(57)【要約】      （修正有）【課題】多発性骨髄腫の治療剤の提供。【解決手段】シノビオリンの活性阻害剤を有効成分として含む、多発性骨髄腫の治療剤。具体的なシノビオリンの活性阻害剤として、特定の置換基を有するナフトキノン誘導体、特定の置換基を有する１，３，５−トリアジン誘導体等が例示される。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
シノビオリンの活性阻害剤を有効成分として含む，多発性骨髄腫の治療剤。
【請求項２】
請求項１に記載の多発性骨髄腫の治療剤であって，
前記シノビオリンの活性阻害剤が，下記式（Ｉ）で示される化合物，その薬学的に許容される塩，又はその薬学的に許容される溶媒和物である多発性骨髄腫の治療剤。
【化１１】
2019156798.tif 000013
（式（Ｉ）中，
Ｒ１〜Ｒ４は，同一でも異なってもよく，水素原子，水酸基，Ｃ１−３アルキル基，Ｃ１−３アルコキシ基，及びハロゲン原子のいずれかを表わす。後述する実施例により実証されたとおり，Ｒ１〜Ｒ４の少なくともひとつは水酸基である。
Ｒ５及びＲ６は，同一でも異なってもよく，水素原子，Ｃ１−３アルキル基，及びハロゲン原子のいずれかを表わす。
Ｘ１及びＸ２は，同一でも異なってもよく，酸素原子又は硫黄原子を表す。
Ａ１−Ａ２は，Ｃ−Ｃ（単結合），又はＣ＝Ｃ（二重結合）を表す。）
【請求項３】
請求項１に記載の多発性骨髄腫の治療剤であって，
前記シノビオリンの活性阻害剤が，下記式（ＩＩ）で示される化合物，その薬学的に許容される塩，又はその薬学的に許容される溶媒和物である多発性骨髄腫の治療剤。
【化１２】
2019156798.tif 000014
（式（ＩＩ）中，
Ｒ１〜Ｒ４は，同一でも異なってもよく，水素原子，水酸基，Ｃ１−３アルキル基，Ｃ１−３アルコキシ基，及びハロゲン原子のいずれかを表わす。後述する実施例により実証されたとおり，Ｒ１〜Ｒ４の少なくともひとつは水酸基である。
Ｒ５及びＲ６は，同一でも異なってもよく，水素原子，Ｃ１−３アルキル基，及びハロゲン原子のいずれかを表わす。
Ｘ１及びＸ２は，同一でも異なってもよく，酸素原子又は硫黄原子を表す。）
【請求項４】
請求項１に記載の多発性骨髄腫の治療剤であって，
前記シノビオリンの活性阻害剤が，下記式（ＩＩＩ）で示される化合物，その薬学的に許容される塩，又はその薬学的に許容される溶媒和物である多発性骨髄腫の治療剤。
【化１３】
2019156798.tif 000015
（式（ＩＩＩ）中，
Ｒ１〜Ｒ４は，同一でも異なってもよく，水素原子，水酸基，Ｃ１−３アルキル基，Ｃ１−３アルコキシ基，及びハロゲン原子のいずれかを表わす。後述する実施例により実証されたとおり，Ｒ１〜Ｒ４の少なくともひとつは水酸基である。
Ｒ５及びＲ６は，同一でも異なってもよく，水素原子，Ｃ１−３アルキル基，及びハロゲン原子のいずれかを表わす。）
【請求項５】
請求項１に記載の多発性骨髄腫の治療剤であって，
前記シノビオリンの活性阻害剤が，下記式１で示される化合物，その薬学的に許容される塩，又はその薬学的に許容される溶媒和物である多発性骨髄腫の治療剤。
【化１４】
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式１中，
Ｒ１１〜Ｒ１３は，同一でも異なってもよく，水素原子，Ｃ１−３アルキル基，Ｃ１−３アルコキシ基，及びハロゲン原子のいずれかを表わし，
Ｒ２１〜Ｒ２３は，同一でも異なってもよく，  
Ｒ１１が水素原子又はハロゲン原子である場合，Ｒ２１は式２〜６で表わされる基のいずれかを表わし，
Ｒ１１がＣ１−３アルキル基又はＣ１−３アルコキシ基である場合，Ｒ２１は水素原子，Ｃ１−３アルキル基，Ｃ１−３アルコキシ基及び−Ｒ３１１ＮＨＲ３１２のいずれかを表わし，前記Ｒ１１と連結して環を形成してもよく，
−Ｒ３１１  は，Ｃ１−３アルキレン基を表し，Ｒ３１２は，Ｃ１−３アルキル基を表し，
Ｒ１２が水素原子又はハロゲン原子である場合，Ｒ２２は式２〜６で表わされる基のいずれかを表わし，
Ｒ１２がＣ１−３アルキル基又はＣ１−３アルコキシ基である場合，Ｒ２２は水素原子，Ｃ１−３アルキル基，Ｃ１−３アルコキシ基及び−Ｒ３２１ＮＨＲ３２２のいずれかを表わし，前記Ｒ１２と連結して環を形成してもよく，
