(57)【要約】本発明は、優れた活性化血液凝固第Ｘ因子阻害活性を示し、血栓・塞栓性疾患の予防または治療剤として有用な［４−［２−［２−ヒドロキシ−５−（Ｎ−ヒドロキシカルバミミドイル）ベンゼンスルホニルアミノ］エチル］−２’−メタンスルホニルビフェニル−３−イルオキシ］酢酸ｎ−ブチル塩酸塩の結晶、それを含有する医薬組成物およびそれらの用途を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
粉末Ｘ線回折による回折パターンが、回折角（２θ±０．１）５．４、８．６、９．１、１２．１、１６．７、１７．３および２１．０度に特徴的なピークを有する、［４−［２−［２−ヒドロキシ−５−（Ｎ−ヒドロキシカルバミミドイル）ベンゼンスルホニルアミノ］エチル］−２’−メタンスルホニルビフェニル−３−イルオキシ］酢酸ｎ−ブチル塩酸塩の結晶。
【請求項２】
請求項１に記載の結晶を有効成分として含有する医薬組成物。
【請求項３】
血栓、塞栓性疾患を予防または治療するための、請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
血栓、塞栓性疾患の予防または治療剤を製造するための、請求項１に記載の結晶の使用。
【請求項５】
請求項１に記載の結晶の治療的有効量を投与することを特徴とする、血栓、塞栓性疾患の治療方法。
【発明の詳細な説明】
〔技術分野〕
本発明は、［４−［２−［２−ヒドロキシ−５−（Ｎ−ヒドロキシカルバミミドイル）ベンゼンスルホニルアミノ］エチル］−２’−メタンスルホニルビフェニル−３−イルオキシ］酢酸ｎ−ブチル塩酸塩の新規な結晶、およびその用途に関する。
〔背景技術〕
式（Ｉ）：
2003078389.tif 000002
で表される［４−［２−［２−ヒドロキシ−５−（Ｎ−ヒドロキシカルバミミドイル）ベンゼンスルホニルアミノ］エチル］−２’−メタンスルホニルビフェニル−３−イルオキシ］酢酸ｎ−ブチル塩酸塩は、当該出願人により見出された文献未記載の新規な化合物である。当該化合物は、優れた活性化血液凝固第Ｘ因子阻害活性を示し、血栓・塞栓性疾患の予防または治療剤として有用な化合物である。これまで当該化合物の結晶多形については知られていない。
〔発明の開示〕
特願２０００−３０５５６９に記載された実施例により得られる結晶（以下、Ａ型結晶と称する）は、保存安定性が悪く、長期保存中に有効成分の含量が低下する問題点を有していた。更にこのＡ型結晶は、ろ過速度が小さいため大量に生産を行う上で取り扱いにくく、工業的生産に不向きであった。そこで本発明者らは、安定性が良好で工業的生産に適した［４−［２−［２−ヒドロキシ−５−（Ｎ−ヒドロキシカルバミミドイル）ベンゼンスルホニルアミノ］エチル］−２’−メタンスルホニルビフェニル−３−イルオキシ］酢酸ｎ−ブチル塩酸塩の結晶について鋭意研究を重ねたところ、当該化合物にはＡ型結晶以外に、Ｂ型結晶および１水和物として得られる結晶の２種類の結晶多形が存在することを見出した。このうち１水和物の形態で得られる結晶は、水溶解度が悪いため製剤化が困難であったが、予想外にもＢ型結晶が、高い水溶解性を示し経口吸収性が良好であり、保存安定性に優れていること、さらにはろ過速度が大きく工業的生産に適した結晶であることを見出し、これらの知見に基づき本発明を完成した。
すなわち本発明は、
（１）  粉末Ｘ線回折による回折パターンが、回折角（２θ±０．１）５．４、８．６、９．１、１２．１、１６．７、１７．３および２１．０度に特徴的なピークを有する、［４−［２−［２−ヒドロキシ−５−（Ｎ−ヒドロキシカルバミミドイル）ベンゼンスルホニルアミノ］エチル］−２’−メタンスルホニルビフェニル−３−イルオキシ］酢酸ｎ−ブチル塩酸塩の結晶（以下、Ｂ型結晶と称する）；
（２）  上記（１）に記載の結晶を有効成分として含有する医薬組成物；
（３）  血栓、塞栓性疾患を予防または治療するための上記（２）に記載の医薬組成物；
（４）  血栓、塞栓性疾患の予防または治療剤を製造するための上記（１）に記載の結晶の使用；および
（５）  上記（１）に記載の結晶の治療的有効量を投与することを特徴とする血栓、塞栓性疾患の治療方法に関する。
〔発明を実施するための最良の形態〕
本発明のＢ型結晶は、以下のようにして製造することができる。すなわち、任意の結晶形態の上記式（Ｉ）で表される化合物を、当該化合物１重量部に対して約４〜約１０重量部、好ましくは約４〜約７重量部のｎ−ブタノールに加熱溶解し、続いて必要に応じて約２０℃〜約５０℃の温度で当該溶液に、当該化合物に対して溶解力の低い第二の溶媒を加え、約０℃〜約３０℃の温度で約３時間〜約２４時間静置するかまたは撹拌することにより、本発明のＢ型結晶を得ることができる。
第二の溶媒としては、例えば、酢酸エチル、アセトン、メチルエチルケトン、ジエチルエーテル、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル、１，２−ジメトキシエタン、テトラヒドロフラン、トルエン、キシレン、クロロベンゼン、アセトニトリルなどが使用され、必要に応じてこれらの溶媒を２種以上組み合せて使用してもよい。第二の溶媒の量は、使用される溶媒の種類によっても異なるが、通常、ｎ−ブタノール１重量部に対して約０．５〜約２重量部が使用される。
このようにして得られる結晶は、図１の粉末Ｘ線回折図に示すように、回折角（２θ±０．１）５．４、８．６、９．１、１２．１、１６．７、１７．３および２１．０度に出現する特徴的なピークによって他の結晶と識別される。
本発明のＢ型結晶は、通常の保存条件では（例えば、２５℃／６０％相対湿度など）では結晶形が変化することなく長期に保存することができ、常法により散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、注射剤などに製剤化することができる。
本発明の結晶を有効成分として含有する医薬組成物を実際の治療に用いる場合、用法に応じ種々の剤型のものが使用される。このような剤型としては、例えば、散剤、顆粒剤、細粒剤、ドライシロップ剤、錠剤、カプセル剤、注射剤、液剤、軟膏剤、坐剤、貼付剤などを挙げることができ、経口または非経口的に投与される。
