(57)【要約】【課題】特定細胞（ＥｐＣＡＭを発現していないがん細胞を含む多くのがん細胞等）を捕捉できる特定細胞捕捉方法、及びこれを用いた特定細胞検査方法を提供する。【解決手段】血液又は体液中に含まれる特定細胞捕捉方法であって、採取した血液又は体液を遠心力１０００〜３０００Ｇの条件下で遠心分離を行った後、親水性ポリマー層に特定細胞を捕捉する特定細胞捕捉方法。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
血液又は体液中に含まれる特定細胞捕捉方法であって、
採取した血液又は体液を遠心力１０００〜３０００Ｇの条件下で遠心分離を行った後、親水性ポリマー層に特定細胞を捕捉する特定細胞捕捉方法。
【請求項２】
特定細胞は、がん細胞である請求項１記載の特定細胞捕捉方法。
【請求項３】
採取した血液又は体液を希釈した後、前記遠心分離を行う請求項１又は２記載の特定細胞捕捉方法。
【請求項４】
希釈は、緩衝溶液又は液体培地を用いて行われる請求項３記載の特定細胞捕捉方法。
【請求項５】
親水性ポリマー層は、下記式（Ｉ）で表されるポリマー及びポリ（メタ）アクリロイルモルホリンからなる群より選択される少なくとも１種の親水性ポリマーで形成されている請求項１〜４のいずれかに記載の特定細胞捕捉方法。
【化１】
2019138838.tif 000007
（式中、Ｒ１は水素原子又はメチル基、Ｒ２はアルキル基を表す。ｍは１〜５、ｎは繰り返し数を表す。）
【請求項６】
親水性ポリマー層は、下記式（Ｉ−１）で表される化合物及び（メタ）アクリロイルモルホリンからなる群より選択される少なくとも１種の親水性モノマーと、他のモノマーとの共重合体で形成されている請求項１〜４のいずれかに記載の特定細胞捕捉方法。
【化２】
2019138838.tif 000008
（式中、Ｒ１、Ｒ２、ｍは前記と同様。）
【請求項７】
親水性ポリマー層の厚みが１０〜５００ｎｍである請求項１〜６のいずれか記載の特定細胞捕捉方法。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれかに記載の特定細胞捕捉方法を用いて捕捉した血液又は体液中の特定細胞を調べる特定細胞検査方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、血液及び体液中の特定細胞（血液又は体液中に存在するがん細胞等）を捕捉する特定細胞捕捉方法及び特定細胞検査方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
がん細胞が発生するとやがて、血液・体液中に出て来ることが知られており、血液中に出て来たがん細胞は、血中循環腫瘍細胞（ＣＴＣ）と呼ばれている。そして、この血中循環腫瘍細胞を調べることによるがんの治療効果の確認、予後寿命、投与前の抗がん剤の効果予測、がん細胞の遺伝子解析を用いた治療方法の検討、等が期待されている。
【０００３】
しかしながら、血中循環腫瘍細胞は非常に数が少なく（数個〜数百個／血液１ｍＬ）、がん細胞を捕捉することが難しいという問題がある。
【０００４】
例えば、血中循環腫瘍細胞の捕捉技術として、Ｃｅｌｌ  Ｓｅａｒｃｈシステムと呼ばれるものが知られているが、これは、抗原抗体反応（ＥｐＣＡＭ抗体で捕捉）を用いる技術であるため、ＥｐＣＡＭを発現しているがん細胞しか捕捉できず、補足可能ながん細胞の種類に制限がある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特表２００５−５２３９８１号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、前記課題を解決し、特定細胞（ＥｐＣＡＭを発現していないがん細胞を含む多くのがん細胞等）を捕捉できる特定細胞捕捉方法、及びこれを用いた特定細胞検査方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、血液又は体液中に含まれる特定細胞捕捉方法であって、採取した血液又は体液を遠心力１０００〜３０００Ｇの条件下で遠心分離を行った後、親水性ポリマー層に特定細胞を捕捉する特定細胞捕捉方法に関する。