−Ｒ３２１は，Ｃ１−３アルキレン基を表し，Ｒ３２２は，Ｃ１−３アルキル基を表し，
Ｒ１３が水素原子又はハロゲン原子である場合，Ｒ２３は式２〜６で表わされる基のいずれかを表わし，
Ｒ１３がＣ１−３アルキル基又はＣ１−３アルコキシ基である場合，Ｒ２３は水素原子，Ｃ１−３アルキル基，Ｃ１−３アルコキシ基及び−Ｒ３３１ＮＨＲ３３２のいずれかを表わし，前記Ｒ１３と連結して環を形成してもよく，
−Ｒ３３１は，Ｃ１−３アルキレン基を表し，Ｒ３３２は，Ｃ１−３アルキル基を表す。
【化１５】
2019156798.tif 000017
【請求項６】
請求項１に記載の多発性骨髄腫の治療剤であって，
前記多発性骨髄腫の治療剤が，ボルテゾミブ耐性多発性骨髄腫の治療剤である，
多発性骨髄腫の治療剤。
【請求項７】
請求項１に記載の多発性骨髄腫の治療剤であって，
前記多発性骨髄腫の治療剤が，ボルテゾミブを対象に継続的に投与した結果ボルテゾミブ耐性が生じた多発性骨髄腫患者に対する多発性骨髄腫の治療剤である，
多発性骨髄腫の治療剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は，シノビオリンの活性阻害剤を有効成分として含む，多発性骨髄腫の治療剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
再表２０１４／１０４２２４号公報には，シノビオリンの活性阻害剤が記載されている。
【０００３】
特許第４５９９５０１号公報には，カルボリン誘導体を有効成分として含む多発性骨髄腫の治療剤が記載されている。
【０００４】
特許第５６６５８６２号公報には，ボルテゾミブ耐性多発性骨髄腫の治療剤が記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】再表２０１４／１０４２２４号公報
【特許文献２】特許第４５９９５０１号公報
【特許文献３】特許第５６６５８６２号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は，多発性骨髄腫の治療剤や，ボルテゾミブ耐性多発性骨髄腫の治療剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は，基本的には，シノビオリンの活性阻害剤が多発性骨髄腫の治療に有効であるという実施例に基づくものである。
すなわち，本発明は，多発性骨髄腫の治療剤に関し，有効成分としてシノビオリンの活性阻害剤を含む。
【０００８】
シノビオリンの活性阻害剤の例は，下記式（Ｉ）で示される化合物，その薬学的に許容される塩，又はその薬学的に許容される溶媒和物である。
【化１】
2019156798.tif 000003
（式（Ｉ）中，
Ｒ１〜Ｒ４は，同一でも異なってもよく，水素原子，水酸基，Ｃ１−３アルキル基，Ｃ１−３アルコキシ基，及びハロゲン原子のいずれかを表わす。後述する実施例により実証されたとおり，Ｒ１〜Ｒ４の少なくともひとつは水酸基である。
Ｒ５及びＲ６は，同一でも異なってもよく，水素原子，Ｃ１−３アルキル基，及びハロゲン原子のいずれかを表わす。
Ｘ１及びＸ２は，同一でも異なってもよく，酸素原子又は硫黄原子を表す。
Ａ１−Ａ２は，Ｃ−Ｃ（単結合），又はＣ＝Ｃ（二重結合）を表す。）
【０００９】
シノビオリンの活性阻害剤の例は，下記式（ＩＩ）で示される化合物，その薬学的に許容される塩，又はその薬学的に許容される溶媒和物である。
【化２】
2019156798.tif 000004
（式（ＩＩ）中，
Ｒ１〜Ｒ４は，同一でも異なってもよく，水素原子，水酸基，Ｃ１−３アルキル基，Ｃ１−３アルコキシ基，及びハロゲン原子のいずれかを表わす。後述する実施例により実証されたとおり，Ｒ１〜Ｒ４の少なくともひとつは水酸基である。
Ｒ５及びＲ６は，同一でも異なってもよく，水素原子，Ｃ１−３アルキル基，及びハロゲン原子のいずれかを表わす。
Ｘ１及びＸ２は，同一でも異なってもよく，酸素原子又は硫黄原子を表す。）
【００１０】
シノビオリンの活性阻害剤の例は，下記式（ＩＩＩ）で示される化合物，その薬学的に許容される塩，又はその薬学的に許容される溶媒和物である。
【化３】
2019156798.tif 000005
（式（ＩＩＩ）中，
