(57)【要約】本発明によれば、一般式2003033507.tif 000053［式中、ＸはＮまたはＣＨであり、Ｒは水素原子、Ｃ１〜Ｃ６アルキル基、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキル基、フェニルＣ１〜Ｃ６アルキル基またはＣ３〜Ｃ６シクロアルキルＣ１〜Ｃ６アルキル基である］で表されるプロテアソーム阻害作用を有する新規なベンジルマロン酸誘導体が得られる。本発明の化合物は、免疫型プロテアソームを選択的に阻害し、構成型プロテアソームへの阻害が弱い、免疫抑制剤、抗炎症剤、抗アレルギー剤、自己免疫疾患治療剤、炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎、クローン病）などの慢性炎症性疾患治療剤、抗がん剤、神経変性疾患治療剤として有用である。
2003033507.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（Ｉ）
2003033507.tif 000048
［式中、ＸはＮまたはＣＨであり、Ｒは水素原子、Ｃ１〜Ｃ６アルキル基、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキル基、フェニルＣ１〜Ｃ６アルキル基またはＣ３〜Ｃ６シクロアルキルＣ１〜Ｃ６アルキル基である］で表される化合物またはその薬学的に許容しうる塩もしくはその水和物。
【請求項２】
一般式（Ｉ）において、ＸはＮまたはＣＨであり、Ｒはブチル基、イソブチル基、プロピル基、イソプロピル基またはベンジル基である、請求項１記載の化合物またはその薬学的に許容しうる塩もしくはその水和物。
【請求項３】
一般式（Ｉ）において、ＸはＮであり、Ｒはブチル基である化合物［Ｎ−（２−ピラジニル）ベンジルマロナミル−（Ｒ）−ボロノルロイシン  １−オキシド］、ＸはＮであり、Ｒはイソブチル基である化合物［Ｎ−（２−ピラジニル）ベンジルマロナミル−（Ｒ）−ボロロイシン  １−オキシド］、ＸはＮであり、Ｒはベンジル基である化合物［Ｎ−（２−ピラジニル）ベンジルマロナミル−（Ｒ）−ボロフェニルアラニン  １−オキシド］、ＸはＣＨであり、Ｒはブチル基である化合物［Ｎ−（２−ピリジル）ベンジルマロナミル−（Ｒ）−ボロノルロイシン  １−オキシド］またはＸはＣＨであり、Ｒはベンジル基である化合物［Ｎ−（２−ピリジル）ベンジルマロナミル−（Ｒ）−ボロフェニルアラニン  １−オキシド］である請求項１記載の化合物またはその薬学的に許容しうる塩もしくはその水和物。
【請求項４】
一般式（ＩＩ）
2003033507.tif 000049
［式中、ＸはＮまたはＣＨであり、Ｒは水素原子、Ｃ１〜Ｃ６アルキル基、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキル基、フェニルＣ１〜Ｃ６アルキル基、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキルＣ１〜Ｃ６アルキル基である］で表される化合物。
【請求項５】
一般式（ＩＩＩ）
2003033507.tif 000050
［式中、Ｒ’は水素原子またはＣ１〜Ｃ６アルキル基等であり、ＸはＮまたはＣＨである］で表される化合物。
【請求項６】
一般式（ＩＶ）
2003033507.tif 000051
［式中、ＸはＮまたはＣＨである］で表されるカルボン酸またはその反応性誘導体と、一般式（Ｖ）
2003033507.tif 000052
［式中、Ｒは水素原子、Ｃ１〜Ｃ６アルキル基、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキル基、フェニルＣ１〜Ｃ６アルキル基またはＣ３〜Ｃ６シクロアルキルＣ１〜Ｃ６アルキル基であり、ＨＹは無機酸または有機酸である］で表されるアミノボラン酸化合物を縮合剤、添加剤、塩基の存在下に反応させることからなる、請求項４記載の化合物の製造方法。
【請求項７】
請求項１に記載の一般式（Ｉ）で表される化合物またはその薬学的に許容しうる塩を有効成分とし、必要によって製剤上許容される医薬品添加物を配合してなる、プロテアソーム阻害薬。
【請求項８】
炎症性腸疾患の治療薬または予防薬である、請求項７記載のプロテアソーム阻害薬。
【発明の詳細な説明】
技術分野
本発明は、免疫型プロテアソームを選択的に阻害し、構成型プロテアソームへの阻害が弱い、免疫抑制剤、抗炎症剤、抗アレルギー剤、自己免疫疾患治療剤、抗がん剤、神経変性疾患治療剤として有用な新規なベンジルマロン酸誘導体と、それを有効成分として含有するプロテアソーム阻害薬に関する。
背景技術
プロテアソームは真核細胞の主として核や細胞質に存在するきわめて複雑な分子構造をした巨大な可溶性高分子タンパク質複合体であり、沈降係数２０ＳのＡＴＰ非依存型と沈降係数２６ＳのＡＴＰ依存型の２つの分子種として存在する。２０Ｓプロテアソームはそれ自身でキモトリプシン様活性やトリプシン様活性およびペプチジルグルタミルペプチド加水分解活性を有しており、短鎖のペプチドを分解することができる。２６Ｓプロテアソームは触媒機能を有する２０Ｓプロテアソームに制御サブユニット複合体が結合して形成されており、ユビキチン化を受けたタンパク質をペプチドやアミノ酸に分解する（実験医学  １５巻、２０５６頁、１９９７年、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ｖｏｌ．２６８、５３３頁、１９９５年、Ｎａｔｕｒｅ  ｖｏｌ．３５７、３７５頁、１９９２年）。また、精製した古細菌プロテアソームの触媒機構の研究から、プロテアソームがスレオニンプロテアーゼであることも判明している（Ｓｃｉｅｎｃｅ  ｖｏｌ．２６８、５７９頁、１９９５年）。
さらに最近、真核生物が通常有するプロテアソーム（構成型プロテアソーム）とは異なり、ＩＦＮ−γによって強く誘導されるプロテアソームとして免疫型プロテアソームが発見された（Ａｄｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，ｖｏｌ．６４、１頁、１９９７年）。
プロテアソームの生理機能として、まずＴＮＦ−α、ＩＬ−１、ＩＬ−２等の炎症性サイトカインやＩＣＡＭ−１、ＶＣＡＭ−１等の接着分子の発現に重要な炎症性サイトカインやＩＣＡＭ−１、ＶＣＡＭ−１等の接着分子の発現に重要な炎症性転写因子ＮＦ−κＢの活性化に重要な役割を担っている（Ｃｅｌｌ  ｖｏｌ．７８、７７３頁、１９９４年、Ｃｅｌｌ  ｖｏｌ．８０、５２９頁、１９９５年）。また、内在性抗原のプロセッシング酵素としても機能しており、免疫応答においても重要な機能を果たしている。さらに細胞周期の制御にも関与し癌抑制タンパク質の分解や神経細胞のアポトーシスにも関与している（Ｎａｔｕｒｅ  ｖｏｌ．３４９、１３２頁、１９９１年、Ｃｅｌｌ  ｖｏｌ．７５、４９５頁、１９９３年、ＦＥＢＳ  ｖｏｌ．３０４、５７頁、１９９２年、組織培養  ２２巻、１０６頁、１９９６年、ＥＭＢＯ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｖｏｌ．１５、３８４５頁、１９９６年）。
炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎、クローン病）は下部消化管を中心とする慢性難治性の炎症性疾患である。炎症の増悪、軽減を繰り返すことを特徴とし、長期にわたって患者の生活の質に悪影響を及ぼす。疾患の原因は特定されていないが、遺伝的、環境的な素因に加え、何らかの切っ掛けにより腸粘膜の免疫破綻が起きると考えられている。薬物による根本的な治療法は現在まで存在しない。本疾患の詳細な病態についても未だ不明の点が多いが、活動期（炎症反応の増悪した時期）の患者組織には炎症性サイトカインや細胞接着分子などの産生亢進が認められ、これらによって炎症性細胞が炎症組織に浸潤し、炎症をさらに悪化、持続させるという悪循環に陥ると考えられている。炎症性サイトカインなど、炎症に関連する遺伝子の発現は、いくつかの転写因子によってコントロールされる。これらの転写因子のうち、最も良く知られているのがＮＦ−κＢである。
炎症性腸疾患の患者組織では、活動期の炎症部位でＮＦ−κＢの活性化が認められる。一方、活動期の非炎症部位や、緩解期（炎症反応の軽減化した時期）の組織ではほぼ正常範囲内にとどまっている（Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  ｖｏｌ．１１５、３５７頁、１９９８年、Ｇｕｔ  ｖｏｌ．４２、４７７頁、１９９８年）。すなわち、ＮＦ−κＢの活性化を阻害することにより、炎症を緩解状態に導く、あるいは緩解状態を維持することが可能と考えられる。
炎症性腸疾患治療薬として現在汎用されているステロイド、５−アミノサリチル酸あるいはその誘導体がＮＦ−κＢの活性化を抑制することが細胞を用いた研究により証明されているほか、患者組織においても薬物投与の効果とともに活性化ＮＦ−κＢの減少が認められている（Ｂｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  ｖｏｌ．１２４、４３１頁、１９９８年、Ａｍ  Ｊ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ  ｖｏｌ．９５、３４５２頁、２０００年など）。
