(57)【要約】【課題】本発明は、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体を投与することによって、血管運動神経症状及び／または頭痛（例えば、片頭痛、群発頭痛及び緊張性頭痛）などのＣＧＲＰ関連障害を予防または治療するための方法を特徴とする。【解決手段】本開示の方法にて使用するための組成物も提供される。ＣＧＲＰに対するアンタゴニスト抗体Ｇ１及びＧ１に由来する抗体についても記載される。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象における頭痛を治療し、またはその発生を減少させる方法であって、ＣＧＲＰ経路を調節する、ある量のモノクローナル抗体を前記対象に複数日に投与することを含み、前記複数日の各日に投与される前記量は、１００〜２０００ｍｇである、前記方法。
【請求項２】
対象における少なくとも１つの血管運動神経症状を治療し、またはその発生を減少させる方法であって、ＣＧＲＰ経路を調節する、ある量のモノクローナル抗体を前記対象に複数日に投与することを含み、前記複数日の各日に投与される前記量は、１００〜２０００ｍｇである、前記方法。
【請求項３】
前記頭痛が片頭痛である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記片頭痛が慢性片頭痛である、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記片頭痛が反復性片頭痛である、請求項３に記載の方法。
【請求項６】
前記頭痛の発生が、単回投与後少なくとも７日間減少する、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記投与後に前記対象が経験する１ヶ月の頭痛時間が、前記対象における投与前のレベルから４０時間以上減少する、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記投与後に前記対象が経験する１ヶ月の頭痛日が、前記対象における投与前のレベルから３日以上減少する、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記投与後に前記対象が経験する１ヶ月の頭痛時間が、前記対象における投与前のレベルと比較して２５％以上減少する、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記モノクローナル抗体が抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項１１】
前記モノクローナル抗体の前記量が１０００ｍｇ未満である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項１２】
前記複数日の２つには７日を上回る間隔がある、請求項１または２に記載の方法。
【請求項１３】
第１の日に投与される前記モノクローナル抗体の量が、第２の日に投与される前記モノクローナル抗体の量と異なる、請求項１または２に記載の方法。
【請求項１４】
前記第１の日に投与される前記モノクローナル抗体の前記量が、前記第２の日に投与される前記モノクローナル抗体の前記量よりも多い、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記対象に１ヶ月あたり３回未満の用量が投与される、請求項１または２に記載の方法。
【請求項１６】
前記投与することが皮下または静脈内投与である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項１７】
前記投与することが、前記量のモノクローナル抗体を含むプレフィルドシリンジを用いることを含む、請求項１または２に記載の方法。
【請求項１８】
前記モノクローナル抗体が、少なくとも１５０ｍｇ／ｍＬの濃度で配合される、請求項１または２に記載の方法。
【請求項１９】
前記モノクローナル抗体が２ｍＬ未満の体積で投与される、請求項１または２に記載の方法。
【請求項２０】
前記モノクローナル抗体と同時にまたは連続的に、第２の作用物質を前記対象に投与することを含む、請求項１または２に記載の方法。
【請求項２１】
前記第２の作用物質が、５−ＨＴ１アゴニスト、トリプタン、麦角アルカロイド及び非ステロイド性抗炎症薬からなる群から選択される、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記モノクローナル抗体の投与後、前記対象による前記第２の作用物質の月間使用が少なくとも１５％減少する、請求項２０に記載の方法。
【請求項２３】
前記第２の作用物質がトリプタンである、請求項２１に記載の方法。
【請求項２４】
前記対象がヒトである、請求項１または２に記載の方法。
【請求項２５】
前記モノクローナル抗体がヒトまたはヒト化抗体である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項２６】
前記モノクローナル抗体が、（ａ）配列番号３に示すＣＤＲ  Ｈ１、配列番号４に示すＣＤＲ  Ｈ２、配列番号５に示すＣＤＲ  Ｈ３、配列番号６に示すＣＤＲ  Ｌ１、配列番号７に示すＣＤＲ  Ｌ２及び配列番号８に示すＣＤＲ  Ｌ３を有する抗体、または（ｂ）表６に示す（ａ）に従った抗体のバリアントを含む、請求項１または２に記載の方法。
【請求項２７】
対象が経験する１ヶ月の頭痛時間数を減らす方法であって、ＣＧＲＰ経路を調節する、ある量のモノクローナル抗体を前記対象に投与することを含み、前記モノクローナル抗体は、単回投与後、前記１ヶ月の頭痛時間数を少なくとも２０時間減少させるのに有効な量である、前記方法。
【請求項２８】
対象が経験する１ヶ月の頭痛時間数を減らす方法であって、ＣＧＲＰ経路を調節する、ある量のモノクローナル抗体を前記対象に投与することを含み、前記モノクローナル抗体は、単回投与後、前記１ヶ月の頭痛時間数を少なくとも１５％減少させるのに有効な量である、前記方法。
【請求項２９】
対象が経験する１ヶ月の頭痛日数を減らす方法であって、ＣＧＲＰ経路を調節する、ある量のモノクローナル抗体を前記対象に投与することを含み、前記モノクローナル抗体は、単回投与後、前記１ヶ月の頭痛日数を少なくとも３日減少させるのに有効な量である、前記方法。
【請求項３０】
対象における抗頭痛薬の使用を減らす方法であって、ＣＧＲＰ経路を調節するモノクローナル抗体を前記対象に投与することを含み、前記モノクローナル抗体は、前記対象の前記抗頭痛薬の月間使用を少なくとも１５％減少させるのに有効な量である、前記方法。
【請求項３１】
前記抗頭痛薬が、５−ＨＴ１アゴニスト、トリプタン、オピエート、β−アドレナリン遮断薬、麦角アルカロイド及び非ステロイド性抗炎症薬からなる群から選択される、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記抗頭痛薬がトリプタンである、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記モノクローナル抗体が抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体である、請求項２７〜３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３４】
前記モノクローナル抗体の前記量が１０００ｍｇ未満である、請求項２７〜３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３５】
前記対象に１ヶ月あたり３回未満の用量が投与される、請求項２７〜３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３６】
前記投与することが皮下または静脈内投与である、請求項２７〜３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３７】
前記モノクローナル抗体が、少なくとも１５０ｍｇ／ｍＬの濃度で配合される、請求項２７〜３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３８】
前記モノクローナル抗体が２ｍＬ未満の体積で投与される、請求項２７〜３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３９】
前記対象がヒトである、請求項２７〜３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４０】
前記モノクローナル抗体がヒトまたはヒト化抗体である、請求項２７〜３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４１】
前記モノクローナル抗体が、（ａ）配列番号３に示すＣＤＲ  Ｈ１、配列番号４に示すＣＤＲ  Ｈ２、配列番号５に示すＣＤＲ  Ｈ３、配列番号６に示すＣＤＲ  Ｌ１、配列番号７に示すＣＤＲ  Ｌ２及び配列番号８に示すＣＤＲ  Ｌ３を有する抗体、または（ｂ）表６に示す（ａ）に従った抗体のバリアントを含む、請求項２７〜３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４２】
対象における頭痛を治療し、またはその発生を減少させる方法であって、ＣＧＲＰ経路を調節する量で、単回用量のモノクローナル抗体を前記対象に投与することを含み、前記モノクローナル抗体の前記量は、１００〜２０００ｍｇである、前記方法。
【請求項４３】
先行請求項のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１４年３月２１日出願の米国仮特許出願第６１／９６８，８９７号、２０１４年１１月２４日出願の米国仮特許出願第６２／０８３，８０９号及び２０１５年２月２３日出願の米国仮特許出願第６２／１１９，７７８号に対する優先権を主張するものであり、全ての目的において、これらの出願の全体を参照により本明細書に援用する。
【背景技術】
【０００２】
カルシトニン遺伝子関連ペプチド（ＣＧＲＰ）は、アミノ酸３７個の神経ペプチドであり、カルシトニン、アドレノメデュリン及びアミリンを含むペプチドファミリーに属する。ヒトでは、２種類のＣＧＲＰ（α−ＣＧＲＰ及びβ−ＣＧＲＰ）が存在し、類似の活性を有している。これらは、３つのアミノ酸が異なり、特異的な分布を示す。また、少なくとも２つのＣＧＲＰ受容体サブタイプも、特異的な活性を有し得る。ＣＧＲＰは、中枢神経系の神経伝達物質であり、ＣＧＲＰ含有ニューロンが血管と緊密に関係している末梢部における強力な血管拡張物質であることが示されている。ＣＧＲＰ媒介性血管拡張はまた、血漿の血管外漏出及び微小血管系の血管拡張を引き起こし、片頭痛に存在する事象のカスケードの一部として、神経原性炎症と関連している。
【０００３】
ＣＧＲＰは、血管運動神経症状に関連する可能性が指摘されている（Ｗｙｏｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｕｒｏｌ．Ｎｅｐｈｒｏｌ．３５：９２−９６（２００１）；Ｗｙｏｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｅｎｏｐａｕｓｅ  ７（１）：２５−３０（２０００））。顔面潮紅及び寝汗などの血管運動神経症状（ＶＭＳ）は、更年期に伴う最も一般的な症状であり、自然なまたは外科的に生じる閉経後の全女性の６０〜８０％に生じるものである。顔面潮紅は、性ステロイドの減少に対する中枢神経系（ＣＮＳ）の適応応答であると思われる（Ｆｒｅｅｄｍａｎ  Ａｍ．Ｊ．Ｈｕｍａｎ  Ｂｉｏｌ．１３：４５３−４６４（２００１））。現在、紅潮の最も有効な治療法は、エストロゲン及び／またはいくつかのプロゲスチンを含むホルモン系治療である。ホルモン治療は、紅潮を軽減するのに有効であり得るが、全ての女性に適するものではない。神経過敏、疲労、過敏性、不眠、抑うつ、記憶の欠落、頭痛、不安、神経質または集中力の欠如などの観察される精神的及び感情的症状は、顔面潮紅及び寝汗による断眠によって引き起こされると考えられる（Ｋｒａｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎ：Ｍｕｒｐｈｙ  ｅｔ  ａｌ．，３．ｓｕｐ．ｒｄ  Ｉｎｔ’ｌ  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  ｏｎ  Ｒｅｃｅｎｔ  Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ−Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ，Ｐａｒｉｓ，Ｆｒａｎｃｅ：ＳＣＩ：３−７（１９９２））。
【０００４】
男性も同様にステロイドホルモン（アンドロゲン）離脱後に顔面潮紅を経験する。これは、加齢に伴うアンドロゲン減少の場合（Ｋａｔｏｖｉｃｈ，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｆｏｒ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ＆Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，１９９０，１９３（２）：１２９−３５）及び前立腺癌治療に伴うホルモン遮断の極端な場合（Ｂｅｒｅｎｄｓｅｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２００１，４１９（１）：４７−５４）も同じである。これらの患者のうちの３分の１もの人が、多大な不快感及び不自由を引き起こすほど重症である、持続性のある常習的な症状を経験する。
【０００５】
ＣＧＲＰは、強力な血管拡張物質であり、片頭痛（前兆のあるものまたは前兆のないもの）及び群発頭痛を含む、各種の血管性頭痛などの他の血管運動神経症状の病理との関連が示されている。Ｄｕｒｈａｍ，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３５０：１０７３−１０７５，２００４。片頭痛中の患者では、外頸静脈中の血清ＣＧＲＰレベルが高い。Ｇｏａｄｓｂｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．２８：１８３−７，１９９０。ヒトα−ＣＧＲＰの静脈内投与により、前兆のない片頭痛を患う患者において頭痛及び片頭痛が誘発されることから、ＣＧＲＰが片頭痛の原因として働くことが示唆されている。Ｌａｓｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｐｈａｌａｌｇｉａ  ２２：５４−６１，２００２。
【０００６】
片頭痛にＣＧＲＰが関与している可能性は、ＣＧＲＰの放出を阻害し（例えば、スマトリプタン）、ＣＧＲＰ受容体で拮抗し（例えば、ジペプチド誘導体ＢＩＢＮ４０９６ＢＳ（Ｂｏｅｒｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ）；ＣＧＲＰ（８〜３７））、または受容体活性膜タンパク質（ＲＡＭＰ）若しくは受容体構成要素タンパク質（ＲＣＰ）（両方ともＣＧＲＰのＣＧＲＰ受容体への結合に影響する）などの受容体関連タンパク質の１つ若しくは複数と相互作用する、多数の化合物の開発及び試験の根拠となってきた。Ｂｒａｉｎ，Ｓ．ｅｔ  ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ２３：５１−５３，２００２。α−２アドレナリン受容体サブタイプ及びアデノシンＡ１受容体も同様に、ＣＧＲＰ放出及び三叉神経活性化を制御（阻害）する（Ｇｏａｄｓｂｙ  ａｔ  ａｌ．，Ｂｒａｉｎ  １２５：１３９２−４０１，２００２）。ヒトにおける神経原性血管拡張及び三叉神経痛覚を阻害することが示されているアデノシンＡ１受容体アゴニストＧＲ７９２３６（メトラファジル）もまた、抗片頭痛活性を示し得る（Ａｒｕｌｍａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｐｈａｌａｌｇｉａ  ２５：１０８２−１０９０，２００５；Ｇｉｆｆｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｐｈａｌａｌｇｉａ  ２３：２８７−２９２，２００３）。
【０００７】
この理論に反するのは、神経原性炎症（例えば、タキキニンＮＫ１受容体アンタゴニスト）または三叉神経活性化（例えば、５ＨＴ１Ｄ受容体アゴニスト）を排他的に阻害する化合物による治療が、片頭痛の急性治療としては相対的に有効でないことが示された所見であり、一部の研究者は、ＣＧＲＰの放出を阻害することが有効な抗片頭痛治療の主要な作用機構であるかどうか疑問視している。Ａｒｕｌｍａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５００：３１５−３３０，２００４。
【０００８】
片頭痛は、重症度の頭痛の反復発作及び悪心、嘔吐、光過敏、音過敏または動作過敏を含み得る随伴的特徴によって特徴付けられる、複雑で一般的な神経学的状態である。一部の患者において、頭痛には、前兆が先行するか、前兆を伴う。頭痛の痛みは、重症である場合もあり、ある特定の患者では片側性であることもある。
【０００９】
片頭痛の発作は、日常生活を破壊するものである。米国及び西欧において、片頭痛患者の全罹患率は、一般集団の１１％（男性６％、女性１５〜１８％）である。更に、個体における平均発作頻度は、１．５回／月である。症状を緩和し、または軽減するための治療は多数利用可能であるが、片頭痛の発作が月３〜４回を超える患者には、予防療法が推奨される。Ｇｏａｄｓｂｙ  ｅｔ  ａｌ．Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４６（４）：２５７−２７５，２００２。
【００１０】
片頭痛の治療に使用されてきた薬理学的介入の多様性及び患者間の応答のばらつきは、この疾患の多様な性質の証拠である。そのため、セロトニン作動性に加えて、アドレナリン作動性、ノルアドレナリン作動性及びドーパミン作動性活性を示す麦角アルカロイドなどの比較的非選択的な薬物（例えば、エルゴタミン、ジヒドロエルゴタミン、メチセルジド）が片頭痛の治療に８０年以上使用されてきた。他の治療薬には、オピエート（例えば、オキシコドン）及びβ−アドレナリン遮断薬（例えば、プロプラノロール）が挙げられる。一部の患者、通常、軽度の症状を有する患者は、１つまたは複数の非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、例えば、アスピリン、アセトアミノフェン及びカフェインの組み合わせ（例えば、Ｅｘｃｅｄｒｉｎ（登録商標）Ｍｉｇｒａｉｎｅ）などの処方箋なしで購入できる治療薬でその症状を制御することができる。
【００１１】
より最近では、一部の片頭痛患者は、電位依存性ナトリウムチャネル及びある特定のグルタミン酸受容体（ＡＭＰＡ−カイニン酸）を遮断し、ＧＡＢＡ−Ａ受容体活性を増強し、炭酸脱水酵素を阻害する抗痙攣薬であるトピラマートで治療されている。一部の患者におけるスマトリプタンなどのセロトニン５ＨＴ−１Ｂ／１Ｄ及び／または５ＨＴ−１ａ受容体アゴニストの比較的最近の成功により、研究者らは、セロトニン作動性がこの疾患の病因であることを提唱してきた。残念ながら、一部の患者はこの治療に良好に応答するが、その効果に比較的耐性のある患者もいる。
【００１２】
アミン作動性脳幹核におけるイオンチャネルの機能不全がこの疾患の根底にあると仮定されてきたが、片頭痛の正確な病態生理学は十分に理解されていない。片頭痛の一種である家族性片麻痺性片頭痛は、電位開口型Ｐ／Ｑ型カルシウムチャネルのα１サブユニットにおけるミスセンス突然変異との関連が示されており、おそらく他のイオンチャネルの突然変異も他の患者集団で認められると思われる。血管の拡張は、片頭痛の疼痛症状に関連し、当該症状を悪化させるが、こうした神経血管事象は、現在では、当該状態の原因ではなく結果であると考えられている。全体として、感覚入力を調節する脳幹経路の機能不全が片頭痛の統一的特徴であると思われる。Ｇｏａｄｓｂｙ，Ｐ．Ｊ．ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４６（４）：２５７−２７５，２００２。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１３】
【非特許文献１】Ｗｙｏｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｕｒｏｌ．Ｎｅｐｈｒｏｌ．３５：９２−９６（２００１）
【非特許文献２】Ｗｙｏｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｅｎｏｐａｕｓｅ  ７（１）：２５−３０（２０００）
【非特許文献３】Ｋｒａｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎ：Ｍｕｒｐｈｙ  ｅｔ  ａｌ．，３．ｓｕｐ．ｒｄ  Ｉｎｔ’ｌ  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  ｏｎ  Ｒｅｃｅｎｔ  Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ−Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ，Ｐａｒｉｓ，Ｆｒａｎｃｅ：ＳＣＩ：３−７（１９９２）
【非特許文献４】Ｋａｔｏｖｉｃｈ，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｆｏｒ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ＆Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，１９９０，１９３（２）：１２９−３５
【非特許文献５】Ｂｅｒｅｎｄｓｅｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２００１，４１９（１）：４７−５４
【非特許文献６】Ｄｕｒｈａｍ，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３５０：１０７３−１０７５，２００４
【非特許文献７】Ｌａｓｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｐｈａｌａｌｇｉａ  ２２：５４−６１，２００２
【非特許文献８】Ｂｒａｉｎ，Ｓ．ｅｔ  ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ２３：５１−５３，２００２
【非特許文献９】Ｇｏａｄｓｂｙ  ａｔ  ａｌ．，Ｂｒａｉｎ  １２５：１３９２−４０１，２００２
【非特許文献１０】Ａｒｕｌｍａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｐｈａｌａｌｇｉａ  ２５：１０８２−１０９０，２００５
【非特許文献１１】Ｇｉｆｆｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｐｈａｌａｌｇｉａ  ２３：２８７−２９２，２００３
【非特許文献１２】Ａｒｕｌｍａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５００：３１５−３３０，２００４
【非特許文献１３】Ｇｏａｄｓｂｙ  ｅｔ  ａｌ．Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４６（４）：２５７−２７５，２００２
【非特許文献１４】Ｇｏａｄｓｂｙ，Ｐ．Ｊ．ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４６（４）：２５７−２７５，２００２
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１４】
いくつかの態様において、本明細書にて開示する本発明は、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体、及び血管運動神経症状を治療または予防するための抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体の使用方法に関する。顔面潮紅などの血管運動神経症状の例については、本明細書にて記載する。いくつかの場合において、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体は、前兆のあるまたは前兆のない片頭痛、片麻痺性片頭痛、群発頭痛、片頭痛性神経痛、慢性頭痛、緊張性頭痛及び他の医学的状態（感染症または腫瘍に起因する頭蓋内圧亢進など）から生じる頭痛などの頭痛を治療または予防するために用いられる。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
一態様において、本発明は、個体における少なくとも１つの血管運動神経症状を治療または予防するための方法を提供し、この方法は、その個体に有効量の抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体を投与することを含む。
一態様において、本発明は、個体における頭痛（例えば、片頭痛及び群発頭痛）を治療または予防するための方法を提供し、この方法は、その個体に有効量の抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体を投与することを含む。
【００１６】
別の態様において、本発明は、個体における頭痛（例えば、片頭痛及び群発頭痛）を改善し、制御し、その発生を減少させ、またはその発症若しくは進行を遅らせるための方法を提供し、この方法は、その個体に有効量の抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体を投与することを含む。
【００１７】
一態様において、本発明は、対象における少なくとも１つの血管運動神経症状及び／または頭痛を治療し、またはその発生を減少させる方法を提供する。一実施形態において、方法は、ＣＧＲＰ経路を調節する、ある量のモノクローナル抗体（例えば、モノクローナル抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体）を対象に複数日に投与することを含み、複数日の各日に投与される量は、１０００ｍｇ未満である。一実施形態において、方法は、ＣＧＲＰ経路を調節する、ある量のモノクローナル抗体（例えば、モノクローナル抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体）を対象に複数日に投与することを含み、複数日の各日に投与される量は、１００〜２０００ｍｇである。いくつかの実施形態において、頭痛は片頭痛（例えば、慢性片頭痛または反復性片頭痛）である。いくつかの実施形態において、複数日の２つには７日を上回る間隔がある。いくつかの実施形態において、単回投与後少なくとも７日間、頭痛の発生が減少する。いくつかの実施形態において、第１の日に投与されるモノクローナル抗体の量は、第２の日に投与されるモノクローナル抗体の量と異なる（例えば、より多い）。いくつかの実施形態において、１ヶ月あたり３回未満の用量が対象に投与される。いくつかの実施形態において、投与は、皮下投与である。いくつかの実施形態において、投与は、静脈内投与である。いくつかの実施形態において、投与は、ある量のモノクローナル抗体を含むプレフィルドシリンジを用いることを含む。いくつかの実施形態において、モノクローナル抗体は、１５０ｍｇ／ｍＬの濃度で配合される。いくつかの実施形態において、モノクローナル抗体は、２ｍＬ未満の体積で投与される。いくつかの実施形態において、モノクローナル抗体の量は、１０００ｍｇ未満である。いくつかの実施形態において、当該投与後に対象が経験する１ヶ月の頭痛時間が、対象における投与前のレベルから４０時間以上（例えば、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、またはそれ以上）減少する。１ヶ月の頭痛時間は、６０時間を超えて減少し得る。いくつかの実施形態において、当該投与後に対象が経験する１ヶ月の頭痛時間が、対象における投与前のレベルと比較して２５％以上（例えば、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、またはそれ以上）減少する。１ヶ月の頭痛時間は、４０％以上減少し得る。いくつかの実施形態において、当該投与後に対象が経験する１ヶ月の頭痛日が、対象における投与前のレベルから３日以上（例えば、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０日以上）減少する。いくつかの実施形態において、方法は、モノクローナル抗体と同時にまたは連続的に、第２の作用物質を対象に投与することを更に含む。第２の作用物質は、５−ＨＴ１アゴニスト、トリプタン、麦角アルカロイド及び非ステロイド性抗炎症薬のいずれかであり得る。いくつかの実施形態において、第２の作用物質は、予防的に対象に投与される物質である。いくつかの実施形態において、モノクローナル抗体の投与後、対象による第２の作用物質の月間使用が少なくとも１５％減少する。いくつかの実施形態において、第２の作用物質は、トリプタンである。いくつかの実施形態において、対象はヒトである。いくつかの実施形態において、モノクローナル抗体は、ヒトまたはヒト化モノクローナル抗体である。いくつかの実施形態において、モノクローナル抗体は、（ａ）配列番号３に示すＣＤＲ  Ｈ１、配列番号４に示すＣＤＲ  Ｈ２、配列番号５に示すＣＤＲ  Ｈ３、配列番号６に示すＣＤＲ  Ｌ１、配列番号７に示すＣＤＲ  Ｌ２及び配列番号８に示すＣＤＲ  Ｌ３を有する抗体、または（ｂ）表６に示す（ａ）に従った抗体のバリアントを含む。
【００１８】
一態様において、本発明は、対象が経験する１ヶ月の頭痛時間数を減らす方法を提供する。一実施形態において、方法は、ＣＧＲＰ経路を調節する、ある量のモノクローナル抗体を対象に投与することを含み、モノクローナル抗体は、単回投与後、１ヶ月の頭痛時間数を少なくとも２０時間（例えば、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０時間またはそれ以上の頭痛時間分）減少させるのに有効な量である。いくつかの実施形態において、１ヶ月の頭痛時間数は、少なくとも約５０時間減少する。一実施形態において、方法は、ＣＧＲＰ経路を調節する、ある量のモノクローナル抗体を対象に投与することを含み、モノクローナル抗体は、単回投与後、１ヶ月の頭痛時間数を少なくとも１５％（例えば、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％またはそれ以上）減少させるのに有効な量である。いくつかの実施形態において、１ヶ月の頭痛時間数は、少なくとも約３０％減少する。いくつかの実施形態において、モノクローナル抗体は、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体である。いくつかの実施形態において、モノクローナル抗体の量は、１０００ｍｇ未満である。いくつかの実施形態において、１ヶ月あたり３回未満の用量が対象に投与される。いくつかの実施形態において、投与は、皮下または静脈内投与である。いくつかの実施形態において、モノクローナル抗体は、少なくとも１５０ｍｇ／ｍＬの濃度で配合される。いくつかの実施形態において、モノクローナル抗体は、２ｍＬ未満の体積で投与される。いくつかの実施形態において、対象はヒトである。いくつかの実施形態において、モノクローナル抗体は、ヒトまたはヒト化抗体である。いくつかの実施形態において、モノクローナル抗体は、（ａ）配列番号３に示すＣＤＲ  Ｈ１、配列番号４に示すＣＤＲ  Ｈ２、配列番号５に示すＣＤＲ  Ｈ３、配列番号６に示すＣＤＲ  Ｌ１、配列番号７に示すＣＤＲ  Ｌ２及び配列番号８に示すＣＤＲ  Ｌ３を有する抗体、または（ｂ）表６に示す（ａ）に従った抗体のバリアントを含む。
【００１９】
一態様において、本発明は、対象が経験する１ヶ月の頭痛日数を減らす方法を提供する。一実施形態において、方法は、ＣＧＲＰ経路を調節する、ある量のモノクローナル抗体を対象に投与することを含み、モノクローナル抗体は、単回投与後、１ヶ月の頭痛日数を少なくとも３日（例えば、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０日またはそれ以上の頭痛日数分）減少させるのに有効な量である。いくつかの実施形態において、１ヶ月の頭痛日数は、少なくとも約６日の頭痛日数分減少する。いくつかの実施形態において、モノクローナル抗体は、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体である。いくつかの実施形態において、モノクローナル抗体の量は、１０００ｍｇ未満である。いくつかの実施形態において、１ヶ月あたり３回未満の用量が対象に投与される。いくつかの実施形態において、投与は、皮下または静脈内投与である。いくつかの実施形態において、モノクローナル抗体は、少なくとも１５０ｍｇ／ｍＬの濃度で配合される。いくつかの実施形態において、モノクローナル抗体は、２ｍＬ未満の体積で投与される。いくつかの実施形態において、対象はヒトである。いくつかの実施形態において、モノクローナル抗体は、ヒトまたはヒト化抗体である。いくつかの実施形態において、モノクローナル抗体は、（ａ）配列番号３に示すＣＤＲ  Ｈ１、配列番号４に示すＣＤＲ  Ｈ２、配列番号５に示すＣＤＲ  Ｈ３、配列番号６に示すＣＤＲ  Ｌ１、配列番号７に示すＣＤＲ  Ｌ２及び配列番号８に示すＣＤＲ  Ｌ３を有する抗体、または（ｂ）表６に示す（ａ）に従った抗体のバリアントを含む。
【００２０】
一態様において、本発明は、対象における抗頭痛薬の使用を減らす方法を提供し、ＣＧＲＰ経路を調節するモノクローナル抗体（例えば、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体）を対象に投与することを含み、モノクローナル抗体は、対象の抗頭痛薬の月間使用を少なくとも１５％（例えば、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、またはそれ以上）減少させるのに有効な量である。いくつかの実施形態において、抗頭痛薬は、５−ＨＴ１アゴニスト、トリプタン、オピエート、β−アドレナリン遮断薬、麦角アルカロイド及び非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）からなる群から選択される。いくつかの実施形態において、抗頭痛薬は、トリプタンである。いくつかの実施形態において、モノクローナル抗体の量は、１０００ｍｇ未満である。いくつかの実施形態において、１ヶ月あたり３回未満の用量が対象に投与される。いくつかの実施形態において、投与は、皮下または静脈内投与である。いくつかの実施形態において、モノクローナル抗体は、少なくとも１５０ｍｇ／ｍＬの濃度で配合される。いくつかの実施形態において、モノクローナル抗体は、２ｍＬ未満の体積で投与される。いくつかの実施形態において、対象はヒトである。いくつかの実施形態において、モノクローナル抗体は、ヒトまたはヒト化抗体である。いくつかの実施形態において、モノクローナル抗体は、（ａ）配列番号３に示すＣＤＲ  Ｈ１、配列番号４に示すＣＤＲ  Ｈ２、配列番号５に示すＣＤＲ  Ｈ３、配列番号６に示すＣＤＲ  Ｌ１、配列番号７に示すＣＤＲ  Ｌ２及び配列番号８に示すＣＤＲ  Ｌ３を有する抗体、または（ｂ）表６に示す（ａ）に従った抗体のバリアントを含む。
【００２１】
一態様において、本発明は、対象における頭痛（例えば、片頭痛）を治療し、またはその発生を減少させる方法を提供し、ＣＧＲＰ経路を調節する量で、単回用量のモノクローナル抗体（例えば、モノクローナル抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体）を対象に投与することを含み、モノクローナル抗体の量は、１００〜２０００ｍｇである。
【００２２】
更なる実施形態において、本発明は、個体における頭痛（例えば、片頭痛及び群発頭痛）を改善し、制御し、その発生を減少させ、またはその発症若しくは進行を遅らせるための方法を提供し、この方法は、その個体に有効量の抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体を、頭痛の治療に有用な少なくとも１つの追加の作用物質と組み合わせて投与することを含む。かかる追加の作用物質には、５−ＨＴ１様アゴニスト（及び他の５−ＨＴ１部位に作用するアゴニスト）及び非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）が挙げられる。
【００２３】
抗ＣＧＲＰ抗体と組み合わせて用いることができる５−ＨＴ１アゴニストの例には、スマトリプタン、ゾルミトリプタン、ナラトリプタン、リザトリプタン、エレトリプタン、アルモトリプタン及びフロバトリプタンなどのトリプタンとして知られている種類の化合物が挙げられる。麦角アルカロイド及び関連化合物もまた、５−ＨＴアゴニスト活性を持つことが知られており、片頭痛などの頭痛を治療するために使用されている。これらの化合物には、エルゴタミン酒石酸塩、エルゴノビンマレイン酸塩及びエルゴロイドメシル酸塩（例えば、ジヒドロエルゴコルニン、ジヒドロエルゴクリスチン、ジヒドロエルゴクリプチン及びジヒドロエルゴタミンメシル酸塩（ＤＨＥ４５））が含まれる。
【００２４】
抗ＣＧＲＰ抗体と組み合わせて用いることができるＮＳＡＩＤの例には、アスピリン、ジクロフェナク、ジフルシナル、エトドラク、フェンブフェン、フェノプロフェン、フルフェニサール、フルルビプロフェン、イブプロフェン、インドメタシン、ケトプロフェン、ケトロラク、メクロフェナム酸、メフェナム酸、ナブメトン、ナプロキセン、オキサプロジン、フェニルブタゾン、ピロキシカム、スリンダク、トルメチンまたはゾメピラク、シクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）阻害薬、セレコキシブ；ロフェコキシブ；メロキシカム；ＪＴＥ−５２２；Ｌ−７４５，３３７；ＮＳ３９８またはこれらの薬学的に許容可能な塩が挙げられる。
【００２５】
別の態様において、本発明は、個体における顔面潮紅を改善し、制御し、その発生を減少させ、またはその発症若しくは進行を遅らせるための方法を提供し、この方法は、その個体に有効量の抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体を投与することを含む。
【００２６】
別の態様において、本発明は、個体における顔面潮紅を改善し、制御し、その発生を減少させ、またはその発症若しくは進行を遅らせるための方法を提供し、この方法は、その個体に有効量の抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体を、顔面潮紅の治療に有用な少なくとも１つの追加の作用物質と組み合わせて投与することを含む。かかる追加の作用物質には、エストロゲン及び／またはプロゲスチンを含むホルモン系治療薬が挙げられるが、これらに限定されない。
【００２７】
一実施形態において、上記方法のいずれかにて使用される抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体は、本明細書に記載の抗体のいずれかである。
【００２８】
いくつかの実施形態において、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体は、ヒトＣＧＲＰを認識する。いくつかの実施形態において、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体は、ヒトα−ＣＧＲＰとβ−ＣＧＲＰの両方に結合する。いくつかの実施形態において、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体は、ヒト及びラットＣＧＲＰと結合する。いくつかの実施形態において、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体は、ＣＧＲＰのアミノ酸２５〜３７を有するＣ末端断片と結合する。いくつかの実施形態において、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体は、ＣＧＲＰのアミノ酸２５〜３７内のＣ末端エピトープと結合する。
【００２９】
いくつかの実施形態において、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体は、モノクローナル抗体である。いくつかの実施形態において、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体は、ヒト化されている。いくつかの実施形態において、抗体はヒト抗体である。いくつかの実施形態において、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体は、抗体Ｇ１である（本明細書に記載のもの）。いくつかの実施形態において、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体は、抗体Ｇ１または表６に記載のＧ１のバリアントの１つまたは複数のＣＤＲ（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたはいくつかの実施形態では６つ全てのＣＤＲ）を含む。更に他の実施形態において、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体は、図５に示す重鎖可変領域のアミノ酸配列（配列番号１）及び図５に示す軽鎖可変領域のアミノ酸配列（配列番号２）を含む。
【００３０】
いくつかの実施形態において、抗体は、改変された定常領域を含み、例えば、補体媒介性溶解を誘発しない、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を刺激しない、ミクログリアを活性化しない、またはこれらの活性の１つ若しくは複数を低下させた、免疫学的に不活性（部分的に免疫学的に不活性を含む）である定常領域を含む。いくつかの実施形態において、定常領域は、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９９）２９：２６１３−２６２４、ＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＧＢ９９／０１４４１号及び／または英国特許出願第９８０９９５１．８号に記載されているように改変される。他の実施形態において、抗体は、Ａ３３０Ｐ３３１からＳ３３０Ｓ３３１への変異を含むヒト重鎖ＩｇＧ２定常領域を含む（野生型ＩｇＧ２配列を基準としたアミノ酸ナンバリング）。Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９９）２９：２６１３−２６２４。いくつかの実施形態において、抗体の重鎖定常領域は、次の変異：１）Ａ３２７Ａ３３０Ｐ３３１からＧ３２７Ｓ３３０Ｓ３３１、２）Ｅ２３３Ｌ２３４Ｌ２３５Ｇ２３６（配列番号４８）からＧ２３６が欠失したＰ２３３Ｖ２３４Ａ２３５、３）Ｅ２３３Ｌ２３４Ｌ２３５からＰ２３３Ｖ２３４Ａ２３５、４）Ｅ２３３Ｌ２３４Ｌ２３５Ｇ２３６Ａ３２７Ａ３３０Ｐ３３１（配列番号４９）からＧ２３６が欠失したＰ２３３Ｖ２３４Ａ２３５Ｇ３２７Ｓ３３０Ｓ３３１（配列番号５０）、５）Ｅ２３３Ｌ２３４Ｌ２３５Ａ３２７Ａ３３０Ｐ３３１（配列番号５１）からＰ２３３Ｖ２３４Ａ２３５Ｇ３２７Ｓ３３０Ｓ３３１（配列番号５０）、及び６）Ｎ２９７からＡ２９７若しくはＮ以外の任意の他のアミノ酸への変異のいずれかを有するヒト重鎖ＩｇＧ１である。いくつかの実施形態において、抗体の重鎖定常領域は、次の変異：Ｅ２３３Ｆ２３４Ｌ２３５Ｇ２３６（配列番号５２）からＧ２３６が欠失したＰ２３３Ｖ２３４Ａ２３５、Ｅ２３３Ｆ２３４Ｌ２３５からＰ２３３Ｖ２３４Ａ２３５、及びＳ２２８Ｌ２３５からＰ２２８Ｅ２３５への変異のいずれかを有するヒト重鎖ＩｇＧ４である。
【００３１】
更に他の実施形態において、定常領域は、Ｎ−結合グリコシル化が脱グリコシル化される。いくつかの実施形態において、定常領域は、定常領域内のオリゴ糖結合残基（Ａｓｎ２９７など）及び／またはＮ−グリコシル化認識配列の一部である隣接残基を変異させることによって、Ｎ−結合グリコシル化が脱グリコシル化される。いくつかの実施形態において、定常領域は、Ｎ−結合グリコシル化が脱グリコシル化される。定常領域のＮ−結合グリコシル化は、酵素的にまたはグリコシル化欠損宿主細胞での発現によって脱グリコシル化され得る。
【００３２】
ＣＧＲＰ（２５℃または３７℃などの適切な温度で表面プラズモン共鳴によって測定されるヒトα−ＣＧＲＰなど）に対する抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体の結合親和性（ＫＤ）は、約０．０２〜約２００ｎＭであり得る。いくつかの実施形態において、結合親和性は、約２００ｎＭ、約１００ｎＭ、約５０ｎＭ、約１０ｎＭ、約１ｎＭ、約５００ｐＭ、約１００ｐＭ、約６０ｐＭ、約５０ｐＭ、約２０ｐＭ、約１５ｐＭ、約１０ｐＭ、約５ｐＭまたは約２ｐＭのいずれかである。いくつかの実施形態において、結合親和性は、約２５０ｎＭ、約２００ｎＭ、約１００ｎＭ、約５０ｎＭ、約１０ｎＭ、約１ｎＭ、約５００ｐＭ、約１００ｐＭまたは約５０ｐＭのいずれか未満である。いくつかの実施形態において、結合親和性は、約５０ｎＭ未満である。
【００３３】
抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体は、頭痛前、頭痛中及び／または頭痛後に投与され得る。いくつかの実施形態において、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体は、頭痛（例えば、片頭痛及び群発頭痛）の発作前に投与される。抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体の投与は、当該技術分野にて知られている任意の手段であってよく、経口、静脈内、皮下、動脈内、筋肉内、経鼻（例えば、吸入ありまたは吸入なし）、心臓内、脊髄内、胸腔内、腹腔内、脳室内、舌下、経皮及び／または吸入による投与が挙げられる。投与は、全身投与（例えば、静脈内）であっても、局所投与であってもよい。
【００３４】
いくつかの実施形態において、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体は、頭痛を治療するための別の作用物質などの別の作用物質とともに投与してもよい。
【００３５】
別の態様において、本発明は、本明細書に記載の方法のいずれか、例えば、頭痛を治療または予防する方法で使用する薬剤の製造のための抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体の使用を提供する。
【００３６】
別の態様において、本発明は、頭痛（例えば、片頭痛及び群発頭痛）を予防または治療するための医薬組成物を提供し、この医薬組成物は、有効量の抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体を１つまたは複数の薬学的に許容可能な賦形剤と組み合わせて含む。
【００３７】
別の態様において、本発明は、本明細書に記載の方法のいずれかにて使用するためのキットを提供する。いくつかの実施形態において、キットは、容器と、本明細書に記載の抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体を薬学的に許容可能な担体と組み合わせて含む組成物と、本明細書に記載の方法のいずれかにて当該組成物を使用するための説明書とを含む。
【００３８】
本発明はまた、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体及び抗体Ｇ１または表６に示すそのバリアントに由来するポリペプチドを提供する。したがって、一態様において、本発明は、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−６８６６及びＰＴＡ−６８６７の発現ベクターによって産生される抗体Ｇ１（同義的に「Ｇ１」と呼ぶ）を提供する。例えば、一実施形態において、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−６８６７の発現ベクターによって産生される重鎖を含む抗体である。更なる実施形態において、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−６８６６の発現ベクターによって産生される軽鎖を含む抗体である。Ｇ１の重鎖及び軽鎖可変領域のアミノ酸配列を図５に示す。抗体Ｇ１の相補性決定領域（ＣＤＲ）部分（Ｃｈｏｔｈｉａ及びＫａｂａｔのＣＤＲを含む）についても図５に示す。Ｇ１のいずれかの部分または領域全体への言及は、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−６８６６及びＰＴＡ−６８６７を有する発現ベクターによって産生される配列及び／または図５に示す配列を包含すると理解される。いくつかの実施形態において、本発明はまた、表６に示すアミノ酸配列を有する、Ｇ１の抗体バリアントも提供する。
【００３９】
一態様において、本発明は、アミノ酸配列が配列番号１と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一であるＶＨドメインを含む抗体を提供する。
【００４０】
別の態様において、本発明は、アミノ酸配列が配列番号２と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一であるＶＬドメインを含む抗体を提供する。
【００４１】
別の態様において、本発明は、抗体Ｇ１または表６に示すそのバリアントの断片または領域を含む抗体を提供する。一実施形態において、断片は、抗体Ｇ１の軽鎖である。別の実施形態において、断片は、抗体Ｇ１の重鎖である。更に別の実施形態において、断片は、抗体Ｇ１の軽鎖及び／または重鎖由来の１つまたは複数の可変領域を含む。更に別の実施形態において、断片は、図５に示す軽鎖及び／または重鎖由来の１つまたは複数の可変領域を含む。更に別の実施形態において、断片は、抗体Ｇ１の軽鎖及び／または重鎖由来の１つまたは複数のＣＤＲを含む。
【００４２】
別の態様において、本発明は、配列番号５に示すＶＨ  ＣＤＲ３または１、２、３、４若しくは５つのアミノ酸置換により配列番号５と異なる配列を含むポリペプチド（抗体であっても抗体でなくてもよい）を提供する。特定の実施形態において、そのようなアミノ酸置換は、保存的置換である。
【００４３】
別の態様において、本発明は、配列番号８に示すＶＬ  ＣＤＲ３または１、２、３、４若しくは５つのアミノ酸置換により配列番号８と異なる配列を含むポリペプチド（抗体であっても抗体でなくてもよい）を提供する。特定の実施形態において、そのようなアミノ酸置換は、保存的置換である。
【００４４】
別の態様において、本発明は、ａ）抗体Ｇ１または表６に示すそのバリアントに由来する１つまたは複数のＣＤＲ、ｂ）抗体Ｇ１または表６に示すそのバリアントの重鎖に由来するＣＤＲ  Ｈ３、ｃ）抗体Ｇ１または表６に示すそのバリアントの軽鎖に由来するＣＤＲ  Ｌ３、ｄ）抗体Ｇ１または表６に示すそのバリアントの軽鎖に由来する３つのＣＤＲ、ｅ）抗体Ｇ１または表６に示すそのバリアントの重鎖に由来する３つのＣＤＲ、ｆ）抗体Ｇ１または表６に示すそのバリアントの軽鎖に由来する３つのＣＤＲ及び重鎖に由来する３つのＣＤＲのうちのいずれか１つまたは複数を含むポリペプチド（抗体であっても抗体でなくてもよい）を提供する。いくつかの実施形態において、本発明は、ａ）抗体Ｇ１若しくは表６に示すそのバリアント由来の１つ若しくは複数（１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたは６つ）のＣＤＲ、ｂ）抗体Ｇ１の重鎖のＣＤＲ  Ｈ３に由来するＣＤＲ、及び／またはｃ）抗体Ｇ１の軽鎖のＣＤＲ  Ｌ３に由来するＣＤＲのうちのいずれか１つまたは複数を含むポリペプチド（抗体であっても抗体でなくてもよい）を更に提供する。いくつかの実施形態において、ＣＤＲは、図５に示すＣＤＲである。いくつかの実施形態において、抗体Ｇ１または表６に示すそのバリアントに由来する１つまたは複数のＣＤＲは、Ｇ１またはそのバリアントの少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つまたは少なくとも６つのＣＤＲと少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％と同一である。
【００４５】
いくつかの実施形態において、ＣＤＲは、ＫａｂａｔのＣＤＲである。他の実施形態において、ＣＤＲは、ＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲである。他の実施形態において、ＣＤＲは、ＫａｂａｔとＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲの組み合わせである（「組み合わせＣＤＲ」または「拡張ＣＤＲ」とも呼ぶ）。言い換えれば、２つ以上のＣＤＲを含有する任意の所定の実施形態について、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ及び／または組み合わせのいずれかであってよい。
【００４６】
いくつかの実施形態において、ポリペプチド（抗体など）は、ＫＡＳＫＸａａＶＸａａＴＹＶＳ（配列番号５３）のアミノ酸配列を含み、５位のＸａａは、Ｒ、Ｗ、Ｇ、ＬまたはＮであり、７位のＸａａは、Ｔ、Ａ、Ｄ、Ｇ、Ｒ、Ｓ、ＷまたはＶである。いくつかの実施形態において、ＫＡＳＫＸａａＶＸａａＴＹＶＳ（配列番号５３）のアミノ酸配列は、抗体軽鎖のＣＤＲ１である。
【００４７】
いくつかの実施形態において、ポリペプチド（抗体など）は、ＸａａＸａａＳＮＲＹＸａａ（配列番号５４）のアミノ酸配列を含み、１位のＸａａは、ＧまたはＡであり、２位のＸａａは、ＡまたはＨであり、７位のＸａａは、Ｌ、Ｔ、ＩまたはＳである。いくつかの実施形態において、ＸａａＸａａＳＮＲＹＸａａ（配列番号５４）のアミノ酸配列は、抗体軽鎖のＣＤＲ２である。
【００４８】
いくつかの実施形態において、ポリペプチド（抗体など）は、ＥＩＲＳＸａａＳＤＸａａＸａａＡＴＸａａＹＡＸａａＡＶＫＧ（配列番号５５）のアミノ酸配列を含み、５位のＸａａは、Ｅ、Ｒ、Ｋ、ＱまたはＮであり、８位のＸａａは、Ａ、Ｇ、Ｎ、Ｅ、Ｈ、Ｓ、Ｌ、Ｒ、Ｃ、Ｆ、Ｙ、Ｖ、ＤまたはＰであり、９位のＸａａは、Ｓ、Ｇ、Ｔ、Ｙ、Ｃ、Ｅ、Ｌ、Ａ、Ｐ、Ｉ、Ｎ、Ｒ、Ｖ、ＤまたはＭであり、１２位のＸａａは、ＨまたはＦであり、１５位のＸａａは、ＥまたはＤである。いくつかの実施形態において、ＥＩＲＳＸａａＳＤＸａａＸａａＡＴＸａａＹＡＸａａＡＶＫＧ（配列番号５５）のアミノ酸配列は、抗体重鎖のＣＤＲ２である。
【００４９】
いくつかの実施形態において、ポリペプチド（抗体など）は、配列番号１のアミノ酸配列を含み、配列番号１の９９位のアミノ酸残基はＬであるか、またはＡ、Ｎ、Ｓ、Ｔ、Ｖ若しくはＲで置換されており、配列番号１の１００位のアミノ酸残基はＡであるか、またはＬ、Ｒ、Ｓ、Ｖ、Ｙ、Ｃ、Ｇ、Ｔ、Ｋ若しくはＰで置換されている。
【００５０】
いくつかの実施形態において、抗体は、ヒト抗体である。他の実施形態において、抗体は、ヒト化抗体である。いくつかの実施形態において、抗体は、モノクローナルである。いくつかの実施形態において、抗体（またはポリペプチド）は、単離される。いくつかの実施形態において、抗体（またはポリペプチド）は、実質的に純粋である。
【００５１】
抗体の重鎖定常領域は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ及びＩｇＥなどの任意の型の定常領域に由来するものであってよく、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４などの任意のアイソタイプであってよい。
【００５２】
いくつかの実施形態において、抗体は、本明細書に記載の改変された定常領域を含む。
【００５３】
別の態様において、本発明は、抗体Ｇ１または表６に示すそのバリアントの断片または領域をコードするポリヌクレオチドを含むポリヌクレオチド（単離されてもよい）を提供する。一実施形態において、断片は、抗体Ｇ１の軽鎖である。別の実施形態において、断片は、抗体Ｇ１の重鎖である。更に別の実施形態において、断片は、抗体Ｇ１の軽鎖及び／または重鎖由来の１つまたは複数の可変領域を含む。更に別の実施形態において、断片は、抗体Ｇ１の軽鎖及び／または重鎖に由来する１つまたは複数（すなわち、１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたは６つ）の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含有する。
【００５４】
別の態様において、本発明は、抗体Ｇ１または表６に示すそのバリアントをコードするポリヌクレオチドを含むポリヌクレオチド（単離されてもよい）を提供する。いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチドは、配列番号９及び配列番号１０に示すポリヌクレオチドの一方または両方を含む。
【００５５】
別の態様において、本発明は、本明細書に記載の抗体（抗体断片を含む）またはポリペプチドのいずれかをコードするポリヌクレオチドを提供する。
【００５６】
別の態様において、本発明は、本明細書にて開示するポリヌクレオチドのいずれかを含むベクター（発現ベクター及びクローニングベクターを含む）及び宿主細胞を提供する。いくつかの実施形態において、ベクターは、ＡＴＣＣ番号ＰＴＡ−６８６７を有するｐＤｂ．ＣＧＲＰ．ｈＦｃＧＩである。他の実施形態において、ベクターは、ＡＴＣＣ番号ＰＴＡ−６８６６を有するｐＥｂ．ＣＧＲＰ．ｈＫＧＩである。
【００５７】
別の態様において、本発明は、本明細書に記載の抗体のいずれかをコードするポリヌクレオチドを含む宿主細胞を提供する。
【００５８】
別の態様において、本発明は、本明細書に記載の抗体またはポリペプチドのいずれかが結合したＣＧＲＰの複合体を提供する。いくつかの実施形態において、抗体は、抗体Ｇ１または表６に示すそのバリアントである。
【００５９】
別の態様において、本発明は、有効量の本明細書に記載のポリペプチド（抗体Ｇ１の１つまたは複数のＣＤＲを含む抗体などの抗体を含む）またはポリヌクレオチドのいずれかと、薬学的に許容可能な賦形剤とを含む医薬組成物を提供する。
【００６０】
別の態様において、本発明は、抗体Ｇ１を作製する方法を提供し、この方法は、抗体Ｇ１の産生を可能にする条件下で、宿主細胞またはその子孫細胞を培養することを含み、宿主細胞は、抗体Ｇ１をコードする発現ベクターを含み、いくつかの実施形態では、抗体Ｇ１を精製することを含む。いくつかの実施形態において、発現ベクターは、配列番号９及び配列番号１０に示すポリヌクレオチド配列の一方または両方を含む。
【００６１】
別の態様において、本発明は、本明細書に記載の抗体またはポリペプチドのいずれかを作製する方法を提供し、この方法は、抗体またはポリペプチドをコードする１つまたは複数のポリヌクレオチドを好適な細胞中で発現させ（単一の軽鎖若しくは重鎖として個別に発現させてもよいし、または軽鎖と重鎖の両方を１つのベクターから発現させる）、一般にはこれ続いて、目的の抗体またはポリペプチドを回収及び／または単離することによる。
【００６２】
