(57)【要約】【課題】新たな抗ピロリ菌剤を提供すること。【解決手段】白金コロイドを含有する抗ピロリ菌剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
白金コロイドを有効成分として含有する抗ピロリ菌剤。
【請求項２】
白金コロイドの濃度が０．０８〜１６ｍＭの液剤である、請求項１に記載の抗ピロリ菌剤。
【請求項３】
さらにパラジウムコロイドを含有する請求項１に記載の抗ピロリ菌剤。
【請求項４】
白金コロイドとパラジウムコロイドのモル比率が１〜１０：１〜３０である、請求項３に記載の抗ピロリ菌剤。
【請求項５】
白金コロイドの濃度が０．０８〜１６ｍＭ、かつ、パラジウムコロイドの濃度が０．１〜３０ｍＭの液剤である、請求項３に記載の抗ピロリ菌剤。
【請求項６】
ピロリ菌が関与する疾患の予防剤、治療剤又は再発予防剤である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の抗ピロリ菌剤。
【請求項７】
ピロリ菌が関与する疾患が、胃炎、胃潰瘍、十二指腸潰瘍、胃癌又は十二指腸癌である、請求項６に記載の抗ピロリ菌剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】  本発明は、抗ピロリ菌剤及びピロリ菌が関与する疾患の予防剤、治療剤又は再発予防剤に関する。
【背景技術】
【０００２】  ヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ：以下「ピロリ菌」という。）は、ヒトの胃粘膜に感染するグラム陰性微好気性らせん状桿菌であり、胃炎、胃潰瘍、十二指腸潰瘍、胃癌、十二指腸癌等の原因の一つとして注目されている。【０００３】  ピロリ菌が、ヒトの胃粘膜上皮に炎症反応や細胞増殖等を発症させるメカニズムにおいて、ピロリ菌由来の病原タンパク質ＣａｇＡが、重要な役割を担っていることが報告されている（非特許文献１）。【０００４】  具体的には、ピロリ菌が保有する病原タンパク質ＣａｇＡが、ピロリ菌の表面にある注射針様ＩＶ型分泌装置を介して胃上皮細胞内に注入される。次いで、ＣａｇＡが細胞内のＳｒｃファミリーチロシンキナーゼによってチロシンリン酸化され、これがヒトがんタンパク質として知られるＳＨＰ２（Ｓｒｃ  ｈｏｍｏｌｏｇｙ  ２−ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｔｙｒｏｓｉｎｅ  ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ）と複合体を形成し、ＳＨＰ２を活性化する。活性化されたＳＨＰ２は、Ｅｒｋ−ＭＡＰキナーゼ経路を介して異常な増殖シグナルを生成し、細胞内のシグナルを撹乱し、癌化を促進すること等が報告されている（非特許文献２及び３）。
【先行技術文献】
【０００５】
【非特許文献１】Ｃｅｌｌ  Ｈｏｓｔ  Ｍｉｃｒｏｂｅ  １２（１）：２０−３３（２０１２）
【非特許文献２】Ｃｅｌｌ  Ｈｏｓｔ  Ｍｉｃｒｏｂｅ  １５（３）：３０６−３１６（２０１４）
【非特許文献３】Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｒｅｐｏｒｔｓ  ５：１５７４９（２０１５）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】  一般に、ピロリ菌に対する抗菌剤として、ペニシリン系、セファロスポリン系、テトラサイクリン系、マクロライド系等の抗生物質が知られている。しかし、これらの抗生物質は、抗菌力は高いものの、過敏症、下痢、口内炎、味覚障害等の副作用を生じさせることがあり、これらを長期間にわたって継続投与した場合には、臓器障害、血液障害等の重篤な副作用を引き起こすおそれもある。