(57)【要約】アスコクロリン、アスコクロリン同族体、アスコフラノン又はアスコフラノン同族体からなる群より選択される化合物であって、少なくともオシルアルデヒド部分を有し、該オシルアルデヒド部分の２位及び４位にある水酸基がいずれも置換されていない化合物、及び少なくとも一方の水酸基が置換されている化合物の１種又は２種以上を有効成分として含有する、多重危険因子症候群の予防又は治療薬。
2003063849.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
アスコクロリン、アスコクロリン同族体、アスコフラノン又はアスコフラノン同族体からなる群より選択される化合物であって、少なくともオルシルアルデヒド部分を有し、該オルシルアルデハイド部分の２位及び４位にある水酸基の水素がいずれも置換されていない化合物、及び少なくとも一方の水酸基の水素が、（Ｃ１〜Ｃ１５）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ１５）アルケニル、アリール、（Ｃ１〜Ｃ１５）アルキルアリール、−（ＣｎＨ２ｎ）Ｒ（式中、ｎは１〜１５の整数であり、Ｒはｎ個の炭素原子のいずれか１つに置換されているＣＯＯＲ’（Ｒ’は、Ｈ又は（Ｃ１〜Ｃ１５）アルキルを表す）を表す）、（Ｃ１〜Ｃ１５）アルキルカルボニル、アリールカルボニル、アリール（Ｃ１〜Ｃ１５）アルキル、アリール（Ｃ１〜Ｃ１５）アルキルカルボニル、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）１〜１５ＣＯＯＨ、２−ピリジルカルボニル、ニコチノイル、イソニコチノイル、トルエンスルホニル、カルバモイル、１個又は２個の（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルで置換されたカルバモイル、アミノ、１個又は２個の（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルで置換されたアミノ、環上にハロゲンを有していてもよいアリールオキシ（Ｃ１〜Ｃ１５）アルキル、及び環上に（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシ若しくは（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシカルボニルを有するアリールからなる群より選択される基により置換されている化合物の１種又は２種以上を有効成分として含有する、多重危険因子症候群の予防又は治療薬。
【請求項２】
化合物が、式：
2003063849.tif 000054
［式中、Ｘは、
2003063849.tif 000055
又は
2003063849.tif 000056
又は
2003063849.tif 000057
又は
2003063849.tif 000058
であり；
Ｒ１は、Ｈ、（Ｃ１〜Ｃ１５）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ１５）アルケニル、又は（Ｃ１〜Ｃ１５）アルキルカルボニルであり；
Ｒ２は、Ｈ、（Ｃ１〜Ｃ１５）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ１５）アルケニル、アリール、（Ｃ１〜Ｃ１５）アルキルアリール、−（ＣｎＨ２ｎ）Ｒ（式中、ｎは１〜１５の整数であり、Ｒはｎ個の炭素原子のいずれか１つに置換されているＣＯＯＲ’（Ｒ’は、Ｈ又は（Ｃ１〜Ｃ１５）アルキルを表す）を表す）、（Ｃ１〜Ｃ１５）アルキルカルボニル、アリールカルボニル、アリール（Ｃ１〜Ｃ１５）アルキル、アリール（Ｃ１〜Ｃ１５）アルキルカルボニル、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）１〜１５ＣＯＯＨ、２−ピリジルカルボニル、ニコチノイル、イソニコチノイル、トルエンスルホニル、カルバモイル、１個又は２個の（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルで置換されたカルバモイル、アミノ、１個又は２個の（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルで置換されたアミノ、環上にハロゲンを有していてもよいアリールオキシ（Ｃ１〜Ｃ１５）アルキル、又は環上に（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシ若しくは（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシを有するアリールであり；及び
Ｒ３は、Ｈ又はハロゲンである。
（ただし、Ｘが
2003063849.tif 000059
であり、Ｒ１がＨであり、Ｒ２がＨであり、かつＲ３がＣｌである場合を除く）］
で表される、請求項１に記載の多重危険因子症候群の予防又は治療薬。
【請求項３】
化合物が、式：
2003063849.tif 000060
［式中、Ｘは、
2003063849.tif 000061
又は
2003063849.tif 000062
又は
2003063849.tif 000063
又は
2003063849.tif 000064
であり；
Ｒ１は、Ｈ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニル、又は（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルカルボニルであり；
Ｒ２は、Ｈ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニル、アリール、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルアリール、−（ＣｎＨ２ｎ）Ｒ（式中、ｎは１〜６の整数であり、Ｒはｎ個の炭素原子のいずれか１つに置換されているＣＯＯＲ’（Ｒ’は、Ｈ又は（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルを表す）を表す）、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルカルボニル、アリールカルボニル、アリール（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、アリール（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルカルボニル、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）１〜６ＣＯＯＨ、２−ピリジルカルボニル、ニコチノイル、イソニコチノイル、トルエンスルホニル、カルバモイル、１個又は２個の（Ｃ１〜Ｃ３）アルキルで置換されたカルバモイル、アミノ、１個又は２個の（Ｃ１〜Ｃ３）アルキルで置換されたアミノ、環上にハロゲンを有していてもよいアリールオキシ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、又は環上に（Ｃ１〜Ｃ３）アルコキシ若しくは（Ｃ１〜Ｃ３）アルコキシを有するアリールであり；及び
Ｒ３は、Ｈ又はＣｌである。
（ただし、Ｘが
2003063849.tif 000065
であり、Ｒ１がＨであり、Ｒ２がＨであり、かつＲ３がＣｌである場合を除く）］
で表される、請求項２に記載の多重危険因子症候群の予防又は治療薬。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれか１項に記載された１種又は２種以上の化合物を治療を必要とする患者に投与することを含む多重危険因子症候群の予防又は治療方法。
【請求項５】
請求項１〜３のいずれか１項に記載された１種又は２種以上の化合物及び使用説明書を含む多重危険因子症候群の予防又は治療薬キット。
【請求項６】
多重危険因子症候群の予防又は治療薬を製造するための請求項１〜３のいずれか１項に記載された化合物の使用。
【請求項７】
式：
2003063849.tif 000066
［式中、Ｘが、
2003063849.tif 000067
であり；
Ｒ１はＨ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル又は（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニル、又は（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルカルボニルであり；
Ｒ２は、Ｈ、−ＣＨ２ＣＯＯＨ、−ＣＨ２ＣＯＯ（Ｃ１〜Ｃ５）アルキル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルカルボニル、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）１〜６ＣＯＯＨ、２−ピリジルカルボニル、ニコチノイル又はイソニコチノイルであり；及びＲ３は、Ｈ又はＣｌである（但し、Ｒ１がＨであり、Ｒ２がＨであり、かつＲ３がＣｌであるときを除く）か、又は
Ｘが、
2003063849.tif 000068
であり；
Ｒ１は、Ｈ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル又は（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニル、又は（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルカルボニルであり；
Ｒ２は、Ｈ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル又は（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニル、−ＣＨ２ＣＯＯＨ、−ＣＨ２ＣＯＯ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルカルボニル、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）１〜６ＣＯＯＨ、２−ピリジルカルボニル、ニコチノイル又はイソニコチノイルであり；及び
Ｒ３は、ＨまたはＣｌである］
で表される化合物、その立体異性体、その光学異性体、又はそれらの医薬として許容できる塩。
【請求項８】
式：
2003063849.tif 000069
［式中、
Ｒ１は、Ｈ、−（Ｃ１〜Ｃ５）アルキル又はアルケニル、又は−Ｃ（＝Ｏ）（Ｃ１〜Ｃ５）アルキルであり；及び
Ｒ２はＨ、−（Ｃ１〜Ｃ５）アルキル、−ＣＨ２ＣＯＯＨ、−ＣＨ２ＣＯＯ（Ｃ１〜Ｃ５）アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）（Ｃ１〜Ｃ５）アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）１〜５ＣＯＯＨ、ニコチノイル又はイソニコチノイルである
（但し、Ｒ１がＨであり、かつＲ２が−ＣＨ２ＣＯＯＨ又はニコチノイルである場合を除く）］
で表される化合物、その立体異性体、その光学異性体、又はそれらの医薬として許容できる塩。
【請求項９】
請求項７又は８に記載の１種又は２種以上の化合物及び医薬として許容できる担体を含む医薬組成物。
【請求項１０】
請求項７又は８に記載の１種又は２種以上の化合物を有効成分とする、多重危険因子症候群の予防又は治療薬。
【発明の詳細な説明】
技術分野
本発明はアスコクロリン、アスコフラノン及びそれらの誘導体を有効成分として含有する多重危険因子症候群の診断、予防及び治療に用いる医薬組成物に関する。
背景技術
多重危険因子症候群
［多重危険因子症候群の概念］
多重危険因子症候群（マルチプルリスクファクター症候群）は比較的新しい疾病の概念である。これまで虚血性心疾患、ＩＩ型糖尿病、脳血管障害などの危険因子とされてきた高脂血症、肥満、本態性高血圧、耐糖能異常、高インスリン血症等がしばしば同一個体に集積することにちなんで規定された疾病の概念で、その根底にあるのは末梢組織のインスリン抵抗性である。本発明を説明する前に、なぜ新しい疾病の概念を導入する必要があったのか、なぜこの症候群を治療する新しい薬物の研究開発が要望されているのか、等々について説明する。
日本を唯一の例外として、先進諸国における第一位の死亡原因は心臓病である。しかも、死亡原因の実に７０％から４０％が心臓病である国が大部分であり、他の死亡原因を引き離し断然トップなのである。従って、疾病のなかで心臓病が占める位置が白人と日本人とではまったく異なることに注意をはらわなければならない。要するに白人にとって心臓病は、健康上における最大の関心事であるとともに、日本人がガンを恐れるにもまして恐怖の的なのである。
心臓病の大部分は、心臓の筋肉に栄養と酸素を送る心臓冠状動脈（冠動脈）の狭窄〜閉塞による虚血性心疾患である。冠動脈は、生活習慣、加齢、遺伝的素因などが原因となって局所的に動脈の炎症性病変が起こり、その結果、血管が狭窄して心筋への血液送入量が減少したり、甚だしい場合には閉塞して血流が途絶し、心筋梗塞、心不全などの虚血性心疾患を好発する。この動脈病変は、病理的にみると血管内膜の剥離、中膜へのコレステロール蓄積、中膜平滑筋細胞の増殖、血栓の基質化等を特徴とする複雑な様相を呈し、病巣は厚みを増して動脈の内腔に向かって盛り上がってくる。このようなタイプの動脈病変を動脈硬化と呼んでいる。動脈硬化は、大動脈、頸動脈、腎臓、大腿部、下肢など冠状動脈以外のあらゆる動脈にも起こりうるが、通常は重篤な心疾患を誘発する冠動脈の動脈硬化を指し、心筋への血液供給が途絶ないし減少するので虚血性心疾患と呼んでいる。
ほとんどの虚血性心疾患は、動脈硬化症の進展につれて発症する。欧米を中心とした先進国では、心筋梗塞、心不全などの循環器疾患が死亡原因第１位を占めている。米国では虚血性心疾患による死亡率は全死因の約４０％を占めており、正確な死亡統計が始まった１９００年以来、その死亡率は常に第１位である。従って、患者数も膨大で、米国では約６，０００万人を数えるとされている（米国心臓協会、２００１年版）。西ヨーロッパの先進国でも虚血性心疾患は死亡原因のトップを占めており、例えば１９７０年代のベルリンにおける死亡者の実に７０％は虚血性心疾患によるものであった。先進国における唯一の例外は日本で、単位人口あたりでの比較では、日本の虚血性心疾患発症率は米国の１／５，北欧の１／１０と世界でももっとも虚血性心疾患が少ない地域に属するが、日本でも虚血性心疾患と脳血管障害を併せた循環器疾患による死亡者は、癌による死亡数を凌駕して第１位である（厚生労働白書、１３版）。
疫学データを単相関分析した場合、虚血性心疾患の発症と強い相関を示すのは「高コレステロール血症」「高血圧症」「喫煙」の三つである。つまり、虚血性心疾患の３大危険因子は、高血圧、高コレステロール血症、喫煙である。米国では三大危険因子を避けるため集中的な啓蒙が行われ、虚血性心疾患の発症と死亡は有意に減少した。しかし、最近にいたり減少のペースが鈍化し、その理由についての研究が進められている。つまり、禁煙に加え高コレステロール血症と高血圧を治療すると、虚血性心疾患の発症と死亡はある程度まで減少するが、依然として高い水準に止まっているのである。虚血性心疾患を発症させる危険因子について見直す研究者が現れたのは当然の帰結であった。
もう一つの危険因子と考えられる肥満の役割については、単独では虚血性心疾患と強い相関を示す危険因子ではないとする考え方が支配的であった。しかし、非インスリン依存性糖尿病（ＮＩＤＤＭ）では肥満、高脂血症、高血圧症の合併する頻度が著しく高く、虚血性心疾患が非糖尿病患者より早期に発症することは以前から知られていた。このような危険因子の集積による冠動脈硬化症の促進を、リーベン（ＤＩＡＢＥＴＥＳ３７：１５９５−１６０７，１９８８年）は一つの症候群“シンドロームＸ”としてとらえ、▲１▼インスリン抵抗性、▲２▼耐糖能異常、▲３▼高インスリン血症、▲４▼高ＶＬＤＬトリグリセライド血症（超低比重リポ蛋白ｖｅｒｙ  ｌｏｗ  ｄｅｎｓｉｔｙ  ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎに含まれる中性脂肪が正常域を越えて上昇すること）、▲５▼低ＨＤＬコレステロール血症（高比重リポ蛋白ｈｉｇｈ  ｄｅｎｓｉｔｙ  ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎに含まれるコレステロールが正常域以下に低下すること）、▲６▼高血圧症等の危険因子六つが集積して虚血性心疾患の高度危険因子になると報告した。一方、カプランは、▲１▼上半身肥満、▲２▼耐糖能異常、▲３▼高トリグリセライド血症、▲４▼高血圧症が同一個体に集積すると、高頻度で虚血性心疾患を誘発して死に直結するとして、Ｔｈｅ  Ｄｅａｄｌｙ  Ｑｕａｒｔｅｔ説を提唱した（Ａｒｃｈ．Ｉｎｔｅｒｎ．Ｍｅｄ．１４９：１５１４−１５２０，１９８９年）。これら二つの説の背後には共通項としてインスリン抵抗性の存在が考えられる。
