(57)【要約】【課題】  ｓＩｇＡの検出に利用可能な新たな分子を提供する。【解決手段】  本発明の分泌型免疫グロブリンＡ（ｓＩｇＡ）結合核酸分子は、下記（ａ）または（ｂ）のいずれかのポリヌクレオチドを含むことを特徴とする。（ａ）配列番号１の塩基配列からなるポリヌクレオチド（ｂ）前記（ａ）の塩基配列に対して、８０％以上の同一性を有する塩基配列からなり、ｓＩｇＡに結合するポリヌクレオチド【選択図】図１
2019149979.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記（ａ）または（ｂ）のいずれかのポリヌクレオチドを含むことを特徴とする、分泌型免疫グロブリンＡ（ｓＩｇＡ）結合核酸分子。
（ａ）配列番号１の塩基配列からなるポリヌクレオチド
（ｂ）前記（ａ）の塩基配列に対して、８０％以上の同一性を有する塩基配列からなり、ｓＩｇＡに結合するポリヌクレオチド
配列番号１：GGTAAGCCTCGGACCCTAGATTTGUGGUUCAUCCACCUCGUACCCAUAAGGGCGGCUAUCAUUCUGCACCUGGGAAAUC
【請求項２】
前記結合核酸分子が、塩基が修飾基で修飾された修飾塩基を含む、請求項１記載のｓＩｇＡ結合核酸分子。
【請求項３】
前記修飾塩基が、ウラシル塩基が修飾基で修飾された修飾ウラシル塩基である、請求項２記載のｓＩｇＡ結合核酸分子。
【請求項４】
前記修飾ウラシル塩基が、下記式（１）で表される修飾ウラシル塩基である、請求項３記載のｓＩｇＡ結合核酸分子。
【化１】
2019149979.tif 000011
【請求項５】
前記ポリヌクレオチドにおいて、前記配列番号１の塩基配列における下線部のウラシル塩基が、修飾塩基である、請求項２から４のいずれか一項に記載のｓＩｇＡ結合核酸分子。
【請求項６】
前記（ｂ）のポリヌクレオチドが、下記（ｅ）のポリヌクレオチドである、請求項１から５のいずれか一項に記載の核酸分子。
（ｅ）前記（ａ）の塩基配列に対して、８０％以上の同一性を有する塩基配列からなり、下記式（２）で表される二次構造を形成可能であり、ｓＩｇＡに結合するポリヌクレオチド
【化２】
2019149979.tif 000012
【請求項７】
前記ポリヌクレオチドが、ＤＮＡである、請求項１から６のいずれか一項に記載のｓＩｇＡ結合核酸分子。
【請求項８】
請求項１から７のいずれか一項に記載の分泌型免疫グロブリンＡ（ｓＩｇＡ）結合核酸分子を含むことを特徴とする、ｓＩｇＡ検出用センサ。
【請求項９】
請求項１から７のいずれか一項に記載の分泌型免疫グロブリンＡ（ｓＩｇＡ）結合核酸分子を含むことを特徴とする、ｓＩｇＡ検出試薬。
【請求項１０】
試料と核酸分子とを接触させ、前記試料中の分泌型免疫グロブリンＡ（ｓＩｇＡ）を検出する工程を含み、
前記核酸分子が、請求項１から７のいずれか一項に記載のｓＩｇＡ結合核酸分子であり、
前記検出工程において、前記試料中のｓＩｇＡと前記核酸分子とを結合させて、前記結合により、前記試料中のｓＩｇＡを検出することを特徴とする、ｓＩｇＡの検出方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ｓＩｇＡ結合核酸分子、ｓＩｇＡ検出用センサ、ｓＩｇＡ検出試薬、およびｓＩｇＡの検出方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、ストレスが、疲労や鬱の一因となり得ることから、ストレスのチェックが重要視されている。しかしながら、ストレス状態か否かは、例えば、本人が気づいていない、または、主観的であるが故に他人によって判断することが難しいという問題がある。このため、ストレスを客観的に判断する方法の確立が求められている。
【０００３】
ヒトは、ストレスを感じることにより、唾液中のｓＩｇＡの分泌が亢進することが知られている。そこで、前記唾液中のｓＩｇＡを測定することで、間接的にストレスを評価する方法が試みられている。具体的には、ｓＩｇＡを抗原とする抗体を使用したＥＬＩＳＡ法が報告されている（非特許文献１）。
【０００４】
しかし、抗体は、タンパク質であり、安定性に問題があるため、低コストで簡易な検査法に抗体を用いることが難しい。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】磯和  勅子、「看護師の職務ストレッサー，バーンアウトおよび身体的健康問題の関連：質問紙および免疫指標からの検討」、行動医学研究、Vol.10、No.1、２５−３３頁
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
そこで、本発明は、ｓＩｇＡの検出に利用可能な新たな分子の提供を目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明のｓＩｇＡ結合核酸分子（以下、「核酸分子」ともいう）は、下記（ａ）または（ｂ）のいずれかのポリヌクレオチドを含むことを特徴とする。
（ａ）配列番号１の塩基配列からなるポリヌクレオチド
（ｂ）前記（ａ）の塩基配列に対して、８０％以上の同一性を有する塩基配列からなり、ｓＩｇＡに結合するポリヌクレオチド
配列番号１：GGTAAGCCTCGGACCCTAGATTTGUGGUUCAUCCACCUCGUACCCAUAAGGGCGGCUAUCAUUCUGCACCUGGGAAAUC
【０００８】
本発明のｓＩｇＡ検出用センサは、前記本発明のｓＩｇＡ結合核酸分子を含むことを特徴とする。
【０００９】
本発明のｓＩｇＡ検出試薬は、前記本発明のｓＩｇＡ結合核酸分子を含むことを特徴とする。
【００１０】
本発明のｓＩｇＡの検出方法は、試料と核酸分子とを接触させ、前記試料中のｓＩｇＡを検出する工程を含み、
前記核酸分子が、前記本発明のｓＩｇＡ結合核酸分子であり、
前記検出工程において、前記試料中のｓＩｇＡと前記核酸分子とを結合させて、前記結合により、前記試料中のｓＩｇＡを検出することを特徴とする。
【発明の効果】
【００１１】
本発明のｓＩｇＡ結合核酸分子は、ｓＩｇＡと結合可能である。このため、本発明のｓＩｇＡ結合核酸分子によれば、例えば、試料中のｓＩｇＡとの結合の有無によって、優れた精度で、ｓＩｇＡを検出できる。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】図１は、実施例におけるアプタマーのｓＩｇＡに対する結合能を示すグラフである。
【図２】図２は、実施例におけるアプタマーのｓＩｇＡへの結合量の相対値（Relative  Unit）を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
