(57)【要約】【課題】２型糖尿病や肥満等の疾患の治療及び／又は予防に有用な、アディポネクチン受容体作動薬、及びアディポネクチン受容体作動用食品組成物を提供すること。【解決手段】トマト由来のカロテノイド、又は、フィトエン、フィトフルエン、β−カロテン、トルレン、リコピン、α−カロテン、及びフコキサンチンからなる群から選ばれる少なくとも１種のカロテノイド、或いは、トマトから、メタノールとメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルとの混合溶媒を用いて抽出された抽出物を有効成分として含有することにより、２型糖尿病や肥満等の疾患の治療及び／又は予防に有用な、アディポネクチン受容体作動薬、及びアディポネクチン受容体作動用食品組成物が提供される。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
トマト由来のカロテノイドを有効成分として含有する、アディポネクチン受容体作動薬。
【請求項２】
前記トマト由来のカロテノイドが、フィトエン、フィトフルエン、β−カロテン、リコピン、及びα−カロテンからなる群から選ばれる少なくとも１種である、請求項１に記載のアディポネクチン受容体作動薬。
【請求項３】
フィトエン、フィトフルエン、β−カロテン、トルレン、リコピン、α−カロテン、及びフコキサンチンからなる群から選ばれる少なくとも１種のカロテノイドを有効成分として含有する、アディポネクチン受容体作動薬。
【請求項４】
前記β−カロテン又は前記リコピンが、シス異性体である、請求項２又は３に記載のアディポネクチン受容体作動薬。
【請求項５】
トマトから、メタノールとメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルとの混合溶媒を用いて抽出された抽出物を有効成分として含有する、アディポネクチン受容体作動薬。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれか一項に記載のアディポネクチン受容体作動薬を有効成分として含有する、アディポネクチン分泌異常に起因する疾患の治療剤及び／又は予防剤。
【請求項７】
トマト由来のカロテノイドを有効成分として含有する、アディポネクチン受容体作動用食品組成物。
【請求項８】
前記トマト由来のカロテノイドが、フィトエン、フィトフルエン、β−カロテン、リコピン、及びα−カロテンからなる群から選ばれる少なくとも１種である、請求項７に記載のアディポネクチン受容体作動用食品組成物。
【請求項９】
フィトエン、フィトフルエン、β−カロテン、トルレン、リコピン、α−カロテン及びフコキサンチンからなる群から選ばれる少なくとも１種のカロテノイドを有効成分として含有する、アディポネクチン受容体作動用食品組成物。
【請求項１０】
前記β−カロテン又は前記リコピンが、シス異性体である、請求項８又は９に記載のアディポネクチン受容体作動用食品組成物。
【請求項１１】
トマトから、メタノールとメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルとの混合溶媒を用いて抽出された抽出物を有効成分として含有する、アディポネクチン受容体作動用食品組成物。
【請求項１２】
請求項７〜１１のいずれか一項に記載のアディポネクチン受容体作動用食品組成物を含有する、アディポネクチン分泌異常に起因する疾患の治療及び／又は予防用食品組成物。
【請求項１３】
前記食品組成物が、健康食品、機能性表示食品、特別用途食品、病者用食品、栄養補助食品、サプリメント、又は特定保健用食品である、請求項７〜１２のいずれか一項に記載の食品組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アディポネクチン受容体作動薬及びその使用に関する。具体的には、本発明は、トマト由来のカロテノイド、又はフィトエン、フィトフルエン、β−カロテン、トルレン、リコピン、α−カロテン、及びフコキサンチンからなる群から選ばれる少なくとも１種のカロテノイド、或いはトマトから、メタノールとメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルとの混合溶媒を用いて抽出された抽出物を有効成分として含有する、アディポネクチン受容体作動薬、該アディポネクチン受容体作動薬を有効成分として含有する、アディポネクチン分泌異常に起因する疾患の治療剤及び／又は予防剤に関する。また、本発明は、アディポネクチン受容体作動用食品組成物及びその使用に関する。具体的には、本発明は、トマト由来のカロテノイド、又はフィトエン、フィトフルエン、β−カロテン、トルレン、リコピン、α−カロテン、及びフコキサンチンからなる群から選ばれる少なくとも１種のカロテノイド、或いはトマトから、メタノールとメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルとの混合溶媒を用いて抽出された抽出物を有効成分として含有する、アディポネクチン受容体作動用食品組成物、該アディポネクチン受容体作動用食品組成物を含有する、アディポネクチン分泌異常に起因する疾患の治療及び／又は予防用食品組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
アディポネクチンは、脂肪細胞から分泌されるホルモンで、インスリン感受性の亢進、動脈硬化の抑制、抗炎症の抑制などの作用が知られている。運動不足などから肥満になった人や、２型糖尿病の人では、脂肪細胞から分泌されるアディポネクチンが低下するため、アディポネクチンは、肥満から引き起こされるインスリン抵抗性に関わる因子として注目されている。
【０００３】
アディポネクチンの作用を細胞内に伝える分子である、アディポネクチン受容体（以下、ＡｄｉｐｏＲとも称する）が同定されている。遺伝的素養や肥満等により既にアディポネクチンの分泌に異常を来している場合、アディポネクチン自体の分泌を促すのではなく、ＡｄｉｐｏＲを直接的に活性させることが重要との報告がある（非特許文献１）。
【０００４】
一方、リコピンやβ−カロテンは、トマト等に含まれている天然に存在するカロテノイド化合物の一種であって、様々な疾病に対して予防的又は治療的に働くことが知られている。
【０００５】
