(57)【要約】ＨＰＬＳ−ＨＰＢＳ−ＰＬＺＡ（ＨＰＬＳは親水性ポリマーセグンメントを表し、ＨＰＢＳは疎水性ポリマーセグメントを表し、ＰＬＺＡはエチレン性不飽和二重結合を有する重合性基を表す）で示されるブロックコポリマーを水性媒体中に分散させ、次いで重合させることにより形成された重合高分子ミセルを含有させたものをキャピラリー電気泳動、マイクロチップ型電気泳動のバッファーとして用い、サンプルを導入後、所定圧力で所定時間加圧した後、泳動電場にて電気泳動を行うことにより、ＤＮＡ等の高分子化合物を迅速かつ高い分解能で分離することが可能となる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（１）：
2003078993.tif 000005
（式中、ＨＰＬＳは親水性ポリマーセグメントを表し、ＨＰＢＳは疎水性ポリマーセグメントを表し、ＰＬＺＡはエチレン性不飽和二重結合を有する重合性基を表す）、
で示されるブロックコポリマーを水性媒体中に分散させ、次いで重合させることにより形成された重合高分子ミセルを含有してなる電気泳動用バッファー。
【請求項２】
該ブロックコポリマーに低分子重合性モノマーをさらに加えて重合させることにより形成された重合高分子ミセルを含有してなる、請求項１記載の電気泳動用バッファー。
【請求項３】
ＨＰＬＳを構成するポリマーがポリエチレングリコール、ポリビニルアルコール、ポリ（メタ）アクリル酸、ポリビニルピリジン、ポリアクリルアミド、ポリジメチルアクリルアミドおよびポリメチルビニルエーテルからなる群より選ばれてなり、ＨＰＢＳが、ポリラクチド、ポリグリコリド、ポリ（ブチロラクトン）、ポリ（バレロラクトン）、ポリプロピレングリコール、ポリ（α−アミノ酸）、ポリ（メタクリル酸メチル）、ポリ（メタクリル酸エチル）、ポリスチレン、ポリ（α−メチルスチレン）、ポリイソプレン、ポリブタジエン、ポリエチレン、ポリプロピレンおよびポリ酢酸ビニルからなる群より選ばれてなる、請求項１または２記載の電気泳動用バッファー。
【請求項４】
ＨＰＬＳがポリエチレングリコールであり、ＨＰＢＳがポリラクチド、ポリグリコリド、ポリ（ブチロラクトン）、ポリ（バレロラクトン）、ポリプロピレングリコールおよびポリ（α−アミノ酸）からなる群より選ばれてなる、請求項１〜３いずれかに記載の電気泳動用バッファー。
【請求項５】
請求項１〜４いずれかに記載の電気泳動用バッファーの存在下で、高分子化合物を含有した試料を泳動することを特徴とする、電気泳動法。
【請求項６】
電気泳動の形態が、キャピラリー電気泳動、マイクロチップ型電気泳動またはナノチップ型電気泳動である、請求項５記載の電気泳動法。
【請求項７】
電気泳動の形態が、
（ａ）１〜３０ｋＶ、１〜６０秒での電気的注入または加圧注入により、高分子化合物を含有した試料をキャピラリーにインジェクトし、高分子化合物の分離が可能な泳動電場下に該高分子化合物を移動させる工程、および
（ｂ）キャピラリー内を加圧したのち、泳動電場により高分子化合物を泳動させる工程、
を含むキャピラリー電気泳動である、請求項５記載の電気泳動法。
【請求項８】
電気泳動の形態が、
ローディングチャネルと、該ローディングチャネルに交差する分離用チャネルとを備え、かつ該ローディングチャネルの一端に試料リザーバーが配置され、該ローディングチャネルの他端にアウトレットが配置されたマイクロチップにおいて、
（ａ）高分子化合物を含有した試料を該試料リザーバーに供する工程、
（ｂ）該ローディングチャネルを加圧することにより、該試料リザーバー中の該高分子化合物をローディングチャネルと分離用チャネルとの交差部に泳動させる工程、および
（ｃ）分離用チャネルを加圧し、次いで泳動電場により該高分子化合物を分離用チャネル内で泳動させる工程、
を含むマイクロチップ型電気泳動である、請求項５記載の電気泳動法。
【請求項９】
（ａ）１〜３０ｋＶ、１〜６０秒での電気的注入または０．２〜５ｋＰａ、２〜６０秒の加圧注入により、高分子化合物を含有した試料をキャピラリーにインジェクトし、高分子化合物の分離が可能な泳動電場下に該試料を移動させる工程、および
（ｂ）０．２〜１０ｋＰａ、２〜６０秒で加圧したのち、泳動電場により該高分子化合物を泳動させる工程、
を含む、キャピラリー電気泳動法。
【請求項１０】
ローディングチャネルと、該ローディングチャネルに交差する分離用チャネルとを備え、かつ該ローディングチャネルの一端に試料リザーバーが配置され、該ローディングチャネルの他端にアウトレットが配置されたマイクロチップにおいて、
（ａ）高分子化合物を含有する試料を該試料リザーバーに供する工程、
（ｂ）該ローディングチャネルを５．５〜７ｋＰａで０．１〜５秒加圧することにより、該試料リザーバー中の該高分子化合物をローディングチャネルと分離用チャネルとの交差部に泳動させる工程、および
（ｃ）分離用チャネルを１〜１０ｋＰａで０．１〜５秒加圧し、次いで泳動電場により該高分子化合物を分離用チャネル内で泳動させる工程、
を含む、マイクロチップ型電気泳動法。
【請求項１１】
請求項１〜４いずれか記載の電気泳動用バッファーの存在下で電気泳動を行う、請求項９または１０記載の方法。
【請求項１２】
さらに、泳動した高分子化合物を検出する工程を含む、請求項５〜１１いずれか記載の電気泳動法。
【発明の詳細な説明】
技術分野
本発明は、高分子化合物を迅速にかつ高い分離能で分離することができる、泳動用バッファーおよび電気泳動法に関する。
背景技術
既存の電気泳動用バッファーは、限定されたサイズに対する分離能については優れているが、粘度が高いポリマー（メチルセルロース、ヒドロキシルセルロース、ポリアクリルアミド等）を用いているため、１）マイクロチャネルにバッファーを注入するのに時間がかかる、２）チャンネル幅が狭くなるにつれて、注入が困難、３）ＤＮＡのサイズに応じてポリマー濃度をかえる必要があり、広範囲のＤＮＡサイズ分離に対し、分離度の限界がある、４）バッファー粘度が温度に敏感である、等の欠点を有するものであった。従って、上記１）〜４）の問題点を有さず、迅速にかつ高い分離能で高分子化合物を分離することができる電気泳動用バッファーが望まれている。また、迅速、かつ高い分離能で高分子化合物を分離することができる電気泳動法が望まれている。
発明の開示
