(57)【要約】【課題】α４インテグリン阻害作用を有する新規化合物を提供すること。【解決手段】スルホンアミド誘導体又はその医薬的に許容される塩は、特定の置換基Ａ及びＢを用いて、下記一般式（Ｉ）で示される構造を有する。2019031449.tif 000092【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式（Ｉ）で示されるスルホンアミド誘導体、又はその医薬的に許容し得る塩。
2019031449.tif 000089
（式中、
Ａは、下記一般式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＩＶ）又は（Ｖ）で表される基を表し、
2019031449.tif 000090
Ｒ1、及び、Ｒ2は、それぞれ独立して、水素原子、又は、炭素数が１〜６の低級アルキル基を表し、
Ｒ3は、水素原子、炭素数が１〜６の低級アルキル基、又は、炭素数が１〜６の低級アルコキシ基を表し、
Ｂは、ヒドロキシ基、又は、炭素数が１〜６の低級アルコキシ基を表す。）
【請求項２】
Ａが一般式（ＩＩ）で表される、請求項１に記載されたスルホンアミド誘導体、又はその医薬的に許容し得る塩。
【請求項３】
Ａが一般式（ＩＩＩ）で表される、請求項１に記載されたスルホンアミド誘導体、又はその医薬的に許容し得る塩。
【請求項４】
Ａが一般式（ＩＶ）で表される、請求項１に記載されたスルホンアミド誘導体、又はその医薬的に許容し得る塩。
【請求項５】
Ａが一般式（Ｖ）で表される、請求項１に記載されたスルホンアミド誘導体、又はその医薬的に許容し得る塩。
【請求項６】
下記式のいずれかで表される、請求項１に記載のスルホンアミド誘導体、又はその医薬的に許容し得る塩。
2019031449.tif 000091
【請求項７】
Ｂが、ヒドロキシ基、イソプロポキシ基、又はイソブトキシ基である、請求項１〜６のいずれか１項に記載のスルホンアミド誘導体、又はその医薬的に許容し得る塩。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれかに記載のスルホンアミド誘導体、又はその医薬的に許容し得る塩を含有する医薬組成物。
【請求項９】
請求項１〜７のいずれかに記載のスルホンアミド誘導体、又はその医薬的に許容し得る塩を含有するα４β７インテグリン依存性の接着過程が病態に関与する炎症性疾患の治療剤又は予防剤。
【請求項１０】
請求項１〜７のいずれかに記載のスルホンアミド誘導体、又はその医薬的に許容し得る塩を含有するα４β７インテグリン阻害剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、スルホンアミド誘導体またはその医薬的に許容し得る塩並びにこれらの化合物を有効成分として含有する医薬組成物に関する。特に、本発明は、α４インテグリン依存性の接着過程が病態に関与する炎症性疾患の治療薬または予防薬として利用可能性のある化合物に関する。
【背景技術】
【０００２】
α４インテグリン依存性の接着過程が病態に関与する炎症性疾患の治療薬または予防薬として利用可能性のあるα４インテグリン阻害作用を有する、経口投与可能な化合物は既に知られている。そのような炎症性疾患としては、例えば、リウマチ様関節炎、炎症性腸疾患、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症、シェーグレン症候群、喘息、乾せん、アレルギー、糖尿病、心臓血管性疾患、動脈硬化症、再狭窄、腫瘍増殖、腫瘍転移、移植拒絶、及び/又はヒト免疫不全ウイルス感染症（非特許文献１参照）が挙げられる。
例えば、特許文献１には、下記式で示されるフェニルアラニン誘導体またはその医薬的に許容し得る塩が開示されており、その代表的な化合物は以下の化学構造を有するものである。
2019031449.tif 000002
そして、特許文献１には、ＶＣＡＭ阻害活性（ＶＣＡＭ−１／α４β１結合アッセイ）及び（ＶＣＡＭ−１／α４β７結合アッセイ）の結果が示されている。
【０００３】
さらに、特許文献２にも、Ｒ１２（Ｒ１３）Ｎ−Ｘ１−基を末端に有する下記式で示されるフェニルアラニン誘導体またはその医薬的に許容し得る塩が開示されている。
2019031449.tif 000003
この化合物は、特許文献１の実施例１の化合物に比べて、血清存在下でのＶＣＡＭ−１／α４β１インテグリン阻害活性が高いことが示されている。又、特許文献３にも、α４インテグリン阻害作用を有する化合物が開示されている。
【０００４】
特許文献４（ＷＯ２００５／０７７９１５）には、下記式で表されるようなα４インテグリン阻害作用を有するフェニルアラニン誘導体が記載されているが、フェニルアラニンのＮ末端には２，６−ジクロロベンゾイル基やアミノ酸残基などが結合している。
2019031449.tif 000004
【０００５】
特許文献５（特開２００３−３２１３５８）には、下記式で表されるようなα４インテグリン阻害作用を有するフェニルアラニン誘導体が記載されているが、フェニルアラニンのＮ末端には２，６−ジクロロベンゾイル基などが結合している。
2019031449.tif 000005
【０００６】
特許文献６（ＷＯ０１／５６９９４）には、下記式で表されるようなα４インテグリン阻害作用を有するフェニルアラニン誘導体が記載されているが、フェニルアラニンのＮ末端にはプロリンなどが結合している。
2019031449.tif 000006
【０００７】
特許文献７（ＷＯ２００６／１２７５８４）には、下記式で表されるようなα４インテグリン阻害作用を有するフェニルアラニン誘導体が記載されているが、フェニルアラニンのＮ末端にはピリミジン環などが直接結合している。
2019031449.tif 000007
【０００８】
特許文献８（ＷＯ０１／４２２１５）には、下記式で表されるようなα４インテグリン阻害作用を有するフェニルアラニン誘導体が記載されているが、フェニルアラニンのＮ末端には２−クロロ−６−メチルベンゾイル基などが結合している。
2019031449.tif 000008
【０００９】
特許文献９（ＷＯ２０１３／１６１９０４）には下記式で表されるようなα４β７インテグリン阻害作用を有するフェニルアラニン誘導体が記載されている。
2019031449.tif 000009
この文献には、特定のフェニルアラニン誘導体のＶＣＡＭ−１／α４β１インテグリン結合阻害活性評価、及び血清存在下におけるＭＡｄＣＡＭ−１／α４β７インテグリン結合阻害活性評価試験の結果が示されており、α４β１インテグリンに対しては効果が低く、α４β７インテグリンに対しては効果が高かったことが記載されている。
【００１０】
特許文献１０（ＷＯ２０１５／０６４５８０）には下記式で表されるようなα４β７インテグリン阻害作用を有するフェニルアラニン誘導体が記載されている。
2019031449.tif 000010
この文献においても、特定のフェニルアラニン誘導体のＶＣＡＭ−１／α４β１インテグリン結合阻害活性評価、及び血清存在下におけるＭＡｄＣＡＭ−１／α４β７インテグリン結合阻害活性評価試験の結果が示されており、α４β１インテグリンに対しては効果が低く、α４β７インテグリンに対しては効果が高かったことが記載されている。
【００１１】
特許文献１１（ＷＯ０１／４２２１５）には、下記式で表されるようなα４インテグリン阻害作用を有するフェニルアラニン誘導体が記載されているが、フェニルアラニンのＮ末端には２−クロロ−６−メチルベンゾイル基などが結合している。
2019031449.tif 000011
【００１２】
特許文献１２（ＷＯ０３／５３９２６）には、下記式で表されるようなα４インテグリン阻害作用を有するフェニルアラニン誘導体が記載されているが、フェニルアラニンのＮ末端には２，６−ジクロロベンゾイル基などが結合している。
2019031449.tif 000012
【００１３】
特許文献１３（ＷＯ２０１３／１１０６８０）、特許文献１４（ＷＯ２０１３／１１０６８１）には、下記式で表されるようなα４インテグリン阻害作用を有するフェニルアラニン誘導体が記載されているが、フェニルアラニンのＮ末端にはポリエチレングリコール様の構造が結合している。
2019031449.tif 000013
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１４】
【特許文献１】ＷＯ０２／１６３２９号公報
【特許文献２】ＷＯ０５／０６１４６６号公報
【特許文献３】ＷＯ０３／０７０７０９号公報
【特許文献４】ＷＯ２００５／０７７９１５号公報
【特許文献５】特開２００３−３２１３５８号公報
【特許文献６】ＷＯ０１／５６９９４号公報
【特許文献７】ＷＯ２００６／１２７５８４号公報
【特許文献８】ＷＯ０１／４２２１５号公報
【特許文献９】ＷＯ２０１３／１６１９０４号公報
【特許文献１０】ＷＯ２０１５／０６４５８０号公報
【特許文献１１】ＷＯ０１／４２２１５号公報
【特許文献１２】ＷＯ０３／５３９２６号公報
【特許文献１３】ＷＯ２０１３／１１０６８０号公報
【特許文献１４】ＷＯ２０１３／１１０６８１号公報
【非特許文献】
【００１５】
【非特許文献１】Ｎａｔ  Ｍｅｄ．  ２０１４  Ｄｅｃ；２０（１２）：１３９７−４００．
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１６】
本発明は、これまでに知られていない化学構造式を有し、α４インテグリン阻害作用を有する新規化合物を提供することを目的とする。
特に、本発明は、α４β１に対しては効果が低く、α４β７に対しては効果が高いという選択性のあるα４インテグリン阻害作用を有する新規化合物を提供することを目的とする。
本発明は、又、経口投与の可能性があるα４インテグリン阻害作用を有する化合物を提供することを目的とする。
本発明は、又、安全性のあるα４インテグリン阻害活性を有する化合物を提供することを目的とする。
本発明は、又、持続性のあるα４インテグリン阻害活性を有する化合物を提供することを目的とする。
本発明は、又、ヒト全血中でα４インテグリン阻害作用を有する新規化合物を提供することを目的とする。
本発明は、又、上記新規化合物と医薬的に許容し得る担体を含有する医薬組成物を提供することを目的とする。
本発明は、又、上記新規化合物を含有する医薬を提供することを目的とする。
本発明は、又、α４β７インテグリン依存性の接着過程が病態に関与する炎症性疾患の治療剤または予防剤を提供することを目的とする。
本発明は、又、α４インテグリン阻害剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１７】
本願発明者らは、様々な構造を有する化合物について、α４インテグリン阻害活性を検討した。その結果、アシルアミノ基を置換基として有するフェニル基が結合したスルホンアミド基を有する特定の化学構造のスルホンアミド誘導体又はその医薬的に許容し得る塩が、ヒト全血中においてα４β７インテグリン阻害活性を有し、これらの化合物を用いると上記課題を解決できることを見出した。
【００１８】
すなわち、本発明は、以下の事項を含んでいる。
〔１〕下記一般式（Ｉ）で示されるスルホンアミド誘導体、又はその医薬的に許容し得る塩。
2019031449.tif 000014
（式中、
Ａは、下記一般式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＩＶ）又は（Ｖ）で表される基を表し、
2019031449.tif 000015
Ｒ1、及び、Ｒ2は、それぞれ独立して、水素原子、又は、炭素数が１〜６の低級アルキル基を表し、
Ｒ3は、水素原子、炭素数が１〜６の低級アルキル基、又は、炭素数が１〜６の低級アルコキシ基を表し、
Ｂは、ヒドロキシ基、又は、炭素数が１〜６の低級アルコキシ基を表す。）
〔２〕Ａが一般式（ＩＩ）で表される、前記〔１〕に記載されたスルホンアミド誘導体、又はその医薬的に許容し得る塩。
〔３〕Ａが一般式（ＩＩＩ）で表される、前記〔１〕に記載されたスルホンアミド誘導体、又はその医薬的に許容し得る塩。
〔４〕Ａが一般式（ＩＶ）で表される、前記〔１〕に記載されたスルホンアミド誘導体、又はその医薬的に許容し得る塩。
〔５〕Ａが一般式（Ｖ）で表される、前記〔１〕に記載されたスルホンアミド誘導体、又はその医薬的に許容し得る塩。
〔６〕下記式のいずれかで表される、前記〔１〕に記載のスルホンアミド誘導体、又はその医薬的に許容し得る塩。
2019031449.tif 000016
〔７〕Ｂが、ヒドロキシ基、イソプロポキシ基、又はイソブトキシ基である、前記〔１〕〜〔６〕のいずれか１項に記載のスルホンアミド誘導体、又はその医薬的に許容し得る塩。
〔８〕前記〔１〕〜〔７〕のいずれかに記載のスルホンアミド誘導体、又はその医薬的に許容し得る塩を含有する医薬組成物。
〔９〕前記〔１〕〜〔７〕のいずれかに記載のスルホンアミド誘導体、又はその医薬的に許容し得る塩を含有するα４β７インテグリン依存性の接着過程が病態に関与する炎症性疾患の治療剤又は予防剤。
〔１０〕前記〔１〕〜〔７〕のいずれかに記載のスルホンアミド誘導体、又はその医薬的に許容し得る塩を含有するα４β７インテグリン阻害剤。
【発明の効果】
【００１９】
本発明によれば、これまでに知られていない化学構造式を有し、α４インテグリン阻害作用を有する新規化合物が提供される。
特に、本発明によれば、α４β１に対しては効果が低く、α４β７に対しては効果が高いという選択性のあるα４インテグリン阻害作用を有する新規化合物が提供される。
本発明によれば、又、経口投与の可能性があるα４インテグリン阻害作用を有する化合物が提供される。
本発明によれば、又、安全性のあるα４インテグリン阻害活性を有する化合物が提供される。
本発明によれば、又、持続性のあるα４インテグリン阻害活性を有する化合物が提供される。
本発明によれば、又、ヒトの血液中でα４インテグリン阻害作用を有する新規化合物が提供される。
本発明によれば、又、上記新規化合物と医薬的に許容し得る担体を含有する医薬組成物が提供される。
本発明によれば、又、上記新規化合物を含有する医薬が提供される。
本発明によれば、又、α４β７インテグリン依存性の接着過程が病態に関与する炎症性疾患の治療剤または予防剤が提供される。
本発明によれば、又、α４インテグリン阻害剤が提供される。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
本明細書において「低級アルキル基」とは、炭素数１〜６の直鎖もしくは分岐鎖又は環状のアルキル基を示す。例えば、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、ｎ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、ｎ−ヘキシル基、イソプロピル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、イソペンチル基、ｔｅｒｔ−ペンチル基、ネオペンチル基、２−ペンチル基、３−ペンチル基、ｎ−ヘキシル基、２−ヘキシル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基、シクロプロピルメチル基、シクロプロピルエチル基等が挙げられ、好ましくは、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基である。
「低級アルコキシ基」とは、炭素数１〜６の直鎖又は分岐鎖、又は、環状のアルキル基を有するアルコキシ基を示す。例えば、メトキシ基、エトキシ基、ｎ−プロポキシ基、ｎ−ブトキシ基、ｎ−ペンチルオキシ基、ｎ−ヘキシルオキシ基、イソプロポキシ基、イソブトキシ基、ｓｅｃ−ブトキシ基、ｔｅｒｔ−ブトキシ基、シクロプロピルオキシ基、シクロブトキシ基、シクロペンチルオキシ基、及び、シクロヘキシルオキシ基が挙げられ、好ましくは、メトキシ基、エトキシ基、ｎ−プロポキシ基、イソプロポキシ基、イソブトキシ基である。
【００２１】
本発明において、一般式（Ｉ）で表されるスルホンアミド誘導体又はその医薬的に許容される塩としては、式中、次のものが好ましい。
2019031449.tif 000017
一般式（Ｉ）において、Ｒ1、及び、Ｒ2は、それぞれ独立して、水素原子、又は、炭素数が１〜６の低級アルキル基が好ましく、水素原子、メチル基、又は、エチル基がより好ましく、水素原子、又は、メチル基が特に好ましい。
Ｒ3は、水素原子、炭素数が１〜６の低級アルキル基、又は、炭素数が１〜６の低級アルコキシ基が好ましく、水素原子、メチル基、エチル基、又は、メトキシ基が好ましく、水素原子、メチル基、又は、メトキシ基が特に好ましい。
Ｂは、ヒドロキシ基、又は、炭素数が１〜６の低級アルコキシ基が好ましく、ヒドロキシ基、メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、イソプロポキシ基、又は、イソブトキシ基がより好ましく、イソプロポキシ基、又は、イソブトキシ基が特に好ましい。
【００２２】
