(57)【要約】      （修正有）【課題】癌組織選択性に優れ、毒性が非常に低く、抗癌剤として実用化の可能性が高い新物質を提供する。【解決手段】親水性のポリエチレングリコールと、スペーサ（ｓｐａｃｅｒ）グループとして、リシン、リシンを含むオリゴペプチド、アミノエタノール、アミノプロパノール、アミノブタノール、アミノペンタノール、およびアミノヘキサノールからなる群より選択された１種を導入した陽イオン性線状ポリホスファゼン化合物、前記化合物に疎水性薬物を化学的に結合させたポリホスファゼン−薬物コンジュゲート化合物およびその製造方法が適用できる。【選択図】図１２
2019123878.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記化学式１で表される線状のポリホスファゼン化合物：
［化学式１］
【化１】
2019123878.tif 000034
式中、ｎは、３〜３００の整数であり、ＭＰＥＧは、平均分子量３５０〜１０００のメトキシポリエチレングリコールを示し、Ｓは、スペーサグループとして、リシン、アルギニン、グルタミン、アスパラギン、チロシン、リシンを含むオリゴペプチド、アルギニンを含むオリゴペプチド、グルタミンを含むオリゴペプチド、アスパラギンを含むオリゴペプチド、チロシンを含むオリゴペプチド、アミノエタノール、アミノプロパノール、アミノブタノール、アミノペンタノール、およびアミノヘキサノールからなる群より選択される１種であり、ｌは、０〜０．９であり、ｍは、０．１〜１であり、ｌ＋ｍ＝１である。
【請求項２】
下記化学式２で表されるポリホスファゼン−薬物コンジュゲート化合物：
［化学式２］
【化２】
2019123878.tif 000035
式中、ｎは、３〜３００の整数であり、ＭＰＥＧは、平均分子量３５０〜１０００のメトキシポリエチレングリコールを示し、Ｓは、スペーサグループとして、リシン、アルギニン、グルタミン、アスパラギン、チロシン、リシンを含むオリゴペプチド、アルギニンを含むオリゴペプチド、グルタミンを含むオリゴペプチド、アスパラギンを含むオリゴペプチド、チロシンを含むオリゴペプチド、アミノエタノール、アミノプロパノール、アミノブタノール、アミノペンタノール、およびアミノヘキサノールからなる群より選択される１種であり、Ｌは、前記スペーサグループと前記薬物を化学結合で連結させることが可能なリンカー（ｌｉｎｋｅｒ）を示し、Ｄは、ＯＨまたはＮＨ２官能基を有する薬物であり、ｘとｙはそれぞれ、０〜０．５であり、ｚは、０より大きくて１．０以下であり、ｘ＋ｙ＋ｚ＝１である。
【請求項３】
前記Ｓは、リシンまたはリシンを含むジペプチドあるいはトリペプチドであることを特徴とする請求項２に記載のポリホスファゼン−薬物コンジュゲート化合物。
【請求項４】
前記Ｓは、アミノエタノールまたはアミノプロパノールであることを特徴とする請求項２に記載のポリホスファゼン−薬物コンジュゲート化合物。
【請求項５】
前記Ｄは、ドセタキセル（ｄｏｃｅｔａｘｅｌ）、パクリタキセル（ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）、カンプトテシン（ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ）、および［（トランス−１，２−ジアミノシクロヘキサン）白金（ＩＩ）］からなる群より選択された１種であることを特徴とする請求項２に記載のポリホスファゼン−薬物コンジュゲート化合物。
【請求項６】
前記化学式２は、下記化学式３〜５のいずれか１つで表されることを特徴とする請求項２に記載のポリホスファゼン−薬物コンジュゲート化合物：
［化学式３］
【化３】
2019123878.tif 000036
［化学式４］
【化４】
2019123878.tif 000037
前記化学式３および４において、ｎは、３〜３００の整数であり、ＭＰＥＧは、平均分子量３５０〜１０００のメトキシポリエチレングリコールを示し、Ｄは、ドセタキセル、パクリタキセル、カンプトテシン（ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ）、および［（トランス−１，２−ジアミノシクロヘキサン）白金（ＩＩ）］からなる群より選択された１種を示し、Ｒは、Ｃ１−６の線状、分枝状または環状アルキル、またはＯＣＨ２Ｂｚである。ここで、ｘとｙはそれぞれ、０〜０．５、ｚは、０より大きくて１．０以下の値を有し、ｘ＋ｙ＋ｚ＝１であり、
［化学式５］
【化５】
2019123878.tif 000038
前記化学式５において、ｎは、３〜３００の整数であり、ＭＰＥＧは、平均分子量３５０〜１０００のメトキシポリエチレングリコールを示し、Ｄは、ドセタキセル、パクリタキセル、およびカンプトテシンからなる群より選択される１種を示し、Ｒ’は、ｔ−ＢｏｃまたはＣＢＺグループを示し、ここで、ｘとｙはそれぞれ、０〜０．５、ｚは、０より大きくて１．０以下の値を有し、ｘ＋ｙ＋ｚ＝１である。
【請求項７】
（ａ）出発物質の六塩化環状ホスファゼンを熱重合してポリジクロロホスファゼン線状重合体を合成した後、メトキシポリエチレングリコールのナトリウム塩と反応させて、ポリホスファゼン高分子中間体を得るステップと、
（ｂ）前記ポリホスファゼン高分子中間体を、リシンエステル、リシンを含むオリゴペプチドのエステル、アミノエタノール、アミノプロパノール、アミノブタノール、アミノペンタノール、およびアミノヘキサノールからなる群より選択される１種と反応させて、親水性陽イオン性（ｃａｔｉｏｎｉｃ）ポリホスファゼン高分子薬物伝達体を製造するステップと、
（ｃ）ＯＨまたはＮＨ２官能基を有する薬物をリンカー（ｌｉｎｋｅｒ）を用いてポリホスファゼン高分子に化学結合で結合させるのに容易な薬物前駆体（ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ）を製造するステップと、
（ｄ）前記（ｂ）ステップのポリホスファゼン高分子薬物伝達体に前記（ｃ）ステップの薬物前駆体（ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ）を導入して、下記化学式２の化合物を得るステップと、を含む下記化学式２の化合物の製造方法：
［化学式２］
【化２】
2019123878.tif 000039
式中、ｎは、３〜３００の整数であり、ＭＰＥＧは、平均分子量３５０〜１０００のメトキシポリエチレングリコールを示し、Ｓは、スペーサグループとして、リシン、リシンを含むオリゴペプチド、アミノエタノール、アミノプロパノール、アミノブタノール、アミノペンタノール、およびアミノヘキサノールからなる群より選択される１種であり、Ｌは、前記スペーサグループと前記薬物を化学結合で連結させることが可能なリンカー（ｌｉｎｋｅｒ）を示し、Ｄは、ＯＨまたはＮＨ２官能基を有する薬物であり、ｘとｙはそれぞれ、０〜０．５であり、ｚは、０より大きくて１．０以下であり、ｘ＋ｙ＋ｚ＝１である。
【請求項８】
前記（ａ）ステップは、化学式１３のポリジクロロホスファゼン線状重合体を含む溶液を０℃未満の温度に冷却させた後、化学式１５のメトキシポリエチレングリコールのナトリウム塩溶液を徐々に加えて、化学式１６のポリホスファゼン高分子中間体を製造することを特徴とする請求項７に記載の前記化学式２の化合物の製造方法：
［化学式１３］
【化１３】
2019123878.tif 000040
前記化学式１３において、ｎは、３〜３００の整数であり、
［化学式１５］
【化１５】
2019123878.tif 000041
前記化学式１５において、ａは、７〜２２の値であり、
［化学式１６］
【化１６】
2019123878.tif 000042
前記化学式１６において、ｎは、３〜３００の整数であり、ａは、７〜２２の値であり、ｂは、０．５〜１．８の値である。
【請求項９】
前記（ｂ）ステップは、前記化学式１６のポリホスファゼン高分子中間体を、リシンエステル、リシンを含むオリゴペプチドのエステル、アミノエタノール、アミノプロパノール、アミノブタノール、アミノペンタノール、およびアミノヘキサノールからなる群より選択される１種と反応させて、下記化学式１９または化学式２０の親水性陽イオン性（ｃａｔｉｏｎｉｃ）ポリホスファゼン高分子薬物伝達体を製造することを特徴とする請求項７に記載の前記化学式２の化合物の製造方法：
［化学式１９］
【化１９】
2019123878.tif 000043
［化学式２０］
【化２０】
2019123878.tif 000044
前記化学式１９および２０において、ｎは、３〜３００の整数であり、ＭＰＥＧは、平均分子量３５０〜１０００のメトキシポリエチレングリコールを示し、ｂは、０．５〜１．８の値を有する。また、Ｒは、Ｃ１−６の線状、分枝状または環状アルキル、またはＯＣＨ２Ｂｚであり、Ｒ’は、ｔ−ＢｏｃまたはＣＢＺグループを示す。
【請求項１０】
前記（ｃ）ステップにおいて、リンカーは、無水アコニット酸であり、薬物は、タキサン系またはカンプトテシン系抗癌剤であることを特徴とする請求項７に記載の前記化学式２の化合物の製造方法。
【請求項１１】
（ａ）出発物質の六塩化環状ホスファゼンを熱重合してポリジクロロホスファゼン線状重合体を合成した後、メトキシポリエチレングリコールのナトリウム塩と反応させて、ポリホスファゼン高分子中間体を得るステップと、
（ｂ）前記ポリホスファゼン高分子中間体を、スペーサグループである、リシンエステル、リシンを含むオリゴペプチドのエステル、アミノエタノール、アミノプロパノール、アミノブタノール、アミノペンタノール、およびアミノヘキサノールからなる群より選択される１種と反応させて、親水性陽イオン性（ｃａｔｉｏｎｉｃ）ポリホスファゼン高分子薬物伝達体を製造するステップと、
（ｃ）前記（ｂ）ステップのポリホスファゼン高分子薬物伝達体のスペーサグループにリンカーを先に結合させるステップと、
（ｄ）前記（ｃ）ステップのポリホスファゼン高分子薬物伝達体のリンカーにＯＨまたはＮＨ２官能基を有する薬物を結合させて、下記化学式２の化合物を得るステップと、を含む下記化学式２の化合物の製造方法。
［化学式２］
【化２】
2019123878.tif 000045
式中、ｎは、３〜３００の整数であり、ＭＰＥＧは、平均分子量３５０〜１０００のメトキシポリエチレングリコールを示し、Ｓは、スペーサグループとして、リシン、リシンを含むオリゴペプチド、アミノエタノール、アミノプロパノール、アミノブタノール、アミノペンタノール、およびアミノヘキサノールからなる群より選択される１種であり、Ｌは、前記スペーサグループと前記薬物を化学結合で連結させることが可能なリンカー（ｌｉｎｋｅｒ）を示し、Ｄは、ＯＨまたはＮＨ２官能基を有する薬物であり、ｘとｙはそれぞれ、０〜０．５であり、ｚは、０より大きくて１．０以下であり、ｘ＋ｙ＋ｚ＝１である。
【請求項１２】
前記ＯＨまたはＮＨ２官能基を有する薬物は、ドセタキセル（ｄｏｃｅｔａｘｅｌ）、パクリタキセル（ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）、カンプトテシン（ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ）、および［（トランス−１，２−ジアミノシクロヘキサン）白金（ＩＩ）］からなる群より選択される１種であることを特徴とする請求項１１に記載の前記化学式２の化合物の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、優れた癌組織選択性と生体適合性を有する陽イオン性線状ポリホスファゼン薬物伝達体化合物を合成し、これに疎水性抗癌剤を化学的に結合させたコンジュゲート化合物およびその製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
現在、臨床で使用されているほとんどの抗癌剤は、分子量が１０００未満の低分子量の単量体である。特に、これら単量体の抗癌剤を静脈注射する場合、体内で正常細胞と癌細胞に対する選択性がなくて深刻な毒性と副作用を伴い、薬物が血中にとどまる半減期（１〜２時間）が短くて持続的な治療効果を期待することができず、抗癌剤治療の限界となっている。したがって、最近の抗癌剤の新薬開発において克服すべき最も核心的な技術は、抗癌剤薬物が癌部位に選択的に伝達する癌標的化（ｔｕｍｏｒ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ）技術と癌部位に到達した薬物が適期に適当な速度で抗癌剤を放出させる放出制御技術である。このような抗癌剤治療の限界を克服しようとする研究努力がここ数十年間世界的に活発に行われてきており、その結果、高分子薬物伝達体を用いることが最も効果的で実用的であることが分かり、最近は高分子治療法（ｐｏｌｙｍｅｒ  ｔｈｅｒａｐｙ）という新たな分野が誕生するに至った（Ｒ．Ｈａａｇ，Ｆ．Ｋｒａｔｚ，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．４５（２００６）１１９８−１２１５）。
【０００３】
これまで薬物伝達体として使用されている高分子は、ほとんどが有機系高分子である。数多くの天然または合成高分子が薬物伝達体として研究／試みられてきたが、実用化の可能性がある高分子は極少数に過ぎなかった。その理由は、高分子物質が特に抗癌剤伝達体として使用されるには、上記で説明された抗癌剤を運搬する薬物伝達体の癌選択性と薬物放出速度のほか、水溶性、生分解性、高分子自体の生体毒性、薬物との相溶性など多様な物性を同時に満足させなければならないからである。
【０００４】
本発明者らは、このような状況に対処して、以前から有機系炭素ではない無機系窒素（Ｎ）とリン（Ｐ）が交互に共役結合で連結されたポリホスファゼン（ｐｏｌｙｐｈｏｓｐｈａｚｅｎｅ）という無機高分子骨格に多様な有機グループを導入することにより、多様な物性の有機／無機ハイブリッド薬物伝達体を設計できることを見出し（Ｙｏｕｎ  Ｓｏｏ  Ｓｏｈｎ，ｅｔ  ａｌ．Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，１９９５，２８，７５６６）、ここ１０余年間、新たな癌組織選択性高分子型抗癌剤の開発に総力を傾けている。特に、本研究の初期には、多様な分子量の親水性ポリエチレングリコール（ＰＥＧ：ｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ））と多様な複数形態の疎水性オリゴペプチド（ｏｌｉｇｏｐｅｐｔｉｄｅ）を導入させて両親媒性ポリホスファゼンを合成することにより、温度感応性など多様な物性を有する知能型薬物伝達体を開発した。このような両親媒性ポリホスファゼンは、温度感応性ミセル、ヒドロゲルなどの多様なナノ構造体を形成するが、疎水性オリゴペプチドによる水に対する溶解度の減少および毒性の発現などの生体適合性に問題が発生することにより実用化に困難があることが分かった。すべての両親媒性高分子は、水溶液で加熱する場合、溶媒の水分子との親和力が低下し、一定温度に至ると高分子が沈殿で離れるが、この時の該温度を低臨界溶液温度（ｌｏｗｅｒ  ｃｒｉｔｉｃａｌ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ  ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ）という。静脈注射用薬物伝達体として使用するには、低臨界溶液温度が体温よりはるかに高ければ（５０℃以上）安全であるが、これらの両親媒性ポリホスファゼンは、ほとんど水溶液でこの温度が体温より低く、皮下注射などの局所伝達用抗癌剤伝達体としては好適であるが。静脈注射用薬物伝達体としては使用が不可能であった。
【０００５】
一方、代表的な疎水性抗癌剤であるタキサン系抗癌剤、すなわち、パクリタキセルおよびドセタキセルは、現在、臨床で乳癌、卵巣癌、小細胞肺癌など様々な種類の癌に優れた治療効果を示し、最も広く使用される抗癌剤の一つである。しかし、これらのタキサン系抗癌剤は、疎水性が強くて水に対する溶解度（＜１μｇ／ｍｌ）が低すぎるため、そのまま注射剤として使用できず、界面活性剤であるポリソルベート８０（Ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ８０）またはクレモフォール（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒｅ  ＥＬ）とエチルアルコールに製剤されて使用されている。しかし、そのように製剤化されたタキサン系抗癌剤は、溶解剤として使用される界面活性剤とアルコールに起因する神経毒性などの副作用とタキサン系抗癌剤自体の強い毒性のため、その使用が大きく制限されている。
【０００６】
したがって、このような問題を解決するために、特にここ１０余年間、世界的に多くの研究が多方面で進められているが、なかでも、特に最近は、有機系高分子ミセルなど多様なナノ構造体を用いようとする研究が活発に行われている。特に、親水性ブロックと疎水性ブロックとから構成された両親媒性高分子ミセルの場合、疎水性グループがミセル内部の核をなすため、タキサンのような疎水性薬物をミセルの核の内部に効率的に捕集して可溶化することができる。また、タキサン分子にポリエチレングリコールのような親水性基を直接化学的に結合させて可溶化したコンジュゲート型抗癌剤と、水溶性ポリグルタミン酸にパクリタキセルを結合させた高分子コンジュゲート型抗癌剤など、様々な種類の高分子型抗癌剤が現在臨床試験段階に入っている。
【０００７】
このように低分子量の抗癌剤を高分子にコンジュゲーションさせた高分子型予備薬物（ｐｒｏｄｒｕｇ）は、薬物の体内滞留時間を延長し、癌組織の特性と高分子粒子の「向上した透過保全（ｅｎｈａｎｃｅｄ  ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ  ａｎｄ  ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ（ＥＰＲ））効果（Ｍａｅｄａ  Ｈ，ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｒｅｌｅａｓｅ６５（２０００）２７１−２８４）」によって癌組織選択性を付与し、薬物放出速度を制御することにより、治療効果を極大化し、また、毒性を画期的に低減することができる点で最も合理的な接近方法として期待されている。これまでの研究報告によれば、高分子ナノ粒子の場合、「向上した透過保全（ＥＰＲ）効果」によって癌選択性を示すには、高分子粒子の大きさが５０〜２００ｎｍ程度にはならなければならないことが知られている（Ｔｏｒｃｈｉｌｉｎ  Ｖ．Ｐ．，Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｒｅｌｅａｓｅ７３（２００１）１３７−１７２）。また、最近、遺伝子伝達体に対する研究によれば、陽イオン性高分子の場合、陰イオンの性質を呈する細胞内で透過効率が大きく向上するという事実が知られている（Ｇａｂｒｉｅｌｓｏｎ，Ｎ．Ｐ．；Ｐａｒｋ，Ｄ．Ｗ．Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｒｅｌｅａｓｅ１３６（２００９）５４−６１）。しかし、現在最も進展した第ＩＩＩ相臨床試験中にあるポリグルメックス（ｐｏｌｉｇｌｕｍｅｘ）は、ポリグルタミン酸にパクリタキセルをエステル結合でコンジュゲーションさせた予備薬物として強い陰イオンを呈しており、パクリタキソールを最大３０％まで溶かせる特徴を持っているが、癌組織以外の他の器官により多く蓄積されるという欠点（Ｗａｌｌａｃｅ  Ｓ．；Ｌｉ  Ｃ．Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．６０（２００８）８８６−８９８）があって、実用化が遅延されている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Ｒ．Ｈａａｇ，Ｆ．Ｋｒａｔｚ，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．４５（２００６）１１９８−１２１５
