(57)【要約】天然物由来であって合成医薬のような副作用の心配が少ない新規のアレルギー症状緩和剤を提供するものである。ダイゼイン、ゲニステイン等のイソフラボン類やエクオール等のイソフラボン類代謝産物を有効成分とすることにより、ケミカルメディエーターの放出抑制効果を有するアレルギー症状緩和剤を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
イソフラボン類を有効成分とするアレルギー症状緩和剤。
【請求項２】
イソフラボン類がダイゼイン、ゲニステイン、ダイジン、ゲニスチン、並びにダイジン及びゲニスチンのマロニル体及びアセチル体からなる群より選択される少なくとも１種以上である請求の範囲１に記載のアレルギー症状緩和剤。
【請求項３】
イソフラボン類の代謝産物単独又は該代謝産物及びイソフラボン類を有効成分とするアレルギー症状緩和剤。
【請求項４】
イソフラボン類の代謝産物がエクオールである請求の範囲３に記載のアレルギー症状緩和剤。
【請求項５】
アレルギー症状緩和作用がケミカルメディエーターの放出抑制を起因とするものであって、ケミカルメディエーターがロイコトリエンである請求の範囲１〜４に何れか記載のアレルギー症状緩和剤。
【発明の詳細な説明】
技  術  分  野
本発明はアレルギー症状緩和剤に関する。
背  景  技  術
花粉症や食物アレルギーの罹患率が増加傾向にあり、その対応が急務となっている。花粉症や食物アレルギーはＩ型アレルギーに分類される。Ｉ型アレルギーは、アレルゲン特異的ＩｇＥ抗体二分子が肥満細胞表面上の高親和性ＩｇＥ受容体に結合し、新たに侵入したアレルゲンにより架橋され、ヒスタミンやロイコトリエンなどのケミカルメディエーターが放出されることにより発症する。ケミカルメディエーターとは、炎症反応に含まれる細胞間の情報伝達物質であり、もともと細胞内に保持されており刺激に応じて細胞外へ遊離してくるもの（ヒスタミン、ヘパリン等）と、刺激に応じて新しく産性されるもの（ロイコトリエン、プロスタグランジン等）が存在する。
このケミカルメディエーターのうち、ロイコトリエン（ＬＴ）はアラキドン酸のようなエイコサポリエン酸から動物組織で合成される一群の生理活性物質をいい、Ａ〜Ｆの６つの型がある。アラキドン酸の５位の炭素原子にリポキシゲナーゼの作用で酸素分子が添加し、５−ヒドロペルオキシドを生じ、続いて、５，６−エポキシドを含むＬＴＡ４となる。さらにエポキシドが開裂し、二重結合が順次移動して１２位の炭素原子に水からヒドロキシル基が入って、５，１２−ジヒドリキシル体となったものがＬＴＢ４である。一方、エポキシド開裂に伴って、６位の炭素原子にグルタチオンのシステイン部分がチオエーテル結合すると、ＬＴＣ４を生じ、これからグルタミン酸を失ってＬＴＤ４、さらにグリシンを遊離してＬＴＥ４、そこへ再びグルタミン酸が取込まれてＬＴＦ４となる。ＬＴＢ４は白血球を活性化し、ＬＴＣ４とＬＴＤ４は気管支に緩除で持続性の収縮を起こし、小腸の運動を促進させ、また血管透過性を亢進させる作用がある（「生化学辞典  第３版」，東京化学同人，１５２９−１５３０）。
近年、アレルギー発症の一連の過程のいずれかを阻害することによりアレルギー症状を緩和する薬剤が種々開発されており、コルチコステロイド、エピネフリン、ヒスタミン拮抗剤、ロイコトリエン合成阻害剤などがアレルギーの治療において利用されている。
一方食品中にも種々の生体機能調節因子が存在しており、これらの因子を含む食品の摂取は生体機能の維持、疾病予防、体質改善をもたらすのに役立つとともに薬剤のような副作用の心配も少ないため、アレルギー症状の緩和作用を有する食品中の有効成分を見出すことが課題となっている。
このような課題に鑑み、緑茶、紅茶、甜茶等の茶類やイチョウ葉、プロポリス等の種々の天然素材に含まれるエピガロカテキンガレート、エピカテキンガレート、エピガロカテキン、エピカテキン等のポリフェノール類や、ケンフェロール、ケルセチン、ミリセチン、ルテオリン等のフラボノイド類がケミカルメディエーター放出抑制活性を有することが見出されているが、近年のアレルギー症状を訴える患者数の増加傾向からも、さらに多くの有効成分の開発が求められている。