そこでデフロンゾは両者の考え方を統一し、肥満によるインスリン抵抗性の発現を強調した“インスリン抵抗性症候群説”を提唱した（Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｃａｒｅ  １４：１７３−１９４，１９９１年）。日本では、松沢等も危険因子としての肥満を掘り下げ、内臓に脂肪が沈着した“内臓脂肪症候群”が高血圧症、脂質代謝異常、耐糖能異常と合併する場合、虚血性心疾患を発症する危険が高まると提唱した（日本内科学会誌８４：１５７９−１５８２  １９９５年）。多重危険因子の相関を図１に示した。すなわち、虚血性心疾患を発症させる多重危険因子症候群の根底にあるのは、加齢、遺伝的素因、生活習慣の三因子である。この内の加齢と遺伝的素因は、現状では人為的にコントロールできない。三素因のうちで人為的にコントロールできるのは、喫煙、過食、運動不足、食塩の過剰摂取等々の生活習慣だけである。しかも、最大の問題は、複数の危険因子が同一個体に集積すること、すなわち、一つしか危険因子を持たない患者はまれなことである。過食と運動不足から起こる肥満を例に取ると、今までは、肥満はそれ自身では有意な危険因子ではなく、耐糖能障害や糖尿病、脂質異常、高血圧が集積した場合、虚血性心疾患のリスクが増大すると考えられていた。しかし、最近になって身体の脂肪分布にも検討が加えられた結果、上体肥満あるいは内臓（腹部）への脂肪の高度沈着は、高インスリン血症を誘発し、それとともに耐糖能障害、高中性脂肪血症、高血圧症を集積する頻度が著しく高いことが明らかになった。腹部への脂肪蓄積が危険なことは、トランスジェニック・マウスを使った最近の研究によっても確認されている（Ｍａｓｕｚａｗａ  Ｈ．ｅｔ  ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２９４：２１６６２−２１７０，２００１）。グルココルチコイドの過剰産生により内臓に脂肪が蓄積すると、そこから放出される遊離脂肪酸が多量に肝臓に流入し、中性脂肪やコレステロールの合成を高め、その結果として惹起される高脂血症は、虚血性心疾患、糖尿病を悪化させるからである。肥満、高血圧、高脂血症、耐糖能障害は、しばしば同一個体に集積する。肥満者では高血圧が合併する頻度は非肥満者の３倍であり、高中性脂肪血症、糖尿病は非肥満者のそれぞれ２倍である。
多重危険因子症候群は自覚症状が無いままに進行するので、治療をせず放置してしまうことが少なくない。気付かないうちに、突然、生命を脅かすような状態を招きかねないので、サイレントキラー（静かなる殺人者）と呼ばれている。
2003063849.tif 000003
インスリン抵抗性
多重危険因子症候群には、根底にインスリン抵抗性の存在が指摘されている。インスリン抵抗性症候群はよく氷山に例えられる。個々の病気である糖尿病や高血圧など、海面に出ている部分は軽症であっても、水面下に重大な危険が潜んでいる可能性があり、血圧や血糖だけを改善するだけでは、本質的な治療にはならないのである。従って、患者が多重危険因子症候群の場合、インスリン抵抗性そのものを治療する必要があることは言うまでもない。インスリンは、ブドウ糖をエネルギーに変え、血糖値を下げる唯一のホルモンである。内臓脂肪の蓄積でインスリン抵抗性が起きると、血糖値は上昇し、糖尿病が発症する。また、インスリン抵抗性は、イスリンが多量に分泌される「高インスリン血症」を招来する。これは、低下したインスリン作用を「量」で補おうとする膵臓の働きによるものである。しかし、インスリンの量が多すぎると、▲１▼腎臓でナトリウム・イオンが排泄され難くなり、ナトリウム・イオンと同一行動をとる水分が体内に貯留する、▲２▼肝臓で脂肪が過剰に生合成される、▲３▼血管壁を構成する中膜平滑筋細胞が増殖し血管内腔を狭索させる、などの現象が起きてくる。これらはそれぞれ、高血圧、高脂血症、動脈硬化に直結する。高インスリン血症の患者は、ますますインスリン抵抗性を強める悪循環に陥り、生活習慣病を悪化させるのである。
多重危険因子症候群のモデル動物
マルチプルリスクファクターである１．肥満、２．高血糖、３．高脂血症、４．高血圧、５．高インスリン血症を有するモデル動物としてマウスではＣ５７ＢＬ／６ｊ−ｏｂ／ｏｂ（ｏｂ／ｏｂマウス）とＣ５７ＢＬ／ｋｓｊ−ｄｂ／ｄｂ（ｄｂ／ｄｂマウス）がラットではＺｕｃｋｅｒ  ｆａｔｔｙ（Ｚｕｃｋｅｒラット）が知られている。ｏｂ／ｏｂマウスは１９５０年にＩｎｇａｌｌｓらによってＣ５７ＢＬ／６Ｊ系統の黒色マウスに見いだされた突然変異で、ｄｂ／ｄｂマウスは１９６６年にＨｕｍｍｅｌらによって黒色のＣ５７ＢＬ／ｋｓｊ系に見いだされ、固定化された。いずれも単一劣性遺伝子”ｏｂ”及び”ｄｂ”によって伝達される。Ｚｕｃｋｅｒラットは１９６１年にＺｕｃｋｅｒらによって発見された突然変異で、劣性遺伝子”ｆａ”として固定化された。ｏｂ／ｏｂマウスは脂肪組織から分泌される肥満遺伝子産物であるレプチンの突然変異が、ｄｂ／ｄｂマウスとＺｕｃｋｅｒ  ｆａｔｔｙラットはともに、レプチン受容体遺伝子の異常が報告されている。ｏｂ／ｏｂマウス、ｄｂ／ｄｂマウス、Ｚｕｃｋｅｒ  ｆａｔｔｙラットには共通して肥満、白色脂肪細胞重量の増加、高インスリン血症、高血糖、高中性脂肪血症が観察される。
ｄｂ／ｄｂマウスの体重は６週齢において正常同腹仔（Ｌｅａｎ）比較して有意に増加しており、１５週齢までは直線的に増加し５０ｇにも達するが、その後は減少し、４３週齢ではＬｅａｎマウスとの間には有意の差は見られなくなる。血糖値は６週齢においてｄｂ／ｄｂマウスはすでに、Ｌｅａｎマウスの２倍の高値を示し、その後も上昇を続け３５週齢にはピークに達し、７００ｍｇ／ｄＬの高値を示すし、その後もその水準を維持する。ｄｂ／ｄｂマウスの血中インスリン濃度は６週齢で、すでにＬｅａｎマウスの数倍の高値を示し、１５週齢でピークに達し、その後は急激に減少し、３５週齢にはＬｅａｎマウスの水準にまで減少する。ｄｂ／ｄｂマウスの血中脂質は常に、Ｌｅａｎマウスに比較して有意の高値を示す。ｄｂ／ｄｂマウスはＬｅａｎマウスに比較して早期の段階から、循環器不全と思われる死亡例が観察され、Ｌｅａｎマウスに比較して平均寿命は短い。
Ｚｕｃｋｅｒ  ｆａｔｔｙラットの体重と脂肪組織重量は９週齢において、Ｌｅａｎラットに比較して有意の高値を示し、その後もほぼ直線的に増加し、５２週齢ではＺｕｃｋｅｒ  ｆａｔｔｙラットの体重は７００ｇにも達し、脂肪組織重量はＬｅａｎラットに比較して４倍にも達する。摂食時のＺｕｃｋｅｒ  ｆａｔｔｙラットの血糖値はＬｅａｎラットに比較して高値傾向を示すが、有意の差は認められないのに対して、Ｚｕｃｋｅｒ  ｆａｔｔｙラットの空腹時血糖値はＬｅａｎラットに比較して有意の上昇を示し、耐糖能異常が認められる。血中インスリン濃度は９週齢において、既にＬｅａｎラットの３倍に上昇しており、２４週齢までは直線的に上昇するが、その後はじょじょに減少する。血中コレステロール、中性脂肪、遊離脂肪酸は９週齢においてＬｅａｎラットに比較して有意の高値を示し、５２週齢まで直線的に上昇するが、特に、ｆａｔｔｙラットは著しい高中性脂肪血症を示す。ｆａｔｔｙラットの血圧はＬｅａｎラットに比較して２５−２８週齢で２０−３０ｍｍＨｇの高値を示し、その後も高血圧状態を維持する。
高コレステロール食負荷によってＬｅａｎラットの大動脈には病理組織学的変化は認められないが、ｆａｔｔｙラットでは大動脈中のコレステロール含量は有意に増加し、泡抹細胞が観察される。
多重危険因子症候群の疫学
循環器疾患の危険因子は数多く報告されているが、それらのなかで高脂血症、高血圧、糖尿病、肥満などは同一患者に集積することが知られており、これらの病態の根底にインスリン抵抗性が存在することが明らかにされてきた。こうした病態はシンドロームＸ、死の四重奏、内臓脂肪症候群、マルチプルリスクファクター症候群などと提唱者によって異なった名称がつけられている。従来行われてきた危険因子の解析はほとんど断面的な解析であり、循環器疾患の発症要因の解明に重要な情報をもたらす時間経過のファクターが考慮されていなかった。こうしたなかで、労働省の委託をうけた作業関連疾患総合対策研究班は１２２，０５１人の勤労者を対象に、１９９０年１月より過去３年間に突然死、循環器疾患を発症した１９３例の検診結果を１０年間溯って分析した。高コレステロールを除いた危険因子として肥満度、血圧、血糖、血清中性脂肪値について、いくつの異常が一個人に集積しているかを分析し、リスクのない時と比較して循環器疾患の発症危険率を算出した。その結果、四つの危険因子のうち３−４の危険因子の集積したいわゆる多重危険因子を有する群では危険率が３０倍以上と著しく高くなることが明らかになった。
すなわち、程度は軽くとも高血圧、糖尿病、肥満、高中性脂肪血症などを複合集積する症例において高率に循環器疾患が発症することが知られようになった。高血圧、糖尿病、肥満、高中性脂肪血症といった危険因子を重複して集積する多重危険因子症候群が、循環器疾患のきわめて大きな発症基盤となっていることが明らかになった。
従来の治療法
クスリは生体にとって異物である。医学や薬学が進歩し、いかに良いクスリが開発されようと、運動療法・食事療法に勝るクスリはない。従って、多重危険因子症候群を治療するさいも、治療の第一選択は運動療法・食事療法である。薬物は運動療法・食事療法が無効の場合、あるいは、ほとんど効果がない場合の選択肢である。しかし、多重危険因子症候群の患者を治療するため、一つ一つの症状に応じて薬物を投与する対症療法は、決して望ましいことではない。高血圧症には降圧剤、高トリグリセライド血症にフィブレイト系薬物、高コレステロール血症にはスタチン系薬物、インスリン抵抗を解除するためにグリタゾン系薬物、肥満を治療するため食欲を減退させる中枢性食欲減退剤、摂取した栄養物が消化管から吸収されることを阻害する吸収阻害剤、浮腫の治療にアルドステロン拮抗剤などを同時に投与することは、薬物間で複雑な相互作用が起こり、個々の薬物の有効性を阻害したり、甚だしい場合には毒性が増強される可能性さえあるためである。一方、多重危険因子症候群の中心に位置するのはインスリン抵抗性であり、云うまでもなく治療はインスリン抵抗性解除に重点が置かれるべきである。
運動療法と食事療法
運動療法がインスリン抵抗性を著明に改善させることについては、多くの報告がある。運動には有酸素運動と無酸素運動があるが、いずれも有効であり、特にジョギングや早足歩きなどの有酸素運動の方がより有効にインスリン抵抗性を改善させるらしい。運動強度はＶＯ２ｍａｘ（最大酸素摂取量）の５０％を維持（３０歳〜４０歳台で脈拍１２０から１３０／分となるくらいの運動）し、１回２０分以上、週３回以上が運動療法の原則である。ただし、虚血性心疾患、糖尿病、高血圧症の患者の中には運動療法が制限されている例もあるので、すべての患者に適用できるわけではない。食事療法に関しては、体脂肪が蓄積しないようにすることがインスリン抵抗性食事療法の原則であり、食事は低エネルギー低脂肪食ということになるが、急激なダイエットはその後のリバウンドを考えるとかえって逆効果となることもある。食習慣はもっとも変更が難しい生活習慣なので、長期に減食療法を継続するのは難しく、治療効果に多くを期待できないのが悩みである。
食欲抑制剤及び消化吸収阻害剤
インスリン抵抗性を改善する薬物療法には間接的なものと、直接作用するものがある。間接的にインスリン抵抗性を改善する薬物は、食欲抑制剤と消化吸収阻害剤である。我が国では病的肥満症を治療する薬として中枢性食欲抑制薬（マジンドール）が、肥満係数（ｂｏｄｙ  ｍａｓｓ  ｉｎｄｅｘ；ＢＭＩ）３５％を超える高度肥満症に限定して使用されている。しかし、強い副作用のため、許可された使用期間は僅かに３ヶ月だけなので、病的肥満の治療にもほとんど役に立っていないのが現実である。また糖尿病治療薬として認可されているα−グルコシダーゼ阻害剤（ボグリボース及びアカルボース）は、腸管での糖質の吸収を抑えて、食後の高インスリン血症を是正することにより、糖毒性の解除に伴い間接的にインスリン抵抗性の治療となると言われている。これらは糖質の消化酵素を阻害して小腸における吸収を抑制する薬物であり、欧米のように食事性エネルギーの大部分を中性脂肪に依存している場合には、糖質の吸収阻害剤はインスリン抵抗性解除の効果に乏しい。中性脂肪の消化管吸収を阻害する薬物としては、膵臓リパーゼの活性を阻害するオルリスタットが使用されている。オルリスタットは膵臓リパーゼにより中性脂肪が脂肪酸とモノグリセライドに加水分解されるのを阻害するので、食事性脂肪の約３０％が吸収されずに排泄させると云われている。いずれにしても、これら消化管吸収阻害剤は、小腸で消化・吸収を免れた糖質、脂質などの栄養物が多量に大腸に流入する際に起こる「腸内細菌の菌交代現象と悪玉菌の異常増殖」「多量のガス発生」「腹部膨満・下痢」などの副作用のため使用が限局されている。
ビグアナイド系薬物
ブホルミンやメトフォルミンに代表されるビグアナイド剤は、主に肝臓のブドウ糖新生・放出を抑え、また筋肉でのブドウ糖取り込みを増加させる作用によりインスリン抵抗性を改善させる。１９７０年代、この系統に属するフェンフォルミンが致死的乳酸アシドーシスを惹起する報告が相次ぎ、一時、ビグアナイド剤の使用は激減した。しかし、最近の大規模な糖尿病研究ＵＫＰＤＳなどでは、この薬物の有効性及び安全性が報告され、インスリン抵抗性を改善する薬物として復活して大々的に使用されるようになっている。しかし、主たる作用の場が肝臓であるため、肝障害が起こること、乳酸アシドーシスが起こること、毒性を発現する量と有効量とが接近しているのが大きな欠点である。
チアゾリジン系薬物
インスリン抵抗性を直接改善させる薬物として１９９７年に登場した最初のチアゾリジン系薬物トログリタゾンは、従来の経口糖尿病薬とは異なる作用でインスリン感受性を高め、血糖を低下させるだけでなく多彩な効果があり、インスリン抵抗性症候群にも有効である可能性が考えられていた。しかし、重症肝機能障害の副作用が続出し死亡例も出たため、使用例が激減し、２０００年３月２２日には同薬の販売中止が決定されて全製品が市場から回収された。臨床の場にはトログリタゾンと同じチアゾリジン系の薬剤としてピオグリタゾン、ロジグリタゾンが１９９９年に発売されており、インスリン抵抗性治療薬として期待されている。ただしこれらの薬剤もトログリタゾン同様、軽重の差はあるにせよ重症肝障害を誘発する可能性があり、肝機能の定期観察が不可欠とされている。
一方、チアゾリジン系薬剤は末梢組織のインスリン抵抗性を解除するとされているが、臨床例の統計にはインスリン抵抗性解除とは矛盾する現象が三つ報告されている。一つはチアゾリジン系薬物を投与しても、ＩＩ型糖尿病患者の血圧が低下しないことである。逆に腎臓におけるナトリウムイオン排泄が障害され体液量が増加した結果、血圧が上昇したとする報告も多い。ＩＩ型糖尿病患者の約七割に認められる高血圧症はインスリン抵抗性に由来するはずであり、全身的にインスリン感受性が回復するのであれば、血圧は低下して当然である。この現象は、チアゾリジン系薬物が必ずしも全身的にインスリン抵抗性を解除しているのではないことを物語っている。二つ目は「副作用の警告」にも明記されているように、チアゾリジン系薬物を投与すると浮腫が起こることである。浮腫は循環血漿量の増加によると考えられるが、心不全が増悪あるいは新に発症することがあるので、投与中は観察を十分に行い、浮腫、急激な体重増加、心不全症状等がみられた場合には投与を中止しなければならない。しかも、浮腫の発現頻度は、インスリン抵抗性解除のために集中的な治療が必要な糖尿病性網膜症合併例で９．３％（３３／３５３例）、糖尿病性神経障害合併例で１０．５％（２９／２７６例）、糖尿病性腎症合併例で１０．０％（２３／２３０例）であり、糖尿病性合併症発症例は非発症例に比べ高い傾向にある。チアゾリジン系薬物は安全性が懸念されるので、合併症を持つ糖尿病患者の治療に使いづらいことが欠点である。三つ目はチアゾリジン系薬物を投与すると、体重が増加すること、すなわち、上半身ないし内臓への脂肪沈着がかえって増加することである。ＩＩ型糖尿病の治療は、食事療法による減量におかれているので、体重増加作用は治療と逆行する副作用である。