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
したがって、本発明の目的は、優れた癌組織選択性を示す新たな陽イオン性ポリホスファゼン系薬物伝達体化合物およびこれらのポリホスファゼン系薬物伝達体化合物に抗癌剤を化学的に結合させたコンジュゲート型化合物、そしてその製造方法を提供することである。
【００１０】
本発明者らは、上述した技術的背景の下で、より優れた癌組織選択性を示す抗癌剤薬物伝達体を開発するために努力している間、ポリホスファゼン骨格に、溶解剤として、親水性のポリエチレングリコールと、疎水性抗癌剤を前記高分子に化学結合で連結させることが可能な多重官能基を有するスペーサ（ｓｐａｃｅｒ）グループとして、アミノ酸、アミノ酸を含むオリゴペプチド、および線状アミノアルコールからなる群より選択される１種を導入して、新たな薬物伝達用ポリホスファゼン化合物を合成した。このように合成された薬物伝達用ポリホスファゼン化合物は、陽イオン（ｃａｔｉｏｎ）性と体内残留時間が非常に長い（３日以上）癌組織選択性とを有するという事実を見出した。また、この化合物に、酸性条件で薬物を放出できるリンカー（ｌｉｎｋｅｒ）を用いて疎水性抗癌剤をコンジュゲーションさせることにより、癌組織選択性に優れ、生分解性を有し、癌組織で薬物の調節放出が可能なスマート高分子型コンジュゲート化合物を合成することができた。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
上記の目的を達成するために、本発明は、下記化学式１で表される線状のポリホスファゼン化合物を提供する。
［化学式１］
【化１】
2019123878.tif 000003
【００１２】
式中、ｎは、３〜３００の整数であり、ＭＰＥＧは、平均分子量３５０〜１０００のメトキシポリエチレングリコールを示し、Ｓは、スペーサグループとして、リシン、アルギニン、グルタミン、アスパラギン、チロシン、リシンを含むオリゴペプチド、アルギニンを含むオリゴペプチド、グルタミンを含むオリゴペプチド、アスパラギンを含むオリゴペプチド、チロシンを含むオリゴペプチド、アミノエタノール、アミノプロパノール、アミノブタノール、アミノペンタノール、およびアミノヘキサノールからなる群より選択される１種であり、ｌは、０〜０．９であり、ｍは、０．１〜１であり、ｌ＋ｍ＝１である。
【００１３】
また、本発明は、下記化学式２で表されるポリホスファゼン−薬物コンジュゲート化合物を提供する。
［化学式２］
【化２】
2019123878.tif 000004
【００１４】
式中、ｎは、３〜３００の整数であり、ＭＰＥＧは、平均分子量３５０〜１０００のメトキシポリエチレングリコールを示し、Ｓは、スペーサグループとして、リシン、アルギニン、グルタミン、アスパラギン、チロシン、リシンを含むオリゴペプチド、アルギニンを含むオリゴペプチド、グルタミンを含むオリゴペプチド、アスパラギンを含むオリゴペプチド、チロシンを含むオリゴペプチド、アミノエタノール、アミノプロパノール、アミノブタノール、アミノペンタノール、およびアミノヘキサノールからなる群より選択される１種であり、Ｌは、前記スペーサグループと前記薬物を化学結合で連結させることが可能なリンカー（ｌｉｎｋｅｒ）を示し、Ｄは、ＯＨまたはＮＨ２官能基を有する薬物であり、ｘとｙはそれぞれ、０〜０．５であり、ｚは、０より大きくて１．０以下であり、ｘ＋ｙ＋ｚ＝１である。
【００１５】
また、本発明は、（ａ）出発物質の六塩化環状ホスファゼンを熱重合してポリジクロロホスファゼン線状重合体を合成した後、メトキシポリエチレングリコールのナトリウム塩と反応させて、ポリホスファゼン高分子中間体を得るステップと、
（ｂ）前記ポリホスファゼン高分子中間体を、リシンエステル、リシンを含むオリゴペプチドのエステル、アミノエタノール、アミノプロパノール、アミノブタノール、アミノペンタノール、およびアミノヘキサノールからなる群より選択される１種と反応させて、親水性陽イオン性（ｃａｔｉｏｎｉｃ）ポリホスファゼン高分子薬物伝達体を製造するステップと、
（ｃ）ＯＨまたはＮＨ２官能基を有する薬物を、リンカー（ｌｉｎｋｅｒ）を用いてポリホスファゼン高分子に化学結合で結合させるのに容易な薬物前駆体（ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ）を製造するステップと、
（ｄ）前記（ｂ）ステップのポリホスファゼン高分子薬物伝達体に前記（ｃ）ステップの薬物前駆体（ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ）を導入して、前記化学式２の化合物を得るステップと、を含む前記化学式２の化合物の製造方法を提供する。
【００１６】
また、本発明は、（ａ）出発物質の六塩化環状ホスファゼンを熱重合してポリジクロロホスファゼン線状重合体を合成した後、メトキシポリエチレングリコールのナトリウム塩と反応させて、ポリホスファゼン高分子中間体を得るステップと、
（ｂ）前記ポリホスファゼン高分子中間体を、スペーサグループである、リシンエステル、リシンを含むオリゴペプチドのエステル、アミノエタノール、アミノプロパノール、アミノブタノール、アミノペンタノール、およびアミノヘキサノールからなる群より選択される１種と反応させて、親水性陽イオン性（ｃａｔｉｏｎｉｃ）ポリホスファゼン高分子薬物伝達体を製造するステップと、
（ｃ）前記（ｂ）ステップのポリホスファゼン高分子薬物伝達体のスペーサグループにリンカーを先に結合させるステップと、
（ｄ）前記（ｃ）ステップのポリホスファゼン高分子薬物伝達体のリンカーにＯＨまたはＮＨ２官能基を有する薬物を結合させて、前記化学式２の化合物を得るステップと、を含む前記化学式２の化合物の製造方法を提供する。
【発明の効果】
【００１７】
本発明の線状ポリホスファゼン化合物は、非常に高い癌組織選択性を有する効果がある。また、本発明の線状ポリホスファゼン−薬物コンジュゲート化合物は、従来の有機系高分子を用いたコンジュゲート薬物とは異なり、体内の肝、腎臓などの主要器官には多く積もることなく血液内で長期間循環し、特に、癌組織に選択的に多量蓄積される優れた癌組織選択性を示し、中性の血液や組織では疎水性抗癌剤を放出せず、酸性の（ｐＨ＝４〜７）癌組織でのみ選択的に毒性の高い抗癌剤を放出することにより、体内で抗癌剤による毒性を画期的に低下させるなど、抗癌剤として優れた物性を有する効果がある。
【００１８】
このように、本発明のポリホスファゼン化合物およびポリホスファゼン−薬物コンジュゲート化合物は、実用化の可能性が非常に高い新物質である。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】図１は、実施例１のポリホスファゼン化合物の粒度分布を示す図である。（平均直径＝３．０ｎｍ）
【図２】図２は、実施例１のポリホスファゼン化合物の陽イオン性を示すゼータ電位の測定結果を示す図である。
【図３】図３は、実施例１４のポリホスファゼン−ドセタキセルコンジュゲート化合物の粒度分布を示す図である。（平均直径＝６０ｎｍ）
【図４】図４は、実施例１４のポリホスファゼン−パクリタキセルコンジュゲート化合物のピレン蛍光を用いたミセルの臨界濃度（ＣＭＣ）の測定結果を示す図である。
【図５】図５は、実施例２０のポリホスファゼン−パクリタキセルコンジュゲート化合物の分子量の変化を示す図である。
【図６】図６は、（ａ）Ａ５４９癌細胞を移植したマウスに、実施例１４のポリホスファゼン化合物に蛍光染料のＣｙ５．５で標識した薬物伝達体を血液注射した後、１２時間、２４時間、４８時間、７２時間硬化後、各器官を分離して撮ってｅｘ  ｖｉｖｏ  ＮＩＲ蛍光イメージを示す図である。ここで、１は肝、２は肺、３は腎臓、４は脾臓、５は癌組織、６は筋肉を示す。（ｂ）は１２時間、２４時間、４８時間、および７２時間に抽出した全体血液（ＷＢ）と血漿（ＰＬ）のＮＩＲ蛍光イメージを示す図である。
【図７】図７は、実施例１４のポリホスファゼン−ドセタキセルコンジュゲート化合物を蛍光染料Ｃｙ５．５で標識した後、ＳＣＣ７癌細胞を移植したマウスに注入した後、２４時間、４８時間後の組織分布を比較した図である。ここで、１は肝、２は肺、３は脾臓、４は腎臓、５は心臓、６は癌組織を示す。
【図８】図８は、前記図７で実施した組織分布実験から得た各組織の蛍光強度を、薬物で処理されていない対照群マウスの同じ組織の蛍光強度の比率を測定して定量的な組織分布を示す図である。
【図９】図９は、実施例１４のポリホスファゼン−ドセタキセルコンジュゲート化合物のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｙラットを用いた薬物動力学実験結果のうち、ドセタキセルの時間に応じたプラズマ濃度プロファイルを示す。
【図１０】図１０は、ＢＡＬＢ／Ｃヌードマウスを用いた実施例１４のポリホスファゼン−ドセタキセルコンジュゲート化合物の胃癌細胞株ＭＫＮ−２８に対する異種移植（ｘｅｎｏｇｒａｆｔ）試験結果である。
【図１１】図１１は、前記図１０で薬物投与開始から試験終了まで４０日間のヌードマウスの体重変化を示す。
【図１２】図１２は、Ａ５４９癌細胞を移植したマウスを用いた実施例１４の異種移植（ｘｅｎｏｇｒａｆｔ）抗癌活性に対する実験結果である。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
本発明の構成および作用をより詳細に説明する。本発明は、以下の説明で具体化されるが、それに限定するものではない。
以下、本発明の構成および作用を詳細に説明する。
【００２１】
上記の目的を達成するために、本発明は、下記化学式１で表される線状のポリホスファゼン化合物を提供する。
［化学式１］
【化１】
2019123878.tif 000005
【００２２】
式中、ｎは、３〜３００の整数であり、ＭＰＥＧは、平均分子量３５０〜１０００のメトキシポリエチレングリコールを示し、Ｓは、スペーサグループとして、リシン、アルギニン、グルタミン、アスパラギン、チロシン、リシンを含むオリゴペプチド、アルギニンを含むオリゴペプチド、グルタミンを含むオリゴペプチド、アスパラギンを含むオリゴペプチド、チロシンを含むオリゴペプチド、アミノエタノール、アミノプロパノール、アミノブタノール、アミノペンタノール、およびアミノヘキサノールからなる群より選択される１種であり、ｌは、０〜０．９であり、ｍは、０．１〜１であり、ｌ＋ｍ＝１である。
【００２３】
前記本発明のポリホスファゼン化合物は、親水性でかつ、多官能性基（ｍｕｌｔｉｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｇｒｏｕｐ）を保有しているリシンまたはリシンを含む親水性オリゴペプチドと親水性ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）をホスファゼン骨格に導入したもので、従来の両親媒性ポリホスファゼンとは異なり、低臨界溶液温度が１００℃以下では観察されない。また、体内血液半減期が画期的に延長されると同時に、高分子の毒性も画期的に改善され、特に驚くべきことは、ポリホスファゼン自体が高い癌組織選択性を示すというのである。このようなポリホスファゼン自体の癌組織選択性はまだ確かではないが、おそらく高分子に結合されているリシンのアミン基によるホスファゼン高分子の陽イオン性とポリエチレングリコールによる血液内での長期循環（ｌｏｎｇ  ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ）に起因すると推定される。
【００２４】
前記リシンを含む親水性オリゴペプチドの好ましい例として、グリシルリシンが挙げられる。
【００２５】
また、本発明は、下記化学式２で表されるポリホスファゼン−薬物コンジュゲート化合物を提供する。
［化学式２］
【化２】
2019123878.tif 000006
【００２６】
式中、ｎは、３〜３００の整数であり、ＭＰＥＧは、平均分子量３５０〜１０００のメトキシポリエチレングリコールを示し、Ｓは、スペーサグループとして、リシン、アルギニン、グルタミン、アスパラギン、チロシン、リシンを含むオリゴペプチド、アルギニンを含むオリゴペプチド、グルタミンを含むオリゴペプチド、アスパラギンを含むオリゴペプチド、チロシンを含むオリゴペプチド、アミノエタノール、アミノプロパノール、アミノブタノール、アミノペンタノール、およびアミノヘキサノールからなる群より選択される１種であり、Ｌは、前記スペーサグループと前記薬物を化学結合で連結させることが可能なリンカー（ｌｉｎｋｅｒ）を示し、Ｄは、ＯＨまたはＮＨ２官能基を有する薬物であり、ｘとｙはそれぞれ、０〜０．５であり、ｚは、０より大きくて１．０以下であり、ｘ＋ｙ＋ｚ＝１である。
【００２７】
本発明の一実施形態において、
前記Ｓは、リシンまたはリシンを含むジペプチドあるいはトリペプチドであることが好ましいが、これに限定されない。
【００２８】
本発明の他の実施形態において、
前記Ｓは、アミノエタノールまたはアミノプロパノールであることが好ましいが、これに限定されない。
【００２９】
好ましくは、前記薬物は、疎水性抗癌剤である。
【００３０】
前記疎水性抗癌剤は、ドセタキセル（ｄｏｃｅｔａｘｅｌ）、パクリタキセル（ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）、カンプトテシン（ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ）、および［（トランス−１，２−ジアミノシクロヘキサン）白金（ＩＩ）］からなる群より選択された１種であるとよい。
【００３１】
本発明の一実施形態において、
前記化学式２は、下記化学式３〜５のいずれか１つで表される。
［化学式３］
【化３】
2019123878.tif 000007
［化学式４］
【化４】
2019123878.tif 000008
前記化学式３および４において、ｎは、３〜３００の整数であり、ＭＰＥＧは、平均分子量３５０〜１０００のメトキシポリエチレングリコールを示し、Ｄは、ドセタキセル、パクリタキセル、カンプトテシン（ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ）、および［（トランス−１，２−ジアミノシクロヘキサン）白金（ＩＩ）］からなる群より選択された１種を示し、Ｒは、Ｃ１−６の線状、分枝状または環状アルキル、またはＯＣＨ２Ｂｚである。ここで、ｘとｙはそれぞれ、０〜０．５、ｚは、０より大きくて１．０以下の値を有し、ｘ＋ｙ＋ｚ＝１であり、
［化学式５］
【化５】
2019123878.tif 000009
前記化学式５において、ｎは、３〜３００の整数であり、ＭＰＥＧは、平均分子量３５０〜１０００のメトキシポリエチレングリコールを示し、Ｄは、ドセタキセル、パクリタキセル、およびカンプトテシンからなる群より選択される１種を示し、Ｒ’は、ｔ−ＢｏｃまたはＣＢＺグループを示し、ここで、ｘとｙはそれぞれ、０〜０．５、ｚは、０より大きくて１．０以下の値を有し、ｘ＋ｙ＋ｚ＝１である。
以下、各成分を具体的に説明する。
【００３２】
［薬物伝達体］
本発明で合成した薬物伝達体ポリホスファゼン化合物は、炭素−炭素結合が骨格をなす有機系高分子とは異なり、無機系元素であるリン（Ｐ）と窒素（Ｎ）の共役結合が高分子骨格をなし、リン原子に親水性ポリエチレングリコールと抗癌剤薬物を化学的結合させることが可能なスペーサグループとして、リシンまたはリシンを含むオリゴペプチド類または線状アミノアルコールが側鎖に導入された新たな無機／有機ハイブリッド型高分子化合物である。導入されたリシンまたはこれを含有するペプチドは、アミノ酸の固有ｐＫａ値に応じてポリホスファゼン高分子体に陽イオン性を付与することができる。この陽イオン性は、スペーサとして導入されたアミノ酸の種類に応じて調節可能である。本発明で使用されたポリエチレングリコールは、分子量３００〜２０００の範囲のメトキシポリエチレングリコールを使用し、その含有量は０．５〜１．８の比率で導入され、この導入比率は、合成された高分子化合物の溶解度および体内挙動、または加水分解される速度によってその用途に合わせて調節することができる。また、薬物のコンジュゲーション比率によっても変化させることができ、薬物がコンジュゲーションされたポリホスファゼン高分子化合物に陽イオン性調節のためにも変化させることができる。ポリホスファゼン高分子化合物の分子量は、繰り返し単位体（ＮＰ）の個数によって定められ、同じ繰り返し単位を有する場合にも、導入されたポリエチレングリコールの分子量によっても調節可能である。本発明の側鎖型高分子（ｂｒａｎｃｈｅｄ  ｐｏｌｙｍｅｒ）化合物は、一般の有機系線状高分子に比べて高い分子量を有するが、小さい水和ボリュームを有する特徴がある。すなわち、原子の密集度が一般の線状高分子化合物に比べて非常に高いため、ボリュームに比べて高い分子量を有する特徴がある。このような特徴のため、相対的に小さな大きさを有するミセルを形成する場合にも、高い癌組織選択性を維持する高分子化合物を得ることができる。
【００３３】
［抗癌剤薬物］
本発明の側鎖型ポリホスファゼン高分子化合物に結合される薬物は、ＯＨまたはＮＨ２官能基を少なくとも１つ以上有する薬物で、好ましくは、疎水性抗癌剤として、大別して、タキサン（ｔａｘａｎ）系薬物、カンプトテシン（ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ）系薬物、および白金錯体系薬物を主に使用したが、これに限定しない。すなわち、ここで、例を挙げた２つの系列の薬物以外にも、ＯＨ、ＮＨ２などの官能基を有するいかなる抗癌剤も本薬物伝達体−スペーサ−リンカーシステムでは導入が可能であり、本発明の例示は、立体障害のため反応性が低下すると知られた代表的な２つの系列の薬物に対する例を利用して説明した。
【００３４】
