(57)【要約】【課題】細胞シグナル伝達の変調、特に成長因子シグナル伝達の制御及び調節のうち少なくともいずれかのための、化合物、組成物、方法並びにキット及びアッセイを提供する。【解決手段】本発明は、特にＴＧＦ‐β及び関係する細胞外マトリックスのシグナル伝達経路において、細胞シグナル伝達のアンタゴニスト又はアゴニストのいずれかの役割を果たす増殖因子指向性作用薬（ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ−ｄｉｒｅｃｔｅｄ  ａｇｅｎｔ）（ＧＤＡ）を提供する。そのようなＧＤＡには、モノクローナル抗体、融合タンパク質及び新規なポリペプチド組成物並びにこれらの組成物のコンジュゲートが含まれる。【選択図】図１
2019163317.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
成長因子の機能に関連した細胞シグナル伝達事象を変調する方法であって、細胞を１以
上の成長因子指向性作用薬（ＧＤＡ）と接触させることを含んでなる方法。
【請求項２】
前記１以上のＧＤＡは、抗体、融合タンパク質、タンパク質、核酸、小分子及びこれら
の組み合わせからなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ＧＤＡはモノクローナル抗体であり、前記モノクローナル抗体は、成長因子、成長
因子プロドメイン複合体（ＧＰＣ）、ＧＰＣ変調因子、及び、前述のうち任意のものの組
み合わせによって形成されたエピトープからなる群から選択されたメンバーに結合する、
請求項２に記載の方法。
【請求項４】
ＧＰＣを安定化する方法であって、前記ＧＰＣを、ＧＰＣを標的とするモノクローナル
抗体に接触させることを含んでなる方法。
【請求項５】
安定化により前記ＧＰＣからの成長因子の放出の阻害がもたらされる、請求項４に記載
の方法。
【請求項６】
細胞ニッチにおける遊離の成長因子のレベルを上昇させる方法であって、ＧＰＣを、Ｇ
ＰＣを標的とするモノクローナル抗体に接触させることを含んでなる方法。
【請求項７】
抗体はＧＰＣを標的とするモノクローナル抗体である、請求項３に記載の方法。
【請求項８】
変調はアップレギュレーション又は細胞シグナル伝達分子のレベルの上昇を含んでなる
、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
変調はダウンレギュレーション又は細胞シグナル伝達分子のレベルの低下を含んでなる
、請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
細胞シグナル伝達分子は配列番号７４〜３１６からなる群から選択される、請求項８又
は９に記載の方法。
【請求項１１】
細胞シグナル伝達分子は、配列番号７４〜１１１からなる群から選択された標的のＴＧ
Ｆ‐βスーパーファミリーからなる群から選択される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
細胞又は細胞ニッチにおけるＴＧＦ‐βポリペプチドの分布を変更する方法であって、
前記細胞又は細胞ニッチのＧＰＣをＧＤＡと接触させることを含んでなる方法。
【請求項１３】
ＧＤＡはモノクローナル抗体を含んでなる、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記ＴＧＦ‐βポリペプチドは、配列番号７４〜１１１及びこれらの組み合わせからな
る群から選択される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
単離モノクローナル抗体であって、配列番号１〜７３からなる群から選択された配列の
うちいずれかの、少なくとも連続１０個のアミノ酸を有しているポリペプチドと特異的に
免疫反応性であるという特性を有する単離モノクローナル抗体。
【請求項１６】
ヒト抗体またはヒト化抗体である、請求項１５に記載の単離モノクローナル抗体。
【請求項１７】
前記抗体は細胞外の環境において免疫反応性である、請求項１５に記載の単離モノクロ
ーナル抗体。
【請求項１８】
前記抗体はフューリン開裂を経ていないＧＰＣと免疫反応性である、請求項１５に記載
の単離モノクローナル抗体。
【請求項１９】
前記単離モノクローナル抗体は安定化抗体である、請求項１５に記載の単離モノクロー
ナル抗体。
【請求項２０】
ＧＰＣと接触しているときに前記ＧＰＣからの成長因子の放出を阻害する、請求項１９
に記載の安定化抗体。
【請求項２１】
接触により成長因子のシグナル伝達経路が阻害される、請求項２０に記載の安定化抗体
。
【請求項２２】
前記成長因子シグナル伝達経路は、配列番号７４〜１１１からなる群から選択されたＴ
ＧＦ‐βスーパーファミリーのメンバーを伴う経路である、請求項２１に記載の安定化抗
体。
【請求項２３】
請求項１５に記載の単離モノクローナル抗体を含んでなる組成物。
【請求項２４】
前記組成物は、細胞若しくは細胞ニッチにおける、又は細胞若しくは細胞ニッチの内側
における成長因子の濃度を減少させる機能を果たす、請求項２３に記載の組成物。
【請求項２５】
前記組成物は、前記細胞又は細胞ニッチの内側における前記成長因子の滞留時間を縮小
する、請求項２４に記載の組成物。
【請求項２６】
前記組成物は、前記細胞又は細胞ニッチの内側におけるネオモルフィックな変化を誘発
する、請求項２３に記載の組成物。
【請求項２７】
前記単離モノクローナル抗体は放出抗体である、請求項１５に記載の単離モノクローナ
ル抗体。
【請求項２８】
ＧＰＣと接触しているときに前記ＧＰＣからの成長因子の放出を促進する、請求項２７
に記載の放出抗体。
【請求項２９】
前記成長因子は、配列番号７４〜１１１からなる群から選択されたＴＧＦ‐βスーパー
ファミリーのメンバーである、請求項２８に記載の放出抗体。
【請求項３０】
接触により成長因子シグナル伝達経路が促進される、請求項２８に記載の放出抗体。
【請求項３１】
接触により細胞又は細胞ニッチの内側における前記成長因子の濃度が上昇する、請求項
２８に記載の放出抗体。
【請求項３２】
接触により前記細胞又は細胞ニッチの内側における前記成長因子の滞留時間が増大する
、請求項２８に記載の放出抗体。
【請求項３３】
前記接触により前記細胞又は細胞ニッチの内側におけるネオモルフィックな変化が誘発
される、請求項２８に記載の放出抗体。
【請求項３４】
前記組成物は食作用又は飲作用によるＧＰＣのクリアランスを促進する、請求項２３に
記載の組成物。
【請求項３５】
モノクローナル抗体であって、
ａ．哺乳動物を、配列番号１〜７３からなる群から選択された配列に少なくとも７０％
同一である少なくとも１つのペプチドと接触させるステップと、
ｂ．哺乳動物から抗体を産生する細胞を収集するステップと、
ｃ．ステップ（ｂ）で得られた細胞を不死化することによってモノクローナル抗体を発
現するハイブリドーマを作出するステップと
を含んでなる方法によって得られるモノクローナル抗体。
【請求項３６】
ＧＰＣを標的とする抗体をコードするポリペプチドを調製する方法であって、
ａ．宿主細胞を得るステップと、
ｂ．ＧＰＣを標的とする抗体をコードするポリペプチドの発現を促進する条件下で培養
液中にて宿主細胞をインキュベートするステップと、
ｃ．発現された抗体を宿主細胞から精製するステップと
を含んでなる方法。
【請求項３７】
医薬組成物であって、有効成分としてＧＰＣ若しくは構成要素に特異的なモノクローナ
ル抗体又はその抗体の少なくとも抗原結合部分を含んでなる抗体フラグメントと、薬学的
に許容可能な担体とを含んでなり、前記抗体は配列番号１〜７３からなる群から選択され
た抗原決定基エピトープを認識する、医薬組成物。
【請求項３８】
異常なＧＰＣシグナル伝達に関連した障害又は疾患に罹患している対象者の治療方法で
あって、
ａ．治療を必要とする前記対象者に、ＧＰＣに特異的な抗体を投与することを含んでな
り、
前記抗体は抗原結合部分を含むとともに、前記抗体は配列番号１〜７３からなる群から
選択された抗原決定基エピトープを認識する、方法。
【請求項３９】
請求項１５に記載のモノクローナル抗体及びその使用のための説明書を含んでなるキッ
ト又はアッセイ。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、特にＴＧＦ‐β及び関係する細胞外マトリックスのシグナル伝達経路におい
て、細胞シグナル伝達のアンタゴニスト又はアゴニストのいずれかの役割を果たす成長因
子指向性作用薬（ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ−ｄｉｒｅｃｔｅｄ  ａｇｅｎｔ）（ＧＤ
Ａ）を提供する。そのようなＧＤＡは、抗体、融合タンパク質、ポリペプチド、核酸及び
小分子組成物のうち少なくともいずれか並びに／又はこれらのコンジュゲートを含んでな
ることができる。
【０００２】
さらに提供されるのは、提供されたＧＤＡを活用するための方法、キット、及びアッセ
イである。さらに提供されるのは、新規な抗原であって、抗体を基にしたＧＤＡの例えば
設計、開発、生産、生成、製造及び発見において有用なものである。
【背景技術】
【０００３】
成長因子は様々な細胞活動を刺激する細胞シグナル伝達分子である。生体系内における
その広範な影響故に、成長因子シグナル伝達は、多くの場合他の生体分子、細胞外マトリ
ックス及び細胞マトリックスのうち少なくともいずれかとの相互作用を通じて、又は特定
の細胞環境若しくはニッチの範囲内で、厳格に調節されている。これらの相互作用は直接
的であっても間接的であってもよい。
【０００４】
形質転換成長因子β（ＴＧＦ‐β）ファミリーの成長因子は様々な細胞プロセスに関与
する。ＴＧＦ‐βファミリーにおけるほとんどすべてのシグナル伝達は共通の経路を通り
、該経路によって二量体リガンドは２個のタイプＩ受容体及び２個のタイプＩＩ受容体を
含むヘテロ四量体の受容体複合体により認識される。受容体はそれぞれセリン‐トレオニ
ンキナーゼドメインを有する。タイプＩＩ受容体はタイプＩ受容体をリン酸化し、そのタ
イプＩ受容体が次に受容体制御型Ｓｍａｄをリン酸化し、該Ｓｍａｄは核内に移動及び蓄
積して転写を調節する。
【０００５】
ヒトには３３個の異なるＴＧＦ‐βファミリーメンバーが存在する。メンバーには、骨
形態形成タンパク質（ＢＭＰ）、インヒビン、アクチビン、成長分化因子（ＧＤＦ）、ミ
オスタチン、ノーダル、抗ミュラー管ホルモン、及びレフティ（ｌｅｆｔｙ）タンパク質
が挙げられる。該ファミリーのメンバーはそれぞれ２００〜４５０残基のプロドメイン及
び約１１０残基のＣ末端成熟型成長因子ドメインを有する（図１を参照）。
【０００６】
プロドメインおよび成熟型成長因子ドメインは単一のポリペプチド鎖として合成される
。プロドメインは、Ｃ末端成長因子ドメインの正確なフォールディング及び二量体化を誘
導する。プロドメインは、成長因子の潜在状態からの放出をもたらす他のシグナルを受け
るまで、成長因子（分泌後）を細胞外マトリックス及び細胞マトリックス（ＥＣＣＭ）中
の特定の場所に向かわせる重要な機能を有することが、ごく最近になって認識されてきた
。潜在状態からの放出は非常に局在化した環境において生じ、これによりほとんどのファ
ミリーメンバーは細胞直径のわずか数倍の距離で作用する。また、該メンバーが血液循環
に達しすると急速に取り除かれる。ほとんどのプロドメイン‐成長因子複合体はホモ二量
体として分泌される。しかしながら、一部はヘテロ二量体として分泌される場合がある。
この特徴は、インヒビン‐アクチビンファミリーにおいて、かつＢＭＰにおいても重要で
あり、ＢＭＰについてはＢＭＰ２／ＢＭＰ７ヘテロ二量体が有力な役割を担う。プロドメ
インと成長因子ドメインとの間のフューリン部位における開裂は、分泌に先立って細胞内
で、又は分泌後に細胞外で生じる。さらなる細胞外プロテアーゼが追加の部位での開裂に
関与する場合もあり；これらにはいわゆるＢＭＰ１又はトロイドプロテアーゼが挙げられ
る。
【０００７】
潜在型ＴＧＦ‐βの結晶構造についての最近の解は、ＴＧＦ‐βファミリー全体にとっ
ての最初のものであり、上記の複合体に対する深い洞察を提供している（非特許文献１）
。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】シ（Ｓｈｉ）、Ｍ．ら、「潜在型ＴＧＦ‐βの構造及び活性化（Ｌａｔｅｎｔ  ＴＧＦ−β  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ａｎｄ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ．）」、ネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ）、２０１１年６月１５日、第４７４巻、第７３５１号、：３４３−９
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】成長因子プロドメイン複合体（ＧＰＣ）の単量体を直線で表現する図。該ポリペプチド内には、分泌シグナルペプチド、プロドメイン、成長因子ドメイン及びジスルフィド結合形成のためのシステイン残基の部位がある。ＧＰＣは、少なくとも１つのプロドメインと１つの成熟型成長因子との組み合わせである。
【図２】成長因子及び成長因子シグナル伝達に関与しうる生体分子の細胞環境であって該成長因子の環境が本発明の１以上のＧＤＡと接触するときの細胞環境の選択的な見方を表す図。図２Ａ．成長因子は調節要素を含んでなる場合がある。ＧＤＡは、成長因子を潜在型若しくは不活性型の立体配座に保つため、又は成長因子の放出及び活性のうち少なくともいずれかを促進するために、成長因子の調節要素部分と相互作用することができる。ＥＣＣＭは成長因子の周囲に示されている。図２Ｂ．成長因子が成長因子プロドメイン複合体（ＧＰＣ）の内部に見出される場合、プロドメインは成長因子の調節要素として機能する。成長因子がＧＤＡとの接触時点で潜在型であるか活性であるかは、ＥＣＣＭの構成要素及び本明細書中に定義されたＧＰＣ変調因子のうち少なくともいずれかとのさらなる相互作用に応じて変化しうる。そのような実施形態では、ＧＤＡは、成長因子の潜在型及び不活性型のうち少なくともいずれかの立体配座を安定化するため、又は成長因子の放出及び活性（ａｃｉｔｉｖｉｔｙ）のうち少なくともいずれかを促進するために、図中の要素のうち任意のもの（ＧＰＣ、ＧＰＣ変調因子及びＥＣＣＭのうち少なくともいずれか）と相互作用することができる。
【図３】ＴＧＦ‐βスーパーファミリー系統樹を示す図。分岐は枝長に比例している。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
発明の概要
本発明は、細胞シグナル伝達の変調、特に成長因子シグナル伝達の制御及び調節のうち
少なくともいずれかのための、化合物、組成物、方法並びにキット及びアッセイを提供す
る。
【００１１】
具体的に提供されるのは、成長因子プロドメイン複合体（ＧＰＣ）の機能を変調する方
法であってＧＰＣを１以上の成長因子指向性作用薬（ＧＤＡ）と接触させることを含んで
なる方法である。本方法では、ＧＤＡはモノクローナル抗体を含んでなることができる。
該モノクローナル抗体は、成長因子、プロドメイン、ＥＣＣＭ、ＧＰＣ変調因子、又は先
述のうちいずれかの領域若しくは部分の組み合わせによって形成されたエピトープからな
る群から選択されたメンバーに結合することができる。