かかる問題に鑑み、本発明はアレルギー症状緩和剤を提供するものである。
発  明  の  開  示
本発明者は、上記課題を解決すべく鋭意研究を重ねた結果、大豆や葛根等に含まれるイソフラボン類がケミカルメディエーター放出抑制活性を有し、アレルギー症状の緩和に適用できる知見を得、本発明を完成した。
即ち本発明は、
（１）イソフラボン類を有効成分とするアレルギー症状緩和剤、
（２）イソフラボン類がダイゼイン、ゲニステイン、ダイジン、ゲニスチン、並びにダイジン及びゲニスチンのマロニル体及びアセチル体からなる群より選択される少なくとも１種以上である上記（１）に記載のアレルギー症状緩和剤、
（３）イソフラボン類の代謝産物単独又は該代謝産物及びイソフラボン類を有効成分とするアレルギー症状緩和剤。
（４）イソフラボン類の代謝産物がエクオールである上記（３）に記載のアレルギー症状緩和剤、
（５）アレルギー症状緩和作用がケミカルメディエーターの放出抑制を起因とするものであって、ケミカルメディエーターがロイコトリエンである上記（１）〜（４）に何れか記載のアレルギー症状緩和剤、
を提供するものである。
発明を実施するための最良の形態
以下、本発明を詳細に説明する。
本発明のアレルギー症状緩和剤はイソフラボン類やそれらの代謝産物を有効成分とすることが特徴である。本発明の有効成分であるイソフラボン類としては、イソフラボン配糖体（ダイジンもしくはゲニスチン又はそれらのアセチル体もしくはマロニル体等）やイソフラボンアグリコン（ダイゼイン、ゲニステイン等）が含まれる。生体内においては直接的に作用するイソフラボンアグリコンを使用することが好ましい。
またイソフラボンの代謝産物としては、エクオール、デヒドロエクオール、Ｏ−デスメチルアンゴレンシン、２−デヒドロ−Ｏ−デスメチルアンゴレンシン、６−ヒドロキシ−Ｏ−デスメチルアンゴレンシン、ジヒドロダイゼイン、ジヒドロゲニステイン、テトラヒドロダイゼイン等を使用することができる。より好ましくはダイゼインの代謝産物であるエクオールを使用することが適当である。
一方、イソフラボン配糖体も、生体内においてはイソフラボンアグリコンやエクオールまで代謝されるため、アレルギー症状緩和剤として使用することができる。
本発明の効果であるアレルギー症状の緩和作用としてはヒスタミン、ロイコトリエン、血小板活性化因子（ＰＡＦ）、プロスタグランジン、トロンボキサン等のケミカルメディエーターの放出抑制活性によるものであるが、特にロイコトリエン（ＬＴＡ４，ＬＴＢ４等）に対する放出抑制活性が強い。
本発明の有効成分は大豆類その他クローバー等のイソフラボン含有植物から公知の方法により抽出して高濃度の抽出液として得ることができる。その方法については特に限定されないが、例えば以下の態様にて調製することができる。
本発明の有効成分を調製するための原料である大豆類としては、例えば丸大豆、脱皮大豆、脱皮脱胚軸大豆、大豆胚軸、脱脂大豆、分離大豆たん白、濃縮大豆たん白、豆乳、オカラ、大豆ホエー等が挙げられる。効率良く有効成分を得るには、イソフラボン類の含有率が高く、ダイジン並びそのマロニル体及びアセチル体の比率が高い大豆胚軸を選択することがより好ましい。
上記大豆類をそのまま、または粉砕してから水、メタノール、エタノールもしくはプロパノール等の極性溶媒により抽出し、大豆抽出液を得る。この抽出液をそのまま有効成分としても良いし、微量の摂取でアレルギー症状緩和作用を得るために、抽出液をさらに精製することも可能である。精製方法としては、陰イオン交換樹脂や合成吸着樹脂等を用いたカラムクロマトグラフィー法による精製や、ブタノールなどの有機溶媒による液液分配法による精製などが用いられる。
また天然の大豆中に含まれるイソフラボン類はアグリコンよりも、配糖体の存在割合が高いため、アグリコンの存在割合を高めたい場合には、大豆抽出液にβ−グリコシダーゼまたはβ−グリコシダーゼを含有する各種酵素剤もしくは微生物菌体（納豆菌、乳酸菌、麹菌等）を作用させ、ダイジンおよびゲニスチンをダイゼインおよびゲニステインに分解させることによりアグリコンリッチな画分が得られる。この画分はさらにカラムクロマトグラフィー等でダイゼインおよびゲニステインの純品を得ることもできる。