（１）ｓＩｇＡ結合核酸分子
本発明のｓＩｇＡ結合核酸分子は、下記（ａ）または（ｂ）のいずれかのポリヌクレオチドを含むことを特徴とする。
（ａ）配列番号１の塩基配列からなるポリヌクレオチド
（ｂ）前記（ａ）の塩基配列に対して、８０％以上の同一性を有する塩基配列からなり、ｓＩｇＡに結合するポリヌクレオチド
【００１４】
本発明の核酸分子は、前述のようにｓＩｇＡに結合可能である。本発明の核酸分子は、例えば、ｓＩｇＡを構成する免疫グロブリンの重鎖に結合してもよいし、免疫グロブリンの軽鎖に結合してもよいし、両者に結合してもよいし、２つのＩｇＡの架橋部（Ｊ鎖）に結合してもよいし、ｓＩｇＡと結合している分泌成分（secretory component）と結合してもよい。前記ｓＩｇＡは、特に制限されず、その由来は、例えば、ヒト、非ヒト動物等があげられる。前記非ヒト動物は、例えば、マウス、ラット、サル、ウサギ、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ブタ等があげられる。ヒトＩｇα−１鎖のＣ領域（Ig alpha-1 chain C region）のアミノ酸配列の情報は、例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ（http://www.uniprot.org/）アクセッション番号Ｐ０１８７６に登録されており、また、ヒトＩｇ−α２鎖のＣ領域（Ig alpha-2 chain C region）のアミノ酸配列の情報は、例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ（http://www.uniprot.org/）アクセッション番号Ｐ０１８７７に登録されている。
【００１５】
本発明において、「ｓＩｇＡに結合する」とは、例えば、ｓＩｇＡに対する結合能を有している、または、ｓＩｇＡに対する結合活性を有しているともいう。本発明の核酸分子と前記ｓＩｇＡとの結合は、例えば、表面プラズモン共鳴分子相互作用（ＳＰＲ；Surface  Plasmon  resonance）解析等により決定できる。前記解析は、例えば、ＰｒｏｔｅＯＮ（商品名、BioRad社）が使用できる。本発明の核酸分子は、ｓＩｇＡに結合することから、例えば、ｓＩｇＡの検出に使用できる。
【００１６】
本発明の核酸分子は、例えば、前記（ａ）または（ｂ）のポリヌクレオチドからなる分子でもよいし、前記ポリヌクレオチドを含む分子でもよい。また、本発明の核酸分子は、例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡまたはＤＮＡおよびＲＮＡから構成されてもよい。本発明の核酸分子がＤＮＡから構成される場合、本発明の核酸分子は、例えば、ＤＮＡ分子、ＤＮＡアプタマーということができる。
【００１７】
前記（ａ）のポリヌクレオチドは、例えば、前記配列番号１の塩基配列を含むポリヌクレオチドでもよいし、前記配列番号１の塩基配列からなるポリヌクレオチドでもよい。また、前記（ａ）のポリヌクレオチドは、前記配列番号１の塩基配列の部分配列を含むヌクレオチドでもよいし、前記部分配列からなるポリヌクレオチドでもよい。前記部分配列は、特に制限されず、例えば、前記配列番号１の塩基配列において、５’末端および３’末端の少なくとも一方の配列を欠失した配列でもよいし、中間領域の配列を欠失した配列でもよい。前記配列番号１のポリヌクレオチドを以下に示す。
【００１８】
ｓＩｇＡ結合核酸分子１（配列番号１）
GGTAAGCCTCGGACCCTAGATTTGUGGUUCAUCCACCUCGUACCCAUAAGGGCGGCUAUCAUUCUGCACCUGGGAAAUC
【００１９】
前記（ｂ）において、「同一性」は、特に制限されず、例えば、前記（ｂ）のポリヌクレオチドが、ｓＩｇＡに結合する範囲であればよい。前記同一性は、例えば、８０％以上、好ましくは８５％以上、より好ましくは９０％以上、さらに好ましくは９５％以上、９６％以上、９７％以上、特に好ましくは９８％以上、最も好ましくは９９％以上である。前記同一性は、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＦＡＳＴＡ等の解析ソフトウェアを用いて、デフォルトのパラメータにより算出できる（以下、同様）。
【００２０】
本発明の核酸分子における前記ポリヌクレオチドは、例えば、下記（ｃ）のポリヌクレオチドでもよい。この場合、本発明の核酸分子は、例えば、下記（ｃ）のポリヌクレオチドからなる分子でもよいし、下記（ｃ）のポリヌクレオチドを含む分子でもよい。
（ｃ）前記（ａ）の塩基配列からなるポリヌクレオチドに対して、ストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドに相補的な塩基配列からなり、ｓＩｇＡに結合するポリヌクレオチド
【００２１】
前記（ｃ）において、「ハイブリダイズ可能なポリヌクレオチド」は、例えば、前記（ａ）のポリヌクレオチドに対して、完全または部分的に相補的なポリヌクレオチドであり、前記ｓＩｇＡに結合する範囲であればよい。前記ハイブリダイズは、例えば、各種ハイブリダイゼーションアッセイにより検出できる。前記ハイブリダイゼーションアッセイは、特に制限されず、例えば、ザンブルーク（Ｓａｍｂｒｏｏｋ）ら編「モレキュラー・クローニング：ア・ラボラトリーマニュアル第２版（Molecular Cloning: A Laboratory Manual 2nd Ed.）」〔Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989)〕等に記載されている方法を採用することもできる。
【００２２】
前記（ｃ）において、「ストリンジェントな条件」は、例えば、低ストリンジェントな条件、中ストリンジェントな条件、高ストリンジェントな条件のいずれでもよい。「低ストリンジェントな条件」は、例えば、５×ＳＳＣ、５×デンハルト溶液、０．５％ＳＤＳ、５０％ホルムアミド、３２℃の条件である。「中ストリンジェントな条件」は、例えば、５×ＳＳＣ、５×デンハルト溶液、０．５％ＳＤＳ、５０％ホルムアミド、４２℃の条件である。「高ストリンジェントな条件」は、例えば、５×ＳＳＣ、５×デンハルト溶液、０．５％ＳＤＳ、５０％ホルムアミド、５０℃の条件である。ストリンジェンシーの程度は、当業者であれば、例えば、温度、塩濃度、プローブの濃度および長さ、イオン強度、時間等の条件を適宜選択することで、設定可能である。「ストリンジェントな条件」は、例えば、前述したザンブルーク（Ｓａｍｂｒｏｏｋ）ら編「モレキュラー・クローニング：ア・ラボラトリーマニュアル第２版（Molecular Cloning: A Laboratory Manual 2nd Ed.）」〔Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989)〕等に記載の条件を採用することもできる。
