(57)【要約】オステオポンチン産生抑制剤又は阻害剤を有効成分とするミエローマ系腫瘍及びそれに伴う骨破壊の予防・治療剤；オステオポンチン産生抑制作用又は阻害作用を測定することを特徴とするミエローマ系腫瘍予防・治療剤のスクリーニング方法；更には血中オステオポンチン濃度測定試薬を含有することを特徴とするエミローマ系腫瘍の診断キット及び診断方法。【特許請求の範囲】
【請求項１】
オステオポンチン産生抑制剤又は阻害剤を有効成分とするミエローマ系腫瘍予防・治療剤。
【請求項２】
オステオポンチン産生抑制剤又は阻害剤を有効成分とするミエローマ系腫瘍に伴う骨破壊の予防・治療剤。
【請求項３】
ミエローマ系腫瘍が多発性骨髄腫である請求項１又は２記載の予防・治療剤。
【請求項４】
オステオポンチン産生抑制作用又は阻害作用を測定することを特徴とするミエローマ系腫瘍予防・治療剤のスクリーニング方法。
【請求項５】
オステオポンチン産生抑制作用又は阻害作用の測定が、オステオポンチン産生能を有するＢ細胞系統のオステオポンチン産生を測定するものである請求項４記載のスクリーニング方法。
【請求項６】
血中オステオポンチン濃度測定試薬を含有することを特徴とするミエローマ系腫瘍の診断剤又は診断用キット。
【請求項７】
血中オステオポンチン濃度を測定することを特徴とするミエローマ系腫瘍の診断方法。
【発明の詳細な説明】
技術分野
本発明は、ミエローマ系腫瘍予防・治療剤、そのスクリーニング方法及びミエローマ系腫瘍の診断方法に関するものである。
背景技術
癌の薬物療法においては、化学療法剤がしばしば使用されているが、その多くは抗癌作用はあるが副作用も強く、副作用発現により投与が制限される場合がある。そのため、癌化学療法剤の効果が不十分であったり、全く効果を示さなかったりする場合もある。特に、ミエローマ系腫瘍は予後の悪い癌として知られており、臨床ではメルファラン、シクロフォスファミド、プレドニゾロンなどが治療に用いられているが、十分な治療効果が得られていないというのが現状である。
ミエローマ系腫瘍とは抗体産生細胞が腫瘍化したもので、ミエローマと他の細胞が融合したハイブリドーマ等も含まれる。疾患としては、多発性骨髄腫、孤立性形質細胞腫などの悪性腫瘍のほか、良性のＭ蛋白血症、高ガンマグロブリン血症、キャッスルマン症候群などの免疫グロブリン異常症なども含まれる。
ミエローマ系腫瘍において多発性骨髄腫は、単クローン由来の形質細胞が制御されずに増殖を繰り返す悪性疾患である。多発性骨髄腫患者は、広範囲に及ぶ骨破壊（または骨吸収）を、ほとんど全ての患者で発症し、難治性のひどい痛みと易骨折性のリスクをともなう。骨の病理組織切片の評価において、ミエローマ細胞に隣接した骨吸収部位に顕著な破骨細胞の活性化が認められたことから、多発性骨髄腫における骨破壊はミエローマ細胞の浸潤（または増殖）だけでなく、ミエローマ細胞から産生される破骨細胞活性化因子（ＯＡＦ）による破骨細胞の活性化によって引き起こされていると考えられている（Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  １９７４；２９：１０４１−６）（Ｈｅｍａｔｏｌ  Ｏｎｃｏｌ  Ｃｌｉｎ  Ｎｏｒｔｈ  Ａｍ  １９９２；６：２８５−９５、Ｂｒ  Ｊ  Ｈａｅｍａｔｏｌ  １９８１；４７：２１−３０）。
近年、ＩＬ−１β（Ｂｌｏｏｄ  １９８９；７４：３８０−７）やリンフォトキシン（ＴＮＦβ）（Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  １９８７；３１７：５２６−３２、Ｎａｔｕｒｅ  １９８６；３１９：５１６−８）、ＩＬ−６（Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  １９８９；８４：２００８−１１、Ｊ  Ｂｏｎｅ  Ｍｉｎ  Ｒｅｓ  １９９１；９：１１４３−６）といった数種類のサイトカインがＯＡＦ活性を有することが知られている。また、ミエローマ系腫瘍の多くはＩＬ−６などのサイトカインに依存的増殖をすることから、これらのサイトカイン依存的増殖をｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｉｎ  ｖｉｖｏで抑制する物質はミエローマ系腫瘍に対して抗癌作用を持つと考えられている。
