(57)【要約】      （修正有）【課題】脳がんを治療する組成物及び脳がんのワクチン接種をする方法の提供。【解決手段】IL-13Rα2ペプチド、EphA2ペプチド、survivinペプチド及びWT1ペプチドを含む、医薬組成物。IL-13Rα2ペプチド、EphA2ペプチド及びsurvivinペプチドを含む、医薬組成物。IL-13Rα2ペプチド、EphA2ペプチド、YKL-40ペプチド及びGP100ペプチドを含む、医薬組成物。１以上のペプチドが樹状細胞に負荷される、前記医薬組成物。【選択図】図１
2019123745.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
IL-13Rα2ペプチド、EphA2ペプチド、survivinペプチド及びWT1ペプチドを含む、医薬
組成物。
【請求項２】
IL-13Rα2ペプチド、EphA2ペプチド及びsurvivinペプチドを含む、医薬組成物。
【請求項３】
IL-13Rα2ペプチド、EphA2ペプチド、YKL-40ペプチド及びGP100ペプチドを含む、医薬
組成物。
【請求項４】
IL-13Rα2ペプチドは配列番号：１−４のいずれかを含み、EphA2ペプチドは配列番号：６を含み、survivinペプチドは配列番号：７を含み、かつ、WT1ペプチドは配列番号：８
を含む、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項５】
IL-13Rα2ペプチドは配列番号：１−４のいずれかを含み、EphA2ペプチドは配列番号：６を含み、survivinペプチドは配列番号：７を含む、請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項６】
IL-13Rα2ペプチドは配列番号：１−４のいずれかを含み、EphA2ペプチドは配列番号：６を含み、YKL-40ペプチドは配列番号：１０を含み、かつ、GP100ペプチドは配列番号：
１１を含む、請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項７】
１以上のペプチドが樹状細胞に負荷される、請求項１−３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項８】
アジュバントをさらに含む、請求項１−３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項９】
アジュバントが、モンタニド（Montanide）ISA-51である、請求項８に記載の医薬組成
物。
【請求項１０】
それを必要とする対象における、脳がんを治療、予防又は管理する方法であって、請求項１−３のいずれか１項に記載の医薬組成物を、該対象に投与することを含む、方法。
【請求項１１】
対象にヘルパーＴ細胞エピトープを投与することをさらに含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
ヘルパーＴ細胞エピトープが、PADREペプチド、破傷風トキソイドペプチド、又はHBV128-140コアペプチドである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
対象に免疫応答調整物質を投与することをさらに含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１４】
免疫応答調整物質が、poly-ICLC又はイミキモドである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
対象がヒトである、請求項１０に記載の方法。
【請求項１６】
対象に、皮下又は節内に医薬組成物を投与する、請求項１０に記載の方法。
【請求項１７】
それを必要とする対象における、脳がんを治療、予防又は管理する方法であって、(i) IL-13Rα2ペプチド、EphA2ペプチド、survivinペプチド、WT1ペプチド、ヘルパーＴ細胞
エピトープ及びアジュバントを含む第１の医薬組成物、並びに、(ii) 免疫応答調整物質
を含む第２の医薬組成物、を該対象に投与することを含む、方法。
【請求項１８】
それを必要とする対象における、脳がんを治療、予防又は管理する方法であって、(i) IL-13Rα2ペプチド、EphA2ペプチド、survivinペプチド、ヘルパーＴ細胞エピトープ及びアジュバントを含む第１の医薬組成物、並びに、(ii) 免疫応答調整物質を含む第２の医
薬組成物、を該対象に投与することを含む、方法。
【請求項１９】
それを必要とする対象における、脳がんを治療、予防又は管理する方法であって、(i) 樹状細胞に負荷されたIL-13Rα2ペプチド、樹状細胞に負荷されたEphA2ペプチド、樹状細胞に負荷されたYKL-40ペプチド、樹状細胞に負荷されたGP100ペプチド、及びヘルパーＴ
細胞エピトープを含む第１の医薬組成物、並びに、(ii) 免疫応答調整物質を含む第２の
医薬組成物、を該対象に投与することを含む、方法。
【請求項２０】
IL-13Rα2ペプチド、EphA2ペプチド及びもう１つのペプチドを含む、医薬組成物。
【請求項２１】
他のペプチドがsurvivinペプチドである、請求項２０に記載の医薬組成物。
【請求項２２】
他のペプチドがWT1ペプチドである、請求項２０に記載の医薬組成物。
【請求項２３】
他のペプチドがYKL-40ペプチドである、請求項２０に記載の医薬組成物。
【請求項２４】
他のペプチドがGP100ペプチドである、請求項２０に記載の医薬組成物。
【請求項２５】
患者にグリオーマのワクチン接種を行う方法であって、患者にCTL応答を発達させるの
に十分な条件下で、EphA2883-891を含む組成物を患者に導入する、方法。
【請求項２６】
それを必要とする対象において脳がんを治療、予防又は管理するための、請求項１−３のいずれか１項に記載の医薬組成物の使用。
【請求項２７】
ヘルパーＴ細胞エピトープをさらに含む、請求項２６に記載の使用。
【請求項２８】
ヘルパーＴ細胞エピトープが、PADREペプチド、破傷風トキソイドペプチド、又はHBV128-140コアペプチドである、請求項２７に記載の使用。
【請求項２９】
免疫応答調整物質の使用をさらに含む、請求項２６に記載の使用。
【請求項３０】
免疫応答調整物質が、poly-ICLC又はイミキモドである、請求項２９に記載の使用。
【請求項３１】
対象がヒトである、請求項２６に記載の使用。
【請求項３２】
医薬組成物が、皮下又は節内に使用するためである、請求項２６に記載の使用。
【請求項３３】
それを必要とする対象における、脳がんの治療、予防又は管理のために、(i) IL-13Rα2ペプチド、EphA2ペプチド、survivinペプチド、WT1ペプチド、ヘルパーＴ細胞エピトー
プ及びアジュバントを含む第１の医薬組成物、並びに、(ii) 免疫応答調整物質を含む第
２の医薬組成物の使用。
【請求項３４】
それを必要とする対象における、脳がんの治療、予防又は管理のために、(i) IL-13Rα2ペプチド、EphA2ペプチド、survivinペプチド、ヘルパーＴ細胞エピトープ及びアジュバントを含む第１の医薬組成物、並びに、(ii) 免疫応答調整物質を含む第２の医薬組成物
の使用。
【請求項３５】
それを必要とする対象における、脳がんの治療、予防又は管理のために、(i) 樹状細胞に負荷するIL-13Rα2ペプチド、樹状細胞に負荷するEphA2ペプチド、樹状細胞に負荷するYKL-40ペプチド、樹状細胞に負荷するGP100ペプチド及びヘルパーＴ細胞エピトープを含
む第１の医薬組成物、並びに、(ii) 免疫応答調整物質を含む第２の医薬組成物の使用。
【請求項３６】
グリオーマに対するワクチン接種のための、CTL応答を発達させるのに十分な条件下で
、EphA2883-891を含む組成物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本出願は、２０１０年８月２４日に出願された、米国仮出願番号61/376,582の利益を主張し、これを参照として本明細書に援用する。
【０００２】
（連邦政府による資金提供を受けた研究開発の記載）
本発明は、国立衛生研究所（ＮＩＨ）によるグラント番号ＮＳ４０９２３及びＣＡ１１７１５２の下、政府の支援により行われた。政府は、当該発明に一定の権利を有する。
【０００３】
（電子的に提出された資料の参照による援用）
本明細書と同時に提出された、２０１１年８月２２日付、One 3.00 Kilobyte ASCII(Text)ファイル名「708849_ST25.TXT」として特定されるコンピューター読み取り可能なヌクレオチド／アミノ酸配列表の全体の内容は参照することにより本明細書に組み込まれる。
【０００４】
１．イントロダクション
本発明は、インターロイキン−１３受容体α２ペプチド脳がんワクチン、並びにそれらが必要な患者にインターロイキン−１３受容体α２ペプチド脳がんワクチンを投与することを含む、脳がんを治療する方法及び脳がんのワクチン接種をする方法を提供する。本発明はインターロイキン−１３受容体α２ペプチド並びに少なくとも一つの追加ペプチド及び／又は免疫賦活剤を含むワクチンレジメンも提供する。
【背景技術】
【０００５】
２．背景技術
脳腫瘍は、手術、放射線治療、化学療法等の既存の方法では特に治療し難い。浸潤性の増殖パターン、血液脳関門等の因子により、悪性グリオーマの治療は他の腫瘍と比べてより問題である。患者への効果的な治療オプションが欠如しているため、免疫療法等の代替治療法の開発につながっている。
【０００６】
免疫療法は、悪性グリオーマの治療において前途有望な新しいアプローチである。腫瘍抗原特異的なＴ細胞エピトープに対する合成ペプチドでパルスした自己グリオーマ細胞又は樹状細胞による末梢免疫の効能が、前臨床マウスモデルで実証された（Okada et al., 2001; Okada et al., 1998）。特異的なＴ細胞エピトープワクチンは、正常な脳の構成成分に対し、理論上自己免疫応答がないため、全グリオーマ細胞ワクチンと比べておそらく安全である。このような抗原特異的なアプローチは、巨大腫瘍抗原アプローチと比べて、より効果的であり得る。なぜなら、巨大腫瘍抗原より特定の抗原ペプチドを使用することで、より効率的に免疫原性Ｔ細胞エピトープの提示及び抗原特異的Ｔ細胞前駆体による刺激が生じるからである。
【０００７】
ヒトグリオーマ関連抗原におけるＴ細胞免疫エピトープの同定は、ヒトグリオーマに対するこのようなワクチン開発には必要である。ヒト悪性グリオーマに対する細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）免疫エピトープは、ほとんど同定されていない。しかしながら、インターロイキン（ＩＬ）−１３受容体（Ｒ）α２に由来するＨＬＡ（ヒトリンパ球抗原）−Ａ２拘束性細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）が近年同定された（Okano et al., 2002）。ＩＬ−１３Ｒα２はヒト悪性グリオーマの大半で発現し、正常組織では発現しないことが既知であり（Debinski et al., 2000）、該同定されたエピトープ（ＩＬ−１３Ｒα２３
４５−３５３）は、グリオーマに対するペプチドワクチンの魅力的な構成成分である。ＩＬ−１３Ｒα２３４５−３５３ペプチドでＣＤ８＋細胞を刺激してユニークなＣＴＬ系を
作製したところ、ＩＬ−１３Ｒα２陽性、ＨＬＡ−Ａ２陽性のグリオーマ細胞が、抗原特異的に効率的に溶解された。しかしながら、このようなペプチドワクチンが如何に効率的に特異的なＣＴＬを誘導することができるのか、ペプチド類似体がＩＬ−１３Ｒα２特異的ＨＬＡ−Ａ２拘束性ＣＴＬの最適な増殖及び活性化に使用できるかどうか、については不明のままである。
【０００８】
ＣＴＬエピトープとして同定されたペプチド中のあるアミノ酸を置換すると、該ペプチドのＨＬＡ（ヒトリンパ球抗原）複合体に対する結合親和性を大いに増加させ、該ペプチドの免疫原性を増加させることが実証された（Bownds et al., 2001; Chen et al., 2000）。ＩＬ−１３Ｒα２３４５−３５３ペプチド及び他のこのようなエピトープの免疫原性を高めることは、強力かつ腫瘍特異的なペプチドワクチンの開発につながる可能性があり、悪性グリオーマの現行の治療レジームを著しく改善するであろう。しかしながら、ＨＬＡ−Ａ２拘束性細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）エピトープのためのポリペプチドを改善する必要が残っている。
【０００９】
上述のとおり、ヒト悪性グリオーマの細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）免疫エピトープはほとんど同定されていない。グリオーマの顕著な抗原不均一性を考慮すると、一つの腫瘍特異的Ｔ細胞エピトープによる免疫治療は、抗原欠損バリアント（variants）の進行前の、病気の一時的な安定化を促すだけかもしれない。ＥｐｈＡ２は、受容体チロシンキナーゼのＥｐｈファミリーのメンバーの１つであって、Ｅｐｈファミリーは２つの主要なクラス（ＥｐｈＡ２及びＥｐｈＢ）からなり、両者はリガンド（それぞれ、ｅｐｈｒｉｎ−Ａ及びｅｐｈｒｉｎ−Ｂ）に対する特異性で区別される。ＥｐｈＡ２は、転移巣等の進行がんで頻繁に過剰発現し、しばしば機能的に調節不全となる（Kinch et al., 2003）。悪性グリオーマの攻撃的かつ浸潤的な性質により、ＥｐｈＡ２は当該腫瘍実体に発現するかもしれず、グリオーマワクチンの潜在的な標的になり得る。ＥｐｈＡ２におけるＴ細胞免疫エピトープが同定され、がん免疫療法の潜在的な標的及び他の形態の代用マーカーとして特徴付けられた（Alves et al., 2003, and Tatsumi et al., 2003）。さらなるＣＴＬエピトープを同定することが、悪性グリオーマの現在の治療レジメにおいて顕著な改善をもたらすであろうグリオーマに対するマルチエピトープワクチン開発の必要なステップである。
【００１０】
３．概要
１態様として、本発明はＨＬＡ−Ａ２拘束性細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）エピトープとして役立つＩＬ−１３α２由来のペプチドを提供する。ＩＬ−１３α２ペプチドは、ＷＬＰＦＧＦＩＬＩ（配列番号：１）の置換変異バリアントであって、アミノ酸残基の少なくとも１つが、該表示された残基以外のアミノ酸に置換され得る、バリアントを含み、からなり、又はそれらから実質的になり得る。さらに、ＩＬ−１３α２ペプチドは、以下の配列：ＷＬＰＦＧＦＩＬＶ（配列番号：２）、ＡＬＰＦＧＦＩＬＶ（配列番号：３）、又はＥＬＰＦＧＦＩＬＶ（配列番号：４）のいずれかを実質的に含み、からなる、又は含み得る。
【００１１】
また、グリオーマに対するワクチンとしての、上記ＩＬ−１３Ｒα２のいずれかの使用も提供する。加えて、本発明は、患者がＣＴＬ応答を誘導するのに十分な条件下で該ペプチドを導入し、患者にグリオーマのワクチン接種をする方法も提供する。さらに、本発明はＴＬＡＤＦＤＰＲＶ（配列番号：６）の配列を有するＥｐｈＡ２ペプチドの使用、又はグリオーマに対するワクチンとして、該ペプチド及び生理学的に許容される担体を含む組成物も提供する。また、本発明はＴＬＡＤＦＤＰＲＶ（配列番号：６）の配列を有するＥｐｈＡ２ペプチド又は該ペプチド及び生理学的に許容される担体を含む組成物が、患者のＣＴＬ応答を誘導するのに十分な条件下で患者に導入することを特徴とする、患者にグリオーマのワクチン接種をする方法も提供する。
【００１２】
別の態様として、本発明は１つのＩＬ−１３Ｒα２ペプチド及び１、２、３又はそれ以上の脳がんに関連する追加のペプチドを有するＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンを提供する。特定の実施形態として、本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは、１以上のヘルパーＴ細胞エピトープ及び／又は免疫応答調整物質（modifier）と同時に投与される。該実施態様では、該１以上のヘルパーＴ細胞エピトープ及び／又は１以上の免疫応答調整物質は、該ワクチンの一部として（例えば、該ＩＬ−１３Ｒα２ペプチド及び１、２、３又はそれ以上の脳がんに関連する追加のペプチドを含む溶液）、又は該ワクチンとは別に（すなわち、該ヘルパーＴ細胞エピトープ及び／又は免疫応答調整物質がワクチン製剤の一部ではない製剤として投与され得る）投与されてよい。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは、無細胞ワクチンとして投与される。他の実施形態では、本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは、アジュバントと共に投与される。好ましい実施態様として、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは、追加のペプチドと共に投与される。他の実施形態では、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは、免疫調節剤と共に投与される。他の実施形態では、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは、免疫調節剤での注射を含むレジメンの構成成分として、モンタニド（Montanide）ＩＳＡ−５１のエマルジョンとして投与される。好ましい実施
形態では、免疫刺激剤はｐｏｌｙ−ＩＣＬＣである。他の実施形態として、ここで記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは樹状細胞ワクチンとして投与される。
【００１３】
１態様として、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチド、ＥｐｈＡ２ペプチド、ＹＫＬ−４０ペプチド及びＧＰ１００を含む。特定の実施形態では、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは、配列番号：１−４に表されるいずれかに記載のＩＬ−１３Ｒα２ペプチド、配列番号：６に表されるＥｐｈＡ２ペプチド、配列番号：１０に表されるＹＫＬ−４０ペプチド、配列番号：１１に表されるＧＰ１００ペプチドを含む。他の特定の実施形態では、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは、配列番号：３に表されるペプチドＩＬ−１３Ｒα２ペプチド、配列番号：６に表されるＥｐｈＡ２ペプチド、配列番号：１０に表されるＹＫＬ−４０ペプチド、配列番号：１１に表されるＧＰ１００ペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは、１以上のヘルパーＴ細胞エピトープと同時に投与される。特定の実施形態では、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは、ヘルパーＴ細胞エピトープがＰＡＤＲＥペプチドである１以上のヘルパーＴ細胞エピトープと同時に投与される。いくつかの実施形態では、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは、免疫応答調整物質と同時に投与される。いくつかの実施形態では、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは、無細胞ワクチンである。他の実施形態では、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは、樹状細胞ワクチンである。
【００１４】
他の実施形態では、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチド、ＩＥｐｈＡ２ペプチド、ｓｕｒｖｉｖｉｎペプチド及びＷＴ１ペプチドを含む。特定の実施形態では、配列番号：１−４に表されるいずれかに記載のＩＬ−１３Ｒα２ペプチド、配列番号：６に表されるＥｐｈＡ２ペプチド、配列番号：７に表されるｓｕｒｖｉｖｉｎペプチド、配列番号：８に表されるＷＴ１ペプチドを含む。他の特定の実施形態では、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは、配列番号：３に表されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチド、配列番号：６に表されるＥｐｈＡ２ペプチド、配列番号：７に表されるｓｕｒｖｉｖｉｎペプチド、配列番号：８に表されるＷＴ１ペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは１以上のヘルパーＴ細胞エピトープと同時に投与される。特定の実施形態では、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンはヘルパーＴ細胞エピトープが破傷風トキソイドであるヘルパーＴ細胞エピトープと同時に投与される。いくつかの実施形態では、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは１以上の免疫応答調整物質と同時に投与される。特定の実施形態では、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは免疫応答調整物質がｐｏｌｙ−ＩＣＬＣである免疫応答調整物質と同時に投与される。特定の実施形
態では、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは、免疫応答調整物質はＭｏｎｔａｎｉｄｅ
ＩＳＡ−５１である免疫応答調整物質と同時に投与される。いくつかの実施形態では、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは無細胞ワクチンである。他の実施形態では、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは樹状細胞ワクチンである。
【００１５】
他の実施形態では、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンはＩＬ−１３Ｒα２ペプチド、ＥｐｈＡ２ペプチド及びｓｕｒｖｉｖｉｎペプチドを含む。特定の実施形態では、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは配列番号：１−４に表されるいずれかのＩＬ−１３Ｒα２ペプチド、配列番号：６に表されるＥｐｈＡ２ペプチド、配列番号：７に表されるｓｕｒｖｉｖｉｎペプチドを含む。他の特定の実施形態では、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは配列番号：３に表されるＩＬ−１３Ｒα２、配列番号：６に表されるＥｐｈＡ２ペプチド、配列番号：７に表されるｓｕｒｖｉｖｉｎペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは、１以上のヘルパーＴ細胞エピトープと同時に投与される。特定の実施形態ではＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは、ヘルパーＴ細胞エピトープが破傷風トキソイドであるヘルパーＴ細胞エピトープと同時に投与される。いくつかの実施形態では、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは１以上の免疫応答調整物質と同時に投与される。特定の実施形態では、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは、免疫応答調整物質がｐｏｌｙ−ＩＣＬＣである免疫応答調整物質と同時に投与される。特定の実施形態では、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは、免疫応答調整物質がＭｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ−５１である免疫応答調整物質と投与される。他の実施形態では、他の実施形態ではＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは樹状細胞ワクチンである。
【００１６】
４．定義
本明細書で用いられる用語「約」又は「およそ」と数を組み合わせて使用した場合、参照数の１、５又は１０％以内の任意の数を意味する。
【００１７】
本明細書で用いられる用語「剤」は、本明細書に記載されるインターロイキン−１３受容体α２ペプチド脳がんワクチンで使用されるか、又は組み合わせて使用される任意の分子、化合物及び／又は物質を意味する。該剤という用語は、タンパク質、免疫グロブリン（例えば、多選択性（multi-specific）Ｉｇ、単鎖Ｉｇ、Ｉｇ断片、ポリクローナル抗体及びその断片、モノクローナル抗体及びその断片）、ペプチド（例えば、ペプチド受容体、セレクチン）、結合タンパク質、生物製剤、化学特異性剤、化学毒性剤（Chemotoxic agent）、抗血管新生剤、小分子薬が挙げられるが、これらに限定されない。
【００１８】
本明細書で用いられる用語「アミノ酸配列同一性」とは、通常、パーセンテージで表されるアミノ酸配列アライメントのペア同士の同一性又は類似性の度合いを意味する。本明細書で用いられる用語「パーセント同一」、「同一のパーセント」、「％同一」、「％の同一」とは、アミノ酸配列に関する場合、最大のパーセント配列相同性を達成するために、必要であれば、配列のアライメントを行い、ギャップを導入した後に、該ペプチド中の対応するアミノ酸残基と同一（すなわち、該アライメント中の指定の位置にあるアミノ酸残基は同一残基）である候補配列中のアミノ酸残基のパーセントを意味する。
本明細書で用いられる用語「パーセント類似」、「類似のパーセント」、「％類似」、「％の類似」とは、アミノ酸配列に関する場合、最大のパーセント配列相同性を達成するために、必要であれば、配列のアライメントを行い、ギャップを導入した後に、該ペプチド中の対応するアミノ酸残基と類似する（すなわち、後述するように、該アライメント中の指定の位置にあるアミノ酸残基の置換が同類置換）候補配列中のアミノ酸残基のパーセントを意味する。配列同一及び類似のパーセントを含む、配列相同性は、当該目的のために設計されたコンピュータアルゴリズムを含む当該技術分野でよく知られている配列アライメント技術、該コンピュータアルゴリズムのデフォルトパラメータ又はこれらを含むソフトウエアパッケージを使用して決定される。
【００１９】
本明細書で用いられる用語「同類置換」とは、同じクラスの別のアミノ酸と１つのクラスのアミノ酸の置換を意味する。特定の実施形態では、同類置換はペプチドの構造若しくは機能又はその両者を変更するものではない。同類置換のためのアミノ酸のクラスは、疎水性（Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ）、中性親水性（Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ）、酸性（Ａｓｐ、Ｇｌｕ）、塩基性（Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ）、立体構造のかく乱（conformation disrupters）；（Ｇｌｙ、Ｐｒｏ）、芳香族（Ｔｒｐ
、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ）が含まれる。
【００２０】
本明細書で用いられる用語「ペプチド」とは、当業者に既知のように、アミド結合により連結されたアミノ酸のポリマーを意味する。ペプチドは、共有アミド結合により４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００又はそれ以上のアミノ酸が連結されたポリマーであり得る。いくつかの実施形態では、ペプチドは、共有アミド結合により６−８、８−１０、１０−１５、１０−２０、１０−２５、１０−３０、１０−４０、１０−５０又は２５−２５アミノ酸が連結されたポリマーである。特定の実施形態では、ペプチドは、共有アミド結合により５０−６５、５０−７５、５０−８５、５０−９５、５０−１００、７５−１００のアミノ酸が連結されたポリマーである。本明細書で記載されるように、該用語は共有アミド結合により連結された単一ペプチド鎖を意味することができる。該用語は、イオン結合、水素結合、ファンデルワールス力、疎水性結合等の非共有結合で結合する複数のペプチド鎖も意味することができる。当業者は、該用語が修飾されたペプチド、例えば、シグナルペプチドの切断、ジスルフィド結合の形成、グリコシル化（例えば、Ｎ−結合型グリコシル化）、プロテアーゼ切断及び脂質修飾（例えば、Ｓ−パルミトイル化）等の翻訳後修飾を含むことも認識するであろう。
【００２１】
本明細書で用いられる用語「精製された」、「単離された」とは、天然資源、例えば、細胞から得られたペプチドと関連して使用さる場合、ペプチドが天然資源の汚染物質、例えば、土粒子、ミネラル、環境からの化学物質、及び／又は該天然資源からの細胞内物質、細胞内に存在する細胞破片、細胞壁物質、膜、オルガネラ、多量の核酸、炭水化物、タンパク質、及び／又は脂質などが挙げられるが、これらに限定されない、を実質的に含まないことを意味する。したがって、単離されたペプチドは、約３０％、２０％、１０％、５％、２％又は１％（乾燥重量）未満、細胞内物質の及び／又は汚染物質を含有するポリペプチドの調製物が含まれる。本明細書で用いられる用語「精製された」、「単離された」とは、化学合成されたペプチドと関連して使用される場合、該ポリペプチドの合成に関与する化学的前駆体又は他の化学物質が実質的に含まれないペプチドを意味する。
【００２２】
本明細書で用いられる用語「核酸」とは、ＤＮＡ分子（例えば、ｃＤＮＡ又はゲノムＤＮＡ）、ＲＮＡ分子（例えば、ｍＲＮＡ）、核酸類似体を使用して作製されるＤＮＡ又はＲＮＡ類似体を含むように意図されている。核酸は、１本鎖又は２本鎖であり得る。
【００２３】
本明細書で用いられる用語「予防ワクチン」とは、がんを予防するために使用される本明細書に記載されるワクチンを意味する。
【００２４】
本明細書で用いられる用語「予防に有効なレジメン」とは、脳がん又はその症状の予防のために１以上の治療を行う行為の投薬、タイミング、頻度及び期間に有効なレジメンを意味する。
【００２５】
本明細書で用いられる用語「治療ワクチン」とは、脳がんを治療及び／又は管理するために使用される本明細書に記載されるワクチンを意味する。
【００２６】
本明細書で用いられる用語「治療に有効なレジメン」とは、脳がん又はその症状の治療及び／又は管理の１以上の治療を行う行為の投薬、タイミング、頻度及び期間のためのレジメンを意味する。
【００２７】
本明細書で用いられる用語「対象」、「患者」とは、互換的に使用され、動物（例えば、鳥、両生類及び哺乳類）を意味し使用される。特定の実施形態では、対象は鳥である。他の実施形態では、対象は動物で非霊長類（例えば、ラクダ、ロバ、シマウマ、ウシ、ブタ、ウマ、ヤギ、ヒツジ、ネコ、イヌ、ラット及びマウス）、及び霊長類（例えば、サル、チンパンジー及びヒト）を含む哺乳動物である。特定の実施形態では、対象は非ヒト動物である。いくつかの実施形態では、対象は家畜又はペットである。他の実施形態では、対象はヒトである。他の実施形態では、対象はヒト乳児である。他の実施形態では、対象はヒト幼児である。他の実施形態では、対象は子供である。他の実施形態では、対象は成人である。他の実施形態では、対象は高齢者である。
【００２８】
本明細書で用いられる用語「ヒト乳児」は、生まれてから１歳のヒトを意味する。
【００２９】
本明細書で用いられる用語「ヒト幼児」は、１歳から３歳のヒトを意味する。
【００３０】
本明細書で用いられる用語「子供」とは、１歳から１８歳のヒトを意味する。
【００３１】
本明細書で用いられる用語「成人」とは、１８歳以上のヒトを意味する。
【００３２】
本明細書で用いられる用語「高齢者」とは、６５歳以上のヒトを意味する。
【００３３】
本明細書で用いられる用語「脳がん」とは、頭蓋内又は中央脊柱管に存在する腫瘍を意味する。脳がんとは、原発腫瘍（すなわち、頭蓋内球又は中央脊柱管にで発生した腫瘍）、二次性腫瘍（すなわち、他の組織で最初に存在していた腫瘍から発生した後に、頭蓋内球又は中央脊柱管に浸潤した腫瘍）両者を意味する。
【００３４】
本明細書で用いられる用語「治療」は、脳がん又はそれに関連する病気若しくは症状の予防又は治療に使用され得る、いかなるプロトコール、方法、組成、製剤及び／又は剤も意味することができる。特定の実施形態では、「治療」は、当業者に知られた脳がん又はそれに関連する病気又は症状を治療又は予防するのに有用な生物学的療法、支持療法及び／又は他の療法を意味する。
【００３５】
本明細書で用いられる用語「有効量」とは、脳がん及び／又は１以上の脳がんの症状の発達、再発、又は発病を予防し、他の療法の予防効果を高める又は改善し、脳がんの重症度、持続を減らし、１以上の症状を改善し、脳がんの進行を予防し、脳がんの退縮を起こし、及び／又は他の療法の治療効果を高める又は改善するのに十分な治療の量を意味する。
【００３６】
本明細書で用いられる用語「組み合わせて」とは、対象への治療の投与と関連する場合、２以上の治療（例えば、予防及び／又は治療）の使用を意味する。「組み合わせて」という用語の使用は、対象に投与される治療（例えば、１次及び２次治療）順に限定されない。治療は、脳がんであった、脳がんである又は脳がんの可能性のある対象に、２次治療の前（例えば、１分、５分、１５分、３０分、４５分、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間、又は１２週間前）、と同時に、又は後で（例えば、１分、５分、１５分、３０分、４５分、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、
８週間、又は１２週間後）治療の投与を行うことができる。治療は、対象に、共に作用するなような順及び時間間隔内で投与することができる。特定の実施形態では、治療は別々に投与された場合、増加した利益を提供するような順及び時間間隔内で投与される。任意の追加の治療が、他の付加治療と任意の順序で投与することができる。
【００３７】
本明細書で用いられる用語「管理する」、「管理している」、「管理」とは、対象への治療の投与との関連で、脳がんの治癒をもたらしていないが、１つの治療（例えば、予防又は治療ワクチン）又は複数の治療の組み合わせから得られる有益な効果を意味する。特定の実施形態では、対象は、病態の進行又は悪化を防ぐために、脳がんを管理するための１以上の治療（例えば、１以上の予防又は治療ワクチン）が投与される。
【００３８】
本明細書で用いられる用語「予防する」、「予防している」及び「予防」とは、対象への治療の投与との関連で、１つの治療（例えば、予防又は治療薬）、又は複数の治療の組み合わせ（例えば、予防又は治療薬の組み合わせの投与から得られる、脳がんの再発、発病及び／又はそれに関連する症状の予防又は阻止を意味する。
【００３９】
本明細書で用いられる用語「同時に」とは、併用効果（つまり、同時にはおそらく一斉に、又は、互いの前後の期間内に起き得る２つ以上の事象）を生み出すのに十分なほど時間が近接していることを意味する。他の剤と投与される場合、本明細書で提供されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは、他の活性剤と共に投与され得る。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン及び１以上の他の剤（例えば、ヘルパーＴ細胞エピトープ、アジュバント、及び／又は免疫応答調整物質）は、対象に同時に投与され、そこで投与される本明細書で提供されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン及び１以上の他の剤は、同一組成物である。他の実施形態では、本明細書で提供されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン及び１以上の他の剤（例えば、ヘルパーＴ細胞エピトープ、アジュバント、及び／又は免疫応答調整物質）は同時に対象に投与され、本明細書で提供されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン及び１以上の他の剤は同一組成物ではない。一つの実施形態では、該剤は、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンとともに投与される剤は、分けて注射される。特定の実施形態では、本明細書で提供されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン及び１以上の他の試薬、例えば、ヘルパーＴ細胞エピトープ、アジュバント及び／又は免疫応答調整物質）は、同時に対象に投与され、その併用投与は、少なくとも１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、１０時間、１２時間、１日、２日、３日、４日、５日、６日、１週間又は２週間分けられる。
【００４０】
本明細書で用いられる用語「脳がん関連ペプチド」とは、１以上の脳がんと関連し、かつ、ＨＬＡ−Ａ２拘束性細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）エピトープとして役立つぺプチドを意味する。いくつかの実施形態では、脳がん関連ペプチドは、グリオーマ関連ペプチド、すなわち、該ペプチドが関連する脳がんは、グリオーマである。好ましい実施形態では、該がん関連ペプチドはグリオーマ細胞により発現される。例となる脳がん関連ペプチドには、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチド、ＥｐｈＡ２ペプチド、ＹＫＬ−４０ペプチド、ＧＰ１００ペプチド、ｓｕｒｖｉｖｉｎペプチド及びＷＴ１ペプチドが挙げられるが、これらに限定されない。
【００４１】
本明細書で用いられる用語「ＩＬ−１３Ｒα２ペプチド」とは、ＩＬ−１３Ｒα２タンパク質に由来し、かつ、ＨＬＡ−Ａ２拘束性細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）エピトープとして役立つぺプチドを意味する。特定の実施形態では、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドが由来するＩＬ−１３Ｒα２タンパク質は、ヒトＩＬ−１３Ｒα２タンパク質である。他の特定の実施形態では、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドは、配列番号：１−４のいずれかの配列を有する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドは、ＩＬ−１３Ｒα２タンパク質の天然（例えば、野生型）の形態で存在するようなＩＬ−１３Ｒα２ペプチドに対
して、１、２、３以上のアミノ酸変異（例えば、付加、置換、欠失）を含む。
【００４２】
本明細書で用いられる用語「ＥｐｈＡ２ペプチド」とは、ＥｐｈＡ２タンパク質に由来し、かつ、ＨＬＡ−Ａ２拘束性細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）エピトープとして役立つぺプチドを意味する。特定の実施形態では、ＥｐｈＡ２ペプチドが由来するＥｐｈＡ２タンパク質は、ヒトＥｐｈＡ２タンパク質である。他の特定の実施形態では、ＥｐｈＡ２ペプチドは、配列番号：６の配列を有する。いくつかの実施形態では、ＥｐｈＡ２ペプチドは、ＥｐｈＡ２タンパク質の天然（例えば、野生型）の形態で存在するようなＥｐｈＡ２ペプチドに対して、１、２、３以上のアミノ酸変異（例えば、付加、置換、欠失）を含む。
【００４３】
本明細書で用いられる用語「ＹＫＬ−４０ペプチド」とは、ＹＫＬ−４０タンパク質に由来し、かつ、ＨＬＡ−Ａ２拘束性細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）エピトープとして役立つぺプチドを意味する。特定の実施形態では、ＹＫＬ−４０ペプチドが由来するＹＫＬ−４０タンパク質は、ヒトＹＫＬ−４０タンパク質である。他の特定の実施形態では、ＹＫＬ−４０ペプチドは、配列番号：１０の配列を有する。いくつかの実施形態では、ＹＫＬ−４０ペプチドは、ＹＫＬ−４０タンパク質の天然（例えば、野生型）の形態で存在するようなＹＫＬ−４０ペプチドに対して、１、２、３以上のアミノ酸変異（例えば、付加、置換、欠失）を含む。
【００４４】
本明細書で用いられる用語「ＧＰ１００ペプチド」とは、ＧＰ１００タンパク質に由来し、かつ、ＨＬＡ−Ａ２拘束性細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）エピトープとして役立つぺプチドを意味する。特定の実施形態では、ＧＰ１００ペプチドが由来するＧＰ１００タンパク質は、ヒトＧＰ１００タンパク質である。他の特定の実施形態では、ＧＰ１００ペプチドは、配列番号：１１の配列を有する。いくつかの実施形態では、ＧＰ１００ペプチドは、ＧＰ１００タンパク質の天然（例えば、野生型）の形態で存在するようなＧＰ１００ペプチドに対して、１、２、３以上のアミノ酸変異（例えば、付加、置換、欠失）を含む。
【００４５】
本明細書で用いられる用語「ｓｕｒｖｉｖｉｎペプチド」とは、ｓｕｒｖｉｖｉｎタンパク質に由来し、かつ、ＨＬＡ−Ａ２拘束性細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）エピトープとして役立つぺプチドを意味する。特定の実施形態では、ｓｕｒｖｉｖｉｎペプチドが由来するｓｕｒｖｉｖｉｎタンパク質は、ヒトｓｕｒｖｉｖｉｎタンパク質である。他の特定の実施形態では、ｓｕｒｖｉｖｉｎペプチドは、配列番号：７の配列を有する。いくつかの実施形態では、ｓｕｒｖｉｖｉｎペプチドは、ｓｕｒｖｉｖｉｎタンパク質の天然（例えば、野生型）の形態で存在するようなｓｕｒｖｉｖｉｎペプチドに対して、１、２、３以上のアミノ酸変異（例えば、付加、置換、欠失）を含む。
【００４６】
本明細書で用いられる用語「ＷＴ１ペプチド」とは、ＷＴ１タンパク質に由来し、かつ、ＨＬＡ−Ａ２拘束性細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）エピトープとして役立つぺプチドを意味する。特定の実施形態では、ＷＴ１ペプチドが由来するＷＴ１タンパク質は、ヒトＷＴ１タンパク質である。他の特定の実施形態では、ＷＴ１ペプチドは、配列番号：７の配列を有する。いくつかの実施形態では、ＷＴ１ペプチドは、ＷＴ１タンパク質の天然（例えば、野生型）の形態で存在するようなＷＴ１ペプチドに対して、１、２、３以上のアミノ酸変異（例えば、付加、置換、欠失）を含む。
【００４７】
本明細書で用いられる用語「無細胞ワクチン」とは、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドがワクチン（例えば、ＩＬ−１３Ｒα２に由来するペプチドが溶液中に存在する）中の細胞（例えば、樹状細胞）に負荷されていないＩＬ−１３Ｒα２ペプチドを含むワクチンを意味する。好ましい実施形態では、該ペプチドは、アジュバントで乳化される。他の好ましい実
施形態では、該アジュバントは、Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ  ５１である。
【００４８】
本明細書で用いられる用語「樹状細胞ワクチン」とは、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドがワクチン中の樹状細胞に負荷されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドを含むワクチンを意味する。
【図面の簡単な説明】
【００４９】
【図１】図１は、様々な濃度の天然ＩＬ−１３Ｒα２３４５−３５３で負荷したＴ２細胞に対し、ＩＬ−１３Ｒα２−Ｖ９及びＩＬ−１３Ｒα２−Ａ  １Ｖ９が、天然のＩＬ−１３Ｒα２３４５−３５３又はＩＬ−１３Ｒα２−Ｅ  １Ｖ９と比べて、ＣＴＬ反応性が高かったことを実証するデータを図示する。ＨＬＡ−Ａ２＋グリオーマ患者由来のＣＤ８＋Ｔ細胞を、１０日間、それぞれ、天然ＩＬ−１３Ｒα２３４５−３５３（●）、ＩＬ−１３Ｒα２−Ｖ９（○）、ＩＬ−１３Ｒα２−Ａ１Ｖ９（△）、ＩＬ−１３Ｒα２−Ｅ１Ｖ９（Ｘ）、Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ  Ｍ１５８−６６ペプチド（▼）又はペプチド無し（□）で負荷した樹状細胞で刺激した。その後、該Ｔ細胞は、４時間５１Ｃｒ−放出アッセイにより、表示された濃度のＩＬ−１３Ｒα２３４５−３５３又はペプチド無しで負荷し、Ｔ２細胞に対する溶解活性を試験した。Ｅ／Ｔ比は１２．５であった。Ｐ＜０．０１は、Ｓｔｕｄｅｎｔ−ｔ  ｔｅｓｔの両側検定による、０．１及び１ｎＭでの天然対ＩＬ−１３Ｒα２−Ａ  １Ｖ９と同様に、天然対ＩＬ−１３Ｒα２−Ｖ９である。これらのデータは、類似の結果を示す３つの独立した実験の１つを示す。
【図２】図２は、Ｖ９ペプチド（白丸）により誘導されたＣＴＬ系は、様々な濃度の野生型ＩＬ−１３Ｒα２３４５−３５３ペプチドで負荷したＴ２細胞に対し溶解活性が増加したことを実証するデータを図示する。３つのアゴニスト類似体（Ｖ９（白丸）、Ａ１Ｖ９（三角）；Ｅ１Ｖ９（Ｘ））又は野生型ペプチド（黒丸）それぞれによって誘導された該ＣＴＬ系は、４時間５１Ｃｒ−放出アッセイにより、様々な濃度（１−１００ｎＭ）のＩＬ−１３Ｒα２３４５−３５３で負荷したＴ２細胞とともに、標的ＩＬ−１３Ｒα２３４５−３５３ペプチドのより低い濃度に対するＣＴＬ反応性を検討した（Ｅ／Ｔ比＝５０）。
【図３】図３は、ヒトグリオーマ細胞系に対し、天然のＩＬ−１３Ｒα２３４５−３５３と比べて、より高い大きさのＣＴＬ反応性を誘導した修飾ペプチドを実証するデータを図示する。ＨＬＡ−Ａ２＋グリオーマ患者に由来するＣＤ８＋細胞を、天然のＩＬ−１３Ｒα２３４５−３５３（●）、ＩＬ−１３Ｒα２−Ｖ９（○）、ＩＬ−１３Ｒα２−Ａ１Ｖ９（△）又はＩＬ−１３Ｒα２−Ｅ１Ｖ９（Ｘ）で刺激した。１０日目に、該細胞について、４時間５１Ｃｒ−放出アッセイで、ヒトグリオーマ細胞ＳＮＢ１９（Ａ）及びＵ−２５１（Ｂ）（共にＩＬ−１３Ｒα＋／ＨＬＡ−Ａ２＋）に対する溶解能を試験した。ＳＮＢ１９グリオーマ細胞に対し、全てのＥ／Ｔ比での、Ｐ＜０．０５は、Ｓｔｕｄｅｎｔ−ｔ  ｔｅｓｔの両側検定による、ＩＬ−１３Ｒα２−Ａ１Ｖ９対天然のＩＬ−１３Ｒα２３４５−３５３と同様に、ＩＬ−１３Ｒα２−Ｖ９対天然ＩＬ−１３Ｒα２３４５−３５３である。Ｕ２５１グリオーマ細胞に対し、Ｓｔｕｄｅｎｔ−ｔ  ｔｅｓｔの両側検定による、ＩＬ−１３Ｒα２−Ａ１Ｖ９対天然のＩＬ−１３Ｒα２３４５−３５３と同様に、ＩＬ−１３Ｒα２−Ｖ９対天然ＩＬ−１３Ｒα２３４５−３５３の１０及び４０のＥ／Ｔ比で、Ｐ＜０．０５である。当該データは、類似の結果を示す異なるドナーの３つの実験の１つを示す。
【図４】図４は、ＩＬ−１３Ｒα２３４５−３５３でパルスした「コールド」のＴ２細胞の追加により、ＣＴＬ系の抗原特異性を示すＣＴＬ活性が阻害されたことを実証するデータを図示する。それぞれのペプチド（コントロール（Ａ）；Ｆｌｕ（Ｂ）；ＩＬ−１３Ｒα２３４５−３５３（Ｃ）；ＩＬ−１３Ｒα２３４５−９Ｖ（Ｄ））で誘導されたＣＴＬ系を、特異的溶解能の評価のために、示されるＥ：Ｔ比で５１Ｃｒ−標識されたヒトグリオーマ細胞系ＳＮＢ１９とともに４時間培養した（●）。コールド標的阻害アッセイのため、ペプチドＩＬ−１３Ｒα２３４５−３５３有（△）、無（○）でパルスした５１Ｃｒ−標識された標的ＳＮＢ１９細胞（１ｘ１０３細胞／ウェル）及びコールドＴ２細胞（１ｘ１０４細胞／ウェル）をＣＴＬとともに培養した。
【図５】図５は、抗ＨＬＡ−Ａ２抗体の追加により、ＣＴＬ系のＨＬＡ−Ａ２−拘束性認識を示すＣＴＬ活性が阻害されたことを実証するデータを図示する。それぞれのペプチド（コントロール（Ａ）；Ｆｌｕ（Ｂ）；ＩＬ−１３Ｒα２３４５−３５３（Ｃ）；ＩＬ−１３Ｒα２３４５−９Ｖ（Ｄ））で誘導したＣＴＬ系を、特異的な溶解能の評価のＥ：Ｔ比を示す５１Ｃｒ−標識されたヒトグリオーマ細胞系ＳＮＢ１９とともに４時間培養した（●）。Ｔ細胞（○）によるＨＬＡ−Ａ２−媒介認識の機能をブロックするために、抗ＨＬＡ−Ａ２抗体（Ｗ６／３２；１０μｇ／ｍｌ）を追加した。
【図６】図６は、天然のＩＬ−１３Ｒα２３４５−３５３で負荷したＥＬ４−ＨＨＤに対し、天然のＩＬ−１３Ｒα２３４５−３５３よりも修飾したペプチドが、より高いＣＴＬ反応性を誘導したことを実証するデータを図示する。コントロールＭＡＲＴ−１２７−３５（●）、天然のＩＬ−１３Ｒα２３４５−３５３（○）、ＩＬ−１３Ｒα２−Ｖ９（△）又はＩＬ−１３Ｒα２−Ａ１Ｖ９（Ｘ）のいずれかで免疫したＨＨＤマウスから得たＳＰＣにつき、標準的な４時間５１Ｃｒ−放出アッセイで、天然のＩＬ−１３Ｒα２３４５−３５３でパルスしたＥＬ４−ＨＨＤに対する特異的な溶解活性を試験した。
【図７】図７は、ＥＬ４−ＨＨＤ−ＩＬ−１３Ｒαに対し、天然のＩＬ−１３Ｒα２３４５−３５３よりも修飾したペプチドが、より高いＣＴＬ反応性を誘導したことを実証するデータを図示する。コントロールＭＡＲＴ−１２７−３５（Ａ）、天然のＩＬ−１３Ｒα２３４５−３５３（Ｂ）、ＩＬ−１３Ｒα２−Ｖ９（Ｃ）、又はＩＬ−１３Ｒα２−Ａ１Ｖ９（Ｄ）のいずれかで免疫したＨＨＤマウスから得たＳＰＣにつき、標準的な４時間５１Ｃｒ−放出アッセイでＥＬ４−ＨＨＤ−ＩＬ−１３Ｒα２（○）又はコントロールＥＬ４−ＨＨＤ（●）に対する特異的な溶解活性を試験した。
