(57)【要約】      （修正有）【課題】化学療法剤耐性がんに対する新規治療方法の提供。【解決手段】ラパチニブ耐性乳がん、ダウノルビシン耐性骨髄性白血病及びドセタキセル耐性前立腺がんから選択される化学療法剤耐性がんを処置するための医薬組成物であって、ラパチニブ、ダウノルビシン及びドセタキセルから選択される化学療法剤と、ウィルホルリドＡとを含む医薬組成物（但し、医薬組成物の成分として、雷公藤の抽出物を除く）。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
化学療法剤に対して耐性を獲得している、がんに罹っている患者を処置する方法であって、そのような処置を必要とする患者にウィルホルリドＡと前記化学療法剤とを組み合わせるための柔軟で積極的なレジメンで投与することを含み、ウィルホルリドＡの投与用量は、前記化学療法剤に対する獲得耐性を克服するのに十分である、上記方法。
【請求項２】
前記がんが、乳がん、白血病又は前立腺がんである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記化学療法剤が、トポイソメラーゼ阻害剤又は二重チロシンキナーゼ阻害剤である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記トポイソメラーゼ阻害剤が、ドセタキセル又はダウノルビシンである、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
ウィルホルリドＡとドセタキセルとを組み合わせるための前記積極的なレジメンが、７５ｍｇ／ｍ２のドセタキセルを３週ごとに少なくとも１回、１〜１０回の３週サイクルの間投与することを含む、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
ウィルホルリドＡとダウノルビシンとを組み合わせるための前記積極的なレジメンが、２５〜５０ｍｇ／ｍ２のダウノルビシンを１週ごとに少なくとも１回、１〜１０回の１週サイクルの間投与することを含む、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
前記二重チロシンキナーゼ阻害剤が、ラパチニブである、請求項３に記載の方法。
【請求項８】
ウィルホルリドＡとラパチニブとを組み合わせるための前記積極的なレジメンが、１０００〜１５００ｍｇのラパチニブを少なくとも１日１回、２１日間投与することを含む、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
投与されるウィルホルリドＡ用量の少なくとも一部が、前記化学療法剤の投与前に投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
ウィルホルリドＡ及び前記化学療法剤が共投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
ウィルホルリドＡの前記投与用量が、ウィルホルリドＡの細胞毒性用量よりも低い、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
ウィルホルリドＡと化学療法剤との組み合わせを含む、がんに罹っている患者の処置に使用するための化学療法組成物であって、ウィルホルリドＡの用量は、患者の前記化学療法剤に対する耐性を克服するのに十分であり、ウィルホルリドＡの用量は細胞毒性がなく、前記化学療法剤の用量は前記患者を処置するのに十分である、上記組成物。
【請求項１３】
前記がんが、乳がん、白血病又は前立腺がんである、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】
前記化学療法剤が、ドセタキセル、ダウノルビシン、又はラパチニブである、請求項１２に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、化学療法剤の有効性を増強するためのウィルホルリドＡの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
薬剤耐性は、化学療法を継続するうちに必ず進行する。この問題を克服することは、がんの処置における主要な課題である。事実、腫瘍細胞は、化学療法剤に対するそれらの耐性を増加させるために複数のメカニズムを利用している。例えば、腫瘍細胞は、多剤耐性トランスポーター及びがんタンパク質上皮成長因子受容体遺伝子を過剰発現するだけでなく、グルタチオン代謝及び薬物解毒に関与する広範な遺伝子を上方制御するレドックスセンシング転写因子であるＮＦ−Ｅ２関連因子２の活性を誘発する。（Ｈｕａｎｇら、２００５ａ年；Ｍａｋａｒｏｖｓｋｉｙら、２００２年；Ｗａｎｇら、２０１０年）；（Ｓａｌｚｂｅｒｇら、２００７年；Ｓｉｒｏｔｎａｋら、２０００年）；（Ｓｉｎｇｈら、２０１０年；Ｚｈａｎｇら、２０１０年）；及び（Ｈｕａｎｇ及びＳａｄｅｅ、２００３年；Ｓｅｒｕｇａら、２０１０年）を参照のこと。ヘッジホッグ経路は、化学療法耐性に関与する別の細胞シグナル伝達経路である。（Ｄｏｍｉｎｇｏ−Ｄｏｍｅｎｅｃｈら、２０１２年）。
【０００３】
今日まで、耐性の特定のメカニズムを標的とするように設計された単一の剤が、有効であると見出されたことはなかった。しかしながら、漢方薬草クロヅル（Ｔｒｉｐｅｒｙｇｉｕｍ  ｗｉｌｆｏｒｄｉｉ）から抽出され得る小分子ウィルホルリドＡは、化学療法剤療法に対して耐性となっているがん細胞を感作し、その結果、がんは化学療法剤に対して再び感受性になる。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明は、化学療法剤に対して耐性を獲得している、がんに罹っている患者を、ウィルホルリドＡを化学療法剤と組み合わせて共投与することによって処置する方法に関する。したがって、この方法は、それを必要とする患者にウィルホルリドＡと化学療法剤との組み合わせを投与する。本発明はまた、ウィルホルリドＡのみ、又は化学療法剤と組み合わせてのいずれかの、ウィルホルリドＡの組成物に関する。本発明の方法及び組成物が薬剤耐性を克服するために使用され得る化学療法剤の種類には、トポイソメラーゼ薬、タキサン、及び二重チロシンキナーゼ阻害薬が含まれる。
【０００５】
一般に、本発明の方法又は組成物により処置されるがんは、化学療法剤単独による処置に対して少なくとも部分的に耐性であることが本明細書で理解されるべきである。したがって、本発明の方法は、単独で投与される場合の化学療法剤の効力と比較して化学療法剤の効力を増加させる投与量でウィルホルリドＡを共投与する。本発明の処置の方法及び組成物は、乳がん、血液がん及び前立腺がんを含めて、様々な器官の固形及び血液系腫瘍を処置するために使用され得る。
【０００６】
ウィルホルリドＡ及び化学療法剤は、連続的に投与されても、共投与されてもよい。それらが連続的に投与される場合、ウィルホルリドＡの少なくとも一部は化学療法剤の投与前に投与される。ウィルホルリドＡは、同じ仕方で、及び類似又は同じ化学療法組成物を使用して投与されてもよい。上述のとおり、本発明の方法において、ウィルホルリドＡ及び化学療法剤は、共投与されてもよく、ウィルホルリドＡと化学療法剤の両方を含有する単一の組成物であってもよい。したがって、本発明の別の実施形態は、ウィルホルリドＡ及び化学療法剤ががんを処置するのに有効な組み合わせ量で投与される、ウィルホルリドＡと化学療法剤との組合せ；並びに薬学的に許容される担体を含む化学療法組成物に関する。
【０００７】
表の簡単な説明
表１は、ドセタキセル耐性前立腺がん細胞系ＰＣ３−ＴｘＲにおけるウィルホルリドＡのＩＣ５０を決定するために使用した７２時間長のウィルホルリドＡ用量−応答分析のスルホローダミンＢ（ＳＲＢ）細胞生存率アッセイの結果を示す。表１は、図１と相関する。
【０００８】
表２は、これらの薬物についてのＩＣ５０濃度を決定するために使用した、ドセタキセル、ラパチニブ、及びダウノルビシンの濃度、並びに細胞系を示す。
【０００９】
表３は、ウィルホルリド前処置の非存在下及び存在下でのドセタキセル、ダウノルビシン、及びラパチニブのＩＣ５０濃度の結果を示す。
【００１０】
表４は、０．６μｇ／ｍｌのウィルホルリドＡにより前処置し、続いて種々の濃度のドセタキセルにより７２時間処置した、ドセタキセル感受性ＰＣ３細胞のＳＲＢ細胞生存率アッセイの結果を報告する。表４及び表５は、図２Ａと相関する。
【００１１】
表５は、種々の濃度のドセタキセルによる７２時間の処置後で、ウィルホルリドＡの前処置なしの、ドセタキセル感受性ＰＣ３細胞のＳＲＢ細胞生存率アッセイの結果を報告する。
【００１２】
表６は、１．２５μｇ／ｍｌのウィルホルリドＡにより前処置し、続いて種々の濃度のドセタキセルにより７２時間処置した、ドセタキセル感受性ＰＣ３細胞のＳＲＢ細胞生存率アッセイの結果を報告する。表６及び表７は、図２Ｂと相関する。
