(57)【要約】本発明は、五環性トリテルペン類、それらの生理的に許容される塩及びそれらの誘導体からなる群より選ばれる化合物を含有する抗肥満用飲食物、特にマスリン酸及び／又はその生理的に許容される塩を含有する抗肥満用飲食物に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
五環性トリテルペン類、それらの生理的に許容される塩及びそれらの誘導体からなる群より選ばれる化合物を含有する抗肥満用飲食物。
【請求項２】
五環性トリテルペン類、それらの生理的に許容される塩及びそれらの誘導体からなる群より選ばれる化合物を含有する前駆型脂肪細胞増殖抑制用飲食物。
【請求項３】
五環性トリテルペン類、それらの生理的に許容される塩及びそれらの誘導体からなる群より選ばれる化合物を含有する前駆型脂肪細胞分化抑制用飲食物。
【請求項４】
五環性トリテルペン類、それらの生理的に許容される塩及びそれらの誘導体からなる群より選ばれる化合物を含有する成熟型脂肪細胞脂肪蓄積抑制用飲食物。
【請求項５】
五環性トリテルペン類がオレアナン系トリテルペン類、ウルサン系トリテルペン類、ルパン系トリテルペン類からなる群より選ばれることを特徴とする請求項１に記載の抗肥満用飲食物。
【請求項６】
五環性トリテルペン類が、マスリン酸、エリトロジオール、ウルソール酸、ウバオール、ベツリン酸又はベツリンである請求項１に記載の抗肥満用飲食物。
【請求項７】
マスリン酸および／またはその生理的に許容される塩を含有する請求項６記載の抗肥満用飲食物。
【請求項８】
五環性トリテルペン類、それらの生理的に許容される塩及びそれらの誘導体からなる群より選ばれる化合物が天然原料から抽出されたものである請求項１に記載の抗肥満用飲食物。
【請求項９】
五環性トリテルペン類、それらの生理的に許容される塩及びそれらの誘導体からなる群より選ばれる化合物が天然原料から抽出され、濃縮および／または分画・精製されたものである請求項１に記載の抗肥満用飲食物。
【請求項１０】
五環性トリテルペン類、それらの生理的に許容される塩及びそれらの誘導体からなる群より選ばれる化合物が、天然原料を抽出処理し、得られた抽出物から単離されたものである請求項１に記載の抗肥満用飲食物。
【請求項１１】
オリーブ植物の脱脂物、オリーブ抽出物又はオリーブ抽出油を有効成分として含有する抗肥満用飲食物。
【請求項１２】
オリーブ抽出物が、オリーブ油の製造工程で得られる脱脂物の水及び／又は有機溶媒による抽出物である請求項１１記載の抗肥満用飲食物。
【請求項１３】
飲食物が水系飲食物である請求項１に記載の抗肥満用飲食物。
【請求項１４】
飲食物の全質量に対する五環性トリテルペン類、それらの生理的に許容される塩及びそれらの誘導体からなる群から選ばれる化合物の含有率が０．００００１〜９０質量％である請求項１に記載の抗肥満用飲食物。
【請求項１５】
五環性トリテルペン類、それらの生理的に許容される塩及びそれらの誘導体からなる群より選ばれる化合物を含有する調合油脂または調合油脂加工品。
【請求項１６】
製品１００ｇに含まれる五環性トリテルペン類、それらの生理的に許容される塩及びそれらの誘導体からなる化合物の含有量が、０．００１〜１０ｇである請求項１５記載の調合油脂または調合油脂加工品。
【請求項１７】
請求項１５に記載の調合油脂および／または調合油脂加工品を使用した抗肥満用飲食物。
【請求項１８】
五環性トリテルペン類、それらの生理的に許容される塩及びそれらの誘導体からなる群より選ばれる化合物を含有する抗肥大性肥満用および／または抗過形成性肥満用飲食物。
【請求項１９】
五環性トリテルペン類、それらの生理的に許容される塩及びそれらの誘導体からなる群より選ばれる化合物を含有する肥満予防および／または肥満治療用飲食物。
【請求項２０】
五環性トリテルペン類、それらの生理的に許容される塩及びそれらの誘導体からなる群より選ばれる化合物を含有する痩身用飲食物。
【請求項２１】
五環性トリテルペン類、それらの生理的に許容される塩及びそれらの誘導体からなる群より選ばれる化合物を含有する、太りにくい体質への改善用飲食物。
【発明の詳細な説明】
発明の背景
本発明は、経口摂取により抗肥満効果を発現する抗肥満用飲食物に関する。
近年、日本人の食事は著しく欧米化し、高カロリー化が進んでいる。その結果、現代人の文明病とも言える肥満を引き起こし、糖尿病、高血圧症、心血管障害、高脂血症、動脈硬化等の種々の疾患に罹る危険率も高く、先進国の国民の健康を脅かす大きな社会問題となっている。また、近年の日本人、特に女性においては、美意識として痩せたいという願望が非常に強い。肥満とは、消費エネルギーよりも摂取エネルギーの方が過剰となり、脂肪組織が通常以上に蓄積した身体状況のことを言う。脂肪組織は、生体内余剰エネルギーを脂肪として蓄積する器官であり、脂肪細胞やその前駆細胞、マクロファージ、血管周囲細胞、血液細胞等から構成されている。脂肪細胞は、その前駆細胞が食物摂取や運動などの環境因子などから派生する数多くの因子によって分化（分化誘導）され、成熟型脂肪細胞（成熟脂肪細胞）となり、細胞内に脂肪を蓄積するようになる細胞である。また、前駆型脂肪細胞（脂肪前駆細胞）や脂肪細胞自身が細胞分裂を繰り返し細胞の数が増えることも知られている（杉原ら；別冊・医学のあゆみ，脂肪細胞−基礎と臨床、ｐ．７−１２，１９９９）。脂肪組織の増大の要因として、脂肪細胞の大きさの増大によるもの（肥大性肥満）、脂肪細胞の数の増大によるもの（過形成性肥満）、あるいは両方の増大によるもの（肥大性−過形成性肥満）がある。肥大性肥満はいわゆる中年太りとして中年以降の人に多くみられ、過形成性肥満は子供のころから肥満児だった人に多くみられる。特に後者の過形成性肥満は、成長期に太ってしまうことにより、脂肪細胞の数そのものが２倍、３倍に増えてしまうことに根本的な原因があり、この増加した脂肪細胞は大人になってからも、体重が減少すれば小さくはなるものの、数そのものが減ることは無く、過食気味になると脂肪細胞が多いがゆえに脂肪が蓄積されやすいため、すぐに太る体質となる原因となっている。
このような肥満に対する処置や痩身等のための方法は、これまでにも提案はされてきているが、現在の実情としては、例えば脂肪吸引術のような外科的処置に基づく方法だけが、本当に満足のいく結果を得ることができるにすぎない。しかし、このような処置は、人または動物の体に使用するには侵襲的施術として危険がないわけではなく、また、費用が非常に高いといった欠点があるのは明らかである。
一方、五環性トリテルペンとは、一般にイソプレン単位６個から成る五環性の化合物で、炭素数は３０個を基本とするが、生合成過程で転移、酸化、脱離あるいはアルキル化され炭素数が前後するものも含まれる。これらの効果としては、概して、抗炎症効果、抗発癌プロモーター効果（日本油化学会誌，４９，５７１，２０００）等が知られている。しかしながら、五環性トリテルペンおよびそれらの生理的に許容される塩、またはそれらの誘導体が、前駆型脂肪細胞増殖抑制（脂肪前駆細胞増殖抑制）効果、前駆型脂肪細胞分化抑制（脂肪前駆細胞分化誘導抑制）効果、成熟型脂肪細胞脂肪蓄積抑制（脂肪前駆細胞成熟抑制）効果を含む抗肥満効果を有し、かつ、これらの効果は、五環性トリテルペンおよびそれらの生理的に許容される塩、またはそれらの誘導体を経口摂取することで十分に発現されることは、これまでに全く知られていなかった。
発明の開示
本発明は、肥大性肥満、過形成性肥満、肥大性−過形成性肥満等の肥満症を予防および／または改善するため、および、必要に応じた痩身や太りにくい体質を作り上げたりするために、これらに対する非常に優れた効果を継続的かつ簡便に享受するための抗肥満用飲食物を提供することを課題とする。
本発明者らは、前記課題を達成する為に鋭意検討した結果、五環性トリテルペン類およびそれらの生理的に許容される塩、またはそれらの誘導体が、前駆型脂肪細胞増殖抑制効果、前駆型脂肪細胞分化抑制効果、成熟型脂肪細胞脂肪蓄積抑制効果等の、肥満等に対する優れた効果を有すること、および、五環性トリテルペン類およびそれらの生理的に許容される塩、またはそれらの誘導体を経口摂取することで十分にその効果を享受することが可能であることを見出し、本発明を完成するに至った。
すなわち、本発明は、五環性トリテルペン類およびそれらの生理的に許容される塩、またはそれらの誘導体からなる群より選ばれる１種または２種以上を含有する抗肥満用飲食物に関する。飲食物という形態であるため、容易に、かつ、継続的な摂取が可能であり、この結果、好適な抗肥満効果が期待できる。
また、本発明は、五環性トリテルペン類およびそれらの生理的に許容される塩、またはそれらの誘導体からなる群より選ばれる１種または２種以上を前駆型脂肪細胞増殖抑制成分、前駆型脂肪細胞分化抑制成分、成熟型脂肪細胞脂肪蓄積抑制成分として含有する抗肥満用飲食物に関する。飲食物という形態であるため、容易に、かつ、継続的な摂取が可能であり、この結果、好適な前駆型脂肪細胞増殖抑制効果、前駆型脂肪細胞分化抑制効果、成熟型脂肪細胞脂肪蓄積抑制効果が期待できる。
また、本発明は、前記五環性トリテルペン類がオレアナン系トリテルペン類、ウルサン系トリテルペン類、ルパン系トリテルペン類から選ばれる１種または２種以上である抗肥満用飲食物に関する。前記オレアナン系トリテルペン類についてはマスリン酸および／またはエリトロジオールが好ましく、特にマスリン酸が好ましい。ウルサン系トリテルペン類については、ウルソール酸および／またはウバオールが好ましい。ルパン系トリテルペン類については、ベツリン酸および／またはベツリンが好ましい。
本発明における該五環性トリテルペン類およびそれらの生理的に許容される塩、またはそれらの誘導体は、天然から得ることも、人工的に得ることもでき、いずれも好適に使用することができるが、本発明が飲食物であることを考慮に入れると、天然原料から抽出したものが好ましく、さらには濃縮および／または分画・精製したものが好ましく、特には単離したものが好ましい。
本発明はまた、オリーブ植物の脱脂物、オリーブ抽出物又はオリーブ抽出油を有効成分として含有する抗肥満用飲食物に関する。オリーブ抽出物が、オリーブ油の製造工程で得られる脱脂物の水及び／又は有機溶媒による抽出物であるのが好ましい。
特にマスリン酸および／またはその生理的に許容される塩は、オリーブ、ホップ、ハッカ、ザクロ、チョウジ、セージまたはナツメから得たものが好ましく、特にはオリーブ植物および／またはオリーブ油製造工程で得られる副産物から水および／または有機溶媒で抽出処理し、さらに濃縮処理および／または分画・精製処理することで得たものが好ましく、特には単離したものが好ましい。この時、本発明が飲食物であることを考慮に入れると、抽出処理における有機溶媒としては、好ましくは親水性有機溶媒、より好ましくはアルコール類、さらに好ましくはエタノールを使用すれば良い。特にオリーブ植物から得られるマスリン酸および／またはその生理的に許容される塩は、天然物であること、価格、製造効率等の面で、非常に好ましい。
ここで、本発明の抗肥満用飲食物の形態としては、菓子、加工食品、油脂類、調味料、乳製品、飲料等の形態が挙げられ、形状・性状も特に制限されず、固体状、半固体状、ゲル状、液体状、粉末状等いずれでもよく、また、錠剤、カプセル剤、液剤、顆粒剤等いずれでも良い。
本発明の抗肥満用飲食物としては、前記五環性トリテルペン類および／またはそのある特定の誘導体は概して油溶性であることから、飲食物が油脂および／または油脂加工品である場合は、特に好ましい形態といえる。さらには、該油脂および／または油脂加工品を原料として使用、若しくは揚げ物や炒め物用として使用することで得られる飲食物も好ましい。また、本発明の抗肥満用飲食物として、飲料等の水系飲食物も得ることができる。特に、五環性トリテルペン類の一部または全部がそれらの生理的に許容される塩および／またはまたはそのある特定の誘導体とすることで、油溶性の五環性トリテルペン類を水溶性にすることができるため好適である。
また、本発明は、五環性トリテルペン類およびそれらの生理的に許容される塩、またはそれらの誘導体からなる群より選ばれる１種または２種以上を含有する抗肥大性肥満用および／または抗過形成性肥満用飲食物に関する。
また、本発明は、五環性トリテルペン類およびそれらの生理的に許容される塩、またはそれらの誘導体からなる群より選ばれる１種または２種以上を含有する肥満予防および／または肥満治療用飲食物に関する。
また、本発明は、五環性トリテルペン類およびそれらの生理的に許容される塩、またはそれらの誘導体からなる群より選ばれる１種または２種以上を含有する痩身用飲食物に関する。
また、本発明は、五環性トリテルペン類およびそれらの生理的に許容される塩、またはそれらの誘導体からなる群より選ばれる１種または２種以上を含有する、太りにくい体質への改善用飲食物に関する。
発明を実施するための最良の形態
本発明は、五環性トリテルペン類およびそれらの生理的に許容される塩、またはそれらの誘導体から選ばれる１種または２種以上を含有する抗肥満用飲食物に関する。本発明は、飲食物という形態であるため、容易、かつ、継続的な摂取が可能であり、好適な抗肥満効果が期待できる。ここで、五環性トリテルペンとは、イソプレン単位６個から成るトリテルペン類のうちの五環性の化合物であり、自然界においては様々な植物体に多く存在する物質群である。これらは、天然には植物体から抽出して得ることができ、また、その中のいくつかは人工的に合成され、既に試薬等として販売されているものもあり、いずれも好適に使用することができる。
これらを含有するとは、その抗肥満効果等を発揮する程度に含有するということであるが、その含量は特に制限されず、含有する五環性トリテルペン類の種類、飲食物の種類、摂取量、摂取の頻度、年齢、性別、体重、症状の程度、健康状態等によって適宜調整すれば良い。以下に限定されないが、例えば、０．００００１〜９０質量％、好ましくは０．０００１〜８０質量％、より好ましくは０．００１〜７０質量％、さらに好ましくは０．０１〜６５質量％、さらに好ましくは０．１〜６０質量％、さらに好ましくは０．２〜５５質量％、さらに好ましくは０．４〜５０質量％、さらに好ましくは０．６〜４５質量％、さらに好ましくは０．８〜４０質量％、さらに好ましくは１．０〜３５質量％、さらに好ましくは２．０〜３０質量％であれば良い。
また本発明は、五環性トリテルペン類およびそれらの生理的に許容される塩、またはそれらの誘導体から選ばれる１種または２種以上を前駆型脂肪細胞増殖抑制成分、前駆型脂肪細胞分化抑制成分、成熟型脂肪細胞脂肪蓄積抑制成分として含有する抗肥満用飲食物に関する。ここで、前駆型脂肪細胞増殖抑制成分、前駆型脂肪細胞分化抑制成分、成熟型脂肪細胞脂肪蓄積抑制成分として含有するとは、その前駆型脂肪細胞増殖抑制効果、前駆型脂肪細胞分化抑制効果、成熟型脂肪細胞脂肪蓄積抑制効果等を発揮する程度に含有するということであるが、その含量は特に制限されず、含有する五環性トリテルペン類の種類、飲食物の種類、摂取量、摂取の頻度、年齢、性別、体重、症状の程度、健康状態等によって適宜調整すれば良い。以下に限定されないが、例えば、０．００００１〜９０質量％、好ましくは０．０００１〜８０質量％、より好ましくは０．００１〜７０質量％、さらに好ましくは０．０１〜６５質量％、さらに好ましくは０．１〜６０質量％、さらに好ましくは０．２〜５５質量％、さらに好ましくは０．４〜５０質量％、さらに好ましくは０．６〜４５質量％、さらに好ましくは０．８〜４０質量％、さらに好ましくは１．０〜３５質量％、さらに好ましくは２．０〜３０質量％であれば良い。
前駆型脂肪細胞増殖抑制効果、前駆型脂肪細胞分化抑制効果、成熟型脂肪細胞脂肪蓄積抑制効果を有するものとしては、前記五環性トリテルペン類のうち、オレアナン系トリテルペン類、ウルサン系トリテルペン類、ルパン系トリテルペン類が好ましく、本発明はこれらから選ばれる１種または２種以上を含有する抗肥満用飲食物に関する。
さらに、前記オレアナン系トリテルペン類についてはマスリン酸および／またはエリトロジオールが好ましく、特にマスリン酸が好ましい。ウルサン系トリテルペン類については、ウルソール酸および／またはウバオールが好ましい。ルパン系トリテルペン類については、ベツリン酸および／またはベツリンが好ましい。
これらは前駆型脂肪細胞増殖抑制効果、前駆型脂肪細胞分化抑制効果、成熟型脂肪細胞脂肪蓄積抑制効果といった抗肥満効果を有し、これらの効果は、培養細胞による試験法で評価することができる。この評価方法によれば、強力な抗肥満効果を有する物質として知られている共役リノール酸（ＣＬＡ）と比較しても、２〜６０倍の抗肥満効果を有することがわかる。また、継続的な摂取による効果としては、実験動物に経口摂取させた場合、その抗肥満効果を十分に発現することがわかる。
本発明における該五環性トリテルペン類およびそれらの生理的に許容される塩、またはそれらの誘導体は、天然から得ることができ、人工的に得ることもでき、いずれも好適に使用することができるが、本発明が飲食物という形態であることを考慮に入れると、天然原料から抽出したものが好ましく、さらには濃縮および／または分画・精製したものが好ましく、特には単離したものが好ましい。
特にマスリン酸および／またはその生理的に許容される塩は、オリーブ、ホップ、ハッカ、ザクロ、チョウジ、セージまたはナツメから得たものが好ましく、特にはオリーブ植物および／またはオリーブ油製造工程で得られる副産物から水および／または有機溶媒で抽出処理し、さらに濃縮処理および／または分画・精製処理することで得たものが好ましく、特には単離したものが好ましい。この時、本発明が飲食物という形態であることを考慮に入れると、抽出処理における有機溶媒としては、好ましくは親水性有機溶媒、より好ましくはアルコール類、さらに好ましくはエタノールを使用すれば良い。特にオリーブ植物から得られるマスリン酸および／またはその生理的に許容される塩は、天然物であること、価格、製造効率等の面で、非常に好ましい。
ここで、本発明における飲食物の形態としては、前述の通り、菓子、加工食品、油脂類、調味料、乳製品、飲料等の各種飲食物が挙げられ、形状・性状も特に制限されず、固体状、半固体状、ゲル状、液体状、粉末状等いずれでもよく、また、錠剤、カプセル剤、液剤、顆粒剤等いずれでも良い。本発明の抗肥満用飲食物としては、前記五環性トリテルペン類および／またはそのある特定の誘導体は概して油溶性であることから、飲食物が油脂および／または油脂加工品である場合は、特に好ましい形態といえる。特に限定されないが、例えば、マスリン酸高含有油脂等が挙げられる。さらには、該油脂および／または油脂加工品を原料として使用、若しくは揚げ物や炒め物として使用することで得られる飲食物も好ましい。
さらに本発明の抗肥満用飲食物として、飲料等の水系飲食物も得ることができる。特に、五環性トリテルペン類の一部または全部をそれらの生理的に許容される塩および／またはそのある特定の誘導体の状態とすることで、本来、概して油溶性を示す五環性トリテルペン類の水溶性を向上させることができるため好適である。特に限定されないが、例えば、本来油溶性であるマスリン酸の生理的に許容される塩や誘導体を配合した水系飲料等が挙げられる。
また、本発明は、五環性トリテルペン類およびそれらの生理的に許容される塩、またはそれらの誘導体からなる群より選ばれる１種または２種以上を含有する抗肥大性肥満用および／または抗過形成性肥満用飲食物に関する。
また、本発明は、五環性トリテルペン類およびそれらの生理的に許容される塩、またはそれらの誘導体からなる群より選ばれる１種または２種以上を含有する肥満予防および／または肥満治療用飲食物に関する。
また、本発明は、五環性トリテルペン類およびそれらの生理的に許容される塩、またはそれらの誘導体からなる群より選ばれる１種または２種以上を含有する痩身用飲食物に関する。
また、本発明は、五環性トリテルペン類およびそれらの生理的に許容される塩、またはそれらの誘導体からなる群より選ばれる１種または２種以上を含有する、太りにくい体質への改善用飲食物に関する。
本発明の抗肥満用飲食物は、前駆型脂肪細胞増殖抑制効果、前駆型脂肪細胞分化抑制効果、成熟型脂肪細胞脂肪蓄積抑制効果等の抗肥満効果を有し、肥満の予防および／または治療用として使用され、また、痩身および／または太りにくい体質への改善用として使用される。肥満の予防を目的とした使用とは、前駆型脂肪細胞の増殖や成熟型脂肪細胞への分化や脂肪蓄積を抑制し、新たな脂肪細胞からなる脂肪組織が発生しないように使用することを示す。肥満の治療を目的とした使用とは、それ以上の前駆型脂肪細胞の増殖の抑制や、余剰に増生した前駆型脂肪細胞が成熟型脂肪細胞へと分化するのを抑制したり、分化シグナルを既に受けた前駆型脂肪細胞が成熟型脂肪細胞へと分化するのを抑制することにより、余剰に増生した脂肪細胞やその前駆細胞の数を減少させ、脂肪組織量を減少させるように使用することを示す。その結果として、皮下脂肪や内臓脂肪の蓄積を抑制および／または減少させることができ、肥満を予防および／または治療することができる。痩身を目的とした使用とは、余剰に増生した脂肪細胞やその前駆細胞の数を減少させ、脂肪組織量を減少させるように使用することを示し、太りにくい体質への改善用として使用とは、成長期における過形成性肥満を抑制させるように使用することを示す。
