(57)【要約】本発明は、大豆７Ｓたん白を有効成分とする体脂肪低減剤又は体脂肪増加抑制剤及びそれらを含有する食品である。大豆蛋白７Ｓたん白は、１１Ｓグロブリンとの分離を良くすることにより純度を上げた、好ましくは極性脂質及びフィチン酸の低減されたものを用いる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
大豆７Ｓたん白を有効成分とする体脂肪低減剤又は体脂肪増加抑制剤。
【請求項２】
体脂肪率３０％以上の肥満の人向けの請求項１の体脂肪低減剤。
【請求項３】
大豆７Ｓたん白の固形分中の極性脂質が２．５％以下である請求項１〜２の何れかに記載の体脂肪低減剤又は体脂肪増加抑制剤。
【請求項４】
大豆７Ｓたん白の固形分中のフィチン酸含量が１．２％以下である請求項１〜２の何れかに記載の体脂肪低減剤又は体脂肪増加抑制剤。
【請求項５】
請求項１記載の体脂肪低減剤又は体脂肪増加抑制剤を含有する食品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】大豆７Ｓたん白を有効成分とする体脂肪低減剤又は体脂肪増加抑制剤及びそれらを含有する食品に関する。
【背景技術】  大豆蛋白質は植物性蛋白質の中で栄養性が優れているだけでなく、近年では様々な生理活性効果が見出され、生理機能剤としても注目される食品素材である。例えば、大豆蛋白質が肝臓での脂肪酸合成酵素の活性を抑えることにより、中性脂肪を低下させることを入谷ら（Ｊ．Ｎｕｔｒ．，１２６，３８０，１９９６）が明らかにしている。また、全大豆グロブリン、７Ｓグロブリン、１１Ｓグロブリンの各々が血中及び肝臓脂質に与える影響が検討されており、動物性蛋白質であるカゼインに比べて、血中のコレステロールや中性脂肪を低減する能力において総じて優れることが示された（沖田らのＪ．Ｎｕｔｒ．，２７，３７９，１９８１）。
一方、大豆由来の蛋白には、細胞膜をはじめプロテインボディー・オイルボディー等の膜を構成する極性脂質との親和力の高い蛋白も存在しており、佐本らにより「脂質会合蛋白質」と名付けられている。「脂質会合蛋白質」は膜蛋白質を主体とする蛋白群の総称で、特にＳＤＳ−ポリアクリルアミド電気泳動による推定分子量において主に３４ｋＤａ、２４ｋＤａ、１８ｋＤａを示す蛋白質を含み、クロロホルム：エタノール＝２：１の極性溶媒により抽出される極性脂質を１０重量％程度含有する画分であり、工業的に生産される分離大豆蛋白の約３５％をも占めていることが佐本らにより報告されている（Ｂｉｏｓｃｉ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，６２（５），９３５−９４０（１９９８））。また、脂質会合蛋白質は風味が悪く、高いアレルゲン性を有している。
但し、大豆蛋白質の蛋白質組成の検定によく用いられるＳＤＳ−ポリアクリルアミド電気泳動法では、脂質会合蛋白質は染色性に乏しいため、実際の存在量よりもはるかに低く見積もられるか、全く考慮されない場合が多かった。
上記のように、大豆７Ｓグロブリンに関しては、これまで、血中のコレステロールや中性脂肪低減に対しての効果は示されてきたが、大豆７Ｓグロブリンを用いた体脂肪の低下又は体脂肪の増加抑制効果に関する例は報告されていない。
本発明者らは、大豆蛋白質から７Ｓグロブリンを多く含む大豆７Ｓたん白を分画し、これを摂取することにより体脂肪が低減或いは増加を抑制することを発見し、本発明に至った。
