(57)【要約】本発明は、以下の（Ａ）、（Ｂ）及び（Ｃ）から選択されるポリペプチドであって、エイコサノイド受容体としての機能または活性を有するポリペプチド、（Ａ）配列番号２又は２１で示されるアミノ酸配列からなるポリペプチド、（Ｂ）配列番号２又は２１で示されるアミノ酸配列において、１もしくは複数個のアミノ酸が欠失、置換もしくは付加されたアミノ酸配列からなるポリペプチド、（Ｃ）配列番号１又は２０で示される塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズし得る核酸またはその相補物にコードされるポリペプチド、前記ポリペプチドをコードする核酸、これを含有する組換えベクターならびに宿主細胞、これらを用いて、前記ポリペプチドの機能又は活性を検出する方法、並びにこれらを用いて、前記ポリペプチドのリガンドまたは作用薬（アゴニスト又はアンタゴニスト）のスクリーニングまたは同定を行う方法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の（Ａ）、（Ｂ）及び（Ｃ）から選択されるポリペプチドであって、エイコサノイド受容体としての機能または活性を有するポリペプチド。
（Ａ）配列番号２又は２１で示されるアミノ酸配列からなるポリペプチド。
（Ｂ）配列番号２又は２１で示されるアミノ酸配列において、１もしくは複数個のアミノ酸が欠失、置換もしくは付加されたアミノ酸配列からなるポリペプチド。
（Ｃ）配列番号１又は２０で示される塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズし得る核酸またはその相補物によってコードされるポリペプチド。
【請求項２】
ヒトのポリペプチドである、請求の範囲第１項記載のポリペプチド。
【請求項３】
哺乳動物のポリペプチドである、請求の範囲第１項記載のポリペプチド。
【請求項４】
エイコサノイド受容体としての機能または活性が、以下の（ｉ）、（ｉｉ）および（ｉｉｉ）から選択される機能または活性であり、リガンドがエイコサノイドである請求の範囲第１項記載のポリペプチド。
（ｉ）リガンドとの特異的結合。
（ｉｉ）リガンドによる刺激に基づく細胞内シグナル伝達の誘導。
（ｉｉｉ）リガンドによる刺激に基づくＧタンパク質の活性化。
【請求項５】
請求の範囲第１項記載のポリペプチドをコードする核酸。
【請求項６】
以下の（ａ）及び（ｂ）から選択される核酸であって、エイコサノイド受容体としての機能または活性を有するポリペプチドをコードする核酸。
（ａ）配列番号１又は２０で示される塩基配列からなる核酸。
（ｂ）配列番号１又は２０で示される塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸またはその相補物。
【請求項７】
ヒトの核酸である、請求の範囲第６項記載の核酸。
【請求項８】
核酸が哺乳動物に由来する、請求の範囲第６項記載の核酸。
【請求項９】
エイコサノイド受容体としての機能または活性が、以下の（ｉ）、（ｉｉ）および（ｉｉｉ）から選択される機能または活性であり、リガンドがエイコサノイドである請求の範囲第６項記載の核酸。
（ｉ）リガンドとの特異的結合。
（ｉｉ）リガンドによる刺激に基づく細胞内シグナル伝達の誘導。
（ｉｉｉ）リガンドによる刺激に基づくＧタンパク質の活性化。
【請求項１０】
請求の範囲第５項又は第６項記載の核酸を含む組換えベクター。
【請求項１１】
請求の範囲第１０項記載の組換えベクターが導入された宿主細胞。
【請求項１２】
請求の範囲第１項記載のポリペプチドの機能または活性を増強する方法であって、該ポリペプチドの細胞における発現を高めることを含む方法。
【請求項１３】
請求の範囲第５項又は第６項記載の核酸、又はこれを含む組換え発現ベクターを細胞に導入することを含む、請求の範囲第１２記載の方法。
【請求項１４】
請求の範囲第１項記載のポリペプチドの機能または活性を抑制する方法であって、配列番号１で示される塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズするオリゴヌクレオチドまたはその相補物を細胞に導入せしめることを含む方法。
【請求項１５】
請求の範囲第１項記載のポリペプチドの機能または活性を抑制する方法であって、該ポリペプチドを認識する抗体を、細胞と接触せしめることを含む方法。
【請求項１６】
抗体が、請求の範囲第１項記載のポリペプチドの機能または活性を中和する抗体である、請求の範囲第１５項記載の方法。
【請求項１７】
請求の範囲第１項記載のポリペプチドを用いて、該ポリペプチドの以下の（ｉ）、（ｉｉ）及び（ｉｉｉ）から選択される機能または活性を検出する方法。
（ｉ）リガンドとの特異的結合。
（ｉｉ）リガンドによる刺激に基づく細胞内シグナル伝達の誘導。
（ｉｉｉ）リガンドによる刺激に基づくＧタンパク質の活性化。
【請求項１８】
請求の範囲第１項記載のポリペプチドに対するリガンド、アゴニストまたはアンタゴニストのスクリーニングまたは同定方法であって、
該ポリペプチドを試験化合物と接触せしめる工程；及び
該試験化合物の存在下における（１）該受容体タンパク質もしくはポリペプチドと試験化合物との特異的結合、（２）細胞内シグナル伝達、または（３）Ｇタンパク質の活性化を検出する工程；を含む方法。
【請求項１９】
請求の範囲第１項記載のポリペプチドに対するリガンドのスクリーニングまたは同定方法であって、
（１）該ポリペプチドを試験化合物と接触せしめる工程；（２）該ポリペプチドと試験化合物との特異的結合を検出する工程；および（３）試験化合物が該ポリペプチドと結合する能力を有するか否か、または該能力の強さを決定する工程；を含む方法。
【請求項２０】
請求の範囲第１項記載のポリペプチドに対するアゴニストのスクリーニングまたは同定方法であって、
（１）該ポリペプチドを試験化合物と接触せしめる工程；（２）該試験化合物の存在下において、細胞内シグナル伝達またはＧタンパク質の活性化を検出する工程；及び（３）該試験化合物が、該ポリペプチドの刺激に基づいて、細胞内シグナル伝達またはＧタンパク質の活性化を誘導する能力の有するか否か、または該能力の強さを決定する工程；を含む方法。
【請求項２１】
請求の範囲第１項記載のポリペプチドに対するアンタゴニストのスクリーニングまたは同定方法であって、
（１）該ポリペプチドを試験化合物およびリガンドと接触せしめる工程；
（２）該ポリペプチドの機能または活性を検出する工程；および（３）該試験化合物が該ポリペプチドの機能もしくは活性を抑制する能力を有するか否か、または該能力の強さを決定する工程；を含む方法。
【請求項２２】
請求の範囲第１項記載のポリペプチドの機能または活性が、以下の（ｉ）、（ｉｉ）及び（ｉｉｉ）から選択される機能または活性であり、リガンドがエコノサイドである請求の範囲第２１項記載の方法。
（ｉ）リガンドとの特異的結合。
（ｉｉ）リガンドの刺激に基づく細胞内シグナル伝達の誘導。
（ｉｉｉ）リガンドによる刺激に基づくＧタンパク質の活性化。
【請求項２３】
細胞内シグナル伝達が、Ｃａ２＋の濃度変化、ｃＡＭＰの濃度変化、ホスホリパーゼＣの活性化、ｐＨの変化  および  Ｋ＋の濃度変化から選択されるものである請求の範囲第１７項、第１８項、第２０項または第２２項記載の方法。
【請求項２４】
Ｇタンパク質の活性化が、Ｇｉサブファミリーに属するＧタンパク質のαサブユニットの活性化である請求の範囲第１７項、第１８項、第２０項または第２２項記載の方法。
【請求項２５】
エイコサノイドが、５−オキソ−６Ｅ，８Ｚ，１１Ｚ，１４Ｚ−エイコサテトラエン酸、５（Ｓ）−ヒドロペルオキシエイコサ−６Ｅ，８Ｚ，１１Ｚ，１４Ｚ−テトラエン酸、アラキドン酸、エイコサ−５Ｚ，８Ｚ，１１Ｚ−トリエン酸、５−ヒドロキシエイコサ−６Ｅ，８Ｚ，１１Ｚ−トリエン酸、エイコサ−５Ｚ，８Ｚ−ジエン酸、５−ヒドロキシエイコサ−６Ｅ，８Ｚ，１１Ｚ，１４Ｚ−テトラエン酸および５，８，１１−エイコサトリイン酸からなる群より選択されるものである請求の範囲第１７項又は第２２項記載の方法。
【請求項２６】
請求の範囲第１項記載のポリペプチドが、該ポリペプチドを含む膜画分の形態のもの、または、該ポリペプチドが細胞表面上に発現している細胞の形態のものである請求の範囲第１７項〜第２２項のいずれか１項記載の方法。
【請求項２７】
該ポリペプチドが細胞表面上に発現している細胞が、該ポリペプチドをコードする核酸またはこれを含む発現ベクターを導入して該ポリペプチドを過剰発現させた細胞である請求の範囲第２６項記載の方法。
【請求項２８】
医薬の選別、同定もしくは特徴づけのために使用されるものである、請求の範囲第１７項〜第２２項のいずれか１項記載の方法。
【請求項２９】
請求の範囲第２１項又は第２２項記載のスクリーニング又は同定方法により、アンタゴニストを選別又は同定し、当該アンタゴニストを、担体とともに混合することからなる、医薬組成物の製造方法。
【請求項３０】
請求の範囲第１項記載のポリペプチドのアンタゴニストを、請求の範囲第１項記載のポリペプチドを発現している細胞と接触せしめて、該細胞における該ポリペプチドのエイコサノイド受容体としての機能又は活性を抑制する方法。
【請求項３１】
アンタゴニストが、請求の範囲第２１項又は第２２項記載のスクリーニング又は同定方法により選別又は同定された化合物である、前記請求の範囲第２９項記載の方法。
【発明の詳細な説明】
技術分野
本発明は、新規な受容体（エイコサノイド受容体）タンパク質およびその遺伝子に関する。また、これらを用いた医薬品候補化合物のスクリーニング方法に関する。
背景技術
多くの神経伝達物質、ホルモン、オータコイドなどの生理活性物質は、細胞表面に存在する特異的な受容体タンパク質を介して、生体の機能を調節している。このような受容体の多くは、細胞内に存在する三量体のＧＴＰ結合タンパク質（以下、Ｇタンパク質と称する）と共役しており、その活性化を通じて情報を細胞内に伝達することが知られている。このことから、これら受容体はＧタンパク質共役型受容体と総称される。Ｇタンパク質共役型受容体は、いずれも７個の膜貫通領域を含む共通の構造を有していることが知られている。
Ｇタンパク質は、α、β及びγサブユニットで構成される三量体であり、基底状態ではこれらサブユニットが会合した不活性型（ＧＤＰ結合型）として存在する。リガンド刺激を受けたＧタンパク質共役型受容体により、不活性型（ＧＤＰ結合型）Ｇタンパク質が活性型（ＧＴＰ結合型）へと変換され、ＧＴＰと結合したαサブユニット（Ｇα）とβ／γサブユニット複合体（Ｇβγ）とに解離する。そして、ＧＴＰと結合したＧα（また場合によってはＧβγ）が、アデニル酸シクラーゼ、ホスホリパーゼＣなどの効果器を制御してシグナルを伝達する。
また、Ｇタンパク質、特にＧαには、多様性があり、Ｇαの種類によって異なる効果器を制御することも知られており、一般に、Ｇタンパク質共役型受容体は、特定の種類のＧタンパク質を活性化し、そのＧタンパク質により特定の情報を細胞内に伝える。
Ｇタンパク質共役型受容体としては、これまでに、α−及びβ−アドレナリン受容体、ムスカリン性アセチルコリン受容体、アデノシン受容体、アンジオテンシン受容体、エンドセリン受容体、ゴナドトロピン放出因子受容体、Ｈ１−及びＨ２−ヒスタミン受容体、ドーパミン受容体、代謝型グルタミン酸受容体、ソマトスタチン受容体、などが知られている。
