(57)【要約】本発明は、女性ホルモン様活性を有するエンテロラクトン、およびエンテロジオールなどの前駆体となることが知られているＳＤＧ（セコイソラリシネシロール  ジグリコシド）を製造するための方法、および、ＳＤＧを配合することにより製造可能となる、女性ホルモンの乱れからくる諸症状、たとえば更年期障害、骨粗鬆症、高脂血症、高血圧症、肥満、鬱、ほてりなどに有効な食品および飲料を提供するものである。【特許請求の範囲】
【請求項１】
セコイソラリシネシロール  ジグリコシド（ＳＤＧ）含有植物素材を塩基性アルコールで抽出することを特徴とするＳＤＧ高含有物の製造法。
【請求項２】
ＳＤＧ含有植物素材が亜麻種子である、請求項１に記載のＳＤＧ高含有物の製造法。
【請求項３】
亜麻種子が脱脂亜麻粕である請求項２のＳＤＧ高含有物の製造法。
【請求項４】
アルコール濃度が３０から１００％（ｖ／ｖ）である請求項１から３のずれか１項に記載のＳＤＧ含有組成物の製造法。
【請求項５】
塩基性アルコールが０．０５から２Ｎのアルカリを含むアルコールである請求項１から４のいずれか１項に記載のＳＤＧ含有組成物の製造法。
【請求項６】
請求項１から５のいずれか１項に記載された製造法により製造されたＳＤＧ高含有物。
【請求項７】
請求項６に記載されたＳＤＧ高含有物からなる飲食物素材。
【請求項８】
請求項７に記載された飲食物素材を含有する飲食物。
【請求項９】
ＳＤＧを１日の摂取量として１〜１０００ｍｇ含有する、請求項８に記載の飲食物。
【請求項１０】
ＳＤＧを重量当たり０．００１〜９０重量％含有する、請求項８に記載の飲食物。
【請求項１１】
ＳＤＧを１日の摂取量として１０〜９０ｍｇ含有する形態にある請求項８に記載の飲食物。
【請求項１２】
ＳＤＧおよびイソフラボン類を含有する飲食物。
【請求項１３】
ＳＤＧを１日の摂取量として１〜１０００ｍｇ含有する、請求項１２に記載の飲食物。
【請求項１４】
ＳＤＧを重量当たり０．００１〜９０重量％含有する、請求項１２に記載の飲食物。
【請求項１５】
ＳＤＧを１日の摂取量として１０〜９０ｍｇ含有する形態にある請求項１２に記載の飲食物。
【請求項１６】
イソフラボン類を１日当たり１０〜９０ｍｇ摂取できる形態にある、請求項１２に記載の飲食物。
【請求項１７】
ＳＤＧが天然物から抽出されたものである、請求項１２から１６のいずれか１項に記載の飲食物。
【請求項１８】
該天然物がＳＤＧ含有植物素材である、請求項１７に記載の飲食物。
【請求項１９】
該ＳＤＧ含有植物素材が亜麻種子である、請求項１８に記載の飲食物。
【請求項２０】
女性ホルモンの乱れからくる諸症状の予防および／または改善効果を有する、請求項８から１９のいずれか１項に記載の飲食物。
【請求項２１】
更年期障害の症状の予防および／または改善効果を有する、請求項８から１９のいずれか１項に記載の飲食物。
【請求項２２】
骨粗鬆症、高脂血症、高血圧症、肥満、鬱、ほてりのうち選ばれた１つ以上の症状の予防および／または改善効果を有する、請求項８から１９のいずれか１項に記載の飲食物。
【請求項２３】
該飲食物が、パン、ビスケットなどの焼き菓子、ジュース、無糖茶などの飲料、酒類、スープ、飴、ガム、ヨーグルト、アイスクリーム、プディング、ゼリーから選ばれたものである、請求項８から１９のいずれか１項に記載の飲食物。
【請求項２４】
該飲食物が、粉末、顆粒、タブレット、ソフトカプセル、ハードカプセル、内服液、シロップより選ばれた加工形態である、請求項８から１９のいずれか１項に記載の飲食物。
【発明の詳細な説明】
技術分野
本発明は、女性ホルモン様活性を有するエンテロラクトン、およびエンテロジオールなどの前駆体となることが知られており、リグナン化合物の一つであるＳＤＧ（セコイソラリシネシロール  ジグリコシド、図１参照）を製造するための方法、および、ＳＤＧを配合することにより製造可能となる、女性ホルモンの乱れからくる諸症状、たとえば更年期障害、骨粗鬆症、高脂血症、肥満、鬱などに有効な食品および飲料に関するものである。
背景技術
更年期障害は、閉経期を迎えエストロゲンが低下することによるホルモンバランスの乱れを原因とする諸症状と考えられ、閉経期までの数年間継続する症状である。更年期に特徴的な症状としては、鬱、ほてり、などが知られている。また、更年期を過ぎると、閉経が訪れるが、これに伴う症状として、骨粗鬆症、高脂血症、高血圧症、肥満、鬱、などが挙げられる。
