(57)【要約】【課題】正常組織のｐＨ環境（ｐＨ７．４）における分解が低減された、新規のｐＨ感受性ブロックコポリマー、前記ブロックコポリマーを含むミセル組成物、及び前記ミセル組成物を含む医薬組成物を提供する。【解決手段】親水性ポリマーセグメント及び疎水性ポリマーセグメントを含むブロックコポリマーであって、前記親水性ポリマーセグメントと前記疎水性ポリマーセグメントとが、下記一般式（Ｉ）で表される構造を含む２価の連結基で連結されている、ブロックコポリマー（式中、Ｘ１〜Ｘ４は、それぞれ独立に、水素原子又は電子吸引性基である。ただし、Ｘ１〜Ｘ４の少なくとも１つは電子吸引性基である。＊は結合手を表す。）。［化１］2019123805.tif 000016【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
親水性ポリマーセグメント及び疎水性ポリマーセグメントを含むブロックコポリマーであって、
前記親水性ポリマーセグメントと前記疎水性ポリマーセグメントとが、下記一般式（Ｉ）で表される構造を含む２価の連結基で連結されている、ブロックコポリマー。
【化１】
2019123805.tif 000015
［式中、Ｘ１〜Ｘ４は、それぞれ独立に、水素原子又は電子吸引性基である。ただし、Ｘ１〜Ｘ４の少なくとも１つは電子吸引性基である。＊は結合手を表す。］
【請求項２】
前記一般式（Ｉ）中、Ｘ１及びＸ２の少なくとも１つが電子吸引性基である、請求項１に記載のブロックコポリマー。
【請求項３】
前記疎水性ポリマーセグメントが、アミノ酸から誘導される繰り返し単位を有する、請求項１又は２に記載のブロックコポリマー。
【請求項４】
前記電子吸引性基がフッ素原子である、請求項１〜３のいずれか一項に記載のブロックコポリマー。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか一項に記載のブロックコポリマーのミセルを含む、ミセル組成物。
【請求項６】
さらに、薬物を含む、請求項５に記載のミセル組成物。
【請求項７】
前記薬物が、前記ミセル内に封入されている、請求項６に記載のミセル組成物。
【請求項８】
前記薬物が抗腫瘍剤である、請求項６又は７に記載のミセル組成物。
【請求項９】
請求項５〜８のいずれか一項に記載のミセル組成物を含む、医薬組成物。
【請求項１０】
腫瘍を治療又は予防するための医薬組成物である、請求項９に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ブロックコポリマー、ミセル組成物、及び医薬組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
親水性ポリマーセグメントと疎水性ポリマーセグメントとを有するブロックコポリマーは、水性溶媒中で、親水性ポリマーセグメントのシェルと疎水性ポリマーセグメントのコアからなるミセルを形成する。このようなミセルは、コア部分に疎水性薬物を封入可能なことから、薬物送達のキャリアとして注目されている。
【０００３】
一方、薬物送達技術においては、疾患部位の細胞特異的に、薬物が取り込まれることが重要である。例えば、親水性ポリマーセグメントとしては、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）が用いられることが多いが、ＰＥＧにより形成されるシェルは、ミセルの細胞への取り込みを低下させる。そのため、ＰＥＧを用いたブロックコポリマーミセルにおいて、ｐＨ依存的にＰＥＧを脱離させることにより、がん細胞への取り込みを改善する試みが提案されている（非特許文献１）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】Xu Y. et al., Nanomicelles based on a boronate ester-linked diblock copolymer as the carrier of doxorubicin with enhanced cellular uptake. Colloids Surf B Biointerfaces. 2016 May 1;141:318-326.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
しかしながら、非特許文献１のブロックコポリマーでは、正常組織のｐＨ環境（ｐＨ７．４）においても、ＰＥＧセグメントが脱離してしまい、正常細胞にも薬物が取り込まれるという問題があった。
本発明は、上記事情に鑑みてなされたものであり、正常組織のｐＨ環境（ｐＨ７．４）における分解が低減された、新規のｐＨ感受性ブロックコポリマー、前記ブロックコポリマーを含むミセル組成物、及び前記ミセル組成物を含む医薬組成物を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、以下の態様を含む。
［１］親水性ポリマーセグメント及び疎水性ポリマーセグメントを含むブロックコポリマーであって、
前記親水性ポリマーセグメントと前記疎水性ポリマーセグメントとが、下記一般式（Ｉ）で表される構造を含む２価の連結基で連結されている、ブロックコポリマー。
【０００７】
【化１】
2019123805.tif 000002
［式中、Ｘ１〜Ｘ４は、それぞれ独立に、水素原子又は電子吸引性基である。ただし、Ｘ１〜Ｘ４の少なくとも１つは電子吸引性基である。＊は結合手を表す。］
［２］前記一般式（Ｉ）中、Ｘ１及びＸ２の少なくとも１つが電子吸引性基である、［１］に記載のブロックコポリマー。
［３］前記疎水性ポリマーセグメントが、アミノ酸から誘導される繰り返し単位を有する、［１］又は［２］に記載のブロックコポリマー。
［４］前記電子吸引性基がフッ素原子である、［１］〜［３］のいずれか一項に記載のブロックコポリマー。
［５］［１］〜［４］のいずれか一項に記載のブロックコポリマーのミセルを含む、ミセル組成物。
［６］さらに、薬物を含む、［５］に記載のミセル組成物。
［７］前記薬物が、前記ミセル内に封入されている、［６］に記載のミセル組成物。
［８］前記薬物が抗腫瘍剤である、［６］又は［７］に記載のミセル組成物。
［９］［５］〜［８］のいずれか一項に記載のミセル組成物を含む、医薬組成物。
［１０］腫瘍を治療又は予防するための医薬組成物である、［９］に記載の医薬組成物。
【発明の効果】
【０００８】
本発明によれば、正常組織のｐＨ環境（ｐＨ７．４）における分解が低減された、新規のｐＨ感受性ブロックコポリマー、前記ブロックコポリマーを含むミセル組成物、及び前記ミセル組成物を含む医薬組成物が提供される。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】本発明の１実施形態にかかるブロックコポリマーのミセルを示す模式図である。
【図２】ＰＥＧ−ＦＰＢＡ−ＣＡＴ−Ｐ（Ａｓｐ）の合成スキームの概略を示す。
【図３】ＰＥＧ−ＦＰＢＡ−ＣＡＴ−Ｐ（Ａｓｐ）の沈降係数とグルコース濃度との関係を示すグラフである。
【図４】蛍光スペクトル解析により、ＰＥＧ−ＦＰＢＡ−ＣＡＴ−Ｐ（Ａｓｐ）のｐＨ感受性及びグルコース感受性を評価した結果を示すグラフである。図４Ａは、ＨＥＰＥＳバッファー（ｐＨ７．４）中で、ＰＥＧ−ＦＰＢＡ−ＣＡＴ−Ｐ（Ａｓｐ）又はＰＥＧ−ＦＰＢＡの蛍光スペクトルを測定した結果である。図４Ｂは、異なるｐＨのＨＥＰＳバッファー中で、ＰＥＧ-ＦＰＢＡ-ＣＡＴ-Ｐ(Ａｓｐ)の蛍光スペクトルを測定した結果である。図４Ｃは、異なる濃度のグルコースを含むＨＥＰＳバッファー中で、ＰＥＧ-ＦＰＢＡ-ＣＡＴ-Ｐ(Ａｓｐ)の蛍光スペクトルを測定した結果である。図４Ｄは、図４Ｂにおける結果を、ｐＨとＰＥＧ-ＦＰＢＡ-ＣＡＴ-Ｐ(Ａｓｐ)の残存量の関係として示したグラフである。図４Ｅは、図４Ｃにおける結果に、さらにグルコース濃度１０ｍＭ及び３０ｍＭにおける結果を加えて、グルコース濃度とＰＥＧ-ＦＰＢＡ-ＣＡＴ-Ｐ(Ａｓｐ)の残存量の関係として示したグラフである。
【図５】５ｍＭグルコースを含むＰＢＳ（ｐＨ７．４）中で、ＰＥＧ-ＦＰＢＡ-ＣＡＴ-ＰＢＬＡミセルを２４時間インキュベートする前と後の、ミセルのサイズ分布を比較した結果を示すグラフである。
【図６】５ｍＭグルコースを含むＰＢＳ（ｐＨ７．４、ｐＨ７、又はｐＨ６．５）中で、ＰＥＧ-ＦＰＢＡ-ＣＡＴ-ＰＢＬＡミセルのＺ平均粒子径を経時的に測定した結果を示すグラフである。図６Ｂは、図６Ａのグラフにおける、横軸１〜４時間の範囲を拡大したグラフである。
【図７】二重標識ＰＥＧ-ＦＰＢＡ-ＣＡＴ-ＰＢＬＡミセルの調製方法の概略を示す。
【図８】図８Ａは、Ｂ１６−Ｆ１０マウスメラノーマ細胞を、二重標識ＰＥＧ-ＦＰＢＡ-ＣＡＴ-ＰＢＬＡとともに、ｐＨ７．４又はｐＨ６．５で、６時間インキュベートした後の、細胞の蛍光顕微鏡画像を示す。図８Ｂは、インキュベーション後の細胞内のＡｌｅｘａ５４５シグナルからの蛍光強度を定量化したグラフである。図８Ｂのグラフ中のデータは、平均±Ｓ．Ｄ．で示した（ｎ＝２０）。
【図９】図９Ａは、二重標識ＰＥＧ−ＦＰＢＡ−ＣＡＴ−ＰＢＬＡミセルを投与した直後のマウスの耳たぶにおいて、ＦＲＥＴシグナルを検出した蛍光顕微鏡画像である。図９Ｂは、二重標識ＰＥＧ−ＦＰＢＡ−ＣＡＴ−ＰＢＬＡミセルを投与したマウスの耳たぶにおいて、血管及び皮膚の所定領域（図９Ａにおける四角形で囲まれた領域）内におけるＦＲＥＴシグナル強度の経時変化を示したグラフである。投与直後の正常組織血管中の強度に対する相対値として示した。図８Ｃは、二重標識ＰＥＧ−ＦＰＢＡ−ＣＡＴ−ＰＢＬＡミセルを投与した直後のマウスの耳たぶにおいて、Ａｌｅｘａ５４５シグナルを検出した蛍光顕微鏡画像である。図９Ｄは、二重標識ＰＥＧ−ＦＰＢＡ−ＣＡＴ−ＰＢＬＡミセルを投与したマウスの耳たぶにおいて、血管及び皮膚の所定領域（図９Ｃにおける四角形で囲まれた領域）内におけるＡｌｅｘａ５４５シグナル強度の経時変化を示したグラフである。投与直後の正常組織血管中の強度に対する相対値として示した。
【図１０】図１０Ａは、二重標識ＰＥＧ−ＦＰＢＡ−ＣＡＴ−ＰＢＬＡミセルを蝶よした直後のマウスの腫瘍組織において、ＦＲＥＴシグナルを検出した蛍光顕微鏡画像である。図１０Ｂは、二重標識ＰＥＧ−ＦＰＢＡ−ＣＡＴ−ＰＢＬＡミセルを投与したマウスの腫瘍組織において、血管及び腫瘍間質組織の所定領域（図１０Ａにおける四角形で囲まれた領域）内におけるＦＲＥＴシグナル強度の経時変化を示したグラフである。投与直後の正常組織血管中の強度に対する相対値として示した。図１０Ｃは、二重標識ＰＥＧ−ＦＰＢＡ−ＣＡＴ−ＰＢＬＡミセルを投与したマウスの腫瘍組織において、Ａｌｅｘａ５４５シグナルを検出した蛍光顕微鏡画像である。図１０Ｄは、二重標識ＰＥＧ−ＦＰＢＡ−ＣＡＴ−ＰＢＬＡミセルを静脈注射したマウスの腫瘍組織において、血管及び腫瘍間質組織の所定領域（図１０Ｃにおける四角形で囲まれた領域）内におけるＡｌｅｘａ５４５シグナル強度の経時変化を示したグラフである。投与直後の正常組織血管中の強度に対する相対値として示した。
