【事件の表示】
　特願２００４−５０１５９９「改善されたウイルス精製方法」拒絶査定不服審判事件〔平成１５年１１月１３日国際公開、ＷＯ０３／９３４６３、平成１７年　８月１１日国内公表、特表２００５−５２３７２２〕について、次のとおり審決する。
【結　論】
　本件審判の請求は、成り立たない。
【理　由】
第１　手続の経緯
　本願は、２００３年４月２８日（パリ条約による優先権主張外国庁受理、２００２年４月３０日、２００３年１月２９日、米国）を国際出願日とするものであって、平成２１年８月２８日付けで拒絶査定がなされ、これに対し、平成２１年１２月１７日に拒絶査定不服審判の請求がなされるとともに、同日付けで手続補正がなされたものである。
　
第２　平成２１年１２月１７日付けの手続補正についての補正却下の決定
　
［補正の却下の決定の結論］
　平成２１年１２月１７日付けの手続補正を却下する。
　
［理由］
１　補正後の本願発明
　本件補正により、特許請求の範囲の請求項１は、
「【請求項１】
　細胞の培養物からウイルスを産生するための方法であって、以下の工程：
（ａ）該ウイルスによって感染された細胞の培養物を提供する工程；
（ｂ）界面活性剤を該細胞の培養物に添加し、そして細胞溶解産物をもたらす時間にわたってインキュベートすることにより、該ウイルスを該細胞から抽出する工程；
（ｃ）
以下：
（１）５μｍまたは８μｍの孔サイズを有するプレフィルターを通して濾過する工程、および
（２）工程（１）の後に、３μｍおよび０．８μｍの孔サイズを有する組み合わせフィルターを通して濾過する工程
を含む段階的濾過によって
（ｄ）該ウイルスをイオン交換クロマトグラフィーおよびサイズ排除クロマトグラフィーの組み合わせによって精製する工程；および
（ｅ）該ウイルスを収集する工程
を包含する、方法。」
（下線は、補正箇所を示す。）と補正された。
　
　上記補正は、補正前の平成２１年８月１１日付け手続補正書の特許請求の範囲の請求項１の（ｃ）細胞の破片を除去する工程が
「（ｃ）以下：　
（１）５μｍまたは８μｍの孔サイズを有するプレフィルターを通して濾過する工程、および  　
（２）工程（１）の後に、３μｍおよび０．８μｍの孔サイズを有する組み合わせフィルターを通して濾過する工程  　
を含む段階的濾過によって」細胞の破片を除去する工程であることに限定したものであって、平成１８年法律第５５号改正附則第３条第１項によりなお従前の例によるとされる同法による改正前の特許法第１７条の２第４項第２号の特許請求の範囲の減縮を目的とするものを含むものである。
　
　そこで、本件補正後の前記請求項１に記載された発明（以下、「本願補正発明」という。）が特許出願の際に、独立して特許を受けることができるものであるのか（平成１８年法律第５５号改正附則第３条第１項によりなお従前の例によるとされる同法による改正前の特許法第１７条の２第５項において準用する同法第１２６条第５項の規定に適合するか）について、以下に検討する。
　
２　引用刊行物とその記載事項
　
　原査定の拒絶の理由に引用された本願優先日前に頒布された刊行物１及び２には、以下の事項が記載されている。なお、下線は当審が付した。
　
（１）刊行物１：国際公開第９８／２２５８８号の記載事項（日本語訳は特表２００１−５０４７０１号公報を参考にした。）
　
（１ａ）「１．
以下の工程を包含するアデノウイルスを産生するための方法：
ａ）低灌流速度にて培地中で宿主細胞を増殖させる工程、
ｂ）宿主細胞をアデノウイルスで感染させる工程、
ｃ）宿主細胞を採集および溶解させて、粗細胞溶解物を産生する工程、
ｄ）粗細胞溶解物を濃縮する工程、
ｅ）粗細胞溶解物の緩衝液を交換する工程、および
ｆ）粗細胞溶解物中に含有する核酸夾雑物の濃度を低減する工程
２．
さらに、クロマトグラフィーを用いて、溶解物からアデノウイルス粒子を単離する工程を含む請求項１記載の方法
・・・  　
４．緩衝液を交換する工程は、ダイアフィルトレーション工程を含む請求項１記載の方法
・・・    　
１２．宿主細胞は、293細胞である請求項１記載の方法
・・・
１６．細胞を採集し、低浸透圧性溶液、高浸透圧溶液、凍結溶解、超音波処理、衝撃噴出（impinging jet）、微小流動化（microfluidization）、または界面活性剤を用いて、エキソサイチュで（ex situ）溶解させる請求項１の方法  　
１７．
細胞を採集し、低浸透圧溶液、高浸透圧溶液、または界面活性剤を用いて、インサイチュで溶解させる請求項１記載の方法
１８．