【００２３】
本発明の核酸分子における前記ポリヌクレオチドは、例えば、下記（ｄ）のポリヌクレオチドでもよい。この場合、本発明の核酸分子は、例えば、下記（ｄ）のポリヌクレオチドからなる分子でもよいし、下記（ｄ）のポリヌクレオチドを含む分子でもよい。
（ｄ）前記（ａ）の塩基配列において、１もしくは数個の塩基が欠失、置換、挿入および／または付加された塩基配列からなり、前記ｓＩｇＡに結合するポリヌクレオチド
【００２４】
前記（ｄ）において、「１もしくは数個」は、例えば、前記（ｄ）のポリヌクレオチドが、ｓＩｇＡに結合する範囲であればよい。前記「１もしくは数個」は、前記（ａ）の塩基配列において、例えば、１〜１６個、１〜１２個、１〜１０個、１〜８個、１〜７個、１〜５個、１〜３個、１〜２個、１個である。本発明において、塩基数および配列数等の個数の数値範囲は、例えば、その範囲に属する正の整数を全て開示するものである。つまり、例えば、「１〜５塩基」との記載は、「１、２、３、４、５塩基」の全ての開示を意味する（以下、同様）。
【００２５】
本発明の核酸分子における前記（ｂ）のポリヌクレオチドは、例えば、下記（ｅ）のポリヌクレオチドでもよい。この場合、本発明の核酸分子は、例えば、下記（ｅ）のポリヌクレオチドからなる分子でもよいし、下記（ｅ）のポリヌクレオチドを含む分子でもよい。
（ｅ）前記（ａ）の塩基配列に対して、８０％以上の同一性を有する塩基配列からなり、下記式（２）で表される二次構造を形成可能であり、前記ｓＩｇＡに結合するポリヌクレオチド
【化２】
2019149979.tif 000003
【００２６】
前記（ｅ）において、「同一性」は、特に制限されず、例えば、前記（ｂ）と同様である。前記（ｅ）のポリヌクレオチドにおいて、「二次構造を形成可能」とは、例えば、前記（ｅ）のポリヌクレオチドが、前記式（２）におけるステム構造およびループ構造を形成可能であることをいう。具体的には、「二次構造を形成可能」とは、例えば、前記（ｅ）のポリヌクレオチドにおいて、下記（ｅ１）、（ｅ２）および（ｅ３）の塩基がステム構造を形成し、下記（ｅ１）、（ｅ２）、および（ｅ３）の塩基以外の塩基が、ループ構造を形成することを意味する。前記（ｅ）のポリヌクレオチドにおいて、下記（ｅ１）、（ｅ２）、および（ｅ３）の塩基は、例えば、ステム構造を形成すればよく、ステム構造において向かい合う塩基対は、水素結合を形成可能な塩基の組合せであればよい。前記水素結合を形成可能な塩基の組合せは、例えば、Ａ−Ｔ、Ｔ−Ａ、Ａ−Ｕ、Ｕ−Ａ、Ｇ−Ｃ、またはＣ−Ｇがあげられる。
（ｅ１）配列番号１の塩基配列の５〜８番目の塩基に対応する塩基と５４〜５７番目の塩基に対応する塩基
（ｅ２）配列番号１の塩基配列の１４〜１７番目の塩基に対応する塩基と４９〜５２番目の塩基に対応する塩基
（ｅ３）配列番号１の塩基配列の２４〜２７番目の塩基に対応する塩基と３３〜３６番目の塩基に対応する塩基
【００２７】
本発明の核酸分子における前記（ｄ）のポリヌクレオチドは、例えば、下記（ｆ）のポリヌクレオチドでもよい。この場合、本発明の核酸分子は、例えば、下記（ｆ）のポリヌクレオチドからなる分子でもよいし、下記（ｆ）のポリヌクレオチドを含む分子でもよい。
（ｆ）前記（ａ）の塩基配列において、１もしくは数個の塩基が欠失、置換、挿入および／または付加された塩基配列からなり、前記式（２）で表される二次構造を形成可能であり、前記ｓＩｇＡに結合するポリヌクレオチド
【００２８】
前記（ｆ）において、「１もしくは数個」は、特に制限されず、例えば、前記（ｄ）と同様である。前記（ｆ）のポリヌクレオチドにおいて、「二次構造を形成可能」とは、例えば、前記（ｆ）のポリヌクレオチドが、前記式におけるステム構造およびループ構造を形成可能であることをいい、例えば、前記（ｅ）のポリヌクレオチドにおける説明を援用できる。ステム構造およびループ構造については、後述する。
【００２９】
本発明の核酸分子において、前記ポリヌクレオチドの構成単位は、例えば、ヌクレオチド残基であり、デオキシリボヌクレオチド残基およびリボヌクレオチド残基があげられる。前記ポリヌクレオチドは、後述するように、例えば、デオキシリボヌクレオチド残基からなるＤＮＡ、デオキシリボヌクレオチド残基およびリボヌクレオチド残基を含むＤＮＡであり、さらに、非ヌクレオチド残基を含んでもよい。本発明の核酸分子は、例えば、以下、アプタマーともいう。
【００３０】
本発明の核酸分子は、例えば、前記（ａ）から（ｆ）のいずれかのポリヌクレオチドからなる分子でもよいし、前記（ａ）から（ｆ）のいずれかのポリヌクレオチドを含む分子でもよい。後者の場合、本発明の核酸分子は、例えば、後述するように、前記（ａ）から（ｆ）のいずれかのポリヌクレオチドを２つ以上含んでもよい。前記（ａ）から（ｆ）の２つ以上のポリヌクレオチドは、同じ配列でもよいし、異なる配列でもよい。また、後者の場合、本発明の核酸分子は、例えば、さらに、リンカーおよび／または付加配列等を有してもよい。ここで、前記リンカーとは、例えば、ポリヌクレオチド間の配列であり、前記付加配列とは、例えば、末端に付加された配列である。
【００３１】
本発明の核酸分子が、例えば、複数のポリヌクレオチドを含む場合、複数のポリヌクレオチドの配列が連結して、一本鎖のポリヌクレオチドを形成していることが好ましい。前記複数のポリヌクレオチドの配列は、例えば、それぞれが直接的に連結してもよいし、リンカーを介して、それぞれが間接的に連結してもよい。前記ポリヌクレオチドの配列は、それぞれの末端において、直接的または間接的に連結していることが好ましい。前記ポリヌクレオチドの配列を複数含む場合、前記配列の数は、特に制限されず、例えば、２以上、２〜２０、２〜１０、２または３である。
【００３２】
前記リンカーの長さは、特に制限されず、例えば、１〜２００塩基長、１〜２４塩基長、１〜２０塩基長、３〜１２塩基長、５〜９塩基長である。前記リンカーの構成単位は、例えば、ヌクレオチド残基であり、デオキシリボヌクレオチド残基およびリボヌクレオチド残基等があげられる。前記リンカーは、特に制限されず、例えば、デオキシリボヌクレオチド残基からなるＤＮＡ、リボヌクレオチド残基を含むＤＮＡ等のポリヌクレオチドがあげられる。前記リンカーの具体例として、例えば、ポリデオキシチミン（ポリｄＴ）、ポリデオキシアデニン（ポリｄＡ）、ＡとＴの繰り返し配列であるポリｄＡｄＴ等があげられ、好ましくはポリｄＴ、ポリｄＡｄＴである。
