【手続補正書】
【提出日】平成13年4月26日(2001.4.26)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【書類名】明細書
【発明の名称】ＩｇＥ関連疾患の治療方法と、その治療において使用する組成物
【特許請求の範囲】
【請求項１】患者の抗原特異的免疫療法に際し抗原に対するアレルギー反応またはアレルギー関連疾患を治療する方法であって、ＩｇＥ活性を阻害する第１組成物を、患者のＩｇＥ活性を低下させるに足る量だけ患者に投与すること、および抗原を含む第２組成物を、抗原に対する免疫反応を調節するに足る量だけ患者に投与することを含んで成る治療方法。
【請求項２】ＩｇＥ活性を阻害する組成物が抗ＩｇＥ抗体を含んで成る特許請求の範囲第１項記載の方法。
【請求項３】抗原が免疫賦活オリゴヌクレオチドを含んで成るポリヌクレオチドに結合されている特許請求の範囲第１項記載の方法。
【請求項４】抗原が免疫賦活オリゴヌクレオチドを含んで成るポリヌクレオチドに結合されている特許請求の範囲第２項記載の方法。
【請求項５】ＩｇＥ関連疾患をもつ患者を治療する方法であって、ＩｇＥ活性を阻害する第１組成物を、前記疾患を軽減するに足る量だけ患者に投与すること、および免疫賦活オリゴヌクレオチドを含む第２組成物を、第１組成物の活性を高めるに足る量だけ患者に投与することを含んで成る治療方法。
【請求項６】ＩｇＥ関連疾患がアレルギーまたはアレルギー関連疾患である特許請求の範囲第５項記載の方法。
【請求項７】ＩｇＥ関連疾患が寄生虫病である特許請求の範囲第５項記載の方法。
【請求項８】ＩｇＥ活性を阻害する組成物が抗ＩｇＥ抗体を含んで成る特許請求の範囲第５項記載の方法。
【請求項９】抗ＩｇＥ抗体がヒト化マウス抗体である特許請求の範囲第８項記載の方法。
【請求項１０】第１組成物が第２組成物の前に投与される特許請求の範囲第５項記載の方法。
【請求項１１】第２組成物が第１組成物の前に投与される特許請求の範囲第５項記載の方法。
【請求項１２】第１組成物が第２組成物と一緒に投与される特許請求の範囲第５項記載の方法。
【請求項１３】抗原特異的免疫療法に際し抗原に対するアレルギー反応またはアレルギー関連疾患を治療する特許請求の範囲第５項記載の方法であって、さらにアレルゲンに対する脱感作を誘発するに足る量の抗原を含む第３組成物を患者に投与することを含んで成る方法。
【請求項１４】第２組成物と第３組成物が、抗原に結合された免疫賦活オリゴヌクレオチドを含む単一組成物を含んで成る特許請求の範囲第１３項記載の方法。
【請求項１５】個人のＩｇＥ関連疾患を治療する方法であって、アナフィラキシーを阻害する作用物質を含む第１組成物を、アナフィラキシーを阻害するための有効量だけ、また免疫賦活オリゴヌクレオチドを含むポリヌクレオチドを含んで成る第２組成物を、第１組成物の活性を高めるに足る量だけ、前記個人に投与することを含んで成る方法。
【請求項１６】さらに抗原を投与することを含んで成る特許請求の範囲第１５項記載の方法。
【請求項１７】抗原がポリヌクレオチドに結合されている特許請求の範囲第１６項記載の方法。
【請求項１８】第１組成物に含まれる作用物質が抗ＩｇＥ抗体である特許請求の範囲第１５項記載の方法。
【請求項１９】抗原がポリヌクレオチドに結合されている特許請求の範囲第１８項記載の方法。
【請求項２０】特許請求の範囲第１項記載の免疫療法に使用される、アレルギー脱感作療法への使用のための許容濃度を超える濃度の抗原を含んで成る組成物。
【請求項２１】特許請求の範囲第５項記載の免疫療法に使用される、アレルギー脱感作療法への使用のための許容濃度を超える濃度の抗原を含んで成る組成物。
【請求項２２】特許請求の範囲第１３項記載の免疫療法に使用される、アレルギー脱感作療法への使用のための許容濃度を超える濃度の抗原を含んで成る組成物。
【請求項２３】ＩｇＥ活性を阻害する組成物と免疫賦活オリゴヌクレオチドとを含んで成る組成物。
【請求項２４】特許請求の範囲第２０項記載の組成物を適当なパッケージに含んで成るキット。
【請求項２５】特許請求の範囲第２１項記載の組成物を適当なパッケージに含んで成るキット。
【請求項２６】特許請求の範囲第２２項記載の組成物を適当なパッケージに含んで成るキット。
【請求項２７】特許請求の範囲第２３項記載の組成物を適当なパッケージに含んで成るキット。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
発明の属する技術分野
本発明は、ＩｇＥ関連疾患の治療法と、その治療において使用する組成物に関するものである。この治療法は、アレルギーの治療と、アレルギー関連疾患の治療に特に有効である。
【０００２】
背景となる技術
アレルギー反応にはアレルギー性喘息やアレルギー性鼻炎などの反応があって、即時型反応と遅延型反応を特徴とする。即時型反応は、アレルゲンと接触して数秒から数分以内に起こる反応であり、細胞の脱顆粒が特徴である。遅延型反応は、４〜２４時間経ってから起こる反応であり、アレルゲンと接触した部位に好酸球が侵入することが特徴である。
【０００３】
さらに具体的に述べるならば、アレルギー反応の初期段階においては、活性化されたＴｈ２タイプのリンパ球が抗原特異的なＩｇＥ抗体の産生を促進し、そのことによって今度は、マスト細胞や好塩基球からヒスタミンその他の炎症媒介物質が放出され始める。遅延反応が起こっている間は、ＣＤ４＋Ｔｈ２細胞が産生するＩＬ−４とＩＬ−５が増加する。これらサイトカインは、アレルゲンと接触することによって組織がダメージを受けて機能不全を起こしている部位に好酸球を送り込むのに重要な役割を果たしているように思われる。
【０００４】
現在のところ、アレルギー性疾患に対する抗原免疫療法では、脱感作療法と呼ばれる方法で治療を行なう過程において、少量の抗原を徐々に量を増やしながら皮下注射する。このような免疫療法では、一般に、何ヶ月にもわたって多数回の注射を行ない、その後、普通は維持療法として最高で５年間にもわたって毎月注射を行なうが、いつ治療を中止してよいかの目安となる実証的指標は存在していない。
【０００５】
抗原免疫療法は単なるその場しのぎの方法であり、現在のところは根本的な治療にはなっていない。ウェーバー（１９９７年）ＪＡＭＡ、第２７８巻、１８８１〜１８８７ページ；スティーヴンス（１９９８年）Ａｃｔａ Ｃｌｉｎｉｃａ Ｂｅｌｉｇｉｃａ、第５３巻、６６〜７２ページ；カナダ・アレルギー・臨床免疫学学会（１９９５年）Ｃａｎ． Ｍｅｄ． Ａｓｓｏｃ． Ｊ．、第１５２巻、１４１３〜１４１９ページ。患者は、この療法を始めても、多くの場合、最後までやり遂げることなく終わる。患者は、一週間以上にわたって注射をしないことがあると、この治療法を最初からすべてやり直さなくてはならない。さまざまな抗原がこれまでに同定され、遺伝子組み換えにより製造されている。
【０００６】
これまでの経緯を知るには、バルド他、Ａｌｌｅｒｇｙ（１９８９年）第４４巻、８１〜９７ページ；バルド、Ｃｕｒｒ． Ｏｐｉｎ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９１年）第３巻、８４１〜８５０ページ；ブレイザー、Ｔｈｅｒ． Ｕｍｓｃｈ．（１９９４年）第５１巻、１９〜２３ページ；ブスケ、Ａｒｂ． Ｐａｕｌ Ｅｈｒｌｉｃｈ Ｉｎｓｔ． Ｂｕｎｄｅｓａｍｔ Ｓｅｒａ． Ｉｍｐｆｓｔｏｆｆｅ Ｆｒａｎｋｆ． Ａ． Ｍ．、１９９４年、２５７〜２６２ページ；ブスケ他、Ａｄｖ． Ｅｘｐ． Ｍｅｄ． Ｂｉｏｌ．（１９９６年）第４０９巻、４６３〜４６９ページ；ブライトネーダー他、Ａｒｂ． Ｐａｕｌ Ｅｈｒｌｉｃｈ Ｉｎｓｔ． Ｂｕｎｄｅｓａｍｔ Ｓｅｒａ． Ｉｍｐｆｓｔｏｆｆｅ Ｆｒａｎｋｆ． Ａ． Ｍ．、１９９７年、８０〜８６ページ；クラメリ他、Ｐｎｅｕｍｏｌｏｇｉｅ（１９９６年）第５０（６）巻、３８７〜３９３ページ；ドノヴァン他、Ｍｏｎｏｇｒ． Ａｌｌｅｒｇｙ（１９９０年）第２８巻、５２〜８３ページ；クラフト、Ａｄｖ． Ｅｘｐ． Ｍｅｄ． Ｂｉｏｌ．（１９９６年）第４０９巻、４７１〜４７４ページ；ナカガワ他、Ｉｎｔ． Ａｒｃｈ． Ａｌｌｅｒｇｙ Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９３年）第１０２巻、１１７〜１２０ページ；シュー、Ａｄｖ． Ｅｘｐ． Ｍｅｄ． Ｂｉｏｌ．（１９９６年）第４０９巻、１３７〜１４０ページ；トーマス、Ａｄｖ． Ｅｘｐ． Ｍｅｄ． Ｂｉｏｌ．（１９９６年）第４０９巻、８５〜９３ページ；ヴァレンタ他、Ａｄｖ． Ｅｘｐ． Ｍｅｄ． Ｂｉｏｌ．（１９９６年）第４０９巻、１８５〜１９６ページ；ヴァレンタ他、Ａｒｂ． Ｐａｕｌ Ｅｈｒｌｉｃｈ Ｉｎｓｔ． Ｂｕｎｄｅｓａｍｔ Ｓｅｒａ． Ｉｍｐｆｓｔｏｆｆｅ Ｆｒａｎｋｆ． Ａ． Ｍ．、１９９７年、２２２〜２２９ページを参照されたい。
【０００７】
抗原免疫療法は、ＩｇＥを媒介とした致命的なアナフィラキシーを引き起こす危険性がある。さらに、抗原免疫療法は、遅延型アレルギー反応におけるサイトカインを媒介とした症状には適用できない。実際、この療法を実践しているある人物は、この治療法のことを、「不幸な出来事が起こる可能性を持った方法」であると述べている（ウェーバー、１９９７年）。抗原免疫療法におけるもうひとつ別の大きな問題は、好ましくない反応として特にアナフィラキシーが起こる危険性があるので、１回ごとの抗原投与量とある期間内の抗原投与量の両方が少な目になることである。したがって、従来の抗原免疫療法は、長期間にわたり、不便で、費用も多くかかる。
【０００８】