【図１１】図１１Ａは、二重標識ＰＥＧ−ＰＢＬＡミセルを静脈注射した直後のマウスの耳たぶにおいて、血管内におけるＦＲＥＴシグナル強度の経時変化を示したグラフである。投与直後の正常組織血管中の強度に対する相対値として示した。図１１Ｂは、二重標識ＰＥＧ−ＰＢＬＡミセルを静脈注射したマウスの腫瘍組織において、血管内及び腫瘍間質組織におけるＦＲＥＴシグナル強度の経時変化を示したグラフである。投与直後の正常組織血管中の強度に対する相対値として示した。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
［ブロックコポリマー］
１実施形態において、本発明は、親水性ポリマーセグメント及び疎水性ポリマーセグメントを含むブロックコポリマーであって、前記親水性ポリマーセグメントと前記疎水性ポリマーセグメントとが、下記一般式（Ｉ）で表される構造を含む２価の連結基で連結されている、ブロックコポリマーを提供する。
【００１１】
【化２】
2019123805.tif 000003
［式中、Ｘ１〜Ｘ４は、それぞれ独立に、水素原子又は電子吸引性基である。ただし、Ｘ１〜Ｘ４の少なくとも１つは電子吸引性基である。Ｘ１〜Ｘ４の２つ以上が電子吸引性基である場合、複数の電子吸引性基は、同じであってもよく、異なっていてもよい。＊は結合手を表す。］
【００１２】
前記一般式（Ｉ）中、Ｘ１〜Ｘ４は、それぞれ独立に、水素原子又は電子吸引性基である。ただし、Ｘ１〜Ｘ４の少なくとも１つは電子吸引性基である。好ましくは、Ｘ１及びＸ２の少なくとも１つが電子吸引性基である。
Ｘ１〜Ｘ４における電子吸引性基には、薬学的に許容される置換基を用いる。
そのような電子吸引性基としては、例えば、ハロゲン原子、ハロゲン化アルキル基、ハロゲン化アルコキシ基、ハロゲン化アリールオキシ基、ハロゲン化アルキルアミノ基、ハロゲン化アルキルチオ基、シアノ基、ニトロ基等が挙げられる。
中でも、ハロゲン原子又はハロゲン化アルキル基が好ましい。
ハロゲン原子としては、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子等が挙げられ、特にフッ素原子が好ましい。
ハロゲン化アルキル基は、炭素素数１〜５のハロゲン化アルキル基が好ましい。炭素数１〜５のハロゲン化アルキル基は、炭素数１〜５のアルキル基の水素原子の一部又は全部がハロゲン原子で置換された基である。ハロゲン化アルキル基におけるアルキル基は、直鎖状であってもよく、分岐鎖状であってもよい。ハロゲン化アルキル基は、炭素数１〜３のハロゲン化アルキル基がより好ましく、炭素数１又は２のハロゲン化アルキル基がさらにこのましい。ハロゲン化アルキル基におけるハロゲン原子としては、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子等が挙げられ、特にフッ素原子が好ましい。
上記の中でも、Ｘ１〜Ｘ４における電子吸引性基としては、フッ素原子が最も好ましい。
【００１３】
Ｘ１〜Ｘ４は、少なくとも１つが電子吸引性基であれば、残りは水素原子であっても電子吸引性基であってもよい。Ｘ１〜Ｘ４の２つ以上が電子吸引性基である場合、複数の電子吸引性基は、同じであってもよく、異なっていてもよいが、同じであることが好ましい。好ましくは、Ｘ１及びＸ２の少なくとも１つが電子吸引性基であり、Ｘ３及びＸ４は水素原子である。より好ましくは、Ｘ１〜Ｘ４のうち、Ｘ１及びＸ２のいずれか１つのみが電子吸引性基であり、その他は水素原子である。さらに好ましくは、Ｘ２が電子吸引性基であり、Ｘ１、Ｘ３及びＸ４は水素原子である。
【００１４】
上記一般式（Ｉ）で表される構造は、ｐＨに依存して、フェニルボロン酸カテコールエステルが開裂する。すなわち、正常組織のｐＨ環境（ｐＨ７．４程度）下では、フェニルボロン酸カテコールエステルは開裂しないが、腫瘍組織のｐＨ環境（ｐＨ６．２〜７．２程度）下では、フェニルボロン酸カテコールエステルが開裂する。本実施形態のブロックコポリマーにおいては、上記一般式（Ｉ）中のＸ１〜Ｘ４の少なくとも１つを電子吸引性基とすることにより、正常組織のｐＨ範囲（ｐＨ７．４程度）では、フェニルボロン酸カテコールエステルが開裂しないという性質を有する。
【００１５】
本実施形態のブロックコポリマーでは、親水性ポリマーセグメント及び疎水性ポリマーセグメントとが、上記一般式（Ｉ）で表される構造を含む２価の連結基で連結されている。
なお、本実施形態のブロックポリマーにおいて、ポリマーセグメントの「親水性」及び「疎水性」は、相対的なものである。すなわち、上記（Ｉ）で表される構造を含む２価の連結基で連結されるポリマーセグメントのうち、より親水性の高いポリマーセグメントが親水性ポリマーセグメントであり、より親水性の低いポリマーセグメントが疎水性ポリマーセグメントである。ポリマーの親水性／疎水性は、例えば、ｌｏｇＰ値によって規定することができる。ｌｏｇＰ値は、オクタノール／水分配係数（Ｐｏｗ）の対数値であり、広範囲の化合物に対し、その親水性／疎水性を特徴づけることのできる有効なパラメータである。ｌｏｇＰ値が０をはさんでプラス側に大きくなると疎水性が増すことを意味し、マイナス側に大きくなると親水性が増すことを意味する。
【００１６】
親水性ポリマーセグメント及び疎水性ポリマーセグメントは、１種の繰り返し単位を有するポリマーであってもよく、２種以上の繰り返し単位を有するポリマーであってもよい。
親水性ポリマーセグメントの繰り返し単位数は、例えば、１個以上、５個以上、１０個以上、２０個以上、又は４５個以上であってよい。また、親水性ポリマーセグメントの繰り返し単位数は、例えば、１０００個以下、７００個以下、又は４５０個以下であってよい。親水性ポリマーセグメントの分子質量は、例えば、１，０００Ｄａ以上、２，０００Ｄａ以上、又は５，０００Ｄａ以上であってよい。また、親水性ポリマーセグメントの分子質量は、例えば、４０，０００Ｄａ以下、３０，０００Ｄａ以下、又は２０，０００Ｄａ以下であってよい。
疎水性ポリマーセグメントの繰り返し単位数は、例えば、５個以上、１０個以上、又は２０個以上であってよい。また、疎水性ポリマーセグメントの繰り返し単位数は、例えば、２００個以下、１００個以下、又は６０個以下であってよい。疎水性ポリマーセグメントの分子質量は、例えば、１，０００Ｄａ以上、又は２，０００Ｄａ以上であってよい。また、疎水性ポリマーセグメントの分子質量は、例えば、３０，０００Ｄａ以下、１６，０００Ｄａ以下、又は１０，０００Ｄａ以下であってよい。
【００１７】
親水性ポリマーセグメントの具体例としては、例えば、ポリアルキレングリコール、ポリ（２−オキサゾリン）、ポリサッカライド、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリアクリルアミド、ポリメタクリルアミド、ポリアクリル酸エステル、ポリメタクリル酸エステル、ポリ（２−メタクロイルオキシエチルホスホリルコリン）、ポリ（Ｎ−(２−ヒドロキシプロピル)メタクリルアミド）（ＰＨＰＭＡ）及びそれらの誘導体等が挙げられる。中でも、ポリアルキレングリコール、ポリ（２−オキサゾリン）等が好ましく、ポリアルキレングリコールがより好ましい。ポリアルキレングリコールとしては、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリエチレングリコール／ポリプロピレングリコールのコポリマー等が挙げられ、ポリエチレングリコール特にが好ましい。
【００１８】
疎水性ポリマーセグメントの具体例としては、例えば、アミノ酸及び／又はその誘導体から誘導される繰り返し単位を有するポリマーが挙げられる。より具体的には、ポリアミノ酸又はその誘導体が挙げられる。ポリアミノ酸及びその誘導体としては、例えば、ポリアスパラギン酸、ポリグルタミン酸、ポリリジン、ポリ（ベンジルアスパラギン酸）、ポリ（ベンジルグルタミン酸）等が挙げられる。
また、疎水性ポリマーセグメントは、例えば、アルキル基側鎖又はアラルキル基側鎖を有するアミノ酸から誘導される繰り返し単位を含んでいてもよい。アルキル基側鎖を有するアミノ酸としては、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシンが挙げられる。また、アラルキル基側鎖を有するアミノ酸としては、フェニルアラニンが挙げられる。２以上のアルキル基側鎖アミノ酸及び／又はアラルキル基側鎖アミノ酸から誘導される繰り返し単位を有する場合、それらの側鎖は同一であってもよく、異なっていてもよい。疎水性ポリマーセグメントの全繰り返し単位に対するアルキル基側鎖アミノ酸又はアラルキル基側鎖アミノ酸から誘導される繰り返し単位の比率は、特に限定されず、例えば、２０％以上、３５％以上、４０％以上、５０％以上、８０％以上、９５％以上、９９％以上、又は１００％であってよい。
【００１９】
本実施形態のブロックコポリマーにおいて、上記一般式（Ｉ）で表される構造を含む２価の連結基は、１個であっても複数個であってもよいが、１個であることが好ましい。また、親水性ポリマーセグメントは、１個であっても複数個であってもよいが、１個であることが好ましい。同様に、疎水性ポリマーセグメントは、１個であっても複数個であってもよいが、１個であることが好ましい。
【００２０】
本実施形態のブロックコポリマーとしては、例えば、下記一般式（ＩＩ）又は（ＩＩＩ）で表されるブロックコポリマーが挙げられる。
【００２１】
【化３】
2019123805.tif 000004
［一般式（ＩＩ）及び（ＩＩＩ）中、Ｘ１〜Ｘ４は、一般式（Ｉ）におけるＸ１〜Ｘ４と同様である。Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立に、１価の基であり、Ｌ１及びＬ２は、それぞれ独立に、単結合又は２価の連結基であり、Ｐ１は親水性ポリマーセグメントであり、Ｐ２は疎水性ポリマーセグメントである。］
【００２２】
一般式（ＩＩ）及び（ＩＩＩ）中、Ｘ１〜Ｘ４は、一般式（Ｉ）におけるＸ１〜Ｘ４と同様である。
一般式（ＩＩ）及び（ＩＩＩ）中、Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立に、１価の基である。Ｒ１及びＲ２における１価の基は、特に限定されないが、本実施形態のブロックコポリマーのミセル形成を妨げないものであることが好ましい。Ｒ１及びＲ２における１価の基の具体例としては、例えば、水素原子、Ｃ１−６アルコキシ基、アリールオキシ基、アリールＣ１−３オキシ基、シアノ基、カルボキシル基、アミノ基、Ｃ１−６アルコキシカルボニル基、Ｃ２−７アシルアミド基、トリ−Ｃ１−６アルキルシロキシ基、シロキシ基、シリルアミノ基、飽和若しくは不飽和のＣ１〜Ｃ２９脂肪族カルボニル基、アリールカルボニル基、水酸基、飽和若しくは不飽和のＣ１〜Ｃ３０脂肪族オキシ基、アリール−低級アルキルオキシ基等が挙げられる。