リコピンは、アディポネクチンの産生を促進すること（特許文献１）や、β−カロテンがアディポネクチン受容体の発現を増加させること（特許文献２）が知られている。しかし、リコピンやβ−カロテンを含むカロテノイドが、ＡｄｉｐｏＲに直接作用してＡｄｉｐｏＲを活性化させることは知られていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開２００９−２８６７２９号公報
【特許文献２】特開２００８−２２２５５５号公報
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】昭和医会誌  第７０巻  第１号  ５２−５７頁  ２０１０
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は上記事情に鑑みてなされたものであって、アディポネクチンの低下により引き起こされる２型糖尿病や肥満等の疾患の治療又は予防に有用な、アディポネクチン受容体作動薬、及びアディポネクチン受容体作動用食品組成物を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、鋭意研究の結果、リコピンやβ−カロテン等のトマト由来のカロテノイド、及び、トルレン、フコキサンチン等のカロテノイド、並びにトマトから、メタノールとメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルとの混合溶媒を用いて抽出された抽出物がＡｄｉｐｏＲに直接作用し、ＡｄｉｐｏＲを活性化させる、ＡｄｉｐｏＲ作動薬として機能することを見出し、本発明を完成するに至った。すなわち、本発明は、以下の［１］〜［１３］に関する。
【００１０】
［１］  トマト由来のカロテノイドを有効成分として含有する、アディポネクチン受容体作動薬。
［２］  前記トマト由来のカロテノイドが、フィトエン、フィトフルエン、β−カロテン、リコピン、及びα−カロテンからなる群から選ばれる少なくとも１種である、［１］に記載のアディポネクチン受容体作動薬。
［３］  フィトエン、フィトフルエン、β−カロテン、トルレン、リコピン、α−カロテン、及びフコキサンチンからなる群から選ばれる少なくとも１種のカロテノイドを有効成分として含有する、アディポネクチン受容体作動薬。
［４］  前記β−カロテン又は前記リコピンが、シス異性体である、［２］又は［３］に記載のアディポネクチン受容体作動薬。
［５］  トマトから、メタノールとメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルとの混合溶媒を用いて抽出された抽出物を有効成分として含有する、アディポネクチン受容体作動薬。
［６］  ［１］〜［５］のいずれか一項に記載のアディポネクチン受容体作動薬を有効成分として含有する、アディポネクチン分泌異常に起因する疾患の治療剤及び／又は予防剤。
［７］  トマト由来のカロテノイドを有効成分として含有する、アディポネクチン受容体作動用食品組成物。
［８］  前記トマト由来のカロテノイドが、フィトエン、フィトフルエン、β−カロテン、リコピン、及びα−カロテンからなる群から選ばれる少なくとも１種である、［７］に記載のアディポネクチン受容体作動用食品組成物。
［９］  フィトエン、フィトフルエン、β−カロテン、トルレン、リコピン、α−カロテン及びフコキサンチンからなる群から選ばれる少なくとも１種のカロテノイドを有効成分として含有する、アディポネクチン受容体作動用食品組成物。
［１０］  前記β−カロテン又は前記リコピンが、シス異性体である、［８］又は［９］に記載のアディポネクチン受容体作動用食品組成物。
［１１］  トマトから、メタノールとメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルとの混合溶媒を用いて抽出された抽出物を有効成分として含有する、アディポネクチン受容体作動用食品組成物。
［１２］  ［７］〜［１１］のいずれか一項に記載のアディポネクチン受容体作動用食品組成物を含有する、アディポネクチン分泌異常に起因する疾患の治療及び／又は予防用食品組成物。
［１３］  前記食品組成物が、健康食品、機能性表示食品、特別用途食品、病者用食品、栄養補助食品、サプリメント、又は特定保健用食品である、［７］〜［１２］のいずれか一項に記載の食品組成物。
【発明の効果】
【００１１】
本発明に係る、トマト由来のカロテノイドを有効成分として含有する、ＡｄｉｐｏＲ作動薬は、優れたＡｄｉｐｏＲ活性化作用を有し、アディポネクチンの低下により引き起こされる２型糖尿病や肥満等の疾患の治療剤及び／又は予防剤として有用である。また、本発明に係る、トマト由来のカロテノイドを有効成分として含有する、ＡｄｉｐｏＲ作動用食品組成物は、優れたＡｄｉｐｏＲ活性化作用を有し、アディポネクチンの低下により引き起こされる２型糖尿病や肥満等の疾患の治療及び／又は予防用食品組成物として有用である。
本発明に係る、フィトエン、フィトフルエン、β−カロテン、トルレン、リコピン、α−カロテン、及びフコキサンチンからなる群から選ばれる少なくとも１種のカロテノイドを有効成分として含有する、アディポネクチン受容体作動薬は、優れたＡｄｉｐｏＲ活性化作用を有し、アディポネクチンの低下により引き起こされる２型糖尿病や肥満等の疾患の治療剤及び／又は予防剤として有用である。また、本発明に係る、フィトエン、フィトフルエン、β−カロテン、トルレン、リコピン、α−カロテン、及びフコキサンチンからなる群から選ばれる少なくとも１種のカロテノイドを有効成分として含有する、ＡｄｉｐｏＲ作動用食品組成物は、優れたＡｄｉｐｏＲ活性化作用を有し、アディポネクチンの低下により引き起こされる２型糖尿病や肥満等の疾患の治療及び／又は予防用食品組成物として有用である。
本発明に係る、トマトから、メタノールとメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルとの混合溶媒を用いて抽出された抽出物（以下、トマトのＭＴＢＥ抽出物とも称する）を有効成分として含有する、アディポネクチン受容体作動薬は、優れたＡｄｉｐｏＲ活性化作用を有し、アディポネクチンの低下により引き起こされる２型糖尿病や肥満等の疾患の治療剤及び／又は予防剤として有用である。また、本発明に係る、トマトのＭＴＢＥ抽出物を有効成分として含有する、ＡｄｉｐｏＲ作動用食品組成物は、優れたＡｄｉｐｏＲ活性化作用を有し、アディポネクチンの低下により引き起こされる２型糖尿病や肥満等の疾患の治療及び／又は予防用食品組成物として有用である。
