(57)【要約】ｃ−Ｊｕｎ  Ｎ末端キナーゼ３と相互作用する機能を有するＢＭＡＬ１、ＢＰＬ１、ＫＩＡＡ１４９１ｃｏｍｐｌｅｔｅ（配列番号１）、またはＫＩＡＡ０５９６ＣＴ（配列番号２）を見出し、これらおよびこれらに由来するペプチドを利用して、ｃ−Ｊｕｎリン酸化の阻害、ｃ−Ｊｕｎの機能（例えば転写活性化能等）の阻害、アポトーシス抑制（例えば神経細胞等のアポトーシス抑制）、さらに神経変性疾患等（例えばポリグルタミン病やアルツハイマー病等）の防止および／または治療に用いる薬剤および医薬組成物並びにその方法を提供した。
2003086462.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ｃ−Ｊｕｎ  Ｎ末端キナーゼ３と相互作用する機能を有する下記ペプチド群から選ばれる１つまたは２つ以上のペプチドを有効成分として含んでなるｃ−Ｊｕｎのリン酸化阻害剤；
（ｉ）ＢＭＡＬ１、
（ｉｉ）ＢＰＬ１、
（ｉｉｉ）配列表の配列番号１に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｉｖ）配列表の配列番号２に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｖ）配列表の配列番号３に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｖｉ）前記（ｉ）から（ｖ）の何れか１つのペプチドを含むペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｖｉｉ）前記（ｉ）から（ｖ）の何れか１つのペプチドのアミノ酸配列のうち少なくとも５個の連続するアミノ酸残基からなるペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｖｉｉｉ）前記（ｉ）から（ｖ）の何れか１つのペプチドのアミノ酸配列において１個ないし数個のアミノ酸残基の変異を有するペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｉｘ）前記（ｉ）から（ｖ）の何れか１つのペプチドと７０％以上の相同性を有するペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｘ）配列表の配列番号４に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
および
（ｘｉ）配列表の配列番号５に記載のアミノ酸配列からなるペプチド。
【請求項２】
ペプチド群が（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｉｉ）、（ｉｖ）、（ｘ）および（ｘｉ）からなるペプチド群である請求の範囲第１項に記載のｃ−Ｊｕｎのリン酸化阻害剤。
【請求項３】
ｃ−Ｊｕｎ  Ｎ末端キナーゼ３（ＪＮＫ３）と相互作用する機能を有する下記ペプチド群から選ばれる１つまたは２つ以上のペプチドをＪＮＫ３と共存させることを含むｃ−Ｊｕｎのリン酸化阻害方法；
（ｉ）ＢＭＡＬ１、
（ｉｉ）ＢＰＬ１、
（ｉｉｉ）配列表の配列番号１に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｉｖ）配列表の配列番号２に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｖ）配列表の配列番号３に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｖｉ）前記（ｉ）から（ｖ）の何れか１つのペプチドを含むペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｖｉｉ）前記（ｉ）から（ｖ）の何れか１つのペプチドのアミノ酸配列のうち少なくとも５個の連続するアミノ酸残基からなるペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｖｉｉｉ）前記（ｉ）から（ｖ）の何れか１つのペプチドのアミノ酸配列において１個ないし数個のアミノ酸残基の変異を有するペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｉｘ）前記（ｉ）から（ｖ）の何れか１つのペプチドと７０％以上の相同性を有するペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｘ）配列表の配列番号４に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
および
（ｘｉ）配列表の配列番号５に記載のアミノ酸配列からなるペプチド。
【請求項４】
ペプチド群が（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｉｉ）、（ｉｖ）、（ｘ）および（ｘｉ）からなるペプチド群である請求の範囲第３項に記載のｃ−Ｊｕｎのリン酸化阻害方法。
【請求項５】
ｃ−Ｊｕｎ  Ｎ末端キナーゼ３と相互作用する機能を有する下記ペプチド群から選ばれる１つまたは２つ以上のペプチドを有効成分として含んでなるｃ−Ｊｕｎの転写活性化能の阻害剤；
（ｉ）ＢＭＡＬ１、
（ｉｉ）ＢＰＬ１、
（ｉｉｉ）配列表の配列番号１に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｉｖ）配列表の配列番号２に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｖ）配列表の配列番号３に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｖｉ）前記（ｉ）から（ｖ）の何れか１つのペプチドを含むペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｖｉｉ）前記（ｉ）から（ｖ）の何れか１つのペプチドのアミノ酸配列のうち少なくとも５個の連続するアミノ酸残基からなるペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｖｉｉｉ）前記（ｉ）から（ｖ）の何れか１つのペプチドのアミノ酸配列において１個ないし数個のアミノ酸残基の変異を有するペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｉｘ）前記（ｉ）から（ｖ）の何れか１つのペプチドと７０％以上の相同性を有するペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｘ）配列表の配列番号４に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
および
（ｘｉ）配列表の配列番号５に記載のアミノ酸配列からなるペプチド。
【請求項６】
ｃ−Ｊｕｎ  Ｎ末端キナーゼ３（ＪＮＫ３）と相互作用する機能を有する下記ペプチド群から選ばれる１つまたは２つ以上のペプチドとＪＮＫ３とを共存させることを含むｃ−Ｊｕｎの転写活性化能の阻害方法；
（ｉ）ＢＭＡＬ１、
（ｉｉ）ＢＰＬ１、
（ｉｉｉ）配列表の配列番号１に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｉｖ）配列表の配列番号２に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｖ）配列表の配列番号３に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｖｉ）前記（ｉ）から（ｖ）の何れか１つのペプチドを含むペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｖｉｉ）前記（ｉ）から（ｖ）の何れか１つのペプチドのアミノ酸配列のうち少なくとも５個の連続するアミノ酸残基からなるペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｖｉｉｉ）前記（ｉ）から（ｖ）の何れか１つのペプチドのアミノ酸配列において１個ないし数個のアミノ酸残基の変異を有するペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｉｘ）前記（ｉ）から（ｖ）の何れか１つのペプチドと７０％以上の相同性を有するペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｘ）配列表の配列番号４に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
および
（ｘｉ）配列表の配列番号５に記載のアミノ酸配列からなるペプチド。
【請求項７】
請求の範囲第１項または第２項に記載のｃ−Ｊｕｎのリン酸化阻害剤または請求の範囲第５項に記載のｃ−Ｊｕｎの転写活性化能の阻害剤を有効量含んでなる医薬組成物。
【請求項８】
ｃ−Ｊｕｎ  Ｎ末端キナーゼ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化に基づく疾患の防止剤および／または治療剤である請求の範囲第７項に記載の医薬組成物。
【請求項９】
ｃ−Ｊｕｎ  Ｎ末端キナーゼ３（ＪＮＫ３）と相互作用する機能を有する下記ペプチド群から選ばれる１つまたは２つ以上のペプチドを有効量含んでなる、ＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化に基づく疾患の防止剤および／または治療剤である医薬組成物；
（ｉ）ＢＭＡＬ１、
（ｉｉ）ＢＰＬ１、
（ｉｉｉ）配列表の配列番号１に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｉｖ）配列表の配列番号２に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｖ）配列表の配列番号３に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｖｉ）前記（ｉ）から（ｖ）の何れか１つのペプチドを含むペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｖｉｉ）前記（ｉ）から（ｖ）の何れか１つのペプチドのアミノ酸配列のうち少なくとも５個の連続するアミノ酸残基からなるペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｖｉｉｉ）前記（ｉ）から（ｖ）の何れか１つのペプチドのアミノ酸配列において１個ないし数個のアミノ酸残基の変異を有するペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｉｘ）前記（ｉ）から（ｖ）の何れか１つのペプチドと７０％以上の相同性を有するペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｘ）配列表の配列番号４に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
および
（ｘｉ）配列表の配列番号５に記載のアミノ酸配列からなるペプチド。
【請求項１０】
ｃ−Ｊｕｎ  Ｎ末端キナーゼ３（ＪＮＫ３）と相互作用する機能を有する下記ペプチド群から選ばれる何れか１つのペプチドをコードするポリヌクレオチドの１つまたは２つ以上を有効量含んでなる、ＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化に基づく疾患の防止剤および／または治療剤である医薬組成物；
（ｉ）ＢＭＡＬ１、
（ｉｉ）ＢＰＬ１、
（ｉｉｉ）配列表の配列番号１に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｉｖ）配列表の配列番号２に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｖ）配列表の配列番号３に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｖｉ）前記（ｉ）から（ｖ）の何れか１つのペプチドを含むペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｖｉｉ）前記（ｉ）から（ｖ）の何れか１つのペプチドのアミノ酸配列のうち少なくとも５個の連続するアミノ酸残基からなるペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｖｉｉｉ）前記（ｉ）から（ｖ）の何れか１つのペプチドのアミノ酸配列において１個ないし数個のアミノ酸残基の変異を有するペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｉｘ）前記（ｉ）から（ｖ）の何れか１つのペプチドと７０％以上の相同性を有するペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｘ）配列表の配列番号４に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
および
（ｘｉ）配列表の配列番号５に記載のアミノ酸配列からなるペプチド。
【請求項１１】
ｃ−Ｊｕｎ  Ｎ末端キナーゼ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化に基づく疾患が神経変性疾患である請求の範囲第８項から第１０項の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
神経変性疾患が、ポリグルタミン病、ハンチントン病、脊髄小脳失調症、球脊髄性筋萎縮症、歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症、アルツハイマー病、ダウン症、パーキンソン病、Ｌｅｗｙ小体型痴呆症、多系統萎縮症、家族性筋萎縮性側索硬化症、進行性核上性麻痺、皮質基底核変性症、ｐｉｃｋ病、ファミリアル  ブリティッシュ  デメンチア（ｆａｍｉｌｉａｌ  Ｂｒｉｔｉｓｈ  ｄｅｍｅｎｔｉａ）、クロイツフェルト−ヤコブ（Ｃｒｅｕｔｚｆｅｌｄｔ−Ｊａｋｏｂ）病、ゲルストマン−ストランスラー（Ｇｅｒｓｔｍａｎｎ−Ｓｔｒａｎｓｓｌｅｒ）症候群、狂牛病（ウシ海綿状脳症）（ＢＳＥ）、またはニューロセルピン（ｎｅｕｒｏｓｅｒｐｉｎ）封入体を伴う家族性痴呆症である請求の範囲第１１項に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
ｃ−Ｊｕｎ  Ｎ末端キナーゼ３（ＪＮＫ３）と相互作用する機能を有する下記ペプチド群から選ばれる１つまたは２つ以上のペプチドをＪＮＫ３と共存させることを含む、ＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化に基づく疾患の防止方法および／または治療方法；
（ｉ）ＢＭＡＬ１、
（ｉｉ）ＢＰＬ１、
（ｉｉｉ）配列表の配列番号１に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｉｖ）配列表の配列番号２に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｖ）配列表の配列番号３に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｖｉ）前記（ｉ）から（ｖ）の何れか１つのペプチドを含むペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｖｉｉ）前記（ｉ）から（ｖ）の何れか１つのペプチドのアミノ酸配列のうち少なくとも５個の連続するアミノ酸残基からなるペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｖｉｉｉ）前記（ｉ）から（ｖ）の何れか１つのペプチドのアミノ酸配列において１個ないし数個のアミノ酸残基の変異を有するペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｉｘ）前記（ｉ）から（ｖ）の何れか１つのペプチドと７０％以上の相同性を有するペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｘ）配列表の配列番号４に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
および
（ｘｉ）配列表の配列番号５に記載のアミノ酸配列からなるペプチド。
【請求項１４】
ｃ−Ｊｕｎ  Ｎ末端キナーゼ３（ＪＮＫ３）と相互作用する機能を有する下記ペプチド群から選ばれる何れか１つのペプチドをコードするポリヌクレオチドの１つまたは２つ以上を用いて、該ポリヌクレオチドがコードするペプチドを発現させることによりＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害することを含む、ＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化に基づく疾患の防止方法および／または治療方法；
（ｉ）ＢＭＡＬ１、
（ｉｉ）ＢＰＬ１、
（ｉｉｉ）配列表の配列番号１に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｉｖ）配列表の配列番号２に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｖ）配列表の配列番号３に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｖｉ）前記（ｉ）から（ｖ）の何れか１つのペプチドを含むペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｖｉｉ）前記（ｉ）から（ｖ）の何れか１つのペプチドのアミノ酸配列のうち少なくとも５個の連続するアミノ酸残基からなるペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｖｉｉｉ）前記（ｉ）から（ｖ）の何れか１つのペプチドのアミノ酸配列において１個ないし数個のアミノ酸残基の変異を有するペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｉｘ）前記（ｉ）から（ｖ）の何れか１つのペプチドと７０％以上の相同性を有するペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｘ）配列表の配列番号４に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
および
（ｘｉ）配列表の配列番号５に記載のアミノ酸配列からなるペプチド。
【請求項１５】
請求の範囲第７項から第１２項の何れか１項に記載の医薬組成物を使用することを特徴とするｃ−Ｊｕｎ  Ｎ末端キナーゼ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化に基づく疾患の防止方法および／または治療方法。
【請求項１６】
ｃ−Ｊｕｎ  Ｎ末端キナーゼ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化に基づく疾患が神経変性疾患である請求の範囲第１３項から第１５項の何れか１項に記載の疾患の防止方法および／または治療方法。
【請求項１７】
神経変性疾患が、ポリグルタミン病、ハンチントン病、脊髄小脳失調症、球脊髄性筋萎縮症、歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症、アルツハイマー病、ダウン症、パーキンソン病、Ｌｅｗｙ小体型痴呆症、多系統萎縮症、家族性筋萎縮性側索硬化症、進行性核上性麻痺、皮質基底核変性症、ｐｉｃｋ病、ファミリアル  ブリティッシュ  デメンチア（ｆａｍｉｌｉａｌ  Ｂｒｉｔｉｓｈ  ｄｅｍｅｎｔｉａ）、クロイツフェルト−ヤコブ（Ｃｒｅｕｔｚｆｅｌｄｔ−Ｊａｋｏｂ）病、ゲルストマン−ストランスラー（Ｇｅｒｓｔｍａｎｎ−Ｓｔｒａｎｓｓｌｅｒ）症候群、狂牛病（ウシ海綿状脳症）（ＢＳＥ）、またはニューロセルピン（ｎｅｕｒｏｓｅｒｐｉｎ）封入体を伴う家族性痴呆症である前記１６項に記載の疾患の防止方法および／または治療方法。
【請求項１８】
下記ペプチド群から選ばれる何れか１つのペプチド；
（ｉ）配列表の配列番号１に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｉｉ）配列表の配列番号１に記載のアミノ酸配列からなるペプチドを含むペプチド、
（ｉｉｉ）配列表の配列番号１に記載のアミノ酸配列の少なくとも５個の連続するアミノ酸残基からなるペプチド、
および
（ｉｖ）前記（ｉ）から（ｉｉｉ）の何れかのペプチドにおいて１個ないし数個のアミノ酸の変異を有するペプチド。
【請求項１９】
ｃ−Ｊｕｎ  Ｎ末端キナーゼ３と相互作用する機能を有する請求の範囲第１８項に記載のペプチド。
【請求項２０】
請求の範囲第１８項または第１９項に記載のペプチドをコードする塩基配列またはその相補的配列を含むポリヌクレオチド。
【請求項２１】
配列表の配列番号７に記載の塩基配列からなるポリヌクレオチド。
【請求項２２】
請求の範囲第２０または第２１項に記載のポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイゼーションするポリヌクレオチド。
【請求項２３】
請求の範囲第２０項から第２２項の何れか１項に記載のポリヌクレオチドを含有する組換えベクター。
【請求項２４】
組換えベクターが組換え発現ベクターである請求の範囲第２３項に記載の組換えベクター。
【請求項２５】
請求の範囲第２３項または第２４項に記載の組換えベクターを導入されてなる形質転換体。
【請求項２６】
請求の範囲第２４項に記載の組換えベクターを導入されてなる形質転換体を培養する工程を含む請求の範囲第１８項または第１９項に記載のペプチドの製造方法。
【請求項２７】
請求の範囲第１８項または第１９項に記載のペプチドを免疫学的に認識する抗体。
【請求項２８】
請求の範囲第１９項に記載のペプチドとｃ−Ｊｕｎ  Ｎ末端キナーゼ３との相互作用を促進するまたは阻害する化合物の同定方法であって、該ペプチド、該ペプチドをコードするポリヌクレオチド、該ポリヌクレオチドを含有する組換えベクター、該組換ベクターを導入されてなる形質転換体および該ペプチドを免疫学的に認識する抗体から選ばれる少なくとも１つを用いることを特徴とする同定方法。
【請求項２９】
請求の範囲第１９項に記載のペプチドをコードするポリヌクレオチドの発現を促進するまたは阻害する化合物の同定方法であって、該ペプチドをコードするポリヌクレオチド、該ポリヌクレオチドを含有する組換えベクター、該組換ベクターを導入されてなる形質転換体および該ペプチドを免疫学的に認識する抗体から選ばれる少なくとも１つを用いることを特徴とする同定方法。
【請求項３０】
請求の範囲第１９項に記載のペプチド、該ペプチドをコードするポリヌクレオチド、該ポリヌクレオチドを含有する組換えベクター、該組換ベクターを導入されてなる形質転換体および該ペプチドを免疫学的に認識する抗体から選ばれる少なくとも１つを有効量含んでなる医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
技術分野
本発明は、ｃ−Ｊｕｎ  Ｎ末端キナーゼ３（以下、ＪＮＫ３と略称する。）と相互作用する機能を有するペプチドを含んでなるｃ−Ｊｕｎのリン酸化阻害剤、および該ペプチドを用いることを特徴とするｃ−Ｊｕｎのリン酸化阻害方法に関する。また、該ペプチドを含んでなるｃ−Ｊｕｎの転写活性化能の阻害剤および該ペプチドを用いることを特徴とするｃ−Ｊｕｎの転写活性化能の阻害方法に関する。さらに、該ペプチド、該ペプチドをコードするポリヌクレオチド、該ポリヌクレオチドを含有する組換えベクター、該組換えベクターを導入されてなる形質転換体、および該ペプチドに対する抗体に関する。また、該形質転換体を用いる該ペプチドの製造方法、該ペプチドとＪＮＫ３との相互作用を促進するまたは阻害する化合物の同定方法、および該ペプチドをコードするポリヌクレオチドの発現を促進するまたは阻害する化合物の同定方法に関する。さらに、該ペプチド、該ポリヌクレオチド、該ベクター、該形質転換体、該抗体、ｃ−Ｊｕｎのリン酸化阻害剤、またはｃ−Ｊｕｎの転写活性化能の阻害剤を含んでなる医薬組成物、およびこれらを用いることを特徴とするｃ−Ｊｕｎのリン酸化に基づく疾患の防止方法および／または治療方法に関する。
背景技術
