(57)【要約】次式（Ｉ）2004002978.tif 000013で示される化合物（立体異性体である活性物質αおよび活性物質β）であって、天然物由来であることから副作用もなく、長期連用においても安全性が高く、飲食物などの添加剤等として広く活用できる消化管運動促進作用物質の提供、ならびに該作用物質を含む添加剤を含有する飲食物の提供である。  具体的には、ビールから単離・精製して得たムスカリンＭ３受容体に作用する消化管運動促進物質であり、ドリンカビリティー促進作用を有する物質であり、またこれら物質を含有する天然物または天然加工品より得た組成物であり、これらの物質または組成物を飲食物用の添加剤として活用して、消化管運動促進性の飲食物が提供される。
2004002978.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
次式（Ｉ）：
2004002978.tif 000010
で示される化合物。
【請求項２】
次式（ＩＩ）：
2004002978.tif 000011
で示される化合物。
【請求項３】
次式（ＩＩＩ）：
2004002978.tif 000012
で示される化合物。
【請求項４】
酵母発酵産物、大麦、発芽した大麦、発芽した大麦の分画物から単離された請求の範囲第１、２または３項に記載の化合物。
【請求項５】
発芽した大麦の分画物が、麦芽根である請求の範囲第４項に記載の化合物。
【請求項６】
ムスカリンＭ３受容体に作用する請求の範囲第１項ないし第５項のいずれかに記載の化合物。
【請求項７】
ムスカリンＭ３受容体を介した作用が、消化管運動促進、胃酸分泌促進、排尿促進、食欲増進作用およびドリンカビリティー促進である請求の範囲第６項に記載の化合物。
【請求項８】
請求の範囲第１ないし第７項のいずれかに記載の化合物を含む天然物または天然物加工品を含有することを特徴とする飲食物、飲食物添加剤、医薬品または動物用飼料。
【請求項９】
請求の範囲第１項ないし第７項のいずれかに記載の化合物を含む天然物または天然物加工品が、酵母発酵産物、大麦、発芽した大麦、発芽した大麦の分画物である請求の範囲第８項に記載の飲食物、飲食物添加剤、医薬品または動物用飼料。
【請求項１０】
請求の範囲第１項ないし第７項のいずれかに記載の化合物を含む天然物または天然物加工品が、麦芽根または麦芽根の加工品である請求の範囲第８項に記載の飲食物、飲食物添加剤、医薬品または動物用飼料。
【請求項１１】
請求の範囲第１項ないし第７項のいずれかに記載の化合物、当該化合物を含む天然物または天然物加工品を含有することを特徴とするムスカリンＭ３受容体を介した促進作用を有する組成物。
【請求項１２】
ムスカリンＭ３受容体を介した促進作用が、消化管運動促進、胃酸分泌促進、排尿促進、食欲増進作用およびドリンカビリティー促進である請求の範囲第１１項に記載の組成物。
【請求項１３】
消化管運動促進剤および／またはドリンカビリティー促進剤である請求の範囲第１１項に記載の組成物。
【請求項１４】
請求の範囲第１項ないし第７項のいずれかに記載の化合物を含む天然物または天然物加工品が、酵母発酵産物、大麦、発芽した大麦、発芽した大麦の分画物である請求の範囲第１１項ないし第１３項のいずれかに記載の組成物。
【請求項１５】
請求の範囲第１項ないし第７項のいずれかに記載の化合物を含む天然物または天然物加工品が、麦芽根または麦芽根の加工品である請求の範囲第１１項ないし第１３項のいずれかに記載の組成物。
【請求項１６】
請求の範囲第１項ないし第７項のいずれかに記載の化合物、化合物を含有する天然物、天然物加工品または組成物を添加した飲食物。
【請求項１７】
アルコール飲料またはノンアルコール飲料である請求の範囲第１６項に記載の飲食物。
【請求項１８】
麦芽発酵飲料である請求の範囲第１６項に記載の飲食物。
【請求項１９】
麦芽発酵飲料がビール、発泡酒または低アルコール麦芽発酵飲料である請求の範囲第１８項に記載の飲食物。
【請求項２０】
茶飲料である請求の範囲第１８項に記載の飲食物。
【請求項２１】
飲食物中の請求の範囲第１項ないし第７項のいずれかに記載の化合物の含有量が、最終製品当たり０．０１ｍｇ〜１００ｍｇ／Ｌである請求の範囲第１６ないし第２０項に記載の飲食物。
【請求項２２】
健康食品および／または特別用途食品である請求の範囲第１６項に記載の飲食物。
【請求項２３】
請求の範囲第１項ないし第７項のいずれかに記載の化合物、当該化合物を含有する天然物、天然物加工品および組成物を含有する、飲食物添加剤または医薬品。
【請求項２４】
ムスカリンＭ３受容体に作用する請求の範囲第２３項の飲食物添加剤または医薬品。
【請求項２５】
消化管運動促進、胃酸分泌促進、排尿促進、食欲増進作用またはドリンカビリティー促進性の、飲食物、飲食物添加剤、医薬品、動物用飼料、あるいは、消化管運動促進剤またはドリンカビリティー促進剤を製造するための、ムスカリンＭ３受容体に作用する請求の範囲第１項ないし第７項のいずれかに記載の化合物、当該化合物を含有する天然物、天然物加工品および組成物の使用。
【請求項２６】
ムスカリンＭ３受容体に作用する消化管運動促進物質を含む天然物または天然物加工品が、酵母発酵産物、大麦、発芽した大麦、発芽した大麦の分画物または麦芽根であることを特徴とする請求の範囲第２５項に記載の使用。
【請求項２７】
範囲第１項ないし第７項のいずれかに記載の化合物を含有する天然物、天然物加工品を出発材料とし、出発材料が固体の場合は抽出−固液分離−乾燥操作により、液体の場合には乾燥操作により揮発性成分を除いて非揮発性成分を回収し、疎水性吸着剤（合成吸着剤等）クロマトグラフィーにより非吸着部を除いて吸着部を回収し、活性物質が濃縮された粗精製画分を得、さらに陽イオン交換（弱酸性陽イオン交換樹脂等）クロマトグラフィーで非吸着部を除き、酸性メタノール（メタノール−塩酸）で活性物質を溶出し、次いで、０．０１Ｎ−塩酸下においてゲル濾過クロマトグラフィーを行うことにより精製画分を得、さらに、ＯＤＳ−ＨＰＬＣ（Ｃ１８−高速液体クロマトグラフィー）による高度精製を行うことを特徴とする請求の範囲第１項ないし第３項のいずれかに記載の化合物の分離精製方法。
【請求項２８】
出発材料が酵母発酵産物、大麦、発芽した大麦、発芽した大麦の分画物または麦芽根であることを特徴とする請求の範囲２７記載の分離精製方法。
【請求項２９】
第１３図のＣＤスペクトルを示す請求の範囲第２項に記載の化合物。
【請求項３０】
第１４図のＣＤスペクトルを示す請求の範囲第３項に記載の化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】  本発明は、ムスカリンＭ３受容体に作用する物質に関し、詳細には、消化管運動促進作用、胃酸分泌促進、排尿促進、食欲増進作用あるいはドリンカビリティー促進作用等を有する物質に関する。
また本発明は、当該物質それ自体、あるいは当該物質を含有する天然物または天然物加工品、あるいは組成物を利用した各種飲食物に関し、特に、消化管運動促進作用またはドリンカビリティー促進作用を利用した飲食物に関する。
【背景技術】  ヒトが摂取した食物は、消化器系の各部で種々の消化を受け、栄養素の大部分が小腸で吸収されたのち、排泄されている。これらの消化・吸収作用が順序よく行われるためには、食物をその消化の状態に応じて順次消化器系の中を移動させる必要がある。すなわち、消化管運動は食物消化のために内容物の輸送、貯蔵、撹拌・混和、そして排出に至る消化のプロセスの進行をつかさどる重要な生理機能である。
