(57)【要約】肝不全に起因する血小板減少症に対する治療用薬剤、好ましくは副作用の少ない薬剤を提供する。グリコプロテインＩｂ（ＧＰＩｂ）とフォンビルブランド因子（ｖＷＦ）との結合を阻害する作用を有する物質、例えば、ＧＰＩｂとｖＷＦとの結合を阻害する抗ＧＰＩｂ抗体または抗ｖＷＦ抗体を、血小板減少症治療用薬剤の有効成分とする。【特許請求の範囲】
【請求項１】
グリコプロテインＩｂとフォンビルブランド因子との結合を阻害する作用を有する物質を有効成分とする、肝硬変、ウイルス性、薬剤性、自己免疫性若しくはアルコール性肝炎、又は劇症肝炎から選ばれる少なくとも一種の肝不全に起因する血小板減少症治療用医薬組成物。
【請求項２】
グリコプロテインＩｂとフォンビルブランド因子との結合を阻害する作用を有する物質を有効成分とする、２Ｂ型又は血小板型フォンビルブランド病治療用医薬組成物。
【請求項３】
グリコプロテインＩｂとフォンビルブランド因子との結合を阻害する作用を有する物質を有効成分とする、ウイルス性肝炎治療用インターフェロン投与に起因する血小板減少症治療用医薬組成物
【請求項４】
前記グリコプロテインＩｂとフォンビルブランド因子との結合を阻害する作用を有する物質が、グリコプロテインＩｂ又はフォンビルブランド因子に結合する物質である、請求項１〜３記載の医薬組成物。
【請求項５】
前記グリコプロテインＩｂ又はフォンビルブランド因子との結合を阻害する作用を有する物質が、グリコプロテインＩｂ又はフォンビルブランド因子に結合する抗体である、請求項１〜３記載の医薬組成物。
【請求項６】
前記グリコプロテインＩｂとフォンビルブランド因子との結合を阻害する作用を有する物質が、グリコプロテインＩｂ又はフォンビルブランド因子に結合するモノクローナル抗体、又は、同モノクローナル抗体に由来し、グリコプロテインＩｂとフォンビルブランド因子との結合を阻害する作用を有するキメラ抗体、ヒト化抗体、完全ヒト抗体もしくはそれらの断片である、請求項１〜３記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記グリコプロテインＩｂとフォンビルブランド因子との結合を阻害する作用を有する物質が、フォンビルブランド因子のＧＰＩｂ結合部位又はその近傍にエピトープを有するモノクローナル抗体である、請求項１〜３記載の医薬組成物。
【請求項８】
前記グリコプロテインＩｂとフォンビルブランド因子との結合を阻害する作用を有する物質が、フォンビルブランド因子のＡ１ドメインにエピトープを有するモノクローナル抗体である、請求項１〜３記載の医薬組成物。
【請求項９】
前記グリコプロテインＩｂとフォンビルブランド因子との結合を阻害する作用を有する物質が、受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−５２４７、ＦＥＲＭ  ＢＰ−５２４８、ＦＥＲＭ  ＢＰ−５２４９、及びＦＥＲＭ  ＢＰ−５２５０で寄託されたハイブリドーマが産生するモノクローナル抗体から選ばれる少なくとも一種を含有する、請求項１〜３記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】  本発明は、血小板減少症を治療する目的で使用される薬剤であって、グリコプロテインＩｂとフォンビルブランド因子との結合を阻害する物質を有効成分とする薬剤に関する。
【背景技術】  血小板減少症とは単位容積あたりの抹消血液中に存在する血小板数が正常よりも低下している状態である。具体的には血小板数の正常範囲が通常１５万〜３５万／μＬに対し、１０万／μＬ以下になった場合を指す。初期症状としては、点状出血および紫斑がもっとも多く、その他鼻血、歯肉出血等が見られる。脳内出血などの重篤な症状に移行するのを防ぐためにも、早期診断、早期治療が重要である。血小板減少の機序には（１）血小板産生の障害、（２）血小板の分布異常、（３）血小板の破壊亢進および（４）血小板の消費増大といった４つの要因が知られているが、その病態や原因は多岐に富んでいる。中でも肝不全に起因する血小板減少は患者の予後を左右する合併症の１つとして古くから臨床で問題視されている。また一部のフォンビルブランド病は先天的なグリコプロテインＩｂおよびフォンビルブランド因子の質的異常によって、生体内で血小板の消費が亢進する結果、血小板減少症状を呈し、出血傾向を示すという稀有な疾患である。
肝不全とは、何らかの原因によって機能するべき肝実質が減少し、肝臓の機能が維持できなくなった状態であり、急性型（主に劇症肝炎）と慢性型（主に肝硬変）に分類される。急性肝不全は、通常明らかな肝疾患の既往のない個体に突然重大な肝障害を生じ、肝不全に陥った状態あるいは慢性肝不全の急激な増悪であり、ウイルス性、薬剤性、自己免疫性、アルコール性肝炎が知られている。慢性肝不全はすでに肝硬変のような肝障害が存在している患者が、何らかの誘因により肝不全に陥った状態である。臨床症状として、肝硬変では全身倦怠感、腹部膨満感、食欲不振、皮膚そう痒感などの症状の出現頻度は高率である。さらに出血傾向、腹水、浮腫、吐下血は肝硬変の重篤化を示唆している。これらが進行して、いわゆる肝不全症状として、肝性脳症、出血傾向、腹水、黄疸などの出現を見る。
中でも出血傾向は、肝硬変患者を扱う消化器内科医や外科医にとって、もっとも煩わしい症状の１つとされている。出血傾向の成因は不明な点も多いが、血液凝固線溶異常や血小板数の低下などが上げられる。肝細胞では血液凝固・線溶に関与する数多くの蛋白を合成・分泌すると同時に肝網内系は活性化凝固因子や線溶活性化酵素（プラスミノゲン・アクチベーター）などの処理除去機能を有している。肝疾患では重症度に応じて、凝固・線溶因子や阻害因子の合成障害に加えて、プラスミノゲン・アクチベーターのクリアランスの低下も認められ、播種性血管内凝固症候群（ｄｉｓｓｅｍｉｎａｔｅｄ  ｉｎｔｒａｖａｓｃｕｌａｒ  ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ；以下「ＤＩＣ」と略記することがある）あるいはその準備状態にあるといえる。一方、血小板減少は慢性肝炎から肝硬変、更には非代償性肝硬変へと病態の進展とも密接に関連している。血小板減少の原因は多様で、これまでは主に脾機能亢進と骨髄での巨核球成熟障害に基づく血小板産生低下や血小板自体の異常による血小板寿命の短縮が原因とされてきたが、いまだその機序には不明な点が多い。