Ｒ１〜Ｒ４は，同一でも異なってもよく，水素原子，水酸基，Ｃ１−３アルキル基，Ｃ１−３アルコキシ基，及びハロゲン原子のいずれかを表わす。後述する実施例により実証されたとおり，Ｒ１〜Ｒ４の少なくともひとつは水酸基である。
Ｒ５及びＲ６は，同一でも異なってもよく，水素原子，Ｃ１−３アルキル基，及びハロゲン原子のいずれかを表わす。）
【００１１】
シノビオリンの活性阻害剤の上記とは別の例は，式１で示される１，３，５−トリアジン誘導体，その医薬的に許容しうる塩，又はその医薬的に許容しうる溶媒和物に関する。１，３，５−トリアジン誘導体の例は，以下の化学式を有する物質（ＬＳ−１０２）である。ＬＳ−１０２は，(S)−N２−(benzo[d]oxazol−6−yl)−N４−(1−cyclohexylethyl)−N６−ethyl−N６−(2−(ethylamino)ethyl)−1,3,5−triazine−2,4,6−triamine（(S)−N２−(ベンゾ[d]オキサゾル−6−イル)−N４−(1−シクロヘキシルエチル)−N６−エチル−N６−(2−(エチルアミノ)エチル)−1,3,5−トリアジン−2,4,6−トリアミン）ともよばれる化合物である。
【化４】
2019156798.tif 000006
【００１２】
この発明の多発性骨髄腫の治療剤は，ボルテゾミブ耐性多発性骨髄腫の治療剤として好ましく用いることができる。例えば，この治療剤は，ボルテゾミブを対象に継続的に投与した結果ボルテゾミブ耐性が生じた多発性骨髄腫患者に対する多発性骨髄腫の治療剤として好ましく用いられる。
【発明の効果】
【００１３】
本発明は，多発性骨髄腫の治療剤や，ボルテゾミブ耐性多発性骨髄腫の治療剤を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】図１は，ボルテゾミブを様々な濃度で添加し，各細胞を培養した際の細胞生存率を，グラフにプロットした図面に替るグラフである。
【図２】図２は，プルンバギンを様々な濃度で添加し，各細胞を培養した際の細胞生存率を，グラフにプロットした図面に替るグラフである。
【図３】図３は，ジュグロンを様々な濃度で添加し，各細胞を培養した際の細胞生存率を，グラフにプロットした図面に替るグラフである。
【図４】図４は，ＬＳ−１０２を投与した際の細胞生存率示す図面に替るグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
以下，本発明を実施するための形態について説明する。本発明は，以下に説明する形態に限定されるものではなく，以下の形態から当業者が自明な範囲で適宜修正したものも含む。
【００１６】
本発明は，多発性骨髄腫の治療剤に関し，有効成分としてシノビオリンの活性阻害剤を含む。多発性骨髄腫は，形質細胞の悪性腫瘍である。多発性骨髄腫患者の典型的な臨床症状は，貧血，骨折，高カルシウム血症，腎機能障害および繰り返す感染症であり，これらの症状は骨髄における悪性腫瘍細胞の増殖が原因である。
【００１７】
シノビオリンの活性阻害剤の例は，下記式（Ｉ）で示される化合物，その薬学的に許容される塩，又はその薬学的に許容される溶媒和物である。この化合物は，例えば，再表２０１４／１０３８６２号公報に記載される通り公知である。そして，この化合物が，シノビオリンの活性阻害剤であることはこの公報に記載されている。シノビオリンの活性阻害剤とは，シノビオリンの活性を阻害する成分を意味する。シノビオリンの活性の例は，ユビキチン化である。シノビオリンの活性阻害剤は，下記式（Ｉ）で示される化合物，その薬学的に許容される塩，又はその薬学的に許容される溶媒和物であり，これらを本発明の化合物ともよぶ。
【００１８】
換言すると，本発明は，下記式（Ｉ）で示される化合物，その薬学的に許容される塩，又はその薬学的に許容される溶媒和物を有効成分とする多発性骨髄腫の治療剤を提供する。
【００１９】
【化５】
2019156798.tif 000007
（式（Ｉ）中，
Ｒ１〜Ｒ４は，同一でも異なってもよく，水素原子，水酸基，Ｃ１−３アルキル基，Ｃ１−３アルコキシ基，及びハロゲン原子のいずれかを表わす。後述する実施例により実証されたとおり，Ｒ１〜Ｒ４の少なくともひとつは水酸基である。
Ｒ５及びＲ６は，同一でも異なってもよく，水素原子，Ｃ１−３アルキル基，及びハロゲン原子のいずれかを表わす。
Ｘ１及びＸ２は，同一でも異なってもよく，酸素原子又は硫黄原子を表す。