【図８】図８は、多形性膠芽腫（ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａ  ｍｕｌｔｉｆｏｒｍｅ；ＧＢＭ）及び未分化星状細胞腫（ＡＡ）におけるＥｐｈＡ２タンパク質の発現を示す。ＧＢＭ（Ａ−Ｃ）又はＡＡ（Ｄ）の患者から得られた外科標本のパラフィン包埋切片を脱パラフィン化し、抗ＥｐｈＡ２ポリクローナル抗体（Ｃ−２０：  Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，  Ｉｎｃ．，  Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ，  Ｃａｌｉｆ．）又はコントロールウサギＩｇＧ（右上隅のウインドウは各サンプル）で染色した。血管で囲まれた内皮及び腫瘍細胞で比較的密な染色が観察された（Ｄ）。検討した１４ＧＢＭのうち９、及び９ＡＡのうち６ケースがＥｐｈＡ２陽性であった（データ示さず）。倍率；原寸×２０
【図９】図９は、ＥｐｈＡ２８８３−８９１で刺激したＣＤ８＋細胞が、ＨＬＡ−Ａ２及びＥｐｈＡ２タンパク質を発現するヒトグリオーマ細胞に対し、ＣＴＬ応答を誘発したことを実証するデータを図示する。ＨＬＡ−Ａ２＋グリオーマ患者からのＣＤ８＋Ｔ細胞を、１０日間ＥｐｈＡ２８８３−８９１で負荷したＤＣで刺激した。これらのＴ細胞を、４時間５１Ｃｒ−放出アッセイにより、ヒトグリオーマ細胞ＳＮＢ１９（ＨＬＡ−Ａ２＋、ＥｐｈＡ２＋）（▲）、Ｕ２５１（ＨＬＡ−Ａ２＋、ＥｐｈＡ２＋）（■）及びＡ１７２（ＨＬＡ−Ａ２−、ＥｐｈＡ２＋）（▼）に対する溶解活性を試験した。
【図１０】図１０：ＩＬ−１２産生レベルがＴＴＰと正の相関が認められた。Ｐ＝０．０２５５は、尤度比検定に続いてコックス回帰に基づいた。黒丸は、既に進行した患者を示し、黒塗菱形は、今日に至るまで再発していない患者を表す。
【図１１】図１１：ＩＦＮ−γ  ＥＬＩＳＰＯＴで評価したＩＬ−１３Ｒα２（Ａ）、ＰＡＤＲＥ（Ｂ）、ＥｐｈＡ２（Ｃ）、ＹＫＬ−４０（Ｄ）又はｇｐ１００（Ｅ）に対するＴ−細胞応答。全ての評価した患者のＩＦＮ−γＥＳＬＩＰＯＴアッセイの時間経過を箱ひげ図（Ｂｏｘ  Ｐｌｏｔ）で示す（箱＝２５回−７５回  パーセンタイル値；垂直線＝最少−最大）。ＹＫＬ−４０（Ｄ）のパネルにおいて各時点の下部にある数字は、該示された時間で評価可能な患者数を示す。これらの数は、他のＧＡＡ及びＰＡＤＲＥに関連する。
【図１２】図１２：ＩＦＮ−γ  ＥＬＩＳＰＯＴで評価した患者１０のＩＬ−１３Ｒα２（■）、ＰＡＤＲＥ（＊）、ＥｐｈＡ２（▲）、ＹＫＬ−４０（◆）又はｇｐ１００（●）に対するＴ−細胞応答。
【図１３】図１３：患者６は、最長３３週間まで分析され、耐久テトラマー応答を示した（ＩＬ−１３Ｒα２テトラマー＋細胞（■）；ＥｐｈＡ２テトラマー＋細胞（▲）；ｇｐ１００テトラマー＋細胞（●））（Ｃ）。ＩＬ−１３Ｒα２−エピトープに対する陽性テトラマー応答のドットプロットの例が示される（Ａ−Ｂ）。
【図１４】図１４：１型サイトカイン及びケモカイン応答の誘導。線グラフは、ケース番号１０（■）、１１（｜）、１６（△）、１９（□）又は２２（?）の１回目のワクチン後２４時間と比較した、１回目ワクチン接種の前日に、ＲＴ−ＰＣＲによるＩＦＮα１（Ａ）、ＣＸＣＬ１０（Ｂ）、ＣＣＬ５（Ｃ）、ＩＬ−１２α（Ｄ）、ＴＬＲ３（Ｅ）又はＣＣＬ２２（Ｆ）につき、ペアの対遺伝子発現を示す。Ｙ軸は、ｐｇ／ｍｌでサイトカイン／ケモカインの濃度を示す。各（Ａ）−（Ｆ）のパネル中の数字は、各患者のΔΔＣＴ値の平均を用いたＰａｉｒｅｄ  Ｓｔｕｄｅｎｔ  ｔ−ｔｅｓｔに基づくＰ値を示す。
【図１５】図１５：１型サイトカイン及びケモカイン応答の誘導。線グラフは、ケース番号９（●）、１０（■）、１２（記号なし）、１６（△）、１８（○）、１９（□）又は２０（▲）の１回目のワクチン後９週間と比較した１回目ワクチン接種の前日にＲＴ−ＰＣＲによりＩＦＮα１（Ａ）、ＣＸＣＬ１０（Ｂ）、ＩＦＮγ（Ｃ）、ＴＬＲ３（Ｄ）のペアの相対遺伝子発現を示す。Ｙ軸は、ｐｇ／ｍｌでサイトカイン／ケモカインの濃度を示す。各（Ａ）−（Ｄ）のパネル中の数字は、各患者のΔΔＣＴ値の平均を用いたＰａｉｒｅｄ  Ｓｔｕｄｅｎｔ  ｔ−ｔｅｓｔに基づくＰ値を示す。
【図１６】図１６：１回目前及び４回目後ワクチン血清サンプルでＬｕｍｉｎｅｘ分析を行った。Ｙ軸は、ｐｇ／ｍｌでサイトカイン／ケモカインの濃度を示す。各（Ａ）−（Ｅ）のパネル中の数字は、濃度の平均を用いたＰａｉｒｅｄ  Ｓｔｕｄｅｎｔ  ｔ−ｔｅｓｔに基づくＰ値を示す。
【図１７】図１７：患者１は、２回のブースターワクチンに続きＧｄ−強化された病巣の大きさの増加を示し該病変の外科的切除が行われた。Ｉｎ  ｓｉｔｕ  ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎにより、ワクチン接種後の組織（Ｂ）におけるＣＸＣＬ１０（ダークスポット）のｍＲＮＡが検出されたが、最初に切除された腫瘍（ワクチン接種前）（Ａ）では検出されなかった。コントロール（Ｃ）。他の２つのワクチン接種前の組織は、ＣＸＣＬ１０メッセンジャー陽性を示さなかった。スケールバーは、１００μｍに相当する。ヘマトキシリン及びエオシン染色をバックグラウンドのために行った。
【図１８】図１８：臨床反応を有する患者。患者２０は、１７週間及び３３週間ＭＲＩでＧｄ−強化腫瘍の完全放射線応答を示した（３つの連続した切片は０週（Ａ−Ｃ）、１７週（Ｄ−Ｆ）及び３３週（Ｇ−Ｉ）を示す）。２回のブースターワクチンに続き、患者１は、Ｇｄ−強化病巣の増大を示した。切除された組織は、有糸分裂活発な腫瘍（Ｊ）の兆候はないが、ＣＤ６８＋マクロファージ（Ｋ）及びＣＤ８＋Ｔ細胞（Ｌ）は顕著な浸潤があることを明らかにした。Ｊ−Ｌの倍率；原寸×２０。
【図１９】図１９：検査のためのフロー図。治療の詳細についてセクション７．７を参照。ブースターワクチンの第２フェーズは、患者が主要なＳＥ又は病気の進行を示さない限り、３７週間後のいつからでもスタート可能で、最初のワクチン接種から３ヶ月毎に最大３年まで投与された。αＤＣ１ワクチンは、超音波を使って、鼠径リンパ節（右及び左は、各々第１回目及び第２回目ワクチン接種を示す）及び腋窩リンパ節（右及び左は、各々３回目及び４回目のワクチン接種）にまで投与された。当該部位は、短期間で注射を繰り返すことによるリンパ節の微小環境での注射による外傷の潜在的影響を最小限にするため、ブースターワクチンのと同じ順番で回転させた。
【図２０】図２０：ＧＢＭ（■）及びＡＧ（◆）の無増悪期間（Ａ）及び全生存期間（Ｂ）。ＴＴＰ中央値は、ＧＢＭ及びＡＧそれぞれで４及び１３ヶ月であった。
【図２１】図２１：ＩＦＡペプチドワクチンは、ｐｏｌｙ−ＩＣＬＣの筋肉内注射（ｉ．ｍ．）と組み合わせた樹状細胞ワクチンに対し、より優れたＣＴＬ活性を誘導する。Ｃ５７ＢＬ／６マウスが２回の注射（０日及び７日に）を受けた。１）皮下（ｓ．ｃ．）ＩＦＡ（ＩＦＡ−ＯＶＡ）でエマルジョン化されたオボアルブミン２５７−２６４ペプチドプラス同時に、ｉ．ｍ．ｐｏｌｙ−ＩＣＬＣ（５０μｇ／注射）；２）ｓ．ｃ．ＩＦＡ−ＯＶＡプラスｉ．ｍ．生理食塩水；３）オボアルブミン２５７−２６４ペプチドで負荷した骨髄由来樹状細胞（ＤＣ−ＯＶＡ）プラスｉ．ｍ．ｐｏｌｙ−ＩＣＬＣ；又は４）ＤＣ−ＯＶＡプラスｉ．ｍ．生理食塩水。他のコントロール群は、ＯＶＡ−ペプチド無しでＩＦＡ又は樹状細胞のみの注射を受けたマウスを含んだ。ｐｏｌｙ−ＩＣＬＣと組み合わせたＩＦＡ−ＯＶＡワクチンは、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいて、最も高いＯＶＡ特異的なＣＴＬレベルを示した。ＩＦＡで乳化された非変異自己ＧＡＡペプチドとｐｏｌｙ−ＩＣＬＣの使用は、自己免疫誘導なしにマウスの生存を改善した。これらのデータは、ｐｏｌｙ−ＩＣＬＣ補助型ＩＦＡ−ペプチドワクチンが効果的かつ安全なワクチン戦略であることを示すことを実証する。
【発明の詳細な説明】
【００５０】
本明細書は、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドを含むインターロイキン１３受容体α２（ＩＬ−１３Ｒα２）ペプチドワクチンを提供する。本明細書で提供される該ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチド及び少なくとも１つの追加的な脳がん関連ペプチドを含む。
【００５１】
一形態において、本明細書で提供されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチド及び１、２、３又はそれ以上の追加の脳がん関連ペプチドを含む。特定の実施形態では、本明細書で記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは、１以上のヘルパーＴ細胞エピトープ及び／又は１以上の免疫応答調整物質とともに投与される。当該実施形態に応じて、１以上のヘルパーＴ細胞エピトープ及び／又は１以上の免疫応答調整物質は、ワクチンの一部（例えば、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチド及び１、２、３又はそれ以上の追加の脳がん関連ペプチドの溶液）又はワクチンとは別に（すなわち、ヘルパーＴ細胞エピトープ及び／又は免疫応答調整物質は、ワクチン製剤の一部ではない製剤として投与され得る）として投与され得る。いくつかの実施形態では、本明細書で記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは、無細胞ワクチンとして投与される。他の実施形態では、本明細書で記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは、樹状細胞ワクチンとして投与される。
【００５２】
一実施形態において、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチド、ＥｐｈＡ２ペプチド、ＹＫＬ−４０ペプチド及びＧＰ１００ペプチドを含む。特定の実施形態では、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは、配列番号：１−４のいずれかのＩＬ−１３Ｒα２ペプチド、配列番号：６のＥｐｈＡ２ペプチド、配列番号：１０のＹＫＬ−４０ペプチド及び配列番号：１１のＧＰ１００ペプチドを含む。他の実施形態では、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは、配列番号：３のＩＬ−１３Ｒα２ペプチド、配列番号：６のＥｐｈＡ２ペプチド、配列番号：１０のＹＫＬ−４０ペプチド、配列番号：１１のＧＰ１００ペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは、１以上のヘルパーＴ細胞エピトープとともに投与される。特定の実施形態では、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは、ヘルパーＴ細胞エピトープがＰＡＤＲＥペプチドであるヘルパーＴ細胞エピトープとともに投与される。いくつかの実施形態では、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは、１以上の免疫応答調整物質とともに投与される。いくつかの実施形態では、１３Ｒα２ペプチドワクチンは、無細胞ワクチンである。他の実施形態では１３Ｒα２ペプチドワクチンは、樹状細胞ワクチンである。
【００５３】
他の実施形態では、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチド、ＥｐｈＡ２ペプチド、ｓｕｒｖｉｖｉｎペプチド及びＷＴ１ペプチドを含む。特定の実施形態では、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは、配列番号：１−４のいずれかのＩＬ−１３Ｒα２ペプチド、配列番号：６のＥｐｈＡ２ペプチド、配列番号：７のｓｕｒｖｉ
ｖｉｎペプチド、配列番号：８のＷＴ１ペプチドを含む。他の実施形態では、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは、配列番号：３のＩＬ−１３Ｒα２ペプチド、配列番号：６のＥｐｈＡ２ペプチド、配列番号：７のｓｕｒｖｉｖｉｎペプチド、配列番号：８のＷＴ１ペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは、１以上のヘルパーＴ細胞エピトープとともに投与される。特定の実施形態では、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは、ヘルパーＴ細胞エピトープが破傷風トキソイドであるヘルパーＴ細胞エピトープとともに投与される。いくつかの実施形態では、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは、１以上の免疫応答調整物質とともに投与される。特定の実施形態では、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは、免疫応答調整物質がｐｏｌｙ−ＩＣＬＣである免疫応答調整物質とともに投与される。特定の実施形態では、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは、免疫応答調整物質がＭｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ−５１である免疫応答調整物質とともに投与される。いくつかの実施形態では、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは、無細胞ワクチンである。他の実施形態では、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは、樹状細胞ワクチンである。
【００５４】
他の実施形態では、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチド、ＥｐｈＡ２ペプチド及びｓｕｒｖｉｖｉｎペプチドを含む。特定の実施形態では、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは、配列番号：１−４のいずれかのＩＬ−１３Ｒα２ペプチド、配列番号：６のＥｐｈＡ２ペプチド、配列番号：７のｓｕｒｖｉｖｉｎペプチドを含む。他の実施形態では、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは、配列番号：３のＩＬ−１３Ｒα２ペプチド、配列番号：６のＥｐｈＡ２ペプチド、配列番号：７のｓｕｒｖｉｖｉｎペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは、１以上のヘルパーＴ細胞エピトープととともに投与される。特定の実施形態では、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは、ヘルパーＴ細胞エピトープが破傷風トキソイドであるヘルパーＴ細胞エピトープとともに投与される。いくつかの実施形態では、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは、１以上の免疫応答調整物質とともに投与される。特定の実施形態では、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは、免疫応答調整物質がｐｏｌｙ−ＩＣＬＣである免疫応答調整物質とともに投与される。特定の実施形態では、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは、免疫応答調整物質がＭｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ−５１である免疫応答調整物質とともに投与される。いくつかの実施形態では、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは、無細胞ワクチンである。他の実施形態では、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは、樹状細胞ワクチンである。
【００５５】
６．１  ペプチド
６．１．１  ＩＬ−１３Ｒα２ペプチド
ＩＬ−１３Ｒα２は、ＴＧＦβを産生するために単球及びマクロファージを誘導するＴｈ２サイトカインであるＩＬ−１３とヘテロダイマーの構成成分として結合する膜糖タンパク質である（例えば、Fichtner-Feigl et al., Nat. Med., 12: 99-106, 2006参照）。
【００５６】
本明細書で提供されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドを含む。ＨＬＡ−Ａ２拘束性細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）エピトープとして役立ち得るいかなるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドも本明細書に記載されるワクチン中で使用してよい。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるワクチン中で使用されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドは、配列番号：１−４のいずれかを含む。特定の実施形態では、本明細書に記載されるワクチン中で使用されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドは、配列番号：３を含む。
【００５７】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるワクチン中で使用されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドは、配列番号：１の変異型を含む。配列番号：１の変異型は少なくとも１、少なくとも２又は少なくとも３アミノ酸置換（例えば、保存的置換）付加、又は欠失を含
む。
【００５８】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるワクチン中で使用されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドは、配列番号：１と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％又は９０％同一のアミノ酸配列を含む。他の実施形態では、本明細書に記載されるワクチン中で使用されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドは、配列番号：１と少なくとも５０％〜６０％、５０％〜７０％、６０％〜７０％、７０％〜８０％、７０％〜９０％又は８０％〜９０％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるワクチン中で使用されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドは、配列番号１と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％又は９０％類似のアミノ酸を含む。他の実施形態では、本明細書に記載されるワクチンに使用されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドは、配列番号：１と少なくとも５０％〜６０％、５０％〜７０％、６０％〜７０％、７０％〜８０％、７０％〜９０％又は８０％〜９０％類似のアミノ酸配列を含む。
【００５９】
６．１．２  ＥｐｈＡ２ペプチド
ＥｐｈＡ２は、ｅｐｈｒｉｎＡ１と相互作用することで脊索の形成に関わるチロシンキナーゼ受容体である（例えば、Naruse-Nakajima et al., Mech. Dev., 102: 95-105, 2001参照）。
【００６０】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは、ＥｐｈＡ２ペプチドを含む。ＨＬＡ−Ａ２拘束性細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）エピトープとして役立ち得るいかなるＥｐｈＡ２ペプチドも本明細書に記載されるワクチンに使用してよい。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるワクチン中で使用されるＥｐｈＡ２ペプチドは配列番号：６を含む。他の実施形態では、本明細書に記載されるワクチン中で使用されるＥｐｈＡ２ペプチドは、米国特許第7,297,337号明細書に開示され
るＥｐｈＡ２ペプチドである。
【００６１】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるワクチン中で使用される、ＥｐｈＡ２ペプチドは配列番号：６の変異型を含み、配列番号：６の変異型は少なくとも１、少なくとも２、又は少なくとも３アミノ酸置換（例えば、保存的置換）付加、又は欠失を含む。
【００６２】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるワクチンで使用されるＥｐｈＡ２ペプチドは、配列番号：６と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％又は９０％同一のアミノ酸配列を含む。他の実施形態では、本明細書に記載されるワクチン中で使用されるＥｐｈＡ２ペプチドは、配列番号：６と少なくとも５０％〜６０％、５０％〜７０％、６０％〜７０％、７０％〜８０％、７０％〜９０％又は８０％〜９０％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるワクチン中で使用されるＥｐｈＡ２ペプチドは、配列番号：６と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％又は９０％類似のアミノ酸配列を含む。他の実施形態では、本明細書に記載されるワクチン中で使用されるＥｐｈＡ２ペプチドは、配列番号：６と少なくとも５０％〜６０％、５０％〜７０％、６０％〜７０％、７０％〜８０％、７０％〜９０％又は８０％〜９０％類似のアミノ酸配列を含む。
【００６３】
６．１．３  Ｓｕｒｖｉｖｉｎペプチド
Ｓｕｒｖｉｖｉｎは、大体のヒトがんで過剰発現しているアポトーシス阻害タンパク質であり、該機能の阻害によりアポトーシスが増加する（例えば、Blanc-Brude et al., Nat. Med., 8: 987-994, 2002参照）。
【００６４】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは、ｓｕｒｖｉｖｉｎペプチドを含む。ＨＬＡ−Ａ２拘束性細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ
）エピトープとして機能し得るいかなるｓｕｒｖｉｖｉｎペプチドも本明細書に記載されるワクチンにおいて使用してよい。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるワクチンで使用されるｓｕｒｖｉｖｉｎペプチドは、配列番号：７を含む。特定の実施形態では、本明細書に記載されるワクチン中で使用されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドは、配列番号：７を含む。他の実施形態では、本明細書に記載されるワクチン中で使用されるｓｕｒｖｉｖｉｎペプチドは、米国特許出願公開第2009/0041732号明細書又はCiesielski et al., Cancer Immunol. Immunother., 59:1211-1221, 2010に記載されるｓｕｒｖｉｖｉｎペプチドである。
【００６５】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるワクチン中で使用されるｓｕｒｖｉｖｉｎペプチドは、配列番号７の変異型を含み、配列番号：７の変異型は、少なくとも１、少なくとも２、又は少なくとも３アミノ酸の置換（例えば、保存的置換）、付加又は欠失を含む。
【００６６】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるワクチン中で使用されるｓｕｒｖｉｖｉｎペプチドは、配列番号：７と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％又は９０％同一のアミノ酸配列を含む。他の実施形態では、本明細書に記載されるワクチンで使用されるｓｕｒｖｉｖｉｎペプチドは、配列番号：７と少なくとも５０％〜６０％、５０％〜７０％、６０％〜７０％、７０％〜８０％、７０％〜９０％又は８０％〜９０％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるワクチン中で使用されるｓｕｒｖｉｖｉｎペプチドは、配列番号：７と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％又は９０％類似のアミノ酸配列を含む。他の実施形態では、本明細書に記載されるワクチン中で使用されるｓｕｒｖｉｖｉｎペプチドは、配列番号：７と少なくとも５０％〜６０％、５０％〜７０％、６０％〜７０％、７０％〜８０％、７０％〜９０％又は８０％〜９０％類似のアミノ酸配列を含む。
【００６７】
６．１．４  ＷＴ１ペプチド
ＷＴ１は、腎臓の発達時に発現し、尾側の中腎小管を制御する転写因子である（例えば、Sainio, Development, 124: 1293-1299, 1997参照）。
【００６８】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンはＷＴ１ペプチドを含む。ＨＬＡ−Ａ２拘束性細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）エピトープとして役立ち得るいかなるＷＴ１ペプチドも本明細書に記載されるワクチン中で使用してよい。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるワクチン中で使用されるＷＴ１ペプチドは配列番号：８を含む。
【００６９】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるワクチン中で使用されるＷＴ１ペプチドは、配列番号：８の変異型を含み、配列番号：８の変異型は、少なくとも１、少なくとも２、又は少なくとも３アミノ酸の置換（例えば、保存的置換）、付加又は欠失を含む。
【００７０】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるワクチン中で使用されるＷＴ１ペプチドは、配列番号：８と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％又は９０％同一のアミノ酸配列を含む。他の実施形態では、本明細書に記載されるワクチン中で使用されるＷＴ１ペプチドは、配列番号：８と少なくとも５０％〜６０％、５０％〜７０％、６０％〜７０％、７０％〜８０％、７０％〜９０％又は８０％〜９０％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるワクチン中で使用されるＷＴ１ペプチドは、配列番号：８と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％類似のアミノ酸配列を含む。他の実施形態では、本明細書に記載されるワクチン中で使用されるＷＴ１ペプチドは、配列番号：８と少なくとも５０％〜６０％、５０％〜７０％、６０％〜７０％、７０％〜８０％、７０％〜９０％又は８０％〜９０％類似のアミノ酸配列を含む。
【００７１】
６．１．５  ＧＰ１００ペプチド
ヒト黒色腫関連抗原ＧＰ１００は、有核哺乳動物細胞で発現するメラニン分化抗原である（例えば、Koch et al., FEBS Lett., 179: 294-298, 1985参照）。
【００７２】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは、ＧＰ１００ペプチドを含む。ＨＬＡ−Ａ２拘束性細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）エピトープとして役立ち得るいかなるＧＰ１００ペプチドも本明細書に記載されるワクチンの中で使用してよい。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるワクチン中で使用されるＧＰ１００ペプチドは配列番号：１１を含む。
【００７３】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるワクチン中で使用されるＧＰ１００ペプチドは、配列番号：１１の変異型を含み、配列番号：１１の変異型は、少なくとも１、少なくとも２、又は少なくとも３アミノ酸の置換（例えば、保存的置換）、付加又は欠失を含む。
【００７４】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるワクチン中で使用されるＧＰ１００ペプチドは、配列番号：１１と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％又は９０％同一のアミノ酸配列を含む。他の実施形態では、本明細書に記載されるワクチン中で使用されるＧＰ１００ペプチドは、配列番号：１１と少なくとも５０％〜６０％、５０％〜７０％、６０％〜７０％、７０％〜８０％、７０％〜９０％又は８０％〜９０％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるワクチン中で使用されるＧＰ１００ペプチドは、配列番号：１１と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％又は９０％類似のアミノ酸配列を含む。他の実施形態では、本明細書に記載されるワクチン中で使用されるＧＰ１００ペプチドは、配列番号：１１と少なくとも５０％〜６０％、５０％〜７０％、６０％〜７０％、７０％〜８０％、７０％〜９０％又は８０％〜９０％類似のアミノ酸配列を含む。
【００７５】
６．１．６  ＹＫＬ−４０ペプチド
ＹＫＬ−４０は分泌糖タンパク質であり、細胞外マトリクス分解及び／又は血管新生、例えば、肝線維症、関節リウマチ及び重度の変形性関節症等に関与していることが知られている（例えば  Bigg et al., (2006), J Biol Chem. 281, 21082-95 参照）。
【００７６】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンはＹＫＬ−４０ペプチドを含む。ＨＬＡ−Ａ２拘束性細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）エピトープとして役立ち得るいかなるＹＫＬ−４０ペプチドも本明細書に記載されるワクチン中で使用してよい。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるワクチン中で使用されるＹＫＬ−４０ペプチドは配列番号：１０を含む。
【００７７】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるワクチン中で使用されるＹＫＬ−４０ペプチドは配列番号：１０の変異型を含み、配列番号：１０の変異型は、少なくとも１、少なくとも２、又は少なくとも３アミノ酸の置換（例えば、保存的置換）、付加、又は欠失を含む。
【００７８】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるワクチン中で使用されるＹＫＬ−４０ペプチドは、配列番号：１０と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％又は９０％同一のアミノ酸配列を含む。他の実施形態では、本明細書に記載されるワクチン中で使用されるＹＫＬ−４０ペプチドは、配列番号：１０と少なくとも５０％〜６０％、５０％〜７０％、６０％〜７０％、７０％〜８０％、７０％〜９０％又は８０％〜９０％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるワクチン中で使用され
るＹＫＬ−４０ペプチドは、配列番号：１０と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％又は９０％類似のアミノ酸配列を含む。他の実施形態では、本明細書に記載されるワクチン中で使用されるＹＫＬ−４０ペプチドは、配列番号：１０と少なくとも５０％〜６０％、５０％〜７０％、６０％〜７０％、７０％〜８０％、７０％〜９０％又は８０％〜９０％類似のアミノ酸配列を含む。
【００７９】
６．２  免疫応答調整物質
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは免疫応答調整物質とともに投与される。免疫応答調整物質は、対象の免疫応答を調整することができる剤を含む。いくつかの実施形態では、免疫応答調整物質はＴｈ１応答へ対象の免疫応答を偏向させる。他の実施形態では、免疫応答調整物質は、Ｔｈ２応答へ対象の免疫応答を偏向させる。好ましい実施形態では、調整された免疫応答は、ＴＬＲとしても知られているＴＬＲ３等のｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ受容体に結合する。本明細書で提供されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンとともに投与可能である免疫応答調整物質の例としては、ｐｏｌｙ−ＩＣＬＣ、イミキモド（Ａｌｄａｒａ（登録商標）；Ｂｅｓｅｌｎａ（登録商標））及びＭＩＳ−４１６（Ｉｎｎａｔｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００８０】
６．２．１  Ｐｏｌｙ−ＩＣＬＣ
ポリリシン及びカルボキシメチルセルロースで安定化されたポリイノシン（酸）ポリシチジル酸（ｐｏｌｙ−ＩＣＬＣ）は、合成核酸であって、Ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ−３（ＴＬＲ３）リガンドとして機能する。Ｐｏｌｙ−ＩＣＬＣ  は、Ｈｉｌｔｏｎｏｌとしても知られている。
【００８１】
６．３  アジュバント
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンはアジュバントとともに投与される。いくつかの実施形態では、「アジュバント」という用語は、本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンとともに又は同一組成物中で投与された場合に、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンに対する免疫応答を増強、加速、延長、強化及び／又は追加する剤を意味する。いくつかの実施形態では、アジュバントはＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンに対する免疫応答を起こし、アレルギー又は他の有害反応を起こさない。アジュバントは、例えば、リンパ球の補充、Ｂ及び／又はＴ細胞の刺激、樹状細胞の刺激、並びにマクロファージの刺激を含むいくつかのメカニズムによる免疫応答を強化することができる。
【００８２】
アジュバントの具体例としては、Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ−５１、Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ  ５０Ｖ、Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ  ２０６、Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＭＳ  １３１２、ＶａｘＩｍｍｕｎｅ（登録商標）（ＣｐＧ７９０９；Ｃｏｌｅｙ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、アルミニウム塩（ａｌｕｍ）（例えば、水酸化アルミニウム、リン酸化アルミニウム及び硫酸アルミニウム等）、３−Ｏ−脱アシル化モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）（ＧＢ  ２２２０２１１参照）、ＭＦ５９（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＡＳ０３（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）、ＡＳ０４（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）、ポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ  ８０；ＩＣＬ  Ａｍｅｒｉｃａｓ，  Ｉｎｃ．）、イミダゾピリジン化合物（WO2007/109812として公開された国際出願番号PCT/US2007/064857参照）、イミダゾキノリン化合物（WO2007/109813として公開された国際出願
番号PCT/US2007/064858参照）及びサポニン、例えば  ＱＳ２１（Kensil et al.,in Vaccine Design:The Subunit and Adjuvant Approach(編者、Powell & Newman, Plenum Press, NY, 1995)；米国特許第5,057,540号明細書参照）が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、アジュバントはＦｒｅｕｎｄ’ｓ  アジュバント（完全又は不完全）である。他のアジュバントは、例えばモノホスホリルリピドＡ（Stoute et al
., N. Engl. J. Med. 336, 86-91 (1997)参照）等の免疫刺激剤と任意に組み合わされて
よい、水中油型エマルジョン（例えば、スクアレン又はピーナッツオイル等）である。他のアジュバントはＣｐＧ（Bioworld Today, Nov. 15, 1998）である。該アジュバントは
、ＭＰＬ又は３−ＤＭＰ、ＱＳ−２１、ポリグルタミン酸若しくはポリリシン等多量体若しくは単量体アミノ酸等の他の特異的免疫刺激剤、免疫増強剤とともに又は無しで使用することができる。ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンの異なる剤は、異なるアジュバントを含んでもよいし、同一のアジュバントを含んでもよい、と理解すべきである。
【００８３】
６．４  ヘルパーＴ細胞エピトープ
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンはヘルパーＴ細胞エピトープとともに投与される。ヘルパーＴ細胞エピトープは、免疫システムによるヘルパーＴ細胞応答を誘導することができる剤を含む。ヘルパーＴ細胞は、ＣＤ４＋Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、ヘルパーＴ細胞エピトープは、Ｃｌａｓｓ  ＩＩ  ＭＨＣ分子により提示され、ヘルパーＴ細胞（ＣＤ４＋Ｔ細胞）のＴ細胞受容体（ＴＣＲ）により認識されることができ、それによりＣＤ４＋Ｔ細胞を活性化し、これらを増殖させ、ＩＬ２等のサイトカインを分泌させ、プロフェッショナル抗原提示細胞を活性化する。様々なメカニズムを通じて、活性化されたヘルパーＴ細胞は、キラーＴ細胞（ＣＤ８＋Ｔ細胞としても知られている）も刺激し、それによりＣＤ８＋Ｔ細胞応答を延長させ、増加させる。本明細書で提供されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンとともに投与されることができる例となるヘルパーＴ細胞エピトープとしては、ＨＢＶｃｏｒｅ１２８−１４０及び破傷風トキソイドが挙げられるが、これらに限定されない。
【００８４】
６．４．１  ＰＡＤＲＥペプチド
ＰＡＤＲＥはＨＬＡ−ＤＲ結合及びＴ細胞受容体刺激の両者のために最適化された非天然エピトープである（例えば、Alexander et al, Immunity, 1:751-761, 1994参照）。
【００８５】
６．４．２  破傷風トキソイド
人口の大多数が感作されてきた破傷風トキソイド（ＴＴ）タンパク質由来のよく特徴付けられたＴｈエピトープ（配列番号：９）は、ヘルパーＴ細胞エピトープとして機能することが知られている。
【００８６】
６．４．２．１  ＨＢＶ  Ｃｏｒｅ１２８−１４０
ＨＢＶタンパク質由来のよく特徴づけられたＴｈエピトープ（配列番号：５）は、ヘルパーＴ細胞エピトープとして機能することが知られている。
【００８７】
６．５  ペプチドの作製と精製
本明細書に記載されるペプチドは、ペプチド合成のために当該分野で知られている任意の方法、特に、化学合成又は組み換え発現技術により作製され得る。本明細書で提供される方法は、特に指定のない限り、分子生物学、微生物学、遺伝解析、組み換えＤＮＡ、有機化学、生化学、ＰＣＲ、オリゴヌクレオチド合成及び修飾、核酸ハイブリダイゼーション、及び当該技術の範囲内での関連分野における従来技術を含む。これらの技術は、本明細書で引用した文献に記載されており十分に文献で説明されている。例えば、Maniatis et al. (1982) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press; Sambrook et al. (1989),  Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Second Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press; Sambrook et al.  (2001) Molecular Cloning:  A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley
& Sons (1987 and annual updates); Current Protocols in Immunology, John Wiley &
Sons (1987 and annual updates) Gait (ed.)(1984) Oligonucleotide Synthesis: A Practical Approach, IRL Press; Eckstein (ed.)(1991) Oligonucleotides and Analogues
: A Practical Approach, IRL Press; Birren et al. (eds.) (1999) Genome Analysis: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Pressを参照。
【００８８】
６．５．１．１  ペプチドの合成作製
本明細書に記載されるペプチドは、従来の段階的溶液又は固相合成法を使用して調製することができる（例えば、Chemical Approaches to the Synthesis of Peptide and Proteins, Williams et al., Eds., 1997, CRC Press, Boca Raton Fla.,及びその中で引用されている文献；  Solid Phase Peptide Synthesis: A Practical Approach, Atherton & Sheppard, Eds., 1989, IRL Press, Oxford, England及びその中で引用されている文献）。
【００８９】
あるいは、本明細書に記載されるペプチドは、例えば、Liu et al., 1996, Tetrahedron Lett. 37(7):933-936; Baca, et al., 1995, J. Am. Chem. Soc. 117:1881-1887; Tam et al., 1995, Int. J. Peptide Protein Res. 45:209-216; Schnolzer and Kent, 1992,
Science 256:221-225; Liu and Tam, 1994, J. Am. Chem. Soc. 116(10):4149-4153; Liu and Tam, 1994, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91:6584-6588; Yamashiro and Li, 1988, Int. J. Peptide Protein Res. 31:322-334に記載されているセグメント縮合法により
調製することができる。本明細書に記載されるペプチドを合成するのに有用な他の方法は、Nakagawa et al., 1985, J. Am. Chem. Soc. 107:7087-7092に記載されている。
【００９０】
ジスルフィド結合の形成は、必要に応じて、マイルドな酸化剤の存在下で通常行われる。化学酸化剤を使用してもよいし、あるいは、該化合物はこれらの結合をもたらす大気酸素に単にさらしてもよい。様々な方法が当分野において知られており、これらも含まれる。例えば、Tam et al., 1979, Synthesis 955-957;Stewart et al., 1984, Solid Phase Peptide Synthesis, 2d Ed., Pierce Chemical Company Rockford, Ill.;Ahmed et al., 1975, J. Biol. Chem. 250:8477-8482；及びPennington et al., 1991 Peptides 1990 164-166, Giralt and Andreu, Eds., ESCOM Leiden, The Netherlands.  追加的な代替案が、Kamber et al., 1980, Helv. Chim. Acta 63:899-915により記載されているものが挙げられる。固相担体で行われる方法が、Albericio, 1985, Int. J. Peptide Protein Res. 26:92-97に記載されている。これらはいずれも参照によりその全体が援用される。
【００９１】
６．５．１．２  ペプチドの組み換え発現
ペプチドの組み換え発現には、該ペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターの構築が必要である。ペプチドをコードするポリヌクレオチドが得られれば、該ペプチドを作製するためのベクターは、当分野でよく知られた組み換えＤＮＡ技術により作製することができる。そして、ペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを発現することによるペプチドの調製方法は本明細書に記載されている。当業者周知の方法を用いて、ペプチドをコードする配列、適切な転写及び翻訳コントロールシグナルを含む発現ベクターを構築することができる。これらの方法は、例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ組み換えＤＮＡ技術、合成技術及びｉｎ  ｖｉｖｏ遺伝子組み換えを含む。したがって、プロモーターと作動可能に連結したペプチドをコードする核酸配列を含む複製可能な発現ベクターが本明細書で提供される。
【００９２】
発現ベクターは、宿主細胞で核酸の発現に適した形態でペプチドをコードする核酸を含む。特定の実施形態では、宿主細胞は単離された宿主細胞である。特定の実施形態では、発現ベクターは、発現する核酸と作動可能に連結した、発現のために使用される宿主細胞に基づいて選択される１以上の制御配列を含む。発現ベクターにおいて、「作動可能に連結した」とは、目的の核酸を発現できるような形式で（例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写／翻訳系中で、又は宿主細胞にベクターが導入される場合、宿主細胞中で）、制御配列に連結していることを意味することを意図する。制御配列は、プロモーター、エンハンサー及
び他の発現コントロールエレメント（例えば、ポリアデニル化シグナル）を含む。制御配列は、多くのタイプの宿主細胞中での恒常的な核酸の発現を指示するもの、ある宿主細胞中での核酸のみの発現を指示するもの（例えば、組織特異的制御配列）、特定の剤で刺激すると核酸の発現を指示するもの（例えば、誘導性制御配列）を含む。発現ベクターの設計が、トランスフォームされる宿主細胞の選択、所望のタンパク質の発現レベル等のような因子に依存することは当業者に理解される。「宿主細胞」という用語は、核酸でトランスフォーム又はトランスフェクトされた特定の対象細胞及びそのような細胞の子孫又は潜在的な子孫を含む意味である。そのような細胞の子孫は、宿主細胞ゲノム内への該核酸の産生又は挿入の成功時に起きるかもしれない変異又は環境的な影響により、該核酸でトランスフォーム又はトランスフェクトされた親細胞と同一でないかもしれない。特定の実施形態では、宿主細胞は単離されている。