一般式（ＩＩ）及び（ＩＩＩ）中、Ｌ１及びＬ２は、それぞれ独立に、単結合又は２価の連結基である。Ｌ１及びＬ２における２価の連結基は、特に限定されないが、本実施形態のブロックコポリマーのミセル形成を妨げないものであることが好ましい。Ｌ１及びＬ２における２価の連結基の具体例としては、例えば、−ＮＨ−、−Ｚ−ＮＨ−、−ＮＨ−Ｚ−、−Ｚ−、−Ｚ−Ｓ−Ｚ−ＮＨ−、−ＮＨ−Ｚ−Ｓ−Ｚ−、−ＣＯ−Ｚ−ＣＯ−、−Ｚ−ＣＯ−Ｚ−ＣＯ−、−ＣＯ−Ｚ−ＣＯ−Ｚ−、−ＮＨ−ＣＯ−Ｚ−ＣＯ−、−ＣＯ−Ｚ−ＣＯ−ＮＨ−、−Ｚ−ＮＨ−ＣＯ−Ｚ−ＣＯ−、−ＣＯ−Ｚ−ＣＯ−ＮＨ−Ｚ−、−Ｚ−Ｓ−Ｚ−ＮＨ−、−Ｚ−ＮＨ−Ｚ−Ｓ−、−ＮＨ−ＣＯ−、−ＣＯ−ＮＨ−、−Ｚ−ＮＨ−ＣＯ−、−ＣＯ−ＮＨ−Ｚ−、−Ｚ−ＮＨ−ＣＯ−Ｚ−、−Ｚ−ＣＯ−ＮＨ−Ｚ−（Ｚはそれぞれ独立して炭素数１〜６のアルキレン基である。）等が挙げられる。
一般式（ＩＩ）及び（ＩＩＩ）中、Ｐ１は親水性ポリマーセグメントであり、Ｐ２は疎水性ポリマーセグメントである。Ｐ１における親水性ポリマーセグメントとしては、上記に挙げたものが挙げられる。Ｐ２における疎水性ポリマーセグメントとしては、上記に挙げたものが挙げられる。
【００２３】
上記一般式（ＩＩ）で表されるブロックコポリマーの具体例としては、下記一般式（ＩＩ−１）で表されるブロックコポリマーが挙げられる。
【００２４】
【化４】
2019123805.tif 000005
［式中、Ｘ１〜Ｘ４は、一般式（Ｉ）におけるＸ１〜Ｘ４と同様である。Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立に、１価の基であり、Ｌ１及びＬ２は、それぞれ独立に、単結合又は２価の連結基であり、Ｐ１は親水性ポリマーセグメントである。Ｒ３は、アミノ酸の側鎖又はその誘導体を表す。ｍは、５以上の整数である。］
【００２５】
また、上記一般式（ＩＩＩ）で表されるブロックコポリマーの具体例としては、下記一般式（ＩＩＩ−１）で表されるブロックコポリマーが挙げられる。
【００２６】
【化５】
2019123805.tif 000006
［式中、Ｘ１〜Ｘ４は、一般式（Ｉ）におけるＸ１〜Ｘ４と同様である。Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立に、１価の基であり、Ｌ１及びＬ２は、それぞれ独立に、単結合又は２価の連結基であり、Ｐ１は親水性ポリマーセグメントである。Ｒ３は、アミノ酸の側鎖又はその誘導体を表す。ｍは、５以上の整数である。］
【００２７】
上記一般式（ＩＩ−１）又は（ＩＩＩ−１）で表されるブロックコポリマーは、一般式（ＩＩ）又は（ＩＩＩ）で表されるブロックコポリマーにおいて、疎水性ポリマーセグメントとして、ポリアミノ酸又はその誘導体を有するものである。
【００２８】
一般式（ＩＩ−１）及び（ＩＩＩ−１）中、Ｘ１〜Ｘ４は、一般式（Ｉ）におけるＸ１〜Ｘ４と同様である。
一般式（ＩＩ−１）及び（ＩＩＩ−１）中、Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立に、１価の基である。Ｒ１の具体例としては、Ｃ１−６アルコキシ基、アリールオキシ基、アリールＣ１−３オキシ基、シアノ基、カルボキシル基、アミノ基、Ｃ１−６アルコキシカルボニル基、Ｃ２−７アシルアミド基、トリ−Ｃ１−６アルキルシロキシ基、シロキシ基、シリルアミノ基等が挙げられる。中でも、Ｒ１としては、水素原子、Ｃ１−６アルコキシ基が好ましく、水素原子又はメトキシ基がより好ましい。また、Ｒ２の具体例としては、水素原子、飽和若しくは不飽和のＣ１〜Ｃ２９脂肪族カルボニル基、アリールカルボニル基等が挙げられる。中でも、Ｒ２としては、水素原子が好ましい。
一般式（ＩＩ−１）及び（ＩＩＩ−１）中、Ｌ１及びＬ２は、それぞれ独立に、単結合又は２価の連結基である。Ｌ１の具体例としては、−ＮＨ−、−Ｚ−ＮＨ−、−ＮＨ−Ｚ−、−Ｚ−、−Ｚ−Ｓ−Ｚ−ＮＨ−、−ＮＨ−Ｚ−Ｓ−Ｚ−、−ＣＯ−Ｚ−ＣＯ−、−Ｚ−ＣＯ−Ｚ−ＣＯ−、−ＣＯ−Ｚ−ＣＯ−Ｚ−、−ＮＨ−ＣＯ−Ｚ−ＣＯ−、−ＣＯ−Ｚ−ＣＯ−ＮＨ−、−Ｚ−ＮＨ−ＣＯ−Ｚ−ＣＯ−、−ＣＯ−Ｚ−ＣＯ−ＮＨ−Ｚ−、−Ｚ−Ｓ−Ｚ−ＮＨ−、−Ｚ−ＮＨ−Ｚ−Ｓ−、−ＮＨ−ＣＯ−、−ＣＯ−ＮＨ−、−Ｚ−ＮＨ−ＣＯ−、−ＣＯ−ＮＨ−Ｚ−、−Ｚ−ＮＨ−ＣＯ−Ｚ−、−Ｚ−ＣＯ−ＮＨ−Ｚ−（Ｚはそれぞれ独立に炭素数１〜６のアルキレン基である。）等が挙げられる。Ｌ２の具体例としては、−ＮＨ−、−Ｚ−ＮＨ−、−ＮＨ−Ｚ−、−Ｚ−、−Ｚ−Ｓ−Ｚ−ＮＨ−、−ＮＨ−Ｚ−Ｓ−Ｚ−（Ｚはそれぞれ独立に炭素数１〜６のアルキレン基である。）等が挙げられる。
一般式（ＩＩ−１）及び（ＩＩＩ−１）中、Ｐ１は親水性ポリマーセグメントである。Ｐ１における親水性ポリマーセグメントとしては、上記に挙げたものが挙げられる。
一般式（ＩＩ−１）及び（ＩＩＩ−１）中、Ｒ３は、アミノ酸の側鎖又はその誘導体を表す。ｍ個のＲ３は、各々独立に選択することができ、全て同じであってもよく、複数種類からなるものであってもよい。Ｒ３の具体例としては、アスパラギン酸の側鎖（カルボキシメチル基）、グルタミン酸の側鎖（カルボキシエチル基）、リジンの側鎖（４−アミノブチル基）、それらの誘導体（ベンジルオキシカルボニルメチル基、ベンジルオキシカルボニルエチル基など）等が挙げられる。また、Ｒ３は、アラニンの側鎖（メチル基）、バリンの側鎖（イソプロピル基）、ロイシンの側鎖（イソブチル基）、イソロイシンの側鎖（ｓｅｃ−ブチル基）、フェニルアラニンの側鎖（ベンジル基）、オルニチンの側鎖（３−アミノプロピル基）、セリンの側鎖（ヒドロキシメチル基）、又はヒスチジンの側鎖（イミダゾイルメチル基）であってもよい。
一般式（ＩＩ−１）及び（ＩＩＩ−１）中、ｍは、５以上の整数を表す。ｍは、１０以上であることが好ましく、２０以上であることがより好ましい。ｍの上限は特に限定されないが、例えば、２００以下、１００以下、又は６０以下が挙げられる。
【００２９】
上記一般式（ＩＩ−１）で表されるブロックコポリマーの好ましい例としては、例えば、下記一般式（ＩＩ−２）で表されるブロックコポリマーが挙げられる。
【００３０】
【化６】
2019123805.tif 000007
［式中、Ｘ１〜Ｘ４は、一般式（Ｉ）におけるＸ１〜Ｘ４と同様である。Ｒ１〜Ｒ３、Ｐ１、及びｍは、一般式（ＩＩ−１）におけるＲ１〜Ｒ３、Ｐ１、及びｍと同様である。Ｌ１’及びＬ２’は、それぞれ独立に、炭素数１〜６のアルキレン基を表す。］
【００３１】
また、上記一般式（ＩＩＩ−１）で表されるブロックコポリマーの好ましい例としては、例えば、下記一般式（ＩＩＩ−２）で表されるブロックコポリマーが挙げられる。
【００３２】
【化７】
2019123805.tif 000008
［式中、Ｘ１〜Ｘ４は、一般式（Ｉ）におけるＸ１〜Ｘ４と同様である。Ｒ１〜Ｒ３、Ｐ１、及びｍは、一般式（ＩＩＩ−１）におけるＲ１〜Ｒ３、Ｐ１、及びｍと同様である。Ｌ１’及びＬ２’は、それぞれ独立に、炭素数１〜６のアルキレン基を表す。］
【００３３】
一般式（ＩＩ−２）及び（ＩＩＩ−２）中、Ｘ１〜Ｘ４は、一般式（Ｉ）におけるＸ１〜Ｘ４と同様である。
一般式（ＩＩ−２）及び（ＩＩＩ−２）中、Ｒ１〜Ｒ３、並びにｍ及びｎは、一般式（ＩＩ−１）及び（ＩＩＩ−１）におけるＲ１〜Ｒ３、並びにｍ及びｎと同様である。
一般式（ＩＩ−２）及び（ＩＩＩ−２）中、Ｌ１’及びＬ２’は、それぞれ独立に、炭素数１〜６のアルキレン基を表す。Ｌ１’及びＬ２’におけるアルキレン基は、直鎖状であっても分岐鎖状であってもよいが、直鎖状であることが好ましい。Ｌ１’及びＬ２’は、炭素数１〜３のアルキレン基であることが好ましく、炭素数１又は２のアルキレン基であることがより好ましい。
【００３４】
上記一般式（ＩＩ−２）で表されるブロックコポリマーの好ましい例としては、例えば、下記一般式（ＩＩ−３）で表されるブロックコポリマーが挙げられる。
【００３５】
【化８】
2019123805.tif 000009
［式中、Ｘ１〜Ｘ４は、一般式（Ｉ）におけるＸ１〜Ｘ４と同様である。Ｒ１〜Ｒ３、Ｐ１、及びｍは、一般式（ＩＩ−１）におけるＲ１〜Ｒ３、Ｐ１、及びｍと同様である。Ｌ１’及びＬ２’は、一般式（ＩＩ−２）におけるＬ１’及びＬ２’と同様である。ｎは、１以上の整数を表す。］
【００３６】
また、上記一般式（ＩＩＩ−２）で表されるブロックコポリマーの好ましい例としては、例えば、下記一般式（ＩＩＩ−３）で表されるブロックコポリマーが挙げられる。
【００３７】
【化９】
2019123805.tif 000010
［式中、Ｘ１〜Ｘ４は、一般式（Ｉ）におけるＸ１〜Ｘ４と同様である。Ｒ１〜Ｒ３、Ｐ１、及びｍは、一般式（ＩＩＩ−１）におけるＲ１〜Ｒ３、Ｐ１、及びｍと同様である。Ｌ１’及びＬ２’は、一般式（ＩＩＩ−２）におけるＬ１’及びＬ２’と同様である。ｎは、１以上の整数を表す。］
【００３８】
上記一般式（ＩＩ−３）又は（ＩＩＩ−３）で表されるブロックコポリマーは、一般式（ＩＩ−２）又は（ＩＩＩ−２）で表されるブロックコポリマーにおいて、親水性ポリマーセグメントとして、ポリエチレングリコールを有するものである。
【００３９】
一般式（ＩＩ−３）及び（ＩＩＩ−３）中、Ｘ１〜Ｘ４は、一般式（Ｉ）におけるＸ１〜Ｘ４と同様である。
一般式（ＩＩ−３）及び（ＩＩＩ−３）中、Ｒ１〜Ｒ３、Ｐ１、及びｍは、一般式（ＩＩＩ−１）及び（ＩＩＩ−１）におけるＲ１〜Ｒ３、Ｐ１、及びｍと同様である。
一般式（ＩＩ−３）及び（ＩＩＩ−３）中、Ｌ１’及びＬ２’は、一般式（ＩＩ−２）及び一般式（ＩＩＩ−２）におけるＬ１’及びＬ２’と同様である。
一般式（ＩＩ−３）及び（ＩＩＩ−３）中、ｎは、１以上の整数を表す。ｎは、５以上であることが好ましく、１０以上であることがより好ましく、２０以上であることがさらに好ましく、４５以上であることが特に好ましい。ｎの上限は特に限定されないが、例えば、７００以下、又は４５０以下が挙げられる。
【００４０】
また、上記一般式（ＩＩ）で表されるブロックコポリマーは、疎水性ポリマーセグメントＰ２が、下記一般式（Ｐ２−１）〜（Ｐ２−３）のいずれかで表される繰り返し単位（以下、それぞれ「繰り返し単位（Ｐ２−１）」、「繰り返し単位（Ｐ２−２）」、「繰り返し単位（Ｐ２−３）」と記載する。）を少なくとも１種を含むものであってもよい。
【００４１】
【化１０】
2019123805.tif 000011