本発明の一般式（Ｉ）で示される化合物が塩の形態を成し得る場合、その塩は医薬的に許容し得るものであればよく、例えば、式中のカルボキシル基等の酸性基に対しては、アンモニウム塩、ナトリウム、カリウム等のアルカリ金属との塩、カルシウム、マグネシウム等のアルカリ土類金属との塩、アルミニウム塩、亜鉛塩、トリエチルアミン、エタノールアミン、モルホリン、ピペリジン、ジシクロヘキシルアミン等の有機アミンとの塩、アルギニン、リジン等の塩基性アミノ酸との塩が挙げることができる。式中に塩基性基が存在する場合の塩基性基に対しては、塩酸、硫酸、リン酸などの無機酸との塩、酢酸、クエン酸、安息香酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、コハク酸等の有機カルボン酸との塩、メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸等の有機スルホン酸との塩が挙げることができる。塩を形成する方法としては、一般式（Ｉ）の化合物と必要な酸または塩基とを適当な量比で溶媒、分散剤中で混合することや、他の塩の形より陽イオン交換または陰イオン交換を行うことによっても得られる。
【００２３】
本発明は式（Ｉ）で表される化合物の全ての同位体を含む。本発明化合物の同位体は、少なくとも１の原子が、原子番号（陽子数）が同じで，質量数（陽子と中性子の数の和）が異なる原子で置換されたものである。本発明化合物に含まれる同位体の例としては、水素原子、炭素原子、窒素原子、酸素原子、リン原子、硫黄原子、フッ素原子、塩素原子などがあり、それぞれ、2Ｈ，3Ｈ，13Ｃ，14Ｃ，15Ｎ，17Ｏ，18Ｏ，31Ｐ，32Ｐ，35Ｓ，18Ｆ，36Ｃｌ等が含まれる。特に、3Ｈや14Ｃのような、放射能を発して中性子を放つ不安定な放射性同位体は、医薬品あるいは化合物の体内組織分布試験等の際、有用である。安定同位体は、崩壊を起こさず、存在量がほとんど変わらず、放射能もないため、安全に使用することができる。本発明の化合物の同位体は、合成で用いている試薬を、対応する同位体を含む試薬に置き換えることにより、常法に従って変換することができる。
【００２４】
一般式（Ｉ）で示される化合物またはその塩は、そのままあるいは各種の医薬組成物として投与される。このような医薬組成物の剤形としては、例えば錠剤、散剤、丸剤、顆粒剤、カプセル剤、坐剤、溶液剤、糖衣剤、デボー剤、またはシロップ剤にしてよく、普通の製剤助剤を用いて常法に従って製造することができる。
例えば錠剤は、本発明の有効成分であるスルホンアミド誘導体を既知の補助物質、例えば乳糖、炭酸カルシウムまたは燐酸カルシウム等の不活性希釈剤、アラビアゴム、コーンスターチまたはゼラチン等の結合剤、アルギン酸、コーンスターチまたは前ゼラチン化デンプン等の膨化剤、ショ糖、乳糖またはサッカリン等の甘味剤、ペパーミント、アカモノ油またはチェリー等の香味剤、ステアリン酸マグネシウム、タルクまたはカルボキシメチルセルロース等の滑湿剤、脂肪、ワックス、半固形及び液体のポリオール、天然油または硬化油等のソフトゼラチンカプセル及び坐薬用の賦形剤、水、アルコール、グリセロール、ポリオール、スクロース、転化糖、グルコース、植物油等の溶液用賦形剤と混合することによって得られる。
【００２５】
上記目的のために用いる投与量は、目的とする治療効果、投与方法、治療期間、年齢、体重などにより決定されるが、経口もしくは非経口のルートにより、通常成人一日あたりの投与量として経口投与の場合で１μｇ〜５ｇ、非経口投与の場合で０．０１μｇ〜１ｇを用いるのがよい。
【００２６】
本発明の一般式（Ｉ）で示される化合物は、例えば、一般式（Ｍ−Ｉ）で示される末端にカルボキシル基を有する中間体と、一般式（Ｍ−ＩＩ）で示される末端にアミノ基を有する中間体とをアミド化反応に付して製造することができる。
アミド化反応は公知であり、例えば、（１）縮合剤を用いる方法、（２）酸ハロゲン化物を用いる方法等が挙げられる。
2019031449.tif 000018
式中、Ｒはｔｅｒｔ−ブチル基を表す。
【００２７】
（１）縮合剤を用いる方法は、例えば、カルボン酸とアミン、又は、その塩とを例えば、ジクロロメタン、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、１，４−ジオキサン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、又は、アセトニトリル等の本反応に悪影響を及ぼさない溶媒中、例えば、ピリジン、トリエチルアミン、又は、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン等の塩基の存在下、又は、非存在下で、例えば１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）、１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール（ＨＯＡｔ）又はＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＨＯＳｕ）等の縮合補助剤の存在下、又は、非存在下で、例えば、１−エチル−３−（３’−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＷＳＣ）、１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、又は（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウム  ヘキサフルオロリン酸塩（ＨＡＴＵ）等の縮合剤を用いて反応させることにより行われる。
【００２８】
（２）酸ハロゲン化物を用いる方法は、カルボン酸を例えば、ジクロロメタン等の本反応に悪影響を及ぼさない溶媒中、又は、無溶媒で例えば、ＤＭＦ等の触媒の存在下、又は、非存在下で、例えば、塩化チオニル、塩化オキサリル又は臭化チオニル等と反応させて得られる酸ハロゲン化物を例えば、ジクロロメタン、又は、ＴＨＦ等の本反応に悪影響を及ぼさない溶媒中、例えば、ピリジンやトリエチルアミン、又は、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンのような塩基の存在下でアミン、又は、その塩と反応させることにより行われる。
このうち、一般式（Ｍ−Ｉ）で示される末端にカルボキシル基を有する中間体は、例えば、下記の方法により製造することができる。
【００２９】
本発明の化合物である一般式（Ｍ−Ｉ）で表される末端にカルボキシル基を有する中間体のうち代表的な化合物の製造方法を以下に示す。なお、以下の説明において、特に記載のない場合は、式中の記号は、前記式（Ｉ）における定義と同様である。
末端にカルボキシル基を有する中間体（Ｍ−Ｉ）は、例えば、以下に記載する方法（製造方法Ａ）等を用いることで合成することができる。
＜製造方法Ａ＞
2019031449.tif 000019
式中、Ｅは、例えば、低級アルキル基等の一般的なエステルの置換基を表す。
式中、Ｙは、例えば、ＯＨ、Ｃｌ、又は、−Ｃ（Ｏ）Ｙ部分が活性エステルとなるような官能基（例えば、コハク酸イミドオキシ基及びベンゾトリアゾリルオキシ基等のヘテロ環オキシ基）を表す。
スルホニルクロリド誘導体（Ｓ１）とアニリン誘導体（Ｓ２）とを、例えば、ジクロロメタン、アセトニトリル、ＴＨＦ、又は、ＤＭＦ等の本反応に悪影響を及ぼさない溶媒中、例えば、ピリジン、トリエチルアミン、又は、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン等の塩基存在下で反応させることでスルホンアミド誘導体（Ｓ３）を合成できる。得られたスルホンアミド誘導体（Ｓ３）は、例えば、メタノール、エタノール、又は、イソプロピルアルコール等の本反応に悪影響を及ぼさない溶媒中、例えば、パラジウムカーボン、水酸化パラジウム、又は、ラネーニッケル等の金属触媒を用いた接触還元反応、又は、酸性条件下（例えば、塩酸、酢酸、又は、塩化アンモニウム等）、例えば、亜鉛等の金属を作用させることで、アミン誘導体（Ｓ４）を合成することができる。得られたアミン誘導体（Ｓ４）とカルボン酸誘導体、酸クロリド誘導体、又は、活性エステル誘導体（Ｓ５）とを、例えば、ジクロロメタン、ＴＨＦ、１，４−ジオキサン、ＤＭＦ、又は、アセトニトリル等の本反応に悪影響を及ぼさない溶媒中、例えば、ピリジン、トリエチルアミン、又は、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン等の塩基の存在下、又は、非存在下で、例えば、ＨＯＢｔ、ＨＯＡｔ、又は、ＨＯＳｕ等の縮合補助剤の存在下、又は、非存在下で、例えばＷＳＣ、ＤＣＣ又はＨＡＴＵ等の縮合剤の存在下、又は、非存在下で反応させることにより、対応するアミド誘導体（Ｓ６）へと誘導することができる。続いて、アミド誘導体（Ｓ６）を、例えば、ＴＨＦ、１，４−ジオキサン、メタノール、又は、エタノール等の本反応に悪影響を及ぼさない溶媒中、例えば、水酸化ナトリウム、又は水酸化リチウム等の塩基を用いたアルカリ加水分解や、例えば、塩酸、又はトリフルオロ酢酸を用いた酸加水分解等を行うことで、目的とするカルボン酸誘導体（Ｍ−Ｉ）を製造することができる。
【００３０】
本発明の化合物である一般式（Ｍ−ＩＩ）で表される末端にアミノ基を有する中間体（Ｓ１３）は、例えば、以下に示した製造方法（製造方法Ｂ）等を用いることで合成することができる。なお、以下の説明において、特に記載のない場合は、式中の記号は、前記式（Ｉ）における定義と同様である。
＜製造方法Ｂ＞
2019031449.tif 000020
式中Ｐは、例えば、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基、ベンジルオキシカルボニル基等の、例えば、脱保護等の操作により除去ができる一般的なアミンの保護基を表し、式中Ｒａは、例えば、低級アルキル基等の一般的なスズの置換基を表し、式中Ｘ1、Ｘ2およびＸ3は、それぞれ独立して、例えば、塩素、臭素、ヨウ素等のハロゲン原子や例えば、トリフルオロメタンスルホニルオキシ基等の脱離基を表し、式中Ｂ1は、脱保護等の操作により、Ｂに容易に変換できる置換基を表す。
スズ誘導体（Ｓ８）と環状誘導体（Ｓ９）とを、例えば、トルエン等の本反応に悪影響を及ぼさない溶媒中、例えば、テトラキス(トリフェニルホスフィン) パラジウム（０）等の金属触媒を用いてスティルカップリング反応を行うことにより、化合物（Ｓ１０）を合成することができる。得られた化合物（Ｓ１０）とハロゲン化物（Ｓ１１）とを、例えば、ＤＭＦ等の本反応に悪影響を及ぼさない溶媒中、例えば、ヨウ素等によって活性化させた亜鉛粉末存在下、例えば、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）等の金属触媒と例えば、２−ジシクロヘキシル−２’，６’−ジメトキシビフェニル（ＳＰｈｏｓ）等の有機合成で一般的に用いられる配位子を用いて、根岸カップリング反応を行うことにより、アミノ酸誘導体（Ｓ１２）を合成することができる。続いて、アミノ酸誘導体（Ｓ１２）を、例えば、塩酸、又はトリフルオロ酢酸を用いた酸加水分解、又は加水素分解等の脱保護を行うことで、目的とするアミン誘導体（Ｓ１３）を製造することができる。
【００３１】
以下の合成例、実施例及び試験例に基づいて本発明をより詳細に説明する。これらは本発明の好ましい実施態様であり、本発明は合成例、実施例、試験例により限定されるものではなく本発明の範囲を逸脱しない範囲で変化させてもよい。また、本発明において使用する試薬や装置、材料は特に言及されない限り、商業的に入手可能である。
化合物の測定に用いた機器は、以下の通りである。
1Ｈ-ＮＭＲ測定：ＡＶＡＮＣＥ  ＩＩＩ  ４００（Ｂｒｕｋｅｒ製）
ＥＳＩ-ＭＳ測定：ＬＣ-ＭＳ  ＳＱＤ／３１００  （Ｗａｔｅｒｓ製）
【００３２】
［合成例１］
４−［［４−（２，２−ジメチルプロパノイルアミノ）フェニル]スルホニルアミノ]−２,５−ジフルオロ−安息香酸
2019031449.tif 000021
（工程１）
２，５−ジフルオロ−４−［（４−ニトロフェニル）スルホニルアミノ］安息香酸メチルの合成
2019031449.tif 000022
ＷＯ２０１３／１６１９０４記載の方法で合成した４−アミノ−２，５−ジフルオロ安息香酸メチル（３．０ｇ，１６．０ｍｍоｌ）のピリジン溶液（３０ｍＬ）に、４−ニトロベンゼンスルホニルクロリド（８．９ｇ，４０．１ｍｍоｌ）を加え、５０℃で１８時間撹拌した。減圧濃縮し、残渣をアセトニトリルを用いてスラリー洗浄することにより、４−［ビス［（４−ニトロフェニル）スルホニル］アミノ−２，５−ジフルオロ安息香酸メチル（１１．６ｇ）を得た。ＴＨＦ（３０ｍＬ）を加え、１Ｍフッ化テトラブチルアンモニウム／ＴＨＦ溶液（８．４ｍＬ）を加え、室温で３０分撹拌した。減圧濃縮し、酢酸エチルで希釈後、０．５Ｍ塩酸、及び飽和食塩水で順次洗浄した。無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧濃縮した後、残渣をヘキサン／酢酸エチル（７／３）でスラリー洗浄することにより、表題化合物を得た（５．３ｇ，８９％）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.39 - 8.32 (m, 2H), 8.09 - 8.02 (m, 2H), 7.62 (dd, J = 10.5, 6.2 Hz, 1H), 7.46 (dd, J = 11.0, 6.3 Hz, 1H), 7.08 (s, 1H), 3.90 (s, 3H) ; MS (ESI) m/z 373 [M+H]+
【００３３】
（工程２）
４−［（４−アミノフェニル）スルホニルアミノ］−２，５−ジフルオロ−安息香酸メチルの合成
2019031449.tif 000023
（工程１）で得られた化合物（２．４ｇ，６．４ｍｍоｌ）の酢酸エチル懸濁液（１０．５ｍＬ）に、１０％のパラジウムカーボン（０．４ｇ）、及びメタノール（２．０ｍＬ）を加え、水素雰囲気下、室温で１８時間撹拌した。セライトろ過し、減圧濃縮した後、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製することにより、表題化合物を得た（１．９ｇ，８４％）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.69 - 7.61 (m, 2H), 7.58 (dd, J = 10.7, 6.3 Hz, 1H), 7.38 (dd, J = 11.6, 6.5 Hz, 1H), 6.98 (d, J = 12.5 Hz, 1H), 6.63 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 3.89 (s, 3H); MS (ESI) m/z 343 [M+H]+
【００３４】
（工程３）
４−［［４−（２，２−ジメチルプロパノイルアミノ）フェニル］スルホニルアミノ］−２，５−ジフルオロ−安息香酸メチルの合成
2019031449.tif 000024
（工程２）で得られた化合物（１．９ｇ，５．４ｍｍоｌ）のジクロロメタン懸濁液（３０ｍＬ）に、トリエチルアミン（１．６ｍＬ，１２ｍｍоｌ）、ピバル酸クロリド（０．７０ｍＬ，５．７ｍｍоｌ）を順次加え，室温で１時間撹拌した。水を加え、ジクロロメタンで抽出し、飽和塩化アンモニウム水溶液、及び飽和食塩水で順次洗浄した。無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧濃縮した後、アセトニトリルでスラリー洗浄することにより、表題化合物を得た（２．１ｇ，９１％）。
MS (ESI) m/z 427 [M+H]+
【００３５】
（工程４）４−［［４−（２，２−ジメチルプロパノイルアミノ）フェニル］スルホニルアミノ］−２，５−ジフルオロ−安息香酸の合成
2019031449.tif 000025
（工程３）で得られた化合物（２．１ｇ，４．９ｍｍоｌ）を１，４−ジオキサン（３６ｍＬ）に溶解し、１Ｍ水酸化ナトリウム水溶液（１２ｍＬ）を加え、室温で１８時間撹拌した。１Ｍ塩酸で中和し、減圧下濃縮した後、酢酸エチル、及び飽和塩化アンモニウム水溶液を加えた。酢酸エチルで抽出し、飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。乾燥剤をろ別した後、ろ液を減圧濃縮し、残渣を酢酸エチル／ヘキサン（７／３）でスラリー洗浄することにより、表題化合物を得た（１．８ｇ，８８％）。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.86 (s, 1H), 9.59 (s, 1H), 7.91 - 7.83 (m, 2H), 7.81 - 7.71 (m, 2H), 7.56 (dd, J = 10.7, 6.5 Hz, 1H), 7.18 (dd, J = 12.0, 6.3 Hz, 1H), 1.22 (s, 8H) ; MS (ESI) m/z 413 [M+H]+