これらの医薬組成物は、その剤型に応じ製剤学的に公知の手法により、適切な賦形剤、崩壊剤、結合剤、滑沢剤、希釈剤、緩衝剤、等張化剤、防腐剤、湿潤剤、乳化剤、分散剤、安定化剤、溶解補助剤などの医薬品添加物と適宜混合または希釈・溶解することにより調剤することができる。
本発明の医薬組成物を実際の治療に用いる場合、その有効成分である本発明の結晶の投与量は患者の年齢、性別、体重、疾患および治療の程度等により適宜決定されるが、経口投与の場合成人１日当たり約１ｍｇ〜約５０００ｍｇの範囲で、非経口投与の場合は、成人１日当たり約０．０１ｍｇ〜約５００ｍｇの範囲で、一回または数回に分けて適宜投与することができる。
〔実施例〕
本発明の内容を以下の参考例、実施例および試験例でさらに詳細に説明するが、本発明はその内容に限定されるものではない。
尚、各結晶の粉末Ｘ線回折データは、株式会社リガクのＸ線回折装置ＲＩＮＴ２１００を用いて測定した（測定条件；Ｃｕ線、管電圧４０ｋＶ、管電流４０ｍＡ）。各種結晶の融点は、株式会社リガクの示差熱重量同時測定装置（ＴＧ／ＤＴＡ）Ｔｈｅｒｍｏ  ｐｌｕｓ  ＴＧ８１２０を用いて昇温速度１０℃／分で測定し、外挿開始点で示した。
参考例１
［４−［２−［２−ヒドロキシ−５−（Ｎ−ヒドロキシカルバミミドイル）ベンゼンスルホニルアミノ］エチル］−２’−メタンスルホニルビフェニル−３−イルオキシ］酢酸ｎ−ブチル塩酸塩のＡ型結晶
工程１
７−ヒドロキシクロマン−２−オン
水素雰囲気下、７−ヒドロキシクロメン−２−オン（１００ｇ）、１０％パラジウム−炭素（１０ｇ）、テトラヒドロフラン（５００ｍＬ）およびエタノール（８００ｍＬ）の混合物を６５℃で１５時間撹拌した。反応混合物を氷冷し、１０％パラジウム−炭素（１０ｇ）のエタノール（２００ｍＬ）懸濁液を加えた。その混合物を水素雰囲気下、６５℃で１５時間撹拌した。反応混合物をケイソウ土ろ過し、ろ液を減圧下に濃縮して無色の７−ヒドロキシクロマン−２−オン（１０６．５ｇ）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ  ｐｐｍ：２．７５−２．９６（４Ｈ，ｍ），５．８１（１Ｈ，ｂｒ  ｓ），６．５９−６．６６（２Ｈ，ｍ），７．０４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ）
工程２
７−ベンジルオキシクロマン−２−オン
室温撹拌下、７−ヒドロキシクロマン−２−オン（２０２．４ｇ）と炭酸カリウム（３４１．０ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド懸濁液に、塩化ベンジル（１５３．２ｍＬ）を加え、その混合物を室温で１５時間撹拌した。減圧下に反応混合物を濃縮して溶媒を除去し、残渣を酢酸エチル−水の混合溶液に加えた。有機層を分離し、水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥、ろ過した。ろ液を減圧下に濃縮し、残渣をジイソプロピルエーテル−ヘキサン中で擦りつぶし、淡茶色固体の７−ベンジルオキシクロマン−２−オン（２６６．１ｇ）をろ取した。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ  ｐｐｍ：２．７３−２．８１（２Ｈ，ｍ），２．９０−２．９８（２Ｈ，ｍ），５．０５（２Ｈ，ｓ），６．６８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ），６．７３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．３，２．５Ｈｚ），７．０８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ），７．３０−７．４６（５Ｈ，ｍ）
工程３
３−（４−ベンジルオキシ−２−ヒドロキシフェニル）プロピオンアミド
室温下、７−ベンジルオキシ−クロマン−２−オン（３３．２６ｇ）のテトラヒドロフラン（２６４ｍＬ）溶液に２８％アンモニア水（８２ｍＬ）を加えた。室温下に２０分間撹拌した後、氷浴中で反応混合物に１ｍｏｌ／Ｌ塩酸（６５４ｍＬ）を加えた。生じた懸濁液を水（約１Ｌ）で希釈し、析出物をろ取して無色粉末の３−（４−ベンジルオキシ−２−ヒドロキシフェニル）プロピオンアミド（３４．８ｇ）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ  ｐｐｍ：２．６０−２．７０（２Ｈ，ｍ），２．８０−２．９０（２Ｈ，ｍ），５．０１（２Ｈ，ｓ），５．４６（２Ｈ，ｂｒ  ｓ），６．４９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．５，２．５Ｈｚ），６．５８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ），６．９３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），７．２８−７．４５（５Ｈ，ｍ），８．６７（１Ｈ，ｓ）
工程４
３−（４−ベンジルオキシ−２−メトキシメトキシフェニル）プロピオンアミド
氷冷撹拌下、６０％油性水素化ナトリウム（５．６４ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（６２８ｍＬ）懸濁液に３−（４−ベンジルオキシ−２−ヒドロキシフェニル）プロピオンアミド（３４．８ｇ）を加え、５０℃で４０分間撹拌した。氷冷下、反応混合物にクロロメチル＝メチル＝エーテル（１２．３９ｇ）を加え、室温下に１５時間撹拌した。減圧下に反応混合物を濃縮して溶媒を除去し、残渣を酢酸エチル（５００ｍＬ）−トルエン（１００ｍＬ）−水（２００ｍＬ）の混合物中へ注いだ。有機層を分離し、水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥、ろ過した。ろ液を減圧下に濃縮し、無色の固体を得た。その固体を酢酸エチル−ジイソプロピルエーテル中で擦りつぶし、無色固体の３−（４−ベンジルオキシ−２−メトキシメトキシフェニル）プロピオンアミド（３５．３ｇ）をろ取した。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ  ｐｐｍ：２．５０（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），２．９１（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），３．４７（３Ｈ，ｓ），５．０２（２Ｈ，ｓ），５．１８（２Ｈ，ｓ），５．２５−５．４５（２Ｈ，ｍ），６．５６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．５，２．５Ｈｚ），６．７７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ），７．０７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），７．３０−７．４５（５Ｈ，ｍ）