プロテアソーム阻害薬はプロテアソームの生理機能の一つであるＮＦ−κＢの活性化を阻害することにより炎症性腸疾患に対し従来の薬物療法よりも強力な治療効果を発揮することが期待される。また、プロテアソームは細胞の増殖や免疫系の制御など様々な生命現象と深く関わっていることからその阻害薬は、臓器移植における拒絶反応などに有効な免疫抑制剤、あるいは慢性関節リウマチ、腎炎、全身性エリテマトーデスなどの自己免疫疾患や喘息、皮膚炎などのアレルギー疾患の治療薬、癌さらには神経変性疾患治療薬として有効であるものと考えられる。
現在までに報告されているプロテアソーム阻害剤としてはラクタシスチン（Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ  ｖｏｌ．４０、１１３頁、１９９１年、タンパク質核酸酵素  ４１巻、３２７頁、１９９６年、細胞工学  １５巻、９２９頁、１９９６年）、ＴＭＣ−９５（特開平１１−２９５９５）などの天然物や、ペプチドアルデヒド（ＷＯ９５／２４９１４、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．ｖｏｌ．３８、２２７６頁、１９９５年、Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．ｖｏｌ．６、２８７頁、１９９６年、特開平１０−３６２８９、特開平１１−２９２８３３）、ペプチド性ケトアミドやケトアルデヒド（Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．ｖｏｌ．９、２６０３頁、１９９９年、Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．ｖｏｌ．８、３７３頁、１９９８年）、ペプチド性エポキシケトン（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．ｖｏｌ．３９、１３４３頁、１９９６年、特開平１１−１２４３９７、Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ＆  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｖｏｌ．６、８１１頁、１９９９年、Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．ｖｏｌ．９、２２８３頁、１９９９年、Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．ｖｏｌ．９、３３３５頁、１９９９年）、ペプチドホウ酸（ＷＯ９６／１３２６６、Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．ｖｏｌ．８、３３３頁、１９９８年）などが報告されている。これら阻害剤は構成型プロテアソームと免疫型プロテアソームに対する阻害活性の差異についてはまったく報告されていない。さらに、免疫型プロテアソームを選択的に阻害する化合物については未だ報告例がない。
発明の開示
本発明の目的は、免疫型プロテアソームを選択的に阻害する物質を提供することによって、副作用の少ない優れた免疫抑制剤、抗炎症剤、抗アレルギー剤、自己免疫疾患治療剤、炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎、クローン病）などの慢性炎症性疾患治療剤、抗がん剤、神経変性疾患治療剤を提供することにある。
本発明者らは、免疫型プロテアソーム選択的阻害活性を有する化合物について鋭意研究を重ねた結果、新規なベンジルマロン酸誘導体が免疫型プロテアソームを選択的に阻害することを見い出し本発明を完成させた。
すなわち、本発明によれば、一般式（Ｉ）
2003033507.tif 000003
［式中、ＸはＮまたはＣＨであり、Ｒは水素原子、Ｃ１〜Ｃ６アルキル基、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキル基、フェニルＣ１〜Ｃ６アルキル基またはＣ３〜Ｃ６シクロアルキルＣ１〜Ｃ６アルキル基である］で表される化合物またはその薬学的に許容しうる塩が提供される。
本発明の上記したベンジルマロン酸誘導体の一般式（Ｉ）中のＲのＣ１〜Ｃ６アルキル基としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、イソペンチル基、２−ペンチル基、３−ペンチル基、ｎｅｏ−ペンチル基、ｔｅｒｔ−ペンチル基、ヘキシル基等が挙げられ、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキル基としては、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基、シクロヘプチル基等が挙げられ、フェニルＣ１〜Ｃ６アルキル基としては、ベンジル基、フェネチル基、１−フェニルエチル基、３−フェニルプロピル基、２−フェニルプロピル基、１−フェニルプロピル基、１−フェニル−２−プロピル基、２−フェニル−２−プロピル基等が挙げられ、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキルＣ１〜Ｃ６アルキル基としては、シクロプロピルメチル基、シクロブチルメチル基、シクロペンチルメチル基、シクロヘキシルメチル基、シクロヘプチルメチル基、シクロプロピルエチル基、シクロブチルエチル基、シクロペンチルエチル基、シクロヘキシルエチル基、シクロヘプチルエチル基等が挙げられる。
本発明の一般式（Ｉ）で示される化合物は、例えば、一般式（ＩＩ）
2003033507.tif 000004
［式中、ＸはＮまたはＣＨであり、Ｒは水素原子、Ｃ１〜Ｃ６アルキル基、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキル基、フェニルＣ１〜Ｃ６アルキル基またはＣ３〜Ｃ６シクロアルキルＣ１〜Ｃ６アルキル基である］で表される、化合物を過ヨウ素酸または過ヨウ素酸塩、例えば、過ヨウ素酸ナトリウム、過ヨウ素酸カリウム、Ａｍｂｅｒｌｙｓｔ．Ａ−２６，ｐｅｒｉｏｄａｔｅ  ｆｏｒｍ（ＣＡＳ登録番号３９３３９−８５−０として登録されているイオン交換樹脂、Ｒｏｈｍ  ａｎｄ  ｈａｓｓ  Ｃｏ．の登録商標）とを反応させて得ることが出来る。
反応は、無溶媒、水または有機溶剤例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、アセトニトリル、アセトン、メチルエチルケトン、メタノール、エタノール、プロパノール、２−プロパノール、ブタノール、酢酸エチル、酢酸ブチル、ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサン、ベンゼン、トルエン、キシレン、クロロホルム、１，２−ジクロロエタン、塩化メチレン、ヘキサン、ヘプタン、オクタン中、均一相、不均一相、または２相系で、氷冷下〜還流温度で実施される。
一般式（ＩＩ）で示される化合物は、一般式（Ｉ）の化合物の合成中間体であり、例えば、一般式（ＩＶ）
2003033507.tif 000005
［式中、ＸはＮまたはＣＨである］で表されるカルボン酸またはその反応性誘導体と、一般式（Ｖ）
2003033507.tif 000006
［式中、Ｒは水素原子、Ｃ１〜Ｃ６アルキル基、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキル基、フェニルＣ１〜Ｃ６アルキル基またはＣ３〜Ｃ６シクロアルキルＣ１〜Ｃ６アルキル基であり、ＨＹは無機酸、例えば、塩酸、硝酸、硫酸または有機酸、例えばトリフルオロ酢酸、メタンスルホン酸、パラトルエンスルホン酸である］で表されるアミノボラン酸化合物を縮合剤、添加剤、塩基等の存在下に反応させて得ることが出来る。
縮合剤としては、例えばジシクロヘキシルカルボジイミド、１−［３−（ジメチルアミノ）プロピル］−３−エチルカルボジイミド・塩酸塩等のカルボジイミド類、ジフェニルホスホリルアジド等のアジド類、カルボニルジイミダゾール、ジエチルピロカーボネート等が挙げられ、添加剤としては、例えばＮ−ヒドロキシスクシンイミド、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール等が挙げられ、塩基としては、例えばトリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、Ｎ−メチルモルホリン、ピリジン等の有機塩基が挙げられる。
反応は、無溶媒、水または有機溶剤例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、アセトニトリル、アセトン、メチルエチルケトン、メタノール、エタノール、プロパノール、２−プロパノール、ブタノール、酢酸エチル、酢酸ブチル、ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサン、ベンゼン、トルエン、キシレン、クロロホルム、１，２−ジクロロエタン、塩化メチレン、ヘキサン、ヘプタン、オクタン中、均一相、不均一相、または２相系で、氷冷下〜還流温度で実施される。
一般式（ＩＩＩ）で示される化合物は、一般式（Ｉ）の化合物の合成中間体であり、一般式（ＩＶ）または一般式（ＶＩ）で示され、一般式（ＩＶ）で示される化合物は、例えば、一般式（ＶＩ）
2003033507.tif 000007
