(57)【要約】トロンボポエチンレセプター活性化作用が有効な疾患の予防・治療・改善薬を提供する。式（１）で表されるトロンボポエチンレセプター活性化剤。2004016264.tif 000015［式中、Ｒ１及びＲ３はそれぞれ独立に、水素原子、ＳＯ３Ｈ、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ１−６アルキルカルボニル基又はＣ６−１８アリールカルボニル基（該Ｃ１−６アルキル基、Ｃ１−６アルキルカルボニル基及びＣ６−１８アリールカルボニル基は、ハロゲン原子、水酸基、Ｃ２−６アルケニル基、Ｃ１−６アルコキシ基、Ｃ１−６アルコキシカルボニル基、Ｃ６−１８アリール基、２−ピリジル基、３−ピリジル基、４−ピリジル基、２−フラニル基、３−フラニル基、２−チエニル基、３−チエニル基又はＮＲ９Ｒ１０で任意に置換されていてもよい。）を意味し、Ｒ２、Ｒ４及びＲａはそれぞれ独立に、水素原子、水酸基又はＣ１−６アルコキシ基を意味する。］
2004016264.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（１）
2004016264.tif 000012
［式中、Ｒ１及びＲ３はそれぞれ独立に、水素原子、ＳＯ３Ｈ、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ１−６アルキルカルボニル基又はＣ６−１８アリールカルボニル基（該Ｃ１−６アルキル基、Ｃ１−６アルキルカルボニル基及びＣ６−１８アリールカルボニル基は、ハロゲン原子、水酸基、Ｃ２−６アルケニル基、Ｃ１−６アルコキシ基、Ｃ１−６アルコキシカルボニル基、Ｃ６−１８アリール基、２−ピリジル基、３−ピリジル基、４−ピリジル基、２−フラニル基、３−フラニル基、２−チエニル基、３−チエニル基（該Ｃ６−１８アリール基、２−ピリジル基、３−ピリジル基、４−ピリジル基、２−フラニル基、３−フラニル基、２−チエニル基及び３−チエニル基は、ハロゲン原子又はＣ１−６アルキル基で任意に置換されていてもよい。）又はＮＲ９Ｒ１０（式中、Ｒ９及びＲ１０はそれぞれ独立に水素原子若しくはＣ１−６アルキル基（該Ｃ１−６アルキル基は、Ｃ６−１８アリール基で任意に置換されていてもよい。）を意味するか又はＲ９及びＲ１０が一緒になって−（ＣＨ２）ｎＸ（ＣＨ２）ｍ−（式中、Ｘは、ＣＲ１１Ｒ１２（式中、Ｒ１１及びＲ１２はそれぞれ独立に水素原子又はＣ１−６アルキル基（該Ｃ１−６アルキル基は、Ｃ６−１８アリール基で任意に置換されていてもよい。）を意味する。）、ＮＲ１３（式中、Ｒ１３は、水素原子又はＣ１−６アルキル基（該Ｃ１−６アルキル基は、Ｃ６−１８アリール基で任意に置換されていてもよい。）を意味する。）、Ｏ又はＳを意味し、ｎは、１、２又は３を意味し、ｍは、１、２又は３を意味するが、ｎ＋ｍは、３、４又は５である。）を意味する。）で任意に置換されていてもよい。）を意味し、Ｒ２、Ｒ４及びＲａはそれぞれ独立に、水素原子、水酸基又はＣ１−６アルコキシ基を意味する。］で表されるトロンボポエチンレセプター活性化剤。
【請求項２】
Ｒ１及びＲ３がそれぞれ独立に、水素原子、ＳＯ３Ｈ、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ１−６アルキルカルボニル基又はＣ６−１８アリールカルボニル基（該Ｃ１−６アルキル基、Ｃ１−６アルキルカルボニル基及びＣ６−１８アリールカルボニル基は、水酸基で任意に置換されていてもよい。）である請求項１記載のトロンボポエチンレセプター活性化剤。
【請求項３】
Ｒ１及びＲ３がそれぞれ独立に、水素原子、ＳＯ３Ｈ、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ１−６アルキルカルボニル基又はＣ６−１８アリールカルボニル基（該Ｃ１−６アルキル基、Ｃ１−６アルキルカルボニル基及びＣ６−１８アリールカルボニル基は、ＮＲ９Ｒ１０（式中、Ｒ９及びＲ１０はそれぞれ独立に水素原子若しくはＣ１−６アルキル基（該Ｃ１−６アルキル基は、Ｃ６−１８アリール基で任意に置換されていてもよい。）を意味するか又はＲ９及びＲ１０が一緒になって−（ＣＨ２）ｎＸ（ＣＨ２）ｍ−（式中、Ｘは、ＣＲ１１Ｒ１２（式中、Ｒ１１及びＲ１２はそれぞれ独立に水素原子又はＣ１−６アルキル基（該Ｃ１−６アルキル基は、Ｃ６−１８アリール基で任意に置換されていてもよい。）を意味する。）、ＮＲ１３（式中、Ｒ１３は、水素原子又はＣ１−６アルキル基（該Ｃ１−６アルキル基は、Ｃ６−１８アリール基で任意に置換されていてもよい。）を意味する。）、Ｏ又はＳを意味し、ｎは、１、２又は３を意味し、ｍは、１、２又は３を意味するが、ｎ＋ｍは、３、４又は５である。）を意味する。）で任意に置換されていてもよい。）である請求項１記載のトロンボポエチンレセプター活性化剤。
【請求項４】
Ｒ１及びＲ３がそれぞれ独立に、水素原子又はＣ１−６アルキル基である請求項１記載のトロンボポエチンレセプター活性化剤。
【請求項５】
Ｒ１及びＲ３がそれぞれ独立に、水素原子又はメチル基であり、Ｒ２及びＲ４がそれぞれ独立に、水素原子、水酸基又はメトキシ基である請求項４記載のトロンボポエチンレセプター活性化剤。
【請求項６】
Ｒ２が水素原子である請求項１、請求項２、請求項３、請求項４又は請求項５記載のトロンボポエチンレセプター活性化剤。
【請求項７】
Ｒ４及びＲａがそれぞれ独立に、水素原子又はメトキシ基である請求項６記載のトロンボポエチンレセプター活性化剤。
【請求項８】
請求項１記載のトロンボポエチンレセプター活性化剤、そのプロドラッグ、若しくは製薬上許容される塩又はそれらの溶媒和物を有効成分として含有するトロンボポエチンレセプター活性化作用が有効な疾患の予防・治療・改善薬。
【請求項９】
請求項１記載のトロンボポエチンレセプター活性化剤、そのプロドラッグ、若しくは製薬上許容される塩又はそれらの溶媒和物を有効成分として含有する血小板増多剤。
【請求項１０】
請求項２記載のトロンボポエチンレセプター活性化剤、そのプロドラッグ、若しくは製薬上許容される塩又はそれらの溶媒和物を有効成分として含有する血小板増多剤。
【請求項１１】
請求項３記載のトロンボポエチンレセプター活性化剤、そのプロドラッグ、若しくは製薬上許容される塩又はそれらの溶媒和物を有効成分として含有する血小板増多剤。
【請求項１２】
請求項４記載のトロンボポエチンレセプター活性化剤、そのプロドラッグ、若しくは製薬上許容される塩又はそれらの溶媒和物を有効成分として含有する血小板増多剤。
【請求項１３】
請求項５記載のトロンボポエチンレセプター活性化剤、そのプロドラッグ、若しくは製薬上許容される塩又はそれらの溶媒和物を有効成分として含有する血小板増多剤。
【請求項１４】
請求項６記載のトロンボポエチンレセプター活性化剤、そのプロドラッグ、若しくは製薬上許容される塩又はそれらの溶媒和物を有効成分として含有する血小板増多剤。
【請求項１５】
請求項７記載のトロンボポエチンレセプター活性化剤、そのプロドラッグ、若しくは製薬上許容される塩又はそれらの溶媒和物を有効成分として含有する血小板増多剤。
【請求項１６】
バシペトスポラ（Ｂａｓｉｐｅｔｏｓｐｏｒａ）属に属する微生物を培養し、その培養液から式（２）
2004016264.tif 000013
（式中、Ｒ５及びＲ７はそれぞれ独立に、水素原子、又はメチル基を意味し、Ｒ６、Ｒ８及びＲｂはそれぞれ独立に、水素原子、水酸基又はメトキシ基を意味する。）で表される化合物を採取することを特徴とする該化合物の製造法。
【請求項１７】
微生物がバシペトスポラ・エスピー（Ｂａｓｉｐｅｔｏｓｐｏｒａ  ｓｐ．）である請求項１６記載の製造法。
【請求項１８】
受託番号ＦＥＲＭ  Ｐ−１８９４０として寄託されている微生物バシペトスポラ・エスピー（Ｂａｓｉｐｅｔｏｓｐｏｒａ  ｓｐ．）Ｎｏ．１１４２株。
【請求項１９】
式（３）
2004016264.tif 000014
で表される化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】  本発明は、トロンボポエチンレセプターに親和性及びアゴニスト作用を有することによりトロンボポエチンレセプター活性化作用が有効な疾患の予防・治療・改善薬に関するものである。具体的には、例えば、造血幹細胞、巨核球前駆細胞、巨核球細胞の分化増殖を促進し、血小板増多作用を示しうる化合物あるいは血管内皮および内皮前駆細胞の分化増殖を促進し血管新生療法に用いたり、抗動脈硬化作用を示しうる化合物を構成成分とする医薬組成物ならびにそれらの製造方法に関するものである。
【背景技術】  トロンボポエチンは３３２個のアミノ酸からなるサイトカインであり、レセプターを介して造血幹細胞、巨核球前駆細胞、巨核球細胞の分化、増殖を刺激することにより血小板産生を亢進することから血液疾患の病態に対する薬剤として期待されている。また最近では、血管内皮および内皮前駆細胞の分化増殖を促進することが報告され（Ｍｉｃｒｏｖａｓｃ．Ｒｅｓ．，１９９９：５８，１０８−１１３、Ｃｉｒｃ．Ｒｅｓ．，１９９９：８４，７８５−７９６、Ｂｌｏｏｄ  ２００１：９８，７１ａ）、血管新生療法や抗動脈硬化，心血管イベント抑制などが期待されている。現在までにトロンボポエチンレセプターを介して血小板産生を調節する生理活性物質としては、トロンボポエチンそのもののほか、特開平１０−７２４９２号公報（ＷＯ９６／４０７５０）、ＷＯ９６／４０１８９、ＷＯ９８／２５９６５等に記載のトロンボポエチンレセプターに親和性を有する低分子ペプチドが知られている。又、ペプチド誘導体ではない低分子化合物でトロンボポエチンレセプターを介して血小板産生を促進する化合物の探索も試みられており、トロンボポエチンレセプターに親和性のある低分子化合物の報告が数件なされている。
１）北陸製薬より出願されている１，４−ベンゾチアゼピン誘導体（特開平１１−１４７７号公報、特開平１１−１５２２７６号公報）
２）塩野義製薬より出願されている特許の国際公開公報（国際公開第０１／０７４２３号パンフレット、国際公開第０１／５３２６７号パンフレット、国際公開第０２／０５９０９９号パンフレット、国際公開第０２／０５９１００号パンフレット）
３）スミスクライン  ビーチャム（Ｓｍｉｔｈｋｌｉｎｅ  Ｂｅｅｃｈａｍ  Ｃｏｒｐ）より出願されている特許の国際公開公報（国際公開第００／３５４４６号パンフレット、国際公開第００／６６１１２号パンフレット、国際公開第０１／３４５８５号パンフレット、国際公開第０１／１７３４９号パンフレット、国際公開第０１／３９７７３号パンフレット、国際公開第０１／２１１８０号パンフレット、国際公開第０１／８９４５７号パンフレット、国際公開第０２／４９４１３号パンフレット、国際公開第０２／０８５３４３号パンフレット）
４）鳥居薬品より出願されている国内公報（特開２００１−９７９４８号公報）
５）Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ  ＧＭＢＨより出願されている国際公開公報（国際公開第９９／１１２６２号パンフレット）
