(57)【要約】【課題】大量供給が容易で、ＨＩＶの感染を予防する効果を有する抗ヒト免疫不全ウイルス剤組成物を提供する。【解決手段】アスコフィラム・ノドサム（Ascophyllum  nodosum）等の海藻由来の、例えば、フコイダン及びアスコフィランの一方又は双方を含む硫酸化多糖を有効成分とし、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に対する感染予防活性を有することを特徴とする抗ヒト免疫不全ウイルス剤組成物。【選択図】図１
2019189543.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
海藻由来の硫酸化多糖を有効成分とし、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に対する感染予防活性を有することを特徴とする抗ヒト免疫不全ウイルス剤組成物。
【請求項２】
前記海藻が、アスコフィラム・ノドサム（Ascophyllum  nodosum）であることを特徴とする請求項１に記載の抗ヒト免疫不全ウイルス剤組成物。
【請求項３】
前記硫酸化多糖が、フコイダン及びアスコフィランの一方又は双方を含むことを特徴とする請求項１又は２に記載の抗ヒト免疫不全ウイルス剤組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規な抗ヒト免疫不全ウイルス剤組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）は、レトロウイルスの一種であり、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）の原因病原体である。ＡＩＤＳの治療には、アジドチミジン（ＡＺＴ）、ジダノシン（ｄｄＩ）等の核酸系抗ＨＩＶ剤等が用いられているが、根治するにはいたっておらず、新たな抗ＨＩＶ剤の開発が望まれている。
【０００３】
新たな抗ＨＩＶ剤の一例として、結核菌の熱水抽出物由来の多糖体を主成分とする組成物を有効成分とする抗ＨＩＶ剤が提案されている（特許文献１参照）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】国際公開第００／５３２０３号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
しかしながら、特許文献１に記載の抗ＨＩＶ剤は、結核菌の熱水抽出物由来の多糖体を主成分とするため、大量供給が困難であり、製造コストが高くなるという問題がある。また、ＡＩＤＳの発症前に、抗ＨＩＶ剤を服用し、体内でＨＩＶが増殖しにくい環境を作ることにより、ＡＩＤＳの発症を予防する方法が知られているが、ＨＩＶの感染そのものに対する予防効果を有する薬剤は知られていない。
【０００６】
本発明はかかる事情に鑑みてなされたもので、大量供給が容易で、ＨＩＶの感染を予防する効果を有する抗ヒト免疫不全ウイルス剤組成物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
前記目的に沿う本発明は、海藻由来の硫酸化多糖を有効成分とし、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に対する感染予防活性を有することを特徴とする抗ヒト免疫不全ウイルス剤組成物を提供することにより上記課題を解決するものである。
【０００８】
本発明に係る抗ヒト免疫不全ウイルス剤組成物において、前記海藻が、アスコフィラム・ノドサム（Ascophyllum  nodosum）であってもよい。
【０００９】
本発明に係る抗ヒト免疫不全ウイルス剤組成物において、前記硫酸化多糖が、フコイダン及びアスコフィランの一方又は双方を含んでいてもよい。
【発明の効果】
【００１０】
本発明によると、大量に入手可能な海藻から、ＨＩＶに対し高い感染予防活性を有する抗ヒト免疫不全ウイルス剤組成物を得ることができる。本発明の抗ヒト免疫不全ウイルス剤組成物は、ＨＩＶの感染そのものを予防することにより、ＨＩＶ感染細胞内でのＨＩＶの増殖を抑制するための長期間に及ぶ薬物投与が不要になるという効果を有している。本発明の抗ヒト免疫不全ウイルス剤組成物は、食経験のある海藻由来の硫酸化多糖を有効成分とするため、高い安全性を有するという効果も有している。
【００１１】
また、本発明によると、ＨＩＶの感染を予防する新規な方法が提供される。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】ヒトＣＤ４陽性Ｔ細胞におけるＨＩＶ−１の感染予防活性の実験結果を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
続いて、本発明を具体化した実施の形態につき説明し、本発明の理解に供する。本発明の一実施の形態に係る抗ヒト免疫不全ウイルス剤組成物（以下、「組成物」と略称される場合がある。）は、海藻由来の硫酸化多糖を有効成分として含んでいる。
