(57)【要約】      （修正有）【課題】特定の条件及び使用に好適である改変プロテアーゼを提供する。【解決手段】親プロテアーゼの単離されたプロテアーゼ変異体であって、前記変異体は、Ｘ０２４Ｇ／Ｒ、Ｘ０５３Ｇ、Ｘ０７８Ｎ、Ｘ１０１Ｎ、Ｘ１２８Ａ／Ｓ及びＸ２１７Ｌ／Ｑからなる群から選択される３つのアミノ酸置換を含むアミノ酸配列を含み、ここで、前記変異体はタンパク質分解活性を有し、前記変異体の各アミノ酸位置は、ある特定のアミノ酸配列のアミノ酸配列と前記変異体のアミノ酸配列とのアラインメントによって決定される、ある特定のアミノ酸配列のアミノ酸配列におけるアミノ酸位置に対応させることにより番号付けされる、変異体。前記親プロテアーゼはスブチリシンプロテアーゼであることができる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
親プロテアーゼの単離されたプロテアーゼ変異体であって、前記変異体は、Ｘ０２４Ｇ
／Ｒ、Ｘ０５３Ｇ、Ｘ０７８Ｎ、Ｘ１０１Ｎ、Ｘ１２８Ａ／Ｓ及びＸ２１７Ｌ／Ｑからな
る群から選択される３つのアミノ酸置換を含むアミノ酸配列を含み、ここで、前記変異体
はタンパク質分解活性を有し、前記変異体の各アミノ酸位置は、配列番号２のアミノ酸配
列と前記変異体のアミノ酸配列とのアラインメントによって決定される、配列番号２のア
ミノ酸配列におけるアミノ酸位置に対応させることにより番号付けされる、変異体。
【請求項２】
前記変異体のアミノ酸配列が、Ｘ０２４Ｇ／Ｒ、Ｘ０５３Ｇ、Ｘ０７８Ｎ、Ｘ１０１Ｎ
、Ｘ１２８Ａ／Ｓ及びＸ２１７Ｌ／Ｑからなる群から選択される４つのアミノ酸置換を含
む、請求項１に記載の変異体。
【請求項３】
前記変異体のアミノ酸配列が、Ｘ０２４Ｇ／Ｒ、Ｘ０５３Ｇ、Ｘ０７８Ｎ、Ｘ１０１Ｎ
、Ｘ１２８Ａ／Ｓ及びＸ２１７Ｌ／Ｑからなる群から選択される５つのアミノ酸置換を含
む、請求項１に記載の変異体。
【請求項４】
前記変異体のアミノ酸配列が、Ｘ０２４Ｇ／Ｒ、Ｘ０５３Ｇ、Ｘ０７８Ｎ、Ｘ１０１Ｎ
、Ｘ１２８Ａ／Ｓ及びＸ２１７Ｌ／Ｑからなる群から選択される６つのアミノ酸置換を含
む、請求項１に記載の変異体。
【請求項５】
前記変異体のアミノ酸配列がアミノ酸置換Ｘ０９７Ａを更に含む、請求項１〜４のいず
れか一項に記載の変異体。
【請求項６】
前記変異体のアミノ酸配列がアミノ酸置換Ｘ０２４Ｇ／Ｒ＋Ｘ０５３Ｇ＋Ｘ０７８Ｎ＋
Ｘ１０１Ｎ＋Ｘ１２８Ａ／Ｓ＋Ｘ２１７Ｌ／Ｑ又はＸ０９７Ａ＋Ｘ１２８Ａ／Ｓ＋Ｘ２１
７Ｌ／Ｑを含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の変異体。
【請求項７】
前記変異体のアミノ酸配列がアミノ酸置換Ｓ０２４Ｇ／Ｒ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋
Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ／Ｓ＋Ｙ２１７Ｌ／Ｑ又はＧ０９７Ａ＋Ｇ１２８Ａ／Ｓ＋Ｙ２１
７Ｌ／Ｑを含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載の変異体。
【請求項８】
前記変異体のアミノ酸配列がアミノ酸置換Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１
０１Ｎ＋Ｇ１２８Ｓ＋Ｙ２１７Ｑ又はＳ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ
＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２１７Ｑ、を含み、選択的に、Ｎ１０９Ｇ、Ｎ０７６Ｄ、Ｓ０３３Ｔ、
Ｎ２４３Ｖ、Ｓ２４８Ａ、Ａ０８８Ｔ、及びＳ０６３Ｇからなる群から選択される置換を
更に含む、請求項７に記載の変異体。
【請求項９】
前記変異体のアミノ酸配列が、以下のもの：
Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｇ１３１Ｈ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｌ２５７Ｇ、
Ｓ０３３Ｔ＋Ｎ０７６Ｄ、
Ｓ００９Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｋ１４１Ｒ＋Ｎ２４３Ｖ、
Ｓ１６２Ｇ＋Ｋ２５６Ｒ、
Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ、
Ｎ１０９Ｇ＋Ｌ２５７Ｇ、
Ｓ１６２Ｇ＋Ｌ２５７Ｇ、
Ｎ０６１Ｇ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ、
Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｓ２４８Ａ、
Ｓ０３３Ｔ＋Ｎ０７６Ｄ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２１８Ｓ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｓ２４８Ｎ＋Ｋ２５
６Ｒ、
Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｋ２５６Ｒ、
Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｇ１３１Ｈ＋Ｎ２４３Ｖ、
Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ、
Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ、
Ｔ１５８Ｓ＋Ｌ２５７Ｇ、
Ｎ０６１Ｓ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ、
Ｐ０４０Ａ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｓ２４８Ｎ＋Ｋ２５６Ｒ、
Ｓ００９Ｔ＋Ｓ０１８Ｔ＋Ｙ０２１Ｎ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｋ１４１Ｒ、
Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｔ１５８Ｓ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｋ２５６Ｒ、
Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｔ１５８Ｓ＋Ｎ２１８Ｓ＋Ｌ２５７Ｇ、
Ｎ１０９Ｇ＋Ｋ２５６Ｒ、
Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｋ２５６Ｒ、
Ｓ０６３Ｇ＋Ｋ２５６Ｒ、
Ｓ０６３Ｇ＋Ｎ１０９Ｇ、
Ｓ０６３Ｇ、
Ｓ０６３Ｇ＋Ｎ０７６Ｄ、
Ｓ０３３Ｔ＋Ｎ０７６Ｄ＋Ｎ２１８Ｓ、及び
Ｎ０７６Ｄ＋Ｎ２１８Ｓからなる群から選択される１組のアミノ酸置換を更に含む、請
求項７に記載の変異体。
【請求項１０】
前記変異体のアミノ酸配列がアミノ酸置換Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１
０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２１７Ｑを含み、以下のもの：
Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｇ１３１Ｈ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｌ２５７Ｇ、
Ｓ０３３Ｔ＋Ｎ０７６Ｄ、
Ｓ００９Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１２８Ｓ＋Ｋ１４１Ｒ＋Ｎ２４３Ｖ、
Ｓ１６２Ｇ＋Ｋ２５６Ｒ、
Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ、
Ｎ１０９Ｇ＋Ｌ２５７Ｇ、
Ｓ１６２Ｇ＋Ｌ２５７Ｇ、
Ｎ０６１Ｇ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ、
Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１２８Ｓ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｓ２４８Ａ、
Ｓ０３３Ｔ＋Ｎ０７６Ｄ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１２８Ｓ＋Ｎ２１８Ｓ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｓ２４
８Ｎ＋Ｋ２５６Ｒ、
Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｋ２５６Ｒ、
Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｇ１３１Ｈ＋Ｎ２４３Ｖ、
Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ、
Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ、
Ｔ１５８Ｓ＋Ｌ２５７Ｇ、
Ｎ０６１Ｓ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ、
Ｐ０４０Ａ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１２８Ｓ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｓ２４８Ｎ＋Ｋ２５６Ｒ、
Ｓ００９Ｔ＋Ｓ０１８Ｔ＋Ｙ０２１Ｎ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１２８Ｓ＋Ｋ１４１Ｒ、
Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｔ１５８Ｓ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｋ２５６Ｒ、
Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｔ１５８Ｓ＋Ｎ２１８Ｓ＋Ｌ２５７Ｇ、
Ｎ１０９Ｇ＋Ｋ２５６Ｒ、
Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１２８Ｓ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｋ２５６Ｒ、
Ｓ０６３Ｇ＋Ｋ２５６Ｒ、
Ｓ０６３Ｇ＋Ｎ１０９Ｇ、
Ｓ０６３Ｇ＋Ａ１２８Ｓ、
Ｓ０６３Ｇ＋Ｎ０７６Ｄ、
Ｓ０３３Ｔ＋Ｎ０７６Ｄ＋Ａ１２８Ｓ＋Ｎ２１８Ｓ、及び
Ｎ０７６Ｄ＋Ｎ２１８Ｓからなる群から選択される１組のアミノ酸置換を更に含む、請
求項７に記載の変異体。
【請求項１１】
前記変異体のアミノ酸配列が、配列番号２又は配列番号６のアミノ酸配列に対して少な
くとも８０％の配列同一性を有する、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の変異体。
【請求項１２】
前記変異体のアミノ酸配列が、配列番号２又は配列番号６のアミノ酸配列に対して少な
くとも８５％の配列同一性を有する、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の変異体。
【請求項１３】
前記変異体が、前記親プロテアーゼと比較して向上したタンパク質分解活性及び／又は
クリーニング活性を有するか、あるいは、配列番号２の配列を有するＢＰＮ’プロテアー
ゼのタンパク質分解活性と比較して向上したタンパク質分解活性及び／又はクリーニング
活性を有する、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の変異体。
【請求項１４】
前記変異体が、配列番号４の配列を有するプロテアーゼのタンパク質分解活性と比較し
て向上したタンパク質分解活性を有する、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の変異体
。
【請求項１５】
前記変異体が、配列番号６の配列を有するプロテアーゼのタンパク質分解活性と比較し
て向上したタンパク質分解活性を有する、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の変異体
。
【請求項１６】
前記親プロテアーゼがスブチリシンプロテアーゼである、請求項１〜１５のいずれか一
項に記載の変異体。
【請求項１７】
前記親プロテアーゼが、配列番号２のアミノ酸配列を有するバチルス・アミロリケファ
シエンス（B. amyloliquefaciens）スブチリシンプロテアーゼＢＰＮ’に対して少なくと
も８０％の配列同一性を有する、請求項１６に記載の変異体。
【請求項１８】
前記親プロテアーゼが、配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同
一性を有する、請求項１６に記載の変異体。
【請求項１９】
前記変異体が配列番号６のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の変異体。
【請求項２０】
親プロテアーゼの単離されたプロテアーゼ変異体であって、前記プロテアーゼ変異体は
タンパク質分解活性を有し、位置２４、５３、７８、９７、１０１、１２８及び２１７か
らなる群から選択される配列番号２のアミノ酸位置に対応する１つ以上のアミノ酸位置に
て変異を含むアミノ酸配列を含み、ここで、前記変異の少なくとも１つは独立して、
（ｉ）前記位置を占めるアミノ酸残基の上流又は下流における１つ以上のアミノ酸残基
の挿入、
（ｉｉ）前記位置を占めるアミノ酸残基の欠失、又は
（ｉｉｉ）異なるアミノ酸残基による、前記位置を占めるアミノ酸残基の置換、
であり、ここで、各アミノ酸位置は、配列番号２のアミノ酸配列と変異体のアミノ酸配
列とのアラインメントによって決定される配列番号２に記載のバチルス・アミロリケファ
シエンス（Bacillus amyloliquefaciens）スブチリシンプロテアーゼＢＰＮ’のアミノ酸
配列におけるアミノ酸位置に対応させることにより番号付けされる、変異体。
【請求項２１】
前記変異体が、位置２４、５３、７８、９７、１０１、１２８及び２１７からなる群か
ら選択される２つのアミノ酸位置における変異を含むアミノ酸配列を含む、請求項２０に
記載の変異体。
【請求項２２】
前記変異体が、位置２４、５３、７８、９７、１０１、１２８及び２１７からなる群か
ら選択される３つのアミノ酸位置における変異を含むアミノ酸配列を含む、請求項２１に
記載の変異体。
【請求項２３】
前記変異体が、位置２４、５３、７８、９７、１０１、１２８及び２１７からなる群か
ら選択される４つのアミノ酸位置における変異を含むアミノ酸配列を含む、請求項２２に
記載の変異体。
【請求項２４】
前記変異体が、位置２４、５３、７８、９７、１０１、１２８及び２１７からなる群か
ら選択される５つのアミノ酸位置における変異を含むアミノ酸配列を含む、請求項２３に
記載の変異体。
【請求項２５】
前記変異体が、位置２４、５３、７８、９７、１０１、１２８及び２１７からなる群か
ら選択される６つのアミノ酸位置における変異を含むアミノ酸配列を含む、請求項２４に
記載の変異体。
【請求項２６】
前記変異体が、位置２４、５３、７８、９７、１０１、１２８及び２１７からなる群か
ら選択される配列番号２の位置に対応するアミノ酸位置のそれぞれにおける変異を含むア
ミノ酸配列を含む、請求項２５に記載の変異体。
【請求項２７】
前記変異体が、位置２４、５３、７８、９７、１０１、１２８及び２１７からなる群か
ら選択される位置における異なるアミノ酸残基によるアミノ酸残基の置換を含むアミノ酸
配列を含む、請求項２０〜２６のいずれか一項に記載の変異体。
【請求項２８】
前記変異体が、位置２４、５３、７８、９７、１０１、１２８及び２１７からなる群か
ら選択される２つの位置のそれぞれにおける異なるアミノ酸残基によるアミノ酸残基の置
換を含むアミノ酸配列を含む、請求項２７に記載の変異体。
【請求項２９】
前記変異体が、位置２４、５３、７８、９７、１０１、１２８及び２１７からなる群か
ら選択される４つの位置のそれぞれにおける異なるアミノ酸残基によるアミノ酸残基の置
換を含むアミノ酸配列を含む、請求項２８に記載の変異体。
【請求項３０】
前記変異体が、位置２４、５３、７８、９７、１０１、１２８及び２１７からなる群か
ら選択される５つの位置のそれぞれにおける異なるアミノ酸残基によるアミノ酸残基の置
換を含むアミノ酸配列を含む、請求項２９に記載の変異体。
【請求項３１】
前記変異体が、位置２４、５３、７８、９７、１０１、１２８及び２１７からなる群か
ら選択される６つの位置のそれぞれにおける異なるアミノ酸残基によるアミノ酸残基の置
換を含むアミノ酸配列を含む、請求項３０に記載の変異体。
【請求項３２】
前記変異体が、位置２４、５３、７８、１０１、１２８及び２１７のそれぞれにおける
異なるアミノ酸残基によるアミノ酸残基の置換を含むアミノ酸配列を含み、ここで、各位
置が配列番号２における位置と対応させることにより番号付けされる、請求項３１に記載
の変異体。
【請求項３３】
前記変異体が、Ｘ０２４Ｇ／Ｒ、Ｘ０５３Ｇ、Ｘ０７８Ｎ、Ｘ０９７Ａ、Ｘ１０１Ｎ、
Ｘ１２８Ａ／Ｓ及びＸ２１７Ｑ／Ｌからなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸
置換を含むアミノ酸配列を含む、請求項２０〜３２のいずれか一項に記載の変異体。
【請求項３４】
前記変異体が、Ｘ０２４Ｇ／Ｒ、Ｘ０５３Ｇ、Ｘ０７８Ｎ、Ｘ０９７Ａ、Ｘ１０１Ｎ、
Ｘ１２８Ａ／Ｓ及びＸ２１７Ｑ／Ｌからなる群から選択される少なくとも２つのアミノ酸
置換を含むアミノ酸配列を含む、請求項３３に記載の変異体。
【請求項３５】
前記変異体が、Ｘ０２４Ｇ／Ｒ、Ｘ０５３Ｇ、Ｘ０７８Ｎ、Ｘ０９７Ａ、Ｘ１０１Ｎ、
Ｘ１２８Ａ／Ｓ及びＸ２１７Ｑ／Ｌからなる群から選択される少なくとも３つのアミノ酸
置換を含むアミノ酸配列を含む、請求項３４に記載の変異体。
【請求項３６】
前記変異体が、Ｘ０２４Ｇ／Ｒ、Ｘ０５３Ｇ、Ｘ０７８Ｎ、Ｘ０９７Ａ、Ｘ１０１Ｎ、
Ｘ１２８Ａ／Ｓ及びＸ２１７Ｑ／Ｌからなる群から選択される少なくとも４つのアミノ酸
置換を含むアミノ酸配列を含む、請求項３５に記載の変異体。
【請求項３７】
前記変異体が、Ｘ０２４Ｇ／Ｒ、Ｘ０５３Ｇ、Ｘ０７８Ｎ、Ｘ０９７Ａ、Ｘ１０１Ｎ、
Ｘ１２８Ａ／Ｓ及びＸ２１７Ｑ／Ｌからなる群から選択される少なくとも５つのアミノ酸
置換を含むアミノ酸配列を含む、請求項３６に記載の変異体。
【請求項３８】
前記変異体が、Ｘ０２４Ｇ／Ｒ、Ｘ０５３Ｇ、Ｘ０７８Ｎ、Ｘ０９７Ａ、Ｘ１０１Ｎ、
Ｘ１２８Ａ／Ｓ及びＸ２１７Ｑ／Ｌからなる群から選択される少なくとも６つのアミノ酸
置換を含むアミノ酸配列を含む、請求項３７に記載の変異体。
【請求項３９】
前記変異体が、（ａ）Ｘ１２８Ａ／Ｓ及び／又はＸ２１７Ｌ／Ｑ、（ｂ）Ｇ１２８Ａ／
Ｓ及び／又はＹ２１７Ｌ／Ｑ、並びに、（ｃ）Ｇ０９７Ａ、Ｇ１２８Ａ／Ｓ及び／又はＹ
２１７Ｌ／Ｑからなる群から選択される置換の組を含むアミノ酸配列を含む、請求項２０
〜３８のいずれか一項に記載の変異体。
【請求項４０】
前記変異体が、アミノ酸置換Ｘ０２４Ｇ／Ｒ＋Ｘ０５３Ｇ＋Ｘ０７８Ｎ＋Ｘ１０１Ｎ＋
Ｘ１２８Ａ／Ｓ＋Ｘ２１７Ｑ／Ｌを含むアミノ酸配列を含む、請求項２０〜３９のいずれ
か一項に記載の変異体。
【請求項４１】
前記変異体が、配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有
するアミノ酸配列を含む、請求項２０〜４０のいずれか一項に記載の変異体。
【請求項４２】
前記変異体が、配列番号２に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配
列を含む、請求項４１に記載の変異体。
【請求項４３】
前記変異体のアミノ酸配列がＳ０２４Ｇ、Ｓ０５３Ｇ、Ｓ０７８Ｎ、Ｓ１０１Ｎ、Ｇ１
２８Ａ／Ｓ及びＹ２１７Ｑの群から選択される少なくとも１つのアミノ酸置換を含む、請
求項２０〜４２のいずれか一項に記載の変異体。
【請求項４４】
前記変異体のアミノ酸配列がアミノ酸置換Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１
０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２１７Ｑを含む、請求項２０〜４３のいずれか一項に記載の変異
体。
【請求項４５】
前記変異体が、前記親プロテアーゼと比較して向上したタンパク質分解活性及び／又は
クリーニング活性を有するか、あるいは、配列番号２に記載のプロテアーゼのタンパク質
分解活性と比較して向上したタンパク質分解活性及び／又はクリーニング活性を有する、
請求項２０〜４４のいずれか一項に記載の変異体。
【請求項４６】
前記変異体が、配列番号４に記載のプロテアーゼのタンパク質分解活性と比較して向上
したタンパク質分解活性を有する、請求項２０〜４４のいずれか一項に記載の変異体。
【請求項４７】
前記変異体が、配列番号６に記載のプロテアーゼのタンパク質分解活性と比較して向上
したタンパク質分解活性を有する、請求項２０〜４４のいずれか一項に記載の変異体。
【請求項４８】
前記親プロテアーゼがスブチリシンプロテアーゼである、請求項２０〜４７のいずれか
一項に記載の変異体。
【請求項４９】
前記親プロテアーゼが、配列番号２のアミノ酸配列を有するバチルス・アミロリケファ
シエンス（B. amyloliquefaciens）スブチリシンプロテアーゼＢＰＮ’に対して少なくと
も８０％の配列同一性を有する、請求項４８に記載の変異体。
【請求項５０】
前記親プロテアーゼが、配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同
一性を有する、請求項４９に記載の変異体。
【請求項５１】
親プロテアーゼの単離されたプロテアーゼ変異体であって、（ａ）前記プロテアーゼ変
異体は、（ｉ）配列番号２の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配
列であって、（ｉｉ）位置２４及び５３におけるグリシンの置換、位置７８及び１０１に
おけるアスパラギンの置換、位置１２８におけるアラニン又はセリンの置換、及び位置２
１７におけるグルタミンの置換を含む、アミノ酸配列を含み、（ｂ）前記親プロテアーゼ
は、配列番号２に対して少なくとも９０％の配列同一性を有し、（ｃ）前記変異体の各ア
ミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置に対応させることにより番号付けされ、
並びに（ｄ）前記変異体は、親プロテアーゼと比較してタンパク質分解活性及び／又はク
リーニング活性が増大している、変異体。
【請求項５２】
前記変異体が成熟型である、請求項１〜５１のいずれか一項に記載の変異体。
【請求項５３】
タンパク質分解活性を有する単離されたポリペプチドであって、前記ポリペプチドは、
ａ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２
１７Ｑ＋Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｇ１３１Ｈ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｌ２５７Ｇ、
ｂ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２
１７Ｑ＋Ｓ０３３Ｔ＋Ｎ０７６Ｄ、
ｃ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ｓ＋Ｙ２
１７Ｑ＋Ｓ００９Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｋ１４１Ｒ＋Ｎ２４３Ｖ、
ｄ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２
１７Ｑ＋Ｓ１６２Ｇ＋Ｋ２５６Ｒ、
ｅ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２
１７Ｑ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ、
ｆ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２
１７Ｑ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｌ２５７Ｇ、
ｇ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２
１７Ｑ＋Ｓ１６２Ｇ＋Ｌ２５７Ｇ、
ｈ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２
１７Ｑ＋Ｎ０６１Ｇ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ、
ｉ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ｓ＋Ｙ２
１７Ｑ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｓ２４８Ａ、
ｊ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ｓ＋Ｙ２
１７Ｑ＋Ｓ０３３Ｔ＋Ｎ０７６Ｄ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２１８Ｓ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｓ２４８Ｎ＋
Ｋ２５６Ｒ、
ｋ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２
１７Ｑ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｋ２５６Ｒ、
ｌ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２
１７Ｑ＋Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｇ１３１Ｈ＋Ｎ２４３Ｖ、
ｍ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２
１７Ｑ＋Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ、
ｎ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２
１７Ｑ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ、
ｏ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２
１７Ｑ＋Ｔ１５８Ｓ＋Ｌ２５７Ｇ、
ｐ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２
１７Ｑ＋Ｎ０６１Ｓ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ、
ｑ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ｓ＋Ｙ２
１７Ｑ＋Ｐ０４０Ａ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｓ２４８Ｎ＋Ｋ２５６Ｒ、
ｒ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ｓ＋Ｙ２
１７Ｑ＋Ｓ００９Ｔ＋Ｓ０１８Ｔ＋Ｙ０２１Ｎ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｋ１４１Ｒ、
ｓ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２
１７Ｑ＋Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｔ１５８Ｓ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｋ２５６Ｒ、
ｔ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２
１７Ｑ＋Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｔ１５８Ｓ＋Ｎ２１８Ｓ＋Ｌ２５７Ｇ、
ｕ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２
１７Ｑ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｋ２５６Ｒ、
ｖ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ｓ＋Ｙ２
１７Ｑ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｋ２５６Ｒ、
ｗ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２
１７Ｑ＋Ｓ０６３Ｇ＋Ｋ２５６Ｒ、
ｘ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２
１７Ｑ＋Ｓ０６３Ｇ＋Ｎ１０９Ｇ、
ｙ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ｓ＋Ｙ２
１７Ｑ＋Ｓ０６３Ｇ、
ｚ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２
１７Ｑ＋Ｓ０６３Ｇ＋Ｎ０７６Ｄ、
ａａ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ｓ＋Ｙ
２１７Ｑ＋Ｓ０３３Ｔ＋Ｎ０７６Ｄ＋Ｎ２１８Ｓ、
ｂｂ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ
２１７Ｑ＋Ｎ０７６Ｄ＋Ｎ２１８Ｓ及び
ｃｃ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ
２１７Ｑ、からなる群から選択されるポリペプチド配列に対して少なくとも８５％の配列
同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、前記変異体の各アミノ酸位置は、配列番号
２の配列のアミノ酸位置に対応させることにより番号付けされる、変異体。
【請求項５４】
請求項１〜５２のいずれか一項に記載の変異体又は請求項５３に記載のポリペプチドを
コードするポリヌクレオチド配列あるいはその相補的ポリヌクレオチド配列を含む、単離
された核酸。
【請求項５５】
配列番号３若しくは配列番号５に記載のポリヌクレオチド配列又はその相補的ポリヌク
レオチド配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するポリヌクレオチド配列を含
む、単離された核酸。
【請求項５６】
請求項５４又は５５に記載の少なくとも１つの核酸を含む発現ベクター。
【請求項５７】
前記少なくとも１つの核酸がプロモーターに作用可能に連結されている、請求項５６に
記載の発現ベクター。
【請求項５８】
（ａ）請求項６４又は６５に記載の核酸、あるいは、（ｂ）請求項５６又は５７に記載
の発現ベクター、を含む、組み換え宿主細胞。
【請求項５９】
前記宿主細胞が細菌細胞である、請求項５８に記載の組み換え宿主細胞。
【請求項６０】
前記宿主細胞がバチルス細胞である、請求項５９に記載の組み換え宿主細胞。
【請求項６１】
前記宿主細胞が枯草菌（Bacillus subtilis）細胞である、請求項７０に記載の組み換
え宿主細胞。
【請求項６２】
（ａ）請求項５４又は５５に記載の核酸、あるいは、（ｂ）請求項５６又は５７に記載
の発現ベクター、を含む、細胞培養物。
【請求項６３】
プロテアーゼ変異体の製造方法であって、前記方法が、前記変異体の生産を促進する条
件下で請求項５８〜６１のいずれか一項に記載の組み換え宿主細胞を培養することを含む
、方法。
【請求項６４】
前記細胞培養物から前記変異体を回収することを更に含む、請求項６３に記載の方法。
【請求項６５】
プロテアーゼ変異体の製造方法であって、前記方法が、
（ａ）請求項５６又は５７に記載の組み換え発現ベクターを細胞集団に導入することと
、
（ｂ）前記発現ベクターによりコードされるプロテアーゼ変異体の生産を促進する条件
下で培地内で前記細胞を培養することと、を含む、方法。
【請求項６６】
（ｃ）前記細胞から又は前記培地から前記変異体を単離又は回収することを更に含む、
請求項６５に記載の方法。
【請求項６７】
組成物が布地ケア製品及びホームケア製品ではない、請求項１〜５２のいずれか一項に
記載の変異体又は請求項５３に記載のポリペプチドを含む組成物。
【請求項６８】
少なくとも１つの添加剤成分又は担体を含む、請求項６７に記載の組成物。
【請求項６９】
前記組成物が追加の酵素を含む、請求項６７又は６８に記載の組成物。
【請求項７０】
前記追加の酵素が、ヘミセルラーゼ、セルラーゼ、アミラーゼ、ペルオキシダーゼ、プ
ロテアーゼ、キシラナーゼ、リパーゼ、ホスホリパーゼ、エステラーゼ、クチナーゼ、ペ
クチナーゼ、ペクタートリアーゼ、マンナナーゼ、ケラチナーゼ、レダクターゼ、オキシ
ダーゼ、フェノールオキシダーゼ、リポキシゲナーゼ、リグニナーゼ、プルラナーゼ、タ
ンナーゼ、ペントサナーゼ、マラナーゼ、β−グルカナーゼ、アラビノシターゼ、ヒアル
ロニダーゼ、コンドロイチナーゼ及びラッカーゼからなる群から選択される、請求項６９
に記載の組成物。
【請求項７１】
前記組成物が、コンタクトレンズをクリーニングするための洗剤組成物である、請求項
６７〜７０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７２】
前記組成物が、パーソナルケア用途において有用であるクリーニング組成物である、請
求項６７〜７０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７３】
少なくとも１つのビルダー及び／又は少なくとも１つの界面活性剤を更に含む、請求項
６７〜７２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７４】
クリーニングの必要のある物品又は表面をクリーニングするための方法であって、前記
方法が、前記物品又は表面を、請求項１〜５２のいずれか一項に記載の変異体、請求項５
３に記載のポリペプチド又は請求項６７〜７３のいずれか一項に記載の組成物と接触させ
ることを含む、方法。
【請求項７５】
前記物品又は表面を水ですすぐことを更に含む、請求項７４に記載の方法。
【請求項７６】
表面又は物品をクリーニングするための方法であって、前記物品又は表面を所望の程度
までクリーニング又は洗浄するのに、充分な時間にわたって並びに／又は充分な若しくは
有効な条件下で、請求項１〜５２のいずれか一項に記載の変異体、請求項５３に記載のポ
リペプチド又は請求項６７〜７３のいずれか一項に記載の組成物と、洗浄すべき前記物品
又は表面の少なくとも一部分を接触させることを含む、方法。
【請求項７７】
表面若しくは布地の処理及び／又はクリーニング方法であって、選択的に前記表面若し
くは布地を洗浄する及び／又はすすぐ工程、前記表面若しくは布地を請求項１〜５２のい
ずれか一項に記載の変異体、請求項５２に記載のポリペプチド又は請求項６７〜７３のい
ずれか一項に記載の組成物と接触させる工程、次いで、選択的に前記表面若しくは布地を
洗浄する及び／又はすすぐ工程を含む、方法。
【請求項７８】
請求項１〜５２のいずれか一項に記載の変異体であって、前記親プロテアーゼがスブチ
リシンプロテアーゼであり、前記変異体が、前記親スブチリシンプロテアーゼと比較した
ときに洗剤において向上した洗浄性能又は向上したクリーニング性能を有するスブチリシ
ンプロテアーゼ変異体、又は、
請求項５３に記載のポリペプチドであって、配列番号２、配列番号４又は配列番号６の
プロテアーゼと比較したときに洗剤において向上した洗浄性能又は向上したクリーニング
性能を有するポリペプチド。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本出願は、米国特許仮出願番号６１／２８５，１２７（２００９年１２月９日出願）及
び同６１／３９２，３７３（２０１０年１０月１２日出願）の優先権及び利益を主張し、
これら各々の開示は全ての目的に関してその全体が参照により本明細書に組み込まれるも
のとする。
【０００２】
（発明の分野）
本発明は、プロテアーゼ変異体、プロテアーゼ変異体を含む組成物、並びに、このよう
なプロテアーゼ変異体及びこれらの組成物を使用する方法を提供する。
【背景技術】
【０００３】
プロテアーゼは工業用酵素の技術分野において長きにわたって周知であるが、特定の条
件及び使用に好適である改変プロテアーゼ（engineered proteases）が依然として必要と
されている。本発明は、これらのニーズ及び他のニーズを満たす。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
第一態様では、本発明は、親プロテアーゼ酵素の単離されたプロテアーゼ変異体を提供
し、このプロテアーゼ変異体はタンパク質分解活性を有し、位置２４、５３、７８、９７
、１０１、１２８及び２１７からなる群から選択される配列番号２のアミノ酸位置に対応
する１つ以上のアミノ酸位置において変異を含むアミノ酸配列を含み、ここで、変異の少
なくとも１つは独立して、（ｉ）この位置を占めるアミノ酸残基の上流又は下流における
１つ以上のアミノ酸残基の挿入、（ｉｉ）この位置を占めるアミノ酸残基の欠失、又は（
ｉｉｉ）異なるアミノ酸残基による、この位置を占めるアミノ酸残基の置換、であり、こ
こで、各アミノ酸位置は、配列番号２のアミノ酸配列と変異体のアミノ酸配列とのアライ
ンメントによって決定される配列番号２に記載のバチルス・アミロリケファシエンス（Ba
cillus amyloliquefaciens）スブチリシンプロテアーゼＢＰＮ’のアミノ酸配列における
アミノ酸位置に対応させることにより番号付けされる。
【０００５】
第二態様では、本発明は、親プロテアーゼの単離されたプロテアーゼ変異体を提供し、
この変異体は、Ｘ０２４Ｇ／Ｒ、Ｘ０５３Ｇ，Ｘ０７８Ｎ，Ｘ１０１Ｎ，Ｘ１２８Ａ／Ｓ
及びＸ２１７Ｌ／Ｑからなる群から選択される３つのアミノ酸置換を含むアミノ酸配列を
含み、ここで、この変異体はタンパク質分解活性を有し、この変異体の各アミノ酸位置は
、配列番号２のアミノ酸配列と変異体のアミノ酸配列とのアラインメントによって決定さ
れる配列番号２のアミノ酸配列におけるアミノ酸位置に対応させることにより番号付けさ
れる。
【０００６】
第三態様では、本発明は、タンパク質分解活性を有する単離されたポリペプチドを提供
し、上記ポリペプチドは、
ａ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２
１７Ｑ＋Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｇ１３１Ｈ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｌ２５７Ｇ、
ｂ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２
１７Ｑ＋Ｓ０３３Ｔ＋Ｎ０７６Ｄ、
ｃ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ｓ＋Ｙ２
１７Ｑ＋Ｓ００９Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｋ１４１Ｒ＋Ｎ２４３Ｖ、
ｄ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２
１７Ｑ＋Ｓ１６２Ｇ＋Ｋ２５６Ｒ、
ｅ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２
１７Ｑ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ、
ｆ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２
１７Ｑ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｌ２５７Ｇ、
ｇ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２
１７Ｑ＋Ｓ１６２Ｇ＋Ｌ２５７Ｇ、
ｈ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２
１７Ｑ＋Ｎ０６１Ｇ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ、
ｉ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ｓ＋Ｙ２
１７Ｑ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｓ２４８Ａ、
ｊ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ｓ＋Ｙ２
１７Ｑ＋Ｓ０３３Ｔ＋Ｎ０７６Ｄ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２１８Ｓ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｓ２４８Ｎ＋
Ｋ２５６Ｒ、
ｋ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２
１７Ｑ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｋ２５６Ｒ、
ｌ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２
１７Ｑ＋Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｇ１３１Ｈ＋Ｎ２４３Ｖ、
ｍ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２
１７Ｑ＋Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ、
ｎ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２
１７Ｑ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ、
ｏ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２
１７Ｑ＋Ｔ１５８Ｓ＋Ｌ２５７Ｇ、
ｐ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２
１７Ｑ＋Ｎ０６１Ｓ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ、
ｑ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ｓ＋Ｙ２
１７Ｑ＋Ｐ０４０Ａ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｓ２４８Ｎ＋Ｋ２５６Ｒ、
ｒ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ｓ＋Ｙ２
１７Ｑ＋Ｓ００９Ｔ＋Ｓ０１８Ｔ＋Ｙ０２１Ｎ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｋ１４１Ｒ、
ｓ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２
１７Ｑ＋Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｔ１５８Ｓ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｋ２５６Ｒ、
ｔ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２
１７Ｑ＋Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｔ１５８Ｓ＋Ｎ２１８Ｓ＋Ｌ２５７Ｇ、
ｕ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２
１７Ｑ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｋ２５６Ｒ、
ｖ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ｓ＋Ｙ２
１７Ｑ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｋ２５６Ｒ、
ｗ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２
１７Ｑ＋Ｓ０６３Ｇ＋Ｋ２５６Ｒ、
ｘ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２
１７Ｑ＋Ｓ０６３Ｇ＋Ｎ１０９Ｇ、
ｙ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ｓ＋Ｙ２
１７Ｑ＋Ｓ０６３Ｇ、
ｚ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２
１７Ｑ＋Ｓ０６３Ｇ＋Ｎ０７６Ｄ、
ａａ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ｓ＋Ｙ
２１７Ｑ＋Ｓ０３３Ｔ＋Ｎ０７６Ｄ＋Ｎ２１８Ｓ、
ｂｂ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ
２１７Ｑ＋Ｎ０７６Ｄ＋Ｎ２１８Ｓ、及び
ｃｃ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ
２１７Ｑ，からなる群から選択されるポリペプチド配列に対して少なくとも８５％の配列
同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、この変異体の各アミノ酸位置は、配列番号
２の配列のアミノ酸位置に対応させることにより番号付けされる。
【０００７】
第四態様では、本発明は、（ａ）配列番号６のポリペプチド配列に対して少なくとも９
５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリ
ペプチド、（ｂ）少なくとも厳密度の高い条件下で（ｉ）配列番号５のポリヌクレオチド
配列と、又は（ｉｉ）（ｉ）の相補的ポリヌクレオチド配列と、ハイブリッド形成するポ
リヌクレオチドによりコードされるポリペプチド、並びに（ｃ）配列番号５のポリヌクレ
オチド配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリヌクレオチド配列を含む
ポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド、からなる群から選択されるプロテア
ーゼ活性を有する単離されたポリペプチドを提供する。
【０００８】
第五態様では、本発明は、親プロテアーゼの単離されたプロテアーゼ変異体を提供し、
ここで、（ａ）この変異体は親プロテアーゼと比較して２０以下、１５以下又は１０以下
の変異を有するアミノ酸配列を含み、ここで、（ｉ）これらの変異は、挿入、欠失又は置
換から独立して選択され、（ｉｉ）これらの変異は、位置２４及び５３におけるグリシン
の置換、位置７８及び１０１におけるアスパラギンの置換、位置１２８におけるアラニン
又はセリンの置換、及び位置２１７におけるグルタミンの置換を包含し、（ｂ）親プロテ
アーゼは、配列番号２に対して少なくとも９０％の配列同一性を有し、（ｃ）配列番号２
のアミノ酸配列は、位置番号付けを決定するために使用され、並びに（ｄ）この変異体は
、親プロテアーゼと比較してタンパク質分解活性が増大しており、ここで、各アミノ酸位
置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置に対応させることにより番号付けされる。
【０００９】
第六態様では、本発明は、親プロテアーゼの単離されたプロテアーゼ変異体を提供し、
ここで、（ａ）この変異体は、（ｉ）配列番号２の配列に対して少なくとも８５％の同一
性を有するアミノ酸配列であって、（ｉｉ）位置２４及び５３におけるグリシンの置換、
位置７８及び１０１におけるアスパラギンの置換、位置１２８におけるアラニン又はセリ
ンの置換、及び位置２１７におけるグルタミンの置換を含む、アミノ酸配列を含み、（ｂ
）この親プロテアーゼは、配列番号２に対して少なくとも８５％の配列同一性を有し、（
ｃ）この変異体の各アミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置に対応させること
により番号付けされ、並びに（ｄ）この変異体は、親プロテアーゼと比較してタンパク質
分解活性が増大している。
【００１０】
別の態様では、本発明は、本発明の少なくとも１つのポリペプチド変異体（例えば、プ
ロテアーゼ変異体）をコードするポリヌクレオチド配列又はその相補的ポリヌクレオチド
配列を含む、単離された又は組み換え核酸を提供する。
【００１１】
別の態様では、本発明は、配列番号３若しくは配列番号５に記載のポリヌクレオチド又
はその相補的ポリヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するポリ
ヌクレオチド配列を含む、単離された又は組み換え核酸を提供する。
【００１２】
別の態様では、本発明は、本発明の少なくとも１つの核酸を含む発現ベクターを提供す
る。本発明の少なくとも１つの核酸又は発現ベクターを含む組み換え宿主細胞又は細胞培
養物も提供される。
【００１３】
別の態様では、本発明は、本発明の少なくとも１つのポリペプチド（例えば、プロテア
ーゼ変異体）の製造方法を提供し、この方法は、（ａ）本発明のポリペプチド（例えば、
プロテアーゼ変異体）をコードする本発明の組み換え発現ベクターを細胞集団に導入する
ことと、（ｂ）この発現ベクターによりコードされるポリペプチド（例えば、プロテアー
ゼ変異体）の生産を促進する条件下で培地内でこの細胞を培養することと、選択的に（ｃ
）細胞又は培地から変異体を単離又は回収することと、を含む。
【００１４】
別の態様では、本発明は、本発明の少なくとも１つのプロテアーゼ変異体又はポリペプ
チドを、選択的に別の酵素と組み合わせて含む組成物を提供する。このような組成物は、
界面活性剤及び／又はビルダー又は担体などの添加剤成分を含んでもよい。このような組
成物は、クリーニング組成物又は洗剤組成物であってもよく、本明細書の他の箇所に記載
のクリーニング方法において有用であり得る。このような組成物は布地ケア製品及びホー
ムケア製品であってもよく、又は、このような組成物は、布地ケア製品及びホームケア製
品でなくてもよい。
【００１５】
別の態様では、本発明は、クリーニングする必要のある物品、対象又は表面をクリーニ
ングするための方法を提供し、この方法は、物品、対象又は表面を、本発明のポリペプチ
ド若しくはプロテアーゼ変異体又は本発明の組成物と接触させることと、選択的にこの物
品、対象又は表面を水ですすぐことと、を含む。
【００１６】
別の態様では、本発明は、物品又は表面（例えば、硬質表面）をクリーニングするため
の方法を提供し、この方法は、物品又は表面（例えば、硬質表面）を充分な時間にわたっ
て又は所望される程度までクリーニング若しくは洗浄するのに十分な若しくは有効な条件
下で本発明のポリペプチド又はプロテアーゼ変異体又は本発明の組成物に、クリーニング
すべき物品又は表面（例えば、硬質表面）の少なくとも一部を接触させることを含み、選
択的にこの物品又は表面（例えば、硬質表面）を水ですすぐことを含む。
【００１７】
本発明の他の態様は、下記に記載される。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】ｐＨＰＬＴ−ＢＰＮ’−ｖ３のプラスミドマップ。
【図２】ｐＨＰＬＴ−ＢＰＮ’−ｖ３＋Ｓ７８Ｎのプラスミドマップ。
【図３】ｐＨＰＬＴ−ＢＰＮ’ｐａｒｔｉａｌ  ｏｐｔのプラスミドマップ。
【図４】ｐＨＰＬＴ−ＢＰＮ’−ｖ３６のプラスミドマップ。
【図５】ＢＰＮ’（配列番号２）及びＧＧ３６（配列番号７５５）を含む成熟参照スブチリシンプロテアーゼのアラインメント。各冷水プロテアーゼ（cold water protease）変異体を含む本明細書に記載の各プロテアーゼ変異体の各アミノ酸位置は、バチルス・アミロリケファシエンス（Bacillus amyloliquefaciens）スブチリシンプロテアーゼＢＰＮ’アミノ酸配列とプロテアーゼ変異体のアミノ酸配列のアラインメントにより決定される図５に示すようなバチルス・アミロリケファシエンス（Bacillus amyloliquefaciens）スブチリシンプロテアーゼＢＰＮ’（配列番号２）のアミノ酸配列内の対応するアミノ酸位置の番号付けに従って番号付けされる。したがって、本明細書において特に指定しない限り、置換位置は、ＢＰＮ’に対する関係で与えられる。
【図６】ｐＨＰＬＴ−ＧＧ３６のマップ。
【図７】ｐＲＡ６８のマップ。
【図８】ｐＲＡ９６のマップ。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
定義
特に指定しない限り、本発明の実施は、当該技術分野内の分子生物学、タンパク質工学
、微生物学及び組み換えＤＮＡにおいて通常使用される従来技術を伴う。このような技術
は、当業者に既知であり、当業者に周知の数多くのテキスト及び参考文献に記載されてい
る。上記及び下記の両方で本明細書で言及される全ての特許、特許出願、論文及び刊行物
は、これによって本明細書に参照により明示的に組み込まれるものとする。
【００２０】
本明細書で特に規定のない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は
、本発明が属する分野の当業者に一般的に理解されるのと同じ意味を有する。多くの技術
用語辞書が当業者に既知である。本明細書に記載されているものと類似した又は等価な任
意の方法及び部材の使用が発明の実施において見出されるが、一部の好適な方法及び部材
を本明細書に記載するものとする。したがって、すぐ下に定義される用語は、概して本明
細書を参照することにより、より完全に説明される。数的範囲は、範囲を画定する数を包
含するものとする。特に示さない限り、それぞれ、核酸は左から右に５’→３’の向きで
記述され、アミノ酸は左から右にアミノ→カルボキシの向きで記述される。本発明は、記
載される特定の方法、プロトコル及び試薬に限定されるものではなく、当業者によりこれ
らが使用される文脈に依存して変更されてもよいことが理解されよう。
【００２１】
本発明の実施は、特に示さない限り、タンパク質精製、分子生物学、微生物学、組み換
えＤＮＡ技術及びタンパク質配列決定の従来技術を採用し、これらの全ては、当該技術分
野内のものである。
【００２２】
更に、本明細書で提供される見出しは、概して本明細書を参照することにより有するこ
とができる本発明の様々な態様を限定するものではない。したがって、すぐ下に定義され
る用語は、概して本明細書を参照することにより、より完全に定義される。しかしながら
、本発明の理解を促進するために、多くの用語を以下に定義する。
【００２３】
本明細書で使用するとき、用語、「プロテアーゼ」及び「プロテイナーゼ」は、他のタ
ンパク質を分解する能力を有する酵素タンパク質を指す。プロテアーゼは、「タンパク質
分解」を行う能力を有し、タンパク質を形成するペプチド又はポリペプチド鎖内でアミノ
酸を一緒に連結するペプチド結合を加水分解することによりタンパク質異化反応を開始す
る。タンパク質消化酵素としてのプロテアーゼのこの活性は、「タンパク質活性」と呼ば
れる。タンパク質分解活性を測定するための多くの周知の手順が存在する（例えば、Ｋａ
ｌｉｓＺ，「Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ，」Ｉｎ：Ｆｉｅｃｈｔｅｒ
（ｅｄ．），Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎ
ｇ／Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（１９８８）を参照されたい）。例えば、タンパク質分
解活性は、それぞれのプロテアーゼが市販の基質を加水分解する能力を解析する比較アッ
セイにより確定され得る。プロテアーゼ又はタンパク質分解活性の解析に有用な代表的な
基質としては、ジメチルカゼイン（Ｓｉｇｍａ  Ｃ−９８０１）、ウシのコラーゲン（Ｓ
ｉｇｍａ  Ｃ−９８７９）、ウシのエラスチン（Ｓｉｇｍａ  Ｅ−１６２５）及びウシの
ケラチン（ＩＣＮ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  ９０２１１１）が挙げられるが、これらに限
定されない。これらの基質を利用する比色分析アッセイが当該技術分野において周知であ
る（例えば、国際公開第９９／３４０１１号及び米国特許第６，３７６，４５０号、これ
らはどちらも参照により本明細書に組み込まれる）。ｐＮＡアッセイ（例えば、Ｄｅｌ  
Ｍａｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．９９：３１６〜３２０［１９７９］
を参照されたい）もまた、勾配溶出時に回収される画分の活性酵素濃度を定量するのに使
用され得る。このアッセイは、酵素が可溶性合成基質、スクシニル−アラニン−アラニン
−プロリン−フェニルアラニン−ｐ−ニトロアニリド（ｓｕｃ−ＡＡＰＦ−ｐＮＡ）を加
水分解する際にｐ−ニトロアニリンが放出される速度を判定する。加水分解反応により黄
色味が生成される速度は、分光光度計で４１０ｎｍにて測定され、この速度は活性酵素濃
度に比例する。加えて、２８０ナノメートル（ｎｍ）での吸光度測定を使用して、総タン
パク質濃度を定量することができる。活性濃度／総タンパク質比は、酵素純度を与える。
【００２４】
本明細書で使用するとき、用語、「スブチリシン」は、ＭＥＲＯＰＳ−ぺプチダーゼデ
ータベースに記載のＳ８セリンプロテアーゼファミリーの任意のメンバーを指す（Ｒａｗ
ｌｉｎｇｓ  ｅｔ  ａｌ．，ＭＥＲＯＰＳ：ｔｈｅ  ｐｅｐｔｉｄａｓｅ  ｄａｔａｂａ
ｓｅ，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，３４  Ｄａｔａｂａｓｅ  ｉｓｓｕｅ，Ｄ２７
０−２７２［２００６］を参照されたい）。そこに記載のように、ぺプチダーゼファミリ
ーＳ８は、セリンエンドペプチダーゼスブチリシン及びその相同体を含有する（Ｒａｗｌ
ｉｎｇｓ  ａｎｄ  Ｂａｒｒｅｔｔ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．２９０：２０５〜２１８，［
１９９３］）。ファミリーＳ８は、サブチラーゼファミリーとしても知られ、セリンペプ
チダーゼの二番目に大きなファミリーである。ファミリーＳ８の第三の構造は、今回判定
された。典型的なＳ８タンパク質構造は三層からなり、七本鎖βシートが二層のへリック
スの間に挟まれている。スブチリシン（Ｓ０８．００１）は、クランＳＢ（ＳＢ）の類型
構造である。異なる構造であるにもかかわらず、スブチリシンの活性部位とキモトリプシ
ン（Ｓ０１．００１）の活性部位は重ね合わせることができ、これは、類似性が分岐進化
よりも収斂の結果であることを示唆する。
【００２５】
「プロテアーゼ変異体」（又は「変異プロテアーゼ」）は、そのアミノ酸配列において
、少なくとも１つのアミノ酸残基が参照プロテアーゼ又は親プロテアーゼのアミノ酸配列
とは異なるプロテアーゼを指し得る。親プロテアーゼ又は参照プロテアーゼは、野生型プ
ロテアーゼである必要はなく、しかしながらそれ自体が野生型プロテアーゼの変異体であ
ってもよい。参照又は親プロテアーゼがいずれかの特定のアミノ酸配列に限定されること
は意図しない。参照又は親プロテアーゼのプロテアーゼ変異体は、親プロテアーゼ又は参
照プロテアーゼのアミノ酸配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９
０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の
同一性を有するアミノ酸配列を含んでもよく、親プロテアーゼ又は参照プロテアーゼのア
ミノ酸配列と比較して少なくとも１つのアミノ酸置換、挿入又は欠失を含んでもよい。一
態様では、本発明は、セリンプロテアーゼの変異体を含み、ここで、この変異体は、セリ
ンプロテアーゼと比較して少なくとも１つの変異を有する。一態様では、本発明は、配列
番号２の成熟ＢＰＮ’配列と比較して１つ以上の変異を含むアミノ酸配列を含む「ＢＰＮ
’変異体」（又は「ＢＰＮ’スブチリシン変異体」）を含む。
【００２６】
親プロテアーゼ又は参照プロテアーゼは、例えば、既知のプロテアーゼ（例えば、ＢＰ
Ｎ’が挙げられるがこれに限定されない）又は市販のプロテアーゼ又は市販のプロテアー
ゼの変異体であり得るが、これに限定されない。親プロテアーゼ又は参照プロテアーゼは
、それ自体が既知又は市販のプロテアーゼの変異体であってもよい。プロテアーゼ変異体
は、市販されている親プロテアーゼから、又は、このような市販の親プロテアーゼの変異
体から、誘導することができる。市販のプロテアーゼとしては、例えば、商品名ＳＡＶＩ
ＮＡＳＥ（登録商標）、ＰＯＬＡＲＺＹＭＥ（登録商標）、ＫＡＮＮＡＳＥ（登録商標）
、ＬＩＱＵＡＮＡＳＥ（登録商標）、ＬＩＱＵＡＮＡＳＥ  ＵＬＴＲＡ（登録商標）、Ｓ
ＡＶＩＮＡＳＥ  ＵＬＴＲＡ（登録商標）、ＯＶＯＺＹＭＥ（登録商標）（ＮｏｖｏＺｙ
ｍｅｓ  Ａ／Ｓによる）、ＭＡＸＡＣＡＬ（登録商標）、ＰＲＯＰＥＲＡＳＥ（登録商標
）、ＰＵＲＡＦＥＣＴ（登録商標）、ＦＮ３（登録商標）、ＦＮ４（登録商標）及びＰＵ
ＲＡＦＥＣＴ  ＯＸＰ（登録商標）、ＰＵＲＡＦＡＳＴ（商標）、ＰＵＲＡＦＥＣＴ（登
録商標）ＰＲＩＭＥ、ＰＵＲＡＭＡＸ（登録商標）（Ｄａｎｉｓｃｏ  ＵＳ  Ｉｎｃ．（
元Ｇｅｎｅｎｃｏｒ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．）による）で販売されてい
るプロテアーゼ、並びにＨｅｎｋｅｌ／Ｋｅｍｉｒａから入手可能なもの、すなわちＢＬ
ＡＰ（以下の変異Ｓ９９Ｄ＋Ｓ１０１Ｒ＋Ｓ１０３Ａ＋Ｖ１０４Ｉ＋Ｇ１５９Ｓ，を有す
る米国特許第５，３５２，６０４号の表２９に示されているアミノ酸配列、以降ではＢＬ
ＡＰと呼ぶ）及びＢＬＡＰ  Ｘ（Ｓ３Ｔ＋Ｖ４Ｉ＋Ｖ２０５Ｉを有するＢＬＡＰ）が挙げ
られるが、これらに限定されない。
【００２７】
本明細書で使用するとき、「冷水プロテアーゼ」は、以下の四つの基準のうちの１つ以
上を呈する酵素である：（ａ）本明細書のパートＩ実施例１に記載の「試験方法」に定義
したようにＰＵＲＡＦＥＣＴ（登録商標）Ｐｒｉｍｅ（アミノ酸置換Ｙ２１７Ｌを有する
配列番号２）と比較したときにｐＨ  ８及び１６℃（６０°Ｆ）におけるＢＭＩで、性能
指数が少なくとも１．１、少なくとも１．２、少なくとも１．３、少なくとも１．４、少
なくとも１．５、少なくとも１．６、少なくとも１．７、少なくとも１．８、少なくとも
１．９、少なくとも２、１．１〜約１０、１．１〜約８、又は更には１．１〜約５、（ｂ
）本明細書のパートＩ実施例１に記載の「試験方法」に定義したようにＢＰＮ’（配列番
号２）と比較したときにｐＨ  ８及び１６℃（６０°Ｆ）におけるＢＭＩで、性能指数が
少なくとも１．３、少なくとも１．４、少なくとも１．５、少なくとも１．６、少なくと
も１．７、少なくとも１．８、少なくとも１．９、少なくとも２、１．３〜約８、又は更
には１．３〜約５、（ｃ）本明細書のパートＩ実施例１に記載の「試験方法」に定義した
ようにＢＰＮ’−ｖ３（配列番号４）と比較したときにｐＨ  ８及び１６℃（６０°Ｆ）
におけるＢＭＩで、性能指数が少なくとも０．９、少なくとも１．０、少なくとも１．１
、少なくとも１．２、少なくとも１．３、少なくとも１．４、少なくとも１．５、少なく
とも１．６、少なくとも１．７、少なくとも１．８、少なくとも１．９、少なくとも２、
０．９〜約１０、０．９〜約８、又は更には０．９〜約５、並びに／あるいは（ｄ）本明
細書のパートＩ実施例１に記載の「試験方法」に定義したようにＢＰＮ’−ｖ３６（配列
番号６）と比較したときにｐＨ  ８及び１６℃（６０°Ｆ）におけるＢＭＩで、性能指数
が少なくとも０．９、少なくとも１．０、少なくとも１．１、少なくとも１．２、少なく
とも１．３、少なくとも１．４、少なくとも１．５、少なくとも１．６、少なくとも１．
７、少なくとも１．８、少なくとも１．９、少なくとも２、０．９〜約１０、０．９〜約
８、０．９〜約５、１．０〜約１０、１．０〜約８、又は更には１．０〜約５。
【００２８】
一部の好適な冷水プロテアーゼはスブチリシンから誘導され、特にスブチリシンＢＰＮ
’（配列番号２）から誘導される。冷水プロテアーゼは、配列番号２のアミノ酸配列を有
するＢＰＮ’の変異体であり得る（例えば、「ＢＰＮ’変異体」又は「ＢＰＮ’スブチリ
シン変異体」）。一部のこのような冷水プロテアーゼは、本明細書に記載のアミノ酸置換
を１つ以上含む。
【００２９】
本明細書で使用するとき、バチルス属は、当業者に既知であるように、バチルス属内の
全ての種を含み、例えば、枯草菌（B. subtilis）、バチルス・リケニホルミス（B. lich
eniformis）、バチルス・レンタス（B. lentus）、バチルス・ブレビス（B. brevis）、
バチルス・ステアロサーモフィラス（B. stearothermophilus）、バチルス・アルカロフ
ィラス（B. alkalophilus）、バチルス・アミロリケファシエンス（B. amyloliquefacien
s）、バチルス・クラウジイ（B. clausii）、バチルス・ハロデュランス（B. halodurans
）、バチルス・メガテリウム（B. megaterium）、バチルス・コアグランス（B. coagulan
s）、バチルス・サーキュランス（B. circulans）、バチルス・ロータス（B. lautus）及
びバチルス・チューリンゲンシス（B. thuringiensis）が挙げられるが、これらに限定さ
れない。バチルス属が引き続き分類再編中であることが認識される。したがって、この属
が、例えば、現在では「ゲオバチルス・ステアロサーモフィラス（Geobacillus stearoth
ermophilus）」という名称であるバチルス・ステアロサーモフィラス（B. stearothermop
hilus）などの生物が挙げられるがこれに限定されない、再分類された種を含むことが意
図される。酸素の存在下での耐性内生胞子の形成は、バチルス属を定義する特徴と考えら
れるが、この特徴は、近年名付けられたアリシクロバチルス（Alicyclobacillus）、アン
フィバチルス（Amphibacillus）、アネウリニバチルス（Aneurinibacillus）、アノキシ
バチルス（Anoxybacillus）、ブレビバチルス（Brevibacillus）、フィロバチルス（Filo
bacillus）、グラシリバチルス（Gracilibacillus）、ハロバチルス（Halobacillus）、
パエニバチルス（Paenibacillus）、サリバチルス（Salibacillus）、サーモバチルス（T
hermobacillus）、ウレイバチルス（Ureibacillus）及びバージバチルス（Virgibacillus
）にも当てはまる。
【００３０】
用語、「ポリヌクレオチド」及び「核酸」は、本明細書において互換的に使用され、鎖
中で任意の長さのヌクレオチドモノマーが共有結合しているポリマーを指す。ＤＮＡ（デ
オキシリボ核酸）、デオキシリボヌクレオチドを含むポリヌクレオチド、ＲＮＡ（リボ核
酸）、リボ核酸のポリマーは、互いに異なる生物学的機能を有するポリヌクレオチド又は
核酸の例である。ポリヌクレオチド又は核酸としては、一本鎖、二本鎖若しくは三本鎖Ｄ
ＮＡ、ゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ＲＮＡ、ＤＮＡ−ＲＮＡハイブリッド、あるいは、プリ
ン塩基及びピリミジン塩基を含むポリマー、天然ヌクレオチド塩基、化学的に修飾された
ヌクレオチド塩基、生化学的に修飾されたヌクレオチド塩基、非天然のヌクレオチド塩基
、又は誘導されたヌクレオチド塩基が挙げられるが、これらに限定されない。以下は、ポ
リヌクレオチドの非限定例である：遺伝子、遺伝子断片、染色体断片、発現配列標識（Ｅ
ＳＴ）、エキソン、イントロン、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、運搬ＲＮＡ（ｔＲ
ＮＡ）、リボソームＲＮＡ（ｒＲＮＡ）、リボザイム、相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）、組み
換えポリヌクレオチド、分枝状ポリヌクレオチド、プラスミド、ベクター、任意の配列の
単離されたＤＮＡ、任意の配列の単離されたＲＮＡ、核酸プローブ及びプライマー。一部
のポリヌクレオチドは、メチル化ヌクレオチド及びヌクレオチド類似体などの修飾された
ヌクレオチド、ウラシル、他の糖、並びに、フルオロリボース及びチオアートなどの連結
基、並びにヌクレオチド分枝を含む。ヌクレオチドの配列は、非ヌクレオチド成分により
割り込まれてもよい。
【００３１】
本明細書で使用するとき、用語、「ベクター」は、核酸又はポリヌクレオチドを標的細
胞又は組織の中に導入又は運搬するために使用される核酸コンストラクト又はポリヌクレ
オチドコンストラクトを指す。ベクターは、典型的には、外来ＤＮＡを別の細胞又は組織
の中に導入するために使用される。ベクターは、一般に、導入遺伝子であるＤＮＡ配列と
、ベクターの「骨格鎖」として働くより大きなポリヌクレオチド配列と、を含む。このベ
クターは、典型的には、挿入された導入遺伝子などの遺伝子情報を標的細胞又は組織に運
搬するよう働き、それにより、標的細胞又は組織において挿入遺伝子を単離、複製又は発
現する。ベクターとしては、プラスミド、クローニングベクター、バクテリオファージ、
ウイルス（例えば、ウイルスベクター）、コスミド、発現ベクター、シャトルベクター、
カセット及びこれらに類するものが挙げられる。ベクターは、典型的には、複製起点、マ
ルチクローニングサイト及び選択マーカーを含む。ベクターを標的細胞の中に挿入するプ
ロセスは、典型的には、細菌及び酵母菌における形質転換として、並びに、哺乳類細胞に
おけるトランスフェクションとして、示される。本発明は、好適な宿主においてＤＮＡ配
列が発現されるよう機能し得る好適なプロ配列（例えば、分泌配列、シグナルペプチド配
列など）に作用可能に連結されているプロテアーゼ変異体（例えば、前駆体又は成熟プロ
テアーゼ変異体）をコードするＤＮＡ配列を含むベクターを含む。
【００３２】
本明細書で使用するとき、用語、「発現カセット」又は「発現ベクター」は、標的細胞
において所望の核酸（例えば、外来核酸又は導入遺伝子）を発現させるために組み換えに
より又は合成により調製された核酸コンストラクト又はベクターを指す。この所望の核酸
は、典型的には、所望のタンパク質を発現する。発現ベクター又は発現カセットは、典型
的には、外来核酸の発現を駆動する又は促進するプロモーターヌクレオチド配列を含む。
この発現ベクター又はカセットはまた、典型的には、標的細胞において特定の核酸の転写
を可能にする任意の他の特定の核酸要素を含む。組み換え発現カセットは、プラスミド、
染色体、ミトコンドリアＤＮＡ、色素体ＤＮＡ、ウイルス、又は核酸断片の中に組み込む
ことができる。一部の発現ベクターは、宿主細胞において非相同なＤＮＡ断片を組み込み
発現させる能力を有する。多くの原核細胞及び真核細胞発現ベクターは、市販されている
。適切な発現ベクターの選択は、当業者であれば既知である。発現ベクターの中に組み込
まれた核酸配列からタンパク質を発現させるための適切な発現ベクターの選択は、当業者
であれば既知である。
【００３３】
ＤＮＡコンストラクトは、標的細胞又は組織の中に導入され得る核酸の人工的に構築さ
れた断片である。ＤＮＡコンストラクトは、典型的には、ベクターの中にサブクローニン
グされた所望のタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含むＤＮＡ挿入断片を含む。
このベクターは、細菌を増殖させるための細菌耐性遺伝子、並びに、生物で所望のタンパ
ク質を発現させるためのプロモーターを含有してもよい。このＤＮＡは、ＰＣＲ又は当業
者に既知の任意の他の技術によりインビトロで生産され得る。このＤＮＡコンストラクト
は、所望の核酸配列を含み得る。一態様では、この配列は、選択的に、対照配列（例えば
、プロモーターなど）などの追加の配列に作用可能に連結される。このＤＮＡコンストラ
クトは、好適な選択マーカーを更に含んでもよく、ホモロジーボックスに隣接した組み込
み配列（incoming sequence）を更に含んでもよい。このコンストラクトは、末端部に加
えられた他の非相同配列を含んでもよい（例えば、スタッファー配列又は隣接配列）。配
列の末端部は、ＤＮＡコンストラクトが閉環構造を形成するように閉じられてもよい。当
該技術分野において周知の技術を用いてＤＮＡコンストラクトの中に組み込まれる、この
所望の核酸配列は、野生型、変異又は修飾された核酸であり得る。このＤＮＡコンストラ
クトは、宿主細胞染色体と相同な核酸配列を１つ以上含んでもよい。このＤＮＡコンスト
ラクトは、１つ以上の非相同ヌクレオチド配列を含んでもよい。このＤＮＡコンストラク
トは、一度インビトロで組み立てられると、例えば、１）宿主細胞の所望の標的配列の中
に非相同的な配列を挿入するために、及び／又は２）宿主細胞染色体の一領域に変異を誘
導する（すなわち、内在性配列を非相同性配列で置換する）ために、３）標的遺伝子を欠
失させるために、４）複製プラスミドを宿主の中に導入するために、使用され得る。「Ｄ
ＮＡコンストラクト」は、本明細書では「発現カセット」と互換的に使用される。
【００３４】
本明細書で使用するとき、「プラスミド」は、染色体ＤＮＡとは独立して複製可能であ
る染色体外のＤＮＡ分子を指す。プラスミドは、二本鎖（ｄｓ）であり、環状であっても
よく、典型的にはクローニングベクターとして使用される。
【００３５】
本明細書において、細胞の中に核酸配列を導入する文脈で使用するとき、用語、「導入
された」は、細胞の中に核酸配列を運搬するのに好適な任意の方法を指す。このような導
入のための方法としては、原形質融合、トランスフェクション、形質転換、エレクトロポ
レーション、接合及び形質導入が挙げられるが、これらに限定されない（例えば、Ｆｅｒ
ｒａｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，「Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，」ｉｎ  Ｈａｒｄｗｏｏｄ  ｅｔ  ａｌ
．（ｅｄｓ．），Ｂａｃｉｌｌｕｓ，Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｒｐ．
，ｐｐ．５７〜７２［１９８９］を参照されたい）。
【００３６】
形質転換は、細胞の遺伝的な変更を指し、遺伝子材料（例えば、ＤＮＡ）の取り込み、
遺伝子組み込み及び発現により生じる。
【００３７】
本明細書で使用するとき、核酸は、別の核酸配列と機能的に関連を持つよう配置された
場合に、別の核酸配列と「作用可能に連結」される。例えば、プロモーター又はエンハン
サーは、このプロモーターがヌクレオチドコーディング配列の転写に影響する場合、ヌク
レオチドコーディング配列に作用可能に連結される。リボソーム結合部位は、コーディン
グ配列の翻訳を促進するように配置された場合に、コーディング配列に作用可能に連結さ
れ得る。典型的には、「作用可能に連結されている」ＤＮＡ配列は、隣接している。しか
しながら、エンハンサーは隣接している必要はない。連結は、都合のよい制限部位で連結
することにより達成される。このような部位が存在しない場合、合成オリゴヌクレオチド
アダプター又はリンカーを従来の実践方法に従って使用してもよい。
【００３８】
本明細書で使用するとき、細胞を参照して使用する場合の「組み換え」は、典型的には
、その細胞が非相同な核酸配列の導入により改変されていること、あるいは、その細胞が
そのように改変された細胞から誘導されていることを指す。例えば、組み換え細胞は、ネ
イティブ（非組み換え）な形態の細胞内では同一形態で見られない遺伝子を含み得、ある
いは、組み換え細胞は、ネイティブな形態の細胞で見られるものの改変されて細胞の中に
再導入されたネイティブな遺伝子を含み得る。組み換え細胞は、細胞から核酸を除去する
ことなく改変された、細胞にとって内在性の核酸を含んでもよく、このような改変として
は、遺伝子置換、部位特異的変異、及び当業者に既知の関連技術により得られるものが挙
げられる。組み換えＤＮＡ（ｒＤＮＡ）は、遺伝子スプライシングのプロセスにより、通
常同時に生じ得ない２つ以上のヌクレオチド配列を組み合わせることにより作られる、人
工ＤＮＡの一形態である。組み換えＤＮＡ技術としては、インビトロでの組み換えＤＮＡ
の製造及び細胞の中への組み換えＤＮＡの運搬についての技術が挙げられ、組み換えＤＮ
Ａは細胞中で発現又は増殖させることができ、これにより組み換えポリペプチドが製造さ
れる。
【００３９】
本明細書で使用するとき、用語、核酸又は遺伝子の「増幅」は、特異的なＤＮＡ配列が
偏って複製されるプロセスを指し、その結果、増幅された核酸又は遺伝子は、遺伝子中に
元々存在していたものよりも多い複製数で存在するようになる。薬剤（例えば、抑制され
得る酵素に関する阻害物質）の存在下で増殖させることによる細胞の選別は、薬剤の存在
下での増殖に必要とされる遺伝子産物をコードする内在性遺伝子の増幅、あるいは、この
核酸又は遺伝子産物又はその両方をコードする外来性（すなわち、投与された）配列の増
幅のいずれかにより得られ得る。
【００４０】
本明細書で使用するとき、用語、「プライマー」は、制限酵素による消化物の精製物（
a purified restriction digest）として自然に生じるか又は合成により調製されるかの
いずれかのオリゴヌクレオチドを指し、これは、核酸鎖に対して相補的であるプライマー
伸長産物の合成が誘導される条件下（すなわち、ヌクレオチド及び、ＤＮＡポリメラーゼ
などの誘導剤の存在下、並びに好適な温度及びｐＨ下）に置かれると合成の開始点として
機能し得る。プライマーは増幅における最大効率のために一本鎖であることが好ましいが
、代わりに二本鎖であってもよい。二本鎖の場合、プライマーは、伸長産物を調製するた
めに使用される前に、その鎖を単離するように最初に処理される。このプライマーは、オ
リゴデオキシリボヌクレオチドを含み得る。このプライマーは、導入剤の存在下において
、伸長産物の合成を開始するのに十分に長くなくてはならない。プライマーの正確な長さ
は、温度、プライマーの供給源、及びどの方法をどのように使用するかなどの様々な要因
に依存する。
【００４１】
本明細書で使用するとき、用語、「プローブ」は、制限酵素による消化物の精製物とし
て自然に生じるか又は合成により、組み換えにより若しくはＰＣＲ増幅により製造される
かのいずれかのオリゴヌクレオチドを指し、これは、典型的には、別の所望のオリゴヌク
レオチドに対してハイブリッド形成することができる。プローブは、一本鎖又は二本鎖で
あり得る。プローブは、特定の遺伝子配列の検出、同定及び単離に有用である。本発明で
使用される任意のプローブは、任意の「リポーター分子」で標識されることが想到され、
その結果、酵素（例えば、ＥＬＩＳＡ並びに酵素に基づく組織化学的アッセイ）、蛍光、
放射活性及び発光システムが挙げられるがこれらに限定されない任意の検出システムで検
出可能である。本発明が任意の特定の検出システム又は標識に限定されることは、意図さ
れていない。
【００４２】
本明細書で使用するとき、用語、「ポリメラーゼ連鎖反応」（ＰＣＲ）は、米国特許第
４，６８３，１９５号、同第４，６８３，２０２号及び同第４，９６５，１８８号（参照
により本明細書に組み込まれる）の方法を指し、これらは、クローニング又は精製を行わ
ずに遺伝子ＤＮＡの混合物中で標的配列の断片濃度を増加させる方法を含む。標的配列を
増幅するためのこのプロセスは、当該技術分野において周知である。
【００４３】
本明細書で使用するとき、用語、「増幅試薬」は、プライマー、核酸テンプレート及び
増幅酵素を除いて、増幅に必要とされる試薬（例えば、デオキシリボヌクレオチド三リン
酸、緩衝剤など）を指す。典型的には、増幅試薬は、他の反応成分と共に、反応槽（試験
管、マイクロウェルなど）内に配置及び収容する。
【００４４】
本明細書で使用するとき、用語、「制限エンドヌクレアーゼ」又は「制限酵素」は、制
限部位として既知のヌクレオチドの特異的部位にて又はその近傍にて二本鎖又は一本鎖Ｄ
ＮＡを切断できる酵素（例えば、細菌由来の酵素）を指す。この制限部位を含むヌクレオ
チド配列は、所与の制限エンドヌクレアーゼ又は制限酵素により認識及び切断され、多く
の場合、ＤＮＡ断片を挿入される部位になる。制限部位は、発現ベクター又はＤＮＡコン
ストラクトの中に設計することができる。
【００４５】
当該技術分野において、ＤＮＡ配列をＲＮＡポリメラーゼにより転写することでＲＮＡ
配列を製造することができる一方、ＲＮＡ配列を逆転写酵素により逆転写することでＤＮ
Ａ配列を製造することができる。
【００４６】
「宿主株」又は「宿主細胞」は、所望のＤＮＡ配列を含む発現ベクターのために好適な
宿主を指す。所望のＤＮＡ配列は、宿主株又は宿主細胞において所望のタンパク質を発現
し得る。
【００４７】
「タンパク質」又は「ポリペプチド」又は「ペプチド」は、アミノ酸残基の高分子配列
である。１つのアミノ酸のカルボキシル基は、別のアミノ酸のアミノ基に連結される。用
語、「タンパク質」及び「ポリペプチド」及び「ペプチド」は、本明細書では互換的に使
用され得る。ペプチドは、２つ以上のアミノ酸を含む。ペプチドは、典型的には、ポリペ
プチド又はタンパク質が含有するアミノ酸よりも少ないアミノ酸を含有する。ＩＵＰＡＣ
−ＩＵＢ  Ｊｏｉｎｔ  Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎ  ｏｎ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｎｏｍ
ｅｎｃｌａｔｕｒｅ（ＪＣＢＮ）に従って定義されるアミノ酸についての一文字コード及
び三文字コードは、本開示全体にわたって使用される。一文字のＸは、２０種のアミノ酸
のうちのいずれかを指す。ポリペプチドは、遺伝子コードの縮重に起因して、１を超える
ヌクレオチド配列によりコードされ得る。
【００４８】
酵素変異体を説明する際、参照を容易にするために典型的には以下の命名法を使用する
：元のアミノ酸（１つ又は複数）：位置（１つ又は複数）：置換されたアミノ酸（１つ又
は複数）。公認のＩＵＰＡＣ一文字又は三文字アミノ酸略記を採用する。一文字「Ｘ」は
、任意のアミノ酸残基を指す。しかしながら、アミノ酸置換の文脈の場合（例えば、「Ｘ
００３Ｃ」）、「Ｘ」は、置換から生じるアミノ酸残基以外のアミノ酸残基を指す（例え
ば、Ｘは、Ｃ以外のアミノ酸残基である）。変異は、典型的には、親アミノ酸についての
一文字コード、続いて、アミノ酸配列における３又は２又は１桁のアミノ酸位置番号、次
に、置換アミノ酸についての一文字コードにより名付けられる。例えば、グリシン（Ｇ）
をアミノ酸セリン（Ｓ）に置換することによりアミノ酸位置８７においてアミノ酸グリシ
ン（Ｇ）を変異させることは、「Ｇ０８７Ｓ」又は「Ｇ８７Ｓ」と表される。典型的には
、トレオニンによる位置２におけるグリシンの置換はＧ００２Ｔと表されるが、このよう
な置換はＧ０２Ｔ又はＧ２Ｔとも表され得る。１又は２個のゼロ（「０」）は、単に各ア
ミノ酸位置に対して便宜上三つの数での表記を提供するために含まれ得る。アミノ酸位置
「００１」は「１」と同じであり、したがって、「Ａ００１Ｃ」は「Ａ１Ｃ」と同じであ
る。「Ｘ００１Ｇ」はアミノ酸配列中のアミノ酸位置１におけるグリシン（Ｇ）による置
換を表し、ここで、グリシンにより置換されることになるアミノ酸は任意のアミノ酸であ
る。複数の変異は、変異間に「−」を挿入することにより、あるいは、変異間にプラス（
＋）記号を用いることにより、示される。例えば、アミノ酸配列中のアミノ酸残基位置８
７及び９０におけるアミノ酸置換は、「Ｇ０８７Ｓ−Ａ０９０Ｙ」若しくは「Ｇ８７Ｓ−
Ａ９０Ｙ」又は「Ｇ８７Ｓ＋Ａ９０Ｙ」若しくは「Ｇ０８７Ｓ＋Ａ０９０Ｙ」のいずれか
で表される。欠失については、一文字コード「Ｚ」を使用する。親配列に対する挿入につ
いては、一文字コード「Ｚ」は位置番号の左側にある。欠失については、一文字コード「
Ｚ」は位置番号の右側にある。挿入については、位置番号は、挿入されるアミノ酸の前の
位置番号であり、各アミノ酸に対して０．０１を加える。例えば、位置８７と８８の間に
三つのアミノ酸、アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）及びチロシン（Ｙ）を挿入することは、
「Ｚ０８７．０１Ａ−Ｚ０８７．０２Ｓ−Ｚ０８７．０３Ｙ」と表される。したがって、
上記全ての変異に位置１００における欠失を加えると、「Ｇ０８７Ｓ−Ｚ０８７．０１Ａ
−Ｚ０８７．０２Ｓ−Ｚ０８７．０３Ｙ−Ａ０９０Ｙ−Ａ１００Ｚ」となる。
【００４９】
「プロ配列」又は「プロペプチド配列」は、プロテアーゼの分泌に必要とされる、シグ
ナルペプチド配列と成熟型プロテアーゼ配列の間のアミノ酸配列を指す。プロ配列又はプ
ロペプチド配列が切断されると、成熟型の活性プロテアーゼが生じる。
【００５０】
用語、「シグナル配列」又は「シグナルペプチド」は、成熟型若しくは前駆体形態のタ
ンパク質の分泌又は直接輸送に関与し得るアミノ酸残基の配列を指す。
【００５１】
シグナル配列は、典型的には、前駆体又は成熟タンパク質の配列に対してＮ末端に位置
する。このシグナル配列は、リーダー配列とも示され得る。このシグナル配列は、内在性
又は外来性であり得る。一つの代表的な外来性シグナル配列は、枯草菌（Bacillus subti
lis）スブチリシンのシグナル配列の最初の七個のアミノ酸残基を、バチルス・レンタス
（Bacillus lentus）のシグナル配列（ＡＴＣＣ  ２１５３６）の最初の七個以外の部分
に融合したものを含む。シグナル配列は、通常、成熟タンパク質には存在しない。シグナ
ル配列は、典型的には、タンパク質の輸送後にシグナルペプチダーゼによりタンパク質か
ら切断される。
【００５２】
用語、「ハイブリッドシグナル配列」は、配列の一部が、発現されることになる遺伝子
のシグナル配列に融合した発現宿主から得られる、配列を指す。合成配列を利用すること
ができる。
【００５３】
用語、タンパク質、ポリペプチド又はペプチドの「成熟型」形態は、シグナルペプチド
配列及びプロぺプチド配列を持たないタンパク質、ポリペプチド又はペプチドの機能的形
態を指す。
【００５４】
用語、タンパク質又はペプチドの「前駆体」形態は、タンパク質のアミノ又はカルボニ
ル末端に作用可能に連結したプロ配列を有する成熟型タンパク質を指す。この前駆体はま
た、プロ配列のアミノ末端に作用可能に連結した「シグナル」配列を有し得る。この前駆
体はまた、翻訳後の活性に関与する追加のポリヌクレオチドを有し得る（例えば、成熟型
タンパク質、ポリペプチド又はペプチドを残してそこから切断されるポリヌクレオチド）
。
【００５５】
アミノ酸配列又は核酸配列に関する用語、「野生型」は、そのアミノ酸配列又は核酸配
列がネイティブの又は自然発生の配列であることを示す。本明細書で使用するとき、用語
、「自然発生」は、自然に見られる（例えば、組み換え法又は化学的方法により操作され
ていない）任意のもの（例えば、タンパク質、アミノ酸又は核酸配列）を指す。本明細書
で使用するとき、用語、「非自然発生」は、自然には見られない任意のものを指す（例え
ば、実験室で作製された、組み換え又は化学合成された核酸）。
【００５６】
特定のアミノ酸配列中のアミノ酸残基は、参照アミノ酸配列の位置におけるアミノ酸残
基と対応させることにより番号付けされ得る。参照アミノ酸配列のアミノ酸残基の位置「
と対応する」又は「と対応している」又は「と対応した」位置にある所望のアミノ酸配列
のアミノ酸残基は、所望の配列のアミノ酸残基が、参照アミノ酸配列中のアミノ酸残基の
位置と等しい又は相同である位置に配置されていることを示す。当業者は、ポリペプチド
中の特定の残基位置が相同な参照配列の位置に対応するかどうかを判定することができる
。例えば、プロテアーゼ変異体は、既知の技術を用いて参照配列のもの（例えば、配列番
号２のＢＰＮ’配列）とアラインメントされ得る。参照配列中のアミノ酸残基の位置は、
所望の配列中のアミノ酸残基の番号付けに使用される。したがって、プロテアーゼ変異体
のアミノ酸残基は、参照配列の対応するアミノ酸残基位置の番号付けに従って番号付けさ
れ得る。例えば、配列番号２の参照配列中のアミノ酸残基は、所望のプロテアーゼ変異体
の各アミノ酸残基のアミノ酸残基位置番号付けを決定するために使用され得る。
【００５７】
本明細書で使用するとき、「相同性」は、配列類似性又は同一性を指し、同一性が好ま
しい。相同性は、当該技術分野において既知の標準技術を用いて判定され得る（例えば、
Ｓｍｉｔｈ  ａｎｄ  Ｗａｔｅｒｍａｎ，Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２［１
９８１］、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｗｕｎｓｃｈ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：
４４３［１９７０］；Ｐｅａｒｓｏｎ  ａｎｄ  Ｌｉｐｍａｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａ
ｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：２４４４［１９８８］、Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｇｅｎｅ
ｔｉｃｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  ＰａｃｋａｇｅにおけるＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳ
ＴＡ及びＴＦＡＳＴＡなどのソフトウェアプログラム（Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔ
ｅｒ  Ｇｒｏｕｐ（Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ））、並びにＤｅｖｅｒｅｕｘ  ｅｔ  ａｌ．
，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ  Ｒｅｓ．１２：３８７〜３９５［１９８４］を参照されたい）。
有用なアルゴリズムの一例は、ＰＩＬＥＵＰである。ＰＩＬＥＵＰは、ペアワイズアライ
ンメントのプログレッシブ法を用いて、一群の関連する配列から複数の配列のアラインメ
ントを行う。ＰＩＬＥＵＰは、アラインメントを行うのに使用されるクラスタリング関係
を示す系統樹をプロットすることもできる。ＰＩＬＥＵＰは、Ｆｅｎｇ及びＤｏｏｌｉｔ
ｔｌｅのプログレッシブアラインメントを単純化させて用いる（Ｆｅｎｇ  ａｎｄ  Ｄｏ
ｏｌｉｔｔｌｅ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｅｖｏｌ．３５：３５１〜３６０［１９８７］を参照され
たい）。この方法は、Ｈｉｇｇｉｎｓ及びＳｈａｒｐにより説明されるものと同様である
（Ｈｉｇｇｉｎｓ  ａｎｄ  Ｓｈａｒｐ，ＣＡＢＩＯＳ  ５：１５１〜１５３［１９８９
］を参照されたい）。有用なＰＩＬＥＵＰパラメーターとしては、３．００のデフォルト
ギャップ重みづけ（default gap weight）、０．１０のデフォルトギャップ伸長重みづけ
（default gap length weight）及び重みつき末端ギャップ（weighted end gaps）が挙げ
られる。有用なアルゴリズムの別の例は、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．により説明さ
れているＢＬＡＳＴアルゴリズムである（Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ
．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３〜４１０［１９９０］；及びＫａｒｌｉｎ  ａｎｄ  Ａｌｔ
ｓｃｈｕｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：５８７３〜５７８
７［１９９３］を参照されたい）。特に有用なＢＬＡＳＴプログラムはＷＵ−ＢＬＡＳＴ
−２プログラムである（Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈ．ＥｎＺｙｍｏｌ．
２６６：４６０〜４８０［１９９６］を参照されたい）。ＷＵ−ＢＬＡＳＴ−２は、複数
の検索パラメーターを使用し、これらのうちのほとんどはデフォルト値に設定される。調
製可能なパラメーターは以下の値に設定される：ｏｖｅｒｌａｐ  ｓｐａｎ＝１、ｏｖｅ
ｒｌａｐ  ｆｒａｃｔｉｏｎ＝０．１２５、ｗｏｒｄ  ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ（Ｔ）＝１１
。ＨＳＰ  Ｓ及びＨＳＰ  Ｓ２パラメーターは動的な値であり、特定の配列の構成及び、
所望の配列を検索する特定のデータベースの構成に依存してプログラム自体により確立さ
れる。しかしながら、これらの値は、感度を上昇させるように調整することができる。
【００５８】
対象ポリペプチド配列と参照ポリペプチド配列の間の配列同一性パーセント（配列同一
性％又は単に同一性％）は、対象アミノ酸配列が、例えば、アミノ酸配列比較アルゴリズ
ム又は目視点検により、これらの配列が最適にアラインメントされたときの比較長さにわ
たる参照ポリペプチド配列に対する特定の百分率の分だけ、アミノ酸残基同士の比較に基
づいて同一であることを意味する。対象核酸配列と参照核酸配列の間の配列同一性パーセ
ントは同様に、対象ヌクレオチド配列が、これらの配列が最適にアラインメントされたと
きの比較長さにわたる参照ヌクレオチドに対する特定の百分率の分だけ、核酸残基同士の
比較に基づいて同一であることを意味する。
【００５９】
参照配列と所望の対象配列の間の配列同一性パーセント（同一性パーセント又は配列同
一性％又は同一性％）は、当業者により容易に判定され得る。２つのポリペプチド配列が
共有する同一性パーセントは、例えば、類似性が最大限になるようそれぞれの配列の残基
のアラインメントを行い、当該技術分野において既知の配列比較アルゴリズムを用いるこ
とにより又は目視点検により配列間の同一のアミノ酸残基の数を判定することにより、各
配列中のアミノ酸残基を直接比較することによって、判定することができる。２つの最適
にアラインメントされたポリペプチド配列は比較長さにわたって比較することができ、両
方のポリペプチド鎖中に同一のアミノ酸残基が生じる最適アラインメントの位置の数を判
定することができ、これにより、一致した位置の数を提供することができ、次に、一致し
た位置の数は比較長さにわたって含まれる位置の合計数で除算される。得られた数に１０
０を乗じて、参照（又はクエリー）ポリペプチド配列に対する対象ポリペプチド配列の同
一性パーセントを得る。２つの核酸配列が共有する同一性パーセントは、最大限の類似性
に対してそれぞれの配列の残基のアラインメントを行い、配列比較アルゴリズムを用いる
ことにより又は目視点検により核酸配列間の同一の核酸残基の数を判定することにより、
核酸配列中のヌクレオチド残基を直接比較することによって、判定することができる。２
つ以上の配列間の同一性パーセントはまた、これらの配列が特定の同一性パーセントであ
るというように記載されてもよい。
【００６０】
配列同一性を判定するのに好適であるアルゴリズムの例は、ＢＬＡＳＴアルゴリズムで
ある（Ａｌｔｓｃｈｕｌ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２１５：４０３〜４
１０［１９９０］を参照されたい）。ＢＬＡＳＴ分析を行うためのソフトウェアは、米国
国立生物工学情報センター（National Center for Biotechnology Information）を通じ
て公に入手可能である。このアルゴリズムは、まず、データベース配列中の同じ長さのワ
ードとアラインメントを行ったときに一致するか又はある程度ポジティブであると評価さ
れた（positive-valued）閾値スコアＴを満たすかのいずれかである問い合わせ配列中の
長さＷの短いワードを同定することにより、高スコアの配列ペア（ＨＳＰ）を同定する。
これらの最初にヒットした隣接ワードは、これらを含有するより長いＨＳＰを見つけるた
めの開始点として働く。ワードのヒットは、累積アラインメントスコアが増加し得る限り
比較されている２つの配列の各々に沿って両方向に拡張される。ワードのヒットの拡張は
、次の場合に止まる：累積アラインメントスコアが最大達成値から量Ｘだけ減少する、累
積スコアがゼロ以下になる、又は、いずれかの配列の末端に到達する。ＢＬＡＳＴアルゴ
リズムパラメーターＷ、Ｔ及びＸは、感度及びアラインメントの速度を決定する。ＢＬＡ
ＳＴプログラムは、デフォルトとして、１１のワード長さ（Ｗ）、５０のＢＬＯＳＵＭ６
２スコアリングマトリックス（Ｈｅｎｉｋｏｆｆ  ａｎｄ  Ｈｅｎｉｋｏｆｆ，Ｐｒｏｃ
．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９：１０９１５［１９９２］を参照されたい
）アラインメント（Ｂ）、１０の期待値（expectation）（Ｅ）、Ｍ’５、Ｎ’−４及び
両方の鎖の比較を用いる。
【００６１】
次に、ＢＬＡＳＴアルゴリズムは、２つの配列間の類似性の統計分析を行う（例えば、
上記Ｋａｒｌｉｎ  ａｎｄ  Ａｌｔｓｃｈｕｌを参照されたい）。ＢＬＡＳＴアルゴリズ
ムにより提供される類似性の一つの尺度は、最小和確率（smallest sum probability）（
Ｐ（Ｎ））であり、これは、２つのヌクレオチド又はアミノ酸配列間の一致が偶然により
生じ得る確率の指標を提供する。例えば、プロテアーゼをコードする核酸に対する試験核
酸の比較において最小和確率が約０．１未満、より好ましくは約０．０１未満、最も好ま
しくは約０．００１未満である場合、核酸は、本発明のプロテアーゼをコードする核酸と
同様であると考えられる。試験核酸がプロテアーゼポリペプチドをコードする状況では、
比較が約０．５未満、より好ましくは約０．２未満の最小和確率をもたらす場合、試験核
酸は特定のプロテアーゼをコードする核酸と同様であると考えられる。
【００６２】
「最適アラインメント」又は「最適アラインメントを行った」は、最高の同一性パーセ
ントスコアを与える２つ（以上）の配列のアラインメントを指す。例えば、２つのポリペ
プチド配列の最適アラインメントは、各配列中の同一のアミノ酸残基の最大数が共にアラ
インメントされているように手動で配列のアラインメントを行うことにより、あるいは、
本明細書に記載の又は当該技術分野において既知の、ソフトウェアプログラム又は手順を
用いることにより、達成することができる。２つの核酸配列の最適アラインメントは、各
配列中の同一のヌクレオチド残基の最大数が共にアラインメントされているように手動で
配列のアラインメントを行うことにより、あるいは、本明細書に記載の又は当該技術分野
において既知の、ソフトウェアプログラム又は手順を用いることにより、達成することが
できる。
【００６３】
２つの配列（例えば、ポリペプチド配列）が、規定のアミノ酸置換マトリックス、ギャ
ップ存在ペナルティ（ギャップオープンペナルティとも呼ばれる）及びギャップ伸張ペナ
ルティなどの規定パラメーターを用い、このペアの配列について最高の同一性スコアが得
られるようアラインメントされた場合、「最適アラインメントが行われた」とみなされ得
る。ＢＬＯＳＵＭ６２スコアリングマトリックス（上記Ｈｅｎｉｋｏｆｆ  ａｎｄ  Ｈｅ
ｎｉｋｏｆｆを参照されたい）は、多くの場合、ポリペプチド配列アラインメントアルゴ
リズム（例えば、ＢＬＡＳＴＰ）においてデフォルトのスコアリング置換マトリックスと
して使用される。ギャップ存在ペナルティはアラインメントされた配列の１つにアミノ酸
ギャップが１つ導入された際に課せられ、ギャップ伸張ペナルティはギャップ中の各残基
位置に対して課される。用いられる代表的なアラインメントは以下のものである：ＢＬＯ
ＳＵＭ６２スコアリングマトリックス、ギャップ存在ペナルティ＝１１、及びギャップ伸
張ペナルティ＝１。アラインメントスコアは、アラインメントが開始及び終了する各配列
のアミノ酸位置により（例えば、アラインメントウィンドウ）、並びに、場合によっては
可能な限り最高の類似性スコアを達成するように一方若しくは両方の配列の中に１つ若し
くは複数のギャップを挿入することにより、決定される。
【００６４】
２つ以上の配列間の最適アラインメントは、目視点検により手動で、あるいは、コンピ
ュータ（例えば、アミノ酸配列に対するＢＬＡＳＴＰプログラム及び核酸に対するＢＬＡ
ＳＴＮプログラム（例えば、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉ
ｄｓ  Ｒｅｓ．２５（１７）：３３８９〜３４０２（１９９７）を参照されたい。米国国
立生物工学情報センター（ＮＣＢＩ）のウェブサイトも参照されたい。）又はＣＬＵＳＴ
ＡＬＷプログラムが挙げられるがこれらに限定されない）を使用することにより、判定す
ることができる。
【００６５】
所望のポリペプチドが参照ポリペプチドのアミノ酸配列に対して少なくとも約６０％、
７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、
９６％、９７％、９８％、９９％又は９９．５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含
む場合、所望のポリペプチドは参照ポリペプチドに対して「実質的に同一」であると言わ
れてもよい。２つのこのようなポリペプチドの間の同一性パーセントは、最適アラインメ
ントを行われた２つのポリペプチド配列の検査により手動で、又は、標準的なパラメータ
ーを用いるソフトウェアプログラム若しくはアルゴリズム（例えば、ＢＬＡＳＴ、ＡＬＩ
ＧＮ、ＣＬＵＳＴＡＬ）を使用することにより、判定することができる。２つのポリペプ
チドが実質的に同一であることの一指標は、第一ポリペプチドが第二ポリペプチドと免疫
交差反応性であることである。典型的には、保存的なアミノ酸置換により異なるポリペプ
チドは、免疫交叉反応性である。したがって、ポリペプチドは、例えば、２つのペプチド
が１つの保存的アミノ酸置換又は１つ以上の保存的アミノ酸置換のみで異なる場合、第二
ポリペプチドに対して実質的に同一である。
【００６６】
所望の核酸が参照核酸のヌクレオチド配列と少なくとも約６０％、７０％、７５％、８
０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９
８％、９９％又は９９．５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む場合、所望の
核酸は、参照核酸に対して「実質的に同一」であると言われてもよい。２つのこのような
核酸の間の同一性パーセントは、２つの最適アラインメントを行った核酸配列の検査によ
り手動で、又は、標準的なパラメーターを用いるソフトウェアプログラム若しくはアルゴ
リズム（例えば、ＢＬＡＳＴ、ＡＬＩＧＮ、ＣＬＵＳＴＡＬ）を使用することにより、判
定することができる。２つの核酸配列が実質的に同一であることの一指標は、２つの核酸
分子が厳密な条件下で（例えば、中度〜高度に厳密な範囲内で）互いにハイブリッド形成
することである。
【００６７】
本明細書で使用するとき、所望の特定成分に関する「単離された」は、成分が他の成分
を本質的に又は実質的に含まないことを意味する。例えば、「単離された」ポリペプチド
は、例えば、他のポリペプチド及び細胞成分が挙げられるがこれらに限定されない他の成
分を本質的に又は実質的に含まないことを意味する。「単離された」核酸は、核酸が、例
えば他の核酸又は細胞成分が挙げられるがこれらに限定されない他の成分を本質的に又は
実質的に含まないことを意味する。この用法の目的のために、「単離された」は、ライブ
ラリ（例えば、スクリーニングライブラリ）の一部ではない核酸又はポリペプチドを指す
。
【００６８】
純度及び均一性は、典型的には、ポリアクリルアミドゲル電気泳動又は高速液体クロマ
トグラフィーなどの分析化学技術を用いて判定される。調製液中に存在する主要なタンパ
ク質又は核酸が実質的に精製される。用語、「精製された」は、核酸又はタンパク質が、
電気泳動ゲル、クロマトグラフ溶出液、及び／又は密度勾配遠心分離にかけた媒質におい
て、本質的に１つのバンドを生じることを示す。具体的には、「精製された」は、単離さ
れた場合に、単離体が、単離体の少なくとも８５重量％、９０重量％、９１重量％、９２
重量％、９３重量％、９４重量％、９５重量％、９６重量％、９７重量％、９８重量％、
９９重量％、９９．５重量％又はそれ以上の核酸又はタンパク質を含有することを意味す
る。精製されたポリぺプチドは、例えば、実験室合成、クロマトグラフィー（例えば、高
速液体クロマトグラフィー）調製電気泳動、ポリアクリルアミドゲル電気泳動後に着色し
ながらの視覚化、遠心分離、沈殿、親和性精製などが挙げられるがこれらに限定されない
多くの方法により入手され得る（一般的には、Ｒ  Ｓｃｏｐｅｓ，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｕ
ｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎ．Ｙ．（１９８２），Ｄｅ
ｕｔｓｃｈｅｒ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  ＥｎＺｙｍｏｌ．，Ｖｏｌ．１８２：Ｇｕｉｄ
ｅ  ｔｏ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ
，Ｉｎｃ．Ｎ．Ｙ．（１９９０）を参照されたい）。本発明は、単離又は精製されたポリ
ペプチド（例えば、本発明の単離されたプロテアーゼ変異体又はスブチリシン変異体）及
び単離又は精製された核酸（例えば、本発明のプロテアーゼ変異体又はスブチリシン変異
体をコードする核酸）を含む。
【００６９】
関連する意味において、本発明は、本発明の１つ以上のポリペプチド（例えば、本発明
の１つ以上のプロテアーゼ変異体）又は本発明の１つ以上の核酸（例えば、本発明の１つ
以上のプロテアーゼ変異体をコードする１つ以上の核酸）などの本発明の１つ以上の分子
について組成物を濃縮する方法を提供する。組成物は、精製又は濃縮技術の適用後に分子
の濃度が実質的に増加するとき、分子について濃縮される。実質的に純粋なポリペプチド
又は核酸は、典型的には、特定の組成物中で全ての分子種の少なくとも約６０重量％、７
０重量％、８０重量％、８５重量％、９０重量％、９１重量％、９２重量％、９３重量％
、９４重量％、９５重量％、９６重量％、９７重量％、９８重量％、９９重量％、９９．
５重量％又はそれ以上を構成する。
【００７０】
本明細書で使用するとき、用語、「コンビナトリアル変異誘発」は、参照核酸配列の核
酸変異体のライブラリが作製される方法を指す。これらのライブラリでは、変異体は、予
め確定された変異セットから選択される１つ又は複数の変異を含有する。この方法はまた
、予め確定された変異セットのメンバーではないランダム変異を導入するための手段も提
供する。一部のこのような方法としては、米国特許第６，５８２，９１４号に記載のもの
が挙げられ、本明細書に参照により組み込まれる。一部のこのようなコンビナトリアル変
異誘発方法は、市販のキット（例えば、ＱＵＩＫＣＨＡＮＧＥ（登録商標）Ｍｕｌｔｉ  
Ｓｉｔｅ−Ｄｉｒｅｃｔｅｄ  Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ  Ｋｉｔ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ
））に実体化された方法を含む及び／又は包含する。
【００７１】
本明細書で使用するとき、プロテアーゼ変異体に関連して使用される「改善された特性
」を有するとは、プロテアーゼ変異体が参照又は親プロテアーゼと比較して改善された特
性を有することを指す。本発明のプロテアーゼ変異体は、以下の特性のうちの１つ以上を
呈し得る：向上した又は改善されたタンパク質分解活性、向上した又は改善された安定性
、向上した又は改善された表面若しくは物品のクリーニング性能、向上した又は改善され
たクリーニング性能、向上した又は改善された布地若しくは洗濯物クリーニング性能又は
洗浄性能、向上した又は改善された手洗い性能、向上した又は改善された手若しくは手動
での食器洗浄性能、向上した又は改善された自動食器洗浄性能、参照プロテアーゼ又は所
望の親プロテアーゼと比較して向上した又は改善された洗濯性能。
【００７２】
本明細書で使用するとき、用語、「機能アッセイ」は、タンパク質の活性の指標を提供
するアッセイである。この用語は、典型的には、タンパク質がその通常の能力で機能し得
るかについて解析されるアッセイシステムを指す。例えば、酵素の場合、機能アッセイは
、反応を触媒することにおける酵素の有効性を判定することを含む。
【００７３】
分子に関する文脈における用語、「特性」又はその文法的に等価な表現は、選択又は検
出され得る分子の任意の特徴若しくは特質を指し得る。例えば、ポリペプチドの文脈では
、特性は、酵素活性（例えば、タンパク質分解活性）、安定性又は他の特性であり得る。
【００７４】
「変異」核酸配列は、典型的には、宿主細胞の野生型配列に生じる少なくとも１つのコ
ドンにおける変異を有し、その結果、変異核酸配列の発現産物が、野生型タンパク質と比
較して改変されたアミノ酸配列を有するタンパク質になる、核酸配列を指す。発現産物は
、改変された機能的能力（例えば、向上した酵素活性）を有し得る。
【００７５】
本明細書で使用するとき、用語、「正味電荷」は、分子内に存在する全ての電荷の和と
して定義される。「正味電荷の変化」は、親タンパク質分子の正味電荷とは異なる正味電
荷を有するタンパク質変異体を得るために親タンパク質分子に対して生じさせることがで
きる（すなわち、この変異体は、親分子の正味電荷と同じではない正味電荷を有する）。
例えば、タンパク質の中性アミノ酸を負に帯電しているアミノ酸で置換すること、又は、
タンパク質の正に帯電しているアミノ酸を中性アミノ酸で置換することにより、非改変タ
ンパク質に対して−１の正味電荷が生じる。タンパク質の正に帯電したアミノ酸を負に帯
電したアミノ酸に置換することにより、非改変タンパク質に対して−２の正味電荷が生じ
る。タンパク質の中性アミノ酸を正に帯電しているアミノ酸で置換すること、又は、タン
パク質の負に帯電しているアミノ酸を中性アミノ酸で置換することにより、親タンパク質
に対して＋１の正味電荷が生じる。タンパク質の負に帯電したアミノ酸を正に帯電したア
ミノ酸に置換することにより、非改変タンパク質に対して＋２の正味電荷が生じる。親タ
ンパク質の正味電荷はまた、１つ以上の帯電したアミノ酸の欠失及び／又は挿入により変
えることができる。
【００７６】
ポリペプチドに関する用語、「熱的に安定」及び「熱安定」及び「熱安定性」は、その
ポリペプチドが例えば、高温への曝露を介するといった、熱のみにより引き起こされるそ
の活性における恒久的変化に対して耐性であることを示す。例えば、熱的に安定な酵素は
、その酵素が高温への曝露によるものなどの、熱のみにより引き起こされる、酵素活性の
恒久的な変化に対して耐性であることを意味する。典型的には、熱的に安定であるプロテ
アーゼは、例えば、少なくとも約６０分、１２０分、１８０分、２４０分、３００分など
といった所与の時間にわたって高温に曝露された後でも、そのタンパク質分解活性の少な
くとも約５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、
９６％、９７％、９８％又は９９％を保持することができる。
【００７７】
ポリペプチド又はプロテアーゼのクリーニング活性は、プロテアーゼにより達成される
クリーニング性能を指し得る。クリーニング活性は、対象、物品又は表面における様々な
酵素反応性のシミ（例えば、食品、植物、血液、インク、血液／ミルク／インク、ミルク
／油／色素、卵黄、ミルク、油、及び／又は卵タンパク質）のうちの１つ以上のクリーニ
ングについての様々なアッセイを使用することにより、判定され得る。ポリペプチド（例
えば、本発明のポリペプチド（プロテアーゼ変異体など）又は参照ポリペプチド（例えば
、参照プロテアーゼ））のクリーニング性能は、対象、物品又は表面にあるシミを標準的
な洗浄条件にかけ、様々なクロマトグラフィー、分光光度法又は他の定量的方法を用いる
ことによりシミが除去された程度を評価することによって、判定され得る。代表的なクリ
ーニングアッセイ及び方法は当該技術分野において既知である、例えば、国際公開第９９
／３４０１１号及び米国特許第６，６０５，４５８号に記載のものが挙げられるがこれら
に限定されず、これらの特許はどちらも参照により本明細書に組み込まれ、並びに、これ
らのクリーニングアッセイ及び方法は、下記に提供されるパートＩの実施例及びパートＩ
Ｉの実施例に含まれる。
【００７８】
用語、プロテアーゼ変異体又は参照プロテアーゼの「クリーニング有効量」は、特定の
クリーニング組成物において所望されるレベルの酵素活性を達成するプロテアーゼの量を
指す。このような有効量は、使用される具体的なプロテアーゼ、クリーニング用途、クリ
ーニング組成物の特定の組成、液体又は乾燥（例えば、顆粒、タブレット、バー）組成物
のいずれが必要とされるか、などのような多くの要因に基づき、当業者により容易に確か
められる。
【００７９】
用語、「クリーニング添加材料」は、クリーニング組成物中に含まれる本発明のプロテ
アーゼ変異体以外の任意の液体、固体、ガス状材料を指す。本発明のクリーニング組成物
は、１つ以上のクリーニング添加材料を含み得る。各クリーニング添加材料は、典型的に
は、クリーニング組成物の具体的な型及び形態（例えば、液体、顆粒、粉末、バー、ペー
スト、スプレー、タブレット、ゲル、フォーム又は他の組成）に基づいて選択される。好
ましくは、各クリーニング添加材料は、本組成物中で使用されるプロテアーゼ酵素と混合
可能である。
【００８０】
クリーニング活性の文脈における用語、「向上した性能」は、標準的な洗浄サイクル及
び／又は複数の洗浄サイクル後の通常の評価により判定されるような、卵、ミルク、植物
、インク、油及び／又は血液などの特定の酵素反応性シミにおける酵素による、上昇した
又はより大きなクリーニング活性を指す。
【００８１】
クリーニング活性の文脈における用語、「減少した性能」は、標準的な洗浄サイクル後
の通常の評価により判定されるような、卵、ミルク、植物又は血液などの特定の酵素反応
性シミにおける酵素による、低下した又はより小さなクリーニング活性を指す。
【００８２】
本明細書で使用するとき、用語、「施設用クリーニング組成物」は、学校、病院、工場
、商店、企業、ビル、レストラン、オフィス複合施設及びビル、加工及び／又は製造工場
、動物病院、ファクトリー農場、ファクトリー牧場が挙げられるがこれらに限定されない
施設における使用に好適な製品を指す。
【００８３】
本明細書で使用するとき、「布地ケア製品及びホームケア製品」は、それが販売されて
いる形態で使用又は消費されることが通常意図され、布地、硬質表面並びに布地ケア及び
ホームケアの領域内の任意の他の表面を処理するためのものである製品又はデバイスを指
し、例えば、エアフレッシュナー及び香料送達系などの空気ケア、自動車ケア、食器洗浄
、布地コンディショニング（柔軟化及び／又はフレッシュニング）、洗濯洗浄性、洗濯及
びすすぎ添加剤及び／又はケア、床及び便器クリーナーなどの硬質表面クリーニング及び
／又は処理、並びに消費者及び施設用途のための他のクリーニング製品が挙げられる。
【００８４】
本明細書で使用するとき、用語、「クリーニング組成物」及び「クリーニング配合物」
は、例えば、布地、洗濯、食器、食卓食器、コンタクトレンズ、他の固体基材、毛髪（ヒ
ト又は動物の毛髪を含む）（シャンプー）、皮膚（石鹸、化粧品及びクリーム）、歯（マ
ウスウォッシュ、練り歯磨き）、非布地及びホームケア対象物、フィルター、膜（例えば
、限外濾過膜が挙げられるがこれに限定されない濾過膜）、硬質表面、並びに、例えば、
机（机の上又は脚）、壁、別の家具物品又は対象、床、天井などの硬質表面が挙げられる
がこれらに限定されない他の表面、が挙げられるがこれらに限定されない、クリーニング
すべき物品から、望まれない化合物を除去するのに使用が見出される組成物を指す。クリ
ーニング組成物又はクリーニング配合物は、例えば、シャンプー（ヒト又は動物の毛髪の
クリーニング用）、石鹸、クリーム又は化粧品（皮膚クリーニング及び／又はスキンケア
用）、マウスウォッシュ（口腔ケア用）、練り歯磨き（歯クリーニング及び／又は口腔ケ
ア用）が挙げられるがこれらに限定されないパーソナルケア用途及び／又はパーソナルケ
ア物品に有用であり得る。これらの用語は、この組成物又は配合物が、組成物又は配合物
において使用されるプロテアーゼ及び／又は他の酵素と混合可能である限り、所望される
特定のタイプのクリーニング組成物又は配合物及び製品の形態（例えば、液体、ゲル、顆
粒又はスプレー組成物）について選択される任意の材料／化合物を包含する。クリーニン
グ組成物又は配合物材料の具体的な選択は、クリーニングすべき表面、対象又は物品（例
えば、布地）及び使用中のクリーニング条件のために所望される組成物又は配合物の形態
を考慮することにより、容易に行われる。一態様では、クリーニング組成物又は配合物は
、布地ケア製品及びホームケア製品（例えば、洗濯物をクリーニングするためのクリーニ
ング組成物）であり得る。別の態様では、クリーニング組成物又は配合物は、布地ケア製
品及びホームケア製品ではない（例えば、コンタクトレンズ、毛髪、歯又は皮膚をクリー
ニングするための、あるいは、パーソナルケア用途及び／又はパーソナルケア物品に有用
な、クリーニング組成物）。
【００８５】
クリーニング組成物及びクリーニング配合物は、任意の対象、物品及び／又は表面を、
クリーニング、漂白、消毒及び／又は殺菌するのに好適である任意の組成物を含む。この
ような組成物及び配合物としては、例えば、クリーニング又は洗剤組成物（例えば、液体
、タブレット、ゲル、バー、顆粒及び／又は固体の、洗濯物クリーニング又は洗剤組成物
、並びに微細布地洗剤組成物）、硬質表面クリーニング組成物及び配合物（例えば、ガラ
ス、木、セラミック及び金属の、カウンタートップ及び窓、カーペットクリーナー、オー
ブンクリーナー、布地フレッシュナー、布地柔軟剤）、並びに、繊維、洗濯促進クリーニ
ング又は洗剤組成物、洗濯時添加クリーニング組成物、及び洗濯シミ抜きクリーニング組
成物、食器洗浄組成物、例えば、手又は手動での食器洗浄組成物（例えば、「手」又は「
手動」食器洗浄洗剤）及び自動食器洗浄組成物（例えば、「自動食器洗浄洗剤」）が挙げ
られるが、これらに限定されない。
【００８６】
本明細書で使用するとき、特に示さない限り、クリーニング組成物又はクリーニング配
合物は、顆粒又は粉末形態の汎用又は強力洗浄剤、特にクリーニング洗剤、液体、顆粒、
ゲル、固体、タブレット又はペースト形態の汎用洗浄剤、特にいわゆる強力液体（ＨＤＬ
）洗剤又は強力粉末洗剤（ＨＤＤ）タイプ、液体微細布地洗剤、手又は手動の食器洗浄剤
（高発泡タイプのものなど）、手又は手動の食器洗浄、自動食器洗浄又は食卓食器若しく
は食卓用器具洗浄剤、例えば、家庭用途及び施設用途のための様々なタブレット、粉末、
固体、顆粒、液体、ゲル及びすすぎ補助タイプの剤、液体クリーニング及び消毒剤、例え
ば、抗菌手洗いタイプ、クリーニングバー、マウスウォッシュ、義歯クリーナー、自動車
用シャンプー、カーペットシャンプー、浴室クリーナー、パーソナルケア物品（例えば、
ヒト（及び他の動物）用毛髪シャンプー及び／又は毛髪リンス、シャワージェル及び発泡
入浴剤、スキンケア物品、化粧品、クリーム、浴用及びパーソナルのヒト向け石鹸）、金
属クリーナー、並びに、漂白添加剤及び「ステインスティック（stain-stick）」又は前
処理タイプなどのクリーニング補助剤を含む。一部の顆粒組成物は「コンパクト」形態で
あり、一部の液体組成物は「濃縮」形態である。
【００８７】
一態様では、本発明は、本発明の少なくとも１つのプロテアーゼ変異体又はポリペプチ
ドを含む、クリーニング組成物又は洗剤組成物を提供し、ここで、このクリーニング組成
物又は洗剤組成物は、コンタクトレンズのクリーニングに有用である。別の態様では、本
発明は、本発明の少なくとも１つのプロテアーゼ変異体又はポリペプチドを含む、クリー
ニング組成物又は洗剤組成物を提供し、ここで、このクリーニング組成物又は洗剤組成物
は、パーソナルケア用途に有用である。別の態様では、本発明は、本発明の少なくとも１
つのプロテアーゼ変異体又はポリペプチドを含む、クリーニング組成物又は洗剤組成物を
提供し、ここで、このクリーニング組成物又は洗剤組成物は、ヒトの毛髪及び／又は動物
の毛髪などの、毛髪のクリーニング又はすすぎに有用である（例えば、毛髪シャンプー及
び／又は毛髪リンス）。別の態様では、本発明は、本発明の少なくとも１つのプロテアー
ゼ変異体又はポリペプチドを含む、クリーニング組成物又は洗剤組成物を提供し、ここで
、このクリーニング組成物又は洗剤組成物は、皮膚（例えば、ヒト及び／又は動物の皮膚
）のクリーニング又は処理に有用である（例えば、シャワージェル、発泡入浴剤、スキン
ケアクリーナー、化粧品、クリーム及び／又は浴用石鹸）。別の態様では、本発明は、本
発明の少なくとも１つのプロテアーゼ変異体又はポリペプチドを含む、クリーニング組成
物又は洗剤組成物を提供し、ここで、このクリーニング組成物又は洗剤組成物は、歯及び
／若しくは義歯のクリーニングに、並びに／又は口腔ケアに、有用である。このようなク
リーニング組成物又は洗剤組成物は、少なくとも１つの添加剤成分又は担体、少なくとも
１つの追加酵素、少なくとも１つのビルダー、及び／又は少なくとも１つの界面活性剤を
含み得、並びに、これらの使用に適した形態で配合され得る。このようなクリーニング又
は洗剤組成物はリン酸塩を含有してもよく、あるいは、リン酸塩を含まなくてもよい。本
発明の組成物に関する更なる詳細は、本明細書において他箇所で提供される。
【００８８】
本明細書で使用するとき、「布地クリーニング組成物」は、洗濯添加組成物、並びに、
シミの付いた布地（例えば、衣類、リネン、及び他の織物材料）の浸漬及び／又は前処理
での使用に好適な組成物などの、手及び機械での洗濯洗剤組成物を含む。
【００８９】
本明細書で使用するとき、「非布地クリーニング組成物」は、例えば、手による又は手
動又は自動食器洗浄洗剤組成物、口腔クリーニング組成物、義歯クリーニング組成物及び
パーソナルクレンジング組成物が挙げられるがこれらに限定されない非繊維（すなわち、
非布地）表面クリーニング組成物を含む。
【００９０】
本明細書で使用するとき、用語、「洗剤組成物」又は「洗剤配合物」は、特定の布地及
び／又は非布地対象又は物品などの、汚れた若しくは汚い対象のクリーニングのために洗
浄媒質中で使用することを意図された組成物に関して、使用される。本発明のこのような
組成物は、任意の特定の洗剤組成物又は配合物に限定されない。実際、本発明の洗剤は、
本発明のプロテアーゼ変異体を少なくとも１つ含み得、加えて、１つ以上の界面活性剤、
トランスフェラーゼ、加水分解酵素、ペルヒドロラーゼ、オキシドレダクターゼ、ビルダ
ー（例えば、ビルダー塩）、漂白剤、漂白活性剤、青味剤、蛍光染料、凝固阻害剤、マス
キング剤、酵素活性剤、抗酸化剤及び／又は安定化剤を含み得る。場合によっては、ビル
ダー塩は、シリケート塩とホスフェート塩の混合物であり、好ましくはケイ酸塩（例えば
、メタケイ酸ナトリウム）がリン酸塩（例えば、トリポリリン酸ナトリウム）よりも多い
。クリーニング組成物又は洗剤組成物が挙げられるがこれらに限定されない本発明の一部
の組成物は、リン酸塩（例えば、リン酸塩又はリン酸塩ビルダー）を全く含有しない。
【００９１】
本明細書で使用するとき、「食器洗浄組成物」は、カトラリーなどの食卓食器をクリー
ニングするためのすべての形態の組成物を指し、顆粒及び液体形態が挙げられるがこれら
に限定されない。一部の態様では、食器洗浄組成物は、自動食器洗浄機において使用を見
出される「自動食器洗浄」組成物である。本発明が任意の特定のタイプの食卓食器組成物
に限定されることは意図されない。実際、本発明は、セラミックス、プラスチック、金属
、陶器、ガラス、アクリルなどが挙げられるがこれらに限定されない任意の材料の食卓食
器（例えば、皿、コップ、グラス、ボウルなどが挙げられるがこれらに限定されない食器
）及びカトラリー（例えば、スプーン、ナイフ、フォーク、給仕用器具などが挙げられる
がこれらに限定され得ない器具）のクリーニングにおいて使用を見出される。用語、「食
卓食器」は、本明細書では食器及びカトラリーの両方に関して使用される。
【００９２】
本明細書で使用するとき、用語、「漂白」は、十分な長さの時間にわたって及び／又は
適切なｐＨで及び／又は増白をもたらす（すなわち、白くする）温度条件で、材料（例え
ば、布地、洗濯物、パルプなど）又は表面を処理すること、並びに／あるいは、材料をク
リーニングすることを指す。漂白に好適な化学物質の例としては、例えば、ＣｌＯ２、Ｈ
２Ｏ２、過酸、ＮＯ２などが挙げられるが、これらに限定されない。
【００９３】
本明細書で使用するとき、プロテアーゼ（例えば、本発明のプロテアーゼ変異体）の「
洗浄性能」は、組成物にプロテアーゼ変異体を添加しない洗剤と比較して洗剤に追加のク
リーニング性能をもたらす、洗浄に対するプロテアーゼ変異体の寄与を指す。洗浄性能は
、関連する洗浄条件下で比較される。一部の試験システムでは、洗剤組成、泡濃度、水硬
度、洗浄機構、時間、ｐＨ及び／又は温度などの他の関連する要因は、特定の市場区分（
例えば、手による又は手動食器洗浄、自動食器洗浄、食卓食器クリーニング、食卓用器具
クリーニング、布地クリーニングなど）における家庭向け用途に典型的な条件を模倣する
ようなやり方で制御することができる。
【００９４】
用語、「関連する洗浄条件」は、本明細書では、特に洗浄温度、時間、洗浄機構、泡濃
度、洗剤のタイプ及び水硬度といった、手による食器洗浄、自動食器洗浄又は洗濯洗剤市
場区分において実際に家庭で使用される条件を示すために使用される。
【００９５】
用語、「改善された洗浄性能」は、関連する洗浄条件下でシミ除去においてより良好な
仕上がりが得られることを示すために、あるいは、対応する野生型又は出発親プロテアー
ゼと比較して同じ仕上がりを得るために必要とされるプロテアーゼ変異体が重量に基づい
てより少量であることを示すために、使用される。
【００９６】
本明細書で使用するとき、用語、「消毒」は、汚染物質を表面から除去すること、並び
に、物品の表面上の細菌を阻害又は殺すことを指す。本発明は、任意の特定の表面、物品
又は、除去されるべき汚染物質若しくは細菌に限定されることを意図しない。
【００９７】
本明細書のクリーニング組成物の「コンパクト」形態は、密度により最も反映され、組
成の点では、無機充填剤塩の量により最もよく反映される。無機充填剤塩は、粉末形態の
洗剤組成物の従来成分である。従来の洗剤組成物では、充填剤塩は、典型的には組成物全
体の約１７〜約３５重量％の実質量で存在する。対照的に、コンパクト組成物では、充填
剤塩は、組成物全体の約１５％を超えない量で存在する。充填剤塩は、組成物の約１０重
量％又はより好ましくは約５重量％を超えない量で存在し得る。無機充填剤塩は、硫酸塩
及び塩化物のアルカリ及びアルカリ土類金属塩から選択することができる。この充填剤塩
は、硫酸ナトリウムであってもよい。
【００９８】
所与のアミノ酸配列中のアミノ酸残基の位置は、典型的には、配列番号２に示されるバ
チルス・アミロリケファシエンス（B. amyloliquefaciens）スブチリシンＢＰＮ’アミノ
酸配列の対応するアミノ酸残基の位置の番号付けを用いて、番号付けされる。したがって
、配列番号２のバチルス・アミロリケファシエンス（B. amyloliquefaciens）スブチリシ
ンＢＰＮ’アミノ酸配列は、参照配列として機能する。本明細書に記載のプロテアーゼ変
異体のアミノ酸配列などの所与のアミノ酸配列は、本明細書に記載のようにアラインメン
トアルゴリズムを用いてＢＰＮ’配列（配列番号２）とアラインメントを行うことができ
、ＢＰＮ’配列中のアミノ酸残基とアラインメントする（好ましくは最適にアライメント
する）所与のアミノ酸配列中のアミノ酸残基は、スブチリシンＢＰＮ’配列中の対応する
アミノ酸残基を参照することにより、便宜上番号付けすることができる。
【００９９】
一般に、本明細書で使用される命名法、並びに、下記の細胞培養、分子遺伝学、分子生
物学、核酸化学及びタンパク質化学における実験室手順の多くは周知であり、当業者によ
り一般的に採用されている。組み換え核酸の製造及び操作方法、核酸合成方法、細胞培養
方法及び導入遺伝子組み込み（例えば、トランスフェクション、電気穿孔）方法は、当業
者に既知であり、数多くの標準テキストに記載されている。オリゴヌクレオチドの合成及
び精製工程は、典型的には、仕様に従って実行される。技術及び手順は、一般に、当該技
術分野で周知の従来方法に従って、並びに、この文書全体にわたって提供される様々な一
般的参照文献に従って、実行される。文献中の手順は、当業者に周知であると考えられ、
読み手の便宜のために提供される。
【０１００】
本発明の１つ以上のプロテアーゼ変異体などのプロテアーゼ（プロテアーゼ変異体を含
む）、並びに、香料を含む封入体、色調剤、両親媒性クリーニングポリマー及びこれらの
混合物からなる群から選択される物質を含んでもよく、上記組成物の任意の態様の残部が
１つ以上の添加剤物質からなる布地ケア製品及びホームケア製品が開示される。上記布地
ケア製品及びホームケア製品の一態様では、上記布地ケア製品及びホームケア製品は、布
地ケア製品及びホームケア製品の総重量に基づいて、約０．００５重量パーセント（０．
０００５重量％）〜約０．１重量％、約０．００１重量％〜約０．０５重量％、又は更に
は約０．００２重量％〜約０．０３重量％の上記プロテアーゼを含んでもよい。上記布地
ケア製品及びホームケア製品の一態様では、上記布地ケア製品及びホームケア製品は、布
地ケア製品及びホームケア製品の総重量に基づいて、約０．００００３重量％〜約０．１
重量％、約０．００００８重量％〜約０．０５重量％、又は更には約０．０００１重量％
〜約０．０４重量％の布地色調剤を含んでもよい。上記布地ケア製品及びホームケア製品
の一態様では、上記布地ケア製品及びホームケア製品は、布地ケア製品及びホームケア製
品の総重量に基づいて、約０．００１重量％〜約５重量％、約０．０１重量％〜約２重量
％、又は更には約０．０３重量％〜約０．５重量％の香料カプセルを含んでもよい。上記
布地ケア製品及びホームケア製品の一態様では、上記布地ケア製品及びホームケア製品は
、布地ケア製品及びホームケア製品の総重量に基づいて、約０．１重量％〜約５重量％、
約０．２５重量％〜約２．５重量％、又は更には約０．３重量％〜約１．５重量％の両親
媒性クリーニングポリマーを含んでもよい。
【０１０１】
本発明のポリぺプチド
本発明は、新規ポリペプチドを提供し、これは「本発明のポリペプチド」と集合的に呼
ばれ得る。本発明のポリぺプチドは、単離された、組み換え体である、実質的に純粋な又
は非自然発生型のプロテアーゼ変異体を含み、例えば、スブチリシンプロテアーゼ変異体
ポリペプチドが挙げられ、これは酵素活性（例えば、タンパク質分解活性）及び／又は本
明細書の他箇所でより詳細に説明されている追加の特性（例えば、クリーニング活性、安
定性など）を有する。本発明のポリペプチドは、単離された、組み換え体である、実質的
に純粋な又は自然発生した冷水プロテアーゼを含み、タンパク質分解活性、クリーニング
活性、安定性、本明細書の他箇所で説明されている他の特性を有する。冷水プロテアーゼ
などの本発明のこのようなポリペプチドは、既知のプロテアーゼと比較して向上した性能
（例えば、向上したタンパク質分解活性、向上したクリーニング性能又は活性、向上した
安定性など）を有し得る。本発明のポリぺプチドは、クリーニング用途に有用であり、ク
リーニングする必要のある（例えば、物品の表面の）物品又は表面をクリーニングする方
法において有用であるクリーニング組成物中に組み込まれ得る。タンパク質分解活性を有
する本発明のポリぺプチドは、例えば、布地ケアクリーニング組成物及びホームケアクリ
ーニング組成物などの布地ケア製品及びホームケア製品で有用である。タンパク質活性を
有する本発明の一部のポリペプチドは、パーソナルケア組成物で有用である。タンパク質
活性を有する本発明のポリぺプチドはまた、非布地ケア製品及び非ホームケア製品で有用
である（すなわち、布地ケア製品でもホームケア製品でもない製品が本明細書に記載され
る）。本発明のプロテアーゼ変異体は、スブチリシンプロテアーゼ変異体であり得る。本
発明は、バチルス種プロテアーゼ変異体及びバチルス種スブチリシンプロテアーゼ変異体
を含む。
【０１０２】
本発明のポリぺプチドは、本明細書全体にわたって開示され、これには下記に提供され
るパートＩ実施例及びパートＩＩ実施例が挙げられるがこれらに限定されない。本発明は
、タンパク質分解活性を有する単離された、組み換え体である、実質的に純粋な又は非自
然発生型のプロテアーゼ変異体（例えば、スブチリシン変異体）を含み、このポリペプチ
ドは、下記のパートＩ及びパートＩＩ実施例のいずれかに記載の特定のプロテアーゼ変異
体のアミノ酸配列に対して少なくとも約６０％、７０％、８０％、８５％、８６％、８７
％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７
％、９８％、９９％、９９．５％又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む
。一態様では、本発明は、タンパク質分解活性を有する単離された、組み換え体である、
実質的に純粋な又は非自然発生型のスブチリシンポリペプチドを含み、このポリペプチド
は、配列番号２のＢＰＮ’配列のプロテアーゼ変異体であり、上記ポリペプチドは、配列
番号２に対して少なくとも約６０％、７０％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％
、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８
％の配列同一性及びパートＩ実施例のいずれかに記載のアミノ酸置換の組を有するアミノ
酸配列を含む。一態様では、本発明は、タンパク質分解活性を有する単離された、組み換
え体である、実質的に純粋な又は非自然発生型のスブチリシンポリペプチドを含み、この
ポリペプチドは、配列番号７５５のＧＧ３６配列のプロテアーゼ変異体であり、上記ポリ
ペプチドは、配列番号７５５に対して少なくとも約６０％、７０％、８０％、８５％、８
６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９
６％、９７％又は９８％の配列同一性及びパートＩＩ実施例のいずれかに記載のアミノ酸
置換の組を有するアミノ酸配列を含む。
【０１０３】
第一態様では、本発明は、親プロテアーゼ酵素の単離された又は非自然発生型のポリペ
プチドプロテアーゼ変異体を提供し、この変異体はタンパク質分解活性を有し、位置２４
、５３、７８、９７、１０１、１２８及び２１７からなる群から選択される配列番号２の
アミノ酸位置に対応する１つ以上のアミノ酸位置において変異を含むアミノ酸配列を含み
、ここで、変異の少なくとも１つは独立して、（ｉ）この位置を占めるアミノ酸残基の上
流又は下流における１つ以上のアミノ酸残基の挿入、（ｉｉ）この位置を占めるアミノ酸
残基の欠失、又は（ｉｉｉ）異なるアミノ酸残基による、この位置を占めるアミノ酸残基
の置換、であり、ここで、各アミノ酸位置は、配列番号２のアミノ酸配列と変異体のアミ
ノ酸配列とのアラインメントによって決定される配列番号２に記載のバチルス・アミロリ
ケファシエンス（Bacillus amyloliquefaciens）スブチリシンプロテアーゼＢＰＮ’のア
ミノ酸配列におけるアミノ酸位置に対応させることにより番号付けされる。本発明の第一
態様によるプロテアーゼ酵素の変異体は、プロテアーゼ変異体と呼ばれ得る。本発明の第
一態様による変異体は、非自然発生型プロテアーゼであり得る。本発明の第一態様による
変異体は、単離又は精製され得る。本発明の第一態様による変異体は、スブチリシン変異
体であり得る。本発明の第一態様による変異体は、タンパク質分解活性を有し得る。本発
明の第一態様による変異体は、配列番号２に記載のＢＰＮ’アミノ酸配列のタンパク質分
解活性と比較して向上したタンパク質分解活性を有し得る。
【０１０４】
本発明の第一態様による変異体は、スブチリシンプロテアーゼである親プロテアーゼの
変異体であり得、スブチリシンプロテアーゼは、バチルス種プロテアーゼであり得る。本
発明の第一態様による親バチルスプロテアーゼは、バチルス・アミロリケファシエンス（
B. amyloliquefaciens）スブチリシンプロテアーゼＢＰＮ’（配列番号２）、バチルス・
ステアロサーモフィラス（B. stearothermophilus）、枯草菌（B. subtilis）、バチルス
・リケニホルミス（B. licheniformis）、バチルス・レンタス（B. lentus）、バチルス
・ブレビス（B. brevis）、バチルス・ステアロサーモフィラス（B. stearothermophilus
）、バチルス・アルカロフィラス（B. alkalophilus）、バチルス・アミロリケファシエ
ンス（B. amyloliquefaciens）、バチルス・クラウジイ（B. clausii）、バチルス・ハロ
デュランス（B. halodurans）、バチルス・メガテリウム（B. megaterium）、バチルス・
コアグランス（B. coagulans）、バチルス・サーキュランス（B. circulans）、バチルス
・ロータス（B. lautus）、Ｂ．ｓｐｅｃｉｅｓ  ＴＳ−２３、バチルス・チューリンゲ
ンシス（B. thuringiensis）、ＢＰＮ’−ｖ３（配列番号４）及びＢＰＮ’−ｖ３６（配
列番号６）からなる群から選択され得る。本発明の第一態様による親プロテアーゼは、配
列番号２、配列番号４又は配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも６０％、７０％
、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％
、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得る。
【０１０５】
本発明の第一態様による変異体は、成熟型を有するプロテアーゼ変異体であり得る。本
発明の第一態様による変異体は、成熟型を有するプロテアーゼ変異体であり得る。
【０１０６】
本発明の第一態様による変異体は、位置２４、５３、７８、９７、１０１、１２８及び
２１７からなる群から選択される２つのアミノ酸位置における変異を含むアミノ酸配列を
含み得る。本発明の第一態様による変異体は、位置２４、５３、７８、９７、１０１、１
２８及び２１７からなる群から選択される３つのアミノ酸位置における変異を含むアミノ
酸配列を含み得る。本発明の第一態様による変異体は、位置２４、５３、７８、９７、１
０１、１２８及び２１７からなる群から選択される４つのアミノ酸位置における変異を含
むアミノ酸配列を含み得る。本発明の第一態様による変異体は、位置２４、５３、７８、
９７、１０１、１２８及び２１７からなる群から選択される５つのアミノ酸位置における
変異を含むアミノ酸配列を含み得る。本発明の第一態様による変異体は、位置２４、５３
、７８、９７、１０１、１２８及び２１７からなる群から選択される６つのアミノ酸位置
における変異を含むアミノ酸配列を含み得る。本発明の第一態様による変異体は、位置２
４、５３、７８、９７、１０１、１２８及び２１７からなる群から選択される配列番号２
の位置に対応するアミノ酸位置のそれぞれにおける変異を含むアミノ酸配列を含み得る。
本発明の第一態様による変異は、位置２４、５３、７８、９７、１０１、１２８及び２１
７からなる群から選択される位置における異なるアミノ酸残基によるアミノ酸残基の置換
を含むアミノ酸配列を含み得る。
【０１０７】
本発明の第一態様による変異は、位置２４、５３、７８、９７、１０１、１２８及び２
１７からなる群から選択される２つ又は３つの位置のそれぞれにおける異なるアミノ酸残
基によるアミノ酸残基の置換を含むアミノ酸配列を含み得る。本発明の第一態様による変
異は、位置２４、５３、７８、９７、１０１、１２８及び２１７からなる群から選択され
る４つの位置のそれぞれにおける異なるアミノ酸残基によるアミノ酸残基の置換を含むア
ミノ酸配列を含み得る。本発明の第一態様による変異は、位置２４、５３、７８、９７、
１０１、１２８及び２１７からなる群から選択される５つの位置のそれぞれにおける異な
るアミノ酸残基によるアミノ酸残基の置換を含むアミノ酸配列を含み得る。本発明の第一
態様による変異は、位置２４、５３、７８、９７、１０１、１２８及び２１７からなる群
から選択される６つ又は７つの位置のそれぞれにおける異なるアミノ酸残基によるアミノ
酸残基の置換を含むアミノ酸配列を含み得る。本発明の第一態様による変異体は、位置２
４、５３、７８、１０１、１２８及び２１７のそれぞれにおける異なるアミノ酸残基によ
るアミノ酸残基の置換を含むアミノ酸配列を含み得、ここで、各位置は配列番号２におけ
る位置と対応させることにより番号付けされる。
【０１０８】
本発明の第一態様による変異体は、Ｘ０２４Ｇ／Ｒ、Ｘ０５３Ｇ，Ｘ０７８Ｎ，Ｘ０９
７Ａ，Ｘ１０１Ｎ，Ｘ１２８Ａ／Ｓ及びＸ２１７Ｑ／Ｌからなる群から選択される少なく
とも１つのアミノ酸置換を含むアミノ酸配列を含み得る。本発明の第一態様による変異体
は、Ｘ０２４Ｇ／Ｒ、Ｘ０５３Ｇ，Ｘ０７８Ｎ，Ｘ０９７Ａ，Ｘ１０１Ｎ，Ｘ１２８Ａ／
Ｓ及びＸ２１７Ｑ／Ｌからなる群から選択される少なくとも２つのアミノ酸置換を含むア
ミノ酸配列を含み得る。本発明の第一態様による変異体は、Ｘ０２４Ｇ／Ｒ、Ｘ０５３Ｇ
，Ｘ０７８Ｎ，Ｘ０９７Ａ，Ｘ１０１Ｎ，Ｘ１２８Ａ／Ｓ及びＸ２１７Ｑ／Ｌからなる群
から選択される少なくとも３つのアミノ酸置換を含むアミノ酸配列を含み得る。本発明の
第一態様による変異体は、Ｘ０２４Ｇ／Ｒ、Ｘ０５３Ｇ，Ｘ０７８Ｎ，Ｘ０９７Ａ，Ｘ１
０１Ｎ，Ｘ１２８Ａ／Ｓ及びＸ２１７Ｑ／Ｌからなる群から選択される少なくとも４つの
アミノ酸置換を含むアミノ酸配列を含み得る。本発明の第一態様による変異体は、Ｘ０２
４Ｇ／Ｒ、Ｘ０５３Ｇ，Ｘ０７８Ｎ，Ｘ０９７Ａ，Ｘ１０１Ｎ，Ｘ１２８Ａ／Ｓ及びＸ２
１７Ｑ／Ｌからなる群から選択される少なくとも５つのアミノ酸置換を含むアミノ酸配列
を含み得る。本発明の第一態様による変異体は、Ｘ０２４Ｇ／Ｒ、Ｘ０５３Ｇ，Ｘ０７８
Ｎ，Ｘ０９７Ａ，Ｘ１０１Ｎ，Ｘ１２８Ａ／Ｓ及びＸ２１７Ｑ／Ｌからなる群から選択さ
れる少なくとも６つのアミノ酸置換を含むアミノ酸配列を含み得る。本発明の第一態様に
よる変異体は、（ａ）Ｘ１２８Ａ／Ｓ及び／又はＸ２１７Ｌ／Ｑ、（ｂ）Ｇ１２８Ａ／Ｓ
及び／又はＹ２１７Ｌ／Ｑ、並びに（ｃ）Ｇ０９７Ａ，Ｇ１２８Ａ／Ｓ及び／又はＹ２１
７Ｌ／Ｑからなる群から選択される置換の組を含むアミノ酸配列を含み得る。本発明の第
一態様による変異体は、アミノ酸置換Ｘ０２４Ｇ／Ｒ＋Ｘ０５３Ｇ＋Ｘ０７８Ｎ＋Ｘ１０
１Ｎ＋Ｘ１２８Ａ／Ｓ＋Ｘ２１７Ｑ／Ｌを含むアミノ酸配列を含み得、ここで、この変異
体はタンパク質分解活性を有し、選択的にこの変異体は、配列番号２、配列番号４又は配
列番号６に記載のプロテアーゼと比較して向上したタンパク質分解活性又は向上したクリ
ーニング活性を有し、あるいは、配列番号２、配列番号４又は配列番号６に記載のプロテ
アーゼのものを超えるタンパク質分解アッセイ（例えば、ＡＡＰＦアッセイ）又はクリー
ニングアッセイ（例えば、ＢＭＩ、植物又は卵の微小標本（microswatch）アッセイ）の
性能指数を有する。
【０１０９】
本発明の第一態様による変異体は、Ｓ０２４Ｇ，Ｓ０５３Ｇ，Ｓ０７８Ｎ，Ｓ１０１Ｎ
，Ｇ１２８Ａ／Ｓ及びＹ２１７Ｑからなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸置
換を含み得る。本発明の第一態様による変異体は、アミノ酸置換Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ
＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２１７Ｑを含むアミノ酸配列を含み得る。
【０１１０】
本発明の第一態様による変異体は、配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも６０
％、６５％、７０％、８０％又は８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得る。
本発明の第一態様による変異体は、配列番号２に対して少なくとも９０％の配列同一性を
有するアミノ酸配列を含み得る。本発明の第一態様による変異体は、配列番号２に対して
少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９
％の同一性を有するアミノ酸配列を含み得る。本発明の第一態様による変異体は、配列番
号２に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得る。
【０１１１】
本発明の第一態様による変異体は、配列番号２に記載のプロテアーゼのタンパク質分解
活性と比較して向上したタンパク質分解活性を有し得る。本発明の第一態様による変異体
は、配列番号４に記載のプロテアーゼのタンパク質分解活性と比較して向上したタンパク
質分解活性を有し得る。本発明の第一態様による変異体は、配列番号６に記載のプロテア
ーゼのタンパク質分解活性と比較して向上したタンパク質分解活性を有し得る。本発明の
第一態様による変異体は、配列番号２、配列番号４又は配列番号６に記載のプロテアーゼ
のクリーニング活性と比較して向上したクリーニング活性を有し得る。本発明の第一態様
による変異体は、配列番号２、配列番号４又は配列番号６に記載のプロテアーゼのものを
超える、タンパク質分解活性（例えば、ＡＡＰＦアッセイ）又はクリーニングアッセイ（
例えば、ＢＭＩ、植物又は卵の微小標本アッセイ）における性能指数を有し得る。
【０１１２】
第二態様では、本発明は、親プロテアーゼの単離された又は非自然発生のポリペプチド
プロテアーゼ変異体を提供し、この変異体は、Ｘ０２４Ｇ／Ｒ、Ｘ０５３Ｇ，Ｘ０７８Ｎ
，Ｘ１０１Ｎ，Ｘ１２８Ａ／Ｓ及びＸ２１７Ｌ／Ｑからなる群から選択される３つのアミ
ノ酸置換を含むアミノ酸配列を含み、ここで、この変異体はタンパク質分解活性を有し、
この変異体の各アミノ酸位置は、配列番号２のアミノ酸配列と変異体のアミノ酸配列との
アラインメントによって決定される配列番号２のアミノ酸配列におけるアミノ酸位置に対
応させることにより番号付けされる。本発明の第一態様による変異体は、配列番号２、配
列番号４又は配列番号６に記載のプロテアーゼと比較して向上したタンパク質分解活性又
は向上したクリーニング活性を有し得る。本発明の第一態様による変異体は、配列番号２
、配列番号４又は配列番号６に記載のプロテアーゼのものを超える、タンパク質分解活性
（例えば、ＡＡＰＦアッセイ）又はクリーニングアッセイ（例えば、ＢＭＩ、植物又は卵
の微小標本アッセイ）における性能指数を有し得る。
【０１１３】
本発明の第二態様による変異体は、Ｘ０２４Ｇ／Ｒ、Ｘ０５３Ｇ，Ｘ０７８Ｎ，Ｘ１０
１Ｎ，Ｘ１２８Ａ／Ｓ及びＸ２１７Ｌ／Ｑからなる群から選択される３つのアミノ酸置換
を含むアミノ酸配列を含み、ここで、この変異体はタンパク質分解活性を有し、この変異
体の各アミノ酸位置は、配列番号２のアミノ酸配列と変異体のアミノ酸配列とのアライン
メントによって決定される配列番号２のアミノ酸配列におけるアミノ酸位置に対応させる
ことにより番号付けされる。本発明の第二態様による変異体は、Ｘ０２４Ｇ／Ｒ、Ｘ０５
３Ｇ，Ｘ０７８Ｎ，Ｘ１０１Ｎ，Ｘ１２８Ａ／Ｓ及びＸ２１７Ｌ／Ｑからなる群から選択
される少なくとも４つのアミノ酸置換を含むアミノ酸配列を含み得る。本発明の第二態様
による変異体は、Ｘ０２４Ｇ／Ｒ、Ｘ０５３Ｇ，Ｘ０７８Ｎ，Ｘ１０１Ｎ，Ｘ１２８Ａ／
Ｓ及びＸ２１７Ｌ／Ｑからなる群から選択される少なくとも５つのアミノ酸置換を含むア
ミノ酸配列を含み得る。本発明の第二態様による変異体は、Ｘ０２４Ｇ／Ｒ、Ｘ０５３Ｇ
，Ｘ０７８Ｎ，Ｘ１０１Ｎ，Ｘ１２８Ａ／Ｓ及びＸ２１７Ｌ／Ｑからなる群から選択され
る少なくとも６つのアミノ酸置換を含むアミノ酸配列を含み得る。本発明の第二態様によ
る変異体は、アミノ酸置換Ｘ０９７Ａを更に含むアミノ酸配列を含み得る。本発明の第二
態様による変異体は、アミノ酸置換Ｘ０２４Ｇ／Ｒ＋Ｘ０５３Ｇ＋Ｘ０７８Ｎ＋Ｘ１０１
Ｎ＋Ｘ１２８Ａ／Ｓ＋Ｘ２１７Ｌ／Ｑ又はＸ０９７Ａ＋Ｘ１２８Ａ／Ｓ＋Ｘ２１７Ｌ／Ｑ
を含むアミノ酸配列を含み得る。
【０１１４】
本発明の第二態様による変異体は、アミノ酸置換Ｓ０２４Ｇ／Ｒ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７
８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ／Ｓ＋Ｙ２１７Ｌ／Ｑ又はＧ０９７Ａ＋Ｇ１２８Ａ／Ｓ＋
Ｙ２１７Ｌ／Ｑを含むアミノ酸配列を含み得る。本発明の第二態様による変異体は、アミ
ノ酸置換Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ｓ＋Ｙ２１７Ｑ又
はＳ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２１７Ｑを含むア
ミノ酸配列を含み得る。
【０１１５】
本発明の第二態様による変異体のアミノ酸配列は、置換Ｎ１０９Ｇを更に含み得る。本
発明の第二態様による変異体のアミノ酸配列は、置換Ｎ０７６Ｄを更に含み得る。本発明
の第二態様による変異体のアミノ酸配列は、置換Ｓ０３３Ｔを更に含み得る。本発明の第
二態様による変異体のアミノ酸配列は、置換Ｎ２４３Ｖを更に含み得る。本発明の第二態
様による変異体のアミノ酸配列は、置換Ｓ２４８Ａを更に含み得る。本発明の第二態様に
よる変異体のアミノ酸配列は、置換Ａ０８８Ｔを更に含み得る。本発明の第二態様による
変異体のアミノ酸配列は、置換Ｓ０６３Ｇを更に含み得る。本発明の第二態様による変異
体のアミノ酸配列は、Ｎ１０９Ｇ，Ｎ０７６Ｄ，Ｓ０３３Ｔ，Ｎ２４３Ｖ，Ｓ２４８Ａ，
Ａ０８８Ｔ，及びＳ０６３Ｇからなる群から選択される２つ以上の置換を更に含み得る。
【０１１６】
本発明の第二態様による変異体のアミノ酸配列は、アミノ酸置換Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３
Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ｓ＋Ｙ２１７Ｑ又はＳ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ
０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２１７Ｑを含むアミノ酸配列を含み得、Ａ０８８
Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｇ１３１Ｈ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｌ２５７Ｇ，Ｓ０３３Ｔ＋Ｎ０
７６Ｄ，Ｓ００９Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｋ１４１Ｒ＋Ｎ２４３Ｖ，Ｓ１６２Ｇ＋Ｋ２５６Ｒ，
Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ，Ｎ１０９Ｇ＋Ｌ２５７Ｇ，Ｓ１６２Ｇ＋Ｌ２５７Ｇ，Ｎ０６１
Ｇ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｓ２４８Ａ，Ｓ０３３Ｔ＋Ｎ０
７６Ｄ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２１８Ｓ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｓ２４８Ｎ＋Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ＋
Ａ１１６Ｔ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｇ１３１
Ｈ＋Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ，Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ，Ｔ１５８Ｓ＋Ｌ２
５７Ｇ，Ｎ０６１Ｓ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ，Ｐ０４０Ａ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ＋
Ｓ２４８Ｎ＋Ｋ２５６Ｒ，Ｓ００９Ｔ＋Ｓ０１８Ｔ＋Ｙ０２１Ｎ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｋ１４１
Ｒ，Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｔ１５８Ｓ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｋ２５６Ｒ，Ａ０
８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｔ１５８Ｓ＋Ｎ２１８Ｓ＋Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ＋
Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０６３Ｇ＋Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０６３
Ｇ＋Ｎ１０９Ｇ，Ｓ０６３Ｇ，Ｓ０６３Ｇ＋Ｎ０７６Ｄ，Ｓ０３３Ｔ＋Ｎ０７６Ｄ＋Ｎ２
１８Ｓ，及びＮ０７６Ｄ＋Ｎ２１８Ｓからなる群から選択されるアミノ酸置換の組を更に
含み得る。
【０１１７】
本発明の第二態様による変異体は、アミノ酸置換Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ
＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２１７Ｑを含むアミノ酸配列を含み得、Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１
０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｇ１３１Ｈ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｌ２５７Ｇ，Ｓ０３３Ｔ＋Ｎ０７６Ｄ，
Ｓ００９Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１２８Ｓ＋Ｋ１４１Ｒ＋Ｎ２４３Ｖ，Ｓ１６２Ｇ＋Ｋ２５６
Ｒ，Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ，Ｎ１０９Ｇ＋Ｌ２５７Ｇ，Ｓ１６２Ｇ＋Ｌ２５７Ｇ，Ｎ０
６１Ｇ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１２８Ｓ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｓ２４８Ａ，
Ｓ０３３Ｔ＋Ｎ０７６Ｄ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１２８Ｓ＋Ｎ２１８Ｓ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｓ２４８
Ｎ＋Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１
０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｇ１３１Ｈ＋Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ，Ｎ１０９Ｇ＋
Ｎ２４３Ｖ，Ｔ１５８Ｓ＋Ｌ２５７Ｇ，Ｎ０６１Ｓ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ，Ｐ０４０
Ａ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１２８Ｓ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｓ２４８Ｎ＋Ｋ２５６Ｒ，Ｓ００９Ｔ＋Ｓ０
１８Ｔ＋Ｙ０２１Ｎ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１２８Ｓ＋Ｋ１４１Ｒ，Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋
Ａ１１６Ｔ＋Ｔ１５８Ｓ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６
Ｔ＋Ｔ１５８Ｓ＋Ｎ２１８Ｓ＋Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ＋Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１
２８Ｓ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０６３Ｇ＋Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０６３Ｇ＋Ｎ１０９Ｇ，
Ｓ０６３Ｇ＋Ａ１２８Ｓ，Ｓ０６３Ｇ＋Ｎ０７６Ｄ，Ｓ０３３Ｔ＋Ｎ０７６Ｄ＋Ａ１２８
Ｓ＋Ｎ２１８Ｓ，及びＮ０７６Ｄ＋Ｎ２１８Ｓ，からなる群から選択されるアミノ酸置換
の組を更に含み得、ここで、この変異体はタンパク質分解活性を有し、この変異体の各ア
ミノ酸位置は、配列番号２のアミノ酸配列と変異体のアミノ酸配列とのアラインメントに
よって決定される配列番号２のアミノ酸配列におけるアミノ酸位置に対応させることによ
り番号付けされる。特に、例えば、置換Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１
Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２１７Ｑ，を含む配列を含み、並びに置換の組Ｓ００９Ｔ＋Ｎ１０９
Ｇ＋Ａ１２８Ｓ＋Ｋ１４１Ｒ＋Ｎ２４３Ｖ，を更に含む、本発明の第二態様による変異体
は、位置１２８のアラニン（すなわち、Ｇ１２８Ａ置換）がＳで置換される（Ａ１２８Ｓ
置換）ことから位置１２８においてセリン（Ｓ）を有する。
【０１１８】
本発明の第二態様による変異体のアミノ酸配列は、配列番号２、配列番号４又は配列番
号６のアミノ酸配列に対して少なくとも６０％、６５％又は７０％の配列同一性を有し得
る。本発明の第二態様による変異体のアミノ酸配列は、配列番号２、配列番号４又は配列
番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％又は８５％の配列同一性を有し得る。本
発明の第二態様による変異体のアミノ酸配列は、配列番号２、配列番号４又は配列番号６
のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、
９６％、９７％又は９８％の配列同一性を有し得る。
【０１１９】
本発明の第二態様による特許プロテアーゼは、スブチリシンプロテアーゼであり得る。
本発明の第二態様による親プロテアーゼは、配列番号２、配列番号４又は配列番号６のア
ミノ酸配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２
％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一
性を有するアミノ酸配列を含み得る。本発明の第二態様による変異体は、成熟型を有する
プロテアーゼ変異体であり得る。本発明の第一態様による変異体は、成熟型を有するプロ
テアーゼ変異体であり得る。
【０１２０】
本発明はまた、配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％
、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１０
０％の配列同一性を有するアミノ酸を含み、並びに、以下のもの：
Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｇ１３１Ｈ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｌ２５７Ｇ，
Ｓ０３３Ｔ＋Ｎ０７６Ｄ，
Ｓ００９Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１２８Ｓ＋Ｋ１４１Ｒ＋Ｎ２４３Ｖ，
Ｓ１６２Ｇ＋Ｋ２５６Ｒ，
Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ，
Ｎ１０９Ｇ＋Ｌ２５７Ｇ，
Ｓ１６２Ｇ＋Ｌ２５７Ｇ，
Ｎ０６１Ｇ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ，
Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１２８Ｓ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｓ２４８Ａ，
Ｓ０３３Ｔ＋Ｎ０７６Ｄ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１２８Ｓ＋Ｎ２１８Ｓ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｓ２４
８Ｎ＋Ｋ２５６Ｒ，
Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｋ２５６Ｒ，
Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｇ１３１Ｈ＋Ｎ２４３Ｖ，
Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ，
Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ，
Ｔ１５８Ｓ＋Ｌ２５７Ｇ，
Ｎ０６１Ｓ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ，
Ｐ０４０Ａ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１２８Ｓ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｓ２４８Ｎ＋Ｋ２５６Ｒ，
Ｓ００９Ｔ＋Ｓ０１８Ｔ＋Ｙ０２１Ｎ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１２８Ｓ＋Ｋ１４１Ｒ，
Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｔ１５８Ｓ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｋ２５６Ｒ，
Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｔ１５８Ｓ＋Ｎ２１８Ｓ＋Ｌ２５７Ｇ，
Ｎ１０９Ｇ＋Ｋ２５６Ｒ，
Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１２８Ｓ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｋ２５６Ｒ，
Ｓ０６３Ｇ＋Ｋ２５６Ｒ，
Ｓ０６３Ｇ＋Ｎ１０９Ｇ，
Ｓ０６３Ｇ＋Ａ１２８Ｓ，
Ｓ０６３Ｇ＋Ｎ０７６Ｄ，
Ｓ０３３Ｔ＋Ｎ０７６Ｄ＋Ａ１２８Ｓ＋Ｎ２１８Ｓ，及び
Ｎ０７６Ｄ＋Ｎ２１８Ｓ，からなる群から選択されるアミノ酸置換の組を含む、本発明
の第二態様による単離されたポリペプチド（例えば、プロテアーゼ変異体）を提供し、
ここで、この変異体は、タンパク質分解活性を有し、変異体の各アミノ酸位置は、配列
番号２のアミノ酸配列と変異体のアミノ酸配列とのアラインメントによって決定される配
列番号２のアミノ酸配列におけるアミノ酸位置に対応させることにより番号付けされる。
このようなポリぺプチドは、配列番号２、配列番号４又は配列番号６に記載のプロテアー
ゼと比較して向上したタンパク質分解活性又は向上したクリーニング活性を有し得る。こ
のようなポリぺプチドは、配列番号２、配列番号４又は配列番号６に記載のプロテアーゼ
のものを超える、タンパク質分解活性（例えば、ＡＡＰＦアッセイ）又はクリーニングア
ッセイ（例えば、ＢＭＩ、植物又は卵の微小標本アッセイ）における性能指数を有し得る
。本発明の第二態様による変異体は、配列番号２の配列を有するＢＰＮ’プロテアーゼの
タンパク質分解活性と比較して向上したタンパク質分解活性を有し得る。本発明の第二態
様による変異体は、配列番号４又は配列番号６の配列を有するプロテアーゼのタンパク質
分解活性と比較して向上したタンパク質分解活性を有し得る。本発明の第二態様による変
異体の親プロテアーゼは、スブチリシンプロテアーゼであり得、選択的にスブチリシンプ
ロテアーゼはバチルス種であり得る。本発明の第二態様による変異体の親スブチリシンプ
ロテアーゼは、バチルス・アミロリケファシエンス（B. amyloliquefaciens）スブチリシ
ンプロテアーゼＢＰＮ’（配列番号２）、バチルス・ステアロサーモフィラス（B. stear
othermophilus）、枯草菌（B. subtilis）、バチルス・リケニホルミス（B. licheniform
is）、バチルス・レンタス（B. lentus）、バチルス・ブレビス（B. brevis）、バチルス
・ステアロサーモフィラス（B. stearothermophilus）、バチルス・アルカロフィラス（B
. alkalophilus）、バチルス・アミロリケファシエンス（B. amyloliquefaciens）、バチ
ルス・クラウジイ（B. clausii）、バチルス・ハロデュランス（B. halodurans）、バチ
ルス・メガテリウム（B. megaterium）、バチルス・コアグランス（B. coagulans）、バ
チルス・サーキュランス（B. circulans）、バチルス・ロータス（B. lautus）、Ｂ．ｓ
ｐｅｃｉｅｓ  ＴＳ−２３、バチルス・チューリンゲンシス（B. thuringiensis）、ＢＰ
Ｎ’−ｖ３（配列番号４）及びＢＰＮ’−ｖ３６（配列番号６）からなる群から選択され
得る。本発明の第二態様による親プロテアーゼは、配列番号２、配列番号４又は配列番号
６のアミノ酸配列に対して少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％
、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％
又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得る。
【０１２１】
本発明の第二態様による変異体は、成熟型を有するプロテアーゼ変異体であり得る。本
発明の第二態様による親プロテアーゼは、成熟型を有するプロテアーゼであり得る。
【０１２２】
本発明の第二態様による変異体は配列番号２、配列番号６又は配列番号４に対して少な
くとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９
３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有
するアミノ酸配列を含み得る。
【０１２３】
第三態様では、本発明は、プロテアーゼ活性を有する単離された又は非自然発生型ポリ
ペプチドを提供し、上記ポリペプチドは、
ａ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２
１７Ｑ＋Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｇ１３１Ｈ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｌ２５７Ｇ、
ｂ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２
１７Ｑ＋Ｓ０３３Ｔ＋Ｎ０７６Ｄ、
ｃ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ｓ＋Ｙ２
１７Ｑ＋Ｓ００９Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｋ１４１Ｒ＋Ｎ２４３Ｖ、
ｄ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２
１７Ｑ＋Ｓ１６２Ｇ＋Ｋ２５６Ｒ、
ｅ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２
１７Ｑ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ、
ｆ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２
１７Ｑ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｌ２５７Ｇ、
ｇ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２
１７Ｑ＋Ｓ１６２Ｇ＋Ｌ２５７Ｇ、
ｈ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２
１７Ｑ＋Ｎ０６１Ｇ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ、
ｉ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ｓ＋Ｙ２
１７Ｑ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｓ２４８Ａ、
ｊ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ｓ＋Ｙ２
１７Ｑ＋Ｓ０３３Ｔ＋Ｎ０７６Ｄ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２１８Ｓ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｓ２４８Ｎ＋
Ｋ２５６Ｒ、
ｋ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２
１７Ｑ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｋ２５６Ｒ、
ｌ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２
１７Ｑ＋Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｇ１３１Ｈ＋Ｎ２４３Ｖ、
ｍ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２
１７Ｑ＋Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ、
ｎ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２
１７Ｑ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ、
ｏ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２
１７Ｑ＋Ｔ１５８Ｓ＋Ｌ２５７Ｇ、
ｐ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２
１７Ｑ＋Ｎ０６１Ｓ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ、
ｑ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ｓ＋Ｙ２
１７Ｑ＋Ｐ０４０Ａ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｓ２４８Ｎ＋Ｋ２５６Ｒ、
ｒ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ｓ＋Ｙ２
１７Ｑ＋Ｓ００９Ｔ＋Ｓ０１８Ｔ＋Ｙ０２１Ｎ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｋ１４１Ｒ、
ｓ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２
１７Ｑ＋Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｔ１５８Ｓ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｋ２５６Ｒ、
ｔ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２
１７Ｑ＋Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｔ１５８Ｓ＋Ｎ２１８Ｓ＋Ｌ２５７Ｇ、
ｕ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２
１７Ｑ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｋ２５６Ｒ、
ｖ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ｓ＋Ｙ２
１７Ｑ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｋ２５６Ｒ、
ｗ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２
１７Ｑ＋Ｓ０６３Ｇ＋Ｋ２５６Ｒ、
ｘ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２
１７Ｑ＋Ｓ０６３Ｇ＋Ｎ１０９Ｇ、
ｙ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ｓ＋Ｙ２
１７Ｑ＋Ｓ０６３Ｇ、
ｚ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２
１７Ｑ＋Ｓ０６３Ｇ＋Ｎ０７６Ｄ、
ａａ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ｓ＋Ｙ
２１７Ｑ＋Ｓ０３３Ｔ＋Ｎ０７６Ｄ＋Ｎ２１８Ｓ、
ｂｂ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ
２１７Ｑ＋Ｎ０７６Ｄ＋Ｎ２１８Ｓ、及び
ｃｃ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ
２１７Ｑ，からなる群から選択されるポリペプチド配列に対して少なくとも８０％、８５
％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９
％又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、この変異体の各アミ
ノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置に対応させることにより番号付けされる。
本発明の第三態様による変異体は、配列番号２、配列番号４又は配列番号６に記載のプロ
テアーゼと比較して向上したタンパク質分解活性又は向上したクリーニング活性を有し得
る。本発明の第三態様による変異体は、配列番号２、配列番号４又は配列番号６に記載の
プロテアーゼのものを超える、タンパク質分解活性（例えば、ＡＡＰＦアッセイ）又はク
リーニングアッセイ（例えば、ＢＭＩ、植物又は卵の微小標本アッセイ）における性能指
数を有し得る。
【０１２４】
本発明の第三態様によるポリペプチドは、上記ａ）〜ｃｃ）のいずれか又はタンパク質
分解活性を有するこれらのいずれかの断片を含み得る、あるいは、これらからなり得る。
本発明の第三態様による変異体又は親プロテアーゼは、成熟型であり得る。
【０１２５】
第四態様では、本発明は、（ａ）配列番号６のポリペプチド配列に対して少なくとも８
５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有
するアミノ酸配列を含むポリペプチド、（ｂ）少なくとも厳密度の高い条件下で（ｉ）配
列番号５のポリヌクレオチド配列と、又は（ｉｉ）（ｉ）の相補的ポリヌクレオチド配列
と、ハイブリッド形成するポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド、並びに（
ｃ）配列番号５のポリヌクレオチド配列に対して少なくとも９０％、９５％、９６％、９
７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含むポリヌ
クレオチドによりコードされるポリペプチド、からなる群から選択されるプロテアーゼ活
性を有する単離された又は非自然発生型のポリペプチドを提供する。本発明の第四態様に
よるポリペプチドは、配列番号６のアミノ酸配列又はタンパク質分解活性を有するこれら
の断片を含み得る、あるいは、これらからなり得る。本発明の第四態様による変異体は、
成熟ＢＰＮ’（配列番号２）のものと比較して増大したタンパク質分解活性及び／又はク
リーニング性能若しくは活性を有し得る。本発明の第四態様による変異体は、配列番号４
若しくは配列番号６のものと比較して増大したタンパク質分解活性及び／又はクリーニン
グ性能若しくは活性を有し得る。本発明の第四態様による変異体又は親プロテアーゼは、
成熟型であり得る。
【０１２６】
第五態様では、本発明は、親プロテアーゼの単離された又は非自然発生型のプロテアー
ゼ変異体を提供し、ここで、（ａ）この変異体は親プロテアーゼと比較して２５以下、２
０以下、１５以下又は１０以下の変異を有するアミノ酸配列を含み、ここで、（ｉ）これ
らの変異は、挿入、欠失又は置換から独立して選択され、（ｉｉ）これらの変異は、位置
２４及び５３におけるグリシンの置換、位置７８及び１０１におけるアスパラギンの置換
、位置１２８におけるアラニン又はセリンの置換、及び位置２１７におけるグルタミンの
置換を包含し、（ｂ）親プロテアーゼは、配列番号２に対して少なくとも９０％の配列同
一性を有し、（ｃ）配列番号２のアミノ酸配列は、位置番号付けを決定するために使用さ
れ、並びに（ｄ）この変異体は、親プロテアーゼと比較してタンパク質分解活性が増大し
ており、ここで、各アミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置に対応させること
により番号付けされる。本発明の第五態様による変異体のアミノ酸配列は、配列番号２、
配列番号４又は配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、
９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の配列同一性を有
し得る。
【０１２７】
本発明の第五態様による親プロテアーゼは、配列番号２、配列番号４又は配列番号６の
配列に対して少なくとも８０％、８５％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は
１００％の配列同一性を有し得る。本発明の第五態様による親プロテアーゼは、配列番号
２のアミノ酸配列を有するプロテアーゼであり得る。本発明の第五態様による変異体又は
親プロテアーゼは、成熟型であり得る。
【０１２８】
本発明の第五態様による変異体のアミノ酸配列は、置換Ｎ１０９Ｇを更に含み得る。本
発明の第五態様による変異体のアミノ酸配列は、置換Ｎ０７６Ｄを更に含み得る。本発明
の第五態様による変異体のアミノ酸配列は、置換Ｓ０３３Ｔを更に含み得る。本発明の第
五態様による変異体のアミノ酸配列は、置換Ｎ２４３Ｖを更に含み得る。本発明の第五態
様による変異体のアミノ酸配列は、置換Ｓ２４８Ａを更に含み得る。本発明の第五態様に
よる変異体のアミノ酸配列は、置換Ａ０８８Ｔを更に含み得る。本発明の第五態様による
変異体のアミノ酸配列は、置換Ｓ０６３Ｇを更に含み得る。
【０１２９】
本発明の第五態様による変異体のアミノ酸配列は、Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６
Ｔ＋Ｇ１３１Ｈ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｌ２５７Ｇ，Ｓ０３３Ｔ＋Ｎ０７６Ｄ，Ｓ００９Ｔ＋Ｎ１
０９Ｇ＋Ｋ１４１Ｒ＋Ｎ２４３Ｖ，Ｓ１６２Ｇ＋Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ，
Ｎ１０９Ｇ＋Ｌ２５７Ｇ，Ｓ１６２Ｇ＋Ｌ２５７Ｇ，Ｎ０６１Ｇ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３
Ｖ，Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｓ２４８Ａ，Ｓ０３３Ｔ＋Ｎ０７６Ｄ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２
１８Ｓ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｓ２４８Ｎ＋Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｎ２４３Ｖ＋
Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｇ１３１Ｈ＋Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８
Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ，Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ，Ｔ１５８Ｓ＋Ｌ２５７Ｇ，Ｎ０６１Ｓ＋Ｎ１
０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ，Ｐ０４０Ａ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｓ２４８Ｎ＋Ｋ２５６Ｒ，
Ｓ００９Ｔ＋Ｓ０１８Ｔ＋Ｙ０２１Ｎ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｋ１４１Ｒ，Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９
Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｔ１５８Ｓ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１
１６Ｔ＋Ｔ１５８Ｓ＋Ｎ２１８Ｓ＋Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ＋Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ＋
Ｎ２４３Ｖ＋Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０６３Ｇ＋Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０６３Ｇ＋Ｎ１０９Ｇ，Ｓ０６３
Ｇ，Ｓ０６３Ｇ＋Ｎ０７６Ｄ，Ｓ０３３Ｔ＋Ｎ０７６Ｄ＋Ｎ２１８Ｓ，及びＮ０７６Ｄ＋
Ｎ２１８Ｓからなる群から選択されるアミノ酸置換の組を更に含み得る。
【０１３０】
本発明の第五態様による親プロテアーゼは、スブチリシンプロテアーゼであり得る。本
発明の第五態様による親プロテアーゼは、配列番号２に記載のＢＰＮ’であり得る。本発
明の第五態様による変異体は、配列番号４若しくは配列番号６のものと比較して増大した
タンパク質分解活性及び／又はクリーニング性能若しくは活性を有し得る。
【０１３１】
第六態様では、本発明は、親プロテアーゼの単離された又は非自然発生プロテアーゼ変
異体を提供し、ここで、（ａ）この変異体は、（ｉ）配列番号２の配列に対して少なくと
も８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％又は９７
％の同一性を有し、並びに、（ｉｉ）位置２４及び５３におけるグリシンの置換、位置７
８及び１０１におけるアスパラギンの置換、位置１２８におけるアラニン又はセリンの置
換、及び位置２１７におけるグルタミンの置換を含む、アミノ酸配列を含み、（ｂ）親プ
ロテアーゼは、配列番号２に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％
、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性
を有し、（ｃ）この変異体の各アミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置に対応
させることにより番号付けされ、並びに（ｄ）この変異体は、親プロテアーゼと比較して
タンパク質分解活性が増大している。本発明の第六態様による親プロテアーゼ（protase
）は、スブチリシンプロテアーゼであり得る。本発明の第六態様による親プロテアーゼは
、配列番号２のアミノ酸配列を有するプロテアーゼであり得る。本発明の第六態様による
変異体は、親プロテアーゼのタンパク質分解活性及び／又はクリーニング活性とそれぞれ
比較して増大したタンパク質分解活性及び／又はクリーニング活性を有し得る。
【０１３２】
本発明の第六態様による変異体のアミノ酸配列は、置換Ｎ１０９Ｇを更に含み得る。本
発明の第六態様による変異体のアミノ酸配列は、置換Ｎ０７６Ｄを更に含み得る。本発明
の第六態様による変異体のアミノ酸配列は、置換Ｓ０３３Ｔを更に含み得る。本発明の第
六態様による変異体のアミノ酸配列は、置換Ｎ２４３Ｖを更に含み得る。本発明の第六態
様による変異体のアミノ酸配列は、置換Ｓ２４８Ａを更に含み得る。本発明の第六態様に
よる変異体のアミノ酸配列は、置換Ａ０８８Ｔを更に含み得る。本発明の第六態様による
変異体のアミノ酸配列は、置換Ｓ０６３Ｇを更に含み得る。
【０１３３】
本発明の第六態様による変異体のアミノ酸配列は、Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６
Ｔ＋Ｇ１３１Ｈ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｌ２５７Ｇ，Ｓ０３３Ｔ＋Ｎ０７６Ｄ，Ｓ００９Ｔ＋Ｎ１
０９Ｇ＋Ｋ１４１Ｒ＋Ｎ２４３Ｖ，Ｓ１６２Ｇ＋Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ，
Ｎ１０９Ｇ＋Ｌ２５７Ｇ，Ｓ１６２Ｇ＋Ｌ２５７Ｇ，Ｎ０６１Ｇ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３
Ｖ，Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｓ２４８Ａ，Ｓ０３３Ｔ＋Ｎ０７６Ｄ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２
１８Ｓ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｓ２４８Ｎ＋Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｎ２４３Ｖ＋
Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｇ１３１Ｈ＋Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８
Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ，Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ，Ｔ１５８Ｓ＋Ｌ２５７Ｇ，Ｎ０６１Ｓ＋Ｎ１
０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ，Ｐ０４０Ａ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｓ２４８Ｎ＋Ｋ２５６Ｒ，
Ｓ００９Ｔ＋Ｓ０１８Ｔ＋Ｙ０２１Ｎ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｋ１４１Ｒ，Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９
Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｔ１５８Ｓ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１
１６Ｔ＋Ｔ１５８Ｓ＋Ｎ２１８Ｓ＋Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ＋Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ＋
Ｎ２４３Ｖ＋Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０６３Ｇ＋Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０６３Ｇ＋Ｎ１０９Ｇ，Ｓ０６３
Ｇ，Ｓ０６３Ｇ＋Ｎ０７６Ｄ，Ｓ０３３Ｔ＋Ｎ０７６Ｄ＋Ｎ２１８Ｓ，及びＮ０７６Ｄ＋
Ｎ２１８Ｓからなる群から選択されるアミノ酸置換の組を更に含み得る。
【０１３４】
本発明の第六態様による変異体は、配列番号２、配列番号４若しくは配列番号６のもの
と比較して増大したタンパク質分解活性及び／又はクリーニング性能若しくは活性を有し
得る。本発明の第六態様による変異体は、配列番号２、配列番号４又は配列番号６に記載
のプロテアーゼのものを超える、タンパク質分解活性（例えば、ＡＡＰＦアッセイ）又は
クリーニングアッセイ（例えば、ＢＭＩ、植物又は卵の微小標本アッセイ）における性能
指数を有し得る。本発明の第六態様による変異体又は親プロテアーゼは、成熟型であり得
る。
【０１３５】
第七態様では、本発明は、配列番号２に示されるアミノ酸配列を有するＢＰＮ’スブチ
リシンプロテアーゼの単離された又は非自然発生型のプロテアーゼ変異体を提供し、上記
プロテアーゼは以下のもの：
（ａ）配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％
、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むプロテアーゼ
変異体であって、上記変異体は、配列番号２及び／又は配列番号４のプロテアーゼと比較
して増大したタンパク質分解活性及び／又は増大したクリーニング活性を有し、ここで、
この変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列に対応させることにより番号付けされ、
上記変異体は群（ｉ）〜（ｘ）から選択される配列番号２に対する少なくとも１組のアミ
ノ酸置換を含む、プロテアーゼ変異体：
（ｉ）Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ２１８Ａ及びＧ０９７
Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ、
（ｉｉ）Ｓ０６３Ｔ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｓ１８３
Ｔ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ２４４Ｎ，Ｎ０６１Ａ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２
１７Ｑ−Ｓ２２４Ａ，Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｐ１２９Ｔ−
Ｑ１８５Ｔ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０６３Ｔ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ａ−Ｇ１２８
Ａ−Ｓ１８３Ｔ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０６３Ｔ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ａ−Ｇ１
２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０６３Ｔ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ａ−Ｇ１２８Ａ−
Ｙ２１７Ｑ−Ｔ２４４Ｉ，及びＳ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｐ１２９Ｔ−Ｙ２
１７Ｑ、
（ｉｉｉ）Ｓ０６３Ｔ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｓ１８
３Ｔ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０６３Ｔ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｓ
１８３Ｔ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ２４４Ｎ，Ｓ０６３Ｔ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ａ
−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，及びＳ０６３Ｔ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ａ−Ｇ
１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ２４４Ｉ、
（ｉｖ）Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１
Ｖ−Ｙ１６７Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１
０１Ｎ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−
Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｖ２０３Ｙ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５
Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ｓ−Ｖ２
０３Ｙ−Ｙ２１７Ｑ，及びＶ０６８Ａ−Ａ０９２Ｇ−Ｙ２１７Ｑ、
（ｖ）Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ
，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２
８Ａ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ
０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ
−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｉ１１１Ｖ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１
７Ｑ、
（ｖｉ）Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７
Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０
９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｉ１１１Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−
Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５
Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２
１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−
Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，及びＳ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０
７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｉ１１１Ｖ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ、
（ｖｉｉ）Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１
７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ
１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ
−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０３８Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９
７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ
０７８Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ
−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６
１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｓ
０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ
，Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２
５Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ
２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ
−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２
５Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｎ
０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ
−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１
７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ
１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ
−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５
５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｇ
０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ
−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０６
１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ
０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ
−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５
３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ
０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ
，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０
１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ
１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ
−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１
７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ
２４９Ｎ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ
，Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５
３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｔ
０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ
−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９
７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，及びＴ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ
−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ、
（ｖｉｉｉ）Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０
１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ
０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ
−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２
４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ
２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ
−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７
８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ
１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，及びＴ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１
７Ｑ、
（ｉｘ）Ｎ０２５Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ
−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２
４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ
２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ
−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ１２
８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ
０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ
−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５
５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｎ
０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ
−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５
３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ
０２５Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ
−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ、並びに
（ｘ）Ｓ０２４Ｇ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ１０１Ｎ−
Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１
Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１
２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−
Ｇ１２８Ａ，Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８
Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１
２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−
Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１
Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｎ０
６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ，Ｎ０６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−
Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８
Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０
７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−
Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４
Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０
２５Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−
Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８
Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ１
２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−
Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１
Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０
６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−
Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５
Ｇ−Ｓ０３８Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１
２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−
Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３
Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０
７８Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−
Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３
Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０
６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−
Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７
Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２
１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−
Ｓ２４９Ｎ，Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１
Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２
１７Ｑ，Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ａ１１６Ｓ−Ｇ１２８Ａ，Ｓ０２４Ｇ−
Ｎ０２５Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４
Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２
１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，
Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０６１
Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０
５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ｓ−
Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７
Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０
２４Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，
Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８
Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２
１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−
Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７
Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１
２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０３８Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−
Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７
Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｔ０
５５Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−
Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５
Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０
５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−
Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１
Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０
９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−
Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８
Ａ−Ｙ２１７Ｑ，及びＳ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−
Ｇ１２８Ａ−Ｓ１３０Ｇ−Ｙ２１７Ｑ、並びに
（ｂ）配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％
、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むプロテアーゼ
変異体であって、上記変異体は、配列番号２、配列番号４及び／又は配列番号６のプロテ
アーゼと比較して増大したタンパク質分解活性及び／又は増大したクリーニング活性を有
し、ここで、この変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列に対応させることにより番
号付けされ、上記変異体は群（ｉ）〜（ｘｖ）から選択される配列番号６に対する少なく
とも１組のアミノ酸置換を含む、プロテアーゼ変異体：
（ｉ）Ａ１１６Ｖ，Ｇ１６０Ｓ，Ｉ１１１Ｌ，Ｉ１１５Ｖ，Ｎ１０９Ｓ，Ｎ１１７Ｍ
，Ｐ００５Ｇ，Ｑ０５９Ｖ，Ｔ１６４Ｓ，Ｙ２６２Ｍ，Ａ０１５Ｑ，Ａ０１５Ｓ，Ａ０９
８Ｅ，Ａ０９８Ｎ，Ａ０９８Ｓ，Ａ０９８Ｔ，Ａ０９８Ｖ，Ａ０９８Ｙ，Ａ１１４Ｓ，Ａ
１１４Ｔ，Ａ１１６Ｇ，Ａ１１６Ｌ，Ａ１１６Ｓ，Ａ１１６Ｔ，Ａ１１６Ｗ，Ａ１３３Ｇ
，Ａ１３３Ｈ，Ａ１３３Ｔ，Ａ１３３Ｖ，Ａ１３７Ｇ，Ａ１３７Ｉ，Ａ１３７Ｌ，Ａ１３
７Ｓ，Ａ１３７Ｔ，Ａ１３８Ｓ，Ａ２１６Ｅ，Ａ２１６Ｆ，Ａ２１６Ｖ，Ｄ０９９Ｓ，Ｄ
１８１Ｅ，Ｆ２６１Ａ，Ｆ２６１Ｑ，Ｇ０２４Ｆ，Ｇ０２４Ｉ，Ｇ０２４Ｑ，Ｇ０２４Ｙ
，Ｇ０９７Ｓ，Ｇ１６０Ｔ，Ｇ２１１Ｌ，Ｇ２１１Ｖ，Ｈ０１７Ｆ，Ｈ０１７Ｗ，Ｈ０３
９Ｖ，Ｈ２２６Ａ，Ｉ０３１Ｖ，Ｉ１１１Ｖ，Ｉ２６８Ｖ，Ｋ１７０Ｒ，Ｋ２６５Ｒ，Ｌ
０１６Ｑ，Ｌ０１６Ｔ，Ｌ１３５Ｍ，Ｌ２０９Ｔ，Ｌ２０９Ｖ，Ｌ２３３Ｍ，Ｌ２５７Ｔ
，Ｌ２５７Ｖ，Ｌ２６７Ａ，Ｌ２６７Ｖ，Ｎ０２５Ａ，Ｎ０２５Ｉ，Ｎ０２５Ｑ，Ｎ０２
５Ｒ，Ｎ０２５Ｔ，Ｎ０２５Ｖ，Ｎ１０１Ｉ，Ｎ１０１Ｑ，Ｎ１０１Ｓ，Ｎ１０９Ａ，Ｎ
１０９Ｇ，Ｎ１０９Ｈ，Ｎ１０９Ｌ，Ｎ１０９Ｍ，Ｎ１０９Ｑ，Ｎ１０９Ｔ，Ｎ１１７Ｑ
，Ｎ１８４Ａ，Ｎ１８４Ｌ，Ｎ１８４Ｔ，Ｎ１８４Ｗ，Ｎ２１２Ｇ，Ｎ２１２Ｌ，Ｎ２１
２Ｖ，Ｎ２４３Ｐ，Ｎ２５２Ｇ，Ｎ２５２Ｍ，Ｐ００５Ｔ，Ｐ０１４Ｓ，Ｐ０４０Ｇ，Ｐ
０４０Ｌ，Ｐ０４０Ｑ，Ｐ１２９Ａ，Ｐ１２９Ｓ，Ｐ１７２Ｇ，Ｐ１７２Ｓ，Ｐ１９４Ｑ
，Ｐ２１０Ａ，Ｐ２１０Ｓ，Ｑ１８５Ｆ，Ｑ１８５Ｇ，Ｑ１８５Ｉ，Ｑ１８５Ｍ，Ｑ１８
５Ｎ，Ｑ１８５Ｓ，Ｑ２７５Ｈ，Ｒ１８６Ｋ，Ｓ００９Ａ，Ｓ００９Ｇ，Ｓ００９Ｈ，Ｓ
００９Ｍ，Ｓ０１８Ｔ，Ｓ１３０Ｔ，Ｓ１３２Ｎ，Ｓ１４５Ｋ，Ｓ１５９Ｔ，Ｓ１６１Ｉ
，Ｓ１６１Ｋ，Ｓ１６１Ｎ，Ｓ１６１Ｔ，Ｓ１６２Ｉ，Ｓ１６２Ｍ，Ｓ１６２Ｙ，Ｓ１６
３Ｇ，Ｓ１８２Ｆ，Ｓ１８２Ｇ，Ｓ１８２Ｖ，Ｓ１８２Ｗ，Ｓ１８３Ｆ，Ｓ１８３Ｌ，Ｓ
１８３Ｍ，Ｓ１８３Ｔ，Ｓ１８３Ｖ，Ｓ１８３Ｗ，Ｓ２２４Ａ，Ｓ２３６Ｔ，Ｓ２４９Ｖ
，Ｔ０２２Ａ，Ｔ０２２Ｇ，Ｔ０２２Ｑ，Ｔ０２２Ｖ，Ｔ２０８Ｖ，Ｔ２４２Ｓ，Ｔ２５
３Ｎ，Ｔ２５３Ｓ，Ｔ２５４Ａ，Ｔ２５４Ｓ，Ｔ２５５Ｌ，Ｔ２５５Ｓ，Ｔ２５５Ｖ，Ｖ
００４Ａ，Ｖ００４Ｐ，Ｖ００４Ｗ，Ｖ０８４Ｃ，Ｖ１３９Ｃ，Ｖ１６５Ｍ，Ｖ２０３Ｆ
，Ｙ０２１Ｋ，Ｙ０２１Ｎ，Ｙ０２１Ｔ，Ｙ０２１Ｖ，Ｙ１６７Ｆ，Ｙ１７１Ｆ，Ｙ２１
４Ｆ，Ｙ２６２Ｆ，及びＹ２６２Ｔからなる群から選択される配列番号６に対する少なく
とも１つの置換、
（ｉｉ）Ａ２１６Ｅ，Ｌ０９０Ｉ，Ａ０９８Ｒ，Ａ０９８Ｗ，Ａ０９８Ｙ，Ａ１１６
Ｇ，Ａ１１６Ｒ，Ａ１１６Ｓ，Ａ１３３Ｍ，Ｉ１０７Ｌ，Ｉ１１５Ｖ，Ｍ１２４Ｌ，Ｎ１
０１Ｉ，Ｎ１０９Ｈ，Ｎ１０９Ｓ，Ｎ１０９Ｔ，Ｎ１１７Ｒ，Ｐ００５Ｇ，Ｑ１８５Ｌ，
Ｓ０８９Ｖ，Ｖ０９５Ａ，Ａ０１５Ｙ，Ａ０２９Ｇ，Ａ０９８Ｄ，Ａ０９８Ｅ，Ａ０９８
Ｇ，Ａ０９８Ｎ，Ａ０９８Ｓ，Ａ０９８Ｔ，Ａ０９８Ｖ，Ａ１１４Ｓ，Ａ１１４Ｔ，Ａ１
１６Ｅ，Ａ１１６Ｌ，Ａ１１６Ｔ，Ａ１１６Ｖ，Ａ１３３Ｈ，Ａ１３３Ｌ，Ａ１３３Ｓ，
Ａ１３７Ｇ，Ａ１３７Ｉ，Ａ１３７Ｌ，Ａ１３７Ｓ，Ａ１３７Ｖ，Ａ１３８Ｓ，Ａ１４４
Ｓ，Ａ１４４Ｖ，Ａ１７６Ｓ，Ａ１７６Ｔ，Ａ１８７Ｔ，Ａ２１６Ｆ，Ａ２１６Ｐ，Ａ２
１６Ｑ，Ａ２１６Ｒ，Ａ２１６Ｓ，Ａ２１６Ｔ，Ａ２１６Ｖ，Ａ２１６Ｙ，Ｄ０４１Ｅ，
Ｄ１２０Ａ，Ｄ１２０Ｅ，Ｄ１２０Ｑ，Ｄ１２０Ｒ，Ｄ１２０Ｓ，Ｄ１８１Ｓ，Ｇ０２０
Ａ，Ｇ０２０Ｓ，Ｇ０２４Ａ，Ｇ０９７Ａ，Ｇ０９７Ｄ，Ｇ０９７Ｓ，Ｇ１３１Ｑ，Ｇ１
６０Ｓ，Ｇ１６６Ｉ，Ｇ２１１Ｌ，Ｇ２１５Ｎ，Ｈ０３９Ｎ，Ｈ２３８Ｎ，Ｉ１１１Ｌ，
Ｉ１１１Ｖ，Ｉ１２２Ａ，Ｌ０７５Ｉ，Ｌ０７５Ｑ，Ｌ１３５Ｍ，Ｌ２０９Ｔ，Ｌ２０９
Ｖ，Ｌ２３３Ｖ，Ｌ２３５Ｍ，Ｌ２３５Ｒ，Ｌ２５７Ａ，Ｍ１１９Ｉ，Ｎ０２５Ａ，Ｎ０
２５Ｇ，Ｎ０２５Ｔ，Ｎ０６１Ｋ，Ｎ１０１Ｆ，Ｎ１０１Ｈ，Ｎ１０１Ｌ，Ｎ１０１Ｑ，
Ｎ１０１Ｒ，Ｎ１０１Ｓ，Ｎ１０１Ｔ，Ｎ１０９Ａ，Ｎ１０９Ｇ，Ｎ１０９Ｋ，Ｎ１０９
Ｌ，Ｎ１１７Ｅ，Ｎ１１７Ｈ，Ｎ１１７Ｋ，Ｎ１１７Ｓ，Ｎ２１２Ｇ，Ｎ２１２Ｓ，Ｎ２
１８Ｆ，Ｎ２１８Ｇ，Ｎ２１８Ｈ，Ｎ２１８Ｌ，Ｎ２１８Ｓ，Ｎ２１８Ｗ，Ｎ２４０Ｑ，
Ｎ２５２Ｍ，Ｎ２５２Ｒ，Ｎ２５２Ｓ，Ｐ００５Ｔ，Ｐ０４０Ａ，Ｐ０４０Ｇ，Ｐ０４０
Ｔ，Ｐ１２９Ｄ，Ｐ１２９Ｓ，Ｐ１９４Ｓ，Ｐ２１０Ｒ，Ｑ０１９Ｒ，Ｑ０１９Ｗ，Ｑ１
０３Ｌ，Ｑ１０３Ｗ，Ｑ１８５Ａ，Ｑ１８５Ｇ，Ｑ１８５Ｍ，Ｑ１８５Ｒ，Ｑ１８５Ｔ，
Ｑ２０６Ｇ，Ｑ２０６Ｙ，Ｑ２１７Ａ，Ｑ２１７Ｅ，Ｑ２１７Ｒ，Ｑ２１７Ｓ，Ｑ２１７
Ｔ，Ｓ００３Ｑ，Ｓ００９Ｈ，Ｓ０１８Ｍ，Ｓ０３３Ｔ，Ｓ１３０Ａ，Ｓ１３０Ｆ，Ｓ１
３０Ｇ，Ｓ１３０Ｔ，Ｓ１３０Ｖ，Ｓ１４５Ｔ，Ｓ１５９Ａ，Ｓ１６１Ｎ，Ｓ１６１Ｔ，
Ｓ１６２Ｖ，Ｓ１６２Ｙ，Ｓ１８２Ｌ，Ｓ１８２Ｗ，Ｓ１８３Ｆ，Ｓ１８３Ｌ，Ｓ１８３
Ｖ，Ｓ１８３Ｗ，Ｓ１８８Ｋ，Ｓ１８８Ｗ，Ｓ２３６Ｑ，Ｓ２３６Ｔ，Ｓ２４８Ｌ，Ｔ０
２２Ｈ，Ｔ０２２Ｋ，Ｔ２０８Ｃ，Ｔ２５３Ｈ，Ｔ２５５Ｖ，Ｖ０４４Ｉ，Ｖ１２１Ｉ，
Ｖ１３９Ｃ，Ｖ１４３Ｈ，Ｖ１４３Ｑ，Ｖ１４３Ｔ，Ｖ１４３Ｗ，Ｖ１４３Ｙ，Ｙ００６
Ｋ，Ｙ０２１Ａ，Ｙ１０４Ｗ，Ａ００１Ｆ，Ａ００１Ｇ，Ａ００１Ｈ，Ａ００１Ｋ，Ａ０
０１Ｌ，Ａ００１Ｑ，Ａ００１Ｓ，Ａ００１Ｙ，Ａ０１３Ｖ，Ａ０１５Ｇ，Ａ０１５Ｋ，
Ａ０１５Ｒ，Ａ０１５Ｓ，Ａ０１５Ｔ，Ａ０１５Ｗ，Ａ０４８Ｓ，Ａ０７３Ｎ，Ａ０７３
Ｓ，Ａ０９２Ｓ，Ａ０９８Ｋ，Ａ０９８Ｐ，Ａ１１６Ｄ，Ａ１１６Ｗ，Ａ１２８Ｓ，Ａ１
３３Ｐ，Ａ１３３Ｔ，Ａ１３３Ｖ，Ａ１３４Ｇ，Ａ１３４Ｓ，Ａ１３７Ｈ，Ａ１３７Ｎ，
Ａ１３７Ｔ，Ａ１４４Ｄ，Ａ１４４Ｋ，Ａ１４４Ｌ，Ａ１４４Ｍ，Ａ１４４Ｎ，Ａ１４４
Ｒ，Ａ１７９Ｇ，Ａ１７９Ｓ，Ａ１８７Ｖ，Ａ２１６Ｇ，Ａ２１６Ｌ，Ａ２１６Ｗ，Ａ２
２３Ｓ，Ａ２３０Ｃ，Ａ２７２Ｋ，Ａ２７２Ｌ，Ａ２７２Ｐ，Ａ２７２Ｓ，Ａ２７２Ｔ，
Ａ２７２Ｗ，Ａ２７３Ｇ，Ａ２７３Ｓ，Ａ２７４Ｇ，Ａ２７４Ｍ，Ａ２７４Ｔ，Ｄ１２０
Ｋ，Ｄ１４０Ｅ，Ｄ１８１Ａ，Ｄ１８１Ｅ，Ｄ１８１Ｇ，Ｄ１８１Ｈ，Ｄ１８１Ｔ，Ｄ２
５９Ｅ，Ｄ２５９Ｎ，Ｄ２５９Ｑ，Ｅ０５４Ｄ，Ｅ１５６Ｄ，Ｅ１５６Ｔ，Ｅ２５１Ｌ，
Ｅ２５１Ｔ，Ｅ２５１Ｖ，Ｆ０５８Ｙ，Ｆ１８９Ｗ，Ｆ２６１Ｋ，Ｆ２６１Ｑ，Ｆ２６１
Ｒ，Ｇ００７Ａ，Ｇ００７Ｓ，Ｇ０２０Ｆ，Ｇ０２０Ｈ，Ｇ０２０Ｎ，Ｇ０２０Ｑ，Ｇ０
２０Ｔ，Ｇ０２０Ｙ，Ｇ０２４Ｆ，Ｇ０２４Ｑ，Ｇ０２４Ｒ，Ｇ０２４Ｔ，Ｇ０２４Ｖ，
Ｇ０２４Ｗ，Ｇ０２４Ｙ，Ｇ０５３Ｔ，Ｇ０９７Ｋ，Ｇ０９７Ｍ，Ｇ０９７Ｒ，Ｇ０９７
Ｔ，Ｇ１３１Ａ，Ｇ１３１Ｈ，Ｇ１３１Ｐ，Ｇ１３１Ｒ，Ｇ１３１Ｔ，Ｇ１３１Ｖ，Ｇ１
６０Ｈ，Ｇ１６０Ｔ，Ｇ１６６Ｃ，Ｇ１６６Ｑ，Ｇ１６６Ｓ，Ｇ１６６Ｔ，Ｇ２１１Ａ，
Ｇ２１１Ｄ，Ｇ２１１Ｋ，Ｇ２１１Ｍ，Ｇ２１１Ｎ，Ｇ２１１Ｑ，Ｇ２１１Ｒ，Ｇ２１１
Ｖ，Ｇ２１１Ｗ，Ｇ２１５Ｓ，Ｇ２１５Ｔ，Ｇ２１５Ｗ，Ｈ０１７Ｔ，Ｈ０１７Ｗ，Ｈ０
１７Ｙ，Ｈ０３９Ｖ，Ｈ２２６Ａ，Ｈ２２６Ｆ，Ｈ２２６Ｉ，Ｈ２２６Ｌ，Ｈ２２６Ｍ，
Ｈ２２６Ｖ，Ｉ０３５Ｖ，Ｉ０７９Ａ，Ｉ０７９Ｓ，Ｉ１０８Ｖ，Ｉ２０５Ｖ，Ｉ２３４
Ｌ，Ｉ２３４Ｖ，Ｉ２６８Ｖ，Ｋ０１２Ｓ，Ｋ０４３Ｐ，Ｋ１３６Ｈ，Ｋ１３６Ｒ，Ｋ１
４１Ａ，Ｋ１４１Ｆ，Ｋ１４１Ｔ，Ｋ１４１Ｗ，Ｋ１７０Ａ，Ｋ１７０Ｇ，Ｋ１７０Ｒ，
Ｋ２１３Ａ，Ｋ２１３Ｒ，Ｋ２１３Ｓ，Ｋ２３７Ａ，Ｋ２３７Ｈ，Ｋ２３７Ｌ，Ｋ２３７
Ｓ，Ｋ２３７Ｖ，Ｋ２５６Ａ，Ｋ２５６Ｇ，Ｋ２５６Ｈ，Ｋ２５６Ｍ，Ｋ２５６Ｐ，Ｋ２
５６Ｑ，Ｋ２５６Ｒ，Ｌ０１６Ａ，Ｌ０１６Ｑ，Ｌ０１６Ｔ，Ｌ０１６Ｖ，Ｌ０４２Ｖ，
Ｌ０７５Ｍ，Ｌ０７５Ｔ，Ｌ０８２Ｍ，Ｌ０８２Ｖ，Ｌ１３５Ｆ，Ｌ１９６Ｉ，Ｌ２０９
Ｈ，Ｌ２０９Ｑ，Ｌ２０９Ｒ，Ｌ２０９Ｓ，Ｌ２０９Ｗ，Ｌ２３３Ａ，Ｌ２３３Ｍ，Ｌ２
３３Ｑ，Ｌ２３５Ｉ，Ｌ２３５Ｋ，Ｌ２５０Ｉ，Ｌ２５７Ｓ，Ｌ２５７Ｔ，Ｌ２５７Ｖ，
Ｌ２６７Ａ，Ｌ２６７Ｑ，Ｌ２６７Ｔ，Ｌ２６７Ｖ，Ｍ１１９Ｃ，Ｍ１９９Ｖ，Ｎ０２５
Ｃ，Ｎ０２５Ｅ，Ｎ０２５Ｆ，Ｎ０２５Ｉ，Ｎ０２５Ｋ，Ｎ０２５Ｌ，Ｎ０２５Ｍ，Ｎ０
２５Ｑ，Ｎ０２５Ｖ，Ｎ０２５Ｙ，Ｎ０６１Ｆ，Ｎ０６１Ｐ，Ｎ０６１Ｓ，Ｎ０６１Ｔ，
Ｎ０７６Ｇ，Ｎ０７８Ｓ，Ｎ１０１Ａ，Ｎ１０９Ｍ，Ｎ１０９Ｑ，Ｎ１０９Ｒ，Ｎ１１７
Ａ，Ｎ１１７Ｍ，Ｎ１１７Ｑ，Ｎ１１８Ｄ，Ｎ１１８Ｇ，Ｎ１１８Ｈ，Ｎ１１８Ｑ，Ｎ１
１８Ｒ，Ｎ１１８Ｓ，Ｎ１８４Ａ，Ｎ１８４Ｃ，Ｎ１８４Ｇ，Ｎ１８４Ｌ，Ｎ１８４Ｒ，
Ｎ１８４Ｓ，Ｎ１８４Ｔ，Ｎ１８４Ｖ，Ｎ１８４Ｗ，Ｎ２１２Ｃ，Ｎ２１２Ｆ，Ｎ２１２
Ｉ，Ｎ２１２Ｋ，Ｎ２１２Ｌ，Ｎ２１２Ｐ，Ｎ２１２Ｑ，Ｎ２１２Ｒ，Ｎ２１２Ｖ，Ｎ２
１２Ｗ，Ｎ２１２Ｙ，Ｎ２１８Ａ，Ｎ２１８Ｐ，Ｎ２１８Ｔ，Ｎ２４０Ａ，Ｎ２４０Ｅ，
Ｎ２４０Ｇ，Ｎ２４０Ｈ，Ｎ２４０Ｌ，Ｎ２４０Ｒ，Ｎ２４０Ｓ，Ｎ２４０Ｔ，Ｎ２４３
Ｃ，Ｎ２４３Ｑ，Ｎ２４３Ｔ，Ｎ２４３Ｖ，Ｎ２５２Ａ，Ｎ２５２Ｇ，Ｎ２５２Ｋ，Ｎ２
５２Ｑ，Ｐ０１４Ｇ，Ｐ０１４Ｑ，Ｐ０１４Ｒ，Ｐ０１４Ｓ，Ｐ０１４Ｔ，Ｐ０４０Ｆ，
Ｐ０４０Ｌ，Ｐ０４０Ｑ，Ｐ０４０Ｓ，Ｐ０４０Ｖ，Ｐ０８６Ｃ，Ｐ０８６Ｈ，Ｐ０８６
Ｓ，Ｐ１２９Ａ，Ｐ１２９Ｅ，Ｐ１２９Ｇ，Ｐ１２９Ｋ，Ｐ１２９Ｒ，Ｐ１７２Ａ，Ｐ１
７２Ｋ，Ｐ１７２Ｑ，Ｐ１７２Ｓ，Ｐ１９４Ａ，Ｐ１９４Ｇ，Ｐ１９４Ｈ，Ｐ１９４Ｌ，
Ｐ１９４Ｍ，Ｐ１９４Ｑ，Ｐ１９４Ｒ，Ｐ１９４Ｖ，Ｐ１９４Ｗ，Ｐ１９４Ｙ，Ｐ２１０
Ａ，Ｐ２１０Ｇ，Ｐ２１０Ｌ，Ｐ２１０Ｓ，Ｐ２３９Ｋ，Ｐ２３９Ｒ，Ｑ００２Ａ，Ｑ０
０２Ｓ，Ｑ０１０Ａ，Ｑ０１０Ｎ，Ｑ０１０Ｒ，Ｑ０１０Ｔ，Ｑ０１９Ａ，Ｑ０１９Ｃ，
Ｑ０１９Ｄ，Ｑ０１９Ｇ，Ｑ０１９Ｓ，Ｑ０１９Ｔ，Ｑ０１９Ｖ，Ｑ０５９Ｉ，Ｑ０５９
Ｖ，Ｑ１０３Ｓ，Ｑ１８５Ｆ，Ｑ１８５Ｈ，Ｑ１８５Ｉ，Ｑ１８５Ｋ，Ｑ１８５Ｎ，Ｑ１
８５Ｓ，Ｑ１８５Ｙ，Ｑ２０６Ｈ，Ｑ２０６Ｌ，Ｑ２０６Ｐ，Ｑ２０６Ｗ，Ｑ２１７Ｆ，
Ｑ２１７Ｈ，Ｑ２１７Ｉ，Ｑ２１７Ｋ，Ｑ２１７Ｌ，Ｑ２１７Ｎ，Ｑ２１７Ｖ，Ｑ２７１
Ｇ，Ｑ２７１Ｒ，Ｑ２７１Ｔ，Ｑ２７５Ｆ，Ｑ２７５Ｐ，Ｑ２７５Ｒ，Ｒ１８６Ａ，Ｒ１
８６Ｉ，Ｒ１８６Ｋ，Ｓ００３Ａ，Ｓ００３Ｆ，Ｓ００３Ｇ，Ｓ００３Ｈ，Ｓ００３Ｋ，
Ｓ００３Ｒ，Ｓ００３Ｔ，Ｓ００９Ｔ，Ｓ０１８Ｎ，Ｓ０１８Ｔ，Ｓ０３７Ｇ，Ｓ０３７
Ｔ，Ｓ０３７Ｖ，Ｓ０３８Ｇ，Ｓ０３８Ｑ，Ｓ０６３Ｎ，Ｓ０６３Ｑ，Ｓ０６３Ｔ，Ｓ０
８９Ｍ，Ｓ０８９Ｎ，Ｓ１３０Ｋ，Ｓ１３０Ｌ，Ｓ１３０Ｒ，Ｓ１３０Ｗ，Ｓ１３２Ｎ，
Ｓ１４５Ｇ，Ｓ１４５Ｋ，Ｓ１４５Ｍ，Ｓ１４５Ｒ，Ｓ１４５Ｖ，Ｓ１５９Ｃ，Ｓ１５９
Ｈ，Ｓ１５９Ｌ，Ｓ１５９Ｑ，Ｓ１５９Ｒ，Ｓ１５９Ｔ，Ｓ１５９Ｗ，Ｓ１６１Ａ，Ｓ１
６１Ｃ，Ｓ１６１Ｇ，Ｓ１６１Ｈ，Ｓ１６１Ｉ，Ｓ１６１Ｋ，Ｓ１６１Ｐ，Ｓ１６１Ｑ，
Ｓ１６１Ｒ，Ｓ１６２Ｆ，Ｓ１６２Ｇ，Ｓ１６２Ｉ，Ｓ１６２Ｌ，Ｓ１６２Ｍ，Ｓ１６２
Ｎ，Ｓ１６２Ｐ，Ｓ１６２Ｒ，Ｓ１６３Ｇ，Ｓ１７３Ａ，Ｓ１７３Ｇ，Ｓ１８２Ｆ，Ｓ１
８２Ｇ，Ｓ１８２Ｋ，Ｓ１８２Ｎ，Ｓ１８２Ｑ，Ｓ１８２Ｖ，Ｓ１８３Ａ，Ｓ１８３Ｍ，
Ｓ１８３Ｑ，Ｓ１８３Ｒ，Ｓ１８３Ｔ，Ｓ１８８Ａ，Ｓ１８８Ｆ，Ｓ１８８Ｇ，Ｓ１８８
Ｐ，Ｓ１８８Ｒ，Ｓ１８８Ｔ，Ｓ１８８Ｖ，Ｓ１９０Ｃ，Ｓ２０４Ａ，Ｓ２０４Ｇ，Ｓ２
０４Ｉ，Ｓ２０４Ｌ，Ｓ２０４Ｑ，Ｓ２０４Ｒ，Ｓ２０４Ｖ，Ｓ２０７Ｇ，Ｓ２２４Ａ，
Ｓ２２４Ｔ，Ｓ２３６Ｃ，Ｓ２３６Ｄ，Ｓ２３６Ｅ，Ｓ２３６Ｇ，Ｓ２３６Ｎ，Ｓ２４８
Ａ，Ｓ２４８Ｆ，Ｓ２４８Ｋ，Ｓ２４８Ｍ，Ｓ２４８Ｔ，Ｓ２４９Ａ，Ｓ２４９Ｒ，Ｓ２
４９Ｔ，Ｓ２４９Ｖ，Ｓ２４９Ｗ，Ｓ２４９Ｙ，Ｓ２６０Ｇ，Ｓ２６０Ｈ，Ｓ２６０Ｋ，
Ｓ２６０Ｎ，Ｔ０２２Ａ，Ｔ０２２Ｇ，Ｔ０２２Ｑ，Ｔ０２２Ｓ，Ｔ０２２Ｖ，Ｔ０２２
Ｙ，Ｔ０５５Ａ，Ｔ０５５Ｋ，Ｔ１５８Ａ，Ｔ１５８Ｓ，Ｔ２０８Ｌ，Ｔ２０８Ｓ，Ｔ２
０８Ｖ，Ｔ２２０Ｓ，Ｔ２４２Ｄ，Ｔ２４２Ｎ，Ｔ２４２Ｓ，Ｔ２４４Ｅ，Ｔ２４４Ｇ，
Ｔ２４４Ｉ，Ｔ２４４Ｒ，Ｔ２４４Ｖ，Ｔ２４４Ｗ，Ｔ２５３Ａ，Ｔ２５３Ｇ，Ｔ２５３
Ｎ，Ｔ２５３Ｓ，Ｔ２５４Ｓ，Ｔ２５４Ｖ，Ｔ２５５Ｈ，Ｔ２５５Ｉ，Ｔ２５５Ｋ，Ｔ２
５５Ｌ，Ｔ２５５Ｑ，Ｔ２５５Ｒ，Ｔ２５５Ｓ，Ｔ２５５Ｙ，Ｖ００４Ａ，Ｖ００４Ｎ，
Ｖ００４Ｐ，Ｖ００４Ｗ，Ｖ００８Ａ，Ｖ００８Ｍ，Ｖ０２６Ｉ，Ｖ０４５Ｓ，Ｖ０４５
Ｗ，Ｖ０５１Ｉ，Ｖ０８１Ｑ，Ｖ０８１Ｔ，Ｖ０８４Ｃ，Ｖ０９３Ｉ，Ｖ０９５Ｃ，Ｖ１
４３Ａ，Ｖ１４３Ｅ，Ｖ１４３Ｆ，Ｖ１４３Ｎ，Ｖ１４３Ｓ，Ｖ１４７Ｉ，Ｖ１４７Ｌ，
Ｖ１４７Ｓ，Ｖ１４７Ｔ，Ｖ１４８Ｉ，Ｖ１４９Ｃ，Ｖ１４９Ｉ，Ｖ１６５Ｍ，Ｖ１８０
Ａ，Ｖ１８０Ｃ，Ｖ１８０Ｉ，Ｖ１８０Ｌ，Ｖ１８０Ｔ，Ｖ１９２Ａ，Ｖ１９２Ｃ，Ｖ１
９２Ｉ，Ｖ１９２Ｓ，Ｖ１９２Ｔ，Ｖ１９２Ｙ，Ｖ１９８Ｌ，Ｖ２０３Ａ，Ｖ２０３Ｆ，
Ｖ２０３Ｋ，Ｖ２０３Ｌ，Ｖ２０３Ｍ，Ｖ２０３Ｎ，Ｖ２０３Ｙ，Ｗ２４１Ｙ，Ｙ００６
Ａ，Ｙ００６Ｇ，Ｙ００６Ｈ，Ｙ００６Ｌ，Ｙ００６Ｎ，Ｙ００６Ｐ，Ｙ００６Ｑ，Ｙ０
０６Ｔ，Ｙ０２１Ｅ，Ｙ０２１Ｋ，Ｙ０２１Ｌ，Ｙ０２１Ｎ，Ｙ０２１Ｑ，Ｙ０２１Ｒ，
Ｙ０２１Ｓ，Ｙ０２１Ｔ，Ｙ１０４Ｆ，Ｙ１０４Ｉ，Ｙ１０４Ｖ，Ｙ１７１Ｆ，Ｙ２１４
Ｆ，Ｙ２１４Ｌ，Ｙ２１４Ｗ，Ｙ２６２Ｆ，及びＹ２６２Ｓからなる群から選択される配
列番号６に対する少なくとも１つの置換、
（ｉｉｉ）Ａ０８８Ｔ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ，Ｎ０６１Ｓ−Ｎ１０
９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２６０Ｐ，Ｓ００９Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｋ
１４１Ｒ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ００９Ｔ−Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ
−Ｋ１４１Ｒ，及びＳ１６２Ｇ−Ｋ２５６Ｒからなる群から選択される配列番号６に対す
る少なくとも１組のアミノ酸置換、
（ｉｖ）Ａ１１６Ｔ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ｇ０２４Ｅ−Ａ１１６Ｔ，Ｋ０４３
Ｙ，Ｎ０７６Ｄ−Ａ１１６Ｔ，Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ０
３３Ｔ−Ｓ０６３Ｇ，Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ００１Ｅ−Ｓ２４９Ａ，Ａ０８８Ｔ−
Ａ１１６Ｔ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１２８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ，Ａ０８８Ｔ−Ｌ２５７
Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｓ２４９Ａ，Ａ１
１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ，Ａ１２８Ｓ，Ａ１２８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，
Ａ１２８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ１２８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１２８
Ｓ−Ｔ１５８Ｓ，Ｇ０２４Ｅ−Ａ０８８Ｔ，Ｇ０２４Ｅ−Ａ１２８Ｓ，Ｇ０２４Ｅ−Ｇ１
３１Ｈ，Ｇ０２４Ｅ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ０２４Ｅ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ０２４Ｅ−Ｎ２１８Ｓ，
Ｇ０２４Ｅ−Ｎ２４３Ｖ，Ｇ０２４Ｅ−Ｓ１６２Ｇ，Ｇ０２４Ｅ−Ｓ２４９Ａ，Ｇ０２４
Ｅ−Ｔ１５８Ｓ，Ｇ１３１Ｈ，Ｇ１３１Ｈ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４９Ａ，Ｋ０
４３Ｙ−Ａ０８８Ｔ，Ｋ０４３Ｙ−Ａ１１６Ｔ，Ｋ２５６Ｒ，Ｎ０７６Ｄ−Ｋ２５６Ｒ，
Ｎ１０９Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８
Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ａ，Ｎ１
０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ，Ｎ１０９Ｇ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−
Ｎ２１８Ｓ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７
Ｇ，Ｎ２４３Ｖ，Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２
４８Ｎ，Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４９Ａ，Ｑ１０３Ｈ−Ａ１２８Ｓ，Ｑ１０３Ｈ−Ｇ１３１Ｈ，
Ｑ１０３Ｈ−Ｋ２５６Ｒ，Ｑ１０３Ｈ−Ｌ２５７Ｇ，Ｑ１０３Ｈ−Ｎ２４３Ｖ，Ｑ１０３
Ｈ−Ｓ２４８Ｎ，Ｑ１０３Ｈ−Ｓ２４９Ａ，Ｑ１０３Ｈ−Ｔ１５８Ｓ，Ｑ２０６Ｄ−Ｎ２
４３Ｖ，Ｓ０３３Ｔ−Ａ１２８Ｓ，Ｓ０３３Ｔ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ０７６Ｄ，
Ｓ０３３Ｔ−Ｎ２１８Ｓ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ２４８Ｎ，Ｓ０３３Ｔ−Ｔ１５８Ｓ，Ｓ０６３
Ｇ−Ａ１２８Ｓ，Ｓ０６３Ｇ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０６３Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ０６３Ｇ−Ｓ１
６２Ｇ，Ｓ０６３Ｇ−Ｔ１５８Ｓ，Ｓ１６２Ｇ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，
Ｓ２４９Ａ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，及びＴ１５８Ｓ−Ｓ２４９Ａからなる群から選択
される配列番号６に対する少なくとも１組のアミノ酸置換、
（ｖ）Ａ０８８Ｔ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ０２４Ｅ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ０２４Ｅ−Ｌ２５７Ｇ，
Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ，Ｎ１０９Ｇ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０３３
Ｔ−Ｎ１０９Ｇ，Ｓ０３３Ｔ−Ｔ１５８Ｓ，Ｓ０６３Ｇ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ００１Ｅ−Ｌ２
５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１２８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１６９Ａ，Ａ０８８Ｔ−Ｋ２５６Ｒ，
Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８
Ｔ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ，Ａ１１６Ｔ，Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ，Ａ１
１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ，Ａ１１６Ｔ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−
Ｎ２１８Ｓ，Ａ１１６Ｔ−Ｓ１６２Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ，Ａ１２８Ｓ，Ａ１２８
Ｓ−Ｇ１６９Ａ，Ａ１２８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１２８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１２８Ｓ−Ｎ２
１８Ｓ，Ｇ０２４Ｅ，Ｇ０２４Ｅ−Ａ１２８Ｓ，Ｇ０２４Ｅ−Ｇ１３１Ｈ，Ｇ０２４Ｅ−
Ｎ１０９Ｇ，Ｇ０２４Ｅ−Ｎ２４３Ｖ，Ｇ０２４Ｅ−Ｓ０３３Ｔ，Ｇ０２４Ｅ−Ｓ０６３
Ｇ，Ｇ０２４Ｅ−Ｓ２４８Ｎ，Ｇ０２４Ｅ−Ｓ２４９Ａ，Ｇ０２４Ｅ−Ｔ１５８Ｓ，Ｇ１
３１Ｈ，Ｇ１３１Ｈ−Ｇ１６９Ａ，Ｇ１３１Ｈ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ，
Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４９Ａ，Ｇ１６９Ａ，Ｇ１６９Ａ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１６９Ａ−Ｎ２４３
Ｖ，Ｋ０４３Ｙ−Ａ０８８Ｔ，Ｋ０４３Ｙ−Ｎ１０９Ｇ，Ｋ２５６Ｒ，Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２
５７Ｇ，Ｎ０６１Ｇ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ０７６Ｄ−Ｎ１０９Ｇ，Ｎ１０９Ｇ，
Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ，Ｎ１０９Ｇ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９
Ｇ−Ｎ２１８Ｓ，Ｎ１０９Ｇ−Ｓ１６２Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ｓ２
４９Ａ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ，Ｎ２１８Ｓ，Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ２１８Ｓ−
Ｌ２５７Ｇ，Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ２４３Ｖ，Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ２４３
Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４９Ａ，Ｐ０４０Ａ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２
４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｑ１０３Ｈ−Ｋ２５６Ｒ，Ｑ１０３Ｈ−Ｌ２５７Ｇ，
Ｑ１０３Ｈ−Ｎ１０９Ｇ，Ｓ００９Ｔ−Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８
Ｓ−Ｋ１４１Ｒ，Ｓ０３３Ｔ−Ａ０８８Ｔ，Ｓ０３３Ｔ−Ａ１１６Ｔ，Ｓ０３３Ｔ−Ａ１
２８Ｓ，Ｓ０３３Ｔ−Ｇ１３１Ｈ，Ｓ０３３Ｔ−Ｋ０４３Ｙ，Ｓ０３３Ｔ−Ｋ２５６Ｒ，
Ｓ０３３Ｔ−Ｌ２５７Ｇ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ０７６Ｄ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ２１８Ｓ，Ｓ０３３
Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ０３３Ｔ−Ｑ１０３Ｈ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ０６３Ｇ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ１
６２Ｇ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ２４８Ｎ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ２４９Ａ，Ｓ０６３Ｇ，Ｓ０６３Ｇ−
Ａ０８８Ｔ，Ｓ０６３Ｇ−Ａ１１６Ｔ，Ｓ０６３Ｇ−Ａ１２８Ｓ，Ｓ０６３Ｇ−Ｇ１３１
Ｈ，Ｓ０６３Ｇ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０６３Ｇ−Ｎ１０９Ｇ，Ｓ０６３Ｇ−Ｎ２１８Ｓ，Ｓ０
６３Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ０６３Ｇ−Ｓ２４８Ｎ，Ｓ０６３Ｇ−Ｓ２４９Ａ，Ｓ０６３Ｇ−
Ｔ１５８Ｓ，Ｓ１６２Ｇ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ１６２Ｇ−Ｎ２１８Ｓ，Ｓ１６２Ｇ−Ｎ２４３
Ｖ，Ｓ１６２Ｇ−Ｓ２４８Ｎ，Ｓ１６２Ｇ−Ｓ２４９Ａ，Ｓ２４８Ｎ，Ｓ２４９Ａ，Ｓ２
４９Ａ−Ｌ２５７Ｇ，Ｔ１５８Ｓ，Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，及びＴ１５８Ｓ−Ｎ２４３
Ｖからなる群から選択される配列番号６に対する少なくとも１組のアミノ酸置換、
（ｖｉ）Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ｋ２５６Ｒ，Ｌ２５７Ｇ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ
，Ｓ１６２Ｇ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ１６２Ｇ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ０２４Ｅ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ０２
４Ｅ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ０２４Ｅ−Ｓ０３３Ｔ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ，Ｎ２１８Ｓ−Ｌ
２５７Ｇ，Ｓ０３３Ｔ−Ａ０８８Ｔ，Ｓ０３３Ｔ−Ａ１１６Ｔ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ２４３Ｖ
，Ｓ０３３Ｔ−Ｑ１０３Ｈ，Ｓ１６２Ｇ−Ｎ２１８Ｓ，Ｓ１６２Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ｔ１５
８Ｓ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ
１６９Ａ，Ａ０８８Ｔ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｓ１６２Ｇ
，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ，Ａ１１６Ｔ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１
６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ１２８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ１２８Ｓ−Ｎ
２４３Ｖ，Ａ１２８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ｇ０２４Ｅ−Ａ１１６Ｔ，Ｇ０２４Ｅ−Ａ１２８Ｓ
，Ｇ０２４Ｅ−Ｇ１３１Ｈ，Ｇ０２４Ｅ−Ｎ２４３Ｖ，Ｇ０２４Ｅ−Ｓ２４８Ｎ，Ｇ０２
４Ｅ−Ｓ２４９Ａ，Ｇ０２４Ｅ−Ｔ１５８Ｓ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ
１５８Ｓ，Ｇ１６９Ａ−Ｎ２１８Ｓ，Ｇ１６９Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｇ１６９Ａ−Ｓ２４８Ｎ
，Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ，Ｎ１０
９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ｓ２４９Ａ，Ｎ２１８Ｓ，Ｎ
２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４９Ａ，Ｎ２４３Ｖ
，Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｑ１０
３Ｈ−Ｎ１０９Ｇ，Ｑ１０３Ｈ−Ｎ２１８Ｓ，Ｓ０３３Ｔ−Ａ１２８Ｓ，Ｓ０３３Ｔ−Ｌ
２５７Ｇ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ２１８Ｓ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ１６２Ｇ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ２４８Ｎ
，Ｓ０３３Ｔ−Ｔ１５８Ｓ，Ｓ０６３Ｇ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０６３Ｇ−Ｌ２５７Ｇ，Ｓ１６
２Ｇ，Ｓ１６２Ｇ−Ｇ１６９Ａ，Ｓ１６２Ｇ−Ｓ２４８Ｎ，Ｓ２４８Ｎ，Ｓ２４８Ｎ−Ｋ
２５６Ｒ，Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｓ２４９Ａ，Ｔ１５８Ｓ−Ｓ１６２Ｇ，及びＴ１５
８Ｓ−Ｓ２４８Ｎからなる群から選択される配列番号６に対する少なくとも１組のアミノ
酸置換、
（ｖｉｉ）Ｓ０３３Ｔ−Ｎ０７６Ｄ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ００１Ｅ−Ｓ０３３
Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ２１８Ｓ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ０６３Ｇ−Ｑ１
０３Ｈ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｇ１６９Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ１２８Ｓ−
Ｇ１６９Ａ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ０６３Ｇ−Ｑ１０３Ｈ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１
Ｈ−Ｇ１６９Ａ−Ｎ２４３Ｐ，Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ｓ０３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１
２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０３３Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−
Ｎ２４３Ｐ，Ｐ０４０Ｅ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ，Ｓ０３３Ｔ−Ａ１２８
Ｓ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１
０９Ｇ−Ｇ１６９Ａ，Ｓ０６３Ｇ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ，Ｇ１６９Ａ，
Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０３３
Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ００１Ｅ−Ｇ１
６９Ａ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１６９Ａ，Ｇ１６９Ａ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ，
Ｓ０３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｐ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１６９
Ａ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ０７６Ｄ−Ｇ１６９Ａ，Ａ００１Ｅ−Ｇ１３１Ｈ−Ｇ１６９Ａ−Ｎ２
４３Ｖ，Ｇ１６９Ａ−Ｓ２４９Ａ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ，Ｇ１６９Ａ−Ｓ２４８Ｎ，
Ｋ０４３Ｙ−Ｇ１６９Ａ，Ｋ０４３Ｙ−Ｎ２１８Ｓ，Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ２１８
Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ０６３Ｇ−Ｇ１６９Ａ，Ａ００１Ｅ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２
４３Ｖ，Ａ００１Ｅ−Ｓ０３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ，
Ｇ０２４Ｅ−Ｎ２１８Ｓ，Ｇ０２４Ｅ−Ｓ０３３Ｔ，Ｇ１６９Ａ−Ｑ２０６Ｄ，Ｎ０７６
Ｄ−Ｎ２１８Ｓ，Ｓ０３３Ｔ−Ｌ２５７Ｇ，Ｓ１６２Ｇ−Ｇ１６９Ａ，Ａ００１Ｅ−Ｎ２
１８Ｓ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ，Ｇ１６９Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ２１８Ｓ，Ｐ０４０Ａ−
Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ０７６
Ｄ，Ａ００１Ｅ−Ｓ０３３Ｔ，Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ，Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ｓ０
１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ，Ｓ０３３Ｔ−Ｋ０４３Ｙ，Ｓ０３３Ｔ−
Ｎ２４３Ｖ，Ｓ０３３Ｔ−Ｑ２０６Ｄ，Ｓ０６３Ｇ−Ｎ２１８Ｓ，Ｓ１６２Ｇ−Ｎ２１８
Ｓ，Ｔ１５８Ｓ−Ｇ１６９Ａ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１６９Ａ，Ｇ１３１Ｈ−Ｇ１６９Ａ，Ｎ０
６１Ｓ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２６０Ｐ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−
Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ａ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８
Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ａ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２
４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ００９Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−
Ａ１２８Ｓ−Ｋ１４１Ｒ，Ｓ００９Ｔ−Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８
Ｓ−Ｋ１４１Ｒ，Ｓ０３３Ｔ−Ａ０８８Ｔ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ０６３Ｇ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ１
６２Ｇ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ００１Ｅ−Ｎ０７６Ｄ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ，
Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８
Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ００９Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｋ１４１Ｒ−Ｎ２
４３Ｖ，Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ｎ０６１Ｓ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２６０Ｐ，
Ｓ０３３Ｔ−Ａ１１６Ｔ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ２４８Ｎ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ２４９Ａ，Ｓ０３３
Ｔ−Ｔ１５８Ｓ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ，Ｎ１０９Ａ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２
５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ１６２Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−
Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８
Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４９Ａ，Ｑ２０６Ｄ−Ｎ２１８Ｓ，Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０
２１Ｎ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ｎ１０９Ｇ−
Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０３３Ｔ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６
Ｔ−Ａ１２８Ｓ，Ｎ０６１Ｓ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２６０Ｐ，Ｎ１
０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｓ００９Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−
Ｋ１４１Ｒ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ０２４Ｅ−Ａ１２８Ｓ，Ｎ０６１
Ｓ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｓ２６０Ｐ，Ｎ１
０９Ｓ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０３３Ｔ，Ｓ０３３Ｔ−Ｇ１３１Ｈ，
Ａ００１Ｅ−Ａ１２８Ｓ，Ａ１２８Ｓ，Ａ１２８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１２８Ｓ−Ｑ２０６
Ｄ，Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ００９Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｋ１
４１Ｒ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ００９Ｔ−Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ａ１２８Ｓ−Ｋ１４１Ｒ−
Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１２８Ｓ，Ａ１２８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３
Ｖ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ０６１Ｓ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２
６０Ｐ，Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−
Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１２８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１２８Ｓ−Ｓ２４９Ａ，Ｎ０７６
Ｄ−Ａ１２８Ｓ，Ｓ０６３Ｇ−Ａ１２８Ｓ，Ａ１２８Ｓ−Ｓ１６２Ｇ，Ａ１２８Ｓ−Ｔ１
５８Ｓ，Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ｎ０６１Ｓ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２６０Ｐ，
Ｓ０３３Ｔ−Ｑ１０３Ｈ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ，Ｎ０６１Ｓ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３
Ｖ，Ｋ０４３Ｙ−Ａ１２８Ｓ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１
０９Ｇ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ００１Ｅ−Ｇ０２４Ｅ−Ｓ２０４Ｅ−Ｑ２０６Ｄ，Ａ００１Ｅ−
Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ，Ｇ０２４Ｅ−Ｎ１０９Ｇ，Ｋ０４３Ｙ−Ｎ１０９
Ｇ，Ｎ０６１Ｇ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ０７６Ｄ−Ｎ１０９Ｇ，Ｎ１０９Ｇ，Ｎ１
０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ，Ｎ１０９Ｇ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，
Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ａ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｑ２０６Ｄ，Ｓ０６３
Ｇ−Ｎ１０９Ｇ，Ａ００１Ｅ−Ａ１１６Ｔ，Ａ００１Ｅ−Ｎ１０９Ｇ，Ａ００１Ｅ−Ｑ２
０６Ｄ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ１１６Ｔ−Ｌ２５７Ｇ，
Ｇ０２４Ｅ−Ａ１１６Ｔ，Ｇ０２４Ｅ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ０２４Ｅ−Ｎ２４３Ｖ，Ｇ０２４
Ｅ−Ｑ２０６Ｄ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ｓ１
６２Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−
Ｓ２４９Ａ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ，Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ００１Ｅ−Ａ０８８
Ｔ，Ａ００１Ｅ−Ｇ０２４Ｅ，Ａ００１Ｅ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ００１Ｅ−Ｎ０７６Ｄ，Ａ０
０１Ｅ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ，Ａ０８８Ｔ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｑ２０６Ｄ，
Ａ１１６Ｔ，Ａ１１６Ｔ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ｇ０２４Ｅ−Ａ０８８
Ｔ，Ｇ０２４Ｅ−Ｋ０４３Ｙ，Ｇ０２４Ｅ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ０２４Ｅ−Ｎ０７６Ｄ，Ｇ０
２４Ｅ−Ｓ１６２Ｇ，Ｇ０２４Ｅ−Ｓ２４８Ｎ，Ｋ０４３Ｙ−Ａ０８８Ｔ，Ｋ０４３Ｙ−
Ａ１１６Ｔ，Ｋ０４３Ｙ−Ｌ２５７Ｇ，Ｋ０４３Ｙ−Ｎ２４３Ｖ，Ｋ０４３Ｙ−Ｑ２０６
Ｄ，Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ０７６Ｄ−Ａ１１６Ｔ，Ｎ０７６Ｄ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ０
７６Ｄ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ０７６Ｄ−Ｑ２０６Ｄ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，
Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｑ２０６
Ｄ，Ｑ２０６Ｄ−Ｌ２５７Ｇ，Ｑ２０６Ｄ−Ｎ２４３Ｖ，Ｑ２０６Ｄ−Ｓ２４８Ｎ，Ｓ０
６３Ｇ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０６３Ｇ−Ｌ２５７Ｇ，Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ００１Ｅ，
Ａ００１Ｅ−Ｋ０４３Ｙ，Ａ００１Ｅ−Ｓ１６２Ｇ，Ａ００１Ｅ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ００１
Ｅ−Ｓ２４９Ａ，Ａ００１Ｅ−Ｔ１５８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｓ１
６２Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｓ２４９Ａ，Ａ１１６Ｔ−Ｑ２０６Ｄ，
Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４９Ａ，Ｇ０２４Ｅ，Ｇ０２４Ｅ−Ｇ１３１
Ｈ，Ｇ０２４Ｅ−Ｓ２４９Ａ，Ｇ０２４Ｅ−Ｔ１５８Ｓ，Ｇ１３１Ｈ，Ｇ１３１Ｈ−Ｋ２
５６Ｒ，Ｇ１３１Ｈ−Ｌ２５７Ｇ，Ｋ０４３Ｙ−Ｋ２５６Ｒ，Ｋ０４３Ｙ−Ｎ０７６Ｄ，
Ｋ２５６Ｒ，Ｌ２５７Ｇ，Ｎ０７６Ｄ−Ａ０８８Ｔ，Ｎ０７６Ｄ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ０７６
Ｄ−Ｓ１６２Ｇ，Ｎ０７６Ｄ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ０７６Ｄ−Ｓ２４９Ａ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２
４３Ｐ−Ｓ２４８Ａ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｐ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，
Ｎ２４３Ｖ，Ｑ２０６Ｄ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０３３Ｔ−Ｐ０４０Ｅ−Ｑ１０３Ｈ−Ｎ１０９
Ｇ，Ｓ０６３Ｇ，Ｓ０６３Ｇ−Ａ１１６Ｔ，Ｓ０６３Ｇ−Ｑ２０６Ｄ，Ｓ１６２Ｇ−Ｋ２
５６Ｒ，Ｓ１６２Ｇ−Ｌ２５７Ｇ，Ｓ１６２Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ１６２Ｇ−Ｑ２０６Ｄ，
Ｓ１６２Ｇ−Ｓ２４８Ｎ，Ｓ２４８Ｎ，Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｓ２４９Ａ，Ｓ２４９
Ａ−Ｌ２５７Ｇ，Ｔ１５８Ｓ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，及びＴ１５８Ｓ−Ｑ２０６Ｄか
らなる群から選択される配列番号６に対する少なくとも１組のアミノ酸置換、
（ｖｉｉｉ）Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８
８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ
２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ
−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８
８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ａ１５３Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ
２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ
−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１４Ｓ−Ａ１１
６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ
１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ
−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１
６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ
２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ
，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５
８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ
２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｙ００６Ｈ
−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５
８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ
２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ
−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５
７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ
１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ
−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４
３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ
２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ
，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１２Ｄ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５
６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ
２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ
−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｖ１４８Ａ−Ｎ２１
８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ
０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ
−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８
８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ
２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ−Ｎ２６９Ｓ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ
−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１
６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ
２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ
−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５
７Ｇ，Ｓ００３Ｐ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｔ１５８Ｓ−Ｓ
２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ
，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８
８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｖ１４７Ａ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ
２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ
−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１
８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ
２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ
−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０
９Ｇ−Ａ１１６Ｔ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ
０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ
，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５
６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ
２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ
−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４
３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ
２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ
−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８
８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ
１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ
−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｗ２４１Ｒ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８
８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ
０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ
，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０
９Ｇ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ
２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ
−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５
６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ
０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ａ２７４Ｄ，Ａ０８８Ｔ
−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５
６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ
０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ
−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１
６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ
２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ
−Ｑ２７１Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１
６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ，Ｇ
１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｉ２３４Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１３１Ｈ−Ｗ２４１Ｌ
−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ａ１３
７Ｖ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ
１３１Ｈ−Ａ１５１Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ
−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１
６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ
１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ
，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５
８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｗ２４１Ｒ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ
２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ
−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５
７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ
２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ
−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ−Ａ２７４Ｔ，Ｎ１０９Ｇ−Ｋ２５
６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ
２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ
−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｐ０１４Ｌ−Ａ０１５Ｌ−Ｌ０１６Ｃ−Ｈ０１
７Ｔ−Ｓ０１８Ｌ−Ｑ０１９Ｋ−Ｇ０２０Ａ−Ｙ０２１Ｔ−Ｔ０２２Ｌ−Ｇ０２３Ｅ，Ｓ
００３Ｆ−Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ
−Ｌ２５７Ｇ，Ｖ００４Ａ−Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ｖ００
４Ａ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｖ
００４Ｌ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｙ００６Ｈ
−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ００１Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５
８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ
１３１Ｈ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ
，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５
７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ
０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ
−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３
１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ
２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ
，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１
６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ａ２７３Ｔ，Ａ
０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ
，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５
７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ
２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ
−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１
６Ｔ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ
１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ
−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１
６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｓ
２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ
−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１
８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ
２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｎ２６９Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ
−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４
３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ
２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ
−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８
８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ
１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ
−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｖ１４
３Ａ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｖ１４７Ｉ−Ｔ
１
５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｋ２５６Ｒ−
Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８
Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２
４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，
Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１
Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１
３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−
Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３
Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１
５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−
Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８
Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｉ１０７Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１
５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−
Ｇ１３１Ｈ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８
Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０
８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−
Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７
Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２
５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−
Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３
Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０
８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，
Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９
Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１
１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−
Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１
Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１
５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−
Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６
Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１
１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−
Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８
Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２
５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−
Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８
Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０
８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−
Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８
Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２
１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｔ−
Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｔ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７
Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１
１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−
Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ−Ｎ２６９Ｄ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６
Ｔ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ，Ａ０
８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−
Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９
Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１
０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，
Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６
Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２
４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−
Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８
Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１
０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−
Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９
Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２
５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−
Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７
Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２
５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−
Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１
Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２
４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−
Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８
Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２
５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−
Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９
Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１
０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−
Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９
Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２
１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−
Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６
Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ−Ｉ２
６８Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−
Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８
Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２
１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−
Ｋ２５６Ｒ−Ｉ２６８Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８
Ｎ−Ｑ２７５Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２
４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，
Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８
Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２
５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｓ１４５Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−
Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８
Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ−Ｑ２７１Ｈ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１
５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｖ１４３Ａ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−
Ｇ１３１Ｈ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１
Ｈ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１
３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，
Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｉ２３４Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８
Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１
１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−
Ｇ１３１Ｈ−Ｖ１４３Ｆ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ１１６Ｔ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６
Ｔ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２
４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，
Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６
Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１
５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，
Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６
Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２
４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，
Ａ１１６Ｔ−Ｖ１４９Ｉ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｑ２７１
Ｈ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ，Ｇ１
３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ，Ｇ１３１Ｈ−
Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３
Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２
５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，
Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６
Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１
１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−
Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３
Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２
５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−
Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｉ２６８Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１
Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１
１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−
Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１
Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ，Ｎ１
０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−
Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８
Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１
０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−
Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｇ２１１
Ｖ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２
５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ｎ１０９Ｇ−
Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９
Ｇ
−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１
６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ
１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ
−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｑ２７
５Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ａ１３７Ｖ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ
１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２３７Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ
−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４
８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ
１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ１４５Ｆ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ
，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４
８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ
１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ
−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５
６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ
１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ
−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｑ２７１Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０
９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ
１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ
−Ｉ２６８Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１
８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ
２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ
−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４
８Ｎ，Ｎ１０９Ｓ−Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ２１８Ｓ，Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ
２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ２４３Ｖ
，Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４
８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｓ１０５Ｐ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ
２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ２４８Ｎ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ
，及びＴ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇからなる群から選択される配列番号６に対す
る少なくとも１組のアミノ酸置換、
（ｉｘ）Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７
Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ−Ｎ２６９Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１
１６Ｔ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−
Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９
Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２
１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ａ２７３Ｔ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−
Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８
Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１
５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−
Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８
Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１
０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−
Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６
Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０
８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−
Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８
Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｉ２６８Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２
４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−
Ａ１１６Ｔ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９
Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１
０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−
Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｓ００３Ｐ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８
Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２
１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−
Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８
Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２
５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−
Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３
Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２
５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−
Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８
Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２
４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，
Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７
Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｑ２
７５Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ａ２１６Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−
Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８
Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１
５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−
Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３
Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２
４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｎ２６９Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，
Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６
Ｔ−Ｖ１４７Ｉ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１
３１Ｈ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−
Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６
Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０
８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−
Ｉ１０７Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３
Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｉ１０７Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２
４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ａ１５３Ｓ−
Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１
Ｈ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２
１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−
Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８
Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２
１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−
Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８
Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２
１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−
Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１
Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１
０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−
Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８
Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２
５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｔ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−
Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｔ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９
Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２
５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−
Ｌ２５７Ｇ−Ｎ２６９Ｄ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ，Ａ０８８
Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１
５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−
Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８
Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１
１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−
Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９
Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ａ１３８Ｖ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２
５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−
Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３
Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２
４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−
Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８
Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２
１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−
Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３
Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２
４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｖ１４９Ａ−Ｋ２５６Ｒ−
Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８
Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１
０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−
Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８
Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２
４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，
Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８
Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｑ２７５Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１
５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−
Ｉ２６８Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８
Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２
１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−
Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８
Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｖ１４３Ａ−Ｔ１
５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｖ１４７Ｉ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−
Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１４Ｓ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６
Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２
５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−
Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１
Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２
５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−
Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｉ２３４Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６
Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１
１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−
Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８
Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ−Ｑ２７１Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２
４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，
Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｉ１０７Ｔ−Ｎ１０９
Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２
５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ａ１３７Ｖ−Ｔ１５８Ｓ−
Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ａ１５１
Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２
１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−
Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７
Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１
１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，
Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８
Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１
０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−
Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６
Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２
４
３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ
１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｇ２１１Ｖ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ
，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５
８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ
２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２３７Ｎ
，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３
１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ
２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ
−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４
８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ
１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ
−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１
８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ
２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ
−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５
７Ｇ，Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｓ００３Ｆ−Ａ
０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ
，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２３３Ｓ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４
８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｖ００４Ａ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ
２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｙ００６Ｈ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ
−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ａ２７２Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ０９８Ｓ−Ｎ２１
８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ−Ｌ
２６７Ｍ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ
−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ａ２７４Ｔ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１
８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ
２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ
−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５
６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ
２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ
−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４
８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ
２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ
，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１
６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ
２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ａ２７４Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ
−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４
８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ
２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ
，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８
８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ
１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ
−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１
８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ
２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ
−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１
８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ
２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ
−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３
１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ
１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ
−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３
１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ
１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ
−Ａ１１６Ｔ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８
８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ
２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ
−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４
３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ
０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ
−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５
６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｓ
２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ
−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１
８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ
０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ
−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１
６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ
１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ
−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５
８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ
１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ
−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３
１Ｈ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ
１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ
−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５
７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ
１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ
−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５
７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ
１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｔ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ
，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３
１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ
１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ
−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１
８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ
２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ
−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４
３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ
２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ
，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８
８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ−Ｉ２６８Ｖ，Ａ
０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ
−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４
８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ
２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ
−Ｇ１３１Ｈ−Ｄ１４０Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８
８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ
１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ
−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５
６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ
０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ
−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５
７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ
２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ
−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１
８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ
１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ
−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１
６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ
１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ
−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０
９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ
１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ
−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０
９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ
１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ
−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５
８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ
１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ
−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０
９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ
２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ
−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３
１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ
１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ
−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８
８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ
２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｔ
−
Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３
Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１
５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−
Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６
Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１
０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，
Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７
Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１
１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，
Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８
Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０
８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−
Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７
Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１
０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−
Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９
Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１
０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−
Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４８
Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２
５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−
Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８
Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１
０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−
Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９
Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１
０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，
Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８
Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２
４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−
Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８
Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２
５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，
Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９
Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１
１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−
Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６
Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０
８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−
Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８
Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０
８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−
Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１
Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２
４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−
Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８
Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１
０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−
Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９
Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１
５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−
Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８
Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２
４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−
Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８
Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１
５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−
Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３
Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２
４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−
Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３
Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１
５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−
Ｔ１５８Ｓ−Ｗ２４１Ｒ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１
Ｈ−Ｖ１４８Ａ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１
０９Ｇ−Ｇ１５４Ａ−Ｎ１５５Ｐ−Ｅ１５６Ｔ−Ｇ１５７Ｌ−Ｔ１５８Ｍ−Ｓ１５９Ｅ−
Ｇ１６０Ｅ−Ｓ１６１Ｌ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８
Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２
１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，
Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３
Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０
８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−
Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６
Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０
８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，
Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６
Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２
５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−
Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８
Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１
５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−
Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８
Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０
８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｖ１４７Ａ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−
Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ−Ｉ２６８Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８
Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２
４８Ｎ−Ｎ２６９Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−
Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ−Ｑ２７１Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８
Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２
４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，
Ａ０８８Ｔ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７
Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１
５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−
Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８
Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２
４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−
Ｌ２５７Ｇ−Ｑ２７１Ｈ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８
Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２
４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｖ１４７Ａ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｋ２５６Ｒ，
Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６
Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１
３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−
Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７
Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２
４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，
Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ａ２３１Ｖ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６
Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１
５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−
Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８
Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１
５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−
Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８
Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２
４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，
Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１
Ｈ−Ｖ１４３Ｆ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ１１６Ｔ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２
１８Ｓ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−
Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６
Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２
１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−
Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７
Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２
５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−
Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ１１６
Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２
４３Ｖ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１１６Ｔ−
Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８
Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２
５
６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ
２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ
，Ｇ１３１Ｈ−Ｋ１４１Ｒ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１
８Ｓ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ
２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｇ１３１Ｈ
−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４
８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ
１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｉ２３４Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ
，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５
８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ
２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ
−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１３
１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ
２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ａ１４４Ｖ
−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３
１Ｈ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ
２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ
−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４
８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ
２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ
−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３
１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ
１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ
，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１
６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ
１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ
−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３
１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ
１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ
−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１
６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ
１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ
−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５
８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ
２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ
−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｖ１４９Ａ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１
８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ，Ｎ
１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ
−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４
３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｉ２６８Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ
２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ
−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ，Ｎ１０
９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ
１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ
−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４
８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ
２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ
−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０
９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ
１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｑ２７５Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ
−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３
１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ
１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ
−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４
３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ１４５Ｆ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ
２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ
，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５
８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ
１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ
−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５
８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ
１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ
−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５
８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ−Ａ２７４Ｔ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ
１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ
−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４
３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ
２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ
−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１
８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ
２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｓ２６０Ｆ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ
，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０
９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ
２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｓ１８２Ｆ−Ｓ２０４Ｆ−Ｓ２０７Ｌ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２３６Ｆ
−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５
８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ
２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ
−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０
９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ
２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ
−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ２１８Ｓ，Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４
８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ
２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ
，Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ−Ｑ２７１Ｒ，Ｓ００３Ｐ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５
８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ２４８Ｎ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ
２１８Ｓ−Ａ２７２Ｖ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ
−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５
７Ｇ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ
２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｔ１５８Ｓ
−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｖ００４Ａ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３
１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，及びＹ００６Ｈ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ
−Ｓ２４８Ｎからなる群から選択される配列番号６に対する少なくとも１組のアミノ酸置
換、
（ｘ）Ｓ０１８Ｆ−Ｓ１６２Ｌ，Ｓ０１８Ｐ−Ｄ１２０Ｎ，Ｐ０１４Ｔ−Ｓ０３７Ｔ，
Ｓ００９Ｔ−Ｋ１４１Ｒ，及びＳ１６１Ｐ−Ｓ１６２Ｌからなる群から選択される配列番
号６に対する少なくとも１組のアミノ酸置換、
（ｘｉ）Ｉ０３１Ｖ−Ｓ０３８Ｗ，Ｐ０１４Ｔ−Ｓ０３７Ｔ，Ｓ０１８Ｆ−Ｓ１６２Ｌ
，Ｓ０１８Ｐ−Ｄ１２０Ｎ，及びＳ１６２Ｌ−Ｄ１８１Ｈからなる群から選択される配列
番号６に対する少なくとも１組のアミノ酸置換、
（ｘｉｉ）Ｙ２１Ｈ−Ｄ２５９Ｇ，Ｓ１８３Ｔ−Ｓ２４９Ｒ，Ｎ６１Ｄ−Ｑ２０６Ｒ，
Ｙ２６２Ｎ−Ｑ２７５Ｒ，Ｋ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｓ，Ａ１３３Ｖ−Ｄ２５９Ｎ，及びＩ０
７９Ｖ−Ｑ２１７Ｈからなる群から選択される配列番号６に対する少なくとも１組のアミ
ノ酸置換、
（ｘｉｉｉ）Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ
，Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１４Ｓ−Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ８８Ｔ
−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１４Ｓ−Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ１８３Ｌ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４
３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ１８３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ
２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｍ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ，Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｓ−Ａ１１６Ｔ−
Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３
Ｖ，Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｍ−Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０
９Ｓ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２
４３Ｖ，Ｎ１０１Ｑ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−
Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｐ１２９Ｓ−Ｓ１３０
Ｔ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，及びＡ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ
２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖからなる群から選択される配列番号６に対する少なくとも１組のア
ミノ酸置換、
（ｘｉｖ）Ｓ３３Ｔ−Ｔ５５Ｐ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｇ−Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１
６Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ３３Ｔ−Ｎ６１Ｇ−Ｓ６３
Ｇ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ３３Ｔ−Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９
Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８
Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｇ１６９Ａ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４９Ｑ，Ｓ３３Ｔ−Ｎ６１
Ｇ−Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ３３
Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ３３Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１
８Ｓ，Ａ１Ｇ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２２４Ａ
−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２２４Ａ
−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４９Ｑ，Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２２４
Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３
Ｖ，Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１４Ｓ−Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ８８
Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１４Ｓ−Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ１８３Ｌ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２
４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１４Ｓ−Ａ１２８Ｓ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１４Ｓ−Ａ１２８Ｓ−
Ｓ１８３Ｌ−Ｓ２２４Ａ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１４Ｓ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ，Ｎ１０９
Ｇ−Ａ１１４Ｓ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１
６Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ６１Ｇ−Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１
６Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ１８３Ｖ，Ｎ
１０９Ｇ−Ａ１１４Ｓ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ
−Ｓ２４８Ａ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２
８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ
１２８Ｓ−Ｓ１８３Ｌ−Ｓ２２４Ａ，Ｎ６１Ｇ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ，
Ｎ１０９Ｍ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ，Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｓ−Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ
−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｍ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ６３
Ｇ−Ａ１２８Ｓ，Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０１Ｑ−Ｎ１０
９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ
２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ，Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｇ，Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ，Ｎ
１０９Ｇ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ６１Ｇ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ
１２８Ｓ−Ｇ１６９Ａ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−
Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｐ１２９Ｓ−Ｓ１３０
Ｔ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，及びＡ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ
２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖからなる群から選択される配列番号６に対する少なくとも１組のア
ミノ酸置換、並びに、
（ｘｖ）Ｇ２４Ｓ−Ｇ５３Ｓ−Ｎ７８Ｓ−Ｇ９７Ａ−Ｎ１０１Ｓ−Ａ１２８Ｓ，Ｉ３１
Ｌ−Ｓ３３Ｔ−Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１６９Ａ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３
Ｖ，Ａ１Ｇ−Ｉ３１Ｌ−Ｓ３３Ｔ−Ｔ５５Ｐ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｇ−Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９
Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｇ１６９Ａ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２
４９Ｑ，Ｓ３３Ｔ−Ｎ６１Ｇ−Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｇ１６
９Ａ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ３３Ｔ−Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１６
９Ａ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ３３Ｔ−Ｔ５５Ｐ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｇ−Ａ８８Ｔ−
Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ３３Ｔ
−Ｔ５５Ｐ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｇ−Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ
１３１Ｈ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４９Ｑ，Ｓ３３Ｔ−Ｎ６１Ｇ−Ｓ６３Ｇ−Ｎ１
０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ３３Ｔ−Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１
２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ３３Ｔ−Ｔ５５Ｐ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９
Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９
Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｇ１６９Ａ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４９Ｑ，Ｓ３
３Ｔ−Ｎ６１Ｇ−Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４
３Ｖ，Ｓ３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ３３Ｔ−Ｎ７６
Ｄ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ３３Ｔ−Ｎ７６Ｄ−Ｎ１０９
Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ３３Ｔ−Ｎ６１
Ｇ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ３３Ｔ−Ｎ７６Ｄ−Ａ１２８
Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ｓ３３Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ１Ｇ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｇ−Ｎ
１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｇ−Ｎ
１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４９Ｑ，Ｎ６１Ｐ−
Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ６３Ｇ−
Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｇ−
Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１４Ｓ
−Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１４Ｓ−Ａ１１６
Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ１８３Ｌ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１４Ｓ−Ａ１
２８Ｓ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１４Ｓ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ１８３Ｌ−Ｓ２２４Ａ，Ｎ１０９Ｇ−
Ａ１１４Ｓ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１４Ｓ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４
Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４
３Ｖ，Ｎ６１Ｇ−Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４
３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ１８３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１４Ｓ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ
２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ａ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ
−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０
９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ１８３Ｌ−Ｓ２２４Ａ，Ｎ
６１Ｇ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ，Ｎ７６Ｄ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ
２２４Ａ，Ｎ１０９Ｍ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ１８３Ｌ
，Ｓ３３Ｔ−Ｎ７６Ｄ，Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｓ−Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−
Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｓ−Ａ１２８
Ｓ−Ｓ２２４Ａ，Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｍ−Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４
３Ｖ，Ｎ１０１Ｑ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｐ１２９Ｓ−Ｓ１３０Ｔ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ
２４３Ｖ，Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｍ−
Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ６３Ｇ−Ａ１２８Ｓ，Ｎ１０９Ｓ−Ａ１２８Ｓ
−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ６１Ｓ
−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０１Ｑ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４
３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１
１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ，Ｓ６３Ｇ−Ｎ
１０９Ｇ，Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ６１Ｇ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ
２４３Ｖ，Ｓ３３Ｔ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｇ１
６９Ａ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１６９Ａ−Ｎ
２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−
Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｐ１２９Ｓ−Ｓ１３０Ｔ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３
Ｖ，及びＡ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖから
なる群から選択される配列番号６に対する少なくとも１組のアミノ酸置換；からなる群か
ら選択される。
【０１３６】
第八態様では、本発明は、配列番号２のアミノ酸配列を有するＢＰＮ’スブチリシンプ
ロテアーゼの単離された又は非自然発生型のプロテアーゼ変異体を提供し、上記変異体は
、タンパク質分解活性を有し、Ｓ１８２Ｅ，Ｎ１０９Ｉ，Ｎ１０９Ｄ−Ｙ２１７Ｌ−Ｓ２
４８Ｒ，Ｎ１０９Ｄ−Ｓ１８８Ｒ−Ｙ２１７Ｌ，Ｓ８７Ｄ−Ｙ２１７Ｌ−Ｓ２４８Ｒ，Ｓ
８７Ｒ−Ｎ１０９Ｄ−Ｙ２１７Ｌ−Ｓ２４８Ｒ，Ｓ８７Ｒ−Ｎ１０９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ｙ
２１７Ｌ−Ｓ２４８Ｒ，Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ，Ｍ１２４Ｖ
−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ６２Ｑ−Ｇ９７Ａ，Ｓ８９Ｙ−Ｍ１２４Ｖ，Ｖ６８Ａ，Ｖ６８Ａ−Ａ９
２Ｇ，Ｖ６８Ａ−Ｇ９７Ａ，Ｖ６８Ａ−Ｉ１１１Ｖ，Ｖ６８Ａ−Ｓ８９Ｙ，Ｖ６８Ａ−Ｖ
２２７Ｔ，Ｖ６８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｗ１０６Ｆ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ
２１７Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ｌ１２６Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ｍ１２４Ｖ−Ｌ１２６Ａ−Ｙ
２１７Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ｎ１２３Ｇ−Ｙ２１７Ｑ，Ｌ９６Ｔ−Ｇ９７Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｍ１
２４Ｖ−Ｌ１２６Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ６２Ｑ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ６２Ｑ−Ｇ９
７Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｍ，Ｇ９７Ｇ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１
７Ｅ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ｍ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｅ，Ｇ９７
Ａ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ｄ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ｍ−Ｇ１２８
Ｇ−Ｙ２１７Ｍ，Ｇ９７Ｇ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ｓ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７
Ｑ，Ｇ９７Ｇ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ｓ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｅ，Ｇ９７Ａ
−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｌ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｎ，Ｇ９７Ｑ−Ｇ１２８Ｓ
−Ｙ２１７Ｌ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｍ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｓ
，Ｇ９７Ｄ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ｍ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ｑ−
Ｇ１２８Ｇ−Ｙ２１７Ｄ−Ｓ８７Ｙ，Ｇ９７Ｓ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ
１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｔ，Ｇ９７Ｄ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｅ，Ｇ９７Ｄ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ
２１７Ｌ，Ｇ９７Ｇ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｅ−Ｓ７８Ｐ−Ａ２７２Ｔ，Ｇ９７Ｔ−Ｇ１
２８Ｓ−Ｙ２１７Ｄ，Ｇ９７Ｄ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｉ，Ｇ９７Ｑ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２
１７Ｑ，Ｇ９７Ｇ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｄ，Ｇ９７Ｑ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｎ，Ｇ９
７Ｓ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｍ，Ｇ９７Ｓ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｎ，Ｇ９７Ｓ−Ｇ１２
８Ｓ−Ｙ２１７Ｍ，Ｇ９７Ｅ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｍ，Ｇ９７Ｓ−Ｇ１２８Ｐ−Ｙ２１
７Ｑ，Ｇ９７Ｔ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ｄ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ−Ａ７３
Ｔ，Ｇ９７Ｅ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｎ，Ｇ９７Ｇ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｉ，Ｇ９７Ｑ
−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｄ，Ｇ９７Ｑ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｍ，Ｇ９７Ｒ−Ｇ１２８Ｔ
−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ１６２Ｐ，Ｇ９７Ｓ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｄ，Ｇ９７Ｔ−Ｇ１２８Ｐ
−Ｙ２１７Ｉ，Ｇ９７Ｑ−Ｇ１２８Ｇ−Ｙ２１７Ｅ，Ｇ９７Ｃ−Ｇ１２８Ｇ−Ｙ２１７Ｎ
，Ｇ９７Ｄ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｈ，Ｇ９７Ｍ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｌ，Ｇ９７Ｍ−
Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｎ，Ｇ９７Ｓ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｅ，Ｇ９７Ｍ−Ｇ１２８Ｓ−
Ｙ２１７Ｉ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ｐ−Ｙ２１７Ａ，Ｇ９７Ｒ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｄ，
Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ１４５Ｄ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−
Ｐ２３９Ｒ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ６１Ｅ−Ｐ１２９Ｅ−Ｓ１６２Ｋ−
Ｋ２１３Ｌ−Ｎ２４０Ｋ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ６１Ｅ，Ｇ９７Ａ−Ｇ
１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｐ４０Ｅ−Ａ１４４Ｋ−Ｋ２１３Ｌ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ
２１７Ｑ−Ｐ１２９Ｅ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ６１Ｅ−Ｐ１２９Ｅ−Ｓ
１５９Ｋ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｋ２１３Ｌ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ
２１７Ｑ−Ｓ８７Ｄ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｑ２０６Ｅ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１
２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｒ−Ｐ４０Ｅ−Ｓ１４５Ｄ−Ｓ１５９Ｋ−Ｋ２１３Ｌ，Ｇ９
７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｋ２６５Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２
４Ｒ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｐ４０Ｅ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７
Ｑ−Ｑ２７５Ｅ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｐ１２９Ｅ−Ｓ１４５Ｄ−Ｎ２４
０Ｋ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ａ１４４Ｋ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１
７Ｑ−Ｓ１５９Ｋ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ１６２Ｋ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２
８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ２４０Ｋ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ５３Ｇ，Ｇ９７
Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ７８Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ５３Ｇ
−Ｓ７８Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ５３Ｇ−Ｉ１１１Ｖ，Ｇ９７Ａ−Ｇ
１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ５３Ｇ−Ｎ１１７Ｓ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ
５３Ｇ−Ｓ１３２Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｙ１０４Ｎ−Ｓ１３２Ｎ，Ｇ
９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ５３Ｇ−Ｓ７８Ｎ−Ｉ１１１Ｖ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２
８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ５３Ｇ−Ｓ７８Ｎ−Ｎ１１７Ｓ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７
Ｑ−Ｓ５３Ｇ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ１３２Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ５３Ｇ−
Ｙ１０４Ｎ−Ｓ１３２Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ７８Ｎ−Ｙ１０４Ｎ−
Ｓ１３２Ｎ，Ｙ２１７Ｌ−Ｖ０６８Ｃ−Ａ０６９Ｇ，Ｙ２１７Ｌ−Ｉ０７９Ｆ−Ａ０９８
Ｇ，Ｙ２１７Ｌ−Ｐ０８６Ｔ−Ｓ１０１Ｄ−Ｑ１０３Ｓ−Ｖ１４７Ｉ，Ｙ２１７Ｌ−Ａ０
８８Ｔ−Ｐ１２９Ｓ−Ｇ１４６Ｄ，Ｙ２１７Ｌ−Ｖ０９３Ｉ−Ｇ１２８Ｄ−Ｐ１２９Ｒ，
Ｙ２１７Ｌ−Ｚ０９６．０１Ｄ−Ａ０９８Ｒ，Ｙ２１７Ｌ−Ｚ０９６．０１Ｈ−Ａ０９８
Ｇ，Ｙ２１７Ｌ−Ｇ０９７Ｓ−Ｚ０９７．０１Ｓ−Ａ０９８Ｇ−Ａ２７３Ｔ，Ｙ２１７Ｌ
−Ａ０９８Ｓ−Ｄ０９９Ｇ−Ｇ１００Ｄ，Ｙ２１７Ｌ−Ｚ０９８．０１Ｎ、Ｙ２１７Ｌ−
Ｄ０９９Ｇ−Ｚ０９９．０１Ｎ、Ｙ２１７Ｌ−Ｄ０９９Ｇ−Ｚ０９９．０１Ｓ、Ｙ２１７
Ｌ−Ｄ０９９Ｖ−Ｓ１０１Ｄ，Ｙ２１７Ｌ−Ｚ０９９．０１Ｓ、Ｙ２１７Ｌ−Ｇ１００Ｄ
，Ｙ２１７Ｌ−Ｓ１０１Ｄ−Ｑ１０３Ｈ，Ｙ２１７Ｌ−Ｓ１０１Ｇ−Ａ１５１Ｖ，Ｙ２１
７Ｌ−Ｓ１０１Ｈ−Ｇ１０２Ｓ，Ｙ２１７Ｌ−Ｓ１０１Ｈ−Ｑ１０３Ｄ，Ｙ２１７Ｌ−Ｇ
１０２Ｒ−Ｑ１０３Ｃ−Ｙ１０４Ｃ−Ｖ１９２Ｉ，Ｙ２１７Ｌ−Ｑ１０３Ｄ，Ｙ２１７Ｌ
−Ｖ１２１Ｉ−Ｉ１２２Ｓ−Ｎ１２３Ｃ，Ｙ２１７Ｌ−Ｖ１２１Ｌ−Ｎ１２３Ｃ，Ｙ２１
７Ｌ−Ｉ１２２Ｓ−Ｎ１２３Ｓ，Ｙ２１７Ｌ−Ｍ１２４Ｉ，Ｙ２１７Ｌ−Ｍ１２４Ｖ，Ｙ
２１７Ｌ−Ｌ１２６Ｆ−Ｐ１２９Ｚ−Ｓ１８２Ｎ，Ｙ２１７Ｌ−Ｌ１２６Ｙ，Ｙ２１７Ｌ
−Ｇ１２７Ｓ−Ｐ１２９Ｄ，Ｙ２１７Ｌ−Ｚ１２７．０１Ｎ−Ｇ１２８Ｓ−Ｐ１２９Ｓ，
Ｙ２１７Ｌ−Ｇ１２８Ｈ−Ｐ１２９Ｙ，Ｙ２１７Ｌ−Ｇ１２８Ｓ−Ｐ１２９Ｄ，Ｙ２１７
Ｌ−Ｇ１２８Ｓ−Ｐ１２９Ｄ−Ｓ２４８Ｒ，Ｙ２１７Ｌ−Ｇ１２８Ｓ−Ｐ１２９Ｇ，Ｙ２
１７Ｌ−Ｐ１２９Ｇ−Ｇ１３１Ｚ，Ｙ２１７Ｌ−Ｐ１２９Ｇ−Ｓ１３０Ｈ−Ｓ１３２Ｚ，
Ｙ２１７Ｌ−Ｐ１２９Ｈ−Ｇ１３１Ｚ，Ｙ２１７Ｌ−Ｐ１２９Ｌ，Ｙ２１７Ｌ−Ｐ１２９
Ｓ−Ｓ１３０Ｈ−Ｓ１３２Ｚ，Ｙ２１７Ｌ−Ｐ１２９Ｚ，Ｙ２１７Ｌ−Ｐ１２９Ｚ−Ｓ１
３０Ｇ，Ｙ２１７Ｌ−Ｐ１２９Ｚ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ１３２Ｈ，Ｙ２１７Ｌ−
Ｐ１２９Ｚ−Ｓ１３０Ｈ，Ｙ２１７Ｌ−Ｓ１３０Ｖ−Ｇ１３１Ｄ−Ｓ１３２Ｉ，Ｓ８７Ｔ
−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｈ−Ｇ９
７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ８７Ｇ−Ａ８８Ｖ−Ｓ８９Ａ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ
−Ｙ２１７Ｑ，Ｐ８６Ｓ−Ｓ８７Ｇ−Ａ８８Ｖ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｑ
５９Ｓ−Ｎ６１Ｐ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｇ９７Ａ
−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ６１Ｐ−Ｎ６２Ｓ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，
Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｌ７５Ｓ−
Ｎ７６Ｙ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｖ２０３Ｙ−Ｙ
２１７Ｑ，Ｔ５５Ｐ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ａ８８Ｖ−Ｌ９０Ｉ−Ｇ９７
Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｇ２１１Ｒ−Ｎ２１２Ｓ−Ｋ２１
３Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ２３Ａ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ
，Ｔ２２Ｎ−Ｓ２４Ａ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ２４Ｒ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１
２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ａ９８Ｓ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２
８Ａ−Ｔ１５８Ｇ−Ｓ１５９Ｇ−Ｙ２１７Ｑ，Ｑ５９Ｅ−Ｎ６１Ｐ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８
Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ａ９８Ｅ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ
−Ｙ２１７Ｑ−Ｐ８６Ｓ−Ｓ８７Ｇ−Ａ８８Ｖ−Ａ１１６Ｎ−Ｎ１１７Ｓ−Ｎ１１８Ｇ，
Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ６３Ｔ−Ｐ８６Ｓ−Ｓ８７Ｇ−Ａ８８Ｖ，Ｇ９７
Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｐ８６Ｓ−Ｓ８７Ｇ−Ａ８８Ｖ−Ｐ２３９Ｒ，Ｇ９７Ａ−
Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｎ６１Ｐ−Ｎ６２Ｓ−Ｐ１９４Ｌ−Ａ２
３２Ｔ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ−Ａ
１３３Ｖ−Ｌ２６７Ｖ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ａ１３４Ｔ−Ｌ２６７Ｖ，
Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｒ−Ｐ４０Ｅ−Ｐ１２９Ｅ−Ｓ１５９Ｋ−Ｋ
２６５Ｒ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ａ１３４Ｔ−Ｇ２１１Ｔ，Ｇ９７Ａ−Ｇ
１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｒ−Ｐ１２９Ｅ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｉ
１１１Ｖ−Ｓ１６１Ｐ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ５５Ｐ−Ｐ１２９Ｑ，Ｇ
９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｉ１１５Ｖ−Ｌ２６７Ｖ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ
２１７Ｑ−Ｐ８６Ｓ−Ｓ８７Ｇ−Ａ８８Ｖ−Ａ１１６Ｓ−Ｎ１１７Ｇ−Ｎ１１８Ｒ，Ｇ９
７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｖ２０３Ｙ−Ｌ２６７Ｖ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２
１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８
Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｐ５２Ｓ−Ｔ５５Ｐ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ
−Ｑ５９Ｓ−Ｎ６１Ｐ−Ａ１１６Ｓ−Ｎ１１７Ｇ−Ｎ１１８Ｒ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−
Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ，Ｇ９７Ａ−Ｇ
１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｐ８６Ｓ−Ｓ８７Ｇ−Ａ８８Ｖ−Ｔ２４２Ｒ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２
８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｐ４０Ｅ−Ｔ５５Ｐ−Ｎ２６９Ｋ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７
Ｑ−Ｇ２３Ａ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ａ１１６Ｎ−Ｎ１１７Ｓ−Ｎ１１８Ｇ，Ｇ９７Ａ−
Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｖ８Ｌ−Ｎ２５Ｙ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ，Ｇ
９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ
−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｇ２１１Ｔ−
Ｌ２６７Ｖ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｒ−Ａ１１６Ｎ−Ｎ１１７Ｓ−
Ｎ１１８Ｇ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｒ−Ａ１２８Ｓ−Ｐ１２９Ｇ，
Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ−Ｎ２４０Ｋ
，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ２５Ｙ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ
，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ａ１３４Ｔ，Ｇ
９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ−Ｌ２６７Ｖ，
Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ８７Ｇ−Ａ８８Ｖ−Ｓ８９Ａ−Ａ１１６Ｎ−Ｎ１
１７Ｓ−Ｎ１１８Ｇ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ６１Ｐ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１
３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７
Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ５５Ｐ−
Ｐ１２９Ｖ−Ｐ１９４Ｓ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ５５Ｐ−Ｐ１２９Ｖ，
Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ１０
１
Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ５５Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｉ１１５Ｖ，Ｇ９７Ａ−
Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ２５Ｙ−Ｓ８７Ｇ−Ａ８８Ｖ−Ｓ８９Ａ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２
８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ａ１３４Ｔ−Ｎ２４０Ｋ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２
４Ｒ−Ｑ５９Ｓ−Ｎ６１Ｐ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｇ２３Ａ−Ｓ２４Ｇ−
Ｎ２５Ｇ−Ｐ２３９Ｒ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ５５Ｐ−Ａ１１６Ｓ−Ｎ
１１７Ｇ−Ｎ１１８Ｒ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ａ１３４Ｔ−Ｓ１６１Ｐ，
Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ１０
１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ２５Ｙ−Ｑ５９Ｓ−Ｎ６１Ｐ
，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ２５Ｙ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ
−Ａ１３７Ｔ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｇ２３Ａ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｎ
６１Ｐ−Ｓ６３Ｈ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ５５Ｐ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ７８Ｎ
−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｐ１２９Ｑ−Ｎ２４０
Ｋ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ５５Ｐ−Ａ１３４Ｔ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ
−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ２５Ｙ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｈ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ
８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｐ１２９Ｓ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ５５
Ｐ−Ｌ７５Ｈ−Ｎ７６Ｇ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ
５３Ｇ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ
−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ５５Ｐ−Ｉ１１５Ｖ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ
−Ｔ５５Ｐ−Ａ１１６Ｎ−Ｎ１１７Ｓ−Ｎ１１８Ｇ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ
−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ａ１１６Ｎ−Ｎ１１７Ｓ−Ｎ１１８Ｇ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−
Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｒ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−
Ｙ２１７Ｑ−Ｇ２３Ａ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｇ２１１Ｒ−Ｎ２１２Ｓ−Ｋ２１３Ｖ，Ｇ
９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ７８Ｎ
−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ５５Ｐ−Ｓ７８Ｎ−
Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｉ１
１５Ｖ−Ａ２７３Ｓ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ２５Ｙ−Ｔ５５Ｐ，Ｇ９７
Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ
７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８
Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｑ５９Ｓ−Ｎ６１Ｐ−Ｎ２４０Ｋ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ
−Ｓ１６１Ｐ−Ｌ２６７Ｖ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−
Ｓ５３Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ
，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ，Ｇ
９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ，Ｇ９７
Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−
Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ２４０Ｋ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−
Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ
−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−
Ｔ５５Ｐ−Ｓ１０１Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｈ−Ａ１