すなわち、本発明は、大豆蛋白質中から大豆７Ｓグロブリンを多く含む７Ｓたん白を分画することにより、大豆７Ｓたん白を有効成分とする体脂肪低減剤又は体脂肪増加抑制剤及びそれらを含有する食品として、提供することを課題とする。
【発明の開示】
本発明は、大豆７Ｓたん白を有効成分とする体脂肪低減剤または体脂肪増加抑制剤である。本発明は、体脂肪の増加を抑制するのみならず、特に体脂肪率３０％以上の肥満の人に対しては積極的に体脂肪を低減する効果も有する。また、本発明は、上記の体脂肪低減剤または体脂肪増加抑制剤を含有する食品に関するものである。
即ち、本発明は、
（１）  大豆７Ｓたん白を有効成分とする体脂肪低減剤又は体脂肪増加抑制剤、
（２）  体脂肪率３０％以上の肥満の人向けの（１）の体脂肪低減剤、
（３）  大豆７Ｓたん白の固形分中の極性脂質が２．５％以下である（１）〜（２）の何れかに記載の体脂肪低減剤又は体脂肪増加抑制剤、
（４）  大豆７Ｓたん白の固形分中のフィチン酸含量が１．２％以下である（１）〜（２）の何れかに記載の体脂肪低減剤又は体脂肪増加抑制剤、
（５）（１）記載の体脂肪低減剤又は体脂肪増加抑制剤を含有する食品
を、提供するものである。
【発明を実施するための最良の形態】本発明において、大豆７Ｓたん白とは、大豆７Ｓグロブリンを多く含むたん白を指す。また大豆７Ｓグロブリンとは、一般に可溶性の球状蛋白質の総称であるグロブリンの中、分子量の超遠心沈降係数が７Ｓに相当するものを言う。グロブリンにはその分子量分布で２Ｓ、７Ｓ、１１Ｓ、１５Ｓが存在し、そのうち、７Ｓと１１Ｓが大豆の様な豆科植物の貯蔵蛋白質には多量に含まれていることが知られている。なお、大豆の７Ｓグロブリンは、免疫学的命名法にいうβ−コングリシニンに実質的に相当する。
本発明における大豆７Ｓたん白を得るには、下記に示すように公知の１１Ｓグロブリンを除去する方法を採用できる。例えば、現在各グロブリン成分の分画方法として広く用いられているタン・シバサキの方法（Ｔｈａｈｎ，Ｖ．Ｈ．，ａｎｄ  Ｓｈｉｂａｓａｋｉ，Ｋ．，Ｊ．Ａｇｒｉｃ．ＦｏｏｄＣｈｅｍ．，２４，１１７，１９７６）はもちろん、その他いわゆるクリオプレシピテーション（Ｂｒｉｇｇｓ，Ｄ．Ｒ．，ａｎｄ  Ｍａｎｎ，Ｒ．Ｌ．，Ｃｅｒｅａｌ  Ｃｈｅｍ，２７，２４３，１９５０）による冷却不溶区分（Ｃｏｌｄ−ｉｎｓｏｌｕｂｌｅ  ｆｒｕｃｔｉｏｎ／ＣＩＦと呼ばれる）や、ウルフらによる（Ｗｏｌｆ，Ｗ．Ｊ．，ａｎｄ  Ｓｌｙ，Ｄ．Ａ．，Ｃｅｒｅａｌ  Ｃｈｅｍ，４４，６５３，１９６７）０．１Ｎ塩化カルシウム添加による分画法等いずれの分画法によっても良い。また、ＵＳ特許（ＵＳ−６１７１６４０）により開示されているような１１Ｓグロブリン画分の欠損した育種大豆を用いてもよい。
上記いずれかの方法等により１１Ｓグロブリンを除去した後、７Ｓたん白を等電点沈殿による精製やその後の中和殺菌の工程により調製することができる。ただし、この際、還元剤は用いずとも十分使用に耐えうる純度の７Ｓたん白が分画でき、また体脂肪低減剤又は体脂肪増加抑制剤として使用する場合も、還元剤を含まない方がより広い範囲の用途が期待できる。
７Ｓたん白の純度（後述のＳＰＥ基準）は、７Ｓグロブリンの含量が４０％以上、好ましくは６０％以上、より好ましくは８０％以上、最も好ましくは９０％以上である。純度が高いほど、より少量の摂取で効果が得られる。
