(57)【要約】抗癌組成物を提供すること。より詳しくは、β１，３グルカン構造を有する海洋性酵母由来成分を含有する組成物が、従来にない効果的なＩＬ−１２誘導剤であることを新規に見出し、さらにβ１，３グルカン構造を有する海洋性酵母由来成分の経口投与により、ＮＫ細胞活性化能、ＮＫＴ細胞活性化能を期待しうる抗癌組成物であることを新規に見出し、本発明からなる抗癌組成物の提供に成功した。【特許請求の範囲】
【請求項１】
β１，３グルカン構造を有する海洋性酵母由来成分を含有するＩＬ−１２誘導剤。
【請求項２】
生体への摂取量としてβ１，３グルカン構造を有する海洋性酵母由来成分を１０ｍｇ〜２０００ｍｇ／体重ｋｇ／日で経口摂取する請求項１のＩＬ−１２誘導剤。
【請求項３】
経口摂取用健康補助食品製剤である請求項１又は２のＩＬ−１２誘導剤。
【請求項４】
ＩＬ−１２誘導能を治療マーカーとして、β１，３グルカン構造を有する海洋性酵母由来成分を摂取させることを特徴とするガンの治療方法。
【請求項５】
ＮＫ細胞及び／又はＮＫＴ細胞の活性化能を治療マーカーとして、β１，３グルカン構造を有する海洋性酵母由来成分を摂取させることを特徴とするガンの治療方法。
【請求項６】
ＩＬ−１２誘導能、ＮＫ細胞及び／又はＮＫＴ細胞の活性化能を治療マーカーとして、β１，３グルカン構造を有する海洋性酵母由来成分を摂取させることを特徴とするガンの治療方法。
【請求項７】
ＩＬ−１２誘導能を指標として、β１，３グルカン構造を有する海洋性酵母由来成分を候補化合物とする新規制癌剤のスクリーニング方法。
【請求項８】
請求項７のスクリーニング方法において、さらにＮＫ細胞及び／又はＮＫＴ細胞の活性化能を指標とする新規制癌剤のスクリーニング方法。
【請求項９】
請求項７又は８のスクリーニング方法で得られたβ１，３グルカン構造を有する海洋性酵母由来成分を用いた制癌剤
【請求項１０】
請求項４〜９の情報を自然法則を利用した媒体に担持した商業用媒体。
【請求項１１】
請求項１０の商業用媒体を利用した商業方法。
【発明の詳細な説明】
本出願は、参照によりここに援用されるところの、日本特許出願番号２００１−３４１１１５、２００２−０４０８４０からの優先権を請求する。
技術分野
本発明は、新規なＩＬ−１２誘導剤の提供に関する。より詳しくは、β１，３グルカン構造を有する海洋性酵母由来成分を含有するＩＬ−１２誘導剤に関する。さらに、β１，３グルカン構造を有する海洋性酵母由来成分の経口投与により、ＮＫ細胞活性化能、ＮＫＴ細胞活性化能を期待しうる抗癌組成物に関する。
背景技術
がん（ｍａｌｉｇｎａｎｔ  ｎｅｏｐｌａｓｍｓ）（ｃａｎｃｅｒ）の予防又は治療のために有用な物質の選別には、従来、がん細胞へのその直接的作用が重要視されていた。免疫賦活剤ががん治療に有用であることは認められていたが、免疫賦活剤として得られた化合物はいずれもその抗がん効果が微弱であり、免疫療法単独又は化学療法との併用治療によってもがんの十分な治療効果は達成されていない。
本発明者の医学博士、八木田は、先にがん治療における画期的な手法として、インターロイキン１２（ＩＬ−１２）を生体内で誘発する物質の有用性に着目し、椎茸菌糸体加工物がその機能を有することを発見し、新免疫療法（Ｎｏｖｅｌ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  ｃａｎｃｅｒ）（ＮＩＴＣ）ともいうべきがん治療法を確立した。従来ＩＬ−１２は、抗がん効果があるものの生体内にＩＬ−１２自体を直接投与した場合には副作用を生じるために患者が治療に耐えられないという事実があり、それ自体を抗がん剤として使用できなかった。しかし、八木田が報告した椎茸菌糸体加工物を含む製剤は、がんの治療において著しい治癒・延命効果を達成した。つまり八木田は、ＩＬ−１２を生体内で誘発できる有効量の椎茸菌糸体加工物を投与することにより、がんの治療目的を達成した（特開平１０−１３９６７０号公報）。
ＩＬ−１２は、ＴＮＦα→ＩＦＮＹ→ＩＬ−１２→ＣＴＬ活性というルートでキラーＴ細胞の活性化効果と増強効果をもつ。つまりＩＬ−１２の産生増強は、キラーＴ細胞の活性化と増強により抗がん効果が期待される。
