(57)【要約】【課題】アルクチゲニンが豊富に含まれる牛蒡子抽出物を製造するための牛蒡子抽出物の製造方法を提供する。【解決手段】牛蒡子の生薬を提供し、牛蒡子の生薬、水及び９５％のエタノール水溶液である抽出剤を順番に混合することにより、７〜１４％の牛蒡子の生薬、８〜４０％の水、及び５０〜８４％の抽出剤が含まれる混合物を獲得し、沸騰の状態で２０〜１８０分で還流抽出することにより、粗抽出液を獲得し、上記の粗抽出液を減圧濃縮と遠心で処理することにより、牛蒡子抽出物を獲得する。また、上記の牛蒡子抽出物を純化する方法を提供する。【選択図】図２ａ
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
牛蒡子の生薬を提供する段階と、牛蒡子の生薬、水及びエタノール濃度が９５％のエタノール水溶液である抽出剤を順番に混合することにより、７〜１４％の牛蒡子の生薬、８〜４０％の水、及び５０〜８４％の抽出剤が含まれる混合物を獲得する段階と、沸騰の状態で２０〜１８０分で還流抽出することにより、粗抽出液を獲得する段階と、前記の粗抽出液を減圧濃縮と遠心で処理することにより、牛蒡子抽出物を獲得する段階とを含むことを特徴とする牛蒡子抽出物の製造方法。
【請求項２】
２５℃、６０００ｒｐｍで１５分遠心を行うことにより、牛蒡子抽出物を獲得することを特徴とする請求項１に記載の牛蒡子抽出物の製造方法。
【請求項３】
請求項１に記載の牛蒡子抽出物の製造方法による牛蒡子抽出物を提供する段階と、牛蒡子抽出物をエタノール濃度が５０％のエタノール水溶液である溶剤に溶かし、牛蒡子の飽和エタノール水溶液を獲得する段階と、前記の牛蒡子の飽和エタノール水溶液を２５℃、６０００ｒｐｍで１５分遠心することにより、底層水溶液を獲得する段階と、樹脂を充填する樹脂充填カラムを提供する段階と、樹脂の体積に対して、１／５０倍の底層水溶液を前記の樹脂充填カラムに通して、順番に樹脂の体積に対して、１〜３倍の５０〜７０％のエタノール水溶液である第一溶出剤と、樹脂の体積に対して、１．５〜２倍の９５％のエタノール水溶液である第二溶出剤により溶出を行い、溶出液を獲得する段階と、溶出液を濃縮及び乾燥して牛蒡子純化物を獲得する段階とを含むことを特徴とする牛蒡子抽出物の純化方法。
【請求項４】
前記樹脂はマクロポーラス樹脂Ｄ１０１であることを特徴とする請求項３に記載の牛蒡子抽出物の純化方法。
【請求項５】
５〜１０ｍｌ／分の流速で前記第一溶出剤及び第二溶出剤により溶出を行うことを特徴とする請求項３に記載の牛蒡子抽出物の純化方法。
【請求項６】
前記の樹脂を９５％のエタノール水溶液である浸漬液に２４時間で予めに浸してから樹脂充填カラムに充填し、樹脂の体積に対して、１．５〜２倍の５０〜７０％のエタノール水溶液である洗い液により前記の樹脂を充填している樹脂充填カラムを洗い、続いて、底層水溶液を樹脂充填カラムに通すことを特徴とする請求項３に記載の牛蒡子抽出物の純化方法。
【請求項７】
前記の第一溶出剤及び前記の浸漬液は５０％のエタノール水溶液であることを特徴とする請求項６に記載の牛蒡子抽出物の純化方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、牛蒡子抽出物の製造方法に関するもので、特に、アルクチゲニンが豊富に含まれる牛蒡子抽出物を製造する方法、および、その牛蒡子抽出物を純化する方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
牛蒡子（dried burdock seeds）は牛蒡（Arctium lappa）の熟成した実であり、主な活性成分としてアルクチイン（arctiin、図1a示す）、及びアルクチゲニン（arctigenin、図1b示す）が含まれる。研究により、アルクチインは抗炎症、脂肪生成の抑制、抗網膜変性症、抗腎炎などの活性を有し、アルクチゲニンは抗高血圧、肝臓機能の維持、抗リウマチ性関節炎、抗疲労、抗不整脈、抗アルツハイマー病、腎臓機能の維持、抗インフルエイザ、抗熱ショック、抗癌細胞などの活性を有することが明らかになった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
台湾公告第１６０４８４２号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