【００１３】
表７は、種々の濃度のドセタキセルによる７２時間の処置後で、ウィルホルリドＡの前処置なしの、ドセタキセル感受性ＰＣ３細胞のＳＲＢ細胞生存率アッセイの結果を報告する。
【００１４】
表８は、２．５μｇ／ｍｌのウィルホルリドＡにより前処置し、続いて種々の濃度のドセタキセルにより７２時間処置した、ドセタキセル感受性ＰＣ３細胞のＳＲＢ細胞生存率アッセイの結果を報告する。表８及び表９は、図２Ｃと相関する。
【００１５】
表９は、種々の濃度のドセタキセルによる７２時間の処置後で、ウィルホルリドＡの前処置なしの、ドセタキセル感受性ＰＣ３細胞のＳＲＢ細胞生存率アッセイの結果を報告する。
【００１６】
表１０は、０．６μｇ／ｍｌのウィルホルリドＡにより前処置し、続いて種々の濃度のドセタキセルにより７２時間処置した、ドセタキセル耐性ＰＣ３−ＴｘＲ細胞のＳＲＢ細胞生存率アッセイの結果を報告する。表１０及び表１１は、図３Ａと相関する。
【００１７】
表１１は、種々の濃度のドセタキセルによる７２時間の処置後で、ウィルホルリドＡの前処置なしの、ドセタキセル耐性ＰＣ３−ＴｘＲ細胞のＳＲＢ細胞生存率アッセイの結果を報告する。
【００１８】
表１２は、１．２５μｇ／ｍｌのウィルホルリドＡにより前処置し、続いて種々の濃度のドセタキセルにより７２時間処置した、ドセタキセル耐性ＰＣ３−ＴｘＲ細胞のＳＲＢ細胞生存率アッセイの結果を報告する。表１２及び表１３は、図３Ｂと相関する。
【００１９】
表１３は、種々の濃度のドセタキセルによる７２時間の処置後で、ウィルホルリドＡの前処置なしの、ドセタキセル耐性ＰＣ３−ＴｘＲ細胞のＳＲＢ細胞生存率アッセイの結果を報告する。
【００２０】
表１４は、２．５μｇ／ｍｌのウィルホルリドＡにより前処置し、続いて種々の濃度のドセタキセルにより７２時間処置した、ドセタキセル耐性ＰＣ３−ＴｘＲ細胞のＳＲＢ細胞生存率アッセイの結果を報告する。表１４及び表１５は、図３Ｃと相関する。
【００２１】
表１５は、種々の濃度のドセタキセルによる７２時間の処置後で、ウィルホルリドＡの前処置なしの、ドセタキセル耐性ＰＣ３−ＴｘＲ細胞のＳＲＢ細胞生存率アッセイの結果を報告する。
【００２２】
表１６は、５．０μｇ／ｍｌのウィルホルリドＡにより前処置し、続いて種々の濃度のドセタキセルにより７２時間処置した、ドセタキセル耐性ＰＣ３−ＴｘＲ細胞のＳＲＢ細胞生存率アッセイの結果を報告する。表１６及び表１７は、図３Ｄと相関する。
【００２３】
表１７は、種々の濃度のドセタキセルによる７２時間の処置後で、ウィルホルリドＡの前処置なしの、ドセタキセル耐性ＰＣ３−ＴｘＲ細胞のＳＲＢ細胞生存率アッセイの結果を報告する。
【００２４】
表１８は、２．５μｇ／ｍｌのウィルホルリドＡにより前処置し、続いて種々の濃度のドセタキセルにより７２時間処置した、ドセタキセル耐性ＤＵ１４５−ＴｘＲ細胞のＳＲＢ細胞生存率アッセイの結果を報告する。表１８及び表１９は、図４と相関する。
【００２５】
表１９は、種々の濃度のドセタキセルによる７２時間の処置後で、ウィルホルリドＡの前処置なしの、ドセタキセル耐性ＤＵ１４５−ＴｘＲ細胞のＳＲＢ細胞生存率アッセイの結果を報告する。
【００２６】
表２０は、２．５μｇ／ｍｌのウィルホルリドＡにより前処置し、続いて種々の濃度のドセタキセルにより７２時間処置した、ダウノルビシン耐性Ｋ５６２／Ｄｏｘ細胞のＳＲＢ細胞生存率アッセイの結果を報告する。表２０及び表２１は、図５と相関する。
【００２７】
表２１は、種々の濃度のドセタキセルによる７２時間の処置後で、ウィルホルリドＡの前処置なしの、ダウノルビシン耐性Ｋ５６２／Ｄｏｘ細胞のＳＲＢ細胞生存率アッセイの結果を報告する。
【００２８】
表２２は、２．５μｇ／ｍｌのウィルホルリドＡにより前処置し、続いて種々の濃度のドセタキセルにより７２時間処置した、ラパチニブ耐性ＨＥＲ２陽性乳腺癌ＳｋＢｒ３−ＴｘＲ細胞のＳＲＢ細胞生存率アッセイの結果を報告する。表２２及び表２３は、図６と相関する。
【００２９】
表２３は、種々の濃度のドセタキセルによる７２時間の処置後で、ウィルホルリドＡの前処置なしの、ラパチニブ耐性ＨＥＲ２陽性乳腺癌ＳｋＢｒ３−ＴｘＲ細胞のＳＲＢ細胞生存率アッセイの結果を報告する。
【００３０】
表２４は、２．５μｇ／ｍｌのウィルホルリドＡにより前処置し、続いて種々の濃度のドセタキセルにより７２時間処置した、ラパチニブ耐性ＨＥＲ２陽性乳管癌Ｂｔ４７４−ＴｘＲ細胞のＳＲＢ細胞生存率アッセイの結果を報告する。表２４及び表２５は、図７Ａと相関する。
【００３１】
表２５は、種々の濃度のドセタキセルによる７２時間の処置後で、ウィルホルリドＡの前処置なしの、ラパチニブ耐性ＨＥＲ２陽性乳管癌Ｂｔ４７４−ＴｘＲ細胞のＳＲＢ細胞生存率アッセイの結果を報告する。
【００３２】
表２６は、２５μｇ／ｍｌのウィルホルリドＡにより前処置し、続いて種々の濃度のドセタキセルにより７２時間処置した、ラパチニブ耐性ＨＥＲ２陽性乳管癌Ｂｔ４７４−ＴｘＲ細胞のＳＲＢ細胞生存率アッセイの結果を報告する。表２４及び表２５は、図７Ｂと相関する。
【００３３】
表２７は、種々の濃度のドセタキセルによる７２時間処置後で、ウィルホルリドＡの前処置なしの、ラパチニブ耐性ＨＥＲ２陽性乳管癌Ｂｔ４７４−ＴｘＲ細胞のＳＲＢ細胞生存率アッセイの結果を報告する。
【図面の簡単な説明】
【００３４】
【図１】ドセタキセル耐性前立腺がん細胞系ＰＣ３−ＴｘＲにおけるウィルホルリドＡのＩＣ５０を決定するために使用した７２時間長のウィルホルリドＡ用量−応答アッセイからのスルホローダミンＢ（ＳＲＢ）細胞生存率アッセイ結果を示す。表１を参照されたい。
【００３５】
【図２Ａ】０．６μｇ／ｍｌのウィルホルリドＡにより前処置し、続いて、種々の濃度のドセタキセルにより７２時間処置した、ドセタキセル感受性ＰＣ３細胞のスルホローダミンＢ（ＳＲＢ）細胞生存率アッセイの結果を示す。表４〜表５を参照されたい。
【図２Ｂ】１．２５μｇ／ｍｌのウィルホルリドＡにより前処置し、続いて、種々の濃度のドセタキセルにより７２時間処置した、ドセタキセル感受性ＰＣ３細胞のスルホローダミンＢ（ＳＲＢ）細胞生存率アッセイの結果を示す。表６〜表７を参照されたい。
【図２Ｃ】２．５μｇ／ｍｌのウィルホルリドＡにより前処置し、続いて、種々の濃度のドセタキセルにより７２時間処置した、ドセタキセル感受性ＰＣ３細胞のスルホローダミンＢ（ＳＲＢ）細胞生存率アッセイの結果を示す。表８〜表９を参照されたい。
【００３６】
【図３Ａ】０．６μｇ／ｍｌのウィルホルリドＡにより前処置し、続いて、種々の濃度のドセタキセルにより７２時間処置した、ドセタキセル耐性ＰＣ３−ＴｘＲ細胞のスルホローダミンＢ（ＳＲＢ）細胞生存率アッセイの結果を示す。表１０〜表１１を参照されたい。
【図３Ｂ】１．２５μｇ／ｍｌのウィルホルリドＡにより前処置し、続いて、種々の濃度のドセタキセルにより７２時間処置した、ドセタキセル耐性ＰＣ３−ＴｘＲ細胞のスルホローダミンＢ（ＳＲＢ）細胞生存率アッセイの結果を示す。表１２〜表１３を参照されたい。
【図３Ｃ】２．５μｇ／ｍｌのウィルホルリドＡにより前処置し、続いて、種々の濃度のドセタキセルにより７２時間処置した、ドセタキセル耐性ＰＣ３−ＴｘＲ細胞のスルホローダミンＢ（ＳＲＢ）細胞生存率アッセイの結果を示す。表１４〜表１５を参照されたい。
【図３Ｄ】５．０μｇ／ｍｌのウィルホルリドＡにより前処置し、続いて、種々の濃度のドセタキセルにより７２時間処置した、ドセタキセル耐性ＰＣ３−ＴｘＲ細胞のスルホローダミンＢ（ＳＲＢ）細胞生存率アッセイの結果を示す。表１６〜表１７を参照されたい。
【００３７】
【図４】２．５μｇ／ｍｌのウィルホルリドＡにより前処置し、続いて、種々の濃度のドセタキセルにより７２時間処置した、ドセタキセル耐性ＤＵ１４５−ＴｘＲ細胞のスルホローダミンＢ（ＳＲＢ）細胞生存率アッセイの結果を示す。表１８〜表１９を参照されたい。
【００３８】
【図５】２．５μｇ／ｍｌのウィルホルリドＡにより前処置し、続いて、種々の濃度のドセタキセルにより７２時間処置した、ダウノルビシン耐性Ｋ５６２／Ｄｏｘ細胞のスルホローダミンＢ（ＳＲＢ）細胞生存率アッセイの結果を示す。表２０〜表２１を参照されたい。
【００３９】
【図６】２．５μｇ／ｍｌのウィルホルリドＡにより前処置し、続いて、種々の濃度のドセタキセルにより７２時間処置したラパチニブ耐性ＨＥＲ２陽性乳腺癌ＳｋＢｒ３−ＴｘＲ細胞のスルホローダミンＢ（ＳＲＢ）細胞生存率アッセイの結果を示す。表２２〜表２３を参照されたい。
【００４０】
【図７Ａ】２．５μｇ／ｍｌのウィルホルリドＡにより前処置し、続いて、種々の濃度のドセタキセルにより７２時間処置したラパチニブ耐性ＨＥＲ２陽性乳管癌Ｂｔ４７４−ＴｘＲ細胞のスルホローダミンＢ（ＳＲＢ）細胞生存率アッセイの結果を示す。表２４〜表２５を参照されたい。
【図７Ｂ】２５μｇ／ｍｌのウィルホルリドＡにより前処置し、続いて、種々の濃度のドセタキセルにより７２時間処置したラパチニブ耐性ＨＥＲ２陽性乳管癌Ｂｔ４７４−ＴｘＲ細胞のスルホローダミンＢ（ＳＲＢ）細胞生存率アッセイの結果を示す。表２６〜表２７を参照されたい。