八木田は、ＩＬ−１２の産生増強の系とは別にＮＫＴ細胞の活性化が抗ガン効果に有用であることを報告している。谷口等は、ＮＫＴ細胞が有するＶα２４Ｖβ１１という特異的なＴ細胞抗原受容体（ＴＣＲ）が認識する特異的な糖脂質抗原を発見し、この抗原が、αガラクトシルセラミドであることを報告している。更に、αガラクトシルセラミドを投与した担ガンマウスでは、ＮＫＴ細胞が活性化され、ガンの消失はみられないものの転移が抑制されることを証明した。
ＮＫＴ細胞には、もう一つの受容体としてＮＫ細胞抗原受容体（ＮＫＲ−Ｐ１；ナチュラルキラー受容体Ｐ１）があることは報告されている（特集  ＮＫＴ細胞の基礎と臨床：最新医学５５巻４号２０００年８１８〜８２３ページ）。ＮＫＲ−Ｐ１もＮＫＴ細胞の活性化に関与し、この活性化が抗ガン効果をより優位であることを八木田は見出している。
ＮＫ細胞についても生体の抗ガン作用に係わるという報告がなされているが、これまでＮＫ細胞の活性と臨床的な抗ガン効果とが相関せず、ＩＬ−１２の産生誘発量とＮＫ細胞の活性とが完全な逆相関を示すことが八木田により証明されており、ヒトにおける抗ガン作用についてのＮＫ細胞の関与は疑問視されていた。
これまでに医学博士八木田は、種々のＩＬ−１２生体内で誘発剤の検討を進め、癌周期との関係を考慮したしま万年茸菌糸体由来の新規なＩＬ−１２誘発剤を見出している（ＩＬＹ登録商標：株式会社オリエントキャンサーセラピー商品名）。医学博士八木田は、β１，３／１，６グルカンを含有するキノコ菌糸体に抗腫瘍効果があり、その抗腫瘍性がＴｈｌ系免疫を総合的に活性化するサイトカイン（ＩＬ−１２）に起因するものであることを見出し、商品名ＡＨＣＣ、ＩＬＸ、ＩＬＹ、クレスチン、ＳＰＧ等の製品の新用途に関する特許出願をしてきた。
発明の開示
本発明は、さらに有用なＩＬ−１２誘発剤、特にガンの進行度の重篤（進行性癌、末期癌）な場合にも、より効果的なＩＬ−１２誘発剤を提供すること、さらに、β１，３グルカン構造を有する海洋性酵母由来成分の経口投与により、ＮＫ細胞活性化能、ＮＫＴ細胞活性化能を期待しうる抗癌組成物を提供することを課題とする。
本発明は、新規な材料として酵母の検討を進め、β１，３グルカン構造を有する海洋性酵母由来成分を含有する組成物が、従来にない効果的なＩＬ−１２誘導剤であることを新規に見出し、さらにβ１，３グルカン構造を有する海洋性酵母由来成分の経口投与により、ＮＫ細胞活性化能、ＮＫＴ細胞活性化能を期待しうる抗癌組成物であることを新規に見出し、本発明からなる抗癌組成物の提供に成功した。
すなわち本発明は、
１．β１，３グルカン構造を有する海洋性酵母由来成分を含有するＩＬ−１２誘導剤。
２．生体への摂取量としてβ１，３グルカン構造を有する海洋性酵母由来成分を１０ｍｇ〜２０００ｍｇ／体重ｋｇ／日で経口摂取する前項１のＩＬ−１２誘導剤。
３．経口摂取用健康補助食品製剤である前項１又は２のＩＬ−１２誘導剤。
４．ＩＬ−１２誘導能を治療マーカーとして、β１，３グルカン構造を有する海洋性酵母由来成分を摂取させることを特徴とするガンの治療方法。
５．ＮＫ細胞及び／又はＮＫＴ細胞の活性化能を治療マーカーとして、β１，３グルカン構造を有する海洋性酵母由来成分を摂取させることを特徴とするガンの治療方法。
６．ＩＬ−１２誘導能、ＮＫ細胞及び／又はＮＫＴ細胞の活性化能を治療マーカーとして、β１，３グルカン構造を有する海洋性酵母由来成分を摂取させることを特徴とするガンの治療方法。
７．ＩＬ−１２誘導能を指標として、β１，３グルカン構造を有する海洋性酵母由来成分を候補化合物とする新規制癌剤のスクリーニング方法。
８．前項７のスクリーニング方法において、さらにＮＫ細胞及び／又はＮＫＴ細胞の活性化能を指標とする新規制癌剤のスクリーニング方法。
９．前項７又は８のスクリーニング方法で得られたβ１，３グルカン構造を有する海洋性酵母由来成分を用いた制癌剤
１０．前項４〜９の情報を自然法則を利用した媒体に担持した商業用媒体。
１１．前項１０の商業用媒体を利用した商業方法。
からなる。
発明を実施するための最良の形態
