(57)【要約】      （修正有）【課題】ビタミンＤ２を含む酵母細胞壁の提供。【解決手段】ビタミンＤ２を添加することによって、あるいは酵母細胞壁画分をＵＶ光で処理することによって、または酵母をＵＶ光で処理しその後自己消化および／もしくは加水分解ならびに分離を行うことによって得ることができる、ビタミンＤ２を含む酵母細胞壁。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ビタミンＤ２を含む、酵母細胞壁。
【発明の詳細な説明】
【開示の内容】
【０００１】
〔発明の分野〕
本出願は、ヒトおよび動物に適用されるビタミンＤの補助供給源に関する。より具体的には、本出願は、ビタミンＤ２を含む酵母細胞壁、その使用、およびその産生方法に関する。
【０００２】
〔発明の背景〕
サッカロミセスなどの酵母は、特にビタミンＢの供給源として、高い栄養価を有することが知られている。例えば、醸造用酵母は、長年にわたりヒト用のサプリメントとして市販されている。トルラ、カンジダ、またはクリベロマイセス（Klyuveromyces）のような他の酵母も、ヒトが使用するためおよび／または動物の飼料のために成長因子およびビタミンの栄養補助食品として使用されてきた。最近になって、ヒトおよび動物が利用する食品の栄養価を高める（fortify）のに使用される、ビタミンＤを含む酵母に対する関心が、高まってきている。しかしながら、酵母は、ビタミンＤを含有しておらず、プロビタミンＤ２ステロールである、エルゴステロールという独自のステロールを含有している。ビタミンＤを含む酵母は、通常、酵母をＵＶ供給源で処理することにより入手される。
【０００３】
〔発明の概要〕
本発明のある態様によると、ビタミンＤ２を含む酵母細胞壁が提供される。
【０００４】
酵母細胞壁の一態様では、ビタミンＤ２は、添加されたビタミンＤ２（added vitamin D2）である。
【０００５】
酵母細胞壁の別の態様では、ビタミンＤ２は、酵母または酵母細胞壁の画分をＵＶ供給源で処理することにより得られる。
【０００６】
酵母細胞壁のさらなる態様では、酵母細胞壁は、ＵＶ処理される。
【０００７】
ビタミンＤ２を含む酵母細胞壁の一態様では、酵母細胞壁は、サッカロミセスまたは任意の非サッカロミセス酵母から産生される。
【０００８】
別の態様では、非サッカロミセス酵母は、カンジダ種、ハンセニアスポラ種、ハンゼヌラ種、クリベロマイセス種、メチニコビア種、ピチア種、スターメレラ種（Starmerella sp）、およびトルラスポラ種からなる群から選択される。
【０００９】
ビタミンＤ２を含む、ＵＶ処理済み酵母細胞壁の態様では、ＵＶ処理済み酵母細胞壁は、β-グルカンを含む。
【００１０】
ビタミンＤ２を含む、ＵＶ処理済み酵母細胞壁の態様では、β‐グルカン含量は、ＵＶ光で処理されていない酵母細胞壁のβ‐グルカン含量の少なくとも７５％、ＵＶ光で処理されていない酵母細胞壁のβ‐グルカン含量の少なくとも８０％、ＵＶ光で処理されていない酵母細胞壁のβ‐グルカン含量の少なくとも８５％、またはＵＶ光で処理されていない酵母細胞壁のβ‐グルカン含量の少なくとも９０％である。
【００１１】
本発明の別の態様によると、前記に定めたような、酵母細胞壁またはＵＶ処理済み酵母細胞壁は、動物またはヒトが栄養摂取するための栄養補助食品として使用される。
【００１２】
本発明のさらなる態様によると、前記に定めたような酵母細胞壁またはＵＶ処理済み酵母細胞壁を、焼き菓子（baked goods）、機能性食品、ダイエット食品（dietary food）、栄養食品、発酵飲料または非発酵飲料のための添加物として使用することが提供される。
【００１３】
本発明のさらなる態様によると、前記に定めたような酵母細胞壁またはＵＶ処理済み酵母細胞壁を用いて製造される、焼き菓子が提供される。
【００１４】
焼き菓子の一態様では、焼き菓子は、パン、クラッカー、スポーツ向けの棒状菓子（sport bars）、またはビスケットである。
【００１５】
本発明の別の態様によると、動物飼料と、ビタミンＤ２を含むＵＶ処理済み酵母細胞壁と、を含む組成物が提供される。
【００１６】
この組成物のある態様では、組成物は、卵黄中のビタミンＤ２含量を増加させるために産卵鶏の食事に使用される。
【００１７】
本発明のさらなる態様によると、卵黄中のビタミンＤ２含量を増加させる方法が提供され、この方法は、産卵鶏の飼料と、ビタミンＤ２を含むＵＶ処理済み酵母細胞壁と、を含む組成物を産卵鶏に与えることを含む。
【００１８】
本発明の別の態様によると、ビタミンＤ２を含むＵＶ処理済み酵母細胞壁を調製する方法が提供され、この方法は、酵母を供給する工程と、自己消化および／または加水分解酵母を得るために酵母を自己消化させ、かつ／または加水分解する工程と、酵母細胞壁画分および酵母抽出物を提供するために自己消化および／または加水分解酵母を分離させる工程と、ビタミンＤ２を含むＵＶ処理済み酵母細胞壁を得るために酵母細胞壁画分をＵＶ光で処理する工程と、を含む。
【００１９】
この方法のある態様では、ビタミンＤ２含量は、ＵＶ光で処理されていない酵母細胞壁より少なくとも１００倍高いか、ＵＶ光で処理されていない酵母細胞壁より少なくとも２００倍高いか、ＵＶ光で処理されていない酵母細胞壁より少なくとも３００倍高いか、ＵＶ光で処理されていない酵母細胞壁より少なくとも４００倍高いか、ＵＶ光で処理されていない酵母細胞壁より少なくとも５００倍高いか、ＵＶ光で処理されていない酵母細胞壁より少なくとも１０００倍高いか、ＵＶ光で処理されていない酵母細胞壁より少なくとも５０００倍高いか、または、ＵＶ光で処理されていない酵母細胞壁より少なくとも１００００倍高い。
【００２０】
本発明のさらなる態様によると、ビタミンＤを含むＵＶ処理済み酵母細胞壁を調製する方法が提供され、この方法は、酵母を供給する工程と、ビタミンＤ２を含むＵＶ処理済み酵母を得るために酵母をＵＶ光で処理する工程と、ＵＶ処理済み自己消化および／または加水分解酵母を得るために、ビタミンＤ２を含むＵＶ処理済み酵母を自己消化させ、かつ／または加水分解する工程と、ビタミンＤ２を含むＵＶ処理済み酵母細胞壁画分およびＵＶ処理済み酵母抽出物を提供するよう、ＵＶ処理済み自己消化および／または加水分解酵母を分離させる工程と、を含む。