本発明の抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体、ポリペプチドならびに当該抗体及びポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、ＣＧＲＰの異常機能に関連する疾患、例えば、頭痛（例えば、片頭痛、群発頭痛、慢性頭痛及び緊張性頭痛）及びＣＧＲＰ活性に拮抗することによって治療または予防され得る他の状態を治療し、予防し、改善し、制御し、その発生を減少させるために使用することができる。
【００６３】
別の態様において、本発明は、本明細書に記載の組成物のいずれか１つまたは複数を含むキット及び組成物を提供する。一般に、適切な包装で適切な説明書を備えたこれらのキットは、本明細書に記載の方法のいずれかに有用である。
【００６４】
一態様において、本発明は、本明細書に記載の方法のいずれかに従った使用のための組成物を提供する。
【００６５】
一態様において、本発明は、対象における少なくとも１つの血管運動神経症状及び／または頭痛を治療し、またはその発生を減少させるのに使用するための組成物を提供する。一実施形態において、使用は、ＣＧＲＰ経路を調節する、ある量のモノクローナル抗体（例えば、モノクローナル抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体）を対象に複数日に投与することを含み、複数日の各日に投与される量は、１０００ｍｇ未満である。一実施形態において、使用は、ＣＧＲＰ経路を調節する、ある量のモノクローナル抗体（例えば、モノクローナル抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体）を対象に複数日に投与することを含み、複数日の各日に投与される量は、１００〜２０００ｍｇである。いくつかの実施形態において、頭痛は片頭痛（例えば、慢性片頭痛または反復性片頭痛）である。いくつかの実施形態において、複数日の２つには７日を上回る間隔がある。いくつかの実施形態において、単回投与後少なくとも７日間、頭痛の発生が減少する。いくつかの実施形態において、第１の日に投与されるモノクローナル抗体の量は、第２の日に投与されるモノクローナル抗体の量と異なる（例えば、より多い）。いくつかの実施形態において、１ヶ月あたり３回未満の用量が対象に投与される。いくつかの実施形態において、投与は、皮下投与である。いくつかの実施形態において、投与は、静脈内投与である。いくつかの実施形態において、投与は、ある量のモノクローナル抗体を含むプレフィルドシリンジを用いることを含む。いくつかの実施形態において、モノクローナル抗体は、１５０ｍｇ／ｍＬの濃度で配合される。いくつかの実施形態において、モノクローナル抗体は、２ｍＬ未満の体積で投与される。いくつかの実施形態において、モノクローナル抗体の量は、１０００ｍｇ未満である。いくつかの実施形態において、当該投与後に対象が経験する１ヶ月の頭痛時間が、対象における投与前のレベルから４０時間以上（例えば、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、またはそれ以上）減少する。１ヶ月の頭痛時間は、６０時間を超えて減少し得る。いくつかの実施形態において、当該投与後に対象が経験する１ヶ月の頭痛時間が、対象における投与前のレベルと比較して２５％以上（例えば、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、またはそれ以上）減少する。１ヶ月の頭痛時間は、４０％以上減少し得る。いくつかの実施形態において、当該投与後に対象が経験する１ヶ月の頭痛日が、対象における投与前のレベルから３日以上（例えば、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０日以上）減少する。いくつかの実施形態において、使用は、モノクローナル抗体と同時にまたは連続的に、第２の作用物質を対象に投与することを更に含む。第２の作用物質は、５−ＨＴ１アゴニスト、トリプタン、麦角アルカロイド及び非ステロイド性抗炎症薬のいずれかであり得る。いくつかの実施形態において、第２の作用物質は、予防的に対象に投与される物質である。いくつかの実施形態において、モノクローナル抗体の投与後、対象による第２の作用物質の月間使用が少なくとも１５％減少する。いくつかの実施形態において、第２の作用物質は、トリプタンである。いくつかの実施形態において、対象はヒトである。いくつかの実施形態において、モノクローナル抗体は、ヒトまたはヒト化モノクローナル抗体である。いくつかの実施形態において、モノクローナル抗体は、（ａ）配列番号３に示すＣＤＲ  Ｈ１、配列番号４に示すＣＤＲ  Ｈ２、配列番号５に示すＣＤＲ  Ｈ３、配列番号６に示すＣＤＲ  Ｌ１、配列番号７に示すＣＤＲ  Ｌ２及び配列番号８に示すＣＤＲ  Ｌ３を有する抗体、または（ｂ）表６に示す（ａ）に従った抗体のバリアントを含む。
【００６６】
一態様において、本発明は、対象が経験する１ヶ月の頭痛時間数を減らすのに使用するための組成物を提供する。一実施形態において、使用は、ＣＧＲＰ経路を調節する、ある量のモノクローナル抗体を対象に投与することを含み、モノクローナル抗体は、単回投与後、１ヶ月の頭痛時間数を少なくとも２０時間（例えば、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０時間またはそれ以上の頭痛時間分）減少させるのに有効な量である。いくつかの実施形態において、１ヶ月の頭痛時間数は、少なくとも約５０時間減少する。一実施形態において、使用は、ＣＧＲＰ経路を調節する、ある量のモノクローナル抗体を対象に投与することを含み、モノクローナル抗体は、単回投与後、１ヶ月の頭痛時間数を少なくとも１５％（例えば、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、またはそれ以上）減少させるのに有効な量である。いくつかの実施形態において、１ヶ月の頭痛時間数は、少なくとも約３０％減少する。いくつかの実施形態において、モノクローナル抗体は、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体である。いくつかの実施形態において、モノクローナル抗体の量は、１０００ｍｇ未満である。いくつかの実施形態において、１ヶ月あたり３回未満の用量が対象に投与される。いくつかの実施形態において、投与は、皮下または静脈内投与である。いくつかの実施形態において、モノクローナル抗体は、少なくとも１５０ｍｇ／ｍＬの濃度で配合される。いくつかの実施形態において、モノクローナル抗体は、２ｍＬ未満の体積で投与される。いくつかの実施形態において、対象はヒトである。いくつかの実施形態において、モノクローナル抗体は、ヒトまたはヒト化抗体である。いくつかの実施形態において、モノクローナル抗体は、（ａ）配列番号３に示すＣＤＲ  Ｈ１、配列番号４に示すＣＤＲ  Ｈ２、配列番号５に示すＣＤＲ  Ｈ３、配列番号６に示すＣＤＲ  Ｌ１、配列番号７に示すＣＤＲ  Ｌ２及び配列番号８に示すＣＤＲ  Ｌ３を有する抗体、または（ｂ）表６に示す（ａ）に従った抗体のバリアントを含む。
【００６７】
一態様において、本発明は、対象が経験する１ヶ月の頭痛日数を減らすのに使用するための組成物を提供する。一実施形態において、使用は、ＣＧＲＰ経路を調節する、ある量のモノクローナル抗体を対象に投与することを含み、モノクローナル抗体は、単回投与後、１ヶ月の頭痛日数を少なくとも３日（例えば、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０日またはそれ以上の頭痛日数分）減少させるのに有効な量である。いくつかの実施形態において、１ヶ月の頭痛日数は、少なくとも約６日の頭痛日数分減少する。いくつかの実施形態において、モノクローナル抗体は、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体である。いくつかの実施形態において、モノクローナル抗体の量は、１０００ｍｇ未満である。いくつかの実施形態において、１ヶ月あたり３回未満の用量が対象に投与される。いくつかの実施形態において、投与は、皮下または静脈内投与である。いくつかの実施形態において、モノクローナル抗体は、少なくとも１５０ｍｇ／ｍＬの濃度で配合される。いくつかの実施形態において、モノクローナル抗体は、２ｍＬ未満の体積で投与される。いくつかの実施形態において、対象はヒトである。いくつかの実施形態において、モノクローナル抗体は、ヒトまたはヒト化抗体である。いくつかの実施形態において、モノクローナル抗体は、（ａ）配列番号３に示すＣＤＲ  Ｈ１、配列番号４に示すＣＤＲ  Ｈ２、配列番号５に示すＣＤＲ  Ｈ３、配列番号６に示すＣＤＲ  Ｌ１、配列番号７に示すＣＤＲ  Ｌ２及び配列番号８に示すＣＤＲ  Ｌ３を有する抗体、または（ｂ）表６に示す（ａ）に従った抗体のバリアントを含む。
【００６８】
一態様において、本発明は、対象における抗頭痛薬の使用を減らすのに使用するための組成物を提供し、ＣＧＲＰ経路を調節するモノクローナル抗体（例えば、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体）を対象に投与することを含み、モノクローナル抗体は、対象の抗頭痛薬の月間使用を少なくとも１５％（例えば、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、またはそれ以上）減少させるのに有効な量である。いくつかの実施形態において、抗頭痛薬は、５−ＨＴ１アゴニスト、トリプタン、オピエート、β−アドレナリン遮断薬、麦角アルカロイド及び非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）からなる群から選択される。いくつかの実施形態において、抗頭痛薬は、トリプタンである。いくつかの実施形態において、モノクローナル抗体の量は、１０００ｍｇ未満である。いくつかの実施形態において、１ヶ月あたり３回未満の用量が対象に投与される。いくつかの実施形態において、投与は、皮下または静脈内投与である。いくつかの実施形態において、モノクローナル抗体は、少なくとも１５０ｍｇ／ｍＬの濃度で配合される。いくつかの実施形態において、モノクローナル抗体は、２ｍＬ未満の体積で投与される。いくつかの実施形態において、対象はヒトである。いくつかの実施形態において、モノクローナル抗体は、ヒトまたはヒト化抗体である。いくつかの実施形態において、モノクローナル抗体は、（ａ）配列番号３に示すＣＤＲ  Ｈ１、配列番号４に示すＣＤＲ  Ｈ２、配列番号５に示すＣＤＲ  Ｈ３、配列番号６に示すＣＤＲ  Ｌ１、配列番号７に示すＣＤＲ  Ｌ２及び配列番号８に示すＣＤＲ  Ｌ３を有する抗体、または（ｂ）表６に示す（ａ）に従った抗体のバリアントを含む。
【００６９】
一態様において、本発明は、対象における頭痛（例えば、片頭痛）を治療し、またはその発生を減少させるのに使用するための組成物を提供し、ＣＧＲＰ経路を調節する量で、単回用量のモノクローナル抗体（例えば、モノクローナル抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体）を対象に投与することを含み、モノクローナル抗体の量は、１００〜２０００ｍｇである。
【図面の簡単な説明】
【００７０】
【図１】アラニン置換した種々のヒトα−ＣＧＲＰ断片に対する１２のネズミ抗体の結合親和性を示す表である。結合親和性は、Ｂｉａｃｏｒｅを用いてチップ上のＣＧＲＰにＦａｂを流すことにより２５℃で測定した。囲み中の値は、親断片２５〜３７（斜字体）（１９〜３７の親断片に由来するＫ３５Ａを除く）と比較した、アラニン変異体の親和性の低下を表す。「ａ」は、１９〜３７及び２５〜３７の断片の親和性が個別のセンサーチップ上での２つの単独測定値の平均±標準偏差であることを示す。「ｂ」は、これらの相互作用が２段階の解離速度であるために単純な二分子相互作用モデルから逸脱することから、これらの親和性が高次構造変化モデルを用いて決定されたものであることを示す。グレースケールの解説：白（１．０）は親と同様の親和性を示す。薄いグレー（０．５未満）は親よりも親和性が高いことを示す。濃いグレー（２を超えるもの）は親よりも親和性が低いことを示す。黒は、結合が検出されなかったことを示す。
【図２Ａ】図２Ａは、３０秒間の電気パルス刺激後における血液細胞の流速として測定した皮膚血流量に対する、ＣＧＲＰ８〜３７（４００ｎｍｏｌ／ｋｇ）、抗体４９０１（２５ｍｇ／ｋｇ）及び抗体７Ｄ１１（２５ｍｇ／ｋｇ）の投与効果を示す。ＣＧＲＰ８〜３７は、電気パルス刺激の３〜５分前に静脈内（ｉｖ）投与した。各抗体は、電気パルス刺激の７２時間前に腹腔内（ＩＰ）投与した。グラフ中の各点は、指定した条件下で処置したラット１匹のＡＵＣを表す。グラフ中の各線は、指定した条件下で処置したラットの平均ＡＵＣを表す。ＡＵＣ（曲線下面積）は、Δ流速×Δ時間に等しい。「Δ流速」は、電気パルス刺激後の流速単位の変化を表し、「Δ時間」は、血液細胞の流速レベルが電気パルス刺激前のレベルに戻るのにかかる時間を表す。
【図２Ｂ】図２Ｂは、３０秒間の電気パルス刺激後における血液細胞の流速として測定した皮膚血流量に対する、ＣＧＲＰ８〜３７（４００ｎｍｏｌ／ｋｇ）、抗体４９０１（２５ｍｇ／ｋｇ）及び抗体７Ｄ１１（２５ｍｇ／ｋｇ）の投与効果を示す。ＣＧＲＰ８〜３７は、電気パルス刺激の３〜５分前に静脈内（ｉｖ）投与した。各抗体は、電気パルス刺激の７２時間前に腹腔内（ＩＰ）投与した。グラフ中の各点は、指定した条件下で処置したラット１匹のＡＵＣを表す。グラフ中の各線は、指定した条件下で処置したラットの平均ＡＵＣを表す。ＡＵＣ（曲線下面積）は、Δ流速×Δ時間に等しい。「Δ流速」は、電気パルス刺激後の流速単位の変化を表し、「Δ時間」は、血液細胞の流速レベルが電気パルス刺激前のレベルに戻るのにかかる時間を表す。
【図３】３０秒間の電気パルス刺激後における血液細胞の流速として測定した皮膚血流量に対する、異なる用量の抗体４９０１（２５ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇまたは１ｍｇ／ｋｇ）の投与効果を示す。各抗体は、電気パルス刺激の２４時間前に静脈内（ＩＶ）投与した。グラフ中の各点は、指定した条件下で処置したラット１匹のＡＵＣを表す。グラフ中の線は、指定した条件下で処置したラットの平均ＡＵＣを表す。
【図４Ａ】図４Ａは、３０秒間の電気パルス刺激後における血液細胞の流速として測定した皮膚血流量に対する、抗体４９０１（１ｍｇ／ｋｇまたは１０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｖ．）、抗体７Ｅ９（１０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｖ．）及び抗体８Ｂ６（１０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｖ．）の投与効果を示す。各抗体は、静脈内（ｉ．ｖ．）投与し、次いで、抗体投与後３０分、６０分、９０分及び１２０分に電気パルス刺激を行った。Ｙ軸は、抗体を全く投与していない場合（時間０）のＡＵＣレベルと比較したＡＵＣのパーセントを表す。Ｘ軸は、抗体投与と電気パルス刺激との間の時間（分）を表す。「＊」はＰ＜０．０５を示し、「＊＊」はＰ＜０．０１を示す（時間０と比較）。データは、一元配置ＡＮＯＶＡをダネットの多重比較検定とともに用いて分析した。
【図４Ｂ】図４Ｂは、３０秒間の電気パルス刺激後における血液細胞の流速として測定した皮膚血流量に対する、抗体４９０１（１ｍｇ／ｋｇまたは１０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｖ．）、抗体７Ｅ９（１０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｖ．）及び抗体８Ｂ６（１０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｖ．）の投与効果を示す。各抗体は、静脈内（ｉ．ｖ．）投与し、次いで、抗体投与後３０分、６０分、９０分及び１２０分に電気パルス刺激を行った。Ｙ軸は、抗体を全く投与していない場合（時間０）のＡＵＣレベルと比較したＡＵＣのパーセントを表す。Ｘ軸は、抗体投与と電気パルス刺激との間の時間（分）を表す。「＊」はＰ＜０．０５を示し、「＊＊」はＰ＜０．０１を示す（時間０と比較）。データは、一元配置ＡＮＯＶＡをダネットの多重比較検定とともに用いて分析した。
【図５】抗体Ｇ１の重鎖可変領域のアミノ酸配列（配列番号１）及び軽鎖可変領域のアミノ酸配列（配列番号２）を示す。ＫａｂａｔのＣＤＲは太字で、ＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲは下線付きで示す。重鎖及び軽鎖可変領域に関するアミノ酸残基は、順番にナンバリングされている。
【図６】Ｂｉａｃｏｒｅを用いたペプチド競合による抗体Ｇ１のエピトープマッピングを示す。Ｎ−ビオチン化ヒトα−ＣＧＲＰをＳＡセンサーチップ上に捕捉した。競合ペプチドの不存在下または１０ｕＭの競合ペプチドとともに１時間予めインキュベートしたＧ１  Ｆａｂ（５０ｎＭ）をチップ上に流した。チップ上のヒトα−ＣＧＲＰに対するＧ１  Ｆａｂの結合を測定した。Ｙ軸は、競合ペプチドが存在しない場合の結合と比較した、競合ペプチドの存在による結合阻害率を表す。
【図７】３０秒間の電気パルス刺激後における血液細胞の流速として測定した皮膚血流量に対する、抗体Ｇ１（１ｍｇ／ｋｇまたは１０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｖ．）またはビヒクル（ＰＢＳ、０．０１％Ｔｗｅｅｎ２０）の投与効果を示す。抗体Ｇ１またはビヒクルを静脈内（ｉ．ｖ．）投与し、次いで、抗体投与後３０分、６０分、９０分及び１２０分に神経電気パルス刺激を行った。Ｙ軸は、抗体またはビヒクル（１００％と定義）を全く投与していない場合（時間０）のＡＵＣレベルと比較したＡＵＣのパーセントを表す。Ｘ軸は、抗体投与と電気パルス刺激との間の時間（分）を表す。「＊」はＰ＜０．０５を示し、「＊＊」はＰ＜０．０１を示す（ビヒクルと比較）。データは、二元配置ＡＮＯＶＡ及びボンフェローニ事後検定を用いて分析した。
【図８Ａ】投薬から２４時間後の３０秒間の電気パルス刺激後における血液細胞の流速として測定した皮膚血流量に対する、抗体Ｇ１（１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇまたは１０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｖ．）またはビヒクル（ＰＢＳ、０．０１％Ｔｗｅｅｎ２０）の投与効果を示す。抗体Ｇ１またはビヒクルは、神経電気パルス刺激の２４時間前に静脈内（ｉ．ｖ．）投与した。Ｙ軸は、曲線下総面積（ＡＵＣ、血液細胞の流速変化に、刺激から流速がベースラインに戻るまでの時間変化を乗じたもの）を表す。Ｘ軸は、様々な用量の抗体Ｇ１を表す。「＊」はＰ＜０．０５を示し、「＊＊」はＰ＜０．０１を示す（ビヒクルと比較）。データは、一元配置ＡＮＯＶＡ及びダンの多重比較検定を用いて分析した。
【図８Ｂ】投薬から７日後の３０秒間の電気パルス刺激後における血液細胞の流速として測定した皮膚血流量に対する、抗体Ｇ１（０．３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇまたは１０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｖ．）またはビヒクル（ＰＢＳ、０．０１％Ｔｗｅｅｎ２０）の投与効果を示す。抗体Ｇ１またはビヒクルは、神経電気パルス刺激の７日前に静脈内（ｉ．ｖ．）投与した。Ｙ軸は、総ＡＵＣを表す。Ｘ軸は、様々な用量の抗体Ｇ１を表す。「＊＊」はＰ＜０．０１を示し、「＊＊＊」はＰ＜０．００１を示す（ビヒクルと比較）。データは、一元配置ＡＮＯＶＡ及びダンの多重比較検定を用いて分析した。
【図８Ｃ】図８Ａ及び８Ｂのデータの曲線当てはめ分析である。神経電気パルス刺激の２４時間前または７日前のいずれかに抗体Ｇ１またはビヒクルを静脈内（ｉ．ｖ．）投与した。Ｙ軸は、総ＡＵＣを表す。Ｘ軸は、様々な用量の抗体Ｇ１を「ｍｇ／ｋｇ」単位のＥＣ５０を求めるための対数目盛で表す。
【図９】電界刺激後の中硬膜動脈の直径変化に対する、抗体ｍｕ７Ｅ９（１０ｍｇ／ｋｇ）、ＢＩＢＮ４０９６ＢＳまたはビヒクル（ＰＢＳ、０．０１％Ｔｗｅｅｎ２０）の効果を示す。抗体ｍｕ７Ｅ９、ＢＩＢＮ４０９６ＢＳまたはビヒクルは、電気刺激に対するベースライン応答が確立された後の時間点０分にて静脈内（ｉ．ｖ．）投与した。Ｙ軸は、電界刺激後の中硬膜動脈の直径変化を表す。安静時の直径が０％に相当する。Ｘ軸は、電気パルス刺激の時間（分）を表す。「＊」はＰ＜０．０５を示し、「＊＊」はＰ＜０．０１を示す（ビヒクルと比較）。データは、一元配置ＡＮＯＶＡ及びダネットの多重比較検定を用いて分析した。
【図１０】電界刺激後の中硬膜動脈の直径変化に対する、様々な用量の抗体Ｇ１（１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇまたは１０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｖ．）またはビヒクル（ＰＢＳ、０．０１％Ｔｗｅｅｎ２０）の効果を示す。抗体Ｇ１またはビヒクルは、電界刺激の７日前に静脈内（ｉ．ｖ．）投与した。Ｙ軸は、中硬膜動脈の直径変化を表す。安静時の直径が０％に相当する。Ｘ軸は、刺激電圧を表す。「＊」はＰ＜０．０５を示し、「＊＊」はＰ＜０．０１を示し、「＊＊＊」はＰ＜０．００１を示す（ビヒクルと比較）。データは、二元配置ＡＮＯＶＡ及びボンフェローニ事後検定を用いて分析した。
【図１１Ａ】モルヒネ中毒ラットにおいてナロキソン皮下注射（１ｍｇ／ｋｇ）によって誘発した深部体温の低下に対する、２４時間前に静脈内（ｉ．ｖ．）投与した抗体ｍｕ４９０１（１０ｍｇ／ｋｇ）またはビヒクル（ＰＢＳ、０．０１％Ｔｗｅｅｎ２０）の効果を示す。Ｙ軸は、ベースラインからの温度差を表す。Ｘ軸は、ナロキソン注射時からの測定時間を表す。
【図１１Ｂ】モルヒネ中毒ラットにおいてナロキソン皮下注射（１ｍｇ／ｋｇ）によって誘発した尾表面温度の上昇に対する、２４時間前に静脈内（ｉ．ｖ．）投与した抗体ｍｕ４９０１（１０ｍｇ／ｋｇ）またはビヒクル（ＰＢＳ、０．０１％Ｔｗｅｅｎ２０）の効果を示す。Ｙ軸は、ベースラインからの温度差を表す。Ｘ軸は、ナロキソン注射時からの測定時間を表す。
【図１２】異なる用量の抗体Ｇ１の効果とプラセボを比較した、臨床試験の結果を示すグラフである。
【図１３】異なる用量の抗体Ｇ１の効果とプラセボを比較した、臨床試験の結果を示すグラフである。
【図１４】異なる用量の抗体Ｇ１の効果とプラセボを比較した、臨床試験の結果を示すグラフである。
【図１５】異なる用量の抗体Ｇ１の効果とプラセボを比較した、臨床試験の結果を示すグラフである。
【図１６】異なる用量の抗体Ｇ１の効果とプラセボを比較した、臨床試験の結果を示すグラフである。
【図１７】異なる用量の抗体Ｇ１の効果とプラセボを比較した、臨床試験の結果を示すグラフである。
【図１８】異なる用量の抗体Ｇ１の効果とプラセボを比較した、臨床試験の結果を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００７１】
いくつかの態様において、本明細書にて開示する本発明は、個体に治療上有効な量の抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体を投与することによって、個体における血管運動神経症状（例えば、顔面潮紅）を治療し、及び／または予防するための方法を提供する。
【００７２】
いくつかの態様において、本明細書にて開示する本発明は、個体に治療上有効な量の抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体を投与することによって、個体における頭痛（例えば、片頭痛、群発頭痛、慢性頭痛及び緊張性頭痛）を治療し、及び／または予防するための方法を提供する。いくつかの場合において、頭痛は、片頭痛である。
【００７３】
いくつかの態様において、本明細書にて開示する本発明はまた、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体及びＧ１または表６に示すそのバリアントに由来するポリペプチドを提供する。いくつかの実施形態において、本発明はまた、これらの抗体及びポリペプチドを作製する方法及び使用する方法を提供する。
【００７４】
本出願全体を通して、種々の公開物（特許及び特許出願を含む）を参照する。これらの公開物の開示については、その全体を参照により本明細書に援用する。
【００７５】
一般的技術
本発明の各種態様の実施には、特に指定のない限り、当該技術分野の技術範囲内である、分子生物学（組み換え技術を含む）、微生物学、細胞生物学、生化学及び免疫学の従来技術が採用される。このような技術については、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，ｓｅｃｏｎｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９）Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ；Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ，ｅｄ．，１９８４）；Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ；Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｎｏｔｅｂｏｏｋ（Ｊ．Ｅ．Ｃｅｌｌｉｓ，ｅｄ．，１９９８）Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ；Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，ｅｄ．，１９８７）；Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｃｅｌｌ  ａｎｄ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｊ．Ｐ．Ｍａｔｈｅｒ  ａｎｄ  Ｐ．Ｅ．Ｒｏｂｅｒｔｓ，１９９８）Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ；Ｃｅｌｌ  ａｎｄ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ：Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ（Ａ．Ｄｏｙｌｅ、Ｊ．Ｂ．Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ，ａｎｄ  Ｄ．Ｇ．Ｎｅｗｅｌｌ，ｅｄｓ．，１９９３−１９９８）Ｊ．Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ；Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）；Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｄ．Ｍ．Ｗｅｉｒ  ａｎｄ  Ｃ．Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ，ｅｄｓ．）；Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  Ｖｅｃｔｏｒｓ  ｆｏｒ  Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｃｅｌｌｓ（Ｊ．Ｍ．Ｍｉｌｌｅｒ  ａｎｄ  Ｍ．Ｐ．Ｃａｌｏｓ，ｅｄｓ．，１９８７）；Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，１９８７）；ＰＣＲ：Ｔｈｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ｃｈａｉｎ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ，（Ｍｕｌｌｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，１９９４）；Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，１９９１）；Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，１９９９）；Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ（Ｃ．Ａ．Ｊａｎｅｗａｙ  ａｎｄ  Ｐ．Ｔｒａｖｅｒｓ，１９９７）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｐ．Ｆｉｎｃｈ，１９９７）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ  ｐｒａｃｔｉｃａｌ  ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｄ．Ｃａｔｔｙ．，ｅｄ．，ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ，１９８８−１９８９）；Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ  ｐｒａｃｔｉｃａｌ  ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｐ．Ｓｈｅｐｈｅｒｄ  ａｎｄ  Ｃ．Ｄｅａｎ，ｅｄｓ．，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，２０００）；Ｕｓｉｎｇ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ｍａｎｕａｌ（Ｅ．Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｄ．Ｌａｎｅ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，１９９９）；Ｔｈｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｍ．Ｚａｎｅ���ｔｉ  ａｎｄ  Ｊ．Ｄ．Ｃａｐｒａ，ｅｄｓ．，Ｈａｒｗｏｏｄ  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，１９９５）などの文献にて詳細に説明されている。
【００７６】
定義
「抗体」は、免疫グロブリン分子の可変領域に位置する少なくとも１つの抗原認識部位を介して、炭水化物、ポリヌクレオチド、脂質、ポリペプチドなどの標的に特異的に結合することができる免疫グロブリン分子である。本明細書で使用するとき、この用語は、インタクトポリクローナルまたはモノクローナル抗体だけではなく、それらの断片（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖなど）、一本鎖（ＳｃＦｖ）、それらの変異体、抗体部分（ドメイン抗体など）を含む融合タンパク質、及び抗原認識部位を含む他の任意の修飾構造の免疫グロブリン分子も包含する。抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＡまたはＩｇＭ（またはそれらのサブクラス）などの任意のクラスの抗体を含み、いずれかの特定のクラスである必要はない。免疫グロブリンは、抗体重鎖の定常ドメインの抗体アミノ酸配列に応じて、異なるクラスに割り振ることができる。免疫グロブリンには、５つの主要なクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭがあり、これらのいくつかは、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２のサブクラス（アイソタイプ）に更に分類することができる。異なるクラスの免疫グロブリンに対応する重鎖の定常ドメインは、それぞれアルファ、デルタ、イプシロン、ガンマ及びミューと呼ばれる。異なるクラスの免疫グロブリンのサブユニット構造及び三次元構造は、よく知られている。
【００７７】
本明細書で使用するとき、「モノクローナル抗体」は、実質的に均質な抗体の集団から得られた抗体を指し、すなわち、この集団に含まれる個々の抗体は、微量に存在する可能性が想定される自然に発生する変異を除いて、同一である。モノクローナル抗体は、極めて特異性が高く、単一の抗原部位に向けられる。更に、異なる決定基（エピトープ）に対する異なる抗体を典型的に含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に向けられる。「モノクローナル」という修飾語は、実質的に均質な抗体の集団から得られるという抗体の特徴を示すものであり、いずれかの特定の方法による抗体の産生が求められるものと解釈されるべきではない。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ  ａｎｄ  Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，１９７５，Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５によって最初に記載されたハイブリドーマ方法によって作製してもよいし、米国特許第４，８１６，５６７号に記載の方法などの組み換えＤＮＡ法によって作製してもよい。モノクローナル抗体はまた、例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ｎａｔｕｒｅ，３４８：５５２−５５４に記載された技術を用いて作製されたファージライブラリーから単離してもよい。
【００７８】
本明細書で使用するとき、「ヒト化」抗体は、非ヒト免疫グロブリン由来の最小配列を含む、特異的なキメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖またはそれらの断片（Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２または抗体の他の抗原結合部分配列など）である非ヒト（例えば、ネズミ）抗体の形態を指す。主に、ヒト化抗体は、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）であって、レシピエントの相補性決定領域（ＣＤＲ）に由来する残基が、所望の特異性、親和性及び生物活性を有するマウス、ラットまたはウサギなどの非ヒト種（ドナー抗体）のＣＤＲに由来する残基で置き換えられているものである。ある場合には、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク領域（ＦＲ）残基が、対応する非ヒト残基によって置き換えられる。更に、ヒト化抗体には、レシピエント抗体中にも、移入したＣＤＲまたはフレームワーク配列中にも認められないが、抗体性能を更に改良及び最適化するために包含される残基を含めてもよい。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの全てを実質的に含み、全てまたは実質的に全てのＣＤＲ領域が非ヒト免疫グロブリンのＣＤＲ領域に対応し、全てまたは実質的に全てのＦＲ領域がヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のＦＲ領域である。ヒト化抗体はまた、最適には、免疫グロブリン、典型的にはヒト免疫グロブリンの定常領域またはドメイン（Ｆｃ）の少なくとも一部を含む。抗体は、ＷＯ９９／５８５７２に記載するように修飾されたＦｃ領域を有してよい。ヒト化抗体の他の形態は、元の抗体の１つまたは複数のＣＤＲに「由来する」１つまたは複数のＣＤＲとも呼ばれる、元の抗体に対して改変を加えた１つまたは複数のＣＤＲ（１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ）を有する。
【００７９】
本明細書で使用するとき、「ヒト抗体」は、ヒトによって産生された抗体のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を有する抗体を意味し、かつ／または当該技術分野にて知られている若しくは本明細書にて開示するヒト抗体の作製技術のいずれかを用いて作製されている。このヒト抗体の定義は、少なくとも１つのヒト重鎖ポリペプチドまたは少なくとも１つのヒト軽鎖ポリペプチドを含む抗体を含む。このような例の１つは、ネズミ軽鎖とヒト重鎖のポリペプチドを含む抗体である。ヒト抗体は、当該技術分野において知られている各種技術を使用して作製することができる。一実施形態において、ヒト抗体は、ファージライブラリーから選択され、このファージライブラリーがヒト抗体を発現する（Ｖａｕｇｈａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１４：３０９−３１４；Ｓｈｅｅｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，ＰＮＡＳ，（ＵＳＡ）９５：６１５７−６１６２；Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ａｎｄ  Ｗｉｎｔｅｒ，１９９１，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：３８１；Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１）。ヒト抗体はまた、トランスジェニック動物、例えば、内因性免疫グロブリン遺伝子が部分的にまたは完全に不活性化されているマウスに、ヒト免疫グロブリン遺伝子座を導入することによっても作製することができる。この手法は、米国特許第５，５４５，８０７号、同第５，５４５，８０６号、同第５，５６９，８２５号、同第５，６２５，１２６号、同第５，６３３，４２５号及び同第５，６６１，０１６号に記載されている。あるいは、標的抗原に対する抗体を産生するヒトＢリンパ球を不死化させることによってヒト抗体を作製してもよい（このようなＢリンパ球は、個体から回収してもよいし、インビトロで免疫化してもよい）。例えば、Ｃｏｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ，Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ，ｐ．７７（１９８５）；Ｂｏｅｒｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７（１）：８６−９５及び米国特許第５，７５０，３７３号を参照されたい。
【００８０】
本明細書で使用するとき、「カルシトニン遺伝子関連ペプチド」及び「ＣＧＲＰ」という用語は、任意の形態のカルシトニン遺伝子関連ペプチド及びＣＧＲＰの活性の少なくとも一部を保持するそのバリアントを指す。例えば、ＣＧＲＰは、α−ＣＧＲＰまたはβ−ＣＧＲＰであり得る。本明細書で使用するとき、ＣＧＲＰは、全ての哺乳動物種、例えば、ヒト、イヌ、ネコ、ウマ及びウシの天然配列ＣＧＲＰを含む。
【００８１】
本明細書で使用するとき、「抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体」（同義的に「抗ＣＧＲＰ抗体」と呼ぶ）は、ＣＧＲＰに結合し、ＣＧＲＰ生物活性及び／またはＣＧＲＰシグナル伝達によって媒介される下流経路（複数可）を阻害することができる抗体を指す。抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体は、ＣＧＲＰ生物活性を調節、遮断、拮抗、抑制または低減する（有意にを含む）か、あるいはさもなければ受容体結合及び／またはＣＧＲＰに対する細胞応答の誘発などのＣＧＲＰシグナル伝達によって媒介される下流経路を含むＣＧＲＰ経路を拮抗する抗体を包含する。本発明の目的上、「抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体」という用語は、ＣＧＲＰ自体、ＣＧＲＰ生物活性（頭痛の任意の側面をもたらす能力を含むが、これに限定されない）またはその生物活性の帰結が、任意の意味のある程度で実質的に無効にされ、低下し、または中和する、先に特定された用語、名称ならびに機能的状態及び特徴を全て包含することを明確に理解されたい。いくつかの実施形態において、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体は、ＣＧＲＰと結合し、ＣＧＲＰがＣＧＲＰ受容体に結合するのを妨げる。他の実施形態において、抗ＣＧＲＰ抗体は、ＣＧＲＰと結合し、ＣＧＲＰ受容体の活性化を妨げる。抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体の例については、本明細書中に記載する。
【００８２】
本明細書で使用するとき、「Ｇ１」及び「抗体Ｇ１」という用語は、同じ意味で用いられ、ＡＴＣＣ  ＰＴＡ−６８６７及びＡＴＣＣ  ＰＴＡ−６８６６の受託番号を有する発現ベクターによって産生される抗体を指す。重鎖及び軽鎖可変領域のアミノ酸配列を図５に示す。抗体Ｇ１のＣＤＲ部分（Ｃｈｏｔｈｉａ及びＫａｂａｔのＣＤＲを含む）を図５に図式的に示す。重鎖及び軽鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを配列番号９及び配列番号１０に示す。Ｇ１の特性評価については、実施例にて記載する。
【００８３】
「ポリペプチド」、「オリゴペプチド」、「ペプチド」及び「タンパク質」という用語は、本明細書にて同じ意味で用いられ、任意の長さのアミノ酸の高分子を指す。高分子は、直鎖でも分岐鎖でもよく、修飾アミノ酸を含み得、非アミノ酸によって遮られていてもよい。これらの用語はまた、自然にまたは介入により、例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化または任意の他の操作若しくは修飾（標識要素との結合など）により修飾されたアミノ酸高分子も包含する。また、この定義内には、例えば、アミノ酸の１つまたは複数の類似体（例えば、非天然アミノ酸などを含む）及び当該技術分野において知られている他の修飾を含有するポリペプチドも含まれる。本発明のポリペプチドは、抗体に基づくものであることから、これらのポリペプチドは、単鎖または会合した鎖として存在し得ることを理解されたい。
【００８４】
本明細書にて同じ意味で使用する「ポリヌクレオチド」または「核酸」は、任意の長さのヌクレオチドの高分子を指し、ＤＮＡ及びＲＮＡを含む。ヌクレオチドは、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、修飾ヌクレオチド若しくは塩基及び／またはそれらの類似体、またはＤＮＡ若しくはＲＮＡポリメラーゼによって高分子に取り込まれ得る任意の基質であってよい。ポリヌクレオチドは、メチル化されたヌクレオチド及びそれらの類似体などの修飾ヌクレオチドを含み得る。存在する場合、ヌクレオチド構造への修飾は、高分子の組み立ての前または後に加えることができる。ヌクレオチドの配列は、非ヌクレオチド構成要素によって遮られていてもよい。ポリヌクレオチドは、標識要素との結合などによって、重合後に更に修飾されてもよい。他の種類の修飾には、例えば、「キャップ」、類似体での天然ヌクレオチドの１つまたは複数の置換、ヌクレオチド間修飾、例えば、非荷電結合（例えば、メチルホスホネート、ホスホトリエステル、ホスホアミデート、カルバメートなど）による修飾及び荷電結合（例えば、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエートなど）による修飾、ペンダント部分、例えば、タンパク質（例えば、ヌクレアーゼ、毒素、抗体、シグナルペプチド、ｐｌｙ−Ｌ−リシンなど）を含有する修飾、インターカレータ（例えば、アクリジン、ソラレンなど）による修飾、キレート化剤（例えば、金属、放射性金属、ホウ素、酸化金属など）を含有する修飾、アルキル化剤を含有する修飾、修飾結合（例えば、αアノマー核酸など）による修飾、ならびにポリヌクレオチド（複数可）の非修飾形態が挙げられる。更に、糖中に通常存在するヒドロキシル基のうちのいずれかを、例えば、ホスホネート基、ホスフェート基によって置換してもよいし、標準的な保護基によって保護してもよいし、活性化して更なるヌクレオチドの更なる結合をもたらしてもよいし、固体支持体に結合させてもよい。５’及び３’末端のＯＨを、リン酸化することもできるし、アミン若しくは１〜２０個の炭素原子の有機キャッピング基部分で置換することもできる。他のヒドロキシルも同様に標準的な保護基に誘導化されてもよい。ポリヌクレオチドはまた、当該技術分野において一般に知られているリボースまたはデオキシリボースの糖の類似形態も含み得、例えば、２’−Ｏ−メチル−、２’−Ｏ−アリル、２’−フルオロ−または２’−アジド−リボース、炭素環糖類似体、α−アノマー糖、アラビノース、キシロースまたはリキソースなどのエピマー糖、ピラノース糖、フラノース糖、セドヘプツロース、非環式類似体及びメチルリボシドなどの脱塩基ヌクレオシド類似体が挙げられる。１つまたは複数のホスホジエステル結合は、他の結合基によって置換されてよい。これらの他の結合基には、ホスフェートがＰ（Ｏ）Ｓ（「チオエート」）、Ｐ（Ｓ）Ｓ（「ジチオエート」）、（Ｏ）ＮＲ２（「アミデート」）、Ｐ（Ｏ）Ｒ、Ｐ（Ｏ）ＯＲ’、ＣＯまたはＣＨ２（「ホルムアセタール」）で置換され、式中、各ＲまたはＲ’は、独立して、Ｈであるか、または置換若しくは非置換である、エーテル（−Ｏ−）結合を任意に含有するアルキル（１〜２０個のＣ）、アリール、アルケニル、シクロアルキル��シクロアルケニル若しくはアラルジル（ａｒａｌｄｙｌ）である実施形態が挙げられるが、これらに限定されない。ポリヌクレオチド中の全ての結合が同一である必要はない。先の記載は、ＲＮＡ及びＤＮＡを含む、本明細書にて言及する全てのポリヌクレオチドに適用される。
【００８５】
抗体の「可変領域」は、単独または組み合わせのいずかである、抗体軽鎖の可変領域または抗体重鎖の可変領域を指す。重鎖及び軽鎖の可変領域はそれぞれ、超可変領域としても知られている３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）によって連結された４つのフレームワーク領域（ＦＲ）からなる。各鎖中のＣＤＲは、ＦＲによって極めて近接してまとめられ、他の鎖のＣＤＲとともに、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する。ＣＤＲを特定するには、（１）異種間の配列多様性に基づくアプローチ（すなわち、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，（５ｔｈ  ｅｄ．，１９９１，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ  ＭＤ））、及び（２）抗原−抗体複合体の結晶学的研究に基づくアプローチ（Ａｌ−ｌａｚｉｋａｎｉ  ｅｔ  ａｌ（１９９７）Ｊ．Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．２７３：９２７−９４８））の少なくとも２つの技術がある。本明細書で使用するとき、ＣＤＲは、いずれか一方または両方のアプローチの組み合わせによって定義されるＣＤＲを指し得る。
【００８６】
抗体の「定常領域」は、単独または組み合わせのいずれかである、抗体軽鎖の定常領域または抗体重鎖の定常領域を指す。
【００８７】
抗体またはポリペプチドに「優先的に結合する」または「特異的に結合する」（本明細書にて同じ意味で用いる）エピトープは、当該技術分野において十分に理解されている用語であり、このような特異的または優先的結合を特定する方法も同様に当該技術分野において十分知られている。ある分子が、他の細胞または物質よりも、より頻繁に、より迅速に、より長い期間及び／またはより高い親和性で特定の細胞または物質と反応し、または会合する場合に、その分子は、「特異的結合」または「優先的結合」を示すと言う。ある抗体は、他の物質への結合よりも、より高い親和性、アビディティで、より容易に、及び／またはより長い期間、結合する場合、その抗体は、標的に「特異的に結合」または「優先的に結合」する。例えば、ＣＧＲＰエピトープに特異的または優先的に結合する抗体は、他のＣＧＲＰエピトープまたは非ＣＧＲＰエピトープへの結合よりも、より高い親和性、アビディティで、より容易に、及び／またはより長い期間このエピトープに結合する抗体である。この定義を読むことにより、例えば、第１の標的に特異的または優先的に結合する抗体（または部分若しくはエピトープ）が第２の標的に特異的または優先的に結合してもしなくてもよいこともまた理解される。したがって、「特異的結合」または「優先的結合」は、排他的な結合を必ずしも必要とするものではない（ただし、含む場合もある）。一般に、必ずしも必須ではないが、結合への言及は、優先的結合を意味する。
【００８８】
本明細書で使用するとき、「実質的に純粋」は、少なくとも５０％純粋（すなわち、汚染物質を含まない）、より好ましくは少なくとも９０％純粋、より好ましくは少なくとも９５％純粋、より好ましくは少なくとも９８％純粋、より好ましくは少なくとも９９％純粋である物質を指す。
【００８９】
「宿主細胞」は、ポリヌクレオチド挿入物を組み込むためのベクター（複数可）のレシピエントになり得る、またはレシピエントになっている個々の細胞または細胞培養物を含む。宿主細胞は、単一の宿主細胞の子孫を含み、その子孫は、自然発生的、偶発的または意図的な変異により、元の親細胞と必ずしも（形態学的にまたはゲノムＤＮＡ相補鎖において）完全に同一でなくてもよい。宿主細胞は、本発明のポリヌクレオチド（複数可）をインビボでトランスフェクションした細胞を含む。
【００９０】
「Ｆｃ領域」という用語は、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するために使用される。「Ｆｃ領域」は、天然配列のＦｃ領域またはバリアントＦｃ領域であってよい。免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界は変わり得るが、ヒトＩｇＧ重鎖のＦｃ領域は、通常、アミノ酸残基の位置Ｃｙｓ２２６またはＰｒｏ２３０からそのカルボキシル末端までに及ぶものと定義される。Ｆｃ領域の残基のナンバリングは、Ｋａｂａｔと同様のＥＵインデックスのナンバリングである。Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．，１９９１。免疫グロブリンのＦｃ領域は、一般に、２つの定常ドメインであるＣＨ２及びＣＨ３を含む。
【００９１】
本明細書で使用するとき、「Ｆｃ受容体」及び「ＦｃＲ」は、抗体のＦｃ領域に結合する受容体を記述する。好ましいＦｃＲは、天然配列のヒトＦｃＲである。更に、好ましいＦｃＲは、ＩｇＧ抗体に結合するもの（ガンマ受容体）であり、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ及びＦｃγＲＩＩＩサブクラスの受容体を含み、これらの受容体の対立遺伝子バリアント及び選択的スプライシングによる形態を含む。ＦｃγＲＩＩ受容体は、ＦｃγＲＩＩＡ（「活性型受容体」）及びＦｃγＲＩＩＢ（「抑制型受容体」）を含み、これらは、その細胞質ドメインが主に異なる類似のアミノ酸配列を有する。ＦｃＲは、Ｒａｖｅｔｃｈ  ａｎｄ  Ｋｉｎｅｔ，１９９１，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，９：４５７−９２；Ｃａｐｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ，４：２５−３４；ならびにｄｅ  Ｈａａｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．，１２６：３３０−４１にて概説されている。「ＦｃＲ」はまた、母親由来ＩｇＧの胎児への輸送を担う、胎児性受容体ＦｃＲｎを含む（Ｇｕｙｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９７６，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１１７：５８７；及びＫｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２４：２４９）。
【００９２】
「補体依存性細胞傷害」及び「ＣＤＣ」は、補体の存在下における標的の溶解を指す。補体活性化経路は、同種抗原と複合体を形成した分子（例えば、抗体）に補体系の第１成分（Ｃ１ｑ）が結合することによって開始される。補体活性化を評価するには、例えば、Ｇａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，２０２：１６３（１９９６）の記載の通りに、ＣＤＣアッセイを実施することができる。
【００９３】
「機能性Ｆｃ領域」は、天然配列のＦｃ領域の少なくとも１つのエフェクター機能を有する。例示的な「エフェクター機能」には、Ｃ１ｑ結合、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、Ｆｃ受容体結合、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、食作用、細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体；ＢＣＲ）の下方制御などが挙げられる。このようなエフェクター機能は、一般に、Ｆｃ領域と結合ドメイン（例えば、抗体可変ドメイン）を組み合わせる必要があり、このような抗体エフェクター機能を評価するためには、当該技術分野において知られている各種アッセイを用いて評価することができる。
【００９４】
「天然配列のＦｃ領域」は、天然に見られるＦｃ領域のアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含む。「バリアントＦｃ領域」は、少なくとも１つのアミノ酸修飾により天然配列のＦｃ領域のアミノ酸配列とは異なるが、天然配列のＦｃ領域の少なくとも１つのエフェクター機能を保持する、アミノ酸配列を含む。好ましくは、バリアントＦｃ領域は、天然配列のＦｃ領域または親ポリペプチドのＦｃ領域と比較して、天然配列のＦｃ領域または親ポリペプチドのＦｃ領域中に少なくとも１つのアミノ酸置換、例えば、約１〜約１０個のアミノ酸置換、好ましくは約１〜約５個のアミノ酸置換を有する。本明細書におけるバリアントＦｃ領域は、天然配列のＦｃ領域及び／または親ポリペプチドのＦｃ領域と、好ましくは少なくとも約８０％の配列同一性、最も好ましくは少なくとも約９０％の配列同一性、より好ましくは少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％の配列同一性を有する。
【００９５】
本明細書で使用するとき、「抗体依存性細胞媒介性細胞傷害」及び「ＡＤＣＣ」は、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）を発現する非特異的細胞傷害性細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球及びマクロファージ）が標的細胞上に結合した抗体を認識し、その後、標的細胞の溶解を引き起こす、細胞媒介性反応を指す。目的分子のＡＤＣＣ活性は、米国特許第５，５００，３６２号または同第５，８２１，３３７号に記載されているものなどのインビトロＡＤＣＣアッセイを用いて評価することができる。このようなアッセイに有用なエフェクター細胞には、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）及びＮＫ細胞が挙げられる。代替的にまたは追加的に、目的分子のＡＤＣＣ活性は、インビボで評価でき、例えば、Ｃｌｙｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，ＰＮＡＳ（ＵＳＡ），９５：６５２−６５６に記載されているものなどの動物モデルにて評価され得る。
【００９６】
本明細書で使用するとき、「治療」は、有益なまたは望ましい臨床結果を得るための手法である。本発明の目的上、有益なまたは望ましい臨床結果には、重症度の軽減を含めた頭痛のあらゆる側面の改善、疼痛強度及び他の随伴症状の緩和、発生頻度の減少、頭痛罹患者の生活の質の向上、ならびに頭痛を治療するのに必要な他の薬の用量の低減のうちの１つまたは複数が挙げられるが、これらに限定されない。片頭痛の他の関連症状には、悪心、嘔吐、光過敏、音過敏及び／または動作過敏が挙げられるが、これらに限定されない。群発頭痛の他の関連症状には、眼の下または周辺の腫脹、過剰な涙、赤目、鼻漏または鼻詰まり及び赤く紅潮した顔が挙げられるが、これらに限定されない。
【００９７】
頭痛の「発生を減少させる」とは、重症度の軽減（例えば、片頭痛用エルゴタミン、ジヒドロエルゴタミンまたはトリプタンを含む、当該状態のために一般に使用される他の薬剤及び／または治療薬の必要性及び／または量（例えば、曝露量）の低減を含み得る）、継続期間の短縮、及び／または頻度の低減（例えば、個体における次の反復性発作までの時間を遅延させ、または延長させることを含む）のいずれかを意味する。当業者であれば理解するように、治療に対する応答に関しては、個体で異なる場合があることから、例えば、「個体における頭痛の発生を減少させる方法」は、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体の投与により、この特定の個体における発生のこうした減少が生じる可能性があるという合理的な見込みに基づいた、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体の投与を表す。
【００９８】
頭痛または頭痛の１つ若しくは複数の症状を「改善する」とは、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体を投与しない場合と比較して、頭痛の１つ若しくは複数の症状が軽減することまたは良くなることを意味する。「改善する」にはまた、症状の継続期間が短くなることまたは減少することも含まれる。
【００９９】
本明細書で使用するとき、「頭痛を制御する」とは、個体における頭痛の１つ若しくは複数の症状の重症度若しくは継続期間または頭痛発作の頻度が維持されることまたは低減することを指す（治療前のレベルと比較して）。例えば、個体において、頭痛の継続期間若しくは重症度または発作頻度が、治療前のレベルと比較して、少なくともおよそ１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％または７０％のいずれか低減する。
【０１００】
本明細書で使用するとき、「頭痛時間」とは、対象が頭痛を経験している間の時間を指す。頭痛時間は、整数時間（例えば、１時間、２時間、３時間などの頭痛時間）または整数と端数の時間（例えば、０．５時間、１．２時間、２．６７時間などの頭痛時間）で表すことができる。１時間またはそれ以上の頭痛時間は、特定の時間期間に関して記載され得る。例えば、「１日の頭痛時間」は、１日の期間（例えば、２４時間）内に対象が経験する頭痛時間数を指し得る。別の例において、「１週間の頭痛時間」は、１週間の期間（例えば、７日間）内に対象が経験する頭痛時間数を指し得る。理解され得るように、１週間の期間は、暦週に対応していても、対応していなくてもよい。別の例において、「１ヶ月の頭痛時間」は、１ヶ月の期間内に対象が経験する頭痛時間数を指し得る。理解され得るように、１ヶ月の期間（例えば、２８〜３１日の期間）は、特定の月に応じて日数が変動し得、暦月に対応していても、対応していなくてもよい。更に別の例として、「１年の頭痛時間」は、１年の期間内に対象が経験する頭痛時間数を指し得る。理解され得るように、１年の期間（例えば、３６５日または３６６日の期間）は、特定の年に応じて日数が変動し得、暦年に対応していても、対応していなくてもよい。いくつかの実施形態において、頭痛時間は、特定の種類の頭痛（例えば、片頭痛、群発頭痛、慢性頭痛及び緊張性頭痛）に関するものであってよい。例えば、「片頭痛時間」は、対象が片頭痛を経験する時間を指し得る。