ｃ−Ｊｕｎ  Ｎ末端キナーゼ（以下、ＪＮＫと略称する。）はＭＡＰキナーゼスーパーファミリーに属する蛋白質リン酸化酵素である。ＭＡＰキナーゼは細胞増殖や分化を制御する細胞内シグナル経路上で重要な役割を果たす酵素であり、増殖刺激などにより活性化する。しかしながら、ＪＮＫは古典的ＭＡＰキナーゼ（ＥＲＫ）とは異なり、増殖刺激ではほとんど活性化せず、細胞に対するストレス、例えばＤＮＡ損傷、紫外線、熱、高浸透圧、ＥＲストレスおよび活性酸素等、並びに炎症性サイトカイン、例えば腫瘍壊死因子（Ｔｕｍｏｒ  Ｎｅｃｒｏｓｉｓ  Ｆａｃｔｏｒ）やインターロイキン１等により活性化する。
ＪＮＫがストレス応答により活性化されアポトーシスに関与することは、ＪＮＫの活性化が神経成長因子（Ｎｅｒｖｅ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ）除去による神経系細胞株ＰＣ１２細胞の細胞死において観察されたこと等から従来知られていた。近年、ＪＮＫがカスパーゼ（ｃａｓｐａｓｅ）依存的なアポトーシスの調節に作用すること、またカスパーゼ非依存的にＪＮＫ依存的なアポトーシスが起こることが報告されている。さらに、哺乳類において病理的（神経変性疾患）に起こる細胞死の多くが、カスパーゼ非依存的に起こることが明らかになってきた（非特許文献１）。
アポトーシスには転写依存的な細胞死（例えば神経栄養因子除去による交感神経死やＤＮＡ損傷による死）と転写非依存的な細胞死（例えば紫外線照射による死やＦａｓによる死）があり、ＪＮＫは両方への関与が示唆されている。転写依存的な細胞死では、ＪＮＫがｃ−Ｊｕｎのアミノ酸配列中第６３番目および第７３番目のセリン（Ｓ）をリン酸化してｃ−Ｊｕｎを活性化することが認められている。例えば、ｃ−Ｊｕｎのリン酸化部位をアラニン（Ａ）に置換した変異体（Ａ６３、Ａ７３）のノックインマウスでは、カイニン酸投与による神経死が顕著に抑制された（非特許文献２）。ｃ−Ｊｕｎはトランスアクチベーターであり、遺伝子の発現制御部位に結合してその遺伝子の転写を促進する転写活性化能を有する。したがって、ｃ−Ｊｕｎはその下流でなんらかのアポトーシス促進因子、例えばＢｉｍおよびＦａｓＬ等の転写を誘導すると予想されている。
現在、哺乳類には３種類のＪＮＫ遺伝子、すなわちＪＮＫ１遺伝子、ＪＮＫ２遺伝子、およびＪＮＫ３遺伝子が見出されている。このうちＪＮＫ３遺伝子は脳神経系等に特異的に発現しており、低酸素状態等のショック的状況で発現して脳機能に障害を与えることが知られている。また、ＪＮＫ３遺伝子をノックアウトすると、カイニン酸投与による興奮性神経死が抑制されることが報告されている（非特許文献３）。
以下に、本明細書で引用した文献を列記する。
特許文献１：国際公開第ＷＯ０１／６７２９９号公報。
非特許文献１：北中  千史ら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ（２０００）３７：４０８−４１８。
非特許文献２：Ｂｅｈｒｅｎｓ，Ａ．ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ（１９９９）２１：３２６−３２９。
非特許文献３：Ｙａｎｇ，Ｄ．Ｄ．ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ（１９９７）３８９：８６５−８７０。
非特許文献４：Ｋｏｙａｎｏ，Ｓ．ｅｔ  ａｌ．，ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｅｒｓ（１９９９）４５７：３８５−３８８。
非特許文献５：Ｇｅｋａｋｉｓ  Ｎ．ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９９８）２８０：１５６４−１５６９。
非特許文献６：Ｂｕｎｇｅｒ  Ｍ．Ｋ．ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ（２０００）１０３：１００９−１０１７。
非特許文献７：Ｎｉｐｐｏｎ  Ｒｉｎｓｈｏ（１９９６）５４（１）：２５９−２６７。
非特許文献８：サムブルック等編［モレキュラークローニング，ア  ラボラトリーマニュアル  第２版］コールドスプリングハーバーラボラトリー，１９８９。非特許文献９：村松正實編［ラボマニュアル遺伝子工学］丸善株式会社，１９８８。
非特許文献１０：エールリッヒ，Ｈ．Ｅ．編［ＰＣＲテクノロジー，ＤＮＡ増幅の原理と応用］ストックトンプレス，１９８９。
非特許文献１１：Ｕｌｍｅｒ，Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９８３）２１９：６６６−。
非特許文献１２：Ｉｋｅｄａ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ（１９９７）２３３：２５８−２６４０。
非特許文献１３：Ｓｕｚｕｋｉ，ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ（１９９４）８（２）：１２２−１２８。
非特許文献１４：Ｙａｓｕｄａ，Ｓ．ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅｓ  ｔｏ  Ｃｅｌｌｓ（１９９９）４：７３４−７５６。
非特許文献１５：浦  誠司ら、実験医学（２００１）１９：１８３９−１８４４。
非特許文献１６：Ｎａｔｕｒｅ（１９５７）１７９：１６０〜１６１。
発明の開示
かかる現状において本発明は、ＪＮＫ３が関わるシグナル経路を阻害する物質を見出し、該シグナル経路の異常によって引き起こされる疾患、例えば細胞のアポトーシスに基づく疾患、具体的には神経変性疾患等の防止手段および／または治療手段を提供することを目的とした。
上記目的を達成すべく本発明者らは鋭意努力し、ＪＮＫ３と相互作用する蛋白質ＢＭＡＬ１およびＢＰＬ１、並びに配列表の配列番号１、配列番号２または配列番号３に記載のアミノ酸配列からなる蛋白質を見出した。さらにＢＭＡＬ１、および配列番号２に記載のアミノ酸配列からなる蛋白質がＪＮＫ３と結合することを明らかにした。そして、これらが何れもＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害することを実証して本発明を完成した。
すなわち本発明の一態様は、ＪＮＫ３と相互作用する機能を有する下記ペプチド群から選ばれる１つまたは２つ以上のペプチドを有効成分として含んでなるｃ−Ｊｕｎのリン酸化阻害剤に関する；
（ｉ）ＢＭＡＬ１、
（ｉｉ）ＢＰＬ１、
（ｉｉｉ）配列表の配列番号１に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｉｖ）配列表の配列番号２に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｖ）配列表の配列番号３に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｖｉ）前記（ｉ）から（ｖ）の何れか１つのペプチドを含むペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｖｉｉ）前記（ｉ）から（ｖ）の何れか１つのペプチドのアミノ酸配列のうち少なくとも５個の連続するアミノ酸残基からなるペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｖｉｉｉ）前記（ｉ）から（ｖ）の何れか１つのペプチドのアミノ酸配列において１個ないし数個のアミノ酸残基の変異を有するペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｉｘ）前記（ｉ）から（ｖ）の何れか１つのペプチドと７０％以上の相同性を有するペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｘ）配列表の配列番号４に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
および
（ｘｉ）配列表の配列番号５に記載のアミノ酸配列からなるペプチド。
また本発明の一態様は、ペプチド群が（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｉｉ）、（ｉｖ）、（ｘ）および（ｘｉ）からなるペプチド群である前記ｃ−Ｊｕｎのリン酸化阻害剤に関する。
さらに本発明の一態様は、ＪＮＫ３と相互作用する機能を有する前記ペプチド群から選ばれる１つまたは２つ以上のペプチドをＪＮＫ３と共存させることを含むｃ−Ｊｕｎのリン酸化阻害方法に関する。
さらにまた本発明の一態様は、ペプチド群が（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｉｉ）、（ｉｖ）、（ｘ）および（ｘｉ）からなるペプチド群である前記ｃ−Ｊｕｎのリン酸化阻害方法に関する。
また本発明の一態様は、ＪＮＫ３と相互作用する機能を有する前記ペプチド群から選ばれる１つまたは２つ以上のペプチドを有効成分として含んでなるｃ−Ｊｕｎの転写活性化能の阻害剤に関する。
さらに本発明の一態様は、ＪＮＫ３と相互作用する機能を有する前記ペプチド群から選ばれる１つまたは２つ以上のペプチドとＪＮＫ３とを共存させることを含むｃ−Ｊｕｎの転写活性化能の阻害方法に関する。
さらにまた本発明の一態様は、前記ｃ−Ｊｕｎのリン酸化阻害剤または前記ｃ−Ｊｕｎの転写活性化能の阻害剤を有効量含んでなる医薬組成物に関する。
また本発明の一態様は、ＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化に基づく疾患の防止剤および／または治療剤である前記医薬組成物に関する。
さらに本発明の一態様は、ＪＮＫ３と相互作用する機能を有する前記ペプチド群から選ばれる１つまたは２つ以上のペプチドを有効量含んでなる、ＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化に基づく疾患の防止剤および／または治療剤である医薬組成物に関する。
さらにまた本発明の一態様は、ＪＮＫ３と相互作用する機能を有する前記ペプチド群から選ばれる何れか１つのペプチドをコードするポリヌクレオチドの１つまたは２つ以上を有効量含んでなる、ＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化に基づく疾患の防止剤および／または治療剤である医薬組成物に関する。
また本発明の一態様は、ＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化に基づく疾患が神経変性疾患である前記医薬組成物に関する。
さらに本発明の一態様は、神経変性疾患が、ポリグルタミン病、ハンチントン病、脊髄小脳失調症、球脊髄性筋萎縮症、歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症、アルツハイマー病、ダウン症、パーキンソン病、Ｌｅｗｙ小体型痴呆症、多系統萎縮症、家族性筋萎縮性側索硬化症、進行性核上性麻痺、皮質基底核変性症、ｐｉｃｋ病、ファミリアル  ブリティッシュ  デメンチア（ｆａｍｉｌｉａｌ  Ｂｒｉｔｉｓｈ  ｄｅｍｅｎｔｉａ）、クロイツフェルト−ヤコブ（Ｃｒｅｕｔｚｆｅｌｄｔ−Ｊａｋｏｂ）病、ゲルストマン−ストランスラー（Ｇｅｒｓｔｍａｎｎ−Ｓｔｒａｎｓｓｌｅｒ）症候群、狂牛病（ウシ海綿状脳症）（ＢＳＥ）、またはニューロセルピン（ｎｅｕｒｏｓｅｒｐｉｎ）封入体を伴う家族性痴呆症である前記医薬組成物に関する。
さらにまた本発明の一態様は、ＪＮＫ３と相互作用する機能を有する前記ペプチド群から選ばれる１つまたは２つ以上のペプチドをＪＮＫ３と共存させることを含む、ＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化に基づく疾患の防止方法および／または治療方法に関する。
また本発明の一態様は、ＪＮＫ３と相互作用する機能を有する前記ペプチド群から選ばれる何れか１つのペプチドをコードするポリヌクレオチドの１つまたは２つ以上を用いて、該ポリヌクレオチドがコードするペプチドを発現させることによりＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害することを含む、ＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化に基づく疾患の防止方法および／または治療方法に関する。
さらに本発明の一態様は、前記医薬組成物を使用することを特徴とするＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化に基づく疾患の防止方法および／または治療方法に関する。
さらにまた本発明の一態様は、ＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化に基づく疾患が神経変性疾患である前記疾患の防止方法および／または治療方法に関する。
また本発明の一態様は、神経変性疾患が、ポリグルタミン病、ハンチントン病、脊髄小脳失調症、球脊髄性筋萎縮症、歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症、アルツハイマー病、ダウン症、パーキンソン病、Ｌｅｗｙ小体型痴呆症、多系統萎縮症、家族性筋萎縮性側索硬化症、進行性核上性麻痺、皮質基底核変性症、ｐｉｃｋ病、ファミリアル  ブリティッシュ  デメンチア（ｆａｍｉｌｉａｌ  Ｂｒｉｔｉｓｈ  ｄｅｍｅｎｔｉａ）、クロイツフェルト−ヤコブ（Ｃｒｅｕｔｚｆｅｌｄｔ−Ｊａｋｏｂ）病、ゲルストマン−ストランスラー（Ｇｅｒｓｔｍａｎｎ−Ｓｔｒａｎｓｓｌｅｒ）症候群、狂牛病（ウシ海綿状脳症）（ＢＳＥ）、またはニューロセルピン（ｎｅｕｒｏｓｅｒｐｉｎ）封入体を伴う家族性痴呆症である前記疾患の防止方法および／または治療方法に関する。
さらに本発明の一態様は、下記ペプチド群から選ばれる何れか１つのペプチドに関する：
（ｉ）配列表の配列番号１に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｉｉ）配列表の配列番号１に記載のアミノ酸配列からなるペプチドを含むペプチド、
（ｉｉｉ）配列表の配列番号１に記載のアミノ酸配列の少なくとも５個の連続するアミノ酸残基からなるペプチド、
および
（ｉｖ）前記（ｉ）から（ｉｉｉ）の何れかのペプチドにおいて１個ないし数個のアミノ酸の変異を有するペプチド。
さらにまた発明の一態様は、ＪＮＫ３と相互作用する機能を有する前記ペプチドに関する。
また本発明の一態様は、前記ペプチドをコードする塩基配列またはその相補的配列を含むポリヌクレオチドに関する。
さらに本発明の一態様は、配列表の配列番号７に記載の塩基配列からなるポリヌクレオチドに関する。
さらにまた本発明の一態様は、前記ポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイゼーションするポリヌクレオチドに関する。
また本発明の一態様は、前記ポリヌクレオチドを含有する組換えベクターに関する。
さらに本発明の一態様は、組換えベクターが組換え発現ベクターである前記組換えベクターに関する。
さらにまた本発明の一態様は、前記組換えベクターを導入されてなる形質転換体に関する。
また本発明の一態様は、前記組換えベクターを導入されてなる形質転換体を培養する工程を含む前記ペプチドの製造方法に関する。
さらに本発明の一態様は、前記ペプチドを免疫学的に認識する抗体に関する。
さらにまた本発明の一態様は、前記ペプチドとＪＮＫ３との相互作用を促進するまたは阻害する化合物の同定方法であって、該ペプチド、該ペプチドをコードするポリヌクレオチド、該ポリヌクレオチドを含有する組換えベクター、該組換ベクターを導入されてなる形質転換体および該ペプチドを免疫学的に認識する抗体から選ばれる少なくとも１つを用いることを特徴とする同定方法に関する。
また本発明の一態様は、前記ペプチドをコードするポリヌクレオチドの発現を促進するまたは阻害する化合物の同定方法であって、該ペプチドをコードするポリヌクレオチド、該ポリヌクレオチドを含有する組換えベクター、該組換ベクターを導入されてなる形質転換体および該ペプチドを免疫学的に認識する抗体から選ばれる少なくとも１つを用いることを特徴とする同定方法に関する。
さらに本発明の一態様は、前記ペプチド、該ペプチドをコードするポリヌクレオチド、該ポリヌクレオチドを含有する組換えベクター、該組換ベクターを導入されてなる形質転換体および該ペプチドを免疫学的に認識する抗体から選ばれる少なくとも１つを有効量含んでなる医薬組成物に関する。
発明を実施するための最良の形態
本発明は、参照によりここに援用されるところの、日本国特許出願番号第２００２−９５２９１号、同第２００２−９５３９０号、同第２００２−９５４４２号および同第２００２−９５４８６からの優先権を請求するものである。
本明細書中で使用されている技術的および科学的用語は、別途定義されていない限り、当業者により普通に理解される意味を持つ。本明細書中では当業者に既知の種々の方法が参照されている。そのような引用されている公知の方法を開示する刊行物等の資料は、引用により、本明細書中にそれらの全体が完全に記載されているものと見なす。
以下、本発明について、発明の実施の態様をさらに詳しく説明する。以下の詳細な説明は例示であり、説明のためのものに過ぎず、本発明を何ら限定するものではない。
本発明においては、ＪＮＫ３と相互作用する蛋白質を国際公開第ＷＯ０１／６７２９９号公報（特許文献１）記載の方法に従って予測し、その結果４つの蛋白質、ＢＰＬ１、ＢＭＡＬ１、ＫＩＡＡ１４９１（配列番号６）およびＫＩＡＡ０５９６（配列番号３）を見出した。また、ＫＩＡＡ１４９１の欠失していると考えられたＮ末端側領域をインシリコで予測して完全長のＫＩＡＡ１４９１（以下、ＫＩＡＡ１４９１ｃｏｍｐｌｅｔｅと称する。）をコードする塩基配列（配列番号７）を得、遺伝子工学的手法によりＫＩＡＡ１４９１ｃｏｍｐｌｅｔｅ（配列番号１）を取得した。さらに実験により、ＫＩＡＡ０５９６（配列番号３）のＣ末端領域アミノ酸配列からなる蛋白質ＫＩＡＡ０５９６ＣＴ（配列番号２）およびＢＰＬ１がＪＮＫ３と結合することを明らかにした。また、ＢＰＬ１、ＢＭＡＬ１、ＫＩＡＡ１４９１ｃｏｍｐｌｅｔｅ（配列番号１）およびＫＩＡＡ０５９６ＣＴ（配列番号２）が何れもＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害することを見出した。
本明細書においては、単離された若しくは合成の完全長蛋白質；単離された若しくは合成の完全長ポリペプチド；または単離された若しくは合成の完全長オリゴペプチドを意味する総称的用語として「ペプチド」という用語を使用し、ここで蛋白質、ポリペプチド若しくはオリゴペプチドは最小サイズが２アミノ酸である。以降、アミノ酸を表記する場合、１文字または３文字にて表記することがある。
また、本明細書においてＪＮＫ３と相互作用する機能を有するペプチドとは、ＪＮＫ３と特異的に作用し合うペプチド、具体的には例えばその機能の１つとして特異的にＪＮＫ３と接触するあるいは結合するペプチドを意味する。より具体的には、その機能の１つとしてＪＮＫ３のリン酸化能を阻害する、好ましくは拮抗的に阻害する機能を、有効量の該ペプチドとＪＮＫ３との共存在下で示すペプチドを意味する。
ＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化はアポトーシス、例えば神経細胞死に関与していることが報告されている（非特許文献２）。また、ｃ−Ｊｕｎはトランスアクチベーターであり、遺伝子の発現制御部位に結合して当該遺伝子の転写を促進する転写活性化能を有し、そのシグナル経路の下流でなんらかのアポトーシス促進因子、例えばＢｉｍおよびＦａｓＬ等の転写を誘導すると予想されている。
これらから、ＪＮＫ３と相互作用する上記ペプチドを用いてＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害することにより、ｃ−Ｊｕｎの転写活性化能を抑制することができる。さらにはＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化により引き起こされる生理的現象、例えばアポトーシスを抑制すること、ひいてはＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化に基づく疾患、例えば神経変性疾患等の防止および／または治療が可能である。
ＪＮＫ３と相互作用すると予測されたペプチドＫＩＡＡ１４９１（配列番号６）は、かずさＤＮＡ研究所データベースＨＵＧＥから見出したペプチド（ＧｅｎＢａｎｋ、アクセッション番号：ＡＢ０４０９２４）であり、その機能は報告されていなかった。ＫＩＡＡ１４９１はそのＮ末端側領域が欠失していると考えられたため、当該欠失領域をインシリコで予測し、該領域をコードしているｃＤＮＡ配列がＱＶ１−ＭＴ０１３２−２０１１００−４９８−ｂ０５  ＭＴ０１３２  Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ  ｃＤＮＡ（ＧｅｎＢａｎｋ、アクセッション番号：ＢＦ８９４９２８）配列に相当することを見出した。これらから、完全長のＫＩＡＡ１４９１（ＫＩＡＡ１４９１ｃｏｍｐｌｅｔｅ）をコードする塩基配列（配列番号７）を得た。ＫＩＡＡ１４９１ｃｏｍｐｌｅｔｅ遺伝子のオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）全長は２３６１塩基対、当該遺伝子の遺伝子産物は７８６アミノ酸残基（配列番号１）からなる。当該遺伝子およびその遺伝子産物については今までに報告されていない。また、ＫＩＡＡ１４９１ｃｏｍｐｌｅｔｅ  ｃＤＮＡに対応するｍＲＮＡが脳に存在することを、ヒト脳由来のｐｏｌｙＡ  ＲＮＡを用いた逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）により明らかにした。
ＫＩＡＡ１４９１ｃｏｍｐｌｅｔｅをヒト脳ｃＤＮＡから遺伝子工学的手法により得てＪＮＫ３との相互作用を実験的に検討した結果、ＪＮＫ３によりリン酸化されること、さらにＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害することを見出した。すなわち、ＫＩＡＡ１４９１ｃｏｍｐｌｅｔｅがＪＮＫ３と相互作用することにより、ＪＮＫ３のｃ−Ｊｕｎリン酸化作用が阻害され、その結果ｃ−Ｊｕｎのリン酸化が阻害されると考えている。
上記ペプチドの別の１つは、ＫＩＡＡ０５９６（配列番号３）（ＧｅｎＢａｎｋ、アクセッション番号：ＡＢ０１１１６８）である。ＫＩＡＡ０５９６の機能については報告されていなかった。ＫＩＡＡ０５９６は、ＪＮＫ３と結合することが報告されているマウスＪＮＫ結合蛋白質１（ＪＮＫＢＰ１）（非特許文献４）（ＧｅｎＢａｎｋ、アクセッション番号：ＡＢ０２９４８２）と７４％の相同性を示すことが判明したことから、ＪＮＫＢＰ１のヒトホモログであることが予想された。ヒトにおいては今までにＪＮＫＢＰ１についての報告は無い。マウスＪＮＫＢＰ１はＪＮＫ３のｃ−Ｊｕｎリン酸化活性を増強するＪＮＫシグナル経路の活性化蛋白質であり、ＪＮＫシグナル経路のスキャホールド蛋白質であるＪＩＰ−１と同じような役割を担っている可能性がある（非特許文献４）。マウスＪＮＫＢＰ１のＣ末端領域がＪＮＫ３との結合に必要であることが知られていることから、ＫＩＡＡ０５９６のＣ末端領域（アミノ酸配列第６３９〜１２１７番目）からなるペプチド（配列番号２、以後ＫＩＡＡ０５９６ＣＴと称する。）を作製し、ＫＩＡＡ０５９６ＣＴがＪＮＫ３と結合すること、および活性化ＪＮＫ３のｃ−Ｊｕｎリン酸化を用量依存的に阻害することを見出した。すなわち、ＫＩＡＡ０５９６ＣＴがＪＮＫ３と結合することにより、ＪＮＫ３のｃ−Ｊｕｎリン酸化作用が阻害され、その結果ｃ−Ｊｕｎのリン酸化が阻害されると考えている。さらに、ＫＩＡＡ０５９６ＣＴを含むＫＩＡＡ０５９６（配列番号３）は、ＫＩＡＡ０５９６ＣＴと同様にＪＮＫ３と結合してＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害すると考えられる。
上記ペプチドのまた別の１つであるＢＭＡＬ１は、ＪＮＫ３と相互作用して自らもＪＮＫ３によりリン酸化されるが、ＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害した。すなわち、ＢＭＡＬ１がＪＮＫ３と相互作用することにより、ＪＮＫ３のｃ−Ｊｕｎリン酸化作用が阻害され、その結果ｃ−Ｊｕｎのリン酸化が阻害されると考えている。
ＢＭＡＬ１はサーカディアンリズム関連遺伝子であるＰＥＲＩＯＤ遺伝子（ＰＥＲ）の転写を促進する転写因子であり、ＣＬＯＣＫ蛋白質とヘテロダイマーを形成し、ＰＥＲ遺伝子プロモーターに存在するＥ−ｂｏｘ配列に結合する（非特許文献５および非特許文献６）。ＢＭＡＬ１のアイソフォームであるＭＯＰ３のノックアウトマウスでは、サーカディアンリズムの異常が見られる。
