(57)【要約】シナプス間隙のグルタミン酸濃度を上昇させる作用を有する化合物を活性成分として含有する神経伝達促進剤であって、該グルタミン酸濃度の上昇が、グリア細胞へのグルタミン酸再取り込みの阻害および／またはグリア細胞からのグルタミン酸放出の促進によるものである神経伝達促進剤、ならびに当該化合物を用いて脳疾患を予防または治療する方法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
シナプス間隙のグルタミン酸濃度を上昇させる作用を有する化合物を活性成分として含有する神経伝達促進剤であって、該グルタミン酸濃度の上昇がグリア細胞へのグルタミン酸再取り込みの阻害によるものである、神経伝達促進剤。
【請求項２】
シナプス間隙のグルタミン酸濃度を上昇させる作用を有する化合物を活性成分として含有する神経伝達促進剤であって、該グルタミン酸濃度の上昇がグリア細胞からのグルタミン酸放出の促進によるものである、神経伝達促進剤。
【請求項３】
シナプス間隙のグルタミン酸濃度を上昇させる作用を有する化合物が式（Ｉ）：
2003047625.tif 000010
〔式中、Ｒ１は低級アルキル、アリール、アル（低級）アルコキシ、または複素環基であり、以上の基はハロゲンで置換されていてもよく、Ｒ２は水素原子または低級アルキルであり、Ｒ３はシクロ（低級）アルキル、アリールまたはアル（低級）アルキルであり、以上の基はハロゲンで置換されていてもよく、Ａは−ＣＯ−、−ＳＯ２−または低級アルキレンであり、Ｙは−ＣＯ−、−ＳＯ２−または−ＣＯＮＨ−を表す。〕の構造を有する化合物、その塩、プロドラッグ、または溶媒和物である、請求項１または２記載の神経伝達促進剤。
【請求項４】
シナプス間隙のグルタミン酸濃度を上昇させる作用を有する化合物が、Ｎ−（４−アセチル−１−ピペラジニル）−ｐ−フルオロベンズアミド一水和物である、請求項１または２記載の神経伝達促進剤。
【請求項５】
シナプス間隙のグルタミン酸濃度を上昇させる作用を有する化合物を活性成分として含有する脳疾患予防・治療剤であって、該グルタミン酸濃度の上昇がグリア細胞へのグルタミン酸再取り込みの阻害によるものである、脳疾患予防・治療剤。
【請求項６】
シナプス間隙のグルタミン酸濃度を上昇させる作用を有する化合物を活性成分として含有する脳疾患予防・治療剤であって、該グルタミン酸濃度の上昇がグリア細胞からのグルタミン酸放出の促進によるものである、脳疾患予防・治療剤。
【請求項７】
脳疾患が、痴呆症、健忘症、精神分裂病、躁鬱病、脳梗塞、頭部外傷、ニコチン禁断症状、脊髄損傷、不安、頻尿、尿失禁、筋緊張性ジストロフィー、注意欠陥多動性障害、過剰昼間睡眠（ナルコレプシー）、パーキンソン病、自閉症および心身症からなる群から選ばれる、請求項５または６記載の脳疾患予防・治療剤。
【請求項８】
シナプス間隙のグルタミン酸濃度を上昇させる作用を有する化合物が、式（Ｉ）：
2003047625.tif 000011
〔式中、Ｒ１は低級アルキル、アリール、アル（低級）アルコキシ、または複素環基であり、以上の基はハロゲンで置換されていてもよく、Ｒ２は水素原子または低級アルキルであり、Ｒ３はシクロ（低級）アルキル、アリールまたはアル（低級）アルキルであり、以上の基はハロゲンで置換されていてもよく、Ａは−ＣＯ−、−ＳＯ２−または低級アルキレンであり、Ｙは−ＣＯ−、−ＳＯ２−または−ＣＯＮＨ−を表す。〕の構造を有する化合物、その塩、プロドラッグ、または溶媒和物である、請求項５〜７のいずれかに記載の脳疾患予防・治療剤。
【請求項９】
シナプス間隙のグルタミン酸濃度を上昇させる作用を有する化合物が、Ｎ−（４−アセチル−１−ピペラジニル）−ｐ−フルオロベンズアミド一水和物である、請求項５〜７のいずれかに記載の脳疾患予防・治療剤。
【請求項１０】
神経伝達促進剤製造のための、シナプス間隙のグルタミン酸濃度を上昇させる作用を有する化合物の使用であって、グルタミン酸濃度の上昇がグリア細胞へのグルタミン酸再取り込みの阻害によるものである、使用。
【請求項１１】
神経伝達促進剤製造のための、シナプス間隙のグルタミン酸濃度を上昇させる作用を有する化合物の使用であって、グルタミン酸濃度の上昇がグリア細胞からのグルタミン酸放出の促進によるものである、使用。
【請求項１２】
シナプス間隙のグルタミン酸濃度を上昇させる作用を有する化合物が式（Ｉ）：
2003047625.tif 000012
〔式中、Ｒ１は低級アルキル、アリール、アル（低級）アルコキシ、または複素環基であり、以上の基はハロゲンで置換されていてもよく、Ｒ２は水素原子または低級アルキルであり、Ｒ３はシクロ（低級）アルキル、アリールまたはアル（低級）アルキルであり、以上の基はハロゲンで置換されていてもよく、Ａは−ＣＯ−、−ＳＯ２−または低級アルキレンであり、Ｙは−ＣＯ−、−ＳＯ２−または−ＣＯＮＨ−を表す。〕の構造を有する化合物、その塩、プロドラッグ、または溶媒和物である、請求項１０または１１記載の使用。
【請求項１３】
シナプス間隙のグルタミン酸濃度を上昇させる作用を有する化合物が、Ｎ−（４−アセチル−１−ピペラジニル）−ｐ−フルオロベンズアミド一水和物である、請求項１０または１１記載の使用。
【請求項１４】
脳疾患予防・治療剤製造のための、シナプス間隙のグルタミン酸濃度を上昇させる作用を有する化合物の使用であって、グルタミン酸濃度の上昇がグリア細胞へのグルタミン酸再取り込みの阻害によるものである、使用。
【請求項１５】
脳疾患予防・治療剤製造のための、シナプス間隙のグルタミン酸濃度を上昇させる作用を有する化合物の使用であって、グルタミン酸濃度の上昇がグリア細胞からのグルタミン酸放出の促進によるものである、使用。
【請求項１６】
脳疾患が、痴呆症、健忘症、精神分裂病、躁鬱病、脳梗塞、頭部外傷、ニコチン禁断症状、脊髄損傷、不安、頻尿、尿失禁、筋緊張性ジストロフィー、注意欠陥多動性障害、過剰昼間睡眠（ナルコレプシー）、パーキンソン病、自閉症および心身症からなる群から選ばれる、請求項１４または１５記載の使用。
【請求項１７】
シナプス間隙のグルタミン酸濃度を上昇させる作用を有する化合物が、式（Ｉ）：
2003047625.tif 000013
