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　特願２００３−３５８３１０「超強力小麦系統の作出方法」拒絶査定不服審判事件〔平成１７年５月１２日出願公開、特開２００５−１１７９９０〕について、次のとおり審決する。
【結　論】
　本件審判の請求は、成り立たない。
【理　由】
１　手続の経緯・本願発明
 　本願は、平成１５年１０月１７日の出願であって、その請求項１及び２に係る発明は、平成２１年９月１４日付けの手続補正書により補正された特許請求の範囲の請求項１及び２に記載された事項により特定されるとおりのものと認められ、その請求項１に係る発明は次のとおりのものである。
　
 「以下の工程を含む、超強力小麦系統の作出方法。
　（ａ）5＋10高分子量グルテニンサブユニット又は42kD低分子量グルテニンの少なくとも一方を有する小麦品種又は系統を交配親とする小麦系統から、小麦種子を採取する工程
　（ｂ）上記小麦種子のタンパク質を抽出し、該タンパク質のグルテニン画分を沈殿させる工程
　（ｃ）上記沈殿をpH6-11の溶解バッファーに溶解し、得られたグルテニン溶液をドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）−ポリアクリルアミドゲル電気泳動法に供し、小麦種子タンパク質の高分子量グルテニンを分離する工程
　（ｄ）上記グルテニン溶液をpH6-11の乾燥ゲルストリップの膨潤液に添加したものを二次元ゲル電気泳動法に供し、低分子量グルテニンを分離する工程
　（ｅ）各ゲル上のグルテニンの分離パターンにおいて、5＋10高分子量グルテニンサブユニット又は42kD低分子量グルテニンの少なくとも一方が認められる小麦種子を採取した小麦系統を選抜する工程
　（ｆ）選抜した小麦系統を自殖、又は、他の小麦品種又は系統と交配することによって、その後代において超強力小麦系統を得る工程」（以下、「本願発明」という。）
　
２　引用刊行物とその記載事項
　原査定の拒絶の理由に引用された、本願出願前に頒布された刊行物１（原査定の引用文献１）及び刊行物２（原査定の引用文献２）には下記の事項がそれぞれ記載されている。
　
（１）刊行物１：Ｂｒｅｅｄｉｎｇ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｖｏｌ．５１，２００１，ｐ．１４３−１４６
（１ａ）「Ｃａｎａｄａ　Ｗｅｓｔａｎ　Ｅｘｔｒａ−Ｓｔｒｏｎｇ　Ｒｅｄ　Ｓｐｒｉｎｇ（
ＣＷＥＳＲＳ）小麦は、極めて強いドウ特性を有し
日本小麦の小麦粉品質の改良のために、これらの性質に関連するタンパク質組成を調べ、それらを日本小麦の品種に導入する
ＣＷＥＳＲＳ小麦の品種Ｇｌｅｎｌｅａから、特異なＬＭＷＧ成分を導入した、準同質遺伝子系統（ＮＩＬ
導入されたＬＭＷＧ成分は、製パン品質に極めて強い効果を示した
　
（１ｂ）「植物材料
　
日本の小麦品種春のあけぼの
ＨＭＷＧサブユニット
５＋１０
Ｇｌｅｎｌｅａ
ＨＭＷＧサブユニット
５＋１０
と交配された
この子孫は、春のあけぼので５回戻し交配された
タンパク質成分は
ＳＤＳ−ＰＡＧＥで検査された
グルテインタンパク質は、連続するアセトン沈殿により調製された
　
（１ｃ）「電気泳動パターン
　
ＮＩＬ
春のあけぼの
Ｇｌｅｎｌｅａ
ＳＤＳ−ＰＡＧＥパターンは、図１
ＬＭＷＧ成分は、春のあけぼのとＧｌｅｎｌｅａの間で置換され