【０１０１】
本明細書で使用するとき、「頭痛日」は、対象が頭痛を経験する日を指し得る。頭痛日は、整数日（例えば、１日、２日、３日などの頭痛日）または整数と端数の日（例えば、０．５日、１．２日、２．６７日などの頭痛日）で表すことができる。１日またはそれ以上の頭痛日は、特定の時間期間に関して記載され得る。例えば、「１週間の頭痛日」は、１週間の期間（例えば、７日間）内に対象が経験する頭痛日数を指し得る。理解され得るように、１週間の期間は、暦週に対応していても、対応していなくてもよい。別の例において、「１ヶ月の頭痛日」は、１ヶ月の期間内に対象が経験する頭痛日数を指し得る。理解され得るように、１ヶ月の期間（例えば、２８〜３１日の期間）は、特定の月に応じて日数が変動し得、暦月に対応していても、対応していなくてもよい。更に別の例において、「１年の頭痛日」は、１年の期間内に対象が経験する頭痛日数を指し得る。理解され得るように、１年の期間（例えば、３６５日または３６６日の期間）は、特定の年に応じて日数が変動し得、暦年に対応していても、対応していなくてもよい。いくつかの実施形態において、頭痛日は、特定の種類の頭痛（例えば、片頭痛、群発頭痛、慢性頭痛及び緊張性頭痛）に関するものであってよい。例えば、「片頭痛日」は、対象が片頭痛を経験する日を指し得る。
【０１０２】
本明細書で使用するとき、頭痛の発症を「遅らせる」とは、当該疾患の進行を延期し、阻害し、減速させ、遅延し、安定化させ、及び／または先延ばしすることを意味する。この遅延は、疾患歴及び／または治療対象の個体に応じて、様々な時間の長さであり得る。当業者には明らかであるように、十分なまたは有意な遅延は、事実上、個体が頭痛（例えば、片頭痛）を発症しないという点において、予防を包含し得る。症状の発症を「遅らせる」方法は、当該方法を使用しない場合と比較して、所定の時間枠における症状の発症の確率を下げ、及び／または所定の時間枠における症状の程度を低減させる方法である。このような比較は、通常、統計的に有意な数の対象者を用いた臨床試験に基づく。
【０１０３】
頭痛の「発症」または「進行」とは、疾患の初期症状及び／または後続の進行を意味する。頭痛の発症は、当該技術分野においてよく知られている標準的な臨床技術を用いて、検出可能であり、評価することができる。しかしながら、発症はまた、検出し得ない進行も指す。本開示の目的上、発症または進行は、症状の生物学的過程を指す。「発症」は、発現、再発及び開始を含む。本明細書で使用するとき、頭痛の「開始」または「発現」は、初期発症及び／または再発を含む。
【０１０４】
本明細書で使用するとき、薬物、化合物または医薬組成物の「有効な用量」または「有効量」は、有益なまたは望ましい結果を達成するのに十分な量である。予防的使用に関して、有益なまたは望ましい結果には、疾患のリスクの排除若しくは低下、重症度の軽減、または疾患の生化学的、組織学的及び／または行動学的症状、その合併症及び疾患の発症中に呈示される中間的な病理学的表現型を含む、疾患の開始の遅延などの結果が挙げられる。治療的使用に関して、有益なまたは望ましい結果には、頭痛発作の疼痛強度、継続期間若しくは頻度の低減、ならびにその合併症及び疾患の発症中に呈示される中間的な病理学的表現型を含めた頭痛に起因する１つまたは複数の症状（生化学的、組織学的及び／または行動学的症状）の低減、疾患を患う人の生活の質の向上、疾患を治療するのに必要な他の薬の用量の低減、別の薬の効果の増大、及び／または患者の疾患進行の遅延などの臨床結果が挙げられる。有効な用量は、１回または複数回の投与で投与することができる。本開示の目的上、薬物、化合物または医薬組成物の有効な用量は、直接的または間接的に、予防的処置または治療的処置を実施するのに十分な量である。臨床的状況において理解されるように、薬物、化合物または医薬組成物の有効な用量は、別の薬物、化合物または医薬組成物と併せて達成されてもよいし、そうでなくてもよい。したがって、「有効な用量」は、１つまたは複数の治療用物質を投与する状況にて考慮され得、単一の作用物質は、１つまたは複数の他の作用物質と併せて望ましい結果を達成し得るか、または達成するのであれば、有効量で投与されたとみなされ得る。
【０１０５】
「個体」または「対象」は、哺乳動物、より好ましくはヒトである。哺乳類はまた、家畜、競技用動物、ペット、霊長類、ウマ、イヌ、ネコ、マウス及びラットが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１０６】
本明細書で使用するとき、「ベクター」は、宿主細胞において、１つ若しくは複数の目的の遺伝子または配列を送達し、かつ好ましくはそれらを発現させることができる構築物を意味する。ベクターの例には、ウイルスベクター、ネイキッドＤＮＡまたはＲＮＡ発現ベクター、プラスミド、コスミドまたはファジーベクター、カチオン性縮合剤と結合したＤＮＡまたはＲＮＡ発現ベクター、リポソーム内に封入されたＤＮＡまたはＲＮＡ発現ベクター、及び産生細胞などのある特定の真核細胞が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１０７】
本明細書で使用するとき、「発現制御配列」は、核酸の転写を誘導する核酸配列を意味する。発現制御配列は、構成性若しくは誘導性プロモーターなどのプロモーターまたはエンハンサーであり得る。発現制御配列は、転写される核酸配列に機能的に連結している。
【０１０８】
本明細書で使用するとき、「薬学的に許容可能な担体」または「薬学的に許容可能な賦形剤」は、活性成分と組み合わせたときに、その活性成分が生物活性を維持することができ、対象の免疫系と反応性でない、あらゆる物質を含む。例には、リン酸緩衝生理食塩水溶液、水、油／水エマルジョンなどのエマルジョン、及び各種の湿潤剤などの標準的な薬学的担体のいずれかが挙げられるが、これらに限定されない。エアロゾルまたは非経口的投与に好ましい希釈剤は、リン酸緩衝生理食塩水または通常（０．９％）生理食塩水である。このような担体を含む組成物は、よく知られている従来方法によって配合される（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏ，ｅｄ．，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ，１９９０；及びＲｅｍｉｎｇｔｏｎ，Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  ２０ｔｈ  Ｅｄ．Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，２０００を参照）。
【０１０９】
「ｋｏｎ」という用語は、本明細書で使用するとき、抗原に対する抗体の結合に関する速度定数を指すものとする。
【０１１０】
「ｋｏｆｆ」という用語は、本明細書で使用するとき、抗体／抗原複合体からの抗体の解離に関する速度定数を指すものとする。
【０１１１】
「ＫＤ」という用語は、本明細書で使用するとき、抗体−抗原相互作用の平衡解離定数を指すものとする。
【０１１２】
本明細書で使用するとき、「血管運動神経症状」という用語は、血管拡張に関連する状態を指すものとする。かかる血管拡張は、頭痛（前兆のあるまたは前兆のない片頭痛、片麻痺性片頭痛、慢性片頭痛、反復性片頭痛、高頻度反復性片頭痛、群発頭痛、片頭痛性神経痛、慢性頭痛、緊張性頭痛、他の医学的状態（感染症または腫瘍に起因する頭蓋内圧亢進など）から生じる頭痛、慢性発作性片側頭痛；器質的病変を伴わない各種頭痛；非血管性頭蓋内疾患に伴う頭痛；原因物質の投与またはその離脱に伴う頭痛；頭部以外の感染症に伴う頭痛；代謝障害に伴う頭痛；頭蓋骨、頸、眼、耳、鼻、副鼻腔、歯、口または他の顔面・頭蓋組織に起因する頭痛；脳神経痛；ならびに神経幹痛及び求心路遮断性疼痛）、とりわけ体温調節障害によって引き起こされる、顔面潮紅（またはホットフラッシュ）、コールドフラッシュ、不眠、睡眠障害、気分障害、過敏性、多汗、寝汗、日中の汗、疲労などに関連し得る、または関連する可能性がある。
【０１１３】
本明細書で使用するとき、「潮紅」、「顔面潮紅」及び「ホットフラッシュ」という用語は、当該技術分野で認識されている用語であり、対象における、通常は発汗を伴う突発性の皮膚潮紅から典型的になる、体温の断続的な乱れを指す。
【０１１４】
Ａ．血管運動神経症状及び／または頭痛を予防または治療するための方法
一態様において、本発明は、対象における少なくとも１つの血管運動神経症状を治療し、またはその発生を減少させる方法を提供する。別の態様において、本発明は、対象における頭痛（例えば、片頭痛）を治療し、またはその発生を減少させる方法を提供する。いくつかの実施形態において、方法は、ＣＧＲＰ経路を調節する、有効量の抗体（例えば、モノクローナル抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体）または当該抗体に由来するポリペプチドを個体に投与することを含む。いくつかの実施形態において、少なくとも１つの血管運動神経症状は、頭痛（例えば、片頭痛）及び／または顔面潮紅に関連し得る。
【０１１５】
別の態様において、本発明は、個体における少なくとも１つの血管運動神経症状を改善し、制御し、その発生を減少させ、またはその発症若しくは進行を遅らせるための方法を提供し、この方法は、その個体に有効量の抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体を投与することを含む。いくつかの実施形態において、少なくとも１つの血管運動神経症状は、頭痛（例えば、片頭痛）及び／または顔面潮紅に関連し得る。
【０１１６】
別の態様において、本発明は、個体における頭痛（例えば、片頭痛）または頭痛に関連する症状（例えば、下痢または光過敏）を改善し、制御し、その発生を減少させ、またはその発症若しくは進行を遅らせるための方法を提供し、この方法は、その個体に有効量のＣＧＲＰ経路を調節する抗体または抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体を、頭痛の治療に有用な少なくとも１つの追加の作用物質と組み合わせて投与することを含む。
【０１１７】
かかる追加の作用物質には、５−ＨＴアゴニスト及びＮＳＡＩＤが挙げられるが、これらに限定されない。例えば、抗体と少なくとも１つの追加の作用物質を同時に投与することができ、すなわち、その個々の治療的効果が重なり合うように時間的に十分近接して投与することができる。例えば、抗ＣＧＲＰ抗体と組み合わせて投与される５−ＨＴアゴニストまたはＮＳＡＩＤの量は、患者における頭痛の再発頻度を減少させ、またはこれらの作用物質の一方を投与せずにいずれか１つを投与した場合と比較してより長い持続効果をもたらすのに十分なものである必要がある。この手順は、頭痛を治療するために用いることができ、頭痛は、前兆のあるまたは前兆のない片頭痛、片麻痺性片頭痛、慢性片頭痛、反復性片頭痛、高頻度反復性片頭痛、群発頭痛、片頭痛性神経痛、慢性頭痛、緊張性頭痛、他の医学的状態（感染症または腫瘍に起因する頭蓋内圧亢進など）から生じる頭痛、慢性発作性片側頭痛；器質的病変を伴わない各種頭痛；非血管性頭蓋内疾患に伴う頭痛；原因物質の投与またはその離脱に伴う頭痛；頭部以外の感染症に伴う頭痛；代謝障害に伴う頭痛；頭蓋骨、頸、眼、耳、鼻、副鼻腔、歯、口または他の顔面・頭蓋組織に起因する頭痛；脳神経痛；ならびに神経幹痛及び求心路遮断性疼痛を含む、多様な種類のいずれかに該当するものである。
【０１１８】
抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体と組み合わせて投与され得る追加の作用物質の追加の非限定的な例には、以下のうちの１つまたは複数が挙げられる。
（ｉ）オピオイド鎮痛薬、例えば、モルヒネ、ヘロイン、ヒドロモルフォン、オキシモルフォン、レボルファノール、レバロルファン、メタドン、メペリジン、フェンタニル、コカイン、コデイン、ジヒドロコデイン、オキシコドン、ヒドロコドン、プロポキシフェン、ナルメフェン、ナロルフィン、ナロキソン、ナルトレキソン、ブプレノルフィン、ブトルファノール、ナルブフィンまたはペンタゾシン；
（ｉｉ）非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、例えば、アスピリン、ジクロフェナク、ジフルシナル、エトドラク、フェンブフェン、フェノプロフェン、フルフェニサール、フルルビプロフェン、イブプロフェン、インドメタシン、ケトプロフェン、ケトロラク、メクロフェナム酸、メフェナム酸、ナブメトン、ナプロキセン、オキサプロジン、フェニルブタゾン、ピロキシカム、スリンダク、トルメチン若しくはゾメピラク、シクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）阻害薬、セレコキシブ；ロフェコキシブ；メロキシカム；ＪＴＥ−５２２；Ｌ−７４５，３３７；ＮＳ３９８またはこれらの薬学的に許容可能な塩；
（ｉｉｉ）バルビツール酸系鎮静薬、例えば、アモバルビタール、アプロバルビタール、ブタバルビタール、ブタビタール（ｂｕｔａｂｉｔａｌ）、メホバルビタール、メタルビタール、メトヘキシタール、ペントバルビタール、フェノバルチタール（ｐｈｅｎｏｂａｒｔｉｔａｌ）、セコバルビタール、タルブタール、テアミラール（ｔｈｅａｍｙｌａｌ）またはチオペンタールまたはこれらの薬学的に許容可能な塩；
（ｉｖ）バルビツール酸系鎮痛薬、例えば、ブタルビタール若しくはこれらの薬学的に許容可能な塩またはブタルビタールを含む組成物；
（ｖ）鎮静作用を有するベンゾジアゼピン、例えば、クロルジアゼポキシド、クロラゼプ酸、ジアゼパム、フルラゼパム、ロラゼパム、オキサゼパム、テマゼパム若しくはトリアゾラムまたはこれらの薬学的に許容可能な塩；
（ｖｉ）鎮静作用を有するＨ１アンタゴニスト、例えば、ジフェンヒドラミン、ピリラミン、プロメタジン、クロルフェニラミン若しくはクロルシクリジンまたはこれらの薬学的に許容可能な塩；
（ｖｉｉ）グルテチミド、メプロバメート、メタカロン若しくはジクロラールフェナゾンまたはこれらの薬学的に許容可能な塩などの鎮静薬；
（ｖｉｉｉ）骨格筋弛緩薬、例えば、バクロフェン、カリソプロドール、クロルゾキサゾン、シクロベンザプリン、メトカルバモール若しくはオルフェナドリンまたはこれらの薬学的に許容可能な塩；
（ｉｘ）ＮＭＤＡ受容体アンタゴニスト、例えば、デキストロメトルファン（（＋）−３−ヒドロキシ−Ｎ−メチルモルフィナン）またはその代謝産物のデキストロルファン（（＋）−３−ヒドロキシ−Ｎ−メチルモルフィナン）、ケタミン、メマンチン、ピロロキノリンキノン若しくはｃｉｓ−４−（ホスホノメチル）−２−ピペリジンカルボン酸またはこれらの薬学的に許容可能な塩；
（ｘ）アルファ−アドレナリン作動薬、例えば、ドキサゾシン、タムスロシン、クロニジンまたは４−アミノ−６，７−ジメトキシ−２−（５−メタンスルホンアミド−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノール−２−イル）−５−（２−ピリジル）キナゾリン；
（ｘｉ）三環系抗うつ薬、例えば、デシプラミン、イミプラミン、アミトリプチリンまたはノルトリプチリン；
（ｘｉｉ）抗痙攣薬、例えば、カルバマゼピンまたはバルプロ酸；
（ｘｉｉｉ）タキキニン（ＮＫ）アンタゴニスト、特にＮＫ−３、ＮＫ−２またはＮＫ−１アンタゴニスト、例えば、（αＲ，９Ｒ）−７−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）ベンジル］−８，９，１０，１１−テトラヒドロ−９−メチル−５−（４−メチルフェニル）−７Ｈ−［１，４］ジアゾチノ［２，１−ｇ］［１，７］ナフチリジン−６−１３−ジオン（ＴＡＫ−６３７）、５−［［（２Ｒ，３Ｓ）−２−［（１Ｒ）−１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エトキシ−３−（４−フルオロフェニル）−４−モルホリニル］メチル］−１，２−ジヒドロ−３Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−オン（ＭＫ−８６９）、ラネピタント、ダピタントまたは３−［［２−メトキシ−５−（トリフルオロメトキシ）フェニル］メチルアミノ］−２−フェニル−ピペリジン（２Ｓ，３Ｓ）；
（ｘｉｖ）ムスカリンアンタゴニスト、例えば、オキシブチン（ｏｘｙｂｕｔｉｎ）、トルテロジン、プロピベリン、トロプシウム（ｔｒｏｐｓｉｕｍ）塩化物またはダリフェナシン；
（ｘｖ）ＣＯＸ−２阻害薬、例えば、セレコキシブ、ロフェコキシブまたはバルデコキシブ；
（ｘｖｉ）非選択的ＣＯＸ阻害薬（好ましくはＧＩ保護を有するもの）、例えば、ニトロフルルビプロフェン（ＨＣＴ−１０２６）；
（ｘｖｉｉ）コールタール鎮痛薬、特にパラセタモール；
（ｘｖｉｉｉ）ドロペリドールなどの神経弛緩薬；
（ｘｉｘ）バニロイド受容体アゴニスト（例えば、レシンフェラトキシン（ｒｅｓｉｎｆｅｒａｔｏｘｉｎ））またはアンタゴニスト（例えば、カプサゼピン）；
（ｘｉｘ）プロプラノロールなどのベータアドレナリン作動性薬；
（ｘｘ）メキシレチンなどの局所麻酔薬；
（ｘｘｉ）デキサメタゾンなどのコルチコステロイド；
（ｘｘｉｉ）セロトニン受容体アゴニストまたはアンタゴニスト；
（ｘｘｉｉｉ）コリン作動性（ニコチン）鎮痛薬；
（ｘｘｉｖ）トラマドール（商標）；
（ｘｘｖ）シルデナフィル、バルデナフィルまたはタラダフィル（ｔａｌａｄａｆｉｌ）などのＰＤＥＶ阻害薬；
（ｘｘｖｉ）ガバペンチンまたはプレガバリンなどのアルファ−２−デルタリガンド；
（ｘｘｖｉｉ）カナビノイド（ｃａｎａｂｉｎｏｉｄ）；及び
（ｘｘｖｉｉｉ）アミトリプチリン（Ｅｌａｖｉｌ）、トラゾドン（Ｄｅｓｙｒｅｌ）及びイミプラミン（Ｔｏｆｒａｎｉｌ）などの抗うつ薬またはフェニトイン（Ｄｉｌａｎｔｉｎ）若しくはカルバマゼピン（Ｔｅｇｒｅｔｏｌ）などの抗痙攣薬。
【０１１９】
当業者であれば、抗ＣＧＲＰ抗体と組み合わせて使用される特定の作用物質の適切な用量を決定することができるであろう。例えば、スマトリプタンは、約０．０１〜約３００ｍｇの用量で投与され得る。場合によって、スマトリプタンは、２ｍｇ〜３００ｍｇの用量で投与され得る。スマトリプタンの典型的な用量は、非経口以外で投与される場合、約２５〜約１００ｍｇであり、通常は約５０ｍｇが好ましく、非経口的に投与される場合、好ましい用量は、約６ｍｇである。しかしながら、これらの用量は、特定の患者または特定の併用療法にとって最適なものとなるように、当該技術分野において標準的な方法に従って変更されてよい。更に、例えば、セレコキシブを５０〜５００ｍｇの量で投与してもよい。
【０１２０】
別の態様において、本発明は、個体における顔面潮紅を改善し、制御し、その発生を減少させ、またはその発症若しくは進行を遅らせるための方法を提供し、この方法は、その個体に有効量の抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体を、顔面潮紅の治療に有用な少なくとも１つの追加の作用物質と組み合わせて投与することを含む。かかる追加の作用物質には、エストロゲン及び／またはいくつかのプロゲスチンを含むホルモン系治療薬が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１２１】
別の態様において、本開示は、対象における頭痛（例えば、片頭痛）を治療し、またはその発生を減少させる方法を提供し、この方法は、ＣＧＲＰ経路を調節する、ある量のモノクローナル抗体（例えば、モノクローナル抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体）を対象に複数日に投与することを含む。いくつかの実施形態において、複数日の各日に投与されるモノクローナル抗体の量は、０．１ｍｇ〜５０００ｍｇ、１ｍｇ〜５０００ｍｇ、１０ｍｇ〜５０００ｍｇ、１００ｍｇ〜５０００ｍｇ、１０００ｍｇ〜５０００ｍｇ、０．１ｍｇ〜４０００ｍｇ、１ｍｇ〜４０００ｍｇ、１０ｍｇ〜４０００ｍｇ、１００ｍｇ〜４０００ｍｇ、１０００ｍｇ〜４０００ｍｇ、０．１ｍｇ〜３０００ｍｇ、１ｍｇ〜３０００ｍｇ、１０ｍｇ〜３０００ｍｇ、１００ｍｇ〜３０００ｍｇ、１０００ｍｇ〜３０００ｍｇ、０．１ｍｇ〜２０００ｍｇ、１ｍｇ〜２０００ｍｇ、１０ｍｇ〜２０００ｍｇ、１００ｍｇ〜２０００ｍｇ、１０００ｍｇ〜２０００ｍｇ、０．１ｍｇ〜１０００ｍｇ、１ｍｇ〜１０００ｍｇ、１０ｍｇ〜１０００ｍｇまたは１００ｍｇ〜１０００ｍｇであってよい。いくつかの実施形態において、当該量は、１００〜２０００ｍｇである。
【０１２２】
別の態様において、本開示は、対象における頭痛（例えば、片頭痛）を治療し、またはその発生を減少させる方法を提供し、この方法は、ＣＧＲＰ経路を調節する量で、単回用量のモノクローナル抗体（例えば、モノクローナル抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体）を対象に投与することを含む。いくつかの実施形態において、単回用量は、０．１ｍｇ〜５０００ｍｇ、１ｍｇ〜５０００ｍｇ、１０ｍｇ〜５０００ｍｇ、１００ｍｇ〜５０００ｍｇ、１０００ｍｇ〜５０００ｍｇ、０．１ｍｇ〜４０００ｍｇ、１ｍｇ〜４０００ｍｇ、１０ｍｇ〜４０００ｍｇ、１００ｍｇ〜４０００ｍｇ、１０００ｍｇ〜４０００ｍｇ、０．１ｍｇ〜３０００ｍｇ、１ｍｇ〜３０００ｍｇ、１０ｍｇ〜３０００ｍｇ、１００ｍｇ〜３０００ｍｇ、１０００ｍｇ〜３０００ｍｇ、０．１ｍｇ〜２０００ｍｇ、１ｍｇ〜２０００ｍｇ、１０ｍｇ〜２０００ｍｇ、１００ｍｇ〜２０００ｍｇ、１０００ｍｇ〜２０００ｍｇ、０．１ｍｇ〜１０００ｍｇ、１ｍｇ〜１０００ｍｇ、１０ｍｇ〜１０００ｍｇまたは１００ｍｇ〜１０００ｍｇの抗体量であってよい。いくつかの実施形態において、単回用量は、１００〜２０００ｍｇの抗体量であってよい。
【０１２３】
別の態様において、本開示は、対象における少なくとも１つの血管運動神経症状を治療し、またはその発生を減少させる方法を提供し、この方法は、ＣＧＲＰ経路を調節する、ある量のモノクローナル抗体（例えば、モノクローナル抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体）を対象に複数日に投与することを含む。いくつかの実施形態において、複数日の各日に投与されるモノクローナル抗体の量は、０．１ｍｇ〜５０００ｍｇ、１ｍｇ〜５０００ｍｇ、１０ｍｇ〜５０００ｍｇ、１００ｍｇ〜５０００ｍｇ、１０００ｍｇ〜５０００ｍｇ、０．１ｍｇ〜４０００ｍｇ、１ｍｇ〜４０００ｍｇ、１０ｍｇ〜４０００ｍｇ、１００ｍｇ〜４０００ｍｇ、１０００ｍｇ〜４０００ｍｇ、０．１ｍｇ〜３０００ｍｇ、１ｍｇ〜３０００ｍｇ、１０ｍｇ〜３０００ｍｇ、１００ｍｇ〜３０００ｍｇ、１０００ｍｇ〜３０００ｍｇ、０．１ｍｇ〜２０００ｍｇ、１ｍｇ〜２０００ｍｇ、１０ｍｇ〜２０００ｍｇ、１００ｍｇ〜２０００ｍｇ、１０００ｍｇ〜２０００ｍｇ、０．１ｍｇ〜１０００ｍｇ、１ｍｇ〜１０００ｍｇ、１０ｍｇ〜１０００ｍｇまたは１００ｍｇ〜１０００ｍｇであってよい。いくつかの実施形態において、当該量は、１００〜２０００ｍｇである。
【０１２４】
別の態様において、本開示は、対象が経験する１ヶ月の頭痛時間数を減らす方法を提供し、この方法は、ＣＧＲＰ経路を調節する、ある量のモノクローナル抗体（例えば、モノクローナル抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体）を対象に投与することを含む。いくつかの実施形態において、モノクローナル抗体は、単回投与後、１ヶ月の頭痛時間数を少なくとも０．１、１、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００時間またはそれ以上の頭痛時間分減少させるのに有効な量であり得る。いくつかの実施形態において、モノクローナルは、単回投与後、１ヶ月の頭痛時間数を少なくとも２０時間の頭痛時間分減少させるのに有効な量であり得る。いくつかの実施形態において、モノクローナル抗体は、１ヶ月の頭痛時間数を少なくとも４０時間の頭痛時間分減少させるのに有効な量であり得る。いくつかの実施形態において、モノクローナル抗体は、単回投与後、１ヶ月の頭痛時間数を少なくとも０．１％、１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％またはそれ以上減少させるのに有効な量であり得る。いくつかの実施形態において、モノクローナルは、単回投与後、１ヶ月の頭痛時間数を少なくとも１５％減少させるのに有効な量であり得る。
【０１２５】
別の態様において、本開示は、対象が経験する１ヶ月の頭痛日数を減らす方法を提供し、この方法は、ＣＧＲＰ経路を調節する、ある量のモノクローナル抗体（例えば、モノクローナル抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体）を対象に投与することを含む。いくつかの実施形態において、モノクローナル抗体は、単回投与後、１ヶ月の頭痛日数を少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０日またはそれ以上の頭痛日分減少させるのに有効な量であり得る。いくつかの実施形態において、モノクローナル抗体は、単回投与後、１ヶ月の頭痛日数を少なくとも３日の頭痛日数分減少させるのに有効な量であり得る。いくつかの実施形態において、モノクローナル抗体は、単回投与後、１ヶ月の頭痛日間数を少なくとも０．１％、１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％またはそれ以上減少させるのに有効な量であり得る。
【０１２６】
別の態様において、本開示は、対象における抗頭痛薬の使用を減らす方法を提供し、この方法は、ＣＧＲＰ経路を調節するモノクローナル抗体（例えば、モノクローナル抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体）を対象に投与することを含む。いくつかの実施形態において、モノクローナル抗体は、対象の抗頭痛薬の月間使用を少なくとも０．１％、１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％またはそれ以上減少させるのに有効な量であり得る。いくつかの実施形態において、モノクローナル抗体は、対象の抗頭痛薬の月間使用を少なくとも１５％減少させるのに有効な量であり得る。抗頭痛薬は、本明細書に別途記載する抗頭痛薬の任意の種類であり得る。抗頭痛薬の非限定的な例としては、５−ＨＴ１アゴニスト（及び他の５−ＨＴ１部位に作用するアゴニスト）、トリプタン（例えば、スマトリプタン、ゾルミトリプタン、ナラトリプタン、リザトリプタン、エレトリプタン、アルモトリプタン、アフロバトリプタン（ａｆｒｏｖａｔｒｉｐｔａｎ））、麦角アルカロイド（例えば、エルゴタミン酒石酸塩、エルゴノビンマレイン酸塩及びエルゴロイドメシル酸塩（例えば、ジヒドロエルゴコルニン、ジヒドロエルゴクリスチン、ジヒドロエルゴクリプチン及びジヒドロエルゴタミンメシル酸塩（ＤＨＥ４５））、及び非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）（例えば、アスピリン、ジクロフェナク、ジフルシナル、エトドラク、フェンブフェン、フェノプロフェン、フルフェニサール、フルルビプロフェン、イブプロフェン、インドメタシン、ケトプロフェン、ケトロラク、メクロフェナム酸、メフェナム酸、ナブメトン、ナプロキセン、オキサプロジン、フェニルブタゾン、ピロキシカム、スリンダク、トルメチンまたはゾメピラク、シクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）阻害薬、セレコキシブ；ロフェコキシブ；メロキシカム；ＪＴＥ−５２２；Ｌ−７４５，３３７；ＮＳ３９８またはこれらの薬学的に許容可能な塩）、オピエート（例えば、オキシコドン）及びβ−アドレナリン遮断薬（例えば、プロプラノロール）が挙げられる。
【０１２７】
本明細書に記載の全ての方法に関して、抗体（例えば、ＣＧＲＰ経路を調節するモノクローナル抗体、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体、モノクローナル抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体）への言及には、これらの作用物質のうちの１つまたは複数を含む組成物も包含される。したがって、このような組成物を、本明細書に記載の抗体に関する方法に従って用いることができる。これらの組成物は、本明細書に別途記載する薬学的に許容可能な賦形剤などの好適な賦形剤を更に含み得る。本発明は、単独で用いてもよいし、従来の他の治療法と組み合わせて用いてもよい。
【０１２８】
本明細書に記載の抗体（例えば、モノクローナル抗体、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体、モノクローナル抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体）は、任意の治療用量で、任意の好適な経路により、任意の好適な配合で個体または対象に投与することができる。当業者であれば、本明細書に記載する例が限定ではなく、利用可能な技術の例示を意図することは明らかであろう。したがって、いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗体は、既知の方法に従って、例えば、静脈内投与（例えば、ボーラスまたは一定期間にわたる連続注入）、筋肉内、腹腔内、脳脊髄内、皮下、関節内、舌下、動脈内、滑液嚢内、吹送、髄腔内、経口、吸入、経鼻（例えば、吸入ありまたは吸入なし）、頬側、経直腸、経皮、心臓内、骨内、皮内、経粘膜、経膣、硝子体内、関節周囲内、局部、皮膚上または局所経路を介して、個体に投与することができる。投与は、例えば、静脈内投与の全身投与であっても、局所投与であってもよい。液剤には、ジェットネブライザー及び超音波ネブライザーを含む、市販のネブライザーが投与に有用である。液剤は、直接霧化することもできるし、凍結乾燥粉末を再構成後に霧化することもできる。あるいは、本明細書に記載の抗体は、フルオロカーボン配合物及び定量吸入器を用いてエアロゾル化することもできるし、凍結乾燥して粉砕した粉末として吸入されてもよい。
【０１２９】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗体は、部位特異的または標的化局所送達技術によって投与することができる。部位特異的または標的化局所送達技術には、種々の埋め込み可能な抗体の貯蔵源、注入カテーテル、留置カテーテル若しくはニードルカテーテルなどの局所送達カテーテル、人工血管、外膜ラップ、シャント及びステント若しくは他の埋め込み可能な装置、部位特異的な担体、直接注射または直接適用が挙げられる。例えば、ＰＣＴ国際公開番号ＷＯ００／５３２１１及び米国特許第５，９８１，５６８号を参照されたい。
【０１３０】
本明細書に記載する抗体の種々の製剤を投与に用いることができる。いくつかの実施形態において、抗体は、そのまま投与されてよい。いくつかの実施形態において、抗体及び薬学的に許容可能な賦形剤は、種々の製剤であってよい。薬学的に許容可能な賦形剤は、当該技術分野において知られており、薬理学的に有効な物質の投与を促進する、比較的不活性な物質である。例えば、賦形剤は、形態または粘稠性を与えることができ、または希釈剤として作用することができる。好適な賦形剤には、安定化剤、湿潤乳化剤、浸透圧モル濃度を変更するための塩、カプセル化剤、緩衝剤及び皮膚浸透助剤が挙げられるが、これらに限定されない。非経口及び非経口以外の薬物送達のための賦形剤及び製剤化については、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ，Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  ２０ｔｈ  Ｅｄ．Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ（２０００）に記載されている。
【０１３１】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗体を含む、これらの作用物質は、注入（例えば、腹腔内、静脈内、皮下、筋肉内など）による投与用に製剤化されてよい。したがって、これらの作用物質は、生理食塩水、リンゲル液、ブドウ糖液などの薬学的に許容可能なビヒクルと組み合わせることができる。具体的な投与レジメン、すなわち、用量、タイミング及び反復は、特定の個体及びその個体の病歴によって異なる。
【０１３２】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗体を含む、これらの作用物質は、末梢投与用に製剤化されてよい。かかる製剤は、静脈内及び皮下を含む、任意の好適な末梢経路を介して末梢から投与することができる。末梢投与用に調製される作用物質には、中枢的、脊髄的、鞘内またはＣＮＳに直接的に送達されない物質、薬剤及び／または抗体を含むことができる。末梢投与経路の非限定的な例としては、経口、舌下、頬側、局所、経直腸、吸入、経皮、皮下、静脈内、動脈内、筋肉内、心臓内、骨内、皮内、腹腔内、経粘膜、経膣、硝子体内、関節内、関節周囲内、局部または皮膚上である経路が挙げられる。
【０１３３】
本開示に従って使用される抗体の治療用製剤は、保存及び／または使用のために、所望の純度を有する抗体を、任意選択の薬学的に許容可能な担体、賦形剤または安定剤と混合することによって、調製することができ（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ，Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  ２０ｔｈ  Ｅｄ．Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ（２０００））、場合によって、凍結乾燥製剤または水溶液の形態であってよい。許容可能な担体、賦形剤または安定剤は、使用される用量及び濃度でレシピエントに対して非毒性である。抗体の治療用製剤は、１つまたは複数の薬学的に許容可能な担体、賦形剤または安定剤を含み得、これらの種類の非限定的な例には、リン酸、クエン酸及び他の有機酸などの緩衝剤；塩化ナトリウムなどの塩；アスコルビン酸及びメチオニンを含む酸化防止剤；保存剤（オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド；ヘキサメトニウムクロリド；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチルまたはベンジルアルコール；メチルまたはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；及びｍ−クレゾールなど）；低分子量（約１０残基未満）のポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン若しくは免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、メチオニン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン若しくはリシンなどのアミノ酸（例えば、０．１ｍＭ〜１００ｍＭ、０．１ｍＭ〜１ｍＭ、０．０１ｍＭ〜５０ｍＭ、１ｍＭ〜５０ｍＭ、１ｍＭ〜３０ｍＭ、１ｍＭ〜２０ｍＭ、１０ｍＭ〜２５ｍＭの濃度）；グルコース、マンノース若しくはデキストリンを含む単糖、二糖及び他の炭水化物；ＥＤＴＡ（例えば、ＥＤＴＡ二ナトリウム二水和物）などのキレート剤（例えば、０．００１ｍｇ／ｍＬ〜１ｍｇ／ｍＬ、０．００１ｍｇ／ｍＬ〜１ｍｇ／ｍＬ、０．００１ｍｇ／ｍＬ〜０．１ｍｇ／ｍＬ、０．００１ｍｇ／ｍＬ〜０．０１ｍｇ／ｍＬ、０．０１ｍｇ／ｍＬ〜０．１ｍｇ／ｍＬの濃度）；スクロース、マンニトール、トレハロース若しくはソルビトールなどの糖（例えば、１ｍｇ／ｍＬ〜５００ｍｇ／ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬ〜２００ｍｇ／ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬ〜１００ｍｇ／ｍＬ、５０ｍｇ／ｍＬ〜１５０ｍｇ／ｍＬの濃度）；ナトリウムなどの塩生成対イオン；金属複合体（例えば、Ｚｎ−タンパク質複合体）；及び／またはＴＷＥＥＮ（商標）（例えば、ポリソルベート（例えば、ポリソルベート２０、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０、ポリソルベート８０））、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）若しくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤（例えば、０．０１ｍｇ／ｍＬ〜１０ｍｇ／ｍＬ、０．０１ｍｇ／ｍＬ〜１ｍｇ／ｍＬ、０．１ｍｇ／ｍＬ〜１ｍｇ／ｍＬ、０．０１ｍｇ／ｍＬ〜０．５ｍｇ／ｍＬの濃度）が挙げられる。
【０１３４】
抗体製剤は、様々な物理的性質のいずれかの点から特性評価され得る。例えば、液体の抗体製剤は、治療的有効性、安全性及び保存に好適な任意のｐＨを有し得る。例えば、液体の抗体製剤のｐＨは、ｐＨ４〜ｐＨ約９、ｐＨ５〜ｐＨ８、ｐＨ５〜ｐＨ７またはｐＨ６〜ｐＨ８であってよい。いくつかの実施形態において、液体の抗体製剤は、３．０、３．５、４．０、４．５、５．０、５．５、６．０、６．５、７．０、７．５、８．０、８．５、９．０、９．５若しくは１０以上または以下のｐＨを有し得る。
【０１３５】
別の例として、液体の抗体製剤は、治療的有効性、安全性及び保存に好適な任意の粘度を有し得る。例えば、液体の抗体製剤の粘度は、２５℃で、０．５ｃＰ（センチポアズ）〜１００ｃＰ、１ｃＰ〜５０ｃＰ、１ｃＰ〜２０ｃＰ、１ｃＰ〜１５ｃＰまたは５ｃＰ〜１５ｃＰであってよい。いくつかの実施形態において、液体の抗体製剤は、２５℃で、０．５ｃＰ、１ｃＰ、１．２ｃＰ、１．４ｃＰ、１．６ｃＰ、１．８ｃＰ、２．０ｃＰ、２．２ｃＰ、２．４ｃＰ、２．６ｃＰ、２．８ｃＰ、３．０ｃＰ、３．２ｃＰ、３．４ｃＰ、３．６ｃＰ、３．８ｃＰ、４．０ｃＰ、４．２ｃＰ、４．４ｃＰ、４．６ｃＰ、４．８ｃＰ、５．０ｃＰ、５．２ｃＰ、５．４ｃＰ、５．６ｃＰ、５．８ｃＰ、６．０ｃＰ、６．２ｃＰ、６．４ｃＰ、６．６ｃＰ、６．８ｃＰ、７．０ｃＰ、７．２ｃＰ、７．４ｃＰ、７．６ｃＰ、７．８ｃＰ、８．０ｃＰ、８．２ｃＰ、８．４ｃＰ、８．６ｃＰ、８．８ｃＰ、９．０ｃＰ、９．２ｃＰ、９．４ｃＰ、９．６ｃＰ、９．８ｃＰ、１０．０ｃＰ、１０．２ｃＰ、１０．４ｃＰ、１０．６ｃＰ、１０．８ｃＰ、１１．０ｃＰ、１１．２ｃＰ、１１．４ｃＰ、１１．６ｃＰ、１１．８ｃＰ、１２．０ｃＰ、１２．２ｃＰ、１２．４ｃＰ、１２．６ｃＰ、１２．８ｃＰ、１３．０ｃＰ、１３．２ｃＰ、１３．４ｃＰ、１３．６ｃＰ、１３．８ｃＰ、１４．０ｃＰ、１４．２ｃＰ、１４．４ｃＰ、１４．６ｃＰ、１４．８ｃＰまたは１５．０ｃＰの粘度を有し得、粘度はこれ以上でもこれ以下であってもよい。
【０１３６】
別の例において、液体の抗体製剤は、治療的有効性、安全性及び保存に好適な任意の導電率を有し得る。例えば、液体の抗体製剤の導電率は、０．１ｍＳ／ｃｍ（ミリジーメンス毎センチメートル）〜１５ｍＳ／ｃｍ、０．１ｍＳ／ｃｍ〜１０ｍＳ／ｃｍ、０．１ｍＳ／ｃｍ〜５ｍＳ／ｃｍ、０．１ｍＳ／ｃｍ〜２ｍＳ／ｃｍまたは０．１ｍＳ／ｃｍ〜１．５ｍＳ／ｃｍであってよい。いくつかの実施形態において、液体の抗体製剤は、０．１９ｍＳ／ｃｍ、０．５９ｍＳ／ｃｍ、１．０９ｍＳ／ｃｍ、１．１９ｍＳ／ｃｍ、１．２９ｍＳ／ｃｍ、１．３９ｍＳ／ｃｍ、１．４９ｍＳ／ｃｍ、１．５９ｍＳ／ｃｍ、１．６９ｍＳ／ｃｍ、１．７９ｍＳ／ｃｍ、１．８９ｍＳ／ｃｍ、１．９９ｍＳ／ｃｍ、２．０９ｍＳ／ｃｍ、２．１９ｍＳ／ｃｍ、２．２９ｍＳ／ｃｍ、２．３９ｍＳ／ｃｍ、２．４９ｍＳ／ｃｍ、２．５９ｍＳ／ｃｍ、２．６９ｍＳ／ｃｍ、２．７９ｍＳ／ｃｍ、２．８９ｍＳ／ｃｍ、２．９９ｍＳ／ｃｍ、３．０９ｍＳ／ｃｍ、３．１９ｍＳ／ｃｍ、３．２９ｍＳ／ｃｍ、３．３９ｍＳ／ｃｍ、３．４９ｍＳ／ｃｍ、３．５９ｍＳ／ｃｍ、３．６９ｍＳ／ｃｍ、３．７９ｍＳ／ｃｍ、３．８９ｍＳ／ｃｍ、３．９９ｍＳ／ｃｍ、４．０９ｍＳ／ｃｍ、４．１９ｍＳ／ｃｍ、４．２９ｍＳ／ｃｍ、４．３９ｍＳ／ｃｍ、４．４９ｍＳ／ｃｍ、４．５９ｍＳ／ｃｍ、４．６９ｍＳ／ｃｍ、４．７９ｍＳ／ｃｍ、４．８９ｍＳ／ｃｍ、４．９９ｍＳ／ｃｍ、５．０９ｍＳ／ｃｍ、６．０９ｍＳ／ｃｍ、６．５９ｍＳ／ｃｍ、７．０９ｍＳ／ｃｍ、７．５９ｍＳ／ｃｍ、８．０９ｍＳ／ｃｍ、８．５９ｍＳ／ｃｍ、９．０９ｍＳ／ｃｍ、９．５９ｍＳ／ｃｍ、１０．０９ｍＳ／ｃｍ、１０．５９ｍＳ／ｃｍ、１１．０９ｍＳ／ｃｍ、１１．５９ｍＳ／ｃｍ、１２．０９ｍＳ／ｃｍ、１２．５９ｍＳ／ｃｍ、１３．０９ｍＳ／ｃｍ、１３．５９ｍＳ／ｃｍ、１４．０９ｍＳ／ｃｍ、１４．５９ｍＳ／ｃｍまたは１５．０９ｍＳ／ｃｍの導電率を有し得、導電率はこれ以上でもこれ以下であってもよい。
【０１３７】
別の例において、液体の抗体製剤は、治療的有効性、安全性及び保存に好適な任意のモル浸透圧濃度を有し得る。例えば、液体の抗体製剤のモル浸透圧濃度は、５０ｍＯｓｍ／ｋｇ（ミリオスモル毎キログラム）〜５０００ｍＯｓｍ／ｋｇ、５０ｍＯｓｍ／ｋｇ〜２０００ｍＯｓｍ／ｋｇ、５０ｍＯｓｍ／ｋｇ〜１０００ｍＯｓｍ／ｋｇ、５０ｍＯｓｍ／ｋｇ〜７５０ｍＯｓｍ／ｋｇまたは５０ｍＯｓｍ／ｋｇ〜５００ｍＯｓｍ／ｋｇであってよい。いくつかの実施形態において、液体の抗体製剤は、５０ｍＯｓｍ／ｋｇ、６０ｍＯｓｍ／ｋｇ、７０ｍＯｓｍ／ｋｇ、８０ｍＯｓｍ／ｋｇ、９０ｍＯｓｍ／ｋｇ、１００ｍＯｓｍ／ｋｇ、１２０ｍＯｓｍ／ｋｇ、１４０ｍＯｓｍ／ｋｇ、１６０ｍＯｓｍ／ｋｇ、１８０ｍＯｓｍ／ｋｇ、２００ｍＯｓｍ／ｋｇ、２２０ｍＯｓｍ／ｋｇ、２４０ｍＯｓｍ／ｋｇ、２６０ｍＯｓｍ／ｋｇ、２８０ｍＯｓｍ／ｋｇ、３００ｍＯｓｍ／ｋｇ、３２０ｍＯｓｍ／ｋｇ、３４０ｍＯｓｍ／ｋｇ、３６０ｍＯｓｍ／ｋｇ、３８０ｍＯｓｍ／ｋｇ、４００ｍＯｓｍ／ｋｇ、４２０ｍＯｓｍ／ｋｇ、４４０ｍＯｓｍ／ｋｇ、４６０ｍＯｓｍ／ｋｇ、４８０ｍＯｓｍ／ｋｇ、５００ｍＯｓｍ／ｋｇ、５２０ｍＯｓｍ／ｋｇ、５４０ｍＯｓｍ／ｋｇ、５６０ｍＯｓｍ／ｋｇ、５８０ｍＯｓｍ／ｋｇ、６００ｍＯｓｍ／ｋｇ、６２０ｍＯｓｍ／ｋｇ、６４０ｍＯｓｍ／ｋｇ、６６０ｍＯｓｍ／ｋｇ、６８０ｍＯｓｍ／ｋｇ、７００ｍＯｓｍ／ｋｇ、７２０ｍＯｓｍ／ｋｇ、７４０ｍＯｓｍ／ｋｇ、７６０ｍＯｓｍ／ｋｇ、７８０ｍＯｓｍ／ｋｇ、８００ｍＯｓｍ／ｋｇ、８２０ｍＯｓｍ／ｋｇ、８４０ｍＯｓｍ／ｋｇ、８６０ｍＯｓｍ／ｋｇ、８８０ｍＯｓｍ／ｋｇ、９００ｍＯｓｍ／ｋｇ、９２０ｍＯｓｍ／ｋｇ、９４０ｍＯｓｍ／ｋｇ、９６０ｍＯｓｍ／ｋｇ、９８０ｍＯｓｍ／ｋｇ、１０００ｍＯｓｍ／ｋｇ、１０５０ｍＯｓｍ／ｋｇ、１１００ｍＯｓｍ／ｋｇ、１１５０ｍＯｓｍ／ｋｇ、１２００ｍＯｓｍ／ｋｇ、１２５０ｍＯｓｍ／ｋｇ、１３００ｍＯｓｍ／ｋｇ、１３５０ｍＯｓｍ／ｋｇ、１４００ｍＯｓｍ／ｋｇ、１４５０ｍＯｓｍ／ｋｇ、１５００ｍＯｓｍ／ｋｇのモル浸透圧濃度を有し得、モル浸透圧濃度はこれ以上でもこれ以下であってもよい。
【０１３８】
抗体を含有するリポソームは、当該技術分野において知られている方法、例えば、Ｅｐｓｔｅｉｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８２：３６８８（１９８５）；Ｈｗａｎｇ，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７７：４０３０（１９８０）；ならびに米国特許第４，４８５，０４５号及び同第４，５４４，５４５号に記載されている方法によって調製することができる。循環時間を向上させたリポソームについては、米国特許第５，０１３，５５６号に開示されている。特に有用なリポソームは、ホスファチジルコリン、コレステロール及びＰＥＧ誘導体化ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥＧ−ＰＥ）を含む脂質組成物を用いて、逆相蒸発法によって作製することができる。定めた孔径のフィルターを通してリポソームを押し出すことで、所望の直径を有するリポソームが得られる。
【０１３９】
活性成分はまた、例えば、コアセルベーション技術若しくは界面重合によって調製されたマイクロカプセル、例えば、それぞれヒドロキシメチルセルロース若しくはゼラチンのマイクロカプセル及びポリ（メチルメタシレート（ｍｅｔｈｙｌｍｅｔｈａｃｙｌａｔｅ））マイクロカプセル中、コロイド状薬物送達系（例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルション、ナノ粒子及びナノカプセル）中、またはマクロエマルション中に閉じ込めてもよい。こうした技術は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ，Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  ２０ｔｈ  Ｅｄ．Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ（２０００）に開示されている。
【０１４０】
徐放性調製物を調製してもよい。徐放性調製物の好適な例には、抗体を含有する固体疎水性ポリマーの半透過性マトリクスが挙げられ、このマトリクスは、成形物品の形態、例えば、フィルムまたはマイクロカプセルである。徐放性マトリクスの例には、ポリエステル、ヒドロゲル（例えば、ポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリレート）またはポリ（ビニルアルコール））、ポリラクチド（米国特許第３，７７３，９１９号）、Ｌ−グルタミン酸とＬ−グルタミン酸７−エチルのコポリマー、非分解性エチレン−ビニルアセテート、ＬＵＰＲＯＮ  ＤＥＰＯＴ（商標）（乳酸−グリコール酸コポリマー及び酢酸リュープロリドからなる注入可能なミクロスフェア）などの分解性乳酸−グリコール酸コポリマー、スクロース酢酸イソブチル及びポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸が挙げられる。
【０１４１】
インビボ投与に使用する製剤は、一般に、滅菌したものである必要がある。これは、例えば、滅菌濾過膜を通す濾過によって容易に行うことができる。治療用抗体組成物は、一般に、滅菌アクセスポートを有する容器、例えば、皮下注射針によって貫通可能な栓を有する静脈注射用溶液バッグまたはバイアル中に入れられる。
【０１４２】
本発明による組成物は、経口、非経口若しくは経直腸投与または吸入若しくは吹送による投与のための錠剤、丸剤、カプセル剤、散剤、粒剤、液剤若しくは懸濁剤または坐剤などの単位剤形であってよい。場合によって、単位剤形は、その単位用量を対象に投与するのに有用なプレフィルド容器（例えば、プレフィルドシリンジ）で提供してもよい。
【０１４３】
錠剤などの固形組成物を調製するために、主要な活性成分と、薬学的担体（例えば、コーンスターチ、ラクトース、ショ糖、ソルビトール、タルク、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、リン酸ニカルシウムまたはガムなどの従来の錠剤化成分）及び他の薬学的希釈剤（例えば、水）とを混合して、本発明の化合物または非毒性の薬学的に許容可能なその塩の均一混合物を含有する固形製剤前組成物を形成することができる。これらの製剤前組成物を均一であると称する場合、これは、活性成分が当該組成物全体に均一に分散されており、そのため、組成物を錠剤、丸剤及びカプセル剤などの等しく有効な単位剤形に容易に分割することができることを意味する。次いで、この固形製剤前組成物を、０．１〜約５００ｍｇの本発明の活性成分を含有する、上述した種類の単位剤形に分割する。新規組成物の錠剤または丸剤をコーティングし、または別の方法で調合して、持続性作用の利点をもたらす剤形を提供することができる。例えば、錠剤または丸剤は、内側投与成分及び外側投与成分を含み、外側投与成分が内側投与成分を包む形態にすることができる。この２つの成分は、胃内での分解に抵抗するように働き、内側成分を完全なまま十二指腸に到達させるか、または内側成分の放出を遅延させられる腸溶性の層により隔てることができる。このような腸溶性層またはコーティングには、様々な材料を使用することができ、このような材料には、多数のポリマー酸ならびにポリマー酸とセラック、セチルアルコール及び酢酸セルロースなどの材料との混合物が挙げられる。
【０１４４】
好適な界面活性剤には、特に、ポリオキシエチレンソルビタン（例えば、Ｔｗｅｅｎ（商標）２０、４０、６０、８０または８５）及び他のソルビタン（例えば、Ｓｐａｎ（商標）２０、４０、６０、８０または８５）などの非イオン性剤が挙げられる。界面活性剤を含む組成物は、好都合には、０．０５〜５％の界面活性剤を含み、０．１〜２．５％であり得る。必要であれば、他の成分、例えば、マンニトールまたは他の薬学的に許容可能なビヒクルを加えてもよいことが理解されよう。
【０１４５】
好適な乳剤は、Ｉｎｔｒａｌｉｐｉｄ（商標）、Ｌｉｐｏｓｙｎ（商標）、Ｉｎｆｏｎｕｔｒｏｌ（商標）、Ｌｉｐｏｆｕｎｄｉｎ（商標）及びＬｉｐｉｐｈｙｓａｎ（商標）などの市販の脂肪乳剤を用いて調製することができる。活性成分は、予め混合した乳剤組成物中に溶解させてもよいし、あるいは、油（例えば、ダイズ油、サフラワー油、綿実油、ゴマ油、コーン油またはアーモンド油）中に溶解させてもよく、これをリン脂質（例えば、卵のリン脂質、大豆のリン脂質または大豆レシチン）及び水と混合すると乳剤が形成される。他の成分、例えば、グリセロールまたはグルコースを加えて、乳剤の張度を調整してもよいことが理解されよう。好適な乳剤は、通常、最大２０％、例えば、５〜２０％の油を含む。脂肪乳剤は、０．１〜１．０ｌｍ、特に０．１〜０．５ｌｍの脂肪滴を含み得、５．５〜８．０の範囲のｐＨを有し得る。
【０１４６】
乳剤組成物は、抗体と、Ｉｎｔｒａｌｉｐｉｄ（商標）またはその成分（ダイズ油、卵のリン脂質、グリセロール及び水）とを混合することによって調製されたものであってよい。
【０１４７】
吸入または吹送のための組成物には、薬学的に許容可能な水性溶媒若しくは有機溶媒またはその混合物中の液剤及び懸濁剤、ならびに散剤が挙げられる。液体または固形組成物は、上記の好適な薬学的に許容可能な賦形剤を含有し得る。いくつかの実施形態において、組成物は、局所的または全身的な効果を得るために、経口または経鼻の呼吸経路によって投与される。好ましくは滅菌した薬学的に許容可能な溶媒中の組成物を、ガスを用いて霧化することができる。霧化した液剤を霧化装置から直接吸い込んでもよいし、霧化装置にフェイスマスク、テントまたは間欠的陽圧呼吸器を取り付けてもよい。液剤、懸濁剤または散剤組成物は、当該製剤を適切な方法で送達する装置から、好ましくは経口または経鼻により投与してもよい。
【０１４８】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗体（例えば、ＣＧＲＰ経路を調節するモノクローナル抗体、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体、モノクローナル抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体）を含む製剤は、０．１ｍｇ〜３０００ｍｇ、１ｍｇ〜１０００ｍｇ、１００〜１０００ｍｇまたは１００〜５００ｍｇの範囲の抗体量で、任意の好適な投与経路用に調製することができる。いくつかの場合、本明細書に記載の抗体（例えば、ＣＧＲＰ経路を調節するモノクローナル抗体、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体、モノクローナル抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体）を含む製剤は、多くともまたは少なくとも０．１ｍｇ、１ｍｇ、１００ｍｇ、１ｍｇ、１０ｍｇ、２５ｍｇ、５０ｍｇ、７５ｍｇ、１００ｍｇ、１２５ｍｇ、１５０ｍｇ、１７５ｍｇ、２００ｍｇ、２２５ｍｇ、２５０ｍｇ、２７５ｍｇ、３００ｍｇ、３２５ｍｇ、３５０ｍｇ、３７５ｍｇ、４００ｍｇ、４５０ｍｇ、４７５ｍｇ、５００ｍｇ、５２５ｍｇ、５５０ｍｇ、５７５ｍｇ、６００ｍｇ、６２５ｍｇ、６５０ｍｇ、６７５ｍｇ、７００ｍｇ、７２５ｍｇ、７５０ｍｇ、７７５ｍｇ、８００ｍｇ、８２５ｍｇ、８５０ｍｇ、８７５ｍｇ、９００ｍｇ、９２５ｍｇ、９５０ｍｇ、９７５ｍｇ、１０００ｍｇ、１１００ｍｇ、１２００ｍｇ、１３００ｍｇ、１４００ｍｇ、１５００ｍｇ、１６００ｍｇ、１７００ｍｇ、１８００ｍｇ、１９００ｍｇ、２０００ｍｇまたは３０００ｍｇの抗体量を含み得る。
【０１４９】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗体（例えば、ＣＧＲＰ経路を調節するモノクローナル抗体、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体、モノクローナル抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体）を含む液剤は、０．１〜５００ｍｇ／ｍＬ、０．１〜３７５ｍｇ／ｍＬ、０．１〜２５０ｍｇ／ｍＬ、０．１〜１７５ｍｇ／ｍＬ、０．１〜１００ｍｇ／ｍＬ、１ｍｇ／ｍＬ〜５００ｍｇ／ｍＬ、１ｍｇ／ｍＬ〜３７５ｍｇ／ｍＬ、１ｍｇ／ｍＬ〜３００ｍｇ／ｍＬ、１ｍｇ／ｍＬ〜２５０ｍｇ／ｍＬ、１ｍｇ／ｍＬ〜２００ｍｇ／ｍＬ、１ｍｇ／ｍＬ〜１５０ｍｇ／ｍＬ、１ｍｇ／ｍＬ〜１００ｍｇ／ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬ〜５００ｍｇ／ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬ〜３７５ｍｇ／ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬ〜２５０ｍｇ／ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬ〜１５０ｍｇ／ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬ〜１００ｍｇ／ｍＬ、１００ｍｇ／ｍＬ〜５００ｍｇ／ｍＬ、１００ｍｇ／ｍＬ〜４５０ｍｇ／ｍＬ、１００ｍｇ／ｍＬ〜４００ｍｇ／ｍＬ、１００ｍｇ／ｍＬ〜３５０ｍｇ／ｍＬ、１００ｍｇ／ｍＬ〜３００ｍｇ／ｍＬ、１００ｍｇ／ｍＬ〜２５０ｍｇ／ｍＬ、１００ｍｇ／ｍＬ〜２００ｍｇ／ｍＬまたは１００ｍｇ／ｍＬ〜１５０ｍｇ／ｍＬの範囲の抗体濃度で、任意の好適な投与経路用に調製することができる。いくつかの実施形態において、液剤は、本明細書に記載の抗体を、０．１、０．５、１、５、１０、１５  ２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１０５  １１０、１１５、１２０、１２５、１３０、１３５、１４０、１４５、１５０、１５５、１６０、１６５、１７０、１７５、１８０、１８５、１９０、１９５、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０若しくは５００ｍｇ／ｍＬの濃度、多くともこれらの濃度、または少なくともこれらの濃度で含み得る。
【０１５０】
抗体製剤は、抗体及び本明細書に別途記載する他の種類を含む、１つまたは複数の構成成分を含み得る。抗体及び別の構成成分は、抗体の治療的有効性、安全性及び保存に好適な任意の量及び／または好適な任意の濃度であってよい。一例として、抗体製剤は、５１．４ｍｇ／ｍＬの抗体（例えば、抗体Ｇ１、別の抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体、ＣＧＲＰ経路を調節するモノクローナル抗体）、２０ｍＭのヒスチジン、０．１ｍｇ／ｍＬのメチオニン、８４ｍｇ／ｍＬのトレハロース二水和物、０．０５ｍｇ／ｍＬのＥＤＴＡ二ナトリウム二水和物及び０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０を含む溶液であってよい。
【０１５１】
別の例において、抗体製剤は、２００ｍｇ／ｍＬの抗体（例えば、抗体Ｇ１、別の抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体、ＣＧＲＰ経路を調節するモノクローナル抗体）、１５ｍＭのアルギニン、７８ｍｇ／ｍＬのスクロース、０．３ｍｇ／ｍＬのＥＤＴＡ及び０．１ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０を含み得る。
【０１５２】
別の例において、抗体製剤は、１７５ｍｇ／ｍＬの抗体（例えば、抗体Ｇ１、別の抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体、ＣＧＲＰ経路を調節するモノクローナル抗体）、２０ｍＭのグリシン、８８ｍｇ／ｍＬのトレハロース二水和物、０．０１５ｍｇ／ｍＬのＥＤＴＡ及び０．２５ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０を含み得る。
【０１５３】
別の例において、抗体製剤は、２２５ｍｇ／ｍＬの抗体（例えば、抗体Ｇ１、別の抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体、ＣＧＲＰ経路を調節するモノクローナル抗体）、２３ｍＭのアスパラギン、８４ｍｇ／ｍＬのソルビトール、０．１ｍｇ／ｍＬのＥＤＴＡ及び０．１５ｍｇ／ｍＬのポリソルベート６０を含み得る。
【０１５４】
別の例において、抗体製剤は、１５０ｍｇ／ｍＬの抗体（例えば、抗体Ｇ１、別の抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体、ＣＧＲＰ経路を調節するモノクローナル抗体）、１７ｍＭのアスパラギン、７４ｍｇ／ｍＬのマンニトール、０．０２５ｍｇ／ｍＬのＥＤＴＡ及び０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０を含み得る。
【０１５５】
別の例において、抗体製剤は、１００ｍｇ／ｍＬの抗体（例えば、抗体Ｇ１、別の抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体、ＣＧＲＰ経路を調節するモノクローナル抗体）、１６ｍＭのアルギニン、８７ｍｇ／ｍＬのマンニトール、０．０２５ｍｇ／ｍＬのＥＤＴＡ及び０．１５ｍｇ／ｍＬのポリソルベート２０を含み得る。
【０１５６】
別の例において、抗体製剤は、２５０ｍｇ／ｍＬの抗体（例えば、抗体Ｇ１、別の抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体、ＣＧＲＰ経路を調節するモノクローナル抗体）、２５ｍＭのヒスチジン、７４ｍｇ／ｍＬのマンニトール、０．０２５ｍｇ／ｍＬのＥＤＴＡ及び０．２５ｍｇ／ｍＬのポリソルベート２０を含み得る。
【０１５７】
別の例において、抗体製剤は、５０ｍｇ／ｍＬの抗体（例えば、抗体Ｇ１、別の抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体、ＣＧＲＰ経路を調節するモノクローナル抗体）、１９ｍＭのアルギニン、８４ｍｇ／ｍＬのスクロース、０．０５ｍｇ／ｍＬのＥＤＴＡ及び０．３ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０を含み得る。