本発明のアディポネクチン作動薬及びアディポネクチン作動用食品組成物は、アディポネクチンの産生を促進したり、ＡｄｉｐｏＲの発現を促進したりしても、アディポネクチンの効果を期待することができない、遺伝的素養によりアディポネクチン分泌に異常を来している患者に対しても、ＡｄｉｐｏＲに作用して、ＡｄｉｐｏＲを直接活性化させることができるため、アディポネクチン分泌異常に起因する２型糖尿病や肥満等の疾患の治療剤及び／又は予防剤、並びに前記疾患の治療用食品組成物及び／又は予防用食品組成物として有用である。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】トマト由来のカロテノイド及びトルレンのＡＭＰキナーゼ（ＡＭＰＫ）のリン酸化作用を示す図である。
【図２】α−カロテン及びフコキサンチンのＡＭＰキナーゼ（ＡＭＰＫ）のリン酸化作用を示す図である。
【図３】ＡｄｉｐｏＲのノックダウンによる、β−カロテンのＡＭＰキナーゼ（ＡＭＰＫ）のリン酸化に対する抑制作用を示す図である。
【図４】ＡｄｉｐｏＲのノックダウンによる、リコピンのＡＭＰキナーゼ（ＡＭＰＫ）のリン酸化に対する抑制作用を示す図である。
【図５】トマトのＭＴＢＥ抽出物及びトマトの８０％メタノール抽出物のＡＭＰキナーゼ（ＡＭＰＫ）のリン酸化作用を示す図である。
【図６】ＡｄｉｐｏＲのノックダウンによる、トマトのＭＴＢＥ抽出物のＡＭＰキナーゼ（ＡＭＰＫ）のリン酸化に対する抑制作用を示す図である。
【図７】オールトランスリコピン、１３−シスリコピンのＡＭＰキナーゼ（ＡＭＰＫ）のリン酸化作用を示す図である。
【図８】オールトランスβ−カロテン、９−シスβ−カロテン及び１３−シスβ−カロテンのＡＭＰキナーゼ（ＡＭＰＫ）のリン酸化作用を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
以下、本発明について詳しく説明する。
≪トマト由来のカロテノイド≫
本発明において用いられるトマト由来のカロテノイドとしては、トマトに含まれるカロテノイドであれば、特に制限はないが、例えば、フィトエン、フィトフルエン、β−カロテン、リコピン、α−カロテン等が挙げられるが、β−カロテン及びリコピンが好ましい。
【００１４】
本発明において用いられるトマト由来のカロテノイドは特に限定されず、天然の成分であっても、合成されたものであってもよい。また、トマト由来のカロテノイドが体内で吸収・分解された際に生じるものであってもよい。例えば、β−カロテンの代わりに、β−カロテンが体内で吸収分解された際に生じるレチナール、レチノイン酸の形態で用いてもよい。
【００１５】
β−カロテンは、下記構造を有する分子量５３６．８７のカロテノイドであり、水には殆ど溶けない脂溶性の橙色色素である。
【００１６】
【化１】
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【００１７】
本発明において用いられるβ−カロテンは、異性体が存在する。該異性体としては、オールトランス異性体（以下、オールトランス体ともいう）と、１１個の共役π結合のうち、少なくとも１個にシス型を含む、シス異性体（以下、シス体ともいう）等が挙げられる。該シス異性体としては、５−シス体、９−シス体、１３−シス体等が挙げられる。本発明において用いられるβ−カロテンは、これらのβ−カロテンのいずれであってもよいが、シス体であることが好ましい。
【００１８】
リコピンは、下記構造を有する分子量５３６．８７のカロテノイドであり、水には殆ど溶けない脂溶性の赤色色素である。
【００１９】
【化２】
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【００２０】
本発明において用いられるリコピンは、異性体が存在する。該異性体としては、オールトランス異性体（以下、オールトランス体ともいう）と、１１個の共役π結合のうち、少なくとも１個にシス型を含む、シス異性体（以下、シス体ともいう）等が挙げられる。該シス異性体としては、５−シス体、９−シス体、１３−シス体等が挙げられる。本発明において用いられるリコピンは、これらのリコピンのいずれであってもよいが、シス体であることが好ましい。
【００２１】
リコピンは、天然においては、トマト、柿、スイカ、ピンクグレープフルーツなどの天然物に含まれており、本発明において用いられるリコピンは、これらの天然物から分離及び抽出されたのものであってもよい。
【００２２】
また、本発明において用いられるリコピンは、天然物からの抽出物を必要に応じて適宜精製したものでもよいし、合成品であってもよい。
【００２３】
また、本発明において用いられるリコピンは、リコピン誘導体であってもよい。該リコピンの誘導体としては、例えば、レチノイン酸のようなカロテノイド、合成アシクロ−レチノイン酸、１−ＨＯ−３’，４’−ジデヒドロリコピン、３，１’−（ＨＯ）２−γ−カロテン、１，１’−（ＨＯ）２−３，４，３’，４’−テトラデヒドロリコピン、１，１’−（ＨＯ）２−３，４−ジデヒドロリコピン等が挙げられ、常法に従い、製造することができる。
【００２４】
本発明において用いられるリコピンの形態の一つとしては、トマト加工品から抽出された脂溶性抽出物が挙げられる。トマト加工品としては、トマトペースト、トマトピューレ、トマトジュース、トマトパルプ等が挙げられる。該トマト加工品から抽出された脂溶性抽出物は、当該脂溶性抽出物を含む組成物中における安定性、品質、生産性の点から特に好ましい。
ここで、トマト加工品から抽出された脂溶性抽出物とは、トマト加工品から、有機溶剤や油を用いて抽出された抽出物や超臨界抽出法によって抽出された抽出物を意味する。脂溶性抽出物であるリコピンとしては、リコピン含有オイル又はオレオレジンとして広く市販されているトマト抽出物を用いることができ、例えば、サンブライト（株）より販売されているＬｙｃ−Ｏ−Ｍａｔｏ  １５％、Ｌｙｃ−Ｏ−Ｍａｔｏ  ６％、協和発酵バイオ（株）より販売されているリコピン１８等が挙げられる。
【００２５】
≪その他のカロテノイド≫
本発明において用いられるカロテノイドとしては、前記トマト由来のカロテノイド以外に、トルレン、フコキサンチン等が挙げられる。
本発明において用いられるトルレン、及びフコキサンチンは特に限定されず、天然の成分であっても、合成されたものであってもよい。
【００２６】
≪トマトのＭＴＢＥ抽出物≫
