(57)【要約】本発明は疼痛および不安の解消のための新規な医薬組成物を提供することを課題とする。本発明はラクトフェリンを有効成分として含む医薬組成物に関する。本発明の組成物は、第一相の痛みおよび第二相の痛みを含む痛み、不安およびストレスからなる群より選択される少なくとも一つの疾患または状態を処置するために有用である。特に末期ガン患者における生活の質を著しく損なう疼痛および不安を緩和ないし解消させるのに有用である。本発明の組成物はまた、関節炎または骨接合部位の疾患（例えば、慢性関節リウマチ、変形性関節症、四十肩及び五十肩、テニス肘および野球肩等のスポーツ外傷ならびに腰痛）に伴う第一相の痛みおよび第二相の痛みを含む痛み、並びに炎症を処置するために有用である。
2003061688.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ラクトフェリンを有効成分とする、第一相の痛みおよび第二相の痛みを含む痛み、不安およびストレスからなる群より選択される少なくとも一つの疾患または状態を処置するための組成物。。
【請求項２】
ラクトフェリンを有効成分とする、慢性関節リウマチ、変形性関節症、四十肩及び五十肩、テニス肘および野球肩等のスポーツ外傷ならびに腰痛を含む関節炎または骨接合部位の疾患に伴う第一相の痛みおよび第二相の痛みを含む痛み、並びに炎症を処置するための組成物。
【請求項３】
ラクトフェリンを有効成分とする、ＩＬ−１０産生の誘導および／またはＴＮＦ−α産生の抑制により改善される疾患または状態を処置するための組成物。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれ１項に記載された組成物であって：
有効成分および医薬として許容される添加剤を乾燥状態で混合し；
所望により、混合物を乾燥状態で強圧成型し、次いで成型物を一定の大きさの微粒状物または顆粒とし；そして
所望により、混合物、微粒状物または顆粒を打錠するかもしくはカプセルに充填する
ことを含む工程により得られうる、粉末剤、散剤、顆粒剤、錠剤またはカプセル剤の形態である、前記組成物。
【請求項５】
腸溶性製剤の形態である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項６】
有効成分を含む顆粒を打錠したものを、胃液に対しては抵抗性があり、小腸内で溶解する基剤を主成分とする皮膜でコーティングしてなる、請求項１〜４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項７】
有効成分を一日当たり約０．１ｍｇ〜約５０，０００ｍｇ、好ましくは約０．５ｍｇ〜約１０，０００ｍｇを、最も好ましくは約１０ｍｇ〜約２，０００ｍｇ投与するための、請求項１〜６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項８】
以下の工程を含む、請求項１〜７のいずれか１項に記載の組成物の製造方法：
有効成分および医薬として許容される添加剤を乾燥状態で混合し；
所望により混合物を乾燥状態で強圧成型し、次いで成型物を一定の大きさの微粒状物または顆粒とし；そして
混合物、微粒状物または顆粒を打錠するかもしくはカプセルに充填する
ことを含む工程により得られうる、粉末剤、散剤、顆粒剤、錠剤またはカプセル剤の形態である、前記組成物。
【請求項９】
第一相の痛みおよび第二相の痛みを含む痛み、不安およびストレスからなる群より選択される少なくとも一つの疾患または状態を処置するための医薬の製造における、ラクトフェリンの有効成分としての使用。
【請求項１０】
慢性関節リウマチ、変形性関節症、四十肩及び五十肩、テニス肘および野球肩等のスポーツ外傷ならびに腰痛を含む関節炎または骨接合部位の疾患に伴う第一相の痛みおよび第二相の痛みを含む痛み、並びに炎症からなる群より選択される少なくとも一つの疾患または状態を処置するための医薬の製造における、ラクトフェリンの有効成分としての使用。
【請求項１１】
ＩＬ−１０産生の誘導および／またはＴＮＦ−α産生の抑制により改善される疾患または状態を処置するための医薬の製造における、ラクトフェリンの有効成分としての使用。
【請求項１２】
医薬が：
有効成分および医薬として許容される添加剤を乾燥状態で混合し；
所望により混合物を乾燥状態で強圧成型し、次いで成型物を一定の大きさの微粒状物または顆粒とし；そして
混合物、微粒状物または顆粒を打錠するかもしくはカプセルに充填する
ことを含む工程により得られうる、粉末剤、散剤、顆粒剤、錠剤またはカプセル剤の形態である、請求項９〜１１のいずれ１項に記載された使用。
【請求項１３】
医薬が、腸溶性製剤の形態である、請求項９〜１２のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１４】
医薬が、有効成分を含む顆粒を打錠したものを、胃液に対しては抵抗性があり、小腸内で溶解する基剤を主成分とする皮膜でコーティングしてなる、請求項９〜１２のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１５】
医薬が、有効成分を一日当たり約０．１ｍｇ〜約５０，０００ｍｇ、好ましくは約０．５ｍｇ〜約１０，０００ｍｇを、最も好ましくは約１０ｍｇ〜約２，０００ｍｇ投与するための、請求項９〜１４のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１６】
医薬が、以下を含む工程により得られうる、粉末剤、散剤、顆粒剤、錠剤またはカプセル剤の形態である、請求項９〜１５のいずれか１項に記載の使用：
有効成分および医薬として許容される添加剤を乾燥状態で混合し；
所望により混合物を乾燥状態で強圧成型し、次いで成型物を一定の大きさの微粒状物または顆粒とし；そして
混合物、微粒状物または顆粒を打錠するかもしくはカプセルに充填する。
【請求項１７】
ラクトフェリンを有効成分を用いる、第一相の痛みおよび第二相の痛みを含む痛み、不安およびストレスからなる群より選択される少なくとも一つの疾患または状態の処置方法。
【請求項１８】
ラクトフェリンを有効成分として用いる、慢性関節リウマチ、変形性関節症、四十肩及び五十肩、テニス肘および野球肩等のスポーツ外傷ならびに腰痛を含む関節炎または骨接合部位の疾患に伴う第一相の痛みおよび第二相の痛みを含む痛み、並びに炎症からなる群より選択される少なくとも一つの疾患または状態の処置方法。
【請求項１９】
ラクトフェリンを有効成分として用いる、ＩＬ−１０産生の誘導および／またはＴＮＦ−α産生の抑制により改善される疾患または状態の処置方法。
【請求項２０】
有効成分を、以下の工程により選られうる粉末剤、散剤、顆粒剤、錠剤またはカプセル剤の形態で用いる、請求項１７〜１９のいずれ１項に記載された方法：
有効成分および医薬として許容される添加剤を乾燥状態で混合し；
所望により混合物を乾燥状態で強圧成型し、次いで成型物を一定の大きさの微粒状物または顆粒とし；そして
混合物、微粒状物または顆粒を打錠するかもしくはカプセルに充填する。
【請求項２１】
有効成分が、腸溶性製剤の形態である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
有効成分が、有効成分を含む顆粒を打錠したものを、胃液に対しては抵抗性があり、小腸内で溶解する基剤を主成分とする皮膜でコーティングしてなる、請求項２０に記載の方法。
【請求項２３】
有効成分を一日当たり約０．１ｍｇ〜約５０，０００ｍｇ、好ましくは約０．５ｍｇ〜約１０，０００ｍｇを、最も好ましくは約１０ｍｇ〜約２，０００ｍｇ投与する、請求項２１に記載の方法。
【請求項２４】
有効成分を一日当たり約０．１ｍｇ〜約５０，０００ｍｇ、好ましくは約０．５ｍｇ〜約１０，０００ｍｇを、最も好ましくは約１０ｍｇ〜約２，０００ｍｇ投与する、請求項２２に記載の方法。
【請求項２５】
有効成分が、以下を含む工程により得られうる、粉末剤、散剤、顆粒剤、錠剤またはカプセル剤の形態である、請求項２１に記載の方法：
有効成分および医薬として許容される添加剤を乾燥状態で混合し；