本発明は、迅速、かつ高い分離能で高分子化合物を分離することができる電気泳動用バッファーおよび電気泳動法を提供することを目的とする。
すなわち、本発明の要旨は、
［１］  一般式（１）：
2003078993.tif 000002
（式中、ＨＰＬＳは親水性ポリマーセグメントを表し、ＨＰＢＳは疎水性ポリマーセグメントを表し、ＰＬＺＡはエチレン性不飽和二重結合を有する重合性基を表す）、
で示されるブロックコポリマーを水性媒体中に分散させ、次いで重合させることにより形成された重合高分子ミセルを含有してなる電気泳動用バッファー、
［２］  前記［１］記載の電気泳動用バッファーの存在下で、高分子化合物を含有した試料を泳動することを特徴とする、電気泳動法、
［３］  （ａ）１〜３０ｋＶ、１〜６０秒での電気的注入または０．２〜５ｋＰａ、２〜６０秒の加圧注入により、高分子化合物を含有した試料をキャピラリーにインジェクトし、高分子化合物の分離が可能な泳動電場下に該試料を移動させる工程、および
（ｂ）０．２〜１０ｋＰａ、２〜６０秒で加圧したのち、泳動電場により該高分子化合物を泳動させる工程、
を含む、キャピラリー電気泳動法、
［４］  ローディングチャネルと、該ローディングチャネルに交差する分離用チャネルとを備え、かつ該ローディングチャネルの一端に試料リザーバーが配置され、該ローディングチャネルの他端にアウトレットが配置されたマイクロチップにおいて、
（ａ）高分子化合物を含有する試料を該試料リザーバーに供する工程、
（ｂ）該ローディングチャネルを５．５〜７ｋＰａで０．１〜５秒加圧することにより、該試料リザーバー中の該高分子化合物をローディングチャネルと分離用チャネルとの交差部に泳動させる工程、および
（ｃ）分離用チャネルを１〜１０ｋＰａで０．１〜５秒加圧し、次いで泳動電場により該高分子化合物を分離用チャネル内で泳動させる工程、
を含む、マイクロチップ型電気泳動法、
に関する。
発明を実施するための最良の形態
本発明の電気泳動用バッファーは、一般式（１）：
2003078993.tif 000003
（式中、ＨＰＬＳは親水性ポリマーセグメントを表し、ＨＰＢＳは疎水性ポリマーセグメントを表し、ＰＬＺＡはエチレン性不飽和二重結合を有する重合性基を表す）、
で示されるブロックコポリマーを水性媒体中に分散させ、次いで重合させることにより形成された重合高分子ミセルを含有することを１つの大きな特徴とする
本発明の電気泳動用バッファーは、従来のキャピラリー電気泳動やマイクロチップ型電気泳動に通常使用されてきたバッファーと比べて低粘度であるという特徴を有する。そのため、マイクロチャネルやキャピラリーにバッファーをスムーズに注入でき、バッファー注入時間を短縮することができるという利点を有する。またチャネル幅が狭くなってもバッファー注入が容易である。本発明のバッファーは、従来、高粘度のバッファーのみで解析可能であるとされていた低塩基サイズ（たとえば２〜２００ｂｐ等）の核酸についても再現よく解析することができる。従来のバッファーはそれぞれの核酸のサイズに応じてバッファーの粘度を変更しなければならなかったが、本発明のバッファーは、核酸の広範囲なサイズについて使用可能であるため、同時に異なるサイズの核酸の解析が可能である。また、本発明のバッファーは温度による粘度変化の問題に左右されることがなく、気温や室温による日間誤差を生じにくいという利点を有する。
なお、本明細書において、高分子化合物としては、タンパク質、ペプチド、アミノ酸、糖類、多糖類、核酸（例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡなど）などが挙げられる。前記核酸は、一本鎖であっても、二本鎖であってもよい。
前記一般式（１）中のＨＰＬＳ−ＨＰＢＳ（親水性ポリマーセグメント−疎水性ポリマーセグメント）からなる部分は、それ自体が水性媒体中で高分子ミセルを形成するものであれば、それぞれのセグメントを構成するポリマーの種類（例えば重合度、原料モノマー等）を問わない。従って、本明細書において、「ポリマー」の語は、オリゴマーを含む概念で使用される。
前記一般式（１）中のＨＰＬＳ−ＨＰＢＳ部分では、疎水性ポリマーセグメント末端（ＨＰＬＳとの結合の反対側）に、基ＰＬＺＡ、すなわちエチレン性不飽和二重結合を有する重合性基が共有結合されている。このような官能基は、ＨＰＬＳ−ＨＰＢＳ部分のミセル形成能に悪影響を及ぼさないものであれば、いずれの官能基であってもよい。
限定されるものではないが、ＨＰＬＳを構成するポリマーとしては、ポリエチレングリコール、ポリビニルアルコール、ポリ（メタ）アクリル酸、ポリビニルピリジン、ポリアクリルアミド、ポリジメチルアクリルアミドおよびポリメチルビニルエーテル等が挙げられ、ＨＰＢＳを構成するポリマーとしては、ポリラクチド、ポリグリコリド、ポリ（ブチロラクトン）、ポリ（バレロラクトン）、ポリプロピレングリコール、ポリ（α−アミノ酸）、ポリ（メタクリル酸メチル）、ポリ（メタクリル酸エチル）、ポリスチレン、ポリ（α−メチルスチレン）、ポリイソプレン、ポリブタジエン、ポリエチレン、ポリプロピレンおよびポリ酢酸ビニルが挙げられる。
これらのうち、ＨＰＬＳとしては、ミセル形成能の観点から、ポリエチレングリコールが特に好ましい。また、ＨＰＢＳとしては、ミセル形成能の観点から、ポリラクチドが特に好ましい。
前記ＰＬＺＡとしては、水性媒体中で重合しうるものであればよく、例えば（メタ）アクリロイル、クロチル、ビニルカルボニルアミノ（ＣＨ２＝ＣＨＣＯＮＨ−；アクリルアミド基）、イソプロペニルカルボニルアミノ［ＣＨ２＝Ｃ（ＣＨ３）ＣＯＮＨ−；メタクリルアミド基］、ビニロキシカルボニル（ＣＨ２＝ＣＨＯＣＯ−）、ｐ−ビニルベンジル（ＣＨ２＝ＣＨ−Ｃ６Ｈ４−ＣＨ２−）、ｐ−イソプロペニルベンジル（ＣＨ２＝Ｃ（ＣＨ３）−Ｃ６Ｈ４−ＣＨ２−）、ｐ−イソプロペニルフェニル（ＣＨ２＝ＣＨ−ＣＨ２−）およびビニル（ＣＨ２＝ＣＨ−）基等を挙げることができる。
これらのうち、ＰＬＺＡとしては、安定な重合形成の観点から、（メタ）アクリロイルが特に好ましい。