細胞を採集し界面活性剤を用いて溶解させる請求項１７の方法
１９．界面活性剤が、Thesit，NP-40，Tween20，Briji-58，TritonX-100（※原文は、これらはすべて”丸Ｒマーク”付き。以下同じ）、オクチルグルコシドである請求項１８の方法
・・・     　
２１．細胞溶解物はBenzonase，Pulmozyme（※原文は、これらはすべて”丸Ｒマーク”付き。以下同じ）によって処理される請求項１の方法    　
・・・
２８．膜濾過を用いた濃縮工程をさらに包含する請求項１の方法」
（第１１３頁２行目〜１１７頁４行）
　
（１ｂ）「本発明の特定の局面において、低浸透圧性溶液、高浸透圧溶液、凍結溶解、超音波処理、衝撃噴出（impinging jet）、微小流動化（microfluidization）、または
界面活性剤を用いて、エキソサイチュで（ex situ）細胞は採集されそして溶解され得る
界面活性剤を用いて、インサイチュで細胞は採集されそして溶解される
、用語「インサイチュ」は、CellCube
TM
のような組織培養装置内に位置する細胞をいい、そして「エキソサイチュ」は、組織培養装置から取り出された細胞をいう
　
（１ｃ）「３．
細胞採集および溶解の方法
　アデノウイルス感染は、感染した細胞の溶解を生じる。アデノウイルス感染の溶解特徴は、ウイルス産生の２つの異なる態様を許容する。一方は、細胞溶解の前に、感染した細胞を採集する。他方の態様は、産生されたウイルスによる完全な細胞溶解の後に、ウイルス上清を採集する。後者の態様については、完全な細胞溶解を達成するためにより長いインキュベーション時間が必要である。ウイルス感染後のこの長期のインキュベーション時間は、複製可能アデノウイルス（RCA）の生成の可能性の増加について、特に、最新の第一世代アデノウイルスベクター（E1欠失ベクター）についての深刻な懸念を生じる。それゆえ、感染細胞を細胞溶解前に採集することが、選り抜きの産生態様として選択された。表１は、
細胞採集後に細胞を溶解するために使用されている最も一般的な方法を列挙する
（表１　省略）
Ａ）界面活性剤
　細胞は、膜によって結合される。細胞の成分を放出するために、細胞をこじ開けることが必要である。本発明に従ってこれを達成し得る最も有利な方法は、界面活性剤の使用により膜を可溶化することである
　界面活性剤は、変性性または非変性性であり得る。前者は、ドデシル硫酸ナトリウムのような陰イオン性またはエチルトリメチルアンモニウムブロミドのような陽イオン性であり得る。これらの界面活性剤は全体的に膜を破壊し、そしてタンパク質-タンパク質相互作用を壊すことによってタンパク質を変性させる。非変性界面活性剤は、TiritonX-100のような非陰イオン性界面活性剤、コール酸塩のような胆汁酸塩、およびCHAPSのような両イオン性界面活性剤に分類され得る。両性イオン性物（zwitterionics）は、同じ分子中に陽イオン基および陰イオン基の両方を含み、正電荷は、同じまたは隣接する分子の負電荷によって中和される。」（第２８頁３行〜第３０頁８行，公表公報第３１頁７行〜３３頁１２行）
  　
（１ｄ）「４．濃縮および濾過の方法
　本発明の１つの局面は、
細胞溶解物からのアデノウイルスの粗精製の方法を使用する。
この精製プロセスの最初の工程は、細胞の溶解物から大きな粒子物質（特に、細胞成分）を除去するための細胞溶解物の明澄化である
溶解物の明澄化は、深部（depth）フィルターを使用して
　
細胞溶解物の明澄化および予備濾過後、得られるウイルス上清を最初に濃縮し、次いで、緩衝液をダイアフィルトレーションによって交換する
　
（１ｅ）「８．核酸夾雑物を除去すること
　本発明は、
夾雑する核酸を除去するためにヌクレアーゼを用いる。代表的ヌクレアーゼには、Benzonase，Pulmozyme；あるいは当該技術分野内で普通に使用される任意の他のDNaseまたはRNaseが挙げられる
   　
（１ｆ）「９．精製技術
　本発明は、本発明の
アデノウイルスベクターを精製するために多くの異なる精製法を用いる。このような技術としては、沈降およびクロマトグラフィーに基づく技術が挙げられ、そして本明細書中以下でより詳細に説明する
　Ｂ）クロマトグラフィー
　本発明のある実施態様では、
精製したアデノウイルスを産生することが所望される。精製技術は、当該技術分野で周知である。
