(57)【要約】【課題】本発明の課題は、新規な体重増加抑制および／または内臓脂肪蓄積抑制用組成物を提供することにある。【解決手段】ポリメトキシフラボン類とウルソール酸を有効成分として含有する体重増加抑制および／または内臓脂肪蓄積抑制用組成物。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ポリメトキシフラボン類とウルソール酸を有効成分として含有する体重増加抑制および
／または内臓脂肪蓄積抑制用組成物。
【請求項２】
ポリメトキシフラボン類１質量部当たりウルソール酸を１〜５質量部含有する請求項１
に記載の組成物。
【請求項３】
ポリメトキシフラボン類がブラックジンジャー（学名：ケンフェリア・パルビフローラ
Ｋａｅｍｐｆｅｒｉａ ｐａｒｖｉｆｌｏｒａ）抽出物由来である請求項１又は２に記
載の組成物。
【請求項４】
ウルソール酸がセージ（学名：サルビア・オフィシナリス  Ｓａｌｖｉａ  ｏｆｆｉｃ
ｉｎａｌｉｓ）抽出物由来である請求項１〜３のいずれかに記載の組成物。
【請求項５】
ブラックジンジャー（学名：ケンフェリア・パルビフローラ  Ｋａｅｍｐｆｅｒｉａ 
ｐａｒｖｉｆｌｏｒａ）抽出物及びセージ（学名：サルビア・オフィシナリス  Ｓａｌｖ
ｉａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）抽出物を含有する体重増加抑制および／または内臓脂肪
蓄積抑制用組成物。
【請求項６】
ポリメトキシフラボン類とウルソール酸を有効成分とする褐色脂肪組織と白色脂肪組織の両方の組織におけるエネルギー代謝を促進する遺伝子発現活性化用組成物。
【請求項７】
活性化遺伝子がミトコンドリア脱共役タンパク質（ｕｎｃｏｕｐｌｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ  １，ＵＣＰ１）によって熱へと変換される機構を制御する遺伝子系である請求項６に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ポリメトキシフラボン類とウルソール酸を有効成分として含有する体重増加抑制および／または内臓脂肪蓄積抑制用組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
ポリメトキシフラボン類は、下記の化学式（１）の構造を有する天然化合物である。
【０００３】
【化１】
2019189594.tif 000003
【０００４】
ポリメトキシフラボン類には、呈味改善作用（特許文献１）、筋肉疾患の改善作用（特許文献２）、抗肥満作用や血流改善作用（特許文献３）、発ガン抑制作用（特許文献４）などの様々な作用が知られている。
ポリメトキシフラボン類を多く含む植物として柑橘類果実の果皮が知られており、効率よく抽出する方法も知られている（特許文献４）。またショウガ科の植物にも多く含有されており、中でも黒ショウガ（ブラックジンジャー）の熱水抽出物にはポリメトキシフラボン類が多く含まれている（特許文献５）。
ブラックジンジャー抽出物はダイエット用の食品としても注目されている。
【０００５】
一方、ウルソール酸は下記の化学式（２）で特定される化合物である。
【０００６】
【化２】
2019189594.tif 000004
【０００７】
ウルソール酸は、リンゴ、バジル、ビルベリー、クランベリー、エルダーフラワー、ペパーミント、ローズマリー、ラベンダー、オレガノ、タイム、サンザシ、プルーンなど、多くの植物中に存在するテルペンである。
このウルソール酸にも抗肥満作用（特許文献６、７）が見いだされており、注目されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特開２０１３−１２１９７３号公報
【特許文献２】特開２０１６−１９３９０６号公報
