(57)【要約】本発明は、ペルオキシソーム増殖剤応答性受容体リガンド剤、及び、それを有効成分として含有する、インスリン抵抗性の改善、又は、インスリン抵抗性症候群の予防及び／若しくは改善用組成物を簡便且つ効率的に提供すること。プレニルフラボノイド、プレニルフラボノイドではないフラボノール誘導体、プレニルフラボノイドではないカルコン誘導体、医薬上若しくは飲食上許容されるそれらの塩、配糖体及び／又はエステル化体からなるペルオキシソーム増殖剤応答性受容体リガンド剤；上記リガンド剤を含む組成物；上記リガンド剤を含む植物由来の抽出物；上記抽出物の製造方法である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
プレニルフラボノイド、並びに、医薬上若しくは飲食上許容されるその塩、配糖体及びエステル化体からなる群より選択される少なくとも１種からなるペルオキシソーム増殖剤応答性受容体リガンド剤。
【請求項２】
プレニルフラボノイドが、３−アリルクマリン誘導体、イソフラブ−３−エン誘導体、イソフラバン誘導体、イソフラバノン誘導体、イソフラボン誘導体、フラボノール誘導体、フラバノン誘導体、カルコン誘導体及びジベンゾイルメタン誘導体からなる群より選ばれた少なくとも１種である請求の範囲第１項記載のペルオキシソーム増殖剤応答性受容体リガンド剤。
【請求項３】
プレニルフラボノイドが、一般式（１）で表される３−アリルクマリン誘導体からなる請求の範囲第１項又は２項記載のペルオキシソーム増殖剤応答性受容体リガンド剤。
2003037316.tif 000037
〔Ｒ１〜Ｒ７は、プレニル基又は隣接する２個のＲが−ＣＨ＝ＣＨＣ（ＣＨ３）２Ｏ−で６員環を形成した構造を少なくとも１つ以上含んでおり、その他はＨ、ＯＨ又はＯＣＨ３である。〕
【請求項４】
一般式（１）で表される３−アリルクマリン誘導体が、グリシクマリン又はグリシリンである請求の範囲第３項記載のペルオキシソーム増殖剤応答性受容体リガンド剤。
【請求項５】
プレニルフラボノイドが、一般式（２）で表されるイソフラブ−３−エン誘導体からなる請求の範囲第１項又は２項記載のペルオキシソーム増殖剤応答性受容体リガンド剤。
2003037316.tif 000038
〔Ｒ１〜Ｒ７は、プレニル基又は隣接する２個のＲが−ＣＨ＝ＣＨＣ（ＣＨ３）２Ｏ−で６員環を形成した構造を少なくとも１つ以上含んでおり、その他はＨ、ＯＨ又はＯＣＨ３である。〕
【請求項６】
一般式（２）で表されるイソフラブ−３−エン誘導体が、デヒドログリアスペリンＤ、デヒドログリアスペリンＣ又はグラブレンである請求の範囲第５項記載のペルオキシソーム増殖剤応答性受容体リガンド剤。
【請求項７】
プレニルフラボノイドが、一般式（３）で表されるイソフラバン誘導体からなる請求の範囲第１項又は２項記載のペルオキシソーム増殖剤応答性受容体リガンド剤。
2003037316.tif 000039
〔Ｒ１〜Ｒ７は、プレニル基又は隣接する２個のＲが−ＣＨ＝ＣＨＣ（ＣＨ３）２Ｏ−で６員環を形成した構造を少なくとも１つ以上含んでおり、その他はＨ、ＯＨ又はＯＣＨ３である。〕
【請求項８】
一般式（３）で表されるイソフラバン誘導体が、グリアスペリンＤ、グラブリジン、ヒスパグラブリジンＢ、４’−Ｏ−メチルグラブリジン又は３’−ヒドロキシ−４’−Ｏ−メチルグラブリジンである請求の範囲第７項記載のペルオキシソーム増殖剤応答性受容体リガンド剤。
【請求項９】
プレニルフラボノイドが、一般式（４）で表されるイソフラバノン誘導体からなる請求の範囲第１項又は２項記載のペルオキシソーム増殖剤応答性受容体リガンド剤。
2003037316.tif 000040
〔Ｒ１〜Ｒ８は、プレニル基又は隣接する２個のＲが−ＣＨ＝ＣＨＣ（ＣＨ３）２Ｏ−で６員環を形成した構造を少なくとも１つ以上含んでおり、その他はＨ、ＯＨ又はＯＣＨ３である。〕
【請求項１０】
一般式（４）で表されるイソフラバノン誘導体が、グリアスペリンＢ又はグリチルイソフラバノンである請求の範囲第９項記載のペルオキシソーム増殖剤応答性受容体リガンド剤。
【請求項１１】
プレニルフラボノイドが、一般式（５）で表されるイソフラボン誘導体からなる請求の範囲第１項又は２項記載のペルオキシソーム増殖剤応答性受容体リガンド剤。
2003037316.tif 000041
〔Ｒ１〜Ｒ９は、プレニル基又は隣接する２個のＲが−ＣＨ＝ＣＨＣ（ＣＨ３）２Ｏ−で６員環を形成した構造を少なくとも１つ以上含んでおり、その他はＨ、ＯＨ又はＯＣＨ３である。〕
【請求項１２】
一般式（５）で表されるイソフラボン誘導体が、グリウラリンＢ、ルピワイテオン、セミリコイソフラボンＢ又はグリチルイソフラボンである請求の範囲第１１項記載のペルオキシソーム増殖剤応答性受容体リガンド剤。
【請求項１３】
プレニルフラボノイドが、一般式（６）で表されるフラボノール誘導体からなる請求の範囲第１項又は２項記載のペルオキシソーム増殖剤応答性受容体リガンド剤。
2003037316.tif 000042
〔Ｒ１はＯＨ又はＯＣＨ３である。Ｒ２〜Ｒ９は、プレニル基又は隣接する２個のＲが−ＣＨ＝ＣＨＣ（ＣＨ３）２Ｏ−で６員環を形成した構造を少なくとも１つ以上含んでおり、その他はＨ、ＯＨ又はＯＣＨ３である。〕
【請求項１４】
一般式（６）で表されるフラボノール誘導体が、イソリコフラボノール、リコフラボノール又はトパゾリンである請求の範囲第１３項記載のペルオキシソーム増殖剤応答性受容体リガンド剤。
【請求項１５】
プレニルフラボノイドが、一般式（７）で表されるフラバノン誘導体からなる請求の範囲第１項又は２項記載のペルオキシソーム増殖剤応答性受容体リガンド剤。
2003037316.tif 000043
〔Ｒ１〜Ｒ８は、プレニル基又は隣接する２個のＲが−ＣＨ＝ＣＨＣ（ＣＨ３）２Ｏ−で６員環を形成した構造を少なくとも１つ以上含んでおり、その他はＨ、ＯＨ又はＯＣＨ３である。〕
【請求項１６】
一般式（７）で表されるフラバノン誘導体が、グラブロールである請求の範囲第１５項記載のペルオキシソーム増殖剤応答性受容体リガンド剤。
【請求項１７】
プレニルフラボノイドが、一般式（８）で表されるカルコン誘導体からなる請求の範囲第１項又は２項記載のペルオキシソーム増殖剤応答性受容体リガンド剤。
2003037316.tif 000044
〔Ｒ１〜Ｒ９は、プレニル基又は隣接する２個のＲが−ＣＨ＝ＣＨＣ（ＣＨ３）２Ｏ−で６員環を形成した構造を少なくとも１つ以上含んでおり、その他はＨ、ＯＨ又はＯＣＨ３である。〕
【請求項１８】
一般式（８）で表されるカルコン誘導体が、リコカルコンＣである請求の範囲第１７項記載のペルオキシソーム増殖剤応答性受容体リガンド剤。
【請求項１９】
プレニルフラボノイドが、一般式（９）で表されるジベンゾイルメタン誘導体からなる請求の範囲第１項又は２項記載のペルオキシソーム増殖剤応答性受容体リガンド剤。
2003037316.tif 000045
〔Ｒ１〜Ｒ７は、プレニル基又は隣接する２個のＲが−ＣＨ＝ＣＨＣ（ＣＨ３）２Ｏ−で６員環を形成した構造を少なくとも１つ以上含んでおり、その他はＨ、ＯＨ又はＯＣＨ３である。〕
【請求項２０】
一般式（９）で表されるジベンゾイルメタン誘導体が、グリシルジオンＡ又はグリシルジオンＣである請求の範囲第１９項記載のペルオキシソーム増殖剤応答性受容体リガンド剤。
【請求項２１】
プレニルフラボノイドではないカルコン誘導体、並びに、医薬上若しくは飲食上許容されるその塩、配糖体及びエステル化体からなる群より選択される少なくとも１種からなるペルオキシソーム増殖剤応答性受容体リガンド剤。
【請求項２２】
プレニルフラボノイドではないカルコン誘導体が、エチナチン、イソリクイリチゲニン、リコカルコンＡ又はリコカルコンＢである請求の範囲第２１項記載のペルオキシソーム増殖剤応答性受容体リガンド剤。
【請求項２３】
プレニルフラボノイドではないフラボノール誘導体、並びに、医薬上若しくは飲食上許容されるその塩、配糖体及びエステル化体からなる群より選択される少なくとも１種からなるペルオキシソーム増殖剤応答性受容体リガンド剤。
【請求項２４】
プレニルフラボノイドではないフラボノール誘導体が、ケンプフェロール３−Ｏ−メチルエステルである請求の範囲第２３項記載のペルオキシソーム増殖剤応答性受容体リガンド剤。
【請求項２５】
ペルオキシソーム増殖剤応答性受容体がペルオキシソーム増殖剤応答性受容体γである請求の範囲第１〜２４項のいずれか１項記載のペルオキシソーム増殖剤応答性受容体リガンド剤。
【請求項２６】
式：
2003037316.tif 000046
で表される化合物。
【請求項２７】
請求の範囲第１〜２５項のいずれか１項記載のペルオキシソーム増殖剤応答性受容体リガンド剤を含有することを特徴とする、植物由来の抽出物。
【請求項２８】
抽出物が有機溶媒で抽出されたものである請求の範囲第２７項記載の抽出物。
【請求項２９】
抽出物中に、ペルオキシソーム増殖剤応答性受容体リガンド剤を乾体基準で５重量％以上含有する請求の範囲第２７項又は２８項記載の抽出物。
【請求項３０】
抽出物中に、グリシクマリン、グリシリン、デヒドログリアスペリンＣ、デヒドログリアスペリンＤ、グリアスペリンＢ及びグリアスペリンＤからなる群より選ばれた少なくとも１種を、乾体基準で０．５重量％以上含有する請求の範囲第２７〜２９項のいずれか１記載の抽出物。
【請求項３１】
抽出物中に、グリシクマリン、グリシリン、デヒドログリアスペリンＣ、デヒドログリアスペリンＤ、グリアスペリンＢ及びグリアスペリンＤを、乾体基準で各々０．５重量％以上含有する請求の範囲第２７〜２９項のいずれか１項記載の抽出物。
【請求項３２】
抽出物中に、グリチルイソフラバノン、グリチルイソフラボン、グリウラリンＢ、セミリコイソフラボンＢ及びイソリクイリチゲニンからなる群より選ばれた少なくとも１種を、乾体基準で０．０１重量％以上含有する請求の範囲第２７〜２９項のいずれか１項記載の抽出物。
【請求項３３】
抽出物中に、グリチルイソフラバノン、グリチルイソフラボン、グリウラリンＢ、セミリコイソフラボンＢ及びイソリクイリチゲニンを、乾体基準で各々０．０１重量％以上含有する請求の範囲第２７〜２９項のいずれか１項記載の抽出物。
【請求項３４】
抽出物中に、グラブレン、グラブリジン、グラブロール、３’−ヒドロキシ−４’−Ｏ−メチルグラブリジン、４’−Ｏ−メチルグラブリジン及びヒスパグラブリジンＢからなる群より選ばれた少なくとも１種を、乾体基準で０．５重量％以上含有する請求の範囲第２７〜２９のいずれか１記載の抽出物。