一般的には、牛蒡子において約２．６４〜８．０２％のアルクチイン、及び約０．１３〜１．０４％のアルクチゲニンしか含有しないため、牛蒡子を抽出しても豊富なアルクチゲニンを含有する牛蒡子抽出物を獲得することが難しいと考えられる。よって、上記課題を解決するために牛蒡子抽出物を製造する方法、および、その牛蒡子抽出物を純化する方法を提供する必要がある。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明は、上記の課題を解決するために、アルクチゲニンが豊富に含まれる牛蒡子抽出物を製造するための牛蒡子抽出物の製造方法を提供する。
【０００６】
また、上記の牛蒡子抽出物を純化するための牛蒡子抽出物の純化方法を提供する。
【０００７】
本発明の牛蒡子抽出物の製造方法は、牛蒡子の生薬を提供する段階と、牛蒡子の生薬、水及びエタノール濃度が９５％のエタノール水溶液である抽出剤を順番に混合することにより、７〜１４％の牛蒡子の生薬、８〜４０％の水、及び５０〜８４％の抽出剤が含まれる混合物を獲得する段階と、沸騰の状態で２０〜１８０分で還流抽出することにより、粗抽出液を獲得する段階と、上記の粗抽出液を減圧濃縮と遠心で処理することにより、牛蒡子抽出物を獲得する段階を含む。好ましくは、２５℃、６０００ｒｐｍで１５分遠心を行うことにより、牛蒡子抽出物を獲得する。これによって、水を加えることにより、牛蒡子の生薬が含有するアルクチインを多元生物活性を有するアルクチゲニンを転化させ、ひいてはアルクチゲニンが豊富に含まれる牛蒡子抽出物を製造することができる効果を有する。
【０００８】
本発明の牛蒡子抽出物の純化方法は、上記の牛蒡子抽出物を提供する段階と、牛蒡子抽出物をエタノール濃度が５０％のエタノール水溶液である溶剤に溶かし、牛蒡子の飽和エタノール水溶液を獲得する段階と、牛蒡子の飽和エタノール水溶液を２５℃、６０００ｒｐｍで１５分遠心することにより、底層水溶液を獲得する段階と、樹脂を充填する樹脂充填カラムを提供する段階と、樹脂の体積に対して、１／５０倍の底層水溶液を樹脂充填カラムに通して、順番に樹脂の体積に対して、１〜３倍の５０〜７０％のエタノール水溶液である第一溶出剤、と樹脂の体積に対して、１．５〜２倍の９５％のエタノール水溶液である第二溶出剤により溶出を行い、溶出液を獲得する段階と、溶出液を濃縮と乾燥して牛蒡子純化物を獲得する段階を含む。好ましくは、上記樹脂はマクロポーラス樹脂Ｄ１０１であり、また、５〜１０ｍｌ／分の流速で上記第一溶出剤及び第二溶出剤により溶出を行う。また、上記の樹脂を９５％のエタノール水溶液である浸漬液に２４時間で予めに浸してから樹脂充填カラムに充填し、５０〜７０％のエタノール水溶液である洗い液により上記の樹脂を充填している樹脂充填カラムを洗い、続いて、底層水溶液を樹脂充填カラムに通す。また、好ましくは上記の第一溶出剤及び上記の浸漬液は５０％のエタノール水溶液である。これによって、樹脂充填カラムの使用、及び第一溶出剤と第二溶出剤の選択により、牛蒡子抽出物を効果的に純化し、ひいてはアルクチゲニンが豊富に含まれる牛蒡子抽出物を獲得することができる効果を有する。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１ａ】アルクチインの化学構造式。
【図１ｂ】アルクチゲニンの化学構造式。
【図２ａ】第Ａ０組の牛蒡子抽出物をＨＰＬＣで分析した結果。
【図２ｂ】第Ａ１組の牛蒡子抽出物をＨＰＬＣで分析した結果。
【図３ａ】第Ｂ１組の純化しようとするサンプルをＨＰＬＣで分析した結果。
【図３ｂ】第Ｂ２組の純化しようとするサンプルをＨＰＬＣで分析した結果。
【図３ｃ】第Ｂ３組の純化しようとするサンプルをＨＰＬＣで分析した結果。
【図４】第Ｃ組の牛蒡子抽出物をＨＰＬＣで分析する結果。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
本発明の実施の一形態について、以下、図面を参照して説明する。
【００１１】
本発明の牛蒡子抽出物の製造方法においては、水を加えることにより、牛蒡子の生薬が含有するアルクチインを多元生物活性を有するアルクチゲニンに転化させる。詳しく言うと、本発明において、「牛蒡子の生薬」とは、牛蒡の種子を乾燥したものを指し、又、効率的に転化させるために、上記の牛蒡子の生薬は予め粗粒状に研磨してもよい。
【００１２】
操作者は牛蒡子の生薬、水及び抽出剤を順番に混合することにより、７〜１４％の牛蒡子の生薬、８〜４０％の水、及び５０〜８４％の抽出剤が含まれる混合物を獲得することができ、例お挙げると、抽出剤は９５％のエタノール水溶液であってもよい。
【００１３】
そして、沸騰の状態で２０〜１８０分で還流抽出することにより、粗抽出液を獲得することができる。上記の粗抽出液は減圧濃縮と遠心で処理することにより（例えば、２５℃、６０００ｒｐｍで遠心を１５分行う）、アルクチゲニンが豊富に含まれる牛蒡子抽出物を獲得することができる。