【特許文献３】特開２０１７−１１２９５１号公報
【特許文献４】特開２０１０−０３７３１７号公報
【特許文献５】特開２０１３−１９２５１３号公報
【特許文献６】国際公開第２００３／０１１２６７号
【特許文献７】特表２００８−５０８２８４号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明者らは、ダイエット用飲食品の研究を行っている。上記のような背景技術をもとに研究を行い、ポリメトキシフラボン類とウルソール酸を併用すると相乗的に体重増加抑制および／または内臓脂肪蓄積抑制作用を示すことを見いだし、本発明をなした。
【００１０】
すなわち、本発明の課題は、新規な体重増加抑制および／または内臓脂肪蓄積抑制用組成物を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明の主な構成は以下の通りである。
（１）ポリメトキシフラボン類とウルソール酸を有効成分として含有する体重増加抑制および／または内臓脂肪蓄積抑制用組成物。
（２）ポリメトキシフラボン類１質量部当たりウルソール酸を１〜５質量部含有する（１）に記載の組成物。
（３）ポリメトキシフラボン類がブラックジンジャー（学名：ケンフェリア・パルビフローラ  Ｋａｅｍｐｆｅｒｉａ ｐａｒｖｉｆｌｏｒａ）抽出物由来である（１）又は（２）に記載の組成物。
（４）ウルソール酸がセージ（学名：サルビア・オフィシナリス  Ｓａｌｖｉａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）抽出物由来である（１）〜（３）のいずれかに記載の組成物。
（５）ブラックジンジャー（学名：ケンフェリア・パルビフローラ  Ｋａｅｍｐｆｅｒｉａ ｐａｒｖｉｆｌｏｒａ）抽出物及びセージ（学名：サルビア・オフィシナリス  Ｓａｌｖｉａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）抽出物を含有する体重増加抑制および／または内臓脂肪蓄積抑制用組成物。
（６）ポリメトキシフラボン類とウルソール酸を有効成分とする褐色脂肪組織と白色脂肪組織の両方の組織におけるエネルギー代謝を促進する遺伝子発現活性化用組成物。
（７）活性化遺伝子がミトコンドリア脱共役タンパク質（ｕｎｃｏｕｐｌｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ  １，ＵＣＰ１）によって熱へと変換される機構を制御する遺伝子系である（６）に記載の組成物。
【発明の効果】
【００１２】
本発明により新たな体重増加抑制および／または内臓脂肪蓄積抑制用組成物が提供される。本発明の組成物は、食事量を制限せず、あるいは過剰な運動を必要とせずにダイエット効果を発揮する。また本発明の組成物は、褐色脂肪組織と白色脂肪組織の両方の組織におけるエネルギー代謝を促進する遺伝子発現を活性化する。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】試験動物の体重変化を示すグラフである。
【図２】試験動物の１匹あたりの総摂餌量を示すグラフである。
【図３】試験動物の白色脂肪組織重量を示すグラフである。
【図４】試験動物の大腿四頭筋重量を示すグラフである。
【図５】試験動物の血液生化学分析結果を示すグラフである。
【図６】試験動物の血液ホルモンの分析結果を示すグラフである。
【図７】試験動物の精巣上体周囲白色脂肪組織のＵＣＰ１、ＰＧＣ１−α、ＰＲＤＭ１６遺伝子の発現量を測定した結果を示すグラフである。
【図８】試験動物の褐色脂肪組織のＵＣＰ１、ＰＧＣ１−α、ＰＲＤＭ１６遺伝子の発現量を測定した結果を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