【００２１】
この方法のある態様では、ＵＶ処理済み酵母細胞壁中のビタミンＤ２含量は、ビタミンＤ２を含むＵＶ処理済み酵母中のビタミンＤ２の含量の、少なくとも１．２５倍、好ましくは少なくとも１．５倍、さらに好ましくは少なくとも１．７５倍、最も好ましくは少なくとも２倍である。
【００２２】
〔詳細な説明〕
ビタミンＤは、ヒトおよび動物双方の健康において、重要な役割を果たす。ヒトは、日光からのＵＶ照射にさらされると、ビタミンＤ、特にビタミンＤ３を産生することができる。また、ビタミンＤは、食事、特にビタミンＤ強化ミルクを通じて、得ることができる。特に成人において、直射日光の下で過ごす時間が少なく、ミルクの消費が少ない人では、これらのビタミンＤ供給源は、良好な健康状態に必要なビタミンＤレベルをもたらすのに不十分になってきている。
【００２３】
例えば、栄養価を高めたパンおよびシリアルは、食事におけるビタミンＤの補助供給源となっている。しかしながら、添加物として使用される市販のビタミンＤ３は、抽出および精製工程によって動物源（animal sources）から分離されており、個体群（population）の少なくとも一部にとっては、許容できない添加物となる。
【００２４】
ビタミンＤの、許容される代替的供給源は、酵母において見つけることができる。しかしながら、酵母は、ビタミンＤを含んでおらず、プロビタミンＤ２ステロールである、エルゴステロールという独自のステロールを含んでいる。例えばエルゴステロールを含有する酵母で作られるパンにおいて、ビタミンＤを増加させることで知られる方法のうちの１つは、パン屋（bakers）がパンをＵＶ光で処理することを必要としている。ビタミンＤを増加させることで知られる他の方法は、概して、酵母の自己消化を避けるために低温での活性酵母のＵＶ処理を含み、これにより、酵母の生存能力、酵素活性、およびビタミンＤ含量を保つ。
【００２５】
エルゴステロールは、酵母の自己消化および／または加水分解ならびに分離プロセス後に、主に、酵母細胞壁副産物に分割されることが観察された。エルゴステロールは、酵母の自己消化および／または加水分解ならびに分離プロセス下で安定したままであり、ビタミンＤ２に変換される能力の大部分を保持していることが分かった。その結果、ＵＶ光でビタミンＤ２に変換可能な、より多くのエルゴステロール含量を、酵母細胞壁副産物中に得ることができる。これは、良好な健康状態に必要なビタミンＤレベルを、ヒトおよび動物に与えるのに有利であることが分かった。これはまた、動物源から分離されていないビタミンＤの安い補助供給源を、ヒトおよび動物に与えるのにも有利であることが分かった。さらに、このことは、付加価値のある食品および飼料添加物ならびに付加価値のある焼き菓子をヒトおよび動物に与えるのに有利であることが分かった。
【００２６】
本出願は、ビタミンＤ２を含む酵母細胞壁、その使用、およびその産生方法に関する。
【００２７】
用語「酵母細胞壁」は、本明細書で使用される場合、酵母の自己消化および／または加水分解により得られる副産物を指すことが理解されるであろう。このプロセスにおいては、不溶性細胞壁が、可溶性成分（酵母抽出物）から分離される。酵母細胞壁は、主に、β‐グルカン、マンノ蛋白質および蛋白質で構成される。前述したとおり、エルゴステロールは、酵母の自己消化および／または加水分解の後で、主に、酵母細胞壁に分割される。
【００２８】
用語「ＵＶ処理済みの」または「ＵＶ光で処理される」は、本明細書で使用される場合、酵母細胞壁または酵母が、その中のビタミンＤ２含量を増加させる目的でＵＶ光にさらされたか、またはさらされるプロセスを指すことが理解されるであろう。
【００２９】
用語「ビタミンＤを含むＵＶ処理済み酵母細胞壁」は、本明細書で使用される場合、ビタミンＤ２の含量がＵＶ光での処理に応じて増加されている、前述した酵母細胞壁を指すことが理解されるであろう。
【００３０】
図面に示され、本明細書で説明される実施形態を、これから参照する。これにより、開示の範囲の制限が意図されているわけではないことが、理解される。本開示は、例示された実施形態に対するあらゆる変更および改変を含み、かつこの開示が属する分野の当業者が通常思いつくであろう、開示の原理のさらなる適用を含むことが、さらに理解される。
【００３１】
ある実施形態では、ビタミンＤ２を含む酵母細胞壁が提供される。ビタミンＤ２は、添加ビタミンＤ２（added vitamin D2）であってよい。添加ビタミンＤ２は、本出願のための任意の適切な供給源から得られ、酵母細胞壁と混合されることができる。
【００３２】
別の実施形態では、ビタミンＤ２を含む細胞壁は、ビタミンＤ２を含むＵＶ処理済み酵母細胞壁である。ビタミンＤ２を含むＵＶ処理済み酵母細胞壁を得る方法も提供される。
【００３３】
図３を参照すると、本出願による、ビタミンＤ２を含むＵＶ処理済み酵母細胞壁を調製する方法１０が示されている。工程２０では、方法１０は、酵母を供給することを含む。この酵母は、サッカロミセス属由来の酵母、または任意の非サッカロミセス酵母であってよい。非サッカロミセス酵母は、カンジダ種、ハンセニアスポラ種、ハンゼヌラ種、クリベロマイセス種、メチニコビア種、ピチア種、スターメレラ種、およびトルラスポラ種からなる群から選択される。好ましくは、酵母は、サッカロミセスセレビシエ、またはCyberlindnera jadinii（トルラ酵母）である。
【００３４】
工程２２では、工程２０の酵母が、自己消化および／または加水分解酵母を得るために、当業者に既知の方法に従って自己消化および／または加水分解を受ける。ある実施形態では、少なくとも１つの酵素が、酵母の加水分解に使用され得る。好ましくは、その少なくとも１つの酵素は、パパイン（papaine）である。酵母を加水分解する目的の、他の適切な酵素または酵素混合物を使用し得ることが、理解される。一実施形態では、自己消化および／または加水分解は、５０〜６５℃、優先的には（preferentially）５５〜６０℃の温度で、例えば、２０〜２８時間、優先的には、２２〜２４時間の期間にわたり、行われ得る。
【００３５】