【００９３】
従来のトランスフォーメーション又はトランスフェクション法で、発現ベクターを宿主細胞に導入することができる。当該技術には、リン酸カルシウム又は塩化カルシウム共沈殿、ＤＥＡＥデキストラン媒介トランスフェクション、リポフェクション及びエレクトロポレーションを含むがこれらに限定されない。宿主細胞のトランスフォーム又はトランスフェクトに適した手法は、Sambrook et al., 1989, Molecular Cloning - A Laboratory Manual, 第２版, Cold Spring Harbor Press, New York及び他の実習マニュアルに開示されている。特定の実施形態では、宿主細胞はペプチドをコードする核酸を含む発現ベクターで一過的にトランスフェクトされる。他の実施形態では、宿主細胞はペプチドをコードする核酸を含む発現ベクターで安定にトランスフェクトされる。したがって、本明細書で提供される宿主細胞は、本明細書に記載される又は本明細書で提供される方法に従って作製されるペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む宿主細胞である。
【００９４】
ペプチドを発現するために様々な宿主−発現ベクター系を使用することができる。該宿主−発現ベクター系は、目的のコードする配列を作製し、その後精製可能なビヒクルを表すが、適切なヌクレオチドコーディング配列でトランスフォーム又はトランスフェクトされた場合ｉｎ  ｓｉｔｕでペプチドを発現し得る細胞も表す。これらは、配列をコードするペプチドを含む、組み換えバクテリオファージＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ又はコスミドＤＮＡ発現ベクターでトランスフォームされた細菌（例えば、大腸菌及び枯草菌）等の微生物；配列をコードするペプチドを含む、組み換え酵母発現ベクターでトランスフォームされた酵母（例えば、サッカロミセス、ピチア）；配列をコードするペプチドを含む、組み換えウイルス発現ベクター（例えば、バキュロウイルス）でトランスフォームされた昆虫細胞系；組み換えウイルス発現ベクター（例えば、カリフラワー・モザイクウイルス、ＣａＭＶ；タバコ・モザイクウイルス、ＴＭＶ）で感染された又は配列をコードするペプチドを含む、組み換えプラスミド発現ベクター（例えば、Ｔｉプラスミド）でトランスフォームされた植物細胞系；あるいは、哺乳動物細胞のゲノム又は哺乳動物ウイルス（例えば、アデノウイルス後期プロモーター；ワクシニアウイルス  ７．５Ｋプロモーター）由来のプロモーターを含む組み換え発現構築物を保持する哺乳動物細胞系（例えば、ＣＯＳ、ＣＨＯ、ＢＨＫ、２９３、ＮＳ０及び３Ｔ３細胞）であるが、これらに限定されない。好ましくは、大腸菌等の細菌性の細胞、より好ましくは、真核細胞がペプチドの発現のために使用される。例えば、ヒトサイトメガロウイルス由来の主要な中間初期遺伝子プロモーター要素等のベクターと組み合わせた、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）等の哺乳動物細胞は、効果的なペプチド発現系である（Foecking et al., 1986, Gene 45:101；及びCockett et al., 1990, Bio/Technology 8:2）。特定の実施形態では、本明細書に記載される又は本明細書で提供される方法に従って作製されるペプチドをコードする核酸配列の発現は、構成的なプロモーター、誘導プロモーター又は組織特異的なプロモーターにより制御される。
【００９５】
細菌系では、発現されるペプチドの用途に応じて多数の発現ベクターを有利に選択する
ことができる。例えば、ペプチドの医薬組成物作製のために、多量のペプチドを作製しなければならない場合、容易に精製される融合タンパク質産物の高レベル発現を指示するベクターが望ましいであろう。当該ベクターとしては、大腸菌発現ベクターｐＵＲ２７８（Ruther et al., 1983, EMBO 12:1791）であり、ペプチドをコードする配列は、融合タン
パク質が作製されるように、ｌａｃＺをコードする領域とインフレームで個別にベクターに連結され得る；ｐＩＮベクター（Inouye & Inouye, 1985, Nucleic Acids Res. 13:3101-3109; Van Heeke & Schuster, 1989, J. Biol. Chem. 24:5503-5509）等が挙げられる
が、これらに限定されない。グルタチオン５−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）との融合タンパク質として、外来ポリペプチドを発現するためにｐＧＥＸベクターを使用することもできる。一般に、そのような融合タンパク質は可溶性であり、マトリクスグルタチオン−アガロースビーズへ吸着、結合させ、続く遊離グルタチオン下での溶出により、溶解した細胞から容易に精製することができる。ｐＧＥＸベクターは、ＧＳＴ部分からクローン化した標的遺伝子産物を遊離できるよう、トロンビン又はＸａ因子プロテアーゼ開裂部位を含むように設計されている。
【００９６】
昆虫系では、オウトグラファ・カリフォルニカ核多角体病ウイルス（AcNPV）を外来遺
伝子発現ベクターとして使用することができる。該ウイルスは、スポドプテラ・フルギペルダ（Spodoptera frugiperda）細胞内で増殖する。配列をコードするペプチドをウイル
スの非必須領域（例えば、ポリヘドリン遺伝子）に個別にクローニングし、ＡｃＮＰＶプロモーター（例えば、ポリヘドリンプロモーター）の制御下に配置され得る。
【００９７】
哺乳動物宿主細胞において多数のウイルス発現系を使用することができる。発現ベクターとして、アデノウイルスが使用される場合、目的の配列をコードするペプチドは、アデノウイルス転写／翻訳調節複合体、例えば、後期プロモーター及び三分節リーダー配列と連結することができる。次いで当該キメラ遺伝子は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ又はｉｎ  ｖｉｖｏ組み換えによりアデノウイルスゲノムに挿入される。ウイルスゲノムの非必須領域（例えば、Ｅｌ又はＥ３領域）への挿入により、感染宿主中で生存可能でペプチドを発現可能な組換えウイルスを得ることができる（例えば、Logan & Shenk, 1984, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:355-359参照）。挿入されたペプチドコーディング配列の効率のよい翻訳には、特定の開始シグナルも必要であるだろう。当該シグナルは、ＡＴＧ開始コドン及び隣接配列を含む。さらに、全挿入物を確実に翻訳するために、開始コドンは所望のコード配列の読み枠と同調していなければならない。当該外来性翻訳シグナル及び開始コドンは、様々な起源のものであってよく、天然でも合成でもよい。発現効率は、適切な転写エンハンサーエレメント、転写ターミネーター等を含めることにより増強することができる（例えば、Bittner et al., 1987, Methods in Enzymol. 153:51-544参照）。
【００９８】
加えて、挿入配列の発現を調節し、あるいは望ましい特定の様式で遺伝子産物を修飾及びプロセシングする宿主細胞株を選択することができる。タンパク質産物の当該修飾（例えば、糖化）及びプロセッシング（例えば、開裂）は、ペプチドの機能に関し重要であるだろう。異なる宿主細胞が、タンパク質と遺伝子産物の翻訳後プロセッシング及び修飾のために特徴的かつ特異的なメカニズムを有する。発現される外来タンパク質の正しい修飾及びプロセッシングを確実にするために、適切な細胞系又は宿主系を選択することができる。この目的を達成するために、１次転写産物の正確なプロセッシング、遺伝子産物の糖化及びリン酸化のための細胞機構を保有する真核宿主細胞を使用することができる。当該哺乳動物宿主細胞は、ＣＨＯ、ＶＥＲＹ、ＢＨＫ、Ｈｅｌａ、ＣＯＳ、Ｖｅｒｏ、ＭＤＣＫ、２９３、３Ｔ３、Ｗ１３８、ＢＴ４８３、Ｈｓ５７８Ｔ、ＨＴＢ２、ＢＴ２Ｏ及びＴ４７Ｄ、ＮＳ０（内在的にいかなる免疫グロブリン鎖も産生しないマウス骨髄腫細胞株）、ＣＲＬ７Ｏ３Ｏ及びＨｓＳ７８Ｂｓｔ細胞が挙げられるが、これらに限定されない。
【００９９】
組換えペプチドの長期間高収量で作製するためには、安定的な発現が好ましい。例えば
、安定にペプチド分子を発現する細胞系を操作することができる。宿主細胞は、ウイルス複製起点を含む発現ベクターを用いるよりもむしろ、適切な発現調節エレメント（例えば、プロモーター、エンハンサー、配列、転写ターミネーター、ポリアデニル化部位等）により制御されるＤＮＡ及び選択マーカーを用いてトランスフォームすることができる。外来ＤＮＡの導入に続いて、遺伝子操作した細胞を富化培地中で１〜２日間増殖させてよく、次いで選択培地に切り換える。組み換えプラスミドの選択マーカーは、選択に対する耐性を付与し、細胞の染色体にプラスミドを安定的に組み込ませ、それを増殖させて増殖巣を形成することを可能にし、それを後にクローンニングし、細胞系へと拡大することができる。当該方法は、ペプチドを発現する細胞系を操作するために有利に使用することができる。このように操作された細胞系は、直接的又は間接的にペプチドと相互作用する組成物のスクリーニング及び評価に特に有用であり得る。一般的に知られている組み換えＤＮＡ技術の方法を、所望の組み換えクローンの選択に通常適用することができ、当該方法は、例えば、Ausubel et al. (eds.), Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, NY (1993); Kriegler, Gene Transfer and Expression, A Laboratory Manual, Stockton Press, NY (1990); and in Chapters 12 and 13, Dracopoli et al. (eds.), Current Protocols in Human Genetics, John Wiley & Sons, NY (1994); Colberre-Garapin et al., 1981, J. Mol. Biol. 150:1に記載されており、これらは、参照によりその全体が本明細書に援用される。
【０１００】
ペプチドの発現レベルは、ベクター増幅により増加させることができる（総説については、Bebbington and Hentschel、「DNAクローニングにおいて、哺乳動物細胞中でクロー
ン化遺伝子を発現させるための、遺伝子増幅に基づくベクターの使用」、Vol.3(Academic
Press, New York, 1987)）。ペプチド発現ベクター系中でマーカーが増幅可能な場合、
宿主細胞の培養液中に存在するインヒビターレベルの上昇はマーカー遺伝子のコピー数を増加させる。該増幅される領域は、該ペプチドと関連するため、ペプチド生産も増加する（Crouse et al., 1983, Mol. Cell. Biol. 3:257参照）。
【０１０１】
宿主細胞を用いるペプチドの組み換え発現の代替としては、例えば、Ｔ７プロモーター制御配列及びＴ７ポリメラーゼを用いて、ペプチドをコードする核酸を含む発現ベクターをｉｎ  ｖｉｔｒｏで転写及び翻訳することができる。特定の実施形態では、Ｐｒｏｍｅｇａ  ＴＮＴ（登録商標）又は転写及び翻訳に必要な構成成分を含む細胞溶解物若しくは細胞抽出等の結合された転写／翻訳系をペプチド生産に使用することができる。
【０１０２】
したがって、本明細書ではペプチドを作製するための方法が提供される。１実施形態では、該方法はペプチドを作製するのに適した培地中で、ペプチドをコードする核酸を含む宿主細胞の培養を含む。いくつかの実施形態では、該方法は、培地又は宿主細胞からペプチドを単離することもさらに含む。
【０１０３】
特定の実施形態では、本明細書に記載されるペプチドを発現するために植物（例えば、Nicotiana属の植物）を操作することができる。特定の実施形態では、公知の方法を使用
してアグロ浸透（agroinfiltration）法を介して本明細書に記載されるペプチドを発現するために植物を操作することができる。例えば、目的の遺伝子をコードする核酸、例えば、本明細書に記載されるペプチドをコードする遺伝子をアグロバクテリウム（Agrobacterium）の株に導入し、続いて該株を液体培地中で栽培し、その結果生じる細菌を洗浄して
緩衝液中に懸濁する。それから、植物細胞の一部に目的の遺伝子をトランスフォームするようなアグロバクテリウム（Agrobacterium）に、本明細書に記載されるペプチドをコー
ドする核酸を含むアグロバクテリウム（Agrobacterium）に植物をさらす（例えば、注射
又は水浸を介して）。それから植物は一過的にペプチドを発現し、当該技術分野で知られている方法及び本明細書に記載される方法でペプチドを単離することができる（具体例として、Shoji et al., 2008, Vaccine, 26(23):2930-2934; and D’Aoust et al., 2008, 
J. Plant Biotechnology, 6(9):930-940参照）。特定の実施形態では、植物はtobacco植
物（つまり、Nicotiana tabacum）である。他の特定の実施形態では、植物は、tobacco植物類（例えば、Nicotiana benthamiana）である。
【０１０４】
他の実施形態では、本明細書に記載されるペプチドを発現するために藻（例えば、クラミドモナス・レインハーディ（Chlamydomonas reinhardtii））を操作することができる
（例えば、Rasala et al., 2010, Plant Biotechnology Journal (Published online March 7, 2010）参照）。
【０１０５】
６．５．１．３  ペプチドの精製
本明細書に記載されるペプチド及び本明細書で記載される方法を使用して作製されるペプチドは、ペプチドの精製のために当該分野で知られた任意の方法、例えば、クロマトグラフィー（例えば、イオン交換、アフィニティー、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａ後の特定の抗原に対するアフィニティーによる、及びサイジングカラムクロマトグラフィー）、遠心分離、異なる溶解度、又は任意の他のタンパク質精製の標準的手法で精製することができる。さらに、本明細書に記載される、あるいは、他の当該分野で知られている異種ペプチドに、ペプチドを融合して精製を促進してもよい。特定のペプチドを精製するために使用される実際の条件は、一つには、合成戦略（例えば、合成作製対組み換え作製）、ペプチドの正味荷電、疎水性及び／又は親水性にもよるが、当業者には明らかである。
【０１０６】
６．６  医薬組成物及び投与経路
本明細書では、医薬組成物も提供される。いくつかの実施形態では，本明細書で提供される組成物は、インターロイキン１３受容体α２ペプチド脳がんワクチンを含む。他の実施形態では、本明細書で提供される組成物は、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン並びにヘルパーＴ細胞エピトープ、アジュバント、及び／又は免疫応答調整物質を含む。他の実施形態では、本明細書で提供される組成物は、免疫応答調整物質を含む。本明細書で提供される医薬組成物は獣医及び／又はヒト投与に適している。
【０１０７】
本明細書で提供される医薬組成物（例えば、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンを含む組成物、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン並びにヘルパーＴ細胞エピトープ、アジュバント及び／若しくは免疫応答調整物質を含む組成物、又は免疫応答調整物質を含む組成物）は、対象に投与される任意の形態であり得、該対象は、好ましくは動物であり、ヒトに限定されないが、哺乳動物又はウシ、ウマ、ヒツジ、ブタ、家禽、ネコ、イヌ、マウス、ラット、ウサギ、モルモット等の非ヒト動物を含み、より好ましくは哺乳動物であり、最も好ましくはヒトである。
【０１０８】
特定の実施形態では、本明細書で提供される組成物は（例えば、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンを含む組成物、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン並びにヘルパーＴ細胞エピトープ、アジュバント、及び／若しくは免疫応答調整物質を含む組成物、又は免疫応答調整物質を含む組成物）、液体の形態である（例えば、エリキシル剤、シロップ剤、液剤、乳剤、又は懸濁液）。本明細書で提供される液体組成物の典型的な投与経路は、非経口、皮内、腫瘍内、脳内及び髄腔内を挙げることができるが、これらに限定されない。非経口投与は、皮下、節内、静脈内、筋肉内、腹腔内及び胸腔内投与技術が挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、組成物は非経口的に投与される。注射による投与の組成物は、１以上の界面活性剤、防腐剤、湿潤剤、分散剤、懸濁剤、緩衝剤、安定化剤及び等張剤を含むことができる。特定の実施形態では、ワクチンを送達するためにポンプを使用することができる（例えば、Sefton, CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 1987, 14, 201; Buchwald et al., Surgery 1980, 88: 507; Saudek et al., N. Engl. J. Med. 1989, 321: 574参照）。特定の実施形態では、該ポンプはインスリン様ポンプであるが、
これに限定されない。
【０１０９】
本明細書で提供される医薬組成物（例えば、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンを含む組成物、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン並びにヘルパーＴ細胞エピトープ、アジュバント、及び／若しくは免疫応答調整物質を含む組成物、又は免疫応答調整物質を含む組成物）を調製するのに使用される物質は、使用される量内で無毒であり得る。当業者には、医薬組成物中の有効成分の最適用量は、様々な因子によることが明らかである。関連要因は、対象のタイプ（例えば、ヒト）、対象の全体的な健康状態、治療を必要とする対象の脳がんのタイプ、多剤レジメンの一部としての組成物の使用、投与されるワクチンの具体的な形態、投与方法、利用される組成物が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１１０】
本発明の液体組成物は、溶液、懸濁液又は他の形態であるかによるが、以下の１以上：注射用水等の滅菌希釈液、食塩水、好ましくは生理食塩水、リンガー液、等張食塩水、溶媒又は懸濁媒体として使用することができる合成モノ又はジクリセリド等の固定油、ポリエチレングリコール、グリセリン、シクロデキストリン、プロピレングリコール又は他の溶媒；ベンジルアルコール又はメチルパラベン等の抗菌剤；アスコルビン酸又は亜硫酸水素ナトリウム等の抗酸化剤；エチレンジアミン四酢酸等のキレート剤；酢酸塩、クエン酸塩又はリン酸塩等の緩衝液；及び塩化ナトリウム又はデキストロース等の等張を調節するための試薬も含むことができる。非経口組成物は、アンプル、使い捨て注射器、又はガラス、プラスチック製若しくは他の素材の複数回投与用バイアルに封入することができる。注射用組成物は、好ましくは滅菌される。
【０１１１】
本明細書で提供される組成物（例えば、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンを含む組成物、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン並びにヘルパーＴ細胞エピトープ、アジュバント、及び／若しくは免疫応答調整物質を含む組成物、又は免疫応答調整物質を含む組成物）は、薬学的に許容可能な担体又はビヒクルを含むことができる。本明細書において、「薬学的に許容可能な」とは、動物での使用、より具体的にはヒトでの使用が連邦若しくは州政府の規制機関に認可されている、あるいは、米国薬局方（Pharmacopeia）若しくは他の一般的な薬局方（Pharmacopeia）に記載されていることを意味する。「担体」という用語は、医薬組成物が投与される希釈液、アジュバント、賦形剤、又はビヒクルを意味する。食塩水、水性デキストロース及びグリセロール溶液は、特に、注射剤のために、液体担体として利用することができる。適した賦形剤は、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、米、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、タルク、塩化ナトリウム、乾燥スキムミルク、グリセロール、プロピレングリコール、水、エタノール等を含む。適した薬学的担体の例は、「Remington’s Pharmaceutical Sciences」 by E.W. Martinに記載されている。投与様
式に製剤を適合すべきである。
【０１１２】
１実施形態では、本明細書で提供される組成物（例えば、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンを含む組成物、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン並びにヘルパーＴ細胞エピトープ、アジュバント、及び／若しくは免疫応答調整物質を含む組成物、又は免疫応答調整物質を含む組成物）は、動物、特にヒトへの非経口投与に適合した薬学的組成物として、所定の方法に従って調製することができる。概して、該組成物中の成分は、例えば、活性剤の量を示すアンプル又は小袋等など密閉された容器内で、凍結乾燥粉末又は水を含まない濃縮物として単位用量形態でそれぞれ個別に又は混合して供給される。本明細書に記載される組成物を注射により投与する場合、必要に応じて、投与前に成分を混合することができるように注射用滅菌水のアンプル又は生理食塩水を提供することができる。
【０１１３】
本明細書で提供される組成物（例えば、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンを含む組成物、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン並びにヘルパーＴ細胞エピトープ、アジュバント、及び／若しくは免疫応答調整物質を含む組成物、又は免疫応答調整物質を含む組成物）
は、追加の予防薬、追加の治療剤、制吐剤、造血コロニー刺激因子、アジュバント治療、抗体／抗体フラグメント剤、抗うつ剤及び鎮痛剤、から選択される追加の活性薬剤が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１１４】
本明細書で提供される医薬組成物（例えば、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンを含む組成物、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン並びにヘルパーＴ細胞エピトープ、アジュバント、及び／若しくは免疫応答調整物質を含む組成物、又は免疫応答調整物質を含む組成物）は、医薬分野で周知の方法を使用して調製することができる。例えば、注射で投与されることを意図している組成物は、水溶液を形成するように、水及び／又は他の液体成分と本明細書に記載されるワクチンのペプチドを組み合わせて調製することができる。同種の溶液又は懸濁液の形成を促進するために界面活性剤を追加することができる。
【０１１５】
投与のための説明書と共に、容器、パック又はディスペンサー中に、本明細書に記載される医薬組成物を含むことができる。
【０１１６】
６．７  予防的及び治療的使用
１態様として、本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンを有効量投与することにより、それを必要とする対象での脳がんを予防、治療、及び／又は管理するための方法を本明細書は提供する。
【０１１７】
他の態様として、患者（例えば、ヒト患者）の脳がんを予防、治療、及び／又は管理する方法であって、予防上有効なレジメン又は治療上有効なレジメンを患者に投与することを含み、脳がんと診断された患者に、本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン又は本明細書に記載される医薬組成物を投与することを含む方法を本明細書は提供する。
【０１１８】
他の態様として、患者（例えば、ヒト患者）の脳がんを予防、治療、及び／又は管理する方法であって、予防上有効なレジメン又は治療上有効なレジメンを患者に投与することを含み、脳がんを再発した患者に、本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン又は本明細書に記載される医薬組成物を投与することを含む方法を本明細書は提供する。
【０１１９】
他の態様として、患者（例えば、ヒト患者）の脳がんを予防、治療、及び／又は管理する方法であって、予防上有効なレジメン又は治療上有効なレジメンを患者に投与することを含み、本明細書に記載されるワクチンを含まない脳がん治療で失敗した又は失敗しつつある患者に、本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン又は本明細書に記載される医薬組成物を投与することを含む方法を本明細書は提供する。
【０１２０】
他の態様として、患者（例えば、ヒト患者）の脳がんを予防、治療、及び／又は管理する方法であって、予防上有効なレジメン又は治療上有効なレジメンを患者に投与することを含み、脳がん寛解患者に、本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン又は本明細書に記載される医薬組成物を投与することを含む方法を本明細書は提供する。
【０１２１】
他の態様として、患者（例えば、ヒト患者）の脳がんを予防、治療、及び／又は管理する方法であって、予防上有効なレジメン又は治療上有効なレジメンを患者に投与することを含み、本明細書に記載されるワクチンを含まない脳がん治療のために難治性である患者に、本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン又は本明細書に記載される医薬組成物を投与することを含む方法を本明細書は提供する。この態様の１実施形態では、患者は、本明細書に記載されるワクチンを含まない脳がん治療を受けてきた又は受けている。この態様の他の実施形態では、患者は、脳がんの予防、治療、及び／又は管理のた
めに、本明細書に記載されるワクチンを含まない脳がん治療を以前に受けたことがない。
【０１２２】
他の態様として、本明細書は、他の脳がん治療を受けてきた患者に、本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン又は本明細書に記載される医薬組成物を投与することを含む予防上有効なレジメン又は治療上有効なレジメンを患者に投与することを含む方法である、患者（例えば、ヒト患者）の脳がんを予防、治療、及び／又は管理する方法を本明細書は提供する。いくつかの実施形態では、以前の脳がん治療は、例えば、化学療法、放射線療法、外科療法、小分子療法、生物学的療法、抗体療法、ホルモン療法、免疫療法、抗血管新生療法又はそれらの任意の組み合わせである。いくつかの実施形態では、該患者の以前の脳がん治療は失敗している。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンの投与を含む治療上有効なレジメンは、以前の治療を受けた直後に、患者に投与される。例えば、特定の実施形態では、患者がＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンを投与される前に、以前の治療の結果は知られていないだろう。１実施形態では、以前の化学療法はテモゾロミド（temolozimide）である。実施形態では、以前の療法は放射線療法である。他の実施形態では、以前の療法はテモゾロミド及び放射線療法の組み合わせである。好ましい実施形態では、たテモゾロミド及び放射線療法の組み合わせは、Ｓｔｕｐｐレジメンを用いて投与される。他の実施形態では、以前の療法は外科療法である。いくつかの実施形態では、患者は併用療法の開始前に外科療法を受ける。いくつかの実施形態では、患者はテモゾロミドの前に外科療法を受ける。いくつかの実施形態では、患者は放射線療法の開始前に外科療法を受ける。本明細書に記載されるこれらの実施形態のそれぞれで、併用療法は、組み合わされる治療と共に、患者の治療、前、中、後にＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンを投与することができる。
【０１２３】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは、脳がんの予防、治療及び／又は管理のために、単剤療法として投与され得る。他の実施形態では、本明細書で提供される方法は、それらが必要な対象に本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン及び１以上の、脳がん又は１以上のその症状の予防、治療及び／又は管理あるいは現在使用されている、使用されてきた、有用であることが知られている、又は有用であるかもしれない本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン以外の他の剤を投与する方法を含む。特定の実施形態では、併用療法は、本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンと共に機能して、相加的又は相乗的効果を有する、本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンの予防又は治療効果を改善する。いくつかの実施形態では、併用療法は、本明細書に記載される組成物の投与、前、間、後に投与することができる。
【０１２４】
他の実施形態では、本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンの有効量を投与することを含む、脳がんの対象の免疫応答誘導のための方法を提供する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン又は本明細書に記載される組成物による該免疫応答は、対象の脳がんの予防、治療及び／又は管理に有効である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン又は本明細書に記載される組成物により対象で誘導される免疫応答は、対象の脳がん症状を軽減するために有効である。
【０１２５】
医師は、任意の従来の脳がんスクリーニング手法；神経学的検査、画像検査法（例えば、コンピューター断層撮影（ＣＴ）、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）、超音波、Ｘ線撮像、陽電子放射断層撮影（ＰＥＴ）スキャン）、及び生検（例えば、定位的生検（sterotactic biopsy））を用いて患者を診断することができるがこれらに限定されない。
【０１２６】
６．７．１  投与量及び投与頻度
脳がんの治療、予防及び／又は管理に有効な本明細書に記載される組成物（例えば、Ｉ
Ｌ−１３Ｒα２ペプチドワクチンを含む組成物、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン並びにヘルパーＴ細胞エピトープ、アジュバント、及び／若しくは免疫応答調整物質含む組成物又は免疫応答調整物質含む組成物）の量は、脳がんの状態、組成物が投与される患者、投与経路及び／又は脳がんのタイプによる。当該量は、標準的な臨床技術により決定され、医師の判断に従って決定され得る。
【０１２７】
例えば、有効量は投与手段、標的部位、患者の生理的状態（年齢、体重、健康を含む）、患者がヒト、動物であるか、他の薬物が投与されている、該治療が予防又は治療上であるか、により変わり得る。通常、患者はヒトであるが、トランスジェニック哺乳動物を含む非ヒト哺乳動物も治療することができる。治療用量は、最適な安全性と有効性を最適化するために用量設定される。
【０１２８】
特定の実施形態では、最適な用量範囲を同定するのを助けるために、ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイが採用される。有効量は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ又は動物モデル試験系から得られる用量反応曲線から推定され得る。
【０１２９】
特定の実施形態では、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは無細胞ワクチンであり、無細胞ワクチンは、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチド及び１、２、３、以上の追加の脳がん関連ペプチドを含む。いくつかの実施形態では、例となる無細胞ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは、用量当たり約２５、５０、７５、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、４７５、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０又は８００μｇの各々脳がん関連ペプチドを含む。他の実施形態では、例となる無細胞ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは、用量当たり約２５−５０、２５−７５、２５−１００、５０−１００、５０−１５０、５０−２００、１００−１５０、１００−２００、１００−２５０、１００−３００、１５０−２００、１５０−２５０、１５０−３００、２００−２５０、２５０−３００、２５０−３５０、２５０−４００、３００−３５０、３００−４００、３００−４５０、３００−５００、３５０−４００、３５０−４５０、４００−５００、４００−６００、５００−６００、５００−７００、６００−７００、６００−８００又は７００−８００μｇの各々脳がん関連ペプチドを含む。他の実施形態では、例となる無細胞ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは、患者キログラムあたり、約５μｇ−１００ｍｇ、１５μｇ−５０ｍｇ、１５μｇ−２５ｍｇ、１５μｇ−１０ｍｇ、１５μｇ−５ｍｇ、１５μｇ−１ｍｇ、５μｇ−１００μｇ、１５μｇ−７５μｇ、５μｇ−５０μｇ、１０μｇ−５０μｇ、１５μｇ−４５μｇ、２０μｇ−４０μｇ又は２５−３５μｇの各々脳がん関連ペプチドを含む。
【０１３０】
特定の実施形態では、無細胞ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは、ヘルパーＴ細胞エピトープとともに投与される。いくつかの実施形態では、例となる無細胞ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは、約２５、５０、７５、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、４７５、５００、５５０、又は６００μｇのヘルパーＴ細胞エピトープとともに投与される。他の実施形態では、例となる無細胞ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは、約２５−５０、２５−７５、２５−１００、５０−１００、５０−１５０、５０−２００、１００−１５０、１００−２００、１００−２５０、１００−３００、１５０−２００、１５０−２５０、１５０−３００、２００−２５０、２５０−３００、２５０−３５０、２５０−４００、３００−３５０、３００−４００、３００−４５０、３００−５００、３５０−４００、３５０−４５０、４００−５００、４００−６００又は５００−６００μｇのヘルパーＴ細胞エピトープとともに投与される。
【０１３１】
特定の実施形態では、無細胞ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは、免疫応答調整物質
とともに投与される。いくつかの実施形態では、例となる無細胞ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは、約１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、１１００、１２００、１３００、１４００、１５００、１６００、１７００又は１８００μｇの免疫応答調整物質とともに投与される。他の実施形態では、例となる無細胞ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは、約１００−３００、２００−４００、４００−８００、６００−８００、８００−１０００、８００−１２００、１０００−１２００、１０００−１４００、１２００−１４００、１２００−１６００、１４００−１６００、１４００−１８００又は１６００−１８００μｇの免疫応答調整物質とともに投与される。他の実施形態では、例となる無細胞ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは、患者キログラムあたり約１、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５又は６０μｇの免疫応答調整物質とともに投与される。他の実施形態では、例となる無細胞ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは、患者キログラムあたり、約１−５、１−１０、５−１０、５−１５、１０−１５、１０−２０、１５−２０、１５−２５、１５−３０，２０−２５、２０−３０、２０−３５、２５−３０、２５−３５、２５−４０、３０−３５、３０−４０、３５−４０、３５−４５、４０−４５、４０−５０、４５−５０、５０−５５又は５０−６０μｇの免疫応答調整物質とともに投与される。
【０１３２】
特定の実施形態では、無細胞ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンはアジュバントとともに投与される。いくつかの実施形態では、無細胞ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンを含む組成物は、０．５対１、１対０．５、１対１、１対２、１対３、２対１又は３対１アジュバントと共に混合される。
【０１３３】
特定の実施形態では、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは樹状細胞ワクチンであって、該樹状細胞ワクチンは、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドを負荷した樹状細胞及び１、２、３又はそれ以上の追加の脳がん関連ペプチドで負荷した樹状細胞を含む。いくつかの実施形態では，例となる樹状細胞ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは、投与量あたり脳がん関連ペプチドで負荷した樹状細胞の、約１０３、５ｘ１０３、１０４、５ｘ１０４、１０５、５ｘ１０５、１０６、５ｘ１０６、１０７、３ｘ１０７、５ｘ１０７、７ｘ１０７、１０８、５ｘ１０８、１ｘ１０９、５ｘ１０９、１ｘ１０１０、５ｘ１０１０、１ｘ１０１１、５ｘ１０１１又は１０１２を含む。他の実施形態では、例となる樹状細胞ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは、投与量あたり脳がん関連ペプチドで負荷した樹状細胞の、約１０３−１０４、１０３−１０５、１０４−１０５、１０４−１０６、１０５−１０６、１０５−１０７、１０６−１０７、１０６−１０８、１０７−１０８、１０７−１０９、１０８−１０９、１０９−１０１０、１０１０−１０１１又は１０１１−１０１２を含む。
【０１３４】
特定の実施形態では、樹状細胞ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは、ヘルパーＴ細胞エピトープとともに投与される。いくつかの実施形態では、例となる樹状細胞ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは、約２５、５０、７５、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、４７５、５００、５５０又は６００μｇのヘルパーＴ細胞エピトープとともに投与される。他の実施形態では、例となる樹状細胞ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは、約２５−５０、２５−７５、２５−１００、５０−１００、５０−１５０、５０−２００、１００−１５０、１００−２００、１００−２５０、１００−３００、１５０−２００、１５０−２５０、１５０−３００、２００−２５０、２５０−３００、２５０−３５０、２５０−４００、３００−３５０、３００−４００、３００−４５０、３００−５００、３５０−４００、３５０−４５０、４００−５００、４００−６００又は５００−６００μｇのヘルパーＴ細胞エピトープとともに投与される。
【０１３５】
特定の実施形態では、樹状細胞ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは、免疫応答調整物
質とともに投与される。いくつかの実施形態では、例となる樹状細胞ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは、約１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、１１００、１２００、１３００、１４００、１５００、１６００、１７００又は１８００μｇの免疫応答調整物質とともに投与される。他の実施形態では、例となる樹状細胞ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは、約１００−３００、２００−４００、４００−８００、６００−８００、８００−１０００、８００−１２００、１０００−１２００、１０００−１４００、１２００−１４００、１２００−１６００、１４００−１６００、１４００−１８００又は１６００−１８００μｇの免疫応答調整物質とともに投与される。他の実施形態では、例となる樹状細胞ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは、患者キログラムあたり、約１、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５又は６０μｇの免疫応答調整物質とともに投与される。他の実施形態では、例となる樹状細胞ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは、患者キログラムあたり、約１−５、１−１０、５−１０、５−１５、１０−１５、１０−２０、１５−２０、１５−２５、１５−３０、２０−２５、２０−３０、２０−３５、２５−３０、２５−３５、２５−４０、３０−３５、３０−４０、３５−４０、３５−４５、４０−４５、４０−５０、４５−５０、５０−５５又は５０−６０μｇの免疫応答調整物質とともに投与される。
【０１３６】
特定の実施形態では、樹状細胞ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンはアジュバントとともに投与される。いくつかの実施形態では、樹状細胞ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンを含む組成物は、０．５対１、１対０．５、１対１、１対２、１対３、２対１又は３対１で、アジュバントと共に混合される。
【０１３７】
特定の実施形態では、本明細書に記載される組成物（例えば、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンを含む組成物、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン及びヘルパーＴ細胞エピトープ、アジュバント、及び／若しくは免疫応答調整物質を含む組成物、又は免疫応答調整物質を含む組成物）は、単回投与として一度対象に投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される組成物（例えば、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンを含む組成物、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン及びヘルパーＴ細胞エピトープ、アジュバント、及び／又は免疫応答調整物質を含む組成物、又は免疫応答調整物質を含む組成物）は、複数回投与され（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０又は１０回以上）、用量は、少なくとも１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１５日又は３０日に分けられ得る。特定の実施形態ではＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは、節内に（intranodally）又は皮下に投与され、免疫応答調整物質筋肉内投与される。
【０１３８】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される組成物が無細胞ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンを含む場合、０、３、６、９、１２、１５、１８及び２１週に投与し、２１週間にわたって該組成物を投与することができる。特定の実施形態では、無細胞ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンを含む組成物は、ヘルパーＴ細胞エピトープ、アジュバント、及び／又は免疫応答調整物質とともに投与される。特定の実施形態では、無細胞ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンを含む本明細書に記載される組成物を、０、３、６、９、１２、１５、１８及び２１週に投与し、２１週間にわたって該組成物を投与することができ、該組成物は、免疫応答調整物質とともに投与され、該免疫応答調整物質は、無細胞ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン各投与日に投与され、無細胞ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンの各投与後４日目に投与される。他の特定の実施形態では、無細胞ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンを含む本明細書に記載される組成物は、０、３、６、９、１２、１５、１８及び２１週に投与し、２１週間にわたって該組成物を投与することができる。そして、該組成物は、免疫応答調整物質とともに投与され、該免疫応答調整物質は、無細胞ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン各投与日に投与される。特定の実施形態では、無細胞ＩＬ
−１３Ｒα２ペプチドワクチンは、皮下投与され、免疫応答調整物質は、筋肉内投与される。
【０１３９】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される組成物が樹状細胞ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンを含む場合、該組成物は、０、２、４及び６週に投与し、６週間にわたって該組成物を投与することができる。特定の実施形態では、無細胞ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンを含む組成物は、ヘルパーＴ細胞エピトープ、アジュバント及び／又は免疫応答調整物質とともに投与される。特定の実施形態では、樹状細胞ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンを含む本明細書に記載される組成物は、０、２、４及び６週に投与し、６週間にわたって該組成物を投与することができ、該組成物は、免疫応答調整物質とともに投与され、該免疫応答調整物質投与は、樹状細胞ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンの投与の初日に開始され、１週間に２回投与される。特定の実施形態では、樹状細胞ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは、節内に（intranodally）投与され、免疫応答調整物質は、筋肉内投与される。