いずれも健康維持に大きな影響を与えるものであることから、適切な対処法が望まれている。治療法としては、対症療法として、骨粗鬆症、高脂血症、高血圧症、肥満、鬱に対する個別の治療法が選択される場合もあるが、これらに有効とされているのがＨＲＴすなわちホルモン療法である。症状が複数あっても、女性ホルモンをとることで劇的な改善が得られる場合も多い。
しかし、このＨＲＴには、乳がん、子宮ガンなどの発ガン性のリスクがあることと、擬似生理による出血などの問題もある。発ガン性に関しては、プロゲステロンとの併用によりほぼ解消されたと考えられているが、発ガン性のイメージは根強く、かつ出血の問題などを併せて、ＨＲＴに踏み切る例は、期待効果の大きさほどには多くないと言える。
ＨＲＴに匹敵する効能が食品で得られれば、大きなメリットを産み出すことは容易に想像できる。こうした中、近年、日本はもとより米国でも注目を集めているのが植物エストロゲンである。
植物エストロゲンの代表は、大豆イソフラボンであり、最近注目を集めている食品素材である。大豆イソフラボンは、女性ホルモン様作用を示す成分として知られていることから、女性ホルモンの乱れからくる諸症状、たとえば更年期障害、骨粗鬆症、高脂血症、肥満、鬱などに有効となる知見が数多く得られている。大豆胚芽抽出物に含まれる大豆イソフラボンは、ゲニステイン（Ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ）、ダイゼイン（Ｄａｉｄｚｅｉｎ）およびグリシテイン（Ｇｌｙｃｉｔｉｎ）などの総称であり、ほとんどが配糖体として存在し、腸内微生物によってアグリコン化され、吸収されるものと考えられている。
大豆イソフラボンは構造的にエストロゲンと共通な性質を有することから、エストロゲン受容体に結合することが予想されるが、実際、エストロゲン受容体ＥＲβに選択性をもって結合することが報告されている（Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  １３９，４２５２（１９９８））。
植物エストロゲンは、古くからその存在は知られており、牛の乳の出を良くするなどの効能のほか、大量摂取により不妊となることも知られている。このことから、その使用には十分な注意が必要となる。ヒトにおける安全性を重視した場合、食経験に基づく安全性が最も重要と考えられる。
日本人は、米国人に比べて子宮ガン、乳がん、および男性の前立腺ガンの発症率が極めて低いと同時に、更年期症状も軽いことが知られている（Ｊ．Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ  １２５，７５７Ｓ（１９９５））。血中のイソフラボン濃度は、これを説明する大きな根拠となるが、日本人は米国人に比べ、約１０倍以上あることが確認されている。さらに、大豆イソフラボンは培養細胞や動物を用いた試験により、乳がん、子宮ガンの増殖を抑制することを始め、閉経モデルである卵巣摘出ラットを用いて、骨吸収過程を抑制することにより骨粗鬆症を改善すること、閉経に伴う高脂血症を改善すること、肥満を抑制すること、などの多くの有効性に関する知見が得られている。
こうした知見により、大豆イソフラボンは更年期を始めとする多くの症状を改善する効果が期待でき、かつ安全性も高い植物エストロゲンであると結論づけてよいものと判断できる。
日本人のイソフラボンの平均摂取量は、１日約２０ｍｇと考えられている。積極的にイソフラボンを摂取することが推奨されており、イソフラボン摂取を目的とした食品に関して、（財）日本健康・栄養食品協会では、イソフラボン含有食品と呼ぶイソフラボンを含有する食品における摂取目安量を１０〜９０ｍｇとしている。また、特定保健用食品としても骨吸収抑制作用に基づき、厚生労働省により安全で効能がある素材として許可を得るまでに至っている。
このイソフラボン以外にも、多くの植物エストロゲンと呼ばれる成分が知られている。例えば、ホップに含まれるプレニルナリンゲニン、アルファルファに含まれるクメステロール、そして、最近注目を集めているのは亜麻に含まれるリグナン化合物である。
植物エストロゲンの摂取を地域別に分析すると、東洋ではイソフラボンを主に摂取しているのに対し、北欧では、リグナンを主に摂取していることが判明している。両方の地域ともに、乳がんの発症率および更年期症状の重症度が低いことでその他の地域よりも植物エストロゲンの摂取による恩恵を得ていることが統計的にも示されている。
