(57)【要約】癌の誘発または癌の転移を予防する食品素材を提供する。癌の誘発または癌の転移を予防する成分を含むカワリハラタケ抽出物。前記成分は、カワリハラタケの子実体を熱水抽出する工程、得られる抽出液を透析処理する工程、および得られる透析外液をクロマトグラフィー処理する工程によって得られる、分子量１００〜２０００のクロマトグラフィー主溶出画分であり得る。あるいは、前記成分は、カワリハラタケの子実体を熱水抽出する工程、得られる抽出液にエタノールを添加して沈殿を得る工程、および該沈殿を水に溶解して透析処理する工程によって得られる透析外液であり得る。【特許請求の範囲】
【請求項１】
癌の誘発または癌の転移を予防する成分を含む、カワリハラタケ抽出物。
【請求項２】
溶媒抽出して調製される、請求項１に記載の抽出物。
【請求項３】
熱水抽出して調製される、請求項２に記載の抽出物。
【請求項４】
前記成分が、カワリハラタケの子実体を熱水抽出する工程、得られる抽出液を透析処理する工程、および得られる透析外液をクロマトグラフィー処理する工程によって得られる、分子量１００〜２０００のクロマトグラフィー主溶出画分である、請求項１に記載の抽出物。
【請求項５】
前記成分が、カワリハラタケの子実体を熱水抽出する工程、得られる抽出液にエタノールを添加して沈殿を得る工程、および該沈殿を水に溶解して透析処理する工程によって得られる透析外液である、請求項１に記載の抽出物。
【請求項６】
前記癌が、ウレタン、（４−Ｎ−メチル−Ｎ−ニトロソアミノ）−１−（３−ピリジル）−１−ブタノンまたはアゾキシメタンで誘発される、請求項１に記載の抽出物。
【請求項７】
前記癌が、肺癌である、請求項１に記載の抽出物。
【請求項８】
前記癌が、大腸癌である、請求項１に記載の抽出物。
【請求項９】
癌の誘発または癌の転移を予防する組成物であって、カワリハラタケ抽出物および薬学的に受容可能なキャリアを含む、組成物。
【請求項１０】
粉末、液体、錠剤、カプセル、およびペレットからなる群から選択される形態の、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
癌の誘発または癌の転移を予防する組成物の調製のためのカワリハラタケの抽出物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】  本発明は、癌の誘発または癌の転移を予防する成分を含むカワリハラタケの抽出物に関する。より詳細には、本発明は、発酵食品およびアルコール飲料中に存在するウレタン（ＥＣ（エチルカルバメート））、タバコ煙中に存在する発癌性物質ＮＮＫ［｛（４−Ｎ−メチル−Ｎニトロソアミノ）−１−（３−ピリジル）−１−ブタノン｝］もしくはＡＯＭ（アゾキシメタン）による癌の誘発、またはウレタン、ＮＮＫもしくはＡＯＭにより誘発された癌の転移を予防するカワリハラタケ抽出物に関する。
【背景技術】  ウレタンおよびＮＮＫは、種々の癌を誘発することが知られている。
ウレタンは、マウスにおいて、用量依存様式で、肺癌および肝癌を誘発し、ウレタンのヒトにおける安全用量（ｖｉｒｔｕａｌｌｙｓａｆｅｄｏｓｅ、ＶＳＤ）は、肺癌について１．８×１０−４ｍｇ／ｋｇ体重、肝癌について７．２×１０−５ｍｇ／ｋｇ体重であると計算されている（Ｋ．Ｉｎａｉら、Ｊｐｎ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．８２、３８０〜３８５頁、１９９１年４月）。
妊娠および催乳の間にウレタンで処理したマウスの子孫は、胎盤伝達によって有意に増加した胎仔癌、肺癌、および卵巣嚢胞腺腫を発症し、そして親の妊娠マウスにおいても、子宮内膜仮形成および子宮血管腫を発生させた（Ｔ．Ｎｏｍｕｒａ、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、３３、１６７７−１６８３頁、１９７３、７月）。
経口投与されたウレタンは、マウスにおいて、肺癌、リンパ腫、肝癌、胃乳頭腫、脂腺腺腫、乳房腫瘍、肺腺腫症、偏平上皮細胞腫瘍、白血病、間葉腫など誘発する（ＩＡＲＣ  ＭＯＮＯＧＲＡＰＨＳ  ＯＮ  ＴＨＥ  ＥＶＡＬＵＡＴＩＯＮ  ＯＦ  ＴＨＥ  ＣＡＲＳＩＮＯＧＥＮＩＣ  ＲＩＳＣ  ＲＩＳＫ  ＯＦ  ＣＨＥＭＩＣＡＬＳ  ＴＯ  ＭＡＮ、第７巻、１１１〜１３１頁、ｔｈｅ  ｖｉｅｗｓ  ｏｆ  ｔｗｏ  ＩＡＲＣ  Ｗｏｒｋｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｏｎ  ｔｈｅ  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｉｃ  Ｒｉｓｋｓ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ  ｔｏ  Ｍａｎ  ｗｈｉｃｈ  ｍｅｔ  ｉｎ  Ｌｙｏｎ、１９７４年２月４日〜１１日、および１９７４年６月１８日〜２４日）。