【請求項３５】
抽出物中に、グラブレン、グラブリジン、グラブロール、３’−ヒドロキシ−４’−Ｏ−メチルグラブリジン、４’−Ｏ−メチルグラブリジン及びヒスパグラブリジンＢを、乾体基準で各々０．５重量％以上含有する請求の範囲第２７〜２９項のいずれか１項記載の抽出物。
【請求項３６】
抽出物中に、リコカルコンＡ、リコカルコンＢ、リコカルコンＣ、グリシルジオンＡ及びグリシルジオンＣからなる群より選ばれた少なくとも１種を、乾体基準で０．５重量％以上含有する請求の範囲第２７〜２９項のいずれか１記載の抽出物。
【請求項３７】
抽出物中に、リコカルコンＡ、リコカルコンＢ、リコカルコンＣ、グリシルジオンＡ及びグリシルジオンＣを、乾体基準で各々０．５重量％以上含有する請求の範囲第２７〜２９項のいずれか１記載の抽出物。
【請求項３８】
グリチルリチン含量が乾体基準で０．００１重量％以上、０．５重量％以下である請求の範囲第２７〜３７項のいずれか１項に記載の抽出物。
【請求項３９】
甘草由来である請求の範囲第２７〜３８項のいずれか１項に記載の抽出物。
【請求項４０】
甘草が、グリキルリーザ・ウラレンシス、グリキルリーザ・グラブラ、グリキルリーザ・インフラータ及びグリキルリーザ・エチナータからなる群より選択される少なくとも１種である請求の範囲第３９項記載の抽出物。
【請求項４１】
甘草が、グリキルリーザ・ウラレンシスである請求の範囲第３９項記載の抽出物。
【請求項４２】
甘草が、グリキルリーザ・グラブラである請求の範囲第３９項記載の抽出物。
【請求項４３】
甘草が、グリキルリーザ・インフラータである請求の範囲第３９項記載の抽出物。
【請求項４４】
ペルオキシソーム増殖剤応答性受容体のリガンド結合領域に結合する能力を有するプレニルフラボノイドを有効成分として含有することを特徴とする、インスリン抵抗性の改善、又は、インスリン抵抗性症候群の予防及び／若しくは改善用組成物。
【請求項４５】
インスリン抵抗性症候群は、高インスリン血症、糖尿病、脂質代謝異常、肥満、高血圧及び動脈硬化性疾患からなる群より選ばれる少なくとも１つの症状又は疾患である請求の範囲第４４項記載の組成物。
【請求項４６】
症状又は疾患が糖尿病である請求の範囲第４５項記載の組成物。
【請求項４７】
ペルオキシソーム増殖剤応答性受容体のリガンド結合領域に結合する能力を有するプレニルフラボノイドを有効成分として含有することを特徴とする、炎症又は癌の予防及び／又は改善用組成物。
【請求項４８】
請求の範囲第１〜２５項のいずれか１項記載のペルオキシソーム増殖剤応答性受容体リガンド剤を有効成分として含有することを特徴とする、インスリン抵抗性の改善、又は、インスリン抵抗性症候群の予防及び／若しくは改善用組成物。
【請求項４９】
インスリン抵抗性症候群は、高インスリン血症、糖尿病、脂質代謝異常、肥満、高血圧及び動脈硬化性疾患からなる群より選ばれる少なくとも１つの症状又は疾患である請求の範囲第４８項記載の組成物。
【請求項５０】
症状又は疾患が糖尿病である請求の範囲第４９項記載の組成物。
【請求項５１】
請求の範囲第１〜２５項のいずれか１項記載のペルオキシソーム増殖剤応答性受容体リガンド剤を有効成分として含有することを特徴とする、炎症又は癌の予防及び／又は改善用組成物。
【請求項５２】
ペルオキシソーム増殖剤応答性受容体のリガンド結合領域に結合する能力を有するプレニルフラボノイド又はペルオキシソーム増殖剤応答性受容体リガンド剤として、請求の範囲第２７〜４３項のいずれか１項記載の抽出物を含有する請求の範囲第４４〜５１項のいずれか１項記載の組成物。
【請求項５３】
飲食用であることを特徴とする請求の範囲第４４〜５２項のいずれか１項記載の組成物。
【請求項５４】
医薬用であることを特徴とする請求の範囲第４４〜５２項のいずれか１項記載の組成物。
【請求項５５】
家畜又はペット用であることを特徴とする請求の範囲第４４〜５２項のいずれか１項記載の組成物。
【請求項５６】
錠剤、カプセル剤、顆粒剤又は散剤の形態にある請求の範囲第４４〜５５項のいずれか１項記載の組成物。
【請求項５７】
請求の範囲第２７〜４３項のいずれか１項記載の抽出物を１剤当たり０．１ｍｇ〜１０００ｍｇ含有する請求の範囲第５６項記載の組成物。
【請求項５８】
全表面積に占める皮の面積の割合が３割以上の甘草から抽出することを特徴とする、請求の範囲第３９〜４３項のいずれか１項記載の抽出物を製造する方法。
【請求項５９】
甘草が切断品または周皮である請求の範囲第５８項記載の製造法。
【請求項６０】
甘草が切断品である請求の範囲第５８項記載の製造法。
【請求項６１】
甘草を脂肪酸エステルで抽出することを特徴とする、請求の範囲第３９〜４３項のいずれか１項記載の抽出物を製造する方法。
【請求項６２】
脂肪酸エステルが酢酸エチルである請求の範囲第６１項記載の製造法。
【請求項６３】
甘草を水溶性有機溶剤で抽出することを特徴とする、請求の範囲第３９〜４３項のいずれか１項記載の抽出物を製造する方法。
【請求項６４】
水溶性有機溶剤が、炭素数１〜４の１価アルコール、アセトン又はそれらの混合物である請求の範囲第６３項記載の製造法。
【請求項６５】
水溶性有機溶剤が、エタノール、アセトン又はそれらの混合物である請求の範囲第６３項記載の製造法。
【請求項６６】
水溶性有機溶剤が、エタノールである請求の範囲第６３項記載の製造法。
【請求項６７】
含水率が３０容量％以下の有機溶媒を用いて甘草から抽出することを特徴とする、請求の範囲第３９〜４３項のいずれか１項記載の抽出物を製造する方法。
【請求項６８】
抽出後、吸着処理及び／又は分別により精製する操作を更に含む請求の範囲第５８〜６７項のいずれか１項記載の製造法。
【請求項６９】
甘草からの抽出、及び／又は、その後の操作を、脱酸素雰囲気下に行う請求の範囲第５８〜６８項のいずれか１項記載の製造法。
【発明の詳細な説明】
技術分野
本発明は、ペルオキシソーム増殖剤応答性受容体リガンド剤及びその製造方法、更にはペルオキシソーム増殖剤応答性受容体リガンド剤を有効成分として含有する、インスリン抵抗性の改善、又は、インスリン抵抗性症候群（２型糖尿病、高インスリン血症、脂質代謝異常、肥満、高血圧、動脈硬化性疾患）の予防及び／若しくは改善用組成物に関する。
背景技術
ペルオキシソーム増殖剤応答性受容体（ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ：ＰＰＡＲ）は、脂質代謝を維持する遺伝子群の発現制御を担う転写制御因子として同定された核内受容体ファミリーに属するリガンド依存性転写制御因子である。哺乳動物ではＰＰＡＲα、ＰＰＡＲδ（ＰＰＡＲβ、ＮＵＣ−１、ＦＡＡＲ）、ＰＰＡＲγの３種のサブタイプの存在が知られており、ＰＰＡＲαは主に肝臓で、ＰＰＡＲδは普遍的に発現している。ＰＰＡＲγにはＰＰＡＲγ１とＰＰＡＲγ２の２種のアイソフォームが存在しており、ＰＰＡＲγ１は脂肪組織の他に免疫系臓器や副腎、小腸で発現している。ＰＰＡＲγ２は脂肪組織で特異的に発現しており、脂肪細胞の分化・成熟を制御するマスターレギュレーターである（河田照雄、医学のあゆみ，１８４，５１９〜５２３，１９９８）。
ＰＰＡＲγリガンドとしては、合成化合物ではトログリタゾン、ピオグリタゾン、ロシグリタゾンなどのチアゾリジン誘導体が知られている。天然化合物では、１５−デオキシ−Δ１２，１４−プロスタグランジンＪ２やΔ１２−プロスタグランジンＪ２などのアラキドン酸代謝物、ω−３多価不飽和脂肪酸、α−リノレン酸、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）などの不飽和脂肪酸、９−ヒドロキシオクタデカジエン酸や１３−ヒドロキシオクタデカジエン酸などのエイコサノイド類などが知られている（Ｊ．Ａｕｗｅｒｘ，Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ，４２，１０３３〜１０４９，１９９９）。特開２０００−３５５５３８には、共役トリエン構造又は共役テトラエン構造を有する炭素数１０〜２６の共役不飽和脂肪酸が開示されている。また、フラボノイドでは、フラボン誘導体であるクリシン（ｃｈｒｙｓｉｎ）及びアピゲニン（ａｐｉｇｅｎｉｎ）、フラボノール誘導体であるケンプフェロール（ｋａｅｍｐｆｅｒｏｌ）がＰＰＡＲγリガンドであることが報告されている（Ｙ．Ｃ．Ｌｉａｎｇ，ｅｔ  ａｌ．，ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｅｒｓ，４９６，１２〜１８，２００１）。フラボノイドは植物に広く含まれる成分であり、抗酸化作用を有していることは知られている。しかし、特定の植物にのみ含まれるプレニルフラボノイドがＰＰＡＲγリガンドであることは未だ知られていない。
ＰＰＡＲγリガンドであるチアゾリジン誘導体は、そのアゴニスト活性と血糖降下作用が相関することからインスリン抵抗性改善作用との関連が注目され、２型糖尿病（インスリン非依存性糖尿病：ＮＩＤＤＭ）に対するインスリン抵抗性改善薬として開発された。すなわち、ＰＰＡＲγリガンドであるチアゾリジン誘導体はＰＰＡＲγを活性化することにより、前駆脂肪細胞から分化した正常機能を有する小型脂肪細胞を増加させ、インスリン抵抗性を惹起するＴＮＦαや遊離脂肪酸の産生や分泌が亢進している肥大脂肪細胞をアポトーシスにより減少させることで、インスリン抵抗性を改善する（Ａ．Ｏｋｕｎｏ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ，１０１，１３５４〜１３６１，１９９８）。またＰＰＡＲγリガンドは、インスリン抵抗性を改善することから、２型糖尿病だけでなく、高インスリン血症、脂質代謝異常、肥満（特に内臓脂肪型肥満）、高血圧、動脈硬化性疾患といったインスリン抵抗性症候群（Ｒ．Ａ．ＤｅＦｒｏｎｚｏ＆Ｅ．Ｆｅｒｒａｎｎｉｎｉ，Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｃａｒｅ，１４，１７３〜１９４，１９９１）の予防・改善にも有効である。インスリン抵抗性症候群と同様の病態概念として、シンドロームＸ（Ｇ．Ｍ．Ｒｅａｖｅｎ，Ｄｉａｂｅｔｅｓ，３７，１５９５〜１６０７，１９８８）、死の四重奏（Ｎ．Ｍ．Ｋａｐｌａｎ，Ａｒｃｈｉｖｅｓ  ｏｆ  Ｉｎｔｅｒｎａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，１４９，１５１４〜１５２０，１９８９）、内臓脂肪症候群（Ｙ．Ｍａｔｓｕｚａｗａ，Ｄｉａｂｅｔｅｓ／Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ  Ｒｅｖｉｅｗｓ，１３，３〜１３，１９９７）が挙げられる。