特にホルモンの作用を有するような活性成分は摂取に十分な注意が必要となる中、イソフラボンとリグナンには、疫学的な有用性を示す知見が存在することからも、イソフラボンとリグナンは世界の２大植物エストロゲンとして研究者によって位置付けられている。
亜麻に含まれるリグナン化合物（亜麻リグナン）は腸内細菌に変換されてエンテロラクトン、エンテロジオールなどの女性ホルモン様作用を示す活性成分に変換されることが明らかにされた（Ｎａｔｕｒｅ  ２９８，６５９（１９８２））。ここで注目すべき点は、リグナン含有植物素材の中で特に亜麻種子に含まれるＳＤＧなどのリグナンが活性成分に変換される効率が高いことがトンプソンらの研究によって明らかになったことである（Ｆｌａｘｓｅｅｄ  ｉｎ  Ｈｕｍａｎ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ，Ｃｈａｐｔｅｒ  ５（ｐ８２−９８），ａｃａｄｅｍｉｃ  ｐｒｅｓｓ，ＡＯＣＳ  Ｐｒｅｓｓ（１９９５））。
このように、亜麻リグナンが注目されているが、亜麻自体は古くは新石器時代より食されている他、古代ギリシャ、ローマ、あるいはエジプト時代から現代に至るまで食用とされつづけている。しかし、亜麻種子のままの摂取においては、殻が硬く摂取しても有効に成分が利用されにくいこと、油の含有率が高く高カロリー食品であること、シアン配糖体が含まれていること、およびビタミンＢのアンタゴニストの存在などの問題がある。さらに、亜麻種子の油は不飽和脂肪酸の含量が多いため劣化しやすく、日本では工業用油としての利用がほとんどであり、これまで食用としては注目されていなかった。
わが国では、通常の食生活においては豆製品の摂取から判断してイソフラボンの摂取はある程度高いレベルを保っていると判断できるのに対し、リグナン型の植物エストロゲンに関しては、摂取量が低いことが指摘されている。しかし、亜麻リグナンを高含有する食品はほとんど存在せず、これらを解決した食品素材の開発が望まれていた。
一方、亜麻に含まれるリグナン化合物を食品添加物として利用するという報告がある。特開平１１−２２１０４８にはイソフラボン、リグナン、サポニン、カテキン、およびフェノール酸を用い、のぼせ、骨粗鬆症、睡眠障害、膣乾燥、月経前症候群を軽減または予防する方法が記載されており、リグナン類の例として亜麻リグナンが記載されている。また、特許第３０６５２５号には、退色防止剤としてリグナン化合物が開示され、ＳＤＧがリグナン化合物の例として記載されている。しかし亜麻リグナンの生理作用については解明されていない。
また、リグナンの製造法に関しては、亜麻種子からのリグナンの抽出法に関する米国特許第５，７０５，６１８号がある。該特許には、アルコール抽出後、濃縮して更にアルカリ処理をするという方法が記載されている。また、日本特許第３０６５９２５には、亜麻種子からのアルコール抽出物または粗リグナン配糖体濃縮物を酵素処理もしくは酸処理する方法が開示されている。しかし、これらの製法は、工程が複雑でかつコスト面も改善余地を残すものである。また、亜麻種子にはたん白質が多く含有されることが知られているが、これらの方法ではアミノ酸含有量の低いものしか得られない。
発明の開示
本発明の目的は、女性ホルモン様活性を有するエンテロラクトン、およびエンテロジオールなどの前駆体となることが知られているＳＤＧ（セコイソラリシネシロール  ジグリコシド）の効率的な製造法を開発し、ＳＤＧを含有する新規食品素材を実用に供することである。
本発明のさらなる目的は、本発明の新規食品素材を配合した、女性ホルモン（主としてエストロジェン）の乱れからくる諸症状、たとえば更年期障害、骨粗鬆症、高脂血症、高血圧症、肥満、鬱、ほてりなどの予防および症状軽減に有効な健康食品も含む形態、ジャンルを問わない食品および飲料を提供することである。
本発明者らは、植物エストロゲンに着目し、さらに亜麻リグナンの生理作用について鋭意検討した結果、驚くべきことに亜麻リグナンに含まれるＳＤＧが女性ホルモンの乱れから来る諸症状たとえば、更年期障害、骨粗鬆症、高血圧症、高脂血症、肥満症、鬱、ほてりなどに対して有効であることを見出した。
さらに、本発明者らは、亜麻種子等に含まれるリグナン化合物ＳＤＧを効率よく、しかも高収率で製造する方法を開発した。本発明においては、ＳＤＧを含む植物材料、例えば亜麻種子またはその脱脂残渣を、塩基性アルコールで抽出する。本発明によれば、驚くべきことに、塩基性アルコールにより抽出と加水分解を同時に行っても、高収率でリグナン化合物ＳＤＧが回収でき、更に原料由来のアミノ酸を合わせて回収することができることが判明した。