【０１５８】
別の例において、抗体製剤は、１２５ｍｇ／ｍＬの抗体（例えば、抗体Ｇ１、別の抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体、ＣＧＲＰ経路を調節するモノクローナル抗体）、２２ｍＭのグリシン、７９ｍｇ／ｍＬのトレハロース二水和物、０．１５ｍｇ／ｍＬのＥＤＴＡ及び０．１５ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０を含み得る。
【０１５９】
別の例において、抗体製剤は、１７５ｍｇ／ｍＬの抗体（例えば、抗体Ｇ１、別の抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体、ＣＧＲＰ経路を調節するモノクローナル抗体）、２０ｍＭのヒスチジン、０．１ｍｇ／ｍＬのメチオニン、８４ｍｇ／ｍＬのトレハロース二水和物、０．０５ｍｇ／ｍＬのＥＤＴＡ二ナトリウム二水和物及び０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０を含む溶液であってよい。
【０１６０】
別の例において、抗体製剤は、２００ｍｇ／ｍＬの抗体（例えば、抗体Ｇ１、別の抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体、ＣＧＲＰ経路を調節するモノクローナル抗体）、３０ｍＭのアルギニン、７８ｍｇ／ｍＬのスクロース、０．３ｍｇ／ｍＬのＥＤＴＡ及び０．１ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０を含み得る。
【０１６１】
別の例において、抗体製剤は、１７５ｍｇ／ｍＬの抗体（例えば、抗体Ｇ１、別の抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体、ＣＧＲＰ経路を調節するモノクローナル抗体）、２０ｍＭのグリシン、８８ｍｇ／ｍＬのトレハロース二水和物、０．０１５ｍｇ／ｍＬのＥＤＴＡ及び０．１５ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０を含み得る。
【０１６２】
別の例において、抗体製剤は、１５０ｍｇ／ｍＬの抗体（例えば、抗体Ｇ１、別の抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体、ＣＧＲＰ経路を調節するモノクローナル抗体）、２０ｍＭのヒスチジン、８４ｍｇ／ｍＬのスクロース、０．０５ｍｇ／ｍＬのＥＤＴＡ及び０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０を含み得る。
【０１６３】
別の例において、抗体製剤は、２２５ｍｇ／ｍＬの抗体（例えば、抗体Ｇ１、別の抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体、ＣＧＲＰ経路を調節するモノクローナル抗体）、２３ｍＭのヒスチジン、８４ｍｇ／ｍＬのソルビトール、０．１ｍｇ／ｍＬのＥＤＴＡ及び０．１５ｍｇ／ｍＬのポリソルベート６０を含み得る。
【０１６４】
別の例において、抗体製剤は、１５０ｍｇ／ｍＬの抗体（例えば、抗体Ｇ１、別の抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体、ＣＧＲＰ経路を調節するモノクローナル抗体）、１７ｍＭのアスパラギン、７４ｍｇ／ｍＬのマンニトール、０．３ｍｇ／ｍＬのＥＤＴＡ及び０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０を含み得る。
【０１６５】
別の例において、抗体製剤は、１００ｍｇ／ｍＬの抗体（例えば、抗体Ｇ１、別の抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体、ＣＧＲＰ経路を調節するモノクローナル抗体）、１６ｍＭのアルギニン、８７ｍｇ／ｍＬのマンニトール、０．０２５ｍｇ／ｍＬのＥＤＴＡ及び０．２５ｍｇ／ｍＬのポリソルベート２０を含み得る。
【０１６６】
別の例において、抗体製剤は、２５０ｍｇ／ｍＬの抗体（例えば、抗体Ｇ１、別の抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体、ＣＧＲＰ経路を調節するモノクローナル抗体）、２５ｍＭのヒスチジン、８９ｍｇ／ｍＬのマンニトール、０．０２５ｍｇ／ｍＬのＥＤＴＡ及び０．２５ｍｇ／ｍＬのポリソルベート２０を含み得る。
【０１６７】
別の例において、抗体製剤は、１２５ｍｇ／ｍＬの抗体（例えば、抗体Ｇ１、別の抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体、ＣＧＲＰ経路を調節するモノクローナル抗体）、２９ｍＭのアルギニン、８４ｍｇ／ｍＬのスクロース、０．０５ｍｇ／ｍＬのＥＤＴＡ及び０．３ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０を含み得る。
【０１６８】
別の例において、抗体製剤は、１５０ｍｇ／ｍＬの抗体（例えば、抗体Ｇ１、別の抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体、ＣＧＲＰ経路を調節するモノクローナル抗体）、２５ｍＭのアスパラギン、８４ｍｇ／ｍＬのマンニトール、０．０５ｍｇ／ｍＬのＥＤＴＡ及び０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０を含み得る。
【０１６９】
別の例において、抗体製剤は、１４５のｍｇ／ｍＬ抗体（例えば、抗体Ｇ１、別の抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体、ＣＧＲＰ経路を調節するモノクローナル抗体）、２２ｍＭのヒスチジン、７２ｍｇ／ｍＬのトレハロース二水和物、０．０５ｍｇ／ｍＬのＥＤＴＡ及び０．１ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０を含み得る。
【０１７０】
本明細書に記載の抗体は、注入（例えば、腹腔内、静脈内、皮下、筋肉内など）を含む、任意の好適な方法を用いて投与することができる。抗体はまた、本明細書に記載するように、吸入を介して投与することができる。いくつかの場合、抗体は、吸入ありまたは吸入なしで経鼻投与されてもよい。一般に、本明細書に記載する抗体の投与に関して、初回候補用量は、約２ｍｇ／ｋｇであってよい。本発明の目的上、典型的な１日用量は、前述の要因に応じて、約３μｇ／ｋｇから３０μｇ／ｋｇ、３００μｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇまたはそれ以上までの範囲で変動し得る。例えば、約１ｍｇ／ｋｇ、約２．５ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ及び約２５ｍｇ／ｋｇの用量を用いることができる。数日またはそれ以上にわたる反復投与については、状態に応じて、症状の所望の抑制が生じるまでまたは十分な治療レベル、例えば、疼痛の減少が達成されるまで、治療を継続する。例示的な投薬レジメンは、約８．５ｍｇ／ｋｇの初回投与量に続き、毎週約２．８ｍｇ／ｋｇの抗体の維持投与量または隔週約２．８ｍｇ／ｋｇの維持投与量を投与することを含む。別の例示的な投薬レジメンは、１００ｍｇ、１２５ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２２５ｍｇ、２５０ｍｇ、２７５ｍｇ、３００ｍｇ、３５０ｍｇ、４００ｍｇ、４５０ｍｇ、５００ｍｇ、５５０ｍｇ、６００ｍｇ、６７５ｍｇまたは９００ｍｇの用量を月１回、対象に皮下投与することを含む。別の例示的な投薬レジメンは、６７５ｍｇの初回投与量を皮下投与し、続いて、２２５ｍｇの抗体の月間投与量を皮下投与することを含む。しかしながら、医師が達成しようとする薬物動態減衰のパターンに応じて、他の投与レジメンが有用である場合もある。例えば、いくつかの実施形態において、週１〜４回の投薬が企図される。この治療の経過は、従来の技術及びアッセイによって容易に観察される。投薬レジメン（使用されるＣＧＲＰアンタゴニスト（複数可）を含む）は、時間の経過とともに変化し得る。
【０１７１】
いくつかの実施形態において、対象に投与される本明細書に記載の抗体（例えば、ＣＧＲＰ経路を調節するモノクローナル抗体、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体、モノクローナル抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体）の用量または量は、０．１μｇ〜３０００ｍｇ、１ｍｇ〜１０００ｍｇ、１００〜１０００ｍｇ、１００〜５００ｍｇ、０．１ｍｇ〜５０００ｍｇ、１ｍｇ〜４０００ｍｇ、２５０ｍｇ〜１０００ｍｇ、５００ｍｇ〜１０００ｍｇ、１００ｍｇ〜９００ｍｇ、４００ｍｇ〜９００ｍｇ、１０ｍｇ〜３０００ｍｇ、１０ｍｇ〜２０００ｍｇ、１００ｍｇ〜２０００ｍｇ、１５０ｍｇ〜２０００ｍｇ、２００ｍｇ〜２０００ｍｇ、２５０ｍｇ〜２０００ｍｇ、３００ｍｇ〜２０００ｍｇ、３５０ｍｇ〜２０００ｍｇ、４００ｍｇ〜２０００ｍｇ、４５０ｍｇ〜２０００ｍｇ、５００ｍｇ〜２０００ｍｇ、５５０ｍｇ〜２０００ｍｇ、６００ｍｇ〜２０００ｍｇ、６５０ｍｇ〜２０００ｍｇ、７００ｍｇ〜２０００ｍｇ、７５０ｍｇ〜２０００ｍｇ、８００ｍｇ〜２０００ｍｇ、８５０ｍｇ〜２０００ｍｇ、９００ｍｇ〜２０００ｍｇ、９５０ｍｇ〜２０００ｍｇまたは１０００ｍｇ〜２０００ｍｇの範囲であってよい。いくつかの実施形態において、対象に投与される本明細書に記載の抗体の用量または量は、０．１μｇ、１μｇ、１００μｇ、１ｍｇ、１０ｍｇ、２５ｍｇ、５０ｍｇ、７５ｍｇ、１００ｍｇ、１２５ｍｇ、１５０ｍｇ、１７５ｍｇ、２００ｍｇ、２２５ｍｇ、２５０ｍｇ、２７５ｍｇ、３００ｍｇ、３２５ｍｇ、３５０ｍｇ、３７５ｍｇ、４００ｍｇ、４５０ｍｇ、４７５ｍｇ、５００ｍｇ、５２５ｍｇ、５５０ｍｇ、５７５ｍｇ、６００ｍｇ、６２５ｍｇ、６５０ｍｇ、６７５ｍｇ、７００ｍｇ、７２５ｍｇ、７５０ｍｇ、７７５ｍｇ、８００ｍｇ、８２５ｍｇ、８５０ｍｇ、８７５ｍｇ、９００ｍｇ、９２５ｍｇ、９５０ｍｇ、９７５ｍｇ、１０００ｍｇ、１１００ｍｇ、１２００ｍｇ、１３００ｍｇ、１４００ｍｇ、１５００ｍｇ、１６００ｍｇ、１７００ｍｇ、１８００ｍｇ、１９００ｍｇ、２０００ｍｇ若しくは３０００ｍｇであってもよいし、多くともこれらの量、これらの量未満または少なくともこれらの量であってもよい。いくつかの実施形態において、当該量は、１００〜２０００ｍｇである。
【０１７２】
いくつかの実施形態において、対象に投与される本明細書に記載の抗体（例えば、ＣＧＲＰ経路を調節するモノクローナル抗体、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体、モノクローナル抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体）の用量または量は、０．１〜５００、０．１〜１００、０．１〜５０、０．１〜２０、０．１〜１０、１〜１０、１〜７、１〜５または０．１〜３ｍｇ／ｋｇ体重の範囲であってよい。いくつかの実施形態において、対象に投与される本明細書に記載の抗体（例えば、ＣＧＲＰ経路を調節するモノクローナル抗体、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体、モノクローナル抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体）の用量または量は、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．５、２．０、２．５、３．０、３．５、４．０、４．５、５．０、５．５、６．０、６．５、７．０、７．５、８．０、８．５、９．０、９．５、１０．０、１０．５、１１．０、１１．５、１２．０、１２．５、１３．０、１３．５、１４．０、１４．５、１５．０、１５．５、１６．０、１６．５、１７．０、１７．５、１８．０、１８．５、１９．０、１９．５、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、４７５若しくは５００ｍｇ／ｋｇ体重であってもよいし、多くともこれらの量、これらの量未満または少なくともこれらの量であってもよい。
【０１７３】
いくつかの実施形態において、ある用量または量の本明細書に記載する抗体（例えば、ＣＧＲＰ経路を調節するモノクローナル抗体、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体、モノクローナル抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体）が対象に投与される頻度は、変わり得る。いくつかの実施形態において、単回投与の抗体が治療全体で対象に投与され得る。いくつかの実施形態において、ある用量または量の抗体が対象に投与される頻度は、一定である（例えば、月１回の投与）。いくつかの実施形態において、ある用量または量の本明細書に記載する抗体が対象に投与される頻度は、変動し得る（例えば、初回投与後１ヶ月に投与を１回、その後、３ヶ月及び７ヶ月に追加投与）。いくつかの実施形態において、対象に投与される抗体の頻度は、１日あたり１、２、３、４、５若しくは６回であるか、少なくともこれらの回数、これらの回数未満または多くともこれらの回数である。いくつかの実施形態において、抗体（例えば、ＣＧＲＰ経路を調節するモノクローナル抗体、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体、モノクローナル抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体）が対象に投与される頻度は、１日あたり１、２、３、４、５若しくは６回の投与であるか、少なくともこれらの回数、これらの回数未満または多くともこれらの回数である。
【０１７４】
いくつかの実施形態において、ある用量または量の本明細書に記載する抗体（例えば、ＣＧＲＰ経路を調節するモノクローナル抗体、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体、モノクローナル抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体）が対象に投与される頻度は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１２５、１５０、１８０若しくは２００日ごとにつき１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９若しくは２０回であるか、少なくともこれらの回数、これらの回数未満または多くともこれらの回数である。
【０１７５】
いくつかの実施形態において、ある用量または量の本明細書に記載する抗体（例えば、ＣＧＲＰ経路を調節するモノクローナル抗体、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体、モノクローナル抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体）が対象に投与される頻度は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５若しくは１００週ごとにつき１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９若しくは２０回であるか、少なくともこれらの回数、これらの回数未満または多くともこれらの回数である。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗体（例えば、ＣＧＲＰ経路を調節するモノクローナル抗体、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体、モノクローナル抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体）が対象に投与される頻度は、１週あたり１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４または１５回用量未満である。
【０１７６】
いくつかの実施形態において、ある用量または量の抗体（例えば、ＣＧＲＰ経路を調節するモノクローナル抗体、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体、モノクローナル抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体）が対象に投与される頻度は、１ヶ月ごと、２ヶ月ごと、３ヶ月ごと、４ヶ月ごと、５ヶ月ごと、６ヶ月ごと、７ヶ月ごと、８ヶ月ごと、９ヶ月ごと、１０ヶ月ごと、１１ヶ月ごと、１２ヶ月ごと、１３ヶ月ごと、１４ヶ月ごと、１５ヶ月ごと、１６ヶ月ごと、１７ヶ月ごと若しくは１８ヶ月ごとにつき１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９若しくは２０回であるか、少なくともこれらの回数、これらの回数未満または多くともこれらの回数である。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗体（例えば、ＣＧＲＰ経路を調節するモノクローナル抗体、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体、モノクローナル抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体）が対象に投与される頻度は、１ヶ月あたり１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４または１５回用量未満である。いくつかの実施形態において、ある用量または量の抗体は、１ヶ月あたり１回、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回、１０回またはそれ以上、対象に投与され得る（例えば、皮下または静脈内）。
【０１７７】
いくつかの実施形態において、５０ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、３５０ｍｇ、４００ｍｇ、４５０ｍｇ、５００ｍｇ、５５０ｍｇ、６００ｍｇ、６５０ｍｇ、７００ｍｇ、７５０ｍｇ、８００ｍｇ、８５０ｍｇ、９００ｍｇ、９５０ｍｇ、１０００ｍｇ、１０５０ｍｇ、１１００ｍｇ、１１５０ｍｇ、１２００ｍｇ、１２５０ｍｇ、１３００ｍｇ、１３５０ｍｇ、１４００ｍｇ、１４５０ｍｇ、１５００ｍｇ、１５５０ｍｇ、１６００ｍｇ、１６５０ｍｇ、１７００ｍｇ、１７５０ｍｇ、１８００ｍｇ、１８５０ｍｇ、１９００ｍｇ、１９５０ｍｇ、２０００ｍｇ、２０５０ｍｇ、２１００ｍｇ、２１５０ｍｇ、２２００ｍｇ、２２５０ｍｇ、２３００ｍｇ、２３５０ｍｇ、２４００ｍｇ、２４５０ｍｇ、２５００ｍｇ、２５５０ｍｇ、２６００ｍｇ、２６５０ｍｇ、２７００ｍｇ、２７５０ｍｇ、２８００ｍｇ、２８５０ｍｇ、２９００ｍｇ、２９５０ｍｇ、３０００ｍｇまたはそれ以上の用量または量の抗体が、対象に月１回投与され得る（例えば、皮下または静脈内）。いくつかの実施形態において、０．１ｍｇ〜５０００ｍｇ、１ｍｇ〜４０００ｍｇ、１０ｍｇ〜３０００ｍｇ、１０ｍｇ〜２０００ｍｇ、１００ｍｇ〜２０００ｍｇ、１５０ｍｇ〜２０００ｍｇ、２００ｍｇ〜２０００ｍｇ、２５０ｍｇ〜２０００ｍｇ、３００ｍｇ〜２０００ｍｇ、３５０ｍｇ〜２０００ｍｇ、４００ｍｇ〜２０００ｍｇ、４５０ｍｇ〜２０００ｍｇ、５００ｍｇ〜２０００ｍｇ、５５０ｍｇ〜２０００ｍｇ、６００ｍｇ〜２０００ｍｇ、６５０ｍｇ〜２０００ｍｇ、７００ｍｇ〜２０００ｍｇ、７５０ｍｇ〜２０００ｍｇ、８００ｍｇ〜２０００ｍｇ、８５０ｍｇ〜２０００ｍｇ、９００ｍｇ〜２０００ｍｇ、９５０ｍｇ〜２０００ｍｇまたは１０００ｍｇ〜２０００ｍｇの用量または量の抗体が、対象に月１回投与され得る（例えば、皮下または静脈内）。いくつかの実施形態において、１００〜２０００ｍｇの抗体が月１回投与される。
【０１７８】
いくつかの実施形態において、５０ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、３５０ｍｇ、４００ｍｇ、４５０ｍｇ、５００ｍｇ、５５０ｍｇ、６００ｍｇ、６５０ｍｇ、７００ｍｇ、７５０ｍｇ、８００ｍｇ、８５０ｍｇ、９００ｍｇ、９５０ｍｇ、１０００ｍｇ、１０５０ｍｇ、１１００ｍｇ、１１５０ｍｇ、１２００ｍｇ、１２５０ｍｇ、１３００ｍｇ、１３５０ｍｇ、１４００ｍｇ、１４５０ｍｇ、１５００ｍｇ、１５５０ｍｇ、１６００ｍｇ、１６５０ｍｇ、１７００ｍｇ、１７５０ｍｇ、１８００ｍｇ、１８５０ｍｇ、１９００ｍｇ、１９５０ｍｇ、２０００ｍｇ、２０５０ｍｇ、２１００ｍｇ、２１５０ｍｇ、２２００ｍｇ、２２５０ｍｇ、２３００ｍｇ、２３５０ｍｇ、２４００ｍｇ、２４５０ｍｇ、２５００ｍｇ、２５５０ｍｇ、２６００ｍｇ、２６５０ｍｇ、２７００ｍｇ、２７５０ｍｇ、２８００ｍｇ、２８５０ｍｇ、２９００ｍｇ、２９５０ｍｇ、３０００ｍｇまたはそれ以上の用量または量の抗体が、対象に３ヶ月ごとに投与され得る（例えば、皮下または静脈内）。いくつかの実施形態において、０．１ｍｇ〜５０００ｍｇ、１ｍｇ〜４０００ｍｇ、１０ｍｇ〜３０００ｍｇ、１０ｍｇ〜２０００ｍｇ、１００ｍｇ〜２０００ｍｇ、１５０ｍｇ〜２０００ｍｇ、２００ｍｇ〜２０００ｍｇ、２５０ｍｇ〜２０００ｍｇ、３００ｍｇ〜２０００ｍｇ、３５０ｍｇ〜２０００ｍｇ、４００ｍｇ〜２０００ｍｇ、４５０ｍｇ〜２０００ｍｇ、５００ｍｇ〜２０００ｍｇ、５５０ｍｇ〜２０００ｍｇ、６００ｍｇ〜２０００ｍｇ、６５０ｍｇ〜２０００ｍｇ、７００ｍｇ〜２０００ｍｇ、７５０ｍｇ〜２０００ｍｇ、８００ｍｇ〜２０００ｍｇ、８５０ｍｇ〜２０００ｍｇ、９００ｍｇ〜２０００ｍｇ、９５０ｍｇ〜２０００ｍｇまたは１０００ｍｇ〜２０００ｍｇの用量または量の抗体が、対象に３ヶ月ごとに投与され得る（例えば、皮下または静脈内）。いくつかの実施形態において、４５０ｍｇ〜２０００ｍｇが３ヶ月以下ごとに１回投与される。
【０１７９】
いくつかの実施形態において、５０ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、３５０ｍｇ、４００ｍｇ、４５０ｍｇ、５００ｍｇ、５５０ｍｇ、６００ｍｇ、６５０ｍｇ、７００ｍｇ、７５０ｍｇ、８００ｍｇ、８５０ｍｇ、９００ｍｇ、９５０ｍｇ、１０００ｍｇ、１０５０ｍｇ、１１００ｍｇ、１１５０ｍｇ、１２００ｍｇ、１２５０ｍｇ、１３００ｍｇ、１３５０ｍｇ、１４００ｍｇ、１４５０ｍｇ、１５００ｍｇ、１５５０ｍｇ、１６００ｍｇ、１６５０ｍｇ、１７００ｍｇ、１７５０ｍｇ、１８００ｍｇ、１８５０ｍｇ、１９００ｍｇ、１９５０ｍｇ、２０００ｍｇ、２０５０ｍｇ、２１００ｍｇ、２１５０ｍｇ、２２００ｍｇ、２２５０ｍｇ、２３００ｍｇ、２３５０ｍｇ、２４００ｍｇ、２４５０ｍｇ、２５００ｍｇ、２５５０ｍｇ、２６００ｍｇ、２６５０ｍｇ、２７００ｍｇ、２７５０ｍｇ、２８００ｍｇ、２８５０ｍｇ、２９００ｍｇ、２９５０ｍｇ、３０００ｍｇまたはそれ以上の用量または量の抗体が、対象に６ヶ月ごとに投与され得る（例えば、皮下または静脈内）。いくつかの実施形態において、０．１ｍｇ〜５０００ｍｇ、１ｍｇ〜４０００ｍｇ、１０ｍｇ〜３０００ｍｇ、１０ｍｇ〜２０００ｍｇ、１００ｍｇ〜２０００ｍｇ、１５０ｍｇ〜２０００ｍｇ、２００ｍｇ〜２０００ｍｇ、２５０ｍｇ〜２０００ｍｇ、３００ｍｇ〜２０００ｍｇ、３５０ｍｇ〜２０００ｍｇ、４００ｍｇ〜２０００ｍｇ、４５０ｍｇ〜２０００ｍｇ、５００ｍｇ〜２０００ｍｇ、５５０ｍｇ〜２０００ｍｇ、６００ｍｇ〜２０００ｍｇ、６５０ｍｇ〜２０００ｍｇ、７００ｍｇ〜２０００ｍｇ、７５０ｍｇ〜２０００ｍｇ、８００ｍｇ〜２０００ｍｇ、８５０ｍｇ〜２０００ｍｇ、９００ｍｇ〜２０００ｍｇ、９５０ｍｇ〜２０００ｍｇまたは１０００ｍｇ〜２０００ｍｇの用量または量の抗体が、対象に６ヶ月ごとに投与され得る（例えば、皮下または静脈内）。いくつかの実施形態において、４５０ｍｇ〜２０００ｍｇが６ヶ月以下ごとに１回投与される。
【０１８０】
いくつかの実施形態において、ある用量または量の抗体（例えば、ＣＧＲＰ経路を調節するモノクローナル抗体、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体、モノクローナル抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体）が対象に投与（例えば、皮下または静脈内投与）される頻度は、四半期ごとにつき１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９若しくは２０回であるか、少なくともこれらの回数、これらの回数未満または多くともこれらの回数である。理解されるように、「四半期」とは、１年の４分の１の期間を指すものであり、１月１日〜３月３１日、４月１日〜６月３０日、７月１日〜９月３０日または１０月１日〜１２月３１日の期間などの暦四半期を指す場合もある。いくつかの場合、「四半期」とは、およそ３ヶ月の期間を指すことがある。
【０１８１】
いくつかの実施形態において、５０ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、３５０ｍｇ、４００ｍｇ、４５０ｍｇ、５００ｍｇ、５５０ｍｇ、６００ｍｇ、６５０ｍｇ、７００ｍｇ、７５０ｍｇ、８００ｍｇ、８５０ｍｇ、９００ｍｇ、９５０ｍｇ、１０００ｍｇ、１０５０ｍｇ、１１００ｍｇ、１１５０ｍｇ、１２００ｍｇ、１２５０ｍｇ、１３００ｍｇ、１３５０ｍｇ、１４００ｍｇ、１４５０ｍｇ、１５００ｍｇ、１５５０ｍｇ、１６００ｍｇ、１６５０ｍｇ、１７００ｍｇ、１７５０ｍｇ、１８００ｍｇ、１８５０ｍｇ、１９００ｍｇ、１９５０ｍｇ、２０００ｍｇ、２０５０ｍｇ、２１００ｍｇ、２１５０ｍｇ、２２００ｍｇ、２２５０ｍｇ、２３００ｍｇ、２３５０ｍｇ、２４００ｍｇ、２４５０ｍｇ、２５００ｍｇ、２５５０ｍｇ、２６００ｍｇ、２６５０ｍｇ、２７００ｍｇ、２７５０ｍｇ、２８００ｍｇ、２８５０ｍｇ、２９００ｍｇ、２９５０ｍｇ、３０００ｍｇまたはそれ以上の用量または量の抗体が、対象に四半期ごとに投与され得る（例えば、皮下または静脈内）。いくつかの実施形態において、０．１ｍｇ〜５０００ｍｇ、１ｍｇ〜４０００ｍｇ、１０ｍｇ〜３０００ｍｇ、１０ｍｇ〜２０００ｍｇ、１００ｍｇ〜２０００ｍｇ、１５０ｍｇ〜２０００ｍｇ、２００ｍｇ〜２０００ｍｇ、２５０ｍｇ〜２０００ｍｇ、３００ｍｇ〜２０００ｍｇ、３５０ｍｇ〜２０００ｍｇ、４００ｍｇ〜２０００ｍｇ、４５０ｍｇ〜２０００ｍｇ、５００ｍｇ〜２０００ｍｇ、５５０ｍｇ〜２０００ｍｇ、６００ｍｇ〜２０００ｍｇ、６５０ｍｇ〜２０００ｍｇ、７００ｍｇ〜２０００ｍｇ、７５０ｍｇ〜２０００ｍｇ、８００ｍｇ〜２０００ｍｇ、８５０ｍｇ〜２０００ｍｇ、９００ｍｇ〜２０００ｍｇ、９５０ｍｇ〜２０００ｍｇまたは１０００ｍｇ〜２０００ｍｇの用量または量の抗体が、対象に四半期ごとに投与され得る（例えば、皮下または静脈内）。
【０１８２】
いくつかの実施形態において、ある用量または量の抗体（例えば、ＣＧＲＰ経路を調節するモノクローナル抗体、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体、モノクローナル抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体）が投与される頻度は、１年ごと、２年ごと、３年ごと、４年ごとまたは５年ごとにつき１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９若しくは２０回であるか、少なくともこれらの回数、これらの回数未満または多くともこれらの回数である。いくつかの実施形態において、抗体（例えば、ＣＧＲＰ経路を調節するモノクローナル抗体、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体、モノクローナル抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体）が対象に投与される頻度は、１年ごとに１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４または２５回用量未満である。
【０１８３】
いくつかの実施形態において、５０ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、３５０ｍｇ、４００ｍｇ、４５０ｍｇ、５００ｍｇ、５５０ｍｇ、６００ｍｇ、６５０ｍｇ、７００ｍｇ、７５０ｍｇ、８００ｍｇ、８５０ｍｇ、９００ｍｇ、９５０ｍｇ、１０００ｍｇ、１０５０ｍｇ、１１００ｍｇ、１１５０ｍｇ、１２００ｍｇ、１２５０ｍｇ、１３００ｍｇ、１３５０ｍｇ、１４００ｍｇ、１４５０ｍｇ、１５００ｍｇ、１５５０ｍｇ、１６００ｍｇ、１６５０ｍｇ、１７００ｍｇ、１７５０ｍｇ、１８００ｍｇ、１８５０ｍｇ、１９００ｍｇ、１９５０ｍｇ、２０００ｍｇ、２０５０ｍｇ、２１００ｍｇ、２１５０ｍｇ、２２００ｍｇ、２２５０ｍｇ、２３００ｍｇ、２３５０ｍｇ、２４００ｍｇ、２４５０ｍｇ、２５００ｍｇ、２５５０ｍｇ、２６００ｍｇ、２６５０ｍｇ、２７００ｍｇ、２７５０ｍｇ、２８００ｍｇ、２８５０ｍｇ、２９００ｍｇ、２９５０ｍｇ、３０００ｍｇまたはそれ以上の用量または量の抗体が、対象に毎年１回投与され得る。いくつかの実施形態において、０．１ｍｇ〜５０００ｍｇ、１ｍｇ〜４０００ｍｇ、１０ｍｇ〜３０００ｍｇ、１０ｍｇ〜２０００ｍｇ、１００ｍｇ〜２０００ｍｇ、１５０ｍｇ〜２０００ｍｇ、２００ｍｇ〜２０００ｍｇ、２５０ｍｇ〜２０００ｍｇ、３００ｍｇ〜２０００ｍｇ、３５０ｍｇ〜２０００ｍｇ、４００ｍｇ〜２０００ｍｇ、４５０ｍｇ〜２０００ｍｇ、５００ｍｇ〜２０００ｍｇ、５５０ｍｇ〜２０００ｍｇ、６００ｍｇ〜２０００ｍｇ、６５０ｍｇ〜２０００ｍｇ、７００ｍｇ〜２０００ｍｇ、７５０ｍｇ〜２０００ｍｇ、８００ｍｇ〜２０００ｍｇ、８５０ｍｇ〜２０００ｍｇ、９００ｍｇ〜２０００ｍｇ、９５０ｍｇ〜２０００ｍｇまたは１０００ｍｇ〜２０００ｍｇの用量または量の抗体が、対象に毎年１回投与され得る。いくつかの実施形態において、４５０ｍｇ〜２０００ｍｇが１年以下ごとに１回投与される。
【０１８４】
いくつかの実施形態において、方法は、本明細書に記載の抗体（例えば、ＣＧＲＰ経路を調節するモノクローナル抗体、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体、モノクローナル抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体）を対象に複数日に投与することを含み得る。２、３、４、５、６、７、８日またはそれ以上の複数日には、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５日またはそれ以上の間隔があってよい。いくつかの実施形態において、複数日の２つには、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０日またはそれ以上の間隔がある。更に、いくつかの実施形態において、複数日の第１の日に投与される抗体の量は、第２の日に投与される抗体の量と異なってもよい（例えば、より多いまたはより少ない）。
【０１８５】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗体（例えば、ＣＧＲＰ経路を調節するモノクローナル抗体、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体、モノクローナル抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体）の初回投与量（例えば、負荷投与量）を対象に投与し、続いて、所望の間隔で１または複数の追加投与量を投与してもよい。いくつかの実施形態において、初回投与量及び追加投与量の１または複数は、同用量である。いくつかの実施形態において、１または複数の追加投与量は、初回投与量と異なる用量である。いくつかの実施形態において、１または複数の追加投与量が投与される頻度は、一定である（例えば、毎月）。いくつかの実施形態において、１または複数の追加投与量が投与される頻度は、変動する（例えば、初回投与１ヶ月後に追加投与を１回、続いて、初回投与３ヶ月後にもう１回の追加投与）。任意の望ましい及び／または治療レジメンの初回負荷投与量、追加投与量及び追加投与量の頻度（例えば、本明細書に記載のものを含む）を用いることができる。例示的なレジメンには、初回負荷投与量である６７５ｍｇの抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体を皮下投与し、その後、後続の維持投与量である２２５ｍｇの抗体を１ヶ月間隔で皮下投与することが挙げられる。
【０１８６】
いくつかの実施形態において、０．１μｇ、１μｇ、１００μｇ、１ｍｇ、１０ｍｇ、２５ｍｇ、５０ｍｇ、７５ｍｇ、１００ｍｇ、１２５ｍｇ、１５０ｍｇ、１７５ｍｇ、２００ｍｇ、２２５ｍｇ、２５０ｍｇ、２７５ｍｇ、３００ｍｇ、３２５ｍｇ、３５０ｍｇ、３７５ｍｇ、４００ｍｇ、４５０ｍｇ、４７５ｍｇ、５００ｍｇ、５２５ｍｇ、５５０ｍｇ、５７５ｍｇ、６００ｍｇ、６２５ｍｇ、６５０ｍｇ、６７５ｍｇ、７００ｍｇ、７２５ｍｇ、７５０ｍｇ、７７５ｍｇ、８００ｍｇ、８２５ｍｇ、８５０ｍｇ、８７５ｍｇ、９００ｍｇ、９２５ｍｇ、９５０ｍｇ、９７５ｍｇ、１０００ｍｇ、１５００ｍｇ、２０００ｍｇまたは３０００ｍｇの初回投与量の抗体（例えば、ＣＧＲＰ経路を調節するモノクローナル抗体、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体、モノクローナル抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体）を対象に投与し、続いて、０．１μｇ、１μｇ、１００μｇ、１ｍｇ、１０ｍｇ、２５ｍｇ、５０ｍｇ、７５ｍｇ、１００ｍｇ、１２５ｍｇ、１５０ｍｇ、１７５ｍｇ、２００ｍｇ、２２５ｍｇ、２５０ｍｇ、２７５ｍｇ、３００ｍｇ、３２５ｍｇ、３５０ｍｇ、３７５ｍｇ、４００ｍｇ、４５０ｍｇ、４７５ｍｇ、５００ｍｇ、５２５ｍｇ、５５０ｍｇ、５７５ｍｇ、６００ｍｇ、６２５ｍｇ、６５０ｍｇ、６７５ｍｇ、７００ｍｇ、７２５ｍｇ、７５０ｍｇ、７７５ｍｇ、８００ｍｇ、８２５ｍｇ、８５０ｍｇ、８７５ｍｇ、９００ｍｇ、９２５ｍｇ、９５０ｍｇ、９７５ｍｇ、１０００ｍｇ、１５００ｍｇ、２０００ｍｇまたは３０００ｍｇの１または複数の追加投与量の抗体を投与し得る。
【０１８７】
いくつかの実施形態において、ある用量または量の本明細書に記載する抗体（例えば、ＣＧＲＰ経路を調節するモノクローナル抗体、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体、モノクローナル抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体）は、例えば、投与経路及び／または投与する特定の製剤に応じて、分割用量に分け、複数の分割用量として投与してもよい。例えば、ある用量が皮下投与される場合、その皮下投与量を複数の分割用量に分け、各分割用量を、例えば、単一部位におけるより多量の単回皮下注射を避けるために、異なる部位に投与してもよい。例えば、９００ｍｇの皮下用量をそれぞれ２２５ｍｇの４つの分割用量に分けて、２２５ｍｇの各用量を異なる部位に投与することができ、これにより、各部位での注入量を最小限にする助けとすることができる。分割用量の分割は、同量であっても（例えば、同量の４つの分割用量）、異なる量であってもよい（例えば、４つの分割用量であって、その分割用量のうちの２つが他の分割用量の２倍である用量）。
【０１８８】
いくつかの実施形態において、治療期間中に対象に投与される抗体の投薬回数は、例えば、対象における血管運動神経症状及び／または頭痛の発生減少の達成に応じて変動し得る。いくつかの実施形態において、血管運動神経症状は、頭痛の形態（例えば、片頭痛、慢性片頭痛、反復性片頭痛、他の種類の頭痛など）に関係する。例えば、治療期間中に投与される投薬回数は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９若しくは５０回であってもよいし、少なくともこれらの回数または多くともこれらの回数であってもよい。いくつかの場合（例えば、対象が慢性片頭痛である場合）、治療は、無期限に施されてよい。いくつかの場合、治療は、処置のために、多くとも１、２、３、４、５または６回の用量を対象に投与するような急性のものであり得る。
【０１８９】
いくつかの実施形態において、ある用量（または分割用量）または量の本明細書に記載する抗体（例えば、ＣＧＲＰ経路を調節するモノクローナル抗体、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体、モノクローナル抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体）は、液剤に製剤化され、対象に投与され得る（例えば、皮下注射、静脈内注射を介して）。かかる場合、抗体を含む液剤の量は、例えば、液剤中の抗体の濃度、抗体の所望の用量、及び／または使用する投与経路に応じて、異なってよい。例えば、対象に投与される（例えば、注入を介して、例えば、皮下注射または静脈内注射などにより投与される）本明細書に記載の抗体を含む液剤の量は、０．００１ｍＬ〜１０．０ｍＬ、０．０１ｍＬ〜５．０ｍＬ、０．１ｍＬ〜５ｍＬ、０．１ｍＬ〜３ｍＬ、０．５ｍＬ〜２．５ｍＬまたは１ｍＬ〜２．５ｍＬであってよい。例えば、対象に投与される（例えば、注入を介して、例えば、皮下注射または静脈内注射などにより投与される）本明細書に記載の抗体（例えば、ＣＧＲＰ経路を調節するモノクローナル抗体、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体、モノクローナル抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体）を含む液剤の量は、０．００１、０．００５、０．０１、０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１０、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４．０、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．５、６．０、６．５、７．０、７．５、８．０、８．５、９．０、９．５若しくは１０．０ｍＬであってもよいし、少なくともこれらの量、これらの量未満または多くともこれらの量であってもよい。
【０１９０】
いくつかの実施形態において、ある用量（または分割用量）または量の本明細書に記載する抗体（例えば、ＣＧＲＰ経路を調節するモノクローナル抗体、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体、モノクローナル抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体）は、抗体を対象に投与するのに有用なプレフィルド容器で供給してもよい。このようなプレフィルド容器は、自己投与用または他者による投与用に設計され得る。例えば、ある用量（または分割用量）または量の本明細書に記載する抗体は、プレフィルドシリンジ中の液剤として供給され得る。かかる例において、プレフィルドシリンジは、自己投与用または他者による投与用に設計され得る。場合により、プレフィルドシリンジは、皮下投与用及び／または静脈内投与用に設計され得る。
【０１９１】
本発明の目的上、抗体の適切な用量は、用いられる抗体（またはその組成物）、血管運動神経症状の種類及び重症度、頭痛（例えば、片頭痛）または他の治療すべき状態の種類及び重症度、予防目的または治療目的で作用物質を投与するのか、治療歴、患者の臨床歴及び当該作用物質に対する応答、ならびに主治医の判断に応じて決定され得る。通常、臨床医は、望ましい結果が得られる用量に達するまで、抗体を投与する。用量及び／または頻度は、治療期間を通じて変動し得る。
【０１９２】
一般に、半減期などの経験的考察も用量の決定に寄与する。例えば、ヒト免疫系に適合するヒト化抗体または完全ヒト抗体などの抗体を用いて、抗体の半減期を延ばし、抗体が宿主の免疫系から攻撃を受けないようにすることができる。投与頻度は、療法期間を通じて決定し、調整することができ、通常は、必ずしも必須ではないが、頭痛（例えば、片頭痛）または他の状態の治療及び／または抑制及び／または改善及び／または遅延に基づく。あるいは、抗体の持続性連続放出製剤が適切な場合もある。持続放出性を達成するための各種製剤及び装置は、当該技術分野において知られている。
【０１９３】
一実施形態において、本明細書に記載の抗体（例えば、ＣＧＲＰ経路を調節するモノクローナル抗体、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体、モノクローナル抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体）の用量は、当該抗体の１回または複数回の投与が行われた個体において、経験的に決定されてよい。漸増用量の抗体が個体に投与される。抗体の有効性を評価するために、疾患の指標を追跡することができる。
【０１９４】
本発明の方法に従った抗体（例えば、ＣＧＲＰ経路を調節するモノクローナル抗体、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体、モノクローナル抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体）の投与は、例えば、レシピエントの生理学的状態、投与目的が治療目的であるか予防目的であるか、及び当該分野の医師に知られている他の要因に応じて、連続的であっても、断続的であってもよい。抗体の投与は、本質的に、予め設定した期間にわたって連続的であってもよいし、一連の間隔の投与、例えば、頭痛（例えば、片頭痛）の発症前、発症時または発症後のいずれか、頭痛の発症前、発症時、発症前及び発症後、発症時及び発症後、発症前及び発症時、または発症前、発症時及び発症後であってもよい。投与は、頭痛を誘発する可能性のある任意の事象の前、その間及び／またはその後であってよい。
【０１９５】
いくつかの実施形態において、１種を超える抗体が存在してよい。少なくとも１種、少なくとも２種、少なくとも３種、少なくとも４種、少なくとも５種以上の異なる抗体が存在し得る。一般に、これらの抗体は、互いに悪影響を及ぼさない相補的な活性を有し得る。本明細書に記載の抗体（例えば、ＣＧＲＰ経路を調節するモノクローナル抗体、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体、モノクローナル抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体）はまた、他のＣＧＲＰアンタゴニストまたはＣＧＲＰ受容体アンタゴニストとともに使用することができる。例えば、次のＣＧＲＰアンタゴニスト：ＣＧＲＰに対するアンチセンス分子（ＣＧＲＰをコードする核酸に対するアンチセンス分子を含む）、ＣＧＲＰ阻害化合物、ＣＧＲＰ構造類似体、ＣＧＲＰと結合するＣＧＲＰ受容体の優性阻害変異、及び抗ＣＧＲＰ受容体抗体のうちの１つまたは複数を用いることができる。抗体はまた、他の作用物質と併用することができ、作用物質の有効性を増大させ、及び／または補完するように機能する。
【０１９６】
頭痛の診断または評価は、当該技術分野において十分確立されている。評価は、患者による症状の特徴付けなどの主観的基準に基づいて実施されてもよい。例えば、片頭痛は、次の基準：１）４〜７２時間継続する頭痛の反復発作；２）次の症状：片側性疼痛、拍動性、動作時における増悪及び中等度〜重度の疼痛のうちの２つを伴うもの；ならびに３）次の症状：悪心または嘔吐及び光過敏または音過敏のうちの１つを伴うものに基づいて診断され得る。Ｇｏａｄｓｂｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４６：２５７−２７０，２００２。いくつかの実施形態において、頭痛（例えば、片頭痛）の評価は、本明細書に別途記載するように、頭痛時間によるものでもよい。例えば、頭痛（例えば、片頭痛）の評価は、１日の頭痛時間、１週間の頭痛時間、１ヶ月の頭痛時間及び／または１年間の頭痛時間を基準にしてもよい。いくつかの場合、対象が頭痛時間を報告してもよい。
【０１９７】
治療の有効性は、当該技術分野において知られている方法によって評価することができる。例えば、疼痛緩和について評価してもよい。したがって、いくつかの実施形態において、抗ＣＧＲＰ抗体の投与から１、２または数時間後に、疼痛緩和を主観的に観察する。いくつかの実施形態において、抗ＣＧＲＰ抗体の投与後に、頭痛の発作頻度を主観的に観察する。
【０１９８】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載する、対象における頭痛を治療し、またはその発生を減少させる方法により、本明細書に記載の抗体（例えば、ＣＧＲＰ経路を調節するモノクローナル抗体、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体、モノクローナル抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体）の単回投与後、頭痛の発生が長期間にわたって減少し得る。例えば、頭痛の発生は、単回投与後、少なくとも０．５、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０日またはそれ以上減少し得る。
【０１９９】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載する、対象における頭痛を治療し、またはその発生を減少させる方法により、本明細書に記載する１または複数の用量の抗体（例えば、ＣＧＲＰ経路を調節するモノクローナル抗体、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体、モノクローナル抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体）を対象に投与した後に対象が経験する頭痛時間数が投与前のレベルから減少し得る。例えば、１または複数の用量の抗体を対象に投与した後に対象が経験する１日の頭痛時間は、対象における投与前のレベルから０．５、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３または２４時間の頭痛時間分減少し得る。いくつかの場合、１または複数の用量の抗体を対象に投与した後に対象が経験する１日の頭痛時間は、対象における投与前のレベルを基準にして、０．５％、１％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％またはそれ以上減少し得る。別の例において、１または複数の用量の抗体を対象に投与した後に対象が経験する１週間の頭痛時間は、対象における投与前のレベルから０．５、１、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５時間またはそれ以上の頭痛時間分減少し得る。いくつかの場合、１または複数の用量の抗体を対象に投与した後に対象が経験する１週間の頭痛時間は、対象における投与前のレベルを基準にして、０．５％、１％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％またはそれ以上減少し得る。別の例において、１または複数の用量の抗体を対象に投与した後に対象が経験する１ヶ月の頭痛時間は、投与前レベルから０．５、１、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１０５、１１０、１１５、１２０、１２５時間またはそれ以上の頭痛時間分減少し得る。いくつかの場合、１または複数の用量の抗体を対象に投与した後に対象が経験する１週間の頭痛時間は、対象における投与前のレベルを基準にして、０．５％、１％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％またはそれ以上減少し得る。
【０２００】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載する、対象における頭痛を治療し、またはその発生を減少させる方法により、本明細書に記載する１または複数の用量の抗体（例えば、ＣＧＲＰ経路を調節するモノクローナル抗体、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体、モノクローナル抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体）を対象に投与した後に対象が経験する頭痛日数が投与前のレベルから減少し得る。例えば、１または複数の用量の抗体を対象に投与した後に対象が経験する１週間の頭痛日は、対象における投与前のレベルから０．５、１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５または７日の頭痛日分減少し得る。いくつかの場合、１または複数の用量の抗体を対象に投与した後に対象が経験する１週間の頭痛日は、対象における投与前のレベルを基準にして、０．５％、１％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％またはそれ以上減少し得る。別の例において、１または複数の用量の抗体を対象に投与した後に対象が経験する１ヶ月の頭痛日は、投与前レベルから０．５、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０日またはそれ以上の頭痛日分減少し得る。
【０２０１】
いくつかの実施形態において、方法は、抗体（例えば、ＣＧＲＰ経路を調節するモノクローナル抗体、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体、モノクローナル抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体）と同時にまたは連続的に、１つまたは複数の追加の作用物質を対象に投与することを含み得る。いくつかの実施形態において、追加の作用物質は、本明細書に別途記載する例示的な抗頭痛薬（例えば、５−ＨＴ１アゴニスト、トリプタン、麦角アルカロイド、オピエート、β−アドレナリン遮断薬、ＮＳＡＩＤ）などの抗頭痛薬であってよい。いくつかの実施形態において、治療的効果は、抗体または１つ若しくは複数の追加の作用物質の単独使用と比較して、より大きいものであり得る。したがって、抗体と１つまたは複数の追加の作用物質との相乗効果が達成され得る。いくつかの実施形態において、１つまたは複数の追加の作用物質を予防的に対象に投与してもよい。
【０２０２】
Ｂ．抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体
いくつかの実施形態において、本発明の方法は、抗体を使用し、この抗体は、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体であり得る。抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体は、受容体への結合及び／またはＣＧＲＰに対する細胞応答の誘発などのＣＧＲＰシグナル伝達によって媒介される下流経路を含むＣＧＲＰ生物活性を遮断、抑制または低減する（有意にを含む）あらゆる抗体分子を指し得る。
【０２０３】
抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体は、次の特徴：（ａ）ＣＧＲＰへの結合、（ｂ）ＣＧＲＰのその受容体（複数可）への結合の阻止、（ｃ）ＣＧＲＰ受容体の活性化（ｃＡＭＰ活性化を含む）の遮断または減少、（ｄ）ＣＧＲＰ生物活性またはＣＧＲＰシグナル伝達機能によって媒介される下流経路の阻害、（ｅ）頭痛（例えば、片頭痛）のいずれかの側面の予防、改善または治療、（ｆ）ＣＧＲＰクリアランスの増大、及び（ｇ）ＣＧＲＰ合成、産生または放出の阻害（減少）のいずれか１つまたは複数を呈し得る。抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体は、当該技術分野において知られている。例えば、Ｔａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｓｃｉ．（Ｌｏｎｄ）．８９：５６５−７３，１９９５；Ｓｉｇｍａ（Ｍｉｓｓｏｕｒｉ，ＵＳ）、製品番号Ｃ７１１３（クローン＃４９０１）；Ｐｌｏｕｒｄｅｅｔ  ａｌ．，Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  １４：１２２５−１２２９，１９９３を参照されたい。
【０２０４】
いくつかの実施形態において、抗体は、ＣＧＲＰ及び／またはＣＧＲＰ経路（ＣＧＲＰシグナル伝達機能によって媒介される下流経路を含む）を阻害するようにＣＧＲＰと反応する。いくつかの実施形態において、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体は、ヒトＣＧＲＰを認識する。いくつかの実施形態において、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体は、ヒトα−ＣＧＲＰとβ−ＣＧＲＰの両方に結合する。いくつかの実施形態において、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体は、ヒト及びラットＣＧＲＰと結合する。いくつかの実施形態において、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体は、ＣＧＲＰのアミノ酸２５〜３７を有するＣ末端断片と結合する。いくつかの実施形態において、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体は、ＣＧＲＰのアミノ酸２５〜３７内のＣ末端エピトープと結合する。
【０２０５】
本発明に有用な抗体は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、抗体断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、Ｆｃなど）、キメラ抗体、二重特異性抗体、ヘテロ複合抗体、一本鎖（ＳｃＦｖ）、それらの変異体、抗体部分（例えば、ドメイン抗体）を含む融合タンパク質、ヒト化抗体、ならびに所望の特異性の抗原認識部位を含む免疫グロブリン分子の任意の他の改変形態（抗体のグリコシル化バリアント、抗体のアミノ酸配列バリアント及び共有結合的に修飾した抗体を含む）を包含し得る。抗体は、ネズミ、ラット、ヒトまたは任意の他の起源であってよい（キメラまたはヒト化抗体を含む）。
【０２０６】
いくつかの実施形態において、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体は、モノクローナル抗体である。いくつかの実施形態において、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体は、ヒト化されている。いくつかの実施形態において、抗体はヒト抗体である。いくつかの実施形態において、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体は、抗体Ｇ１である（本明細書に記載のもの）。いくつかの実施形態において、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体は、抗体Ｇ１または表６に記載のＧ１のバリアントの１つまたは複数のＣＤＲ（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたはいくつかの実施形態では６つ全てのＣＤＲ）を含む。更に他の実施形態において、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体は、図５に示す重鎖可変領域のアミノ酸配列（配列番号１）及び図５に示す軽鎖可変領域のアミノ酸配列（配列番号２）を含む。
【０２０７】
いくつかの実施形態において、抗体は、（ａ）ＬＣＶＲ１７（配列番号５８）とＨＣＶＲ２２（配列番号５９）；（ｂ）ＬＣＶＲ１８（配列番号６０）とＨＣＶＲ２３（配列番号６１）；（ｃ）ＬＣＶＲ１９（配列番号６２）とＨＣＶＲ２４（配列番号６３）；（ｄ）ＬＣＶＲ２０（配列番号６４）とＨＣＶＲ２５（配列番号６５）；（ｅ）ＬＣＶＲ２１（配列番号６６）とＨＣＶＲ２６（配列番号６７）；（ｆ）ＬＣＶＲ２７（配列番号６８）とＨＣＶＲ２８（配列番号６９）；（ｇ）ＬＣＶＲ２９（配列番号７０）とＨＣＶＲ３０（配列番号７１）；（ｈ）ＬＣＶＲ３１（配列番号７２）とＨＣＶＲ３２（配列番号７３）；（ｉ）ＬＣＶＲ３３（配列番号７４）とＨＣＶＲ３４（配列番号７５）；（ｊ）ＬＣＶＲ３５（配列番号７６）とＨＣＶＲ３６（配列番号７７）；及び（ｋ）ＬＣＶＲ３７（配列番号７８）とＨＣＶＲ３８（配列番号７９）からなる群から選択される軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）と重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含む。これらの領域の配列については、本明細書中に記載する。抗体の他の例については、ＵＳ２０１１０３０５７１１、ＵＳ２０１２０２９４８０２、ＵＳ２０１２０２９４７９７及びＵＳ２０１００１７２８９５に記載されており、これらを参照により本明細書に援用する。
【０２０８】
いくつかの実施形態において、抗体は、本明細書に記載する、免疫学的に不活性である定常領域などの改変された定常領域を含む。いくつかの実施形態において、定常領域は、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９９）２９：２６１３−２６２４、ＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＧＢ９９／０１４４１号及び／または英国特許出願第９８０９９５１．８号に記載の通りに改変される。他の実施形態において、抗体は、Ａ３３０Ｐ３３１からＳ３３０Ｓ３３１への変異を含むヒト重鎖ＩｇＧ２定常領域を含む（アミノ酸ナンバリングは野生型ＩｇＧ２配列を基準とする）。Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９９）２９：２６１３−２６２４。いくつかの実施形態において、抗体は、次の変異：Ｅ２３３Ｆ２３４Ｌ２３５からＰ２３３Ｖ２３４Ａ２３５への変異を含むＩｇＧ４の定常領域を含む。更に他の実施形態において、定常領域は、Ｎ−結合グリコシル化が脱グリコシル化される。いくつかの実施形態において、定常領域は、定常領域内のオリゴ糖結合残基（Ａｓｎ２９７など）及び／またはＮ−グリコシル化認識配列の一部である隣接残基を変異させることによって、Ｎ−結合グリコシル化が脱グリコシル化される。いくつかの実施形態において、定常領域は、Ｎ−結合グリコシル化が脱グリコシル化される。定常領域のＮ−結合グリコシル化は、酵素的にまたはグリコシル化欠損宿主細胞での発現によって脱グリコシル化され得る。
【０２０９】
抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体のＣＧＲＰ（ヒトα−ＣＧＲＰなど）への結合親和性（ＫＤ）は、約０．０２〜約２００ｎＭであり得る。いくつかの実施形態において、結合親和性は、約２００ｎＭ、約１００ｎＭ、約５０ｎＭ、約１０ｎＭ、約１ｎＭ、約５００ｐＭ、約１００ｐＭ、約６０ｐＭ、約５０ｐＭ、約２０ｐＭ、約１５ｐＭ、約１０ｐＭ、約５ｐＭまたは約２ｐＭのいずれかである。いくつかの実施形態において、結合親和性は、約２５０ｎＭ、約２００ｎＭ、約１００ｎＭ、約５０ｎＭ、約１０ｎＭ、約１ｎＭ、約５００ｐＭ、約１００ｐＭまたは約５０ｐＭのいずれか未満である。