容易に識別されるバンドが、ＧｌｅｎｌｅａからのＬＭＷＧ成分のマーカーとして用いられた。ＬＮＷＧの特異なバンドは、図１の大きな矢印で示され、分子量４４ｋＤａと推定された
　
（１ｄ）図１として、「Ｇｌｅｎｌｅａ（１）、準同質遺伝子系統（２）、春のあけぼの（３）のＳＤＳ−ＰＡＧＥパターン。矢印は、春のあけぼのとＧｌｅｎｌｅａ間で置換された、低分子量グルテイン成分を示す。」と説明欄に記載され、ＳＤＳ−ＰＡＧＥパターンが示されている。
　
（１ｅ）製パン品質の評価の項目に、
「ＮＩＬのＳＤＳ沈降容量（６０ｍｌ）は、春のあけぼの（４９ｍｌ）よりも高い値を示した（図２）。ＳＤＳ沈降容量は、ひと塊のパンの容量と、ドウ強度と高い相関性があることを示した（Axford et al.1979,Preston et al.1982）。高いＳＤＳ沈降容量は、強いドウ特性と、高く特異なパン塊の容量を予測した。混合特性は、十分に長いミキシングタイムと優れたミキシングトレランスを一般に意味する良い製パン品質と関連している。ＮＩＬのピークタイム（４．０分）は、春のあけぼの（２．６分）よりも長かった（図３）。春のあけぼののピークタイムは、市販の強力粉と類似の値を示した（データは示さず）。
ＮＩＬは、超強力小麦の粉特性を示し
　
（１ｆ）「特異なＬＭＷＧ成分は、Ｇｌｕ−Ｄ１対立遺伝子のサブユニット５＋１０以外のＨＭＷＧサブユニットより大きなドウ強度を示すことを支持することは、我々以前の研究結果（Takata等　2000b）と比較して合理的である。例えば、サブユニット５＋１０のブレイキングフォースの値は、０．７８Nで、Ｇｌｕ−Ｄ１対立遺伝子のサブユニット２＋１２より大きく、ＬＭＷＧは、０．８０Ｎで、同じ遺伝的背景の春のあけぼののサブユニット５＋１０より大きい。製パン品質における、ＨＭＷＧサブユニット５＋１０とＬＭＷＧ成分の寄与分の違いは、解明されるべく残っている。
特異なＬＭＷＧ成分は、５＋１０サブユニットと比較して、ドウ特性に等価な効果を有しているようである
　
（２）刊行物２：特開平６−１２５６６９号公報
（２ａ）「【請求項１】穀物Ｗｘ遺伝子の発現産物である複数のＷｘタンパク質を、
二次元電気泳動法を用いて分離する
遺伝子発現の確認方法
【請求項２】コムギＷｘ遺伝子の発現産物であるＷｘタンパク質Ｗｘ−Ａ１、Ｗｘ−Ｂ１およびＷｘ−Ｄ１を、二次元電気泳動法を用いて分離することを特徴とする、請求項１記載のＷｘ遺伝子発現の確認方法。
【請求項３】二次元電気泳動法が、等電点電気泳動とＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動との組合わせである、請求項１または２記載のＷｘ遺伝子発現の確認方法。
【請求項４】コムギＷｘ遺伝子Ｗｘ−Ａ１、Ｗｘ−Ｂ１およびＷｘ−Ｄ１を有しそのうちの２種の遺伝子の発現を欠いた６倍体コムギ変異体と、残りの１種の遺伝子の発現を欠いた６倍体コムギ変異体とを交配し、その後代において上記３種の遺伝子の発現を欠いた個体を得ることを特徴とする、モチコムギの
作出方法
　
（２ｂ）「【０００５】〔発明の具体的説明〕・・・
Ｗｘ
遺伝子発現の確認方法
本発明によるＷｘ遺伝子発現の確認方法は、穀物のＷｘ遺伝子の発現産物である複数のＷｘタンパク質を二次元電気泳動法を用いて分離することを特徴とするものであり、特に、コムギにおけるＷｘ遺伝子の発現産物であるＷｘタンパク質Ａ１、Ｂ１およびＤ１を二次元電気泳動法を用いて分離することを特徴とするものであることは前記したところである。従来の
ＳＤＳ−ＰＡＧＥによる電気泳動では