本発明の海洋性酵母由来成分の主成分は、β１，３グルカン構造を有している。検討した酵母は、海洋性酵母由来の商品名Ｙ−１０９５（三共イーストＭ）、実用パン酵母（アルペンローゼ使用）等を使い検討した。その結果、β１，３グルカン構造を有している海洋性酵母成分は、強力なＩＬ−１２誘導剤であり、特に進行性、末期性ガンにおける強力なＩＬ−１２誘導剤であることを見出した。さらに、β１，３グルカン構造を有している海洋性酵母成分の経口投与により、ＮＫ細胞活性化能、ＮＫＴ細胞活性化能を期待しうる抗癌組成物であることを新規に見出した。
本発明者は、ＩＬ−１２産生誘発剤には、ＡＨＣＣのように初期癌の患者に特に効果的にＩＬ−１２産生誘発をおこす物質の他に、本発明からなるβ１，３グルカン構造を有している酵母由来物のように進行性の癌又は末期癌の患者にも特徴的にＩＬ−１２産生誘発効果を発揮する物質の存在を見出した。
本発明の組成物又は経口摂取用健康補助食品製剤は、肺癌、肺腺腫、胸腺腫、甲状腺癌、膀胱癌、結腸癌、直腸癌、盲腸癌、尿管癌、乳癌、子宮頸癌、脳腫瘍、舌癌、咽頭癌、鼻腔癌、喉頭癌、胃癌、肝癌、胆管癌、精巣癌、卵巣癌、子宮体癌、悪性黒色腫、脂肪肉腫等の治療に有効であるが、これらの癌に限定されない。とくに、ＡＨＣＣ（株式会社アミノアップ）等のＩＬ−１２産生誘発剤を投与してもＩＬ−１２量が低値（例えば７．８ｐｇ／ｍｌ以下）の者に好適に投与される。
本発明に係るＩＬ−１２産生誘導剤、ＮＫ活性化剤、ＮＫＴ活性化剤は、免疫測定法による結果を指標として、その活性化を誘導または増強し、さらに活性化を維持できる処方にて用いられる。すなわち、指標をもとに、その活性化を誘導または増強し、さらに活性化を維持できる投与量、ならびに投与期間を選択して用いられる。当該ＩＬ−１２産生誘導剤、ＮＫ活性化剤、ＮＫＴ活性化剤は、好適には経口摂取される。無論、投与量を減少させ、これらを非経口に耐え得る品質に調製することで、非経口摂取（静脈内または筋肉内投与などを含む）も可能である。
また、β１，３グルカン構造を有している海洋性酵母成分を投与による免疫活性化に与える影響を以下のマーカーを用いて測定、検討した。
▲１▼ＩＬ−１２産生能力
ＣＴＬ活性はＣＤ８（＋）パーフォリン産生能力で判定が可能であるが、このＣＤ８（＋）パーフォリン値には細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）と免疫抑制性Ｔ細胞（ＳＴＣ；Ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ  Ｔ  ｃｅｌｌ）とがあり、前者はガン細胞を障害し、後者の活性化は結果的にガンの増殖につながる。したがってその絶対値では評価はできない。しかし前者はＩＦＮＹが１０ＩＵ／ｍｌ以上かもしくはＩＬ−１２値が７．８ｐｇ／ｍｌ以上であればＣＴＬであり、ＩＦＮＹとＩＬ−１２が低値であればＳＴＣと判定される。そこでＣＴＬ活性は、ＩＦＮＹ産生能力（ＩＦＮＹ値）もしくはＩＬ−１２産生能力（ＩＬ−１２値）で評価が可能である。
▲２▼ＮＫとＮＫＴ細胞活性化能
ＮＫとＮＫＴ細胞とはＮＫＲ−Ｐ１（ＮＫ細胞受容体ＣＤ１６１（＋））を共有しており、前者はＣＤ３（−）ＣＤ１６１（＋）の表面マーカーでＮＫ細胞数は測定可能であり、その活性化はＣＤ３（−）ＣＤ１６１（＋）パーフォリン産生能力で判定が可能である。一方後者のＮＫＴ細胞はＣＤ３（＋）ＣＤ１６１（＋）でその細胞数は測定が可能となり、そのパーフォリン産生能力でＮＫＴ細胞の活性化は測定可能である。
したがってガン治療における新免疫療法（ＮＩＴＣ）であっても一般的な免疫療法であっても以下の測定項目でそれぞれのｅｆｆｅｃｔｏｒ細胞を評価することが可能である。具体的には、ＣＴＬ活性はＩＦＮＹあるいはＩＬ−１２の誘導産生能力で評価が可能である。ＮＫ細胞の活性化はＣＤ３（−）ＣＤ１６１（＋）もしくはＣＤ３（−）ＣＤ１６１（＋）パーフォリン値でも評価可能である。ＮＫＴ細胞の活性化はＣＤ３（＋）ＣＤ１６１（＋）もしくはＣＤ３（＋）ＣＤ１６１（＋）パーフォリン値でも評価が可能である。
細胞および各マーカーの測定方法を以下に例示する。
（ＮＫＴ細胞の測定）（ＮＫ細胞の測定）（ＣＤ８の測定）
