を効果的に治療等することができ、より低コストでかつ安全にα−ｇａｌ Ａ欠乏症の治療等を行うことを可能にするという顕著な作用効果を奏することができるのに対し、引用例の用量範囲は非常に広いものであって、単に任意の治療薬の使用可能と思われる一般的な用量を全てカバーするような範囲を記載したに過ぎず、ここから本願発明にある特定の用量範囲に限定し得たとはいえず、また、（ｉｉ）本願発明のヒトα−ｇａｌ Ａ調製物の体重１ｋｇあたり０．１〜０．３ｍｇの用量が、他の類似のα−ガラクトシダーゼ調製物の用量と比べて顕著に少ない旨の試験結果を示しつつ、類似の糖タンパク質でありかつ同じ臨床適応に用いられるにもかかわらず、２つのα−ｇａｌ Ａ調製物が全く異なる用量で用いられるのだから、引用例に体重１ｋｇあたり０．０１〜１００ｍｇというα−ｇａｌ Ａ調製物の非常に広い用量範囲が記載されているからといって、当業者といえども本願発明の体重１ｋｇあたり０．１〜０．３ｍｇの用量範囲を容易に想到し得たはずがない旨を主張する。
　そこで、上記主張について検討する。
　（ｉ）の点について、請求人は「本願発明は、従来のものより……顕著な作用効果を奏することができる」と主張するが、前記第４の２で検討したように、そもそも引用発明と本願発明とで使用されるα−ｇａｌ Ａが同じものであって、本願発明により新たな「物」を提供するわけではないから、引用発明からみた本願発明が顕著な作用効果を奏することを説明する内容として、上記主張は当を得たものではない。
　また、ある数値範囲が示されている以上、単に数値範囲の広狭のみに基づきその範囲から好適な部分を選択することの可否を論じることは妥当ではなく、また、仮に任意の治療薬の使用可能と思われる一般的な用量を全てカバーするものと解した場合であっても、上記１で指摘した観点に基づいて、本願発明にある、単位用量を体重１ｋｇあたり０．１〜０．３ｍｇとすることは、当業者にとり依然として容易であるといえる。そして、上記範囲とすることにより本願発明が奏する作用効果に臨界的意義があるわけでもない。
　また、（ｉｉ）の点について、請求人が示した試験結果は本願発明にあたるReplagal（登録商標）と、他の類似のα−ガラクトシダーゼ調製物であるFabrazyme（登録商標）とを用いたものであるところ、後者はＣＨＯ細胞において産生されたヒトα−ｇａｌ Ａであって、ヒト包皮繊維芽細胞において産生された、引用例に記載されたヒトα−ｇａｌ Ａとは、少なくともヒトα−ｇａｌ Ａ産生に用いた細胞の点で製造方法が異なることが明らかであるとともに、両者が同様にグリコシル化されていることやマンノースまたはマンノース−６−ホスフェートを介したα−Ｇａｌ Ａの内部移行が同程度に行われることが確認されているわけでもない。そうすると、由来の異なる細胞により産生されたヒトα−ｇａｌ Ａを用いた試験結果をもとに、当業者といえども引用発明から本願発明に想到し得ないとする請求人の主張は、その理由がない。
　したがって、上記請求人の主張は、いずれも採用することができない。
　
第６　むすび
　以上のとおり、本願発明は、引用例に記載された発明に基づいて、当業者が容易に発明をすることができたものであるから、特許法２９条２項の規定により特許を受けることができないものである。
　それ故、他の請求項について論及するまでもなく、本願は拒絶すべきものである。
　よって、結論のとおり審決する。