従来の、抽出と加水分解を別途行う方法では、両工程の間に濃縮工程も必要であり、事実上３工程が必要であった。これに対して、本発明の方法は１工程でリグナン化合物の抽出が可能であり、ＳＤＧの製造が非常に効率化される。
発明を実施するための最良の形態
本発明における有効成分であるＳＤＧの製造原料としては、リグナン、特にＳＤＧを含有する天然物であれば使用することができる。例えばリグナンは、オーツ麦、コーン、ライ麦、蕎麦、小麦などの全粒穀物中に２〜８ｍｇ／ｋｇで含まれている。亜麻種子には、全粒穀物の１００倍にも相当する８００ｍｇ／Ｋｇのリグナンが含有されていると報告されており、ＳＤＧの製造原料として特に好ましい。
また、ＳＤＧの製造原料としては、亜麻種子を破砕した後、ヘキサンなど、食品の製造に利用できる溶剤で抽出脱脂したものを利用できるが、より望ましくは工業的に亜麻種子から油をヘキサン抽出した残さ、脱脂亜麻粕を用いるのが適当である。この脱脂亜麻粕は通常廃棄されるか家畜の飼料用に用いられており、食品には有効利用されていなかった。
脱脂亜麻粕からのＳＤＧの製法に関しては、二つの留意点がある。一つは亜麻種子に含まれる粘性ムコ多糖の存在、もう一つはリグナン化合物の糖鎖による高分子化である。これらを考慮して開発したＳＤＧの効率的製造法は、分解と同時に抽出するものである。
まず、溶媒に関しては通常植物原料を抽出するのに使われるものが利用可能となるが、特に食品原料として利用可能な溶媒が望ましい。最も適当なのは、食品用のアルコールであり、例えば、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノールである。抽出に使用するアルコールは、粘性ムコ多糖が抽出されない濃度にする必要があり、３０から１００％（ｖ／ｖ）の濃度が望ましいが、例えば５０％（ｖ／ｖ）アルコールで抽出することができる。
さらに、上述の濃度では抽出できないＳＤＧをアルカリ条件下に抽出することで糖鎖を加水分解し未抽出ＳＤＧを抽出させることにより抽出効率を高めることが可能となる。
このことから、アルカリ条件による加水分解と抽出を併せる方法として、本発明の塩基性アルコール抽出法は、目的成分の回収量を高めると同時に工程を簡素化できることから工業的に大きなメリットを有する方法である。また、塩基性アルコールによる抽出法により、亜麻種子に含まれるたん白質がアミノ酸の形で従来法に比べ効率よく抽出される点からも、本発明の製法は有効である。
亜麻粕に対して用いる抽出液は亜麻粕に対して１から２０倍量が適当であるが、バッチ処理に対して循環型の抽出装置ならばより少量の抽出液量で済むことになる。
塩基性アルコール抽出工程に用いるアルカリは、食品製造に利用できるものなら特にその種類は選ばないが、例えば、ＮａＯＨを用いることができる。
添加するＮａＯＨの濃度としては、処理する亜麻粕の量に依存するが、０．０５から２ＮのＮａＯＨ、より好ましくは０．１から０．２Ｎである。
塩基性アルコールによる抽出に関しては、通常のアルコール抽出よりも短時間で行なうことができ、室温で行なう場合には３０分ないし３時間、典型的には約１時間で抽出が完了する。抽出温度は、通常の抽出装置ならばアルコールの沸点以下が望ましく、例えば室温から７０度までの温度が望ましい。加圧可能な抽出装置を利用すれば、より高温での処理も可能となる。
抽出物は、最終的に中和する必要がある。この中和には酸を用いるが、望ましくは食品製造に用いることが出来る酸、たとえば酢酸、塩酸などが良い。添加する酸の量は、抽出物を中和するのに必要な量である。
塩基性アルコール抽出された段階の本発明のＳＤＧ高含有物は、ＳＤＧは原料から１ないし２％回収される。さらに、アミノ酸として、疲労回復、体力増強などが期待できるとされるグルタミン酸、筋肉に取り込まれて直接エネルギー源となると考えられているバリン、イソロイシン、ロイシン等を、従来の方法で抽出したＳＤＧ高含有物に比べて約８〜１０倍も多く含んでいる。従って本ＳＤＧ含有組成物をそのままあるいは飲食物の形態に加工あるいは飲食物に添加して摂取した場合にはＳＤＧの効果に加え、疲労回復、体力増強などの効果も得られる。このＳＤＧ高含有物には、シアン配糖体はほとんど含まれていないので、脱塩してそのまま食品素材として用いることが可能である。さらに純度アップを目的として精製工程でより高含有の食品素材にすることも可能である。精製方法としては、食品製造に適する方法であればその手段を選ばないが、例えば、活性炭あるいは、シリカゲル、逆相系樹脂（ＯＤＳ）、およびスチレンジビニルベンゼン系吸着樹脂（ダイアイオンＨＰ２０、三菱化学製）、あるいは、樹脂を用いない方法として、ＣＰＣ法（遠心液々分離法）、結晶化法、あるいは溶媒に対する溶解性の違いを利用した分画法などを利用することができる。