アレルギーなどのＩｇＥ関連疾患を治療するための別の方法では、ヒスタミンの放出を抑制する化合物を投与する。そのための薬は多数あって薬局で入手することができる。その他の薬としては、抗ＩｇＥ結合抗体などがある。しかし、この方法の欠点は、単に症状を抑えているだけで、根本的な治療または保護にはなっていない点である。
必要とされているのは、アレルギーなどのＩｇＥ関連疾患を治療するための改善された方法である。
これまでに述べた部分で引用したすべての文献と、以下に述べる部分で引用するすべての文献は、参考としてこの明細書に組み込んである。
【０００９】
発明の説明
本発明は、抗原特異的免疫療法を行ないながら、抗原に対するアレルギー反応またはアレルギー関連疾患を治療する方法として、ＩｇＥの活性を抑制する第１の組成物を、被験対象の体内でＩｇＥの活性を低下させるのに十分な量だけ被験対象に投与するとともに、反応または疾患を一時的に緩和するのに十分な量の抗原（または、抗原を含んだ第２の組成物）を被験対象に投与するという方法を提供する。
【００１０】
本発明は、さらに、ＩｇＥの活性を抑制する第１の組成物を、疾患を一時的に緩和するのに十分な量だけ投与するとともに、免疫活性化オリゴヌクレオチドを含む第２の組成物を、第１の組成物の活性を増加させるのに十分な量だけ投与することにより、ＩｇＥ関連疾患を抱える被験対象を治療する方法を提供する。本発明を実施する際に被験対象に第１の組成物と第２の組成物を投与する順番は任意であり、両方の組成物を同時に投与することも可能である。さらに、当業者であれば容易に理解できるであろうが、この明細書のどの実施態様に記載した活性成分（すなわち、ＩｇＥおよび／またはアナフィラキシー抑制剤、ＩＳＳおよび／または抗原）も、２つ以上の活性成分を同時に投与するために単一の組成物にすることができる。
【００１１】
本発明は、さらに、抗原特異的免疫療法を行ないながら、アレルゲンに対するアレルギー反応またはアレルギー関連疾患を治療する方法として、ＩｇＥの活性を抑制する第１の組成物を、疾患を一時的に緩和するのに十分な量だけ投与し、免疫活性化オリゴヌクレオチドを含む第２の組成物を、第１の組成物の活性を増加させるのに十分な量だけ投与し、アレルゲンに対する脱感作を誘発するのに十分な量の抗原を含む第３の組成物を投与するという方法を提供する。アナフィラキシー・ショックを避けるため、第３の組成物は第１の組成物よりも後に投与することが好ましい。この点を除くと、第２の組成物と第３の組成物はどちらを先に投与してもよく、同時に投与することもできる。この明細書に記載したＩＳＳ−抗原複合体は、これら組成物を同時に投与するのに特に役に立つ。
【００１２】
この明細書に記載した方法は、アレルギー、アレルギー関連疾患、寄生虫の感染など、ＩｇＥに関連したあらゆる疾患の治療に適している。なお、疾患の具体例はこれがすべてではない。アレルギーを引き起こす可能性のある物質のリストを表１に示すが、すべての物質を網羅してあるわけではない。さまざまなアレルギー関連疾患が知られている。例えば、喘息、じんましん、ならびにこの明細書に記載したそれ以外の疾患が挙げられるが、それがすべてではない。寄生虫の感染にはぜん虫などの感染が含まれるが、それがすべてではない。
【００１３】
この明細書に記載したように、ＩｇＥの活性を抑制する組成物は、従来技術で知られている任意のものが可能である。この組成物は、抗ＩｇＥ抗体などの抗ＩｇＥ抗原結合断片を含んでいることが好ましい。
本発明は、さらに、この明細書に記載した方法に従って免疫療法を行なう際に使用する少なくとも１つの抗原を含む組成物を提供する。重要なことだが、この組成物は、アレルギーの脱感作療法において使用可能な量よりも多い量を被験対象に投与することが適当である。したがってこの組成物は、脱感作療法において通常用いられている組成物よりも濃縮された形で提供することができる。
本発明は、さらに、ＩｇＥの活性を抑制する組成物と、この明細書に記載した治療で使用する免疫活性化オリゴヌクレオチドの両方を含む組成物を提供する。
【００１４】
本発明の実施形態
本発明は、（ａ）被験対象の体内でＩｇＥの活性を抑制して、（薬剤投与および／または抗原との接触の際の）アナフィラキシーなど、望ましくない反応を好ましくは十分に低減または阻止する１つ以上の組成物の中の１つ（または複数）の薬剤と、（ｂ）アレルギー状態などのＩｇＥ関連疾患において抗原および／または免疫活性化ポリヌクレオチド配列（ＩＳＳ）を利用した免疫療法とを組み合わせた方法を提供する。このような組み合わせは、現在行なわれている治療法よりもはるかに大きな利点を有する。
【００１５】
本発明の組み合わせ療法により、（抗原を従来よりも多く投与することができるため、）より積極的で、したがってより効果的な免疫療法が可能になり、しかもアナフィラキシーなどの望ましくない副作用の危険性が大きく減ることになる。さらに、治療期間が従来よりも短縮されるため、時間が節約されるとともに不便さが減る。これは、特に、被験対象が長期間にわたって何回も病院を訪問しなくてはならないのに、疑問符がつく治療結果しか得られないことがしばしばある従来のアレルギー免疫療法においてはよく考えなくてはならない問題である。治療期間の短縮には、治療が成功したことを従来よりも簡単かつ正確に判定できるという利点もある。
【００１６】
比較的少ない投与量を維持したまま時間をかけて徐々に投与量を増やしていくという従来の脱感作療法と比べると、本発明の方法では、それよりもかなり多い量の抗原を投与することができる（すなわち、普通ならば（ＩｇＥ抑制剤を投与しなければ）アナフィラキシーを起こす危険性が高いと思われる量の抗原を投与することができる）。
【００１７】
一般的な方法
本発明を実施するにあたっては、特に記載しない限りは、（遺伝子組み換え技術を含む）分子生物学、微生物学、細胞生物学、生化学、免疫学における当業者には周知の一般的な技術を利用する。そうした技術は文献に詳細に説明されている。参考文献としては、例えば以下のものが挙げられる。
【００１８】
『分子クローニング：実験室マニュアル』第２版（サムブルック他、１９８９年）；『オリゴヌクレオチドの合成』（Ｍ．Ｊ．ゲイト編、１９８４年）；『動物細胞の培養』（Ｒ．Ｉ．フレッシュニー編、１９８７年）；『酵素学における方法』（アカデミック・プレス）；『実験免疫学ハンドブック』（Ｄ．Ｍ．ウィアーとＣ．Ｃ．ブラックウェル編）；『哺乳類細胞のための遺伝子導入ベクター』（Ｊ．Ｍ．ミラーとＭ．Ｐ．カロス編、１９８７年）；『分子生物学における最新のプロトコル』（Ｆ．Ｍ．オースベル他編、１９８７年）；『ＰＣＲ：ポリメラーゼ連鎖反応』（マリス他編、１９９４年）；『免疫学における最新のプロトコル』（Ｊ．Ｅ．コリガン他編、１９９１年）；『イムノアッセイ・ハンドブック』（デイヴィッド・ワイルド編、ストックトン・プレス、ニューヨーク州、１９９４年）；『免疫学的分析法』（Ｒ．マセイエフ、Ｗ．Ｈ．アルバート、Ｎ．Ａ．ステインズ編、ヴァインハイム、ＶＣＨ社、１９９３年）。
【００１９】
定義
この明細書で用いる“治療”とは、好ましい臨床治療結果あるいは望ましい臨床治療結果を得るための方法のことを意味する。本発明が目的とする好ましい臨床治療結果あるいは望ましい臨床治療結果に含まれるのは、検出可能であるかどうかに関係なく、１つ以上の症状の緩和、疾患または病気の程度の軽減、疾患または病気の安定化（すなわち非悪化）、疾患または病気の進行の遅延化または鈍化、疾患または病気の改善または一時的緩和、（部分的または全体的な）寛解などであるが、これだけに限定されるわけではない。“治療”には、治療を受けなかった場合に予想される余命と比べて余命が延びることも含まれる。
【００２０】
疾患または病気の“一時的緩和”は、疾患または病気を治療しなかった場合と比べて、その疾患または病気の状態の程度および／または望ましくない臨床症状が軽減すること、および／または、疾患または病気の進行が鈍化または遅延化することを意味する。特にアレルギーに関しては、当業者であれば周知のように、一時的緩和は、アレルゲンに対する免疫応答が変化したときに起こることがある。さらに、一時的緩和は、１回の薬剤投与によって起こるとは限らず、一連の薬剤投与によって起こることがしばしばある。したがって、応答または疾患を一時的に緩和するのに十分な量を１回以上にわたって投与するとよい。
【００２１】
“被験対象”は、脊椎動物、好ましくは哺乳類、さらに好ましくはヒトである。哺乳類には、家畜、スポーツに使用する動物、囓歯類、ペットなどが含まれるが、これだけに限定されるわけではない。
“ＩｇＥ関連疾患”とは、ＩｇＥレベルの一時的上昇または長期的上昇を１つの特徴とする生理学的状態のことを意味する。ＩｇＥ関連疾患には、アレルギーおよびアレルギー反応、（以下に説明する）アレルギー関連疾患、喘息、鼻炎、結膜炎、じんましん、ショック、ハチ刺症アレルギー、薬物アレルギー、寄生虫の感染などが含まれるが、これだけに限定されるわけではない。この用語には、これら疾患に関連して現われる症状も含まれる。一般に、これらの疾患におけるＩｇＥは、抗原特異的である。
【００２２】
“抗原に対するアレルギー反応”とは、抗原特異的なＩｇＥの産生と、その結果起こるＩｇＥ抗体の効果を一般的な特徴とする免疫応答のことを意味する。従来技術において周知のように、ＩｇＥは、マスト細胞および好塩基球のＩｇＥ受容体と結合する。抗原と接触することによってＩｇＥがその抗原を認識すると、その抗原はマスト細胞および好塩基球の表面にあるＩｇＥと結合し、これら細胞の脱顆粒が起こる。本発明の方法は、“抗原に対するアレルギー反応”、“アレルギー”、“アレルギー状態”のいずれに対しても同様に適用することができる。さらに、本発明の方法は、アレルギー反応の予防ならびに前アレルギー症状の治療にも適用することができる。
【００２３】