正常者では循環血小板の３分の１が脾臓にプールされるが、肝硬変患者においては肝硬変に伴う門脈圧亢進から脾腫を生じ、脾臓にプールする血小板が増加し、結果として末梢血中の血小板数が低下する。また、門脈圧亢進による合併症回避の目的で、脾摘を行った肝硬変患者では、血小板数は慢性肝炎患者とほぼ同程度まで回復することからも、脾腫が原因の１つであることに間違いないが、末梢血中の血小板数と脾腫の程度の相関はそれほど高くない。
一方、血小板産生系に関与する主たるサイトカインとしてトロンボポエチン（ｔｈｒｏｍｂｏｐｏｉｅｔｉｎ、以下「ＴＰＯ」と略記することがある）が１９９４年にクローニングされ、その産生部位として肝細胞、骨盤ストローマ細胞、腎臓等が同定された。そのことから、慢性肝疾患とＴＰＯ産生の関係が注目されたが、慢性肝炎、肝硬変でも血中ＴＰＯ値は健常者と差がないとする報告が大半である。また、肝硬変脾摘群と慢性肝炎群との比較では血小板数、血中ＴＰＯ値とも差がない。肝硬変では骨髄での著しい巨核球、血小板の産生低下を来す状態がない限り、血中ＴＰＯ値はほぼ一定であり、末梢血中の血小板数とは無関係と考えられている。その他症例によっては、凝固・線溶系の亢進に伴う血小板数の変化、血小板膜糖蛋白に対する自己抗体の関与、さらに血小板の質的異常なども一因として挙げられている。
肝硬変を基礎疾患にもつ肝不全はさまざまな病態を呈し、また肝不全を繰り返す可能性が強いことから、病態を把握して適切な対症療法を行うことの他、日常より確実なｆｏｌｌｏｗ  ｕｐと予防処置が肝要である。肝不全患者の出血傾向に対するマネジメントには、一般的な止血剤とともに血液凝固線溶因子の補充や凝固線溶の是正が重要とされている。補充療法としては新鮮凍結血漿の投与が行われるが、ウイルス感染のリスクや抗体産生などの懸念がある。肝不全が高度でＤＩＣ合併も予想されるときの血液凝固異常の是正にはメシル酸ガベキサートが使用されている。しかし、高濃度での細胞毒性による投与部位での血管静脈炎や潰瘍、壊死など投与に注意が必要なこと、ショック・アナフィラキシーショック、白血球減少といった重篤な副作用が知られる他、血小板減少に対する直接的な作用がないことから、薬剤としての満足度は低い。ヘパリンも、ＤＩＣ合併時における血液凝固異常の是正を目的として用いられるが、その抗トロンビン作用は肝臓で産生されるＡＴ−ＩＩＩに依存しているため、ＡＴ−ＩＩＩ製剤の併用が必要となる他、薬効延長による出血傾向の助長などの副作用があることが知られている。また、急性肝不全には対症的な治療法に加え、血漿交換が行われる。血漿交換は、患者血液中の低分子から高分子までの有害物質を含む血漿成分の大部分を交換することにより、肝機能の解毒と排泄能の役割を代行しつつ、アルブミンや凝固因子などを補充することで、肝機能の補完の役割も担うため、とくに劇症肝炎では汎用されているが、肝硬変に対しても一部には適応があると考えられる。しかし、血漿交換においては、通常中心静脈カテーテルを体内に留置し、連続で数回実施されることから医療コストが高い、入院が必要、ウイルス感染のリスク、全身性の感染、カテーテル部位での出血等が問題として挙げられている。このように、肝不全患者の出血傾向に対して、上記のごとく凝固・線溶機能の正常化を目的とした治療法はいくつかあるが、血小板減少に対する有効な治療法でかつ副作用の少ないものはこれまでに確立していない。
また、現在Ｃ型慢性肝炎のウイルス血症を改善する唯一の治療薬として、インターフェロン（ＩＦＮ）が認められ、広く使用されているが、ほとんどの症例で血小板数が投与後次第に減少することが知られている。中には治療を継続したいにも関わらず、ＩＦＮを減量または中止せざるを得ない場合があり、この血小板減少は臨床上大きな問題になっている。特に肝硬変にＩＦＮを投与している場合などでは、投与前から血小板数が１０万／μＬ以下と低値を示すことが多いため細心の注意が必要である。このインターフェロンの副作用に対する有効な治療法もいまだ確立していない。
一方、血小板血栓に重要な役割をもつフォンビルブランド因子（ｖｏｎ  Ｗｉｌｌｅｂｒａｎｄ  Ｆａｃｔｏｒ、以下「ｖＷＦ」と略記することがある）の血漿中濃度が、肝疾患で上昇していることが報告されている。例えば、胆道性肝硬変患者において、ｖＷＦレベルが健常人の約２倍の上昇が認められたが、その他肝疾患でも同様の増加が認められている（Ｉｎｔ  Ｊ  Ｍｉｃｒｏｃｉｒｃ  Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ、第１５巻、第７５頁、１９９５年）。また、肝硬変の病態進行度と血漿中ｖＷＦレベルに有意な相関が認められている（Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ、第２３巻、第１３７７頁、１９９６年）。健常人のｖＷＦレベルが９２±２０％であるのに対し、肝硬変患者では３６７±１８５％と上昇している（Ｊ  Ｈｅｐａｔｏｌ、第３０巻、第４５１頁、１９９９年）。さらにＢ型肝炎と関連した肝硬変患者で、血小板減少が顕著な患者では、血漿中ｖＷＦレベルは５０６％に上昇し、血漿交換にも抵抗性で、予後が悪いことが報告されている（Ａｎｎ  Ｈｅｍａｔｏｌ、第８０巻、第４９６頁、２００１年）。
ここに、ｖＷＦは高分子量のマルチマー構造をもつ糖蛋白であり、骨髄巨核球の他に血管内皮細胞で合成され、循環血液中に放出される。その一方で、ただちに血中の酵素によって分解されることによって、正常なマルチマーサイズを保持しながら循環している。また、サイトカインやずり応力刺激、人為的破壊によって内皮細胞から血中に放出されることから、血管傷害マーカーとしても知られている。ｖＷＦは血液凝固第ＶＩＩＩ因子を安定化させるキャリアー蛋白としての役割の他に、狭窄した血管や微小循環中で派生する高いずり応力が存在する環境下で血小板膜上のグリコプロテインＩｂ（ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ  Ｉｂ、以下「ＧＰＩｂ」と略記することがある）との結合を経て、血管内皮下組織への血小板の粘着、さらには血小板の凝集塊を形成させる接着蛋白としての役割をもつ。
なお、ｖＷＦは、分子量２６０ｋＤ（２，０５０個のアミノ酸残基）のサブユニットからなり、その中に約２００個のアミノ酸からなるＡドメインが３個連続している部分がある（Ｎ末端から５０９〜１１１１の位置に、順にＡ１、Ａ２、Ａ３が存在する）。このうち、Ａ１ドメイン（５０９〜７１２）は、Ａ３同様、ジスルフィド結合によりループ状の構造をとっており、Ａ１ループとも呼ばれている。