上記で説明された本発明の親水性線状ホスファゼン高分子に疎水性タキサン系抗癌剤を化学的に結合させたポリホスファゼン−タキサン系薬物コンジュゲート化合物は、まだ世界的に報告されていない完全に新たな形態の静脈注射用高分子抗癌剤であって、その分子量分布を約３，０００〜３００，０００Ｄａまで調節可能であり、特に、分子量が３０，０００〜１００，０００Ｄａの範囲の高分子を分離することにより、生体適合性と効率性を極大化することができた。本発明の親水性ポリホスファゼン化合物自体はミセルを形成することができないが、疎水性タキサン系抗癌剤分子が結合されたコンジュゲート−薬物化合物は、約２０ｎｍ〜１００ｎｍの大きさのミセル粒子を形成することにより、上述した「向上した透過保全（ＥＰＲ）効果」と本ポリホスファゼン−タキサン系薬物コンジュゲート化合物のミセルの皮（ｓｈｅｌｌ）を形成するポリエチレングリコールによる血中長期循環性（ｌｏｎｇ  ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ）などによって優れた癌組織選択性を確保することができた。最後に、優れた抗癌効果のために最も重要な癌組織に到達したポリホスファゼン−タキサン系薬物コンジュゲート化合物から抗癌成分であるタキサン系薬物の適期放出を誘導するために、癌組織／細胞の酸性（ｐＨ＝４〜７）環境でのみ分解可能な無水アコニット酸のようなリンカー（ｌｉｎｋｅｒ）を用いてホスファゼン高分子とタキサン系薬物を連結することにより、ホスファゼン−タキサン系薬物コンジュゲートが血中および正常組織では分解せず、癌組織／細胞に到達した後にのみタキサン系抗癌剤を放出できるように設計することにより、優れた抗癌効果と同時に、体内で薬物による毒性を画期的に低下させることができる理想型の新たな高分子コンジュゲート物質の合成を完成した。
【００３５】
下記化学式６のドセタキセルは、２，７，１０，２’位に４個のＯＨ基を有しており、このうち、最も反応性が良い２’位のＯＨ基を用いてリンカーグループとエステル結合（−ＣＯＯＤ−）させ、再び該リンカーとポリホスファゼンのスペーサとアミド結合（−ＣＯＮＨ−）反応をさせてコンジュゲーションさせる。
［化学式６］
【化６】
2019123878.tif 000010
【００３６】
パクリタキセルの場合にも同様であり、最も反応性が良い２’位のＯＨ基を用いてリンカーとエステル結合で反応させた後、該リンカーを用いてポリホスファゼンに導入されたスペーサにアミド結合で反応をさせてコンジュゲーションさせる。
【００３７】
この時、リンカーを用いる理由は、立体障害の多く生じる薬物をエステル結合で直接高分子にコンジュゲーションさせる場合には、収率が大きく低下し、複数種類の異性体が生じ得る問題を有する。特にドセタキセルの場合、反応時間が２４時間以上長くなると、自体の異性体が生じる危険が非常に高いため、リンカーを導入して単分子間の速やかな反応を利用して速い時間内に高収率でリンカーを導入し、導入されたリンカーの高い反応性を利用してポリホスファゼンに速い時間内に高収率で反応させることができるからである。
【００３８】
本発明で使用したカンプトテシン系の薬物は、次の例示の化合物を含むが、これらだけを意味するものではなく、薬学的に活性のある誘導体をすべて含む。特に、カンプトテシン（ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ）、イリノテカン（ｉｒｉｎｏｔｅｃａｎ）、トポテカン（ｔｏｐｏｔｅｃａｎ）、そしてベロテカン（ｂｅｌｏｔｅｃａｎ）のカンプトテシン系の薬物を含むことができる。
【００３９】
［スペーサ（Ｓ）］
本発明では、リンカーと化学結合が可能なスペーサグループを導入した。スペーサグループは、リンカーとの結合に使用可能な１級アミン基とポリホスファゼン高分子骨格に結合（ｇｒａｆｔ）が可能な１級アミン基またはアルコール基を有するアミノ酸類、すなわち、リシン、アルギニン、グルタミン、アスパラギン、チロシン、およびこれらを含むオリゴペプチドまたは線状アミノアルコールから選択される１種である。好ましくは、リシンまたはリシンを含むオリゴマーである。このようなアミノ酸は、塩基性アミノ酸類に分類されるアミノ酸であり、塩基性アミノ酸が導入される場合には、そのアミノ酸の固有ｐＫａ値に応じて特定ｐＨで高分子体に陽イオン性を付与する特徴を有する。また、単純なアミノ酸類のみを含むのではなく、２つ以上のアミノ酸の組み合わせによりスペーサを導入することができる。例えば、グリシル−リシン（Ｇｌｙ−Ｌｙｓ）、アラニル−リシン（Ａｌａ−Ｌｙｓ）、またはこれらのアミノ酸類を用いた組み合わせであるトリペプチドなどが使用される。さらに、特定の組み合わせのアミノ酸またはペプチドの場合には、保護基のカルボキシルエステルを加水分解して、リンカーを導入せずに薬物を直接導入してもよい。これに使用可能な代表的なアミノ酸はリシンであり、実施例においてもその例を示した。
【００４０】
［リンカー（ｌｉｎｋｅｒ）］
高分子を用いたコンジュゲート型抗癌剤の場合には、薬物の調節放出が薬物の活性において最も重要な役割を果たす。
【００４１】
本発明では、薬物部分と高分子薬物伝達体を連結させるに際して、アミド結合（−ＣＯＮＨ−）および／またはエステル結合（−ＣＯＯ−）中でリンカーと薬物の種類に応じて選択して使用した。これは、すでに知られた酸−刺激感応性無水アコニット酸をリンカー（ｌｉｎｋｅｒ）として用いた既存の薬物伝達システムとの差別点であり、これによって効率的な薬物の調節放出が可能になった。また、薬物のうち、アミン官能基を有しない薬物に対しても使用可能なリンカーであるため、薬物の適用範囲を画期的に高めたスペーサ−リンカーシステムである。
【００４２】
この反応は、一般的なカップリング（ｃｏｕｐｌｉｎｇ）反応条件ですべて実行が可能であり、ジクロロメタン、クロロホルム、アセトニトリル、１，４−ジオキサン、ジメチルホルムアミド、そしてテトラヒドロフランなど反応に影響を及ぼさないいかなる種類の有機溶媒も使用が可能である。ただし、リンカー導入時に、エステル結合を作るために生成される中間体物質の不安定性のため、全体反応はよく乾燥した溶媒とアルゴン気流下で進行しなければならず、生成された不安定な中間体の反応効率を増加させるために、低温（−１０〜０℃）を維持して反応を進行させた。また、無水シスアコニット酸の場合には、塩基条件で無水物環が開かれる特徴があるので、異性体が生じ得る可能性があるため、一般的にエステル結合の形成に使用する塩基性のＤＭＡＰ（ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏｐｙｒｉｄｉｎｅ）触媒の代わりに、ＤＰＴＳ（ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏｐｙｒｉｄｉｎｅ／ｐ−ｔｏｌｕｅｎｅ  ｓｕｌｆｏｎｉｃ  ａｃｉｄ、０．１−１．０当量）を用いて、中性状態で触媒の役割を果たせる反応条件を選択して反応した。これを用いて複合体を形成させることが可能な薬物は、オリゴペプチド（ｏｌｉｇｏｐｅｐｔｉｄｅｓ）、ポリペプチド（ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅｓ）、単分子薬物、抗体（ａｎｔｉｂｏｄｙ）、ヌクレオチド（ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ）、リピド（ｌｉｐｉｄ）系列など、−ＯＨまたは−ＮＨ２の官能基を有するいかなる物質も可能である。最も好まれるスペーサ−リンカー−薬物の結合種類は、アミド（スペーサ−リンカー）／エステル（リンカー−スペーサ）結合であり、アミド（スペーサ−リンカー）／アミド（リンカー−スペーサ）、そしてエステル（スペーサ−リンカー）／エステル（リンカー−スペーサ）結合も可能である。
【００４３】
本発明で使用したリンカーの場合、下記化学式７〜１１に相当する多様な環状無水物系列のリンカーを使用することができ、好ましくは、下記化学式７のアコニチック無水物を使用する。
［化学式７］
【化７】
2019123878.tif 000011
［化学式８］
【化８】
2019123878.tif 000012
［化学式９］
【化９】
2019123878.tif 000013
［化学式１０］
【化１０】
2019123878.tif 000014
［化学式１１］
【化１１】
2019123878.tif 000015
【００４４】
酸性条件（ｐＨ＝５．５）で薬物の放出が起こりやすいと知られたリンカーである無水アコニット酸の場合には、一般的に下記反応式１のような反応経路によって合成される。しかし、このような合成方法の場合には、図式のように薬物を放出できない異性体が生じ得る問題を有しており、薬物の付く位置によって薬物の放出速度が異なってその比率を調節することが難しく、また、その比率によって抗癌活性が異なる問題を有する。特に、スペーサ／リンカー、そしてリンカー／薬物の結合がすべてアミド結合で連結される場合には、加水分解による薬物の放出が非常に難しい異性体（反応式１−ｉｎａｃｔｉｖｅ）が生成されるため、薬物の効率性が低下する問題を有する。
［反応式１］
【数１】
2019123878.tif 000016
【００４５】
また、反応式２の場合には、すべてエステル結合で連結されるリンカーとして作用する場合であり、この場合にも、不活性（ｉｎａｃｔｉｖｅ）組み合わせが生じ得るが、エステル結合の体内での酵素による加水分解のため、薬物の放出が可能ではあるが、この場合にも、特定条件である酸性条件での薬物の調節放出がやや難しい異性体が生成されるという欠点がある。また、薬物の−ＯＨ基を用いて無水物環を開環する反応の場合、親核基として作用する方を過剰使用しなければならず、特に立体障害の多く生じる薬物の場合には、より多量の薬物を使用しなければならないという欠点がある。本発明に使用したタキサン系の薬物の場合には、少なくては２０倍以上を使用してこそ反応が完了することを確認した。この場合、薬物に基づいた収率が５％以下と非常に低いため、商業化において非常に大きな問題として作用し得る。
［反応式２］
【数２】
2019123878.tif 000017
【００４６】
反面、本発明の合成経路に相当する次の反応式３は、一例として、無水アコニット酸の環を先に開環せず、枝部分のカルボン酸部分を薬物と先に反応させた後、無水物の環を過剰のＮＨＳ（Ｎ−ｈｙｄｒｏｘｙ  ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｅ）を用いて開環したり、１級アミンを有するスペーサが導入された高分子を用いて直接環を開環することができる。この時、ＮＨＳを用いて環を開環すると、一般的に知られた活性エステル（ａｃｔｉｖｅ  ｅｓｔｅｒ）を形成し、１級アミンを有する物質とこれ以上の試薬なしに、塩基条件下で容易にアミド結合の形成可能な誘導体を得ることができる。この反応の他の利点は、比較的収率の低い過程であるエステル結合を作る過程でリンカーグループを過剰に使用して薬物の浪費を防ぐことができ、反応の終結点を比較的簡単なＴＬＣ方法を利用して確認できるという利点がある。また、既存の知られた反応方法とは異なり、無水物環の開環を後で行うため、薬物の放出が難しい異性体が生じないという利点を有する新たな合成方法である。
［反応式３］
【数３】
2019123878.tif 000018
【００４７】
また、本発明は、前記線状ポリホスファゼン化合物およびポリホスファゼン−薬物コンジュゲート化合物の製造方法を提供する。
【００４８】
この時、必要に応じて使用される薬物、スペーサ、リンカーについて具体例を挙げて説明するが、本発明がこれらの例に限定されるものではない。
【００４９】
本発明の線状ポリホスファゼン高分子化合物は、３価の窒素（Ｎ）と５価のリン（Ｐ）とから構成されたホスファゼン基本単位骨格（−Ｎ＝Ｐ−）のリン原子に親水性が強いメトキシポリエチレングリコール（ＭＰＥＧ）を先に結合させた後、１級アミン基２個とカルボキシル基１個を有する多官能性（ｍｕｌｔｉｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ）リシン、リシンを含むオリゴペプチドまたは線状アミノアルコールを結合させて合成する。このように合成したポリホスファゼン化合物の側枝グループである多官能性リシン、リシンを含むオリゴペプチドまたは線状アミノアルコールをスペーサとして使用し、無水アコニット酸をリンカーとして用いて、タキサン系、白金錯体系、またはカンプトテシン系などの疎水性抗癌剤をポリホスファゼン高分子に連結させると、新たな高分子型の線状ポリホスファゼン−薬物コンジュゲート化合物を得ることができる。
【００５０】
本発明のコンジュゲート化合物は、癌組織に選択的に多量蓄積される優れた癌組織選択性を示すが、前記化学式２のｘ、ｙ、ｚの値を調節することにより、水に対する溶解度が高く、体内滞留時間が長く、癌組織選択性に優れた抗癌剤を製造することができる。
【００５１】
本発明において、前記リシン、アルギニン、グルタミン、アスパラギン、またはチロシンを含むオリゴペプチドから選択される１種のスペーサは、好ましくは、リシンおよびグリシンを含むオリゴペプチドで、例えば、ジペプチドあるいはトリペプチドである。より好ましくは、グリシルリシンから構成されたジペプチドである。この時、特にこれに制限されるものではないが、前記オリゴペプチドにおいて、リシンは、タキサン系抗癌剤（Ｄ）に連結される末端部位に位置することが好ましい。具体的には、例えば、前記化学式２において、Ｓは、リシン、グリシルリシン、リシンエステル、またはグリシルリシンエステルであるとよく、好ましくは、前記Ｓは、リシン、リシンＣ１−６アルキルエステル、またはグリシルリシンＣ１−６アルキルエステルであり、より好ましくは、前記Ｓは、リシンエチルエステルまたはグリシルリシンエチルエステルである。
【００５２】
また、線状アミノアルコールから選択される１種のスペーサは、好ましくは、アミノエタノール、アミノプロパノール、アミノブタノール、アミノペンタノール、アミノヘキサノールであり、より好ましくは、アミノエタノールとアミノプロパノールである。
【００５３】
本発明において、タキサン系抗癌剤（Ｄ）は、リシンのアミン基またはカルボキシル基を介して高分子に連結されるが、前記抗癌剤がリシンのカルボキシル基に連結される場合、リシンのアミン基は、アミン保護基（例：ｔ−Ｂｏｃ、ＦＭＯＣ、ＣＢＺグループ）で保護されていることが好ましい。
【００５４】
前記化学式２において、Ｌは、スペーサ（Ｓ）と抗癌剤（Ｄ）を化学的に連結させるリンカーで、シスアコニチック無水物、スクシニル無水物、またはマレイック無水物などを示し、より好ましくは、前記Ｌは、アコニチック無水物である。
【００５５】
一方、本発明において、抗癌剤（Ｄ）としては、タキサン系抗癌剤、カンプトテシン系抗癌剤、または白金錯体系抗癌剤を使用し、例えば、ドセタキセル（ｄｏｃｅｔａｘｅｌ）、パクリタキセル（ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）、カンプトテシン、トポテカン、イリノテカン、ベロテカン、オキサリプラチン（Ｏｘａｌｉｐｌａｔｉｎ）などが挙げられるが、必ずしもこれに制限されるものではない。
【００５６】
本発明のコンジュゲート化合物は、分子量が約３，０００〜３００，０００の値を有し、好ましくは３０，０００〜１００，０００の値を有し、水溶液で溶けやすく、平均粒子の直径が２０〜２００ｎｍの大きさの比較的大きなミセル粒子を形成する。本発明の高分子ミセル型コンジュゲート化合物は、上述した「向上した透過保全（ＥＰＲ）効果」によって優れた癌組織選択性を示す。
【００５７】
このような本発明のポリホスファゼンおよびポリホスファゼン−タキサンコンジュゲート化合物は、次の４ステップを含む合成工程により製造される：
（ａ）出発物質の六塩化環状ホスファゼンを熱重合してポリジクロロホスファゼン線状重合体（Ｎ＝ＰＣｌ２）ｎを合成した後、メトキシポリエチレングリコールのナトリウム塩と反応させて、ポリホスファゼン高分子中間体［ＮＰＣｌ（ＭＰＥＧ）］を得るステップと、
（ｂ）前記ポリホスファゼン高分子中間体を、リシンエステル、リシンを含むオリゴペプチドのエステル、アミノエタノール、アミノプロパノール、アミノブタノール、アミノペンタノール、およびアミノヘキサノールからなる群より選択される１種と反応させて、親水性陽イオン性（ｃａｔｉｏｎｉｃ）ポリホスファゼン高分子薬物伝達体を製造するステップと、
（ｃ）ＯＨまたはＮＨ２官能基を有する薬物をリンカー（ｌｉｎｋｅｒ）を用いてポリホスファゼン高分子に化学結合で結合させるのに容易な薬物前駆体（ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ）を製造するステップと、
（ｄ）前記（ｂ）ステップのポリホスファゼン高分子薬物伝達体に前記（ｃ）ステップの薬物前駆体（ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ）を導入して、下記化学式２の化合物を得るステップ。
［化学式２］
【化２】
2019123878.tif 000019
【００５８】
式中、ｎは、３〜３００の整数であり、ＭＰＥＧは、平均分子量３５０〜１０００のメトキシポリエチレングリコールを示し、Ｓは、スペーサグループとして、リシン、リシンを含むオリゴペプチド、アミノエタノール、アミノプロパノール、アミノブタノール、アミノペンタノール、およびアミノヘキサノールからなる群より選択される１種であり、Ｌは、前記スペーサグループと前記薬物を化学結合で連結させることが可能なリンカー（ｌｉｎｋｅｒ）を示し、Ｄは、ＯＨまたはＮＨ２官能基を有する薬物であり、ｘとｙはそれぞれ、０〜０．５であり、ｚは、０より大きくて１．０以下であり、ｘ＋ｙ＋ｚ＝１である。
【００５９】
本発明の他の実施形態において、
前記ＯＨまたはＮＨ２官能基を有する薬物は、ドセタキセル（ｄｏｃｅｔａｘｅｌ）、パクリタキセル（ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）、カンプトテシン（ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ）、および［（トランス−１，２−ジアミノシクロヘキサン）白金（ＩＩ）］からなる群より選択される１種であるとよいが、これに限定されない。
【００６０】
前記（ａ）〜（ｄ）までの４ステップの反応は、薬物の構造に応じてやや変化を与えることができる。例えば、白金錯体系抗癌剤の場合、（ｃ）ステップで薬物とリンカーを予め反応させて前駆体を作った後、（ｄ）ステップで前駆体をポリホスファゼン高分子に導入する代わりに、（ｃ）ステップでリンカーを先に高分子に結合させた後、（ｄ）ステップで薬物を高分子のリンカーと結合させてもよい。
【００６１】
次のすべての製造過程は、水分が入らないように真空および窒素ラインを用いて行うことが好ましく、反応に使用する各種溶媒は、水分を十分に除去して使用することが好ましい。
以下、製造過程について詳細に説明する。
【００６２】
（ａ）ステップ
まず、下記化学式１２で表される六塩化環状ホスファゼン三量体すなわち、（Ｎ＝ＰＣｌ２）３を文献に提示された方法（Ｙｏｕｎ  Ｓｏｏ  Ｓｏｈｎ，ｅｔ  ａｌ．Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，２８，７５６６（１９９５））によって熱重合させて、平均分子量が１０４〜１０５の範囲である、化学式１３で表されるポリジクロロホスファゼン線状重合体（Ｎ＝ＰＣｌ２）ｎを得る。
［化学式１２］
【化１２】
2019123878.tif 000020
［化学式１３］
【化１３】
2019123878.tif 000021
【００６３】
前記化学式１３において、ｎは、ポリホスファゼンの重合度で３〜３００の整数である。
【００６４】
下記化学式１４のモノメトキシポリエチレングリコールをトルエンと水のアゼオトロピ現象を利用して水分を除去させた後、アルカリ金属のナトリウムと反応させて、化学式１５のメトキシポリエチレングリコールのナトリウム塩として作った後、トリエチルアミンの存在下で化学式１３のポリジクロロホスファゼン線状重合体と反応させる。