【００１２】
本発明は、ＧＰＣを安定化する方法であって、ＧＰＣを、ＧＰＣを標的とするモノクロ
ーナル抗体に接触させることを含んでなる方法を提供する。本方法では、安定化によりＧ
ＰＣからの成長因子放出の阻害がもたらされうる。さらに提供されるのは、細胞ニッチに
おける遊離の成長因子のレベルを上昇させる方法であって、前記ＧＰＣを、ＧＰＣを標的
とするモノクローナル抗体に接触させることを含んでなる方法である。
【００１３】
本発明は、細胞シグナル伝達経路を変調する方法であって、ＧＰＣを含んでなる細胞を
、ＧＰＣを標的とするモノクローナル抗体に接触させることを含んでなる方法を提供する
。１つの実施形態では、変調はアップレギュレーション又は細胞シグナル伝達分子のレベ
ルの上昇を含んでなる。別の実施形態では、変調はダウンレギュレーション又は細胞シグ
ナル伝達分子のレベルの低下を含んでなる。先の２つの実施形態のいずれにおいても、細
胞シグナル伝達分子は、表３、４、５、６及び７に列挙されたもので構成されている標的
群から選択されうる。さらなる実施形態では、細胞シグナル伝達分子は、表３に列挙され
た標的のＴＧＦ‐βスーパーファミリーからなる群から選択される。
【００１４】
本発明は、細胞又は細胞ニッチにおけるＴＧＦ‐βポリペプチドの分布を変更する方法
であって、前記細胞又は細胞ニッチのＧＰＣをＧＤＡと接触させることを含んでなる方法
を提供する。１つの実施形態では、ＧＤＡはモノクローナル抗体を含んでなる。さらなる
実施形態では、ＴＧＦ‐βポリペプチドは、表３に列挙されたもの及びそれらの組み合わ
せからなる群から選択される。
【００１５】
本発明は、単離モノクローナル抗体であって、配列番号１〜７３からなる群から選択さ
れた配列のうちいずれかの、少なくとも連続１０個のアミノ酸を有しているポリペプチド
と特異的に免疫反応性であるという特性を有する単離モノクローナル抗体を提供する。１
つの実施形態では、単離モノクローナル抗体はヒト抗体またはヒト化抗体であってよい。
別の実施形態では、単離モノクローナル抗体は細胞外の環境において免疫反応性であって
よい。別の実施形態では、単離モノクローナル抗体は、フューリン開裂を経ていないＧＰ
Ｃと免疫反応性であってよい。別の実施形態では、単離モノクローナル抗体は阻害抗体で
ある。さらなる実施形態では、阻害抗体は、ＧＰＣと接触しているときにＧＰＣからの成
長因子の放出を阻害することができる。さらなる実施形態では、阻害抗体は、ＧＰＣと接
触しているときに成長因子のシグナル伝達経路を阻害することができる。さらなる実施形
態では、成長因子シグナル伝達経路は、表３に列挙されたもののうち任意のものからなる
群から選択されたＴＧＦ‐βスーパーファミリーのメンバーを伴う経路であってよい。別
の実施形態では、単離モノクローナル抗体は組成物の一部である。この組成物は、細胞若
しくは細胞ニッチにおける、又は細胞若しくは細胞ニッチの内側における成長因子の濃度
を減少させる機能を果たすことができる。この組成物は、細胞又は細胞ニッチの内側にお
ける成長因子の滞留時間をさらに縮小することができる。組成物は、細胞又は細胞ニッチ
の内側におけるネオモルフィックな（ｎｅｏｍｏｒｐｈｉｃ）変化を誘発する場合もある
。単離モノクローナル抗体は放出抗体であってもよい。１つの実施形態では、放出抗体は
、ＧＰＣと接触しているときにＧＰＣからの成長因子の放出を促進する。さらなる実施形
態では、成長因子は、表３に列挙されたもののうち任意のものからなる群から選択された
ＴＧＦ‐βスーパーファミリーのメンバーである。別の実施形態では、放出抗体は、ＧＰ
Ｃと接触すると成長因子シグナル伝達経路を促進する。別の実施形態では、ＧＰＣを放出
抗体と接触させることにより、細胞又は細胞ニッチの内側における成長因子の濃度が上昇
する。別の実施形態では、ＧＰＣを放出抗体と接触させることにより、細胞又は細胞ニッ
チの内側における成長因子の滞留時間が増大する。別の実施形態では、ＧＰＣを放出抗体
と接触させることにより、細胞又は細胞ニッチの内側におけるネオモルフィックな変化が
誘発される。本発明の単離モノクローナル抗体を含んでなる組成物は、食作用又は飲作用
によるＧＰＣのクリアランスを促進することができる。
【００１６】
本発明は、モノクローナル抗体であって、哺乳動物を、配列番号１〜７３からなる群か
ら選択された配列に少なくとも７０％同一である少なくとも１つのペプチドと接触させる
ステップと、該哺乳動物から抗体を産生する細胞を収集するステップと、得られた細胞を
不死化することによってモノクローナル抗体を発現するハイブリドーマを作出するステッ
プとを含んでなる方法によって得られたモノクローナル抗体を提供する。
【００１７】
本発明は、ＧＰＣを標的とする抗体をコードするポリペプチドを調製する方法であって
、宿主細胞を得るステップと、ＧＰＣを標的とする抗体をコードするポリペプチドの発現
を促進する条件下で培養液中にて宿主細胞をインキュベートするステップと、発現された
抗体を宿主細胞から精製するステップとを含んでなる方法を提供する。
【００１８】
本発明は、有効成分として、ＧＰＣ若しくは構成要素に特異的なモノクローナル抗体又
は該抗体の少なくとも抗原結合部分を含んでなる抗体フラグメントであって該抗体は配列
番号１〜７３からなる群から選択された抗原決定基エピトープを認識するものと、薬学的
に許容可能な担体とを含んでなる、医薬組成物を提供する。
【００１９】
本発明は、異常なＧＰＣシグナル伝達に関連した障害又は疾患に罹患している対象者を
治療する方法であって、治療を必要とする対象者に、ＧＰＣに特異的な抗体であって該抗
体は抗原結合部分を含んでなりかつ該抗体は配列番号１〜７３からなる群から選択された
抗原決定基エピトープを認識する抗体、を投与するステップを含んでなる方法を提供する
。
【００２０】
最後に、本発明は、モノクローナル抗体及び該抗体の使用のための説明書を含んでなる
キット又はアッセイを提供する。
詳細な説明
本発明は、特にＴＧＦ‐β及び関係する細胞外マトリックスのシグナル伝達経路におい
て、細胞シグナル伝達のアンタゴニスト又はアゴニストのいずれかの役割を果たす成長因
子指向性作用薬（ＧＤＡ）を提供する。
【００２１】
ＧＤＡは、抗体、融合タンパク質、新規なポリペプチド、核酸及び小分子組成物のうち
少なくともいずれか並びに／又はこれらのコンジュゲートを含んでなることができる。さ
らに提供されるのは、ＧＤＡを活用するための方法、キット及びアッセイ、並びに抗体の
ような特異的ＧＤＡの生産のための新規な抗原である。
【００２２】
Ｉ．本発明の組成物
〔成長因子指向性作用薬（ＧＤＡ）〕
ある実施形態では、本発明は少なくとも１つの成長因子指向性作用薬すなわちＧＤＡを
含んでなる化合物及び組成物を提供する。本明細書中で使用されるように、用語「成長因
子」は、細胞の挙動の変化、例えば、限定するものではないが細胞成長、細胞増殖及び細
胞分化の変化を刺激する１以上の生体分子を指す。成長因子はペプチド又はポリペプチド
であってよく、他の種類の生体分子に関連していてもよい。通常の成長因子としては、限
定するものではないが、骨形態形成タンパク質（ＢＭＰ）、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮ
Ｆ）、上皮成長因子（ＥＧＦ）、エリトロポエチン（ＥＰＯ）、線維芽細胞成長因子（Ｆ
ＧＦ）、グリア細胞株由来神経栄養因子（ＧＤＮＦ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ‐Ｃ
ＳＦ）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ‐ＣＳＦ）、成長分化因子‐９（
ＧＤＦ９）、肝細胞成長因子（ＨＧＦ）、肝細胞がん由来成長因子（ＨＤＧＦ）、インス
リン様成長因子（ＩＧＦ）、遊走刺激因子、神経成長因子（ＮＧＦ）、胎盤成長因子（Ｐ
ＧＦ）、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、トロンボポエチン（ＴＰＯ）、形質転換成長
因子アルファ（ＴＧＦ‐α）ファミリーのメンバー、形質転換成長因子ベータ（ＴＧＦ‐
β）ファミリーのメンバー、腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ‐α）、血管内皮成長因子（
ＶＥＧＦ）、並びにＷｎｔ（ウィント）及びＮｏｔｃｈ（ノッチ）シグナル伝達経路のメ
ンバーが挙げられる。本明細書中で使用されるように、用語「成長因子指向性作用薬」又
は「ＧＤＡ」とは、成長因子に関連した細胞シグナル伝達を、変更、変調、アンタゴナイ
ズ、アゴナイズ、又は何らかの方法で混乱させるように機能する、外因的に供給された化
合物、組成物又は実体を指す。一般に、ＧＤＡは任意の化学物質であってよい。いくつか
の実施形態では、ＧＤＡはポリマー体を含んでなるものでもよいし、非ポリマー体を含ん
でなるものでもよい。いくつかの実施形態では、ＧＤＡは、１以上の抗体、融合タンパク
質、新規なポリペプチド、核酸、多糖類、脂質及び小分子組成物のうち少なくともいずれ
か、並びに／又はこれらのコンジュゲート及び組み合わせのうち少なくともいずれかを含
んでなることができる。いくつかの実施形態では、ＧＤＡは１以上の調節要素に対して指
向性である。いくつかの実施形態では、ＧＤＡはＴＧＦ‐β又はＴＧＦ‐βファミリーメ
ンバーの成長因子に関連する細胞シグナル伝達を変調する。いくつかの実施形態では、Ｇ
ＤＡは、少なくとも１つの成長因子プロドメイン複合体（ＧＰＣ）との接触により、成長
因子に関連する細胞シグナル伝達を変調する。いくつかの実施形態では、ＧＤＡは、１以
上の細胞外（ｅｘｔａｃｅｌｌｕｌａｒ）マトリックス及び細胞マトリックスのうち少な
くともいずれか（ＥＣＣＭ）の構成要素と接触することにより、成長因子に関連する細胞
シグナル伝達を変調する。
【００２３】
〔成長因子指向性作用薬（ＧＤＡ）：標的部位〕
いくつかの実施形態では、ＧＤＡは少なくとも１つの標的部位に対して指向性である。
本明細書中で使用されるように、用語「標的部位」とは、ＧＤＡ化合物又は組成物と、細
胞、組織、器官又は生物体の中の生体分子又は生体構造物との間の相互作用の１以上の領
域を指す。いくつかの実施形態では、標的部位は１つのタンパク質上のみに存在してもよ
いし、２以上のタンパク質によって形成されてもよい。
【００２４】
いくつかの実施形態では、標的部位は、生体分子、例えば、限定するものではないがタ
ンパク質、糖、脂質及び核酸分子を含んでなることができる。いくつかの実施形態では、
標的部位は任意の他の形態の結合エピトープを含んでなる。企図されるＧＤＡ標的部位に
は、成長因子の機能を変更、増強又は阻害するための任意かつあらゆる可能な相互作用領
域が含まれる。標的部位は、成長因子、成長因子プロドメイン、成長因子プロドメイン複
合体（ＧＰＣ）、ＧＰＣ変調因子又はＥＣＣＭの任意の生体分子の中に見出されてもよい
し、これらの上に見出されてもよい。
【００２５】
別例として、又は追加として、そのような部位には、ＥＣＣＭ構成要素、調節要素、成
長因子、受容体、リガンド、ＧＰＣ及びＧＰＣ変調因子の間の相互作用の領域が含まれう
る。
【００２６】
本明細書中で使用されるように、用語「ＧＰＣ」又は「成長因子プロドメイン複合体」
は、成熟型成長因子とそのプロドメインとの組み合わせを指す。いくつかの実施形態では
、ＧＰＣプロドメインのポリペプチドは成長因子と連続している。いくつかの実施形態で
は、ＧＰＣプロドメインのポリペプチドは通常のペプチド結合によって成長因子に連結さ
れているのではなく、化学結合及び分子間相互作用のうち少なくともいずれか、例えば、
限定するものではないが非共有結合、イオン結合、水素結合、疎水的相互作用、双極子‐
双極子相互作用及びファン‐デル‐ワールス力のうち少なくともいずれかを通じて関連を
維持している。いくつかの実施形態では、ＧＰＣはＴＧＦ‐βファミリーのメンバーを含
んでなる。
【００２７】
標的部位には１以上の調節要素が含まれうる。本明細書中で使用されるように、用語「
調節要素」とは、１以上の成長因子と連続しているか、該成長因子の内部又は成長因子上
に存在しているか、該成長因子に直接的又は間接的に結合しているかのうち少なくともい
ずれかの、成長因子の活性を変調する１以上の領域、構成部分、又はドメインを指す。Ｇ
ＤＡは、成長因子の活性をアゴナイズ、アンタゴナイズ、又は他の方法で変調するために
、調節要素及びＧＰＣ若しくは関連構造物のうち少なくともいずれかの上の、又は該調節
要素及びＧＰＣ若しくは関連構造物のうち少なくともいずれかに沿った、任意の数の標的
部位と結合又は相互作用することができる。
【００２８】
いくつかの実施形態では、ＧＤＡと調節要素との間の接触により、調節要素及び成長因
子構造物のうち少なくともいずれかにおける立体配座的、構造的及び３次元的のうち少な
くともいずれかの変化がもたらされる。いくつかの実施形態では、ＧＤＡと調節要素との
間の接触により、調節要素からの成長因子の放出がもたらされる。
【００２９】
いくつかの実施形態では、ＧＤＡと調節要素との間の接触は成長因子活性の増大をもた
らす。いくつかの実施形態では、ＧＤＡと調節要素との間の接触は成長因子活性の減少を
もたらす。
【００３０】
いくつかの実施形態では、ＧＤＡと調節要素との間の接触は、調節要素からの成長因子
の放出を妨げる。
いくつかの実施形態では、調節要素はＧＰＣの少なくとも１つのプロドメインを含んで
なる。本明細書中で使用されるように、用語「プロドメイン」は、機能タンパク質と連続
して合成されるが典型的には成熟型タンパク質から開裂されるＮ末端タンパク質ドメイン
を指す。プロドメインは長さが数個（１０）〜数百アミノ酸であってよい。いくつかの実
施形態では、プロドメインは翻訳後修飾を受ける。そのような翻訳後修飾には、限定する
ものではないが、リン酸化、ユビキチン化、グリコシル化及びピロリル化（ｐｙｒｏｌｉ
ｚａｔｉｏｎ）が挙げられる。
【００３１】
いくつかの実施形態では、ＧＤＡは、成長因子活性を低減するためにＧＰＣによる成熟
型成長因子の保持を安定化する役割を果たしうる。ＧＤＡは、成長因子活性を増強するた
めにＧＰＣから成熟型成長因子を放出する場合もある。
【００３２】
いくつかの実施形態では、ＧＤＡは、１以上のＧＰＣ若しくは１以上の（ｏｎｅ  ｏｒ
ｅ  ｍｏｒｅ）天然のＧＰＣ貯蔵場所へ、又は任意の他の成長因子隔離形態へとＧＤＡが
導入された際に、活性型及び遊離型のうち少なくともいずれかの成長因子と、不活性型及
び隔離型のうち少なくともいずれかの成長因子との比率を変調する。いくつかの実施形態
では、そのような成長因子比率のＧＤＡ誘導型の変調（ＧＤＡ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｍｏｄ
ｕｌａｔｉｏｎｓ  ｓｕｃｈ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ｒａｔｉｏｓ）は特定の細
胞ニッチに局所化されてもよい。いくつかの実施形態では、ＧＰＣとＧＰＣ変調因子との
接触が、ＧＤＡの非存在下における成熟型成長因子の放出を刺激する場合がある。
【００３３】
本明細書中で使用されるように、用語「ＧＰＣ変調因子」とは、ＧＰＣとの直接的又は
間接的な相互作用によってＧＰＣを変調する能力を有する、任意の内因性の１又は複数の
生体分子を指す。ＧＰＣ変調因子には、限定するものではないが、インテグリン、トロイ