消化管内の内容物は、消化管壁を構成する平滑筋の規則正しい収縮運動（蠕動運動）による消化管運動により輸送、貯蔵、撹拌・混和等が行われており、この消化管運動は、神経性および体液性の調節を受けている。神経性調節には自律神経系の二重支配と、消化管壁内神経の支配が存在するが、その主体はコリン作動性の副交感神経節後繊維である。一方、体液性調節は、消化管ホルモンによるものである。
これらの調節機構のバランスが乱れ、消化管運動機能に障害が生じると、消化のプロセスの各段階での障害が引き起こされ、その結果、嚥下困難、むねやけ、悪心、嘔吐、腹痛、腹部膨満、下痢、便秘などの消化器症状が出現する。特に、近年のストレス過多の社会において、潰瘍や癌などの器質的な病変が認められていないにも拘わらず、このような消化器症状を訴えるという症例が増えてきている。従来、わが国ではこの疾患は慢性胃炎とされ、治療に明確な指針がなかったが、消化器病の診断学の進歩により、こうした症例の多くは、胃内容物の排出遅延を中心とした消化管運動機能異常が原因であることが明らかになり、胃炎とは明確に区別してｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｄｙｓｐｅｐｓｉａ（機能性ディスペプシア）あるいはｎｏｎ−ｕｌｃｅｒ  ｄｙｓｐｅｐｓｉａ（ＮＵＤ）と呼ばれるようになってきている。また、高齢者において胃壁の筋肉の緊張性が減弱することによって生ずる胃アトニー症や、神経性消化不良、胃神経症などの精神心理学的要因による症状も、この疾患に含まれる。さらに、術後の消化管運動の低下症状や、抗ガン剤の投与による食欲不振なども、近年問題となってきている。
近年、消化管運動に関わる受容体の研究が進み、消化管運動の神経性調節機構の詳細が明らかになってきた。大部分の消化管の運動は、主に副交感神経の節後繊維である壁内コリン作動性神経によって調節されている。この神経終末より放出されるアセチルコリンが平滑筋のムスカリンＭ３受容体に結合して平滑筋の収縮を引き起こし、このアセチルコリンがコリンエステラーゼで分解されると、平滑筋は元に戻る。この収縮と回復の反復頻度が高まると運動が促進されることになる。
したがって、ムスカリンＭ３受容体アゴニストとして作用する物質は、消化管平滑筋を収縮させ消化管運動を促進させることとなり、消化管運動機能の低下に基づく消化器症状の改善を促し、極めて有効な消化管運動促進作用物質となる。
ところで、飲食物の中でもアルコール含有飲料は、上部消化管の運動性に影響を及ぼすことが知られている。例えば、Ｐｆｅｉｆｆｅｒら（Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．，Ｖｏｌ．７０，ｐｐ  ４８７−４９１，１９９２）は、ビールが胃の排出運動を促進させ、胃−盲腸通過時間を短縮させること、逆に、ビールと同程度の濃度（７．５％）のエタノールは胃の排出運動を抑制することを報告している。また、胃排出の速いビールほどドリンカビリティーが高いことを示す興味深い報告もある（Ｂｉｏｓｃｉ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，Ｖｏｌ．６２，ｐｐ  ８４６−８５１，１９９８）。
ビールのドリンカビリティーとは、ビールを大量に飲んでもまだおいしく飲める性質のことをいい、ヨーロッパではバイタートリンケンあるいはドリンカビリティーと呼ばれ、ビールの評価を決める重要な要因の一つとされている。したがって上記した研究結果から、ビールには消化管運動促進作用、あるいはドリンカビリティー促進作用物質が含有されており、その作用はアルコール成分以外の物質に由来するものと考えられていたが、かかる活性物質については未だ明らかとなっておらず、その特定が望まれていた。
先に本発明者らは、ビールの乾燥物に胃排出促進作用があることをマウスにおいて実証し、さらに、受容体結合性試験やモルモット回腸縦走筋の収縮性試験によってビール乾燥物の作用メカニズムについて検討した結果、ビール乾燥物はムスカリンＭ３受容体を刺激することによって消化管運動を促進する作用があることを明らかにした（Ａｌｃｏｈｏｌｉｓｍ：Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ＆  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｖｏｌ．２６，Ｎｏ．５，ｐｐ  ６７７−６８１，２００２）。
したがって、ビール中に含有される消化管運動促進物質、あるいはドリンカビリティー促進物質を特定し、かかる物質を提供することは、ムスカリンＭ３受容体に作用する物質として、消化管運動促進作用、ドリンカビリティー促進作用、胃酸分泌促進、排尿促進あるいは食欲増進作用等を有する物質の提供につながるものであり、極めて有用なことである。
一方、ビールの原料となる大麦等について、その微量含有成分に関し種々研究がなされており、米国特許第３，４７５，４５９号には、大麦から得られた抗真菌作用物質としてＨｏｒｄａｔｉｎｅ  Ａが示されている。しかしながら、Ｈｏｒｄａｔｉｎｅ  Ａの立体構造についてはデータに基づいた詳細な検討は成されておらず、また、幾何異性体の存在は知られていない。さらに、抗真菌作用以外の作用、特にムスカリンＭ３受容体に対する作用については、一切論じられていない。
本発明は、ビールからムスカリンＭ３受容体に作用する活性本体、すなわち、消化管運動促進作用の活性本体を単離して物質を特定すると共に、かかる物質を各種機能性飲食物に応用させ、かかる消化管運動促進物質を利用した消化管運動促進作用剤、胃酸分泌促進作用剤、排尿促進作用剤、食欲増進作用剤およびドリンカビリティー促進剤等を提供することを課題とする。
本発明者らは、上記の課題を解決するべく鋭意研究を重ね、ムスカリンＭ３受容体への結合活性を指標として、ビール中から消化管運動促進物質の精製を試みた。その結果、ビールから、計４ステップの液体クロマトグラフィーにより、最終的に、ムスカリンＭ３受容体への結合活性物質を単離するとともに、その構造を決定し、本発明を完成させた。
【発明の開示】
したがって、本発明の一つの態様は、次式（Ｉ）：
2004002978.tif 000003
で示される化合物について、その立体構造を明らかにし、かかる化合物を提供することを基本とする。
すなわち本発明者らは、上記式（Ｉ）の化合物について、その２種の異性体（活性物質α、および活性物質β）を分離し、それぞれの活性物質αおよび活性物質βについて、紫外吸収スペクトル、質量分析スペクトル、および核磁気共鳴スペクトルデータ等の解析により、その立体構造を特定させた。
したがって、本発明の具体的態様としては、上記式（Ｉ）で示される化合物の異性体である、式（ＩＩ）：
2004002978.tif 000004
で示される活性物質α（以下、単に「活性物質α」と称する）を提供し、また式（ＩＩＩ）：
2004002978.tif 000005
で示される活性物質β（以下、単に「活性物質β」と称する）を提供する。
本発明で提供される上記式（Ｉ）で示される化合物は、分子中に２個の不斉炭素を有している。したがって本発明が提供する化合物（Ｉ）には上記の通り立体異性体が存在するが、本発明の上記式（Ｉ）中には、その立体異性体の個々の化合物、さらにはその立体異性体の混合物も包含される。
また、上記の立体異性体であるシス体：式（ＩＩ）またはトランス体：（ＩＩＩ）で示される化合物には、鏡像異性体が存在する。本発明の活性物質αは第１３図に示したＣＤスペクトルを、また活性物質βは第１４図に示したＣＤスペクトルを示す絶対配置を持つものであるが、本発明の式（ＩＩ）または（ＩＩＩ）で示される化合物中には、その鏡像体も包含される。