【０００８】
特定細胞は、がん細胞であることが好ましい。
特定細胞捕捉方法は、採取した血液又は体液を希釈した後、前記遠心分離を行うものであることが好ましい。
希釈は、緩衝溶液又は液体培地を用いて行われることが好ましい。
【０００９】
親水性ポリマー層は、下記式（Ｉ）で表されるポリマー及びポリ（メタ）アクリロイルモルホリンからなる群より選択される少なくとも１種の親水性ポリマーで形成されていることが好ましい。
【化１】
2019138838.tif 000002
（式中、Ｒ１は水素原子又はメチル基、Ｒ２はアルキル基を表す。ｍは１〜５、ｎは繰り返し数を表す。）
【００１０】
親水性ポリマー層は、下記式（Ｉ−１）で表される化合物及び（メタ）アクリロイルモルホリンからなる群より選択される少なくとも１種の親水性モノマーと、他のモノマーとの共重合体で形成されていることが好ましい。
【化２】
2019138838.tif 000003
（式中、Ｒ１、Ｒ２、ｍは前記と同様。）
【００１１】
親水性ポリマー層の厚みは、１０〜５００ｎｍであることが好ましい。
本発明はまた、前記特定細胞捕捉方法を用いて捕捉した血液又は体液中の特定細胞を調べる特定細胞検査方法に関する。
【発明の効果】
【００１２】
本発明によれば、血液又は体液中に含まれる特定細胞捕捉方法であって、採取した血液又は体液を遠心力１０００〜３０００Ｇの条件下で遠心分離を行った後、親水性ポリマー層に特定細胞を捕捉する特定細胞捕捉方法であるため、特定細胞（ＥｐＣＡＭを発現していないがん細胞を含む多くのがん細胞等）を効果的に捕捉できる。すなわち、高い遠心力である１０００〜３０００Ｇの条件下で遠心分離すると、赤血球、白血球等と、特定細胞との分離が良好になる。そのため、例えば、血液又は体液中から特定細胞を充分に捕捉でき、また、赤血球、白血球、血小板等の血球細胞の粘着・接着を抑制できる。従って、がん細胞等の特定細胞を選択的に捕捉できる。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】親水性ポリマー層が形成されたウェルを有するマルチウェルプレートの模式図の一例である。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
本発明は、血液又は体液中に含まれる特定細胞捕捉方法であって、採取した血液又は体液を所定遠心力で遠心分離を行った後、親水性ポリマー層に特定細胞を捕捉する特定細胞捕捉方法である。
【００１５】
すなわち、先ず、体等から採取した血液又は体液に所定遠心力で遠心分離処理を施すことにより、採取した血液又は体液に比べ、赤血球、白血球等の濃度が減少した試料を作製した後、作製された試料を親水性ポリマー層に接触させ、試料中のがん細胞等の特定細胞を捕捉する方法である。よって、血球細胞等による細胞接着抑止効果が減じ、親水性ポリマーに対する特定細胞の本来の接着能力が発揮されるので、がん細胞等の特定細胞の捕捉性が大きく向上すると共に、血球細胞等の捕捉性が低下し、血球細胞が多い状態では到底発揮し得ないがん細胞の選択的な捕捉効果を奏する。
【００１６】
具体的には、予め、採取した血液又は体液に所定遠心力で遠心分離処理を施すことで、血液又は体液中の血小板、赤血球、白血球等を分離（除去）して、これらの濃度が減少した試料を作製した後、該試料を親水性ポリマー層に接触させ、特定細胞を選択的に捕捉できる。従って、血液又は体液中の腫瘍細胞等が親水性ポリマー層に、効果的に捕捉される。そして、捕捉された腫瘍細胞等の数を測定することで、血液又は体液中の腫瘍細胞等の数が判り、がん治療効果の確認等を期待できる。また、捕捉した腫瘍細胞等を培養し、その培養した細胞で抗がん剤等の効き目を確認することで、抗がん剤等の投与前に、体外で抗がん剤等の効き目を確認できると同時に、抗がん剤等の選定にも役立つ。
【００１７】
前記特定細胞捕捉方法において、特定細胞としては、がん細胞（ＥｐＣＡＭを発現していないがん細胞を含む任意のがん細胞）等が挙げられる。がん細胞としては、血中循環腫瘍細胞（ＣＴＣ）等が挙げられる。