本発明は、五環性トリテルペン類およびそれらの生理的に許容される塩、またはそれらの誘導体から選ばれる１種または２種以上を含有する本発明の抗肥満用飲食物に関するが、ここで五環性トリテルペンとは、一般に、トリテルペン類の１種であり、イソプレン単位６個から成る五環性の化合物で、炭素数は３０個を基本とするが、生合成過程で転移、酸化、脱離あるいはアルキル化され炭素数が前後するものも含まれる。本発明の抗肥満用飲食物における五環性トリテルペン類とは、上記五環性トリテルペン類、それらの生理的に許容される塩および／またはそれらの水酸基やカルボキシル基が置換された誘導体をも含み、また、これらの由来は特に制限されず、天然から得られるもの、人工的に合成されたもの、市販品等いずれも使用することができるが、本発明が飲食物という形態であることを考慮に入れると、天然物を用いることが好ましい。
五環性トリテルペン類は、一般に、その骨格により分類されている。本発明における五環性トリテルペン類としては、例えば、オレアナン系トリテルペン類、ウルサン系トリテルペン類、ルパン系トリテルペン類、ホパン系トリテルペン類、セラタン系トリテルペン類、フリーデラン系トリテルペン類、タラキセラン系トリテルペン類、タラキサスタン系トリテルペン類、マルチフロラン系トリテルペン類、ジャーマニカン系トリテルペン類等が挙げられる。
ここで、生理的に許容される塩とは、特に五環性トリテルペン酸のカルボキシル基から誘導される塩であり（部分構造：−ＣＯＯＸ；Ｘは任意の陽イオン性物質を示す。）、本発明における天然物からの単離物に本来的に含まれるものも含む。本発明においては、通常飲食物で用いられている塩であれば特に限定はされず、例えば、ナトリウム、カリウム、リチウム等のアルカリ金属塩、カルシウム、マグネシウム、バリウム、亜鉛等のアルカリ土類金属塩、アンモニア、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、エチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、プロピルアミン、ブチルアミン、テトラブチルアミン、ペンチルアミン、ヘキシルアミン等のアルキルアミン塩、エタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、プロパノールアミン、ジプロパノールアミン、イソプロパノールアミン、ジイソプロパノールアミン等のアルカノールアミン塩、ピペラジン、ピペリジン等のその他の有機アミン塩、リジン、アルギニン、ヒスチジン、トリプトファン等の塩基性アミノ酸塩等の塩が挙げられる。これらのうち、アルカリ金属塩、アルキルアミン塩、アルカノールアミン塩及び塩基性アミノ酸塩が好ましい。一概にこれらの塩類は、その元となる五環性トリテルペン類に比べて、より水溶性を示すため、本発明においては、特に水系の飲食物に適用する場合に好ましい。
また、誘導体とは、生化学的あるいは人工的に形成可能な誘導体であり、本発明においては、可能な誘導体であれば特に限定はされないが、例えば、アルコールエステル基を有する誘導体、脂肪酸エステル基を有する誘導体、アルコキシ基を有する誘導体、アルコキシメチル基を有する誘導体、あるいは配糖体等が挙げられる。これらのうち、特にアルコールエステル基を有する誘導体、脂肪酸エステル基を有する誘導体、アルコキシ基を有する誘導体、アルコキシメチル基を有する誘導体は、その元となる五環性トリテルペン類に比べて、より脂溶性を示すため、本発明においては、特に油系の飲食物に適用する場合に好ましく、また配糖体は、その元となる五環性トリテルペン類に比べて、より水溶性を示すため、本発明においては、特に水系の飲食物に適用する場合に好ましい。
これらの誘導体は、一部は天然にも存在し、また、人工的に形成させることで得ることができる。また、本発明の誘導体を再度誘導体化して、それらの塩を使用することもできる。
このように、五環性トリテルペン類を、生理的に許容される適当な塩や誘導体の形態にすることにより、水溶性又は油溶性を向上させることができ、従って、ハンドリング性・品質・抗肥満効果を向上させた製品を設定することができる。
アルコールエステル基とは、一般的なカルボキシル基とアルコール類との脱水反応の結果として形成される官能基を示す（部分構造：−ＣＯＯＲ；Ｒは任意の炭化水素系官能基を示す。）。すなわち、本発明における五環性トリテルペン類の、アルコールエステル基を有する誘導体とは、特に、そのカルボキシル基とアルコール類から形成可能な誘導体を示す。この際のアルコール類に特に制限は無いが、例えば、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、アリルアルコール、ｎ−ブタノール、ｓｅｃ−ブタノール、ｔｅｒｔ−ブタノール、エチレングリコール、トリメチルシリルアルコール、トリエチルシリルアルコール、フェノール、ベンジルアルコール、糖類等が挙げられる。このうち、エタノール、トリエチルシリルアルコール、メタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、トリメチルシリルアルコールから形成される誘導体が好ましい。
脂肪酸エステル基とは、一般的な水酸基と脂肪酸類との脱水反応の結果として形成される官能基を示す（部分構造：−ＯＣＯＲ；Ｒは任意の炭化水素系官能基を示す。）。すなわち、本発明における五環性トリテルペン類の、脂肪酸エステル基を有する誘導体とは、特に、その水酸基と脂肪酸類から形成可能な誘導体を示す。この際の脂肪酸類に特に制限は無いが、例えば、酢酸、プロピオン酸、酪酸、イソ酪酸、吉草酸、イソ吉草酸、ピバル酸、カプロン酸、カプリル酸、カプリン酸、ウンデカン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、パルミトレイン酸、ステアリン酸、オレイン酸、エライジン酸、バクセン酸、リノール酸、リノエライジン酸、リノレン酸、γ−リノレン酸、アラキジン酸、アラキドン酸、エイコサペンタエン酸、ベヘン酸、ドコサヘキサエン酸、リグノセリン酸、セロチン酸、モンタン酸、メリシン酸等が挙げられる。このうち、酢酸、無水酢酸、カプロン酸、カプリル酸、カプリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、パルミトレイン酸、ステアリン酸、オレイン酸、エライジン酸、リノール酸、リノエライジン酸、リノレン酸、γ−リノレン酸、アラキジン酸、アラキドン酸、エイコサペンタエン酸、ベヘン酸、ドコサヘキサエン酸から形成される誘導体が好ましい。
アルコキシ基とは、一般的な水酸基とアルコール類との脱水反応の結果として形成される官能基を示す（部分構造：−ＯＲ；Ｒは任意の炭化水素系官能基を示す。）。すなわち、本発明における五環性トリテルペン類の、アルコキシ基を有する誘導体とは、特に、その水酸基とアルコール類から形成可能な誘導体を示す。この際のアルコール類に特に制限は無いが、例えば、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、アリルアルコール、ｎ−ブタノール、ｓｅｃ−ブタノール、ｔｅｒｔ−ブタノール、エチレングリコール、トリメチルシリルアルコール、トリエチルシリルアルコール、フェノール、ベンジルアルコール、糖類等が挙げられる。このうち、エタノール、トリエチルシリルアルコール、メタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、トリメチルシリルアルコールから形成される誘導体が好ましい。
アルコキシメチル基とは、一般的なヒドロキシメチル基とアルコール類との脱水反応の結果として形成される官能基を示す（部分構造：−ＣＨ２ＯＲ；Ｒは任意の炭化水素系官能基を示す。）。すなわち、本発明における五環性トリテルペン類の、アルコキシメチル基を有する誘導体とは、特に、そのヒドロキシメチル基とアルコール類から形成可能な誘導体を示す。この際のアルコール類に特に制限は無いが、例えば、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、アリルアルコール、ｎ−ブタノール、ｓｅｃ−ブタノール、ｔｅｒｔ−ブタノール、エチレングリコール、トリメチルシリルアルコール、トリエチルシリルアルコール、フェノール、ベンジルアルコール、糖類等が挙げられる。このうち、エタノール、トリエチルシリルアルコール、メタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、トリメチルシリルアルコールから形成される誘導体が好ましい。
また、本発明における配糖体とは、上記のアルコールエステル基を有する誘導体、アルコキシ基を有する誘導体、アルコキシメチル基を有する誘導体のうち、特に、五環性トリテルペン類のカルボキシル基、水酸基、ヒドロキシメチル基と糖類から形成可能な誘導体を示す（部分構造：−ＣＯＯＲ、−ＯＲ、−ＣＨ２ＯＲ；Ｒは任意の糖類を示す。）。この際の糖類に特に制限は無いが、例えば、グルコース、マンノース、ガラクトース、フルクトース、キシロース、アラビノース、フコース、ラムノース、グルコサミン、ガラクトサミン、グルクロン酸等が挙げられ、いずれもα体、β体どちらでもよい。またこれらの配糖体は、単糖でもよいし、二糖以上の様々な組み合わせのオリゴ糖でもよい。これらの中には、通常天然に存在し、サポニンという総称で知られているものも有るが、本発明においては、これらのいずれを用いてもよい。
本発明における五環性トリテルペン類等は上述の通りであるが、特に抗肥満効果の高さの面からは、オレアナン系トリテルペン類、ウルサン系トリテルペン類、ルパン系トリテルペン類およびそれらの生理的に許容される塩、またはそれらの誘導体が好ましい。それぞれ、オレアナン系トリテルペン類については一般式（Ｉ）に、ウルサン系トリテルペン類については一般式（ＩＩ）に、ルパン系トリテルペン類については一般式（ＩＩＩ）に示される骨格を有する五環性トリテルペン類およびそれらの生理的に許容される塩、またはそれらの誘導体である。また、それぞれの式中の官能基については、上記と同様である。
2003039270.tif 000002
（式中、Ｒ１、Ｒ２は水素原子（−Ｈ）、水酸基（−ＯＨ）、アルコキシ基（−ＯＲ）、アルコールエステル基（−ＯＣＯＲ）を示し、Ｒ３はメチル基（−ＣＨ３）、ヒドロキシメチル基（−ＣＨ２ＯＨ）、アルコキシメチル基（−ＣＨ２ＯＲ）、カルボキシル基（−ＣＯＯＨ）、脂肪酸エステル基（−ＣＯＯＲ）、カルボン酸塩（−ＣＯＯＸ）を示す。）
2003039270.tif 000003
（式中、Ｒ１は水素原子（−Ｈ）、水酸基（−ＯＨ）、アルコキシ基（−ＯＲ）、アルコールエステル基（−ＯＣＯＲ）を示し、Ｒ２はメチル基（−ＣＨ３）、ヒドロキシメチル基（−ＣＨ２ＯＨ）、アルコキシメチル基（−ＣＨ２ＯＲ）、カルボキシル基（−ＣＯＯＨ）、脂肪酸エステル基（−ＣＯＯＲ）、カルボン酸塩（−ＣＯＯＸ）を示す。）
2003039270.tif 000004
（式中、Ｒ１は水素原子（−Ｈ）、水酸基（−ＯＨ）、アルコキシ基（−ＯＲ）、アルコールエステル基（−ＯＣＯＲ）を示し、Ｒ２はメチル基（−ＣＨ３）、ヒドロキシメチル基（−ＣＨ２ＯＨ）、アルコキシメチル基（−ＣＨ２ＯＲ）、カルボキシル基（−ＣＯＯＨ）、脂肪酸エステル基（−ＣＯＯＲ）、カルボン酸塩（−ＣＯＯＸ）を示す。）
本発明において特に制限は無いが、例えば、オレアナン系トリテルペン類として、マスリン酸、オレアノール酸、エリトロジオール、β−アミリン、ヘデラゲニン、グリチルレチン酸等が挙げられ、ウルサン系トリテルペン類として、ウルソール酸、ウバオール、α−アミリン、キノボ酸、タラキサステロール、α−ヒドロキシウルソール酸等が挙げられ、ルパン系トリテルペン類として、ベツリン酸、ベツリン、ルペオール等が挙げられる。また、これらの生理的に許容される塩および誘導体については、前述と同様である。それらの生理的に許容される塩、またはそれらの誘導体を使用する場合には、オレアナン系トリテルペン類、ウルサン系トリテルペン類、ルパン系トリテルペン類およびそれらの生理的に許容される塩、またはそれらの誘導体の由来は制限されず、天然から得られるもの、人工的に合成されたもの、市販品等いずれも使用することができるが、本発明が飲食物という形態であることを考慮に入れると、天然物を用いることが好ましい。
上述の通り、本発明においては、五環性トリテルペン類のうちのオレアナン系トリテルペン類（Ｉ）、ウルサン系トリテルペン類（ＩＩ）、ルパン系トリテルペン類（ＩＩＩ）およびそれらの生理的に許容される塩、またはそれらの誘導体が好ましいが、抗肥満効果の強さの面から更に、オレアナン系トリテルペンとしてマスリン酸、エリトロジオールが好ましく、ウルサン系トリテルペンとしてウルソール酸、ウバオールが好ましく、ルパン系トリテルペンとしてベツリン酸、ベツリンが好ましく、当然に、それらの生理的に許容される塩、またはそれらの誘導体が好ましい。
マスリン酸、エリトロジオールは、いずれもオレアナン系トリテルペン類の一種であり、各種植物中に存在することが知られている物質である。また、これらの生理的に許容される塩および誘導体については、前述と同様である。本発明の抗肥満用飲食物において、マスリン酸、エリトロジオール、それらの生理的に許容される塩、またはそれらの誘導体を使用する場合には、これらの物質の由来は制限されず、天然から得られるもの、人工的に合成されたもの、市販品等いずれも使用することができるが、本発明が飲食物という形態であることを考慮に入れると、天然物を用いることが好ましい。
本発明においては、抗肥満効果の高さ、安定供給の面で、マスリン酸および／またはその生理的に許容される塩が最も好ましい。マスリン酸（ｍａｓｌｉｎｉｃ  ａｃｉｄ）は、オレアナン系トリテルペンの一種で、化学式（ＩＶ）に示す構造であり、作用としては、抗炎症作用や抗ヒスタミン作用を有することが知られている。天然には、オリーブ、ホップ、ハッカ、ザクロ、チョウジ、セージ、ナツメ等に存在することが知られている。本発明の抗肥満用飲食物において、マスリン酸、その生理的に許容される塩および誘導体の由来は制限されず、天然から得られるもの、人工的に合成されたもの、市販品等いずれも使用することができるが、本発明が飲食物という形態であることを考慮に入れると、例えば、オリーブ、ホップ、ハッカ、ザクロ、チョウジ、セージ、ナツメ等の天然から得られるものが好ましく、特にオリーブから得られるマスリン酸および／またはその生理的に許容される塩は原料供給や含量の面で非常に好ましい。マスリン酸および／またはその生理的に許容される塩は、これらの原料、特にオリーブ植物から、水および／または有機溶媒により抽出処理することで得ることができ、さらに濃縮・精製することで高濃度の天然由来マスリン酸および／またはその生理的に許容される塩を簡便かつ大量に得ることができる。
尚、本明細書において、「オリーブ」は、オリーブ植物及び／又はオリーブ油及び／又はオリーブ油製造工程で得られる副産物を意味する。
2003039270.tif 000005
本発明において、マスリン酸の生理的に許容される塩および誘導体については前記記載と同様である。すなわち、その生理的に許容される塩とは化学式（ＩＶ）における−ＣＯＯＨから誘導されるものであり、その塩の種類は通常飲食物で用いられるものであれば特に限定はされない。具体的には、例えば、マスリン酸の塩として、マスリン酸ナトリウム、マスリン酸カリウム、マスリン酸アンモニウム、マスリン酸ジメチルアンモニウム、マスリン酸カルシウム、マスリン酸マグネシウム等が挙げられる。このうち、マスリン酸ナトリウム及びマスリン酸カリウムが好ましい。
また、マスリン酸の誘導体としては、例えば、いずれか一個所が誘導体化されているものとして、マスリン酸メチルエステル、マスリン酸エチルエステル、マスリン酸ｎ−プロピルエステル、マスリン酸イソプロピルエステル、マスリン酸ｎ−ブチルエステル、マスリン酸トリメチルシリルエステル、マスリン酸トリエチルシリルエステル、マスリン酸−β−Ｄ−グルコピラノシルエステル、マスリン酸−β−Ｄ−ガラクトピラノシルエステル、３−Ｏ−アセチル−マスリン酸、３−Ｏ−プロピオニル−マスリン酸、３−Ｏ−ブチリル−マスリン酸、３−Ｏ−バレリル−マスリン酸、３−Ｏ−カプリル−マスリン酸、３−Ｏ−ラウリル−マスリン酸、３−Ｏ−ミリスチル−マスリン酸、３−Ｏ−パルミチル−マスリン酸、３−Ｏ−パルミトオレイル−マスリン酸、３−Ｏ−ステアリル−マスリン酸、３−Ｏ−ステアロイル−マスリン酸、３−Ｏ−オレイル−マスリン酸、３−Ｏ−バクセニル−マスリン酸、３−Ｏ−リノレイル−マスリン酸、３−Ｏ−リノレニル−マスリン酸、３−Ｏ−アラキジル−マスリン酸、３−Ｏ−アラキドニル−マスリン酸、３−Ｏ−ベヘニル−マスリン酸、２−Ｏ−アセチル−マスリン酸、２−Ｏ−プロピオニル−マスリン酸、２−Ｏ−ブチリル−マスリン酸、２−Ｏ−バレリル−マスリン酸、２−Ｏ−カプリル−マスリン酸、２−Ｏ−ラウリル−マスリン酸、２−Ｏ−ミリスチル−マスリン酸、２−Ｏ−パルミチル−マスリン酸、２−Ｏ−パルミトオレイル−マスリン酸、２−Ｏ−ステアリル−マスリン酸、２−Ｏ−ステアロイル−マスリン酸、２−Ｏ−オレイル−マスリン酸、２−Ｏ−バクセニル−マスリン酸、２−Ｏ−リノレイル−マスリン酸、２−Ｏ−リノレニル−マスリン酸、２−Ｏ−アラキジル−マスリン酸、２−Ｏ−アラキドニル−マスリン酸、２−Ｏ−ベヘニル−マスリン酸、３−Ｏ−メチル−マスリン酸、３−Ｏ−エチル−マスリン酸、３−Ｏ−ｔ−ブチル−マスリン酸、３−Ｏ−トリエチルシリル−マスリン酸、３−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル−マスリン酸、３−Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−マスリン酸、３−Ｏ−β−Ｄ−グルクロノピラノシル−マスリン酸、２−Ｏ−メチル−マスリン酸、２−Ｏ−エチル−マスリン酸、２−Ｏ−ｔ−ブチル−マスリン酸、２−Ｏ−トリエチルシリル−マスリン酸、２−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル−マスリン酸、２−Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−マスリン酸、２−Ｏ−β−Ｄ−グルクロノピラノシル−マスリン酸等が挙げられる。このうち、マスリン酸エチルエステル、マスリン酸トリエチルシリルエステル、３−Ｏ−アセチル−マスリン酸、２−Ｏ−アセチル−マスリン酸、２−Ｏ−トリエチルシリル−マスリン酸、３−Ｏ−ステアロイル−マスリン酸、２−Ｏ−ステアロイル−マスリン酸が好ましい。以上には、誘導体として１基のみ誘導体化されているものを挙げたが、当然、これらのうち誘導される位置および種類が可能な２基以上が誘導体化されたものでもよい。例えば、マスリン酸又は上述の好ましいマスリン酸エステルの２，３−Ｏ−ジアセチル体、２，３−Ｏ−ジトリエチルシリル体、２，３−ジステアロイル体が好ましいものとしてあげられる。また、配糖体については単糖のもののみ挙げたが、当然、様々な糖��から選ばれる二糖以上のオリゴ糖でもよい。
エリトロジオール（ｅｒｙｔｈｒｏｄｉｏｌ）は、オレアナン系トリテルペンの一種で、化学式（Ｖ）の様な構造であり、作用としてはこれまでに、抗炎症作用（Ｐｌａｎｔａ．Ｍｅｄ．ＶＯＬ．６１，Ｎｏ．２，１８２−１８５  １９９５）等を有することが知られている。天然には、オリーブ、ヒマワリ、キンセンカ、アラビアゴムノキ、コウキシタン、ナガバカコノキ等に存在することが知られている。本発明の抗肥満用飲食物において、エリトロジオールまたはそれらの誘導体の由来は制限されず、天然から得られるもの、人工的に合成されたもの、市販品等いずれも使用することができるが、本発明が飲食物という形態であることを考慮に入れると、例えば、オリーブ、ヒマワリ、キンセンカ、アラビアゴムノキ、コウキシタン、ナガバカコノキ等の天然から得られるものが好ましい。特に、オリーブが好ましく、具体的にはオリーブ植物及び／又はオリーブ油製造工程で得られる副産物から得られるものが好ましい。
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エリトロジオールについて、その生理的に許容される塩や誘導体については前述と同様である。