“アレルギー関連疾患”は、抗原特異的なＩｇＥが免疫応答する結果として発生する疾患を意味する。免疫応答には、低血圧、ショックなども含まれるが、これだけに限定されるわけではない。アナフィラキシーはアレルギー関連疾患の一例であり、その状態に陥ると、ヒスタミンが放出されて血管中を循環し、血管の拡張が起こるとともに毛細血管の透過性が大きくなり、循環している血液から血漿が大量に失われる。アナフィラキシーは、全身に起こることも、局所的に起こることもある。前者の場合、アナフィラキシーに伴う効果は全身に及び、後者の場合には、反応は、標的となった特定の組織または器官に限られる。
【００２４】
“寄生虫の感染”とは、後生動物に属する寄生虫による感染のことを意味する。そうした寄生虫としては、例えば、ぜん虫、住血吸虫（Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ ｍａｎｓｏｎｉ）が挙げられる。寄生虫に感染すると、ＩｇＥのレベルが上昇する（したがって寄生虫の感染は、ＩｇＥ関連疾患である）。
【００２５】
この明細書で用いる“抗原”という用語は、抗体またはＴ細胞の抗原受容体が特異的に認識または結合する物質のことを意味する。抗原としては、ペプチド、タンパク質、糖タンパク質、多糖、ガングリオシド、脂質、ならびにこれらの一部または組み合わせを挙げることができる。抗原は、自然界に存在しているものでも、合成されたものでもよい。ハプテンも“抗原”に含まれる。ハプテンは低分子量の化合物であり、それ自体は免疫原性を持たないが、抗原決定基を備えていて免疫原性を有する分子と結合することによって免疫原性を持つようになる。
【００２６】
この明細書で用いる“アレルゲン”という用語は、抗原のこと、あるいは分子（通常はタンパク質）の抗原部位のことを意味する。被験対象がアレルゲンと接触すると、アレルギー反応が誘発される。一般に、被験対象が特定のアレルゲンに対してアレルギーであるかどうかは、例えばかゆみ・発赤テストによって、あるいは従来技術で知られている任意の方法によってわかる。複数の被験対象のうちのほんの少数であれ、ある分子に対して免疫応答を示したとき、その分子はアレルゲンであると言われる。これまでに多数のアレルゲンが分離されている。その中には、表１（後掲）に掲載したものも含まれるが、それだけに限定されるわけではない。
【００２７】
“脱感作”（ｄｅｓｅｎｓｉｔｉｚａｔｉｏｎ）という用語は、被験対象が反応を示したアレルゲンを徐々に多く投与していくプロセスを意味する。脱感作に用いるアレルゲンの投与量は従来技術で知られており、例えば、フォーナドリー（１９９８年）Ｏｔｏｌａｒｙｎｇｏｌ． Ｃｌｉｎ． Ｎｏｒｔｈ Ａｍ．、第３１巻、１１１〜１２７ページを参照されたい。
【００２８】
物質の“効果的な量”とは、好ましい臨床治療結果あるいは望ましい臨床治療結果を得るのに十分な量のことであり、したがって“効果的な量”は、状況に応じて異なる。病気治療における“効果的な量”とは、本発明の方法で治療している疾患を改善または一時的に緩和するのに十分な量のことである。ＩｇＥの活性を抑制する組成物（すなわち、ＩｇＥを抑制する薬剤を含む組成物）を投与する場合における効果的な量とは、そのような抑制（抑制は、完全または絶対的でなくともよい）を達成するのに十分な量のことである。
【００２９】
特にアレルギーの場合には、効果的な量が、投与したとき、および／または、抗原と接触したときのアナフィラキシー（または別の望ましくない副作用）を減少させる、および／または、抑制するのに十分な量になっていることが非常に好ましい。効果的な量は、１回で投与することも、複数回に分けて投与することもできる。特にアレルギーの脱感作療法においては、効果的な量は、通常は１回ごとに量を増やしていく複数回の投与によって達成される。
【００３０】
この明細書で用いる“ＩＳＳ”という用語は、インビトロ、インビボ、および／またはエクスビボで測定可能な免疫応答に影響を及ぼすオリゴヌクレオチド配列のことを意味する。従来技術で周知のように、さまざまな長さの配列が“オリゴヌクレオチド”という用語に含まれる。この明細書に記載してあるように、そして当業者には明らかなように、“ＩＳＳ”と呼ばれるものの１つに、１つのＩＳＳを含む（あるいは、１つのＩＳＳで構成することのできる）ポリヌクレオチドがある。
【００３１】
測定可能な免疫応答の具体例としては、抗原特異的な抗体の産生、サイトカインの分泌、リンパ球であるＮＫ細胞、ＣＤ４＋Ｔリンパ球、ＣＤ８＋Ｔリンパ球、Ｂリンパ球などの集団の活性化または増加が挙げられるが、これだけに限定されるわけではない。ＩＳＳ配列は、Ｔｈ１タイプの応答を選択的に活性化することが好ましい。本発明で使用するのに適したＩＳＳについては、以下にさらに詳しく説明する。
“ＩＳＳ−抗原複合体”とは、共有結合および／または非共有結合による相互作用を通じて抗原と結合したＩＳＳを含むＩＳＳオリゴヌクレオチドまたはＩＳＳポリヌクレオチドのことを意味する。
【００３２】
この明細書で用いる“薬剤”（ａｇｅｎｔ）という用語は、生物学的化合物または化学的化合物のことを意味し、例えば、単独または複合体の有機または無機の分子、ペプチド、タンパク質、オリゴヌクレオチドなどが挙げられる。例えばタンパク質、ペプチド、ポリヌクレオチド、さまざまなコア構造に基づいた合成有機化合物などの非常に多様な化合物を合成することができ、これらも“薬剤”という用語に含まれる。さらに、さまざまな天然資源、例えば植物または動物の抽出物なども、化合物の供給源になりうる。薬剤は、単独で、あるいは組み合わせて投与することができる。
【００３３】
“ＩｇＥの活性を抑制する”組成物または薬剤とは、その組成物が存在していないこと以外は同じ条件にした場合と比較したときに、ＩｇＥの活性を低下させる薬剤を含んでいる組成物のことである。従来技術で知られているように、ＩｇＥの活性は、一般に、ＩｇＥの循環レベルを測定することによって示されるが、それ以外にも、ＩｇＥの機能と関係した活性、例えば好塩基球との結合、アナフィラキシー、Ｆｃ受容体などの受容体（高親和性のＦｃ受容体と低親和性受容体ＣＤ２３が含まれる）との結合を測定することによっても示される。少しでも活性が低下していれば十分である。
【００３４】
ＩｇＥの循環レベルに関しては、少なくとも約１０％、好ましくは少なくとも約２０％、好ましくは少なくとも約４０％、さらに好ましくは少なくとも約５０％、さらに好ましくは少なくとも約６０％、さらに好ましくは少なくとも約７５％、さらに好ましくは少なくとも約８０％、さらに好ましくは少なくとも約９０％、さらに好ましくは少なくとも約９５％低下していることが好ましい。ＩｇＥの活性を低下させる別の方法は、アナフィラキシーを抑制すること（または、アナフィラキシーの危険をなくすこと）である。この方法が、本発明と特に関係が深い。ＩｇＥの活性を抑制する薬剤がこの明細書に記載されている。そうした薬剤としては、抗ＩｇＥ抗体、ＩｇＥ受容体、抗ＩｇＥ受容体抗体、ＩｇＥ受容体のリガンドなどが挙げられるが、これだけに限定されるわけではない。
【００３５】
アナフィラキシーを“抑制する”薬剤（または組成物）とは、その薬剤が存在していないこと以外は同じ条件にした場合に起こったであろうアナフィラキシーよりもアナフィラキシーが軽くなる薬剤のことである。したがって、アナフィラキシーを抑制する薬剤または組成物とは、アナフィラキシーの危険を小さくする（あるいは、なくしてさえしまう）薬剤または組成物のことである。アナフィラキシーを抑制すると、ＩｇＥの活性が低下し（例えばＩｇＥと結合することによってＩｇＥの循環レベルが低下することも含む）；ＩｇＥを分泌するＢ細胞上のＩｇＥと結合し；アンタゴニスト；ＩｇＥ産生よりも上流で起こる現象に影響を及ぼし；ＩｇＥがマスト細胞の受容体と結合するのを阻止する（例えば、マスト細胞の受容体と結合してもヒスタミンを放出させない）といった現象が最も典型的に見られる。
【００３６】
本発明を達成するには、ヒスタミン放出の上流に作用する任意の薬剤を用いることが可能である。ＩｇＥの産生および／またはＩｇＥの活性を抑制する作用を有する薬剤が好ましい。ただし、抑制作用のあるこの薬剤が全身性アナフィキラシーを誘発するようなことがあってはならない。したがって、本発明で用いるＩｇＥの活性抑制剤は、好塩基球またはマスト細胞からヒスタミンを放出させないことが好ましい。
【００３７】
本発明の方法
本発明は、アレルギーの治療法と、それ以外のＩｇＥ関連疾患の治療法を提供する。そこで本発明の一実施態様では、被験対象に対して抗原特異的免疫療法を行ないながら、抗原に対するアレルギー反応またはアレルギー関連疾患を治療する方法（すなわち、抗原特異的免疫療法または脱感作療法のための方法）であって、（ａ）ＩｇＥの活性を抑制する第１の組成物を投与し；（ｂ）抗原に対する免疫応答を変化させるのに十分な量の抗原を含む第２の組成物を投与する操作を含む方法が提供される。
【００３８】
免疫応答の変化により、アレルギー反応または疾患が一時的に緩和されるはずである。この明細書に記載してあることだが、本発明の実施態様において投与する抗原の量は、ＩｇＥ抑制剤を投与していないときに投与するであろう量よりも多い（すなわち、投与する抗原は、従来の脱感作療法で一般に使われるよりも量が多い）。好ましい実施態様では、第１の組成物は、抗ＩｇＥ抗体、好ましくは、以下に説明するようなヒト化された抗ＩｇＥ抗体を含んでいる。
【００３９】
いくつかの実施態様では、抗ＩｇＥ抗体に加え、第２の組成物の抗原が、免疫活性化オリゴヌクレオチド（すなわちＩＳＳ）を含んでいるポリヌクレオチドと結合している。この結合は、共有結合でも非共有結合でもよく、包み込みまたはプラットフォームとなる分子との結合などの他のメカニズムによるものでもよい。別の実施態様では、第１の組成物は抗ＩｇＥ抗体を含んでおり、第２の組成物は、ＩＳＳを含むポリヌクレオチドまたはＩＳＳからなるポリヌクレオチドと好ましくは複合体の形で結合した抗原を含んでいる。