いずれも生理活性物質の標的として、生体内での重要な役割を担っている。さらに、現在までに知られている医薬品の多くが、やはりＧタンパク質共役型受容体を標的とするリガンド、あるいはアゴニストやアンタゴニストであったという事実も非常に意義深い。
これらのことから、Ｇタンパク質共役型受容体は、医薬品開発の標的として注目されている。新たなＧタンパク質共役型受容体を見出すこと、そのリガンドを同定すること、及び、それらのアゴニストやアンタゴニストをスクリーニング又は同定する方法を見出すことは、新たな医薬品候補化合物のスクリーニングにつながることから、強く望まれている。
エイコサノイド受容体については、以下のようなことが知られている。エイコサノイドと総称されるなかには、プロスタグランジン、プロスタサイクリン、トロンボキサンチン、ロイコトリエンおよび５−オキソ−ＥＴＥや５−ＨＥＴＥなどのエイコサテトラエン酸が含まれる。これまでにエイコサノイドをリガンドとする受容体として、プロスタグランジンＥＰ１、ＥＰ２、ＥＰ３、ＥＰ４、Ｆ２α受容体、プロスタサイクリンＰＩ２受容体、トロンボキサンチンＴＡ２受容体、ロイコトリエンＢ４受容体が報告されており、すべてＧタンパク質共役型受容体である（Ｎａｒｕｍｉｙａら、Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｒｅｖ．、第７９巻、第１１９３−１２２６頁、１９９９、Ｍｏｈａｍｍｅｄ  Ａｋｂａｒら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、第２７１巻、第１８３６３−１８３６７頁、１９９６）。しかし、本発明で見出した５−オキソ−ＥＴＥなどエイコサテトラエン酸やエイコサトリエン酸をリガンドとする受容体は、これまでに報告されていない。
本発明の目的は、新規Ｇタンパク質共役型受容体およびその遺伝子を提供することにある。より詳細には、新規なエイコサノイド受容体およびその遺伝子を提供することにある。
また、当該受容体タンパク質に対するリガンドおよび作用薬（アゴニスト又はアンタゴニスト）のスクリーニング、同定、特徴付けを行う方法を提供することにある。また、上記以外の目的については、以下の記載より明らかである。
発明の要旨
本発明者らは、新規Ｇタンパク質共役型受容体をコードする全長ｃＤＮＡをヒトから単離した。また、この受容体タンパク質を遺伝子組換え技術により細胞中で発現させることに成功した。さらにこの受容体に対するリガンドを同定し、この受容体が、エイコサノイド受容体であることを見出し、本発明を完成するに到った。
すなわち、本発明は、以下の（Ａ）、（Ｂ）及び（Ｃ）から選択されるポリペプチドであって、エイコサノイド受容体としての機能または活性を有するポリペプチドに関する。
（Ａ）配列番号２又は２１で示されるアミノ酸配列からなるポリペプチド。
（Ｂ）配列番号２又は２１で示されるアミノ酸配列において、１もしくは複数個のアミノ酸が欠失、置換もしくは付加されたアミノ酸配列からなるポリペプチド。
（Ｃ）配列番号１又は２０で示される塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズし得る核酸またはその相補物によってコードされるポリペプチド。
また、本発明は、前記ポリペプチドをコードする核酸にも関する。
また、本発明は、前記核酸を含有する組換えベクターならびに宿主細胞にも関する。
また、本発明は、前記ポリペプチドを用いる該ポリペプチドの機能又は活性検出方法にも関する。また、本発明は、これらを用いて、該ポリペプチドの機能又は活性を変調（増強又は抑制）させる方法にも関する。
さらに、本発明は、これらを用いる前記ポリペプチドのリガンドまたは作用薬（アゴニスト又はアンタゴニスト）のスクリーニング方法または同定方法にも関する。
発明を実施するための最良の形態
後記配列表における配列番号１は、発明者らによって単離された受容体タンパク質（ＴＧ１０１９タンパク質と称する）の遺伝子（ＴＧ１０１９遺伝子と称する）のヒト由来ｃＤＮＡ（翻訳領域全長を含む）の塩基配列を表す。配列番号２は、当該ｃＤＮＡにコードされる受容体タンパク質（ＴＧ１０１９タンパク質）のアミノ酸配列を表す。
本発明の受容体タンパク質は、Ｇタンパク質共役型受容体タンパク質であり、エイコサノイド受容体としての機能（生物学的活性）を有する。したがって、本発明の受容体タンパク質は、エイコサノイドと特異的に結合する。そして、エイコサノイドと本発明の受容体タンパク質との特異的結合により、受容体タンパク質が刺激され、そして細胞内シグナル伝達が誘導される。
本発明の受容体タンパク質のリガンドであるエイコサノイドとは、エイコサン酸等の炭素数２０の脂肪酸に由来する物質をいい、好ましくは、８位が不飽和の脂肪酸である。より詳細には、５−オキソ−６Ｅ，８Ｚ，１１Ｚ，１４Ｚ−エイコサテトラエン酸（５−ｏｘｏ−６Ｅ，８Ｚ，１１Ｚ，１４Ｚ−ｅｉｃｏｓａｔｅｔｒａｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄ，５−オキソ−ＥＴＥと略称）、５−ヒドロペルオキシエイコサ−６Ｅ，８Ｚ，１１Ｚ，１４Ｚ−テトラエン酸（５−ｈｙｄｒｏｐｅｒｏｘｙｅｉｃｏｓａ−６Ｅ，８Ｚ，１１Ｚ，１４Ｚ−ｔｅｔｒａｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄ，５−ＨＰＥＴＥと略称）、アラキドン酸（ａｒａｃｈｉｄｏｎｉｃ  ａｃｉｄまたはｅｉｃｏｓａ−５Ｚ，８Ｚ，１１Ｚ，１４Ｚ−ｔｅｔｒａｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄ）、エイコサ−５Ｚ，８Ｚ，１１Ｚ−トリエン酸（ｅｉｃｏｓａ−５Ｚ，８Ｚ，１１Ｚ−ｔｒｉｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄ）、５−ヒドロキシエイコサ−６Ｅ，８Ｚ，１１Ｚ−トリエン酸（５−ｈｙｄｒｏｘｙｅｉｃｏｓａ−６Ｅ，８Ｚ，１１Ｚ−ｔｅｔｒａｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄ，５−ＨＥＴｒＥと略称）、エイコサ−５Ｚ，８Ｚ−ジエン酸（ｅｉｃｏｓａ−５Ｚ，８Ｚ−ｄｉｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄ）、５−ヒドロキシエイコサ−６Ｅ，８Ｚ，１１Ｚ，１４Ｚ−テトラエン酸（５−ｈｙｄｒｏｘｙｅｉｃｏｓａ−６Ｅ，８Ｚ，１１Ｚ，１４Ｚ−ｔｅｔｒａｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄ，５−ＨＥＴＥと略称）、および５，８，１１−エイコサトリイン酸（５，８，１１−ｅｉｃｏｓａｔｒｉｙｎｏｉｃ  ａｃｉｄ）などをいう。上記リガンドの合成経路図を下記表１に示した。
2003078466.tif 000002
５−オキソ−ＥＴＥは、アラキドン酸から５−ＨＥＴＥを経由して合成され、強力な抗酸球、好中球の走化因子であることが知られている（Ｓｃｈｗｅｎｋら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、第２７０巻、第１５０２９−１５０３６頁、１９９５年、Ｇｕｉｌｂｅｒｔら、Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、第２１巻、第９７−１０４頁、１９９９年）。また、５−オキソ−ＥＴＥは、動物レベルでも好酸球の遊走を誘導することが知られている（Ｓｔａｍａｔｉｏｕら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．、第１０２巻、第２１６５−２１７２頁、１９９８年）。さ（Ｓｔａｍａｔｉｏｕら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．、第１０２巻、第２１６５−２１７２頁、１９９８年）。さらに、この作用は、未同定のＧタンパク質共役型受容体を介した作用であることが推定されている（Ｏ’Ｆｌａｈｅｒｔｙら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、第１６４巻、第３３４５−３３５２頁、２０００年）。
したがって、本発明の新規Ｇタンパク質共役型受容体のアンタゴニストは、抗酸球が関与する喘息などのアレルギーや炎症の治療薬として有用である可能性がある。
アラキドン酸は、プロスタグランジンやロイコトリエンの生合成中間体であり、また、５−ＨＰＥＴＥは、アラキドン酸からロイコトリエンへの生合成の中間体であることが知られている。
５−ｏｘｏＥＴＥや５−ＨＥＴＥは、前立腺ガンや乳がん細胞、肺癌、膵臓癌、中皮腫の成長因子であるとともに、維持因子でもあり、その合成を阻害するとアポトーシスを引き起こすことが知られている（Ｇｈｏｓｈら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．、第２３５巻、第４１８−４２３頁、１９９７年、Ｇｈｏｓｈら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、第９５巻、第１３１８２−１３１８７頁、１９９８年、Ａｖｉｓら、ＦＡＳＥＢＪ．、第１５巻、第２００７−２００９頁、２００１年、Ａｖｉｓら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．、第９７巻、第８０６−８１３頁、１９９６年、Ｄｉｎｇら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．、第２６１巻、第２１８−２２３頁、１９９９年、Ｒｏｍａｎｏら、ＦＡＳＥＢ  Ｊ．、第１５巻、第２３２６−２３３６頁、２００１年）。
したがって、本発明の新規Ｇタンパク質共役型受容体のアンタゴニストは、上記のガンに対する抗ガン剤となる可能性がある。
また、本発明の受容体タンパク質は、リガンド（アゴニスト）により刺激を受けると、Ｇｉサブファミリーに属するＧタンパク質を活性化する。αサブユニットに着目すると、本発明の受容体タンパク質は、リガンド（アゴニスト）による刺激を受けるとＧｉα（Ｇｉサブファミリーに属するＧタンパク質のαサブユニット、例えばＧｉα１）を活性化型（ＧＴＰ結合能を有する状態）に変換する。そして、かかるＧタンパク質の活性化を介して細胞内でシグナルを伝えることができる。
上記の通り、本発明の受容体タンパク質（ポリペプチド）は、以下の（ｉ）〜（ｉｉｉ）の機能を有するものである。
（ｉ）リガンドとの特異的結合。
（ｉｉ）リガンド（アゴニストとして作用するリガンド）による刺激に基づく細胞内シグナル伝達（Ｃａ２＋の濃度変化、ｃＡＭＰの濃度変化、ホスホリパーゼＣの活性化、ｐＨの変化、Ｋ＋の濃度変化など）の誘導。
（ｉｉｉ）リガンド（アゴニストとして作用するリガンド）による刺激に基づくＧタンパク質（Ｇｉサブファミリーに属するＧタンパク質のαサブユニット）の活性化。
ここで、リガンド（アゴニストとして作用するリガンド）としては、例えば、５−オキソ−ＥＴＥ、５−ＨＰＥＴＥ、アラキドン酸、エイコサ−５Ｚ，８Ｚ，１１Ｚ−トリエン酸、５−ＨＥＴｒＥ、エイコサ−５Ｚ，８Ｚ−ジエン酸、５−ＨＥＴＥ、及び５，８，１１−エイコサトリイン酸等のエイコサノイドが挙げられ、これらのうち、５−オキソ−ＥＴＥがとりわけ好適な例として挙げられる。
本発明において「リガンド」とは、受容体タンパク質に特異的に結合することができる化合物を意味する。リガンドには、天然の化合物および人工的に合成された化合物の両方が含まれる。
