(57)【要約】【課題】本発明は、遺伝子型の異なる種々のチクングニアウイルスや、構造タンパク質の一部に変異を起こしたチクングニアウイルスであっても、迅速かつ高感度に検出することを目的とする。また、チクングニアウイルス以外の他のウイルスとの交叉反応を抑え、特異的にチクングニアウイルスを検出することを目的とする。【解決手段】本発明は、試料添加部、標識物質保持部、検出部を有するクロマトグラフ媒体部及び吸収部を含む、チクングニアウイルスを検出するための免疫クロマト分析装置であって、前記標識物質保持部は、（Ａ）の抗体またはその抗原結合断片を含有し、前記検出部は、（Ｂ）の抗体またはその抗原結合断片、及び（Ｃ）の抗体またはその抗原結合断片を含有する、免疫クロマト分析装置に関する。【選択図】図１
2019138777.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
試料添加部、標識物質保持部、検出部を有するクロマトグラフ媒体部及び吸収部を含む、チクングニアウイルスを検出するための免疫クロマト分析装置であって、
前記標識物質保持部は、下記（Ａ）の抗体またはその抗原結合断片を含有し、
前記検出部は、下記（Ｂ）の抗体またはその抗原結合断片、及び下記（Ｃ）の抗体またはその抗原結合断片を含有する、
免疫クロマト分析装置。
（Ａ）下記（１）の重鎖可変領域と下記（２）の軽鎖可変領域とを含む、チクングニアウイルスに対する抗体
（１）重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含み、
ＣＤＲＨ１が、下記（Ｈ１−Ａ）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、
ＣＤＲＨ２が、下記（Ｈ２−Ａ）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、
ＣＤＲＨ３が、下記（Ｈ３−Ａ）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである重鎖可変領域
（Ｈ１−Ａ）下記（Ｈ１−Ａ１）、（Ｈ１−Ａ２）または（Ｈ１−Ａ３）のアミノ酸配列
（Ｈ１−Ａ１）配列番号１のアミノ酸配列
（Ｈ１−Ａ２）配列番号１のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（Ｈ１−Ａ３）配列番号１のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（Ｈ２−Ａ）下記（Ｈ２−Ａ１）、（Ｈ２−Ａ２）または（Ｈ２−Ａ３）のアミノ酸配列
（Ｈ２−Ａ１）配列番号２のアミノ酸配列
（Ｈ２−Ａ２）配列番号２のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（Ｈ２−Ａ３）配列番号２のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（Ｈ３−Ａ）下記（Ｈ３−Ａ１）、（Ｈ３−Ａ２）または（Ｈ３−Ａ３）のアミノ酸配列
（Ｈ３−Ａ１）配列番号３のアミノ酸配列
（Ｈ３−Ａ２）配列番号３のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（Ｈ３−Ａ３）配列番号３のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（２）軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲＬ）１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含み、
ＣＤＲＬ１が、下記（Ｌ１−Ａ）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、
ＣＤＲＬ２が、下記（Ｌ２−Ａ）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、
ＣＤＲＬ３が、下記（Ｌ３−Ａ）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである軽鎖可変領域
（Ｌ１−Ａ）下記（Ｌ１−Ａ１）、（Ｌ１−Ａ２）または（Ｌ１−Ａ３）のアミノ酸配列
（Ｌ１−Ａ１）配列番号４のアミノ酸配列
（Ｌ１−Ａ２）配列番号４のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（Ｌ１−Ａ３）配列番号４のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（Ｌ２−Ａ）下記（Ｌ２−Ａ１）、（Ｌ２−Ａ２）または（Ｌ２−Ａ３）のアミノ酸配列
（Ｌ２−Ａ１）配列番号５のアミノ酸配列
（Ｌ２−Ａ２）配列番号５のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（Ｌ２−Ａ３）配列番号５のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（Ｌ３−Ａ）下記（Ｌ３−Ａ１）、（Ｌ３−Ａ２）または（Ｌ３−Ａ３）のアミノ酸配列
（Ｌ３−Ａ１）配列番号６のアミノ酸配列
（Ｌ３−Ａ２）配列番号６のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（Ｌ３−Ａ３）配列番号６のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（Ｂ）下記（３）の重鎖可変領域と上記（２）の軽鎖可変領域とを含む、チクングニアウイルスに対する抗体
（３）重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含み、
ＣＤＲＨ１が、下記（Ｈ１−Ｂ）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、
ＣＤＲＨ２が、下記（Ｈ２−Ｂ）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、
ＣＤＲＨ３が、下記（Ｈ３−Ｂ）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである重鎖可変領域
（Ｈ１−Ｂ）下記（Ｈ１−Ｂ１）、（Ｈ１−Ｂ２）または（Ｈ１−Ｂ３）のアミノ酸配列
（Ｈ１−Ｂ１）配列番号７のアミノ酸配列
（Ｈ１−Ｂ２）配列番号７のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（Ｈ１−Ｂ３）配列番号７のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（Ｈ２−Ｂ）下記（Ｈ２−Ｂ１）、（Ｈ２−Ｂ２）または（Ｈ２−Ｂ３）のアミノ酸配列
（Ｈ２−Ｂ１）配列番号８のアミノ酸配列
（Ｈ２−Ｂ２）配列番号８のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（Ｈ２−Ｂ３）配列番号８のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（Ｈ３−Ｂ）下記（Ｈ３−Ｂ１）、（Ｈ３−Ｂ２）または（Ｈ３−Ｂ３）のアミノ酸配列
（Ｈ３−Ｂ１）配列番号９のアミノ酸配列
（Ｈ３−Ｂ２）配列番号９のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（Ｈ３−Ｂ３）配列番号９のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（Ｃ）下記（４）の重鎖可変領域と上記（２）の軽鎖可変領域とを含む、チクングニアウイルスに対する抗体
（４）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含み、
ＣＤＲＨ１が、下記（Ｈ１−Ｃ）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、
ＣＤＲＨ２が、下記（Ｈ２−Ｃ）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、
ＣＤＲＨ３が、下記（Ｈ３−Ｃ）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである重鎖可変領域
（Ｈ１−Ｃ）下記（Ｈ１−Ｃ１）、（Ｈ１−Ｃ２）または（Ｈ１−Ｃ３）のアミノ酸配列
（Ｈ１−Ｃ１）配列番号１０のアミノ酸配列
（Ｈ１−Ｃ２）配列番号１０のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（Ｈ１−Ｃ３）配列番号１０のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（Ｈ２−Ｃ）下記（Ｈ２−Ｃ１）、（Ｈ２−Ｃ２）または（Ｈ２−Ｃ３）のアミノ酸配列
（Ｈ２−Ｃ１）配列番号１１のアミノ酸配列
（Ｈ２−Ｃ２）配列番号１１のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（Ｈ２−Ｃ３）配列番号１１のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（Ｈ３−Ｃ）下記（Ｈ３−Ｃ１）、（Ｈ３−Ｃ２）または（Ｈ３−Ｃ３）のアミノ酸配列
（Ｈ３−Ｃ１）配列番号１２のアミノ酸配列
（Ｈ３−Ｃ２）配列番号１２のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（Ｈ３−Ｃ３）配列番号１２のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
【請求項２】
試料添加部、標識物質保持部、検出部を有するクロマトグラフ媒体部及び吸収部を含む、チクングニアウイルスを検出するための免疫クロマト分析装置であって、
前記標識物質保持部は、下記（Ａ）の抗体またはその抗原結合断片を含有し、
前記検出部は、下記（Ｂ）の抗体またはその抗原結合断片、及び下記（Ｃ）の抗体またはその抗原結合断片を含有する、
免疫クロマト分析装置。
（Ａ）下記（１）の重鎖可変領域と下記（２）の軽鎖可変領域とを含む、チクングニアウイルスに対する抗体
（１）下記（Ｈ−Ａ）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む重鎖可変領域
（Ｈ−Ａ）下記（Ｈ−Ａ１）、（Ｈ−Ａ２）または（Ｈ−Ａ３）のアミノ酸配列
（Ｈ−Ａ１）配列番号１３のアミノ酸配列
（Ｈ−Ａ２）配列番号１３のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（Ｈ−Ａ３）配列番号１３のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（２）下記（Ｌ−Ａ）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む軽鎖可変領域
（Ｌ−Ａ）下記（Ｌ−Ａ１）、（Ｌ−Ａ２）または（Ｌ−Ａ３）のアミノ酸配列
（Ｌ−Ａ１）配列番号１４のアミノ酸配列
（Ｌ−Ａ２）配列番号１４のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（Ｌ−Ａ３）配列番号１４のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（Ｂ）下記（３）の重鎖可変領域と上記（２）の軽鎖可変領域とを含む、チクングニアウイルスに対する抗体
（３）下記（Ｈ−Ｂ）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む重鎖可変領域
（Ｈ−Ｂ）下記（Ｈ−Ｂ１）、（Ｈ−Ｂ２）または（Ｈ−Ｂ３）のアミノ酸配列
（Ｈ−Ｂ１）配列番号１５のアミノ酸配列
（Ｈ−Ｂ２）配列番号１５のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（Ｈ−Ｂ３）配列番号１５のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（Ｃ）下記（４）の重鎖可変領域と上記（２）の軽鎖可変領域とを含む、チクングニアウイルスに対する抗体
（４）下記（Ｈ−Ｃ）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む重鎖可変領域
（Ｈ−Ｃ）下記（Ｈ−Ｃ１）、（Ｈ−Ｃ２）または（Ｈ−Ｃ３）のアミノ酸配列
（Ｈ−Ｃ１）配列番号１６のアミノ酸配列
（Ｈ−Ｃ２）配列番号１６のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（Ｈ−Ｃ３）配列番号１６のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
【請求項３】
試料添加部、標識物質保持部、検出部を有するクロマトグラフ媒体部及び吸収部を含む、チクングニアウイルスを検出するための免疫クロマト分析装置であって、
前記標識物質保持部は、下記（Ａ）の抗体またはその抗原結合断片を含有し、
前記検出部は、下記（Ｂ）の抗体またはその抗原結合断片、及び下記（Ｃ）の抗体またはその抗原結合断片を含有する、
免疫クロマト分析装置。
（Ａ）下記（１）の重鎖と下記（２）の軽鎖とを含む、チクングニアウイルスに対する抗体
（１）下記（ＨＡ）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む重鎖
（ＨＡ）下記（ＨＡ１）、（ＨＡ２）または（ＨＡ３）のアミノ酸配列
（ＨＡ１）配列番号１７のアミノ酸配列
（ＨＡ２）配列番号１７のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（ＨＡ３）配列番号１７のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（２）下記（ＬＡ）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む軽鎖
（ＬＡ）下記（ＬＡ１）、（ＬＡ２）または（ＬＡ３）のアミノ酸配列
（ＬＡ１）配列番号１８のアミノ酸配列
（ＬＡ２）配列番号１８のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（ＬＡ３）配列番号１８のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（Ｂ）下記（３）の重鎖と上記（２）の軽鎖とを含む、チクングニアウイルスに対する抗体
（３）下記（ＨＢ）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む重鎖
（ＨＢ）下記（ＨＢ１）、（ＨＢ２）または（ＨＢ３）のアミノ酸配列
（ＨＢ１）配列番号１９のアミノ酸配列
（ＨＢ２）配列番号１９のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（ＨＢ３）配列番号１９のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（Ｃ）下記（４）の重鎖と上記（２）の軽鎖とを含む、チクングニアウイルスに対する抗体
（４）下記（ＨＣ）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む重鎖
（ＨＣ）下記（ＨＣ１）、（ＨＣ２）または（ＨＣ３）のアミノ酸配列
（ＨＣ１）配列番号２０のアミノ酸配列
（ＨＣ２）配列番号２０のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（ＨＣ３）配列番号２０のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
【請求項４】
チクングニアウイルスのうち、チクングニアウイルスのエンベロープ糖タンパク質を検出するための、請求項１〜３のいずれか１項に記載の免疫クロマト分析装置。
【請求項５】
前記チクングニアウイルスのエンベロープ糖タンパク質が、チクングニアウイルスのＥ１タンパク質である、請求項４に記載の免疫クロマト分析装置。
【請求項６】
前記（Ａ）の抗体またはその抗原結合断片、前記（Ｂ）の抗体またはその抗原結合断片、および、前記（Ｃ）の抗体またはその抗原結合断片が、ＥＣＳＡ型、Ａｓｉａｎ型、及びＷＡ型の少なくともいずれか１の遺伝子型を有するチクングニアウイルスに特異的に結合する、請求項１〜５のいずれか１項に記載の免疫クロマト分析装置。
【請求項７】
前記標識物質保持部は、さらに、下記（Ｄ）の抗体またはその抗原結合断片を含有し、
前記検出部は、さらに、下記（Ｅ）の抗体またはその抗原結合断片を含有する、請求項１〜６のいずれか１項に記載の免疫クロマト分析装置。
（Ｄ）下記（１）の重鎖可変領域と下記（２）の軽鎖可変領域とを含む、チクングニアウイルスに対する抗体
（１）重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含み、
ＣＤＲＨ１が、下記（Ｈ１−Ｄ）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、
ＣＤＲＨ２が、下記（Ｈ２−Ｄ）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、
ＣＤＲＨ３が、下記（Ｈ３−Ｄ）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである重鎖可変領域
（Ｈ１−Ｄ）下記（Ｈ１−Ｄ１）、（Ｈ１−Ｄ２）または（Ｈ１−Ｄ３）のアミノ酸配列
（Ｈ１−Ｄ１）配列番号２１のアミノ酸配列
（Ｈ１−Ｄ２）配列番号２１のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（Ｈ１−Ｄ３）配列番号２１のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（Ｈ２−Ｄ）下記（Ｈ２−Ｄ１）、（Ｈ２−Ｄ２）または（Ｈ２−Ｄ３）のアミノ酸配列
（Ｈ２−Ｄ１）配列番号２２のアミノ酸配列
（Ｈ２−Ｄ２）配列番号２２のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（Ｈ２−Ｄ３）配列番号２２のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（Ｈ３−Ｄ）下記（Ｈ３−Ｄ１）、（Ｈ３−Ｄ２）または（Ｈ３−Ｄ３）のアミノ酸配列
（Ｈ３−Ｄ１）配列番号２３のアミノ酸配列
（Ｈ３−Ｄ２）配列番号２３のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（Ｈ３−Ｄ３）配列番号２３のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（２）軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲＬ）１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含み、
ＣＤＲＬ１が、下記（Ｌ１−Ａ）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、
ＣＤＲＬ２が、下記（Ｌ２−Ａ）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、
ＣＤＲＬ３が、下記（Ｌ３−Ａ）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである軽鎖可変領域
（Ｌ１−Ａ）下記（Ｌ１−Ａ１）、（Ｌ１−Ａ２）または（Ｌ１−Ａ３）のアミノ酸配列
（Ｌ１−Ａ１）配列番号４のアミノ酸配列
（Ｌ１−Ａ２）配列番号４のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（Ｌ１−Ａ３）配列番号４のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（Ｌ２−Ａ）下記（Ｌ２−Ａ１）、（Ｌ２−Ａ２）または（Ｌ２−Ａ３）のアミノ酸配列
（Ｌ２−Ａ１）配列番号５のアミノ酸配列
（Ｌ２−Ａ２）配列番号５のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（Ｌ２−Ａ３）配列番号５のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（Ｌ３−Ａ）下記（Ｌ３−Ａ１）、（Ｌ３−Ａ２）または（Ｌ３−Ａ３）のアミノ酸配列
（Ｌ３−Ａ１）配列番号６のアミノ酸配列
（Ｌ３−Ａ２）配列番号６のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（Ｌ３−Ａ３）配列番号６のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（Ｅ）下記（３）の重鎖可変領域と上記（２）の軽鎖可変領域とを含む、チクングニアウイルスに対する抗体
（３）重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含み、
ＣＤＲＨ１が、下記（Ｈ１−Ｅ）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、
ＣＤＲＨ２が、下記（Ｈ２−Ｅ）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、