一方、オステオポンチンは分泌型リン糖タンパク質であり、当初、骨の細胞外基質として同定された。オステオポンチンは、破骨細胞、マクロファージ、活性化Ｔ細胞、平滑筋細胞、上皮細胞といった多様な細胞で発現しており、骨、腎、胎盤、平滑筋、分泌上皮といったいくつかの組織で発現している。オステオポンチンはアルギニン−グリシン−アスパラギン酸（ＲＧＤ）配列を有し、種々の細胞においてαｖβ１、β３およびβ５インテグリンを介して結合し、接着、走化、シグナル伝達を誘導する。オステオポンチンは、骨吸収、血管新生、創傷治癒、組織障害などにおける正常な組織修復過程や、再狭窄、アテローム性動脈硬化症、腎疾患、腫瘍といったいくつかの疾患にも関与すると考えられている。
しかしながら、前記の如くミエローマ系腫瘍は、通常の抗癌剤がほとんど効果を奏さない極めて特殊な腫瘍であり、どのような成分が有効か全く予想できないものである。
本発明の目的はミエローマ系腫瘍及びそれに伴う骨破壊の予防・治療剤及びそのスクリーニング方法；並びにミエローマ系腫瘍の診断方法を提供することにある。
発明の開示
上記実情に鑑み、本発明者らは鋭意研究を行った結果、ミエローマ系腫瘍、特に多発性骨髄腫において、オステオポンチン産生が有意に増加しており、血中のオステオポンチン濃度とミエローマ系腫瘍の存在、症状等との間に高い相関関係があることからオステオポンチン濃度を測定すればミエローマ系腫瘍の診断が可能であること；またオステオポンチン産生抑制作用又は阻害作用を測定すればミエローマ系腫瘍予防治療剤のスクリーニングが可能であること；さらに、オステオポンチン産生抑制剤及び阻害剤がミエローマ系腫瘍及びそれに伴う骨破壊に対して優れた予防・治療効果を有し、多発性骨髄腫、孤立性形質細胞腫、Ｍ蛋白血症、高ガンマグロブリン血症、免疫グロブリン異常症及びそれに伴う骨破壊の予防及び治療用の医薬として有用であることを見出し、本発明を完成した。
すなわち、本発明は、オステオポンチン産生抑制剤又は阻害剤を有効成分とするミエローマ系腫瘍及びそれに伴う骨破壊の予防・治療剤；オステオポンチン産生抑制作用又は阻害作用を測定することを特徴とするミエローマ系腫瘍予防・治療剤のスクリーニング方法；更には血中オステオポンチン濃度測定試薬を含有することを特徴とするミエローマ系腫瘍の診断キット及び診断方法を提供するものである。
発明を実施するための最良の形態
本発明のミエローマ系腫瘍及びそれに伴う骨破壊の予防・治療剤の有効成分として用いられるオステオポンチン産生抑制剤又は阻害剤としては、ＰＰＡＲγアゴニスト（Ｃｉｒｃ．Ｒｅｓ．２００２；９０：３４８−３５５）及びＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤（Ｂｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２００１；１３３：８３−８８）等が挙げられる。ＰＰＡＲγアゴニストとしては、トログリタゾン、ピオグリタゾン、ロシグリタゾン及びインドメタシン等が挙げられ、ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤としては、ロスバスタチン、ロバスタチン、シンバスタチン、プラバスタチン、フルバスタチン、アトルバスタチン、セリバスタチン、ピタバスタチン及びメバスタチン等が挙げられる。