所望により混合物を乾燥状態で強圧成型し、次いで成型物を一定の大きさの微粒状物または顆粒とし；そして
混合物、微粒状物または顆粒を打錠するかもしくはカプセルに充填する。
【請求項２６】
有効成分が、以下を含む工程により得られうる、粉末剤、散剤、顆粒剤、錠剤またはカプセル剤の形態である、請求項２２に記載の方法：
有効成分および医薬として許容される添加剤を乾燥状態で混合し；
所望により混合物を乾燥状態で強圧成型し、次いで成型物を一定の大きさの微粒状物または顆粒とし；そして
混合物、微粒状物または顆粒を打錠するかもしくはカプセルに充填する。
【請求項２７】
モルヒネと併用するための、請求項１〜３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２８】
モルヒネと併用される、請求項９〜１１のいずれか１項に記載の使用。
【請求項２９】
モルヒネと併用される、請求項９〜１１のいずれか１項に記載の処置方法。
【発明の詳細な説明】
技術分野
本発明は、ラクトフェリンを含む医薬組成物に関する。本発明の組成物は、第一相の痛みおよび第二相の痛みを含む痛み、不安およびストレスからなる群より選択される少なくとも一つの疾患または状態を処置するために有用である。特に末期ガン患者における生活の質を著しく損なう疼痛および不安を緩和ないし解消させるのに有用である。本発明の組成物はまた、関節炎または骨接合部位の疾患（例えば、慢性関節リウマチ、変形性関節症、四十肩及び五十肩、テニス肘および野球肩等のスポーツ外傷ならびに腰痛）に伴う第一相の痛みおよび第二相の痛みを含む痛み、並びに炎症を処置するために有用である。
背景技術
１９８１年から日本人の死因の第１位を占めているのは“ガン”で、高齢化社会の到来と共に年々増加の一途をたどっている。ガン患者に耐え難い苦痛を与える疼痛が発現する頻度は病状の悪化とともに増加し、８０％の末期ガン患者は持続する激しい疼痛に苦しみ、それとともに患者は死への恐怖から極度に不安な状態に陥る。
不安感の大部分は疼痛に由来しているので、ＷＨＯはガン性疼痛の治療に鎮痛薬の３段階使用を提案しており、最終段階に使われるのはモルヒネ類である。第１段階の穏やかな痛みを鎮めるために使われるのは、アセトアミノフェン、アスピリン、イブプロフェン等の非麻薬性鎮痛剤であり、補助薬剤として特殊な痛みや、他の症状を抑える薬として抗うつ剤、抗てんかん剤、制吐剤、抗不安剤等が使われる。第二段階の中等度の痛みを抑えるためには、弱い麻薬性鎮痛剤とその他の鎮痛剤が併用される。弱い麻薬性鎮痛剤の代表としては、コデイン、オキシコドン配合剤等があげられる。最終段階の耐え難いガンの痛みからの解放を目的に、各種のモルヒネ製剤が開発されてきた。一方、患者の不安感を除去するには、抗ストレスホルモンであるグルココルチコイド剤（いわゆるステロイド）が頻用されている。
適切な痛みの治療がどうしても必要なのは、疼痛からの解放が患者の生活の質（ＱＯＬ）向上のためばかりでなく、疼痛は患者が病気と闘うエネルギーを奪うからでもある。痛みの治療が十分でないと、患者は不安に陥り、ガンと闘い抗ガン治療を受けるためのエネルギーが出にくくなる。痛みの緩和治療が不十分な場合、ガン治療の根底を危うくしかねないのである。極めて重要な点は、痛みは不必要なものであり、患者の容態を悪化させるだけであるということである。痛みの治療は緊急の問題とすべきであって、後回しであってはならない。つまり、疼痛治療はガンそのものの治療と同じぐらい大切なのである。痛みは患者の病状に大きな影響を与えるので、この二つを分けて考えるべきでなく、疼痛治療とガン治療は不即不離のものである。
痛みは気持ちのあり方によって支配される度合いが高く、ガン患者は家族に囲まれた自宅で、一日のリズム、一週間のリズムの中に暮らす方が痛みの程度も軽い。疼痛治療はできることなら、入院治療より在宅治療の方が効果は高い。しかし、在宅でのガン治療の問題点は、モルヒネとステロイドの使用法が末端の医療機関に普及していないことである。ステロイドを投与して食欲不振がせっかくよくなっても、専門医療機関から退院すると地域の医師がステロイドを危険視して服用を止めさせてしまう例が多い。そしてモルヒネおよびステロイドは服用に際しては非常に注意を要する薬物であるから、投与を中止することも一概に間違った措置として退けることはできない。
ガン治療においてモルヒネとステロイドが制約を受けず使用できるのは、それらが患者を疼痛と不安から解放し、人間としての尊厳を維持しつつ死を迎えさせる終末医療の一環として用いられるためである。
しかしながら、モルヒネは乱用すると薬物依存症に陥り、それから離脱することが著しく困難である。また、モルヒネは腸管の蠕動運動を抑制するため、腹部が膨満し極度の便秘が起こる。ガン患者は食欲不振のため健常者と比べ食物摂取が細っていることに加え、極度の便秘のため、便通は７〜１０日に１回になることも珍しくない。古い大便が体内に長期滞留することは、正常な代謝機能および免疫機能に悪影響を及ぼすことは必至である。モルヒネによる便秘に対し、主として緩下剤が処方されているが、有効性には限界がある。便秘を起こさないモルヒネ製剤はまだ出現していない。さらに、モルヒネは嘔吐を起こさせることでも知られている。モルヒネによる嘔吐は、投与経路による発生率の差はなく、すくなくとも１／３の患者に発生し、制吐薬の併用が不要な患者は、１／３に過ぎないといわれている。このように発生頻度が高いので、すべてのモルヒネ投与患者は投与開始と同時に制吐薬を併用すべしとする意見さえある。催吐作用への耐性は比較的早く出現するため、制吐薬が必要な期間はモルヒネの投薬開始からおよそ２週間であることが多いが、制吐薬併用による医療コスト上昇は問題である。その上、眠気はモルヒネ使用患者の約２０％に起こる副作用である。その他、呼吸抑制、混乱、幻覚、ふらつき感、血圧低下、発汗、掻痒症等の副作用がモルヒネには認められる。そして、約半数にみられる口内乾燥は、ＱＯＬを大きく損なう副作用である。これらの副作用は患者に不快感を与えると同時に、その対応のため医療コストの上昇圧力として作用する。
抗ストレスホルモンとして使用されるステロイドも多彩な副作用を持っている。もっとも警戒すべき副作用は、免疫抑制である。ガン患者における死因の大部分は、免疫能低下にともなって日和見病原菌が侵入し、それに続いて多臓器不全が惹起されるためといわれる。したがって、免疫能を低下させるステロイドがガン患者の生命を短縮している可能性は否定できない。さらに、ステロイドは強い異化作用を持っているので、患者の衰弱を加速して生存期間を短縮していることも考えられる。また、ナトリウムの尿排泄が抑制されることによる全身性の浮腫と尿閉、骨のカルシウム溶出を促進することによる骨折等もステロイドの副作用である。
ガン患者の疼痛と不安が良好にコントロールされている場合でも、容態が短時間で急変することは稀でない。これをガン性緊急症と呼んでいる。ガン性緊急症としては、呼吸困難、疼痛の増強、意識障害・錯乱、尿閉、骨折、出血、上肢の麻痺・脱力、半身麻痺等があげられる。これらの症状がモルヒネおよびステロイドの過剰投与と無縁とは思われない。
ガンの疼痛とそれにともなう患者の不安管理は、極限状態における医療であって、ガン以外にも疼痛と不安をコントロールする必要がある疾病は多数にのぼる。つまり、疼痛とそれにともなう不安を解消させることは、医療の中でも重要な地位を占めている。したがって、モルヒネあるいはステロイドにみられるような副作用をともなわず、低いコストで疼痛を改善し、不安を解消する手段は社会的なニーズが非常に高いと考えられる。
他方、関節炎にともなう疼痛や腰痛もまた非常に深刻な問題である。関節炎には慢性関節リウマチ、変形性関節症、五十〜四十肩、スポーツの外傷による関節炎等が主要なものである。腰痛は骨接合部の疼痛である。