【００１８】
前記特定細胞捕捉方法は、採取した血液又は体液に遠心力１０００〜３０００Ｇ（×ｇ）の条件下で遠心分離処理を施す。１０００Ｇ以上であると、赤血球、白血球等の分離が良くなると同時に、がん細胞等の特定細胞のロス（赤血球等と同じ分画に入るなどによるロス）が減るため、特定細胞の選択的な捕捉効果を奏する。一方、３０００Ｇ以下であると、特定細胞へのストレスが抑制され、本来の細胞の性質が維持される。好ましくは１３００〜２８００Ｇ、より好ましくは１５００〜２５００Ｇである。
【００１９】
遠心分離の時間、温度は、赤血球等の分離性等の観点から、適宜設定すれば良く、例えば、１〜１２０分（好ましくは１〜６０分）、２〜４０℃（好ましくは３〜３０℃）の条件で実施すれば良い。なお、遠心分離処理は、公知の方法を採用でき、例えば、公知の遠心分離装置で実施できる。
【００２０】
前記遠心分離処理において、採取した血液又は体液に遠心分離を施し、血小板を含む上澄みを取り除くことで、採取した血液又は体液に比べて、血小板濃度を減少させた試料が作製される。また、採取した血液又は体液に遠心分離を施し、中間の単核球層を分離することで、赤血球や白血球が分離、除去され、がん細胞等の特定細胞の濃度を高めた試料を作製できる。
【００２１】
なお、前記特定細胞捕捉方法は、前記遠心分離を行う前に、血液又は体液中のたんぱく質濃度を減少させる他の処理を施してもよい。血液又は体液中のたんぱく質濃度を減少させる他の処理方法としては、例えば、採取した血液又は体液を希釈する方法が挙げられる。ここで、希釈方法としては、ヒト血液のｐＨ（約７．４）リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）等の緩衝溶液や、ＤＭＥＭ（ダルベッコ改変イーグル培地）等の液体培地、を用いる方法があり、具体的には、採取した血液又は体液に緩衝溶液を加えて希釈することや、液体培地に採取した血液又は体液を加えて希釈することで、採取した血液又は体液に比べて、たんぱく質濃度を減少させることが可能である。
【００２２】
前記特定細胞捕捉方法は、必要に応じて前記他の処理を行った後、前記遠心分離処理を施し、次いで、親水性ポリマー層に特定細胞を捕捉させる。
【００２３】
親水性ポリマー層（親水性ポリマーにより形成される層）は、所定の基材に形成できる。基材としては、ポリアクリル酸メチル、ポリメタクリル酸メチル、ポリアクリル酸、ポリメタクリル酸等のアクリル樹脂（ポリアクリル樹脂）、シクロオレフィン樹脂（ポリシクロオレフィン）、カーボネート樹脂（ポリカーボネート）、スチレン樹脂（ポリスチレン）、ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）等のポリエステル樹脂、ポリジメチルシロキサン、ソーダ石灰ガラス、ほうケイ酸ガラス等のガラス、等が挙げられる。
【００２４】
親水性ポリマー層（親水性ポリマーにより形成される層）の膜厚は、好ましくは１０〜５００ｎｍ、より好ましくは３０〜４００ｎｍ、更に好ましくは５０〜３５０ｎｍである。上記範囲内に調整することで、良好なタンパク質や細胞に対する低吸着性、がん細胞に対する選択的捕捉性が得られる。
【００２５】
親水性ポリマーは、親水性を有するものを適宜選択できる。例えば、１種又は２種以上の親水性モノマーの単独重合体及び共重合体、１種又は２種以上の親水性モノマーと他のモノマーとの共重合体等が挙げられる。前記単独重合体、共重合体としては、ポリアクリル酸、ポリアクリル酸エステル、ポリメタクリル酸、ポリメタクリル酸エステル、ポリアクリロイルモルホリン、ポリメタクリロイルモルホリン、ポリアクリルアミド、ポリメタクリルアミド等が挙げられる。
【００２６】
親水性モノマーは、親水性基を有する各種モノマーを使用できる。親水性基は、例えば、アミド基、硫酸基、スルホン酸基、カルボン酸基、水酸基、アミノ基、アミド基、オキシエチレン基等、公知の親水性基が挙げられる。
【００２７】
