(57)【要約】      （修正有）【課題】腫瘍特異的ペプチド−薬物複合体及びこの複合体を含む医薬組成物の提供。【解決手段】例えば、Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−マイトマイシン、Ｎα−スクシンアミド酸−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−マイトマイシン、Ｎα−アセトアミド−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−マイトマイシン、Ｎα−ブチルアミド−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−マイトマイシン、Ｎα−ヘキサンアミド−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−マイトマイシン、Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−ドキソルビシン、Ｎα−スクシンアミド酸−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−ドキソルビシン、Ｎα−アセトアミド−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−ドキソルビシン、Ｎα−ブチルアミド−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−ドキソルビシンからなる群から選択される、ペプチド−薬物複合体。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ：
Ｒ−Ｙ−Ｚ−Ａｓｎ−Ｌｉｎｋｅｒ−Ｄ（式Ｉ）
のペプチド−薬物複合体であって、
式中、
Ｒが、
ｉ）１〜約５個のヒドロキシル基、アミン基、カルボキシル基、スルホン酸基、またはホスホリル基で任意に置換された、Ｃ１〜約Ｃ２０の直鎖、分岐鎖または脂環式カルボン酸から誘導されたアシル基、カルバモイル基、スルホニル基、ホスホリル基またはアルキル基、
ｉｉ）１〜約５０個のＬ−またはＤ−アミノ酸残基を有するペプチド、及び
ｉｉｉ）４００〜約４０，０００の分子量を有するポリエチレングリコールからなる群から選択される置換基を含み、
Ｙが、Ａｌａ、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ、Ｌｅｕ、Ａｒｇ、Ｐｒｏ、Ｖａｌ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅからなる群から選択されるアミノ酸残基であり、
Ｚが、Ａｌａ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ及びＰｒｏからなる群から選択されるアミノ酸残基であり、
Ａｓｎが、アスパラギン残基であり、
Ｌｉｎｋｅｒが、ｐ−アミノベンジルカルバモイル部分またはｐ−アミノベンジルカルボネート部分であり、
Ｄが、前記リンカー部分に結合した抗腫瘍薬部分であり、前記薬物が、マイトマイシン、ドキソルビシン、アミノプテリン、アクチノマイシン、ブレオマイシン、９−アミノ−カンプトテシン、Ｎ８−アセチルスペルミジン、１−（２−クロロエチル）−１，２−ジメタンスルホニルヒドラジド、タリソマイシン、シタラビン、エトポシド、カンプトテシン、タキソール、エスペラミシン、ポドフィラトキシン、アングイジン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、モルホリン−ドキソルビシン、ｎ−（５，５−ジアセトキシ−ペンチル）ドキソルビシン、及びこれらの誘導体からなる群から選択される、前記ペプチド−薬物複合体。
【請求項２】
Ｒが、
ｉ）１〜約５個のヒドロキシル基、アミン基、カルボキシル基、スルホン酸基、またはホスホリル基で任意に置換された、Ｃ１〜約Ｃ２０の直鎖、分岐鎖または脂環式カルボン酸から誘導されたアシル基、
ｉｉ）１〜約５０個のＬ−またはＤ−アミノ酸残基を有するペプチド、及び
ｉｉｉ）４００〜約４０，０００の分子量を有するポリエチレングリコールからなる群から選択される置換基を含み、
Ｙが、Ａｌａ、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ、Ｌｅｕ、Ａｒｇ、Ｐｒｏ、Ｖａｌ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅからなる群から選択されるアミノ酸残基であり、
Ｚが、Ａｌａ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ及びＰｒｏからなる群から選択されるアミノ酸残基であり、
Ａｓｎが、アスパラギン残基であり、
Ｌｉｎｋｅｒが、ｐ−アミノベンジルカルバモイル部分であり、
Ｄが、抗腫瘍薬部分であり、前記薬物が、マイトマイシン及びドキソルビシンからなる群から選択される、請求項１に記載のペプチド−薬物複合体。
【請求項３】
Ｒが、
ｉ）１〜約５個のヒドロキシル基、アミン基、カルボキシル基、スルホン酸基、またはホスホリル基で任意に置換された、Ｃ１〜約Ｃ２０の直鎖、分岐鎖または脂環式カルボン酸から誘導されたアシル基、カルバモイル基、スルホニル基、ホスホリル基またはアルキル基、
ｉｉ）１〜約５０個のＬ−またはＤ−アミノ酸残基を有するペプチド、及び
ｉｉｉ）４００〜約４０，０００の分子量を有するポリエチレングリコールからなる群から選択される置換基を含み、
Ｙが、Ａｌａ、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ、Ｌｅｕ、Ａｒｇ、Ｐｒｏ、Ｖａｌ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅからなる群から選択されるアミノ酸残基であり、
Ｚが、Ａｌａ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ及びＰｒｏからなる群から選択されるアミノ酸残基であり、
Ａｓｎが、アスパラギン残基であり、
Ｌｉｎｋｅｒが、ｐ−アミノベンジルカルボネート部分であり、
Ｄが、リンカー部分に結合した抗腫瘍薬部分であり、前記薬物が、カンプトテシンである、請求項１に記載のペプチド−薬物複合体。
【請求項４】
式ＩＩ：
Ｄ’−Ｌｉｎｋｅｒ−Ａｓｎ−Ｚ−Ｙ−Ｒ’−Ｙ−Ｚ−Ａｓｎ−Ｌｉｎｋｅｒ−Ｄ（式ＩＩ）
のペプチド−薬物複合体であって、
式中、Ｄ及びＤ’が、互いに同一または異なる細胞障害性薬部分であり、マイトマイシン、ドキソルビシン、アミノプテリン、アクチノマイシン、ブレオマイシン、９−アミノ−カンプトテシン、Ｎ８−アセチルスペルミジン、１−（２−クロロエチル）−１，２−ジメタンスルホニルヒドラジド、タリソマイシン、シタラビン、エトポシド、カンプトテシン、タキソール、エスペラミシン、ポドフィラトキシン、アングイジン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、モルホリン−ドキソルビシン、ｎ−（５，５−ジアセトキシ−ペンチル）ドキソルビシン、及びこれらの誘導体からなる群から独立して選択され、
Ｌｉｎｋｅｒが、ｐ−アミノベンジルカルボネート部分またはｐ−アミノベンジルカルボネート部分であり、前記リンカーは、同一であっても異なってもよく、
Ｒ’が、
ｉ）１〜約５個のヒドロキシル基、アミン基、カルボキシル基、スルホン酸基、またはホスホリル基で任意に置換された、Ｃ１〜約Ｃ２０の直鎖、分岐鎖または脂環式カルボン酸から誘導されたアシル基、カルバモイル基、スルホニル基、ホスホリル基またはアルキル基から選択されるビス−官能基、
ｉｉ）１〜約５０個のＬ−またはＤ−アミノ酸残基を有するペプチド、及び
ｉｉｉ）４００〜約４０，０００の分子量を有するポリエチレングリコールからなる群から選択される置換基を含み、
Ｙが、Ａｌａ、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ、Ｌｅｕ、Ａｒｇ、Ｐｒｏ、Ｖａｌ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅからなる群から選択されるアミノ酸残基であり、
Ａｓｎが、アスパラギン残基であり、
Ｚが、Ａｌａ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ及びＰｒｏからなる群から選択されるアミノ酸残基であ
る、前記ペプチド−薬物複合体。
【請求項５】
Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−マイトマイシン、
Ｎα−スクシンアミド酸−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−マイトマイシン、
Ｎα−アセトアミド−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−マイトマイシン、
Ｎα−ブチルアミド−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−マイトマイシン、
Ｎα−ヘキサンアミド−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−マイトマイシン、
Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−ドキソルビシン、
Ｎα−スクシンアミド酸−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−ドキソルビシン、
Ｎα−アセトアミド−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−ドキソルビシン、
Ｎα−ブチルアミド−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−ドキソルビシン、
Ｎα−ヘキサンアミド−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−ドキソルビシンンからなる群から選択される、ペプチド−薬物複合体。
【請求項６】
Ｎα−［−（２−アミド−２−オキソエトキシ）酢酸］−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−マイトマイシン、
Ｎα−［−（（２−アミド−２−オキソエトキシ）（メチル）アミノ酢酸］−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−マイトマイシン、
Ｎα−［−（２−アミド−２−オキソエトキシ）酢酸］−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−ドキソルビシン、
Ｎα−［−（（２−アミド−２−オキソエトキシ）（メチル）アミノ酢酸］−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−ドキソルビシン、
Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−カンプトテシン、
Ｎα−スクシンアミド酸−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−カンプトテシン、
Ｎα−［−（２−アミド−２−オキソエトキシ）酢酸］−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−カンプトテシン、及び
Ｎα−［−（（２−アミド−２−オキソエトキシ）（メチル）アミノ酢酸］−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−カンプトテシンからなる群から選択される、ペプチド−薬物複合体。
【請求項７】
Ｎ１−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−マイトマイシン，Ｎ４−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−ドキソルビシン−スクシンアミド、
Ｎ１−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−マイトマイシン，Ｎ５−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−ドキソルビシン−ビス（Ｏα）−アセトアミド、
Ｎ１−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−マイトマイシン，Ｎ５−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−ドキソルビシン−ビス（Ｎα−メチル）−アセトアミド、