工程２２の自己消化および／または加水分解酵母は、７５〜８５℃の温度で１５〜３０分間の、当業者に既知の方法での、熱処理により不活化され得る。
【００３６】
工程２４では、工程２２の自己消化および／または加水分解酵母は、酵母細胞壁画分および酵母抽出物をもたらすために分離される。より具体的には、可溶性画分（酵母抽出物）が、例えば遠心分離機を使用することにより、当業者に既知の方法に従って、不溶性部分（酵母細胞壁画分）から分離される。可溶性画分を不溶性画分から分離する、任意の他の適切な方法を使用してよいことが、理解される。しかしながら、本出願の一部を形成するわけではない酵母抽出物は、例えば、食品、ワイン、ビール、および燃料エタノールの生産など、他の適切な適用において、使用され得る。
【００３７】
工程２６では、工程２４から得られた液体の酵母細胞壁画分は、ＵＶ光で処理されて、その中のビタミンＤ２の含量を増加させ、ビタミンＤ２を含むＵＶ処理済み酵母細胞壁を産生する。酵母細胞壁中のビタミンＤ２の含量を増加させるために、工程２４の酵母細胞壁画分は、図１または図２に示すような、撹拌を伴うＵＶ光バイオリアクターシステム（UV photo-bioreactor system with agitation）においてＵＶ光で処理され得る。小規模、例えば実験室規模では、酵母細胞壁画分は、約２〜６時間、好ましくは約４時間にわたり、図２の表面ＵＶ光バイオリアクター（surface UV photo-bioreactor）においてＵＶ光で処理され得る。工程２４から得られた酵母細胞壁画分は、約４℃〜約６０℃、好ましくは約５０℃の温度で、ＵＶ光により処理され得る。別の実施形態では、ＵＶ光は、処理される酵母細胞壁の表面から２．５〜１０ｃｍの距離に位置付けられ得る。
【００３８】
あるいは、大規模の場合、工程２４から得られた酵母細胞壁画分は、例えば２４〜１２０時間など、さらに長い期間、図２に示すような水中光バイオリアクター（submerged photo-bioreactor）においてＵＶ光で処理され得る。ＵＶ光による酵母細胞壁画分の処理は、必要に応じて、より短いか、またはより長い期間を必要とすることが、理解される。大規模の場合、酵母細胞壁は、約４℃〜約６０℃の温度で、好ましくは約４℃の温度で、ＵＶ光により処理され得る。一実施形態では、ＵＶ光は、光バイオリアクターの中に沈められることができる。
【００３９】
一実施形態では、ＵＶ光の波長は、２００〜４００ｎｍの範囲、好ましくはＵＶＢバンド、より具体的には３０２ｎｍ、または好ましくはＵＶＣバンド、より具体的には２５４ｎｍであってよい。
【００４０】
工程２６からの、ビタミンＤ２を含む、対応するＵＶ処理済み液体酵母細胞壁は、さらに濃縮され、吹き付け乾燥されて、ビタミンＤ２を含むＵＶ処理済み酵母細胞壁の粉末を入手することができる。例えばローラー乾燥などの、他の適切な方法が、ビタミンＤ２を含む、乾燥したＵＶ処理済み酵母細胞壁を入手する目的で使用され得ることが、理解される。
【００４１】
方法１０のある実施形態では、前述したＵＶ処理済み酵母細胞壁中のビタミンＤ２の含量は、ＵＶ処理されていない酵母細胞壁と比較した場合に、少なくとも５０倍、より好ましくは少なくとも１００倍、少なくとも２００倍、少なくとも３００倍、少なくとも４００倍、少なくとも５００倍、少なくとも１０００倍、少なくとも５０００倍、少なくとも１００００倍、増加する。
【００４２】
図４を参照すると、本出願に従った、ビタミンＤを含むＵＶ処理済み酵母細胞壁を調製する代替的方法１１０が示されている。工程１２０では、方法１１０は、酵母を供給することを含む。酵母は、方法１０の説明で定義したとおりである。
【００４３】
工程１２２では、工程１２０の酵母は、ＵＶ光で処理されて、ビタミンＤ２を含むＵＶ処理済み酵母を得る。酵母は、方法１０の説明で定めたのと同じ、ＵＶ光、時間、および温度の条件にさらされる。
【００４４】
工程１２４では、工程１２２で得られた、ビタミンＤ２を含むＵＶ処理済み酵母は、当業者に既知の方法に従って、自己消化および／または加水分解を受けて、ビタミンＤ２を含む、自己消化および／または加水分解されたＵＶ処理済み酵母を得る。ある実施形態では、少なくとも１つの酵素が、ＵＶ処理済み酵母の加水分解に使用され得る。好ましくは、少なくとも１つの酵素は、パパインである。酵母を自己消化／加水分解する目的の、他の適切な酵素または酵素混合物を使用し得ることが、理解される。一実施形態では、自己消化／加水分解は、５０〜６５℃、優先的には５５〜６０℃の温度で、例えば２０〜２８時間、優先的には２２〜２４時間の期間にわたり、行われ得る。
【００４５】
工程１２４から得られた、ビタミンＤ２を含む、自己消化および／または加水分解されたＵＶ処理済み酵母は、７５〜８５℃の温度で１５〜３０分間の、当業者に既知の方法での熱処理により不活化され得る。
【００４６】
工程１２６では、自己消化および／または加水分解されたＵＶ処理済み酵母は、ビタミンＤ２を含むＵＶ処理済み酵母細胞壁画分と、酵母抽出物と、を提供するように分離される。さらに具体的には、可溶性画分（酵母抽出物）は、方法１０で定めたのと同じ適切な方法に従って、不溶性部分（ビタミンＤ２を含むＵＶ処理済み酵母細胞壁画分）から分離される。しかしながら、本出願の一部を形成しない酵母抽出物は、方法１０で定められたような、他の適切な適用に使用され得る。
【００４７】
工程１２６からの、ビタミンＤ２を含む、対応するＵＶ処理済み液体酵母細胞壁画分は、さらに濃縮され、吹き付け乾燥されて、ビタミンＤ２を含むＵＶ処理済み酵母細胞壁の粉末を得ることができる。例えばローラー乾燥などの、他の適切な方法が、ビタミンＤ２を含む、乾燥したＵＶ処理済み酵母細胞壁を得る目的で使用され得ることが、理解される。
【００４８】
方法１１０のある実施形態では、自己消化／加水分解および分別工程後に酵母細胞壁に分割される、ＵＶ処理済みの市販液体酵母中のビタミンＤ２のパーセンテージは、少なくとも７５％、より好ましくは少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、および少なくとも９５％である。分離工程の収率（yield）に応じて、ＵＶ処理済み酵母細胞壁中のビタミンＤ２含量は、ビタミンＤ２を含むＵＶ処理済み酵母中のビタミンＤ２含量の、少なくとも１．２５倍、好ましくは少なくとも１．５倍、より好ましくは少なくとも１．７５倍、最も好ましくは少なくとも２倍である。
