(57)【要約】一般式（１）で示される化合物は、ＨＤＡＣ１，４に対して選択的に強い阻害活性を備えている。そのため、本発明の化合物はＨＤＡＣ１，４に起因した疾患の治療または予防のための薬剤として有用となる。2003070754.tif 000040
2003070754.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の一般式（１）で示される化合物。
2003070754.tif 000031
［式中、Ｒ１１，Ｒ２１，Ｒ３１，Ｒ４１はそれぞれ独立して水素またはメチル基を示す。Ｒ２２，Ｒ２３，Ｒ３２，Ｒ３３，Ｒ４２，Ｒ４３はそれぞれ独立して水素、炭素数１〜６の直鎖アルキル基、非芳香族環状アルキル基もしくは置換基を有することもある芳香環が結合した炭素数１〜６の直鎖アルキル基、非芳香族環状アルキル基、または非芳香族環状アルキル基もしくは置換基を有することもある芳香環が結合した非芳香族環状アルキル基のいずれかを示す。また、Ｒ２１とＲ２２，Ｒ２２とＲ２３，Ｒ３１とＲ３２，Ｒ３２とＲ３３，Ｒ４１とＲ４２，Ｒ４２とＲ４３は、それぞれ結合を持たず非環状構造を示すか、または鎖長炭素数１〜５の直鎖アルキレン基、炭素数１〜６の分岐鎖を有する鎖長炭素数１〜５の直鎖アルキレン基、もしくは、炭素数１〜６の環構造を備えた鎖長炭素数１〜５の直鎖アルキレン基を介して結合した環構造を示す。Ｘは、水素、当該Ｘよりも左に示す構造体と同一構造、硫黄原子を含む任意の構造体であって当該硫黄原子と上記式１中の硫黄原子とがジスルフィド結合を介して結合し得る置換基を有することもあるアルキル基もしくはアリール基、または前記Ｒ２２，Ｒ２３，Ｒ３２，Ｒ３３，Ｒ４２，またはＲ４３の末端に結合し該Ｘの左に位置する硫黄原子と分子内ジスルフィド結合を形成している硫黄原子のいずれかを示す。］
【請求項２】
請求項１記載の化合物を有効成分として含有する、ヒストン脱アセチル化酵素阻害剤。
【請求項３】
請求項１記載の化合物を有効成分として含有する、アポトーシス誘導剤。
【請求項４】
請求項１記載の化合物を有効成分として含有する、分化誘導剤。
【請求項５】
請求項１記載の化合物を有効成分として含有する、血管新生阻害剤。
【請求項６】
請求項１記載の化合物を有効成分として含有する、がん転移抑制剤。
【請求項７】
請求項１記載の化合物を有効成分として含有する、ヒストン脱アセチル化酵素１または４に起因した疾患の治療または予防のための薬剤。
【請求項８】
ヒストン脱アセチル化酵素１または４に起因した疾患が、がん、自己免疫疾患、皮膚病、または感染症である、請求項７記載の治療または予防のための薬剤。
【請求項９】
一般式（２）
2003070754.tif 000032
（式中、ｎは一般式（１）で定義したと同様であり、Ｈａｌは塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子のいずれかのハロゲン原子、または同様に良い脱離基となるアリルまたはアルキルスルフォキシ基のいずれを用いてもよく、Ｐ２はアミノ基の保護基を表す）で示される化合物を、一般式（３）
2003070754.tif 000033
（式中、Ｒ１１，Ｒ２１，Ｒ２２，Ｒ２３，Ｒ３１，Ｒ３２，Ｒ３３，Ｒ４１，Ｒ４２，及びＲ４３は、一般式（１）で定義したと同様であり、Ｐ２はカルボキシル基の保護基を表す）で示される化合物とペプチド結合剤の存在下で反応させ、一般式（４）
2003070754.tif 000034
（式中、ｎ，Ｒ１１，Ｒ２１，Ｒ２２，Ｒ２３，Ｒ３１，Ｒ３２，Ｒ３３，Ｒ４１，Ｒ４２，Ｒ４３，Ｐ１，Ｐ２，及びＨａｌは、前記で定義したと同様である）で示される化合物を得、次いで前記一般式（４）で示される化合物を、触媒的水素化、酸処理、もしくは加水分解により、Ｐ１及びＰ２を除去した後に、ペプチド結合剤の存在下で環化反応させ、一般式（５）
2003070754.tif 000035
（式中、ｎ，Ｒ１１，Ｒ２１，Ｒ２２，Ｒ２３，Ｒ３１，Ｒ３２，Ｒ３３，Ｒ４１，Ｒ４２，Ｒ４３，Ｐ１，Ｐ２，及びＨａｌは、前記で定義したと同様である）で示される化合物を得るか、または一般式（６）
2003070754.tif 000036
（式中、Ｒ２１，Ｒ２２，Ｒ２３，Ｒ３１，Ｒ３２，Ｒ３３，Ｒ４１，Ｒ４２，Ｒ４３，及びＰ１は、前記で定義したと同様である）で示される化合物を、一般式（７）
2003070754.tif 000037
（式中、ｎ，Ｒ１１，Ｐ２，及びＨａｌは、前記で定義したと同様である）で示される化合物とペプチド結合剤存在下で反応させ、一般式（８）
2003070754.tif 000038
（式中、ｎ，Ｒ１１，Ｒ２１，Ｒ２２，Ｒ２３，Ｒ３１，Ｒ３２，Ｒ３３，Ｒ４１，Ｒ４２，Ｒ４３，Ｐ１，Ｐ２，及びＨａｌは、前記で定義したと同様である）で示される化合物を得、次いで一般式（８）で示される化合物を、触媒的水素化、酸処理、フルオリドアニオン処理、もしくは加水分解によりＰ１及びＰ２を除去した後に、ペプチド結合剤の存在下で環化反応させて、上記一般式（５）で示される化合物を得、次いで一般式（５）で示される化合物を、硫黄原子を含む試薬と反応させ、一般式（９）
2003070754.tif 000039
（式中、ｎ，Ｒ１１，Ｒ２１，Ｒ２２，Ｒ２３，Ｒ３１，Ｒ３２，Ｒ３３，Ｒ４１，Ｒ４２，及びＲ４３は、前記で定義したと同様であり、Ｐ３はスルフィドリル基の保護基を表す）で示される化合物を得、次いで一般式（９）で示される化合物をアンモニアまたは他のアミン類及び酸化剤で処理することを含む、請求項１記載の化合物の製造方法。
【発明の詳細な説明】
技術分野
本発明はヒストン脱アセチル化酵素（Ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ：ＨＤＡＣ）阻害剤およびその製造方法に関する。
背景技術
真核生物のクロマチン構造と遺伝子の発現は、ヒストンアセチル化酵素（ＨＡＴ）によるヒストンのアセチル化と、ヒストン脱アセチル化酵素（ＨＤＡＣ）による脱アセチル化によって調節されている。ＨＤＡＣの阻害剤ががん細胞の分化や、アポトーシスを誘導することが以前から知られ、制がん剤としての応用が期待されている（Ｍａｒｋｓ，Ｐ．Ａ．，Ｒｉｃｈｏｎ，Ｖ．Ｍ．，ａｎｄ  Ｒｉｆｋｉｎｄ，Ｒ．Ａ．（２０００）．Ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ：Ｉｎｄｕｃｅｒｓ  ｏｆ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｏｒ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  ｏｆ  ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄ  ｃｅｌｌｓ．Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．９２，１２１０−１２１６；Ｙｏｓｈｉｄａ，Ｍ．，Ｈｏｒｉｎｏｕｃｈｉ，Ｓ．，ａｎｄ  Ｂｅｐｐｕ，Ｔ．（１９９５）．Ｔｒｉｃｈｏｓｔａｔｉｎ  Ａ  ａｎｄ  ｔｒａｐｏｘｉｎ：ｎｏｖｅｌ  ｃｈｅｍｉｃａｌ  ｐｒｏｂｅｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｈｉｓｔｏｎｅ  ａｃｅｔｙｌａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｃｈｒｏｍａｔｉｎ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ａｎｄ  ｆｕｎｃ
2003070754.tif 000003
Ｙｏｓｈｉｄａ，Ｍ．，Ｋｏｆｌｅｒ，Ｒ．，ａｎｄ  Ｃｓｏｒｄａｓ，Ａ．（１９９９）．Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ  ａｎｄ  ｂｕｔｙｒａｔｅ  ｉｎ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ：ｎｏｎ−ａｄｄｉｔｉｖｅ  ｉｎ  ｔｈｙｍｏｃｙｔｅｓ  ａｎｄ  ｓｙｎｅｒｇｉｓｔｉｃ  ｉｎ  ａ  Ｔ  ｃｅｌｌ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｌｅｕｋｅｍｉａ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅ．Ｃｅｌｌ  Ｄｅａｔｈ  Ｄｉｆｆ．６，６０９−６０７）。
実際、米国では動物実験で制がん剤としての有効性を示すいくつかのＨＤＡＣ阻害剤（Ｎａｋａｊｉｍａ，Ｈ．，Ｋｉｍ，Ｙ．Ｂ．，Ｔｅｒａｎｏ，Ｈ．，Ｙｏｓｈｉｄａ，Ｍ．，ａｎｄ  Ｈｏｒｉｎｏｕｃｈｉ，Ｓ．（１９９８）．ＦＲ９０１２２８，ａ  ｐｏｔｅｎｔ  ａｎｔｉｔｕｍｏｒ  ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ，ｉｓ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ．Ｅｘｐ．Ｃｅｌｌ  Ｒｅｓ．２４１，１２６−１３３；Ｓａｉｔｏ，Ａ．，Ｙａｍａｓｈｉｔａ，Ｔ．，Ｍａｒｉｋｏ，Ｙ．，Ｎｏｓａｋａ，Ｙ．，Ｔｓｕｃｈｉｙａ，Ｋ．，Ａｎｄｏ，Ｔ．，Ｓｕｚｕｋｉ，Ｔ．，Ｔｓｕｒｕｏ，Ｔ．，ａｎｄ  Ｎａｋａｎｉｓｈｉ，Ｏ．（１９９９）．Ａ  ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｏｆ  ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ，ＭＳ−２７−２７５，ｗｉｔｈ  ｍａｒｋｅｄ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ａｎｔｉｔｕｍｏｒ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ａｇａｉｎｓｔ  ｈｕｍａｎ  ｔｕｍｏｒｓ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９６，４５９２−４５９７）の臨床研究が開始されている。
ＨＤＡＣ特異的阻害剤としてはトリコスタチンＡ（ＴＳＡ）が有名である（Ｙｏｓｈｉｄａ，Ｍ．，Ｋｉｊｉｍａ，Ｍ．，Ａｋｉｔａ，Ｍ．，ａｎｄ  Ｂｅｐｐｕ，Ｔ．（１９９０）．Ｐｏｔｅｎｔ  ａｎｄ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍａｍｍａｌｉａｎ  ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ  ｂｏｔｈ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ａｎｄ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ｂｙ  ｔｒｉｃｈｏｓｔａｔｉｎ  Ａ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６５，１７１７４−１７１７９）。実際、ＴＳＡは白血病細胞、神経細胞、乳癌細胞などの分化を誘導することが知られている（Ｙｏｓｈｉｄａ，Ｍ．，Ｎｏｍｕｒａ，Ｓ．，ａｎｄ  Ｂｅｐｐｕ，Ｔ．Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｔｒｉｃｈｏｓｔａｔｉｎｓ  ｏｎ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍｕｒｉｎｅ  ｅｒｙｔｈｒｏｌｅｕｋｅｍｉａ  ｃｅｌｌｓ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．４７：３６８８−３６９１，１９８７；Ｈｏｓｈｉｋａｗａ，Ｙ．，Ｋｉｊｉｍａ，Ｍ．，Ｙｏｓｈｉｄａ，Ｍ．，ａｎｄ  Ｂｅｐｐｕ，Ｔ．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｍａｒｋｅｒｓ  ｉｎ  ｔｅｒａｔｏｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｃｅｌｌｓ  ｖｉａ  ｈｉｓｔｏｎｅ  ｈｙｐｅｒａｃｅｔｙｌａｔｉｏｎ  ｂｙ  ｔｒｉｃｈｏｓｔａｔｉｎ  Ａ．Ａｇｒｉｃ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．５５：１４９１−１４９５，１９９１；Ｍｉｎｕｃｃｉ，Ｓ．，Ｈｏｒｎ，Ｖ．，Ｂｈａｔｔａｃｈａｒｙｙａ，Ｎ．，Ｒｕｓｓａｎｏｖａ，Ｖ．，Ｏｇｒｙｚｋｏ，Ｖ．Ｖ．，Ｇａｂｒｉｅｌｅ，Ｌ．，Ｈｏｗａｒｄ，Ｂ．Ｈ．，ａｎｄ  Ｏｚａｔｏ，Ｋ．Ａ  ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｐｏｔｅｎｔｉａｔｅｓ  ｒｅｔｉｎｏｉｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｅｍｂｒｙｏｎａｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｃｅｌｌｓ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９４：１１２９５−１１３００，１９９７；Ｉｎｏｋｏｓｈｉ，Ｊ．，Ｋａｔａｇｉｒｉ，Ｍ．，Ａｒｉｍａ，Ｓ．，Ｔａｎａｋａ，Ｈ．，Ｈａｙａｓｈｉ，Ｍ．，Ｋｉｍ，Ｙ．Ｂ．，Ｆｕｒｕｍａｉ，Ｒ．，Ｙｏｓｈｉｄａ，Ｍ．，Ｈｏｒｉｎｏｕｃｈｉ，Ｓ．，ａｎｄ  Ｏｍｕｒａ，Ｓ．（１９９９）．Ｎｅｕｒｏｎａｌ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏ  ２ａ  ｃｅｌｌｓ  ｂｙ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  ｃｅｌｌ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ，ｔｒｉｅｈｏｓｔａｔｉｎ  Ａ  ａｎｄ  ｂｕｔｙｒｏｌａｃｔｏｎｅ  Ｉ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２５６，３７２−３７６；Ｗａｎｇ，Ｊ．，Ｓａｕｎｔｈａｒａｒａｊａｈ，Ｙ．，Ｒｅｄｎｅｒ，Ｒ．Ｌ．，ａｎｄ  Ｌｉｕ，Ｊ．Ｍ．Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ  ｒｅｌｉｅｖｅ  ＥＴＯ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｒｅｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  ｉｎｄｕｃｅ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＡＭＬ  １−ＥＴＯ  ｌｅｕｋｅｍｉａ  ｃｅｌｌｓ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５９：２７６６−２７６９，１９９９；Ｍｕｎｓｔｅｒ，Ｐ．Ｎ．，Ｔｒｏｓｏ−Ｓａｎｄｏｖａｌ，Ｔ．，Ｒｏｓｅｎ，Ｎ．，Ｒｉｆｋｉｎｄ，Ｒ．，Ｍａｒｋｓ，Ｐ．Ａ．，ａｎｄ  Ｒｉｃｈｏｎ，Ｖ．Ｍ．Ｔｈｅ  ｈｉｓｔｏｎ��  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｓｕｂｅｒｏｙｌａｎｉｌｉｄｅ  ｈｙｄｒｏｘａｍｉｃ  ａｃｉｄ  ｉｎｄｕｃｅｓ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌｓ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６１：８４９２−８４９７，２００１；Ｆｅｒｒａｒａ，Ｆ．Ｆ．，Ｆａｚｉ，Ｆ．，Ｂｉａｎｃｈｉｎｉ，Ａ．，Ｐａｄｕｌａ，Ｆ．，Ｇｅｌｍｅｔｔｉ，Ｖ．，Ｍｉｎｕｃｃｉ，Ｓ．，Ｍａｎｃｉｎｉ，Ｍ．，Ｐｅｌｉｃｃｉ，Ｐ．Ｇ．，Ｌｏ  Ｃｏｃｏ，Ｆ．，ａｎｄ  Ｎｅｒｖｉ，Ｃ．Ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ−ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｒｅｓｔｏｒｅｓ  ｒｅｔｉｎｏｉｃ  ａｃｉｄ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ａｎｄ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｉｎ  ａｃｕｔｅ  ｍｙｅｌｏｉｄ  ｌｅｕｋｅｍｉａ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６１：２−７，２００１；Ｇｏｔｔｌｉｃｈｅｒ，Ｍ．，Ｍｉｎｕｃｃｉ，Ｓ．，Ｚｈｕ，Ｐ．，Ｋｒａｍｅｒ，Ｏ．Ｈ．，Ｓｃｈｉｍｐｆ，Ａ．，Ｇｉａｖａｒａ，Ｓ．，Ｓｌｅｅｍａｎ，Ｊ．Ｐ．，Ｌｏ  Ｃｏｃｏ，Ｆ．，Ｎｅｒｖｉ，Ｃ．，Ｐｅｌｉｃｅｉ，Ｐ．Ｇ．，ａｎｄ  Ｈｅｉｎｚｅｌ，Ｔ．Ｖａｌｐｒｏｉｃ  ａｃｉｄ  ｄｅｆｉｎｅｓ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｃｌａｓｓ  ｏｆ  ＨＤＡＣ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｉｎｄｕｃｉｎｇ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄ  ｃｅｌｌｓ．ＥＭＢＯ  Ｊ．２０：６９６９−６９７８，２００１）。さらにＨＤＡＣ阻害剤とは異なる機構で遺伝子発現を活性化する薬物との併用によって、その分化誘導作用やアポトーシス誘導作用は相乗的に増大することも知られている。例えば、核内受容体であるレチノイン酸受容体を活性化し、分化に関する遺伝子発現を引き起こすレチノイン酸とＨＤＡＣ阻害剤との併用でがん細胞の分化が促進される（Ｍｉｎｕｃｃｉ，Ｓ．，Ｈｏｒｎ，Ｖ．，Ｂｈａｔｔａｃｈａｒｙｙａ，Ｎ．，Ｒｕｓｓａｎｏｖａ，Ｖ．，Ｏｇｒｙｚｋｏ，Ｖ．Ｖ．，Ｇａｂｒｉｅｌｅ，Ｌ．，Ｈｏｗａｒｄ，Ｂ．Ｈ．，ａｎｄ  Ｏｚａｔｏ，Ｋ．Ａ  ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｐｏｔｅｎｔｉａｔｅｓ  ｒｅｔｉｎｏｉｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｅｍｂｒｙｏｎａｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｃｅｌｌｓ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９４：１１２９５−１１３００，１９９７；Ｆｅｒｒａｒａ，Ｆ．Ｆ．，Ｆａｚｉ，Ｆ．，Ｂｉａｎｃｈｉｎｉ，Ａ．，Ｐａｄｕｌａ，Ｆ．，Ｇｅｌｍｅｔｔｉ，Ｖ．，Ｍｉｎｕｃｃｉ，Ｓ．，Ｍａｎｃｉｎｉ，Ｍ．，Ｐｅｌｉｃｃｉ，Ｐ．Ｇ．，Ｌｏ  Ｃｏｃｏ，Ｆ．，ａｎｄ  Ｎｅｒｖｉ，Ｃ．Ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ−ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｒｅｓｔｏｒｅｓ  ｒｅｔｉｎｏｉｃ  ａｃｉｄ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ａｎｄ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｉｎ  ａｃｕｔｅ  ｍｙｅｌｏｉｄ  ｌｅｕｋｅｍｉａ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６１：２−７，２００１；Ｃｏｆｆｅｙ，Ｄ．Ｃ．，Ｋｕｔｋｏ，Ｍ．Ｃ．，Ｇｌｉｃｋ，Ｒ．Ｄ．，Ｂｕｔｌｅｒ，Ｌ．Ｍ．，Ｈｅｌｌｅｒ，Ｇ．，Ｒｉｆｋｉｎｄ，Ｒ．Ａ．，Ｍａｒｋｓ，Ｐ．Ａ．，Ｒｉｃｈｏｎ，Ｖ．Ｍ．，ａｎ��  Ｌａ  Ｑｕａｇｌｉａ，Ｍ．Ｐ．