本発明の純粋なアデノウイルス粒子の調製に特に適切な分析方法は、イオン交換クロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー；ポリアクリルアミドゲル電気泳動である。本発明に関連して用いられるべき特に効率的な精製方法は、HPLCである
　本発明のある局面は、アデノウイルス粒子の精製に関し、そして特定の実施態様では、その実質的な精製に関する。本明細書で使用される用語「精製された」は、他の成分から単離可能な組成物をいうことが意図され、ここで、
アデノウイルス粒子は、天然に得られ得る形態に対して任意の程度まで精製される
　一般的に、「精製された」とは、種々の他の成分を除去するための分画化を受けているアデノウイルス粒子をいい、そしてこの組成物は、その発現された生物学的活性を実質的に保持する。用語「実質的に精製された」が使用される場合、この名称は、粒子、タンパク質、またはペプチドが、組成物中の約50％以上の構成成分を構成するような、組成物の主要成分を形成する組成物をいう。
　タンパク質またはペプチドの精製の程度を定量するための種々の方法は、本明細書の開示を考慮すれば当業者に公知である。これらには、例えば、活性画分の比活性を決定すること、またはSDS/PAGE分析によって画分内のポリペプチドの量を評価することが包含される。画分の純度を評価するために好ましい方法は、画分の比活性を算出すること、これを最初の抽出物の比活性と比較すること、および純度の程度を算出することであり、ここでは「-倍精製数」によって評価される。活性の量を表すために使用される実際の単位は、もちろん、精製に続いて選択される特定のアッセイ技術、ならびに、発現されたタンパク質またはペプチドが検出可能な活性を示すかどうかに依存する。
　
アデノウイルスが、常に最も精製された状態で提供されるという一般的な要件は存在しない。実際、実質的にあまり精製されていない産物が、ある実施態様で有用性を有することが予想される
部分精製は、少数の精製工程を組み合わせて使用することによって
達成され得る
　もちろん、当業者に公知のクロマトグラフィー技法および他の精製技法もまた、本発明のアデノウイルスベクターによって発現されるタンパク質を精製するために用いられ得ることが理解される。イオン交換クロマトグラフィーおよび高速液体クロマトグラフィーは、アデノウイルス粒子の精製に用いられる代表的精製技法であり、そして本明細書で以下にさらに詳細に記載される。」（第５９頁１２行〜第６３頁１８行，公表公報６２頁２６行〜６６頁１９行）  　
　
（１ｇ）「 実施例１
                             材料および方法
Ａ）細胞
　Master Cell Bankからの293細胞（ヒト上皮胚性腎細胞）を研究に使用した。
Ｂ）培地
　ダルベッコ改変イーグル培地（DMEM、4.5g/Lグルコース）＋l0％ウシ胎児血清（FBS）を、細胞増殖相に使用した。ウイルス産生相については、DMEM中のFBS濃度を２％まで低下させた。
Ｃ）ウイルス
　AdCMVp53は、サイトメガロウイルス（CMV）即時プロモーターの制御下でヒト野生型p53タンパク質を発現する、遺伝子操作した複製不可能なヒト５型アデノウイルスである。
Ｄ）Celligenバイオリアクター
　５Ｌの総容量（3.5Ｌの作業用量）を有するCelligenバイオリアクター（New Brunswick Scientific，Co．Inc.）を使用して、マイクロキャリア培養を用いてウイルス上清を産生した。3g/Lのガラスコーティングされたマイクロキャリア（SoloHiII）を、バイオリアクターで細胞を培養するために使用した。
Ｅ）Celligenバイオリアクターにおけるウイルス上清の産生
　マスターセルバンク（MCB）からの293細胞を融解し、そしてCellfactories（Nunc）に拡げた。一般に、細胞を、約85〜90％のコンフルエンスに分割した。細胞を、１×105細胞/mlの接種濃度でバイオリアクターに接種した。細胞を、中程度の撹拌によってマイクロキャリアに付着させた。30rpmの速度での連続撹拌を、細胞接種後６〜８時間で開始した。細胞を、pH＝7.20、溶存酸素（DO）＝60％の空気飽和、温度＝37℃に設定したプロセスパラメータで７日間培養した。８日目に、細胞を、MOI＝５でAdCMVp53に感染させた。ウイルス感染の50時間後、撹拌速度を、30rpmから150rpmに増加して、
細胞溶解および上清へのウイルスの放出を容易にした。ウイルス上清を、感染後74時間で採取した。次いで、ウイルス上清を、さらに濃縮／ダイアフィルトレーションのために濾過した