本発明において用いられる、トマトのＭＴＢＥ抽出物としては、トマトから、メタノール：メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル＝１：３の溶媒を用いて抽出された抽出物等が挙げられる。使用されるトマトとしては、トマトそのものであっても、前記トマト加工品であってもよい。トマトのＭＴＢＥ抽出物は、当該抽出物をさらに濃縮等の処理や精製を行ったものであってもよい。トマトのＭＴＢＥ抽出物は、カロテノイド等の脂溶性成分を多く含む。それに対し、トマトを、８０％メタノール水溶液（以下、８０％メタノールとも称する）で抽出した抽出物は、トマトの水溶性成分を多く含む。
トマトのＭＴＢＥ抽出物は、例えば、トマトに、メタノール:メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル＝１：３の溶媒を添加し、ビーズ破砕機等を用いて溶媒内でトマトを破砕した後、超音波処理を行い、得られたトマト破砕物にメタノール：水＝１：３の溶媒を加えて混和して遠心分離し、得られる上清を乾固させること等により得ることができる。
【００２７】
≪ＡｄｉｐｏＲ作動薬≫
トマト由来のカロテノイド、トルレン、及びフコキサンチンは、ＡｄｉｐｏＲを活性化させ、ＡｄｉｐｏＲ作動薬として機能する。また、トマトのＭＴＢＥ抽出物は、ＡｄｉｐｏＲを活性化させ、ＡｄｉｐｏＲ作動薬として機能する。従って、トマト由来のカロテノイドを有効成分として含有する、ＡｄｉｐｏＲ作動薬、フィトエン、フィトフルエン、β−カロテン、トルレン、リコピン、α−カロテン及びフコキサンチンからなる群から選ばれる少なくとも１種のカロテノイドを有効成分として含有する、ＡｄｉｐｏＲ作動薬、及びトマトのＭＴＢＥ抽出物を有効成分として含有する、ＡｄｉｐｏＲ作動薬は、ＡｄｉｐｏＲが活性化されないことにより引き起こされる状態又は疾病の治療及び／又は予防に用いることができる。例えば、インスリン抵抗性の改善、ＴＮＦ−α産生の抑制、及び２型糖尿病、動脈硬化、冠動脈疾患、腎不全、心筋梗塞、高血圧、肝線維化、肥満等の治療及び／又は予防に用いることができる。
【００２８】
また、本発明のＡｄｉｐｏＲ作動薬は、アディポネクチンの産生を促進したり、ＡｄｉｐｏＲの発現を促進したりしても、アディポネクチンの効果を期待することができない、遺伝的素養によりアディポネクチン分泌に異常を来している患者に対しても、ＡｄｉｐｏＲに作用して、ＡｄｉｐｏＲを直接活性化させることができるため、アディポネクチン分泌異常に起因する２型糖尿病や肥満等の疾患の治療剤及び／又は予防剤として用いることができる。
【００２９】
トマト由来のカロテノイド、トルレン、フコキサンチン、及びトマトのＭＴＢＥ抽出物は、そのままでＡｄｉｐｏＲ作動薬とすることができるし、さらに他の任意成分を配合してＡｄｉｐｏＲ作動薬としてもよい。このような任意成分は、ＡｄｉｐｏＲの活性化作用が期待され、かつ安全性が確認されているものを特に制限なく用いることができる。
【００３０】
本発明に係るＡｄｉｐｏＲ作動薬の投与形態としては、例えば錠剤、被覆錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、溶液、シロップ剤、乳液等による経口投与を挙げることができる。これらの各種製剤は、常法に従って主薬である、トマト由来のカロテノイド、トルレン、フコキサンチン、又はトマトのＭＴＢＥ抽出物に加えて、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤、矯味矯臭剤、溶解補助剤、懸濁剤、コーティング剤などの医薬等の製剤技術分野において通常使用しうる既知の補助剤を用いて製剤化することができる。
【００３１】
本発明のＡｄｉｐｏＲ作動薬におけるトマト由来のカロテノイド、トルレン、フコキサンチン、及びトマトのＭＴＢＥ抽出物の含有量は、剤型によって異なるため特に限定されない。
【００３２】
本発明のＡｄｉｐｏＲ作動薬の投与量は、個々の有効成分の活性、患者の性別、症状、年齢、投与方法によって異なるが、例えば、トマト由来のカロテノイド、トルレン、フコキサンチン、又はトマトのＭＴＢＥ抽出物を、通常、成人１人、１日当たり、５〜５００ｍｇ、好ましくは、４０ｍｇ〜２００ｍｇ投与することができる量である。例えば、ＡｄｉｐｏＲ作動薬全量に対して、トマト由来のカロテノイド、トルレン、フコキサンチン、又はトマトのＭＴＢＥ抽出物を好ましくは１〜９５％質量％、より好ましくは、１０〜４０質量％の割合とする。
【００３３】
本発明のＡｄｉｐｏＲ作動薬を投与する対象は、動物、中でも哺乳類が挙げられる。哺乳類としては、特に制限はないが、例えば、ヒト、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ等が挙げられ、ヒトであることが好ましい。また、本発明のＡｄｉｐｏＲ作動薬は、ＡｄｉｐｏＲが活性化されないことに伴う疾患に対する予防剤として、ＡｄｉｐｏＲが活性化されないことに伴う疾患を発症していない上記対象に投与することもできる。
【００３４】
本発明のＡｄｉｐｏＲ作動薬のＡｄｉｐｏＲ活性化作用の測定は、ＡｄｉｐｏＲが活性化されたことに伴う作用を測定することであれば特に制限はないが、例えば、アディポネクチンがＡｄｉｐｏＲに結合した際の下流シグナルである、ＡＭＰキナーゼ（以下、ＡＭＰＫと称する）のリン酸化を測定することにより行うことができる。被検物質投与下におけるリン酸化したＡＭＰＫ（ｐＡＭＰＫ）の量と、被検物質非投与下でのリン酸化したＡＭＰＫの量との比（ｐＡＭＰＫ／ＡＭＰＫ比）が高くなれば当該被検物質はＡｄｉｐｏＲ活性化作用を有すると評価することができる。
【００３５】
また、前記ＡＭＰＫのリン酸化は、ＡｄｉｐｏＲの活性化以外でも起こるため、前記ＡＭＰＫのリン酸化が、ＡｄｉｐｏＲを介して生じていることの判断は、ｓｉＲＮＡによりＡｄｉｐｏＲをノックダウンした系におけるＡＭＰＫのリン酸化を測定し、ＡｄｉｐｏＲをノックダウンしていない系で認められるＡＭＰＫのリン酸化が、ＡｄｉｐｏＲをノックダウンした系で認められるか否かを確認することにより行うことできる。例えば、ＡｄｉｐｏＲノックダウンしていない系で認められるＡＭＰＫのリン酸化が、ＡｄｉｐｏＲをノックダウンした系で認められない場合は、ＡＭＰＫのリン酸化は、ＡｄｉｐｏＲの活性化により生じたものと判断することができる。
【００３６】
≪アディポネクチン分泌異常に起因する疾患の治療剤及び／又は予防剤≫
本発明のＡｄｉｐｏＲ作動薬は、ＡｄｉｐｏＲを直接活性化することができるため、本発明のＡｄｉｐｏＲ作動薬は、アディポネクチン分泌異常に起因する疾患の治療剤及び／又は予防剤の有効成分として用いることができる。