【０１４０】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される組成物が、樹状細胞ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンを含む場合、０、２、４、６、１０、１４、１８、２２及び２６週に投与し、２６週間にわたって該組成物を投与することができる。特定の実施形態では、無細胞ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンを含む組成物は、ヘルパーＴ細胞エピトープ、アジュバント及び／又は免疫応答調整物質とともに投与される。特定の実施形態では、樹状細胞ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンを含む本明細書に記載される組成物は、０、２、４、６、１０、１４、１８、２２及び２６週に投与し、２６週間にわたって該組成物を投与することができ、該組成物は免疫応答調整物質とともに投与され、該免疫応答調整物質投与は、樹状細胞ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン投与の初日から開始され、１週間に２回投与される。特定の実施形態では、樹状細胞ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは節内に（intranodally）投与され、免疫応答調整物質は、筋肉内投与される。
【０１４１】
６．７．２  脳がん
本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは、脳がんの予防、治療及び／又は管理に使用され得る。任意のタイプの脳がんが、本明細書に記載される方法に従って、本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンで処理され得る。例となる脳がんは、グリオーマ（（例えば、毛様細胞性星状細胞腫、びまん性星状細胞腫及び未分化星状細胞腫）を含む星状細胞腫、膠芽細胞腫、乏突起膠腫、脳幹グリオーマ、非脳幹グリオーマ、上衣腫、及び１つのグリア細胞タイプ以上を含む混合腫瘍）、聴神経鞘腫、頭蓋咽頭腫（cranialpharyngioma）、髄膜腫、髄芽腫、原発性中枢神経系腫瘍、松果体（例えば、松果体星状細胞腫及び松果体実質腫瘍）及び下垂体の腫瘍が挙げられる。グリオーマにはさらに、再発悪性グリオーマ、高リスクＷＨＯグレードＩＩ星状細胞腫、乏突起星状細胞腫、再発ＷＨＯグレードＩＩグリオーマ、新たに診断された悪性又は内在性脳幹グリオーマ、不完全に切除された非脳幹グリオーマ及び再発性切除不能低悪性度のグリオーマが挙げられるが、これらに限定されない。本明細書に記載される方法に従って、本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンで処置され得る脳がんの追加のタイプは、成人低悪性度浸潤性テント上星状細胞腫／乏突起膠腫、成人低悪性度浸潤性テント上星状細胞腫、成人低悪性度浸潤性テント上乏突起膠腫、成人低悪性度浸潤性テント上星状細胞腫／乏突起膠腫（毛様細胞性星状細胞腫を除く）、成人低悪性度浸潤性テント上星状細胞腫（毛様細胞性星状細胞腫を除く）、成人低悪性度浸潤性テント上乏突起膠腫（毛様細胞性星状細胞腫を除く）、成人頭蓋内上衣腫、成人頭蓋内上衣腫（上衣下腫及び粘液乳頭状を除く）、成人頭蓋内未分化上衣腫、未分化グリオーマ、未分化膠芽細胞腫、毛様細胞性星状細胞腫、上衣下腫、粘液乳頭状、１〜３の限られた転移性病変（実質内）、３以上の転移性病変（実質内）、軟膜転移（腫瘍性髄膜炎）、原発性中枢神経系、転移性脊椎腫瘍又は髄膜腫が挙げられる。
【０１４２】
１実施形態では、本明細書に記載される方法に従って、本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンで処理される脳がんは、グリオーマである。特定の実施形態では、本明細書に記載される方法に従って、本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンで処理される脳がんは、再発悪性グリオーマである。他の特定の実施形態では、本明細書に記載される方法に従って、本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンで処理される脳がんは、再発ＷＨＯグレードＩＩグリオーマである。他の特定の実施形態では、本明細書に記載される方法に従って、本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンで処理される脳がんは、新たに診断された悪性又は浸潤脳幹グリオーマである。他の特定の実施形態では、本明細書に記載される方法に従って、本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンで処理される脳がんは、不完全に切除された非脳幹グリオーマである。他の特定の実施形態では、本明細書に記載される方法に従って、本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンで処理される脳がんは、再発性切除不能低悪性度グリオーマである。１実施形態では、患者は再発悪性グリオーマ、再発性膠芽細胞腫、未分化星状細胞腫、未分化乏突起膠腫又は混合乏突起星状細胞腫の成人である。他の特定の実施形態では、患者は高リスク低悪性度グリオーマと新たに診断された成人である。他の特定の実施形態では、患者は高リスク低悪性度星状細胞腫と新たに診断された成人である。他の特定の実施形態では、患者は高リスク低悪性度乏突起星状細胞腫と新たに診断された成人である。他の特定の実施形態では、患者は、再発性高リスク低悪性度星状細胞腫の成人である。他の特定の実施形態では、患者は、再発性高リスク低悪性度乏突起星状細胞腫の成人である。他の特定の実施形態では、患者は、再発性高リスク低悪性度乏突起膠腫の成人である。他の特定の実施形態では、患者は、新たに悪性グリオーマと診断された子供である。他の特定の実施形態では、患者は内在性脳幹グリオーマの子供である。他の特定の実施形態では、患者は、非脳幹高悪性度グリオーマの切除が不完全な子供である。他の特定の実施形態では、患者は、再発性切除不能低悪性度グリオーマの子供である。他の特定の実施形態では、患者は、新たにびまん性内在性橋グリオーマと診断された子供である。他の特定の実施形態では、患者は、脳幹に関連しＲＴ又はＲＴの間に化学療法なしに処置された任意の高悪性度グリオーマの子供である。他の特定の実施形態では、患者は、ＲＴと化学療法で処置された非脳幹高悪性度グリオーマと新たに診断された子供である。他の特定の実施形態では、患者は、処置後に再発性非脳幹高悪性度グリオーマが再発した子供である。
【０１４３】
他の実施形態では、本明細書に記載されるに従って本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンで治療された脳がんは星状細胞腫である。特定の実施形態では、本明細書に記載されるに従って本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンで治療された脳がんは、高リスクＷＨＯグレードＩＩ星状細胞腫である。他の特定の実施形態では、本明細書に記載されるに従って本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンで治療された脳がんは、乏突起星状細胞腫（Oligo Astrocytoma）である。
【０１４４】
６．７．３  患者群
１実施形態では、本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン又は組成物は、天然の対象、すなわち、脳がんではない対象に投与することができる。１実施形態では、本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン又は組成物を脳がんの危機にさらされている対象に投与することができる。
【０１４５】
特定の実施形態では、本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン又は組成物を脳がんと診断された患者に投与することができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン又は組成物は、脳がんの症状を示す又は症状が悪化する前に患者に投与される。好ましい実施形態では、脳がんは、グリオーマである。
【０１４６】
特定の実施形態では、本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン又は組成物を、脳がんの治療、予防及び／又は管理の必要な患者に投与することができる。該対象は、以前にがんの治療がなされたかもしれないし、なされていないかもしれない。あるいは、該対象は、寛解、再発、又は治療が失敗したかもしれない。該患者は、異常な細胞遺伝学を有するかもしれない。本明細書に記載される１３Ｒα２ペプチドワクチン及び組成物は、任意の一連の脳がん治療、例えば、脳がん治療の第１、第２、第３ラインとして使用することができる。特定の実施形態では、本明細書に記載されるワクチン又は医薬組成物を受ける又は受けている対象は、他の脳がん治療を受けている又は受けたことがある。他の実施形態では、本明細書に記載されるワクチン又は医薬組成物を受ける又は受けている対象は、他の脳がん治療を受けたことがない又は受けていない。
【０１４７】
特定の実施形態では、対象は当業者に知られた方法で脳がんと診断されているが、当該方法は、神経学的検査、イメージング法（例えば、computed tomography（ＣＴ）、磁気
共鳴画像法（ＭＲＩ）、超音波、Ｘ線造影フレアー（fluid-attenuated inversion-recovery；ＦＬＡＩＲ）配列、Ｔ２強調画像及びポジトロン断層撮影（ＰＥＴ）スキャン）及
び生検（定位生検）が挙げられるが、これらに限定されない。治療に対する腫瘍応答は、マクドナルド（McDonald）基準又はラノ（Response assesment in neuro-oncology；ＲＡＮＯ）基準で評価され得る。腫瘍の大きさ又は治療に対する応答は、様々な磁気共鳴画像法；拡散強調画像、灌流強調画像、ダイナミック造影Ｔ１の透磁率画像、動的磁化率コントラスト、拡散テンソル画像、磁気共鳴分光法、解剖学的ＭＲＩ  Ｔ２強調画像、流体減衰反転回復（ＦＬＡＩＲ）Ｔ２強調画像、及びガドリニウム造影Ｔ１強化画像により評価され得る。これらの画像技術は、腫瘍細胞性、白質への浸潤、低酸素症及び壊死を含む代謝異常、血管新生、毛細血管血液量又は透磁率を評価することで使用することができる。１８Ｆ−フルオロミソニダゾール（18F-fluoromisonidazole）ＰＥＴ及び３’−デオキシ−３’−１８Ｆ−フルオロチミジン（3’-deoxy-3’-18F-fluorothymidine）ＰＥＴ等の
ポジトロン断層法（Positron emission tomograph;PET）技術も、腫瘍応答を画像化する
ために使用することができる。
【０１４８】
１実施形態では、脳がん腫瘍を治療するために、放射線療法を受けている又は受けたことがある対象に、本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン又は組成物を投与することができる。特定の実施形態では、脳がん腫瘍を治療するために、放射線療法と同時に又は後に、対象に本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン又は組成物を投与することができる。他の実施形態では、本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン又は組成物は、脳がん腫瘍を治療するために、放射線療法前の対象に、いくつかの実施形態では、放射線療法の間及び／又は後に、対象に投与することができる。いくつかの好ましい実施形態では、放射線療法は外部分割放射線照射療法（fractionated external beam radiotherapy）、限定視野外部分割放射線照射療法（limited-field fractionated external beam radiotherapy）、全脳放射線療法（whole brain radiotherapy）、定位的放射線療法（stereotactic radiosurgery）又は頭蓋脊髄放射線療法（craniospinal radiotherapy）である。
【０１４９】
１実施形態では、脳がん腫瘍を治療するために、化学療法を受けている又は受けたことがある対象に本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン又は組成物を投与する。特定の実施形態では、脳がん腫瘍を治療するために、化学療法と同時に又は続いて対象に本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン又は組成物を投与する。他の実施形態では、脳がん腫瘍を治療するために、化学療法前の対象に、いくつかの実施形態では、化学療法の間及び／又は後の対象に、本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン又は組成物を投与する。いくつかの好ましい実施形態では、化学療法は、テモゾロミド（Temodar（登録商標））、ニトロソウレア、白金系レジメン、エトポシ
ド、シスプラチン、ベバシズマブ（Avastin（登録商標））、イリノテカン、シクロホス
ファミド、ＢＣＮＵ（carmustine）、カペシタビン、高用量メトトレキサート（methotrexate）、トポテカン（topotecan）、高用量ARA−C、ヒドロキシカルバミド（hydroxyurea）、α−インターフェロン、ソマトスタチン類似体、intra-CSF化学療法(リポソームシタラビン；liposomal cytarabine、メトトレキサート；methotrexate、シタラビン；cytarabine、チオテパ；thiotepa又はリツキシマブ；rituximab（Rituxan（登録商標）））である。
【０１５０】
１実施形態では、１以上の脳がん腫瘍を治療するための化学療法、放射線療法又は手術含む治療戦略に失敗した、治療中である、又は治療したことがある、対象に本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン又は組成物を投与する。好ましい実施形態では、脳がんはグリオーマである。例えば、患者は、化学療法及び手術を共に、失敗した、受けているかもしれないし、受けたことがあるかもしれない。あるいは、患者は放射線及び手術を共に受けたことがあるかもしれないし、又は受けているかもしれない。さらに、患者は化学療法及び放射線を受けたことがあるかもしれないし、又は受けているかもしれない。いくつかの好ましい実施形態では、患者が失敗した、受けている、又は受けたことがある治療の組み合わせは、切除及びテモゾロミド（Temodar（登録商標））（１５０−
２００ｍｇ／ｍ２）５／２８スケジュール、切除及びBCNUウエハー（Gliadel（登録商標
））、ベバシズマブ（Avastin（登録商標））及び化学療法、ＰＣＶの組み合わせ（CCNU
（lomustine）並びにプロカルバジン及びビンクリスチン）、高用量メトトレキサート及
びビンクリスチン、プロカルバジン、シタリビル（cytaribine）又はリツキシマブ、幹細胞レスキュー（stem cell rescue）を伴う高用量化学療法又はリツキシマブ（Rituxan（
登録商標））及びテモゾロミド（Temodar（登録商標））である。
【０１５１】
１実施形態では、脳がん腫瘍を除去するために外科治療を受けている又は受けたことがある対象に、本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン又は組成物を投与する。特定の実施形態では、脳がん腫瘍を除去するための外科治療時に又は術後、対象に本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン又は組成物を投与する。他の実施形態では、脳がん腫瘍を除去するための外科治療前に、いくつかの実施形態では、手術中及び／又は術後、対象に本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン又は組成物を投与する。
【０１５２】
特定の実施形態では、他の治療、例えば、化学療法、放射線療法、ホルモン療法、手術、小分子療法、抗血管新生療法及び／又は、免疫療法を含む生物学的療法であって、治療があまりに毒性であると証明されているか、証明され得る、すなわち、対象に許容されない又は耐え難い副作用が生じる治療の代替として、対象に本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン又は組成物を投与する。
【０１５３】
特定の実施形態では、放射線療法を受けるかもしれない、受けている、又は受けたことのある対象に、本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン又は組成物を投与する。これらの対象は、化学療法、ホルモン療法、小分子療法、抗血管新生療法、及び／又は免疫療法を含む生物学的療法だけでなく、手術を受けたことがある患者である。
【０１５４】
他の実施形態では、ホルモン療法、及び／又は免疫療法を含む生物学的療法を受ける、受けている、受けたことがある対象に、本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン又は組成物を投与する。これらの対象は、化学療法、小分子療法、抗血管新生療法、及び／又は放射線療法だけでなく、手術を受けたことがある人である。
【０１５５】
特定の実施形態では、１以上の療法に難治性を示す対象に、本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン又は組成物を投与する。１実施形態では、療法に難治性を
示すがんは、少なくともがん細胞のある重大な部分が殺されないか、細胞分裂が止まらないことを意味する。がん細胞が難治性を示すか否かは、このような状況において、当分野で受け入れられている「難治性」の意味で、がん細胞の治療の有効性を分析するための任意の方法で、ｉｎ  ｖｉｖｏ又はｉｎ  ｖｉｔｒｏいずれにおいても決定することができる。様々な実施形態では、がん細胞の量が有意に減少していないか増加している場合、がんは難治性である。
【０１５６】
いくつかの実施形態では、脳がん寛解の対象に、本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン又は組成物を投与する。特定の実施形態では、対象は検出可能な脳がんがない、つまり、脳がんは本明細書に記載される従来の方法（例えば、ＭＲＩ）又は当業者に知られた方法を用いて検出することができない。
【０１５７】
１実施形態では、グリオーマと診断された対象に、本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン又は組成物を投与する。特定の実施形態では、星状細胞腫（例えば、毛様細胞性星状細胞腫、びまん性星状細胞腫、及び未分化星状細胞腫）と診断された対象に、本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン又は組成物を投与する。他の特定の実施形態では、膠芽細胞腫と診断された対象に本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン又は組成物を投与する。他の特定の実施形態では、乏突起膠腫と診断された対象に、本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン又は組成物を投与する。他の特定の実施形態では、脳幹グリオーマと診断された対象に本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン又は組成物を投与する。他の特定の実施形態では、上衣腫と診断された対象に、本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン又は組成物を投与する。他の特定の実施形態では、１以上のグリア細胞のタイプを含む混合腫瘍と診断された対象に、本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン又は組成物を投与する。
【０１５８】
特定の実施形態では、再発悪性グリオーマと診断された対象に、本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン又は組成物を投与する。他の特定の実施形態では、ＷＨＯグレードＩＩ星状細胞腫の高リスクがあると診断された対象に、本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン又は組成物を投与する。他の特定の実施形態では、乏突起星状細胞腫と診断された対象に、本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン又は組成物を投与する。他の特定の実施形態では、再発ＷＨＯグレードＩＩグリオーマと診断された対象に、本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン又は組成物を投与する。他の特定の実施形態では、新たに診断された悪性又は内在性脳幹グリオーマの対象に、本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン又は組成物を投与する。他の特定の実施形態では、不完全に切除された非脳幹グリオーマと診断された対象に、本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン又は組成物を投与する。他の特定の実施形態では、切除不能な再発性低悪性度グリオーマと診断された対象に、本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン又は組成物を投与する。
【０１５９】
特定の実施形態では、聴神経鞘腫と診断された対象に、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン又は本明細書に記載される組成物を投与する。他の特定の実施形態では、本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン又は組成を頭蓋咽頭腫と診断された対象に投与する。他の特定の実施形態では、本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン又は組成物を髄膜腫と診断された対象に投与する。他の特定の実施形態では、本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン又は組成物を髄芽腫と診断された対象に投与する。他の特定の実施形態では、本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン又は組成物を原発性中枢神経系リンパ腫と診断された対象に投与する。他の特定の実施形態では、松果腺の腫瘍（例えば、松果体の星状細胞腫瘍又は松果体の実質腫瘍）と診断された対象に、本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン又は組
成物を投与する。他の特定の実施形態では、下垂体の腫瘍と診断された対象に、本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン又は組成物を投与する。
【０１６０】
特定の実施形態では、本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン又は組成物が投与される対象は、ヒト成人である。特定の実施形態では、本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン又は組成物が投与される対象は、高齢者である。特定の実施形態では、本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン又は組成物が投与される対象は、ヒト子供である。特定の実施形態では、本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン又は組成物が投与される対象は、ヒト胎児である。特定の実施形態では、本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン又は組成物が投与される対象は、ヒト幼児である。
【０１６１】
特定の実施形態では、本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン又は組成物が投与される対象は、例えば、フローサイトメトリーにより決定されるように、ＨＬＡ−Ａ２陽性である。
【０１６２】
特定の実施形態では、本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン又は組成物が投与される対象は、カルノフスキーパフォーマンスステータス（Karnofsky performance status；ＫＰＳ）が＞６０である。ＫＰＳは、化学療法薬の無作為化試験で変動する階層及び選択として使用され、０−１００の範囲である。スコア＞６０の患者は、働くことはできないが家で過ごすことはでき、必要な介助の度合いは様々で、個人的ニーズの大半を世話することができる。スコア＞７０の患者は、努力して正常活動を行うが、病気のいくつかの徴候や症状を示す。スコア＞８０の患者は、正常活動を行うことができ、病気の軽度の兆候や症状を示すのみである。スコア＞９０の患者は、正常であり健康上の訴えはなく、病気の兆候や症状を示さない。 
【０１６３】
特定の実施形態では、本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン又は組成物が投与される対象は、白血球数が約１０００／ｍｍ３、１５００／ｍｍ３、２０００／ｍｍ３、２５００／ｍｍ３、３０００／ｍｍ３又は３５００／ｍｍ３、又は約１０００／ｍｍ３−１５００／ｍｍ３、１０００／ｍｍ３−２０００／ｍｍ３、１５００／ｍｍ３−２５００／ｍｍ３、１５００／ｍｍ３−３０００／ｍｍ３、２０００／ｍｍ３−３５００／ｍｍ３若しくは２５００／ｍｍ３−３５００／ｍｍ３である。特定の実施形態では、本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン又は組成物が投与される対象は、白血球数が２５００／ｍｍ３以上又は同等である。
【０１６４】
特定の実施形態では、本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン又は組成物が投与される対象は、リンパ球数が約１００／ｍｍ３、２００／ｍｍ３、３００／ｍｍ３、４００／ｍｍ３、５００／ｍｍ３又は６００／ｍｍ３、又は約１００／ｍｍ３−４００／ｍｍ３、２００／ｍｍ３−４００／ｍｍ３、３００／ｍｍ３−５００／ｍｍ３、３００／ｍｍ３−６００／ｍｍ３、４００／ｍｍ３−５００／ｍｍ３、若しくは４００／ｍｍ３−６００／ｍｍ３である。特定の実施形態では、本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン又は組成物が投与される対象は、リンパ球数が、４００／ｍｍ３以上又は同等である。
【０１６５】
特定の実施形態では、本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン又は組成物が投与される対象は、血小板数が約２５，０００／ｍｍ３、５０，０００／ｍｍ３、７５，０００／ｍｍ３、１００，０００／ｍｍ３、２００，０００／ｍｍ３、３００，０００／ｍｍ３、又は約２５，０００／ｍｍ３−１００，０００／ｍｍ３、５０，０００／ｍｍ３−１００，０００／ｍｍ３、７５，０００／ｍｍ３−１００，０００／ｍｍ３、１００，０００／ｍｍ３−２００，０００／ｍｍ３、１００，０００／ｍｍ３−３００，０
００／ｍｍ３若しくは２００，０００／ｍｍ３−３００，０００／ｍｍ３である。特定の実施形態では、本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン又は組成物が投与される対象は、血小板数が１００，０００／ｍｍ３以上又は同等である。
【０１６６】
特定の実施形態では、本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン又は組成物が投与される対象は、ヘモグロビン数が約５ｇ／ｄＬ、１０ｇ／ｄＬ、１５ｇ／ｄＬ又は２０ｇ／ｄＬ又は約５−１０ｇ／ｄＬ、５−１５ｇ／ｄＬ、１０−１５ｇ／ｄＬ若しくは１０−２０ｇ／ｄＬである。特定の実施形態では、本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン又は組成物が投与される対象は、ヘモグロビン数が１０ｇ／ｄＬ以上又は同等である。
【０１６７】
特定の実施形態では、本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン又は組成物が投与される対象は、ＡＳＴ、ＡＬＴ、ＧＧＴ、ＬＤＨ及びアルカリホスファターゼ値が、正常値の上限の１、１．５、２、２．５又は３倍以内である。特定の実施形態では、本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン又は組成物が投与される対象は、ＡＳＴ、ＡＬＴ、ＧＧＴ、ＬＤＨ及びアルカリホスファターゼ値が正常値の上限の２．５倍以内である。
【０１６８】
特定の実施形態では、本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン又は組成物が投与される対象は、全ビリルビンが約１ｍｇ／ｄＬ、１．５ｍｇ／ｄＬ、２ｍｇ／ｄＬ、２．５ｍｇ／ｄＬ又は３ｍｇ／ｄＬ又は約１．５−２．５ｍｇ／ｄＬ、１．５−３ｍｇ／ｄＬ、２−２．５ｍｇ／ｄＬ若しくは２−３ｍｇ／ｄＬである。特定の実施形態では、本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン又は組成物が投与される対象は、全ビリルビンが２ｍｇ／ｄＬ以上又は同等である。
【０１６９】
特定の実施形態では、本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン又は組成物が投与される対象は、血清クエンチン値が正常値の上限の０．５、１、１．５、２、２．５又は３倍以内である。特定の実施形態では、本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン又は組成物が投与される対象は、血清クエンチン値が、正常値の上限の１．５倍以内である。
【０１７０】
特定の実施形態では、本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン又は組成物が投与される対象は、凝固試験ＰＴ及びＰＴＴが正常値の上限の０．５、１、１．５、２、２．５又は３倍以内である。特定の実施形態では、本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン又は組成物が投与される対象は、正常値の上限内の凝固試験ＰＴ及びＰＴＴである。
【０１７１】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン又は組成物は、以下の患者群の１以上：高齢者；６ヶ月以下の乳児；妊婦；１歳以下の乳児；２歳以下の子供；３歳以下の子供；４歳以下の子供；５歳以下の子供；２０歳以下の成人；２５歳以下の成人；３０歳以下の成人；３５歳以下の成人；４０歳以下の成人；４５歳以下の成人；５０歳以下の成人；７０歳以上の高齢者；８０歳以上の高齢者；８５歳以上の高齢者；９０歳以上の高齢者；９５歳以上の高齢者；化学療法を受けている対象；放射線療法を受けている対象；生物学的療法を受けている対象；インターフェロン治療を受けている対象；アレルギー脱感作注射を受けている対象；違法薬物を接種している対象；成長因子（例えば、Ｐｒｏｃｒｉｔ（登録商標）、Ａｒａｎｅｓｐ（登録商標）、Ｎｅｕｌａｓｔａ（登録商標））治療を受けている対象；インターロイキン（例えば、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標））治療を受けている対象；転移性疾患のある対象；授乳中の女性；活性ウイルス、細菌性又は真菌感染のある対象；自己免疫疾患の病歴がある対象；ＨＩＶの対象；本明細書に記載されるワクチンを含まない治験薬で治療されている対象；神経
膠腫症、頭蓋又は脊椎軟膜転移性疾患の対象；及び／又は免疫抑制療法を受けている対象に投与しないことが望ましい。
【０１７２】
６．７．４  併用療法
特定の実施形態では、脳がんの予防、治療及び／又は管理のために本明細書で提供される方法は、予防上及び／又は治療上有効なレジメンを、それを必要とする患者（例えば、ヒト患者）に投与することを含み、該レジメンは、本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン又は組成物及び１以上の追加療法を患者に投与するものであって、該追加療法は、本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン又は組成物ではない。本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン又は組成物及び追加療法は、別々に、同時に又は連続して投与され得る。併用療法は、相加的又は相乗的に作用し得る。
【０１７３】
併用療法は、同一医薬組成物中で対象に投与され得る。あるいは、併用療法は、別々の医薬組成物中で、同時に対象に投与され得る。併用療法は、同一又は異なる投与経路で対象に投与され得る。
【０１７４】
がん（例えば、脳がん）の予防、治療及び／又は管理に、有用な、使用された又は現在使用されている任意の療法（例えば、治療薬又は予防薬）が、本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン又は組成物と組み合わせて本明細書に記載される方法において使用され得る。療法には、ペプチド、ポリペプチド、抗体、接合体（conjugates）、核酸分子、小分子、模倣薬（mimetic agents）、合成薬、無機分子及び／又は有機分子が挙げられるが、これらに限定されない。がん療法の非限定例としては、化学療法、放射線療法、ホルモン療法、手術、小分子療法、抗血管新生療法、分化療法、エピジェネティック療法、免疫療法、標的療法、及び／又は免疫療法を含む生物学的療法が挙げられる。特定の実施形態では、本発明の予防上及び／又は治療上有効なレジメンは、治療の組み合わせの投与を含む。
【０１７５】
１実施形態では、以前の化学療法はテモゾロミド（temolozimide）である。実施形態では、以前の療法は放射線療法である。他の実施形態では、以前の療法はテモゾロミド（temolozimide）及び放射線療法の組み合わせである。好ましい実施形態では、Ｓｔｕｐｐレジメンを用いたテモゾロミド（temolozimide）及び放射線療法の組み合わせが投与される。他の実施形態では、以前の療法は外科療法である。いくつかの実施形態では、患者は併用療法の開始前に外科療法を受ける。いくつかの実施形態では、患者はテモゾロミド（temolozimide）の前に外科療法を受ける。いくつかの実施形態では、患者は放射線療法の開始前に外科療法を受ける。併用療法の使用を記載するこれらの実施形態のそれぞれで、患者の治療前、中、後に、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンは、組み合わされている治療で投与され得る。
【０１７６】
本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン又は組成物と組み合わせて使用されるがん治療の例は、アシビシン（acivicin）；アクラルビシン（aclarubicin）；
塩酸アコダゾール（acodazole hydrochloride）；アクロニン（acronine）；アドゼレシ
ン（adozelesin）；アルデスロイキン（aldesleukin）；アルトレタミン（altretamine）；アンボマイシン（ambomycin）； 酢酸アメタントロンアセテート； アミノグルテチミ
ド（aminoglutethimide）；アムサクリン（amsacrine）；アナストロゾール（anastrozole）； アントラサイクリン（anthracyclin）；アントラマイシン（anthramycin）；アス
パラギナーゼ；アスペルリン（asperlin）；アザシチジン（vidaza）；アゼテパ（azetepa）；アゾトマイシン（azotomycin）；バチマスタット（batimastat）；ベンゾデパ（benzodepa）；ビカルタミド（bicalutamide）；ビサントレン塩酸塩（bisantrene hydrochloride）；ビスナフィドジメシレート（bisnafide dimesylate）；ビスフォスフォネート(
例えば、pamidronate (aredria), ナトリウムclondronate (bonefos)、zoledronic acid (zometa)、alendronate (fosamax)、etidronate、ib及び／又はnate、cimadronate、risedromate、及びtiludromate)；ビゼレシン（bizelesin）；硫酸ブレオマイシン（bleomycin sulfate）；ブレキナルナトリウム（brequinar sodium）；ブロピリミン（bropirimine）；ブスルファン（busulfan）；カクチノマイシン（cactinomycin）；カルステロン（calusterone）；カラセミド（caracemide）；カルベチマー（carbetimer）；カルボプラチ
ン（carboplatin）；カルムスチン（carmustine）；カルビシン塩酸塩（carubicin hydrochloride）；カルゼレシン（carzelesin）；セデフィンゴール（cedefingol）；クロロムブシル（chlorombucil）；シロールマイシン（cirolemycin）； シスプラチン（cisplatin）； クラドリビン（cladribine）；クリスナトールメシレート（crisnatol mesylate）；シクロホスファミド（シクロホスファミド）；シタラビン(ara-c)；ダカルバジン（dacarbazine）；ダカルバジン；ダクチノマイシン（dactinomycin）；ダウノルビシン塩酸塩（daunorubicin hydrochloride）；デシタビン（dacogen）；脱メチル化剤；デキソルマ
プラチン（dexormaplatin）；デザグアニン（dezaguanine）；デザグアニンイフェシレート（dezaguanine ifesylate）；ジアジコン（diaziquone）；ドセタキセル（docetaxel）；ドキソルビシン（doxorubicin）；塩酸ドキソルビシン（doxorubicin hydrochloride）；ドロルオキシフェン（droloxifene）；ドロロキシフェンクエン酸塩（droloxifene citrate）；プロピオン酸ドロモスタノロン（dromostanolone propionate）；ドゥアゾマイ
シン（duazomycin）；エダトレキセート（edatrexate）；エフロルニチン塩酸塩（eflornithine hydrochloride）；EphA2阻害剤；エルサミトルシン（elsamitrucin）；エンロプ
ラチン（enloplatin）；エンプロメート（enpromate）；エピプロピジン（epipropidine
）；エピルビシン塩酸塩（epirubicin hydrochloride）；エルブロゾール（erbulozole）；エソルビシン塩酸塩（esorubicin hydrochloride）；エストラムスチン（estramustine）；リン酸エストラムスチンナトリウム（estramustine phosphate sodium）；エタニダ
ゾール（etanidazole）；エトポシド（etoposide）；リン酸エトポシド（etoposide phosphate）；エトプリン（etoprine）；ファドロゾール塩酸塩（fadrozole hydrochloride）；ファザラビン（fazarabine）；フェンレチニド（fenretinide）；フロクスウリジン（floxuridine）；リン酸フルダラビン（fludarabine phosphate）；フルオロウラシル（fluorouracil）；５−ｆｄｕｍｐ；フルオロシタビン（flurocitabine）；フォスキドン（fosquidone）；フォストリエシンナトリウム（fostriecin sodium）；ゲムシタビン（gemcitabine）；ヒストン脱アセチル化酵素阻害剤（HDACs）ゲムシタビン塩酸塩（Gemcitabine
Hydrochloride）；ヒドロキシウレア（hydroxyurea）；塩酸イダルビシン（idarubicin hydrochloride）；イホスファミド（ifosfamide）；イルモホシン（ilmofosine）；メシ
ル酸イマチニブ(gleevec、glivec); インターロイキン ii (組み換えインターロイキン ii又はril2を含む)、インターフェロンα２ａ；インターフェロンα２ｂ；インターフェロン  α  ｎ１；インターフェロンαｎ３；インターフェロンβｉ  ａ；インターフェロンγｉ  ｂ；イプロプラチン（iproplatin）；塩酸イリノテカン（イリノテカン hydrochloride）；酢酸ランレオチド（lanreotide acetate）；レナリドミド（レブリミド）；レトロゾール（letrozole）；リュープロレリン酢酸塩（leuprolide acetate）；リアロゾー
ル塩酸塩（liarozole hydrochloride）；ロメトレキソールナトリウム（lometrexol sodium）；ロムスチン（lomustine）；ロソキサントロン塩酸塩（losoxantrone hydrochloride）；マソプロコール（masoprocol）；マイタンシン（maytansine）；メクロレタミン塩
酸塩（mechlorethamine hydrochloride）；抗CD2抗体（例えば、シプリズマブ（MedImmune Inc.;国際公開第02/098370号、これらはいずれも参照によりその全体が援用される。））；酢酸メゲストロール（megestrol acetate）；酢酸メレンゲステロール（melengestrol acetate）；メルファラン（melphalan）；メノガリル（menogaril）；メルカプトプリ
ン（mercaptopurine）；メトトレキセート（methotrexate）；メトトレキセートナトリウム（methotrexate sodium）；メトプリン（metoprine）；メツレデパ（meturedepa）；ミチンドミド（mitindomide）；マイトカルシン（mitocarcin）；マイトクロミン（mitocromin）；ミトギリン（mitogillin）；マイトマルシン（mitomalcin）；マイトマイシン（m
itomycin）；マイトスペル（mitosper）；ミトタン（mitotane）；ミトキサントロン塩酸塩（mitoxantrone hydrochloride）；ミコフェノール酸（mycophenolic acid）；ノコダ
ゾール（nocodazole）；ノガラマイシン（nogalamycin）；オルマプラチン（ormaplatin
）；オキサリプラチン（oxaliplatin）；オキシスラン（Oxisuran）；パクリタキセル（Paclitaxel）；ペガスパルガーゼ（pegaspargase）；ペリオマイシン（peliomycin）；ペ
ンタマスチン（pentamustine）；ペプロマイシン硫酸塩（peplomycin sulfate）；ペルフォスファミド（perfosfamide）；ピポブロマン（pipobroman）；ピポスルファン（piposulfan）；ピロキサントロン塩酸塩（piroxantrone hydrochloride）プリカマイシン（plicamycin）；プロメスタン（plomestane）；ポルフィマーナトリウム（porfimer sodium）
；ポルフィロマイシン（porfiromycin）；プレドニマスチン（prednimustine）；プロカ
ルバジン塩酸塩（procarbazine hydrochloride）；ピューロマイシン（puromycin）；ピ
ューロマイシン塩酸塩（puromycin hydrochloride）；ピラゾフリン（pyrazofurin）；リボプリン（riboprine）； ログレチミド（rogletimide）；サフィンゴール（safingol）
；サフィンゴール塩酸塩（safingol hydrochloride）；セマスチン（semustine）；シム
トラゼン（simtrazene）；スパルフォセートナトリウム（sparfosate sodium）；スパル
ソマイシン（sparsomycin）；塩酸スピロゲルマニウム（spirogermanium hydrochloride
）；スピロマスチン（spiromustine）；スピロプラチン（spiroplatin）；ストレプトニ
グリン（streptonigrin）；ストレプトゾシン（streptozocin）；スロフェヌル（sulofenur）；タリソマイシン（talisomycin）；テコガランナトリウム（tecogalan sodium）；
テガフール（tegafur）；塩酸テトキサントロン（teloxantrone hydrochloride）；テモ
ポルフィン（temoporfin）；テニポシド（teniposide）； テロキシロン（teroxirone）
；テストラクトン（testolactone）；チアミプリン（thiamiprine）；チオグアニン（thioguanine）；チオテパ（thiotepa）；チアゾフリン（tiazofurin）；チラパザミン（tirapazamine）；トレミフェンクエン酸塩（toremifene citrat）；酢酸トレストロン（trestolone acetate）；トリシリビンリン酸塩（triciribine phosphate）；トリメトレキセート（trimetrexate）；グルクロン酸トリメトレキセート（trimetrexate glucuronate）；トリプトレリン（triptorelin）；塩酸ツブロゾール（tubulozole hydrochloride）；ウ
ラシルマスタード（uracil mustard）；ウレデパ（uredepa）；バプレオチド（vapreotide）；ベルテポルフィン（verteporfin）；ビンブラスチン硫酸塩（Vinblastine Sulfate
）；ビンクリスチン硫酸塩（vincristine sulfate）；ビンデシン（Vindesine）；ビンデシン硫酸塩（vindesine sulfate）；ビネピジン硫酸塩（vinepidine sulfate）；ビング
リシナート硫酸塩（vinglycinate sulfate）；ビンロイロシン硫酸（vinleurosine sulfate）；酒石酸ビノレルビン（vinorelbine tartrate）；ビンロシジン硫酸塩（vinrosidine sulfate）；ビンゾリジン硫酸塩（vinzolidine sulfate）；ボロゾール（vorozole）；ゼニプラチン（zeniplatin）；ジノスタチン（zinostatin）；ゾルビシン塩酸塩（zorubicin hydrochloride）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１７７】
本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン又は組成物と組み合わせて使用される他のがん治療の例は、20-epi-1,25-ジヒドロキシビタミンD3（20-epi-1,25 dihydroxyvitamin D3）；5-エチニルウラシル（5-ethynyluracil）；アビラテロン（abiraterone）；アクラルビシン（aclarubicin）；アシルフルベン（acylfulvene）；アデシペノ
ール（adecypenol）；アドゼレシン（adozelesin）；アルデスロイキン（aldesleukin）
；ALL-TKアンタゴニスト；アルトレタミン（altretamine）；アンバムスチン（ambamustine）；アミドックス（amidox）；アミフォスチン（amifostine）；アミノレブリン酸（aminolevulinic acid）；アムルビシン（amrubicin）；アムサクリン（amsacrine）；アナ
グレリド（anagrelide）；アナストロゾール（anastrozole）；アンドログラホリド（andrographolide）；血管新生阻害剤；アンタゴニストＤ； アンタゴニストＧ；アンタレリ
ックス（antarelix）；抗−背側形成タンパク質−１（anti-dorsalizing morphogenetic protein-1）；抗アンドロゲン、抗前立腺癌剤；抗エストロゲン剤； 抗新生物薬；アンチセンスオリゴヌクレオチド； アフィジコリングリシネイト（aphidicolin glycinate）；