本発明は、ポリメトキシフラボン類とウルソール酸を有効成分として含有する体重増加抑制および／または内臓脂肪蓄積抑制用組成物に係る発明である。
ポリメトキシフラボン類は、下記の化学式（１）の一般式で表される。
【００１５】
【化３】
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【００１６】
ポリメトキシフラボン類を得る方法は特に限定されないが、植物から抽出したものを用いても良いし、化学的に合成したものを用いても良い。植物から抽出する場合はブラックジンジャー（学名：ケンフェリア・パルビフローラ  Ｋａｅｍｐｆｅｒｉａ  ｐａｒｖｉｆｌｏｒａ）から抽出精製することができる。ブラックジンジャー抽出物から得ることのできるポリメトキシフラボン類としては、５，７−ジメトキシフラボン、５，７，４’−トリメトキシフラボン、３，５，７，３’，４’−ペンタメトキシフラボン、３，５，７，４’−テトラメトキシフラボン、５，７，３’，４’−テトラメトキシフラボンなどが含有されており、これらの化合物を単離して本発明に用いても良いし、混合物として用いても良い。これらの化合物の混合物であるポリメトキシフラボン類として用いることが簡便である。なお、混合物として用いる場合には、前記５，７−ジメトキシフラボン、５，７，４’−トリメトキシフラボン、３，５，７，３’，４’−ペンタメトキシフラボン、３，５，７，４’−テトラメトキシフラボン、５，７，３’，４’−テトラメトキシフラボン含有量の合計をポリメトキシフラボン類の総量とする。なお、ポリメトキシフラボンの含有量を測定する場合は、各ポリメトキシフラボン化合物の標準品を用いて公知のＨＰＬＣ法で定量することができる。
【００１７】
本発明に使用するポリメトキシフラボン類をブラックジンジャーから抽出する場合は特許文献２に開示された抽出方法を使用することができる。具体的にはブラックジンジャー抽出物の抽出原料としてブラックジンジャー（黒ショウガ）は根茎を用いる。
スライスした乾燥根茎を使用する場合には、抽出効率を高めるために、あらかじめ根茎を粉砕機等で４０メッシュ程度に粉砕しておくことが好ましい。
【００１８】
抽出に使用する溶媒や温度条件等については、特に限定されるものではなく、任意に選択、設定することができる。抽出溶媒としては、水、酸、塩基等といった非有機溶媒や、親水性溶媒、アセトン等といった有機溶媒を選択することができる。親水性溶媒としては、メチルアルコール、エチルアルコール、ｎ−プロピルアルコール、イソプロピルアルコール及びブチルアルコールからなる低級アルコール群から選択される１種類以上が、操作性、抽出効率の点から好ましい。ただし、有機溶媒による抽出よりもむしろ非有機溶媒による抽出が好ましく、なかでも水、温水や熱水、及びわずかに酸を添加した水、エタノールのいずれかが好ましい。
【００１９】
このとき使用する酸としては、特に限定するものではない。ただし、入手のしやすさ及び安全性、後処理の観点から、酢酸の使用が好ましい。
【００２０】
さらに、上記の抽出において、抽出残渣に対して再度抽出工程を１回またはそれ以上繰り返すことが好ましく、この方法によれば抽出効率を向上させることができる。この場合の抽出に用いる溶媒は、同じものであっても異なるものであってもよい。
【００２１】
上記の抽出物は、そのままでも本発明の組成物に使用できるが、濾過、遠心分離及び分留といった処理を行って、不溶性物質及び溶媒を取り除くことが好ましい。このような処理を行うことで、より純度が高くなり、応用範囲も広くなる。
その後、常法に従って抽出液に希釈、濃縮、乾燥、精製等の処理を施し、ポリメトキシフラボン類として本発明組成物に用いることのできるポリメトキシフラボン化合物の混合物を得る。
なお、ポリメトキシフラボン類の精製方法としては、活性炭処理、樹脂吸着処理、イオン交換樹脂、液−液向流分配、分取用液体クロマトグラフィー等の方法が挙げられる。食品等に添加する場合には、未精製のままで使用してもよい。