Ａ１−Ａ２は，Ｃ−Ｃ（単結合），又はＣ＝Ｃ（二重結合）を表す。）
【００２０】
上記の化合物は，抽出，濃縮，留去，結晶化，ろ過，再結晶，各種クロマトグラフィーなどの通常の化学操作を適用し，公知の方法を用いて単離し精製することができる。なお，有効成分は単一の化合物であってもよいし，式（Ｉ）に含まれる化合物が複数種類含まれていてもよい。また，化合物に異性体が存在する場合，化合物として，いずれかの異性体のみが含まれていてもよいし，混合体であってもよい。
【００２１】
その薬学的に許容される塩とは，一般式（Ｉ）で示されるナフタレン誘導体の薬学的に許容される塩を意味する。つまり，薬学的に許容される塩とは，医薬として使用することができる塩を意味する。その薬学的に許容しうる溶媒和物とは，一般式（Ｉ）で示されるナフタレン誘導体の薬学的に許容しうる溶媒和物を意味する。これは，他の一般式の場合も同じである。これらは有効成分の効能を大きく変化させないか，生体内で化合物と変わらない存在となるため，化合物に薬効がある場合，その塩や溶媒和物も同様の薬効があるといえる。
【００２２】
薬学的に許容しうる塩の例は，無機酸塩，有機酸塩，無機塩基塩，有機塩基塩，酸性または塩基性アミノ酸塩である。無機酸塩の例は，塩酸塩，臭化水素酸塩，硫酸塩，硝酸塩，リン酸塩である。有機酸塩の例は，酢酸塩，コハク酸塩，フマル酸塩，マレイン酸塩，酒石酸塩，クエン酸塩，乳酸塩，ステアリン酸塩，安息香酸塩，メタンスルホン酸塩，及びｐ−トルエンスルホン酸塩である。無機塩基塩の例は，ナトリウム塩，カリウム塩などのアルカリ金属塩，カルシウム塩，マグネシウム塩などのアルカリ土類金属塩，アルミニウム塩，及びアンモニウム塩である。有機塩基塩の例は，ジエチルアミン塩，ジエタノールアミン塩，メグルミン塩，及びＮ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン塩である。酸性アミノ酸塩の例は，アスパラギン酸塩，及びグルタミン酸塩である。塩基性アミノ酸塩の例は，アルギニン塩，リジン塩，及びオルニチン塩である。
【００２３】
溶媒和物の例は，水和物である。
【００２４】
Ｃ１−３アルキル基とは，炭素数が１個〜３個のアルキル基を意味する。Ｃ１−３アルキル基の例は，メチル基，エチル基，及びプロピル基（ｎ−プロピル基，イソプロピル基）である。
【００２５】
Ｃ１−３アルコキシ基とは，炭素数が１個〜３個のアルコキシ基を意味する。Ｃ１−３アルコキシ基の例は，メトキシ基，エトキシ基，及びプロポキシ基（ｎ−プロポキシ基，イソプロポキシ基）である。
【００２６】
ハロゲン原子の例は，フッ素原子，塩素原子，臭素原子，及びヨウ素原子である。
【００２７】
式（Ｉ）の化合物は，以下の置換基を有するものが好ましい。
Ｒ１及びＲ４の一方の基が，水酸基で，残りの基が水素原子，水酸基，メチル基，メトキシ基，又は塩素原子であるものが好ましい。
Ｒ２及びＲ３は，水素原子であることが好ましい。
Ｒ５及びＲ６は，水素原子又はメチル基であることが好ましく，いずれか一方がメチル基で残りが水素原子でもよい。
【００２８】
シノビオリンの活性阻害剤の例は，下記式（ＩＩ）で示される化合物，その薬学的に許容される塩，又はその薬学的に許容される溶媒和物である。
【化６】
2019156798.tif 000008
（式（ＩＩ）中，
Ｒ１〜Ｒ４は，同一でも異なってもよく，水素原子，水酸基，Ｃ１−３アルキル基，Ｃ１−３アルコキシ基，及びハロゲン原子のいずれかを表わす。後述する実施例により実証されたとおり，Ｒ１〜Ｒ４の少なくともひとつは水酸基である。
Ｒ５及びＲ６は，同一でも異なってもよく，水素原子，Ｃ１−３アルキル基，及びハロゲン原子のいずれかを表わす。
Ｘ１及びＸ２は，同一でも異なってもよく，酸素原子又は硫黄原子を表す。）
【００２９】
式（ＩＩ）の化合物は，以下の置換基を有するものが好ましい。
Ｒ１及びＲ４の一方の基が，水酸基で，残りの基が水素原子，水酸基，メチル基，メトキシ基，又は塩素原子であるものが好ましい。
Ｒ２及びＲ３は，水素原子であることが好ましい。
Ｒ５及びＲ６は，水素原子又はメチル基であることが好ましく，いずれか一方がメチル基で残りが水素原子でもよい。
【００３０】