【００３３】
本発明の核酸分子において、前記ポリヌクレオチドは、一本鎖ポリヌクレオチドであることが好ましい。前記一本鎖ポリヌクレオチドは、例えば、自己アニーリングによりステム構造およびループ構造を形成可能であることが好ましい。前記ポリヌクレオチドは、例えば、ステムループ構造、インターナルループ構造および／またはバルジ構造等を形成可能であることが好ましい。
【００３４】
本発明の核酸分子は、例えば、二本鎖でもよい。二本鎖の場合、例えば、一方の一本鎖ポリヌクレオチドは、前記（ａ）〜（ｆ）のいずれかのポリヌクレオチドを含み、他方の一本鎖ポリヌクレオチドは、制限されない。前記他方の一本鎖ポリヌクレオチドは、例えば、前記（ａ）〜（ｆ）のいずれかのポリヌクレオチドに相補的な塩基配列を含むポリヌクレオチドがあげられる。本発明の核酸分子が二本鎖の場合、例えば、使用に先立って、変性等により、一本鎖ポリヌクレオチドに解離させることが好ましい。また、解離した前記（ａ）〜（ｆ）のいずれかの一本鎖ポリヌクレオチドは、例えば、前述のように、ステム構造およびループ構造を形成していることが好ましい。
【００３５】
本発明の核酸分子の構成単位は、例えば、ヌクレオチド残基である。前記核酸分子の長さは、特に制限されない。前記核酸分子の長さの下限は、例えば、１５塩基長、３５塩基長、５５塩基長、７５塩基長である。前記核酸分子の長さの上限は、例えば、１０００塩基長であり、２００塩基長、１００塩基長、９０塩基長、８０塩基長である。前記核酸分子の長さの範囲は、例えば、１５〜１０００塩基長、３５〜２００塩基長、５５〜９０塩基長、７５〜８０塩基長である。
【００３６】
前記ヌクレオチド残基は、例えば、デオキシリボヌクレオチド残基およびリボヌクレオチド残基があげられる。本発明の核酸分子は、例えば、デオキシリボヌクレオチド残基のみから構成されるＤＮＡ、１もしくは数個のリボヌクレオチド残基を含むＤＮＡ等があげられる。後者の場合、「１もしくは数個」は、特に制限されず、例えば、前記ポリヌクレオチドにおいて、例えば、１〜９１個、１〜３０個、１〜１５個、１〜７個、１〜３個、１または２個である。
【００３７】
前記ポリヌクレオチドは、ヌクレオチド残基における塩基として、天然塩基を含んでもよいし、修飾塩基を含んでもよい。前記天然塩基（非人工塩基）は、特に制限されず、例えば、プリン骨格を有するプリン塩基、ピリミジン骨格を有するピリミジン塩基等があげられる。前記プリン塩基は、特に制限されず、例えば、アデニン（ａ）、グアニン（ｇ）があげられる。前記ピリミジン塩基は、特に制限されず、例えば、シトシン（ｃ）、チミン（ｔ）、ウラシル（ｕ）等があげられる。
【００３８】
前記ポリヌクレオチドが前記修飾塩基を有する場合、その部位および個数は、特に制限されない。本発明の核酸分子が前記修飾塩基を有する場合、前記配列番号１のポリヌクレオチドにおいては、例えば、下線部のウラシルの一部または全部が、修飾塩基である。前記下線部のウラシルが修飾塩基の場合、前記修飾塩基は、ウラシル塩基が修飾された修飾ウラシルであることが好ましい。
【００３９】
前記修飾塩基は、例えば、塩基が修飾基で修飾されたものである。前記修飾基により修飾される塩基（被修飾塩基）は、例えば、前記天然塩基である。前記天然塩基は、例えば、プリン塩基、ピリミジン塩基等があげられる。前記修飾塩基は、特に制限されず、例えば、修飾アデニン、修飾グアニン、修飾シトシン、修飾チミン、修飾ウラシルがあげられる。
【００４０】
前記修飾塩基は、例えば、前記被修飾塩基が、直接、前記修飾基で修飾されてもよいし、前記被修飾塩基が、間接的に、前記修飾基で修飾されてもよい。後者の場合、例えば、前記被修飾塩基が、リンカーを介して、前記修飾基で修飾される形態があげられる。前記リンカーは、特に制限されない。
【００４１】
前記被修飾塩基の前記修飾基による修飾部位は、特に制限されない。前記塩基がピリミジン塩基の場合、前記ピリミジン塩基の修飾部位は、例えば、前記ピリミジン骨格の５位および６位があげられ、５位が好ましい。前記ピリミジン塩基の５位が修飾される場合、チミンは、５位の炭素にメチル基を有することから、例えば、５位の炭素に、直接的または間接的に前記修飾基が結合してもよいし、５位の炭素に結合したメチル基の炭素に、直接的または間接的に前記修飾基が結合してもよい。前記ピリミジン骨格において、４位の炭素に「＝Ｏ」が結合し、５位の炭素に「−ＣＨ３」または「−Ｈ」以外の基が結合している場合、修飾チミンまたは修飾ウラシルということができる。
【００４２】
前記修飾塩基が修飾ウラシルである場合、前記修飾基は、アデニン残基が好ましい。すなわち、前記修飾塩基は、例えば、塩基が前記アデニン残基で修飾されている。前記アデニン残基が前記被修飾塩基を修飾する部位は、特に制限されず、例えば、前記アデニン残基における６位の炭素に結合するアミノ基があげられる。前記アデニン残基で修飾される前記被修飾塩基は、特に制限されないが、例えば、ウラシルが好ましく、ウラシルの５位の炭素が、前記アデニン残基で修飾されていることが好ましい。前記修飾基は、その一部がさらに置換または修飾されてもよい。前記修飾基がアデニン残基を含む場合、前記アデニン残基は、９位の窒素原子に結合した水素が、下記式（６）で表される置換基に置換されていることが好ましい。下記式（６）において、ｎは、１〜１２の正の整数であり、好ましくは、４である。
【００４３】
【化６】
2019149979.tif 000004
【００４４】
前記修飾基が前記アデニン残基の場合、例えば、以下に示すように、前記リンカーを介して、前記修飾基により前記被修飾塩基が修飾されていることが好ましい。
［ヌクレオチド残基］−［リンカー］−［アデニン残基］
【００４５】
前記リンカーは、特に制限されず、例えば、以下のように、前記ヌクレオチド残基と前記アデニン残基との間の式で表されるが、これには限定されない。下記式において、(CH2)nにおけるｎの数値は、例えば、１〜１０、２〜１０、２である。
［ヌクレオチド残基］  -C=C-C(=O)-NH-(CH2)n-  ［アデニン残基］
［ヌクレオチド残基］  -C=C-C(=O)-NH-CH2-CH2-  ［アデニン残基］
【００４６】
前記式において、前記リンカーの一端［−Ｃ］は、例えば、ヌクレオチド残基における被修飾塩基の炭素と単結合を形成し、前記リンカーの他端［ＣＨ２−］は、例えば、アデニン残基のアミン（−ＮＨ）（例えば、６位の炭素に結合したアミン）と結合している。
【００４７】