また、これらの抗生物質に対して耐性を獲得したピロリ菌が出現する等の問題も生じている。【０００７】  このような事情に鑑み、新たな抗ピロリ菌剤の開発が待たれている。そこで、本発明は新たな抗ピロリ菌剤の提供を目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】  本発明者らは、鋭意検討を進めた結果、白金コロイドが抗ピロリ菌作用を有することを見いだし、さらに白金コロイドを含有する抗ピロリ菌剤を生体内に継続投与することによって、胃粘膜上皮におけるチロシンリン酸化されたＣａｇＡの発現割合を抑制できることを見いだし、本発明を完成させるに至った。【０００９】  すなわち、本発明は以下の［１］〜［７］を提供する。
［１］白金コロイドを有効成分として含有する抗ピロリ菌剤。
［２］白金コロイドの濃度が０．０８〜１６ｍＭの液剤である、［１］に記載の抗ピロリ菌剤。
［３］さらにパラジウムコロイドを含有する［１］に記載の抗ピロリ菌剤。
［４］白金コロイドとパラジウムコロイドのモル比率が１〜１０：１〜３０である、［３］に記載の抗ピロリ菌剤。
［５］白金コロイドの濃度が０．０８〜１６ｍＭ、かつ、パラジウムコロイドの濃度が０．１〜３０ｍＭの液剤である、［３］に記載の抗ピロリ菌剤。
［６］ピロリ菌が関与する疾患の予防剤、治療剤又は再発予防剤である、［１］〜［５］に記載の抗ピロリ菌剤。
［７］ピロリ菌が関与する疾患が、胃潰瘍、十二指腸潰瘍、胃炎、胃癌又は十二指腸癌である、［６］に記載の抗ピロリ菌剤。
【発明の効果】
【００１０】  本発明の抗ピロリ菌剤は、抗ピロリ菌作用を示し、さらに生体内に継続的に投与することによって胃粘膜における病原タンパク質であるチロシンリン酸化されたＣａｇＡの発現割合を減少させる。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】コントロール液の保存開始時の生菌数測定平板の写真である。
【図２】試験液を保存して１分後の生菌数測定平板の写真である。
【図３】コントロール液を保存して１分後の生菌数測定平板の写真である。
【図４】試験液を保存して３分後の生菌数測定平板の写真である。
【図５】コントロール液を保存して３分後の生菌数測定平板の写真である。
【図６】試験液を保存して５分後の生菌数測定平板の写真である。
【図７】コントロール液を保存して５分後の生菌数測定平板の写真である。
【図８】白金パラジウムコロイドをラットに２８日間継続投与後の胃粘膜におけるチロシンリン酸化ＣａｇＡの発現割合減少効果を示したグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１２】  以下、本発明の好適な実施形態について詳細に説明する。ただし、本発明は以下の実施形態に限定されるものではない。
【００１３】  本発明の一実施形態に係る抗ピロリ菌剤は、白金コロイドを含有する。
【００１４】  白金コロイドの製造方法として、種々知られており（例えば、特公昭５７−４３１２５号公報、特公昭５９−１２０２４９号公報、特公平２−４３８０１号公報、特開平９−２２５３１７号公報、特開平１０−１７６２０７号公報等）、当業者は上記方法を参照することによって、白金コロイドを適宜調製することができる。白金コロイドの製造方法として、薬理学的又は生理学的に許容されるものであれば、特に制限されないが、例えば、沈殿法又は金属塩還元反応法として知られる化学的な方法、あるいは燃焼法として知られる物理的な方法等を利用することができる。白金コロイドの製造方法として、ピロリ菌の抗菌作用を増強するという観点から、燃焼法を用いることが好ましい。