Ｎ１−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−マイトマイシン，Ｎ４−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−カンプトテシン−スクシンアミド、
Ｎ１−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−マイトマイシン，Ｎ５−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−カンプトテシン−ビス（Ｏα）−アセトアミド、及び
Ｎ１−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−マイトマイシン，Ｎ５−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−カンプトテシン−ビス（Ｎα−メチル）−アセトアミドからなる群から選択される、ペプチド−薬物複合体。
【請求項８】
請求項１に記載の少なくとも１つのペプチド−薬物複合体と、少なくとも１つの薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物。
【請求項９】
１つまたは複数の個々の投与量として包装された、請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
癌の治療を、前記治療を必要とする哺乳動物で行う方法であって、抗癌有効量の請求項１に記載のペプチド−薬物複合体を投与することを含む、前記方法。
【請求項１１】
癌の治療を、前記治療を必要とする哺乳動物で行う方法であって、抗癌有効量の請求項２に記載のペプチド−薬物複合体を投与することを含む、前記方法。
【請求項１２】
癌の治療を、前記治療を必要とする哺乳動物で行う方法であって、抗癌有効量の請求項３に記載のペプチド−薬物複合体を投与することを含む、方法。
【請求項１３】
癌の治療を、前記治療を必要とする哺乳動物で行う方法であって、抗癌有効量の請求項４に記載のペプチド−薬物複合体を投与することを含む、方法。
【請求項１４】
癌の治療を、前記治療を必要とする哺乳動物で行う方法であって、抗癌有効量の請求項８に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、腫瘍特異的ペプチド−薬物複合体及びこの複合体を含む医薬組成物に関する。本発明はさらに、このような複合体及び組成物の、哺乳動物、特にヒトの癌の治療のための抗腫瘍薬としての使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
癌性細胞は、多くの場合、正常細胞と比較して、ある特定のプロテアーゼを過発現する。このことは、細胞障害性治療薬を、腫瘍プロテアーゼが切断するペプチドに結合させて、正常な細胞に危害を与えずまたは及ぼす影響を実質的に少なくしながら、細胞胞障害性薬を癌性細胞近くで、または癌性細胞内で放出させることによって、癌性細胞を標的化する努力を促した。
【０００３】
特許文献１では、自壊性リンカーを含み、腫瘍の部位において選択的に活性化される腫瘍特異的ペプチド−薬物複合体を開示し、この薬物は、マイトマイシンまたはドキソルビシンであり、自壊性リンカーは、ｐ−アミノベンジルアルコールである。
アスパラギナーゼを発現する細胞は、多くの腫瘍がこれらのプロテアーゼを過発現するために、ペプチド−薬物複合体アプローチのための魅力的な標的となっている。このようなアスパラギナーゼの１つであるレグマインは、これに関して特に注目を集めている（非特許文献１；非特許文献２；非特許文献３；非特許文献４）。
マイトマイシン、ドキソルビシン及びカンプトテシンは、ペプチド−薬物複合体療法で使用される薬物として注目を集めている。特許文献２、特許文献３、特許文献４、及び特許文献５では、ドキソルビシンを含む薬物でレグマインを標的とするペプチド−薬物複合体の例を開示している。
【０００４】
上記参考文献のそれぞれは、その全体が、参照により本明細書に組み込まれている。
【０００５】
これらの以前のアプローチは、一般的に、薬物部分の化学修飾を伴い、これは薬物の効力に悪影響を及ぼす可能性がある。ペプチドがマイトマイシンのアジリジンＮ原子へ直接結合することによって、二級アミド、すなわち、通常、プロテアーゼによる攻撃を受けない官能基がもたらされる。さらに、マイトマイシンに関する研究によって、生物活性に対するアジリジン環中のＮＨ基の役割が示唆されている。したがって、レグマイン及び他のアスパラギナーゼを発現する腫瘍細胞に対するマイトマイシンなどの抗腫瘍薬を標的とする複合体を改善する必要がある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】米国特許第６，２１４，３４５号明細書
【特許文献２】米国特許第７，６０８，５９１号明細書
【特許文献３】米国特許出願公開第２０１１０３００１４７号明細書
【特許文献４】米国特許出願公開第２００９０１７５８７３号明細書
【特許文献５】米国特許第８，３１４，０６０号明細書
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Ｗｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２００６；６６：９７０−９８０
【非特許文献２】Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｖｍｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２００３；６３：２９５７−２９６４
【非特許文献３】Ｂａｊｊｕｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，ＣｈｅｍＭｅｄＣｈｅｍ．２０１１；６：．ｄｏｉ：１０：１００２／ｃｍｄｃ．２０１０００４７８
【非特許文献４】ｈｔｔｐ／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｐｍｃ／ａｒｔｉｃｌｅｓ／ＰＭＣ３５４９５９２／ｐｄｆ／ｎｉｈｍ５４−５９ｓ−３４０２６８．ｐｄｆ．
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１】ヒト血漿に曝されたときのＮα−スクシンアミド酸−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−マイトマイシン[本明細書では複合体８]の減衰速度を時間の関数として示すグラフである。
【図２】Ｎα−スクシンアミド酸−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−マイトマイシンの投与後のＢａｌｂ／マウスの体重を時間の関数として示すグラフである。
【図３】Ｎα−スクシンアミド酸−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−マイトマイシン投与後のＢａｌｂ／ｃマウスにおける皮下ＣＴ−２６同質遺伝子型結腸癌モデルの腫瘍成長曲線を示すグラフである。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明のある特定の実施形態は、ペプチド−薬物複合体である。このような複合体は、一般的に、１）細胞プロテアーゼによって切断され得るペプチド部分を含み、これが２）自壊性リンカー、特に、ｐ−アミノベンジルカルバモイルまたはｐ−アミノベンジルカルボネート部分に結合し、これが次に、３）細胞障害性薬部分に結合する。これらの実施形態では、リンカー部分は、アスパラギン残基に連結し、この部分でタンパク質分解切断が起こる。
【００１０】
特定の実施形態では、ペプチド−薬物複合体は、以下の式Ｉ： 
Ｒ−Ｙ−Ｚ−Ａｓｎ−Ｌｉｎｋｅｒ−Ｄ  （式Ｉ）
の構造を有し、
式中、
Ｒは、
ｉ）１〜約５個のヒドロキシル基、アミン基、カルボキシル基、スルホン酸基、またはホスホリル基で任意に置換された、Ｃ１〜約Ｃ２０の直鎖、分岐鎖または脂環式カルボン酸から誘導されたアシル基、カルバモイル基、スルホニル基、ホスホリル基またはアルキル基、
ｉｉ）１〜約５０個のＬ−またはＤ−アミノ酸残基を有するペプチド、及び
ｉｉｉ）４００〜約４０，０００の分子量を有するポリエチレングリコールからなる群から選択される置換基を含み、
Ｙは、Ａｌａ、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ、Ｌｅｕ、Ａｒｇ、Ｐｒｏ、Ｖａｌ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅからなる群から選択されるアミノ酸残基であり、
Ｚは、Ａｌａ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ及びＰｒｏからなる群から選択されるアミノ酸残基であり、
Ａｓｎは、アスパラギン残基であり、
Ｌｉｎｋｅｒは、ｐ−アミノベンジルカルバモイル部分またはｐ−アミノベンジルカルボネート部分であり、
Ｄは、リンカー部分に結合した抗腫瘍薬部分であり、この薬物は、マイトマイシン、ドキソルビシン、アミノプテリン、アクチノマイシン、ブレオマイシン、９−アミノ−カンプトテシン、Ｎ８−アセチルスペルミジン、１−（２−クロロエチル）−１，２−ジメタンスルホニルヒドラジド、タリソマイシン、シタラビン、エトポシド、カンプトテシン、タキソール、エスペラミシン、ポドフィラトキシン、アングイジン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、モルホリン−ドキソルビシン、ｎ−（５，５−ジアセトキシ−ペンチル）ドキソルビシン、及びこれらの誘導体からなる群から選択される。
【００１１】
式Ｉの特定の実施形態では、
Ｒは、
ｉ）１〜約５個のヒドロキシル、アミン、カルボキシル、スルホン酸、またはホスホリル基で任意に置換された、Ｃ１〜約Ｃ２０の直鎖、分岐鎖または脂環式カルボン酸から誘導されたアシル基、
ｉｉ）１〜約５０個のＬ−またはＤ−アミノ酸残基を有するペプチド、及び
ｉｉｉ）４００〜約４０，０００の分子量を有するポリエチレングリコールからなる群から選択される置換基を含み、
Ｙは、Ａｌａ、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ、Ｌｅｕ、Ａｒｇ、Ｐｒｏ、Ｖａｌ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅからなる群から選択されるアミノ酸残基であり、
Ｚは、Ａｌａ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ及びＰｒｏからなる群から選択されるアミノ酸残基であり、
Ａｓｎは、アスパラギン残基であり、
Ｌｉｎｋｅｒは、ｐ−アミノベンジルカルバモイル部分であり、
Ｄは、抗腫瘍薬部分であり、この薬物は、マイトマイシン及びドキソルビシンから選択される。
【００１２】
式Ｉの他の特定の実施形態では、
Ｒは、
ｉ）１〜約５個のヒドロキシル基、アミン基、カルボキシル基、スルホン酸基、またはホスホリル基で任意に置換された、Ｃ１〜約Ｃ２０の直鎖、分岐鎖または脂環式カルボン酸から誘導されたアシル基、カルバモイル基、スルホニル基、ホスホリル基またはアルキル基、
ｉｉ）１〜約５０個のＬ−またはＤ−アミノ酸残基を有するペプチド、及び
ｉｉｉ）４００〜約４０，０００の分子量を有するポリエチレングリコールからなる群から選択される置換基を含み、
Ｙは、Ａｌａ、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ、Ｌｅｕ、Ａｒｇ、Ｐｒｏ、Ｖａｌ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅからなる群から選択されるアミノ酸残基であり、
Ｚは、Ａｌａ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ及びＰｒｏからなる群から選択されるアミノ酸残基であり、
Ａｓｎは、アスパラギン残基であり、
Ｌｉｎｋｅｒは、ｐ−アミノベンジルカルボネート部分であり、
Ｄは、リンカー部分に結合した抗腫瘍薬部分であり、この薬物は、カンプトテシンである。
【００１３】
さらなる実施形態では、本発明は、式ＩＩ：
Ｄ’−Ｌｉｎｋｅｒ−Ａｓｎ−Ｚ−Ｙ−Ｒ’−Ｙ−Ｚ−Ａｓｎ−Ｌｉｎｋｅｒ−Ｄ（式ＩＩ）
に示される式の二量体ペプチド−薬物複合体を含み、