Ｔｈｅ  ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ，ＣＢＨＡ，ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ｇｒｏｗｔｈ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｎｅｕｒｏｂｌａｓｔｏｍａ  ｘｅｎｏｇｒａｆｔｓ  ｉｎ  ｖｉｖｏ，ａｌｏｎｅ  ａｎｄ  ｓｙｎｅｒｇｉｓｔｉｃａｌｌｙ  ｗｉｔｈ  ａｌｌ−ｔｒａｎｓ  ｒｅｔｉｎｏｉｃ  ａｃｉｄ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６１：３５９１−３５９４，２００１；Ｐｅｔｔｉ，Ｍ．Ｃ．，Ｆａｚｉ，Ｆ．，Ｇｅｎｔｉｌｅ，Ｍ．，Ｄｉｖｅｒｉｏ，Ｄ．，Ｄｅ  Ｆａｂｒｉｔｉｉｓ，Ｐ．，Ｄｅ  Ｐｒｏｐｒｉｓ，Ｍ．Ｓ．，Ｆｉｏｒｉｎｉ，Ｒ．，Ｓｐｉｒｉｔｉ，Ｍ．Ａ．，Ｐａｄｕｌａ，Ｆ．，Ｐｅｌｉｃｃｉ，Ｐ．Ｇ．，Ｎｅｒｖｉ，Ｃ．，ａｎｄ  Ｌｏ  Ｃｏｃｏ，Ｆ．Ｃｏｍｐｌｅｔｅ  ｒｅｍｉｓｓｉｏｎ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｂｌａｓｔ  ｃｅｌｌ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｉｎ  ＰＬＺＦ／ＲＡＲａｌｐｈａ−ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ａｃｕｔｅ  ｐｒｏｍｙｅｌｏｃｙｔｉｃ  ｌｅｕｋｅｍｉａ：ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ａｎｄ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｓｔｕｄｉｅｓ．Ｂｌｏｏｄ  １００：１０６５−１０６７，２００２）。また、多くのがん細胞ではがん抑制遺伝子の発現が低下しているが、その原因として知られるＤＮＡのメチル化を阻害する５−アザデオキシシチジンとの併用によってがん抑制遺伝子の発現の回復とがん細胞のアポトーシスが促進される（Ｎａｎ，Ｘ．，Ｎｇ，Ｈ．Ｈ．，Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｃ．Ａ．，Ｌａｈｅｒｔｙ，Ｃ．Ｄ．，Ｔｕｒｎｅｒ，Ｂ．Ｍ．，Ｅｉｓｅｎｍａｎ，Ｒ．Ｎ．，ａｎｄ  Ｂｉｒｄ，Ａ．Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ  ｒｅｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｂｙ  ｔｈｅ  ｍｅｔｈｙｌ−ＣｐＧ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ＭｅＣＰ２  ｉｎｖｏｌｖｅｓ  ａ  ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ  ｃｏｍｐｌｅｘ．Ｎａｔｕｒｅ  ３９３：３８６−３８９，１９９８；Ｃａｍｅｒｏｎ，Ｅ．Ｅ．，Ｂａｃｈｍａｎ，Ｋ．Ｅ．，Ｍｙｏｈａｎｅｎ，Ｓ．，Ｈｅｒｍａｎ，Ｊ．Ｇ．，ａｎｄ  Ｂａｙｌｉｎ，Ｓ．Ｂ．Ｓｙｎｅｒｇｙ  ｏｆ  ｄｅｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｒｅ−ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｇｅｎｅｓ  ｓｉｌｅｎｃｅｄ  ｉｎ  ｃａｎｃｅｒ．Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔ．２１：１０３−１０７，１９９９；Ｌｉ，Ｑ．Ｌ．，Ｉｔｏ，Ｋ．，Ｓａｋａｋｕｒａ，Ｃ．，Ｆｕｋａｍａｃｈｉ，Ｈ．，Ｉｎｏｕｅ，Ｋ．，Ｃｈｉ，Ｘ．Ｚ．，Ｌｅｅ，Ｋ．Ｙ．，Ｎｏｍｕｒａ，Ｓ．，Ｌｅｅ，Ｃ．Ｗ．，Ｈａｎ，Ｓ．Ｂ．，Ｋｉｍ，Ｈ．Ｍ．，Ｋｉｍ，Ｗ．Ｊ．，Ｙａｍａｍｏｔｏ，Ｈ．，Ｙａｍａｓｈｉｔａ，Ｎ．，Ｙａｎｏ，Ｔ．，Ｉｋｅｄａ，Ｔ．，Ｉｔｏｈａｒａ，Ｓ．，Ｉｎａｚａｗａ，Ｊ．，Ａｂｅ，Ｔ．，Ｈａｇｉｗａｒａ，Ａ．，Ｙａｍａｇｉｓｈｉ，Ｈ．，Ｏｏｅ，Ａ．，Ｋａｎｅｄａ，Ａ．，Ｓｕｇｉｍｕｒａ，Ｔ．，Ｕｓｈｉｊｉｍａ，Ｔ．，Ｂａｅ，Ｓ．Ｃ．，ａｎｄ  Ｉｔｏ，Ｙ．Ｃａｕｓａｌ  ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ｔｈｅ  ｌｏｓｓ  ｏｆ  ＲＵＮＸ３  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  ｇａｓｔｒｉｃ  ｃａｎｃｅｒ．Ｃｅｌｌ  １０９：１１３−１２４，２００２；Ｂｏ���ｖｉｎ，Ａ．Ｊ．，Ｍｏｍｐａｒｌｅｒ，Ｌ．Ｆ．，Ｈｕｒｔｕｂｉｓｅ，Ａ．，ａｎｄ  Ｍｏｍｐａｒｌｅｒ，Ｒ．Ｌ．Ａｎｔｉｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ  ａｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ５−ａｚａ−２’−ｄｅｏｘｙｃｙｔｉｄｉｎｅ  ａｎｄ  ｐｈｅｎｙｌｂｕｔｙｒａｔｅ  ｏｎ  ｈｕｍａｎ  ｌｕｎｇ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｃｅｌｌｓ．Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇｓ  １３：８６９−８７４，２００２；Ｐｒｉｍｅａｕ，Ｍ．，Ｇａｇｎｏｎ，Ｊ．，ａｎｄ  Ｍｏｍｐａｒｌｅｒ，Ｒ．Ｌ．Ｓｙｎｅｒｇｉｓｔｉｃ  ａｎｔｉｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ  ａｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ＤＮＡ  ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ５−ＡＺＡ−２’−ｄｅｏｘｙｃｙｔｉｄｉｎｅ  ａｎｄ  ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｄｅｐｓｉｐｅｐｔｉｄｅ  ｏｎ  ｈｕｍａｎ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｃｅｌｌｓ．Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  １０３：１７７−１８４，２００３）。
ＨＤＡＣ阻害剤は、制がん剤としてのみならず、がん予防薬としても期待されている。ＴＳＡやＳＡＨＡ等は、動物の化学発がんモデルにおいて乳癌の発生を顕著に抑制した。また、バルプロ酸を用いた研究から、ＨＤＡＣ阻害剤は転移を抑制することも示されている（Ｇｏｔｔｌｉｃｈｅｒ，Ｍ．，Ｍｉｎｕｃｃｉ，Ｓ．，Ｚｈｕ，Ｐ．，Ｋｒａｍｅｒ，Ｏ．Ｈ．，Ｓｃｈｉｍｐｆ，Ａ．，Ｇｉａｖａｒａ，Ｓ．，Ｓｌｅｅｍａｎ，Ｊ．Ｐ．，Ｌｏ  Ｃｏｃｏ，Ｆ．，Ｎｅｒｖｉ，Ｃ．，Ｐｅｌｉｃｃｉ，Ｐ．Ｇ．，ａｎｄ  Ｈｅｉｎｚｅｌ，Ｔ．Ｖａｌｐｒｏｉｃ  ａｃｉｄ  ｄｅｆｉｎｅｓ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｃｌａｓｓ  ｏｆ  ＨＤＡＣ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｉｎｄｕｃｉｎｇ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄ  ｃｅｌｌｓ．ＥＭＢＯ  Ｊ．２０：６９６９−６９７８，２００１）。
ＨＤＡＣ阻害剤は制がん剤以外にも、例えば自己免疫疾患、皮膚病、感染症（Ｄａｒｋｉｎ−Ｒａｔｔｒａｙ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９３，１３１４３−１３１４７，１９９６）などの治療・改善薬、さらには遺伝子治療におけるベクター導入の効率化（Ｄｉｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  ２３１，２０１−２０９，１９９７）、導入遺伝子の発現亢進（Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９４，５７９８−５８０３，１９９７）など様々な応用も試みられている。また、ＨＤＡＣ阻害剤は血管新生阻害作用を有すると考えられている（Ｋｉｍ，Ｍ．Ｓ．，Ｋｗｏｎ，Ｈ．Ｊ．，Ｌｅｅ，Ｙ．Ｍ．，Ｂａｅｋ，Ｊ．Ｈ．，Ｊａｎｇ，Ｊ．Ｅ．，Ｌｅｅ，Ｓ．Ｗ．，Ｍｏｏｎ，Ｅ．Ｊ．，Ｋｉｍ，Ｈ．Ｓ．，Ｌｅｅ，Ｓ．Ｋ．，Ｃｈｕｎｇ，Ｈ．Ｙ．，Ｋｉｍ，Ｃ．Ｗ．，ａｎｄ  Ｋｉｍ，Ｋ．Ｗ．（２００１）．Ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅｓ  ｉｎｄｕｃｅ  ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｂｙ  ｎｅｇａｔｉｖｅ  ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｕｍｏｒ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ  ｇｅｎｅｓ．Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄ．７，４３７−４４３；Ｋｗｏｎ，Ｈ．Ｊ．，Ｋｉｍ，Ｍ．Ｓ．，Ｋｉｍ，Ｍ．Ｊ．，Ｎａｋａｊｉｍａ，Ｈ．，ａｎｄ  Ｋｉｍ，Ｋ．Ｗ．（２００２）．Ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ＦＫ２２８  ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ｔｕｍｏｒ  ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ．Ｉｎｔ．Ｊ．ｃａｎｃｅｒ  ９７，２９０−２９６）。
ＨＤＡＣには１０種類以上のサブタイプが存在するが、近年、特定のＨＤＡＣサブタイプとがんとの密接な関係がわかってきた。例えば、発がんの抑制に極めて重要な役割を果たすがん抑制遺伝子ｐ５３の機能発現にｐ５３自身のアセチル化が重要であり（Ｉｔｏ，Ａ．，Ｌａｉ，Ｃ．Ｈ．，Ｚｈａｏ，Ｘ．，Ｓａｉｔｏ，Ｓ．，Ｈａｍｉｌｔｏｎ，Ｍ．Ｈ．，Ａｐｐｅｌｌａ，Ｅ．，ａｎｄ  Ｙａｏ，Ｔ．Ｐ．（２００１）．ｐ３００／ＣＢＰ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｐ５３  ａｃｅｔｙｌａｔｉｏｎ  ｉｓ  ｃｏｍｍｏｎｌｙ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｂｙ  ｐ５３−ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ  ａｇｅｎｔｓ  ａｎｄ  ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ  ｂｙ  ＭＤＭ２．ＥＭＢＯ  Ｊ．２０，１３３１−１３４０）、その機能阻害にＨＤＡＣ１やＨＤＡＣ２が関わること（Ｊｕａｎ，Ｌ．Ｊ．，Ｓｈｉａ，Ｗ．Ｊ．，Ｃｈｅｎ，Ｍ．Ｈ．，Ｙａｎｇ，Ｗ．Ｍ．，Ｓｅｔｏ，Ｅ．，Ｌｉｎ，Ｙ．Ｓ．，ａｎｄ  Ｗｕ，Ｃ．Ｗ．（２０００）．Ｈｉｓｔｏｎｅ  Ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅｓ  Ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ  Ｄｏｗｎ−ｒｅｇｕｌａｔｅ  ｐ５３−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  Ｇｅｎｅ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７５，２０４３６−２０４４３）、前骨髄球性白血病（ＡＰＬ）の発症に関わる蛋白質ＰＭＬ−ＲＡＲやＰＬＺＦ−ＲＡＲ、リンパ腫の発症に関わるＢｃｌ−６等のがん遺伝子が、核内コリプレッサーを介してＨＤＡＣ４などをリクルートし、正常な分化に必要な遺伝子群の発現を抑制することで発がんに至ることなどが示されている（Ｄｈｏｒｄａｉｎ  Ｐ．，Ａｌｂａｇｌｉ，Ｏ．，Ｌｉｎ，Ｒ．Ｊ．，Ａｎｓｉｅａｕ，Ｓ．，Ｑｕｉｅｆ，Ｓ．，Ｌｅｕｔｚ，Ａ．，Ｋｅｒｃｋａｅｒｔ，Ｊ．Ｐ．，Ｅｖａｎｓ，Ｒ．Ｍ．，ａｎｄ  Ｌｅｐｒｉｎｃｅ，Ｄ．（１９９７）．Ｃｏｒｅｐｒｅｓｓｏｒ  ＳＭＲＴ  ｂｉｎｄｓ  ｔｈｅ  ＢＴＢ／ＰＯＺ  ｒｅｐｒｅｓｓｉｎｇ  ｄｏｍａｉｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＬＡＺ３／ＢＣＬ６  ｏｎｃｏｐｒｏｔｅｉｎ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９４，１０７６２−１０７６７；Ｇｒｉｇｎａｎｉ，Ｆ．，Ｄｅ，Ｍ．Ｓ．，Ｎｅｒｖｉ，Ｃ．，Ｔｏｍａｓｓｏｎｉ，Ｌ．，Ｇｅｌｍｅｔｔｉ，Ｖ．，Ｃｉｏｃｅ，Ｍ．，Ｆａｎｅｌｌｉ，Ｍ．，Ｒｕｔｈａｒｄｔ，Ｍ．，Ｆｅｒｒａｒａ，Ｆ．Ｆ．，Ｚａｍｉｒ，Ｉ．，Ｓｅｉｓｅｒ，Ｃ．，Ｇｒｉｇｎａｎｉ，Ｆ．，Ｌａｚａｒ，Ｍ，Ａ．，Ｍｉｎｕｃｃｉ，Ｓ．，ａｎｄ  Ｐｅｌｉｃｃｉ，Ｐ．Ｇ．（１９９８）．Ｆｕｓｉｏｎ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｒｅｔｉｎｏｉｃ  ａｃｉｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ａｌｐｈａ  ｒｅｃｒｕｉｔ  ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ  ｉｎ  ｐｒｏｍｙｅｌｏｃｙｔｉｃ  ｌｅｕｋａｅｍｉａ．Ｎａｔｕｒｅ  ３９１，８１５−８１８；Ｈｅ，Ｌ．Ｚ．，Ｇｕｉｄｅｚ，Ｆ．，Ｔｒｉｂｉｏｌｉ，Ｃ．，Ｐｅｒｕｚｚｉ，Ｄ．，Ｒｕｔｈａｒｄｔ，Ｍ．，Ｚｅｌｅｎｔ，Ａ．，ａｎｄ  Ｐａｎｄｏｌｆｉ，Ｐ．Ｐ．（１９９８）．Ｄｉｓｔｉｎｃｔ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ＰＭＬ−ＲＡＲａｌｐｈａ  ａｎｄ  ＰＬＺＦ−ＲＡＲａｌｐｈａ  ｗｉｔｈ  ｃｏ−ｒｅｐｒｅｓｓｏｒｓ  ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ｔｏ  Ｒ���  ｉｎ  ＡＰＬ．Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔ．１８，１２６−１３５；Ｌｉｎ，Ｒ．Ｊ．，Ｎａｇｙ，Ｌ．，Ｉｎｏｕｅ，Ｓ．，Ｓｈａｏ，Ｗ．，Ｍｉｌｌｅｒ，Ｗ．Ｊ．，ａｎｄ  Ｅｖａｎｓ，Ｒ．Ｍ．（１９９８）．Ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ  ｃｏｍｐｌｅｘ  ｉｎ  ａｃｕｔｅ  ｐｒｏｍｙｅｌｏｃｙｔｉｃ  ｌｅｕｋａｅｍｉａ．Ｎａｔｕｒｅ  ３９１，８１１−８１４）。その一方で、組織特異的に発現するＨＤＡＣサブタイプの中には、正常な組織の発生や分化に重要な役割を果たすものが存在することが知られ（ＭｃＫｉｎｓｅｙ，Ｔ．Ａ．，Ｚｈａｎｇ，Ｃ．Ｌ．，Ｌｕ，Ｊ．，ａｎｄ  Ｏｌｓｏｎ，Ｅ．Ｎ．（２０００）．Ｓｉｇｎａｌ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｎｕｃｌｅａｒ  ｅｘｐｏｒｔ  ｏｆ  ａ  ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ  ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  ｍｕｓｃｌｅ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ．Ｎａｔｕｒｅ  ４０８，１０６−１１１；Ｖｅｒｄｅｌ，Ａ．，ａｎｄ  Ｋｈｏｃｈｂｉｎ，Ｓ．（１９９９）．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｎｅｗ  ｆａｍｉｌｙ  ｏｆ  ｈｉｇｈｅｒ  ｅｕｋａｒｙｏｔｉｃ  ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅｓ．Ｃｏｏｒｄｉｎａｔｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｃｈｒｏｍａｔｉｎ  ｍｏｄｉｆｉｅｒｓ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７４，２４４０−２４４５）、これらを阻害しないためにはサブタイプ特異的な阻害剤の開発が必要であると考えられる。
ＨＤＡＣ６は核外輸送によって核−細胞質間をシャトルし、通常は細胞質に局在する酵素である（Ｖｅｒｄｅｌ，Ａ．，Ｃｕｒｔｅｔ，Ｓ．，Ｂｒｏｃａｒｄ，Ｍ．−Ｐ．，Ｒｏｕｓｓｅａｕｘ，Ｓ．，Ｌｅｍｅｒｃｉｅｒ，Ｃ．，Ｙｏｓｈｉｄａ，Ｍ．，ａｎｄ  Ｋｈｏｃｈｂｉｎ，Ｓ．（２０００）．Ａｃｔｉｖｅ  ｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅ  ｏｆ  ｍＨＤＡ２／ｍＨＤＡＣ６  ｈｉｓｔｏｎｅ−ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｃｙｔｏｐｌａｓｍ．Ｃｕｒｒ．Ｂｉｏｌ．１０，７４７−７４９）。ＨＤＡＣ６は精巣などで発現が高く、正常な組織の分化に関わると推定される。また、ＨＤＡＣ６は微小管の脱アセチル化に関与し、微小管の安定性を制御することが知られている（Ｍａｔｓｕｙａｍａ，Ａ．，Ｓｈｉｍａｚｕ，Ｔ．，Ｓｕｍｉｄａ，Ｙ．，Ｓａｉｔｏ，Ａ．，Ｙｏｓｈｉｍａｔｓｕ，Ｙ．，Ｓｅｉｇｎｅｕｒｉｎ−Ｂｅｒｎｙ，Ｄ．，Ｏｓａｄａ，Ｈ．，Ｋｏｍａｔｓｕ，Ｙ．，Ｎｉｓｈｉｎｏ，Ｎ．，Ｋｈｏｃｈｂｉｎ，Ｓ．，Ｈｏｒｉｎｏｕｃｈｉ，Ｓ．，ａｎｄ  Ｙｏｓｈｉｄａ，Ｍ．（２００２）．Ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｄｅｓｔａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｄｙｎａｍｉｃ  ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅｓ  ｂｙ  ＨＤＡＣ６−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｔｉｏｎ．ＥＭＢＯ  Ｊ．２１，６８２０−６８３１）。さらに、ＨＤＡＣ６は微小管に結合する脱アセチル化酵素で、細胞の運動性に関与する（Ｈｕｂｂｅｒｔ，Ｃ．，Ｇｕａｒｄｉｏｌａ，Ａ．，Ｓｈａｏ，Ｒ．，Ｋａｗａｇｕｃｈｉ，Ｙ．，Ｉｔｏ，Ａ．，Ｎｉｘｏｎ，Ａ．，Ｙｏｓｈｉｄａ，Ｍ．，Ｗａｎｇ，Ｘ．−Ｆ．，ａｎｄ  Ｙａｏ，Ｔ．−Ｐ．（２００２）．ＨＤＡＣ６  ｉｓ  ａ  ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ．Ｎａｔｕｒｅ  ４１７，４５５−４５８）。よってＨＤＡＣ６の阻害剤は転移抑制剤となる可能性がある。ＴＳＡは各ＨＤＡＣサブタイプをほぼ同等に強く阻害するが、環状テトラペプチド構造を有し、活性基としてエポキシケトンを持つトラポキシンはＨＤＡＣ６を阻害することができない（Ｆｕｒｕｍａｉ，Ｒ．，Ｋｏｍａｔｓｕ，Ｙ．，Ｎｉｓｈｉｎｏ，Ｎ．，Ｋｈｏｃｈｂｉｎ，Ｓ．，Ｙｏｓｈｉｄａ，Ｍ．，ａｎｄ  Ｈｏｒｉｎｏｕｃｈｉ，Ｓ．Ｐｏｔｅｎｔ  ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｂｕｉｌｔ  ｆｒｏｍ  ｔｒｉｃｈｏｓｔａｔｉｎ  Ａ  ａｎｄ  ｃｙｃｌｉｃ  ｔｅｔｒａｐｅｐｔｉｄｅ  ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ  ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ  ｔｒａｐｏｘｉｎ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９８：８７−９２，２００１．）。酵素の立体構造の情報から、環状テトラペプチドはあまり保存されていない酵素の活性中心の外側と相互作用するため、環状テトラペプチド部分の構造によってＨＤＡＣ６との結合性が低いと推定される。このことは環状テトラペプチド部分の改変によって様々なＨＤＡＣに選択的な阻害剤を創製できる可能性があることを示している。