前記アデニン残基により修飾された修飾ウラシル塩基は、下記式（１）で表される修飾ウラシル塩基が好ましい。
【化１】
2019149979.tif 000005
【００４８】
前記式（１）の修飾ウラシルは、例えば、ウラシルの５位の炭素が、下記式（３）の修飾基により修飾されているということもできる。すなわち、前記式（１）の修飾ウラシルは、例えば、ウラシルの５位の炭素に結合した水素原子が、下記式（３）の修飾基により置換されている。
【化３】
2019149979.tif 000006
【００４９】
前記ポリヌクレオチドにおける前記アデニン残基で修飾されたウリジンヌクレオチド残基の具体例として、例えば、下記式（４）で表されるヌクレオチド残基（以下、「ＫＫ９」ともいう）があげられる。
【化４】
2019149979.tif 000007
【００５０】
前記配列番号１の塩基配列からなるポリヌクレオチドにおいて、例えば、下線部のウリジンヌクレオチド残基が、ＫＫ９であることがより好ましい。
【００５１】
本発明の核酸分子が、例えば、ＫＫ９を有する場合、前記ポリヌクレオチドの合成には、例えば、下記式（５）で表されるヌクレオチド三リン酸（以下、「ＫＫ９モノマー」ともいう）を、モノマー分子として使用することができる。前記ポリヌクレオチドの合成において、例えば、前記モノマー分子は、ホスホジエステル結合により、他のヌクレオチド三リン酸と結合する。前記ＫＫ９モノマーの製造方法は、公知の方法で製造でき、例えば、国際公開第２０１５／０６４２２３号公報を参照できる。
【化５】
2019149979.tif 000008
【００５２】
前記修飾基としては、この他に、例えば、メチル基、フルオロ基、アミノ基、チオ基、ベンジルアミノカルボニル基（benzylaminocarbonyl）、トリプタミノカルボニル基（tryptaminocarbonyl）およびイソブチルアミノカルボニル基（isobutylaminocarbonyl）等があげられる。
【００５３】
前記修飾アデニンの具体例としては、例えば、７’−デアザアデニン等があげられ、前記修飾グアニンの具体例としては、例えば、７’−デアザグアニン等があげられ、前記修飾シトシンの具体例としては、例えば、５’−メチルシトシン（５−Ｍｅ−ｄＣ）等があげられ、前記修飾ウラシルの具体例としては、例えば、５’−ベンジルアミノカルボニルウラシル、５’−トリプタミノカルボニルウラシル、５’−イソブチルアミノカルボニルウラシル等があげられ、前記修飾ウラシルの具体例としては、例えば、５’−ベンジルアミノカルボニルウラシル（ＢｎｄＵ）、５’−トリプタミノカルボニルウラシル（ＴｒｐｄＵ）および５’−イソブチルアミノカルボニルウラシル等があげられる。例示した前記修飾ウラシルは、ウラシルの修飾塩基ということもできる。
【００５４】
前記ポリヌクレオチドは、例えば、いずれか１種類の前記修飾塩基のみを含んでもよいし、２種類以上の前記修飾塩基を含んでもよい。
【００５５】
本発明の核酸分子は、例えば、修飾ヌクレオチドを含んでもよい。前記修飾ヌクレオチドは、前述の前記修飾塩基を有するヌクレオチドでもよいし、糖残基が修飾された修飾糖を有するヌクレオチドでもよいし、前記修飾塩基および前記修飾糖を有するヌクレオチドでもよい。
【００５６】
前記糖残基は、特に制限されず、例えば、デオキシリボース残基またはリボース残基があげられる。前記糖残基における修飾部位は、特に制限されず、例えば、前記糖残基の２’位または４’位があげられ、いずれか一方でも両方が修飾されてもよい。前記修飾糖の修飾基は、例えば、メチル基、フルオロ基、アミノ基、チオ基等があげられる。
【００５７】
前記修飾ヌクレオチド残基において、塩基がピリミジン塩基の場合、例えば、前記糖残基の２’位および／または４’位が修飾されていることが好ましい。前記修飾ヌクレオチド残基の具体例は、例えば、デオキシリボース残基またはリボース残基の２’位が修飾された、２’−メチル化−ウラシルヌクレオチド残基、２’−メチル化−シトシンヌクレオチド残基、２’−フルオロ化−ウラシルヌクレオチド残基、２’−フルオロ化−シトシンヌクレオチド残基、２’−アミノ化−ウラシルヌクレオチド残基、２’−アミノ化−シトシンヌクレオチド残基、２’−チオ化−ウラシルヌクレオチド残基、２’−チオ化−シトシンヌクレオチド残基等があげられる。
【００５８】
前記修飾塩基の個数は、特に制限されない。前記ポリヌクレオチドにおいて、前記修飾塩基の個数は、例えば、１個以上である。前記修飾塩基は、前記ポリヌクレオチドにおいて、例えば、１〜８０個、１〜７０個、１〜５０個、１〜４０個、１〜３０個、１〜２０個、１〜１０個であり、また、全ての塩基が、前記修飾塩基でもよい。前記修飾塩基の個数は、例えば、いずれか１種類の前記修飾塩基の個数であってもよいし、２種類以上の前記修飾塩基の個数の合計であってもよい。また、前記ポリヌクレオチドを含む前記核酸分子の全長における前記修飾塩基も、特に制限されず、例えば、１〜８０個、１〜５０個、１〜２０個であり、好ましくは、前述の範囲と同様である。
【００５９】
前記ポリヌクレオチドにおいて、前記修飾塩基の割合は、特に制限されない。前記修飾塩基の割合は、前記ポリヌクレオチドの全塩基数のうち、例えば、１／１００以上、１／４０以上、１／２０以上、１／１０以上、１／４以上、１／３以上である。また、前記ポリヌクレオチドを含む前記核酸分子の全長における前記修飾塩基の割合も、特に制限されず、前述の範囲と同様である。ここで、前記全塩基数は、例えば、前記ポリヌクレオチドにおける天然塩基の個数と前記修飾塩基の個数の合計である。前記修飾塩基の割合を分数で示すが、これを満たす全塩基数と修飾塩基数とは、それぞれ正の整数である。
【００６０】
前記ポリヌクレオチドにおける前記修飾塩基が、前記修飾ウラシルの場合、前記修飾ウラシルの個数は、特に制限されない。前記ポリヌクレオチドにおいて、例えば、天然ウラシルは、前記修飾ウラシルに置換できる。前記ポリヌクレオチドにおいて、前記修飾ウラシルの個数は、例えば、１個以上である。前記修飾ウラシルは、前記ポリヌクレオチドにおいて、例えば、１〜８０個、１〜７０個、１〜５０個、１〜４０個、１〜３０個、１〜２０個、１〜１０個であり、また、全てのウラシルが、前記修飾ウラシルでもよい。
【００６１】
前記ポリヌクレオチドにおいて、前記修飾ウラシルの割合は、特に制限されない。前記修飾ウラシルの割合は、前記天然ウラシルの個数と前記修飾ウラシルの個数との合計のうち、例えば、１／１００以上、１／４０以上、１／２０以上、１／１０以上、１／４以上、１／３以上である。
【００６２】