【００４１】
【図８Ａ】ＣＤ−１マウスへのウィルホルリドＡのｉ．ｐ．投与後の血漿中濃度経時曲線を示す。
【図８Ｂ】ＣＤ−１マウスへのウィルホルリドＡのｐ．ｏ．投与後の血漿中濃度経時曲線を示す。
【図８Ｃ】ＣＤ−１マウスへのウィルホルリドＡのｉ．ｖ．投与後の血漿中濃度経時曲線を示す。
【００４２】
【図９】実施例９に記載したとおりに、ウィルホルリドＡの種々の量を１５日長のドセタキセル処置期間の経過にわたって受けるＳＣＩＤマウスが宿主となっているドセタキセル耐性ヒトＰＣ３−ＴｘＲ細胞腫瘍に対する化学感作効果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００４３】
獲得耐性がなければ患者を有効に処置するために使用され得る化学療法剤に対して耐性を獲得しているがんに罹っている患者を処置する方法が、本明細書で記載される。より詳細には、本発明による処置の方法は、小分子化合物３−エピアブルスラクトンＡ（３−ｅｐｉａｂｒｕｓｌａｃｔｏｎｅ  Ａ）の用量を、この処置方法によって標的とされているがんが耐性になっている化学療法剤と共投与する。
【００４４】
本明細書において、３−エピアブルスラクトンＡは、一般にその一般名であるウィルホルリドＡで言及される。分子式Ｃ３０Ｈ４６Ｏ３及び４５４．６８４の分子量を有するウィルホルリドＡは、合成されるか、又は植物源から抽出され得る。例えば、ウィルホルリドＡは、中国に自生している薬草であるクロヅルの根皮又は根木部から有機溶媒で抽出され得る。本明細書にその全体が含まれる、Ｌｕｏら、Ｊ．Ｓｅｐ．Ｓｃｉ．３０（９）：１２８４〜９１頁（２００７年）を参照されたい。ウィルホルリドＡは、化学療法剤療法に対して耐性になっているがん細胞を感作し、その結果、がんは、化学療法剤に対して再び感受性になる。
【００４５】
様々な実施形態において、本発明の方法は、化学療法剤耐性がん細胞をウィルホルリドＡと接触させ、化学療法剤に対する細胞耐性の逆転をもたらし、それにより、化学療法剤に薬剤耐性がん細胞の死又は細胞静止を引き起こさせることによって、抗がん化学療法剤耐性を克服する。したがって、本発明の処置の方法は、化学療法剤に対して耐性である腫瘍細胞の増殖を阻害し、遅延し、又は予防するために使用される。
【００４６】
本明細書で使用される場合、「処置する」又は「処置」という用語は、がんを治癒し、治し、軽減し、緩和し、変化させ、治療し、回復し、改善し、又はそれに影響を及ぼすことを目的として、化学療法剤による処置に対して耐性であるがんを有する対象にウィルホルリドＡを化学療法剤と共投与することを指す。様々な実施形態において、本発明の方法は、ウィルホルリドＡ及び、ウィルホルリドＡと共投与される化学療法剤を同時に又は直ぐ連続して投与するが、一方で他の実施形態において、処置されているがんの細胞が化学療法剤と接触する前にウィルホルリドＡにより少なくとも部分的に感作されることを可能にするように、ウィルホルリドＡは化学療法剤の投与前に投与される。本発明の方法は、ウィルホルリドＡと化学療法剤とを組み合わせるための柔軟で積極的なレジメンを収容するものであることが本明細書で理解されるべきである。
【００４７】
ウィルホルリドＡの「有効量」は、本明細書で理解される場合、指定化学療法剤に対してがん細胞の耐性を低下させるために必要とされるウィルホルリドＡの量を指す。有効量は、当業者によって理解されるように、投与の経路、添加剤の使用、及び他の作用物質との共使用の可能性に依存して変わってもよい。
【００４８】
本発明の方法によって患者に投与されるウィルホルリドＡの投与量は、ウィルホルリドＡと共投与される化学療法剤に対するがんの耐性を逆転させるのに十分である。様々な実施形態において、本発明の方法によって投与されるウィルホルリドＡの用量は、０．５〜４０ｍｇのウィルホルリドＡ／体重１ｋｇである。例えば、一実施形態において、本発明の方法は、約１．２ｍｇ／ｋｇのウィルホルリドＡを投与するが、一方で別の実施形態において、本発明の方法は、６ｍｇ／ｋｇを投与し、さらに別の実施形態において、本発明の方法は、３０ｍｇ／ｋｇを投与する。
【００４９】
本発明の方法によって処置され得るがんは、様々な器官の固形及び血液学的腫瘍を包含する。固形腫瘍の非限定的な例は、転移性乳がん、並びにアンドロゲン依存性及びアンドロゲン非依存性前立腺がんを含む前立腺がんである。本発明の方法によって処置可能な血液学的腫瘍は、例えば、血液、骨髄、脾臓、肝臓及びときに他の組織における未熟顆粒球、例えば、好中球、好酸球及び好塩基球の異常増殖により特徴付けられる慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）を包含する。
【００５０】
本発明によるがんを処置する方法でウィルホルリドＡと共投与されてもよい化学療法剤は、例えば、ダウノルビシン塩酸塩などのトポイソメラーゼ阻害剤を包含する。したがって、様々な実施形態において、本発明の方法によって処置されるがんは、トポイソメラーゼ阻害剤に対して感作されており、例えば、対象は、放射線療法を受けている、及び／又はＣＤＰ−トポイソメラーゼ阻害剤コンジュゲート、粒子若しくは組成物の投与前にホスファターゼ阻害剤（例えば、オカダ酸）を受けている。一実施形態において、がんは、トポイソメラーゼ阻害剤に対して感作されるか、又は感作されており、がんは、乳腺細胞がんであるが、一方で別の実施形態において、がんは、前立腺がんであり、さらに別の実施形態において、がんは、白血病である。
【００５１】
様々な実施形態において、本発明の方法は、ウィルホルリドＡを、２５〜４５ｍｇ／ｍ２／日の静脈内（ＩＶ）投与ダウノルビシン塩酸と、処置（すなわち、処置経過）の第１サイクルの１日、２日、及び３日目、並びにその後のサイクルの１日目、２日目に共投与する。
【００５２】
本発明によってがんを処置する方法でウィルホルリドＡと共投与され得る他の化学療法剤は、タキサンとも呼ばれる、抗有糸分裂タキソイド薬、例えば、ドセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ（商標））である。一実施形態において、がんは、タキサンに感作される又は感作されており、がんは乳腺細胞がんであるが、一方で別の実施形態において、がんは前立腺がんであり、さらに別の実施形態において、がんは白血病である。
【００５３】
様々な実施形態において、本発明の方法は、ウィルホルリドＡを、５０〜８０ｍｇ／ｍ２／日の静脈内（ＩＶ）投与ドセタキセル水和物と、３週ごとに１〜１０サイクルの間に共投与する。本発明の他の実施形態において、５０〜８０ｍｇ／ｍ２／日の静脈内（ＩＶ）投与ドセタキセル水和物は、３〜４週の間隔で１日１回投与される（用量は、適宜増加又は減少させてもよい）。
【００５４】
本発明の方法はまた、商品名Ｔｙｋｅｒｂ（登録商標）の下で市販されているラパチニブなどの、ＨＥＲ２／ｎｅｕ及び上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）経路を妨害する二重チロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）を使用する処置を受け入れる。したがって、有利には本発明の方法によって処置されてもよい患者は、以下の患者集団、すなわち、（ａ）処置がＴＫＩ処置に対する耐性を予防又は遅延させる、ＴＫＩ投薬を受けていないがん患者、（ｂ）野生型ＥＧＦＲを発現する腫瘍を有する患者、（ｃ）ＥＧＦＲの変異型を発現する腫瘍を有する患者、（ｄ）ゲフィチニブ若しくはエルロチニブ、アファチニブ、ダコミチニブなどのＥＧＦＲ阻害剤、又は処置がＥＧＦＲ阻害剤に対する一次若しくは獲得耐性を克服させる他のものによって以前に処置された患者、（ｅ）ゲフィチニブ若しくはエルロチニブ、アファチニブ、ダコミチニブなどのＴＫＩ、又は処置がＴＫＩ処置に対する耐性を克服させる他のものによる処置に対して獲得耐性を有する患者、（ｇ）処置がＴＫＩ処置に対する耐性を予防又は克服させる、Ｔ７９０Ｍ（Ｔ７９０Ｍ＋）によって生じた一次又は獲得耐性を有する患者集団、及び（ｈ）処置がＴＫＩ処置に対する耐性を予防又は克服させる、Ｔ７９０Ｍによって生じなかった（Ｔ７９０Ｍ−）、例えば、ＭＥＴがん遺伝子などの他のメカニズム又は未知の起源による、一次又は獲得耐性を有する患者集団が含まれる。
【００５５】
ウィルホルリドＡと共投与されるラパチニブジトシラートの好ましい用量は、２１日サイクルで１日目〜１４日目のカペシタビン２，０００ｍｇ／ｍ２／日（ほぼ１２時間離して２回用量で経口投与される）と組み合わせて１日１回２１日間経口投与される１，２５０ｍｇ（５錠）である。
【００５６】