ＴＳＡはヒドロキサム酸基がＨＤＡＣ活性ポケット内で亜鉛に配位することで阻害活性を示す（Ｆｉｎｎｉｎ，Ｍ．Ｓ．，Ｄｏｎｉｇｉａｎ，Ｊ．Ｒ．，Ｃｏｈｅｎ，Ａ．，Ｒｉｃｈｏｎ，Ｖ．Ｍ．，Ｒｉｆｋｉｎｄ，Ｒ．Ａ．，Ｍａｒｋｓ，Ｐ．Ａ．，Ｂｒｅｓｌｏｗ，Ｒ．，ａｎｄ  Ｐａｖｌｅｔｉｃｈ，Ｎ．Ｐ．Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ  ｏｆ  ａ  ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ  ｈｏｍｏｌｏｇｕｅ  ｂｏｕｎｄ  ｔｏ  ｔｈｅ  ＴＳＡ  ａｎｄ  ＳＡＨＡ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ．Ｎａｔｕｒｅ  ４０１：１８８−１９３，１９９９．）。ヒドロキサム酸を有するＨＤＡＣ阻害剤としては、Ｏｘａｍｆｌａｔｉｎ（Ｋｉｍ，Ｙ．Ｂ．，Ｌｅｅ，Ｋ．−Ｈ．，Ｓｕｇｉｔａ，Ｋ．，Ｙｏｓｈｉｄａ，Ｍ．，ａｎｄ  Ｈｏｒｉｎｏｕｃｈｉ，Ｓ．Ｏｘａｍｆｌａｔｉｎ  ｉｓ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ａｎｔｉｔｕｍｏｒ  ｃｏｍｐｏｕｎｄ  ｔｈａｔ  ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ｍａｍｍａｌｉａｎ  ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １８：２４６１−２４７０，１９９９．）、ＣＨＡＰ（Ｆｕｒｕｍａｉ，Ｒ．，Ｋｏｍａｔｓｕ，Ｙ．，Ｎｉｓｈｉｎｏ，Ｎ．，Ｋｈｏｃｈｂｉｎ，Ｓ．，Ｙｏｓｈｉｄａ，Ｍ．，ａｎｄ  Ｈｏｒｉｎｏｕｃｈｉ，Ｓ．Ｐｏｔｅｎｔ  ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｂｕｉｌｔ  ｆｒｏｍ  ｔｒｉｃｈｏｓｔａｔｉｎ  Ａ  ａｎｄ  ｃｙｃｌｉｃ  ｔｅｔｒａｐｅｐｔｉｄｅ  ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ  ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ  ｔｒａｐｏｘｉｎ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９８：８７−９２，２００１．，Ｋｏｍａｔｓｕ，Ｙ．，Ｔｏｍｉｚａｋｉ，Ｋ．−ｙ．，Ｔｓｕｋａｍｏｔｏ，Ｍ．，Ｋａｔｏ，Ｔ．，Ｎｉｓｈｉｎｏ，Ｎ．，Ｓａｔｏ，Ｓ．，Ｙａｍｏｒｉ，Ｔ．，Ｔｓｕｒｕｏ，Ｔ．，Ｆｕｒｕｍａｉ，Ｒ．，Ｙｏｓｈｉｄａ，Ｍ．，Ｈｏｒｉｎｏｕｃｈｉ，Ｓ．，ａｎｄ  Ｈａｙａｓｈｉ，Ｈ．Ｃｙｃｌｉｃ  Ｈｙｄｒｏｘａｍｉｃ−ａｃｉｄ−ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  ３１，ａ  ｐｏｔｅｎｔ  ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｗｉｔｈ  ａｎｔｉｔｕｍｏｒ  ａｃｔｉｖｉｔｙ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６１：４４５９−４４６６，２００１．）なども知られている。しかし、ＴＳＡは血中で不安定である上にヒドロキサム酸のキレート作用が強力なために他の必須な金属イオンとキレートを形成してしまうなどの理由で、ヒドロキサム酸を有するＨＤＡＣ阻害剤はこれまでのところ抗がん剤として実際の使用には至っていない。これに対し、最近になってＦＫ２２８のジスルフィド結合の還元により生じるチオール基が、ＨＤＡＣ活性ポケット内の亜鉛と配位する活性基となり、ＨＤＡＣを阻害し得ることが示された。このようにＦＫ２２８は、細胞内の還元力で還元されて活性化するプロドラッグである（Ｆｕｒｕｍａｉ，Ｒ．，Ｍａｔｓｕｙａｍａ，Ａ．，Ｋｏｂａｓｈｉ，Ｎ．，Ｌｅｅ，Ｋ．−Ｈ．，Ｎｉｓｈｉｙａｍａ，Ｍ．，Ｎａｋａｊｉｍａ，Ｈ．，Ｔａｎａｋａ，Ａ．，Ｋｏｍａｔｓｕ，Ｙ．，Ｎｉｓｈｉｎｏ，Ｎ．，Ｙｏｓｈｉｄａ，Ｍ．，ａｎｄ  Ｈｏｒｉｎｏｕｅｈｉ，Ｓ．（２００２）．ＦＫ２２８（ｄｅｐｓｉｐｅｐｔｉ���ｅ）ａｓ  ａ  ｎａｔｕｒａｌ  ｐｒｏｄｒｕｇ  ｔｈａｔ  ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ｃｌａｓｓ  Ｉ  ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅｓ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６２，４９１６−４９２１）。
また、天然界から環状テトラペプチド構造を有し、活性基としてエポキシケトンを持つＨＤＡＣ阻害剤が複数単離されている。このような知見から、酵素認識に対する環状テトラペプチド構造の有用性が示唆されているが（前掲Ｙｏｓｈｉｄａら，１９９５）、これまでの阻害剤は安定性などの種々の点で医薬品として十分に満足できるレベルには達したものはない。そこでそれらの問題点を解決した薬剤の開発が強く望まれている。
発明の開示
そこで、本願発明者らは、環状テトラペプチド構造を有する新規なＨＤＡＣ阻害剤およびその製造方法を提供することを目的とする。
上記課題に鑑み、本願発明者らは、チオール基およびそのジスルフィド結合を有する環状テトラペプチド構造を有する化合物を合成し、そのＨＤＡＣ阻害活性を解析した結果、ジスルフィド結合を有する化合物はｉｎ  ｖｉｔｒｏでは酵素に対してはさほど強いＨＤＡＣ阻害活性を示さないが、還元剤であるジチオスレイトールを共存させてチオール体とすると強いＨＤＡＣ阻害活性を有することが確認された。一方、細胞レベルでのジスルフィド体の活性はＴＳＡやチオール体と同様の強い活性が観察された。すなわち、ジスルフィド体は細胞内に取り込まれた後、細胞内還元でジスルフィド結合が開裂して強い活性が誘導されるＨＤＡＣ阻害剤のプロドラッグとして有用であることが示された。また、このようにチオール基を保護することにより化合物の血清中での安定性が増すとともに、保護基（−ＳＸ）に様々な機能化合物を結合させることにより、ＨＤＡＣ阻害剤以外にも所望の活性を発揮し得る化合物を連結し得る化合物であることを見出した。
即ち、本発明は、ＨＤＡＣ阻害剤およびその製造方法に関し、以下の〔１〕〜〔９〕を提供するものである。
〔１〕  以下の一般式（１）で示される化合物。
2003070754.tif 000004
［式中、Ｒ１１，Ｒ２１，Ｒ３１，Ｒ４１はそれぞれ独立して水素またはメチル基を示す。Ｒ２２，Ｒ２３，Ｒ３２，Ｒ３３，Ｒ４２，Ｒ４３はそれぞれ独立して水素、炭素数１〜６の直鎖アルキル基、非芳香族環状アルキル基もしくは置換基を有することもある芳香環が結合した炭素数１〜６の直鎖アルキル基、非芳香族環状アルキル基、または非芳香族環状アルキル基もしくは置換基を有することもある芳香環が結合した非芳香族環状アルキル基のいずれかを示す。また、Ｒ２１とＲ２２，Ｒ２２とＲ２３，Ｒ３１とＲ３２，Ｒ３２とＲ３３，Ｒ４１とＲ４２，Ｒ４２とＲ４３は、それぞれ結合を持たず非環状構造を示すか、または鎖長炭素数１〜５の直鎖アルキレン基、炭素数１〜６の分岐鎖を有する鎖長炭素数１〜５の直鎖アルキレン基、もしくは、炭素数１〜６の環構造を備えた鎮長炭素数１〜５の直鎖アルキレン基を介して結合した環構造を示す。Ｘは、水素、当該Ｘよりも左に示す構造体と同一構造、硫黄原子を含む任意の構造体であって当該硫黄原子と上記式１中の硫黄原子とがジスルフィド結合を介して結合し得る置換基を有することもあるアルキル基もしくはアリール基、または前記Ｒ２２，Ｒ２３，Ｒ３２，Ｒ３３，Ｒ４２，またはＲ４３の末端に結合し該Ｘの左に位置する硫黄原子と分子内ジスルフィド結合を形成している硫黄原子のいずれかを示す。］
〔２〕  〔１〕記載の化合物を有効成分として含有する、ヒストン脱アセチル化酵素阻害剤。
〔３〕  〔１〕記載の化合物を有効成分として含有する、アポトーシス誘導剤。
〔４〕  〔１〕記載の化合物を有効成分として含有する、分化誘導剤。
〔５〕  〔１〕記載の化合物を有効成分として含有する、血管新生阻害剤。
〔６〕  〔１〕記載の化合物を有効成分として含有する、がん転移抑制剤。
〔７〕  〔１〕記載の化合物を有効成分として含有する、ヒストン脱アセチル化酵素１または４に起因した疾患の治療または予防のための薬剤。
〔８〕  ヒストン脱アセチル化酵素１または４に起因した疾患が、がん、自己免疫疾患、皮膚病、または感染症である、〔７〕記載の治療または予防のための薬剤。
〔９〕  一般式（２）
2003070754.tif 000005
（式中、ｎは一般式（１）で定義したと同様であり、Ｈａｌは塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子のいずれかのハロゲン原子、または同様に良い脱離基となるアリルまたはアルキルスルフォキシ基のいずれを用いてもよく、Ｐ２はアミノ基の保護基を表す）で示される化合物を、一般式（３）
2003070754.tif 000006
（式中、Ｒ１１，Ｒ２１，Ｒ２２，Ｒ２３，Ｒ３１，Ｒ３２，Ｒ３３，Ｒ４１，Ｒ４２，及びＲ４３は、一般式（１）で定義したと同様であり、Ｐ２はカルボキシル基の保護基を表す）で示される化合物とペプチド結合剤の存在下で反応させ、一般式（４）
2003070754.tif 000007
（式中、ｎ，Ｒ１１，Ｒ２１，Ｒ２２，Ｒ２３，Ｒ３１，Ｒ３２，Ｒ３３，Ｒ４１，Ｒ４２，Ｒ４３，Ｐ１，Ｐ２，及びＨａｌは、前記で定義したと同様である）で示される化合物を得、次いで前記一般式（４）で示される化合物を、触媒的水素化、酸処理、もしくは加水分解により、Ｐ１及びＰ２を除去した後に、ペプチド結合剤の存在下で環化反応させ、一般式（５）
2003070754.tif 000008
（式中、ｎ，Ｒ１１，Ｒ２１，Ｒ２２，Ｒ２３，Ｒ３１，Ｒ３２，Ｒ３３，Ｒ４１，Ｒ４２，Ｒ４３，Ｐ１，Ｐ２，及びＨａｌは、前記で定義したと同様である）で示される化合物を得るか、または一般式（６）
2003070754.tif 000009
（式中、Ｒ２１，Ｒ２２，Ｒ２３，Ｒ３１，Ｒ３２，Ｒ３３，Ｒ４１，Ｒ４２，Ｒ４３，及びＰ１は、前記で定義したと同様である）で示される化合物を、一般式（７）
2003070754.tif 000010
（式中、ｎ，Ｒ１１，Ｐ２，及びＨａｌは、前記で定義したと同様である）で示される化合物とペプチド結合剤存在下で反応させ、一般式（８）
2003070754.tif 000011
（式中、ｎ，Ｒ１１，Ｒ２１，Ｒ２２，Ｒ２３，Ｒ３１，Ｒ３２，Ｒ３３，Ｒ４１，Ｒ４２，Ｒ４３，Ｐ１，Ｐ２，及びＨａｌは、前記で定義したと同様である）で示される化合物を得、次いで一般式（８）で示される化合物を、触媒的水素化、酸処理、フルオリドアニオン処理、もしくは加水分解によりＰ１及びＰ２を除去した後に、ペプチド結合剤の存在下で環化反応させて、上記一般式（５）で示される化合物を得、次いで一般式（５）で示される化合物を、硫黄原子を含む試薬と反応させ、一般式（９）
2003070754.tif 000012
（式中、ｎ，Ｒ１１，Ｒ２１，Ｒ２２，Ｒ２３，Ｒ３１，Ｒ３２，Ｒ３３，Ｒ４１，Ｒ４２，及びＲ４３は、前記で定義したと同様であり、Ｐ３はスルフィドリル基の保護基を表す）で示される化合物を得、次いで一般式（９）で示される化合物をアンモニアまたは他のアミン類及び酸化剤で処理することを含む、〔１〕記載の化合物の製造方法。
以下、本発明の実施の形態について図面に基づき詳細に説明する。
本発明の化合物は、上記の一般式（１）で示すことができる。このような化合物はＨＤＡＣ阻害剤として使用できる。
上記式（１）中、Ｒ１１，Ｒ２１，Ｒ３１，Ｒ４１はそれぞれ独立して水素またはメチル基とすることができる。また、Ｒ２２，Ｒ２３，Ｒ３２，Ｒ３３，Ｒ４２，Ｒ４３は、それぞれ独立して水素、炭素数１〜６の直鎖アルキル基、または非芳香族環状アルキル基のいずれかとすることができ、ここで、炭素数１〜６の直鎖アルキル基および非芳香族環状アルキル基には、非芳香族環状アルキル基、芳香環もしくは置換基を有する芳香環が結合していてもよい。また、Ｒ２１とＲ２２，Ｒ２２とＲ２３，Ｒ３１とＲ３２，Ｒ３２とＲ３３，Ｒ４１とＲ４２，Ｒ４２とＲ４３は、それぞれ結合を持たず非環状構造をとってもよく、また鎖長炭素数１〜５の直鎖アルキレン基、炭素数１〜６の分岐鎖を有する鎖長炭素数１〜５の直鎖アルキレン基、もしくは炭素数１〜６の環構造を備えた鎖長炭素数１〜５の直鎖アルキレン基を介して結合した環構造を形成していてもよい。この環状テトラペプチド構造部分はＨＤＡＣのポケットをふさぐキャップとして機能し得ると考えられるため、このキャップ構造として機能し得る範囲で、上記炭素数１〜６の直鎖アルキル基、芳香族環状アルキル基、これらの置換基となり得る芳香族を任意に選択することができる。
また、式（１）中、Ｘを水素とし、隣り合う硫黄原子とともに直接ＨＤＡＣ阻害活性を示すチオール基を形成させてもよい。ただし、Ｘを水素とし、チオール基を露出させた場合には、生体内で不安定となる。そのため、Ｘを水素とした場合には、ドラッグデリバリーシステムなどのように所望の部位まで安定に輸送し得る手段と組み合わせることが好ましい。また、ＨＤＡＣ阻害活性を有するチオール基の安定性を高めるために、Ｘには生体内で代謝され、生体に有害でない置換基を用いることが好ましい。このような置換基としては、当該Ｘと隣り合う硫黄原子とジスルフィド結合を形成し得る硫黄原子を備えた置換基とすることが好ましく、置換基自身で何らかの効能を示すものであってもよく、また、単に保護基としての機能を備えているものであってもよい。このような硫黄原子を含む置換基としては、当該Ｘよりも左に示す構造体と同一構造体、硫黄原子を含む任意の構造体であって当該硫黄原子と上記式（１）中の硫黄原子とジスルフィド結合を介して結合し得るアルキル基もしくはアリール基、または前記Ｒ２２，Ｒ２３，Ｒ３２，Ｒ３３，Ｒ４２，またはＲ４３の末端に結合し該Ｘの左に位置する硫黄原子と分子内ジスルフィド結合を形成している硫黄原子などとすることができる。ここで、置換基を当該Ｘよりも左に示す構造体と同一構造体とした場合には、ダイマー構造となり、生体内における代謝によりジスルフィド結合が切断されて、２分子の活性を有するＨＤＡＣ阻害剤が遊離することになる。また、硫黄原子を有する任意のアルキル基もしくはアリール基は、さらに置換基などを備えていてもよく、また、ＨＤＡＣ阻害剤と同じあるいは異なる効能を発揮し得る構造体としてもよい。
本発明においては、例えば、メチルメルカプタン、ベンジルメルカプタン、シクロヘキシルメルカプタン等のアルキルメルカプタンおよびチオフェノール、メルカプトピリジン等の芳香族メルカプタンに加え、５−アザデオキシシチジンやレチノイン酸等の天然生理活性物質の構造中の一部の原子団をチオール基で置換したアルキルメルカプタンまたはアリルメルカプタンもＳＳ−ハイブリッドのＸ原子団として挙げられるが、好ましくはメチルメルカプタン、エチルメルカプタン、メルカプトエタノール、システアミン、システイン、チオフェノール、２−メルカプトピリジン、４−メルカプトピリジン、５’−メルカプト−５−アザデオキシシチジン、３’−メルカプト５−アザデオキシシチジン、チオレチノールが挙げられる。
また、本発明において式（１）中、環ｎはＨＤＡＣ阻害活性を有する範囲で選択することができ、例えば、ｎは好ましくは４〜７、最も好ましくは５である。この環状テトラペプチド構造から硫黄原子までの炭素数ｎからなる炭素鎖は、ＨＤＡＣの活性ポケット部分に侵入し、この炭素鎖先端の活性チオール基をＨＤＡＣのポケット内の亜鉛分子に接触させＨＤＡＣを阻害する機能を有すると考えられる。
なお、本発明の化合物の代表的な例を図１から３に示すが、本発明の化合物はこれらに限定されるものではない。
また、以下に本発明の化合物の製造方法について説明する。本実施形態の化合物は、２−アミノ−ｎ−ハロアルカン酸を原料として以下の通り製造することができる。なお、Ｒ１１，Ｒ２１，Ｒ２２，Ｒ２３，Ｒ３１，Ｒ３２，Ｒ３３，Ｒ４１，Ｒ４２，Ｒ４３、およびｎなどの定義は上述の説明で述べた定義と同一であるので、ここではその説明を省略する。
本発明における化合物の製造方法の第一の態様は、２−アミノ−ｎ−ハロアルカン酸のアミノ基に保護基Ｐ１を備えた以下の一般式（２）を原料として製造する方法である。具体的には、一般式（２）
2003070754.tif 000013
で示される化合物、一般式（３）
2003070754.tif 000014
で示される化合物とペプチド結合剤の存在下で反応させ、一般式（４）
2003070754.tif 000015
で示される化合物を得る。これら式中、Ｈａｌは塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子のいずれかのハロゲン原子、または同様に良い脱離基となるアリルまたはアルキルスルフォキシ基のいずれを用いてもよく、Ｐ２はアミノ基の保護基を表す。
次いで前記一般式（４）で示される化合物を、触媒的水素化、酸処理、もしくは加水分解により、Ｐ１及びＰ２を除去した後に、ペプチド結合剤の存在下で環化反応させ、一般式（５）
2003070754.tif 000016
で示される化合物を得る。次いで、一般式（５）で示される化合物を、硫黄原子を含む試薬と反応させ、一般式（９）
2003070754.tif 000017
で示される化合物を得、次いで一般式（９）で示される化合物をアンモニアまたは他のアミン類及び酸化剤で処理することにより、ジスルフィド結合を有するプロドラッグ型の化合物（ダイマー型、ハイブリッド型）が形成される。なお、式（９）中、Ｐ３はスルフィドリル基の保護基を表す。これを活性を有するチオール型の化合物に分離するには、還元剤またはジスルフィド結合を消化し得る酵素により処理すればよい。
本発明の化合物の製造方法の第二の態様は、２−アミノ−ｎ−ハロアルカン酸のカルボキシル基に保護基Ｐ２を備えた以下の一般式（７）を原料として製造する方法である。具体的には、一般式（６）
2003070754.tif 000018
で示される化合物を、一般式（７）
2003070754.tif 000019
で示される化合物とペプチド結合剤存在下で反応させ、一般式（８）
2003070754.tif 000020
で示される化合物を得る。次いで一般式（８）で示される化合物を、触媒的水素化、酸処理、フルオリドアニオン処理、もしくは加水分解によりＰ１及びＰ２を除去した後に、ペプチド結合剤の存在下で環化反応させて、上記一般式（５）で示される化合物を得る。次いで一般式（５）で示される化合物を、硫黄原子を含む試薬と反応させ、一般式（９）
2003070754.tif 000021
で示される化合物を得、次いで一般式（９）で示される化合物をアンモニアまたは他のアミン類及び酸化剤で処理することによりジスルフィド結合を有するプロドラッグ型の化合物（ダイマー型、ハイブリッド型）が形成される。上記第一の態様と同様に、活性を有するチオール型の化合物に分離するには、還元剤またはジスルフィド結合を消化し得る酵素により処理すればよい。