単一のバンドとしてしか検出できなかったが
二次元電気泳動法により、
タンパク質を個々に分離確認
等電点電気泳動とＳＤＳ−ＰＡＧＥの組合わせによる二次元電気泳動
　
（２ｃ）「【０００７】（２）等電点電気泳動
等電点電気泳動の具体的な操作方法は、基本的には前記O'Farrel1 の方法に従うことができるが、一般的な操作の概要は以下に示す通りである。まず、泳動用の支持溶液を作成する。支持溶液は、アクリルアミドを基本とするゲル（通常３０％）溶液が好ましい。ゲル用溶液としては、通常この目的に用いられる任意のものが適用できるが、下記のような組成配合のものが一般的である。
尿素
３０％アクリルアミド溶液（高純度品）
純水
１０％ＮＰ−４０
アンフォライン（ｐＨ３．５〜１０）
アンフォライン（ｐＨ５〜８）
１０％過硫酸アンモニウム
ＴＥＭＤ（テトラメチルエチレンジアミン）
上記の配合およびアンフォラインの組合せは、必要に応じて支持溶液としての機能を維持する範囲で任意に変化させることができる。次に、ゲル溶液を垂直に立てた等電点電気泳動用ガラス管に注入してゲル化させ、上側に前記Ｌｙｓｉｓ緩衝液を重層する。一方の陽極電極槽に酸性溶液（たとえば０．０１Ｎリン酸溶液）を入れ、他方の陰極電極槽に塩基性溶液（たとえば０．０２Ｎ  ＮａＯＨ）を入れて適当な条件で予備通電した後、デンプン試料を前記したように１００〜３００μｌ、より好ましくは２００μｌ程度ゲル上に重層する。適当な泳動条件、通常、４００Ｖ（定電圧）で１６〜１８時間、必要に応じて更に８００Ｖ（定電圧）で１時間程度泳動を行う。泳動条件は全体で５０００〜１００００Ｖ・時間となるようにすることが望ましい。泳動終了後、ガラス管よりゲルを抜き出して適当な緩衝液（たとえばＳＤＳ緩衝液：０．１ＭトリスＨＣｌ（ｐＨ６．８）、２．３％ＳＤＳ、５％β−メルカプトエタノール、１０％グリセロール）で平衡化し、これを二次元目のＳＤＳ−ＰＡＧＥのために使用する。」
　
（２ｄ）「【０００８】（３）ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）
ＳＤＳ−ＰＡＧＥの具体的な操作方法については一般的な文献もしくは書物、（たとえばLaemmli:Nature, ２２７；６８０〜６８５，１９７０年）の方法を参照することができるが、好ましくはLaemmli の変法である低ビス濃度ＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動法（Hirano,J.Protein chem.８：１１５〜１３０，１９８９およびKagawa and Hirano,Japan J.Breed.３８：３２７〜３３２，１９８８）を参照することができる。操作の概要は以下に示す通りである。まず、泳動用の分離ゲル用溶液を作成する。」
　
３　対比・判断
　刊行物１には、ＣＷＥＳＲＳ小麦の品種であるＧｌｅｎｌｅａが極めて強いドウ特性を有すいこと（上記(1a)）、Ｇｌｅｎｌｅａと春のあけぼのがＨＭＷＧサブユニット５＋１０を有すること、両者を交配し、春のあけぼので戻し交配した準同質遺伝子系統（ＮＩＬ）の種子から、グルテインタンパク質をアセトンにより沈殿させること（上記(1b)(1c)）、Ｇｌｅｎｌｅａの特異なＬＭＷＧ（４４ｋＤａと推定）を春のあけぼのに導入したことを、ＳＤＳ−ＰＡＧＥで４４ｋＤａと推定されるバンドをマーカーとして、沈殿を検査すること（上記(1c)(1d)）、ＮＩＬは超強力粉の粉特性を有すること（上記(1e)）が記載されており、上記記載事項から、刊行物１には、