１１Ｓグロブリンとの分離効率を上げることで、純度の高い７Ｓたん白を得ることができる。その方法として、大豆蛋白を含む溶液を微酸性下で加温した後、ｐＨ５．６〜６．６において７Ｓたん白を多く含む可溶性画分と、１１Ｓたん白を多く含む不溶性画分に分画する方法が例示される。この方法により、脂質会合たん白質の指標である極性脂質が固形分中に１％以下の高純度７Ｓたん白得られる。また、１１Ｓグロブリンの分離前にフィチン酸をフィターゼのような酵素で分解除去する方法も有効である。この方法により、フィチン酸含量が固形分中に１．２％以下の、通常は０．２％以下の高純度の低フィチン酸７Ｓたん白得られる。また、両方法を併用することにより、さらに分離性は向上する。
体脂肪率による肥満度は、男女別、年齢別により異なるが、一般的に男性の場合、体脂肪率３０％以上が肥満、体脂肪率３５％以上が極度の肥満で、女性の場合、体脂肪率３０％以上が軽度の肥満、体脂肪率３５％以上が肥満、体脂肪率４０％以上が極度の肥満といわれる。本発明の体脂肪低減剤は、体脂肪率３０％以上の肥満の人に好適で、好ましくは体脂肪３５％以上の肥満の人に好適に体脂肪低減効果がある。一方、本発明の体脂肪増加抑制剤は、体脂肪率に関わらず効果がある。
本発明の体脂肪低減剤又は体脂肪増加抑制剤は、１日あたり大豆７Ｓたん白を３ｇ以上、好ましくは５ｇ以上摂取することで効果があるが、効果の面からも、栄養の偏りを避ける意味からも、一日あたり１５ｇ以下の摂取で十分である。
本発明における剤は、得られた大豆７Ｓたん白を有効成分として経口投与用の組成物とすることができ、例えば、公知の方法に従って粉末状、打錠状、顆粒状等の剤形の組成物とすることができる他、各種の食品にも使用することができる。適宜、各種食品に利用する素材、添加剤などを添加することができる。
本発明の有効成分として用いる大豆７Ｓたん白は食用として使用できる安全性の高いものであり、食品への配合量、摂取量は特に限定するものではなく、そのまま摂取しても、また、食餌療法として食品に添加してもよい。
本発明における剤又は食品としては、タブレット状、飲料、ヨーグルト、煎餅、パン、ゼリーなどを含め、特に制限なく提供することができる。飲料としては、本発明の大豆７Ｓたん白、糖、水、安定剤、果汁等を混合し、ＰＨ３．５〜４．５に調製後、均質化しフレーバー等を添加し加熱、冷却し７Ｓたん白を１〜１０％含むものを得ることができる。また、ゲル化剤と組み合わすことでゼリー様食品にすることもできる。ヨーグルトは、７Ｓたん白とクリームヨーグルト、水、糖、ゲル化剤などを混合し、ｐＨ３．５〜４．５に調製後、加熱殺菌することで７Ｓたん白を１〜１５％含むヨーグルト様食品を得ることができる。煎餅については、３０％以上７Ｓたん白に澱粉性物質、調味料等を配合した混合物に、除々に水を加え混練した生地を分割し、１２０℃〜３００℃で挟み焼きし乾燥させることで得られる。パンは、ホスファチジルコリン含有量が４５％以上のリン脂質を併用することにより、小麦粉に対して２〜１８％の７Ｓたん白を用いたパンが作成できる。
以下に、本発明の有効性を実施例と共に示すが、これらの例示によって本発明の技術思想が限定されるものではない。
本発明に用いた主な分析方法は以下の通りである。
＊ＳＤＳ−ポリアクリルアミド電気泳動；Ｌ  ａｅｍｍｌｉ（Ｎａｔｕｒｅ、２２７、６８０（１９７０））の方法に基づきゲル濃度１０−１２％のグラディエントゲルで分析した。アプライ量は１０μｇとした。
＊フィチン酸；Ａｌｉｉ  Ｍｏｈａｍｅｄの方法（Ｃｅｒｅａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ６３，４７５−４７８．１９８６）に準拠して測定した。