ここで、誘導体について以下に制限されないが、例えば、いずれか一個所が誘導体化されているものとして、３−Ｏ−アセチル−エリトロジオール、３−Ｏ−プロピオニル−エリトロジオール、３−Ｏ−ブチリル−エリトロジオール、３−Ｏ−バレリル−エリトロジオール、３−Ｏ−カプリル−エリトロジオール、３−Ｏ−ラウリル−エリトロジオール、３−Ｏ−ミリスチル−エリトロジオール、３−Ｏ−パルミチル−エリトロジオール、３−Ｏ−パルミトオレイル−エリトロジオール、３−Ｏ−ステアリル−エリトロジオール、３−Ｏ−ステアロイル−エリトロジオール、３−Ｏ−オレイル−エリトロジオール、３−Ｏ−バクセニル−エリトロジオール、３−Ｏ−リノレイル−エリトロジオール、３−Ｏ−リノレニル−エリトロジオール、３−Ｏ−アラキジル−エリトロジオール、３−Ｏ−アラキドニル−エリトロジオール、３−Ｏ−ベヘニル−エリトロジオール、２８−Ｏ−アセチル−エリトロジオール、２８−Ｏ−プロピオニル−エリトロジオール、２８−Ｏ−ブチリル−エリトロジオール、２８−Ｏ−バレリル−エリトロジオール、２８−Ｏ−カプリル−エリトロジオール、２８−Ｏ−ラウリル−エリトロジオール、２８−Ｏ−ミリスチル−エリトロジオール、２８−Ｏ−パルミチル−エリトロジオール、２８−Ｏ−パルミトオレイル−エリトロジオール、２８−Ｏ−ステアリル−エリトロジオール、２８−Ｏ−ステアロイル−エリトロジオール、２８−Ｏ−オレイル−エリトロジオール、２８−Ｏ−バクセニル−エリトロジオール、２８−Ｏ−リノレイル−エリトロジオール、２８−Ｏ−リノレニル−エリトロジオール、２８−Ｏ−アラキジル−エリトロジオール、２８−Ｏ−アラキドニル−エリトロジオール、２８−Ｏ−ベヘニル−エリトロジオール、３−Ｏ−メチル−エリトロジオール、３−Ｏ−エチル−エリトロジオール、３−Ｏ−ｔ−ブチル−エリトロジオール、３−Ｏ−トリエチルシリル−エリトロジオール、２８−Ｏ−メチル−エリトロジオール、２８−Ｏ−エチル−エリトロジオール、２８−Ｏ−ｔ−ブチル−エリトロジオール、２８−Ｏ−トリエチルシリル−エリトロジオール、３−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル−エリトロジオール、３−Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−エリトロジオール、３−Ｏ−β−Ｄ−グルクロノピラノシル−エリトロジオール、２８−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル−エリトロジオール、２８−Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−エリトロジオール、２８−Ｏ−β−Ｄ−グルクロノピラノシル−エリトロジオール等が挙げられる。このうち、３−Ｏ−アセチル−エリトロジオール、２８−Ｏ−アセチル−エリトロジオールが好ましい。以上には、誘導体として１基のみ誘導体化されているものを挙げたが、当然、これらのうち誘導される位置および種類が可能な２基以上が誘導体化されたものでもよい。例えば、３，２８−Ｏ−ジアセチル−エリトロジオールがあげられる。また、配糖体については単糖のもののみ挙げたが、当然、様々な糖類から選ばれる二糖以上のオリゴ糖でもよい。
ウルソール酸及びウバオールは、いずれもウルサン系トリテルペン類の一種であり、各種植物中に存在することが知られている物質である。また、これらの生理的に許容される塩および誘導体については、前述と同様である。本発明の抗肥満用飲食物において、ウルソール酸、ウバオール、それらの生理的に許容される塩、またはそれらの誘導体を使用する場合には、これらの物質の由来は制限されず、天然から得られるもの、人工的に合成されたもの、市販品等いずれも使用することができるが、飲食物であることを考慮に入れると、天然物を用いることが好ましい。
ウルソール酸（ｕｒｓｏｌｉｃ  ａｃｉｄ）は、ウルサン系トリテルペンの一種で、化学式（ＶＩ）で示される構造の化合物で、作用としてはこれまでに、抗炎症作用、抗肥満作用、抗糖尿病作用、抗高脂血症作用（Ｊｉｅ  Ｌｉｕ，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｅｔｈｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，４９，５７−６８，１９９５）等を有することが知られている。天然には、リンゴ、サクランボ、ウワウルシ等の果実や葉に広く分布することが知られている。本発明の抗肥満用飲食物において、ウルソール酸、それらの生理的に許容される塩、またはそれらの誘導体の由来は制限されず、天然から得られるもの、人工的に合成されたもの、市販品等いずれも使用することができるが、本発明が飲食物であることを考慮に入れると、例えば、リンゴ、サクランボ、ウワウルシ等の天然から得られるものが好ましい。
2003039270.tif 000007
ウルソール酸について、その生理的に許容される塩や誘導体については前述と同様である。
ここで、その生理的に許容される塩について以下に制限されないが、例えば、ウルソール酸の塩として、ウルソール酸ナトリウム、ウルソール酸カリウム、ウルソール酸アンモニウム、ウルソール酸ジメチルアンモニウム、ウルソール酸カルシウム、ウルソール酸マグネシウム等が挙げられる。
ウルソール酸の誘導体としては、例えば、いずれか一個所が誘導体化されているものとして、ウルソール酸メチルエステル、ウルソール酸エチルエステル、ウルソール酸ｎ−プロピルエステル、ウルソール酸イソプロピルエステル、ウルソール酸ｎ−ブチルエステル、ウルソール酸トリメチルシリルエステル、ウルソール酸トリエチルシリルエステル、ウルソール酸−β−Ｄ−グルコピラノシルエステル、ウルソール酸−β−Ｄ−ガラクトピラノシルエステル、３−Ｏ−アセチル−ウルソール酸、３−Ｏ−プロピオニル−ウルソール酸、３−Ｏ−ブチリル−ウルソール酸、３−Ｏ−バレリル−ウルソール酸、３−Ｏ−カプリル−ウルソール酸、３−Ｏ−ラウリル−ウルソール酸、３−Ｏ−ミリスチル−ウルソール酸、３−Ｏ−パルミチル−ウルソール酸、３−Ｏ−パルミトオレイル−ウルソール酸、３−Ｏ−ステアリル−ウルソール酸、３−Ｏ−ステアロイル−ウルソール酸、３−Ｏ−オレイル−ウルソール酸、３−Ｏ−バクセニル−ウルソール酸、３−Ｏ−リノレイル−ウルソール酸、３−Ｏ−リノレニル−ウルソール酸、３−Ｏ−アラキジル−ウルソール酸、３−Ｏ−アラキドニル−ウルソール酸、３−Ｏ−ベヘニル−ウルソール酸、３−Ｏ−メチル−ウルソール酸、３−Ｏ−エチル−ウルソール酸、３−Ｏ−ｔ−ブチル−ウルソール酸、３−Ｏ−トリエチルシリル−ウルソール酸、３−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル−ウルソール酸、３−Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−ウルソール酸、３−Ｏ−β−Ｄ−グルクロノピラノシル−ウルソール酸等が挙げられる。このうち、ウルソール酸エチルエステルが好ましい。以上には、誘導体として１基のみ誘導体化されているものを挙げたが、当然、これらのうち誘導される位置および種類が可能な２基以上が誘導体化されたものでもよい。また、配糖体については単糖のもののみ挙げたが、当然、様々な糖類から選ばれる二糖以上のオリゴ糖でもよい。
ウバオール（ｕｖａｏｌ）は、ウルサン系トリテルペンの一種で、化学式（ＶＩＩ）の様な構造であり、作用としてはこれまでに、抗炎症作用（Ｐｌａｎｔａ．Ｍｅｄ．ＶＯＬ．６１，Ｎｏ．２，１８２−１８５  １９９５）、グリセロリン酸脱水素酵素阻害作用（特開平９−６７２４９）等を有することが知られている。天然には、オリーブ、ウワウルシ、セージ、アラビアゴムノキ、カユプテ等に存在することが知られている。本発明の抗肥満用飲食物において、ウバオールまたはそれらの誘導体の由来は制限されず、天然から得られるもの、人工的に合成されたもの、市販品等いずれも使用することができるが、本発明が飲食物という形態であることを考慮に入れると、例えば、オリーブ、ウワウルシ、セージ、アラビアゴムノキ、カユプテ等の天然から得られるものが好ましい。特に、オリーブが好ましく、具体的にはオリーブ植物及び／又はオリーブ油製造工程で得られる副産物から得られるものが好ましい。
2003039270.tif 000008
ウバオールについて、その生理的に許容される塩や誘導体については前述と同様である。
ここで、誘導体について以下に制限されないが、例えば、いずれか一個所が誘導体化されているものとして、３−Ｏ−アセチル−ウバオール、３−Ｏ−プロピオニル−ウバオール、３−Ｏ−ブチリル−ウバオール、３−Ｏ−バレリル−ウバオール、３−Ｏ−カプリル−ウバオール、３−Ｏ−ラウリル−ウバオール、３−Ｏ−ミリスチル−ウバオール、３−Ｏ−パルミチル−ウバオール、３−Ｏ−パルミトオレイル−ウバオール、３−Ｏ−ステアリル−ウバオール、３−Ｏ−ステアロイル−ウバオール、３−Ｏ−オレイル−ウバオール、３−Ｏ−バクセニル−ウバオール、３−Ｏ−リノレイル−ウバオール、３−Ｏ−リノレニル−ウバオール、３−Ｏ−アラキジル−ウバオール、３−Ｏ−アラキドニル−ウバオール、３−Ｏ−ベヘニル−ウバオール、２８−Ｏ−アセチル−ウバオール、２８−Ｏ−プロピオニル−ウバオール、２８−Ｏ−ブチリル−ウバオール、２８−Ｏ−バレリル−ウバオール、２８−Ｏ−カプリル−ウバオール、２８−Ｏ−ラウリル−ウバオール、２８−Ｏ−ミリスチル−ウバオール、２８−Ｏ−パルミチル−ウバオール、２８−Ｏ−パルミトオレイル−ウバオール、２８−Ｏ−ステアリル−ウバオール、２８−Ｏ−ステアロイル−ウバオール、２８−Ｏ−オレイル−ウバオール、２８−Ｏ−バクセニル−ウバオール、２８−Ｏ−リノレイル−ウバオール、２８−Ｏ−リノレニル−ウバオール、２８−Ｏ−アラキジル−ウバオール、２８−Ｏ−アラキドニル−ウバオール、２８−Ｏ−ベヘニル−ウバオール、３−Ｏ−メチル−ウバオール、３−Ｏ−エチル−ウバオール、３−Ｏ−ｔ−ブチル−ウバオール、３−Ｏ−トリエチルシリル−ウバオール、２８−Ｏ−メチル−ウバオール、２８−Ｏ−エチル−ウバオール、２８−Ｏ−ｔ−ブチル−ウバオール、２８−Ｏ−トリエチルシリル−ウバオール、３−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル−ウバオール、３−Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−ウバオール、３−Ｏ−β−Ｄ−グルクロノピラノシル−ウバオール、２８−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル−ウバオール、２８−Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−ウバオール、２８−Ｏ−β−Ｄ−グルクロノピラノシル−ウバオール等が挙げられる。このうち、３−Ｏ−アセチル−ウバオール、２８−Ｏ−アセチル−ウバオールが好ましい。以上には、誘導体として１基のみ誘導体化されているものを挙げたが、当然、これらのうち誘導される位置および種類が可能な２基以上が誘導体化されたものでもよい。例えば、３，２８−Ｏ−ジアセチル−ウバオールがあげられる。また、配糖体については単糖のもののみ挙げたが、当然、様々な糖類から選ばれる二糖以上のオリゴ糖でもよい。
ベツリン酸及びベツリンは、いずれもルパン系トリテルペン類の一種であり、各種植物中に存在することが知られている物質である。また、これらの生理的に許容される塩および誘導体については、前述と同様である。本発明の抗肥満用飲食物において、ベツリン酸、ベツリン、それらの生理的に許容される塩、またはそれらの誘導体を使用する場合には、これらの物質の由来は制限されず、天然から得られるもの、人工的に合成されたもの、市販品等いずれも使用することができるが、飲食物という形態であることを考慮に入れると、天然物を用いることが好ましい。
ベツリン酸（ｂｅｔｕｌｉｎｉｃ  ａｃｉｄ）は、ルパン系トリテルペンの一種で、化学式（ＶＩＩＩ）の様な構造であり、作用としてはこれまでに、制癌作用、抗炎症作用、創傷治療促進作用（特公平４−２６６２３）、アルコール吸収抑制作用（特開平７−５３３８５）、発毛促進作用（特開平９−１５７１３９）等を有することが知られている。天然には、センブリ、チョウジ、ブドウ果皮、オリーブ等に遊離状態で、チクセツニンジン、ニンジン、サトウダイコン等にはサポニンとして存在することが知られている。本発明の抗肥満用飲食物において、ベツリン酸、それらの生理的に許容される塩、またはそれらの誘導体の由来は制限されず、天然から得られるもの、人工的に合成されたもの、市販品等いずれも使用することができるが、本発明が飲食物という形態であることを考慮に入れると、例えば、センブリ、チョウジ、ブドウ、オリーブ、チクセツニンジン、ニンジン、サトウダイコン等の天然から得られるものが好ましい。特に、オリーブから得られるものが好ましく、具体的には、オリーブ植物及び／又はオリーブ油製造工程で得られる副産物から得られるものが好ましい。
2003039270.tif 000009
ベツリン酸について、その生理的に許容される塩や誘導体については前述と同様である。
ここで、その生理的に許容される塩について以下に制限されないが、例えば、ベツリン酸の塩として、ベツリン酸ナトリウム、ベツリン酸カリウム、ベツリン酸アンモニウム、ベツリン酸ジメチルアンモニウム、ベツリン酸カルシウム、ベツリン酸マグネシウム等が挙げられる。このうち、ベツリン酸ナトリウム、ベツリン酸カリウムが好ましい。
ベツリン酸の誘導体としては、例えば、いずれか一個所が誘導体化されているものとして、ベツリン酸メチルエステル、ベツリン酸エチルエステル、ベツリン酸ｎ−プロピルエステル、ベツリン酸イソプロピルエステル、ベツリン酸ｎ−ブチルエステル、ベツリン酸トリメチルシリルエステル、ベツリン酸トリエチルシリルエステル、ベツリン酸−β−Ｄ−グルコピラノシルエステル、ベツリン酸−β−Ｄ−ガラクトピラノシルエステル、３−Ｏ−アセチル−ベツリン酸、３−Ｏ−プロピオニル−ベツリン酸、３−Ｏ−ブチリル−ベツリン酸、３−Ｏ−バレリル−ベツリン酸、３−Ｏ−カプリル−ベツリン酸、３−Ｏ−ラウリル−ベツリン酸、３−Ｏ−ミリスチル−ベツリン酸、３−Ｏ−パルミチル−ベツリン酸、３−Ｏ−パルミトオレイル−ベツリン酸、３−Ｏ−ステアリル−ベツリン酸、３−Ｏ−ステアロイル−ベツリン酸、３−Ｏ−オレイル−ベツリン酸、３−Ｏ−バクセニル−ベツリン酸、３−Ｏ−リノレイル−ベツリン酸、３−Ｏ−リノレニル−ベツリン酸、３−Ｏ−アラキジル−ベツリン酸、３−Ｏ−アラキドニル−ベツリン酸、３−Ｏ−ベヘニル−ベツリン酸、３−Ｏ−メチル−ベツリン酸、３−Ｏ−エチル−ベツリン酸、３−Ｏ−ｔ−ブチル−ベツリン酸、３−Ｏ−トリエチルシリル−ベツリン酸、３−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル−ベツリン酸、３−Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−ベツリン酸、３−Ｏ−β−Ｄ−グルクロノピラノシル−ベツリン酸等が挙げられる。このうち、ベツリン酸エチルエステルが好ましい。以上には、誘導体として１基のみ誘導体化されているものを挙げたが、当然、これらのうち誘導される位置および種類が可能な２基以上が誘導体化されたものでもよい。また、配糖体については単糖のもののみ挙げたが、当然、様々な糖類から選ばれる二糖以上のオリゴ糖でもよい。
ベツリン（ｂｅｔｕｌｉｎ）は、ルパン系トリテルペンの一種で、化学式（ＩＸ）の様な構造であり、作用としてはこれまでに、生体タンパク質変性抑制作用（特開平９−６７２５３）、グリセロリン酸脱水素酵素阻害作用（特開平９−６７２４９）、リパーゼ阻害作用（特開平１０−２６５３２８）、肝疾患予防作用（特開平１１−２０９２７５）等を有することが知られている。天然には、シラカバの樹皮等に存在することが知られている。本発明の抗肥満用飲食物において、ベツリンまたはそれらの誘導体の由来は制限されず、天然から得られるもの、人工的に合成されたもの、市販品等いずれも使用することができるが、本発明が飲食物という形態であることを考慮に入れると、例えば、シラカバの樹皮等の天然から得られるものが好ましい。
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ベツリンについて、その生理的に許容される塩や誘導体については前述と同様である。
ここで、誘導体について以下に制限されないが、例えば、いずれか一個所が誘導体化されているものとして、３−Ｏ−アセチル−ベツリン、３−Ｏ−プロピオニル−ベツリン、３−Ｏ−ブチリル−ベツリン、３−Ｏ−バレリル−ベツリン、３−Ｏ−カプリル−ベツリン、３−Ｏ−ラウリル−ベツリン、３−Ｏ−ミリスチル−ベツリン、３−Ｏ−パルミチル−ベツリン、３−Ｏ−パルミトオレイル−ベツリン、３−Ｏ−ステアリル−ベツリン、３−Ｏ−ステアロイル−ベツリン、３−Ｏ−オレイル−ベツリン、３−Ｏ−バクセニル−ベツリン、３−Ｏ−リノレイル−ベツリン、３−Ｏ−リノレニル−ベツリン、３−Ｏ−アラキジル−ベツリン、３−Ｏ−アラキドニル−ベツリン、３−Ｏ−ベヘニル−ベツリン、２８−Ｏ−アセチル−ベツリン、２８−Ｏ−プロピオニル−ベツリン、２８−Ｏ−ブチリル−ベツリン、２８−Ｏ−バレリル−ベツリン、２８−Ｏ−カプリル−ベツリン、２８−Ｏ−ラウリル−ベツリン、２８−Ｏ−ミリスチル−ベツリン、２８−Ｏ−パルミチル−ベツリン、２８−Ｏ−パルミトオレイル−ベツリン、２８−Ｏ−ステアリル−ベツリン、２８−Ｏ−ステアロイル−ベツリン、２８−Ｏ−オレイル−ベツリン、２８−Ｏ−バクセニル−ベツリン、２８−Ｏ−リノレイル−ベツリン、２８−Ｏ−リノレニル−ベツリン、２８−Ｏ−アラキジル−ベツリン、２８−Ｏ−アラキドニル−ベツリン、２８−Ｏ−ベヘニル−ベツリン、３−Ｏ−メチル−ベツリン、３−Ｏ−エチル−ベツリン、３−Ｏ−ｔ−ブチル−ベツリン、３−Ｏ−トリエチルシリル−ベツリン、２８−Ｏ−メチル−ベツリン、２８−Ｏ−エチル−ベツリン、２８−Ｏ−ｔ−ブチル−ベツリン、２８−Ｏ−トリエチルシリル−ベツリン、３−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル−ベツリン、３−Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−ベツリン、３−Ｏ−β−Ｄ−グルクロノピラノシル−ベツリン、２８−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル−ベツリン、２８−Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−ベツリン、２８−Ｏ−β−Ｄ−グルクロノピラノシル−ベツリン等が挙げられる。このうち、３−Ｏ−アセチル−ベツリン、２８−Ｏ−アセチル−ベツリンが好ましい。以上には、誘導体として１基のみ誘導体化されているものを挙げたが、当然、これらのうち誘導される位置および種類が可能な２基以上が誘導体化されたものでもよい。例えば、３，２８−Ｏ−ジアセチル−ベツリンが好ましい。また、配糖体については単糖のもののみ挙げたが、当然、様々な糖類から選ばれる二糖以上のオリゴ糖でもよい。
本発明の抗肥満用飲食物は経口摂取することで、抗肥満効果を発現する。本発明において抗肥満効果とは、直接的には、前駆型脂肪細胞の増殖を抑制すること、前駆型脂肪細胞から成熟型脂肪細胞への分化を抑制すること、および、前駆型脂肪細胞が成熟型脂肪細胞になることを抑制することを意図しており、これによって最終的には、病的な肥満の予防、改善はもちろん、必要に応じた痩身や太りにくい体質を作る、といったような美容的あるいは心理的な面においても期待のできる効果を示す。ここで、前駆型脂肪細胞とは、脂肪組織中に存在し、増殖因子によってその数を増やすことができ、さらに分化因子によって身体に取り込まれた脂肪を蓄積できるようになる成熟型脂肪細胞の、前駆型の細胞のことを言う。一般に、肥満とは、身体に脂肪が過剰に蓄積した状態であり、脂肪を溜め込む脂肪細胞からなる脂肪組織の過剰な増生によるものと考えられている。したがって、脂肪組織の生成に関与する前駆型脂肪細胞の増殖を抑制することができれば、肥満を予防、改善したり、痩身や太りにくい体質にすることが可能である。この点において、本発明の抗肥満用飲食物は、前駆型脂肪細胞増殖抑制効果、前駆型脂肪細胞分化抑制効果、成熟型脂肪細胞脂肪蓄積抑制効果等の抗肥満効果を有する五環性トリテルペン類およびそれらの生理的に許容される塩、またはそれらの誘導体を含有するため、肥満を予防、改善したり、痩身や太りにくい体質にすることが期待でき、非常に好ましい。すなわち、本発明の抗肥満用飲食物は、摂取することによりその抗肥満効果を発現するものであり、具体的には、皮下脂肪や内臓脂肪の蓄積を抑制することや、これら蓄積された脂肪を減少させること等により、肥満を予防、改善したり、痩身や太りにくい体質を作り上げたりすること等に、大きく寄与するものである。