Ｆ）
Cellcube
TM
バイオリアクターシステム
Ｇ）
Cellcube
TM
におけるウイルスの産生
培養物を感染後45〜48時間に採取した
Ｈ）溶解溶液
　20mM Tris+0.25M NaCl＋１mM MgCl2、pH＝7.50緩衝液中１％(v/v)の濃度でTween-20（Fisher Chemicals）を使用して、
Cellcube
TM
においてウイルス産生相の最後に細胞を溶解した
Ｉ）清澄化および濾過
　
Celligenバイオリアクターからのウイルス上清およびCellcube
TM
からのウイルス溶液を、最初に、深層(depth)フィルター(Preflow,GelmanSciences)を用いて清澄化し、次いで、0.8/0.22μmフィルター(SuporCap 100,GelmanSciences)に通して濾過した
Ｊ）濃縮／ダイアフィルトレーション
　接流濾過(tangential flow filtration)（TFF）を使用して、
Celligenバイオリアクターからのウイルス上清およびCellcube
TM
からのウイルス溶液を濃縮および緩衝液交換した
Ｋ）Benzonase処理
　濃縮／ダイアフィルトレーションされたウイルス溶液を、ウイルス溶液中の夾雑する核酸の濃度を低減するために、室温で一晩、100u/ml濃度のBenzonaseTM(American International Chemicals)を用いて処理した。
Ｌ）CsCl勾配超遠心分離
　粗ウイルス溶液を、Beckman超遠心分離機(XL-90)においてSW40ローターを用いる２重CsCl勾配超遠心分離を用いて精製した。・・・略・・・
Ｍ）イオン交換クロマトグラフィー(IEC)精製
　Benzonase処理されたウイルス溶液を、IECを用いて精製した。強陰性樹脂Toyopearl SuperQ 650M(Tosohaas)を、精製のために使用した。XK16カラム（Pharmacia）を備えたFPLCシステム（Pharmacia）を、最初の方法開発のために使用した。さらなるスケールアップ研究を、XK50カラム（Pharmacia）を備えたBioPilotシステム（Pharmacia）を用いて行った。簡単には、樹脂をカラムにパックし、そして1N NaOHで清浄し、次いで緩衝液Ｂを充填し、これに続いて緩衝液Ａで調節した。緩衝液ＡおよびＢは、それぞれ、20mM Tris＋0.25M NaCl＋１mM MgCl2（pH9.00）および20mM Tris＋2M NaCl+１mM MgCl2（pH9.00）からなる。ウイルス溶液サンプルを調節されたカラムにロードし、続いてUV吸収がベースラインに達するまで緩衝液Ａでカラムを洗浄した。精製されたウイルスを、10カラム容量の直線NaCl勾配を用いることによりカラムから溶出させた。
Ｎ）HPLC分析
　HPLC分析手順を、ウイルス生成および精製の効率を評価するために開発した。・・・略・・・各クロマトグラフィー作業後のカラムの洗浄は、100μlの0.15M NaOHを注入し、次いで勾配を流すことにより達成される。」（第７４頁１行〜７８頁１６行，公表公報第７５頁６行〜７９頁１５行）
　
（２）刊行物２：国際公開第９７／０８２９８号の記載事項（日本語訳は特表平１１−５１１３２６号公報を参照した。）
　
（２ａ）「例  １：
２９３細胞からのアデノウィルスの抽出
Ａ．細胞からのアデノウィルスの抽出
　ヒトの胎児細胞系（２９３）がアデノウィルスを増殖するために用いられた。細胞単層が広範な細胞変性効果（ＣＰＥ）を示すまで
ウィルス感染細胞をインキュベートした
０．１％Ｔｗｅｅｎ−８０、１０％グリセロール、２ｍＭのＭｇＣｌ2および５０μｍのＺｎＣｌ2を含有するＰＢＳ中に再懸濁させた
細胞破片を除くために、溶解産物は
３．０μｍガラス繊維フィルター（カリフォルニア州Ｓｉｅｒｒａ  Ｃｏｕｒｔ−ＤｕｂｌｉｎのＭｉｒｃｏＦｉｌｔｒａｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍｓ製＃Ｃ３００Ａ０９０Ｃ）中を通過させる真空濾過により清澄化された。次にこれは０．８μｍ酢酸セルロースフィルター（カリフォルニア州ＳｉｅｒｒａＣｏｕｒｔ−ＤｕｂｌｉｎのＭｉｃｒｏＦｉｌｔｒａｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍｓ製＃ＣＤ８０Ａ０９０Ｃ）を用いて濾過された
　
３　対比・判断
　刊行物１には、「１．以下の工程を包含するアデノウイルスを産生するための方法： 