２８Ｓ−Ｐ１２９Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ８９Ｙ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１
３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ
１３１Ｓ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｉ１１５Ｖ−Ｎ２４０Ｋ，
Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ５３Ｇ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９
Ｇ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ１６１Ｐ−Ｖ２０
３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｎ２４０Ｋ
，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｐ２３９Ｒ，Ｇ
９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ５５Ｐ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ
−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−
Ｎ２５Ｇ−Ｉ１１５Ｖ−Ａ１３４Ｔ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｙ６Ｑ−Ｐ１
２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ５５Ｐ−Ｓ７
８Ｎ−Ｓ８９Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｔ５５Ｐ−
Ｓ７８Ｎ−Ａ８８Ｖ−Ｓ１０１Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ６
３Ｈ−Ｓ７８Ｎ−Ｉ１１１Ｖ−Ａ１３４Ｔ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４
Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ
２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７
Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ５３Ｇ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ
−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ５３Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，
Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ５３Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７
Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ２４０Ｋ
−Ａ２７３Ｓ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ
８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｑ５９Ｓ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ８７
Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｈ−Ｓ
７８Ｎ−Ｓ１６１Ｐ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｈ−Ｓ７８
Ｎ−Ｉ１１１Ｖ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ５５Ｐ−Ａ１２８Ｓ−Ｐ１２９
Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ
，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ６１Ｅ−Ａ１４４Ｋ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−
Ｙ２１７Ｑ−Ａ１３４Ｔ−Ｐ２３９Ｒ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−
Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７
Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ
１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８
７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７
Ｑ−Ｔ５５Ｐ−Ｎ２４０Ｋ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−
Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｐ１
２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ−Ｐ２３９Ｒ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ
９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ５３Ｇ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２
８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｉ１１１Ｖ−Ｐ１２９Ｑ−Ｇ２１１Ｔ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２
１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８
Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｑ５９Ｓ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ８７Ｇ−Ａ８８Ｖ−Ｓ８９Ａ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１
２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−
Ｓ１０１Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ
−Ｓ１６２Ｋ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ５５Ｐ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ
−Ｇ１３１Ｓ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ５５Ｐ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−
Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ８７Ｇ−Ａ８８Ｖ−Ｓ８９Ａ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ
１３１Ｓ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｔ５５
Ｐ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２
１７Ｑ−Ｉ１１１Ｖ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ
２１７Ｑ−Ｉ１１１Ｖ−Ａ２７３Ｓ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ
８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ２２Ｎ−Ｓ２４Ａ
−Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｈ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ
２１７Ｑ−Ｓ５３Ｇ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ−Ｐ１２９
Ｓ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ１５９Ｋ−Ｌ２６７Ｖ，Ｇ９７
Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｐ４０Ｅ−Ｓ５３Ｙ−Ｓ７８Ｙ−Ｐ８６Ｓ−Ｓ８７Ｇ−Ａ
８８Ｖ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｒ−Ｓ１４５Ｄ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２
８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｉ１１１Ｖ−Ｓ１５９Ｋ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ５
５Ｐ−Ｐ１２９Ｌ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｑ５９Ｓ−Ｎ６１Ｐ−Ｖ２０３
Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ５５Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ
８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２
５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ５３Ｇ
−Ｎ６１Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９
７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ８９Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４
Ｒ−Ｐ１２９Ｖ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ８７Ｇ−Ａ８８Ｖ−Ｓ８９Ａ−
Ａ１１６Ｎ−Ｎ１１７Ｓ−Ｎ１１８Ｇ−Ｐ１７２Ｈ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ
−Ｉ１１１Ｖ−Ａ１３４Ｔ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｑ５９Ｓ−Ｎ６１Ｐ−
Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｐ５Ｓ−Ｓ
８７Ｇ−Ａ８８Ｖ−Ｓ８９Ａ−Ａ１１６Ｇ−Ｎ１１７Ｒ，Ｙ２１７Ｑ−Ｎ６１Ｐ−Ａ９７
Ｇ−Ｇ１０２Ａ−Ａ１２８Ｇ−Ｐ１２９Ｓ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４
Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ７８Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ
１４５Ｄ−Ｓ１５９Ｋ−Ｎ２４０Ｋ−Ｑ２７５Ｅ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−
Ｔ５５Ｐ−Ａ１２８Ｓ−Ｐ１２９Ｄ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｇ２３Ａ−Ｓ
２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｐ１２９Ｄ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２
４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ
９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｉ１１１Ｖ−Ｐ２３９Ｒ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ
２１７Ｑ−Ｓ８７Ｇ−Ａ８８Ｖ−Ｓ８９Ａ−Ｓ１６２Ｋ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１
７Ｑ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｉ１１５Ｖ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ
−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｓ７８Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ５
５Ｐ−Ａ９２Ｇ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−
Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ２
２Ｎ−Ｓ２４Ａ−Ｔ５５Ｐ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ５３Ｇ−Ｓ８７Ｔ−
Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ
２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ，Ｇ
９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ−Ｓ１５９Ｋ，
Ｇ９７Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ６１Ｐ−Ｎ６２Ｑ−Ｇ１００Ｎ−Ａ１２８Ｇ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１
２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｒ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ１８２Ｐ−Ｌ２６７Ｖ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２
８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｐ２３９Ｒ−Ａ２７３Ｓ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ５
３Ｇ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−
Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ−Ｔ２４２Ｒ，Ｇ９７Ａ
−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ３Ｆ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｇ２１１Ｔ，Ｇ９
７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｌ７５Ｈ−Ｎ７６Ｇ，Ｇ９７Ａ−
Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ５３Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８
Ｌ
−Ｓ８９Ｇ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ａ１
４４Ｋ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ
−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｑ５９Ｓ−Ｎ６１Ｐ−Ａ１１６Ｎ−
Ｎ１１７Ｓ−Ｎ１１８Ｇ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ
８９Ｇ−Ｉ１１１Ｖ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｒ−Ｓ１４５Ｄ−Ｐ２
３９Ｒ−Ｑ２７５Ｅ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ１４５Ｄ−Ａ２７３Ｓ，Ｇ
９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｋ１４１Ｅ−Ｔ２４２Ｒ，Ｇ９
７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３
Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ａ１１６Ｎ−Ｎ１１７Ｓ−Ｎ１１８Ｇ−Ｐ１２
９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ８９Ｙ−Ｇ２１
１Ｔ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ８７Ｇ−Ａ８８Ｖ−Ｓ８９Ａ−Ａ１１６Ｎ
−Ｎ１１７Ｓ−Ｎ１１８Ｇ−Ａ１４４Ｔ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ
−Ｎ２５Ｇ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９
７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｐ１２９Ｖ，Ｇ９７Ａ−Ｙ２１７
Ｑ−Ｎ６１Ｐ−Ａ１２８Ｇ−Ｐ１２９Ｓ−Ｓ１３０Ｐ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７
Ｑ−Ｔ５５Ｐ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｇ１１０Ｃ−Ｓ１３０Ｐ，Ｇ
９７Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ１２３Ｇ−Ａ１２８Ｇ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ
６１Ｐ−Ｎ６２Ｑ−Ｇ１００Ｎ−Ｇ１０２Ａ−Ｍ１２４Ｉ，Ｓ７８Ｎ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２
８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２
８Ａ−Ａ１３７Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ６１Ｐ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７
Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｓ１３０Ｐ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ｑ１０３Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１
７Ｑ，Ｓ６３Ｔ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１０２Ａ−Ｇ１２８
Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ｎ１０９Ｄ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４８Ｒ，Ｓ８７
Ｒ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｓ１８８Ｄ−Ｙ２１７
Ｑ，Ｓ８７Ｄ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４８Ｒ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ
−Ｓ１８８Ｄ−Ｓ２４８Ｒ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｓ２４８Ｄ−Ｙ２１７
Ｑ，Ｓ７８Ｎ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｌ２６７Ｖ，Ｓ７８Ｎ−Ｇ９７Ａ−
Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ１６１Ｐ，Ｓ７８Ｎ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−
Ｉ１１５Ｖ，Ｓ７８Ｎ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ａ２７３Ｓ，Ｓ７８Ｎ−Ｇ
９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｇ２１１Ｔ，Ｓ７８Ｎ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２
１７Ｑ，Ｓ７８Ｎ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｉ１１１Ｖ，Ｓ７８Ｎ−Ｇ９７
Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｖ１４７Ｌ，Ｓ７８Ｎ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７
Ｑ−Ｉ１０８Ｖ，Ｓ７８Ｎ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ８９Ｙ，Ｓ７８Ｎ−
Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ａ１３８Ｔ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−
Ａ１３４Ｔ−Ｋ２１３Ｌ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｇ２３Ａ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ
２５Ｇ−Ｐ１２９Ｖ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｒ−Ｐ２３９Ｒ，及び
Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｒ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ，からな
る群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、この変異体のアミノ
酸位置は、配列番号２のアミノ酸配列に対応させることにより番号付けされる。
【０１３７】
本発明の第八態様による変異体は、配列番号２及び／又は配列番号４の配列を有するプ
ロテアーゼと比較して、増大したタンパク質分解活性及び／又は増大したクリーニング活
性を有し得、並びに、成熟型であり得る。本発明の第八態様による変異体は、配列番号２
又は配列番号４に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、
９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含
み得、ここで、この変異体は、タンパク質分解活性を有し、選択的に、配列番号２又は配
列番号４の配列を有するプロテアーゼと比較して、向上したタンパク質分解活性及び／又
は向上したクリーニング活性を有する。
【０１３８】
本発明の第八態様による変異体は、位置２４、２５、４０、５２、５３、５５、５８、
５９、６１、６２、６３、６８、７８、８６、８７、８８、８９、９２、９６、９７、１
００、１０１、１０３、１０４、１０６、１１１、１１４、１１５、１１６、１１７、１
１８、１２３、１２４、１２５、１２６、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１
３３、１３４、１４４、１４５、１５９、１６１、１６２、１６７、１９４、２０３、２
０６、２１３、２１７、２２７、２３２、２３９、２４０、２４２、２６５、２６７及び
２７５からなる群から選択される位置において３、４、５、６、７、８、９、１０、１１
、１２、１３、１４又は１５個のアミノ酸置換を含み得る。第八態様による変異体は、群
（ａ）及び（ｂ）から選択される合計で３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２
、１３、１４又は１５個のアミノ酸置換を含み得る：（ａ）Ｎ６１Ｅ，Ａ１４４Ｋ，Ｐ１
２９Ｅ、Ｐ２３９Ｒ，Ｐ４０Ｅ，Ｑ１０３Ｅ，Ｑ２０６Ｅ，Ｑ７２７５Ｅ，Ｓ１４５Ｄ，
Ｓ１５９Ｋ，Ｓ１６２Ｋ，Ｓ２４Ｒ，Ｓ６３Ｈ，Ｓ８７Ｄ及びＴ２４２Ｒからなる群から
選択される帯電アミノ酸置換、並びに（ｂ）Ａ１１４Ｇ，Ａ１１６Ｎ，Ａ１３３Ｖ，Ａ１
３４Ｔ，Ａ２３２Ｔ，Ａ８８Ｖ，Ａ９２Ｇ，Ｆ５８Ｇ，Ｇ１００Ｔ，Ｇ１２８Ａ，Ｇ１３
１Ｓ，Ｇ９７Ａ，Ｉ１１１Ｖ，Ｉ１１５Ｖ，Ｋ２１３Ｌ，Ｋ２６５Ｎ，Ｌ１２６Ａ，Ｌ２
６７Ｖ，Ｌ９６Ｔ，Ｍ１２４Ｖ，Ｎ１１７Ｓ，Ｎ１１８Ｇ，Ｎ１２３Ｇ，Ｎ２４０Ｋ，Ｎ
２５Ｇ，Ｎ６１Ｐ，Ｎ６２Ｑ，Ｎ６２Ｒ，Ｎ６２Ｓ，Ｐ１２９Ｑ，Ｐ１２９Ｖ，Ｐ１９４
Ｌ，Ｐ２３９Ｖ，Ｐ５２Ｌ，Ｐ８６Ｓ，Ｑ５９Ｓ，Ｓ１０１Ｎ，Ｓ１２５Ａ，Ｓ１３０Ｇ
，Ｓ１３２Ｎ，Ｓ１６１Ｐ，Ｓ２４Ｇ，Ｓ５３Ｇ，Ｓ７８Ｎ，Ｓ８７Ｇ，Ｓ８９Ｙ，Ｔ５
５Ｐ，Ｖ２０３Ｙ，Ｖ２２７Ｔ，Ｖ６８Ａ，Ｗ１０６Ｆ，Ｙ１０４Ｎ，Ｙ１６７Ａ，及び
Ｙ２１７Ｑからなる群から選択される中性アミノ酸置換。第八態様による変異体は、配列
番号２に対して少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、
９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み得る。
【０１３９】
第九態様では、本発明は、以下の群から選択される単離された又は非自然発生型のプロ
テアーゼ変異体を提供する：
（ａ）タンパク質分解活性を有するプロテアーゼ変異体であって、この変異体は、配列
番号２に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、
９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、群（ｉ）〜（Ｖｉｉ）から選択
される配列番号２と比較して少なくとも１組のアミノ酸置換を含む、プロテアーゼ変異体
：
（ｉ）Ｑ０５９Ｖ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１０８Ｖ−Ｇ１２８Ａ−Ｖ１４７Ｑ
−Ｇ２１１Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ２５２Ｑ，Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１０８Ｖ−Ｇ１２
８Ａ−Ｖ１４７Ｑ−Ｇ２１１Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１０８Ｖ−Ｇ
１２８Ａ−Ｖ１４７Ｑ／−Ｇ２１１Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ２５２Ｑ，Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７
Ａ−Ｉ１０８Ｖ−Ｇ１２８Ａ−Ｖ１４７Ｑ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ２５２Ｑ，及びＳ０７８Ｎ−
Ｓ０８７Ｅ−Ｇ０９７Ａ−Ｍ１２４Ｉ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２２４Ａ、
（ｉｉ）Ｑ０５９Ｖ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１０８Ｖ−Ｇ１２８Ａ−Ｖ１４７
Ｑ−Ｇ２１１Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ２５２Ｑ，Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１０８Ｖ−Ｇ１
２８Ａ−Ｖ１４７Ｑ−Ｇ２１１Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１０８Ｖ−
Ｇ１２８Ａ−Ｖ１４７Ｑ−Ｇ２１１Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ２５２Ｑ，Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７
Ａ−Ｉ１０８Ｖ−Ｇ１２８Ａ−Ｖ１４７Ｑ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ２５２Ｑ，及びＳ０７８Ｎ−
Ｓ０８７Ｅ−Ｇ０９７Ａ−Ｍ１２４Ｉ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２２４Ａ、
（ｉｉｉ）Ｇ０９７Ａ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ１６７Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｖ０６８Ａ−Ｙ１６
７Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ１６７Ａ，Ｉ１１１Ｖ−Ｍ
１２４Ｖ−Ｙ１６７Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｖ０６８Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｙ１６７Ａ−Ｙ２１７Ｑ
，Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ１６７Ａ−Ｙ２１７Ｑ，及びＰ０５２Ｌ−Ｖ
０６８Ａ−Ｉ１１１Ｖ、
（ｉｖ）Ｇ０９７Ａ−Ｎ１２３Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ０９７Ａ−Ｎ１２３Ｖ−Ｙ２１７
Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｇ１０２Ａ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１
０２Ａ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−
Ｎ１２３Ｑ−Ｙ２１７Ｑ，及びＧ１０２Ａ−Ｎ１２３Ｑ−Ｙ２１７Ｑ、
（ｖ）Ｇ０９７Ａ−Ｎ１２３Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ０９７Ａ−Ｎ１２３Ｖ−Ｙ２１７Ｑ
，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１００Ｄ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｓ１０
１Ｎ−Ｇ１０２Ａ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｇ１０２Ａ−Ｇ
１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｎ１２３Ｑ−Ｙ２１７Ｑ
，及びＧ１０２Ａ−Ｎ１２３Ｑ−Ｙ２１７Ｑ、
（ｖｉ）Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１００Ｎ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１
Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｍ１２４Ｉ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ１０２Ａ−Ｎ１２３Ｑ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０
２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｎ１２３Ｑ−
Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｎ１２３Ｑ−Ｙ２１７
Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｎ１２３Ｑ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０
６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１００Ｑ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−
Ｇ１０２Ａ−Ｐ１２９Ｓ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４
Ｖ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ０９７Ａ−Ｎ１２３Ｑ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０
６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｎ１２３Ｑ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−
Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｍ１２４Ｉ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１
Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｍ１２４Ｉ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０
９７Ａ−Ｍ１２４Ｉ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−
Ｍ１２４Ｉ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１
Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ１００Ｎ−Ｇ１０２Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０
９７Ａ−Ｇ１００Ｑ−Ｓ１０１Ｎ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−
Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１００Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０７８
Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｎ１２３Ｑ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０
６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１００Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−
Ｇ０９７Ａ−Ｇ１００Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｓ０７８
Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１００Ｎ−Ｉ１１１Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０
９７Ａ−Ｇ１００Ｄ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１００Ｑ−
Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１０２Ａ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１
Ｐ−Ｇ１０２Ａ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０
６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１０２Ａ−Ｐ１２９Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−
Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１０２Ａ−Ｐ１２９Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ１０２
Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｐ１２９Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ０９７Ａ−Ｎ１２３Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０
５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ１０２Ａ−Ｐ１２９Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−
Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｉ１１１Ｖ−Ｙ２１７
Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｉ１１１Ｖ−Ｙ２
１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｉ１１１Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，
Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６２Ｑ−Ｓ０７８
Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｙ２
１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−
Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１
Ｎ−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｉ１
１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ０９７Ａ−Ｎ１２３Ｑ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−
Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１
Ｖ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｉ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０
５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０７８Ｎ−
Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８
Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ０９７Ａ−Ｎ１２３Ａ−Ｙ２１７Ｑ及びＹ２１７Ｑ、並びに、
（ｖｉｉ）Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６
１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ
０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ，Ｓ０２４Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ
−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５
３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ
０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ
−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２
８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４９Ｎ，Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ
０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｔ０５５Ｐ
−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６
１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ
０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ
−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｔ０５
５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０３８Ｇ−Ｓ
０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ
−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９
７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ
０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｓ１３０Ｇ−Ｙ２１７Ｑ，及びＳ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７
８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ、並びに、
（ｂ）タンパク質分解活性を有するプロテアーゼ変異体であって、この変異体は、配列
番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９
５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、群（ｉ
）〜（ｘｉｉ）から選択される配列番号６と比較して少なくとも１組のアミノ酸置換を含
む、プロテアーゼ変異体：
（ｉ）Ａ００１Ｃ，Ａ００１Ｄ，Ａ００１Ｅ，Ａ００１Ｆ，Ａ００１Ｈ，Ａ００１Ｋ
，Ａ００１Ｌ，Ａ００１Ｍ，Ａ００１Ｎ，Ａ００１Ｐ，Ａ００１Ｑ，Ａ００１Ｒ，Ａ００
１Ｓ，Ａ００１Ｔ，Ａ００１Ｖ，Ａ０１３Ｃ，Ａ０１３Ｓ，Ａ０１５Ｃ，Ａ０１５Ｄ，Ａ
０１５Ｅ，Ａ０１５Ｌ，Ａ０１５Ｒ，Ａ０４８Ｃ，Ａ０４８Ｅ，Ａ０４８Ｓ，Ａ０７３Ｎ
，Ａ０７３Ｔ，Ａ０７４Ｇ，Ａ０７４Ｓ，Ａ０８５Ｃ，Ａ０８５Ｇ，Ａ０８５Ｓ，Ａ０８
５Ｔ，Ａ０８５Ｖ，Ａ０８８Ｍ，Ａ０８８Ｓ，Ａ０９２Ｓ，Ａ０９８Ｇ，Ａ１１４Ｇ，Ａ
１３３Ｅ，Ａ１３３Ｐ，Ａ１３３Ｒ，Ａ１３７Ｅ，Ａ１３７Ｈ，Ａ１３７Ｒ，Ａ１４２Ｃ
，Ａ１４４Ｄ，Ａ１４４Ｇ，Ａ１４４Ｈ，Ａ１４４Ｋ，Ａ１４４Ｌ，Ａ１４４Ｎ，Ａ１４
４Ｒ，Ａ１５２Ｓ，Ａ１５３Ｇ，Ａ１５３Ｓ，Ａ１５３Ｖ，Ａ１７６Ｃ，Ａ１７９Ｇ，Ａ
１８７Ｃ，Ａ１８７Ｆ，Ａ１８７Ｇ，Ａ１８７Ｌ，Ａ１８７Ｎ，Ａ１８７Ｐ，Ａ１８７Ｑ
，Ａ１８７Ｓ，Ａ１８７Ｔ，Ａ１８７Ｖ，Ａ１８７Ｗ，Ａ２００Ｇ，Ａ２１６Ｃ，Ａ２１
６Ｈ，Ａ２１６Ｒ，Ａ２１６Ｗ，Ａ２２３Ｓ，Ａ２２８Ｓ，Ａ２３０Ｇ，Ａ２３０Ｓ，Ａ
２３０Ｔ，Ａ２３０Ｖ，Ａ２３１Ｖ，Ａ２３２Ｃ，Ａ２３２Ｖ，Ａ２７２Ｅ，Ａ２７２Ｇ
，Ａ２７２Ｋ，Ａ２７２Ｐ，Ａ２７２Ｒ，Ａ２７３Ｄ，Ａ２７３Ｇ，Ａ２７３Ｈ，Ａ２７
３Ｌ，Ａ２７３Ｐ，Ａ２７３Ｑ，Ａ２７３Ｒ，Ａ２７３Ｔ，Ａ２７３Ｖ，Ａ２７４Ｈ，Ａ
２７４Ｍ，Ａ２７４Ｒ，Ｄ０３６Ｅ，Ｄ０３６Ｎ，Ｄ０３６Ｑ，Ｄ０３６Ｓ，Ｄ０４１Ｃ
，Ｄ０６０Ｇ，Ｄ０９９Ａ，Ｄ０９９Ｈ，Ｄ０９９Ｑ，Ｄ１２０Ｅ，Ｄ１８１Ａ，Ｄ１８
１Ｇ，Ｄ１８１Ｈ，Ｄ１８１Ｔ，Ｄ１９７Ｔ，Ｄ２５９Ａ，Ｄ２５９Ｇ，Ｄ２５９Ｈ，Ｄ
２５９Ｎ，Ｄ２５９Ｐ，Ｄ２５９Ｑ，Ｄ２５９Ｓ，Ｄ２５９Ｔ，Ｅ１５６Ａ，Ｅ１５６Ｃ
，Ｅ１５６Ｇ，Ｅ１５６Ｈ，Ｅ１５６Ｌ，Ｅ１５６Ｑ，Ｅ１５６Ｓ，Ｅ１５６Ｖ，Ｅ１９
５Ｇ，Ｅ２５１Ｃ，Ｅ２５１Ｉ，Ｅ２５１Ｌ，Ｅ２５１Ｑ，Ｅ２５１Ｔ，Ｆ０５８Ｙ，Ｆ
１８９Ａ，Ｆ１８９Ｇ，Ｆ１８９Ｈ，Ｆ１８９Ｌ，Ｆ１８９Ｒ，Ｆ１８９Ｓ，Ｆ１８９Ｔ
，Ｆ１８９Ｗ，Ｆ１８９Ｙ，Ｆ２６１Ｃ，Ｆ２６１Ｄ，Ｆ２６１Ｅ，Ｆ２６１Ｋ，Ｆ２６
１Ｐ，Ｇ０２０Ｃ，Ｇ０２０Ｅ，Ｇ０２０Ｆ，Ｇ０２０Ｈ，Ｇ０２０Ｌ，Ｇ０２０Ｎ，Ｇ
０２０Ｑ，Ｇ０２０Ｒ，Ｇ０２０Ｔ，Ｇ０２０Ｙ，Ｇ０２４Ａ，Ｇ０２４Ｄ，Ｇ０２４Ｐ
，Ｇ０４６Ｄ，Ｇ０５３Ａ，Ｇ０５３Ｄ，Ｇ０５３Ｅ，Ｇ０５３Ｆ，Ｇ０５３Ｌ，Ｇ０５
３Ｍ，Ｇ０５３Ｑ，Ｇ０５３Ｒ，Ｇ０５３Ｓ，Ｇ０５３Ｙ，Ｇ０９７Ｋ，Ｇ０９７Ｍ，Ｇ
０９７Ｒ，Ｇ１３１Ｃ，Ｇ１３１Ｄ，Ｇ１３１Ｒ，Ｇ１４６Ａ，Ｇ１５７Ａ，Ｇ１５７Ｎ
，Ｇ１５７Ｐ，Ｇ１５７Ｓ，Ｇ１５７Ｔ，Ｇ１６０Ａ，Ｇ１６０Ｌ，Ｇ１６０Ｒ，Ｇ１６
０Ｖ，Ｇ１６６Ｃ，Ｇ１６６Ｉ，Ｇ１６６Ｌ，Ｇ１６６Ｑ，Ｇ１６６Ｖ，Ｇ１６６Ｗ，Ｇ
１６９Ａ，Ｇ１７８Ａ，Ｇ２１１Ｅ，Ｇ２１１Ｋ，Ｇ２１５Ｃ，Ｇ２１５Ｄ，Ｇ２１５Ｅ
，Ｇ２１５Ｈ，Ｇ２１５Ｌ，Ｇ２１５Ｓ，Ｇ２１５Ｔ，Ｇ２１５Ｗ，Ｇ２５８Ａ，Ｇ２５
８Ｄ，Ｇ２５８Ｐ，Ｇ２５８Ｓ，Ｈ０１７Ｉ，Ｈ０３９Ｓ，Ｈ２２６Ｌ，Ｈ２３８Ｎ，Ｈ
２３８Ｙ，Ｉ０１１Ｌ，Ｉ０１１Ｔ，Ｉ０１１Ｖ，Ｉ０３１Ｃ，Ｉ０３１Ｆ，Ｉ０３１Ｌ
，Ｉ０７９Ｅ，Ｉ０７９Ｆ，Ｉ０７９Ｋ，Ｉ０７９Ｌ，Ｉ０７９Ｍ，Ｉ０７９Ｑ，Ｉ０７
９Ｒ，Ｉ１０７Ｌ，Ｉ１１１Ｍ，Ｉ１７５Ｌ，Ｉ２０５Ａ，Ｉ２０５Ｃ，Ｉ２０５Ｖ，Ｉ
２６８Ｌ，Ｉ２６８Ｍ，Ｋ０１２Ａ，Ｋ０１２Ｃ，Ｋ０１２Ｅ，Ｋ０１２Ｆ，Ｋ０１２Ｇ
，Ｋ０１２Ｈ，Ｋ０１２Ｌ，Ｋ０１２Ｎ，Ｋ０１２Ｓ，Ｋ０１２Ｔ，Ｋ０１２Ｗ，Ｋ０２
７Ａ，Ｋ０２７Ｎ，Ｋ０２７Ｓ，Ｋ０２７Ｔ，Ｋ０４３Ａ，Ｋ０４３Ｃ，Ｋ０４３Ｄ，Ｋ
０４３Ｅ，Ｋ０４３Ｆ，Ｋ０４３Ｇ，Ｋ０４３Ｈ，Ｋ０４３Ｉ，Ｋ０４３Ｌ，Ｋ０４３Ｍ
，Ｋ０４３Ｎ，Ｋ０４３Ｐ，Ｋ０４３Ｑ，Ｋ０４３Ｒ，Ｋ０４３Ｔ，Ｋ０４３Ｖ，Ｋ０４
３Ｗ，Ｋ０４３Ｙ，Ｋ１３６Ｇ，Ｋ１３６Ｈ，Ｋ１４１Ａ，Ｋ１４１Ｇ，Ｋ１４１Ｈ，Ｋ
１４１Ｌ，Ｋ１４１Ｍ，Ｋ１４１Ｎ，Ｋ１４１Ｑ，Ｋ１４１Ｒ，Ｋ１４１Ｔ，Ｋ１４１Ｖ
，Ｋ１４１Ｗ，Ｋ１７０Ａ，Ｋ１７０Ｃ，Ｋ１７０Ｇ，Ｋ１７０Ｑ，Ｋ１７０Ｓ，Ｋ２１
３Ａ，Ｋ２１３Ｇ，Ｋ２１３Ｈ，Ｋ２１３Ｉ，Ｋ２１３Ｌ，Ｋ２１３Ｎ，Ｋ２１３Ｑ，Ｋ
２１３Ｒ，Ｋ２１３Ｓ，Ｋ２１３Ｔ，Ｋ２１３Ｖ，Ｋ２３７Ａ，Ｋ２３７Ｈ，Ｋ２３７Ｉ
，Ｋ２３７Ｌ，Ｋ２３７Ｎ，Ｋ２３７Ｓ，Ｋ２３７Ｔ，Ｋ２３７Ｖ，Ｋ２５６Ａ，Ｋ２５
６Ｃ，Ｋ２５６Ｄ，Ｋ２５６Ｅ，Ｋ２５６Ｇ，Ｋ２５６Ｈ，Ｋ２５６Ｍ，Ｋ２５６Ｐ，Ｋ
２５６Ｑ，Ｋ２５６Ｓ，Ｋ２５６Ｔ，Ｋ２５６Ｖ，Ｋ２５６Ｗ，Ｋ２６５Ｇ，Ｋ２６５Ｈ
，Ｋ２６５Ｎ，Ｋ２６５Ｓ，Ｋ２６５Ｙ，Ｌ０１６Ｅ，Ｌ０４２Ｃ，Ｌ０４２Ｆ，Ｌ０４
２Ｍ，Ｌ０４２Ｖ，Ｌ０７５Ｇ，Ｌ０７５Ｈ，Ｌ０７５Ｉ，Ｌ０７５Ｔ，Ｌ０８２Ａ，Ｌ
０８２Ｅ，Ｌ０８２Ｆ，Ｌ０８２Ｈ，Ｌ０８２Ｒ，Ｌ０８２Ｓ，Ｌ０８２Ｔ，Ｌ０９０Ｍ
，Ｌ１３５Ｆ，Ｌ１９６Ｍ，Ｌ２０９Ａ，Ｌ２０９Ｃ，Ｌ２０９Ｅ，Ｌ２０９Ｇ，Ｌ２０
９Ｈ，Ｌ２０９Ｒ，Ｌ２０９Ｓ，Ｌ２３３Ｅ，Ｌ２３３Ｇ，Ｌ２３３Ｓ，Ｌ２３５Ｍ，Ｌ
２３５Ｒ，Ｌ２３５Ｖ，Ｌ２３５Ｗ，Ｌ２５７Ｃ，Ｌ２５７Ｄ，Ｌ２５７Ｅ，Ｌ２５７Ｇ
，Ｌ２５７Ｐ，Ｌ２５７Ｒ，Ｌ２５７Ｗ，Ｌ２６７Ｅ，Ｌ２６７Ｆ，Ｍ０５０Ｌ，Ｍ０５
０Ｙ，Ｍ１１９Ｃ，Ｍ１１９Ｉ，Ｍ１２４Ｌ，Ｍ２２２Ａ，Ｍ２２２Ｆ，Ｍ２２２Ｌ，Ｍ
２２２Ｓ，Ｍ２２２Ｔ，Ｎ０２５Ｃ，Ｎ０２５Ｅ，Ｎ０２５Ｐ，Ｎ０５６Ｄ，Ｎ０５６Ｓ
，Ｎ０６１Ａ，Ｎ０６１Ｃ，Ｎ０６１Ｄ，Ｎ０６１Ｇ，Ｎ０６１Ｉ，Ｎ０６１Ｋ，Ｎ０６
１Ｌ，Ｎ０６１Ｑ，Ｎ０６１Ｒ，Ｎ０６２Ａ，Ｎ０６２Ｃ，Ｎ０６２Ｈ，Ｎ０６２Ｌ，Ｎ
０６２Ｑ，Ｎ０６２Ｒ，Ｎ０６２Ｓ，Ｎ０６２Ｔ，Ｎ０６２Ｖ，Ｎ０６２Ｙ，Ｎ０７６Ａ
，Ｎ０７６Ｄ，Ｎ０７６Ｅ，Ｎ０７６Ｌ，Ｎ０７６Ｍ，Ｎ０７６Ｐ，Ｎ０７６Ｑ，Ｎ０７
６Ｓ，Ｎ０７６Ｔ，Ｎ０７６Ｖ，Ｎ０７８Ｄ，Ｎ０７８Ｅ，Ｎ０７８Ｆ，Ｎ０７８Ｇ，Ｎ
０７８Ｈ，Ｎ０７８Ｋ，Ｎ０７８Ｐ，Ｎ０７８Ｑ，Ｎ０７８Ｒ，Ｎ１０１Ｄ，Ｎ１０１Ｆ
，Ｎ１０１Ｒ，Ｎ１１７Ｇ，Ｎ１１７Ｒ，Ｎ１１７Ｓ，Ｎ１１８Ａ，Ｎ１１８Ｄ，Ｎ１１
８Ｈ，Ｎ１１８Ｑ，Ｎ１１８Ｒ，Ｎ１１８Ｓ，Ｎ１１８Ｔ，Ｎ１８４Ｃ，Ｎ１８４Ｅ，Ｎ
１８４Ｐ，Ｎ１８４Ｒ，Ｎ２１２Ｃ，Ｎ２１２Ｄ，Ｎ２１２Ｅ，Ｎ２１２Ｒ，Ｎ２１２Ｗ
，Ｎ２１８Ｃ，Ｎ２１８Ｄ，Ｎ２１８Ｅ，Ｎ２１８Ｆ，Ｎ２１８Ｇ，Ｎ２１８Ｍ，Ｎ２１
８Ｐ，Ｎ２１８Ｒ，Ｎ２１８Ｔ，Ｎ２１８Ｖ，Ｎ２１８Ｗ，Ｎ２４０Ａ，Ｎ２４０Ｇ，Ｎ
２４０Ｑ，Ｎ２４０Ｓ，Ｎ２４０Ｗ，Ｎ２４３Ｃ，Ｎ２４３Ｇ，Ｎ２４３Ｓ，Ｎ２５２Ｄ
，Ｎ２５２Ｅ，Ｎ２５２Ｖ，Ｎ２６９Ｃ，Ｎ２６９Ｈ，Ｐ００５Ａ，Ｐ００５Ｄ，Ｐ００
５Ｍ，Ｐ００５Ｑ，Ｐ００５Ｖ，Ｐ００５Ｗ，Ｐ０１４Ａ，Ｐ０１４Ｄ，Ｐ０１４Ｆ，Ｐ
０１４Ｋ，Ｐ０１４Ｍ，Ｐ０１４Ｒ，Ｐ０１４Ｖ，Ｐ０４０Ｆ，Ｐ０４０Ｒ，Ｐ０４０Ｗ
，Ｐ０５７Ａ，Ｐ０５７Ｗ，Ｐ１２９Ｅ，Ｐ１２９Ｒ，Ｐ１２９Ｖ，Ｐ１７２Ｅ，Ｐ１７
２Ｋ，Ｐ１７２Ｒ，Ｐ１９４Ｅ，Ｐ１９４Ｈ，Ｐ１９４Ｒ，Ｐ１９４Ｗ，Ｐ２０１Ａ，Ｐ
２０１Ｇ，Ｐ２０１Ｔ，Ｐ２１０Ｅ，Ｐ２１０Ｌ，Ｐ２３９Ａ，Ｐ２３９Ｇ，Ｐ２３９Ｈ
，Ｐ２３９Ｋ，Ｐ２３９Ｎ，Ｐ２３９Ｒ，Ｐ２３９Ｔ，Ｑ００２Ｄ，Ｑ００２Ｅ，Ｑ００
２Ｇ，Ｑ００２Ｉ，Ｑ００２Ｋ，Ｑ００２Ｌ，Ｑ００２Ｐ，Ｑ００２Ｒ，Ｑ００２Ｖ，Ｑ
０１０Ｄ，Ｑ０１０Ｒ，Ｑ０１０Ｗ，Ｑ０１９Ｃ，Ｑ０１９Ｄ，Ｑ０１９Ｅ，Ｑ０１９Ｈ
，Ｑ０１９Ｌ，Ｑ０１９Ｐ，Ｑ０１９Ｒ，Ｑ０５９Ａ，Ｑ０５９Ｃ，Ｑ０５９Ｄ，Ｑ０５
９Ｅ，Ｑ０５９Ｌ，Ｑ０５９Ｒ，Ｑ０５９Ｓ，Ｑ０５９Ｔ，Ｑ０５９Ｗ，Ｑ１０３Ｗ，Ｑ
１８５Ｄ，Ｑ１８５Ｅ，Ｑ１８５Ｋ，Ｑ１８５Ｒ，Ｑ１８５Ｗ，Ｑ２０６Ｄ，Ｑ２０６Ｇ
，Ｑ２０６Ｈ，Ｑ２０６Ｌ，Ｑ２０６Ｖ，Ｑ２０６Ｗ，Ｑ２１７Ａ，Ｑ２１７Ｃ，Ｑ２１
７Ｅ，Ｑ２１７Ｆ，Ｑ２１７Ｇ，Ｑ２１７Ｈ，Ｑ２１７Ｋ，Ｑ２１７Ｌ，Ｑ２１７Ｒ，Ｑ
２１７Ｖ，Ｑ２４５Ａ，Ｑ２４５Ｄ，Ｑ２４５Ｅ，Ｑ２４５Ｈ，Ｑ２４５Ｍ，Ｑ２４５Ｒ
，Ｑ２７１Ａ，Ｑ２７１Ｃ，Ｑ２７１Ｄ，Ｑ２７１Ｅ，Ｑ２７１Ｆ，Ｑ２７１Ｇ，Ｑ２７
１Ｌ，Ｑ２７１Ｐ，Ｑ２７１Ｒ，Ｑ２７１Ｔ，Ｑ２７１Ｗ，Ｑ２７１Ｙ，Ｑ２７５Ａ，Ｑ
２７５Ｆ，Ｑ２７５Ｇ，Ｑ２７５Ｉ，Ｑ２７５Ｌ，Ｑ２７５Ｐ，Ｑ２７５Ｒ，Ｒ１８６Ａ
，Ｒ１８６Ｈ，Ｒ１８６Ｉ，Ｒ１８６Ｌ，Ｒ１８６Ｍ，Ｒ１８６Ｖ，Ｒ１８６Ｗ，Ｓ００
３Ｄ，Ｓ００３Ｅ，Ｓ００３Ｆ，Ｓ００３Ｋ，Ｓ００３Ｒ，Ｓ００９Ｃ，Ｓ００９Ｅ，Ｓ
００９Ｋ，Ｓ０１８Ｃ，Ｓ０１８Ｄ，Ｓ０１８Ｒ，Ｓ０３７Ａ，Ｓ０３７Ｄ，Ｓ０３７Ｅ
，Ｓ０３７Ｇ，Ｓ０３７Ｈ，Ｓ０３７Ｋ，Ｓ０３７Ｌ，Ｓ０３７Ｐ，Ｓ０３７Ｒ，Ｓ０３
７Ｙ，Ｓ０３８Ｄ，Ｓ０３８Ｍ，Ｓ０３８Ｐ，Ｓ０３８Ｒ，Ｓ０３８Ｙ，Ｓ０４９Ｃ，Ｓ
０４９Ｔ，Ｓ０６３Ａ，Ｓ０６３Ｃ，Ｓ０６３Ｄ，Ｓ０６３Ｆ，Ｓ０６３Ｌ，Ｓ０６３Ｍ
，Ｓ０６３Ｒ，Ｓ０６３Ｙ，Ｓ０８７Ｃ，Ｓ０８７Ｄ，Ｓ０８７Ｋ，Ｓ０８７Ｌ，Ｓ０８
７Ｍ，Ｓ０８７Ｎ，Ｓ０８７Ｒ，Ｓ０８７Ｙ，Ｓ０８９Ａ，Ｓ０８９Ｃ，Ｓ０８９Ｄ，Ｓ
０８９Ｅ，Ｓ０８９Ｆ，Ｓ０８９Ｇ，Ｓ０８９Ｈ，Ｓ０８９Ｉ，Ｓ０８９Ｋ，Ｓ０８９Ｐ
，Ｓ０８９Ｒ，Ｓ０８９Ｖ，Ｓ０８９Ｙ，Ｓ１０５Ｔ，Ｓ１２５Ａ，Ｓ１３０Ｃ，Ｓ１３
０Ｄ，Ｓ１３０Ｅ，Ｓ１３０Ｋ，Ｓ１３０Ｒ，Ｓ１３０Ｗ，Ｓ１４５Ｄ，Ｓ１４５Ｇ，Ｓ
１４５Ｌ，Ｓ１４５Ｒ，Ｓ１４５Ｔ，Ｓ１５９Ｃ，Ｓ１５９Ｄ，Ｓ１５９Ｌ，Ｓ１５９Ｐ
，Ｓ１５９Ｗ，Ｓ１６１Ｃ，Ｓ１６１Ｅ，Ｓ１６１Ｒ，Ｓ１６２Ｃ，Ｓ１６２Ｅ，Ｓ１６
２Ｗ，Ｓ１６３Ａ，Ｓ１７３Ｔ，Ｓ１７３Ｖ，Ｓ１８２Ｃ，Ｓ１８２Ｅ，Ｓ１８２Ｒ，Ｓ
１８３Ｃ，Ｓ１８３Ｄ，Ｓ１８３Ｐ，Ｓ１８３Ｒ，Ｓ１８８Ｃ，Ｓ１８８Ｄ，Ｓ１８８Ｅ
，Ｓ１８８Ｆ，Ｓ１８８Ｋ，Ｓ１８８Ｌ，Ｓ１８８Ｐ，Ｓ１８８Ｒ，Ｓ１８８Ｗ，Ｓ１９
０Ａ，Ｓ１９０Ｃ，Ｓ１９０Ｇ，Ｓ１９０Ｔ，Ｓ１９１Ｇ，Ｓ２０４Ｅ，Ｓ２０４Ｇ，Ｓ
２０４Ｒ，Ｓ２０４Ｙ，Ｓ２０７Ｇ，Ｓ２２４Ｇ，Ｓ２２４Ｔ，Ｓ２３６Ｃ，Ｓ２３６Ｄ
，Ｓ２３６Ｅ，Ｓ２３６Ｇ，Ｓ２４８Ｃ，Ｓ２４８Ｄ，Ｓ２４８Ｅ，Ｓ２４８Ｈ，Ｓ２４
８Ｒ，Ｓ２４９Ｅ，Ｓ２４９Ｌ，Ｓ２４９Ｒ，Ｓ２６０Ａ，Ｓ２６０Ｃ，Ｓ２６０Ｅ，Ｓ
２６０Ｇ，Ｓ２６０Ｋ，Ｓ２６０Ｑ，Ｓ２６０Ｒ，Ｓ２６０Ｖ，Ｓ２６０Ｙ，Ｔ０２２Ｌ
，Ｔ０２２Ｐ，Ｔ０５５Ｃ，Ｔ０５５Ｄ，Ｔ０５５Ｅ，Ｔ０５５Ｉ，Ｔ０５５Ｋ，Ｔ０５
５Ｍ，Ｔ０５５Ｒ，Ｔ０５５Ｓ，Ｔ０５５Ｖ，Ｔ０５５Ｗ，Ｔ０５５Ｙ，Ｔ０７１Ａ，Ｔ
１５８Ａ，Ｔ１５８Ｄ，Ｔ１５８Ｅ，Ｔ１５８Ｇ，Ｔ１５８Ｌ，Ｔ１５８Ｐ，Ｔ１５８Ｑ
，Ｔ１５８Ｒ，Ｔ１５８Ｖ，Ｔ１５８Ｙ，Ｔ１６４Ａ，Ｔ１６４Ｇ，Ｔ１６４Ｋ，Ｔ１６
４Ｑ，Ｔ１６４Ｒ，Ｔ２０８Ｓ，Ｔ２２０Ａ，Ｔ２４２Ｄ，Ｔ２４２Ｇ，Ｔ２４４Ｄ，Ｔ
２４４Ｅ，Ｔ２４４Ｒ，Ｔ２５３Ｅ，Ｔ２５３Ｒ，Ｔ２５３Ｙ，Ｔ２５４Ｇ，Ｔ２５５Ｃ
，Ｔ２５５Ｄ，Ｔ２５５Ｅ，Ｔ２５５Ｋ，Ｔ２５５Ｒ，Ｖ００４Ｄ，Ｖ００４Ｅ，Ｖ００
４Ｔ，Ｖ０２６Ａ，Ｖ０２８Ｉ，Ｖ０２８Ｌ，Ｖ０３０Ｉ，Ｖ０４４Ａ，Ｖ０４４Ｃ，Ｖ
０４４Ｐ，Ｖ０４４Ｔ，Ｖ０４５Ｃ，Ｖ０４５Ｄ，Ｖ０４５Ｅ，Ｖ０４５Ｇ，Ｖ０４５Ｉ
，Ｖ０４５Ｎ，Ｖ０４５Ｒ，Ｖ０４５Ｔ，Ｖ０５１Ｈ，Ｖ０７２Ｌ，Ｖ０８１Ａ，Ｖ０８
１Ｇ，Ｖ０８１Ｈ，Ｖ０８１Ｒ，Ｖ０８１Ｓ，Ｖ０８４Ｉ，Ｖ０８４Ｍ，Ｖ０９５Ａ，Ｖ
０９５Ｃ，Ｖ１４３Ａ，Ｖ１４３Ｃ，Ｖ１４３Ｅ，Ｖ１４３Ｆ，Ｖ１４３Ｇ，Ｖ１４３Ｈ
，Ｖ１４３Ｑ，Ｖ１４３Ｔ，Ｖ１４３Ｗ，Ｖ１４７Ａ，Ｖ１４７Ｑ，Ｖ１４７Ｓ，Ｖ１４
８Ｉ，Ｖ１４８Ｌ，Ｖ１４９Ｃ，Ｖ１４９Ｉ，Ｖ１４９Ｌ，Ｖ１６５Ｃ，Ｖ１６５Ｌ，Ｖ
１８０Ａ，Ｖ１８０Ｃ，Ｖ１８０Ｍ，Ｖ１８０Ｓ，Ｖ１９２Ｃ，Ｖ１９２Ｆ，Ｖ１９２Ｇ
，Ｖ１９２Ｉ，Ｖ１９２Ｑ，Ｖ１９２Ｙ，Ｖ２０３Ａ，Ｖ２０３Ｃ，Ｖ２０３Ｄ，Ｖ２０
３Ｅ，Ｖ２０３Ｇ，Ｖ２０３Ｋ，Ｖ２０３Ｍ，Ｖ２０３Ｒ，Ｖ２０３Ｓ，Ｖ２７０Ｃ，Ｖ
２７０Ｇ，Ｖ２７０Ｌ，Ｖ２７０Ｐ，Ｗ２４１Ｆ，Ｗ２４１Ｌ，Ｙ００６Ａ，Ｙ００６Ｃ
，Ｙ００６Ｄ，Ｙ００６Ｅ，Ｙ００６Ｍ，Ｙ００６Ｎ，Ｙ００６Ｒ，Ｙ００６Ｓ，Ｙ０２
１
Ｃ，Ｙ０９１Ｗ，Ｙ１０４Ｔ，Ｙ１０４Ｖ，Ｙ１０４Ｗ，Ｙ２１４Ｈ，Ｙ２１４Ｑ，Ｙ２
６２Ｃ，Ｙ２６２Ｄ，Ｙ２６２Ｅ，Ｙ２６２Ｈ，Ｙ２６２Ｉ，Ｙ２６２Ｒ，及びＹ２６２
Ｖ、
（ｉｉ）Ａ００１Ｃ，Ａ００１Ｅ，Ａ００１Ｐ，Ａ０１５Ｃ，Ａ０１５Ｅ，Ａ０４８
Ｃ，Ａ０４８Ｅ，Ａ０７３Ｔ，Ａ０８５Ｃ，Ａ０８５Ｇ，Ａ０８８Ｉ，Ａ０８８Ｍ，Ａ１
１４Ｇ，Ａ１２８Ｈ，Ａ１３７Ｒ，Ａ１４２Ｃ，Ａ１８７Ｃ，Ａ１８７Ｆ，Ａ１８７Ｌ，
Ａ１８７Ｎ，Ａ１８７Ｐ，Ａ１８７Ｗ，Ａ２１６Ｃ，Ａ２１６Ｈ，Ａ２３０Ｇ，Ａ２３０
Ｓ，Ａ２７３Ｄ，Ａ２７３Ｈ，Ａ２７３Ｐ，Ａ２７３Ｑ，Ａ２７３Ｒ，Ａ２７３Ｔ，Ａ２
７４Ｈ，Ｄ０３６Ｎ，Ｄ０３６Ｑ，Ｄ０３６Ｓ，Ｄ０４１Ｃ，Ｄ０４１Ｎ，Ｄ０９９Ａ，
Ｄ０９９Ｈ，Ｄ０９９Ｎ，Ｄ０９９Ｑ，Ｄ０９９Ｓ，Ｄ１９７Ｔ，Ｄ２５９Ｈ，Ｅ１５６
Ｃ，Ｅ１５６Ｇ，Ｅ１５６Ｈ，Ｅ１５６Ｌ，Ｅ１５６Ｑ，Ｆ０５８Ｇ，Ｆ１８９Ａ，Ｆ１
８９Ｇ，Ｆ１８９Ｈ，Ｆ１８９Ｌ，Ｆ１８９Ｒ，Ｆ１８９Ｓ，Ｆ１８９Ｔ，Ｆ２６１Ｃ，
Ｆ２６１Ｄ，Ｆ２６１Ｅ，Ｇ０４６Ｄ，Ｇ０５３Ｅ，Ｇ０５３Ｌ，Ｇ０５３Ｍ，Ｇ０５３
Ｑ，Ｇ０５３Ｒ，Ｇ１３１Ｃ，Ｇ１３１Ｄ，Ｇ１４６Ａ，Ｇ１５７Ｎ，Ｇ１５７Ｐ，Ｇ１
５７Ｔ，Ｇ１６０Ｖ，Ｇ１７８Ａ，Ｇ２１５Ｃ，Ｇ２１５Ｌ，Ｇ２５８Ａ，Ｇ２５８Ｐ，
Ｈ０３９Ａ，Ｈ０３９Ｓ，Ｈ０６７Ｔ，Ｈ２３８Ｙ，Ｉ０１１Ｌ，Ｉ０３１Ｆ，Ｉ０７９
Ｅ，Ｉ１１１Ｍ，Ｉ１７５Ｌ，Ｉ２６８Ｍ，Ｋ０１２Ａ，Ｋ０１２Ｃ，Ｋ０１２Ｅ，Ｋ０
１２Ｆ，Ｋ０１２Ｇ，Ｋ０１２Ｈ，Ｋ０１２Ｌ，Ｋ０１２Ｎ，Ｋ０１２Ｗ，Ｋ０２７Ｎ，
Ｋ０２７Ｓ，Ｋ０２７Ｔ，Ｋ０４３Ｃ，Ｋ０４３Ｄ，Ｋ０４３Ｇ，Ｋ０４３Ｌ，Ｋ０４３
Ｒ，Ｋ０４３Ｗ，Ｋ１３６Ｅ，Ｋ１３６Ｇ，Ｋ１４１Ｇ，Ｋ１４１Ｌ，Ｋ１４１Ｍ，Ｋ１
４１Ｎ，Ｋ１４１Ｒ，Ｋ１７０Ｃ，Ｋ１７０Ｑ，Ｋ２１３Ｖ，Ｋ２５６Ｄ，Ｋ２６５Ｇ，
Ｋ２６５Ｎ，Ｋ２６５Ｑ，Ｋ２６５Ｓ，Ｋ２６５Ｙ，Ｌ０４２Ｃ，Ｌ０４２Ｆ，Ｌ０７５
Ｇ，Ｌ０７５Ｖ，Ｌ０８２Ａ，Ｌ０８２Ｅ，Ｌ０８２Ｆ，Ｌ０８２Ｈ，Ｌ０８２Ｒ，Ｌ０
８２Ｓ，Ｌ０９０Ｍ，Ｌ０９０Ｔ，Ｌ１２６Ｗ，Ｌ２３３Ｅ，Ｌ２３３Ｇ，Ｌ２３３Ｓ，
Ｌ２３５Ｖ，Ｌ２５７Ｄ，Ｌ２５７Ｅ，Ｌ２５７Ｇ，Ｌ２５７Ｐ，Ｌ２５７Ｒ，Ｌ２５７
Ｗ，Ｍ０５０Ｌ，Ｍ２２２Ａ，Ｍ２２２Ｆ，Ｍ２２２Ｌ，Ｍ２２２Ｓ，Ｍ２２２Ｔ，Ｎ０
２５Ｒ，Ｎ０５６Ｓ，Ｎ０６２Ｃ，Ｎ０６２Ｈ，Ｎ０６２Ｌ，Ｎ０６２Ｑ，Ｎ０６２Ｒ，
Ｎ０６２Ｔ，Ｎ０６２Ｙ，Ｎ０７６Ｄ，Ｎ０７６Ｐ，Ｎ０７８Ｄ，Ｎ０７８Ｅ，Ｎ０７８
Ｆ，Ｎ０７８Ｒ，Ｎ０７８Ｖ，Ｎ１１７Ｇ，Ｎ１１８Ｌ，Ｎ１８４Ｐ，Ｎ２６９Ｃ，Ｎ２
６９Ｈ，Ｎ２６９Ｑ，Ｐ００５Ｖ，Ｐ００５Ｗ，Ｐ０１４Ｋ，Ｐ０５７Ａ，Ｐ０５７Ｗ，
Ｐ０８６Ｆ，Ｐ１２９Ｖ，Ｐ２０１Ｔ，Ｐ２２５Ｇ，Ｐ２２５Ｓ，Ｐ２３９Ａ，Ｐ２３９
Ｇ，Ｐ２３９Ｈ，Ｐ２３９Ｎ，Ｐ２３９Ｔ，Ｑ００２Ｄ，Ｑ００２Ｉ，Ｑ００２Ｋ，Ｑ０
０２Ｌ，Ｑ００２Ｐ，Ｑ００２Ｒ，Ｑ００２Ｖ，Ｑ０１０Ｗ，Ｑ０１９Ｌ，Ｑ０１９Ｐ，
Ｑ０５９Ｃ，Ｑ０５９Ｄ，Ｑ０５９Ｅ，Ｑ０５９Ｗ，Ｑ１８５Ｗ，Ｑ２１７Ｃ，Ｑ２４５
Ａ，Ｑ２４５Ｈ，Ｑ２７１Ｃ，Ｑ２７１Ｄ，Ｑ２７１Ｅ，Ｑ２７１Ｌ，Ｑ２７１Ｗ，Ｑ２
７５Ａ，Ｑ２７５Ｇ，Ｒ１８６Ｍ，Ｓ００９Ｃ，Ｓ００９Ｌ，Ｓ０１８Ｃ，Ｓ０１８Ｄ，
Ｓ０３７Ｅ，Ｓ０３７Ｈ，Ｓ０３７Ｋ，Ｓ０３７Ｌ，Ｓ０３７Ｐ，Ｓ０３８Ｐ，Ｓ０３８
Ｙ，Ｓ０４９Ｃ，Ｓ０４９Ｎ，Ｓ０６３Ｃ，Ｓ０６３Ｄ，Ｓ０６３Ｆ，Ｓ０６３Ｌ，Ｓ０
６３Ｙ，Ｓ０８７Ｃ，Ｓ０８７Ｋ，Ｓ０８７Ｌ，Ｓ０８７Ｎ，Ｓ０８７Ｒ，Ｓ０８７Ｙ，
Ｓ０８９Ｄ，Ｓ０８９Ｅ，Ｓ０８９Ｆ，Ｓ０８９Ｇ，Ｓ０８９Ｐ，Ｓ０８９Ｗ，Ｓ１０５
Ｔ，Ｓ１２５Ａ，Ｓ１３０Ｃ，Ｓ１４５Ｄ，Ｓ１５９Ｄ，Ｓ１５９Ｐ，Ｓ１６３Ａ，Ｓ１
７３Ｖ，Ｓ１８２Ｐ，Ｓ１８３Ｐ，Ｓ１９０Ａ，Ｓ１９０Ｇ，Ｓ１９１Ｇ，Ｓ２０４Ｅ，
Ｓ２２４Ｇ，Ｓ２４８Ｅ，Ｓ２４８Ｈ，Ｓ２４９Ｅ，Ｓ２６０Ｖ，Ｓ２６０Ｙ，Ｔ０２２
Ｐ，Ｔ０５５Ｅ，Ｔ０５５Ｍ，Ｔ０５５Ｒ，Ｔ０５５Ｗ，Ｔ１５８Ｄ，Ｔ１５８Ｅ，Ｔ１
６４Ａ，Ｔ１６４Ｇ，Ｔ１６４Ｋ，Ｔ１６４Ｑ，Ｔ１６４Ｒ，Ｔ２２０Ａ，Ｔ２４２Ｇ，
Ｔ２４２Ｐ，Ｔ２５３Ｅ，Ｔ２５５Ｃ，Ｔ２５５Ｇ，Ｖ００４Ｄ，Ｖ００４Ｔ，Ｖ０４４
Ａ，Ｖ０４４Ｌ，Ｖ０４４Ｐ，Ｖ０４４Ｔ，Ｖ０４５Ｃ，Ｖ０４５Ｇ，Ｖ０４５Ｉ，Ｖ０
４５Ｋ，Ｖ０４５Ｌ，Ｖ０４５Ｎ，Ｖ０４５Ｒ，Ｖ０４５Ｔ，Ｖ０４５Ｖ，Ｖ０５１Ｈ，
Ｖ０８１Ａ，Ｖ０８１Ｇ，Ｖ０８１Ｈ，Ｖ０８１Ｒ，Ｖ０８４Ｓ，Ｖ１４３Ｇ，Ｖ１４７
Ａ，Ｖ１４８Ｌ，Ｖ１６５Ｃ，Ｖ１８０Ｓ，Ｖ２０３Ｄ，Ｖ２０３Ｇ，Ｖ２０３Ｓ，Ｖ２
７０Ｃ，Ｖ２７０Ｇ，Ｖ２７０Ｐ，Ｖ２７０Ｓ，Ｗ２４１Ｌ，Ｙ１０４Ｔ，Ｙ２１４Ｈ，
Ｙ２１４Ｑ，Ｙ２６２Ｄ，Ｙ２６２Ｅ，Ｙ２６２Ｇ，Ｙ２６２Ｈ，Ｙ２６２Ｌ，Ｙ２６２
Ｎ，Ｙ２６３Ｇ，及びＹ２６３Ｗ、
（ｉｉｉ）Ａ００１Ｅ，Ａ００１Ｅ−Ａ０８８Ｔ，Ａ００１Ｅ−Ａ１１６Ｔ，Ａ００
１Ｅ−Ａ１２８Ｓ，Ａ００１Ｅ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ００１Ｅ−Ｇ
０２４Ｅ，Ａ００１Ｅ−Ｇ１３１Ｈ，Ａ００１Ｅ−Ｇ１３１Ｈ−Ｇ１６９Ａ−Ｎ２４３Ｖ
，Ａ００１Ｅ−Ｇ１６９Ａ，Ａ００１Ｅ−Ｋ０４３Ｙ，Ａ００１Ｅ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ００
１Ｅ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ００１Ｅ−Ｎ０７６Ｄ，Ａ００１Ｅ−Ｎ０７６Ｄ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ
１２８Ｓ，Ａ００１Ｅ−Ｎ１０９Ｇ，Ａ００１Ｅ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ００１Ｅ−Ｎ２４３Ｖ
，Ａ００１Ｅ−Ｑ１０３Ｈ，Ａ００１Ｅ−Ｑ２０６Ｄ，Ａ００１Ｅ−Ｓ０３３Ｔ，Ａ００
１Ｅ−Ｓ０３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ００１Ｅ−Ｓ０３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ
２４３Ｖ，Ａ００１Ｅ−Ｓ０６３Ｇ，Ａ００１Ｅ−Ｓ１６２Ｇ，Ａ００１Ｅ−Ｓ２４８Ｎ
，Ａ００１Ｅ−Ｓ２４９Ａ，Ａ００１Ｅ−Ｔ１５８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１２８Ｓ，Ａ０８
８Ｔ−Ｇ１６９Ａ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｑ２０６Ｄ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ
１６９Ａ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ１１６Ｔ−Ｑ２０６Ｄ，Ａ１２８Ｓ，Ａ１２８Ｓ
−Ｇ１３１Ｈ，Ａ１２８Ｓ−Ｇ１６９Ａ，Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４
３Ｖ，Ａ１２８Ｓ−Ｑ２０６Ｄ，Ｇ０２４Ｅ，Ｇ０２４Ｅ−Ａ０８８Ｔ，Ｇ０２４Ｅ−Ａ
１２８Ｓ，Ｇ０２４Ｅ−Ｇ１３１Ｈ，Ｇ０２４Ｅ−Ｋ０４３Ｙ，Ｇ０２４Ｅ−Ｎ０７６Ｄ
，Ｇ０２４Ｅ−Ｎ２１８Ｓ，Ｇ０２４Ｅ−Ｑ１０３Ｈ，Ｇ０２４Ｅ−Ｑ２０６Ｄ，Ｇ０２
４Ｅ−Ｓ０３３Ｔ，Ｇ０２４Ｅ−Ｓ０６３Ｇ，Ｇ０２４Ｅ−Ｓ１６２Ｇ，Ｇ０２４Ｅ−Ｓ
２４８Ｎ，Ｇ０２４Ｅ−Ｓ２４９Ａ，Ｇ１３１Ｈ−Ｇ１６９Ａ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ
，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ，Ｇ１３１Ｈ−Ｑ２０６Ｄ，Ｇ１６９Ａ，Ｇ１６９Ａ−Ｋ２５
６Ｒ，Ｇ１６９Ａ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１６９Ａ−Ｎ２１８Ｓ，Ｇ１６９Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｇ
１６９Ａ−Ｑ２０６Ｄ，Ｇ１６９Ａ−Ｓ２４８Ｎ，Ｇ１６９Ａ−Ｓ２４９Ａ，Ｋ０４３Ｙ
，Ｋ０４３Ｙ−Ａ１１６Ｔ，Ｋ０４３Ｙ−Ａ１２８Ｓ，Ｋ０４３Ｙ−Ｇ１３１Ｈ，Ｋ０４
３Ｙ−Ｇ１６９Ａ，Ｋ０４３Ｙ−Ｌ２５７Ｇ，Ｋ０４３Ｙ−Ｎ０７６Ｄ，Ｋ０４３Ｙ−Ｎ
１０９Ｇ，Ｋ０４３Ｙ−Ｎ２１８Ｓ，Ｋ０４３Ｙ−Ｑ１０３Ｈ，Ｋ０４３Ｙ−Ｑ２０６Ｄ
，Ｋ０４３Ｙ−Ｓ０６３Ｇ，Ｋ０４３Ｙ−Ｓ１６２Ｇ，Ｋ０４３Ｙ−Ｓ２４８Ｎ，Ｋ０４
３Ｙ−Ｓ２４９Ａ，Ｋ０４３Ｙ−Ｔ１５８Ｓ，Ｎ０７６Ｄ，Ｎ０７６Ｄ−Ａ０８８Ｔ，Ｎ
０７６Ｄ−Ａ１１６Ｔ，Ｎ０７６Ｄ−Ａ１２８Ｓ，Ｎ０７６Ｄ−Ｇ１３１Ｈ，Ｎ０７６Ｄ
−Ｇ１６９Ａ，Ｎ０７６Ｄ−Ｎ２１８Ｓ，Ｎ０７６Ｄ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ０７６Ｄ−Ｑ１０
３Ｈ，Ｎ０７６Ｄ−Ｑ２０６Ｄ，Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１６２Ｇ，Ｎ０７６Ｄ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ
０７６Ｄ−Ｓ２４９Ａ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１６９Ａ，Ｎ１０９Ｇ−Ｑ２０６Ｄ，Ｎ１０９Ｇ
−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ２１８Ｓ，Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ２１
８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４９Ａ，Ｐ０４０Ｅ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ
１３１Ｈ，Ｑ１０３Ｈ，Ｑ１０３Ｈ−Ｇ１６９Ａ，Ｑ１０３Ｈ−Ｑ２０６Ｄ，Ｑ２０６Ｄ
，Ｑ２０６Ｄ−Ｋ２５６Ｒ，Ｑ２０６Ｄ−Ｌ２５７Ｇ，Ｑ２０６Ｄ−Ｎ２１８Ｓ，Ｑ２０
６Ｄ−Ｎ２４３Ｖ，Ｑ２０６Ｄ−Ｓ２４８Ｎ，Ｑ２０６Ｄ−Ｓ２４９Ａ，Ｓ０１８Ｔ−Ｙ
０２１Ｎ−Ｓ０３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ
，Ｓ０３３Ｔ，Ｓ０３３Ｔ−Ａ０８８Ｔ，Ｓ０３３Ｔ−Ａ１１６Ｔ，Ｓ０３３Ｔ−Ａ１２
８Ｓ，Ｓ０３３Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｐ，Ｓ０３３Ｔ−Ｇ１３１Ｈ，Ｓ
０３３Ｔ−Ｇ１６９Ａ，Ｓ０３３Ｔ−Ｋ０４３Ｙ，Ｓ０３３Ｔ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０３３Ｔ
−Ｌ２５７Ｇ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ０７６Ｄ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ０７６Ｄ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１
８Ｓ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ０７６Ｄ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ
２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ
−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ２１８Ｓ，Ｓ０３３Ｔ−Ｐ０４
０Ｅ−Ｑ１０３Ｈ−Ｎ１０９Ｇ，Ｓ０３３Ｔ−Ｑ１０３Ｈ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ，Ｓ
０３３Ｔ−Ｑ２０６Ｄ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ０６３Ｇ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ０６３Ｇ−Ｑ１０３Ｈ
−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｇ１６９Ａ−Ｎ２４３Ｐ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ０６
３Ｇ−Ｑ１０３Ｈ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｇ１６９Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ
０３３Ｔ−Ｓ１６２Ｇ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ２４８Ｎ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ２４９Ａ，Ｓ０６３Ｇ
−Ａ１１６Ｔ，Ｓ０６３Ｇ−Ｇ１３１Ｈ，Ｓ０６３Ｇ−Ｇ１６９Ａ，Ｓ０６３Ｇ−Ｎ１０
９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ，Ｓ０６３Ｇ−Ｎ２１８Ｓ，Ｓ０６３Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ
０６３Ｇ−Ｑ２０６Ｄ，Ｓ０６３Ｇ−Ｓ２４９Ａ，Ｓ１６２Ｇ−Ｇ１６９Ａ，Ｓ１６２Ｇ
−Ｎ２１８Ｓ，Ｓ１６２Ｇ−Ｑ２０６Ｄ，Ｓ１６２Ｇ−Ｓ２４９Ａ，Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５
６Ｒ，Ｓ２４８Ｎ−Ｓ２４９Ａ，Ｓ２４９Ａ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ２４９Ａ−Ｌ２５７Ｇ，Ｔ
１５８Ｓ−Ｇ１６９Ａ，Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ｔ１５８Ｓ−Ｑ２０６Ｄ，及びＴ１５
８Ｓ−Ｓ１６２Ｇ、
（ｉｖ）Ａ００１Ｅ，Ａ００１Ｅ−Ａ０８８Ｔ，Ａ００１Ｅ−Ａ１１６Ｔ，Ａ００１
Ｅ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ００１Ｅ−Ｇ０２４Ｅ，Ａ００１Ｅ−Ｇ１
３１Ｈ−Ｇ１６９Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ００１Ｅ−Ｇ１６９Ａ，Ａ００１Ｅ−Ｋ０４３Ｙ，
Ａ００１Ｅ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ００１Ｅ−Ｎ０７６Ｄ，Ａ００１Ｅ−Ｎ０７６Ｄ−Ｎ１０９
Ｇ−Ａ１２８Ｓ，Ａ００１Ｅ−Ｎ１０９Ｇ，Ａ００１Ｅ−Ｑ１０３Ｈ，Ａ００１Ｅ−Ｑ２
０６Ｄ，Ａ００１Ｅ−Ｓ０３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ００１Ｅ−Ｓ０３３Ｔ−
Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ００１Ｅ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ００１Ｅ−Ｔ１５８Ｓ，Ａ０８８
Ｔ−Ｇ１６９Ａ，Ａ０８８Ｔ−Ｑ２０６Ｄ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１６９Ａ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２
１８Ｓ，Ａ１１６Ｔ−Ｑ２０６Ｄ，Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ，Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−
Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１２８Ｓ−Ｑ２０６Ｄ，Ｇ０２４Ｅ−Ｋ０４３Ｙ，Ｇ０２４
Ｅ−Ｎ０７６Ｄ，Ｇ０２４Ｅ−Ｑ２０６Ｄ，Ｇ１３１Ｈ−Ｇ１６９Ａ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２
１８Ｓ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１３１Ｈ−Ｑ２０６Ｄ，Ｇ１３１Ｈ−
Ｓ２４８Ｎ，Ｇ１６９Ａ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１６９Ａ−Ｎ２１８Ｓ，Ｇ１６９Ａ−Ｎ２４３
Ｖ，Ｇ１６９Ａ−Ｑ２０６Ｄ，Ｇ１６９Ａ−Ｓ２４９Ａ，Ｋ０４３Ｙ−Ｇ１６９Ａ，Ｋ０
４３Ｙ−Ｎ０７６Ｄ，Ｋ０４３Ｙ−Ｎ２１８Ｓ，Ｋ０４３Ｙ−Ｑ２０６Ｄ，Ｎ０６１Ｐ−
Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ０６１
Ｓ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｓ２６０Ｐ，Ｎ０
６１Ｓ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ０７６Ｄ，Ｎ０７６Ｄ−Ｇ１３１Ｈ，Ｎ０７６Ｄ−
Ｌ２５７Ｇ，Ｎ０７６Ｄ−Ｎ１０９Ｇ，Ｎ０７６Ｄ−Ｑ１０３Ｈ，Ｎ０７６Ｄ−Ｑ２０６
Ｄ，Ｎ０７６Ｄ−Ｓ２４９Ａ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１
０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−
Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１６９Ａ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｐ−Ｓ２４８
Ａ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｐ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２
４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ａ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−
Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９
Ｇ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４９Ａ，Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２
５６Ｒ，Ｐ０４０Ｅ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ，Ｑ１０３Ｈ−Ｑ２０６Ｄ，
Ｑ２０６Ｄ，Ｑ２０６Ｄ−Ｋ２５６Ｒ，Ｑ２０６Ｄ−Ｌ２５７Ｇ，Ｑ２０６Ｄ−Ｎ２１８
Ｓ，Ｑ２０６Ｄ−Ｓ２４８Ｎ，Ｑ２０６Ｄ−Ｓ２４９Ａ，Ｓ００９Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１
２８Ｓ−Ｋ１４１Ｒ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ００９Ｔ−Ｓ０１８Ｔ−
Ｙ０２１Ｎ−Ａ１２８Ｓ−Ｋ１４１Ｒ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ａ１２８
Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ｎ０６１Ｓ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２
６０Ｐ，Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ｎ０６１Ｓ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２６０Ｐ，
Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ｓ０３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８
Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０３３Ｔ，Ｓ０３３Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｐ，Ｓ０
３３Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ０３３Ｔ−Ｇ１６９Ａ，Ｓ０３３Ｔ−
Ｎ０７６Ｄ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ０７６Ｄ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８
Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１
２８Ｓ−Ｎ２４３Ｐ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−
Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０３３Ｔ−Ｐ０４０Ｅ−Ｑ１０３Ｈ−Ｎ１０９
Ｇ，Ｓ０３３Ｔ−Ｑ１０３Ｈ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ０６３Ｇ−Ｑ１
０３Ｈ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｇ１６９Ａ−Ｎ２４３Ｐ，Ｓ０３３Ｔ−
Ｓ０６３Ｇ−Ｑ１０３Ｈ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｇ１６９Ａ−Ｎ２４３
Ｖ，Ｓ０６３Ｇ−Ｇ１３１Ｈ，Ｓ０６３Ｇ−Ｇ１６９Ａ，Ｓ０６３Ｇ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１
２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ，Ｓ０６３Ｇ−Ｑ２０６Ｄ，Ｓ１６２Ｇ−Ｑ２０６Ｄ，Ｔ１５８Ｓ−
Ｑ２０６Ｄ，及びＴ１５８Ｓ−Ｓ１６２Ｇ、
（ｖ）Ａ００１Ｅ−Ａ０８８Ｔ，Ａ００１Ｅ−Ａ１２８Ｓ，Ａ００１Ｅ−Ａ１２８Ｓ
−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ００１Ｅ−Ｇ０２４Ｅ，Ａ００１Ｅ−Ｇ０２４Ｅ−Ｓ２０
４Ｅ−Ｑ２０６Ｄ，Ａ００１Ｅ−Ｇ１３１Ｈ−Ｇ１６９Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ００１Ｅ−Ｋ
０４３Ｙ，Ａ００１Ｅ−Ｎ０７６Ｄ，Ａ００１Ｅ−Ｎ０７６Ｄ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ
，Ａ００１Ｅ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ００１Ｅ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ００１Ｅ−Ｑ１０３Ｈ，Ａ００
１Ｅ−Ｑ２０６Ｄ，Ａ００１Ｅ−Ｓ０３３Ｔ，Ａ００１Ｅ−Ｓ０３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ
２１８Ｓ，Ａ００１Ｅ−Ｓ１６２Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｑ２０６Ｄ，Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ
−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１２８Ｓ−Ｑ２０６Ｄ，Ｇ０２４Ｅ−Ｑ２０６Ｄ，Ｇ１３
１Ｈ−Ｑ２０６Ｄ，Ｋ０４３Ｙ−Ｇ１３１Ｈ，Ｋ０４３Ｙ−Ｑ１０３Ｈ，Ｋ０４３Ｙ−Ｑ
２０６Ｄ，Ｋ０４３Ｙ−Ｓ１６２Ｇ，Ｎ０６１Ｓ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ
−Ｓ２６０Ｐ，Ｎ０７６Ｄ−Ａ１２８Ｓ，Ｎ０７６Ｄ−Ｑ２０６Ｄ，Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１６
２Ｇ，Ｎ０７６Ｄ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ
１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ
−Ｎ２４３Ｐ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｑ２０６Ｄ，Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４
８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｐ０４０Ｅ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ，Ｑ１０３Ｈ−Ｑ
２０６Ｄ，Ｑ２０６Ｄ−Ｋ２５６Ｒ，Ｑ２０６Ｄ−Ｎ２４３Ｖ，Ｑ２０６Ｄ−Ｓ２４８Ｎ
，Ｑ２０６Ｄ−Ｓ２４９Ａ，Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ｎ０６１Ｓ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４
３Ｖ−Ｓ２６０Ｐ，Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ｎ０６１Ｓ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ
２６０Ｐ，Ｓ０３３Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｐ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ０７６Ｄ
−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ０７６Ｄ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１
８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０３３Ｔ−Ｐ０４０Ｅ−Ｑ１０３Ｈ−Ｎ
１０９Ｇ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ０６３Ｇ−Ｑ１０３Ｈ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ
−Ｇ１６９Ａ−Ｎ２４３Ｐ，Ｓ０６３Ｇ−Ｑ２０６Ｄ，Ｓ１６２Ｇ−Ｑ２０６Ｄ，及びＴ
１５８Ｓ−Ｑ２０６Ｄ、
（ｖｉ）Ａ００１Ｅ，Ａ００１Ｅ−Ａ１２８Ｓ，Ａ００１Ｅ−Ｇ０２４Ｅ，Ａ００１
Ｅ−Ｇ１３１Ｈ，Ａ００１Ｅ−Ｇ１６９Ａ，Ａ００１Ｅ−Ｋ０４３Ｙ，Ａ００１Ｅ−Ｋ２
５６Ｒ，Ａ００１Ｅ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ００１Ｅ−Ｎ０７６Ｄ，Ａ００１Ｅ−Ｎ１０９Ｇ，
Ａ００１Ｅ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ００１Ｅ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ００１Ｅ−Ｑ１０３Ｈ，Ａ００１
Ｅ−Ｑ２０６Ｄ，Ａ００１Ｅ−Ｓ０３３Ｔ，Ａ００１Ｅ−Ｓ０６３Ｇ，Ａ００１Ｅ−Ｓ１
６２Ｇ，Ａ００１Ｅ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ００１Ｅ−Ｓ２４９Ａ，Ａ００１Ｅ−Ｔ１５８Ｓ，
Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ，Ａ０８８
Ｔ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｑ２０６Ｄ，Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１
３１Ｈ，Ａ１１６Ｔ−Ｑ２０６Ｄ，Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１２８Ｓ，Ａ１２８Ｓ−
Ｇ１３１Ｈ，Ａ１２８Ｓ−Ｑ２０６Ｄ，Ｇ０２４Ｅ，Ｇ０２４Ｅ−Ｎ０７６Ｄ，Ｇ０２４
Ｅ−Ｎ１０９Ｇ，Ｇ０２４Ｅ−Ｑ２０６Ｄ，Ｇ１３１Ｈ，Ｇ１３１Ｈ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１
３１Ｈ−Ｑ２０６Ｄ，Ｇ１６９Ａ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１６９Ａ−Ｑ２０６Ｄ，Ｋ０４３Ｙ，
Ｋ０４３Ｙ−Ａ０８８Ｔ，Ｋ０４３Ｙ−Ａ１１６Ｔ，Ｋ０４３Ｙ−Ａ１２８Ｓ，Ｋ０４３
Ｙ−Ｇ１３１Ｈ，Ｋ０４３Ｙ−Ｇ１６９Ａ，Ｋ０４３Ｙ−Ｋ２５６Ｒ，Ｋ０４３Ｙ−Ｌ２
５７Ｇ，Ｋ０４３Ｙ−Ｎ０７６Ｄ，Ｋ０４３Ｙ−Ｎ１０９Ｇ，Ｋ０４３Ｙ−Ｎ２１８Ｓ，
Ｋ０４３Ｙ−Ｎ２４３Ｖ，Ｋ０４３Ｙ−Ｑ１０３Ｈ，Ｋ０４３Ｙ−Ｓ０６３Ｇ，Ｋ０４３
Ｙ−Ｓ１６２Ｇ，Ｋ０４３Ｙ−Ｓ２４８Ｎ，Ｋ０４３Ｙ−Ｓ２４９Ａ，Ｋ０４３Ｙ−Ｔ１
５８Ｓ，Ｎ０７６Ｄ−Ａ０８８Ｔ，Ｎ０７６Ｄ−Ａ１１６Ｔ，Ｎ０７６Ｄ−Ａ１２８Ｓ，
Ｎ０７６Ｄ−Ｇ１３１Ｈ，Ｎ０７６Ｄ−Ｇ１６９Ａ，Ｎ０７６Ｄ−Ｎ１０９Ｇ，Ｎ０７６
Ｄ−Ｎ２１８Ｓ，Ｎ０７６Ｄ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ０７６Ｄ−Ｑ１０３Ｈ，Ｎ０７６Ｄ−Ｑ２
０６Ｄ，Ｎ０７６Ｄ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ０７６Ｄ−Ｔ１５８Ｓ，Ｎ１０９Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−
Ｇ１６９Ａ，Ｎ１０９Ｇ−Ｑ２０６Ｄ，Ｎ１０９Ｇ−Ｓ１６２Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８
Ｓ，Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ｑ１０３Ｈ，Ｑ１０３Ｈ−Ａ１２８Ｓ，Ｑ１０３Ｈ−Ｇ１
３１Ｈ，Ｑ１０３Ｈ−Ｑ２０６Ｄ，Ｑ１０３Ｈ−Ｓ２４８Ｎ，Ｑ１０３Ｈ−Ｓ２４９Ａ，
Ｑ１０３Ｈ−Ｔ１５８Ｓ，Ｑ２０６Ｄ，Ｑ２０６Ｄ−Ｋ２５６Ｒ，Ｑ２０６Ｄ−Ｌ２５７
Ｇ，Ｑ２０６Ｄ−Ｎ２１８Ｓ，Ｑ２０６Ｄ−Ｎ２４３Ｖ，Ｑ２０６Ｄ−Ｓ２４８Ｎ，Ｑ２
０６Ｄ−Ｓ２４９Ａ，Ｓ０３３Ｔ，Ｓ０３３Ｔ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ０６３Ｇ，
Ｓ０３３Ｔ−Ｓ２４９Ａ，Ｓ０６３Ｇ−Ａ０８８Ｔ，Ｓ０６３Ｇ−Ｇ１３１Ｈ，Ｓ０６３
Ｇ−Ｇ１６９Ａ，Ｓ０６３Ｇ−Ｎ０７６Ｄ，Ｓ０６３Ｇ−Ｎ１０９Ｇ，Ｓ０６３Ｇ−Ｎ２
１８Ｓ，Ｓ０６３Ｇ−Ｑ１０３Ｈ，Ｓ０６３Ｇ−Ｑ２０６Ｄ，Ｓ１６２Ｇ−Ｑ２０６Ｄ，
Ｓ１６２Ｇ−Ｓ２４９Ａ，Ｓ２４８Ｎ−Ｓ２４９Ａ，Ｓ２４９Ａ−Ｋ２５６Ｒ，Ｔ１５８
Ｓ−Ｑ２０６Ｄ，及びＴ１５８Ｓ−Ｓ２４９Ａ、
（ｖｉｉ）Ｇ１３１Ｈ−Ｓ１６２Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５
８Ｓ，Ｋ０４３Ｙ−Ｇ１３１Ｈ，Ｋ０４３Ｙ−Ｓ１６２Ｇ，Ｑ１０３Ｈ−Ａ１２８Ｓ，Ｑ
１０３Ｈ−Ｎ２１８Ｓ，Ｓ０３３Ｔ−Ｑ１０３Ｈ，Ｓ０６３Ｇ−Ａ０８８Ｔ，Ｓ０６３Ｇ
−Ｇ１３１Ｈ，Ｓ０６３Ｇ−Ｓ２４８Ｎ，及びＴ１５８Ｓ−Ｓ１６２Ｇ、
（ｖｉｉｉ）Ａ０１５Ｓ−Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２
１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ０９８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−
Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ０９８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６
Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｇ１４６Ｃ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０
８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ−Ｌ２６７Ｍ，Ａ０８８Ｔ−
Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６
Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１
１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−
Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６
Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２
１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−
Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８
Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２
４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，
Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６
Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１
５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−
Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８
Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１
３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，
Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８
Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２
４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−
Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８
Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０
８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｉ２６８Ｖ，
Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８
Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｑ２７１Ｒ，Ａ０
８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−
Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｑ２７５Ｒ，Ａ０８８
Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２
４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，
Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６
Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１
１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−
Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８
Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｅ２５１Ｋ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１
１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−
Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８
Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１
５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−
Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８
Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２
４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，
Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８
Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１３８Ｅ−Ｎ２
１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ，
Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｋ１４１Ｅ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７
Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２
３７Ｒ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，
Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８
Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２
５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，
Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１
Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２
４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−
Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８
Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２
４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−
Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８
Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２
１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−
Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６
Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１
３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−
Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８
Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｉ２３４Ｔ−Ｓ２
４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−
Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８
Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１
５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−
Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１
Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１
３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，
Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６
Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２
４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−
Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６
Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０
８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−
Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１
Ｈ−Ｖ１４９Ｌ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０
８８Ｔ−Ｉ１０７Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ａ２２３Ｇ−Ｓ２４８Ｎ−
Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｉ１０７Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８
Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｉ１０８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２
１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｋ２１３Ｎ−Ｎ２４３Ｖ−
Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｌ２５７
Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ａ２３２Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２
５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｄ１４０Ｇ−Ｓ２４８Ｎ−
Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｄ１４０Ｇ−Ｔ１５８
Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１
３１Ｈ−Ｋ１４１Ｅ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−
Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８
Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２
１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−
Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９
Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２
５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−
Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１
Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｎ２６９Ｄ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１
１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｑ２７５Ｒ，Ａ０８８Ｔ−
Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７
Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０
８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−
Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ−Ｉ２６８Ｖ，Ａ０８８
Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｆ−Ｓ２
４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−
Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８
Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１
１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−
Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８
Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２
４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−
Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６
Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１
０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−
Ｉ２６８Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３
Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１
５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−
Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｖ１４９Ａ−Ｎ２１８
Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１
３１Ｈ−Ｗ２４１Ｌ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−
Ａ１１６Ｔ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｍ１２４Ｉ−Ｇ１３１
Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１
１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−
Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６
Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１
０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−
Ｔ
１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ
−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５
６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ
２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ
−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５
８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ
２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｖ１４８Ａ
−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｄ１４０Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８
８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ａ１３８Ｖ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ
２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｄ１４０Ｇ−Ｔ１５８Ｓ
−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｋ１４
１Ｅ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｋ
２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ
，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８
８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ
０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ
−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０
９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ−Ｑ２７５Ｒ，Ａ
０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｑ２７１Ｒ
，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８
８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ
１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ
−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５
６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２３３Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ
２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ
−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４
３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ
２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ
−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５
７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ
２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ
−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１
８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ
２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ
−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４
８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｖ１４９Ａ−Ｋ
２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｖ１４９Ｌ−Ｔ１５８Ｓ
−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５
７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ
１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ
−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４
８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ
２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｔ２５５Ｋ−Ｋ２５６Ｒ
−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０
９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ
２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ
−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１
８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ−Ｑ
２７１Ｋ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ
−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０
９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ
１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ
−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８
８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ
１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ
−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｗ２４
１Ｒ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ
０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ
−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８
８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ
２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ
−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ−Ｑ２７１Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５
７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ
２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ
−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１
８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ
２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ
−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５
８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ
１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ
−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５
８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｑ２４５Ｋ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ
２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ
，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５
８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ
２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ−Ｑ２７５Ｋ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ
−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４
８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ
１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｖ２０３Ｉ−Ｎ２１８Ｓ
−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｖ１４７Ｉ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５
６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｙ１０４Ｈ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ
２４３Ｖ，Ａ１１６Ｔ−Ｄ１４０Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ
，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｋ１４１Ｅ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５
７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ
２４３Ｖ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ
−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３
１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ
２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ
−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５
６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｗ２４１Ｒ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ
２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ
，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３
１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ
１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ
−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ−Ｎ２６９Ｄ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１
８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｑ２７１Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ
２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１１６Ｔ
−Ｇ１３１Ｈ−Ｖ１３９Ｉ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３
１Ｈ−Ｖ１５０Ａ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ
１１６Ｔ−Ｇ１５７Ｅ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ
−Ｋ１４１Ｅ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１
６Ｔ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ
２１８Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ
，Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ１１
６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ
２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ
，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５
８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ０２４Ｓ−Ｇ０５３Ｓ−Ｎ０７８Ｓ−Ｇ
０９７Ａ−Ｎ１０１Ｓ，Ｇ０５３Ｓ−Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ
−Ｔ１５８Ｓ−Ｇ１６９Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ０６
５Ｄ−Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｇ１３１Ｈ−Ｋ１４１Ｒ−Ｔ
１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１３１Ｈ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ
−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１
８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ｇ
１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ
，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１
８Ｓ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４０Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ
２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｇ１３１Ｈ
−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１３
１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ
１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｉ２６８Ｖ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ
−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ−Ｎ２６９Ｓ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４
３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ
１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ｉ１０７Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ
−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｉ１０７Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５
７Ｇ，Ｋ２５６Ｒ，Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｌ０９０Ｉ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ
２４３Ｖ，Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ
，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０
９
Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１
１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｗ２４１Ｒ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−
Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１
Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１
５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ−Ｑ２７１Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−
Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９
Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１
０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−
Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６
Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２
４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−
Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｉ２３４Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８
Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｋ１４１Ｅ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２
１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−
Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｗ２４１Ｒ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８
Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２
５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２３７Ｒ−Ｎ２４３Ｖ−
Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８
Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｋ１４１Ｅ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２
１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，
Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ，Ｎ１０９
Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２
１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−
Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８
Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２
４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−
Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８
Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２
５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ｎ１０９Ｇ−
Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３
Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１
０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−
Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３
Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ２
１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，
Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｓ００３Ｐ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８
Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｓ００３Ｐ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１
５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ００３Ｐ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−
Ｌ２５７Ｇ，Ｓ００３Ｐ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｓ１０５Ｈ−Ｗ１０６Ｇ−Ｉ１０７
Ｌ−Ｉ１０８Ｓ−Ｎ１０９Ａ−Ｇ１１０Ａ−Ｉ１１１Ｓ−Ｅ１１２Ｎ−Ｗ１１３Ｇ−Ａ１
１４Ｐ，Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｔ１５８Ｓ，Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ｔ１５８Ｓ−
Ｎ２１８Ｓ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２３３
Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２
４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｔ１５８Ｓ−
Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８
Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｔ１
５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−
Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｔ１５８
Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｖ００４Ａ−Ａ０
８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｖ００４Ｌ−
Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｙ００６
Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，及びＹ１０４Ｈ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−
Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ、
（ｉｘ）Ａ０８８Ｔ−Ａ０９８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７
Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１
３１Ｈ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，
Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８
Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１
１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−
Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１
Ｈ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２
５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−
Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１
Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１
５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−
Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８
Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０
８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，
Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｖ１５０Ａ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７
Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｋ２
５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−
Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８
Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｑ２７１Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２
４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−
Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６
Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２
５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，
Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６
Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１
５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−
Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１３８Ｅ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３
Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｄ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０
８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−
Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２３７Ｒ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８
Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２
５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，
Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３
Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１
３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−
Ｎ２１８Ｓ−Ｉ２３４Ｔ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８
Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１
３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−
Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６
Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１
３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−
Ｖ１４９Ｌ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８
Ｔ−Ｉ１０８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２
５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｋ２１３Ｎ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，
Ａ０８８Ｔ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１
Ｈ−Ｄ１４０Ｇ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１
３１Ｈ−Ｋ１４１Ｅ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−
Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３
Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１
３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｑ２７５Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−
Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６
Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１
０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−
Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８
Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０
８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−
Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ−Ｉ２６８
Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２
４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−
Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１
Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１
０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−
Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｖ１４９Ａ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８
Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｗ２４１Ｌ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２
５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｍ１２４Ｉ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−
Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８
Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２
１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−
Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８
Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０
８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−
Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１２Ｄ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７
Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２
５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−
Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８
Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２
５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，
Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ−Ｑ２７１
Ｐ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｖ１４８Ａ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０
８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１３７Ｅ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−
Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｄ１４０Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８
Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ａ１５２Ｓ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２
５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｄ１４０Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−
Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７
Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１
０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−
Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８
Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０
８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−
Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８
Ｓ−Ｌ２３３Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１
５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−
Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１
Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１
３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｗ２４１Ｒ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−
Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８
Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１
０９Ｇ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，
Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９
Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｔ２５５Ｋ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１
０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−
Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７
Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２
１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−
Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８
Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０
８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−
Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８
Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｑ２７５Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２
４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−
Ｎ１０９Ｇ−Ｗ２４１Ｒ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３
Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２
５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−
Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８
Ｔ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ−Ｉ２６８Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０
８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−
Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８
Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２
４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｑ２４５Ｋ−
Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６
Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１
５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ−Ｑ２７５Ｋ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−
Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７
Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２
４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−
Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８
Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１
５
８Ｓ−Ｖ２０３Ｉ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｙ１０４Ｈ−Ａ
１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｙ１０４Ｈ−Ｎ１０９Ｇ
−Ａ１１６Ｔ−Ａ１５３Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ−Ｎ２６
９Ｄ，Ａ０８８Ｔ−Ｙ１０４Ｈ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ａ１３７Ｅ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ
２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０９８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ
−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｄ１４
０Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｋ
１４１Ｅ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ
−Ｎ２１８Ｓ−Ｗ２４１Ｒ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１
６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ
２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ１１６Ｔ
−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３
１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｖ１３９Ｉ−Ｎ
２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１５７Ｅ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ
−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１
８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｓ
２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ
−Ｑ２７１Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５
７Ｇ，Ｇ０５３Ｓ−Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｇ
１６９Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ０６５Ｄ−Ａ０８８Ｔ
−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１３
１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１３１Ｈ−Ｓ
２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ
，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｋ２５６Ｒ，Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５
７Ｇ，Ｌ０９０Ｉ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ
１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ
−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１
６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ
１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ
，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｉ２３４Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５
７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ
１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｗ２４１Ｒ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ
，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５
８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ
２３７Ｒ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ
−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０
９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ
２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ａ１３７Ｖ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ
−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｋ１４１Ｅ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３
１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ
２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ
，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｑ２７１Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１
８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ
１０９Ｇ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ
−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４
３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ
２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ
，Ｎ２４３Ｖ，Ｐ０１４Ｌ−Ａ０１５Ｌ−Ｌ０１６Ｃ−Ｈ０１７Ｔ−Ｓ０１８Ｌ−Ｑ０１
９Ｋ−Ｇ０２０Ａ−Ｙ０２１Ｔ−Ｔ０２２Ｌ−Ｇ０２３Ｅ，Ｓ００３Ｐ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ
１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ００３Ｐ−Ｎ１０９Ｇ
−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ｓ００３Ｐ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｓ１０
５Ｈ−Ｗ１０６Ｇ−Ｉ１０７Ｌ−Ｉ１０８Ｓ−Ｎ１０９Ａ−Ｇ１１０Ａ−Ｉ１１１Ｓ−Ｅ
１１２Ｎ−Ｗ１１３Ｇ−Ａ１１４Ｐ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ
，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４
８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ｔ
１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ
，Ｖ００４Ａ−Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ｖ００４Ａ−Ａ０８
８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｖ００４Ｍ−Ａ
１１６Ｔ−Ｖ１４８Ａ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｙ００６Ｈ
−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｙ１０４Ｈ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５
８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ｙ１０４Ｈ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，及
びＹ１０４Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ、
（ｘ）Ａ０４５Ｓ−Ｓ２３６Ｇ，Ａ０４５Ｓ−Ｓ２３６Ｙ，Ａ１３４Ｔ−Ｓ２６０Ｇ
，Ｇ０２４Ａ−Ｓ０３７Ｗ，Ｉ０３１Ｖ−Ｓ０３８Ｗ，Ｉ１１５Ｔ−Ｓ１８３Ｔ，Ｉ１１
５Ｖ−Ｎ１８４Ｙ，Ｎ０２５Ｋ−Ｐ１２９Ｋ，Ｎ０２５Ｋ−Ｐ１２９Ｒ，Ｎ０２５Ｋ−Ｓ
０３７Ｐ，Ｎ０６１Ｄ−Ｓ２６０Ｉ，Ｑ０１０Ｌ−Ｓ０３７Ｐ，Ｑ０１０Ｒ−Ｓ０３７Ｔ
，Ｑ０１９Ｌ−Ｓ２６０Ｎ，Ｑ０１９Ｌ−Ｓ２６０Ｐ，Ｓ０３７Ｐ−Ｔ２５４Ｓ，Ｓ１６
１Ｐ−Ｔ２５３Ａ，及びＳ１６２Ｌ−Ｄ１８１Ｈ、
（ｘｉ）Ａ０４５Ｓ−Ｓ２３６Ｇ，Ａ０４５Ｓ−Ｓ２３６Ｙ，Ａ１３３Ｖ−Ｓ２６０
Ｎ，Ａ１３４Ｔ−Ｓ２６０Ｇ，Ｇ０２４Ａ−Ｓ０３７Ｗ，Ｉ０３１Ｖ−Ｓ０３８Ｗ，Ｉ１
１５Ｔ−Ｓ１８３Ｔ，Ｉ１１５Ｖ−Ｎ１８４Ｙ，Ｎ０２５Ｋ−Ｐ１２９Ｒ，Ｎ０２５Ｋ−
Ｓ０３７Ｐ，Ｎ０６１Ｄ−Ｓ２６０Ｉ，Ｑ０１０Ｒ−Ｓ０３７Ｔ，Ｑ０１９Ｌ−Ｓ２６０
Ｎ，Ｑ０１９Ｌ−Ｓ２６０Ｐ，及びＳ１６２Ｌ−Ｄ１８１Ｈ、並びに、
（ｘｉｉ）Ａ０４５Ｓ−Ｓ２３６Ｇ，Ａ０４５Ｓ−Ｓ２３６Ｙ，Ｉ１１５Ｔ−Ｓ１８
３Ｔ，Ｎ０２５Ｋ−Ｓ０３７Ｐ，Ｎ０６１Ｓ−Ｓ２６０Ｐ，Ｑ０１０Ｌ−Ｓ０３７Ｐ，Ｑ
０１０Ｒ−Ｓ０３７Ｔ，Ｑ０１９Ｌ−Ｓ２６０Ｎ，Ｓ０３７Ｐ−Ｔ２５４Ｓ，及びＳ１６
１Ｐ−Ｓ２６０Ｐ。ここで、この変異体の各アミノ酸位置は、配列番号２のアミノ酸配列
におけるアミノ酸位置に対応させることにより番号付けされる。
【０１４０】
本発明の第九態様による変異体は、配列番号２、配列番号４又は配列番号６に記載のプ
ロテアーゼとそれぞれ比較して向上したタンパク質分解活性及び／又は向上したクリーニ
ング活性を有し得る。本発明の第九態様による変異体は、配列番号２、配列番号４又は配
列番号６に記載のプロテアーゼのものを超える、タンパク質分解活性（例えば、ＡＡＰＦ
アッセイ）又はクリーニングアッセイ（例えば、ＢＭＩ、植物又は卵の微小標本アッセイ
）における性能指数を有し得る。本発明の第九態様による変異体は、ＢＰＮ’スブチリシ
ンプロテアーゼ（配列番号２）のプロテアーゼ変異体であり得る。
【０１４１】
第二十一態様では、本発明は、親プロテアーゼの変異体である単離された又は非自然発
生型の冷水プロテアーゼを提供し、上記冷水プロテアーゼは、下記の群（ａ）及び（ｂ）
から選択される合計で３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４又は
１５個の変異を含み、ここで、少なくとも１つの変異は群（ａ）から選択される：
（ａ）１、９、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、３３
、４３、７６、１０２、１０９、１３７、１４１、１５８、１６９、２０４、２１０、２
１８、２４３、２４８、２４９、２５６、２５７、２６０及び２６９、並びに、
（ｂ）２４、２５、４０、５２、５３、５５、５８、５９、６１、６２、６３、６８、
７８、８６、８７、８８、８９、９２、９６、９７、１００、１０１、１０３、１０４、
１０６、１１１、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１２３、１２４、１２５、
１２６、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１４４、１４５、
１５９、１６１、１６２、１６７、１９４、２０３、２０６、２１３、２１７、２２７、
２３２、２３９、２４０、２４２、２６５、２６７及び２７５。ここで、アミノ酸位置は
、配列番号２に対応させることにより番号付けされる。本発明の第二十一態様による親プ
ロテアーゼは、配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、
９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００
％の同一性を有するアミノ酸配列を含み得、本発明の第二十一態様による変異体は、下記
の群（ａ）及び（ｂ）から選択される合計で３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、
１２、１３、１４又は１５個の変異を含み、ここで、少なくとも１つの変異は群（ａ）か
ら選択される：
（ａ）Ａ１Ｅ／Ｔ、Ｓ９／Ｔ、Ｐ１４Ｌ，Ａ１５Ｌ，Ｌ１６Ｃ，Ｈ１７Ｔ，Ｓ１８Ｌ／
Ｔ、Ｑ１９Ｋ，Ｇ２０Ａ，Ｙ２１Ｎ／Ｔ、Ｔ２２Ｌ，Ｇ２３Ｅ，Ｓ３３Ｔ，Ｋ４３Ｙ，Ｎ
７６Ｄ，Ｇ１０２Ａ，Ｎ１０９Ａ／Ｓ／Ｇ、Ａ１３７Ｖ，Ｋ１４１Ｒ，Ｔ１５８Ｓ，Ｇ１
６９Ａ，Ｓ２０４Ｅ，Ｐ２１０Ｓ，Ｎ２１８Ｓ，Ｎ２４３Ｐ／Ｖ、Ｓ２４８Ｎ／Ａ、Ｓ２
４９Ａ，Ｋ２５６Ｒ，Ｌ２５７Ｇ，Ｓ２６０Ｐ，及びＮ２６９Ｄ、並びに、
（ｂ）Ｓ２４Ｇ／Ｒ／Ｅ、Ｎ２５Ｇ，Ｐ４０Ａ／Ｅ、Ｐ５２Ｌ，Ｓ５３Ｇ，Ｔ５５Ｐ，
Ｆ５８Ｇ，Ｑ５９Ｓ，Ｎ６１Ｅ／Ｐ／Ｇ／Ｓ、Ｎ６２Ｑ／Ｒ／Ｓ、Ｓ６３Ｇ／Ｈ、Ｖ６８
Ａ，Ｓ７８Ｎ，Ｐ８６Ｓ，Ｓ８７Ｄ／Ｇ、Ａ８８Ｔ／Ｖ、Ｓ８９Ｙ，Ａ９２Ｇ，Ｌ９６Ｔ
，Ｇ９７Ａ，Ｇ１００Ｎ／Ｑ／Ｔ、Ｓ１０１Ｎ，Ｑ１０３Ｅ／Ｈ、Ｙ１０４Ｎ，Ｗ１０６
Ｆ，Ｉ１１１Ｖ，Ａ１１４Ｇ，Ｉ１１５Ｖ，Ａ１１６Ｎ／Ｔ、Ｎ１１７Ｓ，Ｎ１１８Ｇ，
Ｎ１２３Ａ／Ｇ／Ｑ／Ｖ、Ｍ１２４Ｉ／Ｖ、Ｓ１２５Ａ，Ｌ１２６Ａ，Ｇ１２８Ａ／Ｓ、
Ｐ１２９Ｅ／Ｑ／Ｓ／Ｖ、Ｓ１３０Ｇ，Ｇ１３１Ｓ／Ｈ、Ｓ１３２Ｎ，Ａ１３３Ｖ，Ａ１
３４Ｔ，Ａ１４４Ｋ，Ｓ１４５Ｄ，Ｓ１５９Ｋ，Ｓ１６１Ｐ，Ｓ１６２Ｇ／Ｋ、Ｙ１６７
Ａ，Ｐ１９４Ｌ，Ｖ２０３Ｙ，Ｑ２０６Ｄ／Ｅ、Ｋ２１３Ｌ，Ｙ２１７Ｑ／Ｌ／Ｄ、Ｖ２
２７Ｔ，Ａ２３２Ｔ，Ｐ２３９Ｒ／Ｖ、Ｎ２４０Ｋ，Ｔ２４２Ｒ，Ｋ２６５Ｎ，Ｌ２６７
Ｖ，及びＱ２７５Ｅ。本発明の第二態様による変異体及び親プロテアーゼは、成熟型であ
り得る。
【０１４２】
本発明の第二十一態様による変異体は、ＢＰＮ’野生型と比較して−１、０又は＋１の
合計正味電荷を有し得る。
【０１４３】
本発明の第一、第二、第四、第五、第六、第七、第八、第九又は第二十一態様では、こ
の変異体は、親スブチリシンプロテアーゼと比較したときに洗剤において改善された洗浄
性能又はクリーニング性能を有するスブチリシンプロテアーゼ変異体であり得、これはス
ブチリシンプロテアーゼであってもよい。本発明の第三態様では、ポリペプチドは、配列
番号２、配列番号４又は配列番号６のプロテアーゼのものと比較したとき、洗剤において
改善された洗浄性能及びクリーニング性能を有し得る。このような態様の代表的な洗剤は
、パートＩ実施例及びパートＩＩ実施例に示す。
【０１４４】
本発明の第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九又は第二十一態様に
よるプロテアーゼ変異体は、冷水プロテアーゼであり得る。一態様では、本発明の第一、
第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九又は第二十一態様によるプロテアーゼ
変異体は、（ｉ）本明細書のパートＩ実施例１に記載の「試験方法」に定義したように配
列番号４のアミノ酸配列を有する酵素と比較したときにｐＨ  ８及び６０°Ｆ（１６℃）
におけるＢＭＩで、１を超える、少なくとも１．１、少なくとも１．２、少なくとも１．
３、少なくとも１．４、少なくとも１．５、少なくとも１．６、少なくとも１．７、少な
くとも１．８、少なくとも１．９、少なくとも２、少なくとも１〜約１０、少なくとも１
〜約８、又は少なくとも１〜約５の性能指数、あるいは、（ｉｉ）本明細書のパートＩ実
施例１に記載の「試験方法」に定義したように配列番号６のアミノ酸配列を有する酵素と
比較したときにｐＨ  ８及び６０°Ｆ（１６℃）におけるＢＭＩで、少なくとも１、少な
くとも１．１、少なくとも１．２、少なくとも１．３、少なくとも１．４、少なくとも１
．５、少なくとも１．６、少なくとも１．７、少なくとも１．８、少なくとも１．９、少
なくとも２、少なくとも１〜約１０、少なくとも１〜約８、又は少なくとも１〜約５の性
能指数、を有する冷水プロテアーゼであり得る。
【０１４５】
上記のように、本発明のプロテアーゼ変異体ポリペプチドは、酵素活性（例えば、タン
パク質分解活性）を有し、したがって、例えば、食卓食器物品、食卓用器具物品、布地、
硬質表面（例えば、机、机の上、壁、家具物品、床、天井など）を有する物品をクリーニ
ングするための方法が挙げられるがこれらに限定されないクリーニング用途に有用である
。本発明の１つ以上のプロテアーゼ変異体ポリペプチドを含む代表的なクリーニング組成
物は、以下に記載される。本発明のプロテアーゼ変異体の酵素活性（例えば、プロテアー
ゼ活性）は、当業者に周知の手順を使用して容易に判定することができる。下記に提示さ
れる実施例は、酵素活性、クリーニング性能及び／又は洗浄性能を評価するための方法を
記載する。シミ（例えば、タンパク質性シミ）の除去、硬質表面のクリーニング、又は洗
濯物、食卓食器若しくは食卓用器具物品のクリーニングにおけるプロテアーゼ変異体の性
能は、当該技術分野において周知の手順を用いて、並びに／あるいは、パートＩ実施例及
び／又はパートＩＩ実施例に記載の手順を用いることにより、容易に判定することができ
る。
【０１４６】
本発明のポリペプチドは、保存型又は非保存型のいずれかで、１つ以上のアミノ酸挿入
、欠失及び／又は置換などの様々な変化にさらすことができ、このような変化がポリペプ
チドの酵素活性を実質的には変化させない場合を包含する。同様に、本発明の核酸はまた
、非表現変異（例えば、ヌクレオチド配列中の変異は、例えば、コードされているアミノ
酸が核酸変異により変化しない場合に、アミノ酸配列中に非表現変異を生じる）又は表現
変異のいずれかを生じる、特定のコドンが同一又は異なるアミノ酸をコードするような１
つ以上のコドンにおける１つ以上の核酸の１つ以上の置換、配列における１つ以上の核酸
（又はコドン）の１つ以上の欠失、配列における１つ以上の核酸（又はコドン）の１つ以
上の追加又は挿入、並びに／あるいは、配列における１つ以上の核酸（又はコドン）の１
つ以上の分断などの、様々な変化にかけることもできる。核酸配列における多くのこのよ
うな変化は、元々の核酸配列によりコードされているプロテアーゼ変異体と比較して、得
られたコードされているプロテアーゼ変異体の酵素活性を実質的に変化させなくてもよい
。本発明の核酸はまた、発現系（例えば、細菌発現系）に最適な発現を提供する１つ以上
のコドンを含むように改変することができ、一方で、所望される場合には上記１つ以上の
コドンは依然として同じアミノ酸をコードする。
【０１４７】
本発明は、本明細書に記載のアミノ酸置換を有し、また、保存的及び非保存的置換など
の１つ以上の追加のアミノ酸置換を含む、配列を含む所望の酵素活性（例えば、プロテア
ーゼ活性又はクリーニング性能活性）を有するプロテアーゼ変異体ポリペプチドを含むポ
リペプチド属を含み、ここで、ポリペプチドは、所望の酵素活性（例えば、プロテアーゼ
変異体のクリーニング活性又は性能に反映されるような、プロテアーゼ活性又はスブチリ
シン活性）を呈し、維持し、又は大体維持する。本発明によるアミノ酸置換としては、１
つ以上の非保存的置換及び／又は１つ以上の保存的アミノ酸置換を挙げてもよいが、これ
らに限定されない。保存的なアミノ酸残基置換は、典型的には、アミノ酸残基の一官能種
類内の一員を同じ官能種類に属する残基（同一のアミノ酸残基は、機能的に相同であるか
又は機能相同性パーセントの算出において保存されたものであると考えられる）と交換す
ることを伴う。保存的なアミノ酸置換は、典型的には、アミノ酸配列中のアミノ酸を機能
的に同様のアミノ酸と置換することを伴う。例えば、アラニン、グリシン、セリン及びト
レオニンは機能的に同様であり、したがって、互いに保存的なアミノ酸置換基として機能
し得る。アスパラギン酸及びグルタミン酸は、互いに保存的な置換基として機能し得る。
アスパラギン及びグルタミンは、互いに保存的な置換基として機能し得る。アルギニン、
リシン及びヒスチジンは、互いに保存的な置換基として機能し得る。イソロイシン、ロイ
シン、メチオニン及びバリンは、互いに保存的な置換基として機能し得る。フェニルアラ
ニン、チロシン及びトリプトファンは、互いに保存的な置換基として機能し得る。
【０１４８】
他の保存的なアミノ酸置換基を想定することができる。例えば、アミノ酸は、同様の機
能又は化学構造又は組成により分類することができる（例えば、酸性、塩基性、脂肪族、
芳香族、イオウ含有）。例えば、脂肪族グループは、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、
バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）を含み得る。互いに保存的な置換基
であると考えられるアミノ酸を含有する他のグループとしては、以下のものが挙げられる
：芳香族：フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、トリプトファン（Ｗ）；イオウ含
有：メチオニン（Ｍ）、システイン（Ｃ）；塩基性：アルギニン（Ｒ）、リシン（Ｋ）、
ヒスチジン（Ｈ）；酸性：アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）；無極性非帯電残
基：システイン（Ｃ）、メチオニン（Ｍ）及びプロリン（Ｐ）；親水性非帯電残基：セリ
ン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、アスパラギン（Ｎ）及びグルタミン（Ｑ）。アミノ酸の追
加的な分類は、当業者に周知であり、様々な標準的テキストに記載されている。本明細書
におけるポリペプチド配列のリストは、上記置換基と共に、全ての保存的に置換されたポ
リペプチド配列の発現リストを提供する。
【０１４９】
より保存的な置換は、上記アミノ酸残基分類内で存在し、これはまた若しくは代替的に
好適であり得る。より保存的である置換のための保存グループとしては、バリン−ロイシ
ン−イソロイシン、フェニルアラニン−チロシン、リシン−アルギニン、アラニン−バリ
ン及びアスパラギン−グルタミンが挙げられる。したがって、例えば、本発明は、タンパ
ク質分解活性を有する単離された又は組み換えプロテアーゼ変異体ポリペプチド（例えば
、スブチリシン変異体）を含み、上記プロテアーゼ変異体ポリペプチドは、配列番号２の
アミノ酸配列に対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、
９８％、９９％又は９９．５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。本発明のプロ
テアーゼ変異体において１つのアミノ酸を別のアミノ酸に保存的に置換することは、プロ
テアーゼ変異体の酵素活性又はクリーニング性能活性を有意に変化させることを期待する
ものではない。得られたプロテアーゼの酵素活性又はクリーニング性能活性は、標準的ア
ッセイ及び本明細書に記載のアッセイを用いて容易に判定することができる。
【０１５０】
本発明のポリペプチド配列の保存的に置換された変異体（例えば、本発明のプロテアー
ゼ変異体）は、ポリペプチド配列のアミノ酸の低百分率、場合によっては約２５％未満、
約２０％未満、約１５％未満、約１４％未満、約１３％未満、約１２％未満、約１１％未
満、約１０％未満、約９％未満、約８％未満、約７％未満又は約６％未満、あるいは、ポ
リペプチド配列のアミノ酸の約５％未満、約４％未満、約３％未満、約２％未満又は約１
％未満の、保存的アミノ酸での置換を含む。
【０１５１】
本明細書において他箇所でより詳細に並びに本明細書において実施例で記載しているよ
うに、本発明のポリペプチドは、既知のスブチリシンなどの既知のプロテアーゼと比較さ
れ得るクリーニング能力を有し得る。代表的な既知のスブチリシンプロテアーゼとしては
、例えば、バチルス・レンタス（B. lentus）スブチリシンＧＧ３６、バチルス・アミロ
リケファシエンス（B. amyloliquefaciens）スブチリシンＢＰＮ’、バチルス・アミロリ
ケファシエンス（B. amyloliquefaciens）スブチリシンＢＰＮ’−Ｙ２１７Ｌ，及びバチ
ルス・クラウジイ（B. clausii）ＰＢ９２が挙げられるがこれらに限定されない。
【０１５２】
本発明の多数のポリぺプチドとしては、例えば、実施例が挙げられるがこれに限定され
ない本明細書全体にわたって説明及び記載されている、例えば、スブチリシンプロテアー
ゼ変異体などのプロテアーゼ変異体が挙げられる。パートＩ実施例は、例えば、ＢＰＮ’
プロテアーゼ変異体が挙げられるがこれに限定されない本発明のプロテアーゼ変異体を説
明する。パートＩＩ実施例は、例えば、ＧＧ３６プロテアーゼ変異体が挙げられるがこれ
に限定されない本発明の追加のプロテアーゼ変異体を説明する。
【０１５３】
本発明は、参照セリンプロテアーゼと比較したときに１つ以上の置換を有するセリンプ
ロテアーゼ変異体などのプロテアーゼ変異体を提供する。一態様では、本発明は冷水プロ
テアーゼを提供する。加えて、本発明は、例えば、セリンプロテアーゼといった１つ以上
のプロテアーゼ変異体を含む組成物を提供する。組成物は、本明細書の他箇所に記載のよ
うに、本発明の少なくとも１つのこのようなプロテアーゼ変異体と添加剤成分とを含み得
る。一態様では、本発明は、例えば、セリンプロテアーゼ変異体といった、少なくとも１
つのこれらのプロテアーゼ変異体を含むクリーニング組成物を提供する。クリーニング組
成物は、洗剤組成物であってもよい。クリーニングのトレンドは、エネルギーを節約する
ためにより低い洗浄温度を使用することである。酵素は、温度が低くなるほど活性が低く
なり、クリーニング性能の低下が生じる。当該技術分野において現在周知のものよりも冷
水洗浄条件で向上した性能を有する酵素が、当該技術分野において必要とされている。本
発明はこのニーズに対処する。
【０１５４】
本発明は、スブチリシンプロテアーゼ変異体などの本明細書に記載の少なくとも１つの
セリンプロテアーゼ変異体を含むクリーニング組成物を提供する。このスブチリシンプロ
テアーゼ変異体は、ＢＰＮ’プロテアーゼ変異体であってもよい。上記において更に詳細
に述べられているように、本発明は、ＢＰＮ’プロテアーゼ変異体及びＧＧ３６プロテア
ーゼ変異体を含む組成物を含む。例えば、本発明のスブチリシン変異体が挙げられるがこ
れらに限定されない一部のプロテアーゼ変異体は、冷水プロテアーゼである。このクリー
ニング組成物は、洗濯洗剤であってもよい。この洗濯洗剤は、３〜１１のｐＨを有する洗
剤（例えば、ｐＨ  ４、ｐＨ  ５、ｐＨ  ６、ｐＨ  ７、ｐＨ  ７．５、ｐＨ  ８、ｐＨ
９、ｐＨ  １０、ｐＨ  １０．５などの間）、冷水洗剤、低ｐＨ洗剤（例えば、ｐＨ  
３〜６）、中性ｐＨ洗剤（例えば、ｐＨ  ６．５〜７．５）、アルカリｐＨ洗剤（例えば
、ｐＨ  ９〜１１）又はコンパクト洗剤であり得る。洗剤は、リン酸塩を含んでもよく、
又は、リン酸塩を含まなくてもよい。このクリーニング組成物は、食器洗浄洗剤であって
もよい。一態様ではこの食器洗浄洗剤はリン酸塩を含まない洗剤であり、別の態様ではこ
の食器洗浄洗剤はリン酸塩含有洗剤である。一態様では、本発明のクリーニング組成物は
、少なくとも１つの追加の酵素を更に含み、これは選択的に、中性メタロプロテアーゼ、
リパーゼ、クチナーゼ、アミラーゼ、カルボヒドラーゼ、セルラーゼ、ぺクチナーゼ、マ
ンナナーゼ、アラビナーゼ、ガラクタナーゼ、キシラナーゼ、ペルヒドロラーゼ、オキシ
ダーゼ及びペルオキシダーゼの群から選択され得る。本発明のセリンプロテアーゼ変異体
をコードする単離された核酸、本発明の１つ以上のこのような核酸を含む発現ベクター及
び本発明の少なくとも１つのこのような発現ベクターを含む宿主細胞もまた提供される。
【０１５５】
本明細書全体にわたって、参照を容易にするため、「アミノ酸置換の組」又は「置換の
組」は、複数のアミノ酸置換の組（すなわち、Ｇ０９７Ａ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２１７Ｑ）又
は単一のアミノ酸置換の組（すなわち、Ｙ２１７Ｑ）を指し得る。したがって、Ｇ０９７
Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ及びＹ２１７Ｑからなる群から選択される少なくとも１組の
アミノ酸置換を含むＢＰＮ’配列（配列番号２）を含むＢＰＮ’変異体は、このＢＰＮ’
変異体がＢＰＮ’−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ又はＢＰＮ’−Ｙ２１７Ｑを含
むアミノ酸配列を含むことを示す。
【０１５６】
配列番号４に記載されている成熟ＢＰＮ’−ｖ３スブチリシンプロテアーゼ変異体のア
ミノ酸配列は、ＢＰＮ’−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，と表すことができ、こ
れは３つの置換Ｇ０９７Ａ，Ｇ１２８Ａ，及びＹ２１７Ｑを有する配列番号２のＢＰＮ’
アミノ酸配列を意味する。このフォーマットでは、各ダッシュ（−）は、プラスサイン（
＋）を用いるのと等価である。したがって、ＢＰＮ’−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１
７Ｑは、互換的にＢＰＮ’＋Ｇ０９７Ａ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２１７Ｑと書くことができる。
配列番号６に記載されている成熟ＢＰＮ’−ｖ３６スブチリシンプロテアーゼ変異体のア
ミノ酸配列は、ＢＰＮ’−Ｓ２４Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ
２１７Ｑ又はＢＰＮ’＋Ｓ２４Ｇ＋Ｓ５３Ｇ＋Ｓ７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２
１７Ｑと書くことができる。本発明のＢＰＮ’変異体は、これらのフォーマットを用いて
書くことできる。
【０１５７】
加えて、本発明はスブチリシン変異体を提供し、ここで、このような変異体は各々タン
パク質分解活性を有する成熟型であり、Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ，Ｎ６１Ｐ−Ｓ６
３Ｈ，Ｓ８７Ｇ−Ａ８８Ｖ−Ｓ８９Ａ，Ｐ８６Ｓ−Ｓ８７Ｇ−Ａ８８Ｖ，Ｑ５９Ｓ−Ｎ６
１Ｐ，Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ，Ｎ６１Ｐ−Ｎ６２Ｓ，Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ
，Ｌ７５Ｓ−Ｎ７６Ｙ，Ｖ２０３Ｙ，Ｔ５５Ｐ，Ａ８８Ｖ−Ｌ９０Ｉ，Ｇ２１１Ｒ−Ｎ２
１２Ｓ−Ｋ２１３Ｖ，Ｇ２３Ａ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ，Ｔ２２Ｎ−Ｓ２４Ａ，Ｓ２４Ｒ，
Ａ９８Ｓ，Ｔ１５８Ｇ−Ｓ１５９Ｇ，Ｑ５９Ｅ−Ｎ６１Ｐ，及びＡ９８Ｅ，からなる群か
ら選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’−ｖ３アミノ酸配列（配列番
号４）を含み、ここで、アミノ酸位置は、配列番号２として記載されているバチルス・ア
ミロリケファシエンス（B. amyloliquefaciens）スブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列に
対応させることにより番号付けされる。
【０１５８】
配列番号４として記載されているＢＰＮ’−ｖ３アミノ酸配列は、Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８
Ａ−Ｙ２１７Ｑと書いてもよいことに留意されたい。本発明は、タンパク質分解活性を有
するプロテアーゼ変異体を含み、ここで、上記変異体は、配列番号４中にアミノ酸置換Ａ
１２８Ｓを有する配列番号４のアミノ酸配列を含む。したがって、本発明は、アミノ酸配
列ＢＰＮ’−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑを含む。本明細書全体にわたって、本発
明のポリペプチド変異体は、それぞれ参照ポリペプチド配列中の１つ以上の具体化された
位置での１つ以上の特定のアミノ酸置換を含む参照ポリペプチドの変異体として記載され
得る。
【０１５９】
本発明はスブチリシン変異体も提供し、ここで、このような変異体はそれぞれ、タンパ
ク質分解活性を有する成熟型であり、Ｐ８６Ｓ−Ｓ８７Ｇ−Ａ８８Ｖ−Ａ１１６Ｎ−Ｎ１
１７Ｓ−Ｎ１１８Ｇ，Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ，Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ
−Ｓ５３Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｎ６
１Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｔ５５Ｐ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ
−Ｖ２０３Ｙ，Ｓ５３Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９
Ｇ−Ｓ１０１Ｎ，Ｖ２０３Ｙ−Ｌ２６７Ｖ，Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｓ１０１Ｎ
，Ａ１３４Ｔ−Ｌ２６７Ｖ，Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ７
８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ，Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ１
０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｎ２５Ｙ−Ｑ５９Ｓ−Ｎ６１Ｐ，Ｉ１１１Ｖ−Ｓ１６１Ｐ，Ｉ１１
５Ｖ−Ｌ２６７Ｖ，Ｔ５５Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ−
Ｖ２０３Ｙ，Ｎ２５Ｙ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ−Ａ１３７Ｔ，Ｎ６１Ｐ−
Ｓ６３Ｈ−Ａ１２８Ｓ−Ｐ１２９Ｑ，Ｓ５３Ｇ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｓ
２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ，
Ｎ６１Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ，Ｎ２５Ｙ−Ｎ６１Ｐ
−Ｓ６３Ｈ，Ｑ５９Ｓ−Ｎ６１Ｐ−Ｖ２０３Ｙ，Ｖ８Ｌ−Ｎ２５Ｙ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３
０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ，Ｐ８６Ｓ−Ｓ８７Ｇ−Ａ８８Ｖ−Ｐ２３９Ｒ，Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−
Ｓ５３Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｐ１２
９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ，Ｎ２４０Ｋ，Ｇ２３Ａ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｇ２１１
Ｒ−Ｎ２１２Ｓ−Ｋ２１３Ｖ，Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｈ−Ｓ７８Ｎ−Ｉ１１１Ｖ−Ａ１３４Ｔ
，Ｓ６３Ｔ−Ｐ８６Ｓ−Ｓ８７Ｇ−Ａ８８Ｖ，Ｇ２３Ａ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ａ１１６
Ｎ−Ｎ１１７Ｓ−Ｎ１１８Ｇ，Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ，
Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ａ１１６Ｎ−Ｎ１１７Ｓ−Ｎ１１８Ｇ，Ｔ５５Ｐ−Ｎ２４０Ｋ，Ｔ
５５Ｐ−Ｐ１２９Ｖ−Ｐ１９４Ｓ，Ｎ２５Ｙ−Ｓ８７Ｇ−Ａ８８Ｖ−Ｓ８９Ａ，Ｓ２４Ｇ
−Ｎ２５Ｇ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ，Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ
１３１Ｓ−Ｖ２０３Ｙ，Ｑ５９Ｓ−Ｎ６１Ｐ−Ｎ２４０Ｋ，Ｓ２４Ｒ−Ｐ４０Ｅ−Ｐ１２
９Ｅ−Ｓ１５９Ｋ−Ｋ２６５Ｒ，Ｐ５２Ｓ−Ｔ５５Ｐ−Ｖ２０３Ｙ，Ｓ２４Ｒ−Ｐ１２９
Ｅ，Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ７８Ｎ，Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｔ５５
Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ，Ｐ８６Ｓ−Ｓ８７Ｇ−Ａ８８Ｖ−Ａ１１６Ｓ−Ｎ１１７Ｇ−
Ｎ１１８Ｒ，Ｎ６１Ｐ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ，Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ
−Ｔ５５Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ，Ｇ２３Ａ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ
−Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｈ，Ｓ２４Ｒ−Ｑ５９Ｓ−Ｎ６１Ｐ，Ｎ６１Ｐ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３
０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ，Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ
８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ，Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｔ５５Ｐ−
Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｎ６１Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０
１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ，
Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ７８
Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ−Ａ１３３Ｖ−Ｌ２
６７Ｖ，Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ，Ｇ２３Ａ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−
Ｐ２３９Ｒ，Ｓ８７Ｇ−Ａ８８Ｖ−Ｓ８９Ａ−Ａ１１６Ｎ−Ｎ１１７Ｓ−Ｎ１１８Ｇ，Ｑ
５９Ｓ−Ｎ６１Ｐ−Ａ１１６Ｓ−Ｎ１１７Ｇ−Ｎ１１８Ｒ，Ｑ５９Ｓ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ８７
Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ，Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９
Ｇ−Ｖ２０３Ｙ，Ａ１３４Ｔ−Ｇ２１１Ｔ，Ｔ５５Ｐ−Ａ１２８Ｓ−Ｐ１２９Ｑ，Ｔ５５
Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ，Ｐ８６Ｓ−Ｓ８７Ｇ−Ａ８
８Ｖ−Ｔ２４２Ｒ，Ｓ１６１Ｐ−Ｖ２０３Ｙ，Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｎ６１Ｐ
−Ｓ７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ２１１Ｔ−Ｌ２６７Ｖ，Ｐ４０Ｅ−Ｔ５５Ｐ−
Ｎ２６９Ｋ，Ｓ２４Ｒ−Ａ１２８Ｓ−Ｐ１２９Ｇ，Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｎ６１Ｐ−Ｎ６
２Ｓ−Ｐ１９４Ｌ−Ａ２３２Ｔ，Ｔ５５Ｐ−Ａ１１６Ｓ−Ｎ１１７Ｇ−Ｎ１１８Ｒ，Ｓ２
４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０
Ｇ−Ｇ１３１Ｓ−Ｎ２４０Ｋ，Ｓ５３Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ
８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ，Ｎ２５Ｙ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ，Ｔ５５Ｐ−Ｉ１１
５Ｖ，Ｎ２５Ｙ−Ｔ５５Ｐ，Ｇ２３Ａ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｐ１２９Ｄ，
Ｓ５３Ｇ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ−Ｐ１２９Ｓ−Ｖ２０
３Ｙ，Ｔ５５Ｐ−Ａ１３４Ｔ，Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｈ−Ｓ７８Ｎ−Ｉ１１１Ｖ，Ｎ６１Ｐ−
Ａ９７Ｇ−Ｇ１０２Ａ−Ａ１２８Ｇ−Ｐ１２９Ｓ，Ｓ５３Ｇ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ，Ｑ
５９Ｓ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ８７Ｇ−Ａ８８Ｖ−Ｓ８９Ａ，Ｓ５３Ｇ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ
８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｐ１２９Ｓ，Ｓ５３
Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｔ５５Ｐ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ
−Ｇ１３１Ｓ，Ｑ５９Ｓ−Ｎ６１Ｐ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ，Ａ１３４Ｔ
−Ｐ２３９Ｒ，Ｔ５５Ｐ−Ｖ２０３Ｙ，Ｔ５５Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８９Ｙ，Ｔ２２Ｎ−Ｓ２
４Ａ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｈ，Ｓ１６１Ｐ−Ｌ２６７Ｖ，Ｔ５５Ｐ−Ｌ７５Ｈ−Ｎ７６Ｇ，
Ａ１３４Ｔ−Ｓ１６１Ｐ，Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ａ１３４Ｔ，Ｔ５５Ｐ−Ａ１
１６Ｎ−Ｎ１１７Ｓ−Ｎ１１８Ｇ，Ａ１２８Ｓ，Ｔ５５Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｉ１１５Ｖ，Ｙ６
Ｑ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ，Ｓ２４Ｒ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３
１Ｓ，Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ，Ｔ５５Ｐ−Ｐ１２９Ｖ，
Ｎ６１Ｐ−Ｎ６２Ｑ−Ｇ１００Ｎ−Ａ１２８Ｇ，Ｔ５５Ｐ−Ｐ１２９Ｑ，Ｓ２４Ｇ−Ｎ２
５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１
０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｎ２４０Ｋ，Ａ１３４Ｔ−Ｎ２４
０Ｋ，Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｐ２３９Ｒ，Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１
Ｓ−Ｌ２６７Ｖ，Ｐ１２９Ｑ−Ｎ２４０Ｋ，Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−
Ｖ２０３Ｙ，Ｉ１１１Ｖ−Ａ２７３Ｓ，Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ａ８
８Ｖ−Ｓ１０１Ｎ，Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｓ７８Ｎ，Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ
５３Ｇ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ
−Ｓ５３Ｇ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｖ２０３Ｙ，Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５
Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｓ
８７Ｇ−Ａ８８Ｖ−Ｓ８９Ａ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ，Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３
Ｈ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ１６１Ｐ，Ｔ５５Ｐ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８
９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｉ１１１Ｖ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ，Ｔ
２２Ｎ−Ｓ２４Ａ−Ｔ５５Ｐ，Ｉ１１５Ｖ−Ｎ２４０Ｋ，Ｓ８７Ｇ−Ａ８８Ｖ−Ｓ８９Ａ
−Ａ１１６Ｎ−Ｎ１１７Ｓ−Ｎ１１８Ｇ−Ｐ１７２Ｈ，Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ７８Ｎ−
Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ，Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｉ１１５Ｖ−Ａ１３
４Ｔ，Ｔ５５Ｐ−Ａ１２８Ｓ−Ｐ１２９Ｄ，Ｉ１１１Ｖ−Ｓ１５９Ｋ，Ｎ２４０Ｋ−Ａ２
７３Ｓ，Ｓ１５９Ｋ−Ｌ２６７Ｖ，Ｉ１１１Ｖ−Ｐ１２９Ｑ−Ｇ２１１Ｔ，Ｉ１１５Ｖ−
Ａ２７３Ｓ，Ｓ８９Ｙ，Ｓ２４Ｒ−Ａ１１６Ｎ−Ｎ１１７Ｓ−Ｎ１１８Ｇ，Ｎ６１Ｅ−Ａ
１４４Ｋ，Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ−Ｐ２３９Ｒ，Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ
８９Ｇ−Ｉ１１５Ｖ，Ｔ５５Ｐ−Ａ９２Ｇ，Ｓ１４５Ｄ−Ｓ１５９Ｋ−Ｎ２４０Ｋ−Ｑ２
７５Ｅ，Ｓ８９Ｙ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ，Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ
１３１Ｓ−Ｓ１６２Ｋ，Ｉ１１１Ｖ−Ａ１３４Ｔ，Ｐ４０Ｅ−Ｓ５３Ｙ−Ｓ７８Ｙ−Ｐ８
６Ｓ−Ｓ８７Ｇ−Ａ８８Ｖ，Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｌ７５Ｈ−Ｎ７６Ｇ，Ｎ６１Ｐ−Ａ１
２８Ｇ−Ｐ１２９Ｓ−Ｓ１３０Ｐ，Ｓ２４Ｒ−Ｓ１４５Ｄ，Ｓ２４Ｒ−Ｓ１４５Ｄ−Ｐ２
３９Ｒ−Ｑ２７５Ｅ，Ｓ２４Ｒ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ１８２Ｐ−Ｌ２６７Ｖ，Ｓ５３Ｇ−Ｎ６１
Ｐ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｐ５Ｓ−Ｓ８７Ｇ−Ａ８
８Ｖ−Ｓ８９Ａ−Ａ１１６Ｇ−Ｎ１１７Ｒ，Ｓ５３Ｇ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−
Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｑ５９Ｓ−Ｎ６１Ｐ−Ａ１１６Ｎ−Ｎ１
１７Ｓ−Ｎ１１８Ｇ，Ｐ２３９Ｒ−Ａ２７３Ｓ，Ｓ５３Ｇ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８
Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｓ２４Ｒ−Ｐ１２９Ｖ，Ｉ１１１Ｖ−Ｐ２３９
Ｒ，Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｔ５５Ｐ−Ｐ１２９Ｌ，
Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｉ１１１Ｖ，Ｓ１４５Ｄ−Ａ２７３Ｓ，Ｐ１２９Ｑ−Ｓ
１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ−Ｔ２４２Ｒ，Ｓ３Ｆ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｇ２１１
Ｔ，Ｓ８７Ｇ−Ａ８８Ｖ−Ｓ８９Ａ−Ｓ１６２Ｋ，Ｓ８９Ｙ−Ｇ２１１Ｔ，Ｓ８７Ｔ−Ａ
８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ａ１４４Ｋ，Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ−Ｓ１５９Ｋ，Ａ
１１６Ｎ−Ｎ１１７Ｓ−Ｎ１１８Ｇ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ，Ｓ２４Ｇ−
Ｎ２５Ｇ−Ｐ１２９Ｖ，Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ
−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｎ１２３Ｇ−Ａ１２８Ｇ，Ｎ６１Ｐ−Ｎ６２Ｑ−Ｇ１００Ｎ
−Ｇ１０２Ａ−Ｍ１２４Ｉ，Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｋ１４１Ｅ−Ｔ２４２Ｒ，Ｓ８７Ｇ−
Ａ８８Ｖ−Ｓ８９Ａ−Ａ１１６Ｎ−Ｎ１１７Ｓ−Ｎ１１８Ｇ−Ａ１４４Ｔ，Ｔ５５Ｐ−Ｎ
６１Ｐ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｇ１１０Ｃ−Ｓ１３０Ｐ，Ｌ７５Ｓ−Ｎ７６Ｙ
−Ａ１１６Ｓ−Ｎ１１７Ｇ−Ｎ１１８Ｒ，Ｓ１４５Ｄ−Ｓ１５９Ｋ−Ｋ２１３Ｌ−Ｐ２３
９Ｒ−Ｎ２４０Ｋ，Ｓ２４Ｒ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ，Ｇ２３Ａ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ
２５Ｇ−Ｐ１２９Ｖ，Ａ１３４Ｔ−Ｋ２１３Ｌ，Ｓ８９Ｙ−Ａ２７３Ｓ，Ｓ２４Ｒ−Ｐ２
３９Ｒ，Ｎ１２３Ｇ−Ａ１２８Ｇ−Ｐ１２９Ｓ，Ｓ８９Ｙ−Ｐ２３９Ｒ，Ｓ２４Ｇ−Ｎ２
５Ｇ−Ａ９２Ｇ，Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｈ−Ｉ１１５Ｖ−Ａ２２８Ｖ，Ａ９７Ｇ−Ａ１２８Ｇ
−Ｑ２１７Ｌ，Ｌ７５Ｓ−Ｎ７６Ｙ−Ｐ１２９Ｖ，Ｓ２４Ｒ−Ｐ１２９Ｌ，Ｓ８７Ｇ−Ａ
８８Ｖ−Ｓ８９Ａ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１８２Ｙ−Ｓ２０４Ｙ−Ｐ２３９Ｑ，Ｓ２４Ｒ−Ａ９
２Ｇ，Ｓ２４Ｒ−Ａ１１６Ｓ−Ｎ１１７Ｇ−Ｎ１１８Ｒ，Ｇ２３Ａ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ
−Ａ１１６Ｇ−Ｎ１１７Ｒ，Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｐ１２９Ｌ，Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ
８９Ｇ−Ｓ１０１Ｇ，Ｇ２３Ａ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｐ１２９Ｌ，Ｓ５３Ｇ−Ｎ６１Ｐ
−Ｇ１０２Ａ−Ｖ２０３Ｙ，Ｔ５５Ｐ−Ｖ１４７Ｐ，Ｙ６Ｑ−Ｌ７５Ｓ−Ｎ７６Ｙ，Ｎ６
１Ｐ−Ｓ６３Ｈ−Ｖ１４７Ｐ，Ｓ２４Ｒ−Ｖ１４７Ｐ，Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｖ６８Ｃ−
Ａ６９Ｇ，Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｎ６１Ｐ−Ｌ７５Ｓ−Ｎ７６Ｙ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３
Ｙ，Ｌ７５Ｓ−Ｎ７６Ｙ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｌ７５Ｓ−Ｎ７６Ｙ−Ｓ
７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ−Ｓ１３０Ｐ，Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ
−Ｓ５３Ｇ−Ｓ１０１Ｎ−Ｓ１３０Ｐ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ４７Ｅ−Ｍ５０Ｉ−Ｌ７５Ｓ−Ｎ
７６Ｙ−Ｓ１６２Ｋ，Ｓ５３Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ
−Ｓ１３０Ｐ−Ｖ２０３Ｙ，Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｌ７５Ｓ−Ｎ７６Ｙ−Ａ１２８Ｔ−Ｐ
１２９Ｔ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｑ−Ｓ１３２Ｃ−Ａ１３３Ｇ−Ａ１３４Ｔ，Ｐ１２９Ｑ
−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ−Ｖ１４７Ｐ，Ｓ５３Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｎ６１Ｐ−Ｌ７５Ｓ−Ｎ
７６Ｙ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｇ１０２Ａ−Ｓ１３０Ｐ−Ｖ２０３Ｙ，及びＳ
５
３Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｎ６１Ｐ−Ｌ７５Ｓ−Ｎ７６Ｙ−Ｓ１０１Ｎ−Ｓ１３０Ｐ−Ｖ２０３Ｙ
，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’−ｖ３アミノ
酸配列（配列番号４）を含み、ここで、アミノ酸位置は、配列番号２として記載されてい
るバチルス・アミロリケファシエンス（B. amyloliquefaciens）スブチリシンＢＰＮ’の
アミノ酸配列に対応させることにより番号付けされている。
【０１６０】
本発明はスブチリシン変異体も提供し、ここで、この変異体はタンパク質分解活性を有
する成熟型であり、Ｐ４０Ｅ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｄ−Ｙ２１７Ｌ，Ｐ４０Ｅ−Ｙ２１７Ｌ
，Ｔ２２Ｖ−Ｓ７８Ｎ−Ｑ２０６Ｅ−Ｋ２１３Ｎ−Ｙ２１７Ｌ，Ｔ２２Ｖ−Ｓ７８Ｎ−Ｋ
２１３Ｎ−Ｙ２１７Ｌ，Ｓ８７Ｄ−Ｙ２１７Ｌ，Ｓ７８Ｎ−Ｙ２１７Ｌ，Ｋ２１３Ｎ−Ｙ
２１７Ｌ，Ｑ２０６Ｅ−Ｙ２１７Ｌ，及びＴ２２Ｖ−Ｙ２１７Ｌ，からなる群から選択さ
れる少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’−ｖ３アミノ酸配列（配列番号４）を
含み、ここで、アミノ酸位置は、配列番号２のバチルス・アミロリケファシエンス（B. a
myloliquefaciens）スブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列に対応させることにより番号付
けされている。
【０１６１】
本発明はスブチリシン変異体も提供し、ここで、このような変異体はそれぞれ、タンパ
ク質分解活性を有する成熟型であり、この変異体は、Ｓ８７Ｄ−Ｎ７６Ｄ−Ｓ７８Ｎ，Ｐ
４０Ｅ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｄ，Ｐ４０Ｅ−Ｓ８７Ｄ，Ｓ７８Ｎ−Ｐ４０Ｅ，Ｓ８７Ｄ−Ｎ
７６Ｄ，Ｐ４０Ｅ，Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｄ，Ｓ８７Ｄ，及びＳ７８Ｎ，からなる群から選択
される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’−ｖ３アミノ酸配列（配列番号４）
を含み、ここで、アミノ酸位置は、配列番号２のバチルス・アミロリケファシエンス（B.