〔式中、Ｒ１は低級アルキル、アリール、アル（低級）アルコキシ、または複素環基であり、以上の基はハロゲンで置換されていてもよく、Ｒ２は水素原子または低級アルキルであり、Ｒ３はシクロ（低級）アルキル、アリールまたはアル（低級）アルキルであり、以上の基はハロゲンで置換されていてもよく、Ａは−ＣＯ−、−ＳＯ２−または低級アルキレンであり、Ｙは−ＣＯ−、−ＳＯ２−または−ＣＯＮＨ−を表す。〕の構造を有する化合物、その塩、プロドラッグ、または溶媒和物である、請求項１４〜１６のいずれかに記載の使用。
【請求項１８】
シナプス間隙のグルタミン酸濃度を上昇させる作用を有する化合物が、Ｎ−（４−アセチル−１−ピペラジニル）−ｐ−フルオロベンズアミド一水和物である、請求項１４〜１６のいずれかに記載の使用。
【請求項１９】
シナプス間隙のグルタミン酸濃度を上昇させる作用を有する化合物の有効量を、神経伝達の促進を必要とする対象に投与することを含む、神経伝達を促進する方法であって、グルタミン酸濃度の上昇がグリア細胞へのグルタミン酸再取り込みの阻害によるものである、方法。
【請求項２０】
シナプス間隙のグルタミン酸濃度を上昇させる作用を有する化合物の有効量を、神経伝達の促進を必要とする対象に投与することを含む、神経伝達を促進する方法であって、グルタミン酸濃度の上昇がグリア細胞からのグルタミン酸放出の促進によるものである、方法。
【請求項２１】
シナプス間隙のグルタミン酸濃度を上昇させる作用を有する化合物が、式（Ｉ）：
2003047625.tif 000014
〔式中、Ｒ１は低級アルキル、アリール、アル（低級）アルコキシ、または複素環基であり、以上の基はハロゲンで置換されていてもよく、Ｒ２は水素原子または低級アルキルであり、Ｒ３はシクロ（低級）アルキル、アリールまたはアル（低級）アルキルであり、以上の基はハロゲンで置換されていてもよく、Ａは−ＣＯ−、−ＳＯ２−または低級アルキレンであり、Ｙは−ＣＯ−、−ＳＯ２−または−ＣＯＮＨ−を表す。〕の構造を有する化合物、その塩、プロドラッグ、または溶媒和物である、請求項１９または２０記載の方法。
【請求項２２】
シナプス間隙のグルタミン酸濃度を上昇させる作用を有する化合物が、Ｎ−（４−アセチル−１−ピペラジニル）−ｐ−フルオロベンズアミド一水和物である、請求項１９または２０記載の方法。
【請求項２３】
シナプス間隙のグルタミン酸濃度を上昇させる作用を有する化合物の有効量を、脳疾患の予防または治療を必要とする患者に投与することを含む、脳疾患の予防または治療方法であって、グルタミン酸濃度の上昇がグリア細胞へのグルタミン酸再取り込みの阻害によるものである、方法。
【請求項２４】
シナプス間隙のグルタミン酸濃度を上昇させる作用を有する化合物の有効量を、脳疾患の予防または治療を必要とする患者に投与することを含む、脳疾患の予防または治療方法であって、グルタミン酸濃度の上昇がグリア細胞からのグルタミン酸放出の促進によるものである、方法。
【請求項２５】
脳疾患が、痴呆症、健忘症、精神分裂病、躁鬱病、脳梗塞、頭部外傷、ニコチン禁断症状、脊髄損傷、不安、頻尿、尿失禁、筋緊張性ジストロフィー、注意欠陥多動性障害、過剰昼間睡眠（ナルコレプシー）、パーキンソン病、自閉症および心身症からなる群から選ばれる、請求項２３または２４記載の方法。
【請求項２６】
シナプス間隙のグルタミン酸濃度を上昇させる作用を有する化合物が、式（Ｉ）：
2003047625.tif 000015
〔式中、Ｒ１は低級アルキル、アリール、アル（低級）アルコキシ、または複素環基であり、以上の基はハロゲンで置換されていてもよく、Ｒ２は水素原子または低級アルキルであり、Ｒ３はシクロ（低級）アルキル、アリールまたはアル（低級）アルキルであり、以上の基はハロゲンで置換されていてもよく、Ａは−ＣＯ−、−ＳＯ２−または低級アルキレンであり、Ｙは−ＣＯ−、−ＳＯ２−または−ＣＯＮＨ−を表す。〕の構造を有する化合物、あるいはその塩、プロドラッグまたは溶媒和物である、請求項２３〜２５のいずれかに記載の方法。
【請求項２７】
シナプス間隙のグルタミン酸濃度を上昇させる作用を有する化合物が、Ｎ−（４−アセチル−１−ピペラジニル）−ｐ−フルオロベンズアミド一水和物である、請求項２３〜２５のいずれかに記載の方法。
【請求項２８】
請求項１または２記載の神経伝達促進剤と該神経伝達促進剤を脳疾患の予防または治療に使用し得るかまたは使用すべきであることを記載した書類とを含む商業的パッケージ。
【発明の詳細な説明】
技術分野
本発明は、グリア細胞に作用してシナプス間隙のグルタミン酸濃度を上昇させる作用を有する化合物を活性成分として含有する神経伝達促進剤に関する。本発明はまた、当該化合物を用いて脳疾患を予防または治療する方法に関する。
背景技術
国際公開公報ＷＯ００／７２８３４には、式（Ｉ）：
2003047625.tif 000002
〔式中、Ｒ１は低級アルキル、アリール、アル（低級）アルコキシ、または複素環基であり、以上の基はハロゲンで置換されていてもよく、Ｒ２は水素原子または低級アルキルであり、Ｒ３はシクロ（低級）アルキル、アリールまたはアル（低級）アルキルであり、以上の基はハロゲンで置換されていてもよく、Ａは−ＣＯ−、−ＳＯ２−または低級アルキレンであり、Ｙは−ＣＯ−、−ＳＯ２−または−ＣＯＮＨ−を表す。〕の構造を有する化合物（以下、化合物（Ｉ）とも言う）、さらに具体的には、Ｎ−（４−アセチル−１−ピペラジニル）−ｐ−フルオロベンズアミド一水和物（以下、ＦＫ９６０とも言う）が脳内ソマトスタチンの遊離を促進し、シナプス伝達長期増強作用を発現することによって、痴呆症等の治療剤として使用され得ることが開示されている。
上記ＦＫ９６０は、海馬ＣＡ３領域においてｌｏｎｇ−ｔｅｒｍ  ｐｏｔｅｎｔｉａｔｉｏｎ（ＬＴＰ）を増強することが知られている。一方、ソマトスタチンは、シナプス前グルタミン酸放出を増大させ、その結果、ＬＴＰ増強作用を示すが、この作用がＦＫ９６０の作用と類似していることから、ＦＫ９６０のＬＴＰ増強作用は、ＦＫ９６０によってソマトスタチンの放出が刺激されることによって起こると考えられている。しかし、痴呆の動物モデルにおけるＦＫ９６０の記憶障害の緩解作用の詳細なメカニズムは解明されていない。
発明の開示
本発明は、新規な作用機序を有する神経伝達促進剤ならびに脳疾患の予防・治療剤を提供することを目的とする。