［化学式１４］
【化１４】
2019123878.tif 000022
［化学式１５］
【化１５】
2019123878.tif 000023
【００６５】
前記化学式１４および１５において、ａは、ＭＰＥＧの重合度で７〜２２である。
本発明の実施形態によれば、前記ａは、７〜２２になるとよい。
【００６６】
前記反応をより詳細に説明すれば、まず、前記化学式１２の六塩化ホスファゼン三量体（Ｎ＝ＰＣｌ２）３と、これに対して３〜１０重量％に相当する量の無水塩化アルミニウム（ＡｌＣｌ３）をパイレックス（登録商標）反応管に入れて真空状態で密封した後、１０〜２０ｒｐｍで回転させ、２３０〜２５０℃で３〜５時間溶融反応させると、化学式１３のポリジクロロホスファゼン線状重合体を得る。次に、化学式１４のモノメトキシポリエチレングリコールを１．２〜１．５当量のナトリウム金属片とともに、任意の有機溶媒、好ましくは、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、ベンゼン、トルエンなどの溶媒で反応させて、化学式１５のアルコキシド型のナトリウム塩として作る。こうして作った化学式１５のメトキシポリエチレングリコールのナトリウム塩溶液を、同じ溶媒に溶かした化学式１３のポリジクロロホスファゼン線状重合体１モル（１繰り返し単位）に０．５〜１．８当量滴加する。この時、反応溶媒は、前記反応を阻害しない任意の溶媒であればよく、好ましくは、テトラヒドロフラン、ベンゼン、トルエン、クロロホルムなどの溶媒中で行われる。化学式１９のポリジクロロホスファゼン溶液を０℃以下の低い温度に冷却させた後、化学式１５のメトキシポリエチレングリコールのナトリウム塩溶液を徐々に付加するが、好ましくは、０℃以下で２〜８時間反応させた後、室温で６〜２４時間反応させて、ポリエチレングリコールが０．５〜１．８当量置換された下記化学式１６の高分子中間体を製造することができる。前記低温で反応を行うためには、例えば、氷−浴槽を用いて行うことができる。
［化学式１６］
【化１６】
2019123878.tif 000024
【００６７】
化学式１６において、ｎは、ポリホスファゼンの重合度で３〜３００の整数であり、ａは、ＭＰＥＧの重合度で７〜２２であり、ｂは、ＭＰＥＧの置換量で０．５〜１．８である。
【００６８】
（ｂ）ステップ
前記化学式１６のポリホスファゼン高分子中間体の未置換の２−ｂ個の塩素に対して、１．５〜１．８当量のリシンエステルまたはリシンを含むオリゴペプチドのエステルと６当量のトリエチルアミンを任意の有機溶媒、好ましくは、テトラヒドロフラン、クロロホルム、またはジクロロメタン溶媒に溶かした混合溶液を前記反応液に滴加し、４０〜６０℃で１２時間〜３日間還流反応させる。この時、前記リシンエステルとしては、例えば、下記化学式１７で表される物質を使用することができ、リシンを含むオリゴペプチドのエステルとしては、下記化学式１８で表される物質を使用することができる。この時、グリシン部分は、グリシンのほか、ロイシン、フェニルアラニン、イソロイシン、バリンなどのアミノ酸類に代替できる。
［化学式１７］
【化１７】
2019123878.tif 000025
［化学式１８］
【化１８】
2019123878.tif 000026
【００６９】
前記化学式１７および１８において、Ｒは、Ｃ１−６の線状、枝状または環状アルキル、またはＯＣＨ２Ｂｚであり、Ｒ’は、アミングループの保護基であるｔ−Ｂｏｃ（ｔｅｒｔ−ｂｕｔｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ）、Ｆｍｏｃ（ｆｌｕｏｒｅｎｙｌｍｅｔｈｙｌｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ）、またはＣＢＺ（ｃａｒｂｏｚｅｎｙｌｏｘｙ）グループを示す。
【００７０】
本発明において、前記Ｒの具体例としては、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｎ−ブチル、またはｔ−ブチルなどが挙げられるが、特にこれに制限されるものではない。
【００７１】
次に、反応溶液を遠心分離または濾過して副産物として生成された過剰の沈殿物（例：Ｅｔ３ＮＨＣｌまたはＮａＣｌ）を除去した後、濾液を減圧濃縮し、これに再びエタノールを添加してさらに減圧濃縮する。この作業を２回繰り返して有機系溶媒を完全に除去した後に、オイル状態の反応混合物を再び少量のエタノール（１００ｍｌ）に溶かした後、多量の水（９００ｍｌ）を添加して、低温で再結晶する。３時間後、溶液を０．４５μｍのメンブレンを用いてフィルタして、沈殿物を除去する。この溶液を再び０．２μｍ、そして０．１μｍのメンブレンを用いて１００ｎｍ以上の高分子あるいは沈殿物をすべて除去した後に、限外濾過膜装備と限外濾過膜（ＭＷＣＯ＝３，０００Ｄａ）を用いて低分子量の不純物を除去する。この時、最初３回のデソルティング作業では水：エタノール３：１の体積比率の溶液で洗い、以後、純粋な水で６回以上洗浄作業、精製作業、そして濃縮作業を経て、高濃度の高分子溶液を得る。こうして得られたポリホスファゼン高分子溶液を凍結乾燥して、ポリホスファゼン高分子誘導体、例えば、下記化学式１９または化学式２０のポリホスファゼン系高分子誘導体を得ることができる。
［化学式１９］
【化１９】
2019123878.tif 000027
［化学式２０］
【化２０】
2019123878.tif 000028
【００７２】
前記化学式１９および２０において、ｎは、ポリホスファゼンの重合度で３〜３００の整数であり、ＯＭＰＥＧは、平均分子量３５０〜１０００のメトキシポリエチレングリコールを示し、ｂは、０．５〜１．８の値を有する。また、Ｒは、Ｃ１−６の線状、枝状または環状アルキル、またはＯＣＨ２Ｂｚであり、Ｒ’は、アミングループの保護基であるｔ−Ｂｏｃ、Ｆｍｏｃ、またはＣＢＺグループを示す。
【００７３】
（ｃ）ステップ
前記（ｂ）ステップで合成したポリホスファゼン高分子薬物伝達体にタキサンのような疎水性抗癌剤を化学的に直接結合させることは、高分子および薬物の化学構造上容易でない上に、たとえ結合させてコンジュゲートを作っても、体内で薬物が高分子伝達体から容易に離れられるように、適当なリンカー（Ｌ）を用いて高分子薬物伝達体と抗癌剤を連結させてコンジュゲートを合成しなければならない。コンジュゲート型抗癌剤の合成において、リンカーの役割は非常に重要である。特に、本発明において、リンカーグループは、ポリホスファゼン高分子薬物伝達体の官能基（−ＣＯＯＨ、−ＮＨ２）とタキサン抗癌剤の官能基（−ＯＨ、−ＮＨ２）を用いて容易に連結できなければならず、より重要なのは、このように合成されたコンジュゲート抗癌物質が体内注入時に血中では抗癌剤を放出せず、癌組織に到達した後は抗癌剤を直ちに放出できなければならないからである。本発明では、下記化学式７の無水アコニット酸が、特にタキサン抗癌剤コンジュゲートの合成に最適なリンカーであることを見出し、次のようにタキサンと無水アコニット酸が結合された前駆体を合成した。
【００７４】
無水アコニット酸（２．０ｍｍｏｌ、３１２ｍｇ）とドセタキセル（１．０ｍｍｏｌ、８０３ｍｇ）をアルゴン気流下で混ぜた後、低温に冷却させる。これに、ＴＨＦまたはジクロロメチレンクロライド溶媒に溶解させて混合した後、低温（０℃）を維持し、ＤＩＣ（２．０ｍｍｏｌ、０．２５２ｇ）、ＤＰＴＳ（２．０ｍｍｏｌ、０．５８ｇ）を順に入れて、中性状態で無水アコニット酸のカルボン酸とドセタキセルの−ＯＨ（２’）をエステル結合で１２時間反応させる。１２時間後、ＴＬＣを用いて反応が終結されたことを確認した後、ＮＨＳ（Ｎ−ｈｙｄｒｏｘｙｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｅ）をＤＩＰＥＡとともに過剰に添加して、無水アコニット酸の無水環を開環する。無水アコニット酸の環は、塩基性溶液で−ＯＨ官能基または−ＮＨ２官能基によって開環反応が起こりやすいことが知られている。添加後、再び１２時間反応させ、反応液を０℃に３時間冷却させる。その後、反応溶液を減圧フィルタして、溶けない不純物を除去する。その後、減圧蒸留して使用した有機溶媒をすべて除去し、オイル状態の反応混合物を得る。これに、エタノール（５０ｍｌ）を添加して完全に溶かした後、多量の水（５００ｍｌ）を添加した後、冷蔵庫で３時間再結晶する。上等液を注ぎ捨てる作業を２回繰り返した後、オイル状態の反応水にメチレンクロライド３００ｍｌを添加して完全に溶解させる。この溶液を分別漏斗に移した後、飽和した塩水（１００ｍｌ）を用いて３回洗浄する。洗浄後、有機層を集め、この有機層を無水ＮａＨＣＯ３を用いて乾燥した後、減圧フィルタし、減圧蒸留して、−ＮＨ２官能基を有するスペーサ（Ｓ）に直接アミド結合で結合させて、リンカーの導入された薬物前駆体を９５％以上の高収率で得ることができた。
【００７５】
（ｄ）ステップ
前記（ｂ）ステップで得られたポリホスファゼン高分子薬物伝達体に疎水性抗癌剤、例えば、タキサン系抗癌剤を結合させて、本発明の化学式２で表される線状ポリホスファゼン−抗癌剤コンジュゲートを得る。この時、ポリホスファゼン高分子誘導体にタキサン抗癌剤を結合させる方法には、ポリホスファゼン高分子のリシンアミン基とアコニチックリンカーを用いてアミド結合で連結させる方法と、ポリホスファゼン高分子のリシンカルボキシル基とタキサンの２’−アルコール基をエステル結合で連結する方法の２つがある。したがって、本（ｄ）ステップは、下記の２つの方法で行われる。
【００７６】
まず、アミド結合方法の場合、前記得られたポリホスファゼン高分子誘導体、例えば、化学式１９または化学式２０の高分子誘導体に、アミン保護基（ｔ−Ｂｏｃ）を三フッ化酢酸（ｔｒｉｆｌｕｏｒｏａｃｅｔｉｃ  ａｃｉｄ）とメチレンクロライドの２：１混合溶液を用いて６時間以上反応させて保護基を除去した後、反応溶液をトリエチルアミンを用いて中和した後に、減圧蒸留して濃縮する。この濃縮液をＮａＨＣＯ３飽和溶液に再び溶かして、限外濾過膜（例：ＭＷＣＯ＝３，０００）を用いて、水／エタノールの混合溶液で３回、そして純粋な水で６回洗う作業と精製作業を経た後、２００ｍｌ以下に濃縮して凍結乾燥する。
【００７７】
このように乾燥したホスファゼン系高分子と、これに導入しようとする抗癌剤、例えば、ドセタキセルと連結基リンカー（ｌｉｎｋｅｒ）、例えば、無水アコニット酸を予め反応させて活性化されたエステル形態に製造されたアコニチックタキサン−ＮＨＳ（Ｎ−ｈｙｄｒｏｘｙｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｙｌ）エステルを１２時間塩基性条件で反応させる。１２時間後、減圧蒸留して濃縮し、再びエタノールに溶かして減圧濃縮して使用した溶媒およびＤＩＰＥＡ（ｄｉｉｓｏｐｒｏｐｙｌｅｔｈｙｌａｍｉｎｅ）をすべて除去する（３７℃、５ｍｍｂａｒ）。溶媒がすべて除去された高分子混合物をエタノール５０ｍｌを用いて綺麗に溶かした後に、水９５０ｍｌを添加した後、冷蔵庫で３時間再結晶する。３時間後、溶液を減圧フィルタして得られた溶液を、限外濾過膜装置を用いて、前記のような方法でエタノール３０％水溶液を用いて５回洗浄し、再び純粋な水を用いて６回以上洗浄して、精製作業と未反応薬物をすべて除去し、追加的に使用したエタノールをすべて除去して、所望の化学式３または化学式４のポリホスファゼン−ドセタキセルコンジュゲートを合成した。この時、透析回数は、透析して出る濾液のＵＶ  ｓｐｅｃｔｒｕｍを測定して、ドセタキセルの残留量が０．１％以下になるまで洗浄した。
［化学式３］
【化３】
2019123878.tif 000029
［化学式４］
【化４】
2019123878.tif 000030
【００７８】
前記化学式３および４において、ｎは、ポリホスファゼンの重合度で３〜３００の整数であり、ＭＰＥＧは、平均分子量３５０〜１０００のメトキシポリエチレングリコールを示し、Ｌは、スペーサと薬物を化学結合で連結させることが可能なリンカー（ｌｉｎｋｅｒ）を示し、Ｄは、タキサン系、カンプトテシン系、または白金錯体系の抗癌剤を示し、Ｒは、Ｃ１−６の線状、分枝状または環状アルキル、またはＯＣＨ２Ｂｚである。ここで、ｘとｙはそれぞれ、０〜０．５であり、ｚは、０より大きくて１．０以下の値を有し、ｘ＋ｙ＋ｚ＝１である。
【００７９】
次に、エステル結合方法では、得られたポリホスファゼン高分子誘導体のリシンのエステルをアルカリで加水分解して酸性化した後、タキサン分子と直接エステル化反応させて行われる。具体的には、例えば、前記化学式１９のポリホスファゼン高分子誘導体をメタノールに溶かした後、エステルグループをＫＯＨまたはＮａＯＨ（１．５〜２倍過剰）を用いて加水分解して、金属塩形態のポリホスファゼンを得る。メタノールを減圧蒸留して除去した後、固体状態の反応混合物を水（１００ｍｌ）に溶かした後、分別漏斗に移す。この溶液にメチレンクロライドまたはクロロホルム（３００ｍｌ）を添加した後、有機酸溶液を徐々に添加して徐々に酸性化させる。水層のｐＨを約４〜３程度低下させた後、添加した有機溶媒で高分子を抽出する。有機溶媒を用いて３回さらに抽出して集めた有機溶媒層を、無水ＮａＨＣＯ３を用いて乾燥し、これをフィルタした後、減圧濾過して、加水分解された高分子を得る。加水分解されたホスファゼン系高分子とタキサン（例：パクリタキセル）をテトラヒドロフランなどの任意の有機溶媒に溶かした後、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミドとトリエチルアミンを添加して、タキサンを高分子体にエステル結合でコンジュゲーションさせる。薄層クロマトグラフィー法（例：ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ＝１０：１）を用いて反応が終わったことを確認した後、減圧濾過、減圧蒸留して反応溶液を濃縮させた後、最後に透析膜（例：ＭＷＣＯ＝３，５００）を用いて分離精製し、凍結乾燥すると、本発明のコンジュゲート化合物、例えば、下記化学式５のポリホスファゼン−タキサンコンジュゲート化合物を得ることができる。
［化学式５］
【化５】
2019123878.tif 000031
【００８０】
前記化学式５において、ｎは、ポリホスファゼンの重合度を示す値で３〜３００の整数であり、ＭＰＥＧは、平均分子量３５０〜１０００のメトキシポリエチレングリコールを示し、Ｄは、ドセタキセル、パクリタキセル、およびカンプトテシンからなる群より選択される１種を示し、Ｒ’は、ｔ−Ｂｏｃ、Ｆｍｏｃ、またはＣＢＺグループを示す。ここで、ｘとｙはそれぞれ、０〜０．５、ｚは、０より大きくて１．０以下の値を有し、ｘ＋ｙ＋ｚ＝１である。
【００８１】
以下、本発明の構成および作用を実施例および実験例を挙げて説明するが、本発明の権利範囲が必ずしもこれに制限されるわけではない。
【００８２】
実施例では、Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ  Ｃ、Ｈ、Ｎ分析器で炭素、水素、および窒素の元素分析を行った。水素核磁気共鳴スペクトルとリン核磁気共鳴スペクトルは、Ｖａｒｉａｎ  Ｇｅｍｉｎｉ−５００ＮＭＲ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒを用いて得た。水溶液中でのナノ粒子の粒度分布は、Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ（Ｎａｎｏ−ＺＳ）を用いて測定した。
【００８３】
実施例
ポリホスファゼン化合物（薬物伝達体）の合成
実施例１．［ＮＰ（ＭＰＥＧ５５０）１．５（ＬｙｓＥｔ）０．５］ｎの合成
六塩化ホスファゼン三量体（［ＮＰＣｌ２］３、１１．５４ｇ、１００ｍｍｏｌ）に、触媒の三塩化アルミニウム（ＡｌＣｌ３、７．５ｗｔ％）を添加した後、既存の方法（Ｓｏｈｎ  Ｙ．Ｓ．ｅｔ  ａｌ．Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ１９９５，２８，７５６６）通りに２５０℃で５時間溶融重合してポリジクロロホスファゼン（［ＮＰＣｌ２］ｎ）を合成した。一方、分子量５５０のメトキシポリエチレングリコール（ＭＰＥＧ５５０）（８２．５ｇ、１５０．０ｍｍｏｌ）とナトリウム（Ｎａ）金属（４．９ｇ、２００．４ｍｍｏｌ）を乾燥したトルエン溶媒に入れて、アルゴン気流下、６時間、１２０℃で撹拌して、メトキシポリエチレングリコールのナトリウム塩を製造した。前記作られたポリジクロロホスファゼンをガラス反応器に移した後、これに、乾燥したテトラヒドロフラン（１００ｍｌ）を入れて溶かした後、氷浴（０℃）で前記製造したメトキシポリエチレングリコールのナトリウム塩溶液を６０分間滴加した。１時間後に氷浴を除去し、常温で１２時間引き続き反応させて、ＭＰＥＧ５５０が置換されたホスファゼン高分子中間体反応溶液を得る。別の容器で乾燥したクロロホルム溶媒（２００ｍＬ）で乾燥したトリエチルアミン（７１．６ｍｌ、５１６ｍｍｏｌ）で中和したＢｏｃ−ｌｙｓｉｎｅエチルエステル（Ｎα−ＢｏｃＬｙｓＥｔ、２０．５ｇ、７５．０ｍｍｏｌ）を前記高分子反応溶液に徐々に加えた後、常温で２４時間反応させた。この反応溶液を濾過して生成された過剰の沈殿物（ＮＥｔ３．ＨＣｌまたはＮａＣｌ）を除去し、濾液を減圧濃縮した後、再び少量のエタノールに溶かして２回減圧乾燥する。減圧乾燥後、再び水に溶かして溶けない沈殿物を除去した後、限外濾過膜（ＣＥ、ＭＷＣＯ＝３，０００）を用いて、分子量３０００以下の不純物を除去する。蒸留水を用いて５回以上洗浄した高分子溶液を凍結乾燥して、ポリホスファゼン高分子誘導体を得た。その後、ポリホスファゼン高分子誘導体から保護基（ｔ−Ｂｏｃ）を除去するために、前記誘導体を３０％（ｖ／ｖ）トリフルオロ酢酸が溶けているメチレンクロライド（２００ｍｌ）に再び溶かした後、６時間反応させて、リシンアミン基の保護基であるターシャリーブチルオキシカルボニル基が完全に除去された薬物コンジュゲーション用の純粋なポリホスファゼン誘導体［ＮＰ（ＭＰＥＧ５５０）１．５（ＬｙｓＥｔ）０．５］ｎを得た（収率６５％、３．３７ｇ）。
【００８４】
１Ｈ−ＭＮＲを用いてリシンのアルファアミンの脱保護反応を確認した後、反応溶液を氷浴下で冷却させた後、トリエチルアミンを添加して溶液を中和させる。完全に中和されたことを確認した後、減圧蒸留器を用いて有機溶媒を完全に除去し、再び高分子溶液にＮａＨＣＯ３溶液を添加して完全に溶かす。完全に溶けない場合には、メンブレンフィルタを用いて溶けない不純物を除去する。
【００８５】
この時、濃い高分子溶液は、メンブレンフィルタが難しいため、０．４５μｍ、０．２μｍ、そして０．１μｍの順にフィルタして、綺麗な高分子溶液を得る。
【００８６】
こうして得られた高分子溶液は、まず、限外濾過膜を用いて、デソルティング（ｄｅｓａｌｔｉｎｇ）作業を行う。デソルティング作業が行われた高分子溶液は、再び多様なＭＷＣＯ値を有する限外濾過膜を用いて、所望の範囲の分子量を有する高分子物質を選択的に抽出する。本発明で使用した限外濾過膜は、３ｋＤａ、３０ｋＤａ、１００ｋＤａ、３００ｋＤａのＭＷＣＯ値を有する限外濾過膜を用いて、所望の分子量範囲を有するポリホスファゼン高分子を抽出して使用した。この時、高分子の総収率は９０％、分子量ごとの収得率はそれぞれ（２０、３０、５、３０、５％）の収得率で高分子物質を得る。
【００８７】
組成式：Ｃ８３Ｈ１７０Ｎ４Ｏ４１Ｐ２