親水性モノマーの具体例としては、（メタ）アクリル酸、（メタ）アクリル酸エステル、（メトキシエチル（メタ）アクリレート等のアルコキシアルキル（メタ）アクリレート、ヒドロキシエチル（メタ）アクリレート等のヒドロキシアルキル（メタ）アクリレート）、（メタ）アクリルアミド、環状基を有する（メタ）アクリルアミド誘導体（（メタ）アクリロイルモルホリン等）、などが挙げられる。なかでも、（メタ）アクリル酸、（メタ）アクリル酸エステル、アルコキシアルキル（メタ）アクリレート、（メタ）アクリロイルモルホリンが好ましく、アルコキシアルキル（メタ）アクリレートがより好ましく、２−メトキシエチルアクリレートが特に好ましい。
【００２８】
他のモノマーは、親水性ポリマーの作用効果を阻害しない範囲内で適宜選択すれば良い。例えば、スチレン等の芳香族モノマー、酢酸ビニル、温度応答性を付与できるＮ−イソプロピルアクリルアミドなどが挙げられる。
【００２９】
なかでも、親水性ポリマーとしては、下記式（Ｉ）で表されるポリマー及びポリ（メタ）アクリロイルモルホリンからなる群より選択される少なくとも１種が好ましい。
【化３】
2019138838.tif 000004
（式中、Ｒ１は水素原子又はメチル基、Ｒ２はアルキル基を表す。ｍは１〜５、ｎは繰り返し数を表す。）
【００３０】
Ｒ２のアルキル基の炭素数は、１〜１０が好ましく、１〜５がより好ましい。なかでも、Ｒ２は、メチル基又はエチル基が特に好ましい。ｍは、１〜３が好ましい。ｎ（繰り返し単位数）は、１５〜１５００が好ましく、４０〜１２００がより好ましい。
【００３１】
また、親水性ポリマーとして、下記式（Ｉ−１）で表される化合物及び（メタ）アクリロイルモルホリンからなる群より選択される少なくとも１種の親水性モノマーと、他のモノマーとの共重合体も好適に使用できる。
【化４】
2019138838.tif 000005
（式中、Ｒ１、Ｒ２、ｍは前記と同様。）
【００３２】
親水性ポリマー層の表面の少なくとも一部（一部又は全部）は、水の接触角が２５〜７５度であることが好ましく、３５〜７５度であることがより好ましく、３５〜７０度であることが更に好ましい。所定の水の接触角を有する場合、本発明の効果が良好に得られる。
【００３３】
親水性ポリマー層は、（１）親水性ポリマーを各種溶剤に溶解・分散した親水性ポリマー溶液・分散液を、基材表面（基材凹部）に注入し、所定時間保持、乾燥する方法、（２）該親水性ポリマー溶液・分散液を基材表面に塗工（噴霧）する方法、等、公知の手法により、基材表面の全部又は一部に親水性ポリマー溶液・分散液をコーティングすることで、親水性ポリマーにより形成されるポリマー層が形成された基材を製造できる。そして、親水性ポリマー層が形成された基材に、必要に応じて他の部品を追加することで、特定細胞の検査が可能な装置を製造できる。
【００３４】
溶剤、注入方法、塗工（噴霧）方法などは、従来公知の材料及び方法を適用できる。
（１）、（２）の保持、乾燥時間は、基材の大きさ、導入する液種、等により適宜設定すれば良い。保持時間は、５分〜１０時間が好ましく、１０分〜５時間がより好ましく、１５分〜２時間が更に好ましい。乾燥は、室温（約２３℃）から８０℃で行うことが好ましく、室温から５０℃で行うことがより好ましい。また、減圧して乾燥しても良い。更に、保持して一定時間後、適宜、余分な親水性ポリマー溶液・分散液を排出し、乾燥してもよい。
【００３５】
溶剤としては、親水性ポリマーの溶解が可能なものであれば特に限定されず、使用する親水性ポリマーに応じて適宜選択すれば良い。例えば、水、有機溶媒、これらの混合溶媒が挙げられ、有機溶媒としては、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、ｉ−プロパノール、メトキシプロパノール等のアルコール類；アセトン、メチルエチルケトン等のケトン類；テトラヒドロフラン、アセトニトリル、酢酸エチル、トルエン等が列挙される。
【００３６】
