(57)【要約】【課題】フトモモセイロンニッケイに関する抽出物の使用方法を提供するものである。【解決手段】フトモモセイロンニッケイの抽出物からα−グルコシダーゼまたはα−アミラーゼを抑制できる経口薬物を製作することを特徴とする、フトモモセイロンニッケイに関する抽出物の使用方法を提供する。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
フトモモセイロンニッケイの抽出物からα−グルコシダーゼを抑制できる経口薬物を製作することを特徴とする、フトモモセイロンニッケイに関する抽出物の使用方法。
【請求項２】
フトモモセイロンニッケイの抽出物からα−アミラーゼを抑制できる経口薬物を製作することを特徴とする、フトモモセイロンニッケイに関する抽出物の使用方法。
【請求項３】
前記フトモモセイロンニッケイの抽出物は、経口投薬によってα−グルコシダーゼを抑制することができ、澱粉の熱量が人体に吸収されることを減少させることにより、ダイエットの効果を有することを特徴とする請求項２に記載の、フトモモセイロンニッケイに関する抽出物の使用方法。
【請求項４】
前記フトモモセイロンニッケイの抽出物の経口用量は、５０ｍｇ／ｋｇないし２００ｍｇ／ｋｇであることを特徴とする請求項１に記載の、フトモモセイロンニッケイに関する抽出物の使用方法。
【請求項５】
前記フトモモセイロンニッケイの抽出物の経口用量は、５０ｍｇ／ｋｇないし２００ｍｇ／ｋｇであることを特徴とする請求項２に記載の、フトモモセイロンニッケイに関する抽出物の使用方法。
【請求項６】
前記フトモモセイロンニッケイの抽出物は、下記のステップによって生成し、
ステップ１：フトモモセイロンニッケイ（Ｓｙｚｙｇｉｕｍ  ｚｅｙｌａｎｉｃｕｍ  Ｌ．）の部分を室温で粉末に研磨し、
ステップ２：前記粉末を溶剤と共に１：１０の体積比例で混合すると共に、室温で２４時間揺らして反応させ、
ステップ３：前記ステップ２の混合物をろ過することにより、残留物とエキス液をそれぞれ生成し、
ステップ４：前記ステップ３の前記残留物と前記ステップ２の前記溶剤と再び混合し、前記溶剤の混合比例は、前記ステップ２の２倍とすると共に、室温で２４時間揺らして反応させ、
ステップ５：前記ステップ３とステップ４を繰り返し、前記エキス液を収集し、
ステップ６：前記エキス液を６０℃で真空吸引して乾燥した後に、生成したフトモモセイロンニッケイに関する抽出物を−３０℃に保存することを特徴とする請求項１または２に記載の、フトモモセイロンニッケイに関する抽出物の使用方法。
【請求項７】
前記溶剤は、イオン水、ブタノール、酢酸エチル、メタノール及びエタノールのいずれか一つであることを特徴とする請求項６に記載の、フトモモセイロンニッケイに関する抽出物の使用方法。
【請求項８】
前記溶剤は、酢酸エチルであることを特徴とする請求項７に記載の、フトモモセイロンニッケイに関する抽出物の使用方法。
【請求項９】
前記フトモモセイロンニッケイの部分は、樹皮、果実及び葉のいずれか一つであることを特徴とする請求項６に記載の、フトモモセイロンニッケイに関する抽出物の使用方法。
【請求項１０】
前記フトモモセイロンニッケイの部分は、樹皮であることを特徴とする請求項９に記載の、フトモモセイロンニッケイに関する抽出物の使用方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、フトモモセイロンニッケイに関する抽出物の使用方法であり、特に服用後に体内のα−グルコシダーゼ及びα−アミラーゼの降下を達成できる抽出物の使用方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
人体の消化システムには、何十種類もの酵素が食物の消化や分解の役に立ち、食物の消化後にそれに含有される栄養と熱量を放出させると共に、人体に吸収させることができる。食物の吸収を抑えるために「酵素抑制物」によって酵素を作用させられないことにより、食物が分解できず、体に吸収できないことが達成でき、これは、市販のダイエット食品に含まれる澱粉抑制剤の作用でもあり、澱粉の消化や吸収を阻害することにより、澱粉や熱量の吸収を減少させる。
【０００３】