アポトーシス遺伝子モジュレーター；アポトーシス調節剤；アプリン酸（apurinic acid
）；アラ−ＣＤＰ−ＤＬ−ＰＴＢＡ（ara-CDP-DL-PTBA）；アルギニンデアミナーゼ（arginine deaminase）；アスラクリン（asulacrine）；アタメスタン（atamestane）；アト
リムスチン（atrimustine）；アキシナスタチン１（axinastatin 1）；アキシナスタチン２（axinastatin 2）；アキシナスタチン３（axinastatin 3）；アザセトロン（azasetron）； アザトキシン（azatoxin）； アザチロシン（azatyrosine）；バッカチンIII誘導
体（baccatin III derivatives）；バラノール（balanol）；バチマスタット（batimastat）；ＢＣＲ／ＡＢＬアンタゴニスト；ベンゾクロリン（benzochlorins）；ベンゾイルスタウロスポリン（benzoylstaurosporine）；β−ラクタム誘導体；β−アレチン（beta-alethine）； β−クラマイシンＢ（betaclamycin B）；ベツリン酸（betulinic acid）；ｂＦＧＦ阻害剤；ビカルタミド（bicalutamide）；ビサントレン（bisantrene）；ビサジリジニルスペルミン（bisaziridinylspermine）；ビスナファイド（bisnafide）；ビストラテンＡ（bistratene A）；ビゼレシン（bizelesin）；ブレフレート（breflate）；ブ
ロピリミン（bropirimine）；ブドチタン（budotitane）；ブチオニンスルホキシミン（buthionine sulfoximine）；カルシポトリオール（calcipotriol）；カルホスチンＣ（calphostin C）；カンプトセシン誘導体；カナリアポックスＩＬ−２（canarypox IL-2）；
カペシタビン（capecitabine）；カルボキサミド−アミノ−トリアゾール（carboxamide-amino-triazole）；カルボキサミドトリアゾール（carboxyamidotriazole）；ＣａＲｅｓｔＭ３； ＣＡＲＮ ７００；軟骨由来阻害剤（cartilage derived inhibitor）；カルゼ
レシン（carzelesin）；カゼインキナーゼ阻害剤(ＩＣＯＳ)；カスタノスペルミン（castanospermine）；セクロピンＢ（cecropin B）；セトロレリクス（cetrorelix）；クロリ
ン（chlorins）；クロロキノキサリンスルホンアミド（chloroquinoxaline sulfonamide
）；シカプロスト（cicaprost）；シス−ポルフィリン（cis-porphyrin）；クラドリビン（cladribine）；クロミフェン類似体（clomifene analogues）；クロトリマゾール（clotrimazole）；コリスマイシンＡ（collismycin A）；コリスマイシンB（collismycin B）；コンブレタスタチンＡ４（combretastatin A4）；コンブレタスタチン類似体（combretastatin analogue）；コナゲニン（conagenin）；クラムベシジン８１６（crambescidin 816）；クリスナトール（crisnatol）； クリプトフィシン８（cryptophycin 8）；クリ
プトフィシンＡ（cryptophycin A）誘導体；クラシンＡ（curacin A）；シクロペンタア
ントラキノン（cyclopentanthraquinones）；シクロプラタン（cycloplatam）；シペマイシン（cypemycin）；シタラビンオクホスフェート（cytarabine ocfosfate）；細胞溶解
因子；シトスタチン（cytostatin）；ダクリキシマブ（dacliximab）；デシタビン（decitabine）；デヒドロジデムニンB（dehydrodidemnin B）;デスロレリン（deslorelin）；
デキサメタゾン（dexamethasone）；デキシホスファミド（dexifosfamide）；デキシラゾキサン（dexrazoxane）；デキシホスファミド（dexifosfamide）；デキシラゾキサン（dexrazoxane）；デキシベラパミル（dexverapamil）；ジアジコン（diaziquone）；ジデム
ニンＢ（didemnin B）；ジドックス（didox）；ジエチルノルスペルミン（diethylnorspermine）；ジヒドロ−５−アザシチジン（dihydro-5-azacytidine）；ジヒドロタキソール（dihydrotaxol）ジオキサマイシン（dioxamycin）；ジフェニルスピロマスチン（diphenyl spiromustine）；ドセタキセル（docetaxel）；ドコサノール（docosanol）；ジオキ
サマイシン（dioxamycin）；ジフェニルスピロマスチン（diphenyl spiromustine）；ド
セタキセル（docetaxel）；ドコサノール（docosanol）；ドラセトロン（dolasetron）；ドキシフルリジン（doxifluridine）；ドロロキシフェン（droloxifene）；ドロナビノール（dronabinol）；デュオカルマイシンＳＡ（duocarmycin SA）；エブセレン（ebselen
）； エコマスチン（ecomustine）；エデルフォシン（edelfosine）；エドレコロマブ（edrecolomab）；エフロールニチン（eflornithine）；エレメン（elemene）；エミテファ
ル（emitefur）；エピルビシン（epirubicin）；エプリステライド（epristeride）；エ
ストラムスチン類似体（estramustine analogue）；エストロゲンアゴニスト；エストロ
ゲンアンタゴニスト；エタニダゾール（etanidazole）；エトポシドリン酸塩（etoposide
phosphate）；エキセメスタン（exemestane）；ファドロゾール（fadrozole）；ファザ
ラビン（fazarabine）；フェンレチニド（fenretinide）；フィルグラスチム（filgrastim）；フィナステリド（finasteride）；フラボピリドール（flavopiridol）；フレゼラスチン（flezelastine）；フルアステロン（fluasterone）；フルダラビン（fludarabine）；塩酸フルオロダウノルニシン（fluorodaunorunicin hydrochloride）；フォルフェニメックス（forfenimex）；フォルメスタン（formestane）；フォストリエシン（fostriecin）；フォテムスチン（fotemustine）；ガドリニウムテキサフィリン（gadolinium texaphyrin）；ガリウム硝酸塩（gallium nitrate）；ガロシタビン（galocitabine）；ガニレ
リックス（ganirelix）；ゼラチナーゼ阻害剤（gelatinase inhibitors）；ゲムシタビン（gemcitabine）；グルタチオン阻害剤；HMG-CoA還元酵素阻害剤(例えば、アトルバスタ
チン；セリバスタチン；フルバスタチン；lescol；lupitor；ロバスタチン；ロスバスタ
チン；シンバスタチン)；ヘプスルファン（hepsulfam）； ヘレグリン（heregulin）；ヘキサメチレンビスアセトアミド（hexamethylene bisacetamide）；ヒペリシン（hypericin）；イバンドロ酸（ibandronic acid）；イダルビシン（idarubicin）；イドキシフェン（idoxifene）；イドラマントン（idramantone）；イルモホシン（ilmofosine）；イロマスタット（ilomastat）；イミダゾアクリドン（imidazoacridones）；イミキモド（imiquimod）；免疫賦活剤ペプチド；インスリン様成長因子-1 受容体阻害剤；インターフェロ
ンアゴニスト；インターフェロン；インターロイキン；イオベングアン（iobenguane）；ヨードドキソルビシン（iododoxorubicin）；イポメアノール（ipomeanol）；4 -イロプ
ラクト（4- iroplact）；イルソグラジン（irsogladine）；イソベンガゾール（isobengazole）；イソホモハリコンドリンＢ（isohomohalicondrin B）；イタセトロン（itasetron）；ジャスプラキノリド（jasplakinolide）；カハラリドＦ（kahalalide F）；ラメラ
リン−Ｎトリアセテート（lamellarin−N triacetate）；ランレオチド（lanreotide）；レイナマイシン（leinamycin）；レノグラスチム（lenograstim）；レンチナン硫酸塩（lentinan sulfate）；レプトルスタチン（leptolstatin）；レトロゾール（letrozole）；
白血病抑制因子；白血球α−インターフェロン；リュープロリド＋エストロゲン＋プロ
ゲステロン；リュープロレイン（leuprorelin）；レバミソール（levamisole）；LFA-3TIP（Biogen, Cambridge, MA；国際公開第93/0686号及び米国特許第6,162,432号明細書）；リアロゾール（liarozole）； 線形ポリアミン類似体（linear polyamine analogue）；
親油性二糖ペプチド；脂溶性白金化合物；リソクリナミド７（lissoclinamide 7）；ロバプラチン（lobaplatin）；ロンブリシン（lombricine）；ロメトレキソール（lometrexol）；ロニダミン（lonidamine）；ロソキサントロン（losoxantrone）；ロバスタチン（lovastatin）；ロキソリビン（loxoribine）；ルートテカン（lurtotecan）；ルテチウムテキサフィリン（lutetium texaphyrin）；リソフィリン（lysofylline）；細胞溶解ペプチド；マイタンシン（maitansine）；マンノスタチン（mannostatin）；マリマスタット（marimastat）；マソプロコール（masoprocol）； マスピン（maspin）； マトリリシン阻
害剤（matrilysin inhibitors）；マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤；メノガリ
ル（menogaril）；メルバロン（merbarone）；メテレリン（meterelin）；メチオニナー
ゼ（methioninase）；メトクロプラミド（metoclopramide）；ＭＩＦ阻害剤；ミフェプリストン（mifepristone）；ミルテフォシン（miltefosine）；ミリモスチム（mirimostim
）；ミスマッチ二本鎖ＲＮＡ；マイトグアゾン（mitoguazone）；マイトラクトル（mitolactol）；マイトマイシン類似体（mitomycin analogues）；マイトナファイド（mitonafide）；マイトトキシン線維芽細胞成長因子−サポリン（mitotoxin fibroblast growth factor-saporin）；ミトキサントロン（mitoxantrone）；モファロテン（mofarotene）； 
モルグラモスチム（molgramostim）；モノクローナル抗体；ヒト絨毛性性腺刺激ホルモン；モノホスホリル脂質Ａ＋ミオバクテリア細胞壁ｓｋ；モピダモール（mopidamol）；多
剤耐性遺伝子阻害剤；多腫瘍抑制１に基づく治療（multiple tumor suppressor 1-based therapy）；マスタード（mustard）抗がん剤；マイカペルオキシドＢ（mycaperoxide B）；ミコバクテリア細胞壁抽出物；ミリアポロン（myriaporone）；Ｎ−アセチルジナリン
（N-acetyldinaline）；Ｎ−置換ベンズアミド；ナファレリン（nafarelin）；ナグレス
ティップ（nagrestip）；ナロキソン＋ペンタゾシン（naloxone + pentazocine）；ナパ
ビン（napavin）；ナフテルピン（naphterpin）；ナルトグラスチム（nartograstim）；
ネダプラチン（nedaplatin）；ネモルビシン（nemorubicin）；ネリドロン酸（neridronic acid）；中性エンドペプチダーゼ；ニルタミド（nilutamide）；ニサマイシン（nisamycin）；酸化窒素モジュレーターnitric oxide modulators；ニトロオキシド抗酸化剤；ニトルリン（nitrullyn）；Ｏ６−ベンジルグアニン（Ｏ6-benzylguanine）；オクトレオチド（octreotide）；オキセノン（okicenone）；オリゴヌクレオチド；オナプリストン（onapristone）；オンダンセトロン（ondansetron）；オンダンセトロン（ondansetron）；オラシン（oracin）；経口サイトカインインデューサー（oral cytokine inducer）；オ
ルマプラチン（ormaplatin）；オサテロン（osaterone）；オキサリプラチン（oxaliplatin）；オキサウノマイシン（oxaunomycin）；パクリタキセル（paclitaxel）；パクリタ
キセル類似体（paclitaxel analogues）；パクリタキセル誘導体（paclitaxel derivatives）；パラウアミン（palauamine）；パルミトイルリゾキシン（palmitoylrhizoxin）；
パミドロン酸（pamidronic acid）；パナキシトリオール（panaxytriol）；パノミフェン（panomifene）；パラバクチン（parabactin）；パゼルリプチン（pazelliptine）；ペガスパルガーゼ（pegaspargase）；ペルデシン（peldesine）；ペントサンポリ硫酸ナトリ
ウム（pentosan polysulfate sodium）；ペントスタ
チン（pentostatin）；ペントロゾール（pentrozole）；ペルフルブロン（perflubron）
；ペルホスファミド（perfosfamide）；ペリリルアルコール（perillyl alcohol）；フェナジノマイシン（phenazinomycin）；酢酸フェニル（phenylacetate）；ホスファターゼ
阻害剤；ピシバニール（picibanil）；塩酸ピロカルピン（pilocarpine hydrochloride）；ピラルビシン（pirarubicin）；ピリトレキシム（piritrexim）；プラセチンＡ（placetin A）；プラセチンＢ（placetin B）；プラスミノーゲン活性化因子阻害剤；白金錯体
（platinum complex）；白金化合物（platinum compounds）； 白金−トリアミン錯体（platinum-triamine complex）； ポルフィマーナトリウム（porfimer sodium）；ポルフィロマイシン（porfiromycin）；プレドニゾン（prednisone）；プロピルビス−アクリドンプロスタグランジンＪ２（propyl bis-acridone； prostaglandin J2）；プロテアソーム阻害剤；プロテインＡベース免疫モジュレーター（protein A-based immune modulator）；プロテインキナーゼＣ阻害剤；プロテインキナーゼＣ阻害剤、マイクロアルガル（microalgal）；タンパク質チロシンホスファターゼ阻害剤；プリンヌクレオシドホスホリラーゼ阻害剤；プルプリン（purpurins）；ピラゾロアクリジン（pyrazoloacridine）；ピロ
リドキシレーテッド（pyridoxylated）ヘモグロビンポリオキシエチレンコンジュゲート
；rafアンタゴニスト；ラルチトレキセド；ラモセトロン；RASファルネシルタンパク質トランスフェラーゼ阻害剤；ras阻害剤；ras-GAP阻害剤；脱メチル化レテルリプチ；レニウムＲｅ１８６エチドロン酸塩（rhenium Re 186 etidronate；リゾキシン（rhizoxin）；
リボザイム；ＲＩＩレチナミド（RII retinamide）；ログレチミド（rogletimide）；ロ
ヒツキン（rohitukine）；ロムルチド（romurtide）；ロクイニメックス（roquinimex）
；ルビギノンＢ１（rubiginone B1）；ルボキシル（ruboxyl）； サフィンゴール（safingol）；サイントピン（saintopin）；ＳａｒＣＮＵ；サルコフィトールＡ（sarcophytol A）；サルグラモスチム（sargramostim）；Ｓｄｉ１作動薬（Sdi1 mimetics）；セムスチン（semustine）； 老化由来阻害剤１（senescence derived inhibitor 1）；センスオリゴヌクレオチド；シグナル伝達阻害剤；シグナル伝達モジュレーター；単鎖抗原結合タンパク質；シゾフィラン（sizofiran）；ソブゾキサン（sobuzoxane）；ボロカプタンナト
リウム（sodium borocaptate）；フェニルアセテートナトリウム（sodium phenylacetate）；ソルベロール（solverol）；ソマトメジン結合タンパク質；ソネルミン（sonermin）；スパルフォス酸（sparfosic acid）；スピカマイシンＤ（spicamycin D）；スピロムスチン（spiromustine）；スプレノペンチン（splenopentin）；スポンジスタチン１（spongistatin 1）；スクアラミン（squalamin）； 幹細胞阻害剤； 幹細胞分裂阻害剤；スチ
ピアミド（stipiamide）；ストロメリシン（stromelysin）阻害剤；スルフィノシン（sulfinosine）；超活性（superactive）血管作動性腸管ペプチドアンタゴニスト；スラジス
タ（suradista）；スラミン（suramin）；スワインソニン（swainsonin）；合成グリコサミノグリカン；タルリムスチン（tallimustine）；5- フルオロウラシル（5-fluorouracil）；ロイコボリン（leucovorin）；タモキシフェンメチオジド（tamoxifen methiodide
）；タウロムスチン（tauromustine）；タザロテン（tazarotene）；テコガランナトリウム（tecogalan sodium）；テガフール（tegafur）；テルラピリリウム（tellurapyrylium）；テロメラーゼ阻害剤；テモポルフィン；テモゾロミド；テニポシド；テトラクロロデカオキシド（tetrachlorodecaoxide）；テトラゾミン；タリカルピン；チオコラリン；トロンボポエチン；トロンボポエチン模倣；サイマルファシン（thymalfasin）；チモポエ
チン受容体アゴニスト；チモトリナン；甲状腺刺激ホルモン；エチルエチオプルプリン錫；チラパザミン；チタノセン2塩化物；トプセンチン；トレミフェン；全能性幹細胞因子
；翻訳阻害剤；トレチノイン；トリアセチルウリジン；トリシリビン；トリ；トリプトレリン；トロピセトロン；ツロステリド；チロシンキナーゼ阻害剤；チルホスチン；UBC阻
害剤；ウベニメクス；尿生殖洞由来成長阻害因子；ウロキナーゼ受容体アンタゴニスト；バプレオチド；バリオリンB；ベクター系、赤血球遺伝子治療；サリドマイド；ベラレソ
ール（velaresol）；ベラミン（veramine）；ベルディン（verdins）；ベルテポルフィン（verteporfin）；ビノレルビン（vinorelbine）；ビンキサルチン（vinxaltine）；ビタキシン（VITAXINTM）；(米国特許出願公開第2002/0168360号明細書Ａ１、公開日；11月14日、 2002、 タイトル「Treating Inflammatory or Autoimmune Disorders by Administering Integrin αvβ3 Antagonists in Combination With Other Prophylactic or Therapeutic Agent」参照)；ボロゾール（vorozole）；ザノテロン（zanoterone）；ゼニプラ
チン（zeniplatin）；ジラスコルブ（zilascorb）；ジノスタチンスチマラマー（zinostatin stimalamer）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１７８】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン又は組成物を組み合わせて使用される療法は、免疫調節薬である。本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン又は組成物と組み合わせて使用される免疫調節薬の非限定的例は、例えば、サイトカイン、ペプチド模倣体、及び抗体のタンパク質性試薬（例えば、ヒト、ヒト化、キメラ、モノクローナル、ポリクローナル、Ｆｖｓ、ＳｃＦｖｓ、Ｆａｂ又はＦ（ａｂ）２断片又はエピトープ結合断片）、核酸分子（例えば、アンチセンス核酸分子、及びトリプルへリックス）、小分子、有機化合物、無機化合物が挙げられる。特に、免疫調節薬は、メトトレキサート、レフルノミド、シクロホスファミド、サイトキサン、イムラン（Immuran）、シクロスポリン、ミノサイクリン、アザチオプリン、抗生
物質（例えば、FK506（tacrolimus））、メチルプレドニゾロン（methylprednisolone；MP）、コルチコステロイド、ステロイド、ミコフェノール酸モフェチル、ラパマイシン（
シロリムス）、ミゾリビン、デオキシスペルグアリン、ブレキナルブレキナル（brequinar）、マロノニトリロアミンド（malononitriloamindes）（例えば、leflunamide）、Ｔ細胞受容体モジュレーター、サイトカイン受容体モジュレーター、及びモジュレーター肥満細胞モジュレーター等が挙げられるが、これらに限定されない。免疫調節薬の他の例は、例えば、米国特許出願公開第2005/0002934号明細書、段落259-275に開示され、これらは
いずれも参照によりその全体が本明細書に援用される。１実施形態では、免疫調節薬は化学療法剤である。代替実施形態では、免疫調節薬は化学療法剤以外の免疫調節薬である。いくつかの実施形態では、本発明に従って使用される療法は、免疫調節薬ではない。
【０１７９】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン又は組成物と組み合わせて使用される療法は抗血管新生薬である。本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン又は組成物と組み合わせて使用される抗血管新生薬の非限定例は、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、コンジュゲート、抗体（例えば、ヒト、ヒト化、キメラ、モノクローナル、ポリクローナル、Ｆｖｓ、ＳｃＦｖｓ、Ｆａｂ又はＦ（ａｂ）２断片又はこれらの抗原結合断片）、ＴＮＦ−αに特異的に結合する抗体等、核酸分子（例えば、アンチセンス核酸分子、及びトリプルへリックス）、有機分子、無機
分子、血管新生を減少又は阻害する小分子が挙げられる。抗血管新生薬の他の例は、例えば、米国特許出願公開第2005/0002934号明細書、段落277-282に開示され、これらはいず
れも参照によりその全体が本明細書に援用される。好ましい実施形態では、抗血管新生療法は、ベバシズマブ（Avastin（登録商標））である。他の実施形態では、本発明に従っ
て使用される療法は、抗血管新生ではない。
【０１８０】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン又は組成物と組み合わせて使用される療法は、抗炎症剤である。本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン又は組成物と組み合わせて使用される抗炎症剤の非限定例は、当業者に周知の炎症性疾患の治療で有用な試薬を含む、任意の抗炎症剤を含む。抗炎症剤の非限定例は、非ステロイド性抗炎症剤（NSAIDs）、ステロイド性抗炎症剤、抗コリン薬（例えば、アトロピン硫酸塩、硝酸メチルアトロピン及び臭化イプラトロピウム（ATROVENTTM））、β２−アゴニスト（例えば、abuterol（VENTOLINTM及びPROVENTILTM）、
ビトルテロール（TORNALATETM）、レバルブテロール(XOPONEXTM）、metaproterenol（ALUPENTTM）、ピルブテロール（MAXAIRTM）、terbutlaine（BRETHAIRETM 及びBRETHINETM）
、アルブテロール（PROVENTILTM、 REPETABSTM及びVOLMAXTM）、ホルモテロール(FORADIL
AEROLIZERTM）、及びサルメテロール（SEREVENTTM及びSEREVENT DISKUSTM）及びメチル
キサンチン（例えば、テオフィリン（UNIPHYLTM、THEO-DURTM、SLO-BIDTM、及びTEHO-42TM））。NSAIDsの例は、アスピリン（aspirin）、イブプロフェン（ibuprofen）、セレコ
キシブ（CELEBREXTM）、ジクロフェナク（VOLTARENTM）、エトドラク（LODINETM）、フェノプロフェン（NALFONTM）、インドメタシン（INDOCINTM）、ケトロラック（TORADOLTM）、オキサプロジン（DAYPROTM）、ナブメトン（nabumentone）（RELAFENTM）、スリンダク（CLINORILTM）、トルメンチン（TOLECTINTM）、ロフェコキシブ（VIOXXTM）、ナプロキ
セン（ALEVETM、NAPROSYNTM）、ケトプロフェン（ACTRONTM）及びナブメトン（RELAFENTM）が挙げられるが、これらに限定されない。該NSAIDsは、シクロオキシゲナーゼ酵素（例えば、COX-1及び／又はCOX-2）を阻害することにより機能する。ステロイド性抗炎症剤の例は、グルココルチコイド、デキサメタゾン（DECADRONTM）、コルチコステロイド（例えば、methylprednisolone（MEDROLTM））、コルチゾン（cortisone）、ヒドロコルチゾン
（hydrocortisone）、プレドニゾン（prednisone）（PREDNISONETM及びDELTASONETM）、
プレドニゾロン（PRELONETM及びPEDIAPREDTM）、トリアムシノロン、アザルフィジン及びエイコサノイドの阻害剤（例えば、プロスタグランジン、トロンボキサン及びロイコトリエン）が挙げられるが、これらに限定されない。他の抗炎症剤の例は、米国特許出願公開第2005/0002934号明細書、段落290-294に開示され、これらはいずれも参照によりその全
体が本明細書に援用される。他の実施形態では、本発明に従って使用される療法は、抗血管新生ではない。
【０１８１】
特定の実施形態では、本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン又は組成物と組み合わせて使用される療法は、アルキル化剤、ニトロソ尿素、代謝拮抗剤、及びアントラサイクリン、トポイソメラーゼII阻害剤、又は有糸分裂阻害剤である。アルキル化剤は、ブスルファン、シスプラチン、カルボプラチン、クロランブシル（cholormbucil）、シクロホスファミド、イホスファミド、バジン、メクロレタミン、メルファラン、及びテモゾロミドであるが、これらに限定されない。ニトロソ尿素は、カルムスチン（BCNU）及びロムスチン（CCNU）である。代謝拮抗剤、限定されないが、５−フルオロウラシル、カペシタビン、メトトレキセート、ゲムシタビン、シタラビン及びフルダラビンであるが、これらに限定されない。アントラサイクリンは、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン、ミトキサントロンであるが、これらに限定されない。トポイソメラーゼII阻害剤は、トポテカン、イリノテカン、エトポシド（etopiside）（VP-16）、及びテニポシドであるが、これらに限定されない。有糸分裂阻害剤は、タキサン（paclitaxel、docetaxel）及びビンカ・アルカロイド（vinblastine、vincristine及びvinorelbine)であるが、これらに限定されない。
【０１８２】
現在利用可能ながん療法及び用量、投与経路並びに推奨使用法は、当分野で知られており、Physician’s Desk Reference (60th ed., 2006)等の文献に記載されている。本発明に従って、化学療法剤の投与量及び投与頻度は、上記に記載されている。
【０１８３】
６．７．５  生物学的アッセイ
本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン及び組成物は、脳がんを治療、予防、又は管理する能力について試験され得る。
【０１８４】
６．７．５．１  Ｉｎ  Ｖｉｖｏアッセイ
本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン及び構成成分は、ヒトに使用する前に、適した動物モデル系で試験され得る。該動物モデル系は、ラット、マウス、ニワトリ、ウシ、サル、ブタ、イヌ、ウサギ等が挙げられるが、これらに限定されない。当分野で周知の任意の動物モデルが使用され得る。手順のいくつかの面は変わってよい。いくつかの面とは、ワクチン構成成分を投与する一時的レジーム、当該ワクチン組成物が、別々に、又は混合剤として投与されるか、及びワクチン構成成分の投与頻度、であるが、これらに限定されない。
【０１８５】
本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン若しくは組成物、又は本明細書に記載される併用療法の有効性を評価するために、がんの動物モデルを使用することができる。脳がんのための動物モデル例は、ＩＬ−１３Ｒα２を発現する脳がん細胞系、又はＩＬ−１３Ｒα２を発現する原発性ヒト腫瘍細胞を用いる異種移植研究が挙げられるが、これらに限定されない。該モデルでは、ＩＬ−１３Ｒα２特異的Ｔ細胞応答を誘導するためにマウスは免疫され、腫瘍の増殖を阻害する能力が評価される。１実施形態では、当該免疫の前に、該腫瘍異種移植は、既存の腫瘍の増殖を阻害するためのＩＬ−１３Ｒα２特異的Ｔ細胞応答の能力の試験を形成する。他の実施形態では、ＩＬ−１３Ｒα２特異的Ｔ細胞応答は、腫瘍形成を妨げるための免疫応答の能力を評価するために、腫瘍細胞の注射の前に誘導される。
【０１８６】
６．７．５．２  細胞毒性分析
本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチン及び組成物の毒性及び／又は有効性は、細胞培養又は実験動物中で標準的な調剤方法、例えば、ＬＤ５０（集団の５０％致死量）及びＥＤ５０（集団５０％中の治療有効量）を決定することにより、決定することができる。毒性及び有効性間の用量比は治療指数であり、ＬＤ５０／ＥＤ５０比として表わすことができる。大きな治療指数を示す治療レジメンが好ましい。毒性副作用を示す治療レジメンは使用可能である一方で、非感染細胞への潜在的なダメージを最小限にし、副作用を減らすために、影響を受ける組織への当該試薬をターゲットする送達システムを設計するよう注意が払われるべきである。
【０１８７】
６．８  製品
本発明には、包装済やラベルした医薬製品も含まれる。当該製品は、密封されたガラスバイアルや他の容器等の適した容器（vessel）又は容器（container）に、適した単位用
量形態を含む。医薬製品は、例えば、単位用量形態で本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンの構成成分を含んでよい。
【０１８８】
特定の実施形態では、単位用量形態は経口、静脈内、筋肉内、鼻腔内、又は皮下送達に適している。したがって、本明細書には、溶液、好ましくは滅菌され、各送達経路に適した溶液が包含される。
【０１８９】
いずれの医薬製品とも包装材料及び容器は、保管及び出荷中の製品の安定性を保護する
ように設計されている。さらに、本明細書で提供される製品には、使用説明書、又は医師、技師又は患者に対し、問題になっている脳がんを如何に適切に予防又は治療するかについて助言を与えるその他の情報材料が含まれている。換言すると、製品には実際の投与量、監視手順及び他の情報に限定されず、これらを含む投与レジメンを指示又は示唆する説明手段を含む。
【０１９０】
具体的には、例えば、箱、ボトル、チューブ、バイアル、容器、噴霧器、注入器、静脈内（ｉ．ｖ．）バッグ、薬袋等の包装材料を含む製品が本明細書で提供され、前記包装材料内に含まれた本明細書に記載されるワクチン又は医薬組成物の少なくとも１単位用量形態は、本明細書に記載されたワクチン又は医薬組成物が本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンを含み、かつ、該包装材料は、本明細書に記載される特定の投与量を投与して特定の投与レジメンを使用することで、脳がん又は１以上のこれらの症状を予防、管理、及び／又は治療し得る、本明細書に記載されるＩＬ−１３Ｒα２ペプチドワクチンを含む説明手段を含む。
【０１９１】
７．実施例
以下の実施例は、本発明をさらに説明するが、当然のことながら、その範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。
【０１９２】
７．１  実施例１
本実施例は、天然のＩＬ−１３Ｒα２３４５−３５３に対してＣＴＬ応答の誘導を増強するＩＬ−１３Ｒα２３４５−３５３の修飾ペプチド同定を示す。
【０１９３】
表１に示す３つの修飾ペプチドを合成した。これらの修飾ペプチドの結合能を、ＨＬＡ−Ａ２トランスフェクトしたＴ２細胞系を用いて評価した。分注したＴ２細胞を、１ｎＭの修飾ペプチド又はＩＬ−１３Ｒα２３４５−３５３とともに１晩培養し、フローサイトメトリーにより、Ｔ２細胞上の細胞表面ＨＬＡ−Ａ２発現レベルを検討した。ペプチドエピトープとのＨＬＡ−Ａ２の安定な結合は、さらにＨＬＡ−Ａ２の表面発現を安定化させる（Francini et al., 2002; Alves et al., 2003）。表１の平均蛍光強度（Mean Fluorescence Intensity；ＭＦＩ）に、ＨＬＡ−Ａ２の定量的発現レベルを示しているが、Ｔ２細胞と共培養したペプチド−エピトープの結合親和性と相関する。修飾ペプチドＶ９及びＡ１Ｖ９は、天然のＩＬ−１３Ｒα２３４５−３５３（表１）と比べて、ＨＬＡ−Ａ２により高い親和性を有し、これらの修飾ペプチドはＩＬ−１３Ｒα２３４５−３５３と比べてより免疫原性である可能性を示す。
【０１９４】
【表１】
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【０１９５】
７．２  実施例２
本実施例は、Ｖ９類似体アゴニストにより誘導されたＣＴＬが、野生型ペプチドによるＣＴＬ誘導と比べて、より効率的にＨＬＡ−Ａ＊０２０１に提示されたペプチドＩＬ−１３Ｒα２３４５−３５３を認識したことを示す。
【０１９６】
ＨＬＡ−Ａ＊０２０１＋グリオーマ患者由来の樹状細胞（ＤＣｓ）を、それぞれＶ９、Ａ１Ｖ９、Ｅ１Ｖ９、コントロールインフルエンザ（ｆｌｕ）、又は野生型ペプチド（１０μｇ／ｍＬ）でパルスし、自己ＣＤ８＋Ｔ細胞を刺激するために使用した。７日目に、個々の応答細胞培養物を、１次刺激で使用した対応するペプチドで負荷した自己樹状細胞で一度再刺激した。１０日目に、誘導されたＴ細胞系の特異的なＣＴＬ反応性について、野生型ＩＬ−１３Ｒα２３４５−３５３又はペプチド無しで負荷したＴ２細胞でまず試験した。
【０１９７】
図１に図示するように、各野生型（ＩＬ−１３Ｒ）又はアゴニスト類似体（Ｖ９、Ａ１Ｖ９及びＥ１Ｖ９）で刺激されたＴ細胞は、１００ｎｇ／ｍｌ野生型ＩＬ−１３Ｒα２３４５−３５３でパルスしたＴ２標的細胞を効率的に溶解した。一方、Ｔ２細胞上にペプチドが無いものでは、低いバックグラウンド溶解のみが観察された。コントロールｆｌｕ−ペプチド又はペプチド無し（コントロール）で刺激したＴ細胞は、バックグラウンドレベルを超える溶解活性が一切見られなかった。当該結果は、野生型又はアゴニスト類似体で誘導されたＣＴＬ系が、野生型ＩＬ−１３Ｒα２３４５−３５３エピトープを発現する細胞を特異的に認識して溶解したことを示す。特に、Ｖ９ペプチドは、各エフェクター／標的（Ｅ／Ｔ）比（ｐ＝０．０１８、０．０２０及び０．０１１、それぞれＥ／Ｔ比が５０、２５及び１２．５）で、野生型ＩＬ−１３Ｒα２３４５−３５３と比較して、抗原特異的ＣＴＬ応答のレベルを有意に高く誘導した。同一セットの実験を、少なくとも３つの個別のＨＬＡ−Ａ２＋グリオーマ患者で繰り返し、Ｖ９ペプチドは試験した全４ドナーで、天然のＩＬ−１３Ｒα２３４５−３５３よりも恒常的に高いＣＴＬ反応性を示した（データ示さず）。
【０１９８】
続いて、アゴニスト類似体又は野生型ペプチドで誘導されたＣＴＬ細胞系の感受性について、４時間５１Ｃｒ−放出アッセイで、様々な濃度（１−１００ｎＭ）のＩＬ−１３Ｒα２３４５−３５３ペプチドで負荷したＴ２細胞について検討した（図２）。全ＣＴＬ細胞系が、ペプチド負荷したＴ２細胞に対してペプチド用量依存に溶解活性を示した。検討
した全ての濃度（Ｐ＝０．０２９、０．０３９及び０．０１８、それぞれ、１、１０及び１００ｎＭ）において、アゴニスト類似体Ｖ９で誘導されたＣＴＬ系は、野生型ＩＬ−１３Ｒα２３４５−３５３と比べてより高いＣＴＬ反応性を示した。しかし、大きな標準偏差のため、統計学的有意差はなかった。１ｎＭ  ＩＬ−１３Ｒα２３４５−３５３でＶ９誘導されたＣＴＬにより達成された平均パーセント溶解値が、１００ｎＭペプチドで野生型ペプチド誘導されたＣＴＬで示されたものより高いことは注目に値する。しかし、大きな標準偏差のため、統計学的有意差はなかった。当該結果は、低濃度標的野生型ＩＬ−１３Ｒα２３４５−３５３ペプチドを認識することができるＣＴＬ誘導において、Ｖ９ペプチドが野生型ペプチドよりも効果的であることを示す。ヒト腫瘍細胞は、ＨＬＡ−分子上に低レベルの標的ＣＴＬエピトープしか発現しないため（Bakker et al., 1995; Lupetti
et al., 1998）、この能力は重要である。
【０１９９】
７．３  実施例３
本実施例は、修飾ペプチドにより誘導されたＣＴＬが、天然ペプチドにより誘導されたＣＴＬより、さらに効率的にＩＬ−１３Ｒα２を発現するＨＬＡ−Ａ２＋グリオーマを溶解したことを示す。
【０２００】
ＩＬ−１３Ｒα２由来エピトープを内在的に発現し提示するＨＬＡ−Ａ２＋ヒトグリオーマ細胞に対するＣＴＬ活性を増強するＩＬ−１３Ｒα２−Ｖ９等の修飾ペプチドの能力を検討した。ヒトグリオーマ細胞系Ｕ２５１及びＳＮＢ１９はＨＬＡ−Ａ２及びＩＬ−１３Ｒα２を発現するのに対し、ヒトグリオーマ細胞系Ａ１７２はＩＬ−１３Ｒα２を発現するが、ＨＬＡ−Ａ２を発現しない（Okano et al., 2002）。したがって、Ｕ２５１及びＳＮＢ１９を相対的標的グリオーマ細胞として、Ａ１７２を反応のＨＬＡ−Ａ２拘束性を示すネガティブコントロール系として使用した。
【０２０１】
これらのグリオーマ細胞に対するペプチド誘導ＣＴＬ系の溶解能を、４時間５１Ｃｒ放出アッセイを用いて検討した。図３に示されるように、Ｕ−２５１及びＳＮＢ１９細胞系は、ＩＬ−１３Ｒα２３４５−３５３又は各その修飾ペプチドで誘導された全ＣＴＬ系の細胞傷害性活性に高い反応性を示した。対照的に、Ａ１７２細胞は、試験したいずれのＣＴＬ系によっても、バックグラウンドレベル（＜１０％）を超えて溶解することがなかったことは、ＩＬ−１３Ｒα２３４５−３５３又は修飾ペプチド誘導ＣＴＬ系が、ＨＬＡ−Ａ２拘束的にＳＮＢ１９及びＵ−２５１グリオーマ細胞を溶解したことを示唆する（データ示さず）。黒色腫関連抗原エピトープＭａｒｔ−１２７−３５で刺激したＴ細胞及びペプチド無しで刺激したＴ細胞は、試験した全エフェクター／標的（Ｅ／Ｔ）比で、バックグラウンドレベル（＜１０％）の溶解しか示さなかった。当該特定の患者では、ＩＬ−１３Ｒα２−Ｖ９及び−Ａ１Ｖ９は両者とも、天然のＩＬ−１３Ｒα２３４５−３５３ペプチドと比べて各Ｅ／Ｔ比でＳＮＢ１９及びＵ−２５１のより高い溶解レベルを誘導した。
【０２０２】
溶解活性の特異性を決定するために、４時間５１Ｃｒ−放出アッセイにおいて、ＩＬ−１３Ｒα２３４５−３５３ペプチドでパルスした非放射標識（コールド）Ｔ２細胞を添加してコールド標的競合実験を行った（図４）。天然のＩＬ−１３Ｒα２３４５−３５３又はＩＬ−１３Ｒα２−Ｖ９により誘導されたＣＴＬ系による抗ＳＮＢ１９グリオーマ細胞溶解活性は、ＩＬ−１３Ｒα２３４５−３５３パルスしたコールドＴ２細胞の添加により、ほぼ完全に阻害された。しかしながら、該ＣＴＬ活性が非ペプチドパルスコールドＴ２細胞の添加では阻害されなかったことは、ＣＴＬの溶解活性がエピトープＩＬ−１３Ｒα２３４５−３５３特異的であったことを示す。
【０２０３】
さらに、ＣＴＬ反応性においてＨＬＡ−Ａ２を介したシグナリングをブロックするために、抗ＨＬＡ−Ａ２抗体（Ｗ６／３２）を使用した。図５に示されるように、当該抗体の添加はＣＴＬを介した溶解を阻害し、これらのペプチドにより誘導された抗グリオーマＣ
ＴＬ反応性は、ＨＬＡ−Ａ２拘束性であることを確認した。
【０２０４】
７．４  実施例４
本実施例は、ＩＬ−１３Ｒα２由来ＣＴＬエピトープでのＨＬＡ−Ａ２トランスジェニック（ＨＨＤ）マウスのワクチン接種を示す。
【０２０５】
ＩＬ−１３Ｒα２３４５−３５３及び／又はその修飾ペプチドでの免疫が、ｉｎ  ｖｉｖｏでＣＴＬ応答を誘発することができるか否か、また、誘導されたＣＴＬ応答がＩＬ−１３Ｒα２３４５−３５３発現脳腫瘍に対し、治療的抗腫瘍反応を媒介することができるかを検討するために、Dr. Francois A. Lemonnier（Pasteur Institute, Paris）からＨ
ＨＤマウスの提供を受けた。ＨＨＤマウスは、Ｄｂ×β２ミクログロブリン（β２Ｍ）を欠失（ｎｕｌｌ）し、修飾されたＨＬＡ−Ａ２．１−β２ミクログロブリン単鎖（ＨＨＤ
遺伝子）導入マウスである（Pascolo et al., 1997）。Ｉｎ  ｖｉｖｏ実験で、ＨＨＤマウスはインタクトなインフルエンザウイルス（Pascolo et al., 1997）等の複数のエピトープ、ＥｐｈＡ２（Alves et al., 2003）、ＨＥＲ−２／ｎｅｕ及びｈＴＥＲＴ（Scardino et al., 2002）、ＭＡＧＥ（Graff-Dubois et al., 2002）等の新規がん関連抗原、新規乳がん関連ＢＡ４６（Carmon et al., 2002）に対してＨＬＡ−Ａ２拘束性応答を示
すことが示された。それ故、これらのマウスは、潜在的な腫瘍由来ＨＬＡ−Ａ２拘束性ＣＴＬエピトープの同定及び特徴づけに有用なツールである。
【０２０６】
ＩＬ−１３Ｒα２を発現するＨＨＤマウス同系腫瘍細胞系を作製するために、ＨＨＤ遺伝子トランスフェクトＥＬ４リンパ腫細胞（ＥＬ４−ＨＨＤ）を得た。ＥＬ４−ＨＨＤ細胞は、Ｄｂｘβ２Ｍの欠損と修飾されたＨＬＡ−Ａ２．１−β２Ｍ単鎖（Pascolo et al., 1997）の挿入により産生され、その結果、ＨＨＤマウスの同系移植を可能にする。ＥＬ４−ＨＨＤ細胞に、ＩＬ−１３Ｒα２をコードする発現プラスミドを安定にトランスフェクトした。細胞系（ＥＬ４−ＨＨＤ−ＩＬ−１３Ｒα２）は、ＩＬ−１３Ｒα２タンパク質を発現し、同系ＨＨＤマウスへの注射の後、皮下（ｓ．ｃ．）及び頭蓋内（ｉ．ｃ．）隙間に腫瘍を形成した。
【０２０７】
７．５  実施例５
本実施例は、修飾ペプチドでのＨＨＤマウスのｉｎ  ｖｉｖｏ免疫が、ＩＬ−１３Ｒα２３４５−３５３を発現する標的細胞に対し、天然ペプチドと比べてより高いＣＴＬ応答を誘導したことを示す。
【０２０８】
ＨＨＤマウスに、ＣＤ４＋ヘルパーＴ細胞応答を刺激することでＣＤ８＋ＣＴＬの刺激を促進するＩ−Ａｂ−拘束性ＨＢＶコア１２８−１４０（ＴＰＰＡＹＲＰＰＮＡＰＩＬ）（配列番号：５）Ｔ−ヘルパーエピトープ１４０μｇの存在下、不完全Ｆｒｅｕｎｄ’ｓアジュバント（ＩＦＡ）でエマルジョン化した１００μｇのＩＬ−１３Ｒα２−Ｖ９、−Ａ１Ｖ９、ＩＬ−１３Ｒα２３４５−３５３ペプチドを皮下注射（ｓ．ｃ．）した（７日及び１４日目に）。コントロール動物には、ＨＢＶヘルパーペプチドのみを含むＩＦＡを注射した。最後の免疫後７日目にこれらの動物を殺傷し、ｉｎ  ｖｉｖｏ刺激のために使用したもの（１０μＭ）と同一のペプチドで、５×１０６脾臓細胞（ＳＰＣｓ）をｉｎ  ｖｉｔｒｏ刺激した。培養６日目に、混合集団についてＩＬ−１３Ｒα２３４５−３５３でパルスしたＩＬ−１３Ｒα２又はＥＬ４−ＨＨＤを発現するＥＬ４−ＨＨＤ細胞に対する特異的な細胞傷害性を試験した。
【０２０９】
ＥＬ４−ＨＨＤ−ＩＬ−１３Ｒα２及びＥＬ４−ＨＨＤを、１００μＣｉの５１Ｃｒで６０分間標識し、９６ウェルＶ底プレート（３×１０３細胞／ウェル）に播いた。標識したＥＬ４−ＨＨＤを、ＩＬ−１３Ｒα２３４５−３５３（１μＭ）で３７℃２時間パルスした。コントロール標的細胞はペプチドでパルスしなかった。刺激された脾臓細胞は、エ
フェクター細胞として添加して３７℃４時間培養した。上清の１００μＬを回収して放射能をガンマカウンターで測定した。
【０２１０】
図６は、修飾ペプチドで誘導されたＣＴＬ応答が、天然のＩＬ−１３Ｒα３４５−３５３で負荷したＴ２細胞を溶解することができたことを示す。コントロールの非パルスＥＬ４−ＨＨＤは、バックグラウンドレベルを超えて、ＣＴＬにより溶解されることはなかった（図７）。さらに、ＩＬ−１３Ｒα２−Ｖ９での免疫は、検討した他のペプチドと比べて、天然のＩＬ−１３Ｒα２３４５−３５３ペプチドでパルスしたＥＬ４−ＨＨＤ細胞に対するＣＴＬ反応性レベルがより高い傾向を示した。しかし、この差は３回のサンプル内の変動であるため統計学的に有意ではない。これらのデータは、修飾ペプチドが天然ペプチドよりも抗ＩＬ−１３Ｒα２３４５−３５３ＣＴＬの、より高いレベルを誘導したという、ヒトＨＬＡ−Ａ２＋患者由来のＴ細胞に関する以前の一連のデータを裏付けるものである。
【０２１１】
ＥＬ４−ＨＨＤ−ＩＬ−１３Ｒα２細胞を溶解する図６で使用された同一のＨＨＤマウス由来ＣＴＬの能力について、内在的にＩＬ−１３Ｒα２を発現する細胞で自然に処理されるＩＬ−１３Ｒα２３４５−３５３ペプチドを認識するＣＴＬ能力を評価するために検討した。図７は、ＩＬ−１３Ｒα２３４５−３５３、ＩＬ−１３Ｒα２−Ｖ９又は−Ａ１Ｖ９での免疫が、ＥＬ４−ＨＨＤ−ＩＬ−１３Ｒα２細胞に対する特異的なＣＴＬ反応性を誘導したことを示す。コントロールＥＬ４−ＨＨＤは、バックグラウンドレベルを超えて溶解されなかったため、ＣＴＬ反応性は抗原特異的であった。修飾ペプチドＩＬ−１３Ｒα２−Ｖ９及び−Ａ１Ｖ９は、ＥＬ４−ＨＨＤ−ＩＬ−１３Ｒα細胞に対する天然のＩＬ−１３Ｒα２３４５−３５３と比べて、ＣＴＬ反応性をより高く誘導した（全エフェクター／標的比でｐ＜０．０５）。ＥＬ４−ＨＨＤ−ＩＬ−１３Ｒα２腫瘍となったＨＨＤマウスにおけるＩＬ−１３Ｒα２３４５−３５３又は修飾されたＩＬ−１３Ｒα２ペプチドでのワクチン接種ｉｎ  ｖｉｖｏ抗腫瘍効果を現在評価中である。
【０２１２】
７．６  実施例６
本実施例は、ＥｐｈＡ２がＨＬＡ−Ａ２拘束性ＣＴＬエピトープとして利用可能であることを示す。
【０２１３】
５個のＨＬＡ−Ａ２及び３個のＤＲ４  Ｔ細胞エピトープが以前同定されたように（Tatsumi et al., 2003）、ＥｐｈＡ２は魅力的な腫瘍関連抗原であり、腫瘍ワクチンの標的である。図８に示されるように、ヒト多形性膠芽腫（ＧＢＭ）１４ケースのうち９ケースが、未分化星状細胞腫（ＡＡ）９ケースのうち６ケースが、高レベルのＥｐｈＡ２を発現する。加えて、ＥｐｈＡ２８８３−８９１エピトープで刺激されたＨＬＡ−Ａ２＋グリオーマ患者から得たＣＤ８＋細胞で、抗グリオーマＣＴＬ反応性が誘導された（図９）。ＥｐｈＡ２８８３−８９１で負荷したＴ２細胞を用いた並行アッセイは、コントロールの負荷しなかったＴ２標的と比較してペプチド特異的な応答を示したことから、この応答はＥｐｈＡ２８８３−８９１エピトープ特異的であった（図示せず）。当該データは、ＥｐｈＡ２８８３−８９１がＣＴＬエピトープとして役立ち得ることを強く示唆する。
【０２１４】
７．７  実施例７
本実施例は、ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）−Ａ２＋の再発悪性グリオーマの患者へのグリオーマ関連抗原（ＧＡＡ）エピトープ用の合成ペプチドで負荷した新たなα１型極性化樹状細胞（αＤＣ１）ワクチン接種及びｐｏｌｙ−ＩＣＬＣ投与の安全性及び免疫原性を評価するために行ったフェーズＩ／ＩＩ試験を記載する。当該ペプチド用のＧＡＡは、ＥｐｈＡ２、インターロイキン−１３受容体（ＩＬ−１３Ｒ）α２、ＹＫＬ−４０及びｇｐ１００である。
【０２１５】
７．７．１  患者及び方法
７．７．１．１  患者