さらにまた、本発明で提供される式（Ｉ）〜（ＩＩＩ）で示される化合物は塩の形態をとることもでき、本明細書ならびに請求の範囲においては、式（Ｉ）〜（ＩＩＩ）で示される化合物中には、かかる塩も包含される。
なお、式（Ｉ）〜（ＩＩＩ）の化合物の構造について付言すると、当該化合物はｐ−Ｃｏｕｍａｒｏｙｌａｇｍａｔｉｎｅの二量体である。ｐ−Ｃｏｕｍａｒｏｙｌａｇｍａｔｉｎｅはフェノール基とアミド基の間に二重結合を有している。シス体のｐ−Ｃｏｕｍａｒｏｙｌａｇｍａｔｉｎｅで二量体を構成する場合には、式（Ｉ）の五員環部分がシス式、すなわち、式（ＩＩＩ）の立体構造となる。
一方、式（ＩＩ）については、五員環部分がシス式、二重結合部分がトランス体である。シス体同士、あるいはトランス体同士のｐ−Ｃｏｕｍａｒｏｙｌａｇｍａｔｉｎｅの二量体では、通常、取り得ない立体構造を有している。すなわち、本発明者らは、式（ＩＩ）の化合物は、天然物として極めて珍しい構造であることを見出した。
また、本発明は、活性物質αおよび活性物質βの分離・精製方法を提供するものでもあり、具体的には、ビールを出発材料とし、凍結乾燥により揮発性成分を除いて非揮発性成分を回収し、合成吸着剤クロマトグラフィーにより非吸着部を除いて吸着部を回収し、活性物質が濃縮された粗精製画分を得、さらに、弱酸性陽イオン交換クロマトグラフィーで非吸着部を除き、酸性メタノール（メタノール−塩酸）で活性物質を溶出し、次いで、０．０１Ｎ−塩酸下においてゲル濾過クロマトグラフィーを行うことにより精製画分を得、さらに、ＯＤＳ−ＨＰＬＣ（Ｃ１８−高速液体クロマトグラフィー）による高度精製を行い、２種の活性物質を単離する方法を提供する。このようにして得られた活性物質は、共に水溶性であった。
この２種の活性物質αおよびβは、高速液体クロマトグラムにより、それぞれ単一ピークであることが確認され、また、ムスカリンＭ３受容体の結合性試験において、当該受容体に対する親和性を有することが確認された。特に、マウスにおける胃排出能促進活性を指標として消化管運動に及ぼす影響について検討した結果、当該活性物質αおよびβは、強い消化管運動促進作用を有することが確認できた。
ところでムスカリンＭ３受容体は小腸だけでなく、胃を構成する各種細胞表面に存在し、アセチルコリンは胃の生理機能の発現に重要な役割を果たしている。すなわち、壁細胞、主細胞およびＧ細胞はムスカリンＭ３受容体を介したアセチルコリンの刺激によって、それぞれ胃酸、ペプシノーゲンおよびガストリンの分泌を促進し、胃平滑筋は収縮することが知られている。
さらに、膀胱の平滑筋（排尿筋）にもムスカリンＭ３受容体が存在しており、アセチルコリンの作用によって平滑筋が収縮し、排尿が促されることが明らかになっている。
本発明により提供される活性物質αおよびβは、ムスカリンＭ３受容体に対する作用を有していることから、消化管運動促進作用のみならず、ムスカリンＭ３受容体の多様な生理作用に起因する排尿促進作用、胃酸分泌促進作用、および食欲増進作用を有するものであり、したがって、催吐性軽減や、味覚忌避軽食の効果も期待できる化合物である。
したがって本発明は、また別の態様として、消化管運動促進作用、胃酸分泌促進、排尿促進、食欲増進作用あるいはドリンカビリティー促進作用等を有する上記式（Ｉ）〜（ＩＩＩ）で示される活性物質を提供する。
さらに本発明者らは、ビールから単離した当該活性物質（α、β）の由来を検討するべく、かかる活性物質を多く含む各種素材をスクリーニングした結果、酵母発酵産物、大麦、発芽した大麦、発芽した大麦の分画物に、当該活性物質が含まれることを見出した。特に、発芽した大麦の分画物の一つである麦芽根には、当該物質が高濃度で含有されていることを見出した。
そこで、当該活性物質を高濃度で含有する麦芽根の抽出物について、マグヌス法を用いてモルモットの回腸縦走筋の収縮に及ぼす影響を検討した結果、麦芽根抽出物は、回腸縦走筋を強く収縮させ、消化管運動促進作用を有することを確認した。
したがって、本発明はさらまた別の態様として、上記式（Ｉ）〜（ＩＩＩ）で示される活性物質、ならびにそれら活性物質を含有する天然物、または天然加工品、あるいは組成物を利用した、消化管運動促進作用またはドリンカビリティー促進作用を有する各種飲食物、飲食物添加物、医薬品、動物用飼料を提供する。
より具体的には、本発明は、上記式（Ｉ）〜（ＩＩＩ）で示される活性物質、ならびにそれら活性物質を含有する天然物、または天然加工品、あるいは組成物として、特に麦芽根を利用した各種飲食物、飲食物添加物、医薬品、動物用飼料を提供する。
さらに具体的には、本発明は、かかる飲食物として、アルコール飲料、ノンアルコール飲料、健康食品、特別用途食品を提供する。
【図面の簡単な説明】  第１図は、参考例１による、ビール乾燥物の分画物の［３Ｈ］４−ＤＡＭＰ結合に対する阻害曲線を示すグラフである。
第２図は、実施例１の、ビール中の消化管運動促進物質の分離・精製のフローを示す図である。
第３図は、実施例１で得られた本発明の活性物質αのＨＰＬＣクロマトグラム図である。
第４図は、実施例１における本発明の活性物質αの［３Ｈ］４−ＤＡＭＰ結合に対する阻害曲線を示すグラフである。
第５図は、実施例１における本発明の活性物質βの［３Ｈ］４−ＤＡＭＰ結合に対する阻害曲線を示すグラフである。
第６図は、実施例２の活性物質αおよび活性物質βの紫外吸収スペクトルデータを示すグラフである。
第７図は、実施例２の活性物質αの質量分析スペクトルデータを示すグラフである。
第８図は、実施例２の活性物質βの質量分析スペクトルデータを示すグラフである。
第９図は、実施例２における活性物質αの核磁気共鳴（１Ｈ−ＮＭＲ）スペクトル解析図である。
第１０図は、実施例２における活性物質βの核磁気共鳴（１Ｈ−ＮＭＲ）スペクトル解析図である。
第１１図は、実施例２における活性物質αの核磁気共鳴（１３Ｃ−ＮＭＲ）スペクトル解析図である。
第１２図は、実施例２における活性物質βの核磁気共鳴（１３Ｃ−ＮＭＲ）スペクトル解析図である。
第１３図は、実施例２における活性物質αのＣＤスペクトル解析図である。
第１４図は、実施例２における活性物質βのＣＤスペクトル解析図である。
第１５図は、実施例３におけるマウスにおける活性物質αおよび活性物質βの胃排出能促進効果の結果を示すグラフである。
第１６図は、実施例４の麦芽根から抽出・部分精製した組成物のＨＰＬＣクロマトグラムを示す図である。
第１７図は、実施例５のモルモットにおける当該活性物質を含有する麦芽根抽出物の回腸縦走筋の収縮作用を示すグラフである。
第１８図は、実施例６のヒトにおける消化管運動促進性物質配合飲食物（アルコール飲料）の排尿促進作用の結果を示すグラフである。
第１９図は、実施例７のラットにおける消化管運動促進性物質配合飲食物（ノンアルコール飲料）のドリンカビリティー促進作用の結果を示すグラフである。
第２０図は、実施例８のヒトにおける消化管運動促進性物質配合飲食物（ビール）のドリンカビリティー促進作用の結果を示すグラフである。
【発明を実施するための最良の形態】  以下に、本発明が提供する式（Ｉ）〜（ＩＩＩ）で示されるムスカリンＭ３受容体に対する作用を有する活性物質の単離・精製、その特性等を詳細に説明することにより、本発明を詳細に説明していく。
本発明が提供するムスカリンＭ３受容体に対する作用を有する式（Ｉ）〜（ＩＩＩ）で示される活性物質は、具体的には、ビールから４ステップの液体クロマトグラフィーを適宜組み合わせ、単離・精製することができる。より具体的には、ビールを凍結乾燥することにより揮発性成分を除き、得られた非揮発性成分を、合成吸着剤、例えば、アンバーライトＸＡＤ−２、ダイアイオンＨＰ−２０を用いたクロマトグラフィーに供して非吸着部を除き、吸着部をアルコール、或いはメタノールにて溶出し、活性物質が濃縮された粗精製画分を得た。