一般式（１）で示されるブロックコポリマーの具体例としては、メトキシ−ポリエチレングリコール／ポリラクチド−メタアクリロイル、メトキシ−ポリビニルアルコール／ポリグリコシド−クロチル、メトキシ−ポリ（メタ）アクリル酸／ポリブチルラクトン−ビニロキシカルボニルメトキシ−ポリアクリルアミド／ポリスチレン−ｐ−ビニルベンジルが挙げられる。上記具体例の中でも、安定なミセル形成の観点からメトキシ−ポリエチレングリコール／ポリラクチド−メタアクリロイルが特に好ましい。
これらの一般式（１）で示されるブロックコポリマーは、それ自体既知のいずれの方法によって製造されたものでもよいが、好ましくは、それぞれ対応するモノマーを用い、いわゆる、リビングアニオン重合によりまずＨＰＬＳを形成し、そのままの反応系にＨＰＢＳに対応するモノマーを重合させ、さらにエチレン性不飽和二重結合を有するハロゲン化物、酸無水物を加えて、ＰＬＺＡ基を導入することにより製造することができる。このような重合法は、各セグメントが所望の分子量をもつブロックコポリマーを製造するのに適する。具体的には、ブロックコポリマーの分子量は、ＨＰＬＳは、５００〜５０，０００、好ましくは３，０００〜８，０００であり、ＨＰＢＳは、５００〜８０，０００、好ましくは３，０００〜８，０００である。なお、これらの各セグメントの分子量は、ゲルパーミエーションクロマトグラフィーにより測定することができる。
こうして製造される一般式（１）のブロックコポリマーは、水性媒体（例えば水または適当な緩衝剤で緩衝化した水溶液）にある一定濃度で分散されることにより高分子ミセルを形成することができる。
このようなミセルを形成する上で最適な各セグメントの分子量は、親水性ポリマー鎖および疎水性ポリマー鎖の種類、ならびにそれらの鎖の組み合わせによって変動するので限定できるものではない。しかし、当業者であれば、過度の実験を要することなく、ブロックコポリマーを現実に調製し、それらのミセル形成能を評価することにより、最適な各セグメントの分子量を決定することができる。特に好ましい態様であるポリエチレングリコール（またはポリオキシエチレン）を親水性ポリマーセグメントに有し、ポリラクチドを疎水性ポリマーセグメントに有するブロックコポリマーを例にすると、前者の分子量は、一般に５００〜５０，０００、好ましくは３，０００〜８，０００、特に好ましくは５，５００〜６，５００であり、後者の分子量は、一般に５００〜８０，０００、好ましくは３，０００〜８，０００、特に好ましくは４，０００〜４，５００である。
本発明に従えば、以上のようにして得られる高分子ミセルは、反応混合液の状態または反応混合液から単離した後再度水性媒体に懸濁させた状態で、適当な重合開始剤の存在下、疎水性ポリマーセグメントの末端に共有結合したエチレン性不飽和二重結合を有する重合性基を利用して重合させることにより重合高分子ミセルを製造することができる。重合開始剤としては、前記重合性基を水性媒体中で重合させることのできるものであればその種類を問うことなく利用できるが、一般に、ラジカル重合開始剤を用いるのがよい。このような開始剤としては、過酸化物、アゾ化合物やレドックス開始剤を挙げることができる。また、前記重合は光や放射線を用いて開始させることもできる。
本発明の電気泳動用バッファーには、一般式（１）で示されるブロックコポリマーに低分子重合性モノマーをさらに加えて重合させることにより形成された重合高分子ミセルもまた好適に使用することができる。この態様では、一般式（１）で示されるブロックコポリマーに低分子重合性モノマー（例えば、スチレン、（メタ）アクリル酸メチル、酢酸ビニル、α−ｃメチルスチレン、ジアルキル（メタ）アクリルアミド、メチレンビスアクリルアミド、エチレングリコールビス（メタ）アクリレート等）を加えて重合を行うことにより、重合高分子ミセルを効率よく製造できるという利点を有する。
こうして得られる重合高分子ミセルは、前駆高分子ミセルの形状をほぼそのまま保持し、かつ水性媒体中のいかなる濃度においてもミセルの形態を安定に保持することができ、電気泳動用バッファーで使用するのに好適である。
本発明の電気泳動用バッファーにおける本発明の重合高分子ミセルの含有量は、測定物質の高い分離能を得る観点から、１〜２０ｍｇ／ｍｌ、より好ましくは５〜１０ｍｇ／ｍｌである。
前記ミセルを希釈するための希釈液としては、水、トリス−グリシンバッファー、トリス−グリシンバッファー、トリス−ホウ酸バッファー、トリス−塩酸バッファー、トリス−トリシンバッファー、トリス−リン酸一水素ナトリウムバッファー、トリス−ホウ酸−ＥＤＴＡバッファー等、一般に高分子化合物の電気泳動用緩衝液として使用される緩衝液が挙げられる。希釈用の水または緩衝バッファーを調製するための水は超純水、脱イオン水、ＭｉｌｌｉＱ水等、通常電気泳動に使用される水が使用されるが、ＭｉｌｌｉＱ水が特に好ましい。
被検高分子化合物がタンパク質やペプチドである場合、前記一般式（１）のブロックコポリマーに加えて、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）やペプチドの場合、ＴｒｉｔｏｎＸ−１００、ε−アミノカプロン酸、３−（Ｃ３−コラミドプロピル）−ジメチルアミノ）−１−プロパン、ＣＨＡＰＳ、６〜８Ｍ尿素、テトラメチルエチレンジアミン（ＴＥＭＥＤ）、ヘキシルトリメチルアンモニウムブロマイド（ＨＴＡＢ）等を添加することができる。
本発明の電気泳動用バッファーのｐＨは、好適な電気泳動と正常なピーク分離の観点から、被検高分子化合物がタンパク質の場合、２〜９が好ましく、６．８〜８．６がより好ましい。被検高分子化合物がペプチドの場合、２〜１１が好ましく、２．５〜３．１がより好ましい。被検物が核酸の場合、好適な電気泳動と正常なピーク分離の観点から、６．８〜９．２が好ましく、７．５〜８．５がより好ましい。
本発明の電気泳動用バッファーは、本発明の重合高分子ミセルを前記記載の希釈用バッファーで適宜希釈し、さらに水酸化ナトリウムや前記記載の緩衝液でｐＨを調整することで調製される。
本発明の電気泳動法としては、前記電気泳動用バッファーの存在下で、高分子化合物を含有した試料を泳動することを特徴とする方法が挙げられる。ここで、電気泳動の形態としては、特に限定されることなく、種々の形態に適用可能であるが、なかでもキャピラリー電気泳動、マイクロチップ型電気泳動またはナノチャネル型電気泳動に特に好適に使用される。
本発明の電気泳動法は、より具体的には、キャピラリー電気泳動において、