人体は糖分を摂取した後、唾液、胃液或いは膵臓から分泌されるα−アミラーゼによって多糖をオリゴ糖の分子に分解し、その後小腸に至ると、上皮細胞のα−グルコシダーゼと胃腸内の消化酵素によってオリゴ糖を人体に吸収可能なブドウ糖に分解し、この時に血糖値が最も高くなる。従って、α−グルコシダーゼ阻害剤及びα−アミラーゼ阻害剤を使用することにより、炭水化合物の消化や吸収を明らかに減少させることができると共に、１型糖尿病患者ではない糖尿病患者に対して食後の血糖値上昇を抑制することができる。
【０００４】
２型糖尿病は、世界中に最も重要な慢性病の一つであり、且つその発病率は年々上昇する趨勢がある。２型糖尿病に対する現在の治療方式は、降血糖薬を患者に経口投薬することが主な治療方式であり、血糖降下の薬は、概ねにスルホニルウレア（ｓｕｌｆｏｎｙｌｕｒｅａ）、ビグアニド（Ｂｉｇｕａｎｉｄｅ）、チアゾリジンジオン（Ｔｈｉａｚｏｌｉｄｉｎｅｄｉｏｎｅ）、α−グルコシダーゼ阻害剤（α−ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ）、セリンプロテアーゼ阻害剤（ＤＰＰ−４阻害剤）、グルカゴン様ペプチド−１作用剤（ｇｌｕｃａｇｏｎ−ｌｉｋｅｐｅｐｔｉｄｅ−１作用剤）、ナトリウム・グルコース共役輸送体−２阻害剤（ＳＧＬＴ−２阻害剤）、インスリン薬剤（Ｉｎｓｕｌｉｎ）などの８種類に分かれる。
【０００５】
アカルボース（Ａｃａｒｂｏｓｅ）は、オリゴ糖の一種であり、服用後に人体の小腸における末端細胞の消化酵素を抑制する作用があり、そのため、炭水化合物の消化を緩和することができ、ひいてはブドウ糖の吸収を遅延させることができることによって、糖尿病の患者は、食事後の高血糖と食事後の高インスリン血症の状況を緩和することができる。これにより、食事後の高血糖値現象を避けて食事後の安定な血糖コントロールを行うことができるので、よく使用される阻害剤である。消化酵素には、α−グルコシダーぜ（α−ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅｓ）およびα−アミラーゼ（α−ａｍｙｌａｓｅ）が含まれている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
しかしながら、アカルボースの服用後は、食物の消化吸収が遅延されるので、消化されない食物が結腸にそのまま進入し、そして腸内の菌によって発酵し、ひいては悪心、下痢などの胃腸不適症状が発生してしまう。よって、関連の技術分野では、小腸における末端細胞の消化酵素を抑制するために、新たな医薬物が求められている。
【０００７】
フトモモセイロンニッケイ（Ｓｙｚｙｇｉｕｍ  ｚｅｙｌａｎｉｃｕｍ  Ｌ．）は、フトモモ属の植物であり、主にインドやマレイシアの区域に成長し、医療上には、関節リウマチと梅毒を治療する効果がある。その葉からｍａｃｒｏｃｙｃｌｉｃ  ｅｌｌａｇｉｔａｎｎｉｎ、ｚｅｙｌａｎｉｉｎなどの高い酸化対抗効能を有する物質を抽出することができ、フトモモセイロンニッケイには、優れた抗菌効果と多種の栄養成分を有する研究報告（Ｓｈｉｌｐａ，  Ｋ．  Ｊ．，  ＆  Ｋｒｉｓｈｎａｋｕｍａｒ，  Ｇ．  （２０１５）．  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ，  ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  ｓｔｕｄｉｅｓ  ｏｆ  Ｓｙｚｙｇｉｕｍ  ｃａｒｙｏｐｈｙｌｌａｔｕｍ  （Ｌ．）  Ａｌｓｔｏｎ  ａｎｄ  Ｓｙｚｙｇｉｕｍ  ｚｅｙｌａｎｉｃｕｍ  （Ｌ．）  ＤＣ  ｆｒｕｉｔｓ．  Ｃｏｇｅｎｔ  Ｆｏｏｄ  ＆  Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ，  １（１），  １０１８６９４．）もある。
【０００８】