降圧剤
多重危険因子症候群に投与される降圧剤は、主としてアンジオテンシン転換酵素阻害剤（ＡＣＥ阻害剤）、アンジオテンシンＩＩ拮抗剤、カルシウム拮抗剤である。これらは合併症のない高血圧患者の治療に限ると安全性が高く長期使用できる。しかし、現実には血圧が高いだけの患者はほとんど見あたらず、幾つかの危険因子を合併する多重危険因子症候群の患者がほとんどである。そのため降圧剤を投与すると高血圧患者の血圧は低下するが、脳血管障害と虚血性心疾患による死亡を予防する効果は以前ほど顕著ではなくなっている。降圧剤は作用のメカニズムからみてインスリン感受性を回復させる効果は期待できないからである。
現状では、単剤でインスリン抵抗性を解除することにより高血圧、脂質代謝異常、耐糖能異常、肥満などの多重危険因子を改善できる薬物は存在しない。
発明の開示
前述のように多重危険因子症候群の薬物治療は、現状では一つの薬物で対応することができない。しかし、本症候群の根底にインスリン抵抗性が存在するとすれば、インスリン抵抗性を改善する薬物は、「高血圧」「脂質代謝異常」「耐糖能異常」「高インスリン血症」「肥満」、ひいてはそれらの危険因子が集約した形であらわれる虚血性心疾患も改善するはずである。本特許の発明者等は多年にわたりアスコクロリン、アスコフラノン並びにそれらの誘導体（以下、本系統の化合物という）についてインスリン抵抗性の改善効果を動物実験と臨床の両面で検討し、これらの化合物がインスリン抵抗性を解除する結果、多重危険因子症候群の病態を有意に改善することを確認して本発明を完成した。
本発明に包含される化合物群は、平成１０年特許願第３７７９０５及び平成１１年特許願第１０６９９６号に記載されているアスコクロリン；並びにアスコクロリン同族体又はアスコフラノン；並びにアスコフラノン同族体である。
本発明は、下記１〜１０に記載された多重危険因子症候群の予防又は治療薬、多重危険因子症候群の予防又は治療方法、多重危険因子症候群の予防又は治療薬キット、多重危険因子症候群の予防又は治療薬を製造するための上記化合物の使用、新規なアスコフラノン誘導体、新規なアスコクロリン誘導体、これらの誘導体の１種若しくは２種以上を含む医薬組成物並びにこれらの誘導体の１種若しくは２種以上を有効成分とする、多重危険因子症候群の予防又は治療薬を提供する。
１．アスコクロリン、アスコクロリン同族体、アスコフラノン又はアスコフラノン同族体からなる群より選択される化合物であって、少なくともオルシルアルデヒド部分を有し、該オルシルアルデハイド部分の２位及び４位にある水酸基の水素がいずれも置換されていない化合物、及び少なくとも一方の水酸基の水素が、（Ｃ１〜Ｃ１５）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ１５）アルケニル、アリール、（Ｃ１〜Ｃ１５）アルキルアリール、−（ＣｎＨ２ｎ）Ｒ（式中、ｎは１〜１５の整数であり、Ｒはｎ個の炭素原子のいずれか１つに置換されているＣＯＯＲ’（Ｒ’は、Ｈ又は（Ｃ１〜Ｃ１５）アルキルを表す）を表す）、（Ｃ１〜Ｃ１５）アルキルカルボニル、アリールカルボニル、アリール（Ｃ１〜Ｃ１５）アルキル、アリール（Ｃ１〜Ｃ１５）アルキルカルボニル、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）１〜１５ＣＯＯＨ、２−ピリジルカルボニル、ニコチノイル、イソニコチノイル、トルエンスルホニル、カルバモイル、１個又は２個の（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルで置換されたカルバモイル、アミノ、１個又は２個の（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルで置換されたアミノ、環上にハロゲンを有していてもよいアリールオキシ（Ｃ１〜Ｃ１５）アルキル、及び環上に（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシ若しくは（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシカルボニルを有するアリールからなる群より選択される基により置換されている化合物の１種又は２種以上を有効成分として含有する、多重危険因子症候群の予防又は治療薬。
２．上記１において、化合物が、式：
2003063849.tif 000004
［式中、Ｘは、
2003063849.tif 000005
又は
2003063849.tif 000006
又は
2003063849.tif 000007
又は
2003063849.tif 000008
であり；
Ｒ１は、Ｈ、（Ｃ１〜Ｃ１５）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ１５）アルケニル、又は（Ｃ１〜Ｃ１５）アルキルカルボニルであり；
Ｒ２は、Ｈ、（Ｃ１〜Ｃ１５）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ１５）アルケニル、アリール、（Ｃ１〜Ｃ１５）アルキルアリール、−（ＣｎＨ２ｎ）Ｒ（式中、ｎは１〜１５の整数であり、Ｒはｎ個の炭素原子のいずれか１つに置換されているＣＯＯＲ’（Ｒ’は、Ｈ又は（Ｃ１〜Ｃ１５）アルキルを表す）を表す）、（Ｃ１〜Ｃ１５）アルキルカルボニル、アリールカルボニル、アリール（Ｃ１〜Ｃ１５）アルキル、アリール（Ｃ１〜Ｃ１５）アルキルカルボニル、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）１〜１５ＣＯＯＨ、２−ピリジルカルボニル、ニコチノイル、イソニコチノイル、トルエンスルホニル、カルバモイル、１個又は２個の（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルで置換されたカルバモイル、アミノ、１個又は２個の（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルで置換されたアミノ、環上にハロゲンを有していてもよいアリールオキシ（Ｃ１〜Ｃ１５）アルキル、又は環上に（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシ若しくは（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシを有するアリールであり；及び
Ｒ３は、Ｈ又はハロゲンである。
（ただし、Ｘが
2003063849.tif 000009
であり、Ｒ１がＨであり、Ｒ２がＨであり、かつＲ３がＣｌである場合を除く）］
で表される化合物である、多重危険因子症候群の予防又は治療薬。
３．上記２において、化合物が、式：
2003063849.tif 000010
［式中、Ｘは、
2003063849.tif 000011
又は
2003063849.tif 000012
又は
2003063849.tif 000013
又は
2003063849.tif 000014
であり；
Ｒ１は、Ｈ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニル、又は（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルカルボニルであり；
Ｒ２は、Ｈ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニル、アリール、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルアリール、−（ＣｎＨ２ｎ）Ｒ（式中、ｎは１〜６の整数であり、Ｒはｎ個の炭素原子のいずれか１つに置換されているＣＯＯＲ’（Ｒ’は、Ｈ又は（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルを表す）を表す）、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルカルボニル、アリールカルボニル、アリール（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、アリール（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルカルボニル、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）１〜６ＣＯＯＨ、２−ピリジルカルボニル、ニコチノイル、イソニコチノイル、トルエンスルホニル、カルバモイル、１個又は２個の（Ｃ１〜Ｃ３）アルキルで置換されたカルバモイル、アミノ、１個又は２個の（Ｃ１〜Ｃ３）アルキルで置換されたアミノ、環上にハロゲンを有していてもよいアリールオキシ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、又は環上に（Ｃ１〜Ｃ３）アルコキシ若しくは（Ｃ１〜Ｃ３）アルコキシを有するアリールであり；及び
Ｒ３は、Ｈ又はＣｌである。
（ただし、Ｘが
2003063849.tif 000015
であり、Ｒ１がＨであり、Ｒ２がＨであり、かつＲ３がＣｌである場合を除く）］
で表される化合物である、多重危険因子症候群の予防又は治療薬。
４．上記１〜３のいずれか１項に記載された１種又は２種以上の化合物を治療を必要とする患者に投与することを含む多重危険因子症候群の予防又は治療方法。
５．上記１〜３のいずれか１項に記載された１種又は２種以上の化合物及び使用説明書を含む多重危険因子症候群の予防又は治療薬キット。
６．多重危険因子症候群の予防又は治療薬を製造するための上記１〜３のいずれか１項に記載された化合物の使用。
７．式：
2003063849.tif 000016
［式中、Ｘが、
2003063849.tif 000017
であり；
Ｒ１はＨ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル又は（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニル、又は（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルカルボニルであり；
Ｒ２は、Ｈ、−ＣＨ２ＣＯＯＨ、−ＣＨ２ＣＯＯ（Ｃ１〜Ｃ５）アルキル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルカルボニル、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）１〜６ＣＯＯＨ、２−ピリジルカルボニル、ニコチノイル又はイソニコチノイルであり；及びＲ３は、Ｈ又はＣｌである（但し、Ｒ１がＨであり、Ｒ２がＨであり、かつＲ３がＣｌであるときを除く）か、又は
Ｘが、
2003063849.tif 000018
であり；
Ｒ１は、Ｈ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル又は（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニル、又は（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルカルボニルであり；
Ｒ２は、Ｈ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル又は（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニル、−ＣＨ２ＣＯＯＨ、−ＣＨ２ＣＯＯ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルカルボニル、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）１〜６ＣＯＯＨ、２−ピリジルカルボニル、ニコチノイル又はイソニコチノイルであり；及び
Ｒ３は、ＨまたはＣｌである］
で表される化合物、その立体異性体、又はそれらの医薬として許容できる塩。
８．式：
2003063849.tif 000019
［式中、
Ｒ１は、Ｈ、−（Ｃ１〜Ｃ５）アルキル又はアルケニル、又は−Ｃ（＝Ｏ）（Ｃ１〜Ｃ５）アルキルであり；及び
Ｒ２はＨ、−（Ｃ１〜Ｃ５）アルキル、−ＣＨ２ＣＯＯＨ、−ＣＨ２ＣＯＯ（Ｃ１〜Ｃ５）アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）（Ｃ１〜Ｃ５）アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）１〜５ＣＯＯＨ、ニコチノイル又はイソニコチノイルである
（但し、Ｒ１がＨであり、かつＲ２が−ＣＨ２ＣＯＯＨ又はニコチノイルである場合を除く）］
で表される化合物、その立体異性体、又はそれらの医薬として許容できる塩。
９．上記７又は８に記載の１種又は２種以上の化合物及び医薬として許容できる担体を含む医薬組成物。
１０．上記７又は８に記載の１種又は２種以上の化合物を有効成分とする、多重危険因子症候群の予防又は治療薬。
発明を実施するための最良の形態
本発明多重危険因子症候群の予防又は治療薬として用いるアスコクロリン、アスコクロリン同族体、アスコフラノン又はアスコフラノン同族体からなる群より選択される化合物は、少なくともオルシルアルデヒド部分を有し、該オルシルアルデハイド部分の２位及び４位にある水酸基の水素がいずれも置換されていない化合物、及び少なくとも一方の水酸基の水素が、（Ｃ１〜Ｃ１５）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ１５）アルケニル、（Ｃ１〜Ｃ１５）アルキニル、アリール、（Ｃ１〜Ｃ１５）アルキルアリール、−（ＣｎＨ２ｎ）Ｒ（式中、ｎは１〜１５の整数であり、Ｒはｎ個の炭素原子のいずれか１つに置換されているＣＯＯＲ’（Ｒ’は、Ｈ又は（Ｃ１〜Ｃ１５）アルキルを表す）を表す）、（Ｃ１〜Ｃ１５）アルキルカルボニル、アリールカルボニル、アリール（Ｃ１〜Ｃ１５）アルキル、アリール（Ｃ１〜Ｃ１５）アルキルカルボニル、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）１〜１５ＣＯＯＨ、２−ピリジルカルボニル、ニコチノイル、イソニコチノイル、トルエンスルホニル、カルバモイル、１個又は２個の（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルで置換されたカルバモイル、アミノ、１個又は２個の（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルで置換されたアミノ、環上にハロゲンを有していてもよいアリールオキシ（Ｃ１〜Ｃ１５）アルキル、及び環上に（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシ若しくは（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシを有するアリールからなる群より選択される基により置換されている化合物である。
本発明において、（Ｃ１〜Ｃ１５）アルキルは、炭素数１〜１５の直鎖若しくは分岐鎖のアルキル基を意味し、好ましくは炭素数１〜８、更に好ましくは炭素数１〜６の直鎖若しくは分岐鎖のアルキル基である。好適な例として、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｓ−ブチル、ｉ−ブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル、ｎ−ヘプチル、ｎ−オクチル、ｎ−ノニル、ｎ−デシル、ｎ−ウンデシル、ｎ−ドデシル等の基が挙げられる。なお、これらの基はクロロ（Ｃｌ）、ブロモ（Ｂｒ）、ヨード（Ｉ）などのハロゲン、ヒドロキシル（ＯＨ）、アミノ（ＮＨ２）などの置換基を有していてもよい。
本発明において、（Ｃ１〜Ｃ１５）アルケニルは、二重結合を１個含む炭素数２〜１５の直鎖若しくは分岐鎖のアルケニル基を意味し、好ましくは炭素数２〜８、更に好ましくは炭素数２〜６の直鎖若しくは分岐鎖のアルケニル基である。好適な例として、ビニル、アリル、１−若しくは２−ブテニル、１−若しくは２−ペンテニル、１−、２−若しくは３−ヘキセニル、１−、２−、３−若しくは４−オクテニル等の基が挙げられる。なお、これらの基はクロロ（Ｃｌ）、ブロモ（Ｂｒ）、ヨード（Ｉ）などのハロゲン、ヒドロキシル（ＯＨ）、アミノ（ＮＨ２）などの置換基を有していてもよい。