ａ）低灌流速度にて培地中で宿主細胞を増殖させる工程、   　
ｂ）宿主細胞をアデノウイルスで感染させる工程、  　
ｃ）宿主細胞を採集および溶解させて、粗細胞溶解物を産生する工程、  　
ｄ）粗細胞溶解物を濃縮する工程、  　
ｅ）粗細胞溶解物の緩衝液を交換する工程、および  　
ｆ）粗細胞溶解物中に含有する核酸夾雑物の濃度を低減する工程」であって、さらに、「クロマトグラフィーを用いて、溶解物からアデノウイルス粒子を単離する工程を含む」ことが記載されている（1a）。
　そして、「宿主細胞を採集および溶解させて、粗細胞溶解物を産生する工程」について、細胞を採集し、界面活性剤を用いて溶解させたこと（1a,1c）が記載されている。
　そうすると、刊行物１の上記記載（特に上記（1a,1c））から、刊行物１には、
「以下の工程を包含するアデノウイルスを産生するための方法：
ａ）低灌流速度にて培地中で宿主細胞を増殖させる工程
ｂ）宿主細胞をアデノウイルスで感染させる工程
ｃ）宿主細胞を採集し界面活性剤を用いて溶解して、粗細胞溶解物を産生する工程、
ｄ）粗細胞溶解物を濃縮する工程、
ｅ）粗細胞溶解物の緩衝液を交換する工程、および
ｆ）粗細胞溶解物中に含有する核酸夾雑物の濃度を低減する工程、
ｇ）クロマトグラフィーを用いて、溶解物からアデノウイルス粒子を単離する工程」
の発明（以下、「刊行物１発明」という。）が記載されていると認められる。
　
　そこで、本願補正発明と刊行物１発明とを比較する。
　
（ア）刊行物１発明の「ａ）低灌流速度にて培地中で宿主細胞を増殖させる工程、ｂ）宿主細胞をアデノウイルスで感染させる工程」は、宿主細胞を培地中で培養し、これをウイルスに感染させて、ウイルスに感染させた細胞を得ているので、本願補正発明の「（ａ）該ウイルスによって感染された細胞の培養物を提供する工程」に相当する。
　
（イ）刊行物１発明の「ｃ）宿主細胞を採集し界面活性剤を用いて溶解して、粗細胞溶解物を産生する工程」は、前工程である「ｂ）宿主細胞をアデノウイルスで感染させる工程」で得た、ウイルスに感染させた宿主細胞に、界面活性剤を添加して宿主細胞の膜を溶かし、ウイルスを放出させるものである（1a,1c）。
　そうすると、刊行物１発明の「ｃ）宿主細胞を採集し界面活性剤を用いて溶解して、粗細胞溶解物を産生する工程」と、本願補正発明の「（ｂ）界面活性剤を該細胞の培養物に添加し、そして細胞溶解産物をもたらす時間にわたってインキュベートすることにより、該ウイルスを該細胞から抽出する工程」とは、「（ｂ）界面活性剤を該細胞に添加し、そして細胞溶解産物をもたらして、該ウイルスを該細胞から抽出する工程」である点で共通する。
　
（ウ）刊行物１発明の「ｄ）粗細胞溶解物を濃縮する工程」について、刊行物１を参照すると、「４．濃縮および濾過の方法」として、細胞溶解物からのアデノウイルスの粗精製の方法を使用すること、明澄化、濃縮、および透析を含むこと、最初に細胞の溶解物から大きな粒子物質（特に、細胞成分）を除去するための細胞溶解物の明澄化を行うこと、溶解物の明澄化は、深部（depth）フィルターを使用して行うこと、細胞溶解物の明澄化および予備濾過後、濃縮し、緩衝液をダイアフィルトレーションすること（1d）が、そして、具体的な実施例としては、「Ｉ）清澄化および濾過」として、最初に深層(depth)フィルタを用いて清澄化し、次いで、0.8/0.22μmフィルターに通して濾過し、その後「Ｊ）濃縮／ダイアフィルトレーション」を行うこと（1g）が記載されている。
　そうすると、刊行物１発明の「ｄ）粗細胞溶解物を濃縮する工程」は、細胞溶解物の明澄化および予備濾過を含む工程であって、細胞溶解物を深層(depth)フィルタを通して濾過して清澄化し、次いで0.8/0.22μmフィルターを通して濾過するとの段階的濾過を行うものであり、よって、刊行物１発明の「ｄ）粗細胞溶解物を濃縮する工程」と本願補正発明の「（ｃ）以下：
（１）５μｍまたは８μｍの孔サイズを有するプレフィルターを通して濾過する工程、
および
（２）工程（１）の後に、３μｍおよび０．８μｍの孔サイズを有する組み合わせフィルターを通して濾過する工程
を含む段階的濾過によって細胞の破片を除去する工程」とは、
「（ｃ）段階的濾過によって細胞の破片を除去する工程」である点で共通する。
　