ＮＫＲ−Ｐ１を有するＮＫＴ細胞の測定は、ＮＫＴ細胞の細胞表面に特異的に存在する細胞表面抗原（ＣＤ３およびＣＤ１６１）の測定により行うことができる。具体的には、末梢血中のリンパ球について、ＣＤ３が陽性でかつＣＤ１６１が陽性（ＣＤ３（＋）ＣＤ１６１（＋））の細胞を検定する。つまり、ＮＫＴ細胞の細胞表面抗原であるＣＤ３およびＣＤ１６１を、モノクローナル抗体を用いてフローサイトメトリーを使用するＴｗｏ  Ｃｏｌｏｒ検査により測定する。ここでＮＫＴ細胞が活性化されているとは、リンパ球の中でＣＤ３（＋）ＣＤ１６１（＋）ＮＫＴ細胞の割合が１０％以上、より好ましくは１６％以上であることをいう。ＮＫＴ細胞活性化能とは、ＮＫＴ細胞の割合を１０％以上、より好ましくは１６％以上に増加せしめる機能、またはある物質を投与する前のＮＫＴ細胞の割合より更に増強せしめる機能を意味する。
同様に（ＣＤ３（−）ＣＤ１６１（＋））とはＣＤ３が陰性でかつＣＤ１６１が陽性の細胞を検定することである。この方法が本発明ではＮＫ細胞の測定に有用であることを確認した。
さらにＣＤ８（＋）とはＣＤ８が陽性の細胞を検定することである。この方法が本発明ではＣＴＬ活性の測定に有用であることを確認した。
実施例ではガン患者の血液を用いて、血中細胞について細胞表面抗原であるＣＤ３、ＣＤ１６１、ＣＤ８について陽性・陰性で区別し、各細胞の割合を、フローサイトメトリーを用いたＴｗｏ  Ｃｏｌｏｒ検査により常法通り測定した。このときＣＤ３、ＣＤ１６１、ＣＤ８に対するモノクローナル抗体は、それぞれコールター社製又はベクトンディッキンソン社製ものを使用した。
（パーフォリン産生細胞の測定）
末梢血中のリンパ球について、細胞表面抗原であるＣＤ３、ＣＤ８、ＣＤ１６１のうち２者とパーフォリンについてフローサイトメトリーを用いたＴｈｒｅｅ  Ｃｏｌｏｒ検査により常法通り測定する。具体的には、採取した血液に固定液を加えて細胞を固定し、膜透過液を添加後抗パーフォリン抗体（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ社製）を添加して反応させ、さらにＰＲＥ−Ｃｙ５標識二次抗体（ＤＡＫＯ社製）を添加して反応させ、ついで抗ＣＤ３−ＰＥ（Ｃｏｕｌｔｅｒ  ６６０４６２７）抗体および抗ＣＤ１６１−ＦＩＴＣ（Ｂ−Ｄ）抗体を添加して反応させ、その後フローサイトメトリーで測定する。図中での略語はＰＥＲＦと表示した。
（サイトカインを測定するための試料の調製）
まず、血液より単核球画分を分離調製する。ヘパリン加末梢血をリン酸緩衝生理食塩水（Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  Ｂｕｆｆｅｒｅｄ  Ｓａｌｉｎｅ）（ＰＢＳ）で２倍に希釈して混和した後、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｃｏｎｒａｙ液（比重１．０７７）上に重層し、４００Ｇで２０分間遠沈後、単核球画分を採取する。洗浄後、１０％牛胎児血清（ＦＢＳ）を加えたＲＰＭＩ−１６４０培地を加え、細胞数を１×１０６個となるように調製する。得られた細胞浮遊液２００μｌにフィトヘマグルチニン（Ｐｈｙｔｏｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ）（ＤＩＦＣＯ社製）を２０μｇ／ｍｌの濃度となるように加え、９６穴マイクロプレートにて５％ＣＯ２存在下、３７℃で２４時間培養し、該培養した細胞溶液中のサイトカインを測定する試料とする。
（ＩＬ−１２量の測定）
誘発されるＩＬ−１２量の測定は、後述するマウスを用いた実験例では血清中に十分なＩＬ−１２量の誘発があり、ヒトにおけるような間接的な測定をすること無しに直接酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）による測定キットで測定可能である。マウスを用いたこの系では、経口によりＩＬ−１２産生誘発物質を継続的に摂取させ、その後の血中ＩＬ−１２量の増加によりＩＬ−１２産生誘発能を検定できる。