本発明者は、ＦＫ９６０の記憶障害緩解作用の機構について鋭意検討を行った結果、ＦＫ９６０を投与することによってシナプス間隙のグルタミン酸濃度が上昇することを見出し、さらに、ＦＫ９６０がグリア細胞に作用することによってシナプス間隙のグルタミン酸濃度を上昇させ、歯状回における海馬神経伝達を促進することにより、記憶障害緩解作用を示すことを見出し、本発明を完成するに至った。
すなわち本発明は以下の通りである。
（１）シナプス間隙のグルタミン酸濃度を上昇させる作用を有する化合物を活性成分として含有する神経伝達促進剤であって、該グルタミン酸濃度の上昇がグリア細胞へのグルタミン酸再取り込みの阻害によるものである、神経伝達促進剤。
（２）シナプス間隙のグルタミン酸濃度を上昇させる作用を有する化合物を活性成分として含有する神経伝達促進剤であって、該グルタミン酸濃度の上昇がグリア細胞からのグルタミン酸放出の促進によるものである、神経伝達促進剤。
（３）シナプス間隙のグルタミン酸濃度を上昇させる作用を有する化合物が式（Ｉ）：
2003047625.tif 000003
〔式中、Ｒ１は低級アルキル、アリール、アル（低級）アルコキシ、または複素環基であり、以上の基はハロゲンで置換されていてもよく、Ｒ２は水素原子または低級アルキルであり、Ｒ３はシクロ（低級）アルキル、アリールまたはアル（低級）アルキルであり、以上の基はハロゲンで置換されていてもよく、Ａは−ＣＯ−、−ＳＯ２−または低級アルキレンであり、Ｙは−ＣＯ−、−ＳＯ２−または−ＣＯＮＨ−を表す。〕の構造を有する化合物、その塩、プロドラッグ、または溶媒和物である、上記（１）または（２）記載の神経伝達促進剤。
（４）シナプス間隙のグルタミン酸濃度を上昇させる作用を有する化合物が、Ｎ−（４−アセチル−１−ピペラジニル）−ｐ−フルオロベンズアミド一水和物である、上記（１）または（２）記載の神経伝達促進剤。
（５）シナプス間隙のグルタミン酸濃度を上昇させる作用を有する化合物を活性成分として含有する脳疾患予防・治療剤であって、該グルタミン酸濃度の上昇がグリア細胞へのグルタミン酸再取り込みの阻害によるものである、脳疾患予防・治療剤。
（６）シナプス間隙のグルタミン酸濃度を上昇させる作用を有する化合物を活性成分として含有する脳疾患予防・治療剤であって、該グルタミン酸濃度の上昇がグリア細胞からのグルタミン酸放出の促進によるものである、脳疾患予防・治療剤。
（７）脳疾患が、痴呆症、健忘症、精神分裂病、躁鬱病、脳梗塞、頭部外傷、ニコチン禁断症状、脊髄損傷、不安、頻尿、尿失禁、筋緊張性ジストロフィー、注意欠陥多動性障害、過剰昼間睡眠（ナルコレプシー）、パーキンソン病、自閉症および心身症からなる群から選ばれる、上記（５）または（６）記載の脳疾患予防・治療剤。
（８）シナプス間隙のグルタミン酸濃度を上昇させる作用を有する化合物が、式（Ｉ）：
2003047625.tif 000004
〔式中、Ｒ１は低級アルキル、アリール、アル（低級）アルコキシ、または複素環基であり、以上の基はハロゲンで置換されていてもよく、Ｒ２は水素原子または低級アルキルであり、Ｒ３はシクロ（低級）アルキル、アリールまたはアル（低級）アルキルであり、以上の基はハロゲンで置換されていてもよく、Ａは−ＣＯ−、−ＳＯ２−または低級アルキレンであり、Ｙは−ＣＯ−、−ＳＯ２−または−ＣＯＮＨ−を表す。〕の構造を有する化合物、その塩、プロドラッグ、または溶媒和物である、上記（５）〜（７）のいずれかに記載の脳疾患予防・治療剤。
（９）シナプス間隙のグルタミン酸濃度を上昇させる作用を有する化合物が、Ｎ−（４−アセチル−１−ピペラジニル）−ｐ−フルオロベンズアミド一水和物である、上記（５）〜（７）のいずれかに記載の脳疾患予防・治療剤。
（１０）神経伝達促進剤製造のための、シナプス間隙のグルタミン酸濃度を上昇させる作用を有する化合物の使用であって、グルタミン酸濃度の上昇がグリア細胞へのグルタミン酸再取り込みの阻害によるものである、使用。
（１１）神経伝達促進剤製造のための、シナプス間隙のグルタミン酸濃度を上昇させる作用を有する化合物の使用であって、グルタミン酸濃度の上昇がグリア細胞からのグルタミン酸放出の促進によるものである、使用。
（１２）シナプス間隙のグルタミン酸濃度を上昇させる作用を有する化合物が式（Ｉ）：
2003047625.tif 000005
〔式中、Ｒ１は低級アルキル、アリール、アル（低級）アルコキシ、または複素環基であり、以上の基はハロゲンで置換されていてもよく、Ｒ２は水素原子または低級アルキルであり、Ｒ３はシクロ（低級）アルキル、アリールまたはアル（低級）アルキルであり、以上の基はハロゲンで置換されていてもよく、Ａは−ＣＯ−、−ＳＯ２−または低級アルキレンであり、Ｙは−ＣＯ−、−ＳＯ２−または−ＣＯＮＨ−を表す。〕の構造を有する化合物、その塩、プロドラッグ、または溶媒和物である、上記（１０）または（１１）記載の使用。
（１３）シナプス間隙のグルタミン酸濃度を上昇させる作用を有する化合物が、Ｎ−（４−アセチル−１−ピペラジニル）−ｐ−フルオロベンズアミド一水和物である、上記（１０）または（１１）記載の使用。
（１４）脳疾患予防・治療剤製造のための、シナプス間隙のグルタミン酸濃度を上昇させる作用を有する化合物の使用であって、グルタミン酸濃度の上昇がグリア細胞へのグルタミン酸再取り込みの阻害によるものである、使用。
（１５）脳疾患予防・治療剤製造のための、シナプス間隙のグルタミン酸濃度を上昇させる作用を有する化合物の使用であって、グルタミン酸濃度の上昇がグリア細胞からのグルタミン酸放出の促進によるものである、使用。
（１６）脳疾患が、痴呆症、健忘症、精神分裂病、躁鬱病、脳梗塞、頭部外傷、ニコチン禁断症状、脊髄損傷、不安、頻尿、尿失禁、筋緊張性ジストロフィー、注意欠陥多動性障害、過剰昼間睡眠（ナルコレプシー）、パーキンソン病、自閉症および心身症からなる群から選ばれる、上記（１４）または（１５）記載の使用。
（１７）シナプス間隙のグルタミン酸濃度を上昇させる作用を有する化合物が、式（Ｉ）：
2003047625.tif 000006
