【手続補正書】
【提出日】平成13年9月17日(2001.9.17)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
インフルエンザ菌（ヘモフィルス・インフルエンジー（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ））の菌株のインフルエンザ菌アドヘシン（Ｈｉａ）タンパク質をエンコードしている単離され精製された核酸分子であって、
（ａ）図１８、２０、２１、２２、２３、２４および２５に示される配列（配列番号２３、２７、２９、３１、３３、３５、３７）からなる群から選択されるＤＮＡ配列、または
（ｂ）図１８、２０、２１、２２、２３、２４および２５に示される配列（配列番号２４、２８、３０、３２、３４、３６、３８）からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するインフルエンザ菌アドヘシン（ｒＨｉａ）タンパク質をエンコードしているＤＮＡ配列を有する単離され精製されたことを特徴とする核酸分子。
【請求項２】
インフルエンザ菌の菌株のＮ末端切断型インフルエンザ菌アドヘシン（Ｈｉａ）タンパク質をエンコードしており、
配列番号７と配列番号１５
配列番号９と配列番号１５
配列番号１１と配列番号１５
配列番号１３と配列番号１５
配列番号５５と配列番号５７
からなる群から選択されるヌクレオチドの１対によって増幅可能な、単離され精製された核酸分子。
【請求項３】
封入体として発現可能なインフルエンザ菌の菌株のＮ末端切断型インフルエンザ菌アドヘシン（Ｈｉａ）タンパク質をエンコードしており、前記Ｎ末端切断型タンパク質がコロニー化からの保護のための能力を有する、単離され精製された核酸。
【請求項４】
インフルエンザ菌の菌株１１のＥ２１、Ｔ３３、Ｖ３８およびＮ５２切断部およびインフルエンザ菌の菌株３３のＶ３８切断部からなる群から選択される切断型Ｈｉａタンパク質をエンコードしている、請求項３に記載の核酸分子
【請求項５】
請求項１に記載の前記核酸分子を含むことを特徴とする宿主を形質転換するためのベクター。
【請求項６】
請求項２から４に記載の前記核酸分子を含むことを特徴とする宿主を形質転換するためのベクター。
【請求項７】
プラスミドベクターである、請求項５または６に記載のベクター。
【請求項８】
前記プラスミドベクターが、
図１Ａ中に示されるＤＳ−２００８−２−３
図５Ａ中に示されるＤＳ−２１８６−１−１
図５Ａ中に示されるＤＳ−２２０１−１
図５Ａ中に示されるＤＳ−２１８６−２−１
図５Ａ中に示されるＤＳ−２１６８−２−６
図３２中に示されるＩＡ−１９１−３−１
からなる群から選択されるプラスミドの同定特性を有する、請求項７に記載のベクター。
【請求項９】
請求項１に記載の完全長のインフルエンザ菌アドヘシン（Ｈｉａ）タンパク質または請求項２から４のいずれか一項に記載のＮ末端切断型インフルエンザ菌アドヘシン（Ｈｉａ）タンパク質および前記完全長または切断型Ｈｉａタンパク質を発現するために前記核酸分子に作用的に結合しているプロモーターを含む、宿主を形質転換するためのベクター。
【請求項１０】
大腸菌の遺伝子をさらに含む、請求項９に記載のベクター。
【請求項１１】
プラスミドベクターである、請求項９に記載のベクター。
【請求項１２】
前記プラスミドベクターが、
図６Ａ中に示されるＢＫ−９６−２−１１
図７Ａ中に示されるＤＳ−２２４２−１
図７Ａ中に示されるＤＳ−２２４２−２
図８Ａ中に示されるＤＳ−２３４０−２−３
図９Ａ中に示されるＤＳ−２４４７−２
図９Ｂ中に示されるＤＳ−２４４８−１７
図３２中に示されるＪＢ−２９３０−３
からなる群から選択されるプラスミドベクターの同定特性を有する請求項１１に記載のベクター。
【請求項１３】
請求項５〜１２のいずれかに記載のベクターによって形質転換され、ヘモフィルスの分類不能型菌株の防御性インフルエンザ菌アドヘシン（Ｈｉａ）タンパク質を発現する宿主細胞。
【請求項１４】
大腸菌の菌株である、請求項１３に記載の宿主細胞。
【請求項１５】
請求項１４に記載の形質転換された大腸菌またはその免疫原性断片によって産生可能な、インフルエンザ菌の菌株の組換え防御性インフルエンザ菌アドヘシン（Ｈｉａ）タンパク質。
【請求項１６】