本発明において、アリールは芳香族化合物から水素原子１個を除いた残りの原子団を意味し、フェニル、ナフチル、ビフェニル、アントラニル（アントリル）、フェナントリル、及びこれらが１〜３個の置換基（但し、アルキルを除く）によって置換されたものを意味する。置換基の種類は特に限定されないが、好ましい置換基としては、（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニル、ハロゲン（フルオロ、クロロ、ブロモ、ヨード）、ヒドロキシル、アミノ、ニトロなどが挙げられる。好ましいアリールは、フェニル及びナフチルである。
本発明において、（Ｃ１〜Ｃ１５）アルキルアリールは、（Ｃ１〜Ｃ１５）アルキルを置換基として有するアリールを意味し、（Ｃ１〜Ｃ１５）アルキル及びアリールの意味は前記の通りである。好ましい、（Ｃ１〜Ｃ１５）アルキルアリールの例としては、トリル（２−メチルフェニル、３−メチルフェニル、４−メチルフェニル）、４−エチルフェニル、キシリル（例えば、２，４−ジメチルフェニル、２，５−ジメチルフェニル、３，５−ジメチルフェニル、３，４−ジメチルフェニル）等が挙げられる。
本発明において、−（ＣｎＨ２ｎ）Ｒ（式中、ｎは１〜１５の整数である）は、ｎ個のメチレンの末端の炭素原子にＲが結合している基（−ＣＨ２ＣＨ２・・・ＣＨ２ＣＨ２Ｒ）あるいはＲが末端の炭素原子以外の炭素原子に結合している基（−ＣＨ２ＣＨ２・・・ＣＨＲＣＨ３）を意味する。また、Ｒはｎ個の炭素原子のいずれか１つに置換されているＣＯＯＲ’を意味し、Ｒ’は、Ｈ又は（Ｃ１〜Ｃ１５）アルキルを意味する。Ｒ’における（Ｃ１〜Ｃ１５）アルキルの意味は前記の通りである。好ましい−（ＣｎＨ２ｎ）Ｒの例としては、−ＣＨ２ＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）２ＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）３ＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）４ＣＯＯＨ、−ＣＨ２ＣＯＯＣＨ３が挙げられる。
本発明において、（Ｃ１〜Ｃ１５）アルキルカルボニルにおける（Ｃ１〜Ｃ１５）アルキルの意味は前記の通りである。好ましい、（Ｃ１〜Ｃ１５）アルキルカルボニルとしては、−ＣＯＣＨ３、−ＣＯＣＨ２ＣＨ３が挙げられる。
本発明において、アリールカルボニルにおけるアリールの意味は前記の通りである。好ましい、アリールカルボニルとしてはベンゾイル、１−ナフトイルが挙げられる。
本発明において、アリール（Ｃ１〜Ｃ１５）アルキルにおけるアリール及び（Ｃ１〜Ｃ１５）アルキルの意味は前記の通りである。好ましい、アリール（Ｃ１〜Ｃ１５）アルキルとしては、ベンジル、フェネチルが挙げられる。
本発明において、アリール（Ｃ１〜Ｃ１５）アルキルカルボニルにおけるアリール及び（Ｃ１〜Ｃ１５）アルキルの意味は前記の通りである。好ましい、アリール（Ｃ１〜Ｃ１５）アルキルカルボニルとしては、ベンジルカルボニル、フェネチルカルボニルが挙げられる。
本発明において、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）１〜１５ＣＯＯＨの中で特に好ましいのは、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）１〜６ＣＯＯＨであり、例えば、−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ２ＣＯＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）２ＣＯＯＨが挙げられる。
本発明において、２−ピリジルカルボニル、ニコチノイル（３−ピリジルカルボニル）、イソニコチノイル（４−ピリジルカルボニル）、トルエンスルホニル、カルバモイル、アミノはいずれも好ましい基として用いることができる。
本発明において、１個又は２個の（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルで置換されたカルバモイルにおける（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルとしては、特にメチル、エチル、ｎ−プロピルが好ましい。好ましい例として、メチルカルバモイル、ジメチルカルバモイル、エチルカルバモイル、ジエチルカルバモイルが挙げられる。
本発明において、１個又は２個の（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルで置換されたアミノにおける（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルとしては、特にメチル、エチル、ｎ−プロピルが好ましい。好ましい例として、メチルアミノ、ジメチルアミノ、エチルアミノ、ジエチルアミノが挙げられる。
本発明において、環上にハロゲンを有してもよいアリールオキシにおけるアリールの意味は前記の通りである。ハロゲンはフルオロ（Ｆ）、クロロ（Ｃｌ）、ブロモ（Ｂｒ）、ヨード（Ｉ）を意味し、特にクロロが好ましい。環上にハロゲンを有してもよいアリールオキシの好適な例としては、フェノキシメチル、フェノキシエチル、４−クロロフェノキシメチル等が挙げられる。
本発明において、環上に（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシ若しくは（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシカルボニルを有するアリールとして好ましい基の例としては、４−メトキシフェニル、４−アセチルフェニルが挙げられる。
本明細書で「アスコフラノン同族体」というときは、特に断らない限り、アスコフラノンと類似の構造を有する化合物を意味し、少なくともオルシルアルデヒド部分を有し、オルシルアルデヒド部分の３位に適当な側鎖（例えば、テルペノイド基）を有し、５位にＨ又はハロゲン（例えば、Ｃｌ）を有し，かつ核内リセプターＰＰＡＲに結合することができるものを指す。デヒドロアスコフラノンもアスコフラノン同族体に含まれる。
本明細書で「アスコクロリン同族体」というときは、特に断らない限り、アスコクロリンと類似の構造を有する化合物を意味し、少なくともオルシルアルデヒド部分を有し、オルシルアルデヒド部分の３位に適当な側鎖（例えば、テルペノイド基）を有し、５位にＨ又はハロゲン（例えば、Ｃｌ）を有し，かつ核内リセプターＰＰＡＲに結合することができるものを指す。
本発明の化合物は、その立体異性体、又はそれらの医薬として許容できる塩をも含む。本発明において、立体異性体は幾何異性体、互変異性体、光学異性体等を含む。また、医薬として許容できる塩は、塩酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩、臭化水素酸塩、酢酸塩、アスコルビン酸塩、安息香酸塩、サリチル酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、リンゴ酸塩、酒石酸塩などの酸との塩、ナトリウム塩、カリウム塩、マグネシウム塩、カルシウム塩などの塩基との塩を含む。
以下に、本発明で用いるアスコフラノン及びその誘導体並びにアスコクロリン及びその誘導体を示す。
2003063849.tif 000020
2003063849.tif 000021
2003063849.tif 000022
製造方法
本発明の化合物は、糸状菌Ａｓｃｏｃｈｙｔａ  ｖｉｃｉａｅなどを培養することにより産生される代謝産物アスコクロリン、アスコフラノン及びそれらの類縁物質、さらに、それらを有機化学的に修飾した誘導体に大別される。アスコフラノンは本発明者の一人が１９７２年に報告した糸状菌Ａｓｃｏｃｈｙｔａ  ｖｉｃｉａｅが産生する抗生物質（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  Ｎｏ．２５，２５４１−２５４４）で、本菌はアスコフラノンと同時にアスコクロリンをも産生する。一方、アスコクロリンはＡｓｃｏｃｈｙｔａ  ｖｉｃｉａｅ以外にもＮｅｃｔｒｉａ  ｃｏｃｃｉｎｅｓ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｓｏ．、Ｃｙｌｉｎｄｏｃａｒｐｏｎ  ｌｕｃｉｄｉｕｍ、Ｃｙｌｉｎｄｒｏｃｌａｄｉｕｍ  ｉｌｉｃｉｃｏｌａ、Ｃｙｌｉｎｄｒｏｃｌａｄｉｕｍ  ｓｐ．、Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｓｐ．等の糸状菌が産生することが報告されているが、アスコフラノンがこれらの糸状菌から単離されたという報告はない。アスコフラノンはＡｓｃｏｃｈｙｔａ  ｖｉｃｉａｅに特異的な代謝産物である。
デヒドロアスコフラノンは、アスコフラノンを出発物質として、そのテトラハイドロフラン環から、定法に従って脱水素反応を行うことにより、合成することができる。また、アシル化、アルキル化されたデヒドロアスコクロリンは、次の方法によって合成することができる。なお、この方法はアスコクロリン及びアスコフラノン、並びにそれらの誘導体のアシル化、アルキル化のためにも用いることができる。
本願化合物の光学異性体は、周知の慣用手段（光学分割、クロマトグラフィーによる分離、不斉合成等）を用いて製造することができる。
アシル化
2003063849.tif 000023
アルキル化
2003063849.tif 000024
２−Ｏ−アルキルデヒドロアスコフラノン誘導体
オルシルアルデヒド２位の水酸基をアルキル基に置換する方法は次の通りである。
2003063849.tif 000025
作用
［動物実験の成績］
本系統の化合物のマウス、ラット、イヌ、ウズラ、ウサギ等の各種モデル動物に対する実験成績を、表２に示した。
本系統の化合物は各種の実験動物モデルにおいて有意に血圧を降下させる作用を示す。降圧作用は麻酔ラット並びに麻酔イヌの動脈圧を測定する急性の血圧降下実験、及び片側の腎臓を摘出しミネラルコルチコイドと食塩水を負荷したＤＯＣＡ高血圧ラット、本態性高血圧症の病態モデルと言われる自然発症高血圧ラット、遺伝性肥満糖尿病マウスであるｏｂ／ｏｂマウスなどを用いた慢性実験でも認められる。
本系統の化合物はマウス、ラット、ビーグル犬などの健常動物に経口投与すると、血清総コレステロールを有意に低下させることができる。特筆すべきは、２％コレステロールを混入した飼料を与え９ヶ月間飼育し高コレステロール血症を呈したウズラ並びにミネラルコルチコイドと食塩水を負荷したため心血管病を発症し、高コレステロール血症を発症したラットなどの病態モデルでも、血清コレステロールの上昇を有意に抑制することである。
遺伝性肥満動物である、ｄｂ／ｄｂマウス、ｏｂ／ｏｂマウス及びＺｕｃｋｅｒラットは、血清が白濁するほどの著しい高中性脂肪血症を呈する。本系統の化合物はマウス、ラット、ビーグル犬など健常動物の血清中性脂肪を低下させる一方で、遺伝性肥満動物の血清中性脂肪を有意に低下させ、白濁した血清を透明にするほど強力な血清中性脂肪低下作用を示す。さらに、糖尿病動物で上昇している血清遊離脂肪酸濃度の低下作用を示すことも確認している。
一方、本系統の化合物は、遺伝性肥満糖尿病マウスにおいて血糖低下、耐糖能改善、血清インスリン低下、インスリン感受性改善、多飲多尿の改善、尿糖排泄の減少等々、糖代謝異常を正常化する多彩な作用を示す。
動脈硬化の予防／治療に関しては、その改善に有効と考えられているフィブレイト系薬物、チアゾリジン系薬物、プロブコール、スタチン系薬物と本系統の化合物とのあいだには、作用面で大きな差異が認められる。両者間のもっとも大きな違いは、前者が動脈の炎症性病変に直接的な消炎作用を示さないのに対し、後者は直接的な消炎作用を示唆する実験成績が集積していることである。すなわち、本系統の化合物はウサギ及びウズラの飼料に多量の脂質を添加して発症させる動脈硬化を有意に阻止する作用を示す。さらに、片側腎臓摘出ラットにミネラルコルチコイドを投与し、食塩水を飲料水として飼育して惹起される高血圧症、心臓の肥大、大動脈の肥厚、腎臓の浮腫等を抑制し、心血管病を予防する作用を示す。高血圧性の心血管病を発症したラットは、腸間膜動脈のような細小動脈に典型的な血管炎症である結節性動脈周囲炎を多発するが、本系統の化合物は結節性動脈周囲炎の発症をも有意に阻止する。これらは、予防的な作用であるが、興味深いことに本系統の化合物は結節性動脈周囲炎に対し治療効果を示す。すなわち、片側腎臓摘出ラットにミネラルコルチコイドを投与し、食塩水を飲料水として１ヶ月ほど飼育して結節性動脈周囲炎の発症を確認してから、ミネラルコルチコイドと食塩水の負荷を中止して正常な飼育条件に戻すと、ラットの血圧は徐々に低下して正常に近づき、結節性動脈周囲炎も治癒して消失する。その際、本系統の化合物を経口投与すると、結節性動脈周囲炎の治癒・消失が有意に促進されるのである。
多重危険因子症候群は上半身肥満、腹部への多量の脂肪沈着（内臓脂肪症候群）がもっとも顕著な危険のシグナルである。最近の研究によると、内臓脂肪症候群をまねく犯人として、副腎皮質が産生するグルココルチコイドが疑われている。副腎皮質の過形成からグルココルチコイド産生が過剰になって惹起されるクッシング症候群は、腹部への著しい脂肪沈着が起こること、疾病治療のためにグルココルチコイドの投与を受けた患者がしばしば上半身肥満を起こすことがこの仮説の根拠になっている。現在、トランスジェニック・マウスでの解析から副腎皮質でグルココルチコイドを産生する酵素が過剰に発現することが、グルココルチコイドの過剰生産から腹部への脂肪沈着を促進する原因であることが確認されている。従って、生体内でのグルココルチコイド産生コントロールが、多重危険因子症候群を予防あるいは治療する上で決定的に重要になる可能性がある。
本系統の化合物は、ラットにデキサメサゾンを投与して惹起される肝臓の糖新生を抑制するので、ｉｎ  ｖｉｖｏでグルココルチコイドの作用と拮抗しており、さらに、ラットにコルチゾールを投与して起こる多飲多尿と尿糖排泄を特徴とするステロイド糖尿病を抑制する作用がある。また、同位元素で標識した４−Ｏ−ｍｅｔｈｙｌａｓｃｏｃｈｌｏｒｉｎは、脂肪組織と同時に副腎にも多量かつ特異的に分布し、副腎皮質のステロイドホルモン（グルココルチコイド＋ミネラルコルチコイド）合成を制御することがわかっている。これらの事実は本系統の化合物が内臓脂肪症候群の予防及び／又は治療に有用であることを強く支持している。
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［臨床試験の成績］
一方、本系統の化合物を用いて行った臨床試験の成績は、次の表３に要約されている。なお、臨床Ｉ試験は高血圧症、糖尿病などを合併した高コレステロール血症患者１６名の参加を得て行われた。一方、臨床ＩＩ試験は、インスリン非依存性ＩＩ型糖尿病患者７９名の参加の下で行われた。
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実施例で詳細に述べるように、本系統の化合物が多重危険因子症候群の患者が持つ個々の危険因子に対する改善効果は、１６名の高コレステロール血症患者が参加した臨床臨床Ｉ試験と７９名のＩＩ型糖尿病患者が参加した臨床第二相前期試験の成績から証明することができる。
本系統の化合物の製剤
本発明の化合物を投与する場合、類似の用途に供される薬剤が許容されている。任意の投与経路で純品の形または適当な医薬組成物の形で製剤化して投与することができる。従って投与は、例えば錠剤、座剤、丸剤、カプセル剤、散剤、液剤、懸濁剤、乳剤、クリーム剤、ローション剤、エアロゾール剤、軟膏剤、ゲル化剤などのような固体、半固体、凍結乾燥粉末または液体投与形態で、例えば経口、鼻腔内、非経口または局所的に、好ましくは正確な用量を１回に投与しうる適当な単位用量形態で実施することができる。この組成物は通常の製薬用担体または賦形剤および本発明の化合物からなり、さらにその他の医療用医薬品、担体および吸収補助剤などを含有してもよい。一般に製剤上許容しうる組成物は、投与しようとする剤形に応じて、本発明の化合物を約１〜９９（重量）％含有し、適当な医薬添加物を約９９〜１％含有している。この組成物は、医療用医薬品として本発明の化合物を約５〜７５％含有し、残りは適当な医薬品用賦形剤を含有している。