（エ）刊行物１発明の「ｇ）クロマトグラフィーを用いて、溶解物からアデノウイルス粒子を単離する工程」は、クロマトグラフィーを用いて溶解物からアデノウイルス粒子を精製する工程に相当し、その結果として、精製されたアデノウイルス粒子が収集されることは明らかであるから、刊行物１発明の「ｇ）クロマトグラフィーを用いて、溶解物からアデノウイルス粒子を単離する工程」と、本願補正発明の「（ｄ）該ウイルスをイオン交換クロマトグラフィーおよびサイズ排除クロマトグラフィーの組み合わせによって精製する工程；および（ｅ）該ウイルスを収集する工程」とは、「（ｄ）該ウイルスをクロマトグラフィーによって精製する工程；および（ｅ）該ウイルスを収集する工程」である点で共通する。
  　
（オ）刊行物１発明の「ｅ）粗細胞溶解物の緩衝液を交換する工程」は、ダイアフィルトレーション工程を含むものであり（1a）、本願補正発明の方法はこうした工程を排除するものではない。
　
（カ）刊行物１発明の「ｆ）粗細胞溶解物中に含有する核酸夾雑物の濃度を低減する工程」は、刊行物１を参照すると夾雑する核酸を除去するためにヌクレアーゼを用いることであって、代表的なヌクレアーゼとしてベンゾナーゼも挙げられている（1e）。本願補正発明の方法は、こうした酵素で細胞溶解物の処理を行う工程を排除するものではない。
　
　したがって、両者の間には、以下の一致点及び相違点がある。
　
（一致点）
「細胞の培養物からウイルスを産生するための方法であって、以下の工程：
（ａ）該ウイルスによって感染された細胞の培養物を提供する工程；
（ｂ）界面活性剤を該細胞に添加し、そして細胞溶解産物をもたらして、該ウイルスを該細胞から抽出する工程
（ｃ）段階的濾過によって細胞の破片を除去する工程；
（ｄ）該ウイルスをクロマトグラフィーによって精製する工程；および
（ｅ）該ウイルスを収集する工程
を包含する、方法」
  　
（相違点１）
　「（ｂ）界面活性剤を該細胞に添加し、そして細胞溶解産物をもたらして、該ウイルスを該細胞から抽出する工程」について、本願補正発明では、界面活性剤を細胞の培養物に添加して細胞溶解産物をもたらす時間にわたってインキュベートするのに対し、刊行物１発明では、界面活性剤を細胞の培養物に添加することについては規定していない点。
  　
（相違点２）
  「（ｃ）段階的濾過によって細胞の破片を除去する工程」について、本願補正発明では「（１）５μｍまたは８μｍの孔サイズを有するプレフィルターを通して濾過する工程、および（２）工程（１）の後に、３μｍおよび０．８μｍの孔サイズを有する組み合わせフィルターを通して濾過する工程」を含む段階的濾過であるのに対し、刊行物１発明では、フィルタの孔サイズなどの種類については特に限定していない点。
　
（相違点３）
　「（ｄ）該ウイルスをクロマトグラフィーによって精製する工程」について、本願補正発明では「該ウイルスをイオン交換クロマトグラフィーおよびサイズ排除クロマトグラフィーの組み合わせ」によるのに対し、刊行物１発明ではクロマトグラフィーの種類やその組合せについては特に規定していない点。
　
　そこで、上記各相違点について検討する。
　
（相違点１について）　
　本願補正発明の「細胞の培養物」との語句について、本願明細書段落【００２９】には、以下のとおりに記載されている。　
    　
・「【００２９】本明細書中で用いられる場合、「細胞培養物」または「細胞の培養物」とは、それらの培養条件において見出されるような培養細胞の集団を意味する。特に、細胞培養物は、細胞および培養培地を含む。ペレット化した細胞は、培養条件下で培養培地中に再度配置されない限り、細胞培養物とはみなされない。」
　
　また、本願補正発明の「インキュベートする」との語句の意味について、本願明細書に段落【００３３】には以下のとおりに定義されている。
    　
・「【００３３】  本明細書中で用いられる場合、細胞培養物への界面活性剤の添加後に「インキュベートする」とは、細胞培養物を界面活性剤と一定時間混合させる作用をいう。」
　
　そうすると、本願補正発明の「（ｂ）界面活性剤を該
細胞の培養物
インキュベートする
細胞および培養培地を含む細胞培養物
細胞および培養培地を含む細胞培養物
界面活性剤と混合させる
　そして、刊行物１発明では、「宿主細胞を採集し界面活性剤を用いて溶解」させる際、培養培地を含んでいることについては規定しておらず、この点において、本願補正発明と相違する。