【００４９】
一実施形態では、ＵＶ処理済み酵母細胞壁は、β‐グルカンをさらに含み、β‐グルカンは、ヒトおよび動物にとって多くの健康上の利益があることも知られている。図５に示すように、異なる波長および温度でのＵＶ光処理の前および後に測定された、酵母細胞壁中のβ‐グルカン含量は、互いによく似ている。ＵＶ光処理前の酵母細胞壁は、乾燥量基準で、酵母細胞壁の総重量に比べて２９．１７重量％のβ‐グルカン含量を有する。２５４ｎｍのＵＶ光で、４℃で処理された酵母細胞壁は、乾燥量基準で、酵母細胞壁の総重量に比べて３１．４１重量％のβ‐グルカン含量を有する。３０２ｎｍのＵＶ光で、５０℃で処理された酵母細胞壁は、乾燥量基準で、酵母細胞壁の総重量に比べて３０．３８重量％のβ‐グルカン含量を有する。これらの結果を参照すると、ビタミンＤ２を含むＵＶ処理済み酵母細胞壁は、条件にかかわらず、ＵＶ光処理後にそのβ‐グルカン含量の大部分を保持すると、結論付けられる。より具体的には、ビタミンＤ２を含むＵＶ処理済み酵母細胞壁は、ＵＶ処理されていない酵母細胞壁と比べて、そのβ‐グルカン含量の、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％を保持することができる。
【００５０】
ある実施形態では、動物飼料と、ビタミンＤ２を含むＵＶ処理済み酵母細胞壁と、を含む組成物が提供される。この組成物は、β‐グルカンをさらに含むことができる。この組成物は、卵黄中のビタミンＤ２含量を増やすために、産卵鶏の食事に使用され得る。組成物は、栄養補助食品として動物の食事に使用されてもよいことが、理解される。ある実施形態では、動物は、牛、豚、鳥、馬、羊、ウサギ（lapine）、ヤギ、犬、および猫であってよい。好ましくは、鳥は、鶏、七面鳥、カモ、ガチョウ、キジ、ウズラ、またはコンパニオンバード（companion birds）である。
【００５１】
別の実施形態では、卵黄中のビタミンＤ含量を増加させる方法が提供され、この方法は、産卵鶏の飼料と、ビタミンＤを含むＵＶ処理済み酵母細胞壁と、を含む組成物を、産卵鶏に与えることを含む。
【００５２】
一実施形態では、ビタミンＤ２を含むＵＶ処理済み酵母細胞壁は、焼き菓子、機能性食品、ダイエット食品、栄養補助食品（nutraceutical food）、発酵飲料または非発酵飲料のための添加物として使用され得る。ＵＶ処理済み酵母細胞壁は、β‐グルカンをさらに含み得る。
【００５３】
一実施形態では、ビタミンＤ２を含むＵＶ処理済み酵母細胞壁を使用して製造される、焼き菓子が提供される。ＵＶ処理済み酵母細胞壁は、β‐グルカンをさらに含むことができる。好ましくは、焼き菓子は、パン、クラッカー、スポーツ向けの棒状菓子、またはビスケットである。
【００５４】
一実施形態では、ヒトが栄養摂取するための、ビタミンＤ２を含む商品が提供され、このビタミンＤ２含量は、食事からの日々のビタミンＤ摂取の規制上要件に匹敵するものである。
【００５５】
一実施形態では、ＵＶ処理済み酵母細胞壁は、発酵飲料および発酵食品において、栄養素またはビタミン供給源として使用され得る。
【００５６】
〔実施例〕
器具
紫外線処理による酵母細胞壁中のビタミンＤ２の増加を評価する目的で、図１および図２の光バイオリアクターを使用した。バイオリアクター１は、容量Ｖ１の酵母材料２を含有する溶液を含み、これは、溶液表面から５ｃｍの距離に位置付けられた紫外線ランプ３とは直接接触しない（図１）。あるいは、バイオリアクター１は、Ｖ１より多い容量Ｖ２の溶液２を含み、紫外線ランプ３は、石英スリーブ４と共に溶液中に挿入される（図２）。処理中に溶液の均質化を確実にするため、撹拌器５を使用する。
【００５７】
実施例１：自己消化／加水分解および酵母分別
酵母細胞壁および酵母抽出物は、酵素増大自己消化／加水分解プロセスを用いて、サッカロミセスセレビシエから産生された。通常の市販パン酵母クリームを使用し、クリーム酵母の固体含量を、分別実験前に、１４．９９％に調節した。６リットルの液体酵母が、ケマップ社の発酵槽（Chemap fermenter）内で、２２時間、５５℃で、ｐＨを５．６、撹拌を６００ｒｐｍとして、加水分解された。パパイン（BiocatalysisのPromod 144GL）が、液体酵母の乾燥物質含量に基づいて、０．５％の割合で添加された。２２時間の自己消化／加水分解の後、加水分解物が、８５℃で３０分間の熱処理により、不活化された。酵母の加水分解物を冷却した後、分離が、実験用遠心分離機（Thermo ScientificのSorvall Legend XTR、１００００ｇ）を用いて行われて、酵母細胞壁画分を洗浄し、採取した。液体細胞壁および液体酵母抽出物の重量を測定した。乾燥重量分析（固体含量）が、物質収支解析を行うため以下の３つのサンプルで行われた：加水分解の初めにおける液体酵母サンプル、加水分解に続いた熱不活化処理後の、加水分解された酵母サンプル、および最終液体酵母細胞壁サンプル。
【００５８】
分離後、乾燥細胞壁サンプルが、液体細胞壁から準備された。乾燥細胞壁サンプルを準備するために、液体細胞壁は、ろ過または遠心分離され、かつプレスされて、細胞壁の塊を生じた。この塊は、次に、８５℃のオーブンで４〜５時間乾燥され、その後、乾燥細胞壁は、解析前にコーヒーグラインダーで挽かれて（grounded）、微粒子にされた。細胞壁サンプルのエルゴステロール含量は、Dimartino（２００７年）およびHuang他（２００９年）を出典とする、サンプル準備および抽出プロトコルを用いて、その後、決定された。
【表１】
2019068843.tif 000002
表１：通常のパン酵母の分別中の乾燥物質収支
（＊：ラレマンド社（Lallemand）の酵母培養物コレクション）
【００５９】
通常のパン酵母での分別実験中の乾燥物質収支解析の結果を、表１に示す。１４．９９％が固体の液体酵母６０００ｇから、２２６４ｇの液体細胞壁が産生された。１７．１８％と決定された、液体細胞壁の固体含量に基づくと、産生された酵母細胞壁の乾燥物質は、３６９ｇとなる。細胞壁および酵母抽出物で達成された収率は、それぞれ、４３．２５％および５６．７５％であった。双方の収率は、サッカロミセスセレビシエによる市販酵母抽出物の産生において達成される収率に似ている。