「極めて強いドウ特性を示すＣＷＥＳＲＳ小麦の品種であって、ＨＭＷＧサブユニット５＋１０と、特異なＬＭＷＧ（４４ｋＤａと推定）を有するＧｌｅｎｌｅａを、日本小麦の品種であって、ＨＭＷＧサブユニット５＋１０を有する春のあけぼのと交配し、春のあけぼので戻し交配した準同質遺伝子系統（ＮＩＬ）の種子を採取し、グルテインタンパク質をアセトン沈殿により調製し、沈殿をＳＤＳ−ＰＡＧＥで検査し、４４ｋＤａと推定されるバンドをマーカーとして、上記特異なＬＭＷＧ成分が導入されたことを確認した準同質遺伝子系統（ＮＩＬ）を栽培し、超強力小麦の特性を示す準同質遺伝子系統（ＮＩＬ）を作出する方法」の発明（以下、「刊行物１発明」という。）が記載されていると認められる。
　
　そこで、本願発明と刊行物１発明とを比較する。
（ア）刊行物１発明の「極めて強いドウ特性を示すＣＷＥＳＲＳ小麦の品種であって、ＨＭＷＧサブユニット５＋１０と、特異なＬＭＷＧ（４４ｋＤａと推定）を有するＧｌｅｎｌｅａ」及び「日本小麦の品種であって、ＨＭＷＧサブユニット５＋１０を有する春のあけぼの」は、本願発明の「5+10高分子量グルテニンサブユニット又は42kD低分子量グルテニンの少なくとも一方を有する小麦品種又は系統」である「交配親」に相当する。
　
（イ）刊行物１発明の「準同質遺伝子系統（ＮＩＬ）の種子を採取し、グルテインタンパク質をアセトン沈殿により調製」することは、本願発明の、（ａ）の小麦種子を採取する工程で採取した「上記小麦種子のタンパク質を抽出し、該タンパク質のグルテニン画分を沈殿させる工程」に相当する。
　
（ウ）刊行物１発明は「ＳＤＳ−ＰＡＧＥで検査」することにより、「特異なＬＭＷＧ成分が導入」されたことを確認しており、ＳＤＳ−ＰＡＧＥで「特異なＬＭＷＧ成分」が分離されることは明らかである。また、「ＨＭＷＧサブユニット５＋１０」は、両親が有するものであるから、これも分離されることも明らかである。そして、「ＳＤＳ−ＰＡＧＥ」は「ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）−ポリアクリルアミドゲル電気泳動法」と、「ＬＭＷＧ成分」は低分子量グルテニンと、「ＨＭＷＧ」は高分子量グルテニンと同義である。
　そうすると、刊行物１発明の「沈殿をＳＤＳ−ＰＡＧＥで検査」することと、本願発明の「（ｃ）上記沈殿をpH6-11の溶解バッファーに溶解し、得られたグルテニン溶液をドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）−ポリアクリルアミドゲル電気泳動法に供し、小麦種子タンパク質の高分子量グルテニンを分離する工程」及び「（ｄ）上記グルテニン溶液をpH6-11の乾燥ゲルストリップの膨潤液に添加したものを二次元ゲル電気泳動法に供し、低分子量グルテニンを分離する工程」とは、電気泳動により、高分子量グルテニンと低分子量グルテニンを分離する工程である点で共通する。
　
（エ）刊行物１発明の上記特異なＬＭＷＧ成分について「４４ｋＤａと推定されるバンドをマーカーとして、上記特異なＬＭＷＧ成分が導入されたことを確認」することについて、確認した特異なＬＭＷＧ成分が導入されたものを選抜することは、「超強力小麦の特性を示す準同質遺伝子系統（ＮＩＬ）を作出する方法」においては当然のことであるから、本願発明の「ゲル上のグルテニンの分離パターンにおいて、5＋10高分子量グルテニンサブユニット又は42kD低分子量グルテニンの少なくとも一方が認められる小麦種子を採取した小麦系統を選抜する工程」とは、低分子量グルテニンの分子量が異なるものの、ゲル上のグルテニンの分離パターンにおいて、5＋10高分子量グルテニンサブユニット又は低分子量グルテニンの少なくとも一方が認められる小麦種子を採取した小麦系統を選抜する工程である点で共通する。