６）山之内製薬より出願されている国際公開公報（国際公開第０２／０６２７５号パンフレット）
一方、キサントシリン類縁体は広く抗菌作用を有することが知られており、又それ以外にも、抗ウイルス作用、アロマターゼ阻害作用（特開平０７−６９８８３号公報）、抗腫瘍剤（特開平０２−３０４０５８号公報及び特開平０４−１８２４２７号公報）、駆虫剤（特開平０２−４０３２４号公報）、プロスタグランジン合成阻害作用、血小板凝集抑制作用等があることが報告されている。しかし、トロンボポエチンレセプター親和性及びアゴニスト活性については何ら報告されていなかった。
トロンボポエチンやトロンボポエチンレセプターに親和性を有する低分子ペプチドは、消化管で容易に分解されてしまう可能性が高く、通常、経口投与は困難であり、トロンボポエチンそのものには抗トロンボポエチン抗体の出現が報告されている。
又、ペプチド誘導体ではない低分子化合物は、経口投与が可能である可能性が高いものの、未だ実用可能な薬剤が上市されるに至ってはいない。
そのため、優れたトロンボポエチンレセプター親和性及びアゴニスト活性を有し、トロンボポエチンレセプター活性化作用が有効な疾患の予防・治療・改善薬となり、且つ経口投与も可能な低分子化合物が望まれていた。具体的には、例えば、造血幹細胞、巨核球前駆細胞、巨核球細胞の分化増殖を促進し、血小板増多剤、あるいは他の血球系細胞増多剤となりうる低分子化合物、あるいは血管内皮および内皮前駆細胞の分化増殖を促進し血管新生療法に用いたり、動脈硬化を予防・治療する薬剤となりうる低分子化合物が望まれていた。
【発明の開示】
本発明者らはトロンボポエチンレセプター親和性及びアゴニスト活性を有する低分子化合物を見出すべく、鋭意検討したところ、意外にも従来公知であるキサントシリンおよびその類縁体及びそれらの誘導体がトロンボポエチンレセプターに親和性及びアゴニスト作用を有することを見出し、又、キサントシリン類縁体の新規な製造方法も見出し、本発明を完成するに至った。
即ち、本発明は式（１）
2004016264.tif 000003
［式中、Ｒ１及びＲ３はそれぞれ独立に、水素原子、ＳＯ３Ｈ、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ１−６アルキルカルボニル基又はＣ６−１８アリールカルボニル基（該Ｃ１−６アルキル基、Ｃ１−６アルキルカルボニル基及びＣ６−１８アリールカルボニル基は、ハロゲン原子、水酸基、Ｃ２−６アルケニル基、Ｃ１−６アルコキシ基、Ｃ１−６アルコキシカルボニル基、Ｃ６−１８アリール基、２−ピリジル基、３−ピリジル基、４−ピリジル基、２−フラニル基、３−フラニル基、２−チエニル基、３−チエニル基（該Ｃ６−１８アリール基、２−ピリジル基、３−ピリジル基、４−ピリジル基、２−フラニル基、３−フラニル基、２−チエニル基及び３−チエニル基は、ハロゲン原子又はＣ１−６アルキル基で任意に置換されていてもよい。）又はＮＲ９Ｒ１０（式中、Ｒ９及びＲ１０はそれぞれ独立に水素原子若しくはＣ１−６アルキル基（該Ｃ１−６アルキル基は、Ｃ６−１８アリール基で任意に置換されていてもよい。）を意味するか又はＲ９及びＲ１０が一緒になって−（ＣＨ２）ｎＸ（ＣＨ２）ｍ−（式中、Ｘは、ＣＲ１１Ｒ１２（式中、Ｒ１１及びＲ１２はそれぞれ独立に水素原子又はＣ１−６アルキル基（該Ｃ１−６アルキル基は、Ｃ６−１８アリール基で任意に置換されていてもよい。）を意味する。）、ＮＲ１３（式中、Ｒ１３は、水素原子又はＣ１−６アルキル基（該Ｃ１−６アルキル基は、Ｃ６−１８アリール基で任意に置換されていてもよい。）を意味する。）、Ｏ又はＳを意味し、ｎは、１、２又は３を意味し、ｍは、１、２又は３を意味するが、ｎ＋ｍは、３、４又は５である。）を意味する。）で任意に置換されていてもよい。）を意味し、Ｒ２、Ｒ４及びＲａはそれぞれ独立に、水素原子、水酸基又はＣ１−６アルコキシ基を意味する。］で表されるトロンボポエチンレセプター活性化剤に関するものであり、又、該トロンボポエチンレセプター活性化剤、そのプロドラッグ、若しくは製薬上許容される塩又はそれらの溶媒和物を有効成分として含有するトロンボポエチンレセプター活性化作用が有効な疾患の予防・治療・改善薬に関するものであり、又、該トロンボポエチンレセプター活性化剤、そのプロドラッグ、若しくは製薬上許容される塩又はそれらの溶媒和物を有効成分として含有する血小板増多剤に関するものであり、又、バシペトスポラ（Ｂａｓｉｐｅｔｏｓｐｏｒａ）属に属する微生物を培養し、その培養液から式（２）
2004016264.tif 000004
（式中、Ｒ５及びＲ７はそれぞれ独立に、水素原子、又はメチル基を意味し、Ｒ６、Ｒ８及びＲｂはそれぞれ独立に、水素原子、水酸基又はメトキシ基を意味する。）で表される化合物を採取することを特徴とする該化合物の製造法に関するものであり、又、受託番号ＦＥＲＭ  Ｐ−１８９４０として寄託されている微生物バシペトスポラ・エスピー（Ｂａｓｉｐｅｔｏｓｐｏｒａ  ｓｐ．）Ｎｏ．１１４２株に関するものであり、又、式（３）
2004016264.tif 000005
で表される化合物に関する。
【図面の簡単な説明】  図１：本発明化合物（キサントシリンＸモノメチルエーテル）によるＵＴ７／ＥＰＯ−ｍｐｌ細胞の増殖に対する効果を、ＭＴＴ法を用いて評価した図である。
図２：本発明化合物（キサントシリンＸモノメチルエーテル）によるＵＴ７／ＥＰＯ細胞の増殖に対する効果を、ＭＴＴ法を用いて評価した図である。
図３：本発明化合物（３−メトキシキサントシリンＸジメチルエーテル）によるＵＴ７／ＥＰＯ−ｍｐｌ細胞の増殖に対する効果を、ＷＳＴ法を用いて評価した図である。
図４：本発明化合物（３−メトキシキサントシリンＸジメチルエーテル）によるＵＴ７／ＥＰＯ細胞の増殖に対する効果を、ＷＳＴ法を用いて評価した図である。
【発明を実施するための最良の形態】  以下、更に詳細に本発明を説明する。
尚、本発明中、「ｎ」はノルマルを、「ｉ」はイソを、「ｓ」はセカンダリーを、「ｔ」はターシャリーを、「ｃ」はシクロを、「ｏ」はオルトを、「ｍ」はメタを、「ｐ」はパラを意味する。
まず、置換基Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３、Ｒ４及びＲａの各置換基における語句について説明する。
Ｃ１−６アルキル基としては、直鎖、分枝又は環状のもの（Ｃ３−６シクロアルキル基）を含んでいてもよく、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｃ−プロピル、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル、ｓ−ブチル、ｔ−ブチル、ｃ−ブチル、１−メチル−ｃ−プロピル、２−メチル−ｃ−プロピル、ｎ−ペンチル、１−メチル−ｎ−ブチル、２−メチル−ｎ−ブチル、３−メチル−ｎ−ブチル、１，１−ジメチル−ｎ−プロピル、１，２−ジメチル−ｎ−プロピル、２，２−ジメチル−ｎ−プロピル、１−エチル−ｎ−プロピル、ｃ−ペンチル、１−メチル−ｃ−ブチル、２−メチル−ｃ−ブチル、３−メチル−ｃ−ブチル、１，２−ジメチル−ｃ−プロピル、２，３−ジメチル−ｃ−プロピル、１−エチル−ｃ−プロピル、２−エチル−ｃ−プロピル、ｎ−ヘキシル、１−メチル−ｎ−ペンチル、２−メチル−ｎ−ペンチル、３−メチル−ｎ−ペンチル、４−メチル−ｎ−ペンチル、１，１−ジメチル−ｎ−ブチル、１，２−ジメチル−ｎ−ブチル、１，３−ジメチル−ｎ−ブチル、２，２−ジメチル−ｎ−ブチル、２，３−ジメチル−ｎ−ブチル、３，３−ジメチル−ｎ−ブチル、１−エチル−ｎ−ブチル、２−エチル−ｎ−ブチル、１，１，２−トリメチル−ｎ−プロピル、１，２，２−トリメチル−ｎ−プロピル、１−エチル−１−メチル−ｎ−プロピル、１−エチル−２−メチル−ｎ−プロピル、ｃ−ヘキシル、１−メチル−ｃ−ペンチル、２−メチル−ｃ−ペンチル、３−メチル−ｃ−ペンチル、１−エチル−ｃ−ブチル、２−エチル−ｃ−ブチル、３−エチル−ｃ−ブチル、１，２−ジメチル−ｃ−ブチル、１，３−ジメチル−ｃ−ブチル、２，２−ジメチル−ｃ−ブチル、２，３−ジメチル−ｃ−ブチル、２，４−ジメチル−ｃ−ブチル、３，３−ジメチル−ｃ−ブチル、１−ｎ−プロピル−ｃ−プロピル、２−ｎ−プロピル−ｃ−プロピル、１−ｉ−プロピル−ｃ−プロピル、２−ｉ−プロピル−ｃ−プロピル、１，２，２−トリメチル−ｃ−プロピル、１，２，３−トリメチル−ｃ−プロピル、２，２，３−トリメチル−ｃ−プロピル、１−エチル−２−メチル−ｃ−プロピル、２−エチル−１−メチル−ｃ−プロピル、２−エチル−２−メチル−ｃ−プロピル及び２−エチル−３−メチル−ｃ−プロピル等が挙げられる。
Ｃ１−６アルキルカルボニル基としては、直鎖、分枝又は環状のもの（Ｃ３−６シクロアルキルカルボニル基）を含んでいてもよく、メチルカルボニル、エチルカルボニル、ｎ−プロピルカルボニル、ｉ−プロピルカルボニル、ｃ−プロピルカルボニル、ｎ−ブチルカルボニル、ｉ−ブチルカルボニル、ｓ−ブチルカルボニル、ｔ−ブチルカルボニル、ｃ−ブチルカルボニル、１−メチル−ｃ−プロピルカルボニル、２−メチル−ｃ−プロピルカルボニル、ｎ−ペンチルカルボニル、１−メチル−ｎ−ブチルカルボニル、２−メチル−ｎ−ブチルカルボニル、３−メチル−ｎ−ブチルカルボニル、１，１−ジメチル−ｎ−プロピルカルボニル、１，２−ジメチル−ｎ−プロピルカルボニル、２，２−ジメチル−ｎ−プロピルカルボニル、１−エチル−ｎ−プロピルカルボニル、ｃ−ペンチルカルボニル、１−メチル−ｃ−ブチルカルボニル、２−メチル−ｃ−ブチルカルボニル、３−メチル−ｃ−ブチルカルボニル、１，２−ジメチル−ｃ−プロピルカルボニル、２，３−ジメチル−ｃ−プロピルカルボニル、１−エチル−ｃ−プロピルカルボニル、２−エチル−ｃ−プロピルカルボニル、ｎ−ヘキシルカルボニル、１−メチル−ｎ−ペンチルカルボニル、２−メチル−ｎ−ペンチルカルボニル、３−メチル−ｎ−ペンチルカルボニル、４−メチル−ｎ−ペンチルカルボニル、１，１−ジメチル−ｎ−ブチルカルボニル、１，２−ジメチル−ｎ−ブチルカルボニル、１，３−ジメチル−ｎ−ブチルカルボニル、２，２−ジメチル−ｎ−ブチルカルボニル、２，３−ジメチル−ｎ−ブチルカルボニル、３，３−ジメチル−ｎ−ブチルカルボニル、１−エチル−ｎ−ブチルカルボニル、２−エチル−ｎ−ブチルカルボニル、１，１，２−トリメチル−ｎ−プロピルカルボニル、１，２，２−トリメチル−ｎ−プロピルカルボニル、１−エチル−１−メチル−ｎ−プロピルカルボニル、１−エチル−２−メチル−ｎ−プロピルカルボニル、ｃ−ヘキシルカルボニル、１−メチル−ｃ−ペンチルカルボニル、２−メチル−ｃ−ペンチルカルボニル、３−メチル−ｃ−ペンチルカルボニル、１−エチル−ｃ−ブチルカルボニル、２−エチル−ｃ−ブチルカルボニル、３−エチル−ｃ−ブチルカルボニル、１，２−ジメチル−ｃ−ブチルカルボニル、１，３−ジメチル−ｃ−ブチルカルボニル、２，２−ジメチル−ｃ−ブチルカルボニル、２，３−ジメチル−ｃ−ブチルカルボニル、２，４−ジメチル−ｃ−ブチルカルボニル、３，３−ジメチル−ｃ−ブチルカルボニル、１−ｎ−プロピル−ｃ−プロピルカルボニル、２−ｎ−プロピル−ｃ−プロピルカルボニル、１−ｉ−プロピル−ｃ−プロピルカルボニル、２−ｉ−プロピル−ｃ−プロピルカルボニル、１，２，２−トリメチル−ｃ−プロピルカルボニル、１，２，３−トリメチル−ｃ−プロピルカルボニル、２，２，３−トリメチル−ｃ−プロピルカルボニル、１−エチル−２−メチル−ｃ−プロピルカルボニル、２−エチル−１−メチル−ｃ−プロピルカルボニル、２−エチル−２−メチル−ｃ−プロピルカルボニル及び２−エチル−３−メチル−ｃ−プロピルカルボニル等が挙げられる。