〔式中、Ｒ１は低級アルキル、アリール、アル（低級）アルコキシ、または複素環基であり、以上の基はハロゲンで置換されていてもよく、Ｒ２は水素原子または低級アルキルであり、Ｒ３はシクロ（低級）アルキル、アリールまたはアル（低級）アルキルであり、以上の基はハロゲンで置換されていてもよく、Ａは−ＣＯ−、−ＳＯ２−または低級アルキレンであり、Ｙは−ＣＯ−、−ＳＯ２−または−ＣＯＮＨ−を表す。〕の構造を有する化合物、その塩、プロドラッグ、または溶媒和物である、上記（１４）〜（１６）のいずれかに記載の使用。
（１８）シナプス間隙のグルタミン酸濃度を上昇させる作用を有する化合物が、Ｎ−（４−アセチル−１−ピペラジニル）−ｐ−フルオロベンズアミド一水和物である、上記（１４）〜（１６）のいずれかに記載の使用。
（１９）シナプス間隙のグルタミン酸濃度を上昇させる作用を有する化合物の有効量を、神経伝達の促進を必要とする対象に投与することを含む、神経伝達を促進する方法であって、グルタミン酸濃度の上昇がグリア細胞へのグルタミン酸再取り込みの阻害によるものである、方法。
（２０）シナプス間隙のグルタミン酸濃度を上昇させる作用を有する化合物の有効量を、神経伝達の促進を必要とする対象に投与することを含む、神経伝達を促進する方法であって、グルタミン酸濃度の上昇がグリア細胞からのグルタミン酸放出の促進によるものである、方法。
（２１）シナプス間隙のグルタミン酸濃度を上昇させる作用を有する化合物が、式（Ｉ）：
2003047625.tif 000007
〔式中、Ｒ１は低級アルキル、アリール、アル（低級）アルコキシ、または複素環基であり、以上の基はハロゲンで置換されていてもよく、Ｒ２は水素原子または低級アルキルであり、Ｒ３はシクロ（低級）アルキル、アリールまたはアル（低級）アルキルであり、以上の基はハロゲンで置換されていてもよく、Ａは−ＣＯ−、−ＳＯ２−または低級アルキレンであり、Ｙは−ＣＯ−、−ＳＯ２−または−ＣＯＮＨ−を表す。〕の構造を有する化合物、その塩、プロドラッグ、または溶媒和物である、上記（１９）または（２０）記載の方法。
（２２）シナプス間隙のグルタミン酸濃度を上昇させる作用を有する化合物が、Ｎ−（４−アセチル−１−ピペラジニル）−ｐ−フルオロベンズアミド一水和物である、上記（１９）または（２０）記載の方法。
（２３）シナプス間隙のグルタミン酸濃度を上昇させる作用を有する化合物の有効量を、脳疾患の予防または治療を必要とする患者に投与することを含む、脳疾患の予防または治療方法であって、グルタミン酸濃度の上昇がグリア細胞へのグルタミン酸再取り込みの阻害によるものである、方法。
（２４）シナプス間隙のグルタミン酸濃度を上昇させる作用を有する化合物の有効量を、脳疾患の予防または治療を必要とする患者に投与することを含む、脳疾患の予防または治療方法であって、グルタミン酸濃度の上昇がグリア細胞からのグルタミン酸放出の促進によるものである、方法。
（２５）脳疾患が、痴呆症、健忘症、精神分裂病、躁鬱病、脳梗塞、頭部外傷、ニコチン禁断症状、脊髄損傷、不安、頻尿、尿失禁、筋緊張性ジストロフィー、注意欠陥多動性障害、過剰昼間睡眠（ナルコレプシー）、パーキンソン病、自閉症および心身症からなる群から選ばれる、上記（２３）または（２４）記載の方法。
（２６）シナプス間隙のグルタミン酸濃度を上昇させる作用を有する化合物が、式（Ｉ）：
2003047625.tif 000008
〔式中、Ｒ１は低級アルキル、アリール、アル（低級）アルコキシ、または複素環基であり、以上の基はハロゲンで置換されていてもよく、Ｒ２は水素原子または低級アルキルであり、Ｒ３はシクロ（低級）アルキル、アリールまたはアル（低級）アルキルであり、以上の基はハロゲンで置換されていてもよく、Ａは−ＣＯ−、−ＳＯ２−または低級アルキレンであり、Ｙは−ＣＯ−、−ＳＯ２−または−ＣＯＮＨ−を表す。〕の構造を有する化合物、あるいはその塩、プロドラッグまたは溶媒和物である、上記（２３）〜（２５）のいずれかに記載の方法。
（２７）シナプス間隙のグルタミン酸濃度を上昇させる作用を有する化合物が、Ｎ−（４−アセチル−１−ピペラジニル）−ｐ−フルオロベンズアミド一水和物である、上記（２３）〜（２５）のいずれかに記載の方法。
（２８）上記（１）または（２）記載の神経伝達促進剤と該神経伝達促進剤を脳疾患の予防または治療に使用し得るかまたは使用すべきであることを記載した書類とを含む商業的パッケージ。
発明の詳細な説明
本発明において「グリア細胞」とは、この用語が通常当分野で用いられる場合に指し示すものの範囲と同程度までの意味を有するものであり、これには、具体的には、星状細胞、希突起膠細胞、上衣細胞、小膠細胞等が包含されるが、特にグルタミン酸の放出・再取り込みには星状細胞が貢献していると考えられている。
シナプス前終末よりシナプス間隙に放出されたグルタミン酸は、シナプス後細胞のグルタミン酸受容体に反応した後、シナプスに隣接するグリア細胞あるいはシナプス前終末にグルタミン酸トランスポーターを介して再吸収される。また、グリア細胞に発現している神経伝達物質受容体がシナプス前終末から放出された神経伝達物質に反応し、グリア細胞内のカルシウム濃度を上昇させ、グリア細胞からグルタミン酸を小胞輸送により放出する。上記２つの機構により、シナプス間隙グルタミン酸濃度がグリア細胞により調節されている。
本発明において「シナプス間隙のグルタミン酸濃度を上昇させる作用」とは、ニューロンとニューロンとの間（シナプス）および／またはニューロンとグリア細胞との間のグルタミン酸濃度を上昇させ得る能力を示す。本発明においてこのグルタミン酸濃度の上昇は、シナプス間隙からのグリア細胞へのグルタミン酸の再取り込みの阻害および／またはグリア細胞からシナプス間隙へのグルタミン酸放出の促進によって達成され得る。本発明において、シナプス間隙のグルタミン酸濃度の上昇は、これらのうちいずれか一方に起因するものであってもよいし、両方に起因するものであってもよい。