ポリメトキシフラボン類の含有量は、上記の化合物の標準品を用いて公知のＨＰＬＣ法で定量し、その合計値をポリメトキシフラボン量とする。
【００２２】
本発明に使用するポリメトキシフラボン類としては、市販されているブラックジンジャー抽出物を利用することができる。このような市販品としては、黒ショウガエキス（オリザ油化株式会社）、ブラックジンジャーエキス（丸善製薬株式会社）を例示できる。なおブラックジンジャーエキスは食経験が長く安全な抽出物であることが熟知されている。
本発明に用いるブラックジンジャー抽出物は、ポリメトキシフラボン類を２０〜４０質量％含有するものが好ましい。
【００２３】
ウルソール酸は下記の化学式（２）で特定される化合物である。
【００２４】
【化４】
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【００２５】
ウルソール酸は、リンゴ、バジル、ビルベリー、クランベリー、エルダーフラワー、ペパーミント、ローズマリー、セージ、ラベンダー、オレガノ、タイム、サンザシ、プルーンなど、多くの植物から抽出することができる。本発明に使用するウルソール酸はこれらの植物抽出物又は植物抽出物から抽出した精製物が好ましい。なかでもローズマリーやセージからの抽出物が好ましい。
【００２６】
本発明では通常、シソ科アキギリ属の多年草または常緑低木であるセージ（学名：サルビア・オフィシナリス  Ｓａｌｖｉａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）からウルソール酸を得る。セージからの抽出は、通常の溶媒抽出方法で実施できる。セージと同様にウルソール酸を高含有するローズマリーからの抽出方法が、特開２０１７−１４９６７３号公報に開示されており、これに準じてセージからウルソール酸を抽出することができる。抽出の一例は次のとおりである。
【００２７】
乾燥セージ葉に９５％エタノールを添加してエキスを抽出する。抽出液を減圧濃縮してエタノールを除去した後に濾過して固形物を除去する。冷却より生成する沈殿物をエタノール・アンモニア溶液で溶解させて、濾過により不純物を除去した後に濃縮する。濃縮後に静置して固形物を分離する。この固形物を純水で洗浄して真空乾燥して、ウルソール酸を５０％以上含むセージ抽出物を得る。セージ抽出物中のウルソール酸の含有量は、標準品を用いて公知のＨＰＬＣ法で定量することができる。例えば、ＨＰＬＣのカラムにはＣ１８もしくはＯＤＳカラムを用い、移動相にはメタノールとアセトニトリルを３０：７０で混合した溶液を用い、０．６ｍｌ／ｍｉｎの流速で流す。ウルソール酸の検出は、２１０ｎｍのＵＶもしくはＰＤＡ検出機を用いる。
本発明に用いるセージ抽出物は、ウルソール酸を３０〜７０質量％含有するものが好ましい。
【００２８】
なお、本発明の組成物を調製するためには、ウルソール酸を含むセージ抽出物として市販されているものを購入して使用することもできる。このような市販品として、「セージエキス」サビンサジャパンコーポレーション製を例示できる。この「セージエキス」はウルソール酸５０％を含有する。なおセージエキスは、食経験が長く安全な抽出物であることが熟知されている。
【００２９】
本発明の体重増加抑制および／または内臓脂肪蓄積抑制用組成物にあっては、ポリメトキシフラボン類１質量部に対してウルソール酸を０．１〜１０質量部、好ましくは０．５〜７質量部、特に好ましく１〜５質量部配合する。抗肥満効果を発揮するためには、ヒトにあっては１日当たりウルソール酸として０．０１〜５０ｇ、好ましくは０．０５〜２０ｇ、特に好ましくは０．１〜１０ｇを摂取することで効果を発揮する。
また本発明の体重増加抑制および／または内臓脂肪蓄積抑制用組成物は、食品や飲料に配合しても差し支えなく、食事と同時に摂取することが好ましい。