ＣＤＲＨ３が、下記（Ｈ３−Ｅ）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである重鎖可変領域
（Ｈ１−Ｅ）下記（Ｈ１−Ｅ１）、（Ｈ１−Ｅ２）または（Ｈ１−Ｅ３）のアミノ酸配列
（Ｈ１−Ｅ１）配列番号２４のアミノ酸配列
（Ｈ１−Ｅ２）配列番号２４のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（Ｈ１−Ｅ３）配列番号２４のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（Ｈ２−Ｅ）下記（Ｈ２−Ｅ１）、（Ｈ２−Ｅ２）または（Ｈ２−Ｅ３）のアミノ酸配列
（Ｈ２−Ｅ１）配列番号２５のアミノ酸配列
（Ｈ２−Ｅ２）配列番号２５のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（Ｈ２−Ｅ３）配列番号２５のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（Ｈ３−Ｅ）下記（Ｈ３−Ｅ１）、（Ｈ３−Ｅ２）または（Ｈ３−Ｂ３）のアミノ酸配列
（Ｈ３−Ｅ１）配列番号２６のアミノ酸配列
（Ｈ３−Ｅ２）配列番号２６のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（Ｈ３−Ｅ３）配列番号２６のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
【請求項８】
前記標識物質保持部は、さらに、下記（Ｄ）の抗体またはその抗原結合断片を含有し、
前記検出部は、さらに、下記（Ｅ）の抗体またはその抗原結合断片を含有する、請求項１〜６のいずれか１項に記載の免疫クロマト分析装置。
（Ｄ）下記（１）の重鎖可変領域と下記（２）の軽鎖可変領域とを含む、チクングニアウイルスに対する抗体
（１）下記（Ｈ−Ｄ）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む重鎖可変領域
（Ｈ−Ｄ）下記（Ｈ−Ｄ１）、（Ｈ−Ｄ２）または（Ｈ−Ｄ３）のアミノ酸配列
（Ｈ−Ｄ１）配列番号２７のアミノ酸配列
（Ｈ−Ｄ２）配列番号２７のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（Ｈ−Ｄ３）配列番号２７のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（２）下記（Ｌ−Ａ）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む軽鎖可変領域
（Ｌ−Ａ）下記（Ｌ−Ａ１）、（Ｌ−Ａ２）または（Ｌ−Ａ３）のアミノ酸配列
（Ｌ−Ａ１）配列番号１４のアミノ酸配列
（Ｌ−Ａ２）配列番号１４のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（Ｌ−Ａ３）配列番号１４のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（Ｅ）下記（３）の重鎖可変領域と上記（２）の軽鎖可変領域とを含む、チクングニアウイルスに対する抗体
（３）下記（Ｈ−Ｅ）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む重鎖可変領域
（Ｈ−Ｅ）下記（Ｈ−Ｅ１）、（Ｈ−Ｅ２）または（Ｈ−Ｅ３）のアミノ酸配列
（Ｈ−Ｅ１）配列番号２８のアミノ酸配列
（Ｈ−Ｅ２）配列番号２８のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（Ｈ−Ｅ３）配列番号２８のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
【請求項９】
前記標識物質保持部は、さらに、下記（Ｄ）の抗体またはその抗原結合断片を含有し、
前記検出部は、さらに、下記（Ｅ）の抗体またはその抗原結合断片を含有する、請求項１〜６のいずれか１項に記載の免疫クロマト分析装置。
（Ｄ）下記（１）の重鎖と下記（２）の軽鎖とを含む、チクングニアウイルスに対する抗体
（１）下記（ＨＤ）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む重鎖
（ＨＤ）下記（ＨＤ１）、（ＨＤ２）または（ＨＤ３）のアミノ酸配列
（ＨＤ１）配列番号２９のアミノ酸配列
（ＨＤ２）配列番号２９のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（ＨＤ３）配列番号２９のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（２）下記（ＬＡ）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む軽鎖
（ＬＡ）下記（ＬＡ１）、（ＬＡ２）または（ＬＡ３）のアミノ酸配列
（ＬＡ１）配列番号１８のアミノ酸配列
（ＬＡ２）配列番号１８のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（ＬＡ３）配列番号１８のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（Ｅ）下記（３）の重鎖と上記（２）の軽鎖とを含む、チクングニアウイルスに対する抗体
（３）下記（ＨＥ）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む重鎖
（ＨＥ）下記（ＨＥ１）、（ＨＥ２）または（ＨＥ３）のアミノ酸配列
（ＨＥ１）配列番号３０のアミノ酸配列
（ＨＥ２）配列番号３０のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（ＨＥ３）配列番号３０のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
【請求項１０】
前記（Ｄ）の抗体またはその抗原結合断片、および、前記（Ｅ）の抗体またはその抗原結合断片が、ＥＣＳＡ型、Ａｓｉａｎ型、及びＷＡ型の少なくともいずれか１の遺伝子型を有するチクングニアウイルスに特異的に結合する、請求項７〜９のいずれか１項に記載の免疫クロマト分析装置。
【請求項１１】
前記標識物質保持部における前記抗体（Ａ）の抗体またはその抗原結合断片と、前記抗体（Ｄ）の抗体またはその抗原結合断片と、の含有比率（質量）が１：２〜２：１である、請求項７〜１０のいずれか１項に記載の免疫クロマト分析装置。
【請求項１２】
前記試料添加部に添加する試料が、チクングニアウイルス感染者の全血、血清、血漿、精液、および髄液のいずれか１である、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の免疫クロマト分析装置。
【請求項１３】
請求項１〜１２のいずれか１項に記載の免疫クロマト分析装置と、検体を希釈して展開するための検体希釈液とを含む、免疫クロマト分析キット。
【請求項１４】
以下の工程（１）〜（４）を含む、請求項１３に記載の免疫クロマト分析キットを用いて検体に含まれるチクングニアウイルスを検出する免疫クロマト分析方法。
（１）検体希釈液により検体を希釈した検体含有液を試料添加部に添加する工程
（２）標識物質保持部に保持されている、前記（Ａ）の抗体またはその抗原結合断片により前記チクングニアウイルスを認識させる工程
（３）前記検体および前記（Ａ）の抗体またはその抗原結合断片を移動相としてクロマトグラフ媒体部に展開させる工程
（４）展開された移動相中のチクングニアウイルスを、検出部に含まれる前記（Ｂ）の抗体またはその抗原結合断片および前記（Ｃ）の抗体またはその抗原結合断片により検出する工程
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、チクングニアウイルスの検出のための免疫クロマト分析装置、免疫クロマト分析キットおよび免疫クロマト分析方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
チクングニアウイルス（Ｃｈｉｋｕｎｇｕｎｙａ  ｖｉｒｕｓ：ＣＨＩＫＶ）は蚊やダニ等の節足動物内で増殖し、それらの吸血活動によって脊椎動物に伝播される。チクングニアウイルスに感染すると、チクングニア熱といわれる高熱や関節の激しい痛みを引き起こす。ときに重篤な症状を引き起こすこともあり、早期治療を行うための迅速診断法の確立が望まれている。
【０００３】
チクングニアウイルスは、トガウイルス科アルファウイルス属に分類され、球状のＲＮＡウイルスである。その遺伝子型は大きく分類して、ＥＣＳＡ型、ＷＡ型、及びＡｓｉａｎ型の３つの遺伝子型があることが知られている。いずれの遺伝子型においてもゲノムＲＮＡの３’端側の１／３の領域は、ＣＰ、Ｅ３、Ｅ２、６Ｋ、Ｅ１の５つの構造タンパク質をコードし、５’端側の２／３の領域はｎｓＰ１、ｎｓＰ２、ｎｓＰ３、ｎｓＰ４の４つの非構造タンパク質をコードする。
【０００４】
非特許文献１及び２には、チクングニアウイルスのＥ１タンパク質を認識するマウスモノクローナル抗体を用いた免疫クロマトグラフィーにより、ＥＣＳＡ型およびＡｓｉａｎ型のチクングニアウイルスを検出する方法が開示されている。非特許文献３には、チクングニアウイルスのＥ１タンパク質と反応するマウスモノクローナル抗体であるＣＫ４７が開示されている。
また、特許文献１には、チクングニアウイルスのＥ２タンパク質に対する抗体である、抗チクングニアウイルスＥ２抗体を使用して、免疫複合体を形成させ、その免疫複合体の有無により、チクングニアウイルスの存在または非存在を検出する方法が開示されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特表２０１０−５３８２９１号公報
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，Ｆｅｂｒｕａｒｙ  ２０１５  Ｖｏｌｕｍｅ  ５３  Ｎｕｍｂｅｒ  ２
【非特許文献２】Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ２４  （２０１８）  ７８ｅ８１
【非特許文献３】Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，４６４−４６５（２０１４）  １１１−１１７
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
しかしながら、非特許文献２に記載の免疫クロマトグラフィーに用いられる抗体は、ＥＣＳＡ型のチクングニアウイルスおいては感度が良好であるものの、Ａｓｉａｎ型のチクングニアウイルスおいては感度が低い結果となっている。
また、非特許文献１に記載の免疫クロマトグラフィーに用いられた抗体は、非特許文献３に開示されているとおり、ウイルスタンパク質の点変異により著しく活性が下がってしまう問題があった。
【０００８】
また、特許文献１には、チクングニアウイルスのＥ２タンパク質に対する抗体が開示されているが、当該抗体がチクングニアウイルスの種々の遺伝子型に対して反応性を有するかについては特に着目されておらず、各遺伝子型への反応性や感度は不明である。また、チクングニアウイルスのＥ２タンパク質はホスト（ヒト）が中和抗体を作ることが知られており、チクングニアウイルスのＥ２タンパク質を免疫学的測定系のターゲットとした場合、ホスト由来の抗体による競合阻害を受けてしまうおそれがあった。
【０００９】
本発明は前述の技術的な課題に鑑みてなされたものであり、遺伝子型の異なるチクングニアウイルス間であっても、迅速かつ高感度に検出することを目的とする。また本発明は、構造タンパク質の一部に変異を起こしたチクングニアウイルスであっても、迅速かつ高感度に検出することを目的とする。さらに、チクングニアウイルス以外の他のウイルス（例えば、シンドビスウイルス：Ｓｉｎｄｂｉｓ  ｖｉｒｕｓ，ＳＩＮＶ）との交叉反応を抑え、チクングニアウイルスを特異的に検出することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは、前記課題を解決すべく鋭意研究を重ねた結果、免疫クロマト分析装置において、その標識物質保持部および検出部にチクングニアウイルスに対する特定の抗体を組み合わせて使用することにより、前記課題を解決できることを見出し、本発明に至った。
【００１１】
したがって、本発明は以下の通りである。
１．試料添加部、標識物質保持部、検出部を有するクロマトグラフ媒体部及び吸収部を含む、チクングニアウイルスを検出するための免疫クロマト分析装置であって、
前記標識物質保持部は、下記（Ａ）の抗体またはその抗原結合断片を含有し、
前記検出部は、下記（Ｂ）の抗体またはその抗原結合断片、及び下記（Ｃ）の抗体またはその抗原結合断片を含有する、
免疫クロマト分析装置。
（Ａ）下記（１）の重鎖可変領域と下記（２）の軽鎖可変領域とを含む、チクングニアウイルスに対する抗体
（１）重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含み、
ＣＤＲＨ１が、下記（Ｈ１−Ａ）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、
ＣＤＲＨ２が、下記（Ｈ２−Ａ）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、
ＣＤＲＨ３が、下記（Ｈ３−Ａ）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである重鎖可変領域
（Ｈ１−Ａ）下記（Ｈ１−Ａ１）、（Ｈ１−Ａ２）または（Ｈ１−Ａ３）のアミノ酸配列
（Ｈ１−Ａ１）配列番号１のアミノ酸配列
（Ｈ１−Ａ２）配列番号１のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（Ｈ１−Ａ３）配列番号１のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（Ｈ２−Ａ）下記（Ｈ２−Ａ１）、（Ｈ２−Ａ２）または（Ｈ２−Ａ３）のアミノ酸配列
（Ｈ２−Ａ１）配列番号２のアミノ酸配列
（Ｈ２−Ａ２）配列番号２のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（Ｈ２−Ａ３）配列番号２のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（Ｈ３−Ａ）下記（Ｈ３−Ａ１）、（Ｈ３−Ａ２）または（Ｈ３−Ａ３）のアミノ酸配列
（Ｈ３−Ａ１）配列番号３のアミノ酸配列
（Ｈ３−Ａ２）配列番号３のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（Ｈ３−Ａ３）配列番号３のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（２）軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲＬ）１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含み、
ＣＤＲＬ１が、下記（Ｌ１−Ａ）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、
ＣＤＲＬ２が、下記（Ｌ２−Ａ）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、
ＣＤＲＬ３が、下記（Ｌ３−Ａ）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである軽鎖可変領域
（Ｌ１−Ａ）下記（Ｌ１−Ａ１）、（Ｌ１−Ａ２）または（Ｌ１−Ａ３）のアミノ酸配列
（Ｌ１−Ａ１）配列番号４のアミノ酸配列
（Ｌ１−Ａ２）配列番号４のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（Ｌ１−Ａ３）配列番号４のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（Ｌ２−Ａ）下記（Ｌ２−Ａ１）、（Ｌ２−Ａ２）または（Ｌ２−Ａ３）のアミノ酸配列
（Ｌ２−Ａ１）配列番号５のアミノ酸配列
（Ｌ２−Ａ２）配列番号５のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（Ｌ２−Ａ３）配列番号５のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（Ｌ３−Ａ）下記（Ｌ３−Ａ１）、（Ｌ３−Ａ２）または（Ｌ３−Ａ３）のアミノ酸配列
（Ｌ３−Ａ１）配列番号６のアミノ酸配列
（Ｌ３−Ａ２）配列番号６のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（Ｌ３−Ａ３）配列番号６のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（Ｂ）下記（３）の重鎖可変領域と上記（２）の軽鎖可変領域とを含む、チクングニアウイルスに対する抗体
（３）重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含み、
ＣＤＲＨ１が、下記（Ｈ１−Ｂ）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、
ＣＤＲＨ２が、下記（Ｈ２−Ｂ）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、
ＣＤＲＨ３が、下記（Ｈ３−Ｂ）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである重鎖可変領域
（Ｈ１−Ｂ）下記（Ｈ１−Ｂ１）、（Ｈ１−Ｂ２）または（Ｈ１−Ｂ３）のアミノ酸配列
（Ｈ１−Ｂ１）配列番号７のアミノ酸配列
（Ｈ１−Ｂ２）配列番号７のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（Ｈ１−Ｂ３）配列番号７のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（Ｈ２−Ｂ）下記（Ｈ２−Ｂ１）、（Ｈ２−Ｂ２）または（Ｈ２−Ｂ３）のアミノ酸配列
（Ｈ２−Ｂ１）配列番号８のアミノ酸配列
（Ｈ２−Ｂ２）配列番号８のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（Ｈ２−Ｂ３）配列番号８のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（Ｈ３−Ｂ）下記（Ｈ３−Ｂ１）、（Ｈ３−Ｂ２）または（Ｈ３−Ｂ３）のアミノ酸配列
（Ｈ３−Ｂ１）配列番号９のアミノ酸配列
（Ｈ３−Ｂ２）配列番号９のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（Ｈ３−Ｂ３）配列番号９のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（Ｃ）下記（４）の重鎖可変領域と上記（２）の軽鎖可変領域とを含む、チクングニアウイルスに対する抗体
（４）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含み、
ＣＤＲＨ１が、下記（Ｈ１−Ｃ）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、
ＣＤＲＨ２が、下記（Ｈ２−Ｃ）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、
ＣＤＲＨ３が、下記（Ｈ３−Ｃ）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである重鎖可変領域
（Ｈ１−Ｃ）下記（Ｈ１−Ｃ１）、（Ｈ１−Ｃ２）または（Ｈ１−Ｃ３）のアミノ酸配列
（Ｈ１−Ｃ１）配列番号１０のアミノ酸配列
（Ｈ１−Ｃ２）配列番号１０のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（Ｈ１−Ｃ３）配列番号１０のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（Ｈ２−Ｃ）下記（Ｈ２−Ｃ１）、（Ｈ２−Ｃ２）または（Ｈ２−Ｃ３）のアミノ酸配列
（Ｈ２−Ｃ１）配列番号１１のアミノ酸配列
（Ｈ２−Ｃ２）配列番号１１のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（Ｈ２−Ｃ３）配列番号１１のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（Ｈ３−Ｃ）下記（Ｈ３−Ｃ１）、（Ｈ３−Ｃ２）または（Ｈ３−Ｃ３）のアミノ酸配列
（Ｈ３−Ｃ１）配列番号１２のアミノ酸配列
（Ｈ３−Ｃ２）配列番号１２のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（Ｈ３−Ｃ３）配列番号１２のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
２．試料添加部、標識物質保持部、検出部を有するクロマトグラフ媒体部及び吸収部を含む、チクングニアウイルスを検出するための免疫クロマト分析装置であって、
前記標識物質保持部は、下記（Ａ）の抗体またはその抗原結合断片を含有し、