これらの有効成分を含む大豆抽出液は、ダイゼイン、ゲニステイン含有画分としてそのまま適用しても良いし、濃縮液または乾燥粉末に加工しても良い。
またエクオールなどのイソフラボン類の代謝産物は、上記大豆抽出液やダイゼイン、ゲニステインを基質として、化学合成的・酵素的に水素化する還元反応により得ることができる（例えば国際公開ＷＯ００／４９００９号公報）し、イソフラボン類の資化性微生物を用いた発酵法によっても得ることができる（例えば国際公開ＷＯ９９／０７３９２号公報）。
以上に示した本発明の有効成分は、ヒスタミンやロイコトリエン等のアレルギー症状を発生する原因物質であるケミカルメディエーターの体内への放出を抑制する作用を有し、優れたアレルギー症状緩和効果を奏するものであるので、医薬または特定保健用食品等の健康食品用途として有用である。
本発明の有効成分を薬剤に適用する場合には、原液、濃縮液又は粉末化したものをそのままアレルギー症状緩和剤として使用することも可能であるし、薬理的に許容しうる担体を混合し、適宜、投与に適した単位服用形態の組成物を調製してもよい。例えば経口投与に好適な剤形として、錠剤、丸剤、カプセル剤、もしくは顆粒剤等の固形製剤を常法に従い製剤化すればよく、コーティングを施すことも可能である。さらに、乳濁剤、溶液剤、懸濁剤、シロップ剤といった液体製剤を常法に従って製造し、液体製剤として使用してもよい。
本発明の有効成分を健康食品などの可食性組成物に添加として用いる場合の形態としては、例えば、飲料（液体、粉末）、菓子、加工食品、調味料などに適した種々の形態とすることが可能であり、特に限定されるものではない。可食性組成物とするために通常使用される甘味料、調味料、腑形剤、乳化剤、着色料、香料、安定化剤等を必要に応じて配合し、製造すればよい。
さらに、本発明の薬剤や可食性組成物にはアレルギー症状の緩和に有効であるとされているエピガロカテキンガレート、エピカテキンガレート、エピガロカテキン、エピカテキン等のポリフェノール類や、ケンフェロール、ケルセチン、ミリセチン、ルテオリン等のフラボノイド類その他の有効成分を含有させ、相乗効果を得ることももちろん可能である。
本発明におけるアレルギー症状緩和剤の投与量は、摂取対象者の症状や年齢、体重等や投与方法により異なるが、通常、有効成分として１日あたり１０ｍｇ〜１０００ｍｇ摂取すればよい。摂取は１日１回、または必要に応じて複数回に分けて、所要量を摂取すればよい。
（実施例）
以下、この発明の実施例を示すが、本発明がこれらによってその技術範囲が限定される物ではない。
＜実施例１＞
・実験材料および試薬
イソフラボン類として、ゲニスチン、ダイジン、ゲニステインおよびダイゼインをフジッコ（株）より、エクオールをＡｐｉｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ社より購入した。カルシウムイオノフォアＡ２３１８７およびＬＴＢ４はＳｉｇｍａ社より、プロスタグランジンＢ２（ＰＧＢ２）はＣａｙｍａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙより購入した。タイロード緩衝液（ｐＨ７．４）は１３７ｍＭ  ＮａＣｌ、２．７ｍＭ  ＫＣｌ、１．８ｍＭ  ＣａＣｌ２、１．０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１２ｍＭ  ＮａＨＣＯ３、０．４ｍＭ  ＮａＨ２ＰＯ４となるように調製した。
・ラット腹腔内滲出細胞（ＰＥＣ）の調製
Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ系雄ラット（８−９週齢）の腹腔内に０．１％  Ｄ−グルコース、０．１％  魚ゼラチン（Ｓｉｇｍａ社製）および０．１％  ウシ血清アルブミンを含むタイロード緩衝液を注入した。腹部を２分間穏やかにマッサージした後、開腹してＰＥＣを含むタイロード緩衝液を回収した。このタイロード緩衝液を４℃、２００Ｇで５分間遠心分離した後に上清を除去し、細胞ペレットを得た。細胞ペレットをｍ−ＡＣＴ（１５０ｍＭ  ＮＨ４Ｃｌ、１０ｍＭ  ＫＨＣＯ３、１０ｍＭ  ＥＤＴＡ−２Ｎａ、ｐＨ７．４）に再懸濁して４℃で  ５分間保持し、赤血球を溶血させた。さらにこの細胞懸濁液を４℃、２００Ｇで５分間遠心分離して上清を除去し、細胞数が２×１０６ｃｅｌｌｓ／ｍｌとなるようにタイロード緩衝液に再懸濁して実験に用いた。