【００１５】  燃焼法としては、例えば、塩化白金酸溶液及び低級アルコールの混合溶液、並びに、水素ガスを、それぞれ別の供給系から送出し、燃焼させた水素ガス炎と、上記混合溶液とを混合させ８３０〜８７０℃で燃焼させ、燃焼火炎をコロイド生成槽中の槽底近くに達する渦流を生じさせた液体分散媒中に吹き込むこと等によって、白金コロイドを製造する方法が挙げられる。
【００１６】  本実施形態に係る抗ピロリ菌剤が液剤である場合において、白金コロイドの濃度は特に限定されず、使用される白金コロイドの種類、当該抗ピロリ菌剤の用途、製剤形態、使用方法等によって適宜設定される。
液剤における白金コロイドの濃度としては、生体内で抗ピロリ菌作用を奏し、かつ継続投与した場合にも副作用を起こりにくくするという観点から、０．０８〜１６ｍＭであることが好ましく、０．１〜１０ｍＭであることが好ましく、０．４〜８ｍＭであることがさらに好ましい。
【００１７】  本発明の別の実施形態に係る抗ピロリ菌剤は、白金コロイド、及び、パラジウムコロイドを含有する。
【００１８】  パラジウムコロイドの製造方法として、種々知られており（例えば、特公昭５７−４３１２５号公報、特公昭５９−１２０２４９号公報、特公平２−４３８０１号公報、特開平９−２２５３１７号公報、特開平１０−１７６２０７号公報等）、当業者は上記方法を参照することによって、パラジウムコロイドを適宜調製することができる。パラジウムコロイドの製造方法として、薬理学的又は生理学的に許容されるものであれば、特に制限されないが、例えば、沈殿法又は金属塩還元反応法として知られる化学的な方法、あるいは燃焼法として知られる物理的な方法等を利用することができる。パラジウムコロイドの製造方法として、白金の酸化による劣化を防止するという観点から、燃焼法を用いることが好ましい。
【００１９】  燃焼法としては、例えば、塩化パラジウム溶液及び低級アルコールの混合溶液、並びに、水素ガスを、それぞれ別の供給系から送出し、燃焼させた水素ガス炎と、上記混合溶液とを混合させ６３０〜６７０℃で燃焼させ、燃焼火炎をコロイド生成槽中の槽底近くに達する渦流を生じさせた液体分散媒中に吹き込むこと等によって、パラジウムコロイドを製造する方法が挙げられる。
【００２０】  本実施形態に係る抗ピロリ菌剤に含まれる白金コロイド及びパラジウムコロイドのモル比率は、特に制限されず、使用される白金コロイド及びパラジウムコロイドの種類及び濃度、該抗ピロリ菌剤の用途、製剤形態、使用方法等に応じて適宜設定される。上記抗ピロリ菌剤に含まれる白金コロイド及びパラジウムコロイドのモル比率としては、抗ピロリ菌作用を有効に奏するという観点から、白金コロイド：パラジウムコロイド＝１〜１０：１〜３０であることが好ましく、白金コロイド：パラジウムコロイド＝１〜３：１〜９であることがより好ましい。
【００２１】  本実施形態に係る抗ピロリ菌剤が液剤である場合において、パラジウムコロイドの濃度は特に限定されず、使用されるパラジウムコロイドの種類、併用される白金コロイドの種類及び濃度、当該抗ピロリ菌剤の用途、製剤形態、使用方法等によって適宜設定される。
液剤におけるパラジウムコロイドの濃度としては、白金の酸化による劣化を防止し、かつ継続投与した場合にも副作用を起こりにくくするという観点から、０．１〜３０ｍＭであることが好ましく、０．４〜１６ｍＭであることがより好ましく、０．８〜１２ｍＭであることがさらに好ましい。
【００２２】  本実施形態に係る抗ピロリ菌剤は、さらに界面活性剤を含有していてもよい。
【００２３】  界面活性剤としては、薬理学的又は生理学的に許容されるものであれば特に制限されず、非イオン性界面活性剤、両性界面活性剤、陰イオン性界面活性剤、陽イオン性界面活性剤のいずれであってもよい。本実施形態に係る抗ピロリ菌剤に含有させる界面活性剤として、抗ピロリ菌作用を有効に奏するという観点から、非イオン性界面活性剤を含有させることが好ましい。