本発明のミエローマ系腫瘍及びそれに伴う骨破壊の予防・治療剤を使用するにあたり、投与量、投与部位、投与間隔、投与期間などは投与対象の患者の性別、年齢、体重、病状、併用することもある他の薬物や治療法の種類などを考慮して決定される。また、本発明のミエローマ系腫瘍及びそれに伴う骨破壊の予防・治療剤の剤形には特別の制限はなく、有効成分であるオステオポンチン産生抑制剤及び阻害剤は、単独又は他の薬学的に許容される溶解剤、賦形剤、結合剤、希釈剤等の担体を用いて、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、粉末剤、ローション剤、軟膏剤、注射剤、坐剤等の剤型とすることができる。これらの製剤は、公知の方法で製造することができる。例えば、経口投与用製剤とする場合には、トラガントガム、アラビアガム、ショ糖エステル、レシチン、オリーブ油、大豆油、ＰＥＧ４００等の溶解剤、澱粉、マンニトール、乳糖等の賦形剤：カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルセルロース等の結合剤：結晶セルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム等の崩壊剤：タルク、ステアリン酸マグネシウム等の滑沢剤、軽質無水ケイ酸等の流動性向上剤等を適宜組み合わせて処方することにより製造することができる。
本発明のミエローマ系腫瘍及びそれに伴う骨破壊の予防・治療剤は、経口投与又は非経口投与により投与される。本発明のミエローマ系腫瘍及びそれに伴う骨破壊の予防・治療剤の投与量は、患者の体重、年齢、性別、症状等によって異なるが、通常成人の場合、一日０．０１〜１０００ｍｇ、好ましくは０．１〜１００ｍｇを１〜３回に分けて投与するのが好ましい。
本発明のミエローマ系腫瘍及びそれに伴う骨破壊の予防・治療剤のスクリーニング方法としてのオステオポンチン産生抑制作用又は阻害作用の測定は、自体公知の方法に準じて行なうことができる。例えば、ミエローマ細胞などのオステオポンチン産生能の高まった細胞に対して、被検物質を添加した後、オステオポンチン産生を免疫学的手法、ＲＴ−ＰＣＲ法、ノーザンブロット法又はウエスタンブロッティング法を用いて測定する方法等が挙げられる。被検物質添加時のオステオポンチン産生量を、被検物質非添加時のそれと対比して減少していれば、当該被検物質はミエローマ系腫瘍及びそれに伴う骨破壊の予防・治療剤として有用であると判定できる。
後記実施例に示すように血中オステオポンチン濃度は、ミエローマ系腫瘍患者で特異的に高いだけでなく、病期（ステージ）や活動性に依存して高値を示し、また骨疼痛を伴う患者において高値を示し、さらに骨吸収性骨破壊像のある患者において高値を示す。従って、血中オステオポンチン濃度を測定すれば、ミエローマ系腫瘍の種々の症状の診断ができる。
本発明のミエローマ系腫瘍の診断方法としては、血中のオステオポンチン濃度を公知の方法に準じて測定することにより行うことができる。
測定対象は、血液が好ましく、全血、血漿、血清のいずれでもよいが、血漿が特に好ましい。またオステオポンチン濃度の測定法としては、免疫学的方法が好ましく、特に後に記載するヒトオステオポンチンＥＬＩＳＡキット（Ｉｍｍｕｎｏ−Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｇｕｎｍａ，Ｊａｐａｎ）等を用いて測定するのが特に好ましい。
また、本発明のミエローマ系腫瘍診断剤としては、血中のオステオポンチン濃度を測定できる試薬を含有していればよく、例えば免疫学的測定試薬の場合には、抗オステオポンチンモノクローナル抗体、抗オステオポンチンポリクローナル抗体等を含む試薬が挙げられる。具体的にはヒトオステオポンチンＥＬＩＳＡキット等が挙げられる。
実施例
以下に、実施例を挙げてこの発明を更に具体的に説明するが、この発明の技術的範囲はこれらの実施例に限定されるものではない。
実施例１（オステオポンチンの免疫細胞化学的検討）