【００３０】
本発明の組成物は、そのまま、あるいは製剤化し、健康食品やサプリメント錠に配合することもできる。
なお製剤化に当たっては、賦形剤やその他の有効成分を本発明の組成物の目的を阻害しない範囲で使用することができる。具体的には、シクロデキストリン、へミセルロース、リグニン、グアーガム、コンニャクマンナン、イサゴール、アルギン酸、寒天、カラギーナン、キチン、カルボキシルメチルセルロース、ポリデキストロースなどの食物繊維や増粘剤、食用油、カルシウム、鉄、ナトリウム、亜鉛、銅、カリウム、リン、マグネシウム、ヨウ素、マンガン、セレンなどのミネラル；ビタミンＡ、ビタミンＣ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、ビタミンＫ、ナイアシン、葉酸、パントテン酸などの脂溶性又は水溶性のビタミン群、グリセリン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、プロピレングリコール脂肪酸エステル、リン脂質、アラビアガム、キサンタンガム、トラガカントガム、ローカストビーンガムなどの乳化剤や分散剤、増量剤、保存料・酸化防止剤、風味調整剤や香料、塩化ナトリウム、グルタミン酸ナトリウム、グリシン、コハク酸、乳酸ナトリウムなどの呈味料、クエン酸、クエン酸ナトリウム、酢酸、アジピン酸、フマル酸、リンゴ酸などの酸味料、マルチトール、アスパルテームなどの低カロリー甘味料、着色剤などである。
【実施例】
【００３１】
以下に本発明の組成物を用いた試験例を示し、本発明をさらに説明する。
＜１．抗肥満作用確認のための動物試験＞
試験動物はチャールズリバーからＣ５７ＢＬ／６ｊマウス、雄、４週齢を購入し、１週間の馴化期間の後に５週齢から試験に供した。
【００３２】
通常食はオリエンタル酵母工業社のＡＩＮ−９３Ｍを使用し、高脂肪食はリサーチダイエット社のＤ１２４９２を使用した。高脂肪食は小分けにして使用直前まで冷凍庫で保管した。Ｄ１２４９２の組成は下記表１の通りである。
【００３３】
【表１】
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【００３４】
試験用飼料の調製原料
ポリメトキシフラボン類として丸善製薬株式会社が販売する「ブラックジンジャー」を用いた。この製品には、ブラックジンジャー抽出物３３質量％、ポリメトキシフラボン類として５，７−ジメトキシフラボン、５，７，４’−トリメトキシフラボン、３，５，７，３’，４’−ペンタメトキシフラボン、３，５，７，４’−テトラメトキシフラボン、５，７，３’，４’−テトラメトキシフラボンを合計で８．０％以上含有する。
ウルソール酸として、サビンサジャパンコーポレーションが販売するセージエキス１００％を用いた。この製品には、ウルソール酸が５０質量％含有されている。
【００３５】
動物飼育飼料にポリメトキシフラボン類及びウルソール酸を添加混合して下記の表２の試験食を調製した。
【００３６】
【表２】
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【００３７】
試験飼料は１２週間の自由摂取とした。また試験群は１群１０匹とした。
馴化飼育期間は全てのマウスに通常食の給餌を行った。試験食の給餌開始日の前日に、平均体重が均等になるように体重層別無作為抽出法により、以下のように群分けを行った。
試験群１：通常食群（ノーマル群）
試験群２：高脂肪食給餌（コントロール群）
試験群３：高脂肪食給餌＋１．５％ブラックジンジャー＊群 
試験群４：高脂肪食給餌＋０．５％セージ群
試験群５：高脂肪食給餌＋１．５％ブラックジンジャー＊＋０．５％セージ群
（＊：ブラックジンジャー原料は上記したブラックジンジャーエキス３３質量％、賦形剤６７質量％を含有しており、１．５％ブラックジンジャー群はブラックジンジャーエキスを０．５質量％投与することとなる。）