元素分析理論値（％）：Ｃ，５１．３３；Ｈ，８．８２；Ｎ，２．８８。
測定値（％）：Ｃ，５１．６６；Ｈ，８．５９；Ｎ，２．８３。
水素核磁気共鳴スペクトル（ＣＤＣｌ３）（δ，ｐｐｍ）：１．２５（ｓ，１．５Ｈ，Ｌｙｓ−ＯＣＨ２ＣＨ３），２．４９（ｂｒ，１．００Ｈ，ｓｕｕｃｉｎｙｌ−ＣＨ２），２．９０（ｂｒ，１．００Ｈ，Ｌｙｓ−ε−ＣＨ２），３．３８（ｓ，４．５０Ｈ，ＭＰＥＧ５５０−ＯＣＨ３），３．６５（ｂｒ，６６．０Ｈ，ＭＰＥＧ５５０−ＯＣＨ２ＣＨ２），４．４（ｓ，１Ｈ，Ｌｙｓｉｎｅ−ＣＨ）。
リン核磁気共鳴スペクトル（ＣＤＣｌ３，ｐｐｍ）：δ−０．０１４（ｓ），δ−５．５５１（ｓ）。
【００８８】
実施例２．［ＮＰ（ＭＰＥＧ７５０）１．５（ＬｙｓＥｔ）０．５］ｎの合成
六塩化ホスファゼン三量体（［ＮＰＣｌ２］３、１１．５４ｇ、１００ｍｍｏｌ）、ＭＰＥＧ７５０（１１２．５ｇ、１５０ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（８０．０ｍｌ、６００ｍｍｏｌ）、Ｂｏｃ−ｌｙｓｉｎｅエチルエステル（Ｎα−ＢｏｃＬｙｓＥｔ、２０．５ｇ、７５．０ｍｍｏｌ）を用いて、実施例１と同様の方法でポリホスファゼン高分子誘導体を合成した。合成した高分子は、実施例１と同様の方法で、限外濾過膜と装備を用いて、３〜３０ｋＤａ、３０〜１００ｋＤａ、１００〜３００ｋＤａ、そして３００ｋＤａ以上の分子量ごとに分離分取した。
［ＮＰ（ＭＰＥＧ７５０）１．５（ＬｙｓＥｔ）０．５］ｎを得た（収率、７４％）。
【００８９】
組成式：Ｃ１０７Ｈ２１８Ｎ４Ｏ５３Ｐ２
元素分析理論値（％）：Ｃ，５２．０１；Ｈ，８．８９；Ｎ，２．２７。測定値（％）：Ｃ，５１．３０；Ｈ，８．９９；Ｎ，２．３６３。
水素核磁気共鳴スペクトル（ＣＤＣｌ３）（δ，ｐｐｍ）：１．２５（ｓ，１．５０Ｈ，Ｌｙｓ−ＯＣＨ２ＣＨ３），１．３９−１．９８（ｂｒ，３．００Ｈ，Ｌｙｓ−ＣＨ２），２．９０（ｂｒ，１Ｈ，Ｌｙｓ−ε−ＣＨ２），３．３８（ｓ，４．５０Ｈ，ＭＰＥＧ７５０−ＯＣＨ３），３．６５（ｂｒ，９８．０Ｈ，ＭＰＥＧ７５０−ＯＣＨ２ＣＨ２），４．０１（ｂｓ，６Ｈ，ＭＰＥＧ７５０−ＣＨ２），４．４５（ｍ，０．５Ｈ，Ｌｙｓ−ＣＨ）。
リン核磁気共鳴スペクトル（ＣＤＣｌ３，ｐｐｍ）：δ−０．０１４（ｓ），δ−５．５５１（ｓ）。
【００９０】
実施例３．［ＮＰ（ＭＰＥＧ１０００）１．５（ＬｙｓＥｔ）０．５］ｎの合成
六塩化ホスファゼン三量体（［ＮＰＣｌ２］３、１１．５４ｇ、１００ｍｍｏｌ）、ＭＰＥＧ１０００（１５０ｇ、１５０ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（８０．０ｍｌ、６００ｍｍｏｌ）、Ｎα−ＢｏｃＬｙｓＥｔ（２０．５ｇ、７５．０ｍｍｏｌ）を用いて、実施例１と同様の方法でポリホスファゼン高分子誘導体を合成した。合成した高分子は、実施例１と同様の方法で、限外濾過膜と装備を用いて、３〜３０ｋＤａ、３０〜１００ｋＤａ、１００〜３００ｋＤａ、そして３００ｋＤａ以上の分子量ごとに分離分取した。
［ＮＰ（ＭＰＥＧ１０００）１．５（ＬｙｓＥｔ）０．５］ｎを得た（収率、７４％）。
【００９１】
組成式：Ｃ１４３Ｈ２９０Ｎ４Ｏ７１Ｐ２
元素分析理論値（％）：Ｃ，５２．６２；Ｈ，８．９６；Ｎ，１．７２。測定値（％）：Ｃ，５３．０１；Ｈ，８．７０；Ｎ，１．９３。
水素核磁気共鳴スペクトル（ＣＤＣｌ３）（δ，ｐｐｍ）：１．２５（ｓ，１．５０Ｈ，Ｌｙｓ−ＯＣＨ２ＣＨ３），１．３９−１．９８（ｂｒ，３．００Ｈ，Ｌｙｓ−ＣＨ２），２．９０（ｂｒ，１Ｈ，Ｌｙｓ−ε−ＣＨ２），３．３８（ｓ，４．５０Ｈ，ＭＰＥＧ７５０−ＯＣＨ３），３．６５（ｂｒ，１３０．０Ｈ，ＭＰＥＧ１０００−ＯＣＨ２ＣＨ２），４．４５（ｍ，０．５Ｈ，Ｌｙｓ−ＣＨ）。
リン核磁気共鳴スペクトル（ＣＤＣｌ３，ｐｐｍ）：δ−０．０１４（ｓ），δ−５．５５１（ｓ）。
【００９２】
実施例４．［ＮＰ（ＭＰＥＧ５５０）１．２５（ＬｙｓＥｔ）０．７５］ｎの合成
六塩化ホスファゼン三量体（［ＮＰＣｌ２］３、１１．５４ｇ、１００ｍｍｏｌ）、ＭＰＥＧ５５０（６９．０ｇ、１２６ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（８０．０ｍｌ、６００ｍｍｏｌ）、Ｎα−ＢｏｃＬｙｓＥｔ（２７．４ｇ、１００ｍｍｏｌ）を用いて、実施例１と同様の方法でポリホスファゼン高分子誘導体を合成した。合成した高分子は、実施例１と同様の方法で、限外濾過膜と装備を用いて、３〜３０ｋＤａ、３０〜１００ｋＤａ、１００〜３００ｋＤａ、そして３００ｋＤａ以上の分子量ごとに分離分取した。
［ＮＰ（ＭＰＥＧ５５０）１．２５（ＬｙｓＥｔ）０．７５］ｎを得た（収率、７４％）。
【００９３】
組成式：Ｃ７４．５Ｈ１５３Ｎ５Ｏ３５．５Ｐ２
元素分析理論値（％）：Ｃ，５１．１４；Ｈ８．８２；Ｎ，４．１４。測定値（％）：Ｃ，５０．８７；Ｈ，９．０２８；Ｎ，４．３１。
水素核磁気共鳴スペクトル（ＣＤＣｌ３）（δ，ｐｐｍ）：１．２５（ｓ，２．２５Ｈ，Ｌｙｓ−ＯＣＨ２ＣＨ３），１．３９−１．９８（ｂｒ，４．５０Ｈ，Ｌｙｓ−ＣＨ２），２．９０（ｂｒ，１．５Ｈ，Ｌｙｓ−ε−ＣＨ２），３．３８（ｓ，３．７５Ｈ，ＭＰＥＧ７５０−ＯＣＨ３），３．６５（ｂｒ，８２．５Ｈ，ＭＰＥＧ５５０−ＯＣＨ２ＣＨ２），４．４５（ｍ，０．７Ｈ，Ｌｙｓ−ＣＨ）。
リン核磁気共鳴スペクトル（ＣＤＣｌ３，ｐｐｍ）：δ−０．０１４（ｓ），δ−５．５５１（ｓ）。
【００９４】
実施例５．［ＮＰ（ＭＰＥＧ５５０）１．０（ＬｙｓＥｔ）１．０］ｎの合成
六塩化ホスファゼン三量体（［ＮＰＣｌ２］３、１１．５４ｇ、１００ｍｍｏｌ）、ＭＰＥＧ５５０（５５．０ｇ、１００ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（８０．０ｍｌ、６００ｍｍｏｌ）、Ｎα−ＢｏｃＬｙｓＥｔ（３５．６ｇ、１３０ｍｍｏｌ）を用いて、実施例１と同様の方法でポリホスファゼン高分子誘導体を合成した。合成した高分子は、実施例１と同様の方法で、限外濾過膜と装備を用いて、３〜３０ｋＤａ、３０〜１００ｋＤａ、１００〜３００ｋＤａ、そして３００ｋＤａ以上の分子量ごとに分離分取した。  ［ＮＰ（ＭＰＥＧ５５０）１．０（ＬｙｓＥｔ）１．０］ｎを得た（収率、７４％）。
【００９５】
組成式：Ｃ６６Ｈ１３６Ｎ６Ｏ３０Ｐ２
元素分析理論値（％）：Ｃ，５０．９５；Ｈ，８．８１；Ｎ，５．４０。測定値（％）：Ｃ，５０．２９；Ｈ，８．９５；Ｎ，５．５１。
水素核磁気共鳴スペクトル（ＣＤＣｌ３）（δ，ｐｐｍ）：１．２５（ｓ，３．００Ｈ，Ｌｙｓ−ＯＣＨ２ＣＨ３），１．３９−１．９８（ｂｒ，６．００Ｈ，Ｌｙｓ−ＣＨ２），２．９０（ｂｒ，２．０Ｈ，Ｌｙｓ−ε−ＣＨ２），３．３８（ｓ，３．０Ｈ，ＭＰＥＧ７５０−ＯＣＨ３），３．６５（ｂｒ，６６．０Ｈ，ＭＰＥＧ５００−ＯＣＨ２ＣＨ２），４．４５（ｍ，１．０Ｈ，Ｌｙｓ−ＣＨ）。
リン核磁気共鳴スペクトル（ＣＤＣｌ３，ｐｐｍ）：δ−０．０１４（ｓ），δ−５．５５１（ｓ）。
【００９６】
実施例６．［ＮＰ（ＭＰＥＧ５５０）１．５０（ＧｌｙＬｙｓＥｔ）０．５０］ｎの合成
六塩化ホスファゼン三量体（［ＮＰＣｌ２］３、１１．５４ｇ、１００ｍｍｏｌ）、ＭＰＥＧ５５０（８２．５ｇ、１５０ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（８０．０ｍｌ、６００ｍｍｏｌ）、Ｇｌｙ（Ｎε−ＢｏｃＬｙｓＥｔ（２４．８ｇ、９０ｍｍｏｌ）を用いて、実施例１と同様の方法でポリホスファゼン高分子誘導体を合成した。合成した高分子は、実施例１と同様の方法で、限外濾過膜と装備を用いて、３〜３０ｋＤａ、３０〜１００ｋＤａ、１００〜３００ｋＤａ、そして３００ｋＤａ以上の分子量ごとに分離分取した。
［ＮＰ（ＭＰＥＧ５５０）１．５（ＧｌｙＬｙｓＥｔ）０．５］ｎを得た（収率、７４％）。
【００９７】
組成式：Ｃ８５Ｈ１７３Ｎ５Ｏ４２Ｐ２
元素分析理論値（％）：Ｃ，５１．０６；Ｈ，８．７２；Ｎ，３．５０。測定値（％）：Ｃ，５０．７５；Ｈ，８．８２；Ｎ，３．６１。
水素核磁気共鳴スペクトル（ＣＤＣｌ３）（δ，ｐｐｍ）：１．２５（ｓ，３．００Ｈ，Ｌｙｓ−ＯＣＨ２ＣＨ３），１．３９−１．９８（ｂｒ，６．００Ｈ，Ｌｙｓ−ＣＨ２），２．９０（ｂｒ，２．０Ｈ，Ｌｙｓ−ε−ＣＨ２），３．３８（ｓ，３．０Ｈ，ＭＰＥＧ７５０−ＯＣＨ３），３．６５（ｂｒ，６６．０Ｈ，ＭＰＥＧ５００−ＯＣＨ２ＣＨ２），３．９２（ｂｓ，２Ｈ，Ｇｌｙ−ＣＨ２），４．４５（ｍ，１．０Ｈ，Ｌｙｓ−ＣＨ）。
リン核磁気共鳴スペクトル（ＣＤＣｌ３，ｐｐｍ）：δ−０．０１４（ｓ），δ−５．５５１（ｓ）。
【００９８】
実施例７．［ＮＰ（ＭＰＥＧ５５０）１．５（Ｎα−ＢｏｃＬｙｓ）０．５］ｎの合成
六塩化ホスファゼン三量体（［ＮＰＣｌ２］３、１１．５４ｇ、１００ｍｍｏｌ）、ＭＰＥＧ５５０（８２．５ｇ、１５０ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（８０．０ｍｌ、６００ｍｍｏｌ）、Ｎα−ＢｏｃＬｙｓＥｔ（２０．５ｇ、７５ｍｍｏｌ）を用いて、実施例１と同様の方法でポリホスファゼンスペーサのアミングループが保護された高分子誘導体を合成した。合成した誘導体（１０ｇ、１０ｍｍｏｌ）、ＮａＯＨ（０．４ｇ、１０ｍｍｏｌ）をメタノール溶媒に溶かして、４時間常温で反応させて加水分解する。加水分解は１Ｈ−ＮＭＲを用いて確認し、加水分解が確認された高分子溶液は減圧蒸留して、固体状態の高分子を得る。この固体を蒸留水に溶かした後、有機酸溶液を用いてｐＨを３以下に低下させた後、クロロホルムまたはメチレンクロライド溶媒を用いて３回抽出する。抽出した有機層は無水ＮａＨＣＯ３を用いて乾燥し、乾燥した有機層は再び減圧蒸留して、カルボン酸形態のポリホスファゼン高分子を得る。（収率：９５％以上）
【００９９】
組成式：Ｃ８６Ｈ１７４Ｎ４Ｏ４３Ｐ２
元素分析理論値（％）：Ｃ，５１．２８；Ｈ，８．７１；Ｎ，２．７８。測定値（％）：Ｃ，５１．０２；Ｈ，８．９４；Ｎ，２．９１。
水素核磁気共鳴スペクトル（ＣＤＣｌ３）（δ，ｐｐｍ）：１．３２（ｓ，４．５Ｈ，Ｂｏｃ−ＣＨ３），１．３９−１．９８（ｂｒ，６．００Ｈ，Ｌｙｓ−ＣＨ２），２．９０（ｂｒ，２．０Ｈ，Ｌｙｓ−ε−ＣＨ２），３．３８（ｓ，３．０Ｈ，ＭＰＥＧ５５０−ＯＣＨ３），３．６５（ｂｒ，６６．０Ｈ，ＭＰＥＧ５５０−ＯＣＨ２ＣＨ２），４．４５（ｍ，１．０Ｈ，Ｌｙｓ−ＣＨ）。
【０１００】
実施例８．［ＮＰ（ＭＰＥＧ５５０）（ＡＥ）］ｎの合成
六塩化ホスファゼン三量体（［ＮＰＣｌ２］３、（２．０ｇ、５．７２ｍｍｏｌ）、触媒の三塩化アルミニウム（ＡｌＣｌ３、７．０ｗｔ％）、分子量５５０のメトキシポリエチレングリコール（ＭＰＥＧ５５０）（９．４８ｇ、１７．２ｍｍｏｌ）とナトリウム（Ｎａ）金属（０．５９ｇ、２５．７ｍｍｏｌ）を、実施例１と同様の方法で反応させて、ＭＰＥＧ５５０が置換されたホスファゼン高分子中間体溶液を得る。一方、２−アミノエタノール（ＡＥ）（１．３０ｇ、２１．３ｍｏｌ）と水和ナトリウム（０．６１ｇ、２５．４ｍｍｏｌ）を、乾燥したテトラヒドロフラン（５０ｍｌ）溶媒で常温で５時間反応させると、黄色の２−アミノエタノールのナトリウム塩が沈殿で離れる。この沈殿を濾過して、エチルエーテル（ｅｔｈｙｌｅｔｈｅｒ）で十分に洗った後、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）（５０ｍｌ）溶媒に溶かした後、この溶液を前記ＭＰＥＧ５５０が置換されたホスファゼン中間体溶液に徐々に加えた後、約５０℃で２４時間反応させる。反応液から副産物の塩化ナトリウムを濾過／除去した後、濾過液をセルロースメンブレン（ＭＷＣＯ：３．５ｋＤａ）を用いて透析した後、凍結乾燥すると、新たな機能性ポリホスファゼン高分子［ＮＰ（ＭＰＥＧ５５０）（ＡＥ）］ｎを得る（収率：７０％）。
【０１０１】
組成式：Ｃ２７Ｈ５７Ｎ２Ｏ１４Ｐ．Ｈ２Ｏ
元素分析理論値（％）：Ｃ，４７．４５；Ｈ，８．６４；Ｎ，４．１０；測定値（％）：４７．３８；Ｈ，８．６１；Ｎ，３．９５。
水素核磁気共鳴スペクトル（Ｄ２Ｏ）（δ，ｐｐｍ）：３．２６（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ３  ｏｆ  ＭＰＥＧ），３．５０−３．５２（ｍ，４Ｈ，（ＣＨ２）２  ｏｆ  ａｍｉｎｏｅｔｈａｎｏｌ），３．５４−３．８１（ｂｒｍ，４６Ｈ，ＣＨ２  ｏｆ  ＭＰＥＧ），３．８３−４．１０（ｂｒｍ，２Ｈ，−Ｐ−Ｏ−ＣＨ２−  ｏｆ  ＭＰＥＧ）。
リン核磁気共鳴スペクトル（ＣＤＣｌ３，ｐｐｍ）：δ−２．６６（Ｏ−Ｐ−Ｏ）。
【０１０２】
実施例９．［ＮＰ（ＭＰＥＧ７５０）（ＡＥ）］ｎの合成
六塩化ホスファゼン三量体（［ＮＰＣｌ２］３、（２．０ｇ、５．７２ｍｍｏｌ）、触媒の三塩化アルミニウム（ＡｌＣｌ３、７．０ｗｔ％）、分子量７５０のメトキシポリエチレングリコール（ＭＰＥＧ７５０）（１２．９ｇ、１７．２ｍｍｏｌ）、ナトリウム（Ｎａ）金属（０．５９ｇ、２５．７ｍｍｏｌ）、２−アミノエタノール（ＡＥ）（１．３０ｇ、２１．３ｍｏｌ）、および水和ナトリウム（０．６１ｇ、２５．４ｍｍｏｌ）を実施例８と同様の方法で反応させて、ＭＰＥＧ７５０が置換されたホスファゼン高分子［ＮＰ（ＭＰＥＧ７５０）（ＡＥ）］ｎ（収率：７８％）を得る。
【０１０３】
組成式：Ｃ３５Ｈ７３Ｎ２Ｏ１８Ｐ．Ｈ２Ｏ
元素分析理論値（％）：Ｃ，４８．８９；Ｈ，８．７３；Ｎ，３．２６；測定値（％）：Ｃ，４８．０２；Ｈ，８．９６；Ｎ，３．５５。
水素核磁気共鳴スペクトル（Ｄ２Ｏ）（δ，ｐｐｍ）：３．４１（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ３  ｏｆ  ＭＰＥＧ），３．４９−３．５３（ｍ，４Ｈ，（ＣＨ２）２  ｏｆ  ａｍｉｎｏｅｔｈａｎｏｌ），３．５７−３．８３（ｂｒｍ，６２Ｈ，ＣＨ２  ｏｆ  ＭＰＥＧ），３．８３−４．０５（ｂｒｍ，２Ｈ，−Ｐ−Ｏ−ＣＨ２−  ｏｆ  ＭＰＥＧ）。
リン核磁気共鳴スペクトル（ＣＤＣｌ３，ｐｐｍ）：δ−３．９５（Ｏ−Ｐ−Ｏ）。
【０１０４】
抗癌剤−リンカー前駆体の合成
実施例１０．２’−Ａｃｏｎｉｔｉｃ−ｄｏｃｅｔａｘｅｌ  ＮＨＳ  ｅｓｔｅｒの合成
Ａｃｏｎｉｔｉｃ  ａｎｈｙｄｒｉｄｅ（２０ｍｍｏｌ、３．１２ｇ）、ＤＰＴＳ（６．０ｇ、２０ｍｍｏｌ）とｄｏｃｅｔａｘｅｌ（８．０３ｇ、１０．０ｍｍｏｌ）を４時間真空乾燥した後、低温（−１０℃）に冷却させた後、よく乾燥したテトラヒドロフラン（１００ｍｌ）を添加して反応物を完全に溶かす。反応物を完全に溶かした後、同じくよく乾燥したテトラヒドロフランに溶かしたＤＣＩ（２０ｍｍｏｌ、２．５ｇ）を２０分間徐々に添加する。−１０℃を維持したまま６時間反応させた後、再び０℃で６〜１２時間反応させる。反応の進行過程は、ＴＬＣ（展開溶媒、ＭＣ：ＭｅＯＨ＝９５：５）を用いてｒｆ値が０．４程度のドセタキセルの点が消えることを用いて確認した。未反応ドセタキセルが消えることを確認した後、もう１回、ＨＰＬＣを用いて最終反応の完了を確認した後、この反応溶液に過剰のＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ、１１．５ｇ、１００ｍｍｏｌ）と塩基としてはＤＩＰＥＡ（ｄｉｉｓｏｐｒｏｐｙｌ  ｅｔｈｙｌ  ａｍｉｎｅ）を過剰（５〜１０倍）に添加して、塩基性条件で作って、追加的に１２時間反応をさらに行った。１２時間後、反応混合物を減圧乾燥して固体状態の反応混合物を得、この混合物を再び少量のエタノール（５０ｍｌ）に溶かした後、過剰の水（９５０ｍｌ）を添加して、０℃で３時間再結晶する。その後、上等液を注ぎ捨てた後、濃褐色のオイルをクロロホルムまたはメチレンクロライドなどの有機溶媒に溶かす。この溶液を分別漏斗に移した後、塩水／酸性（クエン酸、ｐＨ＝２）／塩基性（ＮａＨＣＯ３、ｐＨ＝９）／塩水の順に洗浄した後、有機層を乾燥剤（ＭｇＳＯ４）を用いて乾燥した後、フィルタ、そして減圧蒸留して、所望の２’−ａｃｏｎｉｔｉｃ−ｄｏｃｅｔａｘｅｌ−ＮＨＳ  ｅｓｔｅｒを得ることができた。
【０１０５】
組成式：Ｃ５３Ｈ６０Ｎ２Ｏ２１
元素分析理論値（％）：Ｃ，５９．９９；Ｈ，５．７０；Ｎ，２．６４。測定値（％）：Ｃ，６０．０７；Ｈ，５．８６；Ｎ，２．７１。
水素核磁気共鳴スペクトル（ＣＤＣｌ３）（δ，ｐｐｍ）：１．１３ｐｐｍ（ｓ，３Ｈ，Ｃ１７−ＣＨ３），１．２４ｐｐｍ（ｓ，３Ｈ，Ｃ１６−ＣＨ３），１．３４ｐｐｍ（ｓ，９Ｈ，Ｃ６０−ｔ  Ｂｕ），１．７５ｐｐｍ（ｓ，３Ｈ，Ｃ１９−ＣＨ３），１．９６ｐｐｍ（ｓ，３Ｈ，Ｃ１８−ＣＨ３），２．１８ｐｐｍ（ｄ，２Ｈ，Ｃ１４−ＣＨ２），２．４３ｐｐｍ（ｓ，３Ｈ，Ｃ２２−ＣＨ３），２．６４（ｔ，４Ｈ，ＮＨＳ−ＣＨ２ＣＨ２），２．９２（ｓ，２Ｈ，ａｃｏｎｉｔｉｃ−ＣＨ２），４．２１ｐｐｍ（ｄ，１Ｈ，Ｃ２０−ＣＨａ），４．２４ｐｐｍ（ｍ，１Ｈ，Ｃ７−ＣＨ），４．３２ｐｐｍ（ｄ，１Ｈ，Ｃ２０−ＣＨｂ），４．９５ｐｐｍ（ｄｄ，１Ｈ，Ｃ５−ＣＨ），５．２３ｐｐｍ（ｄ，１Ｈ，Ｃ１０−ＣＨ），５．４０ｐｐｍ（ｄ，１Ｈ，Ｃ３０−ＣＨ），５．６９ｐｐｍ（ｄ，１Ｈ，Ｃ２−ＣＨ），６．４０−６．６８（ｍ，１Ｈ，ａｃｏｎｉｔｉｃ−ＣＨ），７．５１ｐｐｍ（ｍ，２Ｈ，Ｃ３３，Ｃ２７−ＣＨ），７．５３（ｍ，６Ｈ，Ｃ３２，Ｃ３４−ＣＨ；Ｃ３１，Ｃ３５−ＣＨ；Ｃ２６，Ｃ２８−ＣＨ），８．１２（ｄ，２Ｈ，Ｃ２５，Ｃ２９−ＣＨ）。
【０１０６】
実施例１１．２’−Ａｃｏｎｉｔｉｃ−ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ−ＮＨＳエステルの合成
Ａｎｃｏｎｉｔｉｃ  ａｎｈｙｄｒｉｄｅ（３．１２ｇ、２０ｍｍｏｌ）、ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ（８．５３ｇ、１０ｍｍｏｌ）、ＤＰＴＳ（５．８８ｇ、２０ｍｍｏｌ）、ＮＨＳ（１００ｍｍｏｌ、１１．５ｇ）、ＤＩＣ（２０ｍｍｏｌ、２．５２ｇ）、そしてＤＩＰＥＡ（１０ｍｌ）を用いて、実施例６と同様の方法で、２’−Ａｃｏｎｉｔｉｃ−ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ−ＮＨＳエステルを得る。
【０１０７】
組成式：Ｃ５５Ｈ５８Ｎ２Ｏ１９
元素分析理論値（％）：Ｃ，６２．８５；Ｈ，５．５６；Ｎ，２．６７。測定値（％）：Ｃ，６１．９０；Ｈ，５．７５；Ｎ，２．８０。
水素核磁気共鳴スペクトル（ＣＤＣｌ３）（δ，ｐｐｍ）：１．１３ｐｐｍ（ｓ，３Ｈ，Ｃ１７−ＣＨ３），１．２４ｐｐｍ（ｓ，３Ｈ，Ｃ１６−ＣＨ３），１．３４ｐｐｍ（ｓ，９Ｈ，Ｃ６０−ｔ  Ｂｕ），１．７５ｐｐｍ（ｓ，３Ｈ，Ｃ１９−ＣＨ３），１．９６ｐｐｍ（ｓ，３Ｈ，Ｃ１８−ＣＨ３），２．１８ｐｐｍ（ｄ，２Ｈ，Ｃ１４−ＣＨ２），２．４３ｐｐｍ（ｓ，３Ｈ，Ｃ２２−ＣＨ３），２．６４（ｔ，４Ｈ，ＮＨＳ−ＣＨ２ＣＨ２），２．９２（ｓ，２Ｈ，ａｃｏｎｉｔｉｃ−ＣＨ２），４．２１ｐｐｍ（ｄ，１Ｈ，Ｃ２０−ＣＨａ），４．２４ｐｐｍ（ｍ，１Ｈ，Ｃ７−ＣＨ），４．３２ｐｐｍ（ｄ，１Ｈ，Ｃ２０−ＣＨｂ），４．９５ｐｐｍ（ｄｄ，１Ｈ，Ｃ５−ＣＨ），５．２３ｐｐｍ（ｄ，１Ｈ，Ｃ１０−ＣＨ），５．４０ｐｐｍ（ｄ，１Ｈ，Ｃ３０−ＣＨ），５．６９ｐｐｍ（ｄ，１Ｈ，Ｃ２−ＣＨ），６．４０−６．６８（ｍ，１Ｈ，ａｃｏｎｉｔｉｃ−ＣＨ），７．５１ｐｐｍ（ｍ，２Ｈ，Ｃ３３，Ｃ２７−ＣＨ），７．５３（ｍ，６Ｈ，Ｃ３２，Ｃ３４−ＣＨ；Ｃ３１，Ｃ３５−ＣＨ；Ｃ２６，Ｃ２８−ＣＨ），８．１２（ｄ，２Ｈ，Ｃ２５，Ｃ２９−ＣＨ）。