また、ウレタンは、アルコール発酵で生成され、ワインなどの醸造製品に所定レベルで含まれていることから、カナダでは規制対象となっている（Ｅｔｈｙｌ  Ｃａｒｂａｍａｔｅ  ｉｎ  Ａｌｃｏｈｏｌｉｃ  Ｂｅｖｅｒａｇｅｓ  ａｎｄ  Ｆｅｒｍｅｎｔｅｄ  Ｆｏｏｄｓ、ＡＣＳ  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  Ｓｅｒｉｅｓ  Ｎｏ．４８４、Ｆｏｏｄ  Ｓａｆｅｔｙ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ、Ｊｏｈｎ  Ｗ．Ｆｉｎｌｅｙら編、４１９〜４２８頁、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ、１９９２年；Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｖｏｌａｔｉｌｅ  Ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓ  ｆｒｏｍ  Ｇｒａｐｅｓ、Ｊ．Ａｇｒｉｃ．Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍ．、第２４巻、第２号、３２９〜３３１頁、１９７６年；ＲＡＴＩＯＮＡＬＥ  ＦＯＲ  ＴＨＥ  ＥＳＴＡＢＬＩＳＨＭＥＮＴ  ＯＦ  ＧＵＩＤＥＬＩＮＥＳ  ＴＯ  ＬＩＭＩＴ  ＥＴＨＹＬ  ＣＡＲＢＡＭＡＴＥ  ＬＥＶＥＬＳ  ＩＮ  ＡＬＣＯＨＯＬＩＣ  ＢＥＶＥＲＡＧＥＳ、ＢＵＲＥＡＵ  ＯＦ  ＣＨＥＭＩＣＡＬ  ＳＡＦＥＴＹ  ＦＯＯＤ  ＤＩＲＥＣＴＯＲＡＴＥ  ＨＥＡＬＴＨ  ＰＲＯＴＥＣＴＩＯＮ  ＢＲＡＮＣＨ，ＨＥＡＬＴＨ  ＆  ＷＥＬＦＡＲＥ  ＣＡＮＡＤＡ、１〜８頁；Ｅｔｈｙｌｃａｒｂａｍａｔｅ  ｉｎ  Ｆｅｒｍｅｎｔｅｄ  Ｂｅｖｅｒａｇｅｓ  ａｎｄ  Ｆｏｏｄｓ、Ｃｏｒｎｅｌｉｕｓ  Ｓ．Ｏｕｇｈ、Ｊ．Ａｇｒｉｃ．Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍ．、第２４巻、第２号、３２３〜３２７頁）。
ＮＮＫは、タバコ煙に含まれる潜在的発癌物質の１つである（Ｄｊｏｒｄｉｊｅｖｉｃ，Ｍ．Ｖ．ら、Ａ  Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｏｆ  ｓｅｌｅｃｔｅｄ  ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｍａｉｎｓｔｒｅａｍ  ｓｍｏｋｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｌｅａｄｉｎｇ  Ｕ．Ｓ．ａｎｄ  Ｊａｐａｎｅｓｅ  ｃｉｇａｒｅｔｔｅｓ．Ｉｎ：Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＣＯＲＥＳＴＡ  ｓｍｏｋｅ  ａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｍｅｅｔｉｎｇ、２００〜２１７頁、１９９６年、１１月３日〜８日）。男性女性を問わず肺癌の発症率は有意に増加している。
肺癌の発症は喫煙およびアルコール摂取と高度に相関している。国際癌研究所（Ｔｈｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ａｇｅｎｃｙ  ｆｏｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ｏｎ  Ｃａｎｃｅｒ）は、ヒトにおける喫煙量とアルコール摂取量とが相乗的に増加する傾向にあること、そして喫煙およびアルコール摂取によって取り込まれたＮＮＫおよびウレタンが、肺癌発症の原因であることを示唆している。
肺癌は、男性の癌による死亡原因の４５％、女性の癌による死亡原因の２１．５％を占め、今や、肺癌は心疾患に代わり、アメリカにおける喫煙者の死亡の第１の原因となりつつある。
従って、喫煙またはアルコール摂取による癌の誘発を予防する食餌成分が求められている。
一般に、カワリハラタケと呼ばれるものは、学名を「カワリハラタケ・ブラゼイ・ムリル  Ａｇａｒｉｃｕｓ  ｂｌａｚｅｉ  Ｍｕｒｉｌｌ」和名を「カワリハラタケ」という担子菌類ハラタケ科に属するきのこである。カワリハラタケ（以後、本明細書では、一般に、カワリハラタケ、またはＡＢＭ、またはアガリクスと称する）は、ブラジルのサンパウロ州に位置するＰｉｅｄａｄｅ地方で伝統的に医薬として用いられている。カワリハラタケは、種々の免疫賦活活性、発癌予防効果、腫瘍増殖抑制効果をもつといわれ、現在、健康食品として幅広く内服されている。
カワリハラタケに含まれる多糖類は、β−１，６−グルコピラノシル残基を含み、ザルコーマ１８０に対して抗腫瘍活性を有する（Ｅｂｉｎａ  Ｔら（１９８６）、Ｊｐｎ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ７７：１０３４−１０４２）。
カワリハラタケ抽出物は、（１→６）−β分岐をもつ（１→４）−α−Ｄ−グルカンを含み、ナチュラルキラー細胞活性化およびアポトーシスを経由して媒介される選択的抗腫瘍活性を有する（Ｆｕｊｉｍｉｙａ  Ｙら（１９９８）、Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ  ４６：１４７−１５９）。
カワリハラタケに含まれるペプチドグリカンは、二重移植腫瘍系において、Ｍｅｔｈ  Ａ腫瘍細胞に対して直接的な細胞傷害性作用を有し、そして腫瘍をもつマウスに対して間接的な免疫増強作用を有する（Ｅｂｉｎａ  Ｔら（１９９８）、Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ  １１：２５９−２６５）。
カワリハラタケに含まれる多糖類は、マウスにおけるＴ細胞サブセットにおける脾臓Ｔｈｙ１，２−、Ｌ３Ｔ４陽性細胞の割合を変えた（Ｍｉｚｕｎｏ  Ｍら（１９９８）、Ｂｉｏｓｃｉ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６２：４３４−４３７）。
これらの報告は、カワリハラタケに含まれる多糖類が、免疫調節活性を通じて腫瘍細胞に対する細胞傷害性作用を有することを示唆している。