前記特定細胞捕捉方法では、血液又は体液中に遠心分離処理を施して得られた試料（血球細胞濃度が低下した試料）を、親水性ポリマー層が形成された基材に接触させることで、特定細胞を捕捉できる。試料と親水性ポリマー層の接触方法は特に限定されず、接触可能な任意の手法を採用でき、例えば、試料の注入、塗工（噴霧）等が挙げられる。
【００３７】
試料と親水性ポリマー層とを接触させることで、試料に含まれる特定細胞が親水性ポリマー層に捕捉されると共に、血球細胞等の吸着が抑制される。そのため、例えば、試料を接触させた後に所定時間保持し、次いで、洗浄することで、特定細胞を選択的に親水性ポリマー層に捕捉できる。そして、捕捉された特定細胞の数を測定することで、採取した血液又は体液中の特定細胞数が判り、がん治療効果の確認等が期待される。
【００３８】
前記特定細胞捕捉方法は、例えば、基材として、マルチウェルプレート、スライドチャンバー等を用い、必要に応じて他の部品を追加した装置を使用して実施できる。図１は、マルチウェルプレート１の一例を示している。
【００３９】
図１のマルチウェルプレート１は、特定細胞を捕捉する目的で使用される器具で、いわゆるマトリクス状にウェル１１が配置されたマルチウェルプレート１である。マルチウェルプレート１は、円形に開口された複数のウェル１１を有している。ウェル１１は、採取した血液又は体液に所定遠心力の遠心分離処理を施して血球細胞等の濃度を減少させた試料を注入する凹部であり、注入した試料を検査に供することにより、採取した血液又は体液をそのまま検査に供するケースに比べ、特定細胞を効果的に捕捉できる。従って、血液又は体液中の特定細胞の有無の確認、特定細胞数の計測、特定細胞の培養、薬の効き目の確認・選定を実施できる。
【００４０】
図１では、一例として、４行６列の２４個のウェル１１を有する２４ウェルプレートを示しているが、マルチウェルプレート１は、ウェル１１を少なくとも２つ以上有していれば良く、ウェル１１の個数は任意である。２４ウェルプレートの他には、ウェル１１が、６個、９６個、３８４個等の汎用マルチウェルプレートでも良い。
【００４１】
ウェル１１は非貫通孔であり、マルチウェルプレート１の表面に開口されている。ウェル１１には、開口から、血液又は体液中に遠心分離処理を施して得られた試料が注入される。また、特定細胞の存在を確認した場合、特定細胞を培養するための培養液を注入することも可能である。
【００４２】
ウェル１１の開口の直径Ｒ、深さＤは、特に限定されず、通常のマルチウェルプレート１のＲ、Ｄを採用できる。図１では、マルチウェルプレート１の表面及び裏面に対して、ウェル１１の内側面が略垂直であるが、ウェル１１は、内側面が傾斜し、開口から底面にかけて窄まる形状でも良い。また、内側面が傾斜し、開口から底面にかけて拡がる形状でも良い。
【００４３】
図１では、ウェル１１は円形に開口しているが、ウェル１１の開口形状は任意であり、四角形等、任意の形状に開口したものでもよい。
【００４４】
マルチウェルプレート１は、複数のウェル１１が分離可能なものを好適に使用できる。複数のウェルを有する場合、特定細胞数計測用ウェルと、特定細胞培養用ウェルとに分離使用でき、例えば、計測用ウェルで特定細胞の存在の有無を確認した上で、存在が確認された場合に培養用ウェルで特定細胞を培養し、その細胞で薬の効き目を確認できる。なお、スライドチャンバーは、チャンバーが１個以上１０個以下のものが好適である。
【００４５】
マルチウェルプレート１及びスライドチャンバーにおいて、ウェル１１の内側面は、少なくとも一部に親水性ポリマー層が形成されていることが好ましい。図１は、ウェルの底面及び側面の一部に親水性ポリマー層２１が形成されている例を示している。
【００４６】
ウェル１１内に、血液又は体液中に遠心分離処理を施して得られた試料を導入すると、これらに含まれる特定細胞が親水性ポリマー層２１に捕捉されると共に、血球細胞等の吸着が抑制される。そのため、試料の導入後に所定時間保持し、次いで、洗浄することで、特定細胞を選択的に親水性ポリマー層２１に捕捉できる。
【００４７】