【００３６】
［合成例２］
５−ブロモ−２−（トリメチルスズ）ピリジン
2019031449.tif 000026
５−ブロモ−２−ヨードピリジン（４ｇ，１４．１ｍｍｏｌ）をトルエン（３０ｍＬ）に溶解し、２．６Ｍ  ｎ−ブチルリチウムヘキサン溶液（５．９６ｍＬ，１５．５ｍｍｏｌ）を−４０℃で滴下した。−４０〜−３０℃で３０分間撹拌した後、トリメチルスズクロリド（２．８１ｇ，１４．１ｍｍｏｌ）のトルエン溶液（５ｍＬ）を−７８℃で滴下した。ゆっくりと０℃まで昇温しながら１時間撹拌した。ヘキサンと炭酸水素ナトリウム水溶液を加えて分液した後、有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。乾燥剤をろ別した後、ろ液を減圧濃縮し、残渣をアミノシリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製することにより、表題化合物を得た（３．４ｇ，７５％）
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.82 (dt, J = 2.4, 1.2 Hz, 1H), 7.71 - 7.61 (m, 1H), 7.34 (dd, J = 8.0, 0.8 Hz, 1H), 0.35 (m, 9H) ; MS (ESI) m/z 321 [M+H]+
【００３７】
［合成例３］
（２Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−ヨード−プロパン酸イソブチル 
2019031449.tif 000027
（工程１）
イソブチル  （ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−セリナートの合成
2019031449.tif 000028
イソブタノール（３００ｍＬ）に塩化アセチル（１０ｍＬ，１４２．８ｍｍｏｌ）を０℃で滴下し、室温で３０分間撹拌した。反応液にＬ−セリン（５．０ｇ，４７．６ｍｍｏｌ）を加えて、８０℃で一晩撹拌した。溶媒を減圧留去して、得られた残渣にＴＨＦ（１２５ｍＬ）を加えた。反応液を０℃に冷却した後、トリエチルアミン（１３．２ｍＬ，９４．４ｍｍｏｌ）と二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１２．５ｇ，５７．１ｍｍｏｌ）を加えて室温で一晩撹拌した。溶媒を減圧留去した後、酢酸エチルを加えて、塩化アンモニウム水溶液、炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。乾燥剤をろ別し、ろ液を減圧濃縮して表題化合物の粗精製物を得た（１４ｇ）。
MS (ESI) m/z 262 [M+H]+
【００３８】
（工程２）
イソブチル  Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｏ−（メチルスルホニル）−Ｌ−セリナートの合成
2019031449.tif 000029
（工程１）で得られた粗精製物（１１．４ｇ）をジクロロメタン（１０４ｍＬ）に溶解し、メタンスルホニルクロリド（５．１２ｍＬ，６６．２ｍｍｏｌ）とトリエチルアミン（９．２３ｍＬ，６６．２ｍｍｏｌ）を０〜５℃で滴下し、室温で２時間撹拌した。１Ｍ塩酸（１００ｍＬ）を加えて、ジクロロメタンで３回抽出した。得られた有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。乾燥剤をろ別し、ろ液を減圧濃縮して残渣にヘキサンを加えて、０℃で激しく撹拌した。析出した固体をろ過した。ろ液を減圧濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製した。ろ過した固体と合わせて、表題化合物を得た（１２．０２ｇ，８０％，３ｓｔｅｐｓ）。
MS (ESI) m/z 340 [M+H]+
【００３９】
（工程３）
（２Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−ヨード−プロパン酸イソブチルの合成
2019031449.tif 000030
（工程２）で得られた化合物（１２．０２ｇ，３５．４ｍｍｏｌ）をアセトン（１００ｍＬ）に溶解し、ヨウ化ナトリウム（１５．９ｇ，１０６ｍｍｏｌ）を加えて一晩撹拌した。反応液をろ過した後、ろ液を減圧濃縮した。残渣に酢酸エチルを加えて、チオ硫酸ナトリウム水溶液、飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。乾燥剤をろ別した後、ろ液を減圧濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製することにより、表題化合物を得た（１１．８３ｇ，９０％）。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.38 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.23 (td, J = 8.7, 4.8 Hz, 1H), 3.92 - 3.80 (m, 2H), 3.50 (dd, J = 10.2, 4.8 Hz, 1H), 3.40 - 3.34 (m, 1H), 1.94 - 1.82 (m, 1H), 1.40 (s, 9H), 0.90 (d, J = 6.7 Hz, 6H); MS (ESI) m/z 372 [M+H]+
【００４０】
［合成例４］
（Ｓ）−２−（２，５−ジフルオロ−４−（（４−ピバルアミドフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド）−３−（４’−メトキシ−１’−メチル−２’−オキソ−１’，２’−ジヒドロ−［２，３’−ビピリジン］−５−イル）プロパン酸（Ａ１）
2019031449.tif 000031
（工程１）
４−メトキシ−１−メチルピリジン−２（１Ｈ）−オンの合成
2019031449.tif 000032
４−メトキシピリジン  Ｎ−オキシド（２．０ｇ，１５．９８ｍｍｏｌ）を無水酢酸（６０ｍＬ）に溶解し、１３５℃で一晩撹拌した。溶媒を減圧留去した後、メタノール（２０ｍＬ）と水（２０ｍＬ）を加えて、室温で一晩撹拌した。メタノールを減圧留去した後、凍結乾燥を行った。得られた固体をＤＭＦ（４０ｍＬ）に溶解し、炭酸カリウム（４．４１ｇ，３１．９ｍｍｏｌ）とヨウ化メチル（１．５０ｍＬ，２４．１ｍｍｏｌ）を加えて６０℃で一晩撹拌した。さらにヨウ化メチル（０．７５ｍＬ，１．２ｍｍｏｌ）を加えて６０℃で一晩撹拌した。反応液をセライトろ過した後、ろ液を減圧濃縮した。残渣をアミノシリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製することにより、表題化合物を得た（１．５０ｇ，６７％）。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.55 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 5.91 (dd, J = 7.5, 2.8 Hz, 1H), 5.78 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 3.71 (s, 3H), 3.33 (s, 3H); MS (ESI) m/z 140 [M+H]+
【００４１】
（工程２）
３−ヨード−４−メトキシ−１−メチルピリジン−２（１Ｈ）−オンの合成
2019031449.tif 000033
（工程１）で得られた化合物（１．５０ｇ，１０．７７ｍｍｏｌ）とＮＩＳ（２．５０ｇ，１１．１ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（４０ｍＬ）に溶解し、室温で２日間撹拌した。反応液を減圧濃縮した後、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製することにより、表題化合物を得た（１．９５ｇ，６８％）。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.79 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.26 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 3.88 (s, 3H), 3.46 (s, 3H); MS (ESI) m/z 266 [M+H]+
【００４２】
（工程３）
５−ブロモ−４’−メトキシ−１’−メチル−［２，３’−ビピリジン］−２’（１’Ｈ）−オンの合成
2019031449.tif 000034
（工程２）で得られた化合物（１７０ｍｇ，０．６４ｍｍｏｌ）、５−ブロモ−２−（トリメチルスズ）ピリジン（０．２３ｇ，０．７１７ｍｍｏｌ）、ヨウ化銅（１２ｍｇ，０．０６３ｍｍｏｌ）、テトラキストリフェニルホスフィンパラジウム（７４ｍｇ，０．０６４ｍｍｏｌ）をトルエン（１２ｍＬ）に懸濁し、アルゴン雰囲気下、１００℃で一晩撹拌した。反応液をセライトろ過し、ろ液を減圧濃縮した。残渣をアミノシリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製することにより、表題化合物を得た（１１７ｍｇ，６２％）。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.68 (dd, J = 2.5, 0.8 Hz, 1H), 7.99 (dd, J = 8.4, 2.5 Hz, 1H), 7.85 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.27 (dd, J = 8.4, 0.7 Hz, 1H), 6.38 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 3.73 (s, 3H), 3.42 (s, 3H); MS (ESI) m/z 295 [M+H]+
【００４３】
（工程４）
（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−（４’−メトキシ−１’−メチル−２’−オキソ−１’，２’−ジヒドロ−［２，３’−ビピリジン］−５−イル）プロパン酸メチルの合成
2019031449.tif 000035
亜鉛粉末（１４３ｍｇ，２．１９ｍｍｏｌ）を１６０℃で真空乾燥し、ＤＭＦ（２ｍＬ）とヨウ素（３５ｍｇ，０．１４ｍｍｏｌ）を加えた。反応液をアルゴン雰囲気下、室温にて１５分間撹拌した。（２Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−ヨード−プロパン酸イソブチル（２４３ｍｇ，０．６５５ｍｍｏｌ）、及びヨウ素（２３ｍｇ，０．０９１ｍｍｏｌ）を順次加え、アルゴン雰囲気下、室温にて３０分間撹拌した。
別の容器に、（工程３）で得られた化合物（１２９ｍｇ，０．４３７ｍｍｏｌ）を入れ、ＤＭＦ（１．０ｍＬ）に溶解させた。トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（２１ｍｇ，０．０２３ｍｍｏｌ）、ＳＰｈｏｓ（１８ｍｇ，０．０４４ｍｍｏｌ）を順次加え、アルゴン雰囲気下、室温にて１０分間撹拌した。この混合溶液を先に調製した混合溶液に加え、脱気とアルゴン置換操作を行った後、６０℃にて一晩撹拌した。反応液を室温まで冷却し、減圧濃縮した後、残渣をＯＤＳを充填剤とする逆相ＨＰＬＣに付し、ＴＦＡ０．１％（ｖ／ｖ）含有する水とアセトニトリルの混合溶液で溶出し、目的のフラクションを凍結乾燥することにより、表題化合物を得た（１４６ｍｇ，７３％）。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.75 (m, 1H), 8.44 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 8.24 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.16 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.47 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 6.63 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 4.46 - 4.35 (m, 1H), 3.96 (s, 3H), 3.88 (dd, J = 6.5, 1.0 Hz, 2H), 3.54 (s, 3H), 3.29 (dd, J = 14.1, 5.3 Hz, 1H), 3.07 (dd, J = 14.0, 10.5 Hz, 1H), 1.86 (m, 1H), 1.31 (s, 9H), 0.88 (dd, J = 6.7, 0.9 Hz, 6H); MS (ESI) m/z 460 [M+H]+
【００４４】
（工程５）
（Ｓ）−２−アミノ−３−（４’−メトキシ−１’−メチル−２’−オキソ−１’，２’−ジヒドロ−［２，３’−ビピリジン］−５−イル）プロパン酸イソブチルの合成
2019031449.tif 000036
（工程４）で得られた化合物（１４６ｍｇ，０．３１８ｍｍｏｌ）を４Ｍ塩酸１，４−ジオキサン溶液（１．０ｍＬ）に溶解し、室温で４時間撹拌した。溶媒を減圧留去して凍結乾燥することにより、表題化合物の塩酸塩を得た（１０１ｍｇ，８０％）。
MS (ESI) m/z 360 [M+H]+
【００４５】
（工程６）
（Ｓ）−２−（２，５−ジフルオロ−４−（（４−ピバルアミドフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド）−３−（４’−メトキシ−１’−メチル−２’−オキソ−１’，２’−ジヒドロ−［２，３’−ビピリジン］−５−イル）プロパン酸イソブチル(Ｐ１)の合成
2019031449.tif 000037
（工程５）で得られた化合物（１８．５ｍｇ，０．０４６７ｍｍｏｌ）と［合成例１］で得られた化合物（１８．７ｍｇ，０．０４５３ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液（０．５ｍＬ）に、ＨＡＴＵ（２３．１ｍｇ，０．０６０８ｍｍｏｌ）、及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２５μＬ，０．１３７ｍｍｏｌ）を順次加え、室温にて一晩撹拌した。反応液をＯＤＳを充填剤とする逆相ＨＰＬＣに付し、ＴＦＡ０．１％（ｖ／ｖ）含有する水とアセトニトリルの混合溶液で溶出し、目的のフラクションを凍結乾燥することにより、表題化合物を得た（１５．３ｍｇ，４４％）。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.73 (s, 1H), 9.58 (s, 1H), 8.83 (dd, J = 7.8, 1.7 Hz, 1H), 8.74 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.39 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 8.23 - 8.10 (m, 2H), 7.89 - 7.83 (m, 2H), 7.78 - 7.72 (m, 2H), 7.26 (dd, J = 10.2, 6.3 Hz, 1H), 7.18 (dd, J = 11.1, 6.3 Hz, 1H), 6.61 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 4.82 (td, J = 9.3, 5.2 Hz, 1H), 3.92 (s, 3H), 3.90 - 3.86 (m, 2H), 3.53 (s, 3H), 3.40 - 3.37 (m, 1H), 3.20 (dd, J = 14.1, 10.2 Hz, 1H), 1.85 (hept, J = 6.8 Hz, 1H), 1.21 (s, 9H), 0.85 (dd, J = 6.7, 0.8 Hz, 6H); MS (ESI) m/z 754 [M+H]+
【００４６】
（工程７）
（Ｓ）−２−（２，５−ジフルオロ−４−（（４−ピバルアミドフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド）−３−（４’−メトキシ−１’−メチル−２’−オキソ−１’，２’−ジヒドロ−［２，３’−ビピリジン］−５−イル）プロパン酸(Ａ１) の合成
2019031449.tif 000038