【００４０】
別の実施態様では、ＩｇＥ関連疾患を抱える被験対象の治療法であって、ＩｇＥの活性を抑制する第１の組成物を、疾患を一時的に緩和するのに十分な量だけ被験対象に投与し；免疫促進性オリゴヌクレオチドを含む第２の組成物を、第１の組成物の活性を上昇させるのに十分な量だけ被験対象に投与する操作を含む治療法が提供される。別の実施態様では、抗原をやはり投与する。
【００４１】
一般に、第１の組成物は、ＩｇＥの活性を低下させるのに十分な量を投与する。これらの実施態様は特に有効である。というのも、ＩＳＳの投与によってＩｇＥのレベル低下が促進される一方で、Ｔｈ１の応答が促進されるからである。以下に説明するように、ＩｇＥ関連疾患には、アレルギー（あらゆるタイプのアレルギー）；アレルギー関連疾患；喘息が含まれるが、これだけに限定されるわけではない。
【００４２】
本発明の方法では、ＩｇＥの活性を抑制する組成物（すなわち、この組成物はＩｇＥの活性を抑制する薬剤を含んでいる）を投与する。ＩｇＥの活性が十分に抑制され、この組成物の投与および／または抗原と接触する際のアナフィラキシーが回避できる、あるいはアナフィラキシーの程度が少なくてすむことが好ましい。
【００４３】
本発明の別の実施態様では、アナフィラキシーを抑制する、あるいはアナフィラキシーの危険性を低下させる薬剤、好ましくはＩｇＥの活性を抑制する薬剤を含む第１の組成物と、ＩＳＳ（または免疫活性化オリゴヌクレオチド）を含む第２の組成物とを投与することによってヒトのＩｇＥ関連疾患を治療する方法であって、第１の組成物が効果をもたらす量が、アナフィラキシーを抑制する（またはアナフィラキシーの危険性を低下させる）効果をもたらす量であり、第２の組成物が効果をもたらす量が、第１の組成物の活性を向上または増大させるのに十分な量であることを特徴とする治療法が提供される。抗原も（第２の組成物または第３の組成物の中に入れて）そのヒトに投与することが好ましい。
【００４４】
好ましい実施態様では、第１の組成物に含まれる薬剤は、抗ＩｇＥ抗体、好ましくは、以下に説明するようなヒト化された抗ＩｇＥ抗体である。いくつかの実施態様では、抗ＩｇＥ抗体に加え、免疫活性化オリゴヌクレオチド（すなわちＩＳＳ）を含むポリヌクレオチドと結合した抗原も投与する。この結合は、共有結合でも非共有結合でもよく、包み込みまたはプラットフォームとなる分子との結合などの他のメカニズムによるものでもよい。別の実施態様では、第１の薬剤は抗ＩｇＥ抗体であり、第２の組成物は、ＩＳＳ（またはＩＳＳを含むポリヌクレオチド）と好ましくは複合体の形で結合した抗原を含んでいる。
【００４５】
ＩｇＥの活性を抑制する組成物
本発明の方法では、ＩｇＥの活性を抑制する（すなわち、ＩｇＥの活性を抑制する薬剤を含む）とともに、最も好ましくはアナフィラキシー、特に全身性アナフィラキシーを抑制する第１の組成物を投与する。以下に説明するように、抗ＩｇＥ抗体、より好ましくはヒト化された抗ＩｇＥ抗体を用いることが好ましい。
【００４６】
ＩｇＥ活性の抑制剤は従来技術で知られており、例えば、抗ＩｇＥ抗体、ＩｇＥ結合断片（抗体断片を含む）、受容体、受容体の断片などが挙げられるが、これだけに限定されるわけではない。例えば、本発明のいくつかのＩｇＥ活性抑制剤は、ＩｇＥがＢ細胞、マスト細胞、または好塩基球の表面にあるＩｇＥ受容体と結合するのを阻止することによって作用する。その際に阻害されるのは、ＩｇＥ分子の表面にある受容体結合部位、または受容体表面にあるＩｇＥ結合部位である。抗ＩｇＥ抗体がＢ細胞の表面にあるＩｇＥと結合することにより、ＩｇＥを産生するＢ細胞をクローン除去し、ＩｇＥの産生を減少させる可能性がある。また、ＩｇＥ活性抑制剤も可溶性ＩｇＥと結合することによって作用し、ＩｇＥが循環しなくなる可能性がある。
【００４７】
ＩｇＥ活性の抑制剤は従来技術で知られており、例えば、抗ＩｇＥ抗体、ＩｇＥ結合断片（抗体断片を含む）、受容体、受容体の断片などが挙げられるが、これだけに限定されるわけではない。アメリカ合衆国特許第５，６１４，６１１号には、ＩｇＥを有するＢ細胞に対して特異的なヒト化された抗ＩｇＥモノクローナル抗体が開示されている。これら抗ＩｇＥ抗体は、Ｂ細胞と特異的に結合し、好塩基球またはマスト細胞とは結合しないため、好塩基球またはマスト細胞からのヒスタミン放出を誘発しない。
【００４８】
アメリカ合衆国特許第５，４４９，７６０号には、可溶性ＩｇＥとは結合するが、Ｂ細胞または好塩基球の表面にあるＩｇＥとは結合しない抗ＩｇＥ抗体が記載されている。このような抗体は、可溶性ＩｇＥと結合し、例えばＩｇＥ受容体結合部位を阻害すること、抗原結合部位を阻害すること、および／または単純にＩｇＥが循環しなくなるようにすることによって、ＩｇＥの活性を抑制する。別の抗ＩｇＥ抗体およびその抗ＩｇＥ抗体に由来するＩｇＥ結合断片が、アメリカ合衆国特許第５，６５６，２７３号に記載されている。アメリカ合衆国特許第５，５４３，１４４号には、可溶性ＩｇＥと結合し、ＩｇＥを発現しているＢ細胞上の膜結合ＩｇＥとも結合するが、好塩基球と結合したＩｇＥとは結合しない抗ＩｇＥ抗体が記載されている。
【００４９】
ＩｇＥの活性を抑制する別の方法は、血漿または血清をアフィニティ・カラムを通過させて抗体を選択的に除去するという成分献血によってＩｇＥが循環しなくなるようにすることである。選択の程度は、アフィニティ・カラムの特性によって決まる。例えば、（ポリクローナルまたはモノクローナル）抗ＩｇＥ抗体がカラムのマトリックスと架橋するようなアフィニティ・カラムを設計することができよう。
【００５０】
抗ＩｇＥ抗体の調製
この明細書に記載してあるように、ＩｇＥ活性抑制剤としては例えば抗ＩｇＥ抗体と抗ＩｇＥ受容体抗体が挙げられるが、これだけに限定されるわけではない。
抗ＩｇＥ抗体を生産するには、例えばヒト血清をもとにして、免疫確立のためのヒトＩｇＥを精製するとよい。別の方法として、ＩｇＥを産生する細胞系、例えば細胞系Ｕ２６６（ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ８０３３）を培養することによってヒトＩｇＥを生産することもできる。
【００５１】
ヒトＩｇＥは、従来技術で知られているアフィニティ・クロマトグラフィーによって精製することができる。例えば、ヒトＩｇＥに対する特異性を有するマウスのモノクローナル抗体を適切な基質と結合させたものは、ＩｇＥ特異的な免疫吸着剤となる可能性がある。ＩｇＥ調製物をこの免疫吸着剤と接触させた後、吸着されたＩｇＥを免疫吸着剤から溶離すると、ＩｇＥを実質的に純粋な形態にすることができる。このようなヒトＩｇＥ調製物は、抗ＩｇＥ抗体を産生するための免疫原として用いることができる。
【００５２】
ポリクローナル抗体は、免疫原性複合体を通常はアジュバントと混合して哺乳類の宿主に投与することにより、増やすことができる。一般には、免疫原は、凍結乾燥した免疫原を再び水に溶かして溶液または懸濁液の形態にし、注射用の調整物とする。好ましいアジュバントは、水溶液を油と混合したエマルジョンである。特に、第１回目の投与に関してはフロイント完全アジュバントが好ましく、以後の投与に関してはフロイント不完全アジュバントが好ましい。一般に、調製物は、さまざまな部位に投与し、少なくとも４週間にわたって２回以上投与する。血清を回収し、標準的なイムノアッセイまたは沈降反応により、ハプテン−タンパク質複合体を用いて、あるいは分析物に対して競合的に結合するそれ以外の化合物を用いて、特異性のある抗体が存在しているかどうかを検査する。
【００５３】
ポリクローナル抗血清は、分析物とは反応しない抗体または望ましくない交差反応性を有する抗体を含んでいるのが一般的である。ポリクローナル抗血清から特異性のある抗体を精製する方法は公知であり、特に、分析物が固相と結合するカラムを用いたアフィニティ精製法が利用される。抗血清をカラムを通過させ、そのカラムを洗浄し、マイルドな変性用バッファー、例えば０．１Ｍのグリシン、０．２ＭのＮａＣｌ、ｐＨ２．５というバッファーを用いて抗体を溶離する。抗血清を、潜在的な干渉性のある物質を含むバッファーの中でカラムを通過させる場合には、結合した分画を溶離するとその分画に交差反応しない抗体が豊富に含まれていることになる。
【００５４】
本発明で用いる抗ＩｇＥ抗体はモノクローナルであることが好ましい。モノクローナル抗体は、従来技術で知られている多くの方法で調製することができる。ハイブリドーマ法に関する一般的な文献としては、ハロウとレーン（１９８８年）、アメリカ合衆国特許第４，４９１，６３２号、第４，４７２，５００号、第４，４４４，８８７号、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、第７３Ｂ巻、３ページ（１９８１年）を参照されたい。モノクローナル抗体を生産する最も一般的な方法は、免疫を確立した動物から採取した脾臓細胞またはそれ以外の抗体産生細胞を不死化してクローニングする方法である。クローンは、非生産性の骨髄腫と融合させることによって、あるいはエプスタイン・バー・ウイルスをトランスフェクトすることによって、あるいは腫瘍性ＤＮＡを形質変換することによって、不死化する。
【００５５】