工程５
２−（４−ベンジルオキシ−２−メトキシメトキシフェニル）エチルアミン
６５℃で３−（４−ベンジルオキシ−２−メトキシメトキシフェニル）プロピオンアミド（２８．４２ｇ）および１，８−ジアザビシクロ〔５．４．０〕−７−ウンデセン（４０．４ｍＬ）のメタノール（８９５ｍＬ）溶液にＮ−ブロモこはく酸イミド（１６．０４ｇ）を加えた。６５℃で１５分間撹拌した後、さらにＮ−ブロモこはく酸イミド（１６．０４ｇ）を反応混合物に６５℃で加えた。得られた混合物を６５℃にて１５分間撹拌した後、減圧下に濃縮し、溶媒を除去した。残渣に水および酢酸エチルを加え、有機層を分離した。有機層を水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥、ろ過した。ろ液を減圧下に濃縮し、油状物を得た。この残渣のエタノール（２４２ｍＬ）溶液に８ｍｏｌ／Ｌ水酸化カリウム（６７．６ｍＬ）を加え、この混合物を１５時間加熱還流した。反応混合物を減圧下に濃縮し、溶媒を除去した。残渣に酢酸エチル（５００ｍＬ）−トルエン（５０ｍＬ）−水（３００ｍＬ）を加え、有機層を分離した。有機層を水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥、ろ過した。ろ液を減圧下に濃縮し、残渣を中圧液体シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ヘキサン−酢酸エチル）で精製し、無色油状の２−（４−ベンジルオキシ−２−メトキシメトキシフェニル）エチルアミン（８０．０ｇ）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ  ｐｐｍ：１．３１（２Ｈ，ｂｒｓ），２．７１（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ），２．９０（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ），３．４７（３Ｈ，ｓ），５．０３（２Ｈ，ｓ），５．１７（２Ｈ，ｓ），６．５６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．２，２．５Ｈｚ），６．７９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ），７．０４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ），７．２９−７．４５（５Ｈ，ｍ）
工程６
４−（２−アミノエチル）−３−メトキシメトキシフェノール
水素雰囲気下、２−（４−ベンジルオキシ−２−メトキシメトキシフェニル）エチルアミン（１８．００ｇ）、１０％パラジウム−炭素（デグサ社製：Ｅ１０１  ＮＥ／Ｗ、３．６ｇ）およびエタノール（２３０ｍＬ）の混合物を室温下に１時間撹拌した。触媒をケイソウ土でろ去し、ろ液を減圧下に濃縮して無色固体の４−（２−アミノエチル）−３−メトキシメトキシフェノール（１２．６５ｇ）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ  ｐｐｍ：２．６５−２．７５（２Ｈ，ｍ），２．７５−２．８５（２Ｈ，ｍ），３．４５（３Ｈ，ｓ），５．１６（２Ｈ，ｓ），６．３６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．１，２．３Ｈｚ），６．５８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ），６．９４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ）
工程７
５−カルバモイル−２−メトキシベンゼンスルホニルクロリド
クロロスルホン酸（１７３３ｇ）に氷冷撹拌下、４−メトキシベンズアミド（１５０ｇ）を１５分間かけて少しずつ加えた。その混合物を室温で１４時間撹拌後、５０℃でさらに１．５時間撹拌した。反応混合物を氷（７ｋｇ）に滴下し、析出物をろ取後、水、ヘキサンで洗浄して５−カルバモイル−２−メトキシベンゼンスルホニルクロリド（２３０ｇ）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ：３．８１（３Ｈ，ｓ），７．００（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），７．１０（１Ｈ，ｂｒ  ｓ），７．８４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．５，２．５Ｈｚ），７．８７（１Ｈ，ｂｒ  ｓ），８．２３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ）
工程８
５−シアノ−２−メトキシベンゼンスルホニルクロリド