（工程６）で得られた化合物（１５．３ｍｇ，０．０２０ｍｍоｌ）を１，４−ジオキサン（０．４１ｍＬ）と水（０．３６９ｍＬ）に溶解し、１Ｍ水酸化ナトリウム水溶液（０．０４１ｍＬ）を加え、室温で５時間撹拌した。１Ｍ塩酸で中和し、ＯＤＳを充填剤とする逆相ＨＰＬＣに付し、ＴＦＡ０．１％（ｖ／ｖ）含有する水とアセトニトリルの混合溶液で溶出し、目的のフラクションを凍結乾燥することにより、表題化合物を得た（９．０ｍｇ，６５％）。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13.11 (s, 1H), 10.71 (s, 1H), 9.58 (s, 1H), 8.76 - 8.65 (m, 2H), 8.37 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 8.23 - 8.08 (m, 2H), 7.90 - 7.81 (m, 2H), 7.78 - 7.70 (m, 2H), 7.28 (dd, J = 10.3, 6.3 Hz, 1H), 7.17 (dd, J = 11.2, 6.3 Hz, 1H), 6.61 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 4.82 - 4.69 (m, 1H), 3.92 (s, 3H), 3.53 (s, 3H), 3.16 (dd, J = 14.0, 10.3 Hz, 1H), 1.21 (s, 9H); MS (ESI) m/z 698 [M+H]+
【００４７】
［合成例５］
（Ｓ）−２−（２，５−ジフルオロ−４−（（４−ピバルアミドフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド）−３−（４’−メトキシ−１’，６’−ジメチル−２’−オキソ−１’，２’−ジヒドロ−［２，３’−ビピリジン］−５−イル）プロパン酸（Ａ２）
2019031449.tif 000039
（工程１）
４−メトキシ−１，６−ジメチルピリジン−２（１Ｈ）−オンの合成
2019031449.tif 000040
２，４−ジヒドロキシ−６−メチルピリジン（１．０１ｇ，８．０７３ｍｍｏｌ）と炭酸カリウム（３．６０ｇ，２６．０４ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（２０ｍＬ）に懸濁し、ヨウ化メチル（１．３ｍＬ，２０．８８ｍｍｏｌ）を加えて室温で３日間撹拌した。さらに炭酸カリウム（１．８０ｇ，１３．０２ｍｍｏｌ）とヨウ化メチル（０．６５ｍＬ，１０．４４ｍｍｏｌ）を加えて６０℃で８時間撹拌した。反応液をろ過した後、ろ液を減圧濃縮した。残渣をアミノシリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製することにより、表題化合物を得た（０．７８ｇ，６３％）。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 5.86 (dq, J = 2.7, 0.9 Hz, 1H), 5.69 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 3.69 (s, 3H), 3.32 (d, J = 0.7 Hz, 3H), 2.28 (t, J = 0.6 Hz, 3H); MS (ESI) m/z 154 [M+H]+
【００４８】
（工程２）
３−ヨード−４−メトキシ−１，６−ジメチルピリジン−２（１Ｈ）−オンの合成
2019031449.tif 000041
（工程１）で得られた化合物（０．７８ｇ，５．０９２ｍｍｏｌ）とＮＩＳ（１．１６ｇ，５．１５６ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（２０ｍＬ）に溶解し、室温で一晩撹拌した。反応液を減圧濃縮した後、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製することにより、表題化合物を得た（０．７４ｇ，５２％）。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 6.25 (d, J = 0.9 Hz, 1H), 3.86 (s, 3H), 3.45 (s, 3H), 2.38 (d, J = 0.8 Hz, 3H); MS (ESI) m/z 280 [M+H]+
【００４９】
（工程３）
５−ブロモ−４’−メトキシ−１’，６’−ジメチル−［２，３’−ビピリジン］−２’（１’Ｈ）−オンの合成
2019031449.tif 000042
（工程２）で得られた化合物（１８５ｍｇ，０．６６３ｍｍｏｌ）、５−ブロモ−２−（トリメチルスズ）ピリジン（３０７ｍｇ，０．９５７ｍｍｏｌ）、ヨウ化銅（１４ｍｇ，０．０７３５ｍｍｏｌ）、テトラキストリフェニルホスフィンパラジウム（８９ｍｇ，０．０７７０ｍｍｏｌ）をトルエン（５．０ｍＬ）に懸濁し、アルゴン雰囲気下、１００℃で一晩撹拌した。溶媒を減圧留去した後、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製することにより、表題化合物を得た（１５２ｍｇ，７４％）。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.66 (dd, J = 2.5, 0.7 Hz, 1H), 7.97 (dd, J = 8.4, 2.5 Hz, 1H), 7.25 (dd, J = 8.4, 0.8 Hz, 1H), 6.34 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 3.71 (s, 3H), 3.41 (s, 3H), 2.43 (d, J = 0.8 Hz, 3H); MS (ESI) m/z 309 [M+H]+
【００５０】
（工程４）
（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−（４’−メトキシ−１’，６’−ジメチル−２’−オキソ−１’，２’−ジヒドロ−［２，３’−ビピリジン］−５−イル）プロパン酸イソブチルの合成
2019031449.tif 000043
亜鉛粉末（１６２ｍｇ，２．４８ｍｍｏｌ）を１６０℃で真空乾燥し、ＤＭＦ（２ｍＬ）とヨウ素（２５ｍｇ，０．０９９ｍｍｏｌ）を加えた。反応液をアルゴン雰囲気下、室温にて１５分間撹拌した。（２Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−ヨード−プロパン酸イソブチル（２６９ｍｇ，０．７２５ｍｍｏｌ）、及びヨウ素（２５ｍｇ，０．０９９ｍｍｏｌ）を順次加え、アルゴン雰囲気下、室温にて３０分間撹拌した。
別の容器に、（工程３）で得られた化合物（１５２ｍｇ，０．４９２ｍｍｏｌ）を入れ、ＤＭＦ（１．０ｍＬ）に溶解させた。トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（２４ｍｇ，０．０２６２ｍｍｏｌ）、ＳＰｈｏｓ（２０ｍｇ，０．０４９ｍｍｏｌ）を順次加え、アルゴン雰囲気下、室温にて１０分間撹拌した。この混合溶液を先に調製した混合溶液に加え、脱気とアルゴン置換操作を行った後、６０℃にて一晩撹拌した。反応液を室温まで冷却し、酢酸エチルと水を加えて分液した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。乾燥剤をろ別した後、ろ液を減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製することにより、表題化合物を得た（１１５ｍｇ，４９％）。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.47 - 8.34 (m, 1H), 7.61 (dd, J = 8.1, 2.4 Hz, 1H), 7.41 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.17 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.31 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 4.21 (td, J = 9.2, 8.1, 4.9 Hz, 1H), 3.92 - 3.81 (m, 2H), 3.69 (s, 3H), 3.40 (s, 3H), 3.03 (dd, J = 14.1, 4.9 Hz, 1H), 2.90 (dd, J = 14.0, 10.5 Hz, 1H), 2.45 - 2.38 (m, 3H), 1.86 (m, 1H), 1.35 (s, 9H), 0.88 (d, J = 6.7 Hz, 6H); MS (ESI) m/z 474 [M+H]+
【００５１】
（工程５）
（Ｓ）−２−アミノ−３−（４’−メトキシ−１’，６’−ジメチル−２’−オキソ−１’，２’−ジヒドロ−［２，３’−ビピリジン］−５−イル）プロパン酸イソブチルの合成
2019031449.tif 000044
（工程４）で得られた化合物（１１５ｍｇ，０．３１８ｍｍｏｌ）を４Ｍ塩酸１，４−ジオキサン溶液（１．０ｍＬ）と１，４−ジオキサン（１．０ｍL）に溶解し、室温で５時間撹拌した。溶媒を減圧留去して凍結乾燥することにより、表題化合物の塩酸塩を得た（１０５ｍｇ）。
MS (ESI) m/z 374 [M+H]+
【００５２】
（工程６）
（Ｓ）−２−（２，５−ジフルオロ−４−（（４−ピバルアミドフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド）−３−（４’−メトキシ−１’，６’−ジメチル−２’−オキソ−１’，２’−ジヒドロ−［２，３’−ビピリジン］−５−イル）プロパン酸
イソブチル（Ｐ２）の合成
2019031449.tif 000045
（工程５）で得られた化合物（２０．２ｍｇ，０．０４９３ｍｍｏｌ）と［合成例１］で得られた化合物（１９．９ｍｇ，０．０４８３ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（１．０ｍＬ）溶液に、ＨＡＴＵ（２７．５ｍｇ，０．０７２３ｍｍｏｌ）、及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（３０μＬ，０．１７２ｍｍｏｌ）を順次加え、室温にて７時間撹拌した。反応液をＯＤＳを充填剤とする逆相ＨＰＬＣに付し、ＴＦＡ０．１％（ｖ／ｖ）含有する水とアセトニトリルの混合溶液で溶出し、目的のフラクションを凍結乾燥することにより、表題化合物を得た（２６．４ｍｇ，７０％）。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.73 (s, 1H), 9.58 (s, 1H), 8.90 - 8.77 (m, 1H), 8.72 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 8.40 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 8.27 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.90 - 7.82 (m, 2H), 7.79 - 7.71 (m, 2H), 7.26 (dd, J = 10.2, 6.3 Hz, 1H), 7.18 (dd, J = 11.2, 6.3 Hz, 1H), 6.64 (s, 1H), 4.88 - 4.76 (m, 1H), 3.95 (s, 3H), 3.91 - 3.84 (m, 2H), 3.53 (s, 3H), 3.42 - 3.37 (m, 1H), 3.20 (dd, J = 14.1, 10.2 Hz, 1H), 2.55 (s, 3H), 1.93 - 1.78 (m, 1H), 1.21 (s, 9H), 0.92 - 0.79 (m, 6H); MS (ESI) m/z 768 [M+H]+
【００５３】
（工程７）
（Ｓ）−２−（２，５−ジフルオロ−４−（（４−ピバルアミドフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド）−３−（４’−メトキシ−１’，６’−ジメチル−２’−オキソ−１’，２’−ジヒドロ−［２，３’−ビピリジン］−５−イル）プロパン酸（Ａ２）の合成
2019031449.tif 000046
（工程６）で得られた化合物（１５．１ｍｇ，０．０１９５ｍｍоｌ）を１，４−ジオキサン（０．６１５ｍＬ）と水（０．５５３ｍＬ）に溶解し、１Ｍ水酸化ナトリウム水溶液（０．０６１５ｍＬ）を加え、室温で３時間撹拌した。１Ｍ塩酸で中和し、ＯＤＳを充填剤とする逆相ＨＰＬＣに付し、ＴＦＡ０．１％（ｖ／ｖ）含有する水とアセトニトリルの混合溶液で溶出し、目的のフラクションを凍結乾燥することにより、表題化合物を得た（１１．３ｍｇ，８１％）。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13.11 (s, 1H), 10.71 (s, 1H), 9.58 (s, 1H), 8.69 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 8.43 - 8.35 (m, 1H), 8.31 - 8.20 (m, 1H), 7.93 - 7.82 (m, 2H), 7.79 - 7.68 (m, 2H), 7.28 (dd, J = 10.3, 6.3 Hz, 1H), 7.17 (dd, J = 11.2, 6.3 Hz, 1H), 6.63 (s, 1H), 4.80 - 4.68 (m, 1H), 3.94 (s, 3H), 3.53 (s, 3H), 3.15 (dd, J = 14.0, 10.2 Hz, 1H), 2.54 (s, 3H), 1.21 (s, 9H); MS (ESI) m/z 712 [M+H]+
【００５４】
［合成例６］
（Ｓ）−２−（２，５−ジフルオロ−４−（（４−ピバルアミドフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド）−３−（４’−メトキシ−１’，５’−ジメチル−２’−オキソ−１’，２’−ジヒドロ−［２，３’−ビピリジン］−５−イル）プロパン酸（Ａ３）
2019031449.tif 000047
（工程１）
４−メトキシ−１，５−ジメチルピリジン−２（１Ｈ）−オンの合成
2019031449.tif 000048
４−メトキシ−３−メチルピリジン  Ｎ−オキシド（１．０３ｇ，７．３９９ｍｍｏｌ）を無水酢酸（３０ｍＬ）に溶解し、１３５℃で一晩撹拌した。溶媒を減圧留去した後、メタノール（１０ｍＬ）と水（１０ｍＬ）を加えて、室温で一晩撹拌した。メタノールを減圧留去した後、凍結乾燥を行った。得られた固体をＤＭＦ（２０ｍＬ）に溶解し、炭酸カリウム（２．５６ｇ，１８．５ｍｍｏｌ）とヨウ化メチル（０．９２ｍＬ，１４．８ｍｍｏｌ）を加えて６０℃で一晩撹拌した。反応液を減圧濃縮し、残渣をアミノシリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製することにより、表題化合物を得た（０．５８ｇ，５１％）。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.41 (t, J = 1.2 Hz, 1H), 5.79 (s, 1H), 3.74 (s, 3H), 3.30 (s, 3H), 1.87 (d, J = 1.1 Hz, 3H); MS (ESI) m/z 154 [M+H]+
【００５５】
（工程２）
３−ヨード−４−メトキシ−１，５−ジメチルピリジン−２（１Ｈ）−オンの合成
2019031449.tif 000049
（工程１）で得られた化合物（０．５８ｇ，３．７９ｍｍｏｌ）とＮＩＳ（０．８５５ｇ，３．８０ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（１５ｍＬ）に溶解し、室温で5日間撹拌した。反応液を減圧濃縮した後、酢酸エチルと１０％チオ硫酸ナトリウム水溶液を加えて分液した。反応液を減圧濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製することにより、表題化合物を得た（０．６５５ｇ，６２％）。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.63 (q, J = 1.0 Hz, 1H), 3.75 (s, 3H), 3.43 (s, 3H), 2.04 (d, J = 1.1 Hz, 3H); MS (ESI) m/z 280 [M+H]+
【００５６】
（工程３）
５−ブロモ−４’−メトキシ−１’，５’−ジメチル−［２，３’−ビピリジン］−２’（１’Ｈ）−オンの合成
2019031449.tif 000050