【００１４】
上記の牛蒡子抽出物の製造方法により製造される牛蒡子抽出物は、さらに後記の牛蒡子抽出物の純化方法を経て、より豊富なアルクチゲニンが含まれる牛蒡子純化物を獲得することができる。
【００１５】
詳しく述べると、上記の牛蒡子抽出物を溶剤（エタノール濃度が５０％であるエタノール水溶液）に溶かし、牛蒡子の飽和エタノール水溶液を形成し、続いて牛蒡子の飽和エタノール水溶液を２５℃、６０００ｒｐｍで１５分遠心することにより、上層油状物、底層水溶液及び沈殿物を形成し、底層水溶液を純化しようとするサンプルとして収集することができる。
【００１６】
底層水溶液は樹脂充填カラムを通るため、樹脂充填カラムに充填される樹脂の吸着により、さらに底層水溶液におけるアルクチゲニンを大量に収集し、そして樹脂に吸着されるアルクチゲニンを溶出させ、より豊富なアルクチゲニンが含まれる牛蒡子純化物を獲得することができる。
【００１７】
本実施例では、上記樹脂はマクロポーラス樹脂Ｄ１０１であってもよい。操作者は樹脂を浸漬液（エタノール濃度が９５％であるエタノール水溶液）に２４時間で予めに浸してから樹脂充填カラムに充填し、樹脂の体積に対して、１．５〜２倍の洗い液（エタノール濃度が５０〜７０％であるエタノール水溶液）により樹脂を充填している樹脂充填カラムを洗ってから、底層水溶液を純化するのに用いられる樹脂充填カラムを獲得することができる。
【００１８】
続いて、操作者は樹脂の体積に対して、１／５０倍の底層水溶液を樹脂充填カラムに通して、先ずは樹脂の体積に対して、１〜３倍の第一溶出剤（エタノール濃度が５０〜７０％であるエタノール水溶液）により溶出を行い、続いて樹脂の体積に対して、１．５〜２倍の第二溶出剤（エタノール濃度が９５％であるエタノール水溶液）により溶出を行い、又、５〜１０ｍｌ／分の流速で上記第一溶出剤及び第二溶出剤により溶出を行い、溶出液を獲得することができる。その溶出液はさらに濃縮と乾燥を経て、より豊富なアルクチゲニンが含まれる牛蒡子純化物を獲得することができる。
【００１９】
本発明の牛蒡子抽出物の製造方法は、牛蒡子の生薬が含有するアルクチインを多元生物活性を有するアルクチゲニンに転化させ、豊富なアルクチゲニンが含まれる牛蒡子抽出物を獲得し、そして、上記の牛蒡子抽出物の純化方法により、より豊富なアルクチゲニンが含まれる牛蒡子純化物を獲得することができることを証明するために、以下に示す試験を行った。
【００２０】
（Ａ）水を加えたことによる効果
【００２１】
本試験において、牛蒡子の生薬が順番に水と抽出剤（９５％のエタノールであるエタノール水溶液）を混合させ、沸騰の状態で還流抽出することにより、Ａ１組の牛蒡子純化物を獲得した。また、牛蒡子の生薬を直接に上記の抽出剤と混合させ、還流抽出することにより、Ａ０組の牛蒡子抽出物を獲得した。
【００２２】
上記のＡ１組とＡ０組の牛蒡子抽出物をさらにＨＰＬＣにより分析することができ、分析の条件は下記のように示した。クロマトグラフィーカラムはＣｏｓｍｏｓｉｌ ５Ｃ１８−ＭＳ−ＩＩ（Ｉ.Ｄ. ４．６×２５０ｍｍ，５μｍ）、測定波長は２００〜９００ ｎｍの全波長スキャン、分析時間６２分、流速は０．８ｍｌ／分、注入量は１０μｌ、メタノール―３２ｍＭ塩酸（Ｖ／Ｗは３８：６２）を流動相として定組成溶離（isocratic elution）を行い、その分析結果はそれぞれに図２a、２bのように示した。又、図２a、２bの分析結果は外部標準法で含有量を表示され、その結果は表1のように示した。
【００２３】
【表１】
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【００２４】
表１に示すように、Ａ０組の牛蒡子抽出物におけるアルクチゲニン／アルクチインの含有量の比率と比較すると、Ａ１組の牛蒡子抽出物におけるアルクチゲニン／アルクチインの含有量の比率が顕著に向上したので、本実施例における牛蒡子抽出物の製造方法により牛蒡子の生薬が含有するアルクチインを多元生物活性を有するアルクチゲニンに効果的に転化させ、ひいてはアルクチゲニンが豊富に含まれる牛蒡子抽出物を獲得することを証明することができた。
【００２５】
（Ｂ）純化しようとするサンプルの選択
【００２６】