近年、血栓性血小板減少性紫斑病（Ｔｈｒｏｍｂｏｔｉｃ  Ｔｈｒｏｍｂｏｃｙｔｏｐｅｎｉｃ  Ｐｕｒｐｕｒａ、以下「ＴＴＰ」と略記することがある）の病態にｖＷＦが大きく関与していることが明らかにされてきた。ＴＴＰは血小板減少症、細小血管障害による赤血球破壊を伴った溶血性貧血、動揺性精神神経症状、発熱、腎機能障害を古典的５徴候とする疾患であり、病因は感染、妊娠、癌、臓器移植、膠原病など多彩である。ＴＴＰ患者においては、ｖＷＦ特異的分解酵素の活性が低下することにより、血漿中に異常高分子量マルチマーをもつｖＷＦが放出され、微小血管内でｖＷＦ関与の血栓形成を誘発、血小板が消費された結果、末梢血中の血小板数が低下すると考えられている。
さらに重要なことには、ｖＷＦ特異的分解酵素がクローニングされ、本酵素の主要産生臓器が肝臓であることが明らかにされた。実際、先天性胆道閉鎖症が原因の肝硬変患者において、血小板減少とともにｖＷＦ特異的分解酵素活性がシビアに減少しており、肝移植によって本酵素活性が正常化することが明らかにされている。また、肝硬変患者で血漿中ｖＷＦ抗原量の増加とともに、ｖＷＦ特異的分解酵素活性の低下も観察されている（Ｂｌｏｏｄ、第９８巻、第２７３０頁、２００１年）。
さらに、ｖＷＦの量的または質的異常に起因するフォンビルブランド病（ｖｏｎ  Ｗｉｌｌｅｂｒａｎｄ  ｄｉｓｅａｓｅ、以下「ｖＷＤ」と略記することがある）の一部の患者にも、血小板減少に伴う止血困難例が存在することが知られている。一般に、ｖＷＤは皮膚・粘膜の出血傾向を主徴とする先天性止血異常であり、ｖＷＦの量的低下（１型）、欠損（３型）もしくは質的異常（２型）に起因する。欧米では人口１０万人当たり１．０〜９．３人、日本では０．５６人程度であるが、本疾病の周知とともに増加していくと考えられる。
これらｖＷＤ三病型のうち、２Ｂ型ではｖＷＦ上のＧＰＩｂ結合ドメインの異常により、ＧＰＩｂとの結合が亢進する。また、血小板型ｖＷＤと呼ばれる患者では逆に、ＧＰＩｂ上のｖＷＦ結合ドメインの異常により、ｖＷＦとの結合が亢進する。どちらの病型も、生体内で血小板血栓が形成され、ｖＷＦの高分子マルチマーが消費され、血小板数が減少する結果、止血困難となることが示唆されている。
上記２Ｂ型及び血小板型ｖＷＤの治療法としては両病型とも、１型及び３型ｖＷＤの第一選択薬として使われるｄｅｓｍｏｐｒｅｓｓｉｎ［１−ｄｅｓａｍｉｎｏ−８−Ｄ−ａｒｇｉｎｉｎｅ  ｖａｓｏｐｒｅｓｓｉｎ，ＤＤＡＶＰ］（商品名「デスモプレシン注」）が禁忌とされていることが、他の病型のｖＷＤと比べて特徴的である。通常、大出血や手術などのときはヒトＦＶＩＩＩ／ｖＷＦ製剤を１日１〜２回で止血が得られるまで１〜２日投与する。しかし、ｖＷＦの量的低下（１型）や欠損（３型）であるｖＷＤに比べて、ｖＷＦ自体は健常人並みに存在することから、投与されるｖＷＦ製剤と拮抗関係にあるため、ｖＷＦの機能を是正させるのに必要な量は当然多くなる等、問題点も多く、他の有効な治療法が期待されている。
【発明の開示】
本発明は、上記現状に鑑みなされたものであり、肝硬変、ウイルス性、薬剤性、自己免疫性若しくはアルコール性肝炎、又は劇症肝炎等の肝不全に起因する血小板減少症、或いは２Ｂ型又は血小板型フォンビルブランド病に対する治療用薬剤、好ましくは副作用の少ない薬剤の提供を目的とする。
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意検討を加えた結果、肝臓に器質的、機能的な障害が認められる疾患、とくに非代償性肝硬変のような肝細胞の産生が見られない状態では、ｖＷＦ特異的分解酵素の産生低下によって生じるｖＷＦの異常高分子量マルチマーが、ＴＴＰと同じメカニズムで血小板減少を引き起こしている可能性、及び従来ＤＩＣとして扱われていた肝不全における多臓器不全においても、ｖＷＦの異常高分子量マルチマーが血小板減少に何らかの役割を果たしている可能性に想到した。さらに本発明者らは肝不全における血小板減少、止血異常、並びに２Ｂ型および血小板型ｖＷＤの問題の本質は、血漿中のｖＷＦと血小板膜上の糖蛋白ＧＰＩｂとの結合亢進によって血小板血栓が体内で自然発症することであると捉え、ｖＷＦとＧＰＩｂの結合を阻害する薬剤は血小板減少を改善できその結果止血異常も是正し得る可能性に想到した。血漿中のｖＷＦと血小板膜状の糖蛋白ＧＰＩｂとの結合亢進抑制、即ち、ｖＷＦの異常高分子マルチマーの関与する血小板凝集塊形成の抑制により、単一血小板の増加をもって止血困難の是正が可能であることを見出し、本発明を完成させた。また、本発明は、上記疾患群に留まるものではなく、何らかの原因でｖＷＦ特異的分解酵素活性が低下している症例にもすべて適用可能である。
すなわち、本発明の要旨は以下のとおりである。
（１）  グリコプロテインＩｂとフォンビルブランド因子との結合を阻害する作用を有する物質を有効成分とする、肝硬変、ウイルス性、薬剤性、自己免疫性若しくはアルコール性肝炎、又は劇症肝炎から選ばれる少なくとも一種の肝不全に起因する血小板減少症治療用医薬組成物。
（２）  グリコプロテインＩｂとフォンビルブランド因子との結合を阻害する作用を有する物質を有効成分とする、２Ｂ型又は血小板型フォンビルブランド病治療用医薬組成物。
（３）  グリコプロテインＩｂとフォンビルブランド因子との結合を阻害する作用を有する物質を有効成分とする、ウイルス性肝炎治療用インターフェロン投与に起因する血小板減少症治療用医薬組成物
（４）  前記グリコプロテインＩｂとフォンビルブランド因子との結合を阻害する作用を有する物質が、グリコプロテインＩｂ又はフォンビルブランド因子に結合する物質である、（１）〜（３）記載の医薬組成物。
（５）  前記グリコプロテインＩｂ又はフォンビルブランド因子との結合を阻害する作用を有する物質が、グリコプロテインＩｂ又はフォンビルブランド因子に結合する抗体である、（１）〜（３）記載の医薬組成物。
（６）  前記グリコプロテインＩｂとフォンビルブランド因子との結合を阻害する作用を有する物質が、グリコプロテインＩｂ又はフォンビルブランド因子に結合するモノクローナル抗体、又は、同モノクローナル抗体に由来し、グリコプロテインＩｂとフォンビルブランド因子との結合を阻害する作用を有するキメラ抗体、ヒト化抗体、完全ヒト抗体もしくはそれらの断片である、（１）〜（３）記載の医薬組成物。
（７）  前記グリコプロテインＩｂとフォンビルブランド因子との結合を阻害する作用を有する物質が、フォンビルブランド因子のＧＰＩｂ結合部位又はその近傍にエピトープを有するモノクローナル抗体である、（１）〜（３）記載の医薬組成物。