【０２１０】
ＣＧＲＰに対する抗体の結合親和性を決定する１つの方法は、抗体の単機能Ｆａｂ断片の結合親和性を測定することによるものである。単機能Ｆａｂ断片を得るには、抗体（例えば、ＩｇＧ）をパパインで切断してもよいし、組み換え的に発現させてもよい。抗体の抗ＣＧＲＰ  Ｆａｂ断片の親和性は、予め固定化されたストレプトアビジンセンサーチップ（ＳＡ）を備える表面プラズモン共鳴（Ｂｉａｃｏｒｅ３０００（商標）表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）システム、Ｂｉａｃｏｒｅ，ＩＮＣ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ  ＮＪ）により、ＨＢＳ−ＥＰランニング緩衝液（０．０１Ｍ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、０．１５  ＮａＣｌ、３ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．００５％ｖ／ｖ界面活性剤Ｐ２０）を用いて、特定することができる。ビオチン化されたヒトＣＧＲＰ（または任意の他のＣＧＲＰ）を０．５ｕｇ／ｍＬ未満の濃度にＨＢＳ−ＥＰ緩衝液中に希釈し、様々な接触時間を用いて個々のチップチャネルへ注入して、詳細な反応速度論的試験に関する５０〜２００ＲＵ（レスポンスユニット）またはスクリーニングアッセイに関する８００〜１，０００ＲＵのいずれかの２つの範囲の抗原密度を達成することができる。再生試験については、２５％ｖ／ｖエタノール中の２５ｍＭ  ＮａＯＨが、２００回を超える注入に対して、チップ上のＣＧＲＰの活性を保持したまま、結合したＦａｂを効果的に除去することが示された。典型的には、精製したＦａｂ試料の連続希釈物（予想されるＫＤの０．１〜１０倍の濃度域）を１００μＬ／分で１分間注入し、最大２時間の解離時間をとる。Ｆａｂタンパク質の濃度は、既知の濃度のＦａｂ（アミノ酸分析によって決定）を標準として使用するＥＬＩＳＡ及び／またはＳＤＳ−ＰＡＧＥ電気泳動によって決定される。反応速度論的結合速度（ｋｏｎ）及び解離速度（ｋｏｆｆ）は、ＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎプログラムを用いて、１：１ラングミュア結合モデル（Ｋａｒｌｓｓｏｎ，Ｒ．Ｒｏｏｓ，Ｈ．Ｆａｇｅｒｓｔａｍ，Ｌ．Ｐｅｔｅｒｓｓｏｎ，Ｂ．（１９９４）．Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  ６．９９−１１０）にデータを全体的にフィッティングさせることにより、同時に得られる。平衡解離定数（ＫＤ）の値は、ｋｏｆｆ／ｋｏｎとして算出される。このプロトコルは、ヒトＣＧＲＰ、別の哺乳動物のＣＧＲＰ（マウスＣＧＲＰ、ラットＣＧＲＰ、霊長類ＣＧＲＰなど）、及び異なる型のＣＧＲＰ（α型及びβ型など）を含めたあらゆるＣＧＲＰに対する、抗体の結合親和性の特定における使用に適している。抗体の結合親和性は、一般に、２５℃で測定されるが、３７℃で測定してもよい。
【０２１１】
抗体は、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体を含め、当該技術分野において知られている任意の方法によって作製することができる。宿主動物の免疫化の経路及びスケジュールは、本明細書にて詳述する通り、抗体刺激及び抗体産生に関して確立されている従来技術に概して沿うものである。ヒト及びマウス抗体の産生のための一般的技術は、当該技術分野において知られており、本明細書に記載されている。
【０２１２】
ヒトを含むあらゆる哺乳動物対象または抗体産生細胞を操作して、ヒトを含む哺乳動物、ハイブリドーマ細胞株の作製の基礎とすることができることが企図される。典型的には、宿主動物に対して、本明細書に記載のものを含めたある量の免疫原を、腹腔内、筋肉内、経口、皮下、足底内及び／または皮内に接種する。
【０２１３】
ハイブリドーマは、Ｋｏｈｌｅｒ，Ｂ．  ａｎｄ  Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｃ．（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５−４９７の一般的な体細胞ハイブリダイゼーション技術またはＢｕｃｋ，Ｄ．Ｗ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ，１８：３７７−３８１（１９８２）による改変を用いて、リンパ球及び不死化骨髄腫細胞から作製することができる。ハイブリダイゼーションには、限定するものではないが、Ｘ６３−Ａｇ８．６５３及びＳａｌｋ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｃｅｌｌ  Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  Ｃｅｎｔｅｒ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．，ＵＳＡから得られるものを含む、入手可能な骨髄腫系を使用することができる。一般に、この技術は、ポリエチレングリコールなどの融合物質を用いて、または当業者によく知られた電気的手段によって、骨髄腫細胞とリンパ系細胞を融合させることを伴う。融合後、融合培地から細胞を分離し、ハイブリダイズしていない親細胞を取り除くために、ヒポキサンチン−アミノプテリン−チミジン（ＨＡＴ）培地などの選択増殖培地中で増殖させる。モノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマを培養するために、本明細書に記載の培地のいずれかを、血清を添加してまたは血清を添加せずに用いることができる。細胞融合技術の別の代替法として、ＥＢＶ不死化Ｂ細胞を用いて本発明のモノクローナル抗体（例えば、モノクローナル抗ＣＧＲＰ抗体）を産生することができる。ハイブリドーマを増殖させ、サブクローニングし、所望により、従来のイムノアッセイ手順（例えば、ラジオイムノアッセイ、酵素イムノアッセイまたは蛍光イムノアッセイ）によって抗免疫原活性に関して上清を分析する。
【０２１４】
抗体の供給源として使用され得るハイブリドーマは、全ての誘導体、ＣＧＲＰに特異的なモノクローナル抗体またはその部分を産生する親ハイブリドーマの子孫細胞を包含する。
【０２１５】
かかる抗体を産生するハイブリドーマは、周知の手順を用いて、インビトロまたはインビボで増殖することができる。モノクローナル抗体は、所望により、硫酸アンモニウム沈殿、ゲル電気泳動、透析、クロマトグラフィー及び限外濾過などの従来の免疫グロブリン精製手順によって、培養培地または体液から単離され得る。好ましくない活性が存在する場合には、例えば、固相に付着させた免疫原からなる吸着剤に調製物を通し、免疫原から所望の抗体を溶出または放出させることによって、除去することができる。ヒトＣＧＲＰにより、または二官能性若しくは誘導体化剤、例えば、マレイミドベンゾイルスルホスクシンイミドエステル（システイン残基を介した結合）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（リシン残基を介する）、グルタアデヒド（ｇｌｕｔａｒａｄｅｈｙｄｅ）、無水コハク酸、ＳＯＣｌ２若しくはＲ１Ｎ＝Ｃ＝ＮＲ（式中、Ｒ及びＲ１は、異なるアルキル基である）を用いて、免疫化対象の種において免疫原性であるタンパク質、例えば、キーホールリンペットヘモシアニン、血清アルブミン、ウシチログロブリン若しくはダイズトリプシン阻害物質に結合させた標的アミノ酸配列を含有する断片により、宿主動物を免疫化すると、抗体（例えば、モノクローナル抗体）集団を得ることができる。
【０２１６】
所望により、目的の抗体（例えば、モノクローナルまたはポリクローナル抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体）の配列を決定することができ、次いで、発現または増殖のために、ポリヌクレオチド配列をベクターにクローニングすることができる。目的の抗体をコードする配列は、宿主細胞中のベクターに維持され得、次いで、宿主細胞を増殖させ、その後の使用のために凍結することができる。別の代替法には、抗体を「ヒト化」するか、またはその親和性若しくは抗体の他の特徴を改善する遺伝子操作のために、ポリヌクレオチド配列を用いることができる。例えば、抗体がヒトにおける臨床試験及び治療にて用いられる場合、免疫応答を回避するために、ヒト定常領域に更に類似するように、定常領域を遺伝子操作することができる。ＣＧＲＰへのより高い親和性、及びＣＧＲＰ阻害のより高い有効性を得るために、抗体配列を遺伝子的に操作することが望ましい場合がある。ＣＧＲＰに対する結合能力を保持したまま、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体に１つまたは複数のポリヌクレオチドの変化を加えることができることは、当業者には明白であるだろう。
【０２１７】
モノクローナル抗体のヒト化は、４つの一般的工程を含み得、（１）出発抗体の軽鎖及び重鎖可変ドメインのヌクレオチド及び予想されるアミノ酸配列の決定、（２）ヒト化抗体の設計、すなわち、ヒト化プロセスにて使用する抗体フレームワーク領域の決定、（３）実際のヒト化方法／技術、ならびに（４）ヒト化抗体のトランスフェクション及び発現である。例えば、米国特許第４，８１６，５６７号、同第５，８０７，７１５号、同第５，８６６，６９２号、同第６，３３１，４１５号、同第５，５３０，１０１号、同第５，６９３，７６１号、同第５，６９３，７６２号、同第５，５８５，０８９号及び同第６，１８０，３７０号を参照されたい。
【０２１８】
非ヒト免疫グロブリンに由来する抗原結合部位を含む「ヒト化」抗体分子については、げっ歯類または改変げっ歯類Ｖ領域及びその関連相補性決定領域（ＣＤＲ）をヒト定常ドメインに融合させたキメラ抗体を含め、多数記載されている。例えば、Ｗｉｎｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ  ３４９：２９３−２９９（１９９１）、Ｌｏｂｕｇｌｉｏ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８６：４２２０−４２２４（１９８９）、Ｓｈａｗ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３８：４５３４−４５３８（１９８７）及びＢｒｏｗｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．４７：３５７７−３５８３（１９８７）を参照されたい。他の参考文献には、適切なヒト抗体定常ドメインとの融合前に、ヒト支持フレームワーク領域（ＦＲ）にグラフトされたげっ歯類ＣＤＲについて記載されている。例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２７（１９８８）、Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：１５３４−１５３６（１９８８）及びＪｏｎｅｓｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２−５２５（１９８６）を参照されたい。別の参考文献は、組み換え的に張り合わされた（ｖｅｎｅｅｒｅｄ）げっ歯類フレームワーク領域によって支持されたげっ歯類ＣＤＲについて記載している。例えば、欧州特許公開第０５１９５９６号を参照されたい。これらの「ヒト化」分子は、ヒトレシピエントにおいて、当該部分の治療適用の持続期間及び有効性を制限する、げっ歯類抗ヒト抗体分子に対する望ましくない免疫学的応答を最小限に抑えるように設計される。例えば、免疫学的に不活性である（例えば、補体溶解を誘発しない）ように抗体定常領域を操作することができる。例えば、ＰＣＴ公開第ＰＣＴ／ＧＢ９９／０１４４１号；英国特許出願第９８０９９５１．８号を参照されたい。用いることができる、抗体をヒト化する他の方法はまた、Ｄａｕｇｈｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１９：２４７１−２４７６（１９９１）ならびに米国特許第６，１８０，３７７号、同第６，０５４，２９７号、同第５，９９７，８６７号、同第５，８６６，６９２号、同第６，２１０，６７１号及び同第６，３５０，８６１号ならびにＰＣＴ公開第ＷＯ０１／２７１６０号に開示されている。
【０２１９】
更に別の代替法では、特異的なヒト免疫グロブリンタンパク質を発現するように操作された市販のマウスを用いることによって、完全ヒト抗体を得てもよい。より好ましい（例えば、完全ヒト抗体）またはより強い免疫応答をもたらすように設計されたトランスジェニック動物も同様に、ヒト化またはヒト抗体の作製に用いることができる。このような技術の例は、Ａｂｇｅｎｉｘ，Ｉｎｃ．（Ｆｒｅｍｏｎｔ、ＣＡ）のＸｅｎｏｍｏｕｓｅ（商標）ならびにＭｅｄａｒｅｘ，Ｉｎｃ．（Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ、ＮＪ）のＨｕＭＡｂ−Ｍｏｕｓｅ（登録商標）及びＴＣ  Ｍｏｕｓｅ（商標）である。
【０２２０】
一代替法では、当該技術分野において知られている任意の方法を使用して、抗体を組み換え的に作製し、発現させてもよい。別の代替法では、ファージディスプレイ技術によって、抗体を組み換え的に作製してもよい。例えば、米国特許第５，５６５，３３２号、同第５，５８０，７１７号、同第５，７３３，７４３号及び同第６，２６５，１５０、ならびにＷｉｎｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２：４３３−４５５（１９９４）を参照されたい。あるいは、ファージディスプレイ技術（ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２−５５３（１９９０））を用いて、免疫化していないドナー由来の免疫グロブリン可変（Ｖ）ドメイン遺伝子レパートリーからヒト抗体及び抗体断片をインビトロで作製することができる。この技術に従って、抗体Ｖドメイン遺伝子を、Ｍ１３またはｆｄなどの繊維状バクテリオファージのメジャーまたはマイナーのいずれかのコートタンパク質遺伝子にインフレームでクローニングし、機能性抗体断片としてファージ粒子の表面上に提示させる。繊維状粒子は、ファージゲノムの一本鎖ＤＮＡのコピーを含有しているので、抗体の機能性に基づく選択により、当該特性を呈する抗体をコードする遺伝子も選択される。したがって、ファージは、Ｂ細胞の性質の一部を再現するものである。ファージディスプレイは、種々の形式で実施することができ、概説については、例えば、Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｋｅｖｉｎ  Ｓ．  ａｎｄ  Ｃｈｉｓｗｅｌｌ，Ｄａｖｉｄ  Ｊ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ３：５６４−５７１（１９９３）を参照されたい。Ｖ遺伝子セグメントのいくつかの供給源をファージディスプレイに使用することができる。Ｃｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４−６２８（１９９１）は、免疫化したマウスの脾臓に由来するＶ遺伝子の小ランダムコンビナトリアルライブラリーから多種多様な抗オキサゾロン抗体を単離した。免疫化していないヒトドナー由来のＶ遺伝子レパートリーを構築することができ、Ｍａｒｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７（１９９１）またはＧｒｉｆｆｉｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ．１２：７２５−７３４（１９９３）に記載の技術に従って、多種多様な抗原（自己抗原を含む）に対する抗体を本質的に単離することができる。自然な免疫応答において、抗体遺伝子は、高い割合で突然変異を蓄積する（体細胞高頻度突然変異）。導入された変化の一部は、より高い親和性を付与し、その後の抗原刺激において、高親和性表面免疫グロブリンを提示するＢ細胞が優先的に複製され、分化する。この自然の過程は、「鎖シャフリング」として知られる技術を用いることによって再現することができる。Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌ．１０：７７９−７８３（１９９２））。この方法において、ファージディスプレイによって得られた「一次」ヒト抗体の親和性について、その重鎖及び軽鎖Ｖ領域遺伝子を、非免疫化ドナーから取得したＶドメイン遺伝子の天然バリアント（レパートリー）のレパートリーで順次置き換えることによって、向上することができる。この技術により、ｐＭ〜ｎＭ範囲の親和性を有する抗体及び抗体断片の作製が可能となる。非常に大きいファージ抗体レパートリー（「最大ライブラリー（ｔｈｅ  ｍｏｔｈｅｒ−ｏｆ−ａｌｌ  ｌｉｂｒａｒｉｅｓ）」としても知られる）を作製するための手順は、Ｗａｔｅｒｈｏｕｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２１：２２６５−２２６６（１９９３）に記載されている。遺伝子シャフリングを用いてげっ歯類抗体からヒト抗体を得ることも可能であり、この場合、ヒト抗体は、出発げっ歯類抗体と類似の親和性及び特異性を有する。「エピトープインプリンティング」とも呼ばれるこの方法に従って、ファージディスプレイ技術によって得られたげっ歯類抗体の重鎖または軽鎖Ｖドメイン遺伝子を、ヒトＶドメイン遺伝子のレパートリーで置き換えることで、げっ歯類−ヒトキメラが作製される。抗原の選択により、機能性抗原結合部位を復元することができるヒト可変領域が単離される。すなわち、エピトープがパートナーの選択を支配する（刷り込む）。残りのげっ歯類Ｖドメインを置き換えるために、このプロセスを繰り返すと、ヒト抗体が得られる（１９９３年４月１日公開のＰＣＴ公開第ＷＯ９３／０６２１３号参照）。ＣＤＲグラフティングによるげっ歯類抗体の従来のヒト化とは異なり、この技術は、げっ歯類起源のフレームワークまたはＣＤＲ残基を有さない、完全なヒト抗体を提供する。
【０２２１】
上記の議論はヒト化抗体に関するものであるが、論じた一般原則については、イヌ、ネコ、霊長類、ウマ及びウシでの使用のために抗体をカスタマイズすることにも適用できることは明らかである。本明細書に記載の抗体をヒト化する１つまたは複数の態様、例えば、ＣＤＲグラフティング、フレームワーク変異及びＣＤＲ変異を組み合わせてもよい。
【０２２２】
抗体は、宿主動物から抗体及び抗体産生細胞をまず分離し、遺伝子配列を得、その遺伝子配列を用いて宿主細胞（例えば、ＣＨＯ細胞）中で抗体を組み換え的に発現させることによって、組み換え的に作製してもよい。用いることができる別の方法は、植物（例えば、タバコ）またはトランスジェニックミルクにおいて抗体配列を発現させることである。植物またはミルクにおいて組み換え的に抗体を発現させる方法は、開示されている。例えば、Ｐｅｅｔｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｖａｃｃｉｎｅ  １９：２７５６（２００１）；Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．  ａｎｄ  Ｄ．Ｈｕｓｚａｒ  Ｉｎｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  １３：６５（１９９５）；ならびにＰｏｌｌｏｃｋ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２３１：１４７（１９９９）を参照されたい。抗体の誘導体、例えば、ヒト化、一本鎖などを作製するための方法は、当該技術分野において知られている。
【０２２３】
イムノアッセイ及び蛍光標識細胞分取（ＦＡＣＳ）などのフローサイトメトリー分取技術を用いて、ＣＧＲＰに特異的である抗体を単離することもできる。
【０２２４】
抗体は、多くの異なる担体に結合させてもよい。担体は、活性及び／または不活性であってよい。よく知られた担体の例には、ポリプロピレン、ポリスチレン、ポリエチレン、デキストラン、ナイロン、アミラーゼ、ガラス、天然及び修飾セルロース、ポリアクリルアミド、アガロースならびにマグネタイトが挙げられる。担体の性質は、可溶性または不溶性のいずれであってもよい。当業者であれば、抗体に結合させる他の好適な担体を認識しており、または慣用的な実験を用いてそれを確認することができるであろう。いくつかの実施形態において、担体は、心筋を標的にする部分を含む。
【０２２５】
モノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、容易に、従来の手順を用いて、単離し、配列決定される（例えば、モノクローナル抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用することにより）。ハイブリドーマ細胞は、こうしたＤＮＡの好ましい供給源として機能する。ＤＮＡを単離したら、そのＤＮＡを発現ベクター内（ＰＣＴ公開第ＷＯ８７／０４４６２号に開示の発現ベクターなど）に配置し、次いで、これを、大腸菌細胞、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞または他の免疫グロブリンタンパク質を産生しない骨髄腫細胞などの宿主細胞にトランスフェクションして、組み換え宿主細胞中にてモノクローナル抗体の合成を行う。例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ８７／０４４６２号を参照されたい。ＤＮＡはまた、例えば、ヒト重鎖及び軽鎖定常ドメインをコードする配列を相同的ネズミ配列に代えて用いるか（Ｍｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８１：６８５１（１９８４））、または免疫グロブリンをコードする配列に免疫グロブリンではないポリペプチドをコードする配列の全て若しくは一部を共有結合させることによって、改変してもよい。このようにして、本明細書の抗ＣＧＲＰモノクローナル抗体の結合特異性を有する「キメラ」または「ハイブリッド」抗体を作製する。
【０２２６】
抗体（例えば、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体）及び抗体に由来するポリペプチドは、当該技術分野において知られている方法を使用して特定または特性評価を行うことができ、これにより、ＣＧＲＰ生物活性の低減、改善または中和が検出及び／または測定される。例えば、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体は、候補作用物質をＣＧＲＰとインキュベートし、次の特徴：（ａ）ＣＧＲＰへの結合、（ｂ）ＣＧＲＰのその受容体への結合の阻止、（ｃ）ＣＧＲＰ受容体の活性化（ｃＡＭＰ活性化を含む）の遮断または減少、（ｄ）ＣＧＲＰ生物活性またはＣＧＲＰシグナル伝達機能によって媒介される下流経路の阻害、（ｅ）頭痛（例えば、片頭痛）のいずれかの側面の予防、改善または治療、（ｆ）ＣＧＲＰクリアランスの増大、及び（ｇ）ＣＧＲＰ合成、産生または放出の阻害（減少）のいずれか１つまたは複数を観察することによって、特定することもできる。いくつかの実施形態において、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体またはポリペプチドは、候補作用物質をＣＧＲＰとインキュベートし、結合及び／またはそれに付随するＣＧＲＰ生物活性の低減若しくは中和を観察することによって特定される。結合試験は、精製したＣＧＲＰポリペプチド(複数可)を用いるか、またはＣＧＲＰポリペプチド(複数可)を自然に発現する細胞若しくはＣＧＲＰポリペプチドを発現するように形質転換した細胞を用いて行うことができる。一実施形態において、結合アッセイは、競合結合試験であり、この場合、ＣＧＲＰ結合に関して、既知の抗ＣＧＲＰアンタゴニストと競合する候補抗体の能力が評価される。アッセイは、ＥＬＩＳＡ形式を含む各種形態で実施され得る。他の実施形態において、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体は、候補作用物質をＣＧＲＰとインキュベートし、結合及びそれに付随する細胞表面上に発現しているＣＧＲＰ受容体の活性化阻害を観察することによって特定される。
【０２２７】
最初の特定の後、候補抗体（例えば、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体）の活性について、標的とする生物活性を試験するのに知られているバイオアッセイによって更に確認し、精製することができる。あるいは、バイオアッセイを用いて、候補を直接スクリーニングすることができる。例えば、ＣＧＲＰは、応答性細胞において、多数の測定可能な変化を促進する。これらには、細胞（例えば、ＳＫ−Ｎ−ＭＣ細胞）中におけるｃＡＭＰの刺激が挙げられるが、これらに限定されない。アンタゴニスト活性はまた、動物モデルを用いて、例えば、ラット伏在神経の刺激によって誘発される皮膚血管拡張を測定することによって、測定してもよい。Ｅｓｃｏｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１１０：７７２−７７６，１９９３。アンタゴニスト抗体またはポリペプチドの有効性を試験するために、頭痛（片頭痛など）の動物モデルを更に用いることができる。Ｒｅｕｔｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ（１５）Ｓｕｐｐｌ．３，２０００。抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体またはポリペプチドを同定し、特性評価するための方法のいくつかについては、実施例にて詳細に記載する。
【０２２８】
抗体は、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体を含め、当該技術分野においてよく知られている方法を用いて、特性を評価することができる。例えば、１つの方法は、結合するエピトープを同定する方法、すなわち「エピトープマッピング」である。タンパク質上のエピトープ位置のマッピング及び特徴付けに関しては、抗体−抗原複合体の結晶構造の解明、競合アッセイ、遺伝子断片発現アッセイ及び合成ペプチド系アッセイを含め、当該技術分野において知られている多くの方法があり、例えば、Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ，Ｕｓｉｎｇ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９９の第１１章に記載されている通りである。更なる例として、エピトープマッピングを用いて、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体が結合する配列を決定することができる。エピトープマッピングは、様々な供給源、例えば、Ｐｅｐｓｃａｎ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｅｄｅｌｈｅｒｔｗｅｇ  １５，８２１９  ＰＨ  Ｌｅｌｙｓｔａｄ、Ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）から商業的に利用可能である。エピトープは、直線状エピトープ、すなわち、一続きのアミノ酸中に含有されているエピトープであっても、一続きのアミノ酸中に必ずしも含有されていない場合もあるアミノ酸の三次元相互作用によって形成された高次構造エピトープであってもよい。様々な長さのペプチド（例えば、少なくとも４〜６のアミノ酸長）を単離または合成することができ（例えば、組み換え的に）、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体との結合試験に用いることができる。別の例において、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体が結合するエピトープは、ＣＧＲＰ配列に由来する重複ペプチドを使用し、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体による結合を決定することにより、体系的スクリーニングにて決定することができる。遺伝子断片発現アッセイでは、ＣＧＲＰをコードするオープンリーディングフレームをランダムにまたは特定の遺伝子構造で断片化し、ＣＧＲＰの発現断片と試験対象抗体との反応性を決定する。遺伝子断片は、例えば、ＰＣＲによって作製し、次いで、放射性アミノ酸存在下で、インビトロで転写させ、タンパク質に翻訳することができる。次いで、抗体と放射性標識したＣＧＲＰ断片との結合について、免疫沈降及びゲル電気泳動によって決定する。ファージ粒子の表面上に提示されたランダムペプチド配列の大型ライブラリー（ファージライブラリー）を用いることによって、ある特定のエピトープを同定することもできる。あるいは、単純な結合試験にて、試験抗体への結合について、重複ペプチド断片の確定ライブラリーを試験することができる。更なる例において、抗原結合ドメインの変異導入、ドメイン交換実験及びアラニンスキャニング変異導入を実施して、エピトープ結合に必須である、足りる及び／または必要である残基を同定することができる。例えば、ドメイン交換実験は、ＣＧＲＰポリペプチドの様々な断片が、密接に関係しているが抗原的には異なるタンパク質（ニューロトロフィンタンパク質ファミリーの別のメンバーなど）に由来する配列に置き換えられた（交換��れた）変異ＣＧＲＰを用いて行うことができる。抗体と変異ＣＧＲＰの結合を評価することにより、抗体結合に対する特定のＣＧＲＰ断片の重要性を評価することができる。
【０２２９】
抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体を含む、抗体の特性評価に使用することができる更に別の方法は、同じ抗原（すなわち、ＣＧＲＰ上の各種断片）に結合することが知られている他の抗体との競合アッセイを用いて、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体が他の抗体と同じエピトープに結合するかどうかを特定することである。競合アッセイについては、当業者によく知られている。
【０２３０】
発現ベクターを用いて、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体を含む、抗体の発現を誘導することができる。当業者は、発現ベクターを投与して外因性タンパク質の発現をインビボで得ることについて精通している。例えば、米国特許第６，４３６，９０８号、同第６，４１３，９４２号及び同第６，３７６，４７１号を参照されたい。発現ベクターの投与には、注入、経口投与、パーティクルガンまたはカテーテル投与及び局所投与を含む、局所または全身投与が挙げられる。別の実施形態において、発現ベクターは、交感神経幹若しくは神経節、または冠状動脈、心房、心室若しくは心膜に直接投与される。
【０２３１】
発現ベクターまたはサブゲノムポリヌクレオチドを含有する治療用組成物の標的送達を用いることもできる。受容体媒介性ＤＮＡ送達技術については、例えば、Ｆｉｎｄｅｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．（１９９３）１１：２０２；Ｃｈｉｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ：Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  Ｏｆ  Ｄｉｒｅｃｔ  Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ（Ｊ．Ａ．Ｗｏｌｆｆ，ｅｄ．）（１９９４）；Ｗｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（１９８８）２６３：６２１；Ｗｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（１９９４）２６９：５４２；Ｚｅｎｋｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（１９９０）８７：３６５５；Ｗｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（１９９１）２６６：３３８に記載されている。ポリヌクレオチドを含有する治療用組成物は、遺伝子治療プロトコルにおいて、局所投与の場合、約１００ｎｇ〜約２００ｍｇの範囲のＤＮＡで投与する。遺伝子治療プロトコル中、約５００ｎｇ〜約５０ｍｇ、約１μｇ〜約２ｍｇ、約５μｇ〜約５００μｇ及び約２０μｇ〜約１００μｇの濃度範囲のＤＮＡを使用することもできる。遺伝子送達ビヒクルを用いて、治療用ポリヌクレオチド及びポリペプチドを送達することができる。遺伝子送達ビヒクルは、ウイルス起源でも非ウイルス起源でもよい（Ｊｏｌｌｙ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ（１９９４）１：５１；Ｋｉｍｕｒａ，Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ（１９９４）５：８４５；Ｃｏｎｎｅｌｌｙ，Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ（１９９５）１：１８５；及びＫａｐｌｉｔｔ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ（１９９４）６：１４８を概ね参照されたい）。かかるコード配列の発現は、内因性哺乳動物プロモーターまたは異種プロモーターを用いて誘導することができる。コード配列の発現は、構成的または制御的のいずれであってもよい。
【０２３２】
所望のポリヌクレオチドを送達し、所望の細胞中において発現させるためのウイルス性ベクターは、当該技術分野においてよく知られている。例示的なウイルス系ビヒクルは、組み換えレトロウイルス（例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ９０／０７９３６号；同第ＷＯ９４／０３６２２号；同第ＷＯ９３／２５６９８号；同第ＷＯ９３／２５２３４号；同第ＷＯ９３／１１２３０号；同第ＷＯ９３／１０２１８号；同第ＷＯ９１／０２８０５号；米国特許第５、２１９，７４０号及び同第４，７７７，１２７号；英国特許第２，２００，６５１号；ならびに欧州特許第０３４５２４２号を参照）、アルファウイルス系ベクター（例えば、シンドビスウイルスベクター、セムリキ森林ウイルス（ＡＴＣＣ  ＶＲ−６７；ＡＴＣＣ  ＶＲ−１２４７）、ロスリバーウイルス（ＡＴＣＣ  ＶＲ−３７３；ＡＴＣＣ  ＶＲ−１２４６）及びベネズエラウマ脳炎ウイルス（ＡＴＣＣ  ＶＲ−９２３；ＡＴＣＣ  ＶＲ−１２５０；ＡＴＣＣ  ＶＲ１２４９；ＡＴＣＣ  ＶＲ−５３２））及びアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター（例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ９４／１２６４９号、同第ＷＯ９３／０３７６９号；同第ＷＯ９３／１９１９１号；同第ＷＯ９４／２８９３８号；同第ＷＯ９５／１１９８４号及び同第ＷＯ９５／００６５５号を参照）が挙げられるが、これらに限定されない。Ｃｕｒｉｅｌ，Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．（１９９２）３：１４７に記載されている不活化アデノウイルスに連結したＤＮＡの投与も用いることができる。
【０２３３】
非ウイルス性の送達ビヒクル及び方法もまた用いることができ、不活化アデノウイルスにのみ連結したまたは連結していないポリカチオン性濃縮ＤＮＡ（例えば、Ｃｕｒｉｅｌ，Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．（１９９２）３：１４７参照）；リガンド連結ＤＮＡ（例えば、Ｗｕ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（１９８９）２６４：１６９８５参照）；真核細胞送達ビヒクル細胞（例えば、米国特許第５，８１４，４８２号；ＰＣＴ公開第ＷＯ９５／０７９９４号；同第ＷＯ９６／１７０７２号；同第ＷＯ９５／３０７６３号及び同第ＷＯ９７／４２３３８号参照）及び核電荷中和または細胞膜との融合が挙げられるがこれらに限定されない。ネイキッドＤＮＡもまた用いることができる。例示的なネイキッドＤＮＡ導入法については、ＰＣＴ公開第ＷＯ９０／１１０９２号及び米国特許第５，５８０，８５９号に記載されている。遺伝子送達ビヒクルとして作用するリポソームについては、米国特許第５，４２２，１２０号；ＰＣＴ公開第ＷＯ９５／１３７９６号；同第ＷＯ９４／２３６９７号；同第ＷＯ９１／１４４４５号及びＥＰ０５２４９６８に記載されている。更なる手法は、Ｐｈｉｌｉｐ，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．（１９９４）１４：２４１１及びＷｏｆｆｅｎｄｉｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（１９９４）９１：１５８１に記載されている。
【０２３４】
Ｃ．抗体Ｇ１ならびに関連する抗体、ポリペプチド、ポリヌクレオチド、ベクター及び宿主細胞
本発明は、抗体Ｇ１及び表６に示す抗体Ｇ１のバリアントまたは抗体Ｇ１及び表６に示す抗体Ｇ１のバリアントに由来するポリペプチド、ならびにＧ１及びＧ１のバリアント若しくは当該ポリペプチドをコードする配列を含むポリヌクレオチドを含む、医薬組成物を含めた組成物を包含する。いくつかの実施形態において、組成物は、ＣＧＲＰに結合する１つ若しくは複数の抗体若しくはポリペプチド（抗体であってもなくてもよい）及び／またはＣＧＲＰに結合する１つ若しくは複数の抗体若しくはポリペプチドをコードする配列を含む１つ若しくは複数のポリヌクレオチドを含む。これらの組成物は、緩衝液を含む薬学的に許容可能な賦形剤などの好適な賦形剤を更に含み得、これらは、当該技術分野においてよく知られている。
【０２３５】
いくつかの実施形態において、本発明の抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体及びポリペプチドは、次の特徴：（ａ）ＣＧＲＰへの結合、（ｂ）ＣＧＲＰのその受容体への結合の阻止、（ｃ）ＣＧＲＰ受容体の活性化（ｃＡＭＰ活性化を含む）の遮断または減少、（ｄ）ＣＧＲＰ生物活性またはＣＧＲＰシグナル伝達機能によって媒介される下流経路の阻害、（ｅ）頭痛（例えば、片頭痛）のいずれかの側面の予防、改善または治療、（ｆ）ＣＧＲＰクリアランスの増大、及び（ｇ）ＣＧＲＰ合成、産生または放出の阻害（減少）のいずれか（１つまたは複数）によって特徴付けられる。
【０２３６】
いくつかの実施形態において、本発明は、以下のいずれかまたは以下のいずれかを含む組成物（医薬組成物を含む）を提供する。（ａ）抗体Ｇ１または表６に示すそのバリアント、（ｂ）抗体Ｇ１または表６に示すそのバリアントの断片または領域、（ｃ）抗体Ｇ１または表６に示すそのバリアントの軽鎖、（ｄ）抗体Ｇ１または表６に示すそのバリアントの重鎖、（ｅ）抗体Ｇ１または表６に示すそのバリアントの軽鎖及び／または重鎖の１つまたは複数の可変領域、（ｆ）抗体Ｇ１または表６に示すそのバリアントの１つまたは複数のＣＤＲ（１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたは６つのＣＤＲ）、（ｇ）抗体Ｇ１の重鎖のＣＤＲ  Ｈ３、（ｈ）抗体Ｇ１または表６に示すそのバリアントの軽鎖のＣＤＲ  Ｌ３、（ｉ）抗体Ｇ１または表６に示すそのバリアントの軽鎖の３つのＣＤＲ、（ｊ）抗体Ｇ１または表６に示すそのバリアントの重鎖の３つのＣＤＲ、（ｋ）抗体Ｇ１または表６に示すそのバリアントの軽鎖の３つのＣＤＲ及び重鎖の３つのＣＤＲ、（ｌ）（ｂ）〜（ｋ）のいずれか１つを含む抗体。いくつかの実施形態において、本発明はまた、上述のいずれか１つまたは複数を含むポリペプチドを提供する。
【０２３７】
抗体Ｇ１のＣＤＲ部分（Ｃｈｏｔｈｉａ及びＫａｂａｔのＣＤＲを含む）を図５に図式的に示す。ＣＤＲ領域の決定は、十分に当該技術分野の技術範囲内である。いくつかの実施形態において、ＣＤＲがＫａｂａｔとＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲの組み合わせ（「組み合わせＣＤＲ」または「拡張ＣＤＲ」とも呼ぶ）であり得ることは理解される。いくつかの実施形態において、ＣＤＲは、ＫａｂａｔのＣＤＲである。他の実施形態において、ＣＤＲは、ＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲである。換言すれば、２つ以上のＣＤＲを用いる実施形態において、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、組み合わせＣＤＲまたはこれらの組み合わせのいずれかであってよい。
【０２３８】
いくつかの実施形態において、本発明は、Ｇ１または表６に示すそのバリアントの少なくとも１つのＣＤＲ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つまたは６つ全てのＣＤＲと実質的に同一である、少なくとも１つのＣＤＲ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つまたは６つ全てのＣＤＲを含む、ポリペプチド（抗体であってもなくてもよい）を提供する。他の実施形態には、Ｇ１またはＧ１に由来する少なくとも２つ、３つ、４つ、５つまたは６つのＣＤＲと実質的に同一である、少なくとも２つ、３つ、４つ、５つまたは６つのＣＤＲを有する抗体が挙げられる。いくつかの実施形態において、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたは６つのＣＤＲは、Ｇ１または表６に示すそのバリアントの少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたは６つのＣＤＲに少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一である。本発明の目的上、結合特異性及び／または全体的活性は概ね保持されるが、その活性の程度は、Ｇ１または表６に示すそのバリアントと比較して変わり得る（より大きいこともより小さいこともあり得る）ことが理解される。
【０２３９】
いくつかの実施形態において、本発明はまた、Ｇ１または表６に示すそのバリアントのアミノ酸配列を含み、Ｇ１または表６に示すそのバリアントの配列の次のいずれか：少なくとも５つの連続アミノ酸、少なくとも８つの連続アミノ酸、少なくとも約１０の連続アミノ酸、少なくとも約１５の連続アミノ酸、少なくとも約２０の連続アミノ酸、少なくとも約２５の連続アミノ酸、少なくとも約３０の連続アミノ酸を有し、当該アミノ酸の少なくとも３つは、Ｇ１（図５）または表６に示すそのバリアントの可変領域に由来する、ポリペプチド（抗体であってもなくてもよい）を提供する。一実施形態において、可変領域は、Ｇ１の軽鎖由来である。別の実施形態において、可変領域は、Ｇ１の重鎖由来である。例示的なポリペプチドは、Ｇ１の重鎖と軽鎖の両方の可変領域の連続アミノ酸（上述した長さ）を有する。別の実施形態において、５つ（またはそれ以上）の連続アミノ酸は、図５に示すＧ１の相補性決定領域（ＣＤＲ）に由来する。いくつかの実施形態において、連続アミノ酸は、Ｇ１の可変領域に由来する。
【０２４０】
抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体及びポリペプチドのＣＧＲＰ（ヒトα−ＣＧＲＰなど）への結合親和性（ＫＤ）は、約０．０６〜約２００ｎＭであり得る。いくつかの実施形態において、結合親和性は、約２００ｎＭ、１００ｎＭ、約５０ｎＭ、約１０ｎＭ、約１ｎＭ、約５００ｐＭ、約１００ｐＭ、約６０ｐＭ、約５０ｐＭ、約２０ｐＭ、約１５ｐＭ、約１０ｐＭ、約５ｐＭまたは約２ｐＭのいずれかである。いくつかの実施形態において、結合親和性は、約２５０ｎＭ、約２００ｎＭ、約１００ｎＭ、約５０ｎＭ、約１０ｎＭ、約１ｎＭ、約５００ｐＭ、約１００ｐＭまたは約５０ｐＭのいずれか未満である。
【０２４１】
いくつかの実施形態において、本発明はまた、これらの抗体またはポリペプチドのいずれを作製する方法を提供する。本発明の抗体は、当該技術分野において知られている手順によって作製することができる。ポリペプチドは、抗体のタンパク質分解若しくは他の分解、上述した組み換え法（すなわち、単一または融合ポリペプチド）または化学合成によって作製することができる。抗体のポリペプチド、特に約５０のアミノ酸までの短いポリペプチドは、化学合成によって簡便に生成される。化学合成の方法は、当該技術分野において知られており、商業的に利用可能である。例えば、固相方法を使用する自動ポリペプチドシンセサイザーによって抗体を作製することができるであろう。米国特許第５，８０７，７１５号、同第４，８１６，５６７号及び同第６，３３１，４１５号も参照されたい。
【０２４２】
別の代替法において、抗体は、当該技術分野においてよく知られている手順を用いて、組み換え的に作製することができる。一実施形態において、ポリヌクレオチドは、配列番号９及び配列番号１０に示す、抗体Ｇ１の重鎖及び／または軽鎖可変領域をコードする配列を含む。別の実施形態において、配列番号９及び配列番号１０に示すヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを、発現または増殖のために、１つまたは複数のベクターにクローニングする。目的の抗体をコードする配列は、宿主細胞中のベクターに維持され得、次いで、宿主細胞を増殖させ、その後の使用のために凍結することができる。ベクター（発現ベクターを含む）及び宿主細胞については、本明細書にて詳述する。
【０２４３】
いくつかの実施形態において、本発明はまた、Ｇ１などの本発明の抗体の一本鎖可変領域断片（「ｓｃＦｖ」）を包含する。一本鎖可変領域断片は、短い連結ペプチドを用いて、軽鎖及び／または重鎖可変領域を連結することによって作製される。Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４２６。連結ペプチドの一例は、（ＧＧＧＧＳ）３（配列番号５７）であり、一方の可変領域のカルボキシ末端と他方の可変領域のアミノ末端との間の約３．５ｎｍを架橋する。他の配列のリンカーも設計され、使用されている。Ｂｉｒｄら（１９８８）。次に、リンカーは、薬物の結合または固体支持体の結合などの追加の機能のために修飾することができる。単一鎖バリアントを組み換え的にまたは合成的に作製することができる。ｓｃＦｖの合成作製の場合、自動シンセサイザーを用いることができる。ｓｃＦｖの組み換え作製の場合、ｓｃＦｖをコードするポリヌクレオチドを含有する好適なプラスミドを、好適な宿主細胞、酵母菌、植物、昆虫若しくは哺乳動物細胞などの真核生物、または大腸菌などの原核生物のいずれかに導入することができる。目的のｓｃＦｖをコードするポリヌクレオチドは、ポリヌクレオチドのライゲーションなどの慣用的操作によって生成することができる。得られたｓｃＦｖを、当該技術分野において知られている、標準的なタンパク質精製技術を用いて単離することができる。
【０２４４】
ダイアボディなどの一本鎖抗体の他の形態もまた包含される。ダイアボディは、ＶＨ及びＶＬドメインが単一のポリペプチド鎖上に発現しているが、同一鎖上の２つのドメイン間で対をなすには短すぎるリンカーを用いることにより、それらのドメインを別の鎖の相補的ドメインと対合させ、２つの抗原結合部位を創出する、二価の二重特異性抗体である。（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ，Ｐ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ  Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：６４４４−６４４８；Ｐｏｌｊａｋ，Ｒ．Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ２：１１２１−１１２３を参照）。
【０２４５】
例えば、本明細書に開示の抗体を用いて、少なくとも２つの異なる抗原に対して結合特異性を有する二重特異性抗体であるモノクローナル抗体を作製することができる。二重特異性抗体の作製方法は、当該技術分野において知られている（例えば、Ｓｕｒｅｓｈ  ｅｔ  ａｌ．，１９８６，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  １２１：２１０を参照）。元来、二重特異性抗体の組み換え作製は、２つの免疫グロブリン重鎖−軽鎖対と、異なる特異性を有する２つの重鎖との共発現に基づいていた（Ｍｉｌｌｓｔｅｉｎ  ａｎｄ  Ｃｕｅｌｌｏ，１９８３，Ｎａｔｕｒｅ  ３０５，５３７−５３９）。
【０２４６】
二重特異性抗体を作製する１つの手法では、所望の結合特異性を有する抗体可変ドメイン（抗体−抗原結合部位）を免疫グロブリン定常ドメイン配列に融合させる。融合は、好ましくは、ヒンジ、ＣＨ２及びＣＨ３領域の少なくとも一部を含む免疫グロブリン重鎖定常ドメインとの融合である。軽鎖結合に必要な部位を含有する第１の重鎖定常領域（ＣＨ１）が、融合体の少なくとも１つに存在するのが好ましい。免疫グロブリン重鎖融合体及び所望により免疫グロブリン軽鎖をコードするＤＮＡを別個の発現ベクターに挿入し、好適な宿主生物にコトランスフェクトする。これにより、構築物に用いられる３つのポリペプチド鎖の割合が異なるときに最適な収率が得られる実施形態において、３つのポリペプチド断片の相互比率を調節する上で、大きな柔軟性がもたらされる。しかしながら、少なくとも２つのポリペプチド鎖の発現が同じ割合であるときに高収率が得られる場合、または割合に特定の重要性がない場合には、２つまたは３つ全てのポリペプチド鎖をコードする配列を１つの発現ベクターに挿入することも可能である。
【０２４７】
１つの手法において、二重特異性抗体は、第１の結合特異性を有する一方のアームのハイブリッド免疫グロブリン重鎖と、他方のアームのハイブリッド免疫グロブリン重鎖−軽鎖対（第２の結合特異性をもたらす）から構成される。免疫グロブリン軽鎖が二重特異性分子の半分である、この非対称構造により、望ましくない免疫グロブリン鎖の組み合わせからの所望の二重特異性化合物の分離を容易にする。この手法については、１９９４年３月３日に公開されたＰＣＴ公開第ＷＯ９４／０４６９０号に記載されている。
【０２４８】
２つの共有結合抗体を含むヘテロ複合抗体も本発明の範囲内である。かかる抗体は、免疫系細胞を不必要な細胞に対して標的化するために（米国特許第４，６７６，９８０号）、またＨＩＶ感染の治療のために（ＰＣＴ出願公開第ＷＯ９１／００３６０号及び同第ＷＯ９２／２００３７３号；ＥＰ０３０８９）使用されている。ヘテロ複合抗体は、任意の簡便な架橋方法を用いて作製することができる。好適な架橋剤及び技術については、当該技術分野においてよく知られており、米国特許第４，６７６，９８０号に記載されている。
【０２４９】
キメラまたはハイブリッド抗体もまた、架橋剤が関与するものを含む、タンパク質合成化学の既知の方法を用いて、インビトロで調製することができる。例えば、ジスルフィド交換反応を用いるか、またはチオエーテル結合を形成することによって、免疫毒素が構築され得る。本目的に好適な試薬の例としては、イミノチオレート及びメチル−４−メルカプトブチルイミダートが挙げられる。
【０２５０】
抗体Ｇ１若しくは表６に示すそのバリアントの１つまたは複数のＣＤＲ、または抗体Ｇ１若しくは表６に示すそのバリアントに由来する１つまたは複数のＣＤＲを含むヒト化抗体は、当該技術分野において知られている任意の方法を用いて作製することができる。例えば、４つの一般的工程を用いて、モノクローナル抗体をヒト化することができる。
【０２５１】
いくつかの実施形態において、本発明は、抗体Ｇ１または表６に示すそのバリアントの修飾物を包含し、活性及び／または親和性が向上または低下した、その特性に有意な影響を与えない機能的に等価である抗体及びバリアントを含む。例えば、ＣＧＲＰに対して所望の結合親和性を有する抗体を得るために、抗体Ｇ１または表６に示すそのバリアントのアミノ酸配列を変異させてよい。ポリペプチドの修飾は、当該技術分野において慣用的な作業であり、本明細書にて詳述する必要はない。ポリペプチドの修飾については、実施例で例示する。修飾ポリペプチドの例には、アミノ酸残基の保存的置換、機能活性に有意な有害的変化をもたらさないアミノ酸の１つまたは複数の欠失若しくは付加を有するポリペプチド、または化学的類似体の使用が挙げられる。
【０２５２】
アミノ酸配列の挿入には、１つの残基から１００以上の残基を含有するポリペプチドの長さ範囲に及ぶアミノ末端及び／またはカルボキシル末端の融合、ならびに１つまたは複数のアミノ酸残基の配列内挿入が挙げられる。末端挿入の例には、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体またはエピトープタグに融合した抗体が挙げられる。抗体分子の他の挿入バリアントには、抗体Ｎ末端またはＣ末端に酵素、または抗体の血清中半減期を増大させるポリペプチドを融合したものが挙げられる。
【０２５３】
置換バリアントは、抗体分子中の少なくとも１つのアミノ酸残基を除去し、その位置に異なる残基を挿入したものである。置換変異導入に関して最も目的対象になる部位には、超可変領域が挙げられるが、ＦＲの変更もまた企図される。保存的置換については、表１に「保存的置換」という見出しで示す。こうした置換により生物活性に変化がもたらされる場合、表１に「代表的置換」と称するまたはアミノ酸クラスに関して以下で詳述するようなより実質的な変化を導入し、生成物をスクリーニングすることができる。
【０２５４】
【表１】
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【０２５５】
抗体の生物学的特性の実質的な改変は、（ａ）置換領域内のポリペプチド主鎖の構造、例えば、シート若しくはヘリックス構造、（ｂ）標的部位における分子の電荷若しくは疎水性、または（ｃ）側鎖の嵩を維持することに対する効果が顕著に異なる置換を選択することによって達成される。天然残基は、共通する側鎖特性：
（１）無極性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
（２）極性無電荷：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
（３）酸性（負電荷）：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
（４）塩基性（正電荷）：Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
（５）鎖配向性に影響する残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；及び
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、Ｈｉｓ
に基づいて各群に分けられる。
【０２５６】
非保存的置換は、これらのクラスのうちの１つのメンバーを別のクラスに交換することによってなされる。
【０２５７】
抗体の適切な立体構造の維持に関与しない任意のシステイン残基もまた、通常はセリンで置換することができ、分子の酸化安定性を改善し、異常な架橋を防ぐことができる。逆に、特にその抗体がＦｖ断片などの抗体断片である場合、システイン結合(複数可)を抗体に付加してもよく、抗体の安定性が向上する。
【０２５８】
アミノ酸修飾は、１つまたは複数のアミノ酸の変化または修飾から、可変領域などの領域の完全な再設計まで多様であり得る。可変領域における変化は、結合親和性及び／または特異性を変えることができる。いくつかの実施形態において、ＣＤＲドメイン内に１つから５つの保存的アミノ酸置換がなされる。他の実施形態において、ＣＤＲドメイン内に１つから３つを超えない保存的アミノ酸置換がなされる。更に他の実施形態において、ＣＤＲドメインは、ＣＤＲ  Ｈ３及び／またはＣＤＲ  Ｌ３である。
【０２５９】
修飾にはまた、グリコシル化及び非グリコシル化ポリペプチド、ならびに他の翻訳後修飾、例えば、種々の糖によるグリコシル化、アセチル化及びリン酸化反応などがなされたポリペプチドも挙げられる。抗体は、定常領域の保存的位置でグリコシル化される（Ｊｅｆｆｅｒｉｓ  ａｎｄ  Ｌｕｎｄ，１９９７，Ｃｈｅｍ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６５：１１１−１２８；Ｗｒｉｇｈｔ  ａｎｄ  Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，１９９７，ＴｉｂＴＥＣＨ  １５：２６−３２）。免疫グロブリンのオリゴ糖側鎖は、タンパク質の機能（Ｂｏｙｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３２：１３１１−１３１８；Ｗｉｔｔｗｅ  ａｎｄ  Ｈｏｗａｒｄ，１９９０，Ｂｉｏｃｈｅｍ．２９：４１７５−４１８０）、ならびに糖タンパク質の立体構造及び提示される三次元表面に影響し得る糖タンパク質の部分間の分子内相互作用（Ｈｅｆｆｅｒｉｓ  ａｎｄ  Ｌｕｎｄ，上掲；Ｗｙｓｓ  ａｎｄ  Ｗａｇｎｅｒ，１９９６，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．７：４０９−４１６）に影響を与える。オリゴ糖はまた、特異的認識構造に基づいて、所定の糖タンパク質をある特定の分子に標的化するのに役立ち得る。抗体のグリコシル化は、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）に影響することも報告されている。特に、二分岐ＧｌｃＮＡｃの形成を触媒するグリコシルトランスフェラーゼであるβ（１，４）−Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ（ＧｎＴＩＩＩ）のテトラサイクリン制御発現を示すＣＨＯ細胞は、ＡＤＣＣ活性が向上することが報告された（Ｕｍａｎａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｍａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．１７：１７６−１８０）。
【０２６０】
抗体のグリコシル化は、通常、Ｎ−結合型またはＯ−結合型のいずれかである。Ｎ−結合型は、アスパラギン残基の側鎖への炭水化物部分の結合を指す。トリペプチド配列であるアスパラギン−Ｘ−セリン、アスパラギン−Ｘ−スレオニン及びアスパラギン−Ｘ−システイン（Ｘはプロリン以外の任意のアミノ酸）は、アスパラギン側鎖への炭水化物部分の酵素的結合のための認識配列である。したがって、これらのトリペプチド配列のいずれかがポリペプチド中に存在することで、潜在的なグリコシル化部位が創出される。Ｏ−結合型グリコシル化とは、ヒドロキシアミノ酸、最も一般的にはセリンまたはスレオニンへのＮ−アセチルガラクトサミン、ガラクトースまたはキシロースの糖のうちの１つの結合を指すが、５−ヒドロキシプロリンまたは５−ヒドロキシリシンも用いることができる。