本発明によって治療或いは予防されるアディポネクチン分泌異常に起因する疾患は、アディポネクチンが分泌異常により、分泌されない、或いは、分泌されても少量しか分泌されないため、ＡｄｉｐｏＲが活性化されないことにより引き起こされる疾患であれば特に制限はないが、例えば、アディポネクチンの産生を促進したり、ＡｄｉｐｏＲの発現を促進したりしても、アディポネクチンの効果を期待することができない、遺伝的素養によりアディポネクチン分泌が異常となっていることに伴う疾患を挙げることができる。
【００３７】
本発明のアディポネクチン分泌異常に起因する疾患の治療剤及び／又は予防剤の投与形態としては、例えば錠剤、被覆錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、溶液、シロップ剤、乳液等による経口投与を挙げることができる。これらの各種製剤は、常法に従って主薬であるトマト由来のカロテノイド、トルレン、フコキサンチン、又はトマトのＭＴＢＥ抽出物に加えて、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤、矯味矯臭剤、溶解補助剤、懸濁剤、コーティング剤などの医薬等の製剤技術分野において通常使用しうる既知の補助剤を用いて製剤化することができる。
【００３８】
本発明のアディポネクチン分泌異常に起因する疾患の治療剤及び／又は予防剤におけるトマト由来のカロテノイド、トルレン、フコキサンチン、又はトマトのＭＴＢＥ抽出物の含有量は、剤型によって異なるが、一般にアディポネクチン分泌異常に起因する疾患の治療剤及び／又は予防剤の全質量に対して、１質量％〜９５質量％であることが好ましく、１０〜４０質量％であることがより好ましい。
【００３９】
本発明のアディポネクチン分泌異常に起因する疾患の治療剤及び／又は予防剤の投与量は、個々の有効成分の活性、患者の性別、症状、年齢、投与方法によって異なるが、例えば、トマト由来のカロテノイド、トルレン、フコキサンチン、又はトマトのＭＴＢＥ抽出物を、通常、成人１人、１日当たり、５〜５００ｍｇ、好ましくは、４０ｍｇ〜２００ｍｇ投与することができる量である。例えば、アディポネクチン分泌異常に起因する疾患の治療剤及び／又は予防剤全量に対して、トマト由来のカロテノイド、トルレン、フコキサンチン、又はトマトのＭＴＢＥ抽出物を好ましくは１〜９５％質量％、より好ましくは、１０〜４０質量％の割合とする。
【００４０】
本発明のアディポネクチン分泌異常に起因する疾患の治療剤及び／又は予防剤を投与する対象は、動物、中でも哺乳類が挙げられる。哺乳類としては、特に制限はないが、例えば、ヒト、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ等が挙げられ、ヒトであることが好ましい。
【００４１】
≪食品組成物≫
本発明により、トマト由来のカロテノイドを有効成分として含有する、ＡｄｉｐｏＲ作動用食品組成物、及びフィトエン、フィトフルエン、β−カロテン、トルレン、リコピン、α−カロテン及びフコキサンチンからなる群から選ばれる少なくとも１種のカロテノイドを有効成分として含有する、ＡｄｉｐｏＲ作動用食品組成物、及びトマトのＭＴＢＥ抽出物を有効成分として含有するＡｄｉｐｏＲ作動用食品組成物を提供することができる。本発明に係るトマト由来のカロテノイド、トルレン、フコキサンチン及びトマトのＭＴＢＥ抽出物は、ＡｄｉｐｏＲ活性化作用を有するため、ＡｄｉｐｏＲ作動用食品組成物の有効成分として、各種食品組成物に含有させることができる。本発明において、食品組成物には、食品だけでなく飲料も含む。
【００４２】
本発明の食品組成物において、トマト由来のカロテノイドは、フィトエン、フィトフルエン、β−カロテン、トルレン、リコピン、α−カロテン等が挙げられ、β−カロテン及びリコピンが好ましく用いられる。
【００４３】
本発明の食品組成物において、トマトのＭＴＢＥ抽出物としては、トマトから、メタノール：メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル＝１：３の溶媒を用いて抽出された抽出物等が挙げられる。前記トマトとしては、トマトそのものであっても、前記トマト加工品であってもよい。トマトのＭＴＢＥ抽出物は、当該抽出物をさらに濃縮等の処理や精製を行ったものであってもよい。トマトのＭＴＢＥ抽出物は、カロテノイド等の脂溶性成分を多く含む。
【００４４】
本発明のＡｄｉｐｏＲ作動用食品組成物により治療及び／又は予防することができる疾患としては、ＡｄｉｐｏＲが活性化されないことにより引き起こされる状態又は疾病であれば特に制限はないが、例えば、インスリン抵抗性の改善、ＴＮＦ−α産生の抑制、及び２型糖尿病、動脈硬化、冠動脈疾患、腎不全、心筋梗塞、高血圧、肝線維化、肥満等を挙げることができる。
【００４５】
また、本発明のＡｄｉｐｏＲ作動用食品組成物は、アディポネクチンの産生を促進したり、ＡｄｉｐｏＲの発現を促進したりしても、アディポネクチンの効果を期待することができない、遺伝的素養によりアディポネクチン分泌に異常を来している患者に対しても、ＡｄｉｐｏＲに作用して、ＡｄｉｐｏＲを直接活性化させることができるため、アディポネクチン分泌異常による２型糖尿病や肥満等の疾患の治療及び／又は予防用食品組成物として用いることができる。
【００４６】
トマト由来のカロテノイド、トルレン、フコキサンチン、及びトマトのＭＴＢＥ抽出物は、そのままでＡｄｉｐｏＲ作動用食品組成物とすることができるし、さらに他の任意成分を配合してＡｄｉｐｏＲ作動用食品組成物としてもよい。このような任意成分は、ＡｄｉｐｏＲを活性化作用が期待され、かつ安全性が確認されているものを特に制限なく用いることができる。
【００４７】
本発明のＡｄｉｐｏＲ作動用食品組成物を摂取させる対象は、動物、中でも哺乳類が挙げられる。哺乳類としては、特に制限はないが、例えば、ヒト、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ等が挙げられ、ヒトであることが好ましい。また、本発明のＡｄｉｐｏＲ作動用食品組成物は、ＡｄｉｐｏＲが活性化されないことに伴う疾患に対する予防用食品組成物として、ＡｄｉｐｏＲが活性化されないことに伴う疾患を発症していない上記対象に摂取させることもできる。
【００４８】
本発明のＡｄｉｐｏＲ作動用食品組成物は、ＡｄｉｐｏＲを直接活性化することができるため、本発明のＡｄｉｐｏＲ作動用食品組成物は、アディポネクチン分泌異常に起因する疾患の治療及び／又は予防用食品組成物の有効成分として用いることができる。