【００２４】  非イオン性界面活性剤としては、例えば、モノラウリン酸ＰＯＥ（２０）ソルビタン（ポリソルベート２０）、モノパルミチン酸ＰＯＥ（２０）ソルビタン（ポリソルベート４０）、モノステアリン酸ＰＯＥ（２０）ソルビタン（ポリソルベート６０）、トリステアリン酸ＰＯＥ（２０）ソルビタン（ポリソルベート６５）、モノオレイン酸ＰＯＥ（２０）ソルビタン（ポリソルベート８０）等のＰＥＯソルビタン脂肪酸エステル；ＰＯＥ（４０）硬化ヒマシ油（ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油４０）、ＰＯＥ（６０）硬化ヒマシ油（ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油６０）等のＰＯＥ硬化ヒマシ油；ＰＯＥ（９）ラウリルエーテル等のＰＯＥアルキルエーテル；ＰＯＥ（２０）ＰＯＰ（４）セチルエーテル等のＰＯＥ−ＰＯＰアルキルエーテル；ＰＯＥ（１９６）ＰＯＰ（６７）グリコール（ポロクサマー４０７、プルロニックＦ１２７）、ＰＯＥ（２００）ＰＯＰ（７０）グリコール等のポリオキシエチレン・ポリオキシプロピレンブロックコポリマー；ポリオキシエチレンヒマシ油３５、ポリオキシエチレンヒマシ油４０、ポリオキシエチレンヒマシ油５０、ポリオキシエチレンヒマシ油６０等の酸化エチレンの平均付加モル数が３０を上回るポリオキシエチレンヒマシ油等が挙げられる。
本実施形態に係る抗ピロリ菌剤において、上記非イオン性界面活性剤を、１種単独で使用してもよく、また２種以上を組み合わせて使用してもよい。
【００２５】  本実施形態に係る抗ピロリ菌剤は、個体、液体、ペースト等のいずれの形状であってもよく、タブレット（素錠、糖衣錠、発泡錠、フィルムコート錠、チュアブル錠、トローチ剤等を含む。）、カプセル剤、丸剤、粉末剤（散剤）、細粒剤、顆粒剤、液剤（懸濁液、乳濁液、シロップ等を含む。）、ペースト等の形態であってもよい。これらの各種製剤は、薬理学的又は生理学的に許容されるものであれば、賦形剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤、安定剤、懸濁化剤等の添加剤を混合し、周知の方法で製造することができる。
【００２６】  本実施形態に係る抗ピロリ菌剤は、ヒトに投与又は摂取されても、非ヒト哺乳動物に投与又は摂取されてもよい。本実施形態に係る抗ピロリ菌剤の投与量（摂取量）は、白金コロイドの質量に換算して、成人１日あたり、例えば、０．０６〜６ｍｇであることが好ましく、０．１〜４ｍｇであることがより好ましく、０．３〜３ｍｇであることがさらに好ましい。投与量は、個体の状態、年齢等に応じて適宜決定することができる。
【００２７】  本実施形態に係る抗ピロリ菌剤は、経口投与（摂取）されてもよく、非経口投与されてもよいが、経口投与されることが好ましい。抗ピロリ菌剤は、１日あたりの白金コロイドの質量に換算した値が上記範囲内にあれば、１日１回投与されてもよく、１日複数回に分けて投与されてもよい。
【００２８】  本実施形態に係る抗ピロリ菌剤は、継続的に投与（摂取）されることによって、チロシンがリン酸化されたＣａｇＡの発現割合を減少させる効果がより高まる。本実施形態に係る抗ピロリ菌剤は、２週間以上継続して投与（摂取）されることが好ましく、３週間以上継続して投与（摂取）されることがより好ましく、４週間以上継続して投与（摂取）されることがさらに好ましい。