［式中、Ｒ”はＣ１〜Ｃ６アルキル基等であり、ＸはＮまたはＣＨである］で表されるカルボン酸エステルを酸または塩基存在下に加水分解して得ることが出来る。
塩基としては、例えば水酸化リチウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等が挙げられ、酸としては、例えばトリフルオロ酢酸等が挙げられる。
反応は、無溶媒、水または有機溶剤例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、アセトニトリル、アセトン、メチルエチルケトン、メタノール、エタノール、プロパノール、２−プロパノール、ブタノール、酢酸エチル、酢酸ブチル、ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサン、ベンゼン、トルエン、キシレン、クロロホルム、１，２−ジクロロエタン、塩化メチレン、ヘキサン、ヘプタン、オクタン中、均一相、不均一相、または２相系で、氷冷下〜還流温度で実施される。
一般式（ＶＩ）で示される化合物は、例えば、一般式（ＶＩＩ）
2003033507.tif 000008
［式中、Ｒ”はＣ１〜Ｃ６アルキル基等であり、ＸはＮまたはＣＨである］で表されるカルボン酸エステルに過酸、たとえばメタクロロ過オキシ安息香酸を反応させて得ることが出来る。
反応は、無溶媒、水または有機溶剤例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、アセトニトリル、アセトン、メチルエチルケトン、メタノール、エタノール、プロパノール、２−プロパノール、ブタノール、酢酸エチル、酢酸ブチル、ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサン、ベンゼン、トルエン、キシレン、クロロホルム、１，２−ジクロロエタン、塩化メチレン、ヘキサン、ヘプタン、オクタン中、均一相、不均一相、または２相系で、氷冷下〜還流温度で実施される。
一般式（ＶＩＩ）で示される化合物は、例えば、一般式（ＶＩＩＩ）
2003033507.tif 000009
［式中、Ｒ”はＣ１〜Ｃ６アルキル基等である］で表されるベンジルマロン酸誘導体と一般式（ＩＸ）
2003033507.tif 000010
［式中、ＸはＮまたはＣＨである］で表されるアミン誘導体を反応させて得ることが出来る。
反応は、無溶媒、水または有機溶剤例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、アセトニトリル、アセトン、メチルエチルケトン、メタノール、エタノール、プロパノール、２−プロパノール、ブタノール、酢酸エチル、酢酸ブチル、ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサン、ベンゼン、トルエン、キシレン、クロロホルム、１，２−ジクロロエタン、塩化メチレン、ヘキサン、ヘプタン、オクタン中、均一相、不均一相、または２相系で、氷冷下〜還流温度で実施される。
一般式（Ｉ）で示される化合物を得る反応を反応スキームで示すと次の通りである。
2003033507.tif 000011
一般式（Ｖ）で示される化合物は、ＷＯ  ９６／１３２６６に開示された方法により合成することが出来る。一般式（Ｖ）で示される化合物を得る反応を反応スキームで示すと次の通りである。
2003033507.tif 000012
一般式（Ｉ）で示される化合物の具体例としては、
Ｎ−（２−ピラジニル）ベンジルマロナミル−（Ｒ）−ボロノルバリン  １−オキシド、
Ｎ−（２−ピラジニル）ベンジルマロナミル−（Ｒ）−ボロバリン  １−オキシド、
Ｎ−（２−ピラジニル）ベンジルマロナミル−（Ｒ）−ボロノルロイシン  １−オキシド、
Ｎ−（２−ピラジニル）ベンジルマロナミル−（Ｒ）−ボロロイシン  １−オキシド、
Ｎ−（２−ピラジニル）ベンジルマロナミル−（Ｒ）−ボロイソロイシン  １−オキシド、
Ｎ−（２−ピラジニル）ベンジルマロナミル−（Ｒ）−ボロフェニルアラニン  １−オキシド、
Ｎ−（２−ピリジル）ベンジルマロナミル−（Ｒ）−ボロノルバリン  １−オキシド、
Ｎ−（２−ピリジル）ベンジルマロナミル−（Ｒ）−ボロバリン  １−オキシド、
Ｎ−（２−ピリジル）ベンジルマロナミル−（Ｒ）−ボロノルロイシン  １−オキシド、
Ｎ−（２−ピリジル）ベンジルマロナミル−（Ｒ）−ボロロイシン  １−オキシド、
Ｎ−（２−ピリジル）ベンジルマロナミル−（Ｒ）−ボロイソロイシン  １−オキシド、
Ｎ−（２−ピリジル）ベンジルマロナミル−（Ｒ）−ボロフェニルアラニン  １−オキシド、
などが挙げられる。
一般式（ＩＩ）で示される化合物の具体例としては、
Ｎ−（２−ピラジニル）ベンジルマロナミル−（Ｒ）−ボロノルバリン  （＋）−ピナンジオール  エステル  １−オキシド、
Ｎ−（２−ピラジニル）ベンジルマロナミル−（Ｒ）−ボロバリン  （＋）−ピナンジオール  エステル  １−オキシド、
Ｎ−（２−ピラジニル）ベンジルマロナミル−（Ｒ）−ボロノルロイシン  （＋）−ピナンジオール  エステル  １−オキシド、
Ｎ−（２−ピラジニル）ベンジルマロナミル−（Ｒ）−ボロロイシン  （＋）−ピナンジオール  エステル  １−オキシド、
Ｎ−（２−ピラジニル）ベンジルマロナミル−（Ｒ）−ボロイソロイシン  （＋）−ピナンジオール  エステル  １−オキシド、
Ｎ−（２−ピラジニル）ベンジルマロナミル−（Ｒ）−ボロフェニルアラニン  （＋）−ピナンジオール  エステル  １−オキシド、
Ｎ−（２−ピリジル）ベンジルマロナミル−（Ｒ）−ボロノルバリン  （＋）−ピナンジオール  エステル  １−オキシド、
Ｎ−（２−ピリジル）ベンジルマロナミル−（Ｒ）−ボロバリン  （＋）−ピナンジオール  エステル  １−オキシド、
Ｎ−（２−ピリジル）ベンジルマロナミル−（Ｒ）−ボロノルロイシン  （＋）−ピナンジオール  エステル  １−オキシド、
Ｎ−（２−ピリジル）ベンジルマロナミル−（Ｒ）−ボロロイシン  （＋）−ピナンジオール  エステル  １−オキシド、
Ｎ−（２−ピリジル）ベンジルマロナミル−（Ｒ）−ボロイソロイシン  （＋）−ピナンジオール  エステル  １−オキシド、
Ｎ−（２−ピリジル）ベンジルマロナミル−（Ｒ）−ボロフェニルアラニン  （＋）−ピナンジオール  エステル  １−オキシド、
などが挙げられる。
一般式（ＩＩＩ）で示される化合物は、一般式（ＩＶ）または一般式（ＶＩ）で示される。
一般式（ＩＶ）で示される化合物の具体例としては、
Ｎ−（２−ピラジニル）ベンジルマロンアミド酸  １−オキシド、
Ｎ−（２−ピリジル）ベンジルマロンアミド酸  １−オキシド、
などが挙げられ、反応性誘導体としては、
Ｎ−（２−ピラジニル）ベンジルマロンアミド酸クロリド  １−オキシド、
Ｎ−（２−ピリジル）ベンジルマロンアミド酸クロリド  １−オキシド、
Ｎ−（２−ピラジニル）ベンジルマロンアミド酸酢酸無水物  １−オキシド、
Ｎ−（２−ピリジル）ベンジルマロンアミド酸酢酸無水物  １−オキシド、
などが挙げられ、一般式（ＶＩ）で示される化合物の具体例としては、
Ｎ−（２−ピラジニル）ベンジルマロンアミド酸メチル  １−オキシド、
Ｎ−（２−ピリジル）ベンジルマロンアミド酸メチル  １−オキシド、
Ｎ−（２−ピラジニル）ベンジルマロンアミド酸エチル  １−オキシド、
Ｎ−（２−ピリジル）ベンジルマロンアミド酸エチル  １−オキシド、
などが挙げられる。
一般式（Ｖ）で示される化合物の具体例としては、
（Ｒ）−ボロノルバリン  （＋）−ピナンジオール  エステル  トリフルオロ酢酸塩、
（Ｒ）−ボロバリン  （＋）−ピナンジオール  エステル  トリフルオロ酢酸塩、
（Ｒ）−ボロノルロイシン  （＋）−ピナンジオール  エステル  トリフルオロ酢酸塩、
（Ｒ）−ボロロイシン  （＋）−ピナンジオール  エステル  トリフルオロ酢酸塩、
（Ｒ）−ボロイソロイシン  （＋）−ピナンジオール  エステル  トリフルオロ酢酸塩、
（Ｒ）−ボロフェニルアラニン  （＋）−ピナンジオール  エステル  トリフルオロ酢酸塩、
（Ｒ）−ボロノルロイシン  （＋）−ピナンジオール  エステル  塩酸塩、
（Ｒ）−ボロロイシン  （＋）−ピナンジオール  エステル  塩酸塩、
（Ｒ）−ボロフェニルアラニン  （＋）−ピナンジオール  エステル  塩酸塩、
（Ｒ）−ボロノルロイシン  （＋）−ピナンジオール  エステル  硝酸塩、
（Ｒ）−ボロロイシン  （＋）−ピナンジオール  エステル  硝酸塩、
（Ｒ）−ボロフェニルアラニン  （＋）−ピナンジオール  エステル  硝酸塩、
（Ｒ）−ボロノルロイシン  （＋）−ピナンジオール  エステル  硫酸塩、
（Ｒ）−ボロロイシン  （＋）−ピナンジオール  エステル  硫酸塩、
（Ｒ）−ボロフェニルアラニン  （＋）−ピナンジオール  エステル  硫酸塩、
（Ｒ）−ボロノルロイシン  （＋）−ピナンジオール  エステル  メタンスルホン酸塩、
（Ｒ）−ボロロイシン  （＋）−ピナンジオール  エステル  メタンスルホン酸塩、
（Ｒ）−ボロフェニルアラニン  （＋）−ピナンジオール  エステル  メタンスルホン酸塩、
（Ｒ）−ボロノルロイシン  （＋）−ピナンジオール  エステル  パラトルエンスルホン酸塩、
（Ｒ）−ボロロイシン  （＋）−ピナンジオール  エステル  パラトルエンスルホン酸塩、
（Ｒ）−ボロフェニルアラニン  （＋）−ピナンジオール  エステル  パラトルエンスルホン酸塩、