本発明によって治療或いは予防されるアディポネクチン分泌異常に起因する疾患は、アディポネクチンが分泌異常により、分泌されない、或いは、分泌されても少量しか分泌されないため、ＡｄｉｐｏＲが活性化されないことにより引き起こされる疾患であれば特に制限はないが、例えば、アディポネクチンの産生を促進したり、ＡｄｉｐｏＲの発現を促進したりしても、アディポネクチンの効果を期待することができない、遺伝的素養によりアディポネクチン分泌が異常となっていることに伴う疾患を挙げることができる。
【００４９】
本発明のＡｄｉｐｏＲ作動用食品組成物、及びアディポネクチン分泌異常に起因する疾患の治療及び／又は予防用食品組成物（以下、本発明の食品組成物と総称する）としては、特に限定されないが、例えば、各種飲料、ヨーグルト、チーズ、バター、乳酸菌発酵品等の各種乳製品、流動食、ゼリー、キャンディ、レトルト食品、錠菓、クッキー、カステラ、パン、ビスケット、などが挙げられる。また、健康食品、機能性表示食品、特別用途食品、病者用食品、栄養補助食品、サプリメント又は特定保健用食品等として使用することもできる。
【００５０】
本発明の食品組成物には、可食性の、炭水化物、蛋白質、脂質、ビタミン類、ミネラル類、糖質（ブドウ糖、等）、天然又は人工甘味剤、クエン酸、炭酸水、果汁、安定剤、保存剤、結合剤、増粘剤、乳化剤などを適宜配合することができる。
【００５１】
本発明の食品組成物の摂取量は、その形態によって異なるが、トマト由来のカロテノイド、トルレン、フコキサンチン又はトマトのＭＴＢＥ抽出物を、１通常、成人１人、１日当たり、５〜５００ｍｇ、好ましくは、４０ｍｇ〜２００ｍｇ投与することができる量である。例えば、ＡｄｉｐｏＲ作動用食品組成物１００ｇ中に、トマト由来のカロテノイド、トルレン、フコキサンチン又はトマトのＭＴＢＥ抽出物を好ましくは５〜５００ｍｇ、より好ましくは、４０〜２００ｍｇ含有させる。なお、トマトを主成分とした食品組成物にＡｄｉｐｏＲ作動薬を配合する場合には、トマト中のカロテノイドの量に合わせて上記トマト由来のカロテノイド量となるように、ＡｄｉｐｏＲ作動薬の含有量を調節することができる。
【００５２】
本発明の食品組成物の摂取回数は、特に限定されないが、好ましくは１日１〜３回であり、必要に応じて摂取回数を増減してもよい。なお、「１日当り」とは、本発明の食品組成物の形態によって異なるが、表示される１日の摂取目安量や、通常１度で消費する飲みきりタイプの飲料であれば１本当りに含まれる量を指すものである。
【００５３】
上記の食品組成物は、ＡｄｉｐｏＲ活性化による、ＡｄｉｐｏＲが活性化されないことに伴う各種疾患の治療及び／又は予防作用を有する旨の表示をした食品組成物であってもよい。前記ＡｄｉｐｏＲが活性化されないことに伴う各種疾患に対する治療及び／又は予防作用を有する旨の表示をした食品組成物としては、例えば、遺伝的素養による、アディポネクチン分泌異常に起因する各種疾患に対して治療及び／又は予防作用を有する旨の表示を付した食品組成物等が挙げられる。
【実施例】
【００５４】
以下、実施例により本発明をより具体的に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
【００５５】
［実施例１］
１０％ウシ胎児血清、１％ペニシリン−ストレプトマイシン（以下、Ｐ／Ｓと略記する）を加えた高グルコースダルベッコ改変イーグル培地（以下、ＤＭＥＭと略記する）を使用し、マウス筋芽細胞株Ｃ２Ｃ１２を１２ウェルプレートに２×１０５細胞／ウェルで播種した。３日後、２％ウマ血清、１％Ｐ／Ｓを含むＤＭＥＭを分化誘導培地として使用して培地交換を行った。その後、２日おきに分化誘導培地の交換を行い、５日間分化誘導を行った。５日後、無血清のＤＭＥＭで一晩培養した。
【００５６】
一晩培養後、Ｃ２Ｃ１２の培養液を除去し、被験薬として、フィトエン、フィトフルエン、β−カロテン（オールトランス体）、トルレン、リコピン（オールトランス体）及びカロテノイドと類似構造を有するレチノール及びゲラニルゲラニオール（ＧＧＯＨ）、並びに、陽性コントロールとしてＡｄｉｐｏＲを活性化することが知られている下記構造式で表されるアディポロン（ＡｄｉｐｏＲｏｎ；Ｎａｔｕｒｅ  ５０３：４９４−４９９  ２０１３）を用い、各被験薬を１μＭ（アディポロンは１μＭと５０μＭ）となるように溶解した無血清のＤＭＥＭを添加して１０分間培養することで、被験薬をＣ２Ｃ１２に１０分間反応させた。なお、各被験薬の溶媒として０．２％Ｔｗｅｅｎ−２０を含むテトラヒドロフランを使用し、ＤＭＥＭ中の溶媒の最終濃度が０．０５％になるようにして各被験薬を添加した。コントロールとしては、０．０５％の溶媒のみを含むＤＭＥＭを用いた。
【００５７】
【化３】
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【００５８】
反応後、Ｃ２Ｃ１２をリン酸緩衝生理食塩水（Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｂｕｆｆｅｒｅｄ  ｓａｌｉｎｅ；ＰＢＳ）で洗浄し、細胞溶解液（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、５ｍＭ  ＥＤＴＡ、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、０．５％  Ｎｏｎｉｄｅｔ  Ｐ−４０、１％  ｐｒｏｔｅａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ、１％  ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）を添加した。続いて、氷上でスクレイパーにて細胞を回収し、超音波処理により細胞を破砕した。得られた細胞破砕物を遠心分離し、上清をタンパク質溶液として回収した。回収タンパク質の濃度を測定後、タンパク質溶液に等量のＳＤＳサンプルバッファー（１２５ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ  ６．８）、４％  ＳＤＳ、１０％  スクロース、１０％  ２−メルカプトエタノール、０．０１％  ブロモフェノールブルー）を加えて混合し、沸騰水中で３分間煮沸処理したものを、泳動用サンプルとして以降のウエスタンブロットまで−３０℃にて保存した。  
【００５９】