（８）  前記グリコプロテインＩｂとフォンビルブランド因子との結合を阻害する作用を有する物質が、フォンビルブランド因子のＡ１ドメインにエピトープを有するモノクローナル抗体である、（１）〜（３）記載の医薬組成物。
（９）  前記グリコプロテインＩｂとフォンビルブランド因子との結合を阻害する作用を有する物質が、受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−５２４７、ＦＥＲＭ  ＢＰ−５２４８、ＦＥＲＭ  ＢＰ−５２４９、及びＦＥＲＭ  ＢＰ−５２５０で寄託されたハイブリドーマが産生するモノクローナル抗体から選ばれる少なくとも一種を含有する、（１）〜（３）記載の医薬組成物。
【図面の簡単な説明】図１
ＤＭＮを週３回、３週間腹腔内投与し作成したラット肝障害モデルにおいて、３週目からＡＪＷ２００を０．１ｍｇ／ｋｇの用量で７日間連投したときの、血小板数に対する影響を示したものである。（＊＊＊＊：Ｐ＜０．０００１  ｖｓ  Ｎｏｒｍａｌ，＃：Ｐ＜０．０５  ｖｓ  Ｃｏｎｔｒｏｌ、ｔ検定）
【発明を実施するための最良の形態】  以下、本発明を詳細に説明する。
本発明の血小板減少症治療用医薬組成物は、ＧＰＩｂとｖＷＦとの結合を阻害する作用を有する物質を有効成分とする。ＧＰＩｂとｖＷＦとの結合を阻害する作用を有する物質としては、ＧＰＩｂ又はｖＷＦに結合し、その結果、ＧＰＩｂとｖＷＦとの結合を阻害する物質が挙げられる。本発明者らは、肝硬変、ウイルス性、薬剤性、自己免疫性、若しくはアルコール性肝炎、又は劇症肝炎から選ばれる少なくとも一種の肝不全における血小板減少、止血異常、並びに２Ｂ型および血小板型ｖＷＤの問題の本質は、血漿中のｖＷＦと血小板膜上の糖蛋白ＧＰＩｂとの結合亢進によって血小板血栓が体内で自然発症することであるとの知見、即ち、血漿中のｖＷＦと血小板膜状の糖蛋白ＧＰＩｂとの結合亢進を抑制することによって血小板凝集塊形成を抑制する結果、血小板減少や止血異常を是正し得るとの独自の知見に基づき、後記実施例に示すように、ｖＷＦに対して反応性を有するモノクローナル抗体ＡＪｖＷ−２のヒト化抗体（ＡＪＷ２００）の治療効果を、ラット肝障害モデルを用いて評価したところ、病態進行に伴う血小板減少を改善する効果があることを見出し、本発明を完成した。
ＧＰＩｂとｖＷＦとの結合を阻害する作用を有する物質として、具体的には、ＧＰＩｂとｖＷＦとの結合が関与する血小板凝集に対して阻害作用を示す化合物が挙げられる。抗生物質であるリストセチン（ｒｉｓｔｏｃｅｔｉｎ）（Ｍ．Ａ．Ｈｏｗａｒｄ，Ｂ．Ｇ．Ｆｉｒｋｉｎ，Ｔｈｒｏｂ．Ｈａｅｍｏｓｔａｓｉｓ，２６，３６２−３６９（１９７１））、蛇毒由来のタンパク質であるボトロセチン（ｂｏｔｒｏｃｅｔｉｎ）（Ｍ．Ｓ．Ｒｅａｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，７５，４５１４−４５１８（１９７８））により惹起される血小板凝集に対して阻害作用を示す化合物として、オーリントリカルボン酸（ａｕｒｉｎ  ｔｒｉｃａｒｂｏｘｙｌｉｃ  ａｃｉｄ）（Ｍ．Ｄ．Ｐｈｉｌｌｉｐｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，７２，１９８９−１９０３（１９８８）；Ｇｏｌｉｎｏ  Ｐ，Ｒａｇｎｉ  Ｍ，Ｃｉｒｉｌｌｏ  Ｐ，Ｐａｓｃｕｃｃｉ  Ｉ，Ｅｚｅｋｏｗｉｔｚ  ＭＤ，Ｐａｗａｓｈｅ  Ａ，Ｓｃｏｇｎａｍｉｇｌｉｏ  Ａ，Ｐａｃｅ  Ｌ，Ｇｕａｒｉｎｏ  Ａ，Ｃｈｉａｒｉｅｌｌｏ  Ｍ．Ａｕｒｉｎｔｒｉｃａｒｂｏｘｙｌｉｃ  ａｃｉｄ  ｒｅｄｕｃｅｓ  ｐｌａｔｅｌｅｔ  ｄｅｐｏｓｉｔｉｏｎ  ｉｎ  ｓｔｅｎｏｓｅｄ  ａｎｄ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｌｙ  ｉｎｊｕｒｅｄ  ｒａｂｂｉｔ  ｃａｒｏｔｉｄ  ａｒｔｅｒｉｅｓ  ｍｏｒｅ  ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｌｙ  ｔｈａｎ  ｏｔｈｅｒ  ａｎｔｉｐｌａｔｅｌｅｔ  ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎｓ．Ｔｈｒｏｍｂ  Ｈａｅｍｏｓｔ．１９９５  Ｓｅｐ；７４（３）：９７４−９）、芳香族アミジノ化合物等の色素物質（Ｊ．Ｄ．Ｇｅｒａｔｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｈｒｏｍｂ．Ｈａｅｍｏｓｔａｓｉｓ，３９，４１１−４２５（１９７８））の他、ｖＷＦあるいはＧＰＩｂの部分フラグメントペプチドなどが知られている（Ｙ．Ｆｕｊｉｍｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６１，３８１−３８５（１９８６）、Ｋ．Ｔｉｔａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，８４，５６１０−５６１４（１９８７））。ｖＷＦあるいはＧＰＩｂの部分フラグメントペプチドは、それぞれの結合領域の配列を含むことが望ましく、さらには結合能を高めるべく、部分的にミューテーションを加えたものや、補体及び／又はＦｃレセプターが結合が出来ないようにミューテーションを加えた免疫グロブリンタンパク質の部分ペプチド、たとえばＦｃ領域、との融合タンパク質としたものであってもよい。また、その他血中半減期延長及び／又は抗原性の軽減等を目的とし修飾を加えた部分フラグメントペプチドであってもよい。
