(57)【要約】【課題】ＭＡＬＤＩ質量分析用のサンプルプレート上に均一に再結晶化溶媒を付着させるための装置を提供する。【解決手段】溶媒の気化温度以上の耐熱性を有すると共にサンプルプレートを収容して密閉できる函体１と、この中に前記サンプルプレートを出し入れする扉４付きの出入口３と、函体１内でサンプルプレートを底から浮かせてほぼ水平に支える通気性の支持体（金網２）とを備えて構成される。この装置に適量の溶媒を導入して密閉し、外部から加温して内部に溶媒蒸気を充満させ、これにサンプルプレートを出入口３から挿入して金網２上に水平に載置すると、サンプルプレート上にほぼ均一に溶媒が結露するから、数秒後に取り出して室温で暫時静置すれば、溶媒の揮発に伴い均一な結晶が再び生成する。【選択図】          図１
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【実用新案登録請求の範囲】
【請求項１】
サンプルプレート上に調製されたＭＡＬＤＩ質量分析用サンプルに再結晶化のための溶媒を添加するサンプル再結晶化装置であって、前記溶媒の気化温度以上の耐熱性を有すると共に前記サンプルプレートを収容して密閉できる函体と、該函体内に前記サンプルプレートを出し入れする扉または蓋を備えた出入口と、前記函体内で前記サンプルプレートを函体の底面から浮かせてほぼ水平に支える通気性の支持体と、を備えることを特徴とするサンプル再結晶化装置。
【請求項２】
前記函体の底面に対して傾斜した天井面、または上に凸形の天井面を備えることを特徴とする請求項１記載のサンプル再結晶化装置。
【考案の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本考案は、マトリックス支援レーザ脱離イオン化法（Matrix Assisted Laser Desorption /Ionization、以下、ＭＡＬＤＩと略記する）による質量分析においてサンプルを調製する過程で用いるサンプル再結晶化装置に関する。
【背景技術】
【０００２】
ＭＡＬＤＩは、レーザ光を吸収し易く且つイオン化し易いマトリックスと呼ばれる物質をサンプルに予め混合しておき、これにレーザ光を照射することで試料をイオン化する方法である。具体的には、通常、マトリックスは液体状態でサンプルに添加され、このマトリックスがサンプルに含まれる分析対象物質を取り込み、マトリックスが揮発するにつれてマトリックスと分析対象物質の混合結晶ができる。これにレーザ光を照射すると、分析対象物質、マトリックス、レーザ光の相互作用により、分析対象物質をイオン化することができる。ＭＡＬＤＩ質量分析は分子量の大きな高分子化合物をあまり開裂させることなく分析することが可能であり、しかも微量分析にも好適であることから、近年、生命科学などの分野で広範に利用されている。
【０００３】
ＭＡＬＤＩ質量分析におけるサンプルはサンプルプレートと呼ばれる金属板上に調製される。即ち、サンプル液をサンプルプレートに滴下し、さらにマトリックスを加えて乾燥させ、サンプルとマトリックスの混合結晶を生成させる。例えば、糖鎖サンプルの場合、マトリックスとしては主に2,5-dihydroxybenzoic acid（ＤＨＢ）が用いられる。ところが、このサンプル／マトリックス結晶は、前述の一般的調整法ではサンプルプレート上には均一には形成されず、非常に偏りを持った結晶となる。そのためＭＡＬＤＩ質量分析のオペレータは、測定のたびにイオンが検出できる場所を探しながらレーザ光を照射しなければならず、熟練者以外には難しい作業であった。
【０００４】
測定中にイオン化位置を探す作業を省くために、サンプル／マトリックス結晶の再結晶化という手法が既に利用されている。例えば、非特許文献１に記されたマトリックス・レイヤー法は再結晶化の過程を含むサンプル前処理法の一つである。再結晶化とは、再結晶化溶媒（揮発性の有機溶媒１００％から成る）をサンプル／マトリックス結晶に添加して一旦溶解させた後、溶媒を短時間で揮発させることにより均一性の高い結晶を再度生成させる手法である。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】I.Garaguso,J.Borlak「 Matrix layer sample preparation:An improved MALDI-MS peptide analysis method for proteomic studies」Proteomics 2008,8, Wiley-VCH Verlag & co.