＊クロメタ油分；乾物試料に対してクロロホルム・メタノールの混合液（容量比、２：１）を約５０倍加え、１６０℃にて抽出される画分を秤量しクロメタ油分とした。
＊純度（ＳＰＥ基準）；上記のＳＤＳ−ポリアクリルアミド電気泳動で得られた泳動パターンをデンシトメーターで面積として測定し、該当画分の全面積に対する面積比率を純度（ＳＰＥ基準）とした。ここに７Ｓグロブリン含量はα、α’、βサブユニットの総量を指す。純度測定方法は、これ以外に下記に示すように、混在する脂質会合たん白の量も考慮した補正純度で求める場合もあるが、本願ではＳＰＥ基準に準じた。
＊補正純度；当該試料中に７Ｓグロブリン以外に、クロメタ油分の１０重量倍に相当する脂質会合たん白質が混在する。そこで、試料のＳＰＥ基準による純度の値をＡ％として、全たん白に対する純度として算出する。
補正純度（％）＝（１００（％）−クロメタ油分（％）＊１０）＊Ａ（％）／１００
＊  体脂肪；体の電気抵抗を測定して体脂肪を算出した。具体的には、株式会社タニタ製「８電極方式体組成計ＢＣ−１１８」で体脂肪率を測定した。
製造例１（高純度低フィチン酸７Ｓたん白の調製）
低変性脱脂大豆１重量部に、１０重量部の４０℃の抽出水を加え、塩酸にてｐＨ５．３に調整した。この溶液に蛋白重量あたり８ｕｎｉｔ相当のフィターゼ（ノボ社製「ＰＨＹＴＡＳＥ  ＮＯＶＯ  Ｌ」）を加え、４０℃にて蛋白の抽出と酵素反応を併せた３０分間の処理を行い、酵素処理した抽出スラリーを得た。この酵素処理抽出スラリーを２５℃付近まで冷却し、塩酸にてｐＨ６．１に調整し、バッチ式遠心分離機（１，２００Ｇ）で遠心分離した。このとき可溶性画分と不溶性画分は明確な分離をした。なお、この遠心分離時の溶液温度は２５℃付近であった。次に、可溶性画分を塩酸にてｐＨ４．９に調整後、遠心分離して沈澱カードを得た。沈澱カードは加水（４倍重量）し、１０倍量の水で水洗後、苛性ソーダで中和し、１４０℃１５秒間殺菌を行ったのち直ちに噴霧乾燥してフィターゼ処理した大豆７Ｓたん白を得た。
このようにして得られた高純度大豆７Ｓたん白の純度（ＳＰＥ基準）は９５％であった。またフィチン酸含量が固形分中０．０５％であり、フィチン酸がほぼ完全に分解、除去されていることを確認した。一方、本品のクロメタ油分含量は０．５％であった。さらにシスチンとメチオニンの含硫アミノ酸の合計は１２ｍｇ／ｇ蛋白質で本来５ｍｇ／ｇ蛋白質である精製７Ｓと比べてもかなり不純物の少ない高純度の大豆７Ｓたん白であることがが示唆された。
製造例２（高純度低フィチン酸７Ｓたん白の調製  その２）
脱脂大豆に１：１０の重量割合で水を加え、随時ｐＨを７．０に調整しながら１時間撹拌し、この混合物を遠心分離（４、０００ｒ．ｐ．ｍ．，２０℃で１０分間）し、得られた上澄液をｐＨ６．０に調整して、フィターゼ（フィターゼノボＬ：ノボインダストリー社製）をたん白質当たり０．２％添加後、４０℃で１時間反応させた。この反応液をｐＨ６．０に再調整後、遠心分離（４、０００ｒ．ｐ．ｍ．，２０℃で１０分間）して得られた上澄液を、ｐＨ５．０に調整し、遠心分離（４、０００ｒ．ｐ．ｍ．，４℃で１０分間）した。得られた沈殿物を回収し加水後、ｐＨ７．０に中和して殺菌し、噴霧乾燥して低フィチン酸大豆７Ｓたん白を得た。