（工程２）で得られた化合物（１８０ｍｇ，０．６４５ｍｍｏｌ）、５−ブロモ−２−（トリメチルスズ）ピリジン（３２１ｍｇ，１．０ｍｍｏｌ）、ヨウ化銅（１５ｍｇ，０．０７９ｍｍｏｌ）、テトラキストリフェニルホスフィンパラジウム（９４ｍｇ，０．０８１ｍｍｏｌ）をトルエン（５．０ｍＬ）に懸濁し、アルゴン雰囲気下、１００℃で一晩撹拌した。溶媒を減圧留去した後、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製することにより、表題化合物を得た（１０８ｍｇ，５４％）。
MS (ESI) m/z 309 [M+H]+
【００５７】
（工程４）
（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−（４’−メトキシ−１’，５’−ジメチル−２’−オキソ−１’，２’−ジヒドロ−［２，３’−ビピリジン］−５−イル）プロパン酸イソブチルの合成
2019031449.tif 000051
亜鉛粉末（６３ｍｇ，０．９６３ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（２．０ｍＬ）に懸濁させ、ヨウ素（２７ｍｇ，０．１０６ｍｍｏｌ）を加えた後、室温にて１５分間撹拌した。（２Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−ヨード−プロパン酸イソブチル（１５７ｍｇ，０．４２４ｍｍｏｌ）、及びヨウ素（１８ｍｇ，０．０７０９ｍｍｏｌ）を順次加え、室温にて３０分間撹拌した。
別の容器に、（工程３）で得られた化合物（１１９ｍｇ，０．３８５ｍｍｏｌ）を入れ、ＤＭＦ（３．０ｍＬ）に溶解させた。トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（１８ｍｇ，０．０１９７ｍｍｏｌ）、ＳＰｈｏｓ（１６ｍｇ，０．０３９０ｍｍｏｌ）を順次加え、５分間撹拌した。この混合溶液を先に調製した混合溶液に加え、脱気とアルゴン置換操作を行った後、６０℃にて一晩撹拌した。反応液に酢酸エチルと水を加えてセライトろ過した後、ろ液を分液して無水硫酸マグネシウムで乾燥した。乾燥剤をろ別し、ろ液を減圧濃縮した後、残渣をＯＤＳを充填剤とする逆相ＨＰＬＣに付し、ＴＦＡ０．１％（ｖ／ｖ）含有する水とアセトニトリルの混合溶液で溶出し、目的のフラクションを凍結乾燥することにより、表題化合物を得た（７１．２ｍｇ，３９％）。
MS (ESI) m/z 474 [M+H]+
【００５８】
（工程５）
（Ｓ）−２−（２，５−ジフルオロ−４−（（４−ピバルアミドフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド）−３−（４’−メトキシ−１’，５’−ジメチル−２’−オキソ−１’，２’−ジヒドロ−［２，３’−ビピリジン］−５−イル）プロパン酸イソブチル(Ｐ３)の合成
2019031449.tif 000052
（工程４）で得られた化合物（７１ｍｇ，０．１５ｍｍｏｌ）を４Ｍ塩酸１，４−ジオキサン溶液（０．８ｍL）と１，４−ジオキサン（２．０ｍL）に溶解し、一晩撹拌した。溶媒を減圧留去して得られた残渣と［合成例１］で得られた化合物（５５ｍｇ，０．１３０ｍｍｏｌ）のアセトニトリル溶液（１．５ｍＬ）に、ＨＡＴＵ（５９ｍｇ，０．１５６ｍｍｏｌ）、及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（８１μＬ，０．４５５ｍｍｏｌ）を順次加え、室温にて１．５時間撹拌した。反応液をＯＤＳを充填剤とする逆相ＨＰＬＣに付し、ＴＦＡ０．１％（ｖ／ｖ）含有する水とアセトニトリルの混合溶液で溶出し、目的のフラクションを凍結乾燥することにより、表題化合物を得た（６１．２ｍｇ，６１％）。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.72 (s, 1H), 9.58 (s, 1H), 8.81 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 8.72 (s, 1H), 8.29 - 8.15 (m, 1H), 7.91 - 7.78 (m, 4H), 7.75 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 7.24 (dd, J = 10.2, 6.2 Hz, 1H), 7.18 (dd, J = 11.2, 6.3 Hz, 1H), 4.88 - 4.77 (m, 1H), 3.89 (d, J = 6.4 Hz, 2H), 3.47 - 3.09 (m, 8H), 2.04 (s, 3H), 1.91 - 1.81 (m, 1H), 1.21 (s, 9H), 0.87 (d, J = 6.7 Hz, 6H)  ; MS (ESI) m/z 768 [M+H]+
【００５９】
（工程６）
（Ｓ）−２−（２，５−ジフルオロ−４−（（４−ピバルアミドフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド）−３−（４’−メトキシ−１’，５’−ジメチル−２’−オキソ−１’，２’−ジヒドロ−［２，３’−ビピリジン］−５−イル）プロパン酸(Ａ３) の合成
2019031449.tif 000053
（工程５）で得られた化合物（２６．５ｍｇ，０．０３４５ｍｍоｌ）を１，４−ジオキサン（１．０ｍＬ）に溶解し、１Ｍ水酸化リチウム水溶液（０．１７ｍＬ）を加え、室温で７０分間撹拌した。ＴＦＡで中和した後、反応液をＯＤＳを充填剤とする逆相ＨＰＬＣに付し、ＴＦＡ０．１％（ｖ／ｖ）含有する水とアセトニトリルの混合溶液で溶出し、目的のフラクションを凍結乾燥することにより、表題化合物を得た（１５．２ｍｇ，６２％）。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.71 (s, 1H), 9.58 (s, 1H), 8.74 - 8.60 (m, 2H), 8.18 (s, 1H), 7.92 - 7.71 (m, 6H), 7.27 (dd, J = 10.3, 6.3 Hz, 1H), 7.18 (dd, J = 11.2, 6.3 Hz, 1H), 4.80 - 4.70 (m, 1H), 3.61 - 3.07 (m, 8H), 2.03 (s, 3H), 1.22 (s, 9H)  ; MS (ESI) m/z 712 [M+H]+
【００６０】
［合成例７］
（Ｓ）−２−（２，５−ジフルオロ−４−（（４−ピバルアミドフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド）−３−（１’，４’，６’−トリメチル−２’−オキソ−１’，２’−ジヒドロ−［２，３’−ビピリジン］−５−イル）プロパン酸（Ａ４）
2019031449.tif 000054
（工程１）
５−ブロモ−１’，４’−ジメチル−［２，３’−ビピリジン］−２’（１’Ｈ）−オンの合成
2019031449.tif 000055
３−ヨード−１，４−ジメチルピリジン−２（１Ｈ）−オン（１００ｍｇ，０．４０２ｍｍｏｌ）、５−ブロモ−２−（トリメチルスズ）ピリジン（１９５ｍｇ，０．６０２ｍｍｏｌ）、ヨウ化銅（８ｍｇ，０．０４２ｍｍｏｌ）、テトラキストリフェニルホスフィンパラジウム（４６ｍｇ，０．０４０ｍｍｏｌ）をトルエン（５．０ｍＬ）に懸濁し、アルゴン雰囲気下、１００℃で一晩撹拌した。反応液をセライトろ過し、ろ液を減圧濃縮した。残渣を減圧濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製することにより、表題化合物の粗精製物を得た（１４８ｍｇ）。
MS (ESI) m/z 279 [M+H]+
【００６１】
（工程２）
（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−（１’，４’−ジメチル−２’−オキソ−１’，２’−ジヒドロ−［２，３’−ビピリジン］−５−イル）プロパン酸イソブチルの合成
2019031449.tif 000056
亜鉛粉末（９０ｍｇ，１．３８ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１．５ｍＬ）に懸濁させ、ヨウ素（４０ｍｇ，０．１５８ｍｍｏｌ）を加えた後、室温にて１５分間撹拌した。（２Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−ヨード−プロパン酸イソブチル（２４０ｍｇ，０．６４７ｍｍｏｌ）、及びヨウ素（３５ｍｇ，０．１３８ｍｍｏｌ）を順次加え、室温にて３０分間撹拌した。
別の容器に、（工程１）で得られた化合物を入れ、ＤＭＦ（２．０ｍＬ）に溶解させた。トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（２０ｍｇ，０．０２１８ｍｍｏｌ）、ＳＰｈｏｓ（１８ｍｇ，０．０４３８ｍｍｏｌ）を順次加え、１０分間撹拌した。この混合溶液を先に調製した混合溶液に加え、脱気とアルゴン置換操作を行った後、６０℃にて一晩撹拌した。反応液を室温まで冷却し、減圧濃縮した後、残渣をＯＤＳを充填剤とする逆相ＨＰＬＣに付し、ＴＦＡ０．１％（ｖ／ｖ）含有する水とアセトニトリルの混合溶液で溶出し、目的のフラクションを凍結乾燥することにより、表題化合物を得た（６８ｍｇ，３８％，２ｓｔｅｐｓ）。
MS (ESI) m/z 444 [M+H]+
【００６２】
（工程３）
（Ｓ）−２−（２，５−ジフルオロ−４−（（４−ピバルアミドフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド）−３−（１’，４’−ジメチル−２’−オキソ−１’，２’−ジヒドロ−［２，３’−ビピリジン］−５−イル）プロパン酸イソブチル(Ｐ４)の合成
2019031449.tif 000057
（工程２）で得られた化合物（３０ｍｇ，０．０６７６ｍｍｏｌ）を４Ｍ塩酸１，４−ジオキサン溶液（１．０ｍL）とジクロロメタン（１．０ｍL）に溶解し、３時間撹拌した。溶媒を減圧留去して得られた残渣と［合成例１］で得られた化合物（２８ｍｇ，０．０６７６ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液（１．５ｍＬ）に、ＨＡＴＵ（３１ｍｇ，０．０８１５ｍｍｏｌ）、及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２９μＬ，０．１６６ｍｍｏｌ）を順次加え、室温にて一晩時間撹拌した。反応液をＯＤＳを充填剤とする逆相ＨＰＬＣに付し、ＴＦＡ０．１％（ｖ／ｖ）含有する水とアセトニトリルの混合溶液で溶出し、目的のフラクションを凍結乾燥することにより、表題化合物を得た（１５．８ｍｇ，３８％）。
MS (ESI) m/z 738 [M+H]+
【００６３】
（工程４）
（Ｓ）−２−（２，５−ジフルオロ−４−（（４−ピバルアミドフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド）−３−（１’，４’，６’−トリメチル−２’−オキソ−１’，２’−ジヒドロ−［２，３’−ビピリジン］−５−イル）プロパン酸（Ａ４）の合成
2019031449.tif 000058
（工程３）で得られた化合物（１５．８ｍｇ，０．０２５５ｍｍоｌ）をメタノール（２．０ｍＬ）に溶解し、１Ｍ水酸化ナトリウム水溶液（０．０４ｍＬ）を加え、室温で１時間撹拌した。反応液をＯＤＳを充填剤とする逆相ＨＰＬＣに付し、ＴＦＡ０．１％（ｖ／ｖ）含有する水とアセトニトリルの混合溶液で溶出し、目的のフラクションを凍結乾燥することにより、表題化合物を得た（４ｍｇ，２３％）。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.69 (s, 1H), 9.58 (s, 1H), 8.75 - 8.58 (m, 2H), 8.19 - 8.02 (m, 1H), 7.91 - 7.81 (m, 2H), 7.79 - 7.70 (m, 3H), 7.67 - 7.56 (m, 1H), 7.25 (dd, J = 10.2, 6.3 Hz, 1H), 7.16 (dd, J = 11.2, 6.3 Hz, 1H), 6.28 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 4.82 - 4.64 (m, 1H), 3.46 (s, 3H), 3.18 - 3.05 (m, 1H), 1.96 (s, 3H), 1.21 (s, 9H); MS (ESI) m/z 682 [M+H]+
【００６４】
［合成例８］
（Ｓ）−２−（２，５−ジフルオロ−４−（（４−ピバルアミドフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド）−３−（６−（４−メトキシ−１−メチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロピリミジン−５−イル）ピリジン−３−イル）プロパン酸（Ａ５）
2019031449.tif 000059
（工程１）
５−（５−ブロモピリジン−２−イル）−６−メトキシ−３−メチルピリミジン−４（３Ｈ）−オンの合成
2019031449.tif 000060
５−ヨード−６−メトキシ−３−メチルピリミジン−４（３Ｈ）−オン（５９９ｍｇ，２．２５ｍｍｏｌ）、５−ブロモ−２−（トリメチルスズ）ピリジン（１．４５ｇ，４．５２ｍｍｏｌ）、ヨウ化銅（４３ｍｇ，０．２２５ｍｍｏｌ）、テトラキストリフェニルホスフィンパラジウム（２６０ｍｇ，０．２２４ｍｍｏｌ）をトルエン（１０ｍＬ）に懸濁し、アルゴン雰囲気下、１００℃で５時間撹拌した。反応液をセライトろ過し、ろ液を減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製することにより、表題化合物を得た（３５３ｍｇ，５３％）。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.71 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.54 (s, 1H), 8.03 (dd, J = 8.4, 2.5 Hz, 1H), 7.37 (dd, J = 8.4, 0.8 Hz, 1H), 5.76 (s, 0H), 3.81 (s, 3H), 3.43 (s, 3H); MS (ESI) m/z 296 [M+H]+
【００６５】
（工程２）
（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−（６−（４−メトキシ−１−メチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロピリミジン−５−イル）ピリジン−３−イル）プロパン酸イソブチルの合成
2019031449.tif 000061
亜鉛粉末（２３２ｍｇ，３．５５ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（３．０ｍＬ）に懸濁させ、ヨウ素（７５ｍｇ，０．３０ｍｍｏｌ）を加えた後、室温にて１５分間撹拌した。（２Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−ヨード−プロパン酸イソブチル（６５８ｍｇ，１．７７ｍｍｏｌ）、及びヨウ素（７５ｍｇ，０．３０ｍｍｏｌ）を順次加え、室温にて３０分間撹拌した。
別の容器に、（工程１）で得られた化合物（３５０ｍｇ，１．１８ｍｍｏｌ）を入れ、ＤＭＦ（２．０ｍＬ）に溶解させた。トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（２７ｍｇ，０．０２９ｍｍｏｌ）、ＳＰｈｏｓ（４８ｍｇ，０．１１７ｍｍｏｌ）を順次加え、１０分間撹拌した。この混合溶液を先に調製した混合溶液に加え、脱気とアルゴン置換操作を行った後、６０℃にて一晩撹拌した。反応液にジクロロメタンを加えてセライトろ過した。ろ液を水で洗浄した後、減圧濃縮し、残渣をＯＤＳを充填剤とする逆相ＨＰＬＣに付し、ＴＦＡ０．１％（ｖ／ｖ）含有する水とアセトニトリルの混合溶液で溶出し、目的のフラクションを凍結乾燥することにより、表題化合物を得た（３８９ｍｇ，７２％）。
MS (ESI) m/z 461 [M+H]+
【００６６】
（工程３）
（Ｓ）−２−（２，５−ジフルオロ−４−（（４−ピバルアミドフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド）−３−（６−（４−メトキシ−１−メチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロピリミジン−５−イル）ピリジン−３−イル）プロパン酸イソブチル（Ｐ５）の合成
2019031449.tif 000062