さらにＰＰＡＲγリガンドは、炎症性サイトカインの産生を抑制すること（Ｃ．Ｊｉａｎｇ，ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３９１，８２〜８６，１９９８）、アポトーシスを誘導して癌細胞の増殖を抑制すること（Ｙ．Ｔｓｕｂｏｕｃｈｉ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ，２７０，４００〜４０５，２０００）から、炎症や癌の予防・改善にも有効である。
発明の要約
上記に鑑み、ＰＰＡＲγリガンドはインスリン抵抗性を改善し、２型糖尿病をはじめ、高インスリン血症、脂質代謝異常、肥満（特に内臓脂肪型肥満）、高血圧、動脈硬化性疾患などのインスリン抵抗性症候群を予防及び／又は改善する効果を有する。本発明は、天然物より見出したＰＰＡＲリガンド剤、及びその簡便且つ効率的な製造法、更にはそれを有効成分として含有する、インスリン抵抗性の改善、又は、インスリン抵抗性症候群の予防及び／若しくは改善用組成物を提供することを課題とする。
本発明者らは、食経験のある天然物からＰＰＡＲγリガンド活性を有するものを探索した結果、甘草をはじめとする植物の抽出物にＰＰＡＲγリガンド活性があることを見出した。また、本発明者らは、その活性成分を鋭意探索した結果、当該抽出物中の特定成分がＰＰＡＲγリガンド活性を有していることを見出した。さらに本発明者らは、甘草よりこれらの成分を抽出するには、有機溶媒、好ましくは脂肪酸エステルや水溶性有機溶剤、なかんずく水溶性有機溶剤を用いれば効率的に抽出できることを見出し、本発明を完成するに至った。
即ち、本発明の第１発明は、プレニルフラボノイド、プレニルフラボノイドではないカルコン誘導体、プレニルフラボノイドではないフラボノール誘導体、医薬上若しくは飲食上許容されるそれらの塩、配糖体及び／又はエステル化体からなるペルオキシソーム増殖剤応答性受容体リガンド剤に関する。
第２発明は、プレニルフラボノイド、プレニルフラボノイドではないカルコン誘導体、プレニルフラボノイドではないフラボノール誘導体、医薬上若しくは飲食上許容されるそれらの塩、配糖体及び／又はエステル化体からなるペルオキシソーム増殖剤応答性受容体リガンド剤を含有する、植物由来の抽出物に関する。
第３発明は、ペルオキシソーム増殖剤応答性受容体のリガンド結合領域に結合する能力を有するプレニルフラボノイド、プレニルフラボノイドではないカルコン誘導体、プレニルフラボノイドではないフラボノール誘導体、医薬上若しくは飲食上許容されるそれらの塩、配糖体及び／又はエステル化体を有効成分として含有する、インスリン抵抗性の改善、又は、インスリン抵抗性症候群の予防及び／若しくは改善用組成物に関する。
第４発明は、ペルオキシソーム増殖剤応答性受容体のリガンド結合領域に結合する能力を有するプレニルフラボノイド、プレニルフラボノイドではないカルコン誘導体、プレニルフラボノイドではないフラボノール誘導体、医薬上若しくは飲食上許容されるそれらの塩、配糖体及び／又はエステル化体を有効成分として含有する、炎症又は癌の予防及び／又は改善用組成物に関する。
第５発明は、全表面積に占める皮の面積の割合が３割以上の甘草から抽出する、上記抽出物の製造方法に関する。
第６発明は、甘草を脂肪酸エステル又は水溶性有機溶剤で抽出する、上記抽出物の製造方法に関する。
第７発明は、含水率が３０容量％以下の有機溶媒を用いて甘草から抽出する、上記抽出物の製造方法に関する。
発明の詳細な開示
以下に、本発明の実施の形態を詳しく説明する。
ＰＰＡＲリガンド剤（好ましくはＰＰＡＲγリガンド剤）は、ＰＰＡＲリガンド活性（好ましくはＰＰＡＲγリガンド活性）を有する化合物、すなわちＰＰＡＲ（好ましくはＰＰＡＲγ）のリガンド結合領域に結合する能力を有する化合物である。ＰＰＡＲγリガンド活性は、例えば、ＰＰＡＲγリガンド結合領域とＧＡＬ４との融合蛋白に対する結合をルシフェラーゼの発現で評価するレポーター・アッセイ（Ｂ．Ｍ．Ｆｏｒｍａｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ，８３，８０３〜８１２，１９９５）や、ＰＰＡＲγリガンド結合領域を含む蛋白を用いたコンペティション・バインディング・アッセイ（Ｓ．Ａ．Ｋｌｉｅｗｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ，８３，８１３〜８１９，１９９５）などにより測定することができる。これらのアッセイにおいて、サンプルの活性は一般に溶媒対照と比較し、溶媒対照よりも高い活性を示し、なおかつ用量依存性が認められるサンプルを「ＰＰＡＲγリガンド活性あり」と評価する。
本発明のＰＰＡＲリガンド剤、好ましくはＰＰＡＲγリガンド剤は、プレニルフラボノイド、プレニルフラボノイドではないカルコン誘導体、プレニルフラボノイドではないフラボノール誘導体、医薬上若しくは飲食上許容されるそれらの塩、配糖体及びエステル化体からなる群より選ばれた少なくとも１種の化合物である。
医薬上若しくは飲食上許容される塩としては特に限定されないが、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、マグネシウム塩、カルシウム塩などが挙げられる。
医薬上若しくは飲食上許容される配糖体としては特に限定されないが、例えば、グルコース、ガラクトースなどの単糖の配糖体、または二糖やオリゴ糖の配糖体などが挙げられる。
医薬上若しくは飲食上許容されるエステル化体としては特に限定されないが、例えば、酢酸エステル、プロピオン酸エステル、リン酸エステル、硫酸エステルなどが挙げられる。
これらの化合物のうち少なくとも１種を有効成分として含有する本発明の組成物は、インスリン抵抗性を改善することから、糖尿病をはじめインスリン抵抗性症候群の予防及び／又は改善剤として有用である。
本発明のＰＰＡＲリガンド剤であるプレニルフラボノイドとしては特に限定されないが、３−アリルクマリン誘導体、イソフラブ−３−エン誘導体、イソフラバン誘導体、イソフラバノン誘導体、イソフラボン誘導体、フラボノール誘導体、フラバノン誘導体、カルコン誘導体、ジベンゾイルメタン誘導体からなる群より選ばれた少なくとも１種の化合物が好ましい。
ここでいうプレニルフラボノイドとは、フラボノイドの側鎖に下記（Ａ）又は（Ｂ）を少なくとも１つ以上有している化合物とする：（Ａ）プレニル基、（Ｂ）プレニル基がそれと隣接する水酸基と結合して〔−ＣＨ＝ＣＨＣ（ＣＨ３）２Ｏ−〕となり６員環を形成した構造。フラボノイドは、２つのフェニル基が３つの炭素原子を介して結合している物質群の総称であり、例えば、フラボン、フラボノール、フラバノン、フラバノノール、イソフラボン、イソフラボノール、イソフラバノン、イソフラバン、イソフラブ−３−エン、３−アリルクマリン、カルコン、ジヒドロカルコン、ジベンゾイルメタン、クメスタン、プテロカルパン、カテキン、アントシアニジンなどである。
本発明に用いるプレニルフラボノイドである３−アリルクマリン誘導体は、特に限定されないが、下記一般式（１）で表されるものが好ましく、例えば、グリシクマリン（ｇｌｙｃｙｃｏｕｍａｒｉｎ）、グリシリン（ｇｌｙｃｙｒｉｎ）、ガンカオニンＷ（ｇａｎｃａｏｎｉｎ  Ｗ）、グリアスペリンＬ（ｇｌｙａｓｐｅｒｉｎ  Ｌ）、カンゾノールＷ（ｋａｎｚｏｎｏｌ  Ｗ）など、表１に示す化合物が挙げられる。また、これらの化合物の塩、配糖体、エステル化体などの誘導体も挙げられる。この中でも、グリシクマリン又はグリシリンがより好ましい。
2003037316.tif 000002
〔Ｒ１〜Ｒ７は、プレニル基又は隣接する２個のＲが−ＣＨ＝ＣＨＣ（ＣＨ３）２Ｏ−で６員環を形成した構造を少なくとも１つ以上含んでおり、その他はＨ、ＯＨ又はＯＣＨ３である。〕
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本発明に用いるプレニルフラボノイドであるイソフラブ−３−エン誘導体は、特に限定されないが、下記一般式（２）で表されるものが好ましく、例えば、デヒドログリアスペリンＣ（ｄｅｈｙｄｒｏｇｌｙａｓｐｅｒｉｎ  Ｃ）、デヒドログリアスペリンＤ（ｄｅｈｙｄｒｏｇｌｙａｓｐｅｒｉｎ  Ｄ）、グラブレン（ｇｌａｂｒｅｎｅ）、ＲＬ−Ｓなど、表２に示す化合物が挙げられる。また、これらの化合物の塩、配糖体、エステル化体などの誘導体も挙げられる。この中でも、デヒドログリアスペリンＣ、デヒドログリアスペリンＤ又はグラブレンがより好ましい。また、デヒドログリアスペリンＤは本発明において初めて見出された新規化合物である。
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〔Ｒ１〜Ｒ７は、プレニル基又は隣接する２個のＲが−ＣＨ＝ＣＨＣ（ＣＨ３）２Ｏ−で６員環を形成した構造を少なくとも１つ以上含んでおり、その他はＨ、ＯＨ又はＯＣＨ３である。〕
2003037316.tif 000005
本発明に用いるプレニルフラボノイドであるイソフラバン誘導体は、特に限定されないが、一般式（３）で表されるものが好ましく、例えば、グリアスペリンＣ（ｇｌｙａｓｐｅｒｉｎ  Ｃ）、グリアスペリンＤ（ｇｌｙａｓｐｅｒｉｎ  Ｄ）、グリアスペリンＩ（ｇｌｙａｓｐｅｒｉｎ  Ｉ）、リコリシディン（ｌｉｃｏｒｉｃｉｄｉｎ）、リコリソフラバンＡ（ｌｉｃｏｒｉｓｏｆｌａｖａｎ  Ａ）など、表３に示す化合物が挙げられる。また、これらの化合物の塩、配糖体、エステル化体などの誘導体も挙げられる。この中でも、グリアスペリンＤ、グラブリジン（ｇｌａｂｒｉｄｉｎ）、ヒスパグラブリジンＢ（ｈｉｓｐａｇｌａｂｒｉｄｉｎ  Ｂ）、４’−Ｏ−メチルグラブリジン（４’−Ｏ−ｍｅｔｈｙｌｇｌａｂｒｉｄｉｎ）又は３’−ヒドロキシ−４’−Ｏ−メチルグラブリジン（３’−ｈｙｄｒｏｘｙ−４’−Ｏ−ｍｅｔｈｙｌｇｌａｂｒｉｄｉｎ）がより好ましい。
2003037316.tif 000006
〔Ｒ１〜Ｒ７は、プレニル基又は隣接する２個のＲが−ＣＨ＝ＣＨＣ（ＣＨ３）２Ｏ−で６員環を形成した構造を少なくとも１つ以上含んでおり、その他はＨ、ＯＨ又はＯＣＨ３である。〕
2003037316.tif 000007