典型的な多発性骨髄腫患者３名から採取した骨髄細胞におけるオステオポンチンの発現を、アビジン−ビオチン−パーオキシダーゼ複合体法を用いた免疫細胞化学的手法により検討した。対照群として、ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ｇａｍｍｏｐａｔｉｅｓ  ｗｉｔｈ  ｕｎｃｅｒｔａｉｎ  ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ（ＭＧＵＳ：単クローン性の免疫グロブリンの増加を認めるが、多発性骨髄腫の診断基準を満たさないもの。）を含む多発性骨髄腫とは異なる血液疾患患者５名の骨髄細胞を使用した。骨髄細胞は密度勾配遠心法によって単離した。そこから調製したそれぞれの患者由来の骨髄細胞１×１０５を、Ｃｙｔｏｓｐｉｎ２（Ｓｈａｎｄｏｎ  Ｓｏｕｔｅｒｎ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  Ｌｔｄ，Ｃｈｅｓｈｉｒｅ，ＵＫ）を用いてガラス製スライド上に定着させた。スライドは使用するまで−８０℃で保管した。今らが作製したマウス抗ヒトオステオポンチンモノクローナルＩｇＧ抗体（４Ｃ１）（Ｊ．Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２００２；８４：４２０−４３２）を１次抗体として使用した。オステオポンチンとは無関係の同濃度のマウスＩｇＧ抗体（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＵＳＡ）をネガティブコントロールとして１次抗体に使用した。ビオチン化ウマ抗マウスＩｇＧ抗体（Ｖｅｃｔｏｒ，Ｌｏｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ，ＵＳＡ）を２次抗体として使用した。Ｃｙｔｏｓｐｉｎ処理したスライドを冷イソプロパノール中で２分間浸して細胞を固定した。１０％正常ウマ血清を用いてブロッキングした後、４Ｃ１またはネガティブコントロール抗体を４℃で一晩反応させた。内因性のパーオキシダーゼ活性を０．３％ｈｙｄｒｏｇｅｎ  ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅメタノール溶液の３０分間処理により阻害した。ＰＢＳ（リン酸緩衝液）で洗浄後ビオチンか２次抗体を室温で２時間反応させた。洗浄後ａｖｉｄｉｎ−ｈｏｒｓｅｒａｄｉｓｈ  ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ  ｃｏｍｐｌｅｘ（ＶＥＣＴＡＳＴＡＩＮ  Ｅｌｉｔｅ  ＡＢＣ  ｋｉｔ，Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ，ＵＳＡ）を１時間反応させた。その後ジアミノベンゼンテトラヒドロクロリド（ＤＢＡ）を用いた基質で発色させ、さらに細胞数の計数のためにギムザ染色を行なった。
その結果、図１に示すように、典型的なミエローマ細胞の形態を有していた骨髄細胞の大部分が、マウス抗ヒトオステオポンチンモノクローナルＩｇＧ抗体である４Ｃ１によって茶色に染色された（左写真）。一方、コントロール抗体では着色が観察されなかった（右写真）。
また、図２に示すように、ＭＧＵＳ（写真Ａ）、脊髄形成異常症候群（写真Ｂ）、特発性血小板減少性紫斑病（写真Ｃ）、急性骨髄性白血病（写真Ｄ）、遺伝性球状赤血球症（写真Ｅ）の、どの由来の骨髄細胞にもオステオポンチンの発現を示す染色は認められなかった。
従って、オステオポンチンはミエローマ細胞において特異的に発現していることがわかる。
実施例２（ＲＴ−ＰＣＲ法によるオステオポンチンの分析）
ステージの異なるＢ細胞系細胞（ＲＰＭＩ８２２６；ミエローマ細胞系、Ｄａｕｄｉ；バーキットリンパ腫由来のリンパ芽球様Ｂ細胞系、Ｒａｍｏｓ；バーキットリンパ腫由来のリンパ芽球Ｂ細胞系、Ｒａｊｉ；バーキットリンパ腫由来のリンパ芽球Ｂ細胞系、Ｋｏｐｎ−８；ｐｒｅ−Ｂ細胞系、ＮＡＬＭ−１６；ｐｒｏ−Ｂ細胞系、Ｒｅｈ；ｐｒｏ−Ｂ細胞系）におけるオステオポンチンのｍＲＮＡ発現を、ヒトオステオポンチンより設計した特異的なプライマー（センスプライマー；５’−ＧＧＡＣＴＣＣＡＴＴ  ＧＡＣＴＣＧＡＡＣＧ−３’（配列番号１）、アンチセンスプライマー；５’−ＴＡＡＴＣＴＧＧＡＣＴＧＣＴＴＧＴＧＧＣ−３’（配列番号２））を用いたＲＴ−ＰＣＲ法により検討した。それぞれの細胞株からＴＲＩＺＯＬ試薬（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＵＳＡ）を用いて１００ｎｇのｍＲＮＡを精製し、これからそれぞれのｃＤＮＡを合成した。