慢性関節リウマチは、多発性の関節炎がおこる慢性の炎症疾患であるが、女性に男性の３倍以上みられ、３０歳代から５０歳代で発病することが多いとされている。発症には、体質素因、免疫医学的要因、環境因子の３つが重要視されている。免疫学的要因では、リュウマトイド因子が関節の中で産生され免疫グロブリンＧと結合して関節炎を引き起こし、関節の破壊が進行するとされている。環境因子では、寒冷、湿気、ストレス、ウイルス感染等があげられる。初期の症状の多くは、起床時に関節がこわばり、関節の痛みと腫脹があり、よくおかされる関節は、手足の指、手、足、肘、膝、肩等で、進行すると変形することもある。また、関節症状だけでなく、脱力感、倦怠感、微熱等全身症状を伴うこともある。一旦、慢性関節リウマチを発症すると完全な治癒は難しく、患者は生涯この病気とつき合わねばならない。悪化を防ぐため、患者は心身の安静と適度な運動、ビタミン、ミネラル、たんぱく質の摂取、冷えや湿気の防御に心掛ける必要がある。
変形性関節症は非炎症性であり、可動関節、特に荷重のかかる関節が徐々に変形をきたし疼痛および可動域制限をきたす疾患である。病理学的には関節軟骨の荒廃、軟骨下骨の骨新生を特徴とする。本症は、加齢とともに起こってくる一次性と外傷、慢性関節リウマチ等の基礎疾患に伴って出現してくる二次性に分類される。変形性関節症の病因と病気の成り立ちは次のように考えられている。本態性変形性関節症は関節軟骨の老化現象であり、加齢、代謝障害、循環障害、肥満、性ホルモンの影響等も示唆されており、これに機械的影響が加わって出現する。続発性変形性関節症の基礎疾患としては、外傷、慢性関節リウマチ、アルカプトン尿症、ヘモクロマトーシス、痛風、Ｃｈａｒｃｏｔ関節等がある。成人人口の半数以上が本症を有しているといわれ、頻度は加齢とともに幾何級数的に増加し、６０歳以上では軽症を含めて本症を有していない症例は例外的である。男女比はほぼ同数である。
五十〜四十肩、テニス肘、野球肩および各種の腰痛も一般的な骨と骨の接合部に痛みを生ずる特徴があることから、関節の病気に分類できる特徴を備えている。これらの疼痛は生命を脅かす恐れはないが、一般に難治性で長い経過をたどる。
今日、慢性関節リウマチおよび変形性関節症等の関節の疼痛あるいは腰痛のように骨の接合部位の痛みを緩和するために日常的に処方される薬剤は、非ステロイド系鎮痛消炎剤と総称されるアスピリン、インドメサシン、イブプロフェン、ジクロフェナック等、数十種類の合成化合物と、ステロイドと俗称される合成グルココルチコイドホルモン等である。
疼痛を媒介するのはプロスタグランジンであり、非ステロイド系鎮痛消炎剤によってシクロオキシゲナーゼを阻害してプロスタグランジン生合成を減少／停止させれば、疼痛は緩和する。しかしながら、プロスタグランジンは胃の血行動態を支配しているため、胃における産生が阻害されると、血流が低下した胃は消化性潰瘍を多発するようになる。これまでの非ステロイド系鎮痛消炎剤は、プロスタグランジン産生に当たって律速となるシクロオキシゲナーゼ−１および２の双方を阻害する諸刃の剣であった。最近における非ステロイド系鎮痛消炎剤分野におけるトピックは、炎症部位で発現するシクロオキシゲナーゼ−２（ｃｏｘ−２）を特異的に阻害するｃｏｘ−２阻害剤の出現である。ｃｏｘ−２阻害剤は、非ステロイド系鎮痛消炎剤に不可避であった消化性潰瘍を減らすことができると期待されている。
副腎皮質ホルモンのグルココルチコイド（いわゆるステロイド）も関節炎の治療に頻用される。ステロイドは関節炎に対し劇的な改善効果を示す反面、多彩な副作用のため使用が著しく制約されている。ステロイドによる治療は、免疫能を低下させて感染症に罹りやすくさせ、消化性潰瘍を多発させ、糖尿病を誘発する等、重大な副作用をもたらす。また、投与を中断すると投与前より症状を悪化させる反跳現象（リバウンド）を呈する。
金製剤、ペニシラミン、免疫抑制剤、抗インターロイキン−６抗体等も関節炎の治療に用いられるが、これらも限られた範囲で処方されるに過ぎない。
関節の疼痛は、治癒が見込める五十〜四十肩、腰痛、スポーツに伴う関節痛であっても、極めて長期の経過を取ることが特徴であり、さらに、慢性関節リウマチ、変形性関節症は完治が困難で、いったん発症すると患者は生涯にわたって病気とつき合う運命にある。関節の疼痛を鎮めるには、温泉浴のような物理的な鎮痛法もあるが、非ステロイド系消炎鎮痛剤およびステロイド等による薬物療法が主流である。既に述べたようにこれらの薬剤は、長期投与すると消化性潰瘍を高い頻度で誘発する。したがって、消化性潰瘍を誘発させることなく、高度の安全性をもって関節の疼痛を改善できる方法が、長年探し求められてきた。
ラクトフェリンは、いろいろな哺乳動物の乳汁中に含まれる鉄結合性蛋白質である。１９３９年に牛乳中に発見され、その後、ウシ以外の多くの哺乳動物の乳汁中に含まれていることが判明した。１９６０年、牛乳および人乳からはじめて単離され、既にベーカー等はＸ線回折法によりその構造決定を行っている（ベーカー等、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８４：１７６９−１７７３，１９８７年）。ヒトでは、乳汁はもとより涙、鼻汁、唾液、気管支および子宮粘液、精液、胆汁、膵液等の外分泌液、血漿、尿、羊水等の体液、好中球の二次顆粒等からも分離され、好中球の半減期から一日あたり約５グラムほどが生合成されていると考えられている。
ラクトフェリンは分布が広汎であり、かつ生体内で多量に産生されていることから、いろいろな業界でその応用が検討されてきた。動物個体レベルで微生物の感染を阻止する作用（宮崎等，Ｃｈｅｍｏｔｈｒａｐｙ  ３９：８２９−８３５（１９９１））に加え、ガンに関連した作用としては、抗ガン作用（Ｂｅｚａｕｌｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５４：２３１０−２３１２（１９９４））、発ガン予防（関根等，Ｊｐｎ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．８８：５２３−５２６（１９９７））、転移阻止（久原，臨床免疫  ３４：３７６−３８１（２０００））、さらに血管新生を阻害することによるガン転移の阻害（島村等，第６０回日本ガン学会総会記事（２００１年１０月））が報告されてきた。また、ラクトフェリンは生体内の分布が広汎で、多量に産生されていることから、いろいろな役割を担っていると推定される。特に、生体が外界と直接接触する眼、口腔および消化管粘膜、鼻腔、気管支等をおおう粘液に存在することから、病原微生物およびウイルスの感染を防御する最初の防壁としての役割が強調されてきた。さらに最近では、Ｃ型肝炎治療、大腸ガンの二次予防、白癬菌の皮膚感染症等の分野で臨床応用が進められている。しかしながら、疼痛改善および不安解消のためにラクトフェリンを有効に用いることができたという報告はなく、またラクトフェリンを経口投与して慢性関節リウマチ、偏性性関節症、五十〜四十肩、慢性腰痛、テニス肘、野球肩の治療を試みた例は知られていない。
発明の開示
本発明者等は長年にわたりラクトフェリンの作用について研究を重ねてきた。  本発明者等がＧＬＰ対応で実施したビーグル犬およびラットの毒性試験では、牛乳から抽出したラクトフェリン（ニュージーランド、Ｔａｔｕａ乳業会社製、純度８７％）は、物理的な限界量を動物に経口投与しても何らの毒性も示さなかった。１回投与による急性毒性試験では、最高投与量の５ｇ／ｋｇでも異常所見はまったく認められなかった。最高投与量を２ｇ／ｋｇに設定した両種動物における３ヶ月間の亜急性毒性試験でも、急性毒性試験と同様に異常所見は一切なかった。したがって、ラクトフェリンは経口投与すると、まったく毒性がなく、ガン患者のようなｉｍｍｕｎｏｃｏｍｐｒｏｍｉｚｅｄ  ｈｏｓｔｓに頻発する日和見感染症を防御し、ガン予防、ガンの成長阻止、転移防止および転移巣を破壊する等々、ガン治療薬として理想に限りなく近い性質を持っていると考えられた。また、老齢の患者のような免疫能が低下した患者に投与しても極めて安全であると考えられた。
そこで、本発明者らは、牛乳から抽出したラクトフェリンを腸溶錠とし、末期ガン患者のボランティアに内服を依頼して成績を集計した。その結果、ラクトフェリン腸溶錠を内服した患者は一様に疼痛から解放され、さらに不安が解消されたため食欲が増加する効果を一応認めた（特願２０００−３５７５７３参照）。