上記ペプチドのさらに別の１つであるＢＰＬ１は、ＪＮＫ３に結合し、ＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を用量依存的に阻害した。すなわち、ＢＰＬ１がＪＮＫ３と結合することにより、ＪＮＫ３のｃ−Ｊｕｎリン酸化作用が阻害され、その結果ｃ−Ｊｕｎのリン酸化が阻害されると考えている。
ＢＰＬ１はヒドロキシカルボキシラーゼ合成酵素（Ｈｏｌｏｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅ  ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ）の１つであり、カルボキシラーゼ、特にメチルクロトニルＣｏＡカルボキシラーゼ、アセチルＣｏＡカルボキシラーゼ、ピルビン酸カルボキシラーゼ、およびプロピオニルＣｏＡカルボキシラーゼの４種の代謝関連カルボキシラーゼにビオチンを結合させ活性化させる機能を有する（非特許文献７）。当該酵素の欠損は、ホロカルボキシラーゼ合成酵素欠損症を引き起こす。ホロカルボキシラーゼ合成酵素欠損症は複数のカルボキシラーゼの活性低下を反映した多彩な生化学的異常、臨床症状を示す常染色体劣性の先天性代謝異常症である（非特許文献７）。
これら知見に基づき本発明においては、ＪＮＫ３と相互作用するペプチドを有効成分として含むｃ−Ｊｕｎのリン酸化阻害剤およびｃ−Ｊｕｎの転写活性化能の阻害剤を提供する。また、ＪＮＫ３と相互作用するペプチドをＪＮＫ３と共存させることを１つの特徴とするｃ−Ｊｕｎのリン酸化阻害方法およびｃ−Ｊｕｎの転写活性化能の阻害方法を提供する。ここで、ｃ−Ｊｕｎの転写活性化能の阻害剤とは、ｃ−Ｊｕｎの特定ＤＮＡ配列への結合、ｃ−Ｊｕｎと協同して転写を行う他因子との結合等、ｃ−Ｊｕｎを含む転写活性装置になんらかの形で作用することにより、最終的にｃ−Ｊｕｎが関与する転写活性を阻害するものを意味する。
ＪＮＫ３と相互作用するペプチドは、好ましくは、ＫＩＡＡ１４９１ｃｏｍｐｌｅｔｅ（配列番号１）、ＫＩＡＡ０５９６ＣＴ（配列番号２）、ＫＩＡＡ０５９６（配列番号３）、ＢＭＡＬ１、またはＢＰＬ１である。ＢＭＡＬ１およびＢＰＬ１は公知のペプチドであるが、ＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害することは報告されていない。ＢＭＡＬ１にはいくつかのアイソフォーム、例えばＢＭＡＬ１ａやＢＭＡＬ１ｂなどが知られているが、いずれも本発明に使用できる。好ましくは、ＢＭＡＬ１ｂである。これらペプチドの何れかに由来するペプチドであって、ｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチドもまた、本発明の範囲に含まれる。ＫＩＡＡ１４９１ｃｏｍｐｌｅｔｅ（配列番号１）、ＫＩＡＡ０５９６ＣＴ（配列番号２）、ＫＩＡＡ０５９６（配列番号３）、ＢＭＡＬ１、またはＢＰＬ１に由来するペプチドとは、例えば、これら５つのペプチドの何れかを含んでなるペプチド、またはこれら５つのペプチドの何れかの部分ペプチドである。あるいは、これら５つのペプチドの何れかのペプチドのアミノ酸配列において変異を有するペプチド、またはこれら５つのペプチドの何れかと７０％以上の相同性を有するペプチドであってもよい。本発明に係るｃ−Ｊｕｎのリン酸化阻害剤およびｃ−Ｊｕｎの転写活性化能の阻害剤は、上記ペプチドから選ばれる１つまたは２つ以上を有効成分として含んでなる。また、本発明に係るｃ−Ｊｕｎのリン酸化阻害方法およびｃ−Ｊｕｎの転写活性化能の阻害方法は、上記ペプチドから選ばれる１つまたは２つ以上をＪＮＫ３と共存させることを１つの特徴とする。該ペプチドとＪＮＫ３との共存は、インビトロ（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）およびインビボ（ｉｎ  ｖｉｖｏ）の何れにおいても行うことができる。
本明細書において部分ペプチドとは、当該部分ペプチドを含有するペプチドのアミノ酸配列のうち少なくとも５個、好ましくは８個以上のアミノ酸、より好ましくは１２個以上、さらに好ましくは１５個以上の連続したアミノ酸残基からなるペプチドを意味する。さらにより好ましくはＪＮＫ３と相互作用するペプチドとＪＮＫ３との接触部位等の特異的に作用する部位あるいは結合部位を含むペプチドが望ましい。かかる部分ペプチドは、例えばＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を拮抗的に阻害できると考えられるため、ＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化阻害に好適である。
上記ペプチドのアミノ酸配列において変異を有するペプチドは、そのアミノ酸配列において１個以上、例えば１〜１００個、好ましくは１〜３０個、より好ましくは１〜２０個、さらに好ましくは１〜１０個、特に好ましくは１個ないし数個のアミノ酸の欠失・置換・付加または挿入といった変異を有するアミノ酸配列からなるペプチドを意味する。かかる変異を有するペプチドは天然に存在するものであってよく、また変異を導入したものであってもよい。変異を導入する手段は自体公知であり、例えば、部位特異的変異導入法、遺伝子相同組換え法、プライマー伸長法またはポリメラーゼ連鎖反応法（ＰＣＲ）等を単独でまたは適宜組み合わせて用いることができる。例えば成書に記載の方法（非特許文献８、非特許文献９および非特許文献１０等）に準じて、あるいはそれらの方法を改変して利用することにより得ることができる。例えばウルマーの技術（非特許文献１１）を利用することもできる。このような変異の導入において、当該ペプチドの基本的な性質（物性、機能、生理活性または免疫学的活性等）を変化させないという観点からは、例えば、同族アミノ酸（極性アミノ酸、非極性アミノ酸、疎水性アミノ酸、親水性アミノ酸、陽性荷電アミノ酸、陰性荷電アミノ酸および芳香族アミノ酸等）の間での相互置換は容易に想定される。さらに、これら利用できるペプチドは、その構成アミノ基またはカルボキシル基等を、例えばアミド化修飾する等、機能の著しい変更を伴わない程度に改変が可能である。
ＫＩＡＡ１４９１ｃｏｍｐｌｅｔｅ（配列番号１）、ＫＩＡＡ０５９６ＣＴ（配列番号２）、ＫＩＡＡ０５９６（配列番号３）、ＢＭＡＬ１およびＢＰＬ１は、慣用の遺伝子工学的手法により得ることが可能である。例えば、これらをコードするポリヌクレオチドの情報に基づき公知の方法で設計した適切なプライマーを用い、例えばヒト脳由来ｃＤＮＡライブラリーを鋳型として用いて目的の遺伝子を増幅し、得られた遺伝子を発現ベクターに挿入して宿主細胞に導入することにより、これらを発現する細胞を得ることができる。また、別の例として、公知の無細胞蛋白質合成系を利用してこれらペプチド合成することも可能である。
ＫＩＡＡ１４９１ｃｏｍｐｌｅｔｅをコードするポリヌクレオチドとしては、例えば配列番号７に記載のポリヌクレオチドを用いることができる。ＫＩＡＡ０５９６ＣＴ（配列番号２）およびＫＩＡＡ０５９６（配列番号３）をコードするポリヌクレオチドとしては、例えば配列番号８に記載のポリヌクレオチドを用いることができる。ＢＭＡＬ１は公知のペプチドであり（非特許文献１２）、ＢＭＡＬ１をコードするポリヌクレオチドが公開されている。これら配列情報を利用してＢＭＡＬ１を取得可能である。例えば、配列番号４に記載のアミノ酸配列からなるペプチドをコードするポリヌクレオチド、例えば配列番号９に記載の塩基配列からなるポリヌクレオチドを用いることができる。ヒトＢＰＬ１のｃＤＮＡも既にクローニングされ（非特許文献１３）、そのアミノ酸配列も開示されている。例えば、配列番号５に記載のアミノ酸配列からなるペプチドをコードするポリヌクレオチド、例えば配列番号１０に記載の塩基配列からなるポリヌクレオチドを用いて公知の遺伝子工学的手法によりＢＰＬ１を得ることができる。
ＫＩＡＡ１４９１ｃｏｍｐｌｅｔｅ（配列番号１）、ＫＩＡＡ０５９６ＣＴ（配列番号２）、ＫＩＡＡ０５９６（配列番号３）、ＢＭＡＬ１、またはＢＰＬ１に由来するペプチドは、それぞれのアミノ酸配列に基づいて設計して自体公知の方法で合成することにより得ることができる。例えば、ペプチドの化学合成方法としては固相合成方法、液相合成方法等が知られているが何れを用いることもできる。または、遺伝子工学的手法を用いて、慣用の方法で取得することも可能である。あるいは、上記ペプチドを適当なペプチダーゼにより切断することによっても当該ペプチドの部分ペプチドを得ることができる。好ましくは、取得したペプチドからＪＮＫ３と相互作用するものをさらに選択する。例えば、ＫＩＡＡ０５９６ＣＴ（配列番号２）、ＫＩＡＡ０５９６（配列番号３）、またはＢＰＬ１に由来するペプチドについては、ＪＮＫ３との結合を指標にして、ＪＮＫ３との結合機能を有するものを選択することができる。あるいは、ＪＮＫ３と相互作用してｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害するペプチドを選択する。ペプチドによるｃ−Ｊｕｎのリン酸化の阻害は、例えばＪＮＫ３によりｃ−Ｊｕｎがリン酸化される条件下において、ＫＩＡＡ１４９１ｃｏｍｐｌｅｔｅ（配列番号１）、ＫＩＡＡ０５９６ＣＴ（配列番号２）、ＫＩＡＡ０５９６（配列番号３）、ＢＭＡＬ１、またはＢＰＬ１に由来するペプチドを共存させて、該リン酸化が阻害されるか否かを測定することにより判定できる。ｃ−Ｊｕｎのリン酸化の検出は、慣用のリン酸化蛋白質の検出方法により行うことができる。
ＫＩＡＡ１４９１ｃｏｍｐｌｅｔｅ（配列番号１）、ＫＩＡＡ０５９６ＣＴ（配列番号２）、ＫＩＡＡ０５９６（配列番号３）、ＢＭＡＬ１、またはＢＰＬ１、あるいはこれら由来のペプチドは、ＪＮＫ３と相互作用する機能があり、ＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎリン酸化の阻害作用を示す。
近年、ＪＮＫシグナル経路が、ポリグルタミン病による細胞死のモデル系においてポリグルタミンを含む凝集体の中で活性化していること、またポリグルタミンによる細胞死をＭＫＫ４（ＪＮＫシグナルにおいてＪＮＫの上流に位置し、ＪＮＫをリン酸化して活性化せしめるＭＡＰキナーゼキナーゼ４）やｃ−Ｊｕｎのドミナントネガティブ変異体が抑制することが報告されている（非特許文献１４）。さらに、アルツハイマー病の原因遺伝子アミロイド・プレカーサー・プロテイン（ＡＰＰ）の切断産物であるアミロイドβによる細胞死にＪＮＫが関与するというデータが示されている（非特許文献１５）。
これらから、ＫＩＡＡ１４９１ｃｏｍｐｌｅｔｅ（配列番号１）、ＫＩＡＡ０５９６ＣＴ（配列番号２）、ＫＩＡＡ０５９６（配列番号３）、ＢＭＡＬ１、またはＢＰＬ１、あるいはこれら由来のペプチドを用いてＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害することにより、ＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化が関わるアポトーシスに基づく疾患、例えば神経変性疾患等の解明並びに防止および／または治療が可能になると考えられる。
神経変性疾患としては、次に挙げる例に限定されるものではないが、ポリグルタミン病（例えばハンチントン病、脊髄小脳失調症、球脊髄性筋萎縮症、および歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症等）、並びにアルツハイマー病、ダウン症、パーキンソン病、Ｌｅｗｙ小体型痴呆症、多系統萎縮症、家族性筋萎縮性側索硬化症、進行性核上性麻痺、皮質基底核変性症、ｐｉｃｋ病、ファミリアル  ブリティッシュ  デメンチア（ｆａｍｉｌｉａｌ  Ｂｒｉｔｉｓｈ  ｄｅｍｅｎｔｉａ）、クロイツフェルト−ヤコブ（Ｃｒｅｕｔｚｆｅｌｄｔ−Ｊａｋｏｂ）病、ゲルストマン−ストランスラー（Ｇｅｒｓｔｍａｎｎ−Ｓｔｒａｎｓｓｌｅｒ）症候群、狂牛病（ウシ海綿状脳症）（ＢＳＥ）、およびニューロセルピン（ｎｅｕｒｏｓｅｒｐｉｎ）封入体を伴う家族性痴呆症等を例示できる。
本発明においては、ＫＩＡＡ１４９１ｃｏｍｐｌｅｔｅ（配列番号１）、ＫＩＡＡ０５９６ＣＴ（配列番号２）、ＫＩＡＡ０５９６（配列番号３）、ＢＭＡＬ１、またはＢＰＬ１、あるいはこれら由来のペプチドを単独でまたは複数組み合わせて利用することによって、これらのうち少なくとも１つを有効成分として含んでなる医薬組成物を提供する。あるいは、本発明に係るｃ−Ｊｕｎリン酸化阻害剤またはｃ−Ｊｕｎの転写活性化能の阻害剤を有効量含んでなる医薬組成物も本発明の範囲に含まれる。本発明に係る医薬組成物は、ＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化に基づく疾患、例えば神経変性疾患の防止剤および／または治療剤として用いることができる。
また、ＫＩＡＡ１４９１ｃｏｍｐｌｅｔｅ（配列番号１）、ＫＩＡＡ０５９６ＣＴ（配列番号２）、ＫＩＡＡ０５９６（配列番号３）、ＢＭＡＬ１、またはＢＰＬ１、あるいはこれら由来のペプチドの何れか１つをコードするポリヌクレオチドを、蛋白質発現用のベクターやトランスポーターを用いてインビボで発現させてＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害し、上記疾患を防止および／または治療することも可能である。これらペプチドのインビボでの発現は、公知の方法を利用して実施できる。例えばこれらペプチドをコードするポリヌクレオチドを処理加工して、核酸ベクター、例えば複製欠損レトロウイルスベクター等、に挿入して対象の細胞中に送達することにより可能である。したがって、ＫＩＡＡ１４９１ｃｏｍｐｌｅｔｅ（配列番号１）、ＫＩＡＡ０５９６ＣＴ（配列番号２）、ＫＩＡＡ０５９６（配列番号３）、ＢＭＡＬ１、またはＢＰＬ１、あるいはこれら由来のペプチドの何れか１つをコードするポリヌクレオチドの少なくとも１つを有効成分として含有してなる、ＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化に基づく疾患の防止剤および／または治療剤である医薬組成物も本発明の範囲に含まれる。
本発明においてはまた、ＫＩＡＡ１４９１ｃｏｍｐｌｅｔｅ（配列番号１）、ＫＩＡＡ０５９６ＣＴ（配列番号２）、ＫＩＡＡ０５９６（配列番号３）、ＢＭＡＬ１、またはＢＰＬ１、あるいはこれら由来のペプチドとＪＮＫ３とを共存させることを含む、ＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎリン酸化に基づく疾患の防止方法および／または治療方法を提供する。また、本発明に係るｃ−Ｊｕｎリン酸化の阻害剤またはｃ−Ｊｕｎの転写活性化能の阻害剤を用いる、ＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎリン酸化に基づく疾患の防止方法および／または治療方法も本発明の範囲に含まれる。さらに、ＫＩＡＡ１４９１ｃｏｍｐｌｅｔｅ（配列番号１）、ＫＩＡＡ０５９６ＣＴ（配列番号２）、ＫＩＡＡ０５９６（配列番号３）、ＢＭＡＬ１、またはＢＰＬ１、あるいはこれら由来のペプチドの何れか１つをコードするポリヌクレオチドの少なくとも１つを用いて、該ポリヌクレオチドをコードするペプチドを発現させることによりＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害することを含む、ＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎリン酸化に基づく疾患の防止方法および／または治療方法も本発明において提供することができる。
医薬組成物の処方は、適当な医薬担体と組み合わせて処方することが好ましい。かかる処方は、治療上有効量のＫＩＡＡ１４９１ｃｏｍｐｌｅｔｅ（配列番号１）、ＫＩＡＡ０５９６ＣＴ（配列番号２）、Ｋ１ＡＡ０５９６（配列番号３）、ＢＭＡＬ１、またはＢＰＬ１、これら由来のペプチド、これらペプチドをコードするポリヌクレオチド、あるいは該ポリヌクレオチドを含むベクターのうちの少なくとも１つに、医薬上許容される担体または賦形剤を含む。かかる担体としては、生理食塩水、緩衝化生理食塩水、デキストロース、水、グリセロール、エタノール、およびそれらの混合物が挙げられるが、これらに限らない。処方は投与経路に適したものを選択すればよく、該処方は当業者によく知られている。また、処方するときには、これらを単独で使用してもよく、あるいは治療に必要な他の化合物または医薬と共に使用してもよい。
投与形態は、全身投与であっても局所投与であってもよい。全身投与の好ましい一態様は、注射、例えば静脈注射が挙げられる。皮下、筋肉内または腹腔内のような他の注射経路を用いることもできる。投与の別の態様は、腸溶処方またはカプセル処方がうまく処方されるならば、経口投与も可能である。さらに、胆汁酸塩またはフシジン酸または他の界面活性剤のような浸透剤を用いる経粘膜投与または経皮投与を用いることもできる。局所的な投与においては、膏薬、パスタ、ゲル等の形態での投与であってもよい。
必要な用量範囲は、治療上有効量の上記ペプチド、ポリヌクレオチドおよびベクターから選択された少なくとも何れか１つの有効性、投与経路、処方の性質、対象の症状の性質、および担当医師の判断による。具体的には、適当な用量は、例えば対象の体重１ｋｇあたり０．１μｇ乃至１００μｇの範囲である。しかしながら、当該分野においてよく知られた最適化のための一般的な常套的実験を用いてこれらの用量の変更を行うことができる。
製剤化にあたっては、例えば、ペプチド、ポリヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド等各対象の物性に応じた公知の製剤化手段を導入すればよい。具体的には、例えば散剤、丸剤、錠剤、カプセル製剤、水溶液製剤、エタノール溶液製剤、リポソーム製剤、脂肪乳剤、シクロデキストリン等の包接体等の製剤化方法が利用できる。
散剤、丸剤、カプセル剤および錠剤は、ラクトース、グルコース、シュークロース、マンニトール等の賦形剤、澱粉、アルギン酸ソーダ等の崩壊剤、マグネシウムステアレート、タルク等の滑沢剤、ポリビニルアルコール、ヒドロキシプロピルセルロース、ゼラチン等の結合剤、脂肪酸エステル等の界面活性剤、グリセリン等の可塑剤等を用いて製造できる。錠剤やカプセルを製造するには、固体の製薬担体が用いられる。
懸濁剤は、水、シュークロース、ソルビトール、フラクトース等の糖類、ＰＥＧ等のグリコール類、油類を使用して製造できる。
注射用の溶液は、塩溶液、グルコース溶液、または塩水とグルコース溶液の混合物からなる担体を用いて調製可能である。
リポソーム化は、例えばリン脂質を有機溶媒（クロロホルム等）に溶解した溶液に、当該物質を溶媒（エタノール等）に溶解した溶液を加えた後、溶媒を留去し、これにリン酸緩衝液を加え、振とう、超音波処理および遠心処理した後、上清をろ過処理して回収することにより行い得る。
脂肪乳剤化は、例えば当該物質、油成分（大豆油、ゴマ油、オリーブ油等の植物油、ＭＣＴ等）、乳化剤（リン脂質等）等を混合、加熱して溶液とした後に、必要量の水を加え、乳化機（ホモジナイザー、例えば高圧噴射型や超音波型等）を用いて、乳化・均質化処理して行い得る。また、これを凍結乾燥化することも可能である。なお、脂肪乳剤化するとき、乳化助剤を添加してもよく、乳化助剤としては、例えばグリセリンや糖類（例えばブドウ糖、ソルビトール、果糖等）が例示される。
シクロデキストリン包接化は、例えば当該物質を溶媒（エタノール等）に溶解した溶液に、シクロデキストリンを水等に加温溶解した溶液を加えた後、冷却して析出した沈殿をろ過し、滅菌乾燥することにより行い得る。このとき、使用されるシクロデキストリンは、当該物質の大きさに応じて、空隙直径の異なるシクロデキストリン（α、β、γ型）を適宜選択すればよい。
さらに本発明においては、配列表の配列番号１に記載のアミノ酸配列からなるペプチドＫＩＡＡ１４９１ｃｏｍｐｌｅｔｅを提供する。本発明の範囲には、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含むペプチド、または該アミノ酸配列の少なくとも５個の連続するアミノ酸残基からなるペプチド（部分ペプチド）等、ＫＩＡＡ１４９１ｃｏｍｐｌｅｔｅに由来するペプチドも包含される。さらに、ＫＩＡＡ１４９１ｃｏｍｐｌｅｔｅまたはこれに由来するペプチドに基づいて、ＪＮＫ３との相互作用、例えばＪＮＫ３によるリン酸化やＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化の阻害を指標にして、１個以上、例えば１〜１００個、好ましくは１〜３０個、より好ましくは１〜２０個、さらに好ましくは１〜１０個、特に好ましくは１個ないし数個のアミノ酸の欠失、置換、付加あるいは挿入といった変異を有するアミノ酸配列からなるペプチドも提供できる。変異を有するペプチドは天然に存在するものであってよく、また変異を導入したものであってもよい。欠失、置換、付加あるいは挿入等の変異の導入は上記方法により実現できる。
ＫＩＡＡ１４９１ｃｏｍｐｌｅｔｅまたはこれに由来するペプチドは、それらを遺伝子工学的手法で発現させた細胞、無細胞系合成産物、化学合成産物、または該細胞や生体試料から調製したものであってよく、これらからさらに精製されたものであってもよい。また、それらの性質や機能、例えばＪＮＫ３との相互作用、例えばＪＮＫ３によるリン酸化あるいはＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎリン酸化の阻害に影響しない限りにおいて、Ｎ末端側やＣ末端側に別のタンパク質やペプチド等を直接的にまたはリンカーペプチド等を介して間接的に遺伝子工学的手法等を用いて付加することにより標識化したものであってもよい。好ましくは、それらの基本的な性質が阻害されないような標識化が望ましい。付加するタンパク質やペプチド等としては、例えばグルタチオン  Ｓ−トランスフェラーゼ、β−ガラクトシダーゼ、ホースラディッシュ・パーオキシダーゼ（ＨＲＰ）またはアルカリホスファターゼ等の酵素類、Ｈｉｓ−ｔａｇ、Ｍｙｃ−ｔａｇ、ＨＡ−ｔａｇ、ＦＬＡＧ−ｔａｇまたはＸｐｒｅｓｓ−ｔａｇ等のタグペプチド類、グリーン蛍光タンパク質、フルオレセインイソチオシアネート（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ  ｉｓｏｔｈｉｏｃｙａｎａｔｅ）またはフィコエリスリン（ｐｈｙｃｏｅｒｙｔｈｒｉｎ）等の蛍光物質類、マルトース結合タンパク質、免疫グロブリンのＦｃ断片、ビオチン、あるいは放射性同位元素等が挙げられるが、これらに限定されない。標識化するとき、これら蛋白質やペプチド等は単独で付加してもよいし複数を組み合わせて付加することもできる。これら標識化に用いたタンパク質またはペプチド等の物質自体、またはその機能を測定することにより、例えばこれらペプチドとＪＮＫ３との相互作用を検出することが可能であり、また本発明に係るペプチドの検出または精製が容易になる。
ＫＩＡＡ１４９１ｃｏｍｐｌｅｔｅに由来するペプチドのうち、ＪＮＫ３と相互作用するものは、ＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する物質として、またはＪＮＫ３とＫＩＡＡ１４９１ｃｏｍｐｌｅｔｅとの相互作用を調節する化合物の同定において有用である。また、免疫学的に認識され得るペプチド、例えばエピトープペプチドは後述するようにＫＩＡＡ１４９１ｃｏｍｐｌｅｔｅに対する抗体を作製するための抗原として単独またはキャリア（例えば、キーホールリンペットヘモシアニンまたは卵白アルブミン）と結合して使用できる
ＫＩＡＡ１４９１ｃｏｍｐｌｅｔｅまたはこれに由来するペプチドをコードする塩基配列またはその相補的配列を含んでなるポリヌクレオチドもまた本発明において提供可能である。例えば、該ポリヌクレオチドは、配列表の配列番号１に記載のアミノ酸配列からなるペプチドをコードする塩基配列またはその相補的配列を含んでなるポリヌクレオチドであり得る。好ましくは、配列表の配列番号７に記載の塩基配列からなるポリヌクレオチドである。これらは例えばＫＩＡＡ１４９１ｃｏｍｐｌｅｔｅまたはこれに由来するペプチドの製造に有用な遺伝子情報を提供するものであり、あるいは核酸に関する試薬または標準品としても利用できる。