（工程２）で得られた化合物（６３．８ｍｇ，０．１３９ｍｍｏｌ）をＴＦＡ（３．０ｍＬ）に溶解し、３０分間撹拌した。溶媒を減圧留去して得られた残渣と［合成例１］で得られた化合物（５７ｍｇ，０．１３８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液（２．０ｍＬ）に、ＨＡＴＵ（７９ｍｇ，０．２０８ｍｍｏｌ）、及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（７０μＬ，０．４０１ｍｍｏｌ）を順次加え、室温にて５時間撹拌した。反応液をＯＤＳを充填剤とする逆相ＨＰＬＣに付し、ＴＦＡ０．１％（ｖ／ｖ）含有する水とアセトニトリルの混合溶液で溶出し、目的のフラクションを凍結乾燥することにより、表題化合物を得た（７０ｍｇ，６７％）。
MS (ESI) m/z 755 [M+H]+
【００６７】
（工程４）
（Ｓ）−２−（２，５−ジフルオロ−４−（（４−ピバルアミドフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド）−３−（６−（４−メトキシ−１−メチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロピリミジン−５−イル）ピリジン−３−イル）プロパン酸（Ａ５）の合成
2019031449.tif 000063
（工程３）で得られた化合物（５６ｍｇ，０．０７４ｍｍоｌ）をメタノール（１．０ｍＬ）に溶解し、１Ｍ水酸化ナトリウム水溶液（０．５ｍＬ）を加え、室温で１時間撹拌した。１Ｍ塩酸で中和し、ＯＤＳを充填剤とする逆相ＨＰＬＣに付し、ＴＦＡ０．１％（ｖ／ｖ）含有する水とアセトニトリルの混合溶液で溶出し、目的のフラクションを凍結乾燥することにより、表題化合物を得た（３９ｍｇ，７６％）。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.72 (s, 1H), 9.58 (s, 1H), 8.83 - 8.63 (m, 3H), 8.36 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 8.12 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.93 - 7.81 (m, 2H), 7.81 - 7.65 (m, 2H), 7.27 (dd, J = 10.2, 6.3 Hz, 1H), 7.17 (dd, J = 11.2, 6.3 Hz, 1H), 4.94 - 4.64 (m, 1H), 3.95 (s, 3H), 3.50 (s, 3H), 3.25 - 3.08 (m, 1H), 1.22 (s, 9H); MS (ESI) m/z 699 [M+H]+
【００６８】
［合成例９］
（Ｓ）−２−（２，５−ジフルオロ−４−（（４−ピバルアミドフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド）−３−（６−（１，２，４−トリメチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロピリミジン−５−イル）ピリジン−３−イル）プロパン酸（Ａ６）
2019031449.tif 000064
（工程１）
５−（５−ブロモピリジン−２−イル）−３，６−ジメチルピリミジン−４（３Ｈ）−オンの合成
2019031449.tif 000065
５−ヨード−３，６−ジメチルピリミジン−４（３Ｈ）−オン（２００ｍｇ，０．８０ｍｍｏｌ）、５−ブロモ−２−（トリメチルスズ）ピリジン（５１３ｍｇ，１．６０ｍｍｏｌ）、ヨウ化銅（３８ｍｇ，０．２０ｍｍｏｌ）、テトラキストリフェニルホスフィンパラジウム（２３１ｍｇ，０．２０ｍｍｏｌ）をトルエン（７．０ｍＬ）に懸濁し、アルゴン雰囲気下、１００℃で一晩撹拌した。溶媒を減圧留去した後、セライトろ過し、ろ液を減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製することにより、表題化合物を得た（２２８ｍｇ，ｑｕａｎｔ）。
MS (ESI) m/z 280 [M+H]+
【００６９】
（工程２）
（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−（６−（１，４−ジメチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロピリミジン−５−イル）ピリジン−３−イル）プロパン酸イソブチルの合成
2019031449.tif 000066
亜鉛粉末（１５７ｍｇ，２．４０ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（２ｍＬ）に懸濁させ、ヨウ素（５１ｍｇ，０．２０ｍｍｏｌ）を加えた後、室温にて１５分間撹拌した。（２Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−ヨード−プロパン酸イソブチル（４４５ｍｇ，１．２０ｍｍｏｌ）、及びヨウ素（５１ｍｇ，０．２０ｍｍｏｌ）を順次加え、室温にて３０分間撹拌した。
別の容器に、（工程１）で得られた化合物（２２８ｍｇ）を入れ、ＤＭＦ（２．０ｍＬ）に溶解させた。トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（１８ｍｇ，０．０２０ｍｍｏｌ）、ＳＰｈｏｓ（３３ｍｇ，０．０８０ｍｍｏｌ）を順次加え、１０分間撹拌した。この混合溶液を先に調製した混合溶液に加え、脱気とアルゴン置換操作を行った後、６０℃にて一晩撹拌した。反応液にジクロロメタンを加えてセライトろ過した。ろ液を水で洗浄した後、減圧濃縮し、残渣をＯＤＳを充填剤とする逆相ＨＰＬＣに付し、ＴＦＡ０．１％（ｖ／ｖ）含有する水とアセトニトリルの混合溶液で溶出し、目的のフラクションを凍結乾燥することにより、表題化合物を得た（２６９ｍｇ，７６％）。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.68 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 8.54 (s, 1H), 8.09 (dd, J = 8.2, 2.2 Hz, 1H), 7.68 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.46 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 4.42 - 4.29 (m, 1H), 3.90 - 3.82 (m, 2H), 3.46 (s, 3H), 3.20 (dd, J = 14.0, 5.2 Hz, 1H), 3.02 (dd, J = 14.0, 10.3 Hz, 1H), 2.13 (s, 3H), 1.94 - 1.77 (m, 1H), 1.33 (s, 9H), 0.88 (d, J = 6.7 Hz, 6H); MS (ESI) m/z 445 [M+H]+
【００７０】
（工程３）
（Ｓ）−２−（２，５−ジフルオロ−４−（（４−ピバルアミドフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド）−３−（６−（１，４−ジメチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロピリミジン−５−イル）ピリジン−３−イル）プロパン酸イソブチル（Ｐ６）の合成
2019031449.tif 000067
（工程２）で得られた化合物（２５ｍｇ，０．０５６ｍｍｏｌ）をＴＦＡ（３．０ｍＬ）に溶解し、３０分間撹拌した。溶媒を減圧留去して得られた残渣と［合成例１］で得られた化合物（２３ｍｇ，０．０５６ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液（２．０ｍＬ）に、ＨＡＴＵ（３２ｍｇ，０．０８４ｍｍｏｌ）、及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（３０μＬ，０．１７２ｍｍｏｌ）を順次加え、室温にて一晩時間撹拌した。反応液をＯＤＳを充填剤とする逆相ＨＰＬＣに付し、ＴＦＡ０．１％（ｖ／ｖ）含有する水とアセトニトリルの混合溶液で溶出し、目的のフラクションを凍結乾燥することにより、表題化合物を得た（１４．８ｍｇ，３６％）。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.65 (s, 1H), 9.51 (s, 1H), 8.87 - 8.64 (m, 2H), 8.51 (s, 1H), 8.17 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.92 - 7.75 (m, 2H), 7.75 - 7.51 (m, 3H), 7.17 (dd, J = 10.2, 6.2 Hz, 1H), 7.11 (dd, J = 11.2, 6.3 Hz, 1H), 4.81 - 4.68 (m, 1H), 3.82 (d, J = 6.5 Hz, 2H), 3.11 (dd, J = 14.0, 10.1 Hz, 1H), 2.05 (s, 3H), 1.86 - 1.71 (m, 1H), 1.15 (s, 9H), 0.79 (d, J = 6.7 Hz, 6H); MS (ESI) m/z 739 [M+H]+
【００７１】
（工程４）
（Ｓ）−２−（２，５−ジフルオロ−４−（（４−ピバルアミドフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド）−３−（６−（１，２，４−トリメチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロピリミジン−５−イル）ピリジン−３−イル）プロパン酸（Ａ６）の合成
2019031449.tif 000068
（工程３）で得られた化合物（２９．６ｍｇ，０．０４０ｍｍоｌ）をメタノール（２．０ｍＬ）に溶解し、１Ｍ水酸化ナトリウム水溶液（０．１ｍＬ）を加え、室温で１時間撹拌した。１Ｍ塩酸で中和し、ＯＤＳを充填剤とする逆相ＨＰＬＣに付し、ＴＦＡ０．１％（ｖ／ｖ）含有する水とアセトニトリルの混合溶液で溶出し、目的のフラクションを凍結乾燥することにより、表題化合物を得た（７．６ｍｇ，２８％）。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.68 (s, 1H), 9.57 (s, 1H), 8.67 - 8.55 (m, 2H), 8.48 (s, 1H), 7.92 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.88 - 7.81 (m, 2H), 7.78 - 7.69 (m, 2H), 7.53 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.24 (dd, J = 10.2, 6.3 Hz, 1H), 7.16 (dd, J = 11.3, 6.3 Hz, 1H), 4.75 - 4.62 (m, 1H), 3.44 (s, 3H), 3.29 (dd, J = 13.6, 4.6 Hz, 1H), 3.07 (dd, J = 14.0, 10.2 Hz, 1H), 2.06 (s, 3H), 1.21 (s, 9H); MS (ESI) m/z 683 [M+H]+
【００７２】
［合成例１０］
（Ｓ）−２−（２，５−ジフルオロ−４−（（４−ピバルアミドフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド）−３−（６−（１，２，４−トリメチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロピリミジン−５−イル）ピリジン−３−イル）プロパン酸（Ａ７）
2019031449.tif 000069
（工程１）
５−（５−ブロモピリジン−２−イル）−２，３，６−トリメチルピリミジン−４（３Ｈ）−オンの合成
2019031449.tif 000070
５−ヨード−２，３，６−トリメチルピリミジン−４（３Ｈ）−オン（２００ｍｇ，０．７５８ｍｍｏｌ）、５−ブロモ−２−（トリメチルスズ）ピリジン（４８６ｍｇ，１．５１ｍｍｏｌ）、ヨウ化銅（１５ｍｇ，０．０７９ｍｍｏｌ）、テトラキストリフェニルホスフィンパラジウム（８８ｍｇ，０．０７６ｍｍｏｌ）をトルエン（７．０ｍＬ）に懸濁し、アルゴン雰囲気下、１００℃で一晩撹拌した。反応液をセライトろ過し、ろ液を減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製することにより、表題化合物の粗精製物を得た。
MS (ESI) m/z 294 [M+H]+
【００７３】
（工程２）
（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−（６−（１，２，４−トリメチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロピリミジン−５−イル）ピリジン−３−イル）プロパン酸イソブチルの合成
2019031449.tif 000071
亜鉛粉末（２０５ｍｇ，３．１４ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（５ｍＬ）に懸濁させ、ヨウ素（６１ｍｇ，０．２４ｍｍｏｌ）を加えた後、室温にて１５分間撹拌した。（２Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−ヨード−プロパン酸イソブチル（５８１ｍｇ，１．５７ｍｍｏｌ）、及びヨウ素（６１ｍｇ，０．２４ｍｍｏｌ）を順次加え、室温にて３０分間撹拌した。
別の容器に、（工程１）で得られた粗精製物を入れ、ＤＭＦ（５．０ｍＬ）に溶解させた。トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（２４ｍｇ，０．０２６ｍｍｏｌ）、ＳＰｈｏｓ（４３ｍｇ，０．１０５ｍｍｏｌ）を順次加え、１０分間撹拌した。この混合溶液を先に調製した混合溶液に加え、脱気とアルゴン置換操作を行った後、６０℃にて一晩撹拌した。反応液を減圧濃縮した後、残渣をＯＤＳを充填剤とする逆相ＨＰＬＣに付し、ＴＦＡ０．１％（ｖ／ｖ）含有する水とアセトニトリルの混合溶液で溶出した。目的のフラクションを減圧濃縮して、酢酸エチルと炭酸水素ナトリウム水溶液を加えて分液した。有機層を減圧濃縮して、表題化合物を得た（２７３ｍｇ，７９％）。
MS (ESI) m/z 459 [M+H]+
【００７４】
（工程３）
（Ｓ）−２−（２，５−ジフルオロ−４−（（４−ピバルアミドフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド）−３−（６−（１，２，４−トリメチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロピリミジン−５−イル）ピリジン−３−イル）プロパン酸イソブチル（Ｐ７）の合成
2019031449.tif 000072
（工程２）で得られた化合物（２７３ｍｇ，０．５９６ｍｍｏｌ）をＴＦＡ（３．０ｍＬ）に溶解し、３０分間撹拌した。溶媒を減圧留去して得られた残渣と［合成例１］で得られた化合物（２４６ｍｇ，０．５９６ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液（７．０ｍＬ）に、ＨＡＴＵ（３３３ｍｇ，０．８７６ｍｍｏｌ）、及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２９７μＬ，１．７０ｍｍｏｌ）を順次加え、室温にて２日間撹拌した。反応液をＯＤＳを充填剤とする逆相ＨＰＬＣに付し、ＴＦＡ０．１％（ｖ／ｖ）含有する水とアセトニトリルの混合溶液で溶出し、目的のフラクションを凍結乾燥することにより、表題化合物を得た（２７６ｍｇ，６２％）。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.71 (s, 1H), 9.58 (s, 1H), 8.81 (dd, J = 7.9, 1.8 Hz, 1H), 8.71 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 8.14 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.96 - 7.80 (m, 2H), 7.80 - 7.62 (m, 3H), 7.23 (dd, J = 10.2, 6.3 Hz, 1H), 7.17 (dd, J = 11.2, 6.3 Hz, 1H), 4.87 - 4.73 (m, 1H), 3.88 (d, J = 6.5 Hz, 2H), 3.49 (s, 3H), 3.34 (dd, J = 14.1, 5.3 Hz, 1H), 3.16 (dd, J = 14.0, 10.1 Hz, 1H), 2.59 (s, 3H), 2.09 (s, 3H), 1.90 - 1.78 (m, 1H), 1.22 (s, 9H), 0.86 (d, J = 6.7 Hz, 6H); MS (ESI) m/z 753 [M+H]+