などが挙げられる。
一般式（ＶＩＩ）で示される化合物の具体例としては、
Ｎ−（２−ピラジニル）ベンジルマロンアミド酸メチル、
Ｎ−（２−ピリジル）ベンジルマロンアミド酸メチル、
Ｎ−（２−ピラジニル）ベンジルマロンアミド酸エチル、
Ｎ−（２−ピリジル）ベンジルマロンアミド酸エチル、
などが挙げられる。
一般式（ＶＩＩＩ）で示される化合物の具体例としては、
ベンジルマロン酸ジメチル、
ベンジルマロン酸ジエチル、
などが挙げられる。
上記した本発明の化合物は、下記する実施例で示されるように、免疫型プロテアソームを選択的に阻害することによって、副作用の少ない優れた免疫抑制剤、抗炎症剤、抗アレルギー剤、自己免疫疾患治療剤、炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎、クローン病）などの慢性炎症性疾患治療剤、抗がん剤、神経変性疾患治療剤および予防薬として有用である。
本発明の一般式（Ｉ）で示される化合物は所望によって薬理学的に許容され得る酸または塩基との付加塩に変換することができ、これらの酸または塩基付加塩も本発明の範囲に包含される。酸付加塩としては、例えば塩酸、臭化水素酸、硫酸、燐酸等の無機酸との塩類、酢酸、コハク酸、シュウ酸、リンゴ酸、酒石酸、フマル酸、マレイン酸、クエン酸、マロン酸、乳酸、メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、マンデル酸、スベリン酸等の有機酸との塩類が挙げられ、塩基付加塩としては、ナトリウム塩、カリウム塩、各種アンモニウム塩等の無機または有機塩基との塩類が挙げられる。
この一般式（Ｉ）で表される化合物を医薬として使用する場合には種々の投与形態の製剤とすることができる。すなわち、この製剤は経口的に錠剤、糖衣錠、硬質カプセル剤、軟質カプセル剤、腸溶製剤、または溶液、エマルジョンもしくは懸濁液のような液剤の形態で投与することができる。また、非経口投与の場合には注射剤、坐剤、注腸剤またはパップ剤等の形態で投与される。注腸剤は溶液、エマルジョンまたは懸濁液のような液剤で用いられる。
これらの製剤の調製にあたっては製剤化のための慣用の添加剤、例えば賦形剤、結合剤、崩壊剤、安定剤、防腐剤、溶解剤、湿潤剤、乳化剤、滑沢剤、粘着剤、甘味剤、着色剤、香味剤、張度調製剤、緩衝剤、酸化防止剤などを添加して製剤化することができる。
これら慣用の添加剤としては、例えば、賦形剤としては、例えば、乳糖、トウモロコシ澱粉、リン酸カルシウム、メタケイ酸アルミン酸マグネシウムなど、結合剤としては、例えば、結晶セルロース、マンニトール、デキストリン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、マクロゴールなど、滑沢剤としては、例えば、ステアリン酸カルシウム、タルクなどが使用される。
本発明のプロテアソーム阻害薬の投与方法、投与量は各種製剤形態、患者の性別、疾患の程度により適宣選択されるが、有効成分の一日あたりの投与量は１０〜１０００ｍｇである。
発明を実施するための最良の形態
以下に処方例を示す。
腸溶性錠剤（１錠）
2003033507.tif 000013
素錠の各成分を均一に混合し、直打用粉末とする。これを、ロータリー式打錠機で直径９．５ｍｍ、重量４００ｍｇの錠剤にした後、均一にしたフィルム成分で錠剤コーティング機によりフィルムコーティングを行う。
注腸剤
2003033507.tif 000014
ポリソルベート８０、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油６０、パラオキシ安息香酸エチル、パラオキシ安息香酸プロピルおよび主薬を温水に溶解し１００ｍＬとする。
パップ剤（４００ｃｍ２当たり）
2003033507.tif 000015
ゼラチン、ポリビニルアルコール、メチルセルロースをグリセリンに分散させ、これに、精製水、カオリン、ポリアクリル酸ナトリウム及び主薬を混合し、ポリエチレンフィルム上に延展する。
以下に本発明を実施例によってさらに説明するが、これらは本発明を具体的に説明するだけのものであって、本発明を限定するものではない。
製造例  １
（１Ｓ，２Ｓ，８Ｓ，６Ｒ）−４−イソブチル−２，９，９−トリメチル−３，５−ジオキサ−４−ボラトリシクロ［６．１．１．０２，６］デカン
2003033507.tif 000016
イソブチルマグネシウムクロリド（２．０ｍｏｌ／Ｌエーテル溶液、１００ｍＬ）をナスフラスコに入れ、アルゴン置換した。滴下ロートにホウ酸トリメチル（２５ｍＬ）のエーテル溶液を入れ、−７８℃に冷却した。攪拌下にホウ酸トリメチルを滴下し、滴下終了後反応液を室温に戻し、１夜攪拌した。エーテルを加え、反応液を氷冷し、４０％硫酸（５０ｍＬ）を滴下し、室温下で７時間攪拌した。反応液を濾過し、濾液をエーテル抽出し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧留去した。
得られたイソブチルボラン酸のエーテル溶液を濃縮し、（１Ｓ，２Ｓ，５Ｓ，３Ｒ）−（＋）−ピナンジオール（１０ｇ）を加えて溶解した後、室温下に１夜攪拌した。溶媒を留去し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー精製し、標題化合物（９．０１ｇ）を油状物として得た（収率１９％）。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ：０．７４−０．９８（ｍ，１１Ｈ），１．１４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１１．２Ｈｚ），１．２９（ｓ，３Ｈ），１．３８（ｓ，３Ｈ），１．７１−１．９５（ｍ，３Ｈ），２．０５（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝５．６Ｈｚ），２．１７−２．２６（ｍ，１Ｈ），２．２９−２．３８（ｍ，１Ｈ），４．２６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，８．８Ｈｚ）
同様にして以下の化合物を得た。
（１Ｓ，２Ｓ，８Ｓ，６Ｒ）−４−ブチル−２，９，９−トリメチル−３，５−ジオキサ−４−ボラトリシクロ［６．１．１．０２，６］デカン
2003033507.tif 000017
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ：０．８２（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．８Ｈｚ），０．８４（ｓ，３Ｈ），０．８９（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），１．１２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．７Ｈｚ），１．２９（ｓ，３Ｈ），１．３８（ｓ，３Ｈ），１．２４−１．４６（ｍ，４Ｈ），１．８４（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，２．９Ｈｚ，１４．２Ｈｚ），１．８８−１．９４（ｍ，１Ｈ），２．０４（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝５．６Ｈｚ），２．１７−２．２６（ｍ，１Ｈ），２．２９−２．３８（ｍ，１Ｈ），４．２５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，８．３Ｈｚ）
（１Ｓ，２Ｓ，８Ｓ，６Ｒ）−４−ベンジル−２，９，９−トリメチル−３，５−ジオキサ−４−ボラトリシクロ［６．１．１．０２，６］デカン
2003033507.tif 000018
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ：０．８２（ｓ，３Ｈ），１．０６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１１．２Ｈｚ），１．２７（ｓ，３Ｈ），１．３８（ｓ，３Ｈ），１．８２（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，３．４Ｈｚ，１４．２Ｈｚ），１．８５−１．９１（ｍ，１Ｈ），２．０４（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝５．６Ｈｚ），２．１３−２．２１（ｍ，１Ｈ），２．２６−２．３７（ｍ，１Ｈ），２．３３（ｓ，２Ｈ），４．２７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，８．８Ｈｚ），７．０９−７．２７（ｍ，５Ｈ）
製造例  ２
（１Ｓ，２Ｓ，８Ｓ，６Ｒ）−４−［（１Ｓ）−１−クロロ−３−メチルブチル］−２，９，９−トリメチル−３，５−ジオキサ−４−ボラトリシクロ［６．１．１．０２，６］デカン
2003033507.tif 000019
