(57)【要約】魚介類の種苗生産用餌料として用いられる動物プランクトンを培養、増殖するための培養餌料であって、水溶性コバルト化合物が添加されていることを特徴とする動物プランクトンの培養餌料およびそれを用いる培養方法が開示されている。ビタミンＢ１２のような高価な栄養成分を用いずに、Ｓ型ワムシ等の動物プランクトンを効率的に、増殖することができる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
魚介類の種苗生産用生物餌料として用いられる動物プランクトンを培養、増殖するための培養餌料であって、水溶性コバルト化合物が添加されていることを特徴とする、動物プランクトンの培養餌料。
【請求項２】
動物プランクトンがＳ型ワムシ（Ｂｒａｃｈｉｏｎｕｓ  ｒｏｔｕｎｄｉｆｏｒｍｉｓ）であることを特徴とする、請求項１の培養餌料。
【請求項３】
コバルトとして約３μ〜３ｍｍｏｌ／ｌの濃度で水溶性コバルト化合物が添加されていることを特徴とする、請求項２の培養餌料。
【請求項４】
水溶性コバルト化合物が、硫酸コバルト、塩化コバルト、酢酸コバルト、炭酸コバルトまたは硝酸コバルトから選ばれることを特徴とする、請求項１〜３のいずれかの培養餌料。
【請求項５】
魚介類の種苗生産用生物餌料として用いられる動物プランクトンを培養、増殖するに当って、培養水に水溶性コバルト化合物を添加することを特徴とする、動物プランクトンの培養方法。
【請求項６】
動物プランクトンがＳ型ワムシ（Ｂｒａｃｈｉｏｎｕｓ  ｒｏｔｕｎｄｉｆｏｒｍｉｓ）であることを特徴とする、請求項５の培養方法。
【請求項７】
水溶性コバルト化合物が、硫酸コバルト、塩化コバルト、酢酸コバルト、炭酸コバルトまたは硝酸コバルトから選ばれることを特徴とする、請求項５または６の培養方法。
【発明の詳細な説明】
技術分野
本発明は、魚介類の種苗生産において初期餌料として用いられるワムシ等の動物プランクトンの培養餌料の改良に関する。
背景技術
近年、動物性タンパク質源、特に貴重な動物性タンパク質源である魚介類の捕獲量の減少傾向を補うために種苗生産の重要性がますます大きくなっている。種苗生産とは、栽培漁業や養殖などの所謂「作り育てる漁業」のスタートとなる魚介類仔稚を人工的に作り出す過程であり、例えば代表的海産魚であるマダイの場合、放流用として３３００万尾、養殖用として５３００万尾程の種苗が１９９７年に日本国内で生産されている。
魚介類の種苗生産用の餌料として汎用されているのは、ワムシ、ミジンコ、海産コペポーダなど動物プランクトンである。特にワムシは大量培養技術の進歩や栄養価改善の努力により、現在では、ワムシ→アルテミア幼生→人工飼料（魚介肉ミンチ）という餌料系列における初期餌料として多種類の海産魚の飼育に不可欠なものとなっている。
ワムシには海産および淡水産のワムシが存在する。種苗生産用初期餌料として用いられているのは主に海産ワムシであり、これにはＳ型ワムシ（種名としてはＢｒａｃｈｉｏｎｕｓ  ｒｏｔｕｎｄｉｆｏｒｍｉｓ、まだ標準和名は与えられていない）、および、これよ一回り大型のＬ型ワムシ（Ｂｒａｃｈｉｏｎｕｓ  ｐｌｉｃａｔｉｌｉｓ、従来のシオミズツボワムシのこと）から成る大きさの異なる二型が存在していることがよく知られており、最近は、３０℃前後の高温下での増殖能の大きいＳ型ワムシが特に注目され、その培養法等の改良が盛んに試みられている。
このような魚介類種苗生産用の生物餌料として用いられるワムシ（特にＳ型ワムシ）に代表される動物プランクトンを培養し増殖を高める栄養素として確認され広く認知されているものとしてビタミンＢ１２（シアノコバラミン）がある。ビタミンＢ１２はＣ６３Ｈ８８ＣｏＮ１４Ｐで表される化合物で、コリン環がコバルトイオンに配位結合した構造を持ち自然界では産生菌の働きにより環境中に富化されることが多い。事実、かつて露天水槽で微細藻類のナンノクロロプシスを培養し、これをワムシ等の動物プランクトンの主餌料として使用していた頃はこのナンノクロロプシスの培養水自身が細菌によって産生蓄積されたビタミンＢ１２の供給源となっていたため、特にビタミンＢ１２の添加を行なうことなく動物プランクトンの増殖が得られていた。しかし、最近は多くの魚介類種苗生産機関において初期餌料に使われるワムシ等の動物プランクトンの培養餌料として、上記のような自家生産の微細藻を使用する代わりに、タンク培養で工場生産される各種の濃縮餌料（濃縮淡水クロレラや濃縮生パン酵母液）を用いるようになった。これらは、ビタミンＢ１２が殆どまたは全く含有していない製品（培養餌料）として生産されるので，ワムシ餌料として出荷する前にビタミンＢ１２を添加している。