ｖＷＦの部分フラグメントとして具体的には、Ａ１ループを含むフラグメントが挙げられる（Ｄａｒｄｉｋ  Ｒ，Ｖａｒｏｎ  Ｄ，Ｅｓｋａｒａｅｖ  Ｒ，Ｔａｍａｒｉｎ  Ｉ，Ｉｎｂａｌ  Ａ．Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ｆｒａｇｍｅｎｔ  ｏｆ  ｖｏｎ  Ｗｉｌｌｅｂｒａｎｄ  ｆａｃｔｏｒ  ＡＲ５４５Ｃ  ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ｐｌａｔｅｌｅｔ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｔｏ  ｔｈｒｏｍｂｉｎ  ａｎｄ  ｐｌａｔｅｌｅｔ  ａｄｈｅｓｉｏｎ  ｔｏ  ｔｈｒｏｍｂｉｎ−ｔｒｅａｔｅｄ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｃｅｌｌｓ．Ｂｒ  Ｊ  Ｈａｅｍａｔｏｌ．２０００  Ｊｕｎ；１０９（３）：５１２−８；ＭｃＧｈｉｅ  ＡＩ，ＭｃＮａｔｔ  Ｊ，Ｅｚｏｖ  Ｎ，Ｃｕｉ  Ｋ，Ｍｏｗｅｒ  ＬＫ，Ｈａｇａｙ  Ｙ，Ｂｕｊａ  ＬＭ，Ｇａｒｆｉｎｋｅｌ  ＬＩ，Ｇｏｒｅｃｋｉ  Ｍ，Ｗｉｌｌｅｒｓｏｎ  ＪＴ．Ａｂｏｌｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｙｃｌｉｃ  ｆｌｏｗ  ｖａｒｉａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ｓｔｅｎｏｓｅｄ，ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｕｍ−ｉｎｊｕｒｅｄ  ｃｏｒｏｎａｒｙ  ａｒｔｅｒｉｅｓ  ｉｎ  ｎｏｎｈｕｍａｎ  ｐｒｉｍａｔｅｓ  ｗｉｔｈ  ａ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｆｒａｇｍｅｎｔ（ＶＣＬ）ｄｅｒｉｖｅｄ  ｆｒｏｍ  ｈｕｍａｎ  ｐｌａｓｍａ  ｖｏｎ  Ｗｉｌｌｅｂｒａｎｄ  ｆａｃｔｏｒ−ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ  Ｉｂ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｄｏｍａｉｎ．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ．１９９４  Ｄｅｃ；９０（６）：２９７６−８１）。
また、蛇毒中からも同様の血小板凝集阻害活性をもつペプチドが報告されており、ＷＯ９２０８４７２号国際公開パンフレットではクロタルス・ホリダス・ホリダス（Ｃｒｏｔａｌｕｓ  ｈｏｒｒｉｄｕｓ  ｈｏｒｒｉｄｕｓ）、セラステス・セラステス（Ｃｅｒａｓｔｅｓ  ｃｅｒａｓｔｅｓ）から、いずれも、少なくともＮ末端側アミノ酸配列の相同性が高い、分子量約２５キロダルトンの異なる２本鎖よりなるペプチドについて示している。また、Ｐｅｎｇら（Ｍ．Ｐｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，８１，２３２１−２３２８（１９９３））が報告しているエキス・カリナタス（Ｅｃｈｉｓ  ｃａｒｉｎａｔｕｓ）から得た血小板凝集阻害ペプチドも、インビトロでの活性、分子量など、上記ペプチドに非常に類似するものである。その他、蛇毒については、以下の論文に詳しい。Ｙｅｈ  ＣＨ，Ｃｈａｎｇ  ＭＣ，Ｐｅｎｇ  ＨＣ，Ｈｕａｎｇ  ＴＦ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ａｎｔｉｔｈｒｏｍｂｏｔｉｃ  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ａｇｋｉｓｔｉｎ，ａ  ｐｌａｔｅｌｅｔ  ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ  Ｉｂ  ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ．Ｂｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２００１  Ｆｅｂ；１３２（４）：８４３−５０；Ｃｈａｎｇ  ＭＣ，Ｌｉｎ  ＨＫ，Ｐｅｎｇ  ＨＣ，Ｈｕａｎｇ  ＴＦ．Ａｎｔｉｔｈｒｏｍｂｏｔｉｃ  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｃｒｏｔａｌｉｎ，ａ  ｐｌａｔｅｌｅｔ  ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ  Ｉｂ  ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ  ｆｒｏｍ  ｖｅｎｏｍ  ｏｆ  Ｃｒｏｔａｌｕｓ  ａｔｒｏｘ．Ｂｌｏｏｄ．  １９９８  Ｍａｒ  １；９１（５）：１５８２−９；Ｋａｗａｓａｋｉ  Ｔ，Ｔａｎｉｕｃｈｉ  Ｙ，Ｈｉｓａｍｉｃｈｉ  Ｎ，Ｆｕｊｉｍｕｒａ  Ｙ，Ｓｕｚｕｋｉ  Ｍ，Ｔｉｔａｎｉ  Ｋ，Ｓａｋａｉ  Ｙ，Ｋａｋｕ  Ｓ，Ｓａｔｏｈ  Ｎ，Ｔａｋｅｎａｋａ  Ｔ，ｅｔ  ａｌ．Ｔｏｋａｒａｃｅｔｉｎ，ａ  ｎｅｗ  ｐｌａｔｅｌｅｔ  ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ  ｔｈａｔ  ｂｉｎｄｓ  ｔｏ  ｐｌａｔｅｌｅｔ  ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ  ｉｂ  ａｎｄ  ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ｖｏｎ  Ｗｉｌｌｅｂｒａｎｄ  ｆａｃｔｏｒ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｓｈｅａｒ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｐｌａｔｅｌｅｔ  ａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ．Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｊ．１９９５  Ｊｕｎ  １５；３０８（Ｐｔ  ３）：９４７−５３；Ｐｅｎｇ  Ｍ，Ｌｕ  Ｗ，Ｂｅｖｉｇｌｉａ  Ｌ，Ｎｉｅｗｉａｒｏｗｓｋｉ  Ｓ，Ｋｉｒｂｙ  ＥＰ．Ｅｃｈｉｃｅｔｉｎ：ａ  ｓｎａｋｅ  ｖｅｎｏｍ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｔｈａｔ  ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｏｆ  ｖｏｎ  Ｗｉｌｌｅｂｒａｎｄ  ｆａｃｔｏｒ  ａｎｄ  ａｌｂｏａｇｇｒｅｇｉｎｓ  ｔｏ  ｐｌａｔｅｌｅｔ  ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ  Ｉｂ．Ｂｌｏｏｄ．１９９３  Ｍａｙ  １；８１（９）：２３２１−８