ＨＤＡＣを阻害する化合物が、がん細胞、白血病細胞、および神経細胞などの分化を誘導すること、アポトーシスを誘導すること、また、がんの転移を抑制することが以前から知られている（Ｙｏｓｈｉｄａ，Ｍ．，Ｎｏｍｕｒａ，Ｓ．，ａｎｄ  Ｂｅｐｐｕ，Ｔ．Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｔｒｉｃｈｏｓｔａｔｉｎｓ  ｏｎ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍｕｒｉｎｅ  ｅｒｙｔｈｒｏｌｅｕｋｅｍｉａ  ｃｅｌｌｓ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．４７：３６８８−３６９１，１９８７；Ｈｏｓｈｉｋａｗａ，Ｙ．，Ｋｉｊｉｍａ，Ｍ．，Ｙｏｓｈｉｄａ，Ｍ．，ａｎｄ  Ｂｅｐｐｕ，Ｔ．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｍａｒｋｅｒｓ  ｉｎ  ｔｅｒａｔｏｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｃｅｌｌｓ  ｖｉａ  ｈｉｓｔｏｎｅ  ｈｙｐｅｒａｃｅｔｙｌａｔｉｏｎ  ｂｙ  ｔｒｉｃｈｏｓｔａｔｉｎ  Ａ．Ａｇｒｉｃ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．５５：１４９１−１４９５，１９９１；Ｍｉｎｕｃｃｉ，Ｓ．，Ｈｏｒｎ，Ｖ．，Ｂｈａｔｔａｃｈａｒｙｙａ，Ｎ．，Ｒｕｓｓａｎｏｖａ，Ｖ．，Ｏｇｒｙｚｋｏ，Ｖ．Ｖ．，Ｇａｂｒｉｅｌｅ，Ｌ．，Ｈｏｗａｒｄ，Ｂ．Ｈ．，ａｎｄ  Ｏｚａｔｏ，Ｋ．Ａ  ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｐｏｔｅｎｔｉａｔｅｓ  ｒｅｔｉｎｏｉｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｅｍｂｒｙｏｎａｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｃｅｌｌｓ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９４：１１２９５−１１３００，１９９７；Ｉｎｏｋｏｓｈｉ，Ｊ．，Ｋａｔａｇｉｒｉ，Ｍ．，Ａｒｉｍａ，Ｓ．，Ｔａｎａｋａ，Ｈ．，Ｈａｙａｓｈｉ，Ｍ．，Ｋｉｍ，Ｙ．Ｂ．，Ｆｕｒｕｍａｉ，Ｒ．，Ｙｏｓｈｉｄａ，Ｍ．，Ｈｏｒｉｎｏｕｃｈｉ，Ｓ．，ａｎｄ  Ｏｍｕｒａ，Ｓ．（１９９９）．Ｎｅｕｒｏｎａｌ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏ  ２ａ  ｃｅｌｌｓ  ｂｙ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  ｃｅｌｌ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ，ｔｒｉｃｈｏｓｔａｔｉｎ  Ａ  ａｎｄ  ｂｕｔｙｒｏｌａｃｔｏｎｅ  Ｉ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２５６，３７２−３７６；Ｗａｎｇ，Ｊ．，Ｓａｕｎｔｈａｒａｒａｊａｈ，Ｙ．，Ｒｅｄｎｅｒ，Ｒ．Ｌ．，ａｎｄ  Ｌｉｕ，Ｊ．Ｍ．Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ  ｒｅｌｉｅｖｅ  ＥＴＯ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｒｅｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  ｉｎｄｕｃｅ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＡＭＬ１−ＥＴＯ  ｌｅｕｋｅｍｉａ  ｃｅｌｌｓ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５９：２７６６−２７６９，１９９９；Ｍｕｎｓｔｅｒ，Ｐ．Ｎ．，Ｔｒｏｓｏ−Ｓａｎｄｏｖａｌ，Ｔ．，Ｒｏｓｅｎ，Ｎ．，Ｒｉｆｋｉｎｄ，Ｒ．，Ｍａｒｋｓ，Ｐ．Ａ．，ａｎｄ  Ｒｉｃｈｏｎ，Ｖ．Ｍ．Ｔｈｅ  ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ  ｉｎ  ｈｉｂｉｔｏｒ  ｓｕｂｅｒｏｙｌａｎｉｌｉｄｅ  ｈｙｄｒｏｘａｍｉｃ  ａｃｉｄ  ｉｎｄｕｃｅｓ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌｓ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６１：８４９２−８４９７，２００１；Ｆｅｒｒａｒａ，Ｆ．Ｆ．，Ｆａｚｉ，Ｆ．，Ｂｉａｎｃｈｉｎｉ，Ａ．，Ｐａｄ���ｌａ，Ｆ．，Ｇｅｌｍｅｔｔｉ，Ｖ．，Ｍｉｎｕｃｃｉ，Ｓ．，Ｍａｎｃｉｎｉ，Ｍ．，Ｐｅｌｉｃｃｉ，Ｐ．Ｇ．，Ｌｏ  Ｃｏｃｏ，Ｆ．，ａｎｄ  Ｎｅｒｖｉ，Ｃ．  Ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ−ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｒｅｓｔｏｒｅｓ  ｒｅｔｉｎｏｉｃ  ａｃｉｄ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ａｎｄ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｉｎ  ａｃｕｔｅ  ｍｙｅｌｏｉｄ  ｌｅｕｋｅｍｉａ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６１：２−７，２００１；Ｇｏｔｔｌｉｃｈｅｒ，Ｍ．，Ｍｉｎｕｃｃｉ，Ｓ．，Ｚｈｕ，Ｐ．，Ｋｒａｍｅｒ，Ｏ．Ｈ．，Ｓｃｈｉｍｐｆ，Ａ．，Ｇｉａｖａｒａ，Ｓ．，Ｓｌｅｅｍａｎ，Ｊ．Ｐ．，Ｌｏ  Ｃｏｃｏ，Ｆ．，Ｎｅｒｖｉ，Ｃ．，Ｐｅｌｉｃｃｉ，Ｐ．Ｇ．，ａｎｄ  Ｈｅｉｎｚｅｌ，Ｔ．Ｖａｌｐｒｏｉｃ  ａｃｉｄ  ｄｅｆｉｎｅｓ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｃｌａｓｓ  ｏｆ  ＨＤＡＣ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｉｎｄｕｃｉｎｇ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄ  ｃｅｌｌｓ．ＥＭＢＯ  Ｊ．２０：６９６９−６９７８，２００１）。よって、本発明の化合物は、アポトーシス誘導剤、分化誘導剤、およびがん転移抑制剤として利用できる。
また、ＨＤＡＣを阻害する化合物は、血管新生を阻害すると予想されている（Ｋｉｍ，Ｍ．Ｓ．，Ｋｗｏｎ，Ｈ．Ｊ．，Ｌｅｅ，Ｙ．Ｍ．，Ｂａｅｋ，Ｊ．Ｈ．，Ｊａｎｇ，Ｊ．Ｅ．，Ｌｅｅ，Ｓ．Ｗ．，Ｍｏｏｎ，Ｅ．Ｊ．，Ｋｉｍ，Ｈ．Ｓ．，Ｌｅｅ，Ｓ．Ｋ．，Ｃｈｕｎｇ，Ｈ．Ｙ．，Ｋｉｍ，Ｃ．Ｗ．，ａｎｄ  Ｋｉｍ，Ｋ．Ｗ．（２００１）．Ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅｓ  ｉｎｄｕｃｅ  ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｂｙ  ｎｅｇａｔｉｖｅ  ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｕｍｏｒ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ  ｇｅｎｅｓ．Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄ．７，４３７−４４３；Ｋｗｏｎ，Ｈ．Ｊ．，Ｋｉｍ，Ｍ．Ｓ．，Ｋｉｍ，Ｍ．Ｊ．，Ｎａｋａｊｉｍａ，Ｈ．，ａｎｄ  Ｋｉｍ，Ｋ．Ｗ．（２００２）．Ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ＦＫ２２８  ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ｔｕｍｏｒ  ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ．Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ９７，２９０−２９６）。よって、本発明の化合物は、血管新生阻害剤としても利用できる。
また、本発明の化合物は、種々のＨＤＡＣのうち、ＨＤＡＣ１，４に対して選択的に強い阻害活性を示す。そのため、本発明の化合物は、ＨＤＡＣ１，４に起因した疾患の治療または予防のための薬剤として有用になる。この疾患としては、がん以外にも、ＨＤＡＣ１，４が関与した自己免疫疾患、皮膚病、感染症などを含めることができる。また、本発明の化合物は、上記疾患の治療または予防のための薬剤への応用だけでなく、遺伝子治療におけるベクター導入の効率化、導入遺伝子の発現亢進などのような遺伝子治療の補助剤あるいは促進剤として応用してもよい。
また、本発明の化合物はレチノイン酸やＤＮＡメチル化阻害剤と併用することができる。本発明は、このような併用剤もまた提供するものである。
本発明の化合物を製剤化する場合には、必要に応じて充填剤、増量剤、結合剤、保湿剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤等の希釈剤あるいは賦形剤を用いることができる。また、この医薬製剤中に着色剤、保存剤、香料、風味剤、甘味剤等や他の医薬品を医薬製剤中に含有させてもよい。この医薬製剤としては各種の形態が治療目的または予防目的に応じて選択でき、例えば、錠剤、丸剤、散剤、液剤、懸濁剤、乳剤、顆粒剤、カプセル剤、注射剤、坐剤等が挙げられる。
錠剤、カプセル剤に混和することができる添加剤としては、例えばゼラチン、コーンスターチ、トラガントガム、アラビアゴムのような結合剤、結晶性セルロースのような賦形剤、コーンスターチ、ゼラチン、アルギン酸のような膨化剤、ステアリン酸マグネシウムのような潤滑剤、ショ糖、乳糖又はサッカリンのような甘味剤、ペパーミント、アカモノ油又はチェリーのような香味剤が用いられる。調剤単位形態がカプセルである場合には、上記の材料にさらに油脂のような液状担体を含有することができる。
また、注射用の水溶液としては、例えば生理食塩水、ブドウ糖やその他の補助薬を含む等張液、例えばＤ−ソルビトール、Ｄ−マンノース、Ｄ−マンニトール、塩化ナトリウムが挙げられ、適当な溶解補助剤、例えばアルコール、具体的にはエタノール、ポリアルコール、例えばプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、非イオン性界面活性剤、例えばポリソルベート８０ＴＭ、ＨＣＯ−５０と併用してもよい。
油性液としてはゴマ油、大豆油があげられ、溶解補助剤として安息香酸ベンジル、ベンジルアルコールと併用してもよい。また、緩衝剤、例えばリン酸塩緩衝液、酢酸ナトリウム緩衝液、無痛化剤、例えば、塩酸プロカイン、安定剤、例えばベンジルアルコール、フェノール、酸化防止剤と配合してもよい。調製された注射液は通常、適当なアンプルに充填させる。
患者への投与は、経口、非経口投与のいずれでも可能である。非経口投与の剤型としては、例えば、注射剤型、経鼻投与剤型、経肺投与剤型、経皮投与型などが挙げられる。注射剤型の例としては、例えば、静脈内注射、筋肉内注射、腹腔内注射、皮下注射などにより全身または局部的に投与することができる。また、鼻腔内的、経気管支的、筋内的、経皮的、または経口的に当業者に公知の方法により投与しうる。
本発明の化合物を非経口的に投与する場合は、その１回投与量は投与対象、対象臓器、症状、投与方法によっても異なるが、例えば注射剤の形では通常成人（体重６０ｋｇとして）においては、通常、１日当り約０．０１から３０ｍｇ、好ましくは約０．１から２０ｍｇ、より好ましくは約０．１から１０ｍｇ程度を静脈注射により投与するのが好都合であると考えられる。他の動物の場合も、体重６０ｋｇ当たりに換算した量、あるいは体表面積あたりに換算した量を投与することができる。
また、本発明の化合物を経口的に投与する場合は、その１回投与量は投与対象、対象臓器、症状、投与方法によっても異なるが、例えば通常成人（体重６０ｋｇとして）においては、１日あたり約１００μｇから２０ｍｇであると考えられる。
発明を実施するための最良の形態
本実施例で示す化合物の合成工程の全体の流れを図１、２に示し、Ｈ−Ｌ−Ａｂ７−ＯＨを出発原料として各合成工程について以下に詳細に説明する。なお、ここでは２−ａｍｉｎｏ−７−ｂｒｏｍｏｈｅｐｔａｎｏｉｃ  ａｃｉｄを「Ａｂ７」と、２−ａｍｉｎｏ−７−ａｃｅｔｙｌｔｉｏｈｅｐｔａｎｏｉｃ  ａｃｉｄを「Ａｍ７（Ａｃ）」と、２−ａｍｉｎｏ−７−ｍｅｒｃａｐｔｏｈｅｐｔａｎｉｏｃ  ａｃｉｄを「Ａｍ７」と、ｓｕｌｆｉｄｅ  ｏｆ  ２−ａｍｉｎｏ−７−ｍｅｒｃａｐｔｏｈｅｐｔａｎｉｏｃ  ａｃｉｄを「Ａｍ７（−）」と、２−ａｍｉｎｏ−８．９−ｄｉｍｅｒｃａｐｔｏ（Ｓ９−２’−ｎｉｔｒｏ−Ｎ，Ｎ’−ｄｉｍｅｔｈｙｌ  ｂｅｎｚａｍｉｄｅ）を「Ａｍ７（Ｅｌｌ）」と、２−ａｍｉｎｏ−８，９−ｄｉｍｅｒｃａｐｔｏ−１１−ｈｙｄｒｏｘｙｕｎｄｅｃａｎｏｉｃ  ａｃｉｄを「Ａｍ７（ＳＭＥｔ）」と、２−ａｍｉｎｏ−８．９−ｄｉｍｅｒｃａｐｔｏ（Ｓ９−２’−ｐｙｒｉｄｙｌ）ｎｏｎａｎｏｉｃ  ａｃｉｄを「Ａｍ７（Ｓ２Ｐｙ）」と、２−ａｍｉｎｏ−８．９−ｄｉｍｅｒｃａｐｔｏ（Ｓ９−４’−ｐｙｒｉｄｙｌ）ｎｏｎａｎｏｉｃ  ａｃｉｄを「Ａｍ７（Ｓ４Ｐｙ）」と、２−ａｍｉｎｏ−８，９−ｄｉｍｅｒｃａｐｔｏｄｅｃａｎｏｉｃ  ａｃｉｄを「Ａｍ７（ＳＭｅ）」と略す。また、合成化合物であるＳｕｌｆｕｒ−ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ｃｙｃｌｉｃ  ｐｅｐｔｉｄｅｓを「ＳＣＯＰ」と略して示す。
実施例１．  Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｂ７−ＯＨの合成
Ｈ−Ｌ−Ａｂ７−ＯＨ（７．３ｇ，３２．４ｍｍｏｌ）を水：ジオキサン＝１：１溶液（３０ｍｌ，ｖ／ｖ）に溶解し、氷冷下（Ｂｏｃ）２Ｏ（７．６８ｇ，３５．６ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（６．７２ｍｌ，４８．６ｍｍｏｌ）を加え５時間攪拌した。反応液を留去後、エーテルで洗い、水相をクエン酸で酸性にして酢酸エチルで逆抽出した。ＭｇＳＯ４で乾燥後、酢酸エチルを留去し、減圧下乾燥後に油状の標記化合物（１０．４ｇ，３２．４ｍｍｏｌ，収率１００％）を得た。
実施例２．  Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｂ７−ＮＨＭｅの合成
Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｂ７−ＯＨ（３２６ｍｇ，１．０ｍｍｏｌ），塩酸モノメチルアミン（８１ｍｇ，１．２ｍｍｏｌ），ＨＯＢｔ・Ｈ２Ｏ（１８４ｍｇ，１．２ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３ｍｌ）溶液に氷冷下でトリエチルアミン（０．１７ｍｌ，１．２ｍｍｏｌ）及びＤＣＣ（２４７ｍｇ，１．２ｍｍｏｌ）を加えた。１５時間攪拌後、ＤＭＦを留去し、酢酸エチルに溶解し、１０％クエン酸水溶液、４％炭酸水素ナトリウム水溶液及び飽和食塩水で順次洗浄した。ＭｇＳＯ４で乾燥後、濃縮、油状物をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（３．６ｘ１５ｃｍ，クロロホルム）で精製し、エーテル／石油エーテル（１：１０）を加えて固化し、白色粉末の標記化合物（２５０ｍｇ，０．７４ｍｍｏｌ，収率７４％）を得た。ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．５８（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ＝９／１）
実施例３．  Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｍ７（Ａｃ）−ＮＨＭｅの合成
Ｂｏｃ−Ａｂ７−ＮＨＭｅ（１２５ｍｇ，０．３７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２ｍｌ）溶液に、チオ酢酸カリウム（６４ｍｇ，０．５６ｍｍｏｌ）を加えて３時間反応させた。ＤＭＦを留去し、酢酸エチルに溶解し、１０％クエン酸水溶液及び飽和食塩水で順次洗浄した後、ＭｇＳＯ４で乾燥、濃縮、エーテル／石油エーテル（１：１０）を加えて固化し、白色粉末の標記化合物（１２０ｍｇ，０．３６ｍｍｏｌ，収率９７％）を得た。ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．５７（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ＝９／１）
実施例４．  Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｍ７（−）−ＮＨＭｅ  ＳＳ  ｄｉｍｅｒの合成
Ｂｏｃ−Ａｍ７（Ａｃ）−ＮＨＭｅ（６０ｍｇ，０．１８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（０．５ｍｌ）溶液にメタノール性アンモニア（２０ｅｑ．）を加え、２４時間撹拌した。反応液を濃縮後、生成したＳＳ  ｄｉｍｅｒをフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（１．５×３０ｃｍ，１％メタノール／クロロホルム）で精製し、白色粉末の標記化合物（４３ｍｇ，０．１１ｍｍｏｌ，収率６１％）を得た。ＨＰＬＣ保持時間、８．５ｍｉｎ，ＨＲＭＳ（ＦＡＢ，ｄｉｔｈｉｏｄｉｅｔｈａｎｏｌ），５７９．３２９３［Ｍ＋Ｈ］，Ｃ２６Ｈ５１Ｏ６Ｎ４Ｓ２（５７９．３２５０）．
実施例５．  Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｍ７（Ｓ４Ｐｙ）−ＮＨＭｅの合成
Ｂｏｃ−Ａｍ７（Ａｃ）−ＮＨＭｅ（６０ｍｇ，０．１８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（０．５ｍｌ）溶液に４，４’−ジチオジピリジン（７９ｍｇ．０．３６ｍｍｏｌ）及びメタノール性アンモニア（２０ｅｑ．）を加え、５時間撹拌した。反応液を濃縮後、油状物をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（１．５×３０ｃｍ，クロロホルム）で精製し、凍結乾燥を行い、標記化合物（４３ｍｇ，０．１１ｍｍｏｌ，収率６１％）を得た。ＨＰＬＣ保持時間、５．６ｍｉｎ，ＨＲＭＳ（ＦＡＢ，ｄｉｔｈｉｏｄｉｅｔｈａｎｏｌ），４００．１７６６［Ｍ＋Ｈ］，Ｃ１８Ｈ２９Ｏ３Ｎ３Ｓ２（４００．１７２９）．
実施例６．  Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｂ７−ＯＢｚｌの合成
Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｂ７−ＯＨ（４．０５ｇ，１２．５ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（２０ｍｌ）に溶解し、氷冷下ベンジルアルコール（１．５５ｍｌ，１５．０ｍｍｏｌ），４−ジメチルアミノピリジン（１５３ｍｇ，１．２５ｍｍｏｌ）及びＤＣＣ（３．０９ｇ，１５．０ｍｍｏｌ）を加え８時間撹拌を行った。反応液を留去後、酢酸エチルに溶解し、１０％クエン酸水溶液、４％炭酸水素ナトリウム水溶液及び飽和食塩水で順次洗浄した。ＭｇＳＯ４で乾燥後、濃縮、油状物をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（５×２０ｃｍ，２０％酢酸エチル／ヘキサン）で精製し、油状の標記化合物（４．２９ｇ，１０．４ｍｍｏｌ，収率８３％）を得た。ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．４９（酢酸エチル／ヘキサン＝１／４）
実施例７．  Ｂｏｃ−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｌ−Ｐｒｏ−ＯＢｚｌの合成