５−カルバモイル−２−メトキシベンゼンスルホニルクロリド（１５０ｇ）を酢酸エチル（１８００ｍＬ）に懸濁し、氷冷撹拌下塩化チオニル（２１９ｍＬ）を滴下後、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２．３ｍＬ）を加え、５５℃にて３時間撹拌した。反応混合物を減圧下に濃縮後、残渣に酢酸エチルと水を加えた。分離した有機層を水、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液及び飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下に溶媒を留去した。得られた残渣を酢酸エチル−ヘキサンにより再結晶し、５−シアノ−２−メトキシベンゼンスルホニルクロリド（８６．８ｇ）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ  ｐｐｍ：４．１６（３Ｈ，ｓ），７．２４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ），７．９６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．８，２．２Ｈｚ），８．２８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ）
工程９
５−シアノ−Ｎ−〔２−（４−ヒドロキシ−２−メトキシメトキシフェニル）エチル〕−２−メトキシベンゼンスルホンアミド
４−（２−アミノエチル）−３−メトキシメトキシフェノール（１２．３ｇ）および炭酸水素ナトリウム（７．９ｇ）をテトラヒドロフラン（１３３ｍＬ）−水（１４．４ｍＬ）に懸濁させ、５−シアノ−２−メトキシベンゼンスルホニルクロリド（１４．５０ｇ）のテトラヒドロフラン（１８０ｍＬ）溶液を内温１０〜２０℃に保持しながら１０分間隔で１８ｍＬずつ加えた後、室温下にこの混合物を８時間撹拌した。反応混合物をアミノプロピル化シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：酢酸エチル）で精製した後、酢酸エチル−ジイソプロピルエーテルより再結晶し、無色結晶の５−シアノ−Ｎ−〔２−（４−ヒドロキシ−２−メトキシメトキシフェニル）エチル〕−２−メトキシベンゼンスルホンアミド（２１．８７ｇ）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ  ｐｐｍ：２．７４（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．３Ｈｚ），３．１０−３．２０（２Ｈ，ｍ），３．４０（３Ｈ，ｓ），３．８１（３Ｈ，ｓ），４．８５−４．９５（２Ｈ，ｍ），５．０８（２Ｈ，ｓ），６．３８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．２，２．２Ｈｚ），６．５９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ），６．８７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ），７．００（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），７．７８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．５，２．２Ｈｚ），８．１６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ）
工程１０
トリフルオロメタンスルホン酸＝４−〔２−（５−シアノ−２−メトキシベンゼンスルホニルアミノ）エチル〕−３−メトキシメトキシフェニル
氷冷撹拌下、５−シアノ−Ｎ−〔２−（４−ヒドロキシ−２−メトキシメトキシフェニル）エチル〕−２−メトキシベンゼンスルホンアミド（２１．８７ｇ）およびＮ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（１０．２１ｇ）の塩化メチレン（２３０ｍＬ）溶液にトリフルオロスルホン酸無水物（９．３８ｍＬ）を加え、１時間撹拌した。反応混合物に破砕した氷（約５０ｇ）を加え、減圧下に濃縮し、塩化メチレンを除去した。残渣を酢酸エチル（５００ｍＬ）−水（２００ｍＬ）に注ぎ、有機層を分離した。有機層を水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥、ろ過した。ろ液を減圧下に濃縮し、残渣を酢酸エチル−ジイソプロピルエーテルから再結晶して無色粉末のトリフルオロメタンスルホン酸＝４−〔２−（５−シアノ−２−メトキシベンゼンスルホニルアミノ）エチル〕−３−メトキシメトキシフェニル（２４．７５ｇ）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ  ｐｐｍ：２．８６（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），３．１５−３．２５（２Ｈ，ｍ），３．４４（３Ｈ，ｓ），３．８６（３Ｈ，ｓ），４．８９（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），５．１６（２Ｈ，ｓ），６．８６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．５，２．２Ｈｚ），７．００−７．０５（２Ｈ，ｍ），７．１２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），７．８１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．５，２．２Ｈｚ），８．２０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ）
工程１１
５−シアノ−２−メトキシ−Ｎ−〔２−（３−メトキシメトキシ−２’−メチルチオビフェニル−４−イル）エチル〕ベンゼンスルホンアミド