Ｃ６−１８アリールカルボニル基としては、ベンゾイル基、１−インデニルカルボニル基、２−インデニルカルボニル基、３−インデニルカルボニル基、４−インデニルカルボニル基、５−インデニルカルボニル基、６−インデニルカルボニル基、７−インデニルカルボニル基、α−ナフチルカルボニル基、β−ナフチルカルボニル基、１−テトラヒドロナフチルカルボニル基、２−テトラヒドロナフチルカルボニル基、５−テトラヒドロナフチルカルボニル基、６−テトラヒドロナフチルカルボニル基、ｏ−ビフェニリルカルボニル基、ｍ−ビフェニリルカルボニル基、ｐ−ビフェニリルカルボニル基、１−アントリルカルボニル基、２−アントリルカルボニル基、９−アントリルカルボニル基、１−フェナントリルカルボニル基、２−フェナントリルカルボニル基、３−フェナントリルカルボニル基、４−フェナントリルカルボニル基及び９−フェナントリルカルボニル基等が挙げられる。
Ｃ６−１８アリール基としては、フェニル基、１−インデニル基、２−インデニル基、３−インデニル基、４−インデニル基、５−インデニル基、６−インデニル基、７−インデニル基、α−ナフチル基、β−ナフチル基、１−テトラヒドロナフチル基、２−テトラヒドロナフチル基、５−テトラヒドロナフチル基、６−テトラヒドロナフチル基、ｏ−ビフェニリル基、ｍ−ビフェニリル基、ｐ−ビフェニリル基、１−アントリル基、２−アントリル基、９−アントリル基、１−フェナントリル基、２−フェナントリル基、３−フェナントリル基、４−フェナントリル基及び９−フェナントリル基等が挙げられる。
ハロゲン原子としては、フッ素、塩素、臭素及びヨウ素が挙げられる。
Ｃ２−６アルケニル基としては、直鎖、分枝又は環状のもの（Ｃ３−６シクロアルケニル基）を含んでいてもよく、エテニル、１−プロペニル、２−プロペニル、１−メチル−１−エテニル、１−ブテニル、２−ブテニル、３−ブテニル、２−メチル−１−プロペニル、２−メチル−２−プロペニル、１−エチルエテニル、１−メチル−１−プロペニル、１−メチル−２−プロペニル、１−ペンテニル、２−ペンテニル、３−ペンテニル、４−ペンテニル、１−ｎ−プロピルエテニル、１−メチル−１−ブテニル、１−メチル−２−ブテニル、１−メチル−３−ブテニル、２−エチル−２−プロペニル、２−メチル−１−ブテニル、２−メチル−２−ブテニル、２−メチル−３−ブテニル、３−メチル−１−ブテニル、３−メチル−２−ブテニル、３−メチル−３−ブテニル、１，１−ジメチル−２−プロペニル、１−ｉ−プロピルエテニル、１，２−ジメチル−１−プロペニル、１，２−ジメチル−２−プロペニル、１−ｃ−ペンテニル、２−ｃ−ペンテニル、３−ｃ−ペンテニル、１−ヘキセニル、２−ヘキセニル、３−ヘキセニル、４−ヘキセニル、５−ヘキセニル、１−メチル−１−ペンテニル、１−メチル−２−ペンテニル、１−メチル−３−ペンテニル、１−メチル−４−ペンテニル、１−ｎ−ブチルエテニル、２−メチル−１−ペンテニル、２−メチル−２−ペンテニル、２−メチル−３−ペンテニル、２−メチル−４−ペンテニル、２−ｎ−プロピル−２−プロペニル、３−メチル−１−ペンテニル、３−メチル−２−ペンテニル、３−メチル−３−ペンテニル、３−メチル−４−ペンテニル、３−エチル−３−ブテニル、４−メチル−１−ペンテニル、４−メチル−２−ペンテニル、４−メチル−３−ペンテニル、４−メチル−４−ペンテニル、１，１−ジメチル−２−ブテニル、１，１−ジメチル−３−ブテニル、１，２−ジメチル−１−ブテニル、１，２−ジメチル−２−ブテニル、１，２−ジメチル−３−ブテニル、１−メチル−２−エチル−２−プロペニル、１−ｓ−ブチルエテニル、１，３−ジメチル−１−ブテニル、１，３−ジメチル−２−ブテニル、１，３−ジメチル−３−ブテニル、１−ｉ−ブチルエテニル、２，２−ジメチル−３−ブテニル、２，３−ジメチル−１−ブテニル、２，３−ジメチル−２−ブテニル、２，３−ジメチル−３−ブテニル、２−ｉ−プロピル−２−プロペニル、３，３−ジメチル−１−ブテニル、１−エチル−１−ブテニル、１−エチル−２−ブテニル、１−エチル−３−ブテニル、１−ｎ−プロピル−１−プロペニル、１−ｎ−プロピル−２−プロペニル、２−エチル−１−ブテニル、２−エチル−２−ブテニル、２−エチル−３−ブテニル、１，１，２−トリメチル−２−プロペニル、１−ｔ−ブチルエテニル、１−メチル−１−エチル−２−プロペニル、１−エチル−２−メチル−１−プロペニル、１−エチル−２−メチル−２−プロペニル、１−ｉ−プロピル−１−プロペニル、１−ｉ−プロピル−２−プロペニル、１−メチル−２−ｃ−ペンテニル、１−メチル−３−ｃ−ペンテニル、２−メチル−１−ｃ−ペンテニル、２−メチル−２−ｃ−ペンテニル、２−メチル−３−ｃ−ペンテニル、２−メチル−４−ｃ−ペンテニル、２−メチル−５−ｃ−ペンテニル、２−メチレン−ｃ−ペンチル、３−メチル−１−ｃ−ペンテニル、３−メチル−２−ｃ−ペンテニル、３−メチル−３−ｃ−ペンテニル、３−メチル−４−ｃ−ペンテニル、３−メチル−５−ｃ−ペンテニル、３−メチレン−ｃ−ペンチル、１−ｃ−ヘキセニル、２−ｃ−ヘキセニル及び３−ｃ−ヘキセニル等が挙げられる。
Ｃ１−６アルコキシ基としては、直鎖、分枝又は環状のもの（Ｃ３−６シクロアルコキシ基）を含んでいてもよく、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、ｉ−プロポキシ、ｃ−プロポキシ、ｎ−ブトキシ、ｉ−ブトキシ、ｓ−ブトキシ、ｔ−ブトキシ、ｃ−ブトキシ、１−メチル−ｃ−プロポキシ、２−メチル−ｃ−プロポキシ、ｎ−ペンチルオキシ、１−メチル−ｎ−ブトキシ、２−メチル−ｎ−ブトキシ、３−メチル−ｎ−ブトキシ、１，１−ジメチル−ｎ−プロポキシ、１，２−ジメチル−ｎ−プロポキシ、２，２−ジメチル−ｎ−プロポキシ、１−エチル−ｎ−プロポキシ、ｃ−ペンチルオキシ、１−メチル−ｃ−ブトキシ、２−メチル−ｃ−ブトキシ、３−メチル−ｃ−ブトキシ、１，２−ジメチル−ｃ−プロポキシ、２，３−ジメチル−ｃ−プロポキシ、１−エチル−ｃ−プロポキシ、２−エチル−ｃ−プロポキシ、ｎ−ヘキシルオキシ、１−メチル−ｎ−ペンチルオキシ、２−メチル−ｎ−ペンチルオキシ、３−メチル−ｎ−ペンチルオキシ、４−メチル−ｎ−ペンチルオキシ、１，１−ジメチル−ｎ−ブトキシ、１，２−ジメチル−ｎ−ブトキシ、１，３−ジメチル−ｎ−ブトキシ、２，２−ジメチル−ｎ−ブトキシ、２，３−ジメチル−ｎ−ブトキシ、３，３−ジメチル−ｎ−ブトキシ、１−エチル−ｎ−ブトキシ、２−エチル−ｎ−ブトキシ、１，１，２−トリメチル−ｎ−プロポキシ、１，２，２−トリメチル−ｎ−プロポキシ、１−エチル−１−メチル−ｎ−プロポキシ、１−エチル−２−メチル−ｎ−プロポキシ、ｃ−ヘキシルオキシ、１−メチル−ｃ−ペンチルオキシ、２−メチル−ｃ−ペンチルオキシ、３−メチル−ｃ−ペンチルオキシ、１−エチル−ｃ−ブトキシ、２−エチル−ｃ−ブトキシ、３−エチル−ｃ−ブトキシ、１，２−ジメチル−ｃ−ブトキシ、１，３−ジメチル−ｃ−ブトキシ、２，２−ジメチル−ｃ−ブトキシ、２，３−ジメチル−ｃ−ブトキシ、２，４−ジメチル−ｃ−ブトキシ、３，３−ジメチル−ｃ−ブトキシ、１−ｎ−プロピル−ｃ−プロポキシ、２−ｎ−プロピル−ｃ−プロポキシ、１−ｉ−プロピル−ｃ−プロポキシ、２−ｉ−プロピル−ｃ−プロポキシ、１，２，２−トリメチル−ｃ−プロポキシ、１，２，３−トリメチル−ｃ−プロポキシ、２，２，３−トリメチル−ｃ−プロポキシ、１−エチル−２−メチル−ｃ−プロポキシ、２−エチル−１−メチル−ｃ−プロポキシ、２−エチル−２−メチル−ｃ−プロポキシ及び２−エチル−３−メチル−ｃ−プロポキシ等が挙げられる。
Ｃ１−６アルコキシカルボニル基としては、直鎖、分枝又は環状のもの（Ｃ３−６シクロアルコキシカルボニル基）を含んでいてもよく、メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、ｎ−プロポキシカルボニル、ｉ−プロポキシカルボニル、ｃ−プロポキシカルボニル、ｎ−ブトキシカルボニル、ｉ−ブトキシカルボニル、ｓ−ブトキシカルボニル、ｔ−ブトキシカルボニル、ｃ−ブトキシカルボニル、１−メチル−ｃ−プロポキシカルボニル、２−メチル−ｃ−プロポキシカルボニル、ｎ−ペンチルオキシカルボニル、１−メチル−ｎ−ブトキシカルボニル、２−メチル−ｎ−ブトキシカルボニル、３−メチル−ｎ−ブトキシカルボニル、１，１−ジメチル−ｎ−プロポキシカルボニル、１，２−ジメチル−ｎ−プロポキシカルボニル、２，２−ジメチル−ｎ−プロポキシカルボニル、１−エチル−ｎ−プロポキシカルボニル、ｃ−ペンチルオキシカルボニル、１−メチル−ｃ−ブトキシカルボニル、２−メチル−ｃ−ブトキシカルボニル、３−メチル−ｃ−ブトキシカルボニル、１，２−ジメチル−ｃ−プロポキシカルボニル、２，３−ジメチル−ｃ−プロポキシカルボニル、１−エチル−ｃ−プロポキシカルボニル、２−エチル−ｃ−プロポキシカルボニル、ｎ−ヘキシルオキシカルボニル、１−メチル−ｎ−ペンチルオキシカルボニル、２−メチル−ｎ−ペンチルオキシカルボニル、３−メチル−ｎ−ペンチルオキシカルボニル、４−メチル−ｎ−ペンチルオキシカルボニル、１，１−ジメチル−ｎ−ブトキシカルボニル、１，２−ジメチル−ｎ−ブトキシカルボニル、１，３−ジメチル−ｎ−ブトキシカルボニル、２，２−ジメチル−ｎ−ブトキシカルボニル、２，３−ジメチル−ｎ−ブトキシカルボニル、３，３−ジメチル−ｎ−ブトキシカルボニル、１−エチル−ｎ−ブトキシカルボニル、２−エチル−ｎ−ブトキシカルボニル、１，１，２−トリメチル−ｎ−プロポキシカルボニル、１，２，２−トリメチル−ｎ−プロポキシカルボニル、１−エチル−１−メチル−ｎ−プロポキシカルボニル、１−エチル−２−メチル−ｎ−プロポキシカルボニル、ｃ−ヘキシルオキシカルボニル、１−メチル−ｃ−ペンチルオキシカルボニル、２−メチル−ｃ−ペンチルオキシカルボニル、３−メチル−ｃ−ペンチルオキシカルボニル、１−エチル−ｃ−ブトキシカルボニル、２−エチル−ｃ−ブトキシカルボニル、３−エチル−ｃ−ブトキシカルボニル、１，２−ジメチル−ｃ−ブトキシカルボニル、１，３−ジメチル−ｃ−ブトキシカルボニル、２，２−ジメチル−ｃ−ブトキシカルボニル、２，３−ジメチル−ｃ−ブトキシカルボニル、２，４−ジメチル−ｃ−ブトキシカルボニル、３，３−ジメチル−ｃ−ブトキシカルボニル、１−ｎ−プロピル−ｃ−プロポキシカルボニル、２−ｎ−プロピル−ｃ−プロポキシカルボニル、１−ｉ−プロピル−ｃ−プロポキシカルボニル、２−ｉ−プロピル−ｃ−プロポキシカルボニル、１，２，２−トリメチル−ｃ−プロポキシカルボニル、１，２，３−トリメチル−ｃ−プロポキシカルボニル、２，２，３−トリメチル−ｃ−プロポキシカルボニル、１−エチル−２−メチル−ｃ−プロポキシカルボニル、２−エチル−１−メチル−ｃ−プロポキシカルボニル、２−エチル−２−メチル−ｃ−プロポキシカルボニル及び２−エチル−３−メチル−ｃ−プロポキシカルボニル等が挙げられる。