泳動用サンプルを、各サンプルのタンパク質量が１０μｇになるようにして１０％アクリルアミドゲルを用いたポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）に供した。タンパク質をＰＶＤＦ膜に転写後、１次抗体として抗ｐＡＭＰＫ抗体（Ｃｅｌｌ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ社製、＃２５３５）または抗ＡＭＰＫ抗体（Ｃｅｌｌ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ社製、＃５８３１）、２次抗体としてＨＲＰ標識抗ウサギＩｇＧ抗体（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社製、＃ｓｃ−２００４）、及び検出試薬としてＭｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｉｍｍｏｂｉｌｏｎ  Ｗｅｓｔｅｒｎを用いて、リン酸化されたＡＭＰＫ（ｐＡＭＰＫ）又はＡＭＰＫを検出した。検出されたバンドの画像から、画像解析ソフト（ＩｍａｇｅＪ、ＮＩＨ）を用いてｐＡＭＰＫ及びＡＭＰＫの発現量を定量化し、ＡＭＰＫリン酸化活性の指標としてｐＡＭＰＫ／ＡＭＰＫ比を算出した。その結果を図１に示す。
【００６０】
図１に示したように、フィトエン、フィトフルエン、β−カロテン（オールトランス体）、トルレン、リコピン（オールトランス体）及び陽性コントロールであるアディポロンは、ｐＡＭＰＫ／ＡＭＰＫ比を上昇させ、ＡＭＰＫをリン酸化させることが確認された。それに対し、レチノール及びゲラニルゲラニオール（ＧＧＯＨ）は、ｐＡＭＰＫ／ＡＭＰＫ比を上昇させず、ＡＭＰＫをリン酸化させないことが確認された。
【００６１】
［実施例２］
被験薬として、α−カロテン及びフコキサンチンを用い、実施例１と同様にして、ｐＡＭＰＫ／ＡＭＰＫ比を算出した。その結果を図２に示す。
図２に示したように、α−カロテン及びフコキサンチンは、ｐＡＭＰＫ／ＡＭＰＫ比を上昇させ、ＡＭＰＫをリン酸化させることが確認された。
【００６２】
［実施例３］
実施例１で分化誘導して３日目のマウス筋芽細胞株Ｃ２Ｃ１２を、２％ウマ血清を含むＤＭＥＭで１回洗浄後、ＤＭＥＭを６００μＬ／ウェル加えた。
Ｏｐｔｉ−ＭＥＭ  Ｉ  Ｒｅｄｕｃｅｄ  Ｓｅｒｕｍ  Ｍｅｄｉｕｍ（ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製、以下、Ｏｐｔｉ−ＭＥＭと略記する）６０μＬにＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ  ２０００（ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製）を５μＬ添加し、５分間室温にて静置した。
一方、別のＯｐｔｉ−ＭＥＭ  ６０μＬに、配列番号１で表される塩基配列からなるセンス鎖と、配列番号２で表されるアンチセンス鎖とからなるｓｉＲＮＡ（ＱＩＡＧＥＮ社製、Ｍｍ＿Ａｄｉｐｏｒ１＿３、＃ＳＩ００８９０３０９）またはコントロールｓｉＲＮＡ（ＳＩＧＭＡ−ＡＬＤＲＩＣＨ社製、ＭＩＳＳＩＯＮ ｓｉＲＮＡ Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ Ｎｅｇａｔｉｖｅ Ｃｏｎｔｒｏｌ、＃ＳＩＣ−００１）を６０ｐｍｏｌ添加し、ここに５分間静置した前述のＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ  ２０００含有Ｏｐｔｉ−ＭＥＭ  ６０μＬを加え緩やかに混和して２０分間室温で静置した。
２０分後、計１２０μＬの上記Ｏｐｔｉ−ＭＥＭを、前述の６００μＬ／ウェルのＤＭＥＭで培養中のＣ２Ｃ１２に添加し、２日間培養した。２日後、実施例１と同様の方法で、β−カロテン（オールトランス体）をＣ２Ｃ１２に１０分間反応させ、ｐＡＭＰＫ及びＡＭＰＫの発現量の定量及びＡＭＰＫリン酸化活性の算出を行った。
【００６３】
その結果を図３に示す。図３において、「コントロール ｓｉＲＮＡ」は、ＡｄｉｐｏＲをノックダウンしない系でのｐＡＭＰＫ／ＡＭＰＫ比、「ＡｄｉｐｏＲ ｓｉＲＮＡ」は、ＡｄｉｐｏＲをｓｉＲＮＡによりノックダウンした系でのｐＡＭＰＫ／ＡＭＰＫ比をそれぞれ示す。
図３に示したように、ｐＡＭＰＫ／ＡＭＰＫ比は、β−カロテン（オールトランス体）の添加により上昇し、当該β−カロテンにより上昇したｐＡＭＰＫ／ＡＭＰＫ比は、ＡｄｉｐｏＲのノックダウンにより抑制された。
このことから、実施例１で見られた、β−カロテン（オールトランス体）によるＡＭＰＫのリン酸化は、ＡｄｉｐｏＲの活性化によるものであることが明らかとなった。
【００６４】
［実施例４］
β−カロテン（オールトランス体）の代わりに、リコピン（オールトランス体）を用い、実施例３と同様にして、ｐＡＭＰＫ／ＡＭＰＫ比を算出した。その結果を図４に示す。図４に示したように、ｐＡＭＰＫ／ＡＭＰＫ比は、リコピン（オールトランス体）の添加により上昇し、当該リコピンの添加により上昇したｐＡＭＰＫ／ＡＭＰＫ比は、ＡｄｉｐｏＲのノックダウンにより抑制された。
このことから、実施例１で見られた、リコピン（オールトランス体）によるＡＭＰＫのリン酸化は、ＡｄｉｐｏＲの活性化によるものであることが明らかとなった。
【００６５】
［実施例５］
（トマトのＭＴＢＥ抽出物の製造）
液体窒素を用いて凍結破砕したトマトを、氷上にて蓋付きのチューブに約１５０ｍｇ秤量し、トマト１５０ｍｇに対してメタノール: メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル＝１：３の溶媒を６００μＬ添加した。ビーズ破砕機を用いて溶媒内でトマトを破砕した後、２分間超音波処理を行った。トマト破砕物から色が抜けていることを確認後、チューブにメタノール：水＝１：３の溶媒を６００μＬ加え転倒混和し、４℃、１００００Ｇで５分間遠心分離した。溶液が２層に分離していることを確認後、橙色の上清を回収した。これを遠心エバポレーターにより乾固させることによりトマトのＭＴＢＥ抽出物を得た。
【００６６】
（トマトの８０％メタノール抽出物の製造）
液体窒素を用いて凍結破砕したトマトを７２時間凍結乾燥させた。その乾燥粉末約５０ｍｇを蓋付きのチューブに秤量し、トマト５０ｍｇに対して８０％メタノールを１ｍＬ添加した。ビーズ破砕機を用いて８０％メタノール中でトマトを破砕した後、１５，０００ｒｐｍ、４℃で１０分間遠心分離し、上清を回収した。回収した上清の一部を新しいチューブに移し、上清と等量の水を加えた後、転倒混和した。さらに、上清の１．２倍量のメタノール: メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル＝１：３の溶媒を加え、転倒混和後、４℃、１００００Ｇ、５分間遠心分離した。溶液が２層に分離していることを確認後、橙色の上清を除去し、下層の溶液を回収した。これを遠心エバポレーターにより乾固させることでトマトの８０％メタノール抽出物を得た。