【０１０８】
実施例１２．２’−Ａｃｏｎｉｔｉｃ−ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ−ＮＨＳエステルの合成
Ａｎｃｏｎｉｔｉｃ  ａｎｈｙｄｒｉｄｅ（２０ｍｍｏｌ、３．１２ｇ）、ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ（１０ｍｍｏｌ、３．４８ｇ）、ＤＰＴＳ（２０ｍｍｏｌ、５．８８ｇ）、ＮＨＳ（１００ｍｍｏｌ、１１．５ｇ）、ＤＩＣ（２０ｍｍｏｌ、２．５２ｇ）、そしてＤＩＰＥＡ（１０ｍｌ）を用いて、実施例６と同様の方法で、２’−Ａｃｏｎｉｔｉｃ−ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ−ＮＨＳエステルを得る。
【０１０９】
組成式：Ｃ３０Ｈ２３Ｎ３Ｏ１１
元素分析理論値（％）：Ｃ，５９．９０；Ｈ，３．８５；Ｎ，６．９９。測定値（％）：Ｃ，６０．２９；Ｈ，３．９８；Ｎ，６．５７。
水素核磁気共鳴スペクトル（ＣＤＣｌ３）（δ，ｐｐｍ）：０．９（ｔ，３Ｈ，Ｃ１８−ＣＨ３），２．０（ｍ，２Ｈ，Ｃ１９−ＣＨ２），２．６４（ｔ，４Ｈ，ＮＨＳ−ＣＨ２ＣＨ２），２．９２（ｓ，２Ｈ，ａｃｏｎｉｔｉｃ−ＣＨ２），４．２０（ｄ，２Ｈ，Ｃ５−ＣＨ２），４．７６（ｍ，２Ｈ，Ｃ２２−ＣＨ２），６．４０−６．６８（ｍ，１Ｈ，ａｃｏｎｉｔｉｃ−ＣＨ），６．７０（ｓ，１Ｈ，Ｃ１４−ＣＨ），７．５９（ｓ，１Ｈ，Ｃ１１−ＣＨ），７．８０（ｍ，２Ｈ，Ｃ１２−ＣＨ；Ｃ７−ＣＨ），８．０（ｍ，２Ｈ，Ｃ９−ＣＨ；Ｃ１２−ＣＨ）
【０１１０】
実施例１３．２’−Ａｃｏｎｉｔｉｃ−ｇｌｙｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎの合成
ｔ−Ｂｏｃ−ｇｌｙｃｉｎｅ（０．５ｇ、２．８５ｍｍｏｌ）とｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ（ＣＰＴ）（０．５ｇ、１．４３ｍｍｏｌ）を無水塩化メチレン（２０ｍｌ）に溶かした後、これに、ＤＩＰＣ（０．３６ｍｌ、２．８５ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（０．３１ｇ、２．５３ｍｍｏｌ）を加えて、室温で１６時間かき混ぜて反応させる。反応混合物を希釈塩酸（ｐＨ２）で抽出した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた後、回転乾燥器で乾燥させると、ｔ−Ｂｏｃ−ｇｌｙｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎが得られる。この中間化合物を塩化メチレンとフッ化酢酸の混合溶媒（１０ｍｌ／１０ｍｌ）で１時間反応させて、ｔ−Ｂｏｃを除去して得られたｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ−ｇｌｙ−ＮＨ２とｃｉｓ−ａｃｏｎｉｔｉｃ  ａｎｈｙｄｒｉｄｅ（０．５７ｇ、３．６３ｍｍｏｌ）をジメチルホルムアルデヒド（ＤＭＦ）溶媒（２ｍｌ）に溶かした後、０℃で１６時間反応させた後、エーテルを加えて沈殿させて濾過／乾燥すると、ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ前駆体２’−Ａｃｏｎｉｔｉｃ−ｇｌｙｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎが８０％の収率で得られる。
【０１１１】
組成式：Ｃ２８Ｈ２３Ｎ３Ｏ１０
元素分析理論値（％）：Ｃ，５９．８４；Ｈ，４．０９；Ｎ，７．４８；測定値（％）：Ｃ，５９．７２；Ｈ，４．０１；Ｎ，７．３９。
水素核磁気共鳴スペクトル（ＤＭＳＯ）（δ，ｐｐｍ）：０．８８−０．９３（ｂｒｍ，３Ｈ，−ＣＨ３  ｏｆ  ＣＰＴ−Ｃ１８），２．１２−２．１６（ｍ，２Ｈ，−ＣＨ２  ｏｆ  ＣＰＴ−Ｃ−１９），２．８６（ｓ，２Ｈ，−ＣＨ２  ｏｆ  ｃｉｓ−ａｃｏｎｉｔａｔｅ），３．９２−４．４２（ｂｒｍ，２Ｈ，−ＣＨ２  ｏｆ  ｇｌｙｃｉｎｅ），５．２７（ｂｒｓ，２Ｈ，−ＣＨ２  ｏｆ  ＣＰＴ−Ｃ５），５．４９（ｂｒｓ，２Ｈ，−ＣＨ２  ｏｆ  ＣＰＴ−Ｃ２２），５．９７（ｓ，１Ｈ，＝ＣＨ  ｏｆ  ｃｉｓ−ａｃｏｎｉｔａｔｅ），７．１８−７．２１（ｍ，１Ｈ，＝ＣＨ  ｏｆ  ＣＰＴ−Ｃ１４），７．６９−７．７２（ｍ，１Ｈ，＝ＣＨ  ｏｆ  ＣＰＴ−Ｃ１１），７．８４−７．８９（ｍ，１Ｈ，＝ＣＨ  ｏｆ  ＣＰＴ−Ｃ１０）８．１０−８．２１（ｍ，２Ｈ，＝ＣＨ  ｏｆ  ＣＰＴ−Ｃ１２  ａｎｄ  Ｃ９），８．６８（ｂｒｓ，１Ｈ，＝ＣＨ  ｏｆ  ＣＰＴ−Ｃ７），１２．３−１２．８（ｂｒｓ，−ＣＯＯＨ  ｏｆ  ｃｉｓ−ａｃｏｎｉｔａｔｉｃ  ａｃｉｄ）。
【０１１２】
ポリホスファゼン−抗癌剤コンジュゲート化合物の合成
実施例１４．［ＮＰ（ＭＰＥＧ５５０）１．５（ＬｙｓＥｔ−２’−ａｃｏｎｉｔｉｃ−ｄｏｃｅｔａｘｅｌ）０．５］ｎの合成
実施例１で得られたポリホスファゼン誘導体（４．８５ｇ、５．０ｍｍｏｌ）をメチレンクロライドに溶かした後、氷浴を用いて冷却させ、実施例８の２’−アコニチックドセタキセルＮＨＳエステル（２’−ａｃｏｎｉｔｉｃ−ｄｏｃｅｔａｘｅｌ−ＮＨＳ、２．６５ｇ、２．５ｍｍｏｌ）をメチレンクロライドに溶かした後、反応フラスコに添加する。十分に冷却した後、ＤＩＰＥＡ（１０ｍｌ）を添加した後、１２時間低温（０〜５℃）を維持して反応させる。１２時間後、反応溶媒を減圧蒸留して除去した後、再びエタノールに溶かして減圧蒸留する過程を２回繰り返す。減圧蒸留後得られる高分子物質を、再び少量のエタノールと多量の水に溶かして再結晶する。この時、溶けない沈殿物はメンブレンフィルタを用いて除去し、最後に、綺麗な溶液は限外濾過膜を用いて分離精製する。限外濾過膜を用いて精製する時は、初期にはエタノール３０％（ｖ／ｖ）溶液を用いて５回洗浄した後、再び純粋な水に切り替えて５回洗浄、濃縮させる。こうして得られた濃縮溶液を凍結乾燥して、最終ポリホスファゼン−薬物コンジュゲート化合物［ＮＰ（ＭＰＥＧ５５０）１．５（ＬｙｓＥｔ−２’−ａｃｏｎｉｔｉｃ−ｄｏｃｅｔａｘｅｌ）０．５］ｎを得る。（収率＝９０％）
【０１１３】
組成式：Ｃ１３２Ｈ２２５Ｎ５Ｏ５９Ｐ２
元素分析理論値（％）：Ｃ，５４．８９；Ｈ，７．８５；Ｎ，２．４２。測定値（％）：Ｃ，５３．６２：Ｈ，７．９２；Ｎ，２．６７。
水素核磁気共鳴スペクトル（ＣＤＣｌ３）（δ，ｐｐｍ）：１．１３ｐｐｍ（ｓ，１．５Ｈ，Ｃ１７−ＣＨ３），１．２４ｐｐｍ（ｓ，１．５Ｈ，Ｃ１６−ＣＨ３），１．３４ｐｐｍ（ｂｓ，４．１Ｈ，Ｃ６０−ｔ  Ｂｕ），１．７５ｐｐｍ（ｓ，１．５Ｈ，Ｃ１９−ＣＨ３），１．９６ｐｐｍ（ｓ，１．５Ｈ，Ｃ１８−ＣＨ３），２．１８ｐｐｍ（ｄ，１．０Ｈ，Ｃ１４−ＣＨ２），２．４３ｐｐｍ（ｓ，１．５Ｈ，Ｃ２２−ＣＨ３），４．２１ｐｐｍ（ｄ，０．５Ｈ，Ｃ２０−ＣＨａ），４．２４ｐｐｍ（ｍ，０．５Ｈ，Ｃ７−ＣＨ），４．３２ｐｐｍ（ｄ，０．５Ｈ，Ｃ２０−ＣＨｂ），４．９５ｐｐｍ（ｄｄ，０．５Ｈ，Ｃ５−ＣＨ），５．２３ｐｐｍ（ｄ，０．５Ｈ，Ｃ１０−ＣＨ），５．４０ｐｐｍ（ｄ，０．５Ｈ，Ｃ３０−ＣＨ），５．６９ｐｐｍ（ｄ，０．５Ｈ，Ｃ２−ＣＨ），７．５１ｐｐｍ（ｍ，１．０Ｈ，Ｃ３３，Ｃ２７−ＣＨ），７．５３（ｍ，３．０Ｈ，Ｃ３２，Ｃ３４−ＣＨ；Ｃ３１，Ｃ３５−ＣＨ；Ｃ２６，Ｃ２８−ＣＨ），８．１２（ｄ，０．６Ｈ，Ｃ２５，Ｃ２９−ＣＨ），１．２４（ｓ，１．５Ｈ，Ｌｙｓ−ＯＣＨ２ＣＨ３），１．２９（ｂｓ，１Ｈ，Ｌｙｓ−ＣＨ２），１．５５ｐｐｍ（ｂｓ，１Ｈ，Ｌｙｓ−ＣＨ２），１．８０（ｂｓ，１Ｈ，Ｌｙｓ−ＣＨ２），２．９０（ｂｒ，１Ｈ，Ｌｙｓ−ｅ−ＣＨ２），３．３８ｐｐｍ（ｓ，４．５０Ｈ，ＣＨ３Ｏ−，ＰＥＧ），ａｎｄ３．６３ｐｐｍ（ｍ，６６．０Ｈ，−ＣＨ２ＣＨ２−Ｏ−），４．４（ｓ，０．５１Ｈ，Ｌｙｓｉｎｅ−ＣＨ）。
リン核磁気共鳴スペクトル（ＣＤＣｌ３，ｐｐｍ）：δ−０．０１４（ｓ），δ−５．５５１（ｓ）。
【０１１４】
実施例１５．［ＮＰ（ＭＰＥＧ５５０）１．５（ＬｙｓＥｔ）０．２（ＬｙｓＥｔ−２’−ａｃｏｎｉｔｉｃ−ｄｏｃｅｔａｘｅｌ）０．３］ｎの合成
実施例１で得られたポリホスファゼン誘導体（９．７ｇ、１０．０ｍｍｏｌ）、実施例８の２’−アコニチックドセタキセルＮＨＳエステル（３．１８ｇ、３．０ｍｍｏｌ）、そしてＤＩＰＥＡ（５ｍｌ）を用いて、実施例１４と同様の方法で、最終ポリホスファゼン−薬物コンジュゲート化合物［ＮＰ（ＭＰＥＧ５５０）１．５（ＬｙｓＥｔ）０．２（ＬｙｓＥｔ−２’−ａｃｏｎｉｔｉｃ−ｄｏｃｅｔａｘｅｌ）０．３］ｎを得る。（収率＝９０％）
【０１１５】
組成式：Ｃ１１２．４Ｈ２０３Ｎ４．６Ｏ５１．８Ｐ２
元素分析理論値（％）：Ｃ，５３．７９；Ｈ，８．１５；Ｎ，２．５７。測定値（％）：Ｃ，５３．４８：Ｈ，８．３１；Ｎ，２．６４。
水素核磁気共鳴スペクトル（ＣＤＣｌ３）（δ，ｐｐｍ）：１．１３ｐｐｍ（ｓ，０．９Ｈ，Ｃ１７−ＣＨ３），１．２４ｐｐｍ（ｓ，０．９Ｈ，Ｃ１６−ＣＨ３），１．３４ｐｐｍ（ｂｓ，３．３１Ｈ，Ｃ６０−ｔ  Ｂｕ），１．７５ｐｐｍ（ｓ，０．９Ｈ，Ｃ１９−ＣＨ３），１．９６ｐｐｍ（ｓ，０．９Ｈ，Ｃ１８−ＣＨ３），２．１８ｐｐｍ（ｄ，０．６Ｈ，Ｃ１４−ＣＨ２），２．４３ｐｐｍ（ｓ，０．９Ｈ，Ｃ２２−ＣＨ３），４．２１ｐｐｍ（ｄ，０．３Ｈ，Ｃ２０−ＣＨａ），４．２４ｐｐｍ（ｍ，０．３Ｈ，Ｃ７−ＣＨ），４．３２ｐｐｍ（ｄ，０．３Ｈ，Ｃ２０−ＣＨｂ），４．９５ｐｐｍ（ｄｄ，０．３１Ｈ，Ｃ５−ＣＨ），５．２３ｐｐｍ（ｄ，０．３Ｈ，Ｃ１０−ＣＨ），５．４０ｐｐｍ（ｄ，０．３Ｈ，Ｃ３０−ＣＨ），５．６９ｐｐｍ（ｄ，０．３Ｈ，Ｃ２−ＣＨ），７．５１ｐｐｍ（ｍ，０．６Ｈ，Ｃ３３，Ｃ２７−ＣＨ），７．５３（ｍ，１．８Ｈ，Ｃ３２，Ｃ３４−ＣＨ；Ｃ３１，Ｃ３５−ＣＨ；Ｃ２６，Ｃ２８−ＣＨ），８．１２（ｄ，０．６Ｈ，Ｃ２５，Ｃ２９−ＣＨ），１．２４（ｓ，１．５Ｈ，Ｌｙｓ−ＯＣＨ２ＣＨ３），１．２９（ｂｓ，１Ｈ，Ｌｙｓ−ＣＨ２），１．５５ｐｐｍ（ｂｓ，１Ｈ，Ｌｙｓ−ＣＨ２），１．８０（ｂｓ，１Ｈ，Ｌｙｓ−ＣＨ２），２．９０（ｂｒ，１Ｈ，Ｌｙｓ−ｅ−ＣＨ２），３．３８ｐｐｍ（ｓ，４．５０Ｈ，ＣＨ３Ｏ−，ＰＥＧ），ａｎｄ３．６３ｐｐｍ（ｍ，６６．０Ｈ，−ＣＨ２ＣＨ２−Ｏ−），４．４（ｓ，０．５１Ｈ，Ｌｙｓｉｎｅ−ＣＨ）。
リン核磁気共鳴スペクトル（ＣＤＣｌ３，ｐｐｍ）：δ−０．０１４（ｓ），δ−５．５５１（ｓ）。
【０１１６】
実施例１６．［ＮＰ（ＭＰＥＧ７５０）１．５（ＬｙｓＥｔ）０．２（ＬｙｓＥｔ−２’−ａｃｏｎｉｔｉｃ−ｄｏｃｅｔａｘｅｌ）０．３］ｎの合成
実施例２のポリホスファゼン（１２．３ｇ、１０ｍｍｏｌ）と実施例１１の２’−アコニチックドセタキセルＮＨＳエステル（５．３ｇ、５．０ｍｍｏｌ）、そしてＤＩＰＥＡ（１０ｍｌ）を用いて、実施例１４と同様の方法で、最終ポリホスファゼン−ドセタキセルコンジュゲート化合物［ＮＰ（ＭＰＥＧ７５０）１．５（ＬｙｓＥｔ）０．２（ＬｙｓＥｔ−２’−ａｃｏｎｉｔｉｃ−ｄｏｃｅｔａｘｅｌ）０．３］ｎを得る。（収率＝８９％）
【０１１７】
組成式：Ｃ１３６．４Ｈ２５１Ｎ４．６Ｏ６３．８Ｐ２
元素分析理論値（％）：Ｃ，５３．９２；Ｈ，８．３３；Ｎ，２．１２。測定値（％）：Ｃ，５３．２７：Ｈ，８．４５；Ｎ，２．３１。
水素核磁気共鳴スペクトル（ＣＤＣｌ３）（δ，ｐｐｍ）：１．１３ｐｐｍ（ｓ，０．９Ｈ，Ｃ１７−ＣＨ３），１．２４ｐｐｍ（ｓ，０．９Ｈ，Ｃ１６−ＣＨ３），１．３４ｐｐｍ（ｂｓ，３．３１Ｈ，Ｃ６０−ｔ  Ｂｕ），１．７５ｐｐｍ（ｓ，０．９Ｈ，Ｃ１９−ＣＨ３），１．９６ｐｐｍ（ｓ，０．９Ｈ，Ｃ１８−ＣＨ３），２．１８ｐｐｍ（ｄ，０．６Ｈ，Ｃ１４−ＣＨ２），２．４３ｐｐｍ（ｓ，０．９Ｈ，Ｃ２２−ＣＨ３），４．２１ｐｐｍ（ｄ，０．３Ｈ，Ｃ２０−ＣＨａ），４．２４ｐｐｍ（ｍ，０．３Ｈ，Ｃ７−ＣＨ），４．３２ｐｐｍ（ｄ，０．３Ｈ，Ｃ２０−ＣＨｂ），４．９５ｐｐｍ（ｄｄ，０．３１Ｈ，Ｃ５−ＣＨ），５．２３ｐｐｍ（ｄ，０．３Ｈ，Ｃ１０−ＣＨ），５．４０ｐｐｍ（ｄ，０．３Ｈ，Ｃ３０−ＣＨ），５．６９ｐｐｍ（ｄ，０．３Ｈ，Ｃ２−ＣＨ），７．５１ｐｐｍ（ｍ，０．６Ｈ，Ｃ３３，Ｃ２７−ＣＨ），７．５３（ｍ，１．８Ｈ，Ｃ３２，Ｃ３４−ＣＨ；Ｃ３１，Ｃ３５−ＣＨ；Ｃ２６，Ｃ２８−ＣＨ），８．１２（ｄ，０．６Ｈ，Ｃ２５，Ｃ２９−ＣＨ），１．２４（ｓ，１．５Ｈ，Ｌｙｓ−ＯＣＨ２ＣＨ３），１．２９（ｂｓ，１Ｈ，Ｌｙｓ−ＣＨ２），１．５５ｐｐｍ（ｂｓ，１Ｈ，Ｌｙｓ−ＣＨ２），１．８０（ｂｓ，１Ｈ，Ｌｙｓ−ＣＨ２），２．９０（ｂｒ，１Ｈ，Ｌｙｓ−ε−ＣＨ２），３．３８ｐｐｍ（ｓ，４．５０Ｈ，ＣＨ３Ｏ−，ＰＥＧ），ａｎｄ３．６３ｐｐｍ（ｍ，９８．０Ｈ，−ＣＨ２ＣＨ２Ｏ−），４．０（ｂｓ，４Ｈ，ＭＰＥＧ７５０−ＣＨ２），４．５１（ｓ，０．５１Ｈ，Ｌｙｓｉｎｅ−ＣＨ）。
リン核磁気共鳴スペクトル（ＣＤＣｌ３，ｐｐｍ）：δ−０．０１４（ｓ），δ−５．５５１（ｓ）。
【０１１８】
実施例１７．［ＮＰ（ＭＰＥＧ１０００）１．５（ＬｙｓＥｔ）０．２（ＬｙｓＥｔ−２’−ａｃｏｎｉｔｉｃ−ｄｏｃｅｔａｘｅｌ）０．３］ｎの合成
実施例３のポリホスファゼン（１５．６ｇ、１０ｍｍｏｌ）と実施例８の２’−アコニチックドセタキセルａｃｔｉｖｅ  ｅｓｔｅｒ（５．３ｇ、５．０ｍｍｏｌ）、そしてＤＩＰＥＡ（１０ｍｍｌ）を用いて、実施例１４と同様の方法で、最終ポリホスファゼン−ドセタキセルコンジュゲート化合物［ＮＰ（ＭＰＥＧ１０００）１．５（ＬｙｓＥｔ）０．２（ＬｙｓＥｔ−２’−ａｃｏｎｉｔｉｃ−ｄｏｃｅｔａｘｅｌ）０．３］ｎを得る。（収率＝８９％）
【０１１９】
組成式：Ｃ１７２．４Ｈ３２３Ｎ４．６Ｏ４８．２Ｐ２
元素分析理論値（％）：Ｃ，５４．０４、Ｈ，８．５０；Ｎ，１．６８。測定値（％）：Ｃ，５３．７１：Ｈ，８．７４；Ｎ，２．０１。
水素核磁気共鳴スペクトル（ＣＤＣｌ３）（δ，ｐｐｍ）：１．１３ｐｐｍ（ｓ，０．９Ｈ，Ｃ１７−ＣＨ３），１．２４ｐｐｍ（ｓ，０．９Ｈ，Ｃ１６−ＣＨ３），１．３４ｐｐｍ（ｂｓ，３．３１Ｈ，Ｃ６０−ｔ  Ｂｕ），１．７５ｐｐｍ（ｓ，０．９Ｈ，Ｃ１９−ＣＨ３），１．９６ｐｐｍ（ｓ，０．９Ｈ，Ｃ１８−ＣＨ３），２．１８ｐｐｍ（ｄ，０．６Ｈ，Ｃ１４−ＣＨ２），２．４３ｐｐｍ（ｓ，０．９Ｈ，Ｃ２２−ＣＨ３），４．２１ｐｐｍ（ｄ，０．３Ｈ，Ｃ２０−ＣＨａ），４．２４ｐｐｍ（ｍ，０．３Ｈ，Ｃ７−ＣＨ），４．３２ｐｐｍ（ｄ，０．３Ｈ，Ｃ２０−ＣＨｂ），４．９５ｐｐｍ（ｄｄ，０．３１Ｈ，Ｃ５−ＣＨ），５．２３ｐｐｍ（ｄ，０．３Ｈ，Ｃ１０−ＣＨ），５．４０ｐｐｍ（ｄ，０．３Ｈ，Ｃ３０−ＣＨ），５．６９ｐｐｍ（ｄ，０．３Ｈ，Ｃ２−ＣＨ），７．５１ｐｐｍ（ｍ，０．６Ｈ，Ｃ３３，Ｃ２７−ＣＨ），７．５３（ｍ，１．８Ｈ，Ｃ３２，Ｃ３４−ＣＨ；Ｃ３１，Ｃ３５−ＣＨ；Ｃ２６，Ｃ２８−ＣＨ），８．１２（ｄ，０．６Ｈ，Ｃ２５，Ｃ２９−ＣＨ），１．２４（ｓ，１．５Ｈ，Ｌｙｓ−ＯＣＨ２ＣＨ３），１．２９（ｂｓ，１Ｈ，Ｌｙｓ−ＣＨ２），１．５５ｐｐｍ（ｂｓ，１Ｈ，Ｌｙｓ−ＣＨ２），１．８０（ｂｓ，１Ｈ，Ｌｙｓ−ＣＨ２），２．９０（ｂｒ，１Ｈ，Ｌｙｓ−ε−ＣＨ２），３．３８ｐｐｍ（ｓ，４．５０Ｈ，ＭＰＥＧ−ＣＨ３Ｏ−），ａｎｄ３．６３ｐｐｍ（ｍ，１２８Ｈ，ＭＰＥＧ−ＣＨ２ＣＨ２Ｏ），４．０（ｂｓ，４Ｈ，ＭＰＥＧ１０００−ＣＨ２），４．５１（ｓ，０．５１Ｈ，Ｌｙｓｉｎｅ−ＣＨ）。
リン核磁気共鳴スペクトル（ＣＤＣｌ３，ｐｐｍ）：δ−０．０１４（ｓ），δ−５．５５１（ｓ）。
【０１２０】
実施例１８．［ＮＰ（ＭＰＥＧ５５０）１．０（ＬｙｓＥｔ）０．５（ＬｙｓＥｔ−２’−ａｃｏｎｉｔｉｃ−ｄｏｃｅｔａｘｅｌ）０．５］ｎの合成
実施例５のポリホスファゼン（７．７ｇ、１０ｍｍｏｌ）と実施例１１の２’−アコニチックドセタキセルＮＨＳエステル（６．３６ｇ、６．０ｍｍｏｌ）、そしてＤＩＰＥＡ（１０ｍｍｌ）を用いて、実施例１４と同様の方法で、最終ポリホスファゼン−ドセタキセルコンジュゲート化合物［ＮＰ（ＭＰＥＧ５５０）１．０（ＬｙｓＥｔ）０．５（ＬｙｓＥｔ−２’−ａｃｏｎｉｔｉｃ−ｄｏｃｅｔａｘｅｌ）０．５］ｎを得る。（収率＝８９％）
【０１２１】
組成式：Ｃ１１５Ｈ１９１Ｎ７Ｏ４８Ｐ２
元素分析理論値（％）：Ｃ，５５．２１；Ｈ，７．７０；Ｎ，３．９２。測定値（％）：Ｃ，５４．９２：Ｈ，８．０１；Ｎ，３．９９。
水素核磁気共鳴スペクトル（ＣＤＣｌ３）（δ，ｐｐｍ）：１．１３ｐｐｍ（ｓ，０．９Ｈ，Ｃ１７−ＣＨ３），１．２４ｐｐｍ（ｓ，０．９Ｈ，Ｃ１６−ＣＨ３），１．３４ｐｐｍ（ｂｓ，３．３１Ｈ，Ｃ６０−ｔ  Ｂｕ），１．７５ｐｐｍ（ｓ，０．９Ｈ，Ｃ１９−ＣＨ３），１．９６ｐｐｍ（ｓ，０．９Ｈ，Ｃ１８−ＣＨ３），２．１８ｐｐｍ（ｄ，０．６Ｈ，Ｃ１４−ＣＨ２），２．４３ｐｐｍ（ｓ，０．９Ｈ，Ｃ２２−ＣＨ３），４．２１ｐｐｍ（ｄ，０．３Ｈ，Ｃ２０−ＣＨａ），４．２４ｐｐｍ（ｍ，０．３Ｈ，Ｃ７−ＣＨ），４．３２ｐｐｍ（ｄ，０．３Ｈ，Ｃ２０−ＣＨｂ），４．９５ｐｐｍ（ｄｄ，０．３１Ｈ，Ｃ５−ＣＨ），５．２３ｐｐｍ（ｄ，０．３Ｈ，Ｃ１０−ＣＨ），５．４０ｐｐｍ（ｄ，０．３Ｈ，Ｃ３０−ＣＨ），５．６９ｐｐｍ（ｄ，０．３Ｈ，Ｃ２−ＣＨ），７．５１ｐｐｍ（ｍ，０．６Ｈ，Ｃ３３，Ｃ２７−ＣＨ），７．５３（ｍ，１．８Ｈ，Ｃ３２，Ｃ３４−ＣＨ；Ｃ３１，Ｃ３５−ＣＨ；Ｃ２６，Ｃ２８−ＣＨ），８．１２（ｄ，０．６Ｈ，Ｃ２５，Ｃ２９−ＣＨ），１．２４（ｓ，３．０Ｈ，Ｌｙｓ−ＯＣＨ２ＣＨ３），１．２９（ｂｓ，２Ｈ，Ｌｙｓ−ＣＨ２），１．５５ｐｐｍ（ｂｓ，２Ｈ，Ｌｙｓ−ＣＨ２），１．８０（ｂｓ，２Ｈ，Ｌｙｓ−ＣＨ２），２．９０（ｂｒ，２Ｈ，Ｌｙｓ−ｅ−ＣＨ２），３．３８ｐｐｍ（ｓ，３．００Ｈ，ＣＨ３Ｏ−，ＰＥＧ），ａｎｄ３．６３ｐｐｍ（ｍ，４４．０Ｈ，−ＣＨ２ＣＨ２−Ｏ−），４．４（ｓ，０．５１Ｈ，Ｌｙｓｉｎｅ−ＣＨ）。
リン核磁気共鳴スペクトル（ＣＤＣｌ３，ｐｐｍ）：δ−０．０１４（ｓ），δ−５．５５１（ｓ）。
【０１２２】
実施例１９．［ＮＰ（ＭＰＥＧ５５０）１．５（ＧｌｙＬｙｓＥｔ）０．２（ＧｌｙＬｙｓＥｔ−２’−ａｃｏｎｉｔｉｃ−ｄｏｃｅｔａｘｅｌ）０．３］ｎの合成
実施例６のポリホスファゼン（１０．４ｇ、１０ｍｍｏｌ）と実施例８の２’−アコニチックドセタキセルＮＨＳエステル（５．３ｇ、５．０ｍｍｏｌ）、そしてＤＩＰＥＡ（１０ｍｍｌ）を用いて、実施例１４と同様の方法で、最終ポリホスファゼン−ドセタキセルコンジュゲート化合物［ＮＰ（ＭＰＥＧ５５０）１．５（ＧｌｙＬｙｓＥｔ）０．２（ＧｌｙＬｙｓＥｔ−２’−ａｃｏｎｉｔｉｃ−ｄｏｃｅｔａｘｅｌ）０．３］ｎを得る。（収率＝８９％）
【０１２３】
組成式：Ｃ１１４．４Ｈ２０６Ｎ５．６Ｏ５２．８Ｐ２
元素分析理論値（％）：Ｃ，５３．５３；Ｈ，８．０９；Ｎ，３．０６。測定値（％）：Ｃ，５２．９８：Ｈ，８．２３；Ｎ，３．１９。