このようにして得られた高純度低フィチン酸７Ｓたん白の純度（ＳＰＥ基準）は８８％であることがしめされた。またフィチン酸含量が固形分中０．０５％であり、フィチン酸がほぼ完全に分解、除去されていることを確認した。一方、本品のクロメタ油分含量は１．０％であった。さらにシスチンとメチオニンの含硫アミノ酸の合計は１６ｍｇ／ｇ蛋白質で本来５ｍｇ／ｇ蛋白質である精製７Ｓと比べても不純物の少ない高純度の大豆７Ｓたん白であることがが示唆された。
製造例３（低フィチン酸７Ｓたん白の調製）
脱脂大豆に１：１０の重量割合で水を加え、随時ｐＨを７．０に調整しながら１時間撹拌後遠心分離（４，０００ｒ．ｐ．ｍ．，２０℃で１分間）し上澄液を得た。得られた上澄液をｐＨ６．４に調整して、４℃にて一晩放置して、遠心分離（４，０００ｒ．ｐ．ｍ．，４℃で１０分間）して沈殿を除去した。得られた上澄液を、ＰＨ４．５に調整し、遠心分離（４，０００ｒ．ｐ．ｍ．，４℃で１０分間）して得られた沈殿物を回収して７Ｓたん白カードとした。
この７Ｓたん白カードに４倍量の水を加え、ＰＨ６．０に調整後、フィターゼ（フィターゼノボＬ：ノボインダストリー社製）を蛋白質当たり０．２％添加後、４０℃で１時間反応させた。この反応液をｐＨ５．０に調整後、遠心分離（４，０００ｒ．ｐ．ｍ．，２０℃で１０分間）してホエー画分を除き、低フィチン酸７Ｓたん白カードを得た。低フィチン酸７Ｓたん白カードはともに加水後、ＰＨ７．０に中和して殺菌し、噴霧乾燥して低フィチン酸７Ｓたん白を得た。このようにして得られた７Ｓグロブリンの純度（ＳＰＥ基準）は８０％であった。またフィチン酸含量は固形分中０．０５％であり、フィターゼ処理によりフィチン酸がほぼ完全に分解、除去されていることを確認した。また本品のクロメタ油分含量は２．８％であった。一方、シスチンとメチオニンの含硫アミノ酸の合計は２５ｍｇ／ｇ蛋白質で、本来５ｍｇ／ｇ蛋白質である精製７Ｓに比べ高い値を示し、まだ不純物の多いことが示唆された。
試験例１［体脂肪低減効果］
製造例１で調製した高純度低フィチン酸７Ｓたん白３２部と粉末マルトース（ファイントース／株式会社林原商事製）６８部の混合物に、水６部、エタノール１４部を加え混練した。この混合物を６０℃の乾燥器にて１０時間乾燥させた後、１ｍｍ目のふるいを通した。この処理の後、上記混合物９４部にシュガーエステル（ＤＫ−エステル／第一工業製薬株式会社製）３部、粉末果汁（小川香料株式会社製）２部、クエン酸１部を加え、打錠器にて一錠当り０．５ｇ高純度低フィチン酸７Ｓたん白を含むタブレット（１．７ｇ／タブレット）を得た。
これを４週間に渡って、朝・夕各食事前に６粒づつ、計１２粒（７Ｓグロブリンとして約５ｇ）摂取し、摂取開始前と２・４週間後の体脂肪率をインピーダンス式体組成測定装置（装置名ＢＣ−１１８／株式会社タニタ）で測定した。
その結果、表１のような結果が得られ、大豆７Ｓグロブリンを毎日約５ｇ摂取することにより体脂肪率が有意に低下することが示された。特にその傾向は初期体脂肪率の高い人で顕著であり、７Ｓグロブリンが単なる除脂肪効果ではなく、体内のホメオスタシスとも呼応した優れた体脂肪低減効果を示すことが明らかとなった。［図１］は体脂肪率毎の人数分布（摂取前〜摂取４週間）を示す図である。
［図２］は初期体脂肪率と摂取（４週間）後の体脂肪率の変化を示す図である。
【表１】
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なお、同様の試験を製造例３で得られたクロメタ油分の高い７Ｓたん白でもおこなった。その結果、体脂肪率の低下は上記と同様の傾向が得られたが、製造例１で得られたものに比べて風味の点で劣り、被験者から継続摂取しにくいという意見がみられた。