置換基Ｒ１及びＲ３の好ましい具体例としては、それぞれ独立に、水素原子、メチル基、エチル基、ｎ−ヘキシル基、２−フルオロエチル基、ベンジル基、ｐ−クロロフェニル基、ｐ−メチルフェニル基、エトキシカルボニルメチル基、２−プロペニル基、４−ピリジルメチル基、２−ピリジルメチル基、メチルカルボニル基、ベンゾイル基、２−ジエチルアミノエチル基及び２−（１−ピペリジノ）−エチル基等が挙げられる。
置換基Ｒ２、Ｒ４及びＲａの好ましい具体例としては、それぞれ独立に、水素原子、水酸基及びメトキシ基等が挙げられる。
本発明の、好ましい式（１）で表されるトロンボポエチンレセプター活性化剤、トロンボポエチンレセプター活性化作用が有効な疾患の予防・治療・改善薬に用いる好ましい化合物及び血小板増多剤に用いる好ましい化合物としては、以下に示すものが挙げられる。
１）Ｒ１及びＲ３がそれぞれ独立に、水素原子、ＳＯ３Ｈ、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ１−６アルキルカルボニル基又はＣ６−１８アリールカルボニル基（該Ｃ１−６アルキル基、Ｃ１−６アルキルカルボニル基及びＣ６−１８アリールカルボニル基は、水酸基で任意に置換されていてもよい。）である式（１）で表される化合物。
２）Ｒ１及びＲ３がそれぞれ独立に、水素原子、ＳＯ３Ｈ、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ１−６アルキルカルボニル基又はＣ６−１８アリールカルボニル基（該Ｃ１−６アルキル基、Ｃ１−６アルキルカルボニル基及びＣ６−１８アリールカルボニル基は、ＮＲ９Ｒ１０（式中、Ｒ９及びＲ１０はそれぞれ独立に水素原子若しくはＣ１−６アルキル基（該Ｃ１−６アルキル基は、Ｃ６−１８アリール基で任意に置換されていてもよい。）を意味するか又はＲ９及びＲ１０が一緒になって−（ＣＨ２）ｎＸ（ＣＨ２）ｍ−（式中、Ｘは、ＣＲ１１Ｒ１２（式中、Ｒ１１及びＲ１２はそれぞれ独立に水素原子又はＣ１−６アルキル基（該Ｃ１−６アルキル基は、Ｃ６−１８アリール基で任意に置換されていてもよい。）を意味する。）、ＮＲ１３（式中、Ｒ１３は、水素原子又はＣ１−６アルキル基（該Ｃ１−６アルキル基は、Ｃ６−１８アリール基で任意に置換されていてもよい。）を意味する。）、Ｏ又はＳを意味し、ｎは、１、２又は３を意味し、ｍは、１、２又は３を意味するが、ｎ＋ｍは、３、４又は５である。）を意味する。）で任意に置換されていてもよい。）である式（１）で表される化合物。
３）Ｒ１及びＲ３がそれぞれ独立に、水素原子又はＣ１−６アルキル基である式（１）で表される化合物。
４）Ｒ１及びＲ３がそれぞれ独立に、水素原子又はメチル基であり、Ｒ２及びＲ４がそれぞれ独立に、水素原子、水酸基又はメトキシ基である３）に記載の化合物。
５）Ｒ２が水素原子である式（１）で表される化合物又は１）、２）、３）若しくは４）に記載の化合物。
６）Ｒ４及びＲａがそれぞれ独立に、水素原子又はメトキシ基である５）に記載の化合物。
７）Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３，Ｒ４及びＲａが以下に示す組み合わせである化合物。
Ｒ１＝Ｈ、    Ｒ２＝ＯＨ、    Ｒ３＝Ｈ、      Ｒ４＝ＯＨ、    Ｒａ＝Ｈ
Ｒ１＝ＣＨ３、Ｒ２＝ＯＣＨ３、Ｒ３＝ＣＨ３、  Ｒ４＝ＯＣＨ３、Ｒａ＝Ｈ
Ｒ１＝Ｈ、    Ｒ２＝ＯＣＨ３、Ｒ３＝Ｈ、      Ｒ４＝ＯＣＨ３、Ｒａ＝Ｈ
Ｒ１＝ＣＨ３、Ｒ２＝ＯＨ、    Ｒ３＝ＣＨ３、  Ｒ４＝ＯＨ、    Ｒａ＝Ｈ
Ｒ１＝Ｈ、    Ｒ２＝Ｈ、      Ｒ３＝Ｈ、      Ｒ４＝ＯＨ、    Ｒａ＝Ｈ
Ｒ１＝ＣＨ３、Ｒ２＝Ｈ、      Ｒ３＝ＣＨ３、  Ｒ４＝ＯＣＨ３、Ｒａ＝Ｈ
Ｒ１＝ＣＨ３、Ｒ２＝Ｈ、      Ｒ３＝ＣＨ３、  Ｒ４＝ＯＨ、    Ｒａ＝Ｈ
Ｒ１＝Ｈ、    Ｒ２＝Ｈ、      Ｒ３＝Ｈ、      Ｒ４＝Ｈ、      Ｒａ＝Ｈ
Ｒ１＝ＣＨ３、Ｒ２＝Ｈ、      Ｒ３＝ＣＨ３、  Ｒ４＝Ｈ、      Ｒａ＝Ｈ
Ｒ１＝Ｈ、    Ｒ２＝Ｈ、      Ｒ３＝ＣＨ３、  Ｒ４＝Ｈ、      Ｒａ＝Ｈ
Ｒ１＝ＣＨ３、Ｒ２＝Ｈ、      Ｒ３＝ＳＯ３Ｈ、Ｒ４＝Ｈ、      Ｒａ＝Ｈ
Ｒ１＝ＣＨ３、Ｒ２＝Ｈ、      Ｒ３＝ＣＨ３、  Ｒ４＝ＯＣＨ３、Ｒａ＝ＯＣＨ３
８）Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３，Ｒ４及びＲａが以下に示す組み合わせである化合物。
Ｒ１＝Ｈ、    Ｒ２＝Ｈ、      Ｒ３＝Ｈ、      Ｒ４＝Ｈ、      Ｒａ＝Ｈ
Ｒ１＝ＣＨ３、Ｒ２＝Ｈ、      Ｒ３＝ＣＨ３、  Ｒ４＝Ｈ、      Ｒａ＝Ｈ
Ｒ１＝Ｈ、    Ｒ２＝Ｈ、      Ｒ３＝ＣＨ３、  Ｒ４＝Ｈ、      Ｒａ＝Ｈ
Ｒ１＝ＣＨ３、Ｒ２＝Ｈ、      Ｒ３＝ＳＯ３Ｈ、Ｒ４＝Ｈ、      Ｒａ＝Ｈ
Ｒ１＝ＣＨ３、Ｒ２＝Ｈ、      Ｒ３＝ＣＨ３、  Ｒ４＝ＯＣＨ３、Ｒａ＝Ｈ
Ｒ１＝ＣＨ３、Ｒ２＝Ｈ、      Ｒ３＝ＣＨ３、  Ｒ４＝ＯＣＨ３、Ｒａ＝ＯＣＨ３
９）Ｒ２及びＲ４が共に水酸基であるか又はＲ２が水酸基でＲ４が水素原子であり、Ｒ１及びＲ３が共に水素原子である式（１）で表される化合物。
１０）Ｒ２及びＲ４が共にＣ１−６アルコキシ基であるか又はＲ２がＣ１−６アルコキシ基でＲ４が水素原子であり、Ｒ１及びＲ３が共にＣ１−６アルキル基である式（１）で表される化合物。
１１）Ｒ２及びＲ４が共に水素原子であり、Ｒ１及びＲ３が共に、水素原子、ＳＯ３Ｈ、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ１−６アルキルカルボニル基又はＣ６−１８アリールカルボニル基（該Ｃ１−６アルキル基、Ｃ１−６アルキルカルボニル基及びＣ６−１８アリールカルボニル基は、ハロゲン原子、水酸基、Ｃ２−６アルケニル基、Ｃ１−６アルコキシ基、Ｃ１−６アルコキシカルボニル基、Ｃ６−１８アリール基、２−ピリジル基、３−ピリジル基、４−ピリジル基、２−フラニル基、３−フラニル基、２−チエニル基、３−チエニル基（該Ｃ６−１８アリール基、２−ピリジル基、３−ピリジル基、４−ピリジル基、２−フラニル基、３−フラニル基、２−チエニル基及び３−チエニル基は、ハロゲン原子又はＣ１−６アルキル基で任意に置換されていてもよい。）又はＮＲ９Ｒ１０（式中、Ｒ９及びＲ１０はそれぞれ独立に水素原子若しくはＣ１−６アルキル基（該Ｃ１−６アルキル基は、Ｃ６−１８アリール基で任意に置換されていてもよい。）を意味するか又はＲ９及びＲ１０が一緒になって−（ＣＨ２）ｎＸ（ＣＨ２）ｍ−（式中、Ｘは、ＣＲ１１Ｒ１２（式中、Ｒ１１及びＲ１２はそれぞれ独立に水素原子又はＣ１−６アルキル基（該Ｃ１−６アルキル基は、Ｃ６−１８アリール基で任意に置換されていてもよい。）を意味する。）、ＮＲ１３（式中、Ｒ１３は、水素原子又はＣ１−６アルキル基（該Ｃ１−６アルキル基は、Ｃ６−１８アリール基で任意に置換されていてもよい。）を意味する。）、Ｏ又はＳを意味し、ｎは、１、２又は３を意味し、ｍは、１、２又は３を意味するが、ｎ＋ｍは、３、４又は５である。）を意味する。）で任意に置換されていてもよい。）である式（１）で表される化合物。
１２）Ｒ２及びＲ４が共に水素原子であり、Ｒ１がメチル基であり、Ｒ３が、水素原子、ＳＯ３Ｈ、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ１−６アルキルカルボニル基又はＣ６−１８アリールカルボニル基（該Ｃ１−６アルキル基、Ｃ１−６アルキルカルボニル基及びＣ６−１８アリールカルボニル基は、ハロゲン原子、水酸基、Ｃ２−６アルケニル基、Ｃ１−６アルコキシ基、Ｃ１−６アルコキシカルボニル基、Ｃ６−１８アリール基、２−ピリジル基、３−ピリジル基、４−ピリジル基、２−フラニル基、３−フラニル基、２−チエニル基、３−チエニル基（該Ｃ６−１８アリール基、２−ピリジル基、３−ピリジル基、４−ピリジル基、２−フラニル基、３−フラニル基、２−チエニル基及び３−チエニル基は、ハロゲン原子又はＣ１−６アルキル基で任意に置換されていてもよい。）又はＮＲ９Ｒ１０（式中、Ｒ９及びＲ１０はそれぞれ独立に水素原子若しくはＣ１−６アルキル基（該Ｃ１−６アルキル基は、Ｃ６−１８アリール基で任意に置換されていてもよい。）を意味するか又はＲ９及びＲ１０が一緒になって−（ＣＨ２）ｎＸ（ＣＨ２）ｍ−（式中、Ｘは、ＣＲ１１Ｒ１２（式中、Ｒ１１及びＲ１２はそれぞれ独立に水素原子又はＣ１−６アルキル基（該Ｃ１−６アルキル基は、Ｃ６−１８アリール基で任意に置換されていてもよい。）を意味する。）、ＮＲ１３（式中、Ｒ１３は、水素原子又はＣ１−６アルキル基（該Ｃ１−６アルキル基は、Ｃ６−１８アリール基で任意に置換されていてもよい。）を意味する。）、Ｏ又はＳを意味し、ｎは、１、２又は３を意味し、ｍは、１、２又は３を意味するが、ｎ＋ｍは、３、４又は５である。）を意味する。）で任意に置換されていてもよい。）である式（１）で表される化合物。
好ましい式（２）で表される化合物としては以下に示すものが挙げられる。
１３）Ｒ５，Ｒ６，Ｒ７，Ｒ８及びＲｂが以下に示す組み合わせである化合物。
Ｒ５＝Ｈ、    Ｒ６＝ＯＨ、    Ｒ７＝Ｈ、      Ｒ８＝ＯＨ、    Ｒｂ＝Ｈ
Ｒ５＝ＣＨ３、Ｒ６＝ＯＣＨ３、Ｒ７＝ＣＨ３、  Ｒ８＝ＯＣＨ３、Ｒｂ＝Ｈ
Ｒ５＝Ｈ、    Ｒ６＝ＯＣＨ３、Ｒ７＝Ｈ、      Ｒ８＝ＯＣＨ３、Ｒｂ＝Ｈ
Ｒ５＝ＣＨ３、Ｒ６＝ＯＨ、    Ｒ７＝ＣＨ３、  Ｒ８＝ＯＨ、    Ｒｂ＝Ｈ
Ｒ５＝Ｈ、    Ｒ６＝Ｈ、      Ｒ７＝Ｈ、      Ｒ８＝ＯＨ、    Ｒｂ＝Ｈ
Ｒ５＝ＣＨ３、Ｒ６＝Ｈ、      Ｒ７＝ＣＨ３、  Ｒ８＝ＯＣＨ３、Ｒｂ＝Ｈ
Ｒ５＝ＣＨ３、Ｒ６＝Ｈ、      Ｒ７＝ＣＨ３、  Ｒ８＝ＯＨ、    Ｒｂ＝Ｈ
Ｒ５＝Ｈ、    Ｒ６＝Ｈ、      Ｒ７＝Ｈ、      Ｒ８＝Ｈ、      Ｒｂ＝Ｈ
Ｒ５＝ＣＨ３、Ｒ６＝Ｈ、      Ｒ７＝ＣＨ３、  Ｒ８＝Ｈ、      Ｒｂ＝Ｈ
Ｒ５＝Ｈ、    Ｒ６＝Ｈ、      Ｒ７＝ＣＨ３、  Ｒ８＝Ｈ、      Ｒｂ＝Ｈ
Ｒ５＝ＣＨ３、Ｒ６＝Ｈ、      Ｒ７＝ＣＨ３、  Ｒ８＝ＯＣＨ３、Ｒｂ＝ＯＣＨ３
１４）Ｒ５，Ｒ６，Ｒ７，Ｒ８及びＲｂが以下に示す組み合わせである化合物。
Ｒ５＝Ｈ、    Ｒ６＝Ｈ、      Ｒ７＝Ｈ、      Ｒ８＝Ｈ、      Ｒｂ＝Ｈ
Ｒ５＝ＣＨ３、Ｒ６＝Ｈ、      Ｒ７＝ＣＨ３、  Ｒ８＝Ｈ、      Ｒｂ＝Ｈ
Ｒ５＝Ｈ、    Ｒ６＝Ｈ、      Ｒ７＝ＣＨ３、  Ｒ８＝Ｈ、      Ｒｂ＝Ｈ