シナプス間隙のグルタミン酸濃度を上昇させる作用の評価方法としては、歯状回における集合スパイク（ＰＳ）測定（Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ８５７（２０００）３１７−３２０）、ニューロンにおける自発的ミニチュア興奮性シナプス後電流（ｍＥＰＳＣ）およびシナプス後グルタミン酸作動性応答測定（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ９７（２００１）７−１２）、グリア細胞からのグルタミン酸放出濃度測定（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ  ２９５（２００２）３７６−３８１）ならびに、グリア細胞およびグリア細胞グルタミン酸トランスポーター（ＧＬＴ−１）発現卵母細胞におけるグルタミン酸トランスポーター電流測定（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ９７（２００１）７−１２）などが挙げられる。さらに具体的には、評価方法として、ラット海馬スライスの歯状回における集合スパイク（ＰＳ）測定、ラット海馬ニューロンにおける自発的ミニチュア興奮性シナプス後電流（ｍＥＰＳＣ）およびシナプス後グルタミン酸作動性応答測定、ラット培養グリア細胞からのグルタミン酸放出濃度測定ならびに、ラット培養グリア細胞およびグリア細胞グルタミン酸トランスポーター（ＧＬＴ−１）発現アフリカツメガエル卵母細胞におけるグルタミン酸トランスポーター電流測定などが挙げられるが、グリア細胞からのグルタミン酸放出促進作用については、ラット培養星状細胞からのグルタミン酸放出濃度測定が、グリア細胞へのグルタミン酸再取り込み抑制作用については、ラット培養星状細胞およびグリア細胞グルタミン酸トランスポーター（ＧＬＴ−１）発現アフリカツメガエル卵母細胞におけるグルタミン酸トランスポーター電流測定が好ましい。
本発明はまた、シナプス間隙のグルタミン酸濃度を上昇させる作用を有する物質をスクリーニングする方法を提供する。スクリーニング対象物質としては、シナプス間隙のグルタミン酸濃度を上昇させる作用を有するか否かを評価することを所望とする物質であれば特に制限されず、如何なる物質でもスクリーニング対象としてよい。スクリーニングは、上述したシナプス間隙のグルタミン酸濃度を上昇させる作用の評価方法を用いて行うことができる。すなわち、グリア細胞からのグルタミン酸放出促進作用またはグリア細胞へのグルタミン酸再取り込み抑制作用を指標として、対象物質をスクリーニングすることができる。また、シナプス間隙のグルタミン酸濃度の調節にはＰＫＡ経路が関与していることが考えられるので、ＰＫＡ経路の活性化作用を指標として、対象物質をスクリーニングすることもできる。例えば、グリア細胞からのグルタミン酸放出促進作用を指標とするスクリーニング方法は、ｉ）スクリーニング対象物質を含む媒体とグリア細胞とを接触させる工程と、ｉｉ）スクリーニング対象物質を含まない媒体とグリア細胞とを接触させる工程と、ｉｉｉ）工程ｉ）で得られた媒体とグリア細胞との混合物をグリア細胞からのグルタミン酸放出促進作用について評価する工程と、ｉｖ）工程ｉｉ）で得られた媒体とグリア細胞との混合物をグリア細胞からのグルタミン酸放出促進作用について評価する工程と、ｖ）工程ｉｉｉ）で得られた結果と工程ｉｖ）で得られた結果とを比較する工程とを含む。媒体は、細胞が生存可能であり、グリア細胞とスクリーニング対象物質とが接触可能であれば特に限定されず、工程ｉｉｉ）および工程ｉｖ）で採用する評価方法によって適宜選択されるが、好ましくは水性媒体であって浸透圧やｐＨ等を調整したものが用いられる。媒体とグリア細胞との接触は、通常、接触時間２０分〜４０分、温度３０℃〜４０℃の条件下で行われる。比較工程において有意に促進されたグルタミン酸放出が認められた物質はシナプス間隙のグルタミン酸濃度を上昇させる作用を有する物質として用いることができる。
より具体的には、グリア細胞からのグルタミン酸放出促進作用を指標とする場合には次のようにスクリーニングすることができる。グリア細胞を、細胞外液（１４５ｍＭ  ＮａＣｌ、５ｍＭ  ＫＣｌ、２．４ｍＭ  ＣａＣｌ２、１．８ｍＭグルコース、１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ  ７．４）中で、スクリーニング対象物質の存在および非存在下で、インキュベートする。細胞外液中のグルタミン酸をＮＡＤ−ＮＡＤＨ酵素循環法によりアッセイする。タンパク質はローリー法により測定する。測定結果に有意差があるかどうかを評価する。
また、グリア細胞へのグルタミン酸再取り込み抑制作用を指標とする場合には次のようにスクリーニングすることができる。ＧＬＴ−１発現卵母細胞を、インキュベーション後に記録チャンバーへと移し、標準リンガー液またはＮａ＋を含まないリンガー液中に室温にて連続して灌流する。チャンバーに、スクリーニング対象物質のみ、またはスクリーニング対象物質＋グルタミン酸トランスポーター阻害剤の存在下および非存在下、グルタミン酸を付与し、励起電流を二電極電圧クランプ法により測定する。測定結果に有意差があるかどうかを評価する。
また、ＰＫＡ経路の活性化を指標とする場合には、グリア細胞から作製した全細胞パッチを、スクリーニング対象物質のみ、あるいはスクリーニング対象物質＋プロテインキナーゼ阻害剤またはグルタミン酸トランスポーター阻害剤の存在下および非存在下、グルタミン酸を付与し、励起電流を二電極電圧クランプ法により測定する。測定結果に有意差があるかどうかを評価する。
シナプス間隙のグルタミン酸濃度を上昇させる作用を有する化合物の具体例としては、式（Ｉ）：
2003047625.tif 000009
〔式中、Ｒ１は低級アルキル、アリール、アル（低級）アルコキシ、または複素環基であり、以上の基はハロゲンで置換されていてもよく、Ｒ２は水素原子または低級アルキルであり、Ｒ３はシクロ（低級）アルキル、アリールまたはアル（低級）アルキルであり、以上の基はハロゲンで置換されていてもよく、Ａは−ＣＯ−、−ＳＯ２−または低級アルキレンであり、Ｙは−ＣＯ−、−ＳＯ２−または−ＣＯＮＨ−を表す。〕の構造を有する化合物、その塩または溶媒和物が挙げられ、その中でも特にＮ−（４−アセチル−１−ピペラジニル）−ｐ−フルオロベンズアミド一水和物が好ましい。
式（Ｉ）における各定義を以下に説明する。
本明細書中で用いられる「低級」とは、特に他に明記しない限り、炭素数が１〜６個であることを意味する。
「低級アルキル」としては、直鎖または分枝鎖のもの、例えばメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、ヘキシルなどが挙げられ、これらの中でもメチルが好ましい。