また、ＫＩＡＡ１４９１ｃｏｍｐｌｅｔｅまたはこれに由来するペプチドのアミノ酸配列、例えば配列表の配列番号１に記載のアミノ酸配列をコードする塩基配列またはその相補的配列を含んでなるポリヌクレオチドの対応する領域にストリンジェントな条件下でハイブリダイゼーションするポリヌクレオチドを提供する。ハイブリダイゼーションの条件は、例えば成書に記載の方法（非特許文献）等に従うことができる。これらのポリヌクレオチドは目的のポリヌクレオチド、例えば配列表の配列番号７に記載の塩基配列からなるポリヌクレオチドまたはその相補鎖にハイブリダイゼーションするものであれば相補的配列でなくともよい。例えば、ＫＩＡＡ１４９１ｃｏｍｐｌｅｔｅをコードする遺伝子の塩基配列またはその相補的配列に対する相同性において好ましくは８５％以上、より好ましくは９０％以上、さらに好ましくは９５％以上の相同性を示すポリヌクレオチドであり得る。これらポリヌクレオチドの指定された塩基配列の領域の連続する１０個以上のヌクレオチド、好ましくは１５個以上、より好ましくは２０個以上のヌクレオチドからなるポリヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチドも本発明に包含される。これらポリヌクレオチドはその機能、例えばコードするペプチドの発現や、発現されたペプチドの機能が阻害されない限りにおいて、５’末端側やＣ’末端側に、例えば、グルタチオン  Ｓ−トランスフェラーゼ、β−ガラクトシダーゼ、ホースラディッシュ・パーオキシダーゼ（ＨＲＰ）またはアルカリホスファターゼ等の酵素類、Ｈｉｓ−ｔａｇ、Ｍｙｃ−ｔａｇ、ＨＡ−ｔａｇ、ＦＬＡＧ−ｔａｇまたはＸｐｒｅｓｓ−ｔａｇ等のタグペプチド類、またはグリーン蛍光タンパク質等の遺伝子が付加されたものであってもよい。これらポリヌクレオチドは、ＫＩＡＡ１４９１ｃｏｍｐｌｅｔｅまたはこれに由来するペプチド等の製造に有用である。さらに、ＫＩＡＡ１４９１ｃｏｍｐｌｅｔｅをコードする遺伝子またはｍＲＮＡの検出のためのプローブまたはプライマーとして、または該遺伝子発現を調節するためのアンチセンスオリゴヌクレオチド等として有用である。その意味で、これらポリヌクレオチドは翻訳領域のみでなく、非翻訳領域に対応するものも包含する。また、アンチセンスオリゴヌクレオチドによってＫＩＡＡ１４９１ｃｏｍｐｌｅｔｅをコードする遺伝子の発現を特異的に阻害するためには、該遺伝子に固有な領域の塩基配列を用いることが好ましい。ＫＩＡＡ１４９１ｃｏｍｐｌｅｔｅまたはこれに由来するペプチドをコードするポリヌクレオチドは、例えば公知の蛋白質発現系を利用して発現蛋白質の確認を行い、その生理活性を指標にして得ることが可能である。例えばＪＮＫ３との相互作用、具体的には例えばＪＮＫ３によるリン酸化またはＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎリン酸化の阻害を指標にすることができる。発現系としては、無細胞蛋白質発現系を利用する場合は、例えば胚芽、家兎網状赤血球等由来のリボソーム系の技術を利用できる（非特許文献１６）。
ポリヌクレオチドを適当なベクターＤＮＡに組み込むことにより、組換えベクターを得ることができる。用いるベクターＤＮＡは、宿主の種類および使用目的により適宜選択される。ベクターＤＮＡは、天然に存在するものを抽出したもののほか、増殖に必要な部分以外のＤＮＡの部分が一部欠落しているものでもよい。例えば、染色体、エピソームおよびウイルス由来のベクター、例えば細菌プラスミド由来、バクテリオファージ由来、トランスポゾン由来、酵母エピソーム由来、挿入エレメント由来、酵母染色体エレメント由来、例えばバキュロウイルス、パポバウイルス、ＳＶ４０、ワクシニアウイルス、アデノウイルス、鶏痘ウイルス、仮性狂犬病ウイルスおよびレトロウイルス等のウイルス由来のベクター、並びにそれらを組み合わせたベクター、例えばプラスミドおよびバクテリオファージの遺伝学的エレメント由来のベクター、例えばコスミドおよびファージミド等が挙げられる。また、目的により発現ベクターやクローニングベクター等を用いることができる。
組換えベクターは、目的の遺伝子配列と複製そして制御に関する情報を担持した遺伝子配列、例えばプロモーター、リボソーム結合部位、ターミネーター、シグナル配列、エンハンサー等とを構成要素とし、これらを自体公知の方法により組み合わせて作製する。ベクターＤＮＡにポリヌクレオチドを組込む方法は、自体公知の方法を適用できる。例えば、適当な制限酵素を選択、処理してＤＮＡを特定部位で切断し、次いで同様に処理したベクターとして用いるＤＮＡと混合し、リガーゼによって再結合する方法が用いられる。あるいは、目的のポリヌクレオチドに適当なリンカーをライゲーションし、これを目的に適したベクターのマルチクローニングサイトへ挿入することによっても、所望の組換えベクターが得られる。
ベクターＤＮＡを、自体公知の宿主に自体公知の方法で導入することにより形質転換体が得られる。宿主に導入するベクターＤＮＡは、１種のベクターＤＮＡであってもよく、２種以上のベクターＤＮＡを導入してもよい。宿主としては、例えば大腸菌、酵母、枯草菌、昆虫細胞または動物細胞等が例示できる。ベクターＤＮＡの宿主細胞への導入は、自体公知の手段が応用され、例えば成書に記載されている標準的な方法（非特許文献８）により実施できる。より好ましい方法としては、遺伝子の安定性を考慮するならば染色体内へのインテグレート法が挙げられるが、簡便には核外遺伝子を利用した自律複製系を使用できる。具体的には、リン酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥＡＥ−デキストラン媒介トランスフェクション、マイクロインジェクション、陽イオン脂質媒介トランスフェクション、エレクトロポレーション、形質導入、スクレープ負荷（ｓｃｒａｐｅｌｏａｄｉｎｇ）、バリスティック導入（ｂａｌｌｉｓｔｉｃ  ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ）および感染等が挙げられる。
後述する実施例においては、昆虫細胞を利用したが、無論これに限定されるものではない。
ＫＩＡＡ１４９１ｃｏｍｐｌｅｔｅまたはこれに由来するペプチドは、その塩基配列の情報、例えば配列表の配列番号７に記載の塩基配列に基づいて、公知の遺伝子工学的手法により得ることが可能である。例えば、当該塩基配列にしたがって設計し公知の方法で合成したプライマーを用いて、ヒト脳由来ｃＤＮＡライブラリーから目的の遺伝子を増幅し、発現ベクターに挿入して宿主細胞に導入し、当該ペプチドを発現する細胞を構築し、当該細胞から公知の方法で目的のペプチドを抽出して精製することにより得られる。また、公知の無細胞蛋白質合成系を利用して合成することも可能である。後述する実施例では、昆虫細胞を用いた遺伝子発現系を用い、ＰＣＲにより増幅したＫＩＡＡ１４９１ｃｏｍｐｌｅｔｅのＯＲＦ部分を組み込んだバキュロウイルスを作成して昆虫細胞Ｓｆ９に感染させ、発現誘導することによりＫＩＡＡ１４９１ｃｏｍｐｌｅｔｅを得たが、ＫＩＡＡ１４９１ｃｏｍｐｌｅｔｅの取得方法は、この実施例に限定されない。
例えば、ベクターＤＮＡとして発現ベクターを使用して、目的のペプチドをコードするポリヌクレオチドを挿入する。得られたベクターを導入した形質転換細胞を、自体公知の各々の宿主の培養条件に最適な条件を選択して培養し、その培養液または細胞自体から、目的のペプチドを回収および／または精製する。回収および／または精製は、目的のペプチドの性質あるいは機能を指標として行う。例えばＪＮＫ３によるリン酸化やＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎリン酸化の阻害作用を指標にすることができる。ＫＩＡＡ１４９１ｃｏｍｐｌｅｔｅまたはこれに由来するペプチドの場合、ＪＮＫ３によるそれ自体のリン酸化蛋白質を指標にすることもできる。回収および／または精製の方法としては、硫安やアルコール等を用いた溶解度差に基づく分画手段、ゲルろ過、イオンカラムクロマトグラフィー、アフィニティクロマトグラフィー等が挙げられ、これらを単独でまたは組み合わせて使用する。好ましくは、該ペプチドのアミノ酸配列情報に基づき、これらに特異的なポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体を作成し、該抗体を用いて特異的に吸着回収する方法を使用する。
抗体は、ＫＩＡＡ１４９１ｃｏｍｐｌｅｔｅまたはこれに由来するペプチドを抗原として用いて作製する。抗原は該ペプチド、またはそれらの断片でもよく、少なくとも８個、好ましくは少なくとも１０個、より好ましくは少なくとも１２個、さらに好ましくは１５個以上のアミノ酸で構成される。ＫＩＡＡ１４９１ｃｏｍｐｌｅｔｅまたはこれに由来するペプチドに特異的な抗体を作成するためには、これらに固有なアミノ酸配列からなる領域を用いることが好ましい。この領域のアミノ酸配列は、必ずしもこれらのものと相同または同一である必要はなく、その立体構造上の外部への露出部位が好ましく、露出部位のアミノ酸配列が一次構造上で不連続であっても、該露出部位について連続的なアミノ酸配列であればよい。抗体は免疫学的に該ペプチドを結合または認識する限り特に限定されない。この結合または認識の有無は、公知の抗原抗体結合反応によって決定できる。
抗体の産生には、自体公知の抗体作製法を利用できる。例えば、抗原をアジュバントの存在下または非存在下で、単独でまたは担体に結合して動物に投与し、体液性応答および／または細胞性応答等の免疫誘導を行うことにより抗体が得られる。担体はそれ自体が宿主に対して有害作用を示さずかつ抗原性を増強せしめるものであれば特に限定されず、例えばセルロース、重合アミノ酸、アルブミンおよびキーホールリンペットヘモシアニン等が例示できる。アジュバントとしては、フロイント完全アジュバント（ＦＣＡ）、フロイント不完全アジュバント（ＦＩＡ）、Ｒｉｂｉ（ＭＰＬ）、Ｒｉｂｉ（ＴＤＭ）、Ｒｉｂｉ（ＭＰＬ＋ＴＤＭ）、百日咳ワクチン（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ  ｖａｃｃｉｎｅ）、ムラミルジペプチド（ＭＤＰ）、アルミニウムアジュバント（ＡＬＵＭ）、およびこれらの組み合わせを例示できる。免疫される動物は、マウス、ラット、ウサギ、ヤギ、ウマ等が好適に用いられる。
ポリクローナル抗体は、免疫手段を施された動物の血清から自体公知の抗体回収法によって取得できる。好ましい抗体回収手段として免疫アフィニティクロマトグラフィー法が挙げられる。
モノクローナル抗体は、免疫手段が施された動物から抗体産生細胞（例えば、脾臓またはリンパ節由来のリンパ球）を回収し、自体公知の永久増殖性細胞（例えば、Ｐ３−Ｘ６３−Ａｇ８株等のミエローマ株）への形質転換手段を導入することにより生産できる。例えば、抗体産生細胞と永久増殖性細胞とを自体公知の方法で融合させてハイブリドーマを作成してこれをクローン化し、目的とするペプチドを特異的に認識する抗体を産生するハイブリドーマを選別し、該ハイブリドーマの培養液から抗体を回収する。
かくして得られたポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体は、ペプチドの精製用抗体、試薬または標識マーカー等として利用できる。
ＫＩＡＡ１４９１ｃｏｍｐｌｅｔｅまたはこれに由来するペプチド、これらの何れかをコードするポリヌクレオチド、該ポリヌクレオチドを含むベクター、該ベクターを導入されてなる形質転換体あるいはこれらペプチドの何れかを認識する抗体のうちの少なくとも１つを有効成分として含む医薬組成物も、本発明の範囲に包含される。
ＫＩＡＡ１４９１ｃｏｍｐｌｅｔｅまたはこれに由来するペプチド、これをコードする塩基配列またはその相補的塩基配列を含むポリヌクレオチド、当該ポリヌクレオチドを含むベクター、該ベクターを導入されてなる形質転換体、これらを免疫学的に認識する抗体、およびこれらを用いる蛋白質合成系は、単独でまたは複数を組み合せることによって、ＫＩＡＡ１４９１ｃｏｍｐｌｅｔｅの活性阻害剤または活性促進剤、あるいはＫＩＡＡ１４９１ｃｏｍｐｌｅｔｅの発現阻害剤または発現促進剤の同定に有効な手段を提供する。同定方法は自体公知の医薬品スクリーニングシステムを利用して構築可能である。被検物質としては、例えば化学ライブラリーや天然物由来の化合物、またはＫＩＡＡ１４９１ｃｏｍｐｌｅｔｅまたはこれに由来するペプチドの立体構造に基づいてドラッグデザインして得られた化合物等が挙げられる。
詳しくは、ＫＩＡＡ１４９１ｃｏｍｐｌｅｔｅまたはこれに由来するペプチドと、被検物質との間の接触等の特異的作用を可能にする条件を選別し、この相互作用の有無を検出することのできるシグナルおよび／またはマーカーを使用する系を導入し、このシグナルおよび／またはマーカーの存在、不存在、またはその変化を検出することにより、本発明に係るペプチドの活性を促進または阻害する化合物を同定可能である。例えば、ＫＩＡＡ１４９１ｃｏｍｐｌｅｔｅまたはこれに由来するペプチドとＪＮＫ３との相互作用あるいはＪＮＫ３によるリン酸化を指標にして、当該相互作用やリン酸化を調節し得る化合物を選別することができる。具体的には例えば、ＫＩＡＡ１４９１ｃｏｍｐｌｅｔｅ、ＪＮＫ３およびＡＴＰ（アデノシン三リン酸）の共存下で被検物質を添加してリン酸化反応を行い、リン酸化されたＫＩＡＡ１４９１ｃｏｍｐｌｅｔｅの量を測定する。被検物質無添加の反応で得られた結果と比較して、反応後のリン酸化蛋白質の量が低減していれば、該被検物質はＫＩＡＡ１４９１ｃｏｍｐｌｅｔｅとＪＮＫ３との相互作用を阻害すると判定できる。また反応後のリン酸化蛋白質の量が増加していれば、該被検物質はＫＩＡＡ１４９１ｃｏｍｐｌｅｔｅとＪＮＫ３との相互作用を促進すると判定できる。また別の例として、ＫＩＡＡ１４９１ｃｏｍｐｌｅｔｅ、ＪＮＫ３、ｃ−ＪｕｎおよびＡＴＰの共存下で被検物質を添加してリン酸化反応を行い、リン酸化されたｃ−Ｊｕｎの量を測定する同定方法が挙げられる。被検物質無添加の反応で得られた結果と比較して、リン酸化されたｃ−Ｊｕｎの量が低減していれば、該被検物質はＫＩＡＡ１４９１ｃｏｍｐｌｅｔｅとＪＮＫ３との相互作用を促進すると判定できる。またリン酸化されたｃ−Ｊｕｎの量が増加していれば、該被検物質はＫＩＡＡ１４９１ｃｏｍｐｌｅｔｅとＪＮＫ３との相互作用を阻害すると判定できる。
ＫＩＡＡ１４９１ｃｏｍｐｌｅｔｅまたはこれに由来するペプチドをコードするポリヌクレオチドの発現を可能にする条件を選別し、ここに被検物質を存在させて、該ポリヌクレオチドの発現を検出することのできるシグナルおよび／またはマーカーを使用する系を導入し、このシグナルおよび／またはマーカーの存在、不存在、またはその変化を検出することにより、該ポリヌクレオチドの発現を促進するまたは阻害する化合物を同定可能である。例えば、ＫＩＡＡ１４９１ｃｏｍｐｌｅｔｅ遺伝子のプロモーター領域の下流に、ＫＩＡＡ１４９１ｃｏｍｐｌｅｔｅをコードするポリヌクレオチドの代わりにレポーター遺伝子を連結したベクターを作成し、該ベクターを導入した細胞、例えば真核細胞等と被検物質とを接触させ、レポーター遺伝子の発現の有無および変化により、本発明に係る遺伝子の発現に影響を与える化合物を同定可能である。被検物質を接触させないときと比較してレポーター遺伝子の発現量が増加したとき、該被検物質はＫＩＡＡ１４９１ｃｏｍｐｌｅｔｅの発現を促進すると判定できる。また、発現量が低減したとき、該被検物質はＫＩＡＡ１４９１ｃｏｍｐｌｅｔｅの発現を阻害すると判定できる。
ここでシグナルとは、そのもの自体がその物理的または化学的性質により直接検出され得るものを指し、マーカーとはそのものの物理的または生物学的性質を指標として間接的に検出され得るものを指す。シグナルとしてはルシフェラーゼ、ＧＦＰ、および放射性同位体等、マーカーとしては、レポーター遺伝子、例えばβ−ガラクトシダーゼやクロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ（ＣＡＴ）遺伝子等、または検出用のｔａｇ、例えば６×Ｈｉｓ−ｔａｇ等、公知のものが利用できる。これらのシグナルまたはマーカーの検出方法は、当業者には周知のものである。
実施例
以下、本発明を実施例に基づき具体的に説明するが、本発明は下記の実施例に限定されるものではない。
実施例１
（ＪＮＫ３と相互作用する蛋白質のインシリコでの探索）
ＪＮＫ３と相互作用する蛋白質を、国際公開第ＷＯ０１／６７２９９号公報（特許文献１）に記載の予測方法にしたがってインシリコ（ｉｎ  ｓｉｌｉｃｏ）で予測した。すなわち、ＪＮＫ３のアミノ酸配列をある長さのオリゴペプチドに分解し、各オリゴペプチドのアミノ酸配列あるいはそのアミノ酸配列と相同なアミノ酸配列を持った蛋白質をデータベース中で検索し、得られた蛋白質とＪＮＫ３との間でローカルアライメントを行い、ローカルアライメントのスコアの高いものをＪＮＫ３と相互作用すると予測した。ここではローカルアライメントのスコアを、国際公開第ＷＯ０１／６７２９９号公報に記載の方法と同様に、２５．０以上とした。また、ＪＮＫ３は脳神経系に特異的に発現する蛋白質であり、低酸素状態等のショック的状況で発現し脳機能に障害を与えることが分かっているので、ＪＮＫ３と相互作用する蛋白質の候補は、脳で発現し重要な機能を持っている既知の蛋白質に絞った。
この結果、ＪＮＫ３由来の６アミノ酸残基からなるオリゴペプチドＱＧＦＤＫＱ（配列番号１１）と相同性あるオリゴペプチドＱＴＦＤＫＱ（配列番号１２）が、機能未知の蛋白質ＫＩＡＡ１４９１（配列番号６）のアミノ酸配列中に存在することが分かった。第１図に、ＪＮＫ３（図中、上の配列）とＫＩＡＡ１４９１（図中、下の配列）とのローカルアライメントの結果を示した。
（完全長ＫＩＡＡ１４９１のインシリコでの配列決定）
ＫＩＡＡ１４９１（配列番号６）はかずさＤＮＡ研究所データベースＨＵＧＥによるとＮ末端が欠失している可能性があったので、Ｎ末端側領域をコードしているｃＤＮＡ配列をインシリコにより予測した。まずＫＩＡＡ１４９１の５’末端１２０塩基をｂｌａｓｔｎ検索し、ＱＶ１−ＭＴ０１３２−２０１１００−４９８−ｂ０５  ＭＴ０１３２  Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ  ｃＤＮＡ（ＧｅｎＢａｎｋ、アクセッション番号：ＢＦ８９４９２８）と１２０塩基に渡り１００％の相同性を示すことを見出した。ＫＩＡＡ１４９１の第１〜１２０番目の塩基がＢＦ８９４９２８の第３５８〜４７７番目の塩基に相当することから、ＢＦ８９４９２８はＫＩＡＡ１４９１の上流配列を有していると考えられた。次いで、ＢＦ８９４９２８をＫＩＡＡ１４９１と同一フレームでインシリコ翻訳して得られる上流から第２番目のメチオニンをファーストメチオニンと考え、対応するｍＲＮＡが脳に存在することを、ヒト脳由来のｐｏｌｙＡ  ＲＮＡを用いたＲＴ−ＰＣＲにより確認した。このメチオニンまで上流域を延長したｃＤＮＡをＫＩＡＡ１４９１ｃｏｍｐｌｅｔｅ  ｃＤＮＡ（配列番号７）と称し、該メチオニンまでのアミノ酸配列を含む完全長のＫＩＡＡ１４９１をＫＩＡＡ１４９１ｃｏｍｐｌｅｔｅ（配列番号１）と称する。
（ＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化に対するＫＩＡＡ１４９１ｃｏｍｐｌｅｔｅの作用解析）
＜材料＞
ＫＩＡＡ１４９１ｃｏｍｐｌｅｔｅは、Ｎ末端ＧＳＴ融合蛋白質（以下、ＧＳＴ−ＫＩＡＡ１４９１ｃｏｍｐｌｅｔｅ）として大腸菌にて発現後、グルタチオン  セファロース  ４Ｂ（Ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ  ｓｅｐｈａｒｏｓｅ  ４Ｂ、Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ  ｂｉｏｔｅｃｈ社）で精製して使用した。
すなわち、ヒト脳ｃＤＮＡを鋳型として、ＫＩＡＡ１４９１ｃｏｍｐｌｅｔｅ  ｃＤＮＡのＯＲＦ領域をＰＣＲにより増幅後、ゲートウェイクローニングテクノロジー（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）を用いてｐＤＥＳＴ１５ベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）に組込み、大腸菌用ＧＳＴ−ＫＩＡＡ１４９１ｃｏｍｐｌｅｔｅ発現ベクターを構築した。
当該ベクターを大腸菌ＢＬ２１−ＳＩ株（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）に導入後、１００μｇ／ｍｌのアンピシリンを含むＬＢＯＮ培地中（ＮａＣｌを含まないＬＢ培地）にて３７℃で培養後、ＮａＣｌを終濃度０．３Ｍとなるように添加し、さらに２５℃で培養してＧＳＴ−ＫＩＡＡ１４９１ｃｏｍｐｌｅｔｅの発現を誘導した。菌体を回収して抽出液を調整し、Ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ  ｓｅｐｈａｒｏｓｅ  ４Ｂを用いてＧＳＴ−ＫＩＡＡ１４９１ｃｏｍｐｌｅｔｅを精製した。精製蛋白質は透析後に使用した。
活性化型ヒトＪＮＫ３は、Ｎ末端ヒスチジンタグ（Ｈｉｓ−ｔａｇ）付加蛋白質（以下、Ｈｉｓ−ＪＮＫ３）として調製した。まず、ヒト海馬ｃＤＮＡライブラリーを鋳型としてＲＴ−ＰＣＲにより得たヒトＪＮＫ３（ＪＮＫ３α１）ｃＤＮＡを、ｐＦＡＳＴＢＡＣ  ＨＴ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）に挿入し、添付の説明書に従い、Ｈｉｓ−ＪＮＫ３発現用組換えバキュロウイルスを作製した。次に、作製した組換えウイルスをＳｆ９細胞に感染させてＨｉｓ−ＪＮＫ３を発現させ、プロボンドレジン（Ｐｒｏｂｏｎｄ  Ｒｅｓｉｎ）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）で精製して使用した。
ｃ−Ｊｕｎのインビトロ  リン酸化実験には、ｃ−Ｊｕｎの代わりにｃ−ＪｕｎのＮ末端７９アミノ酸領域からなるペプチド〔ｃ−Ｊｕｎ（１−７９）〕を用いた。ｃ−Ｊｕｎ（１−７９）は、Ｎ末端ＧＳＴ融合蛋白質〔以下、ＧＳＴ−ｃ−Ｊｕｎ（１−７９）〕として大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）にて発現後、Ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ  ｓｅｐｈａｒｏｓｅ  ４Ｂ（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ  ｂｉｏｔｅｃｈ社）で精製して使用した。
＜インビトロ  リン酸化実験（Ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ｋｉｎａｓｅ  ａｓｓａｙ）＞
１μｇの各ＧＳＴ融合タンパク質（ＧＳＴ−ＫＩＡＡ１４９１ｃｏｍｐｌｅｔｅ、ＧＳＴ−ｃ−Ｊｕｎ（１−７９）、またはＧＳＴ）と活性化型ＪＮＫ３（０、１４、２８または７０ｎｇ）を、５μＣｉの［γ−３２Ｐ］ＡＴＰ（３０００Ｃｉ／ｍｍｏｌ、ＮＥＮ社）を含むカイネーションバッファー（２５ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，ｐＨ７．５／５ｍＭ  β−グリセロホスフェート（ｇｌｙｃｅｒｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ）／２ｍＭ  ジチオスレイトール（ｄｉｔｈｉｏｔｈｒｅｉｔｏｌ、ＤＴＴ）／０．１ｍＭ  Ｎａ３ＶＯ４／１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２／１０μＭ  ＡＴＰ）中にて３０℃で３０分間インキュベーションすることにより、リン酸化反応を行った。反応後、等量の２×ＳＤＳ  サンプルバッファー〔４％  ＳＤＳ／１２５ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，ｐＨ６．８／２０％  グリセロール（ｇｌｙｃｅｒｏｌ）／０．０１％  ブロムフェノールブルー（ＢＰＢ）／１０％  β−メルカプトエタノール（ｍｅｒｃａｐｔｏｅｔｈａｎｏｌ）〕を加え、１００℃で５分間処理した後、５−２０％  ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより蛋白質を分離し、ＢＡＳ２０００（Ｆｕｊｉ  ｆｉｌｍ社）を用いたオートラジオグラフィーによりリン酸化蛋白質を検出した（第２図Ａおよび第２図Ｂ）。
１μｇのＧＳＴ−ｃ−Ｊｕｎ（１−７９）と活性化型ＪＮＫ３（７０ｎｇ）を、ＧＳＴまたはＧＳＴ−ＫＩＡＡ１４９１ｃｏｍｐｌｅｔｅ（共に１μｇまたは２μｇ）の存在下または非存在下で、１００μＭのＡＴＰを含むカイネーションバッファー中にて３０℃で２０分間インキュベーションすることにより、リン酸化反応を行った。反応後、等量の２×ＳＤＳサンプルバッファーを加え、１００℃で５分間処理した後、上清を１０％ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分離し、１次抗体として抗リン酸化ｃ−Ｊｕｎ（Ｓ６３）抗体（ａｎｔｉ−Ｐｈｏｓｐｈｏ−ｃ−Ｊｕｎ（Ｓ６３）ａｎｔｉｂｏｄｙ、Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ社）を、２次抗体としてホースラディッシュ・パーオキシダーゼ結合抗ウサギＩｇＧ抗体（ＨＲＰ−ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ  ａｎｔｉ−ｒａｂｂｉｔ  ＩｇＧ  ａｎｔｉｂｏｄｙ、Ａｍｅｒｓｈａｍ  ｐｈａｒｍａｃｉａ  ｂｉｏｔｅｃｈ社）を用いたイムノブロッティングによりリン酸化されたＧＳＴ−ｃ−Ｊｕｎ（１−７９）を検出した（第３図）。検出にはＥＣＬウエスタンブロッティング  ディテクションキット（Ａｍｅｒｓｈａｍ  ｐｈａｒｍａｃｉａ  ｂｉｏｔｅｃｈ社）を使用した。さらに、検出されたリン酸化ＧＳＴ−ｃ−Ｊｕｎ（１−７９）のバンド強度を画像解析ソフト、Ｉｎｔｅｌｌｉｇｅｎｔ  Ｑｕａｎｔｉｆｉｅｒ（Ｂｉｏ  Ｉｍａｇｅ社）を用いて定量し、ＧＳＴまたはＧＳＴ−ＫＩＡＡ１４９１ｃｏｍｐｌｅｔｅ存在下でのバンド強度を、非存在下での強度を１００％としたときの相対強度で示した（表１）。