【考案の概要】
【考案が解決しようとする課題】
【０００６】
上記の再結晶化に当たって、オペレータはピペット等を用いて溶媒をサンプルプレートに滴下しなければならない。サンプルプレートは、例えば９０ｍｍ×１４０ｍｍ程度のサイズであり、これに例えば２４行１６列に合計３８４ものウェルが配列されており、各ウェルに前記のサンプル／マトリックス結晶が調製されている。従って、再結晶化の操作としては、この多数のウェルに対して手動による溶媒滴下処理を行なうことが求められ、オペレータは長時間の集中した作業を強いられることになる。
【０００７】
こうした作業の負担を軽減するために、塗装用のスプレーガンを用いてサンプルプレートに溶媒を噴霧する方法も試みられた。しかし、この方法では溶媒を均一に吹き付けることが難しく、その結果として再結晶化が成功する部分と失敗する部分が生じることがあり、必ずしも効果的な方法であるとは言えない。
【０００８】
本考案は上記事情に鑑みてなされたものであり、ＭＡＬＤＩ質量分析用のサンプルプレート上に均一に再結晶化溶媒を付着させるためのサンプル再結晶化装置を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本考案装置は、上記課題を解決するために、溶媒の気化温度以上の耐熱性を有すると共にサンプルプレートを収容して密閉できる函体と、この函体内に前記サンプルプレートを出し入れする扉または蓋付きの出入口と、函体内でサンプルプレートを函体の底から浮かせてほぼ水平に支える通気性の支持体とを備えて構成される。
【００１０】
上記構成の装置に適量の再結晶化溶媒を導入して密閉し、外部から加温して函体内に溶媒蒸気を充満させ、これにサンプル／マトリックス結晶が調製されたサンプルプレートを挿入し支持体上に水平に載置すると、サンプルプレート上にほぼ均一に溶媒が結露するから、数秒後に取り出して室温で暫時静置すれば、結露した溶媒の揮発に伴い均一なサンプル／マトリックス結晶が再び生成する。
【００１１】
また、本考案の第２は、上記構成において、函体の底面に対して傾斜した天井面、または上に凸形の天井面を備える。これにより天井面の内面に生じた結露が函体内に置かれたサンプルプレート面へ滴下することを防止できる。
【考案の効果】
【００１２】
本考案装置を使用することにより、サンプルプレート上に存在する多数のサンプル／マトリックス混合結晶が均一に再結晶化され、従来オペレータが行なっていた手動で再結晶化溶媒を滴下する手間を省き、作業の失敗を回避することができる。さらに、再結晶化されたサンプル／マトリックス混合結晶はウェル内に均一に分布するため、ＭＡＬＤＩ質量分析に際してオペレータは局在化した結晶を目視で探してイオン化のためのレーザ照射位置を定める作業を省くことができる。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】本考案の一実施例を示す図である。
【図２】本考案の変形例を示す図である。
【考案を実施するための形態】
【実施例１】
【００１４】
図１に本考案の一実施例を示す。同図に示すとおり本実施例装置は、天井面１１、底面１２、前面１３、背面１４および左右の側面１５から成る函体１を主要構成要素とする。
材料はステンレス等の金属板であり、サイズは、例えば巾１２０、高さ５０、奥行き１７０（以下、単位は全てｍｍ）程度である（適用サンプルプレート、９０×１４０の場合）。
【００１５】
前面１３には、サンプルプレートを出し入れするための出入口３が開設され、扉４により開閉できる。出入口３のサイズは、巾１００、高さ１５程度で、その下縁は底面１２からの高さ２０〜２５に位置する。この出入口３の下縁とほぼ同じ高さに、サンプルプレートを載置するための金網２が底面１２と平行に張設されている。扉４はその裏面にパッキン（図示しない）を有し、掛け金４１を掛けることで出入口３を密閉できる。
【００１６】