【００３８】
測定項目
試験飼育期間中の外観、姿勢、行動および排泄物の異常などの一般状態を観察して、異常がある場合には記録した。体重は週１回、小動物専用天秤にて測定した。摂餌量は週３回、天秤で給餌量と残餌量を測定して下式で計算して１匹１日あたりの摂餌量を求めた。
１匹１日あたりの摂餌量＝（給餌量−残餌量）÷５（収容匹数）÷日数
【００３９】
試験食の給餌開始から１２週間投与した後、ケージ内の床敷を除いて糞食防止の為の網を敷いた後に１６時間絶食させた。イソフルラン吸入麻酔下で、腹部大静脈から全採血して安楽死させた。腹部大静脈から採取した血液は、室温で放置した後に採血から３０分以内に遠心分離（４℃、５，０００ｒｐｍ、１０ｍｉｎ）して、血清を−８０℃で保管した。精巣周囲脂肪、腎周囲脂肪、腸間膜脂肪、褐色脂肪、肝臓、ヒラメ筋、腓腹筋および大腿四頭筋をサンプリングし、各組織の重量を測定した。各種脂肪組織は、ＲＮＡｌａｔｅｒに入れて−８０℃保管した。肝臓は５ｍｍ片をＲＮＡｌａｔｅｒ浸漬して−８０℃に保管し、残りの肝葉はそのまま−８０℃で冷凍保管した。
【００４０】
血清は、グルコース（クイックオート  ネオ  ＧＬＵ／ＨＫ、シノテスト）、中性脂肪（ＬタイプワコーＴＧ・Ｍ、和光純薬）、総コレステロール（ＬタイプワコーＣＨＯ・Ｍ、和光純薬）、ＨＤＬ−コレステロール（コレステストＮ  ＨＤＬ、積水メディカル）、ＬＤＬ−コレステロール（コレステストＬＤＬ、積水メディカル）、遊離脂肪酸（ＮＥＦＡ−ＨＲ、和光純薬）、インスリン（超高感度マウスインスリン測定キット、森永生科学研究所）、レプチン（マウス／ラットレプチン測定キット、森永生科学研究所）、アディポネクチン（マウス／ラットアディポネクチンＥＬＩＳＡキット、大塚製薬）を測定した。
【００４１】
全ての測定結果は、平均値±標準偏差で示した。ノーマル群とコントロール群の比較は、エクセルの関数ｔ−ｔｅｓｔにて計算した。高脂肪食を給餌したコントロール群と素材添加群の比較は、ＥＸＣＥＬ統計Ｖｅｒ．７．０を使用してＴｕｋｅｙ−ｋｒａｍｅｒの多重比較を行った。有意水準は両側５％未満とした。
【００４２】
結果及び考察
（１）体重変化
試験期間の体重変化を図１、試験期間の試験動物１匹当たりの総摂取量を図２に示した。
高脂肪食を与えたコントロール群の体重は、投与開始１５日目以降通常食群と比較して有意な体重の増加が見られ（ｔ−ｔｅｓｔ、Ｐ＜０．０５）、食餌性肥満モデルとして成立していることを確認した。１．５％ブラックジンジャー群は、投与６４、７１日後はコントロール群と比較して有意な体重の増加抑制が見られたが、体重の増加抑制効果は弱かった。０．５％セージ群ではコントロール群と比較して統計的に有意な体重の増加抑制は見られなかった。本発明の組成物である１．５％ブラックジンジャー＋０．５％セージ群の体重は、投与３６日目以降コントロール群と比較して有意な体重の増加抑制効果が見られ、５０日以降は０．５％セージ群と比較して有意な抑制効果がみられ、６４日後以降は１．５％ブラックジンジャー群と比較しても有意な抑制が見られ、ブラックジンジャーとセージの併用による相乗作用効果が確認できた。すなわち本発明の組成物は、高脂肪食摂取による体重増加を有意に抑制する組成物であることが確認できた。
【００４３】
試験期間中、動物は１群２ケージで各ケージ５匹を飼育した。通常食群と比較して高脂肪食群の摂餌量は少し低かったが、図２に示すように高脂肪食を与えた群間で摂餌量に差はなかった。
したがって本発明の組成物の体重抑制効果は、食事量に影響するものではなくエネルギー代謝に関わる効果であるものと予想された。
【００４４】
（２）組織重量