［式中、Ｒ３は、アミノ酸の側鎖又はその誘導体を表す。Ｒ４及びＲ６は、それぞれ独立に、−Ｏ−又は−ＮＨ−であり、Ｒ５及びＲ７は、それぞれ独立に、水素原子、フェニル基、ベンジル基、−（ＣＨ２）４−フェニル基、アミノ基若しくはカルボニル基で置換されていてもよい炭素数４〜１６のアルキル基、又はステロール誘導体の残基である。ｙは１又は２である。］
【００４２】
また、上記一般式（ＩＩＩ）で表されるブロックコポリマーは、疎水性ポリマーセグメントＰ２が、下記一般式（Ｐ２−４）〜（Ｐ２−６）のいずれかで表される繰り返し単位（以下、それぞれ「繰り返し単位（Ｐ２−４）」、「繰り返し単位（Ｐ２−５）」、「繰り返し単位（Ｐ２−６）」と記載する。）を少なくとも１種を含むものであってもよい。
【００４３】
【化１１】
2019123805.tif 000012
［式中、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ６、及びｙは、上記一般式（Ｐ２−１）〜（Ｐ２−３）におけるＲ３、Ｒ４、Ｒ６、及びｙと同様である。］
【００４４】
上記一般式（Ｐ２−１）及び（Ｐ２−４）中、Ｒ３は、アミノ酸の側鎖又はその誘導体を表し、一般式（ＩＩ−１）又は（ＩＩＩ−１）におけるＲ３と同様である。上記一般式（ＩＩ）で表されるブロックコポリマーにおいて、疎水性ポリマーセグメントＰ２は、繰り返し単位（Ｐ２−１）を１個以上含むことが好ましく、５個以上含むことがより好ましく、１０個以上含むことがさらに好ましく、２０個以上含むことが特に好ましい。上記一般式（ＩＩＩ）で表されるブロックコポリマーにおいて、疎水性ポリマーセグメントＰ２は、繰り返し単位（Ｐ２−４）」を１個以上含むことが好ましく、５個以上含むことがより好ましく、１０個以上含むことがさらに好ましく、２０個以上含むことが特に好ましい。
疎水性ポリマーセグメントＰ２において、繰り返し単位（Ｐ２−１）又は（Ｐ２−４）で表される繰り返し単位の個数のは特に限定されないが、例えば、２００個以下、１００個以下、又は６０個以下が挙げられる。疎水性ポリマーセグメントＰ２が、繰り返し単位（Ｐ２−１）又は（Ｐ２−４）を２個以上含む場合、各繰り返し単位におけるＲ３は、各々独立に選択することができ、全て同じであってもよく、複数種類からなるものであってもよい。
疎水性ポリマーセグメントＰ２が繰り返し単位（Ｐ２−１）又は（Ｐ２−４）を複数含む場合、各繰り返し単位におけるＲ３のうち、５０％以上が炭素数１〜８のアルキル基又はアラルキル基を含むアミノ酸側鎖又はその誘導体であることが好ましい。前記割合は、８０％以上、９０％以上、９５％以上、９９％以上、又は１００％であってもよい。
【００４５】
上記一般式（Ｐ２−２）及び（Ｐ２−５）中、Ｒ４は、−Ｏ−又は−ＮＨ−である。Ｒ５は水素原子、フェニル基、ベンジル基、−（ＣＨ２）４−フェニル基、アミノ基若しくはカルボニル基で置換されていてもよい炭素数４〜１６のアルキル基、又はステロール誘導体の残基である。ｙは１又は２である。上記一般式（ＩＩ）で表されるブロックコポリマーにおいて、疎水性ポリマーセグメントＰ２は、繰り返し単位（Ｐ２−２）を１個以上含むことができ、５個以上、１０個以上、又は２０個以上含んでいてもよい。上記一般式（ＩＩＩ）で表されるブロックコポリマーにおいて、疎水性ポリマーセグメントＰ２は、繰り返し単位（Ｐ２−５）を１個以上含むことができ、５個以上、１０個以上、又は２０個以上含んでいてもよい。
疎水性ポリマーセグメントＰ２において、繰り返し単位（Ｐ２−２）又は（Ｐ２−５）で表される繰り返し単位の個数のは特に限定されないが、例えば、２００個以下、１００個以下、又は６０個以下が挙げられる。疎水性ポリマーセグメントＰ２が、一般式（Ｐ２−２）又は（Ｐ２−５）で表される繰り返し単位を２個以上含む場合、各繰り返し単位におけるＲ５は、各々独立に選択することができ、全て同じであってもよく、複数種類からなるものであってもよい。同様に、各繰り返し単位におけるＲ４及びｙも、各々独立に選択することができる。
【００４６】
上記一般式（Ｐ２−３）及び（Ｐ２−６）中、Ｒ６は、Ｏ−又は−ＮＨ−である。Ｒ７は水素原子、フェニル基、ベンジル基、−（ＣＨ２）４−フェニル基、アミノ基若しくはカルボニル基で置換されていてもよい炭素数４〜１６のアルキル基、又はステロール誘導体の残基である。上記一般式（ＩＩ）で表されるブロックコポリマーにおいて、疎水性ポリマーセグメントＰ２は、繰り返し単位（Ｐ２−３）を１個以上含むことができ、５個以上、１０個以上、又は２０個以上含んでいてもよい。上記一般式（ＩＩＩ）で表されるブロックコポリマーにおいて、疎水性ポリマーセグメントＰ２は、繰り返し単位（Ｐ２−６）を１個以上含むことができ、５個以上、１０個以上、又は２０個以上含んでいてもよい。
疎水性ポリマーセグメントＰ２において、繰り返し単位（Ｐ２−３）又は（Ｐ２−６）で表される繰り返し単位の個数のは特に限定されないが、例えば、２００個以下、１００個以下、又は６０個以下が挙げられる。疎水性ポリマーセグメントＰ２が、一般式（Ｐ２−３）又は（Ｐ２−６）で表される繰り返し単位を２個以上含む場合、各繰り返し単位におけるＲ７は、各々独立に選択することができ、全て同じであってもよく、複数種類からなるものであってもよい。同様に、各繰り返し単位におけるＲ６も、各々独立に選択することができる。
【００４７】
上記一般式（ＩＩ）で表されるブロックコポリマーにおいて、疎水性ポリマーセグメントＰ２が、繰り返し単位（Ｐ２−２）及び（Ｐ２−３）のいずれかを有する場合、Ｒ５又はＲ７が水素原子である繰り返し単位は、繰り返し単位（Ｐ２−２）及び（Ｐ２−３）の合計の７５％以下である。
上記一般式（ＩＩＩ）で表されるブロックコポリマーにおいて、疎水性ポリマーセグメントＰ２が、繰り返し単位（Ｐ２−５）及び（Ｐ２−６）のいずれかを有する場合、Ｒ５又はＲ７が水素原子である繰り返し単位は、繰り返し単位（Ｐ２−５）及び（Ｐ２−６）の合計の７５％以下である。
【００４８】
上記一般式（ＩＩ）で表されるブロックコポリマーにおいて、疎水性ポリマーセグメントＰ２は、繰り返し単位（Ｐ２−１）〜（Ｐ２−３）のいずれかからなるものであってもよく、これら以外の繰り返し単位を含むものであってもよい。疎水性ポリマーセグメントＰ２が、繰り返し単位（Ｐ２−１）〜（Ｐ２−３）のいずれかを２種以上含む場合、それらは疎水性ポリマーセグメントＰ２中でランダムに存在してもよく、ブロックとして存在してもよい。
【００４９】
一般式（ＩＩ）で表されるブロックコポリマーにおける疎水性ポリマーセグメントＰ２は、繰り返し単位（Ｐ２−１）及び（Ｐ２−２）のいずれかを有することが好ましい。疎水性ポリマーセグメントＰ２の具体例としては、繰り返し単位（Ｐ２−１）、繰り返し単位（Ｐ２−２）及び繰り返し単位（Ｐ２−３）からなるランダムコポリマー；繰り返し単位（Ｐ２−１）のブロック、繰り返し単位（Ｐ２−２）のブロック及び繰り返し単位（Ｐ２−３）のブロックからなるブロックコポリマー；繰り返し単位（Ｐ２−１）のブロック、並びに繰り返し単位（Ｐ２−２）及び繰り返し単位（Ｐ２−３）から構成されるブロックからなるブロックコポリマー；繰り返し単位（Ｐ２−１）及び繰り返し単位（Ｐ２−２）からなるランダムコポリマー；繰り返し単位（Ｐ２−１）のブロック及び繰り返し単位（Ｐ２−２）のブロックからなるブロックコポリマー；繰り返し単位（Ｐ２−２）及び繰り返し単位（Ｐ２−３）からなるランダムコポリマー；繰り返し単位（Ｐ２−２）のブロック及び繰り返し単位（Ｐ２−３）のブロックからなるブロックコポリマー；繰り返し単位（Ｐ２−１）及び繰り返し単位（Ｐ２−３）からなるランダムコポリマー；繰り返し単位（Ｐ２−１）位のブロック及び繰り返し単位（Ｐ２−３）のブロックからなるブロックコポリマー；繰り返し単位（Ｐ２−１）のポリマー；繰り返し単位（Ｐ２−２）のポリマー：等が挙げられる。前記例示中、疎水性ポリマーセグメントＰ２が、繰り返し単位（Ｐ２−１）のブロック、繰り返し単位（Ｐ２−２）のブロック及び繰り返し単位（Ｐ２−３）のブロックのいずれかを含む場合、当該ブロックは、１個であってもよく、複数個であってもよい。
【００５０】
一般式（ＩＩ）で表されるブロックコポリマーにおける疎水性ポリマーセグメントＰ２において、疎水性ポリマーセグメントＰ２が有する繰り返し単位全体に対する繰り返し単位（Ｐ２−１）の割合は、例えば、２０〜１００％である。好ましくは、３５〜１００％、４０〜１００％、５０〜１００％、８０〜１００％、又は９０〜１００％である。
疎水性ポリマーセグメントＰ２が有する繰り返し単位全体に対する繰り返し単位（Ｐ２−２）の割合は、例えば、１０〜１００％である。好ましくは、２０〜１００％、３５〜１００％、４０〜１００％、５０〜１００％、８０〜１００％、又は９０〜１００％である。
疎水性ポリマーセグメントＰ２が有する繰り返し単位全体に対する繰り返し単位（Ｐ２−３）の割合は、例えば、０〜９０％である。好ましくは、０〜８０％、０〜６５％、０〜５０％、０〜２０％、又は０〜１０％ある。
【００５１】
上記一般式（ＩＩＩ）で表されるブロックコポリマーにおいて、疎水性ポリマーセグメントＰ２は、繰り返し単位（Ｐ２−４）〜（Ｐ２−６）のいずれかからなるものであってもよく、これら以外の繰り返し単位を含むものであってもよい。疎水性ポリマーセグメントＰ２が、繰り返し単位（Ｐ２−４）〜（Ｐ２−６）のいずれかを２種以上含む場合、それらは疎水性ポリマーセグメントＰ２中でランダムに存在してもよく、ブロックとして存在してもよい。
【００５２】
一般式（ＩＩＩ）で表されるブロックコポリマーにおける疎水性ポリマーセグメントＰ２は、繰り返し単位（Ｐ２−４）及び（Ｐ２−５）のいずれかを有することが好ましい。疎水性ポリマーセグメントＰ２の具体例としては、繰り返し単位（Ｐ２−４）、繰り返し単位（Ｐ２−５）及び繰り返し単位（Ｐ２−６）からなるランダムコポリマー；繰り返し単位（Ｐ２−４）のブロック、繰り返し単位（Ｐ２−５）のブロック及び繰り返し単位（Ｐ２−６）のブロックからなるブロックコポリマー；繰り返し単位（Ｐ２−４）のブロック、並びに繰り返し単位（Ｐ２−５）及び繰り返し単位（Ｐ２−６）から構成されるブロックからなるブロックコポリマー；繰り返し単位（Ｐ２−４）及び繰り返し単位（Ｐ２−５）からなるランダムコポリマー；繰り返し単位（Ｐ２−４）のブロック及び繰り返し単位（Ｐ２−５）のブロックからなるブロックコポリマー；繰り返し単位（Ｐ２−５）及び繰り返し単位（Ｐ２−６）からなるランダムコポリマー；繰り返し単位（Ｐ２−５）のブロック及び繰り返し単位（Ｐ２−６）のブロックからなるブロックコポリマー；繰り返し単位（Ｐ２−４）及び繰り返し単位（Ｐ２−６）からなるランダムコポリマー；繰り返し単位（Ｐ２−４）位のブロック及び繰り返し単位（Ｐ２−６）のブロックからなるブロックコポリマー；繰り返し単位（Ｐ２−４）のポリマー；繰り返し単位（Ｐ２−５）のポリマー：等が挙げられる。前記例示中、疎水性ポリマーセグメントＰ２が、繰り返し単位（Ｐ２−４）のブロック、繰り返し単位（Ｐ２−５）のブロック及び繰り返し単位（Ｐ２−６）のブロックのいずれかを含む場合、当該ブロックは、１個であってもよく、複数個であってもよい。