Ｒ５＝ＣＨ３、Ｒ６＝Ｈ、      Ｒ７＝ＣＨ３、  Ｒ８＝ＯＣＨ３、Ｒｂ＝Ｈ
Ｒ５＝ＣＨ３、Ｒ６＝Ｈ、      Ｒ７＝ＣＨ３、  Ｒ８＝ＯＣＨ３、Ｒｂ＝ＯＣＨ３
１５）Ｒ５，Ｒ６，Ｒ７，Ｒ８及びＲｂが以下に示す組み合わせである化合物。
Ｒ５＝ＣＨ３、Ｒ６＝Ｈ、      Ｒ７＝ＣＨ３、  Ｒ８＝Ｈ、      Ｒｂ＝Ｈ
Ｒ５＝Ｈ、    Ｒ６＝Ｈ、      Ｒ７＝ＣＨ３、  Ｒ８＝Ｈ、      Ｒｂ＝Ｈ
Ｒ５＝ＣＨ３、Ｒ６＝Ｈ、      Ｒ７＝ＣＨ３、  Ｒ８＝ＯＣＨ３、Ｒｂ＝Ｈ
Ｒ５＝ＣＨ３、Ｒ６＝Ｈ、      Ｒ７＝ＣＨ３、  Ｒ８＝ＯＣＨ３、Ｒｂ＝ＯＣＨ３
本発明の式（１）で示される化合物またはその製薬上許容される塩は製造条件により任意の結晶形として存在することができ、任意の水和物として存在することができるが、これら結晶形や水和物およびそれらの混合物も本発明の範囲に含有される。またアセトン、エタノール、テトラヒドロフランなどの有機溶媒を含む溶媒和物として存在することもあるが、これらの形態はいずれも本発明の範囲に含有される。
本発明の式（１）で示される化合物は、必要に応じて製薬上許容される塩に変換することも、または生成した塩から遊離させることもできる。本発明の製薬上許容される塩としては、例えば、アルカリ金属（リチウム、ナトリウム、カリウムなど）、アルカリ土類金属（マグネシウム、カルシウムなど）、アンモニウム、有機塩基及びアミノ酸との塩などが挙げられる。また無機酸（塩酸、臭化水素酸、リン酸、硫酸など）及び有機酸（酢酸、クエン酸、マレイン酸、フマル酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸など）との塩も可能である。
プロドラッグとしては、化学的または代謝的に分解できる基を有する本発明の誘導体であり、加溶媒分解によりまたは生理的条件下のインビボにおいて薬理学的に活性な本発明を形成する化合物となる化合物である。適当なプロドラッグ誘導体を選択する方法および製造する方法は、例えばＤｅｓｉｇｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｄｒｕｇ（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ａｍｓｔｅｒｄａｍ  １９８５）に記載されている。本発明の場合、水酸基を有する場合は、その化合物と適当なアシルハライドまたは適当な酸無水物とを反応させることによって製造されるアシルオキシ誘導体のようなプロドラッグが例示される。プロドラッグとして特に好ましいアシルオキシとしては−ＯＣＯＣ２Ｈ５，−ＯＣＯ（ｔ−Ｂｕ），−ＯＣＯＣ１５Ｈ３１，−ＯＣＯ（ｍ−ＣＯ２Ｎａ−Ｐｈ），−ＯＣＯＣＨ２ＣＨ２ＣＯ２Ｎａ，−ＯＣＯＣＨ（ＮＨ２）ＣＨ３，−ＯＣＯＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２などがあげられる。本発明を形成する化合物がアミノ基を有する場合は、アミノ基を有する化合物と適当な酸ハロゲン化物または適当な混合酸無水物とを反応させることにより製造されるアミド誘導体のようなプロドラッグが例示される。プロドラッグとして特に好ましいアミドとしては、−ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２０ＯＣＨ３，−ＮＨＣＯＣＨ（ＮＨ２）ＣＨ３等があげられる。
本発明のトロンボポエチンレセプター活性化剤、そのプロドラッグ、若しくは製薬上許容される塩又はそれらの溶媒和物を有効成分とする医薬は、通常錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、丸剤、シロップ剤などの経口投与剤、直腸投与剤、経皮吸収剤あるいは注射剤として投与できる。本剤は１個の治療剤として、あるいはほかの治療剤との混合物として投与できる。それらは単体で投与してもよいが、一般的には医薬組成物の形態で投与する。それらの製剤は、薬理的、製剤学的に許容しうる添加物を加え、常法により製造することができる。すなわち、経口剤には通常の賦形剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤、湿潤剤、可塑剤、コーティング剤などの添加物を使用することができる。経口用液剤は、水性または油性懸濁液、溶液、乳濁液、シロップ、エリキシルなどの形態であってもよく、あるいは使用前に水またはほかの適当な溶媒で調製するドライシロップとして供されてもよい。前記の液剤は、懸濁化剤、香料、希釈剤あるいは乳化剤のような通常の添加剤を含むことができる。直腸内投与する場合は座剤として投与することができる。坐剤はカカオ脂、ラウリン脂、マクロゴール、グリセロゼラチン、ウィテップゾール、ステアリン酸ナトリウムまたはそれらの混合物など、適当な物質を基剤として、必要に応じて乳化剤、懸濁化剤、保存剤などを加えることができる。注射剤は、水性あるいは用時溶解型剤形を構成しうる注射用蒸留水、生理食塩水、５％ブドウ糖溶液、プロピレングリコールなどの溶解剤ないし溶解補助剤、ｐＨ調節剤、等張化剤、安定化剤などの製剤成分が使用される。
本発明の薬剤をヒトに投与する場合は、その投与量を患者の年齢、状態により決定するが通常成人の場合、経口剤あるいは直腸内投与では０．１〜１０００ｍｇ／ヒト／日程度、注射剤で０．０５ｍｇ〜５００ｍｇ／ヒト／日程度である。これらの数値はあくまでも例示であり、投与量は患者の症状にあわせて投与されるものである。
本発明を使用する場面としては、トロンボポエチンレセプター親和性及びアゴニスト活性を有する化合物を使用することにより病態の改善が期待できる場面が挙げられる。具体的には、血小板数の異常を伴う血液疾患があげられる。より詳細には巨核球による造血過程の異常に起因するヒトを含む哺乳類の疾患、とりわけ血小板減少を伴う疾患の治療や予防に有用である。このような疾患としてはたとえば、癌化学療法及びまたは癌放射線療法に伴う血小板減少、骨髄移植、手術、及び重症感染症による血小板減少、あるいは消化管出血等をあげることができるが、これらに限定されることはない。血小板減少を伴う代表的な疾患である再生不良性貧血や突発性血小板性紫斑病、骨髄異形成症候群、トロンボポエチン欠損症なども本発明の医薬適用対象である。また、本発明は末梢血幹細胞放出促進剤、巨核球性白血病細胞の分化誘導剤、血小板ドナーの血小板増加剤などとして使用することもできる。またこの他、血管内皮および内皮前駆細胞の分化増殖により、血管新生療法に用いたり、動脈硬化症，心筋梗塞，不安定狭心症，末梢動脈閉塞症などを予防・治療する場面が想定されるが、これらに限定されることはない。
次に、式（２）で表される化合物の製造方法について説明する。
式（２）で表される化合物は、バシペトスポラ（Ｂａｓｉｐｅｔｏｓｐｏｒａ）属に属する微生物を培養し、その培養液から採取することにより、製造することができる。
本発明に用いられるバシペトスポラ（Ｂａｓｉｐｅｔｏｓｐｏｒａ）属に属する微生物としては、微生物の菌株に変異を生じさせて一層生産性を向上させた菌株等の変異株、また、菌株の細胞中に存在する、本反応に関与する遺伝子を切り出し、これを適切なベクター例えばプラスミドに挿入し、このベクターを用いて適当な異種宿主もしくは同種宿主を形質転換することによる菌株等も含まれる。
バシペトスポラ（Ｂａｓｉｐｅｔｏｓｐｏｒａ）属に属する微生物の好ましい例としては、バシペトスポラ・エスピー（Ｂａｓｉｐｅｔｏｓｐｏｒａ  ｓｐ．）が挙げられ、更に好ましくは、バシペトスポラ・エスピー（Ｂａｓｉｐｅｔｏｓｐｏｒａ  ｓｐ．）Ｎｏ．１１４２株が挙げられる。
バシペトスポラ・エスピー（Ｂａｓｉｐｅｔｏｓｐｏｒａ  ｓｐ．）Ｎｏ．１１４２株の菌学的性質は以下の通りである、
１．各種培地における生育状態
２５℃、７日間培養時の生育
オートミール寒天培地            ＋
麦芽エキス寒天培地              ＋
ポテトデキストロース寒天培地    ＋
３７℃での生育                  −
可溶性色素及び滲出液の産生      −
コロニーの形態：  直径３７〜４２ｃｍ、白色羊毛状、平滑、裏面白色
２．顕微鏡下における形態的特徴
菌糸          ：  幅１〜５μｍ、無色、平滑分岐、隔壁有
分生子柄      ：  直立、単生
分生子形成細胞：  直線状、先端での環紋無し
分生子        ：  鎖状連結、単細胞、球形〜亜球形、表面粗面、直径７〜１２μｍ
以上の諸性状に基づき既知菌種との比較を試みた結果、Ｎｏ．１１４２株をバシペトスポラ（Ｂａｓｉｐｅｔｏｓｐｏｒａ）に属する一菌株と同定し、バシペトスポラ・エスピーＮｏ．１１４２株と命名した。本菌株は次の通り寄託した。
独立行政法人  産業技術総合研究所  特許生物寄託センター（ＩＰＯＤ）
〒３０５−８５６６  日本国茨城県つくば市東１丁目１番地１  中央第６
２００２年０７月２２日（２２．０７．２００２）、１４産生奇  第９９０号（ＦＥＲＭ  Ｐ−１８９４０）
受託番号：ＩＰＯＤ  ＦＥＲＭ  ＢＰ−８４１０
バシペトスポラ・エスピー（Ｂａｓｉｐｅｔｏｓｐｏｒａ  ｓｐ．）Ｎｏ．１１４２株は、他の糸状菌に見られるようにその性状が変化しやすい。例えば、Ｎｏ．１１４２株の、又は本菌株に由来する突然変異体（自然発生又は誘発性）、形質接合体又は遺伝子組み換え体であっても、キサントシリンＸモノメチルエーテル（Ｒ５＝Ｈ、Ｒ６＝Ｈ、Ｒ７＝ＣＨ３、Ｒ８＝Ｈ、Ｒｂ＝Ｈである化合物）、キサントシリンＸジメチルエーテル（Ｒ５＝ＣＨ３、Ｒ６＝Ｈ、Ｒ７＝ＣＨ３、Ｒ８＝Ｈ、Ｒｂ＝Ｈである化合物）、３−メトキシキサントシリンＸジメチルエーテル（Ｒ５＝ＣＨ３、Ｒ６＝Ｈ、Ｒ７＝ＣＨ３、Ｒ８＝ＯＣＨ３、Ｒｂ＝Ｈである化合物）と３，３’−ジメトキシキサントシリンＸジメチルエーテル（Ｒ５＝ＣＨ３、Ｒ６＝Ｈ、Ｒ７＝ＣＨ３、Ｒ８＝ＯＣＨ３、Ｒｂ＝ＯＣＨ３である化合物）を生産するものは全て本発明に使用できる。
バシペトスポラ（Ｂａｓｉｐｅｔｏｓｐｏｒａ）属に属する微生物の培養方法について説明する。
本発明により式（２）で表される化合物を製造するには、まずバシペトスポラ（Ｂａｓｉｐｅｔｏｓｐｏｒａ）属に属する微生物を培地中で培養する。栄養源としては、従来糸状菌の培養に利用されている公知のものが使用できる。例えば、炭素源としては、グルコース、スクロース、水飴、澱粉、デキストリン、大豆油等を使用しうる。また、窒素源としては、ペプトン、肉エキス、酵母エキス、コーン・スチープ・リカー、オートミール、硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、硝酸アンモニウム、尿素等を使用できる。その他必要に応じて食塩、硫酸マグネシウム、硫酸銅、硫酸亜鉛、塩化マンガン、炭酸カルシウム、燐酸塩等の無機塩を単独又は組み合わせて加えることができるほか、本菌株の生育や、式（２）で表される化合物の生産を促進する有機物、例えば核酸類、ビタミン類や無機物を適当に添加することができる。なお、培養中の発泡が著しい時には、消泡剤等を適宜添加すればよい。