前記検出部は、下記（Ｂ）の抗体またはその抗原結合断片、及び下記（Ｃ）の抗体またはその抗原結合断片を含有する、
免疫クロマト分析装置。
（Ａ）下記（１）の重鎖可変領域と下記（２）の軽鎖可変領域とを含む、チクングニアウイルスに対する抗体
（１）下記（Ｈ−Ａ）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む重鎖可変領域
（Ｈ−Ａ）下記（Ｈ−Ａ１）、（Ｈ−Ａ２）または（Ｈ−Ａ３）のアミノ酸配列
（Ｈ−Ａ１）配列番号１３のアミノ酸配列
（Ｈ−Ａ２）配列番号１３のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（Ｈ−Ａ３）配列番号１３のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（２）下記（Ｌ−Ａ）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む軽鎖可変領域
（Ｌ−Ａ）下記（Ｌ−Ａ１）、（Ｌ−Ａ２）または（Ｌ−Ａ３）のアミノ酸配列
（Ｌ−Ａ１）配列番号１４のアミノ酸配列
（Ｌ−Ａ２）配列番号１４のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（Ｌ−Ａ３）配列番号１４のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（Ｂ）下記（３）の重鎖可変領域と上記（２）の軽鎖可変領域とを含む、チクングニアウイルスに対する抗体
（３）下記（Ｈ−Ｂ）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む重鎖可変領域
（Ｈ−Ｂ）下記（Ｈ−Ｂ１）、（Ｈ−Ｂ２）または（Ｈ−Ｂ３）のアミノ酸配列
（Ｈ−Ｂ１）配列番号１５のアミノ酸配列
（Ｈ−Ｂ２）配列番号１５のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（Ｈ−Ｂ３）配列番号１５のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（Ｃ）下記（４）の重鎖可変領域と上記（２）の軽鎖可変領域とを含む、チクングニアウイルスに対する抗体
（４）下記（Ｈ−Ｃ）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む重鎖可変領域
（Ｈ−Ｃ）下記（Ｈ−Ｃ１）、（Ｈ−Ｃ２）または（Ｈ−Ｃ３）のアミノ酸配列
（Ｈ−Ｃ１）配列番号１６のアミノ酸配列
（Ｈ−Ｃ２）配列番号１６のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（Ｈ−Ｃ３）配列番号１６のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
３．試料添加部、標識物質保持部、検出部を有するクロマトグラフ媒体部及び吸収部を含む、チクングニアウイルスを検出するための免疫クロマト分析装置であって、
前記標識物質保持部は、下記（Ａ）の抗体またはその抗原結合断片を含有し、
前記検出部は、下記（Ｂ）の抗体またはその抗原結合断片、及び下記（Ｃ）の抗体またはその抗原結合断片を含有する、
免疫クロマト分析装置。
（Ａ）下記（１）の重鎖と下記（２）の軽鎖とを含む、チクングニアウイルスに対する抗体
（１）下記（ＨＡ）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む重鎖
（ＨＡ）下記（ＨＡ１）、（ＨＡ２）または（ＨＡ３）のアミノ酸配列
（ＨＡ１）配列番号１７のアミノ酸配列
（ＨＡ２）配列番号１７のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（ＨＡ３）配列番号１７のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（２）下記（ＬＡ）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む軽鎖
（ＬＡ）下記（ＬＡ１）、（ＬＡ２）または（ＬＡ３）のアミノ酸配列
（ＬＡ１）配列番号１８のアミノ酸配列
（ＬＡ２）配列番号１８のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（ＬＡ３）配列番号１８のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（Ｂ）下記（３）の重鎖と上記（２）の軽鎖とを含む、チクングニアウイルスに対する抗体
（３）下記（ＨＢ）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む重鎖
（ＨＢ）下記（ＨＢ１）、（ＨＢ２）または（ＨＢ３）のアミノ酸配列
（ＨＢ１）配列番号１９のアミノ酸配列
（ＨＢ２）配列番号１９のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（ＨＢ３）配列番号１９のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（Ｃ）下記（４）の重鎖と上記（２）の軽鎖とを含む、チクングニアウイルスに対する抗体
（４）下記（ＨＣ）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む重鎖
（ＨＣ）下記（ＨＣ１）、（ＨＣ２）または（ＨＣ３）のアミノ酸配列
（ＨＣ１）配列番号２０のアミノ酸配列
（ＨＣ２）配列番号２０のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（ＨＣ３）配列番号２０のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
４．チクングニアウイルスのうち、チクングニアウイルスのエンベロープ糖タンパク質を検出するための、前記１〜３のいずれか１に記載の免疫クロマト分析装置。
５．前記チクングニアウイルスのエンベロープ糖タンパク質が、チクングニアウイルスのＥ１タンパク質である、前記４に記載の免疫クロマト分析装置。
６．前記（Ａ）の抗体またはその抗原結合断片、前記（Ｂ）の抗体またはその抗原結合断片、および、前記（Ｃ）の抗体またはその抗原結合断片が、ＥＣＳＡ型、Ａｓｉａｎ型、及びＷＡ型の少なくともいずれか１の遺伝子型を有するチクングニアウイルスに特異的に結合する、前記１〜５のいずれか１に記載の免疫クロマト分析装置。
７．前記標識物質保持部は、さらに、下記（Ｄ）の抗体またはその抗原結合断片を含有し、
前記検出部は、さらに、下記（Ｅ）の抗体またはその抗原結合断片を含有する、前記１〜６のいずれか１に記載の免疫クロマト分析装置。
（Ｄ）下記（１）の重鎖可変領域と下記（２）の軽鎖可変領域とを含む、チクングニアウイルスに対する抗体
（１）重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含み、
ＣＤＲＨ１が、下記（Ｈ１−Ｄ）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、
ＣＤＲＨ２が、下記（Ｈ２−Ｄ）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、
ＣＤＲＨ３が、下記（Ｈ３−Ｄ）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである重鎖可変領域
（Ｈ１−Ｄ）下記（Ｈ１−Ｄ１）、（Ｈ１−Ｄ２）または（Ｈ１−Ｄ３）のアミノ酸配列
（Ｈ１−Ｄ１）配列番号２１のアミノ酸配列
（Ｈ１−Ｄ２）配列番号２１のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（Ｈ１−Ｄ３）配列番号２１のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（Ｈ２−Ｄ）下記（Ｈ２−Ｄ１）、（Ｈ２−Ｄ２）または（Ｈ２−Ｄ３）のアミノ酸配列
（Ｈ２−Ｄ１）配列番号２２のアミノ酸配列
（Ｈ２−Ｄ２）配列番号２２のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（Ｈ２−Ｄ３）配列番号２２のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（Ｈ３−Ｄ）下記（Ｈ３−Ｄ１）、（Ｈ３−Ｄ２）または（Ｈ３−Ｄ３）のアミノ酸配列
（Ｈ３−Ｄ１）配列番号２３のアミノ酸配列
（Ｈ３−Ｄ２）配列番号２３のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（Ｈ３−Ｄ３）配列番号２３のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（２）軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲＬ）１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含み、
ＣＤＲＬ１が、下記（Ｌ１−Ａ）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、
ＣＤＲＬ２が、下記（Ｌ２−Ａ）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、
ＣＤＲＬ３が、下記（Ｌ３−Ａ）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである軽鎖可変領域
（Ｌ１−Ａ）下記（Ｌ１−Ａ１）、（Ｌ１−Ａ２）または（Ｌ１−Ａ３）のアミノ酸配列
（Ｌ１−Ａ１）配列番号４のアミノ酸配列
（Ｌ１−Ａ２）配列番号４のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（Ｌ１−Ａ３）配列番号４のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（Ｌ２−Ａ）下記（Ｌ２−Ａ１）、（Ｌ２−Ａ２）または（Ｌ２−Ａ３）のアミノ酸配列
（Ｌ２−Ａ１）配列番号５のアミノ酸配列
（Ｌ２−Ａ２）配列番号５のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（Ｌ２−Ａ３）配列番号５のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（Ｌ３−Ａ）下記（Ｌ３−Ａ１）、（Ｌ３−Ａ２）または（Ｌ３−Ａ３）のアミノ酸配列
（Ｌ３−Ａ１）配列番号６のアミノ酸配列
（Ｌ３−Ａ２）配列番号６のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（Ｌ３−Ａ３）配列番号６のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（Ｅ）下記（３）の重鎖可変領域と上記（２）の軽鎖可変領域とを含む、チクングニアウイルスに対する抗体
（３）重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含み、
ＣＤＲＨ１が、下記（Ｈ１−Ｅ）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、
ＣＤＲＨ２が、下記（Ｈ２−Ｅ）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、
ＣＤＲＨ３が、下記（Ｈ３−Ｅ）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである重鎖可変領域
（Ｈ１−Ｅ）下記（Ｈ１−Ｅ１）、（Ｈ１−Ｅ２）または（Ｈ１−Ｅ３）のアミノ酸配列
（Ｈ１−Ｅ１）配列番号２４のアミノ酸配列
（Ｈ１−Ｅ２）配列番号２４のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（Ｈ１−Ｅ３）配列番号２４のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（Ｈ２−Ｅ）下記（Ｈ２−Ｅ１）、（Ｈ２−Ｅ２）または（Ｈ２−Ｅ３）のアミノ酸配列
（Ｈ２−Ｅ１）配列番号２５のアミノ酸配列
（Ｈ２−Ｅ２）配列番号２５のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（Ｈ２−Ｅ３）配列番号２５のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（Ｈ３−Ｅ）下記（Ｈ３−Ｅ１）、（Ｈ３−Ｅ２）または（Ｈ３−Ｂ３）のアミノ酸配列
（Ｈ３−Ｅ１）配列番号２６のアミノ酸配列
（Ｈ３−Ｅ２）配列番号２６のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（Ｈ３−Ｅ３）配列番号２６のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
８．前記標識物質保持部は、さらに、下記（Ｄ）の抗体またはその抗原結合断片を含有し、
前記検出部は、さらに、下記（Ｅ）の抗体またはその抗原結合断片を含有する、前記１〜６のいずれか１に記載の免疫クロマト分析装置。
（Ｄ）下記（１）の重鎖可変領域と下記（２）の軽鎖可変領域とを含む、チクングニアウイルスに対する抗体
（１）下記（Ｈ−Ｄ）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む重鎖可変領域
（Ｈ−Ｄ）下記（Ｈ−Ｄ１）、（Ｈ−Ｄ２）または（Ｈ−Ｄ３）のアミノ酸配列
（Ｈ−Ｄ１）配列番号２７のアミノ酸配列
（Ｈ−Ｄ２）配列番号２７のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（Ｈ−Ｄ３）配列番号２７のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（２）下記（Ｌ−Ａ）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む軽鎖可変領域
（Ｌ−Ａ）下記（Ｌ−Ａ１）、（Ｌ−Ａ２）または（Ｌ−Ａ３）のアミノ酸配列
（Ｌ−Ａ１）配列番号１４のアミノ酸配列
（Ｌ−Ａ２）配列番号１４のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（Ｌ−Ａ３）配列番号１４のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（Ｅ）下記（３）の重鎖可変領域と上記（２）の軽鎖可変領域とを含む、チクングニアウイルスに対する抗体
（３）下記（Ｈ−Ｅ）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む重鎖可変領域
（Ｈ−Ｅ）下記（Ｈ−Ｅ１）、（Ｈ−Ｅ２）または（Ｈ−Ｅ３）のアミノ酸配列
（Ｈ−Ｅ１）配列番号２８のアミノ酸配列
（Ｈ−Ｅ２）配列番号２８のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（Ｈ−Ｅ３）配列番号２８のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
９．前記標識物質保持部は、さらに、下記（Ｄ）の抗体またはその抗原結合断片を含有し、
前記検出部は、さらに、下記（Ｅ）の抗体またはその抗原結合断片を含有する、前記１〜６のいずれか１に記載の免疫クロマト分析装置。
（Ｄ）下記（１）の重鎖と下記（２）の軽鎖とを含む、チクングニアウイルスに対する抗体
（１）下記（ＨＤ）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む重鎖
（ＨＤ）下記（ＨＤ１）、（ＨＤ２）または（ＨＤ３）のアミノ酸配列
（ＨＤ１）配列番号２９のアミノ酸配列
（ＨＤ２）配列番号２９のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（ＨＤ３）配列番号２９のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（２）下記（ＬＡ）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む軽鎖
（ＬＡ）下記（ＬＡ１）、（ＬＡ２）または（ＬＡ３）のアミノ酸配列
（ＬＡ１）配列番号１８のアミノ酸配列
（ＬＡ２）配列番号１８のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（ＬＡ３）配列番号１８のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（Ｅ）下記（３）の重鎖と上記（２）の軽鎖とを含む、チクングニアウイルスに対する抗体
（３）下記（ＨＥ）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む重鎖
（ＨＥ）下記（ＨＥ１）、（ＨＥ２）または（ＨＥ３）のアミノ酸配列
（ＨＥ１）配列番号３０のアミノ酸配列
（ＨＥ２）配列番号３０のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（ＨＥ３）配列番号３０のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
１０．前記（Ｄ）の抗体またはその抗原結合断片、および、前記（Ｅ）の抗体またはその抗原結合断片が、ＥＣＳＡ型、Ａｓｉａｎ型、及びＷＡ型の少なくともいずれか１の遺伝子型を有するチクングニアウイルスに特異的に結合する、前記７〜９のいずれか１に記載の免疫クロマト分析装置。
１１．前記標識物質保持部における前記抗体（Ａ）の抗体またはその抗原結合断片と、前記抗体（Ｄ）の抗体またはその抗原結合断片と、の含有比率（質量）が１：２〜２：１である、前記７〜１０のいずれか１に記載の免疫クロマト分析装置。
１２．前記試料添加部に添加する試料が、チクングニアウイルス感染者の全血、血清、血漿、精液、および髄液のいずれか１である、前記１〜１１のいずれか１に記載の免疫クロマト分析装置。
１３．前記１〜１２のいずれか１に記載の免疫クロマト分析装置と、検体を希釈して展開するための検体希釈液とを含む、免疫クロマト分析キット。
１４．以下の工程（１）〜（４）を含む、前記１３に記載の免疫クロマト分析キットを用いて検体に含まれるチクングニアウイルスを検出する免疫クロマト分析方法。
（１）検体希釈液により検体を希釈した検体含有液を試料添加部に添加する工程
（２）標識物質保持部に保持されている、前記（Ａ）の抗体またはその抗原結合断片により前記チクングニアウイルスを認識させる工程
（３）前記検体および前記（Ａ）の抗体またはその抗原結合断片を移動相としてクロマトグラフ媒体部に展開させる工程
（４）展開された移動相中のチクングニアウイルスを、検出部に含まれる前記（Ｂ）の抗体またはその抗原結合断片および前記（Ｃ）の抗体またはその抗原結合断片により検出する工程
【発明の効果】
【００１２】
本発明に係る免疫クロマト分析装置を用いることによって、遺伝子型の異なる種々のチクングニアウイルス、および構造タンパク質の一部に変異を起こしたチクングニアウイルスであっても、迅速かつ高感度に検出することができる。また、チクングニアウイルス以外の他のウイルス（例えば、シンドビスウイルス）との交叉反応性が低く、チクングニアウイルスを特異的に検出することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】図１は、本発明の一実施形態の免疫クロマト分析装置の構造を説明するための断面図である。
【図２】図２は、本発明の実施例及び比較例の免疫クロマト分析装置を用いてチクングニアウイルス（ＥＣＳＡ型、Ａｓｉａｎ型）の測定した結果を示すグラフである。
【図３】図３は、本発明の実施例及び比較例の免疫クロマト分析装置を用いてチクングニアウイルス（ＷＡ型）の測定した結果を示すグラフである。
【図４】図４は、本発明の実施例及び比較例の免疫クロマト分析装置を用いて、野生型（ＷＴ）および変異型（ＭＴ）のチクングニアウイルス（ＥＣＳＡ型）の測定した結果を示すグラフである。
【図５】図５は、本発明の実施例及び比較例の免疫クロマト分析装置を用いて、野生型（ＷＴ）および変異型（ＭＴ）のチクングニアウイルス（Ａｓｉａｎ型）の測定した結果を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
本発明に係る免疫クロマト分析装置は、前述のとおり、標識物質保持部が前記（Ａ）の抗体またはその抗原結合断片を含有し、検出部が前記（Ｂ）の抗体またはその抗原結合断片、及び前記（Ｃ）の抗体またはその抗原結合断片を含有することを特徴とする。本発明に係る免疫クロマト分析装置は、標識物質保持部および検出部に、前記特定の組み合わせの抗体またはその抗原結合断片を有することで、遺伝子型の異なる種々のチクングニアウイルスや、構造タンパク質の一部に変異を起こしたチクングニアウイルスであっても、迅速かつ高感度に検出することができ、さらに、チクングニアウイルス以外の他のウイルス（例えば、シンドビスウイルス）との交叉反応性が低く、チクングニアウイルスを特異的に検出することができるというものである。
以下に、本発明を実施するための形態を説明する。
【００１５】
（検体）