本発明に用いるプレニルフラボノイドであるイソフラバノン誘導体は、特に限定されないが、下記一般式（４）で表されるものが好ましく、例えば、グリアスペリンＢ（ｇｌｙａｓｐｅｒｉｎ  Ｂ）、グリアスペリンＫ（ｇｌｙａｓｐｅｒｉｎ  Ｋ）、カンゾノールＧ（ｋａｎｚｏｎｏｌ  Ｇ）、３’−プレニル−キエビトン（３’−ｐｒｅｎｙｌ−ｋｉｅｖｉｔｏｎｅ）、グリアスペリンＦ（ｇｌｙａｓｐｅｒｉｎ  Ｆ）など、表４に示す化合物が挙げられる。また、これらの化合物の塩、配糖体、エステル化体などの誘導体も挙げられる。この中でも、グリアスペリンＢ又はグリチルイソフラバノン（ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｓｏｆｌａｖａｎｏｎｅ）がより好ましい。
2003037316.tif 000008
〔Ｒ１〜Ｒ８は、プレニル基又は隣接する２個のＲが−ＣＨ＝ＣＨＣ（ＣＨ３）２Ｏ−で６員環を形成した構造を少なくとも１つ以上含んでおり、その他はＨ、ＯＨ又はＯＣＨ３である。〕
2003037316.tif 000009
本発明に用いるプレニルフラボノイドであるイソフラボン誘導体は、特に限定されないが、下記一般式（５）で表されるものが好ましく、例えば、ワイテオン（ｗｉｇｈｔｅｏｎｅ）、ガンカオニンＡ（ｇａｎｃａｏｎｉｎ  Ａ）、ガンカオニンＢ（ｇａｎｃａｏｎｉｎ  Ｂ）、ガンカオニンＧ（ｇａｎｃａｏｎｉｎ  Ｇ）、ガンカオニンＮ（ｇａｎｃａｏｎｉｎ  Ｎ）など、表５に示す化合物が挙げられる。また、これらの化合物の塩、配糖体、エステル化体などの誘導体も挙げられる。この中でも、グリウラリンＢ（ｇｌｙｕｒａｌｌｉｎ  Ｂ）、ルピワイテオン（ｌｕｐｉｗｉｇｈｔｅｏｎｅ）、セミリコイソフラボンＢ（ｓｅｍｉｌｉｃｏｉｓｏｆｌａｖｏｎｅ  Ｂ）又はグリチルイソフラボン（ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｓｏｆｌａｖｏｎｅ）がより好ましい。
2003037316.tif 000010
〔Ｒ１〜Ｒ９は、プレニル基又は隣接する２個のＲが−ＣＨ＝ＣＨＣ（ＣＨ３）２Ｏ−で６員環を形成した構造を少なくとも１つ以上含んでおり、その他はＨ、ＯＨ又はＯＣＨ３である。〕
2003037316.tif 000011
本発明に用いるプレニルフラボノイドであるフラボノール誘導体は、特に限定されないが、下記一般式（６）で表されるものが好ましく、例えば、リコフラボノール（ｌｉｃｏｆｌａｖｏｎｏｌ）、ガンカオニンＰ（ｇａｎｃａｏｎｉｎ  Ｐ）、トパゾリン（ｔｏｐａｚｏｌｉｎ）、グリアスペリンＡ（ｇｌｙａｓｐｅｒｉｎ  Ａ）、イソリコフラボノール（ｉｓｏｌｉｃｏｆｌａｖｏｎｏｌ）など、表６に示す化合物が挙げられる。また、これらの化合物の塩、配糖体、エステル化体などの誘導体も挙げられる。この中でも、イソリコフラボノール、リコフラボノール又はトパゾリンがより好ましい。
2003037316.tif 000012
〔Ｒ１はＯＨ又はＯＣＨ３である。Ｒ２〜Ｒ９は、プレニル基又は隣接する２個のＲが−ＣＨ＝ＣＨＣ（ＣＨ３）２Ｏ−で６員環を形成した構造を少なくとも１つ以上含んでおり、その他はＨ、ＯＨ又はＯＣＨ３である。〕
2003037316.tif 000013
本発明に用いるプレニルフラボノイドであるフラバノン誘導体は、特に限定されないが、下記一般式（７）で表されるものが好ましく、例えば、６−プレニルピノセムブリン（６−ｐｒｅｎｙｌｐｉｎｏｃｅｍｂｒｉｎ）、６−プレニルナリンゲニン（６−ｐｒｅｎｙｌｎａｒｉｎｇｅｎｉｎ）、６−プレニルエリオジクチオール（６−ｐｒｅｎｙｌｅｒｉｏｄｉｃｔｙｏｌ）、シノフラバノンＢ（ｓｉｎｏｆｌａｖａｎｏｎｅ  Ｂ）、パラトカルピンＬ（ｐａｒａｔｏｃａｒｐｉｎ  Ｌ）など、表７に示す化合物が挙げられる。また、これらの化合物の塩、配糖体、エステル化体などの誘導体も含まれる。この中でも、グラブロール（ｇｌａｂｒｏｌ）がより好ましい。
2003037316.tif 000014
〔Ｒ１〜Ｒ８は、プレニル基又は隣接する２個のＲが−ＣＨ＝ＣＨＣ（ＣＨ３）２Ｏ−で６員環を形成した構造を少なくとも１つ以上含んでおり、その他はＨ、ＯＨ又はＯＣＨ３である。〕
2003037316.tif 000015
本発明に用いるプレニルフラボノイドであるカルコン誘導体は、特に限定されないが、下記一般式（８）で表されるものが好ましく、例えば、リコカルコンＣ（ｌｉｃｏｃｈａｌｃｏｎｅ  Ｃ）、リコカルコンＤ（ｌｉｃｏｃｈａｌｃｏｎｅ  Ｄ）、グリインフラニンＧ（ｇｌｙｉｎｆｌａｎｉｎ  Ｇ）、カンゾノールＢ（ｋａｎｚｏｎｏｌ  Ｂ）、カンゾノールＣ（ｋａｎｚｏｎｏｌ  Ｃ）など、表８に示す化合物が挙げられる。また、これらの化合物の塩、配糖体、エステル化体などの誘導体も挙げられる。この中でも、リコカルコンＣがより好ましい。
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〔Ｒ１〜Ｒ９は、プレニル基又は隣接する２個のＲが−ＣＨ＝ＣＨＣ（ＣＨ３）２Ｏ−で６員環を形成した構造を少なくとも１つ以上含んでおり、その他はＨ、ＯＨ又はＯＣＨ３である。〕
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本発明に用いるプレニルフラボノイドであるジベンゾイルメタン誘導体は、特に限定されないが、下記一般式（９）で表されるものが好ましく、例えば、グリシルジオンＡ（ｇｌｙｃｙｒｄｉｏｎｅ  Ａ）、グリシルジオンＢ（ｇｌｙｃｙｒｄｉｏｎｅ  Ｂ）、グリシルジオンＣ（ｇｌｙｃｙｒｄｉｏｎｅ  Ｃ）、グリインフラニンＢ（ｇｌｙｉｎｆｌａｎｉｎ  Ｂ）、グリインフラニンＤ（ｇｌｙｉｎｆｌａｎｉｎ  Ｄ）など、表９に示す化合物が挙げられる。また、これらの化合物の塩、配糖体、エステル化体などの誘導体も挙げられる。この中でも、グリシルジオンＡ又はグリシルジオンＣがより好ましい。
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〔Ｒ１〜Ｒ７は、プレニル基又は隣接する２個のＲが−ＣＨ＝ＣＨＣ（ＣＨ３）２Ｏ−で６員環を形成した構造を少なくとも１つ以上含んでおり、その他はＨ、ＯＨ又はＯＣＨ３である。〕
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本発明に用いるプレニルフラボノイドではないカルコン誘導体としては特に限定されないが、エチナチン（ｅｃｈｉｎａｔｉｎ）、イソリクイリチゲニン（ｉｓｏｌｉｑｕｉｒｉｔｉｇｅｎｉｎ）、リコカルコンＡ（ｌｉｃｏｃｈａｌｃｏｎｅ  Ａ）、リコカルコンＢ（ｌｉｃｏｃｈａｌｃｏｎｅ  Ｂ）が挙げられる。また、これらの化合物の塩、配糖体、エステル化体などの誘導体も挙げられる。
本発明に用いるプレニルフラボノイドではないフラボノール誘導体としては特に限定されないが、ケンプフェロール３−Ｏ−メチルエステル（ｋａｅｍｐｆｅｒｏｌ  ３−Ｏ−ｍｅｔｈｙｌｅｓｔｅｒ）が挙げられる。また、これらの化合物の塩、配糖体、エステル化体などの誘導体も挙げられる。
尚、これらの化合物の名称は、平賀敬夫及び梶山喜一郎の報告（明治薬科大学紀要，２７，９〜５７，１９９７）並びにＴ．Ｎｏｍｕｒａ＆Ｔ．Ｆｕｋａｉの報告（Ｆｏｒｔｓｃｈｒｉｔｔｅ  ｄｅｒ  Ｃｈｅｍｉｅ  ｏｒｇａｎｉｓｃｈｅｒ  Ｎａｔｕｒｓｔｏｆｆｅ，７３，１〜１５８，１９９８）を参照した。
本発明のＰＰＡＲリガンド剤は、上記化合物であれば、植物等の天然由来、化学合成あるいは培養細胞などにより生合成した化合物のいずれも使用することができるが、食経験のある天然由来であるのが好ましい。これらの化合物を得る方法は、特に限定されないが、食経験のあるマメ科の甘草から得ることができ、他の植物から得ることもできる。他の植物としては、ＰＰＡＲリガンド剤、好ましくはＰＰＡＲγリガンド剤を含有する植物であれば特に限定されず、マメ科の植物の他に、例えば、クワ科、トチュウ科、アサ科、イラクサ科などの植物が挙げられる。
以下、本発明のＰＰＡＲリガンド剤の製造法について甘草から得る場合を例に説明するが、必ずしも甘草に限定されるものではない。
使用しうる甘草は、マメ科カンゾウ属（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ属）の植物であれば良く、例えば、グリキルリーザ・ウラレンシス（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａｕｒａｌｅｎｓｉｓ  Ｆｉｓｃｈ．ｅｔ  ＤＣ；ウラルカンゾウ）、Ｇ．インフラータ（Ｇ．ｉｎｆｌａｔａ  ＢＡＴ．；チョウカカンゾウ）、Ｇ．グラブラ（Ｇ．ｇｌａｂｒａ  Ｌ．；ヨウカンゾウ）、Ｇ．グラブラ（Ｇ．ｇｌａｂｒａＬ．ｖａｒ  ｇｌａｎｄｕ  ｒｉｆｅｒａ  Ｒｅｇｅｌ  ｅｔ  Ｈｅｒｄｅｒ；ナンキンカンゾウ）、Ｇ．エチナータ（Ｇ．ｅｃｈｉｎａｔａ  Ｌ．；シナカンゾウ）、Ｇ．パリディフローラ（Ｇ．ｐａｌｌｉｄｉｆｌｏｒａ  Ｍａｘｉｍ；イヌカンゾウ）やその他同属植物（Ｌｅｇｕｍｉｎｏｓａｅ）を挙げることができる。産地としては、例えば、新彊産、東北産、西北産、モンゴル産、ロシア産、アフガニスタン産、イラン産、トルコ産等である。なかでも上述したようなＰＰＡＲリガンド活性成分の含量が高いＧ．ウラレンシス（産地：東北産、西北産、モンゴル産、新彊産等）、Ｇ．グラブラ（産地：ロシア産、アフガニスタン産、イラン産、トルコ産等）、Ｇ．インフラータ（産地：新彊産等）が好ましく、特にＧ．ウラレンシスが好ましく用いられる。
本発明において、上記甘草の根、根茎又はストロンの使用が好ましく、これらは、微粉砕品、粉砕品、切断品、あるいは上記甘草の周皮が用いられる。ここで、微粉砕品とはいわゆる粉末あるいは粉末に近いものをいい、粉砕品とは糸状あるいは繊維状あるいは綿状のもの（例えば、長さ５ｍｍ程度から１０ｃｍ程度のもの）をいう。また、切断品とは、甘草の根、根茎又はストロン等を切断したもの（例えば、長さは、普通１〜１０ｃｍ程度、好ましくは約１〜５ｃｍ程度、より好ましくは２〜４ｃｍ程度であり、太さは、普通約３ｃｍ以下、好ましくは約２ｃｍ以下、より好ましくは約１ｃｍ以下の程度に輪切りにしたもの）であり、普通円柱状もしくはそれと本質的に類似した形態を有する。微粉砕品、粉砕品、切断品は、通常の機器を使用して得ることができる。微粉砕品は、例えば、マスコローダー式粉砕機、石臼式粉砕機等により粉末あるいは粉末に近いものとして得ることができ、粉砕品は、例えば、ハンマーミル式粉砕機等で得ることができる。また、切断品は、上記甘草の根等を通常の裁断機で上記長さに切断し得ることができる。