処理した細胞は、クローニングし、培養して、その中から望ましい特異性を有する抗体を産生するクローンを選択する。特異性テストを培養上澄み液に対して行なう。そのための方法は多数ある。例えば、イムノアッセイにおいて検出試薬として免疫確立抗原を用いる。次に、選択したクローンからモノクローナル抗体を精製するため、大量の培養上澄み液、あるいはクローンを注入して好ましい状態にした宿主動物の腹水を精製する。手を加えていない上澄み液または腹水を用いて抗体の活性をテストすることができる。抗体は、さらに、硫酸アンモニウム沈降法、イオン交換クロマトグラフィー、ゲル濾過クロマトグラフィーなどの標準的な生化学的調製法を用いて精製することもできる。
【００５６】
モノクローナル抗体を得る別の方法として、免疫原性のある細胞またはウイルス粒子を、望む分析物または分析物−タンパク質複合体とインビトロで接触させる方法がある。ここに、“免疫原性のある”とは、細胞またはウイルス粒子が、遺伝子組み換えをさらに行なうことなしに抗原特異的な抗体を発現することができるため、抗原提示によって細胞混合物の中からその細胞またはウイルス粒子を選択できることを意味する。免疫原性のある真核細胞は、免疫が確立した哺乳類のドナーから回収することができる。あるいは免疫原性のある真核細胞は、免疫が確立してはいないが、インビトロの環境において免疫原と免疫促進性成長因子の存在下で培養することによってあらかじめ刺激を与えたドナーから回収することもできる。
【００５７】
望む特異性を有する細胞は、培養条件にすることによって特異性のあるクローンは増殖するが非特異的なクローンは増殖しない状態になった免疫原と接触させることにより、選択することができる。免疫原性のあるファージは、その表面で免疫グロブリンの可変領域の断片を発現するような構成にすることができる。マークス他、（１９９６年）Ｎ． Ｅｎｇｌ． Ｊ． Ｍｅｄ．、第３３５巻、７３０ページ；ＷＯ特許出願９４／１３８０４、９２／０１０４７、９０／０２８０９；マクギネス他、（１９９６年）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．、第１４巻、１１４９ページを参照されたい。望む特異性を有するファージは、例えば、固相と結合させたハプテン−タンパク質複合体に付着させ、次に大腸菌の中で増幅することによって選択することができる。
【００５８】
抗体は、生物工学技術を利用して調製することもできる。望む特異性を有するＨ鎖可変領域とＬ鎖可変領域のアミノ酸配列は、プロトタイプとなる抗体分子から得られる。このアミノ酸配列は、例えばヒト化するために変化させることもある。次に、そのアミノ酸をコードしているポリヌクレオチドを合成またはクローニングし、転写要素および翻訳要素と機能的な関連性を持たせ、適切な宿主細胞で発現させる。例えば、アメリカ合衆国特許第５，２２５，５３９号、第５，６９３，７６１号を参照されたい。
【００５９】
さらに好ましいのは、本発明で用いる抗体が“ヒト化された”抗体、またはキメラ抗体になっていることである。ヒト化された抗体は、動物（例えばマウス）の抗体に由来する可変領域または抗原結合（超可変な、あるいは相補性を決定する）領域と、ヒト抗体に由来する残りの領域とを含んでいる。一般に、ヒト化された抗体は、ヒトにおいては、ヒトでない抗体よりも免疫原性が小さい。ヒト化された抗体を生産する方法は、過去の文献に記載されている。例えば、アメリカ合衆国特許第５，４４９，７６０号と、ベター他（１９８８年）Ｓｃｉｅｎｃｅ、第２４０巻、１０４１−１０４３ページを参照されたい。
【００６０】
投与する抗体（または、任意のＩｇＥ抑制剤）の量は、経験的に決定することができる。さらに、推奨されている投与量は、抗体についての出版物の中にたいてい記載されている。抗ＩｇＥ抗体の効果的な量の具体例は、例えば、アメリカ合衆国特許第５，５４３，１４４号、第５，６５６，２７３号に記載されている。適切な量が投与されたかどうかは、例えばＩｇＥのレベルを測定すること、および／または症状を観察することにより、知ることができる。
【００６１】
ＩｇＥ結合断片
ＩｇＥ活性抑制剤としてはＩｇＥ結合断片があるが、それだけに限定されるわけではない。この明細書で用いる“ＩｇＥ結合断片”という用語は、完全な免疫グロブリン分子だけでなく、免疫グロブリン分子の断片または誘導体（組み換え誘導体も含む）、あるいは望む特異性を有するＴ細胞受容体のことも意味する。
【００６２】
抗原結合断片は、単一のポリヌクレオチド鎖（例えばｓｃＦｖ）、ジスルフィド結合した複数のポリペプチド（例えば完全な免疫グロブリン）、または非共有結合によって結びついた複数のペプチド（例えばＦｖ断片）が可能である。一般に、抗原結合断片は、向かい合った２つの可変領域を備えており、それぞれの可変領域は、免疫グロブリンまたはＴ細胞の受容体からのものである。しかし、十分な親和性があって自ら抗原と結合する単一の可変領域を見つけることができる。
【００６３】
抗体断片は、標準的なタンパク質化学の方法で調製することができる。例えば、ペプシン、パパイン、トリプシンなどのタンパク質分解酵素を用いて抗体を切断したり；ジチオトレイトールなどの試薬を用いてジスルフィド結合を還元したりすることにより抗体断片を調製する。抗体断片の具体例としては、（ＶＨ−ＣＨ１領域とＶＬ−ＣＬ領域を含む）Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ）２断片、（ＶＨ−ＣＨ１−ＣＨ２領域とＶＬ−ＣＬ領域を含む）Ｆｄ断片、（ＶＨ領域とＶＬ領域を含む）Ｆｖ断片、抗原結合活性を有するＨ鎖またはＬ鎖の単離された断片が挙げられる。
【００６４】
遺伝子工学により完全な免疫グロブリンの変異体を生産するには、抗体をコードしているポリヌクレオチドを獲得し、スプライスをコードしている配列に分子生物学の一般的な手法を適用するという方法、あるいは、突然変異を導入してそれを翻訳するという方法が可能である。遺伝子工学による特に興味深い変異体としては、キメラ抗体、ヒト化された抗体、Ｆａｂ様抗体、単一鎖可変領域断片（ｓｃＦＶで、ペプチド結合剤によって結合されたＨ鎖とＬ鎖の可変領域を含む）、ジアボディ（２つの可変領域を含んでおり、それら可変領域が重合して２価の抗原結合ペプチドとなるペプチド）が挙げられる。
【００６５】
抗原結合活性は、抗原と候補断片が、複合体の形成を可能にする条件（典型的な条件は、生理学的ｐＨになっている等張バッファー）において結合する、適切な任意の結合アッセイにより知ることができる。安定な複合体が形成されたかどうかは、例えば、物理化学的な手段（例えばバイオセンサー）によって、あるいは反応成分の１つに適切な標識（例えば放射性同位体または酵素の標識）をつけることによってわかる。安定な複合体の存在は、結合活性と関係している。
【００６６】
抗原とペプチドの間の全アビディティは、少なくとも約１０８Ｍ−１、好ましくは少なくとも約１０１０Ｍ−１、さらに好ましくは少なくとも約１０１２Ｍ−１であることが好ましい。一般に、抗原結合断片の開発は、望む特異性を有する抗体のプロトタイプを獲得し、断片の製造または構造の改変を行ない、次に結合活性を再テストするというプロセスを経る。微小断片化または修飾は、抗原結合活性が残っている限りは継続する可能性がある。
【００６７】
従来技術で知られているように、ＩｇＥ結合断片（または任意のＩｇＥ抑制剤）の量は、経験的に決めることができる。適切な量が投与されたかどうかは、例えばＩｇＥのレベルを測定すること、および／または症状を観察することにより知ることができる。
【００６８】
抗原免疫療法
本発明のいくつかの実施態様では、抗原（すなわち、抗原を含む組成物）を投与する。ＩｇＥの活性を抑制する組成物（特に、投与および／または抗原と接触する際にアナフィラキシーを抑制する組成物）を投与するという条件下で抗原を投与するので、抗原の投与量は、ＩｇＥ抑制剤を投与しないときに投与するであろう量よりも多くなることがわかる。したがって、その量は、ＩｇＥ抑制剤を使用しない、あるいは使用を想定していない従来のアレルギー免疫療法における“最大許容投与量（ＭＴＤ）”よりも多くなる。従来技術で知られているように、ＭＴＤは、全身性アナフィラキシー反応を誘発することのない最大投与量である。別の方法として、本発明の治療を受けている被験対象に対して投与する抗原の量をＭＴＤよりも少なくすることもできる。
【００６９】
したがって、いくつかの実施態様では、従来の脱感作療法（すなわち、ＩｇＥの活性を抑制する組成物を投与しない）を行なっている間に投与されたであろう量、あるいは投与されるであろう量の少なくとも約１．２５倍、少なくとも約１．５倍、少なくとも約１．７５倍、少なくとも約２．００倍の量の抗原を投与する。別の実施態様では、従来の脱感作療法を行なっている間に投与されたであろう量、あるいは投与されるであろう量の少なくとも約５倍、少なくとも約７倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約１２倍、少なくとも約１５倍、少なくとも約２０倍の量の抗原を投与する。
【００７０】
いくつかの実施態様では、最初に投与する抗原の量は、約０．２５μｇ、約０．５μｇ、約１．０μｇ、約２．０μｇ、約５．０μｇ、約１０μｇ、約１５μｇ、約２０μｇのいずれかである。いくつかの実施態様では、最後の投与量、すなわち終了時の投与量は、約２５μｇ、約４０μｇ、約５０μｇ、約７５μｇ、約１００μｇ、約１２５μｇ、約１５０μｇ、約１７５μｇ、約２００μｇのいずれかである。投与する抗原は、これよりも大きな濃度および／または多い量にしてもよかろう。したがって、抗原の“量”は、濃度を大きくすることによって増やすことができよう。投与量を従来よりも多くすることに加え、投与を重ねるごとに増やしていく投与量を、従来よりも早く増やしていくことも可能であることがわかる。
【００７１】