試験例２［体脂肪増加抑制効果］
製造例２で調製した高純度低フィチン酸７Ｓたん白１００部に水１４部にクエン酸６部とエタノール８０部を加え混練りした。この混合物を５０℃の乾燥器にて１０時間乾燥させた後、１ｍｍ目のふるいを通した。この処理粉体５６．２部と粉末マルトース（ファイントース／株式会社林原商事製）３３．２部と粉糖１０．６部の混合物に、８０％エタノール液を４０部を加え混練した。この混合物を５０℃の乾燥器にて１０時間乾燥させた後、１ｍｍ目のふるいを通した。この処理の後、上記混合物９４．５部にシュガーエステル（ＤＫ−エステル／第一工業製薬株式会社製）３部、粉末果汁（小川香料株式会社製）２部、香料０．５部を加え、打錠器にて一錠当り０．７５ｇ高純度低フィチン酸７Ｓたん白を含むタブレット（１．５ｇ／タブレット）を得た。またプラセボ食品として、上記高純度低フィチン酸７Ｓたん白を糖、デキストリン、澱粉に置換し、クエン酸を減量し酸味調整をした配合の炭水化物を主体とするタブレット（１．５ｇ／タブレット）を作製した。表２は試験食品とプラセボ食品の組成を示す。
【表２】
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被験対象者は２８名、試験期間は１６週間とし、上記７Ｓグロブリン含有の試験食品と炭水化物主体タブレットであるプラセボ食品を各々８週間毎、二重盲検、クロスオーバー方式にて摂取した。通常の朝・夕各食事前に４粒づつ摂取（朝食とらない場合のみ昼食、夕食前に摂取）、計８粒（７Ｓグロブリンとして約５ｇ）摂取した。摂取開始前と４週間、８週間、１２週間、摂取終了の１６週間での体脂肪率をインピーダンス式体組成測定装置（装置名ＢＣ−１１８／株式会社タニタ）で測定した。体脂肪率の測定は、昼休み乃至夕方の各々同時間帯で、水分の影響が少なくなるように食事前の排尿後に施行した。図３に試験方法を図解した。
その結果、表３（Ａ群）、表４（Ｂ群）のような結果が得られ、これらＡ群、Ｂ群併せた成績（図４）において、プラセボ食品摂取期間に体脂肪率の上昇が見られ（ｐ＜０．０１）、変化の平均±標準偏差は０．８±１．４％となった。一方、試験食摂取期間中には体脂肪率の増加が抑えられ、変化の平均±標準偏差は０．１±１．１％となり、プラセボ食期間の変化に比べて有意に低値であった（ｐ＜０．０５）。大豆７Ｓグロブリンを毎日約５ｇ摂取することにより体脂肪率の増加が有意に抑制されることが示された。
【表３】
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【表４】
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本発明は、低フィチン酸７Ｓたん白の体脂肪低減能又は体脂肪増加抑制能の有効性を示すものであり、大豆７Ｓたん白を１日約５ｇ摂取することにより、体脂肪の低減または増加抑制等の効果を示すものである。
【産業上の利用可能性】  以上説明したとおり、本願発明は大豆７Ｓたん白を有効成分とする剤または食品を摂取することで、体脂肪の低減効果または増加抑制効果を奏するものである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【国際調査報告】
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