ド／ＢＭＰプロテアーゼ、トロンボスポンジン、フィブリリン、メタロプロテアーゼ、ク
リプト（ｃｒｙｐｔｏ）およびフューリン／ＰＡＣＥが挙げられる。いくつかの実施形態
では、ＧＰＣ変調因子は１以上の細胞又は細胞に結合した実体を含んでなる。
【００３４】
本発明の１以上のＧＤＡの投与又は該ＧＤＡとの接触が、ひいてはＧＰＣとＧＰＣ変調
因子との接触を引き起こし、いくつかの成果のうちいずれかを生じることもある。いくつ
かの実施形態では、ＧＰＣとＧＰＣ変調因子との接触は、ＧＰＣからの成熟型成長因子の
放出をもたらしうる。いくつかの実施形態では、ＧＰＣとＧＰＣ変調因子との接触は、Ｇ
ＰＣによる成長因子の保持をもたらしうる。いくつかの実施形態では、ＧＰＣとＧＰＣ変
調因子との接触は、成長因子活性の増大をもたらしうる。いくつかの実施形態では、ＧＰ
ＣとＧＰＣ変調因子との接触は、成長因子活性の減少をもたらしうる。
【００３５】
〔成長因子指向性作用薬（ＧＤＡ）：ＥＣＣＭ及びニッチ〕
本明細書中で使用されるように、用語「細胞外及び細胞マトリックス」すなわちＥＣＣ
Ｍは、細胞外マトリックス及び細胞マトリックスの両方、並びに細胞外及び細胞表面の環
境の構成要素に直接的又は間接的に関連しうるさらなるタンパク質又は分子（例えば、限
定するものではないがタンパク質、核酸、膜、脂質及び糖など）を指す。いくつかの実施
形態では、ＥＣＣＭ構成要素には、例えば、限定するものではないが、潜在型ＴＧＦ‐β
結合タンパク質（ＬＴＢＰ）、フィブリリン、エラスチン、コラーゲンなどのような分子
が挙げられる。いくつかの実施形態では、ＥＣＣＭ構成要素には細胞及び血小板が含まれ
る。いくつかの実施形態では、ＥＣＣＭ構成要素には、細胞及び血小板表面に関連するタ
ンパク質及び分子、例えば、限定するものではないがＧＡＲＰ（ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉ
ｎ−Ａ  ｒｅｐｅｔｉｔｉｏｎｓ  ｐｒｅｄｏｍｉｎａｎｔ  ｐｒｏｔｅｉｎ）、受容体
、プロテオグリカン、糖質分子、内在性膜タンパク質、糖脂質などが挙げられる。いくつ
かの実施形態では、ＥＣＣＭ構成要素にはＧＰＣ変調因子が含まれる。いくつかの実施形
態では、成長因子シグナル伝達経路の変調は、特定の細胞ニッチ内において生じうる。し
たがって、ＧＤＡは、特定の細胞ニッチ内において作動、標的化、及び機能のうち少なく
ともいずれかを為すように設計されうる。本明細書中で使用されるように、用語「細胞ニ
ッチ」とは、哺乳類の生物体内における、又は該生物体に由来する、組織、器官又は器官
系内の細胞系の独自の一組の生理学的条件を指す。細胞ニッチは、ｉｎ  ｖｉｖｏ、ｉｎ
ｖｉｔｒｏ、ｅｘ  ｖｉｖｏ、又はｉｎ  ｓｉｔｕで生じうる。成長因子シグナル伝達
に関与する複雑な性質及び動態プロセスを考えると、細胞ニッチは機能的、空間的又は時
間的に位置付けられてもよいし、１以上の細胞を包含する任意の環境を指すために使用さ
れてもよい。そのため、いくつかの実施形態では、細胞ニッチには、例えば栄養細胞のよ
うな支援を提供する別の細胞に隣接している任意の細胞の環境が含まれる。
【００３６】
本明細書中で使用されるように、「機能的細胞ニッチ」とは、触媒性（酵素が関与する
ものなど）、構造的（コファクターなど）、電子的（イオン濃度又はｐＨの測定値など）
、複製、再生及び修復のうち少なくともいずれか（ＤＮＡ及びＲＮＡの機能など）、伝達
性（イオンチャネルなど）、機能的環境（脂質又はグリコシル化の層又はコーティング、
マトリックスなど）、アポトーシス性、又はこれらの組み合わせのいずれであれ、一連の
生体分子機能という特性を有する細胞ニッチである。いくつかの実施形態では、機能的細
胞ニッチ内のＧＤＡは、機能的細胞ニッチに関連した少なくとも１つの生体分子機能にお
ける１以上の表現型の変化をもたらすことになろう。機能的細胞ニッチの一例は、ＴＧＦ
‐β成長因子シグナル伝達を伴うものである。ＴＧＦ‐β機能的細胞ニッチ内で作用する
ＧＤＡは、成長因子又はＧＰＣのレベルの変調（上昇又は下降）のような表現型の変化を
もたらすことができる。ＧＤＡの作用によってもたらされた変化はさらに、成長因子又は
ＧＰＣのレベルにより引き起こされた生体分子機能に関連する下流の変化としても現れる
場合がある。
【００３７】
本明細書中で使用されるように、「空間的細胞ニッチ」は、空間における配向という特
性を有する細胞ニッチである。空間的細胞ニッチは、器官又は組織内に見出される場合、
典型的にはその器官又は組織内の細胞のみを含む。空間的細胞ニッチは、ＧＤＡが機能す
る細胞ニッチ内の微小環境を含んでなることもできる。そのような場合、細胞ニッチは、
接触された細胞と、接触された細胞に直接接触している近隣の細胞とによって定義されて
もよい。空間的細胞ニッチの例には、例えば腫瘍内のような、組織又は器官内の部位又は
領域が挙げられる。ＧＤＡは、ニッチ又は生物体全体における変化を達成するために、空
間的ニッチ内で作用することもできる。そのような変化は、生体分子のレベル及び活性の
うち少なくともいずれかの変調（上昇若しくは下降）により、又は細胞形状若しくは他の
細胞への接続性のような空間的ニッチにおける構造的変化により証拠づけられるような、
表現型の変化であってもよい。
【００３８】
本明細書中で使用されるように、「時間的に定義される細胞ニッチ」は、時間の決めら
れた事象という特性を有する細胞ニッチである。時間的細胞ニッチは、ＧＤＡの効果の開
始までの時間又は持続時間、Ｔｍａｘ、Ｃｍａｘ又はその他の典型的には経時的に測定さ
れる薬物動態学的若しくは薬力学的パラメータの測定値のような、一連又は一組の事象を
含んでなることができる。
【００３９】
いくつかの実施形態では、ＧＤＡは１以上の別個すなわち分離した細胞ニッチを変調す
るために作用することが可能であり、かつ繰り返し作用することができる。いくつかの実
施形態では、ＧＤＡは、１以上の細胞ニッチ、１以上の天然の貯蔵場所又は任意の他の成
長因子隔離部位へとＧＤＡが導入された際に、活性型及び遊離型のうち少なくともいずれ
かの成長因子と、不活性型及び隔離型のうち少なくともいずれかの成長因子との比率を変
調する。いくつかの実施形態では、比率は、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％
、５０％又はそれ以上変調されうる。
【００４０】
細胞ニッチの変調は、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％又はそれ以
上であってよい。混乱又は変調の測定は細胞ニッチの種類に基づいて決定されることにな
ろうし、そのような方法は当分野において当業者に既知である。例えば、空間的細胞ニッ
チの変更又は変調は、細胞又は細胞微小環境の場所又は空間配座における少なくとも１０
％の変化によって定義されうる。そのような変化は、標準的な顕微鏡技法で、蛍光顕微鏡
技法で、又は標識調査の使用によって、容易に検出可能である。そのような変化はさらに
、当分野で既知の技法、例えば、限定するものではないが、ウエスタンブロット、ノーザ
ンブロット、逆転写酵素（ＲＴ）ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によるｍＲＮＡのＤＮ
Ａへの変換とその後のサザンブロッティングで使用するためのＰＣＲ増幅又はリアルタイ
ムＲＴ‐ＰＣＲ、ＰＣＲアレイ、遺伝子アレイ、細胞を用いるリポーターアッセイなどを
使用して、タンパク質及び遺伝子発現のうち少なくともいずれかのレベルでも検出されう
る。いくつかの実施形態では、そのようなアッセイの感度（ｓｅｎｓｉｔｉｔｙ）は少な
くとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％であるか又は３０％より高い。いく
つかの実施形態では、変調は、表面プラズモン共鳴技術を適用する方法に準じて測定され
てもよい。
【００４１】
いくつかの実施形態では、変調は、生体応答の検出、及び細胞シグナル伝達カスケード
におけるタンパク質修飾のような細胞シグナル伝達事象に起因するタンパク質修飾の検出
のうち少なくともいずれかによって測定されうる。そのような修飾には、限定するもので
はないがタンパク質のリン酸化、タンパク質の脱リン酸化（ｄｅｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａ
ｔｏｉｎ）、タンパク質のユビキチン化、タンパク質分解、タンパク質開裂、タンパク質
の局在化及びタンパク質の誤局在が挙げられる。
【００４２】
ＴＧＦ‐βファミリーメンバーのシグナル伝達の場合、ＳＭＡＤタンパク質のリン酸化
又は下流遺伝子の転写活性化が検出されうる。
１つの実施形態では、検出方法は、リン酸ＳＭＡＤに対する抗体の使用とその後の免疫
ペルオキシダーゼに基づいた結合抗体の視覚化を含みうる。別例として、遺伝子発現の誘
導が、ＧＦＰ又はルシフェラーゼの発現を駆動するＴＧＦ‐β誘導型プロモータを使用し
て単層細胞培養物又は組織切片において検出されてもよい。上記に開示された方法は過去
の出版物に記載されており、該出版物には、ワング（Ｗａｎｇ）、Ｒ．ら、「ＧＡＲＰは
ＴＧＦβの生物学的利用能及び活性化を調節する（ＧＡＲＰ  ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  ｔｈ
ｅ  ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ  ａｎｄ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＴＧＦβ
）」、モレキュラー・バイオロジー・オブ・ザ・セル（Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  Ｃｅｌｌ）、
２０１２年３月、第２３巻、第６号、ｐ．１１２９−３９；アベ（Ａｂｅ）、Ｍ．ら、「
プラスミノーゲンアクチベータインヒビター１プロモータ‐ルシフェラーゼ構築物でトラ
ンスフェクトされた細胞を用いる形質転換成長因子‐βのアッセイ」、アナリティカル・
バイオケミストリー（Ａｎａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ）、１９９４年２月１日、第２１６巻、
第２号、ｐ．２７６−８４；米国特許第７０１５９０６号；同第５９６７９７９号；同第
７８６３５６９号；同第７２９７９６１号；同第７７３８１０７号；同第６７８４９９９
号及び同第７３５８０５６号明細書が含まれ、これらはいずれも全体が参照によって本願
に組込まれる。
【００４３】
〔成長因子指向性作用薬：抗体〕
ＧＤＡは抗体又はそのフラグメントを含んでなることができる。本明細書中で使用され
るように、用語「抗体」は最も広い意味で用いられ、かつ具体的には様々な実施形態、例
えば、限定するものではないが、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性
抗体（例えば少なくとも２つの完全な抗体から形成された二重特異性抗体）、及び所望の
生物活性を示す限りはダイアボディのような抗体フラグメントに及ぶ。抗体は元来アミノ
酸に基づいた分子であるが、糖部分などを用いた１以上の修飾をさらに含んでなることも
できる。
【００４４】
「抗体フラグメント」は、完全な抗体の一部分を含んでなり、好ましくは該抗体の抗原
結合領域を含んでなる。抗体フラグメントの例には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２
、及びＦｖフラグメント；ダイアボディ；線状（ｌｉｎｅａｒ）抗体；一本鎖抗体分子；
並びに抗体フラグメントから形成された多重特異性抗体が挙げられる。抗体をパパイン消
化すると、それぞれ単一の抗原結合部位を備えた「Ｆａｂ」フラグメントと呼ばれる２つ
の同一の抗原結合性フラグメントが生じる。さらに、残りの「Ｆｃ」フラグメントも生じ
るが、この名称は該フラグメントが容易に結晶化する能力を反映している。ペプシン処理
では、２つの抗原結合部位を有しておりかつなおも抗原を架橋する能力を有するＦ（ａｂ
’）２フラグメントが生じる。ＧＤＡは、これらのフラグメントのうち１以上を含んでな
ることができる。本明細書中の目的については、「抗体」は重鎖及び軽鎖可変領域並びに
Ｆｃ領域を含んでなることができる。
【００４５】
「未変性の抗体」は通常、２個の同一の軽（Ｌ）鎖及び２個の同一の重（Ｈ）鎖で構成
されている約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体の糖タンパク質である。軽鎖はそれ
ぞれ１個の共有結合のジスルフィド結合で重鎖に連結されており、ジスルフィド結合の数
は種々の免疫グロブリンアイソタイプの重鎖の間では様々である。重鎖及び軽鎖はそれぞ
れ、規則的に間隔を置いて鎖内ジスルフィド架橋も有している。重鎖はそれぞれ一端に可
変領域（ＶＨ）を有し、該可変領域にいくつかの定常領域が後続する。軽鎖はそれぞれ一
端に可変領域と（ＶＬ）、他端に定常領域とを有しており；軽鎖の定常領域は重鎖の第１
の定常領域と並んでおり、軽鎖の可変領域は重鎖の可変領域と並んでいる。
【００４６】
本明細書中で使用されるように、用語「可変領域」は、抗体間で配列が大幅に異なり、
かつ各特定の抗体の特定の抗原についての該抗体の結合及び特異性において用いられる、
特異的な抗体領域を指す。本明細書中で使用されるように、用語「Ｆｖ」は、完全な抗原
認識及び抗原結合の部位を包含する抗体フラグメントを指す。この領域は、非共有結合に
より緊密に関連した１個の重鎖可変領域と１個の軽鎖可変領域との二量体で構成されてい
る。
【００４７】
任意の脊椎動物の生物種由来の抗体「軽鎖」は、その定常領域のアミノ酸配列に基づい
て、カッパ及びラムダと呼ばれる２つの明白に区別できる種類のうちの一方に割り当てる
ことが可能である。抗体はその重鎖の定常領域のアミノ酸配列に応じて異なるクラスに割
り当てることが可能である。５つの主なクラスすなわちＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ
、及びＩｇＭの完全抗体が存在し、これらのうちいくつかはさらにサブクラス（アイソタ
イプ）に、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、及びＩｇＡ２に分
けられることもある。「一本鎖Ｆｖ」又は「ｓｃＦｖ」は、本明細書中で使用されるよう
に、ＶＨ及びＶＬ抗体領域の融合タンパク質であって、これらの領域がともに連結されて
一本のポリペプチド鎖となっているものを指す。いくつかの実施形態では、Ｆｖポリペプ
チドリンカーが、ｓｃＦｖが抗原結合のための所望の構造を形成することを可能にする。
【００４８】
用語「ダイアボディ」は、２個の抗原結合部位を備えた小さな抗体フラグメントであっ
て、同一のポリペプチド鎖の中に軽鎖可変領域ＶＬに接続された重鎖可変領域ＶＨを含ん
でなるフラグメントを指す。同一鎖上のこの２つの領域の間の対合が可能となるには短す
ぎるリンカーを使用することにより、これらの領域は、強制的に別の鎖の相補的な領域と
対合して２個の抗原結合部位を作出することになる。ダイアボディについては、例えば欧
州特許第４０４，０９７号明細書；国際公開第９３／１１１６１号；及びホリンガー（Ｈ
ｏｌｌｉｎｇｅ）ら、米国科学アカデミー紀要（Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  