Ｂｏｃ−Ｌ−Ｐｒｏ−ＯＨ（１．０８ｇ，５．０ｍｍｏｌ）とベンジルブロミド（０．８９３ｍｌ，７５ｍｍｏｌ）とをＤＭＦ（１０ｍｌ）中、氷冷下でトリエチルアミン（１０．５ｍｌ，７５ｍｍｏｌ）存在下で反応させて、生じたＢｏｃ−Ｌ−Ｐｒｏ−ＯＢｚｌを油状物として得た。これを氷冷下２ＮＨＣｌ／ジオキサン（５ｅｑ．）で３時間反応させて、Ｈ−Ｌ−Ｐｒｏ−ＯＢｚｌ・ＨＣｌを得た。
Ｂｏｃ−Ｌ−Ｉｌｅ−ＯＨ・１／２Ｈ２Ｏ（１．３９ｇ，６．０ｍｍｏｌ），Ｈ−Ｄ−Ｐｒｏ−ＯＢｚｌ・ＨＣｌ（９５６ｍｇ，４．０ｍｍｏｌ）及びＨＯＢｔ・Ｈ２Ｏ（６１３ｍｇ，４．０ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１０ｍｌ）溶液に氷冷下でＤＣＣ（１．２４ｇ，６．０ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（０．７０ｍｌ，４．０ｍｍｏｌ）を加えた。８時間撹拌後、ＤＭＦを留去し、酢酸エチルに溶解し、１０％クエン酸水溶液、４％炭酸水素ナトリウム水溶液及び飽和食塩水で順次洗浄した。ＭｇＳＯ４で乾燥後、濃縮、油状物をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（４×３０ｃｍ，１％メタノール／クロロホルム）で精製し、油状の標記化合物（１．６３ｇ，３．３８ｍｍｏｌ，収率８５％）を得た。ＴＬＣ：Ｒｆ＝（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ＝９／１）
実施例８．  Ｂｏｃ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｌ−Ｐｒｏ−ＯＢｚｌの合成
Ｂｏｃ−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｌ−Ｐｒｏ−ＯＢｚｌ（１．６３ｇ，３．３８ｍｍｏｌ）をＴＦＡ（５ｍｌ）に溶解し、氷冷下３０分間放置した。反応終了後ＴＦＡを留去し、減圧下乾燥し、Ｈ−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｌ−Ｐｒｏ−ＯＢｚｌ・ＴＦＡを得た。これをＤＭＦ（８ｍｌ）に溶解させ、Ｂｏｃ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−ＯＨ（１．５０ｇ，５．０７ｍｍｏｌ）を加え、続いて氷冷下ＨＢＴＵ（１．９２ｇ，５．０７ｍｍｏｌ），ＨＯＢｔ・Ｈ２Ｏ（５１８ｍｇ，３．３８ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（２．３７ｍｌ，１６．９ｍｍｏｌ）を加え、３時間撹拌した。反応液を濃縮後、酢酸エチルに溶解し、１０％クエン酸水溶液、４％炭酸水素ナトリウム水溶液及び飽和食塩水で順次洗浄した。ＭｇＳＯ４で乾燥後、濃縮、フォーム状物をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（４×３０ｃｍ，１％メタノール／クロロホルム）で精製し、フォーム状の標記化合物（１．４４ｇ，２．４２ｍｍｏｌ，収率７２％）を得た。ＴＬＣ：Ｒｆ＝（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ：９／１）
実施例９．  Ｂｏｃ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｌ−Ｐｒｏ−Ｌ−Ａｂ７−ＯＢｚｌの合成
Ｂｏｃ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｌ−Ｐｒｏ−ＯＢｚｌ（１．４４ｇ，２．４２ｍｍｏｌ）をメタノール（１２ｍｌ）に溶解し、５％Ｐｄ−Ｃ（１５０ｍｇ）存在下接触還元を行った。５時間後、Ｐｄ−Ｃ触媒を濾過し、反応液を留去後、Ｂｏｃ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｌ−Ｐｒｏ−ＯＨ・ＴＦＡを得た。
Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｂ７−ＯＢｚｌ（１．２９ｇ，３．１２ｍｍｏｌ）をＴＦＡ（１０ｍｌ）に溶解し、氷冷下３０分間放置した。反応終了後ＴＦＡを留去し、減圧下乾燥し、Ｈ−Ｌ−Ａｂ７−ＯＨ・ＴＦＡを得た。これをＤＭＦ（１６ｍｌ）に溶解させ、Ｂｏｃ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｌ−Ｐｒｏ−ＯＨ（１．２１ｇ，２．４０ｍｍｏｌ）を加え、続いて氷冷下ＨＢＴＵ（１．１８ｇ，３．１２ｍｍｏｌ），ＨＯＢｔ・Ｈ２Ｏ（３６８ｍｇ，２．４０ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（１．３４ｍｌ，９．６ｍｍｏｌ）を加え、３時間撹拌した。反応液を濃縮後、酢酸エチルに溶解し、１０％クエン酸、４％炭酸水素ナトリウム水溶液及び飽和食塩水で順次洗浄した。ＭｇＳＯ４で乾燥後、濃縮、フォーム状物をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（４×３０ｃｍ，２％メタノール／クロロホルム）で精製し、フォーム状の標記化合物（１．２０ｇ，１．４７ｍｍｏｌ，収率６１％）を得た。ＴＬＣ：Ｒｆ＝（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ＝９／１）
実施例１０．  Ｈ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｌ−Ｐｒｏ−Ｌ−Ａｂ７−ＯＨ・ＴＦＡの合成
Ｂｏｃ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｌ−Ｐｒｏ−Ｌ−Ａｂ７−ＯＢｚｌ（１．２０ｇ，１．４７ｍｍｏｌ）をメタノール（７．５ｍｌ）に溶解し、Ｐｄ−Ｃ触媒（１３０ｍｇ）下、接触還元を行った。５時間後、Ｐｄ−Ｃ触媒を濾過し、反応液を留去後、Ｂｏｃ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｌ−Ｐｒｏ−Ｌ−Ａｂ７−ＯＨを得た。これをＴＦＡ（５ｍｌ）に溶解し、氷冷下３０分間放置した。反応液を留去後、エーテル／石油エーテル（１：１０）を加えて固化し、減圧下乾燥後に標記化合物（７７０ｍｇ，１．０２ｍｍｏｌ，収率６９％）を得た。
実施例１１．  Ｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ａｂ７−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｌ−Ｐｒｏ−）の合成
Ｈ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｌ−Ｐｒｏ−Ｌ−Ａｂ７−ＯＨ・ＴＦＡ（７７０ｍｇ，１．０２ｍｍｏｌ），ＨＡＴＵ（３８８ｍｇ，１．５３ｍｍｏｌ）及びＤＩＥＡ（０．７１ｍｌ）を５分割して３０分毎にＤＭＦ（１０００ｍｌ）に加えて、環化反応を行った。２時間後溶媒を留去して残渣を酢酸エチルに取り、１０％クエン酸水溶液、４％ＮａＨＣＯ３及び飽和食塩水で順次洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥した。酢酸エチルを留去して残った油状物をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（４×３０ｃｍ，２％メタノール／クロロホルム）で精製し、フォーム状物１３０ｍｇ（２１％）を得た。ＨＰＬＣ保持時間、８．２０ｍｉｎ．，ＦＡＢ−ＭＳ（ｄｉｔｈｉｏｄｉｅｔｈａｎｏｌ），５９３［Ｍ＋Ｈ］，（５９３．２）．
実施例１２．  Ｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ａｍ７（Ａｃ）−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｌ−Ｐｒｏ−）の合成
ｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ａｂ７−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｌ−Ｐｒｏ−）（２５ｍｇ，０．０４２ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（０．５ｍｌ）溶液にチオ酢酸カリウム（９．５９ｍｇ，０．０８４ｍｍｏｌ）を加えて３時間反応させた。ＤＭＦを留去し、残渣を酢酸エチルに取り１０％クエン酸水溶液、４％ＮａＨＣＯ３及び飽和食塩水で順次洗浄した後、環化反応後と同様に生成したチオエステルを単離精製して１９ｍｇ（７６％）の油状物を得た。ＨＰＬＣ保持時間、８．２０ｍｉｎ．，ＦＡＢ−ＭＳ（ｄｉｔｈｉｏｄｉｅｔｈａｎｏｌ），５８９［Ｍ＋Ｈ］，（５８９．３）．
実施例１３．  Ｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ａｍ７（−）−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｌ−Ｐｒｏ−）（ＳＳ−ｄｉｍｅｒ：ＳＣＯＰ  ２９６）の合成
ｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ａｍ７（Ａｃ）−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｌ−Ｐｒｏ−）（１９ｍｇ，０．０３２２ｍｍｏｌ）を温めたＤＭＦ（２ｍｌ）溶液に溶かし、メタノール性アンモニア（１０ｅｑ．）を作用させてアセチル基を除去した。溶媒留去後ＤＭＦ（２ｍｌ）に溶かし、１ＭＩ２（エタノール）０．０４ｍｌを加えて酸化を行った。生成したＳＳ  ｄｉｍｅｒをＳｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０（ＤＭＦ）カラムで精製した。水を加えて白色粉末として得た。収量７．４ｍｇ（４２％）。ＨＰＬＣ保持時間、１４．１ｍｉｎ．，ＨＲＭＳ（ＦＡＢ，ｄｉｔｈｉｏｄｉｅｔｈａｎｏｌ），１０９１．５６４８［Ｍ＋Ｈ］，Ｃ５６Ｈ８３Ｏ１０Ｎ８Ｓ２（１０９１．５６７４）．
実施例１４．  Ｂｏｃ−Ｌ−Ｉｌｅ−ＤＬ−Ｐｉｐ−ＯＢｚｌの合成
Ｂｏｃ−ＤＬ−Ｐｉｐ−ＯＨ（２．２９ｇ，１０ｍｍｏｌ）とベンジルブロミド（１．７９ｍｌ，１５ｍｍｏｌ）とをＤＭＦ（２０ｍｌ）中でトリエチルアミン（２．１ｍｌ，１５ｍｍｏｌ）存在下で反応させて、生じたＢｏｃ−ＤＬ−Ｐｉｐ−ＯＢｚｌを油状物として得た。これを２Ｎ  ＨＣｌ／ジオキサン（５ｅｑ．）で３時間反応させて、Ｈ−ＤＬ−Ｐｉｐ−ＯＢｚｌ・ＨＣｌを得た。
Ｂｏｃ−Ｌ−Ｉｌｅ−ＯＨ・１／２Ｈ２Ｏ（２．４７ｇ，１０．７ｍｍｏｌ），Ｈ−Ｄ−Ｐｒｏ−ＯＢｚｌ・ＨＣｌ（２．２８ｇ，８．９ｍｍｏｌ）及びＨＯＢｔ・Ｈ２Ｏ（１．３６ｍｇ，８．９ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２０ｍｌ）溶液に氷冷下でＤＣＣ（２．２０ｇ，１０．７ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（１．２５ｍｌ，８．９ｍｍｏｌ）を加えた。８時間撹拌後、ＤＭＦを留去し、酢酸エチルに溶解し、１０％クエン酸水溶液、４％炭酸水素ナトリウム水溶液及び飽和食塩水で順次洗浄した。ＭｇＳＯ４で乾燥後、濃縮、油状物をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（４×３０ｃｍ，１％メタノール／クロロホルム）で精製し、油状の標記ｄｉａｓｔｅｒｅｏｍｅｒ混合物（３．３３ｇ，７．７０ｍｍｏｌ，収率８７％）を得た。ＴＬＣ：Ｒｆ＝（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ：９／１）
実施例１５．  Ｂｏｃ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−ＤＬ−Ｐｉｐ−ＯＢｚｌの合成
Ｂｏｃ−Ｌ−Ｉｌｅ−ＤＬ−Ｐｉｐ−ＯＢｚｌ（３．３３ｇ，７．７０ｍｍｏｌ）をＴＦＡ（１０ｍｌ）に溶解し、氷冷下３０分間放置した。反応終了後ＴＦＡを留去し、減圧下乾燥し、Ｈ−Ｌ−Ｉｌｅ−ＤＬ−Ｐｉｐ−ＯＢｚｌ・ＴＦＡを得た。これをＤＭＦ（１６ｍｌ）に溶解させ、Ｂｏｃ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−ＯＨ（３．４１ｇ，１１．６ｍｍｏｌ）を加え、続いて氷冷下ＨＢＴＵ（４．３８ｇ，１１．６ｍｍｏｌ），ＨＯＢｔ・Ｈ２Ｏ（１．１８ｇ，７．７０ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（７．０１ｍｌ，５０．１ｍｍｏｌ）を加え、３時間撹拌した。反応液を濃縮後、酢酸エチルに溶解し、１０％クエン酸水溶液、４％炭酸水素ナトリウム水溶液及び飽和食塩水で順次洗浄した。ＭｇＳＯ４で乾燥後、濃縮、フォーム状物をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（４×３０ｃｍ，１％メタノール／クロロホルム）で精製し、フォーム状の標記ｄｉａｓｔｅｒｅｏｍｅｒ混合物（３．４６ｇ，５．６７ｍｍｏｌ，収率７４％）を得た。ＴＬＣ：Ｒｆ＝（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ＝９／１）
実施例１６．  Ｂｏｃ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−ＤＬ−Ｐｉｐ−Ｌ−Ａｂ７−ＯＢｚｌの合成
Ｂｏｃ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−ＤＬ−Ｐｉｐ−ＯＢｚｌ（３．４６ｇ，７．３７ｍｍｏｌ）をメタノール（３０ｍｌ）に溶解し、５％Ｐｄ−Ｃ（２３０ｍｇ）存在下接触還元を行った。８時間後、Ｐｄ−Ｃ触媒を濾過し、反応液を留去後、Ｂｏｃ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−ＤＬ−Ｐｉｐ−ＯＨを得た。
Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｂ７−ＯＢｚｌ（３．０５ｇ，３．１２ｍｍｏｌ）をＴＦＡ（５ｍｌ）に溶解し、氷冷下３０分間放置した。反応終了後ＴＦＡを留去し、減圧下乾燥し、Ｈ−Ｌ−Ａｂ７−ＯＢｚｌ・ＴＦＡを得た。これをＤＭＦ（１６ｍｌ）に溶解させ、Ｂｏｃ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−ＤＬ−Ｐｉｐ−ＯＨ（２．８０ｇ，５．３９ｍｍｏｌ）を加え、続いて氷冷下ＨＢＴＵ（２．６６ｇ，７．０１ｍｍｏｌ），ＨＯＢｔ・Ｈ２Ｏ（８２５ｍｇ，５．３９ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（３．０２ｍｌ，２１．６ｍｍｏｌ）を加え、３時間撹拌した。反応液を濃縮後、酢酸エチルに溶解し、１０％クエン酸水溶液、４％炭酸水素ナトリウム水溶液及び飽和食塩水で順次洗浄した。ＭｇＳＯ４で乾燥後、濃縮、フォーム状物をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（４×３０ｃｍ，２％メタノール／クロロホルム）で精製し、フォーム状の標記ｄｉａｓｔｅｒｅｏｍｅｒ混合物（４．０７ｇ，４．９１ｍｍｏｌ，収率９１％）を得た。ＴＬＣ：Ｒｆ：（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ＝９／１）
実施例１７．  Ｈ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−ＤＬ−Ｐｉｐ−Ｌ−Ａｂ７−ＯＨ・ＴＦＡの合成
Ｂｏｃ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｌ−Ｐｒｏ−ＤＬ−Ｐｉｐ−ＯＢｚｌ（４．０７ｇ，４．９１ｍｍｏｌ）をメタノール（１０ｍｌ）に溶解し、Ｐｄ−Ｃ触媒（３００ｍｇ）存在下接触還元を行った。８時間後、Ｐｄ−Ｃ触媒を濾過し、反応液を留去後、Ｂｏｃ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−ＤＬ−Ｐｉｐ−ＯＨを得た。これをＴＦＡ（１０ｍＬ）に溶解し、氷冷下３０分間放置した。反応液を留去後、エーテル／石油エーテル（１：１０）を加えて固化し、減圧下乾燥後に標記ｄｉａｓｔｅｒｅｏｍｅｒ混合物（２．６０ｇ，３．５１ｍｍｏｌ，収率７２％）を得た。
実施例１８．  Ｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ａｂ７−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｌ−Ｐｉｐ−）およびＣｙｃｌｏ（−Ｌ−Ａｂ７−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｉｐ−）の合成
鎖状テトラペプチド、Ｈ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−ＤＬ−Ｐｉｐ−Ｌ−Ａｂ７−ＯＨ（１．２８ｇ，２．０ｍｍｏｌ），ＨＡＴＵ（１．１４ｇ，３．０ｍｍｏｌ）及びＤＩＥＡ（１．０ｍｌ）を５分割して３０分毎にＤＭＦ（１０００ｍｌ）に加えて、環化反応を行った。２時間後、反応液を濃縮後、酢酸エチルに溶解し、１０％クエン酸水溶液、４％炭酸水素ナトリウム水溶液及び飽和食塩水で順次洗浄した。ＭｇＳＯ４で乾燥後、濃縮、フォーム状物をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（４×３０ｃｍ，２％メタノール／クロロホルム）で精製し、Ｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ａｂ７−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｌ−Ｐｉｐ−）を３７２ｍｇ（６１％，ＨＰＬＣ保持時間、８．９４ｍｉｎ．，ＦＡＢ−ＭＳ（ｄｉｔｈｉｏｄｉｅｔｈａｎｏｌ），６０７［Ｍ＋Ｈ］，（６０７．２）），Ｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ａｍ７（−）−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｉｐ−）を２３８ｍｇ（３９％，ＨＰＬＣ保持時間、１０．５ｍｉｎ．，ＦＡＢ−ＭＳ（ｄｉｔｈｉｏｄｉｅｔｈａｎｏｌ），６０７［Ｍ＋Ｈ］，（６０７．２）），それぞれフォーム状として得た。
実施例１９．  Ｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ａｍ７（Ａｃ）−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｌ−Ｐｉｐ−）の合成
ｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ａｂ７−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｌ−Ｐｉｐ−）（１３０ｍｇ，０．２１ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１ｍｌ）溶液にチオ酢酸カリウム（６９ｍｇ，０．３１５ｍｍｏｌ）を加えて３時間反応させた。反応液を留去し、反応液を濃縮後、酢酸エチルに溶解し、１０％クエン酸水溶液及び飽和食塩水で順次洗浄し、環化反応後と同様に生成したチオエステルを単離精製して１０９ｍｇ（８６％）の油状物を得た。ＨＰＬＣ保持時間、８．９４ｍｉｎ．，ＦＡＢ−ＭＳ（ｄｉｔｈｉｏｄｉｅｔｈａｎｏｌ），６０３［Ｍ＋Ｈ］，（６０３．３）．
実施例２０，  Ｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ａｍ７（−）−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｌ−Ｐｉｐ−）（ＳＳ−ｄｉｍｅｒ：ＳＣＯＰ  ２９８）の合成
ｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ａｍ７（Ａｃ）−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｌ−Ｐｉｐ−）（１１４ｍｇ，０．１９８ｍｍｏｌ）のメタノール（０．５ｍｌ）溶液にメタノール性アンモニア（１０ｅｑ．）を作用させてアセチル基を除去した。溶媒留去後ＤＭＦ（２ｍｌ）に溶解し、１ＭＩ２（エタノール）０．２５ｍｌを加えて酸化を行った。生成したＳＳ  ｄｉｍｅｒをＳｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０（ＤＭＦ）カラムで精製した。水を加えて白色粉末として得た。収量８２ｍｇ（７８％）。ＨＰＬＣ保持時間、１１．６ｍｉｎ．，ＨＲＭＳ（ＦＡＢ，ｄｉｔｈｉｏｄｉｅｔｈａｎｏｌ），１０６３．５３９１［Ｍ＋Ｈ］，Ｃ６４Ｈ７９Ｏ１０Ｎ８Ｓ２（１０６３．５３６１）．
実施例２１．  Ｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ａｍ７（Ａｃ）−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｉｐ−）の合成
ｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ａｂ７−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｉｐ−）（２４０ｍｇ，０．４０ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（０．５ｍｌ）溶液にチオ酢酸カリウム（６９ｍｇ，０．６０ｍｍｏｌ）を加えて３時間反応させた。反応液を濃縮後、酢酸エチルに溶解し、１０％クエン酸水溶液、４％炭酸水素ナトリウム水溶液及び飽和食塩水で順次洗浄した。ＭｇＳＯ４で乾燥後、濃縮し、環化反応後と同様に生成したチオエステルを単離精製して１６０ｍｇ（６６％）の油状物を得た。ＨＰＬＣ保持時間、１０．５ｍｉｎ．，ＦＡＢ−ＭＳ（ｄｉｔｈｉｏｄｉｅｔｈａｎｏｌ），６０３［Ｍ＋Ｈ］，（６０３．３）．
実施例２２．  Ｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ａｍ７（−）−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｉｐ−）（ＳＳ−ｄｉｍｅｒ：ＳＣＯＰ  ３００）の合成
ｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ａｍ７（Ａｃ）−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｉｐ−）（１６０ｍｇ，０．２７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１０ｍｌ）溶液にメタノール性アンモニア（１０ｅｑ．）を作用させてアセチル基を除去した。溶媒留去後ＤＭＦ（２ｍｌ）に溶かし、１ＭＩ２（エタノール）０．３１ｍｌを加えて酸化を行った。生成したＳＳ  ｄｉｍｅｒをＳｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０（ＤＭＦ）カラムで精製した。水を加えて白色粉末として得た。収量５４ｍｇ（３６％）。ＨＰＬＣ保持時間、１３．４ｉｎ．，ＨＲＭＳ（ＦＡＢ，ｄｉｔｈｉｏｄｉｅｔｈａｎｏｌ），１１１９．５９３９［Ｍ＋Ｈ］，Ｃ５８Ｈ８７Ｏ１０Ｎ８Ｓ２（１１１９．５９８６）．
実施例２３．  Ｂｏｃ−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−ＯＢｚｌの合成
Ｂｏｃ−Ｄ−Ｐｒｏ−ＯＨ（１７．２ｇ，８０ｍｍｏｌ）とベンジルブロミド（１４．３ｍｌ，１２０ｍｍｏｌ）とをＤＭＦ（１６０ｍｌ）中氷冷下でトリエチルアミン（１６．８ｍｌ，１２０ｍｍｏｌ）存在下で反応させ、Ｂｏｃ−Ｄ−Ｐｒｏ−ＯＢｚｌを油状物として得た。これを２Ｎ  ＨＣｌ／ジオキサン（５ｅｑ．）で３時間反応させて、Ｈ−Ｄ−Ｐｒｏ−ＯＢｚｌ・ＨＣｌを得た。
Ｂｏｃ−Ｌ−Ｉｌｅ−ＯＨ・１／２Ｈ２Ｏ（２４．０ｇ，１００ｍｍｏｌ），Ｈ−Ｄ−Ｐｒｏ−ＯＢｚｌ・ＨＣｌ（１９．３ｇ，８０ｍｍｏｌ）及びＨＯＢｔ・Ｈ２Ｏ（１５．３ｇ，１００ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２００ｍｌ）溶液に氷冷下でＤＣＣ（８．３ｇ，３０ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（３．５ｍｌ，２５ｍｍｏｌ）を加えた。８時間撹拌後後、ＤＭＦを留去し、酢酸エチルに溶解し、１０％クエン酸水溶液、４％炭酸水素ナトリウム水溶液及び飽和食塩水で順次洗浄した。ＭｇＳＯ４で乾燥後、濃縮、油状物をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（４×３０ｃｍ，１％メタノール／クロロホルム）で精製し、油状の標記化合物（２１．５ｇ，５１ｍｍｏｌ，収率７２％）を得た。ＴＬＣ：Ｒｆ＝（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ＝９／１）
実施例２４．  Ｂｏｃ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−ＯＢｚｌの合成
Ｂｏｃ−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−ＯＢｚｌ（２１．５ｇ，５１．４ｍｏｌ）をＴＦＡ（５０ｍｌ）に溶解し、氷冷下１時間放置した。反応終了後ＴＦＡを留去し、減圧下乾燥し、Ｈ−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−ＯＢｚｌ・ＴＦＡを得た。これをＤＭＦ（１００ｍｌ）に溶解させ、Ｂｏｃ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−ＯＨ（１６．７ｇ，５６．５ｍｍｏｌ）を加え、続いて氷冷下ＨＢＴＵ（２９．４ｇ，７７ｍｍｏｌ），ＨＯＢｔ・Ｈ２Ｏ（７．８７ｇ，５１ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（２５．２ｍｌ，１８０ｍｍｏｌ）を加え、３時間撹拌した。反応液を濃縮後、酢酸エチルに溶解し、１０％クエン酸水溶液、４％炭酸水素ナトリウム水溶液及び飽和食塩水で順次洗浄した。ＭｇＳＯ４で乾燥後、濃縮、フォーム状物をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（４×３０ｃｍ，１％メタノール／クロロホルム）で精製し、フォーム状の標記化合物（２２．０ｇ，３７ｍｍｏｌ，収率７２％）を得た。ＴＬＣ：Ｒｆ＝（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ＝９／１）
実施例２５．  Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｂ６−ＯＴｍｓｅの合成
Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｂ６−ＯＨ（６２０ｍｇ，２．０ｍｍｏｌ）とトリメチルシリルエタノール（０．５７２ｍｌ，４．０ｍｍｏｌ）とをＤＣＭ（６ｍｌ）中で４−ジメチルアミノピリジン（２４．４ｍｇ，０．２ｍｍｏｌ）存在下６時間撹拌した。反応液を濃縮後、酢酸エチルに溶解し、１０％クエン酸水溶液、４％炭酸水素ナトリウム水溶液及び飽和食塩水で順次洗浄した。ＭｇＳＯ４で乾燥後、濃縮、油状物をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（４×３０ｃｍ，１０％酢酸エチル／ヘキサン）で精製し、油状の標記化合物（８２０ｍｇ，１．６２ｍｍｏｌ，収率８１％）を得た。ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．９７（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ＝９／１）
実施例２６．  Ｂｏｃ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−Ｌ−Ａｂ６−ＯＴｍｓｅの合成
Ｂｏｃ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−ＯＢｚｌ（１．０１ｇ，１．７０ｍｍｏｌ）をメタノール（２０ｍｌ）に溶解し、５％Ｐｄ−Ｃ（１５０ｍｇ）存在下接触還元を行った。８時間後、Ｐｄ−Ｃ触媒を濾過し、反応液を留去後、Ｂｏｃ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−ＯＨを得た。
Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｂ６−ＯＴｍｓｅ（１．５１ｇ，３．０ｍｍｏｌ）をＴＦＡ（５ｍｌ）に溶解し、氷冷下３０分間放置した。反応終了後反応液を留去し、減圧下乾燥し、Ｈ−Ｌ−Ａｍ６−ＯＴｍｓｅ・ＴＦＡを得た。これをＤＭＦ（３．５ｍｌ）に溶解させ、氷冷下で４分割したＢｏｃ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−ＯＨ（８１９ｍｇ，１．６２ｍｍｏｌ），ＨＡＴＵ（７７６ｍｇ，２．０ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（０．２４ｍｌ，１．７ｍｍｏｌ）を加え、３時間撹拌した。反応液を濃縮後、酢酸エチルに溶解し、１０％クエン酸水溶液、４％炭酸水素ナトリウム水溶液及び飽和食塩水で順次洗浄した。無水ＭｇＳＯ４で乾燥後、濃縮、フォーム状物をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（４×３０ｃｍ，１％メタノール／クロロホルム）で精製し、標記化合物（８８８ｍｇ，１．０９ｍｍｏｌ，収率６４％）を得た。ＴＬＣ：Ｒｆ＝（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ＝９／１）
実施例２７．  Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｂ７−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−ＯＢｚｌの合成
Ｂｏｃ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−ＯＢｚｌ（１．１９ｇ，２．０ｍｍｏｌ）をＴＦＡ（５ｍｌ）に溶解し、氷冷下３０分間放置した。反応終了後ＴＦＡを留去し、減圧下乾燥し、Ｈ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−ＯＢｚｌ・ＴＦＡを得た。これをＤＭＦ（４．０ｍｌ）に溶解させ、Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｂ７−ＯＨ（６５２ｍｇ，２．０ｍｍｏｌ）を加え、続いて氷冷下ＨＢＴＵ（１．１４ｇ，３．０ｍｍｏｌ），ＨＯＢｔ・Ｈ２Ｏ（３０６ｍｇ，２．０ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（１．４ｍｌ，１０ｍｍｏｌ）を加え、３時間撹拌した。反応液を濃縮後、酢酸エチルに溶解し、１０％クエン酸水溶液、４％炭酸水素ナトリウム水溶液及び飽和食塩水で順次洗浄した。ＭｇＳＯ４で乾燥後、濃縮、フォーム状物をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（４×３０ｃｍ，２％メタノール／クロロホルム）で精製し、フォーム状の標記化合物（１．５１ｇ，１．８９ｍｍｏｌ，収率９４％）を得た。ＨＰＬＣ保持時間、９．１５ｍｉｎ．
実施例２８．  Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｂ８−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−ＯＢｚｌの合成
Ｂｏｃ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−ＯＢｚｌ（１．１９ｇ，２．０ｍｍｏｌ）をＴＦＡ（５ｍｌ）に溶解し、氷冷下３０分間放置した。反応終了後ＴＦＡを留去し、減圧下乾燥し、Ｈ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−ＯＢｚｌ・ＴＦＡを得た。これをＤＭＦ（４．０ｍｌ）に溶解させ、Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｂ８−ＯＨ（６７６ｍｇ，２．０ｍｍｏｌ）を加え、続いて氷冷下ＨＢＴＵ（１．１４ｇ，３．０ｍｍｏｌ），ＨＯＢｔ・Ｈ２Ｏ（３０６ｍｇ，２．０ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（１．４ｍｌ，１０ｍｍｏｌ）を加え、３時間撹拌した。反応液を濃縮後、酢酸エチルに溶解し、１０％クエン酸水溶液、４％炭酸水素ナトリウム水溶液及び飽和食塩水で順次洗浄した。ＭｇＳＯ４で乾燥後、濃縮、フォーム状物をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（４×３０ｃｍ，２％メタノール／クロロホルム）で精製し、フォーム状の標記化合物（１．４４ｇ，１．７６ｍｍｏｌ，収率８８％）を得た。ＨＰＬＣ保持時間、１０．９ｍｉｎ．
実施例２９．  Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｂ９−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−ＯＢｚｌの合成
Ｂｏｃ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−ＯＢｚｌ（１．１９ｇ，２．０ｍｍｏｌ）をＴＦＡ（５ｍｌ）に溶解し、氷冷下３０分間放置した。反応終了後ＴＦＡを留去し、減圧下乾燥し、Ｈ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−ＯＢｚｌ・ＴＦＡを得た。これをＤＭＦ（４．０ｍｌ）に溶解させ、Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｂ９−ＯＨ（７７５ｍｇ，２．２ｍｍｏｌ）を加え、続いて氷冷下ＨＢＴＵ（１．１４ｇ，３．０ｍｍｏｌ），ＨＯＢｔ・Ｈ２Ｏ（３０６ｍｇ，２．０ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（１．４ｍｌ，１０ｍｍｏｌ）を加え、３時間撹拌した。反応液を濃縮後、酢酸エチルに溶解し、１０％クエン酸水溶液、４％炭酸水素ナトリウム水溶液及び飽和食塩水で順次洗浄した。ＭｇＳＯ４で乾燥後、濃縮、フォーム状物をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（４×３０ｃｍ，２％メタノール／クロロホルム）で精製し、フォーム状の標記化合物（１．３１ｇ，１．５８ｍｍｏｌ，収率７９％）を得た。ＨＰＬＣ保持時間、１１．７ｍｉｎ．
実施例３０．  Ｈ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−Ｌ−Ａｂ６−ＯＨ・ＴＦＡの合成
Ｂｏｃ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−Ｌ−Ａｂ６−ＯＴｍｓｅ（８８８ｍｇ，１．１１ｍｍｏｌ）をエタノール（１０ｍｌ）に溶解し、氷冷下で３分割した１Ｎ  ＮａＯＨ水溶液（１．３２ｍｌ，１．３３ｍｍｏｌ）を加え、３時間放置した。反応液を濃縮後、酢酸エチルに溶解し、１０％クエン酸及び飽和食塩水で順次洗浄した。ＭｇＳＯ４で乾燥後、濃縮し、Ｂｏｃ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−Ｌ−Ａｂ６−ＯＨを得た。これをＴＦＡ（５ｍｌ）に溶解し、氷冷下３０分間放置した。反応液を留去後、減圧下乾燥し、油状の標記化合物（７７８ｍｇ，１．０７ｍｍｏｌ，収率９６％）を得た。
実施例３１．  Ｈ−Ｌ−Ａｂ７−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−ＯＨ・ＴＦＡの合成
Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｂ７−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−ＯＢｚｌ（１．５１ｇ，１．８９ｍｍｏｌ）をメタノール（５ｍｌ）に溶解し、５％Ｐｄ−Ｃ（１５０ｍｇ）存在下接触還元を行った。５時間後、Ｐｄ−Ｃ触媒を濾過し、反応液を留去後、Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｂ７−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−ＯＨを得た。これをＴＦＡ（５ｍｌ）に溶解し、氷冷下３０分間放置した。反応液を留去後、減圧下乾燥し、油状の標記化合物（１．１５ｍｇ，１．８４ｍｍｏｌ，収率９７％）を得た。
実施例３２．  Ｈ−Ｌ−Ａｂ８−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−ＯＨ・ＴＦＡの合成
Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｂ８−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−ＯＢｚｌ（１．４４ｇ，１．７６ｍｍｏｌ）をメタノール（５ｍｌ）に溶解し、５％Ｐｄ−Ｃ（１５０ｍｇ）存在下接触還元を行った。５時間後、Ｐｄ−Ｃ触媒を濾過し、反応液を留去後、Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｂ８−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−ＯＨを得た。これをＴＦＡ（５ｍｌ）に溶解し、氷冷下３０分間放置した。反応液を留去後、減圧下乾燥し、油状の標記化合物（１．１５ｍｇ，１．８４ｍｍｏｌ，収率９７％）を得た。
実施例３３．  Ｈ−Ｌ−Ａｂ９−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−ＯＨ・ＴＦＡの合成
Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｂ９−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−ＯＢｚｌ（１．３１ｇ，１．５８ｍｍｏｌ）をメタノール（２ｍｌ）に溶解し、５％Ｐｄ−Ｃ（１５０ｍｇ）存在下接触還元を行った。１２時間後、Ｐｄ−Ｃ触媒を濾過し、反応液を留去後、Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｂ９−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−ＯＨを得た。これをＴＦＡ（５ｍｌ）に溶解し、氷冷下３０分間放置した。反応液を留去後、エーテル／石油エーテル（１：１０）を加えて固化し、減圧下乾燥後に標記化合物（９０５ｍｇ，１．４２ｍｍｏｌ，収率９０％）を得た。
実施例３４．  Ｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ａｂ６−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−）の合成
Ｈ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−Ｌ−Ａｂ６−ＯＨ・ＴＦＡ（７７８ｍｇ，１．０７ｍｍｏｌ），ＨＡＴＵ（６１６ｍｇ，１．６２ｍｍｏｌ）及びＤＩＥＡ（０．７５ｍｌ）を５分割して３０分毎にＤＭＦ（１１０ｍｌ）に加えて、環化反応を行った。２時間後溶媒を留去して残渣を酢酸エチルに取り、１０％クエン酸、４％ＮａＨＣＯ３、および食塩水で洗い、ＭｇＳＯ４で乾燥した。反応液を濃縮後、酢酸エチルに溶解し、１０％クエン酸水溶液、４％炭酸水素ナトリウム水溶液及び飽和食塩水で順次洗浄した。ＭｇＳＯ４で乾燥後、濃縮、フォーム状物をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（４×３０ｃｍ，１％メタノール／クロロホルム）で精製し、無色油状物１４６ｍｇ（２３％）を得た。ＨＰＬＣ保持時間、９．０６ｍｉｎ．，ＨＲＭＳ（ＦＡＢ，ｄｉｔｈｉｏｄｉｅｔｈａｎｏｌ），５７９．２１９７［Ｍ＋Ｈ］，Ｃ２７Ｈ４１Ｏ５Ｎ４７９Ｂｒ（５７９．２１８２）．