【００２９】  本実施形態に係る抗ピロリ菌剤は、ヒトの胃粘膜上皮に炎症反応や細胞増殖等を発症させる病原タンパク質であるチロシンリン酸化ＣａｇＡの発現割合を減少させることができ、胃炎、胃潰瘍、十二指腸潰瘍、胃癌、十二指腸癌等の予防剤、治療剤又は再発予防剤として有効である。
【実施例】
【００３０】  以下に、実施例を挙げて本発明をさらに詳細に説明する。【００３１】［試験例１：抗ピロリ菌作用］
＜試験菌株＞
試験菌株として、ピロリ菌（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ  ＪＣＭ  １２０９３）を使用した。【００３２】＜試験菌の培養条件＞
上記試験菌を、５％馬脱繊維血液加Ｂｌｏｏｄ  Ａｇａｒ  Ｂａｓｅ  Ｎｏ．２（オキソイド社製）を用いて３７℃±１℃の条件で３〜４日間かけて微好気培養した。その後、再度馬脱繊維血液加Ｂｌｏｏｄ  Ａｇａｒ  Ｂａｓｅ  Ｎｏ．２を加えてさらに３７℃±１℃の条件で３〜４日間かけて微好気培養した。試験菌を生理食塩水に浮遊させ、菌数が１０８〜１０９／ｍＬになるように調製し、これを試験菌液とした。【００３３】＜試験操作＞
検体：白金パラジウムコロイド溶液（ＰＡＰＬＡＬ（登録商標）（６ｍｌの水溶液中、白金コロイドが１．２ｍｇ、パラジウムコロイドが１．８ｍｇ含まれている。）：株式会社東洋厚生製薬所製）
対照：生理食塩水
検体１０ｍＬに試験菌液０．１ｍＬを接種し、これを試験液とした。またコントロールとして対照１０ｍＬに試験菌液０．１ｍＬを接種し、これをコントロール液とした。
試験液及びコントロール液をそれぞれ２０℃±１℃で保存し、１分後、３分後、５分後に、保存した試験液及びコントロール液をＳＣＤＬＰ培地（日本製薬株式会社製）で１０倍に希釈し、生菌数を測定した。【００３４】＜試験結果＞
表１は、試験液及びコントロール液を保存してから、それぞれ１分後、３分後、５分後の生菌数を測定した結果を示した表である。
また表１中の減少率（％）は、コントロール液の生菌数を１００％とした場合に、試験液の生菌数の割合を示した値である。【００３５】
【表１】
2019026629.tif 000002
【００３６】  表１から、白金コロイド及びパラジウムコロイドを含有する検体を、試験菌であるピロリ菌に接種した場合に、保存してから１分後、３分後及び５分後のいずれの試験液においてもピロリ菌の生菌数が減少することが分かる。【００３７】［試験例２：チロシンリン酸化ＣａｇＡの発現量減少作用］
＜動物の準備＞
６週齢の雄性ＰＭＳＳ１（ピロリ菌ＰＭＳＳ１株）陽性ＳＤ系ラット（チャールズリバー社製）１０匹を、試験環境下で７日間馴化した。飼育環境として、室温２５℃±１℃、湿度２０％±２％以下、１日１２時間照明の飼育室にて、金属ケージに５匹ずつ収容し、市販の固形飼料と水を自由に摂取させた。【００３８】＜試験群の構成＞
試験には７週齢のラットを用いた。１０匹のラットを対照群と投与群とに分けそれぞれ５匹ずつとした。対照群には生理食塩水を、投与群には被験物質としてＰＡＰＬＡＬ６００μｌ／ＫｇＢＷを、それぞれ１日１回投与し、これを２８日間継続して行った。
２８日間経過後、投与群について、一般状態、死亡率、体重変化、血液学的検査、血液生化学的検査、臓器重量、肉眼的病理検査、組織学的病理検査において、対照群と比較したところ、有害事象は認められず、通常投与による毒性学的・非生理学的影響も認められなかった。【００３９】
【表２】
2019026629.tif 000003
【００４０】＜チロシンリン酸化ＣａｇＡの発現割合＞
対照群及び投与群のラットから切除した胃粘膜組織をそれぞれ個別に常法に従いホモジナイズ処置後、遠心分離を行い、その上清（可溶性画分）を採取した。