上述の通り、肥満とは、身体に脂肪が過剰に蓄積した状態であり、脂肪を溜め込む脂肪細胞からなる脂肪組織の過剰な増生によるものと考えられているが、この肥満は、高脂血症、糖尿病、動脈硬化、冠状動脈疾患や脳血管疾患等の血管疾患に密接に関与していることが明らかとなっている（板倉編；脂質の科学、ｐ．１３５−１５３，１９９９）。したがって、脂肪細胞の数や、脂肪細胞の脂肪蓄積を抑制することができれば、肥満やそれに引き続く高脂血症、糖尿病、動脈硬化、冠状動脈疾患や脳血管疾患等の血管疾患を予防、改善することが可能である。この点において、本発明の抗肥満用飲食物は、前駆型脂肪細胞増殖抑制効果、前駆型脂肪細胞分化抑制効果、成熟型脂肪細胞脂肪蓄積抑制効果等の抗肥満効果を有する五環性トリテルペン類およびそれらの生理的に許容される塩、またはそれらの誘導体を含有するため、肥満やそれに引き続く冠状動脈疾患や脳血管疾患等の血管疾患の発症を最小限に抑えることが期待でき、非常に好ましい。すなわち、本発明の抗肥満用飲食物は、摂取することによりその抗肥満効果を発現するものであり、さらには、冠状動脈疾患や脳血管疾患等を改善あるいは防止し、延命率の延長等に大きく寄与するものである。
上記、五環性トリテルペン類およびそれらの生理的に許容される塩、またはそれらの誘導体は、前駆型脂肪細胞増殖抑制効果を有する。
本発明において、前駆型脂肪細胞増殖抑制効果とは、脂肪組織中の前駆型脂肪細胞が脂肪組織内で増殖することを抑制することを示し、結果的には、脂肪組織が増生することを予防したり、既に存在する脂肪組織がそれ以上肥大しないように、あるいは縮小させたりすることが期待できる。本発明で前駆型脂肪細胞増殖抑制効果の評価に用いた方法は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの抗肥満効果を有する物質のスクリーニング法として既知の方法であり（Ｓａｔｏｒｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｎｕｔｒ．１２９：９２−９７，１９９９）、スクリーニングが容易で、迅速且つ多大な動物の犠牲が回避できる点が特徴である。本発明では、培養前駆型脂肪細胞の有する酸化還元能により蛍光物質を生成する試薬を用い、その蛍光物質の生成量を蛍光強度の強弱により判定することで、増殖抑制効果の有無を検討している。
本発明における五環性トリテルペン類およびそれらの生理的に許容される塩、またはそれらの誘導体の前駆型脂肪細胞増殖抑制効果は、前駆型脂肪細胞を用いた試験法にて示される。本発明で用いた前駆型脂肪細胞とは、マウス由来の培養前駆型脂肪細胞株であり、この細胞は通常に培養した場合、倍加時間１８時間の増殖能で、培養面上に均一に単層を形成する。これに対して、この培養系内に前駆型脂肪細胞増殖抑制効果を有する物質を存在させると、前駆型脂肪細胞の増殖が抑えられ相対的に細胞の酸化還元能が抑制され、生成される蛍光物質の量も減少し蛍光強度が減少する。この相対的な蛍光強度の度合いから、前駆型脂肪細胞増殖抑制効果を見積もることができる。
上記試験法での評価によると、本発明における五環性トリテルペン類およびそれらの生理的に許容される塩、またはそれらの誘導体の前駆型脂肪細胞増殖抑制効果を、公知の抗肥満効果を有する物質であるＣＬＡと比較すると、例えば、マスリン酸では約２〜３０倍、マスリン酸の塩では約２〜２８倍、エリトロジオールでは約２〜５０倍、ウルソール酸では約２〜６０倍、ウバオールでは約２〜８倍、ベツリン酸では約２〜１０倍、ベツリンでは約２〜１２倍、マスリン酸エチルエステルでは約２〜３０倍、アセチル化マスリン酸では約２〜２８倍、トリエチルシリル化マスリン酸では約２〜２８倍、ステアリル化マスリン酸エチルでは約２〜３２倍、アセチル化エリトロジオールでは約２〜４４倍、ウルソール酸エチルエステルでは約２〜４８倍、アセチル化ウバオールでは約２〜１２倍、ベツリン酸エチルでは約２〜１２倍、アセチル化ベツリンでは約２〜１２倍という、高い前駆型脂肪細胞増殖抑制効果を有していることが分かる。すなわち、本発明の抗肥満用飲食物は、五環性トリテルペン類およびそれらの生理的に許容される塩、またはそれらの誘導体を含有することにより、高い抗肥満効果を有するＣＬＡよりも強い前駆型脂肪細胞増殖抑制効果を享受できるものである。
また、上記、五環性トリテルペン類およびそれらの生理的に許容される塩、またはそれらの誘導体は、前駆型脂肪細胞分化抑制効果を有する。
前駆型脂肪細胞分化抑制効果とは、前駆型脂肪細胞への分化因子の作用を抑制することで、前駆型脂肪細胞が成熟型脂肪細胞へと分化を開始するのを抑制することを示し、結果的には、成熟型脂肪細胞の発生を抑制することで新たな脂肪組織が形成されることを予防したり、既に存在する脂肪組織中の前駆型脂肪細胞が成熟型脂肪細胞にならないようにすることが期待できる。本発明では、上記物質を分化時に作用させ、成熟型脂肪細胞へと分化・成熟した後の、細胞内に取り込まれた中性脂肪（トリグリセリド）量を対照群と比較することで、分化抑制効果の有無を判定している。
本発明における五環性トリテルペン類およびそれらの生理的に許容される塩、またはそれらの誘導体の前駆型脂肪細胞分化抑制効果は、前駆型脂肪細胞を用いた試験法にて示される。本発明で用いた前駆型脂肪細胞とは、マウス由来の培養前駆型脂肪細胞株であり、この細胞を脂肪細胞へ分化させるためには、牛胎児血清、デキサメタゾン、３−イソブチル−１−メチルキサンチン、およびインスリン等の分化因子を効果させる必要がある。この効果により前駆型脂肪細胞が脂肪細胞へと分化を開始する。これに対して、分化期に分化抑制効果を有する物質を存在させると、成熟型脂肪細胞の数が減少、もしくは、細胞内に取り込まれたトリグリセリド量が減少する。このトリグリセリド量の対照群と比較した減少度合いから、前駆型脂肪細胞分化抑制効果を見積もることができる。
上記試験法での評価によると、本発明における五環性トリテルペン類およびそれらの生理的に許容される塩、またはそれらの誘導体の前駆型脂肪細胞分化抑制効果を、公知の抗肥満効果を有する物質であるＣＬＡと比較すると、例えば、マスリン酸では約２〜２２倍、マスリン酸の塩では約２〜２０倍、エリトロジオールでは約２〜２０倍、ウルソール酸では約２〜１８倍、ウバオールでは約２〜１６倍、ベツリン酸では約２〜１８倍、ベツリンでは約２〜２０倍、マスリン酸エチルエステルでは約２〜２２倍、アセチル化マスリン酸では約２〜２２倍、トリエチルシリル化マスリン酸では約２〜２０倍、ステアリル化マスリン酸エチルでは約２〜２２倍、アセチル化エリトロジオールでは約２〜２０倍、ウルソール酸エチルエステルでは約２〜１８倍、アセチル化ウバオールでは約２〜１８倍、ベツリン酸エチルでは約２〜１８倍、アセチル化ベツリンでは約２〜２０倍という、高い前駆型脂肪細胞分化抑制効果を有していることが分かる。すなわち、本発明の抗肥満用飲食物は、五環性トリテルペン類およびそれらの生理的に許容される塩、またはそれらの誘導体を含有することにより、ＣＬＡよりも強い前駆型脂肪細胞分化抑制効果を享受できるものである。
また、上記、五環性トリテルペン類およびそれらの生理的に許容される塩、またはそれらの誘導体は、成熟型脂肪細胞脂肪蓄積抑制効果を有する。
成熟型脂肪細胞脂肪蓄積抑制効果とは、前駆型脂肪細胞が分化因子による刺激を受けた後、身体に取り込まれた脂肪を細胞内に蓄積できるようになる成熟型脂肪細胞になることを抑制することを示し、結果的には、新たな成熟型脂肪細胞の発生を抑制することで更なる脂肪組織が形成されることを予防したり、既に存在する脂肪組織中の前駆型脂肪細胞が、分化因子による刺激を受けたのち成熟型脂肪細胞にならないようにすることが期待できる。本発明では、上記物質を分化因子による刺激を受けた前駆型脂肪細胞に作用させ、成熟型脂肪細胞へと分化・脂肪蓄積した後の、細胞内に取り込まれた中性脂肪（トリグリセリド）量を対照群と比較することで、成熟型脂肪細胞脂肪蓄積抑制効果の有無を判定している。
本発明における五環性トリテルペン類およびそれらの生理的に許容される塩、またはそれらの誘導体の成熟型脂肪細胞脂肪蓄積抑制効果は、前駆型脂肪細胞を用いた試験法にて示される。本発明で用いた前駆型脂肪細胞とは、マウス由来の培養前駆型脂肪細胞株であり、この細胞を脂肪細胞へ分化させるためには、牛胎児血清、デキサメタゾン、３−イソブチル−１−メチルキサンチン、およびインスリン等の分化因子を効果させる必要がある。この効果により前駆型脂肪細胞が脂肪細胞へと分化を開始し、その後成熟型脂肪細胞へと成熟する。これに対して、分化後の脂肪細胞成熟期に、成熟型脂肪細胞脂肪蓄積抑制効果を有する物質を存在させると、成熟型脂肪細胞の数が減少、もしくは、細胞内に取り込まれたトリグリセリド量が減少する。このトリグリセリド量の対照群と比較した減少度合いから、成熟型脂肪細胞脂肪蓄積抑制効果を見積もることができる。
上記試験法での評価によると、本発明における五環性トリテルペン類およびそれらの生理的に許容される塩、またはそれらの誘導体の成熟型脂肪細胞脂肪蓄積抑制効果を、公知の抗肥満効果を有する物質であるＣＬＡと比較すると、例えば、マスリン酸では約２〜２０倍、マスリン酸の塩では約２〜２０倍、エリトロジオールでは約２〜２０倍、ウルソール酸では約２〜１８倍、ウバオールでは約２〜１８倍、ベツリン酸では約２〜１８倍、ベツリンでは約２〜１８倍、マスリン酸エチルエステルでは約２〜２０倍、アセチル化マスリン酸では約２〜２０倍、トリエチルシリル化マスリン酸では約２〜２０倍、ステアリル化マスリン酸エチルでは約２〜２０倍、アセチル化エリトロジオールでは約２〜２０倍、ウルソール酸エチルエステルでは約２〜２０倍、アセチル化ウバオールでは約２〜１８倍、ベツリン酸エチルでは約２〜１８倍、アセチル化ベツリンでは約２〜２０倍という、高い成熟型脂肪細胞脂肪蓄積抑制効果を有していることが分かる。すなわち、本発明の抗肥満用飲食物は、五環性トリテルペン類およびそれらの生理的に許容される塩、またはそれらの誘導体を含有することにより、ＣＬＡよりも強い成熟型脂肪細胞脂肪蓄積抑制効果を享受できるものである。
五環性トリテルペン類、およびそれらのアルコールエステル基を有する誘導体、脂肪酸エステル基を有する誘導体、アルコキシ基を有する誘導体、アルコキシメチル基を有する誘導体は、概して脂溶性なので、油系、あるいは乳化系の飲食物等に好適に配合することができる。また、特に油脂あるいは油脂加工品としての摂取においては、油とともに吸収されることが期待されるため、吸収性の面で好ましい。
また、五環性トリテルペン類の生理的に許容される塩あるいは配糖体は、概して水溶性を示すので、水系あるいは乳化系等の飲食物に、均一に溶解ないしは分散させて含有させることで好適に配合することができる。特に飲料等は水系あるいは乳化系での製品化が多いので、この場合、必要に応じて五環性トリテルペン類を、それらの生理的に許容される塩あるいは配糖体とすることで好適に配合することができる。
さらに、五環性トリテルペン類および／またはそれらの生理的に許容される塩は、極めて微量の飲食物等への配合で、通常必要とされる抗肥満効果を得ることができるので、コスト面でのメリットがあるとともに、配合比の面から他の成分を配合できる余裕が生じるので、その他の機能をさらに充実させることができ、好ましい。
当然、五環性トリテルペン類および／またはそれらの生理的に許容される塩の配合量を増やすことで、極めて優れた抗肥満効果等を有する飲食物の製造が、本発明により可能である。
本発明における五環性トリテルペン類は、上述の通り、天然物として植物等に存在している事が知られており、ほとんどのものがそれらの植物を通して、食経験があるものであり、過剰摂取しない限り生体に対する悪影響はないとされている。
実際に動物に投与した場合では、例えばマスリン酸の場合、ＬＤ５０値は、２０００ｍｇ／体重ｋｇ以上であり、極めて安全性の高いことが確認できる。このことは、前駆型脂肪細胞増殖抑制効果、前駆型脂肪細胞分化抑制効果、成熟型脂肪細胞脂肪蓄積抑制効果等の抗肥満効果を有する五環性トリテルペン類を経口摂取することができる、すなわち、飲食物等の形態を通して摂取することができることを示す。この場合、医薬品等のような投与の際の煩わしさや苦痛を伴うことなく、継続的かつ簡便に体内の取込むことができるので、好ましい。
また、主に痩身用として使用する場合、本発明における五環性トリテルペン類およびそれらの生理的に許容される塩、またはそれらの誘導体は、直接的に前駆型脂肪細胞に対して作用するため、他の栄養素の代謝に対する影響が最小限であることが期待される。すなわち、例えば、脂質分解作用を有する痩身剤等では、体に最低限必要な栄養すら、その吸収を阻害する方向に働く等、副作用の面で不安が残るものであるが、本発明における本発明における五環性トリテルペン類およびそれらの生理的に許容される塩、またはそれらの誘導体は、直接的に前駆型脂肪細胞に対して作用するため、血中脂質、血糖等への影響が殆どないといえる。この点においても、本発明の抗肥満用飲食物は、十分な栄養を摂取しながら、痩身を行うことができるという、安全面においても、非常に好ましいものである。
ここで、本発明の抗肥満用飲食物が適用される症状としては、例えば、肥大性肥満、過形成性肥満、肥大性−過形成性肥満等の肥満が挙げられる。
本発明は、五環性トリテルペン類およびそれらの生理的に許容される塩、またはそれらの誘導体から選ばれる１種または２種以上を含有する抗肥満用飲食物に関する。これらを含有するとは、抗肥満効果を有する程度含有すること、および、前駆型脂肪細胞の増殖抑制、分化抑制、脂肪蓄積抑制による脂肪組織の発生や増生に対する効果を生じさせることを期待して配合するということである。
本発明の抗肥満用飲食物中に、五環性トリテルペン類およびそれらの生理的に許容される塩、またはそれらの誘導体を含有する場合、その含量は、含有する五環性トリテルペン類の種類、飲食物の種類、摂取量、摂取の頻度、年齢、性別、体重、症状の程度、健康状態等の条件により異なるので、一概に規定されないが、当然、前駆型脂肪細胞の増殖抑制、分化抑制、脂肪蓄積抑制による脂肪組織の発生や増生に対する予防・治療に効果を有する量である。特に好適に本発明の抗肥満効果を得るためには、五環性トリテルペン類およびそれらの生理的に許容される塩、またはそれらの誘導体の１日の摂取量が、例えばマスリン酸の場合、０．００１〜５ｇ、より好ましくは０．００１〜１ｇとなるようにするのが最も好ましい。従って、本発明の抗肥満用飲食物中の五環性トリテルペン類およびそれらの生理的に許容される塩またはそれらの誘導体の含量は、以下に限定されるものではないが、例えば、０．００００１〜９０質量％、好ましくは０．０００１〜８０質量％、より好ましくは０．００１〜７０質量％、さらに好ましくは０．０１〜６５質量％、さらに好ましくは０．１〜６０質量％、さらに好ましくは０．２〜５５質量％、さらに好ましくは０．４〜５０質量％、さらに好ましくは０．６〜４５質量％、さらに好ましくは０．８〜４０質量％、さらに好ましくは１．０〜３５質量％、さらに好ましくは２．０〜３０質量％であれば良い。なお、本発明の抗肥満用飲食物の有効成分として、オリーブ植物の脱脂物、オリーブ抽出物又はオリーブ抽出油を含有する場合は、これらの有効成分中に含まれる五環性トリテルペン類等の含有量が上記規定の範囲内になるようにするのが好ましい。
本発明の抗肥満用飲食物中に前駆型脂肪細胞増殖抑制成分、前駆型脂肪細胞分化抑制成分、成熟型脂肪細胞脂肪蓄積抑制成分として、五環性トリテルペン類およびそれらの生理的に許容される塩、またはそれらの誘導体を含有する場合、その含量は、含有する五環性トリテルペン類の種類、飲食物の種類、摂取量、摂取の頻度、年齢、性別、体重、症状の程度、健康状態等の条件により異なるので、一概に規定されないが、当然、前駆型脂肪細胞の増殖抑制、分化抑制、脂肪蓄積抑制に効果を有する量である。以下に限定されるものではないが、例えば、０．００００１〜９０質量％、好ましくは０．０００１〜８０質量％、より好ましくは０．００１〜７０質量％、さらに好ましくは０．０１〜６５質量％、さらに好ましくは０．１〜６０質量％、さらに好ましくは０．２〜５５質量％、さらに好ましくは０．４〜５０質量％、さらに好ましくは０．６〜４５質量％、さらに好ましくは０．８〜４０質量％、さらに好ましくは１．０〜３５質量％、さらに好ましくは２．０〜３０質量％であれば良い。
本発明の抗肥満用飲食物は、該五環性トリテルペン類等を含有するため、前駆型脂肪細胞増殖抑制効果、前駆型脂肪細胞分化抑制効果、成熟型脂肪細胞脂肪蓄積抑制効果等の抗肥満効果を有することを特徴とする。飲食物という形態であるため、容易に、かつ、継続的な摂取が可能であり、好適な効果が期待できる。
また本発明は、好ましくは、前記五環性トリテルペン類が一般式（Ｉ）で表されるオレアナン系トリテルペン類、一般式（ＩＩ）で表されるウルサン系トリテルペン類、一般式（ＩＩＩ）で表されるルパン系トリテルペン類から選ばれる１種または２種以上である抗肥満用飲食物に関する。これらは、抗肥満効果を有し、前駆型脂肪細胞増殖抑制効果、前駆型脂肪細胞分化抑制効果、成熟型脂肪細胞脂肪蓄積抑制効果等の抗肥満効果が高いため、好ましい。
本発明の抗肥満用飲食物中に抗肥満成分、並びに、前駆型脂肪細胞増殖抑制成分、前駆型脂肪細胞分化抑制成分、成熟型脂肪細胞脂肪蓄積抑制成分として、オレアナン系トリテルペン類および／またはそれらの生理的に許容される塩および／またはそれらの誘導体を含有する場合、その含量は、前述の通り一概に規定されず、以下に限定されるものではないが、例えば、０．００００１〜９０質量％、好ましくは０．０００１〜８０質量％、より好ましくは０．００１〜７０質量％、さらに好ましくは０．０１〜６５質量％、さらに好ましくは０．１〜６０質量％、さらに好ましくは０．２〜５５質量％、さらに好ましくは０．４〜５０質量％、さらに好ましくは０．６〜４５質量％、さらに好ましくは０．８〜４０質量％、さらに好ましくは１．０〜３５質量％、さらに好ましくは２．０〜３０質量％であれば良い。
本発明の抗肥満用飲食物中に抗肥満成分、並びに、前駆型脂肪細胞増殖抑制成分、前駆型脂肪細胞分化抑制成分、成熟型脂肪細胞脂肪蓄積抑制成分として、ウルサン系トリテルペン類および／またはそれらの生理的に許容される塩および／またはそれらの誘導体を含有する場合、その含量は、前述の通り一概に規定されず、以下に限定されるものではないが、例えば、０．００００１〜９０質量％、好ましくは０．０００１〜８０質量％、より好ましくは０．００１〜７０質量％、さらに好ましくは０．０１〜６５質量％、さらに好ましくは０．１〜６０質量％、さらに好ましくは０．２〜５５質量％、さらに好ましくは０．４〜５０質量％、さらに好ましくは０．６〜４５質量％、さらに好ましくは０．８〜４０質量％、さらに好ましくは１．０〜３５質量％、さらに好ましくは２．０〜３０質量％であれば良い。
本発明の抗肥満用飲食物中に抗肥満成分、並びに、前駆型脂肪細胞増殖抑制成分、前駆型脂肪細胞分化抑制成分、成熟型脂肪細胞脂肪蓄積抑制成分として、ルパン系トリテルペン類および／またはそれらの生理的に許容される塩および／またはそれらの誘導体を含有する場合、その含量は、前述の通り一概に規定されず、以下に限定されるものではないが、例えば、０．００００１〜９０質量％、好ましくは０．０００１〜８０質量％、より好ましくは０．００１〜７０質量％、さらに好ましくは０．０１〜６５質量％、さらに好ましくは０．１〜６０質量％、さらに好ましくは０．２〜５５質量％、さらに好ましくは０．４〜５０質量％、さらに好ましくは０．６〜４５質量％、さらに好ましくは０．８〜４０質量％、さらに好ましくは１．０〜３５質量％、さらに好ましくは２．０〜３０質量％であれば良い。
さらに、前記オレアナン系トリテルペン類についてはマスリン酸、エリトロジオールが好ましく、特にマスリン酸が好ましい。ウルサン系トリテルペン類については、ウルソール酸、ウバオールが好ましい。ルパン系トリテルペン類については、ベツリン酸、ベツリンが好ましい。
本発明の抗肥満用飲食物中に抗肥満成分、並びに、前駆型脂肪細胞増殖抑制成分、前駆型脂肪細胞分化抑制成分、成熟型脂肪細胞脂肪蓄積抑制成分として、マスリン酸および／またはその生理的に許容される塩またはそれらの誘導体を含有する場合、その含量は、前述の通り一概に規定されず、以下に限定されるものではないが、例えば、０．００００１〜９０質量％、好ましくは０．０００１〜８０質量％、より好ましくは０．００１〜７０質量％、さらに好ましくは０．０１〜６５質量％、さらに好ましくは０．１〜６０質量％、さらに好ましくは０．２〜５５質量％、さらに好ましくは０．４〜５０質量％、さらに好ましくは０．６〜４５質量％、さらに好ましくは０．８〜４０質量％、さらに好ましくは１．０〜３５質量％、さらに好ましくは２．０〜３０質量％であれば良い。
本発明の抗肥満用飲食物中に抗肥満成分、並びに、前駆型脂肪細胞増殖抑制成分、前駆型脂肪細胞分化抑制成分、成熟型脂肪細胞脂肪蓄積抑制成分として、エリトロジオールおよび／またはその生理的に許容される塩またはそれらの誘導体を含有する場合、その含量は、前述の通り一概に規定されず、以下に限定されるものではないが、例えば、０．００００１〜９０質量％、好ましくは０．０００１〜７０質量％、より好ましくは０．００１〜６０質量％、さらに好ましくは０．０１〜５０質量％、さらに好ましくは０．１〜４０質量％、さらに好ましくは１．０〜３０質量％であれば良い。