また、この時Ａｂ６の側鎖末端Ｂｒに置換して転移したＨＯＡｔ  ａｄｄｕｃｔを含む環状テトラペプチド、ｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ａ（ＯＡｔ）６−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−）１６７ｍｇ（２７％）をフォームとして得た。ＨＰＬＣ保持時間、８．１６ｍｉｎ．，ＨＲＭＳ（ＦＡＢ，ｄｉｔｈｉｏｄｉｅｔｈａｎｏｌ），６３５．３３１２［Ｍ＋Ｈ］，Ｃ３２Ｈ４３Ｏ６Ｎ８（６３５．３３０６）．
実施例３５．  Ｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ａｂ７−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−）の合成
Ｈ−Ｌ−Ａｂ７−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−ＯＨ・ＴＦＡ（１．１５ｇ，１．８４ｍｍｏｌ），ＨＡＴＵ（１．０５ｇ，２．７６ｍｍｏｌ）及びＤＩＥＡ（１．２８ｍｌ）を５分割して３０分毎にＤＭＦ（１８０ｍｌ）に加えて、環化反応を行った。上と同様に精製して７００ｍｇ（６４％）のフォームを得た。ＨＰＬＣ保持時間、９．９０ｍｉｎ．，ＨＲＭＳ（ＦＡＢ，ｄｉｔｈｉｏｄｉｅｔｈａｎｏｌ），５９３．２３００［Ｍ＋Ｈ］，Ｃ２８Ｈ４２Ｏ５Ｎ４７９Ｂｒ（５９３．２３３９）．
実施例３６．  Ｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ａｂ８−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−）の合成
Ｈ−Ｌ−Ａｂ８−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−ＯＨ・ＴＦＡ（５１２ｍｇ，０．８０ｍｍｏｌ），ＨＡＴＵ（４５５ｍｇ，１．２０ｍｍｏｌ）及びＤＩＥＡ（０．５６ｍｌ）を５分割して３０分毎にＤＭＦ（８０ｍｌ）に加えて、環化反応を行った。２時間後、反応液を濃縮し、酢酸エチルに溶解し、１０％クエン酸水溶液、４％炭酸水素ナトリウム水溶液及び飽和食塩水で順次洗浄した。ＭｇＳＯ４で乾燥後、濃縮、フォーム状物をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（４×３０ｃｍ，１％メタノール／クロロホルム）で精製し、２６７ｍｇ（５５％）のフォームを得た。ＨＰＬＣ保持時間、９．９５ｍｉｎ．，ＨＲＭＳ（ＦＡＢ，ｄｉｔｈｉｏｄｉｅｔｈａｎｏｌ），６０７．２５０１［Ｍ＋Ｈ］，Ｃ２９Ｈ４４Ｏ５Ｎ４７９Ｂｒ（６０７．２４９５）．
実施例３７．  Ｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ａｂ９−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−）の合成
Ｈ−Ｌ−Ａｂ９−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−ＯＨ・ＴＦＡ（９０５ｍｇ，１．４１ｍｍｏｌ），ＨＡＴＵ（８３３ｍｇ，２．１２ｍｍｏｌ）及びＤＩＥＡ（０．６４ｍｌ）を５分割して３０分毎にＤＭＦ（１５０ｍｌ）に加えて、環化反応を行った。２時間後、反応液を濃縮し、酸エチルに溶解し、１０％クエン酸水溶液、４％炭酸水素ナトリウム水溶液及び飽和食塩水で順次洗浄した。ＭｇＳＯ４で乾燥後、濃縮、フォーム状物をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（４×３０ｃｍ，１％メタノール／クロロホルム）で精製し、５３３ｍｇ（６１％）のフォームを得た。ＨＰＬＣ保持時間、１０．９ｍｉｎ．，ＨＲＭＳ（ＦＡＢ，ｄｉｔｈｉｏｄｉｅｔｈａｎｏｌ），６２１．２６２５［Ｍ＋Ｈ］，Ｃ３０Ｈ４６Ｏ５Ｎ４７９Ｂｒ（６２１．２６５２）．
実施例３８．  Ｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ａｍ６（Ａｃ）−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−）の合成
ｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ａｂ６−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−）（１４６ｍｇ，０．２５２ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（０．５ｍｌ）溶液にチオ酢酸カリウム（５７．６ｍｇ，０．５０４ｍｍｏｌ）を加えて３時間反応させた。反応液を濃縮後、酢酸エチルに溶解し、１０％クエン酸水溶液及び飽和食塩水で順次洗浄した。ＭｇＳＯ４で乾燥後、濃縮し、環化反応後と同様に生成したチオエステルを単離精製して１１４ｍｇ（７９％）の油状物を得た。ＨＰＬＣ保持時間、９．０６ｍｉｎ．，ＨＲＭＳ（ＦＡＢ，ｄｉｔｈｉｏｄｉｅｔｈａｎｏｌ），５７５．２８７９［Ｍ＋Ｈ］，Ｃ２９Ｈ４３Ｏ６Ｎ４Ｓ（５７５．２９０３）．
実施例３９．  Ｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ａｍ７（Ａｃ）−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−）の合成
ｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ａｂ７−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−）（１３３ｍｇ，０．２２６ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（０．５ｍｌ）溶液にチオ酢酸カリウム（５２ｍｇ，０．４５２ｍｍｏｌ）を加えて３時間反応させた。反応液を濃縮後、酢酸エチルに溶解し、１０％クエン酸水溶液及び飽和食塩水で順次洗浄した。ＭｇＳＯ４で乾燥後、濃縮し、生成したチオエステルを単離精製して１１８ｍｇ（８９％）の油状物を得た。ＨＰＬＣ保持時間、９．９０ｍｉｎ．，ＨＲＭＳ（ＦＡＢ，ｄｉｔｈｉｏｄｉｅｔｈａｎｏｌ），５８９．３６０５［Ｍ＋Ｈ］，Ｃ３０Ｈ４５Ｏ６Ｎ４Ｓ（５８９．３０６０）．
実施例４０．  Ｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ａｍ８（Ａｃ）−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−）の合成
ｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ａｂ８−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−）（２６７ｍｇ，０．４３９ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１ｍｌ）溶液にチオ酢酸カリウム（１００ｍｇ，０．８７８ｍｍｏｌ）を加えて３時間反応させた。反応液を濃縮後、酢酸エチルに溶解し、１０％クエン酸水溶液及び飽和食塩水で順次洗浄した。ＭｇＳＯ４で乾燥後、濃縮し、生成したチオエステルを単離精製して２２２ｍｇ（８４％）の油状物を得た。ＨＰＬＣ保持時間、９．９５ｍｉｎ．，ＨＲＭＳ（ＦＡＢ，ｄｉｔｈｉｏｄｉｅｔｈａｎｏｌ），６０３．３２４４［Ｍ＋Ｈ］，Ｃ３１Ｈ４７Ｏ６Ｎ４Ｓ（６０３．３２１６）．
実施例４１．  Ｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ａｍ９（Ａｃ）−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−）の合成
ｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ａｂ９−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−）（２５０ｍｇ，０．４０２ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（０．５ｍｌ）溶液にチオ酢酸カリウム（９１．４ｍｇ，０．８０４ｍｍｏｌ）を加えて３時間反応させた。反応液を濃縮後、酢酸エチルに溶解し、１０％クエン酸水溶液及び飽和食塩水で順次洗浄した。ＭｇＳＯ４で乾燥後、濃縮し、生成したチオエステルを単離精製して１９０ｍｇ（７７％）の油状物を得た。ＨＰＬＣ保持時間、１０．９ｍｉｎ．，ＨＲＭＳ（ＦＡＢ，ｄｉｔｈｉｏｄｉｅｔｈａｎｏｌ），６１７．３３６４［Ｍ＋Ｈ］，Ｃ３２Ｈ４９Ｏ６Ｎ４Ｓ（６１７．３３７３）．
実施例４２．  Ｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ａｍ６（−）−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−）ＳＳ  ｄｉｍｅｒ（ＳＣＯＰ  ３０２）の合成
ｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ａｍ６（Ａｃ）−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−）（１１４ｍｇ，０．１９８ｍｍｏｌ）のメタノール（０．５ｍｌ）溶液にメタノール性アンモニア（１０ｅｑ．）を作用させてアセチル基を除去した。溶媒留去後ＤＭＦ（２ｍｌ）に溶かし、１ＭＩ２（エタノール）０．２ｍｌを加えて酸化を行った。生成したＳＳ  ｄｉｍｅｒをＳｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０（ＤＭＦ）カラムで精製した。水を加えて白色粉末として得た。収量８２ｍｇ（７８％）。ＨＰＬＣ保持時間、１１．６ｍｉｎ．，ＨＲＭＳ（ＦＡＢ，ｄｉｔｈｉｏｄｉｅｔｈａｎｏｌ），１０６３．５３９１［Ｍ＋Ｈ］，Ｃ５４Ｈ７９Ｏ１０Ｎ８Ｓ２（１０６３．５３６１）．
実施例４３．  Ｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ａｍ７（−）−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−）ＳＳ  ｄｉｍｅｒ（ＳＣＯＰ  ３０４）の合成
ｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ａｍ７（Ａｃ）−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−）（１１８ｍｇ，０．２０１ｍｍｏｌ）のメタノール（０．５ｍｌ）溶液にメタノール性アンモニアを作用させてアセチル基を除去し、１ＭＩ２（エタノール）を加えて末端スルフィドリル基を酸化し、精製してＳＳ  ｄｉｍｍｅｒを白色粉末として得た。収量９８ｍｇ（８９％）。ＨＰＬＣ保持時間、１２．３ｍｉｎ．，ＨＲＭＳ（ＦＡＢ，ｄｉｔｈｉｏｄｉｅｔｈａｎｏｌ），１０９１．５６８４［Ｍ＋Ｈ］，Ｃ５６Ｈ８３Ｏ１０Ｎ８Ｓ２（１０９１．５６７４）．
実施例４４．  Ｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ａｍ８（−）−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−）ＳＳ  ｄｉｍｅｒ（ＳＣＯＰ  ３０６）の合成
ｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ａｍ８（Ａｃ）−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−）（２２２ｍｇ，０．３６８ｍｍｏｌ）のメタノール（０．５ｍｌ）溶液にメタノール性アンモニアを作用させてアセチル基を除去し、１ＭＩ２（エタノール）を加えて末端スルフィドリル基を酸化し、精製してＳＳ  ｄｉｍｅｒを白色粉末として得た。収量１６７ｍｇ（８１％）。ＨＰＬＣ保持時間、１３．０ｍｉｎ．，ＨＲＭＳ（ＦＡＢ，ｄｉｔｈｉｏｄｉｅｔｈａｎｏｌ），１１１９．５９６１［Ｍ＋Ｈ］，Ｃ５８Ｈ８６Ｏ１０Ｎ８Ｓ２（１１１９．５９８７）．
実施例４５．  Ｃｙｅｌｏ（−Ｌ−Ａｍ９（−）−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−）ＳＳ  ｄｉｍｅｒ（ＳＣＯＰ  ３０８）の合成
ｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ａｍ９（Ａｃ）−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−）（９５ｍｇ，０．１５４ｍｍｏｌ）のメタノール（０．５ｍｌ）溶液にメタノール性アンモニアを作用させてアセチル基を除去し、１ＭＩ２（エタノール）を加えて末端スルフィドリル基を酸化し、精製してＳＳ  ｄｉｍｅｒを白色粉末として得た。収量８４ｍｇ（９８％）。ＨＰＬＣ保持時間、１４．２ｍｉｎ．，ＨＲＭＳ（ＦＡＢ，ｄｉｔｈｉｏｄｉｅｔｈａｎｏｌ），１１４７．６３０７［Ｍ＋Ｈ］，Ｃ６０Ｈ９１Ｏ１０Ｎ８Ｓ２（１１４７．６３００）．
実施例４６．  Ｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ａｍ７（ＳＭＥｔ）−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−）（ＳＳ  ｈｙｂｒｉｄ：ＳＣＯＰ  ４０４）の合成
ｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ａｍ７（Ａｃ）−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−）（２７０ｍｇ，０．４５ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（０．５ｍｌ）溶液にメタノール性アンモニア（１０ｅｑ．）を作用させてアセチル基を除去し、アンモニアを留去後、２−メルカプトエタノール（１０ｅｑ．）を加え、１ＭＩ２（エタノール）０．２ｍｌを加えて酸化を行った。生成したＳＳ  ｈｙｂｒｉｄをＳｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０（ＤＭＦ）カラムで精製し、凍結乾燥を行い、標記化合物を白色粉末として得た。収量３０ｍｇ（１１％）。ＨＰＬＣ保持時間、８．９ｍｉｎ．，ＨＲＭＳ（ＦＡＢ，ｄｉｔｈｉｏｄｉｅｔｈａｎｏｌ），６２２．２８７７［Ｍ］，Ｃ３０Ｈ４６Ｏ６Ｎ４Ｓ２（６２２．２８５９）．
実施例４７．  Ｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ａｍ７（Ｓ２Ｐｙ）−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−）（ＳＳ  ｈｙｂｒｉｄ：ＳＣＯＰ  ４０１）の合成
ｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ａｍ７（Ａｃ）−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−）（４０ｍｇ，０．０７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１ｍｌ）溶液に２，２’−ジチオピリジン（３１ｍｇ，０．１４ｍｍｏｌ）及びメタノール性アンモニア（１０ｅｑ．）を加え、８時間撹拌した。反応液を濃縮後、粉状物をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（４×３０ｃｍ，１％メタノール／クロロホルム）で精製し、標記化合物を得た。収量１５ｍｇ（３８％）。ＨＰＬＣ保持時間、９．６ｍｉｎ．，ＨＲＭＳ（ＦＡＢ，ｄｉｔｈｉｏｄｉｅｔｈａｎｏｌ），６５６．２９５２［Ｍ＋Ｈ］，Ｃ３３Ｈ４５Ｏ５Ｎ５Ｓ２（６５６．２９４０）．
実施例４８．  Ｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ａｍ７（Ｓ４Ｐｙ）−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−）（ＳＳ  ｈｙｂｒｉｄ：ＳＣＯＰ  ４０２）の合成
ｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ａｍ７（Ａｃ）−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−）（１００ｍｇ，０．１７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１ｍｌ）溶液に４，４’−ジチオピリジン（７５ｍｇ，０．３４ｍｍｏｌ）及びメタノール性アンモニア（２０ｅｑ．）を加え、８時間撹拌した。反応液を濃縮後、粉状物をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（４×３０ｃｍ，１％メタノール／クロロホルム）で精製し、標記化合物を得た。収量１３ｍｇ（１３％）。ＨＰＬＣ保持時間、６．５ｍｉｎ．，ＨＲＭＳ（ＦＡＢ，ｄｉｔｈｉｏｄｉｅｔｈａｎｏｌ），６５６．２９３４［Ｍ＋Ｈ］，Ｃ３３Ｈ４５Ｏ５Ｎ５Ｓ２（６５６．２９４０）．
実施例４９．  Ｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ａｍ７（ＳＥｌｌ）−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−）（ＳＳ  ｈｙｂｒｉｄ：ＳＣＯＰ  ４０３）の合成
５，５’−ジチオビス（２−ニトロベゼン酸）（５１５ｍｇ，１．４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２．８ｍＬ）溶液に、氷冷下ジメチルアミン（３４３ｍｇ，３．０ｍｍｏｌ），ＤＣＣ（８６７ｍｇ，３．０ｍｍｏｌ）及びＨＯＢｔ・Ｈ２Ｏ（２１４ｍｇ，１．４ｍｍｏｌ）を加え、８時間撹拌した。反応終了後反応液を濃縮し、酢酸エチルに溶解し、１０％クエン酸水溶液、４％炭酸水素ナトリウム水溶液及び飽和食塩水で順次洗浄した。無水ＭｇＳＯ４で乾燥した後、酢酸エチルを留去した。真空乾燥後、フラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（４×３０ｃｍ，１％メタノール／クロロホルム）で精製し、５，５’−ジチオビス（２−ニトロベゼン酸ジメチルアミド）を得た。
ｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ａｍ７（Ａｃ）−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−）（１３０ｍｇ，０．２２ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２ｍｌ）溶液に５，５’−ジチオビス（２−ニトロベゼン酸ジメチルアミド）（１９８ｍｇ，０．４４ｍｍｏｌ）及びメタノール性アンモニア（１０ｅｑ．）を加え、６時間撹拌した。反応液を濃縮後、少量のＤＭＦに溶かし、ＨＰＬＣ（ｃｏｌｕｍｎ：ＹＭＣ−Ｐａｃｋ  ＯＤＳ−Ａ  １０×２５０ｍｍ）で精製し、標記化合物を得た。収量１３ｍｇ（９．３％）。ＨＰＬＣ保持時間、９．５ｍｉｎ．，ＨＲＭＳ（ＦＡＢ，ｄｉｔｈｉｏｄｉｅｔｈａｎｏｌ），７７１．３２０１［Ｍ＋Ｈ］，Ｃ３７Ｈ５０Ｏ８Ｎ６Ｓ２（７７１．３２１０）．
実施例５０．  Ｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ａｍ７（ＳＭｅ）−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−）（ＳＣＯＰ４０５）の合成
ｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ａｂ７−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−）（１１８ｍｇ，０．２ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１ｍｌ）溶液に４−ｍｅｔｈｏｘｙｂｅｎｚｙｌｍｅｒｃａｐｔａｎ（０．０５６ｍｌ，０．４ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（０．０７ｍｌ，０．５ｍｍｏｌ）を加えて、室温で２時間反応させた。生成したｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ａｍ７（Ｍｂ）−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−）を酢酸エチルで抽出し、精製した後メタノール（１８ｍｌ）中でＤｉｍｅｔｈｙｌ（ｍｅｔｈｙｌｔｈｉｏ）ｓｕｌｆｏｎｉｕｍ  ｔｅｔｒａｆｌｕｏｒｏｂｏｒａｔｅ（０．９ｍｍｏｌ，１７６ｍｇ）と、室温で２時間反応させた。反応液を濃縮し、クロロホルムに溶解し、シリカゲルクロマトグラフィー（２×２５ｃｍ，２％メタノール／クロロホルム）で精製し、目的物を得た。収量６９ｍｇ（６５％）。ＴＬＣ  Ｒｆ：０．９０（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ：１９／１）。ＨＰＬＣ保持時間、１２．２８ｍｉｎ．ＨＲ−ＦＡＢ＋ＭＳ：５９３．２７７７（ｃａｌｃｄ．：５９２．２７５３，ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ：Ｃ２９Ｈ４４Ｏ５Ｎ４Ｓ２，ｍａｔｒｉｘ：２，２’−ｄｉｔｉｈｉｄｉｅｔｈａｎｏｌ）。
実施例５１．  ＨＤＡＣ酵素阻害活性の測定
本実施例ではＳＣＯＰのＨＤＡＣ酵素阻害活性の測定を行った。活性を測定したＳｕｌｆｕｒ−ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ｃｙｃｌｉｃ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ（ＳＣＯＰ）の構造の一覧を図１〜４に示す。天然のＨＤＡＣ阻害剤である図５に示すようなＣｙｌ−１，Ｃｙｌ−２（Ｆｕｒｕｍａｉ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９８，８７−９２．）を元に環状テトラペプチド構造のコンフォメーション及び活性基までの炭素鎖数を検討した。
天然のＣｙｌ−１，Ｃｙｌ−２は立体コンフォメーションがＬＤＬＬ体であるが、ＬＤＬＤのコンフォメーションを持つものについても検討した。なお、以下に示す実験結果において、Ｘ＝Ｈではジスルフィド結合を切断するため、ＤＴＴを共存させている。
ＨＤＡＣ阻害活性測定を行うにあたり、次の通りＨＤＡＣ溶液を調製した。１００ｍｍディッシュに１×１０７個の２９３Ｔ細胞をまき、２４時間後にヒトＨＤＡＣ１、４またはマウスＨＤＡＣ６を発現するベクター（１μｇ）をＬｉｐｏｆｅｃｔＡｍｉｎｅ  ２０００ｒｅａｇｅｎｔ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）を用いてトランスフェクションした。なお、上記ヒトＨＤＡＣ１発現ベクターはｐｃＤＮＡ３−ＨＤ１（Ｙａｎｇ，Ｗ．Ｍ．，Ｙａｏ，Ｙ．Ｌ．，Ｓｕｎ，Ｊ．Ｍ．，Ｄａｖｉｅ，Ｊ．Ｒ．＆  Ｓｅｔｏ，Ｅ．（１９９７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２，２８００１−２８００７．）、ヒトＨＤＡＣ４発現ベクターはｐｃＤＮＡ３．１（＋）−ＨＤ４（Ｆｉｓｃｈｌｅ，Ｗ．，Ｅｍｉｌｉａｎｉ，Ｓ．，Ｈｅｎｄｚｅｌ，Ｍ．Ｊ．，Ｎａｇａｓｅ，Ｔ．，Ｎｏｍｕｒａ，Ｎ．，Ｖｏｅｌｔｅｒ，Ｗ．＆  Ｖｅｒｄｉｎ，Ｅ．（１９９９）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７４，１１７１３−１１７２０．）、マウスＨＤＡＣ６発現ベクターはｐｃＤＮＡ−ｍＨＤＡ２／ＨＤＡＣ６（Ｖｅｒｄｅｌ，Ａ．＆  Ｋｈｏｃｈｂｉｎ，Ｓ．（１９９９）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７４，２４４０−２４４５．）を用いた。ＯＰＴＩ−ＭＥＭ中で５時間ベクターを取り込ませた後、Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ  ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｅａｇｌｅ’ｓ  ｍｅｄｉｕｍ（ＤＭＥＭ）に培地を交換して１９時間インキュベートした。細胞をＰＢＳで洗った後、ｌｙｓｉｓ  ｂｕｆｆｅｒ（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．５），１２０ｍＭ  ＮａＣｌ，５ｍＭ  ＥＤＴＡ，０．５％Ｎｏｎｉｄｅｔ  Ｐ−４０）に懸濁し、ソニケーションした。上清を遠心分離により集め、ＰｒｏｔｅｉｎＡ／Ｇ  ｐｌｕｓ  ａｇａｒｏｓｅ  ｂｅａｄｓ（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．）を用いて、非特異的タンパクを除いた。その後、ＨＤＡＣ１、ＨＤＡＣ４を発現させた細胞上清には、ａｎｔｉ−ＦＬＡＧ  Ｍ２抗体（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｉｎｃ．）を加え、ＨＤＡＣ６を発現させた細胞上清にはａｎｔｉ−ＨＡ抗体（ｃｌｏｎｅ  ３Ｆ１０，Ｒｏｃｈｅ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ）を加えて４℃で１時間反応させた。これにアガロースビーズを加えて４℃で１時間反応させた後、ｌｙｓｉｓ  ｂｕｆｆｅｒでアガロースビーズを３回洗い、ＨＤ  ｂｕｆｆｅｒ（２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．０），１５０ｍＭ  ＮａＣｌ，１０％グリセロール，ａ  ｃｏｍｐｌｅｔｅ  ｐｒｏｔｅａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｃｏｃｋｔａｉｌ（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｍａｎｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ））で一回洗った。ＨＤ  ｂｕｆｆｅｒ（２００μｌ）中ＦＬＡＧペプチド（４０μｇ）（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｉｎｃ．）またはＨＡペプチド（１００μｇ）で４℃、１時間インキュベートしてアガロースビーズから結合したタンパクを回収し、ＨＤＡＣ反応溶液とし、以下のＨＤＡＣ阻害活性測定に用いた。
インビトロのＨＤＡＣ阻害活性を以下のように評価した。被験化合物をＤＭＳＯに溶解して濃度１０ｍＭとして、これを阻害剤の原溶液とした。陽性コントロールとしてＨＤＡＣ酵素阻害剤として知られているトリコスタチンＡ（ＴＳＡ）をＤＭＳＯに溶解して、濃度１０ｍＭの原溶液を調製した。測定は被験化合物またはコントロールのＴＳＡ存在下、上記ＨＤＡＣ溶液と［３Ｈ］で標識したアセチル化ヒストン基質溶液を３７℃で１５分間インキュベートすることで行った（反応容積１００μｌ）。反応を１０μｌのＨＣｌを添加して止め、酵素反応で切り出された［３Ｈ］酢酸を酢酸エチルで抽出して放射活性を測定した。なお、陰性コントロールとして、阻害剤を反応系に添加せず、同じ操作を行った。阻害活性は、陰性コントロールにおけるＨＤＡＣ活性の５０％阻害濃度（「ＩＣ５０（ｎＭ）」）で表した（表１〜４）。
また、ｉｎ  ｖｉｖｏのＨＤＡＣ阻害活性はｐ２１プロモーター誘導活性を指標に次の通り測定した。実験に用いたＭＦＬＬ−９細胞はヒト野生型ｐ２１プロモーターとルシフェラーゼの融合遺伝子（Ｄｒ．Ｂ．Ｖｏｇｅｌｓｔａｅｉｎ）を安定に保持した細胞であり、１０％ＦＢＳを添加したフェノールレッド不含ＤＭＥＭ培地を用い、３７℃、５％二酸化炭素存在下、水蒸気飽和したインキュベーターを用いて培養を行った。このＭＦＬＬ−９細胞を８５０００個／ｗｅｌｌの細胞密度で９６穴マイクロプレートに播種し、各ｗｅｌｌ当たり上記の培地９９μｌ中で、６時間培養した後、被験化合物溶液１μｌを添加し、引き続き１８時間培養した。また、ここでもＴＳＡをＨＤＡＣ阻害活性に起因するｐ２１プロモーター誘導活性の陽性コントロール化合物とした。
Ｌｕｃ  Ｌｉｔｅ（Ｐａｃｋａｒｄ  ＢｉｏＳｃｓｉｅｎｃｅ  Ｃｏｍｐａｎｙ）を用い、細胞内に発現しているルシフェラーゼの酵素反応の生成物に起因する発光強度を測定した。なお、被験化合物の添加量を零とした群を陰性コントロール群とし、この群における測定値を基準値とした。各被験化合物の添加濃度における活性は、前記の基準値を１とする相対値で表した。被験化合物の活性強度はＴＳＡによる最大活性値の５０％の値を示す時の濃度（「ＥＣ５０（ｎＭ）」）を用いて比較した（表１〜４）。
2003070754.tif 000022
2003070754.tif 000023
表１のインビトロの阻害活性、インビボのＰ２１プロモータ活性で示される通り、天然型コンフォメーションであるＬＤＬＬ体よりもＬＤＬＤ体の方がより活性が高く、活性基であるチオール基までの炭素鎖数はＣ５のものが最適であることがわかった。
2003070754.tif 000024
2003070754.tif 000025
Ｘ＝Ｈの時と同様、ホモダイマーにおいても天然型コンフォメーションであるＬＤＬＬ体よりもＬＤＬＤ体の方が高活性で、活性基であるチオール基までの炭素鎖数はＣ５のものが最適であることが示された。
2003070754.tif 000026
2003070754.tif 000027
ＳＣＯＰ１５２と低分子化合物とのｈｙｂｒｉｄ体でも阻害活性を有することが示された。
2003070754.tif 000028
以上の結果より、天然型コンフォメーションであるＬＤＬＬ体よりもＬＤＬＤ体の方が高活性である。更に、活性基であるチオール基までの炭素鎖数はＣ５のものが最適であることがわかった。また、ＨＤＡＣ６に対する阻害活性がかなり低いことから、酵素サブタイプ選択的な阻害活性を持つことが示された。また、今回の化合物は酵素レベルではＤＴＴ共存下チオール体（Ｘ＝Ｈ）の時に高いＨＤＡＣ阻害活性能を持つ。これに対し、細胞レベルではＸ＝左の構造を持つ化合物、Ｘ＝低分子化合物の時でも高活性を示している。細胞内に取り込まれたジスルフィド体が細胞内の還元力により還元されチオール基が露出して活性化したと考えられる。
次に、ＤＴＴが何らかの作用を及ぼす可能性があることから、精製したＳＣＯＰ１５２を使用し、ＤＴＴ非共存下で実験を行った。
2003070754.tif 000029
ＤＴＴ共存下に比べて、ＥＣ５０値が大きくなった。ＤＴＴが共存すると培地のｐＨが下がり、モノマーの安定性が変わるのではないかと考えられる。もしくは、ＤＴＴが何らかの保護基として作用した可能性がある。以降の実験は精製したＳＣＯＰ１５２を使用し、ＤＴＴ非共存下で実験を行った。
実施例５２．細胞レベルでのＨＤＡＣ阻害活性の測定
ヒストンアセチル化レベルの測定は、ＨｅＬａ細胞に対して被験化合物を作用させ、抗アセチル化リジン抗体を使用してヒストンのアセチル化レベルをウェスタンで確認することにより行った。詳細には、ヒト子宮がん細胞（ＨｅＬａ）は１０％ＦＢＳを添加したＤＭＥＭ培地を用い、３７℃、５％二酸化炭素存在下、水蒸気飽和したインキュベーターを用いて培養を行った。この細胞を１５０００個／ｍｌの細胞密度で６穴プレートに２ｍｌ播種し、１８時間培養した後、被験化合物溶液を添加し、引き続き６時間培養した。細胞をＰＢＳで洗った後、ｌｙｓｉｓ  ｂｕｆｆｅｒ（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）、１２０ｍＭ  ＮａＣｌ、５ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．５％Ｎｏｎｉｄｅｔ  Ｐ−４０）に懸濁し、ソニケーションした。上清を遠心分離により集め、ＳＤＳ  ｂｕｆｆｅｒと混合し、１００℃で５分間処理したサンプルを１５％ＳＤＳゲルで電気泳動後、メンブレンフィルムにトランスファーした。１次抗体としてＡＫＬ５Ｃ１（ジャパンエナジー）、２次抗体：ａｎｔｉ−マウス（ＬＩＦＥ  ＳＣＩＥＮＣＥ）で処理後ＥＣＬ（ａｍｅｒｓｈａｍ  ｐｈａｒｍａｃｉａ  ｂｉｏｔｅｃｈ）処理し、アセチル化バンドの検出を行った（図６）。なお、図６において記載している化合物の濃度の単位はｎＭである。
図６に示す通り、ｐ２１プロモーター誘導活性測定の結果（ＥＣ５０）と一致した阻害傾向が示された。活性基であるチオール基までの炭素鎖数はＣ５のものが最適である。
実施例５３．  細胞毒性テスト
ＳＣＰＯの細胞毒性テストをヒト肺正常細胞（ＴＩＧ−３）、ヒト子宮がん細胞（ＨｅＬａ）を用いて行った。これらＴＩＧ−３細胞、ＨｅＬａ細胞を１０％ＦＢＳを添加したＤＭＥＭ培地を用い、３７℃、５％二酸化炭素存在下、水蒸気飽和したインキュベーターを用いて培養を行った。ＴＩＧ−３は３００００個／ｗｅｌｌ、ＨｅＬａは１００００個／ｗｅｌｌの細胞密度で９６穴マイクロプレートに播種し、各ｗｅｌｌ当たり上記の培地１００μｌ中で１８時間培養した後、培地に希釈した被験化合物溶液を添加し、引き続き４８時間培養した。
各ｗｅｌｌの上清３０μｌを別の９６穴マイクロプレートに移し（Ａ）、残った上清を除いた。そこに、０．５％Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ／ＰＢＳを１００μｌ加えて、細胞を溶解させ、さらに別の９６穴マイクロプレートに３０μｌずつ移した（Ｂ）。これらの９６穴マイクロプレートＡ，Ｂの各ｗｅｌｌにＬＤＨ−Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ｔｅｓｔ（Ｗａｋｏ）の基質溶液を３０μｌずつ入れ、呈色反応をさせた。十分な呈色反応が進んだら、反応停止液６０μｌを加えて呈色反応を停止させた。ＯＤ５６０ｎｍの発色強度をマイクロプレートリーダー（Ｓｏｆｔｍａｘ）で測定した。遊離ＬＤＨ率として［Ａ／（Ａ＋Ｂ）］を求めた。阻害活性は、遊離ＬＤＨ率５０％となるときの濃度をＬＤ５０として示した。なお、がん細胞選択的細胞傷害活性の値（正常細胞ＬＤ５０／がん細胞ＬＤ５０）が高いほど、がん細胞選択的に細胞死を誘導していることを示す。
2003070754.tif 000030
上記表６に示されている通り、今回の化合物はＴＳＡとほぼ同程度のがん細胞選択的に強い細胞傷害活性を有することが示された。
実施例５４．  安定性の評価
ＳＣＯＰ  １５２、ＳＣＯＰ  ３０４及びＳＣＯＰ  ４０２の血清中での安定性の評価は以下の方法で行った。ＦＣＳ  ９９μｌ中にＳＣＯＰ  １５２及びＳＣＯＰ  ３０４（１０ｍＭ）、ＳＣＯＰ  ４０２（１０ｍＭ）を１μｌ加えて３７℃でインキュベートした。これを時間ごとに１ｍｌの酢酸エチルと飽和のために充分な量のＮａＣｌを加えて抽出した。この酢酸エチル相８００μｌをとり、酢酸エチルを留去した後ＤＭＳＯ  １００μｌを加えて溶解させた。この溶液を更にＤＭＳＯで１０倍希釈したものを用いてｐ２１プロモータ誘導活性の測定を行った。インキュベート時間０の活性を１００％として活性を比較した（図７）。
図７に示す通り、血清中でＳＣＯＰ  ３０４およびＳＣＯＰ  ４０２はＳＣＯＰ  １５２よりも長時間安定に活性を保持できることが示された。これはチオール基が保護されたことにより安定性が上昇したと考えられる。
次に、細胞レベルでの安定性の検討を行った。ヒストンのアセチル化レベルにより検討した。ＨｅＬａ細胞に対して化合物を作用させ、抗アセチル化リジン抗体を使用してヒストンのアセチル化レベルをウェスタンで確認した（図８）。詳細には、ヒト子宮がん細胞（ＨｅＬａ）は１０％ＦＢＳを添加したＤＭＥＭ培地を用い、３７℃、５％二酸化炭素存在下、水蒸気飽和したインキュベーターを用いて培養を行った。この細胞を１５０００個／ｍｌの細胞密度で６穴プレートに２ｍｌ播種し、１８時間培養した後、被験化合物溶液をＴＳＡ、ＳＣＯＰ１５２およびＳＣＯＰ３０４は２００ｎＭ、ＳＣＯＰ４０２は１μＭになるよう添加し、引き続き適宜時間培養した。細胞をＰＢＳで洗った後、ｌｙｓｉｓ  ｂｕｆｆｅｒ（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）、１２０ｍＭ  ＮａＣｌ、５ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．５％Ｎｏｎｉｄｅｔ  Ｐ−４０）に懸濁し、ソニケーションした。上清を遠心分離により集め、ＳＤＳ  ｂｕｆｆｅｒと混合し、１００℃で５分間処理したサンプルを１５％ＳＤＳゲルで電気泳動後、メンブレンフィルムにトランスファーした。１次抗体としてＡＫＬ５Ｃ１（ジャパンエナジー）、２次抗体：ａｎｔｉ−マウス（ＬＩＦＥ  ＳＣＩＥＮＣＥ）で処理後ＥＣＬ（ａｍｅｒｓｈａｍ  ｐｈａｒｍａｃｉａ  ｂｉｏｔｅｃｈ）処理し、アセチル化バンドの検出を行った。
本発明の化合物はＨＤＡＣ１，４に対しては強い阻害活性を示したが、ＨＤＡＣ６に対してはほとんど阻害活性を持たなかった。ＨＤＡＣ６は精巣などで発現が高く、正常な組織の分化に関わると推定されるが、発がんとの関わりは示されておらず、ＨＤＡＣ６を阻害することは副作用につながる可能性が考えられる。本発明の化合物にはＨＤＡＣ６阻害作用が非常に弱く、ＴＳＡにないサブタイプ選択性があることからも新しい阻害剤として有用である。更に今回の化合物はテトラペプチド骨格の構造を容易に変えることができるため、さらなる選択性を持たせることができると期待される。
産業上の利用の可能性
上述の通り、本発明の化合物は、ＨＤＡＣ１，４に対して選択的に強い阻害活性を示す。従って、本発明の化合物は、ＨＤＡＣ、とりわけ、ＨＤＡＣ１，４に関与している疾患の治療または予防のための薬剤として、利用し得る。また、本発明の化合物の製造方法は、原料として２−アミノ−ｎ−ハロアルカン酸を用いることにより、種々のタイプの化合物を簡便に合成することができる。そのため、本発明の製造方法を用いることにより、より選択性の高いＨＤＡＣ阻害剤などの開発に寄与することが期待される。
【図面の簡単な説明】
図１は、活性基であるチオール基までの炭素鎖数５のＬＤＬＤ体あるいはＬＤＬＬ体のＳＣＯＰの構造の一覧を示す図である。
図２は、活性基であるチオール基までの炭素鎖数４〜７のＳＣＯＰの構造を示す図である。なお、図においてＳＣＯＰ１５２（Ｃ５）は、図１と重複して示す。
図３は、ホモダイマー型のＳＣＯＰの構造を示す図である。なお、ＳＣＯＰ番号はモノマーの番号を２倍して表示している。
図４は、ＳＣＯＰ１５２に種々の化合物を結合させたハイブリッド型のＳＣＯＰの構造を示す図である。
図５は、天然のＣｙｌ−１，Ｃｙｌ−２は立体コンフォメーションを示す図である。
図６は、細胞内でのヒストンアセチル化レベルを抗アセチル化リジン抗体を用いたウエスタンにより測定した結果を示す写真である。
図７は、ＳＣＯＰ  １５２、ＳＣＯＰ  ３０４およびＳＣＯＰ  ４０２の血清中での安定性の評価を行った結果を示す図である。
図８は、ＳＣＯＰ  １５２、ＳＣＯＰ  ３０４およびＳＣＯＰ  ４０２の細胞レベルでの安定性の評価を行った結果を示す写真である。
【図１】
2003070754.tif 000041
【図２】
2003070754.tif 000042
【図３】
2003070754.tif 000043
【図４】
2003070754.tif 000044
【図５】
2003070754.tif 000045
【図６】
2003070754.tif 000046
【図７】
2003070754.tif 000047
【図８】
2003070754.tif 000048
【国際調査報告】
2003070754.tif 000049
2003070754.tif 000050
2003070754.tif 000051
2003070754.tif 000052