　
（オ）刊行物１発明の「準同質遺伝子系統（ＮＩＬ）を栽培し、超強力小麦の特性を示す準同質遺伝子系統（ＮＩＬ）を作出する方法」は、ＮＩＬとなったものの栽培であるから、通常自殖を行うといえ、本願発明の「選抜した小麦系統を自殖、又は、他の小麦品種又は系統と交配することによって、その後代において超強力小麦系統を得る工程」に相当する。
　
　したがって、両者の間には、以下の一致点及び相違点がある。
（一致点）
　以下の工程を含む、超強力小麦系統の作出方法。
　・5＋10高分子量グルテニンサブユニット又は42kD低分子量グルテニンの少なくとも一方を有する小麦品種又は系統を交配親とする小麦系統から、小麦種子を採取する工程
　・上記小麦種子のタンパク質を抽出し、該タンパク質のグルテニン画分を沈殿させる工程
　・上記沈殿を電気泳動法に供し、小麦種子タンパク質の高分子量グルテニン及び低分子量グルテニンを分離する工程
　・ゲル上のグルテニンの分離パターンにおいて、5＋10高分子量グルテニンサブユニット又は低分子量グルテニンの少なくとも一方が認められる小麦種子を採取した小麦系統を選抜する工程
　・選抜した小麦系統を自殖、又は、他の小麦品種又は系統と交配することによって、その後代において超強力小麦系統を得る工程
　
（相違点１）
　電気泳動により高分子量グルテニンと低分子量グルテニンを分離する工程が、本願発明では、「（ｃ）上記沈殿をpH6-11の溶解バッファーに溶解し、得られたグルテニン溶液をドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）−ポリアクリルアミドゲル電気泳動法に供し、小麦種子タンパク質の高分子量グルテニンを分離する工程」及び「（ｄ）上記グルテニン溶液をpH6-11の乾燥ゲルストリップの膨潤液に添加したものを二次元ゲル電気泳動法に供し、低分子量グルテニンを分離する工程」からなるのに対して、刊行物１発明では、「沈殿をＳＤＳ−ＰＡＧＥ」、つまり上記（ｃ）工程の方法だけで分離し、二次元ゲル電気泳動法を用いない点。
　
（相違点２）
　低分子量グルテニンが、本願発明では「42kD」であるのに対して、刊行物１発明では「４４ｋＤａと推定される」ものである点。
　
　そこで、上記各相違点について検討する。
（相違点１について）
　遺伝子発現産物であるタンパク質を、二次元電気泳動を用いて確認して、望む性質を有する品種を作出することが、本願出願前の周知技術であることは、刊行物２（上記(2b)(2c)(2d)）及び以下に示す周知例に記載されるとおりである。
　
　(1)高田兼則，小麦の製パン性の改良について，冬作物研究，第１号，２００１，ｐ．５１−５９，
　「米国カンザス州立大学の育成系統のＫＳ８３１９５７は超強力小麦の特性を示し、これを交配母体に使用して、秋播の超強力小麦系統勝系３３号を育成した。勝系３３号と姉妹系統および親品種との比較から、ＫＳ８３１９５７に由来するＬＭＷＧがＨＭＷＧサブユニット５＋１０と同様に小麦粉生地物性へ極めて大きな効果をもつことが示唆された（図６）。」（５８頁１〜５行）と記載され、
　図６に２次元電気泳動像が示され、「勝系３３号の種子貯蔵タンパク質の