また、本発明者らは、齧歯類動物を用い、（１）ホットプレートテスト、（２）ホルマリンテスト、（３）酢酸ライジングテスト等の痛みに関連した動物実験を行い、ラクトフェリン投与の有無が実験動物の痛覚に及ぼす影響を検討した。その結果、いずれのテストでも事前にラクトフェリンを投与すると、実験動物は痛覚刺激に対し感覚が鈍麻すること、すなわち、ラクトフェリンは疼痛を緩和する効果があることを発見した。本発明者らは、さらに、ラクトフェリンの鎮痛効果を代表的な非ステロイド系鎮痛消炎剤であるジクロフェナックと比較したところ、ジクロフェナックが無効の第一相疼痛に対しラクトフェリンは用量依存性に鎮痛効果を示すこと、第二相疼痛に対する鎮痛作用も抑制強度および持続時間の点でジクロフェナックより優れていることを見いだした（本明細書の実施例１〜３参照）。
魚類に経口投与したウシラクトフェリンがストレスを緩和していることを示唆する事実は、既に角田が報告している（角田、Ｅｘｃ．Ｍｅｄ．Ｉｎｔ．Ｃｏｎｇｒ．Ｓｅｒ．１１９５：４２９−４４１，２０００年）が、本発明者らは、ラクトフェリンが哺乳動物でも抗ストレス作用を発揮するかどうかについて詳細に検討した。その結果、ラクトフェリン投与がラットにおいてもストレスを緩和し、胃潰瘍発症を軽減することを見いだした（本明細書の実施例４参照）。
また、本発明者らは、ラクトフェリンの腸溶錠を関節炎、五十〜四十肩、腰痛、テニス肘、野球肩の患者に経口投与したところ、全く副作用を呈することなく関節の疼痛を有意に改善することを見いだした（実施例９〜１１参照）。
さらに、本発明者らは、実験動物モデルとしてラットのアジュバント関節炎を用い、関節が腫脹した後肢のアジュバント投与足を１０回折り曲げ、ラットが痛がって悲鳴を上げた回数を記録する方法により、ラクトフェリンの経口投与が関節の疼痛に及ぼす効果を評価した。ちなみに、健常ラットは、後肢の関節を折り曲げても痛くないので悲鳴を上げないが、アジュバント関節炎発症後は過敏な痛覚反応を呈するようになる。アジュバント関節炎ラットにラクトフェリンを投与すると、腫脹した関節を折り曲げても、悲鳴を上げる回数が有意に減少した。すなわち、ラクトフェリンには関節炎局所でも痛覚を鈍麻させる作用があることを見いだした（本明細書の実施例５〜７参照）。ラクトフェリンの関節炎局所における痛覚鈍麻作用は、多方面に応用を可能にする新規な発見である。
また本発明者らの検討によれば、経口投与されたラクトフェリンはオピオイド系を介した鎮痛メカニズムで関節炎の疾病を改善するだけでなく、免疫系の活性化を抑制することによって，炎症の予防および治療効果を示すことが明らかになった（実施例８参照）。さらに本発明者らの検討によれば、ラクトフェリンはモルヒネ様の鎮痛作用を有するのみならず、モルヒネの鎮痛作用を増強する効果を示すことが明らかになった（本明細書の実施例１２および１３参照）。
本発明者らは、このような新規かつ有用な知見に基づき、本発明を完成するに至った。すなわち、本発明は、ラクトフェリンを有効成分とする新規な鎮痛剤を提供する。
発明の詳細な説明
本発明の新規鎮痛剤は、ラクトフェリンを有効成分として含む組成物である。本発明の組成物には、経口投与した場合に、本発明者らの発見した作用を発揮する限り、いかなるラクトフェリンをも用いることができる。ラクトフェリンは分子量が８万程度の高分子であり２個の３価鉄イオンとキレートをつくる性質があるが、本明細書でいう「ラクトフェリン」には、鉄イオンフリーの型から完全に鉄イオンが飽和された型の全てが含まれ、また由来を問わず、ヒト、ウシ、組み換え型等、あらゆるラクトフェリンが含まれる。また、ラクトフェリン自体の代わりに、ラクトフェリンの均等物（例えば、ラクトフェリン群タンパク質またはラクトフェリン群タンパク質の酵素分解物）を用いてもよい。このような組成物もまた、本発明の範囲に含まれる。「ラクトフェリン群タンパク質」には、ラクトフェリンおよびコンアルブミンが含まれ、「ラクトフェリン群タンパク質の酵素分解物」には、ラクトフェリン群タンパク質のラクトフェリシンに相当するペプタイドが含まれる。本発明の組成物は、ラクトフェリン（またはラクトフェリン群タンパク質またはラクトフェリン群タンパク質の酵素分解物）の１種類のみのを含んでいてもよく、また２種類以上を含んでいてもよい。
本発明の組成物は、経口剤、注射剤、座剤、貼付剤、点滴剤、含嗽剤、トローチ等の剤型で実用に供することができる。経口用の粉末剤、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、丸剤若しくは液剤、又は注射剤の形態とすると特に実用に適する。本発明の組成物は、食品、飲料、ドリンク剤の形態であってもよい。また、本発明の組成物を食品や飼料中に添加して投与することもできる。
本発明の組成物を製剤化する際に用いる賦形剤としては、乳糖、庶糖、グルコース等の単糖ないし二糖類、コーンスターチ、ポテトスターチのような澱粉類、結晶セルロース、無機物としては軽質シリカゲル、合成珪酸アルミニウム、メタ珪酸アルミン酸マグネシウム、リン酸水素カルシウム等がある。また、結合剤としては澱粉類、カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）、ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ）、カルボキシメチルセルロース−ナトリウム塩、ポリビニルピロリドン等がある。また、下部消化管でもとの一次粒子にまで崩壊させることを目的として用いる崩壊剤としては、澱粉、カルボキシメチルセルロース−ナトリウム塩、カルボキシメチルセルロース−カルシウム塩、クロスカルメロースナトリウム、カルボキシメチルスターチナトリウム等がある。錠剤ならびに穎粒を腸溶性に被覆するための皮膜剤としては、ＰＨ５〜６で溶解するヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、カルボキシメチルエチルセルロース、酢酸フタル酸セルロース、メタクリル酸コポリマーや、アルカリ性領域で溶解するシェラック等がある。
本発明の組成物は、乾燥状態で製剤化することが好ましい。本発明の組成物の有効成分であるラクトフェリンは、高温・多湿では不安定だからである。詳細には、ラクトフェリンのアミノ基と賦形剤等に存在する還元基との間ではアミノ−カルボニル反応が生じうる。これはさらに多段階を経て、不可逆的に反応物の重合による褐色色素の形成に至る（褐変反応）。酸化を触媒する物質の存在や、高温は、この反応を促進する。すなわち、ラクトフェリンを製剤化する際、水が存在するとラクトフェリンに含まれるＦｅ３＋等の影響で、アミノ−カルボニル反応が促進されうる。また打錠による発熱もまた、この反応を一層促進する。よって、薬理効果の維持された安定なラクトフェリン製剤を得るためには、製剤化はできるだけ乾燥状態で行うのがよい。
ラクトフェリン粉末は通常、非常に比重が軽いためにそのまま打錠できないことから、より薬理効果の維持された安定な錠剤の形態である本発明の組成物を得るには、例えば、有効成分と賦形剤、結合剤、崩壊剤を混合し、混合物をスラグマシンで強圧成型し薄い大きな平たい円盤をつくり、それを砕いて篩過し、一定の大きさの顆粒をそろえる。そして錠剤とする場合には、顆粒に滑沢剤を加えて打錠し、錠剤を所望によりコーティング皮膜で覆って製品化するのがよい。また、カプセル剤とする場合には、顆粒の一定量をカプセルに充填して、カプセル剤とするのがよい。
経口用組成物である本発明の組成物は、腸溶性の製剤とすることが好ましい。本発明者らは、先にした国際出願ＰＣＴ／ＪＰ０１／１０２１２（ＷＯ０２／４１９１２）で詳述しているように、腸管粘膜上にはラクトフェリン・センサーともいうべき構造が存在するとの仮説を有しており、他方、ラクトフェリンが、ペプシンに対して感受性は強いが他のプロテアーゼに対しては著しく抵抗性であるとの知見を有している。すなわち、腸管粘膜上に作用部位が存在し、かつペプシンに対して高感受性であるラクトフェリンにおいては、腸溶性の製剤とすることに特に技術的意義を有する。