本発明の核酸分子は、例えば、１もしくは数個の人工核酸モノマー残基を含んでもよい。前記「１もしくは数個」は、特に制限されず、例えば、前記ポリヌクレオチドにおいて、例えば、１〜１００個、１〜５０個、１〜３０個、１〜１０個である。前記人工核酸モノマー残基は、例えば、ＰＮＡ（ペプチド核酸）、ＬＮＡ（Locked Nucleic Acid）、ＥＮＡ（2’-O, 4’-C-Ethylene-bridged Nucleic Acids）等があげられる。前記モノマー残基における核酸は、例えば、前述と同様である。
【００６３】
本発明の核酸分子は、例えば、ヌクレアーゼ耐性であることが好ましい。本発明の核酸分子は、ヌクレアーゼ耐性のため、例えば、前記修飾化ヌクレオチド残基および／または前記人工核酸モノマー残基を有することが好ましい。本発明の核酸分子は、ヌクレアーゼ耐性のため、例えば、５’末端または３’末端に、数１０ｋＤａのＰＥＧ（ポリエチレングリコール）またはデオキシチミジン等が結合してもよい。
【００６４】
本発明の核酸分子は、例えば、さらに付加配列を有してもよい。前記付加配列は、例えば、前記核酸分子の５’末端および３’末端の少なくとも一方に結合していることが好ましく、より好ましくは３’末端である。前記付加配列は、特に制限されない。前記付加配列の長さは、特に制限されず、例えば、１〜２００塩基長、１〜５０塩基長、１〜２５塩基長、１８〜２４塩基長である。前記付加配列の構成単位は、例えば、ヌクレオチド残基であり、デオキシリボヌクレオチド残基およびリボヌクレオチド残基等があげられる。前記付加配列は、特に制限されず、例えば、デオキシリボヌクレオチド残基からなるＤＮＡ、リボヌクレオチド残基を含むＤＮＡ等のポリヌクレオチドがあげられる。前記付加配列の具体例として、例えば、ポリｄＴ、ポリｄＡ等があげられる。
【００６５】
本発明の核酸分子は、例えば、担体に固定化して使用できる。前記本発明の核酸分子は、例えば、５’末端および３’末端のいずれかを固定化することが好ましく、より好ましくは３’末端である。本発明の核酸分子を固定化する場合、例えば、前記核酸分子は、前記担体に、直接的に固定化してもよいし、間接的に固定化してもよい。後者の場合、例えば、前記付加配列を介して固定化することが好ましい。
【００６６】
本発明の核酸分子は、例えば、さらに標識物質を有してもよく、具体的には、前記核酸分子に前記標識物質が結合してもよい。前記標識物質が結合した前記核酸分子は、例えば、本発明の核酸センサということもできる。前記標識物質は、例えば、前記核酸分子の５’末端および３’末端の少なくとも一方に結合させてもよい。前記標識物質による標識化は、例えば、結合でもよいし、化学修飾でもよい。前記標識物質は、特に制限されず、例えば、酵素、蛍光物質、色素、同位体、薬物、毒素および抗生物質等があげられる。前記酵素は、例えば、ルシフェラーゼ、ＮａｎｏＬｕｃルシフェラーゼ等があげられる。前記蛍光物質は、例えば、ピレン、ＴＡＭＲＡ、フルオレセイン、Ｃｙ３色素、Ｃｙ５色素、ＦＡＭ色素、ローダミン色素、テキサスレッド色素、ＪＯＥ、ＭＡＸ、ＨＥＸ、ＴＹＥ等の蛍光団があげられ、前記色素は、例えば、Ａｌｅｘａ４８８、Ａｌｅｘａ６４７等のＡｌｅｘａ色素等があげられる。前記標識物質は、例えば、前記核酸分子に直接的に連結してもよいし、リンカーを介して、間接的に連結してもよい。前記リンカーは、特に制限されず、例えば、ポリヌクレオチドのリンカー等である。
【００６７】
本発明の核酸分子の製造方法は、特に制限されず、例えば、化学合成を利用した核酸合成方法等、遺伝子工学的手法、公知の方法により合成できる。
【００６８】
本発明の核酸分子は、前述のように、前記ｓＩｇＡに結合性を示す。このため、本発明の核酸分子の用途は、前記ｓＩｇＡへの結合性を利用する用途であれば、特に制限されない。本発明の核酸分子は、例えば、前記ｓＩｇＡに対する抗体に代えて、種々の方法に使用できる。
【００６９】
本発明の核酸分子によれば、ｓＩｇＡを検出できる。ｓＩｇＡの検出方法は、特に制限されず、例えば、後述の検出方法を参照し、ｓＩｇＡと前記核酸分子との結合を検出することによって行える。
【００７０】
（２）ｓＩｇＡ検出用センサ
本発明の検出用センサは、前述のように、ｓＩｇＡの検出用センサであって、前記本発明の核酸分子を含むことを特徴とする。本発明の検出用センサは、前記本発明の核酸分子を含んでいればよく、その他の構成は、特に制限されない。本発明の検出用センサを使用すれば、例えば、前記核酸分子と前記ｓＩｇＡとを結合させることで、前述のように、前記ｓＩｇＡを検出できる。
【００７１】
本発明の検出用センサは、例えば、さらに担体を有し、前記担体に前記核酸分子が配置されている。前記核酸分子は、前記担体に固定化されていることが好ましい。前記担体への前記核酸分子の固定化は、例えば、前述の通りである。本発明の検出用センサの使用方法は、特に制限されず、前記本発明の核酸分子および前記本発明の検出方法を援用できる。
【００７２】
（３）検出試薬およびキット
本発明の検出試薬は、前記本発明のｓＩｇＡ結合核酸分子を含むことを特徴とする。本発明の検出試薬は、前記本発明の核酸分子を含んでいればよく、その他の構成は何ら制限されない。本発明の検出試薬を使用すれば、前述のように、例えば、前記ｓＩｇＡの検出等を行うことができる。
【００７３】
本発明の検出試薬は、例えば、前記本発明の核酸分子として、前記本発明のセンサを含んでもよい。本発明の検出試薬は、例えば、さらに、標識物質を有し、前記標識物質が、前記核酸分子に結合されてもよい。前記標識物質は、例えば、前記本発明の核酸分子における説明を援用できる。また、本発明の検出試薬は、例えば、担体を有し、前記担体に前記核酸分子が固定化されてもよい。前記担体は、例えば、前記本発明の核酸分子における説明を援用できる。
【００７４】
本発明の検出試薬は、例えば、前記本発明の核酸分子の他に、その他の構成要素を含んでもよい。前記構成要素は、例えば、前記担体、緩衝液、使用説明書等があげられる。
【００７５】
本発明の検出試薬において例えば、前記核酸分子および前記緩衝液等のその他の構成要素は、それぞれ別個の容器に収容されてもよいし、同一の容器に混合または未混同で収容されてもよい。前記核酸分子と前記その他の構成要素とが別々の容器に収容されている場合、本発明の検出試薬は、検出キットということもできる。
【００７６】
（４）検出方法
本発明の検出方法は、前述のように、試料と核酸分子とを接触させ、前記試料中のｓＩｇＡを検出する工程を含み、前記核酸分子が、前記本発明のｓＩｇＡ結合核酸分子であり、前記検出工程において、前記試料中のｓＩｇＡと前記核酸分子とを結合させて、前記結合により、前記試料中のｓＩｇＡを検出することを特徴とする。本発明の検出方法は、前記本発明の核酸分子を使用することが特徴であって、その他の工程および条件等は、特に制限されない。また、本発明の検出方法は、前記本発明の核酸分子として、前記本発明のｓＩｇＡ検出用センサを使用してもよい。