このように、カワリハラタケ抽出物の免疫増強活性および抗腫瘍活性に関する多くの報告があるが、これらはいずれも、インビトロで行われた試験または癌に罹患した動物を対象にカワリハラタケ抽出物の影響を試験しているものであって、喫煙または飲酒のような生活習慣が主な原因となって引き起こされる、肺癌、大腸癌などの癌が誘発される過程または癌の転移の過程に及ぼす影響を検討したものではない。本発明者が知る限り、癌が誘発される過程または癌の転移の過程に影響する食餌成分は報告されていない。これは、癌が誘発される過程または癌の転移の過程を評価する信頼性のあるアッセイ系がないためであると考えられる。
【発明の開示】
癌の誘発または癌の転移を潜在的に予防する、薬品素材および食品素材を提供する。
本発明は、癌の誘発（発症）と誘発された癌のその後の癌の転移を予防するカワリハラタケ抽出物およびそれに含まれる食餌成分に関する。本発明者らは、カワリハラタケ抽出物およびそれに含まれる食餌成分が、発癌物質ウレタンまたはＮＮＫを投与することによって肺癌が誘発される過程にあるＡ／Ｊマウスにおいて異常発現する遺伝子または遺伝子産物を顕著に抑制すること、および発癌物質ＡＯＭを投与することによって大腸癌が誘発される過程にあるラットにおいて異常陰窩病巣（ａｂｅｒｒａｎｔ  ｃｒｙｐｔ  ｆｏｃｉ（ＡＣＦ）の形成を顕著に抑制することを見出し、本発明を完成するに至った。
特定の理論に拘束されることは望まないが、カワリハラタケ抽出物には、発癌物質の活性化を阻止するか、発癌物質の代謝により生産される潜在的フリーラジカルを除去するか、発癌物質中のフリーラジカル生産体を除去するか、または発癌遺伝子の発現を抑制するのに有効な成分（単数または複数）が含まれることにより、あるいはそれら成分の相乗的作用により、カワリハラタケ抽出物が癌の誘発とその後の癌の転移を予防すると考えられる。
本発明は、癌の誘発および癌の転移を予防する成分を含む、カワリハラタケ抽出物を提供する。本発明の１つの局面において、上記抽出物は、カワリハラタケを溶媒抽出して調製される。
本明細書で用いる用語「カワリハラタケ」は、一般に、学名を「カワリハラタケ・ブラゼイ・ムリル  Ａｇａｒｉｃｕｓ  ｂｌａｚｅｉ  Ｍｕｒｉｌｌ」和名を「カワリハラタケ」という担子菌類ハラタケ科に属するきのこの子実体、菌糸体、培養液などを含むカワリハラタケ原料を意味する。代表的には、用語「カワリハラタケ」は、カワリハラタケの子実体を意味する。なお、以後、本明細書では、「カワリハラタケ」、「ＡＢＭ」、および「アガリクス」は、交換可能に用いられ、同じカワリハラタケ原料を意味する用語として用いられる。
好ましくは、上記抽出物は、カワリハラタケを熱水抽出して調製される。
好ましくは、上記成分は、カワリハラタケを熱水抽出する工程、得られる抽出液を透析処理する工程、および得られる透析外液をクロマトグラフィー処理する工程によって得られる、分子量１００〜２０００のクロマトグラフィー主溶出画分である。
好ましくは、上記成分は、カワリハラタケの子実体を熱水抽出する工程、得られる抽出液にエタノールを添加して沈殿を得る工程、および該沈殿を水に溶解して透析処理する工程によって得られる透析外液である。
上記癌は、ウレタン、（４−Ｎ−メチル−Ｎ−ニトロソアミノ）−１−（３−ピリジル）−１−ブタノンまたはアゾキシメタンで誘発される癌であり得る。代表的には、上記癌は肺癌または大腸癌であり得る。
本発明はまた、癌の誘発または癌の転移を予防する組成物に関し、この組成物は、上記カワリハラタケ抽出物および薬学的に受容可能なキャリアを含む。
この組成物は、粉末、液体、錠剤、カプセル、およびペレットからなる群から選択される形態であり得る。
【図面の簡単な説明】  図１は、本発明のカワリハラタケ抽出物が、ＮＮＫによる肺癌の誘発を予防することを示す図である。
図２は、本発明のカワリハラタケ抽出物が、ＮＮＫによる肺癌の誘発を用量依存的に予防することを示す図である。
図３は、本発明のカワリハラタケ抽出物が、ＮＮＫの投与で誘導される遺伝子または遺伝子産物を抑制することを示す図である。
図４は、本発明のカワリハラタケ抽出物が、ＮＮＫの投与で誘導される遺伝子または遺伝子産物を用量依存的に抑制することを示す図である。
図５は、本発明のカワリハラタケ抽出物が、ウレタンによる肺癌の誘発を予防することを示す図である。
図６は、本発明のカワリハラタケ抽出物が、ウレタンの投与で誘導される遺伝子または遺伝子産物を抑制することを示す図である。
図７は、本発明のカワリハラタケ抽出物が、ＡＯＭによる大腸癌の誘発を予防することを示す図である。
【発明を実施するための最良の形態】  本発明のカワリハラタケ抽出物は、カワリハラタケ原料を、溶媒抽出して調製される。カワリハラタケ原料は、代表的には、天然または栽培されたカワリハラタケの子実体である。培養タンクなどで培養されたカワリハラタケの菌糸体を用いてもよい。通常、カワリハラタケは、洗浄された後、乾燥して用いられる。市販されている子実体の乾燥物もまた便利に利用できる。通常、乾燥されたカワリハラタケは定法に従って粉末とされ、抽出原料として用いられる。
本発明のカワリハラタケ抽出物は、上記子実体の乾燥物またはその粉末に種々の溶媒を添加して抽出操作を行うことによって得られ得る。一般に、上記溶媒は、上記乾燥子実体またはその粉末の重量に対して２〜１０倍の重量で添加されて抽出操作が行われる。上記溶媒としては、水、エタノール、プロパノール、ブタノール、アセトン、１，３−ブチレングリコール、酢酸エチル、ヘキサン、塩化メチレン、メタノールまたはそれらの混合物が用いられる。代表的には、水を用いてカワリハラタケ抽出物を調製する。
カワリハラタケ粉末と上記溶媒のいずれかとの混合物を、０℃〜１００℃の温度、好ましくは室温〜８０℃の温度で、１０分〜数日、好ましくは１〜２４時間の間、マグネティックスターラー（１００〜５００ｒｐｍでの回転数）などを用いて攪拌または振盪して抽出操作が行われる。代表的には、本発明のカワリハラタケ抽出物は、カワリハラタケ粉末に脱イオン水を添加し、７０℃で２４時間連続攪拌することによって得られ得る。得られる溶液から、遠心分離法、濾過などの定法に従って残渣を取り除いた後凍結乾燥する。得られた粉末をカワリハラタケ抽出物とする。