本発明の目的は、天然のフトモモセイロンニッケイ（Ｓｙｚｙｇｉｕｍ  ｚｅｙｌａｎｉｃｕｍ  Ｌ．）からの抽出物を利用して小腸における末端細胞の消化酵素を抑制できる阻害剤を生成するものを提供し、ひいては経口投与できる経口阻害剤であることにより、使用者は、食事後に薬を飲むことで、体内のα−グルコシダーゼ（α−ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅｓ）およびα−アミラーゼ（α−ａｍｙｌａｓｅ）を降下させることができるので、血糖の優れたコントロール効果を達成できる。本発明の経口阻害剤は、天然物のエキスであるため、服用後に悪い副作用を生じず、現有の阻害剤と共に使用してもよく、糖尿病患者の血糖値をより有効にコントロールすることができる。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
上述の目的を達成するために、本発明に関わるフトモモセイロンニッケイ（Ｓｙｚｙｇｉｕｍ  ｚｅｙｌａｎｉｃｕｍ  Ｌ．）に関する抽出物の抽出方法は、下記のステップを有し、
ステップ１：フトモモセイロンニッケイ（Ｓｙｚｙｇｉｕｍ  ｚｅｙｌａｎｉｃｕｍ  Ｌ．）の部分を室温で粉末に研磨し、
ステップ２：前記粉末を溶剤と共に１：１０の体積比例で混合すると共に、室温で２４時間揺らして反応させ、
ステップ３：前記ステップ２の混合物をろ過することにより、残留物とエキス液をそれぞれ生成し、
ステップ４：前記ステップ３の前記残留物と前記ステップ２の前記溶剤と再び混合し、前記溶剤の混合比例は、前記ステップ２の２倍とすると共に、室温で２４時間揺らして反応させ、
ステップ５：前記ステップ３とステップ４を繰り返し、前記エキス液を収集し、
ステップ６：前記エキス液を６０℃で真空吸引して乾燥した後に、生成したフトモモセイロンニッケイに関する抽出物を−３０℃で保存する。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】本発明に係る実施例１における溶剤により抽出されるα−グルコシダーゼを抑制するＩＣ５０を示す図面である。
【図２】本発明に係る実施例１のフトモモセイロンニッケイに関する抽出物のｐＨ安定性のテストを示す図面である。
【図３】本発明に係る実施例１のフトモモセイロンニッケイに関する抽出物の温度安定性のテストを示す図面である。
【図４】本発明に係る実施例４のフトモモセイロンニッケイに関する抽出物５０  ｍｇ／ｋｇを使用してマウスに対する血糖抑制効果を示す図面である。
【図５】本発明に係る実施例４のフトモモセイロンニッケイに関する抽出物１００  ｍｇ／ｋｇを使用してマウスに対する血糖抑制効果を示す図面である。
【図６】本発明に係る実施例４のフトモモセイロンニッケイに関する抽出物２００  ｍｇ／ｋｇを使用してマウスに対する血糖抑制効果を示す図面である。
【図７】本発明に係る実施例５によりα−グルコシダーゼの抑制効果を示す比較図である。
【図８】本発明に係る実施例５によりα−グルコシダーゼＩＣ５０の抑制効果を示す比較図である。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
本発明の技術特徴とメリットを更に明らかにするために、具体的な実施例と合わせて添付図面を用いて詳細に説明するが、本発明は、これらの実施例に限られていない。
【実施例１】
【００１２】
フトモモセイロンニッケイ（Ｓｙｚｙｇｉｕｍ  ｚｅｙｌａｎｉｃｕｍ  Ｌ．）に関する抽出物の抽出
ステップ１：フトモモセイロンニッケイ（Ｓｙｚｙｇｉｕｍ  ｚｅｙｌａｎｉｃｕｍ  Ｌ．）の部分を室温で粉末に研磨し、
ステップ２：前記粉末を溶剤と共に１：１０の体積比例で混合すると共に、室温で２４時間揺らして反応させ、
ステップ３：前記ステップ２の混合物をろ過することにより、残留物とエキス液をそれぞれ生成し、
ステップ４：前記ステップ３の前記残留物と前記ステップ２の前記溶剤と再び混合し、前記溶剤の混合比例は、前記ステップ２の２倍とすると共に、室温で２４時間揺らして反応させ、
ステップ５：前記ステップ３とステップ４を繰り返し、前記エキス液を収集し、
ステップ６：前記エキス液を６０℃で真空吸引して乾燥した後に、生成したフトモモセイロンニッケイに関する抽出物を−３０℃で保存する。
【００１３】
前記ステップ１において、前記フトモモセイロンニッケイの部分は、樹皮、果実及び葉などの部分を含み、樹皮の効果が最も優れている。
【００１４】
前記ステップ２に使用される前記溶剤は、イオン水、ブタノール、酢酸エチル、メタノール又はエタノールである。
【実施例２】
【００１５】
酵素活性の抑制テスト