＜結果＞
ＪＮＫ３によりｃ−ＪｕｎおよびＧＳＴ−ＫＩＡＡ１４９１ｃｏｍｐｌｅｔｅがリン酸化された（第２図Ａおよび第２図Ｂ）。また、このリン酸化がＪＮＫ３の用量依存的であった（第２図Ｂ）ことから、ＧＳＴ−ＫＩＡＡ１４９１ｃｏｍｐｌｅｔｅのリン酸化は自己リン酸化ではなくＪＮＫ３によるものであることが明らかになった。このことから、ＪＮＫ３とＫＩＡＡ１４９１ｃｏｍｐｌｅｔｅとが相互作用することが判明した。
また、第３図および表１に示したように、１μｇまたは２μｇのＧＳＴ−ＫＩＡＡ１４９１ｃｏｍｐｌｅｔｅ存在下では、ＪＮＫ３によるＧＳＴ−ｃ−Ｊｕｎ（１−７９）のリン酸化が約３０％阻害された。一方、陰性コントロールであるＧＳＴ存在下ではＪＮＫ３によるＧＳＴ−ｃ−Ｊｕｎ（１−７９）のリン酸化に変化はなかった。これらから、ＪＮＫ３によるＧＳＴ−ｃ−Ｊｕｎ（１−７９）のリン酸化がＫＩＡＡ１４９１ｃｏｍｐｌｅｔｅにより阻害されることが明らかになった。
2003086462.tif 000003
実施例２
（ＪＮＫ３と相互作用する蛋白質のインシリコでの探索）
ＪＮＫ３と相互作用する蛋白質を、実施例１と同様にインシリコで予測した。その結果、ＪＮＫ３由来の６アミノ酸残基からなるオリゴペプチドＳＬＦＰＡＤ（配列番号１３）と相同性あるオリゴペプチドＳＬＰＰＡＤ（配列番号１４）が、機能未知の蛋白質ＫＩＡＡ０５９６（ＧｅｎＢａｎｋ、アクセッション番号：ＡＢ０１１１６８）のアミノ酸配列中に存在することが分かった。第４図に、ＪＮＫ３とＫＩＡＡ０５９６とのローカルアライメントの結果を示した。
（ＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化に対するＫＩＡＡ０５９６の作用解析）
ＫＩＡＡ０５９６は、ＪＮＫ３と結合することが報告されているマウスＪＮＫ結合蛋白質１（ＪＮＫＢＰ１、非特許文献４）（ＧｅｎＢａｎｋ、アクセッション番号：ＡＢ０２９４８２）と７４％の相同性を示すことが判明した。マウスＪＮＫＢＰ１は、そのＣ末端領域がＪＮＫ３との結合に必要であることが知られている。そこで、ＫＩＡＡ０５９６のＣ末端領域（アミノ酸配列第６３９〜１２１７番目、以後ＫＩＡＡ０５９６ＣＴと呼ぶ）とＪＮＫ３との結合をファー・ウエスタン（Ｆａｒ−ｗｅｓｔｅｒｎ）法により解析した。さらに、活性化ＪＮＫ３のｃ−Ｊｕｎリン酸化へのＫＩＡＡ０５９６ＣＴの作用を試験した。
＜材料＞
結合試験に用いたヒトＪＮＫ３は、Ｎ末端マルトース結合蛋白質との融合蛋白質（ＭＢＰ−ＪＮＫ３）として調製した。まず、ヒト海馬ｃＤＮＡライブラリーを鋳型としてＲＴ−ＰＣＲにより得たヒトＪＮＫ３（ＪＮＫ３α１）ｃＤＮＡを、ｐＭＡＬ−ｃ２（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  ＢｉｏＬａｂｓ社）に挿入し、添付の説明書に従い、ＭＢＰ−ＪＮＫ３発現ベクターを構築した。当該ベクターを大腸菌ＤＨ５α株に導入し、ＭＢＰ−ＪＮＫ３の発現を誘導した。菌体を回収して抽出液を調整し、アミロース・レジン（ａｍｙｌｏｓｅ  ｒｅｓｉｎ）を用いてＭＢＰ−ＪＮＫ３を精製した。精製蛋白質は透析後に使用した。
リン酸化試験に用いた活性化型ヒトＪＮＫ３は、Ｎ末端Ｈｉｓ−ｔａｇ付加蛋白質（Ｈｉｓ−ＪＮＫ３）として、実施例１と同様に調製した。
ヒトＫＩＡＡ０５９６ＣＴは、Ｎ末端ＧＳＴ融合蛋白質（以下、ＧＳＴ−ＫＩＡＡ０５９６ＣＴ）として大腸菌にて発現後、Ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ  ｓｅｐｈａｒｏｓｅ  ４Ｂ（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ  ｂｉｏｔｅｃｈ社）で精製して使用した。
すなわち、まずＫＩＡＡ０５９６クローン（かずさＤＮＡ研究所より入手）を鋳型としてＫＩＡＡ０５９６の塩基配列第１９１６番目から第３６５５番目までの領域をＰＣＲにより増幅後、ゲートウェイクローニングテクノロジー（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）を用いてｐＤＥＳＴ１５ベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）に組込み、大腸菌用ＧＳＴ−ＫＩＡＡ０５９６ＣＴ発現ベクターを構築した。得ｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）に組込み、大腸菌用ＧＳＴ−ＫＩＡＡ０５９６ＣＴ発現ベクターを構築した。
当該ベクターを大腸菌ＢＬ２１−ＳＩ株（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）に導入後、１００μｇ／ｍｌのアンピシリンを含むＬＢＯＮ培地中（ＮａＣｌを含まないＬＢ培地）にて３７℃で培養後、ＮａＣｌを終濃度０．３Ｍとなるように添加し、さらに２５℃で培養してＧＳＴ−ＫＩＡＡ０５９６ＣＴの発現を誘導した。菌体を回収して抽出液を調整し、Ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ  ｓｅｐｈａｒｏｓｅ  ４Ｂを用いてＧＳＴ−ＫＩＡＡ０５９６ＣＴを精製した。精製蛋白質は透析後に使用した。
＜結合試験＞
ニトロセルロースメンブレン（Ｓｃｈｌｅｉｃｈｅｒ  ＆  Ｓｃｈｕｅｌｌ社、ＢＡ８５）上に１μｇのＧＳＴまたはＧＳＴ−ＫＩＡＡ０５９６ＣＴをスポットした後、メンブレンを５％  スキムミルクを含むＴＢＳＴ（１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，ｐＨ７．５／０．１５Ｍ  ＮａＣｌ／０．０５％  Ｔｗｅｅｎ２０）中にて室温でインキュベーションした。メンブレンをＴＢＳＴでリンスした後、１．０μｇ／ｍｌのＭＢＰ−ＪＮＫ３またはＭＢＰを含むＴＢＳＴ中にて４℃で一晩インキュベーションした。メンブレンをＴＢＳＴで洗浄後、１次抗体として抗ＭＢＰ抗血清（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ社）、２次抗体としてホースラディッシュ・パーオキシダーゼ結合抗ウサギＩｇＧ抗体（Ａｍｅｒｓｈａｍ  ｐｈａｒｍａｃｉａ  ｂｉｏｔｅｃｈ社）を用いたイムノブロッティングにより、結合したＭＢＰ−ＪＮＫ３を検出した（第５図）。なお、検出にはＥＣＬウエスタンブロッティング・ディテクション・キット（Ａｍｅｒｓｈａｍ  ｐｈａｒｍａｃｉａ  ｂｉｏｔｅｃｈ社）を使用した。
＜インビトロ  リン酸化実験（Ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ｋｉｎａｓｅ  ａｓｓａｙ）＞
１μｇのＧＳＴ−ｃ−Ｊｕｎ（１−７９）と活性化型ＪＮＫ３（７０ｎｇ）を、ＧＳＴまたはＧＳＴ−ＫＩＡＡ０５９６ＣＴ（共に１μｇまたは２μｇ）の存在下または非存在下で、１００μＭのＡＴＰを含むカイネーションバッファー（２５ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，ｐＨ７．５／５ｍＭ  β−ｇｌｙｃｅｒｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ／２ｍＭ  ＤＴＴ／０．１ｍＭ  Ｎａ３ＶＯ４／１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２）中にて３０℃で３０分間インキュベーションすることにより、リン酸化反応を行った。反応後、等量の２×ＳＤＳ  サンプルバッファー（４％  ＳＤＳ／１２５ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，ｐＨ６．８／２０％  ｇｌｙｃｅｒｏｌ／０．０１％  ＢＰＢ／１０％  β−ｍｅｒｃａｐｔｏｅｔｈａｎｏｌ）を加え、１００℃で５分間処理した後、上清を１０％ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分離し、１次抗体として抗リン酸化ｃ−Ｊｕｎ（Ｓ６３）抗体（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ社）を、２次抗体としてホースラディッシュ・パーオキシダーゼ結合抗ウサギＩｇＧ抗体（Ａｍｅｒｓｈａｍ  ｐｈａｒｍａｃｉａ  ｂｉｏｔｅｃｈ社）を用いたイムノブロッティングによりリン酸化されたＧＳＴ−ｃ−Ｊｕｎ（１−７９）を検出した（第６図）。検出にはＥＣＬウェスタンブロッティング・ディテクション・キット（Ａｍｅｒｓｈａｍ  ｐｈａｒｍａｃｉａ  ｂｉｏｔｅｃｈ社）を使用した。さらに、検出されたリン酸化ＧＳＴ−ｃ−Ｊｕｎ（１−７９）のバンド強度を画像解析ソフト、Ｉｎｔｅｌｌｉｇｅｎｔ  Ｑｕａｎｔｉｆｉｅｒ（Ｂｉｏ  Ｉｍａｇｅ社）を用いて定量し、ＧＳＴまたはＧＳＴ−ＫＩＡＡ０５９６ＣＴ存在下でのバンド強度を、非存在下での強度を１００％としたときの相対強度で示した（表２）。
＜結果＞
第５図に示したように、ＧＳＴ−ＫＩＡＡ０５９６ＣＴとＭＢＰ−ＪＮＫ３との結合が認められた。しかし、ＧＳＴ−ＫＩＡＡ０５９６ＣＴとＭＢＰとの結合、およびＧＳＴとＭＢＰ−ＪＮＫ３との結合は認められなかったことから、検出されたＧＳＴ−ＫＩＡＡ０５９６ＣＴとＭＢＰ−ＪＮＫ３との結合は特異的であることが確認された。
さらに、第６図および表２に示したように、１μｇまたは２μｇのＫＩＡＡ０５９６ＣＴ存在下では、ＪＮＫ３によるＧＳＴ−ｃ−Ｊｕｎ（１−７９）のリン酸化がそれぞれ約３０％または約６７％阻害された。一方、陰性コントロールであるＧＳＴ存在下ではＪＮＫ３によるＧＳＴ−ｃ−Ｊｕｎ（１−７９）のリン酸化に変化はなかった。これらから、ＪＮＫ３によるＧＳＴ−ｃ−Ｊｕｎ（１−７９）のリン酸化がＫＩＡＡ０５９６ＣＴにより用量依存的に阻害されることが明らかになった。
2003086462.tif 000004
実施例３
（ＪＮＫ３と相互作用する蛋白質のインシリコでの探索）
ＪＮＫ３と相互作用する蛋白質を、実施例１と同様にインシリコで予測した。この結果、ＪＮＫ３由来の６アミノ酸残基からなるオリゴペプチドＫＶＩＥＱＬ（配列番号１５）と相同性あるオリゴペプチドＫＶＫＥＱＬ（配列番号１６）が、サーカディアンリズムに関連する蛋白質ＢＭＡＬ１のアミノ酸配列中に存在することが分かった。また、ＢＭＡＬ１と相同な蛋白質ＢＭＡＬ２のアミノ酸配列中にもオリゴペプチドＫＶＫＥＱＬ（配列番号１６）が存在することが分かった。第７図および第８図に、それぞれＪＮＫ３とＢＭＡＬ１およびＪＮＫ３とＢＭＡＬ２とのローカルアライメントの結果を示した。ローカルアライメントにおいて２５．０以上のスコアを示すフラグメントは、ＪＮＫ３とＢＭＡＬ１との間で７個、ＪＮＫ３とＢＭＡＬ２との間で４個見出された。この結果から、ＪＮＫ３はＢＭＡＬ２よりもＢＭＡＬ１に強く相互作用する蛋白質であると予測された。
（ＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化に対するＢＭＡＬ１の作用解析）
＜材料＞
活性化型ヒトＪＮＫ３は、Ｎ末端ヒスチジンタグ付加蛋白質（Ｈｉｓ−ＪＮＫ３）として実施例１と同様に調製した。
ｃ−Ｊｕｎ（１−７９）は、Ｎ末端ＧＳＴ融合蛋白質〔以下、ＧＳＴ−ｃ−Ｊｕｎ（１−７９）〕として実施例１と同様に調製した。
ヒトＢＭＡＬ１は、Ｎ末端ＧＳＴ融合蛋白質（以下、ＧＳＴ−ＢＭＡＬ１）として大腸菌にて発現後、Ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ  ｓｅｐｈａｒｏｓｅ  ４Ｂ（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ  ｂｉｏｔｅｃｈ社）で精製して使用した。本実施例においては、ＢＭＡＬ１としてＢＭＡＬ１ｂ（配列番号４）を用いた。
すなわち、まず、Ｃ末端Ｖ５／Ｈｉｓ−ｔａｇ付加ヒトＢＭＡＬ１発現プラスミド、ｐｃＤＮＡ３．１−ＢＭＡＬ１／Ｖ５−Ｈｉｓ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）からＢＭＡＬ１のＯＲＦ領域をＰＣＲにより増幅後、ｐＧＥＸ−４Ｔ（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ  ｂｉｏｔｅｃｈ社）に挿入し、大腸菌用ＧＳＴ−ＢＭＡＬ１発現ベクターを構築した。得られた塩基配列（配列番号９）は、ダイレクトシーケンシング法により常法に従って確認した。
次に、上記発現ベクターを導入した大腸菌ＢＬ２１株を１００μｇ／ｍｌのアンピシリンを含むＬＢ培地中にて３７℃で培養後、イソプロピル１−チオ−β−Ｄ−ガラクトシド（ＩＰＴＧ）を終濃度０．３ｍＭとなるように添加し、さらに２５℃で培養後、菌体を回収した。この菌体から、プロテアーゼ阻害剤カクテルを含むＴＧＥＤＳバッファー〔５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，ｐＨ８．０／０．２ｍＭ  エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）／１ｍＭ  ＤＴＴ／１５０ｍＭ  ＮａＣｌ／１０％  ｇｌｙｃｅｒｏｌ〕を用いて、抽出液を調製し、Ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ  ｓｅｐｈａｒｏｓｅ  ４ＢによりＧＳＴ−ＢＭＡＬ１を精製した。精製したＧＳＴ−ＢＭＡＬ１はＴＧＥＤＳバッファー／０．１％  ＴｒｉｔｏｎＸ−１００で透析後に使用した。
＜インビトロ  リン酸化実験（Ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ｋｉｎａｓｅ  ａｓｓａｙ）＞
１μｇの上記各ＧＳＴ融合蛋白質〔ＧＳＴ−ＢＭＡＬ１、ＧＳＴ−ｃ−Ｊｕｎ（１−７９）またはＧＳＴ〕と活性化型ＪＮＫ３（７０ｎｇ）を、５μＣｉの［γ−３２Ｐ］ＡＴＰ（３０００Ｃｉ／ｍｍｏｌ、ＮＥＮ社）を含むカイネーションバッファー（２５ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，ｐＨ７．５／５ｍＭ  β−ｇｌｙｃｅｒｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ／２ｍＭ  ＤＴＴ／０．１ｍＭ  Ｎａ３ＶＯ４／１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２／１０μＭ  ＡＴＰ）中にて３０℃で３０分間インキュベーションすることにより、リン酸化反応を行った。反応後、等量の２×ＳＤＳ  サンプルバッファー〔４％  ＳＤＳ／１２５ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，ｐＨ６．８／２０％  ｇｌｙｃｅｒｏｌ／０．０１％  ＢＰＢ／１０％  β−ｍｅｒｃａｐｔｏｅｔｈａｎｏｌ〕を加え、１００℃で５分間処理した後、５−２０％  ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより蛋白質を分離し、ＢＡＳ２０００（Ｆｕｊｉ  ｆｉｌｍ社）を用いたオートラジオグラフィーによりリン酸化蛋白質を検出した（第９図Ｂ）。また、用いた各ＧＳＴ融合蛋白質（１μｇ）を５−２０％  ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分離後、ＣＢＢ染色を行うことにより、目的蛋白質の移動度を確認した（第９図Ａ）。なお、ＧＳＴ−ＢＭＡＬ１リン酸化反応におけるＪＮＫ３の用量依存性を確認する場合は、反応系に加える活性化型ＪＮＫ３を０ｎｇ、１４ｎｇ、２８ｎｇおよび７０ｎｇとし、以下同様の方法にてリン酸化蛋白質を検出した（第１０図）。
次に、１μｇのＧＳＴ−ｃ−Ｊｕｎ（１−７９）と活性化型ＪＮＫ３（７０ｎｇ）を、ＧＳＴまたはＧＳＴ−ＢＭＡＬ１（共に１μｇまたは２μｇ）の存在下若しくは非存在下で、１００μＭのＡＴＰを含むカイネーションバッファー中にて３０℃で２０分間インキュベーションすることによりリン酸化反応を行った。反応後、上記同様にサンプルバッファーで処理し、上清を１０％ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分離し、１次抗体として抗リン酸化ｃ−Ｊｕｎ抗体（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ社）を、２次抗体としてホースラディッシュ・パーオキシダーゼ結合抗ウサギＩｇＧ抗体（Ａｍｅｒｓｈａｍ  ｐｈａｒｍａｃｉａ  ｂｉｏｔｅｃｈ社）を用いたイムノブロッティングによりリン酸化されたＧＳＴ−ｃ−Ｊｕｎ（１−７９）を検出した（第１１図）。検出にはＥＣＬウエスタンブロッティング・ディテクション・キット（Ａｍｅｒｓｈａｍ  ｐｈａｒｍａｃｉａ  ｂｉｏｔｅｃｈ社）を使用した。さらに、検出されたリン酸化ＧＳＴ−ｃ−Ｊｕｎ（１−７９）のバンド強度を画像解析ソフト、Ｉｎｔｅｌｌｉｇｅｎｔ  Ｑｕａｎｔｉｆｉｅｒ（Ｂｉｏ  Ｉｍａｇｅ社）を用いて定量し、ＧＳＴまたはＧＳＴ−ＢＭＡＬ１存在下でのバンド強度を、非存在下での強度を１００％としたときの相対強度で示した（表３）
＜結果＞
第９図Ｂに示したように、ＪＮＫ３によるＧＳＴ−ｃ−Ｊｕｎ（１−７９）のリン酸化が認められた。一方、陰性コントロールであるＧＳＴにおいてはリン酸化が認められなかったことから、本実施例で用いた実験系がＪＮＫ３の活性を測定する上で妥当であることが確認された。この実験系において、ＪＮＫ３によるＧＳＴ−ＢＭＡＬ１のリン酸化が認められた。また、このリン酸化がＪＮＫ３の用量依存的であったことから、ＧＳＴ−ＢＭＡＬ１のリン酸化は自己リン酸化ではなくＪＮＫ３によるものであることが明らかになった（第１０図）。これらから、ＪＮＫ３とＢＭＡＬ１とが相互作用することが判明した。
また、第１１図および表３に示したように、１μｇまたは２μｇのＧＳＴ−ＢＭＡＬ１の存在下では、ＪＮＫ３によるＧＳＴ−ｃ−Ｊｕｎ（１−７９）のリン酸化がそれぞれ約５％または約１５％にまで低減した。一方、ＧＳＴ存在下ではＪＮＫ３によるＧＳＴ−ｃ−Ｊｕｎ（１−７９）のリン酸化に変化はなかった。これらから、ＪＮＫ３によるＧＳＴ−ｃ−Ｊｕｎ（１−７９）のリン酸化がＢＭＡＬ１により阻害されることが明らかになった。
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実施例４
（ＪＮＫ３と相互作用する蛋白質のインシリコでの探索）
ＪＮＫ３と相互作用する蛋白質を、実施例１と同様にインシリコで予測した。
この結果、ＪＮＫ３由来の６アミノ酸残基からなるオリゴペプチドＬＰＰＳＳＳ（配列番号１７）およびＡＮＬＣＱＶ（配列番号１８）と相同性あるオリゴペプチドＬＰＰＳＳＮ（配列番号１９）およびＡＶＬＣＱＶ（配列番号２０）が、ホロカルボキシラーゼ合成酵素であるＢＰＬ１のアミノ酸配列中に存在することが分かった。第１２図に、ＪＮＫ３とＢＰＬ１とのローカルアライメントの結果を示した。ローカルアライメントにおいて２５．０以上のスコアを示すフラグメントは、ＪＮＫ３とＢＰＬ１との間で８個見出された。この結果から、ＪＮＫ３とＢＰＬ１は相互作用する蛋白質であることが予測された。
（ＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化に対するＢＰＬ１の作用解析）
＜材料＞
活性化型ヒトＪＮＫ３は、Ｎ末端ヒスチジンタグ付加蛋白質（Ｈｉｓ−ＪＮＫ３）として実施例１と同様に調製した。
ｃ−Ｊｕｎ（１−７９）は、Ｎ末端ＧＳＴ融合蛋白質〔以下、ＧＳＴ−ｃ−Ｊｕｎ（１−７９）〕として実施例１と同様に調製した。
ヒトＢＰＬ１は、Ｎ末端ＧＳＴ融合蛋白質（以下、ＧＳＴ−ＢＰＬ１）として大腸菌にて発現後、Ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ  ｓｅｐｈａｒｏｓｅ  ４Ｂ（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ  ｂｉｏｔｅｃｈ社）で精製して使用した。本実施例においては、ＢＰＬ１として配列番号５に記載のアミノ酸配列からなるペプチドを用いた。
すなわち、まず、Ｃ末端Ｖ５／Ｈｉｓ−ｔａｇ付加ヒトＢＰＬ１発現プラスミド、ｐｃＤＮＡ３．１−ＢＰＬ１／Ｖ５−Ｈｉｓ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）からＢＰＬ１のＯＲＦ領域をＰＣＲにより増幅後、ｐＧＥＸ−４Ｔ（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ  ｂｉｏｔｅｃｈ社）に挿入し、大腸菌用ＧＳＴ−ＢＰＬ１発現ベクターを構築した。得られた塩基配列（配列番号１０）は、ダイレクトシーケンシング法により常法に従って確認した。
次に、上記発現ベクターを導入した大腸菌ＢＬ２１株を１００μｇ／ｍｌのアンピシリンを含むＬＢ培地中にて３７℃で培養後、ＩＰＴＧを終濃度０．１ｍＭとなるように添加し、さらに２５℃で培養後、菌体を回収した。この菌体から、プロテアーゼ阻害剤カクテルを含むＴＧＥＤＳバッファー〔５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，ｐＨ８．０／０．２ｍＭ  ＥＤＴＡ／１ｍＭ  ＤＴＴ／１５０ｍＭ  ＮａＣｌ／１０％  ｇｌｙｃｅｒｏｌ〕を用いて、抽出液を調製し、Ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ  ｓｅｐｈａｒｏｓｅ  ４ＢによりＧＳＴ−ＢＰＬ１を精製した。精製したＧＳＴ−ＢＰＬ１はＴＧＥＤＳバッファーで透析後に使用した。
＜インビトロ  リン酸化実験（Ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ｋｉｎａｓｅ  ａｓｓａｙ）＞
１μｇの各ＧＳＴ融合タンパク質〔ＧＳＴ−ＢＰＬ１、ＧＳＴ−ｃ−Ｊｕｎ（１−７９）またはＧＳＴ〕と活性化型ＪＮＫ３（０、１４、２８または７０ｎｇ）を、５μＣｉの［γ−３２Ｐ］ＡＴＰ（３０００Ｃｉ／ｍｍｏｌ、ＮＥＮ社）を含むカイネーションバッファー（２５ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，ｐＨ７．５／５ｍＭ  ｇｌｙｃｅｒｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ／２ｍＭ  ＤＴＴ／０．１ｍＭ  Ｎａ３ＶＯ４／１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２／１０μＭ  ＡＴＰ）中にて３０℃で３０分間インキュベーションすることにより、リン酸化反応を行った。反応後、等量の２×ＳＤＳ  サンプルバッファー（４％  ＳＤＳ／１２５ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，ｐＨ６．８／２０％  ｇｌｙｃｅｒｏｌ／０．０１％  ＢＰＢ／１０％  β−ｍｅｒｃａｐｔｏｅｔｈａｎｏｌ）を加え、１００℃で５分間処理した後、５−２０％  ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより蛋白質を分離し、ＢＡＳ２０００（Ｆｕｊｉ  ｆｉｌｍ社）を用いたオートラジオグラフィーによりリン酸化蛋白質を検出した。
次に、１μｇのＧＳＴ−ｃ−Ｊｕｎ（１−７９）と活性化型ＪＮＫ３（７０ｎｇ）を、ＧＳＴまたはＧＳＴ−ＢＰＬ１（共に１μｇまたは２μｇ）の存在下または非存在下で、５μＣｉの［γ−３２Ｐ］ＡＴＰ（３０００Ｃｉ／ｍｍｏｌ、ＮＥＮ社）を含むカイネーションバッファー中にて、３０℃で３０分間インキュベーションすることにより、リン酸化反応を行った。反応後、等量の２×ＳＤＳ  サンプルバッファーを加え、１００℃で５分間処理した後、上清を１０％ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分離し、１次抗体として抗リン酸化ｃ−Ｊｕｎ（Ｓ６３）抗体（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ社）を、２次抗体としてホースラディッシュ・パーオキシダーゼ結合抗ウサギＩｇＧ抗体（Ａｍｅｒｓｈａｍ  ｐｈａｒｍａｃｉａ  ｂｉｏｔｅｃｈ社）を用いたイムノブロッティングによりリン酸化されたＧＳＴ−ｃ−Ｊｕｎ（１−７９）を検出した（第１３図）。検出にはＥＣＬウエスタンブロッティング・ディテクション・キット（Ａｍｅｒｓｈａｍ  ｐｈａｒｍａｃｉａ  ｂｉｏｔｅｃｈ社）を使用した。さらに、検出されたリン酸化ＧＳＴ−ｃ−Ｊｕｎ（１−７９）のバンド強度を画像解析ソフト、Ｉｎｔｅｌｌｉｇｅｎｔ  Ｑｕａｎｔｉｆｉｅｒ（Ｂｉｏ  Ｉｍａｇｅ社）を用いて定量し、ＧＳＴまたはＧＳＴ−ＢＰＬ１存在下でのバンド強度を、非存在下での強度を１００％としたときの相対強度で示した（表４）。