治験審査委員会（ＩＲＢ）及び米国食品医薬品局（ＦＤＡ）（ＢＢ−ＩＮＤ＃１２４１５）によるインフォームドコンセントと承認を得た再発悪性グリオーマの患者が登録された。患者の臨床的特徴は、表２及び表３Ａに集約されている。登録条件は、多形性膠芽腫（ＧＢＭ）又は未分化星状細胞腫（ＡＡ）；未分化乏突起膠腫（ＡＯ）又は未分化乏突起星状細胞腫（ＡＯＡ）を含む未分化グリオーマ（ＡＧ）；最大２回の以前の再発；＞１８歳；カルノフスキーパフォーマンスステータス（Karnofsky performance status）＞６０；十分な肝機能、腎機能及びＨＬＡ−Ａ２＋が挙げられる。コルチコステロイドの最少用量（デキサメタゾン最大４ｍｇ／日）が許容された。２２人の患者が登録され、少なくとも１回ワクチン接種を受けた。２２人の患者のうち１９人がスケジュールされた最初の４回の免疫を完了した；３人の患者（患者４、１１、１３）が、早期の腫瘍の進行のためにプロトコールから脱落した。９人の患者がブースターワクチン接種を完了した。少なくとも４回ワクチン接種を受けた（ｎ＝１９）及び少なくとも１回ワクチン接種を受けた（ｎ＝２２）それぞれの患者の免疫原性及び安全性データを提示する。
【０２１６】
【表２】
2019123745.tif 000004
【０２１７】
【表３Ａ−１】
2019123745.tif 000005
【０２１８】
【表３Ａ−２】
2019123745.tif 000006
【表３Ａ−３】
2019123745.tif 000007
【０２１９】
【表３Ｂ−１】
2019123745.tif 000008
【０２２０】
【表３Ｂ−２】
2019123745.tif 000009
【０２２１】
７．７．１．２  臨床試験設計
本研究は、ＧＡＡ負荷したαＤＣ１ワクチン接種及びｐｏｌｙ−ＩＣＬＣ（Ｈｉｌｔｏｎｏｌ（登録商標）、  Ｏｎｃｏｖｉｒ、  Ｉｎｃ．）投与の毒性、並びに免疫誘導及び予備的臨床反応を評価するために設計した。最初のワクチンのコースは、短期間での注射の繰り返しによるリンパ節の微小環境での注射誘発外傷の潜在的な影響を最小限にするために、各鼠径部及び腋窩リンパ節クラスタを回転させながら、２週間毎に１又は３×１０７αＤＣ１／注射の４超音波ガイド節内（i.n.）投与からなる（図１９）。最初の評価可能な１０患者は、１×１０７αＤＣ１／注射（用量レベル１）を受け、次に９人が３×１０７αＤＣ１／注射（用量レベル２）を受けた。全患者が１日目以降８週間にわたり、１週間に２回（２回／週）ｐｏｌｙ−ＩＣＬＣ（２０μｇ／ｋｇ）筋肉内（i.m.）注射を受けた。４回のワクチン接種後、主要な有害事象（adverse events；AD）のない不変（stable disease）又は退行（regression of disease）を示した患者は、追加ワクチン接種の
適格者であった。１３週から開始して、これらの患者は追加ワクチン接種と同量で４週間毎に最大５回までワクチン注射及び筋肉内ｐｏｌｙ−ＩＣＬＣ注射を、最初の追加ワクチンから開始して１週間に２回受けた（第１ブースターフェーズ）。第１ブースターフェーズ後、主要な有害事象又は腫瘍進行を示さない患者は、最初のワクチン接種から最長３年まで追加ワクチン（３ヶ月毎）及びｐｏｌｙ−ＩＣＬＣ（各週）の同量を受けた（第２ブースターフェーズ）。
【０２２２】
７．７．１．３  毒性評価及び停止規則
試験は、米国国立がん研究所共通用語規準第３．０版（National Cancer Institute Common Toxicity Criteria version 3.0）を用いて、処置関連有害事象（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ−ｒｅｌａｔｅｄ  ＡＥ）を継続的に監視した。それらが、多分、おそらく又は間違いなく、治療に関連すると判断された場合、以下は用量制限毒性（ＤＬＴ）と考えられた：≧グレード２  過感受性；≧グレード３  非血液学的／代謝毒性；≧グレード３  ｐｏｌｙ−ＩＣＬＣの一時的中止４週間後治まらなかった血液学的（リンパ球減少を除く）又は代謝毒性。停止規則は、任意の時点で観察されたＤＬＴ比が≧３３％で、少なくとも２回ＤＬＴが観察されたことがある場合は、用量レベルが過度に毒性で、その発生を停止することが正当化されると考えられるような場合に実行した。
【０２２３】
７．７．１．４  ペプチド
当該研究で使用されたＨＬＡ−Ａ２拘束性ペプチドは：ＡＬＰＦＧＦＩＬＶ（配列番号：３；ＩＬ−１３Ｒα２３４５−３５３：１Ａ９Ｖ）；ＴＬＡＤＦＤＰＲＶ（配列番号：６；ＥｐｈＡ２８８３−８９１）；ＩＭＤＱＶＰＦＳＶ（配列番号：１１；ＧＰ１００２０９−２１７：Ｍ２）；及びＳＩＭＴＹＤＦＨＧＡ（配列番号：１０；ＹＫＬ−４０２０
１−２１０）を含む。ヘルパーＴ細胞応答用に最適化された非天然エピトープ（例えば、Alexander et al, Immunity, 1:751-761, 1994参照）であるｐａｎ−ＤＲエピトープ（ＰＡＤＲＥ）でもαＤＣ１を負荷した。自動固相ペプチド合成によりペプチドを合成した。純度、無菌性、同一性、有効性、発熱性及び安定性を含む多数の品質保証調査でペプチドを試験した。
【０２２４】
７．７．１．５  ワクチン調製
樹状細胞培養用に、白血球除去輸血製品から単球を得て、ＥｌｕｔｒａＴＭシステムを用いて精製した。Ａａｓｔｒｏｍ  Ｒｅｐｌｉ細胞システムを用いて、滅菌カートリッジ中、１０００Ｕ／ｍＬ  ＧＭ−ＣＳＦ及び１０００Ｕ／ｍＬ  ＩＬ−４を追加したＣｅｌｌＧｅｎｉｘ抗生物質無添加培地中で単球を培養した。未成熟樹状細胞（ｉＤＣ）を６日目に採取して凍結保存した。各ワクチン接種前に分注した凍結ｉＤＣを解凍し、さらに  臨床グレードのＩＬ−１β（１０ｎｇ／ｍＬ）、ＴＮＦ−α（１０ｎｇ／ｍＬ）、ＩＦＮ−α（３０００Ｕ／ｍｌ）、ＩＦＮ−ｙ（１０００Ｕ／ｍＩ）及びｐｏｌｙ−Ｉ：Ｃ（２０μｇ／ｍＩ）で、５％ＣＯ２中３７℃で４８時間成熟化及び極性化し、４−６時間ＧＡＡペプチドと共に負荷した。採取２時間前に該培養液中にＰＡＤＲＥペプチドを添加した。αＤＣ１放出の基準は、グラム染色及び細菌培養での不稔性；マイコプラズマ陰性；エンドトキシン＜５．０  Ｅ．Ｕ．／ｋｇ体重；αＤＣ１上でのＣＤ８６及びＨＬＡ−ＤＲ両者の７０％以上の発現が挙げられる。
【０２２５】
７．７．１．６  末梢血（ＰＢＭＳ）の採取
末梢血（５０−６０ｍｌ）は、ワクチン接種（ワクチン接種前）のための各来院時と同様に、０、９及び３３週に採血した。１０％ジメチルスルホキシド／９０％ＦＢＳ中でＦｉｃｏｌｌ単離ＰＢＭＳを凍結保存した。
【０２２６】
７．７．１．７  ＥＬＩＳＰＯＴアッセイ
Ｅｎｚｙｍｅ−ｌｉｎｋｅｄ  ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ  ｓｐｏｔ（ＥＬＩＳＰＯＴ）アッセイを、若干修正して以前記載されたように（例えば、Kirkwood et al, Clin.Cancer Res., 15:1443-1451, 2009参照）実施した。手短にいうと、野生型ＩＬ−１３Ｒα３４５−３５３、ＥｐｈＡ２８８３−８９１、ＧＰ１００２０９−２１７及びＹＫＬ−４０２０２−２１１で１週間負荷した自己の照射されたＰＢＭＣによる以下のｉｎ  ｖｉｔｒｏ刺激で、バッチＰＢＭＣサンプルを同時に評価した。陽性ＥＬＩＳＰＯＴ応答は、ワクチン接種前のレベルに対するスポット形成Ｔ細胞での２倍増加と任意の抗原に対する少なくとも２つの連続したワクチン後時点での少なくとも１０スポット／２０，０００細胞として定義した。
【０２２７】
７．７．１．８  テトラマーアッセイ
フィコエリトリン（ＰＥ）共役ＨＬＡ−Ａ＊０２０１／ＡＬＰＦＧＦＩＬＶ（配列番号：３）（ＩＬ−１３Ｒα２−テトラマー）、ＨＬＡ−Ａ＊０２０１／ＩＭＤＱＶＰＦＳＶ
（配列番号：１１）（ｇｐ１００−テトラマー）及びＨＬＡ−Ａ＊０２０１／ＴＬＡＤＦＤＰＲＶ（配列番号：６）（ＥｐｈＡ２−テトラマー）は、ピッツバーグ大学ペプチド製造施設で合成したペプチドを用いて、エモリー大学ワクチンセンター内（Atlanta, GA
）にある米国国立アレルギー及び感染症テトラマー施設（National Institute of Allergy and Infectious Disease tetramer facility）で製造した。フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）共役抗ヒトＣＤ８は、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓから入手した。テトラマーアッセイ（例えば、Weber t al, J Immunother., 31:215-23, 2008; and Celis, Cancer, 110:203-14, 2007参照）による全ＣＤ８＋細胞陽性の（０．１＋Ｂ）％と
なるペプチドの１時点での陽性応答を定義することができ、Ｂは、ベースラインでの陽性パーセントであり、全ケースで０．０１％未満であった。彼／彼女が任意のペプチドに対して２つの連続する１時点応答を示した場合、患者は応答したと考えた。
【０２２８】
７．７．１．９  サイトカイン及びケモカインアッセイ
全ＲＮＡサンプルは、ＰＡＸｇｅｎｅ  Ｂｌｏｏｄ  ＲＮＡ  Ｓｙｓｔｅｍ（ＰｒｅＡｎａｌｙｔｉｘ，  Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）を用いてＰＢＭＣから得た。ＲＴ−ＰＣＲを３回実施し、ＧＡＰＤＨに対して値を標準化し、相対的ｍＲＮＡの発現はΔΔＣＴ法を用いて算出した（例えば、Livak and Schmittgen, Methods, 25:402-8, 2001参照）。以
前記載されたように（例えば、Zczepanski et al, Cancer Res., 69:3105-3113, 2009参
照）、ルミネックスアッセイ（Ｌｕｍｉｎｅｘ−ｂａｓｅｄ  ａｓｓａｙ）を血清サンプル中で実施した。事前に試験したマルチプレックスプレート（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）は検量線及びサイトカイン標準品（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を含んでいた。ＣＸＣＬ１０のための放射性標識されたｃＲＮＡプローブで、Ｉｎ  ｓｉｔｕ  ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ（例えば、Fallert and Reinhart, J Virol Methods, 99:23-32, 2002参照）に記
載されているように、オートラジオグラフィー暴露１４日の期間で実施した。
【０２２９】
７．７．１．１０  放射線応答監視
腫瘍の大きさは、９、１７、２５及び３３週、その後３ヶ月毎にコントラスト増強ＭＲＩスキャンを用いて評価した。ＭＲＩ前処置外観に基づく、ＭｃＤｏｎａｌｄ基準及びガドリニウム（Ｇｄ）増強Ｔ１強調画像、Ｔ２強調画像上のシグナル延長領域、あるいは両者の組み合わせで応答を評価した。
【０２３０】
７．７．１．１１  他の臨床的エンドポイント
全生存期間は、研究エントリーから死亡日までの間隔により定義した。無増悪期間（ＴＴＰ）評価にＭＲＩスキャンを使用した。
【０２３１】
７．７．２  結果
７．７．２．１  臨床毒性のまとめ
表４に全２２患者について、処置関連有害事象（Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ−ｒｅｌａｔｅｄ
ＡＥ）を記載している。グレード３又は４の毒性、研究中の死亡、及び第１ブースターフェーズ中のどの用量でも、ＤＬＴはなかった。自己免疫の発生はなかった。毒性プロファイルはどの用量レベルでも同等であった。グレード１又は２注射部位反応はほぼ共通していた（８２％）。疲労（７３％）、筋肉痛（３２％）、発熱（２３％）、寒け／悪寒（１８％）、頭痛（３２％）を含むグレード１インフルエンザ様症状は共通し、通常各ワクチン接種後２４時間に限定された。１患者においてグレード２リンパ球減少を記録した（５％）。
【０２３２】
【表４】
2019123745.tif 000010
【０２３３】
７．７．２．２  αＤＣ１によるＩＬ−１２産生
表３Ａ−３Ｂに示されるように、αＤＣ１によるＣＤ４０Ｌ誘導ＩＬ−１２  ｐ７０産生レベルは、実質的に患者間で変化し、ＴＴＰと正の相関が認められた。しかし、ＩＦＮ−γ  ＥＬＩＳＰＯＴ応答、患者の年齢又は腫瘍タイプとは相関していなかった。
【０２３４】
７．７．２．３  ＧＡＡに対するエピトープ特異的免疫応答誘導
４回のワクチン接種の最初のコースを終了した全１９患者が、免疫学的監視（モニタリ
ング）可能なＰＢＭＣを有していた。患者１７、２１及び２２から得たＰＢＭＣは、ＥＬＩＳＰＯＴ及びテトラマーアッセイの両者を行うためには不十分な量であり、機能的なＥＬＩＳＰＯＴアッセイを優先した。予定の最初の４回ワクチン接種は、各ＩＦＮ−γ  ＥＬＩＳＰＯＴ又はテトラマーアッセイによる、用量レベル１及び２それぞれで、１０中６及び９中５において、少なくとも１つのワクチン標的ＧＡＡに対する免疫応答を誘導した。患者６、７、８、１６、１９、２０及び２２において、いくつかの表示値がブースターワクチンに続く陽性応答の基準に達した。要するに、評価可能な患者１９人のうち１１人（５８％）が、最初の４回ワクチン接種後陽性反応を示し、１９人のうち３人（患者８、１９及び２０；１６％）が、ブースターワクチン接種後にのみ陽性反応を示した。
【０２３５】
陽性反応率（テトラマー又はＥＬＩＳＰＯＴのいずれかによる）は、フィッシャーの正確確率検定（Ｆｉｓｈｅｒ’ｓ  ｅｘａｃｔ  ｔｅｓｔ）あたり、２つのαＤＣ１用量にわたり有意な差を示さなかった。さらに、３週から９週の陽性スポットの合計に基づくＥＬＩＳＰＯＴ応答の大きさは、２つのαＤＣ１用量レベルにわたり同等であった（Ｗｉｌｃｏｘｏｎ検定）。したがって、ＩＦＮ−γ  ＥＬＩＳＰＯＴ応答の期間経過は、両者の用量レベルからの結果を組み合わせて表している（図１１）。ｇｐ１００エピトープは、試験したＧＡＡペプチド中最も高い反応性を示した（ＩＬ−１３Ｒα２−、ＥｐｈＡ２−及びＹＫＬ−４０−由来ペプチドに対し、それぞれ、ｐ＝０．０００１、０．０００３及び０．０００５；Ｗｉｌｃｏｘｏｎ検定による）。他のエピトープのために、ブースターワクチンは特異的反応の誘導を改善するように思われた。一過的な反応の減少が概して１３週に観察された。これは、９週まで陽性反応を示した何人かの患者が、腫瘍進行（患者２、９、１８及び２１）又はリンパ球減少（患者１０）のためにブースターフェーズに参加しなかったため、全データが全患者のためにプールされる場合、全体の反応減少が生じることによることを反映しているのかもしれない。患者１０は、ＩＬ−１３Ｒα２及びｇｐ１００由来エピトープ同様ＰＡＤＲＥに対しても最も高いＩＦＮ−γ  ＥＬＩＳＰＯＴ応答を示した（図１２）。しかし、当該患者のテトラマー分析は、全く反応がなかった（表３Ａ）。３０ヶ月以上不変（stable disease）を示す患者６は、テトラマー（図１３）及びＥＬＩＳＰＯＴアッセイで耐久性及び高レベル応答を示した。
【０２３６】
７．７．２．４  １型サイトカイン及びケモカイン応答の誘導
ＰＢＭＣのＲＴ−ＰＣＲ分析（図１４及び１５）により、１回目ワクチン接種後及び４回目ワクチン接種後両者で、いくつかの１型サイトカイン及びケモカイン、具体的にはＩＦＮ−α１、ＣＸＣＬ１０及びＴＬＲ３のｍＲＮＡ発現の発現増加が明らかになった。ＩＦＮ−γは、４回目ワクチン接種後に発現増加がみられたが、１回目ワクチン接種後ではみられなかった。このことは、ＩＦＮ−γ発現増加が、先天性の免疫応答より、適応免疫応答の誘導と関連している可能性を示唆している。制御性Ｔ細胞を引き付けることが知られているＣＣＬ２２（例えば、Muthuswamy et al., Cancer Res. 68:5972-5978, 2008参
照）及びＣＣＬ５レベルが、１回目ワクチン接種後のサンプルのペア分析で減少していた。Ｐｅｒｆｏｒｉｎ、Ｇｒａｎｚｙｍｅ  Ｂ、ＣＯＸ−２及びＦｏｘｐ３レベルは、有意に変化しなかった。
【０２３７】
５人の患者からの、ワクチン接種前及びワクチン接種後の使用可能な血清サンプル中の、サイトカイン及びケモカインのパネルについてタンパク質レベルで評価した（図１６）。その中で、ワクチン接種後血清で、ＩＦＮ−α、ＣＸＣＬ１０、ＩＬ−１５、ＭＣＰ−１及びＭＩＰ−１βが有意に発現増加していた。ＩＬ−１７は、ＲＴ−ＰＣＲ及び血清分析の両者において、検出可能範囲以下であった。
【０２３８】
加えて、ワクチン接種後放射線進行のため切除された使用可能な５個の腫瘍のうち３個が、脳腫瘍部位へのＣＤ８＋Ｔ細胞の効果的なトラフィッキングに重要なケモカインであるＣＸＣＬ１０（例えば、Nishimura et al., Cancer Res 66:4478-4487, 2006; and Fuj
ita et al., Cancer Res 69:1587-1595, 2009参照）のｍＲＮＡを発現していた（代表的
なケースとして図１７）。当該データは、一般的に免疫不全の悪性グリオーマ患者に、今回のレジメンが全身性、多機能的な免疫応答を誘導することを示している。
【０２３９】
７．７．２．５  免疫組織化学データ
７ケースＧＡＡケースの免疫組織化学データを表５にまとめている。当該データは、ｇｐ１００の発現が原発性高悪性度グリオーマでは非常に低いかもしれないことを示している。免疫組織化学のために、以下のポリクローナル抗体（Ａｂ）及び対応する２次抗体を使用した：抗ヒト（ｈ）ＩＬ−１３Ｒα２（ヤギＩｇＧ；  Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）；抗ヒトＥｐｈＡ２（Ｈ−７７）（ウサギＩｇＧ；  Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）；抗ヒトＹＫＬ−４０（ウサギＩｇＧ；  Ｑｕｉｄｅｌ）及び抗ヒトｇｐ１００（ヤギＩｇＧ；  Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）。
【０２４０】
【表５】
2019123745.tif 000011
【０２４１】
７．７．２．６  臨床結果
２人の患者（患者１及び２０）が客観的に臨床的な腫瘍の退行を経験した（反応率＝９％）。両患者はＥＬＩＳＰＯＴでは非応答者であったが、テトラマー応答者であった。再発性ＧＢＭの患者２０は、ワクチン接種後１７週目に、ベースラインＭＲＩと比較してＧｄ強化質量の消失に基づく完全寛解を示した。これは、治療開始以来少なくとも１３ヶ月間耐久し継続した（図１８Ａ−Ｉ）。再発性ＧＢＭの患者１は、９週目に部分寛解を示した。２回のブースターワクチンに続き、Ｇｄ強化病変が拡大した。しかしながら、病変の生検で、ＣＤ８＋Ｔ細胞及びＣＤ６８＋マクロファージの強い浸潤と有糸分裂活発な腫瘍の痕跡はないことが明らかとなった（図１８Ｊ−Ｌ）。したがって、当該患者はワクチン接種開始後７ヶ月で、再発前に１回の追加ワクチン接種を受けた。９人の患者（４１％；ＧＢＭ及びＡＧでそれぞれ４及び５）が少なくとも１２ヶ月間進行が無かった。５人の患者は進行が無いままで（表３Ａ）、ブースターワクチンを受け続けた。ＴＴＰ中央値は、ＧＢＭ及びＡＧそれぞれ、４月及び１３月である（図２０）。
【０２４２】
７．７．３  結論
本実施例に記載された研究は、ｐｏｌｙ−ＩＣＬＣと組み合わせた新規ＧＡＡ由来ペプチドで負荷したαＤＣ１ワクチンを評価した。当該知見は、安全性及び免疫原性と同様、当該アプローチの予備的な有効性を示す。
【０２４３】
７．８  実施例８
本実施例は、ｐｏｌｙ−ＩＣＬＣと組み合わせたＨＬＡ−Ａ２拘束性グリオーマ抗原ペプチドワクチン接種を含む再発ＷＨＯグレードＩＩグリオーマの成人に対する治療レジメンの安全性及び有効性の研究を記載する。
【０２４４】
７．８．１  合理性（Rational）
本実施例は、再発ＷＨＯグレードＩＩグリオーマの患者における抗腫瘍Ｔ細胞応答を効率的に誘導するように設計されたワクチンレジームを記載する。該レジームは、グリオーマ関連抗原（ＧＡＡ）由来細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）エプトープ−ペプチドの皮下注射とｐｏｌｙ−ＩＣＬＣの同時筋肉内（simultaneous intramuscular; i.m.）投与とを組み合わせる。
【０２４５】
テント上低悪性度グリオーマ（ＬＧＧ）の成人は、放射線療法（ＲＴ）に続く手術又は手術による処置後２年腫瘍進行の重大なリスクがある（２４％）。本実施例に記載された研究は、腫瘍再発リスクを減らす免疫予防的及び免疫療法的可能性を有し、生存率の改善につながる可能性がある。治療的に、免疫治療アプローチは、腫瘍性低悪性度ＩＩ腫瘍細胞の無痛的な膨張を抑制する可能性がある。予防的に、該アプローチは再発性ＬＧＧの約半分で起きる未分化トランスフォーメーションを防ぐ可能性がある。ＬＧＧのより遅い成長率（悪性グリオーマと比較して）は、複数の免疫を繰り返すのに十分な時間を与えるはずであり、ＧＡＡ特異的免疫の高レベルな誘導をもたらす可能性がある。加えて、ｐｏｌｙ−ＩＣＬＣは前臨床脳腫瘍モデルでワクチン効果を促進すること（例えば、Zhu et al.,  J.Transl.Med., 5: 10, 2007参照）、悪性グリオーマ患者で安全であること（例えば
、Salazar et al., Neurosurgery, 38: 1096-1103, 1996参照）が示されている。したが
って、ｐｏｌｙ−ＩＣＬＣと組み合わせたこの形態のワクチンは、強力な抗グリオーマ免疫応答を誘導し、かつ、安全だろうと仮説を立てている。
【０２４６】
７．８．２  目的
本実施例は、再発ＷＨＯグレードＩＩグリオーマの成人でのワクチン研究を記載する。本実施例の目的は、追加の研究で使用し得る免疫学的及び安全性データを収集することを含む。本実施例に記載される研究の患者は最小２年間追跡され得る。そのため、実際２年の全生存（ＯＳ）率並びに６月及び２年無増悪生存（ＰＦＳ）率を予備的手法で決定することができる。
【０２４７】
７．８．２．１  ＧＡＡ特異的Ｔ細胞応答の誘導
この形態のワクチンに反応したＧＡＡペプチドに対するワクチン接種後末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）での応答率及び免疫応答の度合いを、ＩＦＮ−γ−ｅｎｚｙｍｅ−ｌｉｎｋｅｄ  ｉｍｍｕｎｏ−ｓｐｏｔ（ＥＬＩＳＰＯＴ）及びテトラマーアッセイを用いて決定することができる。
【０２４８】
７．８．２．２  安全性
レジメン規定毒性（ＲＬＴ）の頻度に基づく早期停止規則と共に、ワクチンレジームに関与する有害事象の発生率と重症度を評価することができる。
【０２４９】
７．８．２．３  臨床反応
標準的なＷＨＯ応答基準を用いて放射線応答を決定することができる。６月及び２年無
増悪生存率（ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ−ｆｒｅｅ  ｓｕｒｖｉｖａｌ；ＰＦＳ）を連続磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）スキャンに基づき予備的方法で評価することができる。
【０２５０】
７．８．２．４  生物学的相関のための腫瘍組織
進行、生検／切除を行う患者が推奨される。ワクチン接種後腫瘍組織が利用できるときは、ＧＡＡ発現状態及びＧＡＡ特異的Ｔ細胞の浸潤を分析することができる。
【０２５１】
７．８．３  患者選択
７．８．３．１  適正基準
病理学的基準−患者は、以前の生検若しくは切除、又は再手術時（今回の研究へのエントリー前の再手術も許容される。しかし、最初のワクチン投与前少なくとも４週間は、術後デキサメタゾン（Ｄｅｃａｄｒｏｎ）を絶たなければならない。）のいずれかで組織学的に確認された再発性テント上ＷＨＯグレードＩＩ星状細胞腫、乏突起星状細胞腫又は乏突起グリオーマを有する。本研究の患者は、体外照射療法及び／又は化学療法を以前に受けているはずである。以前の治療に関し、本研究の患者は２回以内、以前に再発のために処置を受けているはずである。再発は、最初の治療後の進行として定義する（つまり、最初の治療として使用された場合、照射＋／−化学療法）。したがって、本研究の患者は３回以前に治療を受けているはずという意図である。患者が再発した病気のために外科的切除を受け、最大１２週まで抗がん治療が開始されておらず、該患者がもう１つの外科的切除を受ける場合、これは１切除とみなされる。
【０２５２】
本研究の患者は、フローサイトメトリーに基づきＨＬＡ−Ａ２陽性であるべきである。
【０２５３】
本研究の患者は、以前の治療の毒性効果から回復しているべきである。いかなる治験薬からも４週間；以前の細胞傷害性治療から４週間及び／又は、ビンクリスチン投与から少なくとも２週間、ニトロソ尿素化合物投与から４週間、プロカルバジン投与から３週間、及びインターフェロン、タモキシフェン、サリドマイド、シス（cis）−レチノイン酸等
の非細胞傷害性剤から１週間（放射線増感剤はカウントしない）。以前の放射線療法（ＲＴ）に関し、ＲＴ（又は放射線手術）の完了から少なくとも６ヶ月経っていなければならない。
【０２５４】
本研究の患者は、＞１８歳であるべきである。
【０２５５】
本研究の患者は、＞６０のカルノフスキーパフォーマンスステータス（Appendix I）であるべきである。
【０２５６】
本研究での女性患者の出産の可能性は、血清β−ＨＣＧの妊娠検査を行うべきである。
【０２５７】
患者は全身感染がないべきである。活動性感染の患者（抗生物質治療が必要であろうとなかろうと）は、該感染の完全な回復後適格である可能性がある。抗生物質治療中の患者は、処置を始める前に少なくとも７日間抗生物質を絶つべきである。
【０２５８】
本研究の患者は、白血球数≧２５００／ｍｍ３；リンパ球≧４００／ｍｍ３；血小板≧１００，０００／ｍｍ３、ヘモグロビン≧１０．０ｇ／ｄＬ、正常値の上限２．５×以内のＡＳＴ、ＡＬＴ、ＧＧＴ、ＬＤＨ、アルカリホスファターゼ及び総ビリルビン≦２．０ｍｇ／ｄＬ並びに正常値の上限血清１．５×以内のクリアチニンとして測定される十分な臓器機能を有すべきである。本研究の患者は凝固試験並びにＰＴ及びＰＴＴが、正常値の上限内にあるべきである。
【０２５９】
７．８．３．２  除外基準
本研究の患者は、神経膠腫症、大脳、頭蓋、脊髄軟膜転移症が存在する場合、除外すべきである。
【０２６０】
最初の診断がＷＨＯグレードＩＩグリオーマであったとしても、再発病のための病理学的診断が、より悪性なグリオーマ（すなわち、ＷＨＯグレードＩＩＩ又はＩＶ）へのトランスフォーメーションを示す場合、本研究から患者を除外すべきである。
【０２６１】
本研究の患者は、放射線療法；化学療法；インターフェロン（例えば、Ｉｎｔｒｏｎ−Ａ（登録商標））；アレルギー脱感作注射；成長因子（例えば、Ｐｒｏｃｒｉｔ（登録商標）、Ａｒａｎｅｓｐ（登録商標）、Ｎｅｕｌａｓｔａ（登録商標））；インターロイキン（例えば、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標））；及び／又は任意の治験治療薬を含む、同時処置又は投薬を受けている場合、除外すべきである。
【０２６２】
本研究の患者は、細胞傷害性又は免疫抑制治療を必要とする自己免疫疾患、又は内臓障害を伴う自己免疫疾患を以前に患ったことがないべきである。これらの治療を必要とする活性自己免疫疾患を伴う本研究の患者も除外すべきである。ＮＳＡＩＤの薬を必要とする軽度の関節炎は、除外すべきではない。
【０２６３】
本研究の患者は、本研究に入る前４週間以内に免疫抑制剤を使用していた又は免疫抑制剤の使用を予定されている患者を除外すべきである。周術期及び／又は放射線療法中に、デキサメタゾン又は他のコルチコステロイド薬が使用されている場合、本研究の最初のワクチン投与前少なくとも４週間、患者により漸減され、中断すべきである。局所的なコルチコステロイド及び吸入ステロイド（例えば、Ａｄｖａｉｒ（登録商標）、Ｆｌｏｖｅｎｔ（登録商標）、Ａｚｍａｃｏｒｔ（登録商標））は許容すべきである。
【０２６４】
本研究の患者は、以下の診断：既知の転移を伴わない皮膚の扁平上皮細胞がん；既知の転移を伴わない皮膚の基底細胞がん；非浸潤性乳がん（ＤＣＩＳ又はＬＣＩＳ）；非浸潤性子宮頸癌；及び／又は５年以上再発又は転移の兆候がなく、治療が成功している遠隔転移のない任意のがん、を除く別のがんの診断を受けている場合、除外すべきである。
【０２６５】
本研究の患者は、アルコール中毒又は違法薬物であることが分かっている人を除外すべきである。
【０２６６】
免疫欠損の患者は本治療に反応が見込めないため、ＨＩＶ陽性患者は本研究から除外すべきである。
【０２６７】
７．８．４  ペプチドワクチン
７．８．４．１  ペプチド
以下のペプチド、ＩＬ−１３Ｒα２３４５−３５３１Ａ９Ｖ（ＡＬＰＦＧＦＩＬＶ；配列番号：３）；ＥｐｈＡ２８８３−８９１（ＴＬＡＤＦＤＰＲＶ；配列番号：６）；Ｓｕｒｖｉｖｉｎ９６-１０４：Ｍ２（ＬＭＬＧＥＦＬＫＬ；配列番号：７）；ＷＴ１１２６
−１３４：Ｙ１（ＹＭＦＰＮＡＰＹＬ；配列番号：８）；及び破傷風トキソイド（ＴｅｔＡ８３０）（ＡＱＹＩＫＡＮＳＫＦＩＧＩＴＥＬ；配列番号：９）がワクチン製剤に含まれ得る。
【０２６８】
全ペプチドを合成することができ、ＨＰＬＣで該合成ペプチドを精製することができる合成ペプチドの同一性は、質量分析による質量及びアミノ酸配列の検証で確かめることができる。それぞれのペプチドのロットは、ＦＤＡによる同一性、純度、無菌性、発熱性で評価することができる。
【０２６９】
ペプチドは、ＧＭＰ条件下バイアルに入れ−７０℃で保存可能である。乾燥凍結したペプチドの安定性は、質量分析で毎年試験することができる。
【０２７０】
７．８．４．２  他の試薬
Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ−５１（ＳＥＰＰＩＣ  Ｉｎｃ．，  Ｆａｉｒｆｉｅｌｄ，  ＮＪ）は、ペプチドワクチン中で追加の剤として使用可能である。
【０２７１】
７．８．４．３  投与量及び調製
１つの水中油型エマルジョン（すなわち、容量／注射が１ｍＬ）を形成するために、４つのＨＬＡ−Ａ２拘束性ＧＡＡペプチド（３００μｇ／ペプチド）及び破傷風ペプチド（ペプチド−ｔｅｔ；２００μｇ）各々を含む水溶液（５００μＬ）を１／１でＭｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ−５１とともに混合することができる。
【０２７２】
７．８．４．４  投与
本研究の患者は、インタクト排出腋窩リンパ節に右又は左上腕で皮下にワクチン接種される。排出節としてインタクト腋窩リンパ節を持たない患者のケースでは、インタクト鼠径リンパ節同じ側の上部の腿にワクチンを投与し得る。
【０２７３】
０、３、６、９、１２、１５、１８及び２１週の週にワクチンを投与することができる。
【０２７４】
７．８．５  Ｐｏｌｙ−ＩＣＬＣ
Ｐｏｌｙ−ＩＣＬＣを、Bioserv, Corporation（San Diego, California）のＧＭＰ施
設で調製して、パッケージングすることができる。Ｐｏｌｙ−ＩＣＬＣを、２ｍｇ／ｃｃの濃度で半透明の溶液の１ｃｃを含むバイアル中で供給することができる。Ｐｏｌｙ−ＩＣＬＣは室温で数日間安定であるが、約４℃で冷凍保存することができる。
【０２７５】
７．８．５．１  投与量及び投与
２０μｇ／ｋｇから１６４０μｇ／注射の用量で、各ワクチン接種後０、４日目に２回の注射で、筋肉内注射でＰｏｌｙ−ＩＣＬＣを投与することができる。
【０２７６】
ｐｏｌｙ−ＩＣＬＣ投与（２０μｇ／ｋｇ  ｉ．ｍ．及び最大１６４０μｇ／注射）の最初のコースは、最初のＧＡＡ／ＴＴワクチン当日及び該ワクチン接種後４日目に投与することができる。繰り返しのワクチン接種（３、６、９、１２、１５、１８及び２１週）後それぞれで、ワクチン接種後当日及びワクチン接種後４日にｐｏｌｙ−ＩＣＬＣ（２０μｇ／ｋｇ  ｉ．ｍ．及び最大１６４０μｇ／注射）を投与することができる。
【０２７７】
注射部位に関し、ｐｏｌｙ−ＩＣＬＣは排出腋窩リンパ節での抗原提示プロセスを促進すると思われているため、先のペプチド注射部位（例えば、先のペプチド注射部位の中央から３ｃｍ未満）と接近してｐｏｌｙ−ＩＣＬＣを筋肉内投与（i.m.）投与すべきである。
【０２７８】
Ｐｏｌｙ−ＩＣＬＣは、患者の体重あたり処方される量で（最大１６４０μｇ／注射）、バイアルから供給する際には無菌操作で筋肉内投与（i.m.）すべきである。最初の処置前及び処置後少なくとも２０分間はバイタルサインを監視することができる。
【０２７９】
７．８．６  処置プラン
本実施例に記載された研究は、再発ＷＨＯグレードＩＩグリオーマのＨＬＡ−Ａ２＋患者でのＧＡＡ／ＴＴペプチドワクチン及びｐｏｌｙ−ＩＣＬＣの免疫原性、安全性、臨床的有効性を評価するための患者の２つのコホートを使用することができる。ペプチドワク
チンは局所的に隔離され、免疫応答は主に局所的に、排出リンパ節で生じるため、ワクチン投与量はレシピエントの大きさ（体重又は体表面積による）に比例してスケールアップされる必要はない。薬に関して当然のことであるが、その効果は、体液内での分布に関連している。ｐｏｌｙ−ＩＣＬＣの用量に関し、悪性グリオーマの患者に安全かつ生物学的応答を誘導することが示されている（例えば、Salazar et al. , Neurosurgery, 38: 1096-1103, 1996）一定用量（２０μｇ／ｋｇ／注射及び最大１６４０μｇ／注射）を使用することができる。
【０２８０】
７．８．６．１  スケジュール
０、３、６、９、１２、１５、１８及び２１週にＧＡＡ／ＴＴワクチンの皮下注射で患者を処置することができる。各ワクチン接種後当日及び４日目に（例えば、木曜日にワクチンを投与する場合、ワクチン接種当日及び続く月曜日にｐｏｌｙ−ＩＣＬＣを投与することができる。）筋肉内（Ｉ．ｍ．）にｐｏｌｙ−ＩＣＬＣを投与することができる（２０μｇ／ｋｇ／注射及び最大１６４０μｇ／注射）。ｐｏｌｙ−ＩＣＬＣ投与前又は後２時間以内に各ワクチンを投与することができる。
【０２８１】
臨床来院又はＭＲＩ検査で、あらゆる可能な有害事象、レジメン規定毒性（ＲＬＴ）同様、臨床／放射線応答について患者を評価することができる。ＭＲＩスキャンは、０、１２及び２４週に実施することができる。１２週でのスキャンが明確な腫瘍進行を示す場合、患者は脱落し得る。
【０２８２】
最初のワクチン接種前に得た末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）をベースラインサンプルとして使用することができる。患者がＲＬＴ又は腫瘍進行なく、２つの免疫学的アッセイ（ＥＬＩＳＰＯＴ又はテトラマー）でいずれも陽性応答を示す場合、患者が腫瘍進行、免疫応答の喪失又はＲＬＴを示すまでは、３４−４０週とその後３ヶ月毎の間のいつでもから開始する追加のＧＡＡ／ＴＴワクチン（例えば、セクション７．８．６．２参照）を患者に提供することができる。
【０２８３】
７．８．６．２  付加療法
０（ベースライン）、１２、１５、１８、２１及び２４週に、患者のＰＢＭＣのＧＡＡペプチドに対するＧＡＡ特異的Ｔ細胞応答の存在を評価することができる。ＧＡＡペプチドのいずれかで当該応答が観察される場合、永続的な応答を示すＧＡＡでの追加ワクチン接種同様、最初のワクチン接種から３４−４０週とその後１２ヶ月毎から最長２年までの間のいつでもから開始するｐｏｌｙ−ＩＣＬＣを患者は受けることができる。追加のＰＢＭＣサンプルは、免疫学的監視のために１２週毎（ワクチン投与のための同一の来院で）に得ることができる。追加ワクチンは以下のいずれかの条件、１）腫瘍進行、２）ＲＬＴ又は３）２つの連続する時点での陰性免疫学的応答、の時に終了することができる。
【０２８４】
７．８．６．３  用量変更
７．８．６．３．１  ｐｏｌｙ−ＩＣＬＣの用量変更
発熱及び疲労を含む、グレード２又はそれより大きなインフルエンザ様症状のために、ｐｏｌｙ−ＩＣＬＣは、症状がグレード０になるまで中断することができる。ワクチン接種日にグレード２又はそれより大きなインフルエンザ様症状が起き、ワクチン接種後４日目までグレード０に戻らない場合、ワクチン接種後４日目の次のｐｏｌｙ−ＩＣＬＣ投与は飛ばすることができる。患者が、４日目に症状がない場合（グレード０）、ｐｏｌｙ−ＩＣＬＣは最初の投与量の５０％で再開することができる。ワクチン接種後４日目にｐｏｌｙ−ＩＣＬＣ投与後にグレード２又はそれより大きなインフルエンザ様症状が起きる場合、次のワクチンサイクルでは、２つのｐｏｌｙ−ＩＣＬＣ投与（ワクチン後０日及び４日に）を最初の投与量の５０％で行うことができる。アセトアミノフェン６５０−１０００ｍｇ又は任意のＮＳＡＩＤによる前処置を行うことができる。さらなる投薬によく耐え
るのであれば、最初の投与量は続けて再開することができる。
【０２８５】
肝酵素評価＞４ｘベースライン又はグレード２若しくはそれより大きな他の予測不能で耐え難い副作用の場合、毒性がグレード１又はそれ以下に減少するまでｐｏｌｙ−ＩＣＬＣを中断することができる。それから最初の投与量の半分でＰｏｌｙ−ＩＣＬＣを再投与し、患者を綿密に観察することができる。ｐｏｌｙ−ＩＣＬＣを次のワクチンサイクル時に再開することができない場合、患者はＲＬＴにより脱落し得る。
【０２８６】
研究エントリー時にグレード３又はそれより少ないリンパ球減少（我々の適格基準は４００細胞／μＬを必要とする）を示す患者のために、研究中のグレード３リンパ球減少の発生又は継続的な存在によりｐｏｌｙ−ＩＣＬＣの中断を強制するものではない。しかしながら、グレード  ４  リンパ球減少の場合ｐｏｌｙ−ＩＣＬＣを一時中断することができる。また、グレード３  リンパ球減少であっても、ｐｏｌｙ−ＩＣＬＣの属性が強く疑われる場合、ｐｏｌｙ−ＩＣＬＣ  投与を一時中断することができる。当該ケースでは、全リンパ球数が少なくとも  ４００／μＬに戻ってくる時に最初の投与量の半分で再投与することができる。
【０２８７】
患者は、グレード１毒性のための最初の投与量のままでよい。しかしながら、該投与量はグレード２血液学的または非血液学的毒性（このセクションの前半で概説されるように一過的な発熱や疲労を除く）のために５０％まで減少することができる。５０％投与量レベルで最低２週間毒性がない場合、投与量を開始時の量に増大することができる。その後の毒性は、それらが発生した場合、５０％まで投与量の減少を必要とし、それ以上の増大は許されないかもしれない。減少させた投与量で毒性が再発生する場合、患者の処置をあきらめるかもしれない。
【０２８８】
７．８．６．３．２  ペプチドワクチンのための遅延投薬
ｐｏｌｙ−ＩＣＬＣ投与が一時停止される状況下において、該事象が、ペプチド／ＩＳＡ−５１ワクチンに起因しない場合、予定通りにワクチン投与を続けるべきである。該事象がｐｏｌｙ−ＩＣＬＣ及びペプチドワクチン両者に起因する場合、両者を一時停止することができる。該事象が、ペプチド／ＩＳＡ−５１ワクチンのみにより、ｐｏｌｙ−ＩＣＬＣにはよらないると考えられる場合、ワクチン及びｐｏｌｙ−ＩＣＬＣ投与を一時停止することができる。併発疾患又は研究室で他の毒性の原因を評価する必要がある場合等、有害事象の評価が限定される状況下において、４週間までワクチンスケジュールを中断することができる。４週間まで１つのワクチン投与の遅延は、有害事象による場合、原因にかかわらず、プロトコール違反と考えられないだろう。有害事象が原因で１以上のワクチン接種が４週間まで遅延する場合、原因にかかわらず、処置を中断すべきである。
【０２８９】
研究の間中、レジメン規定毒性（ＲＬＴ）に則って患者を観察することができる。多分、おそらく、あるいは間違いなく処置に関連すると判断される場合、以下はＲＬＴと考えられる。それらが起きれば、患者個人を研究から外し、さらなる注射を投与することはできない。
【０２９０】
≧グレード２又はそれ以上  気管支けいれん又は全身性蕁麻疹（過敏症）
【０２９１】
≧グレード２又はそれ以上  剥脱性紅皮症、アナフィラキシー又は血管虚脱等のアレルギー反応
【０２９２】
≧グレード２又はそれ以上  自己免疫疾患（例えば、甲状腺機能低下症、自己免疫性脳炎）
【０２９３】
任意の≧グレード３  次の有害事象に特に注意を払うワクチン接種に、多分、おそらく、あるいは間違いなく関連する毒性
【０２９４】
≧グレード３  ペプチドワクチン又はｐｏｌｙ−ＩＣＬＣ投与による注射部位反応
【０２９５】
≧グレード３  血液学的毒性又は肝毒性
【０２９６】
≧グレード３  神経毒性：炎症性／リンパ性浸潤の病理学的所見での生検又は切除を必要とする腫瘍進行又は炎症性免疫応答（すなわち、偽腫瘍進行）のいずれかを示すサイン及び兆候
【０２９７】
≧グレード３  十分な制吐剤予防なしで吐き気や嘔吐がＲＬＴとは考えられない
【０２９８】
遅延投薬＞４週間  各ｐｏｌｙ−ＩＣＬＣ又はペプチドワクチンのための
【０２９９】
治療は以下の理由（ｉ）上記で定義したレジメン限定的毒性；（ｉｉ）病気の進行−ＭＲＩスキャンでの最大直径の総和の少なくとも２５％増加又は以前に非強化腫瘍でコントラスト増強の出現、で中断することができる。しかしながら、偽腫瘍進行が疑われる場合、患者に４ｍｇ／日までデキサメタゾンを認め、４−８週間後に再検査を行うことができる。＞４ｍｇ／日デキサメタゾンが必要な場合、あるいは、画像研究の繰り返しで病気の進行の基準を満たしている場合、該患者は研究から外し、さらなる研究は中断することができる。しかしながら、ステロイド投与量が＜４ｍｇ／日、かつ、画像研究の繰り返しで病気の進行の基準を満たしていない場合、該患者は研究を続けることができ、ここに規定された研究処置を受けることができる。腫瘍進行又は偽腫瘍進行が疑われるどのケースでも、対象が本研究に残るか否かを決定するために見直されるべきである。（ｉｉｉ）さらなるワクチン投与又はｐｏｌｙ−ＩＣＬＣ投与を妨げる併発疾患（ｉｖ）妊娠：妊娠した患者は、妊娠期間中追跡し続けられるだろう。
【０３００】
７．８．６．４  処置期間
有害事象による処置の遅延がない場合、２１週間処置、又は以下の基準のうち１つが適用されるまで続けることができる（８回ワクチン接種）：レジメン規定毒性（ＲＬＴ）；病気の進行及び／又はさらなる処置の投与を妨げる併発疾患
【０３０１】
７．８．６．５  同時処置
７．８．６．５．１  許容
熱のため、アセトアミノフェンを使用することができる（３２５ｍｇ錠剤、１又は２  経口、４時間毎）。アセトアミノフェンでの患者の前処置は、ｐｏｌｙ−ＩＣＬＣ副作用による当然の結果として開始される。処置後８時間以上続く熱は、潜在的感染の観点から評価される。
【０３０２】
軽度の局所的な痛みのために、経口アヘン（オキシコドン、５−１０ｍｇ経口、３−４時間毎）を計画することができる。軽度−中等度以上のグレードの痛みは、治療以外の原因のために調査され、それに応じて管理することができる。
【０３０３】
ワクチン／ｐｏｌｙ−ＩＣＬＣ治療（０週）開始前少なくとも４週間は、デキサメタゾン（又は類似のコルチコステロイド薬）を使用すべきではない。デキサメタゾン（４ｍｇ／日まで）は、偽腫瘍進行の状態で使用し、できる限り早く減量／中断することができる。
【０３０４】
示されたとおりに抗けいれん薬を使用すべきである。
【０３０５】
必要に応じて、制吐薬を投与することができる。
【０３０６】
他の許容可能な薬は、ステロイド外用薬；非ステロイド抗炎症剤；抗ヒスタミン（例えば、Ｃｌａｒｉｔｉｎ（登録商標）、Ａｌｌｅｇｒａ（登録商標））；セクション７．８．６．５．２に記載されているものを除く慢性薬；インフルエンザワクチン（少なくとも２週間研究ワクチン接種の開始前又は少なくとも８回目のワクチン接種後２週間にこれらを投与すべきである）；及び／又はコルチコステロイド薬は、経口又は吸入により投与される（例えば、Ａｄｖａｉｒ（登録商標）、Ｆｌｏｖｅｎｔ（登録商標）、Ａｚｍａｃｏｒｔ（登録商標））、を含むことができる。
【０３０７】
７．８．６．５．２  許容不能
本研究の患者は、放射線療法；化学療法；インターフェロン（例えば、Ｉｎｔｒｏｎ−Ａ（登録商標））；アレルギー脱感作アレルギー脱感作注射；成長因子（例えば、Ｐｒｏｃｒｉｔ（登録商標）、Ａｒａｎｅｓｐ（登録商標）、Ｎｅｕｌａｓｔａ（登録商標））；インターロイキン（例えば、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標））；及び／又は任意の治験治療薬を含む、同時処置又は投薬を受けている場合、除外すべきである。
【０３０８】
７．８．７  相関／特別研究
７．８．７．１  免疫学的監視
７．８．７．１．１  Ｅｎｚｙｍｅ  Ｌｉｎｋｅｄ  Ｉｍｍｕｎｏ−ＳＰＯＴ  （ＥＬＩＳＰＯＴ）アッセイ
ＧＡＡワクチン投与前後の末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）中のグリオーマ関連抗原（ＧＡＡ）応答性Ｔリンパ球前駆体の頻度をＥＬＩＳＰＯＴアッセイで測定することができる。ＥＬＩＳＰＯＴで測定された生物学的応答は、アッセイ間の変動を避けるために、１個人の少なくとも同一の時点で行うことができる。ワクチン接種の成功は、抗原特異的、ＭＨＣ拘束的様式でサイトカインを分泌することができるＴ細胞のクローン集団を刺激する。ＥＬＩＳＰＯＴアッセイは、ＣＤ８＋Ｔ細胞集団のＧＡＡ特異的免疫応答同様、ヘルパーＴＴペプチドに対し反応するＣＤ４＋Ｔ細胞を評価するために使用することができる。ＩＦＮ−γ産生は１型Ｔ細胞応答を算定することで評価することができる。  
【０３０９】
同一抗原に対する２つの連続するワクチン接種後の時点の任意の時点で（１２、１５、１８、２１及び２４週）、スポットの数がベースラインで２倍、少なくとも１０スポット／２０，０００細胞存在する場合、ワクチン接種後のスポットの数が、ワクチン接種前の値の少なくとも３倍の標準偏差の場合、対象は反応したと考えられる。応答は抗原のどれか１つでもあり得る。
【０３１０】
７．８．７．１．２  患者のＰＢＭＣ中のＧＡＡ反応性Ｔ細胞のテトラマー分析
テトラマー解析は、末梢血中のＧＡＡ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞存在の評価を、高感度で、該細胞のｉｎ  ｖｉｔｒｏ再刺激なしに可能にする。悪性グリオーマの患者から利用可能な以前のデータに基づいて、腫瘍抗原ワクチンで免疫された患者の何人か、全員ではない、で観察され得るペプチド応答性ＣＤ８＋Ｔ細胞の頻度の顕著（対数又はそれ以上）な増加を予測する。予備的な方法では、該ＰＢＭＣでＣＮＳ腫瘍及びケモカイン受容体（例えば、ＣＸＣＲ３  ａｎｄ  ＣＣＲ５）へのＴ細胞ホーミング（例えば、Zhu et al., J.Transl.Med., 5: 10, 2007参照）を行うとされているインテグリン受容体最晩期抗原（ＶＬＡ）４の表面発現を評価することもできる。テトラマー分析のための手順は、十分に確立されている。
【０３１１】
テトラマーアッセイは、ベースライン時とワクチン接種後の５つの時点（１２、１５、１８、２１及び２４週）で行うことができる。テトラマーアッセイによる全ＣＤ８＋細胞
陽性の（１＋Ｂ）％となるペプチドの１時点の陽性反応を定義することができ、Ｂはベースラインでのパーセント陽性であり、それは通常０．１％未満と考えられる。ＥＬＩＳＰＯＴ反応の定義に類似し、彼／彼女が任意のペプチドに対して２つの連続する１時点応答を示した場合、患者は応答したと考えられる。 
【０３１２】
７．８．７．１．３  リンパ球集合のフローサイトメトリック分析
ワクチン前後の連続時点で、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞の数と同様に、ＣＤ４＋／Ｆｏｘｐ３＋Ｔ制御細胞の数を評価することができる。
【０３１３】
７．８．７．１．４  血清中の自己免疫分析
保存血清で自己抗体の存在を評価することができる。
【０３１４】
７．８．７．２  原発性及び再発性腫瘍組織の評価
患者の使用可能な腫瘍組織でのＧＡＡ発現は、免疫組織化学（ＩＨＣ）及び逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）で評価できる（ワクチン接種前又はワクチン接種後のそれぞれ、又は両者）。
【０３１５】
ワクチン接種後に腫瘍が再発する場合、どのように腫瘍がワクチンの効果を免れたのかを評価することは重要であり得る。この目的を達成するために、組織利用性（tissue-availability）を認めるのと同様、以下の特定の事項を評価することができる。
（ｉ）抗原損失（loss）：ＩＨＣ及びＲＴ−ＰＣＲを用いて、再発した腫瘍が標的ＧＡＡ、ＨＬＡ−Ａ２及び抗原プロセッシングに関与するトランスポーターのような抗原プロセッシング機械部品（machinery components）を発現しているか否かを評価することができる、（ｉｉ）抗アポトーシスアップレギュレーション分子：Ｓｕｒｖｉｖｉｎは標的化されるかもしれないが、他の抗アポトーシス分子はアップレギュレートされるかもしれない。例えば、ｃＦＬＩＰ（細胞内ＦＬＩＣＥ（Ｆａｓ関連デスドメイン様ＩＬ−１β変換酵素）阻害タンパク質）；及び（ｉｉｉ）免疫細胞浸潤：腫瘍がワクチン誘導免疫応答を免れるかもしれない１つの理由は、該腫瘍を浸潤する反応性Ｔ細胞の失敗である。これを検討するために、新鮮な切除された腫瘍組織（固定又は凍結されない）が利用できる時は、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬｓ）を単離し、各ＧＡＡのためのＨＬＡ−Ａ２テトラマーを用いて、それらの数、表現型、抗原特異性の特徴づけを行うことができる。マルチカラーフローサイトメトリーを用いて、テトラマー＋ＴＩＬの機能、生存をパーフォリン／ＩＦＮ−γ及びアネキシンＶそれぞれの染色で決定することができる。コントロール組織は、本研究ではない患者からのワクチン前腫瘍（可能であれば）及び再発腫瘍を含むことができる。当該研究は、ワクチン誘導Ｔ細胞が脳腫瘍部位に効率的にトラフィックし得るか並びにその機能及び生存を維持し得るかを評価することができる。
【０３１６】
７．８．８  研究パラメータ