（ａ）高分子化合物を含有した試料をキャピラリーにインジェクトし、高分子化合物の分離が可能な泳動電場下に該試料を移動させる工程、および
（ｂ）キャピラリー内を加圧し、次いで泳動電場により高分子化合物を泳動させる工程、
を含む。
試料をキャピラリーにインジェクトし、高分子化合物の分離が可能な泳動電場下に高分子化合物を移動させる工程は、より具体的には、電圧法、加圧法、落差法により行われるが、装置の種類や、キャピラリーの太さ（内径）や長さ等により、電圧や加える圧力の大きさおよびそれらに供する時間が適宜決められるが、分離を高速でかつ高い分離能を得、さらに高感度な検出を達成する観点から、１〜３０ｋＶ、１〜６０秒での電気的注入または加圧注入、好ましくは０．２〜５ｋＰａ、より好ましくは１ｋＰａで加圧注入により、高分子化合物を含有した試料をキャピラリーにインジェクトし、高分子化合物の分離が可能な泳動電場下に該試料を移動させることが特に好ましい。ここで、前記加圧は、好ましくは２〜６０秒、より好ましくは５〜１０秒、特に好ましくは７〜８秒行なうことが望ましい。その後、高い分離能を保持した状態で高速分離を達成させる観点から、泳動電場により高分子化合物を泳動させる工程の前に、加圧、好ましくは０．２〜１０ｋＰａ、より好ましくは１ｋＰａで加圧することが望ましい。ここで、前記加圧は、好ましくは２〜６０秒、より好ましくは５〜１０秒、特に好ましくは７〜８秒行なうことが望ましい。
なお、本明細書において、キャピラリー電気泳動における圧力単位（ｋＰａ）は、試料注入口で加圧する力を意味する。
キャピラリー電気泳動に使用されるキャピラリーにおいて、内径、外径、全長、有効長は、特に限定されるものではなく、通常使用されるサイズのものが使用されうる。有効長に関して、高速での解析を可能にする観点から、短い有効長のキャピラリーを用いることができる。ここで、キャピラリーの有効長とは、試料注入口から検出部までの距離をいう。
キャピラリー電気泳動における泳動電場は、良好な分離能を得、移動時間を短縮する観点から、好ましくは、２０Ｖ／ｃｍ〜１０ｋＶ／ｃｍであり、より好ましくは５０Ｖ／ｃｍ〜５ｋＶ／ｃｍであり、特に好ましくは１００Ｖ／ｃｍ〜１ｋＶ／ｃｍであることが望ましい。
マイクロチップ型電気泳動においては、ローディングチャネルと、該ローディングチャネルに交差する分離用チャネルとを備え、かつ該ローディングチャネルの一端に試料リザーバーが配置され、該ローディングチャネルの他端にアウトレットが配置されたマイクロチップが用いられる。
本発明の電気泳動法は、マイクロチップ型電気泳動においては、具体的には、
（ａ）高分子化合物を含有する試料を試料リザーバーに供する工程、
（ｂ）該試料リザーバー中の高分子化合物を加圧によりローディングチャネルと分離用チャネルとの交差部に泳動させる工程、および
（ｃ）該分離用チャネルを加圧し、次いで該分離用チャネル内で高分子化合物を泳動させる工程、
を含む。
試料リザーバーに試料を供する工程は、より具体的には、試料リザーバーに好ましくは１〜１０μｌ、より好ましくは２〜５μｌの試料をローディングすることにより達成される。
試料リザーバー中の試料をローディングチャネルと分離用チャネルとの交差部に泳動させる工程は、より具体的には、十分な検出感度を得る観点から、アウトレットに泳動用緩衝液をセッティングしない条件下で試料を試料リザーバーから加圧、好ましくは３〜７ｋＰａ、より好ましくは５〜７ｋＰａ、特に好ましくは５．５〜７ｋＰａで加圧することによりローディングチャネルと分離用チャネルの交差部に試料を泳動させることが望ましい。ここで、前記加圧は、好ましくは０．１〜５秒、より好ましくは０．５〜２秒、特に好ましくは１秒行なうことが望ましい。
なお、本明細書において、マイクロチップ型電気泳動における圧力単位（ｋＰａ）は、分離用チャネルの圧力負荷口で加圧する力を意味する。
分離用チャネル内で試料を泳動させる工程は、より具体的には、より高速で高分離能を得る観点から、分離用チャネルを加圧、好ましくは１〜１０ｋＰａ、より好ましくは３．５〜１０ｋＰａ、特に好ましくは５〜７ｋＰａで加圧し、次いで試料を泳動電圧により泳動させることが望ましい。ここで、前記加圧は、好ましくは０．１〜５秒、より好ましくは０．５〜２秒、特に好ましくは１秒行なうことが望ましい。
マイクロチップの材質としては、例えば、石英ガラス、ホウケイ酸ガラス、ソーダガラス、ポリメチルメタクリレート、ポリカーボネート、ジメチルシロキサンなどが挙げられる。なかでも、試料の吸着が少なく、チップ加工が容易である観点から、ガラス、またはポリメチルメタクリレートが望ましい。また、キャピラリーと同様に内壁を加工処理したものも用いられる。
マイクロチップ型電気泳動においては、マイクロチップの大きさは、例えば、縦１０〜１２０ｍｍ、横１０〜１２０ｍｍ、厚さ５００〜５０００μｍである。
マイクロチップにおけるローディングチャネルおよび分離用チャネルのそれぞれの形状は特に限定されるものではない。なお、前記チャネルが一枚のチップ上に３〜９６本設置された、同時に多チャネルを解析することができるチップを使用することもできる。多チャネルの並べ方は、並行、放射線状、円形状等があるが、その形状は特に限定されるものではない。
前記チャネルの幅は、マイクロチップの大きさ、使用目的などにより適宜設定されうる。具体的には、チャネルの幅は、十分な解析感度を得る観点から、０．１μｍ以上、好ましくは１０μｍ以上であり、十分な解析精度を得る観点から、１００μｍ以下、好ましくは５０μｍ以下であることが望ましい。また、前記チャネルの深さは、マイクロチップの大きさ、使用目的などにより適宜設定されうる。具体的には、十分な解析感度を得る観点から、０．１μｍ以上、好ましくは１０μｍ以上であり、十分な解析精度を得る観点から、１００μｍ以下、好ましくは５０μｍ以下であることが望ましい。さらに、前記分離用チャネルの長さは、マイクロチップの大きさ、解析対象の化合物に応じて適宜選択することができるが、有効長を、より長くすることが望ましい。有効長は、チャネル交差部から、高分子化合物の検出点（分離用チャネル上に配置）までの距離をいう。十分な分離能を得る観点から、０．１ｍｍ以上、好ましくは１０ｍｍ以上であり、高速分離の観点から、１００ｍｍ以下、好ましくは５０ｍｍ以下であることが望ましい。