無水テトラヒドロフラン（３０ｍＬ）に塩化メチレン（３ｍＬ）を加え、−１００℃に冷却した。攪拌下にノルマルブチルリチウム（１．６ｍｏｌ／Ｌヘキサン溶液、３０ｍＬ）を滴下した。続いて製造例１で得られた（１Ｓ，２Ｓ，８Ｓ，６Ｒ）−４−イソブチル−２，９，９−トリメチル−３，５−ジオキサ−４−ボラトリシクロ［６．１．１．０２，６］デカン（９．０ｇ）の無水テトラヒドロフラン溶液を滴下した。さらに塩化亜鉛（１．０ｍｏｌ／Ｌエーテル溶液、５９ｍＬ）を滴下し、室温下で一夜攪拌した。溶媒を留去し、エーテル（５００ｍＬ）を加えて氷冷し、攪拌下に飽和塩化アンモニウム水溶液（２５０ｍＬ）を加えた。エーテル層を分離し、水層をさらにエーテル抽出した。エーテル層を合わせ、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を留去し、得られた残渣をヘキサンに溶解し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製し、標題化合物（５．４７ｇ）を油状物として得た（収率５０％）。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ：０．８４（ｓ，３Ｈ），０．８６−０．９６（ｍ，８Ｈ），１．１９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．７Ｈｚ），１．３０（ｓ，３Ｈ），１．４２（ｓ，３Ｈ），１．５８−１．６７（ｍ，１Ｈ），１．７６−１．９７（ｍ，２Ｈ），２．０９（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝５．４Ｈｚ），２．１０−２．２０（ｍ，１Ｈ），２．２９−２．３２（ｍ，１Ｈ），３．５４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．９Ｈｚ，９．８Ｈｚ），４．２６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，８．８Ｈｚ）
同様にして以下の化合物を得た。
（１Ｓ，２Ｓ，８Ｓ，６Ｒ）−４−［（１Ｓ）−１−クロロペンチル］−２，９，９−トリメチル−３，５−ジオキサ−４−ボラトリシクロ［６．１．１．０２，６］デカン
2003033507.tif 000020
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ：０．８５（ｓ，３Ｈ），０．９１（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），１．１８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．７Ｈｚ），１．３０（ｓ，３Ｈ），１．２５−１．５４（ｍ，４Ｈ），１．４２（ｓ，３Ｈ），１．７７−１．９６（ｍ，４Ｈ），２．０９（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝５．６Ｈｚ），２．２０−２．２９（ｍ，１Ｈ），２．３０−２．４０（ｍ，１Ｈ），３．４７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，８．３Ｈｚ），４．３７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，８．８Ｈｚ）
（１Ｓ，２Ｓ，８Ｓ，６Ｒ）−４−［（１Ｓ）−α−クロロフェネチル］−２，９，９−トリメチル−３，５−ジオキサ−４−ボラトリシクロ［６．１．１．０２，６］デカン
2003033507.tif 000021
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ：０．８３（ｓ，３Ｈ），１．０７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１１．２Ｈｚ），１．２８（ｓ，３Ｈ），１．３４（ｓ，３Ｈ），１．８２−１．９３（ｍ，２Ｈ），２．０６（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝５．４Ｈｚ），２．１４−２．２２（ｍ，１Ｈ），２．２９−２．３８（ｍ，１Ｈ），３．１１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１４．２Ｈｚ），３．２０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１４．２Ｈｚ），３．６６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，８．３Ｈｚ），４．３５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，８．８Ｈｚ），７．１９−７．３３（ｍ，５Ｈ）
製造例  ３
（１Ｓ，２Ｓ，８Ｓ，６Ｒ）−４−［（１Ｒ）−１−［Ｎ，Ｎ−ビス（トリメチルシリル）アミノ］−３−メチルブチル］−２，９，９−トリメチル−３，５−ジオキサ−４−ボラトリシクロ［６．１．１．０２，６］デカン
2003033507.tif 000022
製造例２で得られた（１Ｓ，２Ｓ，８Ｓ，６Ｒ）−４−［（１Ｓ）−１−クロロ−３−メチルブチル］−２，９，９−トリメチル−３，５−ジオキサ−４−ボラトリシクロ［６．１．１．０２，６］デカン（５．４７ｇ）の無水テトラヒドロフラン（２５ｍＬ）溶液をアルゴン雰囲気下に−７８℃に冷却した。リチウムビス（トリメチルシリル）アミド（１．０ｍｏｌ／Ｌテトラヒドロフラン溶液、２２ｍＬ）を滴下し、室温まで昇温し、一夜攪拌した。溶媒を留去し、ヘキサンに分散し、析出した塩を濾去した。ヘキサンを留去し、得られた残渣を減圧蒸留し、標題化合物（５．４８ｇ）を油状物として得た（収率７０％）。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ：０．１１（ｓ，１８Ｈ），０．８３（ｓ，３Ｈ），０．８７（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．３Ｈｚ），０．８９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．９Ｈｚ），１．１１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．７Ｈｚ），１．２８（ｓ，３Ｈ），１．３６（ｓ，３Ｈ），１．５０−１．９４（ｍ，５Ｈ），２．０２（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝５．６Ｈｚ），２．１２−２．２４（ｍ，１Ｈ），２．２６−２．３６（ｍ，１Ｈ），２．６３（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），４．２６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，８．８Ｈｚ）
同様にして以下の化合物を得た。
（１Ｓ，２Ｓ，８Ｓ，６Ｒ）−４−［（１Ｒ）−１−［Ｎ，Ｎ−ビス（トリメチルシリル）アミノ］ペンチル］−２，９，９−トリメチル−３，５−ジオキサ−４−ボラトリシクロ［６．１．１．０２，６］デカン
2003033507.tif 000023
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ：０．１０（ｓ，１８Ｈ），０．８３（ｓ，３Ｈ），０．８９（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．１Ｈｚ），１．１２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．７Ｈｚ），１．２８（ｓ，３Ｈ），１．２１−１．４５（ｍ，５Ｈ），１．３７（ｓ，３Ｈ），１．６２−１．７４（ｍ，１Ｈ），１．７９−１．９２（ｍ，２Ｈ），２．０２（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝５．４Ｈｚ），２．１５−２．２３（ｍ，１Ｈ），２．２７−２．３５（ｍ，１Ｈ），２．５２（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），４．２８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，８．８Ｈｚ）
（１Ｓ，２Ｓ，８Ｓ，６Ｒ）−４−［（１Ｒ）−α−［Ｎ，Ｎ−ビス（トリメチルシリル）アミノ］フェネチル］−２，９，９−トリメチル−３，５−ジオキサ−４−ボラトリシクロ［６．１．１．０２，６］デカン
2003033507.tif 000024
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ：０．０６（ｓ，１８Ｈ），０．８２（ｓ，３Ｈ），０．９４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．７Ｈｚ），１．２６（ｓ，３Ｈ），１．３６（ｓ，３Ｈ），１．７２−１．７８（ｍ，１Ｈ），１．８２−１．８７（ｍ，１Ｈ），１．９９（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝５．６Ｈｚ），２．０７−２．１５（ｍ，１Ｈ），２．２３−２．３２（ｍ，１Ｈ），２．６５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，１２．７Ｈｚ），２．８１（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），３．０１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１３．２Ｈｚ），４．２７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，８．８Ｈｚ），７．１１−７．１８（ｍ，１Ｈ），７．２０−７．２８（ｍ，４Ｈ）