amyloliquefaciens）スブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列に対応させることにより番号
付けされている。一態様では、これらの置換は、改善された酵素安定性を付与する。
【０１６２】
本発明はスブチリシン変異体も提供し、ここで、このような変異体はそれぞれ、タンパ
ク質分解活性を有する成熟型であり、Ｓ１０１Ｎ，Ａ１３７Ｖ，Ｎ６１Ｐ，Ｓ１３０Ｐ，
Ｑ１０３Ｎ，Ｓ６３Ｔ，Ｇ１０２Ａ，Ｎ１０９Ｄ−Ｓ２４８Ｒ，Ｓ８７Ｒ，Ｓ１８８Ｄ，
Ｓ８７Ｄ−Ｓ２４８Ｒ，Ｓ１８８Ｄ−Ｓ２４８Ｒ，Ｓ２４８Ｄ，Ｎ１０９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ
−Ｓ２４８Ｒ，Ｎ１０９Ｄ，Ｓ８７Ｒ−Ｓ２４８Ｒ，Ｎ１０９Ｄ−Ｓ１８８Ｒ，Ｎ７６Ｄ
，Ｓ８７Ｄ−Ｎ１０９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ｓ２４８Ｒ，Ｓ８７Ｒ−Ｎ１０９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ
−Ｓ２４８Ｒ，Ｓ８７Ｒ−Ｓ１８８Ｒ−Ｓ２４８Ｒ，Ａ１８７Ｄ，Ｎ１０９Ｄ−Ｓ２４８
Ｄ，Ｓ８７Ｒ−Ｎ１０９Ｒ−Ｓ１８８Ｒ−Ｓ２４８Ｒ，Ｆ１８９Ｄ，Ｇ１００Ｎ，Ｓ８７
Ｒ−Ｎ１０９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ，Ｓ８７Ｄ−Ｎ１０９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ，Ｓ８７Ｒ−Ｓ１８８
Ｄ−Ｓ２４８Ｄ，Ｎ６２Ｄ，及びＳ８７Ｄ−Ｎ１０９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ｓ２４８Ｄ，から
なる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’−ｖ３アミノ酸配列
（配列番号４）を含み、ここで、アミノ酸位置は、配列番号２のバチルス・アミロリケフ
ァシエンス（B. amyloliquefaciens）スブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列のアミノ酸残
基位置に対応させることにより番号付けされている。
【０１６３】
本発明はスブチリシン変異体も提供し、ここで、このような変異体はそれぞれ、タンパ
ク質分解活性を有する成熟型であり、Ｓ７８Ｎ−Ｌ２６７Ｖ，Ｓ７８Ｎ−Ｓ１６１Ｐ，Ｓ
７８Ｎ−Ｉ１１５Ｖ，Ｓ７８Ｎ−Ａ２７３Ｓ，Ｓ７８Ｎ−Ｇ２１１Ｔ、Ｓ７８Ｎ，Ｓ７８
Ｎ−Ｉ１１１Ｖ，Ｓ７８Ｎ−Ｖ１４７Ｌ，Ｓ７８Ｎ−Ｉ１０８Ｖ，Ｓ７８Ｎ−Ｓ８９Ｙ，
Ｓ７８Ｎ−Ａ１３８Ｔ，Ｓ７８Ｎ−Ｐ１７２Ｖ，Ｓ７８Ｎ−Ｑ５９Ｇ，Ｐ１２９Ｔ−Ｖ１
４７Ｑ−Ｓ１５９Ｄ−Ｓ１６１Ｐ−Ｓ１８３Ｔ−Ｑ１８５Ｔ−Ｇ２１１Ａ−Ｓ２２４Ａ，
Ｑ０５９Ｖ−Ｉ１０８Ｖ−Ｖ１４７Ｑ−Ｇ２１１Ａ−Ｎ２５２Ｑ，Ｓ７８Ｎ−Ｙ１６７Ａ
，Ｓ７８Ｎ−Ａ９２Ｇ，Ｓ７８Ｎ−Ｐ１２９Ｌ，Ｎ０６１Ａ−Ｓ０８７Ｅ−Ｍ１２４Ｉ−
Ｓ１６１Ｐ−Ｓ２２４Ａ，Ｓ７８Ｎ−Ｎ６２Ｑ，Ｓ７８Ｎ−Ｖ６８Ａ，Ｓ０６３Ｔ−Ｓ１
０１Ａ−Ｌ１２６Ｖ−Ｓ１８３Ｔ−Ｔ２４４Ｎ，Ｓ７８Ｎ−Ｍ１２４Ｔ，Ｐ０４０Ｌ−Ｓ
０５３Ｇ−Ｑ０５９Ｖ−Ｎ０６１Ａ−Ｎ０６２Ｑ−Ｓ０６３Ｔ−Ｓ０８７Ｅ−Ｇ１００Ｎ
，Ｎ０６２Ｑ−Ｇ１００Ｎ−Ｓ１２５Ａ−Ｓ１５９Ｄ−Ｎ２４０Ｓ，Ｖ６８Ａ−Ｇ１０２
Ａ−Ｇ２１１Ａ−Ｓ１２５Ａ，及びＳ０５３Ｇ−Ｖ０６８Ａ−Ｇ１０２Ａ−Ｐ１２９Ｔ−
Ｑ１８５Ｔ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’−
ｖ３アミノ酸配列（配列番号４）を含み、ここで、アミノ酸位置は、配列番号２として記
載されているバチルス・アミロリケファシエンス（B. amyloliquefaciens）スブチリシン
ＢＰＮ’のアミノ酸配列のアミノ酸残基位置に対応させることにより番号付けされている
。
【０１６４】
本発明はスブチリシン変異体も提供し、ここで、このような変異体はそれぞれ、タンパ
ク質分解活性を有する成熟型であり、Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ
２５Ｇ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ５３Ｇ−Ｎ６１
Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ
−Ｓ５３Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ
２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｐ５２
Ｌ−Ｖ６８Ａ−Ｇ９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ，Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ１６７Ａ−Ｙ２１７
Ｑ，Ｙ１０４Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｍ１２４Ｖ−Ｙ１６７Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｉ１
１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｐ５２Ｌ−Ｖ６８Ａ−Ｇ９７Ａ，Ｇ９７Ａ−Ｉ１１１
Ｖ−Ｍ１２４Ｖ，Ｖ６８Ａ−Ａ９２Ｇ−Ｇ９７Ａ，Ｇ９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ−
Ｙ１６７Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｐ５２Ｌ−Ｖ６８Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｐ５２Ｌ−Ｖ
６８Ａ−Ｉ１１１Ｖ，Ｖ６８Ａ−Ａ９２Ｇ−Ｉ１１１Ｖ，Ｐ５２Ｌ−Ｖ６８Ａ−Ｇ９７Ａ
−Ｉ１１１Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｖ６８Ａ−Ｇ９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ，Ｇ９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−
Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ１６７Ａ，Ｓ８９Ｙ−Ｉ１１１Ｖ−
Ｍ１２４Ｖ，Ｖ６８Ａ−Ｓ８９Ｙ−Ｉ１１１Ｖ，Ｖ６８Ａ−Ａ９２Ｇ−Ｙ２１７Ｑ，Ｉ１
１１Ｖ−Ｙ１６７Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｙ１６７Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ
９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｖ６８Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｙ１６７Ａ−Ｙ
２１７Ｑ，Ｉ１１１Ｖ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，
Ｖ６８Ａ−Ｙ１６７Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ１６７Ａ，Ｎ６２Ｑ−
Ｇ９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ，Ｇ９７Ａ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ１６７Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ｌ
１２６Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｖ６８Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ８９Ｙ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ
２１７Ｑ，及びＬ９６Ｔ−Ｇ９７Ａ−Ｙ２１７Ｑ，からなる群から選択される少なくとも
１組のアミノ酸置換を含むアミノ酸配列を含み、ここで、位置は、配列番号２として記載
されているバチルス・アミロリケファシエンス（B. amyloliquefaciens）スブチリシンＢ
ＰＮ’のアミノ酸配列のアミノ酸残基位置に対応させることにより番号付けされている。
一部のこのような変異体は、上記群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含む
ＢＰＮ’アミノ酸配列（配列番号２）を含む。
【０１６５】
本発明はスブチリシン変異体も提供し、ここで、このような変異体はそれぞれ、タンパ
ク質分解活性を有する成熟型であり、Ｓ１８２Ｅ，Ｎ１０９Ｉ，Ｎ１１７Ｈ，Ｋ２３７Ｄ
，Ｌ２５７Ｑ，Ｐ２２５Ｎ，Ｓ１０５Ｈ，Ｓ２３６Ｉ，Ｌ２３５Ｈ，Ｓ２４９Ｅ，Ｎ７６
Ｅ，Ｓ１４５Ｎ，Ｎ２４３Ｄ，Ｒ２４７Ｎ，Ｅ１９５Ｎ，Ａ９８Ｋ，Ｓ１８２Ｎ，Ｓ１６
１Ｈ，Ｇ８３Ｈ，Ｇ１３１Ｄ，Ｔ７１Ｃ，Ｋ１３６Ｑ，Ｐ４０Ｄ，Ａ１８７Ｈ，Ｌ２５０
Ｋ，Ｓ９Ｉ，Ｎ７６Ｍ，Ｓ１３２Ｄ，Ｑ１９Ｆ，Ｅ１１２Ｈ，Ｓ２４９Ｐ，Ｓ５３Ｄ，Ｖ
６８Ｅ，Ｄ４１Ｉ，Ｋ４３Ｈ，Ｖ４Ｈ，Ａ１３Ｙ，Ｎ６２Ｐ，Ｌ１９６Ｅ，及びＶ４４Ｄ
，からなる群から選択される少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１
１又はそれ以上のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’−ｖ３アミノ酸配列を含み、ここで、位置
は、配列番号２として記載されているバチルス・アミロリケファシエンス（B. amyloliqu
efaciens）スブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列のアミノ酸残基位置に対応させることに
より番号付けされている。
【０１６６】
本発明はまた、これらのスブチリシン変異体を含む食器洗浄組成物、並びに、これらの
スブチリシン変異体を含む布地クリーニング組成物を提供する。一部の好ましい態様では
、食器洗浄及び布地クリーニング組成物は少なくとも１つの追加の酵素を更に含む。一部
の好ましい態様では、この追加の酵素は以下から選択される：プロテアーゼ（例えば、中
性メタロプロテアーゼ、野生型セリンプロテアーゼ又は第二変異体セリンプロテアーゼ）
、リパーゼ、クチナーゼ、アミラーゼ、カルボヒドラーゼ、セルラーゼ、ぺクチナーゼ、
マンナナーゼ、アラビナーゼ、ガラクタナーゼ、キシラナーゼ、ペルヒドラーゼ、オキシ
ダーゼ及びペルオキシダーゼ。更に、本発明は、ｉ）スブチリシン変異体を含む食器洗浄
組成物及びｉｉ）クリーニングする必要がある食卓食器を供給する工程と、食卓食器のク
リーニングをもたらすのに有効な条件下で食卓食器を食器洗浄組成物と接触させる工程と
を含む、食器洗浄方法を提供する。同様に、本発明は、ｉ）スブチリシン変異体を含む布
地クリーニング組成物及びｉｉ）クリーニングする必要がある洗濯物を供給する工程と、
洗濯物のクリーニングをもたらすのに有効な条件下で洗濯物を布地洗浄組成物と接触させ
る工程とを含む、布地クリーニング方法を提供する。更なる態様では、本発明は、この変
異体をコードする単離された核酸、この単離された核酸をプロモーターと作用可能に組み
合わせて含む発現ベクターを提供し、並びに／又は、この発現ベクターを含む宿主細胞が
提供される。
【０１６７】
本発明はまた、本明細書に提供されているスブチリシン変異体を含むクリーニング組成
物を提供する。一態様では、クリーニング組成物は、液体、ゲル、タブレット、粉末及び
／又は顆粒洗剤を含む。一部の更なる態様では、クリーニング組成物は洗濯洗剤及び食器
洗剤から選択される。一部の好ましい態様では、クリーニング組成物は洗濯洗剤を含む。
一部の特に好ましい態様では、クリーニング組成物は強力洗剤である。一部の追加的態様
では、クリーニング組成物は、手による食器洗浄洗剤及び自動食器洗浄洗剤から選択され
る食器洗剤を含む。一部の更に好ましい態様では、本明細書に提供されているクリーニン
グ組成物は、少なくとも１つの漂白剤を更に含む。一部の追加的態様では本明細書に提供
されているクリーニング組成物はリン酸塩を含まず、一方、一部の代替的態様では本明細
書に提供されているクリーニング組成物はリン酸塩含有洗剤である。一部の更なる態様で
は、本明細書に提供されているクリーニング組成物は、冷水洗剤である。更に一部の追加
的態様では、本明細書に提供されているクリーニング組成物は、少なくとも１つの追加の
酵素を更に含む。一態様では、クリーニング組成物は、へミセルラーゼ、セルラーゼ、ペ
ルオキシダーゼ、プロテアーゼ、メタロプロテアーゼ、キシラナーゼ、リパーゼ、ホスホ
リパーゼ、エステラーゼ、ペルヒドラーゼ、クチナーゼ、ぺクチナーゼ、ペクチン酸リア
ーゼ、マンナナーゼ、ケラチナーゼ、レダクターゼ、オキシダーゼ、フェノールオキシダ
ーゼ、リポキシゲナーゼ、リグニナーゼ、プルラナーゼ、タンナーゼ、ペントサナーゼ、
マラナーゼ（malanase）、β−グルカナーゼ、アラビノシターゼ、ヒアルロニダーゼ、コ
ンドロイチナーゼ、ラッカーゼ及びアミラーゼからなる群から選択される少なくとも１つ
の追加の酵素又はこれらのいずれかの混合物を含む。
【０１６８】
本発明はまた、クリーニングすべき物品及び本明細書に提供されている少なくとも１つ
のクリーニング組成物を含む組成物を供給することと、物品のクリーニングをもたらすの
に有効な条件下で物品を組成物と接触させることと、を含む、クリーニング方法を提供す
る。一態様では、この方法は、物品をクリーニング組成物と接触させた後で物品をすすぐ
工程を更に含む。一部の好ましい態様では、クリーニングすべき物品は食卓食器を含む。
一部の代替的態様では、クリーニングすべき物品は布地を含む。
【０１６９】
一部の更なる態様では、上記変異、欠失、挿入又はこれらの組み合わせのいずれかは、
変異Ｙ２１７Ｌを含有する配列番号２の酵素又は変異Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ
を含有する配列番号２の酵素のいずれかに適用することができる。
【０１７０】
一態様では、本発明は、スブチリシン、特にスブチリシンＢＰＮ’（配列番号２）（す
なわち、ＢＰＮ’スブチリシン変異体）、から誘導される好適な冷水プロテアーゼを提供
する。一態様では、冷水プロテアーゼは、配列番号２と比較して以下のアミノ酸置換：Ｑ
００２Ｗ，Ｐ００５Ｋ，Ｐ００５Ｌ，Ｐ００５Ｙ，Ｇ００７Ｔ，Ｖ００８Ｇ，Ｖ００８Ｋ
，Ｖ００８Ｐ，Ｉ０１１Ｇ，Ｉ０１１Ｈ，Ｉ０１１Ｓ，Ｋ０１２Ｌ，Ａ０１３Ｍ，Ｌ０１
６Ｗ，Ｇ０２３Ｓ，Ｖ０２６Ｈ，Ｖ０２６Ｗ，Ｖ０２６Ｙ，Ｋ０２７Ｐ，Ｖ０２８Ｑ，Ｖ
０２８Ｓ，Ｖ０２８Ｔ，Ａ０２９Ｃ，Ａ０２９Ｄ，Ａ０２９Ｓ，Ａ０２９Ｔ，Ａ０２９Ｖ
，Ｖ０３０Ｄ，Ｖ０３０Ｅ，Ｖ０３０Ｇ，Ｖ０３０Ｔ，Ｉ０３１Ｅ，Ｉ０３１Ｇ，Ｉ０３
１Ｈ，Ｉ０３１Ｋ，Ｉ０３１Ｎ，Ｉ０３１Ｑ，Ｉ０３１Ｓ，Ｉ０３１Ｙ，Ｓ０３３Ｆ，Ｓ
０３３Ｈ，Ｄ０３６Ｌ，Ｓ０３７Ｐ，Ｄ０４１Ａ，Ｄ０４１Ｃ，Ｄ０４１Ｍ，Ｄ０４１Ｎ
，Ｄ０４１Ｓ，Ｌ０４２Ｓ，Ｌ０４２Ｙ，Ｖ０４４Ｈ，Ｖ０４４Ｑ，Ｖ０４４Ｔ，Ｇ０４
６Ｆ，Ｇ０４６Ｌ，Ｇ０４６Ｍ，Ｇ０４６Ｖ，Ｇ０４７Ｔ，Ｇ０４７Ｗ，Ｓ０４９Ｉ，Ｓ
０４９Ｖ，Ｍ０５０Ｄ，Ｍ０５０Ｉ，Ｍ０５０Ｒ，Ｖ０５１Ａ，Ｖ０５１Ｇ，Ｖ０５１Ｓ
，Ｐ０５２Ｃ，Ｐ０５２Ｉ，Ｐ０５２Ｌ，Ｐ０５２Ｍ，Ｐ０５２Ｖ，Ｐ０５２Ｗ，Ｐ０５
２Ｙ，Ｅ０５４Ｒ，Ｎ０５６Ｇ，Ｎ０５６Ｉ，Ｎ０５６Ｋ，Ｎ０５６Ｍ，Ｎ０５６Ｑ，Ｎ
０５６Ｒ，Ｎ０５６Ｖ，Ｎ０５６Ｙ，Ｐ０５７Ｉ，Ｐ０５７Ｋ，Ｐ０５７Ｌ，Ｐ０５７Ｒ
，Ｐ０５７Ｔ，Ｐ０５７Ｖ，Ｆ０５８Ｔ，Ｑ０５９Ｐ，Ｑ０５９Ｗ，Ｎ０６１Ｐ，Ｎ０６
２Ｄ，Ｎ０６２Ｍ，Ｎ０６２Ｑ，Ｓ０６３Ｃ，Ｓ０６３Ｑ，Ｓ０６３Ｔ，Ｇ０６５Ｑ，Ｖ
０６８Ａ，Ｖ０６８Ｇ，Ｖ０６８Ｍ，Ｖ０６８Ｓ，Ａ０６９Ｃ，Ａ０６９Ｄ，Ａ０６９Ｆ
，Ａ０６９Ｈ，Ａ０６９Ｍ，Ａ０６９Ｎ，Ａ０６９Ｐ，Ａ０６９Ｑ，Ａ０６９Ｒ，Ａ０６
９Ｔ，Ｔ０７１Ｄ，Ｔ０７１Ｅ，Ｔ０７１Ｇ，Ｔ０７１Ｋ，Ｔ０７１Ｍ，Ｖ０７２Ｄ，Ｖ
０７２Ｇ，Ｖ０７２Ｋ，Ｖ０７２Ｑ，Ｖ０７２Ｓ，Ｖ０７２Ｔ，Ａ０７３Ｅ，Ａ０７３Ｉ
，Ａ０７３Ｋ，Ａ０７３Ｍ，Ａ０７３Ｑ，Ａ０７３Ｓ，Ａ０７３Ｖ，Ａ０７４Ｅ，Ａ０７
４Ｆ，Ａ０７４Ｈ，Ａ０７４Ｉ，Ａ０７４Ｌ，Ａ０７４Ｍ，Ａ０７４Ｑ，Ａ０７４Ｒ，Ａ
０７４Ｖ，Ａ０７４Ｗ，Ａ０７４Ｙ，Ｌ０７５Ａ，Ｎ０７６Ａ，Ｎ０７７Ｇ，Ｎ０７７Ｌ
，Ｎ０７７Ｐ，Ｎ０７７Ｑ，Ｎ０７７Ｒ，Ｎ０７７Ｓ，Ｎ０７７Ｔ，Ｓ０７８Ｗ，Ｇ０８
０Ｈ，Ｖ０８１Ｄ，Ｖ０８１Ｆ，Ｖ０８１Ｈ，Ｖ０８１Ｎ，Ｖ０８１Ｑ，Ｖ０８１Ｒ，Ｖ
０８１Ｗ，Ｌ０８２Ｇ，Ｌ０８２Ｎ，Ｌ０８２Ｗ，Ａ０８５Ｉ，Ａ０８５Ｔ，Ａ０８５Ｖ
，Ｐ０８６Ａ，Ｐ０８６Ｇ，Ｐ０８６Ｍ，Ｐ０８６Ｑ，Ｐ０８６Ｒ，Ｐ０８６Ｔ，Ｐ０８
６Ｗ，Ｐ０８６Ｙ，Ｓ０８７Ｆ，Ｓ０８７Ｉ，Ｓ０８７Ｌ，Ｓ０８７Ｍ，Ｓ０８７Ｑ，Ｓ
０８７Ｖ，Ｓ０８７Ｗ，Ａ０８８Ｄ，Ａ０８８Ｅ，Ａ０８８Ｋ，Ａ０８８Ｐ，Ａ０８８Ｑ
，Ｓ０８９Ｄ，Ｓ０８９Ｑ，Ｓ０８９Ｖ，Ｌ０９０Ｄ，Ｌ０９０Ｅ，Ｌ０９０Ｆ，Ｌ０９
０Ｈ，Ｌ０９０Ｐ，Ｌ０９０Ｓ，Ｌ０９０Ｔ，Ｙ０９１Ｌ，Ｙ０９１Ｑ，Ｙ０９１Ｔ，Ａ
０９２Ｃ，Ａ０９２Ｉ，Ａ０９２Ｍ，Ａ０９２Ｎ，Ａ０９２Ｐ，Ａ０９２Ｖ，Ｖ０９３Ｄ
，Ｖ０９３Ｆ，Ｖ０９３Ｌ，Ｖ０９３Ｔ，Ｋ０９４Ｃ，Ｋ０９４Ｒ，Ｋ０９４Ｓ，Ｖ０９
５Ｉ，Ｌ０９６Ｆ，Ｌ０９６Ｈ，Ｌ０９６Ｉ，Ｌ０９６Ｍ，Ｌ０９６Ｎ，Ｌ０９６Ｑ，Ｌ
０９６Ｓ，Ｌ０９６Ｔ，Ｌ０９６Ｖ，Ｌ０９６Ｗ，Ｌ０９６Ｙ，Ｇ０９７Ａ，Ｇ０９７Ｃ
，Ｇ０９７Ｄ，Ｇ０９７Ｅ，Ｇ０９７Ｆ，Ｇ０９７Ｌ，Ｇ０９７Ｍ，Ｇ０９７Ｐ，Ｇ０９
７Ｑ，Ｇ０９７Ｓ，Ｇ０９７Ｖ，Ｇ０９７Ｗ，Ｇ０９７Ｙ，Ｄ０９９Ｃ，Ｄ０９９Ｅ，Ｄ
０９９Ｉ，Ｄ０９９Ｍ，Ｄ０９９Ｐ，Ｄ０９９Ｖ，Ｄ０９９Ｙ，Ｇ１００Ｄ，Ｇ１００Ｅ
，Ｇ１００Ｈ，Ｇ１００Ｉ，Ｇ１００Ｋ，Ｇ１００Ｍ，Ｇ１００Ｑ，Ｇ１００Ｔ，Ｇ１０
０Ｖ，Ｇ１００Ｙ，Ｓ１０１Ａ，Ｓ１０１Ｅ，Ｓ１０１Ｇ，Ｓ１０１Ｎ，Ｓ１０１Ｐ，Ｓ
１０１Ｑ，Ｓ１０１Ｔ，Ｓ１０１Ｖ，Ｇ１０２Ａ，Ｇ１０２Ｓ，Ｑ１０３Ｅ，Ｑ１０３Ｇ
，Ｑ１０３Ｈ，Ｑ１０３Ｋ，Ｑ１０３Ｎ，Ｙ１０４Ｌ，Ｙ１０４Ｍ，Ｙ１０４Ｎ，Ｙ１０
４Ｔ，Ｙ１０４Ｖ，Ｓ１０５Ｄ，Ｓ１０５Ｉ，Ｓ１０５Ｒ，Ｓ１０５Ｖ，Ｗ１０６Ａ，Ｗ
１０６Ｃ，Ｗ１０６Ｅ，Ｗ１０６Ｆ，Ｗ１０６Ｇ，Ｗ１０６Ｉ，Ｗ１０６Ｌ，Ｗ１０６Ｍ
，Ｗ１０６Ｓ，Ｗ１０６Ｔ，Ｗ１０６Ｖ，Ｉ１０７Ｒ，Ｉ１０７Ｓ，Ｉ１０７Ｔ，Ｉ１０
８Ｓ，Ｉ１０８Ｔ，Ｇ１１０Ｓ，Ｇ１１０Ｔ，Ｉ１１１Ａ，Ｉ１１１Ｃ，Ｉ１１１Ｆ，Ｉ
１１１Ｌ，Ｉ１１１Ｍ，Ｉ１１１Ｔ，Ｉ１１１Ｖ，Ｅ１１２Ｉ，Ｅ１１２Ｌ，Ｅ１１２Ｔ
，Ｗ１１３Ｈ，Ａ１１４Ｉ，Ａ１１４Ｖ，Ｉ１１５Ａ，Ｉ１１５Ｅ，Ｉ１１５Ｆ，Ｉ１１
５Ｈ，Ｉ１１５Ｍ，Ｉ１１５Ｎ，Ｉ１１５Ｐ，Ｉ１１５Ｑ，Ｉ１１５Ｒ，Ｉ１１５Ｓ，Ｉ
１１５Ｔ，Ｉ１１５Ｖ，Ｉ１１５Ｙ，Ｎ１１７Ｋ，Ｎ１１７Ｖ，Ｎ１１７Ｗ，Ｎ１１８Ｉ
，Ｎ１１８Ｌ，Ｎ１１８Ｖ，Ｍ１１９Ｆ，Ｍ１１９Ｎ，Ｄ１２０Ｙ，Ｉ１２２Ｒ，Ｉ１２
２Ｓ，Ｉ１２２Ｔ，Ｎ１２３Ａ，Ｎ１２３Ｃ，Ｎ１２３Ｇ，Ｎ１２３Ｓ，Ｍ１２４Ａ，Ｍ
１２４Ｈ，Ｍ１２４Ｎ，Ｍ１２４Ｑ，Ｍ１２４Ｓ，Ｍ１２４Ｔ，Ｍ１２４Ｖ，Ｓ１２５Ａ
，Ｌ１２６Ａ，Ｌ１２６Ｑ，Ｌ１２６Ｓ，Ｌ１２６Ｔ，Ｌ１２６Ｙ，Ｇ１２８Ｅ，Ｇ１２
８Ｎ，Ｇ１２８Ｔ，Ｐ１２９Ｖ，Ｓ１３０Ｐ，Ｓ１３２Ｉ，Ｓ１３２Ｎ，Ｓ１３２Ｐ，Ｓ
１３２Ｑ，Ｓ１３２Ｖ，Ａ１３４Ｉ，Ａ１３４Ｌ，Ａ１３４Ｍ，Ｌ１３５Ｉ，Ｌ１３５Ｔ
，Ｌ１３５Ｖ，Ｌ１３５Ｗ，Ｌ１３５Ｙ，Ｋ１３６Ｄ，Ｋ１３６Ｆ，Ｋ１３６Ｉ，Ｋ１３
６Ｖ，Ｋ１３６Ｙ，Ａ１３７Ｐ，Ａ１３８Ｄ，Ａ１３８Ｅ，Ａ１３８Ｆ，Ａ１３８Ｈ，Ａ
１３８Ｑ，Ａ１３８Ｙ，Ａ１４２Ｇ，Ａ１４２Ｉ，Ａ１４２Ｔ，Ａ１４２Ｖ，Ｖ１４３Ｗ
，Ａ１４４Ｐ，Ｇ１４６Ｌ，Ｇ１４６Ｔ，Ｇ１４６Ｙ，Ｖ１４７Ｄ，Ｖ１４７Ｐ，Ｖ１４
７Ｗ，Ｖ１４７Ｙ，Ｖ１４８Ｎ，Ｖ１４８Ｙ，Ｖ１４９Ｅ，Ａ１５１Ｔ，Ａ１５３Ｔ，Ａ
１５３Ｖ，Ｓ１５９Ｋ，Ｔ１６４Ｗ，Ｖ１６５Ｔ，Ｙ１６７Ａ，Ｙ１６７Ｄ，Ｙ１６７Ｅ
，Ｙ１６７Ｍ，Ｙ１６７Ｐ，Ｙ１６７Ｓ，Ｙ１６７Ｔ，Ｐ１６８Ｌ，Ｐ１６８Ｔ，Ｇ１６
９Ｃ，Ｋ１７０Ｅ，Ｋ１７０Ｎ，Ｋ１７０Ｐ，Ｋ１７０Ｑ，Ｋ１７０Ｓ，Ｋ１７０Ｔ，Ｋ
１７０Ｙ，Ｙ１７１Ｃ，Ｙ１７１Ｄ，Ｙ１７１Ｌ，Ｙ１７１Ｎ，Ｙ１７１Ｗ，Ｐ１７２Ｅ
，Ｐ１７２Ｇ，Ｐ１７２Ｉ，Ｐ１７２Ｌ，Ｐ１７２Ｖ，Ｐ１７２Ｙ，Ｓ１７３Ｈ，Ｓ１７
３Ｗ，Ｓ１７３Ｙ，Ｖ１７４Ａ，Ｖ１７４Ｉ，Ｖ１７４Ｌ，Ｖ１７４Ｓ，Ｉ１７５Ａ，Ｉ
１７５Ｆ，Ｉ１７５Ｒ，Ｉ１７５Ｔ，Ｉ１７５Ｖ，Ａ１７６Ｖ，Ｖ１７７Ｗ，Ｖ１８０Ｆ
，Ｖ１８０Ｈ，Ｖ１８０Ｑ，Ｓ１８２Ｗ，Ｎ１８４Ａ，Ｎ１８４Ｌ，Ｎ１８４Ｖ，Ｑ１８
５Ｄ，Ｑ１８５Ｅ，Ｑ１８５Ｉ，Ｑ１８５Ｓ，Ｑ１８５Ｔ，Ｒ１８６Ｃ，Ｒ１８６Ｄ，Ｒ
１８６Ｅ，Ｒ１８６Ｆ，Ｒ１８６Ｇ，Ｒ１８６Ｉ，Ｒ１８６Ｌ，Ｒ１８６Ｎ，Ｒ１８６Ｐ
，Ｒ１８６Ｑ，Ｒ１８６Ｓ，Ｒ１８６Ｔ，Ｒ１８６Ｖ，Ｒ１８６Ｗ，Ｒ１８６Ｙ，Ａ１８
７Ｄ，Ａ１８７Ｅ，Ａ１８７Ｑ，Ｓ１９０Ｇ，Ｓ１９０Ｎ，Ｙ１９２Ｄ，Ｙ１９２Ｅ，Ｙ
１９２Ｌ，Ｙ１９２Ｑ，Ｇ１９３Ｈ，Ｇ１９３Ｑ，Ｇ１９３Ｔ，Ｇ１９３Ｖ，Ｐ１９４Ｅ
，Ｐ１９４Ｉ，Ｐ１９４Ｌ，Ｐ１９４Ｍ，Ｐ１９４Ｎ，Ｐ１９４Ｔ，Ｐ１９４Ｖ，Ｅ１９
５Ｃ，Ｅ１９５Ｋ，Ｅ１９５Ｗ，Ｌ１９６Ｉ，Ｌ１９６Ｍ，Ｌ１９６Ｔ，Ｌ１９６Ｖ，Ｄ
１９７Ｉ，Ｄ１９７Ｍ，Ｍ１９９Ｆ，Ｍ１９９Ｑ，Ａ２００Ｃ，Ａ２００Ｈ，Ａ２００Ｎ
，Ａ２００Ｔ，Ａ２００Ｖ，Ａ２００Ｙ，Ｐ２０１Ｌ，Ｐ２０１Ｔ，Ｐ２０１Ｖ，Ｖ２０
３Ｇ，Ｉ２０５Ｌ，Ｉ２０５Ｔ，Ｔ２０８Ｃ，Ｔ２０８Ｌ，Ｔ２０８Ｍ，Ｔ２０８Ｐ，Ｔ
２０８Ｖ，Ｌ２０９Ｃ，Ｌ２０９Ｗ，Ｐ２１０Ｃ，Ｐ２１０Ｄ，Ｐ２１０Ｅ，Ｐ２１０Ｆ
，Ｐ２１０Ｇ，Ｐ２１０Ｑ，Ｐ２１０Ｒ，Ｐ２１０Ｓ，Ｐ２１０Ｖ，Ｇ２１１Ａ，Ｇ２１
１Ｄ，Ｇ２１１Ｅ，Ｇ２１１Ｐ，Ｇ２１１Ｔ，Ｇ２１１Ｖ，Ｇ２１１Ｗ，Ｎ２１２Ｅ，Ｎ
２１２Ｔ，Ｋ２１３Ｑ，Ｋ２１３Ｔ，Ｙ２１４Ａ，Ｙ２１４Ｄ，Ｙ２１４Ｎ，Ｙ２１４Ｐ
，Ｙ２１４Ｓ，Ｇ２１５Ｄ，Ｇ２１５Ｑ，Ｇ２１５Ｖ，Ａ２１６Ｅ，Ｙ２１７Ｅ，Ｙ２１
７Ｌ，Ｙ２１７Ｍ，Ｎ２１８Ｐ，Ａ２２３Ｗ，Ｓ２２４Ｄ，Ｓ２２４Ｎ，Ｓ２２４Ｑ，Ｈ
２２６Ｅ，Ｈ２２６Ｔ，Ｖ２２７Ｇ，Ｖ２２７Ｌ，Ｖ２２７Ｓ，Ａ２３０Ｈ，Ａ２３０Ｎ
，Ａ２３１Ｗ，Ａ２３１Ｙ，Ａ２３２Ｎ，Ｉ２３４Ｗ，Ｌ２３５Ｎ，Ｓ２３６Ｗ，Ｈ２３
８Ａ，Ｈ２３８Ｇ，Ｈ２３８Ｉ，Ｐ２３９Ｈ，Ｐ２３９Ｓ，Ｗ２４１Ｇ，Ｗ２４１Ｑ，Ｒ
２４７Ｈ，Ｒ２４７Ｌ，Ｒ２４７Ｗ，Ｒ２４７Ｙ，Ｌ２５０Ｅ，Ｌ２５０Ｔ，Ｎ２５２Ｑ
，Ｔ２５３Ｙ，Ｔ２５４Ｄ，Ｔ２５４Ｑ，Ｔ２５４Ｒ，Ｔ２５５Ｌ，Ｔ２５５Ｐ，Ｋ２５
６Ｇ，Ｋ２５６Ｒ，Ｇ２５８Ｐ，Ｙ２６３Ｄ，Ｙ２６３Ｋ，Ｙ２６３Ｒ，Ｋ２６５Ｐ，Ｉ
２６８Ｓ，Ｉ２６８Ｔ，Ｉ２６８Ｗ，Ｖ２７０Ｆ，Ａ２７３Ｋ，Ａ２７３Ｐ，Ａ２７３Ｒ
，Ａ２７３Ｖ，Ａ２７３Ｗ，Ａ２７４Ｗ，Ｓ１８２Ｅ，及びＮ１０９Ｉ，のうちの１、２
、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１又はそれ以上を含み、ここで、変異体配列の
位置は、配列番号２の位置に対応させることにより番号付けされる。
【０１７１】
別の態様では、本発明は、配列番号２と比較して以下の変異の組：Ｎ１０９Ｄ−Ｙ２１
７Ｌ−Ｓ２４８Ｒ，Ｎ１０９Ｄ−Ｓ１８８Ｒ−Ｙ２１７Ｌ，Ｓ８７Ｄ−Ｙ２１７Ｌ−Ｓ２
４８Ｒ，Ｓ８７Ｒ−Ｎ１０９Ｄ−Ｙ２１７Ｌ−Ｓ２４８Ｒ，Ｓ８７Ｒ−Ｎ１０９Ｄ−Ｓ１
８８Ｄ−Ｙ２１７Ｌ−Ｓ２４８Ｒ，Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ，
Ｍ１２４Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ６２Ｑ−Ｇ９７Ａ，Ｓ８９Ｙ−Ｍ１２４Ｖ，Ｖ６８Ａ，Ｖ６
８Ａ−Ａ９２Ｇ，Ｖ６８Ａ−Ｇ９７Ａ，Ｖ６８Ａ−Ｉ１１１Ｖ，Ｖ６８Ａ−Ｓ８９Ｙ，Ｖ
６８Ａ−Ｖ２２７Ｔ，Ｖ６８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｗ１０６Ｆ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１
２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ｌ１２６Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ｍ１２４Ｖ−Ｌ１
２６Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ｎ１２３Ｇ−Ｙ２１７Ｑ，Ｌ９６Ｔ−Ｇ９７Ａ−Ｙ２１
７Ｑ，Ｍ１２４Ｖ−Ｌ１２６Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ６２Ｑ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ６
２Ｑ−Ｇ９７Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｍ，Ｇ９７Ｇ−Ｇ１２８
Ｓ−Ｙ２１７Ｅ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ｍ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７
Ｅ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ｄ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ｍ
−Ｇ１２８Ｇ−Ｙ２１７Ｍ，Ｇ９７Ｇ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ｓ−Ｇ１２８Ｓ
−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ｇ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ｓ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｅ
，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｌ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｎ，Ｇ９７Ｑ−
Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｌ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｍ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−
Ｙ２１７Ｓ，Ｇ９７Ｄ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ｍ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，
Ｇ９７Ｑ−Ｇ１２８Ｇ−Ｙ２１７Ｄ−Ｓ８７Ｙ，Ｇ９７Ｓ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｎ，Ｇ
９７Ａ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｔ，Ｇ９７Ｄ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｅ，Ｇ９７Ｄ−Ｇ１
２８Ａ−Ｙ２１７Ｌ，Ｇ９７Ｇ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｅ−Ｓ７８Ｐ−Ａ２７２Ｔ，Ｇ９
７Ｔ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｄ，Ｇ９７Ｄ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｉ，Ｇ９７Ｑ−Ｇ１２
８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ｇ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｄ，Ｇ９７Ｑ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１
７Ｎ，Ｇ９７Ｓ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｍ，Ｇ９７Ｓ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｎ，Ｇ９７
Ｓ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｍ，Ｇ９７Ｅ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｍ，Ｇ９７Ｓ−Ｇ１２８
Ｐ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ｔ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ｄ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７
Ｑ−Ａ７３Ｔ，Ｇ９７Ｅ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｎ，Ｇ９７Ｇ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｉ
，Ｇ９７Ｑ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｄ，Ｇ９７Ｑ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｍ，Ｇ９７Ｒ−
Ｇ１２８Ｔ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ１６２Ｐ，Ｇ９７Ｓ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｄ，Ｇ９７Ｔ−
Ｇ１２８Ｐ−Ｙ２１７Ｉ，Ｇ９７Ｑ−Ｇ１２８Ｇ−Ｙ２１７Ｅ，Ｇ９７Ｃ−Ｇ１２８Ｇ−
Ｙ２１７Ｎ，Ｇ９７Ｄ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｈ，Ｇ９７Ｍ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｌ，
Ｇ９７Ｍ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｎ，Ｇ９７Ｓ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｅ，Ｇ９７Ｍ−Ｇ
１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｉ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ｐ−Ｙ２１７Ａ，Ｇ９７Ｒ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ
２１７Ｄ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ１４５Ｄ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ
２１７Ｑ−Ｐ２３９Ｒ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ６１Ｅ−Ｐ１２９Ｅ−Ｓ
１６２Ｋ−Ｋ２１３Ｌ−Ｎ２４０Ｋ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ６１Ｅ，Ｇ
９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｐ４０Ｅ−Ａ１４４Ｋ−Ｋ２１３Ｌ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１
２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｐ１２９Ｅ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ６１Ｅ−Ｐ１
２９Ｅ−Ｓ１５９Ｋ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｋ２１３Ｌ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１
２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ８７Ｄ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｑ２０６Ｅ，Ｇ９
７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｒ−Ｐ４０Ｅ−Ｓ１４５Ｄ−Ｓ１５９Ｋ−Ｋ２１
３Ｌ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｋ２６５Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１
７Ｑ−Ｓ２４Ｒ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｐ４０Ｅ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ
−Ｙ２１７Ｑ−Ｑ２７５Ｅ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｐ１２９Ｅ−Ｓ１４５
Ｄ−Ｎ２４０Ｋ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ａ１４４Ｋ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８
Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ１５９Ｋ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ１６２Ｋ，Ｇ９７
Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ２４０Ｋ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ５３
Ｇ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ７８Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ
−Ｓ５３Ｇ−Ｓ７８Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ５３Ｇ−Ｉ１１１Ｖ，Ｇ
９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ５３Ｇ−Ｎ１１７Ｓ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２
１７Ｑ−Ｓ５３Ｇ−Ｓ１３２Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｙ１０４Ｎ−Ｓ１
３２Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ５３Ｇ−Ｓ７８Ｎ−Ｉ１１１Ｖ，Ｇ９７
Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ５３Ｇ−Ｓ７８Ｎ−Ｎ１１７Ｓ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ
−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ５３Ｇ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ１３２Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−
Ｓ５３Ｇ−Ｙ１０４Ｎ−Ｓ１３２Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ７８Ｎ−Ｙ
１０４Ｎ−Ｓ１３２Ｎ，Ｙ２１７Ｌ−Ｖ０６８Ｃ−Ａ０６９Ｇ，Ｙ２１７Ｌ−Ｉ０７９Ｆ
−Ａ０９８Ｇ，Ｙ２１７Ｌ−Ｐ０８６Ｔ−Ｓ１０１Ｄ−Ｑ１０３Ｓ−Ｖ１４７Ｉ，Ｙ２１
７Ｌ−Ａ０８８Ｔ−Ｐ１２９Ｓ−Ｇ１４６Ｄ，Ｙ２１７Ｌ−Ｖ０９３Ｉ−Ｇ１２８Ｄ−Ｐ
１２９Ｒ，Ｙ２１７Ｌ−Ｚ０９６．０１Ｄ−Ａ０９８Ｒ，Ｙ２１７Ｌ−Ｚ０９６．０１Ｈ
−Ａ０９８Ｇ，Ｙ２１７Ｌ−Ｇ０９７Ｓ−Ｚ０９７．０１Ｓ−Ａ０９８Ｇ−Ａ２７３Ｔ，
Ｙ２１７Ｌ−Ａ０９８Ｓ−Ｄ０９９Ｇ−Ｇ１００Ｄ，Ｙ２１７Ｌ−Ｚ０９８．０１Ｎ、Ｙ
２１７Ｌ−Ｄ０９９Ｇ−Ｚ０９９．０１Ｎ、Ｙ２１７Ｌ−Ｄ０９９Ｇ−Ｚ０９９．０１Ｓ
、Ｙ２１７Ｌ−Ｄ０９９Ｖ−Ｓ１０１Ｄ，Ｙ２１７Ｌ−Ｚ０９９．０１Ｓ、Ｙ２１７Ｌ−
Ｇ１００Ｄ，Ｙ２１７Ｌ−Ｓ１０１Ｄ−Ｑ１０３Ｈ，Ｙ２１７Ｌ−Ｓ１０１Ｇ−Ａ１５１
Ｖ，Ｙ２１７Ｌ−Ｓ１０１Ｈ−Ｇ１０２Ｓ，Ｙ２１７Ｌ−Ｓ１０１Ｈ−Ｑ１０３Ｄ，Ｙ２
１７Ｌ−Ｇ１０２Ｒ−Ｑ１０３Ｃ−Ｙ１０４Ｃ−Ｖ１９２Ｉ，Ｙ２１７Ｌ−Ｑ１０３Ｄ，
Ｙ２１７Ｌ−Ｖ１２１Ｉ−Ｉ１２２Ｓ−Ｎ１２３Ｃ，Ｙ２１７Ｌ−Ｖ１２１Ｌ−Ｎ１２３
Ｃ，Ｙ２１７Ｌ−Ｉ１２２Ｓ−Ｎ１２３Ｓ，Ｙ２１７Ｌ−Ｍ１２４Ｉ，Ｙ２１７Ｌ−Ｍ１
２４Ｖ，Ｙ２１７Ｌ−Ｌ１２６Ｆ−Ｐ１２９Ｚ−Ｓ１８２Ｎ，Ｙ２１７Ｌ−Ｌ１２６Ｙ，
Ｙ２１７Ｌ−Ｇ１２７Ｓ−Ｐ１２９Ｄ，Ｙ２１７Ｌ−Ｚ１２７．０１Ｎ−Ｇ１２８Ｓ−Ｐ
１２９Ｓ，Ｙ２１７Ｌ−Ｇ１２８Ｈ−Ｐ１２９Ｙ，Ｙ２１７Ｌ−Ｇ１２８Ｓ−Ｐ１２９Ｄ
，Ｙ２１７Ｌ−Ｇ１２８Ｓ−Ｐ１２９Ｄ−Ｓ２４８Ｒ，Ｙ２１７Ｌ−Ｇ１２８Ｓ−Ｐ１２
９Ｇ，Ｙ２１７Ｌ−Ｐ１２９Ｇ−Ｇ１３１Ｚ，Ｙ２１７Ｌ−Ｐ１２９Ｇ−Ｓ１３０Ｈ−Ｓ
１３２Ｚ，Ｙ２１７Ｌ−Ｐ１２９Ｈ−Ｇ１３１Ｚ，Ｙ２１７Ｌ−Ｐ１２９Ｌ，Ｙ２１７Ｌ
−Ｐ１２９Ｓ−Ｓ１３０Ｈ−Ｓ１３２Ｚ，Ｙ２１７Ｌ−Ｐ１２９Ｚ，Ｙ２１７Ｌ−Ｐ１２
９Ｚ−Ｓ１３０Ｇ，Ｙ２１７Ｌ−Ｐ１２９Ｚ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ１３２Ｈ，Ｙ
２１７Ｌ−Ｐ１２９Ｚ−Ｓ１３０Ｈ，Ｙ２１７Ｌ−Ｓ１３０Ｖ−Ｇ１３１Ｄ−Ｓ１３２Ｉ
，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ａ１３４Ｔ−Ｋ２１３Ｌ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ
−Ｙ２１７Ｑ−Ｇ２３Ａ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｐ１２９Ｖ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ
２１７Ｑ−Ｓ２４Ｒ−Ｐ２３９Ｒ，及びＧ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｒ−
Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ，のうちの１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、
１１又はそれ以上を含む、スブチリシン変異体、特に成熟ＢＰＮ’（配列番号２）の変異
体などの好適な冷水プロテアーゼを提供し、ここで、変異体配列の位置は、配列番号２の
位置に対応させることにより番号付けされる。
【０１７２】
別の態様では、本発明は、配列番号２と比較して以下の変異の組：Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ
−Ｓ８９Ｇ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｈ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１
２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ８７Ｇ−Ａ８８Ｖ−Ｓ８９Ａ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７
Ｑ，Ｐ８６Ｓ−Ｓ８７Ｇ−Ａ８８Ｖ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｑ５９Ｓ−Ｎ
６１Ｐ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８
Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ６１Ｐ−Ｎ６２Ｓ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ａ−
Ｇ１２８Ａ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｌ７５Ｓ−Ｎ７６Ｙ−
Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｖ２０３Ｙ−Ｙ２１７Ｑ，
Ｔ５５Ｐ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ａ８８Ｖ−Ｌ９０Ｉ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２
８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｇ２１１Ｒ−Ｎ２１２Ｓ−Ｋ２１３Ｖ−Ｙ２
１７Ｑ，Ｇ２３Ａ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｔ２２Ｎ
−Ｓ２４Ａ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ２４Ｒ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ
２１７Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ａ９８Ｓ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｔ１
５８Ｇ−Ｓ１５９Ｇ−Ｙ２１７Ｑ，Ｑ５９Ｅ−Ｎ６１Ｐ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１
７Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ａ９８Ｅ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７
Ｑ−Ｐ８６Ｓ−Ｓ８７Ｇ−Ａ８８Ｖ−Ａ１１６Ｎ−Ｎ１１７Ｓ−Ｎ１１８Ｇ，Ｇ９７Ａ−
Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ６３Ｔ−Ｐ８６Ｓ−Ｓ８７Ｇ−Ａ８８Ｖ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２
８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｐ８６Ｓ−Ｓ８７Ｇ−Ａ８８Ｖ−Ｐ２３９Ｒ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ
−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｎ６１Ｐ−Ｎ６２Ｓ−Ｐ１９４Ｌ−Ａ２３２Ｔ，Ｇ
９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ−Ａ１３３Ｖ−
Ｌ２６７Ｖ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ａ１３４Ｔ−Ｌ２６７Ｖ，Ｇ９７Ａ−
Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｒ−Ｐ４０Ｅ−Ｐ１２９Ｅ−Ｓ１５９Ｋ−Ｋ２６５Ｒ，
Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ａ１３４Ｔ−Ｇ２１１Ｔ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−
Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｒ−Ｐ１２９Ｅ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｉ１１１Ｖ−
Ｓ１６１Ｐ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ５５Ｐ−Ｐ１２９Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ｇ
１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｉ１１５Ｖ−Ｌ２６７Ｖ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−
Ｐ８６Ｓ−Ｓ８７Ｇ−Ａ８８Ｖ−Ａ１１６Ｓ−Ｎ１１７Ｇ−Ｎ１１８Ｒ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１
２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｖ２０３Ｙ−Ｌ２６７Ｖ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ
２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１
７Ｑ−Ｐ５２Ｓ−Ｔ５５Ｐ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｑ５９Ｓ
−Ｎ６１Ｐ−Ａ１１６Ｓ−Ｎ１１７Ｇ−Ｎ１１８Ｒ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ
−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−
Ｙ２１７Ｑ−Ｐ８６Ｓ−Ｓ８７Ｇ−Ａ８８Ｖ−Ｔ２４２Ｒ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２
１７Ｑ−Ｐ４０Ｅ−Ｔ５５Ｐ−Ｎ２６９Ｋ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｇ２３
Ａ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ａ１１６Ｎ−Ｎ１１７Ｓ−Ｎ１１８Ｇ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ
−Ｙ２１７Ｑ−Ｖ８Ｌ−Ｎ２５Ｙ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ，Ｇ９７Ａ−Ｇ
１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ
−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｇ２１１Ｔ−Ｌ２６７Ｖ
，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｒ−Ａ１１６Ｎ−Ｎ１１７Ｓ−Ｎ１１８Ｇ
，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｒ−Ａ１２８Ｓ−Ｐ１２９Ｇ，Ｇ９７Ａ−
Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ−Ｎ２４０Ｋ，Ｇ９７Ａ
−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ２５Ｙ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ，Ｇ９７Ａ
−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ａ１３４Ｔ，Ｇ９７Ａ−Ｇ
１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ−Ｌ２６７Ｖ，Ｇ９７Ａ−
Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ８７Ｇ−Ａ８８Ｖ−Ｓ８９Ａ−Ａ１１６Ｎ−Ｎ１１７Ｓ−Ｎ
１１８Ｇ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ６１Ｐ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ
１３１Ｓ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８
Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ５５Ｐ−Ｐ１２９Ｖ
−Ｐ１９４Ｓ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ５５Ｐ−Ｐ１２９Ｖ，Ｇ９７Ａ−
Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ，Ｇ９
７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ５５Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｉ１１５Ｖ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８
Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ２５Ｙ−Ｓ８７Ｇ−Ａ８８Ｖ−Ｓ８９Ａ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ
２１７Ｑ−Ａ１３４Ｔ−Ｎ２４０Ｋ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｒ−Ｑ
５９Ｓ−Ｎ６１Ｐ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｇ２３Ａ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ
−Ｐ２３９Ｒ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ５５Ｐ−Ａ１１６Ｓ−Ｎ１１７Ｇ
−Ｎ１１８Ｒ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ａ１３４Ｔ−Ｓ１６１Ｐ，Ｇ９７Ａ
−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ
２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ２５Ｙ−Ｑ５９Ｓ−Ｎ６１Ｐ，Ｇ９７
Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ２５Ｙ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ−Ａ１３
７Ｔ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｇ２３Ａ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｎ６１Ｐ−
Ｓ６３Ｈ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ５５Ｐ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ１０
１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｐ１２９Ｑ−Ｎ２４０Ｋ，Ｇ９
７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ５５Ｐ−Ａ１３４Ｔ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１
７Ｑ−Ｎ２５Ｙ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｈ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ８７Ｔ−
Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｐ１２９Ｓ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ５５Ｐ−Ｌ７
５Ｈ−Ｎ７６Ｇ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−
Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２
８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ５５Ｐ−Ｉ１１５Ｖ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ５５
Ｐ−Ａ１１６Ｎ−Ｎ１１７Ｓ−Ｎ１１８Ｇ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４
Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ａ１１６Ｎ−Ｎ１１７Ｓ−Ｎ１１８Ｇ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７
Ｑ−Ｓ２４Ｒ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７
Ｑ−Ｇ２３Ａ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｇ２１１Ｒ−Ｎ２１２Ｓ−Ｋ２１３Ｖ，Ｇ９７Ａ−
Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ１０
１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ５５Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ
−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｉ１１５Ｖ−
Ａ２７３Ｓ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ２５Ｙ−Ｔ５５Ｐ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１
２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ７８Ｎ−
Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２
１７Ｑ−Ｑ５９Ｓ−Ｎ６１Ｐ−Ｎ２４０Ｋ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ１６
１Ｐ−Ｌ２６７Ｖ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ
−Ｔ５５Ｐ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ，Ｇ９７
Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ，Ｇ９７Ａ−
Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１
２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３
Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ２４０Ｋ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７
Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０
１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｔ５５Ｐ
−Ｓ１０１Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｈ−Ａ１２８Ｓ−
Ｐ１２９Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ８９Ｙ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−
Ｇ１３１Ｓ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ
−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｉ１１５Ｖ−Ｎ２４０Ｋ，Ｇ９７Ａ
−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ５３Ｇ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１
０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ１６１Ｐ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ
９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｎ２４０Ｋ，Ｇ９７
Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｐ２３９Ｒ，Ｇ９７Ａ−
Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ５５Ｐ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９
Ｇ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ
−Ｉ１１５Ｖ−Ａ１３４Ｔ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｙ６Ｑ−Ｐ１２９Ｑ−
Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ５５Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ
８９Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｓ７８Ｎ
−Ａ８８Ｖ−Ｓ１０１Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｈ−Ｓ
７８Ｎ−Ｉ１１１Ｖ−Ａ１３４Ｔ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２
５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ
−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１
２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ５３Ｇ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２
８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ５３Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ
−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ５３Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８
８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ２４０Ｋ−Ａ２７
３Ｓ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−
Ｓ１０１Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｑ５９Ｓ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８
８Ｌ−Ｓ８９Ｇ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｈ−Ｓ７８Ｎ−
Ｓ１６１Ｐ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｈ−Ｓ７８Ｎ−Ｉ１
１１Ｖ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ５５Ｐ−Ａ１２８Ｓ−Ｐ１２９Ｑ，Ｇ９
７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７
Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ６１Ｅ−Ａ１４４Ｋ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７
Ｑ−Ａ１３４Ｔ−Ｐ２３９Ｒ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ
−Ｓ５３Ｇ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１
２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ
−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ
８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ５
５Ｐ−Ｎ２４０Ｋ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ８７Ｔ
−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｐ１２９Ｑ−
Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ−Ｐ２３９Ｒ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ａ−
Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ５３Ｇ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ
２１７Ｑ−Ｉ１１１Ｖ−Ｐ１２９Ｑ−Ｇ２１１Ｔ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−
Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２
１７Ｑ−Ｑ５９Ｓ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ８７Ｇ−Ａ８８Ｖ−Ｓ８９Ａ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−
Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１
Ｎ
，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ−Ｓ１６２
Ｋ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ５５Ｐ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１
Ｓ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ５５Ｐ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ
−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ８７Ｇ−Ａ８８Ｖ−Ｓ８９Ａ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ，
Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｎ６１
Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｉ
１１１Ｖ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−
Ｉ１１１Ｖ−Ａ２７３Ｓ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ８７Ｔ−Ａ
８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ２２Ｎ−Ｓ２４Ａ−Ｎ６１Ｐ
−Ｓ６３Ｈ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−
Ｓ５３Ｇ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ−Ｐ１２９Ｓ−Ｖ２０
３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ１５９Ｋ−Ｌ２６７Ｖ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２
８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｐ４０Ｅ−Ｓ５３Ｙ−Ｓ７８Ｙ−Ｐ８６Ｓ−Ｓ８７Ｇ−Ａ８８Ｖ，Ｇ
９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｒ−Ｓ１４５Ｄ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２
１７Ｑ−Ｉ１１１Ｖ−Ｓ１５９Ｋ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ５５Ｐ−Ｐ１
２９Ｌ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｑ５９Ｓ−Ｎ６１Ｐ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７
Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ５５Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ
１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５
３Ｇ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ５３Ｇ−Ｎ６１Ｐ
−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１
２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ８９Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｒ−Ｐ１２
９Ｖ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ８７Ｇ−Ａ８８Ｖ−Ｓ８９Ａ−Ａ１１６Ｎ
−Ｎ１１７Ｓ−Ｎ１１８Ｇ−Ｐ１７２Ｈ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｉ１１１
Ｖ−Ａ１３４Ｔ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｑ５９Ｓ−Ｎ６１Ｐ−Ｐ１２９Ｑ
−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｐ５Ｓ−Ｓ８７Ｇ−Ａ
８８Ｖ−Ｓ８９Ａ−Ａ１１６Ｇ−Ｎ１１７Ｒ，Ｙ２１７Ｑ−Ｎ６１Ｐ−Ａ９７Ｇ−Ｇ１０
２Ａ−Ａ１２８Ｇ−Ｐ１２９Ｓ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５
Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ７８Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ１４５Ｄ−
Ｓ１５９Ｋ−Ｎ２４０Ｋ−Ｑ２７５Ｅ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ５５Ｐ−
Ａ１２８Ｓ−Ｐ１２９Ｄ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｇ２３Ａ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ
２５Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｐ１２９Ｄ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２
５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ
１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｉ１１１Ｖ−Ｐ２３９Ｒ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−
Ｓ８７Ｇ−Ａ８８Ｖ−Ｓ８９Ａ−Ｓ１６２Ｋ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ８
７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｉ１１５Ｖ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ
−Ｎ２５Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｓ７８Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ５５Ｐ−Ａ９
２Ｇ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｓ８７Ｔ−
Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ２２Ｎ−Ｓ２
４Ａ−Ｔ５５Ｐ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ５３Ｇ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−
Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ
２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ，Ｇ９７Ａ−Ｇ
１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ−Ｓ１５９Ｋ，Ｇ９７Ａ−
Ｙ２１７Ｑ−Ｎ６１Ｐ−Ｎ６２Ｑ−Ｇ１００Ｎ−Ａ１２８Ｇ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ
２１７Ｑ−Ｓ２４Ｒ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ１８２Ｐ−Ｌ２６７Ｖ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２
１７Ｑ−Ｐ２３９Ｒ−Ａ２７３Ｓ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ５３Ｇ−Ｓ７
８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ
−Ｙ２１７Ｑ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ−Ｔ２４２Ｒ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８
Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ３Ｆ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｇ２１１Ｔ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１
２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｌ７５Ｈ−Ｎ７６Ｇ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ
−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ５３Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９
Ｇ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ａ１４４Ｋ，
Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｖ２０
３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｑ５９Ｓ−Ｎ６１Ｐ−Ａ１１６Ｎ−Ｎ１１７
Ｓ−Ｎ１１８Ｇ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−
Ｉ１１１Ｖ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｒ−Ｓ１４５Ｄ−Ｐ２３９Ｒ−
Ｑ２７５Ｅ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ１４５Ｄ−Ａ２７３Ｓ，Ｇ９７Ａ−
Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｋ１４１Ｅ−Ｔ２４２Ｒ，Ｇ９７Ａ−Ｇ
１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９
７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ａ１１６Ｎ−Ｎ１１７Ｓ−Ｎ１１８Ｇ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ
１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ８９Ｙ−Ｇ２１１Ｔ，Ｇ
９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ８７Ｇ−Ａ８８Ｖ−Ｓ８９Ａ−Ａ１１６Ｎ−Ｎ１１
７Ｓ−Ｎ１１８Ｇ−Ａ１４４Ｔ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５
Ｇ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ
１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｐ１２９Ｖ，Ｇ９７Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ６
１Ｐ−Ａ１２８Ｇ−Ｐ１２９Ｓ−Ｓ１３０Ｐ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ５
５Ｐ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｇ１１０Ｃ−Ｓ１３０Ｐ，Ｇ９７Ａ−
Ｙ２１７Ｑ−Ｎ１２３Ｇ−Ａ１２８Ｇ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ６１Ｐ−
Ｎ６２Ｑ−Ｇ１００Ｎ−Ｇ１０２Ａ−Ｍ１２４Ｉ，Ｓ７８Ｎ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ
２１７Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ａ
１３７Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ６１Ｐ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１
２８Ａ−Ｓ１３０Ｐ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ｑ１０３Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ
６３Ｔ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１０２Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２
１７Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ｎ１０９Ｄ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４８Ｒ，Ｓ８７Ｒ−Ｇ９
７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｓ１８８Ｄ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ８
７Ｄ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４８Ｒ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｓ１８
８Ｄ−Ｓ２４８Ｒ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｓ２４８Ｄ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ７
８Ｎ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｌ２６７Ｖ，Ｓ７８Ｎ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８
Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ１６１Ｐ，Ｓ７８Ｎ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｉ１１５
Ｖ，Ｓ７８Ｎ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ａ２７３Ｓ，Ｓ７８Ｎ−Ｇ９７Ａ−
Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｇ２１１Ｔ，Ｓ７８Ｎ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，
Ｓ７８Ｎ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｉ１１１Ｖ，Ｓ７８Ｎ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１
２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｖ１４７Ｌ，Ｓ７８Ｎ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｉ１
０８Ｖ，Ｓ７８Ｎ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ８９Ｙ，及びＳ７８Ｎ−Ｇ９
７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ａ１３８Ｔ，のうちの１、２、３、４、５、６、７、８
、９、１０、１１又はそれ以上を含む、スブチリシン変異体、特に成熟ＢＰＮ’（配列番
号２）の変異体などの好適な冷水プロテアーゼを提供し、ここで、変異体配列の位置は、
配列番号２の位置に対応させることにより番号付けされる。
【０１７３】
別の態様では、この冷水プロテアーゼは、配列番号２を有するスブチリシンＢＰＮ’の
変異体であり、ここで、この変異体は、アミノ酸位置２４、２５、４０、５２、５３、５
５、５８、５９、６１、６２、６３、６８、７８、８６、８７、８８、８９、９２、９６
、９７、１００、１０１、１０３、１０４、１０６、１１１、１１４、１１５、１１６、
１１７、１１８、１２３、１２４、１２５、１２６、１２８、１２９、１３０、１３１、
１３２、１３３、１３４、１４４、１４５、１５９、１６１、１６２、１６７、１９４、
２０３、２０６、２１３、２１７、２２７、２３２、２３９、２４０、２４２、２６５、
２６７及び２７５から選択される３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３
、１４、１５又はそれ以上の変異を含み、ここで、変異体配列の位置は、配列番号２のア
ミノ酸配列における位置に対応させることにより番号付けされる。
【０１７４】
別の態様では、この冷水プロテアーゼは、配列番号２を含むスブチリシンＢＰＮ’の変
異体（すなわち、ＢＰＮ’スブチリシン変異体）であり、ここで、この変異体は、群（ａ
）及び（ｂ）；（ａ）Ｎ６１Ｅ，Ａ１４４Ｋ，Ｐ１２９Ｅ，Ｐ２３９Ｒ，Ｐ４０Ｅ，Ｑ１
０３Ｅ，Ｑ２０６Ｅ，Ｑ７２７５Ｅ，Ｓ１４５Ｄ，Ｓ１５９Ｋ，Ｓ１６２Ｋ，Ｓ２４Ｒ，
Ｓ６３Ｈ，Ｓ８７Ｄ及びＴ２４２Ｒからなる群から選択される、帯電している変異、並び
に（ｂ）Ａ１１４Ｇ，Ａ１１６Ｎ，Ａ１３３Ｖ，Ａ１３４Ｔ，Ａ２３２Ｔ，Ａ８８Ｖ，Ａ
９２Ｇ，Ｆ５８Ｇ，Ｇ１００Ｔ，Ｇ１２８Ａ，Ｇ１３１Ｓ，Ｇ９７Ａ，Ｉ１１１Ｖ，Ｉ１
１５Ｖ，Ｋ２１３Ｌ，Ｋ２６５Ｎ，Ｌ１２６Ａ，Ｌ２６７Ｖ，Ｌ９６Ｔ，Ｍ１２４Ｖ，Ｎ
１１７Ｓ，Ｎ１１８Ｇ，Ｎ１２３Ｇ，Ｎ２４０Ｋ，Ｎ２５Ｇ，Ｎ６１Ｐ，Ｎ６２Ｑ，Ｎ６
２Ｒ，Ｎ６２Ｓ，Ｐ１２９Ｑ，Ｐ１２９Ｖ，Ｐ１９４Ｌ，Ｐ２３９Ｖ，Ｐ５２Ｌ，Ｐ８６
Ｓ，Ｑ５９Ｓ，Ｓ１０１Ｎ，Ｓ１２５Ａ，Ｓ１３０Ｇ，Ｓ１３２Ｎ，Ｓ１６１Ｐ，Ｓ２４
Ｇ，Ｓ５３Ｇ，Ｓ７８Ｎ，Ｓ８７Ｇ，Ｓ８９Ｙ，Ｔ５５Ｐ，Ｖ２０３Ｙ，Ｖ２２７Ｔ，Ｖ
６８Ａ，Ｗ１０６Ｆ，Ｙ１０４Ｎ，Ｙ１６７Ａ，及びＹ２１７Ｑ，からなる群から選択さ
れる、中性の変異；から選択される合計で３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１
２、１３、１４、１５又はそれ以上の変異を含み、ここで、変異体配列の位置は、配列番
号２のアミノ酸配列における位置に対応させることにより番号付けされる。
【０１７５】
本発明の核酸
本発明は、単離された、非自然発生の又は組み換え核酸（本明細書では「ポリヌクレオ
チド」とも呼ぶ）を提供し、これは集合的に「本発明の核酸」又は「本発明のポリヌクレ
オチド」とも呼ばれ得、これは本発明のポリペプチド（例えば、プロテアーゼ変異体）を
コードする。下記全てを含む本発明の核酸は、本発明のポリペプチドの組み換え体生産（
例えば、発現）に有用であり、典型的には、この生産には所望のポリペプチドをコードす
る配列又はその断片を含むプラスミド発現ベクターの発現を介する。上述のように、ポリ
ペプチドとしては、クリーニングする必要のある物品又は表面（例えば、物品の表面）を
洗浄するためのクリーニング用途及びクリーニング組成物に有用である酵素活性（例えば
、タンパク質分解活性）を有するスブチリシン変異体ポリペプチドなどのプロテアーゼ変
異体ポリペプチドが挙げられる。
【０１７６】
本発明は、「本発明のポリペプチド」と題された節に上述した、並びに、パートＩ実施
例及びパートＩＩ実施例などの実施例が挙げられるがこれに限定されない本明細書の他箇
所の、本発明の任意のタンパク質、ポリヌクレオチド又はプロテアーゼ変異体（任意の融
合タンパク質などが挙げられる）をコードするポリヌクレオチド配列あるいはこれらの相
補的ポリヌクレオチド配列を含む、単離された、組み換え、実質的に純粋な又は非自然発
生の核酸を含む。本発明はまた、上記、並びに、パートＩ実施例及びパートＩＩ実施例な
どの実施例が挙げられるがこれに限定されない本明細書の他箇所の、本発明の任意のポリ
ヌクレオチド、タンパク質又はプロテアーゼ変異体（任意の融合タンパク質が挙げられる
）の２つ以上の組み合わせをコードするポリヌクレオチド配列を含む、単離された、組み
換え、実質的に純粋な又は非自然発生の核酸を提供する。
【０１７７】
第十態様では、本発明は、本発明の第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八
若しくは第九態様の変異体（又は第三態様にあるようなポリペプチド）をコードするポリ
ヌクレオチド配列又はこれらの相補的ポリヌクレオチド配列を含む、単離された、非自然
発生型の又は組み換え核酸を提供する。
【０１７８】
第十一態様では、本発明は、配列番号３又は配列番号５に記載のポリヌクレオチド配列
に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％
、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有する
ポリヌクレオチド配列あるいはこれらの相補的ポリヌクレオチド配列を含む、単離された
、非自然発生型の又は組み換え核酸を提供する。
【０１７９】
本発明は、配列番号２のアミノ酸配列とは異なるアミノ酸配列を含むプロテアーゼ変異
体をコードする核酸を更に提供し、ここで、このプロテアーゼ変異体の合計正味電荷は、
バチルス・アミロリケファシエンス（B. amyloliquefaciens）ＢＰＮ’スブチリシンプロ
テアーゼの合計正味電荷と比較して＋１、＋２、＋３、＋４、＋５、０、−１、−２、−
３、−４又は−５であり、ここで、このプロテアーゼ変異体のアミノ酸位置は、バチルス
・アミロリケファシエンス（Bacillus amyloliquefaciens）スブチリシンＢＰＮ’アミノ
酸配列とこのプロテアーゼ変異体のアミノ酸配列のアラインメントを行うことにより判定
される配列番号２に示されるバチルス・アミロリケファシエンス（Bacillus amyloliquef
aciens）スブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列中の対応するアミノ酸位置の番号付けに従
って、番号付けされる。
【０１８０】
本発明は、バチルス・アミロリケファシエンス（B. amyloliquefaciens）ＢＰＮ’スブ
チリシンプロテアーゼのスブチリシン変異体をコードする核酸を提供し、ここで、このＢ
ＰＮ’スブチリシンプロテアーゼは配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、ここで、
このプロテアーゼ変異体は、アミノ酸位置１〜２７５から選択されるアミノ酸位置におい
て２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７
、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４又は２５以下の変異で配列番号２のアミノ
酸配列と異なるアミノ酸配列を含み、ここで、このスブチリシン変異体のアミノ酸位置は
、配列番号２として記載されているバチルス・アミロリケファシエンス（B. amyloliquef
aciens）スブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列に対応させることにより番号付けされ、こ
こで、このプロテアーゼ変異体のアミノ酸位置は、このプロテアーゼ変異体とのアライメ
ントにより判定される配列番号２に示されるバチルス・アミロリケファシエンス（Bacill
us amyloliquefaciens）スブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列中の対応するアミノ酸位置
の番号付けに従って、番号付けされる。
【０１８１】
本発明は、配列番号２のアミノ酸配列とは異なるアミノ酸配列を含むスブチリシン変異
体をコードする核酸を提供し、ここで、このプロテアーゼ変異体の合計正味電荷は、バチ
ルス・レンタス（Bacillus lentus）スブチリシンＢＰＮ’プロテアーゼの合計正味電荷
と比較して＋１、＋２、＋３、＋４、＋５、０、−１、−２、−３、−４又は−５であり
、ここで、このプロテアーゼ変異体のアミノ酸位置は、バチルス・アミロリケファシエン
ス（Bacillus amyloliquefaciens）スブチリシンＢＰＮ’アミノ酸配列とこのプロテアー
ゼ変異体のアミノ酸配列のアラインメントを行うことにより判定される配列番号２に示さ
れるバチルス・アミロリケファシエンス（Bacillus amyloliquefaciens）スブチリシンＢ
ＰＮ’のアミノ酸配列中の対応するアミノ酸位置の番号付けに従って、番号付けされる。
【０１８２】
上記低イオン強度プロテアーゼ変異体は、典型的には洗濯洗浄機内で、水に希釈されて
洗濯洗剤洗浄液を形成する洗剤組成物の部分を形成し得、その伝導率は、約０．１ｍＳ／
ｃｍ〜約３ｍＳ／ｃｍ、約０．３ｍＳ／ｃｍ〜約２．５ｍＳ／ｃｍ、又は更には約０．５
ｍＳ／ｃｍ〜約２ｍＳ／ｃｍである。このプロテアーゼ変異体は、高イオン強度のプロテ
アーゼ変異体であってもよい。このような高イオン強度のプロテアーゼ変異体は、２つ以
上の変異を含み、配列番号２に示される野生型ＢＰＮ’スブチリシンプロテアーゼと比較
して＋５、＋４、＋３、＋２、＋１又は０の合計正味電荷を有する。
【０１８３】
上記高イオン強度のプロテアーゼ変異体は、典型的には洗濯洗浄機内で、水に希釈され
て洗濯洗剤洗浄液を形成する洗剤組成物の部分を形成し得、その伝導率は、約３ｍＳ／ｃ
ｍ〜約３０ｍＳ／ｃｍ、約３．５ｍＳ／ｃｍ〜約２０ｍＳ／ｃｍ、又は更には約４ｍＳ／
ｃｍ〜約１０ｍＳ／ｃｍである。
【０１８４】
このプロテアーゼ変異体の電荷は、配列番号２のアミノ酸配列を有するＢＰＮ’と比較
して表される。単一負電荷を付与するアミノ酸はＤ及びＥであり、単一正電荷を付与する
アミノ酸はＲ、Ｈ及びＫである。電荷を変化させる配列番号２に対するアミノ酸変化は、
プロテアーゼ変異体の電荷を計算するために使用される。例えば、野生型の中性位置に負
電荷変異を導入することはプロテアーゼ変異体に−１の正味電荷を加えることになり、一
方、野生型正アミノ酸残基（Ｒ、Ｈ又はＫ）に負電荷変異（Ｄ及びＥ）を導入することは
−２の正味電荷を加えることになる。配列番号２のアミノ酸配列を有するＢＰＮ’に対し
てプロテアーゼ変異体について異なるアミノ酸残基全ての電荷変化を合計すると、プロテ
アーゼ変異体の電荷変化が得られる。理論に束縛されるものではないが、低伝導率の洗濯
洗剤溶液中で使用されるべき冷水プロテアーゼについて好ましい電荷範囲は−５、−４、
−３、−２、−１、０、好ましくは−２、−１であり、高伝導率洗濯洗剤溶液中で使用さ
れるべき冷水プロテアーゼについて好ましい電荷範囲は＋５、＋４、＋３、＋２、＋１、
０、好ましくは＋２、＋１である。電荷を正しく選択することにより、予想外にレベルの
改善された冷水クリーニング性能を得ることができる。「低伝導率の洗濯洗剤溶液」は、
約０．１ｍＳ／ｃｍ〜約３ｍＳ／ｃｍ、約０．３ｍＳ／ｃｍ〜約２．５ｍＳ／ｃｍ、又は
更には約０．５ｍＳ／ｃｍ〜約２ｍＳ／ｃｍの伝導率を有するものとして定義される。「
高伝導率の洗濯洗剤溶液」は、約３ｍＳ／ｃｍ〜約３０ｍＳ／ｃｍ、約３．５ｍＳ／ｃｍ
〜約２０ｍＳ／ｃｍ、又は更には約４ｍＳ／ｃｍ〜約１０ｍＳ／ｃｍの伝導率を有するも
のとして定義される。上記の例は非限定的であることが意図されている。冷水性能を最適
化するために変異が組み合わされる場合にも、酵素電荷は更なる位置における変異により
均衡が得られ得る。
【０１８５】
本発明は、冷水プロテアーゼ及び少なくとも１つの冷水プロテアーゼを含む製品を含む
。一態様では、この冷水プロテアーゼは配列番号２を有するスブチリシンＢＰＮ’の変異
体であり、上記変異体は１つ以上の変異を有するアミノ酸配列を含み、野生型ＢＰＮ’（
配列番号２）と比較して−１、０又は＋１の合計正味電荷を有する。負電荷を付与するア
ミノ酸は典型的にはＤ及びＥであり、正電荷を付与するアミノ酸は典型的にはＲ、Ｈ及び
Ｋである。理論に束縛されるものではないが、この電荷範囲（−１、０、＋１）は、冷水
性能をもたらすのに最適な電荷であると考えられる。しかしながら、これらの例は、非限
定的として見るべきである。一態様では、冷水性能を最適化するために変異が組み合わさ
れた場合、酵素電荷は、更なる位置における変異により均衡が得られる。
【０１８６】
本発明は、タンパク質分解活性を有する、単離された、組み換え型の、実質的に純粋な
又は非自然発生型のプロテアーゼ変異体（例えば、スブチリシン変異体）を提供し、上記
プロテアーゼ変異体は、５０、４５、４０、３５、３０、２５、２０、１９、１８、１７
、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９又は８のアミノ酸残基により配列番号
２に示されるアミノ酸配列とは異なるアミノ酸配列を含み、ここで、アミノ酸位置は、バ
チルス・アミロリケファシエンス（Bacillus amyloliquefaciens）スブチリシンＢＰＮ’
アミノ酸配列とプロテアーゼ変異体のアミノ酸配列のアライメントを行うことにより判定
される配列番号２に示すバチルス・アミロリケファシエンス（Bacillus amyloliquefacie
ns）スブチリシンＢＰＮ’アミノ酸配列のアミノ酸配列中の対応するアミノ酸位置の番号
付けに従って番号付けされ、スブチリシン変異体はＢＰＮ’−ｖ３（配列番号４）又はＢ
ＰＮ’−ｖ３６（配列番号６）のアミノ酸配列を包含する。
【０１８７】
一態様では、本発明は、タンパク質分解活性を有する、単離された、組み換え型の、実
質的に純粋な又は非自然発生型のプロテアーゼ変異体（例えば、スブチリシン変異体）を
提供し、上記プロテアーゼ変異体は、５０、４５、４０、３５、３０、２５、２０、１９
、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、６、５、４、３、２の
アミノ酸残基により配列番号２に示されるアミノ酸配列とは異なるアミノ酸配列を含み、
ここで、アミノ酸位置は、本明細書で上述されているように、バチルス・アミロリケファ
シエンス（Bacillus amyloliquefaciens）スブチリシンＢＰＮ’アミノ酸配列とプロテア
ーゼ変異体のアミノ酸配列のアライメントを行うことにより判定される配列番号２に示す
バチルス・アミロリケファシエンス（Bacillus amyloliquefaciens）スブチリシンＢＰＮ
’のアミノ酸配列中の対応するアミノ酸位置の番号付けに従って番号付けされる。
【０１８８】
本発明は、（ａ）パートＩ実施例に記載のプロテアーゼ変異体が挙げられるがこれらに
限定されない本明細書に記載の任意のプロテアーゼ変異体などの本発明の少なくとも１つ
のプロテアーゼ変異体、（ｂ）本発明の少なくとも１つの冷水プロテアーゼ、又は（ｃ）
パートＩＩ実施例に記載のシリーズＩ  ＧＧ３６変異体が挙げられるがこれらに限定され
ない本明細書に記載の任意のプロテアーゼ変異体などの本発明の少なくとも１つのプロテ
アーゼ変異体、をコードするポリヌクレオチド配列又はこれらのいずれかの相補的ポリヌ
クレオチド配列を含む、単離された、組み換え型の又は非自然発生型の核酸を含む。別の
態様では、本発明は、本発明の少なくとも１つの核酸を含む発現ベクターを提供する。こ
の発現ベクターは、プロモーターに作用可能に連結され得る。
【０１８９】
別の態様では、本発明は、配列番号３又は配列番号５に記載のポリヌクレオチド配列に
対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、
９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するポ
リヌクレオチド配列あるいはこれらの相補的ポリヌクレオチド配列を含む、核酸を提供す
る。
【０１９０】
本発明の核酸は、任意の好適な合成、操作及び／又は単離技術あるいはこれらの組み合
わせを使用することにより、生じさせることができる。例えば、本発明のポリヌクレオチ
ドは、当業者に周知である固相合成技術などの標準的核酸合成技術を用いて、製造するこ
とができる。このような技術では、最大５０個又はそれ以上のヌクレオチド塩基の断片が
典型的には合成され、その後、（例えば、酵素又は化学的連結方法、あるいは、ポリメラ
ーゼを介した組み換え方法により）連結され、任意の所望の連続的な核酸配列が本質的に
形成される。本発明の核酸の合成はまた、古典的なホスホルアミダイト方法を用いる化学
合成が挙げられるがこれに限定されない当該技術分野において既知の任意の好適な方法に
より、促進（又は代替的に達成）することができる（例えば、Ｂｅａｕｃａｇｅ  ｅｔ  
ａｌ．Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ２２：１８５９〜６９（１９８１））
；又は自動化合成方法において典型的に実践されているものとしてＭａｔｔｈｅｓ  ｅｔ
ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ．３：８０１〜８０５（１９８４）により記載の方法を参照され
たい）。本発明の核酸はまた、自動ＤＮＡ合成装置を用いることにより、製造することが
できる。注文に応じ合成される核酸は、様々な商業的供給元に発注することができる（例
えば、Ｔｈｅ  Ｍｉｄｌａｎｄ  Ｃｅｒｔｉｆｉｅｄ  Ｒｅａｇｅｎｔ  Ｃｏｍｐａｎｙ
、ｔｈｅ  Ｇｒｅａｔ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｏｐｅｒｏｎ  
Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｉｎｃ．及びＤＮＡ２．０）。核酸を合成するための他の技
術及び関連する原理は、当該技術分野で既知である（例えば、Ｉｔａｋｕｒａ  ｅｔ  ａ
ｌ．，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．５３：３２３（１９８４）；及びＩｔａｋｕｒ
ａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  １９８：１０５６（１９８４）を参照されたい）。
【０１９１】
上記に示しているように、核酸の修飾に有用なＤＮＡ組み換え技術は、当該技術分野に
おいて周知である。例えば、制限エンドヌクレアーゼ消化、連結、逆転写及びｃＤＮＡ生
産並びにポリメラーゼ連鎖反応（例えば、ＰＣＲ）などの技術は、既知であり、当業者に
より容易に採用される。本発明のヌクレオチドはまた、本発明のプロテアーゼ変異体ポリ
ペプチドをコードするポリヌクレオチドに対してハイブリッド形成できる又はそのポリヌ
クレオチドをＰＣＲ増幅できる１つ以上のオリゴヌクレオチドプローブを使用して、ｃＤ
ＮＡライブラリ（例えば、本明細書に記載のものなどの当該技術分野で一般に使用される
変異誘発技術を用いて生じさせたｃＤＮＡライブラリ）をスクリーニングすることにより
得てもよい。ｃＤＮＡをスクリーニング及び単離するための手順並びにＰＣＲ増幅手順は
、当業者に周知であり、当業者に既知の標準的な参照文献に記載されている。本発明の一
部の核酸は、例えば、既知の変異誘発手順（例えば、部位特異的変異誘発、部位飽和変位
誘発及びインビトロ組み換え）によって（例えば、酵素又は親プロテアーゼをコードする
）自然発生的にポリヌクレオチド主鎖を変更することにより、得ることができる。
【０１９２】
本発明は、本発明の標的核酸（例えば、配列番号３又は５）又はその相補的ポリヌクレ
オチド配列に対してハイブリッド形成する核酸を含み、ここで、ハイブリッド形成は実質
的に標的核酸の全長にわたる。ハイブリッド形成する核酸は、少なくとも厳密な条件下で
又は少なくとも厳密度の高い条件下で本発明のヌクレオチド配列に対してハイブリッド形
成し得る。核酸ハイブリッド形成実験に関する、現密度が中程度の条件、厳密な条件及び
厳密度の高い条件は既知である。このような厳密度のレベルを達成するために組み合わせ
ることができる因子の例は、本明細書に簡潔に議論される。
【０１９３】
水素結合、溶媒排除、塩基スタッキング及びこれらに類するものなどの様々な明確な特
徴を持つ物理化学的な力により、核酸はハイブリッド形成する。核酸のハイブリッド形成
についての広範なガイドは、Ｐ．Ｔｉｊｓｓｅｎ（１９９３）Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｔ
ｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  
Ｂｉｏｌｏｇｙ−ＨｙｂｒｉｄｉＺａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  
Ｐｒｏｂｅｓ，ｖｏｌ．２４，ｐａｒｔ  Ｉ，ｃｈａｐｔｅｒ  ２，「Ｏｖｅｒｖｉｅｗ
ｏｆ  ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  ｈｙｂｒｉｄｉＺａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｔｈｅ  
ｓｔｒａｔｅｇｙ  ｏｆ  ｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄ  ｐｒｏｂｅ  ａｓｓａｙｓ，」（
Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎ．Ｙ．）（本明細書では以降「Ｔｉｊｓｓｅｎ」）に見られる。Ｈ
ａｍｅｓ  ａｎｄ  Ｈｉｇｇｉｎｓ（１９９５）Ｇｅｎｅ  Ｐｒｏｂｅｓ１及び２も参照
されたい。２つの核酸配列が実質的に同一であることの指標としては、２つの分子が少な
くとも厳密な条件下で互いにハイブリッド形成することが挙げられる。サザン及びノザン
ハイブリッド形成などの核酸ハイブリッド形成実験の文脈での厳密なハイブリッド形成条
件は配列に依存し、異なる環境パラメーター下では異なる。厳密度の高い条件は典型的に
は、ハイブリッド形成が、約５℃で、又は、定義されたイオン強度及びｐＨでの特定の配
列についての熱的な融解温度（Ｔｍ）未満で、生じるように選択される。Ｔｍは、（定義
されたイオン強度及びｐＨ下で）完全に適合するプローブに対して試験配列の５０％がハ
イブリッド形成する温度である。Ｔｍは所与の条件下で核酸二重鎖が５０％変性する温度
を示し、核酸ハイブリッドの安定性の直接の尺度を表す。したがって、Ｔｍは、へリック
スからランダムコイルへの移行における中間点に対応する温度に対応し、長さ、ヌクレオ
チド組成、及びヌクレオチドの長い伸張に対するイオン強度に依存する。厳密な条件下で
は、プローブは、典型的には、その標的配列に対してハイブリッド形成するが、他の配列
に対しては全くハイブリッド形成しない。「非常に厳密な条件」が選択されると、特定の
プローブについてのＴｍと等しいものになる。
【０１９４】
ＤＮＡ−ＤＮＡ二重鎖のＴｍは、等式（１）を用いて概算することができる：Ｔｍ（℃
）＝８１．５℃＋１６．６（ｌｏｇ１０Ｍ）＋０．４１（％  Ｇ＋Ｃ）−０．７２（％  
ｆ）−５００／ｎ、式中、Ｍは一価カチオン（通常はＮａ＋）の容量モル濃度であり、（
％  Ｇ＋Ｃ）はグアノシン（Ｇ）及びシトシン（Ｃ）ヌクレオチドの百分率であり、（％
ｆ）はホルムアミド（formalize）の百分率であり、ｎはハイブリッドのヌクレオチド
塩基の数（すなわち、長さ）である。ＲＮＡ−ＤＮＡ二重鎖のＴｍは、等式（２）を用い
て概算することができる：Ｔｍ（℃）＝７９．８℃＋１８．５（ｌｏｇ１０Ｍ）＋０．５
８（％  Ｇ＋Ｃ）−１１．８（％  Ｇ＋Ｃ）２−０．５６（％  ｆ）−８２０／ｎ、式中
、Ｍは一価カチオン（通常はＮａ＋）の容量モル濃度であり、（％  Ｇ＋Ｃ）はグアノシ
ン（Ｇ）及びシトシン（Ｃ）ヌクレオチドの百分率であり、（％  ｆ）はホルムアミドの
百分率であり、ｎはハイブリッドのヌクレオチド塩基の数（すなわち、長さ）である。上
記等式１及び２は、典型的には、約１００〜２００ヌクレオチドよりも長いハイブリッド
二重鎖についてのみ正確である。５０ヌクレオチドよりも短い核酸配列のＴｍは、次のよ
うに計算することができる：Ｔｍ（℃）＝４Ｇ＋Ｃ）＋２（Ａ＋Ｔ）、式中、Ａ（アデニ
ン）、Ｃ、Ｔ（チミン）及びＧは、対応するヌクレオチドの数である。
【０１９５】
ハイブリッド形成をしない核酸物質は典型的には一連の洗浄により除去され、ハイブリ
ッド形成分析を行う際にその厳密度は所望される結果に応じて調整することができる。（
例えば、より高い塩濃度及びより低い温度を用いる）厳密度の低い洗浄条件は、感度を上
昇させるが、不特定のハイブリッド形成シグナル及び高いバックグラウンドシグナルを生
産し得る。（例えば、より低濃度の塩及びハイブリッド形成温度により近いより高い温度
を用いる）厳密のより高い条件は、典型的には特定のシグナルを維持したまま、バックグ
ラウンドシグナルを低下させる。更なるガイドとしては、上記Ｈａｍｅｓ  ａｎｄ  Ｈｉ
ｇｇｉｎｓを参照されたい。
【０１９６】
少なくとも１００ヌクレオチドを含む少なくとも２つの核酸の分析のための代表的な厳
密な条件としては、５０％ホルマリン（すなわちホルムアミド）を４２℃の１ミリグラム
（ｍｇ）のヘパリンと共に含むサザン又はノザンブロットにおける溶液中又はフィルター
上でのインキュベーションが挙げられ、この場合、ハイブリッド形成は一晩行われる。標
準的な厳密度での洗浄は、０．２ｘ  ＳＳＣ緩衝洗浄液を含む溶液を用いて約６５℃にて
約１５分にわたって行うことができる（ＳＳＣ緩衝液の説明についてはＳａｍｂｒｏｏｋ
ｅｔ  ａｌ．（１９８９）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔ
ｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ及びその第
三版（２００１）を参照されたい）。標準的な厳密度で洗浄する前に、厳密度の低い洗浄
を行なってバックグラウンドプローブシグナルを除去してもよい。厳密度の低い洗浄は、
例えば、２ｘ  ＳＳＣ緩衝液を含む溶液中で約４０℃にて約１５分にわたって行うことが
できる。厳密度の高い洗浄は、０．１５ＭのＮａＣｌを含む溶液を用いて約７２℃にて約
１５分にわたって行うことができる。代表的な厳密度が中程度の条件としては、２０％ホ
ルマリン（すなわちホルムアミド）、０．５ｘ  ＳＳＣ、５０ｍＭのリン酸ナトリウム（
ｐＨ  ７．６）、５ｘデンハルト溶液、１０％硫酸デキストラン及び２０ｍｇ／ｍＬの変
性剪断サケ精子ＤＮＡを含む溶液中で３７℃にて一晩インキュベーションした後に１ｘ  
ＳＳＣ中で約３７〜５０℃にてフィルターを洗浄することが挙げられる。厳密度の高い条
件は、（ａ）例えば、５０℃にて０．０１５Ｍの塩化ナトリウム／０．００１５Ｍのクエ
ン酸ナトリウム／０．１％のドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）といった、洗浄に低イオ
ン強度及び高温を使用する条件、（ｂ）例えば、５０％（ｖ／ｖ）ホルムアミドを０．１
％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）／０．１％  Ｆｉｃｏｌｌ／０．１％ポリビニルピロリ
ドン（ＰＶＰ）／５０ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液と共にｐＨ  ６．５にて７５０ｍＭ
の塩化ナトリウム、７５ｍＭのクエン酸ナトリウムを４２℃にて、といった、ハイブリッ
ド形成中に変性剤を採用する条件あるいは、（ｃ）５０％ホルムアミド、５ｘ  ＳＳＣ（
０．７５ＭのＮａＣｌｍ０．０７５Ｍのクエン酸ナトリウム）、５０ｍＭのリン酸ナトリ
ウム（ｐＨ  ６．８）、０．１％のピロリン酸ナトリウム、５ｘデンハルト溶液、音波処
理したサケ精子ＤＮＡ（５０μｇ／ｍＬ）、０．１％  ＳＤＳ及び１０％硫酸デキストラ
ンを４２℃にて、（１）０．２ｘ  ＳＳＣ中で４２℃、（２）５０％ホルムアミド中で５
５℃、及び（３）０．１ｘ  ＳＳＣ中で５５℃（好ましくはＥＤＴＡと共に）、における
洗浄と共に、採用する条件である。特定のハイブリッド形成アッセイにおいて関連しない
プローブについて観察される２ｘ又は２．５ｘ〜５ｘのシグナル対ノイズ比は、特定のハ
イブリッド形成の検出を示す。本発明の文脈における、少なくとも厳密なハイブリッド形
成の検出は、本発明の核酸に対して配列類似性又は相同性が高いことを指す。
【０１９７】
ベクター、細胞及び本発明のプロテアーゼ変異体ポリペプチドの製造方法
例えば、部位特異的飽和変異誘発、走査変異誘発、挿入変異誘
発、欠失変異誘発、無作為変異誘発、部位特異的変異誘発及び指向進化、並びに、様々な
他の組み換え方法が挙げられるがこれらに限定されない、本発明のプロテアーゼ変異体を
コードする本発明の改変されたポリヌクレオチドを生産するのに好適である様々な方法が
当該技術分野で既知である。改変されたポリヌクレオチド及びタンパク質（例えば、プロ
テアーゼ変異体）の製造方法としては、ＤＮＡシャッフリング法（例えば、Ｓｔｅｍｍｅ
ｒ  ＷＰ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ．Ａｃ
ａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９１（２２）：１０７４７〜５１（１９９４）を参照されたい）、
遺伝子の非相同組み換えに基づく方法、例えば、ＩＴＣＨＹ（Ｏｓｔｅｒｍｅｉｅｒ  ｅ
ｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．７：２１３９〜４４［１９９９］）、Ｓ
ＣＲＡＴＣＨＹ（ＬｕｔＺ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ
ＳＡ  ９８：１１２４８〜５３［２００１］）、ＳＨＩＰＲＥＣ（Ｓｉｅｂｅｒ  ｅｔ  
ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１９：４５６〜６０［２００１］）、ＮＲＲ（
Ｂｉｔｔｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０：１０２４〜９［
２００１］、Ｂｉｔｔｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．
ＵＳＡ  １０１：７０１１〜６［２００４］）、オリゴヌクレオチドの使用に依拠してラ
ンダム及び標的変異、欠失及び／又は挿入を行なう方法（Ｎｅｓｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａ
ｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０：１２５１〜５［２００２］；Ｃｏｃｏ  ｅｔ  ａｌ．
，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０：１２４６〜５０［２００２］；Ｚｈａ  ｅｔ  
ａｌ．，Ｃｈｅｍｂｉｏｃｈｅｍ．４：３４〜９［２００３］；Ｇｌａｓｅｒ  ｅｔ  ａ
ｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４９：３９０３〜１３［１９９２］）が挙げられ、Ａｒｋ
ｉｎ  ａｎｄ  Ｙｏｕｖａｎ，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：２９７〜３００（１
９９２）；Ｒｅｉｄｈａａｒ−Ｏｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ＥｎＺｙｍ
ｏｌ．２０８：５６４〜８６（１９９１）も参照されたい。                          
一態様では、親ポリヌクレオチドの全長を適切な発現プラスミドに連結し、以下の変異
誘発方法を使用して本発明の改変プロテアーゼの構築を促進するが、他の方法を使用して
もよい。この方法は、Ｐｉｓａｒｃｈｉｋ  ｅｔ  ａｌ．に記載のものに基づく（Ｐｉｓ
ａｒｃｈｉｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔ．Ｅｎｇ．Ｄｅｓ．Ｓｅｌｅｃｔ．２０：２５７
〜２６５［２００７］）。一態様では、制限酵素がその認識配列の外側を切断する点にお
いて付加的な利点がもたらされ、これにより、任意のヌクレオチド配列の消化が実践的に
可能になり、制限部位の痕の形成を防止する。
【０１９８】
一手法では、プロテアーゼの全長をコードする自然に生じる遺伝子を得、配列決定し、
１つ以上のアミノ酸にて変異（例えば、欠失、挿入、置換）を作製することが所望される
１つ以上の点について調査する。所望の配列にぴったり一致するように配列を変化させる
ための遺伝子の変異は、一般に既知の方法に従うプライマー伸長により達成される。変異
の所望される点の左側までの断片及び右側までの断片はＰＣＲにより増幅され、かつＥａ
ｍ１１０４Ｉ制限部位を包含することになる。この左側断片及び右側断片は、Ｅａｍ１１
０４Ｉにより消化されて、相補的な３塩基突出部を有する複数の断片を生じ、これは次に
プールされ、連結されて、１つ以上の変異を含有する改変配列のライブラリを生じる。こ
の方法は、フレームシフト変異の発生を回避する。また、すべてのオリゴヌクレオチドは
同一の制限部位を有するように合成でき、かつ一部の他の方法により必要とされるような
、制限部位を作る合成リンカーを必要としないことから、この方法は変異誘発プロセスを
単純化する。
【０１９９】
一態様では、本発明は、冷水プロテアーゼの作製方法を含み、この方法は、（ａ）親プ
ロテアーゼをコードするＤＮＡ基質分子の核酸変異体のライブラリをもたらすこと、（ｂ
）核酸変異体のライブラリを宿主細胞に形質転換させること、（ｃ）ライブラリを発現さ
せてポリペプチド発現産物をもたらすこと、（ｄ）ポリペプチド発現産物をスクリーニン
グして、（ｉ）パートＩ実施例１に記載の「試験方法」に定義されるようにＰＵＲＡＦＥ
ＣＴ（登録商標）Ｐｒｉｍｅ（アミノ酸置換Ｙ２１７Ｌを有する配列番号２）と比較して
ｐＨ  ８及び１６℃にて血液／ミルク／インク（ＢＭＩ）のシミに対して１．１〜１０の
性能指数を有する、（ｉｉ）本明細書のパートＩ実施例１に記載の「試験方法」に定義さ
れるようにＢＰＮ’（配列番号２）と比較してｐＨ  ８及び１６℃にてＢＭＩのシミに対
して１．３〜１０の性能指数を有する、（ｉｉｉ）本明細書のパートＩ実施例１に記載の
「試験方法」に定義されるようにＢＰＮ’−ｖ３（配列番号４）と比較してｐＨ  ８及び
１６℃にてＢＭＩのシミに対して０．９〜約１０の性能指数を有する、並びに（ｉｖ）本
明細書のパートＩ実施例１に記載の「試験方法」に定義されるようにＢＰＮ’−ｖ３６（
配列番号６）と比較してｐＨ  ８及び１６℃にてＢＭＩのシミに対して１．０〜約１０の
性能指数を有する、からなる群から選択される少なくとも１つの特性を有する変異体プロ
テアーゼを同定することを含み、ここで、冷水プロテアーゼが同定される。
【０２００】
別の態様では、本発明は、本発明の少なくとも１つの核酸を含む発現ベクターを提供す
る。このような核酸は、（ａ）パートＩ実施例に記載のプロテアーゼ変異体が挙げられる
がこれらに限定されない本明細書に記載の任意のプロテアーゼ変異体などの本発明の少な
くとも１つのプロテアーゼ変異体、（ｂ）本発明の少なくとも１つの冷水プロテアーゼ、
又は（ｃ）パートＩＩ実施例に記載のシリーズＩ  ＧＧ３６変異体が挙げられるがこれら
に限定されない本明細書に記載の任意のプロテアーゼ変異体などの本発明の少なくとも１
つのプロテアーゼ変異体、をコードするポリヌクレオチド配列又はこれらのいずれかの相
補的ポリヌクレオチド配列を含み得る。このような発現ベクターは、プロモーターに作用
可能に連結され得る。
【０２０１】
別の態様では、本発明は、（ａ）本発明の核酸、（ｂ）本発明の核酸を含む発現ベクタ
ー、（ｃ）例えば、本発明の冷水プロテアーゼが挙げられるがこれに限定されない本発明
のプロテアーゼ変異体、を含む組み換え宿主細胞を提供する。この組み換え宿主細胞は、
例えば、バチルス細胞が挙げられるがこれに限定されない細菌細胞であり得る。代表的な
バチルス細胞は、枯草菌（Bacillus subtilis）細胞である。
【０２０２】
別の態様では、本発明は、（ａ）本発明の核酸、（ｂ）本発明の核酸を含む発現ベクタ
ー、（ｃ）例えば、本発明の変異体の冷水プロテアーゼが挙げられるがこれに限定されな
い本発明のプロテアーゼ変異体、を含む細胞培養物を提供する。
【０２０３】
別の態様では、本発明は、本明細書に記載の本発明の少なくとも１つのポリヌクレオチ
ド（例えば、本明細書に記載の本発明のプロテアーゼ変異体をコードするポリヌクレオチ
ド）を含む単離されたベクター又は組み換えベクター、本発明の少なくとも１つの核酸又
はポリヌクレオチドを含む単離された又は組み換え発現ベクター又は発現カセット、本発
明の少なくとも１つの核酸又はポリヌクレオチドを含む単離された、実質的に純粋な又は
組み換えＤＮＡコンストラクト、本発明の少なくとも１つのポリヌクレオチドを含む単離
された又は組み換え細胞、本発明の少なくとも１つのポリヌクレオチドを含む細胞を含む
細胞培養物、本発明の少なくとも１つの核酸又はポリヌクレオチドを含む細胞培養物、並
びに、このようなベクター、核酸、発現ベクター、発現カセット、ＤＮＡコンストラクト
、細胞、細胞培養物又はこれらの任意の組み合わせ若しくは混合物を含む組成物を提供す
る。
【０２０４】
別の態様では、本発明は、本発明の少なくとも１つの核酸又はポリヌクレオチドを含む
本発明の少なくとも１つのベクター（例えば、発現ベクター又はＤＮＡコンストラクト）
を含む組み換え細胞を提供する。一部のこのような組み換え細胞は、このような少なくと
も１つのベクターにより形質転換又はトランスフェクションが行われる。このような細胞
は、典型的には、宿主細胞と呼ばれる。一部のこのような細胞は、例えば、枯草菌（Baci
llus subtilis）細胞などのバチルス種細胞が挙げられるがこれらに限定されない細菌細
胞を含む。本発明はまた、本発明の少なくとも１つのプロテアーゼ変異体を含む組み換え
細胞（例えば、組み換え宿主細胞）を提供する。
【０２０５】
別の態様では、本発明は、本発明の核酸又はポリヌクレオチドを含むベクターを提供す
る。このベクターは、本発明のプロテアーゼ変異体をコードする本発明のポリヌクレオチ
ド配列が、効率的な遺伝子発現に必要とされる１つ若しくは追加の核酸断片に作用可能に
連結される発現ベクター又は発現カセットである（例えば、本発明のプロテアーゼ変異体
をコードする本発明のポリヌクレオチドに作用可能に連結されるプロモーター）。ベクタ
ーは、抗菌剤含有培地での増殖により、プラスミドが感染した宿主細胞の連続培養の維持
を可能にする、転写ターミネーター及び／又は抗生物質耐性遺伝子などの選択遺伝子を含
み得る。
【０２０６】
発現ベクターはプラスミド又はウイルスＤＮＡに由来してもよく、代替的態様では両方
の要素を含有する。代表的なベクターとしては、ｐＸＸ、ｐＣ１９４、ｐＪＨ１０１、ｐ
Ｅ１９４、ｐＨＰ１３が挙げられるがこれらに限定されない（Ｈａｒｗｏｏｄ  ａｎｄ  
Ｃｕｔｔｉｎｇ  ｅｄｓ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄ
ｓ  ｆｏｒ  Ｂａｃｉｌｌｕｓ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ（１９９０）の例
えば第３章を参照されたい；枯草菌（B.subtilis）に好適な複製プラスミドとしては、ｐ
９２に列挙されているものが挙げられる（Ｐｅｒｅｇｏ，Ｍ．（１９９３）Ｉｎｔｅｇｒ
ａｔｉｏｎａｌ  Ｖｅｃｔｏｒｓ  ｆｏｒ  Ｇｅｎｅｔｉｃ  Ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｏｎ
ｓ  ｉｎ  Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ  ｐｐ．６１５〜６２４；Ａ．Ｌ．Ｓｏ
ｎｅｎｓｈｅｉｎ，Ｊ．Ａ．Ｈｏｃｈ，ａｎｄ  Ｒ．Ｌｏｓｉｃｋ（ｅｄ．），Ｂａｃｉ
ｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ  ａｎｄ  ｏｔｈｅｒ  Ｇｒａｍ−ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ｂａ
ｃｔｅｒｉａ：ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  ｍｏｌｅｃ
ｕｌａｒ  ｇｅｎｅｔｉｃｓ，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｆｏｒ  Ｍｉｃｒｏ
ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．）。
【０２０７】
細胞内での所望のタンパク質（例えば、プロテアーゼ変異体）の発現及び生産のために
、改変プロテアーゼをコードするポリヌクレオチドの少なくとも１つのコピーを含む、好
ましくは複数のコピーを含む、少なくとも１つの発現ベクターは、プロテアーゼの発現に
好適な条件下で細胞に形質転換される。一態様ではプロテアーゼ変異体をコードするポリ
ヌクレオチド配列（並びにベクター内に含まれる他の配列）は宿主細胞のゲノムの中に組
み込まれる一方、別の態様ではプロテアーゼ変異体をコードするポリヌクレオチド配列を
含むプラスミドベクターは、細胞内に自律的な染色体要素としてとどまる。本発明は、染
色体外の核酸配列、並びに、宿主細胞ゲノムの中に組み込まれる組み込みヌクレオチド配
列の両方を提供する。本明細書に記載のベクターは、本発明のプロテアーゼ変異体の製造
に有用である。一態様では、このプロテアーゼ変異体をコードするポリヌクレオチドコン
ストラクトは、このプロテアーゼ変異体をコードするポリヌクレオチドの、細菌染色体へ
の組み込み、及び場合によっては増幅を可能にする、組み込みベクター上に存在する。組
み込みのための部位の例は、当業者に周知である。一態様では、本発明のプロテアーゼ変
異体をコードするポリヌクレオチドの転写は、選択された前駆体プロテアーゼのための野
生型プロモーターであるプロモーターによりもたらされる。一部の他の態様では、このプ
ロモーターは、前駆体プロテアーゼとは非相同的なものであるが、宿主細胞において機能
性である。具体的には、細菌宿主細胞での使用に好適なプロモーターの例としては、例え
ば、ａｍｙＥ、ａｍｙＱ、ａｍｙＬ、ｐｓｔＳ、ｓａｃＢ、ｐＳＰＡＣ、ｐＡｐｒＥ、ｐ
ｖｅｇ、ｐＨｐａＩＩプロモーター、バチルス・ステアロサーモフィラス（B. stearothe
rmophilus）マルトース生成アミラーゼ遺伝子、バチルス・アミロリケファシエンス（B. 
amyloliquefaciens）（ＢＡＮ）アミラーゼ遺伝子、枯草菌（B. subtilis）アルカリプロ
テアーゼ遺伝子、バチルス・クラウジイ（B. clausii）アルカリプロテアーゼ遺伝子、バ
チルス・プミリス（B. pumilis）キシロダーゼ遺伝子、バチルス・チューリンゲンシス（
B. thuringiensis）ｃｒｙＩＩＩＡ及びバチルス・リケニホルミス（B. licheniformis）
α−アミラーゼ遺伝子のプロモーターが挙げられるがこれらに限定されない。追加のプロ
モーターとしては、Ａ４プロモーター、並びに、ファージラムダＰＲ又はＰＬプロモータ
ー、及び、大腸菌ｌａｃ、ｔｒｐ又はｔａｃプロモーターが挙げられるがこれらに限定さ
れない。
【０２０８】
本発明のプロテアーゼ変異体は、細菌及び真菌を含む任意の好適なグラム陽性微生物の
宿主細胞で製造することができる。例えば、一態様では、このプロテアーゼ変異体は、真
菌及び／又は細菌由来の宿主細胞で製造することができる。一態様では、宿主細胞は、バ
チルス種、ストレプトマイセス種、エシェリヒア種又はアスペルギルス種である。一態様
では、このプロテアーゼ変異体は、バチルス種（Bacillus sp.）宿主細胞により生産され
る。本発明のプロテアーゼ変異体の生産に使用が見出されるバチルス種（Bacillus sp.）
宿主細胞の例としては、バチルス・リケニホルミス（B. licheniformis）、バチルス・レ
ンタス（B. lentus）、枯草菌（B. subtilis）、バチルス・アミロリケファシエンス（B.