【表２】
2019068843.tif 000003
表２：出発酵母（starting yeast）および酵母細胞壁画分中のエルゴステロール含量
【００６０】
表２に示すように、出発酵母および産生された細胞壁画分のエルゴステロール含量は、それぞれ、０．７０４％および１．６０３％であると判断された。したがって、細胞壁のエルゴステロール含量は、出発酵母のエルゴステロール含量より約２．３倍高かった。
【表３】
2019068843.tif 000004
表３：分別中のエルゴステロール物質収支解析
【００６１】
酵母分別実験中のエルゴステロール物質収支解析を表３に示す。細胞壁画分におけるエルゴステロールの回収効率は、１００％にかなり近かった。細胞壁画分中で回収されたエルゴステロールは、出発酵母からのエルゴステロール全体の９８．５６％を占め、これは、酵母の自己消化および分別プロセス中にエルゴステロールが細胞壁画分へ主に分割したことを示している。その結果、細胞壁画分中でのエルゴステロールの劇的な濃縮（dramatic enrichment）が、酵母抽出物産生プロセス中に達成された。
【００６２】
実施例２：表面光バイオリアクターにおける液体酵母細胞壁のＵＶ処理
液体酵母細胞壁（サッカロミセスセレビシエ由来）が、実施例１のプロトコルと同様に準備された。得られた液体細胞壁の乾燥物質含量は、ＵＶ処理前に１１％に調節された。
【００６３】
図３に示したプロセスに従って、液体酵母細胞壁は、図１に示すような表面紫外線光バイオリアクターを用いて、ＵＶ処理された。光バイオリアクター設備の中心には、ＵＶＰ社の８ＷのＵＶランプがあり、これは、短範囲（２５４ｎｍ）、中範囲（３０２ｎｍ）、および長範囲（３６５ｎｍ）の、３つの切り替え可能ＵＶチューブを備える。液体酵母壁は、紫外線に対してほぼ不透明なので、エルゴステロールの分子すべてが溶液の表面に到達して紫外線照射されるように、処理中に酵母細胞壁をかき混ぜる必要があった。表面光バイオリアクターは、液体酵母細胞壁の薄層を達成し、ビタミンＤ２変換の効率を高めるために使用された。１２０ｍＬの液体酵母細胞壁が、矩形の容器に入れられ、４時間、連続的に照射された。処理中、液体細胞壁は、連続して混合された。これらの実験は、４℃および５０℃で行われ、光化学反応が、それぞれの温度について、２５４ｎｍのＵＶ波長（ＵＶＣ）で行われた。
【００６４】
処理後、乾燥細胞壁サンプルが調製された。液体細胞壁画分は、ろ過または遠心分離およびプレスされて、細胞壁の塊を生じた。細胞壁の塊は、次に、８５℃のオーブンで、４〜５時間乾燥させられ、さらに、解析前にコーヒー破砕機（coffee breaker）で挽かれて、微細粒子になった。乾燥酵母細胞壁サンプルは、公式法９８２．２９（Official Methods of Analysis of AOAC INTERNATIONAL （2000） 第１７版、AOAC INTERNATIONAL, 米国メリーランド州ゲイザースバーグ）を用いたＨＰＬＣビタミンＤ２解析のために、Covance Laboratories Inc.（ウィスコンシン州マディソン）に送られた。
【表４】
2019068843.tif 000005
表４：２５４ｎｍでの表面光バイオリアクターにおけるＵＶ光処理後の、酵母細胞壁のビタミンＤ２含量
【００６５】
表４に示すように、対照の細胞壁中のビタミンＤ２含量は、５５７０ＩＵ／１００ｇと判断された。これは、細胞壁を産生するのに使用された市販のクリーム酵母が、約３７７８ＩＵ／１００ｇのビタミンＤ２（乾燥物質ベースで）を含有する植物から入手したものであったためである。４℃で産生されたビタミンＤ酵母細胞壁サンプルについては、ビタミンＤ２含量は、３，９１０，０００ＩＵ／１００ｇ（乾燥細胞壁ベースで）であり、これは、対照の細胞壁と比べて７０２倍の増加を表している。５０℃の温度では、ビタミンＤ２含量は５，８００，０００ＩＵ／１００ｇ（乾燥細胞壁ベースで）であり、これは、１０４１倍の増加を表す。したがって、液体酵母細胞壁のビタミンＤ２含量は、特に５０℃の温度で、２５４ｎｍでの紫外線処理後に劇的に増加し得る。
【００６６】
実施例３：水中光バイオリアクターにおける液体酵母細胞壁のＵＶ処理
図３に示すプロセスに従って、（サッカロミセスセレビシエから、実施例１に従って産生された）液体酵母細胞壁が、図２に示すような水中紫外線光バイオリアクターにより、ＵＶ処理された。液体細胞壁が、実施例１に従って調製され、固体含量が１０％の、１８リットルの液体酵母細胞壁が、Atlantic Ultraviolet Corporationの、波長が２５４ｎｍ（ＵＶＣ）の１４ワット紫外線ランプを備えた２０リットル光バイオリアクターに入れられた。撹拌器で力強い撹拌を行って、全容量のＵＶ処理を確実にし、石英のスリーブ周辺における付着物の可能性を防ぐことにより紫外線の高い透過率を維持した。１８リットルの液体細胞壁は、４℃で７２時間にわたり、連続的に混合され、ＵＶ処理された。
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表Ａ：水中光バイオリアクターにおいて液体細胞壁を４℃で２５４ｎｍのＵＶ処理を行う間のビタミンＤ２増加の経時変化
【００６７】
表Ａに示すように、細胞壁中のビタミンＤ２含量は、７２時間で６５９０ＩＵ／１００ｇから３，１８０，０００ＩＵ／１００ｇに増え、これは、約４８５倍の増加を表している。達成されたビタミンＤ２含量は、容量が大きいために、表面光バイオリアクターよりも低いが、経時変化は、より多量のビタミンＤ２が、より長い処理時間にわたり得られたことを示している。したがって、液体酵母細胞壁のＵＶ処理による、ビタミンＤ２を含むＵＶ処理済み酵母細胞壁の産生は、表面光バイオリアクターおよび水中光バイオリアクターの双方に適合する。
【００６８】
実施例４：酵母細胞中のビタミンＤ２の増加に対するＵＶ波長の影響