このように調製されたカワリハラタケ抽出物に含まれる、癌の誘発または癌の転移を予防する成分は、当業者に公知のＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）などの手法を利用して得ることができる。得られた成分は、ＮＭＲ法（核磁気共鳴分析法）などの手法を用いてその構造が識別され得る。
以下は、本発明のカワリハラタケ抽出物の製法の一例である。
乾燥子実体に５から１０倍の重量の水を加え、１〜３時間加熱抽出または加熱還流する。このカワリハラタケの熱水抽出は、必要に応じて、熱水抽出残渣についても繰り返して行われる。このようにして得られる熱水抽出液は、凍結乾燥、スプレードライなど、当業者に公知の方法によって乾燥物（以下乾燥物Ａという）とする。乾燥物Ａを、５〜２０倍の容量の水に懸濁または溶解した後、これを、透析チューブに入れ、数倍の容量の蒸留水に対して１０〜１５時間透析する。得られる透析外液を凍結乾燥して、癌の誘発または癌の転移を予防する成分を含む、乾燥物（以下乾燥物Ｃという）を得る。
次に、透析内液についても、さらに流水中で２０〜４０時間透析し、そして蒸留水で２回各数時間透析した後に得られる透析内液を、上記と同様に乾燥物とすることによっても、癌の誘発または癌の転移を予防する成分を含む、カワリハラタケの熱水抽出物の乾燥物（以下乾燥物Ｂという）が得られる。
次に、得られた上記乾燥物Ｃを、約１０倍重量の蒸留水に溶解し、蒸留水を流出溶媒としてゲル濾過クロマトグラフィーを行い、２０ｍＬずつ分取し、多くの画分を得る。得られた画分の中程の主溶出画分で、ゲル濾過法によって分子量１００〜２０００の画分が、本発明の癌の誘発または癌の転移を予防する成分である。
これらの画分は、さらにＯＤＳ（オクタデシルシラン化シリカゲル）を用いる逆相クロマトグラフィー、ＤＥＡＥ−ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ６５０を用いるイオン交換クロマトグラフィーなどを用いて分析すると、アルギニン、リジン、マンニトールの他、数種の成分を含んでいることが確認されている。
また、上記の方法で得られる熱水抽出液に等量のエタノールを加えて混合し、遠心分離処理して沈殿と上澄液に分け、得られる上澄液にさらにその１〜３倍容量のエタノールを加えて混合し、さらに遠心分離処理して得られる沈殿を蒸留水に溶解し、得られる溶液を透析処理して得られる透析外液もまた、本発明の、癌の誘発または癌の転移を予防する成分である。
上記のように調製されたカワリハラタケ抽出物またはそれに含まれる癌の誘発または癌の転移を予防する成分は、そのまま、あるいは種々のキャリアとともに医薬製剤の製造に用いることができる。
上記のように調製されたカワリハラタケ抽出物またはそれに含まれる癌の誘発または癌の転移を予防する成分は、代表的には、生体適合性の薬学的キャリア（例えば、生理食塩水、緩衝化生理食塩水、デキストロース、および水など）とともに経口的に摂取され得る組成物として処方され得る。
上記薬学的に受容可能なキャリアは、当業者に公知であって、例えば、以下のものが挙げられる：リンゲル溶液、ハンクス溶液、または緩衝化生理食塩水などの緩衝液；ゴマ油などの脂肪酸、オレイン酸エチルまたはトリグリセリドなどの合成脂肪酸エステル；ラクトース、スクロース、マンニトール、ソルビトールなどの糖類；トウモロコシ、コムギ、イネ、ジャガイモなどの植物由来デンプン；メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウムなどのセルロース；アラビアゴム、トラガカントゴムなどのゴム；ゼラチン、コラーゲンなどのタンパク質；架橋ポリビニルピロリドン、寒天、アルギン酸またはその塩など。
上記のように調製されたカワリハラタケ抽出物またはそれに含まれる癌の誘発または癌の転移を予防する成分は、単独または他の薬剤もしくは食品素材と組み合わせて摂取され得る。
上記のように調製されたカワリハラタケ抽出物またはそれに含まれる癌の誘発または癌の転移を予防する成分およびそれを含む組成物は、経口的または非経口的に投与され得る。非経口送達は、静脈内、筋肉内、腹腔内、または鼻孔内への投与により達成され得る。本発明の薬学的組成物の処方および投与の詳細は、例えば、当該分野における教科書「ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ’Ｓ  ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ  ＳＣＩＥＮＣＥＳ」（Ｍａａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ）に記載に従って行なわれ得る。
経口投与のためのカワリハラタケ抽出物またはそれに含まれる癌の誘発または癌の転移を予防する成分は、摂取に適した投与形態で当該分野で周知の薬学的に受容可能なキャリアを含む組成物として処方され得る。このようなキャリアは、得られる組成物が、患者による摂取に適した、錠剤、丸剤、糖衣剤、カプセル、液体、ゲル、シロップ、スラリー、懸濁物などに処方されることを可能とする。
本発明の組成物は、カワリハラタケ熱水抽出物またはそれに含まれる癌の誘発または転移を予防する成分を、癌の誘発または転移を予防するに有効な量で含む。当業者は、「癌の誘発または転移を予防するに有効な量」を十分に理解および認識する。「癌の誘発または転移を予防するに有効な量」は、まず、細胞培養によるインビトロアッセイまたは適切な動物モデルによって評価され得る。次に、このような情報を用いて、ヒトにおける摂取に有用な量を決定し得る。「癌の誘発または転移を予防するに有効な量」は、例えば、本明細書に記載される発癌物質ＮＮＫを投与することによって肺癌が誘発されるＡ／Ｊマウスを用いるアッセイ系を用いて決定され得る。