【０２６１】
抗体へのグリコシル化部位の付加は、上記のトリペプチド配列のうちの１つまたは複数を含むようにアミノ酸配列を変えることによって簡便に実施される（Ｎ−結合型グリコシル化部位に関して）。この変更はまた、元の抗体の配列に１つ若しくは複数のセリン残基若しくはスレオニン残基の付加、またはこれらの残基による置換によって行うことができる（Ｏ結合型グリコシル化部位に関して）。
【０２６２】
抗体のグリコシル化パターンは、基本となるヌクレオチド配列を変更することなく、変えることもできる。グリコシル化は、抗体を発現させるために使用する宿主細胞に大きく依存する。候補治療薬である組み換え糖タンパク質、例えば抗体の発現に使用される細胞型は、自然細胞であることは稀であるので、抗体のグリコシル化パターンにおける多様性が見込まれ得る（例えば、Ｈｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：９０６２−９０７０を参照）。
【０２６３】
宿主細胞の選択に加えて、抗体の組み換え産生時のグリコシル化に影響を与える要因には、増殖様式、培地配合、培養密度、酸素添加、ｐＨ、精製スキームなどが挙げられる。特定の宿主生物にて達成されるグリコシル化パターンを変更するために、オリゴ糖産生に関与するある特定の酵素の導入または過剰発現を含む様々な方法が提案されている（米国特許第５，０４７，３３５号、同第５，５１０，２６１号及び同第５．２７８，２９９号）。グリコシル化またはある種のグリコシル化は、例えば、エンドグリコシダーゼＨ（Ｅｎｄｏ  Ｈ）、Ｎ−グリコシダーゼＦ、エンドグリコシダーゼＦ１、エンドグリコシダーゼＦ２、エンドグリコシダーゼＦ３を用いて、糖タンパク質から酵素的に取り除くことができる。加えて、組み換え宿主細胞を遺伝子的に組み換えて、特定の種類の多糖のプロセッシングを欠くようにすることができる。これらの技術及び類似技術については、当該技術分野においてよく知られている。
【０２６４】
他の修飾方法には、当該技術分野において知られているカップリング技術を用いることが挙げられ、酵素的手段、酸化的置換及びキレート化を含むがこれらに限定されない。修飾は、例えば、イムノアッセイのための標識の結合に用いることができる。修飾Ｇ１ポリペプチドは、当該技術分野において確立された手順を用いて作製することができ、当該技術分野において知られている標準的なアッセイを用いてスクリーニングすることができる。これらのいくつかについては、以下及び実施例にて記載する。
【０２６５】
本発明のいくつかの実施形態において、抗体は、改変された定常領域を含み、例えば、補体媒介性溶解を誘発しない、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を刺激しない、若しくはミクログリアを活性化しない、または補体媒介性溶解の誘発、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）に対する刺激若しくはミクログリアの活性化のうちのいずれか１つ若しくは複数の活性を低下させた（改変していない抗体と比較して）、免疫学的に不活性であるか、部分的に不活性である定常領域を含む。定常領域の種々の改変を用いて、エフェクター機能の最適レベル及び／または組み合わせを達成することができる。例えば、Ｍｏｒｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ８６：３１９−３２４（１９９５）；Ｌｕｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １５７：４９６３−９  １５７：４９６３−４９６９（１９９６）；Ｉｄｕｓｏｇｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １６４：４１７８−４１８４（２０００）；Ｔａｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １４３：２５９５−２６０１（１９８９）；及びＪｅｆｆｅｒｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  １６３：５９−７６（１９９８）を参照されたい。いくつかの実施形態において、定常領域は、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９９）２９：２６１３−２６２４、ＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＧＢ９９／０１４４１号及び／または英国特許出願第９８０９９５１．８号に記載されているように改変される。他の実施形態において、抗体は、Ａ３３０Ｐ３３１からＳ３３０Ｓ３３１への変異を含むヒト重鎖ＩｇＧ２定常領域を含む（アミノ酸ナンバリングは野生型ＩｇＧ２配列を基準とする）。Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９９）２９：２６１３−２６２４。更に他の実施形態において、定常領域は、Ｎ−結合グリコシル化が脱グリコシル化される。いくつかの実施形態において、定常領域は、定常領域中のグリコシル化アミノ酸残基またはＮ−グリコシル化認識配列の一部である隣接残基を変異させることによって、Ｎ−結合グリコシル化が脱グリコシル化される。例えば、Ｎ−グリコシル化部位Ｎ２９７をＡ、Ｑ、ＫまたはＨに変異させることができる。Ｔａｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １４３：２５９５−２６０１（１９８９）；及びＪｅｆｆｅｒｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  １６３：５９−７６（１９９８）を参照されたい。いくつかの実施形態において、定常領域は、Ｎ−結合グリコシル化が脱グリコシル化される。定常領域のＮ−結合グリコシル化は、酵素的に（酵素ＰＮＧａｓｅによって炭水化物を取り除くなど）またはグリコシル化欠損宿主細胞での発現によって脱グリコシル化され得る。
【０２６６】
他の抗体改変には、１９９９年１１月１８日に公開されたＰＣＴ公開第ＷＯ９９／５８５７２号に記載の通りに改変された抗体が挙げられる。これらの抗体は、標的分子に対する結合ドメインに加えて、ヒト免疫グロブリン重鎖の定常ドメインの全てまたは一部と実質的に相同であるアミノ酸配列を有するエフェクタードメインを含む。これらの抗体は、有意な補体依存性溶解または標的の細胞媒介性破壊を誘発することなく、標的分子に結合することができる。いくつかの実施形態において、エフェクタードメインは、ＦｃＲｎ及び／またはＦｃγＲＩＩｂに特異的に結合することができる。これらは、通常、２つ以上のヒト免疫グロブリン重鎖ＣＨ２ドメインに由来するキメラドメインに基づく。このように改変された抗体は、長期抗体療法での使用に特に適しており、従来の抗体療法に対する炎症性反応及び他の拒絶反応が回避される。
【０２６７】
いくつかの実施形態において、本発明は、親和性が成熟した実施形態を含む。例えば、親和性成熟抗体は、当該技術分野において知られている手順によって作製することができる（Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１０：７７９−７８３；Ｂａｒｂａｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ，ＵＳＡ  ９１：３８０９−３８１３；Ｓｃｈｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｇｅｎｅ，１６９：１４７−１５５；Ｙｅｌｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５５：１９９４−２００４；Ｊａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５４（７）：３３１０−９；Ｈａｗｋｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２６：８８９−８９６；及びＷＯ２００４／０５８１８４）。
【０２６８】
抗体の親和性の調節及びＣＤＲの特徴付けには、以下の方法を用いることができる。抗体のＣＤＲの特徴付け及び／または抗体などのポリペプチドの結合親和性の変更（改善など）を行う一方法は、「ライブラリースキャニング変異導入」と呼ばれる。一般に、ライブラリースキャニング変異導入は、以下のように行われる。当該技術分野にて認識されている方法を用いて、ＣＤＲ中の１つまたは複数のアミノ酸位置を２つ以上（３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０など）のアミノ酸で置換する。これにより、２つ以上の構成要素の複雑性（全ての位置で２つ以上のアミノ酸を置換する場合）をそれぞれ有する、クローンの小ライブラリー（いくつかの実施形態では、分析されるアミノ酸の位置ごとに１つ）が作られる。一般に、ライブラリーは、天然（無置換）アミノ酸を含むクローンも包含する。各ライブラリーからの少数のクローン、例えば、約２０〜８０のクローン（ライブラリーの複雑性に依存する）を、標的ポリペプチド（または他の結合標的）に対する結合親和性についてスクリーニングし、結合が増加した候補、同じもの、減少したものまたは全くないものを特定する。結合親和性を決定するための方法は、当該技術分野においてよく知られている。結合親和性は、約２倍以上の結合親和性の差異を検出する、Ｂｉａｃｏｒｅ表面プラズモン共鳴分析を用いて決定することができる。Ｂｉａｃｏｒｅは、出発抗体がすでに比較的高い親和性、例えば、約１０ｎＭ以下のＫＤで結合する場合、特に有用である。Ｂｉａｃｏｒｅ表面プラズモン共鳴を用いるスクリーニングについては、本明細書の実施例において記載する。
【０２６９】
結合親和性は、Ｋｉｎｅｘａ  Ｂｉｏｃｅｎｓｏｒは、シンチレーション近接アッセイ、ＥＬＩＳＡ、ＯＲＩＧＥＮイムノアッセイ（ＩＧＥＮ）、蛍光消光、蛍光移動及び／または酵母ディスプレイを用いて特定することができる。結合親和性はまた、好適なバイオアッセイを用いて、スクリーニングしてもよい。
【０２７０】
いくつかの実施形態において、当該技術分野にて認識されている変異導入法（そのいくつかについて本明細書に記載する）を用いて、ＣＤＲ中のそれぞれのアミノ酸位置を２０種全ての天然アミノ酸で置換する（いくつかの実施形態では、１回に１つずつ）。これにより、２０の構成要素の複雑性（それぞれの位置で全２０種のアミノ酸を置換する場合）をそれぞれ有する、クローンの小ライブラリー（いくつかの実施形態では、分析されるアミノ酸の位置ごとに１つ）が作られる。
【０２７１】
いくつかの実施形態において、スクリーニングされるライブラリーは、２つ以上の位置に置換を含み、これらの置換は、同じＣＤＲ中であってもよいし、２つ以上のＣＤＲ中であってもよい。したがって、ライブラリーは、１つのＣＤＲ中の２つ以上の位置に置換を含み得る。ライブラリーは、２つ以上のＣＤＲ中の２つ以上の位置に置換を含み得る。ライブラリーは、３、４、５つ以上の位置に置換を含み得、当該位置は、２つ、３つ、４つ、５つまたは６つのＣＤＲ中に認められる。置換は、冗長性の低いコドンを用いて作製することができる。例えば、Ｂａｌｉｎｔ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９３）Ｇｅｎｅ  １３７（１）：１０９−１８）の表２を参照されたい。
【０２７２】
ＣＤＲは、ＣＤＲＨ３及び／またはＣＤＲＬ３であってよい。ＣＤＲは、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及び／またはＣＤＲＨ３のうちの１つまたは複数であってよい。ＣＤＲは、ＫａｂａｔのＣＤＲ、ＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲまたは拡張ＣＤＲであってよい。
【０２７３】
結合が改善した候補の配列を決定し、これにより、親和性が改善されたＣＤＲ置換変異体（「改善した」置換とも呼ぶ）を同定することができる。また、結合する候補の配列も決定し、これにより、結合を保持するＣＤＲ置換を同定してもよい。
【０２７４】
複数回のスクリーニングを行うことができる。例えば、結合の改善した候補（１つまたは複数のＣＤＲの１つまたは複数の位置にアミノ酸置換をそれぞれ含む）はまた、それぞれの改善したＣＤＲ位置（すなわち、結合の改善を示した置換変異体のＣＤＲ中のアミノ酸位置）に少なくとも元のアミノ酸及び置換したアミノ酸を含む第２のライブラリーの設計に有用である。このライブラリーの作製及びスクリーニングまたは選別については、以下に詳述する。
【０２７５】
ライブラリースキャニング変異導入はまた、結合の改善、同じ結合、結合の減少または結合のないクローン頻度から、抗体−抗原複合体の安定性に対しての各アミノ酸位置の重要性に関する情報が提供されるという点で、ＣＤＲの特性評価の手段を提供する。例えば、ＣＤＲのある位置を全２０種のアミノ酸に変えたときに結合が保持される場合、その位置は、抗原結合に必要でない可能性が高い位置であると特定される。逆に、ＣＤＲのある位置がパーセンテージの低い置換でしか結合を保持しない場合、その位置は、ＣＤＲ機能に重要な位置であると特定される。したがって、ライブラリースキャニング変異導入法により、多数の異なるアミノ酸（全２０種のアミノ酸を含む）に変更することができるＣＤＲの位置、及び変えることのできないまたは少数のアミノ酸にのみ変更可能なＣＤＲの位置に関する情報がもたらされる。
【０２７６】
親和性の改善した候補を組み合わせて、改善したアミノ酸、その位置の元のアミノ酸を含み、かつ望ましいスクリーニング法または選別法を用いて、所望されるまたは可能なライブラリーの複雑性に応じて、その位置の更なる置換を含み得る、第２のライブラリーにしてもよい。加えて、所望により、隣接するアミノ酸位置を少なくとも２つ以上のアミノ酸にランダム化することができる。隣接するアミノ酸のランダム化は、変異ＣＤＲにおける更なる高次構造の柔軟性を与え得るものであり、これにより、多数の改善変異体の導入が可能になり、または容易になり得る。ライブラリーはまた、初回のスクリーニングで親和性の改善を示さなかった位置での置換を含み得る。
【０２７７】
第２のライブラリーは、Ｂｉａｃｏｒｅ表面プラズモン共鳴分析を用いるスクリーニング、及び当該技術分野において知られている選択のための任意の方法（ファージディスプレイ、酵母ディスプレイ及びリボソームディスプレイを含む）を用いる選択を含む、当該技術分野において知られている任意の方法を使用して、結合親和性の改善した及び／または変化したライブラリーメンバーについて、スクリーニングまたは選別される。
【０２７８】
いくつかの実施形態において、本発明はまた、本発明の抗体（Ｇ１など）またはポリペプチドに由来する１つまたは複数の断片または領域を含む融合タンパク質を包含する。一実施形態において、配列番号２（図５）に示す可変軽鎖領域の少なくとも１０の連続アミノ酸及び／または配列番号１（図５）に示す可変重鎖領域の少なくとも１０のアミノ酸を含む、融合ポリペプチドが提供される。他の実施形態において、配列番号２（図５）に示す可変軽鎖領域の少なくとも約１０、少なくとも約１５、少なくとも約２０、少なくとも約２５若しくは少なくとも約３０の連続アミノ酸及び／または配列番号１（図５）に示す可変重鎖領域の少なくとも約１０、少なくとも約１５、少なくとも約２０、少なくとも約２５若しくは少なくとも約３０の連続アミノ酸を含む、融合ポリペプチドが提供される。別の実施形態において、融合ポリペプチドは、図５の配列番号２及び配列番号１に示すＧ１の軽鎖可変領域及び／または重鎖可変領域を含む。別の実施形態において、融合ポリペプチドは、Ｇ１の１つまたは複数のＣＤＲを含む。更に他の実施形態において、融合ポリペプチドは、抗体Ｇ１のＣＤＲ  Ｈ３及び／またはＣＤＲ  Ｌ３を含む。本発明の目的上、Ｇ１融合タンパク質は、１つまたは複数のＧ１抗体と、天然分子には結合していない別のアミノ酸配列、例えば、別の領域からの非相同配列または相同配列とを含有する。例示的な非相同配列には、ＦＬＡＧタグまたは６Ｈｉｓタグ（配列番号５６）などの「タグ」が挙げられるが、これらに限定されない。タグは、当該技術分野においてよく知られている。
【０２７９】
Ｇ１融合ポリペプチドは、当該技術分野において知られている方法によって、例えば、合成的にまたは組み換え的に作製することができる。通常、本発明のＧ１融合タンパク質は、本明細書に記載の組み換え法を用いて、当該タンパク質をコードするポリヌクレオチドが発現するようにすることによって作製されるが、当該技術分野において知られている他の手段、例えば、化学合成などによって調製してもよい。
【０２８０】
いくつかの態様において、本発明はまた、固体支持体（ビオチンまたはアビジンなど）への結合を容易にする試薬と複合体化した（例えば、連結した）、Ｇ１由来の抗体またはポリペプチドを含む組成物を提供する。説明を簡潔にするために、これらの方法が本明細書に記載のＣＧＲＰ結合実施形態のいずれかに適用されるという理解を前提に、概して、Ｇ１または抗体に関して言及する。複合体化とは、一般に、本明細書に記載する構成要素の連結を指す。連結（少なくとも投与のために、これらの構成要素を隣接関係に概ね固定すること）は、任意数の方法で達成することができる。例えば、試薬と抗体のそれぞれが他方と反応できる置換基を持つ場合、試薬と抗体との間の直接反応が可能である。例えば、一方にあるアミノ基またはスルフヒドリル基などの求核基は、他方にある無水物若しくは酸ハロゲン化物などのカルボニル含有基または良好な脱離基（例えば、ハロゲン化物）を含有するアルキル基と反応することができる。
【０２８１】
抗体またはポリペプチドは、蛍光分子、放射性分子または当該技術分野において知られている任意の他の標識などの標識試薬（あるいは「ラベル」とも呼ばれる）に連結することができる。一般に、シグナルを（直接的または間接的に）もたらす標識は、当該技術分野において知られている。
【０２８２】
いくつかの実施形態において、本発明はまた、抗体Ｇ１、及び／または本明細書に記載の抗体若しくはポリペプチドのいずれか若しくは全てを含む、組成物（医薬組成物を含む）及びキットを提供する。
【０２８３】
いくつかの実施形態において、本発明はまた、本発明の抗体及びポリペプチド（図５に示す軽鎖及び重鎖可変領域のポリペプチド配列を含む抗体を含む）をコードする単離ポリヌクレオチド、ならびに当該ポリヌクレオチドを含むベクター及び宿主細胞を提供する。
【０２８４】
いくつかの実施形態において、本発明は、以下のいずれかをコードするポリヌクレオチドを含むポリヌクレオチド（または医薬組成物を含む組成物）を提供する。（ａ）抗体Ｇ１または表６に示すそのバリアント、（ｂ）抗体Ｇ１または表６に示すそのバリアントの断片または領域、（ｃ）抗体Ｇ１または表６に示すそのバリアントの軽鎖、（ｄ）抗体Ｇ１または表６に示すそのバリアントの重鎖、（ｅ）抗体Ｇ１または表６に示すそのバリアントの軽鎖及び／または重鎖の１つまたは複数の可変領域、（ｆ）抗体Ｇ１または表６に示すそのバリアントの１つまたは複数のＣＤＲ（１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたは６つのＣＤＲ）、（ｇ）抗体Ｇ１の重鎖のＣＤＲ  Ｈ３、（ｈ）抗体Ｇ１または表６に示すそのバリアントの軽鎖のＣＤＲ  Ｌ３、（ｉ）抗体Ｇ１または表６に示すそのバリアントの軽鎖の３つのＣＤＲ、（ｊ）抗体Ｇ１または表６に示すそのバリアントの重鎖の３つのＣＤＲ、（ｋ）抗体Ｇ１または表６に示すそのバリアントの軽鎖の３つのＣＤＲ及び重鎖の３つのＣＤＲ、（ｌ）（ｂ）〜（ｋ）のいずれか１つを含む抗体。いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチドは、配列番号９及び配列番号１０に示すポリヌクレオチドの一方または両方を含む。
【０２８５】
別の態様において、本発明は、本明細書に記載の抗体（抗体断片を含む）及びポリペプチド、例えばエフェクター機能を欠損させた抗体及びポリペプチドのいずれかをコードするポリヌクレオチドを提供する。ポリヌクレオチドは、当該技術分野において知られている手順によって作製することができる。
【０２８６】
別の態様において、本発明は、本発明のポリヌクレオチドのいずれかを含む組成物（医薬組成物など）を提供する。いくつかの実施形態において、組成物は、本明細書に記載のＧ１抗体をコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターを含む。他の実施形態において、組成物は、本明細書に記載の抗体またはポリペプチドのいずれかをコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターを含む。更に他の実施形態において、組成物は、配列番号９及び配列番号１０に示すポリヌクレオチドの一方または両方を含む。発現ベクター、及びポリヌクレオチド組成物の投与については、本明細書にて更に説明する。
【０２８７】
別の態様において、本発明は、本明細書に記載のポリヌクレオチドのいずれかを作製する方法を提供する。
【０２８８】
こうした配列に相補的なポリヌクレオチドもまた、本発明に包含される。ポリヌクレオチドは、一本鎖（コード化またはアンチセンス）でも、二本鎖でもよく、ＤＮＡ（ゲノム、ｃＤＮＡまたは合成）またはＲＮＡ分子であり得る。ＲＮＡ分子には、イントロンを含有し、ＤＮＡ分子に１対１で対応するＨｎＲＮＡ分子及びイントロンを含有しないｍＲＮＡ分子が挙げられる。更なるコード配列または非コード配列が本発明のポリヌクレオチド内に存在してもよいが、必須ではなく、ポリヌクレオチドは、他の分子及び／または支持体材料に連結していてもよいが、必須ではない。
【０２８９】
ポリヌクレオチドは、天然配列（すなわち、抗体またはその一部をコードする内因性配列）を含んでもよいし、こうした配列のバリアントを含んでもよい。ポリヌクレオチドのバリアントは、コードされたポリペプチドの免疫反応性が天然の免疫反応性分子と比較して低下しないような１つまたは複数の置換、付加、欠失及び／または挿入を含む。コードされたポリペプチドの免疫反応性への影響は、一般に、本明細書に記載の通りに評価され得る。バリアントは、天然抗体またはその一部をコードするポリヌクレオチド配列に対して、好ましくは少なくとも約７０％の同一性、より好ましくは少なくとも約８０％の同一性、最も好ましくは少なくとも約９０％の同一性を示す。
【０２９０】
２つのポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列は、２つの配列中のヌクレオチドまたはアミノ酸の配列が後述するように最大一致するように配列させたときに同じであれば、「同一」であるという。２つの配列間の比較は、通常、配列を比較領域にわたって比較し、配列が類似している局所的領域を同定し比較することによって行われる。本明細書で使用する「比較領域」とは、２つの配列を最適配列した後に、配列が同数の連続的な位置の参照配列と比較され得る、少なくとも約２０の連続的な位置、通常、３０〜約７５、４０〜約５０のセグメントを指す。
【０２９１】
比較のための配列の最適アラインメントは、バイオインフォマティクスソフトウェアのＬａｓｅｒｇｅｎｅスイートのＭｅｇａｌｉｇｎプログラム（ＤＮＡＳＴＡＲ，Ｉｎｃ．、Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を使用して、デフォルトパラメータを用いて行うことができる。このプログラムは、以下の参考文献に記載のいくつかのアラインメントスキームを組み込んでいる。Ｄａｙｈｏｆｆ，Ｍ．Ｏ．（１９７８）Ａ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ  ｃｈａｎｇｅ  ｉｎ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  −  Ｍａｔｒｉｃｅｓ  ｆｏｒ  ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ  ｄｉｓｔａｎｔ  ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ．Ｉｎ  Ｄａｙｈｏｆｆ，Ｍ．Ｏ．（ｅｄ．）Ａｔｌａｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ  ＤＣ  Ｖｏｌ．５，Ｓｕｐｐｌ．３，ｐｐ．３４５−３５８；Ｈｅｉｎ  Ｊ．，１９９０，Ｕｎｉｆｉｅｄ  Ａｐｐｒｏａｃｈ  ｔｏ  Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ  ａｎｄ  Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｓ  ｐｐ．６２６−６４５  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  ｖｏｌ．１８３，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ；Ｈｉｇｇｉｎｓ，Ｄ．Ｇ．  ａｎｄ  Ｓｈａｒｐ，Ｐ．Ｍ．，１９８９，ＣＡＢＩＯＳ  ５：１５１−１５３；Ｍｙｅｒｓ，Ｅ．Ｗ．  ａｎｄ  Ｍｕｌｌｅｒ  Ｗ．，１９８８，ＣＡＢＩＯＳ  ４：１１−１７；Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，Ｅ．Ｄ．，１９７１，Ｃｏｍｂ．Ｔｈｅｏｒ．１１：１０５；Ｓａｎｔｏｕ，Ｎ．，Ｎｅｓ，Ｍ．，１９８７，Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｅｖｏｌ．４：４０６−４２５；Ｓｎｅａｔｈ，Ｐ．Ｈ．Ａ．  ａｎｄ  Ｓｏｋａｌ，Ｒ．Ｒ．，１９７３，Ｎｕｍｅｒｉｃａｌ  Ｔａｘｏｎｏｍｙ  ｔｈｅ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｎｕｍｅｒｉｃａｌ  Ｔａｘｏｎｏｍｙ，Ｆｒｅｅｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ；Ｗｉｌｂｕｒ，Ｗ．Ｊ．  ａｎｄ  Ｌｉｐｍａｎ，Ｄ．Ｊ．，１９８３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８０：７２６−７３０。
【０２９２】
好ましくは、「配列同一性のパーセンテージ」は、最適に配列された２つの配列を少なくとも２０の位置の比較領域にわたって比較することによって決定され、比較領域中のポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列の部分は、最適なアラインメントの２つの配列の参照配列（付加または欠失を含まないもの）と比較して、２０％以下、通常５〜１５％または１０〜１２％の付加または欠失（すなわち、ギャップ）を含み得る。パーセンテージを計算するには、両配列中で同一の核酸塩基またはアミノ酸残基が生じている位置の数を特定して一致した位置の数を得て、一致した位置の数を参照配列中の総位置数（すなわち、領域の大きさ）で割り、その結果に１００を掛けることにより、配列同一性のパーセンテージが得られる。
【０２９３】
バリアントは、更にまたはあるいは、天然遺伝子またはその一部若しくは相補体に実質的に相同であり得る。このようなポリヌクレオチドのバリアントは、中程度にストリンジェントな条件下で、天然抗体（または相補的配列）をコードする自然に生じるＤＮＡ配列にハイブリダイズすることができる。
【０２９４】
好適な「中程度にストリンジェントな条件」には、５×ＳＳＣ、０．５％ＳＤＳ、１．０ｍＭ  ＥＤＴＡ（ｐＨ８．０）の溶液中での予洗、５０℃〜６５℃、５×ＳＳＣ、終夜でのハイブリダイズ、次いで、０．１％ＳＤＳを含有する２×、０．５×及び０．２×ＳＳＣをそれぞれ用いた６５℃で２０分間の２回の洗浄が含まれる。
【０２９５】
本明細書で使用するとき、「高度にストリンジェントな条件」または「高ストリンジェンシー条件」とは、（１）洗浄に低イオン強度及び高温、例えば、０．０１５Ｍ塩化ナトリウム／０．００１５Ｍクエン酸ナトリウム／０．１％ドデシル硫酸ナトリウムを５０℃にて使用する、（２）ハイブリダイゼーション時に、７５０ｍＭ塩化ナトリウム、７５ｍＭクエン酸ナトリウムを含む０．１％ウシ血清アルブミン／０．１％Ｆｉｃｏｌｌ／０．１％ポリビニルピロリドン／５０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ６．５）とともに、ホルムアミドなどの変性剤、例えば、５０％（ｖ／ｖ）ホルムアミドを４２℃にて使用する、または（３）５０％ホルムアミド、５×ＳＳＣ（０．７５Ｍ  ＮａＣｌ、０．０７５Ｍクエン酸ナトリウム）、５０ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ６．８）、０．１％ピロリン酸ナトリウム、５×デンハート液、音波処理サケ精子ＤＮＡ（５０μｇ／ｍｌ）、０．１％ＳＤＳ及び１０％硫酸デキストランを４２℃にて使用し、４２℃にて０．２×ＳＳＣ（塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム）及び５５℃にて５０％ホルムアミドで洗浄した後、５５℃にてＥＤＴＡを含む０．１×ＳＳＣからなる高ストリンジェンシー洗浄を行うものである。当業者であれば、プローブ長などの要素に適合させるのに必要な温度、イオン強度などを調整する方法は認識するであろう。
【０２９６】
遺伝子コードの縮重の結果として、本明細書に記載のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列が多数存在することは、当業者であれば理解するであろう。これらのポリヌクレオチドの一部は、任意の天然遺伝子のヌクレオチド配列に対して最小限の相同性を有する。しかしながら、コドン使用頻度の相違が原因で変動するポリヌクレオチドが、本発明によって特に企図される。更に、本明細書にて提供するポリヌクレオチド配列を含む遺伝子の対立遺伝子も本発明の範囲内である。対立遺伝子とは、ヌクレオチドの欠失、付加及び／または置換などの１つまたは複数の変異の結果として改変される内因性遺伝子である。こうして得られるｍＲＮＡ及びタンパク質は、改変された構造または機能を有する場合があるが、そうである必要はない。対立遺伝子は、標準的な技術（ハイブリダイゼーション、増幅及び／またはデータベース配列比較など）を用いて同定することができる。
【０２９７】
本発明のポリヌクレオチドは、化学的合成、組み換え法またはＰＣＲを用いて得ることができる。化学的ポリヌクレオチド合成方法は、当該技術分野においてよく知られており、本明細書にて詳述する必要はない。当業者であれば、本明細書に記載する配列及び市販のＤＮＡ合成装置を用いて所望のＤＮＡ配列を作製することができる。
【０２９８】
組み換え法を用いてポリヌクレオチドを作製するには、本明細書にて詳述するように、所望の配列を含むポリヌクレオチドを好適なベクターに挿入することができ、次に、そのベクターを複製及び増幅に好適な宿主細胞に導入することができる。ポリヌクレオチドは、当該技術分野において知られている任意の手段によって、宿主細胞に挿入することができる。細胞は、直接取り込み、エンドサイトーシス、トランスフェクション、Ｆ接合またはエレクトロポレーションにより外因性ポリヌクレオチドを導入することによって形質転換する。導入後、外因性ポリヌクレオチドは、非組み込みベクター（プラスミドなど）として細胞内に維持されるか、宿主細胞ゲノムに組み込まれ得る。このようにして増幅したポリヌクレオチドは、当該技術分野内でよく知られている方法によって、宿主細胞から単離することができる。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（１９８９）を参照されたい。
【０２９９】
あるいは、ＰＣＲによりＤＮＡ配列を複製させる。ＰＣＲ技術は、当該技術分野においてよく知られており、米国特許第４，６８３，１９５号、同第４，８００，１５９号、同第４，７５４，０６５号及び同第４，６８３，２０２号、ならびにＰＣＲ：Ｔｈｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ｃｈａｉｎ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ，Ｍｕｌｌｉｓ  ｅｔ  ａｌ．  ｅｄｓ．，Ｂｉｒｋａｕｓｗｅｒ  Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｓｔｏｎ（１９９４）に記載されている。
【０３００】
ＲＮＡは、単離したＤＮＡを適切なベクター中に使用し、それを好適な宿主細胞に挿入することによって得ることができる。細胞が複製され、ＤＮＡがＲＮＡに転写されたら、当業者によく知られている方法、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（１９８９）に記載されている方法を用いて、ＲＮＡを単離することができる。
【０３０１】
好適なクローニングベクターは、標準的な技術に従って構築してもよいし、当該技術分野において入手可能な多数のクローニングベクターから選択してもよい。選択されるクローニングベクターは、使用を意図する宿主細胞に応じて変わり得るが、有用なクローニングベクターは、一般に、自己複製能を有し、特定の制限エンドヌクレアーゼの標的を１つ有し得、かつ／またはベクターを含有するクローンの選択に用いることができるマーカーの遺伝子を保持し得る。好適な例には、プラスミド及び細菌ウイルス、例えば、ｐＵＣ１８、ｐＵＣ１９、Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔ（例えば、ｐＢＳ  ＳＫ＋）及びその誘導体、ｍｐ１８、ｍｐ１９、ｐＢＲ３２２、ｐＭＢ９、ＣｏｌＥ１、ｐＣＲ１、ＲＰ４、ファージＤＮＡ、ならびにｐＳＡ３及びｐＡＴ２８などのシャトルベクターが挙げられる。これら及び多くの他のクローニングベクターは、ＢｉｏＲａｄ、Ｓｔｒａｔｅｇｅｎｅ及びＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎなどの商業的供給業者から入手可能である。
【０３０２】
発現ベクターは、一般に、本発明の種々の態様のいずれかによるポリヌクレオチドを含有する複製可能なポリヌクレオチド構築物である。発現ベクターは、エピソームとしてまたは染色体ＤＮＡの構成部分として宿主細胞中で複製可能でなければならないことが示唆される。好適な発現ベクターには、プラスミド、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、レトロウイルスを含むウイルスベクター、コスミド及びＰＣＴ公開第ＷＯ８７／０４４６２号に記載の発現ベクター(複数可)が挙げられるが、これらに限定されない。ベクター構成要素は、一般に、シグナル配列、複製起点、１つまたは複数のマーカー遺伝子、好適な転写調節エレメント（プロモーター、エンハンサー及びターミネーターなど）のうちの１つまたは複数を含み得るが、これらに限定されない。発現（すなわち、翻訳）には、リボソーム結合部位、翻訳開始部位及び終止コドンなどの１つまたは複数の翻訳制御エレメントも通常必要である。
【０３０３】
目的のポリヌクレオチドを含有するベクターは、エレクトロポレーション、塩化カルシウム、塩化ルビジウム、リン酸カルシウム、ＤＥＡＥデキストランまたは他の物質を用いるトランスフェクション、微粒子銃、リポフェクション及び感染（例えば、この場合のベクターはワクシニアウイルスなどの感染因子）を含む、多数の適切な手段のいずれかによって、宿主細胞に導入することができる。導入ベクターまたはポリヌクレオチドの選択は、多くの場合、宿主細胞の特徴に依存する。
【０３０４】
いくつかの態様において、本発明はまた、本明細書に記載のポリヌクレオチドのいずれかを含む宿主細胞を提供する。目的の抗体、ポリペプチドまたはタンパク質をコードしている遺伝子を単離するために、異種ＤＮＡを過剰発現することができる任意の宿主細胞を用いることができる。哺乳動物の宿主細胞の非限定的な例には、ＣＯＳ、ＨｅＬａ及びＣＨＯ細胞が挙げられるが、これらに限定されない。ＰＣＴ公開第ＷＯ８７／０４４６２号も参照されたい。好適な非哺乳動物の宿主細胞には、原核生物（大腸菌または枯草菌など）及び酵母菌（出芽酵母、分裂酵母またはＫ．ラクチスなど）が挙げられる。好ましくは、宿主細胞は、その宿主細胞中の対応する内因性抗体または目的のタンパク質のレベルと比較して（存在する場合）、約５倍以上、より好ましくは１０倍以上、更により好ましくは２０倍以上のレベルでｃＤＮＡを発現する。Ａθ１−４０への特異的結合に関する宿主細胞のスクリーニングは、イムノアッセイまたはＦＡＣＳによって行われる。目的の抗体またはタンパク質を過剰発現する細胞を特定することができる。
【０３０５】
Ｄ．組成物
いくつかの実施形態において、本発明の方法にて使用される組成物は、本明細書に記載する、有効量の抗体（例えば、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体、ＣＧＲＰ経路を調節するモノクローナル抗体）または抗体由来ポリペプチドを含む。かかる組成物の例及び製剤化方法については、先のセクション及び以下にも記載されている。一実施形態において、組成物は、ＣＧＲＰアンタゴニストを更に含む。いくつかの実施形態において、組成物は、ＣＧＲＰ経路を調節する１つまたは複数のモノクローナル抗体を含む。いくつかの実施形態において、組成物は、１つまたは複数の抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体を含む。いくつかの実施形態において、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体は、ヒトＣＧＲＰを認識する。いくつかの実施形態において、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体は、ヒト化されている。いくつかの実施形態において、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体は、抗体媒介性溶解またはＡＤＣＣなどの不必要なまたは望ましくない免疫応答を誘発しない定常領域を含む。いくつかの実施形態において、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体は、抗体Ｇ１の１つまたは複数のＣＤＲ（１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたはいくつかの実施形態では６つ全てのＧ１のＣＤＲなど）を含む。いくつかの実施形態において、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体は、ヒト抗体である。
【０３０６】
組成物が２つ以上の抗体（例えば、２つ以上の抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体、ＣＧＲＰの異なるエピトープを認識する抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体の混合物）を含み得ることが理解される。他の例示的な組成物は、同じエピトープを認識する２つ以上の抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体またはＣＧＲＰの異なるエピトープに結合する他の種類の抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体を含む。
【０３０７】
組成物は、薬学的に許容可能な担体、賦形剤または安定剤を更に含むことができる（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  ２０ｔｈ  Ｅｄ．（２０００）Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ａｎｄ  Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｅｄ．Ｋ．Ｅ．Ｈｏｏｖｅｒ）。許容可能な担体、賦形剤または安定剤は、使用される用量及び濃度でレシピエントに対して非毒性である。抗体の治療用製剤は、１つまたは複数の薬学的に許容可能な担体、賦形剤または安定剤を含み得、これらの種類の非限定的な例には、リン酸、クエン酸及び他の有機酸などの緩衝剤；塩化ナトリウムなどの塩；アスコルビン酸及びメチオニンを含む酸化防止剤；保存剤（オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド；ヘキサメトニウムクロリド；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチルまたはベンジルアルコール；メチルまたはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；及びｍ−クレゾールなど）；低分子量（約１０残基未満）のポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン若しくは免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、メチオニン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン若しくはリシンなどのアミノ酸（例えば、０．１ｍＭ〜１００ｍＭ、０．１ｍＭ〜１ｍＭ、０．０１ｍＭ〜５０ｍＭ、１ｍＭ〜５０ｍＭ、１ｍＭ〜３０ｍＭ、１ｍＭ〜２０ｍＭ、１０ｍＭ〜２５ｍＭの濃度）；グルコース、マンノース若しくはデキストリンを含む単糖、二糖及び他の炭水化物；ＥＤＴＡ（例えば、ＥＤＴＡ二ナトリウム二水和物）などのキレート剤（例えば、０．００１ｍｇ／ｍＬ〜１ｍｇ／ｍＬ、０．００１ｍｇ／ｍＬ〜１ｍｇ／ｍＬ、０．００１ｍｇ／ｍＬ〜０．１ｍｇ／ｍＬ、０．００１ｍｇ／ｍＬ〜０．０１ｍｇ／ｍＬの濃度）；スクロース、マンニトール、トレハロース若しくはソルビトールなどの糖（例えば、１ｍｇ／ｍＬ〜５００ｍｇ／ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬ〜２００ｍｇ／ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬ〜１００ｍｇ／ｍＬ、５０ｍｇ／ｍＬ〜１５０ｍｇ／ｍＬの濃度）；ナトリウムなどの塩生成対イオン；金属複合体（例えば、Ｚｎ−タンパク質複合体）；及び／またはＴＷＥＥＮ（商標）（例えば、ポリソルベート（例えば、ポリソルベート２０、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０、ポリソルベート８０））、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）若しくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤（例えば、０．０１ｍｇ／ｍＬ〜１０ｍｇ／ｍＬ、０．０１ｍｇ／ｍＬ〜１ｍｇ／ｍＬ、０．１ｍｇ／ｍＬ〜１ｍｇ／ｍＬ、０．０１ｍｇ／ｍＬ〜０．５ｍｇ／ｍＬの濃度）が挙げられる。薬学的に許容可能な賦形剤については、本明細書にて更に記載する。
【０３０８】
抗体（例えば、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体）及びその組成物はまた、他の作用物質と併用することができ、作用物質の有効性を増大させ、及び／または補完するように機能する。
【０３０９】
Ｅ．キット
一態様において、本発明はまた、本方法にて使用するためのキットを提供する。キットは、本明細書に記載の抗体（例えば、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体（ヒト化抗体など））または本明細書に記載のポリペプチドを含む１つまたは複数の容器と、本明細書に記載の方法のいずれかに従って使用するための説明書とを含み得る。一般に、これらの説明書には、本明細書に記載の方法のいずれかに従った頭痛（片頭痛など）を治療、改善または予防するための抗体の投与に関する説明が含まれる。キットは、個体が頭痛を有するのかどうか、または個体が頭痛を有するリスクがあるかどうかを確認することに基づいて、治療に適した個体を選択する説明を更に含み得る。更に他の実施形態において、説明書は、頭痛（片頭痛など）を有するリスクのある個体に抗体（例えば、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体）を投与する説明を含む。
【０３１０】
いくつかの実施形態において、抗体は、ヒト化抗体である。いくつかの実施形態において、抗体はヒト抗体である。他の実施形態において、抗体は、モノクローナル抗体である。さらに他の実施形態において、いくつかの実施形態において、抗体は、抗体Ｇ１（１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたはいくつかの実施形態では６つ全てのＧ１のＣＤＲなど）のうちの１つまたは複数のＣＤＲを含む。
【０３１１】
抗体（例えば、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体）の使用に関する説明書は、一般に、目的の治療のための用量、投薬スケジュール及び投与経路に関する情報を含む。容器は、単位用量、大量包装（例えば、複数回用量包装）または分割単位用量でもよい。キットに提供される説明書は、通常、ラベルまたは添付文書（例えば、キットに含まれる紙）上の書面での指示であるが、機械可読な説明書（例えば、磁気または光学式記憶ディスク上に保持された説明書）も許容可能である。
【０３１２】
ラベルまたは添付文書は、組成物が頭痛（片頭痛など）を治療、改善及び／または予防するために使用されることを示すものである。本明細書に記載の方法のいずれかを実施するための説明書が提供されてもよい。
【０３１３】
本発明のキットは、適切に包装される。好適な包装には、バイアル、ボトル、ジャー、フレキシブル包装（例えば、密閉したＭｙｌａｒまたはプラスチック袋）などが挙げられるが、これらに限定されない。特定の器具、例えば、吸入器、経鼻投与器具（例えば、アトマイザー）またはミニポンプなどの注入器具と組み合わせて使用するためのパッケージも企図される。キットは、滅菌アクセスポートを有し得る（例えば、容器は、皮下注射針によって貫通可能な栓を有する静脈注射用溶液バッグまたはバイアルであってよい）。容器も同様に、滅菌アクセスポートを有し得る（例えば、容器は、皮下注射針によって貫通可能な栓を有する静脈注射用溶液バッグまたはバイアルであってよい）。組成物中の少なくとも１つの活性物質は、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体及び／またはＣＧＲＰ経路を調節するモノクローナル抗体である。容器は、第２の薬学的活性物質を更に含み得る。
【０３１４】
キットは、緩衝液などの追加の成分及び説明情報を任意に提供してもよい。通常、キットは、容器と、その容器上または容器に付属するラベルまたは添付文書（複数可）とを含む。
【０３１５】
以下の実施例は、本発明を例示するために記載するものであり、本発明を限定するものではない。
【実施例】
【０３１６】
実施例１：ＣＧＲＰに対するモノクローナル抗体の作製及び特性評価
抗ＣＧＲＰ抗体の作製。ラット及びヒトＣＧＲＰに異種間反応性を有する抗ＣＧＲＰ抗体を作製するために、様々な間隔で、２５〜１００μｇのアジュバント中のＫＬＨに結合したヒトα−ＣＧＲＰまたはβ−ＣＧＲＰでマウスを免疫した（足蹠１つにつき５０μｌ、マウス１匹あたり計１００μｌ）。免役付与は、概ね、Ｇｅｅｒｌｉｇｓ  ＨＪ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  １２４：９５−１０２；Ｋｅｎｎｅｙ  ＪＳ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  １２１：１５７−１６６及びＷｉｃｈｅｒ  Ｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｉｎｔ．Ａｒｃｈ．Ａｌｌｅｒｇｙ  Ａｐｐｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．８９：１２８−１３５に記載の通りに実施した。マウスは、最初に、５０μｇのＣＦＡ（完全フロイントアジュバント）中のＫＬＨに結合したヒトα−ＣＧＲＰまたはβ−ＣＧＲＰで免疫した。２１日後、次に、２５μｇのＩＦＡ（不完全フロイントアジュバント）中のＫＬＨに結合したヒトβ−ＣＧＲＰ（最初にヒトα−ＣＧＲＰで免疫したマウス）またはα−ＣＧＲＰ（最初にヒトβ−ＣＧＲＰで免疫したマウス）でマウスを免疫した。２回目の免疫付与から２３日後、２５μｇのＩＦＡ中のＫＬＨに結合したラットα−ＣＧＲＰを用いて、３回目の免役付与を行った。１０日後、ＥＬＩＳＡを用いて抗体力価を試験した。３回目の免役付与から３４日後、２５μｇのＩＦＡ中のペプチド（ラットα−ＣＧＲＰ−ＫＬＨ）を用いて、４回目の免役付与を行った。４回目の免役付与から３２日後、１００μｇの可溶性ペプチド（ラットα−ＣＧＲＰ）を用いて、最後の追加免疫を行った。
【０３１７】
免疫したマウスから脾細胞を採取し、ポリエチレングリコール１５００を用いて、脾細胞とＮＳＯ骨髄腫細胞を１０：１の比で融合させた。ハイブリッドを９６ウェルプレート中の２０％ウマ血清及び２−オキサロ酢酸／ピルビン酸／インスリン（Ｓｉｇｍａ）を含有するＤＭＥＭ中に播種し、ヒポキサンチン／アミノプテリン／チミジン選択を開始した。８日目に、２０％ウマ血清を含む１００μｌのＤＭＥＭを全てのウェルに加えた。抗体捕捉イムノアッセイを用いることによって、ハイブリッドの上清をスクリーニングした。抗体クラスの特定は、クラス特異的２次抗体を用いて行った。
【０３１８】
更なる特性評価のために、モノクローナル抗体産生細胞株のパネルをヒト及びラットＣＧＲＰへの結合に基づいて選択した。これらの抗体及び特性を以下の表２及び３に示す。
【０３１９】
精製及びＦａｂ断片の作製。更なる特性評価のために選択したモノクローナル抗体は、タンパク質Ａ親和性クロマトグラフィーを用いて、ハイブリドーマ培養液の上清から精製した。上清をｐＨ８に平衡化した。次いで、上清を、ＰＢＳでｐＨ８に平衡化したタンパク質ＡカラムＭａｂＳｅｌｅｃｔ（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  ＃１７−５１９９−０２）に充填した。５カラム容量のＰＢＳ（ｐＨ８）でカラムを洗浄した。５０ｍＭのクエン酸リン酸緩衝液（ｐＨ３）で抗体を溶出した。溶出した抗体を１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ８）で中和した。精製した抗体をＰＢＳ（ｐＨ７．４）で透析した。ＳＤＳ−ＰＡＧＥによりネズミモノクローナル抗体の標準曲線を用いて抗体濃度を決定した。
【０３２０】
Ｉｍｍｕｎｏｐｕｒｅ  Ｆａｂキット（Ｐｉｅｒｃｅ  ＃４４８８５）を用いて、完全抗体のパパインタンパク質分解によってＦａｂを作製し、製造者の説明書に従ってタンパク質Ａクロマトグラフィーに流して精製した。既知の濃度の標準的なＦａｂ（アミノ酸分析により決定）を用いたＥＬＩＳＡ及び／またはＳＤＳ−ＰＡＧＥ電気泳動と、１ＯＤ＝０．６ｍｇ／ｍＬ（またはアミノ酸配列に基づく理論当量）を用いたＡ２８０とによって、濃度を決定した。
【０３２１】
Ｆａｂの親和性決定。抗ＣＧＲＰモノクローナル抗体の親和性は、Ｂｉａｃｏｒｅ３０００（商標）表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）システム（Ｂｉａｃｏｒｅ，ＩＮＣ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ  ＮＪ）を使用し、製造者自身のランニング緩衝液であるＨＢＳ−ＥＰ（１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ  ｐＨ７．４、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、３ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．００５％ｖ／ｖポリソルベートＰ２０）を用いて、２５℃または３７℃のいずれかで決定した。親和性は、ＳＡチップ上に予め固定化されたストレプトアビジンを介してＮ末端ビオチン化ＣＧＲＰペプチド（ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｎｅｗ  ＪｅｒｓｅｙまたはＧｌｏｂａｌ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、Ｃｏｌｏｒａｄｏによる受注生産）を捕捉し、ＣＧＲＰ表面に滴定した抗体Ｆａｂの結合反応速度を測定することによって、決定した。ビオチン化ＣＧＲＰをＨＢＳ−ＥＰ中に希釈し、チップに０．００１ｍｇ／ｍＬ未満の濃度で注入した。個々のチップチャネルで様々なフロー時間を用い、詳細な反応速度論的試験に関する５０レスポンスユニット（ＲＵ）未満ならびに濃度試験及びスクリーニングに関する約８００ＲＵの２つの抗原密度範囲を得た。通常１μＭ〜０．１ｎＭにわたる濃度である、精製Ｆａｂ断片の２倍または３倍の連続希釈物（予想されるＫＤの０．１〜１０倍になるようにする）を１００μＬ／分で１分間注入し、解離時間を１０分とした。各結合サイクル後、２５％ｖ／ｖエタノール中の２５ｍＭ  ＮａＯＨで表面を再生した。この表面は、数百回を超えるサイクルに耐性を示した。反応速度論的結合速度（ｋｏｎ）及び解離速度（ｋｏｆｆ）については、ＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎプログラムを用いて、１：１ラングミュア結合モデル（Ｋａｒｌｓｓｏｎ，Ｒ．Ｒｏｏｓ，Ｈ．Ｆａｇｅｒｓｔａｍ，Ｌ．Ｐｅｔｅｒｓｓｏｎ，Ｂ．（１９９４）．Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  ６．９９−１１０）にデータをフィッティングさせることにより、同時に得た。全体の平衡解離定数（ＫＤ）または「親和性」は、ＫＤ＝ｋｏｆｆ／ｋｏｎの比から算出した。ネズミＦａｂ断片の親和性を表２及び３に示す。
【０３２２】
ネズミ抗ＣＧＲＰ抗体のエピトープマッピング。抗ＣＧＲＰ抗体がヒトα−ＣＧＲＰに結合するエピトープを決定するために、様々なＣＧＲＰ断片に対するＦａｂ断片の結合親和性を、上述の通りに、ＳＡセンサーチップ上のＮ末端ビオチン化ＣＧＲＰ断片のアミノ酸１９〜３７及びアミノ酸２５〜３７を捕捉することによって、測定した。図１は、２５℃で測定した各結合親和性を示す。図１に示すように、抗体４９０１を除く全ての抗体が、完全長ヒトα−ＣＧＲＰ（１〜３７）への結合親和性と同様の親和性で、ヒトα−ＣＧＲＰ断片１９〜３７及び２５〜３７に結合する。抗体４９０１は、主に解離速度定数の損失により、完全長ヒトα−ＣＧＲＰ断片への結合と比べて１／６の親和性でヒトα−ＣＧＲＰ断片２５〜３７に結合する。データは、これらの抗ＣＧＲＰ抗体がＣＧＲＰのＣ末端に概ね結合することを示している。
【０３２３】
抗ＣＧＲＰ抗体の結合に関与するヒトα−ＣＧＲＰのアミノ酸の特性を更に評価するために、アラニンスキャニングを実施した。１つのアラニン置換を有するヒトα−ＣＧＲＰの異なるバリアントをペプチド合成により作製した。これらのアミノ酸配列について、Ｂｉａｃｏｒｅ分析に用いた全ての他のペプチドと合わせて表４に示す。これらのバリアントに対する抗ＣＧＲＰ抗体のＦａｂ断片の親和性を上述の通りにＢｉａｃｏｒｅを用いて決定した。図１に示すように、１２の全ての抗体がＣ末端エピトープを標的にし、アミノ酸Ｆ３７が最も重要な残基である。Ｆ３７のアラニンへの変異は、親和性を著しく低下させ、あるいは当該ペプチドに対する抗ＣＧＲＰ抗体の結合を完全に阻害した。次に最も重要なアミノ酸残基はＧ３３であるが、この位置のアラニン交換による影響を受けたのは、親和性の高い抗体（７Ｅ９、８Ｂ６、１０Ａ８及び７Ｄ１１）のみであった。これらの４つの親和性の高い抗体では、アミノ酸残基Ｓ３４もまた重要な役割を果たしているが、重要度は低い。
【０３２４】
【表２】
2019123750.tif 000003
【０３２５】
【表３】
2019123750.tif 000004
【０３２６】
【表４Ａ】
2019123750.tif 000005
【表４Ｂ】
2019123750.tif 000006
【０３２７】
実施例２：インビトロアッセイを用いた抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体のスクリーニング
細胞ベースｃＡＭＰ活性化アッセイ及び結合試験を用いて、インビトロでのアンタゴニスト活性についてネズミ抗ＣＧＲＰ抗体を更にスクリーニングした。
【０３２８】
ｃＡＭＰアッセイによって測定したアンタゴニスト活性。抗ＣＧＲＰ抗体（最終濃度１〜３０００ｎＭ）の存在下若しくは不存在下の５マイクロリットルのヒト若しくはラットα−ＣＧＲＰ（最終濃度５０ｎＭ）またはラットα−ＣＧＲＰ若しくはヒトα−ＣＧＲＰ（最終濃度０．１ｎＭ〜１０μＭ、ｃ−ＡＭＰ活性化の陽性対照として）を３８４ウェルプレート（Ｎｕｎｃ、カタログ番号２６４６５７）に分注した。刺激用緩衝液（２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、１４６ｍＭ  ＮａＣｌ、５ｍＭ  ＫＣｌ、１ｍＭ  ＣａＣｌ２、１ｍＭ  ＭｇＣｌ２及び５００ｕＭ  ３−イソブチル−１−メチルキサンチン（ＩＢＭＸ））中の細胞１０マイクロリットル（ヒトα−ＣＧＲＰを用いる場合はヒトＳＫ−Ｎ−ＭＣ、またはラットα−ＣＧＲＰを用いる場合はＡＴＣＣからのラットＬ６）をプレートの各ウェルに加えた。プレートを室温で３０分間インキュベートした。
【０３２９】
インキュベーション後、ＨｉｔＨｕｎｔｅｒ（商標）Ｅｎｚｙｍｅ  Ｆｒａｇｍｅｎｔ  Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎアッセイ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を製造者の説明書に従って用いて、ｃＡＭＰ活性化を実施した。アッセイは、酵素アクセプター（ＥＡ）及び酵素ドナー（ＥＤ）と呼ばれる２つの断片からなる、遺伝子操作されたβ−ガラクトシダーゼ酵素に基づいている。２つの断片が離れているとき、酵素は不活性である。これらの断片が一緒になると、補完と呼ばれるプロセスによって自然発生的に再構成され、活性型酵素が形成される。ＥＦＣアッセイのプラットフォームは、ＥＤ−ｃＡＭＰペプチド複合体を利用し、ｃＡＭＰは抗ｃＡＭＰに認識される。このＥＤ断片は、ＥＡと再会合することができ、活性型酵素を形成する。試験では、抗ｃＡＭＰ抗体が至適に滴定され、ＥＤ−ｃＡＭＰ複合体に結合し、酵素形成を阻害する。細胞溶解物サンプル中のｃＡＭＰ濃度は、抗ｃＡＭＰ抗体への結合に関してＥＤ−ｃＡＭＰ複合体と競合する。アッセイ中の遊離ＥＤ複合体の量は、ｃＡＭＰの濃度に比例する。したがって、ｃＡＭＰは、活性型酵素が形成され、それがβ−ガラクトシダーゼの蛍光基質のターンオーバーにより定量化されることによって測定される。ｃＡＭＰ活性化アッセイの実施につき、１０μＬの溶解緩衝液及び抗ｃＡＭＰ抗体（比率１：１）を加え、室温で６０分間インキュベートした。次いで、１０μＬのＥＤ−ｃＡＭＰ試薬を各ウェルに加え、室温で６０分間インキュベートした。インキュベーション後、２０μＬのＥＡ試薬及びＣＬ混合物（基質を含む）（比率１：１）を各ウェルに加え、室温で１〜３時間または終夜インキュベートした。ＰＭＴ機器で１秒／ウェルまたはイメージャーで３０秒／部分で、プレートを読み取った。α−ＣＧＲＰによるｃＡＭＰ活性化を阻害する抗体を上記表２及び３中に特定した（「あり」と示す）。表２及び３のデータは、本アッセイでアンタゴニスト活性を示した抗体が概して高親和性を有することを示している。例えば、ヒトα−ＣＧＲＰに対して約８０ｎＭ以下のＫＤ（２５℃で決定）を有する抗体またはラットα−ＣＧＲＰに対して約４７ｎＭ以下のＫＤ（３７℃で決定）を有する抗体がこのアッセイでアンタゴニスト活性を示した。