本発明において「アゴニスト」とは、受容体タンパク質と特異的に結合することなどにより該受容体タンパク質を刺激して細胞内シグナル伝達を誘導する能力を有する化合物を意味する。また、本発明において「アンタゴニスト」とは、受容体タンパク質を刺激して細胞内シグナル伝達を誘導する能力を有する化合物の作用に対して、これを抑制する能力を有する化合物を意味する。
本発明のタンパク質またはポリペプチドとしては、配列番号２で示されるアミノ酸配列からなるものが挙げられる。また、配列番号２で示されるアミノ酸配列において、１もしくは複数個のアミノ酸が欠失、置換もしくは付加されたアミノ酸配列からなるものが挙げられる。アミノ酸の欠失、置換もしくは付加は、エイコサノイド受容体としての機能（生物学的活性；ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｃｔｉｖｉｔｙ）が失われない程度であればよく、通常１〜約８０個、好ましくは１〜約６０個、より好ましくは１〜約４５個、さらに好ましくは１〜約３０個、さらに一層好ましくは１〜約１５個である。
すなわち、本発明のタンパク質またはポリペプチドとしては、配列番号２で示されるアミノ酸配列からなるポリペプチドの他、配列番号２で示されるアミノ酸配列からなるポリペプチドと比較して１もしくはそれ以上の保存的アミノ酸置換（ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｖｅ  ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄ  ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎｓ）を有するポリペプチドが挙げられる。
このようなタンパク質またはポリペプチドには、自然界で発見される変異型タンパク質またはポリペプチドのほか、人為的に改変した変異タンパク質またはポリペプチド、異種生物由来のタンパク質またはポリペプチド等が含まれる。
すなわち、このようなタンパク質またはポリペプチドには、配列番号２で示されるアミノ酸配列からなるポリペプチドの保存的置換変異体（ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｖｅ  ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎ  ｖａｒｉａｎｔｓ）および自然発生対立変異体（ｎａｔｕｒａｌｌｙ  ｏｃｃｕｒｉｎｇ  ａｌｌｅｌｉｃ  ｖａｒｉａｎｔｓ）が含まれる。
このようなタンパク質またはポリペプチドは、配列番号２で示されるアミノ酸配列と、通常約７５％以上、好ましくは約８０％以上、より好ましくは約８５％以上、さらに好ましくは約９０％以上、さらに一層好ましくは約９５％以上のアミノ酸レベルのホモロジーを有する。
本発明の核酸（ＤＮＡ又はＲＮＡ）としては、配列番号１で示される塩基配列からなる核酸を含むものが挙げられる。また、配列番号１で示される塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下（より好ましくはハイストリンジェントな条件下）でハイブリダイズし得る核酸またはその相補物（すなわち相補的配列を有する核酸）を含むものが挙げられる。このようなハイブリダイズし得る核酸は、エイコサノイド受容体としての機能（生物学的活性）を有するタンパク質またはポリペプチドをコードするものであればよい。
このような核酸は、配列番号１で示される塩基配列と、通常約７０％以上、好ましくは約８０％以上、より好ましくは約８５％以上、さらに好ましくは９０％以上、さらに一層好ましくは９５％以上のホモロジーを有する。このような遺伝子又は核酸としては、自然界で発見される変異型遺伝子、人為的に改変した変異型遺伝子、異種生物由来の相同遺伝子（オルソローグ）等が含まれる。
本発明において、ストリンジェントな条件下でのハイブリダイゼーションとは、通常、６×ＳＳＣまたはこれと同等の塩濃度のハイブリダイゼーション溶液中において、５０〜６０℃の温度条件下、約１６時間ハイブリダイゼーションさせ、必要に応じ、６×ＳＳＣまたはこれと同等の塩濃度の溶液等で予備洗浄し、そして１×ＳＳＣまたはこれと同等の塩濃度の溶液中で洗浄することをいう。また、より高いストリンジェンシーを有する条件（ハイストリンジェントな条件）とは、前記において、洗浄を０．１×ＳＳＣまたはこれと同等の塩濃度の溶液中で行うことをいう。
配列のホモロジーは、例えば、ブラスト法（Ｂｌａｓｔ  Ｍｅｔｈｏｄ，Ａｌｔｓｃｈｕｌら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２１５号、４０３−４１０頁、１９９０年）など慣用の方法を用いて解析できる。
本発明の核酸は、哺乳動物の組織や細胞を遺伝子源としてスクリーニングを行うことにより単離取得できる。哺乳動物としては、イヌ、ウシ、ウマ、ヤギ、ヒツジ、サル、ブタ、ウサギ、ラットおよびマウスなどの非ヒト動物のほか、ヒトが挙げられる。これらのうち、ヒトの治療薬の研究開発に利用する上では、ヒト由来のものを用いることが望ましい。
本発明の核酸は、本明細書中に開示された配列情報（後記配列表の配列番号１）を利用して取得することができる。例えば、開示された塩基配列の情報をもとにプライマーやプローブを設計し、これらを用いるＰＣＲ（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  ｃｈａｉｎ  ｒｅａｃｔｉｏｎ）法、コロニーハイブリダイゼーション法、プラークハイブリダイゼーション法を適宜組み合わせて、ＤＮＡライブラリーから選択・取得することができる。
例えば、哺乳動物の細胞や組織から調製したｍＲＮＡからｃＤＮＡを合成し、これを鋳型として、ＰＣＲ法によりｃＤＮＡ断片を得る。得られたｃＤＮＡをプローブとして用い、コロニーハイブリダイゼーション法又はプラークハイブリダイゼーション法によりｃＤＮＡライブラリーをスクリーニングし、そして全長ｃＤＮＡを取得することができる。また、ゲノミックＤＮＡライブラリーをスクリーニングすることにより、ゲノム遺伝子を単離することもできる。また、他の哺乳動物のＤＮＡライブラリーをスクリーニングすることにより、異種生物由来の相同遺伝子（オルソローグ）を単離することもできる。
ｃＤＮＡライブラリーおよびゲノミックＤＮＡライブラリー等のＤＮＡライブラリーは、例えば、「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ」（Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｊ．，Ｆｒｉｔｓｃｈ，Ｅ．Ｆ．およびＭａｎｉａｔｉｓ，Ｔ．著、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓより１９８９年に発刊）に記載の方法により調製することができる。あるいは、市販のライブラリーがある場合はこれを用いてもよい。
得られたｃＤＮＡの塩基配列を決定することにより、遺伝子産物のタンパク質をコードする翻訳領域を決定することができ、このタンパク質のアミノ酸配列を得ることができる。
本発明のタンパク質またはポリペプチドは、通常の遺伝子組換え技術により過剰発現（ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ）させることによって生産することができる。また、他のタンパク質やペプチドとの融合蛋白（ｆｕｓｉｏｎ  ｐｒｏｔｅｉｎ）の形で発現させ生産することもできる。
本発明のタンパク質またはポリペプチドを過剰発現（ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ）させた細胞は、例えば、以下のようにして得ることができる。まず、本発明のタンパク質またはポリペプチドをコードするＤＮＡを、適当なプロモーターの下流に連結される形でベクターに挿入し、発現ベクターを構築する。ついで得られた発現ベクターを宿主細胞に導入する。
この発現系（宿主−ベクター系）としては、例えば、細菌、酵母、昆虫細胞及び哺乳動物細胞の発現系などが挙げられる。このうち、機能がよく保存されたタンパク質を得るためには、昆虫細胞（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ  ＳＦ９、ＳＦ２１等）および哺乳動物細胞（サルＣＯＳ−７細胞、チャイニーズハムスターＣＨＯ細胞、ヒトＨｅＬａ細胞等）を宿主として用いることが好ましい。
本発明のタンパク質またはポリペプチドを発現させるためのプロモーターとしては、哺乳動物細胞系の場合、ＳＶ４０プロモーター、ＬＴＲプロモーター、エロンゲーション１αプロモーター等、昆虫細胞系の場合、ポリヘドリンプロモーター等を用いることができる。
この発現系に用いるベクターとしては、哺乳動物細胞系の場合には、レトロウイルス系ベクター、パピローマウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、ＳＶ４０系ベクター等、昆虫細胞系の場合には、バキュロウイルスベクター等を用いることができる。
本発明のタンパク質またはポリペプチドをコードするＤＮＡとしては、自然界に存在するｍＲＮＡに対応するｃＤＮＡ（例えば、配列番号１に示される塩基配列からなるもの）を用いることができるが、これに限定されない。目的とするタンパク質のアミノ酸配列に対応するＤＮＡを設計して用いることもできる。この場合、ひとつのアミノ酸をコードするコドンは各々１〜６種類知られており、用いるコドンの選択は任意でよいが、例えば発現に利用する宿主のコドン使用頻度を考慮して、より発現効率の高い配列を設計することができる。設計した塩基配列を持つＤＮＡは、ＤＮＡの化学合成、前記ｃＤＮＡの断片化と結合、塩基配列の一部改変等によって取得できる。人為的な塩基配列の一部改変、突然変異導入を、所望の改変をコードする合成オリゴヌクレオチドからなるプライマーを利用したＰＣＲ法や部位特異的突然変異導入法（ｓｉｔｅ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ）（Ｍａｒｋら、Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第８１巻、第５６６２〜５６６６頁、１９８４年）等によって行うことができる。
本発明のタンパク質またはポリペプチドを、発現ベクターを導入した細胞の培養物などから、公知の精製方法（無機塩類による塩析、有機溶媒による分画沈殿、イオン交換樹脂カラムクロマトグラフィー、アフィニティーカラムクロマトグラフィー、ゲルろ過法など）を適宜組合せることによって、分離精製することができる。
本発明のタンパク質またはポリペプチドを過剰発現（ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ）させることにより、細胞における該タンパク質またはポリペプチドの機能又は活性を高める（増強させる）ことができる。