実際に摂取されるカワリハラタケ抽出物の量は、適用される個体の健康状態などに依存し、所望の効果が達成されるように最適化され得る。薬学的または栄養学的に有効な量を決定することは、当業者にとっては慣用的な手順である。
上記のカワリハラタケ抽出物またはそれに含まれる癌の誘発または癌の転移を予防する成分は、その機能を発揮するに十分な量で、選択された１種またはそれ以上の食品素材と混合され得る。選択された１種またはそれ以上の食品素材は、当業者に公知の形態、通常粉末形態で、この免疫賦活活性を有する画分と混合される。そしてこれらは、用途または好みに応じて、液状の食品として供することができる。あるいはハードカプセル、ソフトカプセルなどのカプセル剤、錠剤もしくは丸剤としてか、または粉末状、顆粒状、茶状、ティーバック状もしくは、飴状などの形状に成形され得る。
上記のカワリハラタケ抽出物またはそれに含まれる癌の誘発または癌の転移を予防する成分は、ＮＮＫまたはウレタンによって誘発される肺癌およびその転移を阻止する。本発明は、発酵食品中に存在する発癌性物質、およびタバコ煙中に存在する発癌物質に対する種々の投与剤形におけるカワリハラタケ抽出物治療の研究に基づくものである。本明細書に開示される手法またはプロトコールを指針を参照すれば、その他の発癌物質で誘発される癌に対する上記のカワリハラタケ抽出物またはそれに含まれる癌の誘発または癌の転移を予防する成分の有効性は、容易に実証され得る。
すなわち、上記のカワリハラタケ抽出物またはそれに含まれる癌の誘発または癌の転移を予防する成分の濃度を変えて含有する食餌が、発癌物質を投与されたマウスの肺組織中のサイクリンＤ１遺伝子の発現レベルに与える影響を調べること、肺組織中のＰＣＮＡ（増殖細胞の抗原）の発現レベルに与える影響を調べることで癌の誘発または癌の転移を予防する成分の有効性を容易に実証し得る。
同様に、上記のカワリハラタケ抽出物またはそれに含まれる癌の誘発または癌の転移を予防する成分の濃度を変えて含有する食餌が、発癌物質を投与されたマウスの肺癌発症を阻止するか否かを調べること、発癌物質を投与されたマウスの肺組織中のサイクリンＤ１遺伝子の発現レベルを抑制するか否かを調べること、そして肺組織中のＰＣＮＡ（増殖細胞の抗原）の発現レベルを抑制するか否かを調べることによって、癌の誘発または癌の転移を予防する成分の有効性を容易に実証し得る。
以下、発癌物質としてウレタンおよびＮＮＫを用いた実施例により本発明をより詳細に説明するが、以下の実施例は本発明の例示であり、本発明を制限するものではない。
【実施例】  以下、本願発明を、実施例を挙げて説明する。
（実施例１）カワリハラタケ抽出物の調製
（１）カワリハラタケの熱水抽出物として上記の乾燥物Ａを用いた。これは、カワリハラタケの乾燥子実体（協和アガリクス茸）を沸騰水で抽出し、１８００×ｇで１０分間遠心分離して残渣を取り除き、そして凍結乾燥したものである。これを、３．７ｍｇ／ｍｌの濃度で精製水に溶解したものを試料Ｉ、そして８ｍｇ／ｍｌの精製水に溶解したものを試料ＩＩとした。
（２）３００ｇの協和アガリクス茸に蒸留水２Ｌを加え、２時間加熱還流を行った。得られた液を濾過して濾液（熱水抽出液）と残査とに分けた。残査には再び蒸留水２Ｌを加え、さらに２時間加熱還流して熱水抽出を行い濾液を得た。さらに残った残査についてもう一度同様の熱水抽出を行った。得られた濾液を合わせて凍結乾燥し、乾燥物Ａ（１５３ｇ：抽出率５１％）を得た。
５０ｇの乾燥物Ａに５００ｍＬの蒸留水を加え、透析チューブ（Ｓｐｅｃｔｒａ／Ｐｏｒ  Ｍｅｍｂｒａｎｅ  ５０×３１、８ｍｍ内径×３０ｃｍ長さ、ＦＥ−０５２６−６５）に入れた。これを３Ｌの蒸留水に対して１２時間透析した。得られた透析外液を凍結乾燥して乾燥物Ｃ（２７ｇ：抽出率５３％）を得た。透析内液についてはさらに流水中で３０時間透析し、その後蒸留水で２回（各４時間、合計８時間）透析した後、透析内液を凍結乾燥し、乾燥物Ｂ（１１ｇ：抽出率２２％）を得た。続いて、３ｇの乾燥物Ｃを３０ｍＬの蒸留水に溶かし、ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ  ＨＷ４０Ｃ（４０ｍｍ内径×４２０ｍｍ長さ）を用いるクロマトグラフィーを行った。流出溶媒はすべて蒸留水を用いた。各フラクションについてそれぞれ２０ｍＬずつ分取し、画分１〜３０を得た。それらのフラクションは薄層クロマトグラフィーを参考にして以下の５群に分けた。乾燥重量は次の通りであった。画分１〜１１（７５ｍｇ、２．５％）、画分１２〜１５（９２０ｍｇ、３０．７％）、画分１６〜１７（１５７０ｍｇ、５２．３％）、画分１８〜１９（２７０ｍｇ、９％）、画分２０〜２８（９７ｍｇ、３．２％）。
画分１６（以後、１ＳＹ−１６という）の赤外線吸収スペクトル（ＩＲ）データは以下の通りであった。
画分１６：ＩＲ（ＫＢｒ）３３９０、３３２５、３２８５、２９４０、２９２０、１６４１、１６３４、１６２２、１６１５、１６００、１５９５、１４０５、１３９４、１０８４、１０２０：分子量（ゲル濾過法）１００〜２０００。
（３）上記（２）と同様の熱水抽出を実施して、合わせた濾液（熱水抽出液）６Ｌを得た。この濾液を減圧濃縮して１Ｌとし、これにエタノール１Ｌを加えて混合し、遠心分離して沈殿と上澄液を得た。この上澄液にさらにエタノール３Ｌを加えて混合し、遠心分離して得られる沈殿を蒸留水に溶解し、透析処理した。得られた透析外液を凍結乾燥して粉末を得た（以後、ＡＢＭＫ２２という）。
（実施例２）カワリハラタケ抽出物による、ＮＮＫで誘発される肺癌の予防