液体酵母細胞壁が、サッカロミセスセレビシエから、実施例１に従って産生された。液体酵母細胞壁のＵＶ処理は、実施例２に記載したのと同じ表面光バイオリアクターを用いて、３つの異なる波長：２５４ｎｍ（ＵＶＣ）、３０２ｎｍ（ＵＶＢ）、３６５ｎｍ（ＵＶＡ）を使用して実行された。ＵＶ処理は、２時間行われ、すべての実験は、室温で実行された。４つのＵＶ処理済み乾燥酵母細胞壁サンプル（３つが処理されたもので、１つは対照）が、産生され、実施例２に記載したようなビタミンＤ２解析のためにCovanceに送られた。
【表５】
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表５：表面光バイオリアクターにおけるＵＶ処理後の、酵母細胞壁中のビタミンＤ２の増加に対するＵＶ波長の影響
【００６９】
表５に示すように、選択されたＵＶ波長は、酵母細胞壁画分中のビタミンＤ２増加に多大な影響を及ぼす。ＵＶＡは、液体酵母細胞壁中でエルゴステロールをビタミンＤ２に変換するのに有効ではなかったが、３０２ｎｍの波長（ＵＶＢ）は、２５４ｎｍ（ＵＶＣ）よりも著しく有効であることが分かった。
【００７０】
実施例５：表面光バイオリアクターにおける非サッカロミセス酵母由来の液体酵母細胞壁のＵＶ処理
ＵＶ処理は、非サッカロミセス酵母細胞壁のビタミンＤ２含量を効果的に増大させ、トルラから作られた液体酵母細胞壁の紫外線処理が、実施例２に記載したプロトコルに従って実行された。ＵＶ処理は、４時間にわたり２５４ｎｍで、２つの温度（４℃および５０℃）で行われた。
【表６】
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表６：表面光バイオリアクターにおける２５４ｎｍでのＵＶ処理済みトルラ酵母細胞壁のビタミンＤ２含量
【００７１】
トルラ酵母クリームは、実験室で産生されたので、対照のトルラ酵母細胞壁ではビタミンＤ２は検出されなかった。サッカロミセスセレビシエ酵母細胞壁と同様に、トルラ酵母細胞壁のビタミンＤ２含量は、紫外線処理を通じて、劇的に増加し、４℃では、検出できない程度から、１，３３０，０００ＩＵ／１００ｇに（乾燥細胞壁ベースで）、また５０℃では、検出できない程度から、１，７８０，０００ＩＵ／１００ｇまで（乾燥細胞壁ベースで）の増加であった。加えて、高い光化学反応温度（５０℃）では、より高いビタミンＤ２含量が観察され、これは、サッカロミセスセレビシエ由来のＵＶ処理済み酵母細胞壁において以前観察されたものと一致した。
【００７２】
実施例６：ビタミンＤ２を含むＵＶ処理済み酵母の自己消化および分別を通じた、ビタミンＤ２を含むＵＶ処理済み酵母細胞壁の産生  ‐  パイロット試験
図４に示したプロセスに従って、ビタミンＤ２を含むＵＶ処理済み酵母細胞壁が、ビタミンＤ２含量を増やすために、商用に産生された液体酵母をＵＶ処理することによって、産生された。結果として得られたＵＶ処理済み液体酵母は、次に、典型的な酵母抽出物産生プロセスを受け、これにより、ＵＶ処理済み酵母抽出物およびＵＶ処理済み酵母細胞壁（副産物）を生じた。処理は、図２に示すようなフルスケールの水中光バイオリアクターシステムにおいて実行された。ビタミンＤ２を含むＵＶ処理済み液体酵母は、流動層乾燥機を用いることで、ビタミンＤ２を含むＵＶ処理済み濃縮物インスタントドライイースト（ＩＤＹ）（約９５％固体）へとさらに加工された。
【００７３】
ビタミンＤ２を含むＵＶ処理済み酵母のパイロット分別実験が、ビタミンＤ２を含むＵＶ処理済み濃縮物ＩＤＹで、７５リットルのケマップ社の発酵槽（総容量７５Ｌ）において行われた。ビタミンＤ２を含むＵＶ処理済み濃縮物ＩＤＹ１０ｋｇ（ビタミンＤ２含量は２，７００，０００ＩＵ／１００ｇ）が、５０ｋｇの水道水とブレンドされて、固体含量が約１６％のクリーム酵母を作った。２０ｇの消泡剤を溶液に添加した。パパイン（BiocatalysisのPromod 144GL）が、酵母乾燥物質に基づいて０．５％の用量で添加された。酵母クリームは、６００回転／分（ｒｐｍ）の撹拌速度、５．５〜５．８のｐＨで、２２時間、５６℃で加水分解された。結果として得られた加水分解物は、次に、８０℃で６０分間熱処理されることで、不活化された。冷却後、ビタミンＤ２を含むＵＶ処理済み酵母細胞壁およびビタミンＤ２を含むＵＶ処理済み酵母の抽出物画分（UV treated yeast comprising vitamin D2 extract fractions）を洗浄および採取するために遠心分離機を用いて、分離が実行された。その後、最終的な細胞壁画分の吹き付け乾燥が行われて、最終的な、ビタミンＤ２を含むＵＶ処理済み乾燥酵母細胞壁を産生した。
【表７】
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表７：ビタミンＤ２を含むＵＶ処理済み酵母のパイロット分別中における、ビタミンＤ２を含むＵＶ処理済み酵母抽出物およびビタミンＤ２を含むＵＶ処理済み酵母細胞壁画分の収率
【表８】
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表８：ビタミンＤ２を含むＵＶ処理済み酵母の分別後の吹き付け乾燥されたサンプルの物質収支
【００７４】
表７に示すように、ビタミンＤ２を含むＵＶ処理済み濃縮物ＩＤＹ、１０ｋｇから、ビタミンＤ２を含むＵＶ処理済み乾燥酵母細胞壁が４．５３ｋｇ、ビタミンＤ２を含むＵＶ処理済み乾燥酵母抽出物が４．９４ｋｇ、産生された。ビタミンＤ２を含むＵＶ処理済み酵母細胞壁、およびビタミンＤ２を含むＵＶ処理済み酵母抽出物の収率は、それぞれ、４７．８４％および５２．７６％であった。
【００７５】
ＵＶ処理済み乾燥酵母細胞壁およびＵＶ処理済み乾燥酵母抽出物のビタミンＤ２含量は、それぞれ、５，３６０，０００ＩＵ／１００ｇおよび２１４，０００ＩＵ／１００ｇと判断された。産生されたＵＶ処理済み酵母細胞画分中のビタミンＤ２含量は、ＵＶ処理済み濃縮物ＩＤＹ中のビタミンＤ２含量より１．８８倍高かった。表８はまた、ビタミンＤ２を含むＵＶ処理済み濃縮物ＩＤＹ（９０％）からのＵＶ処理済み酵母抽出プロセス中に、ビタミンＤ２が、ＵＶ処理済み酵母細胞壁画分に主に分割されることを示しており、これは、エルゴステロールが酵母細胞壁画分に主に分割されたという以前の結果と一致するものである。
【００７６】