また、ｖＷＦと血小板との結合を阻害する活性を有する蛇毒由来の多量体ペプチドから得られる一本鎖ペプチドも、本発明に好適に用いることができる（ＷＯ９５／０８５７３、ＷＯ  ００／５９９２６）。具体的には、クロタルス・ホリダス・ホリダス（Ｃｒｏｔａｌｕｓ  ｈｏｒｒｉｄｕｓ  ｈｏｒｒｉｄｕｓ）の蛇毒由来の一本鎖ペプチドＡＳ１０５１が挙げられる。同ペプチドは、ＧＰＩｂに特異的に結合することが知られている（ＷＯ９５／０８５７３）。このような一本鎖ペプチドは、一般的に蛇毒が有する血小板減少を示さない点で優れている。
上記の物質の他に、ＧＰＩｂに結合する物質としては、ＧＰＩｂに結合する抗体が挙げられる（Ｃａｕｗｅｎｂｅｒｇｈｓ  Ｎ，Ａｊｚｅｎｂｅｒｇ  Ｎ，Ｖａｕｔｅｒｉｎ  Ｓ，Ｈｏｙｌａｅｒｔｓ  ＭＦ，Ｄｅｃｌｅｒｃｋ  ＰＪ，Ｂａｒｕｃｈ  Ｄ，Ｄｅｃｋｍｙｎ  Ｈ．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍｕｒｉｎｅ  ａｎｔｉ−ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ  Ｉｂ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｔｈａｔ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ｓｈｅａｒ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ａｎｄ  ｒｉｓｔｏｃｅｔｉｎ／ｂｏｔｒｏｃｅｔｉｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ  Ｉｂ−ｖｏｎ  Ｗｉｌｌｅｂｒａｎｄ  ｆａｃｔｏｒ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ．Ｈａｅｍｏｓｔａｓｉｓ．２０００  Ｍａｙ−Ｊｕｎ；３０（３）：１３９−４８；Ｃａｕｗｅｎｂｅｒｇｈｓ  Ｎ，Ｍｅｉｒｉｎｇ  Ｍ，Ｖａｕｔｅｒｉｎ  Ｓ，ｖａｎ  Ｗｙｋ  Ｖ，Ｌａｍｐｒｅｃｈｔ  Ｓ，Ｒｏｏｄｔ  ＪＰ，Ｎｏｖａｋ  Ｌ，Ｈａｒｓｆａｌｖｉ  Ｊ，Ｄｅｃｋｍｙｎ  Ｈ，Ｋｏｔｚｅ  ＨＦ．Ａｎｔｉｔｈｒｏｍｂｏｔｉｃ  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｐｌａｔｅｌｅｔ  ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ  Ｉｂ−ｂｌｏｃｋｉｎｇ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｆａｂ  ｆｒａｇｍｅｎｔｓ  ｉｎ  ｎｏｎｈｕｍａｎ  ｐｒｉｍａｔｅｓ．  Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ  Ｔｈｒｏｍｂ  Ｖａｓｃ  Ｂｉｏｌ．２０００  Ｍａｙ；２０（５）：１３４７−５３）。本発明においては、このような抗ＧＰＩｂ抗体のうち、ＧＰＩｂのｖＷＦとの結合部位又は近傍に結合し、ＧＰＩｂとｖＷＦとの結合を阻害するような抗体が好ましい。具体的には、６Ｂ４と呼ばれるヒトＧＰＩｂに対するマウスモノクローナル抗体が好ましい（Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ  Ｔｈｒｏｍｂ  Ｖａｓｃ  Ｂｉｏｌ．２０００  Ｍａｙ；２０（５）：１３４７−５３）。
また、ｖＷＦに結合する物質としては、ｖＷＦに結合する抗体が挙げられる。本発明においては、抗ｖＷＦ抗体のうち、ｖＷＦのＧＰＩｂとの結合部位又は近傍に結合し、ｖＷＦとＧＰＩｂとの結合を阻害するような抗体が好ましい。
本発明に用いる抗ＧＰＩｂ抗体又は抗ｖＷＦ抗体は、ＧＰＩｂとｖＷＦとの結合を阻害する限り、ポリクローナル抗体であっても、モノクローナル抗体であってもよい。また、ＧＰＩｂ又はｖＷＦに結合し、ＧＰＩｂとｖＷＦとの結合を阻害する限り、モノクローナル抗体に由来する誘導体であってもよい。
抗ＧＰＩｂポリクローナル抗体又は抗ｖＷＦポリクローナル抗体は、常法に従い、抗体の製造に用いられるマウス、ラット、ウサギ、ヤギ、ヒツジ等の哺乳動物をＧＰＩｂ又はｖＷＦで免疫し、血清から免疫グロブリン画分を分離することによって、製造することができる。また、抗ＧＰＩｂモノクローナル抗体又は抗ｖＷＦモノクローナル抗体は、ケーラーとミルステインの方法（Ｎａｔｕｒｅ，４９５〜４９２頁、１９７５年）によってこれらのモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマを調製し、得られたハイブリドーマの培養上清から抗体を精製することによって、製造することができる。
上記抗体の誘導体としては、キメラ抗体、ヒト化抗体、完全ヒト抗体又はそれらの断片が挙げられる。キメラ抗体は、例えば、ある動物の抗体の定常領域に他の動物の抗体由来の可変領域が連結されたものである。また、ヒト化抗体は、非ヒト抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）の遺伝子配列だけをヒト抗体遺伝子に移植したものである。本発明においては、ヒトにおいて実質的に非免疫原性である点で、ヒト化抗体が好ましい。ヒト化抗体は、例えば、マウスモノクローナル抗体の相補性決定領域をヒト骨髄腫由来の抗体可変部のフレームワーク領域に部位特異的変異により移植した重鎖及び軽鎖の遺伝子を宿主細胞で発現させることにより、製造することができる（Ｃｏ  ＭＳ，Ｙａｎｏ  Ｓ，Ｈｓｕ  ＲＫ，Ｌａｎｄｏｌｆｉ  ＮＦ，Ｖａｓｑｕｅｚ  Ｍ，Ｃｏｌｅ  Ｍ，Ｔｓｏ  ＪＴ，Ｂｒｉｎｇｍａｎ  Ｔ，Ｌａｉｒｄ  Ｗ，Ｈｕｄｓｏｎ  Ｄ，ｅｔ  ａｌ．，Ａ  ｈｕｍａｎｉｚｅｄ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｐｌａｔｅｌｅｔ  ｉｎｔｅｇｒｉｎ  ｇｐＩＩｂ／ＩＩＩａ．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １９９４  Ｍａｒ  １５；１５２（６）：２９６８−７６．）。ヒト定常領域をコードするＤＮＡ配列は、周知の手法にしたがって、種々のヒト細胞から、好ましくは不死化Ｂ細胞から単離され得る（Ｋａｂａｔ，Ｅ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，（１９８７）、ＷＯ  ８７／０２６７１）。また、抗ＧＰＩｂ抗体又は抗ｖＷＦ抗体の可変領域をコードするＤＮＡ配列は、それらの抗体を産生する細胞から単離され得る。また、キメラ遺伝子を発現させる宿主は、多数の供給元、例えばアメリカンタイプカルチャーコレクションから入手し得る（Ｃａｔａｌｏｇｕｅ  ｏｆ  Ｃｅｌｌ  Ｌｉｎｅｓ  ａｎｄ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ，Ｆｉｆｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ（１９８５）Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，Ｍａｒｙｌａｎｄ，Ｕ．Ｓ．Ａ．）。