アルゴン雰囲気下、トリフルオロメタンスルホン酸＝４−〔２−（５−シアノ−２−メトキシベンゼンスルホニルアミノ）エチル〕−３−メトキシメトキシフェニル（２４．７５ｇ）、２−（メチルチオ）フェニルホウ酸（８．３２ｇ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（２．７３ｇ）、テトラ−ｎ−ブチルアンモニウムブロミド（７２８ｍｇ）、炭酸ナトリウム（１０．００ｇ）、水（４８ｍＬ）およびトルエン（２８５ｍＬ）の混合物を８５℃で１５時間加熱した。沈殿物をろ取し、酢酸エチルおよび水で順次洗浄し、黄色粉末の５−シアノ−２−メトキシ−Ｎ−〔２−（３−メトキシメトキシ−２’−メチルチオビフェニル−４−イル）エチル〕ベンゼンスルホンアミド（１９．７４ｇ）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ  ｐｐｍ：２．４０（３Ｈ，ｓ），２．８８（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．３Ｈｚ），３．１９−３．２７（２Ｈ，ｍ），３．４３（３Ｈ，ｓ），３．８２（３Ｈ，ｓ），５．０４（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．７Ｈｚ），５．１７（２Ｈ，ｓ），６．９５−７．０５（２Ｈ，ｍ），７．０８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），７．１０−７．２５（３Ｈ，ｍ），７．２５−７．３０（１Ｈ，ｍ），７．３０−７．４０（１Ｈ，ｍ），７．７９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．８，２．２Ｈｚ），８．２２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ）
工程１２
５−シアノ−Ｎ−〔２−（２’−メタンスルホニル−３−メトキシメトキシビフェニル−４−イル）エチル〕−２−メトキシベンゼンスルホンアミド
水冷撹拌下、５−シアノ−２−メトキシ−Ｎ−〔２−（３−メトキシメトキシ−２’−メチルチオビフェニル−４−イル）エチル〕ベンゼンスルホンアミド（２６．４４ｇ）および炭酸水素ナトリウム（３５．６ｇ）のアセトン（５３０ｍＬ）−水（１０６ｍＬ）懸濁液にオキソン（登録商標、８１．５ｇ）を１５分間隔で２回に分けて加え、同条件下に３時間撹拌拌した。氷冷撹拌下、反応混合物にジエチルエーテル（１００ｍＬ）、水（１００ｍＬ）および飽和亜硫酸ナトリウム水溶液を加えた。得られた混合物を減圧下に濃縮し、アセトンを留去した。氷冷撹拌下、この濃縮物に水（３００ｍＬ）およびジエチルエーテル−ヘキサンを加え、３０分間撹拌した。析出物をろ取し、水およびジエチルエーテル−ヘキサンで洗浄し、白色粉末の５−シアノ−Ｎ−〔２−（２’−メタンスルホニル−３−メトキシメトキシビフェニル−４−イル）エチル〕−２−メトキシベンゼンスルホンアミド（２７．１ｇ）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ：２．６５−２．７５（２Ｈ，ｍ），２．７９（３Ｈ，ｓ），３．０５−３．１５（２Ｈ，ｍ），３．３０−３．３５（３Ｈ，ｍ），４．００（３Ｈ，ｓ），５．１５（２Ｈ，ｓ），６．９４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．６，１．６Ｈｚ），７．０６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ），７．１６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），７．３５−７．４５（２Ｈ，ｍ），７．６６（１Ｈ，ｔｄ，Ｊ＝７．６，１．３Ｈｚ），７．７０−７．８０（２Ｈ，ｍ），８．０５−８．１５（３Ｈ，ｍ）
工程１３
５−シアノ−Ｎ−〔２−（３−ヒドロキシ−２’−メタンスルホニルビフェニル−４−イル）エチル〕−２−メトキシベンゼンスルホンアミド
５−シアノ−Ｎ−〔２−（２’−メタンスルホニル−３−メトキシメトキシビフェニル−４−イル）エチル〕−２−メトキシベンゼンスルホンアミド（１４．８９ｇ）のイソプロピルアルコール（３０ｍＬ）−テトラヒドロフラン（９０ｍＬ）懸濁液に濃塩酸（１１．７ｍＬ）を加え、５０℃で２時間撹拌した。反応混合物を水（５０ｍＬ）で希釈し、酢酸エチル（１５０ｍＬ）で抽出した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液および飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥、ろ過した。ろ液を減圧下に濃縮し、残渣をアミノプロピル化シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：酢酸エチル−メタノール）で精製して無色アモルファスの５−シアノ−Ｎ−〔２−（３−ヒドロキシ−２’−メタンスルホニルビフェニル−４−イル）エチル〕−２−メトキシベンゼンスルホンアミド（１０．２２ｇ）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ  ｐｐｍ：２．６９（３Ｈ，ｓ），２．８７（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ），３．２０−３．３０（２Ｈ，ｍ），３．９８（３Ｈ，ｓ），５．３４（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．７Ｈｚ），５．９３（１Ｈ，ｓ），６．８８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．６，１．６Ｈｚ），６．９７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ），７．０５−７．１５（２Ｈ，ｍ），７．３３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．６，１．３Ｈｚ），７．５６（１Ｈ，ｔｄ，Ｊ＝７．６，１．３Ｈｚ），７．６５（１Ｈ，ｔｄ，Ｊ＝７．６，１．３Ｈｚ），７．８２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．５，２．２Ｈｚ），８．１５−８．２５（２Ｈ，ｍ）
工程１４
〔４−〔２−（５−シアノ−２−メトキシベンゼンスルホニルアミノ）エチル〕−２’−メタンスルホニルビフェニル−３−イルオキシ〕酢酸エチル