白色脂肪組織重量を図３に示した。白色脂肪は、精巣周囲脂肪と腎周囲脂肪と腸間膜脂肪組織重量を加算して求めた。１．５％ブラックジンジャー群では、脂肪蓄積抑制効果は見られなかった。０．５％セージ群では腸間膜脂肪は変化がなかったが、精巣周囲脂肪と腎周囲脂肪では、有意な脂肪蓄積抑制効果が認められた。
【００４５】
１．５％ブラックジンジャー＋０．５％セージ群では、コントロール群と比較して有意に脂肪の蓄積を抑制し、更に１．５％ブラックジンジャー群、０．５％セージ群との間でも有意な脂肪蓄積抑制効果が見られたため、ブラックジンジャーとセージの併用による相乗的な脂肪蓄積抑制効果が確認された。すなわち本発明の組成物は、有意に高脂肪食摂取による脂肪蓄積を抑制する効果を有することが確認された。
【００４６】
大腿四頭筋重量を図４に示した。１．５％ブラックジンジャー＋０．５％セージ群では、体重および白色脂肪の増加抑制により、大腿四頭筋の体重当たりの筋肉量が増加した。
【００４７】
脂肪組織、筋肉組織の重量測定結果から本発明の組成物は、エネルギー代謝を促進させ、脂肪蓄積を抑制するものと考えられる。
【００４８】
（３）血液生化学検査
血液生化学検査結果を図５に示す。脂質代謝の指標となる中性脂肪（以下、ＴＧ）、総コレステロール（Ｔ−ＣＨＯ）、ＨＤＬ−コレステロール（以下、ＨＤＬ−Ｃ）、ＬＤＬ−コレステロール（以下、ＬＤＬ−Ｃ）、遊離脂肪酸（以下、ＮＥＦＡ）を測定した結果、ＴＧ、ＨＤＬ−Ｃ、ＬＤＬ−Ｃの変化は見られなかった。ＮＥＦＡは、１．５％ブラックジンジャー＋０．５％セージ群で有意な低下が見られた。血糖値（以下、ＧＬＵ）は、コントロール群と比較して、１．５％ブラックジンジャー＋０．５％セージ群で有意に高い結果が得られた。
【００４９】
血液生化学検査結果を図６に示す。脂肪細胞から分泌され摂食抑制やエネルギー代謝更新に作用するホルモンであるレプチンは、コントロール群と比較して、１．５％ブラックジンジャー群、０．５％セージ群、１．５％ブラックジンジャー＋０．５％セージ群で有意な低下が見られた。１．５％ブラックジンジャー＋０．５％セージ群のレプチン値は、１．５％ブラックジンジャー群、０．５％セージ群との比較でも有意に低下した。すなわち、ポリメトキシフラボン類とウルソール酸の併用によって相乗的に低下したものである。
【００５０】
アディポネクチンは、脂肪酸の燃焼と糖の取り込みを促進しインスリン抵抗性を改善するホルモンである。このアディポネクチンは、コントロール群と比較して、１．５％ブラックジンジャー群、０．５％セージ群、１．５％ブラックジンジャー＋０．５％セージ群で有意な低下が見られた。１．５％ブラックジンジャー＋０．５％セージ群のアディポネクチン値は、１．５％ブラックジンジャー群、０．５％セージ群との比較でも有意に低下した。すなわち、ポリメトキシフラボン類とウルソール酸の併用によって相乗的に低下したものである。
【００５１】
インスリンおよびインスリン抵抗性の指標となるＨＯＭＡは、群間差はなかった。
【００５２】
＜２．脂肪組織におけるＵＣＰ１、ＰＧＣ１−α、ＰＲＤＭ１６の発現量の測定＞
上記の動物試験で採取した精巣上体周囲白色脂肪組織と褐色脂肪組織を用いてＵＣＰ１（ミトコンドリア脱共役タンパク質ｕｎｃｏｕｐｌｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ  １）及びこれに関与するＰＧＣ１−α（ＰＰＡＲγコアクチベータ１α）、ＰＲＤＭ１６（ＰＲＤ１−ＢＦ１−ＲＩＺ１  ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ  ｄｏｍａｉｎ  ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  １６）の遺伝子発現に及ぼす投与組成物の効果を確認した。
【００５３】
（１）方法