目的に応じて、用いる条件により、ＳＤＧの含有量は固形分当たり１０％から９０％以上にまで高めることが可能である。特に高純度のサンプルの調製にはＯＤＳを用いた分取用ＨＰＬＣカラムクロマトグラフィーを繰り返すことにより得ることが可能である。
亜麻種子には粘性物質が含有されることから食品・飲料への配合は困難であったが、本発明の製法によれば、この粘性物質を分解することにより、健康維持に有効なリグナン化合物としてＳＤＧを食品・飲料に配合することが可能となった。
得られたＳＤＧ高含有物は通常の減圧濃縮法、あるいは、スプレードライ法、凍結乾燥法などにより乾燥し、好ましくは粉末物にすることができる。
したがって、本発明は、本発明の方法により抽出される新規ＳＤＧ高含有食品素材も提供する。本発明により得られたＳＤＧ高含有食品素材は、ＳＤＧが４０重量％までは無色、無臭、無味であり、水に対する溶解性が大きいので、単独でも粉末食品として、または、きな粉などの粉末食品に混入して食することも可能であり、あるいは食品素材として添加するものとして種々の食品や飲料の製造のために使用することもできる。
本発明は更に、ＳＤＧを配合することにより、容易に摂取すべき量のＳＤＧを摂取することができる、経口摂取用組成物を提供する。
ＳＤＧを配合した本発明の食品・飲料は、女性ホルモン、特にエストロジェンの乱れからくる諸症状の予防や軽減のために、特に適することが見出された。本発明のＳＤＧ含有食品は、ＳＤＧとして１日当たり１ｍｇから１０００ｍｇ、より望ましくは５ｍｇから５００ｍｇ、特に望ましくは１０から２５０ｍｇ摂取されるよう食品に配合するよう設定できる。ＳＤＧ配合量は食品の利用目的により選択され、毎日継続摂取可能な形態の食品に利用する場合には、例えば１０ｍｇから９０ｍｇで良い。一方、より保健的な用途を望む場合には、例えば５００ｍｇまでの配合も可能となる。
粉末食品あるいはタブレットなどの水分含量が低い食品形態、あるいはそのものの摂取量が少ない場合、ＳＤＧ配合割合は高めに設定される。用途に応じた摂取量の違いを考慮してＳＤＧを重量あたり例えば０．１％から９０％含有するものを調整した食品の開発が可能となる。
また、飲料、レトルト食品等をはじめとする水分含量が多くそのもの自体の摂取量が多い場合にはＳＤＧ含量をそれに応じて減らすことができ、重量あたり例えば０．００１％から１０％までの配合が望ましい。
本発明のＳＤＧ高含有物は、一般食品の他、機能性食品、栄養補助食品等の原材料に使用することができる。例としてパン、ビスケット、シリアルバーなどの固形状の食品や、ジュース、スープなどの液状の食品が挙げられる。機能性食品の場合、粉末、顆粒、タブレット、ソフトカプセル、ハードカプセル、内服液、シロップ等の加工形態が挙げられる。これらは、通常使用される方法により製造することができる。
またタブレットを製造する場合であれば、賦形剤としてセルロース、乳糖、デキストリン、粉糖、コーンスターチ、還元麦芽糖、ショ糖脂肪酸エステルなど一般的に使用されているものがいずれも使用できるが、これらに限られるものではない。防湿等のためセラック、カルバナロウ、砂糖などを用いることもあるが、適切にコーティングできるものであれば特に制限はない。その他、他の機能性成分としては抗酸化作用を有する素材、例えばビタミンＥ、ポリフェノール、カルシウム等のミネラルを配合してもよい。
さらに、水に対する溶解性が高いこと、味、香りともに配合に大きな影響をもたらさないことから保健の目的を持った飲料にも利用可能となる。味付けとしてはお茶や清涼飲料、ドリンク剤（粉末ドリンクも含む）などの種々の形態が採用可能となる。通常の飲料形態の場合、０．０１ｍｇ／ｍｌから１０ｍｇ／ｍｌの推奨配合量が設定できる。さらに濃縮タイプの飲料の場合には、上限の配合量は濃縮度に応じて高めれば良いことになる。