本試験において、上記のＡ１組の牛蒡子抽出物を溶剤（５０％のエタノールであるエタノール水溶液）に溶かして、牛蒡子の飽和エタノール水溶液を形成し、続いて遠心処理を行い、上層油状物、底層水溶液及び沈殿物を形成させ、そして、上層油状物、底層水溶液及び沈殿物をそれぞれに純化しようとするサンプルとし（Ｂ１組、Ｂ２組、Ｂ３組）、希釈した後ＨＰＬＣにより分析し、分析の条件は下記のように示した。クロマトグラフィーカラムはＣｏｓｍｏｓｉｌ ５Ｃ１８−ＭＳ−ＩＩ（Ｉ.Ｄ. ４．６×２５０ｍｍ，５μｍ）、測定波長は２８０ ｎｍ、分析時間１５分、流速は１ｍｌ／分、注入量は１０μｌ、メタノール―ＨＰＬＣ超純水（Ｖ／Ｗは５５：４５）を流動相として定組成溶離（isocratic elution）を行い、その分析結果はそれぞれに図３a〜３ｃのように示した。又、図３a〜３ｃの分析結果は外部標準法で含有量を表示され、その結果は表２のように示した。
【００２７】
【表２】
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【００２８】
表２に示すように、Ｂ１、Ｂ２組の純化しようとするサンプルにおけるアルクチゲニン／アルクチインの含有量比率は、Ｂ３組の純化しようとするサンプルにおけるアルクチゲニン／アルクチインの含有量比率より顕著に高い。ただし、Ｂ１組の純化しようとするサンプルは油状物であるため、後続の樹脂充填カラムに通す作業に向いていない。故に、Ｂ２組の純化しようとするサンプルを選択して後続の純化作業を行った。
【００２９】
（Ｃ）純化の効果
【００３０】
本試験において、上記Ｂ２組の純化しようとするサンプルを樹脂充填カラムに通して、順番に第一溶出剤（５０〜７０％のエタノールであるエタノール水溶液）、と第二溶出剤（９０％のエタノールであるエタノール水溶液）により溶出を行い、溶出液を獲得した後、その溶出液をＨＰＬＣにより分析し、分析の条件は下記のように示した。クロマトグラフィーカラムはＣｏｓｍｏｓｉｌ ５Ｃ１８−ＭＳ−ＩＩ（Ｉ.Ｄ. ４．６×２５０ｍｍ，５μｍ）、測定波長は２００〜９００ ｎｍの全波長スキャン、分析時間６２分、流速は０．８ｍｌ／分、注入量は１０μｌ、メタノール―３２ｍＭ塩酸水溶液（Ｖ／Ｗは３８：６２）を流動相として定組成溶離（isocratic elution）を行い、その分析結果は図４のように示した。また、図４の分析結果では外部標準法で含有量を表示されると、アルクチインの含有量が２７.３８±１７.６８ ｍｇ／ｇ、アルクチゲニンの含有量が５８０．９５±２９．０３ ｍｇ／ｇ、そしてアルクチゲニン／アルクチインの含有量比率は２１．２１であることが分かった。これによって、Ａ１組の牛蒡子抽出物と比較すると、アルクチゲニン／アルクチインの含有量の比率が顕著に向上したので、本実施例における牛蒡子抽出物の純化方法により、より豊富なアルクチゲニンが含まれる牛蒡子純化物を獲得することができることを示した。
【００３１】
上述した試験の結果を綜合すると、本発明の牛蒡子抽出物の製造方法において、水を加えることにより、牛蒡子の生薬が含有するアルクチインを多元生物活性を有するアルクチゲニンを転化させ、ひいてはアルクチゲニンが豊富に含まれる牛蒡子抽出物を製造することができる効果を有する。
【００３２】
また、本発明の牛蒡子抽出物の純化方法において、樹脂充填カラムの使用、及び第一溶出剤と第二溶出剤の選択により、牛蒡子抽出物を効果的に純化し、ひいてはアルクチゲニンが豊富に含まれる牛蒡子純化物を獲得することができる効果を有する。
【００３３】
本発明は、その精神と必須の特徴事項から逸脱することなく他のやり方で実施することができる。従って、本明細書に記載した好ましい実施形態は例示的なものであり、本発明の範囲を限定するものではない。
【符号の説明】
【００３４】
なし
【図１ａ】
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【図１ｂ】
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【図２ａ】
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【図２ｂ】
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【図３ａ】
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【図３ｂ】
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【図３ｃ】
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【図４】
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