シノビオリンの活性阻害剤の例は，下記式（ＩＩＩ）で示される化合物，その薬学的に許容される塩，又はその薬学的に許容される溶媒和物である。
【化７】
2019156798.tif 000009
（式（ＩＩＩ）中，
Ｒ１〜Ｒ４は，同一でも異なってもよく，水素原子，水酸基，Ｃ１−３アルキル基，Ｃ１−３アルコキシ基，及びハロゲン原子のいずれかを表わす。後述する実施例により実証されたとおり，Ｒ１〜Ｒ４の少なくともひとつは水酸基である。
Ｒ５及びＲ６は，同一でも異なってもよく，水素原子，Ｃ１−３アルキル基，及びハロゲン原子のいずれかを表わす。）
【００３１】
式（ＩＩＩ）の化合物は，以下の置換基を有するものが好ましい。
Ｒ１及びＲ４の一方の基が，水酸基で，残りの基が水素原子，水酸基，メチル基，メトキシ基，又は塩素原子であるものが好ましい。
Ｒ２及びＲ３は，水素原子であることが好ましい。
Ｒ５及びＲ６は，水素原子又はメチル基であることが好ましく，いずれか一方がメチル基で残りが水素原子でもよい。
【００３２】
具体的な化合物は，５−ヒドロキシナフトキノン（別名：ジュグロン），５−ヒドロキシ−２−メチル−［１,４］−ナフトキノン(別名：プルンバギン），５，８−ジヒドロキシ−４ａ，８ａ−ジヒドロ−［１，４］ナフトキノン，５−ヒドロキシ−４ａ，８ａ-ジヒドロ−［１，４］ナフトキノン，５−ヒドロキシ−２，３，４ａ，８ａ−テトラヒドロ−［１，４］ナフトキノン，５−ヒドロキシ−７−メトキシ−４ａ，８ａ−ジヒドロ−［１，４］ナフトキノン，５−ヒドロキシ−８−メトキシ−４ａ，８ａ−ジヒドロ−［１，４］ナフトキノン，及び５−クロロ−８−ヒドロキシ−４ａ，８ａ−ジヒドロ−［１，４］ナフトキノンのいずれか又は２つ以上である。
【００３３】
シノビオリンの活性阻害剤の上記とは別の例は，１，３，５−トリアジン誘導体，その医薬的に許容しうる塩，又はその医薬的に許容しうる溶媒和物に関する。例えば，国際公開ＷＯ２００６−１３７５１４号パンフレットには，１，３，５−トリアジン誘導体がシノビオリンタンパク質の自己ユビキチン化を制御する機能を有することが記載されている。特開２０１４−１４１４７２号公報にも同様な点が記載されている。
【００３４】
シノビオリンタンパク質の阻害活性を有する１，３，５−トリアジン誘導体，その医薬的に許容しうる塩，又はその医薬的に許容しうる溶媒和物における１，３，５−トリアジン誘導体は，以下の式１で示される化合物である。
【００３５】
【化８】
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【００３６】
式１中，Ｒ１１〜Ｒ１３は，同一でも異なってもよく，水素原子，Ｃ１−３アルキル基，Ｃ１−３アルコキシ基，及びハロゲン原子のいずれかを表わす。また，Ｒ２１〜Ｒ２３は，同一でも異なってもよい。  
【００３７】
Ｃ１−３アルキル基の例は，メチル基，エチル基及びプロピル基である。Ｃ１−３アルコキシ基の例は，メトキシ基，エトキシ基，及びプロポキシ基である。ハロゲン原子の例は，フッ素原子，塩素原子，臭素原子，及びヨウ素原子である。
【００３８】
そして，Ｒ１１が水素原子又はハロゲン原子である場合，Ｒ２１は式２〜６で表わされる基のいずれかを表わす。
一方，Ｒ１１がＣ１−３アルキル基又はＣ１−３アルコキシ基である場合，Ｒ２１は水素原子，Ｃ１−３アルキル基，Ｃ１−３アルコキシ基及び−Ｒ３１１ＮＨＲ３１２のいずれかを表わし，前記Ｒ１１と連結して環を形成してもよい。そして，  −Ｒ３１１は，Ｃ１−３アルキレン基を表し，Ｒ３１２は，Ｃ１−３アルキル基を表す。
Ｒ１２が水素原子又はハロゲン原子である場合，Ｒ２２は式２〜６で表わされる基のいずれかを表わす。そして，Ｒ１２がＣ１−３アルキル基又はＣ１−３アルコキシ基である場合，Ｒ２２は水素原子，Ｃ１−３アルキル基，Ｃ１−３アルコキシ基及び−Ｒ３２１ＮＨＲ３２２のいずれかを表わし，前記Ｒ１２と連結して環を形成してもよい。−Ｒ３２１は，Ｃ１−３アルキレン基を表し，Ｒ３２２は，Ｃ１−３アルキル基を表す。
Ｒ１３が水素原子又はハロゲン原子である場合，Ｒ２３は式２〜６で表わされる基のいずれかを表わす。Ｒ１３がＣ１−３アルキル基又はＣ１−３アルコキシ基である場合，Ｒ２３は水素原子，Ｃ１−３アルキル基，Ｃ１−３アルコキシ基及び−Ｒ３３１ＮＨＲ３３２のいずれかを表わし，前記Ｒ１３と連結して環を形成してもよい。−Ｒ３３１は，Ｃ１−３アルキレン基を表し，Ｒ３３２は，Ｃ１−３アルキル基を表す。