次いで、上記で得られたアルコール溶出部を、さらに、弱酸性陽イオン交換クロマトグラフィー、例えばＣＭ−セファデックスＣ−２５カラムクロマトグラフィーにて非吸着部を除き、吸着部から、酸性メタノール（メタノール−塩酸）で活性物質を溶出した。
上記で得られた溶出分画を、０．０１Ｎ−塩酸下におけるゲル濾過クロマトグラフィーを行うことにより精製画分を得、さらに、ＯＤＳ−ＨＰＬＣ（Ｃ１８−高速液体クロマトグラフィー）による高度精製を行い、目的とする２種の活性物質（活性物質α、活性物質β）を単離することができた。
本発明にあっては、上記で単離・精製された活性物質をそのまま消化管運動促進成分として使用することもでき、また、そのような活性物質をそのまま用いる代わりに、ビール中より単離したムスカリンＭ３受容体に作用する物質を含む天然物および天然物加工品を用いることができる。本発明において、天然物とは加工されていない穀物など（例えば、大麦）を指す。天然物加工品とは各種加工の施された天然物、例えば、酵母発酵産物、発芽した大麦、およびこれらの分画物などを指す。ここでいう分画物とは物理的に分けられた分画物（組織分画物）である。また、天然物、酵母発酵産物および発芽した大麦等を微粉末化するなどして、直接飲食可能な組成物の形態に加工したものも天然物加工品に含まれる。
これらの天然物、および天然物加工品は、本発明が目的とする飲食物、飲食物添加剤、医薬品、動物用飼料および消化管運動促進剤の特性に応じて、種々天然物および天然物加工品から、適宜活性物質を抽出・分離・精製する所望の段階での組成物として、使用することができる。本発明では、活性物質を含むこれら組成物も天然物加工品に含む。
本発明において、そのような原料物質として使用される酵母発酵産物とは、例えば、サッカロマイセス属の酵母（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）を用いた発酵により産生される産物を挙げることができる。より具体的には、ウィスキーなどの蒸溜酒を製造する際に得られる蒸溜残液のような酵母発酵産物の非揮発性画分、また、ビール、ワイン、清酒のような醸造酒等の酵母発酵産物を含む酵母発酵液などを挙げることができる。
なお、このような酵母発酵産物から、本発明が目的をするムスカリンＭ３受容体を介した消化管運動促進作用を有する画分を取得する方法としては、例えば次の方法により行うことができる。すなわち、上記した各種の酵母発酵産物から、合成吸着剤（例えば、三菱化学社製：ダイヤイオンＨＰ−２０）等により吸着性成分を吸着し、次いで、吸着成分をメタノールあるいはエタノールなどのアルコールにより溶離させ、吸着画分から消化管運動促進画分を得る。
次いで、必要であれば、酸性ｐＨ条件下で陽イオン交換樹脂（例えば、ファルマシア社製：ＣＭセファデックスＣ−２５）に吸脱着して、酵母発酵産物の消化管運動促進画分成分として陽イオン成分を得、ＨＰＬＣ等で精製、またはエーテル等の有機溶媒中で結晶化して、高純度の活性物質を得ることができる。
また、別な手段として、大麦、発芽した大麦、発芽した大麦の分画物から単離することもできる。本発明において大麦（英名：ｂａｒｌｅｙ）とは、オオムギ属の植物のことをいい、学名は、特に限定されず、Ｈｏｒｄｅｕｍ  ｖｕｌｇａｒｅ  Ｌ．、Ｈｏｒｄｅｕｍ  ｄｉｓｔｉｃｈｏｎ  Ｌ．などが挙げられる。例えば、栽培上では、春播き（ｓｐｒｉｎｇ  ｂａｒｌｅｙ）、秋播き（ｗｉｎｔｅｒ  ｂａｒｌｅｙ）が挙げられ、また、種では、二条大麦と六条大麦が挙げられる。具体的な品種としては、日本においては、はるな二条、あまぎ二条、ミカモゴールデン、タカホゴールデンなどが挙げられ、海外においては、Ａｌｅｘｉｓ種、Ｓｃｈｏｏｎｅｒ種、Ｈａｒｒｉｎｇｔｏｎ種、Ｏｒｂｉｔ種、Ｃｏｒｎｉｃｈｅ種、Ｔｒｉｕｍｐｈ種が挙げられる。
また本発明において、発芽した大麦とは、大麦の穀粒が生長・発生したもののことをいい、麦芽製造においては、緑麦芽（生麦芽）と乾燥麦芽のことをいい、また、大麦の穀粒の栽培においては、若葉が出た状態のものや苗など、特に限定されない。麦芽製造における大麦の発芽の度合いは、生長中の大麦の温度、発芽中に供給される水分含量、発芽表層中の酸素と炭酸ガスの比率、発芽期間などの因子を管理することにより適宜決定できる。また、緑麦芽（生麦芽）の水分は、約４０から４５％、乾燥麦芽の水分は、約３〜１５％のものが挙げられる。
さらに、本発明において、発芽した大麦の分画物とは、穀皮部、でんぷん層（胚乳）、果皮および種皮、葉芽、若葉、苗、幼芽、アロイロン層画分、麦芽根、根芽などの組織画分およびそれらの混合物のことをいい、特に限定されるものではない。このような発芽した大麦の分画物は、常法によって調製でき、具体的には、破砕法、篩い法、搗精法、風選法、比重差選別法、脱芒法などを挙げることができる。
そのなかにあっても、本発明においては特に、麦芽根（幼根ともいう）は、大麦の発芽時に生長／発根する幼根／根であり、本発明が目的とする活性物質α、および活性物質βを含む天然物、および天然物加工品として好ましく使用することができる。
このような大麦、発芽した大麦、発芽した大麦の分画物から、本発明が目的とするムスカリンＭ３受容体を介した消化管運動促進作用を有する組成物を取得する方法としては、常法による各種抽出・分離操作により、当該物質を含む組成物を得ることができる。より具体的には、分配平衡による分離、例えば、固液抽出（水系抽出，有機溶媒系抽出など）、超臨界ガス抽出、吸着（活性炭など）；速度差に基づく分離、例えば、濾過、透析、膜分離（限外濾過、ＲＯ、機能性膜）、液体クロマトグラフィー（イオン交換など）；選択的沈殿の形成による分離、例えば、結晶化、有機溶媒による沈殿など；抽出・分離工程を適宜組み合わせて行うことができる。
なお、必要であれば、濃縮、濾過、乾燥などを適宜行い、濃縮エキス、粉体、乾燥、結晶品などの各種形態として目的とする消化管運動促進組成物を得ることもできる。かかる組成物の純度は、特に限定されず、目的とする飲食物、飲食物添加剤、医薬品、動物用飼料、消化管運動促進剤の特性に応じて適宜決定でき、粗精製物でもよく、あるいは高純度の精製物でもよい。
また、麦芽根および／または根芽から、本発明が目的とするムスカリンＭ３受容体を介した消化管運動促進作用を有する組成物を取得する方法としては、例えば、以下のようにして行うことができる。すなわち、麦芽根および／または根芽が殻などの夾雑物を含む場合は、篩いなどの前処理方法によって夾雑物を取り除く。麦芽根および／または根芽そのものを、直接飲食可能な組成物の形態に加工する場合は、一般的に行われる粉砕法によって粉砕して微粉末化したり、ペースト化したり、ペレット化すればよい。また、麦芽根および／または根芽から、抽出・分離した組成物を得る場合は、水や溶媒によって抽出することにより目的とする消化管運動促進組成物を得る。
次いで、必要であれば、当該抽出液を、合成吸着剤、活性炭、イオン交換樹脂などの各種吸着剤、分離膜などの分離精製法を用いて適宜処理し、さらに純度良く消化管運動促進組成物を得ることができる。また、濃縮、濾過、乾燥などを行い、濃縮エキス、粉体、乾燥、結晶品などの各種形態の、消化管運動促進組成物とすることもできる。あるいは、糖類と混和して、シロップ状の消化管運動促進組成物を得てもよい。また、塩としての形態で得ることもでき、そのような塩としては、塩酸塩など、特に限定されるものではない。