本発明の化合物が病態を改善するために有効な一日あたりの投与量は、成人の体重ｋｇあたりで０．１〜２０ｍｇ／ｋｇにあり、望ましくは０．２〜５ｍｇ／ｋｇである。先に詳細に説明した疾患に対する好ましい投与形態は、疾患の程度に応じて調節可能に設定した投薬量を選定できるように製剤化することである。製剤化にあたって最も重要なことは、本発明の化合物群が脂溶性であることに由来する制約である。核内リセプター・スーパーファミリーのリガンドは、脂溶性ホルモンないしビタミンであり、従って、本発明の化合物も脂溶性であることは当然である。
経口投与用として製剤上許容できる添加物は、例えばマンニット、乳糖、でんぷん、ステアリン酸マグネシウム、サッカリン・ナトリウム、タルク、セルロース、グルコース、ゼラチン、シュクロース、炭酸マグネシウムなどのような通常使用可能な任意の賦形剤を加えて調整する。そのような組成物は、液剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、散剤および徐放製剤などの形態をとる。組成物は錠剤または丸剤の形態が好ましいが、そのような組成物は本発明の化合物と一緒に乳糖、シュークロース、リン酸にカルシウムなどの希釈剤、でんぷんおよびその誘導体のような崩壊剤、ステアリン酸マグネシウムなどのような滑沢剤、およびでんぷん、アラビアゴム、ポリピニルピロリドン、ゼラチン、セルロースおよびそれらの誘導体のような結合剤、さらに高度に脂溶性で溌水性である本発明の化合物粒子表面を水で濡らす作用を示す界面活性剤、脂溶性の添加物、胆汁酸、リン脂質などを含有する。脂肪族系の合成界面活性剤又は有機溶媒可溶の高分子助剤を含有することは特に好ましい。’これらの例としては、例えば、アラビアゴム、アルギン酸ナトリウム、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ハイドロキシプロピルセルロース、ポリビニルピロリドン、ベントナイト、ラウリル硫酸ナトリウム、ポリソルベート８０、ソルビタンモノ脂肪酸エステル、ステアリン酸ポリオキシル４０等がある。
製剤上で特に重要なことは、本発明の化合物が物性の点で溌水性であることに由来する制約である。一般に脂溶性薬物の消化管吸収は、薬物粒子から単分子が水に溶ける速度に支配される。水に溶けた脂溶性薬物は、消化管粘膜の吸収部位に到達すると、事実上バリアフリーで急速に吸収されるからである。水に難溶性の薬物であっても、水への溶解速度が速やかであれば、経口投与により速やかに吸収され、バイオアベイラビリティが大きくなる。しかるに、本発明の化合物は、水の溶ける速度がきわめて遅いことが知られている。従って、製剤化する場合には、水への溶解速度を速めるための添加物及び製剤化工程での工夫が必要である。
本発明の化合物のように水に難溶性かつ水への溶解速度がきわめて遅い場合、水への溶解を促進するための工夫の一つは、薬物粒子直径をできるだけ小さくすること、すなわち、（１）水と粒子が接触する表面積を広げるため微粒子化することである。しかし、単に微粒子化しても、粒子表面が溌水性のため水と接触できず、微粒子として分散しなければ、水への溶解速度は大きくならない。従って、粒子表面が水と接触できるようにするため、（２）本発明の化合物と界面活性剤あるいは脂溶性基と水溶性基を併有する高分子を共存させる必要がある。また、（３）薬物粒子から単分子が遊離しやすくする工夫も必須である。すなわち、薬物粒子が結晶の場合には、結晶の格子から単分子が遊離するため必要な自由エネルギーが小さい結晶形を選択すること、さらに本発明の化合物をアモルファス化して単分子が遊離しやすくする製剤化工程が必要である。これら本発明の化合物を製剤化するため必要な条件は、すべて本発明の化合物発明の請求項に記載されるとおりである。
また、本発明のキットは、本発明で用いられる前記アスコフラノン及びその誘導体並びにアスコクロリン及びその誘導体のうちの１種又は２種以上の化合物及び上で例示した種々の担体を含む任意の１種以上の担体を含む薬学的組成物、並びに使用説明書を含む。
実施例
以下に製剤例、製造例等の実施例を示して本発明を更に具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に何ら限定されるものではない。
実施例１（製剤例１）
一錠中に４−Ｏ−ｍｅｔｈｙｌａｓｃｏｃｈｌｏｒｉｎ、６３ｍｇ、セスキオレエート・ソルビタン１０ｍｇ、粉末シリカゲル１０ｍｇ、とうもろこし澱粉４０ｍｇ、Ｌ−ヒドロキシプロピルセルロース（ＰＯ−３０）５０ｍｇ、ヒドロシキプロピルセルロース−ＳＬ１２ｍｇ、微結晶セルロース４６ｍｇ、カルボキシメチルセルロース・ナトリウム塩１０ｍｇ、ステアリン酸カルシウム３ｍｇ、タルク６ｍｇを含むよう各原料を混合し、定法通りに顆粒化してから打錠して錠剤化した。
実施例２（製剤例２）
４−Ｏ−ｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｙｌａｓｃｏｃｌｏｒｉｎ、１００ｇ、微結晶セルローズ７０ｇ、乳糖３５ｇ、カルボキシメチルセルローズ・カルシウム塩７０ｇ、コーンスターチ７０ｇ及びステアリン酸マグネシウム５ｇを混合し、定法通りに打錠して一錠が０．３５ｇの錠剤を調整した。
実施例３（製剤例３）
マルチプルリスクファクター症候群のモデル動物であるＣ５７ＢＬ／６ｊ−ｏｂ／ｏｂマウスにアスコクロリン誘導体４−Ｏ−カルボキシメチルアスコクロリン（ＡＳ−６）を０．１％の割合になるように混合した粉末飼料で１週間飼育し、体重、血糖値、血中インスリン、血中中性脂肪を測定した。
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ｏｂ／ｏｂ対照群はその正常同腹仔（Ｌｅａｎ）対照群に比較して、体重、血糖値、血中インスリン、血中脂質はいずれも有意の高値を示し、ｏｂ／ｏｂマウスではリスクファクターが多重に集積していたが、ＡＳ−６投与によって体重と血中コレステロールを除くいずれのリスクファクターも有意に減少した。
実施例４
マルチプルリスクファクター症候群のモデル動物であるＣ５７ＢＬ／Ｋｓｊ−ｄｂ／ｄｂマウスにアスコクロリン誘導体４−Ｏ−カルボキシメチルアスコクロリン（ＡＳ−６）を０．１％の割合になるように混合した粉末飼料で１週間飼育し、体重、血糖値、血中インスリン、血中中性脂肪を測定した。
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ｄｂ／ｄｂ対照群はその正常同腹仔（Ｌｅａｎ）対照群に比較して、体重、血糖値、血中インスリン、血中脂質はいずれも有意の高値を示し、ｄｂ／ｄｂマウスではリスクファクターが多重に集積していたが、ＡＳ−６投与によって血糖値、血中遊離脂肪酸、血中中性脂肪はいずれも有意の減少を示した。
実施例５
Ｚｕｃｋｅｒラットを２分し、１群には４−Ｏ−カルボキシメチルアスコクロリン（ＡＳ−６）を０．１２％になるように混合した市販飼料で、他の１群と正常同腹仔（Ｌｅａｎラット）は非混合市販飼料で１０週間飼育し体重、白色脂肪細胞重量、血中インスリン、血糖、血中脂質を測定した。（１群７匹）
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Ｚｕｃｋｅｒ対照群はその正常同腹仔（Ｌｅａｎ）対照群に比較して体重、白色脂肪細胞、血糖値（飽食時）、インスリン、コレステロール、遊離脂肪酸、中性脂肪、リン脂質は有意の高値を示し、リスクファクターを多重に集積していたが、ＡＳ−６投与によって、インスリン、遊離脂肪酸、中性脂肪、リン脂質は有意に低下した。
実施例６
Ｚｕｃｋｅｒラットを用いて糖負荷試験における４−Ｏ−カルボキシメチルアスコクロリン（ＡＳ−６）の効果を検討した。Ｚｕｃｋｅｒ対照ラット、Ｚｕｃｋｅｒ  ＡＳ−６投与ラット（２０ｍｇ／ｋｇ、１週間経口投与）、Ｌｅａｎ対照ラットを一夜絶食し、翌朝、尾静脈より採血後、グルコースを２ｇ／ｋｇ経口投与した。３０分，６０分，１２０分後に尾静脈より採血して血糖を測定した。（１群７匹）
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Ｌｅａｎ対照群に比較して、Ｚｕｃｋｅｒラットは飽食時血糖値には有意の差は認められなかったが、空腹時血糖値は有意の高値を示した。ＡＳ−６投与により空腹時血糖値は１９．７％の低下を示した。
糖負荷試験ではＺｕｃｋｅｒ対照群に耐糖能の低下が認められたが、ＡＳ−６投与により、糖負荷３０，６０，１２０分後に有意の血糖値の低下が認められた。
実施例７
アスコフラノン（ＡＦ）とアスコクロリン（ＡＣ）並びにその誘導体４−Ｏ−メチルアスコクロリン（ＭＡＣ）４−Ｏ−カルボキシメチルアスコクロリン（ＡＳ−６）、４−Ｏ−ニコチノイルアスコクロリン（ＡＳ−１０３）を表に示す割合になるように混合した粉末飼料をｄｂ／ｄｂマウスに１週間与えて血糖低下作用を検討した。（１群８匹）
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Ｌｅａｎ対象群に比較してｄｂ／ｄｂ対象群の血糖値は２．６倍の高値を示したが、本系統の化合物の投与によって、有意の低下作用が認められた。
実施例８
Ｚｕｃｋｅｒラットに４−Ｏ−カルボキシメチルアスコクロリン（ＡＳ−６）を０．１％の割合になるように混合した飼料で、４週間飼育し、投与開始０，２，４週目に血圧を測定した。（１群６匹）
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１０週齢においてＺｕｃｋｅｒラットはその正常同腹仔に比較して有意の血圧上昇（＋１７．９％）が見られたが、ＡＲ−６１０投与によってＺｕｃｋｅｒ対照群に比較して投与開始２週後では１３．７％、４週後では１９．９％の血圧低下が認められた。
実施例  ９
臨床試験Ｉのプロトコールと参加者の背景
尚コレステロール血症の患者１６名の参加を得て実施した臨床Ｉ試験のプロトコールは表に示すとおりである。参加者は白人（コーカソイド）男性９名、白人女性は７名である。彼らは医療機関が提示したヘルシンキ宣言に基づく臨床試験参加同意書に自発的に署名して本臨床臨床Ｉ試験に参加した。年齢は平均５５才（４０〜８２才に分布）、体重は平均７０．２±１３．５７ｋｇ（標準偏差）であった。
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全員が高脂血症を治療するための食事療法を受けていた。種々な薬剤を投与されていたので、臨床Ｉ試験に先立つ８週間は、すべての薬物投与を中止して薬剤の影響をウオッシュアウトする期間とした。臨床Ｉ試験期間中は、併用薬剤の投与は認めなかった。ＩＩ型糖尿病患者は除外したが、参加者の中に５名の高血糖を呈する患者が含まれていた。しかし、糖尿病の診断が確定していなかったので参加を認めた。１６名中に高血圧症を合併している患者が１０名、ＷＨＯの定義によるボーダーライン高血圧症が４名であり、血圧が正常なものは２名に過ぎなかった。
臨床Ｉ試験の成績概要
臨床Ｉ試験は試験期間中の脱落者がなく、すべての患者が１２週の試験期間を完了した。副作用は１例に軽い発疹、１例にめまいがあったが、投与を中止するほどではなかった。前者は一過性で程なく消退したので、投薬との因果関係は不明である。後者は高血圧患者であり、その副作用は血圧が降下したためと思われる。血清生化学検査、血球検査及び尿検査には投薬による異常は認められなかった。血清総コレステロールは投薬により３０％以上低下した。また、投薬により血圧は高血圧群並びにボーダーライン高血圧群とも正常域上限まで低下し、８週間経過した後の偽薬投与期間に徐々に上昇する傾向があった。高血糖を呈した５症例の血糖は投薬により正常値に復帰し、ｐａｉｒｅｄ  ｔ−ｔｅｓｔによる差異は統計的に有意であった。
臨床Ｉ試験における血清総コレステロールの変動
表１１に示すように、本剤による血清総コレステロール低下効果は緩徐ではあるが、統計的には高度な有意差を示す。０．５ｍｇ／ｋｇを経口投与して１週間後に血清総コレステロールは平均７０ｍｇ／ｄｌ低下しており、その１６倍量を投与した６週目では正常値上限まで低下した。さらに偽薬に切り替えた８〜１２週では、血清総コレステロールは少しずつ上昇しているが、いぜんとして投与前より有意に低い水準に止まっている。これほどの強い薬効持ち越し効果は、本剤がヒドロキシメチルグルタリルＣｏＡ阻害剤のような単なる酵素阻害剤ではないことを示唆している。
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臨床Ｉ試験における降圧効果
表１２に４−Ｏ−メチルアスコクロリンの高血圧症患者１０名に対する降圧作用を示した。本剤の高血圧症患者に及ぼす降圧効果は急速とは云えないが、収縮期及び拡張期とも時間を追って徐々に血圧を降下させ、８週目には両者とも正常値まで低下させた。偽薬に切り替えた１０〜１２週目にかけて血圧は徐々に上昇する傾向があるが、投与前値と比べると有意に低く、血圧にも持ち越し効果があることを示唆している。
ボーダーライン高血圧症群４名の収縮期及び拡張期血圧を集計し統計処理した結果を表１３に示す。収縮期圧は投与１週間後に正常化し、収縮期圧も投与６週間後に正常値に復帰した。しかも、偽薬に切り替えた１０〜１２週後でも血圧は正常値を維持しており、持続性の降圧効果を示唆している。なお、臨床Ｉ試験における２名の正常血圧者は、試験期間をとおして正常な血圧を維持しており、本剤が正常な血圧には影響を及ぼさないことは明確である。
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臨床Ｉ試験における血糖値の変動
臨床Ｉ試験における血糖値の変化を表１４に示した。この試験に参加した患者のなかで空腹時血糖（ＦＢＳ）が１００ｍｇ／ｄｌを越える５名の血糖推移を見ると、既に第１週で血糖値は３２．４ｍｇ／ｄｌ低下し、投与量が８ｍｇ／ｋｇに上昇した第６週では完全に正常値に復帰した。偽薬に切り替えた第１０週以降も投与前値と比べて有意に低い水準を維持しており、本剤が高コレステロール血症及び高血圧症の場合と同様、血糖に対しても持ち越し効果があることを示している。
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臨床Ｉ試験における体重の変動
本臨床Ｉ試験では参加した患者は、高コレステロール血症に対する食事療法について栄養士から指導を受けていた。試験期間中、食事療法が許容する範囲内で食事は質・量とも患者の自由な選択にゆだねられ、とくに食事の摂取制限は行われなかった。しかし、投与直前と８週後における体重を比較すると、投与後の体重は僅かに０．９ｋｇではあるが有意に減少しており（Ｐ＜０．００１）、体重が増加した患者はなかった。投薬期間中に食欲不振あるいは消化管症状を訴えた患者は一人もなかったので、この体重減少は副作用によるものではない。本系統の化合物がチアゾリジン系化合物と異なるのは、投薬により体重増加がまったく見られず、逆に徐々にではあるが体重が確実に低下する点である。
臨床臨床Ｉ試験における血清中性脂肪及び遊離脂肪酸の変動
高コレステロール血症患者の血清中性脂肪は、４−Ｏ−メチルアスコクロリンに比較的良好に反応するグループとそうでないグループに分かれることがわかった。すなわち、血清中性脂肪／血清総コレステロールの比が１．２以下（フレデリクソンの分類で高脂血症ｔｙｐｅ  ＩＩａに相当）は、投薬に反応して血清中性脂肪も有意に低下するが、比が１．２以上（フレデリクソン分類でｔｙｐｅ  ＩＩｂ及びｔｙｐｅ  ＩＶ）の場合には有意な低下が認められなかった。中性脂肪／総コレステロールの比が１．２以下のリポ蛋白粒子としては低比重リポ蛋白（ＬＤＬ）があり、逆に比が１．２より大きい場合には血清に含まれるリポ蛋白のなかで、超低比重リポ蛋白（ＶＬＤＬ）が大きな割合を占めている。従って、４−Ｏ−ｍｅｔｈｙｌａｓｃｏｃｈｌｏｒｉｎは、虚血性心疾患に対する最大の危険因子と言われるＬＤＬを選択的に低下させるが、中性脂肪に富む血清リポ蛋白であるＶＬＤＬを減少させる作用は弱いことを物語っている。
実施例１０
臨床ＩＩ試験のプロトコールと参加者の背景
食事療法中で血糖のコントロールが良好な非インスリン依存性ＩＩ型糖尿病患者７９名（全員がモンゴロイドの日本人）が臨床ＩＩ試験に参加した。ＩＩ型糖尿病治療薬として使用されるスルフォニル尿素剤、ビグアナイド剤、血清脂質低下剤として使用されるフィブレート系薬剤、ニコチン酸、プロブコールなどの併用を禁じたが、降圧剤の併用はとくに禁止しなかった。第二相試験におけるプロトコールは表に示すとおりである。参加者は医療機関が提示したヘルシンキ宣言に基づく臨床試験参加同意書に承諾の署名した後、ボランティアーとして参加した。参加者は男性２６名、女性５３名である。加入時の年齢は平均５８才±９．９才（平均値±標準偏差，年齢は３７才〜８１才に分布）、患者の体重を明治生命の標準体重表から割り出した標準体重で除した値は加入時で１．２４±０．１５４（平均値±標準偏差）で肥満者が多い。体重指数は１２週後で１．１８±０．１３７（平均値±標準偏差）に低下した。