本発明に係る免疫クロマト分析装置に適用できる検体（以下、検体試料または単に試料ということもある）の由来は、特に制限されず、例えば、ヒト、ヒトを除く非ヒト動物等があげられ、前記非ヒト動物は、前述のように、例えば、マウス、ラット、イヌ、サル、ウサギ、ヒツジ、ウマ等の哺乳類や媒介動物としてネッタイシマカ、ヒトスジシマカ等の節足動物があげられる。
【００１６】
前記検体の種類は、特に制限はされず、例えば、生体から分離した、体液、尿、体液由来細胞、器官、組織または細胞等の生体試料があげられる。前記体液は、例えば、血液、滑液等の体腔液、リンパ液、組織液等があげられ、具体例として、例えば、全血、血清、血漿、精液、髄液等があげられる。前記生体試料は、全血、血清、血漿、精液、髄液が好ましく、より好ましくは、血清または血漿である。前記試料は、例えば、採取した試料を、そのまま本発明に使用してもよいし、液体等による希釈等の他の処理を実施した上で使用してもよい。前記液体は、特に制限されず、例えば、水、生理食塩水、緩衝液、培地等があげられる。また、前記試料は、例えば、予め酸処理してもよい。これにより、例えば、前記試料中のチクングニアウイルスと抗体等とが抗原抗体複合体を形成している際に、前記抗体等とチクングニアウイルスとを解離できるため、より感度よくチクングニアウイルスを検出できる。前記酸処理に用いる酸は、特に制限されず、例えば、塩酸等があげられる。
【００１７】
（抗体またはその抗原結合断片）
本発明に係る免疫クロマト分析装置は、前述のとおり、標識物質保持部が前記（Ａ）の抗体またはその抗原結合断片を含有し、検出部が前記（Ｂ）の抗体またはその抗原結合断片、及び前記（Ｃ）の抗体またはその抗原結合断片を含有する。
【００１８】
前記抗体等またはその抗原結合断片（以下、抗体等ともいう）は、前述のように、ＥＳＣＡ型ＣＨＩＫＶ、ＷＡ型ＣＨＩＫＶ、およびＡｓｉａｎ型ＣＨＩＫＶの少なくともいずれか１の遺伝子型を有するチクングニアウイルスに特異的に結合する。前記ＥＳＣＡ型ＣＨＩＫＶ、前記ＷＡ型ＣＨＩＫＶ、および前記Ａｓｉａｎ型ＣＨＩＫＶは、例えば、下記参考文献１を参照して分類できる。前記抗体等は、より具体的には、例えば、ＥＳＣＡ型ＣＨＩＫＶのエンベロープ糖タンパク質（以下、「Ｅｎｖタンパク質」ともいう）、ＷＡ型ＣＨＩＫＶのＥｎｖタンパク質、およびＡｓｉａｎ型ＣＨＩＫＶのＥｎｖタンパク質に結合する。前記Ｅｎｖタンパク質は、例えば、ＣＨＩＫＶのエンベロープタンパク質を意味する。前記Ｅｎｖタンパク質は、例えば、６Ｋ−Ｅ１タンパク質、Ｅ２タンパク質、およびＥ３タンパク質から構成されるため、Ｅ３−Ｅ２−６Ｋ−Ｅ１タンパク質ともいう。ＣＨＩＫＶのＥｎｖタンパク質のアミノ酸配列は、例えば、既存のデータベースに登録されている情報を参照できる。具体例として、ＥＳＣＡ型ＣＨＩＫＶ由来Ｅｎｖタンパク質は、例えば、ＮＣＢＩアクセッション番号ＢＡＰ７４２２０．１で登録されているアミノ酸配列において、２６８番目から１２４７番目の下記のアミノ酸配列（配列番号３１）があげられる。ＷＡ型ＣＨＩＫＶ由来Ｅｎｖタンパク質は、例えば、ＮＣＢＩアクセッション番号ＡＡＵ４３８８１．１で登録されているアミノ酸配列において、２６８番目から１２４７番目の下記のアミノ酸配列（配列番号３２）があげられる。Ａｓｉａｎ型ＣＨＩＫＶ由来Ｅｎｖタンパク質は、例えば、ＮＣＢＩアクセッション番号ＡＤＧ９５９３８．１で登録されているアミノ酸配列において、２６８番目から１２４７番目の下記のアミノ酸配列（配列番号３３）があげられる。
参考文献１：Ａｅｋｋａｃｈａｉ  Ｔｕｅｋｐｒａｋｈｏｎ  ｅｔ．ａｌ．，“Ｖａｒｉａｔｉｏｎ  ａｔ  ｐｏｓｉｔｉｏｎ  ３５０  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｃｈｉｋｕｎｇｕｎｙａ  ｖｉｒｕｓ  ６Ｋ−Ｅ１  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｓ  ｔｈｅ  ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ａ  ｒａｐｉｄ  Ｅ１−ａｎｔｉｇｅｎ  ｔｅｓｔ”，Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｒｅｐｏｒｔ，ｖｏｌ．８，Ａｒｔｉｃｌｅ  Ｎｕｍｂｅｒ：１０９４，２０１８
【００１９】
ＥＳＣＡ型ＣＨＩＫＶ由来Ｅｎｖタンパク質（配列番号３１）
ＭＣＬＬＡＮＴＴＦＰＣＳＱＰＰＣＴＰＣＣＹＥＫＥＰＥＥＴＬＲＭＬＥＤＮＶＭＲＰＧＹＹＱＬＬＱＡＳＬＴＣＳＰＨＲＱＲＲＳＴＫＤＮＦＮＶＹＫＡＴＲＰＹＬＡＨＣＰＤＣＧＥＧＨＳＣＨＳＰＶＡＬＥＲＩＲＮＥＡＴＤＧＴＬＫＩＱＶＳＬＱＩＧＩＫＴＤＤＳＨＤＷＴＫＬＲＹＭＤＮＨＭＰＡＤＡＥＲＡＧＬＦＶＲＴＳＡＰＣＴＩＴＧＴＭＧＨＦＩＬＡＲＣＰＫＧＥＴＬＴＶＧＦＴＤＳＲＫＩＳＨＳＣＴＨＰＦＨＨＤＰＰＶＩＧＲＥＫＦＨＳＲＰＱＨＧＫＥＬＰＣＳＴＹＶＱＳＴＡＡＴＴＥＥＩＥＶＨＭＰＰＤＴＰＤＲＴＬＭＳＱＱＳＧＮＶＫＩＴＶＮＧＱＴＶＲＹＫＣＮＣＧＧＳＮＥＧＬＴＴＴＤＫＶＩＮＮＣＫＶＤＱＣＨＡＡＶＴＮＨＫＫＷＱＹＮＳＰＬＶＰＲＮＡＥＬＧＤＲＱＧＫＩＨＩＰＦＰＬＡＮＶＴＣＲＶＰＫＡＲＮＰＴＶＴＹＧＫＮＱＶＩＭＬＬＹＰＤＨＰＴＬＬＳＹＲＮＭＧＥＥＰＮＹＱＥＥＷＶＭＨＫＫＥＶＶＬＴＶＰＴＥＧＬＥＶＴＷＧＮＮＥＰＹＫＹＷＰＱＬＳＴＮＧＴＡＨＧＨＰＨＥＩＩＬＹＹＹＥＬＹＰＴＭＴＶＶＶＶＳＶＡＴＦＩＬＬＳＭＶＧＭＡＡＧＭＣＭＣＡＲＲＲＣＩＴＰＹＥＬＴＰＧＡＴＶＰＦＬＬＳＬＩＣＣＩＲＴＡＫＡＡＴＹＱＥＡＡＩＹＬＷＮＥＱＱＰＬＦＷＬＱＡＬＩＰＬＡＡＬＩＶＬＣＮＣＬＲＬＬＰＣＣＣＫＴＬＡＦＬＡＶＭＳＶＧＡＨＴＶＳＡＹＥＨＶＴＶＩＰＮＴＶＧＶＰＹＫＴＬＶＮＲＰＧＹＳＰＭＶＬＥＭＥＬＬＳＶＴＬＥＰＴＬＳＬＤＹＩＴＣＥＹＫＴＶＩＰＳＰＹＶＫＣＣＧＴＡＥＣＫＤＫＮＬＰＤＹＳＣＫＶＦＴＧＶＹＰＦＭＷＧＧＡＹＣＦＣＤＡＥＮＴＱＬＳＥＡＨＶＥＫＳＥＳＣＫＴＥＦＡＳＡＹＲＡＨＴＡＳＡＳＡＫＬＲＶＬＹＱＧＮＮＩＴＶＴＡＹＡＮＧＤＨＡＶＴＶＫＤＡＫＦＩＶＧＰＭＳＳＡＷＴＰＦＤＮＫＩＶＶＹＫＧＤＶＹＮＭＤＹＰＰＦＧＡＧＲＰＧＱＦＧＤＩＱＳＲＴＰＥＳＫＤＶＹＡＮＴＱＬＶＬＱＲＰＡＶＧＴＶＨＶＰＹＳＱＡＰＳＧＦＫＹＷＬＫＥＲＧＡＳＬＱＨＴＡＰＦＧＣＱＩＡＴＮＰＶＲＡＶＮＣＡＶＧＮＭＰＩＳＩＤＩＰＥＡＡＦＴＲＶＶＤＡＰＳＬＴＤＭＳＣＥＶＰＡＣＴＨＳＳＤＦＧＧＶＡＩＩＫＹＡＡＳＫＫＧＫＣＡＶＨＳＭＴＮＡＶＴＩＲＥＡＥＩＥＶＥＧＮＳＱＬＱＩＳＦＳＴＡＬＡＳＡＥＦＲＶＱＶＣＳＴＱＶＨＣＡＡＥＣＨＰＰＫＤＨＩＶＮＹＰＡＳＨＴＴＬＧＶＱＤＩＳＡＴＡＭＳＷＶＱＫＩＴＧＧＶＧＬＶＶＡＶＡＡＬＩＬＩＶＶＬＣＶＳＦＳＲＨ
【００２０】
ＷＡ型ＣＨＩＫＶ由来Ｅｎｖタンパク質（配列番号３２）
ＬＣＬＬＡＮＴＴＦＰＣＳＱＰＰＣＴＰＣＣＹＥＫＥＰＥＳＴＬＲＭＬＥＤＮＶＭＲＰＧＹＹＱＬＬＫＡＳＬＴＣＳＰＨＲＱＲＲＳＴＫＤＮＦＮＶＹＫＡＴＲＰＹＬＡＨＣＰＤＣＧＥＧＨＳＣＨＳＰＩＡＬＥＲＩＲＮＥＡＴＤＧＴＬＫＩＱＶＳＬＱＩＧＩＫＴＤＤＳＨＤＷＴＫＬＲＹＭＤＳＨＴＰＡＤＡＥＲＡＧＬＬＶＲＴＳＡＰＣＴＩＴＧＴＭＧＨＦＩＬＡＲＣＰＫＧＥＴＬＴＶＧＦＴＤＳＲＫＩＳＨＴＣＴＨＰＦＨＨＥＰＰＶＩＧＲＥＲＦＨＳＲＰＱＨＧＫＥＬＰＣＳＴＹＶＱＳＴＡＡＴＡＥＥＩＥＶＨＭＰＰＤＴＰＤＲＴＬＭＴＱＱＳＧＮＶＫＩＴＶＮＧＱＴＶＲＹＫＣＮＣＧＧＳＮＥＧＬＴＴＴＤＫＶＩＮＮＣＫＩＤＱＣＨＡＡＶＴＮＨＫＮＷＱＹＮＳＰＬＶＰＲＮＡＥＬＧＤＲＫＧＫＩＨＩＰＦＰＬＡＮＶＴＣＲＶＰＫＡＲＮＰＴＶＴＹＧＫＮＱＶＴＭＬＬＹＰＤＨＰＴＬＬＳＹＲＮＭＧＱＥＰＮＹＨＥＥＷＶＴＨＫＫＥＶＴＬＴＶＰＴＥＧＬＥＶＴＷＧＮＮＥＰＹＫＹＷＰＱＭＳＴＮＧＴＡＨＧＨＰＨＥＩＩＬＹＹＹＥＬＹＰＴＭＴＶＶＩＶＳＶＡＳＦＶＬＬＳＭＶＧＴＡＶＧＭＣＶＣＡＲＲＲＣＩＴＰＹＥＬＴＰＧＡＴＶＰＦＬＬＳＬＬＣＣＶＲＴＴＫＡＡＴＹＹＥＡＡＡＹＬＷＮＥＱＱＰＬＦＷＬＱＡＬＩＰＬＡＡＬＩＶＬＣＮＣＬＫＬＬＰＣＣＣＫＴＬＡＦＬＡＶＭＳＩＧＡＨＴＶＳＡＹＥＨＶＴＶＩＰＮＴＶＧＶＰＹＫＴＬＶＮＲＰＧＹＳＰＭＶＬＥＭＥＬＱＳＶＴＬＥＰＴＬＳＬＤＹＩＴＣＥＹＫＴＶＩＰＳＰＹＶＫＣＣＧＴＡＥＣＫＤＫＳＬＰＤＹＳＣＫＶＦＴＧＶＹＰＦＭＷＧＧＡＹＣＦＣＤＡＥＮＴＱＬＳＥＡＨＶＥＫＳＥＳＣＫＴＥＦＡＳＡＹＲＡＨＴＡＳＡＳＡＫＬＲＶＬＹＱＧＮＮＩＴＶＡＡＹＡＮＧＤＨＡＶＴＶＫＤＡＫＦＶＶＧＰＭＳＳＡＷＴＰＦＤＮＫＩＶＶＹＫＧＤＶＹＮＭＤＹＰＰＦＧＡＧＲＰＧＱＦＧＤＩＱＳＲＴＰＥＳＫＤＶＹＡＮＴＱＬＶＬＱＲＰＡＡＧＴＶＨＶＰＹＳＱＡＰＳＧＦＫＹＷＬＫＥＲＧＡＳＬＱＨＴＡＰＦＧＣＱＩＡＴＮＰＶＲＡＶＮＣＡＶＧＮＩＰＩＳＩＤＩＰＤＡＡＦＴＲＶＶＤＡＰＳＶＴＤＭＳＣＥＶＰＡＣＴＨＳＳＤＦＧＧＶＡＩＩＫＹＴＡＳＫＫＧＫＣＡＶＨＳＭＴＮＡＶＴＩＲＥＡＤＶＥＶＥＧＮＳＱＬＱＩＳＦＳＴＡＬＡＳＡＥＦＲＶＱＶＣＳＴＱＶＨＣＡＡＡＣＨＰＰＫＤＨＩＶＮＹＰＡＳＨＴＴＬＧＶＱＤＩＳＴＴＡＭＳＷＶＱＫＩＴＧＧＶＧＬＩＶＡＶＡＡＬＩＬＩＶＶＬＣＶＳＦＳＲＨ
【００２１】
Ａｓｉａｎ型ＣＨＩＫＶ由来Ｅｎｖタンパク質（配列番号３３）
ＭＣＬＬＡＮＴＴＦＰＣＳＱＰＰＣＴＰＣＣＹＥＫＥＰＥＫＴＬＲＭＬＥＤＮＶＭＳＰＧＹＹＱＬＬＱＡＳＬＴＣＳＰＲＲＱＲＲＳＩＫＤＮＦＮＶＹＫＡＴＲＰＹＬＡＨＣＰＤＣＧＥＧＨＳＣＨＳＰＶＡＬＥＲＩＲＮＥＡＴＤＧＴＬＫＩＱＶＳＬＱＩＧＩＫＴＤＤＳＨＤＷＴＫＬＲＹＭＤＮＨＭＰＡＤＡＥＲＡＧＬＦＶＲＴＳＡＰＣＴＩＴＧＴＭＧＨＦＩＬＡＲＣＰＫＧＥＴＬＴＶＧＦＴＤＧＲＫＩＳＨＳＣＴＨＰＦＨＨＤＰＰＶＩＧＲＥＫＦＨＳＲＰＱＨＧＲＥＬＰＣＳＴＹＡＱＳＴＡＡＴＡＥＥＩＥＶＨＭＰＰＤＴＰＤＲＴＬＭＳＱＱＳＧＮＶＫＩＴＶＮＳＱＴＶＲＹＫＣＮＣＧＤＳＮＥＧＬＴＴＴＤＫＶＩＮＮＣＫＶＤＱＣＨＡＡＶＴＮＨＫＫＷＱＹＮＳＰＬＶＰＲＮＡＥＬＧＤＲＫＧＫＶＨＩＰＦＰＬＡＮＶＴＣＲＶＰＫＡＲＮＰＴＶＴＹＧＫＮＱＶＩＭＬＬＹＰＤＨＰＴＬＬＳＹＲＮＭＧＥＥＰＮＹＱＥＥＷＶＴＨＫＫＥＩＲＬＴＶＰＴＥＧＬＥＶＴＷＧＮＮＥＰＹＫＹＷＰＱＬＳＴＮＧＴＡＨＧＨＰＨＥＩＩＬＹＹＹＥＬＹＰＴＭＴＶＶＶＶＳＶＡＳＦＶＬＬＳＭＶＧＶＡＶＧＭＣＭＣＡＲＲＲＣＩＴＰＹＥＬＴＰＧＡＴＶＰＦＬＬＳＬＩＣＣＩＲＴＡＫＡＡＴＹＱＥＡＡＶＹＬＷＮＥＱＱＰＬＦＷＬＱＡＬＩＰＬＡＡＬＩＶＬＣＮＣＬＲＬＬＰＣＣＣＫＴＬＴＦＬＡＶＬＳＶＧＡＨＴＶＳＡＹＥＨＶＴＶＩＰＮＴＶＧＶＰＹＫＴＬＶＮＲＰＧＹＳＰＭＶＬＥＭＥＬＬＳＶＴＬＥＰＴＬＳＬＤＹＩＴＣＥＹＫＴＶＩＰＳＰＹＶＫＣＣＧＴＡＥＣＫＤＫＳＬＰＤＹＳＣＫＶＦＴＧＶＹＰＦＭＷＧＧＡＹＣＦＣＤＴＥＮＴＱＬＳＥＡＨＶＥＫＳＥＳＣＫＴＥＦＡＳＡＹＲＡＨＴＡＳＡＳＡＫＬＲＶＬＹＱＧＮＮＶＴＶＳＡＹＡＮＧＤＨＡＶＴＶＫＤＡＫＦＩＶＧＰＭＳＳＡＷＴＰＦＤＮＫＩＶＶＹＫＧＤＶＹＮＭＤＹＰＰＦＧＡＧＲＰＧＱＦＧＤＩＱＳＲＴＰＥＳＥＤＶＹＡＮＴＱＬＶＬＱＲＰＳＡＧＴＶＨＶＰＹＳＱＡＰＳＧＦＫＹＷＬＫＥＲＧＡＳＬＱＨＴＡＰＦＧＣＱＩＡＴＮＰＶＲＡＭＮＣＡＶＧＮＭＰＩＳＩＤＩＰＤＡＡＦＴＲＶＶＤＡＰＳＬＴＤＭＳＣＥＶＳＡＣＴＨＳＳＤＦＧＧＶＡＩＩＫＹＡＡＳＫＫＧＫＣＡＶＨＳＭＴＮＡＶＴＩＲＥＡＥＩＥＶＥＧＮＳＱＬＱＩＳＦＳＴＡＬＡＳＡＥＦＲＶＱＶＣＳＴＱＶＨＣＡＡＥＣＨＰＰＫＤＨＩＶＮＹＰＡＳＨＴＴＬＧＶＱＤＩＳＡＴＡＭＳＷＶＱＫＩＴＧＧＶＧＬＶＶＡＶＡＡＬＩＬＩＶＶＬＣＶＳＦＳＲＨ
【００２２】
前記抗体等は、ＣＨＩＫＶ、より具体的には、前記Ｅｎｖタンパク質の全長アミノ酸配列からなるタンパク質に結合する抗体の他に、例えば、前記Ｅｎｖタンパク質のペプチド断片に結合する抗体の意味も含む。また、前記Ｅｎｖタンパク質は、例えば、前記配列番号３１のアミノ酸配列における８２６番目（Ｅ１タンパク質の２８４番目、６Ｋ−Ｅ１タンパク質の３５０番目）のアミノ酸と対応するアミノ酸（配列番号３１では、下線で示すグルタミン酸（Ｅ））が、アスパラギン酸（Ｄ）に置換された変異Ｅｎｖタンパク質（Ｅ３５０Ｄ）を含む。また、前記Ｅｎｖタンパク質は、例えば、前記配列番号３２または３３のアミノ酸配列における８２６番目（Ｅ１タンパク質の２８４番目、６Ｋ−Ｅ１タンパク質の３５０番目）のアミノ酸と対応するアミノ酸（配列番号３２または３３では、下線で示すアスパラギン酸（Ｄ））が、グルタミン酸（Ｅ）に置換された変異Ｅｎｖタンパク質（Ｄ３５０Ｅ）を含む。以下、前記Ｅｎｖタンパク質は、特に示さない限り、例えば、全長アミノ酸配列からなる、Ｅｎｖタンパク質、変異Ｅｎｖタンパク質（Ｅ３５０Ｄ）、または変異Ｅｎｖタンパク質（Ｄ３５０Ｅ）の他に、これらのペプチド断片の意味も含む。
【００２３】
前記抗体等は、例えば、分子構造がイムノグロブリンである、いわゆる「抗体」でもよいし、その抗原結合断片でもよい。前記抗体等は、前述の重鎖可変領域および軽鎖可変領域を有していればよい。抗体の場合、例えば、そのイムノグロブリンクラスおよびアイソタイプは、特に制限されない。前記イムノグロブリンクラスは、例えば、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ等があげられる。前記ＩｇＧは、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４等があげられる。
【００２４】
前記抗体は、例えば、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、組み換え抗体、ヒト（例えば、完全ヒト）抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、多特異的抗体等であってもよい。
【００２５】
本発明における「抗原結合断片」は、前記抗体の一部分、例えば、部分断片であり、且つ、前記チクングニアウイルスを認識（結合）するものを意味する。前記抗原結合断片は、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、可変領域断片（Ｆｖ）、ジスルフィド結合Ｆｖ、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、二重特異性抗体およびこれらの重合体等があげられる。
【００２６】
前記抗体等は、前述の重鎖可変領域および軽鎖可変領域の他に、例えば、定常領域を有してもよく、前記定常領域は、例えば、ヒト定常領域、またはマウス定常領域である。抗体（イムノグロブリン）の場合、重鎖の定常領域は、例えば、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３という領域を含み、軽鎖の定常領域は、例えば、ＣＬという領域を含む。本発明における抗体等が前記定常領域を有する場合、例えば、前記重鎖可変領域は、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３の少なくとも１つと結合し、前記軽鎖可変領域は、前記ＣＬと結合しており、前記重鎖可変領域は、例えば、ＣＨ１と直接結合している。
【００２７】
一般に、抗体分子の重鎖および軽鎖は、それぞれ、３箇所の相補性決定領域（ＣＤＲ：Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｉｔｙ  ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ  ｒｅｇｉｏｎ）を有している。ＣＤＲは、超可変領域（ｈｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅ  ｄｏｍａｉｎ）ともいう。ＣＤＲは、前記重鎖および軽鎖の可変領域でも、特に一次構造の変異性が高い領域であり、一次構造上において、通常、３箇所に分離している。本発明においては、重鎖における３ヶ所のＣＤＲを、重鎖のアミノ酸配列におけるアミノ末端側から、重鎖ＣＤＲ１（ＣＤＲＨ１）、重鎖ＣＤＲ２（ＣＤＲＨ２）、および重鎖ＣＤＲ３（ＣＤＲＨ３）と表し、軽鎖における３ヶ所のＣＤＲを、軽鎖のアミノ酸配列におけるアミノ末端側から、軽鎖ＣＤＲ１（ＣＤＲＬ１）、軽鎖ＣＤＲ２（ＣＤＲＬ２）、および軽鎖ＣＤＲ３（ＣＤＲＬ３）と表す。これらの部位は、立体構造の上で相互に近接し、結合する抗原に対する特異性を決定している。
【００２８】
以下、前記（Ａ）の抗体について説明する。
本発明の一の実施態様において、前記（Ａ）の抗体は、下記（１）の重鎖可変領域と下記（２）の軽鎖可変領域とを含む、チクングニアウイルスに対する抗体である。
【００２９】
（１）重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含み、
ＣＤＲＨ１が、下記（Ｈ１−Ａ）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、
ＣＤＲＨ２が、下記（Ｈ２−Ａ）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、
ＣＤＲＨ３が、下記（Ｈ３−Ａ）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである重鎖可変領域
（Ｈ１−Ａ）下記（Ｈ１−Ａ１）、（Ｈ１−Ａ２）または（Ｈ１−Ａ３）のアミノ酸配列
（Ｈ１−Ａ１）配列番号１のアミノ酸配列
（Ｈ１−Ａ２）配列番号１のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（Ｈ１−Ａ３）配列番号１のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（Ｈ２−Ａ）下記（Ｈ２−Ａ１）、（Ｈ２−Ａ２）または（Ｈ２−Ａ３）のアミノ酸配列
（Ｈ２−Ａ１）配列番号２のアミノ酸配列
（Ｈ２−Ａ２）配列番号２のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（Ｈ２−Ａ３）配列番号２のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（Ｈ３−Ａ）下記（Ｈ３−Ａ１）、（Ｈ３−Ａ２）または（Ｈ３−Ａ３）のアミノ酸配列
（Ｈ３−Ａ１）配列番号３のアミノ酸配列
（Ｈ３−Ａ２）配列番号３のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（Ｈ３−Ａ３）配列番号３のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（２）軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲＬ）１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含み、
ＣＤＲＬ１が、下記（Ｌ１−Ａ）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、
ＣＤＲＬ２が、下記（Ｌ２−Ａ）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、
ＣＤＲＬ３が、下記（Ｌ３−Ａ）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである軽鎖可変領域
（Ｌ１−Ａ）下記（Ｌ１−Ａ１）、（Ｌ１−Ａ２）または（Ｌ１−Ａ３）のアミノ酸配列
（Ｌ１−Ａ１）配列番号４のアミノ酸配列
（Ｌ１−Ａ２）配列番号４のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（Ｌ１−Ａ３）配列番号４のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（Ｌ２−Ａ）下記（Ｌ２−Ａ１）、（Ｌ２−Ａ２）または（Ｌ２−Ａ３）のアミノ酸配列
（Ｌ２−Ａ１）配列番号５のアミノ酸配列
（Ｌ２−Ａ２）配列番号５のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（Ｌ２−Ａ３）配列番号５のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（Ｌ３−Ａ）下記（Ｌ３−Ａ１）、（Ｌ３−Ａ２）または（Ｌ３−Ａ３）のアミノ酸配列
（Ｌ３−Ａ１）配列番号６のアミノ酸配列
（Ｌ３−Ａ２）配列番号６のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（Ｌ３−Ａ３）配列番号６のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
【００３０】
前記各ＣＤＲにおいて、「同一性」は、例えば、比較する配列同士を適切にアライメントしたときの同一性の程度であり、前記配列間のアミノ酸の正確な一致の出現率（％）を意味する。前記「同一性」は、それぞれ、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。前記同一性は、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＦＡＳＴＡ等の解析ソフトウェアを用いて、デフォルトのパラメータにより算出できる（以下、同様）。
【００３１】
前記各ＣＤＲにおいて、置換等に関する「１個または数個」は、それぞれ、例えば、１〜５個、１〜４個、１〜３個、１または２個、１個である。
【００３２】