本発明の核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸（オリゴヌクレオチドもしくはポリヌクレオチド）またはその相補物を、本発明の遺伝子を検出するためのプローブとして使用することができる。また、この核酸またはその相補物を、遺伝子の発現を変調（例えば抑制）させるために、例えばアンチセンスオリゴヌクレオチドや、リボザイム、デコイとして使用することもできる。このような核酸としては、例えば、配列番号１示される塩基配列からなる核酸（センス鎖またはアンチセンス鎖）の、原則として連続する１４塩基以上の部分配列もしくはその相補的な配列を有するヌクレオチドを用いることができる。
本発明のタンパク質もしくはポリペプチド、またはこれと免疫学的同等性を有するタンパク質もしくはペプチド（タンパク質の断片または部分配列を有する合成ペプチド等）を抗原として用いて、本発明のタンパク質もしくはポリペプチドを認識する抗体を取得することができる。免役学的同等性を有するとは、例えば本発明のタンパク質もしくはポリペプチドに対する抗体と交差反応を生じるということを意味する。
ポリクローナル抗体は、宿主動物（例えば、ラットやウサギ等）に抗原を接種し、免疫血清を回収する通常の方法により調製することができる。モノクローナル抗体は、通常のハイブリドーマ法などの技術により調製することができる。また、モノクローナル抗体の遺伝子を改変してヒト化モノクローナル抗体等を調製することができる。
上記で得られた抗体を用いて、通常の免疫化学的方法（ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｓｓａｙ法など）により、本発明のタンパク質もしくはポリペプチドの細胞中又は組織中などにおける発現を検出することができる。あるいは、抗体を用いるアフィニティクロマトグラフィーにより本発明のタンパク質もしくはポリペプチドを精製することができる。また、中和抗体を用いて、本発明のタンパク質またはポリペプチドの機能または活性を変調させる（例えば抑制させる）ことができる。
本発明の受容体タンパク質もしくはポリペプチドは、エイコサノイド受容体としての機能または活性（生物学的活性）を有する。かかる機能または活性としては、例えば、以下のようなものが挙げられる。
（ｉ）リガンドとの特異的結合。
（ｉｉ）リガンド（アゴニストとして作用するリガンド）による刺激に基づく細胞内シグナル伝達の誘導。
（ｉｉｉ）リガンド（アゴニストとして作用するリガンド）による刺激に基づくＧタンパク質〔より詳細には、Ｇｉα（Ｇｉサブファミリーに属するＧタンパク質のαサブユニット、例えばＧｉα１など）〕の活性化。
ここでリガンド（アゴニストとして作用するリガンド）としては、エイコサノイド（例えば、５−オキソ−ＥＴＥ、５−ＨＰＥＴＥ、アラキドン酸、エイコサ−５Ｚ，８Ｚ，１１Ｚ−トリエン酸、５−ＨＥＴｒＥ、エイコサ−５Ｚ，８Ｚ−ジエン酸、５−ＨＥＴＥ、および５，８，１１−エイコサトリイン酸など）が挙げられる。
本発明の受容体タンパク質もしくはポリペプチドのかかる機能または活性を、例えば、以下のようにして検出することができる。
前記（ｉ）の機能または活性の検出方法
本発明の受容体タンパク質もしくはポリペプチド（これを含む膜画分の形態、あるいは、これを細胞表面上に発現している細胞の形態のもの等）を、リガンド〔エイコサノイド、例えば、５−オキソ−ＥＴＥ、５−ＨＰＥＴＥ、アラキドン酸、エイコサ−５Ｚ，８Ｚ，１１Ｚ−トリエン酸、５−ＨＥＴｒＥ、エイコサ−５Ｚ，８Ｚ−ジエン酸、５−ＨＥＴＥ、および５，８，１１−エイコサトリイン酸〕と接触せしめ、両者の特異的結合を検出する。かかる結合の検出には、例えば、標識（例えば、ＲＩ標識、蛍光標識など）を付したリガンドを用いることができる。標識を付したリガンドとともに、非標識リガンドを混合して用いる通常の競合アッセイにより特異的結合を検出することができる。
前記（ｉｉ）の機能または活性の検出方法
本発明の受容体タンパク質もしくはポリペプチドを細胞表面に発現している細胞を、リガンド〔エイコサノイド（例えば、５−オキソ−ＥＴＥ、５−ＨＰＥＴＥ、アラキドン酸、エイコサ−５Ｚ，８Ｚ，１１Ｚ−トリエン酸、５−ＨＥＴｒＥ、エイコサ−５Ｚ，８Ｚ−ジエン酸、５−ＨＥＴＥ、および５，８，１１−エイコサトリイン酸等のアゴニストとして作用するもの）と接触せしめ、誘導される細胞内シグナル伝達（例えば、Ｃａ２＋の濃度変化、ｃＡＭＰの濃度変化、ホスホリパーゼＣの活性化、ｐＨの変化、Ｋ＋の濃度変化など）を検出する。本発明の受容体タンパク質もしくはポリペプチドを、より低いレベルで発現している（または発現していない）細胞を対照として用い、このような対照細胞における細胞内シグナル伝達のレベルと比較して、それよりも細胞内シグナル伝達のレベルが高ければ、その程度に応じ（ｉｉ）の機能または活性を有すると認められる。
細胞内シグナル伝達の検出の具体的な方法については、例えば、文献〔Ｃｈｅｎらの方法、Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、第２２６巻、第３４９−３５４頁、１９９５年（Ｃａ２＋の濃度変化、ｃＡＭＰの濃度変化）；  Ｇｒａｍｉｎｓｋｉらの方法、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、第２６８巻、第５９５７−５９６４頁、１９９３年（ホスホリパーゼＣの活性化）；  Ｓａｋｕｒａｉらの方法、Ｃｅｌｌ、第９２巻、第５７３−５８５頁、１９９８年（Ｃａ２＋の濃度変化）；  Ｈｏｌｌｏｐｅｔｅｒらの方法、Ｎａｔｕｒｅ、第４０９巻、第２０２−２０７頁、２００１年（Ｋ＋の濃度変化）；  Ｔａｔｅｍｏｔｏらの方法、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．、第２５１巻、第４７１−４７６頁、１９９８年（ｐＨの変化）；  Ｈｉｎｕｍａらの方法、Ｎａｔｕｒｅ、第３９３巻、第２７２−２７３頁、１９９８年（ａｒａｃｈｉｄｏｎｉｃ  ａｃｉｄ  ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅ  ｒｅｌｅａｓｉｎｇ）；特開平９−２６８号公報など〕に記載された方法に準じて行うことができる。
前記（ｉｉｉ）の機能または活性の検出方法
本発明の受容体タンパク質もしくはポリペプチドとＧｉα（Ｇｉサブファミリーに属するＧタンパク質のαサブユニット、例えばＧｉα１）との融合タンパク質を細胞膜上に発現させた細胞から、膜画分を調製する。この膜画分を、リガンド〔エイコサノイド（例えば、５−オキソ−ＥＴＥ、５−ＨＰＥＴＥ、アラキドン酸、エイコサ−５Ｚ，８Ｚ，１１Ｚ−トリエン酸、５−ＨＥＴｒＥ、エイコサ−５Ｚ，８Ｚ−ジエン酸、５−ＨＥＴＥ、および５，８，１１−エイコサトリイン酸等のアゴニストとして作用するもの〕の存在下および非存在下で、標識したＧＴＰまたはそのアナログ〔例えば、ＧＴＰγＳ（グアノシン５’−Ｏ−（３−チオ三リン酸））など分解されにくいＧＴＰアナログ〕と接触せしめる。その後、標識したＧＴＰまたはそのアナログの膜画分への結合を検出する。リガンドの非存在下での結合レベルと比較して、リガンドの存在下での結合レベルの方がより高ければ、その程度に応じ前記（ｉｉｉ）の機能または活性があるものと認められる。
ここで、Ｇｉα（Ｇｉサブファミリーに属するＧタンパク質のαサブユニット、例えばＧｉα１）及びその遺伝子については、既にアミノ酸配列および塩基配列が知られている〔ヒトＧｉα１（３５１Ｃｙｓ→Ｉｌｅ）／Ｂａｈｉａら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、第３７巻、第１１５５５−１１５６２頁、１９９８年：ヒトＧｉα１／Ｇｅｎｂａｎｋ／ＥＭＢＬ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  ｎｏ．ＡＦＯ５５０１３、ＰＩＲ／ＳＷＩＳＳ−ＰＲＯＴ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  ｎｏ．ＰＯ４８９８：等〕。
従って、ＧｉαをコードするＤＮＡを、開示された既知配列情報を利用して、ＰＣＲ（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  ｃｈａｉｎ  ｒｅａｃｔｉｏｎ）法、コロニーハイブリダイゼーション法、プラークハイブリダイゼーション法またはこれらを適宜組合わせて、ＤＮＡライブラリーから選択・取得することができる。ＧｉαをコードするＤＮＡを、本発明の受容体タンパク質もしくはポリペプチドをコードするＤＮＡの下流に結合し、それを適当なプロモータを含むベクターに組込んで、融合タンパク質を発現させるためのベクターを得ることができる。そして、その融合タンパク質の発現ベクターを、細胞に導入して、融合タンパク質を発現させることができる。
本発明の受容体タンパク質もしくはポリペプチドを、これに対するリガンドまたは作用薬（アゴニストまたはアンタゴニスト）のスクリーニング又は同定のために使用することができる。
本発明の受容体タンパク質もしくはポリペプチドに対するリガンドまたは作用薬（アゴニストまたはアンタゴニスト）のスクリーニングまたは同定方法は、本発明の受容体タンパク質もしくはポリペプチド（これを含む膜画分の形態、あるいは、これを細胞表面上に発現している細胞の形態のもの等）を試験化合物と接触せしめる工程；及び該試験化合物の存在下における（１）該受容体タンパク質もしくはポリペプチドと試験化合物との特異的結合、（２）細胞内シグナル伝達、または（３）Ｇタンパク質（Ｇｉα）の活性化を検出する工程を含む方法を用いて実施することができる。
より詳細には、リガンド、アゴニストおよびアンタゴニストのスクリーニングまたは同定方法は、各々、以下のように実施することができる。
（Ａ）リガンドのスクリーニングまたは同定方法
（１）本発明の受容体タンパク質もしくはポリペプチド（これを含む膜画分の形態、あるいは、これを細胞表面上に発現している細胞の形態のもの等）を試験化合物と接触せしめ、（２）本発明の受容体タンパク質もしくはポリペプチドと試験化合物との特異的結合を検出し、（３）試験化合物が該受容体タンパク質もしくはポリペプチドと結合する能力を有するか否か、または該能力の強さを決定することにより実施できる。
かかる特異的結合の検出は、例えば、標識（例えば、ＲＩ標識、蛍光標識など）を付した既知リガンドを、非標識の試験化合物とともに混合して用いる通常の競合アッセイ法などにより実施することができる。
特異的結合能を有する試験化合物（リガンド）は、作用薬（アゴニストまたはアンタゴニスト）である可能性が高い。
（Ｂ）アゴニストのスクリーニングまたは同定方法
（１）本発明の受容体タンパク質もしくはポリペプチド（これを含む膜画分の形態、あるいは、これを細胞表面上に発現している細胞の形態等）を試験化合物と接触せしめ、（２）該試験化合物の存在下において、細胞内シグナル伝達またはＧタンパク質（Ｇｉα）の活性化を検出し、（３）該試験化合物が、該受容体タンパク質もしくはポリペプチドの刺激に基づいて、細胞内シグナル伝達またはＧタンパク質の活性化を誘導する能力の有するか否か、または該能力の強さを決定することにより実施できる。
細胞内シグナル伝達（例えば、Ｃａ２＋またはｃＡＭＰの濃度変化、ホスホリパーゼＣの活性化、ｐＨの変化、Ｋ＋の濃度変化など）の検出、あるいは、Ｇタンパク質（Ｇｉα）の活性化を、前記と同様の方法を用いて検出することができる。
（Ｃ）アンタゴニストのスクリーニングまたは同定方法