腸溶性とするには、胃液に対しては抵抗性があり、小腸内で溶解する基剤、例えばシェラック、ツェイン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース・フタレート、カルボキシメチルエチルセルロース、酢酸フタル酸セルロース、メタクリル酸コポリマー、水に不溶のエチルセルロースおよびアミノアルキルメタアクリレートコポリマーからなる群より選択される基剤を主成分とする皮膜で、腸溶性のカプセルに有効成分を含む顆粒を充填するか、または有効成分を含む顆粒に滑沢剤を加えて打錠して得た錠剤をコーティングするとよい。
特に本発明者らは、ラクトフェリン腸溶錠を内服した者の血液中に、ラクトフェリンを確認した。このような知見は既存のラクトフェリン製剤では得られてこなかった。腸溶性製剤の形態であるものは、本発明の好ましい実施態様の一つである。さらに、乾燥状態で製剤化された腸溶性製剤の形態であるものは、本発明の特に好ましい実施態様の一つである。
製造された組成物が、腸溶性であるか否かは、塩化ナトリウム２．０ｇに希塩酸２４ｍｌおよび水を加えて溶かし、１０００ｍｌとした第一液（ｐＨ１．２，日本薬局方・一般試験法４１）および０．２Ｍリン酸２水素カリウム試液２５０ｍｌに０．２Ｎ水酸化ナトリウム試液１１８ｍｌおよび水を加えて１０００ｍｌとした第二液（ｐＨ６．８）を用いて崩壊性を試験することにより、確認することができる。第一液に１２０分間浸しても崩壊せず、第二液中では６０分間浸すと崩壊する錠剤または顆粒は、胃では溶解せず、十二指腸に流入して始めて崩壊し、有効成分が溶出されるものであり、腸溶性であると判断することができる。
本発明の組成物は、第一相の痛みおよび第二相の痛みを含む痛み、不安およびストレスからなる群より選択される少なくとも一つの疾患または状態を処置するために有用である。特に末期ガン患者における生活の質を著しく損なう疼痛および不安を緩和ないし解消させるのに有用である。本発明の組成物はまた、関節炎または骨接合部位の疾患に伴う第一相の痛みおよび第二相の痛みを含む痛み、並びに炎症を処置するために有用である。関節炎または骨接合部位の疾患には、例えば、慢性関節リウマチ、変形性関節症、四十肩及び五十肩、テニス肘および野球肩等のスポーツ外傷ならびに腰痛が含まれる。本明細書でいう「処置」は、特別な場合を除き、対象とする疾患又は状態の、予防、治療又は解消および緩和を含む。また、本明細書でいう「第一相の痛み」は、特別な場合を除き、局在の明らかな刺すような鋭い痛みをいう。また、「第二相の痛み」は、遅れてから長く続く焼けるような痛みを含む。
本発明の組成物は、他の医薬、例えば鎮痛剤（モルヒネ、コデイン、ジヒドロコデイン、エチルモルヒネ、オキシコドン等の麻薬性鎮痛剤）、抗炎症剤・抗アレルギー剤（例えば被ステロイド性抗炎症剤、ステロイド性抗炎症剤、消炎酵素剤）と併用することができる。そして、併用される剤の作用を増強させうる。特にモルヒネと併用すると、モルヒネの投与量を大幅に減じることができる。
本発明の有効成分であるラクトフェリンは、下部消化管のビフィズス菌および乳酸菌を増加しうるので、本発明の組成物は、放屁、下痢、腹部膨満等の副作用をともなわず投与することができる。
本発明の組成物は、一般的には、有効成分として一日当たり約０．１ｍｇ〜約５０，０００ｍｇ、好ましくは約０．５ｍｇ〜約１０，０００ｍｇを、最も好ましくは約１０ｍｇ〜約２，０００ｍｇを、一度にまたは分割して、本発明の組成物による処置が必要とされている患者に対し、食前、食事後、食間および／または就寝前等に投与することができる。投与量は、個別に、投与される患者の年齢、体重、および投与目的に応じて定めることもできる。
本発明の組成物の有効成分ラクトフェリンの鎮痛作用は、同時にナロキソンを投与すると消失する。ナロキソンはモルヒネと拮抗し、モルヒネの鎮痛作用を消失させることが知られているので、ラクトフェリンの鎮痛作用は、モルヒネと類似したメカニズムである可能性がある。つまり、モルヒネと同様に痛覚刺激を伝達する中枢のμ−オピオイド受容体に作用し、痛覚刺激の伝達を遮断しているらしい。しかし、ラクトフェリンはモルヒネのように耽溺性はなく、また、本発明者らの検討によれは、オピオイドの副作用である食欲抑制、体重減少等の症状は観察されず、投与された動物の一般状態は良好であった。したがって、ラクトフェリンがモルヒネと全く同じメカニズムにより痛覚刺激伝達をブロックしているのではないことは明らかである。そこで、本発明者らは、アジュバント関節炎を発症したラットでは、血漿のサイトカイン濃度が上昇することに着目し、これらのサイトカイン産生に対しラクトフェリンの経口投与がどのような影響を及ぼすかを詳細に検討した。すると、炎症のマーカーである腫瘍壊死因子（ＴＮＦ−α）が有意に低下し、抗炎症性サイトカインであるインターロイキン−１０（ＩＬ−１０）が有意に上昇した。つまり、ラクトフェリンを経口投与すると、免疫系の活性化により、炎症を鎮める方向に作用することがわかった。ＴＮＦ−αのレベルを下げ、ＩＬ−１０を上げるというラクトフェリンの作用は、関節炎の治療には理想的な特性である。
経口投与された本発明の有効成分ラクトフェリンは、オピオイド系を介した鎮痛メカニズムで関節炎の疾病を改善するだけでなく、免疫系の活性化を抑制することによって、炎症の予防および治療効果を示すことが明らかになった。関節炎における疼痛の軽減は重要な臨床課題であり、ラクトフェリンが鎮痛作用と抗炎症作用とを持つことは、新規な関節炎治療経口薬として大変有用であることを意味する。
以下に、本発明を実施例により具体的に説明するが、本発明はそれに限定されるものではない。
実施例
＜製造例１＞
遺伝子組換えしてヒトラクトフェリン遺伝子を導入した黒麹菌によって生産されたヒトラクトフェリン（純度９８％以上）０．５グラムに、精製ブドウ糖２５グラムを加え、精製水５ｍｌに溶かして無菌濾過する。濾液はバイアルに入れて凍結乾燥し、注射用のラクトフェリン末を製造する。
＜製造例２＞
コーティング機にラクトフェリン５０ｍｇを含有する直径８ｍｍ、重量１８０ｍｇの錠剤をいれ、カルボキシメチルエチルセルロース９％、グリセリン脂肪酸エステル１％、エタノール４５％、塩化メチレン４５％よりなる腸溶性コーティング液を噴霧し、対錠剤重量比で１２％の腸溶性コーティングを施して製品とした。
＜製造例３＞
牛乳から抽出したラクトフェリン１ｋｇをアラビアゴム末０．９ｋｇを混合し、乾式造粒装置を用いて造粒し、粉末硬化植物油６０ｇを混合し、そして直径１０ｍｍの平型杵で１錠の重量１００ｍｇに成型して口腔貼付錠とした。
＜製造例４（ラクトフェリン腸溶錠の製造）＞
ラクトフェリン５．５ｋｇ、乳糖８ｋｇ、結晶セルロース１０ｋｇ、カルボキシメチルセルロース・カルシウム１ｋｇ、グリセリン脂肪酸エステル０．５ｋｇを混合し、実施例１のように乾式で顆粒化した後、ラクトフェリンを１錠中に５０ｍｇ含む直径８ｍｍ、重量平均２５０ｍｇの錠剤に加圧成型した。この錠剤を、コーティング機（フロイント産業（株）製、ハイコーターＨＣＴ−４８Ｎ）に入れ、セラック３０部、ヒマシ油７部をイソプロパノール６３部に熔解した液を計算量だけ噴霧し、対錠剤重量比で１０％の腸溶性コーティングを施した錠剤を製造した。
＜実施例１（ホルマリンテスト（急性実験））＞
ホルマリンテストは、典型的な痛覚刺激試験である。２％のホルマリン５０μｌをラットのフットパッドに注射することによる足上げと足舐め行動を観察することにより、鎮痛効果を測定する方法である。
雄性のウイスター系ラット（６週令）１０頭を無作為に２群に分け、ホルマリン注射の１時間前に、対照群には生理食塩水（１ｍｌ／ｋｇ）、ラクトフェリン群には生理食塩水に溶解したウシラクトフェリン（１００ｍｇ／ｋｇ、ｔａｔｕａ乳業会社製、純度８７％）をそれぞれ腹腔内に投与した。１時間後にホルマリン溶液をフットパッドに注射し、痛覚刺激による足上げ行動と足舐め行動を１時間にわたって計測した（図１および図２）。
図１から明らかなように、ラクトフェリンをホルマリン刺激の１時間前に腹腔内投与すると、有意に足上げ行動が減少した。分散分析で両群のあいだにはＰ＜０．０００１以下の危険率で有意差があった。また、さらに高用量のラクトフェリンを投与すると、疼痛に起因するラットの足舐め行動も有意に減少した（データは示さず）。
また、図２に示すように、ホルマリン注射後の５０分間における足上げ回数（ホルマリンによる第二相の痛覚（遅れてくる激しい刺すような痛み）刺激による）は、ラクトフェリン群の方が有意に減少しており、疼痛に対する感受性が鈍化していることを示唆した。