【０３３０】
放射性リガンド結合試験。結合試験を実施して、ＣＧＲＰのその受容体への結合を阻害することにおける、抗ＣＧＲＰ抗体のＩＣ５０を先の記載の通りに測定した。Ｚｉｍｍｅｒｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  １６：４２１−４，１９９５；Ｍａｌｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７：１４２９４−８，２００２。１０ｐＭの１２５Ｉ−ヒトα−ＣＧＲＰを含む総量１ｍＬのインキュベーション緩衝液（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣＬ、ｐＨ７．４、５ｍＭ  ＭｇＣＬ２、０．１％ＢＳＡ）中にて、ＳＫ−Ｎ−ＭＣ細胞の細胞膜（２５μｇ）を室温で９０分間インキュベートした。阻害濃度（ＩＣ５０）を求めるために、抗体または非標識ＣＧＲＰ（対照として）を約１００倍濃度のストック溶液から様々な濃度でインキュベーション緩衝液に溶解し、細胞膜及び１０ｐＭの１２５Ｉ−ヒトα−ＣＧＲＰとともに同時にインキュベートした。０．５％ポリエチレミミン（ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｍｉｍｉｎｅ）でブロッキングしたガラスマイクロファイバーフィルター（ＧＦ／Ｂ、１μｍ）を通して濾過することにより、インキュベーションを終了させた。用量反応曲線をプロットし、次の等式：Ｋｉ＝ＩＣ５０／（１＋（［リガンド］／ＫＤ）を用いてＫｉ値を決定した（ここで、ＳＫ−Ｎ−ＭＣ細胞中に存在するＣＧＲＰ１受容体へのヒトα−ＣＧＲＰの平衡解離定数はＫＤ＝８ｐＭ、Ｂｍａｘ＝０．０２５ｐｍｏｌ／ｍｇタンパク質）。出されたＩＣ５０値（ＩｇＧ分子基準）を結合部位に変換し（２倍することによって）、Ｂｉａｃｏｒｅにより決定された親和性（ＫＤ）と比較することができるようにした（表２参照）。
【０３３１】
表２は、ネズミ抗体７Ｅ９、８Ｂ６、６Ｈ２及び４９０１のＩＣ５０を示す。データは、抗体親和性がＩＣ５０と概ね相関することを示している。つまり、親和性がより高い（ＫＤ値がより低い）抗体は、放射性リガンド結合試験にてより低いＩＣ５０を示す。
【０３３２】
実施例３：ラットの伏在神経刺激によって誘発した皮膚血管拡張に対する抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体の効果
抗ＣＧＲＰ抗体のアンタゴニスト活性を試験するために、ラットの伏在神経刺激による皮膚血管拡張に対する抗体の効果を、先に記載されたラットモデルを用いて試験した。Ｅｓｃｏｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１１０：７７２−７７６，１９９３。このラットモデルでは、伏在神経を電気的に刺激すると、神経終末からＣＧＲＰの放出が誘発され、これにより皮膚血流量が増加する。伏在神経刺激後に、雄のＳｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラット（１７０〜３００ｇ、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｈｏｌｌｉｓｔｅｒより）の足の皮膚の血流量を測定した。２％イソフルランによる麻酔下にラットを維持した。実験開始時にトシル酸ブレチリウムを投与して（３０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｖ．投与）、伏在神経の交感神経線維の付随刺激に起因する血管収縮を最小限に抑えた。体温は、温度制御ヒーティングパッドにサーモスタット連結された直腸プローブを使用して、３７℃に維持した。抗体、陽性対照（ＣＧＲＰ８−３７）及びビヒクル（ＰＢＳ、０．０１％Ｔｗｅｅｎ２０）の化合物を右大腿静脈から静脈内投与した。ただし、図３に示す実験の場合は、試験化合物及び対照を尾静脈から投与し、図２Ａ及び２Ｂに示す実験の場合は、抗体４９０１及び７Ｄ１１を腹腔内（ＩＰ）注入した。陽性対照化合物ＣＧＲＰ８−３７（血管拡張アンタゴニスト）は、半減期が短いので、神経刺激の３〜５分前に４００ｎｍｏｌ／ｋｇ（２００μｌ）を投与した。Ｔａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｓｃｉ．８９：６５６−７３，１９９５。抗体は、異なる用量（１ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ及び２５ｍｇ／ｋｇ）で投与した。
【０３３３】
図２Ａ及び２Ｂに示す実験では、抗体４９０１（２５ｍｇ／ｋｇ）、抗体７Ｄ１１（２５ｍｇ／ｋｇ）またはビヒクル対照（０．０１％Ｔｗｅｅｎ２０を含むＰＢＳ）を電気パルス刺激の７２時間前に腹腔内（ＩＰ）投与した。図３に示す実験では、抗体４９０１（１ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇまたは２５ｍｇ／ｋｇ）またはビヒクル対照（０．０１％Ｔｗｅｅｎ２０を含むＰＢＳ）を電気パルス刺激の２４時間前に静脈内投与した。抗体またはビヒクル対照の投与後、右後肢の伏在神経を外科的に露出させ、近位側を切断し、乾燥を防ぐためにプラスチックラップで覆った。伏在神経によって刺激分布される領域である、後足の皮膚の背側正中にレーザードップラープローブを置いた。血液細胞の流速として測定される皮膚血流量をレーザードップラー流量計でモニターした。安定したベースライン流速（５％未満の変動）が少なくとも５分間確立されたら、神経を白金双極電極上に置き、６０パルスで電気的に刺激し（２Ｈｚ、１０Ｖ、１ｍｓ、３０秒間）、２０分後に再度刺激した。電気パルス刺激に対する各流速応答について、流速−時間曲線下面積（ＡＵＣ、流速の変化×時間の変化に等しい）により、皮膚血流量における累積変化を推定した。２回の刺激に対する血流応答の平均を得た。動物を１〜３時間の間、麻酔下に維持した。
【０３３４】
図２Ａ及び図２Ｂに示すように、伏在神経に電気パルスを印加することにより刺激される血流増加は、対照と比較して、ＣＧＲＰ８−３７（４００ｎｍｏｌ／ｋｇ、ｉ．ｖ．投与）、抗体４９０１（２５ｍｇ／ｋｇ、ｉｐ投与）または抗体７Ｄ１１（２５ｍｇ／ｋｇ、ｉｐ投与）の存在によって阻害された。ＣＧＲＰ８〜３７を伏在神経刺激の３〜５分前に投与し、抗体を伏在神経刺激の７２時間前に投与した。図３に示すように、伏在神経に電気パルスを印加することにより刺激される血流増加は、伏在神経刺激の２４時間前に異なる用量（１ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ及び２５ｍｇ／ｋｇ）で静脈内投与された抗体４９０１の存在によって阻害された。
【０３３５】
図４Ａ及び４Ｂに示す実験では、抗体投与の前に、伏在神経を外科的に露出させた。右後肢の伏在神経を外科的に露出させ、近位側を切断し、乾燥を防ぐためにプラスチックラップで覆った。伏在神経によって刺激分布される領域である、後足の皮膚の背側正中にレーザードップラープローブを置いた。血液細胞の流速として測定される皮膚血流量をレーザードップラー流量計でモニターした。トシル酸ブレチリウム注入の３０〜４５分後、安定したベースライン流速（５％未満の変動）が少なくとも５分間確立されたら、神経を白金双極電極上に置き、電気的に刺激し（２Ｈｚ、１０Ｖ、１ｍｓ、３０秒間）、２０分後に再度刺激した。これらの２回の刺激に対する血流流速応答の平均を用いて、電気刺激に対するベースライン応答（時間０）を確立した。次いで、抗体４９０１（１ｍｇ／ｋｇまたは１０ｍｇ／ｋｇ）、抗体７Ｅ９（１０ｍｇ／ｋｇ）、抗体８Ｂ６（１０ｍｇ／ｋｇ）、またはビヒクル（０．０１％Ｔｗｅｅｎ２０を含むＰＢＳ）を静脈内（ｉ．ｖ．）投与した。その後、抗体またはビヒクル投与から３０分、６０分、９０分及び１２０分後に神経を刺激した（２Ｈｚ、１０Ｖ、１ｍｓ、３０秒間）。動物をおよそ３時間の間、麻酔下に維持した。電気パルス刺激に対する各流速応答について、流速−時間曲線下面積（ＡＵＣ、流速の変化×時間の変化に等しい）により、皮膚血流量における累積変化を推定した。
【０３３６】
図４Ａに示すように、伏在神経に電気パルスを印加することにより刺激される血流増加は、電気パルス刺激が抗体投与から６０分、９０分及び１２０分後に加えられたときには、ｉ．ｖ．投与された１ｍｇ／ｋｇの抗体４９０１の存在によって有意に阻害され、伏在神経に電気パルスを印加することにより刺激される血流増加は、電気パルス刺激が抗体投与から３０分、６０分、９０分及び１２０分後に加えられたときには、ｉ．ｖ．投与された１０ｍｇ／ｋｇの抗体４９０１の存在によって有意に阻害された。図４Ｂは、電気パルス刺激が抗体投与から３０分、６０分、９０分及び１２０分後に加えられたときには、抗体７Ｅ９（１０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｖ．投与）の存在によって、電気パルス刺激が抗体投与から３０分後に加えられたときには、抗体８Ｂ６（１０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｖ．投与）の存在によって、伏在神経に電気パルスを印加することにより刺激される血流増加が有意に阻害されたことを示している。
【０３３７】
これらのデータは、ラットの伏在神経刺激によって誘導される皮膚血管拡張により測定されたように、抗体４９０１、７Ｅ９、７Ｄ１１及び８Ｂ６がＣＧＲＰ活性を阻害するのに有効であることを示している。
【０３３８】
実施例４  抗ＣＧＲＰ抗体Ｇ１及びそのバリアントの特性評価
抗ＣＧＲＰ抗体Ｇ１の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域のアミノ酸配列を図５に示す。抗体Ｇ１及びそのバリアントの発現及び特性評価に以下の方法を用いた。
【０３３９】
使用した発現ベクター。抗体Ｆａｂ断片の発現は、Ｂａｒｂａｓ（２００１）Ｐｈａｇｅ  ｄｉｓｐｌａｙ：ａ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ  ｐｇ．２．１０．Ｖｅｃｔｏｒ  ｐＣｏｍｂ３Ｘ）に記載のものに類似したＩＰＴＧ誘導性ｌａｃＺプロモーターの制御下とした。ただし、次の追加ドメイン：ＩｇＧ２ヒト免疫グロブリンのヒトκ軽鎖定常ドメイン及びＣＨ１定常ドメイン、Ｉｇγ−２鎖Ｃ領域（タンパク質受託番号Ｐ０１８５９）、免疫グロブリンκ軽鎖（ホモサピエンス）（タンパク質受託番号ＣＡＡ０９１８１）の付加及び発現を含む変更を加えた。
【０３４０】
小スケールＦａｂ作製。Ｆａｂライブラリーで形質転換した大腸菌（エレクトロポレーション用コンピテントセルＴＧ１またはケミカルコンピテントセルＴｏｐ１０のいずれかを使用）から単一コロニーを用いて、マスタープレート（寒天ＬＢ＋カルベニシリン（５０ｕｇ／ｍＬ）＋２％グルコース）と各ウェルに１．５ｍＬ  ＬＢ＋カルベニシリン（５０ｕｇ／ｍＬ）＋２％グルコースを入れた作業プレート（２ｍＬ／ウェル、９６ウェル／プレート）の両方に接種した。ガス透過性接着シール（ＡＢｇｅｎｅ、Ｓｕｒｒｅｙ、ＵＫ）をプレートに付けた。両プレートを３０℃で１２〜１６時間インキュベートし、作業プレートは激しく振盪させた。マスタープレートを必要時まで４℃で保管した。一方、作業プレートの細胞は、ペレット化し（４０００ｒｐｍ、４℃、２０分）、１．０ｍＬ  ＬＢ＋カルベニシリン（５０ｕｇ／ｍＬ）＋０．５ｍＭ  ＩＰＴＧ中に再懸濁して、３０℃で５時間激しく振盪することにより、Ｆａｂの発現を誘導した。誘導した細胞を４０００ｒｐｍ、４℃で２０分間遠心分離にかけ、０．６ｍＬのＢｉａｃｏｒｅ  ＨＢ−ＳＥＰ緩衝液（１０ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ  ｐＨ７．４、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、３ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．００５％ｖ／ｖ  Ｐ２０）中に再懸濁した。ＨＢ−ＳＥＰに再懸濁した細胞を凍結し（−８０℃）、次いで３７℃で融解することによって溶解した。細胞溶解物を４０００ｒｐｍ、４℃で１時間遠心分離にかけてＦａｂ含有上清と細胞片を分離し、その後、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅのマルチスクリーンアッセイシステム９６ウェル濾過プレート及びバキュームマニホールドを用いて濾過した（０．２ｕｍ）。Ｂｉａｃｏｒｅを使用して、濾過した上清をセンサーチップ上のＣＧＲＰに注入することによって、上清を分析した。親和性により選択したＦａｂを発現しているクローンをマスタープレートから取り出し、ＰＣＲ、配列決定及びプラスミド作製のための鋳型ＤＮＡを得た。
【０３４１】
ラージスケールＦａｂ作製。反応速度論的パラメータを得るために、Ｆａｂを以下の通り大規模発現させた。１５０ｍＬ  ＬＢ＋カルベニシリン（５０ｕｇ／ｍＬ）＋２％グルコースを入れた三角フラスコに、親和性により選択したＦａｂ発現大腸菌クローンからの１ｍＬの「スターター」終夜培養物を接種した。スターター培養物の残り（約３ｍＬ）を用いて、配列決定及び更なる操作のためのプラスミドＤＮＡを作製した（ＱＩＡｐｒｅｐミニプレップ、Ｑｉａｇｅｎキット）。１．０のＯＤ６００ｎｍが得られるまで、大規模培養物を激しく振盪しながら３０℃でインキュベートした（通常１２〜１６時間）。細胞を４０００ｒｐｍ、４℃で２０分間遠心分離にかけることによってペレット化し、１５０ｍＬ  ＬＢ＋カルベニシリン（５０ｕｇ／ｍＬ）＋０．５ｍＭ  ＩＰＴＧ中に再懸濁した。３０℃で５時間の発現後、細胞を４０００ｒｐｍ、４℃で２０分間遠心分離にかけることによってペレット化し、１０ｍＬのＢｉａｃｏｒｅ  ＨＢＳ−ＥＰ緩衝液中に再懸濁し、凍結（−８０℃）／融解（３７℃）１サイクルを用いて溶解した。細胞溶解物を４０００ｒｐｍ、４℃で１時間遠心分離にかけてペレット化し、上清を回収し、濾過した（０．２ｕｍ）。濾過した上清を、ＰＢＳ（ｐＨ８）で平衡化したＮｉ−ＮＴＡスーパーフローセファロース（Ｑｉａｇｅｎ、Ｖａｌｅｎｃｉａ．ＣＡ）カラムに充填し、次いで、５カラム容量のＰＢＳ（ｐＨ８）で洗浄した。個々のＦａｂをＰＢＳ（ｐＨ８）＋３００ｍＭイミダゾールを用いて異なる画分で溶出した。Ｆａｂを含む画分をプールし、ＰＢＳで透析し、次いで、親和性評価に先立ちＥＬＩＳＡにより定量化した。
【０３４２】
完全抗体作製。完全抗体を発現させるために、重鎖及び軽鎖可変領域を哺乳動物発現ベクターでクローニングし、リポフェクタミンを用いてＨＥＫ２９３細胞に一過性発現のためにトランスフェクトした。標準的な方法を用いるタンパク質Ａを使用して、抗体を精製した。
【０３４３】
ベクターｐＤｂ．ＣＧＲＰ．ｈＦｃＧＩは、Ｇ１抗体の重鎖を含む発現ベクターであり、重鎖の一過性発現または安定発現に適している。ベクターｐＤｂ．ＣＧＲＰ．ｈＦｃＧＩは、次の領域：ネズミサイトメガロウイルスプロモータ領域（ヌクレオチド７〜６１２）、合成イントロン（ヌクレオチド６１３〜１６７９）、ＤＨＦＲコード領域（ヌクレオチド６８８〜１２５３）、ヒト成長ホルモンシグナルペプチド（ヌクレオチド１８９９〜１９７６）、Ｇ１の重鎖可変領域（ヌクレオチド１９７７〜２６２１）、Ａ３３０Ｐ３３１からＳ３３０Ｓ３３１への変異を含有するヒト重鎖ＩｇＧ２定常領域（野生型ＩｇＧ２配列を基準にしたアミノ酸ナンバリング；Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９９）２９：２６１３−２６２４参照）に対応するヌクレオチド配列を有する。ベクターｐＤｂ．ＣＧＲＰ．ｈＦｃＧＩは、２００５年７月１５日にＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−６８６７が付与された。
【０３４４】
ベクターｐＥｂ．ＣＧＲＰ．ｈＫＧＩは、Ｇ１抗体の軽鎖を含む発現ベクターであり、軽鎖の一過性発現に適している。ベクターｐＥｂ．ＣＧＲＰ．ｈＫＧＩは、次の領域：ネズミサイトメガロウイルスプロモータ領域（ヌクレオチド２〜６１３）、ヒトＥＦ−１イントロン（ヌクレオチド６１４〜１１４９）、ヒト成長ホルモンシグナルペプチド（ヌクレオチド１１６０〜１２３７）、抗体Ｇ１軽鎖可変領域（ヌクレオチド１２３８〜１５５８）、ヒトκ鎖定常領域（ヌクレオチド１５５９〜１８８２）に対応するヌクレオチド配列を有する。ベクターｐＥｂ．ＣＧＲＰ．ｈＫＧＩは、２００５年７月１５日にＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−６８６６が付与された。
【０３４５】
親和性決定のためのＢｉａｃｏｒｅアッセイ。Ｇ１モノクローナル抗体及びそのバリアントの親和性は、Ｂｉａｃｏｒｅ３０００（商標）表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）システム（Ｂｉａｃｏｒｅ，ＩＮＣ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ  ＮＪ）を使用して、２５℃または３７℃のいずれかで決定した。親和性は、予め固定化されたストレプトアビジン（ＳＡセンサーチップ）を介してＮ末端ビオチン化ＣＧＲＰまたは断片を捕捉し、チップ上のＣＧＲＰまたは断片に滴定した抗体Ｇ１  Ｆａｂ断片またはバリアントの結合反応速度を測定することによって決定した。Ｂｉａｃｏｒｅアッセイは全て、ＨＢＳ−ＥＰランニング緩衝液（１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ  ｐＨ７．４、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、３ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．００５％ｖ／ｖポリソルベートＰ２０）中で実施した。Ｎ−ビオチン化ＣＧＲＰを０．００１ｍｇ／ｍＬ未満の濃度にＨＢＳ−ＥＰ緩衝液中に希釈し、様々な接触時間を用いて、ＳＡセンサーチップに注入することによって、ＣＧＲＰ表面を調製した。５０ＲＵ（レスポンスユニット）未満の捕捉レベルに対応する低能力表面を高精度反応速度論的試験に使用し、一方、高能力表面（約８００ＲＵの捕捉ＣＧＲＰ）を濃度試験、スクリーニング及び溶液中親和性決定のために使用した。反応速度論的データは、抗体Ｇ１  Ｆａｂを１ｕＭ〜０．１ｎＭにわたる濃度に（予想されるＫＤの０．１〜１０倍になるように）２倍または３倍に漸増させて連続的に希釈することによって得た。サンプルは、概して、１００μＬ／分で１分間注入し、少なくとも１０分の解離時間とした。各結合サイクル後、２５％ｖ／ｖエタノール中の２５ｍＭ  ＮａＯＨで表面を再生した。この表面は、数百回を超えるサイクルに耐性を示した。全ての漸増系列（通常二重で生成）について、ＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎプログラムを用いて、１：１ラングミュア結合モデルに全体的にフィッティングさせた。これにより、各結合相互作用に関して、一組のみの結合及び解離の反応速度定数（それぞれｋｏｎ及びｋｏｆｆ）が得られ、この比から平衡解離定数（ＫＤ＝ｋｏｆｆ／ｋｏｎ）を得た。このようにして決定した親和性（ＫＤ値）を表６及び７に示す。
【０３４６】
解離速度が極めて遅い場合の結合相互作用の高精度分析。解離速度が極めて遅い場合の相互作用（特に、２５℃における抗体Ｇ１  Ｆａｂのチップ上のヒトα−ＣＧＲＰへの結合）の親和性は、２段階の実験で得た。上記のプロトコルを以下の修正を加えて使用した。結合速度定数（ｋｏｎ）は、５５０ｎＭ〜１ｎＭにわたる２倍漸増系列（二重）を１００ｕＬ／分で３０秒間注入し、３０秒のみの解離段階とすることで決定した。解離速度定数（ｋｏｆｆ）は、同じ漸増系列の３濃度（高、中及び低）を二重で３０秒間注入し、２時間の解離段階とすることで決定した。各相互作用の親和性（ＫＤ）は、表５に示すように、両タイプの実験で得たｋｏｎとｋｏｆｆの各値を組み合わせることによって得た。
【０３４７】
Ｂｉａｃｏｒｅによる溶液中親和性の決定。ラットα−ＣＧＲＰ及びＦ３７Ａ（１９〜３７）ヒトα−ＣＧＲＰに対する抗体Ｇ１の溶液中親和性について、Ｂｉａｃｏｒｅにより３７℃で測定した。高能力のＣＧＲＰチップ表面を使用し（高親和性ヒトα−ＣＧＲＰを検出目的のために選択した）、ＨＢＳ−ＥＰランニング緩衝液を５ｕＬ／分で流した。５ｎＭの一定濃度の抗体Ｇ１  Ｆａｂ断片（溶液ベース相互作用の予想ＫＤ以下になるようにする）を、競合するペプチドであるラットα−ＣＧＲＰまたはＦ３７Ａ（１９〜３７）ヒトα−ＣＧＲＰのいずれか（３倍連続希釈にて１ｎＭ〜１ｕＭにわたる最終濃度）とともに予めインキュベートした。溶液ベース競合ペプチド非含有または含有の抗体Ｇ１  Ｆａｂ溶液をチップ上のＣＧＲＰに注入し、溶液競合の結果としてチップ表面で検出される結合応答の減少をモニターした。抗体Ｇ１  Ｆａｂのみ（５、２．５、１．２５、０．６２５、０．３２５及び０ｎＭ）をチップ上のＣＧＲＰに滴定することによって作成した検量線を用いて、これらの結合応答を「遊離Ｆａｂ濃度」に変換した。用いた競合溶液ベースペプチドの濃度に対して「遊離Ｆａｂ濃度」をプロットし、各データポイントを生成し、ＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェアを用いて溶液中親和性モデルにフィッティングさせた。このようにして（間接的に）決定した溶液中親和性について、表５及び７に示す。これらの溶液中親和性を用いて、ＳＡチップ上のＮ−ビオチン化ＣＧＲＰにＦａｂを直接注入したときに得た親和性の有効性を確認した。これらの２つの方法によって決定した親和性はほぼ一致しており、Ｎ−ビオチン化型ＣＧＲＰをチップに固定することでその本来の溶液中結合活性が変わることはないことが確認される。
【０３４８】
以下の表５は、ＳＡチップ上のＮ−ビオチン化ＣＧＲＰにＦａｂ断片を流すことによってＢｉａｃｏｒｅにより決定した、ヒトα−ＣＧＲＰ、ヒトβ−ＣＧＲＰ、ラットα−ＣＧＲＰ及びラットβ−ＣＧＲＰに対する抗体Ｇ１の結合親和性を示す。解離速度が極めて遅い結合相互作用の親和性をより良く解するために、この試験の方向性を補完する２段階の実験でも親和性を決定した。ラットα−ＣＧＲＰ相互作用の溶液中親和性についても決定した（上述の通り）。両試験の方向性で測定した親和性はほぼ一致しており、溶液中の天然ラットα−ＣＧＲＰの結合親和性は、それがＮ−ビオチン化され、ＳＡチップに結合された場合でも変わらないことが確認される。
【０３４９】
【表５】
2019123750.tif 000007
【０３５０】
以下の表６は、抗体Ｇ１と比較してアミノ酸配列変異を有する抗体、ならびにラットα−ＣＧＲＰ及びヒトα−ＣＧＲＰの両方に対する各抗体の親和性を示す。表６に示すバリアントのアミノ酸置換は、Ｇ１の配列を基準に記載されている。Ｆａｂ断片の結合親和性は、ＢｉａｃｏｒｅによりＳＡチップ上のＣＧＲＰにＦａｂ断片を流すことによって決定した。
【０３５１】
【表６Ａ】
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【表６Ｂ】
2019123750.tif 000009
【表６Ｃ】
2019123750.tif 000010
【表６Ｄ】
2019123750.tif 000011
【表６Ｅ】
2019123750.tif 000012
【表６Ｆ】
2019123750.tif 000013
【０３５２】
抗体Ｇ１によって認識されるヒトα−ＣＧＲＰ上のエピトープを特定するために、上述のＢｉａｃｏｒｅ試験を使用した。ヒトα−ＣＧＲＰは、ＳＡセンサーチップを介した親和性の高い捕捉を可能にするために、Ｎ−ビオチン化型を購入した。ＣＧＲＰペプチドの存在下または不存在下で、チップ上のヒトα−ＣＧＲＰに対するＧ１  Ｆａｂ断片の結合を決定した。典型的には、２０００：１モルのペプチド／Ｆａｂ溶液（例えば、Ｇ１  Ｆａｂ５０ｎＭ中ペプチド１０ｕＭ）をチップ上のヒトα−ＣＧＲＰに注入した。図６は、競合ペプチドによる結合阻害率を示す。図６に示すデータは、Ｇ１  Ｆａｂのヒトα−ＣＧＲＰへの結合を１００％阻害するペプチドがヒトα−ＣＧＲＰの１〜３７（ＷＴ）、８〜３７、２６〜３７、Ｐ２９Ａ（１９〜３７）、Ｋ３５Ａ（１９〜３７）、Ｋ３５Ｅ（１９〜３７）及びＫ３５Ｍ（１９〜３７）、β−ＣＧＲＰ（ＷＴ）の１〜３７、ラットα−ＣＧＲＰ（ＷＴ）の１〜３７、ならびにラットβ−ＣＧＲＰ（ＷＴ）の１〜３７であることを示している。これらのペプチドは全てＣ末端がアミド化されている。ヒトα−ＣＧＲＰのペプチドＦ３７Ａ（１９〜３７）及び１９〜３７（後者のＣ末端は非アミド化）もまたＧ１  Ｆａｂのヒトα−ＣＧＲＰへの結合を約８０％〜９０％阻害した。ヒトα−ＣＧＲＰのペプチド１〜３６（Ｃ末端は非アミド化）は、Ｇ１  Ｆａｂのヒトα−ＣＧＲＰへの結合を約４０％阻害した。ヒトα−ＣＧＲＰのペプチド断片１９〜３６（Ｃ末端はアミド化）、ヒトα−ＣＧＲＰのペプチド断片１〜１３及び１〜１９（Ｃ末端はいずれも非アミド化）、ならびにヒトアミリン、カルシトニン及びアドレノメデュリン（Ｃ末端は全てアミド化）は、チップ上のヒトα−ＣＧＲＰに対するＧ１  Ｆａｂの結合と競合しなかった。これらのデータは、Ｇ１がＣＧＲＰのＣ末端エピトープを標的にし、最も末端にある残基（Ｆ３７）の性質及びそのアミド化両方が結合に重要であることを表している。
【０３５３】
ヒトα−ＣＧＲＰのバリアントに対するＧ１  Ｆａｂの結合親和性についても決定した（３７℃にて）。以下の表７は、チップ上のＮ−ビオチン化ヒトα−ＣＧＲＰ及びバリアントにＧ１  Ｆａｂを直接滴定することによって測定した場合の親和性を示す。表７中のデータは、抗体Ｇ１がＣ末端エピトープに結合し、Ｆ３７及びＧ３３が最も重要な残基であることを示している。Ｇ１は、余分なアミノ酸残基（アラニン）がＣ末端（アミド化）に追加されると、ＣＧＲＰに結合しない。
【０３５４】
【表７】
2019123750.tif 000014
【０３５５】
上記データは、抗体Ｇ１が結合するエピトープがヒトα−ＣＧＲＰのＣ末端上にあり、ヒトα−ＣＧＲＰ上のアミノ酸３３及び３７が抗体Ｇ１の結合に重要であることを示している。また、残基Ｆ３７のアミド化も結合に重要である。
【０３５６】
実施例５：ラットの伏在神経刺激によって誘発した皮膚血管拡張に対する抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体Ｇ１の効果
抗ＣＧＲＰ抗体Ｇ１のアンタゴニスト活性を試験するために、ラットの伏在神経刺激による皮膚血管拡張に対する抗体の効果を、実施例３に記載したラットモデルを用いて試験した。簡潔に述べれば、２％イソフルランによる麻酔下にラットを維持した。実験開始時にトシル酸ブレチリウムを投与して（３０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｖ．投与）、伏在神経の交感神経線維の付随刺激に起因する血管収縮を最小限に抑えた。体温は、温度制御ヒーティングブランケットにサーモスタット連結された直腸プローブを使用して、３７℃に維持した。右後肢の伏在神経を外科的に露出させ、近位側を切断し、乾燥を防ぐためにプラスチックラップで覆った。伏在神経によって刺激分布される領域である、後足の皮膚の背側正中にレーザードップラープローブを置いた。血液細胞の流速として測定される皮膚血流量をレーザードップラー流量計でモニターした。注入２時間以内の抗体効果を評価する実験では、トシル酸ブレチリウム注入の３０〜４５分後、安定したベースライン流速（５％未満の変動）が少なくとも５分間確立されたら、神経を白金双極電極上に置き、電気的に刺激し（２Ｈｚ、１０Ｖ、１ｍｓ、３０秒間）、２０分後に再度刺激した。これらの２回の刺激に対する血流流速応答の平均を用いて、電気刺激に対するベースライン応答（時間０）を確立した。次いで、抗体Ｇ１（１ｍｇ／ｋｇまたは１０ｍｇ／ｋｇ）またはビヒクル（１０ｍｇ／ｋｇのＧ１と等量の０．０１％Ｔｗｅｅｎ２０を含むＰＢＳ）を静脈内（ｉ．ｖ．）投与した。その後、抗体投与から３０分、６０分、９０分及び１２０分後に神経を刺激した（２Ｈｚ、１０Ｖ、１ｍｓ、３０秒間）。動物をおよそ３時間の間、麻酔下に維持した。電気パルス刺激に対する各流速応答について、流速−時間曲線下面積（ＡＵＣ、流速の変化×時間の変化に等しい）により、皮膚血流量における累積変化を推定した。
【０３５７】
図７に示すように、伏在神経に電気パルスを印加することにより刺激される血流増加は、伏在神経が抗体投与から９０分後に電気的に刺激されたとき、ビヒクルと比較して、１ｍｇ／ｋｇの抗体Ｇ１の存在（ｉ．ｖ．投与）によって有意に阻害された。伏在神経に電気パルスを印加することにより刺激される血流増加は、伏在神経が抗体投与から９０分及び１２０分後に電気的に刺激されたとき、ビヒクルと比較して、１０ｍｇ／ｋｇの抗体Ｇ１の存在（ｉ．ｖ．投与）によって有意に阻害された。
【０３５８】
伏在神経試験にてより長い時点での抗体効果を決定する実験では、上述した伏在神経刺激のために動物を準備する２４時間または７日前に、指定用量の抗体をラットに静脈内注射した。これらの実験では、投与前の電気パルス刺激に対するベースライン応答を個々のラットで確立することができなかったため、２４時間または７日にビヒクル（ＰＢＳ、０．０１％Ｔｗｅｅｎ２０）を投与した動物と処置群とを比較した。
【０３５９】
図８Ａ及び８Ｂに示すように、伏在神経刺激によって惹起された後足の皮膚の背側正中における血流増加は、同じ時点に投与したビヒクル群と比較して、刺激の２４時間または７日前のいずれかに１０ｍｇ／ｋｇまたは３ｍｇ／ｋｇのいずれかのＧ１を投与した動物群で有意に阻害された。
【０３６０】
図８Ｃは、５０％最大効果（ＥＣ５０）に必要な用量を決定するために、図８Ａ及び８Ｂに示した用量反応データに当てはめた曲線当てはめ分析を表す。２４時間でのＥＣ５０は１．３ｍｇ／ｋｇであり、７日でのＥＣ５０はわずかに低い（０．８ｍｇ／ｋｇ）。
【０３６１】
実施例６：硬膜動脈（閉鎖頭窓）試験における抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体ｍｕ７Ｅ９の即時効果
閉鎖頭窓モデル：この実験の目的は、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体の即時効果を決定し、ＣＧＲＰ受容体アンタゴニストＢＩＢＮ４０９６ＢＳの即時効果と比較することであった。実験は、先に記載の通りに（Ｗｉｌｌｉａｍｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｐｈａｌａｌｇｉａ  １７（４）：５１８−２４（１９９７））、以下の修正を加えて行った。Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラット（３００〜４００ｇ）にペントバルビタール７０ｍｇ／ｋｇ  ｉ．ｐ．で麻酔をかけた。ペントバルビタール２０ｍｇ／ｋｇ／時のｉ．ｖ．により麻酔を維持した。全薬剤を送達するために、ラットに頸静脈を通してカニューレを挿入した。血圧は、大腿動脈から腹大動脈に通したプローブ（ｍｉｋｒｏ−ｔｉｐカテーテル、Ｍｉｌｌａｒ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）でモニターした。ラットの気管を切開し、呼吸速度を３．５ｍＬの体積で１分あたり７５回に維持した。定位固定装置に頭部を固定し、頭皮を取り除いた後、矢状縫合のすぐ側方の左頭頂部に、歯科用ドリルで骨を薄くすることによって、２×６ｍｍの窓を作成した。マイクロマニピュレータを使用して、白金双極電極をその表面上に下ろし、重鉱油で覆った。電極窓の横に５×６ｍｍの別窓を作成して重鉱油で満たし、この窓から中硬膜動脈（ＭＭＡ）分枝の直径をＣＣＤカメラ及びビデオディメンションアナライザ（Ｌｉｖｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）で連続的にモニターした。準備後、ラットを４５分間以上休ませた。電気刺激に対するベースライン応答を確立し（１５Ｖ、１０ｈｚ、０．５ｍｓパルス、３０秒）、次いで、実験化合物（１０ｍｇ／ｋｇのｍｕ７Ｅ９、３００μｇ／ｋｇのＢＩＢＮ４０９６ＢＳまたはＰＢＳ０．０１％Ｔｗｅｅｎ２０）をラットにｉ．ｖ．投与した。投与から５（ＢＩＢＮ４０９６ＢＳ）、３０、６０、９０及び１２０分後に更なる電気刺激を行った。チャートソフトウェア（ＡＤＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）を用いて全データを記録した。
【０３６２】
図９に示すように、１０ｍｇ／ｋｇのｍｕ７Ｅ９は、電界刺激によって惹起されるＭＭＡの拡張を投与後６０分間以内に有意に阻害し、試験期間（１２０分）にわたってその効果が持続する。比較として、ＢＩＢＮ４０９６ＢＳは、ＭＭＡの拡張を投与５分以内で阻害するが、その効果は９０分までに完全に消失した。阻害の程度は、ＢＩＢＮ４０９６ＢＳとｍｕ７Ｅ９で同程度である。
【０３６３】
実施例７：硬膜動脈（閉鎖頭窓）試験における抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体Ｇ１の長期効果
この実験の目的は、抗ＣＧＲＰ抗体が、電気的に刺激されたＭＭＡの拡張を投与から７日後においても阻害できるかどうかを判断するためである。ラットの準備は、以下の点を除き、上述した即時実験（実施例６）と同様とした。閉鎖頭窓作成の準備及び刺激の７日前に、ラットへの静脈内注射を行った（１０ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇまたは１ｍｇ／ｋｇのＧ１）。即時実験と同様に、投与前の電気刺激に対するベースライン拡張応答を確立することができなかったため、ビヒクル（ＰＢＳ、０．０１％Ｔｗｅｅｎ２０）を投与した対照群におけるＭＭＡの拡張と抗体群とを比較した。ラットを４５分間以上休ませた後、硬膜を３０分間隔で電気的に刺激した。刺激は、２．５Ｖ、５Ｖ、１０Ｖ、１５Ｖ及び２０Ｖで、全て１０Ｈｚ、０．５ｍｓのパルスで３０秒間行った。
【０３６４】
図１０に示すように、１０ｍｇ／ｋｇ及び３ｍｇ／ｋｇのＧ１は、１０〜２０ボルトの範囲の電気刺激によって惹起されたＭＭＡ拡張を有意に阻害した。このデータは、Ｇ１が電気的に刺激されたＭＭＡ拡張を投与後最大７日阻害することができることを表している。
【０３６５】
実施例８：モルヒネ離脱顔面潮紅モデル
モルヒネ離脱ラットモデルは、更年期の顔面潮紅機序に関して確立されたげっ歯類モデルである（Ｓｉｐｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ．１０２８（２）：１９１−２０２（２００４）；Ｍｅｒｃｈｅｎｔｈａｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍａｔｕｒｉｔａｓ  ３０：３０７−３１６（１９９８）；Ｋａｔｏｖｉｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ．４９４：８５−９４（１９８９）；Ｓｉｍｐｋｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ３２：１９５７−１９６６（１９８３））。基本的には、モルヒネペレットを皮下に埋め込むことによって、ラットをモルヒネ中毒にする。中毒状態になったら、ナロキソン（オピオイド拮抗薬）を動物に注入し、直ちに離脱状態にする。この離脱には、皮膚温の上昇、深部体温の低下、心拍数の増加及び血清中黄体形成ホルモンの増加が伴う。これらは全て、ヒト顔面潮紅において生じる場合と類似の程度及びタイミングである（Ｓｉｍｐｋｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ３２：１９５７−１９６６（１９８３））。更に、離脱を誘発する前にラットをエストラジオールで処置した場合、顔面潮紅の症状が軽減する（Ｍｅｒｃｈｅｎｔｈａｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍａｔｕｒｉｔａｓ  ３０：３０７−３１６（１９９８））。これは、モルヒネ離脱モデルが臨床上の顔面潮紅に近似すると考えられている理由である。
【０３６６】
卵巣切除したラットをＣｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓに注文した。卵巣切除後７日以降に、モルヒネペレット（モルヒネベースで７５ｍｇ）を皮下に埋め込むことによって、モルヒネ依存状態を引き起こした。２日後、さらに２つのペレットを埋め込んだ。翌日、ラットに１０ｍｇ／ｋｇの４９０１［＊＊］またはビヒクル（ＰＢＳ、０．０１％Ｔｗｅｅｎ）のいずれかを静脈内注射した。２回目のペレット埋め込みから２日後に、ケタミン（９０ｍｇ／ｋｇ）でマウスに麻酔をかけ、軽く拘束した。表面温度熱電対を尾根部にテープで貼り付け、直腸熱電対を用いて深部温度を測定する。チャートソフトウェア（ＡＤＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）を用いてデータを記録した。安定したベースライン温度が１５分間記録されたら、ナロキソン（１ｍｇ／ｋｇ）を皮下注射した。その後６０分間の温度を連続的に記録した。結果を図１１Ａ及び１１Ｂに示す。
【０３６７】
実施例９：慢性片頭痛の治療
４５歳のヒト男性対象が慢性片頭痛を少なくとも３ヶ月間有すると特定される。慢性片頭痛を有することの特定は、スクリーニング以前の少なくとも３ヶ月間の慢性片頭痛を示唆する頻発性頭痛歴（例えば、月１５日）を認めることによって達成される。頭痛頻度の確認は、１ヶ月あたり少なくとも１５日の頭痛で、少なくとも８日がｉ．片頭痛発作であると認められること、及び／またはｉｉ．片頭痛の前兆が先行する若しくは伴うことのいずれか１つを満たすことが示されている、前向きに収集した基本情報を介して達成される。
【０３６８】
対象における片頭痛の発生を減少させるために、２２５ｍｇの用量の抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体（例えば、抗体Ｇ１）が対象に投与される。抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体は、１５０ｍｇ／ｍＬの濃度で液剤として提供される。２２５ｍｇの用量は、対象の身体の上腕後側に１．５ｍＬの皮下注射として投与される。あるいは、静脈内注射により対象に当該用量が投与される。かかる場合、５．８５ｍＬの抗ＣＧＲＰ抗体１５０ｍｇ／ｍＬを０．９％塩化ナトリウム溶液（通常生理食塩水）と混ぜ合わせてバッグ総容量１３０ｍＬの静脈注射用バッグにしてもよい。１００ｍＬの静脈注射用バッグ容量を１時間にわたって対象に静脈内注入し、総用量は２２５ｍｇである。片頭痛の発生減少が認められるまで、投薬を２８日ごとに繰り返す。慢性片頭痛の発生減少は、対象にて観察される頭痛日数、頭痛発生の時間数（例えば、頭痛時間）、頭痛の重症度及び片頭痛日数を含む、種々の基準を用いて検討される。
【０３６９】
実施例１０：慢性片頭痛の治療
３７歳のヒト女性対象が慢性片頭痛を少なくとも３ヶ月間有すると特定される。慢性片頭痛を有することの特定は、スクリーニング以前の少なくとも３ヶ月間の慢性片頭痛を示唆する頻発性頭痛歴（例えば、月１５日）を認めることによって達成される。頭痛頻度の確認は、１ヶ月あたり少なくとも１５日の頭痛で、少なくとも８日がｉ．片頭痛発作であると認められること、及び／またはｉｉ．片頭痛の前兆が先行する若しくは伴うことのいずれか１つを満たすことが示されている、前向きに収集した基本情報を介して達成される。
【０３７０】
対象における片頭痛の発生を減少させるために、６７５ｍｇの初回負荷投与量の抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体（例えば、抗体Ｇ１）が対象に投与される。抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体は、１５０ｍｇ／ｍＬの濃度で液剤として提供される。６７５ｍｇの負荷投与量は、対象の身体の異なる部位（例えば、上腕後側、下腹部／腹部／腰部、大腿前部など）に１．５ｍＬの皮下注射２２５ｍｇとして３回投与される。
【０３７１】
片頭痛の発生減少が認められるまで、投薬を２２５ｍｇで２８日ごとに繰り返す（例えば、対象の腕に１．５ｍＬの皮下注射１回により）。慢性片頭痛の発生減少は、対象にて観察される頭痛日数、頭痛発生の時間数（例えば、頭痛時間）、頭痛の重症度及び片頭痛日数を含む、種々の基準を用いて検討される。
【０３７２】
実施例１１：慢性片頭痛の治療
２３歳のヒト男性対象が慢性片頭痛を少なくとも３ヶ月間有すると特定される。慢性片頭痛を有することの特定は、スクリーニング以前の少なくとも３ヶ月間の慢性片頭痛を示唆する頻発性頭痛歴（例えば、月１５日）を認めることによって達成される。頭痛頻度の確認は、１ヶ月あたり少なくとも１５日の頭痛で、少なくとも８日がｉ．片頭痛発作であると認められること、及び／またはｉｉ．片頭痛の前兆が先行する若しくは伴うことのいずれか１つを満たすことが示されている、前向きに収集した基本情報を介して達成される。
【０３７３】
対象における片頭痛の発生を減少させるために、９００ｍｇの用量の抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体（例えば、抗体Ｇ１）が対象に投与される。抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体は、１５０ｍｇ／ｍＬの濃度で液剤として提供される。９００ｍｇの用量は、対象の身体の異なる部位（例えば、上腕後側、下腹部／腹部／腰部、大腿前部など）に１．５ｍＬの皮下注射２２５ｍｇとして４回投与される。片頭痛の発生減少が認められるまで、投薬を２８日ごとに繰り返す。慢性片頭痛の発生減少は、対象にて観察される頭痛日数、頭痛発生の時間数（例えば、頭痛時間）、頭痛の重症度及び片頭痛日数を含む、種々の基準を用いて検討される。
【０３７４】
実施例１２：反復性片頭痛の治療
２８歳のヒト男性対象が高頻度の反復性片頭痛を有すると特定される。対象は、スクリーニング以前の少なくとも３ヶ月間に月８日を超える頭痛歴を有することなどの基準を用いて高頻度の反復性片頭痛を有することが特定され、頭痛頻度の確認は、８〜１４日の頭痛（あらゆる種類）で、少なくとも８日がｉ．片頭痛、ｉｉ．片頭痛と思われる頭痛、及び／またはｉｉｉ．トリプタン若しくは麦角化合物の使用のうちの少なくとも１つの基準を満たすことが示されている、前向きに収集した基本情報を介して行われる。
【０３７５】
対象における片頭痛の発生を減少させるために、６７５ｍｇの用量の抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体（例えば、抗体Ｇ１）が対象に投与される。抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体は、１５０ｍｇ／ｍＬの濃度で液剤として提供される。６７５ｍｇの用量は、対象の身体の異なる部位（例えば、上腕後側、下腹部／腹部／腰部、大腿前部など）に１．５ｍＬの皮下注射２２５ｍｇとして３回投与される。片頭痛の発生減少が認められるまで、投薬を２８日ごとに繰り返す。反復性片頭痛の発生減少は、対象にて観察される頭痛日数、頭痛発生の時間数（例えば、頭痛時間）、頭痛の重症度及び片頭痛日数を含む、種々の基準を用いて検討される。
【０３７６】
実施例１３：反復性片頭痛の治療
５２歳のヒト女性対象が高頻度の反復性片頭痛を有すると特定される。対象は、スクリーニング以前の少なくとも３ヶ月間に月８日を超える頭痛歴を有することなどの基準を用いて高頻度の反復性片頭痛を有することが特定され、頭痛頻度の確認は、８〜１４日の頭痛（あらゆる種類）で、少なくとも８日がｉ．片頭痛、ｉｉ．片頭痛と思われる頭痛、及び／またはｉｉｉ．トリプタン若しくは麦角化合物の使用のうちの少なくとも１つの基準を満たすことが示されている、前向きに収集した基本情報を介して行われる。
【０３７７】
対象における片頭痛の発生を減少させるために、２２５ｍｇの用量の抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体（例えば、抗体Ｇ１）が対象に投与される。抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体は、１５０ｍｇ／ｍＬの濃度で液剤として提供される。２２５ｍｇの用量は、対象の身体の上腕後側に１．５ｍＬの皮下注射として投与される。片頭痛の発生減少が認められるまで、投薬を２８日ごとに繰り返す。反復性片頭痛の発生減少は、対象における頭痛日数、頭痛発生の時間数、頭痛の重症度及び片頭痛日数を観察することを含む、種々の観察を用いて検討される。
【０３７８】
実施例１４：非臨床毒性試験及び薬物動態
抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体Ｇ１は、Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ（ＳＤ）ラット及びカニクイザルにおける１ヶ月のＩＶ反復投与毒性試験にて忍容性が良好であり、これらの試験のいずれにおいても標的臓器毒性は確認されなかった。ラットとサルの両試験に関して、１００ｍｇ／ｋｇ／週の無毒性量（ＮＯＡＥＬ）が確立された。この用量レベルは、ラット及びサルのそれぞれにおいて、２，５７０及び３，４４０μｇ／ｍＬの最高濃度（Ｃｍａｘ）、ならびに１９４，０００μｇ・ｈ／ｍＬ及び２９９，０００μｇ・ｈ／ｍＬ（２２日）の曲線下面積（ＡＵＣ（０−１６８ｈ））での全身曝露に相当する。
【０３７９】
３ヶ月のＩＶ／ＳＣラット試験において、標的臓器毒性は特定されず、Ｇ１は最大試験用量３００ｍｇ／ｋｇまで忍容性が良好であった。３ヶ月のサル試験において、１００ｍｇ／ｋｇ以上で、免疫複合体の蓄積の結果、毛様体動脈の血管周囲炎症が観察された。この所見は、ヒト化抗体に対するサルの免疫原性応答に起因するものであり、臨床的に関連しないと思われた。本サル試験における最大試験用量３００ｍｇ／ｋｇは、推定最大臨床用量２，０００ｍｇ、またはｍｇ／ｋｇ基準で２９ｍｇ／ｋｇ（対象の平均体重を７０ｋｇと仮定）の少なくとも１０倍である。
【０３８０】
実施例１５：臨床薬物動態
１０〜２，０００ｍｇの用量を試験する４つの無作為化プラセボ対照二重盲検試験にて、単回ＩＶ曝露後の抗体Ｇ１のＰＫを調べた。１時間のＩＶ注入の終了直後に、最高血漿中濃度（Ｃｍａｘ）に達した。Ｃｍａｘ到達時間（Ｔｍａｘ）の中央値は、１．０〜３．０時間の範囲であり、その後、様々な段階の減少となった。Ｃｍａｘ及び総曝露は、Ｇ１の用量増加に伴い、ほぼ直線的に増加した。終末相半減期（ｔ１／２）は、３６．４〜４８．３日の範囲であった。肝臓でのＧ１代謝を示すものはなく、代謝の主体は、プロテアソーム分解によるものである。
【０３８１】
１つの試験は、３０ｍｇ及び３００ｍｇの用量を２週間の間隔を空けて２回投与する薬物動態とした。最大濃度及び濃度−時間プロファイル下面積は、用量増加に伴って増加した。２回目の投与後の見かけの終末相半減期（ｔ１／２）は、４１．２日（３０ｍｇ）及び５０．０日（３００ｍｇ）（相加平均）であった。１５日の間隔を空けて投与した２回のＩＶ投与後のＧ１の血漿中蓄積率は、１．５（３０ｍｇ）及び１．４（３００ｍｇ）であった。
【０３８２】
実施例１６：臨床安全性及び薬物動態
６つの試験において、１１８名の健康な男性及び女性に抗体Ｇ１を投与し、一方、５７名の男性及び女性の被験者にプラセボを投与した。試験は、０．２ｍｇ〜最大２，０００ｍｇの範囲の単回ＩＶ投与、１４日ごとに１回投与する最大３００ｍｇの２回のＩＶ投与、ならびに２２５及び９００ｍｇのＳＣ投与を含んだ。６つの試験は、健康な男性における、２つのＩＶ単回用量増加ＰＫ及び薬力（ＰＤ）試験（試験Ｂ０１４１００１及びＢ０１４１００２）、健康なボランティアにおけるカプサイシンフレア反応への抗体Ｇ１のＩＶ投与の即時効果を調べるための２コホートプラセボ対照クロスオーバー試験（Ｂ０１４１００６）、健康な男性及び女性のボランティアにおける抗体Ｇ１の並行群間反復投与試験（Ｂ０１４１００７）、最大２，０００ｍｇ用量までの安全性及び忍容性を健康な女性ボランティアにＩＶ投与して評価する単回投与試験（Ｂ０１４１００８）、ＩＶ投与とＳＣ投与間の相対的安全性及びバイオアベイラビリティを比較する試験（Ｇ１−ＳＣ−ＩＶ）を含んだ。
【０３８３】
この６つの試験について、以下の表１１にまとめる。５つのＩＶ試験（Ｂ０１４１００１、Ｂ０１４１００２、Ｂ０１４１００６、Ｂ０１４１００７及びＢ０１４１００８）のうち、３つは、実質上同一の設計及び評価とした。試験Ｂ０１４１００は、０．２ｍｇ、１ｍｇ及び３ｍｇの用量を試験するものであり、１時間の単回ＩＶ注入として投与した。この試験は並行設計とした。注入後７日間、参加者をクリニックに入院させ、７日間の各日に複数の評価を行った。退院後、患者について、退院後１週間（１４日目）、その後は注入後１、２及び３ヶ月後に再評価した。試験Ｂ０１４１００２は、単回投与で１０ｍｇ〜１０００ｍｇの範囲の用量を試験した。最後に、試験Ｂ０１４１００８は、３００ｍｇ、１０００ｍｇ、１５００ｍｇまたは２０００ｍｇの用量を試験した。試験Ｂ０１４１００６は、抗体Ｇ１のＩＶ注入後の最大１週間のカプサイシンフレア阻害を測定することにより、薬力学的読み出し情報をまとめることも目的にしていたため、他の試験とは異なるものであった。
【０３８４】
ＩＶ試験に関する有害事象（ＡＥ）プロファイルは、最初の投薬期間についてのみ報告した。試験Ｂ０１４１００７は、並行設計を用いて、２週間の間隔を空けてＩＶ投与する抗体Ｇ１の３０または３００ｍｇのいずれかの複数回投与について試験した。処置割り当てを含むＷｅｂベースインタラクティブシステムを介して、適格である各被験者に無作為化割り付け順序を割り当てた。無作為化スキームは、統計担当主任が開発した。全試験の参加者は、概して、健康な男性及び女性（１８〜６５歳）であり、全参加者が同意説明文書に署名した。全試験は治験審査委員会（ＩＲＢ）による承認を受けた。ＡＥについては、試験薬との因果関係の有無に関わらない、臨床試験の参加者におけるあらゆる好ましくない医療上の出来事と定義した。試験薬剤またはプラセボの投与後に観察されたＡＥは、試験薬との潜在的な因果関係に関わらない「試験治療下での発現」ＡＥ（ＴＥＡＥ）という用語を用いた。ＴＥＡＥを有する全ての被験者については、その事象が解消するまで、またはその事象が安定するか、かつ／若しくは新しいベースラインに到達するまで、適切な時間間隔で追跡した。ＴＥＡＥは全て軽度、中程度または重度にランク付けした。重篤なＡＥ（ＳＡＥ）は、用量に関わらない、あらゆる好ましくない医療上の出来事であって、死に至るもの、生命を脅かすもの（すなわち、その事象時に被験者が差し迫った死の危険にさらされていた場合）、入院若しくは入院期間の延長が必要となるもの、永続的若しくは顕著な障害・機能不全に陥るもの（例えば、被験者の通常の生活機能を果たす能力の実質的な阻害）、先天異常／先天性欠損を来すもの、または他のあらゆる医学的に重要な事象とアプリオリに定義した。次の状況のうちの１つが存在するときは、治療関連ＡＥ（ＴＲＡＥ）とみなした。１）当該ＡＥの発生と試験製品の投与との間に妥当な時間的関係が特定できる場合、２）当該ＡＥについて、患者の臨床状態、併発性疾患または同時並行治療によって容易に説明することができない場合、３）被験製品の中断または用量減少で当該ＡＥが軽減する場合。
【０３８５】
スクリーニング時、投薬前、注入終了直後及び患者のクリニック入院中に複数回、ならびに全来診時に、血圧、脈拍数及び口腔温を測定した。検体検査には、血液生化学検査、血液分析及び尿検査を含めた。血液学、化学、凝固及び尿の安全性検体検査は、複数の試験時点で行った。スクリーニング時、投薬前である１日目、注入終了直後及び初日に更に５回、ならびに全来診時に、ＥＣＧを記録した。ＱＴｃＦ値は、Ｆｒｉｄｅｒｉｃｉａ（ＱＴｃＦ）の心拍数補正式を用いることで得た。ＥＣＧパラメータであるＱＴ間隔、心拍数、ＱＴｃＦ間隔、ＰＲ間隔及びＱＲＳ間隔についての絶対値及びベースラインからの変化を、コホート、処置及び投薬後時間により評価した。上述の安定性評価に加えて、プロトコルＢ０１４００８には、ベースライン及び投薬後の３時点（２８日目、８４日目及び１６８日目）における完全な眼科検査を含めた。
【０３８６】
記述表及び要約統計量を用いて、臨床データ及びバイタルサインをまとめた。検査データ及び他の安全性データについて、あらゆる変化（基準範囲外の値）及びアプリオリに定義したあらゆる臨床関連変化との相関としてまとめた。要約表を用量で層化し、試験全体でデータをプールした。加えて、全ての抗体Ｇ１曝露に関する統合データの比較をプラセボと対比させた。プラセボはまた、１００ｍｇ及びそれ以上（１００ｍｇ、３００ｍｇ、１０００ｍｇ、１５００ｍｇ及び２０００ｍｇ）の抗体Ｇ１用量、ならびに１０００ｍｇ及びそれ以上（１０００ｍｇ、１５００ｍｇ及び２０００ｍｇ）の抗体Ｇ１用量と対比させた。
【０３８７】
ＩＶ／ＳＣ試験（Ｇ１−ＳＣ−ＩＶ）では、抗体Ｇ１（２２５または９００ｍｇ）またはプラセボの単回投与を行うために、被験者３６名を無作為化し、皮下（ＳＣ）ボーラス注入または１時間のＩＶ注入のいずれかで送達した。被験者を臨床研究ユニットに投薬後７日間入院させ、試験９０日目まで追加の外来患者通院のためにクリニックに定期的に戻らせた。被験者が入院している間、１日目（投薬前、１、６、１２時間）、３日目、７日目及び試験終了時に１回（９０日目）、ＥＣＧを広範囲に行った。投薬前、１、３、７及び９０日目に体温、血圧及び心拍数を含むバイタルサインを収集した。
【０３８８】
【表８】
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【０３８９】
５つのＩＶ試験（０．２〜２，０００ｍｇ）にて評価した広範な用量のすべてで、ＩＶ抗体Ｇ１は、許容可能な忍容性を示した。表８は、全体的な有害事象（ＡＥ）の割合をＩＶ試験の用量ごとにまとめたものである。これらの忍容性の結果に基づけば、明確な安全性に対する懸念は認められなかった。ＩＶ試験の全試験にわたって、プラセボ投与を受けた参加者は、試験治療下での有害事象（ＴＥＡＥ）が平均１．３であると報告された。これらは、試験責任者の試験薬との関係についての意見に関わらない、報告された全ての事象である。ＩＶのＧ１の全用量全体で、ＴＥＡＥ／対象の比率は１．４であった。１００ｍｇまたはそれ以上のＧ１用量を受けた被験者のＴＥＡＥの平均は１．５であり、１，０００ｍｇまたはそれ以上の用量を受けた被験者のＴＥＡＥの平均は１．６であった。
【０３９０】
【表９】
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【０３９１】
ＩＶ試験において、治療関連有害事象（ＴＲＡＥまたは主試験責任者により治療関連とされるＡＥ）は、プラセボを受けた被験者の１７．７％と比較して、ＩＶ  Ｇ１を受けた被験者では２１．２％と報告された。１００ｍｇまたはそれ以上のＧ１の用量で、参加者の２２．４％にＴＲＡＥが生じた。１，０００ｍｇまたはそれ以上の用量で、参加者の２１．７％にＴＲＡＥが生じた。抗体Ｇ１は、バイタルサイン（収縮期及び拡張期血圧［ＢＰ］、体温ならびに心拍数［ＨＲ］）、心電図（ＥＣＧ）異常（ＱＴｃＢ及びＱＴｃＦを含む）、注入部位反応または臨床検査結果において、臨床的に関連する変化パターンとの関係はないように思われる。肝臓機能検査（アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ［ＡＳＴ］、アラニンアミノトランスフェラーゼ［ＡＬＴ］、総ビリルビン及びアルカリホスファターゼ）への影響は限定的であり、プラセボを受けた対象１名で総ビリルビンのグレード１の増加（試験Ｂ０１４１００１）及びプラセボを受けた対象１名でＡＬＴのグレード１の増加（試験Ｂ０１４１００２）があった。臨床的に有意な肝臓機能異常は、いずれの試験用量のＧ１を受けた被験者の間で認められなかった。腎機能、電解質を評価する血液検査または尿検査において、Ｇ１とプラセボとの間に差異を示すものはなかった。
【０３９２】
ＩＶ／ＳＣ試験（Ｇ１−ＳＣ−ＩＶ）において、安全性及び忍容性は、ＳＣ及びＩＶの送達経路間で同程度であった。心拍数及び血圧（拡張期及び収縮期）の平均は、抗体Ｇ１の処置による影響を受けず、抗体Ｇ１でのＳＣ処置後のあらゆる心臓血管パラメータにもいかなる有意性のある変化はなかった。ＳＣ試験中に観察されたＴＲＡＥの要約を以下の表１２に示す。
【０３９３】
【表１０】
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【０３９４】
単回投与試験（Ｂ０１４１００１、Ｂ０１４１００２、Ｂ０１４１００６及びＢ０１４１００８）において、３０ｍｇ〜２，０００ｍｇの範囲の用量に関する薬物動態（ＰＫ）パラメータを算出した。群平均終末相半減期（ｔ１／２）は、およそ４０〜４８日の範囲であった。Ｃｍａｘ及び総曝露（ＡＵＣｉｎｆにより評価）は、用量増加に伴って増加した。ＡＵＣｉｎｆの増加は、３０〜１，０００ｍｇの間で用量にほぼ比例しているようであり、１，０００〜２，０００ｍｇの間では用量比例を上回るようであった。分布容積は低く、６〜１０Ｌであった。
【０３９５】
２用量試験（Ｂ０１４１００７）において、２回目の投与後の見かけの終末相半減期は、４１〜５０日であった。血漿中濃度は２回目の投薬後に蓄積され、およそ１．５の蓄積率であった。更に、ＩＶ／ＳＣ試験（Ｇ１−ＳＣ−ＩＶ）では、薬物動態評価により、Ｇ１をＳＣで送達したときの終末相半減期がＩＶと同様であることが示された。
【０３９６】
実施例１７：抗体Ｇ１の臨床試験における慢性片頭痛の予防
慢性片頭痛を有する被験者にて、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体Ｇ１とプラセボを比較する多施設無作為化二重盲検ダブルダミープラセボ対照並行群間多用量試験を実施した。適格候補被験者をベースラインの２８日の導入期間に参加させた。被験者は頭痛を有し、全試験期間中、電子頭痛日誌システムを用いて健康情報を毎日収集した。導入期間または試験中の片頭痛薬の変更は認めなかった。組み入れ基準は、以下の通りとした。（１）１８〜６５歳の男性または女性；（２）被験者があらゆる既知の潜在的リスク及び利用可能な代替治療を含む、試験に関連する全側面について説明を受けたことを示す、日付入り署名済み同意説明文書；（３）国際頭痛分類（ＩＣＨＤ−ＩＩＩβ版、２０１３）に列挙されている診断基準を満たす慢性片頭痛；（４）片頭痛（例えば、トピラマート、プロプラノロール、アミトリプチリン）または他の医学的状態（例えば、高血圧に使用されるプロプラノロール）のための最大２つの異なる連日性片頭痛予防薬を、その投薬レジメンが２８日の導入期間の開始以前に少なくとも２ヶ月間安定であれば、使用し得る被験者；（５）ボディマス指数（ＢＭＩ）が１７．５〜３４．５ｋｇ／ｍ２及び総体重が５０ｋｇ〜１２０ｋｇ（端点を含む）；（６）方法にて定義した生殖能を有さないか、生殖能を有する場合は、計画された試験期間中に禁欲的であること若しくは許容可能な避妊法を使用すること（あるいはパートナーに使用させること）に同意する被験者；（７）導入期間中に頭痛日を記録する電子頭痛日誌の順守が最低２４／２８日を示すこと（順守８５％）。上記（３）の慢性片頭痛の診断基準は、以下の通りとした。（ａ）スクリーニング以前の少なくとも３ヶ月間に慢性片頭痛を示唆する頻発性頭痛歴（月１５日）；（ｂ）２８日の導入段階中に前向きに収集した基本情報を介した頭痛頻度の確認であって、１ヶ月あたり少なくとも１５日の頭痛で、少なくとも８日が（ｉ）片頭痛発作であると認められること、（ｉｉ）片頭痛の前兆が先行する若しくは伴うこと、または（ｉｉｉ）麦角若しくはトリプタン誘導体により改善することのいずれか１つを満たすことが示されていること。