５−シアノ−Ｎ−〔２−（３−ヒドロキシ−２’−メタンスルホニルビフェニル−４−イル）エチル〕−２−メトキシベンゼンスルホンアミド（５．７２ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５７ｍＬ）溶液にＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２．４６ｍＬ）およびブロモ酢酸エチル（１．３７ｍＬ）を加え、５０℃で１５時間撹拌した。反応混合物を水（１００ｍＬ）に注ぎ、酢酸エチル（１５０ｍＬ）−トルエン（２０ｍＬ）で抽出した。有機層を水および飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥、ろ過した。ろ液を減圧下に濃縮し、残渣をアミノプロピル化シリカゲルクロマトグラフィー（溶出溶媒：酢酸エチル−ヘキサン）で精製し、アモルファスの〔４−〔２−（５−シアノ−２−メトキシベンゼンスルホニルアミノ）エチル〕−２’−メタンスルホニルビフェニル−３−イルオキシ〕酢酸エチル（２．９６ｇ）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ  ｐｐｍ：１．２８（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ），２．５９（３Ｈ，ｓ），２．９５（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），３．３０−３．６０（２Ｈ，ｍ），３．９９（３Ｈ，ｓ），４．２３（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝６．９Ｈｚ），４．６８（２Ｈ，ｓ），５．４３（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．３Ｈｚ），６．９５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．６，１．６Ｈｚ），７．０４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ），７．０９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），７．２０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），７．３６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．６，１．３Ｈｚ），７．５７（１Ｈ，ｔｄ，Ｊ＝７．６，１．３Ｈｚ），７．６５（１Ｈ，ｔｄ，Ｊ＝７．６，１．３Ｈｚ），７．８０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．５，２．２Ｈｚ），８．２０−８．２５（２Ｈ，ｍ）
工程１５
〔４−〔２−（５−シアノ−２−ヒドロキシベンゼンスルホニルアミノ）エチル〕−２’−メタンスルホニルビフェニル−３−イルオキシ〕酢酸エチル
〔４−〔２−（５−シアノ−２−メトキシベンゼンスルホニルアミノ）エチル〕−２’−メタンスルホニルビフェニル−３−イルオキシ〕酢酸エチル（４．６２ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（４０ｍＬ）溶液に塩化リチウム（１．０３ｇ）を加え、１４０℃で２時間撹拌した。反応混合物を室温に戻した後、酢酸エチル（６０ｍＬ）−トルエン（６ｍＬ）−１ｍｏｌ／Ｌ塩酸（３２ｍＬ）混合物に注いだ。有機層を分離し、有機層を１ｍｏｌ／Ｌ塩酸および飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥、ろ過した。ろ液を減圧下に濃縮し、残留物をアミノプロピル化シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：酢酸−酢酸エチル）で精製し、無色アモルファスの〔４−〔２−（５−シアノ−２−ヒドロキシベンゼンスルホニルアミノ）エチル〕−２’−メタンスルホニルビフェニル−３−イルオキシ〕酢酸エチル（３．６７ｇ）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ：１．１４（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），２．７１（３Ｈ，ｓ），２．７５−２．８２（２Ｈ，ｍ），３．０７−３．１６（２Ｈ，ｍ），４．１０（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），４．７５（２Ｈ，ｓ），６．９０−６．９５（２Ｈ，ｍ），７．１２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），７．２０−７．３０（１Ｈ，ｍ），７．３８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．６，１．３Ｈｚ），７．４５−７．６０（１Ｈ，ｂｒ  ｓ），７．６５（１Ｈ，ｔｄ，Ｊ＝７．６，１．３Ｈｚ），７．７５（１Ｈ，ｔｄ，Ｊ＝７．６，１．３Ｈｚ），７．８７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．５，２．２Ｈｚ），８．０１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ），８．０７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．６，１．３Ｈｚ），１１．８０−１２．３０（１Ｈ，ｂｒ）
工程１６
〔４−〔２−〔２−ヒドロキシ−５−（Ｎ−ヒドロキシカルバミミドイル）ベンゼンスルホニルアミノ〕エチル〕−２’−メタンスルホニルビフェニル−３−イルオキシ〕酢酸エチル
〔４−〔２−（５−シアノ−２−ヒドロキシベンゼンスルホニルアミノ）エチル〕−２’−メタンスルホニルビフェニル−３−イルオキシ〕酢酸エチル（２．０１ｇ）の飽和塩化水素−エタノール（１．０ｍＬ）懸濁液を室温下に３時間撹拌した。反応混合物を減圧下に濃縮し、残渣をエタノール（２０．０ｍＬ）に溶かした。この溶液に酢酸ヒドロキシルアンモニウム（３．３４ｇ）を加え、室温下に１３時間撹拌した。反応混合物を酢酸エチル−水に注ぎ、有機層を分離した。水層を酢酸エチルで抽出した。有機層を合し、飽和食塩水で洗浄、無水硫酸マグネシウムで乾燥、ろ過した。ろ液を減圧下に濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：酢酸エチル）で精製してアモルファスの〔４−〔２−〔２−ヒドロキシ−５−（Ｎ−ヒドロキシカルバミミドイル）ベンゼンスルホニルアミノ〕エチル〕−２’−メタンスルホニルビフェニル−３−イルオキシ〕酢酸エチル（１．