現行のように集約的大量培養により動物プランクトンを増殖させるには動物プランクトンのための大量の餌料が必要であり、生産コストに占める餌料費の割合が高くなっている。上述したようなワムシ等の動物プランクトン用の工場生産濃縮餌料に対しては過去の研究成果を元に一般に０．３〜０．５ｍｇ／ｌ程度の濃度でのビタミンＢ１２の添加が行なわれているが、このビタミンＢ１２自体が高価であることが種苗生産用初期餌料として用いられるワムシに代表される動物プランクトンの生産コストの上昇の要因の一つとなっている。
本発明の目的は、ビタミンＢ１２のような高価な栄養成分を用いずに又はその使用を可及的に少なくして、魚介類の種苗生産用餌料であるワムシ等の動物プランクトンを効率的に培養、増殖することのできる新しい技術を提供することにある。
発明の開示
本発明者は、検討を重ねた結果、ビタミンＢ１２の代わりにその構成ミネラル（構成金属）であるコバルトを培養系内に富化すると、ビタミンＢ１２を添加しないでもビタミンＢ１２を添加する場合と同等の高い動物プランクトンの増殖が確保できることを見出し、本発明を導き出した。
かくして、本発明は、魚介類の種苗生産用生物餌料として用いられる動物プランクトンを培養、増殖させるための培養餌料であって、水溶性コバルト化合物が添加されている動物プランクトン用培養餌料を提供する。
さらに、魚介類の種苗生産用生物餌料として用いられる動物プランクトンを培養、増殖するに当って、本発明は、別の視点として、培養水に直接水溶性コバルト化合物を添加する動物プランクトンの培養方法も提供するものである。
発明を実施するための最良の形態
本発明の実施において用いられる「水溶性コバルト化合物」とは、魚介類の種苗生産用餌料となる動物プランクトンを培養する培養水中において溶解してコバルトイオンを生成することのできる化合物を指称し、ビタミンＢ１２（シアノコバラミン）を添加しなくてもビタミンＢ１２を添加した場合と同様の動物プランクトン増殖効果を奏するものである。したがって、本発明に関連して用いる「水溶性コバルト化合物」という語は、ビタミンＢ１２そのものは除外する意味であることは勿論である。
限定するものではないが、本発明において用いられる水溶性コバルト化合物の好適な例として、硫酸コバルト、塩化コバルト、酢酸コバルト、炭酸コバルトまたは硝酸コバルトから選ばれる、生物に対する毒性が無いかまたは低いコバルト塩が挙げられる。この他に、各種のコバルト錯体も、水溶性で動物プランクトンの増殖に悪影響を与えない限り適用可能である。
本発明の培養方法は、魚介類の種苗生産用餌料として知られたワムシ、ミジンコ、海産コペポーダ等の各種の動物プランクトンを増殖するのに適用される。培養水は一般に海水であるが、淡水魚の稚魚の種苗生産に用いられる淡水産ミジンコを培養するような場合には淡水が使用されることは勿論である。本発明が適用される特に好ましい動物プランクトンは、上述したように現在最も多用されているＳ型ワムシ（Ｂｒａｃｈｉｏｎｕｓ  ｒｏｔｕｎｄｉｆｏｒｍｉｓ）あるいはシオミズツボワムシ（Ｌ型ワムシ：Ｂｒａｃｈｉｏｎｕｓ  ｐｌｉｃａｔｉｌｉｓ）であるが、これに限られるものではない。
本発明に従えば、魚介類の種苗生産用餌料として用いられるＳ型ワムシに代表される動物プランクトンを培養するに当って、低廉な水溶性コバルト化合物をきわめて低濃度で餌料に添加するだけでビタミンＢ１２を添加した場合と同様に動物プランクトンの高い増殖が確保される。水溶性化合物の適用添加量は、培養対象の動物プランクトン、培養餌料、培養水の種類など培養条件に依るが、簡単な予備実験により確認することができる。