２次元電気泳動像
　(2)Ｐｌａｎｔ　Ｃｅｌｌ　Ｐｈｙｓｉｏｌ．，Ｖｏｌ．２８，Ｎｏ．７，１９８７，ｐ．１１７３−１１７９
　図１（1175頁）にＧＬＥＮＬＥＡのＳＤＳ−ＰＡＧＥが示され、
　図２（1177頁）にＧＬＥＮＬＥＡの２次元電気泳動（ｐＨ３〜１０のアンフォライン及びＳＤＳ−ＰＡＧＥ使用(1174頁２６〜３０行)）が示され、黒矢印が、４８、４７及び４２ｋＤａであること（1176頁１１〜１２行）が記載されている。
　(3)特表平１０−５０６２８１号公報
　サンプルの調製として「次の緩衝液でサンプルを希釈する：２％β−メルカプトエタノール；２％両性
電解質溶液，ｐＨ３〜１０
　二次元ゲル電気泳動（２ＤＧＥ）として「
説明書にしたがって、１１ｃｍのイモビリン・ドライ・ストリップ（Immobiline Dry Strip）を用い、ｐＨ３．０〜１０．５
にて第一次元展開
ＳＤＳ、勾配８〜１８％にて第二次元展開
　(4)国際公開第０１／１４５８２号
　実施例７に「
二次元電気泳動法による
タンパク質の検討
ファルマシア社イモビラインｐＨ６〜１１  ７ｃｍに終夜膨潤
二次元ＳＤＳ−ＰＡＧＥを行った
（以上の下線は当審で付した。）
　
　そして、刊行物１（上記(1c)）には、分子量４４ｋＤａは、推定されるものであることが記載されており、「推定」としていることから、ＳＤＳ−ＰＡＧＥでは特異なＬＭＷＧ成分が明りょうに分離できていないといえるから、特異なＬＭＷＧ成分を明りょうに分離するために、上記のとおり周知技術である、二次元電気泳動を行うことは、当業者が容易になし得たことといえる。
　そして、上記周知例(3)(4)に記載されるように、二次元電気泳動の装置として、本願明細書でも用いている「イモビリン・ドライ・ストリップ（Immobiline Dry Strip）」は、本願優先日前に市販されていたもので、これは本願発明の「乾燥ゲルストリップ」に相当するものであり、ｐＨ３〜１０（周知例(3)）やｐＨ６〜１１（周知例(4)）等のｐＨ勾配を有するものであるから、市販の「乾燥ゲルストリップ」の中から、ＬＭＷＧ成分を分離するのに適したものを選択してｐＨ６〜１１のものを用い、溶解バッファーとして、上記周知例(3)にも記載されるように、イモビリン・ドライ・ストリップと同じｐＨ範囲のものを用いることは、二次元電気泳動を適用した際に当業者が通常行う設計的事項である。
　
（相違点２について）
　刊行物１発明の分子量４４ｋＤａは、ＳＤＳ−ＰＡＧＥで推定されるバンドであるから、上記のとおり二次元電気泳動を適用してＬＭＷＧ成分を明りょうに分離し、４４ｋＤａと推定されるものではなく、この分子量に近く、上記周知例(2)に記載されるようにＧｌｅｎｌｅａが本来有しており、二次元電気泳動で確認できる４２ｋＤａを超強力小麦の特異なＬＭＷＧ成分のマーカーとすることは当業者が容易になし得たことといえる。
　
（本願発明の効果について）
　超強力小麦品種の候補系統を迅速かつ確実に作出できるという効果は、刊行物１の記載事項及び周知技術から予測しえたことであり、格別顕著なものとはいえいない。
　
４　むすび
　以上のとおり、本願請求項１に係る発明は、刊行物１に記載された発明及び周知技術に基づいて当業者が容易に発明をすることができたものであるから、特許法第２９条第２項の規定により特許を受けることができない。
　したがって、その他の請求項に係る発明についての判断を示すまでもなく本願は拒絶すべきものである。
　よって、結論のとおり審決する。