＜実施例２（ホルマリンテスト（慢性実験））＞
前の実施例はラクトフェリンを腹腔内に注射した際における痛覚に及ぼす影響を試験したものであった。次に、経口投与したラクトフェリンが痛覚にどのような影響を与えるかを検討した。
雄性のウイスター系ラット（６週令）１４頭を無作為に２群に分け、一方の群は齧歯類用標準飼料粉末（日本クレアＣＥ−２）、他方の群はＣＥ−２に１％のウシラクトフェリンを添加し、４週間飼育した。ホルマリン溶液をフットパッドに注射し、痛覚刺激による足上げ行動と足舐め行動を１時間にわたって計測した（図３および図４）。
図３から明らかなように、ラクトフェリンは経口投与した場合でも、ホルマリンによる痛覚刺激を緩和する方向に働いていること、すなわち、疼痛に対する感受性を鈍化させていることがわかった。分散分析で両群のあいだにはＰ＜０．０００１以下の危険率で有意差があった。また、足舐め行動もラクトフェリン投与により有意に減少することを確認した。
図４から明らかなように、ラクトフェリンは経口投与した場合でも、ホルマリンによる第二相の痛覚（遅れてくる激しい刺すような痛み）刺激を有意に抑制する作用を示した。
＜実施例３（非ステロイド系鎮痛消炎剤との比較）＞
次に、ラクトフェリンの鎮痛作用を代表的な非ステロイド系鎮痛消炎剤であるジクロフェナックと比較した。
６週令の雄性ウイスター系ラットを用い、フットパッドにホルマリンを注射する３０分前に、ウシラクトフェリン並びに対照薬ジクロフェナックを腹腔内に投与した。図５に、疼痛反応を、第一相（左側グラフ）と第二相（右側グラフ）に分けて示した。
図５から明らかなように、ラクトフェリンは用量依存性に疼痛の第一相および第二相の両方とも抑制することがわかった。一方、ジクロフェナックは疼痛第二相を抑制するが、抑制の度合いはラクトフェリンに及ばなかった。つまり、ラクトフェリンは「局在の明らかな刺すような鋭い痛み」と「遅れてから長く続く焼けるような痛み」の双方を抑制する作用があることがわかった。
次の図７と８に、両者の痛み抑制効果を経時的に測定した結果を示した。対照群（ｎ＝４）、ジクロフェナック群（ｎ＝５）とも、ホルマリン注射３０分前に腹腔内に投与した。ジクロフェナックの疼痛抑制効果は、ホルマリン注射５０分後あたりから消失しているのに対し、ラクトフェリンによる疼痛抑制は持続時間が長く、ホルマリン注射６０分後でも有意な強い抑制効果が認められた。この結果、ラクトフェリンは局所的な麻酔作用と同時に、末期ガン患者が訴える長く続く焼けるような痛みに対しても抑制する作用があることが明らかになった。
＜実施例４（ストレスに対する作用）＞
雄性のウイスター系ラット（６週令）１６頭を無作為に２群に分け、一方の群（ｎ＝８）は齧歯類用標準飼料粉末（日本クレアＣＥ−２）、他方の群（ｎ＝８）はＣＥ−２に１％のウシラクトフェリンを添加し８週間飼育した。８週間経過した後、ラットを一夜絶食させてから５０％エタノールを体重ｋｇあたり５ｍｌを強制経口投与し、引き続き拘束ストレスを２時間与えた。２時間後に胃を摘出し、胃粘膜上の「出血点数」「出血面積」「潰瘍数」「大潰瘍数」「潰瘍面積」を計測した。
ラット１頭あたりの胃粘膜出血斑数は、ラクトフェリン投与により８７％に減少した。また、ラットあたりの出血面積も、ラクトフェリン群で７９％に減少していた。さらに、ラットあたりの潰瘍数、大潰瘍数はラクトフェリン投与群で約５０％に低下しており、潰瘍面積は約３０％まで減少した。したがって、ラクトフェリンはストレスによる胃潰瘍形成を阻止したといえる。この実験結果は、ラクトフェリンがストレスを抑制する作用があることを示している。
＜実施例５（関節炎予防）＞
リウマチ性関節炎の動物モデルとしてラットアジュバント関節炎モデルを用い、ラクトフェリン（ＬＦ）の経口投与による関節炎の予防・治療効果、およびその作用メカニズムを検討した。
評価項目は、足の腫脹による容積変化、Ｆｌｅｘｉｏｎ  ｔｅｓｔ（関節曲げ伸ばし試験における関節の痛み）、およびリポ多糖（ＬＰＳ）刺激によるサイトカイン産生の測定を行った。
ラット右後肢足底皮下にアジュバントを注射し、毎日１回、足の容積を測定して両後肢の腫脹率を求めた。被験物質は、０．５％ＣＭＣ溶液に懸濁し、１日１回もしくは１日２回、アジュバント処置３時間前を初回投与時（ｄａｙ０）とし、その後から１８日間連日投与した。また、Ｆｌｅｘｉｏｎ  ｔｅｓｔは、アジュバント処置後４日後および１０日後に腫脹したラットの足根関節を１０回伸展し、関節の曲げ伸ばしたために痛覚を刺激されて悲鳴を上げた回数を測定することによりった。
図９には、０．５％ＣＭＣ水溶液０．２ｍｌを経口投与した正常ラット（上段）、０．５％ＣＭＣ水溶液０．２ｍｌを経口投与したアジュバント処置ラット（中段）、およびラクトフェリン、１００ｍｇ／ｋｇを経口投与したアジュバント処置ラット（下段）、格段とも、−１はアジュバント処置足、−２は反対足の写真を示した。また、図１０には、対照群（ｃｏｎｔｒｏｌ）、ＬＦ１００ｍｇ／ｋｇを一日１回経口投与した群（１００ｍｇ／ｋｇ  ｓｉｄ）または２回経口投与した群（１００ｍｇ／ｋｇ  ｂｉｄ）、デキサメサゾン１ｍｇ／ｋｇを一日１回腹腔内投与した群（Ｄｅｘ  １ｍｇ／ｋｇ  ｓｉｄ）の、アジュバンド処置足およびアジュバンド未処置足それぞれの膨張率（％）を示した。図１１には、Ｆｌｅｘｉｏｎ  ｔｅｓｔの結果を示した。
図１０に示したように、ラクトフェリン投与群はコントロール群に比較して、アジュバント処置後の急性炎症期から慢性炎症期のすべての期間、足の腫脹において有意な低値を示した。また、図１１に示したように、ラクトフェリンの経口投与群は、１日１回投与群および１日２回投与群とも悲鳴を上げることなく、疼痛反応を示さなかった。陽性対照としたデキサメサゾンを投与した群は、４日目は悲鳴を上げた個体があった。
陽性対照としてのデキサメサゾン投与群は、ラクトフェリン投与群よりも足の腫脹は低値を示したが、Ｆｌｅｘｉｏｎ  ｔｅｓｔでは、ラクトフェリン投与群に比べその値は高めに推移した。また、デキサメサゾン投与群では、重度な体重増加の抑制が観察され、毛のツヤ等動物の状態が悪かったが、ラクトフェリン投与群は、コントロール群と同様の体重増加を示し、動物の一般状態も良好であった。
＜実施例６（関節炎治療）＞
実施例５に引き続き、慢性炎症期にあるアジュバント処置後１９目目よりラクトフェリン（１００ｍｇ／ｋｇ）の経口投与を７日間行った。結果を図１２Ａ〜Ｃに示した。
投与７目目において、ラクトフェリン投与群はコントロール群に比べて足の腫脹が有意に低値を示していた。また、Ｆｌｅｘｉｏｎ  ｔｅｓｔにおいては、ラクトフェリン投与群はコントロール群に比べて１日目より試験終了日まで有意な低値を示した。デキサメサゾン（１ｍｇ／ｋｇ）投与群においては、足の腫脹は投与１日後から明らかな収縮したが、Ｆｌｅｘｉｏｎ  ｔｅｓｔではラクトフェリン投与群に比べその値は高めに推移した。すなわち、ラクトフェリンの痛覚過敏反応を軽減する効果は、図１２Ｃに示すように、デキサメサゾンとほぼ同等であるか、優っているといえる。
＜実施例７（単回経口投与による疼痛改善＞
次に、アジュバント関節炎モデルにおけるラクトフェリンの疼痛改善効果が単回経口投与によって得られるかを検討した。
アジュバント処置後、２５日目に動物を６群に分け、ＢＳＡ（ウシ血清アルブミン）又はＬＦ（ラクトフェリン）を１回投与し、３時間後に実施例５と同様にＦｌｅｘｉｏｎ  ｔｅｓｔにより疼痛指数を測定した。なお、Ｆｌｅｘｉｏｎ  ｔｅｓｔの３０分前に生理食塩水、モルヒネ、ナロキソンを皮下投与した。
表１に実験のデザインを、図１３に結果を示した。
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図１３に示すように、ラクトフェリン１０〜１００ｍｇ／ｋｇの単回投与によって関節の痛覚過敏反応は用量依存的に抑制された。また、このラクトフェリンの鎮痛作用は、ナロキソンによって完全に阻害された。
＜実施例８（ラクトフェリンの作用機序）＞