本発明の抗肥満用飲食物中に抗肥満成分、並びに、前駆型脂肪細胞増殖抑制成分、前駆型脂肪細胞分化抑制成分、成熟型脂肪細胞脂肪蓄積抑制成分として、ウルソール酸および／またはその生理的に許容される塩またはそれらの誘導体を含有する場合、その含量は、前述の通り一概に規定されず、以下に限定されるものではないが、例えば、０．００００１〜９０質量％、好ましくは０．０００１〜７０質量％、より好ましくは０．００１〜６０質量％、さらに好ましくは０．０１〜５０質量％、さらに好ましくは０．１〜４０質量％、さらに好ましくは１．０〜３０質量％であれば良い。
本発明の抗肥満用飲食物中に抗肥満成分、並びに、前駆型脂肪細胞増殖抑制成分、前駆型脂肪細胞分化抑制成分、成熟型脂肪細胞脂肪蓄積抑制成分として、ウバオールおよび／またはその生理的に許容される塩またはそれらの誘導体を含有する場合、その含量は、前述の通り一概に規定されず、以下に限定されるものではないが、例えば、０．００００１〜９０質量％、好ましくは０．０００１〜７０質量％、より好ましくは０．００１〜６０質量％、さらに好ましくは０．０１〜５０質量％、さらに好ましくは０．１〜４０質量％、さらに好ましくは１．０〜３０質量％であれば良い。
本発明の抗肥満用飲食物中に抗肥満成分、並びに、前駆型脂肪細胞増殖抑制成分、前駆型脂肪細胞分化抑制成分、成熟型脂肪細胞脂肪蓄積抑制成分として、ベツリン酸および／またはその生理的に許容される塩またはそれらの誘導体を含有する場合、その含量は、前述の通り一概に規定されず、以下に限定されるものではないが、例えば、０．００００１〜９０質量％、好ましくは０．０００１〜７０質量％、より好ましくは０．００１〜６０質量％、さらに好ましくは０．０１〜５０質量％、さらに好ましくは０．１〜４０質量％、さらに好ましくは１．０〜３０質量％であれば良い。
本発明の抗肥満用飲食物中に抗肥満成分、並びに、前駆型脂肪細胞増殖抑制成分、前駆型脂肪細胞分化抑制成分、成熟型脂肪細胞脂肪蓄積抑制成分として、ベツリンおよび／またはその生理的に許容される塩またはそれらの誘導体を含有する場合、その含量は、前述の通り一概に規定されず、以下に限定されるものではないが、例えば、０．００００１〜９０質量％、好ましくは０．０００１〜７０質量％、より好ましくは０．００１〜６０質量％、さらに好ましくは０．０１〜５０質量％、さらに好ましくは０．１〜４０質量％、さらに好ましくは１．０〜３０質量％であれば良い。
これらは、含量が高いほど効果が高いが、前述の通り、使用の目的や使用する期間、量、使用対象の年齢、性別、体重等を考慮し、含量を調整することが必要である。
本発明の抗肥満用飲食物について、下記に具体例を列記するが、本発明はこれらに制限されるものではない。本発明の抗肥満用飲食物としては、その形態等について特に制限はないが、例えば、一般食品、加工食品の他、流動食品、経腸栄養食品、健康食品、乳幼児用食品等の形態をとることができる。具体的には、おかき、煎餅、おこし、饅頭、飴等の和菓子、クッキー、ビスケット、クラッカー、パイ、カステラ、ドーナッツ、プリン、スポンジケーキ、ワッフル、バタークリーム、カスタードクリーム、シュークリーム、チョコレート、チョコレート菓子、キャラメル、キャンデー、キューインガム、ゼリー、ホットケーキ、パン、菓子パン等の各種洋菓子、ポテトチップ等のスナック菓子、アイスクリーム、アイスキャンデー、シャーベット等の氷菓、乳酸飲料、乳酸菌飲料、濃厚乳性飲料、果汁飲料、果肉飲料、機能性飲料、炭酸飲料等の清涼飲料水、緑茶、紅茶、コーヒー、ココア等の嗜好品およびこれらの飲料、発酵乳、加工乳、チーズ等の乳製品、豆乳、豆腐等の大豆加工食品、ジャム、果実のシロップ漬、フラワーペースト、ピーナツペースト、フルーツペースト等のペースト類、漬物類、うどんの麺、パスタ等の穀物製品類、ハム、ソーセージ、ベーコン、ドライソーセイジ、ビーフジャーキー、ハンバーグ等の畜肉製品類、魚肉ハム、魚肉ソーセージ、かまぼこ、ちくわ、はんぺん等の魚貝類製品、魚、貝等の干物、鰹、鯖、鰺等の各種節、ウニ、イカ等の塩辛、スルメ、魚等のみりん干、鮭等の燻製品、のり、小魚、貝、山菜、椎茸、昆布等の佃煮、カレー、シチュー等のレトルト食品、みそ、醤油、ソース、ケチャップ、ブイヨン、焼肉のタレ、カレールー、シチューの素、スープの素、だしの素等の各種調味料、米飯類、油脂やマーガリン、ショートニング、マヨネーズ、ドレッシング等の油脂加工品や、油脂を含有する各種レンジおよび冷凍食品等が挙げられる。特に、継続的な摂取という面からは、米飯や各種調味料や、調合油脂やマーガリン、ショートニング、マヨネーズ、ドレッシング等の調合油脂加工品が好ましいといえる。また、形状・性状も特に制限されず、固体状、半固体状、ゲル状、液体状、粉末状等いずれでもよく、また、錠剤、カプセル剤、液剤、顆粒剤等いずれでも良い。
既述のとおり、本発明の抗肥満用飲食物中における五環性トリテルペン類、それらの生理的に許容される塩又はそれらの誘導体の含有量は、これらの１日の摂取量が、０．００１〜５ｇ、更に０．００１〜１ｇとなるようにするのが最も好ましい。より具体的には、本発明の抗肥満用飲食物が調合油脂又はマーガリン、ショートニング、マヨネーズ、ドレッシング等の調合油脂加工品である場合、本発明の飲食物中に含まれる五環性トリテルペン類、特にマスリン酸、それらの生理的に許容される塩またはそれらの誘導体の含量が、製品１００ｇあたり、好ましくは０．００１〜１０ｇ、より好ましくは０．０１〜５ｇ、更に好ましくは０．１〜３ｇ、特に好ましくは０．２〜２ｇであるのが好ましい。本発明の抗肥満用飲食物が錠菓、ソフトカプセル状食品、タブレット食品、粉状食品、顆粒状食品である場合、本発明の飲食物中に含まれる五環性トリテルペン類、特にマスリン酸、それらの生理的に許容される塩またはそれらの誘導体の含量が、製品５００ｍｇあたり、好ましくは１〜４００ｍｇ、より好ましくは５〜３８０ｍｇであるのが好ましい。本発明の抗肥満用飲食物が飲料、健康飲料、清涼飲料、乳性飲料、果汁・果肉飲料、茶・コーヒー類、アルコール飲料である場合、本発明の飲食物中に含まれる五環性トリテルペン類、特にマスリン酸、それらの生理的に許容される塩またはそれらの誘導体の含量が、製品２００ｇあたり、好ましくは０．００２〜１０ｇ、より好ましくは０．０２〜５ｇであるのが好ましい。
また本発明の抗肥満用飲食物には、機能の向上、特に、抗肥満効果の相乗的な向上、抗肥満効果の補助、吸収性の向上等を目的として、その他の生理活性成分等を配合することができる。特に制限は無いが、例えば、相乗的、間接的に抗肥満効果への寄与があるとされる抗酸化成分、体内での吸収性を向上させ効果の効率を上げるための油性成分、栄養強化のための各種ビタミン類、ミネラル類、アミノ酸類等が挙げられる。
抗酸化成分としては、特に制限は無いが、例えば、トコフェロール類およびそれらの誘導体、トコトリエノール類およびそれらの誘導体、セサミン、エピセサミン、セサミノール、セサモリン、セサモール等のリグナン類およびそれらの配糖体、β−カロチン等のカロテノイド類およびその誘導体、没食子酸やエラグ酸等のタンニン類およびそれらの誘導体、フラボン、カテキン、ケルセチン、ロイコアントシアニジン等のフラボノイド類、ユビキノンやビタミンＫ等のキノン類、オリザノール等のフェルラ酸誘導体、オリーブ抽出物等が挙げられる。これらの抗酸化剤は、間接的に抗肥満効果があるとされており、また、本来の抗酸化作用による血行促進効果や抗老化効果等により、体内に対する総合的な相乗効果も期待できるため、好ましい。
油性成分としては、ゴマ油、オリーブ油、茶油等の植物油脂、魚油等の動物油脂の他、特に制限は無いが、例えば、天然および化学反応や酵素反応により得られた、ＭＣＴ、ＭＬＣＴ、ジグリセライド、モノグリセライドや、脂肪酸の構造を設計した構造油脂等が挙げられる。
栄養強化のための各種ビタミン類、ミネラル類、アミノ酸類等については、特に制限はないが、食品添加物公定書に定められるものが望ましい。
その他、本発明の抗肥満用飲食物には、通常の飲食物に使用されている原材料を配合・使用することができる。特に制限は無いが、例えば、みそ、醤油、ソース、ケチャップ、ブイヨン、焼肉のタレ、カレールー、シチューの素、スープの素、だしの素等の各種調味料、豚脂、牛脂、乳脂等の動物性油脂、鯨油、イワシ油、ニシン油等の海産物性油脂、大豆油、菜種油、綿実油、米油、コーン油、胡麻油、落花生油、ヒマワリ油、紅花油、椿油、オリーブ油、亜麻仁油、桐油、ヒマシ油、ヤシ油、パーム油、カカオ脂等の植物性油脂等が挙げられる。特にオリーブ油は、本発明におけるマスリン酸等を含有するため、非常に好ましい。
本発明の抗肥満用飲食物における五環性トリテルペン類は、元来、概して油溶性の物質であるので、溶解性の面からも本発明の抗肥満用飲食物として油脂や油脂加工食品等は好ましい。この様な油脂として、特に制限はないが、例えば、天然あるいは人工的に得た五環性トリテルペン類を通常の油脂に溶かし込んで含有させた油脂が挙げられ、また、植物種子の圧搾・抽出条件を調整し種子中の五環性トリテルペン類を圧搾・抽出油に高濃度に含有させた油脂や、精製条件を調整することで油中に存在する五環性トリテルペン類を残存させた油脂等が挙げられる。また、該五環性トリテルペン類高含有油脂と他の油脂を混合することもでき、この場合、該他の油脂に含まれる微量成分の生理活性効果との相乗効果を期待することができる。
五環性トリテルペンは油糧原料である植物からも得られることから、製造の点からも油脂は好ましいといえ、更にこの油脂の加工品であるマーガリン、ショートニング、マヨネーズ、ドレッシング等の油脂加工品は好ましいといえる。
平成１３年発表の国民栄養調査によると、食材料自体に含まれている脂肪が、全摂取脂肪に占める割合は７６％に相当し、食用油脂やマーガリン、バターなど油脂製品から摂取する油の割合はわずか２４％にすぎないとされている。すなわち、ヒトが一日に摂取する総脂質量は平均約６０ｇに対して、ヒトが一日に摂取する、油脂製品から摂取する油の量は約１４．４ｇということでる。これはヒトが１日に摂取する全食事量（平均約１４００ｇ、農林水産省「食糧需給表」）の約１％に相当する。このことを勘案すると、本発明の油脂を通常どおりの食事に使用しこれを摂取して、本発明における抗肥満効果等を得ようとする場合には、食用油、サラダ油、マーガリン、バターなど油脂および油脂製品中の五環性トリテルペン類およびそれらの生理的に許容される塩の最適含量が、好ましくは０．０００１〜２０質量％、より好ましくは０．０００２〜１８質量％、さらに好ましくは０．０００５〜１６質量％、さらに好ましくは０．００１〜１４質量％、さらに好ましくは０．００２〜１２質量％、さらに好ましくは０．００５〜１０質量％、さらに好ましくは０．０１〜８質量％、さらに好ましくは０．０２〜６質量％、さらに好ましくは０．０５〜４質量％、さらに特に好ましくは０．１〜３質量％、最も好ましくは０．２〜２質量％になるようにするのが好ましい。
同様に、本発明に含まれる上記油脂等を使用した製品も良好である。ここで、使用とは原料として使用することと、揚げ物や炒め物等に使用するいわゆる油脂としての使用の双方を示す。
原料としての使用とは、例えば、上述したような各種飲食物へ、上記五環性トリテルペン類等を含有する油脂等を原料として使用することで、本発明の抗肥満用飲食物とすることができることを示す。このような場合、五環性トリテルペン類等を含有する油脂等は、通常の油脂等とほぼ同様に扱うことができるため、特に飲食物の製造工程を変更する必要性もなく、簡便に本発明の飲食物を得ることができるため、好ましい。
また、油脂としての使用とは、通常、油脂を用いる場合の公知の使用と同様であり、特に制限されないが、例えば、いため油、揚げ油、固形油脂、コーティング油脂等が挙げられる。このような場合、上記五環性トリテルペン類等を含有する油脂等を、揚げ物や炒め物等に使用することで、出来上がった揚げ物や炒め物等を本発明の抗肥満用飲食物とすることができる。そのような使用の方法としては、目的とする飲食物に、本発明における五環性トリテルペン類等を添加、付着、含有等させることができる方法であれば、特に制限されない。
ここで、五環性トリテルペンの飲食物への使用に関して特に制限は無いが、油系の飲食物に対しては、五環性トリテルペン類、あるいはアルコールエステル基を有する誘導体、脂肪酸エステル基を有する誘導体、アルコキシ基を有する誘導体、アルコキシメチル基を有する誘導体が好ましい。これらは、比較的油溶性であるため、好適に油系の飲食物へ適用することができる。また当然、五環性トリテルペン類の生理的に許容される塩あるいは配糖体を配合することも可能であるが、この場合には、乳化剤を用いることが好ましい。
また、概して、水系の飲食物に対しては、五環性トリテルペン類の生理的の許容された塩、あるいは配糖体が好ましい。これらは、比較的水溶性であるため、好適に水系の飲食物へ適用することができる。また当然、その他の五環性トリテルペン類あるいはその誘導体を配合することも可能であるが、この場合には、乳化剤を用いることが好ましい。
上述した五環性トリテルペン類およびそれらの生理的に許容される塩、またはそれらの誘導体は、本発明の抗肥満用飲食物に対して、その原料として使用することができる。すなわち、上述した抗肥満用飲食物に対して、その原料の一つとして配合することができる。この場合、五環性トリテルペン類およびそれらの生理的に許容される塩、またはそれらの誘導体の由来に、特に制限は無く、天然から得たものでも、人工的に得たものでもいずれも好適に使用でき、その純度が高まったものほど好ましい。純度が高いことの利点としては、抗肥満効果等を非常に向上させることができることに加え、不純物が除去されていること等が挙げられる。すなわち、不純物等による予測不能な副作用等の危険性を回避や、抗肥満飲食物製造時における予測不能なトラブルの回避、ハンドリングの向上といった、製品の品質等の向上に大きく寄与することができるため、純度が高まったものほど好ましい。また、分画・精製処理等により純度が高くなった場合、本発明における五環性トリテルペン類およびそれらの生理的に許容される塩、またはそれらの誘導体は、概ね白色あるいは無色の固体、半固体、液体等として得ることができるため、本発明の抗肥満飲食物に余計な色をつけることなく好適に配合することができる等のメリットがあり、好ましい。
本発明の抗肥満用飲食物を飲食することで、抗肥満効果を有する五環性トリテルペン類およびそれらの生理的に許容される塩、またはそれらの誘導体を体内に吸収することにより効果を奏する。飲食物という形態であるため、化粧料のような労力も必要なく、継続的に摂取することができるため好ましい。
本発明の抗肥満用飲食物に含有される五環性トリテルペン類およびそれらの生理的に許容される塩、またはそれらの誘導体を摂取することにより、好適に抗肥満効果を得るための所用量は、上述の通り、摂取の形態、対象者の性別、体重、体調等により異なり、特に制限されないが、例えば、０．００１ｇ／日以上、好ましくは０．０１ｇ／日以上、より好ましくは０．１ｇ／日以上、さらに好ましくは０．２ｇ／日以上、さらに好ましくは０．５ｇ／日以上、特に好ましくは０．７ｇ／日以上、最も好ましくは１．０ｇ／日以上である。
これらの五環性トリテルペン類は、天然には、それぞれに記載した植物体から抽出等することで得ることができる。すなわち、各植物体から、水および／または有機溶媒で抽出でき、さらにその抽出物から、溶媒抽出法、不純物との溶解度差を利用する方法、分別沈殿法、再結晶法、イオン交換樹脂法、液体クロマトグラフ法等を単独または適宜組み合わせて、あるいは反復使用することによって濃縮および／または分画・精製することができる。さらに単離したものは、本発明の飲食物に余計な色、臭い等の影響を与えることがなく好ましい。
特に、マスリン酸および／またはその生理的に許容される塩は、オリーブ植物等から、水および／または有機溶媒で抽出でき、さらにその抽出物から、溶媒抽出法、不純物との溶解度差を利用する方法、分別沈殿法、再結晶法、イオン交換樹脂法、液体クロマトグラフ法等を単独または適宜組み合わせて、あるいは反復使用することによって分画・精製することができ、さらに単離することができる。
オリーブ植物（Ｏｌｅａ  ｅｕｒｏｐａｅａ  Ｌ．）は、国産、欧州産などの産地、食用あるいは搾油用を問わず使用できる。本発明の抗肥満用飲食物に含有されるマスリン酸および／またはその生理的に許容される塩は、天然植物であるオリーブ植物の主に、実または種子から得ることができ、さらに、その種皮、葉、茎、芽から得ることができる。また、これらの乾燥物、粉砕物、脱脂物からも好適に得ることができる。このうち、脱脂された実（果皮含む）や果皮の乾燥物及び粉砕物が好ましい。さらに、オリーブ油の製造工程で生じる副産物、例えば圧搾残査、抽出残査、搾油残査、圧搾油、抽出油、脱ガム油滓、脱酸油滓、ダーク油、廃脱色剤、脱臭スカム、搾油ジュース、排水、廃濾過材から得ることができる。このうち、抽出残渣及び搾油残査が好ましい。
また、上記オリーブ植物の果実やその脱脂物等に、添水する等により加水した場合、あるいは蒸気により蒸す等の加湿処理を行った場合、これらオリーブ植物の果実やその脱脂物等が適度に膨潤するので、抽出効率が良くなり好ましい。なお、本明細書において、オリーブ抽出物とは、オリーブ油製造工程で得られる脱脂物を溶媒抽出して得られる抽出物をいい、オリーブ油製造工程で得られる脱脂物とは、抽出残渣と圧縮残渣とを含む。また、本明細書において、オリーブ抽出油とは、オリーブ油製造工程で得られる圧搾残渣をさらにヘキサン等で溶媒抽出して得られる抽出油をいう。
特に、オリーブ植物の脱脂物には、マスリン酸および／またはその生理的に許容される塩が高濃度で存在し、かつ、得られたマスリン酸および／またはその生理的に許容される塩から油分を除去する必要がないため好ましい。
当該脱脂物は、食油精製工程中に産出するオリーブ搾油残査、またはヘキサン等による抽出残査を原料とすることができる。
また、オリーブ植物または当該脱脂物に含まれる脂質成分をペンタン、ヘキサン、ヘプタン等の炭化水素、酢酸エチルエステル等の低級脂肪酸アルキルエステル、ジエチルエーテル等の非水溶性有機溶媒の１種または２種以上で抽出除去し、更に必要に応じてこの洗浄処理を繰り返した脱脂物も好適に利用できる。
上記オリーブ植物から水および／または有機溶媒で抽出することにより、本発明の抗肥満用飲食物に含有されるマスリン酸および／またはその生理的に許容される塩を得ることができる。
オリーブ植物からマスリン酸および／またはその生理的に許容される塩を得るために用いる有機溶媒としては、親水性有機溶媒、疎水性有機溶媒のいずれでもよい。具体的には、親水性有機溶媒として、メチルアルコール、エチルアルコール、グリセリン、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール等のアルコール、アセトン、テトラヒドロフラン、アセトニトリル、１，４−ジオキサン、ピリジン、ジメチルスルホキシド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、酢酸等の公知の有機溶媒が挙げられ、疎水性有機溶媒として、ヘキサン、シクロヘキサン、四塩化炭素、クロロホルム、ジクロロメタン、１，２−ジクロロエタン、ジエチルエーテル、酢酸エチル、ベンゼン、トルエン等の公知の有機溶媒が挙げられる。また、これらの有機溶媒は１種または２種以上を組み合わせて使用することができる。
工業的には、例えば植物組織への浸透性、抽出効率等からは、親水性有機溶媒を用いることが好ましく、また含水親水性有機溶媒を用いることが好ましい。具体的にはメチルアルコール、エチルアルコール、グリセリン、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール等のアルコール、アセトン、テトラヒドロフラン、アセトニトリル等の有機溶媒およびこれらの含水溶媒が挙げられる。これらの中から選ばれる、１種または２種以上により、オリーブ植物から、本発明の抗肥満用飲食物に含有されるマスリン酸および／またはその生理的に許容される塩を得ることができる。
抽出条件は、特に限定されないが、例えば、温度は５℃〜９５℃、好ましくは１０℃〜９０℃、さらに好ましくは１５℃〜８５℃で、常温でも好適に抽出することができる。温度が高いほうが、抽出効率が高くなる傾向はある。圧力は、常圧でも、加圧でも、吸引等による減圧でも好適に抽出することができる。また、抽出効率を向上させるため、振とう抽出や、攪拌機等のついた抽出機でも抽出することができる。抽出時間は、他の抽出条件によるが、数分〜数時間であり、長時間なほど十分な抽出がなされるが、生産設備、収率等の生産条件によって適宜決めれば良い。
また、抽出に使用する溶媒は、水を単独で使用する場合、有機溶媒を単独で使用する場合、水と有機溶媒とを混合して使用する場合のいずれの場合にも、原料に対し１〜１００倍量（「質量／質量」。以下同様。）、好ましくは１〜２０倍量を使用することができる。