【０３９７】
除外基準は、被験者が以下のいずれをも満たさないこととした。（１）５０歳以降の慢性片頭痛の発症；（２）スクリーニング以前の６ヶ月の間に、片頭痛または任意の医療上若しくは美容上の理由のために頭、顔または首への注入を要するＡ型ボツリヌス毒素を受けている被験者；（３）片頭痛の治療または任意の他の理由のためにオピオイド（コデインを含む）またはバルビツール酸（Ｆｉｏｒｉｎａｌ（登録商標）、Ｆｉｏｒａｃｅｔ（登録商標）またはブタルビタールを含有する任意の他の組み合わせを含む）を含有する薬を月４日を超えて使用する被験者；（４）適切な治療試験後に、反復性または慢性片頭痛の予防治療に対する有効性がないことに起因する、２つを上回る薬物分類または３つを上回る予防薬（２つの薬物分類内）の効果不全；（５）試験責任者の判断による、血液、腎臓、内分泌腺、肺、胃腸、泌尿生殖器、神経または眼の臨床的に有意な疾患；（６）大うつ病、パニック障害または全般性不安障害を含む、臨床的に有意な精神医学的問題の証拠または病歴を有する被験者（診断・統計マニュアル第５版［ＤＳＭ−５］基準による）；（７）スクリーニング時の収縮期血圧が１６０ｍｍＨｇ超または９０ｍｍＨｇ未満；（８）スクリーニング時の拡張期血圧が１１０ｍｍＨｇ超または５０ｍｍＨｇ未満；（９）臨床的に有意な心臓血管疾患または血管虚血（心筋、神経［例えば、脳虚血］、末梢性虚血または他の虚血事象など）の病歴；（１０）癌の既往歴または現病歴（基底細胞癌が切除された被験者は除く）；（１１）妊娠または授乳中の女性；（１２）モノクローナル抗体を含む、注入されるタンパク質に対する過敏症反応の病歴；（１３）試験参加の３０日以内における被験薬での治療；（１４）標準１２誘導体表面心電図における臨床的に有意な異常（２秒を超える洞停止、第２度または第３度の心ブロックを含む）または試験責任者が臨床的に有意であると判断した他の異常；（１５）スクリーニング時にＱＴｃＦが男性で４５０ｍｓｅｃ超、女性で４７０ｍｓｅｃ超を示す標準１２誘導心電図（ＱＴｃＦがこれらの値を超える場合、ＥＣＧを繰り返し、３つのＱＴｃＦ値の平均を用いて被験者候補の適格性を決定した；ＱＴｃはＦｒｉｄｅｒｉｃｉａの計算を用いて得た）；（１６）試験責任者の判断上、臨床的に有意な異常であるあらゆる所見（血液値、血液化学、凝固試験または尿分析を含む）（異常な試験は、確認のために繰り返しが認められた）；（１７）反復試験の確認後、正常値上限（ＵＬＮ）の１．３倍を上回る肝酵素（アラニンアミノトランスフェラーゼ［ＡＬＴ］、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ［ＡＳＴ］、アルカリホスファターゼ）；（１８）ＵＬＮの１．５倍を超える血清クレアチニン、臨床的に有意な蛋白尿（尿検査で＋４）または腎臓疾患の証拠。
【０３９８】
慢性片頭痛を有し、かつ導入期間中に毎日の頭痛日誌の順守率が高いことが確認された被験者を、来院２（１日目）に、３つの治療群の１つに無作為に割り付けた。電子インタラクティブウェブレスポンスシステムを用いて無作為化を行った。性別及びベースラインの片頭痛薬の使用に基づいて、被験者を層化した。３ヶ月の期間にわたって、月１回（２８日ごと）に合計３回の治療薬を投与した。治療薬の投与は、来院２（１日目、１回目の投薬）、来院３（２９日目、２回目の投薬）及び来院４（５７日目、３回目の最終投薬）に行った。３回目の最終投薬のおよそ２８日後の来院５（８５日目）に、最終試験終了評価を行った。注入は、３ヶ月の期間にわたって（２８日ごと）、以下の各群の被験者に皮下投与した。（１）２８日ごとに４回の実薬注入を受ける９００ｍｇ群に割り付けた被験者；（２）最初の治療に３回の実薬及び１回のプラセボ注入、ならびに２回目及び３回目の治療に１回の実薬及び３回のプラセボ注入を受ける６７５／２２５ｍｇ群に割り付けた被験者；（３）２８日ごとに４回のプラセボ注入を受ける群に割り付けた被験者。実薬注入には、２２５ｍｇの抗体Ｇ１が含まれた。エンドポイントは、先の２４時間の期間のデータを記録したＷｅｂベースインタラクティブシステムである毎日の電子頭痛日誌から導出した。総頭痛期間を時間単位で数字で記録し、加えて、重症度の各レベルでの頭痛の時間数も記録した。頭痛の重症度は、既定の時間点で、被験者が主観的にランク付けした（痛みなし、軽度の痛み、中程度の痛み及び重度の痛み）。また、既定の時間点で、次の随伴症状：光過敏、音過敏、悪心及び嘔吐があるかないかについて記録するよう、被験者に指示した。追加のエンドポイントについては、試験期間中における被験者の急性期抗頭痛薬トリプタン（例えば、スマトリプタン）の使用のモニタリングから導出した。本試験の被験者の内訳及び集団構成を表９に示す。
【０３９９】
【表１１】
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【０４００】
１、２及び３週目の各週（それぞれＷ１、Ｗ２及びＷ３）における各群の頭痛時間数のベースラインからの平均の減少を図１５にグラフで表す。結果では、その最初の週を含め、Ｗ１、Ｗ２及びＷ３の各週で、プラセボ群と比較して、両治療群で有意な減少が示されている。
【０４０１】
１、２及び３ヶ月目の各月（それぞれＭ１、Ｍ２及びＭ３）における各群の頭痛時間数のベースラインからの平均の減少を図１２にグラフで表す。結果では、その最初の投薬後を含め、３つの全ての時点で、プラセボ群と比較して、両治療群で有意な減少が示されている。図１２のデータのプラセボ群に対する統計的有意性は、記載のｐ値により示されている。
【０４０２】
ベースライン時ならびに来院２、３及び４（それぞれＶ２、Ｖ３及びＶ４）時における各群の平均頭痛時間数を図１３にグラフで表す。結果では、その最初の投薬後を含め、３つの全ての時点で、プラセボ群と比較して、両治療群で有意な減少が示されている。
【０４０３】
１、２及び３ヶ月目の各月（それぞれＭ１、Ｍ２及びＭ３）における各群の中程度または重度の頭痛日数のベースラインからの平均の減少を図１４に表す。結果では、その最初の投薬後を含め、３つの全ての時点で、プラセボ群と比較して、両治療群で統計的に有意な減少が示されている。プラセボ群に対する統計的有意性は、記載のｐ値により示されている。
【０４０４】
１、２及び３ヶ月目の各月（それぞれＭ１、Ｍ２及びＭ３）における各群の急性期救済薬トリプタンの使用数のベースラインからの平均の減少を図１６にグラフで表す。結果では、その最初の投薬後を含め、３つの全ての時点で、プラセボ群と比較して、両治療群でトリプタン使用の有意な減少が示されている。プラセボ群に対する統計的有意性は、図１６に記載のｐ値により示されている。
【０４０５】
また、プラセボ群と比較した頭痛時間数の有意な減少は、予防薬（例えば、トピラマート及びアミトリプチリンまたはプロプラノロール）を用いる被験者でも観察された。
【０４０６】
いずれの用量も良好な忍容性を示し、安全性に対する懸念は認められなかった。群ごとの試験治療下での有害事象（ＴＥＡＥ）を表１０に記載する。関連ＴＥＡＥの差異は、注入に関連する軽度事象（紅斑、ある程度の不快感）によりほぼ完全に説明される。重篤なＴＥＡＥは、薬物に関連しなかった（薬物関連でない有害事象）。
【０４０７】
【表１２】
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【０４０８】
実施例１８：抗体Ｇ１の臨床研究における高頻度反復性片頭痛の予防
高頻度反復性片頭痛（ＨＦＥＭ）を有する被験者にて、抗ＣＧＲＰ抗体Ｇ１とプラセボを比較する多施設無作為化二重盲検プラセボ対照並行群間試験を実施した。試験設計は、実施例１７の設計に従い、２点の相違を含めた。第１に、組み入れ基準（３）を、国際頭痛学会第２版（Ｏｌｅｓｅｎ及びＳｔｅｉｎｅｒ２００４）に従った反復性片頭痛の基準を満たす、以下に示す高頻度に片頭痛を経験する被験者とした。（ａ）スクリーニング以前の少なくとも３ヶ月間に月８日を超える頭痛歴；（ｂ）２８日の導入段階中に前向きに収集した基本情報を介した頭痛頻度の確認であって、８〜１４日の頭痛（あらゆる種類）で、少なくとも８日が（ｉ）片頭痛、（ｉｉ）片頭痛と思われる頭痛、または（ｉｉｉ）トリプタン若しくは麦角化合物の使用のうちの少なくとも１つの基準を満たすことが示されていること。第２に、投薬スケジュールをＧ１を受ける群について変更した。具体的には、注入は、３ヶ月の期間にわたって（２８日ごと）、以下の各群の被験者に皮下投与した。（１）２８日ごとに６７５ｍｇのＧ１を受ける６７５ｍｇ群に割り付けた被験者；（２）２８日ごとに２２５ｍｇのＧ１を受ける２２５ｍｇ群に割り付けた被験者、及び（３）２８日ごとにプラセボ注入を受けるプラセボに割り付けた被験者。本試験の被験者の内訳及び集団構成を表１３に示す。試験のエンドポイントには、片頭痛日数の減少及びあらゆる重症度の頭痛日数の減少を含めた。
【０４０９】
【表１３】
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【０４１０】
１、２及び３ヶ月目の各月（それぞれＭ１、Ｍ２及びＭ３）における各群の片頭痛日数のベースラインからの平均の減少を図１７に表す。結果では、その最初の投薬後を含め、３つの全ての時点で、プラセボ群と比較して、両治療群で統計的に有意な減少が示されている。プラセボ群に対する統計的有意性は、記載のｐ値により示されている。
【０４１１】
１、２及び３ヶ月目の各月（それぞれＭ１、Ｍ２及びＭ３）における各群のあらゆる重症度の頭痛日数のベースラインからの平均の減少を図１８に表す。結果では、その最初の投薬後を含め、３つの全ての時点で、プラセボ群と比較して、両治療群で統計的に有意な減少が示されている。プラセボ群に対する統計的有意性は、記載のｐ値により示されている。
【０４１２】
いずれの用量も良好な忍容性を示し、安全性に対する懸念は認められなかった。群ごとの試験治療下での有害事象（ＴＥＡＥ）を表１４に記載する。４件の重篤なＴＥＡＥは、腓骨骨折１件、投薬中止による震え１件及び緊急処置室（ＥＲ）での治療を要する片頭痛２件によるものであった。
【０４１３】
【表１４】
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【０４１４】
実施例１９：非臨床安全性
抗体Ｇ１の安全性を評価する２つの試験をカニクイザルで実施した。第１の試験では、抗体Ｇ１の単回投与の安全性を評価した。第２の試験では、抗体Ｇ１の反復投与の安全性を評価した。これらの試験及び結果のそれぞれについては、以下に更に詳述する。単回及び反復投与試験の両方に関して、抗体Ｇ１は、２０ｍＭのヒスチジン、８４ｍｇ／ｍＬのトレハロース二水和物、０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、０．０５ｍｇ／ｍＬのＥＤＴＡ二ナトリウム二水和物及び０．１ｍｇ／ｍＬのＬ−メチオニン、ｐＨ約５．５中に、５１．４ｍｇ／ｍＬの溶液として配合した。ビヒクルは、抗体Ｇ１を含めずに、同じように配合した。更に、両試験において、検証済みＥＬＩＳＡ方法を用いた抗体Ｇ１血漿中濃度の分析のために、血液サンプルを定期的に採取した。
【０４１５】
データは、まず、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ（バージョン６．０）及びＥｘｃｅｌ２０１０（Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ）を用いて、要約表及び図にまとめた。単回曝露試験の場合、ＡＮＯＶＡを用いてテレメトリーデータを分析した。ＳＡＳ  Ｒｅｌｅａｓｅ８．２を用いて分析を行った。ＲＲ間隔の領域にわたるＱＴ間隔を標準化するために、各ＲＲ間隔とその関連するＱＴ間隔とを関連付けることによって、各動物の個別動物補正係数（ＩＡＣＦ）を生成した。このＱＴ／ＲＲ間隔の関係の直線回帰をデータセットについて求めた。全ての処置にわたって、この直線回帰の傾きを関連する動物のＩＡＣＦとして用いた。このＩＡＣＦを用いて、次の等式に使用して、補正したＱＴ間隔（ＱＴｃ）を算出した。
ＱＴ−Ｉ（ｃ）＝心拍数に対して補正したＱＴ間隔＝ＱＴ−Ｉ−［（ＲＲ−３００）＊（ＩＡＣＦ）］
【０４１６】
複数投与試験の場合、同様に一元配置ＡＮＯＶＡを用いてデータを解析した。ＡＮＯＶＡが有意であった場合（Ｐ＜０．０５）、群間比較のためにダネットの事後検定を用いた。各性別について、５％両側確率水準で、処置群を対照群（ビヒクル）と比較した。
【０４１７】
単回投与テレメトリー試験
成雄カニクイザル（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｐｒｉｍａｔｅｓ）８頭にテレメーターを外科的に取り付け、少なくとも２週間回復させた。インプラント（ＤＳＩ  ＴＬ１１Ｍ２−Ｄ７０−ＰＣＴ）及び受信器（ＲＭＣ−１）は、Ｄａｔａ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ社製であった。
【０４１８】
投薬前に少なくとも一晩、動物をテレメトリーデータ取得ケージに順化させた。順化中に、血行動態パラメータの試験前記録を実施し、変換器及び装置が正しく機能することを確認した。動物は、テレメーターによるデータ取得中、テレメトリー受信器を備えたケージ中に個別に収容した。収集日以外は、テレメトリー受信器のないケージに動物を収容した。動物は、１２時間／１２時間の明暗サイクルに維持し、水及び保証付きサル用飼料は自由摂取とした。
【０４１９】
試験の第１段階として、動物（雄８頭）にビヒクルのみを投与し、テレメトリーデータを、投薬前約１時間から開始し、投薬後２２時間にわたって収集した。ビヒクル投与から６日後、同じ動物に抗体Ｇ１の単回ＩＶ投与を行った（カニクイザルの薬理学的ＥＣ５０の約１０倍多い１００ｍｇ／ｋｇ）。テレメーターによる心電図及び血行動態データを全ての動物から同様に連続的に記録した。加えて、抗体Ｇ１の単回投与実施後、３、７、１０及び１４日目にこれらの動物を約２４時間観察した。テレメーターによるＥＣＧ及び血圧信号は、埋め込まれたラジオテレメトリー装置を介して、各ケージに取り付けられた受信器に送信された。取得した信号をデータ変換マトリックス（ＤＳＩモデルＤＥＭ）及びＰＣベースデータ取得システム（ＤＳＩソフトウェアＰｏｎｅｍａｈ  Ｐ３バージョン３．４）に通した。データ解析ソフトウェアは、Ｅｍｋａ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓバージョン２．４．０．２０（Ｅｍｋａ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）であった。アナログ／デジタルサンプリングレートは、テレメーターＥＣＧデータについては１，０００Ｈｚ、血圧データについては５００Ｈｚであった。データは、１分間の平均として記録した。
【０４２０】
群平均収縮期血圧（ＳＢＰ）は、投薬後の初日を通して抗体Ｇ１の処置前後及び翌日以降で同様であった（１日目と同一の時間期間で３、７、１０及び１４日目にテレメーターで測定した動物）。抗体Ｇ１血中濃度が最大濃度になる投薬後１〜４時間（４時間での平均濃度３，５００μｇ／ｍＬ）で、平均ＳＢＰは、ビヒクル投与後の同じ時間期間で１１３ｍｍＨｇであったのと比較して、１１１ｍｍＨｇであった。更に、ＳＢＰは、抗体Ｇ１投与後、３及び７日目に１１０ｍｍＨｇ、１０日目に１０９ｍｍＨｇ、１４日目に１１０ｍｍＨｇであった。他の時間期間でも同様のＳＢＰデータが記録された。本試験はクロスオーバー設計試験であるので、処置を受けた動物は、自身の対照としての役割を果たした。ビヒクル処置と比較した抗体Ｇ１投与後の血圧の変化についてデータを分析すると、７、１０及び１４日目の後半の時間期間で、統計的に有意なＳＢＰの減少はわずかであった。
【０４２１】
抗体Ｇ１での処置後、拡張期血圧（ＤＢＰ）は、ビヒクル投与後に得た平均値よりもおよそ３ｍｍＨｇ低いことが認められた。５〜２２時間からは、ビヒクル群と抗体Ｇ１群の群平均は同様であった。他の日々においても同じ傾向が見られ、ＤＢＰのわずかな減少（２．６２〜３．５ｍｍＨｇの範囲）が最初の測定期間に生じ、７〜１０日目には７〜２２時間の期間で、同様の程度のわずかな変化が散発的に認められた。ＤＢＰに関して認められたのと同様に、ビヒクル処置と比較して、心拍数のわずかな減少が最初の評価（１〜４時間目）に見られた。中間評価では差異は検出されず、全ての日々の１８〜２２時間目にもう一度認められた。
【０４２２】
更に、ＥＣＧ所見に関して、ＱＴｃ間隔の統計的に有意な変化は、ビヒクル処置と比較して、いかなる時間点においてもなかった。ＲＲ、ＰＲ、ＲＳ及びＱＴの統計的に有意な変化がビヒクルと比較して１４日の期間にわたって見られたが、絶対値では全て軽微であった。
【０４２３】
反復投与安全性試験
反復投与安全性試験には、性別を一致させた（１群あたり各性別６頭）抗体Ｇ１未投薬成カニクイザル（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｐｒｉｍａｔｅｓ）４８頭を含めた。ビヒクルまたは抗体Ｇ１を１０ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇまたは３００ｍｇ／ｋｇの用量で週１回の静脈内注射として１４週間、動物に投与した。各群にて、投薬終了後、各性別の２頭の動物を更に４ヶ月回復させた。
【０４２４】
試験前段階に１回、試験状態が達成された後２回（８５日目の投薬前及び投薬４時間後）及び投薬終了から約１週間後１回（回復段階の１０３日目）に、ＥＣＧ及び血圧測定値を記録した。ケタミンで動物に麻酔をかけ、誘導８本を用いてＥＣＧを記録した。ＥＣＧ（心拍数を含む）の測定は、標準として誘導Ｉ、ＩＩ、ａＶＦ、ＣＧ４ＲＬ及びＣＶ４ＬＬを用いて、ＤＳＩを介してＬｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｓｕｉｔｅ  Ｐｏｎｅｍａｈ  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ  Ｐｌａｔｆｏｒｍソフトウェアシステムを使用して、取り込んだデータにより行った。Ｂａｚｅｔｔの式を用いて、ＱＴ間隔の心拍数補正（ＱＴｃ）を算出した。
【０４２５】
最初の投薬前、投薬の１２週間後（投薬１３回）及び投薬終了からおよそ１週間後に、血圧を記録した。ビヒクル処置動物と比較して、動物の処置群のいずれにおいても、ＳＢＰまたはＤＢＰに有意な変化は示されなかった。群平均心拍数は、投与群及び測定時点にわたって比較的一定であり、統計的差異は測定されなかった。投薬第１週の間及び血圧ＥＣＧ評価時に抗体Ｇ１の血漿中濃度を測定すると、週１回の反復投薬による蓄積が見られた。
【０４２６】
更に、ＥＣＧ所見に関して、全ての投薬及び全ての時点にわたって、ＱＴｃ間隔に有意差はなかった。更に、試験期間にわたって評価したＥＣＧパラメータのいずれにおいても、有意なまたは関連するＥＣＧ変化は見られなかった。
【０４２７】
要約すれば、抗体Ｇ１は、両試験にて極めて良好な忍容性を示し、血行動態パラメータのいずれにおいても臨床的に有意な変化は示されず、ＥＣＧパラメータのいずれにおいてもいかなる関連変化も示されなかった。カニクイザルにおいて、心臓血管及び血行動態パラメータは、抗体Ｇ１によるＣＧＲＰの長期阻害からの影響を受けないと思われる。
【０４２８】
本明細書に記載の実施例及び実施形態は、例示のみを目的にするものであり、それらに照らした種々の改良または変更が当業者に想起され、本出願の趣旨及び範囲内に含まれることが理解されるものである。本明細書にて引用する公開物、特許及び特許出願は全て、本出願において、それぞれ個々の公開物、特許または特許出願が参照により援用されることが具体的及び個別に示された場合と同様に、その全体が参照により本明細書に援用される。
【０４２９】
生物材料の寄託
以下の材料については、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，１０８０１  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ，Ｍａｎａｓｓａｓ，Ｖｉｒｇｉｎｉａ  ２０１１０−２２０９，ＵＳＡ（ＡＴＣＣ）に寄託されている。
【表１５】
2019123750.tif 000022
【０４３０】
ベクターｐＥｂ．ＣＧＲＰ．ｈＫＧＩは、Ｇ１の軽鎖可変領域及び軽鎖κ定常領域をコードするポリヌクレオチドであり、ベクターｐＤｂ．ＣＧＲＰ．ｈＦｃＧＩは、Ｇ１の重鎖可変領域及びＡ３３０Ｐ３３１からＳ３３０Ｓ３３１への変異を含有する重鎖ＩｇＧ２定常領域（野生型ＩｇＧ２配列を基準にしたアミノ酸ナンバリング；Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９９）２９：２６１３−２６２４参照）をコードするポリヌクレオチドである。
【０４３１】
これらの寄託は、ブダペスト条約（Ｂｕｄａｐｅｓｔ  Ｔｒｅａｔｙ  ｏｎ  ｔｈｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｄｅｐｏｓｉｔ  ｏｆ  Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｐｕｒｐｏｓｅ  ｏｆ  Ｐａｔｅｎｔ  Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｓ  ｔｈｅｒｅｕｎｄｅｒ）の規定に基づいてなされた。これは、寄託日から３０年間の寄託物の生存培養の維持を保証するものである。寄託物は、ブダペスト条約の条項下、かつＲｉｎａｔ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ社とＡＴＣＣとの合意に準拠して、ＡＴＣＣにより一般に提供されるものであり、これは、関係する米国特許の発行または任意の米国若しくは外国特許出願の公開のいずれか早い時点から、当該寄託物の培養子孫の永続的かつ非限定的な一般入手可能性を保証し、米国特許法第１２２条及びそれに準じた米国特許商標庁長官規則（８８６  ＯＧ  ６３８を特に参照し、米国特許法施行規則１．１４を含む）に従って、米国特許商標庁長官によって決定された権利を有する者に当該子孫の入手可能性を保証するものである。
【０４３２】
本出願の譲受人は、寄託された当該材料の培養物が、最適な条件下における培養時に死滅するか、または消失若しくは破損した場合、通知により、当該材料が同一材料の別のもので速やかに取り替えられることに同意している。寄託された材料の入手可能性は、特許法に従って政府の権限下に付与された権利に反して、本発明の実施を許諾するものとして解釈されるべきではない。
【０４３３】
抗体配列
Ｇ１重鎖可変領域アミノ酸配列（配列番号１）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＮＹＷＩＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＥＩＲＳＥＳＤＡＳＡＴＨＹＡＥＡＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＬＡＹＦＤＹＧＬＡＩＱＮＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
【０４３４】
Ｇ１軽鎖可変領域アミノ酸配列（配列番号２）
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＫＡＳＫＲＶＴＴＹＶＳＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＧＡＳＮＲＹＬＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＳＱＳＹＮＹＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ
【０４３５】
Ｇ１  ＣＤＲ  Ｈ１（拡張ＣＤＲ）（配列番号３）
ＧＦＴＦＳＮＹＷＩＳ
【０４３６】
Ｇ１  ＣＤＲ  Ｈ２（拡張ＣＤＲ）（配列番号４）
ＥＩＲＳＥＳＤＡＳＡＴＨＹＡＥＡＶＫＧ
【０４３７】
Ｇ１  ＣＤＲ  Ｈ３（配列番号５）
ＹＦＤＹＧＬＡＩＱＮＹ
【０４３８】
Ｇ１  ＣＤＲ  Ｌ１（配列番号６）
ＫＡＳＫＲＶＴＴＹＶＳ
【０４３９】
Ｇ１  ＣＤＲ  Ｌ２（配列番号７）
ＧＡＳＮＲＹＬ
【０４４０】
Ｇ１  ＣＤＲ  Ｌ３（配列番号８）
ＳＱＳＹＮＹＰＹＴ
【０４４１】
Ｇ１重鎖可変領域ヌクレオチド配列（配列番号９）
ＧＡＡＧＴＴＣＡＧＣＴＧＧＴＴＧＡＡＴＣＣＧＧＴＧＧＴＧＧＴＣＴＧＧＴＴＣＡＧＣＣＡＧＧＴＧＧＴＴＣＣＣＴＧＣＧＴＣＴＧＴＣＣＴＧＣＧＣＴＧＣＴＴＣＣＧＧＴＴＴＣＡＣＣＴＴＣＴＣＣＡＡＣＴＡＣＴＧＧＡＴＣＴＣＣＴＧＧＧＴＴＣＧＴＣＡＧＧＣＴＣＣＴＧＧＴＡＡＡＧＧＴＣＴＧＧＡＡＴＧＧＧＴＴＧＣＴＧＡＡＡＴＣＣＧＴＴＣＣＧＡＡＴＣＣＧＡＣＧＣＧＴＣＣＧＣＴＡＣＣＣＡＴＴＡＣＧＣＴＧＡＡＧＣＴＧＴＴＡＡＡＧＧＴＣＧＴＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＣＧＴＧＡＣＡＡＣＧＣＴＡＡＧＡＡＣＴＣＣＣＴＧＴＡＣＣＴＧＣＡＧＡＴＧＡＡＣＴＣＣＣＴＧＣＧＴＧＣＴＧＡＡＧＡＣＡＣＣＧＣＴＧＴＴＴＡＣＴＡＣＴＧＣＣＴＧＧＣＴＴＡＣＴＴＴＧＡＣＴＡＣＧＧＴＣＴＧＧＣＴＡＴＣＣＡＧＡＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＴＣＡＧＧＧＴＡＣＣＣＴＧＧＴＴＡＣＣＧＴＴＴＣＣＴＣＣ
【０４４２】
Ｇ１軽鎖可変領域ヌクレオチド配列（配列番号１０）
ＧＡＡＡＴＣＧＴＴＣＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＣＣＣＧＧＣＴＡＣＣＣＴＧＴＣＣＣＴＧＴＣＣＣＣＡＧＧＴＧＡＡＣＧＴＧＣＴＡＣＣＣＴＧＴＣＣＴＧＣＡＡＡＧＣＴＴＣＣＡＡＡＣＧＧＧＴＴＡＣＣＡＣＣＴＡＣＧＴＴＴＣＣＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＣＧＧＴＣＡＧＧＣＴＣＣＴＣＧＴＣＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＣＧＧＴＧＣＴＴＣＣＡＡＣＣＧＴＴＡＣＣＴＣＧＧＴＡＴＣＣＣＡＧＣＴＣＧＴＴＴＣＴＣＣＧＧＴＴＣＣＧＧＴＴＣＣＧＧＴＡＣＣＧＡＣＴＴＣＡＣＣＣＴＧＡＣＣＡＴＣＴＣＣＴＣＣＣＴＧＧＡＡＣＣＣＧＡＡＧＡＣＴＴＣＧＣＴＧＴＴＴＡＣＴＡＣＴＧＣＡＧＴＣＡＧＴＣＣＴＡＣＡＡＣＴＡＣＣＣＣＴＡＣＡＣＣＴＴＣＧＧＴＣＡＧＧＧＴＡＣＣＡＡＡＣＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡ
【０４４３】
Ｇ１重鎖完全抗体アミノ酸配列（本明細書に記載の改変ＩｇＧ２を含む）（配列番号１１）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＮＹＷＩＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＥＩＲＳＥＳＤＡＳＡＴＨＹＡＥＡＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＬＡＹＦＤＹＧＬＡＩＱＮＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＮＦＧＴＱＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＴＶＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
【０４４４】
Ｇ１軽鎖完全抗体アミノ酸配列（配列番号１２）
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＫＡＳＫＲＶＴＴＹＶＳＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＧＡＳＮＲＹＬＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＳＱＳＹＮＹＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
【０４４５】
Ｇ１重鎖完全抗体ヌクレオチド配列（本明細書に記載の改変ＩｇＧ２を含む）（配列番号１３）
ＧＡＡＧＴＴＣＡＧＣＴＧＧＴＴＧＡＡＴＣＣＧＧＴＧＧＴＧＧＴＣＴＧＧＴＴＣＡＧＣＣＡＧＧＴＧＧＴＴＣＣＣＴＧＣＧＴＣＴＧＴＣＣＴＧＣＧＣＴＧＣＴＴＣＣＧＧＴＴＴＣＡＣＣＴＴＣＴＣＣＡＡＣＴＡＣＴＧＧＡＴＣＴＣＣＴＧＧＧＴＴＣＧＴＣＡＧＧＣＴＣＣＴＧＧＴＡＡＡＧＧＴＣＴＧＧＡＡＴＧＧＧＴＴＧＣＴＧＡＡＡＴＣＣＧＴＴＣＣＧＡＡＴＣＣＧＡＣＧＣＧＴＣＣＧＣＴＡＣＣＣＡＴＴＡＣＧＣＴＧＡＡＧＣＴＧＴＴＡＡＡＧＧＴＣＧＴＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＣＧＴＧＡＣＡＡＣＧＣＴＡＡＧＡＡＣＴＣＣＣＴＧＴＡＣＣＴＧＣＡＧＡＴＧＡＡＣＴＣＣＣＴＧＣＧＴＧＣＴＧＡＡＧＡＣＡＣＣＧＣＴＧＴＴＴＡＣＴＡＣＴＧＣＣＴＧＧＣＴＴＡＣＴＴＴＧＡＣＴＡＣＧＧＴＣＴＧＧＣＴＡＴＣＣＡＧＡＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＴＣＡＧＧＧＴＡＣＣＣＴＧＧＴＴＡＣＣＧＴＴＴＣＣＴＣＣＧＣＣＴＣＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＣＣＡＣＴＧＧＣＣＣＣＡＴＧＣＴＣＣＣＧＣＡＧＣＡＣＣＴＣＣＧＡＧＡＧＣＡＣＡＧＣＣＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＡＧＡＡＣＣＴＧＴＧＡＣＣＧＴＧＴＣＣＴＧＧＡＡＣＴＣＴＧＧＣＧＣＴＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＡＧＣＴＧＴＣＣＴＧＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＴＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＡＴＣＣＡＧＣＡＡＣＴＴＣＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＣＣＴＧＣＡＡＣＧＴＡＧＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＡＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＣＧＡＣＡＡＧＡＣＣＧＴＧＧＡＧＡＧＡＡＡＧＴＧＴＴＧＴＧＴＧＧＡＧＴＧＴＣＣＡＣＣＴＴＧＴＣＣＡＧＣＣＣＣＴＣＣＡＧＴＧＧＣＣＧＧＡＣＣＡＴＣＣＧＴＧＴＴＣＣＴＧＴＴＣＣＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＧＡＴＧＡＴＣＴＣＣＡＧＡＡＣＣＣＣＡＧＡＧＧＴＧＡＣＣＴＧＴＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＴＣＣＣＡＣＧＡＧＧＡＣＣＣＡＧＡＧＧＴＧＣＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＴＧＴＧＧＡＣＧＧＡＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＣＡＡＣＧＣＣＡＡＧＡＣＣＡＡＧＣＣＡＡＧＡＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＴＣＡＡＣＴＣＣＡＣＣＴＴＣＡＧＡＧＴＧＧＴＧＡＧＣＧＴＧＣＴＧＡＣＣＧＴＧＧＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＣＧＧＡＡＡＧＧＡＧＴＡＴＡＡＧＴＧＴＡＡＧＧＴＧＴＣＣＡＡＣＡＡＧＧＧＡＣＴＧＣＣＡＴＣＣＡＧＣＡＴＣＧＡＧＡＡＧＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＧＡＣＣＡＡＧＧＧＡＣＡＧＣＣＡＡＧＡＧＡＧＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＴＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＡＧＡＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＧＴＣＣＣＴＧＡＣＣＴＧＴＣＴＧＧＴＧＡＡＧＧＧＡＴＴＣＴＡＴＣＣＡＴＣＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＴＣＣＡＡＣＧＧＡＣＡＧＣＣＡＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＴＡＡＧＡＣＣＡＣＣＣＣＴＣＣＡＡＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＡＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＧＴＡＴＴＣＣＡＡＧＣＴＧＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＴＣＣＡＧＡＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＡＡＡＣＧＴＧＴＴＣＴＣＴＴＧＴＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＣＧＡＧＧＣＣＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＴＡＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＧＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＣＡＧＧＡＡＡＧＴＡＡ
【０４４６】
Ｇ１軽鎖完全抗体ヌクレオチド配列（配列番号１４）
ＧＡＡＡＴＣＧＴＴＣＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＣＣＣＧＧＣＴＡＣＣＣＴＧＴＣＣＣＴＧＴＣＣＣＣＡＧＧＴＧＡＡＣＧＴＧＣＴＡＣＣＣＴＧＴＣＣＴＧＣＡＡＡＧＣＴＴＣＣＡＡＡＣＧＧＧＴＴＡＣＣＡＣＣＴＡＣＧＴＴＴＣＣＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＣＧＧＴＣＡＧＧＣＴＣＣＴＣＧＴＣＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＣＧＧＴＧＣＴＴＣＣＡＡＣＣＧＴＴＡＣＣＴＣＧＧＴＡＴＣＣＣＡＧＣＴＣＧＴＴＴＣＴＣＣＧＧＴＴＣＣＧＧＴＴＣＣＧＧＴＡＣＣＧＡＣＴＴＣＡＣＣＣＴＧＡＣＣＡＴＣＴＣＣＴＣＣＣＴＧＧＡＡＣＣＣＧＡＡＧＡＣＴＴＣＧＣＴＧＴＴＴＡＣＴＡＣＴＧＣＡＧＴＣＡＧＴＣＣＴＡＣＡＡＣＴＡＣＣＣＣＴＡＣＡＣＣＴＴＣＧＧＴＣＡＧＧＧＴＡＣＣＡＡＡＣＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡＣＧＣＡＣＴＧＴＧＧＣＴＧＣＡＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＴＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＣＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＧＣＧＣＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＣＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＣＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＴＴＣＴＣＣＡＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＣＧＣＧＧＴＧＡＧＴＧＣＴＡＡ
【０４４７】
ヒトＣＧＲＰとラットＣＧＲＰ（ヒトα−ＣＧＲＰ（配列番号１５）、ヒトβ−ＣＧＲＰ（配列番号４３）、ラットα−ＣＧＲＰ（配列番号４１）及びラットβ−ＣＧＲＰ（配列番号４４））のアミノ酸配列比較[訳者注：下記で四角で囲まれている配列箇所は、ＰＣＴ／ＵＳ２０１５／０２１８８７では、網掛け文字である]：
【表１６】
2019123750.tif 000023
【０４４８】
軽鎖可変領域ＬＣＶＲ１７アミノ酸配列（配列番号５８）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＤＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＹＴＳＥＹＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＧＤＡＬＰＰＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ
【０４４９】
重鎖可変領域ＨＣＶＲ２２アミノ酸配列（配列番号５９）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＧＮＹＷＭＱＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＡＩＹＥＧＴＧＤＴＲＹＩＱＫＦＡＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＬＳＤＹＶＳＧＦＳＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
【０４５０】
軽鎖可変領域ＬＣＶＲ１８アミノ酸配列（配列番号６０）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＤＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＹＴＳＥＹＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＧＤＡＬＰＰＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ
【０４５１】
重鎖可変領域ＨＣＶＲ２３アミノ酸配列（配列番号６１）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＧＮＹＷＭＱＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＡＩＹＥＧＴＧＫＴＶＹＩＱＫＦＡＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＬＳＤＹＶＳＧＦＳＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
【０４５２】
軽鎖可変領域ＬＣＶＲ１９アミノ酸配列（配列番号６２）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＫＤＩＳＫＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＹＴＳＧＹＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＧＤＡＬＰＰＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
【０４５３】
重鎖可変領域ＨＣＶＲ２４アミノ酸配列（配列番号６３）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＧＮＹＷＭＱＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＡＩＹＥＧＴＧＫＴＶＹＩＱＫＦＡＤＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＬＳＤＹＶＳＧＦＧＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
【０４５４】
軽鎖可変領域ＬＣＶＲ２０アミノ酸配列（配列番号６４）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＲＰＩＤＫＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＹＴＳＥＹＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＧＤＡＬＰＰＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ
【０４５５】
重鎖可変領域ＨＣＶＲ２５アミノ酸配列（配列番号６５）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＧＮＹＷＭＱＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＡＩＹＥＧＴＧＫＴＶＹＩＱＫＦＡＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＬＳＤＹＶＳＧＦＧＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
【０４５６】
軽鎖可変領域ＬＣＶＲ２１アミノ酸配列（配列番号６６）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＤＫＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＹＴＳＧＹＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＧＤＡＬＰＰＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
【０４５７】
重鎖可変領域ＨＣＶＲ２６アミノ酸配列（配列番号６７）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＧＮＹＷＭＱＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＡＩＹＥＧＴＧＫＴＶＹＩＱＫＦＡＧＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＬＳＤＹＶＳＧＦＧＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
【０４５８】
軽鎖可変領域ＬＣＶＲ２７アミノ酸配列（配列番号６８）
ＱＶＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＮＣＱＡＳＱＳＶＹＨＮＴＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＶＰＫＱＬＩＹＤＡＳＴＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＶＡＴＹＹＣＬＧＳＹＤＣＴＮＧＤＣＦＶＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲ
【０４５９】
重鎖可変領域ＨＣＶＲ２８アミノ酸配列（配列番号６９）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＶＳＧＩＤＬＳＧＹＹＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＶＩＧＩＮＧＡＴＹＹＡＳＷＡＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＦＣＡＲＧＤＩＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
【０４６０】
軽鎖可変領域ＬＣＶＲ２９アミノ酸配列（配列番号７０）
ＱＶＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＮＣＱＡＳＱＳＶＹＤＮＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＶＰＫＱＬＩＹＳＴＳＴＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＶＡＴＹＹＣＬＧＳＹＤＣＳＳＧＤＣＦＶＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲ
【０４６１】
重鎖可変領域ＨＣＶＲ３０アミノ酸配列（配列番号７１）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＶＳＧＬＤＬＳＳＹＹＭＱＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＶＩＧＩＮＤＮＴＹＹＡＳＷＡＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＦＣＡＲＧＤＩＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
【０４６２】
軽鎖可変領域ＬＣＶＲ３１アミノ酸配列（配列番号７２）
ＱＶＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＮＣＱＡＳＱＳＶＹＤＮＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＶＰＫＱＬＩＹＳＴＳＴＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＶＡＴＹＹＣＬＧＳＹＤＣＳＳＧＤＣＦＶＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲ
【０４６３】
重鎖可変領域ＨＣＶＲ３２アミノ酸配列（配列番号７３）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＶＳＧＬＤＬＳＳＹＹＭＱＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＶＩＧＩＮＤＮＴＹＹＡＳＷＡＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＦＣＡＲＧＤＩＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
【０４６４】
軽鎖可変領域ＬＣＶＲ３３アミノ酸配列（配列番号７４）
ＱＶＬＴＱＴＰＳＰＶＳＡＡＶＧＳＴＶＴＩＮＣＱＡＳＱＳＶＹＨＮＴＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＱＬＩＹＤＡＳＴＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＱＦＴＬＴＩＳＧＶＱＣＮＤＡＡＡＹＹＣＬＧＳＹＤＣＴＮＧＤＣＦＶＦＧＧＧＴＥＶＶＶＫＲ
【０４６５】
重鎖可変領域ＨＣＶＲ３４アミノ酸配列（配列番号７５）
ＱＳＬＥＥＳＧＧＲＬＶＴＰＧＴＰＬＴＬＴＣＳＶＳＧＩＤＬＳＧＹＹＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＶＩＧＩＮＧＡＴＹＹＡＳＷＡＫＧＲＦＴＩＳＫＴＳＳＴＴＶＤＬＫＭＴＳＬＴＴＥＤＴＡＴＹＦＣＡＲＧＤＩＷＧＰＧＴＬＶＴＶＳＳ
【０４６６】
軽鎖可変領域ＬＣＶＲ３５アミノ酸配列（配列番号７６）
ＱＶＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＮＣＱＡＳＱＳＶＹＨＮＴＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＶＰＫＱＬＩＹＤＡＳＴＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＶＡＴＹＹＣＬＧＳＹＤＣＴＮＧＤＣＦＶＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲ
【０４６７】
重鎖可変領域ＨＣＶＲ３６アミノ酸配列（配列番号７７）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＶＳＧＩＤＬＳＧＹＹＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＶＩＧＩＮＧＡＴＹＹＡＳＷＡＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＦＣＡＲＧＤＩＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
【０４６８】
軽鎖可変領域ＬＣＶＲ３７アミノ酸配列（配列番号７８）
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＶＳＡＡＰＧＱＫＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＮＮＹＶＳＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＤＮＮＫＲＰＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＴＴＬＧＩＴＧＬＱＴＧＤＥＡＤＹＹＣＧＴＷＤＳＲＬＳＡＶＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ
【０４６９】
重鎖可変領域ＨＣＶＲ３８アミノ酸配列（配列番号７９）
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＦＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＩＳＦＤＧＳＩＫＹＳＶＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＦＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＲＬＮＹＹＤＳＳＧＹＹＨＹＫＹＹＧＭＡＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
【図１】
2019123750.tif 000024
【図２Ａ】
2019123750.tif 000025
【図２Ｂ】
2019123750.tif 000026
【図３】
2019123750.tif 000027
【図４Ａ】
2019123750.tif 000028
【図４Ｂ】
2019123750.tif 000029
【図５】
2019123750.tif 000030
【図６】
2019123750.tif 000031
【図７】
2019123750.tif 000032
【図８Ａ】
2019123750.tif 000033
【図８Ｂ】
2019123750.tif 000034
【図８Ｃ】
2019123750.tif 000035
【図９】
2019123750.tif 000036
【図１０】
2019123750.tif 000037
【図１１Ａ】
2019123750.tif 000038
【図１１Ｂ】
2019123750.tif 000039
【図１２】
2019123750.tif 000040
【図１３】
2019123750.tif 000041
【図１４】
2019123750.tif 000042
【図１５】
2019123750.tif 000043
【図１６】
2019123750.tif 000044
【図１７】
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【図１８】
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【配列表】
2019123750000001.app
【手続補正書】
【提出日】令和1年6月5日(2019.6.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
カルシトニン遺伝子関連ペプチド（ＣＧＲＰ）経路を阻害するモノクローナル抗体をある量で対象に投与する、対象における頭痛を治療し、またはその発生を減少させるための組成物であって、
前記モノクローナル抗体が、配列番号３に示すＣＤＲ  Ｈ１、配列番号４に示すＣＤＲ  Ｈ２、配列番号５に示すＣＤＲ  Ｈ３、配列番号６に示すＣＤＲ  Ｌ１、配列番号７に示すＣＤＲ  Ｌ２及び配列番号８に示すＣＤＲ  Ｌ３を含み、
前記モノクローナル抗体が、約２２５ｍｇの用量で月１回投与され、かつ
前記モノクローナル抗体が、少なくとも１５０ｍｇ／ｍＬの濃度で配合され、それにより対象における頭痛を治療し、またはその発生を減少させる、組成物。
【請求項２】
前記投与することが皮下または静脈内投与である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記対象がヒトである、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記モノクローナル抗体がヒトまたはヒト化抗体である、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
カルシトニン遺伝子関連ペプチド（ＣＧＲＰ）経路を調節するモノクローナル抗体をある量で対象に投与する、対象における頭痛を治療し、またはその発生を減少させるための組成物であって、
前記モノクローナル抗体が、配列番号３に示すＣＤＲ  Ｈ１、配列番号４に示すＣＤＲ  Ｈ２、配列番号５に示すＣＤＲ  Ｈ３、配列番号６に示すＣＤＲ  Ｌ１、配列番号７に示すＣＤＲ  Ｌ２及び配列番号８に示すＣＤＲ  Ｌ３を含み、
前記モノクローナル抗体が、約２２５ｍｇの用量で月１回投与され、かつ
前記モノクローナル抗体が、２ｍＬ未満の体積で投与され、それにより対象における頭痛を治療し、またはその発生を減少させる、組成物。
【請求項６】
前記投与することが皮下または静脈内投与である、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
前記モノクローナル抗体が、少なくとも１５０ｍｇ／ｍＬの濃度で配合される、請求項５に記載の組成物。
【請求項８】
前記対象がヒトである、請求項５に記載の組成物。
【請求項９】
前記モノクローナル抗体がヒトまたはヒト化抗体である、請求項５に記載の組成物。
【請求項１０】
前記頭痛が片頭痛である、請求項１に記載の組成物。
【請求項１１】
前記片頭痛が慢性片頭痛である、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
前記片頭痛が反復性片頭痛である、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１３】
前記投与することが、前記量のモノクローナル抗体を含むプレフィルドシリンジを用いることを含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１４】
前記モノクローナル抗体が、約１．５ｍＬの体積で投与される、請求項１に記載の組成物。
【請求項１５】
前記頭痛が片頭痛である、請求項５に記載の組成物。
【請求項１６】
前記片頭痛が慢性片頭痛である、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１７】
前記片頭痛が反復性片頭痛である、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１８】
前記投与することが、前記量のモノクローナル抗体を含むプレフィルドシリンジを用いることを含む、請求項５に記載の組成物。
【請求項１９】
前記モノクローナル抗体が、約１．５ｍＬの体積で投与される、請求項５に記載の組成物。
【請求項２０】
カルシトニン遺伝子関連ペプチド（ＣＧＲＰ）経路を阻害するモノクローナル抗体の３ヶ月ごとに１回の用量を対象に投与する、対象における頭痛を治療し、またはその発生を減少させるための組成物であって、
３ヶ月ごとに投与される用量が１００〜２０００ｍｇであり、
前記モノクローナル抗体が、配列番号３に示すＣＤＲ  Ｈ１、配列番号４に示すＣＤＲ  Ｈ２、配列番号５に示すＣＤＲ  Ｈ３、配列番号６に示すＣＤＲ  Ｌ１、配列番号７に示すＣＤＲ  Ｌ２及び配列番号８に示すＣＤＲ  Ｌ３を含む、組成物。
【請求項２１】
前記頭痛が片頭痛である、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２２】
前記片頭痛が慢性片頭痛である、請求項２１に記載の組成物。
【請求項２３】
前記片頭痛が反復性片頭痛である、請求項２１に記載の組成物。
【請求項２４】
前記頭痛の発生が、単回投与後少なくとも７日間減少する、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２５】
前記投与後に前記対象が経験する１ヶ月の頭痛時間が、前記対象における投与前のレベルから４０時間以上減少する、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２６】
前記投与後に前記対象が経験する１ヶ月の頭痛日が、前記対象における投与前のレベルから３日以上減少する、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２７】
前記投与後に前記対象が経験する１ヶ月の頭痛時間が、前記対象における投与前のレベルと比較して２５％以上減少する、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２８】
前記投与することが皮下または静脈内投与である、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２９】
前記投与することが、前記モノクローナル抗体を含むプレフィルドシリンジを用いることを含む、請求項２０に記載の組成物。
【請求項３０】
前記モノクローナル抗体が、少なくとも１５０ｍｇ／ｍＬの濃度で配合される、請求項２０に記載の組成物。
【請求項３１】
前記モノクローナル抗体と同時にまたは連続的に前記対象に投与される、第２の作用物質をさらに含む、請求項２０に記載の組成物。
【請求項３２】
前記第２の作用物質が、５−ＨＴ１アゴニスト、トリプタン、麦角アルカロイド及び非ステロイド性抗炎症薬からなる群から選択される、請求項３１に記載の組成物。
【請求項３３】
前記モノクローナル抗体の投与後、前記対象による前記第２の作用物質の使用が少なくとも１５％減少する、請求項３１に記載の組成物。
【請求項３４】
前記第２の作用物質がトリプタンである、請求項３２に記載の組成物。
【請求項３５】
前記対象がヒトである、請求項２０に記載の組成物。
【請求項３６】
前記モノクローナル抗体がヒトまたはヒト化抗体である、請求項２０に記載の組成物。
【請求項３７】
３ヶ月ごとに投与される用量が６７５ｍｇである、請求項２０に記載の組成物。
【請求項３８】
６７５ｍｇの用量が、各回２２５ｍｇの３回の注射として投与される、請求項３７に記載の組成物。
【請求項３９】
各回２２５ｍｇの注射が１．５ｍＬである、請求項３８に記載の組成物。
【請求項４０】
前記注射が皮下注射である、請求項３８に記載の組成物。
【請求項４１】
前記注射が、対象の身体の腹部、大腿部又は上腕部への注射である、請求項３８に記載の組成物。
【請求項４２】
カルシトニン遺伝子関連ペプチド（ＣＧＲＰ）経路を阻害するモノクローナル抗体の６７５ｍｇの用量を対象に投与する、対象における頭痛を治療し、またはその発生を減少させるための組成物であって、
前記モノクローナル抗体が、配列番号３に示すＣＤＲ  Ｈ１、配列番号４に示すＣＤＲ  Ｈ２、配列番号５に示すＣＤＲ  Ｈ３、配列番号６に示すＣＤＲ  Ｌ１、配列番号７に示すＣＤＲ  Ｌ２及び配列番号８に示すＣＤＲ  Ｌ３を含み、
６７５ｍｇの用量が、対象の身体の腹部、大腿部又は上腕部へ、１．５ｍＬの３回連続した皮下注射として投与される、組成物。
【外国語明細書】
2019123750000001.pdf