Ｓｃｉ．）、１９９３年、第９０巻、ｐ．６４４４−６４４８に一層十分に記載されてお
り、前記各文献の内容はその全体が参照により本願に組み込まれる。
【００４９】
本明細書中で使用されるような用語「モノクローナル抗体」は、ほぼ均質な細胞（すな
わちクローン）の集団から得られた抗体を指している、すなわち集団を構成している個々
の抗体は、モノクローナル抗体の生産時に発生する可能性のある一般に微量存在するバリ
アントを除き、同一である、及び／又は、同一エピトープに結合する。典型的には様々な
決定基（エピトープ）に対する様々な抗体を含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に
、モノクローナル抗体はそれぞれ抗原上の単一の決定基に対して指向性である。
【００５０】
「モノクローナル」という修飾語は、ほぼ均質な抗体集団から得られるものとしての抗
体の形質を示し、任意の特定の方法による抗体の生産を要するものとして解釈してはなら
ない。本明細書中のモノクローナル抗体には、「キメラ」抗体（免疫グロブリン）であっ
て、重鎖及び軽鎖のうち少なくともいずれかの一部分が、特定の生物種に由来するか又は
特定の抗体のクラス若しくはサブクラスに属している抗体の中の対応する配列と同一又は
相同である一方、鎖の残部が、別の生物種に由来するか又は別の抗体のクラス若しくはサ
ブクラスに属している抗体の中の対応する配列と同一又は相同である抗体、及びそのよう
な抗体のフラグメントが含まれる。
【００５１】
ヒト以外の（例えばネズミ科動物の）抗体の「ヒト化」形態は、最小限の、ヒト以外の
免疫グロブリンに由来する配列を含有するキメラ抗体である。ほとんどの場合、ヒト化抗
体は、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）であって、レシピエントの抗体の超可変
領域の残基が、所望の特異性、親和性、及び能力を有するマウス、ラット、ラビット、又
はヒト以外の霊長類のようなヒト以外の生物種の抗体（ドナー抗体）の超可変領域からの
残基に置き換えられているものである。
【００５２】
用語「超可変領域」は、抗体に関して本明細書中で使用される場合、抗原結合を担うア
ミノ酸残基を含んでなる、抗体の抗原結合ドメイン内の領域を指す。超可変領域内に存在
するアミノ酸は、相補性決定領域（ＣＤＲ）の構造を決定する。本明細書中で使用される
ように、「ＣＤＲ」は、抗体の領域であって該抗体の標的抗原又はエピトープにコンプリ
メンタリーな（ｃｏｍｐｌｉｍｅｎｔａｒｙ）構造を含んでなる領域を指す。
【００５３】
いくつかの実施形態では、本発明のＧＤＡは抗体ミメティックであってもよい。用語「
抗体ミメティック」は、抗体の機能又は効果を模倣し、その分子標的に特異的かつ高い親
和性をもって結合する任意の分子を指す（ｒｅｆｅｒｅｓ）。いくつかの実施形態では、
抗体ミメティックは、タンパク質スカフォールドとしてフィブロネクチンのタイプＩＩＩ
ドメイン（Ｆｎ３）を組み込むように設計された、モノボディであってもよい（米国特許
第６，６７３，９０１号；同第６，３４８，５８４号明細書）。いくつかの実施形態では
、抗体ミメティックは、当分野で既知のもの、例えば、限定するものではないがアフィボ
ディ分子、アフィリン（ａｆｆｉｌｉｎ）、アフィチン（ａｆｆｉｔｉｎ）、アンチカリ
ン（ａｎｔｉｃａｌｉｎ）、アビマー（ａｖｉｍｅｒ）、ダルピン（ＤＡＲＰｉｎ）、フ
ィノマー（Ｆｙｎｏｍｅｒ）及びクニッツ（Ｋｕｎｉｔｚ）並びにドメインペプチドであ
ってよい。他の実施形態では、抗体ミメティックは１以上の非ペプチド領域を備えてもよ
い。
【００５４】
本明細書中で使用されるように、用語「抗体バリアント」は、構造及び機能のうち少な
くともいずれかにおいて抗体に類似している生体分子であって、未変性の抗体と比較して
そのアミノ酸配列、組成又は構造に何らかの相違を含んでなるものを指す。
【００５５】
抗体の調製は、モノクローナル抗体であれポリクローナル抗体であれ、当分野において
既知である。抗体の生産のための技法は当分野において周知であり、例えば、ハーロー（
Ｈａｒｌｏｗ）及びレーン（Ｌａｎｅ）、「抗体、実験の手引き（Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ
，  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ）」、コールド・スプリング・ハーバー研
究所出版（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ
）、１９８８年、並びにハーロー（Ｈａｒｌｏｗ）及びレーン（Ｌａｎｅ）、「抗体の使
用：実験の手引き（Ｕｓｉｎｇ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍ
ａｎｕａｌ）」、コールド・スプリング・ハーバー研究所出版、１９９９年に記載されて
いる。
【００５６】
１つの実施形態では、抗体、抗体フラグメント、その上述のようなバリアント又は誘導
体を含んでなるＧＤＡは、ＧＰＣ、ＧＰＣ変調因子又はＥＣＣＭと特異的に免疫反応性で
ある。好ましい実施形態では、抗体又は抗体フラグメントを含んでなるＧＤＡは、ＴＧＦ
‐βのＧＰＣ又はＴＧＦ‐β成長因子と特異的に免疫反応性である。抗体又は抗体のフラ
グメントを含んでなるＧＤＡはさらに、ＴＧＦ‐βファミリーメンバーのＧＰＣ、ＴＧＦ
‐βファミリーメンバー、Ｗｎｔシグナル伝達の構成要素又はＮｏｔｃｈシグナル伝達の
構成要素の標的部位に結合することもできる。
【００５７】
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、受容体、天然のアンタゴニスト、又は成長
因子細胞シグナル伝達機構のその他の構成要素に免疫反応性であってもよい。
〔成長因子指向性作用薬（ＧＤＡ）：抗体、特性解析〕
本発明の抗体は、該抗体の標的分子、該抗体を生成するために使用される抗原、該抗体
の（アゴニスト又はアンタゴニストのいずれとしてであれ）機能、及び該抗体が機能する
細胞ニッチ、によって特性解析がなされうる。
【００５８】
本発明のＧＤＡ抗体は、放出（アゴニスト）抗体又は阻害（アンタゴニスト）抗体とし
て機能しうる。本明細書中で使用されるように、用語「放出抗体」は、ＧＰＣ、細胞、ニ
ッチ、天然の貯蔵場所又は任意の他の成長因子隔離部位へと抗体が導入された際に、活性
型及び遊離型のうち少なくともいずれかの成長因子の、不活性型及び隔離型のうち少なく
ともいずれかの成長因子に対する比率を増大させる抗体を指す。この状況においては、放
出抗体はアゴニストとしての特性を有しうる。本明細書中で使用されるように、「天然の
貯蔵場所」とは、レベルの上昇した生体分子又はイオンが保管される、細胞、組織又は器
官内の場所である。例えば、細胞外マトリックスは１以上の成長因子のための天然の貯蔵
場所としての役割を果たしうる。
【００５９】
放出に必要な接触は、成長因子の放出のための、ＧＰＣ若しくはその構成要素と、又は
細胞マトリックス若しくはフィブリリンのような細胞構造との、抗体の直接又は間接の接
触として定義することが可能である。成長因子の少なくとも５％、１０％、２０％、３０
％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％又はそれ以上の放出は、ＧＤＡ抗
体の特性を放出抗体であるとするのに十分である。当然ながら、ＧＤＡ抗体の投与後の成
長因子の放出は局所的な場合があり、かつ長期間にわたって生じる場合もあり、かつ放出
のピーク又は急増を含む場合もある。本発明のＧＤＡ抗体は、数分間、数時間、数日又は
それ以上にわたって成長因子を放出するように作用しうる。
【００６０】
放出プロファイルは、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいて接触の約４時間〜約７日間以内に、又は
ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいてより短期間に、初期のピーク若しくは噴出を有しうる。例えば
、初期のピーク又は噴出は、約４時間〜約５時間、又は約４時間〜約６時間、又は約４時
間〜約７時間、又は約４時間〜約８時間、又は約４時間〜約９時間、又は約４時間〜約１
０時間、又は約４時間〜約１１時間、又は約４時間〜約１２時間、又は約４時間〜約２４
時間、又は約４時間〜約３６時間、又は約４時間〜約４８時間、又は約１日〜約７日、又
は約１日〜約２日、又は約１日〜約３日、又は約１日〜約４日、又は約４日〜約５日、又
は約４日〜約６日、又は約４日〜約７日に生じうる。ＧＤＡは、存在する成長因子の５〜
１００％の放出を刺激しうる。例えば、成長因子放出の割合（％）は、約５％〜約１０％
、又は約５％〜約１５％、又は約５％〜約２０％、又は約５％〜約２５％、又は約１０％
〜約３０％、又は約１０％〜約４０％、又は約１０％〜約５０％、又は約１０％〜約６０
％、又は約２０％〜約７０％、又は約２０％〜約８０％、又は約４０％〜約９０％、又は
約４０％〜約１００％であってよい。
【００６１】
本明細書中で使用されるように、用語「阻害抗体」又は「安定化抗体」は、１以上のＧ
ＰＣ、細胞、ニッチ、天然の貯蔵場所及び任意の他の成長因子隔離部位のうち少なくとも
いずれかへと抗体が導入された際に、活性型及び遊離型のうち少なくともいずれかの成長
因子の、不活性型及び隔離型のうち少なくともいずれかの成長因子に対する比率を減少さ
せる抗体を指す。この状況においては、抗体はアンタゴニストとしての特性を有しうる。
本明細書中で使用されるように、「アンタゴニスト」は、別のものの生理学的作用を妨害
又は阻害するものである。アンタゴニスト作用は下流へのシグナル伝達の刺激又は活性化
をもたらす場合すらあり、従ってアンタゴナイズされている経路とは別個の、別経路に関
してアゴニスト的に作用することもある。経路は相互に関係しており（ｉｎｔｅｒｅｌａ
ｔｅｄ）、したがって、１つの非限定的な例において、ＴＧＦ‐βアンタゴニストはＢＭ
Ｐアゴニストとして作用することも、及びその逆に作用することも考えられる。本明細書
中で使用されるように、「下流」とは、ＧＤＡによる作用、結合又は標的化の後に起こる
任意のシグナル伝達又は細胞の事象を意味する。
【００６２】
阻害又は安定化に必要な接触は、成長因子の放出が阻害される、抗体とＧＰＣ若しくは
その構成要素との間の、又は細胞マトリックス若しくはフィブリリンのような細胞構造と
の、直接又は間接の接触であってよい。成長因子の少なくとも５％、１０％、２０％、３
０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％又はそれ以上の放出の阻害は、
ＧＤＡ抗体の特性を阻害又は安定化作用を有するものとするのに十分である。阻害ＧＤＡ
抗体はＧＰＣを安定化して該ＧＰＣをヘテロ二量体として捕捉することができる。
【００６３】
当然ながら、ＧＤＡ抗体との接触後の成長因子放出の阻害は局所的な場合があり、かつ
長期間にわたって生じる場合もあり、かつ放出のピーク、トラフ、又は急増を含む場合も
ある。ＧＰＣを安定化するように機能することもできる阻害抗体は、その放出速度論によ
って定義されうる。成長因子の放出及び対応する放出速度論は、局所的であっても、直接
測定されることも下流のシグナル伝達事象によって推測されることもできる。いくつかの
実施形態では、タンパク質若しくは核酸の濃度の変化、又は表現型による応答が、ＧＤＡ
の効果の指標となりうる。
【００６４】
ＧＤＡ抗体は、数分、数時間、又は数日にわたって成長因子の放出を阻害するように作
用することができる。阻害又は安定化のプロファイルは、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいて導入の
約４時間〜約７日以内、又はｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいてはより短期間に、初期のトラフを
有しうる。例えば、阻害又は安定化の初期のトラフは、約４時間〜約５時間、又は約４時
間〜約６時間、又は約４時間〜約７時間、又は約４時間〜約８時間、又は約４時間〜約９
時間、又は約４時間〜約１０時間、又は約４時間〜約１１時間、又は約４時間〜約１２時
間、又は約４時間〜約２４時間、又は約４時間〜約３６時間、又は約４時間〜約４８時間
、又は約１日〜約７日、又は約１日〜約２日、又は約１日〜約３日、又は約１日〜約４日
、又は約４日〜約５日、又は約４日〜約６日、又は約４日〜約７日に生じうる。ＧＤＡの
導入は、存在する成長因子のうち５％〜１００％の阻害又は安定化をもたらしうる。例え
ば、成長因子の阻害又は安定化の割合（％）は、約５％〜約１０％、又は約５％〜約１５
％、又は約５％〜約２０％、又は約５％〜約２５％、又は約１０％〜約３０％、又は約１
０％〜約４０％、又は約１０％〜約５０％、又は約１０％〜約６０％、又は約２０％〜約
７０％、又は約２０％〜約８０％、又は約４０％〜約９０％、又は約４０％〜約１００％
であってよい。
【００６５】
抗体を含んでなるＧＤＡは、食作用、飲作用、又はＥＣＣＭにおけるアセンブリの阻害
による除去を通じて１以上のＧＰＣの局所濃度を減少させるように作用しうる。ＧＤＡの
導入は、所与のエリア中に存在する成長因子のうち５％〜１００％の除去をもたらしうる
。例えば、成長因子の除去の割合（％）は、約５％〜約１０％、又は約５％〜約１５％、
又は約５％〜約２０％、又は約５％〜約２５％、又は約１０％〜約３０％、又は約１０％
〜約４０％、又は約１０％〜約５０％、又は約１０％〜約６０％、又は約２０％〜約７０
％、又は約２０％〜約８０％、又は約４０％〜約９０％、又は約４０％〜約１００％であ
ってよい。
【００６６】
成長因子の放出、阻害又は除去の測定は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ又はｉｎ  ｖｉｖｏにおい
て、標準物、すなわち正常な生理的状態下での成長因子の自然な放出又は活性に関して行
われうる。測定はＧＤＡ抗体の有無に対しても行われうる。成長因子のレベル、放出、阻
害又は除去を測定するそのような方法には、組織、又は血清若しくは血液のような体液に
おける標準的な測定、例えばウエスタンブロット、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳ
Ａ）、活性アッセイ、リポーターアッセイ、ルシフェラーゼアッセイ、ポリメラーゼ連鎖
反応（ＰＣＲ）アレイ、遺伝子アレイ、リアルタイム逆転写酵素（ＲＴ）ＰＣＲなどが挙
げられる。
【００６７】
ＧＤＡ抗体は、ＧＰＣ若しくはその関連構造物上の、又はＧＰＣ若しくはその関連構造
物に沿った、任意のいくつかの場所に結合するか又はその場所と相互作用して、成長因子
シグナル伝達の増強又は阻害のいずれかをなすことができる。企図されるＧＤＡ抗体標的
部位には、ＧＰＣの機能を変更、増強又は阻害するためのあらゆる可能な部位が含まれる
。いくつかの実施形態では、そのような部位には、限定するものではないが、成長因子、
調節要素、ＧＰＣ、ＧＰＣ変調因子、成長因子を受け取る細胞又は受容体、ＥＣＣＭ構成
要素、及び、先に挙げたもののうちいずれかの領域又は部分を組み合わせることにより形
成されたエピトープ、のうち少なくともいずれかの上又は内部の部位が挙げられる。
【００６８】
本発明のＧＤＡ化合物は１以上の標的部位への結合（可逆的又は不可逆的）を介してそ