５０匹のＡ／Ｊマウス（雄、７週齢）を、実施例１に記載の試料Ｉ、試料ＩＩ、ＡＢＭＫ２２、および１ＳＹ１６をそれぞれ与える群、および対照群の５群に１０匹ずづグルーピングした。各群のマウスに、単回胃管栄養法（ｇａｖａｇｅ）によって、マウス体重１ｋｇあたり４ｍｇのＮＮＫを投与した。ここで、マウスに投与したＮＮＫの量は、ヒトに換算すれば、タバコ１箱を１００年以上吸い続けた量に相当する（Ｄｊｏｒｄｉｊｅｖｉｃ，Ｍ．Ｖ．ら、Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｏｆ  ｓｅｌｅｃｔｅｄ  ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｍａｉｎｓｔｒｅａｍ  ｓｍｏｋｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｌｅａｄｉｎｇ  Ｕ．Ｓ．ａｎｄ  Ｊａｐａｎｅｓｅ  ｃｉｇａｒｅｔｔｅｓ．Ｉｎ：Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＣＯＲＥＳＴＡ  ｓｍｏｋｅ  ａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｍｅｅｔｉｎｇ、２００〜２１７頁、１９９６年、１１月３日〜８日）。
次いで、各群のマウスには、以下に記載のように、カワリハラタケ抽出物を投与した。
対照群：通常の飲用水を自由摂取させた。
試料Ｉ群：試料Ｉを３０％（ｖ／ｖ）含む飲用水を、１６週間の間、自由摂取させた。
試料ＩＩ群：試料ＩＩを６０％（ｖ／ｖ）含む飲用水を、１６週間の間、自由摂取させた。
なお、上記群における各飲用水の平均の摂取量は、約５ｍｌ／匹／日であった。ＡＢＭＫ２２群：ＡＢＭＫ２２を、１００ｍｇ／ｋｇ体重の用量で７日間、胃管栄養法によって投与した。
１ＳＹ１６群：１ＳＹ１６を、１００ｍｇ／ｋｇ体重の用量で７日間、胃管栄養法によって投与した。
各試験群のマウスを、ＮＮＫ投与の１６週後に屠殺して解剖し、肺癌の発生率を剖検顕微鏡により調べた。結果を図１に示す。図１に示すグラフの横軸は各試験群を、縦軸は、肺癌の発生率（対照群の発癌率を１００％としたときの各群のマウスにおける発癌率）を表す。
図１に示されるように、カワリハラタケ抽出物は、対照群と比較して、肺癌の発生率を有意に低下させ（対照群と比較して、試料ＩではＰ＜０．０５、そして試料ＩＩではＰ＜０．０１で有意差あり。図１中＊および＊＊でそれぞれ示される。）、そしてカワリハラタケ抽出物中の成分ＡＢＭＫ２２および１ＳＹ１６は、それぞれ、カワリハラタケ抽出物に比べても肺癌の発生率をさらに低下させた（対照群と比較して、ＡＭＢＫ２２ではＰ＜０．０１、そして１ＳＹ１６ではＰ＜０．００１で有意差あり。図１中＊＊および＊＊＊でそれぞれ示される。）。抑制率（１００−発生率）で表せば、試料Ｉ、試料ＩＩ、ＡＢＭＫ２２および１ＳＹ１６の肺癌の抑制率は、図１に見られるように、それぞれ約３０％、約３５％、約５０％、約８２％であった。
このように、カワリハラタケ抽出物およびそれに含まれる成分の摂取または投与は、ＮＮＫで誘発される癌の発生を抑制することが示された。
（実施例３）カワリハラタケ抽出物による、ＮＮＫで誘発される肺癌の予防
対照群と、上記試料ＩＩを１５％（ｖ／ｖ）、３０％（ｖ／ｖ）および６０％（ｖ／ｖ）濃度でそれぞれ含む飲用水を自由摂取させる３つの試験群とを設け、実施例２と同様にＮＮＫを投与し肺癌を誘発した。実施例２と同様に、各試験群のマウスを、ＮＮＫ投与の１６週後に屠殺して解剖し、肺癌の発生率を剖検顕微鏡により調べた。結果を図２に示す。図２に示すグラフの横軸は各試験群を、縦軸は、肺癌の発生率（対照群の発癌率を１００％としたときの各群のマウスにおける発癌率）を表す。
図２に示されるように、カワリハラタケ抽出物は、対照群と比較して、肺癌の発生率を有意に低下させた（対照群と比較して、試料ＩＩを１５％（ｖ／ｖ）および３０％（ｖ／ｖ）それぞれ含む飲用水を自由摂取させた群ではＰ＜０．０５、そして試料ＩＩを６０％（ｖ／ｖ）含む飲用水を自由摂取させた群ではＰ＜０．０１で有意差あり。図１中＊および＊＊でそれぞれ示される）。
このように、カワリハラタケ抽出物およびそれに含まれる成分の摂取が、ＮＮＫで誘発される癌の発生をほぼ用量依存様式で抑制することが示された。
（実施例４）カワリハラタケ抽出物による、ＮＮＫの投与で誘導される遺伝子または遺伝子産物の抑制
上記試料ＩＩを投与する群を設けなかった点を除いて、実施例２と同様にグルーピングしたＡ／Ｊマウスの各群に、実施例２と同様に上記試料Ｉ、ＡＢＭＫ２２、および１ＳＹ１６を投与した。各群のマウスを、実施例２と同様に、ＮＮＫ投与の１６週後に屠殺して、肺組織におけるサイクリンＤ１の発現、増殖細胞核抗原（ＰＣＮＡ）、およびサイクリン依存性キナーゼ４（ＣＤＫ４）の発現を調べた。サイクリンＤ１、ＰＣＮＡおよびＣＤＫ４は、第９１回癌学会発表論文Ｎｏ．５３１３：Ｉ．Ｐ．Ｌｅｅ、Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｃｙｃｌｉｎ  Ｄ１−ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ  ｂｙ  Ｆｕｍｏｎｉｓｉｎ  Ｂ１  ｉｎ  Ｆｅｍａｌｅ  Ａ／Ｊ  ｍｉｃｅ、２０００年４月１５日、に記載の方法に従って測定した。
一般に、増殖中の細胞は、分裂期（Ｍ期）と間期（Ｇ１期、Ｓ期およびＧ２期）の細胞周期をもつ。ＤＮＡ合成は間期の一部（Ｓ期）で行われる。Ｓ期に倍加した遺伝情報はＭ期に等分配して細胞が複製される。