式中、Ｄ及びＤ’は、互いに同一または異なる細胞障害性薬部分であり、マイトマイシン、ドキソルビシン、アミノプテリン、アクチノマイシン、ブレオマイシン、９−アミノ−カンプトテシン、Ｎ８−アセチルスペルミジン、１−（２−クロロエチル）−１，２−ジメタンスルホニルヒドラジド、タリソマイシン、シタラビン、エトポシド、カンプトテシン、タキソール、エスペラミシン、ポドフィラトキシン、アングイジン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、モルホリン−ドキソルビシン、ｎ−（５，５−ジアセトキシ−ペンチル）ドキソルビシン、及びこれらの誘導体からなる群から独立して選択され、
Ｌｉｎｋｅｒは、ｐ−アミノベンジルカルバメート部分またはｐ−アミノベンジルカルボネート部分であり、これらのリンカーは、同一であっても異なってもよく、
Ｒ’は、
ｉ）１〜約５個のヒドロキシル基、アミン基、カルボキシル基、スルホン酸基、またはホスホリル基で任意に置換された、Ｃ１〜約Ｃ２０の直鎖、分岐鎖または脂環式カルボン酸から誘導されたアシル基、カルバモイル基、スルホニル基、ホスホリル基またはアルキル基から選択されるビス−官能基、
ｉｉ）１〜約５０個のＬ−またはＤ−アミノ酸残基を有するペプチド、及び
ｉｉｉ）４００〜約４０，０００の分子量を有するポリエチレングリコールからなる群から選択される置換基を含み、
Ｙは、Ａｌａ、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ、Ｌｅｕ、Ａｒｇ、Ｐｒｏ、Ｖａｌ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅからなる群から選択されるアミノ酸残基であり、
Ａｓｎは、アスパラギン残基であり、
Ｚは、Ａｌａ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ及びＰｒｏからなる群から選択されるアミノ酸残基であ
る。
【００１４】
当然のことながら、式ＩＩの複合体は、本質的に式Ｉの複合体の二量体型であり、標的とされた細胞または組織に対する複合体当たり細胞障害性薬の２つの分子を標的とすることができる。
【００１５】
さらなる実施形態では、本発明は、少なくとも１つの薬学的に許容される担体中に、式Ｉまたは式ＩＩの少なくとも１つのペプチド−薬物複合体を含む医薬組成物を含む。  
【００１６】
さらなる実施形態では、本発明は、ヒトであり得る哺乳動物において癌を治療する方法を含み、本方法は、抗腫瘍有効量の本発明の複合体または医薬組成物を投与することを含む。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
本明細書で使用される「マイトマイシン」は、ストレプトマイセス・カエスピトサス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｃａｅｓｐｉｔｏｓｕｓ）またはストレプトマイセス・ラベンジュレ（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｌａｖｅｎｄｕｌａｅ）から単離されたアジリジン含有薬物のファミリーのメンバーを指し、具体的には、マイトマイシンＣ及びマイトマイシンＡを含む。
【００１８】
本明細書で使用される「ドキソルビシン」は、ストレストマイセス属細菌のストレストマイセスペウセチウス変種カエシウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｂａｃｔｅｒｉｕｍ  Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｐｅｕｃｅｔｉｕｓ  ｖａｒ．ｃａｅｓｉｕｓ）から誘導されたアントラサイクリンのファミリーのメンバーを指し、ドキソルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン及びイダルビシンを含む。
【００１９】
本明細書で使用される「カンプトテシン」は、カンレンボク（Ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃａ  ａｃｕｍｉｎａｔａ）から単離されたアルカロイドのファミリーのメンバー及びその化学的誘導体を指し、カンプトテシン、イリノテカン、トポテカン及びルビテカンを含む。
【００２０】
本発明は、ペプチド部分と、ｐ−アミノベンジル−カルバモイルまたはｐ−アミノベンジルカルボネートである（自壊性リンカーに結合する薬物中に含まれる官能基のタイプに応じる）自壊性リンカーと、細胞障害性薬部分とを含む腫瘍特異的ペプチド−薬物複合体を提供する。この複合体は、実質的に不活性かつ非毒性であるという意味では、プロドラッグとして作用する。ペプチド部分は、インビボでプロテアーゼ酵素によって選択的に切断され、自壊性リンカー／細胞障害性薬部分を遊離することができる。このような酵素的切断時に、自壊性リンカーは、同時に加水分化して遊離薬物をその活性形態でもたらすが、より多くがヒト患者の腫瘍の部位などの標的化された環境を標的とする。このように、細胞障害性薬は、治療の必要がある特定部位を標的とし、標的部位以外の部位における細胞及び組織の損傷は低減される。
【００２１】
細胞障害性薬部分は、化学的反応性官能基を有し、これによって、薬物骨格が自壊性リンカーに共有結合する。細胞障害性薬を自壊性リンカーに結合させる官能基は、自壊性リンカーの加水分解時に、細胞障害性薬を、細胞障害活性化形態で放出させる。このような官能基としては、例えば、一級アミン、二級アミンまたはヒドロキシルが含まれてもよい。細胞障害性薬としては、マイトマイシン、ドキソルビシン、アミノプテリン、アクチノマイシン、ブレオマイシン、９−アミノ−カンプトテシン、Ｎ８−アセチルスペルミジン、１−（２−クロロエチル）−１，２−ジメタンスルホニルヒドラジド、タリソマイシン、シタラビン、エトポシド、カンプトテシン、タキソール、エスペラミシン、ポドフィラトキシン、アングイジン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、モルホリン−ドキソルビシン、ｎ−（５，５−ジアセトキシ−ペンチル）ドキソルビシン、及びこれらの誘導体が含まれる。好ましい実施形態は、マイトマイシン、ドキソルビシン及び／またはカンプトテシンに基づいている。
【００２２】
薬物（Ｄ）がマイトマイシンである具体的な実施形態では、ペプチド−薬物複合体は、式ＩＩＩ：
【化１】
2019189623.tif 000002
に示される構造を有する（式中Ｒは、上記で定義された通りであり、Ａｌａは、アラニン残基である）。
【００２３】
薬物（Ｄ）がドキソルビシンである具体的な実施形態では、ペプチド−薬物複合体は、式ＩＶ：
【化２】
2019189623.tif 000003
に示される構造を有する（式中Ｒは、上記で定義された通りであり、Ａｌａは、アラニン残基である）。
【００２４】
薬物（Ｄ）がカンプトテシンである具体的な実施形態では、ペプチド−薬物複合体は、式Ｖ：
【化３】
2019189623.tif 000004
に示される構造を有する（式中Ｒは、上記で定義された通りであり、Ａｌａは、アラニン残基である）。
【００２５】
薬物（Ｄ）がマイトマイシンであり、かつ薬物（Ｄ’）がドキソルビシンである二量体複合体の具体的な実施形態では、ペプチド−薬物複合体は、式ＶＩ：
【化４】
2019189623.tif 000005
に示される構造を有する（式中Ｒ’は、上記で定義された通りであり、Ａｌａは、アラニン残基である）。
【００２６】
薬物（Ｄ）がマイトマイシンであり、かつ薬物（Ｄ’）がカンプトテシンである二量体複合体の具体的な実施形態では、ペプチド−薬物複合体は、式ＶＩＩ：
【化５】
2019189623.tif 000006
に示される構造を有する（式中Ｒ’は、上記で定義された通りであり、Ａｌａは、アラニン残基である）。
【００２７】
本発明の好ましい複合体としては、
Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−マイトマイシン、
Ｎα−スクシンアミド酸−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−マイトマイシン、
Ｎα−アセトアミド−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−マイトマイシン、
Ｎα−ブチルアミド−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−マイトマイシン、
Ｎα−ヘキサンアミド−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−マイトマイシン、
Ｎα−［−（２−アミド−２−オキソエトキシ）酢酸］−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−マイトマイシン、及び
Ｎα−［−（（２−アミド−２−オキソエトキシ）（メチル）アミノ酢酸］−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−マイトマイシン、
Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−ドキソルビシン、
Ｎα−スクシンアミド酸−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−ドキソルビシン、
Ｎα−アセトアミド−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−ドキソルビシン、
Ｎα−ブチルアミド−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−ドキソルビシン、及び
Ｎα−ヘキサンアミド−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−ドキソルビシンン、
Ｎα−［−（２−アミド−２−オキソエトキシ）酢酸］−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−ドキソルビシン、ならびに
Ｎα−［−（（２−アミド−２−オキソエトキシ）（メチル）アミノ酢酸］−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−ドキソルビシンが含まれ、式中、ＰＡＢＣは、ｐ−アミノベンジルカルバモイルリンカー部分である。
【００２８】
本発明の他の好ましい複合体としては、
Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−カンプトテシン、
Ｎα−スクシンアミド酸−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−カンプトテシン、
Ｎα−［−（２−アミド−２−オキソエトキシ）酢酸］−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−カンプトテシン、及び
Ｎα−［−（（２−アミド−２−オキソエトキシ）（メチル）アミノ酢酸］−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−カンプトテシンが含まれ、
式中、ＰＡＢＣは、ｐ−アミノベンジルカルボネートリンカー部分である。
【００２９】
好ましい二量体複合体としては、
Ｎ１−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−マイトマイシン，Ｎ４−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−ドキソルビシン−スクシンアミド、
Ｎ１−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−マイトマイシン，Ｎ５−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−ドキソルビシン−ビス（Ｏα）−アセトアミド、
Ｎ１−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−マイトマイシン，Ｎ５−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−ドキソルビシン−ビス（Ｎα−メチル）−アセトアミド、
Ｎ１−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−マイトマイシン，Ｎ４−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−カンプトテシン−スクシンアミド、
Ｎ１−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−マイトマイシン，Ｎ５−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−カンプトテシン−ビス（Ｏα）−アセトアミド、及び