また、人体等への安全性等を考えれば、特に、水、含水低級アルコール、無水低級アルコールのいずれかにより抽出することが好ましい。
さらに、得られるマスリン酸および／またはその生理的に許容される塩の収率や、抗肥満効果の強さをも考慮に入れた場合、低級アルコール含量が１０質量％以上である含水低級アルコールで抽出することが好ましい。さらには低級アルコール含量が１０質量％〜９５質量％の含水アルコールを使用することが好ましく、最も好ましくは低級アルコール含量が３０質量％〜９５質量％に調節された含水低級アルコールが好ましい。
ここで、本発明で使用するアルコールは、メチルアルコール、エチルアルコール、１−プロパノール、１−ブタノール等の１級アルコール、２−プロパノール、２−ブタノール等の２級アルコール、２−メチル−２−プロパノール等の３級アルコールさらにエチレングリコール、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール等の液状多価アルコール等の溶媒が挙げられ、これらの溶媒は１種または２種以上を組み合わせて使用することができる。
低級アルコールとは、炭素数が１〜４である公知のアルコール、例えば、前述の１、２、３級、もしくは、液状多価のアルコール等があげられ、これらの１種または２種以上を組み合わせて使用することができる。
さらに、本発明が飲食物であることを考慮に入れた場合、低級アルコールとしては、エタノールが好ましく、含量が１０質量％以上である含水エタノールで抽出することが好ましい。さらには１０質量％〜９５質量％の含水エタノールを使用することが好ましく、最も好ましくは３０質量％〜９５質量％に調節された含水エタノールが好ましい。
このようにして得られた粗抽出物及び／又は粗抽出液から、溶媒、水分を除去することで、本発明におけるマスリン酸および／またはその生理的に許容される塩を得ることができる。
溶媒、水分の除去は減圧蒸留、減圧・真空乾燥、凍結乾燥、スプレードライ等の公知の方法で行うことができる。
もちろん、溶媒、水分を含んだままでも良く特に状態は制限されない。
脱脂物からの抽出物は、トリグリセライドやステロール、トコフェロール等の油溶性成分は含有していないので、これらを除去、精製する必要がないため、好ましい。加えて、脱脂物とは、搾油後の残査を含むので、オリーブ油を搾油した圧搾残渣（圧搾粕）および抽出残渣（抽出粕）を使用できることから、オリーブの極めて優れた有効利用方法であり、通常は廃棄または飼料等に使用されるものを利用するため、生産コストの面から見ても優れた方法といえる。
さらに、オリーブ植物から抽出されるマスリン酸および／またはその生理的に許容される塩の抗肥満効果をより一層引き出すためには、本発明の抗肥満用飲食物に含有させるマスリン酸および／またはその生理的に許容される塩を濃縮処理等することが好ましい。
濃縮条件は、特に限定されないが、例えば、水への溶解性を利用した方法が挙げられる。本発明の抗肥満用飲食物に含有されるマスリン酸および／またはその生理的に許容される塩は、比較的極性が低く、難水溶性の化合物である。この性質を利用して、オリーブ植物からの粗抽出物を水に溶解しにくい成分および／または水に溶解しない成分、つまり難水溶性等の成分と水に容易に溶ける成分とに分けることで、大幅に濃縮することができる。オリーブ植物からの粗抽出物に含まれる難水溶性等の成分は、オリーブ植物からの粗抽出物全体と比べても、大幅に抗肥満効果に優れており、マスリン酸および／またはその生理的に許容される塩が濃縮されていることが確認できる。
難水溶性等の成分は、オリーブ植物からの粗抽出物を水に添加・攪拌した後、析出している部分を濾過等により採取することで簡易に得ることができる。
また、本発明の抗肥満用飲食物に含有されるマスリン酸および／またはその生理的に許容される塩は、必要に応じて、一般的な溶剤の組み合わせによる液−液分配により濃縮することができる。溶剤の組み合わせは一概に規定し難いが、例えば、水−疎水性有機溶媒の組み合わせが挙げられ、疎水性有機溶媒としては、ヘキサン、四塩化炭素、クロロホルム、ジクロロメタン、１，２−ジクロロエタン、ジエチルエーテル、酢酸エチル、ｎ−ブタノール、ベンゼン、トルエン等の公知の有機溶媒が挙げられる。このうち、ヘキサン、酢酸エチル及びｎ−ブタノールが好ましい。
マスリン酸および／またはその生理的に許容される塩は難水溶性であるため、疎水性有機溶媒相を分取することで、不要な水溶性成分を除去することができる。溶媒を除去することで、容易にマスリン酸および／またはその生理的に許容される塩を濃縮することができる。
さらに、本発明の抗肥満用飲食物に含有されるマスリン酸および／またはその生理的に許容される塩は、上述した抽出物および／または濃縮物から分画・精製処理することが好ましい。これにより上記濃縮以上に濃縮することができ、目的とする成分を単離することもできる。
分画・精製処理することの利点としては、抗肥満効果等を非常に向上させることができることに加え、不純物を除去することができること等が挙げられる。すなわち、該分画・精製処理した場合、マスリン酸および／またはその生理的に許容される塩を白色結晶として得ることができるため、飲食物に余計な色をつけることなく好適に配合することができる等のメリットがあり、好ましい。
分画・精製処理の方法については一概に規定し難いが、例えば、再結晶法、分別沈殿法、クロマトグラフィーを利用する方法などが挙げられる。特にクロマトグラフィーの中でも液体クロマトグラフィーを利用する方法は、本発明の抗肥満用飲食物に含有されるマスリン酸および／またはその生理的に許容される塩を分解することなく、収率良く分画・精製出来るので、好ましい。液体クロマトグラフィーとしては、具体的に、順相液体クロマトグラフィー、逆相液体クロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィー、ペーパークロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）等が挙げられるが、本発明の抗肥満用飲食物に含有されるマスリン酸および／またはその生理的に許容される塩を分画・精製処理する際には、いずれの方法を用いることができる。とりわけ、分離能、処理量、工程数等を考慮に入れると、順相液体クロマトグラフィー、逆相液体クロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）が好ましい。
ここで、順相液体クロマトグラフィーとは、例えば以下のような方法を指す。すなわち、例えばシリカゲルを固定相、ヘキサン−酢酸エチル混液、クロロホルム−メタノール混液等を移動相としたカラムを作成し、オリーブ植物からの粗抽出物あるいはその濃縮物を負荷率０．１〜５％（ｗｔ（質量）／ｖ（体積））で供し、単一移動相による連続的溶出法あるいは溶媒極性を順次増加させる段階的溶出法により、所定の画分を溶出させる方法である。
逆相液体クロマトグラフィーとは、例えば以下のような方法を指す。すなわち、例えばオクタデシルシランを結合させたシリカ（ＯＤＳ）を固定相、水−メタノール混液、水−アセトニトリル混液、水−アセトン混液等を移動相としたカラムを作成し、オリーブ植物からの粗抽出物あるいはその濃縮物を負荷率０．１〜５％（ｗｔ（質量）／ｖ（体積））で供し、単一溶媒による連続的溶出法あるいは溶媒極性を順次低下させる段階的溶出法により、所定の画分を溶出させる方法である。
高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）とは、原理的には、上記順相液体クロマトグラフィーあるいは逆相液体クロマトグラフィーと同様のものであり、より迅速かつ高分離能での分画・精製を行うためのものである。
上記手法を１種または２種以上組み合わせることで、マスリン酸および／またはその生理的に許容される塩を非常に濃縮でき、かつ、不純物が除去された状態で得ることができるため好ましい。
さらに、上記手法を１種または２種以上組み合わせることで、マスリン酸および／またはその生理的に許容される塩の純度を調整することができ、必要に応じた抗肥満効果の強さ、特性等を設計することもできる。
前述した濃縮処理について、好ましくは繰り返し濃縮処理することができ、さらには異なる濃縮処理を組み合わせることができる。同様に、分画・精製処理について、好ましくは繰り返し分画・精製処理することができ、さらには異なる分画・精製処理を組み合わせることができる。さらに、濃縮処理を行った後に分画・精製処理しても良く、分画・精製処理を行った後に分画・精製処理しても良く、濃縮処理した後に分画・精製処理を行い更に濃縮処理することもできる。当然、前述の組み合わせ以外の組み合わせでも良い。
上記に記載した抽出処理、濃縮処理、分画・精製処理等を様々に組み合わせることによって、マスリン酸および／またはその生理的に許容される塩を好適に得ることができ、また、単離したものを得ることもできる。その組み合わせについては特に限定されないが、一連の処理の具体例としては以下のような方法が挙げられる。
例えば、オリーブ植物を水および／または親水性有機溶媒で抽出処理した後、得られた抽出液について親水性有機溶媒の一部または全部を除去し、必要により水を加えて撹拌し、水層部に析出した水不溶分を回収することで濃縮する。析出した水不溶分は、濾過や遠心分離等のよって回収することができるが、この回収効率の向上のため、必要に応じ水溶液に対して水の添加・攪拌等の処理を行うことができる。また、オリーブ植物から得られる抽出液の水および／または親水性有機溶媒を除去した乾固状態の抽出物についても、上記同様に水の添加・攪拌等の処理を行い、濾過等によりその水不溶分を回収することで濃縮処理することができる。この濃縮方法によれば、水系での処理であるので、溶剤を用いた濃縮よりも安全性に優れ、また、使用できる機器の範囲も広いため好ましい。また、油分がほとんど含まれていないため、濃縮・精製の効率にも優れており、好ましい。
これらの濃縮物を順相および／または逆相クロマトグラフィーおよび／または再結晶にて分画・精製処理することにより、高純度に精製されたマスリン酸および／またはその生理的に許容される塩を好適に得ることができ、さらに単離したものを得ることもできる。
ここで、液−液分配の際に添加する水の量は分配処理し得る量を用いれば特に限定されないが、乾固された抽出物の質量当り１〜１００倍量が好ましく、より好ましくは５〜５０倍量、さらに好ましくは１０〜３０倍量程度である。
また、水−疎水性有機溶媒での液−液分配において、水と疎水性有機溶媒とは、水：疎水性有機溶媒＝９：１〜１：９（体積比）で使用するのが好ましく、８：２〜２：８で使用するのがより好ましい。
また、オリーブ植物及び／又はオリーブ油製造工程で得られる副産物から得られるマスリン酸と生理的に許容されるその塩との混合物中のマスリン酸及び生理的に許容されるそれらの塩の合計の含有率が、９５％以上であるのが好ましく、より好ましくは９５％〜９９．９９％である。当該含有率は、例えば、ガスクロマトグラフィーにより測定することができる。
また、オリーブ植物から得られる抽出液について親水性有機溶媒を除去し、残った水溶液に対して、必要に応じて水を添加し、更に疎水性有機溶媒を添加することで、水−疎水性有機溶媒での液−液分配により濃縮処理することができる。また、乾固状態の抽出物についても、上記同様に水を添加し、更に疎水性有機溶媒を添加することで、水−疎水性有機溶媒での液−液分配により濃縮処理することができる。これらの濃縮物を順相および／または逆相クロマトグラフィーおよび／または再結晶にて分画・精製処理することにより、高純度に精製されたマスリン酸および／またはその生理的に許容される塩を得ることができ、さらに単離したものを得ることもできる。
本発明の抗肥満用飲食物は、マスリン酸および／またはその生理的に許容される塩を含有するが、マスリン酸および／またはその生理的に許容される塩を含有するものとして、前記抽出物、濃縮物、分画・精製物、単離物等を含有させることでも本発明の抗肥満用飲食物を得ることもできる。また、濃縮、分画・精製等の度合いを調整することで、マスリン酸および／またはその生理的に許容される塩の濃度等を調整することができ、飲食物へ好適に配合することができる。
さらに、他の抗肥満物質を配合して使用することができ、これにより、詳細な抗肥満効果の設計が可能であり、また、他の抗肥満物質との相乗効果により大幅な抗肥満効果の強化も期待できる。
オリーブ油にはマスリン酸が含有されていることから、本発明の抗肥満用飲食物について、油性成分としてオリーブ油を使用することで、さらに好適な抗肥満効果等が得られるため好ましい。
また、オリーブ植物からマスリン酸および／またはその生理的に許容される塩を抽出する場合には、同時にオレアノール酸および／またはその生理的に許容される塩が抽出されるが、このオレアノール酸および／またはその生理的に許容される塩は、マスリン酸との相溶性に優れている点から、これらの混合物を本発明の抗肥満用飲食物に直接配合することができる。これにより、それぞれが有する生理効果について相乗効果が期待でき、特にはマスリン酸および／またはその生理的に許容される塩の本発明における抗肥満効果について相乗効果が期待できるため好ましい。マスリン酸および／またはその生理的に許容される塩をオリーブ植物から抽出、分画・精製等するに際し、その条件を調整することで、オレアノール酸および／またはその生理的に許容される塩との混合物として得ることもでき、オリーブ植物からそれぞれ別々にマスリン酸および／またはその生理的に許容される塩、オレアノール酸および／またはその生理的に許容される塩を単離し、後に混合することでも得ることができる。また、それぞれ異なる原料から得られたマスリン酸および／またはその生理的に許容される塩と、オレアノール酸および／またはその生理的に許容される塩を混合した物でも良い。
なお、本発明で対象とするマスリン酸および／またはその生理的に許容される塩以外の五環性トリテルペン類についても、マスリン酸および／またはその生理的に許容される塩について記載した原料及び方法に準じて天然物から単離することができる。
本発明の抗肥満用飲食物は、抗肥大性肥満および／または抗過形成肥満用飲食物として使用することができる。上述の通り、五環性トリテルペン類およびそれらの生理的に許容される塩、またはそれらの誘導体は、前駆型脂肪細胞増殖抑制効果、前駆型脂肪細胞分化抑制効果や成熟型脂肪細胞脂肪蓄積抑制効果を有することから、これらの効果により、抗肥大性肥満および／または抗過形成肥満効果を有する。つまり、主に前駆型脂肪細胞増殖抑制効果や前駆型脂肪細胞分化抑制効果により抗過形成性肥満効果を得ると推測され、また、主に成熟型脂肪細胞脂肪蓄積抑制効果により抗肥大性肥満効果を得ると推測され、抗肥大性肥満および／または抗過形成肥満効果を有すると考えられる。
本発明の抗肥満用飲食物は、肥満の予防および／または肥満の治療用飲食物として用いることができる。すなわち、本発明は、五環性トリテルペン類およびそれらの生理的に許容される塩、またはそれらの誘導体からなる群より選ばれる１種または２種以上を含有する肥満予防および／または肥満治療用飲食物に関する。肥満の予防を目的とした使用とは、肥満が気になりだしたり、成長期や中年期等にさしかかったりして、肥満が懸念される際に、予め肥満にならないようにする場合等を示す。このような場合、本発明の飲食物は、五環性トリテルペン類およびそれらの生理的に許容される塩、またはそれらの誘導体といった抗肥満等の効果を有する物質を含有する飲食物であるため、無理な食事制限等をする必要性が低くなり、健康的な肥満予防を可能とするため、好ましい。また、肥満の治療を目的とした使用とは、既に肥満であり、特に健康上、肥満を治す必要性が高いなどといった際に、肥満を改善する場合等を示す。このような場合、本発明の抗肥満用飲食物は、五環性トリテルペン類およびそれらの生理的に許容される塩、またはそれらの誘導体といった抗肥満等の効果を有する物質を含有する飲食物であるため、身体に負担がかかる急激な食事制限や食生活習慣の変更等の必要性を最小限に抑え、比較的緩やかな食事制限等で肥満の治療を行うことを可能にするものであり、好ましい。
また、本発明の抗肥満用飲食物は、痩身用飲食物として用いることができる。すなわち、本発明は、五環性トリテルペン類およびそれらの生理的に許容される塩、またはそれらの誘導体からなる群より選ばれる１種または２種以上を含有する痩身用飲食物に関する。痩身を目的とした使用とは、既に肥満状態である者はもちろん、特に肥満ではない者も含め、健康あるいは美容上、痩せることが必要な際に、必要に応じた痩身を行う場合等を示す。このような場合、本発明の抗肥満用飲食物は、五環性トリテルペン類およびそれらの生理的に許容される塩、またはそれらの誘導体といった抗肥満等の効果を有する物質を含有する飲食物であるため、苦痛や栄養失調等を伴うような無理なダイエットを行うことなく、十分な食事と栄養を提供しながら、効果的な痩身を行うことを可能にするため、好ましい。
また、本発明の抗肥満用飲食物は、太りにくい体質への改善用飲食物として用いることができる。すなわち、本発明は、五環性トリテルペン類およびそれらの生理的に許容される塩、またはそれらの誘導体からなる群より選ばれる１種または２種以上を含有する、太りにくい体質への改善用飲食物に関する。太りにくい体質への改善を目的とした使用とは、根本的かつ長期的な肥満対策において、体質そのものを改善し、太らない体質を作り上げようとする場合等を示す。このような場合、本発明の抗肥満用飲食物は、五環性トリテルペン類およびそれらの生理的に許容される塩、またはそれらの誘導体といった抗肥満等の効果を有する物質を含有する飲食物であるため、長期的な食事制限等といったような苦痛を伴うことなく、十分な食事と栄養を提供しながら、太りにくい体質への改善を行うことを可能にするため、好ましい。
本発明の具体的な実施態様として、オリーブ油製造工程で得られる脱脂残渣をエタノール溶液で抽出処理し、得られた抽出物を乾燥することにより濃縮し、次いで得られた濃縮物をクロマトグラフィにかけて得られるマスリン酸を、０．１〜５質量％の量で含有する食用油脂があげられる。
また、本発明の具体的な実施態様として、オリーブ油製造工程で得られる脱脂残渣をエタノール溶液で抽出処理し、得られた抽出物を、１〜３０質量％の量で含有するドレッシングがあげられる。
また、本発明の具体的な実施態様として、オリーブ油製造工程で得られる脱脂残渣をエタノール溶液で抽出処理し、得られた抽出物を乾燥することにより濃縮し、次いで得られた濃縮物をクロマトグラフィにかけて得られるマスリン酸分画物を、０．１〜５質量％の量で含有するドレッシングがあげられる。
また、本発明の具体的な実施態様として、オリーブ油製造工程で得られる搾油残渣をエタノール溶液で抽出処理し、得られた抽出物を乾燥することにより濃縮し、次いで得られた濃縮物を、０．１〜５質量％の量で含有する飲料があげられる。
また、本発明の具体的な実施態様として、オリーブ油製造工程で得られる脱脂残渣をエタノール溶液で抽出処理し、得られた抽出物を乾燥することにより濃縮し、次いで得られた濃縮物をクロマトグラフィにかけて得られるマスリン酸を、０．５〜２５質量％の量で含有する錠菓があげられる。
また、本発明の具体的な実施態様として、オリーブ油製造工程で得られる搾油残渣をエタノール溶液で抽出処理し、得られた抽出物を乾燥することにより濃縮し、次いで得られた濃縮物をクロマトグラフィにかけて得られるマスリン酸を、０．１〜５質量％の量で含有するクッキーがあげられる。
また、本発明の具体的な実施態様として、オリーブ油製造工程で得られる脱脂残渣をエタノール溶液で抽出処理し、得られた抽出物を乾燥することにより濃縮し、次いで得られた濃縮物をクロマトグラフィにかけて得られるマスリン酸を、０．５〜５質量％の量で含有する衣液及び、これを用いたフライ調理品（冷凍食品）があげられる。
また、本発明の具体的な実施態様として、オリーブ油製造工程で得られる搾油残渣をエタノール溶液で抽出処理し、得られた抽出物を乾燥することにより濃縮し、次いで得られた濃縮物をクロマトグラフィにかけて得られるマスリン酸を、０．０５〜２．５質量％の量で含有するソースがあげられる。
また、本発明の具体的な実施態様として、オリーブ油製造工程で得られる脱脂残渣をエタノール溶液で抽出処理し、得られた抽出物を乾燥することにより濃縮し、次いで得られた濃縮物をクロマトグラフィにかけて得られるマスリン酸を、０．１〜５質量％の量で含有するマヨネーズがあげられる。
また、本発明の具体的な実施態様として、オリーブ油製造工程で得られる搾油残渣をエタノール溶液で抽出処理し、得られた抽出物を乾燥することにより濃縮し、次いで得られた濃縮物をクロマトグラフィにかけて得られるマスリン酸を、０．１〜５質量％の量で含有するマーガリンがあげられる。