ＣＤＫ４は、細胞周期の進行をつかさどるタンパク質リン酸化酵素ファミリーのメンバーであって、いわば、細胞周期進行のエンジンである。サイクリンＤ１は、ＣＤＫ４と結合して、Ｇ１期にある細胞をＳ期に向けて進行させる役割をもつ。いわば、サイクリンＤ１は、ＣＤＫ４の調節因子としてアクセルにあたる役割を果たしている。ＰＣＮＡは、Ｓ期を進行させるＤＮＡポリメラーゼδのサブユニットであって、これもまた細胞周期進行のエンジンにあたる。これらのタンパク質の異常発現は、癌の誘発に至り、従って、これらタンパク質をコードする遺伝子は癌遺伝子である。これらの遺伝子産物を分析すれば、癌の発症に至る過程にあるか否かを評価することができる。
図３は、各群のＡ／Ｊマウスの肺組織におけるＰＣＮＡ、サイクリンＤ１およびＣＤＫ４の測定結果を示す図である。図３の右は、各群の肺組織試料を電気泳動したときのＰＣＮＡ、サイクリンＤ１およびＣＤＫ４のバンドを示す。バンドの濃淡が発現レベルの強弱を表している。図３の右に示されるように、対照群では、ＰＣＮＡ、サイクリンＤ１、およびＣＤＫ４のいずれのバンドも濃く、これらタンパク質が高レベルに異常発現し、発癌が誘導されていることを示す。しかし、試料Ｉ、ＡＢＭＫ２２、および１ＳＹ１６を投与した群では、ＰＣＮＡおよびサイクリンＤ１のバンドは薄く、これらタンパク質は異常発現していないことを示している。図３の左は、各群の測定結果を、定量して棒グラフに表したものである。縦軸は、対照群における発現量を１００％としたときの発現量を、そして横軸は、測定したＰＣＮＡ、サイクリンＤ１、およびＣＤＫ４を表し、各測定項目における４つの棒グラフは、左から順に、対照群、試料Ｉ群、ＡＢＭＫ２２群、および１ＳＹ１６群をそれぞれ表す。図示されるように、試料Ｉ群、ＡＢＭＫ２２群、および１ＳＹ１６群におけるＰＣＮＡおよびサイクリンＤ１の発現レベルは、対照群の発現レベルの約１０％以下であった（統計学的に、Ｐ＜０．０１で有意差があった）。
このように、カワリハラタケ抽出物およびそれに含まれる成分の摂取または投与は、ＮＮＫで誘導された発癌遺伝子の発現を抑制することが示された。
（実施例５）カワリハラタケ抽出物による、ＮＮＫの投与で誘導される遺伝子または遺伝子産物の抑制
上記試料ＩＩを、１５、３０および６０％（ｖ／ｖ）でそれぞれ含む飲用水を自由摂取させた群を用いて試験したことを除いて、実施例４と同様に、肺組織におけるサイクリンＤ１の発現、増殖細胞核抗原（ＰＣＮＡ）、およびサイクリン依存性キナーゼ４（ＣＤＫ４）の発現を調べた。
図４は、各群のマウスにおけるＰＣＮＡ、サイクリンＤ１およびＣＤＫ４の測定結果を示す図である。図４の右は、各群の肺組織試料を電気泳動したときのＰＣＮＡ、サイクリンＤ１およびＣＤＫ４のバンドを示す。バンドの濃淡が発現レベルの強弱を表している。図４の右に示されるように、対照群では、ＰＣＮＡ、サイクリンＤ１、およびＣＤＫ４のいずれのバンドも濃く、これらタンパク質が高レベルに異常発現し、発癌が誘導されていることを示す。しかし、試料ＩＩを１５、３０および６０％でそれぞれ含む飲用水を摂取させた群では、試料ＩＩの濃度が高いほど各発現タンパク質のバンドの濃さが薄くなり、試料ＩＩは、濃度依存的に、これらタンパク質の異常発現を抑制したことを示す。図４の左は、各群の測定結果を、定量して棒グラフに表したものである。縦軸は、対照群における発現量を１００％としたときの発現量を、そして横軸は、測定したＰＣＮＡ、サイクリンＤ１、およびＣＤＫ４を表し、各測定項目において４つの棒グラフは、左から順に、対照群、試料ＩＩを１５、３０および６０％含む飲用水を摂取させた群のマウスにおける測定結果をそれぞれ表す。図示されるように、試料ＩＩは、濃度依存的にこれらタンパク質の異常発現を抑制したことを示す（試料ＩＩを１５、３０および６０％含む飲用水を摂取させた群では、サイクリンＤ１およびＰＣＮＡ発現が、対照群のサイクリンＤ１およびＰＣＮＡ発現に比べ、統計学的にＰ＜０．０１で有意差があった）。
このように、カワリハラタケ抽出物およびそれに含まれる成分の摂取または投与は、ＮＮＫで誘導された発癌遺伝子の発現を濃度依存的に抑制することが示された。
（実施例６）カワリハラタケ抽出物による、ウレタンで誘発される肺癌の予防
上記試料Ｉを３０％（ｖ／ｖ）、および上記試料ＩＩを３０％（ｖ／ｖ）含む飲用水をそれぞれ自由摂取させた群、そしてＡＢＭＫ２２を実施例２のように投与した群を設けたこと、そして各群のマウスに、ＮＮＫの代わりに、ヒトのウレタン曝露レベルの約２０，０００倍のウレタン（２５０ｍｇ／ｋｇマウス体重）を、単回胃管栄養法により投与したことを除いて実施例２と同様に試験した。
実施例２と同様に、各試験群のマウスを、ウレタン投与の１６週後に屠殺して解剖し、肺癌の発生率を剖検顕微鏡により調べた。結果を図５に示す。図５に示すグラフの横軸は各試験群を、縦軸は、肺癌の発生率（対照群の発癌率を１００％としたときの各群のマウスにおける発癌率）を表す。
図５に示されるように、カワリハラタケ抽出物は、対照群と比較して、肺癌の発生率を有意に低下させ（対照群と比較して、試料ＩではＰ＜０．０５、そして試料ＩＩではＰ＜０．０１で有意差あり。図５中＊および＊＊でそれぞれ示される。）、そしてカワリハラタケ抽出物中の成分ＡＢＭＫ２２は、カワリハラタケ抽出物に比べても肺癌の発生率をさらに低下させた（対照群と比較してＰ＜０．００１で有意差あり。図５中＊＊＊でそれぞれ示される。）。抑制率（１００−発生率）で表せば、試料Ｉ、試料ＩＩおよびＡＢＭＫ２２の肺癌の抑制率は、図５に見られるように、それぞれ約３０％、約６０％および約８２％であった。
このように、カワリハラタケ抽出物およびそれに含まれる成分の摂取または投与は、ＮＮＫで誘発される癌の発生を抑制することが示された。
（実施例７）カワリハラタケ抽出物による、ウレタンの投与で誘導される遺伝子または遺伝子産物の抑制