【００３９】
【化９】
2019156798.tif 000011
【００４０】
好ましい態様は，Ｒ１１及びＲ１２は，水素原子又はハロゲン原子を表わし，
Ｒ１３は，Ｃ１−３アルキル基又はＣ１−３アルコキシ基を表わし，
Ｒ２１及びＲ２２は，同一でも異なってもよく，式２〜６で表わされる基のいずれかを表わし，
Ｒ２３は−Ｒ３３１ＮＨＲ３３２を表わし，
−Ｒ３３１は，Ｃ１−３アルキレン基を表し，Ｒ３３２は，Ｃ１−３アルキル基を表す。
【００４１】
好ましい態様は，Ｒ１１及びＲ１２は，水素原子を表わし，
Ｒ１３は，Ｃ１−３アルキル基を表わし，
Ｒ２１及びＲ２２は，同一でも異なってもよく，式２〜６で表わされる基のいずれかを表わし，
Ｒ２３は−Ｒ３３１ＮＨＲ３３２を表わし，
−Ｒ３３１は，Ｃ１−３アルキレン基を表し，Ｒ３３２は，Ｃ１−３アルキル基を表す。
【００４２】
好ましい態様は，Ｒ１１及びＲ１２は，水素原子を表わし，
Ｒ１３は，Ｃ１−３アルキル基を表わし，
Ｒ２１は，式６で表わされる基を表わし，
Ｒ２２は，式３で表わされる基を表わし，      
Ｒ２３は−Ｒ３３１ＮＨＲ３３２を表わし，
−Ｒ３３１は，Ｃ１−３アルキレン基を表し，Ｒ３３２は，Ｃ１−３アルキル基を表す。
【００４３】
ノビオリンタンパク質の阻害活性を有する１，３，５−トリアジン誘導体，その医薬的に許容しうる塩，又はその医薬的に許容しうる溶媒和物における１，３，５−トリアジン誘導体として好ましいものは，以下の化学式を有する物質（ＬＳ−１０２）である。この物質は，例えば特許６２０８６８９号に記載されているとおり，シノビオリンの活性阻害剤である。ＬＳ−１０２の化合物名は， (S)−N２−(ベンゾ[d]オキサゾ−ル−6−イル)−N４−(シクロヘキシルエチル)−N６−エチル−N６−(2−(エチルアミノ)エチル)−1,3,5−トリアジン−2,4,6−トリアミン（ (S)−N２−(benzo[d]oxazol−6−yl)−N４−(1−cyclohexylethyl)−N６−ethyl−N６−(2−(ethylamino)ethyl)−1,3,5−triazine−2,4,6−triamine）である。
【化１０】
2019156798.tif 000012
【００４４】
この発明の多発性骨髄腫の治療剤は，ボルテゾミブ耐性多発性骨髄腫の治療剤として好ましく用いることができる。例えば，この治療剤は，ボルテゾミブを対象に継続的に投与した結果ボルテゾミブ耐性が生じた多発性骨髄腫患者に対する多発性骨髄腫の治療剤として好ましく用いられる。
【００４５】
本発明の薬剤は，生理学的に許容される担体，賦形剤，あるいは希釈剤等と混合し，医薬組成物として経口，あるいは非経口的に投与することができる。経口剤としては，顆粒剤，散剤，錠剤，カプセル剤，溶剤，乳剤，あるいは懸濁剤等の剤型とすることができる。非経口剤としては，注射剤，点滴剤，外用薬剤，あるいは座剤等の剤型を選択することができる。注射剤には，皮下注射剤，筋肉注射剤，静脈内注射剤，あるいは腹腔内注射剤等を示すことができる。外用薬剤には，経鼻投与剤，吸入剤（噴霧剤），あるいは軟膏剤等を示すことができる。主成分である本発明の薬剤を含むように，上記の剤型とする製剤技術は公知である。例えば，経口投与用の錠剤は，本発明の薬剤に賦形剤，崩壊剤，結合剤，および滑沢剤等を加えて混合し，圧縮整形することにより製造することができる。賦形剤には，乳糖，デンプン，あるいはマンニトール等が一般に用いられる。崩壊剤としては，炭酸カルシウムやカルボキシメチルセルロースカルシウム等が一般に用いられる。結合剤には，アラビアゴム，カルボキシメチルセルロース，あるいはポリビニルピロリドンが用いられる。滑沢剤としては，タルクやステアリン酸マグネシウム等が公知である。
【００４６】
また注射剤は，主成分である本発明の薬剤を適当な分散剤とともに溶解，分散媒に溶解，あるいは分散させることにより得ることができる。分散媒の選択により，水性溶剤と油性溶剤のいずれの剤型とすることもできる。水性溶剤とするには，蒸留水，生理食塩水，あるいはリンゲル液等を分散媒とする。油性溶剤では，各種植物油やプロピレングリコール等を分散媒に利用する。このとき，必要に応じてパラベン等の保存剤を添加することもできる。また注射剤中には，塩化ナトリウムやブドウ糖等の公知の等張化剤を加えることができる。更に，塩化ベンザルコニウムや塩酸プロカインのような無痛化剤を添加することができる。