本発明は、五環性トリテルペン類およびそれらの生理的に許容される塩、またはそれらの誘導体からなる群より選ばれる１種または２種以上を含有する抗肥満用飲食物に関する。特にこれらの五環性トリテルペン類は、前駆型脂肪細胞増殖抑制効果、前駆型脂肪細胞分化抑制効果、成熟型脂肪細胞脂肪蓄積抑制効果等の抗肥満効果に優れている。本発明の抗肥満用飲食物では、時間や労力等の負担を必要とせず、簡易に、かつ、継続的に、抗肥満効果を好適に享受することができ、好ましい。また、本発明における五環性トリテルペン類は、天然植物から得ることができるため、日常的な使用において安心して使用することができ、また、特にオリーブ由来の場合は、使用者に対して、精神的な爽快感を与えるため、好ましい。
実施例
次に、実施例を挙げ、本発明をさらに説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
実施例に使用した五環性トリテルペンとして、エリトロジオール（フナコシ社製）、ウルソール酸（和光純薬社製）、ウバオール（フナコシ社製）、ベツリン酸（フナコシ社製）、ベツリン（フナコシ社製）については、試薬として購入した。ＨＰＬＣグレードのものはそのまま用い、そうでないものは、沸点まで加熱したエタノールに飽和になるまで溶解した後、冷却して再結晶させたものを濾過、乾固して用いた。マスリン酸については、以下に実例を挙げて説明するが、オリーブ植物から抽出、精製し、純度９５％であることを確認したものを用いた。
＜製造例１＞
国内産のオリーブ（Ｏｌｅａ  ｅｕｒｏｐａｅａ  Ｌ．）の乾燥果実（種子を含む）５００ｇを破砕し、３Ｌのヘキサンを加え３時間抽出した。これを４度繰り返した脱脂果実（脱脂残渣）について、種子を除去した後、粉砕し、再度５倍量のヘキサンで３時間抽出することで、完全に油分を除去した脱脂残渣２２９ｇを得た。この脱脂残渣に１０倍量のエタノール含量が６０質量％の含水エタノール水溶液を加え、室温で激しく攪拌しながら３時間抽出した。全量を濾過後、ろ液を濃縮乾固して抽出物１１２．７ｇを得た。
この抽出物１００ｇに、水２Ｌを加え、室温で１時間、激しく攪拌した。全量を遠心分離で処理した後、上澄みはデカンテーションにより除去し、残った沈殿を乾燥して濃縮物１０．０ｇを得た。
次にこの濃縮物を、約４０倍量（４００ｇ）のシリカゲルを充填したカラムを用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーで分画した。まず、充填したゲルの１０倍量（４０００ｍＬ）のヘキサン：酢酸エチル＝３：１の溶離液で雑多な不要分を溶出させた後、さらに２．５倍量（１０００ｍＬ）のヘキサン：酢酸エチル＝１：１の溶離液で雑多な不要分を溶出させた。続いて充填したゲルの１０倍量（４０００ｍＬ）のヘキサン：酢酸エチル＝１：１の溶離液で目的とするマスリン酸を溶出させて、粗マスリン酸画分を得た。この画分からヘキサンおよび酢酸エチルを除去後、真空乾燥し粗マスリン酸分画物を１．９６ｇ得た。
さらにこの粗マスリン酸分画物を、約３０倍量（６０ｇ）のオクタデシルシリカゲルを充填したカラムを用いたＯＤＳカラムクロマトグラフィーで精製した。まず、充填したゲルの１０倍量（６００ｍＬ）のメタノール：水＝８：２の溶離液で雑多な不要分を溶出させた。続いて充填したゲルの３０倍量（１８００ｍＬ）のメタノール：水＝８：２の溶離液で目的とするマスリン酸を溶出させて、精製マスリン酸画分を得た。この画分からメタノールを除去後、真空乾燥し精製マスリン酸１として１．５１ｇを単離した。
ここで、ＮＭＲ、ＭＳ等の解析から、この精製マスリン酸１は、その一部がナトリウム塩およびカリウム塩の状態で、残りの大部分が遊離酸の状態であることを確認した。また、これらの純度をＧＣで測定し、マスリン酸としての純度が９５％以上であることを確認した。
＜製造例２＞
イタリア産のオリーブ（Ｏｌｅａ  ｅｕｒｏｐａｅａ  Ｌ．）を搾油し得られた搾油残査（搾油粕）１ｋｇに、１０倍量のエタノール含量が６５質量％の含水エタノール水溶液を加え、室温で激しく攪拌しながら３時間抽出した。全量を濾過後、ろ液を濃縮乾固し抽出物を２０．２ｇ得た。
この抽出物に、ｎ−ブタノール１Ｌ、水１Ｌを加えて１０分間攪拌した後、ｎ−ブタノール相と水相に分けた。ｎ−ブタノール相のｎ−ブタノールを除去後、真空乾燥し濃縮物を１３．３ｇ得た。
次にこの濃縮物を、約４０倍量（５００ｇ）のシリカゲルを充填したカラムを用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーで分画した。まず、充填したシリカゲルの１０倍量（５０００ｍＬ）のヘキサン：酢酸エチル＝３：１の溶離液で雑多な不要分を溶出させた後、さらに２．５倍量（１２５０ｍＬ）のヘキサン：酢酸エチル＝１：１の溶離液で雑多な不要分を溶出させた。続いて充填したシリカゲルの１０倍量（５０００ｍＬ）のヘキサン：酢酸エチル＝１：１の溶離液で目的とするマスリン酸を溶出させて、粗マスリン酸画分を得た。この画分からヘキサンおよび酢酸エチルを除去後、真空乾燥し粗マスリン酸分画物を２．６６ｇ得た。
さらにこの粗マスリン酸分画物を、約３０倍量（８０ｇ）のオクタデシルシリカゲルを充填したカラムを用いたＯＤＳカラムクロマトグラフィーで精製した。まず、充填したゲルの１０倍量（８００ｍＬ）のメタノール：水＝８：２の溶離液で雑多な不要分を溶出させた。続いて充填したゲルの３０倍量（２４００ｍＬ）のメタノール：水＝８：２の溶離液で目的とするマスリン酸を溶出させて、精製マスリン酸画分を得た。この画分からメタノールを除去後、真空乾燥し精製マスリン酸２として２．０６ｇを単離した。
ここで、ＮＭＲ、ＭＳ等の解析から、この精製マスリン酸２は、その一部が遊離酸の状態で、残りの大部分がナトリウムやカリウム等の塩の状態であることを確認した。また、これらの純度をＧＣで測定し、マスリン酸としての純度が９７％以上であることを確認した。
＜製造例３＞
オリーブ油製造工程で得られるイタリア産のオリーブの抽出残渣（搾油残渣をさらに抽出工程で処理した脱脂残渣）１ｋｇに、１０倍量のエタノールを加え、５５℃に加温して激しく攪拌しながら３時間抽出した。全量をろ過後、ろ液を濃縮乾固して、抽出物３５ｇを得た。
次にこの抽出物を、約４０倍量（１４００ｇ）のシリカゲルを充填したカラムを用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーに供した。まず、充填したシリカゲルの約１０倍量（１４Ｌ）のヘキサン：酢酸エチル＝３：１の溶離液で、雑多な不要分を溶出させた後、さらに２．５倍量（３５００ｍＬ）のヘキサン：酢酸エチル＝１：１の溶離液で、雑多な不要分を溶出させ、さらに、充填したシリカゲルの１０倍量（１４Ｌ）のヘキサン：酢酸エチル＝１：１の溶離液で、目的とするマスリン酸を溶出させて、粗マスリン酸画分を得た。この画分からヘキサンおよび酢酸エチルを除去後、真空乾燥し粗マスリン酸分画物５．９０ｇを得た。
さらにこの粗マスリン酸分画物を焼く３０倍量（１８０ｇ）のオクタデシルシリカゲルを充填したカラムを用いたＯＤＳカラムクロマトグラフィーで精製した。まず、充填したゲルの１０倍量（１８００ｍｌ）のメタノール：水＝８：２の溶離液で雑多な不要分を溶出させた。続いて充填したゲルの３０倍量（５４００ｍｌ）のメタノール：水＝８：２の溶離液で目的とするマスリン酸を溶出させて、精製マスリン酸画分を得た。この画分からメタノールおよび水を除去後、真空乾燥し精製マスリン酸３を５．３６ｇ得た。
ここで、ＮＭＲ、ＭＳ等の解析から、この精製マスリン酸３は、その一部がナトリウム塩およびカリウム塩の状態で、残りの大部分が遊離酸の状態であることを確認した。また、これらの純度をＧＣで測定し、マスリン酸としての純度が９７％以上であることを確認した。
マスリン酸、エリトロジオール、ウルソール酸、ウバオール、ベツリン酸、ベツリンの誘導体としては、以下のようにして得た。
＜合成例１＞  マスリン酸エチル
マスリン酸４．５ｇとトリエチルアミン１．０ｇをクロロホルム５０ｍＬに溶解し、塩化チオニル１．１ｇをクロロホルム１０ｍＬに溶解したものを、氷冷下、滴下しながら、１時間攪拌した。続いて、エタノール３．２ｇを加え、トリエチルアミン１．０ｇをクロロホルム１０ｍＬに溶解したものを氷冷下、滴下しながら、３時間攪拌した。反応終了後、クロロホルム溶解分を抽出し、クロロホルムを溜去して得た粗反応物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製し、マスリン酸エチルエステルを３．５ｇ得た。
＜合成例２＞  ２，３−Ｏ−ジ−アセチル−マスリン酸
マスリン酸２．０ｇをピリジン１００ｍＬに溶解し、無水酢酸５０ｍＬを加え、一晩攪拌した。ピリジンおよび無水酢酸を溜去した後、残留物をエーテルに溶かし、このエーテル相を１Ｎ塩酸水溶液で一回、飽和炭酸水素ナトリウム溶液で一回、純水で３回洗浄した後、硫酸マグネシウムを加えて一晩放置した。濾過により硫酸マグネシウムを除去し、エーテルを溜去して得た粗反応物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製し、２，３−Ｏ−ジ−アセチル−マスリン酸を２．２ｇ得た。
＜合成例３＞  ２，３−Ｏ−ジ−トリエチルシリル−マスリン酸トリエチルシリルエステル
マスリン酸１．０ｇを無水ジメチルフォルムアミド２００ｍＬに溶解し、イミダゾール１４４．０ｍｇおよびトリエチルシリルクロライド３５０μＬを０℃で加え、密栓して２時間攪拌した。ジメチルフォルムアミドを溜去した後、残留物をエーテルに溶かし、このエーテル相を１Ｎ塩酸水溶液で一回、飽和炭酸水素ナトリウム溶液で一回、純水で３回洗浄した後、硫酸マグネシウムを加えて一晩放置した。濾過により硫酸マグネシウムを除去し、エーテルを溜去して得た粗反応物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製し、２，３−Ｏ−ジ−トリエチルシリル−マスリン酸トリエチルシリルエステルを１．５ｇ得た。
＜合成例４＞  ２，３−Ｏ−ジ−ステアリルマスリン酸エチル
合成例１で得たマスリン酸エチル１．０ｇを無水トルエン５０ｍＬに溶解し、トリエチルアミン５．０ｇを加え、さらにステアリン酸クロライド６．０ｇを氷冷下で徐々に添加しながら、１時間攪拌し、徐々に室温に戻しながら９時間攪拌した。１Ｎ塩酸水溶液を適量加え、エーテルで抽出し、エーテル相はさらに飽和炭酸水素ナトリウム溶液で一回、純水で３回洗浄した後、硫酸マグネシウムを加えて一晩放置した。濾過により硫酸マグネシウムを除去し、エーテルを溜去して得た粗反応物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製し、２，３−Ｏ−ジ−ステアリルマスリン酸エチルを１．２ｇ得た。
＜合成例５＞  ３，２８−Ｏ−ジ−アセチル−エリトロジオール
エリトロジオール５．０ｇをピリジン２５０ｍＬに溶解し、無水酢酸１００ｍＬを加え、一晩攪拌した。ピリジンおよび無水酢酸を溜去した後、残留物をエーテルに溶かし、このエーテル相を１Ｎ塩酸水溶液で一回、飽和炭酸水素ナトリウム溶液で一回、純水で３回洗浄した後、硫酸マグネシウムを加えて一晩放置した。濾過により硫酸マグネシウムを除去し、エーテルを溜去して得た粗反応物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製し、３，２８−Ｏ−ジ−アセチル−エリトロジオールを５．４ｇ得た。
＜合成例６＞  ウルソール酸エチル
ウルソール酸５．０ｇとトリエチルアミン１．１ｇをクロロホルム５０ｍＬに溶解し、塩化チオニル１．２ｇをクロロホルム１０ｍＬに溶解したものを、氷冷下、滴下しながら、１時間攪拌した。続いて、エタノール３．５ｇを加え、トリエチルアミン１．１ｇをクロロホルム１０ｍＬに溶解したものを氷冷下、滴下しながら、３時間攪拌した。反応終了後、クロロホルム溶解分を抽出し、クロロホルムを溜去して得た粗反応物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製し、ウルソール酸エチルエステルを３．８ｇ得た。
＜合成例７＞  ３，２８−Ｏ−ジ−アセチル−ウバオール
ウバオール５．０ｇをピリジン２５０ｍＬに溶解し、無水酢酸１００ｍＬを加え、一晩攪拌した。ピリジンおよび無水酢酸を溜去した後、残留物をエーテルに溶かし、このエーテル相を１Ｎ塩酸水溶液で一回、飽和炭酸水素ナトリウム溶液で一回、純水で３回洗浄した後、硫酸マグネシウムを加えて一晩放置した。濾過により硫酸マグネシウムを除去し、エーテルを溜去して得た粗反応物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製し、３，２８−Ｏ−ジ−アセチル−ウバオールを５．４ｇ得た。
＜合成例８＞  ベツリン酸エチル
ベツリン酸５．０ｇとトリエチルアミン１．１ｇをクロロホルム５０ｍＬに溶解し、塩化チオニル１．２ｇをクロロホルム１０ｍＬに溶解したものを、氷冷下、滴下しながら、１時間攪拌した。続いて、エタノール３．５ｇを加え、トリエチルアミン１．１ｇをクロロホルム１０ｍＬに溶解したものを氷冷下、滴下しながら、３時間攪拌した。反応終了後、クロロホルム溶解分を抽出し、クロロホルムを溜去して得た粗反応物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製し、ベツリン酸エチルエステルを３．８ｇ得た。
＜合成例９＞  ３，２８−Ｏ−ジ−アセチル−ベツリン
ベツリン５．０ｇをピリジン２５０ｍＬに溶解し、無水酢酸１００ｍＬを加え、一晩攪拌した。ピリジンおよび無水酢酸を溜去した後、残留物をエーテルに溶かし、このエーテル相を１Ｎ塩酸水溶液で一回、飽和炭酸水素ナトリウム溶液で一回、純水で３回洗浄した後、硫酸マグネシウムを加えて一晩放置した。濾過により硫酸マグネシウムを除去し、エーテルを溜去して得た粗反応物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製し、３，２８−Ｏ−ジ−アセチル−ベツリンを５．４ｇ得た。
試験例１
＜前駆型脂肪細胞増殖抑制効果の評価＞
マウス由来前駆型脂肪細胞株３Ｔ３−Ｌ１（ＡＴＣＣ寄託  受託番号ＣＬ−１７３）を、３×１０５細胞／７５ｃｍ２組織培養フラスコ（Ｎｕｎｃ社製）の密度で、１０％牛胎児血清を含むＤＭＥＭ培地（ナカライテスク社製）にて培養した。対数増殖期後半に入る２日後に、細胞を１×１０４細胞／０．３２ｃｍ２マルチプルウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｃｏｓｔａｒ社製）の密度で移植し、１％牛胎児血清を含むＤＭＥＭ培地にて、各トリテルペン類を、表１に記載の濃度になるように加えた状態で４８時間培養した。培養開始後４４時間目にＡｌａｍａｒＢｌｕｅＴＭ（Ａｌａｍａｒ社製）を加え、更に４時間培養した。培養終了後、細胞による酸化還元反応によって生じた蛍光物質を蛍光分光光度計で測定し、コントロール群の蛍光強度と比較することより細胞増殖抑制率を算出した。
（評価基準）  トリテルペン類を溶かした溶媒のみを加えた群をコントロールとし、コントロールで得られた蛍光強度を１００％とした時の、被検物質添加時の蛍光強度から、増殖抑制率を算出した。すなわち、数式１の通りである。
式１
増殖抑制率（％）＝１００−（被検物質添加時の蛍光強度／コントロール時の蛍光強度）×１００
上記方法によって前駆型脂肪細胞増殖抑制効果を評価した。その結果を増殖抑制率として表１に示す。
2003039270.tif 000011
表１から、マスリン酸、エリトロジオール、ウルソール酸、ウバオール、ベツリン酸、ベツリンおよびそれらの生理的に許容される塩、またはそれらの誘導体の前駆型脂肪細胞増殖抑制効果は、強力な抗肥満効果を有する物質として知られている共役リノール酸と比較し、非常に強いことが分かった。
これにより、マスリン酸、エリトロジオール、ウルソール酸、ウバオール、ベツリン酸、ベツリンおよびそれらの生理的に許容される塩、またはそれらの誘導体は、非常に優れた前駆型脂肪細胞増殖抑制効果を享受できることが明らかになった。
試験例２
＜前駆型脂肪細胞分化抑制効果、および成熟型脂肪細胞脂肪蓄積抑制効果の評価＞
マウス由来前駆型脂肪細胞株３Ｔ３−Ｌ１（ＡＴＣＣ寄託  受託番号ＣＬ−１７３）を、３×１０５細胞／７５ｃｍ２組織培養フラスコ（Ｎｕｎｃ社製）の密度で、１０％牛胎児血清を含むＤＭＥＭ培地（ナカライテスク社製）にて培養した。分化抑制効果は、以下の方法で評価した。対数増殖期後半に入る２日後に、１．９ｃｍ２マルチプルウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｃｏｓｔａｒ社製）に、培養細胞を８×１０３細胞／ウェルの密度で移植し、４〜７日間培養した後、分化因子を含むＤＭＥＭ培地と、トリテルペン類を、表２に記載の濃度となるように加えた状態で、４８時間培養した。その後、牛胎児血清とインスリンを含むＤＭＥＭ培地にてさらに８日間培養した。培養終了後、各ウェルに細胞溶解用緩衝液を添加、溶解液中の脂肪量をトリグリセライドＧ−テストワコー（和光純薬工業社製）で測定することで、脂肪細胞内に取り込まれたトリグリセリド量を割り出し、対象群と比較することにより脂肪細胞分化抑制効果を算出した。また、脂肪蓄積抑制効果は、分化因子共存下での２日間培養後、牛胎児血清とインスリンを含むＤＭＥＭ培地に交換して添加する際、トリテルペン類を表２に記載の濃度となるよう加えた状態で８日間培養し、培養終了後に分化抑制効果判定同様の操作を行うことで、脂肪細胞脂肪蓄積抑制効果を算出した。
（評価基準）  トリテルペン類を溶かした溶媒のみを加えた群をコントロールとし、コントロールで得られたトリグリセリド量を１００％とした時の、被検物質添加時のトリグリセリド量から、分化・脂肪蓄積抑制率を算出した。すなわち、式２の通りである。
式２
分化・脂肪蓄積抑制率（％）＝１００−（被検物質添加時のトリグリセリド量／コントロール時のトリグリセリド量）×１００
上記方法によって前駆型脂肪細胞分化抑制効果、および成熟型脂肪細胞脂肪蓄積抑制効果を評価した。その結果を分化・脂肪蓄積抑制率として表２に示す。
2003039270.tif 000012
表２から、マスリン酸、エリトロジオール、ウルソール酸、ウバオール、ベツリン酸、ベツリンおよびそれらの生理的に許容される塩、またはそれらの誘導体の前駆型脂肪細胞分化抑制効果、および成熟型脂肪細胞脂肪蓄積抑制効果は、強力な抗肥満効果を有する物質として知られている共役リノール酸と比較し、非常に強いことが分かった。
これにより、マスリン酸、エリトロジオール、ウルソール酸、ウバオール、ベツリン酸、ベツリンおよびそれらの生理的に許容される塩、またはそれらの誘導体は、優れた前駆型脂肪細胞分化抑制効果および／または成熟型脂肪細胞脂肪蓄積抑制効果を享受できることが明らかになった。
試験例３
＜体脂肪蓄積抑制試験＞
体脂肪蓄積抑制試験は以下の方法で行った。ウィスター系雄性ラット（６週齢、平均体重１６０ｇ）をＡＩＮ−９３組成の粉末調製飼料で１週間予備飼育した後、平均体重が均等になるように１２群（１群８匹）に分け、被験物質を表４に記載した通りに添加した飼料（対照として大豆油を使用）を８週間自由摂取させた。なお、飼料は、表３に記載の組成を基本とし、被験物質を添加した場合の余剰分については、同質量のコーンスターチを減らしたものを使用した。８週間後、各群のラットを解剖し、皮下および内臓脂肪量を測定し、終体重に対する体脂肪蓄積率を算出した。
2003039270.tif 000013
（評価基準）
大豆油摂取群をコントロール群とし、コントロール群で得られた体脂肪蓄積率を１００％とした時の、被験物質摂取群の体脂肪蓄積率から、体脂肪蓄積抑制率を算出した。すなわち、式３の通りである。
式３
体脂肪蓄積抑制率（％）＝１００−（被検物質摂取群の体脂肪蓄積率／コントロール摂取群の体脂肪蓄積率）×１００
上記方法によって体脂肪蓄積抑制効果を評価した。その結果を体脂肪蓄積抑制率として表４に示す。
2003039270.tif 000014
表４から、各五環性トリテルペン類およびそれらの生理的に許容される塩、またはそれらの誘導体は、コントロール群と比較して、有意に（Ｐ＜０．０５）体脂肪の蓄積を抑制した。また、天然からの抽出物（マスリン酸含量１２．２％）、およびその濃縮物（マスリン酸含量１９．５％）を経口摂取した場合でも、体脂肪蓄積抑制効果が発現されることがわかった。
これにより、各五環性トリテルペン類およびそれらの生理的に許容される塩、またはそれらの誘導体は、優れた抗肥満効果を享受できることが明らかになった。また、これらは、天然から得る場合、ただ抽出しただけのものより、濃縮および／または分画・精製したもの、さらには単離されたものが効果が高い傾向が示唆された。
試験例４
＜動物における安全性の確認試験＞