の作用を発揮する。理論に束縛されることは望ましくないが、抗体の結合部位に相当する
標的部位はタンパク質又はタンパク質のドメイン若しくは領域によって形成されることが
最も多い。しかしながら、標的部位には、糖、脂質、核酸分子又は任意の他の形態の結合
性エピトープのような生体分子も含まれうる。
【００６９】
本発明のある種類のアンタゴニスト抗体は、ＴＧＦ‐βのプロドメインに結合し、例え
ばＲＧＤ部位の封鎖によって、又は構造を安定化することによって、インテグリンを介し
た放出に抗して安定化するということになる。そのような抗体は、プロドメイン中の突然
変異が過度のＴＧＦ‐β活性化を引き起こしているカムラチ・エンゲルマン病の治療に有
用であろう。そのような抗体はさらに、フィブリリン又はＬＴＢＰ中の突然変異がＴＧＦ
‐β及びＢＭＰの活性化を変化させるマルファン症候群においても有用であろう。
【００７０】
いくつかの実施形態では、ＧＤＡ抗体は、ＬＴＢＰと関連したＧＰＣからのＴＧＦ‐β
の放出を選択的に阻害するが、ＧＡＲＰと関連したものでは阻害しない。そのような抗体
は抗線維症治療薬として機能するが、炎症性の作用は最小限しか示さない。１つの実施形
態では、ＧＰＣ‐ＬＴＢＰ複合体結合性の抗体はＧＰＣ‐ＧＡＲＰ複合体には結合しない
。そのような抗体は、特定のＬＴＢＰ又はＧＰＣに対して特異的ではないが、ＧＡＲＰ結
合部位の近く又は該部位にオーバーラップしてＧＰＣに結合し、結合がＧＡＲＰによって
妨害されるがＬＴＢＰによっては妨害されないようになっている。１つの実施形態では、
ＧＡＲＰとプロＴＧＦ‐βとの間の組み合わせエピトープに選択的に結合する抗体が提供
される。１つの実施形態では、ＧＡＲＰ‐プロＴＧＦ‐β複合体からのＴＧＦ‐βの放出
を誘導するＧＤＡ抗体が提供される。そのような抗体は、ＧＡＲＰ‐プロＴＧＦ‐β三成
分複合体、ＧＡＲＰ単独、又はプロドメイン単独ではなく、ＧＡＲＰプロドメイン二成分
複合体に結合する該抗体の能力で選択される。
【００７１】
別例として、又は追加として、本発明のＧＤＡ抗体は、ＧＰＣの内在化を誘導するリガ
ンドミメティックとして機能する場合もある。該抗体は従来とは異なる積載物担体として
作用し、結合又はコンジュゲートした薬物積載物を特定のＧＰＣ又はＧＰＣ関係部位へ送
達又は輸送するように作用することができる。
【００７２】
本発明の抗体によって誘発された変化は、細胞内にネオモルフィックな変化をもたらす
場合がある。本明細書中で使用されるように、「ネオモルフィックな変化」とは、新しい
、又は異なった変化又は変更である。例えば、抗体の標的であるＧＰＣとは通常は関連し
ていない成長因子の放出又は安定化を誘発する抗体はネオモルフィックな抗体となり、か
つ放出はネオモルフィックな変化ということになろう。
【００７３】
いくつかの実施形態では、本発明の化合物又は作用薬はタンパク質分解事象を変更又は
制御するように作用する。そのような事象は細胞内事象でも細胞外事象でもよい。これら
には、フューリン開裂又は他のタンパク質分解性プロセシング事象の変更が含まれうる。
そのような事象は、成長因子シグナル伝達分子のタンパク質分解性プロセシング又は成長
因子シグナル伝達分子によって開始される下流のカスケードを含んでなることができる。
【００７４】
ＧＤＡ抗体は、成長因子（リガンド）又はその受容体の二量体化又は多量体化を誘導又
は阻害する場合もある。そのような作用は、単量体形態、二量体形態又多量体形態の安定
化によるものであってよい。さらに、二量体複合体又は多量体複合体の崩壊によるもので
あってもよい。
【００７５】
ＧＤＡ抗体は、受容体群若しくはＧＰＣのいずれか又は他のシグナル伝達分子対を含ん
でなる、単量体ユニットのホモ二量体又はヘテロ二量体に作用する場合もある。
本発明の抗体はその標的に結合する前に細胞内へと内在化せしめられる場合もある。内
在化すると、該抗体は、シグナル伝達事象の増大若しくは減少、１以上のＧＰＣの放出若
しくは安定化、成長因子放出の阻止若しくは促進、又は１以上の細胞ニッチの変更を為す
ように作用しうる。
【００７６】
本発明のＧＤＡ化合物及び組成物はさらに、ＧＰＣ中における成長因子又は細胞外マト
リックス／細胞マトリックス（ＥＣＣＭ）中におけるＧＰＣの滞留時間を変更する場合も
ある。この変更は不可逆的局在化又は一時的局在化をもたらすことができる。
【００７７】
〔成長因子指向性作用薬：抗原〕
ＴＧＦ‐βファミリーのメンバーは全て共通の三次元構造を備えたプロドメインを有す
ることが最近理解されたが、プロドメインの配列及び従って構造は、極めて相違している
（シャイ（Ｓｈｉ）、Ｍ．ら、「潜在型ＴＧＦ‐βの構造及び活性化（Ｌａｔｅｎｔ  Ｔ
ＧＦ−β  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ａｎｄ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ．）」、ネイチャー（Ｎ
ａｔｕｒｅ）、２０１１年６月１５日；第４７４巻、第７３５１号、ｐ．３４３−９）。
この相違は、細胞外環境での成長因子の標的化及び放出の調節におけるプロドメインの卓
越した特殊性をコードしている。
【００７８】
ＴＧＦ‐βファミリーの中にはサブファミリーがあり；これらは図３に示される主要な
枝に相当しているが、同図において相違は枝の長さに比例している。ヒトとマウスとの間
では、ＴＧＦ‐β１、２及び３のプロドメインは８５、９６、及び９７％同一であり；一
方で成長因子ドメインは９９、９７、及び１００％同一である。よって、プロドメイン及
び成長因子ドメインの両方が生物種を越えて高度に保存されている。対照的に、ヒトのＴ
ＧＦ‐β１／ＴＧＦ‐β２、ＴＧＦ‐β１／ＴＧＦ‐β３、及びＴＧＦ‐β２／ＴＧＦ‐
β３では、プロドメインは３４、３３、及び４７％同一であり；一方で成熟型成長因子ド
メインは７１、７７、及び７９％同一である。よって、ＴＧＦ‐βサブファミリー内でさ
えプロドメインはあまり保存されていないが、同一のタイプＩ及びＩＩ受容体に結合する
成長因子ドメインははるかによく保存されている。ＴＧＦ‐β１、２及び３の成長因子ド
メインの間の７１〜７９％という高度な保存を反映して、ヒトのＴＧＦ‐β１、２及び３
の間で交差反応性であるが特異的ではない抗体を作ることは可能であった。これらの抗体
は臨床試験で使用されてきた。
【００７９】
３種のＴＧＦ‐βプロドメインの間の大きな違いは、該ドメインを潜在期から放出する
生物学的機構の相違の反映である。例えば、ＴＧＦ‐β１及びＴＧＦ‐β３はいずれもそ
のプロドメイン中に自身の活性化に必要なＲＧＤ配列を有しており、活性化はインテグリ
ンαＶβ６及びαＶβ８によってプロドメインに与えられた力の結果として生じる。ＴＧ
Ｆ‐β２はそのようなＲＧＤ配列を持たず、その活性化はプロテアーゼを含む別個の機構
を必要としている。
【００８０】
他のサブファミリー内のように、ＴＧＦ‐βサブファミリー内にはいくつかの微妙な違
いもある。例えば、ＴＧＦ‐β１、２及び３は全く同じタイプＩ及びタイプＩＩ受容体に
結合するが、ＴＧＦ‐β２は親和性が著しく低く；よってそのシグナル伝達は、β多糖類
として知られるコレセプターに独自に依存している。ＴＧＦ‐β２はさらに、プロドメイ
ン中の短い挿入部において異なる２個のスプライスバリアントを有することにより、ＴＧ
Ｆ‐β１及び３とは異なっている。１、２、及び３の間でヘテロ二量体も形成しうる。
【００８１】
ＴＧＦ‐βファミリーにおけるヒト及びマウスのオーソログの間の高い配列同一性は、
抗体の誘導にとって重要な意味合いを持つ。生物種を越えた免疫処置によりＴＧＦ‐β２
及びＴＧＦ‐β３に特異的な抗体を作製することは、上記に言及された９６〜９７％の同
一性とも一致して全く困難であった。更に、ＴＧＦ‐β１に対する抗体はほとんどなく、
該抗体の生物学的特性は十分には解析されていない。これに加えてヒト及びマウスのＴＧ
Ｆ‐β１の間の相違は配列全体にわたって均等に分布せずに一定の構造ループ（β１‐β
２、β３‐β４、及びα４‐β７ループ、並びにβ８‐β９ループからβ９‐β１０ルー
プのＲＧＤ配列に先行する部分までの領域）に限定され、かつ抗体の開発はほとんど不可
能である。
【００８２】
本発明は、相違のあるプロドメインのポリペプチド及びペプチドの配列を、全体として
又は部分的に、本明細書中に記載された方法を使用してＧＤＡを設計及び開発するための
抗原として利用する。
【００８３】
本明細書中で使用されるように、「抗原」とは、生物体において免疫応答を誘導又は喚
起する物質である。免疫応答は、異物の存在に対する生物体の細胞、組織及び器官のうち
少なくともいずれかの反応という特性を有する。そのような免疫応答は、典型的には生物
体による異物（例えば抗原又は抗原の一部）に対する１以上の抗体の産生をもたらす。本
発明の抗原は、ペプチド、ポリペプチド、融合タンパク質、又は先述のうち任意のものを
含んでなるものであってよく、１以上の別個のアジュバント又は異種タンパク質にコンジ
ュゲート又は複合体化されてもよい。
【００８４】
本明細書中で使用されるように、「アジュバント」とは、他の作用薬の効果を修飾する
薬理学的又は免疫学的作用薬である。本発明によるアジュバントには、限定するものでは
ないが、化学組成物、生体分子、治療薬、及び治療レジメンのうち少なくともいずれかが
含まれうる。
【００８５】
いくつかの実施形態では、本発明の抗原は、ＴＧＦ‐βファミリーメンバーのプロドメ
インの少なくとも一部、及び任意選択で介在又は隣接している相同又は非相同の配列の１
以上の領域を含んでなる。本明細書中で使用されるように、「プロドメイン」とは、分子
の領域又は区分であって別のものに先行するものを意味する。多くの場合プロドメインは
より大きなタンパク質の一部として合成され、構造的役割から機能的役割までいくつもの
役割を果たして、結合部位、保護パートナー、シグナル伝達分子、輸送主体、安定増強剤
などとして作用する。ＴＧＦ‐βファミリーメンバーのプロドメインは本発明の独自の抗
原としての役割を果たす。大きさは２００〜４５０アミノ酸の範囲にあり、プロドメイン
全体又はその一部分が抗原として使用されうる。
【００８６】
本明細書中で使用されるように、プロドメイン由来の抗原は、配列番号１〜３７から選
択された少なくとも５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５
、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１０５、１１０、１１５
、１２０、１２５、１３０、１３５、１４０、１４５、１５０、１５５、１６０、１６５
、１７０、１７５、１８０、１８５、１９０、１９５、２００、２５０、３００、３５０
、４００、４５０個又はそれ以上のアミノ酸を含んでなることができる。
【００８７】
抗原の構成要素として使用されうる介在配列には相同又は非相同な配列が含まれうる。
これらは他のプロドメイン又は非プロドメインタンパク質配列から選択されうる。
抗原の構成要素として使用されうる隣接配列には相同又は非相同な配列が含まれうる。
これらは他のプロドメイン又は非プロドメインタンパク質配列から選択されうる。
【００８８】
実例となるＴＧＦ‐βファミリーのプロタンパク質（すなわち分泌シグナル配列を除去
した後のタンパク質）のリストが表１に示されている。プロタンパク質はプロドメイン及
び成長因子を包含しており、かつプロドメイン及び成長因子の前駆体である。表中に示さ
れているのは、生じるＴＧＦ‐βファミリーメンバーの名称及びプロタンパク質の配列で
ある。さらに「太字」かつ「下線」で識別されているのはフューリン開裂部位である。フ
ューリン開裂に際し、結果として生じるプロドメインはこの部位を保持しているが、成熟
型成長因子はフューリン開裂部位の後を始点とする。レフティ１及びレフティ２は開裂さ
れないことが分かる。いくつかのプロドメインはフューリン（ＰＡＣＥ）酵素によってさ
らなる部位で、またトロイドプロテアーゼによって、開裂されうることが分かる。いくつ
かの実施形態では、プロタンパク質は最初のフューリン開裂部位（最初の部位はＮ末端に
最も近い部位である）において開裂されうる。いくつかの実施形態では、プロタンパク質
は最初のフューリン開裂部位以外のフューリン開裂部位において開裂されうる。
【００８９】
【表１】
2019163317.tif 000003
2019163317.tif 000004
2019163317.tif 000005
2019163317.tif 000006
2019163317.tif 000007
2019163317.tif 000008
本発明によれば、ＧＰＣ全体、すなわち表１に列挙されたプロタンパク質が、抗原とし
て使用されてもよい。別例として、プロドメインの領域が使用されてもよい。いくつかの
実施形態では、フューリン開裂部位での開裂後に生成されるフラグメントが使用されても
よい。いくつかの実施形態では、１以上のフューリン開裂部位を欠いているバリアントが
抗原として使用されてもよい。いくつかの実施形態では、突然変異したフューリン開裂部
位を含んでなるバリアントが抗原として使用されてもよい。いくつかの実施形態では、α
‐１ヘリックス領域を含んでなる領域が使用されてもよい。表２は、各々のプロドメイン
のα‐１ヘリックス領域を列挙している。いくつかの実施形態では、前述のもののうちい
ずれかの突然変異体が抗原として使用されてもよい。そのような突然変異体には、ＥＣＣ
Ｍ構成要素、例えば、限定するものではないがＬＴＢＰ及びＧＡＲＰに、結合することが
できないシステイン突然変異体が含まれうる。
【００９０】
【表２】
2019163317.tif 000009
本発明の抗体、及び該抗体を生成するために使用される抗原は、主としてアミノ酸に基
づいた分子である。これらの分子は「ペプチド」、「ポリペプチド」又は「タンパク質」
であってよい。
【００９１】
本明細書中で使用されるように、用語「ペプチド」は、２〜５０個又はそれ以上のアミ
ノ酸を有している、アミノ酸に基づいた分子を指す。より小さなペプチドには特別な指示
語が当てはまり、２アミノ酸の分子を指すのは「ジペプチド」、３アミノ酸の分子を指す
のは「トリペプチド」である。５０個を超える連続したアミノ酸を有する、アミノ酸に基
づいた分子は、ポリペプチド又はタンパク質とみなされる。
【００９２】
「アミノ酸」という用語は、天然に存在する全てのＬ‐α‐アミノ酸に加えて天然に存
在しないアミノ酸をも指している。アミノ酸は、以下のような１文字又は３文字の表記す
なわち：アスパラギン酸（Ａｓｐ：Ｄ）、イソロイシン（Ｉｌｅ：Ｉ）、トレオニン（Ｔ
ｈｒ：Ｔ）、ロイシン（Ｌｅｕ：Ｌ）、セリン（Ｓｅｒ：Ｓ）、チロシン（Ｔｙｒ：Ｙ）
、グルタミン酸（Ｇｌｕ：Ｅ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ：Ｆ）、プロリン（Ｐｒｏ：
Ｐ）、ヒスチジン（Ｈｉｓ：Ｈ）、グリシン（Ｇｌｙ：Ｇ）、リジン（Ｌｙｓ：Ｋ）、ア
ラニン（Ａｌａ：Ａ）、アルギニン（Ａｒｇ：Ｒ）、システイン（Ｃｙｓ：Ｃ）、トリプ
トファン（Ｔｒｐ：Ｗ）、バリン（Ｖａｌ：Ｖ）、グルタミン（Ｇｌｎ：Ｑ）メチオニン
（Ｍｅｔ：Ｍ）、アスパラギン（Ａｓｎ：Ｎ）、のいずれかによって識別され、ここでは
それぞれアミノ酸が最初に、続いて括弧で囲んで３文字及び１文字の記号が、列挙されて
いる。
【００９３】
〔成長因子指向性作用薬（ＧＤＡ）：変形形態〕