なおヒトにおいては、血中における阻害剤の存在により、直接血液中のＩＬ−１２量は測定できず、例えば癌患者において誘発されるＩＬ−１２量の測定は、該癌患者の血液から分離調製した末梢血単核球に刺激物質を与えて培養した後の遠沈して細胞を除いた培養液に対して行う。培養に用いる細胞の数は０．５×１０６個／ｍｌ〜１×１０７個／ｍｌであり、好ましくは１×１０６個／ｍｌである。また、細胞を刺激する物質としては、従来使用されているマイトージェンであるフィトヘマグルチニン（ＰＨＡ）を、終濃度０．１〜１００μｇ／ｍｌ、好ましくは１〜２０μｇ／ｍｌとなるように加えて培養する。細胞を刺激する物質としては、ＰＨＡに限定されるものではなく、本発明の目的を達成するため、細胞を刺激して免疫生理活性物質を産生させることができる物質であれば良く、ＰＭＡ（Ｐｈｏｒｂｏｌ  １２−Ｍｙｒｉｓｔａｔｅ−１３−Ａｃｅｔａｔｅ）、ＰＭＡ＋Ｉｏｎｏｍｙｃｉｎ、ＬＰＳ（Ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ）、ＰＷＭ（Ｐｏｋｅ  Ｗｅｅｄ  Ｍｉｔｏｇｅｎ）などが挙げられる。ＩＬ−１２量の測定は自体公知の臨床、生化学的検査を利用できるが、Ｒ＆Ｄ  ＳＹＳＴＥＭＳ社やＭＢＬ社より入手することのできる酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）による測定キットが使用される。ここでＩＬ−１２産生誘発能とは、末梢血単核球が刺激により産生するＩＬ−１２量を、７．８ｐｇ／ｍｌ以上に増強せしめる機能、又はある物質を投与する前のＩＬ−１２産生量より増強せしめる機能を意味する。
本発明の経口摂取用組成物は、ＩＬ−１２産生誘発能を有する活性成分としては、β１，３グルカン構造を有している海洋性酵母由来成分を含有する。
本発明のＩＬ−１２産生を誘発せしめる活性成分としてβ１，３グルカン構造を有している海洋性酵母由来成分を含有する経口摂取用組成物は、癌の各進行段階におけるＩＬ−１２産生誘発能において公知のＡＨＣＣと大きな差異を有する。
本発明のβ１，３グルカン構造を有している海洋性酵母由来成分を有効成分とするものは、癌の初期段階においても十分なＩＬ−１２産生誘発能を示し、特徴的には進行した末期癌においても同等もしくはより強力なＩＬ−１２産生誘発能を発揮する。一方、ＡＨＣＣは、癌の初期段階において特徴的なＩＬ−１２産生誘発能を発揮するが、癌の進行とともにその誘発能は減衰していく。
本発明の経口摂取用組成物の投与量は、１日当たり１〜２０００ｍｇ／ｋｇ体重、より好ましくは１０〜２０００ｍｇ／ｋｇ体重程度であり、１０日〜１ヶ年、１〜数回／日で、好適には経口摂取される。無論、投与量を減少させ、化合物を非経口に耐えうる品質に調製することで、非経口摂取も可能である。
本発明の主成分であるβ１，３グルカン構造を有している海洋性酵母由来成分は、食品素材として公知である。例えば三共イースト・Ｍ（海洋性乾燥酵母）等が例示される。なお、本発明では、市販品をサンプルとした。
経口製剤は、錠剤、散剤、カプセル剤、シロップ剤等に調製される。製剤は、無論既知の賦形剤、崩壊剤、結合剤、滑沢剤等必要な添加物を配合し、常套手段を使用することでも製剤化できる。さらに必要に応じて、矯味剤、着色料、香料、安定剤、殺菌剤、防腐剤等の添加も可能である。
以上説示したように本発明は、β１，３グルカン構造を有している海洋性酵母由来成分を有効成分とする経口摂取用組成と癌の進行段階によるＩＬ−１２産生誘発能との関係を明らかにしたものであるから、これらのことを商業的媒体に担持させれば、当該製品の価値について差別化手段となる。従って、これら情報を商業的媒体に担持させた物は、極めて有用性の高いものである。そのうえ、これら情報を商業的に利用すれば、当該製品の価値について差別化手段となるから、これら情報を利用した商業方法は、極めて有用性の高いものである。
以上のような情報は、自然法則を利用した媒体に担持すれば有用な商業用媒体となり、またその商業用媒体は有用な商業方法を提供する。
実施例
以下に、実施例を用いて本発明を具体的に説明するが、本発明は本実施例に限定されるものではない。
（実施例１）