本実施例のテストのステップは、下記のように示される。まず、フトモモセイロンニッケイに関する抽出物を１：９の体積比例で緩衝液（Ｐｏｔａｓｓｉｕｍ  Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  Ｂｕｆｆｅｒ、リン酸カリウムバッファー）と混合することにより、フトモモセイロンニッケイのエキス液を生成し、次に、前記フトモモセイロンニッケイのエキス液とα−グルコシダーゼ（酵素）を１：１の体積比例で緩衝液に混入し、本実施例において、それぞれ１５μｌのエキス液と酵素を１００μｌの緩衝液に混入し、３７℃で２０分間反応させ、次に、５０μｌの培養体であるｐ−ニトロフェニルグルコピラノシド  （ｐＮＰＧ）を添加し、３７℃で４０分間反応させ、次に１００μｌの１ｍｏｌ／Ｌである炭酸ナトリウムを添加して反応を中止させ、最後にそのＯＤ４１０ｎｍの光吸収値を測定すると共に、α−グルコシダーゼの抑制された活性を計算する。前記の実験方式は、その後に説明する本発明の酵素活性テスト方式であり、異なる条件、例えば、抽出溶剤、反応温度、ｐＨ値などを変化させるだけである。
【００１６】
異なる抽出溶剤による抽出物の活性テスト
図１に示すように、まず異なる溶剤を利用してフトモモセイロンニッケイに対して抽出を行うと共に、それぞれ酵素活性の抑制テストを行う。酢酸エチルを利用して抽出されるフトモモセイロンニッケイの抽出物は、最も高いＩＣ５０を有し、且つ従来のアカルボースより高いので、本発明においては酢酸エチル溶剤によって抽出を行うと共に、その後の実験を行っている。
【００１７】
抽出物の安定性テスト−ｐＨ値
まず０．１ｍＬの前記フトモモセイロンニッケイの抽出物（濃度は１０００μｇ／ｍＬ）を０．９ｍＬの緩衝溶液に添加することにより、フトモモセイロンニッケイの抽出液を生成し、その緩衝液のｐＨ値は、それぞれ２ないし１３であり、３７℃で３０分間反応し、反応後に緩衝溶液を利用してｐＨ値を中性に調整することにより、酵素の活性を破壊することを避ける。次に、１５μｌのフトモモセイロンニッケイの抽出液と同体積の酵素を１００μｌの緩衝溶液に混入することにより、酵素活性の抑制テストを行う。
【００１８】
図２に示すように、反応ｐＨ値はｐＨ２ないしｐＨ８の時、本発明の抽出物はみな優れた抑制活性を有し、緩衝溶液がｐＨ＞９のときから、本発明の抽出物の活性は、ｐＨ＜９の場合と比べて向上することがわかる。
【００１９】
抽出物の安定性テスト−温度
まず生成されたフトモモセイロンニッケイの抽出液をそれぞれ４０℃、５０℃、６０℃、７０℃、８０℃、９０℃及び１００℃で３０分間反応させ、反応後に、室温で３７℃（又は室温）まで温度を降下させることにより、高温による酵素活性の破壊を防止する。次に、１５μｌのフトモモセイロンニッケイの抽出液と同体積の酵素を１００μｌの緩衝溶液に混入することにより、酵素活性の抑制テストを行う。
【００２０】
図３に示すように、本発明の抽出物は、高温で反応したでもα−グルコシダーゼの活性に対する優れた抑制効果を有する。
【００２１】
上述したように、本発明のフトモモセイロンニッケイの抽出物は、ｐＨや温度の変化に対して優れた安定性を有することが分かった。
【実施例３】
【００２２】
本発明の抽出物とアカルボースとの性能比較
本実施例では、まず実施例２の酵素活性テスト方法を利用して二つの群が分かれている。それは、本発明のフトモモセイロンニッケイの抽出物とアカルボースである。それらは異なる酵素に対する抑制効果をテストすると共に、これらの酵素を抑制するＩＣ５０を計算する。これらの酵素は、それぞれ出芽酵母のα−グルコシダーゼ（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ  ａｌｐｈａ−ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ）と、ラットのα−グルコシダーゼ（Ｒａｔ  ａｌｐｈａ−ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ）と、バチルス・ステアロサーモフィルスのα−グルコシダーゼ（Ｂ．ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ  ａｌｐｈａ−ｇｌｕｃｏｓｉｄｅ）と、豚膵臓のα−アミラーゼ（Ｐｏｒｃｉｎｅ  ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  ａｌｐｈａ−ａｍｙｌａｓｅ）と、枯草菌のα−アミラーゼ（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ  ａ−ａｍｙｌａｓｅ）と、ヒト唾液のα−アミラーゼ（Ｈｕｍａｎ  Ｓａｌｉｖａ  ａｌｐｈａ−ａｍｙｌａｓｅ）である。