本発明のＧＤＡは、ポリペプチド全体、複数のポリペプチド又はポリペプチドのフラグ
メントであって、独立に１以上の核酸、複数の核酸、核酸のフラグメント又は前述のうち
いずれかのバリアントによってコードされうるものとして存在しうる。本明細書中で使用
されるように、「ポリペプチド」は、ほとんどの場合はペプチド結合によってともに連結
された、アミノ酸残基（天然又は非天然）のポリマーを意味する。該用語は、本明細書中
で使用されるように、任意の大きさ、構造、又は機能のタンパク質、ポリペプチド、及び
ペプチドを指す。いくつかの実例では、コードされるポリペプチドは約５０アミノ酸より
小さく、よって該ポリペプチドはペプチドと呼ばれる。ポリペプチドがペプチドである場
合、少なくとも約２、３、４個、又は少なくとも５個のアミノ酸残基の長さとなるであろ
う。よって、ポリペプチドには、遺伝子産物、天然に存在するポリペプチド、合成ポリペ
プチド、ホモログ、オーソログ、パラログ、フラグメント並びにその他先述のものの等価
物、バリアント及びアナログが含まれる。ポリペプチドは単一の分子であってもよいし、
二量体、三量体又は四量体のような多分子複合体であってもよい。それらはさらに単鎖又
は多重鎖のポリペプチドを含んでなることも可能であり、関連付け又は連結されていても
よい。ポリペプチドという用語はさらに、１以上のアミノ酸残基が対応する自然界のアミ
ノ酸の人工的化学類似物であるアミノ酸ポリマーにも適用されうる。
【００９４】
用語「ポリペプチドバリアント」は、未変性又は基準の配列とはアミノ酸配列が異なっ
ている分子を指す。アミノ酸配列のバリアントは、未変性又は基準の配列と比較して、ア
ミノ酸配列内のある部位に置換、欠失、及び挿入のうち少なくともいずれかを有しうる。
通常、バリアントは未変性又は基準の配列に対して少なくとも約５０％の同一性（相同性
）を有することになり、かつ好ましくは、バリアントは未変性又は基準の配列に対して少
なくとも約８０％、より好ましくは少なくとも約９０％同一（相同）となろう。
【００９５】
いくつかの実施形態では、「バリアント模倣体」が提供される。本明細書中で使用され
るように、用語「バリアント模倣体」は、活性化配列を模倣するであろう１以上のアミノ
酸を含有するものである。例えば、グルタミン酸は、ホスホロトレオニン及びホスホロセ
リンのうち少なくともいずれかの模倣体としての機能を果たしうる。別例として、バリア
ント模倣体は、失活をもたらすか、又は該模倣体を含有する不活性化産物を生じる場合も
あり、例えば、フェニルアラニンはチロシンの不活性化置換体として作用することが可能
であるし；アラニンはセリンの不活性化置換体として作用することができる。本発明のＧ
ＤＡのアミノ酸配列は、天然に存在するアミノ酸を含んでなることが可能であり、かつそ
れ自体はタンパク質、ペプチド、ポリペプチド、又はこれらのフラグメントであると考え
られる。別例として、ＧＤＡは天然又は非天然のアミノ酸を両方含んでなることもできる
。
【００９６】
用語「アミノ酸配列バリアント」は、未変性又は出発配列と比較してそのアミノ酸配列
中にいくつかの違いを備えた分子を指す。アミノ酸配列バリアントは、アミノ酸配列内の
ある部位に置換、欠失、及び挿入のうち少なくともいずれかを有しうる。「未変性」又は
「出発」配列は野生型の配列と混同されるべきではない。本明細書中で使用されるように
、未変性配列又は出発配列とは比較がなされる元の分子を指す相対的な用語である。「未
変性」又は「出発」配列又は分子は、野生型（自然界に見出される配列）に相当する場合
もあるが、野生型の配列である必要はない。
【００９７】
通常、バリアントは未変性の配列に対して少なくとも約７０％の相同性を有することに
なり、好ましくは、バリアントは未変性の配列に対して少なくとも約８０％、より好まし
くは少なくとも約９０％相同となろう。
【００９８】
「相同性」は、アミノ酸配列に適用されるように、候補アミノ酸配列及び第２の配列を
、最大の割合（％）の相同性を達成するように整列（アラインメント）させて必要ならば
ギャップを導入した後の、第２の配列のアミノ酸配列中の残基と同一な、候補アミノ酸配
列中の残基の割合（％）として定義される。アラインメントのための方法及びコンピュー
タプログラムは当分野において良く知られている。当然ながら、相同性は同一性（％）の
計算によって決まるが、その計算に導入されるギャップ及びペナルティにより値が異なる
場合もある。
【００９９】
「ホモログ」がアミノ酸配列に適用されるときに該用語によって意味されるのは、他の
生物種の対応する配列であって第２の生物種の第２の配列に対してほぼ同一である配列で
ある。
【０１００】
「アナログ」は、１以上のアミノ酸の変更（例えばアミノ酸残基の置換、付加又は欠失
であって親ポリペプチドの性質をなおも維持するもの）によって異なっているポリペプチ
ドバリアントを含むように意図されている。
【０１０１】
用語「誘導体」は用語「バリアント」と同義的に用いられ、基準の分子又は出発分子に
対して任意の方法で修飾又は変化が施された分子を指す。
本発明は、バリアント及び誘導体を含む、アミノ酸に基づいたいくつかの種類のＧＤＡ
について企図する。これらには、置換、挿入、欠失及び共有結合のバリアント及び誘導体
が含まれる。このように、本発明の範囲内に含まれるのは、置換、挿入及び付加のうち少
なくともいずれか、欠失並びに共有結合性の修飾を含有しているＧＤＡ分子である。例を
挙げると、配列タグ又はアミノ酸、例えば１以上のリジンなどが、本発明のペプチド配列
に（例えばＮ末端又はＣ末端に）付加されることが可能である。配列タグはペプチドの精
製又は局在化のために使用することが可能である。リジンは、ペプチド溶解度を上昇させ
るため、又はビオチン化を可能にするために使用可能である。別例として、ペプチド又は
タンパク質のアミノ酸配列のカルボキシ末端及びアミノ末端の領域にあるアミノ酸残基は
、任意選択で欠失せしめられて短縮型配列が提供されてもよい。ある種のアミノ酸（例え
ばＣ末端又はＮ末端の残基）は、例えば、可溶性であるか又は固体支持体に連結したより
大きな配列の一部としての配列の発現のような、配列の使用法に応じて選択的に欠失せし
められてもよい。
【０１０２】
「置換バリアント」とは、タンパク質を指している場合、未変性又は出発配列中の少な
くとも１つのアミノ酸残基が除去されており、かつその同じ部位のその場所に異なるアミ
ノ酸が挿入されているものである。該置換は、分子中の１つのアミノ酸だけが置換されて
いる単一置換であってもよいし、同じ分子中で２以上のアミノ酸が置換されている多重置
換であってもよい。
【０１０３】
本明細書中で使用されるように、用語「保存的アミノ酸置換」とは、配列中に通常存在
するアミノ酸の、大きさ、電荷又は極性が類似した異なるアミノ酸を用いた置換を指す。
保存的置換の例には、イソロイシン、バリン及びロイシンのような非極性（疎水性）残基
を別の非極性残基の代用とする置換が挙げられる。同様に、保存的置換の例には、１つの
極性（親水性）残基を別の残基の代用とする置換、例えばアルギニンとリジンとの間、グ
ルタミンとアスパラギンとの間、及びグリシンとセリンとの間の置換が挙げられる。加え
て、リジン、アルギニン若しくはヒスチジンのような塩基性残基の別のものとの置換、又
はアスパラギン酸若しくはグルタミン酸のような１つの酸性残基の別の酸性残基との置換
は、保存的置換のさらなる例である。非保存的置換の例には、イソロイシン、バリン、ロ
イシン、アラニン、メチオニンのような非極性（疎水性）アミノ酸残基の、システイン、
グルタミン、グルタミン酸又はリジンのような極性（親水性）残基との置換、及び極性残
基の非極性残基との置換が挙げられる。
【０１０４】
「挿入バリアント」とは、タンパク質を指している場合、未変性又は出発配列中の特定
部位のアミノ酸に直接隣接して挿入された１以上のアミノ酸を備えたものである。アミノ
酸に「直接隣接して」とは、該アミノ酸のαカルボキシ官能基又はαアミノ官能基のいず
れかに接続されていることを意味する。
【０１０５】
「欠失バリアント」とは、タンパク質を指している場合、未変性又は出発アミノ酸配列
中の１以上のアミノ酸が除去されたものである。通常、欠失バリアントは分子の特定の領
域の１以上のアミノ酸が欠失したものとなる。
【０１０６】
用語「誘導体」には、本明細書中で言及されるように、有機性のタンパク性又は非タン
パク性の誘導剤を用いた未変性又は出発タンパク質の修飾物、及び翻訳後修飾物が含まれ
る。共有結合性の修飾は、タンパク質の標的とされたアミノ酸残基を、選択された側鎖若
しくは末端残基と反応することが可能な有機性誘導剤と反応させることにより、又は選択
された組換え宿主細胞の中で機能する翻訳後修飾のメカニズムを利用することにより、従
来通りに導入される。結果として生じる共有結合性の誘導体は、生物学的活性のため、イ
ムノアッセイのため、又は組換え糖タンパク質のイムノアフィニティ精製用の抗タンパク
質抗体の調製のための、重要な残基の同定を目的とする計画において有用である。そのよ
うな修飾物は当分野の通常の技術内にあり、過度の実験作業を伴うことなく実施される。
【０１０７】
ある種の翻訳後修飾は、発現されたポリペプチドに対する組換え宿主細胞の作用の結果
である。グルタミニル残基及びアスパラギニル残基は翻訳後に脱アミド化されて対応する
グルタミル残基及びアスパルチル残基となることが多い。別例として、これらの残基は弱
酸性条件下で脱アミド化される。これらの残基のいずれの形態も本発明によって使用され
るタンパク質中に存在しうる。
【０１０８】
他の翻訳後修飾には、プロリン及びリジンのヒドロキシル化、セリル残基又はトレオニ
ル残基の水酸基のリン酸化、リジン、アルギニン及びヒスチジン側鎖のαアミノ基のメチ
ル化が含まれる（Ｔ．Ｅ．クライトン（Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ）、「タンパク質：構造及び
分子特性（Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐ
ｒｏｐｅｒｔｉｅｓ）」、米国サンフランシスコ、Ｗ．Ｈ．フリーマン社（Ｗ．Ｈ．  Ｆ
ｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏ．）、１９８３年、ｐ．７９−８６）。
【０１０９】
共有結合性誘導体は、具体的には本発明のタンパク質が非タンパク質性のポリマーに共
有結合している融合分子を含む。非タンパク質性のポリマーは通常、親水性の合成ポリマ
ー、すなわち自然界には本来見出されないポリマーである。しかしながら、自然界に存在
し、かつ組換え又はｉｎ  ｖｉｔｒｏの方法で生産されるポリマーは、自然界から単離さ
れるポリマーがそうであるように、有用である。親水性のポリビニルポリマー、例えばポ
リビニルアルコール及びポリビニルピロリドンは本発明の範囲内にある。特に有用なのは
、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコールのような（ｓｕｃｈ  ａ）、ポリ
ビニルアルキレンエーテルである。タンパク質は、様々な非タンパク質性のポリマー、例
えばポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール又はポリオキシアルキレンなど
に、米国特許第４，６４０，８３５号；同第４，４９６，６８９号；同第４，３０１，１
４４号；同第４，６７０，４１７号；同第４，７９１，１９２号又は同第４，１７９，３
３７号明細書に述べられた方法で連結されてもよい。
【０１１０】
「特徴」とは、タンパク質を指している場合、分子の個別のアミノ酸配列に基づいた構
成要素として定義される。本発明のタンパク質の特徴には、表面的徴候、局所的な立体配
座形状、折り畳み構造、ループ、半ループ、ドメイン、半ドメイン、部位、末端又はそれ
らの任意の組み合わせが挙げられる。
【０１１１】
タンパク質を指す場合に本明細書中で使用されるように、用語「表面的徴候」とは、タ
ンパク質のポリペプチドに基づいた構成要素であって最も外側の表面に現われているもの
を指す。
【０１１２】
タンパク質を指す場合に本明細書中で使用されるように、用語「局所的な立体配座形状
」とは、タンパク質のポリペプチドに基づいた構造的徴候であって該タンパク質の規定可
能な空間内にあるものを意味する。
【０１１３】
タンパク質を指す場合に本明細書中で使用されるように、用語「折り畳み構造」は、エ
ネルギーを最小化した際に結果として生じるアミノ酸配列の立体配座を意味する。折り畳
み構造はフォールディングプロセスの二次レベルで生じてもよいし三次レベルで生じても
よい。二次レベルの折り畳み構造の例にはβシート及びαヘリックスが含まれる。三次レ
ベルの折り畳み構造の例には、エネルギー的な力の凝集又は分離により形成されたドメイ
ン及び領域が含まれる。このようにして形成される領域には疎水性ポケット及び親水性ポ
ケットなどが挙げられる。
【０１１４】
本明細書中で使用されるように、タンパク質の立体配座に関するときの用語「ターン」
は、ペプチド又はポリペプチドの主鎖の方向を変更し、かつ１、２、３個又はそれ以上の
アミノ酸残基が関与しうる屈曲部を意味する。
【０１１５】
タンパク質を指す場合に本明細書中で使用されるように、用語「ループ」は、ペプチド
又はポリペプチドの主鎖の方向を逆転し、かつ４個以上のアミノ酸残基を含んでなる、ペ
プチド又はポリペプチドの構造的特徴を指す。オリバ（Ｏｌｉｖａ）らにより少なくとも
５種類のタンパク質ループが同定されている（ジャーナル・オブ・モレキュラー・バイオ
ロジー（Ｊ．  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ）、１９９７年、第２６６巻、第４号、ｐ．８１４−８
３０）。
【０１１６】
タンパク質を指す場合に本明細書中で使用されるように、用語「半ループ（ｈａｌｆ−
ｌｏｏｐ）」は、同定されたループの一部分であって由来元のループの少なくとも半数の
アミノ酸残基を有している部分を指す。当然ながら、ループは必ずしも偶数のアミノ酸残
基を含有するとは限らない。したがって、ループが奇数のアミノ酸を含有するか、又は奇
数のアミノ酸を含んでなると同定された場合、その奇数型ループの半ループは、該ループ
の整数の部分又はその次の整数の部分（ループ／２±０．５アミノ酸というアミノ酸の数
）を含んでなることになる。例えば、７アミノ酸のループであると同定されたループは、
３アミノ酸又は４アミノ酸（７／２＝３．５±０．５で３又は４となる）の半ループを生
じると考えられる。
【０１１７】
タンパク質を指す場合に本明細書中で使用されるように、用語「ドメイン」は、１以上
の同定可能な構造的又は機能的な特性又は性質（例えばタンパク質間相互作用のための部
位としての役割を果たす結合能力）を有しているポリペプチドのモチーフを指す。
【０１１８】
タンパク質を指す場合に本明細書中で使用されるように、用語「半ドメイン（ｈａｌｆ
−ｄｏｍａｉｎ）」は、同定されたドメインの一部分であって由来元のドメインの少なく
とも半数のアミノ酸残基を有している部分を意味する。当然ながら、ドメインは必ずしも
偶数のアミノ酸残基を含有するとは限らない。したがって、ドメインが奇数のアミノ酸を
含有するか、又は奇数のアミノ酸を含んでなると同定された場合、その奇数型ドメインの
半ドメインは、該ドメインの整数の部分又はその次の整数の部分（ドメイン／２±０．５