これまでＳＤＧとイソフラボンの有効性に関する比較については十分なデータが存在しない。これらの活性比較試験を実施し、ＳＤＧがイソフラボンと同等あるいはそれ以上の効能を有すること、および、両者を組合せた場合により大きな効果がもたらされることが明らかとなった。ＳＤＧとイソフラボンを組み合わせた食品は、本発明によりはじめて提供されるものであり、女性ホルモンの乱れからくる諸症状、たとえば更年期障害、骨粗鬆症、高脂血症、高血圧症、肥満、鬱、ほてりなどに非常に有効な食品および飲料を提供することが可能である。
イソフラボンの配合量は１日当たり例えば１０〜９０ｍｇ摂取できるように配合される。
実施例
以下、本発明に関して、実施例を示して更に説明する。
実施例１
抽出法
市販の亜麻粕を原料とし、亜麻粕１ｋｇを１０Ｌの５０％エチルアルコールに懸濁後、４ＮのＮａＯＨを４００ｍｌ添加した。攪拌しながら温度を５０℃に上げ、１時間抽出した。酢酸を用いて中和後、ろ過し、減圧下濃縮することにより塩基性アルコール抽出物２４２ｇを得た（組成物１）。
比較のために、ＮａＯＨを添加なしに抽出したものを調製した、すなわち亜麻粕１００ｇを５０％エチルアルコール１Ｌで５０℃、４時間抽出後、抽出物をろ過し、４ＮのＮａＯＨを４０ｍｌ添加後４時間５０℃で分解処理した。これを中和後、減圧下濃縮し、１１．１ｇの抽出物を得た（組成物２）。
実施例２
ＳＤＧ分析法、結果
上記組成物１、２に関してＳＤＧの抽出量をＨＰＬＣ分析により比較した。
分析方法は、ＯＤＳカラム（Ｄｅｖｅｒｏｓｉｌ  ５ＨＧ−３、４．６ｘ５０ｍｍ、野村化学社製）を用い、０．１％ＴＦＡ（トリフルオロ酢酸）存在下、流速１ｍｌ／ｍｉｎ、８分間で１０％から８０％にアセトニトリル濃度を増加させるグラディエント条件にて分析を行った。モニターは２８０ｎｍの波長にてＵＶ検出器にて行い、ピーク高をもとに定量分析した。
サンプルは水に溶解して測定を行った。
結果を表１に示す。
ＳＤＧは、本分析条件において、３．８分のリテンションタイムに現れるピークとして検出可能である。
アルコール抽出した組成物２に比べ、塩基性アルコール抽出した組成物２では、約２割収率が高いことが確認された。
2003075686.tif 000002
実施例３
アミノ酸分析法、結果
亜麻種子にはたん白質が多く含有されていることが知られているが、アルコール濃度を高めると抽出しにくいことが予想された。そこで、塩基性アルコール処理によりアミノ酸含有量が高められるかどうかを検討するために、アミノ酸分析を行った。分析は、日立アミノ酸分析システムＬ８８００形高速アミノ酸分析計により、アミノ酸（ＯＰＡ法）分析システムを用いて行った。
結果を表２に示す。塩基性アルコール抽出した新規製法により、従来法では少量しか抽出されていなかったアミノ酸、特に疲労回復、体力増強などが期待できるとされるグルタミン酸の抽出率が８．１倍上昇するとともに、筋肉に取り込まれて直接エネルギー源になると考えられているバリン、ロイシン、イソロイシンなどのアミノ酸含量が約８〜１１倍に上昇したことから、本発明の製法により、こうした有効成分が効率的に回収できることが確認され、本発明の製法の有効性が確認された。
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実施例４
ＨＰ２０精製
実施例１で得られた組成物１の２４２ｇ（ＳＤＧ１５ｇ含有）を水２Ｌに溶解し、これをダイアイオンＨＰ２０（８ｃｍφｘ６０ｃｍカラム）に負荷した。８Ｌの水で洗浄後、４０％エタノール（ｖ／ｖ）５Ｌで溶出した。溶出は流速１ｖｖｍで実施した。得られた分画物（組成物３）は、３９ｇ、ＳＤＧ含量１４．３ｇとなった。
組成物３と同様に実施例１と上述の作業で繰り返し分取して得た９５ｇ（ＳＤＧ３６．６ｇ含有）を水５００ｍｌに溶解し、これをダイアイオンＨＰ２０（８ｃｍφｘ４０ｃｍカラム）に負荷した。水で洗浄後、１０％、１５％、２０％、４０％エタノール（ｖ／ｖ）５Ｌづつでステップワイズ溶出した。溶出は流速１ｖｖｍで実施した。
分画結果を表３に示す。ＳＤＧは、１０％エタノールではほとんど溶出されなかった。引き続き１５％、２０％エタノールで溶出した結果、ＳＤＧ１４．１ｇ、１６．６ｇが回収された。純度はそれぞれ７４．２％、９１．０％となった。さらに、４０％エタノールで溶出した結果、ＳＤＧ２．９ｇが回収され、純度は１１．８％であった。また、これ以上エタノール濃度を上昇させてもＳＤＧは溶出されなかった。
この結果から、ＨＰ２０を用い、純度の高いＳＤＧを調製することが可能となった。例えば、アルコール濃度１５％以上で溶出するのが好ましい。