培養法としては、例えば振とう又は通気撹拌培養などの好気的条件下での培養法が最も適している。培養温度は２０〜２８℃、培地のｐＨは５．０〜８．０に調製することが好ましい。培養時間は通常８〜１６日間培養を行うと、式（２）で表される化合物が培地或いは菌体中に蓄積されるので、培養中の蓄積量が最大に達した時点で培養を終了するのが好ましい。なお、これらの培養条件は使用する生産菌の特性又は培養方法に応じてそれぞれ最適の条件を選択すればよい。
式（２）で表される化合物の分離・精製方法について説明する。
培養終了後、培養液から式（２）で表される化合物を採取するためには一般に微生物代謝産物をその培養物から単離するために用いられる分離、精製の方法が利用される。すなわち、減圧濃縮、凍結乾燥、例えばブタノール、酢酸エチル、クロロホルム、ベンゼン等を用いた有機溶媒抽出、各種のイオン交換クロマトグラフィー、セファデックスＬＨ−２０等を用いたゲル濾過クロマトグラフィー、活性炭、シリカゲル等による吸着クロマトグラフィーもしくは薄層クロマトグラフィーによる活性物質の吸脱着処理、あるいは逆相カラムを用いた高速液体クロマトグラフィー等を単独あるいは任意の順序に組み合わせ、また反復して用いることにより、式（２）で表される化合物を単離そして採取することができる。かくして得られた式（２）で表される化合物のうち、幾つか化合物の理化学的性質につき以下に示した。
キサントシリンＸモノメチルエーテル（Ｒ５＝Ｈ、Ｒ６＝Ｈ、Ｒ７＝ＣＨ３、Ｒ８＝Ｈ、Ｒｂ＝Ｈである化合物）
１．分子量：３０２
２．組成式：Ｃ１９Ｈ１４Ｎ２Ｏ２
３．性状、色：黄色針状結晶の中性物質
４．１Ｈ核磁気共鳴スペクトル：重クロロホルム中で測定した水素核磁気共鳴スペクトルの化学シフト（δ−値）を以下に示す。
δ（ｐｐｍ）：７．７９（２Ｈ，ｄ），７．７２（２Ｈ，ｄ），７．０２（２Ｈ，ｄ），７．０１（１Ｈ，ｓ），６．８７（１Ｈ，ｓ），６．８６（２Ｈ，ｄ），３．８５（３Ｈ，ｓ）
５．１３Ｃ核磁気共鳴スペクトル：重クロロホルム中で測定した炭素核磁気共鳴スペクトルの化学シフト（δ−値）を以下に示す。
δ（ｐｐｍ）：４８．０，１１４．１，１１５．２，１１５．６，１１６．１，１２３．６，１２６．９，１２７．７，１３１．４，１３１．７，１５９．８，１６１．４，１７３．４，１７３．５
６．マススペクトル：（ＥＩ−ＭＳ）ｍ／ｚ＝３０２（Ｍ＋）
キサントシリンＸジメチルエーテル（Ｒ５＝ＣＨ３、Ｒ６＝Ｈ、Ｒ７＝ＣＨ３、Ｒ８＝Ｈ、Ｒｂ＝Ｈである化合物）
１．分子量：３１６
２．組成式：Ｃ２０Ｈ１６Ｎ２Ｏ２
３．性状、色：黄色針状結晶の中性物質
４．１Ｈ核磁気共鳴スペクトル：重クロロホルム中で測定した水素核磁気共鳴スペクトルの化学シフト（δ−値）を以下に示す。
δ（ｐｐｍ）：７．７９（４Ｈ，ｄ），７．０２（２Ｈ，ｄ），６．９８（４Ｈ，ｄ），３．８７（６Ｈ，ｓ）
５．１３Ｃ核磁気共鳴スペクトル：重クロロホルム中で測定した炭素核磁気共鳴スペクトルの化学シフト（δ−値）を以下に示す。
δ（ｐｐｍ）：５５．５，１１４．５，１１６．３，１２４．９，１２７．５，１３１．８，１６１．２，１７３．３
６．マススペクトル：（ＥＩ−ＭＳ）ｍ／ｚ＝３１６（Ｍ＋）
３−メトキシキサントシリンＸジメチルエーテル（Ｒ５＝ＣＨ３、Ｒ６＝Ｈ、Ｒ７＝ＣＨ３、Ｒ８＝ＯＣＨ３、Ｒｂ＝Ｈである化合物）
１．分子量：３４６
２．組成式：Ｃ２１Ｈ１８Ｎ２Ｏ３
３．性状、色：茶褐色の中性物質
４．１Ｈ核磁気共鳴スペクトル：重クロロホルム中で測定した水素核磁気共鳴スペクトルの化学シフト（δ−値）を以下に示す。
δ（ｐｐｍ）：７．７９（２Ｈ，ｓ），７．４９（Ｈ，ｄ），７．３６（Ｈ，ｄｄ），７．０３（Ｈ，ｓ），７．０２（Ｈ，ｓ），６．９９（２Ｈ，ｄ），６．９５（Ｈ，ｄ），３．９６（３Ｈ，ｓ），３．９５（３Ｈ，ｓ），３．８８（３Ｈ，ｓ）
５．１３Ｃ核磁気共鳴スペクトル：重クロロホルム中で測定した炭素核磁気共鳴の化学シフト（δ−値）を以下に示す。
δ（ｐｐｍ）：５５．５，５６．１，１１１．２，１１１．９，１１４．５，１１６．３，１１６．２，１２４．６，１２４．９，１２５．１，１２７．６，１２７．８，１３１．８，１４９．１，１５０．９，１６１．２，１７３．３，１７３．５
６．マススペクトル：（ＥＩ−ＭＳ）ｍ／ｚ＝３４６（Ｍ＋）
３，３’−ジメトキシキサントシリンＸジメチルエーテル（Ｒ５＝ＣＨ３、Ｒ６＝Ｈ、Ｒ７＝ＣＨ３、Ｒ８＝ＯＣＨ３、Ｒｂ＝ＯＣＨ３である化合物）
１．分子量：３７６
２．組成式：Ｃ２２Ｈ２０Ｎ２Ｏ４
３．性状、色：茶褐色の中性物質
４．１Ｈ核磁気共鳴スペクトル：重クロロホルム中で測定した水素核磁気共鳴の化学シフト（δ−値）を以下に示す。
δ（ｐｐｍ）：７．７９（２Ｈ，ｄ），７．０８（２Ｈ，ｓ），７．０５（Ｈ，ｓ），７．００（Ｈ，ｓ），６．９９（２Ｈ，ｄ），３．９２（９Ｈ，ｓ），３．８７（３Ｈ，ｓ）
５．１３Ｃ核磁気共鳴スペクトル：重クロロホルム中で測定した炭素核磁気共鳴の化学シフト（δ−値）を以下に示す。
δ（ｐｐｍ）：５５．５，５６．２，６１．１，１０７．４，１１４．６，１１６．０，１１７．５，１２４．７，１２７．５，１２７．８，１２８．３，１３２．０，１４０．１，１５３．３，１６１．４，１７３．５，１７３．９
６．マススペクトル：（ＥＩ−ＭＳ）ｍ／ｚ＝３７６（Ｍ＋）
次に、本発明に使用される、式（１）で表される化合物の製造方法について説明する。
式（１）で表される化合物は、微生物を利用する製造法、微生物を利用して得られた化合物を化学修飾する製造法及び化学的な合成による製造法により製造することができる。
微生物を利用する製造法により、式（１）で表される化合物のうち以下に示す化合物を製造することができる。
Ｒ１＝Ｈ、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ３＝Ｈ、Ｒ４＝Ｈ、Ｒａ＝Ｈである化合物（キサントシリンＸ）は、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｎｏｔａｔｕｍやＰｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  Ｃｈｒｙｓｏｇｅｎｕｍ等の微生物を用いることにより製造することができる（ＧＢ  ８９８４９８、Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ  Ａｎｎ（１９５７）Ｖｏｌｕｍｅ  Ｄａｔｅ  １９５６−５７  １４０−３ｐ及びＤＥ  １１２３０８７等）。
Ｒ１＝Ｈ、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ３＝ＣＨ３、Ｒ４＝Ｈ、Ｒａ＝Ｈである化合物（キサントシリンＸモノメチルエーテル）は、Ｄｉｃｈｏｔｏｍｏｍｙｃｅｓ  ａｌｂｕｓ等の微生物を用いることにより製造することができる（Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ  ２１，５８２−５８７（１９６８）、Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ  ２１  ５８７−５９１（１９６８））。
Ｒ１＝ＣＨ３、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ３＝ＣＨ３、Ｒ４＝Ｈ、Ｒａ＝Ｈである化合物（キサントシリンＸジメチルエーテル）、Ｒ１＝Ｃ２Ｈ５、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ３＝Ｃ２Ｈ５、Ｒ４＝Ｈ、Ｒａ＝Ｈである化合物（キサントシリンＸジエチルエーテル）及びＲ１＝ＣＨ３、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ３＝ＣＨ３、Ｒ４＝ＯＣＨ３、Ｒａ＝Ｈである化合物（３−メトキシキサントシリンＸジメチルエーテル）は、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｓｐ．（Ｓｔｒａｉｎ  Ｎｏ．２０８またはＮｏ．９８）等の微生物を用いることにより製造することができる（Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ  ２１（１２）６７１−６７９（１９６８））。
Ｒ１＝Ｈ、Ｒ２＝ＯＨ、Ｒ３＝Ｈ、Ｒ４＝Ｈ、Ｒａ＝Ｈである化合物（キサントシリンＹ１）及びＲ１＝Ｈ、Ｒ２＝ＯＨ、Ｒ３＝Ｈ、Ｒ４＝ＯＨ、Ｒａ＝Ｈである化合物（キサントシリンＹ２）は、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｎｏｔａｔｕｍ等の微生物を用いることにより製造することができる（Ｃｈｅｍ．Ｂｅｒ  １０５（９），３０６１（１９７２））。
Ｒ１＝ＣＨ３、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ３＝ＳＯ３Ｈ、Ｒ４＝Ｈ、Ｒａ＝Ｈである化合物（キサントシリンＸモノメチルエーテル硫酸エステル）はＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｓｐ．（Ｎｏ．ＦＡ２６９２）等の微生物を用いることにより製造することができる（Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ  ４６  ６８７−６８８（１９９３））。
微生物を利用して得られた化合物を化学修飾する製造法により、式（１）で表される化合物のうち以下に示す化合物を製造することができる。
Ｒ１＝ＣＨ３、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ４＝Ｈ、Ｒａ＝Ｈ、Ｒ３がアルキル基、アルキルカルボニル基又はアリールカルボニル基である化合物は、キサントシリンＸモノメチルエーテルを原料として、特開平２−３０４０５８号公報記載の方法に従って製造することができる。
2004016264.tif 000006
即ち、Ｋ２ＣＯ３等の塩基の存在下、対応するハライド等をキサントシリンＸモノメチルエーテルに反応させることにより製造することができる。
Ｒ２＝Ｈ、Ｒ４＝Ｈ、Ｒａ＝Ｈ、Ｒ１及びＲ３がアルキルカルボニル基又はアリールカルボニル基である化合物は、キサントシリンＸを原料として、Ｐｈａｒｍａｚｉｅ  １２，５６７−５８０（１９５７）記載の方法に従って製造することができる。
2004016264.tif 000007
即ち、適当な塩基の存在下、対応する酸無水物又はアシルハライド等をキサントシリンＸに反応させることにより製造することができる。
Ｒ２＝Ｈ、Ｒ４＝Ｈ、Ｒａ＝Ｈ、Ｒ１及びＲ３がジアルキルアミノ基で置換されたアルキル基である化合物は、キサントシリンＸを原料として、ＤＥ  １１６５８記載の方法に従って製造することができる。
2004016264.tif 000008
即ち、対応するハライド等をキサントシリンＸに反応させることにより製造することができる。