製造例  ４
（Ｒ）−ボロロイシン  （＋）−ピナンジオール  エステル  トリフルオロ酢酸塩
2003033507.tif 000025
製造例３で得られた（１Ｓ，２Ｓ，８Ｓ，６Ｒ）−４−［（１Ｒ）−１−［Ｎ，Ｎ−ビス（トリメチルシリル）アミノ］−３−メチルブチル］−２，９，９−トリメチル−３，５−ジオキサ−４−ボラトリシクロ［６．１．１．０２，６］デカン（５．４８ｇ）にペンタン（５０ｍＬ）を加えて溶解し、トリフルオロ酢酸（３．０ｍＬ）を加え、冷蔵庫中で１時間冷却した。析出した結晶を濾取、減圧乾燥し、標題化合物（４．０７ｇ）を得た（収率８０％）。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ：０．８２（ｓ，３Ｈ），０．９２（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．３Ｈｚ），０．９３（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．４Ｈｚ），１．０８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１１．２Ｈｚ），１．２８（ｓ，３Ｈ），１．３９（ｓ，３Ｈ），１．５７−１．６７（ｍ，２Ｈ），１．７３−１．８２（ｍ，１Ｈ），１．８５−１．９３（ｍ，２Ｈ），２．０４（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝５．９Ｈｚ），２．１９−２．３３（ｍ，２Ｈ），２．９２（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝７．８Ｈｚ），４．３３（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，８．８Ｈｚ），７．５０−８．１０（ｂ，２Ｈ）
同様にして以下の化合物を得た。
（Ｒ）−ボロノルロイシン  （＋）−ピナンジオール  エステル  トリフルオロ酢酸塩
2003033507.tif 000026
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ：０．８３（ｓ，３Ｈ），０．８９（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．１Ｈｚ），１．０３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．７Ｈｚ），１．２０−１．４７（ｍ，４Ｈ），１．２９（ｓ，３Ｈ），１．３９（ｓ，３Ｈ），１．７５（ｑｕｉｎｔ．，２Ｈ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），１．８４（ｂｄ，１Ｈ，Ｊ＝１５．１Ｈｚ），１．９２（ｂｓ，１Ｈ），２．０５（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝５．４Ｈｚ），２．１８−２．２８（ｍ，１Ｈ），２．２８−２．３８（ｍ，１Ｈ），２．９２−３．０３（ｂｍ，１Ｈ），４．３６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，８．８Ｈｚ）
（Ｒ）−ボロフェニルアラニン  （＋）−ピナンジオール  エステル  トリフルオロ酢酸塩
2003033507.tif 000027
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ：０．８０（ｓ，３Ｈ），１．０５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１１．２Ｈｚ），１．２６（ｓ，３Ｈ），１．３３（ｓ，３Ｈ），１．７９−１．９３（ｍ，２Ｈ），１．９６（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝５．４Ｈｚ），２．１４−２．２９（ｍ，２Ｈ），３．０３（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．３Ｈｚ，１４．２Ｈｚ），３．１２−３．２５（ｍ，２Ｈ），４．３３（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，８．８Ｈｚ），７．１８−７．３６（ｍ，５Ｈ），７．５７−７．９４（ｂ，１．５Ｈ）
製造例  ５
Ｎ−（２−ピラジニル）ベンジルマロンアミド酸エチル
2003033507.tif 000028
ベンジルマロン酸ジエチル（５２．６ｇ）に２−アミノピラジン（１０．０ｇ）を加え、１６０℃で８時間攪拌した。反応液をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製し、ジイソプロピルエーテルを加えて結晶化し、濾取、減圧乾燥し標題化合物（１７．２ｇ）を得た（収率５５％）。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ：１．１７（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），３．３０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１３．７Ｈｚ），３．３７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１３．７Ｈｚ），３．７０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，８．８Ｈｚ），４．１６（ｑ，２Ｈ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），７．２０−７．３１（ｍ，５Ｈ），８．２６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，２．９Ｈｚ），８．３６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．９Ｈｚ），８．９５（ｂｓ，１Ｈ），９．５０（ｂｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．０Ｈｚ）
同様にして以下の化合物を得た。
Ｎ−（２−ピリジル）ベンジルマロンアミド酸エチル
2003033507.tif 000029
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ：１．１６（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．１Ｈｚ），３．２９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１３．７Ｈｚ），３．３５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１４．１Ｈｚ），３．６４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，８．３Ｈｚ），４．１５（ｑ，２Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），７．０５（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．０Ｈｚ，４．９Ｈｚ，７．３Ｈｚ），７．１８−７．３２（ｍ，５Ｈ），７．７０（ｔｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２．０Ｈｚ），８．１７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．３Ｈｚ），８．２８（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．０Ｈｚ，２．０Ｈｚ，４．９Ｈｚ），８．７７（ｂｓ，１Ｈ）
実施例  １
Ｎ−（２−ピラジニル）ベンジルマロンアミド酸エチル  １−オキシド
2003033507.tif 000030
製造例５で得られたＮ−（２−ピラジニル）ベンジルマロンアミド酸エチル（７．０ｇ）を塩化メチレン（５０ｍＬ）に溶解し、氷冷下に攪拌した。メタクロロ過オキシ安息香酸（４．０ｇ）を徐々に加え、氷冷下に３時間、さらに室温下で１時間攪拌した。反応液を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、溶媒を留去した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製し、低極性側の異性体をジイソプロピルエーテルから結晶化し、濾取、減圧乾燥し、標題化合物（３．０ｇ）を得た（収率４１％）。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ：１．２１（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．１Ｈｚ），３．３３（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１４．２Ｈｚ），３．３７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１３．６Ｈｚ），３．８０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，８．３Ｈｚ），４．１９（ｄｑ，２Ｈ，Ｊ＝１．０Ｈｚ，７．１Ｈｚ），７．１９−７．３２（ｍ，５Ｈ），８．１４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．０Ｈｚ，３．９Ｈｚ），８．２４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．９Ｈｚ），９．６３（ｓ，１Ｈ），１０．５０（ｂｓ，１Ｈ）