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７９名中に高血圧症を合併している患者が７名（全員が降圧剤内服中）、ＷＨＯの定義によるボーダーライン高血圧症が１４名（全員が降圧剤内服中）であり、血圧が正常なものは５８名（内降圧剤内服者３１名を含む）であった。
臨床ＩＩ試験成績の概要
臨床ＩＩ試験も副作用に由来する脱落はなく、すべての患者が１２週の服薬コースを完了した。副作用は２例に軽い発疹があったが、投与を中止するほどではなかった。発疹は一過性で１週間以内に消退したので、投薬との因果関係は不明である。血清生化学検査、血球検査及び尿検査には投薬により異常は認められなかった。血清総コレステロールの投与前値が２２０ｍｇ／ｄｌを越える群は、投薬により血清総コレステロールが有意に低下した。臨床Ｉ試験とは異なり、血清中性脂肪も投薬により有意に低下した。投薬による血糖低下率は低いが、統計的には高度の有意差がある。一方、高血圧群並びにボーダーライン高血圧群の血圧は、投薬により有意に低下した。投薬前後で行った耐糖能試験は、投薬により改善し、同時に採尿して測定した尿糖排泄量も有意に改善した。体重も投与前と比べ０．９ｋｇ有意に減少した。
臨床ＩＩ試験における体重、空腹時血糖、血清総コレステロール、血清中性脂肪の変動
下表に投薬による体重、空腹時血糖、血清総コレステロール、血清中性脂肪の変動を示す。第二相試験の参加者は、非インスリン依存性ＩＩ型糖尿病と診断された患者であり、空腹時血糖値を除くと、表に示された指標に異常値があるために選ばれたわけではない。従って、体重、血清総コレステロール及び血清中性脂肪が正常範囲内にある患者も統計に含まれていた。
指標が正常範囲内の患者も含めた統計処理であるにもかかわらず、体重、空腹時血糖、血清総コレステロール及び血清中性脂肪は、治療により高度に有意な低下が認められた。体重、空腹時血糖、血清総コレステロール及び血清中性脂肪等々の危険因子がすべて有意に改善されており、本系統の化合物が多重危険因子症候群を改善することは明らかである。
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臨床ＩＩ試験における空腹時血糖の変動
空腹時血糖の変動を示す表１２から明らかなように４−Ｏ−メチルアスコクロリンは空腹時血糖が１３０ｍｇ／ｄｌ以下の正常血糖群に対しては血糖降下作用を示さない。しかし、血糖値が１３０ｍｇ／ｄｌを越える群では有意な血糖降下作用を示した。
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臨床ＩＩ試験における血清総コレステロールの変動
臨床ＩＩ試験に参加したＩＩ型糖尿病患者を血清総コレステロール濃度に従って超高値群、高値群と正常群に三分し統計処理を行った。
空腹時血糖の場合と同様、４−Ｏ−メチルアスコクロリンは血清総コレステロールが２２０ｍｇ／ｄｌ以下の正常群に対しては、その濃度を有意に変動させなかった。しかし、高値群と超高値群では投薬により高度に有意な血清総コレステロール低下が認められた。
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臨床ＩＩ試験における血清中性脂肪の変動
血清中性脂肪濃度はシンドロームＸ及びＴｈｅ  Ｄｅａｄｌｙ  Ｑｕａｒｔｅｔ説で危険因子とされる重要な指標である。血清総コレステロールと同様に血清中性脂肪が正常範囲内の１２０ｍｇ／ｄｌ以下の群とそれを越える異常高値群とに分けて統計処理を行った。
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血清中性脂肪も血清総コレステロールの場合と同様、異常高値群は投薬により有意に低下したが、正常値群は低下傾向を示しただけであった。
臨床ＩＩ試験における血圧の変動
この臨床ＩＩ試験に参加したＩＩ型糖尿病患者の約６６％が、降圧剤の投与を受けていた。降圧剤投与にもかかわらずＷＨＯ定義に合致する高血圧及びボーダーライン高血圧の患者が、それぞれ７名と１４名あり統計処理の対象になった。高血圧群は、服薬４週後の収縮期圧が１０ｍｍＨｇ低下したが有意差がなかった。しかし、それを唯一の例外として、収縮期圧及び拡張期圧は治療により少しずつ有意に低下した。高血圧を併発するＩＩ型糖尿病患者の降圧療法には、アンジオテンシン転換酵素阻害剤、アンジオテンシンＩＩ拮抗剤、カルシウム拮抗剤等が使われている。従って、頻用されるこれらの降圧剤が無効であっても、本系統の化合物は降圧効果を発揮することは意味し、高血圧治療に大きな進展をもたらす可能性があることが確認できた。
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ボーダーライン高血圧症のＩＩ型糖尿病患者の場合でも、表に示すように４−Ｏ−メチルアスコクロリンは高度に有意な降圧効果を示した。これらの成績は本系統の化合物が、既存降圧剤の効果を妨げることがないこと、既存降圧剤が無効の場合でも降圧効果を発揮すること等を意味し、単独で降圧剤としても実用化が可能であることを示唆している。
臨床ＩＩ試験における体重の変動と空腹時血糖並びに血清総コレステロール低下率との相関
ＩＩ型糖尿病のようにインスリン感受性が低下している場合、肥満が大きな危険因子になることは既に説明した。そこで体重減少と空腹時血糖並びに血清総コレステロールとの相関を検討した。７９名の患者を１２週間の臨床第二相前期試験中に体重が「３ｋｇ以上減少」、「０．１〜２．９ｋｇの減少」「不変〜増加」の三群に分け、クラスカル・ウオリスのＨｃ検定により体重変動と空腹時血糖ないし血清総コレステロールとの相関を計算した。その結果、表に示すように体重減少と空腹時血糖の低下率は、危険率５％以下で有意に相関することが明らかになった。このことは治療期間内に体重が３ｋｇ以上減少すれば、空腹時血糖の低下効果が確実に発現することを意味している。従来から云われているように、ＩＩ型糖尿病の病態改善は、肥満の治療にあることと一致する成績である。
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血清総コレステロールの低下率は、空腹時血糖よりさらに強く危険率１％以下で体重減少と相関している。この臨床試験に参加したＩＩ型糖尿病患者の体重は、標準体重を２４％オーバーしており、多数の肥満者が含まれていた。体重減少と血清総コレステロールの強い相関は、多重危険因子症候群の患者は可能な限り食物性エネルギーの過剰摂取による内臓脂肪の蓄積を避ける手だてを講ずるべきであること、蓄積した内臓脂肪を燃焼させることが病態を改善するための最優先課題であることを明示している。
臨床ＩＩ試験における糖尿病合併症に対する治療効果
糖尿病は合併症の疾病であり、末梢神経、腎臓、目、皮膚などをはじめ糖尿病に特有の合併症が起こる。この合併症はインスリン感受性の低下によって発症するので、薬物治療によりインスリン抵抗性が改善されるのであれば、合併症も改善されるはずである。そこで合併症の記載がある３０症例について、成績を集計し統計処理して治療効果をしらべた。
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「喉の渇き」と「多量の排尿」は、糖尿病（ＤＩＡＢＥＴＥＳ）の語源がギリシャ語のサイフォンであることからも明らかなように、あたかもサイフォンのように常に喉が渇き多量に飲料水を摂取する結果、多量に排尿することを意味し、糖尿病性腎症に特有の症状と見なすことができる。これらの症状は投薬により有意に改善された。すなわち、４−Ｏ−メチルアスコクロリンはインスリン抵抗性を解除した結果、糖尿病性腎症を改善した。次の「疲労感」「倦怠感」「ふくらはぎの痛み」も糖尿病性合併症特有の症状で、一括して糖尿病性神経症と呼ばれている。表に示すように４−Ｏ−メチルアスコクロリンは、これらの症状も経時的に改善した。これらの結果は本発明の化合物が糖尿病性神経症の改善にも有効に作用することを示している。
この臨床ＩＩ試験で除外例となった罹病１０〜２０年のＩＩ型糖尿病患者５症例でも合併症に対する有効性が明確に認められた。薬物の有効性は罹病期間に反比例し、罹病期間が長期になるほど薬効は低下する。すなわち、全員の糖尿病性腎症に関連する症状、「喉の渇き」「多量の排尿」が消失したのである。
臨床ＩＩ試験における耐糖能改善効果
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た耐糖能試験の成績は図２及び３に示した。実線が治療直前、点線が１２週の治療終了直後の成績である。医療施設によって耐糖能試験の方法が若干異なるので、ここでは同一施設でこの試験に参加したＩＩ型糖尿病患者全員（３０名）の集計結果を示した。図２は耐糖能試験における血糖値を、図３は耐糖能試験における尿糖濃度をそれぞれ示す。また、図２及び図３において数値は平均値±標準偏差を意味する。
これらの図から明らかなように４−Ｏ−メチルアスコクリリンは治療前と比べ経時的に測定された血糖値を有意に低下させる。しかも、採血時に同時に採取した尿に含まれるブドウ糖濃度も有意に減少させた。これらの成績は統計的に高度の有意差があるので、本系統の化合物がインスリン抵抗性を解除し、耐糖能を改善することは明らかである。
以下に製造例を示す。
製造例１
デヒドロアスコフラノン
アスコフラノンのテトラハイドロフラン環から水素を２分子の脱水素したデヒドロアスコフラノンは次のように合成した。水酸化ナトリウム０．１６ｇ（４．０ｍｍｌ）を脱イオン水０．７ｍｌに溶解し、水浴で冷却しながらＡｇＮＯ３（０．３４ｇ，２．００ｍｍｌ）の脱イオン水溶液（０．７ｍｌ）を少しずつ加えた、生成した硝酸銀の水懸濁液にアスコフラノン（０．２ｇ，０．４７６ｍｍｏｌ）のジオキサン溶液（１．４ｍｌ）を加えた。反応混合物を室温で三時間撹拌した後、水−ジオキサン混合溶媒（１：１）で希釈し、セライトで濾過した濾液を６Ｎ−ＨＣｌで酸性としてからジクロルメタンで抽出した。ジクロルメタン層を水、飽和食塩水で洗浄した後、ＭｇＳＯ４で乾燥し、減圧濃縮した。残査をシリカゲルＩＩカラムクロマトグラフィーにかけ、ジクロルメタン：アセトン（６０：１）により精製してデヒドロアスコフラノン０．０４７ｇ（収率２４％）を得た。
融点１３９．５−１４０．５℃  ＩＲ（ｃｍ−１）：１６８０，１６３５，１５５５  １Ｈ  ＮＭＲ（ｐｐｍ）：１．３５（６Ｈ，ｓ），１．８２（３Ｈ，ｂｒ  ｓ），１．８４（３Ｈ，ｂｒ  ｓ），２．１３（２Ｈ，ｂｒ  ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），２．３３（２Ｈ，ｂｒ  ｑ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），２．６０（３Ｈ，ｓ），３．４０（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ）．１０．１４（１Ｈ，ｓ），１２．６９（１Ｈ，ｓ）
１３Ｃ  ＮＭＲ（ｐｐｍ）：１２．９３，１４．４４，１６．１３，２２．０３，２３．０３（ｐｒｏｂａｂｌｙ  ｔｗｏ  ｏｖｅｒｌａｐｐｉｎｇ  ｐｅａｋｓ），２７．０５，３８．２９，８８．１０，９８．５２，１１３．１４，１１３．５９，１１４．２１，１２１．９０，１２５．７６，１３５．０３，１３７．７１，１３８．１２，１５６．１７，１６２．１５，１８４．６６，１９３．３０，２０７．２０  元素分析  実測値（％）Ｃ，６５．８８；Ｈ，６．５４．計算値（％）Ｃ，６５．９４；Ｈ，６．５０
製造例２
Ａ．４−Ｏ−Ｅｔｈｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌｍｅｔｈｙｌ−２−Ｏ−ｍｅｔｈｙｌａｓｃｏｃｈｌｏｒｉｎ（１）
水素化ナトリウム（６０％，２３．１ｍｇ，０．５７８ｍｍｏｌ）をペンタンで洗浄後、ＤＭＦ（１ｍｌ）に懸濁した。これに２−Ｏ−ｍｅｔｈｙｌａｓｃｏｃｈｌｏｒｉｎ（０．２２０ｇ，０．５２５ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２ｍｌ）溶液を滴下し、室温で３０分撹拌した後、ブロモ酢酸エチル（０．０６４１ｍｌ，０．５７８ｍｍｏｌ）を加え、５０℃で４時間撹拌した。反応液を飽和塩化アンモニウム水溶液にあけてエーテル抽出し、有機層を水、飽和食塩水で順次洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。乾燥剤を濾別した後、減圧濃縮し、残滓をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２  １５ｇ，ヘキサン−酢酸エチル）により精製して０．２０４ｇ（７７％）の（１）を得た（無色粘稠油状物質，ａｓ  ａ  ｃｏｌｏｒｌｅｓｓ  ｇｕｍ）。
ＩＲ（ｆｉｌｍ）：１７６５，１７１３，１６９４．  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）：０．７０（３Ｈ，ｓ），０．８０（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ），０．８３（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ），１．３１（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），１．５８−１．６７（１Ｈ，ｍ），１．９０（３Ｈ，ｂｒ  ｓ），１．９０−１．９６（２Ｈ，ｍ），２．３４−２．４４（３Ｈ，ｍ），２．６３（３Ｈ，ｓ），３．６５（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），３．８８（３Ｈ，ｓ），４．２９（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），４．６１（２Ｈ，ｓ），５．３９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ），５．４６（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），５．８９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ），１０．４２（１Ｈ，ｓ）．  ＥＳＭＳ（ｅｌｅｃｔｒｏｓｐｒａｙ  ｍａｓｓ  ｓｐｅｃｔｒｕｍ，ｐｏｓｉｔｉｖｅ）（ｍ／ｚ）：５０５｛（Ｍ＋Ｈ）＋，Ｃ２８Ｈ３７Ｏ６３５Ｃｌ＋Ｈ＋｝，５０７｛（Ｍ＋Ｈ）＋，Ｃ２８Ｈ３７Ｏ６３７Ｃｌ＋Ｈ＋｝
Ｂ．４−Ｏ−Ｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｙｌ−２−Ｏ−ｍｅｔｈｙｌａｓｃｏｃｈｌｏｒｉｎ（２）
上記で得られた（１）（０．２０７ｇ，０．４０９ｍｍｏｌ）をメタノール（６．２ｍｌ）に溶解し、２０％炭酸カリウム水溶液（１ｍｌ，１．４５ｍｍｏｌ）を加えて、室温で２時間撹拌した。反応液を３Ｎ塩酸でｐＨ２に調整した後、エーテルで抽出した。有機層を水、飽和食塩水で順次洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。乾燥剤を濾別した後、減圧濃縮し、残滓をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２  １５ｇ，ジクロロメタン−メタノール）により精製して０．１２２ｇ（６３％）の（２）を得た（無色粘稠油状物質，ａｓ  ａ  ｃｏｌｏｒｌｅｓｓ  ｇｕｍ）。
ＩＲ（ｆｉｌｍ）：１７１５，１６９６．  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）：０．７０（３Ｈ，ｓ），０．８１（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），０．８３（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），１．６２（１Ｈ，ｑｄ，Ｊ＝１３．５，６．０Ｈｚ），１．９１（３Ｈ，ｂｒ  ｓ），１．９１−１．９７（２Ｈ，ｍ），２．３４−２．４５（３Ｈ，ｍ），２．６３（３Ｈ，ｓ），３．６２（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ），３．８４（３Ｈ，ｓ），４．６５（２Ｈ，ｓ），５．４２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ），５．４３（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ），５．８９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ），１０．４２（１Ｈ，ｓ）．