アミノ酸というアミノ酸の数）を含んでなることになる。例えば、７アミノ酸のドメイン
であると同定されたドメインは、３アミノ酸又は４アミノ酸（７／２＝３．５±０．５で
３又は４となる）の半ドメインを生じると考えられる。さらに当然のことながら、サブド
メインがドメイン内又は半ドメイン内で同定される場合もあり、これらのサブドメインは
、由来元のドメイン又は半ドメインにおいて同定された構造的又は機能的性質の全ては所
有していない。さらに当然のことながら、本明細書中のドメインの種類のうちいずれかを
構成するアミノ酸は、ポリペプチドの主鎖に沿って連続している必要はない（すなわち、
隣接していないアミノ酸が構造的に折り畳まれてドメイン、半ドメイン又はサブドメイン
を生じる場合もある）。
【０１１９】
タンパク質を指す場合に本明細書中で使用されるように、アミノ酸に基づいた実施形態
に関する用語「部位」は、「アミノ酸残基」及び「アミノ酸側鎖」と同義的に使用される
。部位とは、ペプチド又はポリペプチド内の位置であって、本発明のポリペプチド系分子
内で修飾、操作、変更、誘導体化、又は変異が施されうる位置を表わす。
【０１２０】
本明細書中で使用されるように、用語「末端（ｔｅｒｍｉｎｉ  ｏｒ  ｔｅｒｍｉｎｕ
ｓ）」とは、タンパク質を指している場合、ペプチド又はポリペプチドの端を指す。その
ような端は、該ペプチド又はポリペプチドの最初又は最後の部位のみに限定されるもので
はなく、末端領域内のさらなるアミノ酸を含みうる。本発明のポリペプチド系分子は、Ｎ
末端（遊離アミノ基（ＮＨ２）を備えたアミノ酸を終端とする）及びＣ末端（遊離カルボ
キシル基（ＣＯＯＨ）を備えたアミノ酸を終端とする）の両方を有するものとして見なす
ことができる。本発明のタンパク質は、ある場合には、ジスルフィド結合又は非共有結合
性の力によって寄せ集められた複数のポリペプチド鎖で構成される（多量体、オリゴマー
）。この種のタンパク質は複数のＮ末端及びＣ末端を有することになる。別例として、ポ
リペプチドの末端は、該ポリペプチドが場合によっては有機コンジュゲートのような非ポ
リペプチド系の構成部分で開始又は終了するように修飾されてもよい。
【０１２１】
特徴のうちいずれかが本発明の分子の構成成分として同定又は定義されると、これらの
特徴についてのいくつかの操作及び／又は修飾のうちいずれかが、移動、交換、反転、欠
失、無作為化又は複製により実施されうる。更に、当然ながら、特徴を操作することによ
り本発明の分子に対する修飾と同じ成果がもたらされる場合もある。例えば、ドメインを
欠失することを伴った操作は、まさに完全長に満たない分子をコードするような核酸の修
飾がもたらすであろう分子の長さの変更をもたらすことになる。
【０１２２】
修飾及び操作は、部位特異的突然変異誘発のような当分野で既知の方法によって遂行可
能である。結果として生じる修飾分子は次に、本明細書中に記載されたもののようなｉｎ
ｖｉｔｒｏ若しくはｉｎ  ｖｉｖｏのアッセイ、又は当分野で既知の任意の他の適当な
スクリーニングアッセイを使用して、活性に関して試験されうる。
【０１２３】
〔同位体の変形形態〕
本発明のＧＤＡは、同位体である１以上の原子を含有しうる。本明細書中で使用される
ように、用語「同位体」は１以上の追加の中性子を有する化学元素を指す。１つの実施形
態では、本発明の化合物は重水素化されていてもよい。本明細書中で使用されるように、
用語「重水素化」は、１以上の水素原子が重水素同位体に置き替えられた物質を指す。重
水素同位体は水素の同位体である。水素の核は１つの陽子を含有するが、重水素核は陽子
及び中性子の両方を含有している。ＧＤＡは、安定性のような化合物の物性を変化させる
ために、又は化合物が診断的及び実験的適用に使用されることを可能にするために、重水
素化される場合がある。
【０１２４】
〔成長因子指向性作用薬（ＧＤＡ）：コンジュゲート及び組み合わせ〕
本発明では、本発明のＧＤＡ、抗原及び抗体のうち少なくともいずれかが、１以上の相
同又は非相同な分子とともに複合体、コンジュゲート、又は組み合わせと為されうること
が企図されている。本明細書中で使用されるように、「相同な（ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ）
分子」は出発分子に対して構造又は機能のうち少なくとも一方において類似していること
を意味し、「非相同な（ｈｅｔｅｒｏｌｏｇｏｕｓ）分子」とは、出発分子に対して構造
又は機能のうち少なくとも一方において異なっている分子である。したがって、構造的ホ
モログは構造的にほぼ同様な分子である。それらは同一である可能性もある。機能的ホモ
ログは機能的にほぼ同様な分子である。それらは同一である可能性もある。
【０１２５】
本発明のＧＤＡはコンジュゲートを含んでなることができる。本発明のそのようなコン
ジュゲートには、天然に存在する物質若しくはリガンド、例えばタンパク質（例えばヒト
血清アルブミン（ＨＳＡ）、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）、高密度リポタンパク質（
ＨＤＬ）、若しくはグロブリン）；糖質（例えばデキストラン、プルラン、キチン、キト
サン、イヌリン、シクロデキストリン若しくはヒアルロン酸）；又は脂質が挙げられる。
リガンドはさらに、組換え分子又は合成分子、例えば合成ポリマー、例えば合成ポリアミ
ノ酸、オリゴヌクレオチド（例えばアプタマー）などであってよい。ポリアミノ酸の例に
は（Ｅｘａｍｐｌｅｓ  ｏｆ  ｐｏｌｙａｍｉｎｏ  ａｃｉｄｓ  ｉｎｃｌｕｄｅ  ｐｏ
ｌｙａｍｉｎｏ  ａｃｉｄ  ｉｓ）、ポリリジン（ＰＬＬ）、ポリＬ‐アスパラギン酸、
ポリＬ‐グルタミン酸、スチレン‐マレイン酸無水物コポリマー、ポリ（Ｌ‐ラクチド‐
コ‐グリコリド（ｇｌｙｃｏｌｉｅｄ）コポリマー、ジビニルエーテル無水マレイン酸コ
ポリマー、Ｎ‐（２‐ヒドロキシプロピル）メタクリルアミドコポリマー（ＨＭＰＡ）、
ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリウレタン、
ポリ（２‐エチルアクリル酸（ｅｔｈｙｌａｃｒｙｌｌｉｃ  ａｃｉｄ）、Ｎ‐イソプロ
ピルアクリルアミドポリマー、又はポリホスファジン（ｐｏｌｙｐｈｏｓｐｈａｚｉｎｅ
）が挙げられる。ポリアミンの例には：ポリエチレンイミン、ポリリジン（ＰＬＬ）、ス
ペルミン、スペルミジン、ポリアミン、プソイドペプチド‐ポリアミン、ペプチドミメテ
ィックなポリアミン、デンドリマーポリアミン、アルギニン、アミジン、プロタミン、カ
チオン性脂質、カチオン性ポルフィリン、ポリアミンの第四塩、又はαヘリカルペプチド
が挙げられる。
【０１２６】
コンジュゲートにはさらに、標的化基（ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｇｒｏｕｐ）、例えば細
胞又は組織を標的化する作用薬又は基、例えばレクチン、糖タンパク質、脂質又はタンパ
ク質、例えば抗体であって、腎臓細胞のような指定された種類の細胞に結合するものを挙
げることができる。標的化基は、チロトロピン、メラノトロピン、レクチン、糖タンパク
質、サーファクタントプロテインＡ、ムチン糖質、多価ラクトース、多価ガラクトース、
Ｎ‐アセチルガラクトサミン、Ｎ‐アセチル‐グルコサミン  多価マンノース（Ｎ−ａｃ
ｅｔｙｌ−ｇｕｌｕｃｏｓａｍｉｎｅ  ｍｕｌｔｉｖａｌｅｎｔ  ｍａｎｎｏｓｅ）、多
価フコース、グリコシル化ポリアミノ酸、多価ガラクトース、トランスフェリン、ビスホ
スホナート、ポリグルタマート、ポリアスパルタート、脂質、コレステロール、ステロイ
ド、胆汁酸、葉酸、ビタミンＢ１２、ビオチン、ＲＧＤペプチド、ＲＧＤペプチドミメテ
ィック又はアプタマーであってもよい。
【０１２７】
標的化基は、タンパク質、例えば糖タンパク質、又はペプチド、例えばコリガンドへの
特異的親和性を有する分子、又は抗体、例えばがん細胞、内皮細胞、若しくは骨細胞のよ
うな特定の種類の細胞に結合する抗体であってよい。標的化基にはさらにホルモン及びホ
ルモン受容体が挙げられる。標的化基にはさらに、非ペプチド性の分子種、例えば脂質、
レクチン、糖質、ビタミン、補因子、多価ラクトース、多価ガラクトース、Ｎ‐アセチル
‐グルコサミン  多価マンノース（Ｎ−ａｃｅｔｙｌ−ｇｕｌｕｃｏｓａｍｉｎｅ  ｍｕ
ｌｔｉｖａｌｅｎｔ  ｍａｎｎｏｓｅ）、多価フコース、又はアプタマーを挙げることが
可能である。
【０１２８】
標的化基は特異的受容体を標的とすることが可能な任意のリガンドであってもよい。例
としては、限定するものではないが、葉酸、ＧａｌＮＡｃ、ガラクトース、マンノース、
マンノース‐６Ｐ、アパタマー（ａｐａｔａｍｅｒ）、インテグリン受容体リガンド、ケ
モカイン受容体リガンド、トランスフェリン、ビオチン、セロトニン受容体リガンド、Ｐ
ＳＭＡ、エンドセリン、ＧＣＰＩＩ、ソマトスタチン、ＬＤＬ、及びＨＤＬリガンドが挙
げられる。特定の実施形態では、標的化基はアプタマーである。アプタマーは未修飾であ
ってもよいし、本明細書中に開示された修飾の任意の組み合わせを有していてもよい。
【０１２９】
さらに他の実施形態では、ＧＤＡは細胞膜透過性のポリペプチドに共有結合でコンジュ
ゲートしている。細胞膜透過性のペプチドはさらにシグナル配列を備えることもできる。
本発明のコンジュゲート物は、安定性の増大；細胞トランスフェクションの増大；及び生
体内分布の変更（例えば、特定の組織又は細胞種への標的化）のうち少なくともいずれか
を為すように設計可能である。
【０１３０】
コンジュゲート部分がＧＤＡ抗体に付加されて、クリアランス用にＧＰＣを標識又はフ
ラグ付けすることが可能となるようになっていてもよい。そのようなタグ付け／フラグ付
け分子には、限定するものではないが、ユビキチン、蛍光分子、ヒトインフルエンザヘマ
グルチニン（ｈｅｍａｇｌｕｔｉｎｉｎ）（ＨＡ）、ｃ‐ｍｙｃ（ヒトの癌原遺伝子ｍｙ
ｃの１０アミノ酸セグメントであって配列ＥＱＫＬＩＳＥＥＤＬ（配列番号３１７）を備
えるもの）、ヒスチジン（Ｈｉｓ）、フラグ（配列ＤＹＫＤＤＤＤＫ（配列番号３１８）
の短いペプチド）、グルタチオンＳ‐トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、Ｖ５（シミアンウ
イルス５型というパラミクソウイルスのエピトープ）、ビオチン、アビジン、ストレプト
アビジン、ホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）及びジゴキシゲニンが挙げら
れる。
【０１３１】
いくつかの実施形態では、ＧＤＡは、疾患又は状態の治療において他のＧＤＡ、ＧＰＣ
、ＧＰＣ変調因子又は他の分子と組み合わされる場合がある。そのような組み合わせは天
然の貯蔵場所又はＧＰＣ（本発明のＧＤＡと組み合わせて投与される任意のＧＰＣを含む
）からの成長因子の放出を加速又は減速することができる。
【０１３２】
〔成長因子指向性作用薬：抗体、製造〕
本発明の抗体は、当分野で既知又は本願に記載された方法によって生産される、ポリク
ローナル若しくはモノクローナル又は組換えの抗体であってよい。
【０１３３】
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、当業者に既知の検出可能な標識を用いた検
出を目的として標識されうる。標識は、放射性同位元素、蛍光化合物、化学発光化合物、
酵素、若しくは酵素コファクター、又は当分野で既知の任意の他の標識であってよい。い
くつかの態様では、所望の抗原に結合する抗体は標識されずに、その一次抗体に特異的に
結合する標識済み二次抗体の結合により検出されてもよい。
【０１３４】
本発明の抗体には、限定するものではないが、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗
体、多重特異性抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体若しくはキメラ抗体、一本鎖抗体、Ｆａｂフ
ラグメント、Ｆ（ａｂ’）フラグメント、Ｆａｂ発現ライブラリによって生じたフラグメ
ント、抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体（例えば本発明の抗体に対する抗Ｉｄ抗体など）
、細胞内で作製された抗体（すなわちイントラボディ）、及び上記のうち任意のもののエ
ピトープ結合フラグメントが挙げられる。本発明の抗体は鳥類及び哺乳動物を含む任意の
動物を起源とするものであってよい。好ましくは、そのような抗体は、ヒト、ネズミ科動
物（例えばマウス及びラット）、ロバ、ヒツジ、ラビット、ヤギ、モルモット、ラクダ、
ウマ、又はニワトリを起源とする。本発明の抗体は、単特異性であっても多重特異性（例
えば二重特異性、三重特異性、若しくはより大きな多重特異性）であってもよい。多重特
異性抗体は、本発明のペプチドの異なるエピトープについて特異的であってもよいし、本
発明のペプチドと、異種のエピトープ、例えば異種のペプチド又は固体支持体材料との両
方に特異的であってもよい。（例えば、国際公開第９３／１７７１５号；同第９２／０８
８０２号；同第９１／００３６０号；同第９２／０５７９３号；タット（Ｔｕｔｔ）、Ａ
．ら、「静止期の細胞毒性Ｔ細胞を活性化及びリダイレクトするためにＴＣＲ／ＣＤ３複
合体及びＣＤ２を介した協調的シグナル伝達を使用する三重特異性Ｆ（ａｂ’）３誘導体
（Ｔｒｉｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｆ（ａｂ’）  ３  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ  ｔｈａｔ  ｕ
ｓｅ  ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｖｉａ  ｔｈｅ  ＴＣＲ／ＣＤ３
ｃｏｍｐｌｅｘ  ａｎｄ  ＣＤ２  ｔｏ  ａｃｔｉｖａｔｅ  ａｎｄ  ｒｅｄｉｒｅｃ
ｔ  ｒｅｓｔｉｎｇ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ．）」、ジャーナル・オブ・
イムノロジー（Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．）、１９９１年７月１日、第１４７巻、第１号、ｐ
．６０−９；米国特許第４，４７４，８９３号、同第４，７１４，６８１号、同第４，９
２５，６４８号、同第５，５７３，９２０号、同第５，６０１，８１９号明細書、及びコ
ステルニー（Ｋｏｓｔｅｌｎｙ）、Ｓ．Ａ．ら、「ロイシンジッパーの使用による二重特
異性抗体の形成（Ｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｎｔｉｂｏ
ｄｙ  ｂｙ  ｔｈｅ  ｕｓｅ  ｏｆ  ｌｅｕｃｉｎｅ  ｚｉｐｐｅｒｓ．）」、ジャーナ
ル・オブ・イムノロジー（Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．）、１９９２年３月１日、第１４８巻、
第５号、ｐ．１５４７−５３を参照のこと）。例えば、抗体は、本発明のペプチド配列の
単位の繰り返しを含有するペプチドに対して生産されてもよいし、本発明の２つ以上のペ
プチド配列を含有するペプチドに対して生産されてもよいし、又はこれらの組み合わせで
あってもよい。
【０１３５】