＜結果＞
ＪＮＫ３によりＧＳＴ−ＢＰＬ１のリン酸化が認められた。また、このリン酸化がＪＮＫ３の用量依存的であったことから、ＧＳＴ−ＢＰＬ１のリン酸化は自己リン酸化ではなくＪＮＫ３によるものであることが明らかになった。このことから、ＪＮＫ３とＢＰＬ１とが相互作用することが判明した。
第１３図および表４に示したように、１μｇまたは２μｇのＧＳＴ−ＢＰＬ１の存在下では、ＪＮＫ３によるＧＳＴ−ｃ−Ｊｕｎ（１−７９）のリン酸化がそれぞれ約２０％または約４０％阻害された。一方、ＧＳＴ存在下ではＪＮＫ３によるＧＳＴ−ｃ−Ｊｕｎ（１−７９）のリン酸化に変化はなかった。これらから、ＪＮＫ３によるＧＳＴ−ｃ−Ｊｕｎ（１−７９）のリン酸化がＢＰＬ１により用量依存的に阻害されることが明らかになった。
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産業上の利用可能性
本発明においては、ＪＮＫ３と相互作用する機能を有するＫＩＡＡ１４９１ｃｏｍｐｌｅｔｅ（配列番号１）、ＫＩＡＡ０５９６ＣＴ（配列番号２）、ＫＩＡＡ０５９６（配列番号３）、ＢＭＡＬ１、およびＢＰＬ１を見出し、これらによってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化の阻害を可能にした。ｃ−Ｊｕｎはトランスアクチベーターであり転写活性化能を有することが知られている。また、神経細胞死が認められる疾患、例えばポリグルタミン病やアルツハイマー病、においてＪＮＫ３の関与が認められている。したがって、ＪＮＫ３と相互作用する機能を有するＫＩＡＡ１４９１ｃｏｍｐｌｅｔｅ（配列番号１）、ＫＩＡＡ０５９６ＣＴ（配列番号２）、ＫＩＡＡ０５９６（配列番号３）、ＢＭＡＬ１、またはＢＰＬ１のうちの１つまたは２つ以上を用いてＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害することにより、ｃ−Ｊｕｎの転写活性化能を抑制することができ、さらにはＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化により引き起こされる生理的現象、例えばアポトーシスを抑制することが可能と考えられる。
これらのことから本発明は、ＪＮＫ３と相互作用する機能を有するＫＩＡＡ１４９１ｃｏｍｐｌｅｔｅ（配列番号１）、ＫＩＡＡ０５９６ＣＴ（配列番号２）、ＫＩＡＡ０５９６（配列番号３）、ＢＭＡＬ１、ＢＰＬ１、またはこれらに由来するペプチドを利用して、ｃ−Ｊｕｎリン酸化の阻害、ｃ−Ｊｕｎの機能（例えば転写活性化能等）の阻害、アポトーシス抑制（例えば神経細胞等のアポトーシス抑制）、さらに神経変性疾患等（例えばポリグルタミン病やアルツハイマー病等）の防止および／または治療に用いる薬剤および医薬組成物並びにその方法を提供可能であり、またＪＮＫシグナル経路およびその機能の研究のために非常に有用である。
配列表フリーテキスト
配列番号１１：ＪＮＫ３とＫＩＡＡ１４９１（配列番号６）とのローカルアライメントにおいて高いスコアを示したＪＮＫ３の部分オリゴペプチド。
配列番号１２：ＪＮＫ３とＫＩＡＡ１４９１（配列番号６）とのローカルアライメントにおいて高いスコアを示したＫＩＡＡ１４９１の部分オリゴペプチド。
配列番号１３：ＪＮＫ３のアミノ酸配列中に存在する連続する６アミノ酸残基からなるペプチド。
配列番号１４：配列番号９に記載のアミノ酸配列からなるペプチドと高い相同性を有するＫＩＡＡ０５９６（配列番号３）の部分ペプチド。
配列番号１５：ＪＮＫ３のアミノ酸配列中に存在する連続する６アミノ酸残基からなるペプチド。
配列番号１６：配列番号４１に記載のアミノ酸配列からなるペプチドと高い相同性を有するＢＭＡＬ１またはＢＭＡＬ２の部分ペプチド。
配列番号１７：ＪＮＫ３のアミノ酸配列中に存在する連続する６アミノ酸残基からなるペプチド。
配列番号１８：ＪＮＫ３のアミノ酸配列中に存在する連続する６アミノ酸残基からなるペプチド。
配列番号１９：配列番号１３に記載のアミノ酸配列からなるペプチドと高い相同性を有するＢＰＬ１の部分ペプチド。
配列番号２０：配列番号１４に記載のアミノ酸配列からなるペプチドと高い相同性を有するＢＰＬ１の部分ペプチド。
配列番号２１：ＪＮＫ３とＫＩＡＡ１４９１（配列番号６）とのローカルアライメントにおいて高いスコアを示したＪＮＫ３の部分オリゴペプチド。
配列番号２２：ＪＮＫ３とＫＩＡＡ１４９１（配列番号６）とのローカルアライメントにおいて高いスコアを示したＫＩＡＡ１４９１の部分オリゴペプチド。
配列番号２３：ＪＮＫ３とＫＩＡＡ１４９１（配列番号６）とのローカルアライメントにおいて高いスコアを示したＪＮＫ３の部分オリゴペプチド。
配列番号２４：ＪＮＫ３とＫＩＡＡ１４９１（配列番号６）とのローカルアライメントにおいて高いスコアを示したＫＩＡＡ１４９１の部分オリゴペプチド。
配列番号２５：ＪＮＫ３とＫＩＡＡ１４９１（配列番号６）の配列において一致する部分配列。
配列番号２６：ＪＮＫ３とＫＩＡＡ１４９１（配列番号６）とのローカルアライメントにおいて高いスコアを示したＪＮＫ３の部分オリゴペプチド。
配列番号２７：ＪＮＫ３とＫＩＡＡ１４９１（配列番号６）とのローカルアライメントにおいて高いスコアを示したＫＩＡＡ１４９１の部分オリゴペプチド。
配列番号２８：ＪＮＫ３とＫＩＡＡ１４９１（配列番号６）の配列において一致する部分配列。
配列番号２９：ＪＮＫ３とＫＩＡＡ１４９１（配列番号６）とのローカルアライメントにおいて高いスコアを示したＪＮＫ３の部分オリゴペプチド。
配列番号３０：ＪＮＫ３とＫＩＡＡ１４９１（配列番号６）とのローカルアライメントにおいて高いスコアを示したＫＩＡＡ１４９１の部分オリゴペプチド。
配列番号３１：ＪＮＫ３とＫＩＡＡ１４９１（配列番号６）の配列において一致する部分配列。
配列番号３２：ＪＮＫ３とＫＩＡＡ１４９１（配列番号６）とのローカルアライメントにおいて高いスコアを示したＪＮＫ３の部分オリゴペプチド。
配列番号３３：ＪＮＫ３とＫＩＡＡ１４９１（配列番号６）とのローカルアライメントにおいて高いスコアを示したＫＩＡＡ１４９１の部分オリゴペプチド。
配列番号３４：ＪＮＫ３とＫＩＡＡ１４９１（配列番号６）とのローカルアライメントにおいて高いスコアを示したＪＮＫ３の部分オリゴペプチド。
配列番号３５：ＪＮＫ３とＫＩＡＡ１４９１（配列番号６）とのローカルアライメントにおいて高いスコアを示したＫＩＡＡ１４９１の部分オリゴペプチド。
配列番号３６：ＪＮＫ３とＫＩＡＡ０５９６（配列番号３）とのローカルアライメントにおいて高いスコアを示したＪＮＫ３の部分オリゴペプチド。
配列番号３７：ＪＮＫ３とＫＩＡＡ０５９６（配列番号３）とのローカルアライメントにおいて高いスコアを示したＫＩＡＡ０５９６の部分オリゴペプチド。
配列番号３８：ＪＮＫ３とＫＩＡＡ０５９６（配列番号３）とのローカルアライメントにおいて高いスコアを示したＪＮＫ３の部分オリゴペプチド。
配列番号３９：ＪＮＫ３とＫＩＡＡ０５９６（配列番号３）とのローカルアライメントにおいて高いスコアを示したＫＩＡＡ０５９６の部分オリゴペプチド。
配列番号４０：ＪＮＫ３とＫＩＡＡ０５９６（配列番号３）とのローカルアライメントにおいて高いスコアを示したＪＮＫ３の部分オリゴペプチド。
配列番号４１：ＪＮＫ３とＫＩＡＡ０５９６（配列番号３）とのローカルアライメントにおいて高いスコアを示したＫＩＡＡ０５９６の部分オリゴペプチド。
配列番号４２：ＪＮＫ３とＫＩＡＡ０５９６（配列番号３）とのローカルアライメントにおいて高いスコアを示したＪＮＫ３の部分オリゴペプチド。
配列番号４３：ＪＮＫ３とＫＩＡＡ０５９６（配列番号３）とのローカルアライメントにおいて高いスコアを示したＫＩＡＡ０５９６の部分オリゴペプチド。
配列番号４４：ＪＮＫ３とＫＩＡＡ０５９６（配列番号３）とのローカルアライメントにおいて高いスコアを示したＪＮＫ３の部分オリゴペプチド。
配列番号４５：ＪＮＫ３とＫＩＡＡ０５９６（配列番号３）とのローカルアライメントにおいて高いスコアを示したＫＩＡＡ０５９６の部分オリゴペプチド。
配列番号４６：ＪＮＫ３とＫＩＡＡ０５９６（配列番号３）とのローカルアライメントにおいて高いスコアを示したＪＮＫ３の部分オリゴペプチド。
配列番号４７：ＪＮＫ３とＫＩＡＡ０５９６（配列番号３）とのローカルアライメントにおいて高いスコアを示したＫＩＡＡ０５９６の部分オリゴペプチド。
配列番号４８：ＪＮＫ３とＫＩＡＡ０５９６（配列番号３）とのローカルアライメントにおいて高いスコアを示したＪＮＫ３の部分オリゴペプチド。
配列番号４９：ＪＮＫ３とＫＩＡＡ０５９６（配列番号３）とのローカルアライメントにおいて高いスコアを示したＫＩＡＡ０５９６の部分オリゴペプチド。
配列番号５０：ＪＮＫ３とＢＭＡＬ１とのローカルアライメントにおいて高いスコアを示したＪＮＫ３の部分オリゴペプチド。
配列番号５１：ＪＮＫ３とＢＭＡＬ１とのローカルアライメントにおいて高いスコアを示したＢＭＡＬ１の部分オリゴペプチド。
配列番号５２：ＪＮＫ３とＢＭＡＬ１とのローカルアライメントにおいて高いスコアを示したＪＮＫ３の部分オリゴペプチド。
配列番号５３：ＪＮＫ３とＢＭＡＬ１とのローカルアライメントにおいて高いスコアを示したＢＭＡＬ１の部分オリゴペプチド。
配列番号５４：ＪＮＫ３とＢＭＡＬ１とのローカルアライメントにおいて高いスコアを示したＪＮＫ３の部分オリゴペプチド。
配列番号５５：ＪＮＫ３とＢＭＡＬ１とのローカルアライメントにおいて高いスコアを示したＢＭＡＬ１の部分オリゴペプチド。
配列番号５６：ＪＮＫ３とＢＭＡＬ１とのローカルアライメントにおいて高いスコアを示したＪＮＫ３の部分オリゴペプチド。
配列番号５７：ＪＮＫ３とＢＭＡＬ１とのローカルアライメントにおいて高いスコアを示したＢＭＡＬ１の部分オリゴペプチド。
配列番号５８：ＪＮＫ３とＢＭＡＬ１とのローカルアライメントにおいて高いスコアを示したＪＮＫ３の部分オリゴペプチド。
配列番号５９：ＪＮＫ３とＢＭＡＬ１とのローカルアライメントにおいて高いスコアを示したＢＭＡＬ１の部分オリゴペプチド。
配列番号６０：ＪＮＫ３とＢＭＡＬ１とのローカルアライメントにおいて高いスコアを示したＪＮＫ３の部分オリゴペプチド。
配列番号６１：ＪＮＫ３とＢＭＡＬ１とのローカルアライメントにおいて高いスコアを示したＢＭＡＬ１の部分オリゴペプチド。
配列番号６２：ＪＮＫ３とＢＭＡＬ１とのローカルアライメントにおいて高いスコアを示したＪＮＫ３の部分オリゴペプチド。
配列番号６３：ＪＮＫ３とＢＭＡＬ１とのローカルアライメントにおいて高いスコアを示したＢＭＡＬ１の部分オリゴペプチド。
配列番号６４：ＪＮＫ３とＢＭＡＬ２とのローカルアライメントにおいて高いスコアを示したＪＮＫ３の部分オリゴペプチド。
配列番号６５：ＪＮＫ３とＢＭＡＬ２とのローカルアライメントにおいて高いスコアを示したＢＭＡＬ２の部分オリゴペプチド。
配列番号６６：ＪＮＫ３とＢＭＡＬ２とのローカルアライメントにおいて高いスコアを示したＪＮＫ３の部分オリゴペプチド。
配列番号６７：ＪＮＫ３とＢＭＡＬ２とのローカルアライメントにおいて高いスコアを示したＢＭＡＬ２の部分オリゴペプチド。
配列番号６８：ＪＮＫ３とＢＭＡＬ２とのローカルアライメントにおいて高いスコアを示したＪＮＫ３の部分オリゴペプチド。
配列番号６９：ＪＮＫ３とＢＭＡＬ２とのローカルアライメントにおいて高いスコアを示したＢＭＡＬ２の部分オリゴペプチド。
配列番号７０：ＪＮＫ３とＢＭＡＬ２とのローカルアライメントにおいて高いスコアを示したＪＮＫ３の部分オリゴペプチド。
配列番号７１：ＪＮＫ３とＢＭＡＬ２とのローカルアライメントにおいて高いスコアを示したＢＭＡＬ２の部分オリゴペプチド。
配列番号７２：ＪＮＫ３とＢＰＬ１とのローカルアライメントにおいて高いスコアを示したＪＮＫ３の部分オリゴペプチド。
配列番号７３：ＪＮＫ３とＢＰＬ１とのローカルアライメントにおいて高いスコアを示したＢＰＬ１の部分オリゴペプチド。
配列番号７４：ＪＮＫ３とＢＰＬ１とのローカルアライメントにおいて高いスコアを示したＪＮＫ３の部分オリゴペプチド。
配列番号７５：ＪＮＫ３とＢＰＬ１とのローカルアライメントにおいて高いスコアを示したＢＰＬ１の部分オリゴペプチド。
配列番号７６：ＪＮＫ３とＢＰＬ１とのローカルアライメントにおいて高いスコアを示したＪＮＫ３の部分オリゴペプチド。
配列番号７７：ＪＮＫ３とＢＰＬ１とのローカルアライメントにおいて高いスコアを示したＢＰＬ１の部分オリゴペプチド。
配列番号７８：ＪＮＫ３とＢＰＬ１とのローカルアライメントにおいて高いスコアを示したＪＮＫ３の部分オリゴペプチド。
配列番号７９：ＪＮＫ３とＢＰＬ１とのローカルアライメントにおいて高いスコアを示したＢＰＬ１の部分オリゴペプチド。
配列番号８０：ＪＮＫ３とＢＰＬ１の配列において一致する部分配列。
配列番号８１：ＪＮＫ３とＢＰＬ１とのローカルアライメントにおいて高いスコアを示したＪＮＫ３の部分オリゴペプチド。
配列番号８２：ＪＮＫ３とＢＰＬ１とのローカルアライメントにおいて高いスコアを示したＢＰＬ１の部分オリゴペプチド。
配列番号８３：ＪＮＫ３とＢＰＬ１の配列において一致する部分配列。
配列番号８４：ＪＮＫ３とＢＰＬ１とのローカルアライメントにおいて高いスコアを示したＪＮＫ３の部分オリゴペプチド。
配列番号８５：ＪＮＫ３とＢＰＬ１とのローカルアライメントにおいて高いスコアを示したＢＰＬ１の部分オリゴペプチド。
配列番号８６：ＪＮＫ３とＢＰＬ１の配列において一致する部分配列。
配列番号８７：ＪＮＫ３とＢＰＬ１とのローカルアライメントにおいて高いスコアを示したＪＮＫ３の部分オリゴペプチド。
配列番号８８：ＪＮＫ３とＢＰＬ１とのローカルアライメントにおいて高いスコアを示したＢＰＬ１の部分オリゴペプチド。
配列番号８９：ＪＮＫ３とＢＰＬ１とのローカルアライメントにおいて高いスコアを示したＪＮＫ３の部分オリゴペプチド。
配列番号９０：ＪＮＫ３とＢＰＬ１とのローカルアライメントにおいて高いスコアを示したＢＰＬ１の部分オリゴペプチド。
【配列表】
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【図面の簡単な説明】
第１図は、ＪＮＫ３とＫＩＡＡ１４９１（配列番号６）との相互作用をインシリコで予測した結果を示す。ＪＮＫ３とＫＩＡＡ１４９１のローカルアライメントを行い、高いスコアを示した領域を表示した。上の配列および下の配列はそれぞれ、ＪＮＫ３に存在する配列およびＫＩＡＡ１４９１に存在する配列である。
第２図Ａおよび第２図Ｂは、ｃ−ＪｕｎおよびＫＩＡＡ１４９１ｃｏｍｐｌｅｔｅ（配列番号１）がＪＮＫ３によりインビトロでリン酸化されたことを示す。第２図Ａは、ＧＳＴ−ｃ−Ｊｕｎ（１−７９）〔グルタチオン  Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）とｃ−ＪｕｎのＮ末端７９アミノ酸領域との融合蛋白質〕がＪＮＫ３によりリン酸化されたが、ＧＳＴはリン酸化されなかったことを示す。第２図Ｂは、ＧＳＴとＫＩＡＡ１４９１ｃｏｍｐｌｅｔｅとの融合蛋白質（ＧＳＴ−ＫＩＡＡ１４９１ｃｏｍｐｌｅｔｅ）が、ＪＮＫ３によりＪＮＫ３の用量依存的にリン酸化されたことを示す。図の左側に示した数値は分子量を示す。
第３図は、ＫＩＡＡ１４９１ｃｏｍｐｌｅｔｅ（配列番号１）がＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害したことを示す。レーン１は、ＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎ（１−７９）のリン酸化反応に他の蛋白質を無添加のとき、レーン２および３はＧＳＴをそれぞれ１μｇおよび２μｇ、レーン４および５はＧＳＴ−ＫＩＡＡ１４９１ｃｏｍｐｌｅｔｅをそれぞれ１μｇおよび２μｇ添加したときの結果を示す。矢頭はリン酸化されたｃ−Ｊｕｎ（１−７９）を示す。
第４図は、ＪＮＫ３とＫＩＡＡ０５６９（配列番号３）との相互作用をインシリコで予測した結果を示す。ＪＮＫ３とＫＩＡＡ０５６９のローカルアライメントを行い、高いスコアを示した領域を表示した。上の配列および下の配列はそれぞれ、ＪＮＫ３に存在する配列およびＫＩＡＡ０５６９に存在する配列である。
第５図は、ＫＩＡＡ０５６９ＣＴ（ＫＩＡＡ０５９６のアミノ酸配列第６３９〜１２１７番目のアミノ酸配列からなるペプチド、配列番号２）がＪＮＫ３と結合したことを示す。上図はＧＳＴ−ＫＩＡＡ０５６９ＣＴ（ＫＩＡＡ０５６９ＣＴとＧＳＴとの融合蛋白質）の、ＭＢＰ−ＪＮＫ３〔ＪＮＫ３とマルトース結合蛋白質（ＭＢＰ）との融合蛋白質〕との結合を、下図は陰性コントロールであるＭＢＰとの結合をファー・ウエスタン法で検出した結果を示す。
第６図は、ＫＩＡＡ０５６９ＣＴ（配列番号２）がＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害したことを示す。レーン１および４は、ＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎ（１−７９）のリン酸化反応に他の蛋白質を無添加のとき、レーン２および３はＧＳＴをそれぞれ１μｇおよび２μｇ、レーン５および６はＧＳＴ−ＫＩＡＡ０５９６ＣＴをそれぞれ１μｇおよび２μｇ添加したときの結果を示す。矢頭はリン酸化されたｃ−Ｊｕｎ（１−７９）を示す。
第７図は、ＪＮＫ３とＢＭＡＬ１との相互作用をインシリコで予測した結果を示す。ＪＮＫ３とＢＭＡＬ１のローカルアライメントを行い、高いスコアを示した領域を表示した。上の配列および下の配列はそれぞれ、ＪＮＫ３に存在する配列およびＢＭＡＬ１に存在する配列である。
第８図は、ＪＮＫ３とＢＭＡＬ２との相互作用をインシリコで予測した結果を示す。ＪＮＫ３とＢＭＡＬ２のローカルアライメントを行い、高いスコアを示した領域を表示した。上の配列および下の配列はそれぞれ、ＪＮＫ３に存在する配列およびＢＭＡＬ２に存在する配列である。
第９図Ａおよび第９図Ｂは、ＢＭＡＬ１がＪＮＫ３によりインビトロでリン酸化されたことを示す。第９図Ａは、精製した各ＧＳＴ融合蛋白質〔レーン１：ＧＳＴ−ＢＭＡＬ１、レーン２：ＧＳＴ、レーン３：ＧＳＴ−ｃ−Ｊｕｎ（１−７９）〕をドデシル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）で泳動した位置をクマシーブリリアントブルー（ＣＢＢ）染色により検出した結果を示す（矢頭）。レーンＭは分子量マーカーである。図の左側に示した数値は分子量を示す。第９図Ｂは、ＧＳＴ−ＢＭＡＬ１（レーン１）またはＧＳＴ−ｃ−Ｊｕｎ（１−７９）（レーン３）がＪＮＫ３によりリン酸されたが、ＧＳＴ（レーン２）はリン酸化されなかったことを示す。矢頭はリン酸化されたＧＳＴ−ＢＭＡＬ１およびＧＳＴ−ｃ−Ｊｕｎ（１−７９）を示す。
第１０図は、ＢＭＡＬ１がＪＮＫ３の用量依存的にＪＮＫ３によりリン酸化されたことを示す。レーン１、レーン２、レーン３およびレーン４はそれぞれ、ＢＭＡＬ１単独、ＪＮＫ３を１４ｎｇ、２８ｎｇおよび７０ｎｇ用いた結果を示す。矢頭はリン酸化されたＧＳＴ−ＢＭＡＬ１を示す。図の左側に示した数値は分子量マーカーの分子量である。
第１１図は、ＢＭＡＬ１がＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害したことを示す。レーン１および４は、ＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎ（１−７９）のリン酸化反応に他の蛋白質を無添加のとき、レーン２および３はＧＳＴをそれぞれ１μｇおよび２μｇ、レーン５および６はＧＳＴ−ＢＭＡＬ１をそれぞれ１μｇおよび２μｇ添加したときの結果を示す。矢頭はリン酸化されたｃ−Ｊｕｎ（１−７９）を示す。
第１２図は、ＪＮＫ３とＢＰＬ１との相互作用をインシリコで予測した結果を示す。ＪＮＫ３とＢＰＬ１のローカルアライメントを行い、高いスコアを示した領域を表示した。上の配列および下の配列はそれぞれ、ＪＮＫ３に存在する配列およびＢＰＬ１に存在する配列である。
第１３図は、ＢＰＬ１がＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害したことを示す。レーン１は、ＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎ（１−７９）のリン酸化反応に他の蛋白質を無添加のとき、レーン２および３はＧＳＴをそれぞれ１μｇおよび２μｇ、レーン４および５はＧＳＴ−ＢＰＬ１をそれぞれ１μｇおよび２μｇ添加したときの結果を示す。矢頭はリン酸化されたｃ−Ｊｕｎ（１−７９）を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【手続補正書】
【提出日】平成16年7月12日(2004.7.12)
【手続補正００１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【書類名】特許請求の範囲
【請求項１】ｃ−Ｊｕｎ  Ｎ末端キナーゼ３と相互作用する機能を有する下記ペプチド群から選ばれる１つまたは２つ以上のペプチドを有効成分として含んでなるｃ−Ｊｕｎのリン酸化阻害剤；
（ｉ）ＢＭＡＬ１、
（ｉｉ）ＢＰＬ１、
（ｉｉｉ）配列表の配列番号１に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｉｖ）配列表の配列番号２に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｖ）配列表の配列番号３に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｖｉ）前記（ｉ）から（ｖ）の何れか１つのペプチドを含むペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｖｉｉ）前記（ｉ）から（ｖ）の何れか１つのペプチドのアミノ酸配列のうち少なくとも５個の連続するアミノ酸残基からなるペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｖｉｉｉ）前記（ｉ）から（ｖ）の何れか１つのペプチドのアミノ酸配列において１個ないし数個のアミノ酸残基の変異を有するペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｉｘ）前記（ｉ）から（ｖ）の何れか１つのペプチドと７０％以上の相同性を有するペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｘ）配列表の配列番号４に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
および
（ｘｉ）配列表の配列番号５に記載のアミノ酸配列からなるペプチド。
【請求項２】ペプチド群が（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｉｉ）、（ｉｖ）、（ｘ）および（ｘｉ）からなるペプチド群である請求の範囲第１項に記載のｃ−Ｊｕｎのリン酸化阻害剤。
【請求項３】ｃ−Ｊｕｎ  Ｎ末端キナーゼ３（ＪＮＫ３）と相互作用する機能を有する下記ペプチド群から選ばれる１つまたは２つ以上のペプチドをＪＮＫ３と共存させることを含むｃ−Ｊｕｎのリン酸化阻害方法；
（ｉ）ＢＭＡＬ１、
（ｉｉ）ＢＰＬ１、
（ｉｉｉ）配列表の配列番号１に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｉｖ）配列表の配列番号２に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｖ）配列表の配列番号３に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｖｉ）前記（ｉ）から（ｖ）の何れか１つのペプチドを含むペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｖｉｉ）前記（ｉ）から（ｖ）の何れか１つのペプチドのアミノ酸配列のうち少なくとも５個の連続するアミノ酸残基からなるペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｖｉｉｉ）前記（ｉ）から（ｖ）の何れか１つのペプチドのアミノ酸配列において１個ないし数個のアミノ酸残基の変異を有するペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｉｘ）前記（ｉ）から（ｖ）の何れか１つのペプチドと７０％以上の相同性を有するペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｘ）配列表の配列番号４に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