実施例７：ビタミンＤ２を含むＵＶ処理済み酵母の自己消化および分別を通じた、ビタミンＤ２を含むＵＶ処理済み酵母細胞壁の産生  ‐  商業試験
商業試験では、１５００リットル発酵槽を使用した。最初の、ビタミンＤ２を含むＵＶ処理済み液体酵母は、実施例６に従って産生された。最初のＵＶ処理済み酵母溶液の固体およびビタミンＤ２含量は、それぞれ、１７．８４％および２，５６０，０００ＩＵ／１００ｇ（乾燥酵母ベースで）と判断された。ビタミンＤ２を含むＵＶ処理済み液体酵母１３００リットルは、５．５のｐＨで、３００ｒｐｍで撹拌して、５５℃で２２時間にわたり発酵槽中で加水分解された。機械的な消泡装置の他に、５００ｍＬの消泡剤も加えた。パパイン（BiocatalysisのPromod 144GL）が、酵母乾燥物質に基づいて０．５％の用量で添加された。加水分解後、加水分解物は、３０分間７５℃で熱処理されることで、不活化された。冷却後、酵母細胞壁画分を採取するためにBTPX205分離器（Alfa Laval Inc.）を用いて、分離が実行された。
【表９】
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表９：ビタミンＤ２を含むＵＶ処理済み酵母の分別後の、吹き付け乾燥したサンプルの物質収支
【００７７】
ビタミンＤ２を含むＵＶ処理済み液体酵母（乾燥物質含量は１７．８４％）１３００リットル、またはＵＶ処理済み乾燥酵母（乾燥物質含量は９５％）２６０ｋｇから、１２７ｋｇの乾燥細胞壁および１３３ｋｇの乾燥酵母抽出物が産生された。酵母細胞壁および酵母抽出物の収率は、それぞれ、４８．７５％および５１．１５％であった。酵母細胞壁中のビタミンＤ２含量は、４，９８０，０００ＩＵ／１００ｇと判断され、これは、最初の、ビタミンＤを含むＵＶ処理済み液体酵母中のビタミンＤ２含量（２，５６０，０００ＩＵ／１００ｇ）より１．９４倍高かった。酵母抽出物画分中のビタミンＤ２含量は、わずかに１３０，０００ＩＵ／１００ｇであった。したがって、ビタミンＤ２を含む酵母で見受けられるよりもビタミンＤ２含量が潜在的に高い、商業レベルのビタミンＤ２を含む酵母細胞壁を産生することができる。
【００７８】
実施例８：ビタミンＤ２を含むＵＶ処理済み酵母細胞壁を産卵鶏の食事に補足することの、卵黄のビタミンＤ２含量に対する影響
１２６羽の３９週齢産卵鶏（egg producing layers）（シェーバー）が、マギル大学（カナダ・モントリオール）で１０週間の実験期間にわたる７つの食事療法にランダムに割り当てられた。すべての鶏はケージに入れられ（１つの療法当たり６個のケージ複製品（cage replicates）；ｎ＝鶏３羽／ケージ）、２２．０℃の温度で、１日当たり１５時間光を当てて（lightning）、制御された条件下で育てられた。以下の７つの食事療法を調べた：食事１＝ビタミンＤ無しの食事（‐ＣＴＬ、陰性対照）；食事２＝食事１＋ビタミンＤ不活化酵母（２，５００ＩＵ／ｋｇ）；食事３＝食事１＋ビタミンＤ不活化酵母（１５，０００ＩＵ／ｋｇ）；食事４＝食事１＋ビタミンＤを含むＵＶ処理済み酵母細胞壁（２，５００ＩＵ／ｋｇ）；食事５＝食事１＋ビタミンＤを含むＵＶ処理済み酵母細胞壁（１５，０００ＩＵ／ｋｇ）。
【００７９】
すべての鶏は、処理前に、２，５００ｋｇＩＵ／ｋｇのビタミンＤ３が補充された、ビタミン無しの食事を与えられた。２週間の適応期間の後、サンプルを回収した。飼料および水は、随意に与えた。
【００８０】
卵を毎日回収し計量した（weighted）。鶏の生体重および飼料摂取が、２週間の時間間隔でケージごとに測定された。ケージ１つ当たり２つの卵（ｎ＝１２／処理）が、２週間ごとに回収されて、卵殻の強度を測定した。別の組の卵が、卵黄のビタミンＤ含量を評価するために同時に回収された。血液サンプルも、血清ビタミンＤ解析のため、収集された（ｎ＝６／処理）。卵黄サンプル中のビタミンＤ３およびＤ２含量が、アイオワ州エムズにあるHeartland Assaysにより解析された。血清サンプルは、ＬＣ／ＭＳ／ＭＲＭ法を用いた２５‐（ＯＨ）Ｄ２および２５‐（ＯＨ）Ｄ３解析のため、インディアナ州ウェストラファイエットにあるIntelimmune LLC Inc.に送られた。
【００８１】
試験の最後に、１つの食事療法につき１０羽の鶏が、頸動脈を出血させて安楽死させられ、それぞれの鶏の脛骨が、脛骨の長さ、直径、および破壊強度の測定のため採取された。卵殻および脛骨の破壊強度は、５００−Ｎロードセルが装着された張力計（Instron Model 4500、米国マサチューセッツ州）を用いて、圧縮破砕強度（compressive fracture force）として測定された。
【００８２】
試験中の、体重、飼料摂取、飼料効率、産卵率（egg production rate）、卵の重さ、卵の直径、および卵殻の破壊強度について収集したデータに基づくと（データは不図示）、試験した５つの食事の中では、著しい影響は観察されなかった。
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表Ｂ：産卵鶏のビタミンＤを補充したさまざまな食事が卵黄のビタミンＤ２含量に与える影響
【００８３】
卵黄中の最も高いビタミンＤ２含量は、１５，０００ＩＵ／ｋｇのビタミンＤ２を含むＵＶ処理済み酵母細胞壁を含有する食事（食事５）で達成され、卵黄中のビタミンＤ２含量は、６週間後で、４２２ＩＵ／１００ｇであった。全卵ベースのビタミンＤ２レベルは、１４６ＩＵ／１００ｇとなった（因子２．９で卵黄の結果を割ったもの：Mattila他、２００４年を参照）。卵１個ベースで（卵の重量を６０ｇと仮定して）、達成された卵１個当たりの最高ビタミンＤ２含量は、約８７．６ＩＵ／卵１個であり、これは、一人が毎日卵を２個食べる場合に１日当たり１７５．２ＩＵのビタミンＤ２摂取（または４４．４％のＲＤＡ）を表す。この研究では、ビタミンＤ２を含む酵母細胞壁が、卵のビタミンＤ２含量を高めるために産卵鶏の食事を補うのに使用され得ることが、うまく証明された。
【００８４】