この研究は外来を基本に、０、３、６、９、１２、１５、１８、２１及び２４週に評価されるようスケジュールされた患者で行うことができる。当該期間ののち、患者が追加のワクチン接種を受けない場合、該患者は研究から外すことができ、同様の腫瘍型の患者のために通常なされるように、それ以降２−４月毎に臨床的に追跡することができる。患者に進行性腫瘍があることが判明した場合、化学療法又は切除等の他の治療を受けることができる。患者が追加ワクチンを受ける場合、該追加ワクチンは１２週毎に投与され、患者が脱落（withdraw）するまで臨床的、免疫学的及び放射線（ＭＲＩ）モニタリングを来院時毎（ｑ１２週）行うことができる。寛解の対象は、追加の２回のワクチン接種を１２週間隔で再処置され、その後追跡される。ワクチン接種は、スケジュールされたワクチン接種の間いつでも、進行又は許容できない毒性のいずれの患者も中止することができる。
【０３１７】
７．８．８．１  前処置（スクリーニング及びベースラインデータ）
以下の手順は治療を続行する前に実施することがある：インフォームドコンセントはスクリーニングの開始前に取得する必要がある；ＨＬＡタイピング（ＨＬＡ−Ａ２陽性のフローサイトメーター評価）；診断の文章化（病理学的）；神経学的検査及びパフォーマンスステータスを含む完全な病歴と身体診察（バイタルサイン及び体重と共に）；ワクチン部位はインタクト排出リンパ節の確認でデザインされる；人口統計情報を記録すべきである；ＣＢＣ及び血小板を評価すべきである；ＰＴ／ＰＴＴを評価すべきである；電解質、クレアチニン、血中尿素窒素、糖、ＡＳＴ、ＡＬＴ、ＡＬＫリン、総ビリルビン、ＬＤＨ、カルシウム及びアルブミンを含む、包括的な代謝パネルを評価すべきである；ＧＧＴ、リン、マグネシウムを評価すべきである；ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイのために採血すべきである；糖尿病患者のＨＧＢＡ１Ｃを実施すべきである；心臓の症状、病歴又は現在の病気の患者にＥＣＧ及びエコー図を実施すべきである；尿検査を実施すべきである；病気のベースライン状態を評価するために脳のＭＲＩをとるべきである；及び／又は女性の出産の可能性は血清β−ＨＣＧの妊娠検査を行うべきである。
【０３１８】
７．８．８．２  処置中の評価
以下の手順を治療の進行に伴って実施することができる；投与前（ワクチン接種当日のワクチン投与０、３、６、９、１２、１５、１８及び２１週間前）：バイタルサイン、体重、パフォーマンスステータス及び神経機能を含む、病歴と身体；ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイのために採血すべきである；電解質、クレアチニン、血中尿素窒素、糖、ＡＳＴ、ＡＬＴ、ＡＬＫリン、総ビリルビン、ＬＤＨ、カルシウム及びアルブミンを含む化学物質を評価すべきである（０週を除く）；臨床上示された場合、ＡＥＤレベルを評価すべきである；神経学的評価及び皮膚検査（注射部位）を含めるように、以前の用量から患者の有害事象をスクリーニングすべきである；及び／又はＭＲＩを行うべきである（ワクチン注射の来院中１２週のみに）
【０３１９】
ワクチン投与後、全患者は各ＧＡＡペプチドワクチン投与後少なくとも２０分間は、有害事象について綿密に観察すべきである。同日に、各ワクチン接種後、ｐｏｌｙ−ＩＣＬＣ（ｉ．ｍ．  ３０ｍｇ／ｋｇ）が投与することができ、ｐｏｌｙ−ＩＣＬＣ注射後、少なくとも２０分間は患者をモニタリングすることができる。
【０３２０】
７．８．８．３  ２４週（８回ワクチン接種後）評価
ワクチンサイクルが完了した後、以下の手順を実施することができる；バイタルサイン、体重、Ｋａｒｎｏｆｓｋｙパフォーマンスステータス及び神経機能を含む病歴及び身体；ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイのために採血すべきである（３、６及び９週を除く）；差があるＣＢＣ及び血小板を評価すべきである（０週を除く）；電解質、クレアチニン、血中尿素窒素、糖、ＡＳＴ、ＡＬＴ、ＡＬＫリン、総ビリルビン、ＬＤＨ、カルシウム及びアルブミンを含む化学物質が評価すべきである（０週を除く）；臨床上示される場合ＡＥＤレベルを評価すべきである；神経学的評価及び皮膚検査（注射部位）を含むため、以前の投与量から有害事象のために患者をスクリーニングすべきである；及び／又はＭＲＩを行うべきである。
【０３２１】
７．８．８．４  追加ワクチンでの評価  （追加ワクチンでのケース）
追加ワクチンを投与する前に、以下の手順が実施される得る；バイタルサイン、体重、Ｋａｒｎｏｆｓｋｙパフォーマンスステータス及び神経機能を含む病歴及び身体；ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイのために採血すべきである（３、６及び９週を除く）；差があるＣＢＣ及び血小板を評価すべきである（０週を除く）；電解質、クレアチニン、血中尿素窒素、糖、ＡＳＴ、ＡＬＴ、ＡＬＫリン、総ビリルビン、ＬＤＨ、カルシウム及びアルブミンを含む化学物質が評価すべきである（０週を除く）；臨床上示される場合ＡＥＤレベルを評価すべきである；神経学的評価及び皮膚検査（注射部位）を含むため、以前の投与量から有害事象のために患者をスクリーニングすべきである；及び／又はＭＲＩを行うべきで
ある。
【０３２２】
追加ワクチン投与後、各ワクチン投与後少なくとも２０分間は、有害事象について全患者を綿密に観察すべきである。追加ワクチンは、以下の条件のいずれかで終了し得る：１）腫瘍進行；２）ＲＬＴ；又は３）追加ワクチン接種開始後、連続した２つの時点で免疫応答陰性。
【０３２３】
【表６−１】
2019123745.tif 000012
【０３２４】
【表６−２】
2019123745.tif 000013
【０３２５】
７．８．９  効果の測定
７．８．９．１  目的
７．８．９．１．１  免疫原性
ワクチン接種後ＰＢＭＣのＧＡＡペプチドに対するＣＤ８＋Ｔ細胞応答の応答率及び大きさは、ＩＦＮ−γ  ＥＬＩＳＰＯＴ及び２次アッセイとしてフローサイトメトリーによるテトラマー分析を用いて評価することができる。
【０３２６】
ＥＬＩＳＰＯＴアッセイは、サイトカイン−発現として抗原特異的Ｔ細胞の機能的な状態を示す。テトラマーを用いるフローサイトメトリー分析は、主な患者由来のＰＢＭＣのインビトロ操作や抗原特異的Ｔ細胞上のホーミング受容体（ｉｎｔｅｇｒｉｎｓ）発現等の表現型解析なしに、抗原結合Ｔ細胞の頻度比較的正確な推定を可能にする。
【０３２７】
末梢血中の応答を測定する生物学的アッセイは、アッセイ間の変動を避けるために、同一の時点で行い得る。
【０３２８】
フローサイトメトリーを用いて、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋／Ｆｏｘｐ３＋制御Ｔ細胞等のリンパ球分画の数も評価することができる。加えて、進行腫瘍の減量手術を受ける患者は、腫瘍組織が入手できれば、抗原特異的ＣＴＬの浸潤が、フローサイトメトリーで、エピトープ特異的ＭＨＶテトラマーと共に腫瘍浸潤リンパ球が評価することができる。
【０３２９】
７．８．９．１．２  安全性
再発性グレードＩＩグリオーマの患者における、４つのＨＬＡ−Ａ２拘束性グリオーマ関連抗原（ＧＡＡ）エピトープペプチドと併用してクラスＩＩ  ＭＨＣ拘束性破傷風トキソイド（ＴＴ）由来のヘルパーＴ細胞及びｉ．ｍ．  ｐｏｌｙ−ＩＣＬＣ投与の安全性を決定することができる。
【０３３０】
エンドポイントは、ワクチン接種後の患者群で通常実施されるように、綿密な臨床経過観察と標準的基準を用いて、有害事象の発生率及び重症度を含むことができる。レジメンは、所定のコホート内の患者のうち、＞３３％でＲＬＴが進む場合、受け入れ難いほど毒性であると考えられる。 
【０３３１】
７．８．９．１．３  応答及び無増悪生存期間
コントラスト増強のＭＲＩスキャンを用いて、１２週、２４週、その後３ヶ月毎に腫瘍再発を最小限で評価することができる。低悪性度グリオーマはコントラスト投与で概して増強しない浸潤性腫瘍であるため、応答及び無増悪生存の評価のために、腫瘍（すなわち、標的病変）をＴ２又はＦＬＡＩＲ  ＭＲＩ画像で測定することができる。ベースラインで増強した病変がある場合、ＷＨＯグレードＩＩ腫瘍に関する病理情報が該腫瘍の状態を真に表しているかについて慎重な議論を行うことができる。増強した腫瘍がグレードＩＩと考えられる場合、増強した病変の大きさを評価することができる。加えて、後述するように、以前は非増強腫瘍での増強の出現は、進行（ＰＤ）と考えられる。
【０３３２】
（Ａ）応答（ＲＥＣＩＳＴ基準による）
完全寛解（ＣＲ）：全標的病変の消失
【０３３３】
部分寛解（ＰＲ）：標的病変の最大直径（ＬＤ）の総和が少なくとも３０％減少し、ベースライン合計ＬＤを参照とする。
【０３３４】
進行（ＰＤ）：標的病変のＬＤ合計が少なくとも２０％増加し、処置開始又は以前に非強化腫瘍でコントラスト増強の出現以来、報告された最小合計ＬＤを参照とする。偽腫瘍進行のために、低用量ステロイドに変更し、ＰＤを有すると宣言される前に再度画像化される。
【０３３５】
不変（ＳＤ）：ＰＲにふさわしい収縮も、ＰＤにふさわしい十分な増加もなく、処置開始以来最小合計ＬＤを参照とする
【０３３６】
（Ｂ）全生存期間（ＯＳ）及び無増悪生存期間（ＰＦＳ）
ＰＦＳは、治療開始から増悪又は死亡の時までの期間として定義される。全患者は、最小２年間追跡されるため、実際の２年ＯＳ及びＰＦＳを決定することができる。
【０３３７】
７．８．９．１．４  ワクチン接種後の腫瘍組織解析
本研究において、全患者から腫瘍組織が得られるわけではない。しかしながら、ワクチン接種前及び／又はワクチン接種後に得られた全ての腫瘍組織において、以下の（ｉ）抗原損失、（ｉｉ）抗アポトーシス分子のアップレギュレーション、（ｉｉｉ）免疫細胞浸潤、を予備的な方法で評価することができる。
【０３３８】
７．８．１０  統計的考察
７．８．１０．１  免疫学的応答の評価
免疫応答の評価は、ＩＦＮ−γ  ＥＬＩＳＰＯＴ及びテトラマーアッセイを用うことができる。
【０３３９】
応答者はＩＦＮ−γ  ＥＬＩＳＰＯＴ又はテトラマーアッセイのいずれかで対応してき
た患者と定義することができる。９対象中少なくとも４応答があれば、コホートはさらなる調査に値するとみなすことができる。その真の応答率が＜１７％の場合、４又はそれ以上の応答を観察するための可能性が＜５％あり、真の応答率が＞６６％である場合、３又はほとんどない応答を観察する可能性は＜５％であるというプロパティ（property）を当該基準は有する。
【０３４０】
７．８．１０．２  安全性の実証及び評価
毒性を評価するためにＮＣＩ有害事象共通用語基準（ＡＥ）（ＣＴＣＡＥ  ３．０）を使用することができる。毒性は、治療に、多分、おそらく、あるいは間違いなく関連した有害事象と考えることができる。目的のカテゴリ毎の毒性の最大評点を、各患者のために記録し、集計結果は、カテゴリや悪性度により集計することができる。
【０３４１】
安全のため、レジメンは、レジメン規定毒性（ＲＬＴ）≧３３％及び少なくとも２ＲＬＴが観察された場合はいつでも過度に毒性であると考えることができる。
【０３４２】
本研究設計は、以下のプロパティがある：当該患者群の真のＲＬＴ比が≧４５％であれば、発生がとまるであろうという可能性が少なくとも９０％あり；真のＲＬＴ比が≦９％であれば、発生がとまらないであろうという可能性が少なくとも９０％あり、レジメンは、安全であると考えられる。
【０３４３】
７．８．１０．３  臨床エンドポイントの評価
全患者について少なくとも２年間追跡することができるので、実際の２年全生存期間（ＯＳ）、無増悪生存期間（ＰＦＳ）及び反応率を予備的エンドポイントとして集計することができる。ＰＦＳは、連続ＭＲＩ撮影画像に基づく、治療開始から進行までの時間間隔として定義する。適切な場合には予備的解析により、画像化応答及びＯＳ／ＰＦＳに対する免疫応答との関係を調査することができる（フィッシャーの正確確率検定及びログランク検定各々を使用して）。
【０３４４】
７．８．１０．４  人口統計データ
評価可能な全患者のベースライン記述統計学は、人口統計学的変数（年齢、性別、人種／民族）、Ｋａｒｎｏｆｓｋｙ又はＬａｎｓｋｙパフォーマンスステータス、登録時の病期とステータス（安定した病気、進行性の病気）、以前使用された治療レジメン（階層Ｃのため）で規定することができる。
【０３４５】
７．９  実施例９
本実施例は、高リスクＷＨＯグレードＩＩ星状細胞腫及び乏突起星状細胞腫の患者にｐｏｌｙ−ＩＣＬＣ投与と組み合わせたＨＬＡ−Ａ２拘束性グリオーマ抗原ペプチドでのワクチン接種の有効性を評価するための研究を記載する。
【０３４６】
７．９．１  合理性
本実施例は、再発ＷＨＯグレードＩＩ星状細胞腫及び乏突起星状細胞腫の患者、すなわち、手術のみ又は手術プラス術後放射線療法後、進行５年の可能性が＞５０％である、における抗腫瘍Ｔ細胞応答を効率的に誘導するように設計したワクチンレジームを記載する。本実施例で提供された研究に記載されたレジームは、グリオーマ関連抗原（ＧＡＡ）由来細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）エピトープペプチドの皮下注射とｐｏｌｙ−ＩＣＬＣの同時筋肉内投与（simultaneous intramuscular; i.m.）とを組み合わせる。
【０３４７】
テント上低悪性度グリオーマ（ＬＧＧ）の成人は、放射線療法（ＲＴ）に続く手術又は手術による処置後２年腫瘍進行の重大なリスクがある（２４％）。当該患者の好ましくないサブセットのために、進行の２年リスクは４０−５０％である。本実施例に記載された
研究は、腫瘍再発リスクを減らす免疫予防的及び免疫療法的可能性を有し、生存率の改善につながる可能性がある。治療的に、免疫治療アプローチは、腫瘍性低悪性度ＩＩ腫瘍細胞の無痛的な膨張を抑制する可能性がある。予防的に、該アプローチは再発性ＬＧＧの約半分で起きる未分化トランスフォーメーションを防ぐ可能性がある。ＬＧＧのより遅い成長率（悪性グリオーマと比較して）は、複数の免疫を繰り返すのに十分な時間を与えるはずであり、ＧＡＡ特異的免疫の高レベルな誘導をもたらす可能性がある。加えて、ｐｏｌｙ−ＩＣＬＣは前臨床脳腫瘍モデルでワクチン効果を促進すること（例えば、Zhu et al., J.Transl.Med., 5: 10, 2007参照）、悪性グリオーマ患者で安全であること（例えば、Salazar et al., Neurosurgery, 38: 1096-1103, 1996参照）が示されている。したがっ
て、ｐｏｌｙ−ＩＣＬＣと組み合わせたこの形式のワクチンは、強力な抗グリオーマ免疫応答を誘導し、かつ、安全だろうと仮説を立てている。
【０３４８】
７．９．２  目的
本実施例は、ＷＨＯグレードＩＩ星状細胞腫及び乏突起星状細胞腫の成人でのワクチン研究を記載する。本実施例の目的は、追加の研究で使用できる可能性のある免疫学的安全性データを収集することを含む。本実施例に記載される研究の患者は、最小２年間追跡され得る。そのため、実際２年の全生存（ＯＳ）率並びに６月及び２年無増悪生存（ＰＦＳ）率を予備的手法で決定することができる。
【０３４９】
７．９．２．１  ＧＡＡ特異的Ｔ細胞応答の誘導
この形態のワクチンに反応したＧＡＡペプチドに対するワクチン接種後末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）での応答率及び免疫応答の度合いを、ＩＦＮ−γ−ｅｎｚｙｍｅ−ｌｉｎｋｅｄ  ｉｍｍｕｎｏ−ｓｐｏｔ（ＥＬＩＳＰＯＴ）及びテトラマーアッセイを用いて決定することができる。
【０３５０】
７．９．２．２  安全性
レジメン規定毒性（ＲＬＴ）の頻度に基づく早期停止規則と共に、ワクチンレジームに関与する有害事象の発生率と重症度を評価することができる。
【０３５１】
７．９．２．３  細胞傷害性
標準的なＷＨＯ応答基準を用いて放射線応答を決定することができる。２年無増悪生存率（ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ−ｆｒｅｅ  ｓｕｒｖｉｖａｌ；ＰＦＳ）を連続磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）スキャンに基づき予備的方法で評価することができる。
【０３５２】
７．９．２．４  生物学的相関のための腫瘍組織
進行、生検／切除を行う患者が推奨される。ワクチン接種後腫瘍組織が利用できるときは、ＧＡＡ発現状態及びＧＡＡ特異的Ｔ細胞の浸潤を分析することができる。
【０３５３】
７．９．２．５  ＧＡＡ特異的Ｔ細胞応答の誘導へのＲＴの影響
２つのコホートにおけるＧＡＡ特異的免疫応答の応答率及び免疫応答の度合いを、ＩＦＮ−γ−ｅｎｚｙｍｅ−ｌｉｎｋｅｄ  ｉｍｍｕｎｏ−ｓｐｏｔ（ＥＬＩＳＰＯＴ）及びテトラマーアッセイを用いて決定することができる。
【０３５４】
７．９．３  患者選択
７．９．３．１  適正基準
病理学的基準−患者は、テント上ＷＨＯグレードＩＩ星状細胞腫又は乏突起星状細胞腫の病理学的診断を受けているべきである。
【０３５５】
本研究の患者はフローサイトメトリーに基づきＨＬＡ−Ａ２陽性であるべきである。
【０３５６】
本研究の患者は以前の治療の毒性効果から回復しているべきである。いかなる治験薬からも４週間；以前の細胞傷害性治療から４週間及び／又は、ビンクリスチン投与から少なくとも２週間、ニトロソ尿素化合物投与から４週間、プロカルバジン投与から３週間、及びインターフェロン、タモキシフェン、サリドマイド、ｃｉｓ−レチノイン酸等の非細胞傷害性剤から１週間（放射線増感剤はカウントしない）。以前の放射線療法（ＲＴ）に関し、ＲＴ（又は放射線手術）の完了から少なくとも６ヶ月経っていなければならない。
【０３５７】
患者が以前にＲＴを受けたか否かに基づいて、患者の２つのコホートを解析すべきである。コホート１：患者は、手術又は生検のみを受けているべきであり（術後放射線又は化学療法なし）、不変又は進行（最初の手術／生検から進行なし）を示すベースライン  ＭＲＩスキャン（最初のワクチン接種４週間以内）であるべきである。コホート２：患者は、登録前≧６月に完了し、不変又は進行を示す最初のワクチン接種前４週間以内でベースライン  ＭＲＩスキャンである、手術又は生検及び放射線療法（ＲＴ）（外部分割放射線照射療法放射線療法及び／又は定位的放射線療法を含む）を受けているべきである。
【０３５８】
本研究の患者は、（ｉ）年齢≧４０歳  任意の切除範囲で；（ｉｉ）年齢１８−３９歳
完全な切除で（術後ＭＲＩ  外観＞１ｃｍ  残留疾患、術後空洞の端から、どちらか
側方に、前側後側に又は上外下方に、残存Ｔ２又はＦＬＡＩＲ異常の最大寸法に基づく）又は、（ｉｉｉ）年齢１８−３９歳、神経外科医定義ＧＴＲで、しかし腫瘍の大きさは≧４ｃｍ（軸及び／又は冠状Ｔ２又はＦＬＡＩＲ  ＭＲ画像に基づく最大術前腫瘍直径）。全患者は、≧１８歳であるべきである。
【０３５９】
本研究の患者は、＞６０のカルノフスキーパフォーマンスステータス（Appendix I）であるべきである。
【０３６０】
本研究での女性患者の出産の可能性は、血清β−ＨＣＧの妊娠検査を行うべきである。
【０３６１】
患者は全身感染がないべきである。活動性感染の患者（抗生物質治療が必要であろうとなかろうと）は、該感染の完全な回復後適格である可能性がある。抗生物質治療中の患者は、処置を始める前に少なくとも７日間抗生物質を断つべきである。
【０３６２】
本研究の患者は、白血球数≧２５００／ｍｍ３；リンパ球≧４００／ｍｍ３；血小板≧１００，０００／ｍｍ３、ヘモグロビン≧１０．０ｇ／ｄＬ、正常値の上限２．５×以内のＡＳＴ、ＡＬＴ、ＧＧＴ、ＬＤＨ、アルカリホスファターゼ及び総ビリルビン≦２．０ｍｇ／ｄＬ並びに正常値の上限血清１．５×以内のクリアチニンとして測定される十分な臓器機能を有すべきである。本研究の患者は凝固試験並びにＰＴ及びＰＴＴが、正常値の上限内にあるべきである。
【０３６３】
７．９．３．２  除外基準
本研究の患者は、神経膠腫症、大脳、頭蓋、脊髄軟膜転移症が存在する場合、除外すべきである。
【０３６４】
本研究の患者は、以前に化学療法又は放射線療法以外の任意のタイプの抗グリオーマ治療を受けていた場合、除外すべきである。 
【０３６５】
本研究の患者は、放射線療法；化学療法；インターフェロン（例えば、Ｉｎｔｒｏｎ−Ａ（登録商標））；アレルギー脱感作注射；成長因子（例えば、Ｐｒｏｃｒｉｔ（登録商標）、Ａｒａｎｅｓｐ（登録商標）、Ｎｅｕｌａｓｔａ（登録商標））；インターロイキン（例えば、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標））；及び／又は任意の治験治療薬を含む、同時処置又は投薬を受けている場合、除外すべきである。
【０３６６】
本研究の患者は、細胞傷害性又は免疫抑制治療を必要とする自己免疫疾患、又は内臓障害を伴う自己免疫疾患を以前に患ったことがないべきである。これらの治療を必要とする活性自己免疫疾患を伴う本研究の患者も除外すべきである。ＮＳＡＩＤの薬を必要とする軽度の関節炎は、除外すべきではない。
【０３６７】
本研究の患者は、本研究に入る前４週間以内に免疫抑制剤を使用していた又は免疫抑制剤の使用を予定されている患者を除外すべきである。周術期及び／又は放射線療法中に、デキサメタゾン又は他のコルチコステロイド薬が使用されている場合、本研究の最初のワクチン投与前少なくとも４週間患者により減らされ、中断すべきである。局所的なコルチコステロイド及び吸入ステロイド（例えば、Ａｄｖａｉｒ（登録商標）、Ｆｌｏｖｅｎｔ（登録商標）、Ａｚｍａｃｏｒｔ（登録商標））は許容すべきである。
【０３６８】
本研究の患者は、以下の診断：既知の転移を伴わない皮膚の扁平上皮細胞がん；既知の転移を伴わない皮膚の基底細胞がん；非浸潤性乳がん（ＤＣＩＳ又はＬＣＩＳ）；非浸潤性子宮頸癌；及び／又は５年以上再発又は転移の兆候がなく、治療が成功している遠隔転移のない任意のがん、を除く別のがんの診断を受けている場合、除外すべきである。 
【０３６９】
本研究の患者は、アルコール中毒又は違法薬物であることが分かっている人は除外すべきである。
【０３７０】
免疫欠損の患者は、本治療に反応が見込めないため、ＨＩＶ陽性患者は本研究から除外すべきである。
【０３７１】
７．９．４  ペプチドワクチン
７．９．４．１  ペプチド
以下のペプチドが、ＩＬ−１３Ｒα２３４５−３５３１Ａ９Ｖ（ＡＬＰＦＧＦＩＬＶ；配列番号：３）；ＥｐｈＡ２８８３−８９１（ＴＬＡＤＦＤＰＲＶ；配列番号：６）；Ｓｕｒｖｉｖｉｎ９６-１０４：Ｍ２（ＬＭＬＧＥＦＬＫＬ；配列番号：７）；ＷＴ１１２
６−１３４：Ｙ１（ＹＭＦＰＮＡＰＹＬ；配列番号：８）；及び破傷風トキソイド（ＴｅｔＡ８３０）（ＡＱＹＩＫＡＮＳＫＦＩＧＩＴＥＬ；配列番号：９）がワクチン製剤に含まれ得る。
【０３７２】
全ペプチドを合成することができ、ＨＰＬＣで該合成ペプチドを精製することができる合成ペプチドの同一性は、質量分析による質量及びアミノ酸配列の検証で確かめることができる。それぞれのペプチドのロットは、ＦＤＡによる同一性、純度、無菌性、発熱性で評価することができる。
【０３７３】
ペプチドは、ＧＭＰ条件下バイアルに入れ−７０℃で保存可能である。乾燥凍結したペプチドの安定性は、質量分析で毎年試験することができる。
【０３７４】
７．９．４．２  他の試薬
Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ−５１（ＳＥＰＰＩＣ  Ｉｎｃ．，  Ｆａｉｒｆｉｅｌｄ，  ＮＪ）は、ペプチドワクチン中で追加の剤として使用可能である。
【０３７５】
７．９．４．３  投与量及び調製
水中油型エマルジョン（すなわち、全容量／注射が１ｍＬ）を形成するために、４つのＨＬＡ−Ａ２拘束性ＧＡＡペプチド（３００μｇ／ペプチド）及び破傷風ペプチド（ペプチド−ｔｅｔ；２００μｇ）各々を含む水溶液（５００μＬ）をＭｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ−５１とともに１／１で混合することができる。
【０３７６】
７．９．４．４  投与
本研究の患者は、インタクト排出腋窩リンパ節に右又は左上腕で皮下にワクチン接種され得る。排出節としてインタクト腋窩リンパ節を持たない患者のケースでは、インタクト鼠径リンパ節同じ側の上部の腿にワクチンを投与し得る。
【０３７７】
０、３、６、９、１２、１５、１８及び２１週の週にワクチンを投与することができる。
【０３７８】
７．９．５  Ｐｏｌｙ−ＩＣＬＣ
Ｐｏｌｙ−ＩＣＬＣを、Bioserv, Corporation（San Diego, California）のＧＭＰ施
設で調製して、パッケージングすることができる。Ｐｏｌｙ−ＩＣＬＣを、２ｍｇ／ｃｃの濃度で半透明の溶液の１ｃｃを含むバイアル中で供給することができる。Ｐｏｌｙ−ＩＣＬＣは室温で数日間安定であるが、約４℃で冷凍保存することができる。
【０３７９】
７．９．５．１  投与量及び投与
２０μｇ／ｋｇから１６４０μｇ／注射の用量で、各ワクチン接種後０、４日目に２回の注射で、筋肉内注射でＰｏｌｙ−ＩＣＬＣを投与することができる。
【０３８０】
ｐｏｌｙ−ＩＣＬＣ投与（２０μｇ／ｋｇ  ｉ．ｍ．及び最大１６４０μｇ／注射）の最初のコースは、最初のＧＡＡ／ＴＴワクチン当日及び該ワクチン接種後４日目に投与することができる。繰り返しのワクチン接種（３、６、９、１２、１５、１８及び２１週）後それぞれで、ワクチン接種後当日及びワクチン接種後４日にｐｏｌｙ−ＩＣＬＣ（２０μｇ／ｋｇ  ｉ．ｍ．及び最大１６４０μｇ／注射）を投与することができる。 
【０３８１】
注射部位に関し、ｐｏｌｙ−ＩＣＬＣは排出腋窩リンパ節での抗原提示プロセスを促進すると思われているため、先のペプチド注射部位（例えば、先のペプチド注射部位の中央から３ｃｍ未満）と接近してｐｏｌｙ−ＩＣＬＣをｉ．ｍ．投与すべきである。
【０３８２】
Ｐｏｌｙ−ＩＣＬＣは、患者の体重あたり処方される量で（最大１６４０μｇ／注射）、バイアルから供給する際には無菌操作で筋肉内（ｉ．ｍ．）投与すべきである。最初の処置前及び処置後少なくとも２０分間はバイタルサインを監視することができる。
【０３８３】
７．９．６  処置プラン
本実施例に記載された研究は、予後不良因子でＷＨＯグレードＩＩ星状細胞腫又は乏突起星状細胞腫のＨＬＡ−Ａ２＋患者でのＧＡＡ／ＴＴペプチドワクチン及びｐｏｌｙ−ＩＣＬＣの免疫原性、安全性、臨床的有効性を評価するための患者の２つのコホートを使用することができる。ペプチドワクチンは局所的に隔離され、免疫応答は主に局所的に、排出リンパ節で生じるため、ワクチン投与量はレシピエントの大きさ（体重又は体表面積による）に比例してスケールアップされる必要はない。薬に関して当然のことであるが、その効果は、体液内での分布に関連している。ｐｏｌｙ−ＩＣＬＣの用量に関し、悪性グリオーマの患者に安全かつ生物学的応答を誘導することが示されている（例えば、Salazar et al. , Neurosurgery, 38: 1096-1103, 1996）一定用量（２０μｇ／ｋｇ／注射及び最大１６４０μｇ／注射）を使用することができる。
【０３８４】
７．９．６．１  スケジュール
コホート１での適格性のある患者は、手術又は生検のみ（術後放射線照射又は化学療法なし）を受け、不変又は退行（最初の手術／生検から進行なし）を示すベースラインＭＲＩスキャン（最初のワクチンの４週間以内）であるべきであり、コホート２の患者は、登録前≧６月ＲＴを完了し、不変又は退行を示すベースラインＭＲＩスキャン（１回目のワ
クチン前４週間以内）であるべきである。全患者が最初のワクチン前少なくとも４週間、デキサメタゾン又は類似のコルチコステロイドを断っていなければならない。
【０３８５】
０、３、６、９、１２、１５、１８及び２１週にＧＡＡ／ＴＴワクチンの皮下注射で患者を処置することができる。各ワクチン接種後当日及び４日目に（例えば、木曜日にワクチンを投与する場合、ワクチン接種当日及び続く月曜日にｐｏｌｙ−ＩＣＬＣを投与することができる。）筋肉内（Ｉ．ｍ．）にｐｏｌｙ−ＩＣＬＣを投与することができる（２０μｇ／ｋｇ／注射及び最大１６４０μｇ／注射）。ｐｏｌｙ−ＩＣＬＣ投与前又は後２時間以内に各ワクチンを投与することができる。
【０３８６】
臨床来院又はＭＲＩ検査で、あらゆる可能な有害事象、レジメン規定毒性（ＲＬＴ）同様、臨床／放射線応答について患者を評価することができる。
【０３８７】
最初のワクチン接種前に得た末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）をベースラインサンプルとして使用することができる。患者がＲＬＴ又は腫瘍進行なく、２つの免疫学的アッセイ（ＥＬＩＳＰＯＴ又はテトラマー）でいずれも陽性応答を示す場合、患者が腫瘍進行、免疫応答の喪失又はＲＬＴを示すまでは、３４−４０週とその後３ヶ月毎の間のいつでもから開始する追加のＧＡＡ／ＴＴワクチン（例えば、セクション７．９．６．２参照）を患者に提供することができる。
【０３８８】
７．９．６．２  付加療法
０（ベースライン）、１２、１５、１８、２１及び２４週に、ＧＡＡペプチドに対するＧＡＡ特異的Ｔ細胞応答の存在を患者のＰＢＭＣで評価することができる。ＧＡＡペプチドのいずれかで当該応答が観察される場合、永続的な応答を示すＧＡＡでの追加ワクチン接種同様、最初のワクチン接種から３４−４０週とその後１２ヶ月毎から最長２年までの間のいつでもから開始するｐｏｌｙ−ＩＣＬＣを患者は受けることができる。追加のＰＢＭＣサンプルは、免疫学的監視のために１２週毎（ワクチン投与のための同一の来院で）に得ることができる。追加ワクチンは以下のいずれかの条件、１）腫瘍進行、２）ＲＬＴ又は３）２つの連続する時点での陰性免疫学的応答、の時に終了することができる。
【０３８９】
７．９．６．３  用量変更
７．９．６．３．１  ｐｏｌｙ−ＩＣＬＣのための用量変更
発熱及び疲労を含む、グレード２又はそれより大きなインフルエンザ様症状のために、ｐｏｌｙ−ＩＣＬＣは、症状がグレード０になるまで中断することができる。ワクチン接種日にグレード２又はそれより大きなインフルエンザ様症状が起き、ワクチン接種後４日目までグレード０に戻らない場合、ワクチン接種後４日目の次のｐｏｌｙ−ＩＣＬＣ投与は飛ばすることができる。患者が、４日目に症状がない場合（グレード０）、ｐｏｌｙ−ＩＣＬＣは最初の投与量の５０％で再開することができる。ワクチン接種後４日目にｐｏｌｙ−ＩＣＬＣ投与後にグレード２又はそれより大きなインフルエンザ様症状が起きる場合、次のワクチンサイクルでは、２つのｐｏｌｙ−ＩＣＬＣ投与（ワクチン後０日及び４日に）を最初の投与量の５０％で行うことができる。アセトアミノフェン６５０−１０００ｍｇ又は任意のＮＳＡＩＤによる前処置を行うことができる。さらなる投薬によく耐えるのであれば、最初の投与量は続けて再開することができる。
【０３９０】
肝酵素評価＞４ｘ  ベースライン又はグレード２若しくはそれより大きな他の予測不能で耐え難い副作用の場合、毒性がグレード１又はそれ以下に減少するまでｐｏｌｙ−ＩＣＬＣを中断することができる。それから最初の投与量の半分でＰｏｌｙ−ＩＣＬＣを再投与し、患者を綿密に観察することができる。ｐｏｌｙ−ＩＣＬＣを次のワクチンサイクル時に再開することができない場合、患者はＲＬＴにより脱落し得る。
【０３９１】
患者は、グレード１若しくは２血液学的毒性、又はグレード１非血液学的毒性の最初の投与量のままかもしれない。５０％投与量レベルで最低２週間毒性がない場合、調査員の裁量で投与量を開始時の量に増大することができる。その後の毒性は、それらが発生した場合、５０％まで投与量の減少を必要とし、それ以上の増大は許されないかもしれない。減少させた投与量で毒性が再発生する場合、患者に対する治療を取りやめ得る。
【０３９２】
７．９．６．３．２  ペプチドワクチンのための遅延投薬
ｐｏｌｙ−ＩＣＬＣ投与が一時停止される状況下において、該事象がペプチド／ＩＳＡ−５１ワクチンに起因しない場合、予定通りにワクチン投与を続けるべきである。併発疾患又は研究室で他の毒性の原因を評価する必要がある場合等、有害事象の評価が限定される状況下において、４週間までワクチンスケジュールを中断することができる。偽腫瘍進行以外の有害事象が原因でワクチン投与が４週間以上遅延する場合、原因にかかわらず、処置を中断すべきである。
【０３９３】
研究の間中、レジメン規定毒性（ＲＬＴ）に則って患者を観察することができる。多分、おそらく、あるいは間違いなく処置に関連すると判断される場合、以下はＲＬＴと考えられる。それらが起きれば、患者個人を研究から外し、さらなる注射を投与することはできない。
【０３９４】
≧グレード２又はそれ以上  気管支けいれん又は全身性蕁麻疹（過敏症）
【０３９５】
≧グレード２又はそれ以上  剥脱性紅皮症、アナフィラキシー又は血管虚脱のようなアレルギー反応
【０３９６】
≧グレード２又はそれ以上  自己免疫疾患（例えば、甲状腺機能低下症、自己免疫性脳炎）
【０３９７】
任意の≧グレード３  次の有害事象に特に注意を払うワクチン接種に多分、おそらく、あるいは間違いなく関連する毒性
【０３９８】
≧グレード３  ペプチドワクチン又はｐｏｌｙ−ＩＣＬＣ投与による注射部位反応
【０３９９】
≧グレード３  血液学的毒性又は肝毒性
【０４００】
≧グレード３  神経毒性：炎症性／リンパ性浸潤の病理学的所見での生検又は切除を必要とする腫瘍進行又は炎症性免疫応答（すなわち、偽腫瘍進行）のいずれかを示すサイン及び兆候
【０４０１】
≧グレード３  十分な制吐剤予防なしで吐き気や嘔吐がＲＬＴとは考えられない
【０４０２】
遅延投薬＞  ４週間  各ｐｏｌｙ−ＩＣＬＣ又はペプチドワクチンのための
【０４０３】
治療は以下の理由（ｉ）上記で定義したレジメン限定的毒性；（ｉｉ）病気の進行−ＭＲＩスキャンでの最大直径の総和の少なくとも２５％増加又は以前に非強化腫瘍でコントラスト増強の出現、で中断することができる。しかしながら、偽腫瘍進行が疑われる場合、患者に４ｍｇ／日までデキサメタゾンを認め、４−８週間後に再検査を行うことができる。＞４ｍｇ／日デキサメタゾンが必要な場合、あるいは、画像研究の繰り返しで病気の進行の基準を満たしている場合、該患者は研究から外し、さらなる研究は中断することができる。しかしながら、ステロイド投与量が＜４ｍｇ／日、かつ画像研究の繰り返しで病気の進行の基準を満たしていない場合、該患者は研究を続けることができ、ここに規定さ
れた研究処置を受けることができる。腫瘍進行又は偽腫瘍進行が疑われるどのケースでも、対象が本研究に残るか否かを決定するために見直されるべきである。（ｉｉｉ）さらなるワクチン投与又はｐｏｌｙ−ＩＣＬＣ投与を妨げる併発疾患（ｉｖ）妊娠：妊娠した患者は、妊娠期間中追跡し続けられるだろう。
【０４０４】
７．９．６．４  処置期間
有害事象による処置の遅延がない場合、２１週間処置、又は以下の基準のうち１つが適用されるまで続けることができる（８回ワクチン接種）：レジメン規定毒性（ＲＬＴ）；病気の進行及び／又はさらなる処置の投与を妨げる併発疾患
【０４０５】
７．９．６．５  同時処置
７．９．６．５．１  許容
熱のため、アセトアミノフェンを使用することができる（３２５ｍｇ錠剤、１又は２  経口、４時間毎）。アセトアミノフェンでの患者の前処置は、ｐｏｌｙ−ＩＣＬＣ副作用による当然の結果として開始される。処置後８時間以上続く熱は、潜在的感染の観点から評価される。
【０４０６】
軽度の局所的な痛みのために、経口アヘン（オキシコドン、５−１０ｍｇ経口、３−４時間毎）を計画することができる。軽度−中等度以上のグレードの痛みは、治療以外の原因のために調査され、それに応じて管理することができる。
【０４０７】
ワクチン／ｐｏｌｙ−ＩＣＬＣ治療（０週）開始前少なくとも４週間は、デキサメタゾン（又は類似のコルチコステロイド薬）を使用すべきではない。デキサメタゾン（４ｍｇ／日まで）は、偽腫瘍進行の状態で使用し、できる限り早く減量／中断することができる。
【０４０８】
示されたとおりに抗けいれん薬を使用すべきである。
【０４０９】
必要に応じて、制吐薬を投与することができる。
【０４１０】
他の許容可能な薬は、ステロイド外用薬；非ステロイド抗炎症剤；抗ヒスタミン（例えば、Ｃｌａｒｉｔｉｎ（登録商標）、Ａｌｌｅｇｒａ（登録商標））；セクション７．８．６．５．２に記載されているものを除く慢性薬；インフルエンザワクチン（少なくとも２週間研究ワクチン接種の開始前又は少なくとも８回目のワクチン接種後２週間にこれらを投与すべきである）；  及び／又はコルチコステロイド薬は、経口又は吸入により投与される（例えば、Ａｄｖａｉｒ（登録商標）、Ｆｌｏｖｅｎｔ（登録商標）、Ａｚｍａｃｏｒｔ（登録商標））を含むことができる。
【０４１１】
７．９．６．５．２  許容不能
許容不能な投薬は、インターフェロン治療（例えば、Ｉｎｔｒｏｎ−Ａ（登録商標））；化学療法；アレルギー脱感作アレルギー脱感作注射；成長因子（例えば、Ｐｒｏｃｒｉｔ（登録商標）、Ａｒａｎｅｓｐ（登録商標）、Ｎｅｕｌａｓｔａ（登録商標））；インターロイキン（例えば、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標））；任意の治験治療薬及び／又は違法薬物を含む。
【０４１２】
７．９．７  相関／特別  研究
７．９．７．１  免疫学的監視
７．９．７．１．１  ＥＬＩＳＰＯＴアッセイ
ＧＡＡワクチン投与前後の末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）中のグリオーマ関連抗原（ＧＡＡ）応答性Ｔリンパ球前駆体の頻度をＥＬＩＳＰＯＴアッセイで測定することができる。
ＥＬＩＳＰＯＴで測定された生物学的応答は、アッセイ間の変動を避けるために、１個人の少なくとも同一の時点で行うことができる。ワクチン接種の成功は、抗原特異的、ＭＨＣ拘束的様式でサイトカインを分泌することができるＴ細胞のクローン集団を刺激する。ＥＬＩＳＰＯＴアッセイは、ＣＤ８＋Ｔ細胞集団のＧＡＡ特異的免疫応答同様、ヘルパーＴＴペプチドに対し反応するＣＤ４＋Ｔ細胞を評価するために使用することができる。ＩＦＮ−γ産生は１型Ｔ細胞応答を算定することで評価することができる。
【０４１３】
同一抗原に対する２つの連続するワクチン接種後の時点の任意の時点で（１２、１５、１８、２１及び２４週）、スポットの数がベースラインで２倍、少なくとも１０スポット／２０，０００細胞存在する場合、ワクチン接種後のスポットの数が、ワクチン接種前の値の少なくとも３倍の標準偏差の場合、対象は反応したと考えられる。応答は抗原のどれか１つでもあり得る。
【０４１４】
７．９．７．１．２  患者のＰＢＭＣ中のＧＡＡ応答性Ｔ細胞のテトラマー解析
ＧＡＡワクチン投与前後の末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）中のグリオーマ関連抗原（ＧＡＡ）応答性Ｔリンパ球前駆体の頻度をＥＬＩＳＰＯＴアッセイで測定することができる。ＥＬＩＳＰＯＴで測定された生物学的応答は、アッセイ間の変動を避けるために、１個人の少なくとも同一の時点で行うことができる。ワクチン接種の成功は、抗原特異的、ＭＨＣ拘束的様式でサイトカインを分泌することができるＴ細胞のクローン集団を刺激する。ＥＬＩＳＰＯＴアッセイは、ＣＤ８＋Ｔ細胞集団のＧＡＡ特異的免疫応答同様、ヘルパーＴＴペプチドに対し反応するＣＤ４＋Ｔ細胞を評価するために使用することができる。ＩＦＮ−γ産生は１型Ｔ細胞応答を算定することで評価することができる。
【０４１５】
テトラマーアッセイは、ベースライン時とワクチン接種後の５つの時点（１２、１５、１８、２１及び２４週）で行うことができる。テトラマーアッセイによる全ＣＤ８＋細胞陽性の（１＋Ｂ）％となるペプチドの１時点の陽性反応を定義することができ、Ｂはベースラインでのパーセント陽性であり、それは通常０．１％未満と考えられる。ＥＬＩＳＰＯＴ反応の定義に類似し、彼／彼女が任意のペプチドに対して２つの連続する１時点応答を示した場合、患者は応答したと考えられる。
【０４１６】
７．９．７．１．３  リンパ球集団のフローサイトメトリー分析
ワクチン前後の連続時点で、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞の数と同様に、ＣＤ４＋／Ｆｏｘｐ３＋Ｔ制御細胞の数を評価することができる。
【０４１７】
７．９．７．１．４   血清中の自己免疫分析
保存血清で自己抗体の存在を評価することができる。
【０４１８】
７．９．７．２  原発性及び再発性腫瘍組織の評価
患者の使用可能な腫瘍組織でのＧＡＡ発現は、免疫組織化学（ＩＨＣ）及び逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）で評価することができる（ワクチン接種前又はワクチン接種後のそれぞれ、又は両者）。
【０４１９】
ワクチン接種後に腫瘍が再発する場合、どのように腫瘍がワクチンの効果を免れたのかを評価することは重要であり得る。この目的を達成するために、組織利用性を認めるのと同様、以下の特定の事項を評価することができる。（ｉ）抗原損失：ＩＨＣ及びＲＴ−ＰＣＲを用いて、再発した腫瘍が標的ＧＡＡ、ＨＬＡ−Ａ２及び抗原プロセッシングに関与するトランスポーター等の抗原プロセッシング機械部品を発現しているか否かを評価することができる、（ｉｉ）抗アポトーシスアップレギュレーション分子：Ｓｕｒｖｉｖｉｎは標的かされるかもしれないが、他の抗アポトーシス分子はアップレギュレートされるかもしれない、例えば、ｃＦＬＩＰ（細胞内ＦＬＩＣＥ（Ｆａｓ関連デスドメイン様ＩＬ−
１β変換酵素）阻害タンパク質）；及び（ｉｉｉ）免疫細胞浸潤：腫瘍がワクチン誘導免疫応答を免れるかもしれない１つの理由は、該腫瘍を浸潤する反応性Ｔ細胞の失敗である。これを検討するために、新鮮な切除された腫瘍組織（固定又は凍結されない）が利用できる時は、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬｓ）を単離し、各ＧＡＡのためのＨＬＡ−Ａ２テトラマーを用いて、それらの数、表現型、抗原特異性の特徴づけを行うことができる。マルチカラーフローサイトメトリーを用いて、テトラマー＋ＴＩＬの機能、生存をパーフォリン／ＩＦＮ−γ及びアネキシンＶそれぞれの染色で決定することができる。コントロール組織は、本研究ではない患者からのワクチン前腫瘍（可能であれば）及び再発腫瘍を含むことができる。当該研究は、ワクチン誘導Ｔ細胞が脳腫瘍部位に効率的にトラフィックし得るか並びにその機能及び生存を維持し得るかを評価することができる。
【０４２０】
７．９．８  研究パラメータ
この研究は外来を基本に、０、３、６、９、１２、１５、１８、２１及び２４週に評価されるようスケジュールされた患者で行うことができる。当該期間の後、患者が追加のワクチン接種を受けない場合、該患者は研究から外すことができ、同様の腫瘍型の患者のために通常なされるように、それ以降２−４月毎に臨床的に追跡することができる。患者に進行性腫瘍があることが判明した場合、化学療法又は切除等の他の治療を受けることができる。患者が追加ワクチンを受ける場合、該追加ワクチンは１２週毎に投与され、患者が脱落（withdraw）するまで臨床的、免疫学的及び放射線（ＭＲＩ）モニタリングを来院時毎（ｑ１２週）行うことができる。寛解の対象は、追加の２回のワクチン接種を１２週間隔で再処置され、その後追跡される。ワクチン接種は、スケジュールされたワクチン接種の間いつでも、進行又は許容できない毒性のいずれの患者も中止することができる。
【０４２１】
７．９．８．１  前処置（スクリーニング及びベースラインデータ）
以下の手順は治療を続行する前に実施することがある：インフォームドコンセントはスクリーニングの開始前に取得する必要がある；ＨＬＡタイピング（ＨＬＡ−Ａ２陽性のフローサイトメーター評価）；診断の文章化（病理学的）；神経学的検査及びパフォーマンスステータスを含む完全な病歴と身体診察（バイタルサイン及び体重と共に）；ワクチン部位はインタクト排出リンパ節の確認でデザインされる；人口統計情報を記録すべきである；ＣＢＣ及び血小板を評価すべきである；ＰＴ／ＰＴＴを評価すべきである；電解質、クレアチニン、血中尿素窒素、糖、ＡＳＴ、ＡＬＴ、ＡＬＫリン、総ビリルビン、ＬＤＨ、カルシウム及びアルブミンを含む、包括的な代謝パネルを評価すべきである；ＧＧＴ、リン、マグネシウムを評価すべきである；ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイのために採血すべきである；糖尿病患者のＨＧＢＡ１Ｃを実施すべきである；心臓の症状、病歴又は現在の病気の患者にＥＣＧ及びエコー図を実施すべきである；尿検査を実施すべきである；病気のベースライン状態を評価するために脳のＭＲＩをとるべきである；及び／又は女性の出産の可能性は血清β−ＨＣＧの妊娠検査を行うべきである。
【０４２２】
７．９．８．２  処置中の評価
以下の手順を治療の進行に伴って実施することができる；投与前（ワクチン接種当日のワクチン投与０、３、６、９、１２、１５、１８及び２１週間前）：バイタルサイン、体重、パフォーマンスステータス及び神経機能を含む、病歴と身体；ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイのために採血すべきである；電解質、クレアチニン、血中尿素窒素、糖、ＡＳＴ、ＡＬＴ、ＡＬＫリン、総ビリルビン、ＬＤＨ、カルシウム及びアルブミンを含む化学物質を評価すべきである（０週を除く）；臨床上示された場合、ＡＥＤレベルを評価すべきである；神経学的評価及び皮膚検査（注射部位）を含めるように、以前の用量から患者の有害事象をスクリーニングすべきである；及び／又はＭＲＩを行うべきである（ワクチン注射の来院中１２週のみに）
【０４２３】
ワクチン投与後、各ＧＡＡペプチドワクチン投与後少なくとも２０分間は、有害事象に
ついて全患者を綿密に観察すべきである。同日に、各ワクチン接種後、ｐｏｌｙ−ＩＣＬＣ（ｉ．ｍ．  ３０ｍｇ／ｋｇ）が投与することができ、ｐｏｌｙ−ＩＣＬＣ注射後、少なくとも２０分間は患者をモニタリングすることができる。
【０４２４】
７．９．８．３  ２４週（８回ワクチン接種後）評価 
ワクチンサイクルが完了した後、以下の手順を実施することができる；バイタルサイン、体重、Ｋａｒｎｏｆｓｋｙパフォーマンスステータス及び神経機能を含む病歴及び身体；ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイのために採血すべきである（３、６及び９週を除く）；差があるＣＢＣ及び血小板を評価すべきである（０週を除く）；電解質、クレアチニン、血中尿素窒素、糖、ＡＳＴ、ＡＬＴ、ＡＬＫリン、総ビリルビン、ＬＤＨ、カルシウム及びアルブミンを含む化学物質が評価すべきである（０週を除く）；臨床上示される場合ＡＥＤレベルを評価すべきである；神経学的評価及び皮膚検査（注射部位）を含むため、以前の投与量から有害事象のために患者をスクリーニングすべきである；及び／又はＭＲＩを行うべきである。
【０４２５】
７．９．８．４  追加ワクチン（追加ワクチンでのケース）での評価
追加ワクチンを投与する前に、以下の手順が実施される得る；バイタルサイン、体重、Ｋａｒｎｏｆｓｋｙパフォーマンスステータス及び神経機能を含む病歴及び身体；ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイのために採血すべきである（３、６及び９週を除く）；差があるＣＢＣ及び血小板を評価すべきである（０週を除く）；電解質、クレアチニン、血中尿素窒素、糖、ＡＳＴ、ＡＬＴ、ＡＬＫリン、総ビリルビン、ＬＤＨ、カルシウム及びアルブミンを含む化学物質が評価すべきである（０週を除く）；臨床上示される場合ＡＥＤレベルを評価すべきである；神経学的評価及び皮膚検査（注射部位）を含むため、以前の投与量から有害事象のために患者をスクリーニングすべきである；及び／又はＭＲＩを行うべきである。
【０４２６】
追加ワクチン投与後、各ワクチン投与後少なくとも２０分間は、有害事象について全患者を綿密に観察すべきである。追加ワクチンは、以下の条件のいずれかで終了し得る：１）腫瘍進行；２）ＲＬＴ；又は３）追加ワクチン接種開始後、連続した２つの時点で免疫応答陰性。
【０４２７】
【表７−１】
2019123745.tif 000014
【０４２８】
【表７−２】
2019123745.tif 000015
【０４２９】
７．９．９  効果の測定
７．９．９．１  目的
７．９．９．１．１  免疫原性
ワクチン接種後ＰＢＭＣのＧＡＡペプチドに対するＣＤ８＋Ｔ細胞応答の応答率及び大きさは、ＩＦＮ−γ  ＥＬＩＳＰＯＴ及び２次アッセイとしてフローサイトメトリーによるテトラマー分析を用いて評価することができる。
【０４３０】
ＥＬＩＳＰＯＴアッセイは、サイトカイン−発現として抗原特異的Ｔ細胞の機能的な状態を示す。テトラマーを用いるフローサイトメトリー分析は、主な患者由来のＰＢＭＣのインビトロ操作や抗原特異的Ｔ細胞上のホーミング受容体（ｉｎｔｅｇｒｉｎｓ）発現等の表現型解析なしに、抗原結合Ｔ細胞の頻度比較的正確な推定を可能にする。
【０４３１】
末梢血中の応答を測定する生物学的アッセイは、アッセイ間の変動を避けるために、同一の時点で行い得る。
【０４３２】
フローサイトメトリーを用いて、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋／Ｆｏｘｐ３＋制御Ｔ細胞等のリンパ球分画の数も評価することができる。加えて、進行腫瘍の減量手術を受ける患者は、腫瘍組織が入手できれば、抗原特異的ＣＴＬの浸潤が、フローサイトメトリーで、エピトープ特異的ＭＨＶテトラマーと共に腫瘍浸潤リンパ球が評価することができる。
【０４３３】
７．９．９．１．２  安全性
グレードＩＩ星状細胞腫及び乏突起星状細胞腫の患者での、クラスＩＩＭＨＣ拘束性破
傷風トキソイド（ＴＴ）由来のヘルパーＴ細胞及びｉ．ｍ．  ｐｏｌｙ−ＩＣＬＣと組み合わせた４つのＨＬＡ−Ａ２拘束性グリオーマ関連抗原（ＧＡＡ）エピトープペプチド投与の安全性を決定することができる。