・ＬＴＢ４放出量の測定
２×１０６ｃｅｌｌｓのＰＥＣに１ｍＭ  ＣａＣｌ２、５μＭカルシウムイオノフォアＡ２３１８７、１〜１００μＭの大豆イソフラボン（ゲニスチンは１〜１０μＭ）を含むタイロード緩衝液５０μｌを加え、３７℃で２０分間インキュベートし、反応させた。内部標準となるＰＧＢ２（２５０ｎｇ）を含むアセトニトリル−メタノール混合液（６：５，ｖｏｌ／ｖｏｌ）５０μｌを加えて反応を停止させ、−３０℃で３０分間保持した。０℃、１０，０００Ｇで１０分間遠心分離した上清をフィルターでろ過し、上清中のＬＴＢ４量を高速液体クロマトグラフィーで分析した。試料溶液２０μｌをＯＤＳ−Ａカラム（１５０×６．０ｍｍ，５μｌ，ｐａｒｔｉｃｌｅ  ｓｉｚｅ  ５μｍ，ＹＭＣ）に供し、移動相はアセトニトリル：メタノール：５ｍＭ  ＣＨ３ＣＯＯＮＨ４（ｐＨ５．６）（３０：２５：４５，ｖｏｌ／ｖｏｌ／ｖｏｌ）を用い、流速は１．１ｍｌ／ｍｌｎ．とした。ＬＴＢ４および内部標準のＰＧＢ２は２８０ｎｍの吸光度（ＳＰＤ−１０ＡＶＰ，島津）で検出した。既知量のＬＴＢ４のピーク面積から検量線をあらかじめ作成し、ＬＴＢ４放出量を求めた。
・結果および考察
大豆イソフラボンを種々の濃度でＰＥＣに添加し、カルシウムイオノフォアＡ２３１８７で刺激した時に細胞外に放出されたＬＴＢ４濃度を表１に示した。
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大豆イソフラボンの配糖体であるゲニスチンとダイジンはいずれの濃度においてもＰＥＣからのＬＴＢ４放出に影響を及ぼさなかった。また、これらのアグリコンであるゲニステインを終濃度１００μＭでＰＥＣに添加した場合、ＬＴＢ４放出を３３％に抑制し、ダイゼインを添加した場合にはＬＴＢ４放出を７９％に抑制した。すなわち抑制効果はダイゼインよりもゲニステインの方が高かった。
＜実施例２＞
次に、大豆イソフラボンの代謝産物であるエクオールを終濃度１〜１００μＭでＰＥＣに添加し、カルシウムイオノフォアＡ２３１８７で刺激した場合、エクオールは添加濃度依存的にＬＴＢ４放出を抑制し、終濃度１００μＭではＬＴＢ４放出を完全に抑制した（表２）。
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以上の結果は、本発明の有効成分であるダイゼインおよびゲニステインおよびその代謝産物であるエクオールがＬＴＢ４放出抑制作用を通じてアレルギー症状の抑制作用をもたらす可能性を示唆するものである。特にダイゼインの代謝産物であるエクオールの抑制効果はダイジン、ダイゼイン、ゲニスチン、ゲニステインと比べて極めて高かった。ＬＴＢ４は、細胞膜リン脂質のアラキドン酸から５−リポキシゲナーゼ（５−ＬＯＸ）の作用により生成されるものであるが、５−ＬＯＸによる反応は、その過程でラジカルを発生し、ヒドロペルオキシドを生成する。詳細のメカニズムについては不明であるが、イソフラボン類にはフリーラジカル捕捉作用を含む抗酸化作用が以前より報告されており、抗酸化活性を通じて本発明の有効成分は特にＬＴＢ４放出抑制作用を発現している可能性が考えられる。また、５−ＬＯＸは非ヘム鉄を含む酵素であることから、イソフラボン類の金属キレート作用による抑制作用である可能性も考えられる。表１の結果より、本実施例の細胞に直接作用させる試験であったため、配糖体であるダイジンおよびゲニスチンに関して明確なＬＴＢ４放出抑制作用は見られなかったが、これらの配糖体は生体内で大部分が代謝によりアグリコン、そして代謝産物にまで分解されるため、これらもアグリコンと同等の効果を有すると考えられる。
産業上の利用可能性
本願発明により天然の大豆等から抽出または精製された副作用の少ないイソフラボン類を有効成分とする新規のアレルギー症状の緩和剤が提供できる。また大豆成分であるイソフラボンの新規の有効利用方法も提供することができ、アレルギー関連産業や大豆関連産業にも貢献しうるものである。
【国際調査報告】
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