amyloliquefaciens）、バチルス・レンタス（B. lentus）、バチルス・ブレビス（B. br
evis）、バチルス・ステアロサーモフィラス（B. stearothermophilus）、バチルス・ア
ルカロフィラス（B. alkalophilus）、バチルス・コアグランス（B. coagulans）、バチ
ルス・サーキュランス（B. circulans）、バチルス・プミリス（B. pumilis）、バチルス
・チューリンゲンシス（B. thuringiensis）、バチルス・クラウジイ（B. clausii）及び
バチルス・メガテリウム（B. megaterium）並びにバチルス属内の他の生物が挙げられる
がこれらに限定されない。一態様では、枯草菌（B. subtilis）宿主細胞内は、プロテア
ーゼ変異体の生産のために使用される。米国特許第５，２６４，３６６号及び同第４，７
６０，０２５号（再発行特許第３４，６０６号）は、本発明のプロテアーゼ変異体を生産
するために使用できる様々なバチルス宿主株を記載しているが、他の好適な株を使用する
こともできる。
【０２０９】
本発明のプロテアーゼ変異体を生産するために使用できるいくつかの工業用細菌株とし
ては、非組み換え（即ち、野生型）バチルス種株、並びに、自然に生じる株の変異体及び
／又は組み換え株が挙げられる。一態様では、宿主株は組み換え株であり、ここで、所望
のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは宿主に導入される。一態様では、宿主株
は、枯草菌（B. subtilis）宿主株であり、特に組み換え枯草菌（Bacillus subtilis）宿
主株である。例えば、１Ａ６（ＡＴＣＣ  ３９０８５）、１６８（１Ａ０１）、ＳＢ１９
、Ｗ２３、Ｔｓ８５、Ｂ６３７、ＰＢ１７５３〜ＰＢ１７５８、ＰＢ３３６０、ＪＨ６４
２、１Ａ２４３（ＡＴＣＣ  ３９、０８７）、ＡＴＣＣ  ２１３３２、ＡＴＣＣ  ６０５
１、ＭＩ１１３、ＤＥ１００（ＡＴＣＣ  ３９、０９４）、ＧＸ４９３１、ＰＢＴ  １１
０及びＰＥＰ  ２１１株が挙げられるがこれらに限定されない数多くの枯草菌（B. subti
lis）株が既知である（例えば、Ｈｏｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ７３：２
１５〜２２８（１９７３）を参照されたい）（米国特許第４，４５０，２３５号及び同第
４，３０２，５４４号、並びに欧州特許第０１３４０４８号（これらはそれぞれその全体
が参照により組み込まれる）も参照されたい）。発現宿主細胞としての枯草菌（B. subti
lis）の使用は当該技術分野において周知である（例えば、Ｐａｌｖａ  ｅｔ  ａｌ．，
Ｇｅｎｅ  １９：８１〜８７（１９８２）；Ｆａｈｎｅｓｔｏｃｋ  ａｎｄ  Ｆｉｓｃｈ
ｅｒ，Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．１６５：７９６〜８０４（１９８６）；及びＷａｎｇ  
ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ  ６９：３９〜４７（１９８８）を参照されたい）。
【０２１０】
一態様では、バチルス宿主細胞は、次の遺伝子ｄｅｇＵ、ｄｅｇＳ、ｄｅｇＲ及びｄｅ
ｇＱのうちの少なくとも１つにおいて変異又は欠失を含むバチルス種である。この変異は
ｄｅｇＵ遺伝子の中にあってもよく、場合によってはこの変異はｄｅｇＵ（Ｈｙ）３２で
あってもよい。例えば、Ｍｓａｄｅｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．１７２
：８２４〜８３４（１９９０）及びＯｌｍｏｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｇｅｎ．Ｇｅｎ
ｅｔ．２５３：５６２〜５６７（１９９７）を参照されたい。典型的な宿主株は、ｄｅｇ
Ｕ３２（Ｈｙ）変異を保有する枯草菌（Bacillus subtilis）である。このバチルス宿主
は、ｓｃｏＣ４（例えば、Ｃａｌｄｗｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．
１８３：７３２９〜７３４０（２００１）を参照されたい）；ｓｐｏＩＩＥ（例えば、Ａ
ｒｉｇｏｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．３１：１４０７〜１４１５
（１９９９）を参照されたい）；及び／又はｏｐｐＡあるいはｏｐｐオペロンの他の遺伝
子（例えば、Ｐｅｒｅｇｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．５：１７３〜
１８５（１９９１）を参照されたい）におけるアミノ酸変異（例えば、置換）又は欠失を
含み得る。実際、ｏｐｐＡ遺伝子における変異と同じ表現型を生じるｏｐｐオペロンにお
ける任意の変異は、本発明の改変されたバチルス株の一態様において使用を見出される。
このような変異は単独で生じてもよく、又は、変異の組み合わせが存在してもよい。一態
様では、本発明のプロテアーゼ変異体を生産するために使用できる改変されたバチルス宿
主細胞株は、上記遺伝子の１つ以上における変異を既に含むバチルス宿主株である。加え
て、内因性プロテアーゼ遺伝子の変異及び／又は欠失を含むバチルス種宿主細胞は使用を
見出される。バチルス宿主細胞は、ａｐｒＥ及びｎｐｒＥ遺伝子の欠失を含み得る。バチ
ルス種宿主細胞は５プロテアーゼ遺伝子の欠失を含んでもよく、バチルス種宿主細胞は９
プロテアーゼ遺伝子の欠失を含んでもよい（例えば、米国特許出願公開第２００５／０２
０２５３５号を参照されたい）。
【０２１１】
宿主細胞は、当該技術分野において既知の任意の好適な方法を使用して、本発明の少な
くとも１つのプロテアーゼ変異体をコードする少なくとも１つの核酸で形質転換される。
核酸がベクターの中に組み込まれるか又はプラスミドＤＮＡを存在させずに使用されるか
のいずれにしろ、核酸は典型的には微生物の中に、一態様では好ましくは大腸菌細胞又は
コンピテントなバチルス細胞の中に、導入される。プラスミドＤＮＡコンストラクト又は
ベクターを利用してバチルス細胞又は大腸菌細胞の中に核酸（例えば、ＤＮＡ）を導入し
、このような細胞をこのようなプラスミドＤＮＡコンストラクト又はベクターにより形質
転換させるための方法は、周知である。一態様では、これらのプラスミドは、その後、大
腸菌細胞から単離され、バチルス細胞に形質転換される。しかしながら、大腸菌などの介
在微生物を使用することは本質的ではなく、一態様では、ＤＮＡコンストラクト又はベク
ターはバチルス宿主の中に直接導入される。
【０２１２】
当業者は、バチルス細胞の中に本発明の核酸又はポリヌクレオチド配列を導入するのに
好適な方法を十分に承知している（例えば、Ｆｅｒｒａｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，「Ｇｅｎｅ
ｔｉｃｓ，」ｉｎ  Ｈａｒｗｏｏｄ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄ．），Ｂａｃｉｌｌｕｓ，Ｐｌ
ｅｎｕｍ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｒｐ．（１９８９），ｐｐ．５７〜７２；Ｓａｕ
ｎｄｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．１５７：７１８〜７２６（１９８
４）；Ｈｏｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．９３：１９２５〜１９３７（
１９６７）；Ｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１３：１
３１〜１３５（１９８６）；及びＨｏｌｕｂｏｖａ，Ｆｏｌｉａ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．
３０：９７（１９８５）；Ｃｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｇｅｎ．Ｇｅｎｅｔ．１
６８：１１〜１１５（１９７９）；Ｖｏｒｏｂｊｅｖａ  ｅｔ  ａｌ．，ＦＥＭＳ  Ｍｉ
ｃｒｏｂｉｏｌ．Ｌｅｔｔ．７：２６１〜２６３（１９８０）；Ｓｍｉｔｈ  ｅｔ  ａｌ
．，Ａｐｐｌ．Ｅｎｖ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．５１：６３４（１９８６）；Ｆｉｓｈｅｒ
ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｃｈ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１３９：２１３〜２１７（１９８１）
；及びＭｃＤｏｎａｌｄ，Ｊ．Ｇｅｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１３０：２０３（１９８４
）を参照されたい）。実際、プロトプラスト形質転換などの形質転換、会合、形質導入及
びプロトプラスト融合のような方法は、周知であり、本発明での使用に適している。形質
転換の方法は、本発明のプロテアーゼ変異体をコードする核酸を含むＤＮＡコンストラク
ト又はベクターを宿主細胞の中に導入するために使用される。バチルス細胞を形質転換す
るための当該技術分野において既知の方法としては、部分的に相同性の常在性プラスミド
を保有するコンピテント細胞によりドナープラスミドを取り込むことを伴うプラスミドマ
ーカーレスキュー形質転換のような方法が挙げられる（Ｃｏｎｔｅｎｔｅ  ｅｔ  ａｌ．
，Ｐｌａｓｍｉｄ  ２：５５５〜５７１（１９７９）；Ｈａｉｍａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏ
ｌ．Ｇｅｎ．Ｇｅｎｅｔ．２２３：１８５〜１９１（１９９０）；Ｗｅｉｎｒａｕｃｈ  
ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．１５４：１０７７〜１０８７（１９８３）；及
びＷｅｉｎｒａｕｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．１６９：１２０５〜１
２１１（１９８７））。この方法では、組み込みドナープラスミドは、染色体性形質転換
を模倣するプロセスにおいて常在「ヘルパー」プラスミドの相同領域と組み換えを行う。
【０２１３】
一般に使用される方法に加えて、一態様では、宿主細胞は、本発明のプロテアーゼ変異
体をコードする核酸を含むＤＮＡコンストラクト又はベクターで直接形質転換される（す
なわち、中間体細胞は、宿主細胞の中への導入に先立ってＤＮＡコンストラクト又はベク
ターを増幅するために又は他のプロセスのために使用されない）。本発明のＤＮＡコンス
トラクト又はベクターを宿主細胞に導入することは、プラスミド又はベクターに挿入せず
に核酸配列（例えば、ＤＮＡ配列）を宿主細胞の中に導入するための当該技術分野で既知
の物理的及び化学的方法を含む。このような方法としては、塩化カルシウム沈殿、電気穿
孔法、ネイキッドＤＮＡ、リポソーム及びこれらに類するものが挙げられるがこれらに限
定されない。追加の態様では、ＤＮＡコンストラクト又はベクターは、プラスミドに挿入
されず、プラスミドと同時形質転換される。更なる態様では、選択マーカーは、当該技術
分野において既知の方法により改変されたバチルス株から除去される（Ｓｔａｈｌ  ｅｔ
ａｌ．，Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．１５８：４１１〜４１８（１９８４）；及びＰａｌ
ｍｅｒｏｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ  ２４７：２５５〜２６４（２０００）を参照され
たい）。
【０２１４】
一態様では、本発明の形質転換された細胞は、従来の栄養培地で培養される。温度、ｐ
Ｈ及びこれらに類するものなどの好適な特定の培養条件は、当業者に既知である。加えて
、一部の培養条件は、Ｈｏｐｗｏｏｄ（２０００）Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｓｔｒｅｐｔｏ
ｍｙｃｅｓ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，Ｊｏｈｎ  Ｉｎｎｅｓ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ，Ｎｏｒ
ｗｉｃｈ  ＵＫ；Ｈａｒｄｗｏｏｄ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９０）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  
Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  Ｂａｃｉｌｌｕｓ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌ
ｅｙなどの科学文献及びＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔ
ｉｏｎ（ＡＴＣＣ）からの科学文献に見出され得る。一態様では、本発明は、本発明の少
なくとも１つのプロテアーゼ変異体又は本発明の少なくとも１つの核酸を含む培養物（例
えば、細胞培養物）を提供する。本発明の少なくとも１つの核酸、ベクター又はＤＮＡコ
ンストラクトを含む組成物も提供される。
【０２１５】
本発明の少なくとも１つのプロテアーゼ変異体をコードする少なくとも１つのポリヌク
レオチド配列で形質転換された宿主細胞は、親プロテアーゼの発現を許容する条件下で好
適な栄養培地内で培養され得、その後、得られたプロテアーゼは培養物から回収される。
これらの細胞を培養するために使用される培地は、適切なサプリメントを含有する最少培
地又は複合培地などの宿主細胞の増殖に好適な任意の従来の培地を含む。好適な培地は、
商業的供給業者から入手可能であり、あるいは、公表されている処方（例えば、Ａｍｅｒ
ｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎのカタログ）に従って調製
してもよい。細胞により生産されたプロテアーゼは、例えば、遠心分離又は濾過による培
地からの宿主細胞の分離、塩析（例えば、硫酸アンモニウム）手法による上清又は濾液の
タンパク質性成分の沈殿、クロマトグラフィー精製（例えば、イオン交換、ゲル濾過、親
和性など）が挙げられるがこれらに限定されない従来手順により培養培地から回収され得
る。本発明のプロテアーゼ変異体を回収又は精製するのに好適な任意の方法を使用するこ
とができる。
【０２１６】
一態様では、組み換え宿主細胞により生産されるプロテアーゼ変異体は、培養培地中に
分泌される。精製を容易にするドメインをコードする核酸配列は、可溶性タンパク質の精
製を容易にするために使用され得る。プロテアーゼ変異体をコードするポリヌクレオチド
配列を含むベクター又はＤＮＡコンストラクトは、プロテアーゼ変異体の生産を容易にす
るために精製を容易にするドメインをコードする核酸配列を更に含んでもよい（例えば、
Ｋｒｏｌｌ，Ｄ．Ｊ．ｅｔ  ａｌ．，ＤＮＡ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１２：４４１〜５３
（１９９３）を参照されたい）。このような精製を容易にするドメインとしては、例えば
、固定化金属上での精製を可能にするヒスチジン−トリプトファンモジュールなどの金属
キレート化ペプチド（Ｐｏｒａｔｈ  Ｊ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｘｐｒ．Ｐｕｒｉｆ．３
：２６３〜２８１（１９９２））、固定化免疫グロブリン上での精製を可能にするプロテ
インＡドメイン、及びＦＬＡＧＳ伸長／親和性精製システムにおいて利用されるドメイン
（Ｉｍｍｕｎｅｘ  Ｃｏｒｐ．（Ｓｅａｔｔｌｅ，ＷＡ））が挙げられるがこれらに限定
されない。精製ドメイン非相同タンパク質との間にＦａｃｔｏｒ  ＸＡ又はエンテロキナ
ーゼ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ））などの切断可能なリンカー
配列を含ませることも、精製を容易にするために使用を見出される。
【０２１７】
本発明のプロテアーゼ変異体などの酵素の酵素活性を検出及び測定するためのアッセイ
は、周知である。例えば、本発明のプロテアーゼ変異体などのプロテアーゼの活性を検出
及び測定するための様々なアッセイも、当業者に既知である。特に、２８０ｎｍでの吸光
度として又はフォーリン法を用いて比色的に測定される、カゼイン又はヘモグロビンから
の酸に可溶なペプチドの放出に基づくアッセイは、プロテアーゼ活性を測定するために利
用可能である（例えば、Ｂｅｒｇｍｅｙｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，「Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｏｆ  
ＥｎＺｙｍａｔｉｃ  Ａｎａｌｙｓｉｓ」  Ｖｏｌ．５，Ｐｅｐｔｉｄａｓｅｓ，Ｐｒｏ
ｔｅｉｎａｓｅｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ，Ｖｅｒｌａｇ  Ｃｈｅ
ｍｉｅ，Ｗｅｉｎｈｅｉｍ（１９８４）を参照されたい）。他の代表的アッセイは、発色
基質の可溶化を伴う（例えば、Ｗａｒｄ，「Ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ，」ｉｎ  Ｆｏｇａ
ｒｔｙ（ｅｄ．）．Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ  ＥｎＺｙｍｅｓ  ａｎｄ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏ
ｌｏｇｙ，Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｌｏｎｄｏｎ，（１９８３），ｐｐ．２５
１〜３１７を参照されたい）。他の代表的アッセイとしては、スクシニル−Ａｌａ−Ａｌ
ａ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−パラニトロアニリドアッセイ（ＳＡＡＰＦｐＮＡ）及び２，４，６
−トリニトロベンゼンスルホン酸ナトリウム塩アッセイ（ＴＮＢＳ  アッセイ）が挙げら
れるがこれらに限定されない。当業者に既知の数多くの追加の参照文献は、好適な方法を
提供する（例えば、Ｗｅｌｌｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．
１１：７９１１〜７９２５（１９８３）；Ｃｈｒｉｓｔｉａｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａ
ｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２２３：１１９〜１２９（１９９４）；及びＨｓｉａ  ｅｔ  
ａｌ．，Ａｎａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．２４２：２２１〜２２７（１９９９）を参照された
い）。
【０２１８】
様々な方法が、宿主細胞内の成熟型プロテアーゼ（例えば、本発明の成熟型プロテアー
ゼ変異体）の生産レベルを測定するために使用することができる。このような方法として
は、例えば、プロテアーゼに特異的なポリクローナル又はモノクローナル抗体を利用する
方法が挙げられるがこれに限定されない。代表的な方法としては、例えば、酵素結合免疫
吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、放射免疫アッセイ（ＲＩＡ）、蛍光免疫アッセイ（ＦＩＡ
）及び蛍光活性化細胞選別法（ＦＡＣＳ）が挙げられるがこれらに限定されない。これら
及び他のアッセイは、当該技術分野において周知である（例えば、Ｍａｄｄｏｘ  ｅｔ  
ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１５８：１２１１（１９８３）を参照されたい）。
【０２１９】
別の態様では、本発明は、本発明の成熟型プロテアーゼ変異体を製造又は生産するため
の方法を提供する。成熟型プロテアーゼ変異体は、シグナルペプチドもプロペプチド配列
も含まない。一部のこのような方法は、例えば、枯草菌（Bacillus subtilis）細胞など
の例えば、バチルス種細胞のような組み換え細菌宿主細胞において本発明のプロテアーゼ
変異体を作製又は製造することを含む。一態様では、本発明は、本発明のプロテアーゼ変
異体の製造方法を提供し、この方法は、プロテアーゼ変異体の生産を促進する条件下で本
発明のプロテアーゼ変異体をコードする核酸を含む組み換え発現ベクターを含む組み換え
宿主細胞を培養することを含む。一部のこのような方法は、培養物からプロテアーゼ変異
体を回収することを更に含む。
【０２２０】
一態様では、本発明は、本発明のプロテアーゼ変異体の生産方法を提供し、この方法は
、（ａ）本発明のプロテアーゼ変異体をコードする核酸を含む組み換え発現ベクターを細
胞（例えば、枯草菌（Bacillus subtilis）などの細菌細胞）集団に導入すること、及び
（ｂ）発現ベクターによりコードされるプロテアーゼ変異体の生産を促進する条件下で培
養培地において細胞を培養すること、を含む。一部のこのような方法は、（ｃ）細胞から
又は培養培地からプロテアーゼ変異体を単離すること、を更に含む。
【０２２１】
組み換え体の生産に加え、本発明のプロテアーゼ変異体ポリペプチドは、固相技術を用
いる直接ペプチド合成により製造してもよい（例えば、Ｓｔｅｗａｒｔ  ｅｔ  ａｌ．（
１９６９）Ｓｏｌｉｄ−Ｐｈａｓｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｗ．Ｈ．Ｆ
ｒｅｅｍａｎ  Ｃｏ，Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ；Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ（１９６３）
Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ  ８５：２１４９〜２１５４を参照されたい）。ペプチド合
成は、手動又は自動技術を用いて行われ得る。自動合成は、例えば、製造者により提供さ
れる指示に従ってＡｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  ４３１Ａ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  
ＳｙｎｔｈｅｓｉＺｅｒ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ（Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，Ｃａｌ
ｉｆ．））を使用して達成され得る。例えば、サブ配列は、別個に化学合成され、化学的
方法を用いて連結されて、プロテアーゼ変異体又はその機能性断片をもたらしてもよい。
別の方法としては、このような変異体ポリペプチド配列は、ポリペプチドの製造に特化し
ている任意の数の企業に発注してもよい。最も一般的には、本発明のポリペプチドは、例
えば、上記及び実施例に記載のように、コードしている核酸を発現させ、ポリペプチドを
回収することにより製造される。
【０２２２】
別の態様では、本発明は、プロテアーゼ変異体の生産方法を提供し、この方法は、変異
体の生産を促進する条件下で本発明の組み換え宿主細胞を培養することを含み、上記宿主
細胞は、本発明の少なくとも１つの核酸を含む発現ベクターを含む。この方法は、培養物
から変異体を回収することを更に含んでもよい。
【０２２３】
別の態様では、本発明は、プロテアーゼ変異体の製造方法を含み、この方法は、（ａ）
本発明の組み換え発現ベクターを細胞集団に導入すること、及び（ｂ）発現ベクターによ
りコードされるスブチリシン変異体の生産を促進する条件下で培養培地において細胞を培
養すること、を含む。この方法は、（ｃ）細胞から又は培養培地から変異体を単離するこ
と、を更に含む。
【０２２４】
別の態様では、本発明は、セリンプロテアーゼ変異体をコードする核酸を含む発現ベク
ターで宿主細胞を形質転換すること、及び、セリンプロテアーゼ変異体の生産に好適な条
件下で形質転換した宿主細胞を培養すること、を含む、バチルスセリンプロテアーゼのセ
リンプロテアーゼ変異体の製造方法を提供する。一態様では、この方法は、生産されたセ
リンプロテアーゼ変異体を回収する工程を更に含む。一態様では宿主細胞はバチルス細胞
であり、これらの態様の部分集合ではバチルス細胞は枯草菌（B. subtilis）細胞である
。更に、本発明は、布地を含む表面及び／又は物品をセリンプロテアーゼ変異体を含むク
リーニング組成物と接触させる工程を含む、クリーニング方法を提供する。一部の代替的
方法では、本発明は、食卓食器を含む表面及び／又は物品をセリンプロテアーゼ変異体を
含むクリーニング組成物と接触させる工程を含む、クリーニング方法を提供する。
【０２２５】
別の態様では、本発明は、野生型スブチリシンプロテアーゼを同定するための方法を提
供し、上記スブチリシンプロテアーゼは、次のアミノ酸：アミノ酸位置２４におけるグリ
シン若しくはアルギニン、アミノ酸位置５３におけるグリシン、アミノ酸位置７８におけ
るアスパラギン、アミノ酸位置９７におけるアラニン、アミノ酸位置１０１におけるアス
パラギン、アミノ酸位置１２８におけるアラニン若しくはセリン、及び／又はアミノ酸位
置２１７におけるロイシン若しくはグルタミン、を含むアミノ酸配列を含み、ここで、上
記アミノ酸位置は、配列番号２に記載ＢＰＮ’のアミノ酸配列におけるアミノ酸位置と対
応させることにより番号付けされ、上記方法は、ａ）少なくとも１つの野生型スブチリシ
ンプロテアーゼ若しくは野生型スブチリシンプロテアーゼのライブラリを含むサンプルを
供給すること又は野生型スブチリシンプロテアーゼをコードする１つ以上のＤＮＡ配列を
含むＤＮＡサンプルを提供すること、及びｂ）野生型プロテアーゼをコードする野生型ス
ブチリシンプロテアーゼ又はＤＮＡ配列を同定すること、を含む。
【０２２６】
第十二態様では、本発明は、本発明の第十又は第十一態様の核酸を少なくとも１つ含む
発現ベクターを提供する。本発明の第十二態様による発現ベクターは、プロモーターに作
用可能に連結され得る。このような発現ベクターは、単離又は精製された形態である。
【０２２７】
第十三態様では、本発明は、（ａ）本発明の第十若しくは第十一態様の核酸、又は、本
発明の第十二態様の発現ベクター、を含む、組み換え宿主細胞を提供する。本発明の第十
三態様の組み換え宿主細胞は細菌細胞であってもよく、選択的にバチルス細胞であっても
よい。本発明の第十三態様の組み換え宿主細胞は、枯草菌（Bacillus subtilis）細胞で
あってもよい。
【０２２８】
第十四態様では、本発明は、（ａ）本発明の第十若しくは第十一態様の核酸、又は、本
発明の第十二態様の発現ベクター、を含む、細胞培養物を提供する。
【０２２９】
第十五態様では、本発明は、プロテアーゼ変異体の製造方法を提供し、この方法は、変
異体の生産を促進する条件下で本発明の第十三態様の組み換え宿主細胞を培養することを
含む。本発明の第十五態様による方法は、培養物から変異体を単離又は回収することを更
に含んでもよい。
【０２３０】
第十六態様では、本発明は、プロテアーゼ変異体の製造方法を提供し、この方法は、（
ａ）本発明の第十二態様の組み換え発現ベクターを細胞集団に導入すること、及び（ｂ）
発現ベクターによりコードされるプロテアーゼ変異体の生産を促進する条件下で培養培地
において細胞を培養すること、を含む。本発明の第十六態様による方法は、（ｃ）細胞か
ら又は培養培地から変異体を単離又は回収すること、を更に含んでもよい。
【０２３１】
本発明の組成物
本発明は、本発明の少なくとも１つのポリペプチド（例えば、少なくとも１つのプロテ
アーゼ変異体）を含む組成物を含む。本発明のポリペプチドは、パートＩ実施例及びパー
トＩＩ実施例を含む下記及び上記に説明されている。このような組成物は、少なくとも１
つの賦形剤、担体、添加剤成分、又は他の置換基、構成成分又は物質を含んでもよい。
【０２３２】
例えば、一態様では、本発明は、少なくとも１つのプロテアーゼ変異体と少なくとも１
つの賦形剤、担体、添加剤成分又は他の置換基、構成成分又は物質とを含む組成物を含む
。このような少なくとも１つのプロテアーゼ変異体は、パートＩ実施例において挙げられ
るがこれらに限定されない本明細書に記載のもののうちのいずれか１つであってもよい。
このような少なくとも１つのプロテアーゼ変異体は、ＢＰＮ’プロテアーゼ変異体であっ
てもよい。例えば、本発明の組成物は、ＢＰＮ’−ｖ３６（配列番号６）若しくはＢＰＮ
’−ｖ３（配列番号４）などのＢＰＮ’プロテアーゼ変異体、又は、本明細書若しくはパ
ートＩ実施例２〜２３に記載の任意のプロテアーゼ変異体であってもよい。このような組
成物は布地ケア製品及びホームケア製品であってもよく、又は、布地ケア組成物及びホー
ムケア組成物であってもよい。別の方法としては、このような組成物は布地ケア製品及び
ホームケア製品であってもよく、又は、布地ケア組成物及びホームケア組成物であっても
よい。
【０２３３】
このような組成物は、（ＢＰＮ’プロテアーゼ変異体に加えて）少なくとも１つのパー
トＩＩ実施例に記載のシリーズＩ  ＧＧ３６プロテアーゼ変異体などの少なくとも１つの
ＧＧ３６プロテアーゼ変異体を更に含んでもよい。このような組成物は、本明細書の他箇
所に記載のような様々な用途に有用である。
【０２３４】
第十七態様では、本発明は、本発明の第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第
八又は第九態様の変異体（又は第三態様にあるようなポリペプチド）を含む組成物を提供
する。本発明の第十七態様による組成物は、本明細書の他箇所により詳細に記載されてい
るように添加剤成分又は担体を含んでもよい。本発明の第十七態様による組成物は、少な
くとも１つのビルダ−及び／又は少なくとも１つの界面活性剤を含んでもよい。本発明の
第十七態様による組成物は、リン酸塩を含んでもよく、又は、リン酸塩を含まなくてもよ
い。
【０２３５】
本発明の第十七態様による組成物は、クリーニング組成物又は洗剤組成物であり得る。
本発明の第十七態様による組成物は、布地ケア製品又はホームケア製品であり得る。本発
明の第十七態様による組成物は、布地ケア製品又はホームケア製品でなくてもよい。本発
明の第十七態様による組成物は、布地ケア製品又はホームケア製品である、クリーニング
組成物又は洗剤組成物であり得る。本発明の第十七態様による組成物は、布地ケア製品又
はホームケア製品ではない、クリーニング組成物又は洗剤組成物であり得る。
【０２３６】
本発明の第十七態様による組成物は、１、２、３、４、５又はそれ以上の追加の酵素を
更に含んでもよい。このような追加の酵素は、ヘミセルラーゼ、セルラーゼ、アミラーゼ
、ペルオキシダーゼ、プロテアーゼ、キシラナーゼ、リパーゼ、ホスホリパーゼ、エステ
ラーゼ、クチナーゼ、ペクチナーゼ、ペクチン酸リアーゼ、マンナナーゼ、ケラチナーゼ
、レダクターゼ、オキシダーゼ、フェノールオキシダーゼ、リポキシゲナーゼ、リグニナ
ーゼ、プルラナーゼ、タンナーゼ、ペントサナーゼ、マラナーゼ、β−グルカナーゼ、ア
ラビノシターゼ、ヒアルロニダーゼ、コンドロイチナーゼ及びラッカーゼからなる群から
選択される追加の酵素からなる群から選択され得る。
【０２３７】
本発明の第十七態様による追加の酵素は、例えば、シリーズＩ  ＧＧ３６プロテアーゼ
変異体などの、タンパク質分解活性を有するＧＧ３６プロテアーゼ変異体であってもよく
、このシリーズＩ  ＧＧ３６プロテアーゼ変異体は、配列番号７５５のスブチリシンバチ
ルス・レンタス（Bacillus lentus）ＧＧ３６に対して少なくとも６０％、７０％、８０
％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９
８％の配列同一性を有するアミノ酸配列と、Ａ１Ｒ，Ｑ２Ｓ，Ｖ４Ｒ，Ｖ４Ｓ，Ｓ９Ａ，
Ｒ１０Ｓ，Ｐ１４Ｋ，Ａ１６Ｓ，Ｈ１７Ｒ，Ｎ１８Ｒ，Ｇ２０Ｒ，Ｔ２２Ａ，Ｔ２２Ｒ，
Ｓ２４Ｒ，Ｓ２４Ｗ，Ｇ２５Ｒ，Ｇ２５Ｖ，Ｖ２６Ｆ，Ｌ４２Ｉ，Ｎ４３Ｒ，Ｎ４３Ａ，
Ｇ４６Ｒ，Ｐ５２Ｆ，Ｐ５２Ｅ，Ｐ５２Ｎ，Ｔ５７Ｒ，Ｑ５９Ａ，Ｎ６２Ｅ，Ｎ６２Ｑ，
Ｖ６８Ａ，Ｖ６８Ｃ，Ｔ７１Ｇ，Ｉ７２Ｃ，Ａ７４Ｃ，Ｌ７５Ａ，Ｌ７５Ｆ，Ｌ７５Ｒ，
Ｎ７６Ｄ，Ｓ７８Ｒ，Ｌ８２Ｒ，Ｐ８６Ｗ，Ｅ８９Ｐ，Ｅ８９Ｔ，Ｅ８９Ｇ，Ｅ８９Ｈ，
Ｅ８９Ｉ，Ｅ８９Ｖ，Ｅ８９Ｗ，Ｙ９１Ｎ，Ｋ９４Ｎ，Ｇ１００Ｓ，Ｓ１０１Ａ，Ｓ１０
１Ｎ，Ｓ１０１Ｇ，Ｓ１０１Ｄ，Ｓ１０３Ｇ，Ｓ１０３Ｎ，Ｖ１０４Ｌ，Ｖ１０４Ｉ，Ｓ
１０６Ｖ，Ｓ１０６Ｇ，Ａ１０８Ｉ，Ｌ１１１Ｖ，Ｅ１１２Ｖ，Ｇ１１５Ｋ，Ｇ１１５Ｒ
，Ｎ１１７Ｆ，Ｇ１１８Ｉ，Ｖ１２１Ｆ，Ｓ１２８Ｄ，Ｓ１２８Ｆ，Ｓ１２８Ｌ，Ｓ１２
８Ｎ，Ｐ１２９Ｅ，Ｓ１４４Ｒ，Ｌ１４８Ｉ，Ａ１５８Ｅ、Ｇ１５９Ｅ，Ｓ１６０Ｄ，Ｓ
１６６Ｄ，Ｎ１８５Ｅ，Ｎ１８５Ｉ，Ｒ１８６Ｈ，Ｓ１８８Ｅ，Ｓ１８８Ｄ，Ｄ１９７Ｆ
，Ｖ２０３Ｅ，Ｙ２０９Ｓ，Ｙ２０９Ｎ，Ｙ２０９Ｆ，Ｙ２０９Ｔ，Ｙ２０９Ｅ，Ｙ２０
９Ｈ，Ｙ２０９Ｇ，Ｐ２１０Ｒ，Ｓ２１２Ｉ，Ｓ２１２Ｆ，Ｙ２１４Ｆ，Ａ２１５Ｎ，Ａ
２１５Ｄ，Ａ２１５Ｅ，Ｌ２１７Ｅ，Ｌ２１７Ｎ，Ｔ２２４Ａ，Ａ２３０Ｅ，Ａ２３１Ｉ
，Ｑ２３６Ｆ，Ｎ２３８Ｒ，Ｎ２３８Ｋ，Ｐ２３９Ｋ，Ｐ２３９Ｇ，Ｐ２３９Ｒ，Ｐ２３
９Ｓ，Ｗ２４１Ｒ，Ｓ２４２Ｒ，Ｓ２４２Ｌ，Ｎ２４３Ｒ，Ｖ２４４Ｒ，Ｎ２４８Ｉ，Ｎ
２４８Ｖ，Ｈ２４９Ｒ，Ｌ２５０Ｉ，Ｎ２５２Ｒ，Ｔ２５３Ｒ，Ｌ２６２Ｄ，Ｙ２６３Ｆ
，Ｓ２６５Ｆ，Ｌ２６７Ｖ，Ｌ２６７Ｎ、Ｎ２６９Ｉ，Ｎ２６９Ｒ，Ｅ２７１Ｆ，Ｅ２７
１Ｉ，Ｅ２７１Ｈ，Ｅ２７１Ｐ，Ｅ２７１Ｔ，Ｅ２７１Ｖ，Ｅ２７１Ｌ，及びＡ２７２Ｆ
，からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸置換と、を含み得、ここで、変異
体の各アミノ酸位置は、配列番号２に記載のバチルス・アミロリケファシエンス（Bacill
us amyloliquefaciens）スブチリシンＢＰＮ’プロテアーゼのアミノ酸配列におけるアミ
ノ酸位置に対応させることにより番号付けされる。追加の酵素（例えば、本明細書に記載
されるようなシリーズＩ  Ｇ３６プロテアーゼ変異体のようなプロテアーゼなど）を含む
本発明の第十七態様による組成物は、布地ケア製品及びホームケア製品であってもよい。
別の方法としては、このような組成物は、布地ケア製品及びホームケア製品でなくてもよ
い。
【０２３８】
本発明の第十七態様による組成物は、配列番号７５５のスブチリシンバチルス・レンタ
ス（Bacillus lentus）ＧＧ３６に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、
９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％
の配列同一性を有するアミノ酸配列と、Ｔ０２２Ｒ−Ｓ０２４Ｒ，Ｓ００９Ａ−Ｅ２７１
Ｌ，Ｎ０１８Ｒ−Ｗ２４１Ｒ，Ｎ０１８Ｒ−Ｇ１１５Ｒ，Ｎ０４３Ｒ−Ｈ２４９Ｒ，Ｇ０
２０Ｒ−Ｈ２４９Ｒ，Ｖ００４Ｒ−Ｈ２４９Ｒ，Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ，Ｎ０１８Ｒ−
Ｈ２４９Ｒ，Ｓ００９Ａ−Ｇ０２０Ｒ，Ｇ０２０Ｒ−Ｗ２４１Ｒ，Ｓ００９Ａ−Ｓ０７８
Ｒ，Ｇ０２０Ｒ−Ｇ１１５Ｒ，Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ，Ｓ０２４Ｒ−Ｓ２４２Ｒ，Ｔ０
２２Ｒ−Ｇ１１５Ｒ，Ｎ０１８Ｒ−Ｎ０４３Ｒ，Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｒ，Ｎ０１８Ｒ−
Ｓ２４２Ｒ，Ｓ２４２Ｒ−Ｎ２６９Ｒ，Ｎ０１８Ｒ−Ｖ２４４Ｒ，Ｓ０２４Ｒ−Ｎ２６９
Ｒ，Ｇ０２０Ｒ−Ｅ２７１Ｌ，Ｓ０２４Ｒ−Ｅ２７１Ｌ，Ｖ００４Ｒ−Ｓ００９Ａ，Ｇ０
２０Ｒ−Ｎ２６９Ｒ，Ａ００１Ｒ−Ｓ０２４Ｒ，Ｖ２４４Ｒ−Ｅ２７１Ｌ，Ｓ００９Ａ−
Ｎ０１８Ｒ，Ｗ２４１Ｒ−Ｅ２７１Ｌ，Ｖ００４Ｒ−Ｓ０２４Ｒ，Ｓ００９Ａ−Ｈ２４９
Ｒ，Ｓ００９Ａ−Ｔ０２２Ｒ，Ｎ０６２Ｅ−Ｐ１２９Ｅ，Ｎ０６２Ｅ−Ｇ１５９Ｅ，Ａ０
１６Ｓ−Ｌ１４８Ｉ，Ａ１５８Ｅ−Ｈ２４９Ｒ，Ａ０１６Ｓ−Ｎ０６２Ｅ，Ｌ１１１Ｖ−
Ｓ１８８Ｄ，Ｔ０２２Ａ−Ｎ０６２Ｅ，Ｎ０６２Ｅ−Ｌ１４８Ｉ，Ｔ０２２Ａ−Ｐ１２９
Ｅ，Ｎ０６２Ｅ−Ｅ２７１Ｆ，Ｎ０６２Ｅ−Ａ１５８Ｅ，Ａ０１６Ｓ−Ｇ１５９Ｅ，Ｎ０
６２Ｅ−Ｒ１８６Ｈ，Ｓ１２８Ｎ−Ｇ１５９Ｅ，Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１８８Ｄ，Ｎ０６２Ｅ−
Ｓ１２８Ｎ，Ｌ１４８Ｉ−Ｇ１５９Ｅ，Ｓ１０３Ｇ−Ａ１５８Ｅ，Ｌ１１１Ｖ−Ｇ１５９
Ｅ，Ａ１５８Ｅ−Ｅ２７１Ｆ，Ａ０１６Ｓ−Ｓ１８８Ｄ，Ｔ０２２Ａ−Ｌ１１１Ｖ，Ｓ１
２８Ｎ−Ａ１５８Ｅ，Ａ０１６Ｓ−Ａ１５８Ｅ，Ｖ１０４Ｌ−Ａ１５８Ｅ，Ｓ１２８Ｎ−
Ｒ１８６Ｈ，Ｇ１５９Ｅ−Ｙ２０９Ｅ，Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１０１Ａ，Ｌ１１１Ｖ−Ｙ２０９
Ｅ，Ｌ１４８Ｉ−Ｓ１８８Ｄ，Ｓ１０１Ａ−Ｙ２０９Ｅ，Ｔ０２２Ａ−Ｓ１８８Ｄ，Ａ０
１６Ｓ−Ｔ０２２Ａ，Ｓ１２８Ｎ−Ｐ１２９Ｅ，Ａ０１６Ｓ−Ｙ２０９Ｅ，Ａ０１６Ｓ−
Ｓ１２８Ｎ，Ｔ０２２Ａ−Ｅ０８９Ｐ，Ｓ１２８Ｎ−Ｙ２０９Ｅ，Ｅ０８９Ｐ−Ａ１５８
Ｅ，Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１０３Ｇ，Ｒ１８６Ｈ−Ｅ２７１Ｆ，Ａ０１６Ｓ−Ｐ１２９Ｅ，Ｅ０
８９Ｐ−Ｇ１５９Ｅ，Ｌ１１１Ｖ−Ｈ２４９Ｒ，Ｓ１０１Ａ−Ｐ１２９Ｅ，Ｌ１４８Ｉ−
Ｙ２０９Ｅ，Ｔ０２２Ａ−Ｇ１５９Ｅ，Ｐ１２９Ｅ−Ｈ２４９Ｒ，Ｐ１２９Ｅ−Ｙ２０９
Ｅ，Ｖ１０４Ｌ−Ｐ１２９Ｅ，Ｓ１２８Ｎ−Ｓ１８８Ｄ，Ｌ１１１Ｖ−Ａ１５８Ｅ，Ｔ０
２２Ａ−Ａ１５８Ｅ，Ｎ０６２Ｅ−Ｙ２０９Ｅ，Ｎ０６２Ｅ−Ｈ２４９Ｒ，Ｓ１０１Ａ−
Ｒ１８６Ｈ，Ｅ０８９Ｐ−Ｐ１２９Ｅ，Ｐ１２９Ｅ−Ｅ２７１、Ｔ２２Ａ−Ｌ１１１Ｖ−
Ｇ１５９Ｅ，Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ｇ−Ｖ１０４Ｌ−Ｙ２０９Ｅ，Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３
Ｇ−Ｖ１０４Ｌ−Ｇ１５９Ｅ，Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ｇ−Ｖ１０４Ｌ−Ｓ１８８Ｄ，Ｓ１
０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ，Ｔ２２Ａ−Ｓ１０３Ｇ−Ｇ１５９Ｅ，Ｔ
２２Ａ−Ｓ１２８Ｎ−Ｅ２７１Ｆ−Ｙ２０９Ｅ，Ｔ２２Ａ−Ｙ２０９Ｅ−Ｅ２７１Ｆ，Ｔ
２２Ａ−Ｓ１０１Ａ−Ｙ２０９Ｅ，Ｓ１０１Ａ−Ｙ２０９Ｅ−Ｅ２７１Ｆ，Ｔ２２Ａ−Ｌ
１１１Ｖ−Ｓ１２８Ｎ，Ｔ２２Ａ−Ｓ１０１Ａ−Ｇ１５９Ｅ，Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ｇ−
Ｖ１０４Ｌ，Ｔ２２Ａ−Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ｇ−Ｖ１０４Ｌ，Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ｇ
−Ｖ１０４Ｌ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ，Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ｇ−Ｖ１０
４Ｌ−Ｓ１２８Ｎ，Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２３６Ｈ−Ｑ
２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｎ２５２Ｋ，Ｓ１０１Ｇ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ
−Ｑ２３６Ｈ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｎ２５２Ｋ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｇ１５
９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２３６Ｈ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｎ２５２Ｋ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ
１０３Ａ−Ｖ１０４Ｌ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２３６Ｈ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｎ２５２Ｋ
，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｌ−Ｇ１５９Ｄ−Ｑ２３６Ｈ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４
８Ｄ−Ｎ２５２Ｋ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｌ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ
２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｎ２５２Ｋ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｌ−Ｇ１５９Ｄ
−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２３６Ｈ−Ｎ２４８Ｄ−Ｎ２５２Ｋ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０
４Ｌ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２３６Ｈ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２５２Ｋ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ
１０３Ａ−Ｖ１０４Ｌ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２３６Ｈ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ
，Ｎ６２Ｅ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５
Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ，Ｎ６２Ｅ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５
９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ，Ｔ２２Ａ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１
０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ，
Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８
Ｄ−Ｓ２４Ｒ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４
５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｔ２５３Ｒ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ａ
２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ，Ｔ２２Ａ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−
Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ，Ｓ１０１
Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２
４９Ｒ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−
Ｎ２４８Ｄ−Ｎ２３８Ｒ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ａ２３２
Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１
５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−
Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３
Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｎ７６Ｄ，及びＳ
１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ
−Ｅ２７１Ｆ，からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸置換と、を含むシリ
ーズＩ  ＧＧ３６プロテアーゼ変異体を含み得、ここで、変異体の各アミノ酸位置は、配
列番号２に記載のバチルス・アミロリケファシエンス（Bacillus amyloliquefaciens）ス
ブチリシンＢＰＮ’プロテアーゼのアミノ酸配列におけるアミノ酸位置に対応させること
により番号付けされる。このような組成物は布地ケア製品及びホームケア製品であっても
よく、又は、布地ケア組成物及びホームケア組成物であってもよい。別の態様では、この
ような組成物は、布地ケア製品及びホームケア製品又は布地ケア組成物及びホームケア組
成物でなくてもよい。
【０２３９】
本発明の第十七態様による組成物は、配列番号７５５のスブチリシンバチルス・レンタ
ス（Bacillus lentus）ＧＧ３６に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、
９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の配列同
一性を有するアミノ酸配列を含み、Ａ１Ｒ，Ｑ２Ｓ，Ｖ４Ｒ，Ｖ４Ｓ，Ｓ９Ａ，Ｒ１０Ｓ
，Ｐ１４Ｋ，Ａ１６Ｓ，Ｈ１７Ｒ，Ｎ１８Ｒ，Ｇ２０Ｒ，Ｔ２２Ａ，Ｔ２２Ｒ，Ｓ２４Ｒ
，Ｓ２４Ｗ，Ｇ２５Ｒ，Ｇ２５Ｖ，Ｖ２６Ｆ，Ｌ４２Ｉ，Ｎ４３Ｒ，Ｎ４３Ａ，Ｇ４６Ｒ
，Ｐ５２Ｆ，Ｐ５２Ｅ，Ｐ５２Ｎ，Ｔ５７Ｒ，Ｑ５９Ａ，Ｎ６２Ｅ，Ｎ６２Ｑ，Ｖ６８Ａ
，Ｖ６８Ｃ，Ｔ７１Ｇ，Ｉ７２Ｃ，Ａ７４Ｃ、Ｌ７５Ａ，Ｌ７５Ｆ，Ｌ７５Ｒ，Ｎ７６Ｄ
，Ｓ７８Ｒ，Ｌ８２Ｒ，Ｐ８６Ｗ，Ｅ８９Ｐ，Ｅ８９Ｔ，Ｅ８９Ｇ，Ｅ８９Ｈ，Ｅ８９Ｉ
，Ｅ８９Ｖ，Ｅ８９Ｗ，Ｙ９１Ｎ，Ｋ９４Ｎ，Ｇ１００Ｓ，Ｓ１０１Ａ，Ｓ１０１Ｎ，Ｓ
１０１Ｇ，Ｓ１０１Ｄ，Ｓ１０３Ｇ，Ｓ１０３Ｎ，Ｖ１０４Ｌ，Ｖ１０４Ｉ，Ｓ１０６Ｖ
，Ｓ１０６Ｇ，Ａ１０８Ｉ，Ｌ１１１Ｖ，Ｅ１１２Ｖ，Ｇ１１５Ｋ，Ｇ１１５Ｒ，Ｎ１１
７Ｆ，Ｇ１１８Ｉ，Ｖ１２１Ｆ，Ｓ１２８Ｄ，Ｓ１２８Ｆ，Ｓ１２８Ｌ，Ｓ１２８Ｎ，Ｐ
１２９Ｅ，Ｓ１４４Ｒ，Ｌ１４８Ｉ，Ａ１５８Ｅ、Ｇ１５９Ｅ，Ｓ１６０Ｄ，Ｓ１６６Ｄ
，Ｎ１８５Ｅ，Ｎ１８５Ｉ，Ｒ１８６Ｈ，Ｓ１８８Ｅ，Ｓ１８８Ｄ，Ｄ１９７Ｆ，Ｖ２０
３Ｅ，Ｙ２０９Ｓ，Ｙ２０９Ｎ，Ｙ２０９Ｆ，Ｙ２０９Ｔ，Ｙ２０９Ｅ，Ｙ２０９Ｈ，Ｙ
２０９Ｇ，Ｐ２１０Ｒ，Ｓ２１２Ｉ，Ｓ２１２Ｆ，Ｙ２１４Ｆ，Ａ２１５Ｎ，Ａ２１５Ｄ
，Ａ２１５Ｅ，Ｌ２１７Ｅ，Ｌ２１７Ｎ，Ｔ２２４Ａ，Ａ２３０Ｅ，Ａ２３１Ｉ，Ｑ２３
６Ｆ，Ｎ２３８Ｒ，Ｎ２３８Ｋ，Ｐ２３９Ｋ，Ｐ２３９Ｇ，Ｐ２３９Ｒ，Ｐ２３９Ｓ，Ｗ
２４１Ｒ，Ｓ２４２Ｒ，Ｓ２４２Ｌ，Ｎ２４３Ｒ，Ｖ２４４Ｒ，Ｎ２４８Ｉ，Ｎ２４８Ｖ
，Ｈ２４９Ｒ，Ｌ２５０Ｉ，Ｎ２５２Ｒ，Ｔ２５３Ｒ，Ｌ２６２Ｄ，Ｙ２６３Ｆ，Ｓ２６
５Ｆ，Ｌ２６７Ｖ，Ｌ２６７Ｎ，Ｎ２６９Ｉ，Ｎ２６９Ｒ，Ｅ２７１Ｆ，Ｅ２７１Ｉ，Ｅ
２７１Ｈ，Ｅ２７１Ｐ，Ｅ２７１Ｔ，Ｅ２７１Ｖ，Ｅ２７１Ｌ，及びＡ２７２Ｆからなる
群から選択される３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、
１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４又は更には２５個のアミノ酸置
換、選択的にＳ１０３Ａ，Ｇ１５９Ｄ，Ｑ２３６Ｈ，Ｑ２４５Ｒ，Ｎ２４８Ｄ，及びＮ２
５２Ｋ，からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸置換、を含む、シリーズＩ
ＧＧ３６プロテアーゼ変異体を含み得、ここで、変異体の各アミノ酸位置は、配列番号
２に記載のバチルス・アミロリケファシエンス（Bacillus amyloliquefaciens）スブチリ
シンＢＰＮ’プロテアーゼのアミノ酸配列におけるアミノ酸位置に対応させることにより
番号付けされる。このような組成物は布地ケア製品及びホームケア製品であってもよく、
又は、布地ケア組成物及びホームケア組成物であってもよい。別の態様では、このような
組成物は、布地ケア製品及びホームケア製品又は布地ケア組成物及びホームケア組成物で
なくてもよい。
【０２４０】
本発明の第十七態様による組成物は、配列番号７５５のスブチリシンバチルス・レンタ
ス（Bacillus lentus）ＧＧ３６に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、
９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の配列同
一性を有するアミノ酸、並びに（ａ）Ａ１Ｒ，Ｑ２Ｓ，Ｖ４Ｒ，Ｖ４Ｓ，Ｓ９Ａ，Ｒ１０
Ｓ，Ｐ１４Ｋ，Ａ１６Ｓ，Ｔ２２Ａ，Ｔ２２Ｒ，Ｓ２４Ｒ，Ｇ２５Ｖ，Ｖ２６Ｆ，Ｌ４２
Ｉ，Ｐ５２Ｆ，Ｐ５２Ｅ，Ｐ５２Ｎ，Ｎ６２Ｅ，Ｎ６２Ｑ，Ｖ６８Ａ，Ｖ６８Ｃ，Ｔ７１
Ｇ，Ｉ７２Ｃ，Ａ７４Ｃ、Ｌ７５Ａ，Ｌ７５Ｆ，Ｓ７８Ｒ，Ｅ８９Ｐ，Ｅ８９Ｔ，Ｅ８９
Ｇ，Ｅ８９Ｈ，Ｅ８９Ｗ，Ｙ９１Ｎ，Ｋ９４Ｎ，Ｇ１００Ｓ，Ｓ１０１Ａ，Ｓ１０１Ｎ，
Ｓ１０１Ｇ，Ｓ１０１Ｄ，Ｓ１０３Ｇ，Ｓ１０３Ｎ，Ｖ１０４Ｌ，Ｖ１０４Ｉ，Ａ１０８
Ｉ，Ｌ１１１Ｖ，Ｅ１１２Ｖ，Ｇ１１５Ｋ，Ｎ１１７Ｆ，Ｖ１２１Ｆ，Ｓ１２８Ｄ，Ｓ１
２８Ｆ，Ｓ１２８Ｌ，Ｓ１２８Ｎ，Ｐ１２９Ｅ，Ｌ１４８Ｉ，Ａ１５８Ｅ、Ｇ１５９Ｅ，
Ｓ１６０Ｄ，Ｓ１６６Ｄ，Ｎ１８５Ｅ，Ｒ１８６Ｈ，Ｓ１８８Ｅ，Ｓ１８８Ｄ，Ｖ２０３
Ｅ，Ｙ２０９Ｓ，Ｙ２０９Ｎ，Ｙ２０９Ｆ，Ｙ２０９Ｔ，Ｙ２０９Ｅ，Ｙ２０９Ｈ，Ｙ２
０９Ｇ，Ｐ２１０Ｒ，Ｓ２１２Ｉ，Ｓ２１２Ｆ，Ｙ２１４Ｆ，Ａ２１５Ｎ，Ａ２１５Ｄ，
Ａ２１５Ｅ，Ｌ２１７Ｅ，Ｌ２１７Ｎ，Ｔ２２４Ａ，Ａ２３０Ｅ，Ａ２３１Ｉ，Ｑ２３６
Ｆ，Ｎ２３８Ｒ，Ｎ２３８Ｋ，Ｐ２３９Ｋ，Ｐ２３９Ｇ，Ｐ２３９Ｒ，Ｎ２４８Ｖ，Ｈ２
４９Ｒ，Ｌ２５０Ｉ，Ｌ２６２Ｄ，Ｙ２６３Ｆ，Ｓ２６５Ｆ，Ｌ２６７Ｖ，Ｌ２６７Ｎ、
Ｎ２６９Ｉ，Ｎ２６９Ｒ，Ｅ２７１Ｆ，Ｅ２７１Ｉ，Ｅ２７１Ｈ及びＡ２７２Ｆ，からな
る群から選択される２つ以上の置換、並びに／又は（ｂ）Ｎ０６２Ｅ−Ｐ１２９Ｅ，Ｎ０
６２Ｅ−Ｇ１５９Ｅ，Ａ０１６Ｓ−Ｌ１４８Ｉ，Ａ１５８Ｅ−Ｈ２４９Ｒ，Ａ０１６Ｓ−
Ｎ０６２Ｅ，Ｌ１１１Ｖ−Ｓ１８８Ｄ，Ｔ０２２Ａ−Ｎ０６２Ｅ，Ｎ０６２Ｅ−Ｌ１４８
Ｉ，Ｔ０２２Ａ−Ｐ１２９Ｅ，Ｎ０６２Ｅ−Ｅ２７１Ｆ，Ｎ０６２Ｅ−Ａ１５８Ｅ，Ａ０
１６Ｓ−Ｇ１５９Ｅ，Ｎ０６２Ｅ−Ｒ１８６Ｈ，Ｓ１２８Ｎ−Ｇ１５９Ｅ，Ｎ０６２Ｅ−
Ｓ１８８Ｄ，Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１２８Ｎ，Ｌ１４８Ｉ−Ｇ１５９Ｅ，Ｓ１０３Ｇ−Ａ１５８
Ｅ，Ｌ１１１Ｖ−Ｇ１５９Ｅ，Ａ１５８Ｅ−Ｅ２７１Ｆ，Ａ０１６Ｓ−Ｓ１８８Ｄ，Ｔ０
２２Ａ−Ｌ１１１Ｖ，Ｓ１２８Ｎ−Ａ１５８Ｅ，Ａ０１６Ｓ−Ａ１５８Ｅ，Ｖ１０４Ｌ−
Ａ１５８Ｅ，Ｓ１２８Ｎ−Ｒ１８６Ｈ，Ｇ１５９Ｅ−Ｙ２０９Ｅ，Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１０１
Ａ，Ｌ１１１Ｖ−Ｙ２０９Ｅ，Ｌ１４８Ｉ−Ｓ１８８Ｄ，Ｓ１０１Ａ−Ｙ２０９Ｅ，Ｔ０
２２Ａ−Ｓ１８８Ｄ，Ａ０１６Ｓ−Ｔ０２２Ａ，Ｓ１２８Ｎ−Ｐ１２９Ｅ，Ａ０１６Ｓ−
Ｙ２０９Ｅ，Ａ０１６Ｓ−Ｓ１２８Ｎ，Ｔ０２２Ａ−Ｅ０８９Ｐ，Ｓ１２８Ｎ−Ｙ２０９
Ｅ，Ｅ０８９Ｐ−Ａ１５８Ｅ，Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１０３Ｇ，Ｒ１８６Ｈ−Ｅ２７１Ｆ，Ａ０
１６Ｓ−Ｐ１２９Ｅ，Ｅ０８９Ｐ−Ｇ１５９Ｅ，Ｌ１１１Ｖ−Ｈ２４９Ｒ，Ｓ１０１Ａ−
Ｐ１２９Ｅ，Ｌ１４８Ｉ−Ｙ２０９Ｅ，Ｔ０２２Ａ−Ｇ１５９Ｅ，Ｐ１２９Ｅ−Ｈ２４９
Ｒ，Ｐ１２９Ｅ−Ｙ２０９Ｅ，Ｖ１０４Ｌ−Ｐ１２９Ｅ，Ｓ１２８Ｎ−Ｓ１８８Ｄ，Ｌ１
１１Ｖ−Ａ１５８Ｅ，Ｔ０２２Ａ−Ａ１５８Ｅ，Ｎ０６２Ｅ−Ｙ２０９Ｅ，Ｎ０６２Ｅ−
Ｈ２４９Ｒ，Ｓ１０１Ａ−Ｒ１８６Ｈ，Ｅ０８９Ｐ−Ｐ１２９Ｅ，Ｐ１２９Ｅ−Ｅ２７１
Ｆ，Ｔ２２Ａ−Ｌ１１１Ｖ−Ｇ１５９Ｅ，Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ｇ−Ｖ１０４Ｌ−Ｙ２０
９Ｅ，Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ｇ−Ｖ１０４Ｌ−Ｇ１５９Ｅ，Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ｇ−Ｖ
１０４Ｌ−Ｓ１８８Ｄ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ，Ｔ２２Ａ−
Ｓ１０３Ｇ−Ｇ１５９Ｅ，Ｔ２２Ａ−Ｓ１２８Ｎ−Ｅ２７１Ｆ−Ｙ２０９Ｅ，Ｔ２２Ａ−
Ｙ２０９Ｅ−Ｅ２７１Ｆ，Ｔ２２Ａ−Ｓ１０１Ａ−Ｙ２０９Ｅ，Ｓ１０１Ａ−Ｙ２０９Ｅ
−Ｅ２７１Ｆ，Ｔ２２Ａ−Ｌ１１１Ｖ−Ｓ１２８Ｎ，Ｔ２２Ａ−Ｓ１０１Ａ−Ｇ１５９Ｅ
，Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ｇ−Ｖ１０４Ｌ，Ｔ２２Ａ−Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ｇ−Ｖ１０４
Ｌ，Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ｇ−Ｖ１０４Ｌ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ，Ｓ１
０１Ａ−Ｓ１０３Ｇ−Ｖ１０４Ｌ−Ｓ１２８Ｎ，Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−
Ａ２３２Ｖ−Ｑ２３６Ｈ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｎ２５２Ｋ，Ｓ１０１Ｇ−Ｖ１０４
Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２３６Ｈ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｎ２５２Ｋ，Ｓ１
０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２３６Ｈ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−
Ｎ２５２Ｋ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｌ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２３６Ｈ−Ｑ２４５
Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｎ２５２Ｋ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｌ−Ｇ１５９Ｄ−Ｑ２
３６Ｈ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｎ２５２Ｋ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｌ−
Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｎ２５２Ｋ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３
Ａ−Ｖ１０４Ｌ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２３６Ｈ−Ｎ２４８Ｄ−Ｎ２５２Ｋ，Ｓ１
０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｌ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２３６Ｈ−Ｑ２４５Ｒ−
Ｎ２５２Ｋ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｌ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２３６
Ｈ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ，Ｎ６２Ｅ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５
９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ，Ｎ６２Ｅ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１
０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ，
Ｔ２２Ａ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ
−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３
２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｓ２４Ｒ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１
５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｔ２５３Ｒ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−
Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ，Ｔ２２Ａ
−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４
８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ
２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ
−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｎ２３８Ｒ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０
４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ
１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ，Ｓ１０１Ｇ
−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７
１Ｆ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ
２４８Ｄ−Ｎ７６Ｄ，及びＳ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｅ−Ａ２３２
Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ，からなる群から選択される１組以上の置換、
を含むシリーズＩ  ＧＧ３６プロテアーゼ変異体を含み得、ここで、変異体の各アミノ酸
位置は、配列番号２に記載のバチルス・アミロリケファシエンス（Bacillus amyloliquef
aciens）スブチリシンＢＰＮ’プロテアーゼのアミノ酸配列におけるアミノ酸位置に対応
させることにより番号付けされる。このような組成物は布地ケア製品及びホームケア製品
であってもよく、又は、布地ケア組成物及びホームケア組成物であってもよい。別の態様
では、このような組成物は、布地ケア製品及びホームケア製品又は布地ケア組成物及びホ
ームケア組成物でなくてもよい。
【０２４１】
本発明の第十七態様による組成物は、配列番号７５５のスブチリシンバチルス・レンタ
ス（Bacillus lentus）ＧＧ３６に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、
９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の配列同
一性を有するアミノ酸、並びに（ａ）Ｖ４Ｒ，Ｈ１７Ｒ，Ｎ１８Ｒ，Ｇ２０Ｒ，Ｔ２２Ｒ
，Ｓ２４Ｒ，Ｓ２４Ｗ，Ｇ２５Ｒ，Ｎ４３Ｒ，Ｎ４３Ａ，Ｇ４６Ｒ，Ｐ５２Ｆ，Ｐ５２Ｎ
，Ｔ５７Ｒ，Ｑ５９Ａ，Ｎ６２Ｑ，Ｔ７１Ｇ，Ｌ７５Ｒ，Ｎ７６Ｄ，Ｓ７８Ｒ，Ｌ８２Ｒ
，Ｐ８６Ｗ，Ｅ８９Ｐ，Ｅ８９Ｗ，Ｅ８９Ｔ，Ｅ８９Ｉ，Ｅ８９Ｈ，Ｅ８９Ｖ，Ｖ１０４
Ｌ，Ｓ１０６Ｖ，Ｓ１０６Ｇ，Ｇ１１５Ｒ，Ｇ１１８Ｉ，Ｖ１２１Ｆ，Ｓ１４４Ｒ，Ｎ１
８５Ｉ，Ｄ１９７Ｆ，Ｙ２０９Ｎ，Ｙ２０９Ｓ，Ｌ２１７Ｅ，Ａ２３１Ｉ，Ｐ２３９Ｒ，
Ｐ２３９Ｓ，Ｗ２４１Ｒ，Ｓ２４２Ｒ，Ｓ２４２Ｌ，Ｎ２４３Ｒ，Ｖ２４４Ｒ，Ｎ２４８
Ｉ，Ｈ２４９Ｒ，Ｎ２５２Ｒ，Ｔ２５３Ｒ，Ｅ２７１Ｔ，Ｅ２７１Ｖ，Ｅ２７１Ｌ，Ｅ２
７１Ｈ，Ｅ２７１Ｆ，Ｅ２７１Ｐ，Ａ１Ｒ，Ｓ９Ａ，Ｓ２１２Ｆ，及びＮ２６９Ｒからな
る群から選択される２つ以上の置換、並びに／又は（ｂ）Ｔ０２２Ｒ−Ｓ０２４Ｒ，Ｓ０
０９Ａ−Ｅ２７１Ｌ，Ｎ０１８Ｒ−Ｗ２４１Ｒ，Ｎ０１８Ｒ−Ｇ１１５Ｒ，Ｎ０４３Ｒ−
Ｈ２４９Ｒ，Ｇ０２０Ｒ−Ｈ２４９Ｒ，Ｖ００４Ｒ−Ｈ２４９Ｒ，Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４
Ｒ，Ｎ０１８Ｒ−Ｈ２４９Ｒ，Ｓ００９Ａ−Ｇ０２０Ｒ，Ｇ０２０Ｒ−Ｗ２４１Ｒ，Ｓ０
０９Ａ−Ｓ０７８Ｒ，Ｇ０２０Ｒ−Ｇ１１５Ｒ，Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ，Ｓ０２４Ｒ−
Ｓ２４２Ｒ，Ｔ０２２Ｒ−Ｇ１１５Ｒ，Ｎ０１８Ｒ−Ｎ０４３Ｒ，Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３
Ｒ，Ｎ０１８Ｒ−Ｓ２４２Ｒ，Ｓ２４２Ｒ−Ｎ２６９Ｒ，Ｎ０１８Ｒ−Ｖ２４４Ｒ，Ｓ０
２４Ｒ−Ｎ２６９Ｒ，Ｇ０２０Ｒ−Ｅ２７１Ｌ，Ｓ０２４Ｒ−Ｅ２７１Ｌ，Ｖ００４Ｒ−
Ｓ００９Ａ，Ｇ０２０Ｒ−Ｎ２６９Ｒ，Ａ００１Ｒ−Ｓ０２４Ｒ，Ｖ２４４Ｒ−Ｅ２７１
Ｌ，Ｓ００９Ａ−Ｎ０１８Ｒ，Ｗ２４１Ｒ−Ｅ２７１Ｌ，Ｖ００４Ｒ−Ｓ０２４Ｒ，Ｓ０
０９Ａ−Ｈ２４９Ｒ，Ｓ００９Ａ−Ｔ０２２Ｒ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−
Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３
Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ，Ｓ１
０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−
Ｈ２４９Ｒ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５
Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｓ２４Ｒ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｌ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３
２Ｖ−Ｑ２３６Ｈ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２５２Ｋ，及びＳ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｌ
−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２３６Ｈ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｎ２５２Ｋ，からなる群から選択
される１組以上の置換を含むシリーズＩ  ＧＧ３６プロテアーゼ変異体を含み得、ここで
、変異体の各アミノ酸位置は、配列番号２に記載のバチルス・アミロリケファシエンス（
Bacillus amyloliquefaciens）スブチリシンＢＰＮ’プロテアーゼのアミノ酸配列におけ
るアミノ酸位置に対応させることにより番号付けされる。このような組成物は布地ケア製
品及びホームケア製品であってもよく、又は、布地ケア組成物及びホームケア組成物であ
ってもよい。別の態様では、このような組成物は、布地ケア製品及びホームケア製品又は
布地ケア組成物及びホームケア組成物でなくてもよい。
【０２４２】
本発明の第十七態様による組成物は、ヘミセルラーゼ、セルラーゼ、アミラーゼ、ペル
オキシダーゼ、プロテアーゼ、キシラナーゼ、リパーゼ、ホスホリパーゼ、エステラーゼ
、クチナーゼ、ペクチナーゼ、ペクチン酸リアーゼ、マンナナーゼ、ケラチナーゼ、レダ
クターゼ、オキシダーゼ、フェノールオキシダーゼ、リポキシゲナーゼ、リグニナーゼ、
プルラナーゼ、タンナーゼ、ペントサナーゼ、マラナーゼ、β−グルカナーゼ、アラビノ
シターゼ、ヒアルロニダーゼ、コンドロイチナーゼ及びラッカーゼからなる群から選択さ
れる少なくとも１つの追加の酵素を含んでもよい。本発明の第十七態様による組成物は、
ヘミセルラーゼ、セルラーゼ、アミラーゼ、ペルオキシダーゼ、プロテアーゼ、キシラナ
ーゼ、リパーゼ、ホスホリパーゼ、エステラーゼ、クチナーゼ、ペクチナーゼ、ペクチン
酸リアーゼ、マンナナーゼ、ケラチナーゼ、レダクターゼ、オキシダーゼ、フェノールオ
キシダーゼ、リポキシゲナーゼ、リグニナーゼ、プルラナーゼ、タンナーゼ、ペントサナ
ーゼ、マラナーゼ、β−グルカナーゼ、アラビノシターゼ、ヒアルロニダーゼ、コンドロ
イチナーゼ及びラッカーゼからなる群から選択される２つ以上の追加の酵素を含んでもよ
い。
【０２４３】
本発明の第十七態様による組成物は、リン酸塩を含んでもよく、又は、リン酸塩を含有
しなくてもよい。本発明の第十七態様による組成物は、少なくとも１つのビルダ−及び／
又は少なくとも１つの界面活性剤を含んでもよい。
【０２４４】
本明細書の更に他箇所にあるように、本発明のプロテアーゼ変異体などの本発明のポリ
ペプチドは、洗濯クリーニング洗浄用途、自動食器洗浄用途、手による食器洗浄用途、硬
質表面クリーニング用途、パーソナルケア用途及び本明細書に記載の他の用途などの様々
なクリーニング用途において、有用である。したがって、例えば、一態様では、本発明は
、本発明の少なくとも１つのポリペプチド（例えば、プロテアーゼ変異体）を含むクリー
ニング組成物を提供する。上記のように、このようなクリーニング組成物としては、例え
ば、自動及び手による食器洗浄洗剤組成物、洗濯洗剤組成物（例えば、液体及び粉末洗濯
洗剤組成物など）、布地クリーニング組成物、硬質表面クリーニング組成物（例えば、食
卓食器ではない物品、食卓用器具ではない物品、机、机の上、家具物品、壁、床、天井な
どが挙げられるがこれらに限定されない）が挙げられるがこれらに限定されない。このよ
うなクリーニング組成物は、クリーニングする必要のある物品又は表面のクリーニング方
法において有用であり、例えば、少なくとも１つの賦形剤、担体及び／又は他の置換基、
構成成分若しくは物質が挙げられるがこれに限定されないものを含んでもよい。
【０２４５】
別の態様では、本発明は、本明細書に記載の任意の本発明のポリペプチド（例えば、任
意の本発明のプロテアーゼ変異体又はスブチリシン変異体）を含む組成物を提供し、ここ
で、上記組成物は、布地ケア組成物及びホームケア組成物、又は、布地ケア製品及びホー
ムケア製品である。
【０２４６】
別の態様では、本発明は、本明細書に記載の任意の本発明のポリペプチド（例えば、任
意の本発明のプロテアーゼ変異体又はスブチリシン変異体）を含む組成物を提供し、ここ
で、上記組成物は、布地ケア組成物及びホームケア組成物ではなく、又は、布地ケア製品
及びホームケア製品ではない。本発明のプロテアーゼ変異体を含む本発明の組成物は、香
料封入体；布地色調剤；冷水に可溶な増白剤；イミニウムカチオン、イミニウムポリイオ
ン、イミニウム双極性イオン、修飾されたアミン、修飾されたアミンオキシド、Ｎ−スル
ホニルイミン、Ｎ−ホスホニルイミン、Ｎ−アシルイミン、チアジアゾール二酸化物、ペ
ルフルオロイミン、環式糖ケトンから選択される物質を含み得る漂白触媒；一回目洗浄リ
パーゼ（first wash lipase）；細菌クリーニングセルラーゼ；Ｇｕｅｒｂｅｔ非イオン
性界面活性剤；及びこれらの任意のものの組み合わせから選択される少なくとも１つの添
加剤物質を更に含んでもよい。本発明の組成物は、スブチリシン（ＥＣ  ３．４．２１．
６２）、トリプシン様又はキモトリプシン様プロテアーゼ、メタロプロテアーゼ及びこれ
らの混合物から選択される少なくとも１つの追加の免疫等価ではない（non-immunoequiva
lent）プロテアーゼを更に含んでもよい。
【０２４７】
枯草菌（B. subtilis）、バチルス・アミロリケファシエンス（B. amyloliquefaciens
）、バチルス・プミルス（B. pumilus）及びバチルス・ギブソニ（B. gibsonii）由来の
スブチリシン（ＥＣ  ３．４．２１．６２）；セルロモナス（Cellulomonas）由来のトリ
プシンプロテアーゼ及び／又はキモトリプシンプロテアーゼ；バチルス・アミロリケファ
シエンス（B. amyloliquefaciens）由来のメタロプロテアーゼ；並びにこれらの混合物か
ら選択される少なくとも１つの追加の免疫等価ではないプロテアーゼを更に含んでもよい
。
【０２４８】
本発明の組成物は、一回目洗浄リパーゼ、α−アミラーゼ、細菌クリーニングセルラー
ゼ及びこれらの混合物から選択される少なくとも１つの追加の酵素を更に含む。
【０２４９】
本発明の組成物は、以下のうちの少なくとも１つを更に含んでもよい：香料マイクロカ
プセルを含む香料を含む封入体；塩基、酸、疎水性、直接及び高分子染料、５５０ｎｍ〜
６５０ｎｍのピ−ク吸収波長を有する染料結合体及びこれらの混合物から選択される物質
を含む色調剤；アニオン性洗浄性界面活性剤、非イオン性洗浄性界面活性剤、カチオン性
洗浄性界面活性剤、双極性イオン性洗浄性界面活性剤及び両性洗浄性界面活性剤及びこれ
らの混合物から選択される物質を含む洗浄性界面活性剤；ゼオライト、リン酸塩及びこれ
らの混合物から選択される物質を含むビルダー；ケイ酸ナトリウム、ケイ酸カリウム及び
これらの混合物から選択される物質を含むシリケート塩；冷水に可溶な増白剤及びこれら
の混合物から選択される増白剤；マレエート／アクリレートランダムコポリマー又はポリ
アクリレートホモポリマー及びこれらの混合物から選択される物質を含むカルボン酸塩ポ
リマー；テレフタレートコポリマー及びその混合物から選択される物質を含む汚れ放出ポ
リマー；アルキルセルロース、アルキルアルコキシアルキルセルロース、カルボキシアル
キルセルロース、アルキルカルボキシアルキルセルロース及びこれらの混合物から選択さ
れる物質を含むセルロースポリマー；イミニウムカチオン、イミニウムポリイオン、イミ
ニウム双極性イオン、修飾されたアミン、修飾されたアミンオキシド、Ｎ−スルホニルイ
ミン、Ｎ−ホスホニルイミン、Ｎ−アシルイミン、チアジアゾール二酸化物、ペルフルオ
ロイミン、環式糖ケトン及びこれらの任意の混合物から選択される物質を含む漂白触媒；
ドデカノイルオキシベンゼンスルホネート、デカノイルオキシベンゼンスルホネート、デ
カノイルオキシ安息香酸又はその塩、３，５，５−トリメチルヘキサノイルオキシベンゼ
ンスルホネート、テトラアセチルエチレンジアミン（ＴＡＥＤ）、ノナノイルオキシベン
ゼンスルホネート（ＮＯＢＳ）及びこれらの混合物から選択される物質を含む漂白活性化
剤；過ホウ酸塩（通常一水和物又は四水和物）、過炭酸塩、過硫酸塩、過リン酸塩、ペル
シリケート塩のナトリウム塩などのアルカリ金属塩が挙げられる無機過水和物塩及びその
任意の混合物から選択される物質を含む過酸化水素供給源；ＤＴＰＡ（ジエチレントリア
ミン五酢酸）、ＨＥＤＰ（ヒドロキシエタンジホスホン酸）、ＤＴＰＭＰ（ジエチレント
リアミンペンタ（メチレンホスホン酸））、エチレンジアミン二コハク酸（ＥＤＤＳ）、
１，２−ジヒドロキシベンゼン−３，５−ジスルホン酸二ナトリウム塩水和物から選択さ
れる物質を含むキレート、上記キレートの誘導体；並びにこれらの任意の混合物。
【０２５０】
本発明の組成物は、染料；少なくとも１つのカチオン性−塩基性染料及びスメクタイト
粘土を含む染料−粘土複合体；並びにこれらの任意の組み合わせ、からなる群から選択さ
れる布地色調剤を含んでもよい。
【０２５１】
本発明の組成物は、小分子染料、高分子染料及びこれらの任意の組み合わせ；少なくと
も１つのカチオン性−塩基性染料及びスメクタイト粘土を含む染料−粘土複合体；並びに
これらの任意の組み合わせ、からなる群から選択される布地色調剤を少なくとも含んでも
よい。
【０２５２】
本発明のプロテアーゼを含む組成物は、単一又は複数区画単位用量で提供されてもよい
。この組成物は、多区画単位用量であってもよく、ここで、プロテアーゼ変異体は、過酸
化水素及び／又はキレート及び／又は追加の酵素の任意の供給源とは異なる区画にある。
本発明の少なくとも１つのプロテアーゼ変異体又はポリペプチドを含む組成物は、洗浄液
を含んでもよい。
【０２５３】
本発明の少なくとも１つのプロテアーゼ変異体を含む組成物は、（組成物合計重量に基
づいて）以下の成分のうちの１つ以上を含んでもよい：約０．０００５重量％〜約０．１
重量％、約０．００１重量％〜約０．０５重量％、又は更には約０．００２ｗｔ％重量％
〜約０．０３重量％の上記プロテアーゼ変異体；並びに、以下のうちの１つ以上を含んで
もよい：約０．００００３重量％〜約０．１重量％の布地色調剤；約０．００１重量％〜
約５重量％の香料カプセル；約０．００１重量％〜約１重量％の冷水に可溶な増白剤；約
０．００００３重量％〜約０．１重量％の漂白触媒；約０．００００３重量％〜約０．１
重量％の一回目洗浄リパーゼ；約０．００００３重量％〜約０．１重量％の細菌クリーニ
ングセルラーゼ；及び／又は約０．０５重量％〜約２０重量％のＧｕｅｒｂｅｔ非イオン
性界面活性剤。
【０２５４】
組成物は、冷水プロテアーゼを含む又は冷水プロテアーゼではないプロテアーゼを含む
、顆粒又は洗濯洗剤であってもよい。
【０２５５】
本発明の組成物は、流体又は固体などの任意の好適な形態で提供され得る。この組成物
は特に液体の形態である場合に単位用量パウチの形態であってもよく、この組成物は水溶
性パウチにより少なくとも部分的に又は更には完全に封入されてもよい。加えて、本組成
物は、上記に詳細を説明したパラメーター及び／又は特徴の任意の組み合わせを有しても
よい。
【０２５６】
特に記載しない限り、本明細書に提供されるすべての構成成分又は組成物濃度は、その
構成成分又は組成物の活性濃度を参照して作製され、不純物、例えば、残留溶媒又は副生
成物といった不純物は除かれるが、不純物は市販の供給物中に存在する場合がある。酵素
構成成分重量は、総活性タンパク質に基づく。すべての百分率及び比率は、特に示さない
限り、重量に基づき計算される。すべての百分率及び比率は、特に示さない限り、総組成
物に基づいて計算される。例示された洗剤組成物では、酵素濃度は、総組成物の重量に基
づき純粋な酵素により表され、特に指定しない限り、洗剤成分は総組成物の重量に基づき
表される。
【０２５７】
本明細書に示すように、一態様では、本発明のクリーニング組成物は、例えば、１つ以
上の界面活性剤、ビルダー、漂白剤、漂白活性化剤、漂白触媒、他の酵素、酵素安定化系
、キレート、蛍光増白剤、汚れ除去ポリマー、転色剤、分散剤、発泡抑制剤、染料、香料
、香料カプセル、着色剤、充填剤塩、ヒドロトロープ、光活性化剤、蛍光剤、布地コンデ
ィショナー、布地柔軟剤、加水分解性界面活性剤、防腐剤、酸化防止剤、収縮低減剤、し
わ低減剤、殺菌剤、抗かび剤、カラー粒子、シルバーケア剤、耐変色剤及び／又は防腐剤
、アルカリ供給源、可溶化剤、担体、賦形剤、加工助剤、顔料、すすぎ補助剤（例えば、
液滴を形成するよりもむしろ薄いシートにおいてクリーニングされる物品の表面から排水
を行うことにより液滴形成を防止するために少なくとも１つの表面活性剤を含有するすす
ぎ補助剤）、溶媒、及び／又はｐＨ調整剤が挙げられるがこれらに限定されない１つ以上
の添加剤物質を更に含んでもよい（例えば、米国特許第６，６１０，６４２号、同第６，
６０５，４５８号、同第５，７０５，４６４号、同第５，７１０，１１５号、同第５，６
９８，５０４号、同第５，６９５，６７９号、同第５，６８６，０１４号及び同第５，６
４６，１０１号を参照されたい。これらのすべては参照により本明細書に組み込まれる）
。具体的なクリーニング組成物材料の態様は、下記に詳細に例示される。クリーニング添
加剤物質が所望のクリーニング組成物中で本発明のプロテアーゼ変異体と混合可能でない
場合、２つの構成成分を組み合わせることが適切になるまで、クリーニング添加剤物質と
プロテアーゼ変異体を分離したまま維持する（すなわち、互いに接触させない）好適な方
法が使用される。このような分離方法としては、当該技術分野において既知の好適な方法
が挙げられる（例えば、ゲルキャップ、封入、タブレット、物理的分離など）。
【０２５８】
本発明のクリーニング組成物は、例えば、洗濯用途、硬質表面クリーニング用途、手に
よる若しくは手動食器洗浄用途、自動食器洗浄用途、眼鏡クリーニング用途、並びに、義
歯、歯、毛髪及び皮膚のクリーニングなどの美容用途において、有利に採用される。低温
溶液中での有効性が増大しているという独特な利点に起因して、本発明のプロテアーゼ変
異体酵素は、洗濯用途、並びに、手による及び自動食器洗浄用途などの食器洗浄用途に適
している。更に、本発明のプロテアーゼ変異体酵素は、固体、ゲル及び／又は液体の、洗
剤組成物及び／又は配合物などの、固体、ゲル、顆粒及び／又は液体組成物において使用
を見出される。
【０２５９】
本発明のプロテアーゼ変異体はまた、クリーニング添加剤製品組成物において使用を見
出される。一態様では、本発明のプロテアーゼ変異体は、低温溶液クリーニングの用途及
び方法において有用である。一態様では、本発明は、本発明の少なくとも１つのプロテア
ーゼ変異体酵素を含み、追加の漂白有効性が所望される場合の洗浄プロセスに含むことに
理想的に適している、クリーニング添加剤製品組成物を提供する。このような例としては
、例えば、低温溶液クリーニング用途が挙げられるが、これに限定されない。一態様では
、添加剤製品組成物は、その最も単純な形態である−すなわち、１つ以上の本発明のプロ
テアーゼである。一態様では、添加剤製品組成物は、クリーニングプロセスへ添加するた
めの投与形態でパッケージ化される。一態様では、添加剤製品組成物は、過酸素の供給源
が採用され、増大した漂白有効性が所望されるクリーニングプロセスへ添加するための投
与形態でパッケージ化される。例えば、予め測定された粉末又は液体などの、ピル、タブ
レット、ゲルキャップ又は他の一回用量単位が挙げられるがこれらに限定されない任意の
好適な一回用量単位形態が使用され得る。したがって、一態様では、本発明は、本発明の
少なくとも１つのプロテアーゼ変異体を含むクリーニング製品組成物を提供し、ここで、
この製品は、一回用量のプロテアーゼ変異体が提供されるように好適な一回用量単位で好
適な形態（例えば、液体、粉末固体、ピル、タブレット、ゲルキャップ又は他の好適な形
態）において配合される。このようなクリーニング製品は、例えば、機械又は手による洗
濯方法及び用途、自動食器洗浄又は手による食器洗浄方法及び用途などが挙げられるがこ
れらに限定されない様々なクリーニング方法及び用途において有用である。このようなク
リーニング方法及び用途は、低温又は低ｐＨ条件にて行われ得る。一態様では、このよう
な組成物の体積を増加するために、少なくとも１つの充填剤及び／又は少なくとも１つの
担体物質が含まれる。好適な充填剤又は担体物質としては、例えば、硫酸塩、炭酸塩、ケ
イ酸塩の様々な塩、並びに、タルク、粘土及びこれらに類するものが挙げられるが、これ
らに限定されない。液体組成物に好適な充填剤又は担体物質としては、例えば、水、又は
、ポリオール及びジオールなどの低分子量第一級及び第二級アルコールが挙げられるがこ
れらに限定されない。このようなアルコールの例としては、例えば、メタノール、エタノ
ール、プロパノール及びイソプロパノールが挙げられるがこれらに限定されない。一態様
では、この組成物は、約５％〜約９０％のこのような充填剤又は担体物質を含有する。酸
性充填剤は、クリーニング方法又は用途において得られる溶液のｐＨを低下させるために
、このような組成物中に含まれ得る。別の方法としては、一態様では、このクリーニング
添加物は、下記により十分に説明するように、１つ以上の添加剤成分を含む。
【０２６０】
本クリーニング組成物及びクリーニング添加物は、有効量の本発明の少なくとも１つの
プロテアーゼ変異体を単独で必要とし、又は有効量の本発明の少なくとも１つのプロテア
ーゼ変異体と他のプロテアーゼ及び／若しくは追加の酵素の組み合わせを必要とする。必
要とされる酵素濃度は、本発明の１つ以上のプロテアーゼ変異体の添加により達成される
。典型的には、クリーニング組成物は、本発明の少なくとも１つのプロテアーゼ変異体を
少なくとも約０．０００１重量パーセント〜約２０重量パーセント、約０．０００１〜約
１０重量パーセント、約０．０００１〜約１重量パーセント、約０．００１〜約１重量パ
ーセント、又は約０．０１〜約０．１重量パーセント含む。一態様では、本発明の組成物
（例えば、本発明のクリーニング組成物）は、組成物１グラム当たり本発明の少なくとも
１つのプロテアーゼ変異体を約０．０１ミリグラム（ｍｇ）〜約１０ｍｇ、約０．０１〜
約５ｍｇ、約０．０１ｍｇ〜約２ｍｇ、約０．０１〜約１ｍｇ、約０．５ｍｇ〜約１０ｍ
ｇ、約０．５〜約５ｍｇ、約０．５〜約４ｍｇ、約０．５〜約４ｍｇ、約０．５〜約３ｍ
ｇ、約０．５〜約２ｍｇ、約０．５〜約１ｍｇ、約０．１〜約１０ｍｇ、約０．１〜約５
ｍｇ、約０．１〜約４ｍｇ、約０．１〜約３ｍｇ、約０．１〜約２ｍｇ、約０．１〜約２
ｍｇ、約０．１〜約１ｍｇ、約０．１〜約０．５ｍｇ含む。
【０２６１】
本発明は、クリーニング組成物が洗浄水に添加される場合に得られる洗浄液中のプロテ
アーゼ濃度が例えば、０．１ｐｐｍ〜１ｐｐｍ、０．１〜５ｐｐｍ、１〜５ｐｐｍ、１ｐ
ｐｍ〜１０ｐｐｍ、５ｐｐｍ〜１０ｐｐｍ、５ｐｐｍ〜７ｐｐｍといった０．０１ｐｐｍ
〜１０ｐｐｍであるように、一定量の本発明のプロテアーゼ変異体を含むクリーニング組
成物を含む（上記組成物は選択的に１つ以上の添加剤成分を含む）。
【０２６２】
本発明のクリーニング組成物は、典型的には、水性クリーニング操作での使用中、洗浄
水が約５．０〜約１１．５、又は更には約７．５〜約１０．５のｐＨを有するように配合
される。液体製品組成物又は配合物は、典型的には、約３．０〜約９．０、又は約３．０
〜約５．０の正味ｐＨを有するように配合される。顆粒洗濯製品組成物は、典型的には、
約９〜１１のｐＨを有するように配合される。手による食器洗浄及び自動食器洗浄洗剤組
成物は、典型的には、例えば、方法及び具体的な用途に依存して約８〜約１０、約９〜約
１１．５、及び約９．５〜約１１．５のｐＨ範囲が挙げられるがこれらに限定されない約
８〜約１１．５のｐＨを有するように、配合される。推奨される使用レベルにｐＨを制御
するための技術としては、緩衝剤、アルカリ、酸などの使用が挙げられ、これらは当業者
には周知である。
【０２６３】
好適な低ｐＨクリーニング組成物は、典型的には約３〜約５の正味ｐＨを有し、典型的
にはこのようなｐＨ環境において加水分解される界面活性剤を有さない。このような界面
活性剤としては、少なくとも１つのエチレンオキシド部分又は更には約１〜約１６モルの
エチレンオキシドを含むアルキル硫酸ナトリウムが挙げられる。このようなクリーニング
組成物は、典型的には、約３〜約５の正味ｐＨを有するこのようなクリーニング組成物を
提供するために、水酸化ナトリウム、モノエタノールアミン又は塩化水素酸などのｐＨ緩
衝剤を十分な量含む。このような組成物は、典型的には、少なくとも１つの酸安定性酵素
を含む。一態様ではこの組成物は液体であり、他の態様ではこれらは固体である。このよ
うな液体組成物のｐＨは、典型的には、正味ｐＨとして測定される。このような固体組成
物のｐＨは、上記組成物の１０％固形分溶液として測定され、ここで、溶媒は蒸留水であ
る。これらの態様では、すべてのｐＨ測定は、特に示されない限り、２０℃にて行われる
。
【０２６４】
一態様では、本発明のプロテアーゼ変異体が顆粒組成物又は液体で採用される場合、プ
ロテアーゼ変異体は、保存中に顆粒組成物の他の構成成分からプロテアーゼ変異体を保護
するために、封入された粒子の形態であることが望ましい。加えて、封入はまた、クリー
ニングプロセス中のプロテアーゼ変異体の有効性を制御する方法でもある。一態様では、
封入は、プロテアーゼ変異体及び／又は追加の酵素の性能を増強する。この点で、本発明
のプロテアーゼ変異体は、当該技術分野において既知の任意の好適な封入材で封入される
。一態様では、封入材は、典型的には、本発明のプロテアーゼ変異体のために少なくとも
一部の触媒を封入する。典型的には、封入材は、水溶性及び／又は水分散性である。一態
様では、封入材は、０℃以上のガラス転移温度（Ｔｇ）を有する。ガラス転移温度は、国
際公開第９７／１１１５１号により詳細に説明されている。封入材は、典型的には、炭水
化物、天然若しくは合成ゴム、キチン、キトサン、セルロース及びセルロース誘導体、ケ
イ酸塩、リン酸塩、ホウ酸塩、ポリビニルアルコール、ポリエチレングリコール、パラフ
ィンワックス並びにこれらの組み合わせからなるものから選択される。封入材が炭水化物
である場合、これは、典型的には、単糖、オリゴ糖、多糖及びこれらの組み合わせから選
択される。一部の典型的態様では、封入材はデンプンである（例えば、欧州特許第０９２
２４９９号、米国特許第４，９７７，２５２号、同第５，３５４，５５９号及び同第５，
９３５，８２６号を参照されたい）。一態様では、封入材は、熱可塑性樹脂、アクリロニ
トリル、メタクリロニトリル、ポリアクリロニトリル、ポリメタクリロニトリル及びこれ
らの混合物などのプラスチックから製造される微小球；ＥＸＰＡＮＣＥＬ（登録商標）（
Ｓｔｏｃｋｖｉｋｓｖｅｒｋｅｎ，Ｓｗｅｄｅｎ）、並びに、ＰＭ  ６５４５、ＰＭ  ６
５５０、ＰＭ  ７２２０、ＰＭ  ７２２８、ＥＸＴＥＮＤＯＳＰＨＥＲＥＳ（登録商標）
、ＬＵＸＳＩＬ（登録商標）、Ｑ−ＣＥＬ（登録商標）及びＳＰＨＥＲＩＣＥＬ（登録商
標）（ＰＱ  Ｃｏｒｐ．（Ｖａｌｌｅｙ  Ｆｏｒｇｅ，ＰＡ））により供給されるものが
挙げられるがこれらに限定されない使用が見出される市販の微小球である。
【０２６５】
本明細書に記載のように、本発明のプロテアーゼ変異体は、例えば、クリーニング、洗
濯、手による食器洗浄及び自動食器洗浄洗剤組成物が挙げられるがこれらに限定されない
クリーニング方法及び用途において特定の使用が見出される。これらの用途は、様々な環
境圧力下に酵素を置く。本発明のプロテアーゼ変異体は、様々な条件下でのこれらのタン
パク質分解活性及び安定性に起因して、このようなクリーニング用途において、現在使用
されている多くの酵素を上回る利点をもたらす。
【０２６６】
様々な洗剤配合、洗浄水体積、洗浄水温度及び洗浄時間の長さなどの様々な洗浄条件が
存在し、洗浄に関与するプロテアーゼはこれらの条件に曝露される。加えて、異なる地域
で使用される洗剤配合は、洗浄水中に存在するこれらの関連構成成分の異なる濃度を有す
る。例えば、欧州の洗剤は典型的には洗浄水中に約４５００〜５０００百万分率（ｐｐｍ
）の洗剤構成成分を有し、一方、日本の洗剤は典型的には洗浄水中に約６６７ｐｐｍの洗
剤構成成分を有する。北米では、特に米合衆国では、洗剤は典型的には洗浄水中に存在す
る約９７５ｐｐｍの洗剤構成成分を有する。
【０２６７】
低濃度洗剤系は、洗浄水中に約８００ｐｐｍ未満の洗剤構成成分が存在するように洗剤
を含む。洗浄水中に約６６７ｐｐｍの洗剤構成成分が存在することから、日本の洗剤は典
型的には低濃度洗剤系と見なされる。
【０２６８】
中濃度洗剤は、洗浄水中に約８００ｐｐｍ〜約２０００ｐｐｍの洗剤構成成分が存在す
るように洗剤を含む。洗浄水中に約９７５ｐｐｍの洗剤構成成分が存在することから、北
米の洗剤は一般に中濃度洗剤系と見なされる。ブラジルは、典型的には、洗浄水中に約１
５００ｐｐｍの洗剤構成成分が存在する。
【０２６９】
高濃度洗剤系は、洗浄水中に約２０００ｐｐｍを超える洗剤構成成分が存在するように
洗剤を含む。洗浄水中に約４５００〜５０００ｐｐｍの洗剤構成成分が存在することから
、欧州の洗剤は一般に高度濃度洗剤系と考えられる。
【０２７０】
南米の洗剤は一般に高発泡リン酸ビルダー洗剤であり、南米で使用される洗剤の範囲は
、洗浄水中の洗剤構成成分が１５００ｐｐｍ〜６０００ｐｐｍの範囲であることから、中
濃度度及び高濃度洗剤の両方に当てはまり得る。上記のように、ブラジルは、典型的には
、洗浄水中に約１５００ｐｐｍの洗剤構成成分が存在する。しかしながら、他の南米諸国
に限定するものではないが、他の地域の高発泡リン酸ビルダー洗剤は、洗浄水中に最大約
６０００ｐｐｍの洗剤構成成分が存在する高濃度洗剤系を有し得る。
【０２７１】
以上の見地から、世界中の典型的な洗浄溶液中の洗剤組成物の濃度は、例えば、日本に
おける約６６７ｐｐｍのような約８００ｐｐｍ未満の洗剤組成物（「低濃度洗剤地域」）
から、例えば、米国における約９７５ｐｐｍ及びブラジルにおける約１５００ｐｐｍのよ
うな約８００ｐｐｍ〜約２０００ｐｐｍ（「中濃度洗剤地域」）に、例えば、欧州におけ
る約４５００ｐｐｍ〜約５０００ｐｐｍ及び高発泡リン酸ビルダー地域における約６００
０ｐｐｍのような約２０００ｐｐｍ超まで（「高濃度洗剤地域」）、様々であることが明
らかである。
【０２７２】
典型的な洗浄溶液の濃度は、経験的に測定される。例えば、米国では、典型的な洗濯機
は、約６４．４Ｌの洗浄溶液の容量を持つ。したがって、洗浄溶液中に約９７５ｐｐｍの
濃度を得るためには、約６２．７９ｇの洗剤組成物が６４．４Ｌの洗浄溶液に添加されな
ければならない。この量は、洗剤と共に提供される計量カップを用いて消費者により洗浄
水に入れるべく計量される典型的な量である。
【０２７３】
更なる例として、異なる地域は、異なる洗浄温度を使用する。日本における洗浄水の温
度は、典型的には、欧州において使用される温度よりも低い。例えば、北米及び日本にお
ける洗浄水の温度は典型的には約１０〜約３０℃（例えば２０℃）であり、一方、欧州に
おける洗浄水の温度は典型的には約３０〜約６０℃（例えば、約４０℃）である。しかし
ながら、エネルギー節約に対する関心から、多くの消費者は、冷水洗浄の使用に切り換え
ている。加えて、一部の更なる領域では、冷水は典型的には洗濯並びに食器洗浄用途に使
用される。一態様では、本発明の「冷水洗浄」は、約４℃〜約１０℃、約１０℃〜約４０
℃、又は約２０℃〜約３０℃、約１５℃〜約２５℃、約１０℃〜約２０℃、約１４℃〜約
１８℃、並びに、約１５℃〜約３５℃の範囲内のすべての他の組み合わせ及び１０℃〜４
０℃内の全範囲及び約１６℃の温度で洗浄を行う。
【０２７４】
更なる例として、異なる地域条件は、典型的には、異なる水硬度を有する。水硬度は通
常、Ｃａ２＋／Ｍｇ２＋を組み合わせてガロン当たりのグレインで説明される。硬度は、
水中のカルシウム（Ｃａ２＋）とマグネシウム（Ｍｇ２＋）の量の尺度である。米国のほ
とんどの水は硬質であるが、硬度の程度は様々である。中硬水（６０〜１２０ｐｐｍ）〜
硬水（１２１〜１８１ｐｐｍ）は、６０〜１８１百万分率（百万分率をＵＳガロン当たり
のグレインに換算するには、ｐｐｍ数を１７．１で除算するとガロン当たりのグレインの
値になる）の硬度のミネラルを有する。
【表１】
2019068807.tif 000002
【０２７５】
欧州の水硬度は、典型的には、Ｃａ２＋／Ｍｇ２＋を組み合わせて、ガロン当たり約１
０．５（例えば、約１０．５〜約２０．０）グレインを超える（例えば、Ｃａ２＋／Ｍｇ
２＋を組み合わせてガロン当たり約１５グレイン）。北米の水硬度は、典型的には、日本
の水硬度を超えるが、欧州の水硬度未満である。例えば、北米の水硬度は、約３〜約１０
グレイン、約３〜約８グレイン、又は約６グレインであり得る。日本の水硬度は、典型的
には、北米の水硬度よりも低く、通常約４未満であり、例えば、Ｃａ２＋／Ｍｇ２＋を組
み合わせてガロン当たり３グレインである。
【０２７６】
したがって、一態様では、本発明は、少なくとも１組の洗浄条件（例えば、洗浄温度、
水硬度及び／又は洗剤濃度）において驚くべき洗浄性能示すプロテアーゼ変異体を提供す
る。一態様では、本発明のプロテアーゼ変異体は、他のスブチリシンプロテアーゼに対し
て洗浄性能で匹敵する。一態様では、本発明のプロテアーゼ変異体は、現在市販されてい
るスブチリシンプロテアーゼと比較したときに向上した洗浄性能を呈する。したがって、
本発明の一態様では、本明細書に提供されるプロテアーゼ変異体は、様々な条件下で、向
上した酸化安定性、向上した熱安定性、向上したクリーニング能力、及び／又は向上した
キレート化剤安定性を呈する。加えて、本発明のプロテアーゼ変異体は、先と同様に単独
で又はビルダー及び安定剤と組み合わせてのいずれかで洗剤を含まないクリーニング組成
物における使用を見出される。
【０２７７】
一態様では、本発明は、組成物の約０．００００１重量％〜約１０重量％の濃度で存在
する本発明の少なくとも１つのプロテアーゼ変異体を含み、残部（例えば、組成物の約９
９．９９９重量％〜約９０．０重量％）が１つ以上のクリーニング添加剤物質を含む、ク
リーニング組成物を提供する。別の態様では、本発明は、組成物の約０．０００１重量％
〜約１０重量％、約０．００１重量％〜約５重量％、約０．００１重量％〜２重量％、又
は約０．００５重量％〜約０．５重量％の濃度で存在する本発明の少なくとも１つのプロ
テアーゼを含み、クリーニング組成物の残部（例えば、約９９．９９９９重量％〜約９０
．０重量％、約９９．９９９重量％〜約９８重量％、約９９．９９５重量％〜約９９．５
重量％）が１つ以上のクリーニング添加剤物質を含む、クリーニング組成物を提供する。
【０２７８】
一態様では、本発明のクリーニング組成物は、本発明の少なくとも１つのプロテアーゼ
変異体に加えて１つ以上の追加の酵素を含み、この追加の酵素は、クリーニング性能及び
／又は布地ケア及び／又は手若しくは手動での食器洗浄及び／又は自動食器洗浄の利益を
もたらす。好適な酵素の例としては、例えば、ヘミセルラーゼ、セルラーゼ、ぺルオキシ
ダーゼ、プロテアーゼ、キシラナーゼ、リパーゼ、ホスホリパーゼ、エステラーゼ、ペル
ヒドロラーゼ、クチナーゼ、ペクチナーゼ、ペクチン酸リアーゼ、マンナナーゼ、ケラチ
ナーゼ、レダクターゼ、オキシダーゼ、フェノールオキシダーゼ、リポキシゲナーゼ、リ
グニナーゼ、プルラナーゼ、タンナーゼ、ペントサナーゼ、マラナーゼ、β−グルカナー
ゼ、アラビノシターゼ、ヒアルロニダーゼ、コンドロイチナーゼ、ラッカーゼ及び／又は
アミラーゼ、中性メタロプロテアーゼ酵素（「ｎｐｒＥ」と略される）、あるいはこれら
の任意の混合物が挙げられるが、これらに限定されない。一態様では、クリーニング組成
物は、本発明の少なくとも１つのプロテアーゼ変異体に加えて、例えば、少なくとも１つ
の追加のプロテアーゼ、リパーゼ、クチナーゼ、セルロース及び／又はアミラーゼなどの
従来の適用可能な酵素を含む追加の酵素の組み合わせ（すなわち、「カクテル」）を含む
。
【０２７９】
本明細書に提供されるプロテアーゼ変異体に加えて、任意の他の好適なプロテアーゼは
、本発明の組成物に使用を見出され得、含まれ得る。一態様では、本発明は、本発明の少
なくとも１つのプロテアーゼ変異体と少なくとも１つの追加のプロテアーゼとを含む組成
物（例えば、クリーニング組成物）を提供する。好適なプロテアーゼとしては、動物、植
物又は微生物由来のものが挙げられる。一態様では、微生物プロテアーゼが含まれてもよ
い。プロテアーゼの化学的又は遺伝学的に改変された変異体が含まれてもよい。一態様で
は、少なくとも１つの追加のプロテアーゼは、セリンプロテアーゼ、好ましくは好アルカ
リ菌プロテアーゼ又はトリプシン様プロテアーゼである。アルカリプロテアーゼの例とし
ては、スブチリシン、特にバチルス由来のもの（例えば、スブチリシン、バチルス・レン
タス（B. lentus）スブチリシン（すなわち、ＧＧ３６）、バチルス・アミロリケファシ
エンス（B. amyloliquefaciens）スブチリシン（すなわち、ＢＰＮ’）、スブチリシンＣ
ａｒｌｓｂｅｒｇ、スブチリシン３０９、スブチリシン１４７、ＰＢ９２及びスブチリシ
ン１６８）が挙げられる。追加の例としては、米国再発行特許第３４，６０６号、米国特
許第５，９５５，３４０号、同第５，７００，６７６号、同第６，３１２，９３６号及び
同第６，４８２，６２８号（これらはすべて参照により本明細書に組み込まれる）に記載
の変異体プロテアーゼ（すなわち、プロテアーゼ変異体）が挙げられる。追加のプロテア
ーゼとしては、（例えば、ブタ又はウシ由来の）トリプシン及び国際公開第８９／０６２
７０号に記載のフザリウムプロテアーゼが挙げられるがこれらに限定されない。本発明の
少なくとも１つのプロテアーゼ変異体を含む本発明の組成物はまた、少なくとも１つの市
販のプロテアーゼ酵素を含んでもよい。本発明の組成物における使用を見出される市販の
プロテアーゼ酵素としては、例えば、ＭＡＸＡＴＡＳＥ（登録商標）、ＭＡＸＡＣＡＬ（
商標）、ＭＡＸＡＰＥＭ（商標）、ＯＰＴＩＣＬＥＡＮ（登録商標）、ＯＰＴＩＭＡＳＥ
（登録商標）、ＰＲＯＰＥＲＡＳＥ（登録商標）、ＰＵＲＡＦＥＣＴ（登録商標）、ＰＵ
ＲＡＦＥＣＴ（登録商標）ＯＸＰ、ＰＵＲＡＭＡＸ（商標）、ＥＸＣＥＬＬＡＳＥ（商標
）及びＰＵＲＡＦＡＳＴ（商標）（Ｇｅｎｅｎｃｏｒ）；ＡＬＣＡＬＡＳＥ（登録商標）
、ＳＡＶＩＮＡＳＥ（登録商標）、ＰＲＩＭＡＳＥ（登録商標）、ＤＵＲＡＺＹＭ（商標
）、ＰＯＬＡＲＺＹＭＥ（登録商標）、ＯＶＯＺＹＭＥ（登録商標）、ＫＡＮＮＡＳＥ（
登録商標）、ＬＩＱＵＡＮＡＳＥ（登録商標）、ＮＥＵＴＲＡＳＥ（登録商標）、ＲＥＬ
ＡＳＥ（登録商標）及びＥＳＰＥＲＡＳＥ（登録商標）（ＮｏｖｏＺｙｍｅｓ）；Ａ２３
０Ｖ+Ｓ２５６Ｇ+Ｓ２５９Ｎを有するＫＡＰバチルス・アルカロフィラス（Bacillus alk
alophilus）スブチリシン（花王）；並びにＢＬＡＰ（商標）バチルス・レンタス（B. le
ntus）プロテアーゼ、ＢＬＡＰ  Ｘ及びＢＬＡＰ  Ｓ（Ｈｅｎｋｅｌ  Ｋｏｍｍａｎｄｉ
ｔｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ  ａｕｆ  Ａｋｔｉｅｎ（Ｄｕｅｓｓｅｌｄｏｒｆ，Ｇｅｒ
ｍａｎｙ））が挙げられるがこれらに限定されない。本発明の組成物に含まれ得る追加の
プロテアーゼとしては、国際公開第９５／２３２２１号、同第９２／２１７６０号、米国
特許出願公開第２００８／００９０７４７号、並びに、米国特許第５，８０１，０３９号
、同第５，３４０，７３５号、同第５，５００，３６４号、同第５，８５５，６２５号、
米国再発行特許第ＲＥ  ３４，６０６号、米国特許第５，９５５，３４０号、同第５，７
００，６７６号、同第６，３１２，９３６号及び同第６，４８２，６２８号、並びに様々
な他の特許に記載のものが挙げられる。メタロプロテアーゼは、本発明の組成物中に含ま
れ得る。このようなメタロプロテアーゼとしては、例えば、国際公開第０７／０４４９９
３号に記載の中性メタロプロテアーゼ酵素（ｎｐｒＥ）が挙げられるがこれに限定されな
い。
【０２８０】
一態様では、本発明は、本発明の少なくとも１つのプロテアーゼ変異体と少なくとも１
つのリパーゼとを含む組成物（例えば、クリーニング組成物）を提供する。好適なリパー
ゼとしては、例えば、細菌又は真菌由来のものが挙げられるがこれらに限定されない。リ
パーゼの化学的又は遺伝学的に改変された変異体が、組成物中に含まれてもよい。有用な
リパーゼの例としては、フミコラ・ラヌギノサ（Humicola lanuginosa）リパーゼ（例え
ば、欧州特許第２５８  ０６８号及び同第３０５  ２１６号を参照されたい）、リゾムコ
ール・ミエヘイ（RhiZomucor miehei）リパーゼ（例えば、欧州特許第２３８  ０２３号
を参照されたい）、カンジダ・アンタルクチカ（C. antarctica）リパーゼなどのカンジ
ダリパーゼ（例えば、カンジダ・アンタルクチカ（C. antarctica）リパーゼＡ又はＢ、
例えば、欧州特許第２１４  ７６１号を参照されたい）、シュードモナス・アルカリゲネ
ス（P. alcaligenes）リパーゼ及びシュードモナス・シュードアルカリゲネス（P. pseud
oalcaligenes）リパーゼ（例えば、欧州特許第２１８  ２７２号を参照されたい）、シュ
ードモナス・セパシア（P. cepacia）リパーゼ（例えば、欧州特許第３３１  ３７６号を
参照されたい）、シュードモナス・スツッツェリ（P. stutZeri）リパーゼ（例えば、英
国特許第１，３７２，０３４号を参照されたい）、シュードモナス・フルオレセンス（P.
fluorescens）リパーゼなどのシュードモナスリパーゼ、バチルスリパーゼ（例えば、枯
草菌（B. subtilis）リパーゼ（Ｄａｒｔｏｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉ
ｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ  １１３１：２５３〜２６０（１９９３））、バチルス・ステアロ
サーモフィラス（B. stearothermophilus）リパーゼ（例えば、日本特許第６４／７４４
９９２号を参照されたい）、並びにＢ．ｐｕｍｉｌｕｓリパーゼ（例えば、国際公開第９
１／１６４２２号を参照されたい））が挙げられる。
【０２８１】
更に、例えば、ペニシリウム・カメンベルティ（Penicillium camembertii）リパーゼ
（Ｙａｍａｇｕｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ  １０３：６１〜６７（１９９１））、
ゲオトリクム・カンジドゥム（Geotricum candidum）リパーゼ（Ｓｃｈｉｍａｄａ  ｅｔ
ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１０６：３８３〜３８８（１９８９））、並びに、リゾ
ープス・デレマ（R. delemar）リパーゼ（Ｈａｓｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ  １０９：
１１７〜１１３（１９９１））、リゾープス・ニベウス（Ｒ．ｎｉｖｅｕｓ）リパーゼ（
Ｋｕｇｉｍｉｙａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｓｃｉ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．５
６：７１６〜７１９（１９９２））及びリゾープス・オリザエ（R. oryzae）リパーゼな
どの様々なリゾープスリパーゼが挙げられるがこれらに限定されない数多くのクローン化
されたリパーゼが本発明の組成物（例えば、クリーニング組成物）において使用を見出さ
れる。
【０２８２】
例えば、シュードモナス・メンドシナ（Pseudomonas mendocina）由来のクチナーゼ（
国際公開第８８／０９３６７号を参照されたい）及びフザリウム・ソラニ・ピシ（Fusari
um solani pisi）由来のクチナーゼ（国際公開第９０／０９４４６号を参照されたい）が
挙げられるがこれらに限定さないクチナーゼなどの他のタイプの脂肪分解酵素も本発明の
一態様において使用を見出される。
【０２８３】
追加の好適なリパーゼとしては、Ｍ１  ＬＩＰＡＳＥ（商標）、ＬＵＭＡ  ＦＡＳＴ（
商標）及びＬＩＰＯＭＡＸ（商標）（Ｇｅｎｅｎｃｏｒ）；ＬＩＰＯＬＡＳＥ（登録商標
）及びＬＩＰＯＬＡＳＥ（登録商標）ＵＬＴＲＡ（ＮｏｖｏＺｙｍｅｓ）；並びにリパー
ゼＰ（商標）「アマノ」（天野製薬株式会社（日本））などの市販のリパーゼが挙げられ
る。
【０２８４】
一態様では、本発明は、本発明の少なくとも１つのプロテアーゼ変異体と、組成物の約
０．００００１重量％〜約１０重量％の追加のリパーゼの濃度で存在する少なくとも１つ
のリパーゼと、組成物の重量残部の１つ以上のクリーニング添加剤物質と、を含む、組成
物（例えば、クリーニング組成物）を提供する。一態様では、本発明のクリーニング組成
物は、本発明の少なくとも１つのプロテアーゼ変異体に加えて、組成物の約０．０００１
重量％〜約１０重量％、約０．００１重量％〜約５重量％、約０．００１重量％〜約２重
量％、又は約０．００５重量％〜約０．５重量％のリパーゼ濃度で少なくとも１つのリパ
ーゼを含む。
【０２８５】
本発明の少なくとも１つの変異体と少なくとも１つのアミラーゼとを含む組成物（例え
ば、クリーニング組成物）も含まれる。アルカリ溶液中での使用に好適な任意のアミラー
ゼ（例えば、α及び／又はβ）は、このような組成物中に含有させるのに有用であり得る
。好適なアミラーゼとしては、例えば、細菌又は真菌由来のものが挙げられるがこれらに
限定されない。アミラーゼの化学的又は遺伝学的に改変された変異体が含まれてもよい。
本発明の組成物において使用が見出されるアミラーゼとしては、例えば、バチルス・リケ
ニホルミス（B. licheniformis）から得られるα−アミラーゼが挙げられるがこれに限定
されない（例えば、英国特許第１，２９６，８３９号を参照されたい）。本発明の組成物
において使用が見出される市販のアミラーゼとしては、例えば、ＤＵＲＡＭＹＬ（登録商
標）、ＴＥＲＭＡＭＹＬ（登録商標）、ＦＵＮＧＡＭＹＬ（登録商標）、ＳＴＡＩＮＺＹ
ＭＥ（登録商標）、ＳＴＡＩＮＺＹＭＥ  ＰＬＵＳ（登録商標）、ＳＴＡＩＮＺＹＭＥ  
ＵＬＴＲＡ（登録商標）及びＢＡＮ（商標）（ＮｏｖｏＺｙｍｅｓ）、並びに、ＰＯＷＥ
ＲＡＳＥ（商標）、ＲＡＰＩＤＡＳＥ（登録商標）及びＭＡＸＡＭＹＬ（登録商標）Ｐ（
Ｇｅｎｅｎｃｏｒ）が挙げられるがこれらに限定されない。
【０２８６】
一態様では、本発明は、少なくとも１つのプロテアーゼ変異体又は少なくとも１つのア
ミラーゼを含むクリーニング組成物を提供し、ここで、アミラーゼは、組成物の約０．０
０００１重量％〜約１０重量％の追加のアミラーゼの濃度で存在し、組成物の重量残部は
１つ以上のクリーニング添加剤物質である。別の態様では、本発明は、少なくとも１つの
プロテアーゼ変異体と、組成物の約０．０００１重量％〜約１０重量％、約０．００１重
量％〜約５重量％、約０．００１重量％〜約２重量％、約０．００５重量％〜約０．５重
量％のアミラーゼ濃度で存在する少なくとも１つのアミラーゼと、を含むクリーニング組
成物を提供する。
【０２８７】
任意の好適なセルラーゼが、本発明のクリーニング組成物において使用を見出され得る
。一態様では、本発明は、本発明の少なくとも１つのプロテアーゼ変異体と１つ又は少な
くとも１つのセルラーゼとを含むクリーニング組成物を提供する。好適なセルラーゼとし
ては、例えば、細菌又は真菌由来のものが挙げられるがこれらに限定されない。セルラー
ゼの化学的又は遺伝学的に改変された変異体は、本発明の組成物中に含まれ得る。好適な
セルラーゼとしては、例えば、フミコラ・インソレンス（Humicola insolens）セルラー
ゼ（例えば、米国特許第４，４３５，３０７号を参照されたい）及び色ケア効果を有する
セルラーゼ（例えば、欧州特許第０  ４９５  ２５７号を参照されたい）が挙げられるが
これらに限定されない。追加の好適なセルラーぜが当該技術分野において既知である。本
明細書の組成物において使用を見出され、含まれ得る市販のセルラーゼとしては、例えば
、ＣＥＬＬＵＺＹＭＥ（登録商標）、ＣＡＲＥＺＹＭＥ（登録商標）（Ｎｏｖｏｚｙｍｅ
ｓ）及びＫＡＣ−５００（Ｂ）（商標）（花王株式会社）、Ｐｕｒａｄａｘ  ７０００Ｌ
、Ｐｕｒａｄａｘ  ＨＡ  ４０００Ｇ（Ｇｅｎｅｎｃｏｒ）が挙げられるがこれらに限定
されない。一態様では、セルラーゼは、成熟野生型又は変異型セルラーゼの、部分又は断
片として組み込まれ、Ｎ末端の部分は除去される（例えば、米国特許第５，８７４，２７
６号を参照されたい）。一態様では、本発明のクリーニング組成物は、本発明の少なくと
も１つのプロテアーゼ変異体と、組成物の約０．００００１重量％〜約１０重量％の追加
のセルラーゼ濃度で存在する少なくとも１つのセルラーゼと、組成物の重量残部の１つ以
上のクリーニング添加剤物質と、を含む。別の態様では、本発明は、本発明の少なくとも
１つのプロテアーゼ変異体と、組成物の約０．０００１重量％〜約１０重量％、約０．０
０１重量％〜約５重量％、約０．００１重量％〜約２重量％、約０．００５重量％〜約０
．５重量％のセルラーゼの濃度で存在する少なくとも１つのアミラーゼと、を含むクリー
ニング組成物を提供する。
【０２８８】
洗剤組成物での使用に好適なマンナナーゼもまた使用を見出され、したがって、本発明
のクリーニング組成物中に含まれ得る。一態様では、本発明は、本発明の少なくとも１つ
のプロテアーゼ変異体と少なくとも１つのマンナナーゼとを含むクリーニング組成物を提
供する。好適なマンナナーゼとしては、例えば、細菌又は真菌由来のものが挙げられるが
これらに限定されない。マンナナーゼの化学的又は遺伝学的に改変された変異体は、本発
明の組成物中に含まれ得る。有用であり、本発明の組成物中に含まれ得る様々なマンナナ
ーゼが既知である（例えば、米国特許第６，５６６，１１４号、同第６，６０２，８４２
号及び同第６，４４０，９９１号（これらは全て参照により本明細書に組み込まれる）を
参照されたい）。一態様では、本発明は、本発明の少なくとも１つのプロテアーゼ変異体
と、組成物の約０．００００１重量％〜約１０重量％の追加のマンナーゼ濃度の少なくと
も１つのマンナナーゼと、組成物の重量残部の１つ以上のクリーニング添加剤物質と、を
含むクリーニング組成物を提供する。一部のこのようなクリーニング組成物では、各マン
ナナーゼは、組成物の約０．０００１重量％〜約１０重量％、約０．００１重量％〜約５
重量％、約０．００１重量％〜約２重量％、又は約０．００５重量％〜約０．５重量％の
マンナナーゼの濃度で存在する。
【０２８９】
ペルオキシダーゼは、本発明の組成物中で過酸化水素又その供給源（例えば、過炭酸塩
、過ホウ酸塩又は過硫酸塩）と組み合わせて使用され得る。オキシダーゼは、本発明の組
成物中で酸素と組み合わせて使用され得る。このようなタイプの酵素はどちらも、「溶液
漂白」のために（すなわち、複数の布地を洗浄液中で一緒に洗浄する場合に染色された布
地から別の布地に布地染料が移るのを防止するために）使用され、好ましくは、増強剤（
例えば、国際公開第９４／１２６２１号及び同第９５／０１４２６号を参照されたい）と
共に使用される。本発明の組成物中に含まれ得る好適なぺルオキシダーゼ／オキシダーゼ
としては、例えば、植物、細菌又は真菌由来のものが挙げられるが、これらに限定されな
い。ペルオキシダーゼ又はオキシダーゼの、化学的又は遺伝学的に改変された変異体は、
本発明の組成物中に含まれ得る。一態様では、本発明は、本発明の少なくとも１つのプロ
テアーゼ変異体と少なくとも１つのペルオキシダーゼ又は少なくとも１つのオキシダーゼ
酵素とを含む、クリーニング組成物を提供する。このようなペルオキシダーゼ又はオキシ
ダーゼはそれぞれ、組成物中に、組成物の約０．００００１重量％〜約１０重量％のペル
オキシダーゼ又はオキシダーゼの濃度で存在し、組成物の重量残部は１つ以上のクリーニ
ング添加剤物質である。別の態様では、本発明は、本発明の少なくとも１つのプロテアー
ゼ変異体と、少なくとも１つのペルオキシダーゼ及び／又は少なくとも１つのオキシダー
ゼと、を含むクリーニング組成物を提供し、ここで、このようなペルオキシダーゼ又はオ
キシダーゼはそれぞれ、組成物中の約０．０００１重量％〜約１０重量％、約０．００１
重量％〜約５重量％、約０．００１重量％〜約２重量％、又は約０．００５重量％〜約０
．５重量％のペルオキシダーゼ又はオキシダーゼ酵素の濃度で各々存在する。
【０２９０】
一態様では、本発明は、本発明の少なくとも１つのプロテアーゼ変異体と、例えば、１
つ以上のペルヒドロラーゼ（例えば、国際公開第０５／０５６７８２号を参照されたい）
が挙げられるがこれに限定されない、使用が見出される１つ以上の追加の酵素と、を含む
組成物（例えば、クリーニング組成物）を提供する。
【０２９１】
別の態様では、本発明は、本発明の少なくとも１つのプロテアーゼ変異体を含む組成物
（例えば、クリーニング組成物）を提供し、例えば、１つ以上の追加のプロテアーゼ、ア
ミラーゼ、リパーゼ、マンナナーゼ及び／又はセルラーゼのような上記酵素の１つ以上の
混合物が包含される。実際、これらの酵素の様々な混合物は本発明の組成物において使用
が見出されることが想到される。様々な濃度のプロテアーゼ変異体及び１つ以上の追加の
酵素は、どちらも独立して約１０％までの範囲であってもよく、クリーニング組成物の残
部は１つ以上のクリーニング添加剤物質である。クリーニング添加剤物質の具体的選択は
、クリーニングすべき表面又は物品（例えば、食卓食器物品、食卓用器具物品又は布地物
品）又は布地、並びに、使用時のクリーニング条件（例えば、手による又は自動食器洗浄
洗剤用途時の条件）に関する組成物の所望される形態を考慮することにより、容易に行わ
れる。
【０２９２】
一態様では、本発明は、本発明の少なくとも１つのプロテアーゼ変異体と（選択的に所
望される場合には少なくとも１つの追加の酵素と）１つ以上のクリーニング添加物質とを
含む組成物（例えば、クリーニング組成物）を提供する。好適なクリーニング添加剤物質
の例としては、例えば、界面活性剤、ビルダー、漂白剤、漂白剤、漂白活性化剤、漂白触
媒、他の酵素、酵素安定化剤、キレート剤、蛍光増白剤、汚れ除去ポリマー、転色剤、転
染防止剤、触媒物質、過酸化水素、過酸化水素供給源、高分子分散剤、粘土汚れ除去剤、
構造弾性化剤、分散剤、発泡抑制剤、染料、香料、着色剤、充填剤塩、ヒドロトロープ、
香料、香料カプセル、光活性化剤、蛍光剤、布地コンディショナー、布地柔軟剤、担体、
ヒドロトロープ、加工助剤、溶媒、色素、加水分解性界面活性剤、防腐剤、酸化防止剤、
収縮低減剤、しわ低減剤、殺菌剤、抗かび剤、カラー粒子、シルバーケア、耐変色剤及び
／又は防腐剤、アルカリ性供給源、可溶化剤、担体、加工助剤、色素及びｐＨ調整剤が挙
げられるが、これらに限定されない（例えば、米国特許第６，６１０，６４２号、同第６
，６０５，４５８号、同第５，７０５，４６４号、同第５，７１０，１１５号、同第５，
６９８，５０４号、同第５，６９５，６７９号、同第５，６８６，０１４号及び同第５，
６４６，１０１号（これらの全ては参照により本明細書に組み込まれる）を参照されたい
）。具体的なクリーニング組成物物質の態様は、下記に詳細に例示される。上記のように
、クリーニング添加剤物質が、所望のクリーニング組成物中に含まれる本発明のプロテア
ーゼ変異体と混合可能でない場合、構成成分を組み合わせることが適切になるまで、クリ
ーニング添加剤物質とプロテアーゼを分離したまま維持する（すなわち、互いに接触させ
ない）好適な方法が使用される。このような分離方法としては、当該技術分野において既
知の好適な方法が挙げられる（例えば、ゲルキャップ、封入、タブレット、物理的分離な
ど）。
【０２９３】
一態様では、本発明の組成物（例えば、クリーニング組成物）は、タンパク質性のシミ
を除去する必要のある表面をクリーニングするのに有用又は有効である本発明の少なくと
も１つのプロテアーゼ変異体を有効量含む。このようなクリーニング組成物としては、硬
質表面、洗濯物、布地、食器、食卓用器具又は食卓食器をクリーニング（例えば、手によ
る若しくは手動の食器洗浄又は自動食器洗浄）するような用途のためのクリーニング組成
物が挙げられる。実際、一態様では本発明は布地クリーニング組成物を提供し、一方、別
の態様では本発明は非布地クリーニング組成物を提供する。注目すべきことに、本発明は
また、本発明の少なくとも１つのプロテアーゼ変異体を含むクリーニング組成物を提供し
、ここで、このようなクリーニング組成物は、口腔ケア（歯磨き、練り歯磨き、マウスウ
ォッシュなど並びに義歯クリーニング組成物が挙げられる）などの、パーソナルケアに好
適であり、皮膚及び毛髪のクリーニングに好適であり、並びに眼鏡のクリーニングに好適
である。本発明は、任意の形態（すなわち、液体、顆粒、バー、固形、半固形、ゲル、エ
マルション、タブレット、カプセルなど）の洗剤組成物を包含することが意図される。
【０２９４】
例示目的で、本発明のプロテアーゼ変異体が使用を見出される複数のクリーニング組成
物は下記により詳細に説明される。本発明のクリーニング組成物が洗濯機洗浄方法におけ
る使用に好適な組成物として配合される一態様では、本発明の組成物は、好ましくは、少
なくとも１つの界面活性剤及び少なくとも１つのビルダー化合物、並びに、有機高分子化
合物、漂白剤、追加の酵素、発泡抑制剤、分散剤、石灰石鹸分散剤、汚れ懸濁剤及び再付
着防止剤及び腐食防止剤からなる群から選択される１つ以上のクリーニング添加剤物質と
いった１つ以上のクリーニング添加物質を含有する。一態様では、洗濯組成物はまた、１
つ以上の柔軟剤も（すなわち、追加のクリーニング添加剤物質として）含有する。本発明
の１つ以上のプロテアーゼ変異体を添加できる追加の代表的洗濯又は布地クリーニング組
成物及び配合物は、下記実施例において示される。
【０２９５】
本発明の組成物はまた、固体又は液体形態での洗剤添加剤製品として使用を見出される
。このような添加剤製品は、従来の洗剤組成物の性能を補助及び／又は増強することが意
図されており、クリーニングプロセスの任意の段階で添加され得る。一態様では洗濯洗剤
組成物の密度は約４００〜約１２００ｇ／リットルの範囲であり、別の態様では２０℃に
て測定したときに約５００〜約９５０ｇ／リットルの組成物の範囲である。
【０２９６】
一態様では、本発明は、少なくとも本発明のプロテアーゼ変異体を含む米国特許第６，
６０５，４５８号に記載されているものなどのクリーニング組成物を提供する。一態様で
は本発明の少なくとも１つのプロテアーゼ変異体を含む組成物はコンパク卜顆粒布地クリ
ーニング組成物であり、一方、他の態様ではこの組成物は着色布地の選択において有用な
顆粒布地クリーニング組成物であり、別の態様ではこの組成物は洗浄能力を通して柔軟化
をもたらす顆粒布地クリーニング組成物である。別の態様では、この組成物は、強力液体
布地クリーニング組成物である。別の態様では、本発明は、本発明の少なくとも１つのプ
ロテアーゼ変異体を含む組成物を提供し、ここで、この組成物は、米国特許第６，６１０
，６４２号及び同第６，３７６，４５０号に記載のもののような布地クリーニング組成物
である。本発明の少なくとも１つのプロテアーゼ変異体を含む欧州又は日本の洗浄条件下
での特別な有用性（例えば、米国特許第６，６１０，６４２号）を有する顆粒洗濯洗剤組
成物も提供される。
【０２９７】
一態様では、本発明は、本明細書に提供される少なくとも１つのプロテアーゼ変異体を
含む硬質表面クリーニング組成物を提供する。一部のこのような組成物は、少なくとも１
つのこのようなプロテアーゼ変異体を含む米国特許第６，６１０，６４２号、同第６，３
７６，４５０号及び同第６，３７６，４５０号に記載のものなどの硬質表面クリーニング
組成物を含む。
【０２９８】
本発明は、本明細書に提供される少なくとも１つのプロテアーゼ変異体を含む手による
食器洗浄又は自動での食器洗浄用の洗剤組成物を含む。一部のこのような組成物は、米国
特許第６，６１０，６４２号及び同第６，３７６，４５０号に記載のものなどの硬質表面
クリーニング組成物を含む。
【０２９９】
一態様では、本発明は、本発明の少なくとも１つのプロテアーゼ変異体並びに／又は少
なくとも１つの界面活性剤並びに／又は、有機高分子化合物、発泡促進剤、ＩＩ族金属イ
オン、溶媒、ヒドロトロープ及び追加の酵素からなる群から選択される少なくとも１つの
追加のクリーニング添加剤物質を含む、手動若しくは手による食器洗浄又は自動食器洗浄
方法においてクリーニング組成物を提供する。
【０３００】
本発明のクリーニング組成物が自動食器洗浄機方法における使用に好適な組成物として
配合される一態様では、本発明の組成物は、典型的には、少なくとも１つの界面活性剤及
び／又は少なくとも１つのビルダー化合物を含有し、有機高分子化合物、漂白剤、追加の
酵素、発泡抑制剤、分散剤、石灰石鹸分散剤、汚れ懸濁剤及び再付着防止剤及び腐食防止
剤から好ましくは選択される１つ以上のクリーニング添加物質を含有し得る。本発明の１
つ以上のプロテアーゼ変異体を添加できる追加の代表的食器洗浄組成物及び配合物は、下
記実施例において示される。
【０３０１】
別の態様では、本発明は、口腔ケア（例えば、歯及び義歯のクリーニング）に有用であ
る本発明の少なくとも１つのプロテアーゼ変異体を含む口腔ケア組成物を提供し、このよ
うな組成物中で有用でありかつ含まれ得る口腔ケア組成物の構成成分としては、米国特許
第６，３７６，４５０号に記載のものが挙げられる。本発明の組成物は、米国特許第６，
３７６，４５０号、同第６，６０５，４５８号及び同第６，６１０，６４２号（これらの
すべては参照により本明細書に組み込まれる）に記載のクリーニング添加物質及び化合物
を更に含み得る。
【０３０２】
本発明のクリーニング組成物は、任意の好適な形態に配合され、配合者により任意のプ
ロセスにより調製され、その非限定例は、米国特許第５，８７９，５８４号、同第５，６
９１，２９７号、同第５，５７４，００５号、同第５，５６９，６４５号、同第５，５６
５，４２２号、同第５，５１６，４４８号、同第５，４８９，３９２号及び同第５，４８
６，３０３号に記載され、これらのすべては参照により本明細書に組み込まれる。低ｐＨ
のクリーニング組成物が所望される場合、このような組成物のｐＨは、モノエタノールア
ミンなどの物質又は塩酸（ＨＣｌ）などの酸性物質の添加を介して調整される。
【０３０３】
本発明の目的にとって本質的なものではないが、以降に示される添加剤の非限定リスト
は、本クリーニング組成物における使用に好適である。一態様では、これらの添加剤は、
例えば、クリーニングすべき基材の処理に関しクリーニング性能を補助又は増強するため
に、あるいは、香料、着色剤、染料又はこれらに類するものと同様にクリーニング組成物
の美観を改質するために、組み込まれる。このような添加剤は本発明のプロテアーゼ変異
体に加えられることが理解される。これらの添加構成成分の正確な性質及びその組み込み
濃度は、組成物の物理的形態、並びに、それが使用されるクリーニング操作の性質に依存
する。好適な添加剤物質としては、例えば、界面活性剤、ビルダー、キレート剤、移染防
止剤、付着助剤、分散剤、追加の酵素及び酵素安定剤、触媒物質、漂白活性化剤、漂白増
進剤、過酸化水素、過酸化水素供給源、予備成形過酸、高分子分散剤、粘土汚れ除去剤／
再付着防止剤、増白剤、発泡抑制剤、染料、香料、構造弾性化剤、布地柔軟剤、担体、ヒ
ドロトロープ、加工助剤及び／又は色素が挙げられるがこれらに限定されない。下記の開
示に加えて、このような他の添加剤の好適な例及び使用濃度は、米国特許第５，５７６，
２８２号、同第６，３０６，８１２号及び同第６，３２６，３４８号に見られ、これらは
参照により組み込まれる。上記添加剤成分は、本発明のクリーニング組成物の残部を構成
し得る。
【０３０４】
一態様では、本発明のクリーニング組成物は、少なくとも１つの界面活性剤及び／又は
界面活性剤系を含み、ここで、この界面活性剤は、非イオン性界面活性剤、アニオン界面
活性剤、カチオン性界面活性剤、両性界面活性剤、双極性イオン性界面活性剤、半極非イ
オン性界面活性剤及びこれらの混合物から選択される。一部の低ｐＨのクリーニング組成
物（例えば、約３〜約５の正味ｐＨを有する組成物）の態様では、アルキルエトキシル化
硫酸塩は組成物の酸性含有物により加水分解され得ると考えられることから、組成物は典
型的にはこのような界面活性剤を含有しない。一態様では、この界面活性剤は、クリーニ
ング組成物の約０．１重量％〜約６０重量％の濃度で存在し、一方代替的態様では濃度は
洗浄組成物の約１重量％〜約５０重量％であり、一方代替的態様では約５重量％〜約４０
重量％である。
【０３０５】
一態様では、本発明のクリーニング組成物は、１つ以上の洗剤ビルダー又はビルダー系
を含む。少なくとも１つのビルダーを含む一部のこのような組成物では、クリーニング組
成物は、クリーニング組成物の少なくとも約１重量％、約３重量％〜約６０重量％、又は
更には約５重量％〜約４０重量％のビルダーを含む。ビルダーとしては、例えば、ポリリ
ン酸塩のアルカリ金属、アンモニウム及びアルカノールアンモニウム塩、アルカリ金属ケ
イ酸塩、アルカリ土類及びアルカリ金属炭酸塩、アルミノケイ酸塩、ポリカルボキシレー
ト化合物、エーテルヒドロキシポリカルボキシレート、無水マレイン酸とエチレン又はビ
ニルメチルエーテルのコポリマー、１，３，５−トリヒドロキシベンゼン−２，４，６−
トリスルホン酸及びカルボキメチルオキシコハク酸、エチレンジアミン四酢酸及びニトリ
ロ三酢酸などのポリ酢酸並びにメリト酸、コハク酸、クエン酸、オキシジコハク酸、ポリ
マレイン酸、ベンゼン１，３，５−トリカルボン酸、カルボキシメチルオキシコハク酸な
どのポリカルボキシレートの様々なアルカリ金属、アンモニウム及び置換アンモニウム塩
、並びにこれらの可溶性塩が挙げられるがこれらに限定されない。任意の好適なビルダー
が本発明の様々な組成物において使用を見出されることが想到される。
【０３０６】
一部のこのような組成物では、ビルダーは、クエン酸塩及びポリリン酸塩（例えば、ト
リポリリン酸ナトリウム及びトリポリリン酸ナトリウム六水和物、トリポリリン酸カリウ
ム、並びに、トリポリリン酸ナトリウム及びトリポリリン酸カリウムの混合物など）など
の水溶性の硬度イオン錯体（例えば、捕捉ビルダー）を形成する。本発明での使用が見出
され得る、当該技術分野において既知のもの（例えば、欧州特許第２  １００  ９４９号
を参照されたい）を含む任意の好適なビルダーが想到される。
【０３０７】
本発明の一部のクリーニング組成物は、少なくとも１つのプロテアーゼ変異体に加えて
少なくとも１つのキレート化剤を含む。好適なキレート化剤としては、例えば、銅、鉄及
び／又はマンガンキレート化剤及びこれらの混合物が挙げられるが、これらに限定されな
い。少なくとも１つのキレート化剤が使用される態様では、本発明のクリーニング組成物
は、主題のクリーニング組成物の約０．１重量％〜約１５重量％、又は更には約３重量％
〜約１０重量％のキレート化剤を含む。
【０３０８】
本明細書に提供される一部のクリーニング組成物は、少なくとも１つのプロテアーゼ変
異体に加えて少なくとも１つの付着助剤を含む。好適な付着助剤としては、例えば、ポリ
エチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリカルボキシレート、ポリテレフタ
ル酸などの汚れ除去ポリマー、カオリナイト、モンモリロナイト、アタパルジャイト、イ
ライト、ベントナイト、ハロイサイトなどの粘土、及びこれらの混合物が挙げられるが、
これらに限定されない。
【０３０９】
本明細書に示すように、一態様では、再付着防止剤は、本発明の一態様における使用を
見出される。一態様では、非イオン性界面活性剤が使用を見出される。これらの非イオン
性界面活性剤もまた、汚れの再付着防止において使用を見出される。一態様では、再付着
防止剤は、当該技術分野において既知であるような非イオン性界面活性剤である（例えば
、欧州特許第２  １００  ９４９号を参照されたい）。
【０３１０】
一態様では、本発明のクリーニング組成物は、１つ以上の移染防止剤を含む。好適な高
分子移染防止剤としては、ポリビニルピロリドンポリマー、ポリアミンＮ−酸化物ポリマ
ー、Ｎ−ビニルピロリドン及びＮ−ビニルイミダゾールのコポリマー、ポリビニルオキサ
ゾリドン、並びにポリビニルイミダゾール又はこれらの混合物が挙げられるが、これらに
限定されない。少なくとも１つの移染防止剤が使用される態様では、本発明のクリーニン
グ組成物は、クリーニング組成物の約０．０００１重量％〜約１０重量％、約０．０１重
量％〜約５重量％、又は更には約０．１重量％〜約３重量％を含む。
【０３１１】
一態様では、ケイ酸塩は、本発明の組成物中に含まれる。一部のこのような態様では、
ケイ酸ナトリウム（例えば、二ケイ酸ナトリウム、メタケイ酸ナトリウム及び結晶質フィ
ロケイ酸塩）は、使用を見出される。一態様では、ケイ酸塩は、約１％〜約２０％の濃度
で存在する。一態様では、ケイ酸塩は、組成物の約５重量％〜約１５重量％の濃度で存在
する。
【０３１２】
一態様では、本発明のクリーニング組成物はまた、分散剤を含む。好適な水溶性有機物
質としては、例えば、ポリカルボン酸が２個以下の炭素原子により互いに分離された少な
くとも２個のカルボキシルラジカルを含むホモポリマー又はコポリマー酸若しくはこれら
の塩が挙げられるがこれらに限定されない。
【０３１３】
一態様では、クリーニング組成物において使用される酵素（例えば、本発明のプロテア
ーゼ変異体又は他の追加の酵素）は、任意の好適な技術により安定化される。一態様では
、本明細書で採用される酵素は、最終組成物中に、カルシウム及び／又はマグネシウムイ
オンを酵素に供給する、このようなイオンの水溶性供給源が存在することにより、安定化
される。一態様では、酵素安定剤としては、オリゴ糖、多糖、並びに、カルシウム塩のよ
うなアルカリ土類金属などの無機二価金属塩が挙げられる。酵素安定化に関する様々な技
術が本発明において使用を見出されることが想到される。例えば、一態様では、本明細書
で採用される酵素は、最終組成物中に、亜鉛（ＩＩ）、カルシウム（ＩＩ）及びマグネシ
ウム（ＩＩ）イオン並びに他の金属イオン（例えば、バリウム（ＩＩＩ）、スカンジウム
（ＩＩ）、鉄（ＩＩ）、マンガン（ＩＩ）、アルミニウム（ＩＩＩ）、スズ（ＩＩ）、コ
バルト（ＩＩ）、銅（ＩＩ）、ニッケル（ＩＩ）及びオキソバナジウム（ＩＶ））を酵素
に供給する、このようなイオンの水溶性供給源が存在することにより安定化される。塩化
物及び硫酸塩もまた本発明の一態様において使用を見出される。好適なオリゴ糖及び多糖
（例えば、デキストリン）は当該技術分野において既知である（例えば、国際公開第０７
／１４５９６４号を参照されたい）。一態様では、可逆性プロテアーゼ阻害剤もまた使用
を見出され、例えば、ホウ素含有化合物（例えば、ホウ酸塩、フェニルボロン酸、４−ホ
ルミルフェニルボロン酸、他のフェニルボロン酸誘導体、ペプチド阻害剤及びこれらに類
するもの）及び／又はトリペプチドアルデヒドは、所望されるように安定性を更に改善す
るために本発明の組成物において使用を見出される。
【０３１４】
一態様では、１つ以上の漂白剤、漂白活性化剤及び／又は漂白触媒が本発明の組成物に
含まれる。一態様では、本発明のクリーニング組成物は、無機及び／又は有機漂白化合物
を含む。無機漂白剤としては、過水和物塩（例えば、過ホウ酸塩、過炭酸塩、過リン酸塩
、過硫酸塩、過ケイ酸塩）が挙げられるが、これらに限定されない。一態様では、無機過
水和物塩は、アルカリ金属塩である。一態様では、無機過水和物塩は追加で保護せずに結
晶質固体として含まれるが、一部の他の態様では塩はコーティングされる。当該技術分野
において既知である任意の好適な塩は、本発明の組成物における使用を見出される（例え
ば、欧州特許第２  １００  ９４９号を参照されたい）。
【０３１５】
一態様では、漂白活性化剤は、本発明の組成物において使用される。漂白活性化剤は、
典型的には、６０℃以下の温度でのクリーニング過程での漂白作用を向上させる有機過酸
前駆体である。本明細書での使用に好適な漂白活性化剤としては、過加水分解条件下で、
好ましくは約１〜約１０個の炭素原子、特に約２〜約４個の炭素原子を有する脂肪族ペル
オキシカルボン酸及び／又は選択的に置換された過安息香酸を生じる化合物が挙げられる
。追加の漂白活性化剤は、当該技術分野において既知であり、本発明の組成物において使
用を見出される（例えば、欧州特許第２  １００  ９４９号を参照されたい）。
【０３１６】
一態様では及び本明細書に更に記載するように、本発明のクリーニング組成物は、少な
くとも１つの漂白触媒を更に含む。一態様では、マンガントリアザシクロノナン及び関連
する錯体並びにコバルト、銅、マンガン及び鉄錯体が使用を見出される。追加の漂白触媒
は、本発明において使用が見出される（例えば、米国特許第４，２４６，６１２号、同第
５，２２７，０８４号及び同第４，８１０４１０号、国際公開第９９／０６５２１号並び
に欧州特許第２  １００  ９４９号を参照されたい）。
【０３１７】
一態様では、本発明のクリーニング組成物は、１つ以上の金属錯体触媒を含む。一態様
では、金属含有漂白触媒が使用を見出される。一部の態様では、金属漂白触媒は、漂白触
媒活性が規定された遷移金属カチオン（例えば、銅、鉄、チタン、ルテニウム、タングス
テン、モリブデン又はマンガンカチオン）、ほとんど又は全く触媒活性を有さない補助金
属カチオン（例えば、亜鉛又はアルミニウムカチオン）、並びに、触媒及び補助金属カチ
オンについて規定された安定度定数を有する分画（sequestrate）を含む触媒系を含み、
特にエチレンジアミン四酢酸、エチレンジアミン四（メチレンホスホン酸）及びこれらの
水溶性塩が使用される（例えば、米国特許第４，４３０，２４３号を参照されたい）。一
態様では、本発明のクリーニング組成物は、マンガン化合物により触媒される。このよう
な化合物及び使用濃度は、当該技術分野において周知である（例えば、米国特許第５，５
７６，２８２号を参照されたい）。追加の態様では、コバルト漂白触媒が使用を見出され
、本発明のクリーニング組成物中に含まれる。様々なコバルト漂白触媒が当該技術分野に
おいて既知であり（例えば、米国特許第５，５９７，９３６号及び同第５，５９５，９６
７号を参照されたい）、既知の手順により容易に調製される。
【０３１８】
一態様では、本発明のクリーニング組成物は、巨大多環固定配位子（macropolycyclic 
rigid ligand）（ＭＲＬ）の遷移金属錯体を含む。実際には、制限目的ではないが、一態
様では、本発明により提供される組成物及びクリーニングプロセスは、水性洗浄溶媒中の
少なくとも約１億分率の活性ＭＲＬ種を供給するように、一態様では洗浄液中の約０．０
０５ｐｐｍ〜約２５ｐｐｍ、約０．０５ｐｐｍ〜約１０ｐｐｍ、及び約０．１ｐｐｍ〜約
５ｐｐｍのＭＲＬを提供するように、調整される。
【０３１９】
一態様では、この遷移金属漂白触媒中の遷移金属としては、例えば、マンガン、鉄及び
クロムが挙げられるが、これらに限定されない。好ましいＭＲＬとしては、例えば、交差
架橋している超硬配位子（special ultra-rigid ligands）（例えば、５，１２−ジエチ
ル−１，５，８，１２−テトラアザビシクロ（６．６．２）ヘキサデカン）も挙げられる
がこれに限定されない。好適な遷移金属ＭＲＬは、既知の手順により容易に調製される（
例えば、国際公開第２０００／３２６０１号及び米国特許第６，２２５，４６４号を参照
されたい）。
【０３２０】
一態様では、本発明は、洗剤タブレットとして配合された自動食器洗浄洗剤組成物を提
供する。このようなタブレットは、本発明の少なくとも１つのプロテアーゼ変異体と、例
えば、ビルダー塩などのビルダーを含む。一部のこのようなタブレットは、タブレット組
成物１００グラム当たり３グラム（ｇ）の水酸化ナトリウムに少なくとも等価であるアル
カリ度と、少なくとも１．４グラム／立方センチメートルの密度と、を有する。ビルダー
塩は、シリケート塩とホスフェート塩の混合物を含むことができ、好ましくはケイ酸塩（
例えば、メタケイ酸ナトリウム）がリン酸塩（例えば、トリポリリン酸ナトリウム）より
も多い。一部のこのようなタブレットは、界面活性剤物質を含まず、自動食器洗浄機での
使用に特に適合している。
【０３２１】
一態様では、本発明のクリーニング組成物は、金属ケア剤を含む。金属ケア剤は、アル
ミニウム、ステンレス鋼及び非第一鉄金属（例えば、銀及び銅）などの金属の変色、腐食
及び／又は酸化を、防止及び／又は低減するのに有用である。好適な金属ケア剤としては
、欧州特許第２  １００  ９４９号、国際公開第９４２６８６０号及び同第９４／２６８
５９号に記載のものが挙げられる。一部のこのようなクリーニング組成物では、金属ケア
剤は、亜鉛塩である。一部のこのようなクリーニング組成物は、約０．１重量％〜約５重
量％の１つ以上の金属ケア剤を含む。
【０３２２】
上記に示しているように、本発明のクリーニング組成物は、任意の好適な形態に配合さ
れ、配合者により任意のプロセスにより調製され、その非限定例は、米国特許第５，８７
９，５８４号、同第５，６９１，２９７号、同第５，５７４，００５号、同第５，５６９
，６４５号、同第５，５１６，４４８号、同第５，４８９，３９２号及び同第５，４８６
，３０３号に記載され、これらのすべては参照により本明細書に組み込まれる。低ｐＨの
クリーニング組成物が所望される一態様では、このような組成物のｐＨは、塩酸（ＨＣｌ
）などの酸性物質の添加を介して調整される。
【０３２３】
本明細書に開示されているクリーニング組成物は、部位（例えば、表面、食卓食器、食
卓用器具又は布地）のクリーニングにおいて使用を見出される。典型的には、部位の少な
くとも一部分は、未希釈形態の又は洗浄液に希釈された本発明のクリーニング組成物に接
触し、次に、この部位は選択的に洗浄され及び／又はすすがれる。本発明の目的のために
、「洗浄」としては、例えば、擦ること及び機械的撹拌が挙げられるがこれらに限定され
ない。一態様では、クリーニング組成物は、溶液中に約５００ｐｐｍ〜約１５，０００ｐ
ｐｍの濃度で採用される。洗浄溶媒が水である場合、水温は典型的には約５℃〜約９０℃
の範囲であり、部位が布地を含む場合、水と布地の質量比は典型的には約１：１〜約３０
：１である。
【０３２４】
組成物の作製及び使用プロセス
例えば、クリーニング組成物などの本明細書に及び全体にわたって記載の本発明の組成
物は、任意の好適な形態に配合することができ、配合者により選択される任意の好適なプ
ロセスにより調製することができる（例えば、米国特許第５，８７９，５８４号、同第５
，６９１，２９７号、同第５，５７４，００５号、同第５，５６９，６４５号、同第５，
５６５，４２２号、同第５，５１６，４４８号、同第５，４８９，３９２号、同第５，４
８６，３０３号、同第４，５１５，７０５号、同第４，５３７，７０６号、同第４，５１
５，７０７号、同第４，５５０，８６２号、同第４，５６１，９９８号、同第４，５９７
，８９８号、同第４，９６８，４５１号、同第５，５６５，１４５号、同第５，９２９，
０２２号、同第６，２９４，５１４号及び同第６，３７６，４４５号を参照されたい）。
【０３２５】
一態様では、本発明のクリーニング組成物は、タブレット、カプセル、サッシェ、パウ
チ及び多区画パウチなどの単位用量形態で提供される。一態様では、単位用量フォーマッ
トは、多区画パウチ（又は他の単位用量フォーマット）内の成分の制御放出をもたらすた
めに設計される。好適な単位用量及び制御放出フォーマットは当該技術分野において既知
である（例えば、単位用量及び制御放出フォーマットでの使用に好適な物質について、欧
州特許第２  １００  ９４９号、国際公開第０２／１０２９５５号、米国特許第４，７６
５，９１６号及び同第４，９７２，０１７号、並びに国際公開第０４／１１１１７８号を
参照されたい）。一態様では、単位用量形態は、水溶性フィルム又は水溶性パウチで包ま
れたタブレットにより提供される。単位用量のための様々なフォーマットが欧州特許第２
１００  ９４７号に提供され、当該技術分野において既知である。
【０３２６】
本発明の組成物の作製及び使用プロセスに関する本発明の追加の態様は、本明細書に他
箇所に記載されている。
【０３２７】
本発明の方法
本発明は、例えば、食卓食器物品、食卓用器具物品、布地物品、洗濯物品、パーソナル
ケア物品、メガネなど又はこれらに類するものをクリーニング又は洗浄する方法、並びに
、例えば、物品の硬質表面などの硬質又は軟質表面をクリーニング又は洗浄するための方
法が挙げられるがこれらに限定されない、洗浄の必要のある物品又は表面（例えば、硬質
表面）をクリーニング又は洗浄するための方法を提供する。
【０３２８】
一態様では、本発明は、クリーニングする必要のある物品、対象又は表面をクリーニン
グするための方法を提供し、この方法は、物品又は表面（あるいはクリーニングすること
が望ましい物品又は表面の部分）を、充分な時間にわたって及び／又は、これらの物品、
対象若しくは表面を所望の程度までクリーニングするのに好適な若しくは有効な条件下で
、本発明の任意のプロテアーゼ変異体又は本発明の組成物と接触させることを含む。一部
のこのような方法は、物品、対象又は表面を水ですすぐことを更に含む。一部のこのよう
な方法では、クリーニング組成物は食器洗浄洗剤組成物であり、クリーニングすべき物品
又は対象は、食卓食器物品又は食卓用器具物品である。食卓食器物品は、食物を給仕する
又は食べるのに通常使用される食器物品である。食卓食器物品は、例えば、皿、平皿、カ
ップ、ボウルなど及びこれらに類するものであり得るがこれらに限定されない。食卓用器
具は、例えば、皿、カトラリー、ナイフ、フォーク、スプーン、箸、ガラス製品、ピッチ
ャー、ソース入れ、飲料容器など及びこれらに類するものが挙げられるがこれらに限定さ
れない、より広い用語であり、食卓用器具物品は、食物を給仕する又は食べるためのこれ
らの又は同様の物品のいずれも含む。一部のこのような方法では、クリーニング組成物は
、自動食器洗浄組成物又は手による食器洗浄洗剤組成物であり、クリーニングすべき物品
又は対象は、食卓食器又は食卓用器具物品である。一部のこのような方法では、クリーニ
ング組成物は、例えば、電動式洗濯洗剤組成物又は液体洗濯洗剤組成物などの洗濯洗剤組
成物であり、クリーニングすべき物品は布地物品である。
【０３２９】
一態様では、本発明は、選択的にそれぞれクリーニング又は洗浄の必要のある布地物品
の、クリーニング又は洗浄のための方法を提供する。一部のこのような方法は、プロテア
ーゼ変異体を含む組成物（例えば、布地又は洗濯クリーニング組成物が挙げられるがこれ
らに限定されない）とクリーニングする必要のある布地物品又は洗濯物品とを供給するこ
とと、布地若しくは洗濯物品を所望の程度までクリーニング又は洗浄するのに充分な若し
くは有効な条件下で、この布地物品又は洗濯物品（又はクリーニングすることが所望され
る物品の部分）を組成物と接触させることと、を含む。
【０３３０】
一態様では、本発明は、選択的にクリーニングする必要のある物品若しくは表面（例え
ば、硬質表面）をクリーニング又は洗浄するための方法を提供し、この方法は、クリーニ
ング若しくは洗浄すべき物品又は表面を供給することと、物品若しくは表面を所望の程度
までクリーニング又は洗浄するのに、充分な時間にわたって並びに／又は充分な若しくは
有効な条件下で、本発明の少なくとも１つのプロテアーゼ変異体又は少なくとも１つのこ
のようなプロテアーゼ変異体を含む本発明の組成物と物品若しくは表面（又はクリーニン
グ若しくは洗浄されることが所望される物品若しくは表面の部分）を接触させることと、
を含む。このような組成物としては、例えば、本発明のクリーニング組成物又は洗剤組成
物（例えば、手による食器洗浄洗剤組成物、手による食器洗浄クリーニング組成物、洗濯
洗剤若しくは布地洗剤若しくは洗濯若しくは布地クリーニング組成物、液体洗濯洗剤、液
体洗濯クリーニング組成物、粉末洗濯洗剤組成物、粉末洗濯クリーニング組成物、自動食
器洗浄洗剤組成物、洗濯促進クリーニング若しくは洗剤組成物、洗濯クリーニング添加剤
及び洗濯シミ抜き組成物などが挙げられるがこれらに限定されない）が挙げられるがこれ
らに限定されない。一部の例では、所望される場合、特に追加のクリーニング又は洗浄が
所望される場合、この方法は一回以上繰り返すことができる。例えば、一部の例では、こ
の方法は、選択的に、物品若しくは表面を所望の程度までクリーニング又は洗浄するのに
十分若しくは有効な時間にわたって、物品又は表面を少なくとも１つのプロテアーゼ変異
体又は組成物と接触させたままにしておくことを更に含む。一部のこのような方法は、物
品又は表面を水ですすぐことを更に含む。一部のこのような方法は、物品又は表面を、本
発明の少なくとも１つのプロテアーゼ変異体又は本発明の組成物と再び接触させることと
、物品若しくは表面を所望の程度までクリーニング又は洗浄するのに、充分な時間にわた
って、物品又は表面を少なくとも１つのプロテアーゼ変異体又は組成物と接触させたまま
にしておくことと、を更に含む。一部のこのような方法では、クリーニング組成物は食器
洗浄洗剤組成物であり、クリーニングすべき物品は、食卓食器又は食卓用器具物品である
。一部のこのような方法では、クリーニング組成物は、自動食器洗浄組成物又は手による
食器洗浄洗剤組成物であり、クリーニングすべき物品は、食卓食器又は食卓用器具物品で
ある。一部のこのような方法では、クリーニング組成物は洗濯洗剤組成物であり、クリー
ニングすべき物品は、布地物品である。
【０３３１】
一態様では、本発明は、自動食器洗浄機で食卓用器具又は食卓食器物品をクリーニング
する方法を提供し、この方法は、自動食器洗浄機を用意することと、（例えば、機械の中
の適切な又は用意されている洗剤区画若しくはディスペンサーに組成物を配置することに
より）機械の中に食卓用器具又は食卓食器をクリーニングするのに十分な本発明の少なく
とも１つのプロテアーゼ変異体又は本発明の組成物を含む一定量の自動食器洗浄組成物を
配置することと、機械の中に食卓食器又は食卓用器具を入れることと、食卓用器具又は食
卓食器物品をクリーニングするように（例えば、製造者の指示に従って）機械を操作する
ことと、を含む。このような方法は、例えば、本明細書に記載の任意のプロテアーゼ変異
体を含むがこれらに限定されない、本明細書に記載の任意の自動食器洗浄組成物を含むこ
とができる。使用すべき自動食器洗浄組成物の量は、製造者の指示又は提案に従って容易
に判定することができ、本明細書に記載の任意のものを含む本発明の少なくとも１つのプ
ロテアーゼ変異体を含む任意の形態の自動食器洗浄組成物（例えば、液体、粉末、固体、
ゲル、タブレット（table）など）が採用され得る。
【０３３２】
一態様では、本発明は、選択的にクリーニングする必要のある表面、物品又は対象をク
リーニングするための方法を提供し、この方法は、物品若しくは表面を所望の程度までク
リーニング又は洗浄するのに、充分な時間にわたって並びに／又は充分な若しくは有効な
条件下で、本発明の少なくとも１つのプロテアーゼ変異体又は未希釈形態の若しくは洗浄
溶液で希釈した本発明のクリーニング組成物と、物品若しくは表面（又はクリーニングさ
れることが所望される物品若しくは表面の部分）とを接触させることを含む。表面、物品
又は対象は、次に（選択的に）所望される場合、洗浄及び／又はすすがれる。本発明の目
的のために、「洗浄」としては、例えば、擦ること及び機械的撹拌が挙げられるがこれら
に限定されない。一態様では、クリーニング組成物は、溶液（例えば、水溶液）中に約５
００ｐｐｍ〜約１５，０００ｐｐｍの濃度で採用される。洗浄溶媒が水である場合、水温
は典型的には約５℃〜約９０℃の範囲であり、部位が布地を含む場合、水と布地の質量比
は典型的には約１：１〜約３０：１である。
【０３３３】
一態様では、本発明は、洗濯機で洗濯物又は布地物品をクリーニングする方法を提供し
、この方法は、洗濯機を用意することと、（例えば、機械の中の適切な又は用意されてい
る洗剤区画若しくはディスペンサーに組成物を配置することにより）機械の中に洗濯物又
は布地物品をクリーニングするのに十分な本発明の少なくとも１つのプロテアーゼ変異体
を含む一定量の洗濯洗剤組成物を配置することと、機械の中に洗濯物又は布地物品を入れ
ることと、食卓用器具又は食卓食器物品をクリーニングするように（例えば、製造者の指
示に従って）機械を操作することと、を含む。このような方法は、例えば、本明細書に記
載の任意のプロテアーゼ変異体を含むがこれらに限定されない、本明細書に記載の任意の
洗濯洗浄洗剤組成物を含むことができる。使用すべき自動洗濯洗剤組成物の量は、製造者
の指示又は提案に従って容易に計量することができ、本明細書に記載の任意のものを含む
本発明の少なくとも１つのプロテアーゼ変異体を含む任意の形態の洗濯洗剤組成物（例え
ば、固体、粉末、液体、タブレット、ゲルなど）が採用され得る。
【０３３４】
第十八態様では、本発明は、クリーニングする必要のある物品、対象又は表面をクリー
ニングするための方法を提供し、この方法は、物品、対象又は表面を、（ｉ）本発明の第
一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八若しくは第九態様の変異体（又は第三態
様にあるようなポリぺプチド）と、又は（ｉｉ）本発明の第十七態様の組成物と、接触さ
せることを含む。本発明の第十八態様の方法は、物品、対象又は表面を水ですすぐことを
更に含み得る。
【０３３５】
第十九態様では、本発明は、物品又は硬質表面をクリーニングするための方法を提供し
、この方法は、物品若しくは硬質表面を所望の程度までクリーニング又は洗浄するのに、
充分な時間にわたって並びに／又は充分な若しくは有効な条件下で、クリーニングすべき
物品又は硬質表面の少なくとも一部分を、（ｉ）本発明の第一、第二、第三、第四、第五
、第六、第七、第八若しくは第九態様の変異体（又は第三態様にあるようなポリぺプチド
）と、又は（ｉｉ）本発明の第十七態様の組成物と、接触させることを含み、選択的に物
品又は硬質表面を水ですすぐことを含む。
【０３３６】
第二十態様では、本発明は、表面若しくは布地を処理及び／又はクリーニングする方法
を提供し、この方法は、選択的に上記表面若しくは布地を洗浄及び／又はすすぐこと、上
記表面若しくは布地を（ｉ）本発明の第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八
若しくは第九態様の変異体（又は第三態様にあるようなポリぺプチド）と、又は（ｉｉ）
本発明の第十七態様の組成物と、接触させること、次に選択的に上記表面若しくは布地を
洗浄及び／又はすすぐことを含む。
【０３３７】
洗濯及び／又は食器洗浄洗剤組成物中に含まれるがこれらに限定されない洗剤組成物中
での本発明のプロテアーゼ変異体又はポリペプチドの使用が含まれる。
【０３３８】
追加の代表的クリーニング方法は、全体にわたって及び下記実施例にて提供される。
【０３３９】
実験
以降のパートＩ実施例及びパートＩＩ実施例の実験についての開示では、以下の略記が
適用される：ＰＩ（性能指数）、ｐｐｍ（百万分率）、Ｍ（モル濃度）、ｍＭ（ミリモル
濃度）、μＭ（マイクロモル濃度）、ｎＭ（ナノモル濃度）、ｍｏｌ（モル）、ｍｍｏｌ
（ミリモル）、μｍｏｌ（マイクロモル）、ｎｍｏｌ（ナノモル）、ｇｍ（グラム）、ｍ
ｇ（ミリグラム）、μｇ（マイクログラム）、ｐｇ（ピコグラム）、Ｌ（リットル）、ｍ
ｌ及びｍＬ（ミリリットル）、μｌ及びμＬ（マイクロリットル）、ｃｍ（センチメート
ル）、ｍｍ（ミリメートル）、μｍ（マイクロメートル）、ｎｍ（ナノメートル）、Ｕ（
ユニット）、Ｖ（ボルト）、ＭＷ（分子量）、ｓｅｃ（秒）、ｍｉｎ（分）、ｈ及びｈｒ
（時間）、℃（セルシウス度）、ＱＳ（十分量）、ＮＤ（実施せず）、ｒｐｍ（毎分回転
数）、ＧＨ（ドイツ硬度）、Ｈ２Ｏ（水）、ｄＨ２Ｏ（脱イオン水）、ＨＣｌ（塩酸）、
ａａ（アミノ酸）、ｂｐ（塩基対）、ｋｂ（キロ塩基対）、ｋＤ（キロダルトン）、ｃＤ
ＮＡ（コピー又は相補的ＤＮＡ）、ＤＮＡ（デオキシリボ核酸）、ｓｓＤＮＡ（単鎖ＤＮ
Ａ）、ｄｓＤＮＡ（２本鎖ＤＮＡ）、ｄＮＴＰ（デオキシリボヌクレオチド三リン酸）、
ＲＮＡ（リボ核酸）、ＭｇＣｌ２（塩化マグネシウム）、ＮａＣｌ（塩化ナトリウム）、
ｗ／ｖ（体積対重量）、ｖ／ｖ（体積対体積）、ｗ／ｗ（重量対重量）、ｇ（重さ）、Ｏ
Ｄ（光学密度）、ｐｐｍ（百万分率）、ダルベッコリン酸緩衝溶液（ＤＰＢＳ）、ＳＯＣ
（２％バクトトリプトン、０．５％バクト酵母抽出物、１０ｍＭのＮａＣｌ、２．５ｍＭ
のＫＣｌ）、テリフィック培地（ＴＢ、１２ｇ／Ｌバクトトリプトン、２４ｇ／Ｌグリセ
ロール、２．３１ｇ／Ｌ  ＫＨ２ＰＯ４、及び１２．５４ｇ／Ｌ  Ｋ２ＨＰＯ４）、ＯＤ
２８０（２８０ｎｍでの光学密度）、ＯＤ６００（６００ｎｍでの光学密度）、Ａ４０５
（４０５ｎｍでの吸光度）、Ｖｍａｘ（酵素触媒反応の飽和最大速度）、ＰＡＧＥ（ポリ
アクリルアミドゲル電気泳動）、ＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水［１５０ｍＭのＮａＣｌ
、１０ｍＭのナトリウムリン酸緩衝液、ｐＨ  ７．２］）、ＰＢＳＴ（ＰＢＳ＋０．２５
％  ＴＷＥＥＮ（登録商標）−２０）、ＰＥＧ（ポリエチレングリコール）、ＰＣＲ（ポ
リメラーゼ連鎖反応）、ＲＴ−ＰＣＲ（逆転写ＰＣＲ）、ＳＤＳ（ドデシル硫酸ナトリウ
ム）、トリス（トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン）、ＨＥＰＥＳ（Ｎ−［２−ヒ
ドロキシエチル］ピペラジン−Ｎ−［２−エタンスルホン酸］）、ＨＢＳ（ＨＥＰＥＳ緩
衝生理食塩水）、トリス−ＨＣｌ（トリス［ヒドロキシメチル］アミノメタン−塩酸塩）
、トリシン（Ｎ−［トリス−（ヒドロキシメチル）−メチル］−グリシン）、ＣＨＥＳ（
２−（Ｎ−シクロ−ヘキシルアミノ）エタン−スルホン酸）、ＴＡＰＳ（３−｛［トリス
−（ヒドロキシメチル）−メチル］−アミノ｝−プロパンスルホン酸）、ＣＡＰＳ（３−
（シクロ−ヘキシルアミノ）−プロパン−スルホン酸、ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド
）、ＤＴＴ（１，４−ジチオ−ＤＬ−トレイトール）、ＳＡ（シナピン酸（ｓ，５−ジメ
トキシ−４−ヒドロキシケイ皮酸）、ＴＣＡ（トリクロロ酢酸）、Ｇｌｕｔ及びＧＳＨ（
還元グルタチオン）、ＧＳＳＧ（酸化グルタチオン）、ＴＣＥＰ（トリス［２−カルボキ
シエチル］ホスフィン）、Ｃｉ（キュリー）、ｍＣｉ（ミリキュリー）、μＣｉ（マイク
ロキュリー）、ＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）、ＲＰ−ＨＰＬＣ（逆相高速液
体クロマトグラフィー）、ＴＬＣ（薄層クロマトグラフィー）、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ（マ
トリックス支援レーザー脱離／イオン化法−飛空時間型）、Ｔｓ（トシル）、Ｂｎ（ベン
ジル）、Ｐｈ（フェニル）、Ｍｓ（メシル）、Ｅｔ（エチル）、Ｍｅ（メチル）、Ｔａｑ
（好熱菌（Thermus aquaticus）ＤＮＡポリメラーゼ）、クレノウ（ＤＮＡポリメラーゼ
Ｉラージ（クレノウ）フラグメント））、ＥＧＴＡ（エチレングリコール−ビス（β−ア
ミノエチルエーテル）Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸）、ＥＤＴＡ（エチレンジアミン四酢
酸）、ｂｌａ（β−ラクタマーゼ又はアンピシリン耐性遺伝子）、ＨＤＬ（強力液体）、
ＨＤＤ（強力粉末洗剤）、ＨＳＧ（高起泡顆粒洗剤）、ＣＥＥ（中央及び東ヨーロッパ）
、ＷＥ（西ヨーロッパ）、洗剤を参照する際に使用する場合のＮＡ（北アメリカ）、洗剤
を参照する際に使用する場合の日本及びＪＰＮ（日本）、ＭＴＰ（マイクロタイタープレ
ート）、ＭＪ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（ＭＪ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｒｅｎｏ，ＮＶ）、Ｂａｓ
ｅｃｌｅａｒ（Ｂａｓｅｃｌｅａｒ  ＢＶ，Ｉｎｃ．，Ｌｅｉｄｅｎ，Ｔｈｅ  Ｎｅｔｈ
ｅｒｌａｎｄｓ）、ＰｅｒＳｅｐｔｉｖｅ（ＰｅｒＳｅｐｔｉｖｅ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍ
ｓ，Ｆｒａｍｉｎｇｈａｍ，ＭＡ）、ＴｈｅｒｍｏＦｉｎｎｉｇａｎ（ＴｈｅｒｍｏＦｉ
ｎｎｉｇａｎ，Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，ＣＡ）、Ａｒｇｏ（Ａｒｇｏ  ＢｉｏＡｎａｌｙｔｉ
ｃａ，Ｍｏｒｒｉｓ  Ｐｌａｉｎｓ，ＮＪ）、ＳｅｉｔＺ  ＥＫＳ（ＳｅｉｔＺＳｃｈｅ
ｎｋ  Ｆｉｌｔｅｒｓｙｓｔｅｍｓ  ＧｍｂＨ，Ｂａｄ  ＫｒｅｕＺｎａｃｈ，Ｇｅｒｍ
ａｎｙ）、Ｐａｌｌ（Ｐａｌｌ  Ｃｏｒｐ．）（Ｅａｓｔ  Ｈｉｌｌｓ，ＮＹ及びＢａｄ
ＫｒｅｕＺｎａｃｈ，Ｇｅｒｍａｎｙ）、Ｓｐｅｃｔｒｕｍ（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ  Ｌａ
ｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，ＤｏｍｉｎｇｕｅＺ  Ｒａｎｃｈｏ，ＣＡ）、Ｍｏｌｅｃｕｌａ
ｒ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  Ｃｏｒｐ．，Ｗｏ
ｏｄｌａｎｄｓ，ＴＸ）、Ａｃｃｅｌｒｙｓ（Ａｃｃｅｌｒｙｓ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ  Ｄ
ｉｅｇｏ，ＣＡ）、Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐｕｔｉｎｇ（Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍ
ｐｕｔｉｎｇ  Ｃｏｒｐ．，Ｍｏｎｔｒｅａｌ，Ｃａｎａｄａ）、Ｎｅｗ  Ｂｒｕｎｓｗ
ｉｃｋ（Ｎｅｗ  Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｃｏ．，Ｅｄｉｓｏｎ，
ＮＪ）、ＣＦＴ（Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｔｅｓｔ  Ｍａｔｅｒｉａｌｓ，Ｖｌａａｒｄ
ｉｎｇｅｎ，Ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）、Ｐ＆Ｇ及びＰｒｏｃｔｅｒ  ＆  Ｇａ
ｍｂｌｅ（Ｐｒｏｃｔｅｒ  ＆  Ｇａｍｂｌｅ，Ｉｎｃ．，Ｃｉｎｃｉｎｎａｔｉ，ＯＨ
）、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｃｈａｌｆｏｎｔ  Ｓ
ｔ．Ｇｉｌｅｓ，Ｕｎｉｔｅｄ  Ｋｉｎｇｄｏｍ）、ＤＮＡ２．０（ＤＮＡ２．０，Ｍｅ
ｎｌｏ  Ｐａｒｋ，ＣＡ）、ＯＸＯＩＤ（Ｏｘｏｉｄ，Ｂａｓｉｎｇｓｔｏｋｅ，Ｈａｍ
ｐｓｈｉｒｅ，ＵＫ）、ＭｅｇａＺｙｍｅ（ＭｅｇａＺｙｍｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎ
ａｌ  Ｉｒｅｌａｎｄ  Ｌｔｄ．，Ｂｒａｙ  Ｂｕｓｉｎｅｓｓ  Ｐａｒｋ，Ｂｒａｙ，
Ｃｏ．，Ｗｉｃｋｌｏｗ，Ｉｒｅｌａｎｄ）、ＦｉｎｎＺｙｍｅｓ（ＦｉｎｎＺｙｍｅｓ
Ｏｙ，Ｅｓｐｏｏ，Ｆｉｎｌａｎｄ）、Ｋｅｌｃｏ（ＣＰ  Ｋｅｌｃｏ，Ｗｉｌｍｉｎ
ｇｔｏｎ，ＤＥ）、Ｃｏｒｎｉｎｇ（Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｃ
ｏｒｎｉｎｇ，ＮＹ）、ＮＥＮ（ＮＥＮ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ
，Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ）、Ｐｈａｒｍａ  ＡＳ（Ｐｈａｒｍａ  ＡＳ，Ｏｓｌｏ，Ｎｏｒ
ｗａｙ）、Ｄｙｎａｌ（Ｄｙｎａｌ，Ｏｓｌｏ，Ｎｏｒｗａｙ）、Ｂｉｏ−Ｓｙｎｔｈｅ
ｓｉｓ（Ｂｉｏ−Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｌｅｗｉｓｖｉｌｌｅ，ＴＸ）、ＡＴＣＣ（Ａｍ
ｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ
，ＭＤ）、Ｇｉｂｃｏ／ＢＲＬ（Ｇｉｂｃｏ／ＢＲＬ，Ｇｒａｎｄ  Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ
）、Ｓｉｇｍａ（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）、
Ｐｈａｒｍａｃｉａ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎ
Ｊ）、ＮＣＢＩ（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇ
ｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ）、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（Ａｐｐｌｉｅ
ｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，ＣＡ）、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎ
ｃｅｓ及び／又はＣｌｏｎｔｅｃｈ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  ＣＬＯＮＴＥＣＨ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，ＣＡ）、Ｏｐｅｒｏｎ  Ｔｅｃｈｎ
ｏｌｏｇｉｅｓ（Ｏｐｅｒｏｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ａｌａｍｅｄａ
，ＣＡ）、ＭＷＧ  Ｂｉｏｔｅｃｈ（ＭＷＧ  Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｈｉｇｈ  Ｐｏｉｎｔ，
ＮＣ）、Ｏｌｉｇｏｓ  Ｅｔｃ（Ｏｌｉｇｏｓ  Ｅｔｃ．Ｉｎｃ，Ｗｉｌｓｏｎｖｉｌｌ
ｅ，ＯＲ）、Ｂａｃｈｅｍ（Ｂａｃｈｅｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｉｎｃ．，Ｋｉｎｇ
ｏｆ  Ｐｒｕｓｓｉａ，ＰＡ）、Ｄｉｆｃｏ（Ｄｉｆｃｏ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ
，Ｄｅｔｒｏｉｔ，ＭＩ）、Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ（Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ，Ｈｅｒｎｄｏｎ
，ＶＡ、Ｓａｎｔａ  ＣｒｕＺ（Ｓａｎｔａ  ＣｒｕＺ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，
Ｉｎｃ．，Ｓａｎｔａ  ＣｒｕＺ，ＣＡ）、Ｏｘｏｉｄ（Ｏｘｏｉｄ  Ｉｎｃ．，Ｏｇｄ
ｅｎｓｂｕｒｇ，ＮＹ）、Ｗｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎ（Ｗｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎ  Ｂｉｏｃ
ｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｒｐ．，Ｆｒｅｅｈｏｌｄ，ＮＪ）、ＧＩＢＣＯ  ＢＲＬ又はＧｉ
ｂｃｏ  ＢＲＬ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂ
ｕｒｇ，ＭＤ）、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ，ＭＡ
）、Ｂｉｏ−Ｒａｄ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅ
ｎ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｃｏｒｐ．，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）、ＮＥＢ（Ｎｅｗ
Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ，Ｂｅｖｅｒｌｙ，ＭＡ）、Ｓｉｇｍａ（Ｓｉｇｍａ
Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）、Ｐｉｅｒｃｅ（Ｐｉｅｒｃｅ
Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）、タカラ（タカラバイオ株式
会社、大津、日本）、Ｒｏｃｈｅ（Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ  Ｒｏｃｈｅ，Ｂａｓｅｌ，
ＳｗｉｔＺｅｒｌａｎｄ）、Ｇｅｎｅ  Ｏｒａｃｌｅ（Ｇｅｎｅ  Ｏｒａｃｌｅ，Ｉｎｃ
．，Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ，ＣＡ）、ＥＭ  Ｓｃｉｅｎｃｅ（ＥＭ  Ｓｃｉｅｎｃ
ｅ，Ｇｉｂｂｓｔｏｗｎ，ＮＪ）、Ｑｉａｇｅｎ（Ｑｉａｇｅｎ，Ｉｎｃ．，Ｖａｌｅｎ
ｃｉａ，ＣＡ）、Ｂｉｏｄｅｓｉｇｎ（Ｂｉｏｄｅｓｉｇｎ  Ｉｎｔｌ．，Ｓａｃｏ，Ｍ
ａｉｎｅ）、Ａｐｔａｇｅｎ（Ａｐｔａｇｅｎ，Ｉｎｃ．，Ｈｅｒｎｄｏｎ，ＶＡ）、Ｓ
ｏｒｖａｌｌ（Ｓｏｒｖａｌｌ  ｂｒａｎｄ，ｆｒｏｍ  Ｋｅｎｄｒｏ  Ｌａｂｏｒａｔ
ｏｒｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ａｓｈｅｖｉｌｌｅ，ＮＣ）、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖ
ｉｃｅｓ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ，Ｃｏｒｐ．，Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，Ｃ
Ａ）、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，Ｍ
Ｎ）、Ｓｉｅｇｆｒｉｅｄ  Ｈａｎｄｅｌ（Ｓｉｅｇｆｒｉｅｄ  Ｈａｎｄｅｌ  ＡＧ，
Ｚｏｆｉｎｇｅｎ，ＳｗｉｔＺｅｒｌａｎｄ）、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ（Ｓｔｒａｔａｇ
ｅｎｅ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｌａ  Ｊｏｌｌａ，ＣＡ）、Ｍａｒｓｈ（Ｍ
ａｒｓｈ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ，ＮＹ）、Ｇｅｎｅａｒｔ（Ｇ
ｅｎｅａｒｔ  ＧｍｂＨ，Ｒｅｇｅｎｓｂｕｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）、Ｂｉｏ−Ｔｅｋ（
Ｂｉｏ−Ｔｅｋ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｗｉｎｏｏｓｋｉ，ＶＴ）、（Ｂｉａｃｏｒ
ｅ（Ｂｉａｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）、ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ（
ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ，Ｒｏｃｋｙ  Ｈｉｌｌ，ＮＪ）、ＳｙｎＰｅｐ（ＳｙｎＰｅｐ，Ｄ
ｕｂｌｉｎ，ＣＡ）、Ｎｅｗ  Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ（Ｎｅｗ  Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ  ｂｒ
ａｎｄ、Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，Ｉｎｃ．，
Ｒｉｎｇｏｅｓ，ＮＪ）、Ｗａｔｅｒｓ（Ｗａｔｅｒｓ，Ｉｎｃ．，Ｍｉｌｆｏｒｄ，Ｍ
Ａ）、Ｍａｔｒｉｘ  Ｓｃｉｅｎｃｅ（Ｍａｔｒｉｘ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｂｏｓｔｏｎ，
ＭＡ）、Ｄｉｏｎｅｘ（Ｄｉｏｎｅｘ，Ｃｏｒｐ．，Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，ＣＡ）、Ｍｏ
ｎｓａｎｔｏ（Ｍｏｎｓａｎｔｏ  Ｃｏ．，Ｓｔ．Ｌｏｕ
ｉｓ，ＭＯ）、Ｗｉｎｔｅｒｓｈａｌｌ（Ｗｉｎｔｅｒｓｈａｌｌ  ＡＧ，Ｋａｓｓｅｌ
，Ｇｅｒｍａｎｙ）、ＢＡＳＦ（ＢＡＳＦ  Ｃｏ．，Ｆｌｏｒｈａｍ  Ｐａｒｋ，ＮＪ）
、Ｈｕｎｔｓｍａｎ（Ｈｕｎｔｓｍａｎ  Ｐｅｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｒｐ．，Ｓ
ａｌｔ  Ｌａｋｅ  Ｃｉｔｙ，ＵＴ）、Ｓｈｅｌｌ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ（Ｓｈｅｌｌ  
Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．，Ｌｏｎｄｏｎ，ＵＫ）、Ｓｔｅｐａｎ（Ｓｔｅｐａｎ，
Ｎｏｒｔｈｆｉｅｌｄ，ＩＬ）、Ｃｌａｒｉａｎｔ（Ｃｌａｒｉａｎｔ，ＳｕｌＺｂａｃ
ｈ，Ｇｅｒｍａｎｙ）、Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ  Ｚｅｏｌｉｔｅ（Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ
Ｚｅｏｌｉｔｅ  Ｌｔｄ．，Ｇｒａｙｓ，Ｅｓｓｅｘ，ＵＫ）、ＪｕｎｇｂｕｎＺｌａ
ｕｅｒ（ＪｕｎｇｂｕｎＺｌａｕｅｒ，Ｂａｓｅｌ，ＳｗｉｔＺｅｒｌａｎｄ）、Ｓｏｌ
ｖａｙ（Ｓｏｌｖａｙ，Ｂｒｕｓｓｅｌｓ，Ｂｅｌｇｉｕｍ）、３Ｖ  Ｓｉｇｍａ（３Ｖ
Ｓｉｇｍａ，Ｂｅｒｇａｍｏ，Ｉｔａｌｙ）、Ｉｎｎｏｓｐｅｃ（Ｉｎｎｏｓｐｅｃ，
Ｅｌｌｅｓｍｅｒｅ  Ｐｏｒｔ，ＵＫ）、Ｔｈｅｒｍｐｈｏｓ（Ｔｈｅｒｍｐｈｏｓ，Ｖ
ｌｉｓｓｉｇｇｅｎ−Ｏｓｔ，Ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）、Ｃｉｂａ  Ｓｐｅｃ
ｉａｌｔｙ（Ｃｉｂａ  Ｓｐｅｃｉａｌｔｙ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｂａｓｅｌ，Ｓｗｉ
ｔＺｅｒｌａｎｄ）、Ｄｏｗ  Ｃｏｒｎｉｎｇ（Ｄｏｗ  Ｃｏｒｎｉｎｇ，Ｂａｒｒｙ，
ＵＫ）、Ｅｎｉｃｈｅｍ（Ｅｎｉｃｈｅｍ  Ｉｂｅｒｉｃａ，Ｂａｒｃｅｌｏｎａ，Ｓｐ
ａｉｎ）、Ｆｌｕｋａ  Ｃｈｅｍｉｅ  ＡＧ（Ｆｌｕｋａ  Ｃｈｅｍｉｅ  ＡＧ，Ｂｕｃ
ｈｓ，ＳｗｉｔＺｅｒｌａｎｄ）、Ｇｉｓｔ−Ｂｒｏｃａｄｅｓ（Ｇｉｓｔ−Ｂｒｏｃａ
ｄｅｓ，ＮＶ，Ｄｅｌｆｔ，Ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）、Ｄｏｗ  Ｃｏｒｎｉｎ
ｇ（Ｄｏｗ  Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｃｏｒｐ．，Ｍｉｄｌａｎｄ，ＭＩ）、Ｍｅｔｔｌｅｒ−