なお、本発明にあっては、麦芽根および／または根芽を、直接、他の原料と混和し、水や溶媒によって抽出・分離し、本発明が目的とする消化管運動促進成分を含む飲料として製造することもできる。この場合の麦芽根および／または根芽の使用量は、直接飲用する飲料の場合、麦芽根および／または根芽の原料配合量として、最終製品当たり２０ｍｇ〜２００ｇ／Ｌ、当該活性物質の含量として、最終製品当たり０．０１ｍｇ〜１００ｍｇ／Ｌ程度であることが好ましい。
以上のようにして得られた本発明が目的とするムスカリンＭ３受容体に作用する消化管運動促進成分は、そのまま単独で消化管運動促進性の添加物として飲食物に添加混合してもよく、または必要であれば飲食用に適する担体と共に、乾燥品、液状品、粉末品等の飲食物添加剤として供してもよい。さらには、アルコール飲料やミネラルウォーターに予め、または用時添加するための易溶性製剤として使用することもできる。
また、本発明が目的とするムスカリンＭ３受容体に作用する消化管運動促進成分を含有する天然物、あるいは天然加工品も、消化管運動促進性の添加物として飲食物に添加混合してもよく、または必要であれば飲食用に適する担体と共に、乾燥品、液状品、粉末品等の飲食物添加剤として供してもよい。さらには、アルコール飲料やミネラルウォーターに予めまたは用時添加するための易溶性製剤としてもよい。
本発明が提供する飲食物添加剤の態様には、種々の用途の飲食物用製品、例えば、調味料、調味液、香料、ふりかけ、食用油、出し汁、栄養強化剤の一成分として消化管運動促進成分を含有する消化管運動促進性の飲食物添加剤も包含される。
本発明において有効成分である、消化管運動促進成分、組成物もしくはそれらの混合物は、食品原料とともに、一般の製造法により飲食物、健康食品、特別用途食品として加工製造することができる。
飲食物の種類、形態は特に限定されず、例えば固形、あるいは液状の食品ないしは嗜好品、例えばパン、麺類、ごはん、菓子類（ビスケット、ケーキ、キャンデー、チョコレート、和菓子、グミ、チュウインガム）、豆腐およびその加工品などの農産食品、みりん、食酢、醤油、味噌、ドレッシングなどの調味料、ヨーグルト、ハム、ベーコン、ソーセージ、マヨネーズなどの畜農食品、かまぼこやハンペン等の水産練り製品、果汁飲料、清涼飲料、スポーツ飲料、コーヒー飲料、茶飲料、炭酸飲料などの飲料、さらにはベビーミルク、コーヒー用ミルク等の粉乳や乳製品等の形態にすることができる。
健康食品の種類、形態も特に限定されず、例えば、錠剤、カプセル品、固形、あるいは液状などが挙げられる。
特別用途食品としては、病弱者用食品、妊産婦／授乳婦用粉乳、乳児用調整粉乳、高齢者用食品、保健機能食品（栄養機能食品、特定保健用食品）を挙げることができる。
また、本発明における有効成分は、ビール、発泡酒、低アルコール麦芽発酵飲料等の麦芽発酵飲料、ワイン、清酒、薬用酒などの醸造酒に添加して消化管運動促進作用／ドリンカビリティー促進作用が増強されたアルコール飲料として、また、ウィスキー、ブランデー、焼酎などの蒸溜酒に添加して消化管運動促進作用／ドリンカビリティー促進作用が付与された食前・食中酒として摂取できる形態にあるアルコール飲料として加工製造されてもよい。
本発明はさらに、本発明が提供する活性物質を含有する消化管運動促進剤を提供するものでもある。このような促進剤は、慣用の製剤技術を用いて、たとえば、カプセル剤、錠剤、粉末剤、顆粒剤、ドリンク剤、シロップ剤、注射剤、点滴剤等の形態に製剤化することができる。これらは、主として食前、食中に消化管運動促進を高める目的で用いることができ、あるいは嗜好品などとして適宜摂取することも可能である。さらに、健常者の消化管運動促進を高める目的以外にも、術後、加齢、疲労、疾病、傷害等における消化管運動能力の低下を回復させる目的で、あるいは、抗ガン剤の投与による食欲不振などを改善する目的で用いることもできる。
本発明が目的とする消化管運動促進活性成分は、ムスカリンＭ３受容体に作用する物質である。このムスカリンＭ３受容体は多様な生理作用に関与していることから、本物質が、消化管運動促進作用のみならず、排尿促進作用、胃酸分泌促進作用、および食欲増進作用を有することは明らかである。
また、本発明が目的とする消化管運動促進成分には、ドリンカビリティー促進作用があることが判明した。
これらの種々の作用／効能を活用し、消化管運動促進、排尿促進、胃酸分泌促進、食欲増進および／またはドリンカビリティー促進成分として、ビールから単離された式（Ｉ）〜（ＩＩＩ）で示された物質をそのまま用いる代わりに、ビール中より単離したムスカリンＭ３受容体に作用する物質を含む天然物（例えば、大麦など）、および天然物加工品（例えば、酵母発酵産物、発芽した大麦、発芽した大麦の分画物など）を用いることができる。特に麦芽根には、式（Ｉ）〜（ＩＩＩ）で示される物質を多く含むことから、麦芽根や麦芽根の加工品を好適に用いることができる。
またそれら天然物および天然物加工品を抽出・分離した組成物の状態で、目的とする飲食物、飲食物添加剤、医薬品、動物用飼料および消化管運動促進剤の特性に応じて好ましい態様として用いることができる。
本発明が提供するムスカリンＭ３受容体に作用する消化管運動促進成分は、最終的に飲食物に添加されてヒトまたは他の動物が摂取する場合、摂取された有効成分が消化管運動を促進する量で提供されればよく、例えば、活性物質に換算して、食事ごとに数ｍｇ程度摂取できる形態で提供されればよい。したがって、飲食物、飲食物添加剤、消化管運動促進成分または動物用飼料の各使用形態により異なるが、それぞれ、好ましくは１日あたり０．０１ｍｇ〜１００ｍｇ、特に好ましくは１日あたり０．０５ｍｇ〜５０ｍｇ、さらに好ましくは、０．１ｍｇ〜１０ｍｇ程度摂取されるよう提供されればよい。
なお、本発明が提供する消化管運動促進物質は、マウスを用いた急性毒性試験において、５０ｍｇ／ｋｇの経口投与でも死亡例はなく、一般症状および体重等に異常は認められず、非常に弱毒または無害の物質であることが判明した。
以上のとおり、本発明によれば、消化管運動の低下によって生じる食欲不振、消化不良、食後の腹部膨満感、胃のもたれ、悪心、嘔吐、上腹部痛などの消化器症状に悩む対象に対し、消化管運動促進効果およびドリンカビリティー促進効果によって、食欲およびドリンカビリティーを増進することができる。
【実施例】  以下に、本発明を実験例および実施例により、さらに詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例等により限定されるものではない。
ビール乾燥物は、ムスカリンＭ３受容体を刺激することによって消化管運動を促進することが明らかとなっている。したがって、ムスカリンＭ３受容体への結合活性を指標として、ビール中の消化管運動促進物質の探索を行った。
参考例１：ムスカリンＭ３受容体結合性試験
ムスカリンＭ３受容体結合性試験法は、次の通りである。
ヒトのムスカリンＭ３受容体を発現させた組換えチャイニーズハムスター卵巣細胞株の膜標品の懸濁液に、検体（ビール乾燥物およびその分画物）と、リガンド：０．２ｎＭの［３Ｈ］４−ＤＡＭＰ（ジフェニルアセトキシ−Ｎ−メチルピペリジン  メチオダイド）を添加し、２２℃で６０分間インキュベートした。反応液をガラス繊維フィルター（ＧＦ／Ｂ：Ｐａｃｋａｒｄ社製）にて吸引濾過して反応を停止させ、氷冷した緩衝液で数回洗浄した。フィルターにシンチレーションカクテル（Ｍｉｃｒｏｓｃｉｎｔ  ０：Ｐａｃｋａｒｄ社製）を加え、フィルター上に残存する放射活性を液体シンチレーションカウンター（Ｔｏｐｃｏｕｎｔ：Ｐａｃｋａｒｄ社製）で計測した。［３Ｈ］４−ＤＡＭＰの特異的結合量は、［３Ｈ］４−ＤＡＭＰの全結合量から１μＭアトロピン存在下の非特異的結合量を差し引くことにより算出した。