ＰＣＲは以下に述べる条件で、オステオポンチン特異的なプライマーを用いて行なった。すなわち、９４℃１分間で変性を行ない、５７℃１分間でアニーリングし、７２℃２分間で伸長を行なった。このサイクルを３０回繰り返した。対照としてＧＡＰＤＨ（Ｇｌｙｃｅｒａｌｄｅｈｙｄｅ−３−ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ）に対する特異的なプライマー（センスプライマー；５’−ＡＡＴＴＡＣＣＡＣＡＡＣＣＣＣＴＡＣＡＡＡＣ−３’（配列番号３）、アンチセンスプライマー；５’−ＣＡＡＣＴＣＴＧＣＡＡＣＡＴＣＴＴＣＣＴＣ−３’（配列番号４））を使用した。ＰＣＲ産物は２％アガロースゲルで電気泳動しバンドの有無を確認した。
その結果、図３に示すように、ミエローマ細胞系であるＲＰＭＩ８２２６に明確なバンドが認められ、Ｄａｕｄｉにも若干のバンドが認められた。しかし、ミエローマ細胞系ではない他の細胞系ではオステオポンチンのバンドが認められなかった。
実施例３（ウエスタンブロッティング法によるオステオポンチンの分析）
自発的なオステオポンチン産生を検討するために、実施例２と同様の異なるステージのＢ細胞系を用いて、ウエスタンブロッティング解析を行なった。それぞれの細胞をｉｎ  ｖｉｔｒｏで３日間培養し、培養上清を採取した。それぞれの細胞の培養上清２０μＬから、４−２０％アクリルアミド濃度勾配ゲルを用いた４時間のＳＤＳ−ＰＡＧＥによりタンパク質を分離したのち、Ｉｍｍｏｂｉｌｏｎ  Ｐメンブレン（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，Ｂｅｄｆｏｒｄ，ＵＳＡ）に４℃下で一晩かけてタンパク質をトランスファーした。タンパク質をトランスファーしたメンブレンは、１０％スキムミルクと０．１％Ｔｗｅｅｎ２０を含むリン酸緩衝液（ＰＢＳ）を用いてブロッキングした。メンブレンを洗浄した後、今らが作製した、ウサギ抗ヒトオステオポンチン抗体（ＯＰＮ２）（Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  ２０００；７７：４８７−４９８）を加えて４℃で一晩反応させた。洗浄後ＨＲＰ標識ヤギ抗ウサギＩｇＧ抗体を加えて室温で１時間反応させた。洗浄した後Ｒｅｎａｉｓｓａｎｃｅ試薬（ＮＥＮ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｂｏｓｔｏｎ，ＵＳＡ）を用いてフィルムに一晩かけて感光させてシグナルを検出した。
その結果、図４に示すように、オステオポンチンのバンドはＲＰＭＩ８２２６にのみ認められ、他の細胞では認められなかった。
これら図３及び図４より、オステオポンチンは、ミエローマ細胞株で特異的に発現しており、他の腫瘍株では発現していないことがわかる。
実施例４（ＥＬＩＳＡ法による血漿中オステオポンチンの定量）
３０名の多発性骨髄腫患者の血漿中オステオポンチン濃度を、ヒトオステオポンチンＥＬＩＳＡキット（Ｉｍｍｕｎｏ−Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｇｕｎｍａ，Ｊａｐａｎ）を用いて測定した。対照として、２１名のＭＧＵＳ患者および３０名の健常者ボランティアより採取した血漿を使用した。データは平均値±標準誤差で示した。Ｍａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ  Ｕ  Ｔｅｓｔを用いて検定を行なった。Ｐ値が０．０５より小さいとき（危険率５％未満のとき）有意差ありとした。
その結果、図５に示すように多発性骨髄腫患者の血漿中オステオポンチン濃度は、ＭＧＵＳ患者や健常者のそれよりも有意な高値を示した。
血漿中オステオポンチン濃度  平均値±標準誤差ｎｇ／ｍＬ；多発性骨髄腫１０５３±９５７、ＭＧＵＳ  ３５５±２０５、健常者３０９±１８４；
多発性骨髄腫  対  ＭＧＵＳおよび健常者  ＊ｐ＜０．０５