Ｔｏｌｅｄｏ（Ｍｅｔｔｌｅｒ−Ｔｏｌｅｄｏ  Ｉｎｃ，Ｃｏｌｕｍｂｕｓ，ＯＨ）、Ｒ
Ｂ（Ｒｅｃｋｉｔｔ−Ｂｅｎｃｋｉｓｅｒ，Ｓｌｏｕｇｈ，ＵＫ）、及びＭｉｃｒｏｓｏ
ｆｔ（Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ，Ｉｎｃ．，Ｒｅｄｍｏｎｄ，ＷＡ）。
【０３４０】
本明細書に適用されている例示の洗剤組成物では、酵素濃度は、総組成物の重量に基づ
いて純粋な酵素により表され、特に指定しない限り、洗剤成分は総組成物の重量に基づい
て表される。ここで略された構成成分の名称は、以下の意味を有する：
【表２−１】
2019068807.tif 000003
【表２−２】
2019068807.tif 000004
【０３４１】
（上記表の続き）
北アメリカ（ＮＡ）及び西ヨーロッパ（ＷＥ）の強力液体洗濯（ＨＤＬ）洗剤に関して
は、予め計量した液体洗剤（ガラス瓶内）を、９５℃のウォーターバスに２時間にわたっ
て配置することで、市販の洗剤中に存在する酵素の加熱不活性化を実施する。ＮＡ及びＷ
Ｅの自動食器洗浄（ＡＤＷ：auto dish washing）洗剤を加熱不活性化するためのインキ
ュベート時間は８時間である。不活性化率を正確に測定するために、未加熱及び加熱洗剤
のどちらも、洗剤を溶解させて５分以内にアッセイにする。酵素活性はＡＡＰＦアッセイ
により試験する。
【０３４２】
加熱不活性化した洗剤の酵素活性の試験に関しては、洗剤の希釈標準溶液は加熱不活性
化母液から調製した。所望の条件に一致するよう、適切な水硬度（例えば、６ｇｐｇ又は
１２ｇｐｇ）及び緩衝剤を洗剤溶液に加える。瓶をボルテックスにかけるか反転させるか
して溶液を混合する。以下の表は本明細書で使用される市販の洗剤及び試験条件の一部に
ついての情報を提供する。一部の実験では、追加の及び／又は他の市販の洗剤が以下の実
施例で使用されることが見出される。
【表３】
2019068807.tif 000005
【０３４３】
一部の更なる態様では、以下の溶液の使用が見出される：
【表４】
2019068807.tif 000006
【０３４４】
実施例は純粋に本発明の例示を目的とするものであり、したがって、決して本発明を限
定することを意図するものではなく、また、本発明の上記の態様及び実施形態を記載し、
詳述するものである。前述の実施例及び発明を実施するための形態は、実例として提供さ
れるものであり、制限を目的とするものではない。
【０３４５】
パートＩ
洗剤の表
パートＩ実施例のアッセイで使用される洗剤の組成を表１−３に示す。ＢＰＮ’変異体
タンパク質サンプルを、パートＩ実施例１に記載のような洗剤組成物に添加して、様々な
試験特性についてアッセイした。
【０３４６】
以下は、タテ型（top-loading）自動洗濯機に好適な液体洗濯洗剤組成物（１、２及び
４）並びにドラム式（front loading）洗濯機に好適な液体洗濯洗剤組成物（３）である
。
【表５】
2019068807.tif 000007
【０３４７】
１  ランダムグラフトコポリマーは、ポリエチレンオキシド主鎖と複数のポリビニルア
セテート側鎖とを有する、ポリビニルアセテートグラフト化ポリエチレンオキシドコポリ
マーである。ポリエチレンオキシド主鎖の分子量は約６０００であり、ポリエチレンオキ
シドとポリビニルアセテートとの重量比は約４０：６０であり、５０個のエチレンオキシ
ド単位当たりのグラフト点は１以下である。
【０３４８】
２  −ＮＨにつき２０個のエトキシル基を有するポリエチレンイミン（ＭＷ＝６００）
。
【０３４９】
３  両親媒性アルコキシル化グリースクリーニングポリマーは、−ＮＨにつき２４個の
エトキシル基、及び−ＮＨにつき１６個のプロポキシル基を有するポリエチレンイミン（
ＭＷ＝６００）である。
【０３５０】
パートＩ実施例
【実施例】
【０３５１】
（実施例１）
アッセイ
以下に示されるような様々なアッセイを用いた。以下に提供されるプロトコルからの任
意の派生が、続く実施例に示される。
【０３５２】
Ａ．９６ウェルマイクロタイタープレートでタンパク質含量を測定するためのＴＣＡア
ッセイ。
【０３５３】
ＢＰＮ’及びＢＰＮ’変異体に関し、このアッセイは、３３〜３７℃にて、加湿エアレ
ーション下で、２３０〜２５０ｒｐｍで振盪させながら３〜４日増殖させた、マイクロタ
イタープレートの、枯草菌（B. subtilis）細菌培養上清の濾過物を用いて開始した。新
しい９６ウェルの平底マイクロタイタープレート（ＭＴＰ）をアッセイに使用した。最初
に、１００μＬ／ウェルの０．２５Ｎ  ＨＣｌを各ウェルに配置した。次いで、培養ブロ
ス濾過物２５μＬを加えた。次いで、「ブランク」読み取り値を得るために、４０５ｎｍ
で光散乱／吸光度（プレートリーダーの５秒混合モードを使用）を測定した。試験のため
、１００μＬ／ウェルの３０％（ｗ／ｖ）トリクロロ酢酸（ＴＣＡ）をプレートに配置し
、室温で１０分にわたってインキュベートした。次いで、４０５ｎｍでの光散乱／吸光度
（プレートリーダーの５秒混合モードを使用）を測定した。装置はＢｉｏｍｅｋ  ＦＸロ
ボット（Beckman Coulter）及びＳｐｅｃｔｒａＭＡＸ（３４０型、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
Ｄｅｖｉｃｅｓ）ＭＴＰリーダーを使用した。ＭＴＰはＣｏｓｔａｒから得た（９０１
７型）。
【０３５４】
計算は、ＴＣＡを用いる試験読み取り値から、ブランク（ＴＣＡ不使用）を減算するこ
とで実施され、サンプル中のタンパク質含量が相対的に測定された。必要に応じて、既知
の変換係数を用い、クローンのＡＡＰＦアッセイにより、ＴＣＡ読み取り値を較正するこ
とで、検量線を生成することができる。しかしながら、ＴＣＡ結果は１ｍＬあたり２５０
〜２５００マイクログラムのタンパク質濃度（ｐｐｍ）に対して直線であることから、良
好に機能する変異体を選択するために、酵素性能に対して直接プロットすることができる
。サンプルの濁度／光散乱は、培養上清中の沈殿し得る合計タンパク質の量に相関して増
加する。
【０３５５】
Ｂ．９６ウェルマイクロタイタープレートでのＡＡＰＦプロテアーゼアッセイ
本発明のプロテアーゼ及び変異体のプロテアーゼ活性を測定するために、Ｎ−スクシニ
ル−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｌ−プロリル−Ｌ−フェニル−ｐ−ニトロアニリド（
ｓｕｃ−ＡＡＰＦ−ｐＮＡ）の加水分解を計測した。使用した試薬溶液は、以下のもので
あった：０．００５％のＴＷＥＥＮ（登録商標）−８０を含有している１００ｍＭのトリ
ス／ＨＣｌ（ｐＨ  ８．６）（トリス希釈緩衝液）、１０ｍＭのＣａＣｌ２及び０．００
５％のＴＷＥＥＮ（登録商標）−８０を含有している１００ｍＭトリス緩衝液（ｐＨ  ８
．６）（トリス／Ｃａ緩衝液）、並びに１６０ｍＭのｓｕｃ−ＡＡＰＦ−ｐＮＡ／ＤＭＳ
Ｏ（ｓｕｃ−ＡＡＰＦ−ｐＮＡ保存溶液）（Ｓｉｇｍａ：Ｓ−７３８８）。ｓｕｃ−ＡＡ
ＰＦ−ｐＮＡ希釈標準溶液を調製するために、１ｍＬのｓｕｃ−ＡＡＰＦ−ｐＮＡ原液を
１００ｍＬのトリス／Ｃａ緩衝液に加え、少なくとも１０秒にわたってウェルをよく混合
した。１０μＬの希釈プロテアーゼ溶液を各ウェルに加え、直ちに１ｍｇ／ｍＬのｓｕｃ
−ＡＡＰＦ−ｐＮＡ希釈標準溶液１９０μＬを加えてアッセイを実施した。溶液を５秒に
わたって混合し、吸光度の変化を、２５℃にて、４０５ｎｍで、ＭＴＰリーダーの動的解
析モードにより読み取りした（５分毎に２５回読み取り）。プロテアーゼ活性はＡＵとし
て表記される（活性＝ΔＯＤ・ｍｉｎ−１ｍｌ−１）。
【０３５６】
Ｃ．ＢＭＩ微小標本アッセイ
血液、ミルク及びインク（ＢＭＩ）のシミをつけた、直径５．５ミリメートルの円形微
小標本をＣＦＴから得た。標本を切りだす前に、布地（ＥＭＰＡ  １１６）を水で洗浄し
た。９６ウェル非結合マイクロタイタープレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ  ３６４１）の各ウェ
ルに微小標本を１つずつ配置した。アッセイに使用した洗剤には、洗剤組成物１、洗剤組
成物２及び洗剤組成物４が含まれた。洗剤をミリＱ（脱イオン）水で濃度０．７８８ｇ／
Ｌの使用強度に希釈した。５ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ  ８．２又はｐＨ  ７．２）を洗剤
に加えることで、これらの洗剤をそれぞれｐＨ  ８又はｐＨ  ７に緩衝化させた。更に、
ガロンあたり６グレイン（ｇｐｇ）の硬度の水（３：１のＣａ：Ｍｇ−ＣａＣｌ２：Ｍｇ
Ｃｌ２・６Ｈ２Ｏ）を添加した。洗剤溶液を、１６℃でのアッセイのためにアイスウォー
ターバスで（３２℃でのアッセイのためには室温で）予め平衡化し、循環リザーバ（Ｂｅ
ｃｋｍａｎ  ＦＸ）に注入した。次いで、微小標本を含有しているＭＴＰの各ウェルに所
望の洗剤溶液１９０μＬを加えた。この混合物に、酵素を希釈した１０μＬのマスター希
釈溶液を加え、酵素濃度をおよそ０．４〜０．５μｇ／ｍＬにした。マスター希釈物は培
養上清から８μｇ／ｍＬで調製されており、ここで、培養上清及びＢＰＮ’−ｖ３又はＢ
ＰＮ’−ｖ３６親対照の、およその酵素濃度は、既知の濃度の精製ＢＰＮ’−ｖ３又はＢ
ＰＮ’−ｖ３６標準の濃度に基づいて、ＡＡＰＦプロテアーゼ活性アッセイを用いて判定
した。ＭＴＰをテープでシールし、冷蔵保管されるサンプルの場合１６℃に予め設定した
、又は卓上のサンプルの場合３２℃に予め設定したｉＥＭＳ恒温器／振盪機（Ｔｈｅｒｍ
ｏ／Ｌａｂｓｙｓｔｅｍｓ）内に、１４００ｒｐｍで撹拌しながら２０分間定置した。適
切な条件下でのインキュベーション後、各プレートからシーリングテープを取り外し、各
ウェルから１２５μＬの溶液（より少量を選別するため手作業によりピペット操作を行う
場合には１５０μＬ）を新しいＭＴＰ（Ｃｏｒｎｉｎｇ  ９０１７）に移した。１２５μ
Ｌ〜１５０μＬの溶液／ウェルを含有させた新しいＭＴＰを、ＭＴＰ  ＳｐｅｃｔｒａＭ
ａｘリーダー（３４０型、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）を用い、６００ｎｍで
（５秒混合モードのプレートリーダーにより）読み取りした。ブランク対照には微小標本
及び洗剤は含有させたが、酵素は含有させなかった。得られた吸光度値をブランク値（酵
素を除く基質）について補正し、加水分解活性を測定した。各サンプル（変異体）に関し
、性能指数を以下に記載するように算出した。６０°Ｆ（１６℃）及びｐＨ  ８にて実施
するこのＢＭＩ微小標本アッセイを、本明細書では「試験方法」として参照する。
【０３５７】
Ｄ．卵微小標本アッセイ
色素含むＣＳ３８時効処理卵黄でシミを付けた直径５．５ミリメートルの円形綿微小標
本をＣＦＴから得た。これらの標本は、水で予めすすがなかった。９６ウェル非結合マイ
クロタイタープレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ  ３６４１）の各ウェルに微小標本を１つずつ配
置した。洗剤組成物４をミリＱ（脱イオン）水で濃度０．７８８ｇ／Ｌの使用強度に希釈
した。５ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ  ８．２）を洗剤に加えることで、この洗剤をｐＨ  ８
に緩衝化させた。更に、ガロンあたり６グレイン（ｇｐｇ）の硬度の水（３：１のＣａ：
Ｍｇ−ＣａＣｌ２：ＭｇＣｌ２・６Ｈ２Ｏ）を添加した。洗剤溶液を、１６℃でのアッセ
イのためにアイスウォーターバスで（３２℃でのアッセイのためには室温で）予め平衡化
し、循環リザーバ（Ｂｅｃｋｍａｎ  ＦＸ）に注入した。次いで、微小標本を含有してい
るＭＴＰの各ウェルに１８５μＬの所望の洗剤溶液を添加した。この混合物に、酵素を希
釈した１５μＬのマスター希釈溶液を加え、反応液中の酵素濃度をおよそ０．６μｇ／ｍ
Ｌにした。マスター希釈物は培養上清から８μｇ／ｍＬで調製されており、ここで、培養
上清及びＢＰＮ’−ｖ３又はＢＰＮ’−ｖ３６親対照の、およその酵素濃度は、既知の濃
度の精製ＢＰＮ’−ｖ３又はＢＰＮ’−ｖ３６標準の濃度に基づいて、ＡＡＰＦプロテア
ーゼ活性アッセイを用いて判定した。ＭＴＰをテープでシールし、冷蔵保管されるサンプ
ルの場合１６℃に予め設定した、又は卓上のサンプルの場合３２℃に予め設定したｉＥＭ
Ｓ恒温器／振盪機（Ｔｈｅｒｍｏ／Ｌａｂｓｙｓｔｅｍｓ）内に、１４００ｒｐｍで撹拌
しながら３０分間定置した。適切な条件下でのインキュベーション後、各プレートからシ
ーリングテープを取り外し、各ウェルから１２５μＬの溶液（より少量を選別するため手
作業によりピペット操作を行う場合には１５０μＬ）を新しいＭＴＰ（Ｃｏｒｎｉｎｇ  
９０１７）に移した。１２５μＬ〜１５０μＬの溶液／ウェルを含有させた新しいＭＴＰ
を、ＭＴＰ  ＳｐｅｃｔｒａＭａｘリーダー（３４０型、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉ
ｃｅｓ）を用い、４０５ｎｍで（５秒混合モードのプレートリーダーにより）読み取りし
た。ブランク対照には微小標本及び洗剤は含有させたが、酵素は含有させなかった。得ら
れた吸光度値をブランク値（酵素を除く基質）について補正し、加水分解活性を測定した
。各サンプル（変異体）に関し、性能指数を以下に記載するように算出した。
【０３５８】
Ｅ．植物微小標本アッセイ
ＷａｒｗｉｃｋからＷａｒｗｉｃｋ  Ｅｑｕｅｓｔの植物を擦りつけた織布綿標本を得
た。これらの標本は、９６ウェル非結合マイクロタイタープレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ  ３
６４１）の各ウェルに１つの微小標本を配置する特注９６ウェル押し抜き機を用いて、５
．５ミリメートル直径の円形微小標本に切断された。標本の切断後、この布地を、水で希
釈した５０％使用強度の洗剤組成物４をウェルあたり１００μＬ用いてウェルの中で洗浄
した（予洗いした）。１００μＬの５０％の洗剤予洗い液により２０分間予洗いした後、
予洗い液を手操作により注意深くピペッティングして除去した。洗剤組成物４をミリＱ（
脱イオン）水で濃度０．７８８ｇ／Ｌの使用強度に希釈した。５ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ
８．２）を洗剤に加えることで、これらの洗剤をｐＨ  ８に緩衝化させた。更に、ガロ
ンあたり６グレイン（ｇｐｇ）の硬度の水（３：１のＣａ：Ｍｇ−ＣａＣｌ２：ＭｇＣｌ
２・６Ｈ２Ｏ）を添加した。洗剤溶液を、１６℃でのアッセイのためにアイスウォーター
バスで（３２℃でのアッセイのためには室温で）予め平衡化した。次に、予洗いの完了後
、直ちに１８０μＬの所望の洗剤溶液を、微小標本を含有するＭＴＰの各ウェルに添加し
た。この混合物に、希釈した酵素のマスター希釈液を２０μＬ加え、反応時酵素濃度をお
よそ０．８μｇ／ｍＬにした。マスター希釈物は培養上清から８μｇ／ｍＬで調製されて
おり、ここで、培養上清及びＢＰＮ’−ｖ３６親対照の、およその酵素濃度は、既知の濃
度の精製ＢＰＮ’−ｖ３６標準の濃度に基づいて、ＡＡＰＦプロテアーゼ活性アッセイを
用いて判定した。ＭＴＰをテープでシールし、冷蔵保管されるサンプルの場合１６℃に予
め設定した、又は卓上のサンプルの場合３２℃に予め設定したｉＥＭＳ恒温器／振盪機（
Ｔｈｅｒｍｏ／Ｌａｂｓｙｓｔｅｍｓ）内に、１４００ｒｐｍで撹拌しながら３０分間定
置した。適切な条件下でのインキュベーション後、各プレートからシーリングテープを取
り外し、各ウェルから１２５μＬの溶液（より少量を選別するため手作業によりピペット
操作を行う場合には１５０μＬ）を新しいＭＴＰ（Ｃｏｒｎｉｎｇ  ９０１７）に移した
。１２５μＬ〜１５０μＬの溶液／ウェルを含有させた新しいＭＴＰを、ＭＴＰ  Ｓｐｅ
ｃｔｒａＭａｘリーダー（３４０型、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）を用い、４
３０ｎｍ及び６７０ｎｍの両方で（５秒混合モードのプレートリーダーにより）読み取り
した。ブランク対照には微小標本及び洗剤は含有させたが、酵素は含有させなかった。得
られた吸光度値をブランク値（酵素を除く基質）について補正し、加水分解活性を測定し
た。各サンプル（変異体）に関し、性能指数を以下に記載するように算出した。
【０３５９】
Ｆ．安定性アッセイ
水に希釈した４０％の濃洗剤組成物３の存在下で、プロテアーゼ変異体の安定性を測定
した。試薬は、ミリＱ水で５０％に希釈した洗剤組成物３、１０ｍＭのＭＥＳ  ０．０１
％  ＴＷＥＥＮ（登録商標）−８０（ｐＨ  ５．８）マスター希釈緩衝液、ＡＡＰＦ試薬
を使用した：ＡＡＰＦアッセイのプロトコルを参照されたい。装置は、希釈酵素を洗剤に
希釈するための平底ＭＴＰ（Ｃｏｒｎｉｎｇ  ９０１７）、並びにｓｕｃ−ＡＡＰＦ−ｐ
ＮＡプレート、Ｂｉｏｍｅｋ  ＦＸ（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ）、Ｓｐｅｃｔｒ
ａｍａｘ  Ｐｌｕｓ３８４  ＭＴＰリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）、
ｉＥＭＳ恒温器／振盪機（１ｍｍ振幅）（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｅｌｅｃｔｒｏｎ  Ｃｏｒｐｏ
ｒａｔｉｏｎ）、シーリングテープ：Ｎｕｎｃ（２３６３６６）、循環リザーバ（Ｂｅｃ
ｋｍａｎ  Ｆｘ）を使用した。
【０３６０】
まず始めに洗剤組成物３を水で５０％に希釈する。この洗剤を室温に維持し、循環リザ
ーバを循環させた。ｉＥＭＳ恒温器／振盪機（Ｔｈｅｒｍｏ／Ｌａｂｓｙｓｔｅｍｓ）を
予め４３℃に設定した。マスター希釈緩衝液を含有させたプレートで、培養上清を約２０
ｐｐｍの濃度に希釈した（マスター希釈プレート）。次いで、５０％洗剤組成物３を１６
０μＬ含有しているプレートに、マスター希釈プレートから４０μＬのサンプルを加え、
最終インキュベーション濃度４ｐｐｍを得た。含有物を混合し、室温で維持し、これらの
プレートで三組ＡＡＰＦアッセイを直ちに実施して、ストレス負荷していない読み取り値
として記録した。上記工程のサンプル２０μＬを１９０μＬのｓｕｃ−ＡＡＰＦ−ｐＮＡ
希釈標準溶液に加えるようＡＡＰＦアッセイを改変した。プレートを直ちにシーリングテ
ープで覆い、４３℃のｉＥＭＳ震盪機に、６５０ｒｐｍにて３０分の間配置した。３０分
間インキュベーションした後、これらのストレス負荷プレートで三組ＡＡＰＦアッセイを
実施し、ストレス負荷した場合の読み取り値を記録した。次のように残留及び開始ＡＡＰ
Ｆ比を算出することにより、サンプルの安定性を測定した：残効性（％）＝［ｍＯＤ．ｍ
ｉｎ−１ストレス負荷］＊１００／［ｍＯＤ．ｍｉｎ−１ストレス未負荷］各サンプル（
変異体）に関し、性能指数を以下に記載するように算出した。
【０３６１】
Ｇ．ＬＡＳ／ＥＤＴＡ安定性アッセイ
代表的なアニオン性界面活性剤（ＬＡＳ＝直鎖アルキルベンゼンスルホン酸塩、具体的
には、ドデシルベンゼン硫酸ナトリウムＤＯＢＳ）及びＥＤＴＡ二ナトリウムの存在下で
のプロテアーゼ変異体の安定性を、所定の条件下でのインキュベーション後に測定し、Ａ
ＡＰＦアッセイを用いて残効性を測定した。試薬は、ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリ
ウム塩（ＤＯＢＳ，Ｓｉｇｍａ  Ｎｏ．Ｄ−２５２５）、ＴＷＥＥＮ（登録商標）−８０
（Ｓｉｇｍａ  Ｎｏ．Ｐ−８０７４）、ＥＤＴＡ二ナトリウム（Ｓｉｅｇｆｒｉｅｄ  Ｈ
ａｎｄｅｌ  Ｎｏ．１６４５９９−０２）、ＨＥＰＥＳ（Ｓｉｇｍａ  Ｎｏ．Ｈ−７５２
３）、未負荷緩衝液：５０ｍＭのＨＥＰＥＳ（１１．９ｇ／Ｌ）＋０．００５％  ＴＷＥ
ＥＮ（登録商標）−８０（ｐＨ  ８．０）、負荷緩衝液：５０ｍＭのＨＥＰＥＳ（１１．
９ｇ／Ｌ）、０．１％（ｗ／ｖ）ＤＯＢＳ（１ｇ／Ｌ）、１０ｍＭのＥＤＴＡ（３．３６
ｇ／Ｌ）（ｐＨ  ８．０）、参照プロテアーゼ及びプロテアーゼ変異体培養上清（２００
〜４００μｇ／ｍＬのタンパク質を含有）を使用した。装置は、希釈プレートとしてＶ又
はＵ底ＭＴＰ（それぞれＧｒｅｉｎｅｒ  ６５１１０１及び６５０１６１）、未負荷及び
ＬＡＳ／ＥＤＴＡ緩衝液用平底ＭＴＰ（Ｃｏｒｎｉｎｇ  ９０１７）、並びにｓｕｃ−Ａ
ＡＰＦ−ｐＮＡプレート、Ｂｉｏｍｅｋ  ＦＸ（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ）、Ｓ
ｐｅｃｔｒａｍａｘ  Ｐｌｕｓ  ３８４  ＭＴＰリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖ
ｉｃｅｓ）、ｉＥＭＳ恒温器／振盪機（１ｍｍ振幅）（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｅｌｅｃｔｒｏｎ
Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、及びＮｕｎｃシーリングテープ（２３６３６６）を使用し
た。
【０３６２】
ｉＥＭＳ恒温器／振盪機（Ｔｈｅｒｍｏ／Ｌａｂｓｙｓｔｅｍｓ）は２９℃に設定した
。培養上清を、未負荷緩衝液を含有しているプレートで約２５ｐｐｍ濃度に希釈した（マ
スター希釈プレート）。次いで、マスター希釈プレートから、２０μＬのサンプルを、未
負荷緩衝液を１８０μＬ含有しているプレートに加え、最終インキュベーション濃度２．
５ｐｐｍを得た。含有物を混合し、室温で維持し、このプレートでＡＡＰＦアッセイを実
施した。次いで、マスター希釈プレートから、２０μＬのサンプルを、１８０μＬ負荷緩
衝液（５０ｍＭのＨＥＰＥＳ（１１．９ｇ／Ｌ）、０．１％（ｗ／ｖ）ＤＯＢＳ（１ｇ／
Ｌ）、１０ｍＭのＥＤＴＡ（３．３６ｇ／Ｌ）（ｐＨ  ８．０））を含有しているプレー
トに加えた。溶液を混合し、直ちに、２９℃のｉＥＭＳ震盪機に４００ｒｐｍで３０分間
配置した。３０分インキュベーションした後、ＡＡＰＦアッセイを負荷プレートで実施し
た。次のように残留及び開始ＡＡＰＦ比を算出することにより、サンプルの安定性を測定
した：残効性（％）＝［ｍＯＤ．ｍｉｎ−１ストレス負荷］＊１００／［ｍＯＤ．ｍｉｎ
−１ストレス未負荷］各サンプル（変異体）に関し、性能指数を以下に記載するように算
出した。
【０３６３】
性能指数
性能指数により、同じタンパク質濃度下での変異体の性能（実測値）と標準又は参照プ
ロテアーゼ酵素の性能（理論値）との比較が得られる。理論値は、標準／参照プロテアー
ゼの性能−用量応答曲線（performance dose response curve）のパラメーターを用いて
（すなわちラングミュア等式を用いて性能曲線を生成することで）算出することができる
。性能指数（ＰＩ）が１超（ＰＩ＞１）の場合は、標準又は参照プロテアーゼ（例えば、
野生型プロテアーゼ又はその他のプロテアーゼ変異体であり得る）と比較したときに、変
異体がより良好なものであることが特定され、一方でＰＩが１（ＰＩ＝１）である場合は
、変異体が標準又は参照プロテアーゼと同様に機能することが特定され、及びＰＩが１未
満（ＰＩ＜１）の場合は、変異体の機能性が標準又は参照プロテアーゼよりも悪いことが
特定される。したがって、ＰＩは、優れた変異体（例えば、標準／参照プロテアーゼと比
較してタンパク質分解活性がより強い変異体）、並びに特定の状況下での使用が望ましく
ない変異体（例えば、標準／参照プロテアーゼよりもタンパク質分解活性が低い変異体）
を特定する。
【０３６４】
参照又は標準プロテアーゼよりも性能指数の値が小さい本発明のプロテアーゼ変異体は
、値の小ささにも関わらず本明細書に記載の用途及び方法で有用であることに留意するこ
とが重要である。例えば、タンパク質分解活性を有する参照又は標準プロテアーゼよりも
性能指数が低い本発明のプロテアーゼ変異体は、本発明の組成物、例えば限定するもので
はないが、例えば、様々な表面及び物品（例えば、洗濯物、布地、及び食卓用食器類、及
びパーソナルケア用品及び組成物が含まれるが挙げられるがこれらに限定されない）など
をクリーニングするためのクリーニング組成物（限定するものではないが、例えば、洗剤
クリーニング組成物が挙げられる）並びにパーソナルケア用適用物及び本明細書に記載さ
れるような組成物に使用するのに有用であり、このようなプロテアーゼ変異体は、同様に
本明細書に記載される布地ケア製品及びホームケア製品及び組成物、並びに布地ケア及び
ホームケア用ではない製品及び組成物、並びに本発明の方法（限定するものではないが、
例えば、本明細書に記載されるクリーニング方法、パーソナルケアの方法など）にも有用
である。
【０３６５】
以下に示される様々な用語は変異体を記載するために使用される：有害でない変異体は
ＰＩ＞０．０５であり、有害な変異体はＰＩが０．０５以下であり、組み合わせ可能な変
異体は少なくとも１つの特性について性能指数が０．２以上であり、すべての特性につい
て＞０．０５である。組み合わせ可能な変異体は、１つ以上の所望の特性について適切な
性能指数を有する送達タンパク質と組み合わせることができる。これらのデータは、任意
のスブチリシン／サブチラーゼ又はプロテアーゼを設計するために使用される。サブチラ
ーゼ又はプロテアーゼが、１つ以上の特定の位置でスブチリシンＢＰＮ’と異なるアミノ
酸を有するように設計された場合でさえも、これらのデータは、ＢＰＮ’野生型アミノ酸
の置換を含む最良の置換の選択を特定することにより、所望の特性を変更するアミノ酸置
換を特定するのに使用される。
【０３６６】
（実施例２）
ＢＰＮ’ライブラリの構築及びＢＰＮ’変異体のクリーニング性能
ａ）ライブラリ構築に使用されるＢＰＮ’−ｖ３発現カセットの説明
コンビナトリアルライブラリの構築に使用されるＢＰＮ’−ｖ３（Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２
８Ａ−Ｙ２１７Ｑ置換を含有するＢＰＮ’プロテアーゼ）発現カセットは、ａｐｒＥ−Ｂ
ＰＮ’ハイブリッドリーダー配列（すなわち、シグナル配列）、バチルス・アミロリケフ
ァシエンス（B. amyloliquefaciens）由来のＢＰＮ’プロ及びＢＰＮ’成熟配列を含む、
ＢＰＮ’発現カセットを用いて作成された。ＤＮＡ配列を以下に配列番号１として示し、
ＢＰＮ’前駆タンパク質をコードしている配列を以下に配列番号１６８として示す。
【配列表１】
【０３６７】
2019068807.tif 000008
配列番号１のヌクレオチド配列において、成熟型プロテアーゼをコードしているＤＮＡ
配列を太字で示し、リーダー配列（ａｐｒＥ−ＢＰＮ’ハイブリッドリーダー配列）をコ
ードしているヌクレオチド配列は標準テキスト（下線なし）で示し、及びプロ配列（ＢＰ
Ｎ’）をコードしているヌクレオチド配列には下線を付する。配列番号１６８にＢＰＮ’
前駆タンパク質のアミノ酸配列（ａｐｒＥ−ＢＰＮ’ハイブリッドリーダー配列、ＢＰＮ
’プロ配列、及びＢＰＮ’成熟タンパク質の配列）を示す。太字の箇所は成熟スブチリシ
ンＢＰＮ’プロテアーゼを示す。
【配列表２】
【０３６８】
2019068807.tif 000009
したがって、成熟スブチリシンＢＰＮ’プロテアーゼのアミノ酸配列は、以下である：
ＡＱＳＶＰＹＧＶＳＱＩＫＡＰＡＬＨＳＱＧＹＴＧＳＮＶＫＶＡＶＩＤＳＧＩＤＳＳＨ
ＰＤＬＫＶＡＧＧＡＳＭＶＰＳＥＴＮＰＦＱＤＮＮＳＨＧＴＨＶＡＧＴＶＡＡＬＮＮＳＩ
ＧＶＬＧＶＡＰＳＡＳＬＹＡＶＫＶＬＧＡＤＧＳＧＱＹＳＷＩＩＮＧＩＥＷＡＩＡＮＮＭ
ＤＶＩＮＭＳＬＧＧＰＳＧＳＡＡＬＫＡＡＶＤＫＡＶＡＳＧＶＶＶＶＡＡＡＧＮＥＧＴＳ
ＧＳＳＳＴＶＧＹＰＧＫＹＰＳＶＩＡＶＧＡＶＤＳＳＮＱＲＡＳＦＳＳＶＧＰＥＬＤＶＭ
ＡＰＧＶＳＩＱＳＴＬＰＧＮＫＹＧＡＹＮＧＴＳＭＡＳＰＨＶＡＧＡＡＡＬＩＬＳＫＨＰ
ＮＷＴＮＴＱＶＲＳＳＬＥＮＴＴＴＫＬＧＤＳＦＹＹＧＫＧＬＩＮＶＱＡＡＡＱ（配列番
号２）
成熟ＢＰＮ’−ｖ３遺伝子のヌクレオチド配列は、以下に示される（ＢＰＮ’−ｖ３発
現カセットで使用されるシグナル配列及びプロペプチド配列は、配列番号１に示されるＢ
ＰＮ’と同様である）：
ＧＣＧＣＡＧＴＣＣＧＴＧＣＣＴＴＡＣＧＧＣＧＴＡＴＣＡＣＡＡＡＴＴＡＡＡＧＣＣ
ＣＣＴＧＣＴＣＴＧＣＡＣＴＣＴＣＡＡＧＧＣＴＡＣＡＣＴＧＧＡＴＣＡＡＡＴＧＴＴＡ
ＡＡＧＴＡＧＣＧＧＴＴＡＴＣＧＡＣＡＧＣＧＧＴＡＴＣＧＡＣＴＣＧＡＧＣＣＡＴＣＣ
ＡＧＡＴＣＴＴＡＡＡＧＴＣＧＣＴＧＧＡＧＧＧＧＣＴＴＣＴＡＴＧＧＴＧＣＣＧＴＣＣ
ＧＡＡＡＣＡＡＡＣＣＣＧＴＴＴＣＡＡＧＡＴＡＡＣＡＡＴＴＣＴＣＡＴＧＧＣＡＣＡＣ
ＡＣＧＴＣＧＣＡＧＧＡＡＣＧＧＴＴＧＣＧＧＣＧＴＴＡＡＡＣＡＡＴＴＣＴＡＴＴＧＧ
ＣＧＴＧＣＴＴＧＧＴＧＴＡＧＣＣＣＣＧＴＣＴＧＣＴＴＣＧＣＴＣＴＡＣＧＣＣＧＴＴ
ＡＡＡＧＴＴＣＴＴＧＣＡＧＣＡＧＡＣＧＧＡＴＣＡＧＧＣＣＡＡＴＡＣＴＣＡＴＧＧＡ
ＴＴＡＴＣＡＡＣＧＧＣＡＴＣＧＡＡＴＧＧＧＣＣＡＴＣＧＣＧＡＡＴＡＡＣＡＴＧＧＡ
ＴＧＴＡＡＴＣＡＡＣＡＴＧＡＧＣＣＴＧＧＧＡＧＣＡＣＣＡＡＧＣＧＧＣＡＧＴＧＣＧ
ＧＣＡＣＴＴＡＡＡＧＣＡＧＣＡＧＴＴＧＡＴＡＡＡＧＣＴＧＴＴＧＣＡＴＣＴＧＧＴＧ
ＴＣＧＴＣＧＴＡＧＴＡＧＣＧＧＣＡＧＣＴＧＧＧＡＡＴＧＡＧＧＧＡＡＣＡＴＣＣＧＧ
ＡＴＣＡＴＣＧＡＧＴＡＣＣＧＴＣＧＧＴＴＡＴＣＣＡＧＧＣＡＡＧＴＡＣＣＣＴＴＣＡ
ＧＴＧＡＴＴＧＣＡＧＴＧＧＧＣＧＣＴＧＴＡＧＡＣＴＣＴＴＣＡＡＡＴＣＡＡＣＧＴＧ
ＣＣＴＣＴＴＴＴＴＣＣＴＣＣＧＴＧＧＧＡＣＣＧＧＡＧＣＴＧＧＡＴＧＴＣＡＴＧＧＣ
ＣＣＣＴＧＧＣＧＴＴＴＣＴＡＴＴＣＡＡＴＣＧＡＣＧＣＴＴＣＣＡＧＧＧＡＡＣＡＡＧ
ＴＡＴＧＧＴＧＣＧＣＡＡＡＡＣＧＧＧＡＣＴＴＣＣＡＴＧＧＣＣＴＣＧＣＣＧＣＡＴＧ
ＴＡＧＣＴＧＧＧＧＣＧＧＣＣＧＣＡＴＴＧＡＴＴＣＴＴＴＣＴＡＡＧＣＡＣＣＣＧＡＡ
ＣＴＧＧＡＣＡＡＡＣＡＣＴＣＡＡＧＴＣＣＧＣＡＧＣＡＧＴＴＴＡＧＡＡＡＡＣＡＣＣ
ＡＣＴＡＣＡＡＡＡＣＴＴＧＧＴＧＡＴＴＣＴＴＴＣＴＡＣＴＡＴＧＧＡＡＡＡＧＧＧＣ
ＴＧＡＴＣＡＡＣＧＴＡＣＡＧＧＣＧＧＣＡＧＣＴＣＡＧ（配列番号３）
成熟ＢＰＮ’−ｖ３プロテアーゼ変異体のタンパク質配列は、以下に示される（ＢＰＮ
’−ｖ３発現カセットで使用されるシグナル配列及びプロペプチド配列は、配列番号１６
８に示されるＢＰＮ’と同じである）：
ＡＱＳＶＰＹＧＶＳＱＩＫＡＰＡＬＨＳＱＧＹＴＧＳＮＶＫＶＡＶＩＤＳＧＩＤＳＳＨ
ＰＤＬＫＶＡＧＧＡＳＭＶＰＳＥＴＮＰＦＱＤＮＮＳＨＧＴＨＶＡＧＴＶＡＡＬＮＮＳＩ
ＧＶＬＧＶＡＰＳＡＳＬＹＡＶＫＶＬＡＡＤＧＳＧＱＹＳＷＩＩＮＧＩＥＷＡＩＡＮＮＭ
ＤＶＩＮＭＳＬＧＡＰＳＧＳＡＡＬＫＡＡＶＤＫＡＶＡＳＧＶＶＶＶＡＡＡＧＮＥＧＴＳ
ＧＳＳＳＴＶＧＹＰＧＫＹＰＳＶＩＡＶＧＡＶＤＳＳＮＱＲＡＳＦＳＳＶＧＰＥＬＤＶＭ
ＡＰＧＶＳＩＱＳＴＬＰＧＮＫＹＧＡＱＮＧＴＳＭＡＳＰＨＶＡＧＡＡＡＬＩＬＳＫＨＰ
ＮＷＴＮＴＱＶＲＳＳＬＥＮＴＴＴＫＬＧＤＳＦＹＹＧＫＧＬＩＮＶＱＡＡＡＱ（配列番
号４）
ｂ）ｐＨＰＬＴ−ＢＰＮ’−ｖ３プラスミドを用いるコンビナトリアルライブラリの構
築
上記のＢＰＮ’−ｖ３発現カセットを含有しているｐＨＰＬＴ−ＢＰＮ’−ｖ３プラス
ミド（図１を参照されたい）を、クローニング用のテンプレートＤＮＡとして使用して、
ＢＰＮ’−ｖ３から誘導された変異体を得た。ベクターｐＨＰＬＴ（米国特許第６，５６
６，１１２号、図４）は、バチルス・リケニホルミス（B. licheniformis）ＬＡＴプロモ
ーター（「Ｐｌａｔ」）と、ＬＡＴシグナルペプチドをコードしている配列（「プレＬＡ
Ｔ」）を含有する。プラスミドｐＵＢ１１０に由来する更なるプラスミド成分はＭｃＫｅ
ｎＺｉｅ  ｅｔ  ａｌ．、Ｐｌａｓｍｉｄ  １５（２）：９３〜１０３（１９８６）に開
示されている：「ｏｒｉ−ｐＵＢ」はｐＵＢ１１０の複製起点であり「ｎｅｏ」はｐＵＢ
１１０に由来するネオマイシン／カナマイシン耐性遺伝子であり、「終結領域」はバチル
ス・リケニホルミス（B. licheniformis）のアミラーゼの転写終結領域である。
【０３６９】
コンビナトリアルなＤＮＡライブラリはＤＮＡ  ２．０で合成され、個々のライゲーシ
ョン反応物として供給された。枯草菌（B. subtilis）の効率的な形質転換については、
場合によっては、Ｉｌｌｕｓｔｒａ  Ｔｅｍｐｌｉｐｈｉキット（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃ
ａｒｅ）を用いるローリング・サークル型増幅（ＲＣＡ）により、ライゲーション反応混
合物からＤＮＡを増幅させた。反応は製造元のプロトコルに従って実施した。１マイクロ
リットルの、１０倍希釈した増幅ＤＮＡを使用して、コンピテントな枯草菌（B. subtili
s）細胞（ΔａｐｒＥ，ΔｎｐｒＥ，ａｍｙＥ：：ｘｙｌＲＰｘｙｌＡｃｏｍＫ−ｐｈｌ
ｅｏ）５０μＬを形質転換させた。形質転換混合物を３７℃にて１時間にわたって振盪し
た。形質転換混合物の１０マイクロリットルアリコートを、１０μｇ／ｍＬのネオマイシ
ン（Ｔｅｋｎｏｖａ）を添加したスキムミルク（１．６％）Ｌｕｒｉａ寒天プレートに蒔
いた。
【０３７０】
スキムミルクプレート上でハローを形成した形質転換体をつつき、１０μｇ／ｍＬのネ
オマイシンを添加した１５０μＬのルリアブロス（ＬＢ）培地を含有しているマイクロタ
イタープレートに植菌した。マイクロタイタープレートにＥｎｚｙｓｃｒｅｅｎ  ｌｉｄ
（Ｅｎｚｙｓｃｒｅｅｎ）を用い、プレートを３７℃、７０〜８０％湿度にて、２５０〜
３００ｒｐｍで振盪させながら一晩増殖させた。一晩培養したプレートを使用し、９６ピ
ンの複製ツール（Ｅｎｚｙｓｃｒｅｅｎ）を用いて、２．５μｇ／ｍＬのネオマイシンを
添加した１８０μＬのＭＢＤ培地（ＭＯＰＳ系合成培地）を含有している新しいマイクロ
タイタープレートに接種した。ＮＨ４Ｃｌ２、ＦｅＳＯ４、及びＣａＣｌ２を基本培地か
ら除外したこと、３ｍＭのＫ２ＨＰＯ４を用いたこと、並びに、６０ｍＭの尿素、及び、
２１０ｇ／Ｌのグルコースと３５０ｇ／Ｌのマルトデキストリンとから作製した１００ｍ
Ｌの溶液を含有させたこと、を除き、ＭＢＤ培地は本質的に当該技術分野において既知で
あるように調製した１  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．１１９：７３６〜７４
７［１９７４］を参照されたい）。１ｇ／ＬのＢＤバクト酵母抽出物を添加し、ＫＯＨで
ｐＨを７．４に調整した。微量栄養素は、４００ｍｇのＦｅＳＯ４・７Ｈ２Ｏ、１００ｍ
ｇのＭｎＳＯ４・Ｈ２Ｏ、１００ｍｇのＺｎＳＯ４・７Ｈ２Ｏ、５０ｍｇのＣｕＣｌ２・
２Ｈ２Ｏ、１００ｍｇのＣｏＣｌ２・６Ｈ２Ｏ、１００ｍｇのＮａＭｏＯ４・２Ｈ２Ｏ、
１００ｍｇのＮａ２Ｂ４Ｏ７・１０Ｈ２Ｏ、１０ｍＬの１Ｍ  ＣａＣｌ２及び１０ｍＬの
０．５Ｍの０．５Ｍのクエン酸ナトリウムを１リットル中に含有している、１００Ｘ原液
として調製した。プロテアーゼ変異体を発現させるために、Ｅｎｚｙｓｃｒｅｅｎ  ｌｉ
ｄｓ（Ｅｎｚｙｓｃｒｅｅｎ）を用いて、ＭＢＤ培地を含有しているマイクロタイタープ
レートで、３７℃、７０〜８０％湿度にて、２５０〜３００ｒｐｍで、６４時間にわたっ
て増殖させた。翌日、培養物をマイクロフィルタプレート（０．２２ｕｍ、Ｍｉｌｌｉｐ
ｏｒｅ）で濾過し、プロテアーゼ変異体を含有している得られた濾液を生化学的解析に使
用した。
【０３７１】
１６℃及びｐＨ  ８での洗剤組成物１のＢＭＩ微小標本アッセイ、並びに１６℃及びｐ
Ｈ  ８での洗剤組成物２のＢＭＩ微小標本アッセイを用いて、プロテアーゼ変異体をクリ
ーニング性能について試験した。タンパク質含量はＴＣＡアッセイを用いて測定した。実
施例１に記載のようにアッセイを実施し、ＢＰＮ’−ｖ３（ＰＩ値１．０を有する）と比
較して性能指数を算出した。
【０３７２】
以下のスブチリシンＢＰＮ’プロテアーゼ変異体（：アミノ酸置換Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２
８Ａ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，の組を含むＢＰＮ’アミノ酸配列（配列番号２））は、
ｐＨ  ８及び１６℃での洗剤組成物１のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、
ＢＰＮ’−ｖ３（配列番号４）と比較して１．０超、少なくとも１．１、少なくとも１．
２、少なくとも１．３、少なくとも１．４、少なくとも１．５、少なくとも１．６、少な
くとも１．７、少なくとも１．８、少なくとも１．９、少なくとも２〜約５、又は、１．
０超〜約５のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配
列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体は、このＢＭ
Ｉ微小標本クリーニングアッセイにおいてＢＰＮ’−ｖ３に対し１．１であるＰＩ値を有
し、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活
性を有し、ＢＰＮ’のＰＩ値よりも大きいＰＩ値を有する。本発明には、本アッセイにお
いて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有するプロテア
ーゼ変異体を含み、この変異体はアミノ酸置換Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ
２１７Ｑ，を含むアミノ酸配列を有し、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配
列と対応させることにより番号付けされる。本アッセイにおいて、配列番号２と比較して
向上したタンパク質分解活性を有するプロテアーゼ変異体も包含され、この変異体は、配
列番号２の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、
９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸
配列を含み、アミノ酸置換Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，を含み、
ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることに
より番号付けされる。ＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’と比較し
て向上したタンパク質分解活性を有する、並びに／あるいはＢＰＮ’（配列番号２）及び
／又はＢＰＮ’−ｖ３のＰＩ値を超えるＰＩ値を有する、スブチリシンプロテアーゼ変異
体も提供され、この変異体は配列番号２と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、
９４％、９５％、９６％、９７％、又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、こ
こで、この変異体は、置換Ｘ０９７Ａ−Ｘ１２８Ａ−Ｘ２１０Ｓ−Ｘ２１７Ｑ，を含み、
ここで、変異体の位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされ、選択的
に、この変異体はＧ０９７Ａ，Ｇ１２８Ａ，Ｐ２１０Ｓ，及びＹ２１７Ｑの群から選択さ
れる少なくとも１つの置換を含む。このようなプロテアーゼ変異体は、単離物、組み換え
体、実質的な純品、又は天然に生じたものではないプロテアーゼ変異体であり得る。本明
細書の他箇所により詳細に記載されるような、このようなプロテアーゼ変異体を含む組成
物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、このような変
異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
【０３７３】
以下のＢＰＮ’変異体：Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８
Ａ−Ｅ１５６Ｓ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２
１７Ｑ−Ｎ２１８Ａ，Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ２１８Ｓ，
及びＧ０９７Ａ−Ｙ１０４Ｆ−Ｇ１２８Ａ−Ｅ１５６Ｓ−Ｐ２１０Ｉ−Ｙ２１７Ｑ，から
なる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’アミノ酸配列（配列
番号２）は、ｐＨ  ８及び１６℃での洗剤組成物１のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセ
イにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して約１．０のＰＩ値を有するものと判定されたが、
ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされ
る。このような変異体は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上
したタンパク質分解活性を有し、ＢＰＮ’よりもＰＩ値が大きい。本発明は、本ＢＭＩ微
小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタン
パク質分解活性を有する、あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して約１．０のＰＩ値を有す
る、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は、配列番号２の配列に対して少なくとも６
０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９
６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少
なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配
列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。ＢＭＩ微小標本クリーニング
アッセイにおいて、ＢＰＮ’と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、並びに／
あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して約１．０のＰＩ値を有する、スブチリシンプロテア
ーゼ変異体も提供され、この変異体は配列番号２に対して少なくとも９０％、９１％、９
２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するア
ミノ酸配列を含み、ここで、この変異体はＸ０９７Ａ，Ｘ１０４Ｆ，Ｘ１２８Ａ，Ｘ１５
６Ａ／Ｓ、Ｘ２１０Ｉ／Ｓ、Ｘ２１７Ｑ，Ｘ２１８Ａ／Ｓの群から選択される少なくとも
１つの置換を含み、選択的に、Ｇ０９７Ａ，Ｙ１０４Ｆ，Ｇ１２８Ａ，Ｅ１５６Ａ／Ｓ、
Ｐ２１０Ｉ／Ｓ、Ｙ２１７Ｑ，及びＮ２１８Ａ／Ｓの群から選択される少なくとも１つの
置換を含み、ここで、変異体の位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付け
される。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの
変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並び
に、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
【０３７４】
以下のＢＰＮ’変異体：Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｅ１５６Ａ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７
Ｑ−Ｎ２１８Ｓ及びＧ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ２１８Ａ，からなる群から
選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’アミノ酸配列（配列番号２）は
、ｐＨ  ８及び１６℃での洗剤組成物１のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて
、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して約０．９のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変
異体の位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異
体はタンパク質分解活性を有する。本発明は、本アッセイにおいて、タンパク質分解活性
を有する、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して約０．９のＰＩ値を有する、並びに／又はＢＰＮ’
と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、プロテアーゼ変異体を含み、この変異
体は、配列番号２の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、
９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有する
アミノ酸配列、並びに上記群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここ
で、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列の位置と対応させることにより番号付けさ
れる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変
異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに
、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
【０３７５】
以下のＢＰＮ’変異体：Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ２１８
Ａ及びＧ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，からなる群から選択される少
なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’アミノ酸配列（配列番号２）は、ｐＨ  ８及
び１６℃での洗剤組成物２のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−
ｖ３と比較して１．０超〜約５のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体の
アミノ酸位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。本発明は、本
ＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上
したタンパク質分解活性を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して１．０
超〜約５のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は配列番号２の配列
に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％
、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上
記群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位
置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。このよ
うな変異体は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパ
ク質分解活性を有し、ＢＰＮ’よりもＰＩ値が大きい。本ＢＭＩ微小標本クリーニングア
ッセイにおいて、ＢＰＮ’と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、並びに／あ
るいは、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して１超、少なくとも１．１、少なくとも１．２、少なく
とも１．３、少なくとも１．４、少なくとも１．５、少なくとも１．６、少なくとも１．
７、少なくとも１．８、少なくとも１．８、少なくとも１．９〜約５のＰＩ値を有する、
スブチリシンプロテアーゼ変異体も提供され、この変異体は配列番号２に対して少なくと
も８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％
又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、この変異体は、Ｘ０９７Ａ，
Ｘ１０４Ｆ，Ｘ１２８Ａ，Ｘ１５６Ａ／Ｓ、Ｘ２１０Ｉ／Ｓ、Ｘ２１７Ｑ，Ｘ２１８Ａ／
Ｓの群から選択される少なくとも１つの置換を含み、選択的に、Ｇ０９７Ａ，Ｙ１０４Ｆ
，Ｇ１２８Ａ，Ｅ１５６Ａ／Ｓ、Ｐ２１０Ｉ／Ｓ、Ｙ２１７Ｑ，及びＮ２１８Ａ／Ｓの群
から選択される少なくとも１つの置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番
号２の配列の位置と対応させることにより番号付けされる。このような変異体は、本アッ
セイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有し、
ＢＰＮ’よりもＰＩ値が大きい。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少な
くともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これ
に限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方
法も含まれる。
【０３７６】
以下のＢＰＮ’変異体：Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ（すなわち、ＢＰＮ’−
ｖ３）、Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｅ１５６Ｓ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，及びＧ０９７
Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ２１８Ｓ，からなる群から選択される少な
くとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’アミノ酸配列（配列番号２）は、ｐＨ  ８及び
１６℃での洗剤組成物２のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ
３と比較して約１．０のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体の位置は配
列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体は、本アッセ
イにおいて、タンパク質分解活性を有し、ＢＰＮ’と比較して向上したタンパク質分解活
性を有する。本発明は、本アッセイにおいて、タンパク質分解活性を有する、ＢＰＮ’−
ｖ３と比較して１．０のＰＩ値を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’と比較して向上し
たタンパク質分解活性を有する、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は、配列番号２
の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、
９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列、並
びに上記群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体の位置
は配列番号２の配列の位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所に
より詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリー
ニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのよ
うな変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
【０３７７】
以下のＢＰＮ’変異体：Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｅ１５６Ａ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７
Ｑ−Ｎ２１８Ｓ，Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ２１８Ａ，及びＧ０９７Ａ−
Ｙ１０４Ｆ−Ｇ１２８Ａ−Ｅ１５６Ｓ−Ｐ２１０Ｉ−Ｙ２１７Ｑ，からなる群から選択さ
れる少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’アミノ酸配列（配列番号２）は、ｐＨ
８及び１６℃での洗剤組成物２のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰ
Ｎ’−ｖ３と比較して約０．９のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体の
位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体はタ
ンパク質分解活性を有する。本発明は、本アッセイにおいて、タンパク質分解活性を有す
る、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して約０．９のＰＩ値を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’
と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、プロテアーゼ変異体を含み、この変異
体は、配列番号２の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、
９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有する
アミノ酸配列、並びに、上記群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、こ
こで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列の位置と対応させることにより番号付け
される。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの
変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並び
に、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
【０３７８】
（実施例３）
コンビナトリアルライブラリの作成及び変異体ＢＰＮ’−ｖ３＋Ｓ７８Ｎのクリーニン
グ性能
ａ）ＢＰＮ’−ｖ３＋Ｓ７８Ｎ変異体及びこの変異体から誘導される合成遺伝子配列の
説明
Ｇｅｎｅ  Ｏｒａｃｌｅは、８つの遺伝子を合成し、ｐＨＰＬＴ−ＢＰＮ’−ｖ３＋Ｓ
７８Ｎ（ＢＰＮ’−Ｓ７８Ｎ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ）親プラスミド（図２
を参照されたい）にクローン化した。これらの遺伝子のうちいくつかをテンプレート（親
）として使用し、コンビナトリアルライブラリを作成した。当該技術分野において既知の
標準的な分子生物学的手法を用いてＢＰＮ’−ｖ３＋Ｓ７８Ｎ変異体を生成した。ＢＰＮ
’−ｖ３＋Ｓ７８Ｎ変異体をコードするヌクレオチド配列を以下に示す。
【０３７９】
ＧＣＧＣＡＧＴＣＣＧＴＧＣＣＴＴＡＣＧＧＣＧＴＡＴＣＡＣＡＡＡＴＴＡＡＡＧＣＣ
ＣＣＴＧＣＴＣＴＧＣＡＣＴＣＴＣＡＡＧＧＣＴＡＣＡＣＴＧＧＡＴＣＡＡＡＴＧＴＴＡ
ＡＡＧＴＡＧＣＧＧＴＴＡＴＣＧＡＣＡＧＣＧＧＴＡＴＴＧＡＴＴＣＧＡＧＣＣＡＴＣＣ
ＡＧＡＴＣＴＴＡＡＡＧＴＣＧＣＴＧＧＡＧＧＧＧＣＴＴＣＴＡＴＧＧＴＧＣＣＧＴＣＣ
ＧＡＡＡＣＡＡＡＣＣＣＧＴＴＴＣＡＡＧＡＴＡＡＣＡＡＴＴＣＴＣＡＴＧＧＣＡＣＡＣ
ＡＣＧＴＣＧＣＡＧＧＡＡＣＧＧＴＴＧＣＧＧＣＧＴＴＡＡＡＣＡＡＴＡＡＴＡＴＴＧＧ
ＣＧＴＧＣＴＴＧＧＴＧＴＡＧＣＣＣＣＧＴＣＴＧＣＴＴＣＧＣＴＣＴＡＣＧＣＣＧＴＴ
ＡＡＡＧＴＴＣＴＴＧＣＡＧＣＡＧＡＣＧＧＡＴＣＡＧＧＣＣＡＡＴＡＣＴＣＡＴＧＧＡ
ＴＴＡＴＣＡＡＣＧＧＣＡＴＣＧＡＡＴＧＧＧＣＣＡＴＣＧＣＧＡＡＴＡＡＣＡＴＧＧＡ
ＴＧＴＡＡＴＣＡＡＣＡＴＧＡＧＣＣＴＧＧＧＡＧＣＡＣＣＡＡＧＣＧＧＣＡＧＴＧＣＧ
ＧＣＡＣＴＴＡＡＡＧＣＡＧＣＡＧＴＴＧＡＴＡＡＡＧＣＴＧＴＴＧＣＡＴＣＴＧＧＴＧ
ＴＣＧＴＣＧＴＡＧＴＡＧＣＧＧＣＡＧＣＴＧＧＧＡＡＴＧＡＧＧＧＡＡＣＡＴＣＣＧＧ
ＡＴＣＡＴＣＧＡＧＴＡＣＣＧＴＣＧＧＴＴＡＴＣＣＡＧＧＣＡＡＧＴＡＣＣＣＴＴＣＡ
ＧＴＧＡＴＴＧＣＡＧＴＧＧＧＣＧＣＴＧＴＡＧＡＣＴＣＴＴＣＡＡＡＴＣＡＡＣＧＴＧ
ＣＣＴＣＴＴＴＴＴＣＣＴＣＣＧＴＧＧＧＡＣＣＧＧＡＧＣＴＧＧＡＴＧＴＣＡＴＧＧＣ
ＣＣＣＴＧＧＣＧＴＴＴＣＴＡＴＴＣＡＡＴＣＧＡＣＧＣＴＴＣＣＡＧＧＧＡＡＣＡＡＧ
ＴＡＴＧＧＴＧＣＧＣＡＡＡＡＣＧＧＧＡＣＴＴＣＣＡＴＧＧＣＣＴＣＧＣＣＧＣＡＴＧ
ＴＡＧＣＴＧＧＧＧＣＧＧＣＣＧＣＡＴＴＧＡＴＴＣＴＴＴＣＴＡＡＧＣＡＣＣＣＧＡＡ
ＣＴＧＧＡＣＡＡＡＣＡＣＴＣＡＡＧＴＣＣＧＣＡＧＣＡＧＴＴＴＡＧＡＡＡＡＣＡＣＣ
ＡＣＴＡＣＡＡＡＡＣＴＴＧＧＴＧＡＴＴＣＴＴＴＣＴＡＣＴＡＴＧＧＡＡＡＡＧＧＧＣ
ＴＧＡＴＣＡＡＣＧＴＡＣＡＧＧＣＧＧＣＡＧＣＴＣＡＧ（配列番号７）
ＢＰＮ’−ｖ３＋Ｓ７８Ｎ変異体のアミノ酸配列を以下に示す。
【０３８０】
ＡＱＳＶＰＹＧＶＳＱＩＫＡＰＡＬＨＳＱＧＹＴＧＳＮＶＫＶＡＶＩＤＳＧＩＤＳＳＨ
ＰＤＬＫＶＡＧＧＡＳＭＶＰＳＥＴＮＰＦＱＤＮＮＳＨＧＴＨＶＡＧＴＶＡＡＬＮＮＮＩ
ＧＶＬＧＶＡＰＳＡＳＬＹＡＶＫＶＬＡＡＤＧＳＧＱＹＳＷＩＩＮＧＩＥＷＡＩＡＮＮＭ
ＤＶＩＮＭＳＬＧＡＰＳＧＳＡＡＬＫＡＡＶＤＫＡＶＡＳＧＶＶＶＶＡＡＡＧＮＥＧＴＳ
ＧＳＳＳＴＶＧＹＰＧＫＹＰＳＶＩＡＶＧＡＶＤＳＳＮＱＲＡＳＦＳＳＶＧＰＥＬＤＶＭ
ＡＰＧＶＳＩＱＳＴＬＰＧＮＫＹＧＡＱＮＧＴＳＭＡＳＰＨＶＡＧＡＡＡＬＩＬＳＫＨＰ
ＮＷＴＮＴＱＶＲＳＳＬＥＮＴＴＴＫＬＧＤＳＦＹＹＧＫＧＬＩＮＶＱＡＡＡＱ（配列番
号８）
遺伝子ＧｃＭ９０−９６及びＧｃＭ１００の、ヌクレオチド配列及びタンパク質配列を
以下に示す。合成された遺伝子ＧｃＭ９０のヌクレオチド配列は、以下の通りである。
【０３８１】
ＧＣＧＣＡＧＴＣＣＧＴＧＣＣＴＴＡＣＧＧＣＧＴＡＴＣＡＣＡＡＡＴＴＡＡＡＧＣＣ
ＣＣＴＧＣＴＣＴＧＣＡＣＴＣＴＣＡＡＧＧＣＴＡＣＡＣＴＧＧＡＴＣＡＡＡＴＧＴＴＡ
ＡＡＧＴＡＧＣＧＧＴＴＡＴＣＧＡＣＡＧＣＧＧＴＡＴＣＧＡＣＴＣＧＡＧＣＣＡＴＣＣ
ＡＧＡＴＣＴＴＡＡＡＧＴＣＧＣＴＧＧＡＧＧＧＧＣＴＴＣＴＡＴＧＧＴＧＣＣＧＧＧＡ
ＧＡＡＡＣＡＡＡＣＣＣＧＴＴＴＣＡＡＧＡＴＡＡＣＡＡＴＴＣＴＣＡＴＧＧＣＡＣＡＣ
ＡＣＧＣＡＧＣＡＧＧＡＡＣＧＧＴＴＧＣＧＧＣＧＴＴＡＡＡＣＡＡＴＡＡＴＡＴＴＧＧ
ＣＧＴＧＣＴＴＧＧＴＧＴＡＧＣＣＣＣＧＴＣＴＧＣＴＴＣＧＣＴＣＴＡＣＧＣＣＧＴＴ
ＡＡＡＧＴＴＣＴＴＧＣＡＧＣＡＧＡＣＧＧＡＴＣＡＧＣＡＣＡＡＴＡＣＴＣＡＴＧＧＡ
ＴＴＡＴＣＡＡＣＧＧＣＡＴＣＧＡＡＴＧＧＧＣＣＡＴＣＧＣＧＡＡＴＡＡＣＡＴＧＧＡ
ＴＧＴＡＡＴＣＡＡＣＡＴＧＡＧＣＣＴＧＧＧＡＧＣＡＡＣＡＡＧＣＧＧＣＡＧＴＧＣＧ
ＧＣＡＣＴＴＡＡＡＧＣＡＧＣＡＧＴＴＧＡＴＡＡＡＧＣＴＧＴＴＧＣＡＴＣＴＧＧＴＧ
ＴＣＧＴＣＧＴＡＧＴＡＧＣＧＧＣＡＧＣＴＧＧＧＡＡＴＧＡＧＧＧＡＡＣＡＴＣＣＧＧ
ＡＴＣＡＴＣＧＡＧＴＡＣＣＧＴＣＧＧＴＴＡＴＣＣＡＧＧＣＡＡＧＴＡＣＣＣＴＴＣＡ
ＧＴＧＡＴＴＧＣＡＧＴＧＧＧＣＧＣＴＧＴＡＧＡＣＴＣＴＴＣＡＡＡＴＡＣＡＣＧＴＧ
ＣＣＴＣＴＴＴＴＴＣＣＴＣＣＧＴＧＧＧＡＣＣＧＧＡＧＣＴＧＧＡＴＧＴＣＡＴＧＧＣ
ＣＣＣＴＧＧＣＧＴＴＴＣＴＡＴＴＣＡＡＴＣＧＡＣＧＣＴＴＣＣＡＧＧＧＡＡＣＡＡＧ
ＴＡＴＧＧＴＧＣＧＣＡＡＡＡＣＧＧＧＡＣＴＴＣＣＡＴＧＧＣＣＴＣＧＣＣＧＣＡＴＧ
ＴＡＧＣＴＧＧＧＧＣＧＧＣＣＧＣＡＴＴＧＡＴＴＣＴＴＴＣＴＡＡＧＣＡＣＣＣＧＡＡ
ＣＴＧＧＡＣＡＡＡＣＡＣＴＣＡＡＧＴＣＣＧＣＡＧＣＡＧＴＴＴＡＧＡＡＡＡＣＡＣＣ
ＡＣＴＡＣＡＡＡＡＣＴＴＧＧＴＧＡＴＴＣＴＴＴＣＴＡＣＴＡＴＧＧＡＡＡＡＧＧＧＣ
ＴＧＡＴＣＡＡＣＧＴＡＣＡＧＧＣＧＧＣＡＧＣＴＣＡＧＴＡＡ（配列番号９）
ＧｃＭ９０のアミノ酸配列は以下に提供される。
【０３８２】
ＡＱＳＶＰＹＧＶＳＱＩＫＡＰＡＬＨＳＱＧＹＴＧＳＮＶＫＶＡＶＩＤＳＧＩＤＳＳＨ
ＰＤＬＫＶＡＧＧＡＳＭＶＰＧＥＴＮＰＦＱＤＮＮＳＨＧＴＨＡＡＧＴＶＡＡＬＮＮＮＩ
ＧＶＬＧＶＡＰＳＡＳＬＹＡＶＫＶＬＡＡＤＧＳＡＱＹＳＷＩＩＮＧＩＥＷＡＩＡＮＮＭ
ＤＶＩＮＭＳＬＧＡＴＳＧＳＡＡＬＫＡＡＶＤＫＡＶＡＳＧＶＶＶＶＡＡＡＧＮＥＧＴＳ
ＧＳＳＳＴＶＧＹＰＧＫＹＰＳＶＩＡＶＧＡＶＤＳＳＮＴＲＡＳＦＳＳＶＧＰＥＬＤＶＭ
ＡＰＧＶＳＩＱＳＴＬＰＧＮＫＹＧＡＱＮＧＴＳＭＡＳＰＨＶＡＧＡＡＡＬＩＬＳＫＨＰ
ＮＷＴＮＴＱＶＲＳＳＬＥＮＴＴＴＫＬＧＤＳＦＹＹＧＫＧＬＩＮＶＱＡＡＡＱ（配列番
号１０）
合成された遺伝子ＧｃＭ９１のヌクレオチド配列は以下に提供される。
【０３８３】
ＧＣＧＣＡＧＴＣＣＧＴＧＣＣＴＴＡＣＧＧＣＧＴＡＴＣＡＣＡＡＡＴＴＡＡＡＧＣＣ
ＣＣＴＧＣＴＣＴＧＣＡＣＴＣＴＣＡＡＧＧＣＴＡＣＡＣＴＧＧＡＴＣＡＡＡＴＧＴＴＡ
ＡＡＧＴＡＧＣＧＧＴＴＡＴＣＧＡＣＡＧＣＧＧＴＡＴＣＧＡＣＴＣＧＡＧＣＣＡＴＣＣ
ＡＧＡＴＣＴＴＡＡＡＧＴＣＧＣＴＧＧＡＧＧＧＧＣＴＴＣＴＡＴＧＧＴＧＣＣＧＴＣＣ
ＧＡＡＡＣＡＡＡＣＣＣＧＴＴＴＧＴＣＧＡＴＡＡＣＡＡＴＴＣＴＣＡＴＧＧＣＡＣＡＣ
ＡＣＧＴＣＧＣＡＧＧＡＡＣＧＧＴＴＧＣＧＧＣＧＴＴＡＡＡＣＡＡＴＡＡＴＡＴＴＧＧ
ＣＧＴＧＣＴＴＧＧＴＧＴＡＧＣＣＣＣＧＴＣＴＧＣＴＴＣＧＣＴＣＴＡＣＧＣＣＧＴＴ
ＡＡＡＧＴＴＣＴＴＧＣＡＧＣＡＧＡＣＧＧＡＴＣＡＧＧＣＣＡＡＴＡＣＴＣＡＴＧＧＡ
ＴＴＧＴＣＡＡＣＧＧＣＡＴＣＧＡＡＴＧＧＧＣＣＡＴＣＧＣＧＡＡＴＡＡＣＡＴＧＧＡ
ＴＧＴＡＡＴＣＡＡＣＡＴＧＡＧＣＣＴＧＧＧＡＧＣＡＣＣＡＡＧＣＧＧＣＡＧＴＧＣＧ
ＧＣＡＣＴＴＡＡＡＧＣＡＧＣＡＧＴＴＧＡＴＡＡＡＧＣＴＧＴＴＧＣＡＴＣＴＧＧＴＣ
ＡＡＧＴＣＧＴＡＧＴＡＧＣＧＧＣＡＧＣＴＧＧＧＡＡＴＧＡＧＧＧＡＡＣＡＴＣＣＧＧ
ＡＴＣＡＴＣＧＡＧＴＡＣＣＧＴＣＧＧＴＴＡＴＣＣＡＧＧＣＡＡＧＴＡＣＣＣＴＴＣＡ
ＧＴＧＡＴＴＧＣＡＧＴＧＧＧＣＧＣＴＧＴＡＧＡＣＴＣＴＴＣＡＡＡＴＣＡＡＣＧＴＧ
ＣＣＴＣＴＴＴＴＴＣＣＴＣＣＧＴＧＧＧＡＣＣＧＧＡＧＣＴＧＧＡＴＧＴＣＡＴＧＧＣ
ＣＣＣＴＧＧＣＧＴＴＴＣＴＡＴＴＣＡＡＴＣＧＡＣＧＣＴＴＣＣＡＧＣＡＡＡＣＡＡＧ
ＴＡＴＧＧＴＧＣＧＣＡＡＡＡＣＧＧＧＡＣＴＴＣＣＡＴＧＧＣＣＴＣＧＣＣＧＣＡＴＧ
ＴＡＧＣＴＧＧＧＧＣＧＧＣＣＧＣＡＴＴＧＡＴＴＣＴＴＴＣＴＡＡＧＣＡＣＣＣＧＡＡ
ＣＴＧＧＡＣＡＡＡＣＡＣＴＣＡＡＧＴＣＣＧＣＡＧＣＡＧＴＴＴＡＧＡＡＣＡＡＡＣＣ
ＡＣＴＡＣＡＡＡＡＣＴＴＧＧＴＧＡＴＴＣＴＴＴＣＴＡＣＴＡＴＧＧＡＡＡＡＧＧＧＣ
ＴＧＡＴＣＡＡＣＧＴＡＣＡＧＧＣＧＧＣＡＧＣＴＣＡＧＴＡＡ（配列番号１１）
ＧｃＭ９１のアミノ酸配列は以下に提供される。
【０３８４】
ＡＱＳＶＰＹＧＶＳＱＩＫＡＰＡＬＨＳＱＧＹＴＧＳＮＶＫＶＡＶＩＤＳＧＩＤＳＳＨ
ＰＤＬＫＶＡＧＧＡＳＭＶＰＳＥＴＮＰＦＶＤＮＮＳＨＧＴＨＶＡＧＴＶＡＡＬＮＮＮＩ
ＧＶＬＧＶＡＰＳＡＳＬＹＡＶＫＶＬＡＡＤＧＳＧＱＹＳＷＩＶＮＧＩＥＷＡＩＡＮＮＭ
ＤＶＩＮＭＳＬＧＡＰＳＧＳＡＡＬＫＡＡＶＤＫＡＶＡＳＧＱＶＶＶＡＡＡＧＮＥＧＴＳ
ＧＳＳＳＴＶＧＹＰＧＫＹＰＳＶＩＡＶＧＡＶＤＳＳＮＱＲＡＳＦＳＳＶＧＰＥＬＤＶＭ
ＡＰＧＶＳＩＱＳＴＬＰＡＮＫＹＧＡＱＮＧＴＳＭＡＳＰＨＶＡＧＡＡＡＬＩＬＳＫＨＰ
ＮＷＴＮＴＱＶＲＳＳＬＥＱＴＴＴＫＬＧＤＳＦＹＹＧＫＧＬＩＮＶＱＡＡＡＱ（配列番
号１２）
合成された遺伝子ＧｃＭ９２のヌクレオチド配列は以下に提供される。
【０３８５】
ＧＣＧＣＡＧＴＣＣＧＴＧＣＣＴＴＡＣＧＧＣＧＴＡＴＣＡＣＡＡＡＴＴＡＡＡＧＣＣ
ＣＣＴＧＣＴＣＴＧＣＡＣＴＣＴＣＡＡＧＧＣＴＡＣＡＣＴＧＧＡＴＣＡＡＡＴＧＴＴＡ
ＡＡＧＴＡＧＣＧＧＴＴＡＴＣＧＡＣＡＧＣＧＧＴＡＴＣＧＡＣＴＣＧＡＧＣＣＡＴＣＣ
ＡＧＡＴＣＴＴＡＡＡＧＴＣＧＣＴＧＧＡＧＧＧＧＣＴＴＣＴＡＴＧＧＴＧＣＣＧＴＣＣ
ＧＡＡＡＣＡＡＡＣＣＣＧＴＴＴＣＡＡＧＡＴＧＣＡＡＡＴＴＣＴＣＡＴＧＧＣＡＣＡＣ
ＡＣＧＴＣＧＣＡＧＧＡＡＣＧＧＴＴＧＣＧＧＣＧＴＴＡＡＡＣＡＡＴＡＡＴＡＴＴＧＧ
ＣＧＴＧＣＴＴＧＧＴＧＴＡＧＣＣＣＣＧＧＡＡＧＣＴＴＣＧＣＴＣＴＡＣＧＣＣＧＴＴ
ＡＡＡＧＴＴＣＴＴＧＣＡＧＣＡＧＡＣＧＧＡＴＣＡＧＧＣＣＡＡＴＡＣＴＣＡＴＧＧＡ
ＴＴＡＴＣＡＡＣＧＧＣＡＴＣＧＡＡＴＧＧＧＣＣＡＴＣＧＣＧＡＡＴＡＡＣＡＴＧＧＡ
ＴＧＴＡＡＴＣＡＡＣＡＴＣＡＧＣＣＴＧＧＧＡＧＣＡＣＣＡＡＧＣＧＧＣＡＧＴＧＣＧ
ＧＣＡＣＴＴＡＡＡＧＣＡＧＣＡＧＴＴＧＡＴＡＡＡＧＣＴＧＴＴＧＣＡＴＣＴＧＧＴＧ
ＴＣＧＴＣＧＴＡＧＴＡＧＣＧＧＣＡＧＣＴＧＧＧＡＡＴＧＡＧＧＧＡＡＣＡＴＣＣＧＧ
ＡＣＣＴＴＣＧＡＧＴＡＣＣＧＴＣＧＧＴＴＡＴＣＣＡＧＧＣＡＡＧＴＡＣＣＣＴＴＣＡ
ＧＴＧＡＴＴＧＣＡＧＴＧＧＧＣＧＣＴＧＴＡＧＡＣＴＣＴＴＣＡＡＡＴＣＡＡＣＧＴＧ
ＣＣＴＣＴＴＴＴＴＣＣＴＣＣＧＴＧＧＧＡＣＣＧＧＡＧＣＴＧＧＡＴＧＴＣＡＴＧＧＣ
ＣＣＣＴＧＧＣＧＴＴＴＣＴＡＴＴＣＡＡＴＣＧＡＣＧＣＴＴＣＣＡＧＧＧＡＡＣＡＡＧ
ＴＡＴＧＧＴＧＣＧＣＡＡＡＡＣＧＧＧＡＣＴＴＣＣＡＴＧＧＣＣＧＣＡＣＣＧＣＡＴＧ
ＴＡＧＣＴＧＧＧＧＣＧＧＣＣＧＣＡＴＴＧＡＴＴＣＴＴＴＣＴＡＡＧＣＡＣＣＣＧＡＡ
ＣＴＧＧＡＣＡＡＡＣＡＣＴＣＡＡＧＴＣＣＧＣＡＧＣＡＧＴＴＴＡＧＡＡＡＡＣＡＣＣ
ＡＣＴＡＣＡＡＡＡＣＴＴＧＧＴＧＡＴＴＣＴＴＴＣＴＡＣＴＡＴＧＧＡＡＡＡＧＧＧＣ
ＴＧＡＴＣＡＡＣＧＴＡＣＡＧＧＣＧＧＣＡＧＣＴＣＡＧＴＡＡ（配列番号１３）
ＧｃＭ９２のアミノ酸配列は以下に提供される。
【０３８６】
ＡＱＳＶＰＹＧＶＳＱＩＫＡＰＡＬＨＳＱＧＹＴＧＳＮＶＫＶＡＶＩＤＳＧＩＤＳＳＨ
ＰＤＬＫＶＡＧＧＡＳＭＶＰＳＥＴＮＰＦＱＤＡＮＳＨＧＴＨＶＡＧＴＶＡＡＬＮＮＮＩ
ＧＶＬＧＶＡＰＥＡＳＬＹＡＶＫＶＬＡＡＤＧＳＧＱＹＳＷＩＩＮＧＩＥＷＡＩＡＮＮＭ
ＤＶＩＮＩＳＬＧＡＰＳＧＳＡＡＬＫＡＡＶＤＫＡＶＡＳＧＶＶＶＶＡＡＡＧＮＥＧＴＳ
ＧＰＳＳＴＶＧＹＰＧＫＹＰＳＶＩＡＶＧＡＶＤＳＳＮＱＲＡＳＦＳＳＶＧＰＥＬＤＶＭ
ＡＰＧＶＳＩＱＳＴＬＰＧＮＫＹＧＡＱＮＧＴＳＭＡＡＰＨＶＡＧＡＡＡＬＩＬＳＫＨＰ
ＮＷＴＮＴＱＶＲＳＳＬＥＮＴＴＴＫＬＧＤＳＦＹＹＧＫＧＬＩＮＶＱＡＡＡＱ（配列番
号１４）
合成された遺伝子ＧｃＭ９３のヌクレオチド配列は以下に提供される。
【０３８７】
ＧＣＧＣＡＧＴＣＣＧＴＧＣＣＴＴＡＣＧＧＣＧＴＡＴＣＡＣＡＡＡＴＴＡＡＡＧＣＣ
ＣＣＴＧＣＴＣＴＧＣＡＣＴＣＴＣＡＡＧＧＣＴＡＣＡＣＴＧＧＡＴＣＡＡＡＴＧＴＴＡ
ＡＡＧＴＡＧＣＧＧＴＴＡＴＣＧＡＣＡＧＣＧＧＴＡＴＣＧＡＣＴＣＧＡＧＣＣＡＴＣＣ
ＡＧＡＴＣＴＴＡＡＡＧＴＣＧＣＴＧＧＡＧＧＧＧＣＴＴＣＴＡＴＧＧＴＧＣＣＧＴＣＣ
ＧＡＡＡＣＡＡＡＣＣＣＧＴＴＴＣＡＡＧＡＴＡＡＣＣＡＡＴＣＴＣＡＴＧＧＣＡＣＡＣ
ＡＣＧＴＣＧＣＡＧＧＡＡＣＧＧＴＴＧＣＧＧＣＧＴＴＡＡＡＣＡＡＴＡＡＴＡＴＴＧＧ
ＣＧＴＧＣＴＴＧＧＴＧＴＡＧＣＣＣＣＧＴＣＴＧＣＴＴＣＧＣＴＣＴＡＣＧＣＣＧＴＴ
ＡＡＡＧＴＴＣＴＴＧＣＡＧＣＡＧＡＣＡＡＣＴＣＡＧＧＣＣＡＡＴＡＣＴＣＡＴＧＧＡ
ＴＴＡＴＣＡＡＣＧＧＣＡＴＣＧＡＡＴＧＧＧＣＣＡＴＣＧＣＧＡＡＴＡＡＣＡＴＧＧＡ
ＴＧＴＡＡＴＣＡＡＣＡＴＧＧＣＡＣＴＧＧＧＡＧＣＡＣＣＡＡＧＣＧＧＣＡＧＴＧＣＧ
ＧＣＡＣＴＴＡＡＡＧＣＡＧＣＡＧＴＴＧＡＴＡＡＡＧＣＴＧＴＴＧＣＡＴＣＴＧＧＴＧ
ＴＣＧＴＣＧＴＡＧＴＡＧＣＧＧＣＡＧＣＴＧＧＧＡＡＴＧＡＧＧＧＡＡＣＡＧＡＴＧＧ
ＡＴＣＡＴＣＧＡＧＴＡＣＣＧＴＣＧＧＴＴＡＴＣＣＡＧＧＣＡＡＧＴＡＣＣＣＴＴＣＡ
ＧＴＧＡＴＴＧＣＡＧＴＧＧＧＣＧＣＴＧＴＡＧＡＣＴＣＴＴＣＡＡＡＴＣＡＡＣＧＴＧ
ＣＣＴＣＴＴＴＴＴＣＣＴＣＣＧＴＧＧＧＡＣＣＧＧＡＧＣＴＧＧＡＴＧＴＣＡＴＧＧＣ
ＣＣＣＴＧＧＣＧＴＴＴＣＴＡＴＴＣＡＡＴＣＧＡＣＧＣＴＴＣＣＡＧＧＧＡＡＣＡＡＧ
ＴＡＴＧＧＴＧＣＧＣＡＡＡＡＣＧＧＧＡＣＴＴＣＣＡＴＧＧＣＣＴＣＧＣＣＧＣＡＴＧ
ＴＡＧＣＴＧＧＧＧＣＧＧＣＣＧＣＡＴＴＧＡＴＴＣＴＴＴＣＴＡＡＧＣＡＣＣＣＧＴＣ
ＡＴＧＧＡＣＡＡＡＣＡＣＴＣＡＡＧＴＣＣＧＣＡＧＣＡＧＴＴＴＡＧＡＡＡＡＣＡＣＣ
ＡＣＴＡＣＡＡＡＡＣＴＴＧＧＴＧＡＴＴＣＴＴＴＣＴＡＣＴＡＴＧＧＡＡＡＡＧＧＧＣ
ＴＧＡＴＣＡＡＣＧＴＡＣＡＧＧＣＧＧＣＡＧＣＴＣＡＧＴＡＡ（配列番号１５）
ＧｃＭ９３のアミノ酸配列は以下に提供される。
【０３８８】
ＡＱＳＶＰＹＧＶＳＱＩＫＡＰＡＬＨＳＱＧＹＴＧＳＮＶＫＶＡＶＩＤＳＧＩＤＳＳＨ
ＰＤＬＫＶＡＧＧＡＳＭＶＰＳＥＴＮＰＦＱＤＮＱＳＨＧＴＨＶＡＧＴＶＡＡＬＮＮＮＩ
ＧＶＬＧＶＡＰＳＡＳＬＹＡＶＫＶＬＡＡＤＮＳＧＱＹＳＷＩＩＮＧＩＥＷＡＩＡＮＮＭ
ＤＶＩＮＭＡＬＧＡＰＳＧＳＡＡＬＫＡＡＶＤＫＡＶＡＳＧＶＶＶＶＡＡＡＧＮＥＧＴＤ
ＧＳＳＳＴＶＧＹＰＧＫＹＰＳＶＩＡＶＧＡＶＤＳＳＮＱＲＡＳＦＳＳＶＧＰＥＬＤＶＭ
ＡＰＧＶＳＩＱＳＴＬＰＧＮＫＹＧＡＱＮＧＴＳＭＡＳＰＨＶＡＧＡＡＡＬＩＬＳＫＨＰ
ＳＷＴＮＴＱＶＲＳＳＬＥＮＴＴＴＫＬＧＤＳＦＹＹＧＫＧＬＩＮＶＱＡＡＡＱ（配列番
号１６）
合成された遺伝子ＧｃＭ９４のヌクレオチド配列は以下に提供される。
【０３８９】
ＧＣＧＣＡＧＴＣＣＧＴＧＣＣＴＴＡＣＧＧＣＧＴＡＴＣＡＣＡＡＡＴＴＡＡＡＧＣＣ
ＣＣＴＧＣＴＣＴＧＣＡＣＴＣＴＣＡＡＧＧＣＴＡＣＡＣＴＧＧＡＴＣＡＡＡＴＧＴＴＡ
ＡＡＧＴＡＧＣＧＧＴＴＡＴＣＧＡＣＡＧＣＧＧＴＡＴＣＧＡＣＴＣＧＡＧＣＣＡＴＣＣ
ＡＧＡＴＣＴＴＡＡＡＧＴＣＧＣＴＧＧＡＧＧＧＧＣＴＴＣＴＡＴＧＧＴＧＣＣＧＴＣＣ
ＧＡＡＡＣＡＡＡＣＣＣＧＴＴＴＣＡＡＧＡＴＡＡＣＡＡＴＡＣＡＣＡＴＧＧＣＡＣＡＣ
ＡＣＧＴＣＧＣＡＧＧＡＡＣＧＧＴＴＧＣＧＧＣＧＴＴＡＡＡＣＡＡＴＡＡＴＡＴＴＧＧ
ＣＧＴＧＣＴＴＧＧＴＧＴＡＧＣＣＣＣＧＴＣＴＧＣＴＴＣＧＣＴＣＴＡＣＧＣＣＧＴＴ
ＡＡＡＧＴＴＣＴＴＧＣＡＧＣＡＧＡＣＧＧＡＧＣＡＧＧＣＣＡＡＴＡＣＴＣＡＴＧＧＡ
ＴＴＡＴＣＡＡＣＧＧＣＡＴＣＧＡＡＴＧＧＧＣＣＡＴＣＧＣＧＡＡＴＡＡＣＡＴＧＧＡ
ＴＧＴＡＡＴＣＡＡＣＡＴＧＡＧＣＧＴＣＧＧＡＧＣＡＣＣＡＡＧＣＧＧＣＡＧＴＧＣＧ
ＧＣＡＣＴＴＡＡＡＧＣＡＧＣＡＧＴＴＧＡＴＡＡＡＧＣＴＧＴＴＧＣＡＴＣＴＧＧＴＧ
ＴＣＧＴＣＧＴＡＧＴＡＧＣＧＧＣＡＧＣＴＧＧＧＡＡＴＧＡＧＧＧＡＡＣＡＴＣＣＧＧ
ＡＴＣＡＴＣＧＡＧＴＡＣＣＧＴＣＧＧＴＴＡＴＣＣＡＧＧＣＡＡＧＴＡＣＣＣＴＴＣＡ
ＧＴＧＡＴＴＧＣＡＧＴＧＧＧＣＧＣＴＧＴＡＧＡＣＴＣＴＡＣＡＡＡＴＣＡＡＣＧＴＧ
ＣＣＴＣＴＴＴＴＴＣＣＴＣＣＧＴＧＧＧＡＣＣＧＧＡＧＣＴＧＧＡＴＧＴＣＡＴＧＧＣ
ＣＣＣＴＧＧＣＧＴＴＴＣＴＡＴＴＣＡＡＴＣＧＡＣＧＣＴＴＣＣＡＧＧＧＡＡＣＡＡＧ
ＴＡＴＧＧＴＧＣＧＣＡＡＡＡＣＧＧＧＡＣＴＴＣＣＡＴＧＧＣＣＴＣＧＣＣＧＣＡＴＧ
ＴＡＧＣＴＧＧＧＧＣＧＧＣＣＧＣＡＴＴＧＡＴＴＣＴＴＴＣＴＡＡＧＣＡＣＣＣＧＡＡ
ＣＴＧＧＡＣＡＡＡＣＡＡＣＣＡＡＧＴＣＣＧＣＡＧＣＡＧＴＴＴＡＧＡＡＡＡＣＡＣＣ
ＡＣＴＡＣＡＡＡＡＣＴＴＧＧＴＧＡＴＴＣＴＴＴＣＴＡＣＴＡＴＧＧＡＡＡＡＧＧＧＣ
ＴＧＡＴＣＡＡＣＧＴＡＣＡＧＧＣＧＧＣＡＧＣＴＣＡＧＴＡＡ（配列番号１７）
ＧｃＭ９４のアミノ酸配列は以下に提供される。
【０３９０】
ＡＱＳＶＰＹＧＶＳＱＩＫＡＰＡＬＨＳＱＧＹＴＧＳＮＶＫＶＡＶＩＤＳＧＩＤＳＳＨ
ＰＤＬＫＶＡＧＧＡＳＭＶＰＳＥＴＮＰＦＱＤＮＮＴＨＧＴＨＶＡＧＴＶＡＡＬＮＮＮＩ
ＧＶＬＧＶＡＰＳＡＳＬＹＡＶＫＶＬＡＡＤＧＡＧＱＹＳＷＩＩＮＧＩＥＷＡＩＡＮＮＭ
ＤＶＩＮＭＳＶＧＡＰＳＧＳＡＡＬＫＡＡＶＤＫＡＶＡＳＧＶＶＶＶＡＡＡＧＮＥＧＴＳ
ＧＳＳＳＴＶＧＹＰＧＫＹＰＳＶＩＡＶＧＡＶＤＳＴＮＱＲＡＳＦＳＳＶＧＰＥＬＤＶＭ
ＡＰＧＶＳＩＱＳＴＬＰＧＮＫＹＧＡＱＮＧＴＳＭＡＳＰＨＶＡＧＡＡＡＬＩＬＳＫＨＰ
ＮＷＴＮＮＱＶＲＳＳＬＥＮＴＴＴＫＬＧＤＳＦＹＹＧＫＧＬＩＮＶＱＡＡＡＱ（配列番
号１８）
合成された遺伝子ＧｃＭ９５のヌクレオチド配列は以下に提供される。
【０３９１】
ＧＣＧＣＡＧＴＣＣＧＴＧＣＣＴＴＡＣＧＧＣＧＴＡＴＣＡＣＡＡＡＴＴＡＡＡＧＣＣ
ＣＣＴＧＣＴＣＴＧＣＡＣＴＣＴＣＡＡＧＧＣＴＡＣＡＣＴＧＧＡＴＣＡＡＡＴＧＴＴＡ
ＡＡＧＴＡＧＣＧＧＴＴＡＴＣＧＡＣＡＧＣＧＧＴＡＴＣＧＡＣＴＣＧＡＧＣＣＡＴＣＴ
ＧＧＡＴＣＴＴＡＡＡＧＴＣＧＣＴＧＧＡＧＧＧＧＣＴＴＣＴＡＴＧＧＴＧＣＣＧＧＧＡ
ＧＡＡＡＣＡＡＡＣＣＣＧＴＴＴＧＴＣＧＡＴＧＣＡＣＡＡＡＣＡＣＡＴＧＧＣＡＣＡＣ
ＡＣＧＴＣＧＣＡＧＧＡＡＣＧＧＴＴＧＣＧＧＣＧＴＴＡＡＡＣＡＡＴＡＡＴＡＴＴＧＧ
ＣＧＴＧＣＴＴＧＧＴＧＴＡＧＣＣＣＣＧＧＡＡＧＣＴＴＣＧＣＴＣＴＡＣＧＣＣＧＴＴ
ＡＡＡＧＴＴＣＴＴＧＣＡＧＣＡＧＡＣＡＡＣＧＣＡＧＣＡＣＡＡＴＡＣＴＣＡＴＧＧＡ
ＴＴＧＴＣＡＡＣＧＧＣＡＴＣＧＡＡＴＧＧＧＣＣＡＴＣＧＣＧＡＡＴＡＡＣＡＴＧＧＡ
ＴＧＴＡＡＴＣＡＡＣＡＴＧＡＧＣＣＴＧＧＧＡＧＣＡＣＣＡＡＧＣＧＧＣＡＧＴＧＣＧ
ＧＣＡＣＴＴＡＡＡＧＣＡＧＣＡＧＴＴＧＡＴＡＡＡＧＣＴＧＴＴＧＣＡＴＣＴＧＧＴＧ
ＴＣＧＴＣＧＴＡＧＴＡＧＣＧＧＣＡＧＣＴＧＧＧＡＡＴＧＡＧＧＧＡＡＣＡＴＣＣＧＧ
ＡＴＣＡＴＣＧＡＧＴＡＣＣＧＴＣＧＧＴＴＡＴＣＣＡＧＧＣＡＡＧＴＡＣＣＣＴＴＣＡ
ＧＴＧＡＴＴＧＣＡＧＴＧＧＧＣＧＣＴＧＴＡＧＡＣＴＣＴＴＣＡＡＡＴＣＡＡＣＧＴＧ
ＣＣＴＣＴＴＴＴＴＣＣＴＣＣＧＴＧＧＧＡＣＣＧＧＡＧＣＴＧＧＡＴＧＴＣＡＴＧＧＣ
ＣＣＣＴＧＧＣＧＴＴＴＣＴＡＴＴＣＡＡＴＣＧＡＣＧＣＴＴＣＣＡＧＧＧＡＡＣＡＡＧ
ＴＡＴＧＧＴＧＣＧＣＡＡＡＡＣＧＧＧＡＣＴＴＣＣＡＴＧＧＣＣＴＣＧＣＣＧＣＡＴＧ
ＴＡＧＣＴＧＧＧＧＣＧＧＣＣＧＣＡＴＴＧＡＴＴＣＴＴＴＣＴＡＡＧＣＡＣＣＣＧＡＡ
ＣＴＧＧＡＣＡＡＡＣＡＣＴＣＡＡＧＴＣＣＧＣＡＧＣＡＧＴＴＴＡＧＡＡＡＡＣＡＣＣ
ＡＣＴＡＣＡＡＡＡＣＴＴＧＧＴＧＡＴＴＣＴＴＴＣＴＡＣＴＡＴＧＧＡＡＡＡＧＧＧＣ
ＴＧＡＴＣＡＡＣＧＴＡＣＡＧＧＣＧＧＣＡＧＣＴＣＡＧＴＡＡ（配列番号１９）
ＧｃＭ９５のアミノ酸配列は以下に提供される。
【０３９２】
ＡＱＳＶＰＹＧＶＳＱＩＫＡＰＡＬＨＳＱＧＹＴＧＳＮＶＫＶＡＶＩＤＳＧＩＤＳＳＨ
ＬＤＬＫＶＡＧＧＡＳＭＶＰＧＥＴＮＰＦＶＤＡＱＴＨＧＴＨＶＡＧＴＶＡＡＬＮＮＮＩ
ＧＶＬＧＶＡＰＥＡＳＬＹＡＶＫＶＬＡＡＤＮＡＡＱＹＳＷＩＶＮＧＩＥＷＡＩＡＮＮＭ
ＤＶＩＮＭＳＬＧＡＰＳＧＳＡＡＬＫＡＡＶＤＫＡＶＡＳＧＶＶＶＶＡＡＡＧＮＥＧＴＳ
ＧＳＳＳＴＶＧＹＰＧＫＹＰＳＶＩＡＶＧＡＶＤＳＳＮＱＲＡＳＦＳＳＶＧＰＥＬＤＶＭ
ＡＰＧＶＳＩＱＳＴＬＰＧＮＫＹＧＡＱＮＧＴＳＭＡＳＰＨＶＡＧＡＡＡＬＩＬＳＫＨＰ
ＮＷＴＮＴＱＶＲＳＳＬＥＮＴＴＴＫＬＧＤＳＦＹＹＧＫＧＬＩＮＶＱＡＡＡＱ（配列番
号２０）
合成された遺伝子ＧｃＭ９６のヌクレオチド配列は以下に提供される。
【０３９３】
ＧＣＧＣＡＧＴＣＣＧＴＧＣＣＴＴＡＣＧＧＣＧＴＡＴＣＡＣＡＡＡＴＴＡＡＡＧＣＣ
ＣＣＴＧＣＴＣＴＧＣＡＣＴＣＴＣＡＡＧＧＣＴＡＣＡＣＴＧＧＡＴＣＡＡＡＴＧＴＴＡ
ＡＡＧＴＡＧＣＧＧＴＴＡＴＣＧＡＣＡＧＣＧＧＴＡＴＣＧＡＣＴＣＧＡＧＣＣＡＴＣＣ
ＡＧＡＴＣＴＴＡＡＡＧＴＣＧＣＴＧＧＡＧＧＧＧＣＴＴＣＴＡＴＧＧＴＧＣＣＧＴＣＣ
ＧＡＡＡＣＡＡＡＣＣＣＧＴＴＴＣＡＡＧＡＴＡＡＣＡＡＴＴＣＴＣＡＴＧＧＣＡＣＡＣ
ＡＣＧＴＣＧＣＡＧＧＡＡＣＧＧＴＴＧＣＧＧＣＧＴＴＡＡＡＣＡＡＴＡＡＴＡＴＴＧＧ
ＣＧＴＧＣＴＴＧＧＴＧＴＡＧＣＣＣＣＧＴＣＴＧＣＴＴＣＧＣＴＣＴＡＣＧＣＣＧＴＴ
ＡＡＡＧＴＴＣＴＴＧＣＡＧＣＡＧＡＣＧＧＡＴＣＡＧＧＣＣＡＡＴＡＣＴＣＡＴＧＧＡ
ＴＴＡＴＣＡＡＣＧＧＣＡＴＣＧＡＡＴＧＧＧＣＣＡＴＣＧＣＧＡＡＴＡＡＣＡＴＧＧＡ
ＴＧＴＡＡＴＣＡＡＣＡＴＧＡＧＣＣＴＧＧＧＡＧＣＡＡＣＡＡＧＣＧＧＣＡＧＴＧＣＧ
ＧＣＡＣＴＴＡＡＡＧＣＡＧＣＡＧＴＴＧＡＴＡＡＡＧＣＴＧＴＴＧＣＡＴＣＴＧＧＴＣ
ＡＡＧＴＣＧＴＡＧＴＡＧＣＧＧＣＡＧＣＴＧＧＧＡＡＴＧＡＧＧＧＡＡＣＡＧＡＴＧＧ
ＡＣＣＴＴＣＧＡＧＴＡＣＣＧＴＣＧＧＴＴＡＴＣＣＡＧＧＣＡＡＧＴＡＣＣＣＴＴＣＡ
ＧＴＧＡＴＴＧＣＡＧＴＧＧＧＣＧＣＴＧＴＡＧＡＣＴＣＴＡＣＡＡＡＴＡＣＡＣＧＴＧ
ＣＣＴＣＴＴＴＴＴＣＣＴＣＣＧＴＧＧＧＡＣＣＧＧＡＧＣＴＧＧＡＴＧＴＣＡＴＧＧＣ
ＣＣＣＴＧＧＣＧＴＴＴＣＴＡＴＴＣＡＡＴＣＧＡＣＧＣＴＴＣＣＡＧＣＡＡＡＣＡＡＧ
ＴＡＴＧＧＴＧＣＧＣＡＡＡＡＣＧＧＧＡＣＴＴＣＣＡＴＧＧＣＣＧＣＡＣＣＧＣＡＴＧ
ＴＡＧＣＴＧＧＧＧＣＧＧＣＣＧＣＡＴＴＧＡＴＴＣＴＴＴＣＴＡＡＧＣＡＣＣＣＧＴＣ
ＡＴＧＧＡＣＡＡＡＣＡＡＣＣＡＡＧＴＣＣＧＣＡＧＣＡＧＴＴＴＡＧＡＡＣＡＡＡＣＣ
ＡＣＴＡＣＡＡＡＡＣＴＴＧＧＴＧＡＴＴＣＴＴＴＣＴＡＣＴＡＴＧＧＡＡＡＡＧＧＧＣ
ＴＧＡＴＣＡＡＣＧＴＡＣＡＧＧＣＧＧＣＡＧＣＴＣＡＧＴＡＡ（配列番号２１）
ＧｃＭ９６のアミノ酸配列は以下に提供される。
【０３９４】
ＡＱＳＶＰＹＧＶＳＱＩＫＡＰＡＬＨＳＱＧＹＴＧＳＮＶＫＶＡＶＩＤＳＧＩＤＳＳＨ
ＰＤＬＫＶＡＧＧＡＳＭＶＰＳＥＴＮＰＦＱＤＮＮＳＨＧＴＨＶＡＧＴＶＡＡＬＮＮＮＩ
ＧＶＬＧＶＡＰＳＡＳＬＹＡＶＫＶＬＡＡＤＧＳＧＱＹＳＷＩＩＮＧＩＥＷＡＩＡＮＮＭ
ＤＶＩＮＭＳＬＧＡＴＳＧＳＡＡＬＫＡＡＶＤＫＡＶＡＳＧＱＶＶＶＡＡＡＧＮＥＧＴＤ
ＧＰＳＳＴＶＧＹＰＧＫＹＰＳＶＩＡＶＧＡＶＤＳＴＮＴＲＡＳＦＳＳＶＧＰＥＬＤＶＭ
ＡＰＧＶＳＩＱＳＴＬＰＡＮＫＹＧＡＱＮＧＴＳＭＡＡＰＨＶＡＧＡＡＡＬＩＬＳＫＨＰ
ＳＷＴＮＮＱＶＲＳＳＬＥＱＴＴＴＫＬＧＤＳＦＹＹＧＫＧＬＩＮＶＱＡＡＡＱ（配列番
号２２）
合成された遺伝子ＧｃＭ１００のヌクレオチド配列は以下に提供される。
【０３９５】
ＧＣＧＣＡＧＴＣＣＧＴＧＣＣＴＴＡＣＧＧＣＧＴＡＴＣＡＣＡＡＡＴＴＡＡＡＧＣＣ
ＣＣＴＧＣＴＣＴＧＣＡＣＴＣＴＣＡＡＧＧＣＴＡＣＡＣＴＧＧＡＴＣＡＡＡＴＧＴＴＡ
ＡＡＧＴＡＧＣＧＧＴＴＡＴＣＧＡＣＡＧＣＧＧＴＡＴＣＧＡＣＴＣＧＡＧＣＣＡＴＣＣ
ＡＧＡＴＣＴＴＡＡＡＧＴＣＧＣＴＧＧＡＧＧＧＧＣＴＴＣＴＡＴＧＧＴＧＣＣＧＴＣＣ
ＧＡＡＡＣＡＡＡＣＣＣＧＴＴＴＣＡＡＧＡＴＡＡＣＡＡＴＴＣＴＣＡＴＧＧＣＡＣＡＣ
ＡＣＧＣＡＧＣＡＧＧＡＡＣＧＧＴＴＧＣＧＧＣＧＴＴＡＡＡＣＡＡＴＡＡＴＡＴＴＧＧ
ＣＧＴＧＣＴＴＧＧＴＧＴＡＧＣＣＣＣＧＴＣＴＧＣＴＴＣＧＣＴＣＴＡＣＧＣＣＧＴＴ
ＡＡＡＧＴＴＣＴＴＧＣＡＧＣＡＧＡＣＧＧＡＴＣＡＧＣＡＣＡＡＴＡＣＴＣＡＴＧＧＡ
ＴＴＡＴＣＡＡＣＧＧＣＡＴＣＧＡＡＴＧＧＧＣＣＡＴＣＧＣＧＡＡＴＡＡＣＡＴＧＧＡ
ＴＧＴＡＡＴＣＡＡＣＡＴＧＧＣＡＣＴＧＧＧＡＧＣＡＣＣＡＡＧＣＧＧＣＡＧＴＧＣＧ
ＧＣＡＣＴＴＡＡＡＧＣＡＧＣＡＧＴＴＧＡＴＡＡＡＧＣＴＧＴＴＧＣＡＴＣＴＧＧＴＧ
ＴＣＧＴＣＧＴＡＧＴＡＧＣＧＧＣＡＧＣＴＧＧＧＡＡＴＧＡＧＧＧＡＡＣＡＴＣＣＧＧ
ＡＴＣＡＴＣＧＡＧＴＡＣＣＧＴＣＧＧＴＴＡＴＣＣＡＧＧＣＡＡＧＴＡＣＣＣＴＴＣＡ
ＧＴＧＡＴＴＧＣＡＧＴＧＧＧＣＧＣＴＧＴＡＧＡＣＴＣＴＴＣＡＡＡＴＣＡＡＣＧＴＧ
ＣＣＴＣＴＴＴＴＴＣＣＴＣＣＧＴＧＧＧＡＣＣＧＧＡＧＣＴＧＧＡＴＧＴＣＡＴＧＧＣ
ＣＣＣＴＧＧＣＧＴＴＴＣＴＡＴＴＣＡＡＴＣＧＡＣＧＣＴＴＣＣＡＧＣＡＡＡＣＡＡＧ
ＴＡＴＧＧＴＧＣＧＣＡＡＡＡＣＧＧＧＡＣＴＴＣＣＡＴＧＧＣＣＴＣＧＣＣＧＣＡＴＧ
ＴＡＧＣＴＧＧＧＧＣＧＧＣＣＧＣＡＴＴＧＡＴＴＣＴＴＴＣＴＡＡＧＣＡＣＣＣＧＡＡ
ＣＴＧＧＡＣＡＡＡＣＡＣＴＣＡＡＧＴＣＣＧＣＡＧＣＡＧＴＴＴＡＧＡＡＡＡＣＡＣＣ
ＡＣＴＡＣＡＡＡＡＣＴＴＧＧＴＧＡＴＴＣＴＴＴＣＴＡＣＴＡＴＧＧＡＡＡＡＧＧＧＣ
ＴＧＡＴＣＡＡＣＧＴＡＣＡＧＧＣＧＧＣＡＧＣＴＣＡＧＴＡＡ（配列番号２３）
ＧｃＭ１００のアミノ酸配列は以下に提供される。
【０３９６】
ＡＱＳＶＰＹＧＶＳＱＩＫＡＰＡＬＨＳＱＧＹＴＧＳＮＶＫＶＡＶＩＤＳＧＩＤＳＳＨ
ＰＤＬＫＶＡＧＧＡＳＭＶＰＳＥＴＮＰＦＱＤＮＮＳＨＧＴＨＡＡＧＴＶＡＡＬＮＮＮＩ
ＧＶＬＧＶＡＰＳＡＳＬＹＡＶＫＶＬＡＡＤＧＳＡＱＹＳＷＩＩＮＧＩＥＷＡＩＡＮＮＭ
ＤＶＩＮＭＡＬＧＡＰＳＧＳＡＡＬＫＡＡＶＤＫＡＶＡＳＧＶＶＶＶＡＡＡＧＮＥＧＴＳ
ＧＳＳＳＴＶＧＹＰＧＫＹＰＳＶＩＡＶＧＡＶＤＳＳＮＱＲＡＳＦＳＳＶＧＰＥＬＤＶＭ
ＡＰＧＶＳＩＱＳＴＬＰＡＮＫＹＧＡＱＮＧＴＳＭＡＳＰＨＶＡＧＡＡＡＬＩＬＳＫＨＰ
ＮＷＴＮＴＱＶＲＳＳＬＥＮＴＴＴＫＬＧＤＳＦＹＹＧＫＧＬＩＮＶＱＡＡＡＱ（配列番
号２４）
ｂ）合成遺伝子ＧｃＭ９０〜９４及びＧｃＭ１００を用いるコンビナトリアルライブラ
リＣＧ１〜ＣＧ５及びＣＧ８の構築
【表６】
2019068807.tif 000010
【０３９７】
各合成遺伝子をｐＨＰＬＴ−ＢＰＮ’−Ｓ７８Ｎ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ
親分子に組み込んだ。６つの合成遺伝子ＧｃＭ９０−９４を含有しているプラスミドを得
て、ＧｃＭ１００をテンプレートとして用いて各位置でコンビナトリアルライブラリを作
成した（表３−１）。２つの更なる遺伝子、ＧｃＭ９５及びＧｃＭ９６も解析のため同様
に合成したが、ライブラリのための親ＤＮＡとしては使用しなかった。これらの遺伝子は
、ｐＨＰＬＴ−ＢＰＮ’−Ｓ７８Ｎ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ親分子上に９つ
の変異を有する。
【０３９８】
合成遺伝子ＧｃＭ９０−９４及びＧｃＭ１００を含有している親プラスミド（テンプレ
ートＤＮＡ）は、２マイクログラムのＤＮＡ及びメチラーゼ（ＮＥＢ）を用い、ＮＥＢプ
ロトコルに従ってメチル化した。次いでＤＮＡ  Ｃｌｅａｎ  ａｎｄ  Ｃｏｎｃｅｎｔｒ
ａｔｏｒキット（Ｚｙｍｏ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）を用いてメチル化ＤＮＡを精製した。Ｑ
ＵＩＫＣＨＡＮＧＥ（登録商標）Ｍｕｌｔｉ  Ｓｉｔｅ−Ｄｉｒｅｃｔｅｄ  Ｍｕｔａｇ
ｅｎｅｓｉｓ  Ｋｉｔ（「ＱＣＭＳキット」、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）を用いて、製造元
のプロトコルに従って（各プライマーをプロトコルに示されている５０ｎｇの代わりに８
６．５ｎｇ使用したライブラリＣＧ３及びＣＧ４は除く）、コンビナトリアルライブラリ
ＣＧ１〜５及びＣＧ８を作成した（それぞれのテンプレート及びプライマーの組み合わせ
については表３−１を参照されたい）。各ライブラリに、所望の置換を導入するために使
用されたすべてのプライマーを表３−１に列挙する。Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ  ＤＮＡ  Ｔ
ｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓによりこれらが合成され、提供された。各ライブラリのＱＣＭＳ
反応の完了後、０．５〜１μＬのＤｐｎＩ（ＱＣＭＳキット）を加え３７℃で１〜４時間
インキュベートし、続いて更に０．５〜１μＬのＤｐｎＩを加え、更に３７℃で１〜４時
間インキュベートすることでテンプレートＤＮＡを消化した。枯草菌（B. subtilis）を
効率的に形質転換させるため、形質転換前にＱＣＭＳ反応混合物のＤＮＡを増幅させ、形
質転換体を実施例２に記載のように増殖させた。
更なる変異体ＢＰＮ’−ｖ３＋Ｓ７８ＮをＤＮＡ２．０により合成した。以下の置換を
それぞれＢＰＮ’−ｖ３＋Ｓ７８Ｎ親分子の中に導入した：Ｑ５９Ｇ，Ｎ６２Ｑ，Ｖ６８
Ａ，Ｓ８９Ｙ，Ａ９２Ｇ，Ｉ１０８Ｖ，Ｉ１１５Ｖ，Ｍ１２４Ｔ，Ｐ１２９Ｌ，Ａ１３８
Ｔ，Ｖ１４７Ｌ，Ｓ１６１Ｐ，Ｙ１６７Ａ，Ｐ１７２Ｖ，Ｇ２１１Ｔ，Ｌ２６７Ｖ，及び
Ａ２７３Ｓ。
【０３９９】
上記のすべてのコンビナトリアルライブラリ変異体及びＤＮＡ２．０で合成した変異体
を、１６℃及びｐＨ  ８での洗剤組成物１のＢＭＩ微小標本アッセイ、並びに１６℃及び
ｐＨ  ８での洗剤組成物２のＢＭＩ微小標本アッセイを用いて、クリーニング性能につい
て試験した。タンパク質含量はＴＣＡアッセイを用いて測定した。実施例１に記載のよう
にアッセイを実施し、ＢＰＮ’−ｖ３（ＰＩ値１．０を有する）と比較して性能指数を算
出した。
【０４００】
以下のＢＰＮ’変異体：Ｓ０６３Ｔ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ａ−Ｇ１２８
Ａ−Ｓ１８３Ｔ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ２４４Ｎ，Ｎ０６１Ａ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１
２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２２４Ａ，Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−
Ｐ１２９Ｔ−Ｑ１８５Ｔ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０６３Ｔ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１
Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｓ１８３Ｔ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０６３Ｔ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１
０１Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０６３Ｔ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ａ−
Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ２４４Ｉ，及びＳ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｐ１
２９Ｔ−Ｙ２１７Ｑ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢ
ＰＮ’アミノ酸配列（配列番号２）は、ｐＨ  ８及び１６℃での洗剤組成物１のＢＭＩ微
小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して１．０超、少なくとも
１．１、少なくとも１．２、少なくとも１．３、少なくとも１．４、少なくとも１．５、
少なくとも１．６、少なくとも１．７、少なくとも１．８、少なくとも１．９、少なくと
も２、１．０超〜約１０、１．０超〜約８、又は１．０超〜約５のＰＩ値を有するものと
判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列と対応させることによ
り番号付けされる。このような変異体は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）
と比較して向上したタンパク質分解活性を有し、ＢＰＮ’及びＢＰＮ’−ｖ３よりもＰＩ
値が大きい。本発明は、本ＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’（配
列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ
’−ｖ３と比較して１超〜約５のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、この変異
体は配列番号２の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９
１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有するア
ミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで
、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番
号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような
１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）
、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
【０４０１】
本ＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’と比較して向上したタンパ
ク質分解活性を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して１．０超〜約５の
ＰＩ値を有する、スブチリシンプロテアーゼ変異体も提供され、この変異体は配列番号２
に対して少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％
、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、この変異体
は、Ｘ０４０Ｅ，Ｘ０５３Ｇ，Ｘ０５９Ｖ，Ｘ０６１Ａ，Ｘ０６２Ｈ／Ｑ、Ｘ０６８Ａ，
Ｘ０７８Ｎ，Ｘ０８７Ｅ，Ｘ１０１Ａ，Ｘ１０２Ａ，Ｘ１０８Ｖ，Ｘ１２４Ｉ，Ｘ１２５
Ａ，Ｘ１２６Ｖ，Ｘ１２９Ｔ，Ｘ１４７Ｑ，Ｘ１５９Ｄ，Ｘ１８３Ｔ，Ｘ１８５Ｔ，Ｘ２
１１Ａ，Ｘ２２４Ａ，Ｘ２４４Ｉ／Ｎ、Ｘ２５２Ｑ，及びＸ２７４Ｄ，の群から選択され
る少なくとも１つの置換を含み、選択的にＸ０４０Ｅ，Ｘ０５３Ｇ，Ｘ０５９Ｖ，Ｘ０６
１Ａ，Ｘ０６２Ｈ／Ｑ、Ｘ０６８Ａ，Ｘ０７８Ｎ，Ｘ０８７Ｅ，Ｘ１０１Ａ，Ｘ１０２Ａ
，Ｘ１０８Ｖ，Ｍ１２４Ｉ，Ｓ１２５Ａ，Ｌ１２６Ｖ，Ｐ１２９Ｔ，Ｖ１４７Ｑ，Ｓ１５
９Ｄ，Ｓ１８３Ｔ，Ｑ１８５Ｔ，Ｇ２１１Ａ，Ｓ２２４Ａ，Ｔ２４４Ｉ／Ｎ、Ｎ２５２Ｑ
，及びＡ２７４Ｄ，の群から選択される少なくとも１つの置換を含み、ここで、変異体の
アミノ酸位置は配列番号２の配列の位置と対応させることにより番号付けされる。本明細
書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組
成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも
１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
【０４０２】
以下のＢＰＮ’変異体：Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ａ−Ｓ０７８
Ｎ−Ｓ０８７Ｅ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２２４Ａ，Ｑ０５９Ｖ−Ｓ０
７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｇ２１１Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｑ０５９Ｖ−Ｓ０７８Ｎ−
Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｖ１４７Ｑ−Ｙ２１７Ｑ，Ｑ０５９Ｖ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７
Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｑ０５９Ｖ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１０８Ｖ−Ｇ１
２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ２５２Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−
Ｐ１２９Ｔ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｇ２１１Ａ−Ｙ２１７
Ｑ，Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｑ１８５Ｔ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０
９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｖ１４７Ｑ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−
Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２２４Ａ，及びＳ０
７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２２４Ａ−Ａ２７４Ｄ，からなる群か
ら選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’アミノ酸配列（配列番号２）
は、ｐＨ  ８及び１６℃での洗剤組成物１のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおい
て、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して約１．０のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、
変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。この
ような変異体は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタン
パク質分解活性を有し、ＢＰＮ’よりもＰＩ値が大きい。本発明は、本ＢＭＩ微小標本ク
リーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分
解活性を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して約１．０のＰＩ値を有す
る、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は、配列番号２の配列に対して少なくとも６
０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９
６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少
なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配
列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細
に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組
成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異
体を用いるクリーニング方法も含まれる。
【０４０３】
以下のＢＰＮ’変異体：１組のアミノ酸置換Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１０８Ｖ−Ｇ
１２８Ａ−Ｖ１４７Ｑ−Ｙ２１７Ｑ，を含むアミノ酸配列（配列番号２）は、ｐＨ  ８及
び１６℃での洗剤組成物１のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいてＢＰＮ’−ｖ
３と比較して約０．９のＰＩ値を有すると判定され、ここで、変異体の位置は配列番号２
の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体はタンパク質分解活性
を有する。本発明は、本アッセイにおいて、タンパク質分解活性を有する、ＢＰＮ’−ｖ
３と比較して０．９のＰＩ値を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’と比較して向上した
タンパク質分解活性を有する、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は、配列番号２の
配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９
３％、９４％、９５％、９６％、９７％、又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列、並
びに上記アミノ酸置換の組を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列の
位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載される
ような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げら
れるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるク
リーニング方法も含まれる。
【０４０４】
以下のＢＰＮ’変異体：Ｑ０５９Ｖ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１０８Ｖ−Ｇ１２８
Ａ−Ｖ１４７Ｑ−Ｇ２１１Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ２５２Ｑ，Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１
０８Ｖ−Ｇ１２８Ａ−Ｖ１４７Ｑ−Ｇ２１１Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−
Ｉ１０８Ｖ−Ｇ１２８Ａ−Ｖ１４７Ｑ−Ｇ２１１Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ２５２Ｑ，Ｓ０７８
Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１０８Ｖ−Ｇ１２８Ａ−Ｖ１４７Ｑ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ２５２Ｑ，及び
Ｓ０７８Ｎ−Ｓ０８７Ｅ−Ｇ０９７Ａ−Ｍ１２４Ｉ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２２４
Ａ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’アミノ酸配
列（配列番号２）は、ｐＨ  ８及び１６℃での洗剤組成物１のＢＭＩ微小標本クリーニン
グアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して０．５以上０．９未満のＰＩ値を有する
ものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列の位置と対応さ
せることにより番号付けされる。このような変異体はタンパク質分解活性を有する。本発
明は、タンパク質分解活性を有するプロテアーゼ変異体を含み、変異体は、配列番号２の
配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９
３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列、並び
に上記群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体の位置は
配列番号２の配列の位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所によ
り詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニ
ング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのよう
な変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
【０４０５】
以下のＢＰＮ’変異体：Ｓ０６３Ｔ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ａ−Ｇ１２８
Ａ−Ｓ１８３Ｔ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０６３Ｔ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ａ−Ｇ１
２８Ａ−Ｓ１８３Ｔ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ２４４Ｎ，Ｓ０６３Ｔ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−
Ｓ１０１Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，及びＳ０６３Ｔ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１
０１Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ２４４Ｉ，からなる群から選択される少なくとも１
組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’アミノ酸配列（配列番号２）は、ｐＨ  ８及び１６℃で
の洗剤組成物２のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３と比較
して１．０超、少なくとも１．１、少なくとも１．２、少なくとも１．３、少なくとも１
．４、少なくとも１．５、少なくとも１．６、少なくとも１．７、少なくとも１．８、少
なくとも１．９、少なくとも２、１．０超〜約１０、１．０超〜約８、又は１．０超〜約
５のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の
配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体は、本アッセイにおいて
、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有し、ＢＰＮ’より
もＰＩ値が大きい。本発明は、本ＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ
’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、並びに／あるいは、
ＢＰＮ’−ｖ３と比較して約１．０超〜約５のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含
み、この変異体は配列番号２の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％
、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一
性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を
含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させる
ことにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくと
もこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限
定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も
含まれる。
【０４０６】
以下のＢＰＮ’変異体：Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ａ−Ｓ０７８
Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２２４Ａ，Ｎ０６１Ａ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ０
８７Ｅ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２２４Ａ，Ｑ０５９Ｖ−Ｓ０７８Ｎ−
Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｇ２１１Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｑ０５９Ｖ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７
Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｖ１４７Ｑ−Ｙ２１７Ｑ，Ｑ０５９Ｖ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１
２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｑ０５９Ｖ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１０８Ｖ−Ｇ１２８Ａ−
Ｙ２１７Ｑ−Ｎ２５２Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｐ１２９
Ｔ−Ｑ１８５Ｔ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｐ１
２９Ｔ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｇ２１１Ａ−Ｙ２１７Ｑ，
Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｐ１２９Ｔ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７
Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｑ１８５Ｔ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２
１７Ｑ，Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２２４Ａ，及びＳ０７８
Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２２４Ａ−Ａ２７４Ｄ，からなる群から選
択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’アミノ酸配列（配列番号２）は、
ｐＨ  ８及び１６℃での洗剤組成物２のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、
ＢＰＮ’−ｖ３と比較して約１．０のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異
体のアミノ酸位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このよう
な変異体は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク
質分解活性を有し、ＢＰＮ’よりもＰＩ値が大きい。本発明は、本ＢＭＩ微小標本クリー
ニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活
性を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して約１のＰＩ値を有する、プロ
テアーゼ変異体を含み、この変異体は、配列番号２の配列に対して少なくとも６０％、７
０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９
７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくとも
１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミ
ノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載さ
れるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙
げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用い
るクリーニング方法も含まれる。
【０４０７】
以下のＢＰＮ’変異体：Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｖ１４７Ｑ−Ｙ２１７
Ｑ及びＳ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１０８Ｖ−Ｇ１２８Ａ−Ｖ１４７Ｑ−Ｙ２１７Ｑ，か
らなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’アミノ酸配列（配
列番号２）は、ｐＨ  ８及び１６℃での洗剤組成物２のＢＭＩ微小標本クリーニングアッ
セイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して約０．９のＰＩ値を有するものと判定されたが
、ここで、変異体の位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。こ
のような変異体はタンパク質分解活性を有する。本発明は、本アッセイにおいて、タンパ
ク質分解活性を有する、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して約０．９のＰＩ値を有する、並びに／
あるいは、ＢＰＮ’と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、プロテアーゼ変異
体を含み、この変異体は、配列番号２の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％
、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８
％の同一性を有するアミノ酸配列、並びに上記群から選択される少なくとも１組のアミノ
酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列の位置と対応させるこ
とにより番号付けされる。本明細書の他箇所に更に詳細に記載されるような、少なくとも
１つのこのような変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられる）、並びに、少
なくとも１つのこのような変異体を用いてクリーニングの必要な物品又は表面をクリーニ
ングするための方法も含まれる。
【０４０８】
以下のＢＰＮ’変異体：Ｑ０５９Ｖ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１０８Ｖ−Ｇ１２８
Ａ−Ｖ１４７Ｑ−Ｇ２１１Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ２５２Ｑ，Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１
０８Ｖ−Ｇ１２８Ａ−Ｖ１４７Ｑ−Ｇ２１１Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−
Ｉ１０８Ｖ−Ｇ１２８Ａ−Ｖ１４７Ｑ−Ｇ２１１Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ２５２Ｑ，Ｓ０７８
Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１０８Ｖ−Ｇ１２８Ａ−Ｖ１４７Ｑ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ２５２Ｑ，及び
Ｓ０７８Ｎ−Ｓ０８７Ｅ−Ｇ０９７Ａ−Ｍ１２４Ｉ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２２４
Ａ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’アミノ酸配
列（配列番号２）は、ｐＨ  ８及び１６℃での洗剤組成物２のＢＭＩ微小標本クリーニン
グアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して０．５以上０．９未満のＰＩ値を有する
ものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列の位置と対応さ
せることにより番号付けされる。このような変異体はタンパク質分解活性を有する。本発
明は、タンパク質分解活性を有するプロテアーゼ変異体を含み、変異体は、配列番号２の
配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９
３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列、並び
に上記群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体の位置は
配列番号２の配列の位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所に更
に詳細に記載されるような、少なくとも１つのこのような変異体を含む組成物（クリーニ
ング組成物が挙げられる）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いてクリー
ニングの必要な物品又は表面をクリーニングするための方法も含まれる。
【０４０９】
（実施例４）
ＢＰＮ’変異体の生産及びクリーニング性能
ＱＵＩＫＣＨＡＮＧＥ（登録商標）Ｍｕｌｔｉ  Ｓｉｔｅ−Ｄｉｒｅｃｔｅｄ  Ｍｕｔ
ａｇｅｎｅｓｉｓによるＢＰＮ’変異体ＬＣ１〜ＬＣ４の作製
ＱＵＩＫＣＨＡＮＧＥ（登録商標）Ｍｕｌｔｉ  Ｓｉｔｅ−Ｄｉｒｅｃｔｅｄ  Ｍｕｔ
ａｇｅｎｅｓｉｓ  Ｋｉｔを用い、異なる親プラスミドからＢＰＮ’変異体を構築した。
ＮＥＢ  Ｄａｍメチラーゼキットを用いて、親プラスミド（表４−１）を、７７．５μＬ
のＨ２０＋１０μＬの１０Ｘ緩衝液＋０．２５μＬのＳＡＭ＋２ｕＬのＤＡＭメチラーゼ
＋１０μＬのミニプレップＤＮＡ（約１５０ｎｇ／μＬ）を含有させた反応液中で、３７
℃で一晩メチル化した。メチル化したプラスミドＤＮＡを、ＱＩＡＧＥＮ（登録商標）Ｐ
ＣＲ精製キットを用い精製した。２．５μＬの５Ｘ緩衝液＋０．５μＬのプライマー１（
２５μＭ）＋０．５μＬのプライマー２（２５μＭ）＋１μＬのｄＮＴＰ’ｓ＋１μＬの
酵素ブレンド＋１８μＬのＨ２Ｏ＋１．５μＬのＤＮＡを含有させた反応混合液で、各Ｄ
ＮＡテンプレートに対してＱＵＩＫＣＨＡＮＧＥ（登録商標）Ｍｕｌｔｉ  Ｓｉｔｅ−Ｄ
ｉｒｅｃｔｅｄ  Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ反応を行った。使用したＰＣＲプログラムは以
下の通りであった：９５℃で１分、（９５℃で１分、５３℃で１分、６５℃で９：３９分
）×２９サイクル、６５℃で１０分、４℃で保持。プライマー配列は表４−２に示される
。すべての反応で、ＭＪ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ＰＴＣ−２００  Ｐｅｌｔｉｅｒ  ｔｈｅ
ｒｍａｌ  ｃｙｃｌｅｒを用いてＰＣＲを実施した。１μＬのＤｐｎＩをＱＵＩＫＣＨＡ
ＮＧＥ（登録商標）Ｍｕｌｔｉ  Ｓｉｔｅ−Ｄｉｒｅｃｔｅｄ  Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ
反応物に加え、３７℃で一晩置くことでＰＣＲサンプルから親ＤＮＡを除去した。形質転
換頻度を増加させるために、製造元のプロトコルに従ってＩｌｌｕｓｔｒａ  Ｔｅｍｐｌ
ｉＰｈｉキットを用い、ローリング・サークル型増幅（ＲＣＡ）させることで、ＤｐｎＩ
消化した反応物を増幅させた。枯草菌（B. subtilis）細胞（ΔａｐｒＥ，ΔｎｐｒＥ，
ａｍｙＥ：：ｘｙｌＲＰｘｙｌＡｃｏｍＫ−ｐｈｌｅｏ）を、各１μＬのＲＣＡ反応物で
形質転換し、形質転換させた細胞を、１０ｐｐｍのネオマイシンを含有しているＬＡ＋１
．６％スキムミルクプレートに蒔き、３７℃で一晩インキュベートした。一晩増殖物から
コロニーを選択し、「ｐｕＲｅＴａｑ  Ｒｅａｄｙ−Ｔｏ−Ｇｏ  ＰＣＲ  Ｂｅａｄｓ」
（Ａｍｅｒｓｈａｍ）を用いて配列決定するためにコロニーＰＣＲを実施した。ＰＣＲ及
び配列決定に使用したプライマーは、ｐＨＰＬＴ  Ｆ１（／５ＰＨＯＳ／ＴＡＣＡＴＡＴ
ＧＡＧＴＴＡＴＧＣＡＧＴＴＴＧ（配列番号５４））及びｐＨＰＬＴ  ｓｅｑ  Ｒ１（／
５ＰＨＯＳ／ＴＴＡＴＣＣＴＴＴＡＣＣＴＴＧＴＣＴＣ（配列番号５５））であった。適
切な配列を有するコロニーを凍結した。実施例２に記載のように、尿素を含有しているＭ
ＯＰＳ系培地中で、３７℃で６８時間にわたり、９６ウェルマイクロタイタープレートで
枯草菌（B. subtilis）形質転換体を増殖させることで、ＢＰＮ’変異体タンパク質を生
産させた。
【表７】
2019068807.tif 000011
【表８】
2019068807.tif 000012
【０４１０】
更なるＢＰＮ’変異体ＬＣ５〜ＬＣ３７の生成
ＢＰＮ’核酸を親遺伝子として含有させた発現プラスミドｐＨＰＬＴ−ＢＰＮ’ｐａｒ
ｔｉａｌ  ｏｐｔ（図３を参照されたい）を用いて、連続的にＬＣ５〜ＬＣ３７と名付け
られた更に３３種のＢＰＮ’変異体をＤＮＡ２．０により作成した。ＬＣ５〜ＬＣ３７の
ＢＰＮ’変異体は、それぞれ以下の通りである：ＢＰＮ’−Ｐ５２Ｌ−Ｖ６８Ａ−Ｇ９７
Ａ−Ｉ１１１Ｖ，ＢＰＮ’−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ１６７Ａ−Ｙ２１７Ｑ，ＢＰＮ
’−Ｙ１０４Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，ＢＰＮ’−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ１６７Ａ−Ｙ２１
７Ｑ，ＢＰＮ’−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，ＢＰＮ’−Ｐ５２Ｌ−Ｖ６８Ａ
−Ｇ９７Ａ，ＢＰＮ’−Ｇ９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ，ＢＰＮ’−Ｖ６８Ａ−Ａ９
２Ｇ−Ｇ９７Ａ，ＢＰＮ’−Ｇ９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ１６７Ａ−Ｙ２１７
Ｑ，ＢＰＮ’−Ｐ５２Ｌ−Ｖ６８Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，ＢＰＮ’−Ｐ５２Ｌ−Ｖ
６８Ａ−Ｉ１１１Ｖ，ＢＰＮ’−Ｖ６８Ａ−Ａ９２Ｇ−Ｉ１１１Ｖ，ＢＰＮ’−Ｐ５２Ｌ
−Ｖ６８Ａ−Ｇ９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，ＢＰＮ’−Ｖ６８Ａ−Ｇ９７Ａ−Ｉ１
１１Ｖ，ＢＰＮ’−Ｇ９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，ＢＰＮ’−Ｇ９７Ａ−Ｉ１１１
Ｖ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ１６７Ａ，ＢＰＮ’−Ｓ８９Ｙ−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ，ＢＰＮ’
−Ｖ６８Ａ−Ｓ８９Ｙ−Ｉ１１１Ｖ，ＢＰＮ’−Ｖ６８Ａ−Ａ９２Ｇ−Ｙ２１７Ｑ，ＢＰ
Ｎ’−Ｉ１１１Ｖ−Ｙ１６７Ａ−Ｙ２１７Ｑ，ＢＰＮ’−Ｇ９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｙ１６
７Ａ−Ｙ２１７Ｑ，ＢＰＮ’−Ｇ９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，ＢＰＮ
’−Ｖ６８Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｙ１６７Ａ−Ｙ２１７Ｑ，ＢＰＮ’−Ｉ１１１Ｖ−Ｇ１２８
Ａ−Ｙ２１７Ｑ，ＢＰＮ’−Ｇ９７Ａ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，ＢＰＮ’−Ｖ６８Ａ−
Ｙ１６７Ａ−Ｙ２１７Ｑ，ＢＰＮ’−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ１６７Ａ，ＢＰＮ’−
Ｎ６２Ｑ−Ｇ９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ，ＢＰＮ’−Ｇ９７Ａ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ１６７Ａ−Ｙ２
１７Ｑ，ＢＰＮ’−Ｇ９７Ａ−Ｌ１２６Ａ−Ｙ２１７Ｑ，ＢＰＮ’−Ｖ６８Ａ−Ｉ１１１
Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，ＢＰＮ’−Ｓ８９Ｙ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，及びＢＰＮ’−Ｌ９６
Ｔ−Ｇ９７Ａ−Ｙ２１７Ｑ。同様に、プラスミドｐＨＰＬＴ−ＢＰＮ’ｐａｒｔｉａｌ  
ｏｐｔもＤＮＡ２．０により作成した。
【０４１１】
実施例２に記載のように、形質転換体をつつき、マイクロタイタープレートに植菌し、
増殖させた。１６℃及びｐＨ  ８での洗剤組成物２のＢＭＩ微小標本アッセイを用いて、
変異体をクリーニング性能についてアッセイした。タンパク質含量はＴＣＡアッセイを用
いて測定した。実施例１に記載のようにアッセイを実施し、ＢＰＮ’−ｖ３（ＰＩ値１．
０を有する）と比較して性能指数を算出した。
【０４１２】
以下のＢＰＮ’変異体：Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ０９７
Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｙ１６７Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０
９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−
Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｖ２０３Ｙ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４
Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１
２８Ｓ−Ｖ２０３Ｙ−Ｙ２１７Ｑ，及びＶ０６８Ａ−Ａ０９２Ｇ−Ｙ２１７Ｑ，からなる
群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’アミノ酸配列（配列番号
２）は、ｐＨ  ８及び１６℃での洗剤組成物２のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイに
おいて、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して１．０超、少なくとも１．１、少なくとも１．２、少
なくとも１．３、少なくとも１．４、少なくとも１．５、少なくとも１．６、少なくとも
１．７、少なくとも１．８、少なくとも１．９、少なくとも２、１．０超〜約１０、１．
０超〜約８、又は１．０超〜約５のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体
のアミノ酸位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような
変異体は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質
分解活性を有し、ＢＰＮ’よりもＰＩ値が大きい。本発明は、本ＢＭＩ微小標本クリーニ
ングアッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性
を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して１．０超〜約５のＰＩ値を有す
る、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は配列番号２の配列に対して少なくとも６０
％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６
％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少な
くとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列
のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。本ＢＭＩ微小標本クリーニング
アッセイにおいて、ＢＰＮ’と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、並びに／
あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して１．０超〜約５のＰＩ値を有する、スブチリシンプ
ロテアーゼ変異体も提供され、この変異体は配列番号２に対して少なくとも８５％、９０
％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同
一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、この変異体は、Ｘ０２４Ｇ，Ｘ０２５Ｇ，Ｘ
０５２Ｌ，Ｘ０５３Ｇ，Ｘ０５５Ｐ，Ｘ０６１Ｐ，Ｘ０６２Ｑ，Ｘ０６８Ａ，Ｘ０８９Ｙ
，Ｘ０９２Ｇ，Ｘ０９６Ｔ，Ｘ０９７Ａ，Ｘ１０１Ｎ，Ｘ１０４Ｎ，Ｘ１１１Ｖ，Ｘ１２
４Ｖ，Ｘ１２６Ａ，Ｘ１２８Ａ／Ｓ、Ｘ１６７Ａ，Ｘ２０３Ｙ，及びＸ２１７Ｑ，の群か
ら選択される少なくとも１つの置換を含み、選択的に、Ｓ０２４Ｇ，Ｎ０２５Ｇ，Ｐ０５
２Ｌ，Ｓ０５３Ｇ，Ｔ０５５Ｐ，Ｎ０６１Ｐ，Ｎ０６２Ｑ，Ｖ０６８Ａ，Ｓ０８９Ｙ，Ａ
０９２Ｇ，Ｌ０９６Ｔ，Ｇ０９７Ａ，Ｓ１０１Ｎ，Ｙ１０４Ｎ，Ｉ１１１Ｖ，Ｍ１２４Ｖ
，Ｌ１２６Ａ，Ｇ１２８Ａ／Ｓ、Ｙ１６７Ａ，Ｖ２０３Ｙ，及びＹ２１７Ｑ，の群から選
択される少なくとも１つの置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配
列の位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載さ
れるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙
げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用い
るクリーニング方法も含まれる。
【０４１３】
以下のＢＰＮ’変異体：Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８
Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｉ１１１Ｖ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２
１７Ｑ，Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ１６７Ａ，Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，
Ｌ０９６Ｔ−Ｇ０９７Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ，Ｓ０５３
Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ｓ−Ｖ２０３Ｙ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０
８９Ｙ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，及びＶ０６８Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，からなる
群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’アミノ酸配列（配列番号
２）は、ｐＨ  ８及び１６℃での洗剤組成物２のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイに
おいて、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して約１．０のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここ
で、変異のアミノ酸位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。本
発明は、本ＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比
較して向上したタンパク質分解活性を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３と比較
して約１．０のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は、配列番号２
の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、
９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含
み、上記群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体のアミ
ノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。
このような変異体は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上した
タンパク質分解活性を有し、ＢＰＮ’よりもＰＩ値が大きく、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して
約１．０のＰＩ値を有する。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくと
もこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限
定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も
含まれる。
【０４１４】
以下のＢＰＮ’変異体：Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ，Ｇ０９７Ａ−Ｌ１２６
Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ０９７Ａ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｉ１１１Ｖ−Ｙ１６７Ａ−Ｙ２
１７Ｑ，Ｍ１２４Ｖ−Ｙ１６７Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｐ０５２Ｌ−Ｖ０６８Ａ−Ｇ０９７Ａ，
Ｓ０８９Ｙ−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ，Ｖ０６８Ａ−Ａ０９２Ｇ−Ｇ０９７Ａ，Ｖ０６８
Ａ−Ａ０９２Ｇ−Ｉ１１１Ｖ，Ｖ０６８Ａ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ，Ｖ０６８Ａ−Ｓ０
８９Ｙ−Ｉ１１１Ｖ，及びＹ１０４Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，からなる群から選択さ
れる少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’アミノ酸配列（配列番号２）は、ｐＨ
８及び１６℃での洗剤組成物２のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰ
Ｎ’−ｖ３と比較して約０．９のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体の
位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体はタ
ンパク質分解活性を有する。本発明は、本アッセイにおいて、タンパク質分解活性を有す
る、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して約０．９のＰＩ値を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’
と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、プロテアーゼ変異体を含み、この変異
体は、配列番号２の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、
９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有する
アミノ酸配列、並びに上記群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここ
で、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列の位置と対応させることにより番号付けさ
れる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変
異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに
、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
【０４１５】
以下のＢＰＮ’変異体：Ｇ０９７Ａ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ１６７Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｖ０６８
Ａ−Ｙ１６７Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ１６７Ａ，Ｉ１
１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ１６７Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｖ０６８Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｙ１６７Ａ−
Ｙ２１７Ｑ，Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ１６７Ａ−Ｙ２１７Ｑ，及びＰ０
５２Ｌ−Ｖ０６８Ａ−Ｉ１１１Ｖ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸
置換を含むＢＰＮ’アミノ酸配列（配列番号２）は、ｐＨ  ８及び１６℃での洗剤組成物
２のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して０．５以
上０．９未満のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体の位置は配列番号２
の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体はタンパク質分解活性
を有する。本発明は、タンパク質分解活性を有するプロテアーゼ変異体を含み、変異体は
、配列番号２の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１
％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミ
ノ酸配列、並びに上記群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、
変異体の位置は配列番号２の配列の位置と対応させることにより番号付けされる。このよ
うな変異体はタンパク質分解活性を有する。本明細書の他箇所により詳細に記載されるよ
うな、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられ
るが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリ
ーニング方法も含まれる。
【０４１６】
（実施例５）
ＢＰＮ’変異体のクリーニング性能
親ＢＰＮ’に基づく変異体をＤＮＡ２．０により作成した。実施例２に記載のように変
異体を増殖させ、１６℃及びｐＨ  ８での洗剤組成物１のＢＭＩ微小標本アッセイ、１６
℃及びｐＨ  ８での洗剤組成物４のＢＭＩ微小標本アッセイ、並びに１６℃及びｐＨ  ８
での洗剤組成物４の卵微小標本アッセイで、クリーニング性能について試験した。タンパ
ク質含量はＴＣＡアッセイを用いて測定した。実施例１に記載のようにアッセイを実施し
、ＢＰＮ’−ｖ３（ＰＩ値１．０を有する）と比較して性能指数を算出した。
【０４１７】
以下のＢＰＮ’変異体：Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｐ２１０
Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１
０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−
Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，及びＳ０２４Ｇ−Ｎ０
２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｉ１１１Ｖ−
Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含
むＢＰＮ’アミノ酸配列（配列番号２）は、ｐＨ  ８及び１６℃での洗剤組成物４のＢＭ
Ｉ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して１．０超、少なく
とも１．１、少なくとも１．２、少なくとも１．３、少なくとも１．４、少なくとも１．
５、少なくとも１．６、少なくとも１．７、少なくとも１．８、少なくとも１．９、少な
くとも２、１．０超〜約１０、１．０超〜約８、又は１．０超〜約５のＰＩ値を有するも
のと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列と対応させること
により番号付けされる。このような変異体は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号
２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有し、ＢＰＮ’よりもＰＩ値が大きい。本
発明は、本ＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比
較して向上したタンパク質分解活性を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３と比較
して１．０超〜約５のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は配列番
号２の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２
％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列
を含み、上記群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体の
アミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされ
る。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異
体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、
少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
【０４１８】
以下のＢＰＮ’変異体：Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８
Ａ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ｓ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ０
９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｉ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ−
Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ０９７Ａ−Ｎ１２３Ｑ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ０９７
Ａ−Ｎ１２３Ｑ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２
１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−
Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｎ１２３Ｑ−Ｙ２１７
Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０
６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｎ１２３Ｑ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｇ１０２Ａ−
Ｐ１２９Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１００Ｎ−Ｓ１０１
Ｎ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１００Ｎ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０
６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１００Ｑ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−
Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７
Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｉ１１１Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１
１１Ｖ−Ｍ１２４Ｉ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ１０２Ａ−Ｉ１１１Ｖ−
Ｐ１２９Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７
Ｑ，Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６２Ｑ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０
９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−
Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３
Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０
２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｎ１２３Ｑ−
Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７
Ａ−Ｇ１００Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０
６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｉ１１１Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−
Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１０２Ａ−Ｐ１２９Ｓ−Ｙ２１７
Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０
６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｍ１２４Ｉ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−
Ｓ１０１Ｎ−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ１０２
Ａ−Ｐ１２９Ｓ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ１０２Ａ−Ｐ１
２９Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１００Ｎ−
Ｓ１０１Ｎ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１
Ｎ−Ｉ１１１Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１０２Ａ−Ｐ１２
９Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ
２１７Ｑ，Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，及びＳ０７８Ｎ−Ｇ０９
７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，からなる群から選択される少なくとも１組
のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’アミノ酸配列（配列番号２）は、ｐＨ  ８及び１６℃での
洗剤組成物４のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３と比較し
て約１．０のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列
番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体は、本アッセイ
において、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有し、ＢＰ
Ｎ’よりもＰＩ値が大きい。本発明は、本ＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて
、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、並びに／あ
るいは、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して約１．０のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含
み、この変異体は、配列番号２の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５
％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同
一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換
を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させ
ることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なく
ともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに
限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法
も含まれる。
【０４１９】
以下のＢＰＮ’変異体：Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｍ１２４Ｉ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１
Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１
００Ｄ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１００Ｑ−Ｓ１０１Ｎ−
Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１００Ｑ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１
Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ１００Ｎ−Ｇ１０２Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｓ０
７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１００Ｎ−Ｉ１１１Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−
Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｍ１２４Ｉ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３
Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｍ１２４Ｉ−Ｙ２１７Ｑ，及びＳ０５３Ｇ−
Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｎ１２３Ｑ−Ｙ２１７Ｑ，からなる群から選択さ
れる少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’アミノ酸配列（配列番号２）は、ｐＨ
８及び１６℃での洗剤組成物４のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰ
Ｎ’−ｖ３と比較して約０．９のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体の
位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体はタ
ンパク質分解活性を有する。本発明は、本アッセイにおいて、タンパク質分解活性を有す
る、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して約０．９のＰＩ値を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’
と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、プロテアーゼ変異体を含み、この変異
体は、配列番号２の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、
９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有する
アミノ酸配列、並びに上記群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここ
で、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列の位置と対応させることにより番号付けさ
れる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変
異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに
、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
【０４２０】
ｐＨ  ８及び１６℃での洗剤組成物１又は４のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイに
おいて、ＢＰＮ’と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、並びに／あるいは、
ＢＰＮ’−ｖ３と比較して１．０超〜約５のＰＩ値を有する、スブチリシンプロテアーゼ
変異体も提供され、この変異体は配列番号２に対して少なくとも８５％、９０％、９１％
、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有す
るアミノ酸配列を含み、ここで、この変異体は、Ｘ０２４Ｇ，Ｘ０２５Ｇ，Ｘ０５３Ｇ，
Ｘ０６１Ｐ，Ｘ０６２Ｑ，Ｘ０７８Ｎ，Ｘ０９７Ａ，Ｘ１００Ｄ／Ｎ／Ｑ、Ｘ１０１Ｎ，
Ｘ１０２Ａ，Ｘ１１１Ｖ，Ｘ１２３Ａ／Ｑ／Ｖ、Ｘ１２４Ｉ／Ｖ、Ｘ１２８Ａ／Ｓ、Ｘ１
２９Ｓ，Ｘ２１０Ｓ，Ｘ２１７Ｑ，の群から選択される少なくとも１つの置換を含み、選
択的に、Ｓ０２４Ｇ，Ｎ０２５Ｇ，Ｓ０５３Ｇ，Ｎ０６１Ｐ，Ｎ０６２Ｑ，Ｓ０７８Ｎ，
Ｇ０９７Ａ，Ｇ１００Ｄ／Ｎ／Ｑ、Ｓ１０１Ｎ，Ｇ１０２Ａ，Ｉ１１１Ｖ，Ｎ１２３Ａ／
Ｑ／Ｖ、Ｍ１２４Ｉ／Ｖ、Ｇ１２８Ａ／Ｓ、Ｐ１２９Ｓ，Ｐ２１０Ｓ，及びＹ２１７Ｑ，
の群から選択される少なくとも１つの置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列
番号２の配列の位置と対応させることにより番号付けされる。このような変異体は、本ア
ッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有し
、ＢＰＮ’よりもＰＩ値が大きい。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少
なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、こ
れに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング
方法も含まれる。
【０４２１】
以下のＢＰＮ’変異体：Ｇ０９７Ａ−Ｎ１２３Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ０９７Ａ−Ｎ１２３
Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｇ１０２Ａ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｓ１
０１Ｎ−Ｇ１０２Ａ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−
Ｉ１１１Ｖ−Ｎ１２３Ｑ−Ｙ２１７Ｑ，及びＧ１０２Ａ−Ｎ１２３Ｑ−Ｙ２１７Ｑ，から
なる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’アミノ酸配列（配列
番号２）は、ｐＨ  ８及び１６℃での洗剤組成物４のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセ
イにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して０．５以上０．９未満のＰＩ値を有するものと判
定されたが、ここで、変異体の位置は配列番号２の配列の位置と対応させることにより番
号付けされる。このような変異体はタンパク質分解活性を有する。本発明は、タンパク質
分解活性を有するプロテアーゼ変異体を含み、変異体は、配列番号２の配列に対して少な
くとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９
５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列、並びに上記群から選択
される少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体の位置は配列番号２の配列
の位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載され
るような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げ
られるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いる
クリーニング方法も含まれる。
【０４２２】
以下のＢＰＮ’変異体：Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１
Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０
６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｉ１１１Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−
Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４
Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｐ２
１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−
Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，及びＳ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０
６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｉ１１１Ｖ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，
からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’アミノ酸配列（
配列番号２）は、ｐＨ  ８及び１６℃での洗剤組成物１のＢＭＩ微小標本クリーニングア
ッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して１．０超、少なくとも１．１、少なくとも１
．２、少なくとも１．３、少なくとも１．４、少なくとも１．５、少なくとも１．６、少
なくとも１．７、少なくとも１．８、少なくとも１．９、少なくとも２、１．０超〜約１
０、１．０超〜約８、又は１．０超〜約５のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで
、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。
このような変異体は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上した
タンパク質分解活性を有し、ＢＰＮ’よりもＰＩ値が大きい。本発明は、本ＢＭＩ微小標
本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク
質分解活性を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して１．０超〜約５のＰ
Ｉ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は配列番号２の配列に対して少な
くとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９
５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択
される少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番
号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所に
より詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリー
ニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのよ
うな変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
【０４２３】
以下のＢＰＮ’変異体：Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８
Ａ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ｓ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ０
９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｉ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ−
Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ０９７Ａ−Ｎ１２３Ｑ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ０９７
Ａ−Ｎ１２３Ｑ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２
１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−
Ｇ０９７Ａ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｎ１２３Ｑ−Ｙ２１７
Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０
６１Ｐ−Ｇ１０２Ａ−Ｐ１２９Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−
Ｇ１００Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１００
Ｑ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０
６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１００Ｎ−Ｉ１１１Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，
Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｉ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１
Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ１０２Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｐ１２９Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０
９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−
Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６２Ｑ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４
Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１
２４Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−
Ｓ１０１Ｎ−Ｎ１２３Ｑ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１
Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１００Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０
２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｉ１１１Ｖ−
Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１０２
Ａ−Ｐ１２９Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２
１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ１０２Ａ−Ｐ１２９Ｓ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，
Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ１０２Ａ−Ｐ１２９Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１
Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｉ１１１Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０
６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１０２Ａ−Ｐ１２９Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−
Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８
Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，及びＳ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，
からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’アミノ酸配列（
配列番号２）は、ｐＨ  ８及び１６℃での洗剤組成物１のＢＭＩ微小標本クリーニングア
ッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して約１．０のＰＩ値を有するものと判定された
がここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けさ
れる。このような変異体は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向
上したタンパク質分解活性を有し、ＢＰＮ’よりもＰＩ値が大きい。本発明は、本ＢＭＩ
微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタ
ンパク質分解活性を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して約１．０のＰ
Ｉ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は、配列番号２の配列に対して少
なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、
９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選
択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列
番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所
により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリ
ーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこの
ような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
【０４２４】
以下のＢＰＮ’変異体：Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｍ１２４Ｉ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１
Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｎ１２３Ｑ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０
９７Ａ−Ｇ１００Ｎ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１００Ｑ−
Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１００Ｑ−Ｓ１０１
Ｎ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ１００Ｎ−Ｇ１０２Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０
２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｍ１２４Ｉ−
Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｍ１２４Ｉ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３
Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０
５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｍ１２４Ｉ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−
Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｎ１２３Ｑ−Ｙ２１７Ｑ，及びＳ０５３Ｇ−Ｎ０
６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１００Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｙ２１７Ｑ，からなる群か
ら選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’アミノ酸配列（配列番号２）
は、ｐＨ  ８及び１６℃での洗剤組成物１のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおい
て、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して約０．９のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、
変異体の位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変
異体はタンパク質分解活性を有する。本発明は、本アッセイにおいて、タンパク質分解活
性を有する、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して約０．９のＰＩ値を有する、並びに／あるいは、
ＢＰＮ’と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、プロテアーゼ変異体を含み、
この変異体は、配列番号２の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、
９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性
を有するアミノ酸配列、並びに上記群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含
み、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列の位置と対応させることにより番
号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような
１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）
、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
【０４２５】
以下のＢＰＮ’変異体：Ｇ０９７Ａ−Ｎ１２３Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ０９７Ａ−Ｎ１２３
Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１００Ｄ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０
６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１０２Ａ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−
Ｇ１０２Ａ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｎ１２３
Ｑ−Ｙ２１７Ｑ，及びＧ１０２Ａ−Ｎ１２３Ｑ−Ｙ２１７Ｑ，からなる群から選択される
少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’アミノ酸配列（配列番号２）は、ｐＨ  ８
及び１６℃での洗剤組成物１のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’
−ｖ３と比較して０．５以上０．９未満のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、
変異体の位置は配列番号２の配列の位置と対応させることにより番号付けされる。このよ
うな変異体はタンパク質分解活性を有する。本発明は、タンパク質分解活性を有するプロ
テアーゼ変異体を含み、変異体は、配列番号２の配列に対して少なくとも６０％、７０％
、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％
又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列、並びに上記群から選択される少なくとも１組
のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体の位置は配列番号２の配列の位置と対応させるこ
とにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくとも
このような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定
されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含
まれる。
【０４２６】
以下のＢＰＮ’変異体：アミノ酸置換Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８
Ａ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，の組を含むＢＰＮ’アミノ酸配列（配列番号２）は、ｐＨ
８及び１６℃での洗剤組成物４の卵微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’
−ｖ３と比較して１．０超〜約５のＰＩを有するものと判定されたが、ここで、変異体の
アミノ酸位置は配列番号２の配列の位置と対応させることにより番号付けされる。このよ
うな変異体は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパ
ク質分解活性を有し、ＢＰＮ’よりもＰＩ値が大きい。本発明は、本卵微小標本クリーニ
ングアッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性
を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して１．０超〜約５のＰＩ値を有す
る、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は配列番号２に対して少なくとも６０％、７
０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９
７％、又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸置換Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０
９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，を含み、ここで、変異体の
アミノ酸位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他
箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（
クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つの
このような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
【０４２７】
以下のＢＰＮ’変異体：Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｇ１０２
Ａ−Ｐ１２９Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２
１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−
Ｇ１２８Ａ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７
Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１
２８Ａ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ｓ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，
Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１
Ｎ−Ｉ１１１Ｖ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０
６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−
Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，及びＧ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，から
なる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’アミノ酸配列（配列
番号２）は、ｐＨ  ８及び１６℃での洗剤組成物４の卵微小標本クリーニングアッセイに
おいて、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して約１．０のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここ
で、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。
このような変異体は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上した
タンパク質分解活性を有し、ＢＰＮ’よりもＰＩ値が大きい。本発明は、本卵微小標本ク
リーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分
解活性を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して約１．０のＰＩ値を有す
る、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は、配列番号２の配列に対して少なくとも６
０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９
６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少
なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配
列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細
に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組
成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異
体を用いるクリーニング方法も含まれる。
【０４２８】
以下のＢＰＮ’変異体：Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｍ１２４Ｉ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３
Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｎ１２３Ｑ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０
６１Ｐ−Ｇ１０２Ａ−Ｐ１２９Ｓ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−
Ｍ１２４Ｖ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ０９７Ａ−Ｎ１２３Ｑ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７
Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１０２Ａ−Ｐ１２９Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０
５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｉ１１１Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，
Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｉ１１１Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１
Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１
１１Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ−
Ｙ２１７Ｑ，Ｇ０９７Ａ−Ｎ１２３Ｑ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１
Ｖ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ２
１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，
Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７
Ａ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１００Ｎ−Ｙ２
１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−
Ｎ１２３Ｑ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｎ１２３Ｑ−Ｙ２１７
Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１００Ｑ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０
６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｎ１２３Ｑ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−
Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｍ１２４Ｉ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１
Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｍ１２４Ｉ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０
９７Ａ−Ｍ１２４Ｉ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−
Ｍ１２４Ｉ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４
Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１００Ｎ−Ｓ１
０１Ｎ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−
Ｇ１０２Ａ−Ｐ１２９Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ１０２Ａ−Ｉ１１１
Ｖ−Ｐ１２９Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ１０２Ａ−Ｐ１２９Ｓ−Ｙ２
１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−
Ｓ１０１Ｎ−Ｉ１１１Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６２Ｑ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１
Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１
０１Ｎ−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−
Ｓ１０１Ｎ−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４
Ｉ−Ｙ２１７Ｑ，Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ１００Ｎ−Ｇ１０２Ａ−Ｙ２
１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１００Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−
Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１００Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｙ２１７
Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１００Ｎ−Ｉ１１１Ｖ−Ｙ２
１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１００Ｑ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−
Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１０２Ａ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ０９７Ａ−Ｎ１２３Ｖ−Ｙ２１７
Ｑ，Ｇ０９７Ａ−Ｎ１２３Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ１０２Ａ−Ｎ１２３Ｑ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０
６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１００Ｑ−Ｓ１０１Ｎ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０７８Ｎ−
Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｎ１２３Ｑ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７
Ａ−Ｇ１００Ｄ−Ｙ２１７Ｑ，及びＮ０６１Ｐ−Ｇ１０２Ａ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，
からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’アミノ酸配列（
配列番号２）は、ｐＨ  ８及び１６℃での洗剤組成物４の卵微小標本クリーニングアッセ
イにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して０．５以上０．９以下のＰＩ値を有するものと判
定されたが、ここで、変異体の位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付け
される。このような変異体はタンパク質分解活性を有する。本発明は、タンパク質分解活
性を有し、及び／又は本卵微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３と比
較して０．５以上０．９以下のＰＩ値を有するプロテアーゼ変異体を含み、変異体は配列
番号２の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９
２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、又は９８％の同一性を有するアミノ酸
配列、並びに上記群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異
体のアミノ酸位置は配列番号２の配列の位置と対応させることにより番号付けされる。本
明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含
む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なく
とも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
【０４２９】
ｐＨ  ８及び１６℃での洗剤組成物４の卵微小標本クリーニングアッセイにおいて、Ｂ
ＰＮ’と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−
ｖ３と比較して１．０超〜約５のＰＩ値を有する、スブチリシンプロテアーゼ変異体も提
供され、この変異体は配列番号２に対して少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、
９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸
配列を含み、ここで、この変異体は、Ｘ０２４Ｇ，Ｘ０２５Ｇ，Ｘ０５３Ｇ，Ｘ０６１Ｐ
，Ｘ０６２Ｑ，Ｘ０７８Ｎ，Ｘ０９７Ａ，Ｘ１００Ｄ／Ｎ／Ｑ、Ｘ１０１Ｎ，Ｘ１０２Ａ
，Ｘ１１１Ｖ，Ｘ１２３Ａ／Ｑ／Ｖ、Ｘ１２４Ｉ／Ｖ、Ｘ１２８Ａ／Ｓ、Ｘ１２９Ｓ，Ｘ
２１０Ｓ，及びＸ２１７Ｑ，の群から選択される少なくとも１つの置換を含み、選択的に
、Ｓ０２４Ｇ，Ｎ０２５Ｇ，Ｓ０５３Ｇ，Ｎ０６１Ｐ，Ｎ０６２Ｑ，Ｓ０７８Ｎ，Ｇ０９
７Ａ，Ｇ１００Ｄ／Ｎ／Ｑ、Ｓ１０１Ｎ，Ｇ１０２Ａ，Ｉ１１１Ｖ，Ｎ１２３Ａ／Ｑ／Ｖ
、Ｍ１２４Ｉ／Ｖ、Ｇ１２８Ａ／Ｓ、Ｐ１２９Ｓ，Ｐ２１０Ｓ，及びＹ２１７Ｑ，の群か
ら選択される少なくとも１つの置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２
の配列の位置と対応させることにより番号付けされる。このような変異体は、本アッセイ
において、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有し、ＢＰ
Ｎ’よりもＰＩ値が大きい。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくと
もこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限
定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も
含まれる。
【０４３０】
（実施例６）
ＢＰＮ’変異体の構築及びクリーニング性能
親ＢＰＮ’に基づくＢＰＮ’コンビナトリアルライブラリはＤＮＡ２．０により作成さ
れたものであり、ライゲーション反応物として供給された。枯草菌（B. subtilis）を効
率的に形質転換させるため、形質転換前にライゲーション反応混合物中のＤＮＡを増幅さ
せ、形質転換体を実施例２に記載のように増殖させた。これらの変異体を、１６℃及びｐ
Ｈ  ８での洗剤組成物１及び洗剤組成物４の、ＢＭＩ微小標本アッセイ、並びに１６℃及
びｐＨ  ８での洗剤組成物４の卵微小標本アッセイを用いて、クリーニング性能について
試験した。ＴＣＡアッセイを用いてタンパク質含量を測定し、ＡＡＰＦアッセイを用いて
プロテアーゼ活性についてアッセイした。実施例１に記載のようにアッセイを実施し、Ｂ
ＰＮ’−ｖ３（ＰＩ値１．０を有する）と比較して性能指数を算出した。
【０４３１】
以下のＢＰＮ’変異体：Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１
Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１
０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０３８Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−
Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３
Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０
６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−
Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７
Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１
２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−
Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１
Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１
０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，
Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４
Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０
２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−
Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８
Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０
５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−
Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５
Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｔ０
５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，
Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７
Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０
２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，
Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７
Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１
２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−
Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５
Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０
６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−
Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８
Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４９Ｎ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１
２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−
Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７
Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０
５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，
Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，及びＴ０５５Ｐ−Ｎ０
６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，からなる群か
ら選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’アミノ酸配列（配列番号２）
は、ｐＨ  ８及び１６℃での洗剤組成物１のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおい
て、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して１．０超、少なくとも１．１、少なくとも１．２、少なく
とも１．３、少なくとも１．４、少なくとも１．５、少なくとも１．６、少なくとも１．
７、少なくとも１．８、少なくとも１．９、少なくとも２、１．０超〜約１０、１．０超
〜約８、又は１．０超〜約５のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のア
ミノ酸位置は、配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変
異体は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分
解活性を有し、ＢＰＮ’よりもＰＩ値が大きい。本発明は、本ＢＭＩ微小標本クリーニン
グアッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を
有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して１．０超〜約５のＰＩ値を有する
、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は配列番号２の配列に対して少なくとも６０％
、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％
、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なく
とも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列の
アミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。
【０４３２】
以下のＢＰＮ’変異体：Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８
Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０
２５Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｇ０９７Ａ−
Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｉ０３５Ｖ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１
Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０
７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−
Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５
Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０
２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｓ１３０Ｇ−Ｙ２１７Ｑ，
Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４
Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０
２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−
Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１
Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０
５５Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−
Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５
Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０
２５Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−
Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０３８
Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０
５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−
Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３
Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０
２４Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−
Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ，Ｓ０２４Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１
Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｓ０
７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−
Ｙ２１７Ｑ，Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ａ１１６Ｓ−Ｇ１２８Ａ，及びＴ０
５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，からなる群から選択される
少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’アミノ酸配列（配列番号２）は、ｐＨ  ８
及び１６℃での洗剤組成物１のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’
−ｖ３と比較して約１．０のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミ
ノ酸位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体
は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’と比較して向上したタンパク質分解活性を有し、ＢＰ
Ｎ’よりもＰＩ値が大きい。本発明は、本ＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて
、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、並びに／あ
るいは、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して約１．０のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含
み、この変異体は、配列番号２の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５
％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同
一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換
を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させ
ることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なく
ともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに
限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法
も含まれる。
【０４３３】
ｐＨ  ８及び１６℃での洗剤組成物１のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて
、ＢＰＮ’と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ
’−ｖ３と比較して１．０超〜約５のＰＩ値を有する、スブチリシンプロテアーゼ変異体
も提供され、この変異体は配列番号２に対して少なくとも８５％、９０％、９１％、９２
％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するアミ
ノ酸配列を含み、ここで、この変異体は、Ｘ０２４Ｇ，Ｘ０２５Ｇ，Ｘ０３５Ｖ，Ｘ０３
８Ｇ，Ｘ０５３Ｇ，Ｘ０５５Ｐ，Ｘ０６１Ｐ，Ｘ０７８Ｎ，Ｘ０９７Ａ，Ｘ１０１Ｎ，Ｘ
１１６Ｓ，Ｘ１２８Ａ／Ｓ、Ｘ１３０Ｇ，Ｘ２１６Ｑ，Ｘ２１７Ｑ，及びＸ２４９Ｎ，の
群から選択される少なくとも１つの置換を含み、選択的に、Ｓ０２４Ｇ，Ｎ０２５Ｇ，Ｉ
０３５Ｖ，Ｓ０３８Ｇ，Ｓ０５３Ｇ，Ｔ０５５Ｐ，Ｎ０６１Ｐ，Ｓ０７８Ｎ，Ｇ０９７Ａ
，Ｓ１０１Ｎ，Ａ１１６Ｓ，Ｇ１２８Ａ／Ｓ、Ｓ１３０Ｇ，Ｙ２１６Ｑ，Ｙ２１７Ｑ，及
びＳ２４９Ｎ，の群から選択される少なくとも１つの置換を含み、ここで、変異体のアミ
ノ酸位置は配列番号２の配列の位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の
他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物
（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つ
のこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
【０４３４】
以下のＢＰＮ’変異体：Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７
Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０
６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−
Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７
Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１
２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−
Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１
Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１
０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，及びＴ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ１２８
Ａ−Ｙ２１７Ｑ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ
’アミノ酸配列（配列番号２）は、ｐＨ  ８及び１６℃での洗剤組成物４のＢＭＩ微小標
本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して１．０超、少なくとも１．
１、少なくとも１．２、少なくとも１．３、少なくとも１．４、少なくとも１．５、少な
くとも１．６、少なくとも１．７、少なくとも１．８、少なくとも１．９、少なくとも２
、１．０超〜約１０、１．０超〜約８、又は１．０超〜約５のＰＩ値を有するものと判定
されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列と対応させることにより
番号付けされる。このような変異体は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と
比較して向上したタンパク質分解活性を有し、ＢＰＮ’よりもＰＩ値が大きい。本発明は
、本ＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して
向上したタンパク質分解活性を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して１
．０超〜約５のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は配列番号２の
配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９
３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含み
、上記群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ
酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。
【０４３５】
以下のＢＰＮ’変異体：Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８
Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０
２５Ｇ−Ｓ０３８Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−
Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ１２８
Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１
２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−
Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５
Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０
７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−
Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８
Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１
０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−
Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７
Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｉ０
３５Ｖ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−
Ｎ０２５Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５
Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０
２５Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ，Ｓ０２４Ｇ−
Ｎ０２５Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４
Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｓ１３０Ｇ−Ｙ２
１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，
Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１
Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０
９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−
Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３
Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０
５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，
Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ１２８
Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１
０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−
Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７
Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１
０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−
Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０６１
Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０
７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０３８Ｇ−
Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３
Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０
６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−
Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３
Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０
５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−
Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４
Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０
２４Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−
Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１
Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ，Ｓ０２４Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０
９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−
Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４９Ｎ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８
Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１
０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−
Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８
Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１
２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−
Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，及びＴ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０
９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，からなる群から選択される少なくとも１
組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’アミノ酸配列（配列番号２）は、ｐＨ  ８及び１６℃で
の洗剤組成物４のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３と比較
して約１．０のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は配
列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体は、本アッセ
イにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有し、Ｂ
ＰＮ’よりもＰＩ値が大きい。本発明は、本ＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおい
て、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、並びに／
あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して約１．０のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を
含み、この変異体は、配列番号２の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８
５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の
同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置
換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応さ
せることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少な
くともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これ
に限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方
法も含まれる。
【０４３６】
以下のＢＰＮ’変異体：Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ａ１１６Ｓ−Ｇ１２８
Ａ及びＳ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｙ
２１７Ｑ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’アミ
ノ酸配列（配列番号２）は、ｐＨ  ８及び１６℃での洗剤組成物４のＢＭＩ微小標本クリ
ーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して約０．９のＰＩ値を有するものと
判定されたが、ここで、変異体の位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付
けされる。このような変異体は、本アッセイにおいて、向上したタンパク質分解活性を有
し、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較してタンパク質分解活性が向上し得る。本発明は、本
アッセイにおいて、タンパク質分解活性を有する、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して約０．９の
ＰＩ値を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’と比較して向上したタンパク質分解活性を
有する、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は、配列番号２の配列に対して少なくと
も６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％
、９６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列、並びに上記群から選択され
る少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の
配列の位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載
されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が
挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用
いるクリーニング方法も含まれる。
【０４３７】
以下のＢＰＮ’変異体：Ｎ０２５Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７
Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２
１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−
Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｓ１０１
Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０
６１Ｐ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−
Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３
Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０
５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−
Ｎ０２５Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７
Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２
１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，
Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，及びＳ０
２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，
からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’アミノ酸配列（
配列番号２）は、ｐＨ  ８及び１６℃での洗剤組成物４の卵微小標本クリーニングアッセ
イにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して１．０超、少なくとも１．１、少なくとも１．２
、少なくとも１．３、少なくとも１．４、少なくとも１．５、少なくとも１．６、少なく
とも１．７、少なくとも１．８、少なくとも１．９、少なくとも２、１．０超〜約１０、
１．０超〜約８、又は１．０超〜約５のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変
異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。この
ような変異体は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタン
パク質分解活性を有し、ＢＰＮ’よりもＰＩ値が大きい。本発明は、本卵微小標本クリー
ニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活
性を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して１．０超〜約５のＰＩ値を有
する、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は配列番号２の配列に対して少なくとも６
０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９
６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少
なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配
列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。
【０４３８】
以下のＢＰＮ’変異体：Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８
Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０
２５Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，
Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３
Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０
２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，
Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７
Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１
０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−
Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５
Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０
５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，
Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０３８
Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２
１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，
Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８
Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１
２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−
Ｓ０７８Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７
Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１
２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ａ１１６Ｓ−Ｇ１２８Ａ，
Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｔ０５５
Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０
９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−
Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１
Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０
６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｇ０９７Ａ−
Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８
Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１
２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−
Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４
Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０
２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｙ２１７Ｑ，
及びＳ０２４Ｇ−Ｉ０３５Ｖ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｙ２
１７Ｑ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’アミノ
酸配列（配列番号２）は、ｐＨ  ８及び１６℃での洗剤組成物４の卵微小標本クリーニン
グアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して約１．０のＰＩ値を有するものと判定さ
れたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号
付けされる。このような変異体は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較
して向上したタンパク質分解活性を有し、ＢＰＮ’よりもＰＩ値が大きい。本発明は、本
卵微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上した
タンパク質分解活性を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して約１．０の
ＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は、配列番号２の配列に対して
少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％
、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から
選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配
列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇
所に更に詳細に記載されるような、少なくとも１つのこのような変異体を含む組成物（ク
リーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこ
のような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
【０４３９】
以下のＢＰＮ’変異体：Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｔ０５５
Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｎ０
６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ，Ｓ０２４Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−
Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５
Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２
１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−
Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１
Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４９Ｎ，Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｓ０
７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−
Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３
Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０
７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−
Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４
Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０
３８Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−
Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０７８
Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，及びＳ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−
Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｓ１３０Ｇ−Ｙ２１７Ｑ，からなる群から選択さ
れる少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’アミノ酸配列（配列番号２）は、ｐＨ
８及び１６℃での洗剤組成物４の卵微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’
−ｖ３と比較して約０．９のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体の位置
は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体はタンパ
ク質分解活性を有する。本発明は、本アッセイにおいて、タンパク質分解活性を有する、
ＢＰＮ’−ｖ３と比較して約０．９のＰＩ値を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’と比
較して向上したタンパク質分解活性を有する、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は
、配列番号２の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１
％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミ
ノ酸配列、並びに上記群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、
変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列の位置と対応させることにより番号付けされる
。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体
を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少
なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
【０４４０】
以下のＢＰＮ’変異体：アミノ酸置換Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７
Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，を含むＢＰＮ’アミノ酸配列（配列番号２）
は、ｐＨ  ８及び１６℃での洗剤組成物４の卵微小標本クリーニングアッセイにおいて、
ＢＰＮ’−ｖ３と比較して約０．８のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異
体の位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。本発明は、本アッ
セイにおいて、タンパク質分解活性を有する、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して０．８のＰＩ値
を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’と比較して向上したタンパク質分解活性を有する
、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は、配列番号２の配列に対して少なくとも６０
％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６
％、９７％、又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、並びに、アミノ酸置換Ｓ
０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ
，を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列の位置と対応させることに
より番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこの
ような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定され
ない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれ
る。
【０４４１】
以下のＢＰＮ’変異体：Ｓ０２４Ｇ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７
Ｑ，Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０
７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−
Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７
Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ，Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１
０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−
Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１
Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０
５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−
Ｎ０２５Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ，Ｎ０６１
Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０
６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−
Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３
Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２
１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−
Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１
Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１
０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−
Ｎ０６１Ｐ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１
Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０
５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，
Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３
Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２
１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０３８Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−
Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１
Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０
２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−
Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３
Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０
２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，
Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７
Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ１
２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−
Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８
Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４９Ｎ，Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０
９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−
Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ａ１１６Ｓ−Ｇ１２８
Ａ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２
１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−
Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８
Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０
２４Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−
Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ０９７
Ａ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１
２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−
Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８
Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０
９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−
Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１
Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０
７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−
Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０３８Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８
Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１
２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，
Ｓ０２４Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７
Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０
２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−
Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５
Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｇ０
９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−
Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８
Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０
９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，及びＳ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１
Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｓ１３０Ｇ−Ｙ２１７Ｑ，からなる群から選択される少な
くとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’アミノ酸配列（配列番号２）は、ＡＡＰＦタン
パク質分解アッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して１．０超、少なくとも１．１、
少なくとも１．２、少なくとも１．３、少なくとも１．４、少なくとも１．５、少なくと
も１．６、少なくとも１．７、少なくとも１．８、少なくとも１．９、少なくとも２、１
．０超〜約１０、１．０超〜約１２、４超〜約１２、１．０超〜約８、又は１．０超〜約
５のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２
の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体は、本アッセイにおい
て、ＢＰＮ’プロテアーゼ（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有し
、ＢＰＮ’よりもＰＩ値が大きい。本発明は、本ＡＡＰＦアッセイにおいて、ＢＰＮ’（
配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、並びに／あるいは、ＢＰ
Ｎ’−ｖ３と比較して１．０超〜約５のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、こ
の変異体は配列番号２の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０
％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有
するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、
ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることに
より番号付けされる。
【０４４２】
以下のＢＰＮ’変異体：アミノ酸置換Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，を含むＢ
ＰＮ’アミノ酸配列（配列番号２）は、ＡＡＰＦタンパク質分解アッセイにおいてＢＰＮ
’−ｖ３と比較して約１．０のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体の位
置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体は、本
アッセイにおいて、ＢＰＮ’プロテアーゼ（配列番号２）と比較して向上したタンパク質
分解活性を有し、ＢＰＮ’よりもＰＩ値が大きい。本発明は、本ＡＡＰＦアッセイにおい
て、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、並びに／
あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して約１．０のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を
含み、この変異体は配列番号２の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５
％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同
一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸置換Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，
を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させ
ることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なく
ともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに
限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法
も含まれる。
【０４４３】
（実施例７）
ＢＰＮ’−ｖ３６の部位評価ライブラリの構築及び
ＢＰＮ’−ｖ３６変異体のクリーニング性能
ＢＰＮ’−ｖ３６の部位評価ライブラリの構築
ＢＰＮ’−ｖ３６のアミノ酸配列は、以下の配列番号６に記載のものである。
【０４４４】
ＡＱＳＶＰＹＧＶＳＱＩＫＡＰＡＬＨＳＱＧＹＴＧＧＮＶＫＶＡＶＩＤＳＧＩＤＳＳＨ
ＰＤＬＫＶＡＧＧＡＳＭＶＰＧＥＴＮＰＦＱＤＮＮＳＨＧＴＨＶＡＧＴＶＡＡＬＮＮＮＩ
ＧＶＬＧＶＡＰＳＡＳＬＹＡＶＫＶＬＧＡＤＧＮＧＱＹＳＷＩＩＮＧＩＥＷＡＩＡＮＮＭ
ＤＶＩＮＭＳＬＧＡＰＳＧＳＡＡＬＫＡＡＶＤＫＡＶＡＳＧＶＶＶＶＡＡＡＧＮＥＧＴＳ
ＧＳＳＳＴＶＧＹＰＧＫＹＰＳＶＩＡＶＧＡＶＤＳＳＮＱＲＡＳＦＳＳＶＧＰＥＬＤＶＭ
ＡＰＧＶＳＩＱＳＴＬＰＧＮＫＹＧＡＱＮＧＴＳＭＡＳＰＨＶＡＧＡＡＡＬＩＬＳＫＨＰ
ＮＷＴＮＴＱＶＲＳＳＬＥＮＴＴＴＫＬＧＤＳＦＹＹＧＫＧＬＩＮＶＱＡＡＡＱ（配列番
号６）
ＢＰＮ’−ｖ３６プロテアーゼ変異型をコードする核酸配列は以下のものである。
【０４４５】
Ｇｃｇｃａｇｔｃｃｇｔｇｃｃｔｔａｃｇｇｃｇｔａｔｃａｃａａａｔｔａａａｇｃｃ
ｃｃｔｇｃｔｃｔｇｃａｃｔｃｔｃａａｇｇｃｔａｃａｃｔｇｇａｇｇｃａａｔｇｔｔａ
ａａｇｔａｇｃｇｇｔｔａｔｃｇａｃａｇｃｇｇｔａｔｃｇａｃｔｃｇａｇｃｃａｔｃｃ
ａｇａｔｃｔｔａａａｇｔｃｇｃｔｇｇａｇｇｇｇｃｔｔｃｔａｔｇｇｔｇｃｃｇｇｇｃ
ｇａａａｃａａａｃｃｃｇｔｔｔｃａａｇａｔａａｃａａｔｔｃｔｃａｔｇｇｃａｃａｃ
ａｃｇｔｃｇｃａｇｇａａｃｇｇｔｔｇｃｇｇｃｇｔｔａａａｃａａｔａａｔａｔｔｇｇ
ｃｇｔｇｃｔｔｇｇｔｇｔａｇｃｃｃｃｇｔｃｔｇｃｔｔｃｇｃｔｃｔａｃｇｃｃｇｔｔ
ａａａｇｔｔｃｔｔｇｇｃｇｃａｇａｃｇｇａａａｔｇｇｃｃａａｔａｃｔｃａｔｇｇａ
ｔｔａｔｃａａｃｇｇｃａｔｃｇａａｔｇｇｇｃｃａｔｃｇｃｇａａｔａａｃａｔｇｇａ
ｔｇｔａａｔｃａａｃａｔｇａｇｃｃｔｇｇｇａｇｃａｃｃａａｇｃｇｇｃａｇｔｇｃｇ
ｇｃａｃｔｔａａａｇｃａｇｃａｇｔｔｇａｔａａａｇｃｔｇｔｔｇｃａｔｃｔｇｇｔｇ
ｔｃｇｔｃｇｔａｇｔａｇｃｇｇｃａｇｃｔｇｇｇａａｔｇａｇｇｇａａｃａｔｃｃｇｇ
ａｔｃａｔｃｇａｇｔａｃｃｇｔｃｇｇｔｔａｔｃｃａｇｇｃａａｇｔａｃｃｃｔｔｃａ
ｇｔｇａｔｔｇｃａｇｔｇｇｇｃｇｃｔｇｔａｇａｃｔｃｔｔｃａａａｔｃａａｃｇｔｇ
ｃｃｔｃｔｔｔｔｔｃｃｔｃｃｇｔｇｇｇａｃｃｇｇａｇｃｔｇｇａｔｇｔｃａｔｇｇｃ
ｃｃｃｔｇｇｃｇｔｔｔｃｔａｔｔｃａａｔｃｇａｃｇｃｔｔｃｃａｇｇｇａａｃａａｇ
ｔａｔｇｇｔｇｃｇｃａａａａｃｇｇｇａｃｔｔｃｃａｔｇｇｃｃｔｃｇｃｃｇｃａｔｇ
ｔａｇｃｔｇｇｇｇｃｇｇｃｃｇｃａｔｔｇａｔｔｃｔｔｔｃｔａａｇｃａｃｃｃｇａａ
ｃｔｇｇａｃａａａｃａｃｔｃａａｇｔｃｃｇｃａｇｃａｇｔｔｔａｇａａａａｃａｃｃ
ａｃｔａｃａａａａｃｔｔｇｇｔｇａｔｔｃｔｔｔｃｔａｃｔａｔｇｇａａａａｇｇｇｃ
ｔｇａｔｃａａｃｇｔａｃａｇｇｃｇｇｃａｇｃｔｃａｇ（配列番号５）
ＢＰＮ’−ｖ３６のアミノ酸配列は、配列番号２のスブチリシンＢＰＮ’アミノ酸配列
を参照することにより表わすことができる。すなわち、ＢＰＮ’−ｖ３６は、６つのアミ
ノ酸置換Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑを
有する、配列番号２のスブチリシンＢＰＮ’配列として表すことができる。アミノ酸配列
ＢＰＮ’−ｖ３６は、便宜上ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１
Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ又はＢＰＮ’＋Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１
０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２１７Ｑとして表記することもできる。本明細書を通して、特に
指定のない限り、アミノ酸配列の各アミノ酸位置は、変異体のアミノ酸配列をバチルス・
アミロリケファシエンス（Bacillus amyloliquefaciens）スブチリシンＢＰＮ’アミノ酸
配列とアラインメントすることによって決定される、配列番号２に示されるバチルス・ア
ミロリケファシエンス（Bacillus amyloliquefaciens）スブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸
配列における対応するアミノ酸位置の番号付けに従って番号付けされる。
【０４４６】
融合ＰＣＲにより、成熟型ＢＰＮ’−ｖ３６（すなわち、ＢＰＮ’−Ｓ２４Ｇ−Ｓ５３
Ｇ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ）タンパク質における単独アミノ酸
位置各々にて部位評価ライブラリ（ＳＥＬ）を作成した。
【０４４７】
各コドンがＢＰＮ’−ｖ３６プロテアーゼ中で変異するように、部分的に重複している
相補的な（変異原性の、順方向及び逆方向）プライマー対を設計した。各変異原性プライ
マーには、両側に少なくとも１５ヌクレオチド隣接させた中央にＮＮＳ（Ｎ＝Ａ、Ｃ、Ｇ
、又はＴ、及びＳ＝Ｇ又はＣ）変異原性コドンを含有させた。所定の位置のライブラリを
作成するために、共通の順方向遺伝子に隣接するプライマー（Ｐ４９７４、ＧＣＣＴＣＡ
ＣＡＴＴＴＧＴＧＣＣＡＣＣＴＡ；配列番号６０）及び変異原性ＮＮＳ逆方向プライマー
、あるいは共通の逆方向遺伝子に隣接するプライマー（Ｐ４９７６、ＣＣＴＣＴＣＧＧＴ
ＴＡＴＧＡＧＴＴＡＧＴＴＣ；配列番号６１）及び変異原性ＮＮＳ順方向プライマーのい
ずれかを用いて、２つのＰＣＲ反応を実施した。これらのＰＣＲ反応は、２種のＰＣＲ断
片を生成したが、一方は変異ＢＰＮ’−ｖ３６遺伝子の５’側半分（５’遺伝子断片）を
コードするものであり、他方は変異ＢＰＮ’−ｖ３６遺伝子の３’側半分（３’遺伝子断
片）をコードするものである。
【０４４８】
各ＰＣＲ増幅反応には、３０ｐｍｏｌの各プライマー及び１００ｎｇのＢＰＮ’−ｖ３
６親テンプレートＤＮＡ（ｐＨＰＬＴ−ＢＰＮ’−ｖ３６プラスミド、図４を参照された
い）を含有させた。増幅はＶｅｎｔ  ＤＮＡポリメラーゼ（ＮＥＢ）を用いて実施した。
ＰＣＲ反応（２０μＬ）は、まず始めに９５℃で２．５分加熱した後、続いて９４℃で１
５秒の変性、５５℃で１５秒のアニーリング、及び７２℃で４０秒の伸長を３０サイクル
行った。増幅させた後、５’及び３’遺伝子断片を、ＱＩＡＧＥＮ（登録商標）ゲルバン
ド精製用キットによりゲル精製し、混合して（各断片につき５０ｎｇ）、プライマーＰ４
９７３（ＡＡＡＧＧＡＴＣＣＴＡＡＴＣＧＧＣＧＣＴＴＴＴＣ、配列番号６２）及びＰ４
９５０（ＣＴＴＧＴＣＴＣＣＡＡＧＣＴＴＡＡＡＡＴＡＡＡＡ、配列番号６３）を用いて
再度ＰＣＲで混合及び増幅させて、完全長の遺伝子断片を生成した。伸長工程を７２℃で
２分にわたって実施したことを除き、ＰＣＲ条件は上記の条件と同様のものであった。完
全長のＤＮＡ断片をＱＩＡＧＥＮ（登録商標）ゲルバンド精製用キットによりゲル精製し
、制限酵素ＢａｍＨＩ及びＨｉｎｄＩＩＩで消化し、同様の制限酵素で消化したｐＨＰＬ
Ｔ−ＢＰＮ’ｐａｒｔｉａｌ  ｏｐｔベクターとライゲーションさせた。Ｉｌｌｕｓｔｒ
ａ  Ｔｅｍｐｌｉｐｈｉキットでローリング・サークル型増幅法を用い、ライゲーション
混合物を製造元（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）の推奨に従って増幅させることで、枯草
菌（Bacillus subtilis）に形質転換させるための多量体ＤＮＡを生成した。この目的の
ため、１μＬのライゲーション混合物と５μＬのサンプル緩衝液を混合し、９５℃で３分
間加熱し、氷中で冷却した。次に、５μＬの反応緩衝液及び０．２μＬの酵素を各チュー
ブに加え、続いて３０℃で１０時間にわたってインキュベートした。ローリング・サーク
ル型増幅産物を１００倍希釈し、枯草菌（B. subtilis）細胞の形質転換に用いた（Δａ
ｐｒＥ，ΔｎｐｒＥ，ａｍｙＥ：：ｘｙｌＲＰｘｙｌＡｃｏｍＫ−ｐｈｌｅｏ）。形質転
換混合物のアリコートを、１．６％のスキムミルク及び１０μｇ／ｍＬのネオマイシンを
含有しているＬＢプレートに蒔き、３７℃で一晩インキュベートした。続いて、ハローを
有するコロニーを、１０μｇ／ｍＬのネオマイシンを含有している１５０μＬのＬＢ培地
に接種した。翌日、培養物は１５％のグリセロールと共に凍結させるか、あるいは実施例
２に記載されるような生化学的解析のためにＭＤＢ培地で増殖させた。
【０４４９】
ＢＰＮ’−ｖ３６変異体のクリーニング性能
１６℃及びｐＨ  ８での洗剤組成物４のＢＭＩ微小標本アッセイ、並びに１６℃及びｐ
Ｈ  ８での洗剤組成物４の卵微小標本アッセイを用いて、ＢＰＮ’−ｖ３６ＳＥＬ由来の
タンパク質変異体をクリーニング性能について試験した。タンパク質含量はＴＣＡアッセ
イを用いて測定した。実施例１に記載のようにアッセイを実施し、ＢＰＮ’−ｖ３６（す
なわち、ＢＰＮ’−Ｓ２４Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７
Ｑ）（ＰＩ値１．０を有する）と比較して性能指数を算出した。
【０４５０】
以下のＢＰＮ’変異体：Ａ１１６Ｖ，Ｇ１６０Ｓ，Ｉ１１１Ｌ，Ｉ１１５Ｖ，Ｎ１０９
Ｓ，Ｎ１１７Ｍ，Ｐ００５Ｇ，Ｑ０５９Ｖ，Ｔ１６４Ｓ，Ｙ２６２Ｍ，Ａ０１５Ｑ，Ａ０
１５Ｓ，Ａ０９８Ｅ，Ａ０９８Ｎ，Ａ０９８Ｓ，Ａ０９８Ｔ，Ａ０９８Ｖ，Ａ０９８Ｙ，
Ａ１１４Ｓ，Ａ１１４Ｔ，Ａ１１６Ｇ，Ａ１１６Ｌ，Ａ１１６Ｓ，Ａ１１６Ｔ，Ａ１１６
Ｗ，Ａ１３３Ｇ，Ａ１３３Ｈ，Ａ１３３Ｔ，Ａ１３３Ｖ，Ａ１３７Ｇ，Ａ１３７Ｉ，Ａ１
３７Ｌ，Ａ１３７Ｓ，Ａ１３７Ｔ，Ａ１３８Ｓ，Ａ２１６Ｅ，Ａ２１６Ｆ，Ａ２１６Ｖ，
Ｄ０９９Ｓ，Ｄ１８１Ｅ，Ｆ２６１Ａ，Ｆ２６１Ｑ，Ｇ０２４Ｆ，Ｇ０２４Ｉ，Ｇ０２４
Ｑ，Ｇ０２４Ｙ，Ｇ０９７Ｓ，Ｇ１６０Ｔ，Ｇ２１１Ｌ，Ｇ２１１Ｖ，Ｈ０１７Ｆ，Ｈ０
１７Ｗ，Ｈ０３９Ｖ，Ｈ２２６Ａ，Ｉ０３１Ｖ，Ｉ１１１Ｖ，Ｉ２６８Ｖ，Ｋ１７０Ｒ，
Ｋ２６５Ｒ，Ｌ０１６Ｑ，Ｌ０１６Ｔ，Ｌ１３５Ｍ，Ｌ２０９Ｔ，Ｌ２０９Ｖ，Ｌ２３３
Ｍ，Ｌ２５７Ｔ，Ｌ２５７Ｖ，Ｌ２６７Ａ，Ｌ２６７Ｖ，Ｎ０２５Ａ，Ｎ０２５Ｉ，Ｎ０
２５Ｑ，Ｎ０２５Ｒ，Ｎ０２５Ｔ，Ｎ０２５Ｖ，Ｎ１０１Ｉ，Ｎ１０１Ｑ，Ｎ１０１Ｓ，
Ｎ１０９Ａ，Ｎ１０９Ｇ，Ｎ１０９Ｈ，Ｎ１０９Ｌ，Ｎ１０９Ｍ，Ｎ１０９Ｑ，Ｎ１０９
Ｔ，Ｎ１１７Ｑ，Ｎ１８４Ａ，Ｎ１８４Ｌ，Ｎ１８４Ｔ，Ｎ１８４Ｗ，Ｎ２１２Ｇ，Ｎ２
１２Ｌ，Ｎ２１２Ｖ，Ｎ２４３Ｐ，Ｎ２５２Ｇ，Ｎ２５２Ｍ，Ｐ００５Ｔ，Ｐ０１４Ｓ，
Ｐ０４０Ｇ，Ｐ０４０Ｌ，Ｐ０４０Ｑ，Ｐ１２９Ａ，Ｐ１２９Ｓ，Ｐ１７２Ｇ，Ｐ１７２
Ｓ，Ｐ１９４Ｑ，Ｐ２１０Ａ，Ｐ２１０Ｓ，Ｑ１８５Ｆ，Ｑ１８５Ｇ，Ｑ１８５Ｉ，Ｑ１
８５Ｍ，Ｑ１８５Ｎ，Ｑ１８５Ｓ，Ｑ２７５Ｈ，Ｒ１８６Ｋ，Ｓ００９Ａ，Ｓ００９Ｇ，
Ｓ００９Ｈ，Ｓ００９Ｍ，Ｓ０１８Ｔ，Ｓ１３０Ｔ，Ｓ１３２Ｎ，Ｓ１４５Ｋ，Ｓ１５９
Ｔ，Ｓ１６１Ｉ，Ｓ１６１Ｋ，Ｓ１６１Ｎ，Ｓ１６１Ｔ，Ｓ１６２Ｉ，Ｓ１６２Ｍ，Ｓ１
６２Ｙ，Ｓ１６３Ｇ，Ｓ１８２Ｆ，Ｓ１８２Ｇ，Ｓ１８２Ｖ，Ｓ１８２Ｗ，Ｓ１８３Ｆ，
Ｓ１８３Ｌ，Ｓ１８３Ｍ，Ｓ１８３Ｔ，Ｓ１８３Ｖ，Ｓ１８３Ｗ，Ｓ２２４Ａ，Ｓ２３６
Ｔ，Ｓ２４９Ｖ，Ｔ０２２Ａ，Ｔ０２２Ｇ，Ｔ０２２Ｑ，Ｔ０２２Ｖ，Ｔ２０８Ｖ，Ｔ２
４２Ｓ，Ｔ２５３Ｎ，Ｔ２５３Ｓ，Ｔ２５４Ａ，Ｔ２５４Ｓ，Ｔ２５５Ｌ，Ｔ２５５Ｓ，
Ｔ２５５Ｖ，Ｖ００４Ａ，Ｖ００４Ｐ，Ｖ００４Ｗ，Ｖ０８４Ｃ，Ｖ１３９Ｃ，Ｖ１６５
Ｍ，Ｖ２０３Ｆ，Ｙ０２１Ｋ，Ｙ０２１Ｎ，Ｙ０２１Ｔ，Ｙ０２１Ｖ，Ｙ１６７Ｆ，Ｙ１
７１Ｆ，Ｙ２１４Ｆ，Ｙ２６２Ｆ，及びＹ２６２Ｔ，からなる群から選択される少なくと
も１つのアミノ酸置換を含むＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１
Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ（配列番号６）（すなわち、ＢＰＮ’−ｖ３６）は、ｐＨ  
８及び１６℃での洗剤組成物４のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ
’−ｖ３６と比較して１．０超、少なくとも１．１、少なくとも１．２、少なくとも１．
３、少なくとも１．４、少なくとも１．５、少なくとも１．６、少なくとも１．７、少な
くとも１．８、少なくとも１．９、少なくとも２、１．０超〜約１０、１．０超〜約８、
又は１．０超〜約５のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位
置は、配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体は、
本アッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を
有し、ＢＰＮ’よりもＰＩ値が大きい。本発明は、本ＢＭＩ微小標本クリーニングアッセ
イにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、
ＢＰＮ’−ｖ３及びＢＰＮ’−ｖ３６と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、
ＢＰＮ’−ｖ３のＰＩ値を超えるＰＩ値を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３６
と比較して１超〜約５のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は配列
番号２又は配列番号６の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０
％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同
一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくとも１、２、３、４、５
、６又はそれ以上のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２
の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により
詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニン
グ組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような
変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
【０４５１】
以下のＢＰＮ’−ｖ３６変異体：Ａ００１Ｇ，Ａ００１Ｙ，Ａ０１３Ｇ，Ａ０１３Ｖ，
Ａ０１５Ｆ，Ａ０１５Ｇ，Ａ０１５Ｋ，Ａ０１５Ｍ，Ａ０１５Ｐ，Ａ０１５Ｔ，Ａ０１５
Ｗ，Ａ０１５Ｙ，Ａ０２９Ｇ，Ａ０７３Ｓ，Ａ０８８Ｃ，Ａ０８８Ｉ，Ａ０８８Ｌ，Ａ０
８８Ｔ，Ａ０８８Ｖ，Ａ０９８Ｄ，Ａ０９８Ｋ，Ａ０９８Ｐ，Ａ０９８Ｒ，Ａ０９８Ｗ，
Ａ１１６Ｄ，Ａ１１６Ｅ，Ａ１１６Ｒ，Ａ１２８Ｓ，Ａ１３３Ｌ，Ａ１３３Ｍ，Ａ１３３
Ｓ，Ａ１３４Ｇ，Ａ１３４Ｓ，Ａ１３７Ｎ，Ａ１３７Ｖ，Ａ１４４Ｍ，Ａ１４４Ｑ，Ａ１
４４Ｓ，Ａ１４４Ｔ，Ａ１４４Ｖ，Ａ１５１Ｃ，Ａ１７６Ｓ，Ａ１７６Ｔ，Ａ１７９Ｓ，
Ａ２１６Ｇ，Ａ２１６Ｌ，Ａ２１６Ｐ，Ａ２１６Ｑ，Ａ２１６Ｓ，Ａ２１６Ｔ，Ａ２１６
Ｙ，Ａ２２８Ｔ，Ａ２３０Ｃ，Ａ２３１Ｃ，Ａ２７２Ｉ，Ａ２７２Ｌ，Ａ２７２Ｑ，Ａ２
７２Ｓ，Ａ２７２Ｔ，Ａ２７２Ｗ，Ａ２７３Ｓ，Ａ２７４Ｇ，Ａ２７４Ｌ，Ａ２７４Ｑ，
Ａ２７４Ｔ，Ａ２７４Ｖ，Ｄ０４１Ｅ，Ｄ０９９Ｇ，Ｄ０９９Ｎ，Ｄ１２０Ａ，Ｄ１２０
Ｋ，Ｄ１２０Ｑ，Ｄ１２０Ｒ，Ｄ１２０Ｓ，Ｄ１４０Ｅ，Ｄ１８１Ｓ，Ｄ２５９Ｅ，Ｅ０
５４Ｄ，Ｅ１５６Ｄ，Ｅ１５６Ｔ，Ｅ２５１Ｖ，Ｆ２６１Ｇ，Ｆ２６１Ｈ，Ｆ２６１Ｌ，
Ｆ２６１Ｒ，Ｆ２６１Ｓ，Ｆ２６１Ｔ，Ｆ２６１Ｖ，Ｆ２６１Ｗ，Ｇ００７Ａ，Ｇ００７
Ｓ，Ｇ０２０Ａ，Ｇ０２０Ｄ，Ｇ０２０Ｓ，Ｇ０２４Ｎ，Ｇ０２４Ｒ，Ｇ０２４Ｓ，Ｇ０
２４Ｔ，Ｇ０２４Ｖ，Ｇ０２４Ｗ，Ｇ０５３Ｈ，Ｇ０５３Ｋ，Ｇ０５３Ｎ，Ｇ０５３Ｔ，
Ｇ０９７Ａ，Ｇ０９７Ｄ，Ｇ０９７Ｔ，Ｇ１３１Ａ，Ｇ１３１Ｈ，Ｇ１３１Ｐ，Ｇ１３１
Ｑ，Ｇ１３１Ｔ，Ｇ１３１Ｖ，Ｇ１６０Ｈ，Ｇ１６０Ｐ，Ｇ１６６Ａ，Ｇ１６６Ｓ，Ｇ１
６６Ｔ，Ｇ２１１Ａ，Ｇ２１１Ｄ，Ｇ２１１Ｍ，Ｇ２１１Ｎ，Ｇ２１１Ｐ，Ｇ２１１Ｑ，
Ｇ２１１Ｒ，Ｇ２１１Ｗ，Ｇ２１５Ａ，Ｇ２１５Ｎ，Ｇ２１５Ｖ，Ｈ０１７Ｌ，Ｈ０１７
Ｍ，Ｈ０１７Ｔ，Ｈ０１７Ｖ，Ｈ０１７Ｙ，Ｈ０３９Ａ，Ｈ０３９Ｃ，Ｈ０３９Ｎ，Ｈ２
２６Ｆ，Ｈ２２６Ｉ，Ｈ２２６Ｍ，Ｈ２２６Ｓ，Ｈ２２６Ｖ，Ｈ２２６Ｙ，Ｉ０３５Ｖ，
Ｉ０７９Ａ，Ｉ０７９Ｓ，Ｉ０７９Ｔ，Ｉ０７９Ｖ，Ｉ０７９Ｗ，Ｉ１０８Ｖ，Ｉ１１５
Ｌ，Ｉ１２２Ａ，Ｉ２３４Ｌ，Ｉ２３４Ｖ，Ｋ０１２Ｒ，Ｋ０２７Ｒ，Ｋ１３６Ｒ，Ｋ１
４１Ｆ，Ｋ２１３Ｗ，Ｋ２３７Ｒ，Ｋ２５６Ｒ，Ｋ２６５Ｑ，Ｌ０１６Ａ，Ｌ０１６Ｆ，
Ｌ０１６Ｉ，Ｌ０１６Ｓ，Ｌ０１６Ｖ，Ｌ０４２Ｉ，Ｌ０７５Ａ，Ｌ０７５Ｍ，Ｌ０７５
Ｑ，Ｌ０７５Ｖ，Ｌ０７５Ｙ，Ｌ０８２Ｋ，Ｌ０８２Ｍ，Ｌ０８２Ｑ，Ｌ０８２Ｖ，Ｌ０
９０Ｉ，Ｌ１９６Ｉ，Ｌ１９６Ｖ，Ｌ２０９Ｑ，Ｌ２０９Ｗ，Ｌ２３３Ａ，Ｌ２３３Ｑ，
Ｌ２３３Ｖ，Ｌ２３５Ｉ，Ｌ２３５Ｋ，Ｌ２５０Ｉ，Ｌ２５７Ａ，Ｌ２５７Ｈ，Ｌ２５７
Ｑ，Ｌ２５７Ｓ，Ｌ２５７Ｙ，Ｌ２６７Ｑ，Ｌ２６７Ｒ，Ｌ２６７Ｓ，Ｌ２６７Ｔ，Ｍ１
９９Ｖ，Ｎ０２５Ｆ，Ｎ０２５Ｇ，Ｎ０２５Ｈ，Ｎ０２５Ｋ，Ｎ０２５Ｌ，Ｎ０２５Ｍ，
Ｎ０２５Ｓ，Ｎ０２５Ｙ，Ｎ０６１Ｆ，Ｎ０６１Ｈ，Ｎ０６１Ｐ，Ｎ０６１Ｓ，Ｎ０６１
Ｔ，Ｎ０６１Ｖ，Ｎ０６１Ｗ，Ｎ０７６Ｇ，Ｎ０７６Ｗ，Ｎ０７８Ｓ，Ｎ０７８Ｔ，Ｎ０
７８Ｖ，Ｎ１０１Ａ，Ｎ１０１Ｈ，Ｎ１０１Ｌ，Ｎ１０１Ｔ，Ｎ１０９Ｋ，Ｎ１０９Ｒ，
Ｎ１１７Ａ，Ｎ１１７Ｅ，Ｎ１１７Ｈ，Ｎ１１７Ｋ，Ｎ１１８Ｇ，Ｎ１８４Ｇ，Ｎ１８４
Ｈ，Ｎ１８４Ｉ，Ｎ１８４Ｓ，Ｎ１８４Ｖ，Ｎ２１２Ａ，Ｎ２１２Ｆ，Ｎ２１２Ｉ，Ｎ２
１２Ｋ，Ｎ２１２Ｐ，Ｎ２１２Ｑ，Ｎ２１２Ｓ，Ｎ２１２Ｙ，Ｎ２１８Ａ，Ｎ２１８Ｈ，
Ｎ２１８Ｌ，Ｎ２１８Ｓ，Ｎ２４０Ｅ，Ｎ２４０Ｈ，Ｎ２４０Ｌ，Ｎ２４０Ｒ，Ｎ２４０
Ｔ，Ｎ２４３Ａ，Ｎ２４３Ｑ，Ｎ２４３Ｔ，Ｎ２４３Ｖ，Ｎ２５２Ａ，Ｎ２５２Ｋ，Ｎ２
５２Ｌ，Ｎ２５２Ｑ，Ｎ２５２Ｒ，Ｎ２５２Ｓ，Ｎ２５２Ｔ，Ｎ２６９Ｑ，Ｎ２６９Ｓ，
Ｐ０１４Ｇ，Ｐ０１４Ｑ，Ｐ０１４Ｔ，Ｐ０４０Ａ，Ｐ０４０Ｈ，Ｐ０４０Ｓ，Ｐ０４０
Ｔ，Ｐ０４０Ｖ，Ｐ０４０Ｙ，Ｐ０８６Ａ，Ｐ０８６Ｃ，Ｐ０８６Ｆ，Ｐ０８６Ｈ，Ｐ０
８６Ｓ，Ｐ１２９Ｄ，Ｐ１２９Ｇ，Ｐ１２９Ｋ，Ｐ１２９Ｔ，Ｐ１７２Ａ，Ｐ１７２Ｑ，
Ｐ１９４Ａ，Ｐ１９４Ｇ，Ｐ１９４Ｌ，Ｐ１９４Ｍ，Ｐ１９４Ｓ，Ｐ１９４Ｖ，Ｐ１９４
Ｙ，Ｐ２１０Ｇ，Ｐ２１０Ｒ，Ｐ２１０Ｖ，Ｑ００２Ａ，Ｑ００２Ｓ，Ｑ０１０Ａ，Ｑ０
１０Ｆ，Ｑ０１０Ｈ，Ｑ０１０Ｉ，Ｑ０１０Ｌ，Ｑ０１０Ｎ，Ｑ０１０Ｓ，Ｑ０１０Ｔ，
Ｑ０１９Ａ，Ｑ０１９Ｇ，Ｑ０１９Ｎ，Ｑ０１９Ｓ，Ｑ０１９Ｔ，Ｑ０１９Ｖ，Ｑ０１９
Ｗ，Ｑ０５９Ｉ，Ｑ１０３Ｌ，Ｑ１０３Ｓ，Ｑ１８５Ａ，Ｑ１８５Ｈ，Ｑ１８５Ｌ，Ｑ１
８５Ｔ，Ｑ１８５Ｙ，Ｑ２０６Ｐ，Ｑ２０６Ｓ，Ｑ２０６Ｙ，Ｑ２１７Ｉ，Ｑ２１７Ｎ，
Ｑ２１７Ｓ，Ｑ２１７Ｔ，Ｑ２４５Ｋ，Ｑ２７５Ｄ，Ｑ２７５Ｓ，Ｑ２７５Ｗ，Ｓ００３
Ａ，Ｓ００３Ｇ，Ｓ００３Ｈ，Ｓ００３Ｍ，Ｓ００３Ｐ，Ｓ００３Ｑ，Ｓ００３Ｔ，Ｓ０
０３Ｖ，Ｓ００９Ｉ，Ｓ００９Ｌ，Ｓ００９Ｐ，Ｓ００９Ｔ，Ｓ００９Ｗ，Ｓ０１８Ａ，
Ｓ０１８Ｇ，Ｓ０１８Ｉ，Ｓ０１８Ｌ，Ｓ０１８Ｍ，Ｓ０１８Ｎ，Ｓ０１８Ｐ，Ｓ０１８
Ｖ，Ｓ０１８Ｗ，Ｓ０３３Ｔ，Ｓ０３７Ｑ，Ｓ０３７Ｔ，Ｓ０３７Ｖ，Ｓ０３８Ｇ，Ｓ０
３８Ｈ，Ｓ０３８Ｋ，Ｓ０３８Ｑ，Ｓ０３８Ｔ，Ｓ０６３Ｋ，Ｓ０６３Ｎ，Ｓ０６３Ｑ，
Ｓ０６３Ｔ，Ｓ０８７Ａ，Ｓ０８７Ｆ，Ｓ０８７Ｇ，Ｓ０８７Ｑ，Ｓ０８７Ｔ，Ｓ０８９
Ｌ，Ｓ０８９Ｍ，Ｓ０８９Ｎ，Ｓ０８９Ｑ，Ｓ０８９Ｔ，Ｓ０８９Ｗ，Ｓ１３０Ａ，Ｓ１
３０Ｆ，Ｓ１３０Ｇ，Ｓ１３０Ｌ，Ｓ１３０Ｖ，Ｓ１４５Ａ，Ｓ１４５Ｈ，Ｓ１４５Ｍ，
Ｓ１４５Ｖ，Ｓ１５９Ａ，Ｓ１５９Ｇ，Ｓ１５９Ｈ，Ｓ１５９Ｑ，Ｓ１５９Ｒ，Ｓ１６１
Ａ，Ｓ１６１Ｇ，Ｓ１６１Ｈ，Ｓ１６１Ｌ，Ｓ１６１Ｍ，Ｓ１６１Ｐ，Ｓ１６１Ｑ，Ｓ１
６１Ｗ，Ｓ１６２Ａ，Ｓ１６２Ｆ，Ｓ１６２Ｇ，Ｓ１６２Ｌ，Ｓ１６２Ｎ，Ｓ１６２Ｐ，
Ｓ１６２Ｒ，Ｓ１６２Ｖ，Ｓ１６３Ｐ，Ｓ１７３Ａ，Ｓ１７３Ｇ，Ｓ１８２Ａ，Ｓ１８２
Ｈ，Ｓ１８２Ｋ，Ｓ１８２Ｌ，Ｓ１８２Ｎ，Ｓ１８２Ｐ，Ｓ１８２Ｑ，Ｓ１８２Ｔ，Ｓ１
８３Ａ，Ｓ１８３Ｇ，Ｓ１８３Ｈ，Ｓ１８３Ｑ，Ｓ１８８Ａ，Ｓ１８８Ｇ，Ｓ１８８Ｔ，
Ｓ１８８Ｖ，Ｓ１９１Ａ，Ｓ２０４Ａ，Ｓ２０４Ｉ，Ｓ２０４Ｌ，Ｓ２０４Ｑ，Ｓ２０４
Ｖ，Ｓ２２４Ｃ，Ｓ２３６Ａ，Ｓ２３６Ｎ，Ｓ２３６Ｑ，Ｓ２４８Ａ，Ｓ２４８Ｆ，Ｓ２
４８Ｇ，Ｓ２４８Ｉ，Ｓ２４８Ｋ，Ｓ２４８Ｌ，Ｓ２４８Ｍ，Ｓ２４８Ｎ，Ｓ２４８Ｑ，
Ｓ２４８Ｔ，Ｓ２４８Ｖ，Ｓ２４９Ａ，Ｓ２４９Ｃ，Ｓ２４９Ｈ，Ｓ２４９Ｑ，Ｓ２４９
Ｔ，Ｓ２４９Ｗ，Ｓ２４９Ｙ，Ｓ２６０Ｈ，Ｓ２６０Ｎ，Ｓ２６０Ｐ，Ｓ２６０Ｔ，Ｔ０
２２Ｈ，Ｔ０２２Ｋ，Ｔ０２２Ｎ，Ｔ０２２Ｒ，Ｔ０２２Ｓ，Ｔ０２２Ｙ，Ｔ０５５Ａ，
Ｔ０５５Ｇ，Ｔ０５５Ｌ，Ｔ０５５Ｎ，Ｔ０５５Ｐ，Ｔ０５５Ｑ，Ｔ０７１Ｓ，Ｔ１５８
Ｈ，Ｔ１５８Ｓ，Ｔ１６４Ｎ，Ｔ２０８Ｃ，Ｔ２０８Ｌ，Ｔ２２０Ｓ，Ｔ２４２Ｎ，Ｔ２
４４Ａ，Ｔ２４４Ｇ，Ｔ２４４Ｈ，Ｔ２４４Ｉ，Ｔ２４４Ｑ，Ｔ２４４Ｓ，Ｔ２４４Ｖ，
Ｔ２４４Ｗ，Ｔ２５３Ａ，Ｔ２５３Ｇ，Ｔ２５３Ｈ，Ｔ２５３Ｑ，Ｔ２５４Ｖ，Ｔ２５５
Ａ，Ｔ２５５Ｇ，Ｔ２５５Ｈ，Ｔ２５５Ｉ，Ｔ２５５Ｑ，Ｔ２５５Ｙ，Ｖ００４Ｇ，Ｖ０
０４Ｎ，Ｖ００４Ｒ，Ｖ００８Ａ，Ｖ００８Ｃ，Ｖ００８Ｍ，Ｖ０２６Ｉ，Ｖ０４４Ｉ，
Ｖ０４４Ｌ，Ｖ０４５Ｈ，Ｖ０４５Ｋ，Ｖ０４５Ｌ，Ｖ０４５Ｍ，Ｖ０４５Ｑ，Ｖ０４５
Ｓ，Ｖ０４５Ｖ，Ｖ０４５Ｗ，Ｖ０４５Ｙ，Ｖ０５１Ｉ，Ｖ０８１Ｌ，Ｖ０８１Ｑ，Ｖ０
８１Ｔ，Ｖ０８４Ａ，Ｖ０８４Ｓ，Ｖ０８４Ｔ，Ｖ０９３Ｉ，Ｖ１２１Ｉ，Ｖ１４３Ｎ，
Ｖ１４３Ｓ，Ｖ１４３Ｙ，Ｖ１４７Ｃ，Ｖ１４７Ｉ，Ｖ１４７Ｌ，Ｖ１４７Ｔ，Ｖ１８０
Ｉ，Ｖ１８０Ｌ，Ｖ１８０Ｔ，Ｖ１９２Ａ，Ｖ１９２Ｓ，Ｖ１９２Ｔ，Ｖ１９８Ｉ，Ｖ１
９８Ｌ，Ｖ１９８Ｍ，Ｖ２０３Ｈ，Ｖ２０３Ｉ，Ｖ２０３Ｌ，Ｖ２０３Ｎ，Ｖ２０３Ｑ，
Ｖ２０３Ｔ，Ｖ２０３Ｗ，Ｖ２０３Ｙ，Ｖ２７０Ａ，Ｖ２７０Ｓ，Ｖ２７０Ｔ，Ｗ２４１
Ｍ，Ｗ２４１Ｙ，Ｙ００６Ｇ，Ｙ００６Ｈ，Ｙ００６Ｉ，Ｙ００６Ｋ，Ｙ００６Ｌ，Ｙ０
０６Ｐ，Ｙ００６Ｑ，Ｙ００６Ｔ，Ｙ００６Ｖ，Ｙ００６Ｗ，Ｙ０２１Ａ，Ｙ０２１Ｄ，
Ｙ０２１Ｅ，Ｙ０２１Ｌ，Ｙ０２１Ｑ，Ｙ０２１Ｒ，Ｙ０２１Ｓ，Ｙ１０４Ｆ，Ｙ１０４
Ｉ，Ｙ２１４Ｌ，Ｙ２１４Ｖ，Ｙ２１４Ｗ，Ｙ２６２Ａ，Ｙ２６２Ｇ，Ｙ２６２Ｌ，Ｙ２
６２Ｎ，Ｙ２６２Ｓ，Ｙ２６２Ｗ，Ｙ２６３Ｇ，及びＹ２６３Ｗ，からなる群から選択さ
れる少なくとも１つのアミノ酸置換を含むＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８
Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑアミノ酸配列（配列番号６）は、ｐＨ  ８及び
１６℃での洗剤組成物４のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ
３６と比較して約１．０のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ
酸位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。したがって、例えば
、本発明は、置換Ａ１２８Ｓ，を含むアミノ酸配列ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−
Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑアミノ酸配列（配列番号６）、例えば
、ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７
Ｑを含む。このような変異体は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較し
て向上したタンパク質分解活性を有し、ＢＰＮ’よりもＰＩ値が大きい。本発明は、本Ｂ
ＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上し
たタンパク質分解活性を有する、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して約１．０のＰＩ値を有する、
並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して約１．０のＰＩ値を有する、プロテアー
ゼ変異体を含み、この変異体は配列番号２又は配列番号６の配列に対して少なくとも６０
％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６
％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択さ
れる少なくとも１、２、３、４、５、６又はそれ以上のアミノ酸置換を含み、ここで、変
異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付
けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つ
の変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並
びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
【０４５２】
以下のＢＰＮ’−ｖ３６変異体：Ａ００１Ｆ，Ａ００１Ｋ，Ａ００１Ｌ，Ａ００１Ｍ，
Ａ００１Ｑ，Ａ００１Ｒ，Ａ００１Ｓ，Ａ００１Ｔ，Ａ００１Ｖ，Ａ０１３Ｃ，Ａ０１３
Ｓ，Ａ０１５Ｄ，Ａ０１５Ｅ，Ａ０１５Ｌ，Ａ０１５Ｒ，Ａ０４８Ｓ，Ａ０７３Ｎ，Ａ０
７３Ｔ，Ａ０７４Ｇ，Ａ０７４Ｓ，Ａ０８５Ｃ，Ａ０８５Ｇ，Ａ０８５Ｓ，Ａ０８５Ｖ，
Ａ０８８Ｍ，Ａ０８８Ｓ，Ａ０９２Ｓ，Ａ０９８Ｇ，Ａ１１４Ｇ，Ａ１３３Ｐ，Ａ１３７
Ｅ，Ａ１３７Ｈ，Ａ１４４Ｇ，Ａ１４４Ｈ，Ａ１４４Ｋ，Ａ１４４Ｌ，Ａ１４４Ｎ，Ａ１
５３Ｓ，Ａ１５３Ｖ，Ａ１７６Ｃ，Ａ１７９Ｇ，Ａ１８７Ｇ，Ａ１８７Ｓ，Ａ２００Ｇ，
Ａ２１６Ｗ，Ａ２２３Ｓ，Ａ２２８Ｓ，Ａ２３０Ｔ，Ａ２３０Ｖ，Ａ２３１Ｖ，Ａ２３２
Ｃ，Ａ２３２Ｖ，Ａ２７２Ｅ，Ａ２７２Ｇ，Ａ２７２Ｋ，Ａ２７２Ｐ，Ａ２７３Ｇ，Ａ２
７３Ｌ，Ａ２７３Ｖ，Ａ２７４Ｍ，Ａ２７４Ｒ，Ｄ０３６Ｅ，Ｄ０９９Ａ，Ｄ０９９Ｑ，
Ｄ１２０Ｅ，Ｄ１８１Ａ，Ｄ１８１Ｇ，Ｄ２５９Ａ，Ｄ２５９Ｇ，Ｄ２５９Ｑ，Ｄ２５９
Ｔ，Ｅ１５６Ａ，Ｅ１５６Ｓ，Ｅ２５１Ｉ，Ｅ２５１Ｌ，Ｅ２５１Ｑ，Ｅ２５１Ｔ，Ｆ０
５８Ｙ，Ｆ２６１Ｃ，Ｆ２６１Ｄ，Ｆ２６１Ｋ，Ｆ２６１Ｐ，Ｇ０２０Ｅ，Ｇ０２０Ｆ，
Ｇ０２０Ｈ，Ｇ０２０Ｌ，Ｇ０２０Ｎ，Ｇ０２０Ｑ，Ｇ０２０Ｒ，Ｇ０２０Ｔ，Ｇ０２０
Ｙ，Ｇ０２４Ａ，Ｇ０２４Ｐ，Ｇ０５３Ａ，Ｇ０５３Ｄ，Ｇ０５３Ｅ，Ｇ０５３Ｆ，Ｇ０
５３Ｌ，Ｇ０５３Ｑ，Ｇ０５３Ｓ，Ｇ０５３Ｙ，Ｇ０９７Ｋ，Ｇ０９７Ｍ，Ｇ１５７Ａ，
Ｇ１５７Ｓ，Ｇ１６０Ａ，Ｇ１６０Ｌ，Ｇ１６６Ｃ，Ｇ１６６Ｉ，Ｇ１６６Ｑ，Ｇ１６９
Ａ，Ｇ２１１Ｋ，Ｇ２１５Ｈ，Ｇ２１５Ｌ，Ｇ２１５Ｓ，Ｇ２１５Ｔ，Ｇ２１５Ｗ，Ｇ２
５８Ｓ，Ｈ０１７Ｉ，Ｈ０３９Ｓ，Ｈ２２６Ｌ，Ｈ２３８Ｎ，Ｈ２３８Ｙ，Ｉ０１１Ｌ，
Ｉ０１１Ｖ，Ｉ０３１Ｌ，Ｉ０７９Ｆ，Ｉ０７９Ｋ，Ｉ０７９Ｌ，Ｉ０７９Ｍ，Ｉ０７９
Ｑ，Ｉ２０５Ａ，Ｉ２０５Ｖ，Ｉ２６８Ｌ，Ｉ２６８Ｍ，Ｋ０１２Ｇ，Ｋ０４３Ｆ，Ｋ０
４３Ｈ，Ｋ０４３Ｉ，Ｋ０４３Ｎ，Ｋ０４３Ｑ，Ｋ０４３Ｔ，Ｋ１４１Ａ，Ｋ１４１Ｒ，
Ｋ１４１Ｗ，Ｋ１７０Ａ，Ｋ２１３Ａ，Ｋ２１３Ｇ，Ｋ２１３Ｈ，Ｋ２１３Ｉ，Ｋ２１３
Ｌ，Ｋ２１３Ｎ，Ｋ２１３Ｑ，Ｋ２１３Ｒ，Ｋ２１３Ｓ，Ｋ２１３Ｔ，Ｋ２１３Ｖ，Ｋ２
３７Ａ，Ｋ２３７Ｈ，Ｋ２３７Ｉ，Ｋ２３７Ｌ，Ｋ２３７Ｎ，Ｋ２３７Ｓ，Ｋ２５６Ａ，
Ｋ２５６Ｇ，Ｋ２５６Ｈ，Ｋ２５６Ｍ，Ｋ２５６Ｐ，Ｋ２５６Ｑ，Ｋ２５６Ｗ，Ｋ２６５
Ｈ，Ｌ０１６Ｅ，Ｌ０４２Ｖ，Ｌ０７５Ｇ，Ｌ０７５Ｈ，Ｌ０７５Ｉ，Ｌ０７５Ｔ，Ｌ０
８２Ａ，Ｌ０８２Ｆ，Ｌ０８２Ｈ，Ｌ０８２Ｒ，Ｌ０８２Ｓ，Ｌ０８２Ｔ，Ｌ０９０Ｍ，
Ｌ１３５Ｆ，Ｌ１９６Ｍ，Ｌ２０９Ｃ，Ｌ２０９Ｈ，Ｌ２０９Ｓ，Ｌ２３３Ｓ，Ｌ２３５
Ｍ，Ｌ２３５Ｒ，Ｌ２３５Ｗ，Ｌ２５７Ｃ，Ｌ２５７Ｇ，Ｌ２６７Ｆ，Ｍ０５０Ｙ，Ｍ１
１９Ｃ，Ｍ１１９Ｉ，Ｍ１２４Ｌ，Ｎ０２５Ｃ，Ｎ０２５Ｅ，Ｎ０２５Ｐ，Ｎ０６１Ａ，
Ｎ０６１Ｇ，Ｎ０６１Ｉ，Ｎ０６１Ｋ，Ｎ０６１Ｌ，Ｎ０６１Ｑ，Ｎ０６１Ｒ，Ｎ０６２
Ｓ，Ｎ０６２Ｔ，Ｎ０７６Ａ，Ｎ０７６Ｐ，Ｎ０７６Ｑ，Ｎ０７６Ｓ，Ｎ０７６Ｔ，Ｎ０
７６Ｖ，Ｎ０７８Ｇ，Ｎ０７８Ｈ，Ｎ０７８Ｋ，Ｎ０７８Ｐ，Ｎ０７８Ｑ，Ｎ０７８Ｒ，
Ｎ１０１Ｆ，Ｎ１１７Ｒ，Ｎ１１７Ｓ，Ｎ１１８Ｄ，Ｎ１１８Ｈ，Ｎ１１８Ｑ，Ｎ１１８
Ｒ，Ｎ１１８Ｓ，Ｎ１１８Ｔ，Ｎ１８４Ｃ，Ｎ１８４Ｅ，Ｎ１８４Ｒ，Ｎ２１２Ｄ，Ｎ２
１２Ｒ，Ｎ２１２Ｗ，Ｎ２１８Ｆ，Ｎ２１８Ｇ，Ｎ２１８Ｍ，Ｎ２１８Ｐ，Ｎ２１８Ｔ，
Ｎ２１８Ｖ，Ｎ２１８Ｗ，Ｎ２４０Ａ，Ｎ２４０Ｇ，Ｎ２４０Ｑ，Ｎ２４０Ｓ，Ｎ２４０
Ｗ，Ｎ２４３Ｃ，Ｎ２４３Ｇ，Ｎ２４３Ｓ，Ｎ２５２Ｖ，Ｎ２６９Ｈ，Ｐ００５Ａ，Ｐ０
０５Ｄ，Ｐ００５Ｍ，Ｐ００５Ｑ，Ｐ０１４Ａ，Ｐ０１４Ｍ，Ｐ０１４Ｒ，Ｐ０１４Ｖ，
Ｐ０４０Ｆ，Ｐ０４０Ｒ，Ｐ０４０Ｗ，Ｐ１２９Ｅ，Ｐ１２９Ｒ，Ｐ１７２Ｅ，Ｐ１７２
Ｋ，Ｐ１９４Ｈ，Ｐ１９４Ｒ，Ｐ１９４Ｗ，Ｐ２０１Ａ，Ｐ２０１Ｇ，Ｐ２１０Ｌ，Ｐ２
３９Ｋ，Ｐ２３９Ｒ，Ｑ００２Ｄ，Ｑ００２Ｅ，Ｑ００２Ｇ，Ｑ００２Ｉ，Ｑ００２Ｐ，
Ｑ００２Ｖ，Ｑ０１０Ｄ，Ｑ０１０Ｒ，Ｑ０１９Ｃ，Ｑ０１９Ｄ，Ｑ０１９Ｅ，Ｑ０１９
Ｈ，Ｑ０１９Ｌ，Ｑ０１９Ｐ，Ｑ０１９Ｒ，Ｑ０５９Ａ，Ｑ０５９Ｅ，Ｑ０５９Ｌ，Ｑ０
５９Ｓ，Ｑ０５９Ｔ，Ｑ１０３Ｗ，Ｑ１８５Ｄ，Ｑ１８５Ｋ，Ｑ１８５Ｒ，Ｑ１８５Ｗ，
Ｑ２０６Ｇ，Ｑ２０６Ｈ，Ｑ２０６Ｌ，Ｑ２０６Ｖ，Ｑ２０６Ｗ，Ｑ２１７Ｅ，Ｑ２１７
Ｆ，Ｑ２１７Ｈ，Ｑ２１７Ｌ，Ｑ２１７Ｖ，Ｑ２４５Ｍ，Ｑ２７１Ａ，Ｑ２７１Ｄ，Ｑ２
７１Ｇ，Ｑ２７１Ｌ，Ｑ２７１Ｐ，Ｑ２７１Ｔ，Ｑ２７１Ｙ，Ｑ２７５Ｆ，Ｑ２７５Ｌ，
Ｑ２７５Ｐ，Ｑ２７５Ｒ，Ｓ００３Ｄ，Ｓ００３Ｆ，Ｓ００３Ｋ，Ｓ００３Ｒ，Ｓ００９
Ｋ，Ｓ０１８Ｄ，Ｓ０１８Ｒ，Ｓ０３７Ａ，Ｓ０３７Ｇ，Ｓ０３７Ｋ，Ｓ０３７Ｌ，Ｓ０
３７Ｐ，Ｓ０３８Ｍ，Ｓ０６３Ａ，Ｓ０６３Ｆ，Ｓ０６３Ｇ，Ｓ０６３Ｍ，Ｓ０６３Ｒ，
Ｓ０６３Ｙ，Ｓ０８７Ｃ，Ｓ０８７Ｋ，Ｓ０８７Ｌ，Ｓ０８７Ｍ，Ｓ０８７Ｎ，Ｓ０８７
Ｙ，Ｓ０８９Ａ，Ｓ０８９Ｄ，Ｓ０８９Ｆ，Ｓ０８９Ｇ，Ｓ０８９Ｈ，Ｓ０８９Ｉ，Ｓ０
８９Ｋ，Ｓ０８９Ｒ，Ｓ０８９Ｖ，Ｓ０８９Ｙ，Ｓ１３０Ｄ，Ｓ１３０Ｅ，Ｓ１３０Ｋ，
Ｓ１３０Ｗ，Ｓ１４５Ｇ，Ｓ１４５Ｌ，Ｓ１４５Ｒ，Ｓ１４５Ｔ，Ｓ１５９Ｄ，Ｓ１５９
Ｌ，Ｓ１５９Ｗ，Ｓ１６１Ｅ，Ｓ１６１Ｒ，Ｓ１６２Ｃ，Ｓ１６２Ｅ，Ｓ１６２Ｗ，Ｓ１
６３Ａ，Ｓ１８２Ｅ，Ｓ１８２Ｒ，Ｓ１８３Ｃ，Ｓ１８３Ｄ，Ｓ１８３Ｐ，Ｓ１８３Ｒ，
Ｓ１８８Ｄ，Ｓ１８８Ｐ，Ｓ２０４Ｇ，Ｓ２０４Ｙ，Ｓ２０７Ｇ，Ｓ２２４Ｇ，Ｓ２２４
Ｔ，Ｓ２３６Ｃ，Ｓ２３６Ｇ，Ｓ２４８Ｄ，Ｓ２４８Ｈ，Ｓ２４８Ｒ，Ｓ２４９Ｅ，Ｓ２
４９Ｌ，Ｓ２４９Ｒ，Ｓ２６０Ａ，Ｓ２６０Ｇ，Ｓ２６０Ｋ，Ｓ２６０Ｑ，Ｓ２６０Ｖ，
Ｓ２６０Ｙ，Ｔ０２２Ｌ，Ｔ０５５Ｄ，Ｔ０５５Ｅ，Ｔ０５５Ｉ，Ｔ０５５Ｋ，Ｔ０５５
Ｍ，Ｔ０５５Ｓ，Ｔ０５５Ｖ，Ｔ０５５Ｙ，Ｔ１５８Ａ，Ｔ１５８Ｇ，Ｔ１５８Ｌ，Ｔ１
５８Ｑ，Ｔ１５８Ｖ，Ｔ１６４Ｋ，Ｔ１６４Ｑ，Ｔ２０８Ｓ，Ｔ２４４Ｄ，Ｔ２４４Ｅ，
Ｔ２４４Ｒ，Ｔ２５３Ｅ，Ｔ２５３Ｒ，Ｔ２５３Ｙ，Ｔ２５４Ｇ，Ｔ２５５Ｄ，Ｔ２５５
Ｅ，Ｔ２５５Ｋ，Ｔ２５５Ｒ，Ｖ０２６Ａ，Ｖ０２８Ｉ，Ｖ０２８Ｌ，Ｖ０３０Ｉ，Ｖ０
４４Ｃ，Ｖ０４４Ｐ，Ｖ０４５Ｅ，Ｖ０４５Ｇ，Ｖ０４５Ｎ，Ｖ０７２Ｌ，Ｖ０８１Ａ，
Ｖ０８１Ｇ，Ｖ０８１Ｈ，Ｖ０８１Ｓ，Ｖ０８４Ｉ，Ｖ０８４Ｍ，Ｖ０９５Ａ，Ｖ０９５
Ｃ，Ｖ１４３Ａ，Ｖ１４３Ｆ，Ｖ１４３Ｈ，Ｖ１４３Ｑ，Ｖ１４３Ｔ，Ｖ１４３Ｗ，Ｖ１
４７Ａ，Ｖ１４７Ｑ，Ｖ１４７Ｓ，Ｖ１４８Ｉ，Ｖ１４８Ｌ，Ｖ１４９Ｃ，Ｖ１４９Ｉ，
Ｖ１４９Ｌ，Ｖ１６５Ｌ，Ｖ１８０Ａ，Ｖ１８０Ｃ，Ｖ１８０Ｍ，Ｖ１９２Ｃ，Ｖ１９２
Ｆ，Ｖ１９２Ｉ，Ｖ１９２Ｑ，Ｖ１９２Ｙ，Ｖ２０３Ａ，Ｖ２０３Ｇ，Ｖ２０３Ｋ，Ｖ２
０３Ｓ，Ｖ２７０Ｃ，Ｖ２７０Ｌ，Ｖ２７０Ｐ，Ｗ２４１Ｆ，Ｙ００６Ａ，Ｙ００６Ｍ，
Ｙ００６Ｎ，Ｙ００６Ｒ，Ｙ００６Ｓ，Ｙ０２１Ｃ，Ｙ０９１Ｗ，Ｙ１０４Ｖ，Ｙ１０４
Ｗ，Ｙ２６２Ｃ，Ｙ２６２Ｄ，Ｙ２６２Ｅ，Ｙ２６２Ｈ，Ｙ２６２Ｉ，Ｙ２６２Ｒ，及び
Ｙ２６２Ｖ，からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸置換を含むＢＰＮ’−
Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑアミノ酸配
列（配列番号６）は、ｐＨ  ８及び１６℃での洗剤組成物４のＢＭＩ微小標本クリーニン
グアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して約０．９のＰＩ値を有するものと判定
されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列と対応させることにより番
号付けされる。このような変異体は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比
較してタンパク質分解活性が向上し得、並びに／あるいは、ＢＰＮ’よりもＰＩ値が大き
い場合がある。本発明は、本ＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、タンパク質
分解活性を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して約０．９のＰＩ値を
有する、プロテアーゼ変異体を含み、変異体は、配列番号２又は配列番号６の配列に対し
て少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４
％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、
上記群から選択される少なくとも１、２、３、４、５、６又はそれ以上のアミノ酸置換を
含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させる
ことにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくと
もこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限
定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も
含まれる。
【０４５３】
以下のＢＰＮ’−ｖ３６変異体：Ａ００１Ｄ，Ａ００１Ｈ，Ａ００１Ｎ，Ａ０１５Ｃ，
Ａ０４８Ｃ，Ａ０４８Ｅ，Ａ０８５Ｔ，Ａ１３３Ｒ，Ａ１３７Ｒ，Ａ１４２Ｃ，Ａ１４４
Ｄ，Ａ１４４Ｒ，Ａ１５２Ｓ，Ａ１５３Ｇ，Ａ１８７Ｐ，Ａ１８７Ｑ，Ａ１８７Ｔ，Ａ１
８７Ｖ，Ａ２１６Ｒ，Ａ２３０Ｓ，Ａ２７２Ｒ，Ａ２７３Ｈ，Ａ２７３Ｔ，Ａ２７４Ｈ，
Ｄ０３６Ｎ，Ｄ０３６Ｓ，Ｄ１８１Ｈ，Ｄ１８１Ｔ，Ｄ２５９Ｎ，Ｄ２５９Ｐ，Ｄ２５９
Ｓ，Ｅ１５６Ｇ，Ｅ１５６Ｈ，Ｅ１５６Ｌ，Ｅ１５６Ｑ，Ｅ１５６Ｖ，Ｅ２５１Ｃ，Ｆ１
８９Ｓ，Ｆ１８９Ｔ，Ｆ１８９Ｗ，Ｆ１８９Ｙ，Ｆ２６１Ｅ，Ｇ０２０Ｃ，Ｇ０２４Ｄ，
Ｇ０５３Ｍ，Ｇ０５３Ｒ，Ｇ０９７Ｒ，Ｇ１３１Ｄ，Ｇ１３１Ｒ，Ｇ１５７Ｎ，Ｇ１６０
Ｒ，Ｇ１６０Ｖ，Ｇ１６６Ｌ，Ｇ１６６Ｗ，Ｇ２１１Ｅ，Ｇ２１５Ｄ，Ｇ２５８Ａ，Ｇ２
５８Ｄ，Ｇ２５８Ｐ，Ｉ０１１Ｔ，Ｉ０３１Ｃ，Ｉ０７９Ｅ，Ｉ０７９Ｒ，Ｉ１７５Ｌ，
Ｉ２０５Ｃ，Ｋ０１２Ｈ，Ｋ０１２Ｎ，Ｋ０２７Ａ，Ｋ０２７Ｎ，Ｋ０２７Ｓ，Ｋ０４３
Ａ，Ｋ０４３Ｄ，Ｋ０４３Ｅ，Ｋ０４３Ｇ，Ｋ０４３Ｌ，Ｋ０４３Ｍ，Ｋ０４３Ｐ，Ｋ０
４３Ｖ，Ｋ０４３Ｗ，Ｋ０４３Ｙ，Ｋ１３６Ｈ，Ｋ１４１Ｈ，Ｋ１４１Ｌ，Ｋ１４１Ｍ，
Ｋ１４１Ｎ，Ｋ１４１Ｑ，Ｋ１４１Ｔ，Ｋ１４１Ｖ，Ｋ１７０Ｇ，Ｋ１７０Ｓ，Ｋ２３７
Ｔ，Ｋ２３７Ｖ，Ｋ２５６Ｄ，Ｋ２５６Ｓ，Ｋ２５６Ｔ，Ｋ２５６Ｖ，Ｋ２６５Ｎ，Ｋ２
６５Ｓ，Ｌ０４２Ｆ，Ｌ０４２Ｍ，Ｌ０８２Ｅ，Ｌ２０９Ａ，Ｌ２０９Ｅ，Ｌ２０９Ｇ，
Ｌ２０９Ｒ，Ｌ２３３Ｇ，Ｌ２３５Ｖ，Ｌ２５７Ｄ，Ｌ２５７Ｅ，Ｌ２５７Ｐ，Ｌ２５７
Ｒ，Ｌ２５７Ｗ，Ｌ２６７Ｅ，Ｍ０５０Ｌ，Ｎ０５６Ｄ，Ｎ０５６Ｓ，Ｎ０６１Ｃ，Ｎ０
６１Ｄ，Ｎ０６２Ａ，Ｎ０６２Ｈ，Ｎ０６２Ｌ，Ｎ０６２Ｖ，Ｎ０６２Ｙ，Ｎ０７６Ｄ，
Ｎ０７６Ｌ，Ｎ０７６Ｍ，Ｎ０７８Ｄ，Ｎ０７８Ｆ，Ｎ１０１Ｄ，Ｎ１０１Ｒ，Ｎ１１８
Ａ，Ｎ２１２Ｃ，Ｎ２１２Ｅ，Ｎ２１８Ｃ，Ｎ２１８Ｄ，Ｎ２１８Ｅ，Ｎ２５２Ｄ，Ｎ２
５２Ｅ，Ｐ０１４Ｆ，Ｐ０１４Ｋ，Ｐ０５７Ａ，Ｐ０５７Ｗ，Ｐ１７２Ｒ，Ｐ１９４Ｅ，
Ｐ２０１Ｔ，Ｐ２１０Ｅ，Ｑ０５９Ｃ，Ｑ０５９Ｄ，Ｑ０５９Ｒ，Ｑ１８５Ｅ，Ｑ２０６
Ｄ，Ｑ２１７Ａ，Ｑ２１７Ｋ，Ｑ２１７Ｒ，Ｑ２４５Ａ，Ｑ２４５Ｄ，Ｑ２４５Ｅ，Ｑ２
４５Ｈ，Ｑ２４５Ｒ，Ｑ２７１Ｅ，Ｑ２７１Ｆ，Ｑ２７１Ｒ，Ｑ２７１Ｗ，Ｑ２７５Ｇ，
Ｑ２７５Ｉ，Ｒ１８６Ｉ，Ｒ１８６Ｌ，Ｒ１８６Ｖ，Ｒ１８６Ｗ，Ｓ００３Ｅ，Ｓ００９
Ｃ，Ｓ００９Ｅ，Ｓ０１８Ｃ，Ｓ０３７Ｄ，Ｓ０３７Ｅ，Ｓ０３７Ｈ，Ｓ０３７Ｒ，Ｓ０
３７Ｙ，Ｓ０３８Ｄ，Ｓ０３８Ｐ，Ｓ０３８Ｒ，Ｓ０３８Ｙ，Ｓ０６３Ｌ，Ｓ０８７Ｄ，
Ｓ０８７Ｒ，Ｓ０８９Ｃ，Ｓ０８９Ｅ，Ｓ１３０Ｃ，Ｓ１３０Ｒ，Ｓ１４５Ｄ，Ｓ１５９
Ｃ，Ｓ１５９Ｐ，Ｓ１６１Ｃ，Ｓ１７３Ｔ，Ｓ１８２Ｃ，Ｓ１８８Ｅ，Ｓ１８８Ｆ，Ｓ１
８８Ｋ，Ｓ１８８Ｌ，Ｓ１８８Ｒ，Ｓ１８８Ｗ，Ｓ１９０Ａ，Ｓ１９０Ｇ，Ｓ１９０Ｔ，
Ｓ２０４Ｒ，Ｓ２３６Ｄ，Ｓ２３６Ｅ，Ｓ２４８Ｃ，Ｓ２４８Ｅ，Ｓ２６０Ｃ，Ｓ２６０
Ｅ，Ｓ２６０Ｒ，Ｔ０２２Ｐ，Ｔ０５５Ｃ，Ｔ０５５Ｗ，Ｔ０７１Ａ，Ｔ１５８Ｄ，Ｔ１
５８Ｅ，Ｔ１５８Ｐ，Ｔ１５８Ｒ，Ｔ１５８Ｙ，Ｔ１６４Ｒ，Ｔ２４２Ｄ，Ｔ２４２Ｇ，
Ｔ２５５Ｃ，Ｖ００４Ｅ，Ｖ００４Ｔ，Ｖ０４５Ｃ，Ｖ０４５Ｄ，Ｖ０４５Ｒ，Ｖ０４５
Ｔ，Ｖ０５１Ｈ，Ｖ０８１Ｒ，Ｖ１４３Ｃ，Ｖ１４３Ｅ，Ｖ１４３Ｇ，Ｖ１９２Ｇ，Ｖ２
０３Ｃ，Ｖ２０３Ｄ，Ｖ２０３Ｅ，Ｖ２０３Ｍ，Ｖ２０３Ｒ，Ｖ２７０Ｇ，Ｗ２４１Ｌ，
Ｙ２１４Ｈ，Ｙ２１４Ｑ，Ａ００１Ｅ，Ａ１３３Ｅ，Ａ１８７Ｌ，Ａ１８７Ｎ，Ａ２１６
Ｃ，Ａ２１６Ｈ，Ａ２７３Ｑ，Ｄ０９９Ｈ，Ｄ２５９Ｈ，Ｅ１５６Ｃ，Ｅ１９５Ｇ，Ｆ１
８９Ｈ，Ｇ１３１Ｃ，Ｇ１４６Ａ，Ｇ１６６Ｖ，Ｇ２１５Ｃ，Ｇ２１５Ｅ，Ｉ１０７Ｌ，
Ｋ０１２Ａ，Ｋ０１２Ｓ，Ｋ０１２Ｔ，Ｋ０４３Ｃ，Ｋ１７０Ｃ，Ｋ２５６Ｃ，Ｋ２５６
Ｅ，Ｋ２６５Ｇ，Ｋ２６５Ｙ，Ｌ２３３Ｅ，Ｍ２２２Ｆ，Ｍ２２２Ｓ，Ｎ０６２Ｑ，Ｎ０
７６Ｅ，Ｎ０７８Ｅ，Ｎ１８４Ｐ，Ｎ２１８Ｒ，Ｐ００５Ｖ，Ｐ０１４Ｄ，Ｑ００２Ｋ，
Ｑ００２Ｌ，Ｑ００２Ｒ，Ｑ０１０Ｗ，Ｑ２７１Ｃ，Ｒ１８６Ｈ，Ｓ０４９Ｃ，Ｓ０６３
Ｃ，Ｓ０６３Ｄ，Ｓ１０５Ｔ，Ｓ１８８Ｃ，Ｓ１９０Ｃ，Ｓ２０４Ｅ，Ｔ０５５Ｒ，Ｔ１
６４Ｇ，Ｖ００４Ｄ，Ｖ０４４Ｔ，Ｖ０４５Ｉ，Ｖ１６５Ｃ，Ｖ１８０Ｓ，Ｙ００６Ｃ，
Ｙ００６Ｄ，Ｙ００６Ｅ，Ｙ１０４Ｔ，Ａ００１Ｃ，Ａ１８７Ｃ，Ａ２３０Ｇ，Ａ２７３
Ｄ，Ａ２７３Ｐ，Ｄ０３６Ｑ，Ｆ１８９Ｇ，Ｆ１８９Ｌ，Ｆ１８９Ｒ，Ｇ１５７Ｔ，Ｇ１
７８Ａ，Ｉ０３１Ｆ，Ｉ１１１Ｍ，Ｋ０１２Ｆ，Ｋ０１２Ｌ，Ｋ０２７Ｔ，Ｋ０４３Ｒ，
Ｋ１３６Ｇ，Ｋ１４１Ｇ，Ｋ１７０Ｑ，Ｍ２２２Ａ，Ｍ２２２Ｌ，Ｎ０６２Ｒ，Ｎ１１７
Ｇ，Ｎ２６９Ｃ，Ｐ００５Ｗ，Ｐ１２９Ｖ，Ｐ２３９Ａ，Ｐ２３９Ｈ，Ｐ２３９Ｔ，Ｑ０
５９Ｗ，Ｑ２１７Ｇ，Ｑ２７５Ａ，Ｒ１８６Ａ，Ｓ１９１Ｇ，Ｔ１６４Ａ，Ｔ２２０Ａ，
Ａ００１Ｐ，Ａ１８７Ｆ，Ａ１８７Ｗ，Ａ２７３Ｒ，Ｄ０４１Ｃ，Ｄ０６０Ｇ，Ｄ１９７
Ｔ，Ｆ１８９Ａ，Ｇ０４６Ｄ，Ｇ１５７Ｐ，Ｋ０１２Ｃ，Ｋ０１２Ｅ，Ｋ０１２Ｗ，Ｌ０
４２Ｃ，Ｍ２２２Ｔ，Ｎ０６２Ｃ，Ｐ２３９Ｇ，Ｐ２３９Ｎ，Ｑ２１７Ｃ，Ｒ１８６Ｍ，
Ｓ０４９Ｔ，Ｓ０８９Ｐ，Ｓ１２５Ａ，Ｓ１７３Ｖ，及びＶ０４４Ａ，からなる群から選
択される少なくとも１つのアミノ酸置換を含むＢＰＮ’−Ｓ２４Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｓ７８Ｎ
−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑアミノ酸配列（配列番号６）は、ｐＨ  ８及び１
６℃での洗剤組成物４のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３
６と比較して０．５以上０．９未満のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異
体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付け
される。このような変異体はタンパク質分解活性を有する。本発明は、本ＢＭＩ微小標本
クリーニングアッセイにおいて、タンパク質分解活性を有する、並びに／あるいは、ＢＰ
Ｎ’−ｖ３６と比較して０．５以上０．９未満のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を
含み、変異体は、配列番号２又は配列番号６の配列に対して少なくとも６０％、７０％、
８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、
９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくと
も１、２、３、４、５、６又はそれ以上のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ
酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。本
明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含
む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なく
とも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
【０４５４】
以下のＢＰＮ’−ｖ３６変異体：Ａ２１６Ｅ，Ｌ０９０Ｉ，Ａ０９８Ｒ，Ａ０９８Ｗ，
Ａ０９８Ｙ，Ａ１１６Ｇ，Ａ１１６Ｒ，Ａ１１６Ｓ，Ａ１３３Ｍ，Ｉ１０７Ｌ，Ｉ１１５
Ｖ，Ｍ１２４Ｌ，Ｎ１０１Ｉ，Ｎ１０９Ｈ，Ｎ１０９Ｓ，Ｎ１０９Ｔ，Ｎ１１７Ｒ，Ｐ０
０５Ｇ，Ｑ１８５Ｌ，Ｓ０８９Ｖ，Ｖ０９５Ａ，Ａ０１５Ｙ，Ａ０２９Ｇ，Ａ０９８Ｄ，
Ａ０９８Ｅ，Ａ０９８Ｇ，Ａ０９８Ｎ，Ａ０９８Ｓ，Ａ０９８Ｔ，Ａ０９８Ｖ，Ａ１１４
Ｓ，Ａ１１４Ｔ，Ａ１１６Ｅ，Ａ１１６Ｌ，Ａ１１６Ｔ，Ａ１１６Ｖ，Ａ１３３Ｈ，Ａ１
３３Ｌ，Ａ１３３Ｓ，Ａ１３７Ｇ，Ａ１３７Ｉ，Ａ１３７Ｌ，Ａ１３７Ｓ，Ａ１３７Ｖ，
Ａ１３８Ｓ，Ａ１４４Ｓ，Ａ１４４Ｖ，Ａ１７６Ｓ，Ａ１７６Ｔ，Ａ１８７Ｔ，Ａ２１６
Ｆ，Ａ２１６Ｐ，Ａ２１６Ｑ，Ａ２１６Ｒ，Ａ２１６Ｓ，Ａ２１６Ｔ，Ａ２１６Ｖ，Ａ２
１６Ｙ，Ｄ０４１Ｅ，Ｄ１２０Ａ，Ｄ１２０Ｅ，Ｄ１２０Ｑ，Ｄ１２０Ｒ，Ｄ１２０Ｓ，
Ｄ１８１Ｓ，Ｇ０２０Ａ，Ｇ０２０Ｓ，Ｇ０２４Ａ，Ｇ０９７Ａ，Ｇ０９７Ｄ，Ｇ０９７
Ｓ，Ｇ１３１Ｑ，Ｇ１６０Ｓ，Ｇ１６６Ｉ，Ｇ２１１Ｌ，Ｇ２１５Ｎ，Ｈ０３９Ｎ，Ｈ２
３８Ｎ，Ｉ１１１Ｌ，Ｉ１１１Ｖ，Ｉ１２２Ａ，Ｌ０７５Ｉ，Ｌ０７５Ｑ，Ｌ１３５Ｍ，
Ｌ２０９Ｔ，Ｌ２０９Ｖ，Ｌ２３３Ｖ，Ｌ２３５Ｍ，Ｌ２３５Ｒ，Ｌ２５７Ａ，Ｍ１１９
Ｉ，Ｎ０２５Ａ，Ｎ０２５Ｇ，Ｎ０２５Ｔ，Ｎ０６１Ｋ，Ｎ１０１Ｆ，Ｎ１０１Ｈ，Ｎ１
０１Ｌ，Ｎ１０１Ｑ，Ｎ１０１Ｒ，Ｎ１０１Ｓ，Ｎ１０１Ｔ，Ｎ１０９Ａ，Ｎ１０９Ｇ，
Ｎ１０９Ｋ，Ｎ１０９Ｌ，Ｎ１１７Ｅ，Ｎ１１７Ｈ，Ｎ１１７Ｋ，Ｎ１１７Ｓ，Ｎ２１２
Ｇ，Ｎ２１２Ｓ，Ｎ２１８Ｆ，Ｎ２１８Ｇ，Ｎ２１８Ｈ，Ｎ２１８Ｌ，Ｎ２１８Ｓ，Ｎ２
１８Ｗ，Ｎ２４０Ｑ，Ｎ２５２Ｍ，Ｎ２５２Ｒ，Ｎ２５２Ｓ，Ｐ００５Ｔ，Ｐ０４０Ａ，
Ｐ０４０Ｇ，Ｐ０４０Ｔ，Ｐ１２９Ｄ，Ｐ１２９Ｓ，Ｐ１９４Ｓ，Ｐ２１０Ｒ，Ｑ０１９
Ｒ，Ｑ０１９Ｗ，Ｑ１０３Ｌ，Ｑ１０３Ｗ，Ｑ１８５Ａ，Ｑ１８５Ｇ，Ｑ１８５Ｍ，Ｑ１
８５Ｒ，Ｑ１８５Ｔ，Ｑ２０６Ｇ，Ｑ２０６Ｙ，Ｑ２１７Ａ，Ｑ２１７Ｅ，Ｑ２１７Ｒ，
Ｑ２１７Ｓ，Ｑ２１７Ｔ，Ｓ００３Ｑ，Ｓ００９Ｈ，Ｓ０１８Ｍ，Ｓ０３３Ｔ，Ｓ１３０
Ａ，Ｓ１３０Ｆ，Ｓ１３０Ｇ，Ｓ１３０Ｔ，Ｓ１３０Ｖ，Ｓ１４５Ｔ，Ｓ１５９Ａ，Ｓ１
６１Ｎ，Ｓ１６１Ｔ，Ｓ１６２Ｖ，Ｓ１６２Ｙ，Ｓ１８２Ｌ，Ｓ１８２Ｗ，Ｓ１８３Ｆ，
Ｓ１８３Ｌ，Ｓ１８３Ｖ，Ｓ１８３Ｗ，Ｓ１８８Ｋ，Ｓ１８８Ｗ，Ｓ２３６Ｑ，Ｓ２３６
Ｔ，Ｓ２４８Ｌ，Ｔ０２２Ｈ，Ｔ０２２Ｋ，Ｔ２０８Ｃ，Ｔ２５３Ｈ，Ｔ２５５Ｖ，Ｖ０
４４Ｉ，Ｖ１２１Ｉ，Ｖ１３９Ｃ，Ｖ１４３Ｈ，Ｖ１４３Ｑ，Ｖ１４３Ｔ，Ｖ１４３Ｗ，
Ｖ１４３Ｙ，Ｙ００６Ｋ，Ｙ０２１Ａ，Ｙ１０４Ｗ，Ａ００１Ｆ，Ａ００１Ｇ，Ａ００１
Ｈ，Ａ００１Ｋ，Ａ００１Ｌ，Ａ００１Ｑ，Ａ００１Ｓ，Ａ００１Ｙ，Ａ０１３Ｖ，Ａ０
１５Ｇ，Ａ０１５Ｋ，Ａ０１５Ｒ，Ａ０１５Ｓ，Ａ０１５Ｔ，Ａ０１５Ｗ，Ａ０４８Ｓ，
Ａ０７３Ｎ，Ａ０７３Ｓ，Ａ０９２Ｓ，Ａ０９８Ｋ，Ａ０９８Ｐ，Ａ１１６Ｄ，Ａ１１６
Ｗ，Ａ１２８Ｓ，Ａ１３３Ｐ，Ａ１３３Ｔ，Ａ１３３Ｖ，Ａ１３４Ｇ，Ａ１３４Ｓ，Ａ１
３７Ｈ，Ａ１３７Ｎ，Ａ１３７Ｔ，Ａ１４４Ｄ，Ａ１４４Ｋ，Ａ１４４Ｌ，Ａ１４４Ｍ，
Ａ１４４Ｎ，Ａ１４４Ｒ，Ａ１７９Ｇ，Ａ１７９Ｓ，Ａ１８７Ｖ，Ａ２１６Ｇ，Ａ２１６
Ｌ，Ａ２１６Ｗ，Ａ２２３Ｓ，Ａ２３０Ｃ，Ａ２７２Ｋ，Ａ２７２Ｌ，Ａ２７２Ｐ，Ａ２
７２Ｓ，Ａ２７２Ｔ，Ａ２７２Ｗ，Ａ２７３Ｇ，Ａ２７３Ｓ，Ａ２７４Ｇ，Ａ２７４Ｍ，
Ａ２７４Ｔ，Ｄ１２０Ｋ，Ｄ１４０Ｅ，Ｄ１８１Ａ，Ｄ１８１Ｅ，Ｄ１８１Ｇ，Ｄ１８１
Ｈ，Ｄ１８１Ｔ，Ｄ２５９Ｅ，Ｄ２５９Ｎ，Ｄ２５９Ｑ，Ｅ０５４Ｄ，Ｅ１５６Ｄ，Ｅ１
５６Ｔ，Ｅ２５１Ｌ，Ｅ２５１Ｔ，Ｅ２５１Ｖ，Ｆ０５８Ｙ，Ｆ１８９Ｗ，Ｆ２６１Ｋ，
Ｆ２６１Ｑ，Ｆ２６１Ｒ，Ｇ００７Ａ，Ｇ００７Ｓ，Ｇ０２０Ｆ，Ｇ０２０Ｈ，Ｇ０２０
Ｎ，Ｇ０２０Ｑ，Ｇ０２０Ｔ，Ｇ０２０Ｙ，Ｇ０２４Ｆ，Ｇ０２４Ｑ，Ｇ０２４Ｒ，Ｇ０
２４Ｔ，Ｇ０２４Ｖ，Ｇ０２４Ｗ，Ｇ０２４Ｙ，Ｇ０５３Ｔ，Ｇ０９７Ｋ，Ｇ０９７Ｍ，
Ｇ０９７Ｒ，Ｇ０９７Ｔ，Ｇ１３１Ａ，Ｇ１３１Ｈ，Ｇ１３１Ｐ，Ｇ１３１Ｒ，Ｇ１３１
Ｔ，Ｇ１３１Ｖ，Ｇ１６０Ｈ，Ｇ１６０Ｔ，Ｇ１６６Ｃ，Ｇ１６６Ｑ，Ｇ１６６Ｓ，Ｇ１
６６Ｔ，Ｇ２１１Ａ，Ｇ２１１Ｄ，Ｇ２１１Ｋ，Ｇ２１１Ｍ，Ｇ２１１Ｎ，Ｇ２１１Ｑ，
Ｇ２１１Ｒ，Ｇ２１１Ｖ，Ｇ２１１Ｗ，Ｇ２１５Ｓ，Ｇ２１５Ｔ，Ｇ２１５Ｗ，Ｈ０１７
Ｔ，Ｈ０１７Ｗ，Ｈ０１７Ｙ，Ｈ０３９Ｖ，Ｈ２２６Ａ，Ｈ２２６Ｆ，Ｈ２２６Ｉ，Ｈ２
２６Ｌ，Ｈ２２６Ｍ，Ｈ２２６Ｖ，Ｉ０３５Ｖ，Ｉ０７９Ａ，Ｉ０７９Ｓ，Ｉ１０８Ｖ，
Ｉ２０５Ｖ，Ｉ２３４Ｌ，Ｉ２３４Ｖ，Ｉ２６８Ｖ，Ｋ０１２Ｓ，Ｋ０４３Ｐ，Ｋ１３６
Ｈ，Ｋ１３６Ｒ，Ｋ１４１Ａ，Ｋ１４１Ｆ，Ｋ１４１Ｔ，Ｋ１４１Ｗ，Ｋ１７０Ａ，Ｋ１
７０Ｇ，Ｋ１７０Ｒ，Ｋ２１３Ａ，Ｋ２１３Ｒ，Ｋ２１３Ｓ，Ｋ２３７Ａ，Ｋ２３７Ｈ，
Ｋ２３７Ｌ，Ｋ２３７Ｓ，Ｋ２３７Ｖ，Ｋ２５６Ａ，Ｋ２５６Ｇ，Ｋ２５６Ｈ，Ｋ２５６
Ｍ，Ｋ２５６Ｐ，Ｋ２５６Ｑ，Ｋ２５６Ｒ，Ｌ０１６Ａ，Ｌ０１６Ｑ，Ｌ０１６Ｔ，Ｌ０
１６Ｖ，Ｌ０４２Ｖ，Ｌ０７５Ｍ，Ｌ０７５Ｔ，Ｌ０８２Ｍ，Ｌ０８２Ｖ，Ｌ１３５Ｆ，
Ｌ１９６Ｉ，Ｌ２０９Ｈ，Ｌ２０９Ｑ，Ｌ２０９Ｒ，Ｌ２０９Ｓ，Ｌ２０９Ｗ，Ｌ２３３
Ａ，Ｌ２３３Ｍ，Ｌ２３３Ｑ，Ｌ２３５Ｉ，Ｌ２３５Ｋ，Ｌ２５０Ｉ，Ｌ２５７Ｓ，Ｌ２
５７Ｔ，Ｌ２５７Ｖ，Ｌ２６７Ａ，Ｌ２６７Ｑ，Ｌ２６７Ｔ，Ｌ２６７Ｖ，Ｍ１１９Ｃ，
Ｍ１９９Ｖ，Ｎ０２５Ｃ，Ｎ０２５Ｅ，Ｎ０２５Ｆ，Ｎ０２５Ｉ，Ｎ０２５Ｋ，Ｎ０２５
Ｌ，Ｎ０２５Ｍ，Ｎ０２５Ｑ，Ｎ０２５Ｖ，Ｎ０２５Ｙ，Ｎ０６１Ｆ，Ｎ０６１Ｐ，Ｎ０
６１Ｓ，Ｎ０６１Ｔ，Ｎ０７６Ｇ，Ｎ０７８Ｓ，Ｎ１０１Ａ，Ｎ１０９Ｍ，Ｎ１０９Ｑ，
Ｎ１０９Ｒ，Ｎ１１７Ａ，Ｎ１１７Ｍ，Ｎ１１７Ｑ，Ｎ１１８Ｄ，Ｎ１１８Ｇ，Ｎ１１８
Ｈ，Ｎ１１８Ｑ，Ｎ１１８Ｒ，Ｎ１１８Ｓ，Ｎ１８４Ａ，Ｎ１８４Ｃ，Ｎ１８４Ｇ，Ｎ１
８４Ｌ，Ｎ１８４Ｒ，Ｎ１８４Ｓ，Ｎ１８４Ｔ，Ｎ１８４Ｖ，Ｎ１８４Ｗ，Ｎ２１２Ｃ，
Ｎ２１２Ｆ，Ｎ２１２Ｉ，Ｎ２１２Ｋ，Ｎ２１２Ｌ，Ｎ２１２Ｐ，Ｎ２１２Ｑ，Ｎ２１２
Ｒ，Ｎ２１２Ｖ，Ｎ２１２Ｗ，Ｎ２１２Ｙ，Ｎ２１８Ａ，Ｎ２１８Ｐ，Ｎ２１８Ｔ，Ｎ２
４０Ａ，Ｎ２４０Ｅ，Ｎ２４０Ｇ，Ｎ２４０Ｈ，Ｎ２４０Ｌ，Ｎ２４０Ｒ，Ｎ２４０Ｓ，
Ｎ２４０Ｔ，Ｎ２４３Ｃ，Ｎ２４３Ｑ，Ｎ２４３Ｔ，Ｎ２４３Ｖ，Ｎ２５２Ａ，Ｎ２５２
Ｇ，Ｎ２５２Ｋ，Ｎ２５２Ｑ，Ｐ０１４Ｇ，Ｐ０１４Ｑ，Ｐ０１４Ｒ，Ｐ０１４Ｓ，Ｐ０
１４Ｔ，Ｐ０４０Ｆ，Ｐ０４０Ｌ，Ｐ０４０Ｑ，Ｐ０４０Ｓ，Ｐ０４０Ｖ，Ｐ０８６Ｃ，
Ｐ０８６Ｈ，Ｐ０８６Ｓ，Ｐ１２９Ａ，Ｐ１２９Ｅ，Ｐ１２９Ｇ，Ｐ１２９Ｋ，Ｐ１２９
Ｒ，Ｐ１７２Ａ，Ｐ１７２Ｋ，Ｐ１７２Ｑ，Ｐ１７２Ｓ，Ｐ１９４Ａ，Ｐ１９４Ｇ，Ｐ１
９４Ｈ，Ｐ１９４Ｌ，Ｐ１９４Ｍ，Ｐ１９４Ｑ，Ｐ１９４Ｒ，Ｐ１９４Ｖ，Ｐ１９４Ｗ，
Ｐ１９４Ｙ，Ｐ２１０Ａ，Ｐ２１０Ｇ，Ｐ２１０Ｌ，Ｐ２１０Ｓ，Ｐ２３９Ｋ，Ｐ２３９
Ｒ，Ｑ００２Ａ，Ｑ００２Ｓ，Ｑ０１０Ａ，Ｑ０１０Ｎ，Ｑ０１０Ｒ，Ｑ０１０Ｔ，Ｑ０
１９Ａ，Ｑ０１９Ｃ，Ｑ０１９Ｄ，Ｑ０１９Ｇ，Ｑ０１９Ｓ，Ｑ０１９Ｔ，Ｑ０１９Ｖ，
Ｑ０５９Ｉ，Ｑ０５９Ｖ，Ｑ１０３Ｓ，Ｑ１８５Ｆ，Ｑ１８５Ｈ，Ｑ１８５Ｉ，Ｑ１８５
Ｋ，Ｑ１８５Ｎ，Ｑ１８５Ｓ，Ｑ１８５Ｙ，Ｑ２０６Ｈ，Ｑ２０６Ｌ，Ｑ２０６Ｐ，Ｑ２
０６Ｗ，Ｑ２１７Ｆ，Ｑ２１７Ｈ，Ｑ２１７Ｉ，Ｑ２１７Ｋ，Ｑ２１７Ｌ，Ｑ２１７Ｎ，
Ｑ２１７Ｖ，Ｑ２７１Ｇ，Ｑ２７１Ｒ，Ｑ２７１Ｔ，Ｑ２７５Ｆ，Ｑ２７５Ｐ，Ｑ２７５
Ｒ，Ｒ１８６Ａ，Ｒ１８６Ｉ，Ｒ１８６Ｋ，Ｓ００３Ａ，Ｓ００３Ｆ，Ｓ００３Ｇ，Ｓ０
０３Ｈ，Ｓ００３Ｋ，Ｓ００３Ｒ，Ｓ００３Ｔ，Ｓ００９Ｔ，Ｓ０１８Ｎ，Ｓ０１８Ｔ，
Ｓ０３７Ｇ，Ｓ０３７Ｔ，Ｓ０３７Ｖ，Ｓ０３８Ｇ，Ｓ０３８Ｑ，Ｓ０６３Ｎ，Ｓ０６３
Ｑ，Ｓ０６３Ｔ，Ｓ０８９Ｍ，Ｓ０８９Ｎ，Ｓ１３０Ｋ，Ｓ１３０Ｌ，Ｓ１３０Ｒ，Ｓ１
３０Ｗ，Ｓ１３２Ｎ，Ｓ１４５Ｇ，Ｓ１４５Ｋ，Ｓ１４５Ｍ，Ｓ１４５Ｒ，Ｓ１４５Ｖ，
Ｓ１５９Ｃ，Ｓ１５９Ｈ，Ｓ１５９Ｌ，Ｓ１５９Ｑ，Ｓ１５９Ｒ，Ｓ１５９Ｔ，Ｓ１５９
Ｗ，Ｓ１６１Ａ，Ｓ１６１Ｃ，Ｓ１６１Ｇ，Ｓ１６１Ｈ，Ｓ１６１Ｉ，Ｓ１６１Ｋ，Ｓ１
６１Ｐ，Ｓ１６１Ｑ，Ｓ１６１Ｒ，Ｓ１６２Ｆ，Ｓ１６２Ｇ，Ｓ１６２Ｉ，Ｓ１６２Ｌ，
Ｓ１６２Ｍ，Ｓ１６２Ｎ，Ｓ１６２Ｐ，Ｓ１６２Ｒ，Ｓ１６３Ｇ，Ｓ１７３Ａ，Ｓ１７３
Ｇ，Ｓ１８２Ｆ，Ｓ１８２Ｇ，Ｓ１８２Ｋ，Ｓ１８２Ｎ，Ｓ１８２Ｑ，Ｓ１８２Ｖ，Ｓ１
８３Ａ，Ｓ１８３Ｍ，Ｓ１８３Ｑ，Ｓ１８３Ｒ，Ｓ１８３Ｔ，Ｓ１８８Ａ，Ｓ１８８Ｆ，
Ｓ１８８Ｇ，Ｓ１８８Ｐ，Ｓ１８８Ｒ，Ｓ１８８Ｔ，Ｓ１８８Ｖ，Ｓ１９０Ｃ，Ｓ２０４
Ａ，Ｓ２０４Ｇ，Ｓ２０４Ｉ，Ｓ２０４Ｌ，Ｓ２０４Ｑ，Ｓ２０４Ｒ，Ｓ２０４Ｖ，Ｓ２
０７Ｇ，Ｓ２２４Ａ，Ｓ２２４Ｔ，Ｓ２３６Ｃ，Ｓ２３６Ｄ，Ｓ２３６Ｅ，Ｓ２３６Ｇ，
Ｓ２３６Ｎ，Ｓ２４８Ａ，Ｓ２４８Ｆ，Ｓ２４８Ｋ，Ｓ２４８Ｍ，Ｓ２４８Ｔ，Ｓ２４９
Ａ，Ｓ２４９Ｒ，Ｓ２４９Ｔ，Ｓ２４９Ｖ，Ｓ２４９Ｗ，Ｓ２４９Ｙ，Ｓ２６０Ｇ，Ｓ２
６０Ｈ，Ｓ２６０Ｋ，Ｓ２６０Ｎ，Ｔ０２２Ａ，Ｔ０２２Ｇ，Ｔ０２２Ｑ，Ｔ０２２Ｓ，
Ｔ０２２Ｖ，Ｔ０２２Ｙ，Ｔ０５５Ａ，Ｔ０５５Ｋ，Ｔ１５８Ａ，Ｔ１５８Ｓ，Ｔ２０８
Ｌ，Ｔ２０８Ｓ，Ｔ２０８Ｖ，Ｔ２２０Ｓ，Ｔ２４２Ｄ，Ｔ２４２Ｎ，Ｔ２４２Ｓ，Ｔ２
４４Ｅ，Ｔ２４４Ｇ，Ｔ２４４Ｉ，Ｔ２４４Ｒ，Ｔ２４４Ｖ，Ｔ２４４Ｗ，Ｔ２５３Ａ，
Ｔ２５３Ｇ，Ｔ２５３Ｎ，Ｔ２５３Ｓ，Ｔ２５４Ｓ，Ｔ２５４Ｖ，Ｔ２５５Ｈ，Ｔ２５５
Ｉ，Ｔ２５５Ｋ，Ｔ２５５Ｌ，Ｔ２５５Ｑ，Ｔ２５５Ｒ，Ｔ２５５Ｓ，Ｔ２５５Ｙ，Ｖ０
０４Ａ，Ｖ００４Ｎ，Ｖ００４Ｐ，Ｖ００４Ｗ，Ｖ００８Ａ，Ｖ００８Ｍ，Ｖ０２６Ｉ，
Ｖ０４５Ｓ，Ｖ０４５Ｗ，Ｖ０５１Ｉ，Ｖ０８１Ｑ，Ｖ０８１Ｔ，Ｖ０８４Ｃ，Ｖ０９３
Ｉ，Ｖ０９５Ｃ，Ｖ１４３Ａ，Ｖ１４３Ｅ，Ｖ１４３Ｆ，Ｖ１４３Ｎ，Ｖ１４３Ｓ，Ｖ１
４７Ｉ，Ｖ１４７Ｌ，Ｖ１４７Ｓ，Ｖ１４７Ｔ，Ｖ１４８Ｉ，Ｖ１４９Ｃ，Ｖ１４９Ｉ，
Ｖ１６５Ｍ，Ｖ１８０Ａ，Ｖ１８０Ｃ，Ｖ１８０Ｉ，Ｖ１８０Ｌ，Ｖ１８０Ｔ，Ｖ１９２
Ａ，Ｖ１９２Ｃ，Ｖ１９２Ｉ，Ｖ１９２Ｓ，Ｖ１９２Ｔ，Ｖ１９２Ｙ，Ｖ１９８Ｌ，Ｖ２
０３Ａ，Ｖ２０３Ｆ，Ｖ２０３Ｋ，Ｖ２０３Ｌ，Ｖ２０３Ｍ，Ｖ２０３Ｎ，Ｖ２０３Ｙ，
Ｗ２４１Ｙ，Ｙ００６Ａ，Ｙ００６Ｇ，Ｙ００６Ｈ，Ｙ００６Ｌ，Ｙ００６Ｎ，Ｙ００６
Ｐ，Ｙ００６Ｑ，Ｙ００６Ｔ，Ｙ０２１Ｅ，Ｙ０２１Ｋ，Ｙ０２１Ｌ，Ｙ０２１Ｎ，Ｙ０
２１Ｑ，Ｙ０２１Ｒ，Ｙ０２１Ｓ，Ｙ０２１Ｔ，Ｙ１０４Ｆ，Ｙ１０４Ｉ，Ｙ１０４Ｖ，
Ｙ１７１Ｆ，Ｙ２１４Ｆ，Ｙ２１４Ｌ，Ｙ２１４Ｗ，Ｙ２６２Ｆ，及びＹ２６２Ｓ，から
なる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸置換を含むＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０
５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑアミノ酸配列（配列番号６）
は、１６℃及びｐＨ  ８での洗剤組成物４の卵微小標本クリーニングアッセイにおいて、
ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して１．０超、少なくとも１．１、少なくとも１．２、少なくと
も１．３、少なくとも１．４、少なくとも１．５、少なくとも１．６、少なくとも１．７
、少なくとも１．８、少なくとも１．９、少なくとも２、１．０超〜約１０、１．０超〜
約８、又は１．０超〜約５のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミ
ノ酸位置は、配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異
体は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解
活性を有し、ＢＰＮ’よりもＰＩ値が大きい。本発明は、本卵微小標本クリーニングアッ
セイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有する
、ＢＰＮ’−ｖ３及びＢＰＮ’−ｖ３６と比較して向上したタンパク質分解活性を有する
、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して１．０超〜５のＰＩ値を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ
’−ｖ３６と比較して１．０超〜約５のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、こ
の変異体は配列番号２又は配列番号６の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％
、
８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又
は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくとも１、２
、３、４、５、６又はそれ以上のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は
、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の
他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物
（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つ
のこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
【０４５５】
以下のＢＰＮ’−ｖ３６変異体：Ａ００１Ｄ，Ａ００１Ｍ，Ａ００１Ｎ，Ａ００１Ｒ，
Ａ００１Ｔ，Ａ００１Ｖ，Ａ０１３Ｃ，Ａ０１３Ｇ，Ａ０１３Ｓ，Ａ０１５Ｄ，Ａ０１５
Ｆ，Ａ０１５Ｌ，Ａ０１５Ｍ，Ａ０１５Ｐ，Ａ０１５Ｑ，Ａ０７４Ｇ，Ａ０７４Ｓ，Ａ０
８５Ｓ，Ａ０８５Ｔ，Ａ０８５Ｖ，Ａ０８８Ｃ，Ａ０８８Ｌ，Ａ０８８Ｓ，Ａ０８８Ｔ，
Ａ０８８Ｖ，Ａ１３３Ｅ，Ａ１３３Ｇ，Ａ１３３Ｒ，Ａ１３７Ｅ，Ａ１４４Ｇ，Ａ１４４
Ｈ，Ａ１４４Ｑ，Ａ１４４Ｔ，Ａ１５１Ｃ，Ａ１５２Ｓ，Ａ１５３Ｇ，Ａ１５３Ｓ，Ａ１
５３Ｖ，Ａ１７６Ｃ，Ａ１８７Ｇ，Ａ１８７Ｑ，Ａ１８７Ｓ，Ａ２００Ｇ，Ａ２２８Ｓ，
Ａ２２８Ｔ，Ａ２３０Ｔ，Ａ２３０Ｖ，Ａ２３１Ｃ，Ａ２３１Ｖ，Ａ２３２Ｃ，Ａ２３２
Ｖ，Ａ２７２Ｅ，Ａ２７２Ｇ，Ａ２７２Ｉ，Ａ２７２Ｑ，Ａ２７２Ｒ，Ａ２７３Ｌ，Ａ２
７３Ｖ，Ａ２７４Ｌ，Ａ２７４Ｑ，Ａ２７４Ｒ，Ａ２７４Ｖ，Ｄ０３６Ｅ，Ｄ２５９Ａ，
Ｄ２５９Ｇ，Ｄ２５９Ｐ，Ｄ２５９Ｓ，Ｄ２５９Ｔ，Ｅ１５６Ａ，Ｅ１５６Ｓ，Ｅ１５６
Ｖ，Ｅ１９５Ｇ，Ｅ２５１Ｃ，Ｅ２５１Ｉ，Ｅ２５１Ｑ，Ｆ１８９Ｙ，Ｆ２６１Ａ，Ｆ２
６１Ｇ，Ｆ２６１Ｈ，Ｆ２６１Ｌ，Ｆ２６１Ｐ，Ｆ２６１Ｓ，Ｆ２６１Ｔ，Ｆ２６１Ｖ，
Ｆ２６１Ｗ，Ｇ０２０Ｃ，Ｇ０２０Ｄ，Ｇ０２０Ｅ，Ｇ０２０Ｌ，Ｇ０２０Ｒ，Ｇ０２４
Ｄ，Ｇ０２４Ｉ，Ｇ０２４Ｎ，Ｇ０２４Ｐ，Ｇ０２４Ｓ，Ｇ０５３Ａ，Ｇ０５３Ｄ，Ｇ０
５３Ｆ，Ｇ０５３Ｈ，Ｇ０５３Ｋ，Ｇ０５３Ｎ，Ｇ０５３Ｓ，Ｇ０５３Ｙ，Ｇ１５７Ａ，
Ｇ１５７Ｓ，Ｇ１６０Ａ，Ｇ１６０Ｌ，Ｇ１６０Ｐ，Ｇ１６０Ｒ，Ｇ１６６Ａ，Ｇ１６６
Ｌ，Ｇ１６６Ｖ，Ｇ１６６Ｗ，Ｇ１６９Ａ，Ｇ２１１Ｅ，Ｇ２１１Ｐ，Ｇ２１５Ａ，Ｇ２
１５Ｄ，Ｇ２１５Ｅ，Ｇ２１５Ｈ，Ｇ２１５Ｖ，Ｇ２５８Ｄ，Ｇ２５８Ｓ，Ｈ０１７Ｆ，
Ｈ０１７Ｉ，Ｈ０１７Ｌ，Ｈ０１７Ｍ，Ｈ０１７Ｖ，Ｈ０３９Ｃ，Ｈ２２６Ｓ，Ｈ２２６
Ｙ，Ｉ０１１Ｔ，Ｉ０１１Ｖ，Ｉ０３１Ｃ，Ｉ０３１Ｌ，Ｉ０３１Ｖ，Ｉ０７９Ｆ，Ｉ０
７９Ｋ，Ｉ０７９Ｌ，Ｉ０７９Ｍ，Ｉ０７９Ｑ，Ｉ０７９Ｒ，Ｉ０７９Ｔ，Ｉ０７９Ｖ，
Ｉ０７９Ｗ，Ｉ１１５Ｌ，Ｉ２０５Ａ，Ｉ２０５Ｃ，Ｉ２６８Ｌ，Ｋ０１２Ｒ，Ｋ０１２
Ｔ，Ｋ０２７Ｒ，Ｋ０４３Ａ，Ｋ０４３Ｅ，Ｋ０４３Ｆ，Ｋ０４３Ｈ，Ｋ０４３Ｉ，Ｋ０
４３Ｍ，Ｋ０４３Ｎ，Ｋ０４３Ｑ，Ｋ０４３Ｔ，Ｋ０４３Ｖ，Ｋ０４３Ｙ，Ｋ１４１Ｈ，
Ｋ１４１Ｑ，Ｋ１４１Ｖ，Ｋ１７０Ｓ，Ｋ２１３Ｇ，Ｋ２１３Ｈ，Ｋ２１３Ｉ，Ｋ２１３
Ｌ，Ｋ２１３Ｎ，Ｋ２１３Ｑ，Ｋ２１３Ｔ，Ｋ２１３Ｗ，Ｋ２３７Ｉ，Ｋ２３７Ｎ，Ｋ２
３７Ｒ，Ｋ２３７Ｔ，Ｋ２５６Ｃ，Ｋ２５６Ｅ，Ｋ２５６Ｓ，Ｋ２５６Ｔ，Ｋ２５６Ｖ，
Ｋ２５６Ｗ，Ｋ２６５Ｈ，Ｋ２６５Ｒ，Ｌ０１６Ｅ，Ｌ０１６Ｆ，Ｌ０１６Ｉ，Ｌ０１６
Ｓ，Ｌ０４２Ｉ，Ｌ０４２Ｍ，Ｌ０７５Ａ，Ｌ０７５Ｈ，Ｌ０７５Ｙ，Ｌ０８２Ｋ，Ｌ０
８２Ｑ，Ｌ０８２Ｔ，Ｌ１９６Ｍ，Ｌ１９６Ｖ，Ｌ２０９Ａ，Ｌ２０９Ｃ，Ｌ２０９Ｅ，
Ｌ２０９Ｇ，Ｌ２３５Ｗ，Ｌ２５７Ｃ，Ｌ２５７Ｈ，Ｌ２５７Ｑ，Ｌ２５７Ｙ，Ｌ２６７
Ｅ，Ｌ２６７Ｆ，Ｌ２６７Ｒ，Ｌ２６７Ｓ，Ｍ０５０Ｙ，Ｎ０２５Ｈ，Ｎ０２５Ｐ，Ｎ０
２５Ｓ，Ｎ０５６Ｄ，Ｎ０６１Ａ，Ｎ０６１Ｃ，Ｎ０６１Ｄ，Ｎ０６１Ｇ，Ｎ０６１Ｈ，
Ｎ０６１Ｉ，Ｎ０６１Ｌ，Ｎ０６１Ｑ，Ｎ０６１Ｒ，Ｎ０６１Ｖ，Ｎ０６１Ｗ，Ｎ０６２
Ａ，Ｎ０６２Ｓ，Ｎ０６２Ｖ，Ｎ０７６Ａ，Ｎ０７６Ｅ，Ｎ０７６Ｌ，Ｎ０７６Ｍ，Ｎ０
７６Ｑ，Ｎ０７６Ｓ，Ｎ０７６Ｔ，Ｎ０７６Ｗ，Ｎ０７８Ｇ，Ｎ０７８Ｈ，Ｎ０７８Ｋ，
Ｎ０７８Ｐ，Ｎ０７８Ｑ，Ｎ０７８Ｔ，Ｎ１０１Ｄ，Ｎ１１８Ａ，Ｎ１１８Ｔ，Ｎ１８４
Ｅ，Ｎ１８４Ｈ，Ｎ１８４Ｉ，Ｎ２１２Ａ，Ｎ２１２Ｄ，Ｎ２１２Ｅ，Ｎ２１８Ｃ，Ｎ２
１８Ｄ，Ｎ２１８Ｅ，Ｎ２１８Ｍ，Ｎ２１８Ｒ，Ｎ２１８Ｖ，Ｎ２４０Ｗ，Ｎ２４３Ａ，
Ｎ２４３Ｇ，Ｎ２４３Ｐ，Ｎ２４３Ｓ，Ｎ２５２Ｄ，Ｎ２５２Ｅ，Ｎ２５２Ｌ，Ｎ２５２
Ｔ，Ｎ２５２Ｖ，Ｎ２６９Ｓ，Ｐ００５Ａ，Ｐ００５Ｄ，Ｐ００５Ｍ，Ｐ００５Ｑ，Ｐ０
１４Ａ，Ｐ０１４Ｄ，Ｐ０１４Ｆ，Ｐ０１４Ｍ，Ｐ０１４Ｖ，Ｐ０４０Ｈ，Ｐ０４０Ｒ，
Ｐ０４０Ｗ，Ｐ０４０Ｙ，Ｐ０８６Ａ，Ｐ１２９Ｔ，Ｐ１７２Ｅ，Ｐ１７２Ｇ，Ｐ１７２
Ｒ，Ｐ１９４Ｅ，Ｐ２０１Ａ，Ｐ２０１Ｇ，Ｐ２１０Ｅ，Ｐ２１０Ｖ，Ｑ００２Ｅ，Ｑ０
０２Ｇ，Ｑ０１０Ｄ，Ｑ０１０Ｆ，Ｑ０１０Ｈ，Ｑ０１０Ｉ，Ｑ０１０Ｌ，Ｑ０１０Ｓ，
Ｑ０１９Ｅ，Ｑ０１９Ｈ，Ｑ０１９Ｎ，Ｑ０５９Ａ，Ｑ０５９Ｌ，Ｑ０５９Ｒ，Ｑ０５９
Ｓ，Ｑ０５９Ｔ，Ｑ１８５Ｄ，Ｑ１８５Ｅ，Ｑ２０６Ｄ，Ｑ２０６Ｓ，Ｑ２０６Ｖ，Ｑ２
１７Ｇ，Ｑ２４５Ｄ，Ｑ２４５Ｅ，Ｑ２４５Ｋ，Ｑ２４５Ｍ，Ｑ２４５Ｒ，Ｑ２７１Ａ，
Ｑ２７１Ｆ，Ｑ２７１Ｐ，Ｑ２７１Ｙ，Ｑ２７５Ｄ，Ｑ２７５Ｈ，Ｑ２７５Ｉ，Ｑ２７５
Ｌ，Ｑ２７５Ｓ，Ｑ２７５Ｗ，Ｒ１８６Ｈ，Ｒ１８６Ｌ，Ｒ１８６Ｖ，Ｒ１８６Ｗ，Ｓ０
０３Ｄ，Ｓ００３Ｅ，Ｓ００３Ｍ，Ｓ００３Ｐ，Ｓ００３Ｖ，Ｓ００９Ａ，Ｓ００９Ｅ，
Ｓ００９Ｇ，Ｓ００９Ｉ，Ｓ００９Ｋ，Ｓ００９Ｍ，Ｓ００９Ｐ，Ｓ００９Ｗ，Ｓ０１８
Ａ，Ｓ０１８Ｇ，Ｓ０１８Ｉ，Ｓ０１８Ｌ，Ｓ０１８Ｐ，Ｓ０１８Ｒ，Ｓ０１８Ｖ，Ｓ０
１８Ｗ，Ｓ０３７Ａ，Ｓ０３７Ｄ，Ｓ０３７Ｑ，Ｓ０３７Ｒ，Ｓ０３７Ｙ，Ｓ０３８Ｄ，
Ｓ０３８Ｈ，Ｓ０３８Ｋ，Ｓ０３８Ｍ，Ｓ０３８Ｒ，Ｓ０３８Ｔ，Ｓ０６３Ａ，Ｓ０６３
Ｇ，Ｓ０６３Ｋ，Ｓ０６３Ｍ，Ｓ０６３Ｒ，Ｓ０８７Ａ，Ｓ０８７Ｄ，Ｓ０８７Ｆ，Ｓ０
８７Ｇ，Ｓ０８７Ｑ，Ｓ０８７Ｔ，Ｓ０８９Ａ，Ｓ０８９Ｃ，Ｓ０８９Ｈ，Ｓ０８９Ｉ，
Ｓ０８９Ｋ，Ｓ０８９Ｌ，Ｓ０８９Ｑ，Ｓ０８９Ｒ，Ｓ０８９Ｔ，Ｓ０８９Ｙ，Ｓ１３０
Ｄ，Ｓ１３０Ｅ，Ｓ１４５Ａ，Ｓ１４５Ｈ，Ｓ１４５Ｌ，Ｓ１５９Ｇ，Ｓ１６１Ｅ，Ｓ１
６１Ｌ，Ｓ１６１Ｍ，Ｓ１６１Ｗ，Ｓ１６２Ａ，Ｓ１６２Ｃ，Ｓ１６２Ｅ，Ｓ１６２Ｗ，
Ｓ１６３Ｐ，Ｓ１７３Ｔ，Ｓ１８２Ａ，Ｓ１８２Ｃ，Ｓ１８２Ｅ，Ｓ１８２Ｈ，Ｓ１８２
Ｒ，Ｓ１８２Ｔ，Ｓ１８３Ｃ，Ｓ１８３Ｄ，Ｓ１８３Ｇ，Ｓ１８３Ｈ，Ｓ１８８Ｃ，Ｓ１
８８Ｄ，Ｓ１８８Ｅ，Ｓ１８８Ｌ，Ｓ１９０Ｔ，Ｓ１９１Ａ，Ｓ２０４Ｙ，Ｓ２２４Ｃ，
Ｓ２３６Ａ，Ｓ２４８Ｃ，Ｓ２４８Ｄ，Ｓ２４８Ｇ，Ｓ２４８Ｉ，Ｓ２４８Ｎ，Ｓ２４８
Ｑ，Ｓ２４８Ｒ，Ｓ２４８Ｖ，Ｓ２４９Ｃ，Ｓ２４９Ｈ，Ｓ２４９Ｌ，Ｓ２４９Ｑ，Ｓ２
６０Ａ，Ｓ２６０Ｃ，Ｓ２６０Ｅ，Ｓ２６０Ｐ，Ｓ２６０Ｑ，Ｓ２６０Ｒ，Ｓ２６０Ｔ，
Ｔ０２２Ｌ，Ｔ０２２Ｎ，Ｔ０２２Ｒ，Ｔ０５５Ｃ，Ｔ０５５Ｄ，Ｔ０５５Ｇ，Ｔ０５５
Ｉ，Ｔ０５５Ｌ，Ｔ０５５Ｎ，Ｔ０５５Ｑ，Ｔ０５５Ｓ，Ｔ０５５Ｖ，Ｔ０５５Ｙ，Ｔ０
７１Ａ，Ｔ０７１Ｓ，Ｔ１５８Ｇ，Ｔ１５８Ｈ，Ｔ１５８Ｌ，Ｔ１５８Ｐ，Ｔ１５８Ｑ，
Ｔ１５８Ｒ，Ｔ１５８Ｖ，Ｔ１５８Ｙ，Ｔ１６４Ｎ，Ｔ１６４Ｓ，Ｔ２４４Ａ，Ｔ２４４
Ｄ，Ｔ２４４Ｈ，Ｔ２４４Ｑ，Ｔ２４４Ｓ，Ｔ２５３Ｑ，Ｔ２５３Ｒ，Ｔ２５３Ｙ，Ｔ２
５４Ａ，Ｔ２５４Ｇ，Ｔ２５５Ａ，Ｔ２５５Ｄ，Ｔ２５５Ｅ，Ｖ００４Ｅ，Ｖ００４Ｇ，
Ｖ００４Ｒ，Ｖ００８Ｃ，Ｖ０２６Ａ，Ｖ０２８Ｌ，Ｖ０３０Ｉ，Ｖ０４４Ｃ，Ｖ０４５
Ｄ，Ｖ０４５Ｅ，Ｖ０４５Ｈ，Ｖ０４５Ｍ，Ｖ０４５Ｑ，Ｖ０４５Ｙ，Ｖ０７２Ｌ，Ｖ０
８１Ｌ，Ｖ０８１Ｓ，Ｖ０８４Ａ，Ｖ０８４Ｉ，Ｖ０８４Ｍ，Ｖ０８４Ｔ，Ｖ１４３Ｃ，
Ｖ１４７Ｃ，Ｖ１４７Ｑ，Ｖ１４９Ｌ，Ｖ１６５Ｌ，Ｖ１８０Ｍ，Ｖ１９２Ｆ，Ｖ１９２
Ｇ，Ｖ１９２Ｑ，Ｖ１９８Ｉ，Ｖ１９８Ｍ，Ｖ２０３Ｃ，Ｖ２０３Ｅ，Ｖ２０３Ｈ，Ｖ２
０３Ｉ，Ｖ２０３Ｑ，Ｖ２０３Ｒ，Ｖ２０３Ｔ，Ｖ２０３Ｗ，Ｖ２７０Ａ，Ｖ２７０Ｌ，
Ｖ２７０Ｔ，Ｗ２４１Ｆ，Ｗ２４１Ｍ，Ｙ００６Ｃ，Ｙ００６Ｄ，Ｙ００６Ｅ，Ｙ００６
Ｉ，Ｙ００６Ｍ，Ｙ００６Ｒ，Ｙ００６Ｓ，Ｙ００６Ｖ，Ｙ００６Ｗ，Ｙ０２１Ｃ，Ｙ０
２１Ｄ，Ｙ０２１Ｖ，Ｙ０９１Ｗ，Ｙ１６７Ｆ，Ｙ２１４Ｖ，Ｙ２６２Ａ，Ｙ２６２Ｃ，
Ｙ２６２Ｉ，Ｙ２６２Ｍ，Ｙ２６２Ｒ，Ｙ２６２Ｔ，Ｙ２６２Ｖ，及びＹ２６２Ｗ，から
なる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸置換を含むＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０
５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑアミノ酸配列（配列番号６）
は、ｐＨ  ８及び１６℃での洗剤組成物４の卵微小標本クリーニングアッセイにおいて、
ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して約１．０のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変
異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このよ
うな変異体は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパ
ク質分解活性を有し、ＢＰＮ’よりもＰＩ値が大きい。本発明は、本卵微小標本クリーニ
ングアッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性
を有する、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して約１．０のＰＩ値を有する、並びに／あるいは、Ｂ
ＰＮ’−ｖ３６と比較して約１．０のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、この
変異体は配列番号２又は配列番号６の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、
８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又
は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくとも１、２
、３、４、５、６又はそれ以上のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は
、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の
他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物
（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つ
のこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
【０４５６】
以下のＢＰＮ’−ｖ３６変異体：Ａ００１Ｅ，Ａ０１５Ｃ，Ａ０１５Ｅ，Ａ０４８Ｃ，
Ａ０４８Ｅ，Ａ０７３Ｔ，Ａ０８５Ｃ，Ａ０８５Ｇ，Ａ０８８Ｉ，Ａ０８８Ｍ，Ａ１１４
Ｇ，Ａ１３７Ｒ，Ａ１８７Ｌ，Ａ１８７Ｎ，Ａ１８７Ｐ，Ａ１８７Ｗ，Ａ２１６Ｃ，Ａ２
３０Ｓ，Ａ２７３Ｄ，Ａ２７３Ｈ，Ａ２７３Ｔ，Ｄ０３６Ｎ，Ｄ０９９Ｎ，Ｄ２５９Ｈ，
Ｅ１５６Ｃ，Ｅ１５６Ｇ，Ｅ１５６Ｈ，Ｅ１５６Ｑ，Ｆ１８９Ｈ，Ｆ１８９Ｒ，Ｆ１８９
Ｓ，Ｆ１８９Ｔ，Ｆ２６１Ｃ，Ｆ２６１Ｄ，Ｆ２６１Ｅ，Ｇ０５３Ｅ，Ｇ０５３Ｍ，Ｇ０
５３Ｑ，Ｇ１３１Ｃ，Ｇ１３１Ｄ，Ｇ１５７Ｎ，Ｇ１６０Ｖ，Ｇ２１５Ｃ，Ｇ２１５Ｌ，
Ｇ２５８Ａ，Ｈ０３９Ａ，Ｉ０１１Ｌ，Ｉ０７９Ｅ，Ｉ２６８Ｍ，Ｋ０１２Ａ，Ｋ０１２
Ｇ，Ｋ０１２Ｈ，Ｋ０１２Ｎ，Ｋ０２７Ｎ，Ｋ０４３Ｃ，Ｋ０４３Ｄ，Ｋ０４３Ｇ，Ｋ０
４３Ｌ，Ｋ０４３Ｗ，Ｋ１３６Ｇ，Ｋ１４１Ｇ，Ｋ１４１Ｌ，Ｋ１４１Ｍ，Ｋ１４１Ｎ，
Ｋ１４１Ｒ，Ｋ１７０Ｃ，Ｋ１７０Ｑ，Ｋ２１３Ｖ，Ｋ２５６Ｄ，Ｋ２６５Ｇ，Ｋ２６５
Ｎ，Ｋ２６５Ｑ，Ｋ２６５Ｓ，Ｌ０８２Ａ，Ｌ０８２Ｆ，Ｌ０８２Ｈ，Ｌ０８２Ｒ，Ｌ０
８２Ｓ，Ｌ０９０Ｍ，Ｌ２３３Ｓ，Ｌ２３５Ｖ，Ｌ２５７Ｅ，Ｌ２５７Ｇ，Ｌ２５７Ｒ，
Ｌ２５７Ｗ，Ｍ２２２Ｓ，Ｎ０２５Ｒ，Ｎ０６２Ｈ，Ｎ０６２Ｔ，Ｎ０７６Ｄ，Ｎ０７６
Ｐ，Ｎ０７８Ｄ，Ｎ０７８Ｅ，Ｎ０７８Ｆ，Ｎ０７８Ｒ，Ｎ０７８Ｖ，Ｎ２６９Ｈ，Ｎ２
６９Ｑ，Ｐ０１４Ｋ，Ｐ０５７Ａ，Ｐ０８６Ｆ，Ｐ２０１Ｔ，Ｑ００２Ｄ，Ｑ００２Ｉ，
Ｑ００２Ｐ，Ｑ００２Ｖ，Ｑ０１９Ｌ，Ｑ０１９Ｐ，Ｑ０５９Ｃ，Ｑ０５９Ｄ，Ｑ０５９
Ｅ，Ｑ１８５Ｗ，Ｑ２７１Ｃ，Ｑ２７１Ｄ，Ｑ２７１Ｅ，Ｑ２７１Ｌ，Ｑ２７１Ｗ，Ｑ２
７５Ｇ，Ｒ１８６Ｍ，Ｓ００９Ｃ，Ｓ００９Ｌ，Ｓ０１８Ｄ，Ｓ０３７Ｅ，Ｓ０３７Ｈ，
Ｓ０３７Ｋ，Ｓ０３７Ｌ，Ｓ０３７Ｐ，Ｓ０３８Ｐ，Ｓ０６３Ｃ，Ｓ０６３Ｄ，Ｓ０６３
Ｆ，Ｓ０６３Ｌ，Ｓ０６３Ｙ，Ｓ０８７Ｌ，Ｓ０８７Ｎ，Ｓ０８７Ｒ，Ｓ０８７Ｙ，Ｓ０
８９Ｄ，Ｓ０８９Ｆ，Ｓ０８９Ｇ，Ｓ０８９Ｗ，Ｓ１０５Ｔ，Ｓ１２５Ａ，Ｓ１３０Ｃ，
Ｓ１５９Ｄ，Ｓ１５９Ｐ，Ｓ１６３Ａ，Ｓ１８２Ｐ，Ｓ１８３Ｐ，Ｓ１９０Ａ，Ｓ１９０
Ｇ，Ｓ２０４Ｅ，Ｓ２２４Ｇ，Ｓ２４８Ｅ，Ｓ２４８Ｈ，Ｓ２４９Ｅ，Ｓ２６０Ｖ，Ｓ２
６０Ｙ，Ｔ０５５Ｍ，Ｔ０５５Ｒ，Ｔ０５５Ｗ，Ｔ１５８Ｄ，Ｔ１５８Ｅ，Ｔ１６４Ｇ，
Ｔ１６４Ｋ，Ｔ１６４Ｑ，Ｔ２２０Ａ，Ｔ２４２Ｇ，Ｔ２５３Ｅ，Ｔ２５５Ｃ，Ｔ２５５
Ｇ，Ｖ００４Ｄ，Ｖ０４４Ｌ，Ｖ０４４Ｐ，Ｖ０４５Ｃ，Ｖ０４５Ｇ，Ｖ０４５Ｌ，Ｖ０
４５Ｎ，Ｖ０４５Ｒ，Ｖ０４５Ｖ，Ｖ０８１Ａ，Ｖ０８１Ｇ，Ｖ０８１Ｈ，Ｖ０８４Ｓ，
Ｖ１４７Ａ，Ｖ２０３Ｄ，Ｖ２０３Ｇ，Ｖ２７０Ｃ，Ｖ２７０Ｐ，Ｖ２７０Ｓ，Ｗ２４１
Ｌ，Ｙ１０４Ｔ，Ｙ２１４Ｑ，Ｙ２６２Ｄ，Ｙ２６２Ｅ，Ｙ２６２Ｇ，Ｙ２６２Ｈ，Ｙ２
６２Ｌ，Ｙ２６２Ｎ，Ｙ２６３Ｇ，及びＹ２６３Ｗ，からなる群から選択される少なくと
も１つのアミノ酸置換を含むＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１
Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑアミノ酸配列（配列番号６）は、ｐＨ  ８及び１６℃での洗
剤組成物４の卵微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して約
０．９のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号
２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体はタンパク質分解活
性を有する。本発明は、本卵微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番
号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−
ｖ３６と比較して約０．９のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は
配列番号２又は配列番号６の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、
９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％
の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくとも１、２、３、４
、５、６又はそれ以上のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番
号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所に
より詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリー
ニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのよ
うな変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
【０４５７】
以下のＢＰＮ’−ｖ３６変異体：Ａ００１Ｃ，Ａ１４２Ｃ，Ａ１８７Ｃ，Ａ２１６Ｈ，
Ａ２７３Ｑ，Ａ２７４Ｈ，Ｄ０３６Ｑ，Ｄ０３６Ｓ，Ｄ０９９Ｓ，Ｄ１９７Ｔ，Ｅ１５６
Ｌ，Ｆ１８９Ａ，Ｆ１８９Ｌ，Ｇ０５３Ｌ，Ｇ０５３Ｒ，Ｇ１５７Ｐ，Ｇ１７８Ａ，Ｇ２
５８Ｐ，Ｈ０３９Ｓ，Ｈ２３８Ｙ，Ｋ０１２Ｃ，Ｋ０１２Ｅ，Ｋ０１２Ｌ，Ｋ０１２Ｗ，
Ｋ１３６Ｅ，Ｋ２６５Ｙ，Ｌ０７５Ｇ，Ｌ０７５Ｖ，Ｌ０８２Ｅ，Ｌ１２６Ｗ，Ｌ２５７
Ｄ，Ｌ２５７Ｐ，Ｍ０５０Ｌ，Ｍ２２２Ａ，Ｍ２２２Ｆ，Ｍ２２２Ｌ，Ｎ０５６Ｓ，Ｎ０
６２Ｃ，Ｎ０６２Ｌ，Ｎ０６２Ｙ，Ｎ２６９Ｃ，Ｐ０５７Ｗ，Ｑ００２Ｋ，Ｑ００２Ｌ，
Ｑ２１７Ｃ，Ｑ２４５Ａ，Ｑ２４５Ｈ，Ｓ０１８Ｃ，Ｓ０３８Ｙ，Ｓ０４９Ｃ，Ｓ０８７
Ｃ，Ｓ０８７Ｋ，Ｓ１４５Ｄ，Ｓ１９１Ｇ，Ｔ０２２Ｐ，Ｔ０５５Ｅ，Ｔ１６４Ａ，Ｔ１
６４Ｒ，Ｖ０４５Ｋ，Ｖ０５１Ｈ，Ｖ０８１Ｒ，Ｖ１４３Ｇ，Ｖ１４８Ｌ，Ｖ１８０Ｓ，
Ｖ２０３Ｓ，Ｖ２７０Ｇ，Ｙ２１４Ｈ，Ａ１８７Ｆ，Ａ２７３Ｐ，Ｆ１８９Ｇ，Ｇ０４６
Ｄ，Ｇ１４６Ａ，Ｇ１５７Ｔ，Ｉ０３１Ｆ，Ｉ１７５Ｌ，Ｋ０１２Ｆ，Ｋ０２７Ｔ，Ｌ０
４２Ｆ，Ｌ２３３Ｅ，Ｌ２３３Ｇ，Ｍ２２２Ｔ，Ｎ０６２Ｒ，Ｎ１８４Ｐ，Ｐ００５Ｖ，
Ｐ００５Ｗ，Ｐ１２９Ｖ，Ｐ２３９Ｎ，Ｐ２３９Ｔ，Ｑ０１０Ｗ，Ｑ０５９Ｗ，Ｑ２７５
Ａ，Ｖ００４Ｔ，Ｖ１６５Ｃ，Ａ１２８Ｈ，Ａ２３０Ｇ，Ｄ０４１Ｃ，Ｈ０６７Ｔ，Ｋ０
２７Ｓ，Ｋ０４３Ｒ，Ｌ０９０Ｔ，Ｎ０６２Ｑ，Ｎ１１７Ｇ，Ｐ２２５Ｇ，Ｐ２２５Ｓ，
Ｐ２３９Ｇ，Ｐ２３９Ｈ，Ｑ００２Ｒ，Ｓ０８９Ｅ，Ｖ０４４Ａ，Ｖ０４５Ｉ，Ａ００１
Ｐ，Ａ２７３Ｒ，Ｄ０４１Ｎ，Ｄ０９９Ａ，Ｄ０９９Ｈ，Ｄ０９９Ｑ，Ｆ０５８Ｇ，Ｉ１
１１Ｍ，Ｌ０４２Ｃ，Ｎ１１８Ｌ，Ｐ２３９Ａ，Ｓ０４９Ｎ，Ｓ０８９Ｐ，Ｓ１７３Ｖ，
Ｔ２４２Ｐ，Ｖ０４４Ｔ，及びＶ０４５Ｔ，からなる群から選択される少なくとも１つの
アミノ酸配列を含むＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１
２８Ａ−Ｙ２１７Ｑアミノ酸配列（配列番号６）は、ｐＨ  ８及び１６℃での洗剤組成物
４の卵微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して約０．５以
上０．９未満のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は配
列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体はタンパク質
分解活性を有する。本発明は、本卵微小標本クリーニングアッセイにおいて、タンパク質
分解活性を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して０．５以上０．９未
満のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、変異体は、配列番号２又は配列番号６
の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、
９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸
配列を含み、上記群から選択される少なくとも１、２、３、４、５、６又はそれ以上のア
ミノ酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置
と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるよう
な、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられる
が、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリー
ニング方法も含まれる。
【０４５８】
（実施例８）
親ＢＰＮ’−ｖ３６に基づく更なるコンビナトリアル変異体のクリーニング性能
ＤＮＡ  ２．０により、親ＢＰＮ’−ｖ３６（ＢＰＮ’−Ｓ２４Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｓ７８
Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ）に基づく更なるコンビナトリアル変異体が作
成され、提供された。これらの変異体を１６℃及びｐＨ  ８での洗剤組成物４のＢＭＩ微
小標本アッセイ、１６℃及びｐＨ  ７での洗剤組成物４のＢＭＩ微小標本アッセイ、１６
℃及びｐＨ  ８での洗剤組成物４の卵微小標本アッセイ、並びに１６℃及びｐＨ  ８での
洗剤組成物４の植物微小標本アッセイで、クリーニング性能について試験した。ＴＣＡア
ッセイを用いてタンパク質含量を測定し、ＡＡＰＦアッセイを用いてプロテアーゼ活性に
ついてアッセイした。実施例１に記載のようにすべてのアッセイを実施し、ＢＰＮ’−ｖ
３６（ＰＩ値１．０を有する）と比較して性能指数を算出した。
【０４５９】
以下のＢＰＮ’−ｖ３６変異体：Ａ０８８Ｔ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ，
Ｎ０６１Ｓ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２６０Ｐ，Ｓ００９Ｔ−Ｎ１０９
Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｋ１４１Ｒ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ００９Ｔ−Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ｎ１
０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｋ１４１Ｒ，及びＳ１６２Ｇ−Ｋ２５６Ｒ，からなる群から選択さ
れる少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８
Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑアミノ酸配列（配列番号６）は、ｐＨ  ８及び
１６℃での洗剤組成物４のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ
３６と比較して１．０超、少なくとも１．１、少なくとも１．２、少なくとも１．３、少
なくとも１．４、少なくとも１．５、少なくとも１．６、少なくとも１．７、少なくとも
１．８、少なくとも１．９、少なくとも２、１．０超〜約１０、１．０超〜約８、又は１
．０超〜約５のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は、
配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体は、本アッ
セイにおいて、ＢＰＮ’、ＢＰＮ’−ｖ３、及びＢＰＮ’−ｖ３６と比較して向上したタ
ンパク質分解活性を有し、ＢＰＮ’、ＢＰＮ’−ｖ３及びＢＰＮ’−ｖ３６よりもＰＩ値
が大きい。本発明は、本ＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’、ＢＰ
Ｎ’−ｖ３及びＢＰＮ’−ｖ３６と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、ＢＰ
Ｎ’−ｖ３と比較して１．０超〜約５のＰＩ値を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−
ｖ３６と比較して１．０超〜約５のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、この変
異体は配列番号２又は配列番号６の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８
５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の
同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置
換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応さ
せることにより番号付けされる。
【０４６０】
以下のＢＰＮ’−ｖ３６変異体：Ａ０８８Ｔ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ，Ａ０８８Ｔ−
Ｇ１３１Ｈ，Ａ０８８Ｔ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２４３
Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｑ１０３Ｈ，Ａ０８８Ｔ−Ｓ１６２Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０
８８Ｔ−Ｓ２４９Ａ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ，Ａ１１６Ｔ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ，
Ａ１１６Ｔ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ１１６
Ｔ−Ｓ１６２Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４９Ａ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１
５８Ｓ，Ａ１２８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１２８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−
Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１２８Ｓ−Ｓ１６２Ｇ，Ａ１２８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１２８
Ｓ−Ｓ２４９Ａ，Ａ１２８Ｓ−Ｔ１５８Ｓ，Ｇ０２４Ｅ−Ａ１１６Ｔ，Ｇ０２４Ｅ−Ｋ２
５６Ｒ，Ｇ０２４Ｅ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ０２４Ｅ−Ｎ１０９Ｇ，Ｇ０２４Ｅ−Ｎ２４３Ｖ，
Ｇ０２４Ｅ−Ｔ１５８Ｓ，Ｇ１３１Ｈ，Ｇ１３１Ｈ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１３１Ｈ−Ｌ２５７
Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１３１Ｈ−Ｓ１６２Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２
４８Ｎ，Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４９Ａ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ，Ｋ０４３Ｙ−Ａ０８８Ｔ，
Ｋ０４３Ｙ−Ｋ２５６Ｒ，Ｋ０４３Ｙ−Ｎ２４３Ｖ，Ｋ２５６Ｒ，Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７
Ｇ，Ｌ２５７Ｇ，Ｎ０６１Ｇ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１
３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ０６１Ｓ−Ａ１２８Ｓ−
Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２６０Ｐ，Ｎ０６１Ｓ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８
Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｓ２６０Ｐ，Ｎ０６１Ｓ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２６０Ｐ，Ｎ０
６１Ｓ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ０７６Ｄ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ０７６Ｄ−Ｌ２５７Ｇ，
Ｎ０７６Ｄ−Ｎ１０９Ｇ，Ｎ０７６Ｄ−Ｔ１５８Ｓ，Ｎ１０９Ａ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３
Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ，Ｎ１
０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−
Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８
Ａ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ａ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１
２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−
Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７
Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ１６２Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１
０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｔ１５８Ｓ−
Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ，Ｎ１０９Ｇ−Ｋ２５６
Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｐ−Ｓ２
４８Ａ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｐ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−
Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８
Ａ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２
４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｓ１６２Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，
Ｎ１０９Ｇ−Ｓ２４９Ａ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ，Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３
Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｓ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２
４３Ｖ，Ｎ２４３Ｖ，Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ２４３Ｖ−
Ｓ２４８Ｎ，Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４９Ａ，Ｐ０４０
Ａ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｑ１０３Ｈ−Ａ１
１６Ｔ，Ｑ１０３Ｈ−Ａ１２８Ｓ，Ｑ１０３Ｈ−Ｇ１３１Ｈ，Ｑ１０３Ｈ−Ｋ２５６Ｒ，
Ｑ１０３Ｈ−Ｌ２５７Ｇ，Ｑ１０３Ｈ−Ｎ１０９Ｇ，Ｑ１０３Ｈ−Ｎ２１８Ｓ，Ｑ１０３
Ｈ−Ｎ２４３Ｖ，Ｑ１０３Ｈ−Ｓ１６２Ｇ，Ｑ１０３Ｈ−Ｓ２４８Ｎ，Ｑ１０３Ｈ−Ｓ２
４９Ａ，Ｑ１０３Ｈ−Ｔ１５８Ｓ，Ｓ００９Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｋ１４１Ｒ−Ｎ２４３Ｖ，