また、前記リザーバーの大きさは、試料の容量に応じて適宜設定することができる。具体的には、試料導入のハンドリングおよび電極の太さの観点から、直径０．０５ｍｍ以上、好ましくは３ｍｍ以下であることが望ましい。
マイクロチップ型電気泳動における泳動電場は、良好な分離能を得、移動時間を短縮する観点から、２０Ｖ／ｃｍ〜５０ｋＶ／ｃｍであり、より好ましくは５０Ｖ／ｃｍ〜５ｋＶ／ｃｍであり、特に好ましくは１００Ｖ／ｃｍ〜１ｋＶ／ｃｍであることが望ましい。
マイクロチップ型電気泳動において、インジェックションする際の試料の量（濃度）は、良好な分離能を得る観点から、試料が、ペプチドまたはタンパク質の場合、０．１ｎｇ／ｍｌ〜１ｇ／ｍｌであり、好ましくは、１０ｎｇ／ｍｌ〜１００ｍｇ／ｍｌであり、より好ましくは、０．１μｇ／ｍｌ〜１０ｍｇ／ｍｌであることが望ましい。前記試料が、糖または多糖の場合、インジェクションする際の試料の量（濃度）は、良好な分離能を得る観点から、試料が、ペプチドまたはタンパク質の場合、０．１μｇ／ｍｌ〜１０ｇ／ｍｌであり、好ましくは、１ｍｇ／ｍｌ〜５ｇ／ｍｌであり、より好ましくは、１００ｍｇ／ｍｌ〜１ｇ／ｍｌであることが望ましい。前記試料が、核酸の場合、インジェクションする際の試料の量（濃度）は、良好な分離能を得る観点から、試料が、ペプチドまたはタンパク質の場合、０．１ｎｇ／ｍｌ〜５００μｇ／ｍｌであり、好ましくは、１０ｎｍｇ／ｍｌ〜１００μｇ／ｍｌであり、より好ましくは、１００ｎｇ／ｍｌ〜５０μｇ／ｍｌであることが望ましい。
ナノチャネル型電気泳動とは、ナノメーターサイズ、１ｎｍ〜１μｍ、好ましくは１０〜５００ｎｍ、より好ましくは５０〜１００ｎｍのチャネル幅からなる流路が形成されたチップを用いて行なわれる電気泳動をいう。これには上記記載のナノサイズの構造体がマイクロメーターサイズのチャネルに形成されているものを含む。ナノサイズの構造体の形状は、特に限定されることなく、例えば、四角、丸、三角等のものが使用され得、構造体の設置間隔も特に限定されない。これらが形成されたナノチャネルチップが用いられる。キャピラリー電気泳動の場合と同様に同時に多チャネル解析可能なチップも含まれる。
ナノチャネル型電気泳動におけるチャネルは、サイズがナノメーターという特徴をもつチャネルの形状が曲率を曲げたもの、蛇行状、ジグザグ状またはそれらの組み合わせ等、様々な設計が可能である。このことにより、微小スケール内に多くのチャネルを形成できる。また、このことにより一度に多数のサンプルを処理することができ、ハイスループット化が可能である。またナノサイズの構造体がマイクロメーターサイズのチャネルに形成される場合、その形状を自在に変えることができ、その設置間隔も自在に変えられるという利点をもつ。同時に多チャネルの測定が可能である。
ナノチャネル型電気泳動においてもマイクロチップ型電気泳動と同様にローディングチャネル、該ローディングチャネルに交差する分離用チャネル、該ローディングチャネルの一端に試料リザーバー、該ローディングチャネルの他端にアウトレットが配置されたものを含むが、形状は特に限定されるものではない。
ナノチャネル型電気泳動に用いられるナノチャネルチップの材質としては、マイクロチップと同様のものが用いられる。例えば、石英ガラス、ホウケイ酸ガラス、ソーダガラス、ポリメチルメタクリレート、ポリカーボネート、ジメチルシロキサンなどが挙げられる。
ナノチャネル型電気泳動におけるナノチャネルチップの大きさはマイクロチップと同様のものが適用される。例えば縦１０〜１２０ｍｍ、横１０〜１２０ｍｍ、厚さ５００〜５０００μｍである。ナノチャネルチップのチャネルの深さ、チャネルの長さ、リザーバーの大きさ等はマイクロチップに準ずる。
本発明はまた、（ａ）１〜３０ｋＶ、１〜６０秒での電気的注入または０．２〜５ｋＰａ、より好ましくは１ｋＰａの加圧注入により、高分子化合物を含有した試料をキャピラリーにインジェクトし、高分子化合物の分離が可能な泳動電場下に該試料を移動させる工程、および
（ｂ）０．２〜１０ｋＰａ、より好ましくは１ｋＰａで加圧したのち、泳動電場により高分子化合物を泳動させる工程、
を含む、キャピラリー電気泳動法に関する。ここで、前記加圧は、２〜６０秒、好ましくは５〜１０秒、より好ましくは７〜８秒行なうことが望ましい。
前記キャピラリー電気泳動法により、試料注入時間がより短時間ですむ高感度検出が可能である広範囲なサイズ（２ｂｐ〜１５ｋｂｐ）の核酸について同時解析することが可能で、かつ高速分析が達成可能である。
加圧条件以外のその他の条件については前記キャピラリー電気泳動の条件に準ずる。
前記キャピラリー電気泳動法には、種々の電気泳動用バッファーを使用することができ、本発明の電気泳動用バッファーを組み合せて使用することもできる。
本発明はまた、ローディングチャネルと、該ローディングチャネルに交差する分離用チャネルとを備え、かつ該ローディングチャネルの一端に試料リザーバーが配置され、該ローディングチャネルの他端にアウトレットが配置されたマイクロチップにおいて、
（ａ）高分子化合物を含有する試料を該試料リザーバーに供する工程、
（ｂ）該ローディングチャネルを３〜７ｋＰａ、好ましくは５〜７ｋＰａ、より好ましくは５．５〜７ｋＰａで加圧することにより、該試料リザーバー中の該試料を分離チャネルに導入する工程、および
（ｃ）分離用チャネルを１〜１０ｋＰａ、好ましくは３．５〜１０ｋＰａ、より好ましくは５〜７ｋＰａ加圧し、次いで該試料を泳動させる工程、
を含む、マイクロチップ型電気泳動法に関する。ここで、前記加圧は、０．１〜５秒、好ましくは０．５〜２秒、より好ましくは１秒行なうことが望ましい。
前記マイクロチップ型電気泳動法により、試料注入時間がより短時間ですむ、高感度検出が可能である広範囲なサイズ（２ｂｐ〜１５ｋｂｐ）の核酸について同時解析することが可能で、かつ高速分析が達成可能である。
加圧条件以外のその他の条件については前記マイクロチップ型電気泳動の条件に準ずる。
前記マイクロチップ型電気泳動法には、種々の電気泳動用バッファーを使用することができ、本発明の電気泳動用バッファーを組み合せて使用することもできる。