免疫沈降とイムノブロットの第１抗体として、ａｎｔｉ−ＣａｇＡポリクローナル抗体（Ａｕｓｔｒａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ，Ｓａｎ  Ｒａｍｏｎ，Ｃａ，ＵＳＡ）とａｎｔｉ−リン酸化チロシン抗体（Ｕｐｓｔａｔｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｃ．，Ｌａｋｅ  Ｐｌａｃｉｄ，ＮＹ，ＵＳＡ）を使用した。
上清を、タンパク質を吸着可能なセファロース４Ｂに吸着させ、洗浄後、ａｎｔｉ−ＣａｇＡ抗体又はａｎｔｉ−リン酸化チロシン抗体を加え、４℃で６０分反応させた。十分洗浄をした後、ＨＲＰラベルされた第二抗体と１時間反応させ、過酸化水素加ＤＡＢ（３，３’−ジアミノベンジジン）にて発色させ発色強度を測定した。またチロシンリン酸化ＣａｇＡの発現割合の評価は、ａｎｔｉ−ＣａｇＡ抗体とａｎｔｉ−リン酸化チロシン抗体を用いた場合の発色割合から評価した（図３）。
その結果を表３に示す。【００４１】
【表３】
2019026629.tif 000004
【００４２】  表３から、ＰＡＰＬＡＬ投与群は、対照群に比べて、ＣａｇＡ全体におけるチロシンリン酸化ＣａｇＡの発現割合が有意に減少していることが分かる。
白金コロイドが、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいて抗ピロリ菌作用を示すだけであれば、ピロリ菌から注入されるＣａｇＡの全体量が減少するだけにとどまる。しかし、試験例２では、ＰＡＰＬＡＬ投与群において、ＣａｇＡ全体にしめるチロシンリン酸化ＣａｇＡの発現割合が減少しており、白金コロイドにはＣａｇＡのチロシンリン酸化を抑制する作用も有することが分かる。【００４３】  チロシンリン酸化ＣａｇＡは、胃炎、胃潰瘍、十二指腸潰瘍、胃癌、十二指腸癌等の病原タンパク質として作用する。このため、生体内においてＣａｇＡ全体に占めるチロシンリン酸化ＣａｇＡの発現割合を減少させる作用を有する白金コロイドは、チロシンリン酸化ＣａｇＡが関与する上記疾患の予防剤、治療剤又は再発予防剤として有効である。
【図１】
2019026629.tif 000005
【図２】
2019026629.tif 000006
【図３】
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【図４】
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【図５】
2019026629.tif 000009
【図６】
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【図７】
2019026629.tif 000011
【図８】
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【手続補正書】
【提出日】平成30年1月25日(2018.1.25)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
白金コロイド、及び、パラジウムコロイドを有効成分として含有する抗ピロリ菌剤。
【請求項２】
白金コロイドとパラジウムコロイドのモル比率が１〜１０：１〜３０である、請求項１に記載の抗ピロリ菌剤。
【請求項３】
白金コロイドの濃度が０．０８〜１６ｍＭ、かつ、パラジウムコロイドの濃度が０．１〜３０ｍＭの液剤である、請求項１又は２に記載の抗ピロリ菌剤。
【請求項４】
ピロリ菌が関与する疾患の予防剤、治療剤又は再発予防剤である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の抗ピロリ菌剤。
【請求項５】
ピロリ菌が関与する疾患が、胃炎、胃潰瘍、十二指腸潰瘍、胃癌又は十二指腸癌である、請求項４に記載の抗ピロリ菌剤。