同様にして以下の化合物を得た。
Ｎ−（２−ピリジル）ベンジルマロンアミド酸エチル  １−オキシド
2003033507.tif 000031
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ：１．２２（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．１Ｈｚ），３．３２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１４．２Ｈｚ），３．３５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，１４．２Ｈｚ），３．７９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，８．３Ｈｚ），４．１９（ｄｑ，２Ｈ，Ｊ＝１．０Ｈｚ，７．２Ｈｚ），７．００（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，６．３Ｈｚ，７．８Ｈｚ），７．１９−７．３６（ｍ，６Ｈ），８．２４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．０Ｈｚ，６．３Ｈｚ），８．４１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，８．３Ｈｚ），１０．７５（ｂｓ，１Ｈ）
実施例  ２
Ｎ−（２−ピラジニル）ベンジルマロンアミド酸  １−オキシド
2003033507.tif 000032
実施例１で得られたＮ−（２−ピラジニル）ベンジルマロンアミド酸エチル  １−オキシド（３．０ｇ）をテトラヒドロフラン（３５ｍＬ）とエタノール（２５ｍＬ）に溶解した。水酸化カリウム（１．０ｇ）の水溶液（１０ｍＬ）を加え、室温下に一夜攪拌した。塩酸（１．６ｍＬ）を加え、溶媒を留去し、析出した残渣を乾固した。イソプロピルアルコール−メタノールで熱時抽出し、不溶物を濾去した。濾液を濃縮し、ジイソプロピルエーテルを加え、析出した結晶を、濾取、減圧乾燥し、標題化合物（０．９５ｇ）を得た（収率３５％）。
同様にして以下の化合物を得た。
Ｎ−（２−ピリジル）ベンジルマロンアミド酸  １−オキシド
2003033507.tif 000033
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ：３．２８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，１４．２Ｈｚ），３．３３（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１４．６Ｈｚ），３．８６（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），７．０７（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，６．８Ｈｚ，７．８Ｈｚ），７．１７−７．３０（ｍ，５Ｈ），７．５３（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，７．３Ｈｚ，８．８Ｈｚ），８．２９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，６．８Ｈｚ），８．５１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，８．８Ｈｚ），１０．８３（ｂｓ，１Ｈ）
実施例  ３
Ｎ−（２−ピラジニル）ベンジルマロナミル−（Ｒ）−ボロロイシン  （＋）−ピナンジオール  エステル  １−オキシド
2003033507.tif 000034
（Ｒ）−ボロロイシン  （＋）−ピナンジオール  エステル  トリフルオロ酢酸塩（１．１９ｇ）に実施例２で得られたＮ−（２−ピラジニル）ベンジルマロンアミド酸  １−オキシド（０．９０ｇ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール・一水和物（０．５３ｇ）、１−［３−（ジメチルアミノ）プロピル］−３−エチルカルボジイミド・塩酸塩（０．６６ｇ）、ジメチルホルムアミド（２０ｍＬ）、Ｎ−メチルモルホリン（０．７６ｍＬ）を順次加え、室温下に１時間攪拌した。反応溶液を水に注ぎ、酢酸エチル抽出し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を留去し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製し、標題化合物（０．３８ｇ）をアモルファスとして得た（収率２３％）。
同様にして以下の化合物を得た。
Ｎ−（２−ピラジニル）ベンジルマロナミル−（Ｒ）−ボロノルロイシン  （＋）−ピナンジオール  エステル  １−オキシド
2003033507.tif 000035
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ：０．７６−０．８３（ｍ，６Ｈ），１．０３−１．７３（ｍ，１３Ｈ），１．７３−１．８４（ｍ，１Ｈ，ＰＤ  ７−Ｈ），１．８４−１．９５（ｍ，１Ｈ），１．９５−２．３５（ｍ，３Ｈ），３．２５−３．４９（ｍ，４Ｈ），４．２６−４．３３（ｍ，１Ｈ），５．８９（ｂｄ，０．５Ｈ，Ｊ＝５．９Ｈｚ），６．０７（ｂｄ，０．５Ｈ，Ｊ＝４．９Ｈｚ），７．１６−７．３３（ｍ，５Ｈ），８．１３−８．２１（ｍ，２Ｈ），９．６０−９．６２（ｍ，１Ｈ），１１．０４（ｂｓ，０．５Ｈ），１１．２７（ｂｓ，０．５Ｈ）
Ｎ−（２−ピラジニル）ベンジルマロナミル−（Ｒ）−ボロフェニルアラニン  （＋）−ピナンジオール  エステル  １−オキシド
2003033507.tif 000036
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ：０．８２（ｓ，１．５Ｈ），０．８４（ｓ，１．５Ｈ），１．０７（ｄ，０．５Ｈ，Ｊ＝１０．７Ｈｚ），１．１５（ｄ，０．５Ｈ，Ｊ＝１１．７Ｈｚ），１．２６（ｓ，１．５Ｈ），１．２８（ｓ，１．５Ｈ），１．３４（ｓ，１．５Ｈ），１．３８（ｓ，１．５Ｈ），１．７５−２．１９（ｍ，５Ｈ），２．５９−３．５５（ｍ，６Ｈ），４．２８−４．３８（ｍ，１Ｈ），５．９１−６．０１（ｍ，１Ｈ），６．８４−７．４０（ｍ，１０Ｈ），８．１４（ｄ，０．５Ｈ，Ｊ＝３．９Ｈｚ），８．１６（ｄ，０．５Ｈ，Ｊ＝４．４Ｈｚ），８．２１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．９Ｈｚ），９．５６（ｓ，０．５Ｈ），９．５８（ｓ，０．５Ｈ），１０．８４（ｂｓ，０．５Ｈ），１１．０３（ｂｓ，０．５Ｈ）
Ｎ−（２−ピリジル）ベンジルマロナミル−（Ｒ）−ボロノルロイシン  （＋）−ピナンジオール  エステル  １−オキシド
2003033507.tif 000037
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ：０．７８−０．８８（ｍ，６Ｈ），１．１０−１．７０（ｍ，１３Ｈ），１．７６−１．９１（ｍ，２Ｈ），１．９５−２．０６（ｍ，１Ｈ），２．１０−２．３５（ｍ，２Ｈ），３．０５−３．５５（ｍ，４Ｈ），４．２７−４．３２（ｍ，１Ｈ），６．１６（ｂｄ，０．３Ｈ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），６．４０（ｂｄ，０．４Ｈ，Ｊ＝５．４Ｈｚ），６．９３−７．０１（ｍ，１Ｈ），７．１５−７．３４（ｍ，６Ｈ），８．１８−８．２５（ｍ，１Ｈ），８．３６−８．４２（ｍ，１Ｈ），１０．８９（ｂｓ，０．４Ｈ），１１．１５（ｂｓ，０．３Ｈ）
Ｎ−（２−ピリジル）ベンジルマロナミル−（Ｒ）−ボロフェニルアラニン  （＋）−ピナンジオール  エステル  １−オキシド
2003033507.tif 000038
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ：０．８２（ｓ，１．２Ｈ），０．８３（ｓ，１．８Ｈ），１．１２（ｄ，０．４Ｈ，Ｊ＝１０．７Ｈｚ），１．１９（ｄ，０．６Ｈ，Ｊ＝１１．２Ｈｚ），１．２６（ｓ，１．８Ｈ），１．２７（ｓ，１．２Ｈ），１．３３（ｓ，１．２Ｈ），１．３６（ｓ，１．８Ｈ），１．７５−２．３９（ｍ，５Ｈ），２．６４−３．５５（ｍ，６Ｈ），４．２８−４．３６（ｍ，１Ｈ），６．３１（ｂｄ，０．４Ｈ，Ｊ＝４．４Ｈｚ），６．５６（ｂｄ，０．６Ｈ，Ｊ＝３．９Ｈｚ），６．８８−７．３９（ｍ，１２Ｈ），８．０４−８．０９（ｍ，０．６Ｈ），８．１５−８．１９（ｍ，０．４Ｈ），８．３３−８．３７（ｍ，１Ｈ），１０．７５（ｂｓ，０．６Ｈ），１０．９２（ｂｓ，０．４Ｈ）