および
（ｘｉ）配列表の配列番号５に記載のアミノ酸配列からなるペプチド。
【請求項４】ペプチド群が（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｉｉ）、（ｉｖ）、（ｘ）および（ｘｉ）からなるペプチド群である請求の範囲第３項に記載のｃ−Ｊｕｎのリン酸化阻害方法。
【請求項５】ｃ−Ｊｕｎ  Ｎ末端キナーゼ３と相互作用する機能を有する下記ペプチド群から選ばれる１つまたは２つ以上のペプチドを有効成分として含んでなるｃ−Ｊｕｎの転写活性化能の阻害剤；
（ｉ）ＢＭＡＬ１、
（ｉｉ）ＢＰＬ１、
（ｉｉｉ）配列表の配列番号１に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｉｖ）配列表の配列番号２に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｖ）配列表の配列番号３に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｖｉ）前記（ｉ）から（ｖ）の何れか１つのペプチドを含むペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｖｉｉ）前記（ｉ）から（ｖ）の何れか１つのペプチドのアミノ酸配列のうち少なくとも５個の連続するアミノ酸残基からなるペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｖｉｉｉ）前記（ｉ）から（ｖ）の何れか１つのペプチドのアミノ酸配列において１個ないし数個のアミノ酸残基の変異を有するペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｉｘ）前記（ｉ）から（ｖ）の何れか１つのペプチドと７０％以上の相同性を有するペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｘ）配列表の配列番号４に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
および
（ｘｉ）配列表の配列番号５に記載のアミノ酸配列からなるペプチド。
【請求項６】ｃ−Ｊｕｎ  Ｎ末端キナーゼ３（ＪＮＫ３）と相互作用する機能を有する下記ペプチド群から選ばれる１つまたは２つ以上のペプチドとＪＮＫ３とを共存させることを含むｃ−Ｊｕｎの転写活性化能の阻害方法；
（ｉ）ＢＭＡＬ１、
（ｉｉ）ＢＰＬ１、
（ｉｉｉ）配列表の配列番号１に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｉｖ）配列表の配列番号２に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｖ）配列表の配列番号３に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｖｉ）前記（ｉ）から（ｖ）の何れか１つのペプチドを含むペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｖｉｉ）前記（ｉ）から（ｖ）の何れか１つのペプチドのアミノ酸配列のうち少なくとも５個の連続するアミノ酸残基からなるペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｖｉｉｉ）前記（ｉ）から（ｖ）の何れか１つのペプチドのアミノ酸配列において１個ないし数個のアミノ酸残基の変異を有するペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｉｘ）前記（ｉ）から（ｖ）の何れか１つのペプチドと７０％以上の相同性を有するペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｘ）配列表の配列番号４に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
および
（ｘｉ）配列表の配列番号５に記載のアミノ酸配列からなるペプチド。
【請求項７】請求の範囲第１項または第２項に記載のｃ−Ｊｕｎのリン酸化阻害剤または請求の範囲第５項に記載のｃ−Ｊｕｎの転写活性化能の阻害剤を有効量含んでなる医薬組成物。
【請求項８】ｃ−Ｊｕｎ  Ｎ末端キナーゼ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化に基づく疾患の防止剤および／または治療剤である請求の範囲第７項に記載の医薬組成物。
【請求項９】ｃ−Ｊｕｎ  Ｎ末端キナーゼ３（ＪＮＫ３）と相互作用する機能を有する下記ペプチド群から選ばれる１つまたは２つ以上のペプチドを有効量含んでなる、ＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化に基づく疾患の防止剤および／または治療剤である医薬組成物；
（ｉ）ＢＭＡＬ１、
（ｉｉ）ＢＰＬ１、
（ｉｉｉ）配列表の配列番号１に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｉｖ）配列表の配列番号２に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｖ）配列表の配列番号３に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｖｉ）前記（ｉ）から（ｖ）の何れか１つのペプチドを含むペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｖｉｉ）前記（ｉ）から（ｖ）の何れか１つのペプチドのアミノ酸配列のうち少なくとも５個の連続するアミノ酸残基からなるペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｖｉｉｉ）前記（ｉ）から（ｖ）の何れか１つのペプチドのアミノ酸配列において１個ないし数個のアミノ酸残基の変異を有するペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｉｘ）前記（ｉ）から（ｖ）の何れか１つのペプチドと７０％以上の相同性を有するペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｘ）配列表の配列番号４に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
および
（ｘｉ）配列表の配列番号５に記載のアミノ酸配列からなるペプチド。
【請求項１０】ｃ−Ｊｕｎ  Ｎ末端キナーゼ３（ＪＮＫ３）と相互作用する機能を有する下記ペプチド群から選ばれる何れか１つのペプチドをコードするポリヌクレオチドの１つまたは２つ以上を有効量含んでなる、ＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化に基づく疾患の防止剤および／または治療剤である医薬組成物；
（ｉ）ＢＭＡＬ１、
（ｉｉ）ＢＰＬ１、
（ｉｉｉ）配列表の配列番号１に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｉｖ）配列表の配列番号２に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｖ）配列表の配列番号３に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｖｉ）前記（ｉ）から（ｖ）の何れか１つのペプチドを含むペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｖｉｉ）前記（ｉ）から（ｖ）の何れか１つのペプチドのアミノ酸配列のうち少なくとも５個の連続するアミノ酸残基からなるペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｖｉｉｉ）前記（ｉ）から（ｖ）の何れか１つのペプチドのアミノ酸配列において１個ないし数個のアミノ酸残基の変異を有するペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｉｘ）前記（ｉ）から（ｖ）の何れか１つのペプチドと７０％以上の相同性を有するペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｘ）配列表の配列番号４に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
および
（ｘｉ）配列表の配列番号５に記載のアミノ酸配列からなるペプチド。
【請求項１１】ｃ−Ｊｕｎ  Ｎ末端キナーゼ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化に基づく疾患が神経変性疾患である請求の範囲第８項から第１０項の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１２】神経変性疾患が、ポリグルタミン病、ハンチントン病、脊髄小脳失調症、球脊髄性筋萎縮症、歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症、アルツハイマー病、ダウン症、パーキンソン病、Ｌｅｗｙ小体型痴呆症、多系統萎縮症、家族性筋萎縮性側索硬化症、進行性核上性麻痺、皮質基底核変性症、ｐｉｃｋ病、ファミリアル  ブリティッシュ  デメンチア（ｆａｍｉｌｉａｌ  Ｂｒｉｔｉｓｈ  ｄｅｍｅｎｔｉａ）、クロイツフェルト−ヤコブ（Ｃｒｅｕｔｚｆｅｌｄｔ−Ｊａｋｏｂ）病、ゲルストマン−ストランスラー（Ｇｅｒｓｔｍａｎｎ−Ｓｔｒａｎｓｓｌｅｒ）症候群、狂牛病（ウシ海綿状脳症）（ＢＳＥ）、またはニューロセルピン（ｎｅｕｒｏｓｅｒｐｉｎ）封入体を伴う家族性痴呆症である請求の範囲第１１項に記載の医薬組成物。
【請求項１３】ｃ−Ｊｕｎ  Ｎ末端キナーゼ３（ＪＮＫ３）と相互作用する機能を有する下記ペプチド群から選ばれる１つまたは２つ以上のペプチドをＪＮＫ３と共存させることを含む、ＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化に基づく疾患の防止方法および／または治療方法；
（ｉ）ＢＭＡＬ１、
（ｉｉ）ＢＰＬ１、
（ｉｉｉ）配列表の配列番号１に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｉｖ）配列表の配列番号２に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｖ）配列表の配列番号３に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｖｉ）前記（ｉ）から（ｖ）の何れか１つのペプチドを含むペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｖｉｉ）前記（ｉ）から（ｖ）の何れか１つのペプチドのアミノ酸配列のうち少なくとも５個の連続するアミノ酸残基からなるペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｖｉｉｉ）前記（ｉ）から（ｖ）の何れか１つのペプチドのアミノ酸配列において１個ないし数個のアミノ酸残基の変異を有するペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｉｘ）前記（ｉ）から（ｖ）の何れか１つのペプチドと７０％以上の相同性を有するペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｘ）配列表の配列番号４に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
および
（ｘｉ）配列表の配列番号５に記載のアミノ酸配列からなるペプチド。
【請求項１４】ｃ−Ｊｕｎ  Ｎ末端キナーゼ３（ＪＮＫ３）と相互作用する機能を有する下記ペプチド群から選ばれる何れか１つのペプチドをコードするポリヌクレオチドの１つまたは２つ以上を用いて、該ポリヌクレオチドがコードするペプチドを発現させることによりＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害することを含む、ＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化に基づく疾患の防止方法および／または治療方法；
（ｉ）ＢＭＡＬ１、
（ｉｉ）ＢＰＬ１、
（ｉｉｉ）配列表の配列番号１に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｉｖ）配列表の配列番号２に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｖ）配列表の配列番号３に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｖｉ）前記（ｉ）から（ｖ）の何れか１つのペプチドを含むペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｖｉｉ）前記（ｉ）から（ｖ）の何れか１つのペプチドのアミノ酸配列のうち少なくとも５個の連続するアミノ酸残基からなるペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｖｉｉｉ）前記（ｉ）から（ｖ）の何れか１つのペプチドのアミノ酸配列において１個ないし数個のアミノ酸残基の変異を有するペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｉｘ）前記（ｉ）から（ｖ）の何れか１つのペプチドと７０％以上の相同性を有するペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｘ）配列表の配列番号４に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
および
（ｘｉ）配列表の配列番号５に記載のアミノ酸配列からなるペプチド。
【請求項１５】請求の範囲第７項から第１２項の何れか１項に記載の医薬組成物を使用することを特徴とするｃ−Ｊｕｎ  Ｎ末端キナーゼ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化に基づく疾患の防止方法および／または治療方法。
【請求項１６】ｃ−Ｊｕｎ  Ｎ末端キナーゼ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化に基づく疾患が神経変性疾患である請求の範囲第１３項から第１５項の何れか１項に記載の疾患の防止方法および／または治療方法。
【請求項１７】神経変性疾患が、ポリグルタミン病、ハンチントン病、脊髄小脳失調症、球脊髄性筋萎縮症、歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症、アルツハイマー病、ダウン症、パーキンソン病、Ｌｅｗｙ小体型痴呆症、多系統萎縮症、家族性筋萎縮性側索硬化症、進行性核上性麻痺、皮質基底核変性症、ｐｉｃｋ病、ファミリアル  ブリティッシュ  デメンチア（ｆａｍｉｌｉａｌ  Ｂｒｉｔｉｓｈ  ｄｅｍｅｎｔｉａ）、クロイツフェルト−ヤコブ（Ｃｒｅｕｔｚｆｅｌｄｔ−Ｊａｋｏｂ）病、ゲルストマン−ストランスラー（Ｇｅｒｓｔｍａｎｎ−Ｓｔｒａｎｓｓｌｅｒ）症候群、狂牛病（ウシ海綿状脳症）（ＢＳＥ）、またはニューロセルピン（ｎｅｕｒｏｓｅｒｐｉｎ）封入体を伴う家族性痴呆症である前記１６項に記載の疾患の防止方法および／または治療方法。
【請求項１８】下記ペプチド群から選ばれる何れか１つのペプチド；
（ｉ）配列表の配列番号１に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｉｉ）配列表の配列番号１に記載のアミノ酸配列からなるペプチドを含むペプチド、
（ｉｉｉ）配列表の配列番号１に記載のアミノ酸配列の少なくとも５個の連続するアミノ酸残基からなるペプチド、
および
（ｉｖ）前記（ｉ）から（ｉｉｉ）の何れかのペプチドにおいて１個ないし数個のアミノ酸の変異を有するペプチド。
【請求項１９】ｃ−Ｊｕｎ  Ｎ末端キナーゼ３と相互作用する機能を有する請求の範囲第１８項に記載のペプチド。
【請求項２０】請求の範囲第１８項または第１９項に記載のペプチドをコードする塩基配列またはその相補的配列を含むポリヌクレオチド。
【請求項２１】配列表の配列番号７に記載の塩基配列からなるポリヌクレオチド。
【請求項２２】請求の範囲第２０または第２１項に記載のポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイゼーションするポリヌクレオチド。
【請求項２３】請求の範囲第２０項から第２２項の何れか１項に記載のポリヌクレオチドを含有する組換えベクター。
【請求項２４】組換えベクターが組換え発現ベクターである請求の範囲第２３項に記載の組換えベクター。
【請求項２５】請求の範囲第２３項または第２４項に記載の組換えベクターを導入されててなる形質転換体。
【請求項２６】請求の範囲第２４項に記載の組換えベクターを導入されてなる形質転換体を培養する工程を含む請求の範囲第１８項または第１９項に記載のペプチドの製造方法。
【請求項２７】請求の範囲第１８項または第１９項に記載のペプチドを免疫学的に認識する抗体。
【請求項２８】請求の範囲第１９項に記載のペプチドとｃ−Ｊｕｎ  Ｎ末端キナーゼ３との相互作用を促進するまたは阻害する化合物の同定方法であって、該ペプチド、該ペプチドをコードするポリヌクレオチド、該ポリヌクレオチドを含有する組換えベクター、該組換ベクターを導入されてなる形質転換体および該ペプチドを免疫学的に認識する抗体から選ばれる少なくとも１つを用いることを特徴とする同定方法。
【請求項２９】請求の範囲第１９項に記載のペプチドをコードするポリヌクレオチドの発現を促進するまたは阻害する化合物の同定方法であって、該ペプチドをコードするポリヌクレオチド、該ポリヌクレオチドを含有する組換えベクター、該組換ベクターを導入されてなる形質転換体および該ペプチドを免疫学的に認識する抗体から選ばれる少なくとも１つを用いることを特徴とする同定方法。
【請求項３０】請求の範囲第１９項に記載のペプチド、該ペプチドをコードするポリヌクレオチド、該ポリヌクレオチドを含有する組換えベクター、該組換ベクターを導入されてなる形質転換体および該ペプチドを免疫学的に認識する抗体から選ばれる少なくとも１つを有効量含んでなる医薬組成物。
【請求項３１】ｃ−Ｊｕｎ  Ｎ末端キナーゼ３と相互作用する機能を有する下記ペプチド群から選ばれる１つまたは２つ以上のペプチドを有効成分として含んでなるｃ−Ｊｕｎのリン酸化阻害剤；
（ｉ）ＢＭＡＬ１、
（ｉｉ）ＢＰＬ１、
（ｉｉｉ）配列表の配列番号１に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｉｖ）配列表の配列番号２に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｖ）配列表の配列番号３に記載のアミノ酸配列からなるヒト由来のペプチド、
（ｖｉ）前記（ｉ）から（ｉｖ）の何れか１つのペプチドを含むペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｖｉｉ）前記（ｖ）のペプチドを含むペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するヒト由来のペプチド、
（ｖｉｉｉ）前記（ｉ）から（ｉｖ）の何れか１つのペプチドのアミノ酸配列のうち少なくとも５個の連続するアミノ酸残基からなるペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｉｘ）前記（ｖ）のペプチドのアミノ酸配列のうち少なくとも５個の連続するアミノ酸残基からなるペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するヒト由来のペプチド、
（ｘ）前記（ｉ）から（ｉｖ）の何れか１つのペプチドのアミノ酸配列において１個ないし数個のアミノ酸残基の変異を有するペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｘｉ）前記（ｖ）のペプチドのアミノ酸配列において１個ないし数個のアミノ酸残基の変異を有するペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するヒト由来のペプチド、
（ｘｉｉ）前記（ｉ）から（ｉｖ）の何れか１つのペプチドと７０％以上の相同性を有するペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｘｉｉｉ）前記（ｖ）のペプチドのアミノ酸配列と７０％以上の相同性を有するペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するヒト由来のペプチド、
（ｘｉｖ）配列表の配列番号４に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
および
（ｘｖ）配列表の配列番号５に記載のアミノ酸配列からなるペプチド。
【請求項３２】ｃ−Ｊｕｎ  Ｎ末端キナーゼ３と相互作用する機能を有する下記ペプチド群から選ばれる１つまたは２つ以上のペプチドを有効成分として含んでなるｃ−Ｊｕｎの転写活性化能の阻害剤；
（ｉ）ＢＭＡＬ１、
（ｉｉ）ＢＰＬ１、
（ｉｉｉ）配列表の配列番号１に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｉｖ）配列表の配列番号２に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｖ）配列表の配列番号３に記載のアミノ酸配列からなるヒト由来のペプチド、
（ｖｉ）前記（ｉ）から（ｉｖ）の何れか１つのペプチドを含むペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｖｉｉ）前記（ｖ）のペプチドを含むペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するヒト由来のペプチド、
（ｖｉｉｉ）前記（ｉ）から（ｉｖ）の何れか１つのペプチドのアミノ酸配列のうち少なくとも５個の連続するアミノ酸残基からなるペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｉｘ）前記（ｖ）のペプチドのアミノ酸配列のうち少なくとも５個の連続するアミノ酸残基からなるペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するヒト由来のペプチド、
（ｘ）前記（ｉ）から（ｉｖ）の何れか１つのペプチドのアミノ酸配列において１個ないし数個のアミノ酸残基の変異を有するペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｘｉ）前記（ｖ）のペプチドのアミノ酸配列において１個ないし数個のアミノ酸残基の変異を有するペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するヒト由来のペプチド、
（ｘｉｉ）前記（ｉ）から（ｉｖ）の何れか１つのペプチドと７０％以上の相同性を有するペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｘｉｉｉ）前記（ｖ）のペプチドのアミノ酸配列と７０％以上の相同性を有するペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するヒト由来のペプチド、
（ｘｉｖ）配列表の配列番号４に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
および
（ｘｖ）配列表の配列番号５に記載のアミノ酸配列からなるペプチド。
【請求項３３】請求の範囲第３２項に記載のｃ−Ｊｕｎの転写活性化能の阻害剤を有効量含んでなる医薬組成物。
【請求項３４】ｃ−Ｊｕｎ  Ｎ末端キナーゼ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化に基づく疾患の防止剤および／または治療剤である請求の範囲第３３項に記載の医薬組成物。