（１）本発明の受容体タンパク質もしくはポリペプチド（これを含む膜画分の形態、あるいは、これを細胞表面上に発現している細胞の形態等）を試験化合物およびリガンド（好ましくは、アゴニストとして作用するリガンド）と接触せしめ、（２）本発明の受容体タンパク質もしくはポリペプチドの機能または活性を検出し、（３）該試験化合物が、本発明の受容体タンパク質もしくはポリペプチドの機能もしくは活性を抑制する能力を有するか否か、または該能力の強さを決定することにより実施できる。
ここで、リガンド（アゴニストとして作用するリガンド）としては、例えば、５−オキソ−ＥＴＥ、５−ＨＰＥＴＥ、アラキドン酸、エイコサ−５Ｚ，８Ｚ，１１Ｚ−トリエン酸、５−ＨＥＴｒＥ、エイコサ−５Ｚ，８Ｚ−ジエン酸、５−ＨＥＴＥ、及び５，８，１１−エイコサトリイン酸等のエイコサノイドが挙げられ、これらのうち、５−オキソ−ＥＴＥがとりわけ好適な例として挙げられる。
また、本発明のタンパク質もしくはポリペプチドの機能または活性としては、前記（ｉ）（ｉｉ）又は（ｉｉｉ）、すなわち
（ｉ）リガンドとの特異的結合、
（ｉｉ）リガンド（アゴニストとして作用するリガンド）による刺激に基づく細胞内シグナル伝達又は
（ｉｉｉ）リガンド（アゴニストとして作用するリガンド）による刺激に基づくＧタンパク質の活性化が挙げられる。
これら機能または活性の検出は、例えば、リガンド（好ましくは、アゴニストとして作用するリガンド）とともに試験化合物を添加もしくは非添加するほかは、前記と同様の方法を適用することにより実施できる。
試験化合物の能力を決定するにあたっては、適切な対照をとることが望ましい。このような対照としては、試験化合物の非存在下での検出・試験、本発明の受容体タンパク質を発現していないか、あるいは同受容体タンパク質の発現レベルがより少ない細胞を用いた検出・試験があげられる。さらに正確な決定のためにこれらの対照を複数組合せてもよい。
前記方法などにより、アンタゴニストとして選別又は同定された化合物は、これを本発明のポリペプチドを発現している細胞と接触せしめることにより、該細胞における該ポリペプチド（エイコサノイド受容体）の機能又は活性を抑制することができる。
また、本発明のポリペプチド（エイコサノイド受容体）に対するアンタゴニストは、医薬の有効成分として使用できることが期待される。従って、前記方法などにより、本発明のポリペプチド（エイコサノイド受容体）に対するアンタゴニストとして選別又は同定された化合物は、医薬の製造のために使用できる。医薬の製造においては、慣用の担体とともに混合して医薬組成物を製造することができ、かかる組成物を医薬として販売することができる。
医薬として用いる際、投与方法は特に限定されず、一般的な経口もしくは非経口的な方法（経口、静脈内、筋肉内、皮下など）を適用すればよい。また、必要に応じては、投与方法に応じた不活性な担体と共に、慣用の医薬製剤（錠剤、顆粒剤、カプセル剤、散剤、注射剤、吸入剤等）として製剤化して用いればよい。例えば、一般的な医薬において許容される結合剤、崩壊剤、増量剤、充填剤、滑沢剤などの賦活剤あるいは希釈剤とともに化合物を用い、通常の方法により、製剤化して用いることができる。
投与量は、投与方法、患者の年令、体重、状態によっても異なるが、一般的な投与量、例えば１日当たり、経口投与の場合は、１〜３００ｍｇ／ｋｇ、非経口投与の場合には、０．０１〜５０ｍｇ／ｋｇの範囲で設定される。
リガンドまたは作用薬のスクリーニング又は同定のために使用する受容体タンパク質もしくはポリペプチドは、受容体タンパク質もしくはポリペプチドを含む膜画分の形態、あるいは、受容体タンパク質もしくはポリペプチドを細胞表面上に発現している細胞の形態等で用いることができる。
受容体タンパク質もしくはポリペプチドを細胞表面上に発現している細胞としては、該受容体タンパク質もしくはポリペプチドを過剰発現（ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ）させた細胞などを用いることができ、例えば、該受容体タンパク質もしくはポリペプチドコードする核酸を含む組換えベクターを導入した細胞などを用いることができる。
組換えベクターを導入する宿主細胞としては、外来受容体タンパク質を、その機能を損なうことなく細胞膜上に発現し得る細胞（哺乳類の細胞、昆虫細胞など）を使用できる。また、宿主細胞としては、組換えベクターを導入する前の細胞それ自体は、対象の受容体タンパク質またはポリペプチドを発現していないか、低いレベルでのみ発現している細胞を用いることが望ましい。
該受容体タンパク質もしくはポリペプチドを含む膜画分は、受容体タンパク質もしくはポリペプチドを発現している細胞を破砕した後、分画遠心分離法や密度勾配遠心分離法などの遠心力を利用した分画法を用いて、調製できる。例えば、細胞破砕液を、低速（約５００〜３０００ｒｐｍ）で短時間（通常、約１〜１０分）遠心し、上清について、さらに高速（約１５０００〜３００００ｒｐｍ）で通常約３０〜１２０分程度遠心し、得られた沈殿画分を、膜画分として用いる。
以下、実施例をもって本発明をさらに詳しく説明するが、これらの実施例は本発明を制限するものではない。
なお、下記実施例において、各操作は特に明示がない限り、「モレキュラークローニング（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ）」（Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｊ．，Ｆｒｉｔｓｃｈ，Ｅ．Ｆ．及びＭａｎｉａｔｉｓ，Ｔ．著、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓより１９８９年に発刊）に記載の方法により行うか、または、市販の試薬やキットを用いる場合には市販品の指示書に従って使用した。
実施例
実施例１  ヒトＴＧ１０１９の単離
（１）ペプチドをリガンドとするＧタンパク質共役型受容体６２個のアミノ酸配列をアライメントし、これらＧタンパク質共役型受容体間でよく保存されているアミノ酸配列（配列番号３）を求めた。この配列（配列番号３）をクエリー配列として、ホモロジー検索法としてｔｂｌａｓｔｎ（Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ＳＦら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、第２１５巻、第４０３−４１０頁、１９９０年）を用いてＮＣＢＩ（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ）のＨｉｇｈ−Ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ  Ｇｅｎｏｍｉｃ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓデータベースを検索した。その結果、クローンＡＣ０１３３９６．３中にホモロジーの高い配列（配列番号４）が見出された。ＡＣ０１３３９６．３の配列を用い、この配列（配列番号４）を含むオープンリーディングフレーム（配列番号５）を推測した。このオープンリーディングフレームにコードされるポリペプチドのアミノ酸配列についてＨＭＭＴＯＰ（膜タンパク質判別および膜貫通ヘリックス予測システム）（Ｔｕｓｎａｄｙ  ＧＥら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、第２８３巻、第４８９−５０６頁、１９９８年）を用いた膜貫通領域の予測および、既知Ｇタンパク質共役型受容体とのホモロジー解析などを行った。その結果、配列番号５に示される塩基配列は、新規Ｇタンパク質共役型受容体の全長をコードするものであることが推測された。
（２）上記（１）のＡＣ０１３３９６．３の塩基配列に基づいてプライマーを設計し、配列番号５を含むＤＮＡをＰＣＲによって取得した。
ヒトｃＤＮＡライブラリ（商品名「Ｈｕｍａｎ  Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  ＱＵＩＣＫ−Ｃｌｏｎｅ  ｃＤＮＡ」；クロンテック社製）を用い、１回目のＰＣＲを行った。その際、センスプライマーとしては、配列番号６に示す塩基配列からなる合成オリゴヌクレオチド（ＡＣ０１３３９６．３の第９７７３５〜９７７６０番目の塩基を含む領域に対応するプライマー）を用い、アンチセンスプライマーとしては、配列番号７に示す塩基配列からなる合成オリゴヌクレオチド（ＡＣ０１３３９６．３の第９６２９９〜９６３２４番目の塩基を含む領域に対応するプライマー）を用いた。これらプライマー及び鋳型ｃＤＮＡを含むＰＣＲ反応液（２５μｌ）〔組成：  鋳型ｃＤＮＡ（商品名「Ｈｕｍａｎ  Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  ＱＵＩＣＫ−Ｃｌｏｎｅ  ｃＤＮＡ」、クロンテック社製）１μｌ、滅菌水１８．５μｌ、ＰＣＲ用緩衝液（Ａｄｖａｎｔａｇｅ  ２  ＰＣＲ  Ｂｕｆｆｅｒ、クロンテック社製）２．５μｌ、デオキシヌクレオチド溶液（ｄＡＴＰ、ｄＣＴＰ、ｄＧＴＰ及びｄＴＴＰ、各１０ｍＭ）０．５μｌ、ポリメラーゼ溶液（Ａｄｖａｎｔａｇｅ  ２  Ｐｏｌｙｍｌｅｒａｓｅ  Ｍｉｘ、クロンテック社製）０．５μｌ、センスプライマー（１０μＭ）１．０μｌ、アンチセンスプライマー（１０μＭ）１．０μｌ〕を調製し、ＰＣＲ〔条件：９４℃、３０秒、（９４℃  ３０秒→６４℃  ３０秒→７２℃  ２．５分）×３０回、７２℃  ２．５分〕を実施した。ついで、前記で得られたＰＣＲ反応液１μｌを鋳型として用い、２回目のＰＣＲを行った。その際、ＰＣＲの反応液組成および反応条件は前記同様とした。得られたＰＣＲ産物をアガロースゲル電気泳動に供し、バンドを切り出して、配列番号５を含むｃＤＮＡ断片（約１５００ｂｐ）を精製取得した。これを、ベクタープラスミド（ｐＧＥＭ−Ｔ  Ｅａｓｙ、プロメガ社製）に連結し、得られたプラスミドを用いて、ｃＤＮＡ断片の塩基配列を決定した。その結果、配列番号１に示した塩基配列（１４６２ｂｐ）を得た。
配列番号１の中には、１つのオープンリーディングフレームが同定された。これにコードされるタンパク質（ＴＧ１０１９タンパク質と称する）のアミノ酸配列（４２３アミノ酸残基）は配列番号２に示した通りであった。配列番号２について、ＨＭＭＴＯＰによる膜貫通領域の予測および、既知Ｇタンパク質共役型受容体とのホモロジー解析を行った。その結果、ＴＧ１０１９タンパク質は、新規なＧ蛋白共役型受容体であると推定され、前記で得られたｃＤＮＡ（１４６２ｂｐ）は、ＴＧ１０１９タンパク質の遺伝子（ＴＧ１０１９遺伝子と称する）の翻訳領域全長を含むｃＤＮＡであると考えられた。図１には、それら塩基配列及びアミノ酸配列とともに、膜貫通領域（下線部）を示した。
配列番号１のＤＮＡ塩基配列を、Ｇｅｎｂａｎｋに登録されたヒトゲノムＤＮＡ配列（Ｇｅｎｂａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＡＣＯ１３３９６（ｖｅｒ３））と比較したところ、４塩基の相違が認められた。相違する塩基は、配列番号１における第４８７番目（Ｇ⇔Ａ）、７７１番目（Ｇ⇔Ａ）、１０２２番目（Ｃ⇔Ａ）及び１０３８番目（Ｇ⇔Ａ）の塩基であった。
これら塩基の相違に伴ない、当該ＤＮＡにコードされるポリペプチドのアミノ酸配列にも３アミノ酸残基の相違が生じ、相違する残基は、配列番号２における第１５０番目（Ｇｌｙ⇔Ａｓｐ）、２４５番目（Ｇｌｕ⇔Ｌｙｓ）及び３３４番目（Ａｌａ⇔Ｔｈｒ）〕の残基であった。