例えば、Ｓ型ワムシ（Ｂｒａｃｈｉｏｎｕｓ  ｒｏｔｕｎｄｉｆｏｒｍｉｓ）を濃縮淡水クロレラのような培養餌料を用いてビタミンＢ１２の添加を全く行うことなく海水で培養する場合は、下限はコバルトとして約３μ  ｍｏｌ／ｌ程度の低濃度での餌料（クロレラ懸濁液）中への添加で充分な増殖効果が得られる。一方、上限はコバルトとして約３ｍｍｏｌ／ｌ程度の濃度での餌料への添加であり、これ以下の濃度では増殖に悪影響を与えず、動物プランクトンの死亡をもたらすこともない（後述の実施例３参照）。
かくして、本発明に従えば、濃縮淡水クロレラのような各種の培養餌料を用いる動物プランクトンの培養においてビタミンＢ１２の添加を可及的に少なくし又はビタミンＢ１２の添加を全く行うことなく動物プランクトンの増殖を図ることができる。
すなわち、本発明は、ワムシ等の動物プランクトン用として従来から知られた各種の濃縮餌料（濃縮淡水クロレラ、濃縮生パン酵母液）あるいは人工飼料に，既述したような水溶性コバルト化合物を添加された新しいタイプの動物プランクトン用餌料を提供するものである。
ビタミンＢ１２に代わる動物プランクトン増殖機能を有する水溶性コバルト化合物は、上述したように培養飼餌料に添加するだけでなく、動物プランクトン培養液に直接添加することもできる。また、ナンノクロロプシスのような微細藻類を動物プランクトンの主餌料とするような場合においても蓄積ビタミンＢ１２の不足を補うために、本発明に従い水溶性コバルト化合物を添加し当該動物プランクトンの増殖を図ることもできる。このようにして、本発明に従えば、既存の各種の培養装置に水溶性コバルト化合物の供給手段を付設することにより、培養水の収穫または水替えに伴う蓄積ビタミンＢ１２の濃度低下などを防止しながら、所望の動物プランクトンを増殖させることができる。
実施例
以下に、本発明の特徴を明らかにするため実施例を示すが、本発明はこの実施例によって制限されるものではない。
実施例１：コバルト化合物の添加効果
この実施例は、動物プランクトンの一つである海産小型ワムシ（Ｓ型：Ｂｒａｃｈｉｏｎｕｓ  ｒｏｔｕｎｄｉｆｏｒｍｉｓ、以下、ワムシと称す）の培養・増殖を例にコバルト化合物の添加効果を示すものである。
３０℃に設定したウォーターバス内に配置した７５０ｍｌ容のガラス容器に、約２５０個体／ｍｌ程度の初期密度でワムシを海水に接種し、通常の空気通気条件下で３日間のバッチ培養を行ないコバルト化合物の餌料への添加効果を検討した。本実施例で用いたコバルト化合物は、飼料添加物として認められている硫酸コバルト（ＩＩ）７水和物（ＣｏＳＯ４・７Ｈ２Ｏ、以下、コバルト塩と称す）であり、０、１．０ｍｇ／ｍｌ（コバルトとして約３ｍｍｏｌ／ｌ）、０．１ｍｇ／ｍｌ（コバルトとして約０．３ｍｍｏｌ／ｌ）、０．０１ｍｇ／ｍｌ（コバルトとして約０．０３ｍｍｏｌ／ｌ）および０．００１ｍｇ／ｍｌ（コバルトとして約３μｍｏｌ／ｌ）の各濃度となるようにビタミンフリー淡水クロレラ濃縮懸濁液（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａｖｕｌｇａｒｉｓ  Ｋ−２２株）に溶かして調整し、ワムシ培養水に添加した。２日目以降はコバルト塩無添加のクロレラをワムシの密度変化に併せ調整しながら毎日至適とされる量を給餌した。
５回の培養試験の結果を第１図に示す。図中の実験Ｉは、１処理区につき１水槽、ＩＩ〜Ｖは各処理区２水槽を設置し２水槽での結果の平均値で示した。また培養開始三日後の各区の増殖率（（初期接種密度／最終密度）×１００）の比較とコバルト塩無添加区との統計的比較の結果を下記の表１に示す。
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第１図および表１から理解されるように、５回の培養試験のいずれでもコバルト塩添加区が無添加区に比べて良好な増殖を示した。３日間の培養でコバルト塩添加区は無添加区に比べていずれも２倍程度の高い増殖を示し、またその差は統計的にも有意であった。