「アリール」としては、フェニル、ナフチル、トリル、キシリル、メシチル、クメニルなどが挙げられ、これらの中でもフェニルおよびナフチルが好ましい。
「アル（低級）アルコキシ」としては、ベンジルオキシ、フェネチルオキシ、フェニルプロポキシ、ベンズヒドリルオキシ、トリチルオキシなどが挙げられる。
「複素環基」としては、窒素原子、酸素原子または硫黄原子などのヘテロ原子を少なくとも１個含む飽和または不飽和の単環式または多環式基が挙げられる。
上記「複素環基」の好適な例としては、窒素原子１〜４個を含む３〜８員、より好ましくは５〜６員の不飽和複素単環式基、例えば、ピロリル、イミダゾリル、ピラゾリル、ピリジル、ピリジルＮ−オキサイド、ピリミジル、ジヒドロピリジル、テトラヒドロピリジル、ピラジニル、ピリダジニル、トリアジニル、トリアゾリル、テトラジニル、テトラゾリルなど；窒素原子１〜５個を含む不飽和縮合複素環式基、例えば、インドリル、イソインドリル、インドリジニル、ベンズイミダゾリル、キノリル、イソキノリル、インダゾリル、ベンゾトリアゾリルなど；酸素原子１〜２個および窒素原子１〜３個を含む３〜８員の不飽和複素単環式基、例えば、オキサゾリル、イソキサゾリル、オキサジアゾリルなど；酸素原子１〜２個および窒素原子１〜３個を含む３〜８員の飽和複素単環式基、例えば、モルホリノ、シドノニルなど；酸素原子１〜２個および窒素原子１〜３個を含む不飽和縮合複素環式基、例えば、ベンゾキサゾリル、ベンゾキサジアゾリルなど、硫黄原子１〜２個および窒素原子１〜３個を含む３〜８員の不飽和複素単環式基、例えば、チアゾリル、イソチアゾリル、チアジアゾリルなど；硫黄原子１〜２個を含む３〜８員の不飽和複素単環式基、例えば、チエニルなど；硫黄原子１〜２個および窒素原子１〜３個を含む不飽和縮合複素環式基、例えば、ベンゾチアゾリル、ベンゾチアジアゾリルなど；酸素原子１個を含む３〜８員の不飽和複素単環式基、例えば、フリルなど；硫黄原子１〜２個を含む不飽和縮合複素環式基、例えば、ベンゾチエニルなど；酸素原子１〜２個を含む不飽和縮合複素環式基、例えば、ベンゾフラニルなどが挙げられる。
「シクロ（低級）アルキル」としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルなどが挙げられる。
「アル（低級）アルキル」としては、ベンジル、フェネチル、フェニルプロピル、ベンズヒドリル、トリチルなどが挙げられる。
「低級アルキレン」としては、メチレン、エチレン、プロピレン、ペンタメチレン、ヘキサメチレンなどが挙げられる。
前記した、低級アルキル、アリール、アル（低級）アルコキシ、複素環基、シクロ（低級）アルキル、およびアル（低級）アルキルは、ハロゲン原子（例えば、フッ素、塩素、臭素およびヨウ素）で置換されていてもよい。
シナプス間隙のグルタミン酸濃度を上昇させる作用を有する化合物を活性成分として含有する脳疾患予防・治療剤を用いて、予防・治療し得る対象となる脳疾患としては、シナプス間隙のグルタミン酸濃度を上昇させることによって、症状が予防または治療される疾患であれば特に限定されないが、特に、痴呆症（例えば、老人性痴呆症、アルツハイマー型痴呆症、脳血管痴呆症、脳外傷後痴呆症、脳腫瘍に伴う痴呆症、慢性硬膜下血腫に伴う痴呆症、正常圧水頭症に伴う痴呆症、髄膜炎痴呆症、パーキンソン病型痴呆症、等様々な病態に伴う痴呆症）、健忘症、精神分裂病、躁鬱病、脳梗塞、頭部外傷、ニコチン禁断症状、脊髄損傷、不安、頻尿、尿失禁、筋緊張性ジストロフィー、注意欠陥多動性障害、過剰昼間睡眠（ナルコレプシー）、パーキンソン病、自閉症、心身症の予防・治療に本発明の脳疾患予防・治療剤は有効である。
以下、本発明の神経伝達促進剤および脳疾患予防・治療剤をまとめて「本発明の薬剤」とも言う。
本発明の薬剤を医薬組成物として使用する場合、直腸投与、吸入、点鼻、点眼、外用（局所）、経口もしくは非経口（皮下、静脈内および筋肉内を含む）等の投与、脳髄、脊髄液、脳腔内等の患部への直接投与、または吸入に適した有機もしくは無機の担体または賦形剤をともに含有する固形、半固形もしくは液状の剤形を含むいかなる剤形で投与してもよい。
本発明の薬剤は、例えば、錠剤、ペレット、トローチ、カプセル、坐剤、クリーム、軟膏、エアゾール、吸入用粉末剤、液剤、乳剤、懸濁剤、その他の使用に適した剤形に用いられる慣用の製薬上許容される実質的に無毒性の担体または賦形剤とともに配合することができる。さらに、必要に応じて助剤、安定化剤、増粘剤、着色料、および香料を配合することもできる。
本発明の薬剤は、当該分野で公知の製剤技術を用いて製剤化することができる。また、本発明の薬剤に用いる化合物は、必要に応じ、当該分野で公知の方法を用いて、その塩、プロドラッグ、溶媒和物にしてもよい。
本発明において「塩」とは、好ましくは、生物学的に許容される通常無毒の塩であり、無機酸付加塩（例えば塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、リン酸塩等）、有機カルボン酸もしくはスルホン酸付加塩（例えばギ酸塩、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、マレイン酸塩、酒石酸塩、フマル酸塩、メタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、トルエンスルホン酸塩等）、酸性アミノ酸（例えばアスパラギン酸、グルタミン酸等）との塩等の酸付加塩が例示される。
本発明において「プロドラッグ」とは、好ましくは、生体内において酵素や胃酸等による反応により、グリア細胞へのグルタミン酸再取り込みを阻害する活性および／またはグリア細胞からのグルタミン酸放出を増加する活性を有する化合物に変換する化合物をいう。
本発明において「溶媒和物」とは、例えば、包接化合物（例えば水和物等）である。
本発明の薬剤は、ヒトをはじめサル、マウス、ラット、ウサギ、ブタ、イヌ、ウマ、ウシ等種々の哺乳動物に適用することができ、適用時、静脈内（輸液に含有させる方法も含む）、筋肉内または経口で投与するのが好ましい。
本発明の薬剤は、対象とする症状の経過または状態に、所望の効果を生じさせる量を製剤に少なくとも含有させればよい。