図６は、多発性骨髄腫患者をＤｕｒｉｅ＆Ｓａｌｍｏｎの分類（Ｃａｎｃｅｒ  １９７５；３６：８４２−５４）に従ってＳｔａｇｅ  Ｉ（６名）、Ｓｔａｇｅ  ＩＩ（非活動性）（１２名）、Ｓｔａｇｅ  ＩＩＩ（活動性）（１２名）の３つの臨床ステージに分類して、血漿中オステオポンチン濃度を比較した結果を示す図である。図６から明らかなように多発性骨髄腫患者の血漿中オステオポンチン濃度は、病期や活動性に依存した有意な上昇を示した。
血漿中オステオポンチン濃度  平均値±標準誤差ｎｇ／ｍＬ；Ｓｔａｇｅ  Ｉ  ３８９±８９、Ｓｔａｇｅ  ＩＩ（非活動性）８１６±４４６、Ｓｔａｇｅ  ＩＩＩ（活動性）１９９１±９５３、
Ｓｔａｇｅ  ＩＩ（非活動性）  対  Ｓｔａｇｅ  Ｉ  ＊ｐ＜０．０５
Ｓｔａｇｅ  ＩＩＩ（活動性）  対  Ｓｔａｇｅ  Ｉ，Ｓｔａｇｅ  ＩＩ（非活動性）  ＊ｐ＜０．０５
図７は、多発性骨髄腫患者の血漿中オステオポンチン濃度を２つの集団の間で比較した結果を示す図である。一方のグループは、ほとんど骨疼痛を感じない患者で、もう一方のグループは顕著な骨疼痛を有する患者で構成した。顕著な骨疼痛を伴う患者の血漿中オステオポンチン濃度は、ほとんど痛みを感じないグループと比較して有意な高値を示した。
血漿中オステオポンチン濃度  平均値±標準誤差ｎｇ／ｍＬ；骨疼痛［−］７７６±６６０、骨疼痛［＋］１８２２±９９４；骨疼痛［＋］  対  骨疼痛［−］＊ｐ＜０．０５
図８は、多発性骨髄腫患者の血漿中オステオポンチン濃度を２つの集団の間で比較した結果を示す図である。一方のグループは磁気共鳴映像法（ＭＲＩ）によってほとんど骨吸収性の骨破壊像が確認できなかった患者で構成した。もう一方のグループは顕著な骨吸収性の骨破壊像が確認できた患者で構成した。顕著な骨吸収性骨破壊像が認められるグループの血漿中オステオポンチン濃度は、ほとんど認められないグループと比較して有意な高値を示した。
血漿中オステオポンチン濃度  平均値±標準誤差ｎｇ／ｍＬ；骨吸収性骨破壊像［−］４８６±１６９、骨吸収性骨破壊像［＋］１４９８±４８６；骨吸収性骨破壊像［＋］  対  骨吸収性骨破壊像［−］＊ｐ＜０．０５
産業上の利用可能性
本発明によれば難治性で予後の悪い癌であるミエローマ系腫瘍の存在だけでなく症状を診断でき、ミエローマ系腫瘍予防・治療剤及びミエローマ系腫瘍に伴う骨破壊の予防・治療剤、並びにそのスクリーニング法が提供される。
【配列表】
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【図面の簡単な説明】
図１は、多発性骨髄腫由来骨髄細胞（左）及び対照群（ＭＧＵＳ）（右）におけるオステオポンチンの免疫細胞化学染色結果を示す図である。
図２は、ＭＧＵＳ（Ａ）、脊髄形成異常症候群（ＭＤＳ）（Ｂ）、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）（Ｃ）及び急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）（Ｄ）、遺伝性球状赤血球症（ＨＳＣ）（Ｅ）におけるオステオポンチンの免疫細胞化学染色結果を示す図である。
図３は、ＲＴ−ＰＣＲ法による、種々の細胞系におけるオステオポンチン（ＯＰＮ）及びＧＡＰＤＨの発現を示す図である。
図４は、ウェスタンブロッティング法による、種々の細胞におけるオステオポンチン（ＯＰＮ）の発現を示す図である。
図５は、多発性骨髄腫患者（ＭＭ）、ＭＧＵＳ及び健常人の血漿中オステオポンチン濃度分布を示す図である。
図６は、多発性骨髄腫患者のステージＩ、ステージＩＩ（非活動性）及びステージＩＩＩ（活動性）における血漿中オステオポンチン濃度を示す図である。
図７は、多発性骨髄腫患者の骨疼痛の有無による血漿中オステオポンチン濃度の差を示す図である。
図８は、多発性骨髄腫患者の骨吸収性骨破壊像の有無による血漿中オステオポンチン濃度の差を示す図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【国際調査報告】
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