前記アミノ酸の置換は、例えば、保存的置換であってもよい（以下、同様）。前記保存的置換は、タンパク質の機能を実質的に改変しないように、１個または数個のアミノ酸を、他のアミノ酸および／またはアミノ酸誘導体に置換することを意味する。「置換するアミノ酸」と「置換されるアミノ酸」とは、例えば、性質および／または機能が類似していることが好ましい。具体的には、例えば、疎水性および親水性の指標（ハイドロパシー）、極性、電荷等の化学的性質、または、二次構造等の物理的性質等が類似していることが好ましい。前記性質および／または機能が類似するアミノ酸またはアミノ酸誘導体は、例えば、当該技術分野において公知である。具体例として、非極性アミノ酸（疎水性アミノ酸）は、例えば、アラニン、バリン、イソロイシン、ロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メチオニン等があげられ、極性アミノ酸（中性アミノ酸）は、グリシン、セリン、スレオニン、チロシン、グルタミン、アスパラギン、システイン等があげられ、陽電荷を有するアミノ酸（塩基性アミノ）酸は、アルギニン、ヒスチジン、リジン等があげられ、負電荷を有するアミノ酸（酸性アミノ酸）は、アスパラギン酸、グルタミン酸等があげられる。
【００３３】
本発明の一の実施態様において、前記（Ａ）の抗体は、下記（１）の重鎖可変領域と下記（２）の軽鎖可変領域とを含む、チクングニアウイルスに対する抗体である。
（１）下記（Ｈ−Ａ）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む重鎖可変領域
（Ｈ−Ａ）下記（Ｈ−Ａ１）、（Ｈ−Ａ２）または（Ｈ−Ａ３）のアミノ酸配列
（Ｈ−Ａ１）配列番号１３のアミノ酸配列
（Ｈ−Ａ２）配列番号１３のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（Ｈ−Ａ３）配列番号１３のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（２）下記（Ｌ−Ａ）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む軽鎖可変領域
（Ｌ−Ａ）下記（Ｌ−Ａ１）、（Ｌ−Ａ２）または（Ｌ−Ａ３）のアミノ酸配列
（Ｌ−Ａ１）配列番号１４のアミノ酸配列
（Ｌ−Ａ２）配列番号１４のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（Ｌ−Ａ３）配列番号１４のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
【００３４】
前記重鎖可変領域のポリペプチドおよび前記軽鎖可変領域のポリペプチドにおいて、前記「同一性」は、それぞれ、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。
【００３５】
前記重鎖可変領域のポリペプチドおよび前記軽鎖可変領域のポリペプチドにおいて、置換等に関する「１個または数個」は、それぞれ、例えば、１〜２０個、１〜１５個、１〜１０個、１〜９個、１〜８個、１〜７個、１〜６個、１〜５個、１〜４個、１〜３個、１または２個、１個である。
【００３６】
本発明の一の実施態様において、前記（Ａ）の抗体は、下記（１）の重鎖と下記（２）の軽鎖とを含む、チクングニアウイルスに対する抗体である。
（１）下記（ＨＡ）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む重鎖
（ＨＡ）下記（ＨＡ１）、（ＨＡ２）または（ＨＡ３）のアミノ酸配列
（ＨＡ１）配列番号１７のアミノ酸配列
（ＨＡ２）配列番号１７のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（ＨＡ３）配列番号１７のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（２）下記（ＬＡ）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む軽鎖
（ＬＡ）下記（ＬＡ１）、（ＬＡ２）または（ＬＡ３）のアミノ酸配列
（ＬＡ１）配列番号１８のアミノ酸配列
（ＬＡ２）配列番号１８のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（ＬＡ３）配列番号１８のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
【００３７】
前記重鎖のポリペプチドおよび前記軽鎖のポリペプチドにおいて、前記「同一性」は、それぞれ、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。
【００３８】
前記重鎖のポリペプチドおよび前記軽鎖のポリペプチドにおいて、置換等に関する「１個または数個」は、それぞれ、例えば、１〜８０個、１〜６０個、１〜４０個、１〜３０個、１〜２０個、１〜１５個、１〜１０個、１〜９個、１〜８個、１〜７個、１〜６個、１〜５個、１〜４個、１〜３個、１または２個、１個である。
【００３９】
つぎに、前記（Ｂ）の抗体について説明する。
本発明の一の実施態様において、前記（Ｂ）の抗体は、下記（３）の重鎖可変領域と上記（２）の各ＣＤＲを有する軽鎖可変領域とを含む、チクングニアウイルスに対する抗体である。
【００４０】
（３）重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含み、
ＣＤＲＨ１が、下記（Ｈ１−Ｂ）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、
ＣＤＲＨ２が、下記（Ｈ２−Ｂ）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、
ＣＤＲＨ３が、下記（Ｈ３−Ｂ）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである重鎖可変領域
（Ｈ１−Ｂ）下記（Ｈ１−Ｂ１）、（Ｈ１−Ｂ２）または（Ｈ１−Ｂ３）のアミノ酸配列
（Ｈ１−Ｂ１）配列番号７のアミノ酸配列
（Ｈ１−Ｂ２）配列番号７のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（Ｈ１−Ｂ３）配列番号７のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（Ｈ２−Ｂ）下記（Ｈ２−Ｂ１）、（Ｈ２−Ｂ２）または（Ｈ２−Ｂ３）のアミノ酸配列
（Ｈ２−Ｂ１）配列番号８のアミノ酸配列
（Ｈ２−Ｂ２）配列番号８のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（Ｈ２−Ｂ３）配列番号８のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（Ｈ３−Ｂ）下記（Ｈ３−Ｂ１）、（Ｈ３−Ｂ２）または（Ｈ３−Ｂ３）のアミノ酸配列
（Ｈ３−Ｂ１）配列番号９のアミノ酸配列
（Ｈ３−Ｂ２）配列番号９のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（Ｈ３−Ｂ３）配列番号９のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
【００４１】
前記各ＣＤＲにおいて、「同一性」は、それぞれ、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。
【００４２】
前記各ＣＤＲにおいて、置換等に関する「１個または数個」は、それぞれ、例えば、１〜５個、１〜４個、１〜３個、１または２個、１個である。
【００４３】
本発明の一の実施態様において、前記（Ｂ）の抗体は、下記（３）の重鎖可変領域と上記（２）の軽鎖可変領域とを含む、チクングニアウイルスに対する抗体である。
（３）下記（Ｈ−Ｂ）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む重鎖可変領域
（Ｈ−Ｂ）下記（Ｈ−Ｂ１）、（Ｈ−Ｂ２）または（Ｈ−Ｂ３）のアミノ酸配列
（Ｈ−Ｂ１）配列番号１５のアミノ酸配列
（Ｈ−Ｂ２）配列番号１５のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（Ｈ−Ｂ３）配列番号１５のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
【００４４】
前記重鎖可変領域のポリペプチドおよび前記軽鎖可変領域のポリペプチドにおいて、前記「同一性」は、それぞれ、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。
【００４５】
前記重鎖可変領域のポリペプチドおよび前記軽鎖可変領域のポリペプチドにおいて、置換等に関する「１個または数個」は、それぞれ、例えば、１〜２０個、１〜１５個、１〜１０個、１〜９個、１〜８個、１〜７個、１〜６個、１〜５個、１〜４個、１〜３個、１または２個、１個である。
【００４６】
本発明の一の実施態様において、前記（Ｂ）の抗体は、下記（３）の重鎖と上記（２）の軽鎖とを含む、チクングニアウイルスに対する抗体である。
（３）下記（ＨＢ）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む重鎖
（ＨＢ）下記（ＨＢ１）、（ＨＢ２）または（ＨＢ３）のアミノ酸配列
（ＨＢ１）配列番号１９のアミノ酸配列
（ＨＢ２）配列番号１９のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（ＨＢ３）配列番号１９のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
【００４７】
前記重鎖のポリペプチドおよび前記軽鎖のポリペプチドにおいて、前記「同一性」は、それぞれ、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。
【００４８】
前記重鎖のポリペプチドおよび前記軽鎖のポリペプチドにおいて、置換等に関する「１個または数個」は、それぞれ、例えば、１〜８０個、１〜６０個、１〜４０個、１〜３０個、１〜２０個、１〜１５個、１〜１０個、１〜９個、１〜８個、１〜７個、１〜６個、１〜５個、１〜４個、１〜３個、１または２個、１個である。
【００４９】
つぎに、前記（Ｃ）の抗体について説明する。
本発明の一の実施態様において、前記（Ｃ）の抗体は、下記（４）の重鎖可変領域と上記（２）の各ＣＤＲを有する軽鎖可変領域とを含む、チクングニアウイルスに対する抗体である。
【００５０】
（４）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含み、
ＣＤＲＨ１が、下記（Ｈ１−Ｃ）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、
ＣＤＲＨ２が、下記（Ｈ２−Ｃ）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、
ＣＤＲＨ３が、下記（Ｈ３−Ｃ）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである重鎖可変領域
（Ｈ１−Ｃ）下記（Ｈ１−Ｃ１）、（Ｈ１−Ｃ２）または（Ｈ１−Ｃ３）のアミノ酸配列
（Ｈ１−Ｃ１）配列番号１０のアミノ酸配列
（Ｈ１−Ｃ２）配列番号１０のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（Ｈ１−Ｃ３）配列番号１０のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（Ｈ２−Ｃ）下記（Ｈ２−Ｃ１）、（Ｈ２−Ｃ２）または（Ｈ２−Ｃ３）のアミノ酸配列
（Ｈ２−Ｃ１）配列番号１１のアミノ酸配列
（Ｈ２−Ｃ２）配列番号１１のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（Ｈ２−Ｃ３）配列番号１１のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（Ｈ３−Ｃ）下記（Ｈ３−Ｃ１）、（Ｈ３−Ｃ２）または（Ｈ３−Ｃ３）のアミノ酸配列
（Ｈ３−Ｃ１）配列番号１２のアミノ酸配列
（Ｈ３−Ｃ２）配列番号１２のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（Ｈ３−Ｃ３）配列番号１２のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
【００５１】
前記各ＣＤＲにおいて、「同一性」は、それぞれ、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。
【００５２】
前記各ＣＤＲにおいて、置換等に関する「１個または数個」は、それぞれ、例えば、１〜５個、１〜４個、１〜３個、１または２個、１個である。
【００５３】
本発明の一の実施態様において、前記（Ｃ）の抗体は、下記（４）の重鎖可変領域と上記（２）の軽鎖可変領域とを含む、チクングニアウイルスに対する抗体である。
（４）下記（Ｈ−Ｃ）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む重鎖可変領域
（Ｈ−Ｃ）下記（Ｈ−Ｃ１）、（Ｈ−Ｃ２）または（Ｈ−Ｃ３）のアミノ酸配列
（Ｈ−Ｃ１）配列番号１６のアミノ酸配列
（Ｈ−Ｃ２）配列番号１６のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（Ｈ−Ｃ３）配列番号１６のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
【００５４】
前記重鎖可変領域のポリペプチドおよび前記軽鎖可変領域のポリペプチドにおいて、前記「同一性」は、それぞれ、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。
【００５５】
前記重鎖可変領域のポリペプチドおよび前記軽鎖可変領域のポリペプチドにおいて、置換等に関する「１個または数個」は、それぞれ、例えば、１〜２０個、１〜１５個、１〜１０個、１〜９個、１〜８個、１〜７個、１〜６個、１〜５個、１〜４個、１〜３個、１または２個、１個である。
【００５６】
本発明の一の実施態様において、前記（Ｃ）の抗体は、下記（４）の重鎖と上記（２）の軽鎖とを含む、チクングニアウイルスに対する抗体である。
（４）下記（ＨＣ）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む重鎖
（ＨＣ）下記（ＨＣ１）、（ＨＣ２）または（ＨＣ３）のアミノ酸配列
（ＨＣ１）配列番号２０のアミノ酸配列
（ＨＣ２）配列番号２０のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（ＨＣ３）配列番号２０のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
【００５７】
前記重鎖のポリペプチドおよび前記軽鎖のポリペプチドにおいて、前記「同一性」は、それぞれ、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。
【００５８】
前記重鎖のポリペプチドおよび前記軽鎖のポリペプチドにおいて、置換等に関する「１個または数個」は、それぞれ、例えば、１〜８０個、１〜６０個、１〜４０個、１〜３０個、１〜２０個、１〜１５個、１〜１０個、１〜９個、１〜８個、１〜７個、１〜６個、１〜５個、１〜４個、１〜３個、１または２個、１個である。
【００５９】
前記（Ａ）の抗体またはその抗原結合断片、前記（Ｂ）の抗体またはその抗原結合断片、および、前記（Ｃ）の抗体またはその抗原結合断片は、ＥＣＳＡ型、Ａｓｉａｎ型、及びＷＡ型の少なくともいずれか１の遺伝子型を有するチクングニアウイルスに特異的に結合する。
【００６０】
つぎに、前記（Ｄ）の抗体について説明する。
本発明の一の実施態様において、前記（Ｄ）の抗体は、下記（１）の重鎖可変領域と下記（２）の軽鎖可変領域とを含む、チクングニアウイルスに対する抗体である。
【００６１】
（１）重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含み、
ＣＤＲＨ１が、下記（Ｈ１−Ｄ）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、
ＣＤＲＨ２が、下記（Ｈ２−Ｄ）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、
ＣＤＲＨ３が、下記（Ｈ３−Ｄ）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである重鎖可変領域
（Ｈ１−Ｄ）下記（Ｈ１−Ｄ１）、（Ｈ１−Ｄ２）または（Ｈ１−Ｄ３）のアミノ酸配列
（Ｈ１−Ｄ１）配列番号２１のアミノ酸配列
（Ｈ１−Ｄ２）配列番号２１のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（Ｈ１−Ｄ３）配列番号２１のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（Ｈ２−Ｄ）下記（Ｈ２−Ｄ１）、（Ｈ２−Ｄ２）または（Ｈ２−Ｄ３）のアミノ酸配列
（Ｈ２−Ｄ１）配列番号２２のアミノ酸配列
（Ｈ２−Ｄ２）配列番号２２のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（Ｈ２−Ｄ３）配列番号２２のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（Ｈ３−Ｄ）下記（Ｈ３−Ｄ１）、（Ｈ３−Ｄ２）または（Ｈ３−Ｄ３）のアミノ酸配列
（Ｈ３−Ｄ１）配列番号２３のアミノ酸配列
（Ｈ３−Ｄ２）配列番号２３のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（Ｈ３−Ｄ３）配列番号２３のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（２）軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲＬ）１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含み、
ＣＤＲＬ１が、下記（Ｌ１−Ａ）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、
ＣＤＲＬ２が、下記（Ｌ２−Ａ）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、
ＣＤＲＬ３が、下記（Ｌ３−Ａ）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである軽鎖可変領域
（Ｌ１−Ａ）下記（Ｌ１−Ａ１）、（Ｌ１−Ａ２）または（Ｌ１−Ａ３）のアミノ酸配列
（Ｌ１−Ａ１）配列番号４のアミノ酸配列
（Ｌ１−Ａ２）配列番号４のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（Ｌ１−Ａ３）配列番号４のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（Ｌ２−Ａ）下記（Ｌ２−Ａ１）、（Ｌ２−Ａ２）または（Ｌ２−Ａ３）のアミノ酸配列
（Ｌ２−Ａ１）配列番号５のアミノ酸配列
（Ｌ２−Ａ２）配列番号５のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（Ｌ２−Ａ３）配列番号５のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（Ｌ３−Ａ）下記（Ｌ３−Ａ１）、（Ｌ３−Ａ２）または（Ｌ３−Ａ３）のアミノ酸配列
（Ｌ３−Ａ１）配列番号６のアミノ酸配列
（Ｌ３−Ａ２）配列番号６のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（Ｌ３−Ａ３）配列番号６のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
【００６２】
前記各ＣＤＲにおいて、「同一性」は、それぞれ、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。
【００６３】
前記各ＣＤＲにおいて、置換等に関する「１個または数個」は、それぞれ、例えば、１〜５個、１〜４個、１〜３個、１または２個、１個である。
【００６４】
本発明の一の実施態様において、前記（Ｄ）の抗体は、下記（１）の重鎖可変領域と下記（２）の軽鎖可変領域とを含む、チクングニアウイルスに対する抗体である。
（１）下記（Ｈ−Ｄ）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む重鎖可変領域
（Ｈ−Ｄ）下記（Ｈ−Ｄ１）、（Ｈ−Ｄ２）または（Ｈ−Ｄ３）のアミノ酸配列
（Ｈ−Ｄ１）配列番号２７のアミノ酸配列
（Ｈ−Ｄ２）配列番号２７のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（Ｈ−Ｄ３）配列番号２７のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（２）下記（Ｌ−Ｄ）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む軽鎖可変領域
（Ｌ−Ｄ）下記（Ｌ−Ｄ１）、（Ｌ−Ｄ２）または（Ｌ−Ｄ３）のアミノ酸配列