Ｎ１−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−マイトマイシン，Ｎ５−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−カンプトテシン−ビス（Ｎα−メチル）−アセトアミドが含まれ、
式中、ＰＡＢＣは、ｐ−アミノベンジルカルバモイルまたはｐ−アミノベンジルカルボネートリンカー部分である。
【００３０】
ペプチド−薬物複合体の調製
一般に、式Ｉ及び式ＩＩのペプチド−薬物複合体は、入手可能な材料及び従来の有機合成技術を用いて調製されてもよい。例えば、記載されるタイプの細胞障害性薬は、市販されているものであり、これらの合成は、科学文献に記載されている。一般的に、本発明のペプチド−薬物複合体は、薬物部分を、自壊性リンカーを介してペプチド配列に共有結合させることによって構築され得る。以下に示される調製物の具体的な合成経路は、利用され得るものを例示するものである。
【００３１】
合成スキームＩは、ペプチド−マイトマイシン複合体を生成するための合成経路を示す。
【化６】
2019189623.tif 000007
【００３２】
合成スキーム２は、ペプチド−ドキソルビシン複合体を生成するための合成経路を示す。
【化７】
2019189623.tif 000008
【００３３】
合成スキーム３は、ペプチド−カンプトテシン複合体を生成するための合成経路を示す。
【化８】
2019189623.tif 000009
【００３４】
合成スキーム４は、ドキソルビシン−ペプチド−マイトマイシン複合体（二量体複合体）を生成するための合成経路を示す。
【化９】
2019189623.tif 000010
【００３５】
合成スキーム５は、カンプトテシン−ペプチド−マイトマイシン複合体（二量体複合体）を生成するための合成経路を示す。
【化１０】
2019189623.tif 000011
【００３６】
一般に、記載された合成反応については、下記のように行われた。
ａ）Ｆｍｏｃ及びトリチル除去、ならびにペプチドカップリングに対しては、標準ペプチド合成法が使用された。
ｂ）自壊性リンカーは、有機／水性溶媒混合物中で、ＥＥＤＱをカップリング試薬として用いて、Ｎα−Ｆｍｏｃ−Ａｓｎまたはトリチル保護Ｎα−Ｆｍｏｃ−Ａｓｎとｐ−アミノベンジルアルコールとを反応させることによって、アミノ酸に結合された。
ｃ）ｐ−アミノベンジルアルコールの活性化炭酸塩は、ｐ−ニトロフェニルクロロホルメートとＮα−Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ−ＰＡＢ−ＯＨまたはＮα−Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｎ−トリチル−Ａｓｎ−ＰＡＢ−ＯＨとを反応させることによって得ることができた。
ｄ）マイトマイシン及びドキソルビシンのペプチド薬物複合体は、ＤＭＦ中、ＨＯＢＴの存在下で、Ｎα−Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ−ＰＡＢ−ＰＮＰまたはＮα−Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−ＰＮＰの対応する活性化炭酸塩と反応させることによって得られた。
ｅ）カンプトテシン複合体の合成については、カンプトテシンをトリホスゲンと反応させて、インサイチュでカンプトテシンクロロホルメートを得て、次いで、これを、Ｎα−Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ−ＰＡＢ−ＯＨとカップリングさせて、対応するＮα−Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−カンプトテシンを得た。
ｆ）ペプチドカップリング法によって、種々の無水物、塩化アシルまたはカルボン酸によるアシル化によって、最終ペプチド−薬物複合体を得た。
【００３７】
合成された最終複合体は、シリカカラムクロマトグラフィー、ＨＰＬＣ、イオン交換クロマトグラフィー、酸／塩基沈降及び結晶化を含む種々の方法によって精製することができる。
【００３８】
最終複合体は、１Ｈ−ＮＭＲ、１３Ｃ−ＮＭＲ、ＭＳ、ＬＣ／ＭＳ、ＵＶ／ＶＩＳ、及び／またはＩＲによって特徴付けることができる。
【００３９】
開示された複合体の多くは、塩酸塩または他の塩として存在することができる。医薬品化学の熟練者であれば、塩の選択は重要ではないこと、他の薬学的に許容される塩を周知の方法で調製することができ、かつ医薬組成物の調製に利用することができることを理解するであろう。例えば、Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｅｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｕｓｅ．（Ｐ．Ｈｅｉｎｒｉｃｈ  Ｓｔａｈｌ及びＣａｍｉｌｌｅ  Ｇ．Ｗｅｒｍｕｔｈ，ｅｄｓ．）Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｕｎｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｕｒｅ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ  ２００２及びｌ．Ｄ．Ｂｉｇｈｌｅｙ，Ｓ．Ｍ．Ｂｅｒｇｅ，Ｄ．Ｃ．Ｍｏｎｋｈｏｕｓｅ，ｉｎ“Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ’．Ｅｄｓ．Ｊ．Ｓｗａｒｂｒｉｃｋ  ａｎｄ  Ｊ．Ｃ．Ｂｏｙｌａｎ，Ｖｏｌ  １３，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｂａｓｅｌ，Ｈｏｎｇ  Ｋｏｎｇ  １９９５，ｐｐ.４５３−４９９を参照されたい。
【００４０】
加えて、当業者であれば、様々な塩が生成されかつ使用され得ることのみならず、水和物、溶媒和物、及び多形体が、本明細書に開示される複合体から生成され得ることも理解するであろう。また、種々の同位体置換変型（例えば、重水素を水素で置換すること、１３Ｃを炭素で置換すること、１５Ｎを窒素で置換することにより）も容易に生成することも可能である。このような誘導体は、本開示の範囲内のものと見なされる。
【００４１】
本発明の医薬組成物を調製するために、複合体の１つまたは複数が、少なくとも１つの薬学的に許容される担体と組み合される。「薬学的に許容される担体」とは、薬理学的に有効な物質を投与する特定の経路に好適である生体適合性化合物を指す。これらには、安定化剤、湿潤剤及び乳化剤、モル浸透圧濃度を変更するための塩、封入剤、緩衝液、ならびに皮膚浸透促進剤が含まれる。薬学的に許容される担体の例は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ａｌｆｏｎｓｏ  Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ．ｅｄ．，１８  ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９０）に記載されている。担体（複数可）の特定の選択は、意図される具体的な療法によって決定する。医薬組成物及びその成分のための種々の製剤が、米国特許出願公開第２０１４／００５７８４４号に記載されており、この開示は、参照により組み込まれるものとする。
【００４２】
複合体中の細胞障害性薬部分の選択は、治療される癌のタイプに従う。特定のタイプの癌または腫瘍の治療については、細胞障害性薬部分は、このようなタイプの癌を治療するために有効な細胞障害性薬に基づくべきである。例えば、マイトマイシンに基づく薬物複合体は、現在知られており、当該技術分野において既知であるマイトマイシン投与プロトコルに従って癌を治療するために使用されるか、またはそれに誘導されてもよい。
【００４３】
本発明の複合体、組成物、及び方法は、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、卵巣癌、胃癌、膵臓癌、肺癌、肝臓癌、食道癌、大腸癌、皮膚癌、及び前立腺癌が含まれるが、これらに限定されない、様々なタイプの癌を治療するために使用されてもよい。
【００４４】
投与の経路としては、注射、経口投与、口腔投与、非経口投与、吸入、及び直腸投与が含まれる。
【００４５】
投与される複合体の投与量、及び投与の特定の経路ならびに投与計画は、治療される癌のタイプ及び特定の癌状態の状況によって決定するが、当業者によって決定することができる。
【００４６】
本発明の複合体は、互いに併用されても、他の化学療法剤または治療と併用されてもよい。例えば、本発明の複合体を使用する療法は、放射線療法と併用されてもよい。
【００４７】
以下に続く実施例は、本発明のある特定の実施形態を例示するものであり、本発明の範囲を限定するものではなく、例示するものと見なされるべきである。
【実施例】
【００４８】
生物学的活性
本発明の代表的なペプチド−薬物複合体を、インビトロ及びインビボ系の両方で試験して、それらの生物学的活性を決定した。これらの試験において、細胞障害薬の複合体の効力を、ヒトの癌原発部位の細胞に対する複合体の細胞毒性を測定することによって決定した。当業者であれば、所望の腫瘍関連プロテアーゼ（本発明の複合体を切断して、薬物を活性形態で放出するプロテアーゼ）を発現する任意の腫瘍細胞株が、以下の分析で使用される特定の腫瘍細胞株の代わりに使用することができることを認識するであろう。以下では、使用された代表的な試験及び得られた結果について説明する。
【００４９】
試験I
ヒト血漿安定性
５００μＭのペプチド−薬物複合体Ｎα−スクシンアミド酸−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−マイトマイシン[本明細書では化合物８]の２０μＬのＤＭＳＯ保存溶液を、ヒト血漿で１ｍＬに希釈し（最終濃度：１０μＭ、２％ＤＭＳＯ）、混合物を３７℃でインキュベートした。１００μＬのアリコートを、０、０．２５、０．５、１、２、４、６時間の時点で取り出し、内部標準としてトルブタミド（２００ｎｇ／ｍＬ）を含有する冷アセトニトリル４００μＬで希釈した。試料を１４，０００ｒｐｍで４分間遠心分離した。上記上清１００μＬを、０．１％ギ酸のＨＰＬＣ水３００μＬで希釈し、１０μＬをＬＣ／ＭＳ／ＭＳ分析用に採取した（カラム：Ｃ−１８；移動相：水中０．１％ギ酸／アセトニトリル中０．１％ギ酸；イオン遷移：Ｑ１イオン（ｍ／ｚ）＝８４０．５、Ｑ２イオン（ｍ／ｚ）＝４６２．２）。図１に示すように、ペプチド−薬物複合体は、ヒト血漿中で比較的安定しており、１５時間超（Ｔ１／２＞１５時間）の半減期を有する。２％未満の遊離薬物マイトマイシンを検出した。
【００５０】
試験ＩＩ
インビトロ細胞毒性アッセイ
ヒト癌腫細胞の単層培養物を、トリプシンーＥＤＴＡを用いて採取し、細胞を計数し、１０％のＦＢＳを含有するＲＰＭＩ−１６４０またはＤＭＥＭ１×１０５／ｍＬに再懸濁させた。細胞（０．１ｍＬ／ウェル）を、９６ウェルのマイクロタイタープレートの各ウェルに添加し、５％ＣＯ２の加湿空気中で、３７℃にて一晩インキュベートした。培地をプレートから除去し、培地中のマイトマイシンまたは複合体の連続希釈液（最終ＤＭＳＯ濃度＜０．１％）を、ウェルに添加した。全ての希釈は、三通り行った。薬物で処理された細胞を、５％ＣＯ２の加湿空気中で、３７℃にてさらに７２時間インキュベートした。冷ＴＣＡ（５０％、重量／体積）５０μＬを、各ウェルに添加し、プレートを４℃で１時間インキュベートした。プレートをゆっくりと流れる水道水で３回洗浄し、室温で乾燥させた。スルホローダミンＢ溶液（０．４％、重量／体積）５０μＬを各ウェルに添加し、プレートを室温で１時間放置した。プレートを酢酸溶液（１％、体積／体積）で濯ぎ、未結合の染料を除去し、室温で乾燥させた。１０ｍＭのＴｒｉｓ塩基溶液２００μＬを各ウェルに添加し、プレートを旋回シェーカー上で１５分間振動させ、タンパク質結合染料を可溶化した。マイクロプレートリーダで、５１０ｎｍにおけるウェルの光学密度を測定し、ＩＣ５０を、各実験で三通り行われた３つの別個の実験からのＧｒａｐｈＰａｄにより計算し、平均値として表した（表１）。
【表１】
2019189623.tif 000012
【００５１】
ＨＣＴ１１６及びＨｅｐＧ２ヒト癌腫細胞株アッセイでは、ペプチド−薬物複合体の細胞毒性が、様々な腫瘍細胞株に応じて、親薬物マイトマイシンと比較して７６〜１７倍低減したことを明らかにしている。腫瘍関連プロテアーゼのレグマインは、低酸素かつ酸性条件下で、固形腫瘍の腫瘍微小環境中で過発現される。しかしながら、細胞培養中のＨＣＴ１１６及びＨｅｐＧ２細胞株双方のあるレベルのレグマイン発現が以前に報告されており、これは、このアッセイで観察されたペプチド−薬物複合体の残存活性をもたらす場合がある。