【請求項３５】ｃ−Ｊｕｎ  Ｎ末端キナーゼ３（ＪＮＫ３）と相互作用する機能を有する下記ペプチド群から選ばれる１つまたは２つ以上のペプチドを有効量含んでなる、ＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化に基づく疾患の防止剤および／または治療剤である医薬組成物；
（ｉ）ＢＭＡＬ１、
（ｉｉ）ＢＰＬ１、
（ｉｉｉ）配列表の配列番号１に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｉｖ）配列表の配列番号２に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｖ）配列表の配列番号３に記載のアミノ酸配列からなるヒト由来のペプチド、
（ｖｉ）前記（ｉ）から（ｉｖ）の何れか１つのペプチドを含むペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｖｉｉ）前記（ｖ）のペプチドを含むペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するヒト由来のペプチド、
（ｖｉｉｉ）前記（ｉ）から（ｉｖ）の何れか１つのペプチドのアミノ酸配列のうち少なくとも５個の連続するアミノ酸残基からなるペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｉｘ）前記（ｖ）のペプチドのアミノ酸配列のうち少なくとも５個の連続するアミノ酸残基からなるペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するヒト由来のペプチド、
（ｘ）前記（ｉ）から（ｉｖ）の何れか１つのペプチドのアミノ酸配列において１個ないし数個のアミノ酸残基の変異を有するペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｘｉ）前記（ｖ）のペプチドのアミノ酸配列において１個ないし数個のアミノ酸残基の変異を有するペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するヒト由来のペプチド、
（ｘｉｉ）前記（ｉ）から（ｉｖ）の何れか１つのペプチドと７０％以上の相同性を有するペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｘｉｉｉ）前記（ｖ）のペプチドのアミノ酸配列と７０％以上の相同性を有するペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するヒト由来のペプチド、
（ｘｉｖ）配列表の配列番号４に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
および
（ｘｖ）配列表の配列番号５に記載のアミノ酸配列からなるペプチド。
【請求項３６】ｃ−Ｊｕｎ  Ｎ末端キナーゼ３（ＪＮＫ３）と相互作用する機能を有する下記ペプチド群から選ばれる何れか１つのペプチドをコードするポリヌクレオチドの１つまたは２つ以上を有効量含んでなる、ＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化に基づく疾患の防止剤および／または治療剤である医薬組成物；
（ｉ）ＢＭＡＬ１、
（ｉｉ）ＢＰＬ１、
（ｉｉｉ）配列表の配列番号１に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｉｖ）配列表の配列番号２に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｖ）配列表の配列番号３に記載のアミノ酸配列からなるヒト由来のペプチド、
（ｖｉｉｉ）前記（ｉ）から（ｉｖ）の何れか１つのペプチドのアミノ酸配列のうち少なくとも５個の連続するアミノ酸残基からなるペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｉｘ）前記（ｖ）のペプチドのアミノ酸配列のうち少なくとも５個の連続するアミノ酸残基からなるペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するヒト由来のペプチド、
（ｘ）前記（ｉ）から（ｉｖ）の何れか１つのペプチドのアミノ酸配列において１個ないし数個のアミノ酸残基の変異を有するペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｘｉ）前記（ｖ）のペプチドのアミノ酸配列において１個ないし数個のアミノ酸残基の変異を有するペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するヒト由来のペプチド、
（ｘｉｉ）前記（ｉ）から（ｉｖ）の何れか１つのペプチドと７０％以上の相同性を有するペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｘｉｉｉ）前記（ｖ）のペプチドのアミノ酸配列と７０％以上の相同性を有するペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するヒト由来のペプチド、
（ｘｉｖ）配列表の配列番号４に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
および
（ｘｖ）配列表の配列番号５に記載のアミノ酸配列からなるペプチド。
【請求項３７】ｃ−Ｊｕｎ  Ｎ末端キナーゼ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化に基づく疾患が神経変性疾患である請求の範囲第３４項から第３６項の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項３８】神経変性疾患が、ポリグルタミン病、ハンチントン病、脊髄小脳失調症、球脊髄性筋萎縮症、歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症、アルツハイマー病、ダウン症、パーキンソン病、Ｌｅｗｙ小体型痴呆症、多系統萎縮症、家族性筋萎縮性側索硬化症、進行性核上性麻痺、皮質基底核変性症、ｐｉｃｋ病、ファミリアル  プリティッシュ  デメンチア（ｆａｍｉｌｉａｌ  Ｂｒｉｔｉｓｈ  ｄｅｍｅｎｔｉａ）、クロイツフェルト−ヤコブ（Ｃｒｅｕｔｚｆｅｌｄｔ−Ｊａｋｏｂ）病、ゲルストマン−ストランスラー（Ｇｅｒｓｔｍａｎｎ−Ｓｔｒａｎｓｓｌｅｒ）症候群、狂牛病（ウシ海綿状脳症）（ＢＳＥ）、またはニューロセルピン（ｎｅｕｒｏｓｅｒｐｉｎ）封入体を伴う家族性痴呆症である請求の範囲第３７項に記載の医薬組成物。
【請求項３９】ｃ−Ｊｕｎ  Ｎ末端キナーゼ３と相互作用する機能を有する下記ペプチド群から選ばれる１つまたは２つ以上のペプチドを有効成分として含んでなるｃ−Ｊｕｎのリン酸化阻害剤；
（ｉ）ＢＭＡＬ１、
（ｉｉ）ＢＰＬ１、
（ｉｉｉ）配列表の配列番号１に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｉｖ）配列表の配列番号２に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｖ）前記（ｉ）から（ｉｖ）の何れか１つのペプチドを含むペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｖｉ）前記（ｉ）から（ｉｖ）の何れか１つのペプチドのアミノ酸配列のうち少なくとも５個の連続するアミノ酸残基からなるペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｖｉｉ）前記（ｉ）から（ｉｖ）の何れか１つのペプチドのアミノ酸配列において１個ないし数個のアミノ酸残基の変異を有するペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｖｉｉｉ）前記（ｉ）から（ｉｖ）の何れか１つのペプチドと７０％以上の相同性を有するペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｉｘ）配列表の配列番号４に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
および
（ｘ）配列表の配列番号５に記載のアミノ酸配列からなるペプチド。
【請求項４０】ｃ−Ｊｕｎ  Ｎ末端キナーゼ３（ＪＮＫ３）と相互作用する機能を有する下記ペプチド群から選ばれる１つまたは２つ以上のペプチドをＪＮＫ３と共存させることを含むｃ−Ｊｕｎのリン酸化阻害方法；
（ｉ）ＢＭＡＬ１、
（ｉｉ）ＢＰＬ１、
（ｉｉｉ）配列表の配列番号１に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｉｖ）配列表の配列番号２に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｖ）前記（ｉ）から（ｉｖ）の何れか１つのペプチドを含むペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｖｉ）前記（ｉ）から（ｉｖ）の何れか１つのペプチドのアミノ酸配列のうち少なくとも５個の連続するアミノ酸残基からなるペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｖｉｉ）前記（ｉ）から（ｉｖ）の何れか１つのペプチドのアミノ酸配列において１個ないし数個のアミノ酸残基の変異を有するペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｖｉｉｉ）前記（ｉ）から（ｉｖ）の何れか１つのペプチドと７０％以上の相同性を有するペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｉｘ）配列表の配列番号４に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
および
（ｘ）配列表の配列番号５に記載のアミノ酸配列からなるペプチド。
【請求項４１】ペプチド群が（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｉｉ）、（ｉｖ）、（ｉｘ）および（ｘ）からなるペプチド群である請求の範囲第４０項に記載のｃ−Ｊｕｎのリン酸化阻害方法。
【請求項４２】ｃ−Ｊｕｎ  Ｎ末端キナーゼ３と相互作用する機能を有する下記ペプチド群から選ばれる１つまたは２つ以上のペプチドを有効成分として含んでなるｃ−Ｊｕｎの転写活性化能の阻害剤；
（ｉ）ＢＭＡＬ１、
（ｉｉ）ＢＰＬ１、
（ｉｉｉ）配列表の配列番号１に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｉｖ）配列表の配列番号２に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｖ）前記（ｉ）から（ｉｖ）の何れか１つのペプチドを含むペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｖｉ）前記（ｉ）から（ｉｖ）の何れか１つのペプチドのアミノ酸配列のうち少なくとも５個の連続するアミノ酸残基からなるペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｖｉｉ）前記（ｉ）から（ｉｖ）の何れか１つのペプチドのアミノ酸配列において１個ないし数個のアミノ酸残基の変異を有するペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｖｉｉｉ）前記（ｉ）から（ｉｖ）の何れか１つのペプチドと７０％以上の相同性を有するペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｉｘ）配列表の配列番号４に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
および
（ｘ）配列表の配列番号５に記載のアミノ酸配列からなるペプチド。
【請求項４３】ｃ−Ｊｕｎ  Ｎ末端キナーゼ３（ＪＮＫ３）と相互作用する機能を有する下記ペプチド群から選ばれる１つまたは２つ以上のペプチドとＪＮＫ３とを共存させることを含むｃ−Ｊｕｎの転写活性化能の阻害方法；
（ｉ）ＢＭＡＬ１、
（ｉｉ）ＢＰＬ１、
（ｉｉｉ）配列表の配列番号１に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｉｖ）配列表の配列番号２に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｖ）前記（ｉ）から（ｉｖ）の何れか１つのペプチドを含むペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｖｉ）前記（ｉ）から（ｉｖ）の何れか１つのペプチドのアミノ酸配列のうち少なくとも５個の連続するアミノ酸残基からなるペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｖｉｉ）前記（ｉ）から（ｉｖ）の何れか１つのペプチドのアミノ酸配列において１個ないし数個のアミノ酸残基の変異を有するペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｖｉｉｉ）前記（ｉ）から（ｉｖ）の何れか１つのペプチドと７０％以上の相同性を有するペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｉｘ）配列表の配列番号４に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
および
（ｘ）配列表の配列番号５に記載のアミノ酸配列からなるペプチド。
【請求項４４】請求の範囲第３９項に記載のｃ−Ｊｕｎのリン酸化阻害剤または請求の範囲第４２項に記載のｃ−Ｊｕｎの転写活性化能の阻害剤を有効量含んでなる医薬組成物。
【請求項４５】ｃ−Ｊｕｎ  Ｎ末端キナーゼ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化に基づく疾患の防止剤および／または治療剤である請求の範囲第４４項に記載の医薬組成物。
【請求項４６】ｃ−Ｊｕｎ  Ｎ末端キナーゼ３（ＪＮＫ３）と相互作用する機能を有する下記ペプチド群から選ばれる１つまたは２つ以上のペプチドを有効量含んでなる、ＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化に基づく疾患の防止剤および／または治療剤である医薬組成物；
（ｉ）ＢＭＡＬ１、
（ｉｉ）ＢＰＬ１、
（ｉｉｉ）配列表の配列番号１に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｉｖ）配列表の配列番号２に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｖ）前記（ｉ）から（ｉｖ）の何れか１つのペプチドを含むペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｖｉ）前記（ｉ）から（ｉｖ）の何れか１つのペプチドのアミノ酸配列のうち少なくとも５個の連続するアミノ酸残基からなるペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｖｉｉ）前記（ｉ）から（ｉｖ）の何れか１つのペプチドのアミノ酸配列において１個ないし数個のアミノ酸残基の変異を有するペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｖｉｉｉ）前記（ｉ）から（ｉｖ）の何れか１つのペプチドと７０％以上の相同性を有するペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｉｘ）配列表の配列番号４に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
および
（ｘ）配列表の配列番号５に記載のアミノ酸配列からなるペプチド。
【請求項４７】ｃ−Ｊｕｎ  Ｎ末端キナーゼ３（ＪＮＫ３）と相互作用する機能を有する下記ペプチド群から選ばれる何れか１つのペプチドをコードするポリヌクレオチドの１つまたは２つ以上を有効量含んでなる、ＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化に基づく疾患の防止剤および／または治療剤である医薬組成物；
（ｉ）ＢＭＡＬ１、
（ｉｉ）ＢＰＬ１、
（ｉｉｉ）配列表の配列番号１に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｉｖ）配列表の配列番号２に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｖ）前記（ｉ）から（ｉｖ）の何れか１つのペプチドを含むペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｖｉ）前記（ｉ）から（ｉｖ）の何れか１つのペプチドのアミノ酸配列のうち少なくとも５個の連続するアミノ酸残基からなるペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｖｉｉ）前記（ｉ）から（ｉｖ）の何れか１つのペプチドのアミノ酸配列において１個ないし数個のアミノ酸残基の変異を有するペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｖｉｉｉ）前記（ｉ）から（ｉｖ）の何れか１つのペプチドと７０％以上の相同性を有するペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｉｘ）配列表の配列番号４に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
および
（ｘ）配列表の配列番号５に記載のアミノ酸配列からなるペプチド。
【請求項４８】ｃ−Ｊｕｎ  Ｎ末端キナーゼ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化に基づく疾患が神経変性疾患である請求の範囲第４５項から第４７項の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項４９】神経変性疾患が、ポリグルタミン病、ハンチントン病、脊髄小脳失調症、球脊髄性筋萎縮症、歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症、アルツハイマー病、ダウン症、パーキンソン病、Ｌｅｗｙ小体型痴呆症、多系統萎縮症、家族性筋萎縮性側索硬化症、進行性核上性麻痺、皮質基底核変性症、ｐｉｃｋ病、ファミリアル  ブリティッシュ  デメンチア（ｆａｍｉｌｉａｌ  Ｂｒｉｔｉｓｈ  ｄｅｍｅｎｔｉａ）、クロイツフェルト−ヤコブ（Ｃｒｅｕｔｚｆｅｌｄｔ−Ｊａｋｏｂ）病、ゲルストマン−ストランスラー（Ｇｅｒｓｔｍａｎｎ−Ｓｔｒａｎｓｓｌｅｒ）症候群、狂牛病（ウシ海綿状脳症）（ＢＳＥ）、またはニューロセルピン（ｎｅｕｒｏｓｅｒｐｉｎ）封入体を伴う家族性痴呆症である請求の範囲第４８項に記載の医薬組成物。
【請求項５０】ｃ−Ｊｕｎ  Ｎ末端キナーゼ３（ＪＮＫ３）と相互作用する機能を有する下記ペプチド群から選ばれる１つまたは２つ以上のペプチドをＪＮＫ３と共存させることを含む、ＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化に基づく疾患の防止方法および／または治療方法；
（ｉ）ＢＭＡＬ１、
（ｉｉ）ＢＰＬ１、
（ｉｉｉ）配列表の配列番号１に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｉｖ）配列表の配列番号２に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｖ）前記（ｉ）から（ｉｖ）の何れか１つのペプチドを含むペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｖｉ）前記（ｉ）から（ｉｖ）の何れか１つのペプチドのアミノ酸配列のうち少なくとも５個の連続するアミノ酸残基からなるペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｖｉｉ）前記（ｉ）から（ｉｖ）の何れか１つのペプチドのアミノ酸配列において１個ないし数個のアミノ酸残基の変異を有するペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｖｉｉｉ）前記（ｉ）から（ｉｖ）の何れか１つのペプチドと７０％以上の相同性を有するペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｉｘ）配列表の配列番号４に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
および
（ｘ）配列表の配列番号５に記載のアミノ酸配列からなるペプチド。
【請求項５１】ｃ−Ｊｕｎ  Ｎ末端キナーゼ３（ＪＮＫ３）と相互作用する機能を有する下記ペプチド群から選ばれる何れか１つのペプチドをコードするポリヌクレオチドの１つまたは２つ以上を用いて、該ポリヌクレオチドがコードするペプチドを発現させることによりＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害することを含む、ＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化に基づく疾患の防止方法および／または治療方法；
（ｉ）ＢＭＡＬ１、
（ｉｉ）ＢＰＬ１、
（ｉｉｉ）配列表の配列番号１に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｉｖ）配列表の配列番号２に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｖ）前記（ｉ）から（ｉｖ）の何れか１つのペプチドを含むペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｖｉ）前記（ｉ）から（ｉｖ）の何れか１つのペプチドのアミノ酸配列のうち少なくとも５個の連続するアミノ酸残基からなるペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｖｉｉ）前記（ｉ）から（ｉｖ）の何れか１つのペプチドのアミノ酸配列において１個ないし数個のアミノ酸残基の変異を有するペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｖｉｉｉ）前記（ｉ）から（ｉｖ）の何れか１つのペプチドと７０％以上の相同性を有するペプチドであってＪＮＫ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化を阻害する機能を有するペプチド、
（ｉｘ）配列表の配列番号４に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
および
（ｘ）配列表の配列番号５に記載のアミノ酸配列からなるペプチド。
【請求項５２】請求の範囲第４４項から第４９項の何れか１項に記載の医薬組成物を使用することを特徴とするｃ−Ｊｕｎ  Ｎ末端キナーゼ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化に基づく疾患の防止方法および／または治療方法。
【請求項５３】ｃ−Ｊｕｎ  Ｎ末端キナーゼ３によるｃ−Ｊｕｎのリン酸化に基づく疾患が神経変性疾患である請求の範囲第５０項から第５２項の何れか１項に記載の疾患の防止方法および／または治療方法。
【請求項５４】神経変性疾患が、ポリグルタミン病、ハンチントン病、脊髄小脳失調症、球脊髄性筋萎縮症、歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症、アルツハイマー病、ダウン症、パーキンソン病、Ｌｅｗｙ小体型痴呆症、多系統萎縮症、家族性筋萎縮性側索硬化症、進行性核上性麻痺、皮質基底核変性症、ｐｉｃｋ病、ファミリアル  ブリティッシュ  デメンチア（ｆａｍｉｌｉａｌ  Ｂｒｉｔｉｓｈ  ｄｅｍｅｎｔｉａ）、クロイツフェルト−ヤコブ（Ｃｒｅｕｔｚｆｅｌｄｔ−Ｊａｋｏｂ）病、ゲルストマン−ストランスラ（Ｇｅｒｓｔｍａｎｎ−Ｓｔｒａｎｓｓｌｅｒ）症候群、狂牛病（ウシ海綿状脳症）（ＢＳＥ）、またはニューロセルピン（ｎｅｕｒｏｓｅｒｐｉｎ）封入体を伴う家族性痴呆症である前記５３項に記載の疾患の防止方法および／または治療方法。




【国際調査報告】
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