本発明はまた、ウィルホルリドＡの医薬組成物に関する。したがって、様々な実施形態において、本発明のウィルホルリドＡ含有組成物は、がんに罹っている患者の処置に使用するための化学療法組成物である。ある実施形態において、化学療法組成物は、ウィルホルリドＡを含み、別の化学療法剤成分を含まない。このような実施形態において、ウィルホルリドＡの用量は、化学療法剤に対する患者の耐性を克服するのに十分であり、ここで、ウィルホルリドＡの用量は細胞毒性がない。しかしながら、他の実施形態において、本発明の化学療法組成物は、ウィルホルリドＡと化学療法剤との組み合わせを含む。ウィルホルリドＡのみの組成物と同様に、ウィルホルリドＡの用量は、化学療法剤に対する患者の耐性を克服するのに十分であるが、細胞毒性用量ではない。
【００５７】
上記のとおり、ウィルホルリドＡのみの組成物又はウィルホルリドＡ組み合わせ組成物のいずれかに含有されるウィルホルリドＡの用量は、化学療法剤に対する患者の耐性を克服するのに十分である。ウィルホルリドＡの十分な用量は、柔軟で積極的な処置レジメンの経過にわたって変わってもよい。様々な実施形態において、本発明の化学療法組成物に含有されるウィルホルリドＡの用量は、ＩＶ投与のために製剤化された５０〜５００μｇ／ｍｌの液体組成物である。
【００５８】
本発明の組み合わせ化学療法組成物の例には、ウィルホルリドＡが、トポイソメラーゼ阻害剤、タキサン化合物、又はＨＥＲ２／ｎｅｕ及び上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）経路を妨害する二重チロシンキナーゼ阻害剤、と組み合わされる組成物が含まれる。様々な実施形態において、本発明の組み合わせ化学療法組成物は、ウィルホルリドＡをトポイソメラーゼ阻害剤であるダウノルビシン塩酸塩と組み合わせてもよい。他の実施形態において、本発明の組み合わせ化学療法組成物は、ウィルホルリドＡをタキサン化合物であるドセタキセル水和物と組み合わせてもよい。さらに別の実施形態において、本発明の組み合わせ化学療法組成物は、ウィルホルリドＡをＴＫＩであるラパチニブジトシラートと組み合わせてもよい。
【００５９】
上述の組成物は、経口、非経口、吸入スプレーにより、局所、直腸、経鼻、頬側、経膣、又は埋込みリザーバーを介して投与することができる。本明細書で使用される場合の「非経口の」という用語は、皮下、皮内、静脈内、筋内、関節内、動脈内、滑液嚢内、胸骨内、髄腔内、病巣内、及び頭蓋内注射又は注入技術を包含する。様々な実施形態において、ウィルホルリドＡのみの組成物及びウィルホルリドＡと別の化学療法剤との組み合わせの組成物を含む、本発明の化学療法組成物は、ウィルホルリドＡと組み合わせて投与される化学療法剤のための当技術分野で知られている製剤処方及び投与の方法によって製剤化及び投与される。
【００６０】
経口投与のための組成物は、限定されないが、カプセル剤、錠剤、乳濁剤及び水性懸濁液剤、分散液剤並びに溶液剤を含む、任意の経口的に許容される剤形であることもできる。経口使用のための錠剤の場合、一般に使用される担体には、ラクトース及びトウモロコシデンプンが含まれる。滑沢剤、例えば、ステアリン酸マグネシウムも典型的に添加される。カプセル形態での経口投与の場合、有用な賦形剤には、ラクトース及び乾燥トウモロコシデンプンが含まれる。水性懸濁液剤又は乳濁液剤が経口投与される場合、活性成分は、乳化剤又は懸濁化剤と組み合わされた油相に懸濁又は溶解させ得る。
【００６１】
本発明の組成物はまた、１種又は複数の添加剤を含有してもよい。好適な添加剤は、例えば、水、生理食塩水、デキストロース、グリセロール又はエタノールである。さらに、必要に応じて、投与される医薬組成物はまた、少量の非毒性補助物質、例えば、湿潤又は乳化剤、ｐＨ緩衝剤、安定剤、溶解度向上剤、及び他のこのような作用物質、例えば、酢酸ナトリウム、モノラウリン酸ソルビタン、トリエタノールアミンオレアート及びシクロデキストリンなどを含有してもよい。
【００６２】
本発明の組成物は、ヒドロプロピルβシクロデキストリン（ＨＢＣＤ、Ｒｏｑｕｅｔｔｅ  Ａｍｅｒｉｃａ、Ｋｅｏｋｕｌ、イタリア国）並びにモノ−、ジ−及びトリグリセリド乳化剤、例えば、Ｃａｍｐｍｕｌ（商標）製品系列（ＡＢＩＴＥＣ  Ｃｏｒｐ．）のような市販される乳化剤などを含めて、ウィルホルリドＡの生物学的利用能を向上させるための種々の添加剤乳化剤を受け入れる。一部の実施形態において、組成物は、０．５〜５ｍｇ／ｍｌから選択される（ウィルホルリドＡ／乳化剤）の濃度でモノグリセリド乳化剤、ジグリセリド乳化剤、トリグリセリド乳化剤、又はそれらの組み合わせと組み合わされたウィルホルリドＡを含有してもよい。一実施形態において、（ウィルホルリドＡ／乳化剤）の濃度は、３ｍｇ／ｍｌである。
【実施例】
【００６３】
（例１）
ウィルホルリドＡのＩＣ５０の決定。ウィルホルリドＡのＩＣ５０は、ドセタキセル耐性前立腺がん系ＰＣ３−ＴｘＲ（Ｅｖａｎ  Ｔ．Ｋｅｌｌｅｒ教授、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｍｉｃｈｉｇａｎから入手した）の細胞培養液中のその化学感作効果（ＣＥ）を決定するために使用し得るウィルホルリドＡ濃度を特定する目的のためにインビトロで決定した。ＰＣ３−ＴｘＲ培養液は、平底Ｃｅｌｌｓｔａｒ（登録商標）９６ウェル蓋付き細胞培養プレート（カタログ番号６５５１８０、Ｇｒｅｉｎｅｒ  Ｂｉｏ−ｏｎｅ、Ｍｏｎｒｏｅ、ＮＣから購入）の各ウェルに、１００μｌの培地に懸濁させた細胞３０００個を添加することによって調製した。細胞培地は、１０％ウシ胎仔血清（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｌｏｇａｎ、ＵＴ）並びにペニシリン（１００Ｕ／ｍｌ）及びストレプトマイシン（１００μｇ／ｍｌ）の溶液（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｇｒａｎｄ  Ｉｓｌａｎｄ、ＮＹ）を補充した基礎ＲＰＭＩ１６４０培地であった。７連のウェルを、試験した各実験条件（すなわち、各データ点についてｎ＝３）に割り当て、ウェルの播種に続いて細胞についての２４時間の回復期間とした。回復期間の間、細胞は３７℃及び５％ＣＯ２でインキュベートした。
【００６４】
回復後、プレーティング培地を、細胞培養液から吸引し、指定濃度のウィルホルリドＡを含有する、１ウェル当たり５０μｌのＲＰＭＩで置き換えた。次いで、細胞をウィルホルリドＡ培地の存在下で７２時間インキュベートした。ウィルホルリドＡ原液（ＤＭＳＯ中０．５ｍｇ／ｍｌ）の１：３連続希釈液を１×１０２〜１×１０−３μｇ／ｍｌの範囲の濃度にすることによって、５０μｌのウィルホルリドＡアリコートを調製した。
【００６５】
７２時間のウィルホルリドＡの処置に続いて、スルホローダミンＢ（ＳＲＢ）アッセイを使用して、生細胞を定量した。アッセイを行うために、ウィルホルリドＡ培地を各ウェルから吸引し、冷トリクロロ酢酸（ＴＣＡ）（カタログ番号：Ｔ６３９９、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈから購入）の１０％溶液で置き換え、４℃で１時間インキュベートした。ＴＣＡインキュベーション後、ＴＣＡ溶液を吸引し、細胞を水道水で５回洗浄した。最後の洗浄液を除去後に、プレートを表面が乾燥するまで室温で蓋を取ったまま放置し、これには１〜２時間かかった。次いで、スルホローダミンＢ（ＳＲＢ）ナトリウム塩（カタログ番号：Ｓ９０１２、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈから購入）の０．４％溶液５０μｌを各ウェルに添加し、プレートを室温で２０〜３０分間インキュベートした。その後、１０ｍＭ  ＴＲＩＳ塩基（カタログ番号：１６１−０７１９、Ｂｉｏ−Ｒａｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｈｅｒｃｕｌｅｓ、ＣＡから購入）中１％酢酸溶液でウェルを５回洗浄した。その後、プレートを数時間又は一晩放置して乾燥させた。乾燥ウェル中に残ったＳＲＢは、１００μｌのＳＲＢ可溶化溶液（１０ｍＭ  ＴＲＩＳ塩基）を各ウェルに添加し、ＳＲＢが溶解するまでプレートを穏やかに動かす振とう器上に置くか、又はプレートを室温で静止したままにすることによって可溶化し、これには、約５〜１０分間かかる。固定時の生細胞の数に直接相関する、各ウェル中のＳＲＢの量は、マイクロプレートリーダーにより５６５ｎｍの吸光度で分光光度法によって決定した。この例で記載したウィルホルリドＡ用量応答分析についての細胞生存率結果を、表１、及びグラフ形式で図１に示す。
【００６６】
【表１】
2019123728.tif 000002
【００６７】
（例２）