また、これらコバルト塩添加区と無添加区の、培養最終日における溶存酸素量、ｐＨおよび総アンモニア濃度を下記の表２にまとめたが、３日間のバッチ培養終了後の培養水環境にこれらの間では差は見られず、いずれの値もワムシの生存、増殖に悪影響が出る値ではなかった。
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実施例２：ビタミンＢ１２との効果比較
本実施例は、ワムシ等の動物プランクトンの増殖に従来より用いられていたＢ１２と本発明に従うコバルト化合物の添加効果の比較を行なうものである。ワムシの要求量に近いビタミンＢ１２の０．００１ｍｇ／ｍｌ添加区と実施例１の実験で高い増殖の得られたコバルト塩０．１および０．０１ｍｇ／ｍｌ添加区とのワムシの増殖の比較を３日間のバッチ培養で実施した。その結果を第２図に、また増殖率の比較を下記の表３に示す。本試験は実施例１と同一条件であり、培養水槽数のみ各区３槽とした。
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第２図および表３に示すように、培養開始１日目はこれら三つの区の増殖に差は見られなかったが、培養開始２日目以降はコバルト塩添加区がより高い増殖を示し、培養最終日の増殖率はビタミン添加区が３３９％であるのに対してコバルト塩投与区は４１１〜５３９％でありコバルト塩添加区の方が高いようであるが、これら３区の間に統計的有意差が認められるまでには到っていない。
実施例３：コバルト化合物の毒性試験
この実施例は、今回使用した硫酸コバルト・７水和物のワムシに対する毒性を検討したものである。実施例１の培養試験と同一条件下で表４に示す各濃度のコバルト塩水溶液をクロレラ給餌量と等量培養水に添加し、３時間後、および２４時間後のワムシの生存率を求めた。その結果は、下記の表４にまとめている。
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表４に示すように、１０，０００ｍｇ／ｍｌ（コバルトとして約３０ｍｏｌ／ｌ）の高濃度コバルト塩添加の場合は投与３時間後には既にワムシは全個体死亡しており、１，０００ｍｇ／ｍｌ（コバルトとして約３ｍｏｌ／ｌ）では投与３時間後、１００ｍｇ／ｍｌ（コバルトとして約３００ｍｍｏｌ／ｌ）では投与２４時間後に生存率に悪影響が見られた。しかしながら１０ｍｇ／ｍｌ（コバルトとして約３０ｍｍｏｌ／ｌ）以下の低濃度区では２４時間後においても生存率の低下は認められず、実施例１の実験で用いた０．１ｍｇ／ｍｌ（コバルトとして約０．３ｍｍｏｌ／ｌ）あるいは０．０１ｍｇ／ｍｌ（コバルトとして約３０μｍｏｌ／ｌ）のコバルト塩水溶液の添加では増殖に悪影響はないものと考えられる。
産業上の利用の可能性
以上のように、本発明に従えば、水溶性コバルト化合物を培養餌料に添加したり、あるいは培養液に直接添加することにより、ビタミンＢ１２を添加している場合と同等以上に、魚介類の種苗生産用餌料として用いられる動物プランクトンを効率的に増殖させることができる。本発明で用いられる水溶性コバルト化合物はビタミンＢ１２に比べて低廉であり、かくして、本発明は種苗生産用餌料の生産コストの大幅な低減にも寄与する。
【図面の簡単な説明】
第１図は、本発明に従いコバルト化合物を餌料に添加することによるワムシの増殖効果を示す１例である。
第２図は、本発明に従いコバルト化合物を餌料に添加することによるワムシの増殖効果をビタミンＢ１２の添加と比較して示すものである。
【図１】
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【図２】
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【国際調査報告】
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