　そこで、刊行物１の記載を参照すると、細胞が採集されそして界面活性剤で溶解される際、エキソサイチュで（ex situ）あるいはインサイチュ（in situ）で溶解されること、用語「インサイチュ」は、CellCubeTMのような組織培養装置内に位置する細胞をいい、「エキソサイチュ」は、組織培養装置から取り出された細胞をいうこと（1b）、実施例には、バイオリアクターシステムとしてCellCubeTMを用い、「Ｇ）CellCubeTM　におけるウイルスの産生」の工程として、宿主細胞である293細胞をCellCubeTMに接種して培養し、ウイルスに感染させた後、培養物を採取すること、さらに「Ｈ）溶解溶液」の工程として、界面活性剤であるTween-20（Fisher Chemicals）を使用してCellCubeTMにおいてウイルス産生相の最後に細胞を溶解させたこと、そして、その後に「Ｉ）清澄化および濾過」の工程では、CellCubeTMからのウイルス溶液をフィルターを用いて清澄化および濾過し、さらに「Ｊ）濃縮／ダイアフィルトレーション」の工程では、CellCubeTMからのウイルス溶液を濃縮および緩衝液交換すること（1g）が、記載され、界面活性剤を用いてインサイチュで細胞を採集し溶解する方法の実施例として、宿主細胞である293細胞を培養してウイルスに感染させた後、「培養物」を採取してこれに界面活性剤を使用して溶解させたことが記載されている。
　ウイルスに感染させた後に採取した「培養物」に、細胞のほか培養培地が含まれているかについては明記していないが、培養装置であるCellCubeTMにおいてウイルス産生相（phase）の最後に界面活性剤を使用して細胞を溶解させたこと、そして、その後の工程である「Ｉ）清澄化および濾過」及び「Ｊ）濃縮／ダイアフィルトレーション」においては、「CellCubeTMからのウイルス溶液」を清澄化および濾過し、さらに濃縮及び緩衝液交換をしていることから、培養装置であるCellCubeTMの中で培養されウイルスに感染させた、そのまま（in situ）の状態で、培養装置（CellCubeTM）内の細胞と培養培地に界面活性剤を使用して細胞を溶解させ、その後、ウイルス溶液を清澄化および濾過し、さらに濃縮および緩衝液交換をしたものと理解でき、そうすると、界面活性剤を添加する「培養物」は細胞と培養培地を含んだものであって、培地を含んだ細胞の培養物に界面活性剤を添加するものである。 
 　
　そして、仮に、刊行物１に記載された実施例が、培養装置（CellCubeTM）から培養培地を除いて「細胞のみ」にして「細胞を採集」していたとしても、工程をより簡略化して作業効率を向上させようとすることは周知の課題であるので、工程の簡略化のために培養培地を除く工程を省くことを考え、界面活性剤の濃度を培養培地を残した状態でも細胞が溶解する程度に調整し、培養培地を含んだ細胞の培養物に界面活性剤を添加して、細胞溶解させることは、当業者が容易になし得たことである。なお、細胞を溶解させるために、細胞を収穫して細胞を溶解させるか、あるいは、細胞を収穫せずに細胞培養物に対して直接的に細胞を溶解させるかは、例えば特表２００３−５１８３８０号公報（段落【００１４】）に記載のとおり、課題解決のための具体化手段である工程上の微差にすぎず、この点からも、培地を含んだ細胞培養物に界面活性剤を添加して細胞溶解を行うことは、当業者が通常なし得た創作能力の発揮の範囲内である。　　
   
　そうすると、刊行物１発明の「宿主細胞を採集し界面活性剤を用いて溶解して、粗細胞溶解物を産生する工程」において、刊行物１には、宿主細胞と培養培地を含む細胞培養物を採取して、これに界面活性剤を添加して混合し、粗細胞溶解物を産生することを含むものであるか、あるいは、宿主細胞に界面活性剤を用いて溶解させる際、培養装置内で培養培地を含む細胞の培養物に対して界面活性剤を添加して混合することで粗細胞溶解物を産生させることも、作業効率を考えて、当業者が容易になし得たことである。
　
（相違点２について）
　刊行物２には、２９３細胞からのアデノウイルスの抽出に際して、ウイルス感染細胞を溶解させた後、細胞破片を除くために、溶解産物を３．０μｍガラス繊維フィルター中を通過させる真空濾過により清澄化し、０．８μｍ酢酸セルロースフィルターを用いて濾過することが、そして、この後、直接クロマトグラフィーにかけるか、あるいは限外濾過システムを用いて追加の濾過工程を行うことが記載されている（1a）。