ビール乾燥物の［３Ｈ］４−ＤＡＭＰ結合に対する阻害曲線を、第１図に示した。図中に示した結果からも判明するように、ビール乾燥物は、０．１ｍｇ／ｍＬから［３Ｈ］４−ＤＡＭＰ結合を抑制し、その結合の５０％を阻害する濃度であるＩＣ５０値は、約２ｍｇ／ｍＬであった。
実施例１：
参考例１に示すムスカリンＭ３受容体結合性試験による結合活性を指標として、リガンドの受容体結合を阻害する画分を分離・精製し、ビール中の消化管運動促進物質の精製を試みた。第２図に、分離・精製フローを示した。
すなわち、１０Ｌのビール（麦芽１００％、アルコール濃度５％、乾燥重量３．５％ｗ／ｖ）を凍結乾燥し、得られた乾燥物に純水を加え、合成吸着剤（吸着剤：ＸＡＤ−２）クロマトグラフィーに供した。ムスカリンＭ３受容体結合活性を有するメタノール溶出物から、メタノールを蒸発させ、得られた乾燥物に純水を加え、弱酸性・陽イオン交換クロマトグラフィー（樹脂：ＣＭセファデックスＣ−２５）に供した。次に、結合活性の得られたメタノール−塩酸溶出物から、メタノールおよび塩酸を蒸発させ、得られた乾燥物に純水を加え、ゲル濾過クロマトグラフィー（樹脂：セファデックスＧ−１５）に供した。さらに、結合活性の得られた活性画分（活性フラクションＮｏ．１：Ｋｄ＝３〜５；活性フラクションＮｏ．２：Ｋｄ＝７〜９）を、それぞれ分取用ＯＤＳ−ＨＰＬＣに付した。その結果、活性フラクションＮｏ．１からは、４．２ｍｇの活性物質αが、また、活性フラクションＮｏ．２からは、１２．６ｍｇの活性物質βが得られた。
上記で得られた２種の活性物質（活性物質αおよび活性物質β）を、ＨＰＬＣにより分析した。活性物質αのＨＰＬＣ分析チャートを、第３図として示す。
図から明らかな様に、活性物質αは、ＨＰＬＣ上の単一ピークに精製できており、また、リテンションタイムは、約３３〜３４分にあることが判明した。
なお、活性物質βも、同様の分析条件で、ＨＰＬＣ上の単一ピークに精製できたことを確認し、また、リテンションタイムは活性物質αとほぼ同一であった。
また、活性物質αおよびβは、異なる条件下でのＨＰＬＣ分析でも単一ピークを示すことを確認された。
かくして得られたＨＰＬＣ上単一ピークに精製された活性物質αおよび活性物質βについて、それぞれの用量をふって、参考例１に記載したムスカリンＭ３受容体結合性試験を行い、用量−作用曲線を求めた。
その結果を、第４図（活性物質α）および第５図（活性物質β）に示した。図中に示した結果から明らかなように、活性物質αおよび活性物質βには、用量依存性が確認され、そのＩＣ５０はそれぞれ、活性物質αでは０．６５×１０−６ｇ／ｍＬ、活性物質βでは２．３０×１０−６ｇ／ｍＬであった。
なお、４−ＤＡＭＰのＩＣ５０は、０．６２×１０−９ｇ／ｍＬであった。
以上に記載したように、ビール中から、２種の活性物質（活性物質αおよび活性物質β）を単離することができ、両者共にＨＰＬＣ上の単一ピークであることを確認し、また、ムスカリンＭ３受容体への結合作用が、用量依存性であることが確認された。
実施例２：
上記で単離・精製した２種の活性物質（活性物質αおよび活性物質β）について、その紫外吸収スペクトル、質量分析スペクトル、および核磁気共鳴スペクトルデータによる解析を行った。
１．紫外線吸収スペクトル
まず、活性物質αおよび活性物質βの紫外吸収スペクトル（ＵＶスペクトル）を測定した結果を第６図に示した。
両物質のＵＶスペクトルは非常に類似しており、２３０ｎｍ付近を中心とする一個の吸収ピーク、３００ｎｍ前後にややブロードな吸収ピークが認められ、両物質に特有の紫外吸収スペクトルパターンを示した。
２．質量分析（ＦＡＢ−ＭＡＳＳ）スペクトル
次に、活性物質αおよび活性物質βについて、その質量分析（ＦＡＢ−ＭＡＳＳ）を行った。
活性物質αおよびβを３−ニトロベンジルアルコールに溶解して、質量分析を行った結果を第７図（活性物質α）および第８図（活性物質β）として示した。その結果、両活性物質とも、分子イオンとして、質量／電荷（ｍ／ｚ）が、５５１（Ｍ＋Ｈ）＋となり、分子量は５５０を有するものであることが判明した。
３．核磁気共鳴（１Ｈ−ＮＭＲ、１３Ｃ−ＮＭＲ）スペクトル
さらに、活性物質αおよび活性物質βについて、その核磁気共鳴（１Ｈ−ＮＭＲ、１３Ｃ−ＮＭＲ）スペクトル解析を行った。溶媒としてＤＭＳＯ−Ｄ６を用い、測定は、Ｂｒｕｋｅｒ  Ｂｉｏｓｐｉｎ社ＤＭＸ−７５０（１Ｈ−ＮＭＲ）またはＤＭＸ−５００（１３Ｃ−ＮＭＲ）で行った。
活性物質αおよび活性物質βの１Ｈ−ＮＭＲスペクトル解析データをそれぞれ第９図（活性物質α）および第１０図（活性物質β）に、また１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル解析データをそれぞれ第１１図（活性物質α）および第１２図（活性物質β）に示した。
活性物質αおよび活性物質βの１Ｈ−ＮＭＲおよび１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを比較した結果、共にシグナルの数が近く、ケミカルシフトやシグナルの分裂パターンが酷似しており、両者はよく似た構造の化合物であることが理解される。
４．構造の決定
以上のように、単離した活性物質αおよび活性物質βについて、紫外吸収、質量分析、および核磁気共鳴スペクトルデータによる解析の結果、両化合物は、その化学構造として、次式（Ｉ）：
2004002978.tif 000006
で示される化合物を基本とし、その立体異性体であることが判明した。
それぞれの立体構造は、下記の式（ＩＩ）（活性物質α）および式（ＩＩＩ）（活性物質β）で示される化学構造式を有するものであることが判明した。
2004002978.tif 000007
なお、個々の立体異性体化合物の絶対配置については、ＣＤ曲線を解析して決定した。活性物質αおよび活性物質βのＣＤスペクトルの測定は、測定機器としてＪＡＳＣＯ  Ｊ−７２５  Ｓｐｅｃｔｒｏｐｏｌａｒｉｍｅｔｅｒを用い、溶媒はメタノールとした。
本発明の活性物質αは第１３図に示したＣＤスペクトルを示す絶対配置を、また活性物質βは第１４図に示したＣＤスペクトルを示す絶対配置を持つことが判明した。
実施例３：
次に、単離・特定ができた活性物質αおよび活性物質βの両者について、マウスにおける消化管運動促進作用を、胃排出能促進活性を指標として評価した。
１．方法
１８時間絶食下のｄｄＹ系マウス（１群１０匹）に、蒸留水、活性物質αおよび活性物質βを、胃ゾンデを用いて経口投与し、６０分後に試験食（フェノールレッドを０．０５％含む１．５％メチルセルロース溶液）を０．２ｍＬ／匹の割合で同様に経口投与した。試験食投与の１５分後に、マウスを頚椎脱臼によって屠殺し、胃を摘出した。胃を内容物とともに１０ｍＬの０．１Ｎ−ＮａＯＨでホモゲナイズし、室温で１時間放置した後、上清１ｍＬに０．１ｍＬの２０％トリクロロ酢酸を加えて除蛋白を行った。遠心分離後、上清０．５ｍＬに０．５ｍＬの０．５Ｎ−ＮａＯＨを加えて発色させ、５６０ｎｍでの吸光度より胃内に残存するフェノールレッド量を求めた。胃排出率は以下の式に従って算出した。
胃排出率（％）＝（Ａ−Ｂ）／Ａ×１００
Ａ：試験食投与直後の胃内フェノールレッド量
Ｂ：試験食投与１５分後の胃内フェノールレッド量
２．結果
測定結果は、平均値と標準誤差で表し、群間の有意差検定にはＳｔｕｄｅｎｔのｔ−検定を用いた。その結果を第１５図に示した。
図中の結果から明らかなように、活性物質α（０．１および０．３ｍｇ／ｋｇ）および活性物質β（０．３および１．０ｍｇ／ｋｇ）は、用量依存的かつ有意に（Ｐ＜０．０５）胃排出を促進していた。したがって、両物質には強い消化管運動促進作用を有することが確認できた。