種々の異なる化学療法剤及びがん細胞系の文脈におけるウィルホルリドＡについての化学感作効果（ＣＥ）値の比較。これらの比較において、細胞培養液中試験した化学療法剤（Ｄ）のインビトロＩＣ５０を、ウィルホルリドＡ（ＰＩ＆ＰＩ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｃ．ｏｆ  Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ、Ｃｈｉｎａ又はＮａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｆｏｒ  Ｆｏｏｄ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ｃｏｎｔｒｏｌ  ｉｎ  Ｂｅｉｊｉｎｇ、Ｃｈｉｎａから購入）による細胞の前処置に薬物処置が続く場合の薬物のＩＣ５０と比較した。評価した化学療法剤は、ドセタキセル（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ、ＵＳＡから購入、カタログ番号０１８８５）、ダウノルビシン（ドキソルビシンとしても知られる、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ．ＭＯ、ＵＳＡから購入）及びラパチニブ（Ｘｉａｏｊｉａｎｇ  Ｃｕｉ教授、Ｃｅｄａｒｓ−Ｓｉｎａｉ、Ｂｅｖｅｒｌｙ  Ｈｉｌｌｓ、ＣＡから入手）であった。
【００６８】
ドセタキセルＩＣ５０及びドセタキセルＩＣ５０（ＷＡ＋Ｄ）は、ドセタキセル耐性前立腺がん系：（ｉ）ＤＵ１４５−ＴｘＲ及びＰＣ３−ＴｘＲ（両系ともＤｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ  ａｎｄ  Ｐａｒｔｎｅｒｓ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅから入手）及び（ｉｉ）ドセタキセル感受性系であるＰＣ３及びＤＵ１４５（ＡＴＣＣ、Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ、ＵＳＡから購入）において決定した。
【００６９】
ダウノルビシンＩＣ５０及びダウノルビシンＩＣ５０（ＷＡ＋Ｄ）は、それぞれ、ダウノルビシン感受性及び耐性の骨髄性白血病系Ｋ５６２及びＫ５６２／Ｄｏｘ（Ｋｅｎｎｅｔｈ  Ｃｈａｎ教授、Ｏｈｉｏ  Ｓｔａｔｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙから入手）において決定した。
【００７０】
ラパチニブＩＣ５０及びラパチニブＩＣ（ＷＡ＋Ｄ）は、ラパチニブ感受性ＨＥＲ２陽性乳腺癌系ＳｋＢｒ３及びそのラパチニブ耐性亜系ＳｋＢｒ３−ＴｘＲ（Ｘｉａｏｊｉａｎｇ  Ｃｕｉ教授、Ｃｅｄａｒｓ−Ｓｉｎａｉ、Ｂｅｖｅｒｌｙ  Ｈｉｌｌｓ、ＣＡから入手）において決定した。
【００７１】
ＩＣ５０値を得るために、１０％ウシ胎仔血清（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｌｏｇａｎ、ＵＴ）並びにペニシリン（１００Ｕ／ｍｌ）及びストレプトマイシン（１００μｇ／ｍｌ）（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｇｒａｎｄ  Ｉｓｌａｎｄ、ＮＹ）の溶液で補充したＲＰＭＩ１６４０中細胞３０００個（ＰＣ３、ＰＣ３−ＴｘＲ、ＤＵ１４５、ＤＵ−１４５−ＴｘＲの場合）又は細胞５０００個（Ｋ５６２、Ｋ５６２／Ｄｏｘ、ＢＴ４７４、ＢＴ４７４−ＴｘＲ、ＳｋＢｒ３及びＳｋＢｒ−ＴｘＲの場合）を含有する１００μｌの培地を各ウェルに入れることによって、所望の細胞を滅菌平底Ｃｅｌｌｓｔａｒ（商標）９６ウェル蓋付き細胞培養プレート（カタログ番号６５５１８０、Ｇｒｅｉｎｅｒ  Ｂｉｏ−ｏｎｅ、Ｍｏｎｒｏｅ、ＮＣから購入）中にプレーティングした。試験した各実験条件に３連ウェルを割り当て、ウェルの播種に続いて細胞のための２４時間回復期間とした。回復期間の間、細胞を３７℃及び５％ＣＯ２でインキュベートした。
【００７２】
培地をウェルから吸引し、続いて、１．２５、２．５、又は５μｇ／ｍｌのいずれかのウィルホルリドＡ（これらは、ＤＭＳＯ中ウィルホルリドＡの０．５ｍｇ／ｍｌ原液から調製した）の濃度でウィルホルリドＡを含有する５０μｌのＲＰＭＩ培地を添加し、細胞を３７℃及び５％ＣＯ２の条件下で２時間インキュベートすることによって、ウィルホルリドＡによる細胞の前処置を行った。２時間の前処置期間の最後に、所望の化学療法剤ＲＰＭＩ培地の５０μｌアリコートを表２に示す量に従って添加した。
【００７３】
【表２】
2019123728.tif 000003
【００７４】
上に記載したとおりに、様々な用量の化学療法剤を添加後、細胞を、前処置ステップのために使用した同じ温度及び大気条件下でさらに７２時間インキュベートした。７２時間のドセタキセルの処置期間に続いて、スルホローダミンＢ（ＳＲＢ）アッセイを例１に記載したとおりに行って、生細胞を定量した。表３は、試験した化学療法剤のＩＣ５０及びＩＣ５０（ＷＡ＋Ｄ）の結果を要約する。
【００７５】
【表３】
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【００７６】
（例３）
ウィルホルリドＡ前処置は、ドセタキセル感受性膵臓腫瘍細胞のドセタキセルに対する感受性を有意には増強しない。ＰＣ３細胞のドセタキセル処置に対するウィルホルリドＡ前処置の化学感作効果を研究した。この研究では、各実験条件について７連ではなく３連のウェルを準備したことを除いて、例１に記載したとおりにＰＣ３細胞を９６ウェルプレートにプレーティングした。細胞を第８継代でプレーティングした。２４時間の停止期間後、プレーティング培地を各ウェルから吸引し、０．６、１．２５、又は２．５μｇ／ｍｌのウィルホルリドＡを含有する５０μｌのＲＰＭＩで置き換えた。次いで、細胞を３７℃及び５％ＣＯ２で２時間インキュベートした。２時間のインキュベーション後、直ちに１００、３３．３、１０、３．３３、１．０、０．３３３、０．１又は０．００１ｎＭのドセタキセルを添加することによってドセタキセルに対する細胞の用量応答分析を行った。次いで、細胞を３７℃及び５％ＣＯ２で７２時間インキュベートした。７２時間のインキュベーション後、例１に記載したとおりにスルホローダミンＢ（ＳＲＢ）アッセイを行って、生細胞を定量した。表４、表６、及び表８は、それぞれ、０．６、１．２５、及び２．５μｇ／ｍｌのウィルホルリドＡによる前処置後に得られたドセタキセル用量応答細胞生存率データを報告する。表５、表７、及び表９は、ドセタキセル処置前にウィルホルリドＡにより前処置しなかった細胞から得られた対照データを報告する。図２は、表４〜表９のデータをグラフ形式で要約する。
【００７７】
【表４】
2019123728.tif 000005
【００７８】
【表５】
2019123728.tif 000006
【００７９】
【表６】
2019123728.tif 000007
【００８０】
【表７】
2019123728.tif 000008
【００８１】
【表８】
2019123728.tif 000009
【００８２】
【表９】
2019123728.tif 000010
【００８３】
（例４）
ウィルホルリドＡは、ドセタキセル耐性前立腺がん系ＰＣ３−ＴｘＲをドセタキセルに対して感作する。ＰＣ３−ＴｘＲ細胞へのドセタキセル処置に対するウィルホルリドＡ前処置の化学感作効果を研究した。この研究では、ＰＣ３−ＴｘＲ細胞を例３に記載したとおりに９６ウェルプレートにプレーティングした。２４時間の停止期間後、プレーティング培地を各ウェルから吸引し、０．６、１．２５、２．５、又は５．０μｇ／ｍｌのいずれかの濃度でウィルホルリドＡを含有する５０μｌのＲＰＭＩで置き換えた。１．２５及び２．５μｇ／ｍｌのウィルホルリドＡによる前処置のためにプレーティングした細胞を、第３７継代でプレーティングした。０．６及び５．０μｇ／ｍｌのウィルホルリドＡによる前処置のためにプレーティングした細胞を、第４２継代でプレーティングした。次いで、細胞を３７℃及び５％ＣＯ２で２時間インキュベートした。２時間のインキュベーション後、直ちに１００、３３．３、１０、３．３３、１．０、０．３３３、０．１又は０．００１ｎＭのドセタキセルを添加することによってドセタキセルに対する細胞の用量応答分析を行った。次いで、細胞を３７℃及び５％ＣＯ２で７２時間インキュベートした。７２時間のインキュベーション後、例１に記載したとおりにスルホローダミンＢ（ＳＲＢ）アッセイを行って、生細胞を定量した。表１０、表１２、表１４、及び表１６は、それぞれ、０．６、１．２５、２．５、及び５．０μｇ／ｍｌのウィルホルリドＡのいずれかによる前処置後に得られたドセタキセル用量応答細胞生存率データを報告する。表１１、表１３、表１５、及び表１７は、ドセタキセル処置前にウィルホルリドＡにより前処置しなかった細胞から得られた対照データを報告する。図３は、表１０〜表１７のデータをグラフ形式で要約する。
【００８４】
【表１０】
2019123728.tif 000011
【００８５】
【表１１】