【００５２】
試験ＩＩＩ
Ｂａｌｂ／ｃマウスにおけるインビボ最大耐用量（ＭＴＤ）
マイトマイシン及び単剤としてのそのペプチド−薬物複合体Ｎα−スクシンアミド酸−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−マイトマイシン [化合物８]の忍容性を、Ｂａｌｂ／ｃマウスにおいて別個に評価した。処置後の異なる時点での異なる群における体重の結果を図２に示す。
【００５３】
マイトマイシン１０ｍｇ／ｋｇを週１回投与した群では、動物の死亡が観察された。５ｍｇ／ｋｇの群では、マウスは、立毛及び発育遅延の挙動を表した。体重減少（＞１５％）は、５ｍｇ／ｋｇのマイトマイシン群で観察された。一方、異常な外観及び体重（＜１０％）は、ペプチド−薬物複合体Ｎα−スクシンアミド酸−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−マイトマイシン [８]、２５、５０及び１００ｍｇ／ｋｇを週１回、２４時間で合計３回の注射で投与した群においては観察されなかった。ネズミ毒性試験では、ペプチド−薬物複合体Ｎα−スクシンアミド酸−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−マイトマイシン [８]は、インビボで親薬物よりも毒性がかなり低いことが明らかになった。ペプチド−薬物複合体のマウス最大耐用量（ＭＴＤ）は、親薬物マイトマイシンと比べて、少なくとも２０倍増加する。
【００５４】
試験ＩＶ
インビボ抗腫瘍活性
ペプチド−薬物複合体Ｎα−スクシンアミド酸−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−マイトマイシン [８]の殺腫瘍効果を、Ｂａｌｂ／ｃマウスにおける皮下ＣＴ−２６同一遺伝子型結腸癌モデルで評価した。各マウスを、ＰＢＳ  ０．１ｍＬ中、ＣＴ−２６腫瘍細胞（５×１０５）で、右わき腹領域に皮下接種した。平均腫瘍サイズが約１８０ｍｍ３に達したとき（１０日後近辺）、ＣＴ−２６腫瘍マウスを、ビヒクル（２％ＤＭＡ及び９８％の４０％２ＨＰ−β−ＣＤ）、マイトマイシン（２ｍｇ／ｋｇ；５ｍｇ／ｋｇ、ＱＷ）及び複合体Ｎα−スクシンアミド酸−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−マイトマイシン [８]（２５ｍｇ／ｋｇ；５０ｍｇ／ｋｇ、ＱＷ）を、３週間にわたって、マウス毎に合計３回の注射で、静脈内投与することによって処置した。ＣＴ−２６モデルの腫瘍成長曲線を図３に示す。
【００５５】
以前報告されたように、ＣＴ−２６細胞がインビトロにおいて腫瘍関連プロテアーゼのレグマインの弱い発現を有するにもかかわらず、レグマイン発現が低酸素かつストレス条件下で誘発されるために、レグマインは、ＣＴ−２６固形腫瘍微小環境内の生内皮細胞上の表面のＴＭＥ及び腫瘍随伴マクロファージ中で、インビボで多量に発現される。レグマイン特異的活性化複合体Ｎα−スクシンアミド酸−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−マイトマイシン [８]は、図３に示すように、Ｂａｌｂ／ｃマウスにおける皮下ＣＴ−２６同一遺伝子型結腸癌モデルに及ぼす強い抗腫瘍効力を立証した。そのＭＴＤよりも非常に低い５０ｍｇ／ｋｇの用量において、この複合体は、未処置対照と対比して腫瘍成長を有意に阻害する（Ｔ／Ｃ＝３６．４％、ｐ＜０．０１）。一方、そのＭＴＤ用量（５ｍｇ／ｋｇ）では、親薬物のマイトマイシンは、非常に弱い腫瘍成長効果を示した（Ｔ／Ｃ＝５０．４％）。したがって、インビボの実験は、本発明のペプチド−マイトマイシン複合体が、宿主に対して親薬物よりも大きな効力及び低い毒性で抗腫瘍活性を生じさせることを示している。
【００５６】
合成実施例
実施例１
Ｎα―Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−Ａｌａ[１]の調製
Ｎα―Ｆｍｏｃ−Ａｌａ（１．５８ｇ、５．０ミリモル）、Ｎ−ヒドロキシルスクシンイミド（０．６３ｇ、５．５ミリモル）及びＤＣＣ（１．０３ｇ、５．０ミリモル）のＣＨ２Ｃｌ２溶液（５０ｍＬ）を、５℃で６時間撹拌した。ＤＣＵを濾過して取り除き、濾液を濃縮した。残渣をＴＨＦ（５０ｍＬ）中に再溶解させて、冷蔵庫（４℃）で一晩保管した。より多量のＤＣＵを濾過して取り除き、ＴＨＦ溶液を、アラニン（０．９９ｇ、７．５ミリモル）及びＮａＨＣＯ３（１．６８ｇ、２０ミリモル）の２５％ＴＨＦ／Ｈ２Ｏ溶液（８０ｍＬ）に添加した。反応混合物を、２５℃で５時間にわたり激しく撹拌した。ＴＨＦを濃縮によって除去し、水性懸濁液を、濃ＨＣｌでｐＨ４に調節した。水性懸濁液を、２５℃でさらに３時間撹拌し、濾過により沈殿物を集め、脱塩水で十分に濯ぎ、ＫＯＨで真空にて乾燥させて、白色固体生成物（１．７７ｇ、８３．７％収率）を得た。
ＬＣ／ＭＳ：（ＭＨ）＋＝３８３
【００５７】
実施例２
Ｎα―Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ−ＰＡＢ−ＯＨ[２]の調製
Ｎα―Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（１．７７ｇ、５．０ミリモル）、ｐ−アミノベンジルアルコール（０．８６ｇ、７．０ミリモル）及びＥＥＤＱ（１．４８ｇ、６ミリモル）のＴＨＦ／Ｈ２Ｏ溶液（１００／２０ｍＬ）を、室温で一晩撹拌した。ＥＥＤＱの追加量（０．６１ｇ、２．５ミリモル）を添加し、さらに２４時間撹拌した。ＴＨＦを濃縮によって除去し、残った懸濁液を、ＮａＯＨ／ＮａＨＣＯ３水性溶液（２／８ｇ、２００ｍＬ）で希釈し、３時間撹拌した。沈殿物を濾過により集め、水で濯ぎ、１０％クエン酸（１５０ｍＬ）中に再懸濁させた。沈殿物を濾過によって集め、１０％クエン酸、続いて脱塩水で濯ぎ、真空中で乾燥させた。上記固体を、酢酸エチル（１００ｍＬ）中で摩砕した。濾過により固体を集め、真空中で乾燥させて、灰白色生成物（０．９５ｇ、４０％収率）を得た。
ＬＣ／ＭＳ：（ＭＨ）＋＝４６０
【００５８】
実施例３
Ｎα―Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−ＰＮＰ[３]の調製
乾燥ＴＨＦ／ＤＭＦ（５０／５ｍＬ）中、Ｎα―Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ−ＰＡＢ−ＯＨ[２]（０．７５ｇ、１．６ミリモル）を室温で、ｐ−ニトロフェニルクロロホルメート（０．４ｇ、２．０ミリモル）及びピリジン（０．１５ｇ、２．０ミリモル）で処理した。１６時間後に、追加量のｐ−ニトロフェニルクロロホルメート（０．２ｇ、１．０ミリモル）を添加し、反応溶液をさらに６時間撹拌した。上記溶液を、酢酸エチル（２５０ｍＬ）で希釈し、５％クエン酸（２×１００ｍＬ）、続いて塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、蒸発乾固させた。残渣を５０％ＥＡ／ヘキサン中で摩砕し、固体を濾過により集め、灰黄色生成物（０．８ｇ、８１％収率）を得た。
ＬＣ／ＭＳ：（ＭＨ）＋＝６２５
【００５９】
実施例４
Ｎα―Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−マイトマイシン[４]の調製
乾燥ＤＭＦ（１５ｍＬ）中、Ｎα―Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−ＰＮＰ[３]（６２４ｍｇ、１．０ミリモル）及びマイトマイシン（４００ｍｇ、１．２ミリモル）を、室温でＨＯＢＴ（６７５ｍｇ、５．０ミリモル）及びＤＩＥＡ（６５０ｍｇ、５．０ミリモル）で４時間処理した。反応混合物を、酢酸エチル（１５０ｍＬ）で希釈し、ＮａＯＨ／ＮａＨＣＯ３（１／４ｇ、２００ｍＬ）で３回洗浄し、続いて塩水で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮乾固させた。残渣を５０％酢酸エチル／ヘキサン（５０ｍＬ）中で摩砕し、固体を濾過により集め、酢酸エチル／ヘキサンで濯ぎ、真空中で乾燥させて、紫色生成物（６３５ｍｇ、７６．３％収率）を得た。
ＬＣ／ＭＳ：（ＭＨ）＋＝８２０
【００６０】
実施例５
Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−マイトマイシン[５]の調製
Ｎα―Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−マイトマイシン[４]（６２４ｍｇ、０．７６ミリモル）を、２０％モルホリン／ＮＭＰ（１５ｍＬ）で室温にて処理した。３０分後に、５０％酢酸エチル／ヘキサン（１００ｍＬ）を添加し、上清を除去した。上記工程を２回繰り返した。残渣をメタノール（２５ｍＬ）中に再溶解させ、溶媒を減圧下で蒸発乾固させた。残渣を、５０％酢酸エチル／ヘキサン（１００ｍＬ）中で摩砕し、室温で一晩撹拌した。固体を濾過により集め、酢酸エチル／ヘキサンで濯ぎ、真空中で乾燥させて、紫色生成物（４４０ｍｇ、９５．６％収率）を得た。
ＬＣ／ＭＳ：（ＭＨ）＋＝５９８
【００６１】
実施例６
Ｎα―Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−マイトマイシン[６]の調製
Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−マイトマイシン[５]（４４０ｍｇ、０．７３ミリモル）及びＮα―Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−Ａｌａ[１]（２８６ｍｇ、０．７５ミリモル）を、ＮＭＰ（１５ｍL）中ＰｙＢｏｐ(３９０ｍｇ、０．７５ミリモル)及びＤＩＥＡ（５８５ｍｇ、４．５ミリモル）で室温にて処理した。１時間後に、反応混合物を、酢酸エチル（２００ｍＬ）で希釈した。有機溶液を、５％クエン酸（３×１００ｍＬ）、塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶媒を減圧下で蒸発させ、残渣を５０％酢酸エチル／ヘキサン（１００ｍＬ）中で摩砕し、室温で一晩撹拌した。固体を濾過により集め、酢酸エチル（５０ｍＬ）中に再懸濁させ、超音波処理した。固体を濾過により集め、酢酸エチルで十分に濯ぎ、真空中で乾燥させて、紫色生成物（５３０ｍｇ、７５．４％収率）を得た。
ＬＣ／ＭＳ：（ＭＨ）＋＝９６２
【００６２】
実施例７
Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−マイトマイシン[７]の調製
Ｎα―Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−マイトマイシン[６]（４８１ｍｇ、０．５ミリモル）を、２０％モルホリン／ＮＭＰ（１０ｍＬ）中で室温にて処理した。３０分後に、５０％酢酸エチル／ヘキサン（１５０ｍＬ）を添加し、１時間撹拌した。上清を除去し、残渣をＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）中で摩砕した。固体を濾過により集め、メタノール（２０ｍＬ）中に再溶解させた。溶媒を減圧下で蒸発させ、残渣を酢酸エチル中で摩砕した。固体を濾過により集め、酢酸エチルで十分に濯ぎ、真空中で乾燥させて、紫色生成物（２７７ｍｇ、７５％収率）を得た。
ＬＣ／ＭＳ：（ＭＨ）＋＝７４０
【００６３】
実施例８
Ｎα−スクシンアミド酸−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−マイトマイシン[８]の調製
ＤＭＡ／ＣＨ２Ｃｌ２（２／６ｍＬ）中、Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−マイトマイシン[７]（２６０ｍｇ、０．３５ミリモル）を、室温において、無水コハク酸（５０ｍｇ、０．５ミリモル）及びＤＩＥＡ（１３０ｍｇ、１．０ミリモル）で処理した。反応混合物を一晩撹拌した。上記反応混合物に、エチルエーテル（１００ｍＬ）を添加し、３０分間撹拌した。上清を除去し、この工程を２回繰り返した。残渣を２％ＨＯＡｃ／酢酸エチル（５０ｍＬ）中で摩砕し、固体を濾過により集め、酢酸エチルで十分に濯ぎ、真空中で乾燥させて、紫色生成物（２６５ｍｇ、９０％収率）を得た。
ＬＣ／ＭＳ：（ＭＨ）-＝８３８
【００６４】
実施例９
Ｎα−アセトアミド−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−マイトマイシン[９]の調製