【００７５】
（工程４）
（Ｓ）−２−（２，５−ジフルオロ−４−（（４−ピバルアミドフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド）−３−（６−（１，２，４−トリメチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロピリミジン−５−イル）ピリジン−３−イル）プロパン酸（Ａ７）の合成
2019031449.tif 000073
（工程３）で得られた化合物（２４１ｍｇ，０．３１９ｍｍоｌ）をメタノール（３．０ｍＬ）に溶解し、１Ｍ水酸化ナトリウム水溶液（１．５ｍＬ）を加え、室温で３０分間撹拌した。１Ｍ塩酸で中和し、ＯＤＳを充填剤とする逆相ＨＰＬＣに付し、ＴＦＡ０．１％（ｖ／ｖ）含有する水とアセトニトリルの混合溶液で溶出し、目的のフラクションを凍結乾燥することにより、表題化合物を得た（１８６ｍｇ，８４％）。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.69 (s, 1H), 9.58 (s, 1H), 8.86 - 8.54 (m, 2H), 8.09 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.98 - 7.80 (m, 2H), 7.80 - 7.70 (m, 2H), 7.66 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.25 (dd, J = 10.3, 6.3 Hz, 1H), 7.16 (dd, J = 11.2, 6.3 Hz, 1H), 4.78 - 4.66 (m, 1H), 3.49 (s, 3H), 3.34 (dd, J = 14.0, 4.7 Hz, 1H), 3.11 (dd, J = 14.0, 10.2 Hz, 1H), 2.58 (s, 3H), 2.07 (s, 3H), 1.22 (s, 9H); MS (ESI) m/z 697 [M+H]+
【００７６】
［合成例１１］
（Ｓ）−２−（２，５−ジフルオロ−４−（（４−ピバルアミドフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド）−３−（６−（５−メトキシ−２−メチル−３−オキソ−２，３−ジヒドロピリダジン−４−イル）ピリジン−３−イル）プロパン酸（Ａ８）
2019031449.tif 000074
（工程１）
４−ブロモ−５−メトキシ−２−メチルピリダジン−３（２Ｈ）−オンの合成
2019031449.tif 000075
４，５−ジブロモピリダジン−３−オン（１．２２７ｇ，４．８ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（１．０ｇ，７．２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（８ｍＬ）に懸濁し、ヨウ化メチル（０．４５ｍＬ，７．．２ｍｍｏｌ）を加えて一晩撹拌した。反応液に酢酸エチルを加えて、固体をろ別した。ろ液を減圧濃縮した後、２８％ナトリウムメトキシドメタノール溶液（１．１ｍＬ）を加えて１時間撹拌した。溶媒を減圧留去した後、残渣をＯＤＳを充填剤とする逆相ＨＰＬＣに付し、ＴＦＡ０．１％（ｖ／ｖ）含有する水とアセトニトリルの混合溶液で溶出し、目的のフラクションを凍結乾燥することにより、表題化合物を得た（０．６ｇ，５７％）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.69 (s, 1H), 4.07 (s, 3H), 3.83 (s, 3H); MS (ESI) m/z 219 [M+H]+
【００７７】
（工程２）
４−（５−ブロモピリジン−２−イル）−５−メトキシ−２−メチルピリダジン−３（２Ｈ）−オンの合成
2019031449.tif 000076
４−ブロモ−５−メトキシ−２−メチルピリダジン−３（２Ｈ）−オン（１００ｍｇ，０．４５７ｍｍｏｌ）、５−ブロモ−２−（トリメチルスズ）ピリジン（１９２ｍｇ，０．５９８ｍｍｏｌ）、ヨウ化銅（９ｍｇ，０．０４７ｍｍｏｌ）、テトラキストリフェニルホスフィンパラジウム（５３ｍｇ，０．０４６ｍｍｏｌ）をトルエン（６．０ｍＬ）に懸濁し、アルゴン雰囲気下、１００℃で一晩撹拌した。反応液をセライトろ過し、ろ液を減圧濃縮した。残渣シリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製することにより、表題化合物を得た（３４ｍｇ，２５％）。
MS (ESI) m/z 296 [M+H]+
【００７８】
（工程３）
（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−（６−（５−メトキシ−２−メチル−３−オキソ−２，３−ジヒドロピリダジン−４−イル）ピリジン−３−イル）プロパン酸イソブチルの合成
2019031449.tif 000077
亜鉛粉末（２２ｍｇ，０．３３８ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１．０ｍＬ）に懸濁させ、ヨウ素（１０ｍｇ，０．０３９ｍｍｏｌ）を加えた後、アルゴン雰囲気下、室温にて１５分間撹拌した。（２Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−ヨード−プロパン酸イソブチル（５５ｍｇ，０．１４９ｍｍｏｌ）、及びヨウ素（４ｍｇ，０．０１５８ｍｍｏｌ）を順次加え、室温にて３０分間撹拌した。
別の容器に、（工程２）で得られた化合物（４０ｍｇ，０．１３５ｍｍｏｌ）を入れ、ＤＭＦ（１．０ｍＬ）に溶解させた。トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（６ｍｇ，０．００６７５ｍｍｏｌ）、ＳＰｈｏｓ（６ｍｇ，０．０１４６ｍｍｏｌ）を順次加え、１０分間撹拌した。この混合溶液を先に調製した混合溶液に加え、脱気とアルゴン置換操作を行った後、６０℃にて一晩撹拌した。反応液を室温まで冷却し、セライトろ過した。ろ液を減圧濃縮した後、残渣をＯＤＳを充填剤とする逆相ＨＰＬＣに付し、ＴＦＡ０．１％（ｖ／ｖ）含有する水とアセトニトリルの混合溶液で溶出し、目的のフラクションを凍結乾燥することにより、表題化合物を得た（１２．８ｍｇ，２１％）。
MS (ESI) m/z 461[M+H]+
【００７９】
（工程４）
（Ｓ）−２−（２，５−ジフルオロ−４−（（４−ピバルアミドフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド）−３−（６−（５−メトキシ−２−メチル−３−オキソ−２，３−ジヒドロピリダジン−４−イル）ピリジン−３−イル）プロパン酸イソブチル（Ｐ８）の合成
2019031449.tif 000078
（工程３）で得られた化合物（１２．８ｍｇ，０．０２７８ｍｍｏｌ）を４Ｍ塩酸１，４−ジオキサン溶液（０．１４ｍL）と１，４−ジオキサン（０．５ｍL）に溶解し、一晩撹拌した。溶媒を減圧留去して得られた残渣と［合成例１］で得られた化合物（１１ｍｇ，０．０２７８ｍｍｏｌ）のアセトニトリル溶液（１．０ｍＬ）に、ＨＡＴＵ（１３ｍｇ，０．０３３４ｍｍｏｌ）、及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１７μＬ，０．０９７３ｍｍｏｌ）を順次加え、室温にて２時間撹拌した。反応液をＯＤＳを充填剤とする逆相ＨＰＬＣに付し、ＴＦＡ０．１％（ｖ／ｖ）含有する水とアセトニトリルの混合溶液で溶出し、目的のフラクションを凍結乾燥することにより、表題化合物を得た（１２．４ｍｇ，５９％）。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.70 (s, 1H), 9.57 (s, 1H), 8.81 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 8.61 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 8.00 - 7.93 (m, 1H), 7.85 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 7.75 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 7.62 - 7.53 (m, 1H), 7.29 - 7.14 (m, 2H), 4.79 - 4.68 (m, 1H), 3.92 - 3.82 (m, 5H), 3.69 (s, 3H), 3.33 - 3.23 (m, 1H), 3.12 (dd, J = 14.0, 10.0 Hz, 1H), 1.90 - 1.78 (m, 1H), 1.21 (s, 9H), 0.85 (d, J = 6.7 Hz, 6H); MS (ESI) m/z 755 [M+H]+
【００８０】
（工程５）
（Ｓ）−２−（２，５−ジフルオロ−４−（（４−ピバルアミドフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド）−３−（６−（５−メトキシ−２−メチル−３−オキソ−２，３−ジヒドロピリダジン−４−イル）ピリジン−３−イル）プロパン酸（Ａ８）の合成
2019031449.tif 000079
（工程４）で得られた化合物（５．０ｍｇ，０．００６６３ｍｍоｌ）をメタノール（１．０ｍＬ）に溶解し、１Ｍ水酸化ナトリウム水溶液（０．１ｍＬ）を加え、室温で１５分間撹拌した。１Ｍ塩酸で中和し、ＯＤＳを充填剤とする逆相ＨＰＬＣに付し、ＴＦＡ０．１％（ｖ／ｖ）含有する水とアセトニトリルの混合溶液で溶出し、目的のフラクションを凍結乾燥することにより、表題化合物を得た（４．０ｍｇ，８６％）。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.70 (s, 1H), 9.58 (s, 1H), 8.65 (dd, J = 8.1, 2.2 Hz, 1H), 8.58 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 8.28 (s, 1H), 7.92 (s, 1H), 7.88 - 7.80 (m, 2H), 7.78 - 7.71 (m, 2H), 7.54 (s, 1H), 7.26 (dd, J = 10.3, 6.3 Hz, 1H), 7.18 (dd, J = 11.2, 6.3 Hz, 1H), 4.76 - 4.57 (m, 1H), 3.88 (s, 3H), 3.69 (s, 3H), 3.30 - 3.20 (m, 1H), 3.08 (dd, J = 14.0, 10.0 Hz, 1H), 1.22 (s, 9H); MS (ESI) m/z 699 [M+H]+
【００８１】
［合成例１２］
（Ｓ）−２−（２，５−ジフルオロ−４−（（４−ピバルアミドフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド）−３−（６−（１，３，６−トリメチル−２，４−ジオキソ−１，２，３，４−テトラヒドロピリミジン−５−イル）ピリジン−３−イル）プロパン酸（Ａ９）
2019031449.tif 000080
（工程１）
５−（５−ブロモピリジン−２−イル）−１，３，６−トリメチルピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオンの合成
2019031449.tif 000081
５−ヨード−１，３，６−トリメチルピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオン（２００ｍｇ，０．７１４ｍｍｏｌ）、５−ブロモ−２−（トリメチルスズ）ピリジン（３４４ｍｇ，１．０７ｍｍｏｌ）、ヨウ化銅（１４ｍｇ，０．０７２ｍｍｏｌ）、テトラキストリフェニルホスフィンパラジウム（８３ｍｇ，０．０７２ｍｍｏｌ）をトルエン（１０ｍＬ）に懸濁し、アルゴン雰囲気下、１００℃で一晩撹拌した。反応液をセライトろ過し、ろ液を減圧濃縮した。残渣をＯＤＳを充填剤とする逆相ＨＰＬＣに付し、ＴＦＡ０．１％（ｖ／ｖ）含有する水とアセトニトリルの混合溶液で溶出し、目的のフラクションを凍結乾燥することにより、表題化合物を得た（２１７ｍｇ，９８％）。
MS (ESI) m/z 310 [M+H]+
【００８２】
（工程２）
（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−（６−（１，３，６−トリメチル−２，４−ジオキソ−１，２，３，４−テトラヒドロピリミジン−５−イル）ピリジン−３−イル）プロパン酸イソブチルの合成
2019031449.tif 000082
亜鉛粉末（１４０ｍｇ，２．１４ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（３．０ｍＬ）に懸濁させ、ヨウ素（４０ｍｇ，０．１５８ｍｍｏｌ）を加えた後、室温にて１５分間撹拌した。（２Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−ヨード−プロパン酸イソブチル（３７６ｍｇ，１．０１ｍｍｏｌ）、及びヨウ素（４０ｍｇ，０．１５８ｍｍｏｌ）を順次加え、室温にて３０分間撹拌した。
別の容器に、（工程１）で得られた化合物（２６０ｍｇ，０．８３８ｍｍｏｌ）を入れ、ＤＭＦ（３．０ｍＬ）に溶解させた。トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（６２ｍｇ，０．０６８ｍｍｏｌ）、ＳＰｈｏｓ（５５ｍｇ，０．１３４ｍｍｏｌ）を順次加え、１０分間撹拌した。この混合溶液を先に調製した混合溶液に加え、脱気とアルゴン置換操作を行った後、６０℃にて一晩撹拌した。反応液をセライトろ過し、ろ液を減圧濃縮した。残渣をＯＤＳを充填剤とする逆相ＨＰＬＣに付し、ＴＦＡ０．１％（ｖ／ｖ）含有する水とアセトニトリルの混合溶液で溶出し、目的のフラクションを凍結乾燥することにより、表題化合物を得た（１７０ｍｇ，４３％）。
MS (ESI) m/z 475 [M+H]+
【００８３】
（工程３）
（Ｓ）−２−（２，５−ジフルオロ−４−（（４−ピバルアミドフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド）−３−（６−（１，３，６−トリメチル−２，４−ジオキソ−１，２，３，４−テトラヒドロピリミジン−５−イル）ピリジン−３−イル）プロパン酸イソブチル(Ｐ９)の合成
2019031449.tif 000083
（工程２）で得られた化合物（１７０ｍｇ，０．３６ｍｍｏｌ）をＴＦＡ（３．０ｍＬ）とジクロロメタン（２．０ｍＬ）に溶解し、１時間撹拌した。溶媒を減圧留去して得られた残渣と［合成例１］で得られた化合物（１４７ｍｇ，０．３６ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液（３．０ｍＬ）に、ＨＡＴＵ（１６３ｍｇ，０．４２９ｍｍｏｌ）、及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１５４μＬ，０．８８２ｍｍｏｌ）を順次加え、室温にて５時間撹拌した。反応液をＯＤＳを充填剤とする逆相ＨＰＬＣに付し、ＴＦＡ０．１％（ｖ／ｖ）含有する水とアセトニトリルの混合溶液で溶出し、目的のフラクションを凍結乾燥することにより、表題化合物を得た（８２ｍｇ，３０％）。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.70 (s, 1H), 9.58 (s, 1H), 8.84 - 8.74 (m, 1H), 8.64 (s, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.88 - 7.82 (m, 2H), 7.79 - 7.69 (m, 2H), 7.52 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.23 (dd, J = 10.2, 6.3 Hz, 1H), 7.17 (dd, J = 11.1, 6.3 Hz, 1H), 4.77 (dd, J = 15.3, 8.0 Hz, 1H), 3.87 (d, J = 6.4 Hz, 2H), 3.44 (s, 3H), 3.31 (dd, J = 14.1, 5.1 Hz, 1H), 3.23 (s, 3H), 3.17 - 3.07 (m, 1H), 2.13 (s, 3H), 1.92 - 1.77 (m, 1H), 1.21 (s, 9H), 0.86 (d, J = 6.7 Hz, 6H); MS (ESI) m/z 769 [M+H]+
【００８４】
（工程４）