９０ｇ）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ：１．１２（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ），２．７０（３Ｈ，ｓ），２．７５−２．８５（２，ｍ），３．００−３．１０（２Ｈ，ｍ），４．０８（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝６．９Ｈｚ），４．７５（２Ｈ，ｓ），５．７７（２Ｈ，ｂｒ  ｓ），６．８５−６．９５（２Ｈ，ｍ），６．９７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），７．１０−７．２５（２Ｈ，ｍ），７．３５−７．４０（１Ｈ，ｍ）７．６０−７．８０（３Ｈ，ｍ），７．９５−８．１０（２Ｈ，ｍ），９．５３（１Ｈ，ｂｒ  ｓ），１０．９（１Ｈ，ｂｒ  ｓ）
工程１７
〔４−〔２−〔２−ヒドロキシ−５−（Ｎ−ヒドロキシカルバミミドイル）−ベンゼンスルホニルアミノ〕エチル〕−２’−メタンスルホニルビフェニル−３−イルオキシ〕酢酸ｎ−ブチル塩酸塩のＡ型結晶
〔４−〔２−〔２−ヒドロキシ−５−（Ｎ−ヒドロキシカルバミミドイル）−ベンゼンスルホニルアミノ〕エチル〕−２’−メタンスルホニルビフェニル−３−イルオキシ〕酢酸エチル（１．４９９ｇ）の３４％塩化水素−ｎ−ブタノール（２０ｍＬ）溶液を６０℃で３時間撹拌した。反応混合物を減圧下に濃縮し、得られた粗結晶をｎ−ブタノール−ジイソプロピルエーテルから再結晶し、白色結晶の〔４−〔２−〔２−ヒドロキシ−５−（Ｎ−ヒドロキシカルバミミドイル）−ベンゼンスルホニルアミノ〕エチル〕−２’−メタンスルホニルビフェニル−３−イルオキシ〕酢酸ｎ−ブチル塩酸塩（１．４７２ｇ）を得た。この結晶の粉末Ｘ線回折図は、図３に示す通りであり、Ａ型結晶であることが確認された。
融点；１５５℃
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ：０．７８（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），１．１５−１．３０（２Ｈ，ｍ），１．４０−１．５５（２Ｈ，ｍ），２．７２（３Ｈ，ｓ），２．７５−２．８５（２Ｈ，ｍ），３．０５−３．１５（２Ｈ，ｍ），４．０５（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），４．７８（２Ｈ，ｓ），６．９０−６．９５（２Ｈ，ｍ），７．１８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），７．２０−７．３０（１Ｈ，ｍ），７．３７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），７．４２−７．５０（１Ｈ，ｍ），７．６６（１Ｈ，ｔｄ，Ｊ＝７．６，１．３Ｈｚ），７．７２−７．８２（２Ｈ，ｍ），８．０２−８．１０（２Ｈ，ｍ），８．６０−９．６０（１Ｈ，ｂｒ），１０．８５−１１．３０（１Ｈ，ｂｒ），１１．８０−１２．２０（１Ｈ，ｂｒ），１２．５０−１３．０５（１Ｈ，ｂｒ）
参考例２
［４−［２−［２−ヒドロキシ−５−（Ｎ−ヒドロキシカルバミミドイル）ベンゼンスルホニルアミノ］エチル］−２’−メタンスルホニルビフェニル−３−イルオキシ］酢酸ｎ−ブチル塩酸塩１水和物の結晶
参考例１で得られた４−［２−［２−ヒドロキシ−５−（Ｎ−ヒドロキシカルバミミドイル）−ベンゼンスルホニルアミノ］エチル］−２’−メタンスルホニルビフェニル−３−イルオキシ］酢酸ｎ−ブチル塩酸塩の粗結晶（８２７ｍｇ）および１規定塩酸（１２．６ｍＬ）の混合物を４０℃に加熱し、終夜撹拌した。得られた結晶を濾取後、減圧下、４０℃で一夜乾燥し、８２３ｍｇの結晶を得た。得られた結晶は、カールフィッシャー水分測定の結果、１水和物であることが判明した。この結晶の粉末Ｘ線回折図は、図２に示す通りである。
融点；１３３℃
実施例１
［４−［２−［２−ヒドロキシ−５−（Ｎ−ヒドロキシカルバミミドイル）ベンゼンスルホニルアミノ］エチル］−２’−メタンスルホニルビフェニル−３−イルオキシ］酢酸ｎ−ブチル塩酸塩のＢ型結晶
参考例１で得られた［４−［２−［２−ヒドロキシ−５−（Ｎ−ヒドロキシカルバミミドイル）−ベンゼンスルホニルアミノ］エチル］−２’−メタンスルホニルビフェニル−３−イルオキシ］酢酸ｎ−ブチル塩酸塩の粗結晶（４７６ｇ）およびｎ−ブタノール（２．１Ｋｇ）の混合物を８６℃に加熱し、完全に溶解するまで撹拌した。不溶物をろ過後、４５℃まで冷却し、同温度で酢酸エチル（２．５Ｋｇ）を滴下した。Ｂ型結晶の種晶を投入後、室温下一夜撹拌し、結晶を析出させた。更に、氷浴下で５．５時間撹拌した後、析出した結晶を濾取した。この結晶を酢酸エチル−ｎ−ブタノール（１５０ｇ−３００ｇ）で洗浄し、さらに酢酸エチル（６５０ｇ）で洗浄した。減圧下、４０℃で一夜乾燥し、３６０ｇの結晶を得た。この結晶の粉末Ｘ線回折図は、図１に示す通りであり、Ｂ型結晶であることが確認された。
融点；１６８℃
実施例２
［４−［２−［２−ヒドロキシ−５−（Ｎ−ヒドロキシカルバミミドイル）ベンゼンスルホニルアミノ］エチル］−２’−メタンスルホニルビフェニル−３−イルオキシ］酢酸ｎ−ブチル塩酸塩のＢ型結晶
参考例１で得られた［４−［２−［２−ヒドロキシ−５−（Ｎ−ヒドロキシカルバミミドイル）−ベンゼンスルホニルアミノ］エチル］−２’−メタンスルホニルビフェニル−３−イルオキシ］酢酸ｎ−ブチル塩酸塩の粗結晶（２００ｍｇ）およびｎ−ブタノール（１．２ｍＬ）の混合物を１００℃に加熱し、完全に溶解するまで撹拌した。混合液を室温まで冷却し、メチルエチルケトン（１．２ｍＬ）を加えた。室温下一夜撹拌し、結晶を析出させた。結晶をろ取し、得られた結晶を酢酸エチル（０．８ｍＬ）で洗浄した。減圧下、４０℃で一夜乾燥し、１３５ｍｇの結晶を得た。得られた結晶は、粉末Ｘ線回折測定の結果、Ｂ型結晶であることが確認された。
融点；１６８℃
実施例３
［４−［２−［２−ヒドロキシ−５−（Ｎ−ヒドロキシカルバミミドイル）ベンゼンスルホニルアミノ］エチル］−２’−メタンスルホニルビフェニル−３−イルオキシ］酢酸ｎ−ブチル塩酸塩のＢ型結晶