アジュバント関節炎モデルは、慢性炎症により免疫系の反応性が上昇しているため、ＬＰＳ刺激によるサイトカインの産生が正常動物に比べて大幅に増加することが知られている。本明細書で明らかになったラクトフェリンの関節炎に対する作用のメカニズムを調べるために、ＬＰＳ刺激によるサイトカイン産生に対するラクトフェリンの作用を、１９日間連続投与群および単回投与群について検討した。
アジュバント関節炎ラットにＬＰＳ  １ｍｇ／ｋｇを腹腔内投与し、サイトカイン産生を刺激した。採血は、ＬＰＳ投与３時間後に行い、サイトカインはＥＬＩＳＡ法で測定した。ラクトフェリン単回投与群（Ｂ群及びＣ群）は、実験日まで０．５％ＣＭＣを毎日１回経口投与し、実験条件を１９日間投与群と合わせた。ラクトフェリン１９日間投与群（Ｅ群）は、アジュバント処置日から毎日１回、ラクトフェリンを経口投与した。表２に実験のデザインを、図１４に実験結果を示した。
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結果、ラクトフェリンの連続投与群、単回投与群のどちらにおいても、有意なＴＮＦ−α産生の抑制、およびＩＬ−１０産生の増加が観察された。デキサメサゾン投与群では、ＴＮＦ−α産生、ＩＬ−１０産生とも減少が観察された。
＜実施例９（変形性関節症）＞
自転車が転倒して右膝と右肘に外傷性の変形性関節症を発症した６６歳男性と肥満して膝関節に変形性関節症を発症した６１歳男性に、牛乳から抽出したラクトフェリンを腸溶性錠剤化して（製造例４）経口投与した。投与は毎食後の３回とし、１回の投与量を１５０ｍｇ（一日あたり４５０ｍｇ）とした。前者はジクロフェナック、後者はイブプロフェンの投与を受けたが、無効だった症例である。前者はラクトフェリン腸溶錠投与１週間後に、後者はラクトフェリン腸溶錠投与２ヶ月後に疼痛を感じなくなり、変形性関節症が治癒した。
＜実施例１０（慢性腰痛に対する効果）＞
腰痛に悩む５５歳の男性と４２歳の女性ボランティアが、牛乳ラクトフェリン腸溶錠（製造例４）を内服した。投与量は一日あたり４５０ｍｇで均等に３分割して食後に内服した。女性ボランティアは、投与５日目から、男性ボランティアは投与１２日目から腰痛が消失し治癒した。
＜実施例１１（四十肩に対する効果）＞
四十肩でいずれか一方の手が肩より上がらない５２歳、４５歳並びに４８歳の男性ボランテイアが牛乳ラクトフェリン腸溶錠（製造例４）を内服した。いずれも、ジクロフェナックが無効だった症例である。投与量は一日あたり４５０ｍｇで均等に３分割して食後に内服した。一人のボランティアは、投与７日目から、他のボランテイアはそれぞれ投与１２日目、２３日目から腰痛が消失し治癒した。
＜実施例１２（モルヒネとの鎮痛作用の比較）＞
ウシラクトフェリンおよび組換え体ヒトラクトフェリンによる鎮痛効果をモルヒネと比較した。
６週令の雄性ウイスター系ラットからなる各群（ｎ＝６〜８）に、フットパッドにホルマリンを注射する３０分前に、ウシラクトフェリン（ｂＬＦ）０．１〜１００μｇ／ｒａｔ、組換え体ヒトラクトフェリン（ｒｈＬＦ）１００μｇ／ｒａｔまたはモルヒネ（Ｍｏｒ）１０μｇ／ｒａｔを脊椎投与（ｉｎｔｒａｔｈｅｃａｌ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ）した。結果を図１５に、第一相の足上げ回数（左側グラフ）と第二相の足上げ回数（右側グラフ）に分けて示した。
図１５から明らかなように、ラクトフェリンの脊椎投与はモルヒネと同様に疼痛の第一相および第二相とも抑制することがわかった。
＜実施例１３（モルヒネの鎮痛作用の増強）＞
実施例１３と同様の方法で、モルヒネ１〜１０，０００ｎｇ／ｒａｔをウシラクトフェリン１００ｎｇ／ｒａｔと同時に（■）、あるいは単独で（●）投与し、ラクトフェリンによるモルヒネの鎮痛作用の増強効果を検討した。結果を図１６に、第一相の足上げ回数（左側グラフ）と第二相の足上げ回数（右側グラフ）に分けて示した。
図１６から明らかなように、ラクトフェリンの投与は、モルヒネの鎮痛作用を第一相および第二相において数１０〜１００倍以上に増強しうることがわかった。
＜実施例１４＞
ラクトフェリン腸溶錠を経口投与した場合の血中のラクトフェリン濃度を抗ウシラクトフェリン抗体を用いるＥＬＩＳＡ法により測定した。
［ＥＬＩＳＡ法によるラクトフェリン測定］
１．９６穴平底マイクロプレート（ＮＵＮＣ社製）に０．０５Ｍ炭酸緩衝液（ｐＨ９．６）で５００倍（２μｇ／ｍｌ）に希釈した抗ウシラクトフェリン抗体（Ｇｏａｔ，ａｎｔｉ−ｂｏｖｉｎｅ  ＬＦ  ａｆｆｉｎｉｔｙ  ｐｕｒｉｆｉｅｄ，Ｂｅｔｈｙｌ  Ｌａｂ．社製）を１００μｌ／ｗｅｌｌ入れ、４℃で一晩吸着させた。
２．プレートを０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０−リン酸緩衝液（ＰＢＳ）にて３回洗浄した。ブロッキング剤として、１．３％ゼラチン含有ＰＢＳを３００μｌ入れ、室温で３０分間インキュベートした。
３．プレートを０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０−ＰＢＳにて３回洗浄し、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０、０．５Ｍ  ＮａＣｌおよび１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含むＰＢＳ（以下、ＮＢ−ＰＢＳ）にて希釈したスタンダードあるいはサンプルを１００μｌ／ｗｅｌｌ入れ、４℃で８時間反応させた。
４．プレートを０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０−ＰＢＳにて３回洗浄し、ＮＢ−ＰＢＳにて１，０００倍に希釈した抗ウシラクトフェリン抗体（Ｒａｂｂｉｔ，ａｎｔｉ−ｂｏｖｉｎｅ  ＬＦ，ＩｇＧ  ｇｒａｄｅ，ヤガイ社製）を１００μｌ／ｗｅｌｌ入れ、４℃で８時間反応させた。
５．プレートを０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０−ＰＢＳにて３回洗浄し、ＮＢ−ＰＢＳにて５，０００倍に希釈したペルオキシダーゼ標識抗ウサギＩｇＧ抗体（Ｇｏａｔ，ａｎｔｉ−ｒａｂｂｉｔ  ＩｇＧ，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｑｕａｉｌ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ社製）を１００μｌ／ｗｅｌｌ入れ、４℃で８時間反応させた。
６．プレートを０，０５％Ｔｗｅｅｎ２０−ＰＢＳにて３回洗浄した。さらに、基質溶液としてリン酸塩緩衝液に溶解した２，２−ａｚｉｎｏ−ｂｉｓ（３−ｅｔｈｙｌ−ｂｅｎｚｏｔｈｉａｚｏｌｉｎｅ−６−ｓｕｌｆｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）Ｄｉａｍｍｏｎｉｕｍ  ｓａｌｔ（１．１８ｍＭ，三光純薬社製）を１００μｌ／ｗｅｌｌ入れ、３７℃で１時間反応させた。
７．マイクロプレートリーダー（Ｓｕｎｒｉｓｅ  Ｓｅｒｉｅｓ，Ｔｙｐｅ  Ｃｌａｓｓｉｃ，チカン社製）にて、波長４０５ｎｍの吸光度を測定し、スタンダードで作成した検量線によりラクトフェリン濃度を算出した。
体重６０ｋｇの男性にラクトフェリン腸溶錠（製造例５）を１８錠（９００ｍｇ／６０ｋｇ＝１５ｍｇ／ｋｇ）投与したところ、４ｈｒ後および８ｈｒ後に採取した血液中には、ラクトフェリンが確認された（図１７Ａ）。
ラクトフェリン腸溶錠の投与および血液採取は、次のスケジュールで行った。すなわち、７：００に朝食を採った後、９：３０少し前にラクトフェリン投与前の血液採取し（Ｐｒｅサンプル）、９：３０にラクトフェリン腸溶錠（製造例４）を投与した後、１３：３０および１７：３０に血液採取した（それぞれ、４ｈｒおよび８ｈｒサンプル）（図１７Ｂ）。
【図面の簡単な説明】
図１は、ラクトフェリン投与による足上げ行動の減少を表すグラフである（実施例１）。一群５頭の平均値および＋または−標準誤差を示した。●は対照群、○はラクトフェリン投与群を表す。
図２はホルマリン注射後の５０分間における第二相の足上げ回数を表すグラフである（実施例１）。＊＊Ｐ＜０．０１（Ｓｔｕｄｅｎｔ’ｓ  ｔ−ｔｅｓｔ）、バーはｍｅａｎ＋ＳＥ。