投与のプロトコルは従来技術で知られている。例えば、ウェーバー（１９９７年）；フォーナドリー（１９９８年）Ｏｔｏｌａｒｙｎｇｏｌ． Ｃｌｉｎ． Ｎｏｒｔｈ Ａｍ．、第３１巻、１１１−１２７ページ；『レミントンの薬の科学』第１９版、マック出版（１９９５年）、第８２章を参照されたい。それぞれの抗原の投与量は、個々の抗原ならびに治療を受ける個人によって異なる上、投与者の判断による部分もある。
【００７２】
一般に、アレルゲン免疫療法は、少ない投与量で投与量を少しずつ増やしていく方法であり、投与する抗原の量は、マイクログラムのオーダーである。抗原の量は、症状の緩和（または消失）が観察されるまで、あるいは好ましくない症状が現われるようになるまで増やしていく。別の方法として、いわゆる“ラッシュ”療法では、最初に集中的に投与し（例えば１日に数回の投与を１週間に１回）、その後は毎週投与することが行なわれる。この療法では、２〜４週間の間隔での維持投与が継続的に行なわれる。時間が経つと、維持投与の頻度は例えば６〜８週間に１回に減らすことができる。
【００７３】
本発明の方法では、全身性アナフィラキシーを誘発しない（すなわちＭＴＤ）限りは、さまざまな量の抗原を用いることができる。ＭＴＤよりも少ない投与量にすることもできる。
多くの抗原が知られており、そうした抗原がこれまでに多数単離されている。単離には、遺伝子組み換え技術を利用することがしばしばある。表１〜６は、使用可能なアレルゲンのリストである。
【００７４】
【表１】
2003524602.tif 000001
【００７５】
【表２】
2003524602.tif 000002
【００７６】
【表３】
2003524602.tif 000003
【００７７】
【表４】
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【００７８】
【表５】
2003524602.tif 000005
【００７９】
【表６】
2003524602.tif 000006
【００８０】
ＩＳＳの投与
実施態様によっては、本発明の方法はＩｇＥ阻害剤（またはアナフィラキシー阻害剤）の投与に加えて概してＩｇＥ阻害剤の活性を高めるに足る量のＩＳＳ（すなわち、ＩＳＳを含むポリヌクレオチド）の投与を含む。当業者には自明であろうが、この賦活は多数の発現形態のうちのいずれかをとろう。たとえばＩｇＥ阻害剤を単独で投与したときと比較した場合のＩｇＥ抑制の持続性向上および／またはＩｇＥ活性低下幅の拡大などである。
【００８１】
ＩＳＳの免疫賦活活性は周知であり、サイトカインおよび／または抗体産生量の測定といった本技術分野の標準方法により容易に確認することができる。一般にＩＳＳは５’−Ｃ、Ｇ−３’の配列を含む。特にＩＳＳは５’、プリン、プリン、Ｃ、Ｇ、ピリミジン、ピリミジン−３’の六量体配列を含む。
好ましいＩＳＳは５’−プリン、プリン、シトシン、グアニン、ピリミジン、ピリミジン、シトシン、（シトシンまたはグアニン）−３’の一般的な八量体配列を含む。最も好ましくはＩＳＳは、ＡＡＣＧＴＴＣＣ、ＡＡＣＧＴＴＣＧ、ＧＡＣＧＴＴＣＣおよびＧＡＣＧＴＴＣＧから成る群より選択される八量体を含む。実施態様によっては、ＩＳＳは配列ＴＧＡＣＴＧＴＧＡＡＣＧＴＴＣＧＡＧＡＴＧＡを含むこともある。
【００８２】
実施態様によってはＩＳＳ−抗原複合体が投与されることもある。ポリヌクレオチドとペプチドなどのような他の構成部分を共有結合および／または非共有結合させるには本技術分野の標準技法を採用する。
ＩＳＳまたはＩＳＳを含むオリゴヌクレオチドは、共有および／または非共有相互作用などを含むさまざまな方法により、複合体の免疫調節分子部分と結合させることができる。
【００８３】
この部分間結合は、ＩＳＳ含有ポリヌクレオチドの３’末端または５’末端で、あるいはＩＳＳの内部位置の適当な修飾塩基部分で実現することができる。免疫調節分子は、ペプチドであって適当な反応性基（たとえば、Ｎ−ヒドロキシコハク酸エステル）を含む場合にはシトシン残基のＮ４アミノ基と直接反応することができる。ＩＳＳ中のシトシン残基の数と位置次第で、１個以上の残基で特異的な標識付けが行える。
あるいは、技術上周知の修飾オリゴヌクレオチドをＩＳＳ含有ポリヌクレオチドの末端かまたは中間位置に組み込むこともできる。これらはしゃ断官能基を含むことができる。しゃ断官能基はしゃ断を解除すると、目的の免疫調節分子上に存在または付着させることができる種々の官能基と反応する。
【００８４】
免疫調節分子がペプチドである場合には、この複合体部分は固形担体化学によりＩＳＳの３’−末端に付着させることができる。たとえば、このＩＳＳ部分は、担体上にあらかじめ合成しておいたポリヌクレオチド部分に付加することができる。Ｈａｒａｌａｍｂｉｄｉｓ ｅｔ ａｌ． （１９９０ａ） Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． １８：４９３−４９９およびＨａｒａｌａｍｂｉｄｉｓ ｅｔ ａｌ． （１９９０ｂ） Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓ． １８：５０１−５０５。あるいはＩＳＳは、３’−末端から延びる切断可能リンカーを介して固形担体へと結合するように合成することもできる。
【００８５】
担体からＩＳＳを化学的に切断すると末端のチオール基がオリゴヌクレオチドの３’−末端に残る（Ｚｕｃｋｅｒｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．（１９８７） Ｎｕｃｌｅｉ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． １５：５３０５−５３２１；Ｃｏｒｅｙ ｅｔ ａｌ．（１９８７） Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３８： １４０１−１４０３）か、または末端のアミン基がオリゴヌクレオチドの３’末端に残る（Ｎｅｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ．（１９８９） Ｎｕｃｌｅｉ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． １７：１７８１−１７９４）。ペプチドのアミノ基に対するアミノ基修飾ＩＳＳの結合はＳｉｎａｈ ｅｔ ａｌ．（１９９１） Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ａｎａｌｏｇｕｅｓ： Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ， ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓに記載されている要領で行うことができる。ペプチドのシステイン残基のチオール側鎖に対する付加マレイミド含有オリゴヌクレオチドの結合についてもすでに説明されている。Ｔｕｎｇ ｅｔ ａｌ．（１９９１） Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ． Ｃｈｅｍ． ２：４６４ −４６５。
【００８６】
複合体のペプチド部分は、オリゴヌクレオチドに、その合成時にあらかじめ組み込んでおいたアミン基、チオール基またはカルボキシル基を通じてＩＳＳ含有ポリヌクレオチドの５’−末端に付加することができる。好ましくは、オリゴヌクレオチドを固形担体に固定化する間に、一方の末端に保護されたアミン基、チオール基またはカルボキシル基を含み他方の末端にホスホラミジトを含む結合基を５’−ヒドロキシル基に共有結合させる。
【００８７】
Ａｇｒａｗａｌ ｅｔ ａｌ．（１９８６） Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． １４：６２２７−６２４５； Ｃｏｎｎｏｌｌｙ （１９８５） Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． １３：４４８５−４５０２； Ｋｒｅｍｓｋｙ ｅｔ ａｌ．（１９８７） Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． １５： ２８９１−２９０９； Ｃｏｎｎｏｌｌｙ （１９８７） Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． １５： ３１３１−３１３９； Ｂｉｓｃｈｏｆｆ ｅｔ ａｌ．（１９８７） Ａｎａｌ． Ｂｉｏｃｈｅｍ． １６４： ３３６−３４４； Ｂｌａｎｋｓ ｅｔ ａｌ． （１９８８） Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． １６： １０２８３−１０２９９；および米国特許第４，８４９，５１３号、５，０１５，７３３号、５，１１８，８００号および５，１１８，８０２号。保護を取り去れば、潜在的なアミン、チオールおよびカルボキシル官能基を利用してオリゴヌクレオチドをペプチドへと共有結合させることができる。Ｂｅｎｏｉｔ ｅｔ ａｌ．（１９８７）； Ｓｉｎａｈ ｅｔ ａｌ．（１９９１）．
【００８８】
ペプチド部分はＩＳＳ含有ポリヌクレオチドの任意の位置で修飾シトシンまたはウラシルに付加することができる。修飾塩基のＣ−５位に、潜在的な反応性官能基、たとえばアミン基またはカルボキシル基などをもつ「リンカーアーム」を組み込めば、ペプチド結合のための取っ掛かりができる。Ｒｕｔｈ， ４ｔｈ Ａｎｎｕａｌ Ｃｏｎｇｒｅｓｓ ｆｏｒ Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ＤＮＡ Ｒｅｓｅａｒｃｈ， ｐ．１２３。
ＩＳＳ−免疫調節分子複合体はまたイオン結合、疎水的相互作用、水素結合、および／またはｖａｎ ｄｅｒ Ｗａａｌｓ力などのような非共有相互作用によっても形成することができる。