【００１４】
＜海藻＞
組成物の有効成分の原料となる海藻は、ＨＩＶに対する感染予防活性を有する硫酸化多糖を含む任意のものを特に制限なく用いることができる。海藻の具体例としては、コンブ、ワカメ、メカブ、モズク、アカモク、ホンダワラ、アスコフィラム・ノドサム等が挙げられる。
【００１５】
＜硫酸化多糖＞
組成物の有効成分となる硫酸化多糖は、海藻に含まれ、多糖類のアルコール性水酸基の少なくとも一部が硫酸エステル化している化合物で、その具体例としては、硫酸化β−１，３−キシラン、硫酸化β−１，４−キシラン、ポルフィラン、フコイダン、アスコフィラン等が挙げられる。組成物の有効成分である硫酸化多糖は、１種類の硫酸化多糖であってもよく、任意の２種類以上のものを任意の割合で含む混合物であってもよい。
【００１６】
硫酸化多糖は、原料となる海藻から、熱水抽出等の任意の公知の方法を用いて単離される。好ましい硫酸化多糖の例としては、フコイダン、アスコフィランが挙げられる。
【００１７】
＜アスコフィラム・ノドサム＞
アスコフィラム・ノドサムは、北欧の海岸地帯に繁殖する大型の褐藻類の一種であり、家畜の飼料や植物の生長促進剤として用いられている。アスコフィラム・ノドサムは、アミノ酸、ビタミン類、灰分、ポリフェノール、各種ミネラルに加え、アルギン酸、フコイダン、マンニット、ラミナリン、アスコフィラン等の水溶性多糖類を含んでいる。アスコフィランは、アスコフィラム・ノドサムに特有の多糖類であり、Ｌ−フコース及び硫酸基を含む点でフコイダンと類似するが、糖残基の組成が異なっており、アポトーシス誘導能やある種のガン細胞に対する抗腫瘍活性を有することが知られている。
【００１８】
＜アスコフィラム・ノドサム抽出物＞
アスコフィラム・ノドサムに含まれる化合物を分離する手段として、任意の公知の方法を用いることができるが、好ましい方法としては、溶媒抽出が挙げられ、特に好ましくは水を溶媒として用いる溶媒抽出が挙げられる。抽出原料であるアスコフィラム・ノドサムとしては、任意の産地のものを用いることができる。なお、生のままの藻体は水分含量が高いため、水洗により塩分を除去した藻体を乾燥し、粉末化したものを抽出原料として用いることが好ましい。抽出原料として用いられるアスコフィラム・ノドサム乾燥粉末の平均的な組成は、蛋白質５〜１０％、炭水化物４５〜６０％、灰分１７〜２０％、脂質２〜４％、水分１０〜１２％である。なお、前処理として、アスコフィラム・ノドサム乾燥粉末を酸水溶液で処理し、酸可溶分を除去しておいてもよい。
【００１９】
アスコフィラム・ノドサムからの抽出は、例えば、アスコフィラム・ノドサム乾燥粉末の１０〜１００倍（質量比）の水を用いて行う。アスコフィラム・ノドサム乾燥粉末を加えた水を室温で１２〜２４時間撹拌すると、アスコフィランがアルギン酸等とともに水中に抽出される。必要ならば、水を新たに加え、１００℃でさらに１２〜２４時間抽出を行ってもよい。このようにして得られる粗抽出物は、他の多糖、タンパク質、炭水化物、脂質、灰分、ミネラル、色素、ポリフェノール等を含んでいる。これらは、いずれも人体および動物に対して何ら害を及ぼさないため、アスコフィラム・ノドサム抽出物を食品や飼料に添加する場合には、分離することなくそのまま用いてもよい。
【００２０】
組成物の原料として用いることができる、純度の高いフコイダン及びアスコフィランを得るためには、以下に述べるような方法で精製を行うことができる。抽出液に含まれるアルギン酸は、塩酸等を加えて抽出液のｐＨを低下させ、生成した沈殿をろ過することにより除去することができる。あるいは、アルギン酸リアーゼを添加し、アルギン酸のみを選択的に加水分解し、アルギン酸の加水分解物を透析により除去してもよい。抽出液に５０％エタノールを添加すると得られる沈殿を水に溶解し、透析により脱塩した後凍結乾燥すると、ほぼ純粋なアスコフィランが得られる。さらに精製が必要な場合は、水−エタノールから再沈殿を行ってもよい。
【００２１】
なお、上述の５０％エタノール可溶性画分は、フコイダンを含んでおり、必要に応じて、分画精製を行うことにより、高純度のフコイダンを得ることができる。
【００２２】
＜フコイダン＞
フコイダンは、主にＬ−フコースが多数結合し、Ｌ−フコース残基の少なくとも一部に硫酸が結合し硫酸エステルを形成した硫酸化多糖である。Ｌ−フコース残基以外に、グルクロン酸残基やガラクトース残基が結合していてもよい。フコイダンは、後述するアスコフィランと共に、アスコフィラム・ノドサムから単離されたものであってもよいが、コンブ、ワカメ、モズク、アカモク等の他の海藻から単離されたものであってもよい。
【００２３】
＜アスコフィラン＞
硫酸基およびＤ−グルクロン酸基を含み、ポリアニオンであるアスコフィランは、水溶性で、ＨＩＶの感染抑制活性を阻害しない任意のカチオンと塩を形成していてもよい。そのようなカチオンの一例としては、ナトリウムイオン、カリウムイオン、マグネシウムイオン、カルシウムイオン、アンモニウムイオン等が挙げられる。