核酸の検出のための蛍光試薬は、エチジウムブロマイド〔５１０／５９５（励起波長／蛍光波長、以下同様）〕、エチジウムホモダイマー−１（Ｅｔｈｉｄｉｕｍ  ｈｏｍｏｄｉｎｅｒ−１）〔５２８／６１７〕、アクリジンオレンジ（Ａｃｒｉｄｉｎｅ  ｏｒａｎｇｅ）〔５０２／５２６〕、チアゾールオレンジ（ＴＯ：Ｔｈｉａｚｏｌｅ  ｏｒａｎｇｅ）〔５０９／５２５〕、ＹＯ−ＰＲＯ−１〔４９１／５０９〕、ＹＯ−ＰＲＯ−３〔６１２／６３１〕、ＴＯ−ＰＲＯ−１〔５１５／５３１〕、ＴＯ−ＰＲＯ−３〔６４２／６６１〕、ＹＯ−ＹＯ−１〔４９１／５０９〕、ＴＯ−ＴＯ−１〔５１４／５３３〕、ＹＯ−ＹＯ−３〔６１２／６３１〕、ＴＯ−ＴＯ−３〔６４２／６６０〕、サイバーグリーンＩ（ＳＹＢＲ  Ｇｒｅｅｎ  Ｉ）〔４９４／５２１〕、ＳＹＢＲサイバーグリーン〔２５４／５２０〕、ＳＹＢＲ  Ｇｏｌｄ〔３００，４９５／５３７〕、オリグリーン（Ｏｌｉ  Ｇｒｅｅｎ）（ｓｓＤＮＡ用）〔５００／５２０〕、リボグリーン（Ｒｉｂｏ  Ｇｒｅｅｎ）（ＲＮＡ用）〔５００／５２５〕、ＦＩＴＣ〔４９４／５１９〕、６−ＦＡＭ〔４８８／５３５〕、ＨＥＸ〔５１５／５５９〕、ｃｙ５〔６４９／６７０）、ｃｙ３〔５５０／５７０〕等がある。これらはキャピラリー電気泳動装置Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｐ／ＡＣＥ〔４８８／５２０（励起波長／検出波長、以下同様）〕、マイクロチップ型電気泳動装置Ｂｉｏａｎａｌｙｚｅｒ（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社製）〔６３５／６７０〜７００〕、ｃｏｓｍｏ−ｉ  ＳＶ１１００（日立電子社製）〔４７２／５８５〕、ｃｏｓｍｏ−ｉ  ＳＶ２１００（日立電子社製）〔６３５／６６０〕等を用いて検出される。
電気泳動に供したタンパク質の検出法としては、例えば、ＵＶ波長光による吸収、ＵＶリニアイメージング検出、蛍光、レーザー、ランプ、ＬＥＤなどによる検出、電気化学的検出、化学発光検出などが挙げられる。具体的には、タンパク質またはペプチドの場合、２００ｎｍにおける吸収を測定すること；例えば、ＳＹＰＲＯ  Ｏｒａｎｇｅとタンパク質またはペプチドとを反応させ、４６０〜５５０ｎｍで励起させ、５５０〜６５０ｎｍで蛍光を測定すること、あるいはタンパク質と蛍光マーカー（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｎｏ．５０６５−４４３０）と反応させ、６３０〜６５０ｎｍで励起させ、６７０〜７００ｎｍで蛍光を測定すること、および電気化学的測定、化学発光測定などにより、タンパク質またはペプチドを検出することができる。
キャピラリー電気泳動においては、例えば、キャピラリーのアウトレットに、ＵＶ波長光を発しうる装置と該ＵＶ波長光の検出器とを設置してもよく、あるいは蛍光波長を発しうる装置と該蛍光波長を検出可能な検出器とを設置してもよい。
マイクロチップ型電気泳動においては、例えば、分離用チャネル上に配置された検出点にＵＶ波長光の検出器を設置してもよく、あるいは、蛍光波長を発しうる装置と該蛍光波長を検出可能な検出器とを設置してもよい。また同時に多チャネルを検出可能である。
ナノチャネル型電気泳動においては、マイクロチップ型電気泳動の場合と同じ検出器、検出方法が適用される。さらにナノチャネル型電気泳動においては、同時多チャネル検出の際、マイクロチップ型電気泳動の場合よりも多数のサンプルを同時に検出可能である。
検出の際、タンパク質、ペプチド、アミノ酸などの同定を行う場合には、ＵＶ吸収、分子量マーカー、標品との移動時間の比較、マススペクトルの解析などにより行うことができる。
本発明の電気泳動法によれば、迅速に高い分離能を得ることができるため、遺伝子の解析ＰＣＲ解析、癌の遺伝子診断解析、ＳＳＣＰによるＳＮＰｓ解析、ＶＮＴＲ解析、ＰＣＲ−ＲＦＬＰ解析、マイクロサテライト解析、その他、痴呆症、筋ジストロフィー、心臓病、心筋梗塞、ダウン症、感染症、糖尿病、フェニルケトン尿症等の各種疾患解析への応用、プロテオソーム解析またはグライコソーム解析におけるタンパク質または糖鎖のハイスループットスクリーニング解析に有用であり、医療診療装置への応用、および生体機能、疾患発症機構等の解明への応用が期待される。
実施例
重合高分子ミセルの調製
エチレングリコール１３０ｍｍｏｌ、６．５ｍＬを乾燥ＴＨＦ３０ｍＬ、２−メトキシエタノール０．１６ｍＬ、ナフタレンカリウム１ｍｍｏｌと共に２５℃で２日間重合させ、さらに３，６−ジメチル１，４−ジオキサン−２，５−ジオン３２ｍｍｏｌ、３１ｍＬとともに２５℃で２時間重合の後、無水メタクリル酸２０ｍｍｏｌ、３．６ｍＬにより停止反応を行った。冷イソプロパノール６００ｍＬ中にて再沈精製、遠心分離で沈殿させ、生成物を回収した。これをベンゼン１００ｍＬに溶解し、凍結乾燥後２．５ｇのコポリマーを回収する。得られたコポリマー２．５ｇを１０００ｍＬの水に溶かし、オイルバスで８０℃に保ち、攪拌しながら６時間加熱し、加熱後そのまま一晩放置し、ミセル溶液を回収した。得られたミセル溶液１００００ｍＬを３０分後、６０℃に保ちながら２０時間熱重合させる。この溶液を回収し、限外濾過膜を用いて所定の濃度に濃縮して、式（２）：
2003078993.tif 000004
（ゲルパーミエーションクロマトグラフィーにより求めた分子量はＰＥＯ／ＰＬＡ＝６１００／４０００）
により表される重合高分子ミセルを得た。。
電気泳動用バッファーの調製
１００ｍｇ／ｍｌの式（２）により表される重合高分子ミセル（超純水で調製、ｐＨ２．９４）を０．１Ｎ  水酸化ナトリウムを用いてｐＨを８．８に調整して用いた。
本実施例の電気泳動は、日立マイクロチップ型電気泳動装置｛ｃｏｓｍｏ−ｉ（ＳＶ１１００）｝を用いて行った。電気泳動用バッファーとして、１０ｍｇ／ｍｌの式（２）により表される重合高分子ミセル（ｐＨ８．８）を用いた（以下では高分子ミセルとよぶ）。対照例の泳動用バッファーとして０．７％ヒドロキシプロピルメチルセルロースを用いた（以下では従来ポリマーとよぶ）。
電気泳動法としては、以下の３種類の方法により電気泳動を行った：
通常法
ローディングチャネルおよび分離用チャネルに泳動用バッファーを充填した後、試料リザーバーに試料１０μｌを満たし、残りのリザーバーに泳動用バッファーを満たすローディングチャネルに電圧を１０μｌ、３００Ｖ、６０秒かけ、試料リザーバーの試料をローディングチャネルにロードする。ひきつづいて分離用チャネルにスクィージング電圧を１３０Ｖかけながら８９０Ｖの分離電圧を１８０秒ロードする：