【００６７】
（各抽出物のＡＭＰＫリン酸化活性の評価）
１０％ウシ胎児血清、１％Ｐ／Ｓを加えた高グルコースＤＭＥＭを使用し、マウス筋芽細胞株Ｃ２Ｃ１２を１２ウェルプレートに２×１０５細胞／ウェルで播種した。３日後、２％ウマ血清、１％Ｐ／Ｓを含むＤＭＥＭを分化誘導培地として使用して培地交換を行った。その後、２日おきに分化誘導培地の交換を行い、５日間分化誘導を行った。５日後、無血清のＤＭＥＭで一晩培養した。
【００６８】
一晩培養後、Ｃ２Ｃ１２の培養液を除去し、被験薬として、上記で得られたトマトのＭＴＢＥ抽出物、トマトの８０％メタノール抽出物、並びに、陽性コントロールとしてアディポロン（ＡｄｉｐｏＲｏｎ）を用い、各被験薬を１μＭ（アディポロンは５０μＭ）となるように溶解した無血清のＤＭＥＭを添加して１０分間培養することで、被験薬をＣ２Ｃ１２に１０分間反応させた。なお、トマトのＭＴＢＥ抽出物の溶媒としてジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を、トマトの８０％メタノール抽出物の溶媒として水を、それぞれ使用し、ＤＭＥＭ中の溶媒の最終濃度が１．０％になるようにして各被験薬を添加した。コントロールとしては、各抽出物に用いたものと同じ溶媒を１．０％含むＤＭＥＭを用いた。アディポロンの溶媒にはＤＭＳＯを用いた。
反応後、実施例１と同様にして、ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）を行い、リン酸化されたＡＭＰＫ（ｐＡＭＰＫ）又はＡＭＰＫを検出した。検出されたバンドの画像から、画像解析ソフト（ＩｍａｇｅＪ、ＮＩＨ）を用いてｐＡＭＰＫ及びＡＭＰＫの発現量を定量化し、ＡＭＰＫリン酸化活性の指標としてｐＡＭＰＫ／ＡＭＰＫ比を算出した。その結果を図５に示す。
図５に示したように、トマトのＭＴＢＥ抽出物及び陽性コントロールであるアディポロンは、ｐＡＭＰＫ／ＡＭＰＫ比を上昇させ、ＡＭＰＫをリン酸化させることが確認された。それに対し、トマトの８０％メタノール抽出物は、ｐＡＭＰＫ／ＡＭＰＫ比を上昇させず、ＡＭＰＫをリン酸化させないことが確認された。
【００６９】
［実施例６］
β−カロテン（オールトランス体）の代わりに、実施例５で得られたトマトのＭＴＢＥ抽出物を１００μｇ／ｍＬ用いる以外は、実施例３と同様にして、ｐＡＭＰＫ／ＡＭＰＫ比を算出した。その結果を図６に示す。
図６に示したように、ｐＡＭＰＫ／ＡＭＰＫ比は、トマトのＭＴＢＥ抽出物の添加により上昇し、当該ＭＴＢＥ抽出物により上昇したｐＡＭＰＫ／ＡＭＰＫ比は、ＡｄｉｐｏＲのノックダウンにより抑制された。
このことから、実施例５で見られた、トマトのＭＴＢＥ抽出物によるＡＭＰＫのリン酸化は、ＡｄｉｐｏＲの活性化によるものであることが明らかとなった。
【００７０】
［実施例７］
（シス体リコピンの調製）
リコピン（オールトランス体；以下、オールトランスリコピンともいう）をクロロホルムに溶解し、５０℃で一晩加温した。加温後、遠心濃縮器でクロロホルムを留去し乾固させ、−８０℃にて冷凍保存した。
上記で得られた乾固物をメタノール: メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル＝１：１の溶媒に溶解し、分取ＨＰＬＣ（Ｐｒｏｍｉｎｅｎｃｅシステム、島津製作所）を用いて、シス体リコピン（以下、シスリコピンともいう）である、１３−シスリコピンを分取後、乾固させた。
【００７１】
（シスリコピンのＡＭＰＫリン酸化活性の評価）
被験薬として、オールトランスリコピン、及び、上記で得られた１３−シスリコピンを、それぞれ０．２％Ｔｗｅｅｎ−２０を含むテトラヒドロフランに溶解したものを用い、実施例１と同様にして、ｐＡＭＰＫ／ＡＭＰＫ比を算出した。その結果を図７に示す。
図７に示したように、１３−シスリコピンは、オールトランスリコピンよりも強くｐＡＭＰＫ／ＡＭＰＫ比を上昇させ、シスリコピンは、オールトランスリコピンよりも強くＡＭＰＫをリン酸化させることが確認された。
【００７２】
［実施例８］
（シス体β−カロテンのＡＭＰＫリン酸化活性の評価）
被験薬として、β−カロテン（オールトランス体；以下、オールトランスβ−カロテンともいう）及び、シス体β−カロテン（以下、シスβ−カロテンともいう）である、９−シスβ−カロテン及び１３−シスβ−カロテンを用い、実施例１と同様にして、ｐＡＭＰＫ／ＡＭＰＫ比を算出した。その結果を図８に示す。
図８に示したように、９−シスβ−カロテン及び１３−シスβ−カロテンは、オールトランスβ−カロテンよりも強くｐＡＭＰＫ／ＡＭＰＫ比を上昇させ、シスβ−カロテンは、オールトランスβ−カロテンよりも強くＡＭＰＫをリン酸化させることが確認された。
【産業上の利用可能性】
【００７３】
本発明に係るトマト由来のカロテノイド、又はフィトエン、フィトフルエン、β−カロテン、トルレン、リコピン、α−カロテン、及びフコキサンチンからなる群から選ばれる少なくとも１種のカロテノイド、或いはトマトから、メタノールとメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルとの混合溶媒を用いて抽出された抽出物を有効成分として含有する、ＡｄｉｐｏＲ作動薬は、優れたＡｄｉｐｏＲ活性化作用を有し、アディポネクチンの低下により引き起こされる２型糖尿病や肥満等の疾患の治療剤及び／又は予防剤として利用可能である。また、本発明に係るトマト由来のカロテノイド、又はフィトエン、フィトフルエン、β−カロテン、トルレン、リコピン、α−カロテン、及びフコキサンチンからなる群から選ばれる少なくとも１種のカロテノイド、或いはトマトから、メタノールとメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルとの混合溶媒を用いて抽出された抽出物を有効成分として含有する、ＡｄｉｐｏＲ作動用食品組成物は、優れたＡｄｉｐｏＲ活性化作用を有し、２型糖尿病や肥満等の疾患の治療及び／又は予防用食品組成物として利用可能である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【配列表】
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