また、抗体の断片としては、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’、ＦａｂおよびＦｖが挙げられる。さらに、二機能性ハイブリッド抗体（Ｌａｎｚａｖｅｃｃｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７，１０５（１９８７））、単一鎖（Ｈｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，８５，５８７９−５８８３（１９８８）およびＢｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２，４２３−４２６（１９８８））等の技術も、本発明に適用することができる。
抗ｖＷＦ抗体としては、ｖＷＦのＧＰＩｂ結合部位又はその近傍にエピトープを有するモノクローナル抗体が好ましい。そのような抗ｖＷＦ抗体として具体的には、ｖＷＦのＡ１ドメインにエピトープを有するモノクローナル抗体が挙げられる。ＧＰＩｂ結合部位又はその近傍にエピトープを有する抗ｖＷＦ抗体としてより具体的には、ハイブリドーマＡＪｖＷ−１、ＡＪｖＷ−２、ＡＪｖＷ−３およびＡＪｖＷ−４が産生するモノクローナル抗体が好適に挙げられる（ＷＯ９６／１７０７８）。これらのハイブリドーマは、平成６年８月２４日に通商産業省工業技術院生命工学工業技術研究所（現  独立行政法人産業技術総合研究所  特許生物寄託センター、〒３０５−８５６６  日本国茨城県つくば市東１丁目１番地１  中央第６）にそれぞれ順にＦＥＲＭ  Ｐ−１４４８６、ＦＥＲＭ  Ｐ−１４４８７、ＦＥＲＭ  Ｐ−１４４８８及びＦＥＲＭ  Ｐ−１４４８９の受託番号で寄託され、平成７年９月２９日にブダペスト条約に基づく国際寄託に移管されて、それぞれ順にＦＥＲＭ  ＢＰ−５２４７、ＦＥＲＭ  ＢＰ−５２４８、ＦＥＲＭ  ＢＰ−５２４９、ＦＥＲＭ  ＢＰ−５２５０の受託番号で寄託されている。尚、ＡＪｖＷ−２が産生するモノクローナル抗体は、文献（Ｂｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、第１２２巻、第１６５頁、１９９７年）（Ｔｈｒｏｍｂ  Ｈａｅｍｏｓｔ、第７９巻、第２０２頁、１９９８年）及び特許（ＷＯ９６／１７０７８）に詳しい。
上記抗体のうち、ＡＪｖＷ−２及びＡＪｖＷ−４が産生するモノクローナル抗体は、下記性質を有する。
（ａ）ヒト・フォンビルブランド因子に対して反応性を有する。
（ｂ）ヒト血小板のＲＩＰＡ（リストセチン惹起血小板凝集反応）、ＢＩＰＡ（ボトロセチン惹起血小板凝集反応）、及びＳＩＰＡ（高ずり応力により惹起される血小板凝集反応）を阻害する。
（ｃ）モルモット血小板のＲＩＰＡ（リストセチン惹起血小板凝集反応）及びＢＩＰＡ（ボトロセチン惹起血小板凝集反応）を阻害する。
（ｄ）モルモット生体内で強い抗血栓作用を示すが、出血は引き起こさない。
また、ＡＪｖＷ−１及びＡＪｖＷ−３が産生するモノクローナル抗体は、下記性質を有する。
（イ）ヒト・フォンビルブランド因子に対して反応特異性を有する。
（ロ）ヒト血小板のＲＩＰＡ（リストセチン惹起血小板凝集反応）、ＢＩＰＡ（ボトロセチン惹起血小板凝集反応）、及びＳＩＰＡ（高ずり応力により惹起される血小板凝集反応）を阻害する。
（ハ）ラット、モルモット、及びウサギのフォンビルブランド因子とは反応しない。
ＡＪｖＷ−２が産生するモノクローナル抗体がｖＷＦのＡ１ループ上にエピトープを有することは、当該抗体のｖＷＦへの結合をＡ１ループフラグメントであるＶＣＬが競合阻害すること、さらには還元アルキル化しループ構造をなくしたＶＣＬでは競合阻害し得ないことから明らかにされている（Ｙａｍａｍｏｔｏ  Ｈ，Ｖｒｅｙｓ  Ｉ，Ｓｔａｓｓｅｎ  ＪＭ，Ｙｏｓｈｉｍｏｔｏ  Ｒ，Ｖｅｒｍｙｌｅｎ  Ｊ，Ｈｏｙｌａｅｒｔｓ  ＭＦ．Ａｎｔａｇｏｎｉｓｍ  ｏｆ  ｖＷＦ  ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ｂｏｔｈ  ｉｎｊｕｒｙ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ａｒｔｅｒｉａｌ  ａｎｄ  ｖｅｎｏｕｓ  ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｈａｍｓｔｅｒ．Ｔｈｒｏｍｂ  Ｈａｅｍｏｓｔ．１９９８；７９：２０２−２１０）。また、ＷＯ９６／１７０７８に記載されているように、ＡＪｖＷ−２が産生するモノクローナル抗体のｖＷＦへの結合を、ＡＪｖＷ−１、ＡＪｖＷ−３、ＡＪｖＷ−４が産生するモノクローナル抗体がそれぞれ競合阻害することが明らかにされている。したがって、これら３つの抗体についても、ｖＷＦへの結合部位は、Ａ１ループ上にあるＡＪｖＷ−２の結合部位の近傍にあるものと考えられる。
本発明において最も好ましい抗体は、ＡＪｖＷ−２が産生するモノクローナル抗体、又はそのヒト化抗体である。同ヒト化抗体及びその製造方法は、ＷＯ  ００／１０６０１号国際公開パンフレットに詳細に開示されている。後記実験例では、同国際公開パンフレットの実施例に記載の方法により得られた、ヒト化抗体（ＡＪＷ２００と呼ぶ）を用いた。
本発明の血小板減少症治療用薬剤は、上記のようなＧＰＩｂとｖＷＦとの結合を阻害する作用を有する物質を有効成分として含有することを特徴とする。本発明の血小板減少症治療用薬剤の剤型としては、注射剤、舌下剤、経皮パップ剤、錠剤、カプセル剤、細粒剤、シロップ剤、座薬、軟膏剤、点眼剤等が挙げられる。
本発明の薬剤中のＧＰＩｂとｖＷＦとの結合を阻害する作用を有する物質の含量は、好ましくは当該薬剤１００重量部中０．０１〜１００重量部である。前記物質は、１種を単独で用いてもよく、任意の２種以上の混合物として用いてもよい。