海洋性酵母（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）の分離と利用
分離試料の採集は主に東北地方の南部と関東地方の太平洋岸の磯で行い、海水２０６１と海藻や海産小動物２９３点を収集した。海水からの分離は、採集地で孔径０．４５μｍのメンプランフィルターでろ過後、フィルターを分離寒天培地に載せ、ガスパック嫌気ジャー（ＢＢＬ社製、炭酸ガス・水素発生  使用）の中で２７℃、１０日間の培養を行った。また、海藻や海産小動物からの分離は、試料約１ｇを集積用培地９ｍｌに入れ嫌気条件で培養を行った後、その少量を分離寒天培地にとり画線した。培養は嫌気条件で行った。
分離株の同定はＶａｎ  Ｄｅｒ  ＷａｌｔとＤ．Ｙａｌｌｏｗの方法により形態学的性質と生理学的性質を調べ、Ｔｈｅ  Ｙｅａｓｔｓ（ｅｄ．ｂｙ  Ｎ．Ｗ．Ｋｒｅｇｅｒ  ｖａｎ  Ｒｉｊ）に準じて行った。また、Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅの基準株とのＤＮＡ−ＤＮＡ相同性試験を行いＳ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅであることを確認した。この結果、海水から１０株と海藻から３株のＳ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅを分離することができた。
酵母（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）菌体の調製
（Ａ）三共海洋性乾燥酵母
（Ｂ）アルペンローゼ使用実用パン酵母
ＹＰＤ培地（酵母エキス  １０ｇ、ポリペプトン  ２０ｇ、Ｇｌｕｃｏｓｅ  ２０ｇ、蒸留水  １０００ｍｌ、ｐＨ５．０）の１５０ｍｌを入れた５００ｍｌ容坂口フラスコで２７℃、２４ｈｒ振とう培養した菌体を接種菌として用いた。本培養は５．０Ｌ用ジャーファーメンターに上述の培養液３．０Ｌを入れて殺菌後（１２１℃、４０分）、上記の振とう培養菌体を摂取し、２５℃、４８ｈｒ培養した。培養した菌体を遠心分離機（８，０００ｒｐｍ、１０ｍｉｎ）にかけ、上清と沈殿に分けた。得られた菌体を０．８５％生理食塩水で２回洗い、７０℃で２４時間乾燥後、乳鉢ですりつぶして菌体粉末を得た｛（Ａ）：約２０ｇ、（Ｂ）：約２２ｇ｝。
（実施例２）
パン酵母（アルペンローゼ実用パン酵母（３００ｍｇ／ｋｇ）、三共（株）海洋性乾燥酵母（Ｙ−１０９５：商品名  三共イースト・Ｍ）（３００ｍｇ／ｋｇ）、三共（株）海洋性生酵母（１ｇ／ｋｇ））で免疫学的抗腫瘍作用とＩＬ−１２産生能力を検討した。尚、それぞれの投与量は各群においてβ１，３グルカンの含有量が同量になるように調整して投与した。
実験は、Ｂ１０マウス（Ｃ５７ＢＬ／１０）に３ＬＬ腫瘍を移植し１３日目腫瘍体積で比較した（図１、図１−２）。
腫瘍移植後水の強制経口投与のｃｏｎｔｒｏｌ（Ａ）が２３９．４１±１５０ｍｍ３（１３日目）に対し、普通パン酵母・乾燥酵母（Ｂ）（３００ｍｇ／ｋｇ）ではｃｏｎｔｒｏｌに比較し、増大傾向が認められた。
一方、三共（株）の海洋性酵母（Ｃ、Ｄ）はいずれもｃｏｎｔｒｏｌに比較し縮小傾向が認められた。
血中ＩＬ−１２濃度に関しては三共の海洋性酵母群（Ｄ’Ｅ’）は水強制経口投与ｃｏｎｔｒｏｌ（Ａ）と比較して有意に高値を示した（図２、図２−２）。ＩＬ−１２濃度はＡｍｅｒｓｈａｍ  ＰｈａｒｍａｃｉａのＢｉｏｔｒａｋ  ＲＰＮ２７０２Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１２ｔｏｔａｌ｛（ｍ）ＩＬ−１２｝、（ｐ４０ａｎｄｐ７０），ｍｏｕｓｅＥＬＩＳＡ  ｓｙｓｔｅｍキットで計った。
水強制経口投与ｃｏｎｔｒｏｌ（Ａ’）に比較し、試験群はいずれもＩＬ−１２は高値を示した。しかし、腫瘍縮小作用とＩＬ−１２産生能力を総合的に比較すると三共（株）の海洋性酵母群が最も有効性が高いものと考えられた。
なお、本実験例で示した海洋性酵母はＹ−１０９５であるが、他の海洋性酵母にも同様の作用が有る（以下の表１）。
2003039568.tif 000002
臨床例