（Ｓ）−２−（２，５−ジフルオロ−４−（（４−ピバルアミドフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド）−３−（６−（１，３，６−トリメチル−２，４−ジオキソ−１，２，３，４−テトラヒドロピリミジン−５−イル）ピリジン−３−イル）プロパン酸（Ａ９）の合成
2019031449.tif 000084
（工程３）で得られた化合物（３７ｍｇ，０．０４８ｍｍоｌ）をメタノール（１．０ｍＬ）に溶解し、１Ｍ水酸化ナトリウム水溶液（０．０６ｍＬ）を加え、室温で３０分間撹拌した。１Ｍ塩酸で中和し、ＯＤＳを充填剤とする逆相ＨＰＬＣに付し、ＴＦＡ０．１％（ｖ／ｖ）含有する水とアセトニトリルの混合溶液で溶出し、目的のフラクションを凍結乾燥することにより、表題化合物を得た（２７ｍｇ，７９％）。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.69 (s, 1H), 9.57 (s, 1H), 8.69 - 8.54 (m, 2H), 8.06 - 7.92 (m, 1H), 7.90 - 7.82 (m, 2H), 7.78 - 7.72 (m, 2H), 7.48 (s, 1H), 7.24 (dd, J = 10.2, 6.3 Hz, 1H), 7.17 (dd, J = 11.2, 6.3 Hz, 1H), 4.76 - 4.65 (m, 1H), 3.43 (s, 3H), 3.36 - 3.27 (m, 1H), 3.23 (s, 3H), 3.13 - 3.02 (m, 1H), 2.11 (s, 3H), 1.21 (s, 9H); MS (ESI) m/z 713 [M+H]+
【００８５】
[合成例１３]
（Ｓ）−２−（２，５−ジフルオロ−４−（（４−ピバルアミドフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド）−３−（４’−メトキシ−１’，６’−ジメチル−２’−オキソ−１’，２’−ジヒドロ−［２，３’−ビピリジン］−５−イル）プロパン酸イソプロピル（Ｐ１０）
2019031449.tif 000085
［合成例５］の（工程６）で得られた化合物（Ｐ２）（１５ｍｇ，０．０１９５ｍｍｏｌ）をイソプロパノール（４．０ｍＬ）に溶解し、アセチルクロリド（０．０２ｍＬ，０．２８２ｍｍｏｌ）を加えて８０℃で一晩撹拌した。溶媒を減圧留去した後、残渣をＯＤＳを充填剤とする逆相ＨＰＬＣに付し、ＴＦＡ０．１％（ｖ／ｖ）含有する水とアセトニトリルの混合溶液で溶出し、目的のフラクションを凍結乾燥することにより、表題化合物を得た（６ｍｇ，４１％）。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.74 (s, 1H), 9.59 (s, 1H), 8.82 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.71 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.39 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 8.24 (s, 1H), 7.91 - 7.83 (m, 2H), 7.79 - 7.71 (m, 2H), 7.28 (dd, J = 10.2, 6.3 Hz, 1H), 7.19 (dd, J = 11.0, 6.3 Hz, 1H), 6.63 (s, 1H), 4.94 (p, J = 6.2 Hz, 1H), 4.74 (t, J = 11.6 Hz, 1H), 3.94 (s, 3H), 3.54 (s, 3H), 3.29 - 3.24 (m, 1H), 3.18 (dd, J = 14.2, 9.8 Hz, 1H), 2.55 (s, 3H), 1.22 (s, 9H), 1.18 (dd, J = 12.5, 6.3 Hz, 6H); MS (ESI) m/z 754 [M+H]+
【００８６】
試験例１
（１）ＭＡｄＣＡＭ−１／α４β７インテグリン結合阻害活性評価試験
α４β７インテグリンを発現していることが知られているヒトＢ細胞系細胞株ＲＰＭＩ−８８６６のＭＡｄＣＡＭ−１への結合を阻害する試験物質の能力を測定した。
９６ウェルのマイクロタイタープレートに、緩衝液Ａ（炭酸緩衝液、ｐＨ９．６）で希釈した組み換えマウスＭＡｄＣＡＭ−１／Ｆｃ（Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ）溶液（０．７５  μｇ／ｍＬ）を５０  μＬ／ウェル加え、４℃で一晩インキュベートした。ＰＢＳで１回洗浄後、ブロックエース（雪印乳業）を１５０  μＬ／ウェル加え、室温で２時間インキュベートした。除去後に、ＰＢＳで１回洗浄を実施した。
結合緩衝液（４０  ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、０．２％  ＢＳＡおよび４  ｍＭ  ＭｎＣｌ2を含むＤＭＥＭ）で希釈した種々の濃度の試験物質及びＲＰＭＩ−８８６６細胞（２ｘ１０6細胞／ｍＬ）を１００  μＬずつＭＡｄＣＡＭ−１／Ｆｃがコーティングされたプレートに添加し（５ｘ１０5細胞／ウェル）、３０℃で１５分〜６０分間インキュベートした。細胞をウェルに結合させた後、ＰＢＳで洗浄することにより、結合していない細胞を除いた。プレートに緩衝液Ｃ（１．５％  Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００を含むＰＢＳ）を５０μＬ／ウェルで加え、結合したＲＰＭＩ−８８６６細胞を溶解した。細胞溶解液３０μＬに、３０μＬのＳｕｂｓｔｒａｔｅ  Ｂｕｆｆｅｒ（Ｐｒｏｍｅｇａ、ＣｙｔｏＴｏｘ  ９６  Ｎｏｎ−Ｒａｄｉｏａｃｔｉｖｅ  Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ  Ａｓｓａｙ）を加え、室温、暗所で３０分反応させた。各々３０μＬのＳｔｏｐ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（Ｐｒｏｍｅｇａ、ＣｙｔｏＴｏｘ  ９６  Ｎｏｎ−Ｒａｄｉｏａｃｔｉｖｅ  Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ  Ａｓｓａｙ）を加え、プレートリーダーを用いて４９０ｎｍの吸光度を測定した。ここで得られた吸光度は、各ウェルの上清に溶出したｌａｃｔａｔｅ  ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ（ＬＤＨ）活性を検出しているものであり、すなわちＭＡｄＣＡＭ−１に結合してプレート上に残ったＲＰＭＩ−８８６６細胞の数に比例する。試験はｄｕｐｌｉｃａｔｅで行い、試験物質を含まないウェルの吸光度を１００％とした時の種々の濃度における細胞の結合率を求め、５０％結合阻害をもたらす濃度ＩＣ50を計算した。得られた結果を、表１にまとめて示す。
【００８７】
（２）ＶＣＡＭ−１／α４β１インテグリン結合阻害活性評価試験
α４β１インテグリンを発現していることが知られているヒトＴ細胞系細胞株ＪｕｒｋａｔのＶＣＡＭ−１への結合を阻害する試験物質の能力を測定した。
９６ウェルのマイクロタイタープレートに、緩衝液Ａ（炭酸緩衝液、ｐＨ９．６）で希釈した組み換えヒトＶＣＡＭ−１／Ｆｃ（Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ）溶液（１μｇ／ｍＬ）を５０μＬ／ウェル加え、４℃で一晩インキュベートした。ＰＢＳで１回洗浄後、ブロックエース（雪印乳業）を１５０μＬ／ウェル加え、室温で２時間インキュベートした。除去後に、ＰＢＳで１回洗浄を実施した。
結合緩衝液（４０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、０．２％ＢＳＡおよび４ｍＭ  ＭｎＣｌ2を含むＤＭＥＭ）で希釈した種々の濃度の試験物質及びＪｕｒｋａｔ細胞（２ｘ１０6細胞／ｍＬ）を、１００μＬずつＶＣＡＭ−１／Ｆｃがコーティングされたプレートに添加し（５ｘ１０5細胞／ウェル）、３０℃で１５分〜６０分間インキュベートした。細胞をウェルに結合させた後、ＰＢＳで洗浄することにより、結合していない細胞を除いた。プレートに緩衝液Ｃ（１．５％  Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００を含むＰＢＳ）を５０μＬ／ウェルで加え、結合したＪｕｒｋａｔ細胞を溶解した。細胞溶解液３０μＬに、３０μＬのＳｕｂｓｔｒａｔｅ  Ｂｕｆｆｅｒ（Ｐｒｏｍｅｇａ、ＣｙｔｏＴｏｘ  ９６  Ｎｏｎ−Ｒａｄｉｏａｃｔｉｖｅ  Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ  Ａｓｓａｙ）を加え、室温、暗所で３０分反応させた。各々３０μＬのＳｔｏｐ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（Ｐｒｏｍｅｇａ、ＣｙｔｏＴｏｘ  ９６  Ｎｏｎ−Ｒａｄｉｏａｃｔｉｖｅ  Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ  Ａｓｓａｙ）を加え、プレートリーダーを用いて４９０ｎｍの吸光度を測定した。ここで得られた吸光度は、各ウェルの上清に溶出したｌａｃｔａｔｅ  ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ（ＬＤＨ）活性を検出しているものであり、すなわちＶＣＡＭ−１に結合してプレート上に残ったＪｕｒｋａｔ細胞の数に比例する。試験はｄｕｐｌｉｃａｔｅで行い、試験物質を含まないウェルの吸光度を１００％とした時の種々の濃度における細胞の結合率を求め、５０％結合阻害をもたらす濃度ＩＣ50を計算した。得られた結果を、表１にまとめて示す。
【００８８】
試験例３
（３）血清存在下におけるＭＡｄＣＡＭ−１／α４β７インテグリン結合阻害活性評価試験（１）
α４β７インテグリンを発現していることが知られているヒトＢ細胞系細胞株ＲＰＭＩ−８８６６のＭＡｄＣＡＭ−１への結合を阻害する試験物質の能力を測定した。
９６ウェルのマイクロタイタープレートに、緩衝液Ａ（炭酸緩衝液、ｐＨ９．６）で希釈した組み換えマウスＭＡｄＣＡＭ−１／Ｆｃ（Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ）溶液（１μｇ／ｍＬ）を５０μＬ／ウェル加え、４℃で一晩インキュベートした。ＰＢＳで１回洗浄後、ブロックエース（雪印乳業）を１５０μＬ／ウェル加え、室温で２時間インキュベートした。除去後に、ＰＢＳで１回洗浄を実施した。
結合緩衝液（４０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、０．２％ＢＳＡおよび４ｍＭ  ＭｎＣｌ2を含むＤＭＥＭ）で希釈した種々の濃度の試験物質及びＲＰＭＩ−８８６６細胞（２ｘ１０6細胞／ｍＬ）を、最終濃度で５０％ヒト血清を含むように、１００μＬずつＭＡｄＣＡＭ−１／Ｆｃがコーティングされたプレートに添加し（５ｘ１０5細胞／ウェル）、３０℃で１５分〜６０分間インキュベートした。細胞をウェルに結合させた後、ＰＢＳで洗浄することにより、結合していない細胞を除いた。プレートに緩衝液Ｃ（１．５％  Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００を含むＰＢＳ）を５０μＬ／ウェルで加え、結合したＲＰＭＩ−８８６６細胞を溶解した。細胞溶解液３０μＬに、３０μＬのＳｕｂｓｔｒａｔｅ  Ｂｕｆｆｅｒ（Ｐｒｏｍｅｇａ、ＣｙｔｏＴｏｘ  ９６  Ｎｏｎ−Ｒａｄｉｏａｃｔｉｖｅ  Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ  Ａｓｓａｙ）を加え、室温、暗所で３０分反応させた。各々３０μＬのＳｔｏｐ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（Ｐｒｏｍｅｇａ、ＣｙｔｏＴｏｘ  ９６  Ｎｏｎ−Ｒａｄｉｏａｃｔｉｖｅ  Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ  Ａｓｓａｙ）を加え、プレートリーダーを用いて４９０ｎｍの吸光度を測定した。ここで得られた吸光度は、各ウェルの上清に溶出したｌａｃｔａｔｅ  ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ（ＬＤＨ）活性を検出しているものであり、すなわちＭＡｄＣＡＭ−１に結合してプレート上に残ったＲＰＭＩ−８８６６細胞の数に比例する。試験はｄｕｐｌｉｃａｔｅで行い、試験物質を含まないウェルの吸光度を１００％とした時の種々の濃度における細胞の結合率を求め、５０％結合阻害をもたらす濃度ＩＣ50を計算した。得られた結果を、表１にまとめて示す。
【００８９】
【表１】
2019031449.tif 000086
【００９０】
試験例（１）と試験例（２）の結果を比較した結果、本発明の化合物は、α４β１に対しては効果が低く、α４β７に対しては効果が高いという選択性のあることが判った。このようにα４β１に対しては効果が低く、α４β７に対しては効果が高いという選択性があると、全身を廻るリンパ球の浸潤を抑制するα４β１に対する作用を少なくし、腸管に特異的に発現するα４β７に対する作用を大きく抑制できるので、適応疾患をより効率的に治療できる可能性があるという利点がある。
【００９１】
試験例４
（４）ヒト全血におけるヒトＭＡｄＣＡＭ−１／α４β７インテグリン結合阻害活性評価試験
試験物質によるヒト全血中におけるＴ細胞α４β７インテグリンとＭＡｄＣＡＭ−１の結合阻害活性を測定した。血液サンプルは健康人ボランティアの血液提供により入手した。
ヒト全血に、４ｍＭ  ＭｎＣｌ２溶液と各種試験物質希釈液を添加し１０分間インキュベートした。１０μｇ／ｍＬの組み換えヒトＭＡｄＣＡＭ−１／Ｆｃ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を添加し、全量５０μＬとして３０分間インキュベートした。Ｌｙｓｅ／Ｆｉｘ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を９５０μＬ添加し、３７℃で１０分間溶血及び固定した。５分間遠心分離後、上清を除き、１０％  非働化ウシ胎仔血清添加ＲＰＭＩ−１６４０培地（以下、培地とする）を６００μＬ添加し、５分間遠心分離後、上清を除き洗浄した。再び培地で洗浄後、２．５μｇ／ｍＬのＭｏｕｓｅ  Ａｎｔｉ−ＭＡｄＣＡＭ−１抗体（ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を添加し、３０分以上インキュベートした。培地で洗浄後、３．４μｇ／ｍＬのＧｏａｔ  Ａｎｔｉ−Ｍｏｕｓｅ  ＩｇＧ  Ｈ＆Ｌ，  ＦＩＴＣ（ａｂｃａｍ）を添加し、３０分以上インキュベートした。培地で洗浄後、０．１５μｇ／ｍＬのＰＥ  Ｍｏｕｓｅ  Ａｎｔｉ−Ｈｕｍａｎ  ＣＤ４（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｇｅｎ）を添加し、３０分以上インキュベートした。培地で洗浄後、フローサイトメトリーを用いてＣＤ４陽性細胞中に占めるＭＡｄＣＡＭ−１陽性細胞率の割合を測定した。
試験物質を含まないウェルのうちリガンド無しを阻害１００％、リガンド有りを阻害０％としたときの種々の濃度における試験物質のＭＡｄＣＡＭ−１結合阻害率を求め、５０％結合阻害をもたらす濃度ＩＣ50を計算した。得られた結果を、表２に示す。
【００９２】
【表２】
2019031449.tif 000087
【００９３】
試験例５
（５）ラットにおける経口投与後の体内動態評価試験
試験物質の経口吸収性および血漿中持続性を評価するため、経口投与後の活性代謝物血漿中濃度を測定した。
試験物質を０．５％（ｗ／ｖ）ヒドロキシプロピルメチルセルロース水溶液へ均一に懸濁させ、胃ゾンデを用いて雄性ラット（Crl:CD(SD)、  ８〜９週齢）に３ｍｇ／５ｍＬ／ｋｇ）を経口投与した。投与１５、３０分、１，２，４，８，１２時間後に、イソフルラン麻酔下にて頸静脈からＤＤＶＰ（エステラーゼ阻害剤）及びヘパリンナトリウムで処理したシリンジを用いて、約０．２ｍＬを採血し、氷上で保管した。採取した血液は冷却遠心機を用いて１８，０００  ｇ  ｘ  ３分間遠心分離することで血漿サンプルを取得し、アセトニトリルで活性代謝物を抽出後、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳにて血漿中の活性代謝物血漿中濃度を定量した。
投与１２時間後の活性代謝物血漿中濃度を表３に示す。
また、薬効及び持続性を示す指標として、試験例４で得られたヒト全血中α4β7阻害活性（IC50）に対する投与１２時間後の活性代謝物血漿中濃度の割合を計算した。この割合が大きいほど薬効、持続性に優れる。結果を表３に示す。
【００９４】
【表３】
2019031449.tif 000088