なお、今回の２０％エタノール溶出画分（組成物４）を、効能試験に供した。
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実施例５
効能１；脂質、骨への効果とイソフラボンとの併用効果
更年期モデル動物を用いたエストロゲン様作用に関する試験
閉経後はエストロゲンの低下に伴う破骨細胞の活性化によって骨量が低下し、骨粗鬆症様の症状が起こることが知られている。また、エストロゲンの低下に伴って脂質代謝のバランスが崩れ、高脂血症や高コレステロール血症などの症状が生じやすい。雌ラットの卵巣を摘出するとエストロゲンレベルが低下して上記のような症状を呈するため、更年期障害のモデル動物として汎用される。ＳＤＧがエストロゲンの低下を補うことによってこれらの更年期障害を抑制する効果を確認するため、卵巣摘出ラットを用いた実験を行なった。
卵巣摘出による骨粗鬆症モデルラットの作製：
Ｗｉｓｔａｒ系ラット（日本チャールズリバー）、♀、３４匹に６週齢で卵巣摘出手術（ＯＶＸ）、同週齢の９匹に疑似手術（Ｓｈａｍ）を施し、ラット用一般飼料ＣＥ−２（日本クレア）にて飼育した。２週間後、卵巣摘出ラットを４群（ｎ＝８〜９）に分け、それぞれＩ〜ＩＶ群とした。陽性対象として、疑似手術を施した卵巣非摘出群（Ｖ群、ｎ＝９）を設けた。
卵巣摘出ラットの飼育：
飼料は、ＡＩＮ−９３Ｍ配合Ｃａ無添加精製飼料（オリエンタル酵母工業製）を基本飼料として、Ｉ群およびＶ群に４週間自由摂取させた。ＩＩ群には大豆イソフラボン、ＩＩＩ群には組成物４（ＳＤＧ９１％含有）、ＩＶ群には大豆イソフラボン（８０％含有）および組成物４を基本飼料にそれぞれ０．１％添加した飼料を摂取させた。飼育終了日にラットの体重を測定した後、解剖して採血および右脚大腿骨の摘出を行なった。
骨量低下抑制効果の判定：
ラットの右脚から摘出した大腿骨は、付着した組織片を取り除いた後、１００℃で２４時間乾燥して重量を測定した。その結果、Ｉ群のラットの体重１００ｇあたりの大腿骨重量は、Ｖ群と比較して著しい低下が見られたが、ＩＩ群、ＩＩＩ群、ＩＶ群ではＩ群と比較して骨重量の低下を抑制する傾向が見られた（表４）。
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脂質代謝改善効果の判定：
ラットの血液から血漿を分離して、自動分析装置（日立）にてトリグリセリドを測定した。Ｉ群で見られた著しいトリグリセリド値の上昇に対して、ＩＩ群では抑制傾向、ＩＩＩ群およびＩＶ群では有意な抑制効果が見られた（表５）。
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上記の試験例から、ＳＤＧは脂質および骨に対する効果を有し、また、イソフラボンと組み合わせることによりその作用が増加することが示され、両者を併用利用することが有効であることが示された。
実施例６
効能２；抗肥満効果
７週齢の雌性Ｗｉｓｔｅｒ系ラットを卵巣摘出し、サンプルを１日１回金属製胃ゾンデを用いて強制経口投与した。投与期間は術後１４日間とした。各群のｎ数は８匹とした。
体重を測定し、閉経後の食欲促進による肥満に対する効果を調べた。サンプルは、陽性対照として１７βエストラジオール、また、比較サンプルとしては大豆イソフラボンの主要化合物であるゲニステインを用いた。また、ＳＤＧは組成物４を用いた。
結果を図２に示す。体重の変化は、ＳＤＧ５０ｍｇ／Ｋｇ、１７βエストラジオール（０．０２ｍｇ／ｋｇ）およびゲニステイン１００ｍｇ／Ｋｇ摂取において体重増加が抑制された。
実施例７
効能３；ほてりの改善とイソフラボンとの相乗効果
更年期モデル動物を用いた試験
閉経後のエストロゲンの急激な低下によってホルモンのバランスが崩れ、自律神経の乱れが生じることによってほてりなどの血管運動障害様の症状が現れる。実験動物においては、雌ラットの卵巣摘出によって尾部皮膚温度が上昇し、更年期障害のほてりに相当する症状が観察される。卵巣摘出ラットにＳＤＧおよび大豆イソフラボンを摂取させ、尾部皮膚温度を測定した。
卵巣摘出による骨粗鬆症モデルラットの作製：
Ｗｉｓｔａｒ系ラット（日本チャールズリバー）、♀、４１匹に６週齢で卵巣摘出手術、同週齢の９匹に擬似手術を施し、ラット用一般試料ＣＥ−２（日本クレア）にて飼育した。１週間後、卵巣摘出ラットを５群（ｎ＝７〜９）に分け、それぞれＩ〜Ｖ群とした。陽性対象として、擬似手術を施した卵巣非摘出群（ｎ＝９）を設けた。