上記試料Ｉを３０％（ｖ／ｖ）、および上記試料ＩＩを３０％（ｖ／ｖ）含む飲用水をそれぞれ自由摂取させた群、そしてＡＢＭＫ２２を実施例２のように投与した群を設けたこと、そして各群のマウスに、ＮＮＫの代わりに、ヒトのウレタン曝露レベルの約２０，０００倍のウレタン（２５０ｍｇ／ｋｇマウス体重）を、単回胃管栄養法により投与したことを除いて実施例２と同様に試験した。
実施例４と同様に、各群の肺組織におけるサイクリンＤ１の発現、増殖細胞核抗原（ＰＣＮＡ）、およびサイクリン依存性キナーゼ４（ＣＤＫ４）の発現を調べた。
図６は、各群のＡ／ＪマウスにおけるＰＣＮＡ、サイクリンＤ１およびＣＤＫ４の測定結果を示す図である。図６の右は、各群の肺組織試料を電気泳動したときのＰＣＮＡ、サイクリンＤ１およびＣＤＫ４のバンドを示す。バンドの濃淡が発現レベルの強弱を表している。図６の右に示されるように、対照群では、ＰＣＮＡ、サイクリンＤ１、およびＣＤＫ４のいずれのバンドも濃く、これらタンパク質が高レベルに異常発現し、発癌が誘導されていることを示す。しかし、試料Ｉ、試料ＩＩを含む飲用水を摂取させた群、およびＡＢＭＫ２２を投与した群では、それぞれのバンドは対照群に比べ相対的に薄く、これら遺伝子の異常発現が抑制されたことを示す。図６の左は、各群の測定結果を、定量して棒グラフに表したものである。縦軸は、対照群における発現量を１００％としたときの発現量を、そして横軸は、測定したＰＣＮＡ、サイクリンＤ１、およびＣＤＫ４を表し、各測定項目において４つの棒グラフは、左から順に、対照群、試料ＩＩ投与群、試料Ｉ投与群、およびＡＢＭＫ２２投与群のマウスにおける測定結果をそれぞれ表す。図示されるように、特にＡＢＭＫ２２が、これら遺伝子の異常発現を抑制することが示された（統計学的にＰ＜０．０５で有意差があった）。
このように、カワリハラタケ抽出物の摂取または投与は、ウレタンで誘導された発癌遺伝子の発現を抑制することが示唆された。
（実施例８）カワリハラタケ抽出物による、ＡＯＭで誘導されるラット結腸癌の予防
アゾキシメタン（ＡＯＭ）は、大腸癌を誘発し、異常陰窩病巣（ａｂｅｒｒａｎｔ  ｃｒｙｐｔ  ｆｏｃｉ（ＡＣＦ））を形成する発癌物質であることが知られている（Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ  ２１（６）：１１４９−１１５５、２０００）。マウスおよびラットのＡＯＭで誘導された結腸癌では、βカテニン遺伝子がしばしば変異している（Ｔａｋａｈａｓｈｉ  Ｍ．ら、Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ、２１：１１１７−１１２０、２０００）。形成異常ＡＣＦでは、βカテニンの改変された細胞局在化および誘導型一酸化窒素シンターゼ（ｉＮＯＳ）の増加した発現の両方が検出されたが、過形成ＡＣＦではそうではなかった（Ｔａｋａｈａｓｈｉ  Ｍ．ら、Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ、２１：１３１９−１３２７、２０００）。従って、マウスまたはラットにおいてＡＯＭで誘導されるＡＣＦは、癌が誘発される過程または癌の転移の過程を評価するアッセイ系として用いることができる。
ＡＯＭで誘導されるＡＣＦをアッセイ系として用い、カワリハラタケ抽出物に含まれる成分が癌の誘発を予防するか否かを評価した。
３０匹のラット（雌、８−９週齢）を、実施例２と同様に、１ＳＹ１６を与える群（１２０ｍｇ／ｋｇ体重および６０ｍｇ／ｋｇ体重）、および対照群の３群に１０匹ずつグルーピングした。各群のラットに、ラット体重１ｋｇあたり１５ｍｇのＡＯＭを１週間の間に２回皮下投与した。
次いで、各群のラットには、以下の記載のように、カワリハラタケ抽出物を投与した。１ＳＹ１６は、０．１％カルボキシメチルセルロース溶液に溶解し、体重の０．５％の用量で投与した。投与回数は週２回の頻度で４週間続けて投与した。
１２０  １ＳＹ１６群：１ＳＹ１６を、１２０ｍｇ／ｋｇ体重の用量で、胃管栄養法によって投与した。
６０  １ＳＹ１６群：１ＳＹ１６を、６０ｍｇ／ｋｇ体重の用量で、胃管栄養法によって投与した。
対照群：カルボキシセルロースを、体重の０．５％の用量で、胃管栄養法によって投与した。
各試験群のラットを、ＡＯＭ投与の１３週後に屠殺して解剖し、ＡＣＦの個数を剖検顕微鏡により調べた。結果を図７に示す。図７に示すグラフの横軸は各試験群を、縦軸は、一匹あたり発生したＡＣＦの個数の平均値である。
図７に示されるように、１ＳＹ１６は、対照群と比較して、発生したＡＣＦの数を有意に低減した（Ｐ＜０．０５で有意差あり。図７中＊で示される。）。抑制率で表すと、６０ｍｇ／ｋｇ体重および１２０ｍｇ／ｋｇ体重の１ＳＹ１６を投与した群における大腸癌発生は、対照群に比べてそれぞれ７２％および８２．５％抑制されることが確認され、１ＳＹ１６の摂取または投与が、ＡＯＭで誘発される癌の発生を抑制することが示された。
以上のように、カワリハラタケ抽出物またはそれに含まれる成分の摂取または投与は、ＮＮＫおよびウレタンの投与によって増加する遺伝子または遺伝子産物発現を濃度依存的に抑制することから、カワリハラタケ抽出物には、発癌物質によって誘導される発癌状態を抑制する成分（単数または複数）が含まれると考えられる。
【産業上の利用可能性】  癌の誘発または癌の転移を潜在的に予防する、薬品素材および食品素材が提供される。より詳細には、肺を標的にした発癌物質による肺癌の発症、およびその結果として起こる癌転移を予防し得る薬品素材および食品素材が提供される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【国際調査報告】
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