図３は、ラクトフェリン経口投与による足上げ行動の減少を表すグラフである（実施例２）。一群７頭の平均値および＋または−標準誤差を示した。●は対照群、○はラクトフェリン投与群。
図４は、ホルマリン注射後の５０分間における第二相の足上げ回数を表すグラフである（実施例２）。＊＊Ｐ＜０．０１（Ｓｔｕｄｅｎｔ’ｓ  ｔ−ｔｅｓｔ）、バーはＭｅａｎ＋ＳＥ。
図５は、ホルマリン注射後の５０分間における足上げ回数を表すグラフである（実施例３）。左側のグラフは第１相、右側のグラフは第二相の結果を表す。
図６はホルマリン注射後の５０分間における足上げ回数を表すグラフである（実施例３）。左側のグラフは第１相、右側のグラフは第二相の結果を表す。
図７は、ジクロフェナックの疼痛抑制効果を表すグラフである（実施例３）。
図８は、ラクトフェリンの疼痛抑制効果を表すグラフである（実施例３）。
図９は、ラットの後肢の写真である（実施例５）。上段；正常ラット、中段；アジュバント処置ラット、下段；ラクトフェリンを経口投与したアジュバント処置ラット。各段とも、−１は処置足、−２は反対足。
図１０は、アジュバンド処置足およびアジュバンド未処置足それぞれの膨張率（％）を示したグラフである（実施例５）。
図１１は、Ｆｌｅｘｉｏｎ  ｔｅｓｔの結果を示したグラフである（実施例５）。
図１２Ａ〜Ｃは、ラクトフェリンのアジュバンド関節炎ラットにおける治療効果を示したグラフである（実施例６）。順に、アジュバンド処置足の容積率、アジュバンド非処置足の容積率、Ｆｌｅｘｉｏｎ  ｔｅｓｔの結果を示す。それぞれ、●は対照群、□はラクトフェリン群、○はデキサメタゾン。
図１３は、ラクトフェリンを単回投与した場合の、アジュバンド処置足およびアジュバンド非処置足それぞれにおける痛覚過敏反応抑制効果を示したグラフである（実施例７）。
図１４は、ラクトフェリンのサイトカイン産生抑制効果を示すグラフである（実施例８）。
図１５は、ラクトフェリン脊髄投与の疼痛抑制効果をモルヒネのそれと比較して示すグラフである。＄＄＄Ｐ＜０．００５，＄＄＄＄Ｐ＜０．００１（ｖｓ．ｃｏｎｔｒｏｌ，Ｓｔｕｄｅｎｔ’ｓ  ｔ−ｔｅｓｔ）．＊＊Ｐ＜０．０１（ｖｓ．ｃｏｎｔｒｏｌ，Ｄｕｎｎｅｔｔ’ｓ  ｔｅｓｔ）
図１６は、ラクトフェリンによるモルヒネの鎮痛作用の増強効果を示すグラフである。ラクトフェリンの同時投与、■はあり、●はなし。＊Ｐ＜０．０５，＊＊Ｐ＜０．０１（ｖｓ．ｃｏｎｔｒｏｌ，Ｄｕｎｎｅｔｔ’ｓ  ｔｅｓｔ）
図１７Ａは、ラクトフェリン腸溶錠を経口投与した場合の血中のラクトフェリン濃度を示したグラフである（実施例１４）。図１７Ｂにはラクトフェリン腸溶錠の投与および血液採取スケジュールを表した。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ】
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【図１２Ｃ】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７Ａ】
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【図１７Ｂ】
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【手続補正書】
【提出日】平成15年9月5日(2003.9.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】請求項８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項８】
以下の工程を含む、請求項１〜７のいずれか１項に記載の組成物の製造方法：
有効成分および医薬として許容される添加剤を乾燥状態で混合し；
所望により混合物を乾燥状態で強圧成型し、次いで成型物を一定の大きさの微粒状物または顆粒とし；そして
混合物、微粒状物または顆粒を打錠するかもしくはカプセルに充填する
ことを含む工程により得られうる、粉末剤、散剤、顆粒剤、錠剤またはカプセル剤の形態である、前記製造方法。
【手続補正書】
【提出日】平成16年10月26日(2004.10.26)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ラクトフェリンを有効成分とするオピオイド作用増強剤。
【請求項２】
オピオイドがモルヒネである、請求項１記載のオピオイド作用増強剤。
【請求項３】
オピオイドが内因性オピオイドである、請求項１記載のオピオイド作用増強剤。
【請求項４】
オピオイド作用増強剤を製造するためのラクトフェリンの使用。
【請求項５】
オピオイドがモルヒネである、請求項４記載の使用。
【請求項６】
オピオイドが内因性オピオイドである、請求項４記載の使用。
【請求項７】
有効成分としてラクトフェリンを含有するオピオイド作用増強用医薬または食品。
【請求項８】
ラクトフェリンおよびオピオイドを有効成分として含む、痛み、不安およびストレスからなる群より選択される少なくとも一つの疾患または状態を処置するための医薬または食品。
【請求項９】
オピオイドがモルヒネである、請求項８記載の医薬または食品。
【請求項１０】
ラクトフェリンおよびオピオイドを有効成分として含む、痛み、不安およびストレスからなる群より選択される少なくとも一つの疾患または状態を処置するための組合せ製剤。
【請求項１１】
オピオイドがモルヒネである、請求項１０記載の組合せ製剤。
【請求項１２】
痛み、不安およびストレスからなる群より選択される少なくとも一つの疾患または状態を処置するための医薬または食品の製造におけるラクトフェリンおよびオピオイドの使用。
【請求項１３】
オピオイドがモルヒネである、請求項１２記載の使用。
【請求項１４】
ラクトフェリンおよびオピオイドを併用することを特徴とする、痛み、不安およびストレスからなる群より選択される少なくとも一つの疾患または状態を処置するためのラクトフェリンの医薬としての使用。
【請求項１５】
痛みが、慢性関節リウマチ、変形性関節症、四十肩及び五十肩、テニス肘および野球肩等のスポーツ外傷ならびに腰痛を含む関節炎または骨接合部位の疾患に伴う痛みである、請求項１４記載の使用。
【請求項１６】
医薬が、腸溶性製剤の形態である、請求項１４または１５のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１７】
有効成分を含む顆粒を打錠したものを、胃液に対しては抵抗性があり、小腸内で溶解する基剤を主成分とする皮膜でコーティングしてなる、請求項１４〜１６のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１８】
ラクトフェリンおよびオピオイドを有効成分とする、痛み、不安およびストレスからなる群より選択される少なくとも一つの疾患または状態を処置するための医薬組成物。
【請求項１９】
痛みが、慢性関節リウマチ、変形性関節症、四十肩及び五十肩、テニス肘および野球肩等のスポーツ外傷ならびに腰痛を含む関節炎または骨接合部位の疾患に伴う痛みである、請求項１８記載の医薬組成物。
【請求項２０】
請求項１８または１９に記載の組成物であって、有効成分および医薬として許容される添加剤を乾燥状態で混合し、所望により混合物を乾燥状態で強圧成型し、次いで成型物を一定の大きさの微粒状物または顆粒とし、そして所望により、混合物、微粒状物または顆粒を打錠するか、もしくはカプセルに充填することを含む工程により得られる、粉末剤、散剤、顆粒剤、錠剤またはカプセル剤の形態である、前記組成物。
【請求項２１】
腸溶性製剤の形態である、請求項１８〜２０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２２】
有効成分を含む顆粒を打錠したものを、胃液に対しては抵抗性があり、小腸内で溶解する基剤を主成分とする皮膜でコーティングしてなる、請求項１８〜２１のいずれか１項に記載の組成物。
【国際調査報告】
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