【００４７】
また，本発明の薬剤を固形，液状，あるいは半固形状の組成物とすることにより外用剤とすることができる。固形，あるいは液状の組成物については，先に述べたものと同様の組成物とすることで外用剤とすることができる。半固形状の組成物は，適当な溶剤に必要に応じて増粘剤を加えて調製することができる。溶剤には，水，エチルアルコール，あるいはポリエチレングリコール等を用いることができる。増粘剤には，一般にベントナイト，ポリビニルアルコール，アクリル酸，メタクリル酸，あるいはポリビニルピロリドン等が用いられる。この組成物には，塩化ベンザルコニウム等の保存剤を加えることができる。また，担体としてカカオ脂のような油性基材，あるいはセルロース誘導体のような水性ゲル基材を組み合わせることにより，座剤とすることもできる。
【００４８】
本発明の薬剤は，安全とされている投与量の範囲内において，ヒトを含む哺乳動物に対して，必要量（有効量）が投与される。本発明の薬剤の投与量は，剤型の種類，投与方法，患者の年齢や体重，患者の症状等を考慮して，最終的には医師または獣医師の判断により適宜決定することができる。本発明の薬剤は，例えば，１日当たり１回〜数回対象に投与される。本発明の薬剤を対象に投与する場合，有効成分である本発明の化合物は，例えば，１回あたり１μｇ以上１０ｇ以下投与され，１０μｇ以上１００ｍｇ以下投与されてもよい。さらに，１回あたり１ｍｇ以上２５ｍｇ以下投与されてもよい。
【００４９】
本発明は，対象であるヒト又はヒト以外の哺乳動物に対し，有効量のシノビオリンの活性阻害剤（又は本発明の化合物）を投与する工程を含む，多発性骨髄腫の治療方法も提供する。
【００５０】
ボルテゾミブ耐性が生じるメカニズム
治療を続けていくうちに，ボルテゾミブに対する耐性を獲得する多発性骨髄腫が出現する。耐性を獲得する主要メカニズムは，プロテアソームが変異を獲得し，ボルテゾミブによる阻害を受け付けなくなることである。ボルテゾミブによる阻害が起こらないことで，ユビキチン化された変性タンパク質の除去が行われ，多発性骨髄腫は生存することが出来る。一方，シノビオリンの阻害は，変性タンパク質のユビキチン化そのものが起こらないので，ボルテゾミブ耐性を獲得した多発性骨髄腫の細胞死を誘導することが可能である。
【実施例】
【００５１】
［実施例１］
一般的ながん細胞株としてＡ５４９細胞，ＨｅＬａ細胞，多発性骨髄腫のがん細胞株としてＫＭＳ１１細胞，ボルテゾミブ耐性を獲得した多発性骨髄腫がん細胞株としてＫＭＳ１１−ＢＴＺ細胞の４種の細胞を準備した。Ａ５４９細胞は１０％ＦＣＳを含んだＤＭＥＭ培地，ＨｅＬａ細胞は１０％ＦＣＳを含んだＭＥＭ培地，ＫＭＳ１１細胞及びＫＭＳ１１−ＢＴＺ細部は１０％ＦＣＳを含んだＲＰＭＩ１６４０培地で培養を行った。
ボルテゾミブ，プルンバギン，ジュグロンの細胞障害性を測定するために，４８ウェルプレートに細胞の播種を行った。ＨｅＬａとＡ５４９は１．２５ x １０４細胞を２００μｌの培地に懸濁して，ＫＭＳ１１とＫＭＳ１１−ＢＴＺは２．５ x １０４細胞を２００μｌの培地に懸濁して播種を行った。細胞播種と同時に，ボルテゾミブ，プルンバギン，ジュグロンを様々な濃度で添加し，３７℃， ５％ ＣＯ２存在下で培養した。３日間の培養の後，各ｗｅｌｌに１０μｌのｃｅｌｌ  ｃｏｕｎｔｉｎｇ  ｋｉｔ  ８(同仁化学研究所)を添加し，３７℃， ５％ ＣＯ２存在下で１時間反応させた後，マイクロプレートリーダーで４５０ ｎｍの吸光度を測定した。吸光度の値から，薬剤非添加時の値を1とした場合の細胞生存率を算出した。得られた細胞生存率から，各薬剤の各細胞に対するＩＣ５０値を算出した。
【００５２】
その結果を図１〜図３に示す。図１は，ボルテゾミブを様々な濃度で添加し，各細胞を培養した際の細胞生存率を，グラフにプロットした図面に替るグラフである。薬剤非添加時の細胞生存率を１としている。各細胞に対するＩＣ５０値も示している。横軸は，ボルテゾミブの濃度（ｎＭ）を示す。ＩＣ５０値が低いものから，ＫＭＳ１１，Ａ５４９，Ｈｅｌａ及びＫＭＳ１１−ＢＴＺの順である。