【００５３】
一般式（ＩＩＩ）で表されるブロックコポリマーにおける疎水性ポリマーセグメントＰ２において、疎水性ポリマーセグメントＰ２が有する繰り返し単位全体に対する繰り返し単位（Ｐ２−４）の割合は、例えば、２０〜１００％である。好ましくは、３５〜１００％、４０〜１００％、５０〜１００％、８０〜１００％、又は９０〜１００％である。
疎水性ポリマーセグメントＰ２が有する繰り返し単位全体に対する繰り返し単位（Ｐ２−５）の割合は、例えば、１０〜１００％である。好ましくは、２０〜１００％、３５〜１００％、４０〜１００％、５０〜１００％、８０〜１００％、又は９０〜１００％である。
疎水性ポリマーセグメントＰ２が有する繰り返し単位全体に対する繰り返し単位（Ｐ２−６）の割合は、例えば、０〜９０％である。好ましくは、０〜８０％、０〜６５％、０〜５０％、０〜２０％、又は０〜１０％ある。
【００５４】
＜ブロックコポリマーの製造方法＞
本実施形態のブロックコポリマーは、公知の方法を組み合わせて合成することができる。例えば、親水性ポリマーセグメントを含む化合物、及び疎水性ポリマーセグメントを含む化合物をそれぞれ合成し、必要に応じて分子質量分布を狭くするように精製する。その後親水性ポリマーセグメントを含む化合物又は疎水性ポリマーセグメントを含む化合物を、ホウ素原子のメタ位の少なくとも１つが電子吸引性基で置換されたフェニルボロン酸誘導体とカップリングさせる。次に、前記フェニルボロン酸誘導体とカップリングさせなかったポリマーセグメントを含む化合物を、カテコール誘導体とカップリングさせる。次に、一方のポリマーセグメントを含む化合物とカップリングさせたフェニルボロン酸誘導体と、他方のポリマーセグメントを含む化合物とカップリングさせたカテコール誘導体との、エステル化反応を行うことにより、本実施形態のブロックコポリマーを製造することができる。
【００５５】
あるいは、疎水性ポリマーセグメントが、ポリアミノ酸又はアミノ酸誘導体のポリマーである場合には、親水性ポリマーセグメントを含む化合物をホウ素原子のメタ位の少なくとも１つが電子吸引性基で置換されたフェニルボロン酸誘導体とカップリングさせ、次いでカテコール誘導体を反応させて、フェニルボロン酸とカテコールとのエステル化反応を行った後、Ｎ−カルボキシアミノ酸無水物又はＮ−カルボキシアミノ酸誘導体無水物を用いて、ポリアミノ酸又はその誘導体の合成を行ってもよい。
あるいは、親水性ポリマーセグメントを含む化合物をカテコール誘導体とカップリングさせ、次いでホウ素原子のメタ位の少なくとも１つが電子吸引性基で置換されたフェニルボロン酸誘導体を反応させて、フェニルボロン酸とカテコールとのエステル化反応を行った後、Ｎ−カルボキシアミノ酸無水物又はＮ−カルボキシアミノ酸誘導体無水物を用いて、ポリアミノ酸又はその誘導体の合成を行ってもよい。
【００５６】
一例として、上記一般式（ＩＩ−２）で表されるブロックコポリマーの合成方法の具体例を下記スキームＩに例示する。なお、下記スキームＩにおけるＸ１〜Ｘ４、Ｒ１〜Ｒ３、Ｐ１、Ｌ１、Ｌ２、ｍ及びｎは、上記と同様である。
【００５７】
【化１２】
2019123805.tif 000013
【００５８】
上記合成スキームＩでは、まず、親水性ポリマーセグメントＰ１を含む化合物（１）とフェニルボロン酸誘導体（２）とのカップリング反応（Ａ）を行い、化合物（３）を得る。反応（Ａ）は、例えば、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）等の溶媒を用いて行うことができる。
次に、化合物（３）とカテコール誘導体（４）とのエステル化反応（Ｂ）を行い、化合物（５）を得る。反応（Ｂ）は、例えば、トルエン溶媒を用いて行うことができる。
次に、化合物（５）のアミノ基を起点として、Ｎ−カルボキシアミノ酸（誘導体）無水物の重合反応（Ｃ）を行うことにより、化合物（７）（一般式（ＩＩ−２）で表されるブロックコポリマー）を得ることができる。反応（Ｃ）は、例えば、ＤＭＦ、ジクロロメタン、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）等の溶媒を用いて行うことができる。反応温度としては、例えば、２５〜４０℃、反応時間としては、例えば、１〜５日が挙げられる。
【００５９】
また、上記一般式（ＩＩＩ−２）で表されるブロックコポリマーの合成方法の具体例を下記スキームＩＩに例示する。なお、下記スキームＩＩにおけるＸ１〜Ｘ４、Ｒ１〜Ｒ３、Ｐ１、Ｌ１、Ｌ２、ｍ及びｎは、上記と同様である。
【００６０】
【化１３】
2019123805.tif 000014
【００６１】
上記スキームＩＩでは、まず、親水性ポリマーセグメントＰ１を含む化合物（１）とカテコール誘導体（８）とのカップリング反応（Ｄ）を行い、化合物（９）を得る。反応（Ｄ）は、例えば、Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢＴ）、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ・ＨＣｌ）等の溶媒を用いて行うことができる。
次に、化合物（９）とフェニルボロン酸誘導体（１０）とのエステル化反応（Ｅ）を行い、化合物（１１）を得る。反応（Ｅ）は、例えば、トルエン溶媒を用いて行うことができる。
次に、化合物（１１）のアミノ基を起点として、Ｎ−カルボキシアミノ酸（誘導体）無水物の重合反応（Ｆ）を行うことにより、化合物（１２）（一般式（ＩＩＩ−２）で表されるブロックコポリマー）を得ることができる。反応（Ｆ）は、例えば、ＤＭＦ、ジクロロメタン、ＴＨＦ等の溶媒を用いて行うことができる。反応温度としては、例えば、２５〜４０℃、反応時間としては、例えば、１〜５日が挙げられる。
【００６２】
本実施形態のブロックコポリマーは、一般式（Ｉ）で表される構造を含む２価の連結基により、親水性ポリマーセグメントと疎水性ポリマーセグメントとが連結されている。一般式（Ｉ）で表される構造中のフェニルボロン酸カテコールエステルは、ｐＨの低下に伴い開裂する。これにより、親水性ポリマーセグメントと、疎水性ポリマーセグメントとが、分離する。そのため、本実施形態のブロックコポリマーにより形成したミセルでは、ｐＨ依存的に、親水性ポリマーセグメントを脱離させることができる。
本実施形態のブロックコポリマーでは、フェニルボロン酸のメタ位の少なくとも１つに電気吸引性基を有することにより、正常組織におけるｐＨ環境（ｐＨ７．４程度）下では、フェニルボロン酸カテコールエステルの開裂が生じない。一方、腫瘍組織等の低ｐＨ環境（ｐＨ６．２〜７．２程度）下では、フェニルボロン酸カテコールエステルの開裂が生じる。そのため、腫瘍組織特異的に、親水性ポリマーセグメントと、疎水性ポリマーセグメントとを分離させることができる。これにより、腫瘍細胞に対する、本実施形態のブロックコポリマーの取り込みを促進させることができる。
【００６３】
［ミセル組成物］
１実施形態において、本発明は、上記実施形態のブロックコポリマー（以下、「本ブロックコポリマー」という。）のミセルを含むミセル組成物を提供する。
【００６４】
本実施形態のミセル組成物は、本ブロックコポリマーにより形成されるミセルを含む。例えば、本ブロックコポリマーを親油性溶媒に溶解又は懸濁し、当該溶解液又は懸濁液を親水性溶媒に分散させると、疎水性ポリマーセグメントからなるコアと、親水性ポリマーセグメントからなるシェルを有するミセルを形成する（以下、「水中油型ミセル」という。）。当該ミセルにおいて、本ブロックコポリマーは、疎水性ポリマーセグメントを内側に向けるとともに、親水性ポリマーセグメントを外側に向けた状態で、放射状に配列している。
一方、本ブロックコポリマーを親水性溶媒に溶解又は懸濁し、当該溶解液又は懸濁液を親油性溶媒に分散させると、親水性ポリマーセグメントからなるコアと、疎水性ポリマーセグメントからなるシェルとを有するミセルを形成する（以下、「油中水型ミセル」という。）。当該ミセルにおいて、本ブロックコポリマーは、親水性ポリマーセグメントを内側に向けるとともに、疎水性ポリマーセグメントを外側に向けた状態で、放射状に配列している。
本実施形態のミセル組成物が含むミセルは、水中油型ミセル及び油中水型ミセルのいずれであってもよいが、水中油型ミセルであることが好ましい。
【００６５】
図１は、本ブロックコポリマーのミセルの一例を示す図である。図１において、本ブロックコポリマー１は、親水性ポリマーセグメント２と、疎水性ポリマーセグメント３とが、電子吸引性基を有するフェニルボロン酸４及びカテコール５のエステルにより、連結された構造をしている。本ブロックコポリマー１は、水性媒体中で、自己組織化により、ミセル１０を形成する。ミセル１０では、親水性ポリマーセグメント２からなるシェル２０と、疎水性ポリマーセグメント３からなるコア３０とが、フェニルボロン酸層４０及びカテコール層５０を介して連結されている。なお、図１の例では、フェニルボロン酸層４０は、カテコール層５０の外側にあるが、この逆であってもよい。すなわち、カテコール層が、フェニルボロン酸層の外側にあってもよい。例えば、上記一般式（ＩＩ）で表されるブロックコポリマーは、水性媒体中で、図１のように、フェニルボロン酸層がカテコール層の外側にあるミセルを形成する。一方、上記一般式（ＩＩＩ）で表されるブロックコポリマーは、水性媒体中で、カテコール層がフェニルボロン酸層の外側にあるミセルを形成する。
【００６６】
図１に示すように、フェニルボロン酸層４０及びカテコール層５０を形成するフェニルボロン酸カテコールエステルは、腫瘍組織等の低ｐＨ環境（ｐＨ６．２〜７．２程度）下において開裂する。これにより、疎水性ポリマーセグメント３からなるコア３０から、親水性ポリマーセグメント２が脱離する。親水性ポリマーセグメント２が脱離することにより、疎水性ポリマーセグメント３のコア３０の腫瘍細胞への取り込みが促進される。
【００６７】
本実施形態のミセル組成物は、本ブロックコポリマーのミセルに加えて、薬物を含んでいてもよい。薬物は、本ブロックコポリマーのミセル内に封入されてていることが好ましい。例えば、薬物が疎水性化合物である場合、水中油型ミセルの疎水性ポリマーセグメントからなるコアに、容易に薬物を封入することができる。ミセル内への薬物の封入は、特に限定されず、公知の方法により行うことができる。例えば、本ブロックコポリマーと薬物とを有機溶媒に溶解し、任意に超音波処理化で水性溶媒を加えることにより、薬物が封入されたミセルを得ることができる。
また、薬物が荷電性化合物である場合には、本ブロックコポリマーの疎水性ポリマーセグメントに、当該薬物と逆の電荷を有する側鎖を導入し、静電相互作用を利用して、水中油型ミセル内に薬物を封入してもよい。