以下に、臨床例を用いて本発明を具体的に説明するが、本発明は本臨床例に限定されるものではない。
また、各臨床例において測定した各種腫瘍マーカーは、それぞれ公知の手法により測定した。また用いた療法の有効性を、日本国厚生省のＧＣＰに基づく抗がん剤の効果判定基準（Ｓｔａｎｄａｒｄ  ｆｏｒ  ｊｕｄｇｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｏｆ  ａｎｔｉ−ｃａｎｃｅｒａｇｅｎｔ  ｕｎｄｅｒ  ＧＣＰ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｊａｐａｎ  Ｍｉｎｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｗｅｌｆａｒｅ）に則って、完全治癒（ＣＲ）、部分治癒（ＰＲ）、無反応（がんの進展無し）（ＮＣ：Ｎｏ  Ｃｈａｎｇｅ）、または無効（ＰＤ：Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ  Ｄｉｓｅａｓｅ）として表した。
（臨床例１）
Ｍ．Ｙ．  ５９歳、女性    卵巣癌
平成１Ｘ年８月７日初診で担子菌製剤のＩＬＸ（登録商標）６．０ｇ／日、ＩＬＹ（登録商標）３．０ｇ／日、ベターシャークＬＯ２０ｇ／日等の投与を開始した。この治療法は八木田がＮＩＴＣとなずけている。
ＩＬ−１２の産生能力とＮＫＴ細胞活性が増強して腫瘍マーカーＣＡ１５−３（３０Ｕ／ｍｌ以下が正常値）が１００Ｕ／ｍｌから著減しつづけ、ＣＡ１２５（３５Ｕ／ｍｌ以下が正常値）も１２００Ｕ／ｍｌから同様に著減しつづけた。平成１＃年７月１日には上記腫瘍マーカーがいずれも正常値以下となりＣＲと判定された。
しかし治療開始後１７ヶ月目からＣＡ１２５値が増加し始め、ＣＡ７２−４やＳＴＮの卵巣癌関連腫瘍マーカーも異常値を示し始めた。
治療開始後２６ヶ月目の平成１Ｙ年９月１４日からＳＰ−１（商品名  Ｙ−１０９５  三共イーストＭ）の海洋性酵母６．０ｇ／日（２ｇを３回に分けて投与）の経口投与が開始された。
投与後２ヶ月目でＣＡ１２５が１９００Ｕ／ｍｌから１２０Ｕ／ｍｌと、ＣＡ７２−４が３８Ｕ／ｍｌから３．０＞Ｕ／ｍｌと著減し３ヶ月目にはＣＡ１２５、ＳＴＮコウゲン、ＣＡ７２−４のいずれもが正常値以下となった。
この間ＳＰ−１  ６ｇ／日（２ｇを３回に分けて投与）の経口投与によりＩＬ−１２産生能力が７．８ｐｇ／ｍｌ以下から１６．１ｐｇ／ｍｌおよび１２．６ｐｇ／ｍｌと産生増強作用が認められた。
以上の結果から、β１，３グルカン構造を有する海洋性酵母由来成分の投与が臨床において有効であることを確認した。また、β１，３グルカン構造を有する海洋性酵母由来成分の投与とＩＬ−１２産生能増強に相関がみられ、ＩＬ−１２誘導能を治療マーカーとして、β１，３グルカン構造を有する海洋性酵母由来成分を摂取させることがガン治療に有効であることを確認した。
詳細データーは、図３に示した。
（臨床例２）
Ｍ．Ｋ．  ７２歳、男性    肺腺癌と胃癌の重複癌
平成１Ｙ年７月２４日、肺腺癌と胃癌の重複癌の切除不能で来院した症例である。
ＩＬＸ（登録商標）６．０ｇ／日、ＩＬＹ（登録商標）３．０ｇ／日、ベターシャークＬＯ２０ｇ／日の経口投与が開始された。
しかし、癌の進行は腫瘍マーカー（ＣＥＡ、ＮＣＣ−ＳＴ４３９、ＣＡ１５−３、ＳＬＸ−１）が上昇せず、ＮＣと判定されていたが５ヶ月目にＳＬＸ−１が１２０Ｕ／ｍｌから１５０Ｕ／ｍｌと悪化しＰＤと判定された。またＩＬ−１２の産生能力も著減した。
そこでＳＰ−１（商品名  Ｙ−１０９５  三共イーストＭ）６ｇ／日（２ｇを３回に分けて投与）の経口投与が開始された。その後各種腫瘍マーカーも低下しつづけＩＬ−１２の産生能力も回復しかつＮＫ細胞もＮＫＴ細胞もともに活性化しＰＲの状態が維持されつづけている。
以上の結果から、β１，３グルカン構造を有する海洋性酵母由来成分の投与が臨床において有効であることを確認した。また、β１，３グルカン構造を有する海洋性酵母由来成分の投与とＩＬ−１２産生能増強、ＮＫ細胞及び／又はＮＫＴ細胞の活性化に相関がみられた。また、ＩＬ−１２誘導能、ＮＫ細胞及び／又はＮＫＴ細胞活性化を治療マーカーとして、β１，３グルカン構造を有する海洋性酵母由来成分を摂取させることがガン治療に有効であることを確認した。