そこで、ヒトｃＤＮＡライブラリー（商品名：Ｍａｒａｔｈｏｎ  Ｒｅａｄｙ  ｃＤＮＡ  ｌｉｂｒａｒｙ，ｈｕｍａｎ  ｆｅｔａｌ  ｓｐｌｅｅｎ；  Ｃｌｏｎｅｔｅｃｈ社製）を鋳型としてＰＣＲ（独立に２回）を行なって、前記の相違が見られた塩基を含むＡｐａＩ断片を取得して、複数クローンについて塩基配列を解析した。
その結果、配列番号１における１０２２番目の塩基の相違（Ｃ⇔Ａ）は、遺伝子多型（ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ）によるものと考えられ、自然発生対立変異体（ｎａｔｕｒａｌｌｙ  ｏｃｃｕｒｒｉｎｇ  ａｌｌｅｌｉｃ  ｖａｒｉａｎｔｓ）に由来すると考えられた。この塩基配列の相違によって、コードされるポリペプチドのアミノ酸配列上の相違は生じない。
一方、配列番号１における第４８７番目（Ｇ⇔Ａ）、７７１番目（Ｇ⇔Ａ）及び１０３８番目（Ｇ⇔Ａ）の塩基における相違は、ＰＣＲエラーによるものと考えられ、これらについては、Ｇｅｎｂａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＡＣＯ１３３９６（ｖｅｒ３）の配列が正しいと考えられた。
すなわち、これらのＰＣＲエラー等を修正した塩基配列は、配列番号１における第４８７番目、７７１番目、１０２２番目及び１０３８番目の塩基が「Ａ」（アデニン）であると考えられ、修正後の塩基配列にコードされるポリペプチドのアミノ酸配列は、配列番号２における第１５０番目、２４５番目及び３３４番目のアミノ酸残基が各々Ａｓｐ、Ｌｙｓ、Ｔｈｒであると考えられた。
ＰＣＲエラー修正後の塩基配列を後記配列表の配列番号２０に、それにコードされるポリペプチドのアミノ酸配列を配列番号２１に各々示した。
実施例２  ＴＧ１０１９遺伝子の発現分布
ヒトの各種組織や細胞におけるＴＧ１０１９遺伝子発現分布を、ドットブロット解析により調べた。ドットブロットは、ヒト組織由来およびヒト培養細胞由来のｍＲＮＡ（ナイロンメンブレンにドットされたもの）（Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ａｒｒａｙ、クロンテック社製）およびＲＩ標識プローブを用いて行った。メンブレンには、図２に示した各種ヒト組織由来およびヒト培養細胞由来のｍＲＮＡ〔ポリ（Ａ）ＲＮＡ〕がドット（吸着固定）されている。
ＲＩ標識プローブは、以下のように調製したものを用いた。すなわち、前記実施例１の（２）項で得たｃＤＮＡ断片を含むプラスミドを制限酵素ＮｏｔＩで処理した後、アガロースゲル電気泳動により約１５００ｂｐのＤＮＡ断片（ＴＧ１０１９遺伝子の翻訳領域全長を含むｃＤＮＡ断片）を精製・取得した。このｃＤＮＡ断片を鋳型とし、ランダムプライマー（ｒａｎｄｏｍ  ｈｅｘａｄｅｏｘｙｒｉｂｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ）、ヌクレオチド混液（ｄＡＴＰ、ｄＧＴＰ及びｄＴＴＰ）およびＤＮＡポリメラーゼＩ（Ｌａｒｇｅ（Ｋｌｅｎｏｗ）Ｆｒａｇｍｅｎｔ）を含むラベリング用キット（Ｐｒｉｍｅ−ａ−Ｇｅｎｅ  Ｌａｂｅｌｉｎｇ  ｓｙｓｔｅｍ、プロメガ社製）と［α−３２Ｐ］ｄＣＴＰを用いてラベリングを行った後、ゲルろ過で精製し、ＲＩ標識プローブを調製した。
ドットブロットのハイブリダイゼーションは、以下のようにして行った。
ｍＲＮＡの固定されたメンブレンを、溶液Ｉ〔Ｓａｌｍｏｎ  Ｔｅｓｔｅｓ  ＤＮＡ（９．４μｇ／μｌ：ＳＩＧＭＡ社製）１６０μｌを９７℃で５分間処理後、氷中で冷却し、これに６０℃のＥｘｐｒｅｓｓＨｙｂ  ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（クロンテック社製）１５ｍｌを加えて調製したもの〕中で、６８℃、３０分間プレインキュベートした。
ついで、このメンブレンを、標識プローブ含有ハイブリダイゼーション溶液〔前記ＲＩ標識プローブ２０μｌ、ヒトＣＯＴ−１  ＤＮＡ（１μｇ／μｌ：Ｒｏｃｈｅ社製）３０μｌ、サケ精巣ＤＮＡ（９．４μｇ／μｌ：ＳＩＧＭＡ社製）１６μｌ、２０×ＳＳＣ（３Ｍ塩化ナトリウム、３００ｍＭクエン酸ナトリウム、ｐＨ７．０）５０μｌ、及びヌクレアーゼフリーＨ２Ｏ（プロメガ社製）８４μｌを加えて、２００μｌの溶液を調製し、これを９７℃で５分間処理後、６８℃で３０分間インキュベートし、さらに５ｍｌの前記溶液Ｉを加えて調製したもの〕中で、６５℃、１２時間ハイブリダイズさせた。ついで、メンブレンを、１％ＳＤＳを含む２×ＳＳＣ（３００ｍＭ塩化ナトリウム、３０ｍＭクエン酸ナトリウム、ｐＨ７．０）にて、６５℃、２０分間、５回、プレ洗浄した後、さらに、０．５％ＳＤＳを含む０．１×ＳＳＣ（１５ｍＭ塩化ナトリウム、１．５ｍＭクエン酸ナトリウム、ｐＨ７．０）にて５５℃、２０分間、２回洗浄した。
イメージアナライザー（Ｂｉｏ−ｉｍａｇｉｎｇ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｓｙｓｔｅｍ  ２０００、フジフィルム社製）を用いてハイブリダイゼーションのシグナルを検出した結果、試験に供したほぼ全ての組織のｍＲＮＡでシグナルが見られた。シグナルが見られた組織の中では、肝臓、腎臓、末梢白血球及び脾臓で比較的強いシグナルが見られた。これらの結果から、ＴＧ１０１９遺伝子は、多くの組織で発現しており、その中でも肝臓、腎臓、末梢白血球及び脾臓での発現が比較的高いと考えられた。
実施例３  ＴＧ１０１９タンパク質（Ｇタンパク質共役型受容体）のリガンド同定
ＴＧ１０１９タンパク質は、前記実施例１の通り、Ｇタンパク質共役型受容体であると推定された。そこで、ＴＧ１０１９タンパク質とＧタンパク質の融合タンパク質を含む膜画分を用い、以下のようにして、ＧＴＰγＳ（グアノシン  ５’−Ｏ−（３−チオ三リン酸））とのリガンド依存的な結合を検出する方法〔Ｗｅｎｚｅｌ−Ｓｅｉｆｅｒｔら、Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、第５８巻、第９５４−９６６頁、２０００年；  Ｂａｈｉａら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、第３７巻、第１１５５５−１１５６２頁、１９９８年〕により、リガンドの同定を行った。
（１）融合タンパク質を発現させるためのプラスミドの調製
以下、（イ）〜（ニ）のようにして、ＴＧ１０１９タンパク質とＧタンパク質〔Ｇｉα１（３５１Ｃｙｓ→Ｉｌｅ）、Ｇｑα、又はＧｓαＬ〕との融合タンパク質を発現させるためのプラスミドを調製した。また、融合タンパク質の概略図を図３に示した。ここで、Ｇｉα１（３５１Ｃｙｓ→Ｉｌｅ）は、Ｇｉα１タンパク質の３５１番目のシステイン残基をイソロイシン残基に変換した変異型Ｇｉα１タンパク質を意味する。
（イ）ＴＧ１０１９遺伝子ｃＤＮＡの調製
前記実施例１の（２）項で得られたＴＧ１０１９遺伝子ｃＤＮＡ（翻訳領域全長を含む）を含むプラスミドを鋳型として用い、ＰＣＲを行った。
その際、センスプライマー（プライマーＴＧ１０１９−１）及びアンチセンスプライマー（プライマーＴＧ１０１９−２）としては、各々、配列番号８および配列番号９に示す塩基配列を有する合成オリゴヌクレオチドを用いた。
これらプライマーはＴＧ１０１９遺伝子のｃＤＮＡ塩基配列（配列番号１）を元に設計したものであり、ＰＣＲ産物として、ＴＧ１０１９タンパク質の全長をコードするｃＤＮＡ（終止コドンを除く）を含み、その両端に制限酵素認識部位（Ｎ末端にＢｇｌＩＩ部位、Ｃ末端にＣｐｏＩおよびＨｉｎｄＩＩＩ部位）が付加されたＤＮＡ断片が得られるよう設計されている。
かくして、得られたＰＣＲ産物を、ベクタープラスミド（ＰＣＲ産物クローニング用ベクターシステム）（ｐＧＥＭ−Ｔ  Ｅａｓｙ  Ｖｅｃｔｏｒ、プロメガ社製）に連結し、得られたプラスミドを、制限酵素ＮｏｔＩ及びＣｐｏＩで処理して、生じた約１３００ｂｐのＤＮＡ断片を回収した。
（ロ）Ｇタンパク質（Ｇｉα１（３５１Ｃｙｓ→Ｉｌｅ））との融合タンパク質発現用プラスミドの調製
ヒト脳由来ｃＤＮＡ（Ｍａｒａｔｈｏｎ−Ｒｅａｄｙ  ｃＤＮＡ  Ｂｒａｉｎ、クロンテック社製）を鋳型として用い、ＰＣＲを行った。その際、センスプライマー（プライマーＧｉα１−１）及びアンチセンスプライマー（プライマーＧｉα１−２）としては、各々、配列番号１０および配列番号１１に示す塩基配列を有する合成オリゴヌクレオチドを用いた。
これらプライマーは、Ｇｉα１タンパク質をコードするｃＤＮＡの既知塩基配列（Ｇｅｎｂａｎｋ／ＥＭＢＬ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  ｎｏ．ＡＦＯ５５０１３）を元に設計したものであり、ＰＣＲ産物としてＧｉα１タンパク質の全長をコードするｃＤＮＡが得られるよう設計されている。
ついで、前記ＰＣＲで得られた産物を鋳型として、２回目のＰＣＲを行った。その際、センスプライマー（プライマーＧｉα１−３）及びアンチセンスプライマー（プライマーＧｉα１−４）としては、各々、配列番号１２および配列番号１３に示す塩基配列を有する合成オリゴヌクレオチドを用いた。
これらプライマーは、ＰＣＲ産物として、Ｇｉα１（３５１Ｃｙｓ→Ｉｌｅ）（Ｇｉα１タンパク質の３５１番目のシステイン残基がイソロイシン残基に置換された変異型Ｇｉα１タンパク質）の全長をコードするｃＤＮＡを含み、その両端に制限酵素認識部位（ＣｐｏＩ部位およびＢａｍＨＩ部位）が付加されたＤＮＡ断片が得られるように設計されている。
得られたＰＣＲ産物を、ベクタープラスミド（ｐＧＥＭ−Ｔ  Ｅａｓｙ  Ｖｅｃｔｏｒ、プロメガ社製）に連結した。このプラスミドを制限酵素ＮｏｔＩ及びＢａｍＨＩで処理し、生じた約１１００ｂｐのＤＮＡ断片を、バキュロウイルスベクタープラスミドｐＶＬ１３９２（ファーミンジェン社製）のＮｏｔＩ／ＢａｍＨＩ部位に挿入して、プラスミドｐＶＬ１３９２／Ｇｉα１（３５１Ｃｙｓ→Ｉｌｅ）を得た。
このプラスミドの制限酵素ＮｏｔＩ／ＣｐｏＩ部位に、前記（イ）で得たＤＮＡ断片を挿入し、融合タンパク質発現用プラスミド  ｐＶＬ１３９２／ＴＧ１０１９−Ｇｉα１（３５１Ｃｙｓ→Ｉｌｅ）を得た。
（ハ）Ｇタンパク質（Ｇｑα）との融合タンパク質発現用プラスミドの調製
ヒト前立腺由来ｃＤＮＡ（Ｍａｒａｔｈｏｎ−Ｒｅａｄｙ  ｃＤＮＡ  Ｐｒｏｓｔａｔｅ、クロンテック社製）を鋳型として用い、ＰＣＲを行った。その際、センスプライマー（プライマーＧｑα−１）及びアンチセンスプライマー（プライマーＧｑα−２）としては、各々、配列番号１４および配列番号１５に示す塩基配列を有する合成オリゴヌクレオチドを用いた。これらプライマーは、ＧｑαをコードするｃＤＮＡの既知塩基配列（Ｇｅｎｂａｎｋ／ＥＭＢＬ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  ｎｏ．Ｕ４３０８３）を元に設計したものであり、ＰＣＲ産物としてＧｑαの全長をコードするｃＤＮＡが得られるよう設計されている。
ついで、前記ＰＣＲで得られた産物を鋳型として、２回目のＰＣＲを行った。その際、センスプライマー（プライマーＧｑα−３）及びアンチセンスプライマー（プライマーＧｑα−４）としては、各々、配列番号１６および配列番号１７に示す塩基配列を有する合成オリゴヌクレオチドを用いた。これらプライマーは、ＰＣＲ産物として、Ｇｑαの全長をコードするｃＤＮＡを含み、その両端に制限酵素認識部位（ＣｐｏＩ部位およびＢａｍＨＩ部位）が付加されたＤＮＡ断片が得られるように設計されている。