【００７７】
本発明によれば、前記本発明の核酸分子が、ｓＩｇＡに特異的に結合することから、例えば、ｓＩｇＡと前記核酸分子との結合を検出することによって、試料中のｓＩｇＡを特異的に検出可能である。具体的には、本発明の検出方法は、例えば、試料中のｓＩｇＡの有無またはｓＩｇＡの量を検出可能であることから、定性または定量も可能といえる。また、本発明の検出方法は、例えば、定性分析または定量分析が可能なことから、分析方法ということもできる。
【００７８】
本発明において、前記試料は、特に制限されない。前記試料は、例えば、唾液、尿、血漿および血清等があげられる。
【００７９】
前記試料は、例えば、液体試料でもよいし、固体試料でもよい。前記試料は、例えば、前記核酸分子と接触させ易く、取扱いが簡便であることから、液体試料が好ましい。前記固体試料の場合、例えば、溶媒を用いて、混合液、抽出液、溶解液等を調製し、これを使用してもよい。前記溶媒は、特に制限されず、例えば、水、生理食塩水、緩衝液等があげられる。
【００８０】
前記検出工程は、例えば、前記試料と前記核酸分子とを接触させて、前記試料中のｓＩｇＡと前記核酸分子とを結合させる接触工程と、前記ｓＩｇＡと前記核酸分子との結合を検出する結合検出工程とを含む。また、前記検出工程は、例えば、さらに、前記結合検出工程の結果に基づいて、前記試料中のｓＩｇＡの有無または量を検出する工程を含む。
【００８１】
前記接触工程において、前記試料と前記核酸分子との接触方法は、特に制限されない。前記試料と前記核酸分子との接触は、例えば、液体中で行われることが好ましい。前記液体は、特に制限されず、例えば、水、生理食塩水、緩衝液等があげられる。
【００８２】
前記接触工程において、前記試料と前記核酸分子との接触条件は、特に制限されない。接触温度は、例えば、４〜３７℃、１８〜２５℃であり、接触時間は、例えば、１０〜１２０分、３０〜６０分である。
【００８３】
前記接触工程において、前記核酸分子は、例えば、担体に固定化された固定化核酸分子でもよいし、未固定の遊離した核酸分子でもよい。後者の場合、例えば、容器内で、前記試料と接触させる。前記核酸分子は、例えば、取扱性に優れることから、前記固定化核酸分子が好ましい。前記担体は、特に制限されず、例えば、基板、ビーズ、容器等があげられ、前記容器は、例えば、マイクロプレート、チューブ等があげられる。前記核酸分子の固定化は、例えば、前述の通りである。
【００８４】
前記結合検出工程は、前述のように、前記試料中のｓＩｇＡと前記核酸分子との結合を検出する工程である。前記両者の結合の有無を検出することによって、例えば、前記試料中のｓＩｇＡの有無を検出（定性）でき、また、前記両者の結合の程度（結合量）を検出することによって、例えば、前記試料中のｓＩｇＡの量を検出（定量）できる。
【００８５】
そして、前記ｓＩｇＡと前記核酸分子との結合が検出できなかった場合は、前記試料中にｓＩｇＡは存在しないと判断でき、前記結合が検出された場合は、前記試料中にｓＩｇＡが存在すると判断できる。
【００８６】
前記ｓＩｇＡと前記核酸分子との結合の検出方法は、特に制限されない。前記方法は、例えば、物質間の結合を検出する従来公知の方法が採用でき、具体例として、前述のＳＰＲ等があげられる。また、前記結合は、例えば、前記ｓＩｇＡと前記核酸分子との複合体の検出でもよい。
【実施例】
【００８７】
つぎに、本発明の実施例について説明する。ただし、本発明は、下記実施例により制限されない。市販の試薬は、特に示さない限り、それらのプロトコルに基づいて使用した。
【００８８】
［実施例１］
本発明のｓＩｇＡ核酸分子について、ｓＩｇＡに対する結合能および動態パラメータを、ＳＰＲにより確認した。
【００８９】
（１）アプタマー
前記配列番号１の塩基配列からなるポリヌクレオチド（ｓＩｇＡ結合核酸分子１）を合成し、実施例のＤＮＡアプタマーとしたｓＩｇＡ結合核酸分子１は、前記配列番号１の塩基配列における下線部のウリジンヌクレオチド残基を、前記式（４）で表されるＫＫ９とした。
【００９０】
前記ｓＩｇＡ結合核酸分子１は、その３’末端に、２０塩基長のポリデオキシアデニン（ポリｄＡ）を付加し、ポリｄＡ付加アプタマーとして、後述するＳＰＲに使用した。
【００９１】
（２）試料
市販のヒトｓＩｇＡ（IgA (Secretory) ,Human、MP Biomedicals, LLC-Cappel Products社製、カタログ番号： #55905）を、試料として、以下の試験に使用した。
【００９２】
（３）ＳＰＲによる結合能の解析
結合能の解析には、ProteON XPR36（BioRad社）を、その使用説明書にしたがって使用した。
【００９３】
まず、ProteON専用のセンサーチップとして、ストレプトアビジンが固定化されたチップ（商品名：ProteOn NLC Sensor Chip、BioRad社）を、ProteON XPR36にセットした。前記センサーチップのフローセルに、超純水（ＤＤＷ）を用いて、５μｍｏｌ／Ｌのビオチン化ポリｄＴをインジェクションし、シグナル強度（ＲＵ：Resonance Unit）が約９００ＲＵになるまで結合させた。前記ビオチン化ポリｄＴは、２０塩基長のデオキシチミジンの５’末端をビオチン化して調製した。そして、前記チップの前記フローセルに、ＳＰＲバッファーを用いて、２００ｎｍｏｌ／Ｌの前記ポリｄＡを付加した結合核酸分子１を、流速２５μＬ／ｍｉｎで８０秒間インジェクションし、シグナル強度が約８００ＲＵになるまで結合させた。この結果を、アプタマーのセンサーチップへの固層化量を示すシグナルとして、アプタマー固層化測定値（Ａ）という。続いて、前記試料を、ＳＰＲバッファーを用いて、流速５０μＬ／ｍｉｎで１２０秒間インジェクションし、引き続き、同じ条件で、ＳＰＲバッファーを流して洗浄を３００秒間行った。前記試料における前記ヒトｓＩｇＡ濃度は、４００ｎｍｏｌ／Ｌとした。前記試料のインジェクションおよび前記ＳＰＲバッファーによる洗浄に並行して、シグナル強度の測定を行った。インジェクション開始を０秒として、１１５〜１２５秒の間におけるシグナル強度の平均値を求め、これを、前記アプタマーとタンパク質との結合量を示すシグナルとして、タンパク質結合測定値（Ｂ）という。そして、タンパク質結合測定値（Ｂ）をアプタマー固層化測定値（Ａ）で割った値（Ｂ／Ａ）を、相対値（Relative Unit）として求めた。また、コントロール１は、前記ｓＩｇＡ結合核酸分子１に代えて、下記配列番号２の塩基配列からなるコントロールの核酸分子（配列番号２）を用いた以外は、同様にして、シグナル強度を測定し、相対値を求めた。下記配列番号２の塩基配列において、Ｎは、Ａ、Ｕ、Ｇ、またはＣを示し、ＮにおけるＵおよび下線部のＵは、前記式（４）で表されるＫＫ９とした。さらに、ネガティブコントロールとして、ヒトｓＩｇＡに代えてヒトα−アミラーゼ（α-Amylase 、Lee  Biosolutions社製、カタログ番号：#120-10）を含む試料を用いた以外は同様にして、シグナル強度を測定し、相対値を求めた。これらの結果を図１および２に示す。