Ｓ００９Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｋ１４１Ｒ，Ｓ００９Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８
Ｓ−Ｋ１４１Ｒ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ００９Ｔ−Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０
２１Ｎ−Ａ１２８Ｓ−Ｋ１４１Ｒ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ａ１２８Ｓ−
Ｎ２４３Ｖ，Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ｎ０６１Ｓ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２６０
Ｐ，Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ｎ０６１Ｓ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２６０Ｐ，Ｓ０
１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ，Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ｎ１０９Ｇ−
Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３
Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｐ−Ｓ２
４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ０３３Ｔ−Ｑ１０３Ｈ，Ｓ０３３Ｔ−
Ｔ１５８Ｓ，Ｓ０６３Ｇ，Ｓ０６３Ｇ−Ａ０８８Ｔ，Ｓ０６３Ｇ−Ａ１２８Ｓ，Ｓ０６３
Ｇ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０６３Ｇ−Ｌ２５７Ｇ，Ｓ０６３Ｇ−Ｎ０７６Ｄ，Ｓ０６３Ｇ−Ｎ１
０９Ｇ，Ｓ０６３Ｇ−Ｑ１０３Ｈ，Ｓ０６３Ｇ−Ｓ１６２Ｇ，Ｓ０６３Ｇ−Ｓ２４８Ｎ，
Ｓ０６３Ｇ−Ｔ１５８Ｓ，Ｓ１６２Ｇ，Ｓ１６２Ｇ−Ｌ２５７Ｇ，Ｓ１６２Ｇ−Ｎ２４３
Ｖ，Ｓ１６２Ｇ−Ｓ２４８Ｎ，Ｓ２４８Ｎ，Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｓ２４９Ａ，Ｔ１
５８Ｓ，Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，
Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，及びＴ１５８Ｓ−Ｓ２４９Ａ，からなる群から選択される少な
くとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１
０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑアミノ酸配列（配列番号６）は、ｐＨ  ８及び１６℃で
の洗剤組成物４のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３６と比
較して約１．０のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は
配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体は、本アッ
セイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有し、
ＢＰＮ’よりもＰＩ値が大きい。本発明は、本ＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにお
いて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、ＢＰＮ
’−ｖ３と比較して約１．０のＰＩ値を有する、並びに、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して約
１．０のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は、配列番号２又は配
列番号６の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、
９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸
配列を含み、上記群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異
体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付け
される。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの
変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並び
に、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
【０４６１】
以下のＢＰＮ’−ｖ３６変異体：Ａ００１Ｅ−Ａ０８８Ｔ，Ａ００１Ｅ−Ａ１１６Ｔ，
Ａ００１Ｅ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ００１Ｅ−Ｇ１３１Ｈ−Ｇ１６９
Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ００１Ｅ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ００１Ｅ−Ｎ１０９Ｇ，Ａ００１Ｅ−Ｎ２
４３Ｖ，Ａ００１Ｅ−Ｓ０３３Ｔ，Ａ００１Ｅ−Ｓ０３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ，
Ａ００１Ｅ−Ｓ０３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ００１Ｅ−Ｓ１６２Ｇ，Ａ００１
Ｅ−Ｔ１５８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１２８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１６９Ａ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２
１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｑ２０６Ｄ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１６９Ａ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ，
Ａ１１６Ｔ−Ｑ２０６Ｄ，Ａ１２８Ｓ，Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ，Ａ１２８Ｓ−Ｇ１６９
Ａ，Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ１２８Ｓ−Ｑ２０６Ｄ，Ｇ０
２４Ｅ，Ｇ０２４Ｅ−Ａ０８８Ｔ，Ｇ０２４Ｅ−Ａ１２８Ｓ，Ｇ０２４Ｅ−Ｇ１３１Ｈ，
Ｇ０２４Ｅ−Ｋ０４３Ｙ，Ｇ０２４Ｅ−Ｎ２１８Ｓ，Ｇ０２４Ｅ−Ｑ１０３Ｈ，Ｇ０２４
Ｅ−Ｓ０３３Ｔ，Ｇ０２４Ｅ−Ｓ０６３Ｇ，Ｇ０２４Ｅ−Ｓ１６２Ｇ，Ｇ０２４Ｅ−Ｓ２
４８Ｎ，Ｇ０２４Ｅ−Ｓ２４９Ａ，Ｇ１３１Ｈ−Ｇ１６９Ａ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ，
Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ，Ｇ１３１Ｈ−Ｑ２０６Ｄ，Ｇ１６９Ａ，Ｇ１６９Ａ−Ｋ２５６
Ｒ，Ｇ１６９Ａ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１６９Ａ−Ｎ２１８Ｓ，Ｇ１６９Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｇ１
６９Ａ−Ｑ２０６Ｄ，Ｇ１６９Ａ−Ｓ２４８Ｎ，Ｇ１６９Ａ−Ｓ２４９Ａ，Ｋ０４３Ｙ，
Ｋ０４３Ｙ−Ａ１１６Ｔ，Ｋ０４３Ｙ−Ａ１２８Ｓ，Ｋ０４３Ｙ−Ｇ１３１Ｈ，Ｋ０４３
Ｙ−Ｇ１６９Ａ，Ｋ０４３Ｙ−Ｌ２５７Ｇ，Ｋ０４３Ｙ−Ｎ１０９Ｇ，Ｋ０４３Ｙ−Ｎ２
１８Ｓ，Ｋ０４３Ｙ−Ｑ１０３Ｈ，Ｋ０４３Ｙ−Ｓ０６３Ｇ，Ｋ０４３Ｙ−Ｓ１６２Ｇ，
Ｋ０４３Ｙ−Ｓ２４８Ｎ，Ｋ０４３Ｙ−Ｓ２４９Ａ，Ｋ０４３Ｙ−Ｔ１５８Ｓ，Ｎ０７６
Ｄ，Ｎ０７６Ｄ−Ａ０８８Ｔ，Ｎ０７６Ｄ−Ａ１２８Ｓ，Ｎ０７６Ｄ−Ｇ１３１Ｈ，Ｎ０
７６Ｄ−Ｎ２１８Ｓ，Ｎ０７６Ｄ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ０７６Ｄ−Ｑ１０３Ｈ，Ｎ０７６Ｄ−
Ｓ１６２Ｇ，Ｎ０７６Ｄ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ０７６Ｄ−Ｓ２４９Ａ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１６９
Ａ，Ｎ１０９Ｇ−Ｑ２０６Ｄ，Ｎ１０９Ｇ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ２１８Ｓ，Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２
５６Ｒ，Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４９Ａ，
Ｐ０４０Ｅ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ，Ｑ１０３Ｈ，Ｑ１０３Ｈ−Ｇ１６９
Ａ，Ｑ２０６Ｄ，Ｑ２０６Ｄ−Ｋ２５６Ｒ，Ｑ２０６Ｄ−Ｌ２５７Ｇ，Ｑ２０６Ｄ−Ｎ２
１８Ｓ，Ｑ２０６Ｄ−Ｎ２４３Ｖ，Ｑ２０６Ｄ−Ｓ２４８Ｎ，Ｑ２０６Ｄ−Ｓ２４９Ａ，
Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ｓ０３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８
Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０３３Ｔ，Ｓ０３３Ｔ−Ａ０８８Ｔ，Ｓ０３３Ｔ−Ａ１１６Ｔ，Ｓ０
３３Ｔ−Ａ１２８Ｓ，Ｓ０３３Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｐ，Ｓ０３３Ｔ−
Ｇ１３１Ｈ，Ｓ０３３Ｔ−Ｋ０４３Ｙ，Ｓ０３３Ｔ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０３３Ｔ−Ｌ２５７
Ｇ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ０７６Ｄ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ０７６Ｄ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ｓ０
３３Ｔ−Ｎ０７６Ｄ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−
Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３
Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ２１８Ｓ，Ｓ０３３Ｔ−Ｐ０４０Ｅ−Ｑ１
０３Ｈ−Ｎ１０９Ｇ，Ｓ０３３Ｔ−Ｑ１０３Ｈ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ，Ｓ０３３Ｔ−
Ｑ２０６Ｄ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ０６３Ｇ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ１６２Ｇ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ２４８
Ｎ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ２４９Ａ，Ｓ０６３Ｇ−Ａ１１６Ｔ，Ｓ０６３Ｇ−Ｇ１３１Ｈ，Ｓ０
６３Ｇ−Ｇ１６９Ａ，Ｓ０６３Ｇ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ，Ｓ０６３Ｇ−
Ｎ２１８Ｓ，Ｓ０６３Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ０６３Ｇ−Ｑ２０６Ｄ，Ｓ０６３Ｇ−Ｓ２４９
Ａ，Ｓ１６２Ｇ−Ｇ１６９Ａ，Ｓ１６２Ｇ−Ｎ２１８Ｓ，Ｓ１６２Ｇ−Ｑ２０６Ｄ，Ｓ１
６２Ｇ−Ｓ２４９Ａ，Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ２４８Ｎ−Ｓ２４９Ａ，Ｓ２４９Ａ−
Ｋ２５６Ｒ，Ｓ２４９Ａ−Ｌ２５７Ｇ，Ｔ１５８Ｓ−Ｇ１６９Ａ，Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６
Ｒ，Ｔ１５８Ｓ−Ｑ２０６Ｄ，及びＴ１５８Ｓ−Ｓ１６２Ｇ，からなる群から選択される
少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−
Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑアミノ酸配列（配列番号６）は、ｐＨ  ８及び１６
℃での洗剤組成物４のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３６
と比較して約０．９のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位
置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体はタン
パク質分解活性を有する。本発明は、本ＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、
ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、並びに／ある
いは、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して約０．９のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含
み、この変異体は配列番号２又は配列番号６の配列に対して少なくとも６０％、７０％、
８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、
９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくと
も１組の酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸
位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載される
ような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げら
れるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるク
リーニング方法も含まれる。
【０４６２】
以下のＢＰＮ’−ｖ３６変異体：Ａ００１Ｅ，Ａ００１Ｅ−Ａ１２８Ｓ，Ａ００１Ｅ−
Ｇ０２４Ｅ，Ａ００１Ｅ−Ｇ１３１Ｈ，Ａ００１Ｅ−Ｇ１６９Ａ，Ａ００１Ｅ−Ｌ２５７
Ｇ，Ａ００１Ｅ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ００１Ｅ−Ｑ１０３Ｈ，Ａ００１Ｅ−Ｓ０６３Ｇ，Ａ０
０１Ｅ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ００１Ｅ−Ｓ２４９Ａ，Ｇ０２４Ｅ−Ｎ０７６Ｄ，Ｋ０４３Ｙ−
Ｎ０７６Ｄ，Ｋ０４３Ｙ−Ｑ２０６Ｄ，Ｎ０７６Ｄ−Ａ１１６Ｔ，Ｎ０７６Ｄ−Ｇ１６９
Ａ，Ｎ０７６Ｄ−Ｑ２０６Ｄ，Ｑ１０３Ｈ−Ｑ２０６Ｄ，Ｓ０３３Ｔ−Ｇ１６９Ａ，Ｓ０
３３Ｔ−Ｓ０６３Ｇ−Ｑ１０３Ｈ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｇ１６９Ａ−
Ｎ２４３Ｐ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ０６３Ｇ−Ｑ１０３Ｈ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１
Ｈ−Ｇ１６９Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ００１Ｅ−Ｋ０４３Ｙ，Ａ００１Ｅ−Ｎ０７６Ｄ，Ａ０
０１Ｅ−Ｎ０７６Ｄ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ，Ａ００１Ｅ−Ｑ２０６Ｄ，及びＧ０２４
Ｅ−Ｑ２０６Ｄ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ
’−Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑアミノ
酸配列（配列番号６）は、ｐＨ  ８及び１６℃での洗剤組成物４のＢＭＩ微小標本クリー
ニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して０．５以上０．９未満のＰＩ値を
有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列と対応さ
せることにより番号付けされる。このような変異体はタンパク質分解活性を有する。
【０４６３】
本発明は、本ＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、タンパク質分解活性を有
する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して０．５以上０．９未満のＰＩ値を
有する、プロテアーゼ変異体を含み、変異体は、配列番号２又は配列番号６の配列に対し
て少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４
％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、
上記群から選択される少なくとも１組の酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は
、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の
他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物
（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つ
のこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
【０４６４】
以下のＢＰＮ’−ｖ３６変異体：Ａ１１６Ｔ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ｇ０２４Ｅ−
Ａ１１６Ｔ，Ｋ０４３Ｙ，Ｎ０７６Ｄ−Ａ１１６Ｔ，Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ｓ０３３
Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ０６３Ｇ，Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ００１Ｅ−Ｓ２
４９Ａ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１２８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ，
Ａ０８８Ｔ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８
Ｔ−Ｓ２４９Ａ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ，Ａ１２８Ｓ，Ａ１
２８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１２８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ１２８Ｓ−
Ｓ２４８Ｎ，Ａ１２８Ｓ−Ｔ１５８Ｓ，Ｇ０２４Ｅ−Ａ０８８Ｔ，Ｇ０２４Ｅ−Ａ１２８
Ｓ，Ｇ０２４Ｅ−Ｇ１３１Ｈ，Ｇ０２４Ｅ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ０２４Ｅ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ０
２４Ｅ−Ｎ２１８Ｓ，Ｇ０２４Ｅ−Ｎ２４３Ｖ，Ｇ０２４Ｅ−Ｓ１６２Ｇ，Ｇ０２４Ｅ−
Ｓ２４９Ａ，Ｇ０２４Ｅ−Ｔ１５８Ｓ，Ｇ１３１Ｈ，Ｇ１３１Ｈ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１３１
Ｈ−Ｓ２４９Ａ，Ｋ０４３Ｙ−Ａ０８８Ｔ，Ｋ０４３Ｙ−Ａ１１６Ｔ，Ｋ２５６Ｒ，Ｎ０
７６Ｄ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ，
Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３
Ｖ−Ｓ２４８Ａ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ，Ｎ１０９Ｇ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｌ２
５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ｓ２４８Ｎ，
Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ２４３Ｖ，Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７
Ｇ，Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４９Ａ，Ｑ１０３Ｈ−Ａ１２８Ｓ，Ｑ１
０３Ｈ−Ｇ１３１Ｈ，Ｑ１０３Ｈ−Ｋ２５６Ｒ，Ｑ１０３Ｈ−Ｌ２５７Ｇ，Ｑ１０３Ｈ−
Ｎ２４３Ｖ，Ｑ１０３Ｈ−Ｓ２４８Ｎ，Ｑ１０３Ｈ−Ｓ２４９Ａ，Ｑ１０３Ｈ−Ｔ１５８
Ｓ，Ｑ２０６Ｄ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ０３３Ｔ−Ａ１２８Ｓ，Ｓ０３３Ｔ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０
３３Ｔ−Ｎ０７６Ｄ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ２１８Ｓ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ２４８Ｎ，Ｓ０３３Ｔ−
Ｔ１５８Ｓ，Ｓ０６３Ｇ−Ａ１２８Ｓ，Ｓ０６３Ｇ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０６３Ｇ−Ｎ２４３
Ｖ，Ｓ０６３Ｇ−Ｓ１６２Ｇ，Ｓ０６３Ｇ−Ｔ１５８Ｓ，Ｓ１６２Ｇ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ２
４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ２４９Ａ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，及びＴ１５８Ｓ−Ｓ２４９
Ａ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’−Ｓ０２４
Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑアミノ酸配列（配列
番号６）は、ｐＨ  ７及び１６℃での洗剤組成物４のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセ
イにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して１．０超、少なくとも１．１、少なくとも１．
２、少なくとも１．３、少なくとも１．４、少なくとも１．５、少なくとも１．６、少な
くとも１．７、少なくとも１．８、少なくとも１．９、少なくとも２、１．０超〜約１０
、１．０超〜約８、又は１．０超〜約５のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、
変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。この
ような変異体は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’、ＢＰＮ’−ｖ３、及びＢＰＮ’−ｖ３
６と比較して向上したタンパク質分解活性を有し、ＢＰＮ’、ＢＰＮ’−ｖ３及びＢＰＮ
’−ｖ３６よりもＰＩ値が大きい。本発明は、本ＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイに
おいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、ＢＰ
Ｎ’、ＢＰＮ’−ｖ３及びＢＰＮ’−ｖ３６と比較して向上したタンパク質分解活性を有
する、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して１．０超〜５のＰＩ値を有する、並びに／あるいは、Ｂ
ＰＮ’−ｖ３６と比較して１．０超〜約５のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み
、この変異体は配列番号２又は配列番号６の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８
０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９
８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくとも
１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミ
ノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載さ
れるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙
げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用い
るクリーニング方法も含まれる。
【０４６５】
以下のＢＰＮ’−ｖ３６変異体：Ａ００１Ｅ−Ａ１２８Ｓ，Ａ００１Ｅ−Ｇ１３１Ｈ，
Ａ００１Ｅ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ００１Ｅ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ００１Ｅ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ００１
Ｅ−Ｓ０３３Ｔ，Ａ００１Ｅ−Ｓ０６３Ｇ，Ａ００１Ｅ−Ｓ１６２Ｇ，Ａ０８８Ｔ，Ａ０
８８Ｔ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｑ１０３Ｈ，Ａ０８８Ｔ−
Ｓ１６２Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ，Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１
Ｈ，Ａ１１６Ｔ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｓ１６２Ｇ，Ａ１
１６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４９Ａ，Ａ１２８Ｓ−Ｇ１６９Ａ，Ａ１２８Ｓ−
Ｎ２１８Ｓ，Ａ１２８Ｓ−Ｓ１６２Ｇ，Ａ１２８Ｓ−Ｓ２４９Ａ，Ｇ０２４Ｅ，Ｇ０２４
Ｅ−Ｎ１０９Ｇ，Ｇ０２４Ｅ−Ｑ１０３Ｈ，Ｇ０２４Ｅ−Ｓ０３３Ｔ，Ｇ０２４Ｅ−Ｓ０
６３Ｇ，Ｇ０２４Ｅ−Ｓ２４８Ｎ，Ｇ１３１Ｈ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ，
Ｇ１３１Ｈ−Ｓ１６２Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ，Ｇ１６９Ａ，Ｇ１６９Ａ−Ｌ２５７
Ｇ，Ｇ１６９Ａ−Ｓ２４８Ｎ，Ｋ０４３Ｙ−Ａ１２８Ｓ，Ｋ０４３Ｙ−Ｇ１３１Ｈ，Ｋ０
４３Ｙ−Ｋ２５６Ｒ，Ｋ０４３Ｙ−Ｌ２５７Ｇ，Ｋ０４３Ｙ−Ｎ１０９Ｇ，Ｋ０４３Ｙ−
Ｎ２４３Ｖ，Ｋ０４３Ｙ−Ｑ１０３Ｈ，Ｋ０４３Ｙ−Ｓ０６３Ｇ，Ｋ０４３Ｙ−Ｓ１６２
Ｇ，Ｋ０４３Ｙ−Ｓ２４８Ｎ，Ｋ０４３Ｙ−Ｓ２４９Ａ，Ｋ０４３Ｙ−Ｔ１５８Ｓ，Ｋ２
５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｌ２５７Ｇ，Ｎ０６１Ｇ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ０６１Ｓ−
Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２６０Ｐ，Ｎ０６１Ｓ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３
Ｖ−Ｓ２６０Ｐ，Ｎ０６１Ｓ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２６０Ｐ，Ｎ０７６Ｄ−Ａ０
８８Ｔ，Ｎ０７６Ｄ−Ａ１２８Ｓ，Ｎ０７６Ｄ−Ｇ１６９Ａ，Ｎ０７６Ｄ−Ｎ２１８Ｓ，
Ｎ０７６Ｄ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１６２Ｇ，Ｎ０７６Ｄ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ０７６
Ｄ−Ｔ１５８Ｓ，Ｎ１０９Ａ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１
２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−
Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ａ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８
Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ１６２Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２
４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−
Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｑ２０６Ｄ，Ｎ１０９Ｇ−Ｓ１６２Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｓ２４９
Ａ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ，Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１
０９Ｓ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ２１８Ｓ，Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，
Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｐ０４０Ａ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８
Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｑ１０３Ｈ，Ｑ１０３Ｈ−Ａ１１６Ｔ，Ｑ１０３Ｈ−Ｇ１６９Ａ，Ｑ１
０３Ｈ−Ｎ１０９Ｇ，Ｑ１０３Ｈ−Ｎ２１８Ｓ，Ｑ１０３Ｈ−Ｓ１６２Ｇ，Ｓ００９Ｔ−
Ａ１２８Ｓ−Ｋ１４１Ｒ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ００９Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｋ１４１
Ｒ，Ｓ００９Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｋ１４１Ｒ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ００９Ｔ−Ｓ０
１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｋ１４１Ｒ，Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−
Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ，Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３
Ｖ，Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２
５６Ｒ，Ｓ０３３Ｔ−Ａ０８８Ｔ，Ｓ０３３Ｔ−Ａ１１６Ｔ，Ｓ０３３Ｔ−Ｇ１３１Ｈ，
Ｓ０３３Ｔ−Ｋ０４３Ｙ，Ｓ０３３Ｔ−Ｌ２５７Ｇ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ，Ｓ０３３
Ｔ−Ｑ１０３Ｈ，Ｓ０３３Ｔ−Ｑ２０６Ｄ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ１６２Ｇ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ２
４９Ａ，Ｓ０６３Ｇ，Ｓ０６３Ｇ−Ａ０８８Ｔ，Ｓ０６３Ｇ−Ａ１１６Ｔ，Ｓ０６３Ｇ−
Ｌ２５７Ｇ，Ｓ０６３Ｇ−Ｎ０７６Ｄ，Ｓ０６３Ｇ−Ｎ１０９Ｇ，Ｓ０６３Ｇ−Ｎ２１８
Ｓ，Ｓ０６３Ｇ−Ｑ１０３Ｈ，Ｓ０６３Ｇ−Ｓ２４８Ｎ，Ｓ０６３Ｇ−Ｓ２４９Ａ，Ｓ１
６２Ｇ，Ｓ１６２Ｇ−Ｇ１６９Ａ，Ｓ１６２Ｇ−Ｌ２５７Ｇ，Ｓ１６２Ｇ−Ｎ２１８Ｓ，
Ｓ１６２Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ１６２Ｇ−Ｓ２４８Ｎ，Ｓ１６２Ｇ−Ｓ２４９Ａ，Ｓ２４８
Ｎ，Ｓ２４８Ｎ−Ｓ２４９Ａ，Ｓ２４９Ａ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ２４９Ａ−Ｌ２５７Ｇ，Ｔ１
５８Ｓ，Ｔ１５８Ｓ−Ｇ１６９Ａ，Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，
Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，及びＴ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，からなる群から選択される少な
くとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１
０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑアミノ酸配列（配列番号６）は、ｐＨ  ７及び１６℃で
の洗剤組成物４のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３６と比
較して約１．０のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は
配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体は、本アッ
セイにおいて、ＢＰＮ’プロテアーゼ（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解
活性を有し、ＢＰＮ’よりもＰＩ値が大きい。本発明は、本ＢＭＩ微小標本クリーニング
アッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有
する、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して１．０のＰＩ値を有する、並びに、ＢＰＮ’−ｖ３６と
比較して約１．０のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は、配列番
号２又は配列番号６の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％
、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一
性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を
含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させる
ことにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくと
もこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限
定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も
含まれる。
【０４６６】
以下のＢＰＮ’−ｖ３６変異体：Ａ００１Ｅ，Ａ００１Ｅ−Ａ０８８Ｔ，Ａ００１Ｅ−
Ａ１１６Ｔ，Ａ００１Ｅ−Ｇ１６９Ａ，Ａ００１Ｅ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ００１Ｅ−Ｎ１０９
Ｇ，Ａ００１Ｅ−Ｓ０３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ００１Ｅ−Ｔ１５８Ｓ，Ａ０
８８Ｔ−Ｇ１６９Ａ，Ａ０８８Ｔ−Ｑ２０６Ｄ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ１２８Ｓ−
Ｇ１３１Ｈ，Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１２８Ｓ−Ｑ２０６
Ｄ，Ｇ０２４Ｅ−Ｋ０４３Ｙ，Ｇ０２４Ｅ−Ｎ０７６Ｄ，Ｇ０２４Ｅ−Ｑ２０６Ｄ，Ｇ１
３１Ｈ−Ｇ１６９Ａ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，
Ｇ１３１Ｈ−Ｑ２０６Ｄ，Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ，Ｇ１６９Ａ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１６９
Ａ−Ｎ２１８Ｓ，Ｇ１６９Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｇ１６９Ａ−Ｑ２０６Ｄ，Ｋ０４３Ｙ−Ｎ０
７６Ｄ，Ｋ０４３Ｙ−Ｎ２１８Ｓ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ，
Ｎ０６１Ｐ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ０６１Ｓ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３
Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｓ２６０Ｐ，Ｎ０６１Ｓ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ０
７６Ｄ，Ｎ０７６Ｄ−Ｇ１３１Ｈ，Ｎ０７６Ｄ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ０７６Ｄ−Ｎ１０９Ｇ，
Ｎ０７６Ｄ−Ｑ１０３Ｈ，Ｎ０７６Ｄ−Ｓ２４９Ａ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３
Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１
０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｐ−Ｓ２４８Ａ−
Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｐ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３
Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ａ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２
４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−
Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４９Ａ，Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６
Ｒ，Ｑ１０３Ｈ−Ｑ２０６Ｄ，Ｑ２０６Ｄ，Ｑ２０６Ｄ−Ｋ２５６Ｒ，Ｑ２０６Ｄ−Ｎ２
１８Ｓ，Ｑ２０６Ｄ−Ｓ２４８Ｎ，Ｑ２０６Ｄ−Ｓ２４９Ａ，Ｓ００９Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−
Ａ１２８Ｓ−Ｋ１４１Ｒ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ００９Ｔ−Ｓ０１８
Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ａ１２８Ｓ−Ｋ１４１Ｒ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ａ１
２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ｎ０６１Ｓ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−
Ｓ２６０Ｐ，Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ｎ０６１Ｓ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２６０
Ｐ，Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ｓ０３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２
４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０３３Ｔ，Ｓ０３３Ｔ−Ｇ１６９Ａ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ０７６Ｄ−
Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ０７６Ｄ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８
Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２
４３Ｐ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−
Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０６３Ｇ−Ｇ１３１Ｈ，Ｓ０６３Ｇ−Ｇ１６９Ａ，Ｓ１６２
Ｇ−Ｑ２０６Ｄ，及びＴ１５８Ｓ−Ｓ１６２Ｇ，からなる群から選択される少なくとも１
組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−
Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑアミノ酸配列（配列番号６）は、ｐＨ  ７及び１６℃での洗剤組
成物４のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して約
０．９のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号
２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体はタンパク質分解活
性を有する。本発明は、本ＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、タンパク質分
解活性を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して約０．９のＰＩ値を有
する、プロテアーゼ変異体を含み、変異体は、配列番号２又は配列番号６の配列に対して
少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％
、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上
記群から選択される少なくとも１組の酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、
配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他
箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（
クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つの
このような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
【０４６７】
以下のＢＰＮ’−ｖ３６変異体：Ａ００１Ｅ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ，
Ａ００１Ｅ−Ｇ０２４Ｅ，Ａ００１Ｅ−Ｇ１３１Ｈ−Ｇ１６９Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ００１
Ｅ−Ｑ１０３Ｈ，Ａ００１Ｅ−Ｓ０３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ００１Ｅ−Ｓ２
４８Ｎ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１６９Ａ，Ａ１１６Ｔ−Ｑ２０６Ｄ，Ｇ１６９Ａ−Ｓ２４９Ａ，
Ｋ０４３Ｙ−Ｇ１６９Ａ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１６９Ａ，Ｐ０４０Ｅ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８
Ｓ−Ｇ１３１Ｈ，Ｑ２０６Ｄ−Ｌ２５７Ｇ，Ｓ０３３Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２
４３Ｐ，Ｓ０３３Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ０３３Ｔ−Ｐ０４０Ｅ−
Ｑ１０３Ｈ−Ｎ１０９Ｇ，Ｓ０３３Ｔ−Ｑ１０３Ｈ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ，Ｓ０６３
Ｇ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ，Ｓ０６３Ｇ−Ｑ２０６Ｄ，Ｔ１５８Ｓ−Ｑ２
０６Ｄ，Ａ００１Ｅ−Ｋ０４３Ｙ，Ａ００１Ｅ−Ｎ０７６Ｄ，Ａ００１Ｅ−Ｑ２０６Ｄ，
Ｓ０３３Ｔ−Ｓ０６３Ｇ−Ｑ１０３Ｈ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｇ１６９
Ａ−Ｎ２４３Ｐ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ０６３Ｇ−Ｑ１０３Ｈ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１
３１Ｈ−Ｇ１６９Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ００１Ｅ−Ｎ０７６Ｄ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ，
Ｋ０４３Ｙ−Ｑ２０６Ｄ，及びＮ０７６Ｄ−Ｑ２０６Ｄ，からなる群から選択される少な
くとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１
０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑアミノ酸配列（配列番号６）は、ｐＨ  ７及び１６℃で
の洗剤組成物４のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３６と比
較して０．５以上０．９未満のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のア
ミノ酸位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異
体はタンパク質分解活性を有する。本発明は、本アッセイにおいて、タンパク質分解活性
を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して０．５以上０．９未満のＰＩ
値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、変異体は、配列番号２又は配列番号６の配列に
対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、
９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含
み、上記群から選択される少なくとも１組の酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位
置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。本明細
書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組
成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも
１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
【０４６８】
以下のＢＰＮ’−ｖ３６変異体：Ａ０８８Ｔ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ０２４Ｅ−Ｋ２５６Ｒ，
Ｇ０２４Ｅ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ，Ｎ１０９Ｇ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ２４３
Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ，Ｓ０３３Ｔ−Ｔ１５８Ｓ，Ｓ０６３Ｇ−Ｌ２
５７Ｇ，Ａ００１Ｅ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１２８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１６９Ａ，
Ａ０８８Ｔ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８
Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ，Ａ１１６Ｔ，Ａ１
１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ，Ａ１１６Ｔ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−
Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ１１６Ｔ−Ｓ１６２Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８
Ｓ，Ａ１２８Ｓ，Ａ１２８Ｓ−Ｇ１６９Ａ，Ａ１２８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１２８Ｓ−Ｌ２
５７Ｇ，Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ｇ０２４Ｅ，Ｇ０２４Ｅ−Ａ１２８Ｓ，Ｇ０２４Ｅ−
Ｇ１３１Ｈ，Ｇ０２４Ｅ−Ｎ１０９Ｇ，Ｇ０２４Ｅ−Ｎ２４３Ｖ，Ｇ０２４Ｅ−Ｓ０３３
Ｔ，Ｇ０２４Ｅ−Ｓ０６３Ｇ，Ｇ０２４Ｅ−Ｓ２４８Ｎ，Ｇ０２４Ｅ−Ｓ２４９Ａ，Ｇ０
２４Ｅ−Ｔ１５８Ｓ，Ｇ１３１Ｈ，Ｇ１３１Ｈ−Ｇ１６９Ａ，Ｇ１３１Ｈ−Ｋ２５６Ｒ，
Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ，Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４９Ａ，Ｇ１６９Ａ，Ｇ１６９Ａ−Ｌ２５７
Ｇ，Ｇ１６９Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｋ０４３Ｙ−Ａ０８８Ｔ，Ｋ０４３Ｙ−Ｎ１０９Ｇ，Ｋ２
５６Ｒ，Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ０６１Ｇ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ０７６Ｄ−
Ｎ１０９Ｇ，Ｎ１０９Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ，Ｎ１０９
Ｇ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ，Ｎ１０９Ｇ−Ｓ１６２Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｓ２
４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ｓ２４９Ａ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ，Ｎ２１８Ｓ，Ｎ２１８Ｓ−
Ｋ２５６Ｒ，Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ２４３Ｖ，Ｎ２４３
Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４９Ａ，Ｐ０４０Ａ−Ｎ１
０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｑ１０３Ｈ−Ｋ２５６Ｒ，
Ｑ１０３Ｈ−Ｌ２５７Ｇ，Ｑ１０３Ｈ−Ｎ１０９Ｇ，Ｓ００９Ｔ−Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１
Ｎ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｋ１４１Ｒ，Ｓ０３３Ｔ−Ａ０８８Ｔ，Ｓ０３３Ｔ−Ａ１
１６Ｔ，Ｓ０３３Ｔ−Ａ１２８Ｓ，Ｓ０３３Ｔ−Ｇ１３１Ｈ，Ｓ０３３Ｔ−Ｋ０４３Ｙ，
Ｓ０３３Ｔ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０３３Ｔ−Ｌ２５７Ｇ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ０７６Ｄ，Ｓ０３３
Ｔ−Ｎ２１８Ｓ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ０３３Ｔ−Ｑ１０３Ｈ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ０
６３Ｇ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ１６２Ｇ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ２４８Ｎ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ２４９Ａ，
Ｓ０６３Ｇ，Ｓ０６３Ｇ−Ａ０８８Ｔ，Ｓ０６３Ｇ−Ａ１１６Ｔ，Ｓ０６３Ｇ−Ａ１２８
Ｓ，Ｓ０６３Ｇ−Ｇ１３１Ｈ，Ｓ０６３Ｇ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０６３Ｇ−Ｎ１０９Ｇ，Ｓ０
６３Ｇ−Ｎ２１８Ｓ，Ｓ０６３Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ０６３Ｇ−Ｓ２４８Ｎ，Ｓ０６３Ｇ−
Ｓ２４９Ａ，Ｓ０６３Ｇ−Ｔ１５８Ｓ，Ｓ１６２Ｇ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ１６２Ｇ−Ｎ２１８
Ｓ，Ｓ１６２Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ１６２Ｇ−Ｓ２４８Ｎ，Ｓ１６２Ｇ−Ｓ２４９Ａ，Ｓ２
４８Ｎ，Ｓ２４９Ａ，Ｓ２４９Ａ−Ｌ２５７Ｇ，Ｔ１５８Ｓ，Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，
及びＴ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換
を含むＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２
１７Ｑアミノ酸配列（配列番号６）は、ｐＨ  ８及び１６℃での洗剤組成物４の卵微小標
本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して１．０超、少なくとも１
．１、少なくとも１．２、少なくとも１．３、少なくとも１．４、少なくとも１．５、少
なくとも１．６、少なくとも１．７、少なくとも１．８、少なくとも１．９、少なくとも
２、１．０超〜約１０、１．０超〜約８、又は１．０超〜約５のＰＩ値を有するものと判
定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列と対応させることにより
番号付けされる。このような変異体は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’、ＢＰＮ’−ｖ３
、及びＢＰＮ’−ｖ３６と比較して向上したタンパク質分解活性を有し、ＢＰＮ’、ＢＰ
Ｎ’−ｖ３及びＢＰＮ’−ｖ３６よりもＰＩ値が大きい。本発明は、本卵微小標本クリー
ニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活
性を有する、ＢＰＮ’、ＢＰＮ’−ｖ３及びＢＰＮ’−ｖ３６と比較して向上したタンパ
ク質分解活性を有する、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して１．０超〜５のＰＩ値を有する、並び
に／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して１．０超〜約５のＰＩ値を有する、プロテア
ーゼ変異体を含み、この変異体は配列番号２又は配列番号６の配列に対して少なくとも６
０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９
６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択
される少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番
号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所に
より詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリー
ニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのよ
うな変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
【０４６９】
以下のＢＰＮ’−ｖ３６変異体：Ａ００１Ｅ，Ａ００１Ｅ−Ａ１１６Ｔ，Ａ００１Ｅ−
Ｇ１３１Ｈ，Ａ００１Ｅ−Ｇ１６９Ａ，Ａ００１Ｅ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ００１Ｅ−Ｎ１０９
Ｇ，Ａ００１Ｅ−Ｓ０３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ００１Ｅ−Ｓ０６３Ｇ，Ａ０
０１Ｅ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ００１Ｅ−Ｓ２４９Ａ，Ａ００１Ｅ−Ｔ１５８Ｓ，Ａ０８８Ｔ，
Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ，Ａ０８８Ｔ−Ｑ１０３Ｈ，Ａ０８８
Ｔ−Ｑ２０６Ｄ，Ａ０８８Ｔ−Ｓ１６２Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｓ２４９Ａ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１
６９Ａ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４９Ａ，
Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ，Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ１２８Ｓ−Ｓ１６２Ｇ，Ａ１２８
Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１２８Ｓ−Ｓ２４９Ａ，Ａ１２８Ｓ−Ｔ１５８Ｓ，Ｇ０２４Ｅ−Ａ０
８８Ｔ，Ｇ０２４Ｅ−Ａ１１６Ｔ，Ｇ０２４Ｅ−Ｋ０４３Ｙ，Ｇ０２４Ｅ−Ｎ０７６Ｄ，
Ｇ０２４Ｅ−Ｎ２１８Ｓ，Ｇ０２４Ｅ−Ｑ１０３Ｈ，Ｇ０２４Ｅ−Ｓ１６２Ｇ，Ｇ１３１
Ｈ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１
３１Ｈ−Ｓ１６２Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ，Ｇ１６９Ａ−
Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１６９Ａ−Ｎ２１８Ｓ，Ｇ１６９Ａ−Ｑ２０６Ｄ，Ｇ１６９Ａ−Ｓ２４８
Ｎ，Ｇ１６９Ａ−Ｓ２４９Ａ，Ｋ０４３Ｙ，Ｋ０４３Ｙ−Ａ１１６Ｔ，Ｋ０４３Ｙ−Ａ１
２８Ｓ，Ｋ０４３Ｙ−Ｇ１６９Ａ，Ｋ０４３Ｙ−Ｋ２５６Ｒ，Ｋ０４３Ｙ−Ｌ２５７Ｇ，
Ｋ０４３Ｙ−Ｎ０７６Ｄ，Ｋ０４３Ｙ−Ｎ２１８Ｓ，Ｋ０４３Ｙ−Ｎ２４３Ｖ，Ｋ０４３
Ｙ−Ｓ０６３Ｇ，Ｋ０４３Ｙ−Ｓ２４８Ｎ，Ｋ０４３Ｙ−Ｓ２４９Ａ，Ｋ０４３Ｙ−Ｔ１
５８Ｓ，Ｌ２５７Ｇ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ０６１Ｐ−
Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ０６１Ｓ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２６０Ｐ，Ｎ０６１
Ｓ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｓ２６０Ｐ，Ｎ０
６１Ｓ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２６０Ｐ，Ｎ０６１Ｓ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，
Ｎ０７６Ｄ，Ｎ０７６Ｄ−Ａ０８８Ｔ，Ｎ０７６Ｄ−Ａ１１６Ｔ，Ｎ０７６Ｄ−Ｇ１３１
Ｈ，Ｎ０７６Ｄ−Ｇ１６９Ａ，Ｎ０７６Ｄ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ０７６Ｄ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ０
７６Ｄ−Ｎ２１８Ｓ，Ｎ０７６Ｄ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ０７６Ｄ−Ｑ１０３Ｈ，Ｎ０７６Ｄ−
Ｓ２４９Ａ，Ｎ０７６Ｄ−Ｔ１５８Ｓ，Ｎ１０９Ａ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６
Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１
０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−
Ｓ２４８Ａ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ａ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９
Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２
４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−
Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ１６２Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６
Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１６９Ａ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｐ−Ｓ２４８Ａ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１
０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ａ−Ｋ２５６Ｒ，
Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６
Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２
５６Ｒ，Ｎ１０９Ｓ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，
Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４９Ａ，Ｑ１０３Ｈ，Ｑ１０３Ｈ−Ａ１１６Ｔ，Ｑ１０３Ｈ−Ａ１２８
Ｓ，Ｑ１０３Ｈ−Ｇ１３１Ｈ，Ｑ１０３Ｈ−Ｇ１６９Ａ，Ｑ１０３Ｈ−Ｎ２１８Ｓ，Ｑ１
０３Ｈ−Ｎ２４３Ｖ，Ｑ１０３Ｈ−Ｓ１６２Ｇ，Ｑ１０３Ｈ−Ｓ２４８Ｎ，Ｑ１０３Ｈ−
Ｓ２４９Ａ，Ｑ１０３Ｈ−Ｔ１５８Ｓ，Ｑ２０６Ｄ，Ｑ２０６Ｄ−Ｌ２５７Ｇ，Ｑ２０６
Ｄ−Ｎ２１８Ｓ，Ｓ００９Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｋ１４１Ｒ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ００９Ｔ−Ｎ１
０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｋ１４１Ｒ，Ｓ００９Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｋ１４１Ｒ−
Ｎ２４３Ｖ，Ｓ００９Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｋ１４１Ｒ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８
Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ００９Ｔ−Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ａ１２８Ｓ−Ｋ１４１Ｒ−Ｎ２
４３Ｖ，Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−
Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ，Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３
Ｖ，Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２
５６Ｒ，Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ｓ０３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−
Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０３３Ｔ，Ｓ０３３Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３
Ｖ，Ｓ０３３Ｔ−Ｇ１６９Ａ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｐ−Ｓ２
４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−
Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０３３Ｔ−Ｑ１０３Ｈ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ，Ｓ０３３Ｔ−Ｑ２０６
Ｄ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ０６３Ｇ−Ｑ１０３Ｈ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｇ１
６９Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ０６３Ｇ−Ｇ１６９Ａ，Ｓ０６３Ｇ−Ｎ０７６Ｄ，Ｓ０６３Ｇ−
Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ，Ｓ０６３Ｇ−Ｑ１０３Ｈ，Ｓ０６３Ｇ−Ｓ１６２
Ｇ，Ｓ１６２Ｇ，Ｓ１６２Ｇ−Ｇ１６９Ａ，Ｓ１６２Ｇ−Ｌ２５７Ｇ，Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２
５６Ｒ，Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｓ２４８Ｎ−Ｓ２４９Ａ，Ｓ２４９Ａ−Ｋ２５６Ｒ，
Ｔ１５８Ｓ−Ｇ１６９Ａ，Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ｔ１５８
Ｓ−Ｓ１６２Ｇ，Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，及びＴ１５８Ｓ−Ｓ２４９Ａ，からなる群か
ら選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−
Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑアミノ酸配列（配列番号６）は、ｐＨ
８及び１６℃での洗剤組成物４の卵微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’
−ｖ３６と比較して約１．０のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のア
ミノ酸位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異
体は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’プロテアーゼ（配列番号２）と比較して向上したタ
ンパク質分解活性を有し、ＢＰＮ’よりもＰＩ値が大きい。本発明は、本卵微小標本クリ
ーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解
活性を有する、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して約１．０のＰＩ値を有する、並びに、ＢＰＮ’
−ｖ３６と比較して１．０のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は
、配列番号２又は配列番号６の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％
、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９
％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくとも１組のアミノ
酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対
応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、
少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、
これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニン
グ方法も含まれる。
【０４７０】
以下のＢＰＮ’−ｖ３６変異体：Ａ００１Ｅ−Ａ０８８Ｔ，Ａ００１Ｅ−Ａ１２８Ｓ，
Ａ００１Ｅ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ００１Ｅ−Ｇ０２４Ｅ，Ａ００１
Ｅ−Ｇ０２４Ｅ−Ｓ２０４Ｅ−Ｑ２０６Ｄ，Ａ００１Ｅ−Ｇ１３１Ｈ−Ｇ１６９Ａ−Ｎ２
４３Ｖ，Ａ００１Ｅ−Ｋ０４３Ｙ，Ａ００１Ｅ−Ｎ０７６Ｄ，Ａ００１Ｅ−Ｎ０７６Ｄ−
Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ，Ａ００１Ｅ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ００１Ｅ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ００１
Ｅ−Ｑ１０３Ｈ，Ａ００１Ｅ−Ｑ２０６Ｄ，Ａ００１Ｅ−Ｓ０３３Ｔ，Ａ００１Ｅ−Ｓ０
３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ００１Ｅ−Ｓ１６２Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｑ２０６Ｄ，
Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１２８Ｓ−Ｑ２０６Ｄ，Ｇ０２４
Ｅ−Ｑ２０６Ｄ，Ｇ１３１Ｈ−Ｑ２０６Ｄ，Ｋ０４３Ｙ−Ｇ１３１Ｈ，Ｋ０４３Ｙ−Ｑ１
０３Ｈ，Ｋ０４３Ｙ−Ｑ２０６Ｄ，Ｋ０４３Ｙ−Ｓ１６２Ｇ，Ｎ０６１Ｓ−Ｎ１０９Ｇ−
Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２６０Ｐ，Ｎ０７６Ｄ−Ａ１２８Ｓ，Ｎ０７６Ｄ−Ｑ２０６
Ｄ，Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１６２Ｇ，Ｎ０７６Ｄ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２
４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−
Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｐ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｑ２０６
Ｄ，Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｐ０４０Ｅ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１
３１Ｈ，Ｑ１０３Ｈ−Ｑ２０６Ｄ，Ｑ２０６Ｄ−Ｋ２５６Ｒ，Ｑ２０６Ｄ−Ｎ２４３Ｖ，
Ｑ２０６Ｄ−Ｓ２４８Ｎ，Ｑ２０６Ｄ−Ｓ２４９Ａ，Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ｎ０６１
Ｓ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２６０Ｐ，Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ｎ０６１Ｓ−Ｎ１
０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２６０Ｐ，Ｓ０３３Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｐ，
Ｓ０３３Ｔ−Ｎ０７６Ｄ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ０７６Ｄ−Ｎ１０９
Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０３３Ｔ−Ｐ０
４０Ｅ−Ｑ１０３Ｈ−Ｎ１０９Ｇ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ０６３Ｇ−Ｑ１０３Ｈ−Ｎ１０９Ｑ−
Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｇ１６９Ａ−Ｎ２４３Ｐ，Ｓ０６３Ｇ−Ｑ２０６Ｄ，Ｓ１６２
Ｇ−Ｑ２０６Ｄ，及びＴ１５８Ｓ−Ｑ２０６Ｄ，からなる群から選択される少なくとも１
組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−
Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑアミノ酸配列（配列番号６）は、ｐＨ  ８及び１６℃での洗剤組
成物４の卵微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して０．５
以上０．９未満のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は
配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体はタンパク
質分解活性を有する。本発明は、本アッセイにおいて、タンパク質分解活性を有する、並
びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して０．５以上０．９未満のＰＩ値を有する、
プロテアーゼ変異体を含み、変異体は、配列番号２又は配列番号６の配列に対して少なく
とも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５
％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群か
ら選択される少なくとも１組の酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番
号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所に
より詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリー
ニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのよ
うな変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
【０４７１】
以下のＢＰＮ’−ｖ３６変異体：Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ｋ２５６Ｒ，Ｌ２５７Ｇ，
Ｓ０３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ，Ｓ１６２Ｇ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ１６２Ｇ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ０２４
Ｅ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ０２４Ｅ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ０２４Ｅ−Ｓ０３３Ｔ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１
１６Ｔ，Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ｓ０３３Ｔ−Ａ０８８Ｔ，Ｓ０３３Ｔ−Ａ１１６Ｔ，
Ｓ０３３Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ０３３Ｔ−Ｑ１０３Ｈ，Ｓ１６２Ｇ−Ｎ２１８Ｓ，Ｓ１６２
Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ｔ１５８Ｓ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０
８８Ｔ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１６９Ａ，Ａ０８８Ｔ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｌ２５７Ｇ，
Ａ０８８Ｔ−Ｓ１６２Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ，Ａ１１６Ｔ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６
Ｔ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ１２８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１２８Ｓ−Ｎ２
１８Ｓ，Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ１２８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ｇ０２４Ｅ−Ａ１１６Ｔ，
Ｇ０２４Ｅ−Ａ１２８Ｓ，Ｇ０２４Ｅ−Ｇ１３１Ｈ，Ｇ０２４Ｅ−Ｎ２４３Ｖ，Ｇ０２４
Ｅ−Ｓ２４８Ｎ，Ｇ０２４Ｅ−Ｓ２４９Ａ，Ｇ０２４Ｅ−Ｔ１５８Ｓ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２
４３Ｖ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ，Ｇ１６９Ａ−Ｎ２１８Ｓ，Ｇ１６９Ａ−Ｎ２４３Ｖ，
Ｇ１６９Ａ−Ｓ２４８Ｎ，Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ，Ｎ１０９
Ｇ−Ｇ１３１Ｈ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ｓ２
４９Ａ，Ｎ２１８Ｓ，Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ２１８Ｓ−
Ｓ２４９Ａ，Ｎ２４３Ｖ，Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ２４３
Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｑ１０３Ｈ−Ｎ１０９Ｇ，Ｑ１０３Ｈ−Ｎ２１８Ｓ，Ｓ０３３Ｔ−Ａ１
２８Ｓ，Ｓ０３３Ｔ−Ｌ２５７Ｇ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ２１８Ｓ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ１６２Ｇ，
Ｓ０３３Ｔ−Ｓ２４８Ｎ，Ｓ０３３Ｔ−Ｔ１５８Ｓ，Ｓ０６３Ｇ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０６３
Ｇ−Ｌ２５７Ｇ，Ｓ１６２Ｇ，Ｓ１６２Ｇ−Ｇ１６９Ａ，Ｓ１６２Ｇ−Ｓ２４８Ｎ，Ｓ２
４８Ｎ，Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｓ２４９Ａ，Ｔ１５８Ｓ−
Ｓ１６２Ｇ，及びＴ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，からなる群から選択される少なくとも１組の
アミノ酸置換を含むＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１
２８Ａ−Ｙ２１７Ｑアミノ酸配列（配列番号６）は、ｐＨ  ８及び１６℃での洗剤組成物
４の植物微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して１．０超
、少なくとも１．１、少なくとも１．２、少なくとも１．３、少なくとも１．４、少なく
とも１．５、少なくとも１．６、少なくとも１．７、少なくとも１．８、少なくとも１．
９、少なくとも２、１．０超〜約１０、１．０超〜約８、又は１．０超〜約５のＰＩ値を
有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列と対応さ
せることにより番号付けされる。このような変異体は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’、
ＢＰＮ’−ｖ３、及びＢＰＮ’−ｖ３６と比較して向上したタンパク質分解活性を有し、
ＢＰＮ’、ＢＰＮ’−ｖ３及びＢＰＮ’−ｖ３６よりもＰＩ値が大きい。本発明は、本Ｂ
ＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上し
たタンパク質分解活性を有する、ＢＰＮ’、ＢＰＮ’−ｖ３及びＢＰＮ’−ｖ３６と比較
して向上したタンパク質分解活性を有する、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して１．０超〜約５の
ＰＩ値を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して１．０超〜約５のＰＩ
値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は配列番号２又は配列番号６の配列
に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％
、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を
含み、上記群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体のア
ミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる
。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体
を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少
なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
【０４７２】
以下のＢＰＮ’−ｖ３６変異体：Ａ００１Ｅ−Ａ０８８Ｔ，Ａ００１Ｅ−Ａ１１６Ｔ，
Ａ０８８Ｔ−Ａ１２８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｑ１０３Ｈ，Ａ０８８
Ｔ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｓ２４９Ａ，Ａ１１６Ｔ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１６９Ａ，Ａ１
１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ１１６Ｔ−Ｓ１６２Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４９Ａ，Ａ１１６Ｔ−
Ｔ１５８Ｓ，Ａ１２８Ｓ−Ｇ１６９Ａ，Ａ１２８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１２８Ｓ−Ｓ１６２
Ｇ，Ａ１２８Ｓ−Ｓ２４９Ａ，Ａ１２８Ｓ−Ｔ１５８Ｓ，Ｇ０２４Ｅ−Ａ０８８Ｔ，Ｇ０
２４Ｅ−Ｋ０４３Ｙ，Ｇ０２４Ｅ−Ｎ２１８Ｓ，Ｇ０２４Ｅ−Ｑ１０３Ｈ，Ｇ０２４Ｅ−
Ｓ０６３Ｇ，Ｇ０２４Ｅ−Ｓ１６２Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｇ１６９Ａ，Ｇ１３１Ｈ−Ｋ２５６
Ｒ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ，Ｇ１３１Ｈ−Ｓ１６２Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ，Ｇ１
３１Ｈ−Ｓ２４９Ａ，Ｇ１６９Ａ，Ｇ１６９Ａ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１６９Ａ−Ｓ２４９Ａ，
Ｎ０７６Ｄ，Ｎ０７６Ｄ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ０７６Ｄ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１６２
Ｇ，Ｎ０７６Ｄ−Ｓ２４９Ａ，Ｎ１０９Ｇ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１
０９Ｇ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４９Ａ，Ｑ１０３Ｈ−Ａ１１６Ｔ，Ｑ１０３Ｈ−
Ｇ１６９Ａ，Ｑ１０３Ｈ−Ｋ２５６Ｒ，Ｑ１０３Ｈ−Ｌ２５７Ｇ，Ｑ１０３Ｈ−Ｎ２４３
Ｖ，Ｑ１０３Ｈ−Ｓ１６２Ｇ，Ｓ０３３Ｔ−Ｇ１３１Ｈ，Ｓ０３３Ｔ−Ｇ１６９Ａ，Ｓ０
３３Ｔ−Ｋ０４３Ｙ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ０７６Ｄ，Ｓ０３３Ｔ−Ｑ２０６Ｄ，Ｓ０６３Ｇ，
Ｓ０６３Ｇ−Ａ１１６Ｔ，Ｓ０６３Ｇ−Ａ１２８Ｓ，Ｓ０６３Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ０６３
Ｇ−Ｓ１６２Ｇ，Ｓ０６３Ｇ−Ｓ２４８Ｎ，Ｓ０６３Ｇ−Ｓ２４９Ａ，Ｓ０６３Ｇ−Ｔ１
５８Ｓ，Ｓ２４９Ａ−Ｌ２５７Ｇ，Ｔ１５８Ｓ−Ｇ１６９Ａ，及びＴ１５８Ｓ−Ｋ２５６
Ｒ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’−Ｓ０２４
Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑアミノ酸配列（配列
番号６）は、ｐＨ  ８及び１６℃での洗剤組成物４の植物微小標本クリーニングアッセイ
において、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して約１．０のＰＩ値を有するものと判定されたが、
ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされ
る。このような変異体は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上
したタンパク質分解活性を有し、ＢＰＮ’よりもＰＩ値が大きい。本発明は、本ＢＭＩ微
小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタン
パク質分解活性を有する、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して１．０のＰＩ値を有する、並びに、
ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して約１．０のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、こ
の変異体は、配列番号２又は配列番号６の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０
％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８
％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくとも１
組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ
酸位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載され
るような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げ
られるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いる
クリーニング方法も含まれる。
【０４７３】
以下のＢＰＮ’−ｖ３６変異体：Ａ００１Ｅ−Ｇ１６９Ａ，Ａ００１Ｅ−Ｋ２５６Ｒ，
Ａ００１Ｅ−Ｎ１０９Ｇ，Ａ００１Ｅ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ，Ａ０８８
Ｔ−Ｇ１３１Ｈ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ１１６Ｔ−Ａ１
２８Ｓ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ，Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１２８Ｓ，Ａ１２８Ｓ−
Ｇ１３１Ｈ，Ｇ０２４Ｅ，Ｇ０２４Ｅ−Ｎ１０９Ｇ，Ｇ１３１Ｈ，Ｇ１３１Ｈ−Ｌ２５７
Ｇ，Ｇ１６９Ａ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１６９Ａ−Ｑ２０６Ｄ，Ｋ０４３Ｙ，Ｋ０４３Ｙ−Ａ０
８８Ｔ，Ｋ０４３Ｙ−Ｌ２５７Ｇ，Ｋ０４３Ｙ−Ｎ１０９Ｇ，Ｎ０７６Ｄ−Ａ０８８Ｔ，
Ｎ０７６Ｄ−Ｇ１３１Ｈ，Ｎ０７６Ｄ−Ｇ１６９Ａ，Ｎ０７６Ｄ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ０７６
Ｄ−Ｔ１５８Ｓ，Ｎ１０９Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｓ１６２Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ，Ｎ２
１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ｑ１０３Ｈ−Ａ１２８Ｓ，Ｑ１０３Ｈ−Ｓ２４８Ｎ，Ｑ１０３Ｈ−
Ｓ２４９Ａ，Ｑ１０３Ｈ−Ｔ１５８Ｓ，Ｑ２０６Ｄ−Ｋ２５６Ｒ，Ｑ２０６Ｄ−Ｌ２５７
Ｇ，Ｑ２０６Ｄ−Ｎ２１８Ｓ，Ｑ２０６Ｄ−Ｎ２４３Ｖ，Ｑ２０６Ｄ−Ｓ２４８Ｎ，Ｓ０
３３Ｔ，Ｓ０３３Ｔ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ０６３Ｇ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ２４９Ａ，
Ｓ０６３Ｇ−Ａ０８８Ｔ，Ｓ０６３Ｇ−Ｇ１３１Ｈ，Ｓ０６３Ｇ−Ｇ１６９Ａ，Ｓ０６３
Ｇ−Ｎ１０９Ｇ，Ｓ１６２Ｇ−Ｑ２０６Ｄ，Ｓ１６２Ｇ−Ｓ２４９Ａ，Ｓ２４８Ｎ−Ｓ２
４９Ａ，Ｓ２４９Ａ−Ｋ２５６Ｒ，Ｔ１５８Ｓ−Ｑ２０６Ｄ，Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４９Ａ，
Ａ００１Ｅ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ００１Ｅ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ００１Ｅ−Ｑ１０３Ｈ，Ａ００１
Ｅ−Ｓ０６３Ｇ，Ａ００１Ｅ−Ｓ１６２Ｇ，Ａ００１Ｅ−Ｔ１５８Ｓ，Ｇ０２４Ｅ−Ｎ０
７６Ｄ，Ｇ１３１Ｈ−Ｑ２０６Ｄ，Ｋ０４３Ｙ−Ａ１１６Ｔ，Ｋ０４３Ｙ−Ｇ１６９Ａ，
Ｋ０４３Ｙ−Ｋ２５６Ｒ，Ｋ０４３Ｙ−Ｎ０７６Ｄ，Ｋ０４３Ｙ−Ｓ０６３Ｇ，Ｋ０４３
Ｙ−Ｓ１６２Ｇ，Ｋ０４３Ｙ−Ｓ２４８Ｎ，Ｋ０４３Ｙ−Ｓ２４９Ａ，Ｋ０４３Ｙ−Ｔ１
５８Ｓ，Ｎ０７６Ｄ−Ａ１１６Ｔ，Ｎ０７６Ｄ−Ａ１２８Ｓ，Ｎ０７６Ｄ−Ｓ２４８Ｎ，
Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１６９Ａ，Ｑ１０３Ｈ，Ｑ１０３Ｈ−Ｇ１３１Ｈ，Ｑ２０６Ｄ−Ｓ２４９
Ａ，Ｓ０６３Ｇ−Ｎ０７６Ｄ，Ｓ０６３Ｇ−Ｎ２１８Ｓ，Ｓ０６３Ｇ−Ｑ１０３Ｈ，Ａ０
０１Ｅ−Ａ１２８Ｓ，Ａ００１Ｅ−Ｇ０２４Ｅ，Ａ００１Ｅ−Ｇ１３１Ｈ，Ａ００１Ｅ−
Ｎ０７６Ｄ，Ａ００１Ｅ−Ｑ２０６Ｄ，Ａ００１Ｅ−Ｓ０３３Ｔ，Ａ００１Ｅ−Ｓ２４８
Ｎ，Ａ００１Ｅ−Ｓ２４９Ａ，Ａ０８８Ｔ−Ｑ２０６Ｄ，Ａ１１６Ｔ−Ｑ２０６Ｄ，Ａ１
２８Ｓ−Ｑ２０６Ｄ，Ｇ０２４Ｅ−Ｑ２０６Ｄ，Ｋ０４３Ｙ−Ａ１２８Ｓ，Ｋ０４３Ｙ−
Ｇ１３１Ｈ，Ｋ０４３Ｙ−Ｎ２１８Ｓ，Ｋ０４３Ｙ−Ｑ１０３Ｈ，Ｎ０７６Ｄ−Ｎ１０９
Ｇ，Ｎ０７６Ｄ−Ｎ２１８Ｓ，Ｎ０７６Ｄ−Ｑ１０３Ｈ，Ｎ１０９Ｇ−Ｑ２０６Ｄ，Ｑ１
０３Ｈ−Ｑ２０６Ｄ，Ｑ２０６Ｄ，Ａ００１Ｅ，Ａ００１Ｅ−Ｋ０４３Ｙ，Ｋ０４３Ｙ−
Ｎ２４３Ｖ，及びＳ０６３Ｇ−Ｑ２０６Ｄ，Ｎ０７６Ｄ−Ｑ２０６Ｄ，からなる群から選
択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０
７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑアミノ酸配列（配列番号６）は、ｐＨ  ８
及び１６℃での洗剤組成物４の植物微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−
ｖ３６と比較して０．５以上０．９未満のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、
変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。この
ような変異体はタンパク質分解活性を有する。本発明は、本植物微小標本クリーニングア
ッセイにおいて、タンパク質分解活性を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３６と
比較して０．５以上０．９未満のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、変異体は
、配列番号２又は配列番号６の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％
、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９
％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくとも１組の酸置換
を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させ
ることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なく
ともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに
限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法
も含まれる。
【０４７４】
以下のＢＰＮ’−ｖ３６変異体：Ｓ０３３Ｔ−Ｎ０７６Ｄ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，
Ａ００１Ｅ−Ｓ０３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ２１８Ｓ，Ｓ０３３
Ｔ−Ｓ０６３Ｇ−Ｑ１０３Ｈ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｇ１６９Ａ−Ｎ２
４３Ｖ，Ａ１２８Ｓ−Ｇ１６９Ａ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ０６３Ｇ−Ｑ１０３Ｈ−Ｎ１０９Ｑ−
Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｇ１６９Ａ−Ｎ２４３Ｐ，Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ｓ０３３
Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０３３Ｔ−Ａ１
２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｐ，Ｐ０４０Ｅ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ，
Ｓ０３３Ｔ−Ａ１２８Ｓ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８
Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１６９Ａ，Ｓ０６３Ｇ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１
３１Ｈ，Ｇ１６９Ａ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−
Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０３３Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８
Ｓ，Ａ００１Ｅ−Ｇ１６９Ａ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１６９Ａ，Ｇ１６９Ａ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１
０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｐ−Ｓ２４８Ｎ−
Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１６９Ａ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ０７６Ｄ−Ｇ１６９Ａ，Ａ００１Ｅ−Ｇ１３１
Ｈ−Ｇ１６９Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｇ１６９Ａ−Ｓ２４９Ａ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ，Ｇ１
６９Ａ−Ｓ２４８Ｎ，Ｋ０４３Ｙ−Ｇ１６９Ａ，Ｋ０４３Ｙ−Ｎ２１８Ｓ，Ｎ２１８Ｓ−
Ｌ２５７Ｇ，Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ０６３Ｇ−Ｇ１６９Ａ，Ａ００１Ｅ−Ａ１２８
Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ００１Ｅ−Ｓ０３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０
８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ，Ｇ０２４Ｅ−Ｎ２１８Ｓ，Ｇ０２４Ｅ−Ｓ０３３Ｔ，Ｇ１６９Ａ−
Ｑ２０６Ｄ，Ｎ０７６Ｄ−Ｎ２１８Ｓ，Ｓ０３３Ｔ−Ｌ２５７Ｇ，Ｓ１６２Ｇ−Ｇ１６９
Ａ，Ａ００１Ｅ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ，Ｇ１６９Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ２
１８Ｓ，Ｐ０４０Ａ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，
Ｓ０３３Ｔ−Ｎ０７６Ｄ，Ａ００１Ｅ−Ｓ０３３Ｔ，Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ，Ｎ２１８
Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ，Ｓ０３３Ｔ−Ｋ０
４３Ｙ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ０３３Ｔ−Ｑ２０６Ｄ，Ｓ０６３Ｇ−Ｎ２１８Ｓ，
Ｓ１６２Ｇ−Ｎ２１８Ｓ，Ｔ１５８Ｓ−Ｇ１６９Ａ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１６９Ａ，Ｇ１３１
Ｈ−Ｇ１６９Ａ，Ｎ０６１Ｓ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２６０Ｐ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１
２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ａ，
Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ａ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８
Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０
０９Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｋ１４１Ｒ，Ｓ００９Ｔ−Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−
Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｋ１４１Ｒ，Ｓ０３３Ｔ−Ａ０８８Ｔ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ０６３
Ｇ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ１６２Ｇ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ００１Ｅ−Ｎ０７６Ｄ−Ｎ１
０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，
Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ００９Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８
Ｓ−Ｋ１４１Ｒ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ｎ０６１Ｓ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１
２８Ｓ−Ｓ２６０Ｐ，Ｓ０３３Ｔ−Ａ１１６Ｔ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ２４８Ｎ，Ｓ０３３Ｔ−
Ｓ２４９Ａ，Ｓ０３３Ｔ−Ｔ１５８Ｓ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ，Ｎ１０９Ａ−Ａ１２８
Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ１
６２Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｔ１５８Ｓ−
Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４９Ａ，Ｑ２０６Ｄ−Ｎ２１８
Ｓ，Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０
２１Ｎ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０３３Ｔ−
Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ，Ｎ０６１Ｓ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３
Ｖ−Ｓ２６０Ｐ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｓ００９Ｔ−Ｎ１
０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｋ１４１Ｒ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ０２４Ｅ−
Ａ１２８Ｓ，Ｎ０６１Ｓ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６
Ｒ−Ｓ２６０Ｐ，Ｎ１０９Ｓ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０３３Ｔ，Ｓ０
３３Ｔ−Ｇ１３１Ｈ，Ａ００１Ｅ−Ａ１２８Ｓ，Ａ１２８Ｓ，Ａ１２８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，
Ａ１２８Ｓ−Ｑ２０６Ｄ，Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ００９
Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｋ１４１Ｒ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ００９Ｔ−Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ａ１
２８Ｓ−Ｋ１４１Ｒ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１２８Ｓ，Ａ１２８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，
Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ０６１Ｓ−Ａ１２８
Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２６０Ｐ，Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ１
２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１２８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１２８Ｓ−
Ｓ２４９Ａ，Ｎ０７６Ｄ−Ａ１２８Ｓ，Ｓ０６３Ｇ−Ａ１２８Ｓ，Ａ１２８Ｓ−Ｓ１６２
Ｇ，Ａ１２８Ｓ−Ｔ１５８Ｓ，Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ｎ０６１Ｓ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２
４３Ｖ−Ｓ２６０Ｐ，Ｓ０３３Ｔ−Ｑ１０３Ｈ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ，Ｎ０６１Ｓ−
Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ｋ０４３Ｙ−Ａ１２８Ｓ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１
Ｈ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ００１Ｅ−Ｇ０２４Ｅ−Ｓ２０４Ｅ−Ｑ２
０６Ｄ，Ａ００１Ｅ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ，Ｇ０２４Ｅ−Ｎ１０９Ｇ，
Ｋ０４３Ｙ−Ｎ１０９Ｇ，Ｎ０６１Ｇ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ０７６Ｄ−Ｎ１０９
Ｇ，Ｎ１０９Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ，Ｎ１０９Ｇ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２
４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ａ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−
Ｑ２０６Ｄ，Ｓ０６３Ｇ−Ｎ１０９Ｇ，Ａ００１Ｅ−Ａ１１６Ｔ，Ａ００１Ｅ−Ｎ１０９
Ｇ，Ａ００１Ｅ−Ｑ２０６Ｄ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ１
１６Ｔ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ０２４Ｅ−Ａ１１６Ｔ，Ｇ０２４Ｅ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ０２４Ｅ−
Ｎ２４３Ｖ，Ｇ０２４Ｅ−Ｑ２０６Ｄ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３
Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ｓ１６２Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２
５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｓ２４９Ａ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ，Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，
Ａ００１Ｅ−Ａ０８８Ｔ，Ａ００１Ｅ−Ｇ０２４Ｅ，Ａ００１Ｅ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ００１
Ｅ−Ｎ０７６Ｄ，Ａ００１Ｅ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ，Ａ０８８Ｔ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０
８８Ｔ−Ｑ２０６Ｄ，Ａ１１６Ｔ，Ａ１１６Ｔ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，
Ｇ０２４Ｅ−Ａ０８８Ｔ，Ｇ０２４Ｅ−Ｋ０４３Ｙ，Ｇ０２４Ｅ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ０２４
Ｅ−Ｎ０７６Ｄ，Ｇ０２４Ｅ−Ｓ１６２Ｇ，Ｇ０２４Ｅ−Ｓ２４８Ｎ，Ｋ０４３Ｙ−Ａ０
８８Ｔ，Ｋ０４３Ｙ−Ａ１１６Ｔ，Ｋ０４３Ｙ−Ｌ２５７Ｇ，Ｋ０４３Ｙ−Ｎ２４３Ｖ，
Ｋ０４３Ｙ−Ｑ２０６Ｄ，Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ０７６Ｄ−Ａ１１６Ｔ，Ｎ０７６
Ｄ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ０７６Ｄ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ０７６Ｄ−Ｑ２０６Ｄ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２
４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ２４３Ｖ−
Ｋ２５６Ｒ，Ｑ２０６Ｄ，Ｑ２０６Ｄ−Ｌ２５７Ｇ，Ｑ２０６Ｄ−Ｎ２４３Ｖ，Ｑ２０６
Ｄ−Ｓ２４８Ｎ，Ｓ０６３Ｇ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０６３Ｇ−Ｌ２５７Ｇ，Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２
５７Ｇ，Ａ００１Ｅ，Ａ００１Ｅ−Ｋ０４３Ｙ，Ａ００１Ｅ−Ｓ１６２Ｇ，Ａ００１Ｅ−
Ｓ２４８Ｎ，Ａ００１Ｅ−Ｓ２４９Ａ，Ａ００１Ｅ−Ｔ１５８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｋ２５６
Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｓ１６２Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｓ２４９Ａ，Ａ１
１６Ｔ−Ｑ２０６Ｄ，Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４９Ａ，Ｇ０２４Ｅ，
Ｇ０２４Ｅ−Ｇ１３１Ｈ，Ｇ０２４Ｅ−Ｓ２４９Ａ，Ｇ０２４Ｅ−Ｔ１５８Ｓ，Ｇ１３１
Ｈ，Ｇ１３１Ｈ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１３１Ｈ−Ｌ２５７Ｇ，Ｋ０４３Ｙ−Ｋ２５６Ｒ，Ｋ０
４３Ｙ−Ｎ０７６Ｄ，Ｋ２５６Ｒ，Ｌ２５７Ｇ，Ｎ０７６Ｄ−Ａ０８８Ｔ，Ｎ０７６Ｄ−
Ｋ２５６Ｒ，Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１６２Ｇ，Ｎ０７６Ｄ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ０７６Ｄ−Ｓ２４９
Ａ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｐ−Ｓ２４８Ａ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｐ−Ｓ２
４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ２４３Ｖ，Ｑ２０６Ｄ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０３３Ｔ−Ｐ０４０Ｅ−
Ｑ１０３Ｈ−Ｎ１０９Ｇ，Ｓ０６３Ｇ，Ｓ０６３Ｇ−Ａ１１６Ｔ，Ｓ０６３Ｇ−Ｑ２０６
Ｄ，Ｓ１６２Ｇ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ１６２Ｇ−Ｌ２５７Ｇ，Ｓ１６２Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ１
６２Ｇ−Ｑ２０６Ｄ，Ｓ１６２Ｇ−Ｓ２４８Ｎ，Ｓ２４８Ｎ，Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，
Ｓ２４９Ａ，Ｓ２４９Ａ−Ｌ２５７Ｇ，Ｔ１５８Ｓ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，及びＴ１
５８Ｓ−Ｑ２０６Ｄ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢ
ＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑア
ミノ酸配列（配列番号６）は、ＡＡＰＦタンパク質分解アッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ
３６と比較して１．０超、少なくとも１．１、少なくとも１．２、少なくとも１．３、少
なくとも１．４、少なくとも１．５、少なくとも１．６、少なくとも１．７、少なくとも
１．８、少なくとも１．９、少なくとも２、１．０超〜約１０、１．０超〜約８、又は１
．０超〜約５のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は、
配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体は、本アッ
セイにおいて、ＢＰＮ’、ＢＰＮ’−ｖ３、及びＢＰＮ’−ｖ３６と比較して向上したタ
ンパク質分解活性を有し、ＢＰＮ’、ＢＰＮ’−ｖ３及びＢＰＮ’−ｖ３６よりもＰＩ値
が大きい。本発明は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上した
タンパク質分解活性を有する、ＢＰＮ’、ＢＰＮ’−ｖ３及びＢＰＮ’−ｖ３６と比較し
て向上したタンパク質分解活性を有する、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して１．０超〜５のＰＩ
値を有する、並びに／又は、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して１．０超〜約５のＰＩ値を有す
る、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は配列番号２又は配列番号６の配列に対して
少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％
、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上
記群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位
置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。本明細
書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組
成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも
１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
【０４７５】
以下のＢＰＮ’−ｖ３６変異体：Ａ００１Ｅ−Ｇ１３１Ｈ，Ａ００１Ｅ−Ｓ０６３Ｇ，
Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ，Ａ１１６
Ｔ−Ｓ１６２Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ，Ｇ０２４Ｅ−Ｓ０６３Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２
４３Ｖ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１３１Ｈ−Ｑ２０６Ｄ，Ｇ１３１Ｈ−
Ｓ２４９Ａ，Ｋ０４３Ｙ，Ｋ０４３Ｙ−Ｓ０６３Ｇ，Ｋ０４３Ｙ−Ｓ２４８Ｎ，Ｋ０４３
Ｙ−Ｓ２４９Ａ，Ｋ０４３Ｙ−Ｔ１５８Ｓ，Ｎ０７６Ｄ，Ｎ０７６Ｄ−Ｇ１３１Ｈ，Ｎ０
７６Ｄ−Ｔ１５８Ｓ，Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，
Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４９Ａ，Ｑ１０３Ｈ−Ｇ１６９Ａ，Ｑ２０６Ｄ−Ｓ２４９Ａ，Ｓ０６３
Ｇ−Ｎ０７６Ｄ，Ｓ０６３Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ０６３Ｇ−Ｓ１６２Ｇ，Ｓ０６３Ｇ−Ｓ２
４９Ａ，Ｓ０６３Ｇ−Ｔ１５８Ｓ，Ｓ１６２Ｇ，Ｓ１６２Ｇ−Ｓ２４９Ａ，Ｓ２４８Ｎ−
Ｋ２５６Ｒ，Ｓ２４８Ｎ−Ｓ２４９Ａ，Ｓ２４９Ａ−Ｋ２５６Ｒ，Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６
Ｒ，Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，及びＴ１５８Ｓ−Ｓ２４９Ａ，からなる群から選択される
少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−
Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑアミノ酸配列（配列番号６）は、ＡＡＰＦタンパク
質分解アッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して約１．０のＰＩ値を有するものと
判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列と対応させることによ
り番号付けされる。このような変異体は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）
と比較して向上したタンパク質分解活性を有し、ＢＰＮ’よりもＰＩ値が大きい。本発明
は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活
性を有する、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して約１．０のＰＩ値を有する、並びに、ＢＰＮ’−
ｖ３６と比較して１．０のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は、
配列番号２又は配列番号６の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、
９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性
を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含
み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させるこ
とにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくとも
このような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定
されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含
まれる。
【０４７６】
以下のＢＰＮ’−ｖ３６変異体：Ｇ１３１Ｈ−Ｓ１６２Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ，
Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ，Ｋ０４３Ｙ−Ｇ１３１Ｈ，Ｋ０４３Ｙ−Ｓ１６２Ｇ，Ｓ０６３
Ｇ−Ａ０８８Ｔ，Ｓ０６３Ｇ−Ｇ１３１Ｈ，Ｓ０６３Ｇ−Ｓ２４８Ｎ，Ｔ１５８Ｓ−Ｓ１
６２Ｇ，Ｑ１０３Ｈ−Ｎ２１８Ｓ，Ｓ０３３Ｔ−Ｑ１０３Ｈ，及びＱ１０３Ｈ−Ａ１２８
Ｓ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’−Ｓ０２４
Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑアミノ酸配列（配列
番号６）は、ＡＡＰＦタンパク質分解アッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して約
０．９のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号
２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体はタンパク質分解活
性を有する。本発明は、本タンパク質分解アッセイにおいて、タンパク質分解活性を有す
る、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して約０．９のＰＩ値を有する、プロテ
アーゼ変異体を含み、変異体は、配列番号２又は配列番号６の配列に対して少なくとも６
０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９
６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少
なくとも１組の酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のア
ミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載
されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が
挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用
いるクリーニング方法も含まれる。
【０４７７】
ＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、タンパク質分解アッセイを有する、Ｂ
ＰＮ’と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、又はＢＰＮ’（配列番号２）よ
りもＰＩ値が大きい、スブチリシンプロテアーゼ変異体も提供され、この変異体は、配列
番号２又は配列番号６に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９
５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで
、変異体は、Ｘ００１Ｅ，Ｘ００９Ｔ，Ｘ０１８Ｔ，Ｘ０２１Ｎ，Ｘ０２４Ｇ，Ｘ０３３
Ｔ，Ｘ０４０Ａ，Ｘ０４３Ｙ，Ｘ０６１Ｇ／Ｐ／Ｓ、Ｘ０６３Ｇ，Ｘ０７６Ｄ，Ｘ０８８
Ｔ，Ｘ１０３Ｈ，Ｘ１０９Ａ／Ｇ／Ｑ／Ｓ、Ｘ１１６Ｔ，Ｘ１２８Ｓ，Ｘ１３１Ｈ，Ｘ１
４１Ｒ，Ｘ１５８Ｓ，Ｘ１６２Ｇ，Ｘ１６９Ａ，Ｘ２０４Ｅ，Ｘ２０６Ｄ，Ｘ２１８Ｓ，
Ｘ２４３Ｐ／Ｖ、Ｘ２４８Ａ／Ｎ、Ｘ２４９Ａ，Ｘ２５６Ｒ，Ｘ２５７Ｇ，及びＸ２６０
Ｐ，からなる群から選択される少なくとも１つの置換を含み、ここで、変異体の位置は配
列番号２の配列と対応させることにより番号付けされ、選択的に、変異体はＡ００１Ｅ，
Ｓ００９Ｔ，Ｓ０１８Ｔ，Ｙ０２１Ｎ，Ｓ０２４Ｇ，Ｓ０３３Ｔ，Ｐ０４０Ａ，Ｋ０４３
Ｙ，Ｎ０６１Ｇ／Ｐ／Ｓ、Ｓ０６３Ｇ，Ｎ０７６Ｄ，Ａ０８８Ｔ，Ｑ１０３Ｈ，Ｎ１０９
Ａ／Ｇ／Ｑ／Ｓ、Ａ１１６Ｔ，Ｇ１２８Ｓ，Ｇ１３１Ｈ，Ｋ１４１Ｒ，Ｔ１５８Ｓ，Ｓ１
６２Ｇ，Ｇ１６９Ａ，Ｓ２０４Ｅ，Ｑ２０６Ｄ，Ｎ２１８Ｓ，Ｎ２４３Ｐ／Ｖ、Ｓ２４８
Ａ／Ｎ、Ｓ２４９Ａ，Ｋ２５６Ｒ，Ｌ２５７Ｇ，及びＳ２６０Ｐ，からなる群から選択さ
れる少なくとも１つの置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列
のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に
記載されるような、少なくとも１つのこのようなプロテアーゼ変異体を含む組成物（クリ
ーニング組成物が挙げられる）、並びに、少なくとも１つのこのようなプロテアーゼ変異
体を用いるクリーニング方法も含まれる。
【０４７８】
（実施例９）
親ＢＰＮ’−ｖ３６に基づくコンビナトリアルライブラリからの変異体の構築及び変異
体のクリーニング性能
ＢＰＮ’−ｖ３６親分子に基づくＢＰＮ’コンビナトリアルライブラリはＤＮＡ２．０
により作成されたものであり、ライゲーション反応物として供給された。枯草菌（B subt
ilis）を効率的に形質転換させるため、形質転換前にライゲーション反応混合物中のＤＮ
Ａを増幅させ、形質転換体を実施例２に記載のように増殖させた。１６℃及びｐＨ  ８で
の洗剤組成物４のＢＭＩ微小標本アッセイ、並びに１６℃及びｐＨ  ８での洗剤組成物４
の卵微小標本アッセイを用いて、変異体をクリーニング性能について試験した。タンパク
質含量はＴＣＡアッセイを用いて測定した。実施例１に記載のようにアッセイを実施し、
ＢＰＮ’−ｖ３６（すなわち、ＢＰＮ’−Ｓ２４Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−
Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ）（ＰＩ値１．０を有する）と比較して性能指数を算出した。
【０４７９】
以下のＢＰＮ’−ｖ３６変異体：Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−
Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８
Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２
５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−
Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ａ１５３Ｓ−Ｎ２１８
Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２
４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，
Ａ１１４Ｓ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７
Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１
５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−
Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６
Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２
４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−
Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８
Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２
５７Ｇ，Ｙ００６Ｈ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−
Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１
Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２
４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−
Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７
Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１
１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−
Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３
Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１
５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１２Ｄ−
Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８
Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１
１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−
Ｖ１４８Ａ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９
Ｇ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０
８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−
Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６
Ｔ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ−Ｎ２６９Ｓ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１
５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，
Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３
Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１
３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−
Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｓ００３Ｐ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６
Ｒ，Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２
４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−
Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｖ１４７Ａ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８
Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２
５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−
Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８
Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０
８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｌ２５７Ｇ，
Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１
Ｈ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２
４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−
Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１
Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１
１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−
Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３
Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２
４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−
Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７
Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２
５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｗ２４１Ｒ−Ｓ２４８Ｎ−
Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９
Ｇ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２
４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，
Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８
Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２
１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−
Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６
Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ａ２
７４Ｄ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−
Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６
Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１
３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−
Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８
Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２
４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ−Ｑ２７１Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−
Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１３１
Ｈ−Ｓ２４８Ｎ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｉ２３４Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１
３１Ｈ−Ｗ２４１Ｌ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−
Ｇ１３１Ｈ−Ａ１３７Ｖ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９
Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ａ１５１Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１
０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，
Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９
Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１
１６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−
Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｗ２４１Ｒ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６
Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１
５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−
Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９
Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１
３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ−Ａ２７４Ｔ，
Ｎ１０９Ｇ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８
Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２
５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｐ０１４Ｌ−Ａ０１５Ｌ−
Ｌ０１６Ｃ−Ｈ０１７Ｔ−Ｓ０１８Ｌ−Ｑ０１９Ｋ−Ｇ０２０Ａ−Ｙ０２１Ｔ−Ｔ０２２
Ｌ−Ｇ０２３Ｅ，Ｓ００３Ｆ−Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２
４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｖ００４Ａ−Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−
Ｎ２１８Ｓ，Ｖ００４Ａ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６
Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｖ００４Ｌ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２
５７Ｇ，Ｙ００６Ｈ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ００１Ｔ−
Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ，Ａ０８８
Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２
１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−
Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８
Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２
５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−
Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１
Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１
５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，
Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６
Ｒ−Ａ２７３Ｔ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２
４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−
Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３
Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２
４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，
Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７
Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１
１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，
Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８
Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２
５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−
Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８
Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｎ２６９Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１
５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−
Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８
Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１
５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−
Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６
Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２
５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−
Ａ１１６Ｔ−Ｖ１４３Ａ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６
Ｔ
−Ｖ１４７Ｉ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３
１Ｈ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ
２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ
−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５
８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ
０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ
，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８
８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ
１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ
−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５
８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ
２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｉ１０７Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ
−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０
９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ
１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ
−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４
３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ
２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ
−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１
８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ
１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ
−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４
８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ
０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ
−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０
９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ
１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ
−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０
９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ
１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ
−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５
７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ
２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ
−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５
８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ
１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ
−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８
８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ
１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ
−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１
６Ｔ−Ｎ２１８Ｔ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｔ−Ｋ
２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ
−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０
９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ−Ｎ２６９Ｄ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ
１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ
−Ｔ１５８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５
７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ
０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ
，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５
６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ
２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ
−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５
８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ
２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ
，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５
７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ
０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ
−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１
８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ
２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ
−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４
３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ
１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ
−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３
１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｌ
２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ
−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４
３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ
０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ
，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８
８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ
０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ
−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０
９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ
２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ
−Ｌ２５７Ｇ−Ｉ２６８Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５
７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ
１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ
−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５
８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｉ２６８Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ
２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｑ２７５Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ
−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１
８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ
２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ
−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｓ１４５Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８
８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ
２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ−Ｑ２７１Ｈ
，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｖ１４３Ａ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５
６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ
１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ
，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４
８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｉ２３４Ｔ−Ｎ
２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ
−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ裢Ꞽ볯鎼볯ꢼ裢뒼볯閼볯뎼裢꺼볯钼볯뚼裢뎼볯钼볯꺼裢ꮼ볯閼戼㹲隼볯貼볯醼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯颼볯銈볯銼볯颼볯貼볯醼볯隼볯銈볯㲬牢ਾ볯閼볯Ꞽ볯ꆼ볯醼볯뒼裢꺼볯醼볯뎼볯ꆼ볯醼볯뒼裢꺼볯醼볯뎼裢겼볯閼볯Ꞽ볯ꆼ볯醼볯뒼戼㹲銈볯銼볯颼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯鞼볯貼볯醼볯隼볯銈볯銼볯鎼볯貼볯醼볯隼볯銈볯銼볯㲔牢ਾ볯뚼裢ꮼ볯閼볯늼볯ꆼ볯醼볯뒼裢꺼볯钼볯뚼裢뎼볯钼볯꺼볯ꆼ볯醼볯뒼裢꺼볯钼볯뚼裢뎼戼㹲銼볯颼볯銈볯銼볯隼볯銈볯銼볯鞼볯貼볯醼볯隼볯銈볯銼볯颼볯貼볯醼볯隼볯銈볯醼볯颼볯㲳牢ਾ볯ꆼ볯醼볯뒼裢뒼볯閼볯뎼裢꺼볯醼볯뎼裢꺼볯钼볯뚼볯ꆼ볯醼볯뒼裢뒼볯閼볯뎼裢꺼볯醼戼㹲颼볯銈볯銼볯颼볯貼볯醼볯隼볯銈볯醼볯颼볯銈볯銼볯鎼볯貼볯醼볯隼볯銈볯醼볯颼볯銈볯㲮牢ਾ볯钼볯뚼裢ꮼ볯閼볯늼볯ꆼ볯醼볯뒼裢뒼볯閼볯뎼裢꺼볯钼볯뚼裢겼볯閼볯Ꞽ볯ꆼ볯醼볯뒼戼㹲銈볯醼볯颼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯颼볯貼볯醼볯隼볯銈볯醼볯颼볯銈볯銼볯颼볯銈볯銼볯㲕牢ਾ볯늼裢겼볯閼볯Ꞽ볯ꆼ볯醼볯뒼裢뚼볯钼볯ꦼ裢뒼볯閼볯뎼裢꺼볯钼볯뚼裢뎼볯钼볯꺼裢ꮼ戼㹲銼볯隼볯銈볯銼볯醼볯貼볯醼볯醼볯銈볯銼볯颼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯鞼볯貼볯醼볯醼볯㲨牢ਾ裢꺼볯钼볯뚼볯Ꞽ볯鎼볯ꢼ裢꺼볯钼볯뚼裢뎼볯钼볯꺼裢ꮼ볯閼볯늼볯Ꞽ볯鎼볯ꢼ裢뒼볯閼戼㹲颼볯貼볯醼볯醼볯銈볯醼볯颼볯銈볯銼볯颼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯隼볯貼볯醼볯醼볯銈볯㲴牢ਾ볯閼볯뎼裢꺼볯钼볯뚼裢ꮼ볯閼볯늼裢겼볯閼볯Ꞽ볯Ꞽ볯鎼볯ꢼ裢뒼볯閼볯뎼裢꺼볯钼볯뚼戼㹲銈볯銼볯颼볯銈볯銼볯鞼볯貼볯醼볯馼볯銈볯醼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯銼볯颼볯銈볯銼볯㲕牢ਾ볯늼裢겼볯閼볯Ꞽ볯꺼볯邼볯Ꞽ裢ꆼ볯醼볯뒼裢Ꞽ볯鎼볯ꢼ裢꺼볯醼볯뎼裢겼볯閼볯Ꞽ볯꺼戼㹲醼볯馼볯銈볯醼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯銼볯颼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯隼볯銈볯銼볯鞼볯㲧牢ਾ볯꺼볯邼볯Ꞽ裢ꆼ볯醼볯뒼裢Ꞽ볯鎼볯ꢼ裢꺼볯醼볯뎼裢뎼볯钼볯꺼裢ꮼ볯閼볯늼볯꺼볯邼戼㹲馼볯銈볯醼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯隼볯貼볯醼볯馼볯銈볯醼볯隼볯銈볯㲧牢ਾ볯鎼볯ꢼ裢꺼볯钼볯뚼裢겼볯閼볯Ꞽ볯꺼볯邼볯Ꞽ裢ꆼ볯醼볯뒼裢Ꞽ볯鎼볯ꢼ裢꺼볯钼볯뚼戼㹲銈볯銼볯颼볯銈볯銼볯隼볯銈볯銼볯鞼볯貼볯醼볯馼볯銈볯醼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯銼볯㲔牢ਾ볯꺼볯꺼볯邼볯Ꞽ裢ꆼ볯醼볯뒼裢Ꞽ볯鎼볯ꢼ裢뎼볯钼볯꺼裢ꦼ볯隼볯뚼볯꺼볯邼볯Ꞽ裢ꆼ戼㹲醼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯颼볯銈볯銼볯颼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯颼볯銈볯銼볯隼볯㲲牢ਾ볯꺼볯邼볯Ꞽ裢ꆼ볯醼볯뒼裢Ꞽ볯鎼볯ꢼ裢뒼볯閼볯뎼裢꺼볯醼볯뎼裢뎼볯钼볯꺼裢겼볯閼戼㹲鞼볯貼볯醼볯馼볯銈볯醼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯颼볯銈볯銼볯颼볯貼볯醼볯馼볯銈볯㲡牢ਾ볯醼볯뒼裢Ꞽ볯鎼볯ꢼ裢뒼볯閼볯뎼裢뎼볯钼볯꺼裢ꮼ볯閼볯늼볯꺼볯邼볯Ꞽ裢ꆼ볯醼볯뒼戼㹲銈볯銼볯颼볯貼볯醼볯馼볯銈볯醼볯隼볯銈볯銼볯颼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯隼볯貼볯醼볯㲐牢ਾ볯Ꞽ裢ꆼ볯醼볯뒼裢꺼볯醼볯뎼裢꺼볯钼볯뚼裢ꮼ볯閼볯늼裢겼볯閼볯Ꞽ볯꺼볯邼볯Ꞽ裢ꆼ戼㹲醼볯隼볯銈볯銼볯颼볯銈볯銼볯颼볯銈볯銼볯鞼볯貼볯醼볯馼볯銈볯醼볯隼볯銈볯銼볯鎼볯㲶牢ਾ裢ꮼ볯閼볯늼볯꺼볯邼볯Ꞽ裢ꆼ볯醼볯뒼裢꺼볯钼볯뚼裢뎼볯钼볯꺼裢ꮼ볯閼볯늼裢겼볯閼戼㹲鞼볯貼볯醼볯馼볯銈볯醼볯隼볯銈볯銼볯颼볯銈볯銼볯鞼볯貼볯醼볯馼볯銈볯醼볯隼볯銈볯㲴牢ਾ볯閼볯뎼裢Ꞽ볯醼볯뚼裢꺼볯钼볯뚼裢뎼볯钼볯꺼裢ꮼ볯閼볯늼볯꺼볯邼볯Ꞽ裢ꆼ볯醼볯뒼戼㹲銈볯醼볯颼볯銈볯銼볯隼볯銈볯銼볯鞼볯貼볯醼볯馼볯銈볯醼볯隼볯銈볯醼볯颼볯銈볯銼볯㲑牢ਾ볯뎼볯꺼볯邼볯Ꞽ裢ꆼ볯醼볯뒼裢뒼볯閼볯뎼裢꺼볯醼볯뎼裢꺼볯钼볯뚼裢ꮼ볯閼볯늼裢겼戼㹲銼戼㹲㰊牢ਾ볯鞼볯貼볯醼볯馼볯銈볯醼볯隼볯銈볯醼볯颼볯銈볯銼볯颼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯鞼볯貼戼㹲꺼볯邼볯Ꞽ裢ꆼ볯醼볯뒼裢뒼볯閼볯뎼裢꺼볯醼볯뎼裢꺼볯钼볯뚼裢뎼볯钼볯꺼裢겼볯閼볯㲗牢ਾ볯貼볯醼볯馼볯銈볯醼볯隼볯銈볯醼볯颼볯銈볯銼볯颼볯銈볯銼볯颼볯銈볯銼볯隼볯銈볯銼戼㹲閼볯Ꞽ볯꺼볯邼볯Ꞽ裢ꆼ볯醼볯뒼裢뒼볯閼볯뎼裢꺼볯钼볯뚼볯꺼볯邼볯Ꞽ裢ꆼ볯醼볯뒼裢㲒牢ਾ볯醼볯颼볯銈볯銼볯閼볯貼볯醼볯馼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鞼볯銈볯醼볯颼볯銈볯銼볯颼戼㹲뎼裢뎼볯钼볯꺼볯꺼볯邼볯Ꞽ裢Ꞽ볯鎼볯ꢼ裢꺼볯醼볯뎼裢ꮼ볯鎼볯꺼볯꺼볯邼볯Ꞽ裢Ꞽ볯㲑牢ਾ볯醼볯銈볯銼볯颼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯隼볯銈볯銼볯鞼볯貼볯醼볯馼볯銈볯醼볯醼볯銈戼㹲꺼볯醼볯뎼裢뎼볯钼볯꺼裢ꮼ볯閼볯늼볯꺼볯邼볯Ꞽ裢Ꞽ볯鎼볯ꢼ裢꺼볯钼볯뚼裢ꮼ볯閼볯㲖牢ਾ볯銈볯銼볯鞼볯貼볯醼볯馼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯閼볯銈볯銼볯颼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼戼㹲閼볯늼裢겼볯閼볯Ꞽ볯꺼볯邼볯Ꞽ裢Ꞽ볯鎼볯ꢼ裢뎼볯钼볯꺼裢ꮼ볯閼볯늼볯꺼볯邼볯Ꞽ裢㲒牢ਾ볯醼볯醼볯銈볯銼볯颼볯銈볯銼볯鞼볯貼볯醼볯馼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯颼볯銈볯銼볯隼戼㹲늼볯꺼볯邼볯Ꞽ裢Ꞽ볯鎼볯ꢼ裢뒼볯閼볯뎼裢꺼볯醼볯뎼裢꺼볯钼볯뚼裢ꮼ볯閼볯늼볯꺼볯㲑牢ਾ볯馼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯颼볯銈볯銼볯鎼볯貼볯醼볯馼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯颼볯銈戼㹲꺼볯钼볯뚼裢ꮼ볯閼볯늼裢겼볯閼볯Ꞽ볯꺼볯邼볯Ꞽ裢Ꞽ볯鎼볯ꢼ裢뒼볯閼볯뎼裢꺼볯钼볯㲓牢ਾ볯銈볯銼볯鞼볯貼볯醼볯馼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯颼볯銈볯銼볯颼볯銈볯銼볯鞼볯貼볯醼戼㹲邼볯Ꞽ裢Ꞽ볯鎼볯ꢼ裢뒼볯閼볯뎼裢뎼볯钼볯꺼裢놼볯鞼볯늼볯꺼볯邼볯Ꞽ裢꺼볯醼볯뎼裢㲒牢ਾ볯銼볯鞼볯貼볯醼볯馼볯銈볯銼볯颼볯銈볯銼볯鎼볯貼볯醼볯馼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯隼戼㹲늼裢겼볯閼볯Ꞽ볯꺼볯邼볯Ꞽ裢꺼볯钼볯뚼裢뎼볯钼볯꺼裢ꮼ볯閼볯늼裢겼볯閼볯Ꞽ볯꺼볯㲑牢ਾ볯馼볯銈볯醼볯颼볯銈볯銼볯颼볯貼볯醼볯馼볯銈볯醼볯颼볯銈볯銼볯隼볯貼볯醼볯馼볯銈戼㹲뒼볯閼볯뎼裢꺼볯醼볯뎼裢꺼볯钼볯뚼裢ꮼ볯閼볯늼裢겼볯閼볯Ꞽ볯꺼볯邼볯Ꞽ裢뒼볯閼볯㲘牢ਾ볯銈볯銼볯颼볯銈볯銼볯颼볯銈볯銼볯鞼볯貼볯醼볯馼볯銈볯醼볯颼볯銈볯銼볯鎼볯貼볯醼戼㹲邼볯Ꞽ裢뒼볯閼볯뎼裢꺼볯钼볯뚼裢ꮼ볯閼볯늼裢겼볯閼볯Ꞽ볯꺼볯邼볯Ꞽ裢뒼볯閼볯뎼裢㲒牢ਾ볯銼볯鎼볯銈볯銼볯颼볯貼볯醼볯馼볯銈볯醼볯隼볯銈볯銼볯颼볯貼볯銼볯颼볯貼볯銼볯颼戼㹲뎼裢꺼볯钼볯뚼裢뎼볯钼볯꺼裢ꮼ볯閼볯늼裢겼볯閼볯Ꞽ볯꺼볯醼볯뎼裢뎼볯钼볯꺼裢겼볯㲒牢ਾ볯鞼볯貼볯銼볯鎼볯貼볯銼볯鎼볯銈볯銼볯隼볯貼볯銼볯鎼볯銈볯銼볯颼볯銈볯銼볯隼볯貼戼㹲꺼볯钼볯뚼裢뎼볯钼볯꺼裢ꮼ볯閼볯늼裢겼볯閼볯Ꞽ볯뎼볯邼볯낼裢ꆼ볯醼볯뒼裢뒼볯閼볯㲘牢ਾ볯銈볯銼볯颼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯颼볯銈볯銼볯隼볯貼볯銼볯颼볯貼볯醼볯颼볯銈볯銼戼㹲钼볯뚼裢ꮼ볯閼볯늼볯誏臣뒼볯閼볯뎼裢꺼볯钼볯뚼裢겼볯閼볯Ꞽ볯讁苣ꪁ苣꒾臣覂臩麊臣㲕牢ਾ苣讂냥ꪁ臣ꢁ苣醼뗧꺁苣龃菣뢅뷧鮏苣ꮐ苣ꊼ볯꺼胢銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯鎼볯銈볯邼볯颼戼㹲꺼裢뎼볯邼볯꺼裢Ꞽ볯銼볯ꆼ裢림볯醼볯놼苣龃菣뢅藩鞈볯超裥ꪕ迥隼볯꾁胣邽볯₨颼迥뎁戼㹲醼볯莄臣꺁듦ꒉ뗧邈觧钼臣ꊼ볯ꦼ뻥辰꣦겜苣ꪃ菣讃菣낂苣莃苣ꒂ臣誁臣ꚁ胣ꊼ볯꺼胢銈뷯㲖牢ਾ볯隼臣钯볨鞁臣醼볯邼뛨膀냥ꪁ臣ꢁ苣醼볯醼胣醰臣辁臣节볯躼볯膀냥ꪁ臣ꢁ苣醼볯鎼胣醰戼㹲ꪁ臣ꢁ苣醼볯钼胣醰臣辁臣节볯躼볯膀냥ꪁ臣ꢁ苣醼볯隼胣醰臣辁臣节볯躼볯膀냥ꪁ臣ꢁ苣㲂牢ਾ볯躼볯膀냥ꪁ臣ꢁ苣醼볯馼胣醰臣辁臣节볯膀볯躼볯薶胣蒴볯邼胣醼볯邼뛨鲀듧颼胣袏臣醼戼㹲躼볯薶胣蒴볯꺁볯ꦼ胥銂鳦馁苣节臣ꢁ裥骮臣貂臣貁胣鎁臣ꞁ胣覤闧鎽臣ꊂ菣躃藩趽뷧꾁胣㲁牢ਾ藩鞈闧랏볯꺁藩鞈臣뺯뿥閁臣讂臣ꢁ臣袂苣ꪕ迥颻臣閁苣讂胣鎁臣袂臣ꪁꓥ낕뷤꾁胣겜苣莃戼㹲뮂苣ꮁ臣蒁臣膀볯낼볯馀胣ꊼ볯꺼胢銈뷯鎼胣誏臣ꊼ볯꺼胢銈뷯鎼볯ꢁ꿦莼臣ꚁ郥誸臣龁苣㲿牢ਾ菣醃苣ꪳ裥ꎧ듦Ꞁ苣覜臣膀볯낼볯馀胣ꊼ볯꺼胢銈뷯鎼迥뎁볯낼볯馀裢隽볯隼苣誂苣낼볯ꒀ戼㹲貁ꓥ趁臣芀鳦몙飦꾁胣겜苣莃苣ꒂ臣誁臣ꚁ胣ꊼ볯꺼胢袼藩鞈闧랏볯覼臣钯볨鞁臣醐룤鞁臣㲟牢ਾ苣뎃菣꾂돨蚈꟨뮴胦銂鳦馁苣膀볯낼볯馀胣ꊼ볯꺼胢銈뷯鎼迥뎁볯낼볯馀裢隽볯隼臣钯볨鞁戼㹲ꚁ郥誸臣龁苣뎃菣꾂돨蚈꟨뮴胦銂鳦馁苣膀볯낼볯馀裢隽볯ꢁ꿦莼臣ꚁ볯躼볯薶胣蒴볯꺁볯㲰牢ਾ볯ꒀ苣覜臣讂胣ꚸ臣ꮁ볯芁苣蒁臣膀볯낼볯馀裢隽볯隼臣钯볨鞁臣醼볯邼뛨鲀듧閼臣낼볯ꒀ戼㹲銂鳦馁苣膀菣궃菣ꊂ菣벂ꓥ낕뷤銂郥뾁胣鎁臣覤闧鎽臣超裥ꪕ迥銼迥꾁藩鞈闧랏볯꺁藩鞈臣㲫牢ਾ꿥鞁臣醰臣辁臣节볯邼볯膀볯邼볯膀볯邼볯膀볯閼볯膀볯邼볯膀볯醼볯膀볯銼볯膀볯鎼볯膀戼㹲馼볯薼胣馼볯薼胣馼볯薼胣馼볯薼迥꾁볯颼볯꺁郥肸胦銂鳦馁苣ꊂ菣躃藩超裥銂郥뾁胣誸꣨㲘牢ਾ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