また、本ブロックコポリマーの疎水性ポリマーセグメントに、薬物を結合可能な官能基を導入し、薬物を当該官能基に結合させて、本ブロックコポリマーと薬物との薬物複合体作製し、当該薬物複合体により水中油型ミセルを形成してもよい。疎水性ポリマーセグメントに導入する官能基は、特に限定されないが、例えば、芳香族若しくは脂肪族のケトン基、又は芳香族若しくは脂肪族のアルデヒド基等が挙げられる。
【００６８】
薬物は、特に限定されず、任意のものであってもよい。薬物は、医薬品の有効成分として公知の化合物が有する生理活性や、体内に投与されて使用される診断薬が有する化学的又は生理学的活性を含み得る。薬物としては、例えば、抗腫瘍剤、シグナル伝達阻害剤、代謝拮抗剤、鎮痛剤、抗炎症剤、造影剤等が挙げられる。
これらの中でも、薬物は、抗腫瘍剤が好ましい。本ブロックコポリマーの水中油型ミセルは、正常組織のｐＨ環境（ｐＨ７．４程度）では安定であるが、腫瘍組織等の低ｐＨ環境（ｐＨ６．２〜７．２程度）下において、親水性ポリマーセグメントが脱離する。そのため、本ブロックコポリマーのミセルに抗腫瘍剤を封入して、がん患者に投与した場合、腫瘍組織に送達されるまで、抗腫瘍剤はミセル内に安定して存在する。ミセルが腫瘍組織に到達すると、腫瘍組織の低ｐＨに応答して、親水性ポリマーセグメントが脱離し、抗腫瘍剤の細胞内への取り込みが促進されるようになる。したがって、腫瘍細胞特異的に、抗腫瘍剤を送達することができる。
抗腫瘍剤としては、特に限定されないが、ビンブラスチンなどのビンカアルカロイド；ＯＳＵ−０３０１２などのＣＯＸ−２選択的非ステロイド性抗炎症剤；（＋）−ＪＱ１などのＢＥＴブロモドメイン阻害剤；Ｋ２５２Ａなどのスタウロスポリン類縁体；ヒドララジンなどの脱メチル化剤；ベンダムスチン及びクロラムブシルなどのアルキル化剤；ＡＺＤ３９などのファシネルトランスフェラーゼ阻害剤；フルルビプロフェンなどの非ステロイド系抗炎症剤等を挙げることができる。また、疎水性抗腫瘍剤としては、例えば、パクリタキセル、トポテカン、カンプトテシン、シスプラチン、塩酸ダウノルビシン、メトトレキサート、マイトマイシンＣ、ドセタキセル、硫酸ビンクレスチン、及びこれらの誘導体等が挙げられる。また、薬剤は、ｓｉＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡなどの抗腫瘍性核酸；抗腫瘍性ペプチド等であってもよい。
【００６９】
本実施形態のミセル組成物は、公知のミセル調製方法を用いて製造することができる。例えば、本ブロックコポリマーを有機溶媒に溶解する。必要に応じて、得られた溶液を風乾、例えば窒素気流雰囲気下でフィルム状に乾固し、さらに必要であれば減圧下で乾固することで有機溶媒を除去してもよい。このようにして処理した本ブロックコポリマーに、内包すべき薬物の溶液を添加し、混合する。次いで、得られた混合液から薬物を内包させながらミセルを形成させる。
【００７０】
上記において、本ブロックコポリマーを溶解する有機溶媒としては、ジクロロメタン、クロロホルム、ジエチルエーテル、ジブチルエーテル、酢酸エチル、酢酸ブチル等の非水混和性有機溶媒、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール、ジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド、アセトニトリル、アセトン、テトラヒドロフラン等の水混和性有機溶媒、および、これらの混合溶媒等が挙げられる。
【００７１】
また、本実施形態のミセル組成物は、本ブロックコポリマーと薬物との混合液を攪拌することにより製造してもよい。混合液の撹拌は、超音波等のエネルギーをかけて行うことが好ましい。
また、本実施形態のミセル組成物は、乳鉢等を用いて乾燥状態の本ブロックコポリマーを均一の粉体とし、そこへ粉末の薬物又は少量の溶液に溶解した薬物を添加した後に穏やかに混合し、適切な緩衝液を添加して撹拌し、氷冷しながら超音波処理することによっても行うことができる。
本実施形態のミセル組成物は、適切な緩衝液を本ブロックコポリマーに添加し、上記と同様に超音波処理して空ミセルを調製し、そこへ同じ緩衝液に溶解した薬物、又は当該緩衝液で希釈した薬物を添加し、穏やかに撹拌するか静置することによっても行うことができる。
上記の緩衝液としては、例えば、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水、クエン酸緩衝液、Ｔｒｉｓ緩衝液、ＴＡＰＳ緩衝液、ＭＥＳ緩衝液、ＨＥＰＥＳ緩衝液等が挙げられる。
【００７２】
本実施形態のミセル組成物は、薬物送達のキャリアとして好適に用いることができる。本ブロックコポリマーの水中油型ミセルは、腫瘍組織の低ｐＨ環境下で親水性ポリマーセグメントが脱離して、腫瘍細胞に対する取り込みが促進されるため、抗腫瘍剤の薬物送達キャリアとして、特に適している。
【００７３】
［医薬組成物］
１実施形態において、本発明は、上記実施形態のミセル組成物を含む医薬組成物を提供する。
【００７４】
上記実施形態のミセル組成物のうち、薬物を含むミセル組成物は、医薬組成物として利用可能である。ミセル組成物は、そのまま生体に投与することもできるが、公知の手法により、適宜他の成分と混合して製剤化されてもよい。本実施形態の医薬組成物の剤型は特に限定されず、乳剤、エマルション剤、液剤、ゲル状剤、カプセル剤、軟膏剤、貼付剤、バップ剤、顆粒剤、錠剤、造影剤等とすることができるが、エマルション剤、液剤、カプセル剤等が好ましい。
【００７５】
本実施形態の医薬組成物は、上記ミセル組成物に加えて、他の成分を含んでもよい。他の成分は、本ブロックコポリマーのミセル構造が維持される限り、医薬品分野において一般的に使用される成分を特に制限なく使用することができる。例えば、前記医薬組成物は、本ブロックコポリマーのミセルを薬学的に許容される担体に溶解又は懸濁したものであってもよい。薬学的に許容される担体としては、医薬分野において常用されるものを特に制限なく使用することができ、例えば、水、生理食塩水、リン酸緩衝液、ＤＭＳＯ、ジメチルアセトアミド、エタノール、グリセロール、ミネラルオイル等を挙げることができる。また、他の成分としては、その他に、溶剤、溶解補助剤、懸濁化剤、等張化剤、緩衝剤、ｐＨ調整剤、賦形剤、安定剤、抗酸化剤、浸透圧調整剤、防腐剤、着色剤、香料等が挙げられる。
【００７６】
本実施形態の医薬組成物の投与経路は、特に限定されず、経口又は非経口経路で投与することができる。なお、非経口経路は、経口以外の全ての投与経路、例えば、静脈内、筋肉内、皮下、鼻腔内、皮内、点眼、脳内、直腸内、腟内及び腹腔内等への投与を包含する。また、投与は、局所投与であっても全身投与であってもよい。
本実施形態の医薬組成物は、単回投与又は複数回投与を行うことが可能であり、その投与期間及び間隔は、薬物の種類、疾患の種類及び状態等、投与経路、投与対象の年齢、体重及び性別等によって、適宜選択することができる。
本実施形態の医薬組成物の投与量は、薬物の種類、疾患の種類及び状態等、投与経路、投与対象の年齢、体重及び性別等によって、適宜選択することができる。本実施形態の医薬組成物の投与量は、医薬組成物に含まれる薬物の治療的有効量とすることができ、例えば、１回につき体重１ｋｇあたり０．０１〜１０００ｍｇ程度、０．１〜５００ｍｇ程度、０．１〜１００ｍｇ程度等とすることができる。
本実施形態の医薬組成物の投与間隔は、薬物の種類、疾患の種類及び状態等、投与経路及び投与量、投与対象の年齢、体重及び性別等によって、適宜選択することができる。本実施形態の医薬組成物の投与間隔は、例えば、１日１〜３回、３日毎、１週間毎等とすることができる。
【００７７】
本実施形態の医薬組成物は、薬物の種類に応じて、適用疾患を選択すればよい。例えば、薬物が抗腫瘍剤である場合、本実施形態の医薬組成物は、腫瘍を治療又は予防するために使用される。上述のように、本実施形態の医薬組成物が含有する水中油型ミセルは、正常組織のｐＨ環境（ｐＨ７．４程度）下では安定であるが、腫瘍組織のような低ｐＨ環境（ｐＨ６．２〜７．２程度）下では、親水性ポリマーセグメントの脱離が生じる。そのため、腫瘍細胞に対する抗腫瘍剤を含むミセルの取り込みが促進される。したがって、本実施形態の医薬組成物は、抗腫瘍剤の腫瘍細胞内に効率的に送達することができる。好ましい態様において、本実施形態の医薬組成物は、腫瘍を治療又は予防するための医薬組成物である。
【００７８】
別の態様において、本発明は、本ブロックコポリマー及び抗腫瘍剤を含む医薬組成物を対象に投与することを含む、腫瘍を治療又は予防する方法を提供する。
別の態様において、本発明は、腫瘍を治療又は予防するための医薬組成物の製造のための、本ブロックコポリマー及び抗腫瘍剤の使用を提供する。
【実施例】
【００７９】
本発明を実施例に基づいて説明する。ただし、本発明の実施態様は、これら実施例の記載に限定されるものではない。
【００８０】
［合成例］ＰＥＧ−ＦＰＢＡ−ＣＡＴ−Ｐ（Ａｓｐ）の合成
以下の手順に従って、ポリエチレングリコール−フルオロフェニルボロン酸カテコールエステル−ポリアスパラギン酸（ＰＥＧ−ＦＰＢＡ−ＣＡＴ−Ｐ（Ａｓｐ））を合成した。ＰＥＧ−ＦＰＢＡ−ＣＡＴ−Ｐ（Ａｓｐ）の合成手順の概略を図２に示す。
【００８１】
（ＰＥＧ−ＦＰＢＡの合成）
ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）−ＮＨ２（１．５５ｇ、０．１２９ｍｍｏｌ、１Ｅｑ．）及びトリエチルアミン（ＴＥＡ；０．０５ｍＬ、０．３７５．ｍｍｏｌ、３Ｅｑ．）を、不活性雰囲気下で、７５ｍＬの脱水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に完全に溶解するまで攪拌した。別のフラスコで、４−カルボキシ−３−フルオロフェニルボロン酸（ＦＰＢＡ；０．２３ｇ、１．２５ｍｍｏｌ、１０Ｅｑ．）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ；０．２１６ｇ、１．８８ｍｍｏｌ、１５Ｅｑ．）及びＮ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ；０．３８６ｇ、１．８７ｍｍｏｌ、１５Ｅｑ．）を、７５ｍＬの乾燥ＤＭＦに溶解し、不活性雰囲気下で、１０分間攪拌した。これを、前記ＰＥＧ−ＮＨ２のＤＭＦ溶液と混合した。不活性雰囲気下、室温で、前記混合物を一晩攪拌した。生成した修飾ＰＥＧをジエチルエーテルで沈殿させ、得られた沈殿を、酸性ｐＨの水で、１日透析した。ポリマーを回収するために、透析溶液を凍結乾燥した。最終産物は、白色粉末であり、収率は９７％であった。ＰＥＧ−ＦＰＢＡの割合を、Ｄ２Ｏを用いたＨ１−ＮＭＲ解析により求めた。１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ，４００ＭＨｚ）：δ（ｐｐｍ）７．７−７．５６（ｍ，ｐｈｅｎｙｌ  ３Ｈ），３．７１（ｍ，ＰＥＧ），３．４０（ｓ，ＣＨ３）