【００９４】
コントロールの核酸分子（配列番号２）
5’-GGTAAGCCTCGGACCCTAGATTTGNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNGCUAUCAUUCUGCACCUGGGAAATC-3’ 
【００９５】
なお、前記ＳＰＲバッファーの組成は、４０ｍｍｏｌ／Ｌ  ＨＥＰＥＳ、１２５ｍｍｏｌ／Ｌ  ＮａＣｌ、１ｍｍｏｌ／Ｌ  ＭｇＣｌ２、５ｍｍｏｌ／Ｌ  ＫＣｌ、および０．０１％  Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０とし、ｐＨは、７．４とした。
【００９６】
図１は、シグナル強度の測定値を示すグラフである。図１において、（Ａ）は、ｓＩｇＡ結合核酸分子１のｓＩｇＡまたはα−アミラーゼに対する結合能を示すグラフであり、（Ｂ）は、コントロールの核酸分子のｓＩｇＡまたはα−アミラーゼに対する結合能を示すグラフである。図１（Ａ）および（Ｂ）において、横軸は、試料のインジェクション開始時を基準とした経過時間を示し、縦軸は、結合力の相対値（ＲＵ）を示す。図１（Ａ）および（Ｂ）に示すように、ｓＩｇＡ結合核酸分子１は、ｓＩｇＡに結合したが、コントロールの核酸分子では、ｓＩｇＡへの結合がみられなかった。また、図１（Ａ）および（Ｂ）に示すように、ｓＩｇＡ結合核酸分子１およびコントロールの核酸分子は、α−アミラーゼには結合しなかった。
【００９７】
つぎに、前記相対値（Ｂ／Ａ値）の結果を図２に示す。図２は、ｓＩｇＡ結合核酸分子１およびコントロールの核酸分子のｓＩｇＡへの結合量の相対値を示すグラフである。図２において、横軸は、核酸分子および試料の種類を示し、左から、核酸分子としてｓＩｇＡ結合核酸分子１を用いた場合のα−アミラーゼおよびｓＩｇＡの結果、核酸分子としてコントロールの核酸分子を用いた場合のα−アミラーゼおよびｓＩｇＡの結果を示す。図２示すように、コントロールの核酸分子は、ｓＩｇＡおよびα−アミラーゼへの結合はみられなかった。これに対して、ｓＩｇＡ結合核酸分子１は、α−アミラーゼには結合しないのに対し、ｓＩｇＡに結合した。
【００９８】
これらの結果から、本発明のアプタマーは、前記ヒトｓＩｇＡに対して結合性を示すことがわかった。
【００９９】
以上、実施形態および実施例を参照して本発明を説明したが、本発明は、上記実施形態および実施例に限定されるものではない。本発明の構成や詳細には、本発明のスコープ内で当業者が理解しうる様々な変更をできる。
【０１００】
＜付記＞
上記の実施形態および実施例の一部または全部は、以下の付記のように記載されうるが、以下には限られない。
（付記１）
下記（ａ）または（ｂ）のいずれかのポリヌクレオチドを含むことを特徴とする、分泌型免疫グロブリンＡ（ｓＩｇＡ）結合核酸分子。
（ａ）配列番号１の塩基配列からなるポリヌクレオチド
（ｂ）前記（ａ）の塩基配列に対して、８０％以上の同一性を有する塩基配列からなり、ｓＩｇＡに結合するポリヌクレオチド
配列番号１：GGTAAGCCTCGGACCCTAGATTTGUGGUUCAUCCACCUCGUACCCAUAAGGGCGGCUAUCAUUCUGCACCUGGGAAAUC
（付記２）
前記結合核酸分子が、塩基が修飾基で修飾された修飾塩基を含む、付記１記載のｓＩｇＡ結合核酸分子。
（付記３）
前記修飾塩基が、ウラシル塩基が修飾基で修飾された修飾ウラシル塩基である、付記２記載のｓＩｇＡ結合核酸分子。
（付記４）
前記修飾ウラシル塩基が、下記式（１）で表される修飾ウラシル塩基である、付記３記載のｓＩｇＡ結合核酸分子。
【化１】
2019149979.tif 000009
（付記５）
前記ポリヌクレオチドにおいて、前記配列番号１の塩基配列における下線部のウラシル塩基が、修飾塩基である、付記２から４のいずれか一項に記載のｓＩｇＡ結合核酸分子。
（付記６）
前記（ｂ）のポリヌクレオチドが、下記（ｅ）のポリヌクレオチドである、付記１から５のいずれかに記載の核酸分子。
（ｅ）前記（ａ）の塩基配列に対して、８０％以上の同一性を有する塩基配列からなり、下記式（２）で表される二次構造を形成可能であり、ｓＩｇＡに結合するポリヌクレオチド
【化２】
2019149979.tif 000010
（付記７）
前記ポリヌクレオチドが、ＤＮＡである、付記１から６のいずれか一の付記に記載のｓＩｇＡ結合核酸分子。
（付記８）
付記１から７のいずれかに記載の分泌型免疫グロブリンＡ（ｓＩｇＡ）結合核酸分子を含むことを特徴とする、ｓＩｇＡ検出用センサ。
（付記９）
付記１から７のいずれかに記載の分泌型免疫グロブリンＡ（ｓＩｇＡ）結合核酸分子を含むことを特徴とする、ｓＩｇＡ検出試薬。
（付記１０）
試料と核酸分子とを接触させ、前記試料中の分泌型免疫グロブリンＡ（ｓＩｇＡ）を検出する工程を含み、
前記核酸分子が、付記１から７のいずれか一の付記に記載のｓＩｇＡ結合核酸分子であり、
前記検出工程において、前記試料中のｓＩｇＡと前記核酸分子とを結合させて、前記結合により、前記試料中のｓＩｇＡを検出することを特徴とする、ｓＩｇＡの検出方法。
（付記１１）
前記試料が、唾液、尿、血漿、および血清からなる群から選択された少なくとも１つである、付記１０記載のｓＩｇＡの検出方法。
【産業上の利用可能性】
【０１０１】
以上のように、本発明のｓＩｇＡ結合核酸分子は、ｓＩｇＡと結合可能である。このため、本発明のｓＩｇＡ結合核酸分子によれば、例えば、試料中のｓＩｇＡとの結合の有無によって、優れた精度で、ｓＩｇＡを検出できる。したがって、本発明のｓＩｇＡ結合核酸分子は、例えば、予防医学、健康管理、感染症等の診断、およびストレスの診断等の分野におけるｓＩｇＡの検出に、極めて有用なツールといえる。
【図１】
2019149979.tif 000013
【図２】
2019149979.tif 000014
【配列表】
2019149979000001.app