2019123728.tif 000012
【００８６】
【表１２】
2019123728.tif 000013
【００８７】
【表１３】
2019123728.tif 000014
【００８８】
【表１４】
2019123728.tif 000015
【００８９】
【表１５】
2019123728.tif 000016
【００９０】
【表１６】
2019123728.tif 000017
【００９１】
【表１７】
2019123728.tif 000018
【００９２】
（例５）
ウィルホルリドＡは、ドセタキセル耐性前立腺がん系ＤＵ１４５−Ｔｘｒをドセタキセルに対して感作する。ＤＵ１４５−Ｔｘｒ細胞へのドセタキセル処置に対するウィルホルリドＡ前処置の化学感作効果を研究した。この研究では、ＤＵ１４５−Ｔｘｒ細胞を例３におけるＰＣ３細胞について記載したとおりに９６ウェルプレートにプレーティングした。２４時間の停止期間後、プレーティング培地を各ウェルから吸引し、０又は２．５μｇ／ｍｌのいずれかの濃度でウィルホルリドＡを含有する５０μｌのＲＰＭＩで置き換えた。次いで、細胞を３７℃及び５％ＣＯ２で２時間インキュベートした。２時間のインキュベーション後、直ちに１００、３３．３、１０、３．３３、１．０、０．３３３、０．１又は０．００１ｎＭのドセタキセルを添加することによってドセタキセルに対する細胞の用量応答分析を行った。次いで、細胞を３７℃及び５％ＣＯ２で７２時間インキュベートした。７２時間のインキュベーション後、例１に記載したとおりにスルホローダミンＢ（ＳＲＢ）アッセイを行って、生細胞を定量した。表１８は、２．５μｇ／ｍｌのウィルホルリドＡによる前処置後に得られたドセタキセル用量応答細胞生存率データを報告し、表１９は、ドセタキセル処置前にウィルホルリドＡにより前処置しなかった細胞から得られた対照データを報告する。図４は、表１８及び表１９のデータをグラフ形式で要約する。
【００９３】
【表１８】
2019123728.tif 000019
【００９４】
【表１９】
2019123728.tif 000020
【００９５】
（例６）
ウィルホルリドＡは、ダウノルビシン耐性骨髄性白血病系Ｋ５６２／Ｄｏｘをダウノルビシンに対して感作する。Ｋ５６２／Ｄｏｘ細胞へのダウノルビシン処置に対するウィルホルリドＡ前処置の化学感作効果を研究した。この研究では、３０００個ではなく５０００個の細胞を１ウェル当たりにプレーティングしたことを除いて、例３におけるＰＣ３細胞について記載したとおりにＫ５６２／Ｄｏｘ細胞を９６ウェルプレートにプレーティングした。２４時間の停止期間後、プレーティング培地を各ウェルから吸引し、０又は２．５μｇ／ｍｌのいずれかの濃度でウィルホルリドＡを含有する５０μｌのＲＰＭＩで置き換えた。次いで、細胞を３７℃及び５％ＣＯ２で２時間インキュベートした。２時間のインキュベーション後、直ちに１００、３３．３、１０、３．３３、１．０、０．３３３、０．１又は０．００１ｎＭのダウノルビシンを添加することによってダウノルビシンに対する細胞の用量応答分析を行った。次いで、細胞を３７℃及び５％ＣＯ２で７２時間インキュベートした。７２時間のインキュベーション後、例１に記載したとおりにスルホローダミンＢ（ＳＲＢ）アッセイを行って、生細胞を定量した。表２０は、２．５μｇ／ｍｌのウィルホルリドＡによる前処置後に得られたダウノルビシン用量応答細胞生存率データを報告し、表２１は、ダウノルビシン処置前にウィルホルリドＡにより前処置しなかった細胞から得られた対照データを報告する。図５は、表２０及び表２１のデータをグラフ形式で要約する。
【００９６】
【表２０】
2019123728.tif 000021
【００９７】
【表２１】
2019123728.tif 000022
【００９８】
（例７）
ウィルホルリドＡは、ラパチニブ耐性ＨＥＲ２陽性乳腺癌系ＳｋＢｒ３−ＴｘＲをラパチニブに対して感作する。ＳｋＢｒ３−Ｔｘｒ細胞へのラパチニブ処置に対するウィルホルリドＡ前処置の化学感作効果を研究した。この研究では、３０００個ではなく５０００個の細胞を１ウェル当たりにプレーティングしたことを除いて、例３におけるＰＣ３細胞について記載したとおりにＳｋＢｒ３−Ｔｘｒ細胞を９６ウェルプレートにプレーティングした。２４時間の停止期間後、プレーティング培地を各ウェルから吸引し、２．５μｇ／ｍｌの濃度でウィルホルリドＡを含有するか、又はウィルホルリドＡをまったく含有しない５０μｌのＲＰＭＩで置き換えた。次いで、細胞を３７℃及び５％ＣＯ２で２時間インキュベートした。２時間のインキュベーション後、直ちに５０μｌのＲＰＭＩアリコート中２０、６．７、２．０、０．６７、０．２、０．０６７、０．００２、及び０．００１ｎＭのラパチニブを指定ウェルに添加することによってラパチニブに対する細胞の用量応答分析を行った。次いで、細胞を３７℃及び５％ＣＯ２で７２時間インキュベートした。７２時間のインキュベーション後、例１に記載したとおりにスルホローダミンＢ（ＳＲＢ）アッセイを行って、生細胞を定量した。表２２は、２．５μｇ／ｍｌのウィルホルリドＡによる前処置後に得られたドセタキセル用量応答細胞生存率データを報告し、表２３は、ラパチニブ処置前にウィルホルリドＡにより前処置しなかった細胞から得られた対照データを報告する。図６は、表２２及び表２３のデータをグラフ形式で要約する。
【００９９】
【表２２】
2019123728.tif 000023
【０１００】
【表２３】
2019123728.tif 000024
【０１０１】
（例８）
ウィルホルリドＡは、ラパチニブ耐性ＨＥＲ２陽性乳管癌系ＢＴ４７４−ＴｘＲをラパチニブに対して感作する。ＢＴ４７４−Ｔｘｒ細胞へのラパチニブ処置に対するウィルホルリドＡ前処置の化学感作効果を研究した。この研究では、３０００個ではなく５０００個の細胞を１ウェル当たりにプレーティングしたことを除いて、例３におけるＰＣ３細胞について記載したとおりにＢｔ４７４−Ｔｘｒ細胞を９６ウェルプレートにプレーティングした。２４時間の停止期間後、プレーティング培地を各ウェルから吸引し、０、２．５、又は２５μｇ／ｍｌのウィルホルリドＡを含有するいずれかの５０μｌのＲＰＭＩで置き換えた。次いで、細胞を３７℃及び５％ＣＯ２で２時間インキュベートした。２時間のインキュベーション後、直ちに５０μｌのＲＰＭＩアリコート中２０、６．７、２．０、０．６７、０．２、０．０６７、０．００２、及び０．００１μＭのラパチニブを指定ウェルに添加することによってラパチニブに対する細胞の用量応答分析を行った。次いで、細胞を３７℃及び５％ＣＯ２で７２時間インキュベートした。７２時間のインキュベーション後、例１に記載したとおりにスルホローダミンＢ（ＳＲＢ）アッセイを行って、生細胞を定量した。表２４及び表２６は、それぞれ、２．５及び２５μｇ／ｍｌのウィルホルリドＡによる前処置後に得られたラパチニブ用量応答細胞生存率データを報告し、表２５及び表２７は、ラパチニブ処置前にウィルホルリドＡにより前処置しなかった細胞から得られた対照データを報告する。図７は、表２４〜表２７のデータをグラフ形式で要約する。
【０１０２】
【表２４】
2019123728.tif 000025
【０１０３】
【表２５】
2019123728.tif 000026
【０１０４】
【表２６】
2019123728.tif 000027
【０１０５】
【表２７】
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【０１０６】
（例９）
ウィルホルリドＡは、インビボでドセタキセルに対する有効な化学感作剤である。上記の、ウィルホルリドＡがインビトロでドセタキセルに対する化学感作剤であることを示した結果に基づいて、ＣＤ−１マウス（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｃ．Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ、ＭＡ）を使用してインビボでの研究を行って、ドセタキセルの化学療法効果に対する経口投与ウィルホルリドＡの有効性を評価した。ウィルホルリドＡの最大耐用量（ＭＴＤ）は、単回用量ＭＴＤ（ｓｄＭＴＤ）及び複数回用量ＭＴＤ（ｍｄＭＴＤ）プロトコルについて決定した。ＭＴＤは、１）非致死性であった；ｉｉ）対照動物と比較して１０％以下の体重増加遅延を生じさせた；３）顕性臓器機能不全又は副作用を生じさせなかった、用量として定義した。単回用量が１日目に投与された７日間にわたるｓｄＭＴＤ研究を行った。ウィルホルリドが毎日投与される７日間にわたるｍｄＭＴＤも行った。
【０１０７】