ＰＰ法
ローディングチャネルおよび分離用チャネルに泳動用バッファーを充填した後、試料リザーバーに試料２μｌロードし、検出側のアウトレット以外のリザーバーには泳動用バッファーを満たさない状態で、１〜５．５ｋＰａ、１秒の圧力を試料リザーバーにロードすることにより、試料をローディングチャネルに、より詳しくはローディングチャネルと分離用チャネルの交差部に導入する。ひきつづいて分離用チャネルのアルトレットと逆側より１〜７ｋＰａ、１秒の圧力を分離用チャネルにかけ、試料の分離用チャネルの下流へ移動させる；
ＰＰ法の改良法
上記ＰＰ法において、ローディングチャネルにサンプルを導入する際の圧力が５．５〜７ｋＰａ、１秒であり、分離用チャネルにかける圧力が１〜１０ｋＰａ、１秒である。あるいは、ローディングチャネルにサンプルを導入する際の圧力が１〜５．５ｋＰａ、１秒であり、分離用チャネルにかける圧力が７〜１０ｋＰａ、１秒である。ここでＰＰ法においては、試料をローディングチャネルと分離用チャネルの交差部に適量、具体的には０．２μｌ導入するが、ＰＰ法の改良法においては過剰量、具体的には０．５μｌ導入する。
なお、以下では、ローディングチャネル（具体的にはローディングチャネルと分離用チャネルの交差部）へサンプルを注入する際の圧力を前者の圧力、分離用チャネルを加圧して交差部のサンプルを分離用チャネルの下流部（検出部側）へ移動させる圧力を後者の圧力とよぶ。
本実施例で使用したＰＰ法およびその改良法における前者および後者の圧力の強さは、
Ｌ：０．１ｃｍ３エア注入  ≒  １〜２ｋＰａ、
ＬＭ：０．２〜０．４ｃｍ３エア注入  ≒  ２〜３ｋＰａ、
Ｍ：０．５ｃｍ３エア注入  ≒  ３〜３．５ｋＰａ、
ＭＨ：０．６〜０．９ｃｍ３エア注入  ≒  ３．５〜５．５ｋＰａ、
Ｈ：１ｃｍ３エア注入  ≒  ５．５〜７ｋＰａ、
ＨＨ：１〜１．５ｃｍ３エア注入  ≒  ７〜１０ｋＰａ、
とした。
例１（高分子ミセル＋通常法）
高分子ミセルを泳動用バッファーとして用いて、１００ｂｐ、８００ｂｐの２本のＤＮＡマーカーの分離を通常法に基づき電気泳動を行なった。その結果、泳動時間１８０ｓ以内ではピークの出現はなかった。（図１）
例２（高分子ミセル＋ＰＰ法）
例１をＰＰ法に基づき行なった。前者のＰの強度はＭ、後者のＰの強度はＬとした。その結果、泳動時間１８０ｓ以内に２本のピークを認めた。（図２）
例３（高分子ミセル＋ＰＰ法）
例２の前者のＰの強度をＭ、後者のＰ強度をＭとした。その結果、１００ｂｐの移動時間が加速された。（図３）
例４（高分子ミセル＋ＰＰ法）
例２の前者のＰの強度をＭ、後者のＰ強度をＨとした。その結果、泳動時間が短縮された。（図４）
例５（高分子ミセル＋通常法）
高分子ミセルを泳動用バッファーとして用いて、１００ｂｐ、５００ｂｐ、８００ｂｐの３本のＤＮＡの分離を通常法に基づき行なった。その結果、泳動時間１８０ｓ以内ではピークの出現はなかった。（図５）
例６（高分子ミセル＋ＰＰ法）
例５をＰＰ法に基づき行なった。前者のＰの強度をし、後者のＰの強度はＬＭとした。その結果、泳動時間１２０ｓ以内に３本のピークを認めた。（図６）
例７（高分子ミセル＋ＰＰ法）
例５をＰＰ法に基づき行なった。前者のＰの強度をし、後者のＰの強度はＭとした。その結果、１００ｂｐ、５００ｂｐの移動時間が加速された。（図７）
例８（高分子ミセル＋ＰＰ法）
高分子ミセルを泳動用バッファーとして用いて、１００ｂｐ−１０００ｂｐの１０本のＤＮＡの分離をＰＰ法に基づき行なった。前者のＰの強度をＭ、後者のＰの強度はＬとした。その結果、泳動時間１８０ｓ以内に１０本のピークを認めた。（図８）
例９（高分子ミセル＋ＰＰ法）
例８をＰＰ法に基づき行なった。前者のＰの強度をＭ、後者のＰの強度はＬＭとした。その結果、泳動時間９０ｓ以内に１０本のピークを認めた。（図９）
例１０（高分子ミセル＋ＰＰ法）
例８をＰＰ法に基づき行なった。前者のＰの強度をＭ、後者のＰの強度はＨとした。その結果、泳動時間ほぼ６０ｓ以内に１０本のピークを認めた。（図１０）
例１１（高分子ミセル＋ＰＰ法の改良法）
例８をＰＰ法に基づき行なった。前者のＰの強度をＭ、後者のＰの強度はＨＨとした。その結果、同様に泳動時間６０ｓ以内に１０本のピークを認め、加速された。（図１１）
例１２（高分子ミセル＋ＰＰ法）
高分子ミセルを泳動用バッファーとして用いて、１００〜８００ｂｐ、８本のＤＮＡの分離をＰＰ法に基づき行なった。前者のＰの強度をＭ、後者のＰの強度をＭＨとした。（図１２）
６０ｓ以内に〜８本のピークを認めた。
例１３（高分子ミセル＋ＰＰ法）
高分子ミセルを泳動用バッファーとして用いて、１〜１５ｂｐの１５本（５ｋｂｐ：ｈｉｇｈ）のＤＮＡの分離をＰＰ法に基づき行なった。前者のＰをＭ、後者をＬとした。（図１３）その結果、１８０ｓ以内に５本のピークを認めた。
例１４（高分子ミセル＋ＰＰ法）
例１３についてＰＰ法、前者をＭ、後者をＭとした。その結果、泳動時間が短縮された。（図１４）
例１５（高分子ミセル＋ＰＰ法）
例１３についてにＰＰ法、前者をＭ、後者をＨに基づき行なった。その結果、泳動間隔が短縮された。（図１５）
例１６（高分子ミセル＋ＰＰ法の改良法）
例１３についてＰＰ法、前者をＭ、後者をＨＨとした。その結果、さらに７ｋｂｐまで検出できた。（図１６）
例１７（高分子ミセル＋ＰＰ法の改良法）
例１３についてＰＰ法、前者をＨ、後者をＬとした。その結果、１８０ｓ以内に８本のピークを確認した。（図１７）
例１８（高分子ミセル＋ＰＰ法の改良法）
例１３についてＰＰ法、前者をＨ、後者をＭとした。その結果、１８０ｓ以内に１５本のピークを検出した。（図１８）
例１９（高分子ミセル＋ＰＰ法の改良法）
例１３についてＰＰ法、前者をＨ、後者をＨとした。その結果、１００ｓ以内に１５本のピークを確認した。（図１９）
例２０（バックグランド）
本泳動において、ＤＮＡなしの高分子ミセルバッファーと蛍光試薬のみのバックグラウンドを調べた。その結果、高分子ミセルによるピークは検出されないことより、一連のピーク検出は本高分子ミセルを泳動バッファーをして用いた場合のそれぞれのＤＮＡのピークと考えられた。（図２０）