詳細データーは、図４に示した。
産業上の利用可能性
β１，３グルカン構造を有する海洋性酵母由来成分を含有する組成物が、従来にない効果的なＩＬ−１２誘導剤であることを新規に見出し、さらにβ１，３グルカン構造を有する海洋性酵母由来成分の経口投与により、ＮＫ細胞活性化能、ＮＫＴ細胞活性化能を期待しうる抗癌組成物であることを新規に見出し、本発明からなる抗癌組成物の提供に成功した。
【図面の簡単な説明】
（図１）腫瘍体積への影響を示す。６ｄは、６日目の結果である。
（図１−２）腫瘍体積への影響を示す。９ｄ、１３ｄは、各９日目、１３日目の結果である。
（図２）ＩＬ−１２誘導量への影響を示す。７ｄは、７日目の結果である。
（図２−２）ＩＬ−１２誘導量への影響を示す。１０ｄ、１４ｄは、各１０日目、１４日目の結果である。
（図３）臨床例１
（図４）臨床例２
【図１】
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【図１−２】
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【図２】
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【図２−２】
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【図３】
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【図４】
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【手続補正書】
【提出日】平成15年7月18日(2003.7.18)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
β１，３グルカン構造を有する海洋性酵母由来成分を含有するＩＬ−１２誘導剤。
【請求項２】
削除
【請求項３】
削除
【請求項４】
ＩＬ−１２誘導能を治療マーカーとして、β１，３グルカン構造を有する海洋性酵母由来成分を摂取させることを特徴とするガンの治療方法。
【請求項５】
ＮＫ細胞及び／又はＮＫＴ細胞の活性化能を治療マーカーとして、β１，３グルカン構造を有する海洋性酵母由来成分を摂取させることを特徴とするガンの治療方法。
【請求項６】
ＩＬ−１２誘導能、ＮＫ細胞及び／又はＮＫＴ細胞の活性化能を治療マーカーとして、β１，３グルカン構造を有する海洋性酵母由来成分を摂取させることを特徴とするガンの治療方法。
【請求項７】
ＩＬ−１２誘導能を指標として、β１，３グルカン構造を有する海洋性酵母由来成分を候補化合物とする新規制癌剤のスクリーニング方法。
【請求項８】
請求項７のスクリーニング方法において、さらにＮＫ細胞及び／又はＮＫＴ細胞の活性化能を指標とする新規制癌剤のスクリーニング方法。
【請求項９】
請求項７又は８のスクリーニング方法で得られたβ１，３グルカン構造を有する海洋性酵母由来成分を用いた制癌剤。
【請求項１０】
請求項４〜９の情報を自然法則を利用した媒体に担持した商業用媒体。
【請求項１１】
請求項１０の商業用媒体を利用した商業方法。
【請求項１２】
進行性の癌又は末期癌の患者に投与することを特徴とする、β１，３グルカン構造を有する海洋性酵母由来成分を含有するＩＬ−１２誘導剤。
【請求項１３】
請求項１２に記載の進行性の癌又は末期癌の患者が、以下のいずれか１から選ばれるＩＬ−１２誘導剤。
１）卵巣癌
２）肺腺癌
３）胃癌
【請求項１４】
生体への摂取量としてβ１，３グルカン構造を有する海洋性酵母由来成分を１０ｍｇ〜２０００ｍｇ／体重ｋｇ／日で経口摂取する請求項１，１２，１３のいずれか１のＩＬ−１２誘導剤。
【請求項１５】
経口摂取用健康補助食品製剤である請求項１，１２〜１４のいずれか１のＩＬ−１２誘導剤。
【国際調査報告】
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