　一般的に、濾過をしてウイルスなどの所望のものを抽出し分離する場合には、求められる分離の精度の程度や、分離したいものと他の構成物質との大きさの差、処理にかかる時間などの濾過条件を適切なものとすることを考えて、適切な大きなの孔を有したフィルタを使用することは、当業者であれば、通常、行うことである。そうすると、刊行物１発明の「粗細胞溶解物を濃縮する工程」について、３μｍおよび０．８μｍの孔サイズを有する組み合わせフィルターを通して濾過することで所望の程度の粗精製を行うこと、そして、粗精製のためのプレ濾過として、５μｍまたは８μｍの孔サイズを有するプレフィルターを通して濾過することは、その後に行う工程から求められる粗精製の程度、抽出したいウイルスと細胞溶解物に含まれる他の構成物質との大きさの差や、濾過条件を考慮して、刊行物１及び２に記載された事項から当業者が適宜になし得たことである。
　
（相違点３について）
　刊行物１発明の「クロマトグラフィーを用いて、溶解物からアデノウイルス粒子を単離する工程」について、刊行物１には、適切な方法として、イオン交換クロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィーが例示されており、また、任意の程度まで精製されること、精製工程を組み合わせて使用されることが記載されている（1f）。
　そうすると、任意の程度まで精製されたウイルスを得るために、適切な方法として記載された、イオン交換クロマトグラフィーとサイズ排除クロマトグラフィーを組み合わせて精製することも、刊行物１の記載事項から当業者が容易に想到し得たことである。
　
（本願補正発明の効果について）
　培養細胞からウイルスを迅速かつ効率的に産生できるとの本願補正発明の効果は、刊行物１及び２に記載された事項から当業者が予測し得た程度のものであり、格別顕著なものとはいえない。
　
　したがって、本願補正発明は、刊行物１及び２に記載された発明に基いて、当業者が容易に発明をすることができたものである。
　
４　むすび
　したがって、本件補正は、平成１８年法律第５５号改正附則第３条第１項によりなお従前の例によるとされる同法による改正前の特許法第１７条の２第５項において準用する同法第１２６条第５項の規定に違反するので、同法第１５９条第１項において読み替えて準用する同法第５３条第１項の規定により却下すべきものである。
   　
第３　本願発明について
１　本願発明
　平成２１年１２月１７日付け手続補正は上記のとおり却下されることになったので、本願の請求項１ないし１７に係る発明は平成２１年８月１１日付け手続補正書で補正された特許請求の範囲の請求項１ないし１７に記載された事項により特定されるとおりのものであると認められる。
　そして、平成２１年８月１１日付け手続補正書により補正された特許請求の範囲の請求項１は以下のとおりのものである。
  　
「【請求項１】
細胞の培養物からウイルスを産生するための方法であって、以下の工程：
（ａ）該ウイルスによって感染された細胞の培養物を提供する工程；
（ｂ）界面活性剤を該細胞の培養物に添加し、そして細胞溶解産物をもたらす時間にわたってインキュベートすることにより、該ウイルスを該細胞から抽出する工程；
（ｃ）細胞の破片を除去する工程；
（ｄ）該ウイルスをイオン交換クロマトグラフィーおよびサイズ排除クロマトグラフィーの組み合わせによって精製する工程；および
（ｅ）該ウイルスを収集する工程
を包含する、方法。」（以下、「本願発明」という。）
  　
２　引用刊行物の記載事項
　原査定の拒絶の理由に引用された刊行物１、２及びその記載事項は、前記「第２　２」に記載したとおりである。
　
３　対比・判断
　本願発明は、前記「第２」で検討した本願補正発明の（ｃ）細胞の破片を除去する工程が、「（ｃ）以下：　
（１）５μｍまたは８μｍの孔サイズを有するプレフィルターを通して濾過する工程、および  　
（２）工程（１）の後に、３μｍおよび０．８μｍの孔サイズを有する組み合わせフィルターを通して濾過する工程  　
を含む段階的濾過によって」細胞の破片を除去する工程であることの構成を省いたものである。
　そうすると、本願発明の構成要件を全て含んだ本願補正発明が、前記「第２　３」に記載したとおり、刊行物１及び２に記載された発明に基いて、当業者が容易に発明をすることができたものであるから、本願発明も、同様の理由により、刊行物１及び２に記載された発明に基いて、当業者が容易に発明をすることができたものである。
　
４　むすび
　以上のとおり、本願発明は、刊行物１及び２に記載された発明に基いて、当業者が容易に発明をすることができたものであるから、特許法第２９条第２項の規定により特許を受けることができない。
　したがって、その他の請求項に係る発明について検討するまでもなく、本願は拒絶をすべきものである。
　よって、結論のとおり審決する。