従来の泳動用バッファーにＰＰ法を施したものと高分子ミセルを用いた泳動用バッファーにＰＰ法を施したものと比較し、本高分子ミセルの有効性を調べた。従来ポリマー（０．７％ＨＰＭＣ（ヒドロキシプロピルメチルセルロース））を泳動用バッファーとした場合と比較した。
例２１（従来ポリマー＋通常法）
１００ｂｐ、８００ｂｐの２本のＤＮＡマーカーの分離を従来のポリマー溶液（０．７％ＨＰＭＣ（ヒドロキシプロピルメチルセルロース）を泳動用バッファーとし、通常法に基づき行なった。（図２１）
例２２（従来ポリマー＋ＰＰ法）
例２１を前出願の電気泳動法によりおこなった。前者をＭ、後者のＰをＬＭとした。その結果、泳動時間の短縮を示した。（図２２）
例２３（従来ポリマー＋ＰＰ法）
例２２において前者をＭ、後者のＰをＭＨとした。その結果、ピークがブロードとなった。（図２３）
例２４（従来ポリマー＋通常法）
１００ｂｐ−８００ｂｐの８本のＤＮＡマーカーの分離を従来のポリマー溶液（０．７％ＨＰＭＣ（ヒドロキシプロピルメチルセルロース）を泳動用バッファーとし、通常法に基づき行なった。（図２４）
例２５（従来ポリマー＋ＰＰ法）
例２４を、ＰＰ法により行なった。前者をＭ、後者のＰをＬＭとした。その結果、前者のピークが加速されたが、ピーク間隔が広がった。（図２５）
例２６（従来ポリマー＋ＰＰ法）
例２５について、前者をＭ、後者のＰをＭＨとした。その結果、ピークがブロードとなった。（図２６）
以上により、従来のポリマー溶液を泳動用バッファーとした場合には、ＰＰ法を用いた場合、ＤＮＡの移動時間が向上するものの、ＤＮＡの場合にはその高速分離には、限界があった。一方、高分子ミセルの場合には、さらに高い圧力をかけることは可能であり（例１〜２０）、これにより、本高分子ミセルの有用性が示された。
本高分子ミセルは、単独ではキャピラリー、マイクロチップ電気泳動において、ＤＮＡ分離の効果は示さないが、ＰＰ法と合わせて用いることにより、ＤＮＡのサイズ分離の効果を発揮した。さらに、ＰＰ法を改良した電気泳動法を用いることにより、従来の高分子ポリマー溶液（例えばセルロース誘導体やポリアクリルアミド溶液を用いて、既存の電気泳動法）による最高の検出速度（１０ｋｂｐをおおよそ８０ｓ）をさらに上回る泳動時間（１０ｋｂｐをおおよそ６０ｓ、１５ｋｂｐをおおよそ１００ｓ）を達成した。
産業上の利用の可能性
本発明の電気泳動法によれば、迅速に高い分離能を得ることができるため、遺伝子の解析ＰＣＲ解析、癌の遺伝子診断解析、ＳＳＣＰによるＳＮＰｓ解析、ＶＮＴＲ解析、ＰＣＲ−ＲＦＬＰ解析、マイクロサテライト解析、その他、痴呆症、筋ジストロフィー、心臓病、心筋梗塞、ダウン症、感染症、糖尿病、フェニルケトン尿症等の各種疾患解析への応用、プロテオソーム解析またはグライコソーム解析におけるタンパク質または糖鎖のハイスループットスクリーニング解析に有用であり、医療診療装置への応用、および生体機能、疾患発症機構等の解明への応用が期待される。
【図面の簡単な説明】
図面中で使用する符号は以下を表す。
１  １００ｂｐのＤＮＡのピーク
２  ２００ｂｐのＤＮＡのピーク
３  ３００ｂｐのＤＮＡのピーク
４  ４００ｂｐのＤＮＡのピーク
５  ５００ｂｐのＤＮＡのピーク
６  ６００ｂｐのＤＮＡのピーク
７  ７００ｂｐのＤＮＡのピーク
８  ８００ｂｐのＤＮＡのピーク
９  ９００ｂｐのＤＮＡのピーク
１０  １ｋｂｐのＤＮＡのピーク
１１  １．１ｋｂｐのＤＮＡのピーク
１２  １．２ｋｂｐのＤＮＡのピーク
１３  １．３ｋｂｐのＤＮＡのピーク
１４  １．４ｋｂｐのＤＮＡのピーク
１５  １．５ｋｂｐのＤＮＡのピーク
図１は、マイクロチップ型電気泳動において、泳動条件を検討した結果を示す図である。
図２は、マイクロチップ型電気泳動において、泳動条件を検討した結果を示す図である。
図３は、マイクロチップ型電気泳動において、泳動条件を検討した結果を示す図である。
図４は、マイクロチップ型電気泳動において、泳動条件を検討した結果を示す図である。
図５は、マイクロチップ型電気泳動において、泳動条件を検討した結果を示す図である。
図６は、マイクロチップ型電気泳動において、泳動条件を検討した結果を示す図である。
図７は、マイクロチップ型電気泳動において、泳動条件を検討した結果を示す図である。
図８は、マイクロチップ型電気泳動において、泳動条件を検討した結果を示す図である。
図９は、マイクロチップ型電気泳動において、泳動条件を検討した結果を示す図である。
図１０は、マイクロチップ型電気泳動において、泳動条件を検討した結果を示す図である。
図１１は、マイクロチップ型電気泳動において、泳動条件を検討した結果を示す図である。
図１２は、マイクロチップ型電気泳動において、泳動条件を検討した結果を示す図である。
図１３は、マイクロチップ型電気泳動において、泳動条件を検討した結果を示す図である。
図１４は、マイクロチップ型電気泳動において、泳動条件を検討した結果を示す図である。
図１５は、マイクロチップ型電気泳動において、泳動条件を検討した結果を示す図である。
図１６は、マイクロチップ型電気泳動において、泳動条件を検討した結果を示す図である。
図１７は、マイクロチップ型電気泳動において、泳動条件を検討した結果を示す図である。
図１８は、マイクロチップ型電気泳動において、泳動条件を検討した結果を示す図である。
図１９は、マイクロチップ型電気泳動において、泳動条件を検討した結果を示す図である。
図２０は、マイクロチップ型電気泳動において、泳動条件を検討した結果を示す図である。
図２１は、マイクロチップ型電気泳動において、泳動条件を検討した結果を示す図である。
図２２は、マイクロチップ型電気泳動において、泳動条件を検討した結果を示す図である。
図２３は、マイクロチップ型電気泳動において、泳動条件を検討した結果を示す図である。
図２４は、マイクロチップ型電気泳動において、泳動条件を検討した結果を示す図である。
図２５は、マイクロチップ型電気泳動において、泳動条件を検討した結果を示す図である。
図２６は、マイクロチップ型電気泳動において、泳動条件を検討した結果を示す図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【国際調査報告】
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