これらの研究で使用した投与経路は、静脈内（ｉ．ｖ．）、強制経口（ｐ．ｏ．）及び腹腔内（ｉ．ｐ．）投与であった。ウィルホルリドＡは、水難溶解性であるので、それをジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ、Ｓｉｇｍａ−ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）、Ｃａｐｍｕｌ（商標）ＭＣＭ  Ｃ８  ＥＰ（カプリン酸のモノ／ジグリセリド、ＡＢＩＴＥＣ、Ｃｏｌｕｍｂｕｓ、ＯＨ）、又はヒドロプロピルβシクロデキストリン（ＨＢＣＤ、Ｒｏｑｕｅｔｔｅ  Ａｍｅｒｉｃａ、Ｋｅｏｋｕｋ、ＩＡ）のいずれかに溶解させた。より具体的には、ウィルホルリドＡの作業濃度は、（ｉ）ｉ．ｐ．投与による使用のためにウィルホルリドＡをＤＭＳＯに３ｍｇ／ｍｌの濃度にて８０℃で溶解させる；（ｉｉ）ｐ．ｏ．投与による使用のためにウィルホルリドＡをＣａｍｐｕｌ（商標）に３ｍｇ／ｍｌの濃度にて溶解させる；及び（ｉｉｉ）ｉ．ｖ．投与による使用のためにウィルホルリドＡをＤＭＳＯに１．５ｍｇ／ｍｌの濃度にて８０℃で溶解させ、次いで、４０％ＨＢＣＤ（ｗ／ｖ）に１０倍に希釈することによって調製した。ウィルホルリドＡの難溶性のために、達成され得る最大用量は、それぞれ、ｉ．ｐ．、ｐ．ｏ．、及びｉ．ｖ．についておよそ６、３０、及び１．２ｍｇ／ｋｇである。したがって、ＭＴＤ研究はこれらの用量で開始した。
【０１０８】
試験した各用量レジメンについて、１２匹のＣＤ−１マウス（６匹の雄及び６匹の雌）は、適当な容量の各ウィルホルリドＡ調製物を受けた。マウスは、無制限の食物及び水で飼った。すべてのマウスを、急性毒性の適応についてウィルホルリドＡ投与に続いて直ちに４時間の期間モニターし、加えて、遅延毒性の適応について１日少なくとも３回１週間モニターした。マウスはまた、処置２４時間後及びその週にわたる研究の間１日おきに体重を量った。結果は、マウスがすべて、単回と複数回の両用量レジメンに関して、それぞれ、ｉ．ｐ．、ｐ．ｏ．、及びｉ．ｖ．について６、３０、及び１．２ｍｇ／ｋｇの用量で十分に耐性であることを示した。これらの結果に基づいて、追加のより低い用量は試験せず、これらの用量をその後の薬物動態学及び異種移植の研究に用いた。
【０１０９】
マウスにおけるウィルホルリドＡの薬物動態学を決定するために、ウィルホルリドＡを、それぞれ、６、３０、及び１．２ｍｇ／ｋｇの用量について、上で記載したとおりのｉ．ｐ．、ｐ．ｏ．、及びｉ．ｖ．投与のために製剤化した。４匹のＣＤ−１マウスを、ウィルホルリドＡ投与前及び（ｉ）ｉ．ｐ．投与５、１０、１５、２０、３０、及び６０分後；（ｉｉ）ｐ．ｏ．投与２、５、１０、１５、２０、及び３０分後；並びに（ｉｉｉ）ｉ．ｖ．投与１、２、３、及び４時間後に犠牲にした。各時点で、血液を心臓穿刺によって取り出し、血漿を１００００ｒｐｍで５分の遠心分離によって分離させた。血漿中ウィルホルリドＡ濃度を、有効ＨＰＬＣ−ＭＳ／ＭＳ法を使用して、測定した。ピーク薬物濃度（Ｃｍａｘ）及び時間対ピーク薬物濃度（Ｔｍａｘ）は血漿中濃度時間経過データから直接読み取ったが、終末相半減期（Ｔ１／２）は、０．６９３／Ｋｅ（ここで、Ｋｅは、終末相消失速度である）であると計算した。ｉ．ｐ．、ｐ．ｏ．、及びｉ．ｖ．に続いての血漿中濃度時間経過曲線を、それぞれ、図８Ａ〜図８Ｃに示す。ｉ．ｐ．、ｐ．ｏ．、及びｉ．ｖ．投与に続いてのウィルホルリドＡのＣｍａｘ値は、それぞれ、０．７５、０．０３、及び２．８２μｇ／ｍｌであり、対応するＴ１／２時間は、４１．０、２５．６及び１１．２分であった。これらの結果に基づいて、ｐ．ｏ．投与は、妥当な血漿中濃度を達成することができないことが示され、したがって、その後のインビポでの異種移植研究に含めなかった。
【０１１０】
インビトロ腫瘍異種移植研究を行って、ＰＣ３−ＴｘＲ細胞の異種移植により生じさせたドセタキセル耐性ヒト前立腺がん腫瘍に対するｉ．ｐ．及びｉ．ｖ．投与ウィルホルリドＡの化学感作効果をドセタキセルについて評価した。簡潔には、ウィルホルリドＡを上で記載したとおりに製剤化し、ｉ．ｖ．及びｉ．ｐ．経路で投与し、ドセタキセルと組み合わせて投与し、これは、２０ｍｇ／ｋｇの用量でｉ．ｖ．投与した。１４日の時間的経過の最後における腫瘍サイズを、ドセタキセルのみを受けた宿主マウスにおける腫瘍サイズと比較した。この研究を行うために、体重が１５〜２０ｇあり、入手してＨＥＰＡ濾過空気（１２時間明／暗サイクル）を有するケージで飼った５６匹の厳密な４〜６週齢の重症複合免疫不全（ＳＣＩＤ）雄マウス（Ｔａｃｏｎｉｃ  Ｆａｒｍｓ，Ｉｎｃ．Ｏｘｎａｒｄ、ＣＡ）には、マウスにＰＣ３−ＴｘＲ細胞を皮下注射することによって、腫瘍を形成させた。注射のための細胞を調製するために、細胞をＭａｔｒｉｇｅｌ（ＢＣ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、Ｆｒａｎｋｌｌｉｎ  Ｌａｋｅｓ、ＮＪ、Ｕ．Ｓ．Ａ．）とＲＰＭＩ１６４０（Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ、Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ、又はＬｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｇｒａｎｄ  Ｉｓｌａｎｄ、ＮＹ）の１：１混合物に懸濁させた。次いで、注射によりマウスの脇腹中に細胞を皮下移植した。細胞の注射に続いて腫瘍増殖を１４日間一貫して示していたマウスを腫瘍研究に使用した。より具体的には、これらの研究は、異種移植腫瘍が、半楕円体についての式、すなわち、体積＝幅２×（長さ／２）によって計算して約１２０ｍｍ３の腫瘍サイズに達したときに開始した。
【０１１１】
研究における腫瘍含有マウスを以下のとおりのそれらの処置に従って７群に無作為化した：群（１）処置なし（すなわち、負対照）；群（２）１週に１回ｉ．ｖ．投与ドセタキセル（２０ｍｇ／ｋｇ）；群（３）１週１回ｉ．ｖ．投与ドセタキセル（２０ｍｇ／ｋｇ）に加えて、ドセタキセル投与直後に１週１回ｉ．ｖ．投与ウィルホルリドＡ（１．２ｍｇ／ｋｇ）、加えて１日１回ｉ．ｐ．投与ウィルホルリドＡ（６ｍｇ／ｋｇ）；群（４）１週１回ｉ．ｖ．投与ドセタキセル（２０ｍｇ／ｋｇ）に加えて、ドセタキセル投与直後に１週１回ｉ．ｖ．投与ウィルホルリドＡ（０．６ｍｇ／ｋｇ）、加えて１日１回ｉ．ｐ．投与ウィルホルリドＡ（３ｍｇ／ｋｇ）；群（５）１週１回ｉ．ｖ．投与ドセタキセル（２０ｍｇ／ｋｇ）に加えて、ドセタキセル投与直後に１週１回ｉ．ｖ．投与ウィルホルリドＡ（０．６ｍｇ／ｋｇ）、加えて１日１回ｉ．ｐ．投与ウィルホルリドＡ（１．５ｍｇ／ｋｇ）；群（６）１週１回ｉ．ｖ．投与ウィルホルリドＡ（１．２ｍｇ／ｋｇ）に加えて１日１回ｉ．ｐ．投与ウィルホルリドＡ（６ｍｇ／ｋｇ）；及び群（７）１週１回ｉ．ｐ．投与ウィルホルリドＡ（０．３ｍｇ／ｋｇ）に加えて１日１回ｉ．ｐ．投与ウィルホルリドＡ（１．５ｍｇ／ｋｇ）。上述の条件に対する応答における腫瘍体積の変化を図９に示す。群（３）の処置プロトコルは、他の群と比較して腫瘍増殖の有意な遅延を示した。ウィルホルリドＡそれ自体は、腫瘍増殖を有意には阻害しなかったが、ウィルホルリドＡは、ドセタキセルの抗腫瘍効果を有意に増強した。
参考文献
Ｈｕａｎｇ  Ｙ，  ａｎｄ  Ｓａｄｅｅ  Ｗ．  （２００３）．  Ｄｒｕｇ  ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ  ａｎｄ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｇｅｎｅｓ  ｉｎ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ：  ａ  ｃｈｅｍｏｇｅｎｏｍｉｃｓ  ａｐｐｒｏａｃｈ．  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ  Ｔｏｄａｙ  ８，  ３５６−３６３．
Ｈｕａｎｇ  Ｙ，  ｅｔ  ａｌ．  （２００５）．  Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｎｇ  ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ｃｈｅｍｉｃａｌ  ｓｃａｆｆｏｌｄｓ  ｏｆ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  ａｇｅｎｔｓ：  ｅｌｌｉｐｔｉｃｉｎｅｓ  ａｓ  ｓｕｂｓｔｒａｔｅｓ  ａｎｄ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  ＭＤＲ１．  Ｐｈａｒｍａｃｏｇｅｎｏｍｉｃｓ  Ｊ  ５，１１２−１２５．