実施例  ４
Ｎ−（２−ピラジニル）ベンジルマロナミル−（Ｒ）−ボロロイシン  １−オキシド
2003033507.tif 000039
実施例３で得られたＮ−（２−ピラジニル）ベンジルマロナミル−（Ｒ）−ボロロイシン  （＋）−ピナンジオール  エステル  １−オキシド（０．６３ｇ）をアセトン（３６ｍＬ）に溶解し、０．１ｍｏｌ／Ｌ酢酸アンモニウム水溶液（３６ｍＬ）、過ヨウ素酸ナトリウム（１．０１ｇ）を加え、室温下に１５時間攪拌した。析出した結晶を濾取し、水洗、続いてアセトン洗浄、減圧乾燥し、標題化合物（０．４１ｇ）を得た（収率８７％）。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ：０．８１−０．８８（ｍ，６Ｈ），１．１６−１．２２（ｍ，１Ｈ），１．２４−１．３０（ｍ，１Ｈ），１．３７−１．５０（ｍ，１Ｈ），２．７３−２．８４（ｍ，１Ｈ），３．２７−３．３１（ｍ，３Ｈ），７．２０−７．３０（ｍ，５Ｈ），８．２６−８．３０（ｍ，１Ｈ），８．３３−８．３５（ｍ，１Ｈ），９．５０−９．５１（ｍ，１Ｈ）
実施例  ５
Ｎ−（２−ピラジニル）ベンジルマロナミル−（Ｒ）−ボロノルロイシン  １−オキシド
2003033507.tif 000040
Ｎ−（２−ピラジニル）ベンジルマロナミル−（Ｒ）−ボロノルロイシン  （＋）−ピナンジオール  エステル  １−オキシドを原料に用いて実施例４と同様に合成を行ない、標題化合物を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ：０．８３−０．８９（ｍ，３Ｈ），１．１５−１．５０（ｍ，６Ｈ），２．６０−２．６９（ｍ，１Ｈ），３．２７−３．３１（ｍ，３Ｈ），７．１５−７．３２（ｍ，５Ｈ），８．２６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，３．９Ｈｚ），８．３４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．９Ｈｚ），９．４８（ｂｓ，１Ｈ）
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ  ３８３（Ｍ＋Ｈ−Ｈ２Ｏ）＋
実施例  ６
Ｎ−（２−ピラジニル）ベンジルマロナミル−（Ｒ）−ボロフェニルアラニン  １−オキシド
2003033507.tif 000041
Ｎ−（２−ピラジニル）ベンジルマロナミル−（Ｒ）−ボロフェニルアラニン  （＋）−ピナンジオール  エステル  １−オキシドを原料に用いて実施例４と同様に合成を行ない、標題化合物を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ：２．３５−３．６５（ｍ，６Ｈ），５．４０−５．７３（ｍ，１Ｈ），６．７６−７．５１（ｍ，１０Ｈ），７．９３−８．３２（ｍ，２Ｈ），９．３５−９．６２（ｍ，１Ｈ），１０．９２（ｂｓ，０．５Ｈ），１１．１０（ｂｓ，０．５Ｈ）
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ  ４１７（Ｍ＋Ｈ−Ｈ２Ｏ）＋
実施例  ７
Ｎ−（２−ピリジル）ベンジルマロナミル−（Ｒ）−ボロノルロイシン  １−オキシド
2003033507.tif 000042
Ｎ−（２−ピリジル）ベンジルマロナミル−（Ｒ）−ボロノルロイシン  （＋）−ピナンジオール  エステル  １−オキシドを原料に用いて実施例４と同様に合成を行ない、標題化合物を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ：０．８２−０．８９（ｍ，３Ｈ），１．０７−１．４８（ｍ，６Ｈ），２．５８−２．６７（ｍ，１Ｈ），３．２５−３．３７（ｍ，３Ｈ），７．１５−７．３２（ｍ，６Ｈ），７．５２−７．６０（ｍ，１Ｈ），８．２９−８．３３（ｍ，１Ｈ），８．４０−８．４５（ｍ，１Ｈ）
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ  ３８２（Ｍ＋Ｈ−Ｈ２Ｏ）＋
実施例  ８
Ｎ−（２−ピリジル）ベンジルマロナミル−（Ｒ）−ボロフェニルアラニン  １−オキシド
2003033507.tif 000043
Ｎ−（２−ピリジル）ベンジルマロナミル−（Ｒ）−ボロフェニルアラニン  （＋）−ピナンジオール  エステル  １−オキシドを原料に用いて実施例４と同様に合成を行ない、標題化合物を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ：２．６０−３．６５（ｍ，６Ｈ），６．６９−７．６０（ｍ，１２Ｈ），８．００−８．３９（ｍ，２Ｈ）
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ  ４１６（Ｍ＋Ｈ−Ｈ２Ｏ）＋
次に本発明の化合物の薬理効果について述べる。
（１）  プロテアソーム阻害作用
ウシ由来プロテアソームおよびヒト由来プロテアソーム阻害作用の測定
ウシ免疫型プロテアソームはウシの脾臓から精製し、ウシ構成型プロテアソームはウシの腎臓から精製した。
ヒト免疫型プロテアソームはＩＦＮ−γ刺激したＪ１１１細胞から精製し、ヒト構成型プロテアソームは無刺激のＪ１１１細胞から精製した。
各プロテアソームは、０．５〜１．０Ｕ／ｍＬの濃度になるように反応緩衝液（２０ｍｍｏｌ／Ｌ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）＋１ｍｏｌ／Ｌ  ＤＴＴ）で希釈して使用した。キモトリプシン様活性の測定にはＳｕｃ−ＬＬＶＹ−ＭＣＡを基質として使用した。上述の蛍光標識基質は、ペプチド研究所より購入した。
初めに、化合物のＤＭＳＯ溶液を９６穴プレート（Ｕ底）に１μＬ／ｗｅｌｌずつ分注した。そこへ、プロテアソーム溶液（０．５〜１．０Ｕ／ｍＬ）を８９μＬ／ｗｅｌｌずつ分注して、プレートミキサーで混合した後、３７℃で１時間インキュベートした。続いて基質（２００μｍｏｌ／ＬのＳｕｃ−ＬＬＶＹ−ＭＣＡ）を１０μＬ／ｗｅｌｌずつ分注し、プレートミキサーで混合した後、３７℃で１時間インキュベートした。最後に１０％ＳＤＳ溶液を１００μＬ／ｗｅｌｌずつ分注して反応を停止させた後、マイクロプレートリーダー（Ｗａｌｌａｃ  Ａｒｖｏ  １４２０）でλｅｘ＝３５５ｎｍ、λｅｍ＝４６０ｎｍ）における蛍光強度を測定した。測定した蛍光強度を基に、次式でプロテアソーム阻害率を計算した。
2003033507.tif 000044
Ｔは試料溶液、Ｂはブランク溶液、Ｃはコントロール溶液の蛍光強度をそれぞれ示す。
得られたウシ由来プロテアソームの阻害作用を表１に示す。
2003033507.tif 000045
＊  ＭＧ−３０４の構造と名称は以下の通りである。
Ｎ−アセチル−（Ｓ）−ロイシル−（Ｓ）−β−（１−ナフチル）アラニル−（Ｒ）−ボロロイシン
2003033507.tif 000046
この表１から明らかなように、本発明化合物は、免疫型プロテアソームに選択性を有することが明らかになった。
続いてヒト由来プロテアソームの阻害作用を表２に示す。
2003033507.tif 000047
この表２から明らかなように、本発明化合物は、ヒト由来プロテアソームに対しても、免疫型プロテアソームに選択性を有することが明らかになった。
（２）  ＩＢＤ（炎症性腸疾患）に対する作用
ラットＴＮＢＳ大腸炎モデルは炎症性腸疾患治療薬の研究によく用いられる動物モデルの一つである（Ｇ．Ｐ．Ｍｏｒｒｉｓ  ｅｔ．ａｌ．，Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，１９８９，９６，７９５−８０３，Ｂ．Ｚｉｎｇａｒｅｌｌｉ  ｅｔ．ａｌ．，Ａｇｅｎｔｓ  Ａｃｔｉｏｎｓ，１９９３，３９，１５０−１５６）。
モデルは２日間絶食した７週齢のＳＤ系雄性ラットに、トリニトロベンゼンスルホン酸（８０ｍｇ／ｍＬ）の５０％エタノール溶液０．２５ｍＬを経肛門的に注腸して作製した。
実施例  ４記載化合物は０．５％カルボキシメチルセルロースナトリウム＋０．０１％Ｔｗｅｅｎ８０水溶液を基剤とする懸濁液とし、ＴＮＢＳ注腸の前日より１日１回７日間注腸投与した。基剤のみを同様に投与した群をコントロール群とした。
治療薬としての有効性を判断するため、炎症性腸疾患の治療に用いられている免疫抑制剤アザチオプリンを対照薬物として評価した。アザチオプリンは０．５％カルボキシメチルセルロースナトリウム＋０．０１％Ｔｗｅｅｎ８０水溶液を基剤とする懸濁液とし、ＴＮＢＳ注腸の前日より１日１回７日間経口投与した。投与終了の翌日にラットを解剖して大腸を摘出し、大腸炎の重症度を肉眼的に評価したところ、実施例  ４記載化合物、アザチオプリンとも症状を改善したが、実施例  ４記載化合物の改善効果の方がアザチオプリンよりも優れていた。
産業上の利用可能性
本発明によれば、プロテアソーム阻害作用を有する新規なベンジルマロン酸誘導体が得られる。本発明の化合物は、免疫型プロテアソームを選択的に阻害し、構成型プロテアソームへの阻害が弱い、免疫抑制剤、抗炎症剤、抗アレルギー剤、自己免疫疾患治療剤、炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎、クローン病）などの慢性炎症性疾患治療剤、抗がん剤、神経変性疾患治療剤として有用である。
【国際調査報告】
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