尚、上記甘草は、その種類、産地、採取時期等により有効成分の組成や含有量が多少異なるので、予め実験により有効成分を多く含有することが確認されたものを使用するのが好ましい。
抽出法としては、上記甘草から有機溶剤を用いて抽出する方法を挙げることができるが、予め甘草を水などで抽出した水抽出残渣、又はその残渣を乾燥させたものから有機溶剤を用いて抽出しても良い。
ここで用いる有機溶剤は、特に制限されないが、医薬品や食品、食品添加物などの製造、加工に使用できる安全なものが好ましく、例えば、アセトン、炭素数１〜４の１価アルコール、グリセリン、脂肪酸エステル、ジエチルエーテル、シクロヘキサン、二酸化炭素、プロピレングリコールなどが挙げられ、またこれらの溶剤のうち少なくとも２種以上を混合して用いても良い。これらのうち、好適に使用しうる溶剤としては、酢酸エチル等の脂肪酸エステルや、炭素数１〜４の１価アルコール、アセトン、プロピレングリコール、グリセリン等の水溶性有機溶剤であり、特に好ましくは、上記水溶性有機溶剤である。
抽出後は、活性炭や樹脂等による吸着処理及び／又は分別等により精製して、抽出物中の活性成分の含有量を高めるのが好ましい。抽出で得たものをシリカゲル、ＯＤＳ、イオン交換樹脂などのカラムクロマトグラフィーにより、目的の化合物を濃縮、分画又は単離することができる。
勿論、その他化学合成を利用してこれら目的の化合物を得ても良い。
以下、本発明におけるＰＰＡＲリガンド剤を含有する甘草抽出物の好ましい製造法として、甘草を脂肪酸エステル又は水溶性有機溶剤で抽出する方法について詳細に説明する。脂肪酸エステル又は水溶性有機溶剤で抽出した甘草抽出物は、良好なＰＰＡＲリガンド活性を示す傾向にあり、特に、水溶性有機溶媒の使用は効率的にＰＰＡＲリガンド活性物質を取得できるため好ましい。
甘草から脂肪酸エステル又は水溶性有機溶剤で目的物質を抽出する際には、甘草の微粉砕品、粉砕品、切断品、あるいは周皮などをそのまま抽出しても構わないが、上述の如く、予め甘草を別の溶媒（例えば、水、アルカリ性水溶液等）で前抽出した後の甘草前抽出残渣から脂肪酸エステル又は水溶性有機溶剤で抽出することにより不純物等を除去しても良い。
甘草を別の溶媒（水、アルカリ性水溶液等）で前抽出した後は、一般的な分離操作（例えば、加圧濾過、減圧濾過、フィルタープレス、遠心分離、沈降等）により、抽出液と甘草抽出残渣を分離し、甘草前抽出残渣を得ることができる。尚、上記分離操作においては、必要に応じ、活性炭、活性白土等の一般に使用しうる濾過助剤や吸着剤等を使用しうる。
このようにして得られた甘草前抽出残渣はそのまま、あるいは、一般的な乾燥操作（例えば、静置乾燥、撹拌乾燥、混合乾燥、流動乾燥、気流乾燥、噴霧乾燥、凍結乾燥、凍結濃縮等）により、使用した別の溶媒（水、アルカリ性水溶液等）の一部又は全てを除去した後、脂肪酸エステル又は水溶性有機溶剤による抽出に用いられる。
本抽出法において、好適に使用しうる脂肪酸エステル又は水溶性有機溶剤としては、特に制限されないが、酢酸エチル等の酢酸エステル、炭素数１〜４の１価アルコール、アセトン、プロピレングリコール、グリセリン等、あるいは、これらの混合物を挙げることができるが、好ましくは、酢酸エチル等の酢酸エステル、炭素数１〜４の１価アルコール、アセトン又はこれらの混合物であり、より好ましくは酢酸エチル、エタノール、アセトン又はこれらの混合物である。とりわけ、溶媒の人体に対する安全性の観点においてはエタノールが好ましい。後述するグリチルリチン等の水溶性不純物の混入を低く抑えるという点では、炭素数２〜４の１価アルコール、脂肪酸エステル、アセトンが好ましく、特に脂肪酸エステルやアセトンが好ましく、さらには酢酸エステルやアセトンが好ましく、なかでも酢酸エチルやアセトンがより好ましい。尚、言うまでもなく、悪影響のない範囲で、他の溶剤を共存させることを妨げない。
ところで、本発明においては、甘草抽出物中の有効成分含量を高め、且つ、グリチルリチン等の水溶性不純物の含量を低く抑えることが重要である。
グリチルリチンは医薬としても利用されているが、血圧上昇作用、心筋障害、水血症（以上、Ｈａｒｄｅｒｓ，Ｈ．＆Ｒａｕｓｃｈ−Ｓｔｒｏｏｍａｎｎ，Ｊ．Ｇ．，Ｍｕｎｃｈ．Ｍｅｄ．Ｗｓｃｈｒ．９５，５８０（１９５３））、低カリウム血症、血漿レニン活性減少、偽性アルドステロン症、四肢弛緩性麻痺（以上、Ｃｏｎｎ，Ｊ．Ｗ．，Ｒｏｖｎｅｒ，Ｄ．Ｒ．＆Ｃｏｈｅｎ，Ｅ．Ｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｍｅｄ．Ａｓｓｏｃ．２０５，４９２（１９６８））、尿中アルドステロン排泄減少、浮腫、頭痛、嗜眠状態（以上、Ｅｐｓｔｅｉｎ，Ｍ．Ｔ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒｉｔ．Ｍｅｄ．Ｊ．，１，４８８（１９７７））等の副作用があり、またショ糖の１５０倍の甘さがある。グリチルリチンの混入は、甘草抽出物のもつ種々の効果を阻害したり、副作用や強い甘さのために食品等としての利用に不利を生じる。
得られる甘草抽出物中の有効成分含量を高め、且つ、グリチルリチン等の水溶性不純物含量を低く抑えるためには、有機溶媒による抽出時に共存する水分含量を低くするのが好ましい。そのためには、一般に、極力乾いた甘草を用い、更に、水を含まない有機溶媒を使用することが重要となる。
しかしながら、甘草はいうまでもなく植物体であり、極力乾いた甘草を得るためには、通常行われている天日干し等では必ずしも十分ではなく、乾燥器等の使用が必要となる。これは、工業的規模での生産上、大きな難点となる。
また、水を含まない有機溶媒を使用したとしても、用いる甘草や作業環境からの水分の混入を完全に防止することが困難なために、水分含量の増加した有機溶媒として回収される。これを、そのままリサイクルすることは難しく、有機溶媒を使い捨てにするか、あるいは、無水化のための特殊で高価な精製設備が必要となり、いずれにせよ、製造コストの上昇につながる。
従って、有効成分含量が高く、水溶性不純物含量の低い高品質の甘草抽出物を極めて簡便かつ安価に製造することができれば、非常に大きなメリットが期待できる。
本発明者らが鋭意検討した結果、上記高品質の甘草抽出物を得る為には、甘草の形態として、全表面積に占める皮の面積の割合が高いもの、普通３割以上、好ましくは５割以上、より好ましくは７割以上、とりわけ８割以上、なかんずく９割以上のもの（具体的には、前記の切断品や周皮（周皮を主とするものを含む））を使用するのが好ましいことを見出した。更に、上記の甘草の形態を用いれば、含水した水溶性有機溶媒を用いた場合でも高品質の甘草抽出物を得ることができることを見出した。
前記の切断品や周皮（周皮を主とするものを含む）のうち、加工がより容易である切断品の使用がより好ましく、切断品の場合は、全表面積に占める皮の面積の割合が、普通５割以上、好ましくは７割以上、より好ましくは８割以上、とりわけ９割以上であるのが好適である。
この方法に依れば、特に上記の水溶性有機溶媒、好ましくは炭素数２〜４の１価アルコール、より好ましくはエタノールを用いる場合にその効果が最大限に発揮される。
用いる有機溶媒の含水率としては、普通約３０容量％以下、好ましくは約２０容量％以下、より好ましくは約１０容量％以下、とりわけ約８容量％以下のものを好適に使用しうる。下限は、特に制限されないが、実用性の観点から、普通約３容量％、好ましくは約４容量％である。
これにより、有効成分含量が高く、水溶性不純物含量の低い高品質の甘草抽出物を好適に取得できる。得られる抽出物中のグリチルリチン含量は、好ましくは０．５重量％以下に最小化できる。また、（甘草を特別に乾燥することなく、）抽出溶媒として安価な含水した水溶性有機溶媒を使用する場合においても高品質の抽出物を好適に取得できる。
上記の脂肪酸エステル又は水溶性有機溶剤による抽出は、一般的な方法に従って実施することができ、特に制限されない。抽出温度は、特に制限されず、系の固化温度から沸点の間、一般に−２０〜１００℃、普通１〜８０℃、好ましくは２０〜６０℃で好適に実施しうる。
抽出の操作は、上記の甘草又は甘草前抽出残渣に対して、例えば１〜２０倍容量、好ましくは２〜１０倍容量の上記脂肪酸エステル又は水溶性有機溶剤を用いて、例えば、０．１時間以上、好ましくは０．２時間以上、より好ましくは０．５時間以上、抽出を行えば良い。普通、１回当たりの抽出時間は１〜１０時間程度で好適に実施しうる。上限は特に制限されず、１日程度であるが、更に長時間行っても良い。抽出は、必要に応じて、１回もしくは複数回実施しても良く、また用いる溶剤を適宜組み合わせても良い。抽出時の圧力は、特に制限されない。常圧〜加圧された状態（１〜数気圧）が用いられうるが、所望ならば減圧にすることもできる。還流下に、またやや加圧された状態で実施しうる。
上記の抽出後は、一般的な分離操作（例えば、加圧濾過、減圧濾過、遠心分離、沈降等）により、抽出液と甘草抽出残渣を分離し、所望により上記溶剤で洗浄を行い、甘草抽出液を得ることができる。尚、上記分離操作においては、必要に応じ、活性炭、活性白土、樹脂等の一般に使用しうる濾過助剤や吸着剤等を使用しうる。
このようにして得られた甘草抽出液は、一般的な溶剤除去操作（例えば、常圧濃縮、減圧濃縮、噴霧乾燥、凍結乾燥、凍結濃縮等）により使用した溶剤を除去し、溶剤が除去された甘草抽出物を取得することができる。尚、上述したように、抽出後は、活性炭や樹脂等による吸着処理及び／又は分別等により精製して、抽出物中の活性成分の含有量を高めるのがより好ましい。
尚、本発明の製造法においては、活性成分の安定性の面から、上記の一連の操作、なかでも溶剤による抽出、又は溶剤による抽出及びその後の操作（抽出液の分離、溶剤除去、活性炭や樹脂等による吸着処理及び／又は分別等）は、窒素ガス等を用いる不活性ガス雰囲気下等の脱酸素雰囲気下に行うのが好ましい。酸化を抑制する目的で、アスコルビン酸、アスコルビン酸ナトリウム、アスコルビン酸パルミチン酸エステル、アスコルビン酸ステアリン酸エステル、トコフェロール等の抗酸化剤の共存下に実施しうる。
溶剤を除去した後に得られる甘草抽出物は、一般に、褐色（例えば、黄褐色〜黒褐色）である。
上記製造法によって得られる甘草抽出物の、甘草に対する抽出物乾体の重量比（乾体基準）は、普通約０．０１以上である。