（Ｌ−Ｄ１）配列番号１４のアミノ酸配列
（Ｌ−Ｄ２）配列番号１４のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（Ｌ−Ｄ３）配列番号１４のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
【００６５】
前記重鎖可変領域のポリペプチドおよび前記軽鎖可変領域のポリペプチドにおいて、前記「同一性」は、それぞれ、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。
【００６６】
前記重鎖可変領域のポリペプチドおよび前記軽鎖可変領域のポリペプチドにおいて、置換等に関する「１個または数個」は、それぞれ、例えば、１〜２０個、１〜１５個、１〜１０個、１〜９個、１〜８個、１〜７個、１〜６個、１〜５個、１〜４個、１〜３個、１または２個、１個である。
【００６７】
本発明の一の実施態様において、前記（Ｄ）の抗体は、下記（１）の重鎖と下記（２）の軽鎖とを含む、チクングニアウイルスに対する抗体である。
（１）下記（ＨＤ）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む重鎖
（ＨＤ）下記（ＨＤ１）、（ＨＤ２）または（ＨＤ３）のアミノ酸配列
（ＨＤ１）配列番号２９のアミノ酸配列
（ＨＤ２）配列番号２９のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（ＨＤ３）配列番号２９のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（２）下記（ＬＤ）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む軽鎖
（ＬＤ）下記（ＬＤ１）、（ＬＤ２）または（ＬＤ３）のアミノ酸配列
（ＬＤ１）配列番号１８のアミノ酸配列
（ＬＤ２）配列番号１８のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（ＬＤ３）配列番号１８のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
【００６８】
前記重鎖のポリペプチドおよび前記軽鎖のポリペプチドにおいて、前記「同一性」は、それぞれ、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。
【００６９】
前記重鎖のポリペプチドおよび前記軽鎖のポリペプチドにおいて、置換等に関する「１個または数個」は、それぞれ、例えば、１〜８０個、１〜６０個、１〜４０個、１〜３０個、１〜２０個、１〜１５個、１〜１０個、１〜９個、１〜８個、１〜７個、１〜６個、１〜５個、１〜４個、１〜３個、１または２個、１個である。
【００７０】
以下、前記（Ｅ）の抗体について説明する。
本発明の一の実施態様において、前記（Ｅ）の抗体は、下記（３）の重鎖可変領域と上記（２）の各ＣＤＲを有する軽鎖可変領域とを含む、チクングニアウイルスに対する抗体である。
【００７１】
（３）重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含み、
ＣＤＲＨ１が、下記（Ｈ１−Ｅ）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、
ＣＤＲＨ２が、下記（Ｈ２−Ｅ）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、
ＣＤＲＨ３が、下記（Ｈ３−Ｅ）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである重鎖可変領域
（Ｈ１−Ｅ）下記（Ｈ１−Ｅ１）、（Ｈ１−Ｅ２）または（Ｈ１−Ｅ３）のアミノ酸配列
（Ｈ１−Ｅ１）配列番号２４のアミノ酸配列
（Ｈ１−Ｅ２）配列番号２４のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（Ｈ１−Ｅ３）配列番号２４のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（Ｈ２−Ｅ）下記（Ｈ２−Ｅ１）、（Ｈ２−Ｅ２）または（Ｈ２−Ｅ３）のアミノ酸配列
（Ｈ２−Ｅ１）配列番号２５のアミノ酸配列
（Ｈ２−Ｅ２）配列番号２５のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（Ｈ２−Ｅ３）配列番号２５のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（Ｈ３−Ｅ）下記（Ｈ３−Ｅ１）、（Ｈ３−Ｅ２）または（Ｈ３−Ｅ３）のアミノ酸配列
（Ｈ３−Ｅ１）配列番号２６のアミノ酸配列
（Ｈ３−Ｅ２）配列番号２６のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（Ｈ３−Ｅ３）配列番号２６のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
【００７２】
前記各ＣＤＲにおいて、「同一性」は、それぞれ、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。
【００７３】
前記各ＣＤＲにおいて、置換等に関する「１個または数個」は、それぞれ、例えば、１〜５個、１〜４個、１〜３個、１または２個、１個である。
【００７４】
本発明の一の実施態様において、前記（Ｅ）の抗体は、下記（３）の重鎖可変領域と上記（２）の軽鎖可変領域とを含む、チクングニアウイルスに対する抗体である。
（３）下記（Ｈ−Ｅ）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む重鎖可変領域
（Ｈ−Ｅ）下記（Ｈ−Ｅ１）、（Ｈ−Ｅ２）または（Ｈ−Ｅ３）のアミノ酸配列
（Ｈ−Ｅ１）配列番号２８のアミノ酸配列
（Ｈ−Ｅ２）配列番号２８のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（Ｈ−Ｅ３）配列番号２８のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
【００７５】
前記重鎖可変領域のポリペプチドおよび前記軽鎖可変領域のポリペプチドにおいて、前記「同一性」は、それぞれ、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。
【００７６】
前記重鎖可変領域のポリペプチドおよび前記軽鎖可変領域のポリペプチドにおいて、置換等に関する「１個または数個」は、それぞれ、例えば、１〜２０個、１〜１５個、１〜１０個、１〜９個、１〜８個、１〜７個、１〜６個、１〜５個、１〜４個、１〜３個、１または２個、１個である。
【００７７】
本発明の一の実施態様において、前記（Ｅ）の抗体は、下記（３）の重鎖と上記（２）の軽鎖とを含む、チクングニアウイルスに対する抗体である。
（３）下記（ＨＥ）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む重鎖
（ＨＥ）下記（ＨＥ１）、（ＨＥ２）または（ＨＥ３）のアミノ酸配列
（ＨＥ１）配列番号３０のアミノ酸配列
（ＨＥ２）配列番号３０のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（ＨＥ３）配列番号３０のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
【００７８】
前記重鎖のポリペプチドおよび前記軽鎖のポリペプチドにおいて、前記「同一性」は、それぞれ、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。
【００７９】
前記重鎖のポリペプチドおよび前記軽鎖のポリペプチドにおいて、置換等に関する「１個または数個」は、それぞれ、例えば、１〜８０個、１〜６０個、１〜４０個、１〜３０個、１〜２０個、１〜１５個、１〜１０個、１〜９個、１〜８個、１〜７個、１〜６個、１〜５個、１〜４個、１〜３個、１または２個、１個である。
【００８０】
前記（Ｄ）の抗体またはその抗原結合断片、および、前記（Ｅ）の抗体またはその抗原結合断片は、ＥＣＳＡ型、Ａｓｉａｎ型、及びＷＡ型の少なくともいずれか１の遺伝子型を有するチクングニアウイルスに特異的に結合する。
【００８１】
本発明において、前記配列番号１〜３０のアミノ酸配列は、例えば、マウス由来のアミノ酸配列である。
【００８２】
前記抗体等の製造方法は、特に制限されず、例えば、前述のアミノ酸配列情報に基づいて、遺伝子工学的に製造することができる。具体的には、例えば、以下のようにして行うことができる。なお、本発明は、この例示には限定されない。
【００８３】
まず、前記抗体等における、前記各領域、前記重鎖、および／または軽鎖のアミノ酸配列をコードする核酸配列を含むベクターを宿主に導入し、形質転換体を得る。そして、前記形質転換体を培養し、前記チクングニアウイルス、具体的には、Ｅｎｖタンパク質に結合する抗体を含む画分を回収し、得られた回収画分から、前記抗体を単離または精製する。
【００８４】
前記ベクターとしては、例えば、前記重鎖可変領域をコードする核酸配列を含むベクター、前記軽鎖可変領域をコードする核酸配列を含むベクター、前記重鎖をコードする核酸配列を含むベクター、前記軽鎖をコードする核酸配列を含むベクター等があげられる。前記宿主は、特に制限されず、前記ベクターを導入でき、前記ベクター内の前記核酸配列を発現できるものであればよい。前記宿主としては、例えば、ＨＥＫ細胞、ＣＨＯ細胞、ＣＯＳ細胞、ＮＳＯ細胞、ＳＰ２／０細胞等の哺乳類細胞等があげられる。前記ベクターを宿主に導入する方法は、特に制限されず、公知の方法が採用できる。
【００８５】
前記形質転換体の培養方法は、特に制限されず、前記宿主の種類に応じて、適宜決定できる。前記抗体を含む画分は、例えば、培養した前記形質転換体を破砕し、液体画分として回収できる。前記抗体の単離または精製は、特に制限されず、公知の方法が採用できる。
【００８６】
本発明において、前記抗体は、例えば、モノクローナル抗体である。前記モノクローナル抗体は、例えば、動物への免疫により得られるモノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体（完全ヒト抗体ともいう）等があげられる。
【００８７】
前記キメラ抗体は、ヒト以外の動物由来抗体の可変領域と、ヒト抗体の定常領域とを連結した抗体である。前記キメラ抗体は、例えば、以下のようにして作製できる。まず、ヒト以外の動物由来のモノクローナル抗体について、チクングニアウイルス、具体的には、Ｅｎｖタンパク質と結合する可変領域（Ｖ領域）の遺伝子を調製し、前記可変領域の遺伝子と、ヒト抗体の定常領域（Ｃ領域）の遺伝子とを連結し、これを、さらに発現ベクターに連結する。そして、前記発現ベクターをトランスフェクトした細胞を培養し、培養液中に分泌される目的のキメラ抗体を回収する。これによりキメラ抗体を調製できる。前記可変領域の遺伝子の由来動物は、特に制限されず、例えば、ラット、マウス等があげられる。前記キメラ抗体の製造方法は、これには制限されず、例えば、特公平３−７３２８０号公報に記載の方法等の、公知の方法を参照して製造できる。
【００８８】
前記ヒト化抗体は、前記ＣＤＲのみをヒト以外の動物由来とし、他の領域をヒト由来とする抗体である。前記ヒト化抗体は、例えば、以下のようにして製造できる。まず、ヒト以外の動物由来のモノクローナル抗体について、前記ＣＤＲの遺伝子を調製し、ヒト抗体の遺伝子、例えば、定常領域に移植（ＣＤＲグラフティング）し、これを、さらに発現ベクターに連結する。そして、前記発現ベクターをトランスフェクトした細胞を培養することによって、培養液中に、目的のＣＤＲを移植したヒト化抗体が分泌される。分泌されるヒト化抗体を回収することによって、調製できる。前記ＣＤＲの由来動物は、特に制限されず、例えば、ラット、マウス等があげられる。ヒト化抗体の製造方法は、これには限定されず、例えば、特表平４−５０６４５８号公報および特開昭６２−２９６８９０号公報等に記載の方法等の、公知の方法を参照して製造できる。
【００８９】
前記ヒト抗体は、全ての領域がヒト由来の抗体である。前記ヒト抗体は、例えば、ヒト以外の動物への、ヒト抗体遺伝子の導入によって作製できる。前記ヒト抗体遺伝子を導入する動物は、例えば、ヒト抗体産生用のトランスジェニック動物が使用できる。前記動物の種類は、特に制限されず、マウス等があげられる。前記ヒト抗体の製造方法は、例えば、Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，Ｖｏｌ．７，ｐ．１３−２１，１９９４；Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，Ｖｏｌ．１５，ｐ．１４６−１５６，１９９７；特表平４−５０４３６５号公報；特表平７−５０９１３７号公報；国際公開第１９９４／２５５８５号；Ｎａｔｕｒｅ，Ｖｏｌ．３６８，ｐ．８５６−８５９，１９９４；および特表平６−５００２３３号公報等に記載の、公知の方法を参照して製造できる。また、前記ヒト抗体は、例えば、ファージディスプレイ法を用いて製造することもでき、例えば、Ｍａｒｋｓ，Ｊ．Ｄ．ｅｔ  ａｌ．：Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，Ｖｏｌ．２２２，ｐ．５８１−５９７，１９９１等に記載の、公知の方法を参照して製造できる。
【００９０】
前記抗体等は、例えば、抗原を動物に免疫することによっても調製できる。前記抗原は、例えば、チクングニアウイルス、具体的には、Ｅｎｖタンパク質の全長アミノ酸配列からなるタンパク質またはそのペプチド断片があげられる。前記抗原は、複数回免疫することが好ましい。この場合、各回で免疫する抗原は、例えば、異なる遺伝子型のチクングニアウイルスもしくはＥｎｖタンパク質、またはそのペプチド断片であることが好ましい。前記ペプチド断片は、例えば、抗原決定基（エピトープ）のみからなるペプチド断片でもよいし、前記抗原決定基を含むペプチド断片でもよい。
【００９１】
前記動物への免疫により得られるモノクローナル抗体は、例えば、『Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ』（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ（１９８７））、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｅｄ．Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｄａｖｉｄ  Ｌａｎｅ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（１９８８））等に記載の方法等の、公知の方法を参照して製造できる。具体的には、例えば、抗原で動物を免疫し、前記免疫動物から採取した抗体産生細胞と、自己抗体産生能を欠く骨髄腫細胞（ミエローマ細胞）とを融合させ、ハイブリドーマを作製する。続いて、前記ハイブリドーマから抗体産生細胞をスクリーニングして、クローニングによりハイブリドーマの単一クローンを作製する。そして、このハイブリドーマクローンを動物に投与し、得られた腹腔からモノクローナル抗体を精製する。または、前記ハイブリドーマを培養して、その培養液からモノクローナル抗体を精製する。このように、前記ハイブリドーマクローンを作製することで、特異性が均一なモノクローナル抗体を安定に供給できる。
【００９２】
前記骨髄腫細胞は、例えば、マウス、ラット、ヒト等の由来であることが好ましい。前記骨髄腫細胞と前記抗体産生細胞とは、例えば、それぞれの由来が同一種でも異種でもよいが、同一種であることが好ましい。
【００９３】
（本発明に係る免疫クロマト分析装置）
次に、図面を参照しながら本発明に係る免疫クロマト分析装置の一実施形態について説明する。なお本発明において、「固定」とは、抗体等が移動しないように膜等の担体に配置されていることを意味し、「保持」とは、抗体等が膜等の担体の中または表面を移動可能に配置されることを意味する。
【００９４】
本発明に係る免疫クロマト分析装置の一実施形態としては、図１に示すように、試料添加部（１）、標識物質保持部（２）、クロマトグラフ媒体部（３）、検出部（４）、吸収部（５）およびバッキングシート（６）から構成されている。
【００９５】
試料添加部（１）は、免疫クロマト分析装置において、検体試料を添加する部位である。試料添加部（１）は、検体試料が迅速に吸収されるが保持力は弱く、速やかに検体試料が移動していく性質の多孔質シートで構成することができる。多孔質シートとしては、例えば、セルロース濾紙、ガラスファイバー濾紙、ポリウレタン、ポリアセテート、酢酸セルロース、ナイロン、及び綿布等が挙げられる。
【００９６】
試料添加部（１）には、抗原抗体反応の促進または非特異的反応を抑制するため、緩衝液、カゼインナトリウム等の塩、非イオン性界面活性剤、陽イオン性界面活性剤、陰イオン性界面活性剤等の界面活性剤、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）等の高分子化合物、ポリアニオン、窒素原子含有ビニル系水溶性高分子、抗菌剤、キレート剤等を含有させることができる。これらは、１種または２種以上を含有させてもよい。
【００９７】
界面活性剤としては、ＨＬＢ値１３〜１７の界面活性剤が好ましく使用できる。例えば、Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００（商品名、ポリエチレングリコールモノ−ｐ−イソオクチルフェニルエーテル、ＨＬＢ：１３．７）、Ｔｗｅｅｎ２０（商品名、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート、ＨＬＢ：１６．７）、Ｔｗｅｅｎ８０（商品名、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレアート、ＨＬＢ：１５．０）、Ｂｒｉｊ３５（ポリオキシエチレングリコールドデシルエーテル、ＨＬＢ：１３．７）等が挙げられ、１種または２種以上を加えてもよい。試料添加部にＨＬＢ値１３〜１７の界面活性剤を含有させることによって、標識物質保持部及び検出部における抗原・抗体の非特異反応を抑えることができ、また検出部における被検出物質の検出感度を高めることができる。
【００９８】
試料添加部（１）の単位面積当たりの界面活性剤の含有量は、通常０．２５μｇ／ｃｍ２〜８μｇ／ｃｍ２であり、好ましくは０．５μｇ／ｃｍ２〜５μｇ／ｃｍ２であり、より好ましくは１μｇ／ｃｍ２〜４μｇ／ｃｍ２である。前記範囲であることで、抗原抗体反応の促進または非特異的反応を抑制できる。
【００９９】
また、窒素原子含有ビニル系水溶性高分子としては、例えば、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）等が挙げられる。試料添加部に窒素原子含有ビニル系水溶性高分子を含有させることによって、抗原と反応した不溶性担体を任意に凝集させることでシグナルの増強が可能となり、検出部における被検出物質の検出感度を高めることができる。
【０１００】
試料添加部（１）の単位面積当たりの窒素原子含有ビニル系水溶性高分子の含有量は、通常０．０５μｇ／ｃｍ２〜０．５μｇ／ｃｍ２であり、好ましくは０．１μｇ／ｃｍ２〜０．５μｇ／ｃｍ２であり、より好ましくは０．２μｇ／ｃｍ２〜０．４μｇ／ｃｍ２である。前記範囲であることで、抗原抗体反応の促進または非特異的反応を抑制できる。
【０１０１】
標識物質保持部（２）は、後述する標識物質を含有しており、当該標識物質は抗体等と結合した標識抗体等として標識物質保持部（２）に保持されている。標識物質と結合する抗体等の種類は、１種類に限られるものではないが、少なくとも前記（Ａ）の抗体またはその抗原結合断片が含まれる。標識物質保持部内を検体が移動する際に、標識物質保持部に保持された標識抗体等と検体中のチクングニアウイルスとが結合する。標識物質保持部（２）には、グラスファイバーまたはセルロースの膜が通常使用される。
【０１０２】
標識物質保持部中の前記（Ａ）の抗体またはその抗原結合断片の含有量は、通常０．０１μｇ〜１μｇであり、好ましくは０．０７５μｇ〜０．７５μｇであり、より好ましくは０．１μｇ〜０．５μｇである。また、標識物質保持部の単位面積当たりの前記（Ａ）の抗体またはその抗原結合断片の含有量は、通常０．０１μｇ／ｃｍ２〜１．８μｇ／ｃｍ２であり、好ましくは０．１３μｇ／ｃｍ２〜１.４μｇ／ｃｍ２であり、より好ましくは０．１５μｇ／ｃｍ２〜１μｇ／ｃｍ２である。
【０１０３】
また、標識物質と結合する抗体には、好ましくは、前記（Ｄ）の抗体またはその抗原結合断片が含まれる。この場合、標識物質保持部中の前記（Ｄ）の抗体またはその抗原結合断片の含有量は、通常０．０５μｇ〜１μｇであり、好ましくは０．０７５μｇ〜０．７５μｇであり、より好ましくは０．１μｇ〜０．５μｇである。また、標識物質保持部の単位面積当たりの前記（Ｄ）の抗体またはその抗原結合断片の含有量は、通常０．０１μｇ／ｃｍ２〜１．８μｇ／ｃｍ２であり、好ましくは０．１３μｇ／ｃｍ２〜１.４μｇ／ｃｍ２であり、より好ましくは０．１５μｇ／ｃｍ２〜１μｇ／ｃｍ２である。