得られたＰＣＲ産物を、ベクタープラスミド（ｐＧＥＭ−Ｔ  Ｅａｓｙ  Ｖｅｃｔｏｒ、プロメガ社製）に連結した。得られたプラスミドを制限酵素ＮｏｔＩ及びＢａｍＨＩで処理し、生じた約１１００ｂｐのＤＮＡ断片を、バキュロウイルスベクタープラスミドｐＶＬ１３９２のＮｏｔＩ／ＢａｍＨＩ部位に挿入して、プラスミドｐＶＬ１３９２／Ｇｑαを得た。
このプラスミドの制限酵素ＮｏｔＩ／ＣｐｏＩ部位に、前記（イ）で得たＤＮＡ断片を挿入し、融合タンパク質発現用プラスミド  ｐＶＬ１３９２／ＴＧ１０１９−Ｇｑαを得た。
（ニ）Ｇタンパク質（ＧｓαＬ）との融合タンパク質発現用プラスミドの調製
ヒト骨髄由来ｃＤＮＡ（Ｍａｒａｔｈｏｎ−Ｒｅａｄｙ  ｃＤＮＡ  Ｂｏｎｅ  ｍａｒｒｏｗ、クロンテック社製）を鋳型として用い、ＰＣＲを行った。その際、センスプライマー（プライマーＧｓαＬ−１）及びアンチセンスプライマー（プライマーＧｓαＬ−２）としては、各々、配列番号１８および配列番号１９に示す塩基配列を有する合成オリゴヌクレオチドを用いた。
これらプライマーは、ＧｓαＬをコードするｃＤＮＡの既知塩基配列（Ｇｅｎｂａｎｋ／ＥＭＢＬ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  ｎｏ．ＸＯ４４０８）を元に設計されたものであり、ＰＣＲ産物としてＧｓαＬの全長をコードするｃＤＮＡを含み、その両端に制限酵素認識部位（ＣｐｏＩ部位およびＸｂａＩ部位）が付加されたＤＮＡ断片が得られるように設計されている。
得られたＰＣＲ産物を、ベクタープラスミド（ｐＧＥＭ−Ｔ  Ｅａｓｙ  Ｖｅｃｔｏｒ、プロメガ社製）に連結した。得られたプラスミドを制限酵素ＮｏｔＩ及びＸｂａＩで処理し、生じた約１２００ｂｐのＤＮＡ断片を、バキュロウイルスベクタープラスミドｐＶＬ１３９２（ファーミンジェン社製）のＮｏｔＩ／ＸｂａＩ部位に挿入して、プラスミドｐＶＬ１３９２／ＧｓαＬを得た。
このプラスミドの制限酵素ＮｏｔＩ／ＣｐｏＩ部位に、前記（イ）で得たＤＮＡ断片を挿入し、融合タンパク質発現用プラスミド  ｐＶＬ１３９２／ＴＧ１０１９−ＧｓαＬを得た。
（２）融合タンパク質を含む膜画分の調製
前記（１）の（ロ）〜（ニ）で得られた３種の発現用プラスミドは、図３（概略図）で示したように、ＴＧ１０１９タンパク質のＣ末端に付加されたリンカー配列（−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−）を介して、ＴＧ１０１９タンパク質（全長）とＧタンパク質〔Ｇｉα１（３５１Ｃｙｓ→Ｉｌｅ）、Ｇｑα又はＧｓαＬ〕が連結した構造の融合タンパク質を発現するプラスミドである。
これら融合タンパク質発現用プラスミドｐＶＬ１３９２／ＴＧ１０１９−Ｇｉα１（３５１Ｃｙｓ→Ｉｌｅ）、ｐＶＬ１３９２／ＴＧ１０１９−Ｇｑα又はｐＶＬ１３９２／ＴＧ１０１９−ＧｓαＬを、以下のようにして、昆虫細胞内で発現させ、融合タンパク質を含む膜画分を調製した。
まず、昆虫細胞  Ｓｆ９（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ  ＳＦ９）（ファーミンジェン社製）をコラーゲンコート処理済みの３ｃｍシャーレに約６０％コンフルエントとなるように、１．５ｍｌの培地〔１０％ウシ胎仔血清、０．１ｍｇ／ｍｌストレプトマイシンおよび１００Ｕ／ｍｌペニシリンを含むＧｒａｃｅ’ｓ  Ｉｎｓｅｃｔ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｕｍ（ｐＨ６．２：ライフテックオリエンタル社製）］中で２７℃で１５分間インキュベートした。
培地を取り除き、トランスフェクション用緩衝液（Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ  Ｂｕｆｆｅｒ  Ａ、ファーミンジェン社製）３７５μｌを加えた後、予め調製しておいたＤＮＡ溶液〔融合タンパク質発現用プラスミド１μｇ、Ｌｉｎｅａｒｉｚｅｄ  ＢａｃｕｌｏＧｏｌｄ  Ｂａｃｕｌｏｖｉｌｕｓ  ＤＮＡ（ファーミンジェン社製）０．１２５μｇ、滅菌水２５μｌ中で混和し、２５℃で１５分間インキュベートした後、Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ  Ｂｕｆｆｅｒ  Ｂ（ファーミンジェン社製）３７５μｌを加えたもの〕４００μｌを滴下した。
これを２７℃で４時間培養した後、培養液を除き、培地１．２ｍｌを加えて２７℃で５日間培養した。得られた培養液を遠心分離（１，０００×ｇ、５分間）し、上清をウイルス液Ｉとして回収した。
Ｓｆ９細胞をコラーゲンコート処理済みの３ｃｍシャーレに約３０％コンフルエントとなるように播き、前記で得たウイルス液Ｉ（１００μｌ）と培地１．２ｍｌを加えて２７℃で４日間培養した。得られた培養液を遠心分離（１，０００×ｇ、５分間）し、その上清をウイルス液１１として回収した。
Ｓｆ９細胞をコラーゲンコート処理済みの１０ｃｍシャーレに約７０％コンフルエントとなるように播き、前記で得たウイルス液ＩＩ（５００μｌ）と培地１２ｍｌを加え、２７℃で４日間培養した。こうして得られた培養液を遠心分離（１，０００×ｇ、５分間）し、その上清をウイルス液ＩＩＩとして回収した。
Ｓｆ９細胞をコラーゲンコート処理済みの１０ｃｍシャーレに約７０％コンフルエントとなるように播き、前記で得たウイルス液ＩＩＩ（１００μｌ）と培地１２ｍｌを加え、２７℃で４日間培養した。こうして得られた細胞を冷却したＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水，ｐＨ７．４）で洗浄後、冷却した溶解緩衝液〔２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，ｐＨ７．５、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．２ｍＭフッ化フェニルメチルスルホニル、１０μｇ／ｍｌペプスタチン、１０μｇ／ｍｌロイペプチン、および２μｇ／ｍｌアプロチニン〕３．６ｍｌに懸濁し、テフロンホモジナイザーを用いて細胞を破砕した。この細胞破砕液を遠心分離（６００×ｇ、１０分間）し、得られた上清をさらに遠心分離（５０，０００×ｇ、２０分間）した。得られた沈殿物を冷却した反応緩衝液〔２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，ｐＨ７．５、５０ｍＭ塩化ナトリウム、１０ｍＭ塩化マグネシウム〕４５０μｌに、テフロンホモジナイザーを用いて懸濁して、融合タンパク質を発現した膜画分を得た。
（３）融合タンパク質を含む膜画分とＧＴＰγＳとの結合試験
前記（２）で得た膜画分（４５０μｌ）を反応緩衝液（７．５４ｍｌ）に懸濁し、これにＧＤＰ（１０ｍＭ）１０μｌを加えた。この溶液１６０μｌに試験検体２０μｌを加え、３０℃で１０分間インキュベーションした後、［３５Ｓ］ＧＴＰγＳ（５ｎＭ，５ｎＣｉ／μｌ：アマシャム  ファルマシア  バイオテク社製）２０μｌを加え、反応を開始した。３０℃で１時間インキュベーションした後、ガラスフィルター（ＵｎｉＦｉｌｔｅｒ−９６ＧＦ／Ｂ、パッカード社製）を用いてろ過することで反応を停止した。フィルターを、冷却した反応緩衝液２００μｌで３回洗浄した後、フィルター上の［３５Ｓ］ＧＴＰγＳ量（膜画分との結合量）を液体シンチレーション測定法によって測定した。こうして測定した［３５Ｓ］ＧＴＰγＳ結合量から、非特異的結合量（１０μＭＧＴＰγＳ存在下で測定した結合量）を差し引き、［３５Ｓ］ＧＴＰγＳの特異的結合量を求めた。
核酸、アミノ酸、ペプチド関連化合物、組織抽出物および脂質関連化合物約３７０種を試験検体として検定した。その結果（図４）、ＴＧ１０１９タンパク質とＧｉα１（３５１Ｃｙｓ→Ｉｌｅ）との融合タンパク質を含む膜画分を用いた場合、５−オキソ−ＥＴＥ、５−ＨＰＥＴＥ、アラキドン酸、エイコサ−５Ｚ，８Ｚ，１１Ｚ−トリエン酸、５−ＨＥＴｒＥ、エイコサ−５Ｚ，８Ｚ−ジエン酸、５−ＨＥＴＥおよび５，８，１１−エイコサトリイン酸を添加することによって濃度依存的に［３５Ｓ］ＧＴＰγＳの特異的結合量が増加した。
ＴＧ１０１９タンパク質とＧｓαＬとの融合タンパク質を含む膜画分を用いた場合には、これら化合物による特異的結合量の増加は、認められなかった。一方、ＴＧ１０１９タンパク質とＧｑαとの融合タンパク質を含む膜画分を用いた場合は、５（Ｓ）−ＨＰＥＴＥにて特異的結合量が増加したが、Ｇｉαにおける場合と比較するとその増加量は小さいものであった。
これらの結果から、ＴＧ１０１９タンパク質は、Ｇｉα１あるいはＧｑαタンパク質と共役するタイプのＧタンパク質共役型受容体であると考えられた。また、５−オキソ−ＥＴＥ、５−ＨＰＥＴＥ、アラキドン酸、エイコサ−５Ｚ，８Ｚ，１１Ｚ−トリエン酸、５−ＨＥＴｒＥ、エイコサ−５Ｚ，８Ｚ−ジエン酸、５−ＨＥＴＥおよび５，８，１１−エイコサトリイン酸がそのリガンド（アゴニスト）として作用することが明らかとなった。
すなわち、ＴＧ１０１９タンパク質は、５−オキソ−ＥＴＥ、５−ＨＰＥＴＥ、アラキドン酸、エイコサ−５Ｚ，８Ｚ，１１Ｚ−トリエン酸、５−ＨＥＴｒＥ、エイコサ−５，８−ジエン酸、５−ＨＥＴＥ、および５，８，１１−エイコサトリイン酸をリガンド（アゴニスト）とするエイコサノイドの受容体であると考えられた。
実施例４    ＴＧ１０１９タンパク質（Ｇタンパク質共役型受容体）のアンタゴニストの同定
５−オキソ−ＥＴＥ（アゴニストとして作用するリガンド）及び試験化合物の存在下、５−オキソ−ＥＴＥ刺激に基づくＴＧ１０１９タンパク質のＧタンパク質活性化作用を検出し、試験化合物の拮抗作用を調べた。
Ｇタンパク質活性化の検出は、ＴＧ１０１９タンパク質とＧｉα１との融合タンパク質を含む膜画分および標識ＧＴＰγＳを用いて、前記実施例３の（３）と同様にして実施した。
すなわち、ＴＧ１０１９タンパク質とＧｉα１との融合タンパク質を含む膜画分（４５０μｌ）を反応液（７．５４ｍｌ）に懸濁し、これにＧＤＰ（１０ｍＭ）１０μｌを加えた。この溶液１６０μｌに、５−オキソ−ＥＴＥ（最終濃度０．１μＭ）及び各種濃度の試験化合物（０Ｍ、１０−７Ｍ〜１０−５Ｍ）を添加して、３０℃で１０分間インキュベーションした。（５−オキソ−ＥＴＥ及び試験化合物の合計液量：２０μｌ）
これに〔３５Ｓ〕ＧＴＰγＳ  ２０μｌを加えて反応を開始し、３０℃で１時間インキュベーションした後、ガラスフィルターでろ過することにより反応を停止した。
フィルター上の〔３５Ｓ〕ＧＴＰγＳ量（膜画分との結合量）を液体シンチレーションにより測定し、測定した〔３５Ｓ〕ＧＴＰγＳ量から、非特異的結合量（１０μＭＧＴＰγＳ存在下で測定した時の結合量）を差引き、特異的結合量を求めた。
その結果、種々のポリ不飽和脂肪酸化合物は、５−オキソ−ＥＴＥ刺激に基づくＴＧ１０１９タンパク質のＧタンパク質活性化作用を抑制し、拮抗作用を示すことがわかった。
このように、ＴＧ１０１９タンパク質（Ｇタンパク質共役型受容体）のアンタゴニストとして作用するものとして同定されたこれら化合物及びそのＩＣ５０値を下記表２に示した。
2003078466.tif 000003
実施例５  ＴＧ１０１９タンパク質（Ｇタンパク質共役型受容体）のＣＨＯ細胞中での発現と機能の確認