Ｍａｋａｒｏｖｓｋｉｙ，  ＡＮ  ｅｔ  ａｌ．  （２００２）．  Ｓｕｒｖｉｖａｌ  ｏｆ  ｄｏｃｅｔａｘｅｌ−ｒｅｓｉｓｔａｎｔ  ｐｒｏｓｔａｔｅ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ｄｅｐｅｎｄｓ  ｏｎ  ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ  ａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  ｃｏｎｔｉｎｕｉｔｙ  ｏｆ  ｄｒｕｇ  ｅｘｐｏｓｕｒｅ．  Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ  ５９，１１９８−１２１１．
Ｓａｌｚｂｅｒｇ  Ｍ，  ｅｔ  ａｌ．  （２００７）．  Ａｎ  ｏｐｅｎ−ｌａｂｅｌ，  ｎｏｎｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ  ｐｈａｓｅ  ＩＩ  ｔｒｉａｌ  ｔｏ  ｅｖａｌｕａｔｅ  ｔｈｅ  ｅｆｆｉｃａｃｙ  ａｎｄ  ｓａｆｅｔｙ  ｏｆ  ｄｏｃｅｔａｘｅｌ  ｉｎ  ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ｇｅｆｉｔｉｎｉｂ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｈｏｒｍｏｎｅ−ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ  ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  ｐｒｏｓｔａｔｅ  ｃａｎｃｅｒ，  Ｏｎｋｏｌｏｇｉｅ  ３０，  ３５５−３６０．
Ｓｅｒｕｇａ  Ｂ．，  ｅｔ  ａｌ．  （２０１０）．  Ｄｒｕｇ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｉｎ  ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  ｃａｓｔｒａｔｉｏｎ−ｒｅｓｉｓｔａｎｔ  ｐｒｏｓｔａｔｅ  ｃａｎｃｅｒ．  Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ．
Ｓｉｎｇｈ  Ａ，  ｅｔ  ａｌ．  （２０１０）．  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ＡＢＣＧ２  （ＢＣＲＰ）  ｉｓ  ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｂｙ  Ｎｒｆ２  ｉｎ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌｓ  ｔｈａｔ  ｃｏｎｆｅｒｓ  ｓｉｄｅ  ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｃｈｅｍｏｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ．  Ｍｏｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ  ９，  ２３６５−２３７６．
Ｓｉｒｏｔｎａｋ  ＦＭ，  ｅｔ  ａｌ．  （２０００）．  Ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｏｆ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  ａｇｅｎｔｓ  ａｇａｉｎｓｔ  ｈｕｍａｎ  ｔｕｍｏｒ  ｘｅｎｏｇｒａｆｔｓ  ｉｓ  ｍａｒｋｅｄｌｙ  ｅｎｈａｎｃｅｄ  ｂｙ  ｃｏａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ  ｏｆＺＤ１８３９  （Ｉｒｅｓｓａ），  ａｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｏｆ  ＥＧＦＲ  ｔｙｒｏｓｉｎｅ  ｋｉｎａｓｅ．  Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ６，  ４８８５−４８９２．
Ｗａｎｇ  Ｚ．，  ｅｔ  ａｌ．  （２０１０）．  Ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｍｕｌｔｉｄｒｕｇ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ  ｂｙ  Ｃｈｉｎｅｓｅ  ｍｅｄｉｃｉｎｅｓ  ａｎｄ  ｏｔｈｅｒ  ｈｅｒｂａｌ  ｐｒｏｄｕｃｔｓ．  Ｃｕｒｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  １  ：５４−５６
【図１】
2019123728.tif 000029
【図２Ａ】
2019123728.tif 000030
【図２Ｂ】
2019123728.tif 000031
【図２Ｃ】
2019123728.tif 000032
【図３Ａ】
2019123728.tif 000033
【図３Ｂ】
2019123728.tif 000034
【図３Ｃ】
2019123728.tif 000035
【図３Ｄ】
2019123728.tif 000036
【図４】
2019123728.tif 000037
【図５】
2019123728.tif 000038
【図６】
2019123728.tif 000039
【図７Ａ】
2019123728.tif 000040
【図７Ｂ】
2019123728.tif 000041
【図８Ａ】
2019123728.tif 000042
【図８Ｂ】
2019123728.tif 000043
【図８Ｃ】
2019123728.tif 000044
【図９】
2019123728.tif 000045
【手続補正書】
【提出日】平成31年3月28日(2019.3.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
化学療法剤に対して耐性を獲得しているがんに罹っている患者を処置するために、該化学療法剤と組合せて使用される、ウィルホルリドＡを含む医薬組成物であって、
該化学療法は、ラパチニブ、ダウノルビシン又はドセタキセルであり、該患者はラパチニブ耐性乳がん、ダウノルビシン耐性骨髄性白血病又はドセタキセル前立腺がんに罹っている、医薬組成物：但し、前記医薬組成物から雷公藤の抽出物を除く。
【請求項２】
ウィルホルリドＡの用量は、０．５〜４０ｍｇ／体重１ｋｇのウィルホルリドＡを投与するのに十分な量である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
ウィルホルリドＡの用量は、１．２ｍｇ／体重１ｋｇ、６ｍｇ／体重１ｋｇ又は３０ｍｇのウィルホルリドＡを投与するのに十分な量である、請求項１又は２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
静脈投与のために製剤化されている液体組成物である、請求項に１〜３の何れか1項に記載の医薬組成物。
【請求項５】
ウィルホルリドＡの用量は、５０〜５００μｇ／ｍｌである、請求項４に記載の医薬組成物。
【請求項６】
ヒドロプロピルβシクロデキストリン、モノグリセリド乳化剤、ジグリセリド乳化剤、及びトリグリセリド乳化剤の少なくとも１つで製剤化されている、請求項１〜５の何れか1項に記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記患者はラパチニブ耐性乳がんに罹っている、請求項１〜６の何れか1項に記載の医薬組成物。
【請求項８】
前記ラパチニブ耐性乳がんは、ＨＥＲ２陽性乳腺癌である、請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項９】
ラパチニブは、ウィルホルリドＡと共投与される、請求項７又は８に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
前記患者はダウノルビシン耐性骨髄性白血病に罹っている、請求項１〜６の何れか1項に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
ダウノルビシンは、ウィルホルリドＡと共投与される、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
前記患者はドセタキセル前立腺がんに罹っている、請求項１〜６の何れか1項に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
ドセタキセルは、ウィルホルリドＡと共投与される、請求項１２に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
請求項１〜１３の何れか1項に記載の医薬組成物と、ラパチニブ、ダウノルビシン又はドセタキセルとを含む、医薬キット。
【外国語明細書】
2019123728000001.pdf