【００８９】
非共有結合型の複合体にはビオチン−ストレプタビジン複合体などのような非共有相互作用によるものなどが含まれる。たとえば、ビオチニル基はＩＳＳの修飾塩基に付加することができる。Ｒｏｇｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９８９） Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． １７：７６４３−７６５１。ペプチド部分にストレプタビジン構成部分を組み込むとストレプタビジン結合ペプチドとビオチン化オリゴヌクレオチドの非共有結合型複合体の形成が可能になる。
【００９０】
非共有結合はまた、ＩＳＳと免疫調節分子内の残基、たとえば荷電アミノ酸が絡むイオン相互作用によっても、またはオリゴヌクレオチドと免疫調節分子の両方と相互作用できる荷電残基を含むリンカー部分の使用によっても、起こりうる。たとえば非共有結合は、一般に負に荷電したＩＳＳとペプチドの正荷電アミノ酸残基（ポリリシン残基やポリアルギニン残基など）の間でも起こりうる。
ＩＳＳと免疫調節分子の間の非共有結合は、天然リガンドとしてＤＮＡと相互作用する分子のＤＮＡ結合モチーフによっても起こりうる。たとえば、そうしたＤＮＡ結合モチーフは転写因子や抗ＤＮＡ抗体の中に認められる。
【００９１】
脂質へのＩＳＳの結合は標準方法によって形成させることができる。そうした方法には、オリゴヌクレオチド−リン脂質複合体の合成（Ｙａｎａｇａｗａ ｅｔ ａｌ．（１９８８） Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｓｙｍｐ． Ｓｅｒ． １９：１８９ −１９２）、オリゴヌクレオチド−脂肪酸複合体の合成（Ｇｒａｂａｒｅｋ ｅｔ ａｌ．（１９９０） Ａｎａｌ． Ｂｉｏｃｈｅｍ． １８５：１３１−１３５； Ｓｔａｒｏｓ ｅｔ ａｌ．（１９８６） Ａｎａｌ． Ｂｉｏｃｈｅｍ． １５６：２２０−２２２）、およびオリゴヌクレオチド−ステロール複合体の合成（Ｂｏｕｊｒａｄ ｅｔ ａｌ．（１９９３） Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ９０： ５７２８−５７３１）などがあるが、それだけに限らない。
【００９２】
オリゴヌクレオチドのオリゴ糖への結合は周知の標準方法を使用して形成させることができる。そうした方法としてはオリゴヌクレオチド−オリゴ糖複合体の合成（この場合オリゴ糖は免疫グロブリンの構成部分）などがあるが、それだけに限らない（Ｏ’Ｓｈａｎｎｅｓｓｙ ｅｔ ａｌ．（１９８５） Ｊ． Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｃｈｅｍ． ７：３４７−３５５）。
【００９３】
ペプチドまたは抗原に対する環状ＩＳＳの結合はいくつかの方法で形成することができる。環状ＩＳＳが組み換え法または化学法を使って合成されるときは、修飾ヌクレオチドが適している。Ｒｕｔｈ （１９９１） Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ａｎｄ Ａｎａｌｏｇｕｅｓ： Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ， ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ． 次いで、標準結合技術を使って環状ＩＳＳを抗原または他のペプチドに結合することができる。Ｇｏｏｄｃｈｉｌｄ （１９９０） Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ． Ｃｈｅｍ． １：１６５． 環状ＩＳＳが組み換え法または化学法を使って単離または合成される場合には、抗原または他のペプチドにあらかじめ組み込んでおいた反応性基（カルベン、またはラジカルなど）を化学的に活性化するか、または光活性化することにより、結合を形成させることができる。
【００９４】
ペプチドまたは他の分子をオリゴヌクレオチドに付加する方法は他に米国特許第５，３９１，７２３号； Ｋｅｓｓｌｅｒ （１９９２） “Ｎｏｎｒａｄｉｏａｃｔｉｖｅ ｌａｂｅｌｉｎｇ ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄｓ” ｉｎ Ｋｒｉｃｋａ（ｅｄ．） Ｎｏｎｉｓｏｔｏｐｉｃ ＤＮＡ Ｐｒｏｂｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ， Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ（Ｋｅｓｓｌｅｒ（１９９２）「核酸の非放射性標識法」−クリッカ編『非同位体ＤＮＡプローブ技術』（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ）所収； Ｇｅｏｇｈｅｇａｎ ｅｔ ａｌ．（１９９２） Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ． Ｃｈｅｍ． ３：１３８−１４６．にも出ている。
ＩＳＳを抗原と近接的に結合する方法としては（ａ）キャプシドへの封入（たとえば、リポソームなど）、（ｂ）表面への吸着、（ｃ）プラットホーム分子（すなわち、ＩＳＳや抗原の付加を可能とする部位を含む合成または天然分子）の使用などもある。
【００９５】
ＩＳＳは単独でまたは他の製剤および／または免疫原および／または免疫賦活剤と組み合わせて投与してもよいし、生理的に許容しうるキャリヤーと混合してもよい。特定ＩＳＳ調剤の有効量と投与方法は個別患者や病期、および当業者には自明の他の要因に応じて異なる可能性がある。特定の用法に有効な投与経路は当業者には明白である。投与経路には局所、皮膚、経皮、経粘膜、表皮、腸管外、胃腸、および経気管支と経歯槽を含む鼻咽喉／肺経路が含まれるがそれだけに限らない。適当な用量範囲は、血中濃度で測定して約１〜１０μＭの組織濃度を実現するに足るＩＳＳ含有組成物を与えるような範囲である。各患者への絶対投与量は生体利用率、クリアランス率および投与経路などのような薬理学的特性に左右される。
【００９６】
本発明は、生理的に許容可能な埋没物、軟膏、クリーム、リンスおよびゼリーを含むがそれだけに限らない局所適用に適したＩＳＳ含有組成物を提供する。局所投与はたとえば、送達システムを内部に分散させた包帯または帯具によるか、あるいは切創または開放創への送達システムの直接投与による。ＩＳＳ含有組成物を内部に分散させたクリーム、リンス、ゼリーまたは軟膏は局所用軟膏または創傷充填剤としての使用に適する。
【００９７】
好ましい皮膚投与経路は最も低侵襲性の経路である。なかでも好ましい手段は経皮透過、表皮投与および皮下注射である。このうち表皮投与は比内組織中でより高いＡＰＣ濃度を達成するうえで好ましい。
経皮投与は、ＩＳＳ含有組成物を皮膚に浸透させ血流中に入り込ませることができるクリーム、リンス、ゼリー等の塗布によって行われる。経皮投与に適した組成物は皮膚に直接塗布されるかまたは経皮具（いわゆる「パッチ」）などのような保護担体に組み込まれる製薬上許容しうる懸濁液、油、クリームおよび軟膏などであるが、それだけに限らない。適当なクリーム、軟膏等の例はＰｈｙｓｉｃｉａｎｓ’ Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅに掲載されている。
【００９８】
経皮透過にはイオン電気導入法が適する。イオン導入には、無傷の皮膚を通して成分を数日以上にわたって送達することができる市販のパッチを使用する。この方法を使用すると、比較的高濃度の製剤組成物を徐々に透過させることができるし、複合薬の注入や吸収促進剤の同時使用も可能になる。
この方法への使用に適したパッチ商品の例はカリフォルニア州ロサンゼルスのゼネラル・メディカル社（Ｇｅｎｅｒａｌ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ）の商標登録商品ＬＥＣＴＲＯ ＰＡＴＣＨである。この商品はリザーバ電極を電子的に中性ｐＨに保ち、また異なる濃度の用量を提供し連続的および／または周期的に投与することができる。パッチの準備と使用はＬＥＣＴＲＯ ＰＡＴＣＨに添付されているメーカーの使用説明書に従って行うのがよい。それらの説明書は言及により本書に組み込まれる。
【００９９】
経皮透過には低周波中音波送達法も適する。Ｍｉｔｒａｇｏｔｒｉ ｅｔ ａｌ．（１９９５） Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６９：８５０−８５３． 低周波超音波（約１ ＭＨｚ）を適用すると、高分子組成物を含めた治療薬の一般的な除放送達が可能になる。
表皮投与は本質的に、刺激物に対する免疫反応を誘発するに足る表皮外層の機械的または化学的刺激を伴う。特に、この刺激は刺激部位にＡＰＣを引き寄せるに足る程度とするのがよい。
代表的な機械的刺激手段は極細の短い、多数の尖器であり、皮膚を刺激して刺激部位にＡＣＰを引き寄せ、尖器端から移されるＩＳＳ含有組成物を含ませるのに使用できる。たとえば、Ｐａｓｔｅｕｒ Ｍｅｒｉｅｕｘ社（フランス／リヨンの）製ＭＯＮＯ−ＶＡＣＣ旧ツベルクリン検査キットはＩＳＳ含有組成物の導入に適した装置を備える。
【０１００】