以下のようにして、ＴＧ１０１９タンパク質発現用ベクターをＣＨＯ細胞に一過性（ｔｒａｎｓｉｅｎｔｌｙ）に導入して組換え型ＴＧ１０１９タンパク質を発現させ、この細胞を用いてＴＧ１０１９タンパク質のエイコサノイド受容体としての機能を確認した。
まず、前記実施例１（１）（イ）で得たＴＧ１０１９タンパク質全長をコードするＤＮＡを、ベクタープラスミドｐｃＤＮＡ３．１（発現ベクター、ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製）のＮｏｔＩ認識部位にサブクローニングし、ＴＧ１０１９タンパク質の発現用ベクタープラスミド  ｐｃＤＮＡ３．１−ＴＧ１０１９  を得た。
ＣＨＯ細胞（１ｘ１０６細胞）を、１０％牛胎児血清含有ＤＭＥＭ／Ｆ−１２培地中で、３７℃２０時間培養した。この細胞を用い、プラスミドＤＮＡ（ｐｃＤＮＡ３．１−ＴＧ１０１９、又は対照としてベクターｐｃＤＮＡ３．１）（５μｇ）およびトランスフェクション用試薬（ＬｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製）を添加してトランスフェクションを実施し、２４時間培養した。百日咳毒素（ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ  ｔｏｘｉｎ）で前処理する場合は、２０時間培養後に、百日咳毒素（１００ｎｇ）を添加して引き続き４時間培養した。
培養後の細胞を回収・洗浄し、ロリプラム（２５ｍＭ）を含むＫＲＨ緩衝液（Ｋｒｅｂｓ−Ｒｉｎｇｅｒ  Ｈｅｐｅｓ  ｂｕｆｆｅｒ、ｐＨ７．４）に懸濁して３７℃、３０分インキュベートした後、９６穴プレートに接種（５−７．５ｘ１０４細胞／９０μｌ／ウエル）した。
ついで、フォルスコリン（１μＭ）及び５−オキソ−ＥＴＥ（最終濃度０Ｍ又は１０−１１〜１０−５Ｍ）を含むＫＲＨ緩衝液（９０μｌ／ウエル）を添加し、室温で１０分インキュベートした後、細胞を溶解させてｃＡＭＰ産生量を測定した。
ｃＡＭＰ産生量は、アマシャム・バイオサイエンス（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）社製のｃＡＭＰエンザイム・イムノアッセイ・システムを用いて測定した。
その結果、ベクターのみ導入した細胞では、フォルスコリン刺激時のｃＡＭＰ産生は、５−オキソ−ＥＴＥの添加によって変化しなかった。一方、ｐｃＤＮＡ３．１−ＴＧ１０１９を導入してＴＧ１０１９タンパク質を発現させた細胞では、フォルスコリン刺激時のｃＡＭＰ産生は、５−オキソ−ＥＴＥの添加によって濃度依存的に抑制された。
また、ＴＧ１０１９タンパク質を発現させた細胞を、感受性のＧ蛋白質を不活化させる百日咳毒素で前処理した場合には、５−オキソ−ＥＴＥ添加によるｃＡＭＰ産生の抑制は見られなかった。
これらの結果から、ＴＧ１０１９タンパク質は、５−オキソ−ＥＴＥをリガンド（アゴニストとして作用するリガンド）とするエイコサノイド受容体であり、Ｇｉ（アデニレートシクラーゼ抑制性のＧ蛋白質）と共役するＧ蛋白質共役型受容体であることが確認された。
産業上の利用可能性
本発明の受容体タンパク質及びその遺伝子は、細胞内情報伝達のメカニズム研究のために有用である。また、新たな疾患に対する治療薬の標的分子となり得る。
また、本発明の受容体タンパク質及びその遺伝子を利用した作用薬（アゴニストまたはアンタゴニスト）のスクリーニング、同定および特徴付けの方法は、新しい医薬の研究開発のために有用である。
【配列表】
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【図面の簡単な説明】
図１は、ＴＧ１０１９のアミノ酸配列、塩基配列及び推測される７回膜貫通領域（下線部）を示した図である。
図２は、ヒトの各組織又は細胞におけるＴＧ１０１９遺伝子の発現分布（ドットブロットの結果）を示した図である。
図３は、ＴＧ１０１９タンパク質と各種Ｇタンパク質との融合タンパク質の構造の概略を示した模式図である。
図４Ａは、５−オキソ−ＥＴＥを試験化合物として用いたときのＴＧ１０１９タンパク質と各種Ｇタンパク質との融合タンパク質を含む膜画分とＧＴＰγＳとの特異的結合量に対する各種試験物質の影響を示した図である。特異的結合量は、試験物質を添加しない場合をコントロールとし、その時の結合量に対する相対値（コントロールの％）で表している。「  ○  Ｇｉα１（３５１Ｃｙｓ→Ｉｌｅ）」は、ＴＧ１０１９タンパク質とＧｉα１（３５１Ｃｙｓ→Ｉｌｅ）との融合タンパク質を含む膜画分における試験結果を示す。「  △  Ｇｑα  」は、ＴＧ１０１９タンパク質とＧｑαとの融合タンパク質を含む膜画分における試験結果を示す。「  □  ＧｓαＬ  」は、ＴＧ１０１９タンパク質とＧｓαＬとの融合タンパク質を含む膜画分における試験結果を示す。
図４Ｂは、５−ＨＰＥＴＥを試験化合物として用いたときのＴＧ１０１９タンパク質と各種Ｇタンパク質との融合タンパク質を含む膜画分とＧＴＰγＳとの特異的結合量に対する各種試験物質の影響を示した図である。特異的結合量は、試験物質を添加しない場合をコントロールとし、その時の結合量に対する相対値（コントロールの％）で表している。「  ○  Ｇｉα１（３５１Ｃｙｓ→Ｉｌｅ）」は、ＴＧ１０１９タンパク質とＧｉα１（３５１Ｃｙｓ→Ｉｌｅ）との融合タンパク質を含む膜画分における試験結果を示す。「  △  Ｇｑα  」は、ＴＧ１０１９タンパク質とＧｑαとの融合タンパク質を含む膜画分における試験結果を示す。「  □  ＧｓαＬ  」は、ＴＧ１０１９タンパク質とＧｓαＬとの融合タンパク質を含む膜画分における試験結果を示す。
図４Ｃは、アラキドン酸を試験化合物として用いたときのＴＧ１０１９タンパク質と各種Ｇタンパク質との融合タンパク質を含む膜画分とＧＴＰγＳとの特異的結合量に対する各種試験物質の影響を示した図である。特異的結合量は、試験物質を添加しない場合をコントロールとし、その時の結合量に対する相対値（コントロールの％）で表している。「  ○  Ｇｉα１（３５１Ｃｙｓ→Ｉｌｅ）」は、ＴＧ１０１９タンパク質とＧｉα１（３５１Ｃｙｓ→Ｉｌｅ）との融合タンパク質を含む膜画分における試験結果を示す。「  △  Ｇｑα  」は、ＴＧ１０１９タンパク質とＧｑαとの融合タンパク質を含む膜画分における試験結果を示す。「  □  ＧｓαＬ  」は、ＴＧ１０１９タンパク質とＧｓαＬとの融合タンパク質を含む膜画分における試験結果を示す。
図４Ｄは、エイコサ−５Ｚ−８Ｚ−１１Ｚ−トリエン酸を試験化合物として用いたときのＴＧ１０１９タンパク質と各種Ｇタンパク質との融合タンパク質を含む膜画分とＧＴＰγＳとの特異的結合量に対する各種試験物質の影響を示した図である。特異的結合量は、試験物質を添加しない場合をコントロールとし、その時の結合量に対する相対値（コントロールの％）で表している。「  ○  Ｇｉα１（３５１Ｃｙｓ→Ｉｌｅ）」は、ＴＧ１０１９タンパク質とＧｉα１（３５１Ｃｙｓ→Ｉｌｅ）との融合タンパク質を含む膜画分における試験結果を示す。「  △  Ｇｑα  」は、ＴＧ１０１９タンパク質とＧｑαとの融合タンパク質を含む膜画分における試験結果を示す。「  □  ＧｓαＬ  」は、ＴＧ１０１９タンパク質とＧｓαＬとの融合タンパク質を含む膜画分における試験結果を示す。
図４Ｅは、５−ＨＥＴｒＥを試験化合物として用いたときのＴＧ１０１９タンパク質と各種Ｇタンパク質との融合タンパク質を含む膜画分とＧＴＰγＳとの特異的結合量に対する各種試験物質の影響を示した図である。特異的結合量は、試験物質を添加しない場合をコントロールとし、その時の結合量に対する相対値（コントロールの％）で表している。「  ○  Ｇｉα１（３５１Ｃｙｓ→Ｉｌｅ）」は、ＴＧ１０１９タンパク質とＧｉα１（３５１Ｃｙｓ→Ｉｌｅ）との融合タンパク質を含む膜画分における試験結果を示す。「  △  Ｇｑα  」は、ＴＧ１０１９タンパク質とＧｑαとの融合タンパク質を含む膜画分における試験結果を示す。「  □  ＧｓαＬ  」は、ＴＧ１０１９タンパク質とＧｓαＬとの融合タンパク質を含む膜画分における試験結果を示す。
図４Ｆは、エイコサ−５Ｚ，８Ｚ−ジエン酸を試験化合物として用いたときのＴＧＴ０１９タンパク質と各種Ｇタンパク質との融合タンパク質を含む膜画分とＧＴＰγＳとの特異的結合量に対する各種試験物質の影響を示した図である。特異的結合量は、試験物質を添加しない場合をコントロールとし、その時の結合量に対する相対値（コントロールの％）で表している。「  ○  Ｇｉα１（３５１Ｃｙｓ→Ｉｌｅ）」は、ＴＧ１０１９タンパク質とＧｉα１（３５１Ｃｙｓ→Ｉｌｅ）との融合タンパク質を含む膜画分における試験結果を示す。「  △  Ｇｑα  」は、ＴＧ１０１９タンパク質とＧｑαとの融合タンパク質を含む膜画分における試験結果を示す。「  □  ＧｓαＬ  」は、ＴＧ１０１９タンパク質とＧｓαＬとの融合タンパク質を含む膜画分における試験結果を示す。
図４Ｇは、５−ＨＥＴＥを試験化合物として用いたときのＴＧ１０１９タンパク質と各種Ｇタンパク質との融合タンパク質を含む膜画分とＧＴＰγＳとの特異的結合量に対する各種試験物質の影響を示した図である。特異的結合量は、試験物質を添加しない場合をコントロールとし、その時の結合量に対する相対値（コントロールの％）で表している。「  ○  Ｇｉα１（３５１Ｃｙｓ→Ｉｌｅ）」は、ＴＧ１０１９タンパク質とＧｉα１（３５１Ｃｙｓ→Ｉｌｅ）との融合タンパク質を含む膜画分における試験結果を示す。「  △  Ｇｑα  」は、ＴＧ１０１９タンパク質とＧｑαとの融合タンパク質を含む膜画分における試験結果を示す。「  □  ＧｓαＬ  」は、ＴＧ１０１９タンパク質とＧｓαＬとの融合タンパク質を含む膜画分における試験結果を示す。
図４Ｈは、５，８，１１−エイコサトリイン酸（ＥＴＩ）を試験化合物として用いたときのＴＧ１０１９タンパク質と各種Ｇタンパク質との融合タンパク質を含む膜画分とＧＴＰγＳとの特異的結合量に対する各種試験物質の影響を示した図である。特異的結合量は、試験物質を添加しない場合をコントロールとし、その時の結合量に対する相対値（コントロールの％）で表している。「  ○  Ｇｉα１（３５１Ｃｙｓ→Ｉｌｅ）」は、ＴＧ１０１９タンパク質とＧｉα１（３５１Ｃｙｓ→Ｉｌｅ）との融合タンパク質を含む膜画分における試験結果を示す。「  △  Ｇｑα  」は、ＴＧ１０１９タンパク質とＧｑαとの融合タンパク質を含む膜画分における試験結果を示す。「  □  ＧｓαＬ  」は、ＴＧ１０１９タンパク質とＧｓαＬとの融合タンパク質を含む膜画分における試験結果を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図４Ｄ】
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【図４Ｅ】
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【図４Ｆ】
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【図４Ｇ】
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【図４Ｈ】
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【国際調査報告】
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