ＤＭＡ／ＣＨ２Ｃｌ２（１／３ｍＬ）中、Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−マイトマイシン[７]（３７ｍｇ、０．０５ミリモル）を、室温において、無水酢酸（１０ｍｇ、０．１ミリモル）及びＤＩＥＡ（１３ｍｇ、０．１ミリモル）で処理した。３０分後、エチルエーテル（５０ｍＬ）を添加し、６０分間撹拌した。軟質固体を濾過により集め、エチルエーテルで濯ぎ、メタノール（５ｍＬ）中に再溶解させた。溶媒を減圧下で除去し、残渣を５０％酢酸エチル／ヘキサン（１０ｍＬ）中で摩砕し、固体を濾過により集め、酢酸エチル／ヘキサンで十分に濯ぎ、真空中で乾燥させて、紫色生成物（３５ｍｇ、９０％収率）を得た。
ＬＣ／ＭＳ：（ＭＨ）＋＝８０５
【００６５】
実施例１０
Ｎα−ブチルアミド−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−マイトマイシン[１０]の調製
ＤＭＡ／ＣＨ２Ｃｌ２（１／３ｍＬ）中、Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−マイトマイシン[７]（３７ｍｇ、０．０５ミリモル）を、室温において、塩化ブチリル（６．３ｍｇ、０．０６ミリモル）及びＤＩＥＡ（１３ｍｇ、０．１ミリモル）で処理した。３０分後、エチルエーテル（５０ｍＬ）を添加し、６０分間撹拌した。固体を濾過により集め、エチルエーテルで濯ぎ、メタノール（５ｍＬ）中に再溶解させた。溶媒を減圧下で除去し、残渣を酢酸エチル（１０ｍＬ）中で摩砕した。固体を濾過により集め、酢酸エチルで十分に濯ぎ、真空中で乾燥させて、紫色生成物（２７ｍｇ、６７％収率）を得た。
ＬＣ／ＭＣ：（ＭＨ）＋＝８０８；（Ｍ＋Ｎａ）＋＝８３３
【００６６】
実施例１１
Ｎα−ヘキサンアミド−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−マイトマイシン[１１]の調製
ＤＭＡ／ＣＨ２Ｃｌ２（１／３ｍＬ）中、Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−マイトマイシン[７]（３７ｍｇ、０．０５ミリモル）を、室温において、塩化ヘキサノイル（９．０ｍｇ、０．０６ミリモル）及びＤＩＥＡ（１３ｍｇ、０．１ミリモル）で処理した。３０分後、エチルエーテル（５０ｍＬ）を添加し、６０分間撹拌した。固体を濾過により集め、エチルエーテルで濯ぎ、メタノール（５ｍＬ）中に再溶解させた。溶媒を減圧下で除去し、残渣を５０％酢酸エチル／ヘキサン（１０ｍＬ）中で摩砕した。固体を濾過により集め、酢酸エチルで十分に濯ぎ、真空中で乾燥させて、紫色生成物（２７ｍｇ、６７％収率）を得た。
ＬＣ／ＭＣ：（ＭＨ）＋＝８３６；（Ｍ＋Ｎａ）＋＝８６０
【００６７】
実施例１２
Ｎα−［−（２−アミド−２−オキソエトキシ）酢酸］−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−マイトマイシン[１２]の調製
ＴＨＦ／ＤＭＦ（４／０．５ｍＬ）中、Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−マイトマイシン[７]（２９５ｍｇ、０．４ミリモル）を、室温において１，４−ジオキサン−２，６−ジオン（７０ｍｇ、０．６ミリモル）及びＤＩＥＡ（６０ｍｇ、０．５ミリモル）で２時間処理した。エチルエーテル（１０ｍＬ）をゆっくりと添加し、混合物を３０分間撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、残渣を酢酸エチル中１％酢酸中で摩砕し、超音波処理した。固体を濾過により集め、酢酸エチルで十分に濯ぎ、真空中で乾燥させて、暗色生成物（２７６ｍｇ、８０％収率）を得た。
ＬＣ／ＭＣ：（ＭＨ）＋＝８５４
【００６８】
実施例１３
Ｎα−［−（（２−アミド−２−オキソエトキシ）（メチル）アミノ）酢酸］−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−マイトマイシン[１３]の調製
ＴＨＦ／ＤＭＦ（４／０．５ｍＬ）中、Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−マイトマイシン[７]（２９５ｍｇ、０．４ミリモル）を、室温において４−メチルモルホリン−２，６−ジオン（７７ｍｇ、０．６ミリモル）及びＤＩＥＡ（１３０ｍｇ、１．０ミリモル）で２時間処理した。エチルエーテル（１０ｍＬ）をゆっくりと添加し、混合物を３０分間撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、残渣を酢酸エチル中１％酢酸中で摩砕し、超音波処理した。固体を濾過により集め、酢酸エチルで十分に濯ぎ、真空中で乾燥させて、暗色生成物（３３９ｍｇ、９７％収率）を得た。
ＬＣ／ＭＳ：（Ｍ-Ｈ）＋＝８６７
【００６９】
実施例１４
Ｎα―Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ−（Ｎ−トリチル）−ＰＡＢ−ＯＨ[１４]の調製
Ｎα―Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｎ−トリチル）（１．４９ｇ、２．５ミリモル）、ｐ−アミノベンジルアルコール（０．３７ｇ、３．０ミリモル）及びＥＥＤＱ（０．７４ｇ、３ミリモル）のＴＨＦ溶液（５０ｍＬ）を、室温で一晩撹拌した。ＥＥＤＱの追加量（０．２５ｇ、１．０ミリモル）を添加し、さらに６時間撹拌した。反応溶液を、酢酸エチル（３００ｍＬ）で希釈し、０．１ＮのＨＣｌで３回洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。酢酸塩溶液を短いシリカプラグを介して濾過し、酢酸エチルで濯ぎ、濃縮乾固させた。残渣を酢酸エチル中で摩砕し、濾過し、酢酸エチルで濯ぎ、真空中で乾燥させて、白色固体を得た（１．６５ｇ、９３％収率）。
ＬＣ／ＭＳ：（ＭＨ）＋＝７０２
【００７０】
実施例１５
Ａｓｎ−（Ｎ−トリチル）−ＰＡＢ−ＯＨ[１５]の調製
Ｎα―Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ−（Ｎ−トリチル）−ＰＡＢ−ＯＨ[１４]（１．６ｇ、２．２８ミリモル）のＣＨ２Ｃｌ２溶液（５０ｍＬ）に、ＤＢＵ（１ｍＬ）を添加した。反応溶液を１５分間撹拌した。反応溶液を、ＣＨ２Ｃｌ２（２００ｍＬ）で希釈し、塩水で２回洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮乾固させた。残渣を、ヘキサン／エチルエーテル（１／１）中で摩砕した。固体を濾過により集めて、エチルエーテルで濯ぎ、真空中で乾燥させて白色固体を得た（１．１ｇ、１００％収率）。
ＬＣ／ＭＳ：（ＭＨ）＋＝４８０
【００７１】
実施例１６
Ｎα−Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−（Ｎ−トリチル）−ＰＡＢ−ＯＨ[１６]の調製
Ａｓｎ−（Ｎ−トリチル）−ＰＡＢ−ＯＨ[１５]（０．７２ｇ、１．５ミリモル）、Ｎα−Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−Ａｌａ[１]（０．５７ｇ、１．５ミリモル）、ＰｙＢｏｐ（０．９４ｇ、１．８ミリモル）及びＤＩＥＡ（１．１７ｇ、９．０ミリモル）のＮＭＰ溶液（２０ｍＬ）を、室温で１時間撹拌した。上記反応物に、５％クエン酸水溶液（１５０ｍＬ）を、氷水温度でゆっくりと添加し、２時間撹拌した。沈殿物を濾過により集めて、５％クエン酸溶液、続いて脱塩水で濯いだ。固体を、水性ＮａＨＣＯ３溶液中に再懸濁させ、摩砕し、濾過し、脱塩水で濯ぎ、ＫＯＨで真空中にて乾燥させ、白色生成物を得た（１．１ｇ、８７％収率）。
ＬＣ／ＭＳ：（ＭＨ）＋＝８４５
【００７２】
実施例１７
Ｎα−Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−（Ｎ−トリチル）−ＰＡＢＣ−ＰＮＰ[１７]の調製
Ｎα−Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−（Ｎ−トリチル）−ＰＡＢ−ＯＨ[１６]（１．１ｇ、１．３ミリモル）、ｐ−ニトロフェニルクロロホルメート（０．３１ｇ、１．６ミリモル）及びピリジン（０．１３ｇ、１．６ミリモル）の乾燥ＴＨＦ反応溶液を、室温で一晩撹拌した。追加量のｐ−ニトロフェニルクロロホルメート（０．２ｇ、１．０ミリモル）及びピリジン（０．０８ｇ、１．０ミリモル）を添加し、さらに４時間撹拌した。上記溶液を酢酸エチル（３００ｍＬ）で希釈し、５％クエン酸溶液（３×１００ｍＬ）、続いて塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させて、濾過し、濃縮乾固させた。残渣をエチルエーテル中で摩砕し、濾過し、酢酸エチルで洗浄し、真空中で乾燥させて、灰白色生成物（１．１ｇ、８３％収率）を得た。
ＬＣ／ＭＳ：（ＭＨ）＋＝１０１０
【００７３】
実施例１８
Ｎα−Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−ＰＮＰ[１８]の調製
Ｎα−Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−（Ｎ−トリチル）−ＰＡＢＣ−ＰＮＰ[１７]（１．０ｇ、１ミリモル）及びＴＩＰＳ（２．５ｍＬ）のＴＦＡ／ＣＨ２ＣＬ２溶液（６／２４ｍＬ）を、室温で２時間撹拌した。上記反応溶液に、エチルエーテル（１５０ｍＬ）をゆっくりと添加し、懸濁液を１時間撹拌した。沈殿物を濾過により集め、エチルエーテルで濯いだ。固体を酢酸エチル中で摩砕し、濾過し、酢酸エチルで濯ぎ、真空中で乾燥させて、灰白色生成物（０．７５ｇ、９７％収率）を得た。
ＬＣ／ＭＳ：（ＭＨ）＋＝７６７
【００７４】
実施例１９
Ｎα−Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−ドキソルビシン[１９]の調製
Ｎα−Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−ＰＮＰ[１８]（３８３ｍｇ、０．５ミリモル）、ドキソルビシン塩酸塩（３４８ｍｇ、０．６ミリモル）、ＨＯＢＴ（２０２ｍｇ、１．５ミリモル）及びＤＩＥＡ（３２５ｍｇ、２．５ミリモル）の乾燥ＤＭＦ反応溶液（５ｍＬ）を、暗所で一晩撹拌した。上記溶液に、氷水温度で５％クエン酸（１００ｍＬ）をゆっくりと添加し、１時間撹拌した。沈殿物を濾過により集め、５％クエン酸、続いて脱塩水で濯いだ。固体を水性ＮａＨＣＯ３溶液中に再懸濁させ、３０分間撹拌した。固体を集め、ＮａＨＣＯ３溶液、続いて脱塩水で十分に濯いだ。固体をイソプロパノール、１０％メタノール／酢酸エチル中に再懸濁させ、摩砕し、濾過し、真空中で乾燥させて、暗赤色生成物（５５０ｍｇ、９４％収率）を得た。  
ＬＣ／ＭＳ：（ＭＨ）＋＝１１７１
【００７５】
実施例２０
Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−ドキソルビシン[２０]の調製
Ｎα−Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−ドキソルビシン[１９]（５００ｍｇ、０．４２ミリモル）の２０％モルホリン／ＮＭＰ溶液（５ｍＬ）を、１時間撹拌した。上記反応溶液に、エチルエーテル（５０ｍＬ）をゆっくりと添加し、得られた懸濁液を３０分間撹拌した。エチルエーテルを、流出させた（３回繰り返した）。残渣を酢酸エチル、２０％メタノール／酢酸エチル中で摩砕した。固体を濾過により集め、真空中で乾燥させた、固体を水中に再懸濁させ、超音波処理し、濾過し、ＫＯＨで真空中にて乾燥させ、暗赤色生成物（３２０ｇ、８０％収率）を得た。
ＬＣ／ＭＣ：（ＭＨ）＋＝９４９
【００７６】
実施例８、１２及び１３の調製の同様の方法を、化合物[２０]から実施例２１、２２及び２３を調製するために用いた。
【００７７】
実施例２１
Ｎα−スクシンアミド酸−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−ドキソルビシン[２１]
ＬＣ／ＭＳ：（ＭＨ）＋＝１０４９
【００７８】
実施例２２
Ｎα−［−（２−アミド−２−オキソエトキシ）酢酸］−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−ドキソルビシン[２２]
ＬＣ／ＭＳ：（ＭＨ）＋＝１０６５
【００７９】
実施例２３
Ｎα−［−（（２−アミド−２−オキソエトキシ）（メチル）アミノ）酢酸］−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−ドキソルビシン[２３]
ＬＣ／ＭＳ：（ＭＨ）＋＝１０７８
【００８０】
実施例２４
Ｎα−Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−カンプトテシン[２４]の調製