図２は，プルンバギンを様々な濃度で添加し，各細胞を培養した際の細胞生存率を，グラフにプロットした図面に替るグラフである。薬剤非添加時の細胞生存率を１としている。各細胞に対するＩＣ５０値も示している。横軸は，プルンバギンの濃度（ｎＭ）である。ＩＣ５０値が低いものから，ＫＭＳ１１−ＢＴＺ，ＫＭＳ１１，Ｈｅｌａ，及びＡ５４９の順である。
図３は，ジュグロンを様々な濃度で添加し，各細胞を培養した際の細胞生存率を，グラフにプロットした図面に替るグラフである。薬剤非添加時の細胞生存率を１としている。横軸は，ジュグロンの濃度（ｎＭ）を示す。各細胞に対するＩＣ５０値も示している。ＩＣ５０値が低いものから，ＫＭＳ１１−ＢＴＺ，ＫＭＳ１１，Ｈｅｌａ，及びＡ５４９の順である。
【００５３】
ボルテゾミブは，Ａ５４９細胞，ＨｅＬａ細胞などの一般的ながん細胞に対してより，ＫＭＳ１１細胞に対して高い細胞障害性を示した。一方，ボルテゾミブ耐性細胞であるＫＭＳ１１−ＢＴＺに対しては細胞障害性を示さなかった。
【００５４】
シノビオリン阻害剤であるプルンバギンやジュグロンは，Ａ５４９細胞，ＨｅＬａ細胞などの一般的ながん細胞に対してより，ＫＭＳ１１細胞に対して高い細胞障害性を示した。ボルテゾミブ耐性細胞であるＫＭＳ１１−ＢＴＺに対してもＫＭＳ１１細胞と同様に高い細胞障害性を示した。
【００５５】
考察
シノビオリンの活性阻害剤が多発性骨髄腫の治療剤として有効であること
以下，実施例に基づき，シノビオリンの活性阻害剤が多発性骨髄腫の治療剤として有効である作用機序について考察する。
細胞内においては，様々なタンパク質が合成されている。タンパク質は２０種類のアミノ酸が１本に連なったものである。そして，このアミノ酸の長い鎖は，さらに複雑に折りたたまれ立体構造をとることで様々な機能を獲得する。タンパク質が出来上がっていく過程で，正しく折りたたまれないタンパク質もできてしまう（これは，変性タンパク質と呼ばれる）。変性タンパク質が細胞内に蓄積すると，小胞体ストレスを生じ，最終的には細胞死が引き起こされる。そのため，変性タンパク質は細胞内から除去される必要がある。変性タンパク質が除去されるにあたり，変性タンパク質はまずシノビオリンという酵素の働きによりユビキチン化という修飾を受ける。次にユビキチン化された変性タンパク質は，プロテアソームという細胞内の構造物によって分解される。
【００５６】
多発性骨髄腫に対して承認を受けているボルテゾミブ（商品名：ベルケイド）はプロテアソームの働きを阻害する分子標的薬である。多発性骨髄腫は，骨髄中の抗体産生細胞が腫瘍化したものであるので，他の細胞に比してタンパク質合成が盛んであり，確率的に変性タンパク質を生じやすい。そのため，ボルテゾミブによる変性タンパク質の蓄積，細胞死は多発性骨髄腫において優先的に起こるというのが薬理機序である。
【００５７】
先述の通り，シノビオリンは変性タンパク質のユビキチン化を行う酵素である。シノビオリンを阻害することにより変性タンパク質はプロテアソームによる分解を免れ，蓄積する。結果として，ボルテゾミブによるプロテアソーム阻害と同様に，多発性骨髄腫の細胞死を優先的に引き起こすことができると考えられる。
【００５８】
［実施例２］
次に，シノビオリンのＥ３ユビキチンリガーゼ活性に対する選択的阻害剤であるＬＳ−１０２が，多発性骨髄腫特異的な細胞障害活性を有するかどうかを検討した。
ＨｅＬａ細胞，ＫＭＳ１１細胞，およびボルテゾミブ耐性ＫＭＳ１１−ＢＴＺ細胞の３種の細胞を５μＭのＬＳ−１０２を添加の上，培養を行った。
３７℃， ５％ ＣＯ２存在下で３日間，培養を行った後，各ｗｅｌｌに１０μｌのｃｅｌｌ  ｃｏｕｎｔｉｎｇ  ｋｉｔ  ８(同仁化学研究所)を添加し，３７℃， ５％ ＣＯ２存在下で１時間反応させた後，マイクロプレートリーダーで４５０ ｎｍの吸光度を測定した。吸光度の値から，薬剤非添加時の値を1とした場合の細胞生存率を算出した。その結果を図４に示す。図４は，ＬＳ−１０２を投与した際の細胞生存率示す図面に替るグラフである。
【産業上の利用可能性】
【００５９】
本発明は，多発性骨髄腫の治療剤に関するため製薬産業において利用されうる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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