【００８２】
（ＰＥＧ−ＦＰＢＡ−ＣＡＴの合成）
上上記で合成したＰＥＧ−ＦＰＢＡ（０．２ｇ、０．０１６５ｍｍｏｌ、１Ｅｑ．）及びドーパミン塩酸塩（５．８ｍｇ、０．０３０６ｍｍｏｌ、１．８５Ｅq．）を、それぞれ、２つの異なるフラスコに入れたベンゼンを用いて凍結乾燥し、微量水分を除去した。その後、不活性雰囲気下で２０ｍＬのトルエンにＰＥＧ−ＦＰＢＡを溶解し、不活性雰囲気下でドーパミンを含むフラスコに移した。前記混合溶液を１時間攪拌した。その後、トルエンを減圧化で除去した。次いで、過剰なドーパミンを除去するために、生成物を、あらかじめアルゴンガスを吹き込んだメタノールで、１日透析した。その後、溶媒をロータリーエバポレーションにより除去した。最後に、生成ポリマーを、ベンゼンを用いて凍結乾燥し、白色粉末を得た（収率８５％）。ＰＥＧ−ＦＰＢＡ−ＣＡＴの割合を、Ｄ２Ｏを用いたＨ１−ＮＭＲ解析により求めた。ＰＥＧに対するドーパミンの付加率は、ドーパミンのフェニル基とＰＥＧのエチレン単位との比から、約９２％と確認された。１Ｈ  ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ，４００ＭＨｚ）：δ（ｐｐｍ）７．６９−７．２７（ｍ，ＦＰＢＡ  ３Ｈ），６．９−６．６５（ｍ，ｃａｔｅｃｈｏｌ  ３Ｈ）３．７１（ｍ，ＰＥＧ），３．３９（ｓ，ＣＨ３），３．２３（ｔ，ＣＨ２，２Ｈ），２．８７（ｔ，ＣＨ２，２Ｈ）
【００８３】
（ＰＥＧ−ＦＰＢＡ−ＣＡＴ−ＰＢＬＡの合成）
ＰＥＧ−ＦＰＢＡ−ＣＡＴ−ポリ（β−ベンジル−Ｌ−アスパラギン酸）（ＰＥＧ−ＦＰＢＡ−ＣＡＴ−ＰＢＬＡ）を、ＰＥＧ−ＦＰＢＡ−ＣＡＴをイニシエーターとして用いたβ−ベンジル−Ｌ−アスパラギン酸−Ｎ−カルボン酸無水物（ＢＬＡ−ＮＣＡ）の開環重合により合成した。まず、ＢＬＡ−ＮＣＡ（０．１７ｇ、０．６８ｍｍｏｌ、４７Ｅｑ．）を、不活性雰囲気下で、ＤＭＦ（１ｍＬ）に溶解した。脱水ＣＨ２Ｃｌ２（４ｍＬ）溶液にＰＥＧ−ＦＰＢＡ−ＣＡＴ（０．１７２ｇ、０．０１４ｍｍｏｌ、１Ｅｑ．）を添加し、３５℃で３日間攪拌した。生成物をジエチルエーテルで沈殿させ、真乾燥した（０．１７７ｇ、収率６４％）。ポリマーにおけるＢＬＡ単位数は、ジメチルスルホキシドーｄ６（ＤＭＳＯ−ｄ６）を用いたＨ１−ＮＭＲ解析により求めた。ポリマーにおけるＢＬＡ単位数は、ＰＥＧにおけるエチレン単位（−ＯＣＨ２ＣＨ２−，δ＝３．５ｐｐｍ）と、ＰＢＬＡにおけるフェニル基（Ｃ６Ｈ５−，δ＝７．３ｐｐｍ）との比から求めた。
【００８４】
（ＰＥＧ−ＦＰＢＡ−ＣＡＴ−Ｐ（Ａｓｐ）の合成）
上記のように合成したＰＥＧ−ＦＰＢＡ−ＣＡＴ−ＰＢＬＡ（０．１６ｇ）をＮａＯＨ水溶液（０．５Ｍ、３．２ｍＬ）に添加し、一晩攪拌することにより脱保護し、ＰＥＧ−ＦＰＢＡ−ＣＡＴ−Ｐ（Ａｓｐ）を調製した。最後に、生成物を、塩基性ｐＨの水で透析した。Ｄ２Ｏを用いたＨ１−ＮＭＲにより、完全な脱保護が確認された。
【００８５】
［実験例１］ＰＥＧ−ＦＰＢＡ−ＣＡＴ−Ｐ（Ａｓｐ）の超遠心分析
ＰＥＧ−ＦＰＢＡ−ＣＡＴ−Ｐ（Ａｓｐ）を２００μｇ／ｍＬとなるようにＰＢＳ（１０ｍＭ、ｐＨ＝７．４、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ）に溶解し、一晩攪拌した。この濃度は、λ＝２１０ｎｍで吸光度約１に達することができる。次いで、分析用超遠心システム（Berkman Coulter Optima XL-I Analytical Ultracentrifugation）を用いて、超遠心分析を行った（一晩、λ＝２１０ｎｍ）。
【００８６】
ＰＥＧ−ＦＰＢＡ−ＣＡＴ−Ｐ（Ａｓｐ）を１ｍｇ／ｍＬとなるようにＰＢＳバッファー（１０ｍＭ、ｐＨ＝７．４、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ）に溶解し、図３に示す濃度でグルコースを添加して、一晩攪拌した。この濃度は、λ１＝２２５ｎｍ及びλ２＝２５０ｎｍで吸光度約１に達することができ、静脈内投与することが可能な最大濃度に相当する。次いで、分析用超遠心システム（Berkman Coulter Optima XL-I Analytical Ultracentrifugation）を用いて、超遠心分析を行った（一晩）。
【００８７】
結果を図３に示す。図３中、各グルコース濃度における沈降係数は、グルコース濃度０ｍＭのときの沈降係数を１としたときの相対値で示した。５ｍＭグルコース存在下における沈降係数は、グルコース非存在下における沈降係数と変わらなかった。この結果は、５ｍＭグルコース存在下では、ＰＥＧ-ＦＰＢＡ-ＣＡＴ-Ｐ(Ａｓｐ)が分解されないことを示す。これにより、血中グルコース濃度の正常値の範囲では、ＰＥＧ−ＦＰＢＡ−ＣＡＴ−Ｐ（Ａｓｐ）が安定であることが確認された。
【００８８】
［実験例２］蛍光スペクトルによるＰＥＧ−ＦＰＢＡ−ＣＡＴ−Ｐ（Ａｓｐ）の安定性評価
分光蛍光光度計（JASCO FP-6500）を用いて、ＰＥＧ−ＦＰＢＡ−ＣＡＴ−Ｐ（Ａｓｐ）の蛍光スペクトル解析を行った。ＰＥＧ−ＦＰＢＡ−ＣＡＴ−Ｐ（Ａｓｐ）（１ｍｇ／ｍＬ）を、異なるｐＨ（ｐＨ７．４、ｐＨ７．１４、ｐＨ６．８８ｐＨ６．８２、ｐＨ６．５）又は異なるＤ（＋）−グルコース濃度（０〜１００ｍＭ）のＰＢＳバッファー（１０ｍＭ、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ）に溶解した。次いで、各サンプルを一晩攪拌し、蛍光スペクトルを測定した。蛍光スペクトルは、３０２ｎｍの励起光（バンド幅＝５ｎｍ）を用い、２５℃で測定した。放射スキャンは、分光蛍光光度計を用いて、３１０〜４８０ｎｍ（バンド幅＝６ｎｍ）の範囲で行った。
【００８９】
結果を図４Ａ〜４Ｅに示す。図４Ａは、ＨＥＰＥＳバッファー（ｐＨ７．４）中で、ＰＥＧ−ＦＰＢＡ−ＣＡＴ−Ｐ（Ａｓｐ）又はＰＥＧ−ＦＰＢＡの蛍光スペクトルを測定した結果である。ＰＥＧ-ＦＰＢＡ-ＣＡＴ-Ｐ(Ａｓｐ)では、フェニルボロン酸カテコールエステルのピークが検出された。
図４Ｂは、異なるｐＨのＨＥＰＳバッファー中で、ＰＥＧ-ＦＰＢＡ-ＣＡＴ-Ｐ(Ａｓｐ)の蛍光スペクトルを測定した結果である。バッファーのｐＨが低くなるほど、フェニルボロン酸カテコールエステルのピークが小さくなった。ｐＨ６．８２以下では、フェニルボロン酸カテコールエステルのピークは、ほとんど検出されなかった。この結果は、ｐＨの低下により、ＰＥＧ-ＦＰＢＡ-ＣＡＴ-Ｐ(Ａｓｐ)中のフェニルボロン酸カテコールエステルが分解することを示す。なお、図４Ｄは、図４Ｂにおける結果を、ｐＨとＰＥＧ-ＦＰＢＡ-ＣＡＴ-Ｐ(Ａｓｐ)の残存量の関係として示したグラフである。
図４Ｃは、異なる濃度のグルコースを含むＨＥＰＳバッファー中で、ＰＥＧ-ＦＰＢＡ-ＣＡＴ-Ｐ(Ａｓｐ)の蛍光スペクトルを測定した結果である。図４Ｃには、グルコースを含まないＨＥＰＳバッファー中で、ＰＥＧ−ＦＰＢＡの蛍光スペクトルを測定した結果も示している。グルコース濃度が高くなるほど、フェニルボロン酸カテコールエステルのピークが小さくなった。この結果は、グルコース濃度の上昇により、ＰＥＧ-ＦＰＢＡ-ＣＡＴ-Ｐ(Ａｓｐ)中のフェニルボロン酸カテコールエステルが分解することを示す。なお、図４Ｅは、図４Ｃにおける結果に、さらにグルコース濃度１０ｍＭ及び３０ｍＭにおける結果を加えて、グルコース濃度とＰＥＧ-ＦＰＢＡ-ＣＡＴ-Ｐ(Ａｓｐ)の残存量の関係として示したグラフである。
【００９０】
［実験例３］ＰＥＧ−ＦＰＢＡ−ＣＡＴ−ＰＢＬＡミセルの安定性評価
（ＰＥＧ−ＦＰＢＡ−ＣＡＴ−ＰＢＬＡミセルの調整）
ＰＥＧ−ＦＰＢＡ−ＣＡＴ−ＰＢＬＡ（２０ｍｇ）を０．５ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２に溶解した。次いで、この溶液を、ＰＢＳ（ｐＨ＝８、１０ｍＭ、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ）に滴加した。混合溶液を２４時間混合して有機溶媒を蒸発させた後、ろ過（０．４５μｍ）した。ＰＥＧ−ＦＰＢＡ−ＣＡＴ−ＰＢＬＡの最終濃度は、１．４ｍｇ／ｍＬであった。
【００９１】
（多分散性評価）
上記のようにＰＥＧ−ＦＰＢＡ−ＣＡＴ−ＰＢＬＡミセルを調製し、サイズ分布及びＺ平均粒子径を、動的光散乱（ＤＬＳ）手法により測定した。測定は、入射ビームとして緑色レーザー（５３２ｎｍ）を用い、１７３°の検出角度で、Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ  ｎａｎｏ  ＺＳ（Ｍａｌｖｅｒｎ  ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，ＵＫ）を使用して、２５℃の温度条件で行った。
【００９２】
＜グルコース存在下でのサイズ分布の安定性＞
５ｍＭのグルコースを含むＰＢＳ（ｐＨ７．４）中で、ＰＥＧ-ＦＰＢＡ-ＣＡＴ-ＰＢＬＡミセルをインキュベートする前と２４時間インキュベートした後に、ミセルのサイズ分布を測定した。
【００９３】
結果を図５に示す。５ｍＭグルコース存在下での２４時間インキュベーションの前後で、ミセルのサイズ分布に大きな差はなかった。この結果は、５ｍＭグルコース存在下では、ＰＥＧ-ＦＰＢＡ-ＣＡＴ-ＰＢＬＡミセルが安定であることを示す。これにより、血中グルコース濃度の正常値の範囲では、ＰＥＧ−ＦＰＢＡ−ＣＡＴ−ＰＢＬＡミセルが安定であることが確認された。
【００９４】
＜Ｚ平均粒子径のｐＨ依存性＞
５ｍＭグルコースを含むＰＢＳ（ｐＨ７．４、ｐＨ７、又はｐＨ６．５）中で、ＰＥＧ-ＦＰＢＡ-ＣＡＴ-ＰＢＬＡミセルのＺ平均粒子径を経時的に測定した。
【００９５】
結果を図６Ａ及び図６Ｂに示す。図６Ｂは、図６Ａのグラフにおける、横軸１〜４時間の範囲を拡大したグラフである。ｐＨ７及びｐＨ６．５では、２時間インキュベーション後に、沈殿が確認された。一方、ｐＨ７．４では、２４時間インキュベーション後も、沈殿は確認されなかった。この結果は、ｐＨ７及びｐＨ６．５では、２時間のインキュベーションの間に、ＰＥＧ-ＦＰＢＡ-ＣＡＴ-ＰＢＬＡミセルが分解したことを示す。
【００９６】
［実験例４］二重標識ＰＥＧ-ＦＰＢＡ-ＣＡＴ-ＰＢＬＡミセルの調製