【００２４】
組成物の有効成分として用いることのできるアスコフィランは、アスコフィラム・ノドサムより抽出され、Ｌ−フコースおよびＤ−キシロースの他にＤ−グルクロン酸を主な構成成分とする任意の硫酸化多糖であればよく、分子量等に特に制限はない。硫酸基含量およびウロン酸含量についても特に制限はないが、硫酸バリウムによる比濁法で測定された硫酸基含量が７〜１５重量％であるものが好ましく、また、カルバゾール硫酸法で測定されたウロン酸含量が２０〜２５重量％であるものが好ましい。
【００２５】
＜抗ヒト免疫不全ウイルス剤組成物＞
アスコフィラム・ノドサム抽出物又はそれより単離されたフコイダン及び／又はアスコフィランを、医薬として許容される担体等と混合することにより、抗ヒト免疫不全ウイルス剤組成物の一例である医薬組成物として用いることができる。医薬組成物のヒトあるいは動物に対する投与形態としては、経口投与、非経口投与（例えば、静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与、吸入投与）等が挙げられ、投与量は、医薬組成物の製剤形態、投与方法、使用目的およびこれに適用される投与対象の年齢、体重、症状によって適宜設定され一義的に決定することは困難であるが、ヒトへの経口投与の場合、一般には製剤中に含有される有効成分（アスコフィラム・ノドサム抽出物）の量で、好ましくは１日当り１０〜１０００ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは１日当り２０〜２００ｍｇ／ｋｇである。投与回数及び間隔は、ヒトへの経口投与の場合、１日１回（２４時間間隔）である。もちろん投与量及び投与間隔は、種々の条件によって変動するので、上記投与量より少ない量で十分な場合もあるし、あるいは範囲を超えて必要な場合もある。
【００２６】
経口投与製剤として調製する場合は、錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤、コーティング剤、液剤、懸濁剤等の形態に調製することができ、非経口投与製剤にする場合には、注射剤、点滴剤、座薬等の形態に調製することができる。製剤化には、任意の公知の方法を用いることができる。例えば、アスコフィラム・ノドサム抽出物と、製薬学的に許容し得る担体または希釈剤、安定剤、およびその他の所望の添加剤を配合して、上記の所望の剤形とすることができる。
【００２７】
組成物は、食品であってもよい。組成物を含む食品としては、アスコフィラム・ノドサム抽出物をそのまま食品として調製したもの、他の食品に添加したもの、あるいは、カプセル、錠剤等、食品または健康食品に通常用いられる任意の形態をとることができる。食品中に配合して摂取あるいは投与する場合には、適宜、賦形剤、増量剤、結合剤、増粘剤、乳化剤、着色料、香料、食品添加物、調味料等と混合し、用途に応じて、粉末、顆粒、錠剤等の形に成形することができる。また、適宜、食品原料中に混合して食品を調製し、ＨＩＶの感染予防活性を有する機能性食品として用いることができる。
【実施例】
【００２８】
次に、本発明の作用効果を確認するために行った実施例について説明する。
実施例１：アスコフィラム・ノドサム由来のアスコフィラン及びフコイダンの精製
アスコフィラム・ノドサムを希クエン酸水で洗浄した後、熱水抽出（９０℃）を行った。次に、遠心分離とろ過によって不溶物を取り除いた後、中和した。その後、酸を加えてアルギン酸を沈殿させて大まかにアルギン酸を除去したのち、アルギン酸リアーゼ処理により、残ったアルギン酸を分解除去した。得られた溶液にエタノールを加え、沈殿からアスコフィラン（図１中「Ａｓ」）、上清からフコイダン（図１中「Ａ−Ｆｕ」）を得た。
【００２９】
実施例２：ヒトＣＤ４陽性Ｔ細胞へのＨＩＶ−１の初期感染に硫酸化多糖が及ぼす効果の検討
ＭＴ−４細胞（ヒトＣＤ４陽性Ｔ細胞）を、１×１０６  ｃｅｌｌの密度でウェルに加え、硫酸化多糖（アスコフィラン：Ａｓ、アルギン酸オリゴマー：Ａｏ、シグマ社製フコイダン：Ｓ−Ｆｕ、アスコフィラム・ノドサム由来フコイダン：Ａ−Ｆｕ、ポルフィラン：Ｐｏ、デキストラン硫酸：Ｄｅ−Ｓ、デキストラン：Ｄｅ、濃度：１００μｇ／ｍＬ）と共に１時間プレインキュベートした。その後、ＨＩＶ−１  Ｒ９株を加え、４８時間インキュベートした。ＨＩＶへの感染の程度を、細胞のライセート中のＨＩＶ  ｐ２４タンパク質を定量（ウェスタンブロット法）し，ＭＴ−４細胞培養上清中に放出されたＨＩＶをＴＺＭ−ｂｌ細胞に感染させ、ルシフェラーゼ法により評価した。
【００３０】
結果を図１に示す。図１中、「Ｎｅｇ」は、ＨＩＶを添加せずにインキュベートした陰性対照、「Ｃｏｎ」は、多糖類を添加せずにインキュベートした陽性対照を示す。図１の結果から、アスコフィラン及びフコイダンは、ＭＴ−４細胞へのＨＩＶの初期感染を抑制することが確認された。
【図１】
2019189543.tif 000003