水素核磁気共鳴スペクトル（ＣＤＣｌ３）（δ，ｐｐｍ）：１．１３ｐｐｍ（ｓ，０．９Ｈ，Ｃ１７−ＣＨ３），１．２４ｐｐｍ（ｓ，０．９Ｈ，Ｃ１６−ＣＨ３），１．３４ｐｐｍ（ｂｓ，３．３１Ｈ，Ｃ６０−ｔ  Ｂｕ），１．７５ｐｐｍ（ｓ，０．９Ｈ，Ｃ１９−ＣＨ３），１．９６ｐｐｍ（ｓ，０．９Ｈ，Ｃ１８−ＣＨ３），２．１８ｐｐｍ（ｄ，０．６Ｈ，Ｃ１４−ＣＨ２），２．４３ｐｐｍ（ｓ，０．９Ｈ，Ｃ２２−ＣＨ３），４．２１ｐｐｍ（ｄ，０．３Ｈ，Ｃ２０−ＣＨａ），４．２４ｐｐｍ（ｍ，０．３Ｈ，Ｃ７−ＣＨ），４．３２ｐｐｍ（ｄ，０．３Ｈ，Ｃ２０−ＣＨｂ），４．９５ｐｐｍ（ｄｄ，０．３１Ｈ，Ｃ５−ＣＨ），５．２３ｐｐｍ（ｄ，０．３Ｈ，Ｃ１０−ＣＨ），５．４０ｐｐｍ（ｄ，０．３Ｈ，Ｃ３０−ＣＨ），５．６９ｐｐｍ（ｄ，０．３Ｈ，Ｃ２−ＣＨ），７．５１ｐｐｍ（ｍ，０．６Ｈ，Ｃ３３，Ｃ２７−ＣＨ），７．５３（ｍ，１．８Ｈ，Ｃ３２，Ｃ３４−ＣＨ；Ｃ３１，Ｃ３５−ＣＨ；Ｃ２６，Ｃ２８−ＣＨ），８．１２（ｄ，０．６Ｈ，Ｃ２５，Ｃ２９−ＣＨ），１．２４（ｓ，１．５Ｈ，Ｌｙｓ−ＯＣＨ２ＣＨ３），１．２９（ｂｓ，１Ｈ，Ｌｙｓ−ＣＨ２），１．５５ｐｐｍ（ｂｓ，１Ｈ，Ｌｙｓ−ＣＨ２），１．８０（ｂｓ，１Ｈ，Ｌｙｓ−ＣＨ２），２．９０（ｂｒ，１Ｈ，Ｌｙｓ−ｅ−ＣＨ２），３．３８ｐｐｍ（ｓ，４．５０Ｈ，ＣＨ３Ｏ−，ＰＥＧ），ａｎｄ３．６３ｐｐｍ（ｍ，６６．０Ｈ，−ＣＨ２ＣＨ２−Ｏ−），３．９８（ｂｓ，２Ｈ，Ｇｌｙ−ＣＨ２），４．４（ｓ，０．５１Ｈ，Ｌｙｓｉｎｅ−ＣＨ）。
リン核磁気共鳴スペクトル（ＣＤＣｌ３，ｐｐｍ）：δ−０．０１４（ｓ），δ−５．５５１（ｓ）。
【０１２４】
実施例２０．［ＮＰ（ＭＰＥＧ５５０）１．５０（ＬｙｓＥｔ）０．２（ＬｙｓＥｔ−２’−ｓｕｃｃｉｎｙｌｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）０．３］ｎの合成
実施例１のポリホスファゼン（９．７ｇ、１０．０ｍｍｏｌ）と文献（Ｃ．Ｍ．Ｈｕａｎｇ，ｅｔ  ａｌ．Ｃｈｅｍ．ＢｉｏＬ２０００，７，４５３）に知られた方法通りに合成した２’−スクシニルパクリタキソール（５．２６ｇ、５．０ｍｍｏｌ）を、ＤＣＩ（２０ｍｍｏｌ、２．５４ｇ）とＤＩＰＥＡ（１０ｍｍｌ）を用いて、一般的なエステル結合方法を利用してポリホスファゼン高分子に化学結合させた。反応液は減圧濾過後、減圧蒸留して乾燥した後、実施例１４と同様の方法で、最終ポリホスファゼン−パクリタキソールコンジュゲート化合物［ＮＰ（ＭＰＥＧ５５０）１．５０（ＬｙｓＥｔ）０．２（ＬｙｓＥｔ−２’−ｓｕｃｃｉｎｙｌｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）０．３］ｎを合成する。（収率＝９０％）
【０１２５】
組成式：Ｃ１１３．６Ｈ２０２Ｎ４．６Ｏ５１．８Ｐ２
元素分析理論値（％）：Ｃ，５４．４９；Ｈ，８．１２；Ｎ，２．５７。測定値（％）：Ｃ，５４．１５；Ｈ，８．２６；Ｎ，２．６１。
水素核磁気共鳴スペクトル（ＣＤＣｌ３）（δ，ｐｐｍ）：１．２５（ｓ，１．５Ｈ，Ｌｙｓ−ＯＣＨ２ＣＨ３），２．４９（ｂｒ，１．００Ｈ，ｓｕｕｃｉｎｙｌ−ＣＨ２），２．９０（ｂｒ，１．００Ｈ，Ｌｙｓ−ε−ＣＨ２），３．３８（ｓ，４．５０Ｈ，ＭＰＥＧ５５０−ＯＣＨ３），３．６５（ｂｒ，６６．０Ｈ，ＭＰＥＧ５５０−ＯＣＨ２ＣＨ２），１．１３（ｓ，１２Ｈ），１．２５（ｓ，１２Ｈ），１．３５（ｓ，３６Ｈ），１．６８（ｍ，８Ｈ），１．７５（ｓ，１２Ｈ），１．８６（ｍ，８Ｈ），１．９６（ｓ，１２Ｈ），２．３６（ｍ，２０Ｈ），２．６０（ｍ，４Ｈ），３．９８（ｓ，８Ｈ），４．０６（ｄ，８Ｈ），４．３０（ｍ，１２Ｈ），４．３３（ｍ．８Ｈ），４．９７（ｄ，４Ｈ），５．２２（ｍ，４Ｈ），５．３６（ｓ，４Ｈ），５．６０（ｍ，４Ｈ），５．６９（ｍ，８Ｈ），６．２０（ｔ，４Ｈ），７．３３（ｍ，８Ｈ），７．４１（ｍ，８Ｈ），７．５２（ｍ，８Ｈ），７．６１（ｍ，４Ｈ），７．３３（ｍ，４Ｈ），８．１２（ｄ，８Ｈ）
リン核磁気共鳴スペクトル（ＣＤＣｌ３，ｐｐｍ）：δ−０．０１４（ｓ），δ−５．５５１（ｓ）。
【０１２６】
実施例２１．［ＮＰ（ＭＰＥＧ５５０）１．５０（ＧｌｙＬｙｓＥｔ−２’−ｓｕｃｃｉｎｙｌｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）０．５０］ｎの合成
実施例６のポリホスファゼン（１０．４ｇ、１０ｍｍｏｌ）と文献の知られた方法通りに合成した２’−スクシニルパクリタキソール（７．３６ｇ、７．０ｍｍｏｌ）を、ＤＣＩ（２０ｍｍｏｌ、２．５４ｇ）とＤＩＰＥＡ（１０ｍｍｌ）を用いて、一般的なエステル結合方法を利用してポリホスファゼン高分子に化学結合させた。反応液は減圧濾過後、減圧蒸留して乾燥した後、実施例１４と同様の方法で、最終ポリホスファゼン−パクリタキソールコンジュゲート化合物［ＮＰ（ＭＰＥＧ５５０）１．５０（ＧｌｙＬｙｓＥｔ−２’−ｓｕｃｃｉｎｙｌｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）０．５０］ｎを合成する。（収率＝８０％）
【０１２７】
組成式：Ｃ１３６Ｈ２２６Ｎ６Ｏ５８Ｐ２
元素分析理論値（％）：Ｃ，５５．６７；Ｈ，７．７６；Ｎ，２．８６。測定値（％）：Ｃ，５５．３６：Ｈ，７．９９；Ｎ，２．９３。
水素核磁気共鳴スペクトル（ＣＤＣｌ３）（δ，ｐｐｍ）：１．２５（ｓ，１．５Ｈ，Ｌｙｓ−ＯＣＨ２ＣＨ３），２．４９（ｂｒ，１．００Ｈ，ｓｕｕｃｉｎｙｌ−ＣＨ２），２．９０（ｂｒ，１．００Ｈ，Ｌｙｓ−ε−ＣＨ２），３．３８（ｓ，４．５０Ｈ，ＭＰＥＧ５５０−ＯＣＨ３），３．６５（ｂｒ，６６．０Ｈ，ＭＰＥＧ５５０−ＯＣＨ２ＣＨ２），１．１３（ｓ，１２Ｈ），１．２５（ｓ，１２Ｈ），１．３５（ｓ，３６Ｈ），１．６８（ｍ，８Ｈ），１．７５（ｓ，１２Ｈ），１．８６（ｍ，８Ｈ），１．９６（ｓ，１２Ｈ），２．３６（ｍ，２０Ｈ），２．６０（ｍ，４Ｈ），３．９８（ｓ，８Ｈ），４．０６（ｄ，８Ｈ），４．３０（ｍ，１２Ｈ），４．３３（ｍ．８Ｈ），４．９７（ｄ，４Ｈ），５．２２（ｍ，４Ｈ），５．３６（ｓ，４Ｈ），５．６０（ｍ，４Ｈ），５．６９（ｍ，８Ｈ），６．２０（ｔ，４Ｈ），７．３３（ｍ，８Ｈ），７．４１（ｍ，８Ｈ），７．５２（ｍ，８Ｈ），７．６１（ｍ，４Ｈ），７．３３（ｍ，４Ｈ），８．１２（ｄ，８Ｈ）
リン核磁気共鳴スペクトル（ＣＤＣｌ３，ｐｐｍ）：δ−０．０１４（ｓ），δ−５．５５１（ｓ）。
【０１２８】
実施例２２．［ＮＰ（ＭＰＥＧ５５０）１．５０（Ｎα−ＢｏｃＬｙｓ）０．２（Ｎα−ＢｏｃＬｙｓ−ｄｏｃｅｔａｘｅｌ）０.３］ｎの合成
実施例７のポリホスファゼン（９．５７ｇ、１０．０ｍｍｏｌ）とドセタキセル（１０．６ｇ、１０．０ｍｍｏｌ）を真空乾燥した後、よく乾燥した有機溶媒であるテトラヒドロフラン、メチレンクロライド、またはクロロホルムなどの有機溶媒に溶かす。反応容器を氷浴を用いて冷却させた後、同じ溶媒に溶かしたＤＣＩ（２０ｍｍｏｌ、２．５４ｇ）とＤＩＰＥＡ（１０ｍｍｌ）を徐々に反応容器に添加する。この状態で、低温（０℃）で２４時間反応させた後、反応液は減圧濾過後、減圧蒸留して乾燥した後、実施例１４と同様の方法で、最終ポリホスファゼン−ドセタキセルコンジュゲート化合物［ＮＰ（ＭＰＥＧ５５０）１．５０（Ｎα−ＢｏｃＬｙｓ）０．２（Ｎα−ＢｏｃＬｙｓ−ｄｏｃｅｔａｘｅｌ）０.３］ｎを合成する。（収率＝６０％）
【０１２９】
組成式：Ｃ１１３．８Ｈ２０４．２Ｎ４．６Ｏ５０．８Ｐ２
元素分析理論値（％）：Ｃ，５４．４２；Ｈ，８．１９；Ｎ，２．５７。測定値（％）：Ｃ，５５．０６；Ｈ，７．９８；Ｎ，２．６０。
水素核磁気共鳴スペクトル（ＣＤＣｌ３）（δ，ｐｐｍ）：１．２５（ｓ，１．５Ｈ，Ｌｙｓ−ＯＣＨ２ＣＨ３），２．４９（ｂｒ，１．００Ｈ，ｓｕｕｃｉｎｙｌ−ＣＨ２），２．９０（ｂｒ，１．００Ｈ，Ｌｙｓ−ε−ＣＨ２），３．３８（ｓ，４．５０Ｈ，ＭＰＥＧ５５０−ＯＣＨ３），３．６５（ｂｒ，６６．０Ｈ，ＭＰＥＧ５５０−ＯＣＨ２ＣＨ２），１．１３（ｓ，１２Ｈ），１．２５（ｓ，１２Ｈ），１．３５（ｓ，３６Ｈ），１．６８（ｍ，８Ｈ），１．７５（ｓ，１２Ｈ），１．８６（ｍ，８Ｈ），１．９６（ｓ，１２Ｈ），２．３６（ｍ，２０Ｈ），２．６０（ｍ，４Ｈ），３．９８（ｓ，８Ｈ），４．０６（ｄ，８Ｈ），４．３０（ｍ，１２Ｈ），４．３３（ｍ．８Ｈ），４．９７（ｄ，４Ｈ），５．２２（ｍ，４Ｈ），５．３６（ｓ，４Ｈ），５．６０（ｍ，４Ｈ），５．６９（ｍ，８Ｈ），６．２０（ｔ，４Ｈ），７．３３（ｍ，８Ｈ），７．４１（ｍ，８Ｈ），７．５２（ｍ，８Ｈ），７．６１（ｍ，４Ｈ），７．３３（ｍ，４Ｈ），８．１２（ｄ，８Ｈ）
リン核磁気共鳴スペクトル（ＣＤＣｌ３，ｐｐｍ）：δ−０．０１４（ｓ），δ−５．５５１（ｓ）。
【０１３０】
実施例２３．［ＮＰ（ＭＰＥＧ５５０）１．５（ＬｙｓＥｔ）０．２（ＬｙｓＥｔ−２’−ａｃｏｎｉｔｉｃ−ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ）０．３］ｎの合成
実施例１のポリホスファゼン（９．７ｇ、１０．０ｍｍｏｌ）と前記合成した実施例１２の２０−ａｃｏｎｉｔｉｃ−ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ−ＮＨＳエステル（２．５ｇ、５．０３ｍｍｏｌ）を、実施例１４と同様の方法で反応させて、最終ポリホスファゼン−カンプトテシンコンジュゲート化合物［ＮＰ（ＭＰＥＧ５５０）１．５（ＬｙｓＥｔ）０．２（ＬｙｓＥｔ−２’−ａｃｏｎｉｔｉｃ−ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ）０．３］ｎを合成する（収率：７５％）。
【０１３１】
組成式：Ｃ９８．６Ｈ１８０．８Ｎ５．２Ｏ４５．８Ｐ２
元素分析理論値（％）：Ｃ，５３．０１；Ｈ，８．１６；Ｎ，３．２６。測定値（％）：Ｃ，５２．６１；Ｈ，８．４２；Ｎ，３．３４。
水素核磁気共鳴スペクトル（ＣＤＣｌ３）（δ，ｐｐｍ）：０．９（ｔ，３Ｈ，Ｃ１８−ＣＨ３），２．０（ｍ，２Ｈ，Ｃ１９−ＣＨ２），２．６４（ｔ，４Ｈ，ＮＨＳ−ＣＨ２ＣＨ２），２．９２（ｓ，２Ｈ，ａｃｏｎｉｔｉｃ−ＣＨ２），４．２０（ｄ，２Ｈ，Ｃ５−ＣＨ２），４．７６（ｍ，２Ｈ，Ｃ２２−ＣＨ２），６．４０−６．６８（ｍ，１Ｈ，ａｃｏｎｉｔｉｃ−ＣＨ），６．７０（ｓ，１Ｈ，Ｃ１４−ＣＨ），７．５９（ｓ，１Ｈ，Ｃ１１−ＣＨ），７．８０（ｍ，２Ｈ，Ｃ１２−ＣＨ；Ｃ７−ＣＨ），８．０（ｍ，２Ｈ，Ｃ９−ＣＨ；Ｃ１２−ＣＨ），１．２４（ｓ，１．５Ｈ，Ｌｙｓ−ＯＣＨ２ＣＨ３），１．２９（ｂｓ，１Ｈ，Ｌｙｓ−ＣＨ２），１．５５ｐｐｍ（ｂｓ，１Ｈ，Ｌｙｓ−ＣＨ２），１．８０（ｂｓ，１Ｈ，Ｌｙｓ−ＣＨ２），２．９０（ｂｒ，１Ｈ，Ｌｙｓ−ｅ−ＣＨ２），３．３８ｐｐｍ（ｓ，４．５０Ｈ，ＣＨ３Ｏ−，ＰＥＧ），ａｎｄ３．６３ｐｐｍ（ｍ，６６．０Ｈ，−ＣＨ２ＣＨ２−Ｏ−），４．４（ｓ，０．５１Ｈ，Ｌｙｓｉｎｅ−ＣＨ）。
リン核磁気共鳴スペクトル（ＣＤＣｌ３，ｐｐｍ）：δ−０．０１４（ｓ），δ−５．５５１（ｓ）。
【０１３２】
実施例２４．［ＮＰ（ＭＰＥＧ５５０）（ＬｙｓＥｔ）（ａｃｏｎｉｔｉｃ−ｇｌｙｃｙｌｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ）］ｎの合成
実施例５の薬物伝達体［ＮＰ（ＭＰＥＧ５５０）（ＬｙｓＥｔ）］ｎ（０．５ｇ、０．２５ｍｍｏｌ）と実施例１３で合成したｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ前駆体ＣＰＴ−Ｇｌｙ−ＡＣＡ−ＮＨＳエステル（０．１７ｇ、０．２５ｍｍｏｌ）を、実施例１４と同様の方法で反応させて、最終ポリホスファゼン−カンプトテシンコンジュゲート化合物［ＮＰ（ＭＰＥＧ５５０）（ＬｙｓＥｔ）（ａｃｏｎｉｔｉｃ−ｇｌｙｃｙｌｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ）］ｎを合成する（収率：８５％）。
【０１３３】
組成式：Ｃ１１１Ｈ１９１Ｎ７Ｏ５０Ｐ２
水素核磁気共鳴スペクトル（ＣＤＣｌ３）（δ，ｐｐｍ）：１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ，ｐｐｍ）：０．８９−０．９２（ｂｒｍ，３Ｈ，−ＣＨ３  ｏｆ  ＣＰＴ−Ｃ１８），１．１３−１．５８（ｂｒｍ，６Ｈ，−ＣＨ２  ｏｆ  ｌｙｓｉｎｅ），２．１２−２．１７（ｂｒｍ，２Ｈ，−ＣＨ２  ｏｆ  ＣＰＴ−Ｃ−１９），３．０１（ｓ，２Ｈ，−ＣＨ２  ｏｆ  ｃｉｓ−ａｃｏｎｉｔａｔｅ），３．２１（ｓ，９Ｈ，−ＯＣＨ３  ｏｆ  ＭＰＥＧ），３．３４−３．５４（ｂｒｍ，１４４Ｈ，−ＣＨ２−ＣＨ２  ｏｆ  ＭＰＥＧ），３．９４−４．４１（ｂｒｍ，５Ｈ，−ＣＨ２  ｏｆｇ  ｌｙｃｉｎｅ，Ｐ−ＮＨ−ＣＨ２  ｏｆ  ｌｙｓｉｎｅ  ａｎｄ＝ＣＨ  ｏｆ  ｃｉｓ−ａｃｏｎｉｔａｔｅ），５．２９（ｂｒｓ，２Ｈ，−ＣＨ２  ｏｆ  ＣＰＴ−Ｃ５），５．４７（ｂｒｓ，２Ｈ，−ＣＨ２  ｏｆ  ＣＰＴ−Ｃ２２），７．１５−７．１７（ｍ，１Ｈ，＝ＣＨ  ｏｆ  ＣＰＴ−Ｃ１４），７．６９−７．７２（ｍ，１Ｈ，＝ＣＨ  ｏｆ  ＣＰＴ−Ｃ１１），７．８４−７．９４（ｍ，１Ｈ，＝ＣＨ  ｏｆ  ＣＰＴ−Ｃ１０）８．１０−８．２１（ｍ，２Ｈ，＝ＣＨ  ｏｆ  ＣＰＴ−Ｃ１２  ａｎｄ  ＣＰＴ−Ｃ９），８．６８（ｂｒｓ，１Ｈ，＝ＣＨ  ｏｆ  ＣＰＴ−Ｃ７）．３１Ｐ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ，ｐｐｍ）：δ−５．１９（Ｏ−Ｐ−Ｏ），０．８５（Ｏ−Ｐ−Ｎ）。
【０１３４】
実施例２５．［ＮＰ（ＭＰＥＧ５５０）（ＡＥ）（ＡＣＡ）Ｐｔ（ｄａｃｈ）］ｎの合成
実施例８の薬物伝達体［ＮＰ（ＭＰＥＧ５５０）（ＡＥ）］ｎ（１ｇ、１．５ｍｍｏｌ）を０．５Ｍ酸性炭酸ナトリウム水溶液（ｐＨ＝９．０、５０ｍｌ）に溶かした後、これに、ｃｉｓ−ａｃｏｎｉｔｉｃ  ａｎｈｙｄｒｉｄｅ（２．３５ｇ、１５ｍｍｏｌ）を加えた後、４℃で５時間反応させた後、セルロースメンブレン（ＭＷＣＯ：３．５ｋＤ）で透析して精製すると、リンカーのアコニット酸（ＡＣＡ）が高分子に結合された中間体［ＮＰ（ＭＰＥＧ５５０）（ＡＥ）（ＡＣＡ）］ｎが得られる。この溶液に水酸化バリウム（１．３３ｍｍｏｌ）のメタノール（２０ｍｌ）溶液を加えた後、常温で５時間かき混ぜた後、減圧蒸留して乾燥させる。乾燥した固体を再び蒸留水（１０ｍｌ）に溶かした後、これに、白金錯体抗癌成分を含む硫酸塩（ｄａｃｈ）Ｐｔ（ＳＯ４）（ｄａｃｈ：ｔｒａｎｓ−１，２−ｄｉａｍｉｎｏｃｙｃｌｏｈｅｘａｎｅ）（０．４９ｇ、１．２１ｍｍｏｌ）の水溶液（１０ｍｌ）を徐々に加えた後、常温で３時間以上反応させた後、沈殿副産物の硫酸バリウムを濾過／除去し、セルロースメンブレン（ＭＷＣＯ：３．５ｋＤ）で透析後、凍結乾燥すると、化合物［ＮＰ（ＭＰＥＧ５５０）（ＡＥ）（ＡＣＡ）Ｐｔ（ｄａｃｈ）］ｎを得る（収率：７４％）。
【０１３５】
組成式：Ｃ３９Ｈ７３Ｎ４Ｏ１９ＰＰｔ．Ｈ２Ｏ
元素分析理論値（％）：Ｃ，４０．８３；Ｈ，６．５４；Ｎ，４．８８。測定値：Ｃ，４０．５４；Ｈ，６．３４；Ｎ，４．６２。
水素核磁気共鳴スペクトル（Ｄ２Ｏ，ｐｐｍ）：１．０４−１．２０（ｂｒｍ，４Ｈ，Ｃ−４，Ｃ−５  ｏｆ  ｄａｃｈ），１．４４（ｂｒｓ，２Ｈ，Ｃ−３  ｏｆ  ｄａｃｈ），１．８２−１．９３（ｂｒｍ，２Ｈ，Ｃ−６  ｏｆ  ｄａｃｈ），２．０２−２．５２（ｂｒｍ，２Ｈ，Ｃ−１，Ｃ−２  ｏｆ  ｄａｃｈ），３．２６（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ３  ｏｆ  ＭＰＥＧ），３．４１−３．４５（ｍ，６Ｈ，ＣＨ２  ｏｆ  ｃｉｓ−ａｃｏｎｉｔａｔｅ  ａｎｄ  ａｍｉｎｏｅｔｈａｎｏｌ），３．４７−３．８１（ｂｒｍ，４６Ｈ，−Ｏ−ＣＨ２  ｏｆ  ＭＰＥＧ），３．９５−４．２１（ｂｒｍ，２Ｈ，−Ｐ−Ｏ−ＣＨ２−  ｏｆ  ＭＰＥＧ），４．６９（ｓ，１Ｈ，−Ｃ＝ＣＨ−  ｏｆ  ｃｉｓ−ａｃｏｎｉｔａｔｅ）。
リン核磁気共鳴スペクトル（Ｄ２Ｏ，ｐｐｍ）：−４．５３（Ｏ−Ｐ−Ｏ）。
【０１３６】
実施例２６．［ＮＰ（ＭＰＥＧ７５０）（ＡＥ）（ＡＣＡ）Ｐｔ（ｄａｃｈ）］ｎの合成
実施例９で合成した薬物伝達体［ＮＰ（ＭＰＥＧ７５０）（ＡＥ）］ｎ（１ｇ、１．１９ｍｍｏｌ）、ｃｉｓ−ａｃｏｎｉｔｉｃ  ａｎｈｙｄｒｉｄｅ（１．８６ｇ、１１．９１ｍｍｏｌ）、Ｂａ（ＯＨ）２．８Ｈ２Ｏ（０．３５ｇ、１．１１ｍｍｏｌ）、そして（ｄａｃｈ）Ｐｔ（ＳＯ４）（０．４ｇ、０．９９ｍｍｏｌ、ｐＨ＝−７．２）を用いて、実施例２５と同様の方法で、高分子白金錯体化合物［ＮＰ（ＭＰＥＧ７５０）（ＡＥ）（ＡＣＡ）Ｐｔ（ｄａｃｈ）］ｎを得る（収率：７２％）。
【０１３７】
組成式：Ｃ４７Ｈ８９Ｎ４Ｏ２３ＰＰｔ．Ｈ２Ｏ
元素分析理論値（％）：Ｃ，４２．６５；Ｈ，６．８８；Ｎ，４．２３。測定値：Ｃ， ４２．３２；Ｈ，７．６４；Ｎ，３．８８。
水素核磁気共鳴スペクトル（Ｄ２Ｏ，ｐｐｍ）：１．０５−１．２１（ｂｒｍ，４Ｈ，Ｃ−４，Ｃ−５  ｏｆ  ｄａｃｈ），１．４７（ｂｒｓ，２Ｈ，Ｃ−３  ｏｆ  ｄａｃｈ），１．８０−１．９３（ｂｒｍ，２Ｈ，Ｃ−６  ｏｆ  ｄａｃｈ），２．０１−２．４５（ｂｒｍ，２Ｈ，Ｃ−１，Ｃ−２  ｏｆ  ｄａｃｈ），３．２７（ｓ，３Ｈ，−ＯＣＨ３  ｏｆ  ＭＰＥＧ），３．４１−３．４５（ｍ，６Ｈ，−ＣＨ２  ｏｆ  ｃｉｓ−ａｃｏｎｉｔａｔｅ  ａｎｄ  ａｍｉｎｏｅｔｈａｎｏｌ），３．５０−３．７２（ｂｒｍ，６２Ｈ，−ＣＨ２  ｏｆ  ＭＰＥＧ），３．９９−４．１３（ｂｒｍ，２Ｈ，−Ｐ−Ｏ−ＣＨ２  ｏｆ  ＭＰＥＧ），４．７０（ｓ，１Ｈ，−Ｃ＝ＣＨ−  ｏｆ  ｃｉｓ−ａｃｏｎｉｔａｔｅ）。
リン核磁気共鳴スペクトル（Ｄ２Ｏ，ｐｐｍ）：−４．５２（Ｏ−Ｐ−Ｏ）。
【０１３８】
実施例２７．［ＮＰ（ＭＰＥＧ５５０）（ＬｙｓＥｔ）（ＡＣＡ）Ｐｔ（ｄａｃｈ）］ｎの合成
実施例５の薬物伝達体［ＮＰ（ＭＰＥＧ５５０）（ＬｙｓＥｔ）］ｎ（１ｇ、１．２８ｍｍｏｌ）、リンカーのｃｉｓ−ａｃｏｎｉｔｉｃ  ａｎｈｙｄｒｉｄｅ（ＡＣＡ）（２ｇ、１１．９１ｍｍｏｌ）、そしてＢａ（ＯＨ）２．８Ｈ２Ｏ（０．４４ｇ、１．３９ｍｍｏｌ）、および（ｄａｃｈ）Ｐｔ（ＳＯ４）（０．５２ｇ、１．２８ｍｍｏｌ）を、実施例２５と同様の方法で、高分子白金錯体化合物［ＮＰ（ＭＰＥＧ５５０）（ＬｙｓＥｔ）（ＡＣＡ）Ｐｔ（ｄａｃｈ）］ｎを得る（Ｙｉｅｌｄ：７９％）。
【０１３９】
組成式：Ｃ４５Ｈ８４Ｎ５Ｏ２０ＰＰｔ．Ｈ２Ｏ
元素分析理論値（％）：Ｃ，４２．８８；Ｈ，６．８３；Ｎ，５．５６。測定値：Ｃ，４２．６３；Ｈ，６．６１；Ｎ，５．４２。
水素核磁気共鳴スペクトル（Ｄ２Ｏ，ｐｐｍ）：１．０７−１．２１（ｂｒｍ，７Ｈ，−ＣＨ３，−（ＣＨ２）２  ｏｆ  ｌｙｓｉｎｅ），１．４３−１．４８（ｂｒｍ，６Ｈ，−Ｃ−３，−Ｃ−４，Ｃ−５  ｏｆ  ｄａｃｈ），１．８０−１．９３（ｂｒｍ，８Ｈ，−ＣＨ２  ｌｙｓｉｎｅ  ａｎｄ  −Ｃ−６  ｏｆ  ｄａｃｈ），２．０２−２．２６（ｂｒｍ，２Ｈ，Ｃ−１，Ｃ−２  ｏｆ  ｄａｃｈ），２．８２（ｂｒｓ，２Ｈ，−ＣＨ２  ｏｆ  ｃｉｓ−ａｃｏｎｉｔａｔｅ），３．２６（ｓ，３Ｈ，−ＯＣＨ３  ｏｆ  ＭＰＥＧ），３．４４−３．７２（ｂｒｍ，４６Ｈ，−ＣＨ２−ＣＨ２  ｏｆ  ＭＰＥＧ），３．９６−４．０３（ｂｒｍ，３Ｈ，−ＣＨ２  ｏｆ  ｅｔｈｙｌｅｓｔｅｒ  ａｎｄ  −Ｎ−ＣＨ  ｏｆ  ｌｙｓｉｎｅ），４．６２（ｓ，１Ｈ，＝ＣＨ  ｏｆ  ｃｉｓ−ａｃｏｎｉｔａｔｅ）。
【０１４０】
実験例
［物性測定および効能試験］
実験例１．ミセルの形成に対する実験
実施例１のポリホスファゼン化合物および実施例１４のポリホスファゼン−ドセタキセルコンジュゲートをそれぞれ水に溶かして（０．２％ｗｔ．／ｗｔ．）、ＤＬＳ（Ｄｙｎａｍｉｃ  Ｌｉｇｈｔ  Ｓｃａｔｔｅｒｉｎｇ）法でこれらの粒度とゼータ電位（ｚｅｔａ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ、ξ）を測定し、有意な結果を図１、図２、および図３に示した。