本発明の特定細胞検査方法は、前述の方法を用いて捕捉した血液又は体液中のがん細胞等の特定細胞を調べる方法である。当該方法により、例えば、特定細胞（ＥｐＣＡＭを発現していないがん細胞も含む多くのがん細胞等）を捕捉できる。また、血液又は体液中から特定細胞を充分に捕捉できると共に、他のタンパク質や細胞の粘着・接着を抑制できるので、特定細胞の選択的な捕捉が可能となる。
【００４８】
前記特定細胞検査方法において、前記親水性ポリマー層に、予め、血球細胞等を除去した血液を接触させることが好適である。これにより、がん細胞等の特定細胞の選択的捕捉性をより高めることができる。
【実施例】
【００４９】
以下、実施例に基づいて本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらのみに限定されるものではない。
【００５０】
（器具例１）
ＡＩＢＮ（アゾビスイソブチロニトリル）を用いて、２−メトキシエチルアクリレートを８０℃で６時間熱重合し、ポリ２−メトキシエチルアクリレートを作製した（分子量Ｍｎ：約１５０００、Ｍｗ：約５００００）。そして、得られたポリ２−メトキシエチルアクリレートの１．０質量％メタノール溶液を作製した。
ポリスチレン製の２４ウェルプレートのウェル部に、作製したポリ２−メトキシエチルアクリレート溶液（１質量％）を注入し、３０分室温放置した後、液をピペットで一部吸出し、乾燥することで、医療用検査器具を製造した。
【００５１】
（器具例２）
ポリ２−メトキシエチルアクリレート溶液の濃度を２．５質量％に変更した以外は、器具例１と同様にして医療用検査器具を製造した。
【００５２】
（器具例３）
ポリ２−メトキシエチルアクリレート溶液の濃度を５．０質量％に変更した以外は、器具例１と同様にして医療用検査器具を製造した。
【００５３】
（器具例４）
ホウけい酸ガラス製プレートであるスライドチャンバーを用い、ポリ２−メトキシエチルアクリレート溶液の濃度を０．３質量％に変えた以外は、器具例１と同様にして医療用検査器具を製造した。
【００５４】
（器具例５）
ポリ２−メトキシエチルアクリレート溶液の濃度を０．５質量％に変更した以外は、器具例４と同様にして医療用検査器具を製造した。
【００５５】
（器具例６）
ポリ２−メトキシエチルアクリレート溶液を注入せず、ポリ２−メトキシエチルアクリレート層を形成しなかった以外は、器具例１と同様にして医療用検査器具を製造した。
【００５６】
〔親水性ポリマー層（コーティング層）の膜厚〕
医療用検査器具の親水性ポリマー層の膜厚は、親水性ポリマー層の断面を、ＴＥＭを使用し、加速電圧１５ｋＶ、１０００倍で測定（撮影）した。
【００５７】
〔水の接触角〕
医療用検査器具の親水性ポリマー層の表面に蒸留水２μｌを滴下し、３０秒後の接触角をθ／２法（室温）で測定した。
【００５８】
〔全血にがん細胞を添加したスパイク血試験〕
染色をしたヒト結腸癌由来上皮細胞（ＨＴ−２９）を全血に１００個／血液１ｍＬになる様に懸濁させた（スパイク血）。これに等量の液体培地を入れて希釈した（希釈スパイク血）。次に、１５ｍＬの遠心分離管に、分離液（ＬｙｍｐｈｏＰｒｅｐ：密度１．０７７±０．００１ｇ／ｍＬ）を入れて、その上に上記希釈スパイク血を入れて、遠心分離（遠心分離条件：表１）を行った。そして単核球層を分離した。分離した単核球層にリン酸バッファー（ＰＢＳ）溶液を添加して、遠心分離を再度行い、濃縮を行った。遠心分離後の最下層にできた塊をＦＢＳ（ウシ胎児血清）１０％添加液体培地（最初の全血量と同じ液量）で懸濁させた。この懸濁液を用いて、ウェルに１ｍｌずつ注入し、３７℃で１時間接着させた。その後、ＰＢＳ溶液で未接着の細胞を洗浄した。次いで、蛍光顕微鏡で接着したがん細胞数をカウントした。
【００５９】
【表１】
2019138838.tif 000006
【００６０】
血液又は体液を遠心力１０００〜３０００Ｇの条件下で遠心分離処理を施して作製された試料を、親水性ポリマー層（コーティング層）に接触させることで、がん細胞等の特定細胞が選択的に捕捉され、特定細胞の接着数を増加させることが可能となった。
【符号の説明】
【００６１】
１    マルチウェルプレート
１１  ウェル
２１  親水性ポリマー層
【図１】
2019138838.tif 000009