本発明を、その特定の実施形態に関連して説明してきたが、さらなる改変が可能であること、ならびに、概して本発明の原理に従い、本発明が属する技術分野の範囲内で既知の習慣または慣習となっている、本開示からの逸脱を含む、前述した必須の特徴に適用され得るような、また特許請求の範囲に従うような、本発明のあらゆる変形、使用、または改作をカバーすることを、本出願が意図していることが理解されるであろう。
【００８５】
〔実施の態様〕
（１）  ビタミンＤ２を含む、酵母細胞壁。
（２）  実施態様１に記載の酵母細胞壁において、
前記酵母は、サッカロミセス属由来であるか、または任意の非サッカロミセス酵母である、酵母細胞壁。
（３）  実施態様２に記載の酵母細胞壁において、
前記非サッカロミセス酵母は、カンジダ種、ハンセニアスポラ種、ハンゼヌラ種、クリベロマイセス種、メチニコビア種、ピチア種、スターメレラ種、およびトルラスポラ種からなる群から選択される、酵母細胞壁。
（４）  実施態様３に記載の酵母細胞壁において、
前記酵母は、サッカロミセスセレビシエ、またはCyberlindnera jadinii（トルラ酵母）である、酵母細胞壁。
（５）  実施態様１〜４のいずれかに記載の酵母細胞壁において、
前記ビタミンＤ２は、添加ビタミンＤ２である、酵母細胞壁。
【００８６】
（６）  実施態様１〜４のいずれかに記載の酵母細胞壁において、
前記酵母細胞壁は、ＵＶ処理される、酵母細胞壁。
（７）  実施態様６に記載のＵＶ処理済み酵母細胞壁において、
前記ＵＶ処理済み酵母細胞壁は、β‐グルカンを含む、ＵＶ処理済み酵母細胞壁。
（８）  実施態様７に記載のＵＶ処理済み酵母細胞壁において、
前記β‐グルカンの含量は、ＵＶで処理されていない酵母細胞壁のβ‐グルカンの含量の少なくとも７５％、好ましくは８０％、より好ましくは８５％、最も好ましくは９０％である、ＵＶ処理済み酵母細胞壁。
（９）  動物またはヒトの栄養摂取のための栄養補助食品としての、実施態様１〜８のいずれかに記載の酵母細胞壁の使用。
（１０）  焼き菓子、機能性食品、ダイエット用食品、栄養食品、発酵飲料または非発酵飲料の添加物としての、実施態様１〜８のいずれかに記載の酵母細胞壁の使用。
【００８７】
（１１）  実施態様１〜８のいずれかに記載の酵母細胞壁を使用して作った、焼き菓子。
（１２）  実施態様１１に記載の焼き菓子において、
前記焼き菓子は、パン、クラッカー、スポーツ向けの棒状菓子、またはビスケットである、焼き菓子。
（１３）  組成物において、
動物飼料と、
実施態様１〜８のいずれかに記載の酵母細胞壁と、
を含む、組成物。
（１４）  実施態様１３に記載の組成物において、
卵黄中のビタミンＤ２含量を増加させるために産卵鶏の食事に使用される、組成物。
（１５）  実施態様１３に記載の組成物において、
栄養補助食品として動物の食事に使用される、組成物。
【００８８】
（１６）  卵黄中のビタミンＤ２含量を増加させる方法において、
産卵鶏の飼料と、ビタミンＤ２を含むＵＶ処理済み酵母細胞壁と、を含む組成物を、産卵鶏に与えることを含む、方法。
（１７）  ビタミンＤ２を含むＵＶ処理済み酵母細胞壁を調製する方法において、
酵母を供給する工程と、
自己消化および／または加水分解酵母を得るために前記酵母を自己消化させ、かつ／または加水分解する工程と、
酵母細胞壁画分および酵母抽出物を提供するために、前記自己消化および／または加水分解酵母を分離させる工程と、
前記ビタミンＤ２を含むＵＶ処理済み酵母細胞壁を得るためにＵＶ光で前記酵母細胞壁画分を処理する工程と、
を含む、方法。
（１８）  ビタミンＤ２を含むＵＶ処理済み酵母細胞壁を調製する方法において、
酵母を供給する工程と、
ビタミンＤ２を含むＵＶ処理済み酵母を得るためにＵＶ光で前記酵母を処理する工程と、
ビタミンＤ２を含む自己消化および／または加水分解されたＵＶ処理済み酵母を得るために、前記ビタミンＤ２を含むＵＶ処理済み酵母を自己消化させ、かつ／または加水分解する工程と、
ビタミンを含むＵＶ処理済み酵母細胞壁画分および酵母抽出物を提供するために、前記ビタミンＤ２を含む自己消化および／または加水分解されたＵＶ処理済み酵母を分離させる工程と、
を含む、方法。
（１９）  実施態様１８に記載の方法において、
前記ＵＶ処理済み酵母細胞壁中の前記ビタミンＤ２の含量は、ＵＶで処理されていない酵母細胞壁より、少なくとも５０倍高いか、好ましくは少なくとも５０００倍、または最も好ましくは少なくとも１００００倍高い、方法。
（２０）  実施態様１８に記載の方法において、
前記ＵＶ処理済み酵母細胞壁中の前記ビタミンＤ２の含量は、前記ビタミンＤ２を含むＵＶ処理済み酵母中のビタミンＤ２の含量の、少なくとも１．２５倍、好ましくは少なくとも１．５倍、より好ましくは少なくとも１．７５倍、最も好ましくは少なくとも２倍である、方法。
【００８９】
（２１）  実施態様１８〜２０のいずれかに記載の方法において、
前記酵母は、サッカロミセス属由来であるか、または任意の非サッカロミセス酵母である、方法。
（２２）  実施態様２１に記載の方法において、
前記非サッカロミセス酵母は、カンジダ種、ハンセニアスポラ種、ハンゼヌラ種、クリベロマイセス種、メチニコビア種、ピチア種、スターメレラ種、およびトルラスポラ種からなる群から選択される、方法。
（２３）  実施態様１８に記載の方法において、
前記酵母は、サッカロミセスセレビシエ、またはCyberlindnera jadinii（トルラ酵母）である、方法。
【図面の簡単な説明】
【００９０】
【図１】本発明のある実施形態による、酵母細胞壁のＵＶ処理に使用される表面ＵＶ光バイオリアクターを示す。
【図２】本発明の別の実施形態による、最大２０Ｌの容量の酵母細胞壁のＵＶ処理のための水中ＵＶ光バイオリアクターを示す。
【図３】本発明のある実施形態による、ビタミンＤ２を含むＵＶ処理済み酵母細胞壁を産生する方法を示す。
【図４】本発明の別の実施形態による、ビタミンＤ２を含むＵＶ処理済み酵母細胞壁を産生する代替的方法を示す。
【図５】本発明のある実施形態による、ＵＶ光での処理前および後の、酵母細胞壁中のβ‐グルカン含量を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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