カンプトテシン（３４８ｍｇ、１ミリモル）及びＤＡＭＰ（３６６ｍｇ、３ミリモル）の乾燥ＣＨ２Ｃｌ２懸濁液（２０ｍＬ）に、トリホスゲン（１００ｍｇ、０．３３ミリモル）を、撹拌しながら氷水温度で添加した。２０分後に、Ｎα−Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ−ＰＡＢ―ＯＨ[２]（４５９ｍｇ、１ミリモル）の乾燥ＣＨ２Ｃｌ２懸濁液（１０ｍＬ）を、上記反応混合物に添加し、室温で一晩撹拌した。得られた反応混合物に、ｐ−ニトロフェニルクロロホルメート（１００ｍｇ、０．５ミリモル）、続いて追加量のＤＡＭＰ（６０ｍｇ、０．５ミリモル）を添加し、反応混合物をさらに４時間撹拌した。濃縮後に、得られた残渣を２５％ＣＨ２Ｃｌ２／酢酸エチル中で摩砕し、濾過し、２５％ＣＨ２Ｃｌ２／酢酸エチルで濯いで、真空中で乾燥させた。固体を、水性ＮａＨＣＯ３中に懸濁させ、超音波処理し、濾過し、水性ＮａＨＣＯ３、続いて５％クエン酸、脱塩水で十分に濯いで、ＫＯＨ上で真空にて乾燥させ、灰黄色生成物（７６３ｍｇ、９１％収率）を得た。
ＬＣ／ＭＳ：（ＭＨ）＋＝８３４
【００８１】
実施例２５
Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−カンプトテシン[２５]の調製
Ｎα−Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−カンプトテシン[２４]（５００ｍｇ、０．６ミリモル）の２％ＤＢＵ／ＣＨ２Ｃｌ２溶液（１５ｍＬ）を、２０分間撹拌した。エチルエーテル（８０ｍＬ）を、上記反応溶液にゆっくりと添加し、３０分間撹拌した。沈殿物を摩砕し、濾過により集め、エチルエーテルで十分に濯いだ。固体を２０％ＣＨ２Ｃｌ２／酢酸エチル中で再摩砕し、濾過し、乾燥させた。固体を水性ＮａＨＣＯ３中に再懸濁させ、摩砕し、濾過し、脱塩水で濯ぎ、ＫＯＨで真空にて乾燥させて、灰黄色生成物（２９５ｍｇ、８０％収率）を得た。
ＬＣ／ＭＳ：（ＭＨ）＋＝６１２
【００８２】
実施例２６
Ｎα−Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−カンプトテシン[２６]の調製
Ｈ２Ｎ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−カンプトテシン[２５]（２４４ｍｇ、０．４ミリモル）、Ｎα−Ａｌａ−Ａｌａ[１]（１９０ｍｇ、０．５ミリモル）、ＰｙＢｏｐ（２６０ｍｇ、０．５ミリモル）及びＤＩＥＡ（３２５ｍｇ、２．５ミリモル）のＮＭＰ溶液（５ｍＬ）を、１時間撹拌した。上記反応溶液に、５％クエン酸（５０ｍＬ）をゆっくりと添加して、得た混合物を３０分間撹拌した。沈殿物を濾過により集めて、５％クエン酸溶液、続いて脱塩水で濯ぎ、ＫＯＨ上、真空中で乾燥させた。固体を１５％ＣＨ２Ｃｌ２／酢酸エチル中で摩砕し、超音波処理し、濾過し、乾燥させて、灰色生成物（２７４ｍｇ、７０％収率）。
ＬＣ／ＭＳ：（ＭＨ）＋＝９７６
【００８３】
実施例２７
Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−カンプトテシン[２７]の調製
Ｎα−Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−カンプトテシン[２６]（４８７ｍｇ、０．５ミリモル）の２％ＤＢＵ／ＣＨ２Ｃｌ２溶液（１０ｍＬ）を、１０分間撹拌した。上記反応溶液に、エチルエーテル（５０ｍＬ）をゆっくりと添加し、３０分間撹拌した。沈殿物を集め、エーテルで濯いだ。固体を２０％ＣＨ２Ｃｌ２／酢酸エチル中に懸濁させ、摩砕し、濾過し、酢酸エチルで濯ぎ、乾燥させて、灰色生成物（２９０ｍｇ、７７％収率）を得た。
ＬＣ／ＭＳ：（ＭＨ）＋＝７５４
【００８４】
実施例８、１２及び１３の調製の同様の方法を、化合物[２７]から実施例２８、２９及び３０を調製するために用いた。
【００８５】
実施例２８
Ｎα−スクシンアミド酸−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−カンプトテシン[２８]
ＬＣ／ＭＳ：（ＭＨ）＋＝８５４
【００８６】
実施例２９
Ｎα−［−（２−アミド−２−オキソエトキシ）酢酸］−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−カンプトテシン[２９]
ＬＣ／ＭＳ：（ＭＨ）＋＝８７０
【００８７】
実施例３０
Ｎα−［−（（２−アミド−２−オキソエトキシ）（メチル）アミノ）酢酸］−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−カンプトテシン[３０]
ＬＣ／ＭＳ：（ＭＨ）＋＝８８３
【００８８】
実施例３１
Ｎ１−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−マイトマイシン，Ｎ４−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−ドキソルビシン−スクシンアミド[３１]の調製
Ｎα−スクシンアミド酸−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−マイトマイシン[８]（８５ｍｇ、０．１ミリモル）、Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−ドキソルビシン[２０]（１０４ｍｇ、０．１１ミリモル）、ＰｙＢｏｐ（６２ｍｇ、０．１２ミリモル）及びＤＩＥＡ（７８ｍｇ、０．６ミリモル）のＮＭＰ溶液（２ｍＬ）を、１時間撹拌した。エチルエーテル（２０ｍＬ）を添加し、得られた混合物を撹拌し、超音波処理した。エーテルを流出させ（２回繰り返した）、残渣をメタノール中で摩砕し、濾過し、乾燥させて、暗色生成物（１００ｍｇ、５７％収率）を得た。
ＬＣ／ＭＳ：（ＭＨ）＋＝１７７０
【００８９】
実施例３２
Ｎ１−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−マイトマイシン，Ｎ５−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−ドキソルビシン−ビス（Ｏα）−アセトアミド[３２]の調製
実施例３１の調製の同様の方法を、化合物[２０]及び化合物[１２]から実施例３２を調製するために用いた。
ＬＣ／ＭＳ：（ＭＨ）＋＝１７８６
【００９０】
実施例３３
Ｎ１−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−マイトマイシン，Ｎ５−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−ドキソルビシン−ビス（Ｎα−メチル）−アセトアミド[３３]の調製
実施例３１の調製についての同様な方法を、化合物[２０]及び化合物[１３]から実施例３３を調製するために用いた。
ＬＣ／ＭＳ：（ＭＨ）＋＝１７９９
【００９１】
実施例３４
Ｎ１−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−マイトマイシン，Ｎ４−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−カンプトテシン−スクシンアミド[３４]の調製
実施例３１の調製の同様の方法を、化合物[２７]及び化合物[８]から実施例３４を調製するために用いた。
ＬＣ／ＭＳ：（ＭＨ）＋＝１５７５
【００９２】
実施例３５
Ｎ１−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−マイトマイシン，Ｎ５−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−カンプトテシン−ビス（Ｏα）−アセトアミド[３５]の調製
実施例３１の調製の同様の方法を、化合物[２７]及び化合物[１２]から実施例３４を調製するために用いた。
ＬＣ／ＭＳ：（ＭＨ）＋＝１５９１
【００９３】
実施例３６
Ｎ１−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−マイトマイシン，Ｎ５−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−カンプトテシン−ビス（Ｎα−メチル）−アセトアミド[３６]の調製
実施例３１の調製の同様の方法を、化合物[２７]及び化合物[１３]から実施例３４を調製するために用いた。
ＬＣ／ＭＳ：（ＭＨ）＋＝１６０４
【００９４】
本実施例で使用される略語は下記の通りである。
ＤＣＣ＝ジクロヘキシルカルビジイミド
ＤＣＭ＝ジクロロメタン
ＤＣＵ＝ジシクロヘキシル尿素
ＤＩＥＡ＝ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＡ＝ジメチルアセトアミド
ＤＭＥＭ＝ダルベッコ修飾イーグル培地
ＤＭＦ＝Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ＝ジメチルスルホキシド
ＥＤＣ＝１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド
ＥＤＴＡ＝Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’，Ｎ’’’，Ｎ’’’’−エチレンジアミン四酢酸
ＦＢＳ＝ウシ胎児血清
Ｆｍｏｃ＝フルオレニルメトキシカルバモイル
ＨＡＴＵ＝１−[ビス（ジメチルアミノ）メチレン]−１Ｈ−１，２，３−トリアゾロ[４，５−ｂ]ピリミジニウム−３−オキシドヘキサフルオロホスフェート
ＨＯＢＴ＝Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール
ＨＰＬＣ＝高圧液体クロマトグラフィー
ＩＲ＝赤外分光法
ＬＣ／ＭＳ＝液体クロマトグラフィー／質量分析法
ＭＳ＝質量分析法
ＭＴＤ＝最大耐用量
ＮＭＰ＝Ｎ−メチルピロリジノン
ＮＭＲ＝核磁気共鳴
ＰＡＢＣ＝ｐ−アミノベンジルカルバモイル
ＰＢＳ＝リン酸緩衝塩類溶液
Ｐｙ＝ピリジン
ＱＷ＝毎週
ＴＣＡ＝トリクロロ酢酸
Ｔｒ＝トリチル、トリフェニルメチル、
ＵＶ／ＶＩＳ＝紫外／可視分光法
【図１】
2019189623.tif 000013
【図２】
2019189623.tif 000014
【図３】
2019189623.tif 000015
【手続補正書】
【提出日】令和1年6月10日(2019.6.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
本願の明細書または図面に記載されている発明。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９４】
本実施例で使用される略語は下記の通りである。
ＤＣＣ＝ジクロヘキシルカルビジイミド
ＤＣＭ＝ジクロロメタン
ＤＣＵ＝ジシクロヘキシル尿素
ＤＩＥＡ＝ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＡ＝ジメチルアセトアミド
ＤＭＥＭ＝ダルベッコ修飾イーグル培地
ＤＭＦ＝Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ＝ジメチルスルホキシド
ＥＤＣ＝１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド
ＥＤＴＡ＝Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’，Ｎ’’’，Ｎ’’’’−エチレンジアミン四酢酸
ＦＢＳ＝ウシ胎児血清
Ｆｍｏｃ＝フルオレニルメトキシカルバモイル
ＨＡＴＵ＝１−[ビス（ジメチルアミノ）メチレン]−１Ｈ−１，２，３−トリアゾロ[４，５−ｂ]ピリミジニウム−３−オキシドヘキサフルオロホスフェート
ＨＯＢＴ＝Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール
ＨＰＬＣ＝高圧液体クロマトグラフィー
ＩＲ＝赤外分光法
ＬＣ／ＭＳ＝液体クロマトグラフィー／質量分析法
ＭＳ＝質量分析法
ＭＴＤ＝最大耐用量
ＮＭＰ＝Ｎ−メチルピロリジノン
ＮＭＲ＝核磁気共鳴
ＰＡＢＣ＝ｐ−アミノベンジルカルバモイル
ＰＢＳ＝リン酸緩衝塩類溶液
Ｐｙ＝ピリジン
ＱＷ＝毎週
ＴＣＡ＝トリクロロ酢酸
Ｔｒ＝トリチル、トリフェニルメチル、
ＵＶ／ＶＩＳ＝紫外／可視分光法
また、本発明は、下記のものも含む。
［発明１］
式Ｉ：
Ｒ−Ｙ−Ｚ−Ａｓｎ−Ｌｉｎｋｅｒ−Ｄ（式Ｉ）
のペプチド−薬物複合体であって、
式中、
Ｒが、
ｉ）１〜約５個のヒドロキシル基、アミン基、カルボキシル基、スルホン酸基、またはホスホリル基で任意に置換された、Ｃ１〜約Ｃ２０の直鎖、分岐鎖または脂環式カルボン酸から誘導されたアシル基、カルバモイル基、スルホニル基、ホスホリル基またはアルキル基、
ｉｉ）１〜約５０個のＬ−またはＤ−アミノ酸残基を有するペプチド、及び