卵巣摘出ラットの飼育：
飼料は、ＡＩＮ−９３Ｍ配合Ｃａ無添加精製飼料（オリエンタル酵母工業製）を基本飼料として、Ｉ群、Ｖ群および卵巣非摘出群に４週間自由に摂取させた。ＩＩ群には大豆イソフラボン、ＩＩＩ群にはＳＤＧ（組成物４）、ＩＶ群には大豆イソフラボンおよびＳＤＧを基本飼料にそれぞれ０．１％添加した飼料を摂取させた。Ｖ群には試験飼料摂取期間中、１７βエストラジオールを１μｇ／ｄａｙとなるように皮下投与した。飼育期間中にラットの尾部皮膚温度を微小精密温度計ＢＡＴ−１２Ｒ（Ｐｈｙｓｉｔｅｍｐ製）によって測定した。卵巣摘出によってラットの尾部皮膚温度は上昇するが、イソフラボンおよびＳＤＧ摂取によって上昇が抑制された。この作用は両者の併用によって更に顕著となり、両者を併用利用することが有効であることが示された（図３）。
効能４；子宮重量に対するＳＤＧとイソフラボンの影響
実施例７において、試験終了時にラットを剖検し、子宮重量を測定した。卵巣摘出によって子宮は萎縮し重量が低下するが、１７βエストラジオールを投与したＶ群の子宮は萎縮が見られず、重量は卵巣非摘出群と同程度であった。これに対してＩＩ群〜ＩＶ群はＩ群と同程度で、子宮の萎縮を抑制する作用が見られなかった。
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実施例８
効能５；更年期女性の不定愁訴改善効果
組成物４を３．３重量％、大豆イソフラボンを６．７重量％、ビタミンＥを０．５重量％含有するタブレットを定法により製造し、試験用タブレットとした。閉経に伴う更年期特有の不定愁訴を訴える女性３３名に試験用タブレットを１日あたり３粒（約６００ｍｇ）ずつ４週間摂取してもらい、Ｋｕｐｐｅｒｍａｎ更年期指数に準じて各症状の変化をアンケート調査した。アンケート結果を集計した結果、眩暈、頭痛、憂鬱感、疲労感、関節痛、筋肉痛が有意に改善し、ほてり、冷えなどの血管運動神経障害様症状は改善傾向が見られた。また、各モニターの簡易更年期指数（ＳＭＩ）は、摂取前期間と比較して有意に低下した（図４）。
実施例９
ＳＤＧを含有するタブレットの調製
表７に示した配合でそれぞれの粉体をミキサーで均一に混合し、打錠機を用いて１粒２００ｍｇのタブレットを打錠した。次にコーティングパン上でセラックを噴霧、乾燥させて、タブレットを製造した。
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実施例１０
ＳＤＧを含有するパンの調製
本発明のＳＤＧ４０％含有抽出物１ｇをドライイースト３ｇ、小麦粉５００ｇ、砂糖５０ｇ、卵１個、塩２ｇ、水３００ｍｌと共にボウルに入れて、混ぜてよくこねた。１５分間発酵させた後、ガス抜きをして、さらに１５分間発酵させた。ガス抜きをして、２０等分して丸く成形した。サラダ油を薄くぬったオーブン皿に並べて１時間２次発酵させた後、１８０度に熱したオーブンで２０分間焼いて、パンを製造した。
実施例１１
飲料
２０Ｌの飲料水に、クエン酸ナトリウム１ｇ、グルコース２００ｇ、ＳＤＧ８０％含有抽出物１ｇを添加し溶解させた後、クエン酸にてｐＨ４．０に調整後、シトラス香料を添加し、１２０ｍｌの褐色ビンに詰めて飲料を製造した。
産業上の利用可能性
本発明によれば、女性ホルモン様活性を有するエンテロラクトン、およびエンテロジオールなどの前駆体となることが知られているＳＤＧ（セコイソラリシネシロール  ジグリコシド）を高含有する新規食品素材およびこれを配合した種々の形態の飲食品の製造が可能となる。
こうしたＳＤＧ含有飲食品、特にＳＤＧとイソフラボンとを含有する飲食品は、女性ホルモンの乱れからくる諸症状、たとえば更年期障害、骨粗鬆症、高脂血症、高血圧症、肥満、鬱、ほてりなどの諸症状を改善できること、あるいは美容効果が期待できる点で、その開発により健康に関する大きな恩恵をもたらすことが期待できる。
【図面の簡単な説明】
図１は、ＳＤＧの構造式を示す。
図２は、抗肥満効果試験における体重の変化を示す。
図３は、ほてりの改善とイソフラボンとの併用効果を示す。
図４は、更年期障女性の不定愁訴改善効果を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【国際調査報告】
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