１）採取した組織よりＲＮＡをＴＲＩｚｏｌ  Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｅｎｔｒｅ  Ｉｎｃ．）で抽出し、ＲＮｅａｓｙ  Ｍｉｃｒｏ  Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ）で精製した。
２）ＲＮＡの濃度を測定し（ＮＡＮＯＤＲＯＰ  ＯＮＥＣ  ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒ，  Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔ  ＲＴ  Ｒｅａｇｅｎｔ  Ｋｉｔ（タカラバイオ）で逆転写を行った（使用装置ＳｉｍｐｌｉＡｍｐ  Ｔｈｅｒｍａｌ  Ｃｙｃｌｅｒ，  ａｐｐｌｉｅｄ  ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）。
３）得られたｃＤＮＡをＴＢ  Ｇｒｅｅｎ  Ｐｒｅｍｉｘ  Ｅｘ  Ｔａｑ（タカラバイオ）を用いてＱｕａｎｔＳｔｕｄｉｏ  Ｒｅａｌ  Ｔｉｍｅ  ＰＣＲ  ｓｙｓｔｅｍによってリアルタイムＰＣＲを行った（使用装置：ａｐｐｌｉｅｄｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）。
４）遺伝子ｈｙｐｏｘａｎｔｈｉｎｅ  ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｂｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ  １（ＨＰＲＴ１）を内因性コントロールとして、測定した遺伝子の発現レベルを標準化した。
なお、測定に用いたプライマーは、Ｐｅｒｆｅｃｔ  Ｒｅａｌ  ｔｉｍｅ  サポートシステム（タカラバイオ）から購入した。
【００５４】
使用したプライマーの配列は、次のとおりである。
Hprt1     forward    TTGTTGTTGGATATGCCCTTGACTA（配列番号1）
reverse  AGGCAGATGGCCACAGGACTA    （配列番号2）
Ucp1      forward    CACTCAGGATTGGCCTCTACGAC  （配列番号3）
reverse  GCTCTGGGCTTGCATTCTGAC    （配列番号4）
Pgc1-α   forward    CACTCCAGCAGAATGAGTGACA   （配列番号5）
reverse  GGTCCTCACCAACCAGAGCA     （配列番号6）
Prdm16    forward    CCTAGCCCTGAGCGATACTGTGA  （配列番号7）
reverse  ACAGACAATGGCTGGAATGGTG   （配列番号8）
【００５５】
（２）結果
図７に精巣上体周囲白色脂肪組織、図８に褐色脂肪組織におけるＵＣＰ１、ＰＧＣ１−α、ＰＲＤＭ１６の発現量を測定した結果を示した。図７、図８から、本発明の組成物は、精巣上体周囲白色脂肪組織と褐色脂肪組織における脂肪の燃焼に関わる遺伝子の発現を活性化していることがわかる。特に精巣上体周囲白色脂肪組織においては、本発明の組成物が顕著にＵＣＰ１、ＰＧＣ１−α、ＰＲＤＭ１６の発現を活性化していた。この結果から、本発明の組成物は、褐色脂肪組織のエネルギー産生に関わる遺伝子を活性化するだけでなく、脂肪の蓄積組織である白色脂肪組織が褐色脂肪組織のように脂肪を燃焼し、熱を産生させるように作用しているものと考えられた。
すなわち、本発明の組成物は、脂肪組織に直接作用して脂肪を燃焼させている作用を有するということができる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【配列表】
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