背面１４には、溶媒導入口５として、函体１の内外を連通するパイプが溶接されており、その外部側末端はプラグ５１により栓塞される。また、天井面１１には内部温度を測定する温度計６が装着されている。
【００１７】
上記の如く構成された装置を用いるサンプルの再結晶化処理は下記のとおりである。
まず溶媒導入口５から再結晶化用溶媒（例えばエタノール）を数ｍＬ注入し、その後、プラグ５１で溶媒導入口５を塞ぐと共に扉４を閉じ掛け金４１を掛けて装置を密閉状態にしてから溶媒の沸点ないしそれ以上の温度（溶媒がエタノールの場合は８５℃）に温度設定したプレートオーブン（または、ホットプレート、図示しない）の上に水平に載せて加温する。
装置内部温度が溶媒の沸点前後の温度まで上昇して溶媒が気化したら、サンプル／マトリックス混合結晶を形成させた室温状態のサンプルプレートを出入口３から挿入して金網２の上に載置し、一度扉４を閉じ数秒後に扉４を開けてサンプルプレートを取り出す。
【００１８】
これにより、装置から取り出したサンプルプレート面には溶媒が結露しているから、そのまま室温で静置し、サンプル／マトリックス混合結晶が再結晶化するまで数十分待つ。
なお、使用にあたっては、排気設備のあるドラフト内で行なう等、有機溶媒が人体に悪影響を及ぼさないように注意する必要がある。
【００１９】
図１に示す構成では、天井面１１は水平、即ち底面１２に平行に構成されているが、熱源に接する底面１２と比較して天井面１１は低温であるから、天井面１１の内面に溶媒蒸気が結露する可能性がある。もし、結露が金網２上に載置されたサンプルプレート面に滴下すれば、均一な再結晶化は望めない。
図２に、そのような事態を避けるための変形例を示す。同図においては、函体１の全体的構成のみを示し、細部構造は図１と同様であるから省略されている。
【００２０】
同図（ａ）は、天井面１１を底面１２（図２には明示しない、図１参照）と平行とはせずに、底面１２に対して傾斜させた例であって、天井面１１の内面に生じた結露は傾斜に従って流れ、側面１５の壁を伝って流下するから、函体１の内部中央に置かれたサンプルプレート面への滴下を防止できる。
同図（ｂ）は天井面１１を屋形に、同図（ｃ）は蒲鉾形に構成した例であり、いずれも上に凸形の天井面１１を備えた構成であって、その作用効果は（ａ）の場合と同様である。
【００２１】
この他、本考案には種々の変形の可能性がある。
例えば、溶媒は扉４を開けてシリンジやスポイトを用いて導入することもできるから、溶媒導入口５を省いて構成を簡略化できる。また、加熱用のプレートオーブンの設定温度と函体１内の温度の関係を予め測定しておけば、温度計６を省いても実用上の支障はない。また、サンプルプレートを支持する金網２は、底面１２で気化した溶媒が函体１内の上部空間に充満することを妨げない程度の通気性を持つ他の支持体、例えば穴あき板等で置き換えることができ、扉４も出入口３を覆う蓋で置き換え可能である。
【００２２】
前記実施例は加熱のためにプレートオーブン等の外部熱源を必要とするが、函体１の下部にヒータと温度調節器を組み込んでもよい。これにより外部熱源は不要となる。
また、函体１内部を洗浄するために、一部の面、例えば天井面１１等を開閉可能に構成してもよい。さらにまた、天井面１１の一部をガラス張りにして、結露状態を目視できるようにしてもよい。
また、本考案で前処理するサンプルとしては、熱による分解の少ない糖鎖とすることが好ましい。
【産業上の利用可能性】
【００２３】
本考案は、ＭＡＬＤＩ質量分析におけるサンプル前処理に利用できる。
【符号の説明】
【００２４】
１  函体
２  金網
３  出入口
４  扉
５  溶媒導入口
６  温度計
１１  天井面
１２  底面
１３  前面
１４  背面
１５  側面
４１  掛け金
５１  プラグ
【図１】
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【図２】
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