製造例３
４−Ｏ−（４−Ｃａｒｂｏｘｙｂｕｔａｎｏｙｌ）ａｓｃｏｃｈｌｏｒｉｎ（４）
ａｓｃｏｃｈｌｏｒｉｎ（０．１５０ｇ，０．３５８ｍｍｏｌ）を無水ピリジン（１．５ｍｌ）に溶解し、４−ジメチルアミノピリジン（４．４ｍｇ，０．０３６ｍｍｏｌ）とグルタル酸無水物（０．０４９ｇ，０．４３０ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を５０℃で一夜撹拌後、１Ｎ塩酸を加えてｐＨ２とし、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。乾燥剤を濾別した後、減圧濃縮し、残滓をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２  １３ｇ，ヘキサン−酢酸エチル）により精製して０．０８１ｇ（４２％）の（４）を無色結晶として得た。
ｍｐ１２０−１２３℃  ＩＲ（ＫＢｒ  ｄｉｓｃ）：〜３０００，１７７１，１７１１，１６４９．  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）：０．７０（３Ｈ，ｓ），０．８１（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），０．８３（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），１．５９−１．６６（１Ｈ，ｍ），１．８８（３Ｈ，ｓ），１．８９−１．９６（２Ｈ，ｍ），２．１２（２Ｈ，ｑｕｉ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），２．３４−２．４５（３Ｈ，ｍ），２．５５（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），２．６５（３Ｈ，ｓ），２．７６（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），３．４２（２Ｈ，ｂｒ  ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），５．３５（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），５．３９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ），５．８７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ），１０．３０（１Ｈ，ｓ），１２．５４（１Ｈ，ｓ）．
製造例４
４−Ｏ−Ｉｓｏｎｉｃｏｔｉｎｏｙｌ−２−Ｏ−ｍｅｔｈｙｌａｓｃｏｃｈｌｏｒｉｎ（５）
２−Ｏ−ｍｅｔｈｙｌａｓｃｏｃｈｌｏｒｉｎ（６１．３ｍｇ，０．１４６ｍｍｏｌ）を無水ピリジン（１ｍｌ）に溶解し、塩化イソニコチノイル塩酸塩（７１．７ｍｇ，０．４０３ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を室温で３時間撹拌後、水を加えてさらに３０分撹拌し、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和硫酸銅水溶液、水、飽和重曹水溶液、飽和食塩水で順次洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。乾燥剤を濾別した後、減圧濃縮し、残滓をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２  １０ｇ，ヘキサン−酢酸エチル）により精製して６９．３ｍｇ（９０％）の（５）を得た（無色粘稠油状物質，ａｓ  ａ  ｃｏｌｏｒｌｅｓｓ  ｇｕｍ）。
ＩＲ（ｆｉｌｍ）：１７６０，１７１０，１７００．  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）：０．６９（３Ｈ，ｓ），０．７６−０．８３（６Ｈ，ｂｒ），１．５９−１．６４（１Ｈ，ｍ），１．６５（３Ｈ，ｂｒ  ｓ），１．８５−１．９６（２Ｈ，ｍ），２．３２−２．４５（３Ｈ，ｍ），２．６７（３Ｈ，ｓ），３．３９−３．５０（１Ｈ，ｂｒ），３．５０−３．６３（１Ｈ，ｂｒ），３．８８（３Ｈ，ｓ），５．２９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ），５．３４（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），５．８２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ），７．７９−７．９９（２Ｈ，ｍ），８．８７（２Ｈ，ｍ），１０．４９（１Ｈ，ｓ）．  ＥＳＭＳ（ｅｌｅｃｔｒｏｓｐｒａｙ  ｍａｓｓ  ｓｐｅｃｔｒｕｍ，ｐｏｓｉｔｉｖｅ）（ｍ／ｚ）：５２４｛（Ｍ＋Ｈ）＋，Ｃ３０Ｈ３４ＮＯ５３５Ｃｌ＋Ｈ＋｝，５２６｛（Ｍ＋Ｈ）＋，Ｃ３０Ｈ３４ＮＯ５３７Ｃｌ＋Ｈ＋｝。
製造例５
４−Ｏ−Ｉｓｏｎｉｃｏｔｉｎｏｙｌａｓｃｏｃｈｌｏｒｉｎ（６）
ａｓｃｏｃｈｌｏｒｉｎ（０．２００ｇ，０．４９４ｍｍｏｌ）を無水ピリジン（１ｍｌ）に溶解し、塩化イソニコチノイル塩酸塩（０．２４２ｇ，１．３６ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を室温で３時間撹拌後、水を加えてさらに３０分撹拌し、エーテルで抽出した。有機層を飽和硫酸銅水溶液、水、飽和重曹水溶液、飽和食塩水で順次洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。乾燥剤を濾別した後、減圧濃縮し、生成した結晶をヘキサン−エーテルから再結晶することにより精製して０．１９９ｇ（７９％）の（６）を無色結晶として得た。
ｍｐ１１９−１２１℃  ＩＲ（ｆｉｌｍ）：１７５２，１７１１，１６４２．  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）：０．６８（３Ｈ，ｓ），０．７９（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），０．８１（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），１．５９−１．６５（１Ｈ，ｍ），１．６８（３Ｈ，ｂｒ  ｓ），１．８６−１．９６（２Ｈ，ｍ），２．３３−２．４４（３Ｈ，ｍ），２．６９（３Ｈ，ｓ），３．３４−３．４６（１Ｈ，ｂｒ），３．４６−３．６０（１Ｈ，ｂｒ），５．２９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ），５．３６（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），５．８２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ），８．０１（２Ｈ，ｂｒ  ｄ，Ｊ＝４．６Ｈｚ），８．８５−８．９５（２Ｈ，ｂｒ），１０．３５（１Ｈ，ｓ），１２．６０（１Ｈ，ｓ）．  ＥＳＭＳ（ｅｌｅｃｔｒｏｓｐｒａｙ  ｍａｓｓ  ｓｐｅｃｔｒｕｍ，ｎｅｇａｔｉｖｅ）（ｍ／ｚ）：５０８｛（Ｍ−Ｈ）−，Ｃ２９Ｈ３２ＮＯ５３５Ｃｌ−Ｈ＋｝，５１０｛（Ｍ−Ｈ）−，Ｃ２９Ｈ３２ＮＯ５３７Ｃｌ−Ｈ＋｝。
製造例６
Ａ．４−Ｏ−Ａｃｅｔｙｌ−２−Ｏ−ｍｅｔｈｙａｓｃｏｆｕｒａｎｏｎｅ（８）；化合物（１）の前駆体
４−Ｏ−ａｓｃｏｆｕｒａｎｏｎｅ（０．３０１ｇ，０．６５１ｍｍｏｌ）をアセトン（２ｍｌ）に溶解し、炭酸カリウム（９９ｍｇ，０．７１６ｍｍｏｌ）、ヨウ化メチル（０．０４８４ｍｌ，０．７８１ｍｍｏｌ）を加えて２時間加熱環流した。反応液をろ過後、ろ液をエーテルで希釈して水、飽和重曹水、飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。乾燥剤を濾別した後、減圧濃縮し、残滓をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２  １０ｇ，ヘキサン−酢酸エチル）により精製して７５．５ｍｇ（２４％）の（８）を得た（無色粘稠油状物質，ａｓ  ａ  ｃｏｌｏｒｌｅｓｓ  ｇｕｍ）。
ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）：１．２２（３Ｈ，ｓ），１．２８（３Ｈ，ｓ），１．６４（３Ｈ，ｓ），１．７７（３Ｈ，ｂｒ  ｓ），２．０４（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ），２．０９−２．２０（２Ｈ，ｍ），２．３５（３Ｈ，ｓ），２．３９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１８．２，１０．０Ｈｚ），２．４７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１８．０，６．２Ｈｚ），２．６３（３Ｈ，ｓ），３．３３（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ），３．８３（３Ｈ，ｓ），４．５２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１０．０，６．２Ｈｚ），５．０８（１Ｈ，ｔｑ，Ｊ＝６．５，１．３Ｈｚ），５．５２（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），１０．４４（１Ｈ，ｓ）．
Ｂ．２−Ｏ−ｍｅｔｈｙｌａｓｃｏｆｕｒａｎｏｎｅ（７）
上で得た（８）（６３．５ｍｇ，０．１３３ｍｍｏｌ）をメタノール（４．２ｍｌ）に溶解し、１％水酸化ナトリウム水溶液（４．２ｍｌ，１．０５ｍｍｏｌ）を加え室温で４時間撹拌した。反応液を２Ｎ塩酸で中和した後、メタノールを留去し、残滓を水で希釈して酢酸エチルで抽出した。有機層を水、飽和重曹水、飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。乾燥剤を濾別した後、減圧濃縮し、残滓をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２  １０ｇ，ヘキサン−酢酸エチル）により精製して５２．１ｍｇ（９０％）の（７）を得た（無色粘稠油状物質，ａｓ  ａ  ｃｏｌｏｒｌｅｓｓ  ｇｕｍ）。
ＩＲ（ｆｉｌｍ）：３３９０，１７５６，１６８６，１５６４．  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）：１．２２（３Ｈ，ｓ），１．２９（３Ｈ，ｓ），１．６４（３Ｈ，ｂｒ  ｓ），１．８０（３Ｈ，ｂｒ  ｓ），２．０６（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），２．１２−２．２２（２Ｈ，ｍ），２．４０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１８．０，１０．０Ｈｚ），２．４７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１８．０，６．５Ｈｚ），２．６６（３Ｈ，ｓ），３．４２（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），３．８２（３Ｈ，ｓ），４．５３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１０．０，６．５Ｈｚ），５．２０（１Ｈ，ｔｑ，Ｊ＝６．９，１．２Ｈｚ），５．５１（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ），６．３５（１Ｈ，ｓ），１０．３７（１Ｈ，ｓ）．  ＥＳＭＳ（ｅｌｅｃｔｒｏｓｐｒａｙ  ｍａｓｓ  ｓｐｅｃｔｒｕｍ，ｎｅｇａｔｉｖｅ）（ｍ／ｚ）：４３３｛（Ｍ−Ｈ）−，Ｃ２４Ｈ３１Ｏ５３５Ｃｌ−Ｈ＋｝，４３５｛（Ｍ−Ｈ）−，Ｃ２４Ｈ３１Ｏ５３７Ｃｌ−Ｈ＋｝。
製造例７
４−Ｏ−（４−Ｃａｒｂｏｘｙｂｕｔａｎｏｙｌ）ａｓｃｏｆｕｒａｎｏｎｅ（９）
ｓａｃｏｆｕｒａｎｏｎｅ（０．１００ｇ，０．２３８ｍｍｏｌ）を無水ピリジン（１ｍｌ）に溶解し、４−ジメチルアミノピリジン（２．９ｍｇ，０．０４ｍｍｏｌ）とグルタル酸無水物（０．０３３ｇ，０．４９０ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を５０℃で一夜撹拌後、１Ｎ塩酸を加えてｐＨ２とし、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。乾燥剤を濾別した後、減圧濃縮し、残滓をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２  １０ｇ，ヘキサン−酢酸エチル）により精製して０．０４０ｇ（３２％）の（９）を得た（無色粘稠油状物質，ａｓ  ａ  ｃｏｌｏｒｌｅｓｓ  ｇｕｍ）。
ＩＲ（ｆｉｌｍ）：〜３０００，１７５２，１７１３，１６３８．  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）：１．２３（３Ｈ，ｓ），１．２９（３Ｈ，ｓ），１．６３（３Ｈ，ｂｒ  ｓ），１．７４（３Ｈ，ｂｒ  ｓ），２．０２（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），２．１１（２Ｈ，ｑｕｉ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），２．１２−２．１７（２Ｈ，ｍ），２．３７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１８．２，１０．０Ｈｚ），２．４４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１８．２，６．３Ｈｚ），２．５４（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），２．６５（３Ｈ，ｓ），２．７６（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），３．２４−３．３１（２Ｈ，ｂｒ），４．５５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１０．０，６．３Ｈｚ），５．０７（１Ｈ，ｔｑ，Ｊ＝７．０，１．５Ｈｚ），５．５０（１Ｈ，ｂｒ  ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），１０．３０（１Ｈ，ｓ），１２．５２（１Ｈ，ｓ）．
製造例８
４−Ｏ−Ｉｓｏｎｉｃｏｔｉｎｏｙｌａｓｃｏｃｈｌｏｒｉｎ（１０）
ａｓｃｏｆｕｒａｎｏｎｅ（０．２００ｇ，０．４７６ｍｍｏｌ）を無水ピリジン（１ｍｌ）に溶解し、塩化イソニコチノイル塩酸塩（０．２３３ｇ，１．３１ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を室温で１時間撹拌後、水を加えてさらに３０分撹拌し、エーテルで抽出した。有機層を飽和硫酸銅水溶液、水、飽和重曹水溶液、飽和食塩水で順次洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。乾燥剤を濾別した後、減圧濃縮し、残滓をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２  １０ｇ，ヘキサン−酢酸エチル）により精製して０．１３５ｇ（５４％）の（１０）を得た（無色粘稠油状物質，ａｓ  ａ  ｃｏｌｏｒｌｅｓｓ  ｇｕｍ）。