ＰＥＧ−ＮＨ２に替えてＮ３−ＰＥＧ−ＮＨ２を用いたこと以外は、上記合成例１（ＰＥＧ−ＦＰＢＡの合成）と同様の操作により、Ｎ３−ＰＥＧ−ＦＰＢＡを得た。次いで、ＤＢＣＯ−ローダミン１１０（１ｍｇ、１Ｅｑ．）及びＮ３−ＰＥＧ−ＦＰＢＡ（１３．６ｍｇ、１Ｅｑ．）を、１ｍＬのＤＭＦ中で混合し、−８０℃で一晩凍結した。４℃で解凍した後、標識ポリマー（Ｒｈｏｄ−ＰＥＧ−ＦＰＢＡ）を酸性ｐＨの水で透析して精製し、凍結乾燥した。これをＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（ＤＭＡＣ）に１０ｇ／Ｌとなるように溶解し、ストック溶液とした。
ＰＥＧ−ＦＰＢＡ−ＣＡＴの替わりにＮ３−ＰＥＧ−ＮＨ２をイニシエーターとして用いたことを以外は、上記合成例１（ＰＥＧ−ＦＰＢＡ−ＣＡＴ−ＰＢＬＡの合成）と同様の操作により、ＢＬＡ−ＮＣＡの開環重合を行い、Ｎ３−ＰＥＧ−ＰＢＬＡを合成した。Ｎ３−ＰＥＧ−ＰＢＬＡ（２１．４ｍｇ、１Ｅｑ．）をＡｌｅｘａ５４５（１ｍｇ、１Ｅ１．）で標識し、標識ポリマー（Ａｌｅｘａ５４５−ＰＥＧ−ＰＢＬＡ）を得た。Ａｌｅｘａ５４５−ＰＥＧ−ＰＢＬＡは、カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｌ２０，ｅｌｕｅｎｔ：ＤＭＦ）精製を行った。これをＤＭＡＣに４ｇ／Ｌとなるように溶解し、ストック溶液とした。
【００９７】
Ｒｈｏｄ−ＰＥＧ−ＦＰＢＡ（５ｍｇ）を、ＤＭＡＣ中でＰＥＧ−ＦＰＢＡ−ＣＡＴ−ＰＢＬＡ（８．５ｍｇ）と一晩混合し、Ｒｈｏｄ−ＰＥＧ−ＦＰＢＡ−ＣＡＴ−ＰＢＬＡ及びＰＥＧ−ＦＰＢＡ−ＣＡＴ−ＰＢＬＡを同率で含む混合物を得た。次いで、Ａｌｅｘａ５４５−ＰＥＧ−ＰＢＬＡ（８ｍｇ）を添加し、ＤＭＡＣ（２１．５ｍＬ）中で一晩攪拌した。ＤＭＡＣを蒸発させた後、標識ポリマー混合物をＣＨ２Ｃｌ２に溶解した。この溶液をＰＢＳ（ｐＨ＝８、１０ｍＭ、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ）に滴加し、一晩攪拌した。ミセル溶液を超遠心により洗浄し、濃縮して、ろ過（０．４５μｍ）した。ミセル内のＡｌｅｘａ５４５−ＰＥＧ−ＰＢＬＡ及びＲｈｏｄ−ＰＥＧ−ＦＰＢＡ−ＣＡＴ−ＰＢＬＡの濃度は、蛍光測定により、それぞれ、１．８０ｍｇ／ｍＬ及び０．２ｍｇ／ｍＬと求められた。
【００９８】
上記に記載した二重標識ＰＥＧ-ＦＰＢＡ-ＣＡＴ-ＰＢＬＡミセルの調製方法の概略を図７に示す。図７に示すように、ミセル表面において、ローダミン１１０とＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ５４５とが隣接した場合には、蛍光共鳴エネルギー移動（Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ  ｒｅｓｏｎａｎｃｅ  ｅｎｅｒｇｙ  ｔｒａｎｓｆｅｒ：ＦＲＥＴ）シグナルが検出される。二重標識ＰＥＧ-ＦＰＢＡ-ＣＡＴ-ＰＢＬＡミセルでは、ローダミン１１０標識ＰＥＧ-ＦＰＢＡ-ＣＡＴ-ＰＢＬＡにおいて、ローダミン１１０標識ＰＥＧが脱離すると、ＦＲＥＴシグナルが減少する。そのため、ＦＲＥＴシグナルの検出により、ローダミン１１０標識ＰＥＧの脱離を確認することができる。
【００９９】
［実験例５］二重標識ＰＥＧ-ＦＰＢＡ-ＣＡＴ-ＰＢＬＡミセルの安定性評価
（マウスメラノーマ細胞への取り込み評価）
Ｂ６−Ｆ１０メラノーマ細胞を、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）及び１％抗生物質（ペニシリン及びスプレぷトマイシン）を含むＲＰＭＩ１６４０培地（ｐＨ７．４）（Sigma Chemical Co., Inc.）中で、５％ＣＯ２を含む加湿雰囲気下、３７℃で維持した。Ｂ１６−Ｆ１０細胞は、３５ｍｍガラス皿（Asahi Techno glass）に入れたＲＰＭＩ培地（ｐＨ６．５又はｐＨ７．４）で、１×１０５細胞を培養した。２４時間培養後、５０μＬの二重標識ミセルを添加し、６時間培養した。細胞をＨｏｅｃｈｓｔで標識し、共焦点レーザー顕微鏡（Zeiss LSM 510 META）を用いて撮像した。Ｈｏｅｃｈｓｔの励起用に２−ｐｈｏｔｏｎ  Ｍａｉ−Ｔａｉレーザーを用い、ミセル内のＡｌｅｘａ５４５の励起用にＨｅ−Ｎｅレーザーを用いた。
【０１００】
結果を図８Ａ及び８Ｂに示す。図８Ａは、６時間インキュベーション後のマウスメラノーマ細胞の蛍光顕微鏡画像である。図８Ｂは、細胞内のＡｌｅｘａ５４５シグナルからの蛍光強度を定量化したグラフである。図８Ｂのグラフ中のデータは、平均±Ｓ．Ｄ．で示した（ｎ＝２０）。
ｐＨ６．５では、ｐＨ７．４と比較して、二重標識ミセルの細胞内への取り込み量が増加することが確認された。
【０１０１】
（血液循環中の安定性評価）
血液循環中の二重標識ＰＥＧ-ＦＰＢＡ-ＣＡＴ-ＰＢＬＡミセルの安定性を、生体内リアルタイム共焦点レーザー顕微鏡（ＩＶＲＴＣＬＳＭ）を用いて、マウス生体内でＦＲＥＴシグナルを検出することにより評価した。全ての画像の撮像は、２０倍対物レンズを備えた直立ＥＣＬＩＰＳＥ  ＦＮ１  （ＮＩＫＯＮ）、６４０ｎｍダイオードレーザー及び４８８／５２５−５０ｎｍバンドパス励起／放射フィルターを装備したＮＩＫＯＮ  Ａ１Ｒ共焦点レーザー顕微鏡システムを用いて行った。
【０１０２】
＜健常組織におけるローダミン１１０標識ＰＥＧの脱離評価＞
Ｕｎｉｖｅｎｔｅｒ  ４００  Ａｎｅｓｔｈｅｓｉａ  ｕｎｉｔ（Univentor Ltd., Zejtun, Malta）を用いて、Ｃ５７ＢＬ６／Ｊマウス（雌、６週齢）を２．０〜３．０％のイソフルラン（Ablott JapanCo., Ltd., Tokyo Japan）で麻酔した。次いで、マウスに、１．８ｍｇ／ｍＬのＡｌｅｘａ５４５−ＰＥＧ−ＰＢＬＡ及び０．２ｍｇ／ｍＬのＲｈｏｄ−ＰＥＧ−ＦＰＢＡ−ＣＡＴ−ＰＢＬＡからなる二重標識ミセルを尾静脈カテーテルにより投与した（２００μＬ；ミセル２ｍｇ／ｍＬ）。二重標識ミセルの血液循環及び安定性を評価するために、１滴の液浸油を滴下してカバースリップで耳たぶを固定し、耳たぶ真皮を観察した。ＦＲＥＴ及びＡｌｅｘａ５４５のシグナルデータは、８時間にわたって、１０分毎にスナップショットをビデオモードで撮像することにより取得した。ＦＲＥＴシグナルの検出は、励起光４８８ｎｍ、放出光５７０ｎｍで行った。
【０１０３】
結果を図９Ａ〜９Ｄに示す。図９Ａは、二重標識ミセルを静脈注射した直後のマウスの耳たぶにおいて、ＦＲＥＴシグナルを検出した蛍光顕微鏡画像である。図９Ｂは、血管及び皮膚の所定領域（図９Ａにおける四角形で囲まれた領域）内におけるＦＲＥＴシグナル強度の経時変化を、正常組織の血管中の強度に対する相対値として表したグラフである。図９Ｃは、二重標識ミセルを投与した直後のマウスの耳たぶにおいて、Ａｌｅｘａ５４５シグナルを検出した蛍光顕微鏡画像である。図９Ｄは、血管及び皮膚の所定領域（図９Ｃにおける四角形で囲まれた領域）内におけるＡｌｅｘａ５４５シグナル強度の経時変化を示したグラフである。投与直後の正常組織血管中の強度に対する相対値として示した。
ＦＲＥＴシグナル及びＡｌｅｘａ５４５シグナルの強度は、同様の経時変化を示した。この結果は、正常組織では、ローダミン１１０標識ＰＥＧの脱離が生じないことを示す。
【０１０４】
＜腫瘍組織におけるローダミン１１０標識ＰＥＧの脱離評価＞
Ｃ５７ＢＬ６／Ｊマウス（雌、６週齢）に、Ｂ１６Ｆ１０マウスメラノーマ細胞（１００，０００／１００μＬ／マウス）を皮下接種した。１週間後、上記と同様に麻酔した後、マウスに二重標識ミセルを尾静脈カテーテルにより投与した（２００μＬ；ミセル２ｍｇ／ｍＬ）。二重標識ミセルの腫瘍血管系での安定性及び腫瘍環境での分解を評価するために、ＩＶＲＣＬＳにより腫瘍組織を観察した。ＦＲＥＴ及びＡｌｅｘａ５４５のシグナルデータは、４時間にわたって、３０分毎にスナップショットをビデオモードで撮像することにより取得した。ＦＲＥＴシグナルの検出は、励起光４８８ｎｍ、放出光５７０ｎｍで行った。
【０１０５】
結果を図１０Ａ〜１０Ｄに示す。図１０Ａは、二重標識ＰＥＧ−ＦＰＢＡ−ＣＡＴ−ＰＢＬＡミセルを静脈注射した直後のマウスの腫瘍組織において、ＦＲＥＴシグナルを検出した蛍光顕微鏡画像である。図１０Ｂは、血管及び腫瘍間質組織の所定領域（図１０Ａにおける四角形で囲まれた領域）内におけるＦＲＥＴシグナル強度の経時変化を、正常組織の血管中の強度に対する相対値として表したグラフである。図１０Ｃは、二重標識ＰＥＧ−ＦＰＢＡ−ＣＡＴ−ＰＢＬＡミセルを投与したマウスの腫瘍組織において、Ａｌｅｘａ５４５シグナルを検出した蛍光顕微鏡画像である。図１０Ｄは、血管及び腫瘍間質組織の所定領域（図１０Ｃにおける四角形で囲まれた領域）内におけるＡｌｅｘａ５４５シグナル強度の経時変化を示したグラフである。投与直後の正常組織血管中の強度に対する相対値として示した。
ＡＬＥＸＡ５４５シグナルは経過時間とともに上昇したが、ＦＲＥＴシグナルは経過時間とともに減少した。この結果は、腫瘍組織では、ローダミン１１０標識ＰＥＧの脱離が生じていることを示す。
【０１０６】
＜二重標識ＰＥＧ-ＰＢＬＡミセル（ネガティブコントロール）のＰＥＧ脱離評価＞
ＦＰＢＡ−ＣＡＴエステル構造が、ローダミン１１０標識ＰＥＧの脱離に寄与していることを確認するために、二重標識ＰＥＧ-ＰＢＬＡミセルを用いて、上記と同様の試験を行った。二重標識ＰＥＧ-ＰＢＬＡミセルは、ＰＥＧ-ＦＰＢＡ-ＣＡＴ-ＰＢＬＡに替えてＰＥＧ-ＰＢＬＡを用いたこと以外は、実験例４と同様の方法により調製した。
【０１０７】
二重標識ＰＥＧ-ＦＰＢＡ-ＣＡＴ-ＰＢＬＡに替えて二重標識ＰＥＧ-ＰＢＬＡミセルを用いたこと以外は、上記＜健常組織におけるローダミン１１０標識ＰＥＧの脱離評価＞
及び＜腫瘍組織におけるローダミン１１０標識ＰＥＧの脱離評価＞と同様の方法で、ＦＲＥＴシグナルを観察した。
【０１０８】
結果を図１１Ａ及び図１１Ｂに示す。図１１Ａは、血管内におけるＦＲＥＴシグナル強度の経時変化を、正常組織の血管中の強度に対する相対値として表したグラフである。図１１Ｂは、血管内及び腫瘍間質組織におけるＦＲＥＴシグナル強度の経時変化を示したグラフである。投与直後の正常組織血管中の強度に対する相対値として示した。
【０１０９】
図１１Ａ及び１１Ｂに示す結果から、二重標識ＰＥＧ-ＰＢＬＡミセルは、健常組織及び腫瘍組織のいずれにおいても、ローダミン１１０標識ＰＥＧの脱離の生じないことが確認された。
【符号の説明】
【０１１０】
１…本ブロックコポリマー、２…親水性ポリマーセグメント、３…疎水性ポリマーセグメント、４…フェニルボロン酸、５…カテコール、１０…ミセル、２０…親水性ポリマーセグメントのシェル、３０…疎水性ポリマーセグメントのコア、４０…フェニルボロン酸層、５０…カテコール層
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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