本発明の薬剤の投与量および投与方法は、化合物の種類、予防および／または治療を受けるべき各患者の年齢および条件によっても変動し得るが、例えば、化合物（Ｉ）が有効成分である場合、化合物（Ｉ）の量で言うと、経口投与で患者の体重１ｋｇあたり１日量として０．０１〜１０ｍｇを投与すればよく、前記疾患の予防・治療のためには、１日に１回〜数回投与すればよい。
実施例
以下に実施例を用いて本発明をより詳細に説明するが、これは本発明の好ましい実施態様を例示するに過ぎず、本発明はこれらにより何ら限定されない。
〔実験例１〕  細胞培養
ニューロン培養
胚性ラット脳（妊娠期間１８日）から海馬を取り出し、細胞を単離し、単離した細胞を、Ｂ２７（ＧＩＢＣＯ，ＮＹ；１：５０）を補充したＮｅｕｒｏｂａｓａｌ（ＧＩＢＣＯ，ＮＹ）、２．５ｍＭ  グルタミンおよび５０μＭ  グルタメートを含む培地で培養した。本培地中では、単離細胞の９５％以上がニューロン特異的な微小管関連タンパク質２抗体に対する免疫反応性を示した。
星状細胞培養
海馬を新生仔ラットから取り出し、細胞を単離し、単離した細胞を、１０％ウシ胎仔血清、２．５ｍＭ  グルタミンおよび５０μＭ  グルタメートを含むＤＭＥＭ（ＧＩＢＣＯ，ＮＹ）で培養した。１０日後、単離細胞はヒトグリア細胞線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）に対するマウスモノクローナル抗体に反応性であった。
〔実験例２〕  ＧＬＴ−１欠損マウスの作製
ＧＬＴ−１欠損マウスを、Ｔａｎａｋａら，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７６，１６９９−１７０２（１９９７）の方法に従って作製した。マウスの遺伝子型は、尾部から単離したゲノムＤＮＡをＰＣＲ解析することによって決定した。
〔実験例３〕  アフリカツメガエル卵母細胞のインビトロ転写・翻訳
ＧＬＴ−１の配列に従って設計された３２Ｐ標識合成オリゴヌクレオチドプローブを用いて、ラット脳ｃＤＮＡライブラリーをスクリーニングすることによって、完全長ＧＬＴ−１ｃＤＮＡを得た。ＧＬＴ−１をコードするｍＲＮＡをインビトロ転写により合成した。アフリカツメガエルの卵巣から卵母細胞を単離し、コラゲナーゼ（０．５ｍｇ／ｍｌ）処理後、Ｂａｒｔｈ溶液（８８ｍＭ  ＮａＣｌ、１ｍＭ  ＫＣｌ、２．４ｍＭ  ＮａＨＣＯ３、０．８２ｍＭ  ＭｇＳＯ４、０．３３ｍＭ  Ｃａ（ＮＯ２）２、０．４１ｍＭ  ＣａＣｌ２、７．５ｍＭ  Ｔｒｉｓ、ｐＨ７．６）中で一晩インキュベートした。卵母細胞にＧＬＴ−１ｍＲＮＡを注射し、１８℃でインキュベートした。
〔実験例４〕  ミニチュア興奮性シナプス後電流（ｍＥＰＳＣ）の測定
室温（２０〜２２℃）、標準細胞外液（１４５ｍＭ  ＮａＣｌ、５ｍＭ  ＫＣｌ、２．４ｍＭ  ＣａＣｌ２、１．８ｍＭ  グルコース、１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、１０−３ｍＭ  テトロドトキシン、ｐＨ  ７．４）中で１０〜１４日間培養したニューロンから、ベーシックパッチ電極充填溶液（１５０ｍＭ  ＫＣｌ、１０ｍＭＢＡＰＴＡ、１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ  ７．２）を用いて、全細胞パッチを作製した。ｍＥＰＳＣをＡｘｏｐａｔｃｈ−２００Ａ増幅器（Ａｘｏｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｉｎｃ．，ＵＳＡ）を用いて記録した。
〔実験例５〕  全細胞膜電流の測定
室温（２０〜２２℃）、Ｄ−２−アミノ−５−ホスホノ吉草酸（ＡＰＶ；１００μＭ）および６，７−ジニトロキノキサリン−２，３−ジオン（ＤＮＱＸ；５μＭ）を含む細胞外液（１４５ｍＭ  ＮａＣｌ、５ｍＭ  ＫＣｌ、２．４ｍＭＣａＣｌ２、１．８ｍＭ  グルコース、１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ  ７．４）中で２〜３週間培養した星状細胞から、ベーシックパッチ電極充填溶液（１５０ｍＭ  ＫＣｌ、１０ｍＭ  ＢＡＰＴＡ、１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．２）を用いて、全細胞のパッチを作製した。ｍＥＰＳＣをＡｘｏｐａｔｃｈ−２００  Ａ増幅器（Ａｘｏｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｉｎｃ．，ＵＳＡ）を用いて記録した。
〔実施例１〕  グルタミン酸濃度測定
実験例１に従って培養した星状細胞を、ＡＰＶ（１００μＭ）およびＤＮＱＸ（５μＭ）を含有する、５００μｌの細胞外液（１４５ｍＭ  ＮａＣｌ、５ｍＭＫＣｌ、２．４ｍＭ  ＣａＣｌ２、１．８ｍＭ  グルコース、１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ  ７．４）中で、ＦＫ９６０の存在および非存在下で、３７℃、３０分、インキュベートした。培地中のグルタミン酸をＮＡＤ−ＮＡＤＨ酵素循環法によりアッセイした。タンパク質はローリー法により測定した。結果を図１に示す。
この結果から、ＦＫ９６０のグルタミン酸濃度上昇作用が濃度依存性であることがわかる。
〔実施例２〕  ＧＬＴ−１グリアグルタミン酸再取り込みに対するＦＫ９６０の作用
Ａ．アフリカツメガエル卵母細胞中で発現したＧＬＴ−１に対するＦＫ９６０の作用を試験した。実験例３に従って調製した卵母細胞を、インキュベーション７日後に記録チャンバーへと移し、標準カエルリンガー液（１１５ｍＭ  ＮａＣｌ、２ｍＭ  ＫＣｌ、１．８ｍＭ  ＣａＣｌ２、５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ  ７．０）またはＮａ＋を含まないカエルリンガー液（１１５ｍＭ  ＬｉＣｌ、２ｍＭ  ＫＣｌ、５ｍＭ  ＭｇＣｌ２、５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、１ｍＭ  ＥＧＴＡ、ｐＨ  ７．０）中に室温（２０〜２２℃）にて連続して灌流した。チャンバーに、ＦＫ９６０（１００ｎＭ）、またはＦＫ９６０（１００ｎＭ）＋Ｌ−トランス−ピロリジン−２，４−ジカルボン酸（ＰＤＣ；グルタミン酸トランスポーター阻害剤；３００μＭ）の存在下および非存在下、グルタミン酸（１ｍＭ）を付与し、励起電流を、二電極電圧クランプ法により、ＧｅｎｅＣｌａｍｐ−５００増幅器（Ａｘｏｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｉｎｃ．，ＵＳＡ）を用いて測定し、ｐＣｌａｍｐソフトウェア（Ａｘｏｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｉｎｃ．，ｖｅｒｓｉｏｎ  ６．０．３）を用いて分析した。結果を図２Ａに示す。