本発明の抽出物中のグリチルリチン含量は、乾体基準で、普通０．５重量％以下、好ましくは０．３重量％以下、より好ましくは０．２重量％以下、なかんずく０．１重量％以下と低含量である。本発明の抽出物中のグリチルリチン含量が乾体基準で０．００１〜０．５重量％の場合、上記副作用や利用上の不利に対し事実上問題はない。
抽出物中のグリチルリチン含量は、例えば、試薬として市販のグリチルリチン又はグリチルリチン酸塩を標準物質としてＨＰＬＣなどの分析により定量することができる。また、抽出物中のＰＰＡＲリガンド剤成分の含量は、例えば、本発明のＰＰＡＲリガンド剤を標準物質としてＨＰＬＣなどの分析により定量することができる。標準物質としてのＰＰＡＲリガンド剤は、甘草等の植物から単離した化合物を用いても良いし、又は化学合成した化合物を用いても良い。抽出物中のＰＰＡＲリガンド剤成分の総量は、定量したＰＰＡＲリガンド剤成分の含量の総和として算出できる。
本発明の抽出物中に含まれるＰＰＡＲリガンド剤成分の総量は、乾体基準で、普通０．５重量％以上であり、好ましくは１重量％以上、より好ましくは２重量％以上である。特に、炭素数１〜４の一価アルコールで抽出した場合には、普通５重量％以上、好ましくは６重量％以上、より好ましくは７重量％以上であり、有効成分が効率良く回収されている。尚、本発明の抽出物中に含まれるＰＰＡＲリガンド剤成分の総量は、乾体基準で、普通最大５０重量％以下であるが、抽出後に活性炭や樹脂等による吸着処理及び／又は分別等により精製して含有量をより高めることができる。
本発明の抽出物は、主要成分として、例えば、グリシクマリン、グリシリン、デヒドログリアスペリンＣ、デヒドログリアスペリンＤ、グリアスペリンＢ及びグリアスペリンＤからなる群より選ばれた少なくとも１種を、抽出物中、乾体基準で普通０．５重量％以上、好ましくは１重量％以上含有していることが好ましい。さらに好ましくは、グリシクマリン、グリシリン、デヒドログリアスペリンＣ、デヒドログリアスペリンＤ、グリアスペリンＢ及びグリアスペリンＤを、抽出物中、乾体基準で各々０．５重量％以上、好ましくは１重量％以上含有している。これらの成分は甘草のなかでも特にＧ．ウラレンシスの抽出物に多く含まれる。
また、例えば、グリチルイソフラバノン、グリチルイソフラボン、グリウラリンＢ、セミリコイソフラボンＢ及びイソリクイリチゲニンからなる群より選ばれた少なくとも１種を、抽出物中、乾体基準で普通０．０１重量％以上、好ましくは０．０２重量％以上含有していることが好ましい。さらに好ましくは、グリチルイソフラバノン、グリチルイソフラボン、グリウラリンＢ、セミリコイソフラボンＢ及びイソリクイリチゲニンを、抽出物中、乾体基準で各々０．０１重量％以上、好ましくは０．０２重量％以上含有している。
また、例えば、グラブレン、グラブリジン、グラブロール、３’−ヒドロキシ−４’−Ｏ−メチルグラブリジン、４’−Ｏ−メチルグラブリジン及びヒスパグラブリジンＢからなる群より選ばれた少なくとも１種を、抽出物中、乾体基準で０．５重量％以上、好ましくは１重量％以上含有していることが好ましい。さらに好ましくは、グラブレン、グラブリジン、グラブロール、３’−ヒドロキシ−４’−Ｏ−メチルグラブリジン、４’−Ｏ−メチルグラブリジン及びヒスパグラブリジンＢを、抽出物中、乾体基準で各々０．５重量％以上、好ましくは１重量％以上含有している。これらの成分は甘草のなかでも特にＧ．グラブラの抽出物に多く含まれる。
また、例えば、リコカルコンＡ、リコカルコンＢ、リコカルコンＣ、グリシルジオンＡ及びグリシルジオンＣからなる群より選ばれた少なくとも１種を、抽出物中、乾体基準で０．５重量％以上、好ましくは１重量％以上含有していることが好ましい。さらに好ましくは、リコカルコンＡ、リコカルコンＢ、リコカルコンＣ、グリシルジオンＡ及びグリシルジオンＣを、抽出物中、乾体基準で各々０．５重量％以上、好ましくは１重量％以上含有している。これらの成分は甘草のなかでも特にＧ．インフラータの抽出物に多く含まれる。
本発明のインスリン抵抗性の改善又はインスリン抵抗性症候群の予防及び／若しくは改善用組成物、並びに、本発明の炎症又は癌の予防及び／若しくは改善用組成物は、本発明のＰＰＡＲリガンド剤を含有する組成物である。すなわち、プレニルフラボノイド、プレニルフラボノイドではないカルコン誘導体、プレニルフラボノイドではないフラボノール誘導体、医薬上若しくは飲食上許容されるそれらの塩、配糖体及びエステル化体からなる群より選ばれた少なくとも１種の化合物を含有する組成物である。
上記と同様、プレニルフラボノイドとしては特に限定されないが、３−アリルクマリン誘導体、イソフラブ−３−エン誘導体、イソフラバン誘導体、イソフラバノン誘導体、イソフラボン誘導体、フラボノール誘導体、フラバノン誘導体、カルコン誘導体、ジベンゾイルメタン誘導体からなる群より選ばれた少なくとも１種の化合物が好ましい。
ここで、上記化合物は、純粋な化合物を使用しても良く、また、医薬品や食品として不適当な不純物を含有しない限り半精製又は粗製のものを使用することもできる。その場合、上記抽出物をそのまま用いても良く、あるいは、それを更に精製したものであっても良い。その形態は限定されず、例えば、保健機能食品（特定保健用食品、栄養機能食品）や健康食品、栄養補助食品などの飲食品、医薬品、医薬部外品などとして用いることができる。
本発明の組成物は、ヒトに投与してもよいし、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ブタ、ニワトリ、ヒツジ、ヤギ、マウス、ラット等の家畜又はペットに投与してもよい。
飲食品として用いる場合は、そのまま直接摂取することができ、また、公知の担体や助剤などを使用してカプセル剤、錠剤、顆粒剤、散剤など服用し易い形態に成型して摂取することができる。更に、本発明のＰＰＡＲリガンド剤以外の製剤素材を、常法により適宜添加混合しても良い。このようなものとしては特に制限されず、例えば、賦形剤、崩壊剤、滑沢剤、結合剤、酸化防止剤、着色剤、凝集防止剤、吸収促進剤、安定化剤等が挙げられる。これら成型剤における本発明のＰＰＡＲリガンド剤の含有量は０．１〜１００重量％、好ましくは１０〜９０重量％が良い。さらに、飲食物材料に混合して、チューインガム、チョコレート、キャンディー、ゼリー、ビスケット、クラッカーなどの菓子類、アイスクリーム、氷菓などの冷菓類、茶、清涼飲料、栄養ドリンク、美容ドリンクなどの飲料、うどん、中華麺、スパゲティー、即席麺などの麺類、蒲鉾、竹輪、半片などの練り製品、ドレッシング、マヨネーズ、ソースなどの調味料、マーガリン、バター、サラダ油などの油脂類、パン、ハム、スープ、レトルト食品、冷凍食品など、すべての飲食物に使用することができる。これら飲食用組成物を摂取する場合、その摂取量は本発明のＰＰＡＲリガンド剤として成人一人一日当たり０．１〜３０００ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは１〜３００ｍｇ／ｋｇ体重が良い。また、家畜やペット用の飼料やペットフードとしても使用することができ、その摂取量は本発明のＰＰＡＲリガンド剤として一日当たり０．１〜３０００ｍｇ／ｋｇ体重が好ましい。
医薬品として用いる場合は、その剤形は特に限定されず、例えば、カプセル剤、錠剤、顆粒剤、散剤、注射剤、坐剤、貼付剤などが挙げられる。製剤化においては、薬剤学的に許容される他の製剤素材、例えば、賦形剤、崩壊剤、滑沢剤、結合剤、酸化防止剤、着色剤、凝集防止剤、吸収促進剤、溶解補助剤、安定化剤などを適宜添加して調製することができる。これら製剤の投与量としては、本発明のＰＰＡＲリガンド剤として成人一人一日当たり０．１〜３０００ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは１〜３００ｍｇ／ｋｇ体重を１回ないし数回に分けて投与する。また、家畜やペット用の医薬品としても使用することができ、その投与量は本発明のＰＰＡＲリガンド剤として一日当たり０．１〜３０００ｍｇ／ｋｇ体重が好ましい。
本発明の組成物が錠剤、カプセル剤又は散剤の形態をとり、かつＰＰＡＲリガンド剤として上記抽出物を含有する場合、上記抽出物を１剤当たり０．１ｍｇ〜１０００ｍｇ含有することが好ましい。
本発明のＰＰＡＲリガンド剤は、植物由来の抽出物成分及びその類縁化合物であり、毒性が低いと考えられる。また、本発明により得られた抽出物は、甘みなどが障害になる食品にも添加することができる。さらに、従来報告されているＰＰＡＲγリガンドである高度不飽和脂肪酸類に比べて安定性が高く、食品や医薬組成物に適した形状という点も優れている。
発明を実施するための最良の形態
以下、実施例を挙げて本発明をさらに具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
（実施例１）甘草からの化合物の抽出、単離（１）
甘草（Ｇ．ウラレンシス：東北甘草）の微粉砕品１．２ｋｇを酢酸エチル５．５Ｌに浸し室温・遮光にて７日間抽出した後、濾過により抽出液を得た。その抽出液を減圧濃縮して溶媒を除去し、抽出物７４．０ｇを得た。その抽出物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（１５００ｍｌ）に付し、クロロホルム：メタノール＝１９：１（ｖ／ｖ）にて溶出した画分を得た。その溶出画分を減圧濃縮して溶媒を除去し、粗画分５５．４ｇを得た。その粗画分から、シリカゲルカラムクロマトグラフィー、ＯＤＳシリカゲルカラムクロマトグラフィー、ＯＤＳカラムを装着した高速液体クロマトグラフィー、ゲル濾過カラムクロマトグラフィー、分取薄相クロマトグラフィーを繰り返すことにより精製し、化合物１（２２５ｍｇ）、化合物２（８０．７ｍｇ）、化合物３（１９．６ｍｇ）、化合物４（２２．２ｍｇ）、化合物５（３．９ｍｇ）、化合物６（７２．８ｍｇ）、化合物７（２８．３ｍｇ）、化合物８（１２．１ｍｇ）、化合物９（６．８ｍｇ）、化合物１０（８．５ｍｇ）、化合物１１（５８．７ｍｇ）、化合物１２（１０．２ｍｇ）を得た。