なお、ムスカリンＭ３受容体は多様な生理作用に関与していることから、両物質は、消化管運動促進作用のみならず、排尿促進作用、胃酸分泌促進作用、および食欲増進作用を有することが判明した。
実施例４：
次に、ビールから単離した両活性物質（活性物質αおよび活性物質β）について、ビール以外の素材から、天然型の活性物質を含む組成物として得るために、実施例１の精製法およびＨＰＬＣ分析法を用い、本活性物質を多く含む天然の素材を検討した。
各種素材のメタノール抽出物を凍結乾燥した後に純水に溶解し、実施例１に準じて、弱酸性・陽イオン交換クロマトグラフィーおよびゲル濾過クロマトグラフィーを行い、得られたフラクション（Ｋｄ＝３〜５およびＫｄ＝７〜９）を、実施例１と同様の条件でＨＰＬＣ分析を行い、リテンションタイムとピーク面積から、活性物質含有の有無およびその含有濃度を算出した。
その結果、発芽した大麦の分画物の一つである麦芽根に、活性物質が含有されていることが確認された。
第１６図に、麦芽根抽出物から得られたフラクションのうち、Ｋｄ＝７〜９の画分のＨＰＬＣ分析チャートを示した。
図中の矢印で示す活性物質のピークがリテンションタイム３３〜３４分に、他のピークと重ならないピークとして確認されていた。
またこのＫｄ＝７〜９の画分に、実施例１で単離された活性物質βを加えて、ＨＰＬＣ分析を行った結果、ピークが一致することが判明した。
したがって、麦芽根には活性物質βが含まれることが明らかとなった。また、同様にＫｄ＝３〜５の画分を分析し、麦芽根に、活性物質αが含まれることが判明した。さらに、ＨＰＬＣによる精製を行って活性物質αおよびβを単離し、それらの紫外線吸収スペクトル、質量分析スペクトル、および核磁気共鳴スペクトルデータによる解析を行い、それぞれ実施例２のスペクトルデータと一致することを確認した。
さらに、ピーク面積から、活性物質の含有濃度を算出したところ、活性物質αおよび活性物質βが、高濃度（それぞれ、麦芽根１ｇ当たり、約０．０５ｍｇおよび約０．５ｍｇ）含有されていることが判明した。
麦芽根は、発芽した大麦の分画物の一つであることから、麦芽根以外の、発芽した大麦の分画物、例えば穀皮部、でんぷん層（胚乳）、果皮および種皮、葉芽、幼芽、アロイロン層画分、根芽などにも本発明が目的とする活性物質が含まれることは明らかであり、また、大麦、発芽した大麦、にも同様に含まれることも明らかである。
以上の検討から、麦芽根およびその関連素材（発芽した大麦の分画物、大麦、発芽した大麦）からの抽出・分離により、天然型の活性物質（活性物質αおよび活性物質β）を含む各種組成物／添加剤を得ることができることが判明した。
実施例５：
さらに、当該活性物質を含有する麦芽根抽出物の消化管運動促進作用を明らかにするために、マグヌス法を用いてモルモットの回腸縦走筋の収縮に及ぼす影響について検討した。
すなわち、Ｈａｒｔｌｅｙ系雄性モルモットより摘出した回腸縦走筋をトランスデューサーからつり下げてＫｒｅｂｓ−Ｒｉｎｇｅｒ溶液に浸し、溶液を３５℃に保温して、９５％Ｏ２／５％ＣＯ２ガスにて飽和・安定化させた。縦走筋の運動をレコーダー上に描記させ、自発性運動が一定になったところで、比較品である麦芽根抽出・乾燥物［ＩＣ５０＝０．２０×１０−３ｇ／ｍＬ、ＩＣ５０；陽性対象物質のＭ３受容体結合に対する５０％競合阻害濃度（参考例１に準ずる）］、対照品であるビール乾燥物（ＩＣ５０＝２．００×１０−３ｇ／ｍＬ、参考例１に同じ）、および陽性対照であるカルバコールを添加し、縦走筋の収縮反応を測定した。
結果を第１７図に示した。その結果、図から明らかな通り、麦芽根抽出・乾燥物は、０．００５〜０．５ｍｇ／ｍＬで用量依存的にモルモットの回腸縦走筋を収縮させた。また、カルバコール（５×１０−３Ｍ）による筋収縮度を１００として、対照品であるビール乾燥物と比較したところ、麦芽根抽出・乾燥物の作用の強さはビール乾燥物の約２０倍に相当した。
したがって、当該活性物質を含有する麦芽根抽出物は、強い消化管運動促進作用を有することが確認できた。
実施例６：ヒトにおける官能試験
本発明が目的とする活性物質（活性物質αおよび活性物質β）を含む天然物または天然物加工品から抽出・分離操作により得た消化管運動促進性の組成物を含む飲食物の一例として、飲料（アルコール飲料）を調製し、ヒトにおける消化管運動促進作用および排尿促進作用を評価した。
１．アルコール飲料の調製
実施例４において、麦芽根には天然型の活性物質（活性物質αおよび活性物質β）が含有されている。したがって、麦芽根の水溶性画分として、麦芽根を水抽出した組成物を添加して、アルコール飲料を調製した。なお、麦芽根を水抽出した組成物は、麦芽根約１５０ｇの粉砕物を用いて、純水にて抽出した後、濾過を行い、乾燥物重量で約３０ｇ［収率：約２０％（ｗ／ｗ）］得られた組成物（活性物質αの含量で約２２．５ｍｇ、活性物質βの含量で約７５ｍｇに相当する量が含まれる）を用いた。
８５０ｍＬの５９％アルコール、１００ｍＬの５倍濃縮タイプの透明・梅果汁、２００ｇの砂糖、２０ｇのクエン酸、６ｍＬの香料、３０ｇの上記組成物（麦芽根を水抽出した組成物）を加え、純水にて最終１０Ｌに調整した調合液を、加熱殺菌、冷却し、炭酸ガスを圧入した後、２５０ｍＬ入りの缶に充填、密栓し、アルコール分５％の梅風味のアルコール飲料である試作品１（当該活性物質の含量として最終製品当たり、活性物質αおよびβを、それぞれ、約２．２５ｍｇ／Ｌおよび約７．５ｍｇ／Ｌ含む）を得た。
なお、対照品１として、上記組成物を加えていない、アルコール飲料を、同様の方法で調製した。
２．官能試験
ヒトにおける消化管運動促進作用および排尿促進作用の評価は、以下の様に行った。
すなわち、健常人男性２０名を１０名ずつに分け、試作品１、対照品１の摂取グループに分け、二週間の間隔をあけて、クロスさせて二重盲検法にてテストした。
試作品１および対照品１は、１５分当たり２．４ｍＬ／ｋｇで２時間摂取させ、また、ポテトチップスを１５分当たり０．２ｇ／ｋｇで２時間摂取させた。
消化管運動促進性の評価は、腹部膨満感を指標とし、６０分および１２０分後の評点を、被験者が記載する方法で行った。
３．評価基準
１）腹部膨満感の評価は、膨満感を感じる順に、
感じる：        ３点、
やや感じる：    ２点、
あまり感じない：１点
の点数による３段階評価とした。
２）排尿促進作用の評価は、試験前に排尿を済ませておき、その後３０分毎にトイレに行き、排出される尿量を測定した。
４．結果
第１表に、腹部膨満感に関する評価結果を示す。
2004002978.tif 000008
上記の結果からも明らかなように、試作品１は、６０分後において、膨満感をあまり感じないという評価が多く、また、１２０分後においても、膨満感を感じるという評価は少なく、膨満感をやや感じるという評価が多かった。
一方対照品１は、６０分後において、膨満感をやや感じるという評価が多く、また、１２０分後においては、膨満感を感じるという評価が多かった。
以上の結果から判断すると、本発明の活性物質を含む組成物を添加した飲料である試作品１には、腹部膨満感を感じる度合いを抑える効果があり、消化管運動促進性の作用があることが示された。
また、第１８図に、３０，６０，９０，１２０分までに排出された尿量の測定結果（平均値）を示した。
その結果、試作品１は、対照品１に比較して各時間において排出される尿量が相対的に多くなっていることが明らかになった。
したがって、ムスカリンＭ３受容体は多様な生理作用に関与していることから推定した通り、本物質には消化管運動促進作用のみならず、排尿促進作用を有することが明らかとなった。
実施例７：
本発明の活性物質（活性物質αおよび活性物質β）には、消化管運動促進作用および排尿促進作用が確認できたことから、本活性物質のドリンカビリティー促進作用を、ラットを用いて検討した。