【０１４１】
図１からみると、ドセタキセルをコンジュゲーションさせる前には、ポリホスファゼン高分子の水溶液での平均粒子サイズが３ｎｍ〜４ｎｍ程度でミセルを形成せず、流体力学的粒子（ｈｙｄｒｏｄｙｎａｍｉｃ  ｖｏｌｕｍｅ）の大きさを示している。これは、ポリホスファゼンに導入されたリシン置換基がｐＨ７．４で陽イオン性（図２）を呈するため、親水性が強いユニマー（ｕｎｉｍｅｒ）状態でいながら、疎水性薬物のドセタキセルがコンジュゲーションされると、０．２％の濃度でその平均直径が６０ｎｍの大きさに大きくなることが確認された（図３）。このように粒子の平均直径が２０倍程度増加することは、ポリホスファゼン薬物伝達体が疎水性薬物とコンジュゲーションされながら、親水性高分子から両親媒性高分子にその性格が変わってミセルを形成することを確認することができた。また、ミセルの大きさは、５〜７０℃の温度範囲で５℃間隔で測定した結果、温度に関係なく、一定の粒子サイズを有することを確認した。
【０１４２】
実験例２．ポリホスファゼン−パクリタキセルコンジュゲートのミセルの臨界濃度の測定
前記実験例１から明らかなように、本発明のポリホスファゼン−ドセタキセルコンジュゲート化合物は、水溶液でミセルを形成するが、これら薬物が静脈注射用ミセル形態の注射剤として使用されるには、安定したミセルが形成されて疎水性の薬物を保護する機能をしなければならない。このようなミセルの安定度は、ミセルの臨界濃度（ＣＭＣ：ｃｒｉｔｉｃａｌ  ｍｉｃｅｌｌｅ  ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ）で表示され、臨界濃度の測定方法には様々な方法が知られているが、ｐｙｒｅｎｅ蛍光法が最も広く使用されている。したがって、その方法（Ｋａｌｙａｎａｓｕｎｄｏｒａｍ，Ｋ．；Ｔｈｏｍａｓ，Ｊ．Ｋ．Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１９８８，９９，２０３９）によって、次のように試験を行った。
【０１４３】
まず、６×１０−７Ｍの濃度でｐｙｒｅｎｅ水溶液を作った後、実施例２０のポリホスファゼン−パクリタキセルコンジュゲートを５．０〜０．０００５％（ｗｔ／ｗｔ）の濃度に溶かした試料を作った。蛍光分光分析器を用いて、３３９ｎｍ波長（ｌｅｘ）での蛍光スペクトルと３９０ｎｍ波長（ｌｅｍ）でのスペクトルを測定した後、バンドＩの蛍光強度とバンドＩＩＩの蛍光強度の比を用いてミセルの臨界濃度を決定して、その結果を図４に示した。
【０１４４】
このように決定された実施例１のポリホスファゼン−パクリタキセルコンジュゲートの臨界濃度は４１ｍｇ／Ｌの非常に低い濃度で測定され、静脈注射する場合、血中でもミセル形態が維持できることが期待される。この結果は薬物の疎水性に起因すると推定される。
【０１４５】
実験例３．高分子化合物の生分解性に対する実験
装備：Ｙｏｎｇｌｉｎ  ＧＰＣ  ｓｙｓｔｅｍｓ
流速：１ｍｌ／ｍｉｎ
移動相：水（８）／アセトニトリル（２）（０．５％ＮａＮＯ３添加剤添加）
カラム：Ｗａｔｅｒｓ  Ｈｙｄｒｏｇｅｌ  ＨＲ  ｃｏｌｕｍｎ（１ｘｇｕａｒｄ、１ｘｌｉｎｅａｒ、２ｘＨＲ２）
【０１４６】
実施例２０のポリホスファゼン−パクリタキセルコンジュゲート２５０ｍｇをｐＨ５．４とｐＨ７．４のバッファー（ＰＢＳ）溶液５ｍｌにそれぞれ溶かした後、３７℃の恒温槽で徐々に撹拌しながら、定められた時間ごとに（０．５／１／２／４／６／８／１６Ｄａｙ）５００μｌずつ取って、凍結乾燥した。凍結乾燥した各試料にＴＨＦを添加してよく溶かした後、０．４５マイクロシリンジフィルタで濾過した後、その濾過液を減圧蒸留して真空乾燥した。その後、０．２％のターシャリーブチルアンモニウムブロミドを含有したＴＨＦを用いて、ゲル透過クロマトグラフィー（ＧＰＣ：Ｇｅｌ  Ｐｅｒｍｅａｔｉｏｎ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）で分解された高分子分布を分析して、図５に示した。
【０１４７】
図５から明らかなように、初期２日目までは１０，０００〜１５，０００Ｄａ程度分子量が急激に減少するが、４日目からは分子量が徐々に減少する。また、ｐＨ７．４では、ｐＨ５．４においてより分解される程度がやや少ないことが分かる。この結果は、体内条件が中性のｐＨ７．４ではポリマー基本骨格が相対的に安定しており、癌細胞がある組織のｐＨであるｐＨ５．４ではポリマー基本骨格がより良く分解されることを意味するもので、癌細胞組織で薬物を体内により良く放出させることができると推定される。そして、ポリマー基本骨格の半減期は約１６日程度と長い時間体中で長い間循環することができて、薬物を運搬するのに好適な物質であると予想される。また、この半減期に対する情報は、静脈注射用薬物伝達体の体外排出時間の調節において非常に重要な意味を有する。本発明では、多様な分子量範囲の高分子を分離分取し、これらの体内挙動と排出、そして加水分解される半減期を用いて、所望の時間内に体外排出可能な高分子型薬物伝達体の合成における基礎資料とし、薬物伝達体の分子量分布とその半減期の相関関係を利用して、薬物の用途に合った薬物伝達体の分子量範囲を選択して使用することができる。
【０１４８】
実験例４．ポリホスファゼン高分子化合物の癌組織選択性に対する実験
装備：Ｋｏｄａｋ  ｉｍａｇｅ  ｓｔａｔｉｏｎ４０００ｍｍ  ｄｉｇｉｔａｌ  ｉｍａｇｉｎｇ  ｓｙｓｔｅｍ（Ｋｏｄａｋ，Ｎｅｗ  Ｈａｖｅｎ，ＣＴ）。
Ｅｘｃｉｔａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｅｍｉｔｉｏｎ  ｆｉｌｔｅｒ：Ｏｍｅｇａ  Ｏｐｔｉｃａｌ，Ｂａｔｔｌｅｂｏｒ，ＶＴ（ｅｘ：５６０ｎｍ、ｅｍ：７００ｎｍ）。
【０１４９】
実験動物は８週齢ＣＨ３／ＨｅＮヌードマウス（ｎｕｄｅ  ｍｏｕｓｅ）（Ｉｎｓｔｉｔｙｔｅ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、Ｔｏｋｙｏ）を用意した後、滅菌した場所で滅菌した餌と水を飲ませ、自由に運動をさせて用意した。癌細胞（Ａ５４９）（１ｘ１０６）をマウスに移植した後、癌組織の大きさが３００ｍｍ３の時まで癌組織を育てた後、マウスを２つのグループに分けた。１グループはＣｙ５．５が付いているポリホスファゼン高分子を注入し、他の１グループは薬物処理せずに対照群として使用した。定められた時間にマウスを解剖して、正常筋肉（ｐａｒｔ  ｏｆ  ｂｉｃｅｐｓ  ｆｅｍｏｒｉｓ）、癌組織、肝、腎臓、肺、心臓、脾臓などの主要組織を丸ごと摘出した。摘出された組織の近赤外線（６８０ｎｍ  ｔｏ  ７２０ｎｍ）蛍光イメージ（ＮＩＲ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ  ｉｍａｇｅ）をＣＣＤカメラ（Ｋｏｄａｋ  Ｉｍａｇｅ  Ｓｔａｔｉｏｎ４０００ＭＭ）で測定した。
【０１５０】
実施例１で合成したポリホスファゼン系高分子化合物に対する癌組織選択性に対する実験を、Ｋｏｄａｋ  ｉｍａｇｅ  ｓｔａｔｉｏｎ４０００ｍｍを用いたｅｘ  ｖｉｖｏ長期分布実験を通して確認した。前記合成した高分子に、ＮＩＲＦ（ｎｅａｒ  ｉｎｆｒａ−ｒｅｄ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ）物質のＣｙ５．５で標識したマウスモデルを用いて、高分子物質の組織分布および血液内挙動を確認した。Ｃｙ５．５がラベリングされているポリホスファゼン系高分子化合物をｉ．ｖ．でマウスに注射した後、１２時間、２４時間、４８時間、そして７２時間の時間間隔で主要臓器である肝（１）、肺（２）、腎臓（３）、脾臓（４）、癌組織（５）、正常組織（６）（図６（ａ））、そして血液（図６（ｂ））をそれぞれ摘出して、図６に示した。特に、ポリホスファゼン高分子の組織分布（図６ａ）をみると、蛍光強度からみて、他の組織に比べて癌組織（５）にはるかに多く蓄積されることが分かった。前記実験例１から明らかなように、ポリホスファゼン高分子は親水性で粒子サイズも非常に小さいユニマー（ｕｎｉｍｅｒ）であって、このように優れた癌組織選択性を示す理由は、高分子成分であるリシンのアルファ−アミン基による陽イオン性（図２参照）と粒子の表面をなすポリエチレングリコールによる長期循環性（ｌｏｎｇ  ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ）のためと推定される。
【０１５１】
実験例５．ポリホスファゼン−ドセタキセルコンジュゲートの癌組織選択性に対する実験
実施例１４で合成したポリホスファゼン−ドセタキセルコンジュゲートに、前記実験例４と同様の方法でＣｙ５．５で標識した後、マウスモデルを用いてポリホスファゼン−ドセタキセルコンジュゲートの組織分布を比較した（図７）。コンジュゲートの組織分布に対する定量は、Ｃｙ５．５が付いている試料が注入されたマウスの組織と、処理されていない対照群マウス組織の近赤外線蛍光強度の比率を測定して、その結果を図８に示した。
【０１５２】
図７から明らかなように、２４時間と４８時間とも癌組織で高い蛍光強度を示すことが分かり、他の器官には癌組織に比べて相対的に少なく分布していることを確認した。また、２４時間よりは、４８時間経過後により高い蛍光強度を示すことから、ポリホスファゼン−ドセタキセルコンジュゲートが血液内で長時間（＞４８時間）循環し、特に癌組織に多く蓄積されることを確認することができた。また、各組織ごとに比較測定したポリホスファゼン−ドセタキセルコンジュゲートの組織分布をグラフで示すと、図８の通りである。この図からみると、本発明のポリホスファゼン−ドセタキセルコンジュゲート化合物が体内のどの主要組織よりも癌組織に圧倒的に蓄積されており、したがって、優れた癌組織選択性を示すことを明らかに示している。
【０１５３】
実験例６．ポリホスファゼン−ドセタキセルコンジュゲート中のドセタキセル含有量の測定法
薬物の含有量は、１Ｈ−ＮＭＲ（Ｖａｒｉａｎ５００Ｈｚ）法を利用した面積積分値の比率、ＵＶスペクトル（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ、Ｌａｍｄａ）を用いた吸光度法、そしてＨＰＬＣ法などを利用して測定した。１Ｈ−ＮＭＲ法を利用する場合には、薬物含有量の誤差範囲が大きく測定される傾向があり、ＵＶスペクトルまたはＨＰＬＣを用いて薬物の含有量を測定した。高濃度ではあるが、薬物がポリホスファゼン骨格に近接しているため、ＮＭＲ法で薬物の含有量を測定するには誤差範囲が大きくて、ＵＶとＨＰＬＣ法を交差定量して薬物の含有量を測定した。まず、１Ｈ−ＮＭＲを用いた方法では、ポリホスファゼン内にあるＭＰＥＧ（−ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３）のターミナルｍｅｔｈｏｘｙ（３Ｈ、−ＣＨ３）ｐｒｏｔｏｎの個数とドセタキセルの７．３３ｐｐｍ（Ｃ１０、２Ｈ）の積分値を比較して定量した。
【０１５４】
ＵＶを用いた定量法を述べると、水：アセトニトリルを１：１で混ぜた溶液（１０ｍｌ）を用いて、ドセタキセル（１０．０ｍｇ）を完全に溶かした後、これを１／２倍ずつ６回希釈すなわち、１ｍｇ／ｍｌ（１ｍｇ／ｍｌ）、１／２ｍｇ／ｍｌ（０．５ｍｇ／ｍｌ）、１／４ｍｇ／ｍｌ（０．２５ｍｇ／ｍｌ）、１／８ｍｇ／ｍｌ（０．１２５ｍｇ／ｍｌ）、１／１６ｍｇ／ｍｌ（０．０６２５ｍｇ／ｍｌ）、１／３２ｍｇ／ｍｌ（０．０３２２５ｍｇ／ｍｌ）に希釈して標準定量曲線グラフを得、これを用いて高分子中のドセタキセルの含有量を定量した。この時、干渉現象を示すことができる実施例１と実施例１１のアコニチックグループのスペクトルは、定量に使用した２３０ｎｍ波長で吸光がないことを確認し、したがって、この方法が高分子内のドセタキセルの定量に最も好適な方法であることを確認し、これを用いて定量した。
【０１５５】
実験例７．ポリホスファゼン−２’−アコニチックドセタキセルコンジュゲートのｉｎ  ｖｉｔｒｏ薬物放出に対する実験
装備：Ａｇｉｌｅｎｔ１１００  ｓｅｒｉｅｓ  ｗｉｔｈ  ＤＡＤ  ｄｅｔｅｃｔｏｒ（２３０ｎｍ）
カラム：Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｚｏｂａｘ  Ｅｃｌｉｐｓｅ  Ｐｌｕｓ  Ｃ１８  ｃｏｌｕｍｎ（直径＝４．６ｍｍ、長さ＝１５０ｍｍ、ｐａｒｔｉｃｌｅ  ｓｉｚｅ＝３．５μｍ）
流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ
移動相の組成：Ａ：０．１％ＴＦＡ  ｉｎ  Ｈ２Ｏ；Ｂ：Ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ（ｉｓｏｃｒａｔｉｃ  ｍｅｔｈｏｄ）
【０１５６】
本発明に使用した薬物のｉｎ  ｖｉｔｒｏ環境下での薬物放出実験は、ＨＰＬＣを用いて進行させた。この時、定量曲線は、前記実験例６で製造した標準溶液を用いて得、３回繰り返し測定およびＲ２値が許容可能な誤差範囲にあることを確認して、標準定量曲線に用いた。
【０１５７】
ＵＶスペクトルを用いて薬物の濃度を決定した溶液を２．０ｍｌＨＰＬＣ用バイアルに５００μＬずつ入れる。このバイアルを３７℃の培養器で定められた時間間隔の間培養した後、ＨＰＬＣを撮る前に、再び５００μＬのアセトニトリルを添加して、沈殿物なしに完全に溶かした後、前記ドセタキセル分析法により放出されたドセタキセルの量を定量した。
【０１５８】
また、アコニチックスペーサは、酸性条件で薬物放出速度が速いため、この特徴を確認するために、前記のような方法で、ｐＨ５．４、７．４に対する実験も進行させた。ただし、ｐＨが調節された放出溶媒を使用する場合には、アセトニトリルが添加されると、沈殿物を形成し得るため、アセトニトリルを添加した後、０．４５μｍシリンジフィルタを用いて沈殿物を除去した後、定量した。
【０１５９】
実験例８．ポリホスファゼン−パクリタキセルコンジュゲートの体外細胞毒性に対する実験
パクリタキセル抗癌剤は、乳癌などの女性癌に優れた治療効果を示すので、本体外細胞毒性（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ）試験では、乳癌（ＭＣＦ−７）と卵素癌（ＳＫ−ＯＶ３）、そして肺癌（Ａ５４９）と胃癌（ＳＮＵ６３８）などを選定して、癌細胞を二酸化炭素５％および空気９５％が供給される３７℃の細胞培養器内で培養した後、文献に報告されたＳＲＢ法（Ｒｉｔａ  Ｓｏｎｇ外Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｒｅｌｅａｓｅ１０５（２００５）１４２−１５０）により細胞毒性を測定した。
【０１６０】
実験結果は、下記表１（体外細胞毒性に関する実験結果）に示した。表１から明らかなように、ＩＣ５０値は標準パクリタキセルより高くなり、薬物のコンジュゲーション量の多い実施例１７の場合、全体的により高い細胞毒性を示した。これは、疎水性薬物であるパクリタキセルのコンジュゲーション量が多くなると、ＣＭＣが低くなる実験結果と一致する結果であり、ＩＣ５０値が高いことは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ実験条件下で薬物の放出速度が相対的に遅いことを表す。
【０１６１】
【表１】
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【０１６２】
実験例９．ポリホスファゼン−ドセタキセルコンジュゲートの薬物動力学に対する実験
前記合成した実施例１４のポリホスファゼン−ドセタキセルコンジュゲートの体内挙動を確認するために、現在臨床で使用するドセタキセル製剤のタキソテール（登録商標）（Ｔａｘｏｔｅｒｅ、（株）サノフィアベンティス）を対照物質として、Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｙラットを用いた薬物動力学実験を文献（Ｊｕｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．４２２（２０１２）３７４−３８０）方法により行い、図９に時間に応じたドセタキセルのプラズマ濃度プロファイルを、そして表２に薬物動力学パラメータを示した。表と図からみると、ドセタキセル基準で同量（５ｍｇ／ｋｇ）を投与したにもかかわらず、初期濃度（Ｃ０）が対照物質（８．７６４μｇ／ｍｌ）と比べて、本ポリホスファゼン−ドセタキセルコンジュゲートの（０．２６３μｇ／ｍｌ）の場合に非常に低いことから、ポリホスファゼン−ドセタキセルコンジュゲート薬物は、ほぼ中性の血中では分解せずに血中で循環していて、ほとんど毒性を示していないことを確認することができた。また、表からみると、ポリホスファゼン−ドセタキセルコンジュゲート化合物の体内半減期（ｔ１／２）が対照物質のタキソテールに比べて約１０倍程度遅く、しかも、薬物の生体利用率を示すＡＵＣｌａｓｔ値は約２倍に達することにより、薬効にも優れていることを裏付けている。
【０１６３】
【表２】
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【０１６４】
実験例１０．ポリホスファゼン−ドセタキセルコンジュゲートのｘｅｎｏｇｒａｆｔ抗癌活性に対する実験
実施例１４のポリホスファゼン−ドセタキセルコンジュゲートの薬効を試験するために、現在臨床で使用するドセタキセル製剤のタキソテール（登録商標）（Ｔａｘｏｔｅｒｅ、（株）サノフィアベンティス）を対照物質として、ＢＡＬＢ／Ｃヌードマウスを用いて、ヒト癌細胞株の中でも最も難治癌に属する胃癌細胞株ＭＫＮ−２８に対するｉｎ  ｖｉｖｏ  ｘｅｎｏｇｒａｆｔ実験を、文献（Ｊｕｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．４２２（２０１２）３７４−３８０）方法により行った。薬物投与量は、対照物質であるタキソテールの場合、ドセタキセル基準で最適な投与量と知られた１０ｍｇ／ｋｇに固定し、本コンジュゲート化合物投与量は、ドセタキセル基準で１０ｍｇ／ｋｇおよび２０ｍｇ／ｋｇとして３回（ｄａｙ１、５、９）投与した後、３０日間癌組織の大きさを測定した。図１０は、ＭＫＮ２８細胞株に対する抗癌活性を示し、図１１では、タキソテールおよびコンジュゲート化合物投与開始から４０日間の実験鼠の体重変化を示す。図１０からみると、コンジュゲート化合物の抗癌効果が対照物質のタキソテールとほぼ対等であることが分かる。しかし、より重要なのは、図１１に示された薬物投与期間中のヌードマウスの体重変化である。すなわち、図１１を詳細に説明すれば、タキソテールの場合、マウスの平均体重が薬物投与直後に初期体重の約１０％以上減少するのに対し、コンジュゲート化合物の場合、薬物投与期間中にも生理食塩水を投与した群と同一に体重増加が観察されることから、薬物による毒性が非常に低いと判断される。同じ方法で行った肺癌細胞株Ａ５４９に対する実験結果を図１２に示した。この図からみると、実施例１４のコンジュゲート薬物の薬効がむしろ対照物質のタキソテールより優れていることが分かる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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