構造解析の結果、化合物１〜３及び５〜１２は既知化合物であり、それぞれ化合物１はグリシクマリン（ｇｌｙｃｙｃｏｕｍａｒｉｎ）、化合物２はグリシリン（ｇｌｙｃｙｒｉｎ）、化合物３はグリウラリンＢ（ｇｌｙｕｒａｌｌｉｎ  Ｂ）、化合物５はエチナチン（ｅｃｈｉｎａｔｉｎ）、化合物６はイソリコフラボノール（ｉｓｏｌｉｃｏｆｌａｖｏｎｏｌ）、化合物７はデヒドログリアスペリンＣ（ｄｅｈｙｄｒｏｇｌｙａｓｐｅｒｉｎ  Ｃ）、化合物８はグリアスペリンＢ（ｇｌｙａｓｐｅｒｉｎ  Ｂ）、化合物９はグリチルイソフラバノン（ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｓｏｆｌａｖａｎｏｎｅ）、化合物１０はルピワイテオン（ｌｕｐｉｗｉｇｈｔｅｏｎｅ）、化合物１１はグリアスペリンＤ（ｇｌｙａｓｐｅｒｉｎ  Ｄ）、化合物１２はセミリコイソフラボンＢ（ｓｅｍｉｌｉｃｏｉｓｏｆｌａｖｏｎｅ  Ｂ）と同定した。尚、これらの化合物の構造同定において、化合物１はＳ．Ｄｅｍｉｚｕ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｂｕｌｌｅｔｉｎ，３６，３４７４〜３４７９（１９８８）、化合物２はＴ．Ｋｉｎｏｓｈｉｔａ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｂｕｌｌｅｔｉｎ，２６，１３５〜１４０（１９７８）、化合物３及び７はＭ．Ｓｈｉｂａｎｏ，ｅｔ  ａｌ．，Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｅｓ，４５，２０５３〜２０６０（１９９７）、化合物５はＫ．Ｋａｊｉｙａｍａ，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，３１，３２２９〜３２３２（１９９２）、化合物６及び９はＴ．Ｈａｔａｎｏ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｂｕｌｌｅｔｉｎ，３６，２０９０〜２０９７（１９８８）、化合物８及び１１はＬ．Ｚｅｎｇ，ｅｔ  ａｌ．，Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｅｓ，３４，５７５〜５８７（１９９２）、化合物１０はＹ．Ｈａｓｈｉｄｏｋｏ，ｅｔ  ａｌ．，Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ  ａｎｄ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，５０，１７９７〜１８０７（１９８６）、化合物１２はＦ．Ｋｉｕｃｈｉ，ｅｔ  ａｌ．，Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｅｓ，３１，６２９〜６３６（１９９０）に記載されたスペクトルデータを参考にした。
化合物４は新規化合物であり、二次元ＮＭＲ（１Ｈ−１Ｈ  ＣＯＳＹ，ＨＭＱＣ，ＨＭＢＣ，ＰＨＮＯＥＳＹ）を中心としたスペクトル解析により、その構造を３−（２’，４’−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）−６−（３”，３”−ｄｉｍｅｔｈｙｌａｌｌｙｌ）−５，７−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙ−２Ｈ−ｃｈｒｏｍｅｎｅと決定し、デヒドログリアスペリンＤ（ｄｅｈｙｄｒｏｇｌｙａｓｐｅｒｉｎ  Ｄ）と命名した。
化合物４の性状及びスペクトルデータを以下に示す。
Ｄｅｈｙｄｒｏｇｌｙａｓｐｅｒｉｎ  Ｄ，褐色粉末状，Ｃ２２Ｈ２４Ｏ５．ＥＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ：３６８．１６１０［Ｍ］＋（計算値，Ｃ２２Ｈ２４Ｏ５：３６８．１６２４）．
ＵＶλｍａｘ（メタノール）ｎｍ：３３０（ｌｏｇε＝４．２５），２４３  ｓｈ（ｌｏｇε＝４．２１）．
ＩＲ（ＫＢｒ錠）ｃｍ−１：３３７５，２９２９，１６１３，１５１６，１４５８，１３０８，１１９８，１１６４，１１１４，１０９２，１０２４，９７８，８３７．
１Ｈ−ＮＭＲ（重ジメチルスルホキシド）ｐｐｍ：７．０６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，Ｈ−６’），６．６８（１Ｈ，ｓ，Ｈ−４），６．３４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，Ｈ−３’），６．３３（１Ｈ，ｓ，Ｈ−８），６．２６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．４，２．３Ｈｚ，Ｈ−５’），５．０９（１Ｈ，ｂｒ  ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，Ｈ−１０），４．９０（２Ｈ，ｓ，Ｈ−２），３．７５（３Ｈ，ｓ，Ｃ−７−ＯＭｅ），３．６７（３Ｈ，ｓ，Ｃ−５−ＯＭｅ），３．１８（２Ｈ，ｂｒ  ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，Ｈ−９），１．７１（３Ｈ，ｓ，Ｍｅ−１３），１．６３（３Ｈ，ｓ，Ｍｅ−１２）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（重ジメチルスルホキシド）ｐｐｍ：６７．９（Ｃ−２），１２８．８（Ｃ−３），１１４．７（Ｃ−４），１１０．４（Ｃ−４ａ），１５４．９（Ｃ−５），１１５．６（Ｃ−６），１５８．０（Ｃ−７），９５．８（Ｃ−８），１５３．２（Ｃ−８ａ），２２．６（Ｃ−９），１２４．１（Ｃ−１０），１３０．４（Ｃ−１１），２６．０（Ｃ−１２），１８．１（Ｃ−１３），１１６．８（Ｃ−１’），１５６．７（Ｃ−２’），１０３．３（Ｃ−３’），１５８．７（Ｃ−４’），１０７．４（Ｃ−５’），１２９．２（Ｃ−６’），６２．３（Ｃ−５−ＯＭｅ），５６．３（Ｃ−７−ＯＭｅ）．
（実施例２）甘草からの化合物の抽出、単離（２）
実施例１と同様に、甘草（Ｇ．ウラレンシス）の微粉砕品よりエタノール抽出して各種クロマトグラフィーを行い、化合物１３〜１７を得た。構造解析の結果、化合物１３はイソリクイリチゲニン（ｉｓｏｌｉｑｕｉｒｉｔｉｇｅｎｉｎ）、化合物１４はケンプフェロール３−Ｏ−メチルエステル（ｋａｅｍｐｆｅｒｏｌ３−Ｏ−ｍｅｔｈｙｌｅｓｔｅｒ）、化合物１５はリコフラボノール（ｌｉｃｏｆｌａｖｏｎｏｌ）、化合物１６はトパゾリン（ｔｏｐａｚｏｌｉｎ）、化合物１７はグリチルイソフラボン（ｇｌｙｃｙｒｒｉｓｏｆｌａｖｏｎｅ）と同定した。
（実施例３）甘草からの化合物の抽出、単離（３）
実施例１又は２と同様にして、甘草（Ｇ．グラブラ）の微粉砕品よりエタノール抽出して化合物１８〜２３を、甘草（Ｇ．インフラータ）の微粉砕品よりエタノール抽出して化合物２４〜２８を得た。構造解析の結果、化合物１８はグラブリジン（ｇｌａｂｒｉｄｉｎ）、化合物１９はグラブレン（ｇｌａｂｒｅｎｅ）、化合物２０はヒスパグラブリジンＢ（ｈｉｓｐａｇｌａｂｒｉｄｉｎ  Ｂ）、化合物２１は４’−Ｏ−メチルグラブリジン（４’−Ｏ−ｍｅｔｈｙｌｇｌａｂｒｉｄｉｎ）、化合物２２は３’−ヒドロキシ−４’−Ｏ−メチルグラブリジン（３’−ｈｙｄｒｏｘｙ−４’−Ｏ−ｍｅｔｈｙｌｇｌａｂｒｉｄｉｎ）、化合物２３はグラブロール（ｇｌａｂｒｏｌ）、化合物２４はリコカルコンＡ（ｌｉｃｏｃｈａｌｃｏｎｅ  Ａ）、化合物２５はリコカルコンＢ（ｌｉｃｏｃｈａｌｃｏｎｅ  Ｂ）、化合物２６はリコカルコンＣ（ｌｉｃｏｃｈａｌｃｏｎｅ  Ｃ）、化合物２７はグリシルジオンＡ（ｇｌｙｃｙｒｄｉｏｎｅ  Ａ）、化合物２８はグリシルジオンＣ（ｇｌｙｃｙｒｄｉｏｎｅ  Ｃ）と同定した。
化合物１〜２８の構造式を表１０〜１３に示す。
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（実施例４）ＰＰＡＲγリガンド活性の測定
ＣＶ−１細胞（雄性アフリカミドリザル腎臓由来の培養細胞）を９６穴培養プレートに６×１０３ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌとなるように植え込み、３７℃、５％ＣＯ２条件下で２４時間培養した。培地には、１０％ＦＢＳ（ウシ胎仔血清）、１０ｍｌ／Ｌペニシリン・ストレプトマイシン溶液（それぞれ５０００ＩＵ／ｍｌ、５０００μｇ／ｍｌ、ＧＩＢＣＯ社）、３７ｍｇ／Ｌアスコルビン酸（和光純薬工業株式会社）を含むＤＭＥＭ（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ  Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｅａｇｌｅ  Ｍｅｄｉｕｍ：ＧＩＢＣＯ社）を用いた。細胞をＯＰＴＩ−ＭＥＭ（ＧＩＢＣＯ社）で洗浄した後、ｐＭ−ｍＰＰＡＲγと４×ＵＡＳｇ−ｌｕｃをリポフェクトアミン・プラス（ＧＩＢＣＯ社）を用いてトランスフェクションした。尚、ｐＭ−ｍＰＰＡＲγは酵母由来転写因子ＧＡＬ４遺伝子（アミノ酸配列１〜１４７）とマウスＰＰＡＲγリガンド結合部位遺伝子（アミノ酸配列１７４〜４７５）を結合したキメラ蛋白発現用プラスミドであり、４×ＵＡＳｇ−ｌｕｃはルシフェラーゼ遺伝子の上流にＧＡＬ４の応答配列（ＵＡＳｇ）を４回組み込んだレポーター・プラスミドである。トランスフェクションの約２４時間後、サンプルを含む培地に交換し、２４時間培養した（ｎ＝４）。サンプルはジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解したものを、無処置対照にはＤＭＳＯを用い、培地に１／１０００量添加した。細胞をＣａ，Ｍｇ含有リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ＋）で洗浄した後、ルックライト（Ｐａｃｋａｒｄ社）を添加し、トップカウント・マイクロプレートシンチレーション／ルミネッセンスカウンター（Ｐａｃｋａｒｄ社）にてルシフェラーゼの発光強度を測定した。
測定群と同様に、コントロール群としてｐＭ−ｍＰＰＡＲγの代わりにｐＭ（ＰＰＡＲγリガンド結合部位遺伝子を除去したプラスミド）を用いて測定した。各サンプルについて、測定群及びコントロール群の発光強度の平均値（ｎ＝４）の比（測定群／コントロール群）を算出し、無処置対照に対する比活性をサンプルのＰＰＡＲγリガンド活性とした。
実施例１〜３で得た化合物１〜２８のＰＰＡＲγリガンド活性を測定した結果を表１４〜１７に示す。また比較化合物として、甘草の成分であるグリチルリチン（グリチルリチン酸：ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚｉｃ  ａｃｉｄ：和光純薬工業株式会社）、グリチルレチン酸（ｇｌｙｃｙｒｒｈｅｔｉｎｉｃ  ａｃｉｄ：和光純薬工業株式会社）、クエルセチン（ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ：Ｓｉｇｍａ社）のＰＰＡＲγリガンド活性を測定した。