【００２３】
その結果は、下表１に示され、本発明の抽出物は、哺乳動物のα−グルコシダーゼに対して優れた抑制効果を有し、α−アミラーゼの抑制方面については、本発明の抽出物によって抑制可能のα−アミラーゼの種類も幅広く、ヒト唾液のα−アミラーゼも抑制できる。
【００２４】
【表１】
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【００２５】
表１から分かるように、本発明の抽出物は、α−アミラーゼを抑制することができ、特に唾液アミラーゼに対して、澱粉の消化や吸収を遮断することにより、澱粉熱量の吸収を減少することができるので、本発明の抽出物は、α−アミラーゼを抑制して血液中のブドウ糖濃度を降下する効果があるほか、ダイエットの効果も有する。
【実施例４】
【００２６】
動物実験
本実施例において、本発明のフトモモセイロンニッケイの抽出物を利用して動物に対して実験を行うと共に、当該抽出物によるマウスの体内に係る食後の血糖抑制効果を観察する。本実験で使用される動物は、ＩＣＲマウス（ＩＣＲ  ｍｉｃｅ）であると共に、二つの群に分けている。
【００２７】
実験群：マウスを１６時間絶食させ、そして本発明のフトモモセイロンニッケイの抽出物を３つの濃度で蒸留水に溶かしてマウスに投薬し、その濃度はそれぞれ５０ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇ及び２００ｍｇ／ｋｇである。ｋｇは、マウスの体重である。マウスに投薬した２０分後に３ｇ／ｋｇの蔗糖をマウスに与え、蔗糖の食後の０．５、１、１．５及び２時間後に、マウスに対して採血を行いその血糖値を検知する。
【００２８】
対照群：マウスを１６時間絶食させ、そして実験群と同体積の蒸留水をマウスに与えた２０分後に３ｇ／ｋｇの蔗糖をマウスに与え、蔗糖食用後の０．５、１、１．５及び２時間後に、マウスに対して採血を行いその血糖値を検知する。
【００２９】
図４ないし図６に示すように、前記抽出物の濃度に係わらず、みな食事後の血糖値の抑制効果を有し、そして用量の向上群では、その血糖値の抑制効果が明らかに上昇する。
【実施例５】
【００３０】
フトモモセイロンニッケイの抽出物に関する抑制効果の比較
本実施例においてα−グルコシダーゼの抑制効果を既知の台湾ニシキギの抽出物（Ｅｕｏｎｙｍｕｓ  ｌａｘｉｆｌｏｒｕｓ  Ｃｈａｍｐ、略語ＥＬＣ）と、糖尿病患者によく使用されている市販のα−グルコシダーゼ阻害剤であるアカルボースと、本発明のフトモモセイロンニッケイの抽出物（略語ＳＺＬ）とを利用することにより、ラットに対してα−グルコシダーゼの抑制テストを行う。
【００３１】
図７と図８に示すように、濃度やＩＣ５０にもかかわらず、本発明のフトモモセイロンニッケイの抽出物は、台湾ニシキギの抽出物又はアカルボースよりα−グルコシダーゼの抑制効果が高く、且つ医療上に使用されるアカルボースより優れた活性抑制効果を有する。
【００３２】
上述の実験から分かるように、本発明のフトモモセイロンニッケイの抽出物は、経口投薬の後に、優れたα−グルコシダーゼ及びα−アミラーゼの抑制効果を有し、ひいては糖尿病患者の食事後に血糖値の異常上昇を抑制することができ、食後の血糖コントロールを達成することができる。しかも本発明のフトモモセイロンニッケイの抽出物は、α−グルコシダーゼを抑制することにより、澱粉の吸収を遮断すると共に、澱粉熱量の吸収を減少させることができるので、ダイエットの効果も有する。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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