急性毒性試験は以下の方法で行った。ウィスター系雌ラット（６週齢、平均体重１６０ｇ）をＡＩＮ−９３組成の粉末調製飼料で１週間予備飼育した後、平均体重が均等になるように６群（１群８匹）に分け、それぞれにマスリン酸投与群、エリトロジオール投与群、ウルソール酸投与群、ウバオール投与群、ベツリン酸投与群、ベツリン投与とした。各被験物質を綿実油に懸濁し、２０００ｍｇ／体重ｋｇになるように、ゾンデを用いて強制的に経口投与した。引き続きＡＩＮ−９３組成の粉末調製飼料で飼育を行い、投与後２週間の予後状態を観察し、２週間後に解剖による内臓状態の検視を行った。
結果としては、投与後２週間において、いずれの群においても死亡例はなく、また、解剖による内臓の所見でも特に異常は見られなかった。このことから各五環性トリテルペンのＬＤ５０値は２０００ｍｇ／体重ｋｇ以上であり、安全性に極めて優れており、飲食物等の形態により経口摂取することが可能であることが分かった。
試験例５  体脂肪蓄積抑制試験
ＳＤ系雄性ラット（６週齢、平均体重１６０ｇ）を固形配合飼料（ラボＭＲストック、日本農産工業）で１週間予備飼育した後、平均体重が均等になるように５群（１群４匹）に分け、被験物質を添加したＡＩＮ−９３組成の粉末調製飼料を４週間自由摂取させた。表５に前記飼料の組成を示す。なお、全ての群に調合油（大豆油：菜種油＝３：７）を７質量％添加した。
４週間後、６時間絶食させた後に各群のラットを解剖し、総内臓脂肪（副睾丸周囲、腸間膜及び腎周囲）および皮下脂肪量を測定した。この測定値より、終体重に対する各部位脂肪質量から脂肪蓄積率を算出した。ここで、総内臓脂肪（副睾丸周囲、腸間膜及び腎周囲）および皮下脂肪量の合計を体脂肪量とし、終体重に対する体脂肪蓄積率を算出した。
さらに、調合油摂取群をコントロール群とした場合の脂肪蓄積率を基準とし、被検物質の脂肪蓄積率と比較することで、その脂肪蓄積抑制効果を下記式４で示す脂肪蓄積抑制率により確認した。結果を表６に示す。
2003039270.tif 000015
＜脂肪蓄積抑制率＞
式４
各部位および体脂肪蓄積抑制率（％）＝１００−（被検物質摂取群の脂肪蓄積率／コントロール摂取群の脂肪蓄積率）×１００
2003039270.tif 000016
表６から、マスリン酸添加飼料を摂取した群が、コントロール群と比較して、体脂肪の低減効果が認められた。その傾向は、特に高用量よりも低用量配合飼料を摂取した群において見られたことから、ほんの少量で優れた抗肥満効果を享受できることが明らかになった。また、これは一日の摂取量においても少量で効果が得られることを示している。
さらには、本発明の抗肥満効果を得るには、必ずしも高濃度・多量に摂取する必要はなく、逆に、低含量域の一定範囲において、好適に機能を発揮する可能性も示すものである。
また、オリーブ抽出物を配合することでも抗肥満機能を発揮することが分かり、更には、これを濃縮、精製、単離する方が、より好適な効果を得ることができることがわかった。
また、オリーブ抽出物と、これらを濃縮・精製（単離）したマスリン酸の抗肥満効果を比較すると、濃縮・精製（単離）したマスリン酸の方が、内臓脂肪と皮下脂肪がバランス良く低減する傾向があることが分かった。これは、皮下脂肪に注目した場合、濃縮・精製（単離）して得られたマスリン酸は、皮下脂肪を好適に低減することができるといえる。
実施例１  食用油脂
精製マスリン酸１                                            １０．０ｇ
ＥＸＶ．オリーブ油                                      １０００．０ｇ
上記配合比率にて、ＥＸＶ．（エキストラバージン）オリーブ油に精製マスリン酸１を添加し、６０℃の温度を保ちながら、攪拌機を用いて全体が清澄になるまで十分に混合、溶解を行い、食用油脂を製造した。
実施例２  ドレッシング
製造例１中で得られた抽出物                                  ３０．０ｇ
水                                                          ４６．６ｇ
キサンタンガム                                                ０．１ｇ
果糖ぶどう糖液糖                                              ５．０ｇ
食塩                                                          ５．０ｇ
ＭＳＧ                                                        ０．３ｇ
米酢（酸度１０％）                                          １０．０ｇ
こしょう                                                          適量
大豆サラダ油                                                ３０．０ｇ
上記配合比率にて、まず大豆サラダ油を除く原材料を、攪拌機付きの加温可能な容器に投入し、プロペラ攪拌機を用いて１００ｒｐｍで攪拌しながら品温が９０℃になるまで加熱し、品温を９０℃に保持しながら２５分間攪拌を行った。その後、品温が２０℃になるまで冷却して大豆サラダ油と合わせてドレッシングを製造した。出来上がったドレッシングは、オリーブ風味の良好なドレッシングであった。
実施例３  ドレッシング
製造例１中で得られた粗マスリン酸分画物                        ３．０ｇ
水                                                          ４６．６ｇ
キサンタンガム                                                ０．１ｇ
果糖ぶどう糖液糖                                              ５．０ｇ
食塩                                                          ５．０ｇ
ＭＳＧ                                                        ０．３ｇ
米酢（酸度１０％）                                          １０．０ｇ
こしょう                                                          適量
大豆サラダ油                                                ３２．０ｇ
上記配合比率にて、まず大豆サラダ油を除く原材料を、攪拌機付きの加温可能な容器に投入し、プロペラ攪拌機を用いて１００ｒｐｍで攪拌しながら品温が９０℃になるまで加熱し、品温を９０℃に保持しながら２５分間攪拌を行った。その後、品温が２０℃になるまで冷却して大豆サラダ油と合わせてドレッシングを得た。
実施例４  飲料
製造例２中で得られた濃縮物                                    ３．０ｇ
ハチミツ                                                    １５．０ｇ
クエン酸                                                      ０．１ｇ
ｄｌ−リンゴ酸                                                ０．１ｇ
Ｄ−ソルビトール液（７０％）                                １０．０ｇ
安息香酸ナトリウム                                            ０．１ｇ
香料                                                              適量
精製水                                          全量１００ｇとする残余
上記原料を均一に混合し、健康用飲料を得た。
実施例５  飲料
エリトロジオール                                              １．０ｇ
ハチミツ                                                    １５．０ｇ
クエン酸                                                      ０．１ｇ
ｄｌ−リンゴ酸                                                ０．１ｇ
Ｄ−ソルビトール液（７０％）                                １０．０ｇ
安息香酸ナトリウム                                            ０．１ｇ
香料                                                              適量
精製水                                          全量１００ｇとする残余
上記原料を均一に混合し、健康用飲料を得た。
実施例６  タブレット食品
ウルソール酸                                                ２２．５ｇ
グラニュー糖                                                  ４．５ｇ
Ｌ−アスコルビン酸                                            ２．１ｇ
糊料                                                              適量
香料                                                              適量
色素                                                              適量
上記配合比率にて、各原材料を混合し、この混合物を直接粉末圧縮法により製錠して、１錠当たり２５０ｍｇのタブレット形状の食品を得た。
実施例７  ソフトカプセル状食品
ベツリン酸                                                    ２．０ｇ
ミツロウ                                                    １４．０ｇ
サフラワー油                                                ８４．０ｇ
ミツロウとサフラワー油を加熱溶解して均一に混合し、徐々に冷却しながらベツリン酸を添加、攪拌し、常温に戻った時点で、ゼラチンのソフトカプセルを皮膜して乾燥し、ソフトカプセル状食品を得た。
実施例８  シリアル食品
ウバオール                                                  ０．１５ｇ
小麦粉                                                      ３０．０ｇ
脱脂大豆                                                    １８．５ｇ
小麦ふすま                                                  １５．０ｇ
小麦胚芽                                                    １１．５ｇ
グラニュー糖                                                １０．０ｇ
上記配合比率にて混合したものを、加水、成型し、オーブンで加熱乾燥して、球形状のシリアル食品を得た。
実施例９  錠菓
クエン酸                                                      １．０ｇ
脱脂粉乳                                                    １５．５ｇ
ショ糖脂肪酸エステル                                          １．０ｇ
フレーバー                                                        適量
精製マスリン酸１                                              ２．５ｇ
グラニュー糖                                                ２０．０ｇ
乳糖                                                        ６０．０ｇ
上記原料を均一に混合し、これを造粒、打錠して一錠５００ｍｇの錠菓を得た。
実施例１０  クッキー
マーガリン                                                  ７０．０ｇ
砂糖                                                        ４０．０ｇ
食塩                                                          ０．７ｇ
全卵                                                        ２０．０ｇ
薄力粉                                                    １００．０ｇ
精製マスリン酸２                                              ２．０ｇ
上記配合にて原料を混合し、１個あたり１０ｇになるように分割し、１８０℃で１５分焼き、クッキーを製造した。
実施例１１  冷凍食品
豚ロース切り身                                        ６０．０ｇ×１０
キサンタンガム                                                １．５ｇ
卵白粉                                                        ２．５ｇ
マルトデキストリン                                            ５．０ｇ
調味料                                                        １．０ｇ
精製マスリン酸１                                              ２．０ｇ
水                                                          ５０．０ｇ
パン粉                                                            適量
キサンタンガム、卵白粉、マルトデキストリン、調味料、マスリン酸を水中で混合撹拌して衣液を調製し、これを豚ロース切り身の周りに付け、さらにパン粉を付着させたものを、１８０℃の大豆油で３分間フライし、フライ食品を得た。なお、フライは１０個作成して全ての原料を使い切った。得られたフライ食品は、−３０℃で冷凍し冷凍食品とした。
実施例１２  レトルト食品
（肉部）
豚挽き肉                                                    ２１．０ｇ
植物油                                                        ５．０ｇ
野菜ベースト                                                  ３．０ｇ
豆板醤                                                        １．０ｇ
（ソース部）
キサンタンガム                                                ０．２ｇ
しょうゆ                                                    １０．０ｇ
みりん                                                        ８．０ｇ
砂糖                                                          ６．０ｇ
食塩                                                          ４．０ｇ
エキス調味料                                                  ０．８ｇ
植物系調味料                                                  ０．８ｇ
精製マスリン酸２                                              ０．８ｇ
豆板醤パウダー                                                ０．１ｇ
水                                                                残部
肉部、ソース部をそれぞれ別々に調理したものを、肉部３０ｇ、ソース部７０ｇの合計１００ｇになるように、アルミ箔入りレトルトパウチに充填した後、レトルト殺菌（１２０℃、２５分）して、レトルト食品を得た。
実施例１３  マーガリン
菜種油                                            ４２．０ｇ
菜種硬化油                                        ４２．０ｇ
水                                                １４．０ｇ
食塩                                                ０．５ｇ
レシチン                                            ０．５ｇ
モノグリセリド                                      ０．４ｇ
精製マスリン酸１                                    ０．６ｇ
香料                                                  適量
カロチン                                              微量
上記原料を常法により混合し、コンビネーターを用い急冷混捏処理してマーガリンを得た。
実施例１４  マヨネーズ
大豆サラダ油                                      ７４．０ｇ
水                                                  ８．４ｇ
砂糖                                                １．０ｇ
グルタミン酸ナトリウム                              ０．３ｇ
粉末マスタード                                      ０．３ｇ
食塩                                                １．０ｇ
米酢                                                ４．０ｇ
精製マスリン酸２                                    １．０ｇ
加塩卵黄                                          １０．０ｇ
上記配合比率にて、まず大豆サラダ油、加塩卵黄を除く原材料を、混合攪拌しながら９０まで加熱し、９０℃に保持しながら２５分間攪拌を行った。２０℃まで冷却した後、大豆サラダ油、加塩卵黄を合わせて減圧下で撹拌し、マヨネーズを得た。
本発明の抗肥満用飲食物によれば、時間や労力等の負担を必要とせず、簡易に、かつ、継続的に、五環性トリテルペン類およびそれらの生理的に許容される塩、またはそれらの誘導体を摂取することができるため、その結果として、その抗肥満効果を好適に享受することができる。また、本発明における五環性トリテルペン類は、天然から得ることができるため、その使用において安心感がある。
【国際調査報告】
2003039270.tif 000017
2003039270.tif 000018
2003039270.tif 000019
2003039270.tif 000020