ＩＲ（ｆｉｌｍ）：１７５６，１６４４．  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）：１．２１（３Ｈ，ｓ），１．２８（３Ｈ，ｓ），１．５３（３Ｈ，ｂｒ  ｓ），１．６２（３Ｈ，ｂｒ  ｓ），１．８８−１．９７（２Ｈ，ｍ），２．０２−２．１２（２Ｈ，ｍ），２．３５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１８．０，１０．０Ｈｚ），２．４２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１８．０，６．３Ｈｚ），２．６９（３Ｈ，ｓ），３．２１−３．３３（１Ｈ，ｂｒ），３．３３−３．４６（１Ｈ，ｂｒ），４．５１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１０．０，６．３Ｈｚ），５．０９（１Ｈ，ｂｒ  ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），５．４８（１Ｈ，ｂｒ  ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），８．００−８．０２（２Ｈ，ｍ），８．８９−８．９１（２Ｈ，ｍ），１０．３５（１Ｈ，ｓ），１２．６０（１Ｈ，ｓ）．  ＥＳＭＳ（ｅｌｅｃｔｒｏｓｐｒａｙ  ｍａｓｓ  ｓｐｅｃｔｒｕｍ，ｎｅｇａｔｉｖｅ）（ｍ／ｚ）：５２４｛（Ｍ−Ｈ）−，Ｃ２９Ｈ３２ＮＯ６３５Ｃｌ−Ｈ＋｝，５２６｛（Ｍ−Ｈ）−，Ｃ２９Ｈ３２ＮＯ６３７Ｃｌ−Ｈ＋｝
製造例９
２，４−Ｄｉ−Ｏ−ｍｅｔｈｙｌａｓｃｏｃｈｌｏｒｉｎｉｃ  ａｃｉｄ（１１）の調製：
２，４−Ｄｉ−Ｏ−ｍｅｔｈｙｌａｓｃｏｃｈｌｏｒｉｎ（０．４２８ｇ，０．９８９ｍｍｏｌ）にＮａＨ２ＰＯ４・２Ｈ２Ｏ（０．１５５ｇ，０．０９９３ｍｍｏｌ）と水（２．６ｍｌ）を加えて撹拌しリン酸塩を溶解した。次にｔｅｒｔ−ブチルアルコール（１０．４ｍｌ）と２−メチル−２−ブテン（０．４６０ｍｌ，４．３４ｍｍｏｌ）を加え、さらに９０％亜塩素酸ナトリウム（０．３０５ｇ，３．０４ｍｍｏｌ）を加えて、室温で１５分間撹拌した。反応液を水で希釈してジクロロメタンで抽出し、ジクロロメタン層を飽和食塩水で洗浄後、硫酸マグネシウムで乾燥した。乾燥剤を濾別した後、減圧濃縮し０．３９６グラムの粗生成物を得た。これをシリカゲルカラムクロマトグラフィー（（Ｍｅｒｃｋ，Ｓｉｌｉｃａ  ｇｅｌ  ６０，粒径６３−２００μｍ，１０ｇ，ジクロロメタン−エタノールで展開）により精製して、０．３８４ｇ（８７％）の（１１）を得た（無色粘稠油状物質，ａｓ  ａ  ｃｏｌｏｒｌｅｓｓ  ｇｕｍ）。
ＩＲ（ＫＢｒ  ｄｉｓｃ）：３４４０，１７１２。
ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，５００ＭＨｚ）：０．７０（３Ｈ，ｓ），０．７９（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），０．８２（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），１．６１（１Ｈ，ｑｄ，Ｊ＝１３．４，４．７Ｈｚ），１．９２（３Ｈ，ｓ），１．９２．２．１０（２Ｈ，ｍ），２．２４−２．２９（１Ｈ，ｍ），２．３３（３Ｈ，ｓ），２．５０−２．６２（２Ｈ，ｍ），３．５３（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），３．８０（３Ｈ，ｓ），３．８１（３Ｈ，ｓ），５．４６（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），５．４８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．８Ｈｚ），５．９３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．８Ｈｚ）。
ＥＳＭＳ（ｅｌｅｃｔｒｏｓｐｒａｙ  ｍａｓｓ  ｓｐｅｃｔｒｕｍ，ｎｅｇａｔｉｖｅ）（ｍ／ｚ）：４４７［（Ｍ−Ｈ）−，Ｃ２５Ｈ３３Ｏ５３５Ｃｌ−Ｈ＋］，４４９［（Ｍ−Ｈ）−，Ｃ２５Ｈ３３Ｏ５３７Ｃｌ−Ｈ＋］、
2003063849.tif 000051
製造例１０
２，４−Ｄｉ−Ｏ−ａｃｅｔｙｌａｓｃｏｃｈｌｏｒｉｎ（１２）の調製：
ａｓｃｏｃｈｌｏｒｉｎ（０．３００ｇ，０．７４１ｍｍｏｌ）を無水ピリジン（１．３ｍｌ）に溶解し、水浴で冷却しながら塩化アセチル（０．１５８ｍｌ，２．２２ｍｍｏｌ）を滴下した。反応液を室温で４時間撹拌後、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（２ｍｌ）を加え、さらに２０分間撹拌した。反応液を水で希釈後、エーテル抽出し、エーテル層を飽和ＣｕＳＯ４水溶液、水、飽和食塩水で順次洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。乾燥剤を濾別した後、減圧濃縮し０．３２０ｇ（８８％）の（１２）を得た（無色粘稠油状物質、ａｓ  ａ  ｃｏｌｏｒｌｅｓｓ  ｇｕｍ）。
ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）：０．７１（３Ｈ，ｓ），０．８１（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ），０．８４（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ），１．６３（１Ｈ，ｑｄ，Ｊ＝１３．０，５．５Ｈｚ），１．８６（３Ｈ，ｓ），１．９０−１．９７（２Ｈ，ｍ），２．３４（３Ｈ，ｓ），２．３５（３Ｈ，ｓ），２．３６−２．４３（３Ｈ，ｍ），３．３５（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），５．２５（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），５．４１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ），５．８７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ），１０．２７（１Ｈ，ｓ）．
製造例１１
２，４−Ｄｉ−Ｏ−ａｃｅｔｙｌａｓｃｏｃｈｌｏｒｉｎｉｃ  ａｃｉｄ（１３）の調製：
２，４−Ｄｉ−Ｏ−ａｃｅｔｙｌａｓｃｏｃｈｌｏｒｉｎ（０．３２０ｇ，０．６５０ｍｍｏｌ）にＮａＨ２ＰＯ４・２Ｈ２Ｏ（０．１０３ｇ，０．６６０ｍｍｏｌ）と水（１．８ｍｌ）を加えて撹拌してリン酸塩を溶解した。次に、ｔｅｒｔ−ブチルアルコール（７．２ｍｌ）と２−メチル−２−ブテン（０．３０９ｍｌ，２．９２ｍｍｏｌ）を加え、さらに９０％亜塩素酸ナトリウム（０．２００ｇ，１．９９ｍｍｏｌ）を加えて、室温で１５分間撹拌した。反応液を水で希釈してジクロロメタンで抽出し、ジクロロメタン層を飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。乾燥剤を濾別した後、減圧濃縮し０．２９０ｇの粗生成物を得た。これをシリカゲルカラムクロマトグラフィー（（Ｍｅｒｃｋ，Ｓｉｌｉｃａ  ｇｅｌ  ６０，粒径６３−２００μｍ，１０ｇ，ジクロロメタン−イソプロピルアルコールで溶出）により精製して、０．２１１ｇ（６４％）の（１３）を得た（無色粘稠油状物質，ａｓ  ａ  ｃｏｌｏｒｌｅｓｓ  ｇｕｍ）。  ＩＲ（ＫＢｒ  ｄｉｓｃ）：３４５０，１７８１，１７３５，１７１２。
ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，５００ＭＨｚ）：０．７１（３Ｈ，ｓ），０．８１（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），０．８３（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），１．６２（１Ｈ，ｑｄ，Ｊ＝１３．０，４．８Ｈｚ），１．８６（３Ｈ，ｓ），１．９３−１．９９（１Ｈ，ｍ），１．９９−２．０６（１Ｈ，ｍ），２．２３（３Ｈ，ｓ），２．２７（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝１３．２，４．８，２．０Ｈｚ），２．２８（３Ｈ，ｓ），２．４２（３Ｈ，ｓ），２．５１−２．５８（２Ｈ，ｍ），３．３３（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ），５．２５（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ），５．５０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ），５．８９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ）。
ＥＳＭＳ（ｅｌｅｃｔｒｏｓｐｒａｙ  ｍａｓｓ  ｓｐｅｃｔｒｕｍ，ｎｅｇａｔｉｖｅ）（ｍ／ｚ）：５０３［（Ｍ−Ｈ）−，Ｃ２７Ｈ３３Ｏ７３５Ｃｌ−Ｈ＋］，５０５［（Ｍ−Ｈ）−］，Ｃ２７Ｈ３３Ｏ７３７Ｃｌ−Ｈ＋］。
2003063849.tif 000052
製造例１２
２，４−Ｄｉ−Ｏ−ｔ−ｂｕｔｙｌｄｉｍｅｔｈｙｌｓｉｌｙｌａｓｃｏｃｈｌｏｒｉｎ（１４）の調製：
ａｓｃｏｃｈｌｏｒｉｎ（０．５００ｇ，１．２３ｍｍｏｌ）を無水ジメチルホルムアミド（２．５ｍｌ）に溶解し、イミダゾール（０．４２１ｇ，６．１８ｍｍｏｌ）及びｔ−ブチルジメチルシリルクロリド（０．５５９ｇ，３．７１ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を室温で２．５時間撹拌後、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（１．２５ｍｌ）を加え、さらに２０分間撹拌した。反応液を水で希釈後、エーテル抽出し、エーテル層を水、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液、飽和食塩水で順次洗浄後、無水炭酸カリウムで乾燥した。乾燥剤を濾別した後、減圧濃縮し、０．９３６４ｇの粗生成物を得た。これをシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン−酢酸エチル，２０：１で溶出）により精製して、０．７０７ｇ（９０％）の（１４）を得た（無色粘稠油状物質，ａｓ  ａ  ｃｏｌｏｒｌｅｓｓ  ｇｕｍ）。
ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）：０．１３（６Ｈ，ｓ），０．２６（６Ｈ，ｓ），０．７０（３Ｈ，ｓ），０．８１（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ），０．８３（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ），１．０２（９Ｈ，ｓ），１．０３（９Ｈ，ｓ），１．６２（１Ｈ，ｑｄ，Ｊ＝１３．５，５．０Ｈｚ），１．７９（３Ｈ，ｓ），１．８９−１．９６（２Ｈ，ｍ），２．３２−２．４５（３Ｈ，ｍ），２．６３（３Ｈ，ｓ），３．４５（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．９Ｈｚ），５．３３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ），５．４１（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ），５．８７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ），１０．２９（１Ｈ，ｓ）．
製造例１３
Ａｓｃｏｃｈｌｏｒｉｎｉｃ  ａｃｉｄ（１５）の調製：
２，４−Ｄｉ−Ｏ−ｔ−ｂｕｔｙｌｄｉｍｅｔｈｙｌｓｉｌｙａｓｃｏｃｈｌｏｒｉｎ（１４）（０．４５０ｇ，０．７１０ｍｍｏｌ）にＮａＨ２ＰＯ４・２Ｈ２Ｏ（０．１１２ｇ，０．８１１ｍｍｏｌ）と水（３ｍｌ）を加えて撹拌し、リン酸塩を溶解した。次に、ｔｅｒｔ−ブチルアルコール（１２ｍｌ）と２−メチル−２−ブテン（０．３３３ｍｌ，３．９６ｍｍｏｌ）を加え、さらに９０％亜塩素酸ナトリウム（０．２１９ｇ，２．１８ｍｍｏｌ）を加えて、室温で４５分間撹拌した。反応液を飽和食塩水で希釈してジクロロメタンで抽出し、ジクロロメタン層を飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。乾燥剤を濾別した後、減圧濃縮し油状生成物２を得た。これを無水テトラヒドロフラン（７ｍｌ）に溶解し、１Ｍフッ化水素酸（２．００ｍｌ，２．００ｍｍｏｌ）及び１Ｍフッ化ナトリウム水溶液（６．４０ｍｌ，６，４０ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を室温で２日間撹拌後、反応液を水で希釈してジクロロメタンで抽出し、抽出液に無水硫酸マグネシウムを加えて脱水乾燥した。乾燥剤を濾別した後、減圧濃縮し、０．４１４ｇの粗生成物を得た。これをシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン−メタノール，１０：１で溶出）により精製して、０．２７６ｇ（９２％）の５を得た（無色粘稠油状物質，ａｓ  ａ  ｃｏｌｏｒｌｅｓｓ  ｇｕｍ）。これにエーテルを加えて結晶化させ、０．１６３ｇ（５５％）の（１５）を無色固体（ａｓ  ａ  ｃｏｌｏｒｌｅｓｓ  ｍｉｃｒｏｃｒｙｓｔａｌｌｉｎｅ  ｓｏｌｉｄ）として得た。
ｍ．ｐ．１５６−１５８℃
ＩＲ（ＫＢｒ  ｄｉｓｃ）：３４３０，１７０５，１５９９，１５６４。
ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，５００ＭＨｚ）：０．６９（３Ｈ，ｓ），０．８０（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ），０．８２（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ），１．６０（１Ｈ，ｑｄ，Ｊ＝１３．３，４．８Ｈｚ），１．９１（３Ｈ，ｓ），１．９１−２．０３（２Ｈ，ｍ），２．２６（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝１３．３，４．８，１．８Ｈｚ），２．５０−２．５８（２Ｈ，ｍ），２．６６（３Ｈ，ｓ），３．４９（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），５．４０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ），５．５３（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），５．９１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ）。
ＥＳＭＳ（ｅｌｅｃｔｒｏｓｐｒａｙ  ｍａｓｓ  ｓｐｅｃｔｒｕｍ，ｎｅｇａｔｉｖｅ）（ｍ／ｚ）：４１９［（Ｍ−Ｈ）−，Ｃ２３Ｈ２９Ｏ５３５Ｃｌ−Ｈ＋］，４２１［（Ｍ−Ｈ）−，Ｃ２３Ｈ２９Ｏ５３７Ｃｌ−Ｈ］。
2003063849.tif 000053
産業上の利用の可能性
前記した本発明のアスコクロリン、アスコクロリン、アスコフラノンまたはアスコフラノン同族体であって、そのオルシルアルデハイド部分の２位及び／又は４位にある水酸基の水素が特定の置換基によって置換されている化合物は、多重危険因子症候群の診断、予防及び治療に有用である。
【図面の簡単な説明】
図１は、虚血性疾患を誘発する多重危険因子の相関を示す図である。
図２は、耐糖能試験における血糖値の経時変化を示すグラフである。
図３は、耐糖能試験における尿糖濃度の経時変化を示すグラフである。
【図１】
2003063849.tif 000070
【図２】
2003063849.tif 000071
【図３】
2003063849.tif 000072
【国際調査報告】
2003063849.tif 000073
2003063849.tif 000074
2003063849.tif 000075
2003063849.tif 000076
2003063849.tif 000077
2003063849.tif 000078
2003063849.tif 000079
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