参考例１で得られた［４−［２−［２−ヒドロキシ−５−（Ｎ−ヒドロキシカルバミミドイル）−ベンゼンスルホニルアミノ］エチル］−２’−メタンスルホニルビフェニル−３−イルオキシ］酢酸ｎ−ブチル塩酸塩の粗結晶（１００ｍｇ）およびｎ−ブタノール（１．０ｍＬ）の混合物を９０℃で加熱し、完全に溶解するまで撹拌した。この混合物を室温まで冷却し、１，２−ジメトキシエタン（０．８ｍＬ）を滴下した。室温下一夜撹拌し、結晶を析出させた。得られた結晶を濾取後、酢酸エチル（０．８ｍＬ）で洗浄した。減圧下、４０℃で一夜乾燥し、５２ｍｇの結晶を得た。得られた結晶は、粉末Ｘ線回折測定の結果、Ｂ型結晶であることが確認された。
融点；１６８℃
試験例１
保存安定性試験
被験試料を４０℃／９０％相対湿度に２ヶ月間保存し、以下の条件のＨＰＬＣにより残存率を求めた。
ＨＰＬＣ条件：
検出波長；  ２２５ｎｍ
カラム；    ＣＡＰＣＥＬＬ  ＰＡＫ  Ｃ１８，ＭＧ  ５μｍ，３．０ｍｍＩ．Ｄ．ｘ  ２５０ｍｍ
カラム温度；３５℃
移動相；    ０．０２ｍｏｌ／Ｌリン酸緩衝液（ｐＨ６．０）：アセトニトリル混液
０→２０ｍｉｎ    ４２：５８
２０→４０ｍｉｎ  ４２：５８→７０：３０
４０→４５ｍｉｎ  ７０：３０
流速；      ０．５ｍＬ／ｍｉｎ
結果を表１に示した。
2003078389.tif 000003
試験例２
飽和水溶解度
被験試料約４０ｍｇを容器に取り、これに水約１５ｍＬを加え懸濁した。撹拌下３７℃に加温し、経時的に試料約１ｍＬを採取した。この液を０．４５μｍのフィルターでろ過し、ろ液５００μＬを正確に取り、水／アセトニトリル混液（１／１）５００μＬを加え、試料溶液とし、試料溶液５μＬにつき以下の分析条件により高速液体クロマトグラフ法により定量した。各採取ポイントの溶解度の内、最高濃度を飽和水溶解度とした。
ＨＰＬＣ条件：
検出波長；    ２２５ｎｍ
カラム；      Ｉｎｅｒｔｓｉｌ  ＯＤＳ−３，５μｍ，４．６ｍｍＩ．Ｄ．ｘ  ２５０ｍｍ
カラム温度；  ３０℃
移動相；      ０．０２ｍｏｌ／Ｌリン酸緩衝液（ｐＨ３．０）：アセトニトリル混液０→３０ｍｉｎ  ４２：５８
流速；        １．０ｍＬ／ｍｉｎ
測定時間；    ３０ｍｉｎ
結果を表２に示した。
2003078389.tif 000004
試験例３
活性化血液凝固第Ｘ因子阻害活性およびプロトロビン時間（ＰＴ）の測定
一晩絶食した６〜９週齢ウイスター系雄性ラット（ＳＬＣ）に、被験試料を０．５％メチルセルロース溶液に６．０ｍｇ／ｍＬになるように懸濁し、５．０ｍＬ／ｋｇを経口投与した。投与前および投与３０分後、頚静脈より１／１０容３．１３％クエン酸ナトリウム加血液を採取し、遠心により血漿サンプルを得た。この血漿サンプルを用いて、被験試料の活性化血液凝固第Ｘ因子およびプロトロビン時間（ＰＴ）に対する影響を調べた。
１）活性化血液凝固第Ｘ因子阻害活性
９６穴マイクロプレートに血漿サンプル２．５μＬ、ｐＨ８．４の１００ｍＭトリス・２００ｍＭ塩化ナトリウム緩衝液２００μＬおよびヒト活性化血液凝固第Ｘ因子（カルバイオケミ社製）をゼラチン−グリシン緩衝溶液で０．０６Ｕ／ｍＬに調製した溶液１０μＬを分注し、１ｍＭ  Ｓ−２２２２（第一化学薬品株式会社製）水溶液５０μＬを加えて。室温で１０分間インキュベートした。６０％酢酸水溶液５０μＬを加えて反応を停止し、吸光度（４０５ｎｍ）をマイクロプレートリーダー（スペクトラマックス２５０，モレキュラーデバイス社製）を用いて測定した。血漿サンプルの代わりにコントロール血漿２．５μＬを加えたものをコントロールとし、ヒト活性化血液凝固第Ｘ因子溶液の代わりにゼラチン−グリシン緩衝溶液１０μＬを加えたものをブランクとした。コントロールの吸光度を１００％として血漿サンプルの阻害％を算出し、活性化血液凝固第Ｘ因子阻害活性の指標とした。結果を表３に示した。
２）プロトロビン時間（ＰＴ）の測定
血漿５０μＬを３７℃に加温した専用キュベットに加え、１分後に３７℃に保温したＰＴ試薬（ベーリンガー・マンハイム株式会社製）１００μＬを加え、自動血液凝固時間測定装置（ＳＴ４，ベーリンガー・マンハイム株式会社製）を用いて凝固時間を測定しＰＴとした。被験試料投与前のＰＴに対する投与後のＰＴの比を求め、抗凝固活性の指標とした。結果を表３に示した。
2003078389.tif 000005
〔産業上の利用可能性〕
本発明の［４−［２−［２−ヒドロキシ−５−（Ｎ−ヒドロキシカルバミミドイル）ベンゼンスルホニルアミノ］エチル］−２’−メタンスルホニルビフェニル−３−イルオキシ］酢酸ｎ−ブチル塩酸塩のＢ型結晶は、ろ過速度が十分に大きいので取り扱いが容易であり、簡便な精製操作により容易に高純度とすることが可能であり、工業的生産に適した結晶である。さらに当該結晶は、水溶解度が高く経口吸収性が良好であり、優れた保存安定性を有するので製剤化に適した結晶である。それ故、当該結晶は、医薬品原体として極めて有用である。
【図面の簡単な説明】
図１は、実施例１で得られた［４−［２−［２−ヒドロキシ−５−（Ｎ−ヒドロキシカルバミミドイル）ベンゼンスルホニルアミノ］エチル］−２’−メタンスルホニルビフェニル−３−イルオキシ］酢酸ｎ−ブチル塩酸塩のＢ型結晶の粉末Ｘ線回折図である。縦軸はＸ線の強度（ｃｐｓ）を示し、横軸は回折角（２θ）を示す。
図２は、参考例２で得られた［４−［２−［２−ヒドロキシ−５−（Ｎ−ヒドロキシカルバミミドイル）ベンゼンスルホニルアミノ］エチル］−２’−メタンスルホニルビフェニル−３−イルオキシ］酢酸ｎ−ブチル塩酸塩１水和物の結晶の粉末Ｘ線回折図である。縦軸はＸ線の強度（ｃｐｓ）を示し、横軸は回折角（２θ）を示す。
図３は、参考例１で得られた［４−［２−［２−ヒドロキシ−５−（Ｎ−ヒドロキシカルバミミドイル）ベンゼンスルホニルアミノ］エチル］−２’−メタンスルホニルビフェニル−３−イルオキシ］酢酸ｎ−ブチル塩酸塩のＡ型結晶の粉末Ｘ線回折図である。縦軸はＸ線の強度（ｃｐｓ）を示し、横軸は回折角（２θ）を示す。
【図１】
2003078389.tif 000006
【図２】
2003078389.tif 000007
【図３】
2003078389.tif 000008
【国際調査報告】
2003078389.tif 000009
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