【０１０４】
また、標識物質保持部中の前記（Ａ）の抗体またはその抗原結合断片と、前記（Ｄ）の抗体またはその抗原結合断片の含有量は、質量比で１：２〜２：１であることが好ましく、１：１であることがさらに好ましい。
【０１０５】
標識物質としては、一般的に酵素等も使用されるが、被検出物質の存在を目視で判定するのに適していることから、標識物質としては、不溶性担体を用いることが好ましい。標識物質としての不溶性担体には、金、銀もしくは白金等の金属粒子、酸化鉄等の金属酸化物粒子、硫黄等の非金属粒子及び合成高分子よりなるラテックス粒子、またはその他の不溶性担体を用いることができる。上述のように不溶性担体は、被検出物質の存在を視覚的に判定するのに適した標識物質であり、目視による判定を容易にするためには有色であることが好ましい。金属粒子及び金属酸化物粒子は、それ自体が粒径に応じた特定の自然色を呈するものであり、その色彩を標識として利用することができる。
【０１０６】
標識物質としての不溶性担体は、特に金粒子が、検出が簡便であり、かつ凝集しづらく非特異的な発色が起こりにくい点で好ましい。金粒子の平均粒径は、例えば１０ｎｍ〜２５０ｎｍ、好ましくは３５ｎｍ〜１２０ｎｍであり、より好ましくは４０ｎｍ〜８０ｎｍである。平均粒径は、例えば、透過型電子顕微鏡（ＴＥＭ：日本電子（株）製、ＪＥＭ−２０１０）により、撮影した投影写真を用いて無作為に１００個の粒子の投影面積円相当径を計測し、その平均値から算出することができる。標識物質保持部における金粒子の含有量は、標識物質保持部の単位面積あたり、通常０．００６μｇ／ｃｍ２〜０．４２μｇ／ｃｍ２であり、好ましくは０．０１μｇ／ｃｍ２〜０．３μｇ／ｃｍ２であり、より好ましくは０．０１μｇ／ｃｍ２〜０．２μｇ／ｃｍ２である。金粒子の含有量が前記範囲であることにより、標識された粒子が分散したまま展開し、抗体等の認識部位が阻害されず高感度化できる。
【０１０７】
クロマトグラフ媒体部（３）は、クロマトグラフの展開部位である。クロマトグラフ媒体部（３）は、毛管現象を示す微細多孔性物質からなる不活性の膜である。検出試薬、固定化試薬または被検出物質などと反応性を有しないという観点や、本発明の効果が向上するという観点から、クロマトグラフ媒体部（３）には、例えば、ニトロセルロース製のメンブレンや、酢酸セルロース製のメンブレンが好ましく使用できる。特にニトロセルロース製のメンブレンが好ましい。なお、セルロース類メンブレン、ナイロンメンブレン、及び、ポリエチレンやポリプロピレン等の多孔質プラスチック布類も使用できる。
【０１０８】
ニトロセルロース製のメンブレンとしては、ニトロセルロースが主体で含まれていればよく、純品またはニトロセルロース混合品などニトロセルロースを主材とするメンブレンを使用することができる。
【０１０９】
ニトロセルロース製のメンブレンは、さらに、毛細管現象を促進させる物質を含有させることもできる。当該物質としては、膜面の表面張力を低下させ、親水性をもたらす物質が好ましい。例えば、糖類、アミノ酸の誘導体、脂肪酸エステル、各種合成界面活性剤またはアルコール等の両親媒性の作用を有する物質であって、被検出物質の移動に影響がなく、標識物質の発色に影響を及ぼさない物質が好ましい。
【０１１０】
ニトロセルロース製のメンブレンは、多孔性であって、毛細管現象を示す。この毛細管現象の指標は、吸水速度（吸水時間：ｃａｐｉｌｌａｒｙ  ｆｌｏｗ  ｔｉｍｅ）を測ることで確認できる。吸水速度は、検出感度と検査時間に影響する。
【０１１１】
前記のようなニトロセルロース製のメンブレンや酢酸セルロース製のメンブレンに代表されるクロマトグラフ媒体部（３）の形態及び大きさは特に制限されるものではなく、実際の操作の点及び反応結果の観察の点において適切であればよい。
【０１１２】
さらに操作をより簡便にするためには、クロマトグラフ媒体部（３）の裏面に、プラスチックなどよりなる支持体を設けることが好ましい。この支持体の性状は特に制限されるものではないが、目視判定によって測定結果の観察を行う場合には、支持体は、標識物質によりもたらされる色彩と類似しない色彩を有するものであることが好ましく、通常、無色又は白色であることが好ましい。
【０１１３】
また、クロマトグラフ媒体部（３）上には、非特異的な吸着により分析の精度が低下することを防止するため、必要に応じて、クロマトグラフ媒体部（３）に、公知の方法でブロッキング処理を行うことができる。一般にブロッキング処理は、ウシ血清アルブミン、スキムミルク、カゼイン及びゼラチン等のタンパク質が好適に用いられる。かかるブロッキング処理後に、必要に応じて、例えば、Ｔｗｅｅｎ２０、ＴｒｉｔｏｎＸ−１００、及びＳＤＳ等の界面活性剤を１つ又は２つ以上組み合わせて洗浄してもよい。
【０１１４】
検出部（４）は、前記クロマトグラフ媒体部（３）上の任意の位置に形成されており、少なくとも前記（Ｂ）の抗体またはその抗原結合断片及び前記（Ｃ）の抗体またはその抗原結合断片が含まれる。検出部（４）への抗体の固定化は、常法に従って行うことができる。
【０１１５】
検出部（４）では、クロマトグラフ媒体部上を移動相として通過した検体中のチクングニアウイルスが、検出部（４）に固定されている抗体と前記標識抗体等とによってサンドイッチ状に挟まれるように特異的に反応結合する。
【０１１６】
検出部（４）に含有される、前記（Ｂ）の抗体またはその抗原結合断片の含有量は、通常０．０５μｇ〜１μｇであり、好ましくは０．２μｇ〜０．７μｇであり、より好ましくは０．２μｇ〜０．６μｇである。また、検出部（４）の単位面積当たりの、前記（Ｂ）の抗体またはその抗原結合断片の含有量は、通常０．０５μｇ／ｃｍ２〜２μｇ／ｃｍ２であり、好ましくは０．１μｇ／ｃｍ２〜１μｇ／ｃｍ２であり、より好ましくは０．２μｇ／ｃｍ２〜０．７μｇ／ｃｍ２である。
【０１１７】
検出部（４）に含有される、前記（Ｃ）の抗体またはその抗原結合断片の含有量は、通常０．１μｇ〜１μｇであり、好ましくは０．２μｇ〜０．７μｇであり、より好ましくは０．３μｇ〜０．６μｇである。また、検出部（４）の単位面積当たりの、前記（Ｃ）の抗体またはその抗原結合断片の含有量は、通常０．１５μｇ／ｃｍ２〜２μｇ／ｃｍ２であり、好ましくは０．２μｇ／ｃｍ２〜１μｇ／ｃｍ２であり、より好ましくは０．２μｇ／ｃｍ２〜０．７μｇ／ｃｍ２である。
【０１１８】
検出部（４）に含有される、前記（Ｂ）の抗体またはその抗原結合断片、及び前記（Ｃ）の抗体またはその抗原結合断片の合計の含有量は、通常０．２μｇ〜２μｇであり、好ましくは０．４μｇ〜１．４μｇであり、より好ましくは０．６μｇ〜１．２μｇである。また、検出部（４）の単位面積当たりの、前記（Ｂ）の抗体またはその抗原結合断片、及び前記（Ｃ）の抗体またはその抗原結合断片の合計の含有量は、通常０．３μｇ／ｃｍ２〜４μｇ／ｃｍ２であり、好ましくは０．４μｇ／ｃｍ２〜２μｇ／ｃｍ２であり、より好ましくは０．４μｇ／ｃｍ２〜１．４μｇ／ｃｍ２である。
【０１１９】
検出部（４）に含有される、前記（Ｂ）の抗体またはその抗原結合断片と、前記（Ｃ）の抗体またはその抗原結合断片の含有量比は、質量比で１：２〜２：１であることが好ましく、２：１であることがさらに好ましい。
【０１２０】
また、検出部（４）には、好ましくは、前記（Ｅ）の抗体またはその抗原結合断片が含まれる。前記（Ｅ）の抗体またはその抗原結合断片を含有する場合、標識物質保持部中の前記（Ｅ）の抗体またはその抗原結合断片の含有量は、通常０．１μｇ〜１μｇであり、好ましくは０．２μｇ〜０．７μｇであり、より好ましくは０．３μｇ〜０．６μｇである。また、検出部（４）の単位面積当たりの、前記（Ｅ）の抗体またはその抗原結合断片の含有量は、通常０．１５μｇ／ｃｍ２〜４μｇ／ｃｍ２であり、好ましくは０．２μｇ／ｃｍ２〜３μｇ／ｃｍ２であり、より好ましくは０．２μｇ／ｃｍ２〜２．５μｇ／ｃｍ２である。
【０１２１】
また、標識物質保持部中の前記（Ｂ）の抗体またはその抗原結合断片及び前記（Ｃ）の抗体またはその抗原結合断片の合計と、前記（Ｅ）の抗体またはその抗原結合断片との含有量比は、質量比で１：２〜２：１であることが好ましい。
【０１２２】
吸収部（５）は、クロマトグラフ媒体部（３）の末端に、検出部（４）を通過した検体や展開液等の液体を吸収させるために設置される。本発明において、吸収部（５）は、例えばグラスファイバー、パルプ、セルロースファイバー等、またはそれら不織布にアクリル酸重合体等の高分子、エチレンオキサイド基等を持つ親水性薬剤を含有させたものが用いられ、特に好ましくはグラスファイバーである。
【０１２３】
バッキングシート（６）は、任意の基材である。片面に粘着剤を塗布したり、粘着テープを貼り付けたりすることにより、片面が粘着性を有し、当該粘着面上に試料添加部（１）、標識物質保持部（２）、クロマトグラフ媒体部（３）、検出部（４）、および吸収部（５）の一部または全部が密着して設けられている。バッキングシート（６）は、粘着剤によって試料液に対して不透過性、非透湿性となるようなものであれば、基材としては、特に限定されない。
【０１２４】
本発明に係る免疫クロマト分析装置は、製品化する前に、通常乾燥処理に施される。乾燥温度は例えば２０℃〜５０℃、乾燥時間は０．５時間〜１時間である。
【０１２５】
＜免疫クロマト分析キット＞
本発明に係る免疫クロマト分析キットは、前記の免疫クロマト分析装置と、前記検体を希釈して展開するための検体希釈液とを含む。
【０１２６】
本発明に係る免疫クロマト分析キットにおいて検体希釈液は、展開液としても使用することができるものであるが、通常溶媒として水を用い、これに緩衝液、カゼインナトリウム等の塩、非イオン性界面活性剤、陽イオン性界面活性剤、陰イオン性界面活性剤等の界面活性剤、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）等の高分子化合物、ポリアニオン、窒素原子含有ビニル系水溶性高分子、抗菌剤、キレート剤等を含有させることができる。これらは、１種または２種以上を含有させてもよい。
【０１２７】
界面活性剤としては、ＨＬＢ値１３〜１７の界面活性剤が好ましく使用できる。例えば、Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００（商品名、ポリエチレングリコールモノ−ｐ−イソオクチルフェニルエーテル、ＨＬＢ：１３．７）、Ｔｗｅｅｎ２０（商品名、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート、ＨＬＢ：１６．７）、Ｔｗｅｅｎ８０（商品名、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレアート、ＨＬＢ：１５．０）、Ｂｒｉｊ３５（ポリオキシエチレングリコールドデシルエーテル、ＨＬＢ：１３．７）等が挙げられ、１種または２種以上を加えてもよい。試料添加部にＨＬＢ値１３〜１７の界面活性剤を含有させることによって、標識物質保持部及び検出部における抗原・抗体の非特異反応を抑えることができ、また検出部における被検出物質の検出感度を高めることができる。
【０１２８】
検体希釈液の非イオン性界面活性剤の含有量は、通常０．５％〜５％であり、好ましくは０．５％〜３％であり、より好ましくは０．５％〜２％である。
【０１２９】
また、窒素原子含有ビニル系水溶性高分子としては、例えば、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）等が挙げられる。検体希釈液に窒素原子含有ビニル系水溶性高分子を含有させることによって、抗原と反応した不溶性担体を任意に凝集させることでシグナルの増強が可能となり、検出部における被検出物質の検出感度を高めることができる。
【０１３０】
検体希釈液の窒素原子含有ビニル系水溶性高分子の含有量は、通常０．１％〜０．８％であり、好ましくは０．２％〜０．６％であり、より好ましくは０．２％〜０．５％である。
【０１３１】
検体希釈液は、検体試料と予め混合して得られる検体含有液を、試料添加部に添加して展開させることもできるし、先に検体試料を試料添加部に添加した後、検体希釈液を試料添加部に添加して展開させてもよい。
【０１３２】
＜免疫クロマト分析方法＞
本発明に係る免疫クロマト分析方法は、以下の工程（１）〜（４）を含み、前記免疫クロマト分析キットを用いて検体に含まれるチクングニアウイルスを検出する方法である。
（１）検体希釈液により検体を希釈した検体含有液を試料添加部に添加する工程
（２）標識物質保持部に保持されている、前記（Ａ）の抗体またはその抗原結合断片により前記チクングニアウイルスを認識させる工程
（３）前記検体および前記（Ａ）の抗体またはその抗原結合断片を移動相としてクロマトグラフ媒体部に展開させる工程
（４）展開された移動相中のチクングニアウイルスを、検出部に含まれる前記（Ｂ）の抗体またはその抗原結合断片および前記（Ｃ）の抗体またはその抗原結合断片により検出する工程
各工程について以下に説明する。
【０１３３】
（１）検体希釈液により検体を希釈した検体含有液を試料添加部に添加する工程
工程（１）では、第１に、検体を、測定精度を低下させることなく、装置内をスムーズに移動する程度の濃度に、検体希釈液で調整または希釈して検体含有液とするのが好ましい。検体希釈液は上述したものを使用できる。第２に、検体含有液を試料として、試料添加部（１）上に、所定量（通常、０．１ｍｌ〜２ｍｌ）添加する。前記試料が試料添加部（１）に添加されると、試料添加部（１）中で移動を開始する。本発明において使用する検体は、上述したものを使用できる。
【０１３４】
（２）標識物質保持部に保持されている、前記（Ａ）の抗体またはその抗原結合断片により前記チクングニアウイルスを認識させる工程
工程（２）は、工程（１）において試料添加部に添加された前記試料を、標識物質保持部（２）へと移動させ、標識物質保持部に保持されている、標識物質が結合した前記（Ａ）の抗体またはその抗原結合断片により、検体中のチクングニアウイルスを認識させる工程である。標識物質は上述したものを使用できる。
【０１３５】
（３）前記検体および前記（Ａ）の抗体またはその抗原結合断片を移動相としてクロマトグラフ媒体部に展開させる工程
工程（３）は、工程（２）において検体中のチクングニアウイルスが、標識物質保持部において標識物質が結合した前記（Ａ）の抗体またはその抗原結合断片に認識された後、検体および前記（Ａ）の抗体またはその抗原結合断片を、クロマトグラフ媒体部上を移動相として通過させる工程である。
【０１３６】
（４）展開された移動相中のチクングニアウイルスを、検出部に含まれる前記（Ｂ）の抗体またはその抗原結合断片および前記（Ｃ）の抗体またはその抗原結合断片により検出する工程
工程（４）は、クロマトグラフ媒体部上を移動相として通過した検体中のチクングニアウイルスが、抗原・抗体の特異的結合反応により、検出部に固定されている前記（Ｂ）の抗体またはその抗原結合断片および前記（Ｃ）の抗体またはその抗原結合断片と、前記工程（２）において標識物質が結合した前記（Ａ）の抗体またはその抗原結合断片とによってサンドイッチ状に挟まれるように特異的に反応結合して、検出部が着色する工程である。
【０１３７】
被検出物質であるチクングニアウイルスが存在しない場合には、試料の水分に溶解した標識試薬は、クロマトグラフ媒体部上の検出部を通過しても特異的結合反応が起こらないので、検出部が着色しない。
【０１３８】
最後に、検体含有液の水分は、吸収部（５）へと移動する。
【実施例】
【０１３９】
以下、本発明を実施例によりさらに説明するが、本発明は下記例に制限されるものではない。
【０１４０】
（１）抗体の作製
（１−１）１３Ｈ１１、３Ｄ１１、および１５Ｂ２モノクローナル抗体
抗原として、ＥＣＳＡ型ＣＨＩＫＶが感染した培養細胞およびＡｓｉａｎ型ＣＨＩＫＶの６Ｋ−Ｅ１タンパク質を発現するセンダイウイルスを用いた。具体的には、前記培養細胞とＣＦＡ（Ｃｏｍｐｌｅｔｅ  Ｆｒｅｕｎｄ’ｓ  ａｄｊｕｖａｎ）との混合物にて、４−６週齢のマウス（Ｂａｌｂ／ｃ）に対して初回免疫を実施した。初回免疫後２週間において、前記培養細胞とＩＦＡ（Ｉｎｃｏｍｐｌｅｔｅ  Ｆｒｅｕｎｄ’ｓ  ａｄｊｕｖａｎｔ）との混合物にて、前記マウスに２度目の免疫を実施した。２回目の免疫後２週間において、前記ウイルスとＩＦＡとの混合物にて、前記マウスに３度目の免疫を実施した。３度目の免疫後３日目に、前記マウスからＢ細胞を調整し、前記Ｂ細胞から常法によりハイブリドーマを調製した。得られたハイブリドーマについて、その培養液を用いて、抗ＣＨＩＫＶ抗体産生ハイブリドーマのスクリーニングを行った。
【０１４１】
この結果、３種類のハイブリドーマ（１３Ｈ１１、３Ｄ１１、および１５Ｂ２株）を単離した。これらのハイブリドーマから生成される抗ＣＨＩＫＶ抗体として、３種類のモノクローナル抗体（１３Ｈ１１、３Ｄ１１、および１５Ｂ２）を得た。１３Ｈ１１、３Ｄ１１、および１５Ｂ２のアイソタイプは、それぞれ、ＩｇＧ１κ、ＩｇＧ２ａκ、およびＩｇＧ２ｂκであった。
１３Ｈ１１は前記（Ａ）の抗体、３Ｄ１１は前記（Ｂ）の抗体、１５Ｂ２は前記（Ｃ）の抗体にそれぞれ対応する。
【０１４２】
抗ＣＨＩＫＶ抗体である１３Ｈ１１、３Ｄ１１、および１５Ｂ２について、アミノ酸配列を決定した。これらの結果を以下に示す。なお、１３Ｈ１１、３Ｄ１１、および１５Ｂ２の軽鎖は、いずれも同じアミノ酸配列である。また、各アミノ酸配列において、下線で示すアミノ酸配列が、Ｎ端からＣ端に向かって、それぞれ、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３のアミノ酸配列に対応する。また、各アミノ酸配列において、括弧で囲ったアミノ酸配列が、可変領域のアミノ酸配列に対応する。
【０１４３】
１３Ｈ１１重鎖（配列番号１７）
ＱＶＱＬＱＱＳＧＰＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＩＳＣＫＡＳＧＹＡＦＳＴＳＷＭＮＷＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＲＩＹＰＧＤＧＤＴＮＹＮＧＫＦＫＧＫＡＴＬＴＡＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＬＴＳＶＤＳＡＶＹＦＣＡＲＳＮＤＧＹＹＶＧＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ］ＡＫＴＴＰＰＳＶＹＰＬＡＰＧＳＡＡＱＴＮＳＭＶＴＬＧＣＬＶＫＧＹＦＰＥＰＶＴＶＴＷＮＳＧＳＬＳＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＤＬＹＴＬＳＳＳＶＴＶＰＳＳＴＷＰＳＥＴＶＴＣＮＶＡＨＰＡＳＳＴＫＶＤＫＫＩＶＰＲＤＣＧＣＫＰＣＩＣＴＶＰＥＶＳＳＶＦＩＦＰＰＫＰＫＤＶＬＴＩＴＬＴＰＫＶＴＣＶＶＶＤＩＳＫＤＤＰＥＶＱＦＳＷＦＶＤＤＶＥＶＨＴＡＱＴＱＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＳＶＳＥＬＰＩＭＨＱＤＷＬＮＧＫＥＦＫＣＲＶＮＳＡＡＦＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＲＰＫＡＰＱＶＹＴＩＰＰＰＫＥＱＭＡＫＤＫＶＳＬＴＣＭＩＴＤＦＦＰＥＤＩＴＶＥＷＱＷＮＧＱＰＡＥＮＹＫＮＴＱＰＩＭＤＴＤＧＳＹＦＶＹＳＫＬＮＶＱＫＳＮＷＥＡＧＮＴＦＴＣＳＶＬＨＥＧＬＨＮＨＨＴＥＫＳＬＳＨＳＰＧＫ
【０１４４】
３Ｄ１１重鎖（配列番号１９）
ＱＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＡＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＷＭＱＷＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＡＩＹＰＧＤＧＤＴＲＹＴＱＫＦＫＧＫＡＴＬＴＡＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＬＡＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＳＹＤＰＦＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ］ＡＫＴＴＡＰＳＶＹＰＬＡＰＶＣＧＤＴＴＧＳＳＶＴＬＧＣＬＶＫＧＹＦＰＥＰＶＴＬＴＷＮＳＧＳＬＳＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＤＬＹＴＬＳＳＳＶＴＶＴＳＳＴＷＰＳＱＳＩＴＣＮＶＡＨＰＡＳＳＴＫＶＤＫＫＩＥＰＲＧＰＴＩＫＰＣＰＰＣＫＣＰＡＰＮＬＬＧＧＰＳＶＦＩＦＰＰＫＩＫＤＶＬＭＩＳＬＳＰＩＶＴＣＶＶＶＤＶＳＥＤＤＰＤＶＱＩＳＷＦＶＮＮＶＥＶＨＴＡＱＴＱＴＨＲＥＤＹＮＳＴＬＲＶＶＳＡＬＰＩＱＨＱＤＷＭＳＧＫＥＦＫＣＫＶＮＮＫＤＬＰＡＰＩＥＲＴＩＳＫＰＫＧＳＶＲＡＰＱＶＹＶＬＰＰＰＥＥＥＭＴＫＫＱＶＴＬＴＣＭＶＴＤＦＭＰＥＤＩＹＶＥＷＴＮＮＧＫＴＥＬＮＹＫＮＴＥＰＶＬＤＳＤＧＳＹＦＭＹＳＫＬＲＶＥＫＫＮＷＶＥＲＮＳＹＳＣＳＶＶＨＥＧＬＨＮＨＨＴＴＫＳＦＳＲＴＰＧＫ
【０１４５】
１５Ｂ２重鎖（配列番号２０）
ＱＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＹＭＹＷＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＥＩＮＰＳＮＧＧＴＮＦＮＥＫＦＫＮＫＡＴＬＴＶＤＫＳＳＮＴＡＹＭＱＬＮＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＴＲＧＹＹＧＮＰＦＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡ］ＡＫＴＴＰＰＳＶＹＰＬＡＰＧＣＧＤＴＴＧＳＳＶＴＬＧＣＬＶＫＧＹＦＰＥＳＶＴＶＴＷＮＳＧＳＬＳＳＳＶＨＴＦＰＡＬＬＱＳＧＬＹＴＭＳＳＳＶＴＶＰＳＳＴＷＰＳＱＴＶＴＣＳＶＡＨＰＡＳＳＴＴＶＤＫＫＬＥＰＳＧＰＩＳＴＩＮＰＣＰＰＣＫＥＣＨＫＣＰＡＰＮＬＥＧＧＰＳＶＦＩＦＰＰＮＩＫＤＶＬＭＩＳＬＴＰＫＶＴＣＶＶＶＤＶＳＥＤＤＰＤＶＱＩＳＷＦＶＮＮＶＥＶＨＴＡＱＴＱＴＨＲＥＤＹＮＳＴＩＲＶＶＳＴＬＰＩＱＨＱＤＷＭＳＧＫＥＦＫＣＫＶＮＮＫＤＬＰＳＰＩＥＲＴＩＳＫＩＫＧＬＶＲＡＰＱＶＹＩＬＰＰＰＡＥＱＬＳＲＫＤＶＳＬＴＣＬＶＶＧＦＮＰＧＤＩＳＶＥＷＴＳＮＧＨＴＥＥＮＹＫＤＴＡＰＶＬＤＳＤＧＳＹＦＩＹＳＫＬＮＭＫＴＳＫＷＥＫＴＤＳＦＳＣＮＶＲＨＥＧＬＫＮＹＹＬＫＫＴＩＳＲＳＰＧＫ
【０１４６】
１３Ｈ１１、３Ｄ１１、および１５Ｂ２軽鎖（配列番号１８）
ＮＩＶＭＴＱＳＰＫＳＭＳＭＳＶＧＥＲＶＴＬＴＣＫＡＳＥＮＶＶＴＹＶＳＷＹＱＱＫＰＥＱＳＰＫＬＬＩＹＧＡＳＮＲＹＴＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＡＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＬＡＤＹＨＣＧＱＧＹＳＹＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩ］ＫＲＡＤＡＡＰＴＶＳＩＦＰＰＳＳＥＱＬＴＳＧＧＡＳＶＶＣＦＬＮＮＦＹＰＫＤＩＮＶＫＷＫＩＤＧＳＥＲＱＮＧＶＬＮＳＷＴＤＱＤＳＫＤＳＴＹＳＭＳＳＴＬＴＬＴＫＤＥＹＥＲＨＮＳＹＴＣＥＡＴＨＫＴＳＴＳＰＩＶＫＳＦＮＲＮＥＣ
【０１４７】
（１−２）ＣＫ−（ｄ）およびＣＫ−（ｅ）モノクローナル抗体
Ｂ７細胞をＣＨＩＫＶに感染させ、広範囲の細胞変性効果が観察されるまでインキュベートした。４℃で一晩４％ホルムアルデヒドを含むリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で感染細胞を不活性化し、採取し、ＰＢＳで３回洗浄し、注射前に−８０℃で保存した。５週齢の雌ＢＡＬＢ／ｃマウス（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ、Ｍａｈｉｄｏｌ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ、Ｂａｎｇｋｏｋ、Ｔｈａｉｌａｎｄ）に対し、完全フロインドアジュバント（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓａｉｎｔ  Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）中の不活性化ＣＨＩＫＶ感染Ｂ７細胞（２．５×１０６感染細胞／マウス）を腹腔内免疫した。さらにアジュバントを含まないＣＨＩＫＶ感染細胞で３週間ごとに３回追加免疫した。最後の追加免疫の３日後、脾臓を取り出し、脾臓細胞を得て、ポリエチレングリコール♯１５００（Ｒｏｃｈｅ  ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、Ｍａｎｎｈｅｉｍ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いてマウス骨髄腫ＰＡＩ細胞と融合させ、ハイブリドーマを調製した。ハイブリドーマを、１５％ＦＢＳ、ヒポキサンチン−アミノプテリン−チミジン（ＧＩＢＣＯ、Ｇｒａｎｄ  Ｉｓｌａｎｄ、ＮＹ）および３％ＢＭ−Ｃｏｎｄｉｍｅｄ  Ｈ１サプリメント（Ｒｏｃｈｅ診断薬）を補充したＲＰＭＩ１６４０中で培養した。ハイブリドーマによって分泌された抗体を、ＣＨＩＫＶ感染Ｖｅｒｏ細胞を用いた間接免疫蛍光アッセイ（ＩＦＡ）でスクリーニングした。
【０１４８】
この結果、２種類のハイブリドーマ（ＣＫ−（ｄ）およびＣＫ−（ｅ）株）を単離した。これらのハイブリドーマから生成される抗ＣＨＩＫＶ抗体として、２種類のモノクローナル抗体（ＣＫ−（ｄ）およびＣＫ−（ｅ））を得た。ＣＫ−（ｄ）およびＣＫ−（ｅ）のアイソタイプは、それぞれ、ＩｇＧ１、およびＩｇＧ２ａであった。
ＣＫ−（ｄ）は前記（Ｄ）の抗体、ＣＫ−（ｅ）は前記（Ｅ）の抗体にそれぞれ対応する。
【０１４９】
抗ＣＨＩＫＶ抗体であるＣＫ−（ｄ）、およびＣＫ−（ｅ）について、アミノ酸配列を決定した。これらの結果を以下に示す。なお、ＣＫ−（ｄ）、およびＣＫ−（ｅ）の軽鎖は、いずれも、前記１３Ｈ１１、３Ｄ１１、および１５Ｂ２と同じアミノ酸配列である。また、各アミノ酸配列において、下線で示すアミノ酸配列が、Ｎ端からＣ端に向かって、それぞれ、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３のアミノ酸配列に対応する。また、各アミノ酸配列において、括弧で囲ったアミノ酸配列が、可変領域のアミノ酸配列に対応する。
【０１５０】
ＣＫ−（ｄ）重鎖（配列番号２９）
ＥＳＧＧＧＬＶＫＬＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＴＹＹＭＳＷＶＲＱＴＰＥＫＲＬＥＬＶＡＡＩＮＳＮＧＧＳＴＹＹＰＤＴＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＬＹＬＱＭＳＳＬＫＳＥＤＴＡＬＹＹＣＡＲＨＥＬＶＧＧＷＦＶＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡＡＫＴＴＰＰＳＶＹＰＬＡＰＧＳＡＡＱＴＮＳＭＶＴＬＧＣＬＶＫＧＹＦＰＥＰＶＴＶＴＷＮＳＧＳＬＳＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＤＬＹＴＬＳＳＳＶＴＶＰＳＳＴＷＰＳＥＴＶＴＣＮＶＡＨＰＡＳＳＴＫＶＤＫＫＩＶＰＲＤＣＧＣＫＰＣＩＣＴＶＰＥＶＳＳＶＦＩＦＰＰＫＰＫＤＶＬＴＩＴＬＴＰＫＶＴＣＶＶＶＤＩＳＫＤＤＰＥＶＱＦＳＷＦＶＤＤＶＥＶＨＴＡＱＴＱＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＳＶＳＥＬＰＩＭＨＱＤＷＬＮＧＫＥＦＫＣＲＶＮＳＡＡＦＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＲＰＫＡＰＱＶＹＴＩＰＰＰＫＥＱＭＡＫＤＫＶＳＬＴＣＭＩＴＤＦＦＰＥＤＩＴＶＥＷＱＷＮＧＱＰＡＥＮＹＫＮＴＱＰＩＭＤＴＤＧＳＹＦＶＹＳＫＬＮＶＱＫＳＮＷＥＡＧＮＴＦＴＣＳＶＬＨＥＧＬＨＮＨＨＴＥＫＳＬＳＨＳＰＧＫ
【０１５１】
ＣＫ−（ｅ）重鎖（配列番号３０）
ＱＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＶＲＰＧＴＳＶＫＭＳＣＫＡＡＧＹＴＦＴＮＹＷＩＧＷＩＫＱＲＰＧＨＧＬＥＷＩＧＤＶＹＰＧＧＧＳＴＹＹＮＥＫＦＫＡＫＡＴＬＴＡＤＴＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＲＬＴＳＥＤＳＡＩＹＹＣＳＲＶＴＳＴＴＧＷＹＦＤＶＷＧＡＧＴＴＶＴＶＳＳＡＫＴＴＡＰＳＶＹＰＬＡＰＶＣＧＤＴＴＧＳＳＶＴＬＧＣＬＶＫＧＹＦＰＥＰＶＴＬＴＷＮＳＧＳＬＳＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＤＬＹＴＬＳＳＳＶＴＶＴＳＳＴＷＰＳＱＳＩＴＣＮＶＡＨＰＡＳＳＴＫＶＤＫＫＩＥＰＲＧＰＴＩＫＰＣＰＰＣＫＣＰＡＰＮＬＬＧＧＰＳＶＦＩＦＰＰＫＩＫＤＶＬＭＩＳＬＳＰＩＶＴＣＶＶＶＤＶＳＥＤＤＰＤＶＱＩＳＷＦＶＮＮＶＥＶＨＴＡＱＴＱＴＨＲＥＤＹＮＳＴＬＲＶＶＳＡＬＰＩＱＨＱＤＷＭＳＧＫＥＦＫＣＫＶＮＮＫＤＬＰＡＰＩＥＲＴＩＳＫＰＫＧＳＶＲＡＰＱＶＹＶＬＰＰＰＥＥＥＭＴＫＫＱＶＴＬＴＣＭＶＴＤＦＭＰＥＤＩＹＶＥＷＴＮＮＧＫＴＥＬＮＹＫＮＴＥＰＶＬＤＳＤＧＳＹＦＭＹＳＫＬＲＶＥＫＫＮＷＶＥＲＮＳＹＳＣＳＶＶＨＥＧＬＨＮＨＨＴＴＫＳＦＳＲＴＰＧＫ
【０１５２】
（２）免疫クロマト分析装置の作製
〈実施例１〉
検体希釈液、及び、試料添加部（１）と、標識物質保持部（２）と、検出部（４）を有するクロマトグラフ媒体（３）と、吸収部（５）とを含む免疫クロマト分析装置からなる免疫クロマト分析キットを作製した。
【０１５３】
１．試料添加部の作製
試料添加部としてグラスファイバーからなる不織布（ミリポア社製：３００ｍｍ×３０ｍｍ）を用いた。
【０１５４】
２．標識物質保持部の作製
リン酸緩衝液（ｐＨ７．４）で前記１３Ｈ１１モノクローナル抗体を、その濃度が０．０５ｍｇ／ｍｌとなるように希釈し、抗体溶液を得た。そして金コロイド懸濁液（田中貴金属工業社製：ＬＣ４０ｎｍ）０．５ｍｌに、前記抗体溶液を０．１ｍｌ加え、室温で１０分間静置した。
次いで、１質量％の牛血清アルブミン（ＢＳＡ）を含むリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）を０．１ｍｌ加え、更に室温で１０分間静置した。その後、十分撹拌した後、８０００×ｇで１５分間遠心分離を行い、上清を除去した後、１質量％のＢＳＡを含むリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）を０．１ｍｌ加えた。以上の手順で標識物質溶液を作製した。
前記作製した標識物質溶液３００μＬに、３００μＬの１０質量％トレハロース水溶液と１．８ｍＬの蒸留水を加えたものを１６ｍｍ×３００ｍｍのグラスファイバーパッド（ミリポア社製）に均一になるように添加した後、真空乾燥機にて乾燥させ、標識物質保持部を作製した。
標識物質保持部における１３Ｈ１１モノクローナル抗体の含有量は０．１μｇ（０．１８μｇ／ｃｍ２）であった。
【０１５５】
３．クロマトグラフ媒体部および検出部の作製
メンブレンとしてニトロセルロースからなるシート（ミリポア社製、商品名：ＨＦ１２０、３００ｍｍ×２５ｍｍ）を用いた。
次に、５質量％のイソプロピルアルコールを含むリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）で、前記３Ｄ１１モノクローナル抗体が０．３ｍｇ／ｍｌ、前記１５Ｂ２モノクローナル抗体が０．６ｍｇ／ｍｌの濃度になるようにした抗体溶液１５０μＬを、乾燥されたメンブレン上の検出部に１ｍｍの幅でイムノクロマト用ディスペンサー「ＸＹＺ３０５０」（ＢＩＯＤＯＴ社製）を用いて１μＬ／ｍｍの量（１シートあたり２５μＬ）でライン状に塗布した。
また、金ナノ粒子標識試薬の展開の有無や展開速度を確認するために検出部の下流に、金ナノ粒子標識物質と広く親和性を有するヤギ由来抗血清をリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）で希釈した液をコントロール部位（コントロールライン）に塗布した。その後、５０℃で３０分間乾燥させ、室温で一晩乾燥させ、クロマトグラフ媒体部および検出部を作製した。
検出部における３Ｄ１１モノクローナル抗体の含有量は０．１４μｇ（０．２５μｇ／ｃｍ２）、１５Ｂ２モノクローナル抗体の含有量は０．１４μｇ（０．２５μｇ／ｃｍ２）であった。
【０１５６】
４．免疫クロマト分析装置の作製
次に、バッキングシートからなる基材（倉本産業社製）に、試料添加部、標識物質保持部、検出部を有するクロマトグラフ媒体部、展開した試料や標識物質を吸収するための吸収部としてグラスファイバー製の不織布を順次貼り合わせた。そして、裁断機で幅が３．５ｍｍとなるように裁断し、免疫クロマト分析装置とした。なお、標識物質保持部の試料展開方向の長さは１６ｍｍとした。
【０１５７】
５．検体希釈液の調製
１質量％の非イオン性界面活性剤（ナカライテスク社製ＮＰ−４０と日油社製ノニデットＭＮ−８１１の１：１混合物）を含む５０ｍＭのＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．５）を調製し、検体を希釈処理するための検体希釈液とした。
【０１５８】
〈実施例２〉
実施例１において、標識物質保持部に１３Ｈ１１モノクローナル抗体の他、ＣＫ−（ｄ）モノクローナル抗体を使用したこと、検出部に３Ｄ１１モノクローナル抗体及び１５Ｂ２モノクローナル抗体の他、ＣＫ−（ｅ）モノクローナル抗体を使用したこと、および標識物質保持部および検出部における各抗体の含有量を下記のとおりとした点を除いては、実施例１と同様にして、実施例２の免疫クロマト分析キットを作製した。
標識物質保持部における１３Ｈ１１モノクローナル抗体の含有量は０．０５μｇ（０．０９μｇ／ｃｍ２）、ＣＫ−（ｄ）モノクローナル抗体の含有量は０．０５μｇ（０．０９μｇ／ｃｍ２）であり、検出部における３Ｄ１１モノクローナル抗体の含有量は０．０６μｇ（０．６９μｇ／ｃｍ２）、１５Ｂ２モノクローナル抗体の含有量は０．１μｇ（１．１μｇ／ｃｍ２）、ＣＫ−（ｅ）モノクローナル抗体の含有量は０．２μｇ（２．２９μｇ／ｃｍ２）であった。
【０１５９】
〈実施例３〉
実施例２において、標識物質保持部における１３Ｈ１１モノクローナル抗体とＣＫ−（ｄ）モノクローナル抗体の含有量が、質量比で１：２とすべく、１３Ｈ１１モノクローナル抗体が０．０３μｇ（０．０５μｇ／ｃｍ２）、ＣＫ−（ｄ）モノクローナル抗体が０．０６μｇ（０．１μｇ／ｃｍ２）としたことを除いては、実施例２と同様にして、実施例３の免疫クロマト分析キットを作製した。
【０１６０】
〈比較例１〉
実施例１において、１３Ｈ１１モノクローナル抗体の代わりにＣＫ−（ｄ）モノクローナル抗体のみを使用し、３Ｄ１１モノクローナル抗体と１５Ｂ２モノクローナル抗体の代わりにＣＫ−（ｅ）モノクローナル抗体のみを使用し、標識物質保持部におけるＣＫ−（ｄ）モノクローナル抗体の含有量を０．１μｇ（０．１８μｇ／ｃｍ２）、検出部におけるＣＫ−（ｅ）モノクローナル抗体の含有量を０．２９μｇ（３．３μｇ／ｃｍ２）としたことを除いては、実施例１と同様にして、比較例１の免疫クロマト分析キットを作製した。
【０１６１】
前記実施例１〜３、及び比較例１において、標識物質保持部および検出部が含有する抗体の組み合わせを下記表１にまとめて示す。
【０１６２】
【表１】
2019138777.tif 000003
【０１６３】
（試験例１）
本試験では、実施例１〜３、比較例１の免疫クロマト分析キットにおいて、遺伝子型が異なるチクングニアウイルス間で反応性の違いが生じるかを調べた。具体的には前記作製した実施例１〜３、比較例１の免疫クロマト分析キットを用い、下記検体を用いて、測定を行った。
検体のチクングニアウイルスとしては、ＥＣＳＡ型（自家培養）、Ａｓｉａｎ型（自家培養）およびＷＡ型（自家培養）を用いた。
ＥＣＳＡ型およびＡｓｉａｎ型については、当該各ウイルスを１×１０４ｐｆｕ／ｍＬ、１×１０５ｐｆｕ／ｍＬ、または１×１０６ｐｆｕ／ｍＬに検体希釈液で希釈して、検体含有液を調製し、これを検体試料とした。また、陰性対照検体として、ウイルスを含有しない検体希釈液を用いた。
また、ＷＡ型（自家培養）については、当該各ウイルスを６ｎｇ／ｍＬ、３０ｎｇ／ｍＬ、１５０ｎｇ／ｍＬとなるように検体希釈液で希釈して、検体含有液を調製し、これを検体試料とした。
また、陰性対照検体として、ウイルスを含有しない検体希釈液を用いた。
【０１６４】
前記調製した各検体含有液または陰性検体９０μＬを免疫クロマト分析装置の試料添加部に添加し展開させ、１５分後にイムノクロマトリーダーを用いて、検出部の発色強度を測定し、以下のとおり評価した。
−：０ｍＡｂｓ以上１０ｍＡｂｓ未満（陰性と判定）
±：１０ｍＡｂｓ以上１５ｍＡｂｓ未満（陽性と判定）
＋：１５ｍＡｂｓ以上１５０ｍＡｂｓ未満（陽性と判定）
＋＋：１５０ｍＡｂｓ以上３００ｍＡｂｓ未満（陽性と判定）
＋＋＋：３００ｍＡｂｓ以上（陽性と判定）
【０１６５】
結果を表２〜５に示す。また、ＥＣＳＡ型およびＡｓｉａｎ型については、ウイルス濃度を１×１０４ｐｆｕ／ｍＬとした場合の遺伝子型ごとに結果をまとめたグラフを図２に示し、ＷＡ型については、６ｎｇ／ｍＬとした場合の結果をまとめたグラフを図３に示す。
【０１６６】
【表２】
2019138777.tif 000004
【０１６７】
【表３】
2019138777.tif 000005
【０１６８】
【表４】
2019138777.tif 000006
【０１６９】
【表５】
2019138777.tif 000007
【０１７０】
試験例１の結果から、実施例１〜３の免疫クロマト分析キットにおいて、いずれもチクングニアウイルスのＥＣＳＡ型、Ａｓｉａｎ型及びＷＡ型の検出が可能であることがわかった。また実施例２及び３は、比較例１の発色強度と比較した場合、実施例１よりもＥＣＳＡ型に対する発色強度が高く、より遺伝子型による差が解消していることがわかった。一方、比較例１の免疫クロマト分析キットにおいて、Ａｓｉａｎ型については、ウイルス濃度が１×１０４の場合陰性と判定された。
なお、陰性検体の結果からもわかるとおり、いずれの免疫クロマト分析キットにおいても非特異反応（擬陽性反応）は見られなかった。
【０１７１】
（試験例２）
本試験では、実施例１〜３、比較例１の免疫クロマト分析キットにおいて、チクングニアウイルスの変異の有無による反応性の違いについて調べた。具体的には前記作製した実施例１〜３、比較例１の免疫クロマト分析キットを用い、下記検体を用いて、測定を行った。
検体のチクングニアウイルスとしては、自家培養の、ＥＣＳＡ野生型（ＷＴ）および変異型（ＭＴ）、Ａｓｉａｎ野生型（ＷＴ）および変異型（ＭＴ）を用い、当該各ウイルスを６ｎｇ／ｍＬ、３０ｎｇ／ｍＬ、１５０ｎｇ／ｍＬとなるように検体希釈液で希釈して、検体含有液を調製し、これを検体試料とした。
前記ＣＳＡ変異型は、ＥＣＳＡ野生型のＥ１タンパク質のアミノ酸配列の３５０番目のグルタミン酸がアスパラギン酸に置換したものであり、Ａｓｉａｎ変異型は、Ａｓｉａｎ野生型のＥ１タンパク質のアミノ酸配列の３５０番目のアスパラギン酸がグルタミン酸に置換したものである。
【０１７２】
前記調製した各検体含有液９０μＬを免疫クロマト分析装置の試料添加部に添加し展開させ、１５分後にイムノクロマトリーダーを用いて、検出部の発色強度を測定し、試験例１と同様に評価した。結果を表６〜９に示す。また、ウイルス濃度を６ｎｇ／ｍＬとした場合の遺伝子型ごとに結果をまとめたグラフを図４及び図５に示す。
【０１７３】
【表６】
2019138777.tif 000008
【０１７４】
【表７】
2019138777.tif 000009
【０１７５】
【表８】
2019138777.tif 000010
【０１７６】
【表９】
2019138777.tif 000011
【０１７７】
表６、７の結果から分かるように、ＥＣＳＡ型に関し、ウイルス濃度が６ｎｇ／ｍＬのとき、実施例１〜３の免疫クロマト分析キットでは、野生型と変異型のいずれにおいても陽性反応が得られた。一方、比較例１の免疫クロマト分析キットでは、変異型において陰性と判定された。
【０１７８】
また表８、９の結果から分かるように、Ａｓｉａｎ型に関し、ウイルス濃度が６ｎｇ／ｍＬのとき、実施例１〜３の免疫クロマト分析キットでは、野生型と変異型のいずれにおいても陽性反応が得られた。一方、比較例１の免疫クロマト分析キットでは、野生型において、陰性と判定された。
【０１７９】
試験例２の結果から、実施例１〜３の免疫クロマト分析キットは、比較例１の免疫クロマト分析キットと比べ、野生型−変異型間の反応性の相違が小さいことがわかった。
【０１８０】
（試験例３）
本試験では、実施例１〜３、比較例１の免疫クロマト分析キットにおいて、チクングニアウイルス以外のウイルスとの交叉反応性を調べた。具体的には、前記作製した実施例１〜３、比較例１の免疫クロマト分析キットを用い、検体として、チクングニアウイルスと同じトガウイルス科アルファウイルス属であるシンドビスウイルス（ＳＩＮＶ、自家培養）を用い、当該ウイルスを、１×１０５ｐｆｕ／ｍＬ、１×１０６ｐｆｕ／ｍＬ、または１×１０７ｐｆｕ／ｍＬに検体希釈液で希釈して、検体含有液を調製し、これを検体試料とした。
前記調製した各検体含有液９０μＬを実施例２、３及び比較例１の免疫クロマト分析装置の試料添加部に添加し展開させ、１５分後にイムノクロマトリーダーを用いて、検出部の発色強度を測定した。結果を表１０に示す（ＮＤは測定不可を示す）。
【０１８１】
【表１０】
2019138777.tif 000012
【０１８２】
以上の結果からわかるように、実施例２、３の免疫クロマト分析キットにおいては、シンドビスウイルスとの交叉反応は見られなかった。一方、比較例１の免疫クロマト分析キットにおいて、１×１０７ｐｆｕ／ｍＬの場合、シンドビスウイルスとの交叉反応が見られた。
【符号の説明】
【０１８３】
１  試料添加部
２  標識物質保持部
３  クロマトグラフ媒体部
４  検出部
５  吸収部
６  バッキングシート
【図１】
2019138777.tif 000013
【図２】
2019138777.tif 000014
【図３】
2019138777.tif 000015
【図４】
2019138777.tif 000016
【図５】
2019138777.tif 000017
【配列表】
2019138777000001.app