ｉｉｉ）４００〜約４０，０００の分子量を有するポリエチレングリコールからなる群から選択される置換基を含み、
Ｙが、Ａｌａ、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ、Ｌｅｕ、Ａｒｇ、Ｐｒｏ、Ｖａｌ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅからなる群から選択されるアミノ酸残基であり、
Ｚが、Ａｌａ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ及びＰｒｏからなる群から選択されるアミノ酸残基であり、
Ａｓｎが、アスパラギン残基であり、
Ｌｉｎｋｅｒが、ｐ−アミノベンジルカルバモイル部分またはｐ−アミノベンジルカルボネート部分であり、
Ｄが、前記リンカー部分に結合した抗腫瘍薬部分であり、前記薬物が、マイトマイシン、ドキソルビシン、アミノプテリン、アクチノマイシン、ブレオマイシン、９−アミノ−カンプトテシン、Ｎ８−アセチルスペルミジン、１−（２−クロロエチル）−１，２−ジメタンスルホニルヒドラジド、タリソマイシン、シタラビン、エトポシド、カンプトテシン、タキソール、エスペラミシン、ポドフィラトキシン、アングイジン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、モルホリン−ドキソルビシン、ｎ−（５，５−ジアセトキシ−ペンチル）ドキソルビシン、及びこれらの誘導体からなる群から選択される、前記ペプチド−薬物複合体。
［発明２］
Ｒが、
ｉ）１〜約５個のヒドロキシル基、アミン基、カルボキシル基、スルホン酸基、またはホスホリル基で任意に置換された、Ｃ１〜約Ｃ２０の直鎖、分岐鎖または脂環式カルボン酸から誘導されたアシル基、
ｉｉ）１〜約５０個のＬ−またはＤ−アミノ酸残基を有するペプチド、及び
ｉｉｉ）４００〜約４０，０００の分子量を有するポリエチレングリコールからなる群から選択される置換基を含み、
Ｙが、Ａｌａ、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ、Ｌｅｕ、Ａｒｇ、Ｐｒｏ、Ｖａｌ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅからなる群から選択されるアミノ酸残基であり、
Ｚが、Ａｌａ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ及びＰｒｏからなる群から選択されるアミノ酸残基であり、
Ａｓｎが、アスパラギン残基であり、
Ｌｉｎｋｅｒが、ｐ−アミノベンジルカルバモイル部分であり、
Ｄが、抗腫瘍薬部分であり、前記薬物が、マイトマイシン及びドキソルビシンからなる群から選択される、発明１に記載のペプチド−薬物複合体。
［発明３］
Ｒが、
ｉ）１〜約５個のヒドロキシル基、アミン基、カルボキシル基、スルホン酸基、またはホスホリル基で任意に置換された、Ｃ１〜約Ｃ２０の直鎖、分岐鎖または脂環式カルボン酸から誘導されたアシル基、カルバモイル基、スルホニル基、ホスホリル基またはアルキル基、
ｉｉ）１〜約５０個のＬ−またはＤ−アミノ酸残基を有するペプチド、及び
ｉｉｉ）４００〜約４０，０００の分子量を有するポリエチレングリコールからなる群から選択される置換基を含み、
Ｙが、Ａｌａ、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ、Ｌｅｕ、Ａｒｇ、Ｐｒｏ、Ｖａｌ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅからなる群から選択されるアミノ酸残基であり、
Ｚが、Ａｌａ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ及びＰｒｏからなる群から選択されるアミノ酸残基であり、
Ａｓｎが、アスパラギン残基であり、
Ｌｉｎｋｅｒが、ｐ−アミノベンジルカルボネート部分であり、
Ｄが、リンカー部分に結合した抗腫瘍薬部分であり、前記薬物が、カンプトテシンである、発明１に記載のペプチド−薬物複合体。
［発明４］
式ＩＩ：
Ｄ’−Ｌｉｎｋｅｒ−Ａｓｎ−Ｚ−Ｙ−Ｒ’−Ｙ−Ｚ−Ａｓｎ−Ｌｉｎｋｅｒ−Ｄ（式ＩＩ）
のペプチド−薬物複合体であって、
式中、Ｄ及びＤ’が、互いに同一または異なる細胞障害性薬部分であり、マイトマイシン、ドキソルビシン、アミノプテリン、アクチノマイシン、ブレオマイシン、９−アミノ−カンプトテシン、Ｎ８−アセチルスペルミジン、１−（２−クロロエチル）−１，２−ジメタンスルホニルヒドラジド、タリソマイシン、シタラビン、エトポシド、カンプトテシン、タキソール、エスペラミシン、ポドフィラトキシン、アングイジン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、モルホリン−ドキソルビシン、ｎ−（５，５−ジアセトキシ−ペンチル）ドキソルビシン、及びこれらの誘導体からなる群から独立して選択され、
Ｌｉｎｋｅｒが、ｐ−アミノベンジルカルボネート部分またはｐ−アミノベンジルカルボネート部分であり、前記リンカーは、同一であっても異なってもよく、
Ｒ’が、
ｉ）１〜約５個のヒドロキシル基、アミン基、カルボキシル基、スルホン酸基、またはホスホリル基で任意に置換された、Ｃ１〜約Ｃ２０の直鎖、分岐鎖または脂環式カルボン酸から誘導されたアシル基、カルバモイル基、スルホニル基、ホスホリル基またはアルキル基から選択されるビス−官能基、
ｉｉ）１〜約５０個のＬ−またはＤ−アミノ酸残基を有するペプチド、及び
ｉｉｉ）４００〜約４０，０００の分子量を有するポリエチレングリコールからなる群から選択される置換基を含み、
Ｙが、Ａｌａ、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ、Ｌｅｕ、Ａｒｇ、Ｐｒｏ、Ｖａｌ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅからなる群から選択されるアミノ酸残基であり、
Ａｓｎが、アスパラギン残基であり、
Ｚが、Ａｌａ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ及びＰｒｏからなる群から選択されるアミノ酸残基であ
る、前記ペプチド−薬物複合体。
［発明５］
Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−マイトマイシン、
Ｎα−スクシンアミド酸−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−マイトマイシン、
Ｎα−アセトアミド−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−マイトマイシン、
Ｎα−ブチルアミド−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−マイトマイシン、
Ｎα−ヘキサンアミド−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−マイトマイシン、
Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−ドキソルビシン、
Ｎα−スクシンアミド酸−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−ドキソルビシン、
Ｎα−アセトアミド−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−ドキソルビシン、
Ｎα−ブチルアミド−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−ドキソルビシン、
Ｎα−ヘキサンアミド−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−ドキソルビシンンからなる群から選択される、ペプチド−薬物複合体。
［発明６］
Ｎα−［−（２−アミド−２−オキソエトキシ）酢酸］−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−マイトマイシン、
Ｎα−［−（（２−アミド−２−オキソエトキシ）（メチル）アミノ酢酸］−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−マイトマイシン、
Ｎα−［−（２−アミド−２−オキソエトキシ）酢酸］−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−ドキソルビシン、
Ｎα−［−（（２−アミド−２−オキソエトキシ）（メチル）アミノ酢酸］−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−ドキソルビシン、
Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−カンプトテシン、
Ｎα−スクシンアミド酸−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−カンプトテシン、
Ｎα−［−（２−アミド−２−オキソエトキシ）酢酸］−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−カンプトテシン、及び
Ｎα−［−（（２−アミド−２−オキソエトキシ）（メチル）アミノ酢酸］−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−カンプトテシンからなる群から選択される、ペプチド−薬物複合体。
［発明７］
Ｎ１−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−マイトマイシン，Ｎ４−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−ドキソルビシン−スクシンアミド、
Ｎ１−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−マイトマイシン，Ｎ５−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−ドキソルビシン−ビス（Ｏα）−アセトアミド、
Ｎ１−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−マイトマイシン，Ｎ５−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−ドキソルビシン−ビス（Ｎα−メチル）−アセトアミド、
Ｎ１−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−マイトマイシン，Ｎ４−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−カンプトテシン−スクシンアミド、
Ｎ１−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−マイトマイシン，Ｎ５−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−カンプトテシン−ビス（Ｏα）−アセトアミド、及び
Ｎ１−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−マイトマイシン，Ｎ５−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢＣ−カンプトテシン−ビス（Ｎα−メチル）−アセトアミドからなる群から選択される、ペプチド−薬物複合体。
［発明８］
発明１に記載の少なくとも１つのペプチド−薬物複合体と、少なくとも１つの薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物。
［発明９］
１つまたは複数の個々の投与量として包装された、発明８に記載の医薬組成物。
［発明１０］
癌の治療を、前記治療を必要とする哺乳動物で行う方法であって、抗癌有効量の発明１に記載のペプチド−薬物複合体を投与することを含む、前記方法。
［発明１１］
癌の治療を、前記治療を必要とする哺乳動物で行う方法であって、抗癌有効量の発明２に記載のペプチド−薬物複合体を投与することを含む、前記方法。
［発明１２］
癌の治療を、前記治療を必要とする哺乳動物で行う方法であって、抗癌有効量の発明３に記載のペプチド−薬物複合体を投与することを含む、方法。
［発明１３］
癌の治療を、前記治療を必要とする哺乳動物で行う方法であって、抗癌有効量の発明４に記載のペプチド−薬物複合体を投与することを含む、方法。
［発明１４］
癌の治療を、前記治療を必要とする哺乳動物で行う方法であって、抗癌有効量の発明８に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。