Ｒ２＝Ｈ、Ｒ４＝Ｈ、Ｒａ＝Ｈ、Ｒ１及びＲ３がアルキル基である化合物、Ｒ２がアルコキシ基、Ｒ４＝Ｈ、Ｒａ＝Ｈ、Ｒ１及びＲ３がアルキル基である化合物及びＲａ＝Ｈ、Ｒ２及びＲ４がアルコキシ基、Ｒ１及びＲ３がアルキル基である化合物は、それぞれ、キサントシリンＸ、キサントシリンＹ１及びキサントシリンＹ２を原料として、Ｃｈｅｍ  Ｂｅｒ  １０５（９）３０６１（１９７２）記載の方法に従って製造することができる。
2004016264.tif 000009
即ち、対応するジアゾアルキルをキサントシリンＸ、キサントシリンＹ１及びキサントシリンＹ２にそれぞれ反応させることにより製造することができる。
化学的な合成による製造法により、式（１）で表される化合物のうち、Ｒ１＝ＣＨ３、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ３＝ＣＨ３、Ｒ４＝Ｈ、Ｒａ＝Ｈである化合物（キサントシリンＸジメチルエーテル）を製造することもできる（Ａｎｇｅｗ  Ｃｈｅｍ  ７４，２１５（１９６２）、Ｃｈｅｍ  Ｂｅｒ  ９８（１）１９３−２０１（１９６５）及びＤＥ  １１６７３３２）。
2004016264.tif 000010
【実施例】  以下に実施例を示し本発明を更に詳細に説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。
製造例１
５００ｍｌ容三角フラスコに液体培地（組成；可溶性でんぷん２％、グルコース０．５％、ポリペプトン０．２％、コーンスチープリカー０．５％、）１００ｍｌを分注し、１２０℃、２０分間オートクレーブ殺菌した。これにバシペトスポラ属菌株Ｎｏ．１１４２の１白金耳を接種し、２５℃、１４０回転／分で４日間旋回培養を行った。ここで得られた培養液を、上記培地と同一組成の培地１リットルを分注した５リットル容三角フラスコ（１８本、オートクレーブ殺菌済）に移植し、２５℃、１４０回転／分で７日間旋回培養を行った。培養終了後、得られた培養液を濾過し、濾液と菌体を得た。
この培養菌体を８０％アセトン水５リットルで１晩抽出し、菌体を濾過により除いた後、菌体溶出液とした。この菌体溶出液を減圧濃縮により溶媒除去し、ヘキサン０．５リットル添加後得られた水層についてさらに酢酸エチル０．５リットルにて３回抽出し、酢酸エチル層を減圧濃縮して褐色の油状物質約７７１ｍｇを得た。これについてクロロホルム−メタノール（１００：０〜５）を展開溶媒とするシリカゲルクロマトグラフィー（２．５×２８ｃｍ）を行い、各画分を濃縮乾固し、キサントシリンＸモノメチルエーテルを含む黄色の活性画分Ａ（約３３ｍｇ）及びとキサントシリンＸジメチルエーテルを含む黄色の活性画分Ｂ（約３７ｍｇ）を得た。
引き続き活性画分Ｂについては、クロロホルム−ヘキサン溶媒による結晶化を行い、黄色針状結晶物質キサントシリンＸジメチルエーテルを得た（約３０ｍｇ）。また活性画分Ａについては、ヘキサン−アセトン（３：１〜３）を展開溶媒とするシリカゲルクロマトグラフィー（２．５×２８ｃｍ）を行い、各画分を濃縮乾固し、キサントシリンＸモノメチルエーテルを含む活性画分（約１１ｍｇ）を得た。さらに本画分について、クロロホルム−ヘキサン溶媒による結晶化を行い、黄色針状結晶物質キサントシリンＸモノメチルエーテルを得た（約１０ｍｇ）。
かくして得られた化合物は、以下の理化学的性質を示す。
１）得られたキサントシリンＸモノチルエーテルの理化学的性質：
１．分子量：３０２
２．組成式：Ｃ１９Ｈ１４Ｎ２Ｏ２
３．性状、色：黄色針状結晶の中性物質
４．１Ｈ核磁気共鳴スペクトル：重クロロホルム中で測定した水素核磁気共鳴スペクトルの化学シフト（δ−値）を以下に示す。
δ（ｐｐｍ）：７．７９（２Ｈ，ｄ），７．７２（２Ｈ，ｄ），７．０２（２Ｈ，ｄ），７．０１（１Ｈ，ｓ），６．８７（１Ｈ，ｓ），６．８６（２Ｈ，ｄ），３．８５（３Ｈ，ｓ）
５．１３Ｃ核磁気共鳴スペクトル：重クロロホルム中で測定した炭素核磁気共鳴の化学シフト（δ−値）を以下に示す。
δ（ｐｐｍ）：４８．０，１１４．１，１１５．２，１１５．６，１１６．１，１２３．６，１２６．９，１２７．７，１３１．４，１３１．７，１５９．８，１６１．４，１７３．４，１７３．５
６．マススペクトル：（ＥＩ−ＭＳ）ｍ／ｚ＝３０２（Ｍ＋）
２）得られたキサントシリンＸジメチルエーテルの理化学的性質：
１．分子量：３１６
２．組成式：Ｃ２０Ｈ１６Ｎ２Ｏ２
３．性状、色：黄色針状結晶の中性物質
４．１Ｈ核磁気共鳴スペクトル：重クロロホルム中で測定した水素核磁気共鳴の化学シフト（δ−値）を以下に示す。
δ（ｐｐｍ）：７．７９（４Ｈ，ｄ），７．０２（２Ｈ，ｄ），６．９８（４Ｈ，ｄ），３．８７（６Ｈ，ｓ）
５．１３Ｃ核磁気共鳴スペクトル：重クロロホルム中で測定した炭素核磁気共鳴の化学シフト（δ−値）を以下に示す。
δ（ｐｐｍ）：５５．５，１１４．５，１１６．３，１２４．９，１２７．５，１３１．８，１６１．２，１７３．３
６．マススペクトル：（ＥＩ−ＭＳ）ｍ／ｚ＝３１６（Ｍ＋）
製造例２
５００ｍｌ容三角フラスコに液体培地（組成；可溶性でんぷん２％、グルコース０．５％、酵母エキス０．２％、リン酸マグネシウム１％，脱脂大豆１％）１００ｍｌを分注し、１２０℃、２０分間オートクレーブ殺菌した。これにバシペトスポラ属菌株Ｎｏ．１１４２の１白金耳を接種し、２５℃、１４０回転／分で４日間旋回培養を行った。ここで得られた培養液を、上記培地と同一組成の培地０．９リットルを分注した５リットル容三角フラスコ（５本、オートクレーブ殺菌済）に移植し、２５℃、１４０回転／分で１１日間旋回培養を行った。培養終了後、得られた培養液を濾過し、濾液と菌体を得た。
この培養菌体を８０％アセトン水１．５リットルで１晩抽出し、菌体を濾過により除いた後、菌体溶出液とした。この菌体溶出液を減圧濃縮により溶媒除去し、ヘキサン０．４リットル添加後得られた水層についてさらに酢酸エチル０．８リットルにて３回抽出し、酢酸エチル層を減圧濃縮して褐色の油状物質約６０８ｍｇを得た。これについてクロロホルム−メタノール（１００：０〜５）を展開溶媒とするシリカゲルクロマトグラフィー（２．５×２８ｃｍ）を行い、各画分を濃縮乾固し、３−メトキシキサントシリンＸジメチルエーテルおよび３，３’−ジメトキシキサントシリンＸジメチルエーテルを含む褐色の画分（約３４ｍｇ）を得た。
引き続き、この画分をアセトニトリルに溶解させ、Ｃ１８逆相−分取ＨＰＬＣ（溶出液；７５％アセトニトリル水溶液、溶出速度；１５ｍｌ／分、吸光度検出器、カラム；Ｉｎｅｒｔｓｉｌ  ＰＲＥＰ−ＯＤＳ  ２０ｘ２５０ｍｍ、カラム温度；４０℃）で分離精製して、保持時間１３．３分〜１４．０分の画分を得た。保持時間１３．３分〜１４．０分の画分を濃縮乾固後、アセトニトリルに溶解させ、再びＣ１８逆相−分取ＨＰＬＣ（溶出液；６５％アセトニトリル水溶液、溶出速度：１５ｍｌ／分、吸光度検出器、カラム；Ｉｎｅｒｔｓｉｌ  ＰＲＥＰ−ＯＤＳ  ２０ｘ２５０ｍｍ、カラム温度；４０℃）で分離精製して、保持時間２５．４分および２７．４分の２画分を得た。保持時間２５．４分および２７．４分の画分をそれぞれ濃縮乾固し、茶褐色物質３−メトキシキサントシリンＸジメチルエーテル（約３．６ｍｇ）および茶褐色物質３，３’−ジメトキシキサントシリンＸジメチルエーテル（約５．５ｍｇ）を得た。
かくして得られた化合物は、以下の理化学的性質を示す。
１）得られた３−メトキシキサントシリンＸジメチルエーテルの理化学的性質：
１．分子量：３４６
２．組成式：Ｃ２１Ｈ１８Ｎ２Ｏ３
３．性状、色：茶褐色の中性物質
４．１Ｈ核磁気共鳴スペクトル：重クロロホルム中で測定した水素核磁気共鳴スペクトルの化学シフト（δ−値）を以下に示す。
δ（ｐｐｍ）：７．７９（２Ｈ，ｓ），７．４９（Ｈ，ｄ），７．３６（Ｈ，ｄｄ），７．０３（Ｈ，ｓ），７．０２（Ｈ，ｓ），６．９９（２Ｈ，ｄ），６．９５（Ｈ，ｄ），３．９６（３Ｈ，ｓ），３．９５（３Ｈ，ｓ），３．８８（３Ｈ，ｓ）
５．１３Ｃ核磁気共鳴スペクトル：重クロロホルム中で測定した炭素核磁気共鳴の化学シフト（δ−値）を以下に示す。
δ（ｐｐｍ）：５５．５，５６．１，１１１．２，１１１．９，１１４．５，１１６．３，１１６．２，１２４．６，１２４．９，１２５．１，１２７．６，１２７．８，１３１．８，１４９．１，１５０．９，１６１．２，１７３．３，１７３．５
６．マススペクトル：（ＥＩ−ＭＳ）ｍ／ｚ＝３４６（Ｍ＋）
２）得られた３，３’−ジメトキシキサントシリンＸジメチルエーテルの理化学的性質：
１．分子量：３７６
２．組成式：Ｃ２２Ｈ２０Ｎ２Ｏ４
３．性状、色：茶褐色の中性物質
４．１Ｈ核磁気共鳴スペクトル：重クロロホルム中で測定した水素核磁気共鳴の化学シフト（δ−値）を以下に示す。
δ（ｐｐｍ）：７．７９（２Ｈ，ｄ），７．０８（２Ｈ，ｓ），７．０５（Ｈ，ｓ），７．００（Ｈ，ｓ），６．９９（２Ｈ，ｄ），３．９２（９Ｈ，ｓ），３．８７（３Ｈ，ｓ）
５．１３Ｃ核磁気共鳴スペクトル：重クロロホルム中で測定した炭素核磁気共鳴の化学シフト（δ−値）を以下に示す。
δ（ｐｐｍ）：５５．５，５６．２，６１．１，１０７．４，１１４．６，１１６．０，１１７．５，１２４．７，１２７．５，１２７．８，１２８．３，１３２．０，１４０．１，１５３．３，１６１．４，１７３．５，１７３．９
６．マススペクトル：（ＥＩ−ＭＳ）ｍ／ｚ＝３７６（Ｍ＋）
試験例１  トロンボポエチン（ＴＰＯ）依存性細胞株の増殖促進活性（１）
（１）細胞及び培養
本発明化合物であるキサントシリンＸモノメチルエーテルのトロンボポエチン（ＴＰＯ）レセプター応答性を、ヒト白血病細胞株ＵＴ７／ＥＰＯ−ｍｐｌを用いて測定した。細胞株ＵＴ７／ＥＰＯ−ｍｐｌはＴａｋａｔｏｋｕらの方法（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７２：７２５９−７２６３（１９９７））により、ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓプロモーター制御下にてヒトトロンボポエチンレセプター（ｃ−ｍｐｌ）発現を誘導するベクターをヒト白血病細胞株ＵＴ７／ＥＰＯに導入した安定形質転換細胞株であり、トロンボポエチンに応答して増殖反応を示す。なお、その親株であるＵＴ７／ＥＰＯ細胞はトロンボポエチンに応答性を示さない。上記２種の細胞は１０％牛血清（ＴＲＡＣＥ  ＳＣＩＥＮＴＩＦＩＣ）を含むＩＭＤＭ培地（ＧＩＢＣＯ）中で、ＣＯ２インキュベーター（５％ＣＯ２、３７℃）を用いて継代培養した。
（２）ＭＴＴ法による細胞増殖の測定
上記継代培養細胞をＰＢＳで２回洗浄後、細胞濃度が６×１０４個／ｍｌとなるように１０％牛血清を含むＩＭＤＭ培地に懸濁し、この懸濁液１００μｌを組織培養用９６穴プレート（ＣＯＲＮＩＮＧ）に移した。さらに、別途ＤＭＳＯ中に溶解したキサントシリンＸモノメチルエーテルを１０％牛血清を含むＩＭＤＭ培地にて８３倍希釈した後、上記細胞懸濁液に２０μｌずつ添加した。引き続き、本細胞懸濁液をＣＯ２インキュベーター（５％ＣＯ２、３７℃）中にて４日間培養した。細胞増殖はモスマンらの方法（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ，６５：５５−６３（１９８３））に準じて測定した。すなわち、各穴に１０μｌの５ｍｇ／ｍｌ  ＭＴＴ試薬（ＳＩＧＭＡ）を添加し、３７℃にて４時間加温した。生成したホルマザン色素を各穴当たり１５０μｌのイソプロパノール／０．１ｍｏｌ／Ｌ−ＨＣｌ溶液にて溶解した後、９６穴マイクロプレートリーダー（ＢＩＯ−ＲＡＤ、Ｍ４５０）を用いて５５０ｎｍの吸光度を測定した。ＵＴ７／ＥＰＯ−ｍｐｌ細胞を用いた時の結果を図１に示した。また、トロンボポエチンレセプターが発現していないＵＴ７／ＥＰＯ細胞を用いた時の結果を図２に示した。