１．方法：
すなわち、まず、実施例６と同様の組成物（麦芽根を水抽出した組成物）を、実施例６と同じ最終濃度（麦芽根の水抽出物：３ｇ／Ｌ）になるように３％の砂糖水に添加し、ノンアルコール飲料である試作２（当該活性物質の含量として最終製品当たり、活性物質αおよびβを、それぞれ約２．２５ｍｇ／Ｌおよび約７．５ｍｇ／Ｌ含む）を調製した。また活性物質を添加しない３％の砂糖水であるノンアルコール飲料、対照品２を調製した。
次いで、ラット（１群３匹）に、試作品２および対照品２を、それぞれ自由摂取させ、摂水量を５日間わたって測定した。
２．結果
第１９図に、試作品２および対照品２についての、各期間（１〜２日目、２〜３日目、３〜４日目、４〜５日目）における、ラット一匹あたりの摂水量の平均値を示した。
図中に示した結果からも判明するように、試作品２は、対照品２に比較して、評価した各期間の全てにおいて、摂水量が相対的に多くなっていることが理解される。
以上の結果から判断すると、本発明が提供する活性物質には、消化管運動促進作用に加え、ドリンカビリティー促進作用があることが理解される。ドリンカビリティー促進作用は、飲料を大量に飲んでも飲み飽きないというだけでなく、おいしさにも影響を及ぼすことから、飲料として重要な特性である。本発明における活性物質を添加した飲料は、その様な特性を付与されたものであることが判明した。
実施例８：ヒトにおける飲食物摂取動態比較
当該活性物質を含む組成物（麦芽根を水抽出した組成物）を添加した醸造酒の一種であるビールを試作し、飲食物摂取動態を比較した。
ビールは、麦芽、ホップ、当該活性物質を含む組成物（麦芽根を水抽出した組成物）、水を原料として、常法に従い、１００Ｌの仕込み、発酵、濾過、充填を行って製造した。すなわち、粉砕した麦芽１５ｋｇを仕込み釜で糖化し、副原料として、上記組成物（０．４ｋｇ；麦芽根２ｋｇ相当）を添加した後、濾過槽で濾過を行った。次に、ホップを添加して煮沸釜で煮沸した後、生じた蛋白質などの澱をワールプールと呼ばれる沈殿槽で除去した。清澄化した溶液に、酵母を加えて、発酵させた後、−１℃に冷却して貯酒を行った。さらに、発酵液を濾過して酵母を除去し、アルコール４％程度の醸造酒（当該活性物質の含量として最終製品当たり、活性物質αおよびβを、それぞれ、約３．０ｍｇ／Ｌおよび約１０．０ｍｇ／Ｌ含む）を製造した（試作品３）。また、コントロールとして、麦芽根を添加しないビールも同様に製造した（対照品３）。
飲食物摂取動態比較は、クロスオーバー・トライアル法に加え、二重盲検法も採用して実施した。すなわち、２０名の被験者を２群に分け、上記の麦芽根添加および無添加ビール；自由摂取、食物；自由摂取、飲食時間；２時間、の条件にて比較検討し、飲用量の変化、および２時間後に残った食事量を評価した。さらに詳しくは、食物として、０分に、オードブル盛合せ、豆腐、魚の刺身を提供、３０分に、肉のステーキ、６０分に、焼きナス、揚げ豆腐を提供、９０分に、ライス、スープ、フルーツを提供した。また、飲用量は、３０分毎に１２０分まで測定した。
飲用量の平均値を第２０図に示す。その結果、当該活性物質を含む組成物（麦芽根を水抽出した組成物）を添加した醸造酒の一種であるビール（試作品３）は、当該活性物質を含む組成物・無添加のビール（対照品３）に較べ、飲用量が多くなる、すなわち、ドリンカビリティーが増大する傾向が見られた。
２時間後に残った食事の評価結果を、第２表に示した。
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その結果、試作品３を飲用した場合、対照品３を飲用した場合に較べ、食事を残す量が明らかに少なく、食欲増進作用が認められた。
これらのことから、当該活性物質を含む組成物を含有する飲料は、ヒトにおいて、ドリンカビリティー促進、および食欲増進の効果があることが確認できた。
以下に本発明の活性物質を含有する飲料、医薬品原体についての実施例を記載する。
実施例９：清涼飲料の製造
果汁、クエン酸、砂糖、香料、当該活性物質を含む組成物（麦芽根を水抽出した組成物）を原料として、常法に従い、調合し最終１，０００ｍＬに調整した後、殺菌、充填を行って、清涼飲料の一種として、果汁系のニアウオーターを製造した。すなわち、グラニュー糖を４０ｇ測りとり５０℃の純水で溶解させ、ストレート果汁換算で１％となる様に各種の濃縮混濁果汁［オレンジ果汁（濃縮倍率５倍）、リンゴ果汁（濃縮倍率４倍）］を加え、さらに０．１５ｇのクエン酸、３ｇの上記組成物、２ｍＬの香料、０．２５ｇのＬ−アスコルビン酸を加えて、純水にて総量を最終１，０００ｍＬに調整した後、１００℃、２０分間の加熱殺菌処理を行い、各１００ｍＬを透明瓶（１１０ｍＬ容量）に充填、密栓し、各種果汁入りの果汁系ニアウオーター（果汁：１％；当該活性物質の含量として、最終製品当たり、活性物質αおよびβをそれぞれ、約２．２５ｍｇ／Ｌおよび約７．５ｍｇ／Ｌ含む）を製造した。
実施例１０：茶飲料の製造
緑茶葉の抽出液０．３Ｌ、重曹０．３ｇに、当該活性物質を含む組成物（麦芽根を水抽出した組成物）を調合し、総量を純水にて１Ｌに調整した。次に、８５℃に昇温後、１９０ｇ缶に充填し、レトルト殺菌（１２５℃、１０分間）を行って、缶入りの茶飲料（当該活性物質の含量として、最終製品当たり、活性物質αおよびβをそれぞれ、約０．２５ｍｇ／Ｌおよび約０．７５ｍｇ／Ｌ含む）を製造した。
実施例１１：健康食品
麦芽根約１．５ｋｇを用いて、純水にて抽出を行った後、陽イオン交換クロマトグラフィーおよびＯＤＳ−ＨＰＬＣにて精製し、約３ｇ［収率：約０．２％（ｗ／ｗ）］の粗精製物（活性物質αの含量で約２５０ｍｇ、活性物質βの含量で約７５０ｍｇ含まれる）を得た。
次に、上記粗精製物：５０ｍｇ、乳糖：１２０ｍｇ、結晶セルロース：；３０ｍｇを配合して、一粒２００ｍｇの内容物からなるカプセル剤の健康食品（当該活性物質の含量として、最終製品当たり、活性物質αおよびβを、それぞれ、約４．１７ｍｇ／カプセルおよび約１２．５ｍｇ／カプセルを含む）を製造した。
実施例１２：医薬品原体
麦芽根約１５０ｋｇを用いて、純水にて抽出を行った後、陽イオン交換クロマトグラフィー、ゲル濾過クロマトグラフィーおよびＯＤＳ−ＨＰＬＣにて精製して、乾固させた後、蒸留水に溶解し、殺菌、濾過、精密濾過を行って、医薬品原体として、約４５ｇの純度約９９％（ＨＰＬＣ分析法による）の活性物質βの精製物を得た。
【産業上の利用可能性】  以上記載のように、本発明により、ビールから単離したムスカリンＭ３受容体に作用する消化管運動促進物質および／またはドリンカビリティー促進物質、ならびに、当該物質を含む天然物および天然物加工品より得た当該物質を含む組成物および精製物を飲食物用の添加剤として活用し、そのような添加剤を含む消化管運動促進性の飲食物を提供することができる。
特に本発明のムスカリンＭ３受容体に作用する消化管運動促進物質は、消化管運動の低下によって生じる食欲不振、消化不良、食後の腹部膨満感、胃のもたれ、悪心、嘔吐、上腹部痛などの消化器症状に悩む対象に対し、有効に消化管運動を促進するものであり、また、ドリンカビリティー促進効果によって、食欲およびドリンカビリティーを増進することができる利点を有する。
さらに、これらの消化管運動促進物質および／またはドリンカビリティー促進物質を含む組成物を用いて、各種飲料、機能性食品を提供することができ、その有用性は多大なものである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【国際調査報告】
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