グルタミン酸（１ｍＭ）により発生させた全細胞膜電流は、Ｌ−トランス−ピロリジン−２，４−ジカルボン酸（ＰＤＣ；グルタミン酸トランスポーター阻害剤）によりもとの振幅の６０％まで阻害された（ＧＬＴ−１を介したグルタミン酸再取り込みを反映する電流値を示す）。ＦＫ９６０（１００ｎＭ）は、振幅を２０％減少させた。このことにより、ＦＫ９６０がＧＬＴ−１を介したグルタミン酸再取り込みを阻害する可能性が示された。
Ｂ．さらに、ラット海馬の培養星状細胞において、ＦＫ９６０のグルタミン酸取り込みに対する作用を試験した。全細胞パッチを培養星状細胞から作製し、ＦＫ９６０（１００ｎＭ）、ＦＫ９６０（１００ｎＭ）＋Ｎ−［２−（ｐ−ブロモシンナミルアミノ）エチル］−５−イソキノリンスルホンアミド（Ｈ−８９；選択的ｃＡＭＰ依存プロテインキナーゼ（ＰＫＡ）阻害剤；１μＭ）、またはＬ−トランス−ピロリジン−２，４−ジカルボン酸（ＰＤＣ；グルタミン酸トランスポーター阻害剤；３００μＭ）の存在下および非存在下、グルタミン酸（１ｍＭ）を付与し、励起電流を、二電極電圧クランプ法により、ＧｅｎｅＣｌａｍｐ−５００増幅器（Ａｘｏｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｉｎｃ．，ＵＳＡ）を用いて測定し、ｐＣｌａｍｐソフトウェア（Ａｘｏｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｉｎｃ．，ｖｅｒｓｉｏｎ  ６．０．３）を用いて分析した。結果を図２Ｂに示す。
グルタミン酸（１ｍＭ）により発生させた全細胞膜電流は、ＰＤＣによりもとの振幅の７５％まで阻害された。ＦＫ９６０（１００ｎＭ）は、振幅を２０％減少し、卵母細胞発現系におけるものと同程度に電流値を減少させた。取り込みに対するＦＫ９６０の作用は、Ｈ−８９存在下で阻害された。これらの結果から、ＦＫ９６０の神経伝達促進作用は、グリア細胞において、ＰＫＡ経路を介し、グリアグルタミン酸再取り込みを阻害することによってシナプス間隙のグルタミン酸濃度上昇させることにより、海馬神経伝達を促進することによるものであることを示している。
〔実施例３〕  ＧＬＴ−１欠損マウスを用いたグルタミン酸濃度測定
実験例２で作製したＧＬＴ−１欠損マウスおよび正常マウスを用いて、実施例１の方法に準じて、グルタミン酸濃度測定を行った。本濃度測定は、何も添加しない場合をコントロールとし、ＦＫ９６０単独、ＦＫ９６０＋Ｈ−８９、ＦＫ９６０＋ビスインドリルマレイミド（ＧＦ；選択的ＰＫＣ阻害剤）、ＦＫ９６０＋ジヒドロカイニン酸（ＤＨＫ；選択的ＧＬＴ−１阻害剤）の存在下にて行い、結果を比較した。結果を図３に示す。
ＧＬＴ−１欠損マウスおよび正常マウスの実験結果に差異はなかった。また、ＧＦを添加しても、ＦＫ９６０のグルタミン酸濃度上昇作用は変化しなかった。これにより、ＰＫＣが関連する経路にＦＫ９６０が作用するのではない可能性が示された。また、ＦＫ９６０によるグリア細胞からのグルタミン酸放出増加はＤＨＫを添加しても変化がなく、同様の増加がＧＬＴ−１欠損マウスでも認められた。このことより、ＦＫ９６０のグリア細胞からのグルタミン酸放出増加作用はＧＬＴ−１の逆行性輸送によるものではないことが明らかとなった。
産業上の利用可能性
本発明により、グリア細胞へのグルタミン酸再取り込みを阻害しかつ／またはグリア細胞からのグルタミン酸放出を促進することによりシナプス間隙のグルタミン酸濃度を上昇させる作用を有する化合物を活性成分として含有する新規な神経伝達促進剤および当該化合物を活性成分として含有する新規な脳疾患予防・治療剤、ならびに当該化合物を用いた神経伝達を促進する方法および脳疾患の予防・治療方法が提供される。
本出願は、日本で出願された特願２００１−３７５０８２を基礎としておりその内容は本明細書に全て包含されるものである。
【図面の簡単な説明】
図１は、ＦＫ９６０のグルタミン酸濃度上昇作用の濃度依存性を示すグラフである。
図２は、グリアグルタミン酸トランスポーターに対するＦＫ９６０の作用を示す図である。
本図中、上部は、ＦＫ９６０処理の前後に記録した電流値を示す。維持電圧は−６０ｍＶ。下部のグラフ中、（Ａ）各値は、コントロール（ＦＫ９６０またはＰＤＣ処理前の電流）に対する平均（±ＳＥＭ）パーセント（ｎ＝５）を示す。＊Ｐ＜０．１，＊＊Ｐ＜０．０１，Ｆｉｓｈｅｒ’ｓ  ｌｅａｓｔ−ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ  ｔｅｓｔを用いた分散分析。（Ｂ）各値は、コントロール（ＦＫ９６０、ＦＫ９６０＋Ｈ−８９、またはＰＤＣ処理前の電流）の平均（±ＳＥＭ）パーセント（ｎ＝５）を示す。＊Ｐ＜０．１，Ｆｉｓｈｅｒ’ｓ  ｌｅａｓｔ−ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ  ｔｅｓｔを用いた分散分析。
図３は、ＧＬＴ−１欠損マウス（ｇｌｔ−１  −／−）と正常マウス（ｇｌｔ−１  ＋／＋）を用いた、各種阻害剤添加時におけるＦＫ９６０のグルタミン酸濃度上昇作用を比較するグラフである。＊＊Ｐ＜０．０１，Ｆｉｓｈｅｒ’ｓ  ｌｅａｓｔ−ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ  ｔｅｓｔを用いた分散分析。
【図１】
2003047625.tif 000016
【図２】
2003047625.tif 000017
【図３】
2003047625.tif 000018
【国際調査報告】
2003047625.tif 000019
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