試験例２  トロンボポエチンレセプターシグナル伝達活性
本発明化合物であるキサントシリンＸモノメチルエーテルのトロンボポエチンレセプターシグナル伝達活性を、小松らの方法（Ｂｌｏｏｄ，８７：４５５２−４５６０（１９９６））に準じて測定した。ヒト白血病細胞株ＵＴ７／ＥＰＯ−ｍｐｌをＰＢＳで３回洗浄後、細胞濃度が９×１０５個／ｍｌとなるように１０％牛血清（ＴＲＡＣＥ  ＳＣＩＥＮＴＩＦＩＣ）を含むＩＭＤＭ培地（ＧＩＢＣＯ）に懸濁し、ＣＯ２インキュベーター（５％ＣＯ２、３７℃）中にて１８時間培養した。本細胞懸濁液２ｍｌ（７×１０６個／ｍｌ）に終濃度３０ｎｇ／ｍｌのトロンボポエチンあるいは別途ＤＭＳＯ中に溶解した終濃度１μｇ／ｍｌのキサントシリンＸモノメチルエーテルを添加し、３７℃にて１〜１５分加温した後、細胞を１．４ｍｌのＴＮＥバッファー〔２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．４），１５０ｍＭ  ＮａＣｌ，１ｍＭ  ＥＤＴＡ，１％  Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００，１ｍＭ  ＰＭＳＦ，１ｍＭ  Ｎａ３ＶＯ４，１／４００希釈Ｐｒｏｔｅａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｃｏｃｋｔａｉｌ（ＳＩＧＭＡ）〕にて溶解した。溶解液を遠心後、上清を各種シグナル伝達に関与する蛋白質に対する抗体〔ａｎｔｉ−Ｊａｋ２（ＵＰＳＴＡＴＥ  ＢＩＯＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ）、ａｎｔｉ−Ｔｙｋ２（ＵＰＳＴＡＴＥ  ＢＩＯＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ）、ａｎｔｉ−ＳＴＡＴ３（ＳＡＮＴＡ  ＣＲＵＺ  ＢＩＯＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ）、ａｎｔｉ−ＳＴＡＴ  ５Ａ（ＵＰＳＴＡＴＥ  ＢＩＯＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ）、ａｎｔｉ−ＰＬＣγ１（ＵＰＳＴＡＴＥ  ＢＩＯＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ）〕及びプロテインＧセファロース（ＰＨＡＲＭＡＣＩＡ）を用いて免疫沈降した。引き続き蛋白質をサンプルバッファーにて変性し、ＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動（７．５％）にて分離した。これを１００Ｖ、１時間の条件にてＰＶＤＦ膜（ＡＴＴＯ、０．２μｍ）に転写し、アルカリフォスファターゼを標識した抗リン酸化チロシン抗体（ＲＣ２０、ＴＲＡＮＳＤＵＣＴＩＯＮ  ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＩＥＳ）を用いてチロシンリン酸化された蛋白質を検出した。発色には１５０μｇ／ｍｌのＮＢＴ（ＢＩＯ−ＲＡＤ）及び３００μｇ／ｍｌのＢＣＩＰ（ＢＩＯ−ＲＡＤ）を用いた。その結果を表１に示す。
2004016264.tif 000011
図１に示したように、トロンボポエチン応答性細胞株ＵＴ７／ＥＰＯ−ｍｐｌの増殖はキサントシリンＸモノメチルエーテルの添加により濃度依存的に促進された。図２に示したように、本化合物は上記細胞の親株であるＵＴ７／ＥＰＯの増殖には影響を及ぼさなかった。以上の結果より、本発明化合物であるキサントシリンＸモノメチルエーテルはトロンボポエチンレセプターに特異的に作用し、その活性化剤として働くことが明らかとなった。
表１に示したように、キサントシリンＸモノメチルエーテルの刺激によりＪａｋ２、Ｔｙｋ２、ＳＴＡＴ３、ＳＴＡＴ５Ａ及びＰＬＣγ１のリン酸化が促進されることが明らかとなった。このリン酸化促進はトロンボポエチンによるものと同一であった。以上の結果より、本発明化合物はトロンボポエチンと同じシグナルを伝達することによりアゴニスト活性を発現することが明らかとなった。
試験例３  トロンボポエチン（ＴＰＯ）依存性細胞株の増殖促進活性（２）
本発明化合物である３−メトキシキサントシリンＸジメチルエーテルのトロンボポエチン（ＴＰＯ）レセプター応答性を、ヒト白血病細胞株ＵＴ７／ＥＰＯ−ｍｐｌを用いて測定した。
試験例１（１）の方法に従って継代培養した細胞をＰＢＳで２回洗浄後、細胞濃度が６×１０４個／ｍｌとなるように１０％牛血清を含むＩＭＤＭ培地に懸濁し、この懸濁液１００μｌを組織培養用９６穴プレート（ＣＯＲＮＩＮＧ）に移した。さらに、別途ＤＭＳＯ中に溶解した３−メトキシキサントシリンＸジメチルエーテルを１０％牛血清を含むＩＭＤＭ培地にて８３倍希釈した後、上記細胞懸濁液に２０μｌずつ添加した。引き続き、本細胞懸濁液をＣＯ２インキュベーター（５％ＣＯ２、３７℃）中にて４日間培養した。細胞増殖はＷＳＴ−８試薬（岸田化学）を用い、添付の説明書に従って測定した。すなわち、各穴に１０μｌの５ｍＭのＷＳＴ−８試薬溶液を添加し、３７℃にて４時間加温した。生成したホルマザン色素は９６穴マイクロプレートリーダー（日本モレキュラーデバイス、Ｓｐｅｃｔｒａｍａｘ１９０）を用いて４５０ｎｍの吸光度を測定した。ＵＴ７／ＥＰＯ−ｍｐｌ細胞を用いた時の結果を図３に示した。また、トロンボポエチンレセプターが発現していないＵＴ７／ＥＰＯ細胞を用いた時の結果を図４に示した。
図３に示したように、トロンボポエチン応答性細胞株ＵＴ７／ＥＰＯ−ｍｐｌの増殖は３−メトキシキサントシリンＸジメチルエーテルの添加により濃度依存的に促進された．図４に示したように、本化合物は上記細胞の親株であるＵＴ７／ＥＰＯの増殖には影響を及ぼさなかった。以上の結果より、本発明化合物である３−メトキシキサントシリンＸジメチルエーテルはトロンボポエチンレセプターに特異的に作用し、その活性化剤として働くことが明らかとなった。
製剤例１
以下の成分を含有する顆粒剤を製造する。
成分  式（１）で表される化合物                  １０ｍｇ
乳糖                                    ７００ｍｇ
コーンスターチ                          ２７４ｍｇ
ＨＰＣ−Ｌ                                １６ｍｇ
１０００ｍｇ
式（１）で表される化合物と乳糖を６０メッシュのふるいに通す。コーンスターチを１２０メッシュのふるいに通す。これらをＶ型混合機にて混合する。混合末に低粘度ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ−Ｌ）水溶液を添加し、練合、造粒（押し出し造粒  孔径０．５〜１ｍｍ）した後、乾燥する。得られた乾燥顆粒を振動ふるい（１２／６０メッシュ）で篩過し顆粒剤を得る。
製剤例２
以下の成分を含有するカプセル充填用散剤を製造する。
成分  式（１）で表される化合物                  １０ｍｇ
乳糖                                      ７９ｍｇ
コーンスターチ                            １０ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム                    １ｍｇ
１００ｍｇ
式（１）で表される化合物と乳糖を６０メッシュのふるいに通す。コーンスターチを１２０メッシュのふるいに通す。これらとステアリン酸マグネシウムをＶ型混合機にて混合する。１０倍散１００ｍｇを５号硬ゼラチンカプセルに充填する。
製剤例３
以下の成分を含有するカプセル充填用顆粒剤を製造する。
成分  式（１）で表される化合物                  １５ｍｇ
乳糖                                      ９０ｍｇ
コーンスターチ                            ４２ｍｇ
ＨＰＣ−Ｌ                                  ３ｍｇ
１５０ｍｇ
式（１）で表される化合物と乳糖を６０メッシュのふるいに通す。コーンスターチを１２０メッシュのふるいに通す。これらをＶ型混合機にて混合する。混合末に低粘度ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ−Ｌ）水溶液を添加し、練合、造粒した後、乾燥する。得られた乾燥顆粒を振動ふるい（１２／６０メッシュ）で篩過し整粒し、その１５０ｍｇを４号硬ゼラチンカプセルに充填する。
製剤例４
以下の成分を含有する錠剤を製造する。
成分  式（１）で表される化合物                  １０ｍｇ
乳糖                                      ９０ｍｇ
微結晶セルロース                          ３０ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム                    ５ｍｇ
ＣＭＣ−Ｎａ                              １５ｍｇ
１５０ｍｇ
式（１）で表される化合物と乳糖と微結晶セルロース、ＣＭＣ−Ｎａ（カルボキシメチルセルロース  ナトリウム塩）を６０メッシュのふるいに通し、混合する。混合末にステアリン酸マグネシウムを添加し、製剤用混合末を得る。本混合末を直打し１５０ｍｇの錠剤を得る。
製剤例５
静脈用製剤は次のように製造する。
式（１）で表される化合物                      １００ｍｇ
飽和脂肪酸グルセリド                        １０００ｍｌ
上記成分の溶液は通常、１分間に１ｍｌの速度で患者に静脈内投与される。
【産業上の利用可能性】  本発明化合物は、トロンボポエチンレセプターに親和性及びアゴニスト作用を示すため、トロンボポエチンレセプター活性化作用が有効な疾患の予防・治療・改善薬、特に、血小板減少症等の血小板数の異常を伴う血液疾患の病態に対する薬剤や血管内皮および内皮前駆細胞の分化増殖を促進することで治療予防できる病態に対する薬剤として用いることができ、医薬品として有用である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【国際調査報告】
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