【０４３４】
エンドポイントは、ワクチン接種後の患者群で通常実施されるように、綿密な臨床経過観察と標準的基準を用いて、有害事象の発生率及び重症度を含むことができる。レジメンは、所定のコホート内の患者のうち、＞３３％でＲＬＴが進む場合、受け入れ難いほど毒性であると考えられる。
【０４３５】
７．９．９．１．３  応答及び無増悪生存期間
コントラスト増強のＭＲＩスキャンを用いて、１２週、２４週、その後３ヶ月毎に腫瘍再発を最小限で評価することができる。低悪性度グリオーマはコントラスト投与で概して増強しない浸潤性腫瘍であるため、応答及び無増悪生存の評価のために、腫瘍（すなわち、標的病変）をＴ２又はＦＬＡＩＲ  ＭＲＩ画像で測定することができる。ベースラインで増強した病変がある場合、ＷＨＯグレードＩＩ腫瘍に関する病理情報が該腫瘍の状態を真に表しているかについて慎重な議論を行うことができる。増強した腫瘍がグレードＩＩと考えられる場合、増強した病変の大きさを評価することができる。加えて、後述するように、以前は非増強腫瘍での増強の出現は、進行（ＰＤ）と考えられる。
【０４３６】
（Ａ）応答（ＲＥＣＩＳＴ基準による）
完全寛解（ＣＲ）：全標的病変の消失
【０４３７】
部分寛解（ＰＲ）：標的病変の最大直径（ＬＤ）の総和が少なくとも３０％減少し、参照ベースライン合計ＬＤとして取る。
【０４３８】
進行（ＰＤ）：標的病変のＬＤ合計が少なくとも２０％増加し、処置開始又は以前に非強化腫瘍でコントラスト増強の出現以来、報告された最小合計ＬＤを参照とする。偽腫瘍進行のために、低用量ステロイドに変更し、ＰＤを有すると宣言される前に再度画像化される。
【０４３９】
不変（ＳＤ）：ＰＲにふさわしい収縮も、ＰＤにふさわしい十分な増加もなく、処置開始以来最小合計ＬＤを参照とする。
【０４４０】
（Ｂ）全生存期間（ＯＳ）及び無増悪生存期間（ＰＦＳ）
ＰＦＳは、治療開始から増悪又は死亡の時までの期間として定義される。全患者は、最小２年間追跡されるため、実際の２年ＯＳ及びＰＦＳを決定することができる。
【０４４１】
７．９．９．１．４  ワクチン接種後の腫瘍組織解析
本研究において、全患者から腫瘍組織が得られるわけではない。しかしながら、ワクチン接種前及び／又はワクチン接種後に得られた全ての腫瘍組織において、以下の（ｉ）抗原損失、（ｉｉ）抗アポトーシス分子のアップレギュレーション、（ｉｉｉ）免疫細胞浸潤、を予備的な方法で評価することができる。
【０４４２】
７．９．１０  統計的考察
７．９．１０．１  免疫学的応答の評価
免疫応答の評価は、ＩＦＮ−γ  ＥＬＩＳＰＯＴ及びテトラマーアッセイを用うことができる。
【０４４３】
応答者はＩＦＮ−γ  ＥＬＩＳＰＯＴ又はテトラマーアッセイのいずれかで対応してきた患者と定義することができる。９対象中少なくとも４応答があれば、コホートはさらな
る調査に値するとみなすことができる。その真の応答率が＜１７％の場合、４又はそれ以上の応答を観察するための可能性が＜５％あり、真の応答率が＞６６％である場合、３又はほとんどない応答を観察する可能性は＜５％であるというプロパティを当該基準は有する。
【０４４４】
７．９．１０．２  安全性の実証及び評価
毒性を評価するためにＮＣＩ有害事象共通用語基準（ＡＥ）（ＣＴＣＡＥ  ３．０）を使用することができる。毒性は、治療に、多分、おそらく、あるいは間違いなく関連した有害事象と考えることができる。目的のカテゴリ毎の毒性の最大評点を、各患者のために記録し、集計結果は、カテゴリや悪性度により集計することができる。
【０４４５】
安全のため、レジメンは、レジメン規定毒性（ＲＬＴ）≧３３％及び少なくとも２ＲＬＴが観察された場合はいつでも過度に毒性であると考えることができる。
【０４４６】
本研究設計は、以下のプロパティがある：当該患者群の真のＲＬＴ比が≧４５％であれば、発生がとまるであろうという可能性が少なくとも９０％あり；真のＲＬＴ比が≦９％であれば、発生がとまらないであろうという可能性が少なくとも９０％あり、レジメンは安全であると考えられる。
【０４４７】
７．９．１０．３  臨床エンドポイントの評価
全患者について少なくとも２年間追跡することができるので、実際の２年全生存期間（ＯＳ）、無増悪生存期間（ＰＦＳ）及び反応率を予備的エンドポイントとして集計することができる。ＰＦＳは、連続ＭＲＩ撮影画像に基づく、ＷＨＯグレードＩＩ星状細胞腫又は乏突起星状細胞腫の患者の病理学的診断から進行までの時間間隔として定義する。適切な場合には予備的解析により、画像化応答及びＯＳ／ＰＦＳに対する免疫応答との関係を調査することができる（フィッシャーの正確確率検定及びログランク検定各々を使用して）。
【０４４８】
７．９．１０．４  人口統計データ
評価可能な全患者のベースライン記述統計学は、人口統計学的変数（年齢、性別、人種／民族）、Ｋａｒｎｏｆｓｋｙ又はＬａｎｓｋｙパフォーマンスステータス、登録時の病期とステータス（安定した病気、進行性の病気）及び／又は以前使用された治療レジメンで規定することができる。
【０４４９】
７．１０  実施例１０
本実施例は、新たに診断された悪性若しくは内在性脳幹グリオーマ（ＢＳＧ）、非脳幹悪性グリオーマ（ＨＧＧ）の不完全な切除、又は再発性切除不能低悪性度グリオーマ（ＬＧＧ）の子供へのＨＬＡ−Ａ２拘束性グリオーマ抗原ペプチドでのワクチン接種とｐｏｌｙ−ＩＣＬＣとの組み合わせの効果を評価するための研究を記載している。
【０４５０】
７．１０．１  合理性
現在のところ、小児悪性グリオーマのための効果的な治療方法は存在しない。免疫療法、特に活性ワクチン接種には、効果的かつ安全な方法として発達する可能性がある。ＧＡＡ特異的ペプチドを用いるワクチンは、理論上自己免疫脳炎の懸念がなく、グリオーマ特異的免疫応答を誘導することができるため、全グリオーマ由来抗原と比較して、より可能性がある。最近の研究からの証拠では、小児グリオーマ及び内在性脳幹グリオーマは、グリオーマ関連抗原（ＧＡＡ）の発現パターンが類似し、ワクチン治療により標的となる可能性がある。内在性脳幹グリオーマ、悪性グリオーマの不完全な切除の子供の予後不良の観点から、当該腫瘍での放射線療法後の免疫の活性と安全性を評価することが適切である。同様に、根深い低悪性度グリオーマでも、類似のＧＡＡスペクトルを発現する。当該病
変は、罹患率と死亡率の増加と共に、従来の治療に一般的に難治性となるため、少なくとも２つの化学療法若しくは生物学的療法レジメン又は照射後に症状が進行した患者でのワクチン治療の潜在的な効果を評価することは適切である。
【０４５１】
ＧＡＡペプチドとｐｏｌｙ−ＩＣＬＣとの併用投与は、抗ＧＡＡ  ＣＴＬ応答の誘導及び脳腫瘍部位への抗原特異的Ｔ細胞トラフィッキングを顕著に高める。本実施例に記載された研究では、悪性グリオーマ又は難治性低悪性度グリオーマと新たに診断された小児患者に、ｐｏｌｙ−ＩＣＬＣの筋肉内投与と組み合わせて複数の新規ＧＡＡ由来ＨＬＡ−Ａ２拘束性ＣＴＬエピトープでワクチン接種することができる。
【０４５２】
７．１０．２  目的
本実施例は、悪性若しくは難治性脳幹グリオーマ（ＢＳＧ）又は不完全に切除された非脳幹高悪性度グリオーマ（ＨＧＧ）若しくは再発性切除不能低悪性度グリオーマ（ＬＧＧ）と新たに診断された子供でのワクチン研究を記載する。
【０４５３】
７．１０．２．１  ＧＡＡ特異的Ｔ細胞応答の誘導
この形態のワクチンに反応したＧＡＡペプチドに対するワクチン接種後末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）での応答率及び免疫応答の度合いを、ＩＦＮ−γ−ｅｎｚｙｍｅ−ｌｉｎｋｅｄ  ｉｍｍｕｎｏ−ｓｐｏｔ（ＥＬＩＳＰＯＴ）及びテトラマーアッセイを用いて決定することができる。
【０４５４】
７．１０．２．２  安全性
新たに診断された悪性脳幹グリオーマ（ＢＳＧ）の子供、及び新たに診断された不完全に切除された非脳幹悪性グリオーマ（ＨＧＧ）の子供において、レジメン規定毒性（ＲＬＴ）の頻度に基づく早期停止規則でワクチンレジームに関連する有害事象の発生率と重症度を評価することができる。２つの化学療法若しくは生物学的療法レジメン又は照射後に進行した処置-難治性、切除不能低悪性度グリオーマの患者における、ワクチンレジーム
に関連する有害事象の発生率と重症度も評価することができる。
【０４５５】
７．１０．２．３  臨床反応
標準的なＷＨＯ応答基準を用いて放射線応答を決定することができる。２年無増悪生存率（ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ−ｆｒｅｅ  ｓｕｒｖｉｖａｌ；ＰＦＳ）を連続磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）スキャンに基づき予備的方法で評価することができる。
【０４５６】
７．１０．２．４  生物学的相関のための腫瘍組織
非脳幹腫瘍が進行した患者のために、生検／腫瘍減量を奨励することができる。ワクチン接種後腫瘍組織が利用できる時は、ＧＡＡ発現状態及びＧＡＡ特異的Ｔ細胞の浸潤を分析することができる。
【０４５７】
７．１０．３  患者選択
７．１０．３．１  適正基準
病理学的基準−患者はグリオーマを有するだろう。いくつかの実施形態では、グリオーマ患者は以下の階層のうちの１つである：（ｉ）階層Ａ：新たに診断されたびまん性内在性橋グリオーマ又は任意の生検診断による脳幹を含む高悪性度グリオーマ；（ｉｉ）階層Ｂ：新たに診断された不完全な切除、非脳幹高悪性度グリオーマ（すなわち、画像化で可視可能な残存腫瘍）；又は、（ｉｉｉ）階層Ｃ：以前の２つの化学療法若しくは生物学的療法レジメン及び／又は放射線療法にもかかわらず再発した任意のサブタイプの切除不能、進行性低悪性度グリオーマ、（ｉｖ）階層Ｄ：放射線療法で処置された、あるいは照射中化学療法なしに処置された脳幹を含む、新たに診断されたびまん性内在性橋グリオーマ（ＤＩＰＧ）又は任意の生検診断による脳幹を含む高悪性度グリオーマ＊、（ｖ）階層Ｅ
：放射線療法あるいは照射中化学療法なしに処置された新たに診断された非脳幹高悪性度グリオーマ＊（ＨＧＧ）、（ｖｉ）階層Ｆ：処置後に再発した再発性非脳幹高悪性度グリオーマ＊。患者は以前の治療の毒性効果から回復していなければならない。高悪性度グリオーマの適格な組織学は、多形性膠芽腫（ＧＢＭ）、未分化星状細胞腫（ＡＡ）又は神経膠肉腫を含む。任意の乏突起膠腫構成成分をもつ患者は、本実施例に記載された特定のプロトコールにふさわしくないかもしれない。
【０４５８】
本研究の患者はフローサイトメトリーに基づきＨＬＡ−Ａ２陽性であるべきである。
【０４５９】
階層Ａ及びＢの患者は、５０００−６０００  ｃＧｙ間の総線量で外部分割放射線照射療法として定義される標準的な照射野ＲＴを受けているべきである。当該階層の患者は、ＲＴの完了４−１２週間内に登録されるべきである。
【０４６０】
本研究の患者は、臨床的に安定であるべきであり、低用量（わずか０．１ｍｇ／ｋｇ／日、最大４ｍｇ／日  デキサメタゾン）コルチコステロイドを、研究登録少なくとも１週間前に断つべきである。
【０４６１】
本研究の患者は、研究時に３歳及び２１歳以下であるべきである。
【０４６２】
本研究の患者は、≧５０のパフォーマンスステータス（ｐｓ）であるべきである。；（Ｋａｒｎｏｆｓｋｙ＞１６歳以上ならば、Ｌａｎｓｋｙ＜１６歳以下ならば）。
【０４６３】
本研究の初経後の女性患者は、血清βＨＣＧ陰性を示すべきである。
【０４６４】
本研究の患者は、全身感染がないべきである。抗体治療の患者は、処置を始める前に少なくとも７日間抗生物質を服用しないべきである。
【０４６５】
本研究の患者は、以下に測定される十分な臓器機能を有するべきである：（ｉ）骨髄：ＡＮＣ＞１，０００／μＬ；血小板＞１００，０００／μＬ（輸血に頼らない）；ヘモグロビン＞８ｇ／ｄｌ（輸血され得る）；（ｉｉ）肝臓：ビリルビン≦１．５ｘ年齢の割に施設正常値（institutional normal）；ＳＧＰＴ（ＡＬＴ）＜３ｘ施設正常値及びアルブミン≧２ｇ／ｄｌ；（ｉｉｉ）腎臓：年齢に基づく血清クレアチニン若しくはクレアチニンクリアランス又はラジオアイソトープＧＦＲ≧７０ｍｌ／分／１．７３ｍ2。
本研究の患者は、年齢の正常範囲内で、凝固試験並びにＰＴ及びＰＴＴを受けるべきである。
【０４６６】
本研究の患者は、明白な心臓、胃腸、肺又は精神疾患がないべきである。
【０４６７】
階層Ｃの患者のために、以前の化学療法の効果の回復が必要かもしれない。
【０４６８】
７．１０．３．２  除外基準
本研究の階層Ａ及び階層Ｂの患者は、軟膜転移疾患の存在がある場合、除外されるべきである。
【０４６９】
本研究の患者は、全体の完全に切除された腫瘍、すなわち、研究の時点で、ＭＲＩスキャンで可視化できる残留疾患がない場合、除外されるべきである。
【０４７０】
本研究の階層Ａ及び階層Ｂの患者は、以前の化学療法又は放射線療法以外の任意のタイプの抗グリオーマ治療を受けていた場合、除外されるべきである。（本研究の階層Cの患
者は、以前に少なくとも２つの化学療法若しくは生物学的療法レジメン及び／又は放射線
療法を受けているべきである。）
【０４７１】
本研究の患者は、放射線療法；化学療法；インターフェロン（例えば、Ｉｎｔｒｏｎ−Ａ（登録商標））；アレルギー脱感作注射；成長因子（例えば、Ｐｒｏｃｒｉｔ（登録商標），  Ａｒａｎｅｓｐ（登録商標），  Ｎｅｕｌａｓｔａ（登録商標））；インターロイキン（例えば、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標））；及び／又は任意の治験治療薬を含む、同時処置又は投薬を受けている場合、除外すべきである。
【０４７２】
本研究の患者は、細胞傷害性又は免疫抑制治療を必要とする自己免疫疾患、又は内臓障害を伴う自己免疫疾患を以前に患ったことがないべきである。これらの治療を必要とする活性自己免疫疾患を伴う本研究の患者も除外すべきである。ＮＳＡＩＤの薬を必要とする軽度の関節炎は、除外すべきではない。
【０４７３】
本研究の患者は、本研究に入る前４週間以内に免疫抑制剤を使用していた又は免疫抑制剤の使用を予定されている患者を除外すべきである。周術期及び／又は放射線療法中に、デキサメタゾン又は他のコルチコステロイド薬が使用されている場合（わずか０．１ｍｇ／ｋｇ／日、最大４ｍｇ／日  デキサメタゾン）、研究登録前少なくとも１週間患者により減らすべきである。局所的なコルチコステロイドは許容すべきである。
【０４７４】
本研究の患者は、アルコール中毒又は違法薬物であることが分かっている人は除外すべきである。
【０４７５】
免疫欠損の患者は、本治療に反応が見込めないため、ＨＩＶ陽性患者は本研究から除外すべきである。
【０４７６】
７．１０．４  ペプチドワクチン
７．１０．４．１  ペプチド
以下のペプチド、ＩＬ−１３Ｒα２３４５−３５３１Ａ９Ｖ（ＡＬＰＦＧＦＩＬＶ；配列番号：３）；ＥｐｈＡ２８８３−８９１（ＴＬＡＤＦＤＰＲＶ；配列番号：６）；Ｓｕｒｖｉｖｉｎ９６-１０４：Ｍ２（ＬＭＬＧＥＦＬＫＬ；配列番号：７）；及び破傷風ト
キソイド（ＴｅｔＡ８３０）（ＡＱＹＩＫＡＮＳＫＦＩＧＩＴＥＬ；配列番号：９）がワクチン製剤に含まれ得る。
【０４７７】
全ペプチドを合成することができ、ＨＰＬＣで該合成ペプチドを精製することができる合成ペプチドの同一性は、質量分析による質量及びアミノ酸配列の検証で確かめることができる。それぞれのペプチドのロットは、ＦＤＡによる同一性、純度、無菌性、発熱性で評価することができる。
【０４７８】
ペプチドは、ＧＭＰ条件下バイアルに入れ−７０℃で保存可能である。乾燥凍結したペプチドの安定性は、質量分析で毎年試験することができる。
【０４７９】
７．１０．４．２  他の試薬
Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ−５１（ＳＥＰＰＩＣ  Ｉｎｃ．，  Ｆａｉｒｆｉｅｌｄ，  ＮＪ）は、ペプチドワクチン中で追加の剤として使用可能である。
【０４８０】
７．１０．４．３  投与量及び調製
水中油型エマルジョン（すなわち、全容量／注射が８００μＬ）を形成するために、全４つのＨＬＡ−Ａ２拘束性ＧＡＡペプチド（３００μｇ／ペプチド）及び破傷風ペプチド（ペプチド−ｔｅｔ；２００μｇ）各々を含む水溶液（４００μＬ）がＭｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ−５１とともに混合され得る。
【０４８１】
７．１０．４．４  投与
本研究の患者は上腕又は大腿に皮下ワクチン接種される。
【０４８２】
ワクチンは、ＲＴ終了後（１週）、４−１２週から開始からＱ３Ｗｋ投与した。
【０４８３】
７．１０．５  Ｐｏｌｙ−ＩＣＬＣ
Ｐｏｌｙ−ＩＣＬＣを、Bioserv, Corporation（San Diego, California）のＧＭＰ施
設で調製して、パッケージングすることができる。Ｐｏｌｙ−ＩＣＬＣを、２ｍｇ／ｃｃの濃度で半透明の溶液の１ｃｃを含むバイアル中で供給することができる。Ｐｏｌｙ−ＩＣＬＣは室温で数日間安定であるが、約４℃で冷凍保存することができる。
【０４８４】
７．１０．５．１  投与量及び投与
ｐｏｌｙ−ＩＣＬＣ投与（３０μｇ／ｋｇ  ｉ．ｍ）の最初の期間は、最初のＧＡＡ／ＴＴワクチン当日に投与することができる。繰り返しのワクチン接種（Ｑ３週）後それぞれで、ワクチン接種後当日にｐｏｌｙ−ＩＣＬＣ（３０μｇ／ｋｇ  ｉ．ｍ．）を投与することができる。
【０４８５】
注射部位に関し、ｐｏｌｙ−ＩＣＬＣは排出腋窩リンパ節での抗原提示プロセスを促進すると思われているため、先のペプチド注射部位（例えば、先のペプチド注射部位の中央から３ｃｍ未満）と接近してｐｏｌｙ−ＩＣＬＣをｉ．ｍ．投与すべきである。
【０４８６】
Ｐｏｌｙ−ＩＣＬＣは、患者の体重あたり処方される量で（最大１６４０μｇ／注射）、バイアルから供給する際には無菌操作で筋肉内（ｉ．ｍ．）投与すべきである。最初の処置前及び処置後少なくとも２０分間はバイタルサインを監視することができる。
【０４８７】
７．１０．６  処置プラン
本実施例に記載された研究は、新たに診断された内在性脳幹グリオーマ（ＢＳＧ）、又は生検診断によるＧＢＭのＨＬＡ−Ａ２＋子供でのＧＡＡ／ＴＴペプチドワクチン及びｐｏｌｙ−ＩＣＬＣの免疫原性、安全性及び予備的臨床効果を評価するための３つの階層（ｓｔｒａｔａ）、ＡＡ若しくは脳幹を含む神経膠肉腫（階層Ａ）；不完全に切除された非脳幹ＧＢＭ、ＡＡ若しくは神経膠肉腫（階層Ｂ）；再発性進行性低悪性度グリオーマ（階層Ｃ）を使用することができる。
【０４８８】
７．１０．６．１  スケジュール
診断後（階層Ａ及びＢ）又は病気進行後（階層Ｃ）、本実施例に記載された研究に従って、潜在的に適格性のある患者を議論することができる。階層Ａ及びＢの全患者は、分画外部放射線療法（ｆｒａｃｔｉｏｎａｔｅｄ  ｅｘｔｅｒｎａｌ  ｂｅａｍ  ｒａｄｉａｔｉｏｎ  ｔｈｅｒａｐｙ；ＦＥＢＲＴ）を受けることができる。患者をＨＬＡ−Ａ２状態と評価することができる。適格性スクリーニング並びにベースラインＭＲＩ及び研究室での研究は、本研究の参加登録２週間以内で最初のワクチン接種の３週間以内に完了すべきである。階層Ａ及びＢの患者は、ＦＥＢＲＴ完了後４−１２週間以内に本研究に参加するために登録すべきである。当該患者のための研究登録の時期は、ＲＴ後ＭＲＩ（典型的には４週に行う）が、増加した増強又は質量効果の兆候を示し、患者が臨床上症候性／悪化であるかに依る。その場合、患者が臨床上安定／改善し、低用量（０．１ｍｇ／ｋｇ／日  最大４ｍｇデカドロン）又はステロイドなし×１週間である場合、研究登録を行うであろう。
【０４８９】
３週間毎最大８サイクル、患者にＧＡＡ／ＴＴワクチンの皮下注射を処置することができる。ワクチンと同日に、筋肉内（ｉ．ｍ．）ｐｏｌｙ−ＩＣＬＣ  （３０μｇ／ｋｇ  
ｉ．ｍ．）を投与することができる。各ワクチンは、ｉ．ｍ．  ｐｏｌｙ−ＩＣＬＣ投与の直前に投与することができる。注射部位に関し、ｐｏｌｙ−ＩＣＬＣは先のペプチド注射部位（例えば、先のペプチド注射部位の中央から３ｃｍ未満）と接近してｐｏｌｙ−ＩＣＬＣをｉ．ｍ．投与すべきである。
【０４９０】
患者は任意の可能性のある有害事象、ＲＬＴ同様、臨床来院及びＭＲＩ検査による臨床／放射線応答について評価することができる。追跡ＭＲＩは、７週から開始して９週毎に行うことができる（７、１６及び２５週）。
【０４９１】
ベースラインサンプルとして、最初のワクチン接種前に得たＰＢＭＣを使用することができる。ワクチン接種後サンプルとして、７、１６及び２５週にＰＢＭＣを得ることができる。少なくとも１人の参加者からある時点で得た全ＰＢＭＣサンプルについて、免疫学的アッセイを行うことができるため、アッセイ間の変動を避けることができるだろう。
【０４９２】
７．１０．６．２  追加“連続”治療
予定された８回目のワクチン接種後、患者が放射線応答（すなわち、完全又は部分的応答）あるいはＲＬＴなく安定した症状を示す場合、８回目のワクチン接種後６週から開始して、その後６週毎に最初のワクチン接種から２年まで、腫瘍進行及びＲＬＴがない限り、患者にｐｏｌｙ−ＩＣＬＣと組み合わせて追加のペプチドワクチン接種を行うことができる。免疫学的監視のため、ワクチン投与のための来院時に追加のＰＢＭＣサンプルを得ることができる。追加ワクチンは、１）腫瘍進行、２）ＲＬＴ又は３）患者の脱落のいずれの場合、終了することができる。
【０４９３】
７．１０．６．３  用量変更
７．１０．６．３．１  ｐｏｌｙ−ＩＣＬＣのための用量変更
アセトアミノフェン又は任意のＮＳＡＩＤによる前処置を各ｐｏｌｙ−ＩＣＬＣ投与前に行うべきである。注射後、４８時間以上続くグレード２又はそれより連続する症状のため、次のｐｏｌｙ−ＩＣＬＣは最初の投与量の６７％にすべきである（すなわち、２０μｇ／ｋｇ）。さらなる投与が中断される場合、最初の投与量を結果的に再開することができる。ある投与量を減らしてもグレード２又はそれより大きな症状が再度起き、＞４８時間続く場合、該患者はＲＬＴにより脱落し得る。
【０４９４】
肝酵素評価＞５ｘベースライン（グレード３）又は≧７日続くいずれの耐え難いグレード２非血液学的毒性は、毒性がグレード１又はそれ以下に減少するまでｐｏｌｙ−ＩＣＬＣを保留することができる。それから最初の投与量の２／３（すなわち、２０μｇ／ｋｇ）でＰｏｌｙ−ＩＣＬＣを再投与し、患者を綿密に観察することができる。投与量を減らしても同一の用量限定毒性が再度起きる場合、参加者はＲＬＴにより脱落し得る。
【０４９５】
グレード３又はそれ以上の血液学的毒性のために、次の投与が与えられる時までに毒性がグレード１又はそれ以下に解決されない限り、次の投与量を６７％（すなわち、２０μｇ／ｋｇ）まで減少するべきである。次の投与が与えられる時までに毒性が解決されない場合、患者に処置をしない。投与量を減少するにもかかわらず、同一の用量制限血液学的毒性が再度起きる場合、患者はＲＬＴにより処置をあきらめるかもしれない。
【０４９６】
７．１０．６．３．２  ペプチドワクチンのための遅延投薬
ｐｏｌｙ−ＩＣＬＣ投与が一時停止される状況下において、該事象がペプチド／ＩＳＡ−５１  ワクチンに起因しない場合、予定通りにワクチン投与を続けるべきである。併発疾患又は研究室で他の毒性の原因を評価する必要がある場合等、有害事象の評価が限定される状況下において、６週間までワクチンスケジュールを中断することができる。偽腫瘍進行以外の有害事象が原因でワクチン投与が６週間以上遅延する場合、原因にかかわらず
、処置を中断すべきである。
【０４９７】
研究の間中、レジメン規定毒性（ＲＬＴ）に則って患者を観察することができる。多分、おそらく、あるいは間違いなく処置に関連すると判断される場合、以下はＲＬＴと考えられる。それらが起きれば、患者個人を研究から外し、さらなる注射を投与することはできない。
【０４９８】
≧グレード２又はそれ以上気管支けいれん又は全身性蕁麻疹（過敏症）
【０４９９】
≧グレード２又はそれ以上  剥脱性紅皮症、アナフィラキシー又は血管虚脱等のアレルギー反応
【０５００】
≧グレード３  ペプチドワクチン又はｐｏｌｙ−ＩＣＬＣ投与による注射部位反応を含む、多分、おそらく、あるいは間違いなく治療レジメンに関連する、任意の≧グレード３
非血液学的毒性（肝毒性を除く）
【０５０１】
≧グレード３  ３３％投与量減少したにもかかわらず再発する又は次の期日（ｄｕｅ）までにグレード１若しくはそれ以下にまでに解決しない血液学的又は肝毒性
【０５０２】
３３％投与量減少したにもかかわらず＞７日続く又は次の期日（ｄｕｅ）までにグレード１若しくはそれ以下にまでに解決しない、耐え難いグレード２非血液学的毒性
【０５０３】
グレード２又はそれより大きな投与量の減少にもかかわらず＞４８時間続く全身症状
【０５０４】
≧グレード３  レジメン関連炎症性免疫応答（すなわち、０．３ｍｇ／ｋｇ／日デカドロン（最大１２ｍｇ／日）の７日試験に反応しない偽腫瘍進行、及び／又は可能であれば減量手術を必要とする）による神経毒性
【０５０５】
≧グレード３  十分な制吐剤予防にもかかわらず吐き気や嘔吐
【０５０６】
遅延投薬＞６週間  ＰＴＰ以外の毒性によるｐｏｌｙ−ＩＣＬＣかペプチドワクチンのための
【０５０７】
治療は以下の理由で中断することができる（ｉ）上記で定義したＰＴＰ以外のレジメン限定的毒性；（ｉｉ）病気の進行−ＭＲＩスキャンでの最大腫瘍直径及びその垂直直径の産物の少なくとも２５％増加（ｉｉｉ）さらなるワクチン投与又はｐｏｌｙ−ＩＣＬＣ投与を妨げる６週間以上の併発疾患（ｉｖ）妊娠：妊娠した患者は、妊娠期間中追跡し続けられるだろう。
【０５０８】
７．１０．６．４  処置期間
有害事象による処置の遅延がない場合、セクション７．１０．６．３．２のＯｆｆ−処置の１つが起きるまでは、２５週間処置を続けることができる（８回ワクチン接種及びそれに続く２５週に来院）。
【０５０９】
７．１０．６．５  同時処置
７．１０．６．５．１  許容
患者は、各ｐｏｌｙ−ＩＣＬＣ投与３０−６０分前に、アセトアミノフェン用量（１５ｍｇ／ｋｇ最大１０００ｍｇまで）を受けるべきである。注射後の熱のため、アセトアミノフェン（１５ｍｇ／ｋｇ最大１０００ｍｇまで各４−６時間、必要に応じて、４ｇ／日を超えず）を投与することができる。４８時間以上続く熱の患者は感染の可能性が有ると
評価すべきである。
【０５１０】
軽度の局所的な痛みのために、経口アヘン（タイレノール及びコデイ０．５ｍｇ／ｋｇ
経口、４時間毎）を使用することができる。
軽度−中等度以上のグレードの痛みは、非治療関連原因のために調査され、それに応じて管理されるであろう。
【０５１１】
デキサメタゾン−わずか０．１ｍｇ／ｋｇ／日、最大４ｍｇ／日を少なくとも１週間ワクチン／ｐｏｌｙ−ＩＣＬＣ治療開始前に（０週）。デキサメタゾン投与量は偽腫瘍進行の状態で増加し、できる限り早く減量／中断することができる。
【０５１２】
示されたとおりに抗けいれん薬を使用すべきである。
【０５１３】
必要に応じて、制吐薬を投与することができる。
【０５１４】
他の許容可能な薬は、ステロイド外用薬；非ステロイド抗炎症剤；抗ヒスタミン（例えば、Ｃｌａｒｉｔｉｎ（登録商標），  Ａｌｌｅｇｒａ（登録商標））；セクション７．１０．６．５．２に記載されているものを除く慢性薬；及び／又はインフルエンザワクチン（少なくとも２週間研究ワクチン接種の開始前又は少なくとも８回目のワクチン接種後２週間にこれらを投与すべきである）が挙げられる。
【０５１５】
７．１０．６．５．２  許容不能
許容不能な治療は、インターフェロン治療（例えば、Ｉｎｔｒｏｎ−Ａ（登録商標））；化学療法；アレルギー脱感作注射；経口又は吸入投与されるコルチコステロイド薬（例えば、Ａｄｖａｉｒ（登録商標）、Ｆｌｏｖｅｎｔ（登録商標）、Ａｚｍａｃｏｒｔ（登録商標））；成長因子（例えば、Ｐｒｏｃｒｉｔ（登録商標）、Ａｒａｎｅｓｐ（登録商標）、Ｎｅｕｌａｓｔａ（登録商標））；インターロイキン（例えば、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標））；他の治験薬及び／又は違法薬物が挙げられる。
【０５１６】
７．１０．７  相関／特別研究
７．１０．７．１  免疫学的監視
７．１０．７．１．１  ＥＬＩＳＰＯＴアッセイ
ＧＡＡワクチン投与前後の末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）中のグリオーマ関連抗原（ＧＡＡ）応答性Ｔリンパ球前駆体の頻度をＥＬＩＳＰＯＴアッセイで測定することができる。ＥＬＩＳＰＯＴで測定された生物学的応答は、アッセイ間の変動を避けるために、１個人の少なくとも同一の時点で行うことができる。ワクチン接種の成功は、抗原特異的、ＭＨＣ拘束的様式でサイトカインを分泌することができるＴ細胞のクローン集団を刺激する。ＥＬＩＳＰＯＴアッセイは、ＣＤ８＋Ｔ細胞集団のＧＡＡ特異的免疫応答同様、ヘルパーＴＴペプチドに対し反応するＣＤ４＋Ｔ細胞を評価するために使用することができる。ＩＦＮ−γ産生は１型Ｔ細胞応答を算定することで評価することができる。
【０５１７】
同一抗原に対する２つの連続するワクチン接種後の時点の任意の時点で（１２、１５、１８、２１及び２４週）、スポットの数がベースラインで２倍、少なくとも１０スポット／２０，０００細胞存在する場合、ワクチン接種後のスポットの数が、ワクチン接種前の値の少なくとも３倍の標準偏差の場合、対象は反応したと考えられる。応答は抗原のどれか１つでもあり得る。
【０５１８】
７．１０．７．１．２  患者のＰＢＭＣ中のＧＡＡ応答性Ｔ細胞のテトラマー解析
テトラマー解析は、末梢血中のＧＡＡ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞存在の評価を、高感度で、該細胞のｉｎ  ｖｉｔｒｏ再刺激なしに可能にする。悪性グリオーマの患者から利用可能
な以前のデータに基づいて、腫瘍抗原ワクチンで免疫された患者の何人か、全員ではない、で観察され得るペプチド応答性ＣＤ８＋Ｔ細胞の頻度の顕著（対数又はそれ以上）な増加を予測する。予備的な方法では、該ＰＢＭＣでＣＮＳ腫瘍及びケモカイン受容体（例えば、ＣＸＣＲ３  ａｎｄ  ＣＣＲ５）へのＴ細胞ホーミング（例えば、Zhu et al., J.Transl.Med., 5: 10, 2007参照）を行うとされているインテグリン受容体最晩期抗原（ＶＬＡ）４の表面発現を評価することもできる。テトラマー分析のための手順は、十分に確立されている。
【０５１９】
テトラマーアッセイは、ベースライン時とワクチン接種後の５つの時点（１２、１５、１８、２１及び２４週）で行うことができる。テトラマーアッセイによる全ＣＤ８＋細胞陽性の（１＋Ｂ）％となるペプチドの１時点の陽性反応を定義することができ、Ｂはベースラインでのパーセント陽性であり、それは通常０．１％未満と考えられる。ＥＬＩＳＰＯＴ反応の定義に類似し、彼／彼女が任意のペプチドに対して２つの連続する１時点応答を示した場合、患者は応答したと考えられる。
【０５２０】
７．１０．７．１．１  リンパ球集団のフローサイトメトリー分析
ワクチン前後の連続時点で、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞の数と同様に、ＣＤ４＋／Ｆｏｘｐ３＋Ｔ制御細胞の数を評価することができる。
【０５２１】
７．１０．７．２  原発性及び再発性腫瘍組織の評価
患者の使用可能な腫瘍組織でのＧＡＡ発現は、免疫組織化学（ＩＨＣ）及び逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）で評価できる（ワクチン接種前又はワクチン接種後のそれぞれ、又は両者）。
【０５２２】
ワクチン接種後に腫瘍が再発する場合、どのように腫瘍がワクチンの効果を免れたのかを評価することは重要であり得る。この目的を達成するために、組織利用性を認めるのと同様、以下の特定の事項を評価することができる。（ｉ）抗原損失：ＩＨＣ及びＲＴ−ＰＣＲを用いて、再発した腫瘍が標的ＧＡＡ、ＨＬＡ−Ａ２及び抗原プロセッシングに関与するトランスポーター等の抗原プロセッシング機械部品を発現しているか否かを評価することができる、（ｉｉ）抗アポトーシスアップレギュレーション分子：Ｓｕｒｖｉｖｉｎは標的かされるかもしれないが、他の抗アポトーシス分子はアップレギュレートされるかもしれない、例えば、ｃＦＬＩＰ（細胞内ＦＬＩＣＥ（Ｆａｓ関連デスドメイン様ＩＬ−１β変換酵素）阻害タンパク質）；及び（ｉｉｉ）免疫細胞浸潤：腫瘍がワクチン誘導免疫応答を免れるかもしれない１つの理由は、該腫瘍を浸潤する反応性Ｔ細胞の失敗である。これを検討するために、新鮮な切除された腫瘍組織（固定又は凍結されない）が利用できる時は、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬｓ）を単離し、各ＧＡＡのためのＨＬＡ−Ａ２テトラマーを用いて、それらの数、表現型、抗原特異性の特徴づけを行うことができる。マルチカラーフローサイトメトリーを用いて、テトラマー＋ＴＩＬの機能、生存をパーフォリン／ＩＦＮ−γ及びアネキシンＶそれぞれの染色で決定することができる。コントロール組織は、本研究ではない患者からのワクチン前腫瘍（可能であれば）及び再発腫瘍を含むことができる。当該研究は、ワクチン誘導Ｔ細胞が脳腫瘍部位に効率的にトラフィックし得るか並びにその機能及び生存を維持し得るかを評価することができる。
【０５２３】
７．１０．８  研究パラメータ
本研究は、最大８個のワクチン接種のために３週間毎に評価されるように、スケジュールされた患者と、外来患者として行うことができる。患者が継続段階の一環として、６週間毎に投与され、追加のワクチンを受けた場合、臨床的、免疫学的及び放射線学（ＭＲＩ）のモニタリングが、治療を終了させるための基準の一つになるまで、全ての来院（Ｑ６Ｗｋ）で行い得る。ワクチン接種は、スケジュール中の任意の時点で、進行性疾患又は許容できない毒性を持ついかなる患者のために停止することがある。
【０５２４】
７．１０．８．１  前処置（スクリーニング及びベースラインデータ）
以下の手順は治療を続行する前に実施することがある：インフォームドコンセントはスクリーニングの開始前に取得する必要がある；ＨＬＡタイピング（ＨＬＡ−Ａ２陽性のフローサイトメーター評価）；及び診断の文章化（非脳幹原発（すなわち、階層  Ｂ）；の組織学的；病理学的又は脳幹原発の画像化）；神経学的検査及びパフォーマンスステータスを含む完全な病歴と身体診察（バイタルサイン及び体重と共に）同時投薬人口統計情報は記録すべきである；差があるＣＢＣ及び血小板は評価すべきである；ＰＴ／ＰＴＴは評価すべきである；電解質、クレアチニン、血中尿素窒素、糖、ＡＳＴ、ＡＬＴ、ＡＬＫリン、総ビリルビン、ＬＤＨ、カルシウム及びアルブミンを含む、包括的な代謝パネルは評価すべきである；ＧＧＴ、リン、マグネシウムは評価すべきである；ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイのために採血すべきである；尿検査を実施すべきである；脳のＭＲＩを行うべきである；及び／又は女性の出産の可能性は血清β−ＨＣＧの妊娠検査を行うべきである。
【０５２５】
７．１０．８．２  処置中の評価
以下の手順が、治療の進行に伴って実施され得る；投与前：バイタルサイン、体重、パフォーマンスステータス、併用投薬及び神経機能を含む、病歴と身体；ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイのために採血すべきである；電解質、クレアチニン、血中尿素窒素、糖、ＡＳＴ、ＡＬＴ、ＡＬＫリン、総ビリルビン、ＬＤＨ、カルシウム及びアルブミンを含む化学物質が評価すべきである；患者は、神経学的評価及び皮膚検査（注射部位）を含めるように、以前の用量から有害事象をスクリーニングすべきである；及び／又はＭＲＩをすべきである（第６週から初めて９週間毎、すなわち、６、１５、２４週）。
【０５２６】
ワクチン投与後、各ＧＡＡペプチドワクチン投与後少なくとも２０分間は、有害事象について全患者を綿密に観察すべきである。同日に、各ワクチン接種後、ｐｏｌｙ−ＩＣＬＣ（ｉ．ｍ．３０ｍｇ／ｋｇ）を投与することができ、ｐｏｌｙ−ＩＣＬＣ注射後、少なくとも２０分間は患者をモニタリングすることができる。
【０５２７】
７．１０．８．３  ２４週（８回ワクチン接種後）評価
ワクチンサイクルが完了した後、以下の手順を実施することができる；病歴、バイタルサイン、体重、全身状態、併用投薬及び神経機能を含む身体；ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイのために採血すべきである；差があるＣＢＣ及び血小板は評価すべきである；電解質、クレアチニン、血中尿素窒素、糖、ＡＳＴ、ＡＬＴ、ＡＬＫリン、総ビリルビン、ＬＤＨ、カルシウム及びアルブミンを含む化学物質が評価すべきである（０週を除く）；及び／又は、神経学的評価及び皮膚検査（注射部位）を含む、以前の用量から患者は有害事象をスクリーニングされるべきである。
【０５２８】
７．１０．８．４  追加“連続”ワクチン接種での評価
追加ワクチンを投与する前に、以下の手順が実施される得る；病歴、バイタルサイン、体重、全身状態、併用投薬及び神経機能を含む身体；ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイのために採血すべきである；差があるＣＢＣ及び血小板は評価すべきである；電解質、クレアチニン、血中尿素窒素、糖、ＡＳＴ、ＡＬＴ、ＡＬＫリン、総ビリルビン、ＬＤＨ、カルシウム及びアルブミンを含む化学物質が評価すべきである（０週を除く）；神経学的評価及び皮膚検査（注射部位）を含む以前の用量から、患者は有害事象をスクリーニングされるべきである；及び／又はＭＲＩを行うべきである。
【０５２９】
追加ワクチンで投与した後、全患者は、各ワクチン接種後少なくとも２０分間は、有害事象について綿密に観察すべきである。追加ワクチンは、以下の条件のいずれかで終了し得る：１）腫瘍進行；２）ＲＬＴ；又は３）追加ワクチン接種開始後、連続した２つの時点で免疫応答陰性。
【０５３０】
【表８】
2019123745.tif 000016
【０５３１】
７．１０．９  効果の測定
７．１０．９．１  目的
７．１０．９．１．１  免疫原性
ワクチン接種後ＰＢＭＣのＧＡＡペプチドに対するＣＤ８＋Ｔ細胞応答の応答率及び大きさは、ＩＦＮ−γ  ＥＬＩＳＰＯＴ及び２次アッセイとしてフローサイトメトリーによるテトラマー分析を用いて評価することができる。
【０５３２】
ＥＬＩＳＰＯＴアッセイは、サイトカイン−発現として抗原特異的Ｔ細胞の機能的な状態を示す。テトラマーを用いるフローサイトメトリー分析は、主な患者由来のＰＢＭＣのインビトロ操作や抗原特異的Ｔ細胞上のホーミング受容体（ｉｎｔｅｇｒｉｎｓ）発現等の表現型解析なしに、抗原結合Ｔ細胞の頻度比較的正確な推定を可能にする。
【０５３３】
末梢血中の応答を測定する生物学的アッセイは、アッセイ間の変動を避けるために、同一の時点で行うことができる。
【０５３４】
フローサイトメトリーを用いて、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋／Ｆｏｘｐ３＋制御Ｔ細胞等のリンパ球分画の数も評価することができる。加えて、進行腫瘍の減量手術を受ける患者は、腫瘍組織が入手できれば、抗原特異的ＣＴＬの浸潤が、フローサイトメトリーで、エピトープ特異的ＭＨＶテトラマーと共に腫瘍浸潤リンパ球を評価することができる。
【０５３５】
７．１０．９．１．２  安全性
クラスＩＩ  ＭＨＣ拘束性破傷風トキソイド（ＴＴ）由来のヘルパーＴ細胞及びｉ．ｍ．  ｐｏｌｙ−ＩＣＬＣと組み合わせた４つのＨＬＡ−Ａ２拘束性グリオーマ関連抗原（ＧＡＡ）エピトープ−ペプチドの安全な投与は、脳幹及び非脳幹悪性グリオーマと新たに診断された患者で、直ちに次の照射（それぞれ階層  Ａ及びＢ）と治療難治性、切除不能、低悪性度グリオーマ（階層Ｃ）を決定することができる。
【０５３６】
エンドポイントは、ワクチン接種後の患者群で通常実施されるように、綿密な臨床経過観察と標準的基準を用いて、有害事象の発生率及び重症度を含むことができる。レジメンは、所定のコホート内の患者のうち、＞３３％でＲＬＴが進む場合、受け入れ難いほど毒性であると考えられる。
【０５３７】
７．１０．９．１．３  応答及び無増悪生存期間
応答及び無増悪生存期間の評価のために、ガドリニウム（Ｇｄ）−強化Ｔ１  ＭＲＩ画像又はＴ２強調画像からの非強化コンポーネントの腫瘍から腫瘍（すなわち、標的病変）を測定することができる。
（Ａ）応答（ＲＥＣＩＳＴ基準による）
【０５３８】
完全寛解（ＣＲ）：安定な又は改善する神経学的検査を伴い、少なくとも６週間維持された、コルチコステロイド（又は副腎交換の用量のみ）の安定又は減少する用量で、全ての目に見える腫瘍と腫瘤効果のＭＲＩ上の完全な消失。
【０５３９】
部分寛解（ＰＲ）：安定な又は改善する神経学的検査を伴い、少なくとも６週間維持された、コルチコステロイド（又は副腎交換の用量のみ）の安定又は減少する用量で、腫瘍の大きさの５０％以上又は同等の減少。
【０５４０】
進行（ＰＤ）：神経学的異常や神経学的状態を悪化させ、腫瘍の進行とは無関係の原因では説明できない（例えば、抗けいれん薬、コルチコステロイド毒、電解質異常、敗血症、高血糖、等）、又は二次元測定の２５％以上の増加、又は安定した神経学的状態又はイメージングを維持するために必要なコルチコステロイドの増量。
【０５４１】
不変（ＳＤ）：神経学的検査は、少なくとも安定しており、メンテナンスコルチコステロイドは増加していない、そして、ＭＲ画像は、ＰＲの基準及び進行性疾患の基準も満たさない。該カテゴリに可能な臨床的有益（ｐｏｓｓｉｂｌｅ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｂｅｎｅｆｉｔ）として報告される場合、安定的疾患の状態は、少なくとも１２週間維持されなければならない。
【０５４２】
偽−進行性疾患（Ｐｓｅｕｄｏ−ＰＤ）：研究上残り、最終的に、ＳＤ、ＰＲ又はＣＲを経験する偽−進行の患者は、応答測定のために、それぞれ、両方偽ＰＤ及びＳＤ、ＰＲ又はＣＲのどちらか、として分類することができる。
【０５４３】
（Ｂ）全生存期間（ＯＳ）及び無増悪生存期間（ＰＦＳ）
ＰＦＳは、治療開始から増悪又は死亡の時までの期間として定義される。全患者は、ＯＳ及びＰＦＳを決定するために従う。
【０５４４】
７．１０．９．１．４  ワクチン接種後の腫瘍組織解析
本研究において、全患者から腫瘍組織が得られるわけではない。しかしながら、ワクチン接種前及び／又はワクチン接種後に得られた全ての腫瘍組織において、以下の（ｉ）抗原損失、（ｉｉ）抗アポトーシス分子のアップレギュレーション、（ｉｉｉ）免疫細胞浸潤を予備的な方法で評価することができる。
【０５４５】
７．１０．１０  統計的考察
７．１０．１０．１  免疫学的応答の評価
免疫応答の評価は、ＩＦＮ−γ  ＥＬＩＳＰＯＴ及びテトラマーアッセイを用うことができる。
【０５４６】
応答者はＩＦＮ−γ  ＥＬＩＳＰＯＴ又はテトラマーアッセイのいずれかで対応してきた患者と定義することができる。９対象中少なくとも５応答があれば、層（階層）はさらなる調査に値するとみなすことができる。その真の応答率が＜１８％の場合、５又はそれ以上の応答を観察するための可能性が＜５％あり、真の応答率が＞６８％である場合、４又はほとんどない応答を観察する可能性は＜５％であるというプロパティを当該基準は有する。
【０５４７】
７．１０．１０．２  安全性の実証及び評価
毒性を評価するためにＮＣＩ有害事象共通用語基準（ＡＥ）（ＣＴＣＡＥ  ３．０）を使用することができる。毒性は、治療に、多分、おそらく、あるいは間違いなく関連した有害事象と考えることができる。目的のカテゴリ毎の毒性の最大評点を、各患者のために記録し、集計結果は、カテゴリや悪性度により集計することができる。
【０５４８】
安全のため、レジメンは、レジメン規定毒性（ＲＬＴ）≧３３％及び少なくとも２ＲＬＴが観察された場合はいつでも過度に毒性であると考えることができる。
【０５４９】
本研究設計は、以下のプロパティ：当該患者群の真のＲＬＴ比が≧４２％であれば、発生がとまるであろうという可能性が少なくとも９０％あり；真のＲＬＴ比が≦８．７％であれば、発生がとまらないであろうという可能性が少なくとも９０％あり、レジメンは、安全であると考えられる。
【０５５０】
７．１０．１０．３  臨床的エンドポイントの評価
臨床応答は実証されており、反応率とその９５％信頼限界は計算することができる。全患者が、全生存期間（ＯＳ）及び無増悪生存期間（ＰＦＳ）の評価に従い得る。ＰＦＳは、死又は進行と診断された患者の時間間隔として、階層Ａ及びＢ用に定義され、連続ＭＲＩ撮影画像に基づく、死又は進行に登録された研究時間から階層Ｃを定義している。適切な場合には、予備的解析では、臨床応答及びＯＳ／ＰＦＳに対する免疫応答の関係を調査することができる（フィッシャーの正確確率検定及びログランク検定各々を使用して）。
【０５５１】
７．１０．１０．４  人口統計データ
評価可能な全患者のベースライン記述統計学は、人口統計学的変数（年齢、性別、人種／民族）、Ｋａｒｎｏｆｓｋｙ又はＬａｎｓｋｙパフォーマンスステータス、登録時の病期とステータス（不変、進行）及び／又は以前使用された治療レジメン（階層Ｃのため）で規定することができる。
【０５５２】
本明細書で引用した全ての刊行物、特許及び特許出願は、個々の刊行物又は特許出願が具体的であるように本明細書中で参考として援用し、個別に参照により援用される。上述の発明は、理解を明確にする目的のために例示及び実施例によってある程度詳細に説明してきたが、当業者は、添付の特許請求の範囲の趣旨及び範囲から逸脱することなく、本発明の記載に照らして容易に明らかであり得る特定の変更及び修飾を行うことができる。
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】令和1年5月7日(2019.5.7)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
成人における再発性膠芽細胞腫の治療、予防又は管理のための医薬組成物であって、該医薬組成物が、無細胞であり、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチド、ＥｐｈＡ２ペプチド、ｓｕｒｖｉｖｉｎペプチド、及びＷＴ１ペプチドを含み、該ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドが配列番号：１〜４のいずれか１つを含み、該ＥｐｈＡ２ペプチドが配列番号：６を含む、医薬組成物。
【請求項２】
さらにアジュバントを含む、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
アジュバントが、モンタニド（Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ）ＩＳＡ−５１である、請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
ＩＬ−１３Ｒα２ペプチド、ＥｐｈＡ２ペプチド、ｓｕｒｖｉｖｉｎペプチド、及びＷＴ１ペプチドを含む無細胞医薬組成物が、アジュバントと１対１の割合で混合されている、請求項２又は３に記載の医薬組成物。
【請求項５】
医薬組成物が皮下投与用に製剤化されている、請求項１〜４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項６】
ｓｕｒｖｉｖｉｎペプチドが配列番号：７を含む、請求項１〜５のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項７】
ＷＴ１ペプチドが配列番号：８を含む、請求項１〜６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項８】
成人における再発性膠芽細胞腫の治療、予防又は管理のための組み合わせ医薬であって、
（ｉ）無細胞であり、ＩＬ−１３Ｒα２ペプチド、ＥｐｈＡ２ペプチド、ｓｕｒｖｉｖｉｎペプチド、及びＷＴ１ペプチドを含み、該ＩＬ−１３Ｒα２ペプチドが配列番号：１〜４のいずれか１つを含み、該ＥｐｈＡ２ペプチドが配列番号：６を含む、第１の医薬組成物；及び
（ｉｉ）免疫応答調整物質を含む第２の医薬組成物、
の組み合わせを含む、医薬。
【請求項９】
第１の医薬組成物がさらにアジュバントを含む、請求項８に記載の組み合わせ医薬。
【請求項１０】
アジュバントがモンタニド（Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ）ＩＳＡ−５１である、請求項９に記載の組み合わせ医薬。
【請求項１１】
ＩＬ−１３Ｒα２ペプチド、ＥｐｈＡ２ペプチド、ｓｕｒｖｉｖｉｎペプチド、及びＷＴ１ペプチドを含む無細胞医薬組成物が、アジュバントと１対１の割合で混合されている、請求項９又は１０に記載の組み合わせ医薬。
【請求項１２】
免疫応答調整物質がｐｏｌｙ−ＩＣＬＣである、請求項８〜１１のいずれか１項に記載の組み合わせ医薬。
【請求項１３】
１４００〜１８００μｇの免疫応答調整物質を含む、請求項８〜１２のいずれか１項に記載の組み合わせ医薬。
【請求項１４】
１０回以上の投与用に製剤化されており、少なくとも３日あけて投与される、請求項８〜１３のいずれか１項に記載の組み合わせ医薬。
【請求項１５】
第１の医薬組成物が皮下投与用に製剤化されており、第２の医薬組成物が筋肉内投与用に製剤化されている、請求項８〜１４のいずれか１項に記載の組み合わせ医薬。
【請求項１６】
さらにベバシズマブを含む、請求項８〜１５のいずれか１項に記載の組み合わせ医薬。
【請求項１７】
ｓｕｒｖｉｖｉｎペプチドが配列番号：７を含む、請求項８〜１６のいずれか１項に記載の組み合わせ医薬。
【請求項１８】
ＷＴ１ペプチドが配列番号：８を含む、請求項８〜１７のいずれか１項に記載の組み合わせ医薬。