また、本発明の薬剤は、剤型に応じて、製剤上許容される賦形剤や増量剤、例えばデキストリン、乳糖、バレイショデンプン、炭酸カルシウムまたはアルギン酸ナトリウム等を配剤してもよい。本発明の薬剤の形態は液状、粉体状、カプセル状、顆粒状のいずれでも構わない。注射剤の場合には、溶媒として注射用蒸留水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リンゲル液等が使用され、これに分散剤を添加してもよい。また、ＧＰＩｂとｖＷＦとの結合を阻害する作用を有する物質以外の抗血栓成分を併用してもよい。
本発明の薬剤が適応される患者としては肝硬変、ウイルス性、薬剤性、自己免疫性、若しくはアルコール性肝炎、又は劇症肝炎等の肝不全に起因する肝機能障害を有する患者及び血小板減少症の患者、並びに２Ｂ型又は血小板型フォオンビルブランド病患者が挙げられるが、それ以外にも上記ｖＷＤとＧＰＩｂの結合が亢進し、血小板が減少した結果、出血傾向を示す患者や、何らかの原因により肝機能が低下し、ｖＷＦ特異的分解酵素の活性が低下した結果、出血傾向を示す患者にも適用可能である。出血傾向を是正する目的で本発明の薬剤を投与する。また、ウイルス性肝炎治療用インターフェロン投与に起因する血小板減少症を改善する目的で本発明の薬剤を投与することもできる。更にはかかるインターフェロン療法に際し、インターフェロン療法の副作用としての血小板減少症の予防目的で本発明の薬剤をインターフェロンと併用することもできる。投与経路としては、経口投与、静脈内投与、舌下吸収、経皮吸収、経腸吸収、点眼等が挙げられる。抗体であれば、静脈内への単回投与で十分有効な可能性もあるが、抗原性の問題がない限りにおいて、数回投与してもよい。また、本発明の薬剤の投与量は、治療効果を奏し得る限り特に制限は無いが、通常成人あたり０．１μｇ／ｋｇ〜１０００ｍｇ／ｋｇの範囲で投与すればよい。特に好ましくは１０μｇ／ｋｇ〜３０ｍｇ／ｋｇの範囲である。
本発明において、血小板減少症としては肝硬変、ウイルス性・薬剤性・自己免疫性若しくはアルコール性の肝炎、劇症肝炎といった肝不全に起因する血小板減少症、２Ｂ型又は血小板型フォンビルブランド病等の血管内腔で生じる血栓形成の亢進に伴う血小板減少症、並びにウイルス性肝炎治療用インターフェロン投与に起因する血小板減少症が挙げられる。
本発明の薬剤が適用される血小板減少症を引き起こすウイルス性肝炎治療用インターフェロンとしては天然型のインターフェロンαであるＮＡＭＡＬＷＡおよびＢＡＬＬ−１、インターフェロンβ、インターフェロンγ−ｎ１等が知られている。また、遺伝子組換え型のインターフェロンα−２ａ、α−２ｂおよびインターフェロンアルファコン−１、およびインターフェロンγ−１ａ等も知られている。ここにウイルス性肝炎とは、Ｂ型慢性活動性肝炎、Ｃ型慢性活動性肝炎等が挙げられるが、その他のウイルスに起因する肝炎であってインターフェロン治療の適用のあるもののすべてが含まれる。
【実施例】  以下実施例を挙げて、本発明の効果を詳細に説明する。ただし本発明は以下の実施例に限定されるものではない。以下の実施例１では、グリコプロテインＩｂとフォンビルブランド因子の結合阻害剤として、ハイブリドーマＡＪｖＷ−２が産生する抗フォンビルブランド因子モノクローナル抗体のヒト化抗体ＡＪＷ２００を用い、グリコプロテインＩｂとフォンビルブランド因子の結合を阻害する物質が血中遊離血小板数を増加させる有効な血小板減少症治療剤であることを具体的に説明する。同ヒト化抗体及びその製造方法は、ＷＯ  ００／１０６０１号国際公開パンフレットに詳細に開示されている。
実施例１  ラット肝障害モデルにおける薬効評価（１）
雄性ＳＤラットにＮ−ニトロソジメチルアミン（ＤＭＮ）を１０ｍｇ／ｋｇの用量で、週３回、３週間腹腔内投与し、ラット肝障害モデルを作成した。３週目に０．１ｍｇ／ｋｇのＡＪＷ２００を１日１回、７日間、尾静脈より単回投与した。病態コントロール群にはＡＪＷ２００の溶媒であるＰＢＳを同様に投与した。群構成を以下に示す。
１．正常コントロール群（ｎ＝１０）
２．病態コントロール群（ｎ＝８）
３．ＡＪＷ２００投与群（ｎ＝８）
最終投与から１日後に採血を行い、血液学的パラメーターを測定した。
結果を図１に示す。病態コントロール群では正常コントロール群に比べ、血小板数が有意に減少していた。これに対し、ＡＪＷ２００投与群では（７日間投与）、病態コントロール群と比べ血小板数が有意に増加していた（図１）。
実施例２  ラット肝障害モデルにおける薬効評価（２）
雄性ＳＤラットにＮ−ニトロソジメチルアミン（ＤＭＮ）を１０ｍｇ／ｋｇの用量で、週３回、３週間腹腔内投与し、ラット肝障害モデルを作成する。３週目に０．１〜１０００μｇ／ｋｇのグリコプロテインＩｂ部分ペプチド、好ましくは１〜１００μｇ／ｋｇのグリコプロテインＩｂ部分ペプチドを１日１回、７日間、尾静脈より単回投与する。病態コントロール群にはグリコプロテインＩｂ部分ペプチドの溶媒を同様に投与する。最終投与から１日後に採血を行い、血液学的パラメーターを測定する。この方法により、グリコプロテインＩｂ部分ペプチドによる血小板数の有意な増加を確認することが出来る。
以上の実験結果により、ＧＰＩｂとｖＷＦとの結合を阻害する物質には肝障害モデルにおいて、ＧＰＩｂとｖＷＦとの結合阻害作用により、血小板減少に対する治療効果を有することが示された。またこの結果により、ＧＰＩｂとｖＷＦとの結合を阻害する物質には、同様の発症メカニズム、即ちＧＰＩｂとｖＷＦとの結合亢進を経て血小板減少を発症すると考えられる２Ｂ型及び血小板型フォンビルブランド病に対する治療効果も有する可能性が示唆された。
【産業上の利用の可能性】
モノクローナル抗体ＡＪＷ２００で代表されるＧＰＩｂとｖＷＦとの結合を阻害する作用を有する物質は、肝硬変、ウイルス性、薬剤性、自己免疫性、若しくはアルコール性肝炎、又は劇症肝炎等の肝不全に起因する血小板減少症の改善効果を有し、更には２Ｂ型又は血小板型フォンビルブランド病の治療においても有効である。また、かかる優れた血小板減少症の改善効果はウイルス性肝炎治療用インターフェロン投与に起因する血小板減少症に対しても有効である。
本出願は、日本で出願された特願２００２−２１９１７３号を基礎としており、その内容を本明細書中に全て包含する。
【図１】
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【国際調査報告】
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