同装置（米国ではペンシルバニア州スフィフトウォーターのＣｏｎｎａｕｇｈｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ， Ｉｎｃ．が販売している）は、一端にシリンジプランジャーを、他端に尖器円板をそれぞれ備えたプラスチック容器である。尖器円板は、表皮細胞の外層を掻く程度の長さの多数の極細尖器の基板となっている。ＭＯＮＯ−ＶＡＣＣキットでは各尖器に旧ツベルクリンが塗布してあるが、本発明では各針にＩＳＳ含有製剤組成物を塗布する。この装置の使用は商品に添付されているメーカーの使用説明書に従うのが好ましい。やはりこの実施態様に使用することができる類似の装置は、現在アレルギー検査に使用されている装置である。
【０１０１】
ＩＳＳの経皮投与法としては、表皮細胞の外層を刺激してその部位にＡＰＣを引き寄せるに足る免疫反応を誘発するような化学薬品の使用も適している。一例は角質分解剤、たとえばＮｏｘｅｍａ ＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎがＮＡＩＲの商品名で販売している市販の局所脱毛クリームに使用されているサリチル酸などである。この方法はまた、粘膜への上皮投与にも使用できる。化学的刺激法は機械的刺激法と併用することもできる（ＭＯＮＯ−ＶＡＣＣ型尖器に化学的刺激物を塗布する場合など）。ＩＳＳは化学的刺激物をもむ含むキャリヤーに懸濁させることが、あるいはそれと一緒に投与することが、できる。
【０１０２】
ＩＳＳ含有組成物を投与のためのもう１つの送達法は合成ポリカチオン性アミノ高分子などのような非脂質高分子を利用する。Ｌｅｆｆ （１９９７） Ｂｉｏｗｏｒｌｄ ８６：１−２。腸管外投与経路は電気注入（イオン電気導入）または直接注射、たとえば中心静脈への直接注射、静脈、筋肉、腹膜内、皮内または皮下注射などがあるが、それだけに限らない。腸管外投与に適した組成物には製薬上許容しうる滅菌等張液などがあるが、それだけに限らない。その種の等張液にはＩＳＳ含有組成物注射用の生理食塩水およびリン酸塩緩衝生理食塩水などがあるが、それだけに限らない。
【０１０３】
胃腸投与経路は摂取や直腸注入などであるが、それだけに限らない。本発明は製薬上許容しうる摂取用の粉末、丸薬、液体、および直腸投与用の座薬などを含むがそれだけに限らない胃腸投与に適したＩＳＳ含有組成物を含む。
【０１０４】
鼻咽喉および肺投与経路は吸入、経気管支および経歯槽経路などであるが、それだけに限らない。本発明は各種の吸入用エアロゾルおよび粉末型送達システムなど吸入投与に適したＩＳＳ含有組成物を含む。ＩＳＳ含有組成物の吸入投与に適した装置は霧化器や気化器などであるが、それだけに限らない。粉末を充填した霧化器および気化器は粉末の吸入送達用に適した種々の装置の一例である。Ｌｉｎｄｂｅｒｇ（１９９３）の１９９３年１２月６−７日マネジメント・フォーラムでの講演要約「ポータブル吸入器の将来を切り開く」などを参照。
注入や局所適用に適した装置、霧化器、気化器の製造方法は技術上周知であり、深く立ち入らない。
【０１０５】
送達経路の選択によって免疫反応の顕在化を調節することができる。たとえば、インフルエンザウィルスベクターを筋肉内または表皮（遺伝子銃）経路で投与した場合にはＩｇＧ力価やＣＴＬ活性は同じであったが、筋肉注射は主にＩｇＧ２Ａを生み出したのに対し、表皮経路は主にＩｇＧ１を生み出した。Ｐｅｒｔｍｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９９６） Ｊ． Ｖｉｒｏｌ． ７０： ６１１９−６１２５． したがって、当業者は本発明組成物の異なる投与経路によって顕在化される免疫原性のわずかな差異を活かすことができる。
上述の組成物および投与方法は本発明の方法の限定ではなく説明を意図している。種々の組成物および装置を生産する方法は当業者には自明であり、ここでは深く立ち入らない。
【０１０６】
用量
ＩｇＥ阻害剤（特に抗ＩｇＥ抗体）および抗原の用量は前述のとおりであり、また一般に本技術分野の熟練の範囲内の経験的決定を要する。ＩＳＳに関しては一般に、適当な用量範囲は血中濃度で測定して約１〜１０μＭの組織濃度を実現するに足るＩＳＳ含有組成物を与えるような範囲である。ＩｇＥ阻害剤および抗原の場合と同様に、適当なＩＳＳ用量は当業者が経験的に決定することになろう。
組成物は任意の順序で、または同時に投与することができる。
【０１０７】
免疫反応の評価
本発明の組成物に対する免疫反応の（定性、定量）分析は技術上周知の任意の方法によって行うことができる。そうした方法には抗原特異的抗体の産生量、ＣＤ４＋Ｔ細胞またはＮＫ細胞などのようなリンパ球の特定母集団の活性化、および／またはＩＦＮ、ＩＬ−２、ＩＬ−４またはＩＬ−１２などのようなサイトカインの産生量を測定することなどが含まれるが、それだけに限らない。特異的抗体反応の測定法は酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）などであり、技術上周知である。ＣＤ４＋Ｔ細胞などのような特定タイプのリンパ球の数の測定はたとえば蛍光活性化細胞選別法（ＦＡＣＳ）などによって行うことができる。
【０１０８】
細胞毒性検定は、たとえばＲａｚ ｅｔ ａｌ．（１９９４） Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ９１：９５１９−９５２３に記載されている要領で行うことができる。サイトカインの血清中濃度は、たとえばＥＬＩＳＡによって測定することができる。免疫原に対する免疫反応を評価するためのこれらや他の検定法は技術上周知である。たとえば、Ｓｅｌｅｃｔｅｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（１９８０）， Ｍｉｓｈｅｌｌ ａｎｄ Ｓｈｉｉｇｉ， ｅｄｓ．， Ｗ．Ｈ． Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏ．を参照。免疫反応の評価は主観的でもよい。たとえば、患者は特定アレルゲンに対するアレルギー反応の発生率や重症度の低下を報告することができる。
【０１０９】
キットと組成物
本発明はまた、本書で述べた方法との併用に適したキットと組成物をも提供する。
本発明のキットは次の組成物のいずれかを適当にパッケージしたものを含む：（ａ）ＩｇＥ阻害剤と抗原；（ｂ）一般に通常の脱感作療法向けに処方される濃度よりも高い濃度の抗原；（ｃ）ＩｇＥ阻害剤と１種以上のＩＳＳ；（ｄ）ＩｇＥ阻害剤、１種以上のＩＳＳおよび抗原；（ｅ）ＩｇＥ阻害剤とＩＳＳ−Ａｇ複合体；（ｆ）ＩｇＥ阻害剤および抗原と近接的に結合したＩＳＳ。本発明のキットは随意に、その使用説明書および／または他の適当な構成要素を含んでもよい。
【０１１０】
本発明の組成物は、抗原濃度を現行・通常の脱感作療法で使用される濃度よりも高くしてある新規配合物である。したがって、本発明の新規配合物における単位容量当たり抗原量は、アナフィラキシーを誘発することなく抗原に対する脱感作（一般に一連の逓増用量の投与を通じて実現される）を誘発するための有効量である。本発明の新規配合物における抗原量は先行技術の配合物よりも著しく高濃度であり、したがって先行技術の配合物によって示唆されてはいない。実施態様によっては、その濃度は通常療法で使用される配合物濃度の約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約１５倍、約２０倍、約２５倍、約５０倍、約７５倍、約１００倍である。現在使用されている抗原配合物の濃度は技術上周知であり改めて述べるまでもない。
【０１１１】
本発明は、ＩｇＥ活性を阻害する組成物または抗原と免疫賦活オリゴヌクレオチド（ＩＳＳ）を含む組成物をも提供する。
一般に、本発明の組成物は好ましくは製薬上許容しうる佐剤をも含む。周知のように、製薬上許容しうる佐剤は、薬理学的有効成分の投与を助長するような比較的不活性の物質である。たとえば、佐剤は賦形または稠度の賦与に、あるいは希釈剤として使用することができる。適当な佐剤は安定剤、湿潤および乳化剤、容量オスモル濃度変更用の塩、包理剤、緩衝液および皮膚浸透促進剤などであるが、それだけに限らない。佐剤および腸管外／非腸管外薬物送達用の配合物はＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， １９ｔｈ Ｅｄ． Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ（１９９５）に記載されている。
【０１１２】
他の配合物はリポソームなどのキャリヤーを含むがそれだけに限らない技術上周知の適当な送達形態を含む。Ｍａｈａｔｏ ｅｔ ａｌ． （１９９７） Ｐｈａｒｍ． Ｒｅｓ． １４：８５３−８５９． 調製リポソームにはシトフェクチン、多重層小胞、１枚膜小胞などがあるが、それだけに限らない。
一般に、これらの組成物は（腹膜、静脈、皮下、筋肉などの）注射による投与を目的に配合される。したがって、これらの組成物は好ましくは製薬上許容しうる賦形剤、たとえば生理食塩水、リンガー液、ブドウ糖液などと混合する。具体的な投薬計画、すなわち用量、タイミングおよび頻度は特定の個人およびその個人の病歴に依存しよう。
【０１１３】
他の配合物はリポソームなどのキャリヤーを含むがそれだけに限らない技術上周知の適当な送達形態を含む。Ｍａｈａｔｏ ｅｔ ａｌ． （１９９７） Ｐｈａｒｍ． Ｒｅｓ． １４：８５３−８５９。調製リポソームにはシトフェクチン、多重層小胞、１枚膜小胞などがあるが、それだけに限らない。
実施態様によっては、１種以上の抗原を組成物に含める場合がある。そうした組成物は少なくとも１種の、少なくとも２種の、少なくとも３種の、少なくとも４種の、少なくと５種の抗原を含む場合がある。その種の「カクテル」（本技術分野ではしばしば、そう呼ばれる）は、たとえば１種以上のアレルゲンに対してアレルギー性である個人の治療に特に有効であろう。