（Ａ）インフルエンザ菌の菌株のインフルエンザ菌アドヘシン（Ｈｉａ）タンパク質をエンコードしている単離され精製された核酸分子であって、
（ａ）図１８、２０、２１、２２、２３、２４および２５に示される配列（配列番号２３、２７、２９、３１、３３、３５、３７）からなる群から選択されるＤＮＡ配列、または
（ｂ）図１８、２０、２１、２２、２３、２４および２５に示される配列（配列番号２４、２８、３０、３２、３４、３６、３８）からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するインフルエンザ菌アドヘシン（ｒＨｉａ）タンパク質をエンコードしているＤＮＡ配列を有する単離され精製された核酸分子、
（Ｂ）インフルエンザ菌の菌株のＮ末端切断型インフルエンザ菌アドヘシン（Ｈｉａ）タンパク質をエンコードしており、
配列番号７と配列番号１５
配列番号９と配列番号１５
配列番号１１と配列番号１５
配列番号１３と配列番号１５
配列番号５５と配列番号５７
からなる群から選択されるヌクレオチドの１対によって増幅可能な、単離され精製された核酸分子、
（Ｃ）封入体として発現可能なインフルエンザ菌の菌株の切断型インフルエンザ菌アドヘシン（Ｈｉａ）タンパク質をエンコードしており、前記Ｎ末端切断型タンパク質がヒトの上皮細胞に結合するための能力を有する、単離され精製された核酸分子、
（Ｄ）請求項５、８または９に記載の発現ベクターによって形質転換された大腸菌によって産生可能な、インフルエンザ菌の菌株の組換え防御性インフルエンザ菌アドヘシン（Ｈｉａ）タンパク質からなる群から選択される少なくとも１つの免疫学的に活性のある成分、および薬学的に許容可能なこれらの担体を含む免疫原性組成物。
【請求項１７】
ヘモフィルスに起因する疾患に対して防御するために宿主へのｉｎ  ｖｉｔｒｏ投与用ワクチンとして製剤化される、請求項１６に記載の免疫原性組成物。
【請求項１８】
免疫系の特定の細胞または粘膜表面への送達用の標的分子と組み合わせた、請求項１６または１７に記載の免疫原性組成物。
【請求項１９】
ミクロ粒子、カプセル、またはリポソーム調製物として製剤化される、請求項１６〜１８のいずれかに記載の免疫原性組成物。
【請求項２０】
アジュバントをさらに含む、請求項１６〜１９のいずれかに記載の免疫原性組成物。
【請求項２１】
インフルエンザ菌の分類不能型菌株の防御性インフルエンザ菌アドヘシン（Ｈｉａ）タンパク質の産生のための方法であって、
請求項６と同様にベクターによって宿主を形質転換すること、
宿主を成長させてエンコードされている切断型Ｈｉａを発現させること、および
前記発現したＨｉａタンパク質を単離および精製することを特徴とする方法。
【請求項２２】
前記宿主細胞が大腸菌であることを特徴とする請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記エンコードされている切断型Ｈｉａが封入体内で発現されることを特徴とする請求項２１または２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記発現したＨｉａの前記単離および精製が、
成長し形質転換された細胞を破壊して上澄みおよび前記封入体を生成すること、
前記封入体を可溶化して組換えＨｉａの溶液を生成すること、
クロマトグラフィによって細胞の残骸のない組換えＨｉａの前記溶液を精製すること、および
前記精製された組換えＨｉａタンパク質を単離することによって実施されることを特徴とする請求項２１〜２３のいずれかに記載の方法。
【請求項２５】
前記ヘモフィルスの分類不能型菌株が菌株１１、３３、３２、２９、Ｍ４０７１、Ｋ９、Ｋ２２および１２からなる群から選択されることを特徴とする請求項２１〜２４のいずれかに記載の方法。
【請求項２６】
前記ベクターがＴ７プロモーターを含み、前記大腸菌が誘導量のラクトースの存在下で培養されることを特徴とする請求項２１〜２５のいずれかに記載の方法。
【請求項２７】
インフルエンザ菌の菌株のＮ末端切断型インフルエンザ菌アドヘシン（Ｈｉａ）タンパク質をエンコードしている核酸分子を増幅および生成する能力がある１対のヌクレオチド配列であって、前記ヌクレオチドの対が、
配列番号７と配列番号１５
配列番号９と配列番号１５
配列番号１１と配列番号１５
配列番号１３と配列番号１５
配列番号５５と配列番号５７
からなる群から選択される１対のヌクレオチド配列。