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陽性対照としてトログリタゾン（三共株式会社）を用い、各化合物のＰＰＡＲγリガンド活性を比較した。その結果、化合物１〜１９、２１〜２４、２６及び２７において、トログリタゾン０．５μＭよりも強いＰＰＡＲγリガンド活性が認められた。化合物２０、２５及び２８では、トログリタゾン０．５μＭよりもやや弱いが、ＰＰＡＲγリガンド活性が認められた。しかし、甘草の主要成分であり親水性成分であるグリチルリチン、グリチルリチンの糖残基が加水分解されたグリチルレチン酸、及びクエルセチン（化合物６のプレニル基がＯＨ基に置換したフラボノール誘導体）には、ＰＰＡＲγリガンド活性が認められなかった。尚、クエルセチンにＰＰＡＲγリガンド活性がないことは、文献情報（Ｌｉａｎｇ，Ｙ，Ｃ．，ｅｔ  ａｌ．，ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｅｒｓ，４９６，１２〜１８，２００１）とも一致する。
（実施例５）２型糖尿病モデル・マウスに対する効果
遺伝的に肥満を呈し２型糖尿病を発症するモデル動物であるＫＫ−Ａｙマウスを用いて、化合物２の糖尿病に対する効果を評価した。陽性対照には、インスリン抵抗性改善薬・２型糖尿病治療薬であるピオグリタゾンを用いた。
ＫＫ−Ａｙマウス（♀，１５週齢）を３群（各群５匹）に分け、粉末ＣＥ−２（日本クレア）を基本飼料として、無添加群（対照群）、ピオグリタゾン添加群、化合物２添加群を自由摂取にて与えた。ピオグリタゾンは、アクトス錠３０（１錠中にピオグリタゾン３０ｍｇを含有、武田薬品工業株式会社）をメノウ乳鉢にて粉砕し、ピオグリタゾン添加量が０．０２％となるように基本飼料に添加した。化合物２は、実施例１と同様にして調製したものを添加量０．１％となるように基本飼料に添加した。投与前日、及び投与後４日目に、マウス尾静脈より少量採血し、簡易式血糖測定器グルテストエース（株式会社三和化学研究所）を用いて、血糖値を測定した。その結果を表１８に示す。
混餌投与を１週間した後、マウスを一晩絶食し、糖負荷試験を行った。すなわち、絶食したマウスに、０．５％カルボキシメチルセルロース−ナトリウム（ＣＭＣ−Ｎａ）溶液に懸濁したピオグリタゾンを２０ｍｇ／ｋｇ、又は化合物２を１００ｍｇ／ｋｇで強制経口投与した。無添加群（対照群）は０．５％ＣＭＣ−Ｎａ溶液を５ｍｌ／ｋｇで投与した。投与３０分後に、マウスに４０％スクロース溶液を２ｇ／ｋｇで負荷した。糖負荷前、糖負荷後３０分、１時間、２時間目にマウス尾静脈より少量採血し、簡易式血糖測定器グルテストエース（株式会社三和化学研究所）を用いて、血糖値を測定した。その結果を表１９に示す。
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表１８から明らかなように、ピオグリタゾンと同様に、化合物２を添加した餌を与えたマウスの血糖値（平均±ＳＥ，ｎ＝５）は、投与４日目で統計的有意に血糖値を低下させた。また、表１９から明らかなように、化合物２は、ピオグリタゾンと同様に、糖負荷後の急激な血糖値の上昇を統計的有意に抑制した。これらの結果から、化合物２は血糖低下作用及び血糖上昇抑制作用を有していることが確認され、ピオグリタゾンと同様にインスリン抵抗性改善作用を有していることが示唆された。
（実施例６）
甘草（Ｇ．ウラレンシス：東北甘草）の微粉砕品（株式会社カネカサンスパイス）５００ｇにエタノール（９９．５容量％）５ｋｇを加え、２５℃で５時間抽出した後、残渣を濾過して抽出液を得た。この抽出液から減圧下で溶剤を除去し、黄褐色〜黒褐色の甘草抽出物４５ｇを得た。この甘草抽出物は良好なＰＰＡＲγリガンド活性を示した。この甘草抽出物に含まれるＰＰＡＲγリガンド活性成分及びグリチルリチンの含量を表２０に示した。
尚、これら活性成分とグリチルリチンの含量は下記条件のＨＰＬＣ分析により求めた。
（グリチルリチン分析条件）
カラム；Ｊ’ｓｐｈｅｒｅ  ＯＤＳ−Ｈ８０（ワイエムシィ）４．６ｍｍ（内径）×２５０ｍｍ（長さ）、カラム温度；４０℃、移動相；アセトニトリル：１０ｍＭリン酸水溶液＝３３：６７（ｖ／ｖ）、流速；１ｍｌ／ｍｉｎ、検出波長；２５４ｎｍ、グリチルリチンの保持時間；２７．１ｍｉｎ。
（活性成分分析条件）
カラム；Ｊ’ｓｐｈｅｒｅ  ＯＤＳ−Ｈ８０（ワイエムシィ）４．６ｍｍ（内径）×２５０ｍｍ（長さ）、カラム温度；４０℃、移動相；１０ｍＭリン酸水溶液に対してアセトニトリルの比率を分析開始１５ｍｉｎまで３５％で一定とし、１５ｍｉｎ以降６５ｍｉｎ後に７０％となるように一定比率で上昇させ、６５ｍｉｎ以降７０ｍｉｎまで７０％で一定とするグラジェント条件、流速；１ｍｌ／ｍｉｎ、検出波長；２５４ｎｍ。各成分の保持時間は、リコカルコンＢが５．２ｍｉｎ、グリチルイソフラバノンが１３．３ｍｉｎ、イソリクイリチゲニンが１４．７ｍｉｎ、グリシクマリンが３２．７ｍｉｎ、セミリコイソフラボンＢが３４．２ｍｉｎ、グラブレンが３５．９ｍｉｎ、グリチルイソフラボンが３６．３ｍｉｎ、デヒドログリアスペリンＣが３７．２ｍｉｎ、リコカルコンＣが３９．１ｍｉｎ、リコカルコンＡが４０．２ｍｉｎ、グラブリジンが４４．７ｍｉｎ、グリシリンが４８．１ｍｉｎ、グリアスペリンＢが５１．１ｍｉｎ、グラブロールが５１．８ｍｉｎ、グリアスペンＤが５２．７ｍｉｎ、グリシルジオンＡが５３．４ｍｉｎ、３’−ヒドロキシ−４’−Ｏ−メチルグラブリジンが５３．５ｍｉｎ、デヒドログリアスペリンＤが５５．２ｍｉｎ、グリウラリンＢが５８．７ｍｉｎ、４’−Ｏ−メチルグラブリジンが５９．８ｍｉｎ、グリシルジオンＣが６３．０ｍｉｎ、ヒスパグラブリジンＢが７４．１ｍｉｎ。
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（実施例７）
エタノールで抽出する代わりに、アセトンで抽出すること以外は実施例６と同様にして甘草抽出物１８ｇを得た。得られた甘草抽出物は良好なＰＰＡＲγリガンド活性を示した。また、この甘草抽出物に含まれる活性成分及びグリチルリチンの含量を実施例６と同様に調べて表２１に示した。
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（実施例８）
エタノールで抽出する代わりに、酢酸エチルで抽出すること以外は実施例６と同様にして甘草抽出物１８ｇを得た。得られた甘草抽出物は良好なＰＰＡＲγリガンド活性を示した。また、この甘草抽出物に含まれる活性成分及びグリチルリチンの含量を実施例６と同様に調べて表２２に示した。
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（比較例１）
エタノールで抽出する代わりに水で抽出すること以外は実施例６と同様にして甘草抽出物を得た。この甘草抽出物はＰＰＡＲγリガンド活性を示さなかった。
（実施例９）
甘草（Ｇ．ウラレンシス：東北甘草）の微粉砕品（株式会社カネカサンスパイス）５００ｇに５ｋｇの水を加えて、６０℃で１日抽出した後、濾過して残渣を得、それを減圧乾燥させた。得られた前抽出残渣にエタノール（９９．５容量％）２．５ｋｇを加え、２５℃で５時間抽出した後、残渣を濾過して抽出液を得た。この抽出液から減圧下で溶剤を除去し、黄褐色〜黒褐色の甘草抽出物４７ｇを得た。この甘草抽出物は良好なＰＰＡＲγリガンド活性を示した。この甘草抽出物に含まれるＰＰＡＲγリガンド活性成分及びグリチルリチンの含量を表２３に示した。
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（実施例１０）
甘草（Ｇ．ウラレンシス：東北甘草）の切断品（甘草の全表面積に占める皮の表面積の割合が約８割）から、実施例６と同様に９９．５及び９５．０容量％のエタノール（含水率は０．５及び５．０容量％）で抽出し、甘草抽出物それぞれ２５．８ｇ、２９．５ｇを得た。これらの甘草抽出物は良好なＰＰＡＲγリガンド活性を示した。これらの甘草抽出物に含まれるＰＰＡＲγリガンド活性及びグリチルリチンの含量を表２４に示した。
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（実施例１１）
甘草（Ｇ．グラブラ）の微粉砕品から、実施例６と同様にして甘草抽出物を得た。得られた甘草抽出物は良好なＰＰＡＲγリガンド活性を示した。また、この甘草抽出物に含まれる活性成分及びグリチルリチンの含量を実施例６と同様に調べて表２５に示した。
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（実施例１２）
甘草（Ｇ．インフラータ）の微粉砕品から、実施例６と同様にして甘草抽出物を得た。得られた甘草抽出物は良好なＰＰＡＲγリガンド活性を示した。また、この甘草抽出物に含まれる活性成分及びグリチルリチンの含量を実施例６と同様に調べて表２６に示した。
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（実施例１３）
実施例６で得られた甘草抽出物にトウモロコシ澱粉、乳糖、カルボキシルメチルセルロース、ステアリン酸マグネシウムを混合し、さらにポリビニルピロリドンの水溶液を結合剤として加え、常法により顆粒化した。これにタルクを加え混合した後、打錠し下記組成の錠剤を得た。
甘草抽出物                    １０重量部
トウモロコシ澱粉              ２５重量部
乳糖                          １５重量部
カルボキシルメチルセルロース  １０重量部
ステアリン酸マグネシウム        ３重量部
ポリビニルピロリドン            ５重量部
タルク                        １０重量部
産業上の利用可能性
本発明によれば、ペルオキシソーム増殖剤応答性受容体（ＰＰＡＲ）リガンド剤、及びそれを含有する組成物が簡便且つ効率的に提供される。本発明の組成物は、インスリン抵抗性の改善、又は、インスリン抵抗性症候群の予防及び／若しくは改善剤として有用である。
【国際調査報告】
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