いくつかの実施形態では、抗体は、本明細書中で教示されるタンパク質又はペプチドの
任意の領域、例えばプロドメイン又はその領域から調製されることが可能である。加えて
、ポリペプチドが受容体タンパク質、例えばＴＧＦβ受容体である場合、抗体は、受容体
全体又は受容体の一部分、例えば細胞内ドメイン、細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン全体
、特定の膜貫通セグメント、細胞内若しくは細胞外ループのうちいずれか、又はこれらの
領域の任意の一部分に対して（例えば、標的とするため、結合するため、又は相互作用す
るために）開発されることが可能である。抗体は、例えば、特定の機能的部位、例えばリ
ガンド結合の部位、又はグリコシル化、リン酸化、ミリスチル化（ｍｙｒｉｓｔｙｌａｔ
ｅｄ）、若しくはアミノ化されている部位に対して開発されることも可能である。
【０１３６】
本発明では、抗体を生成するためのペプチドは、好ましくは、少なくとも４個、少なく
とも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、より好ましくは少なくとも８個、少なくと
も９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、
少なくとも１４個、少なくとも１５個、かつ、好ましくは、長さ約５〜約５０アミノ酸、
より好ましくは長さ約１０〜約３０アミノ酸、さらにより好ましくは長さ約１０〜約２０
アミノ酸、の配列を含有している。
【０１３７】
本発明では、抗体を生成するためにより大きなポリペプチド又はタンパク質が使用され
る場合、これらは好ましくは長さが少なくとも５０個、少なくとも５５個、少なくとも６
０個、少なくとも７０個、少なくとも８０個、少なくとも９０個、又はそれ以上のアミノ
酸数である。
【０１３８】
本発明のモノクローナル抗体は、当業者に既知の十分確立された方法を使用して調製可
能である。１つの実施形態では、モノクローナル抗体は、ハイブリドーマ技術（ケーラー
（Ｋｏｈｌｅｒ）、Ｇ．ら、「所定の特異性の抗体を分泌する融合細胞の連続培養物（Ｃ
ｏｎｔｉｎｕｏｕｓ  ｃｕｌｔｕｒｅｓ  ｏｆ  ｆｕｓｅｄ  ｃｅｌｌｓ  ｓｅｃｒｅｔ
ｉｎｇ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｏｆ  ｐｒｅｄｅｆｉｎｅｄ  ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ）」
、ネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ）、１９７５年８月７日；第２５６巻、第５５１７号、ｐ．
４９５−７）を使用して調製される。ハイブリドーマ法においては、マウス、ハムスター
、又はその他の適切な宿主動物が、典型的には、免疫剤（例えば本発明のペプチド）を用
いて、該免疫剤に特異的に結合する抗体を産生するか又は産生能力を有するリンパ球を誘
発するために免疫化される。別例として、リンパ球はｉｎ  ｖｉｔｒｏで免疫化されても
よい。リンパ球はその後、ハイブリドーマ細胞を形成するためにポリエチレングリコール
のような適当な融合剤を使用して不死化細胞株と融合せしめられる（ゴーディング（Ｇｏ
ｄｉｎｇ）、Ｊ．Ｗ．、「モノクローナル抗体：原理と実践（Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａ
ｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ）」、アカデ
ミック・プレス（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ）、１９８６年、ｐ．５９−１０３１）
。不死化細胞株は、通常は形質転換された哺乳動物細胞、特にげっ歯動物、ラビット、ウ
シ及びヒトを起源とする骨髄腫（ミエローマ）細胞である。通常、ラット又はマウスの骨
髄腫細胞株が使用される。ハイブリドーマ細胞は、融合していない不死化細胞の増殖又は
生存を阻害する１以上の物質を好ましくは含有する適当な培地において培養されうる。例
えば、親細胞が酵素ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＧＰ
ＲＴ又はＨＰＲＴ）を欠いている場合、ハイブリドーマのための培地は典型的には、ＨＧ
ＰＲＴ欠損細胞の成長を防止する物質であるヒポキサンチン、アミノプテリン、及びチミ
ジンを含むことになろう（「ＨＡＴ培地」）。
【０１３９】
好ましい不死化細胞株は、効率的に融合し、選択された抗体産生細胞による安定した高
レベルの抗体発現を支援し、かつＨＡＴ培地のような培地に感受性であるものである。よ
り好ましい不死化細胞株はネズミ科動物の骨髄腫細胞株であり、該細胞株は例えば米国カ
リフォルニア州サンディエゴのソーク研究所細胞流通センター（Ｓａｌｋ  Ｉｎｓｔｉｔ
ｕｔｅ  Ｃｅｌｌ  Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  Ｃｅｎｔｅｒ）及び米国バージニア州マ
ナッサスのアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐ
ｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）から入手可能である。ヒトの骨髄腫細胞株
及びマウスとヒトとのヘテロミエローマの細胞株も、ヒトモノクローナル抗体の産生につ
いて記載されている（コズボール（Ｋｏｚｂｏｒ）、Ｄ．ら、「ヒトモノクローナル抗体
の産生用のヒトのハイブリッド骨髄腫（Ａ  ｈｕｍａｎ  ｈｙｂｒｉｄ  ｍｙｅｌｏｍａ
ｆｏｒ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉ
ｂｏｄｉｅｓ）」、ジャーナル・オブ・イムノロジー（Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．）、１９８
４年１２月、第１３３巻、第６号、ｐ．３００１−５；ブロジャー（Ｂｒｏｄｅｕｒ）、
Ｂ．ら、「モノクローナル抗体生産の技法及び応用（Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔ
ｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ）」、米国ニューヨ
ークのマルセル・デッカー社（Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，  Ｉｎｃ．）、１９８７年
、第３３巻、ｐ．５１−６３）。
【０１４０】
ハイブリドーマ細胞が培養された培地はその後、モノクローナル抗体の存在についてア
ッセイすることが可能である。好ましくは、ハイブリドーマ細胞によって産生されたモノ
クローナル抗体の結合特異性（すなわち特異的免疫反応性）が、免疫沈降によって、又は
ｉｎ  ｖｉｔｒｏの結合アッセイ、例えばラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）若しくは酵素
結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）などによって、決定される。そのような技法及びアッ
セイは当業者には既知である。モノクローナル抗体の結合特異性は、例えば、スキャチャ
ード解析によって決定可能である（マンソン（Ｍｕｎｓｏｎ）、Ｐ．Ｊ．ら、「リガンド
：リガンド結合系の特性解析のための汎用的なコンピュータ化手法（Ｌｉｇａｎｄ：  ａ
ｖｅｒｓａｔｉｌｅ  ｃｏｍｐｕｔｅｒｉｚｅｄ  ａｐｐｒｏａｃｈ  ｆｏｒ  ｃｈａ
ｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｌｉｇａｎｄ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｓｙｓｔｅｍｓ）
」、アナリティカル・バイオケミストリー（Ａｎａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ）、１９８０年９
月１日、第１０７巻、第１号、ｐ．２２０−３９）。
【０１４１】
所望のハイブリドーマ細胞が同定された後、クローンは限界希釈の手順でサブクローニ
ングされて標準的な方法で成長せしめられる場合もある。この目的に適した培地には、例
えば、ダルベッコの改変イーグル培地（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ  Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｅａ
ｇｌｅ’ｓ  Ｍｅｄｉｕｍ）又はＲＰＭＩ‐１６４０培地が挙げられる。別例として、ハ
イブリドーマ細胞は哺乳動物において腹水としてｉｎ  ｖｉｖｏで成長せしめられてもよ
い。
【０１４２】
サブクローンによって分泌されたモノクローナル抗体は、従来の免疫グロブリン精製手
順、例えば、プロテインＡ‐セファロース、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー
、ゲル電気泳動法、透析、又は親和性クロマトグラフィーなどによって培地又は腹水から
単離又は精製されうる。
【０１４３】
別の実施形態では、本発明のモノクローナル抗体は、参照によりその全体が本願に組み
込まれる米国特許第４，８１６，５６７号明細書に記載されるもののような組換えＤＮＡ
法によっても作製可能である。本発明のモノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、従来
の手順を使用して（例えばネズミ科動物の抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異
的に結合する能力を有するオリゴヌクレオチドプローブを使用することにより）、容易に
単離及び配列決定されることが可能である。本発明のハイブリドーマ細胞は好ましいＤＮ
Ａ供給源としての役割を果たす。単離されると、ＤＮＡは発現ベクターに組み込まれるこ
とが可能であり、該ベクターは次いでサルのＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（
ＣＨＯ）細胞、又は骨髄腫細胞などの本来は免疫グロブリンタンパク質を産生しない宿主
細胞へトランスフェクトされて、該組換え宿主細胞内でのモノクローナル抗体の合成に至
る。該ＤＮＡはさらに、例えば、相同なネズミ科動物の配列の代わりにヒトの重鎖及び軽
鎖定常領域のコード配列を用いることにより（米国特許第４，８１６，５６７号明細書）
、又は免疫グロブリンコード配列に非免疫グロブリンポリペプチドのコード配列の全体若
しくは一部を共有結合で連結することにより、修飾可能である。そのような非免疫グロブ
リンポリペプチドは、本発明の抗体の定常領域の代わりに用いられてもよいし、キメラ的
二価抗体を作出するために本発明の抗体の１つの抗原結合部位の可変領域の代わりに用い
られてもよい。
【０１４４】
別の実施形態では、本発明の抗体は当業者に既知の様々な手順によって産生されること
も可能である。ｉｎ  ｖｉｖｏでのポリクローナル抗体の産生については、ラビット、ラ
ット、マウス、ヒツジ、又はヤギのような宿主動物は、例えば腹腔内及び皮内のうち少な
くともいずれかの注射によって、遊離ペプチド又は担体に結合したペプチドのいずれかを
用いて免疫化される。注射材料は、典型的には約１００μｇのペプチド又は担体タンパク
質を含有する乳濁液である。宿主生物種に応じて、免疫学的応答を増大させるために様々
なアジュバントが使用されることも可能である。アジュバントには、限定するものではな
いが、フロイントの（完全及び不完全）アジュバント、水酸化アルミニウムのような鉱物
ゲル剤、リソレシチンのような表面活性物質、プルロニック（ｐｌｕｒｏｎｉｃ）ポリオ
ール、ポリアニオン、ペプチド、油乳剤、キーホールリンペットヘモシニアン、ジニトロ
フェノール、並びに潜在的に有用なヒトアジュバント、例えばＢＣＧ（カルメット・ゲラ
ン桿菌）及びコリネバクテリウム・パルヴム（ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｐａｒ
ｖｕｍ）が挙げられる。そのようなアジュバントも当分野において良く知られている。数
回のブースター注射が、例えば約２週間の間隔で、例えば固体表面に吸着した遊離ペプチ
ドを用いるＥＬＩＳＡアッセイによって検出可能な有用な力価の抗体を提供するために、
必要とされる場合もある。免疫化された動物の血清中の抗体の力価は、抗体の選択によっ
て、例えば当分野で良く知られた方法に従いペプチドを固体担体上に吸着して選択された
抗体を溶出することにより、高めることが可能である。
【０１４５】
抗体、該抗体のバリアント及びフラグメントを含んでなるＧＤＡは、高スループットの
発見方法を使用して選択及び生産されうる。１つの実施形態では、合成抗体、該抗体のバ
リアント及びフラグメントを含んでなるＧＤＡは、ディスプレイライブラリの使用を通じ
て生産される。用語「ディスプレイ」は、本明細書中で使用されるように、所与の宿主の
表面上におけるタンパク質又はペプチドの発現すなわち「ディスプレイ」を指す。用語「
ライブラリ」は、本明細書中で使用されるように、独自のｃＤＮＡ配列を集めた一群を指
す。ライブラリは、僅か２個の独自のｃＤＮＡから何千億個もの独自のｃＤＮＡまで含有
しうる。好ましい実施形態では、合成抗体を含んでなるＧＤＡは抗体ディスプレイライブ
ラリ又は抗体フラグメントディスプレイライブラリを使用して生産される。用語「抗体フ
ラグメントディスプレイライブラリ」は、本明細書中で使用されるように、ディスプレイ
ライブラリであって各メンバーが抗体の少なくとも１つの可変領域を含有する抗体フラグ
メントをコードしているものを指す。そのような抗体フラグメントは、好ましくはＦａｂ
フラグメントであるが、一本鎖抗体（ｓｃＦｖ：ｓｉｎｇｌｅ−ｃｈａｉｎ  ｖａｒｉａ
ｂｌｅ  ｆｒａｇｍｅｎｔ）のような他の抗体フラグメントも同様に企図される。Ｆａｂ
抗体フラグメントライブラリでは、コードされる各Ｆａｂは、該Ｆａｂフラグメントの相
補性決定領域（ＣＤＲ）の可変ループ内に含まれるアミノ酸配列を除いて同一となりうる
。別例又は追加の実施形態では、ＶＨ及びＶＬのうち少なくともいずれかの個々の領域内
のアミノ酸配列も同様に異なっていてもよい。
【０１４６】
ディスプレイライブラリは、いくつかの可能な宿主、例えば、限定するものではないが
酵母、バクテリオファージ、細菌及びレトロウイルスにおいて発現されうる。使用可能な
さらなるディスプレイ技術には、リボソームディスプレイ、マイクロビーズディスプレイ
及びタンパク質‐ＤＮＡ連結技法が挙げられる。好ましい実施形態では、Ｆａｂディスプ
レイライブラリは酵母又はバクテリオファージ（本明細書中では「ファージ」又は「ファ
ージ粒子」とも呼ばれる）において発現される。発現されるとＦａｂはファージ又は酵母
の表面を装飾し、該表面において所与の抗原と相互作用することができる。ＧＰＣ、成長
因子、又は所望の標的部位由来の抗原を含んでなる抗原が、その抗原への親和性が最も高
い抗体フラグメントを発現するファージ粒子又は酵母細胞を選択するために使用されうる
。次に、結合した抗体フラグメントのＣＤＲをコードするＤＮＡ配列は、結合した粒子又
は細胞を使用してシーケンシングすることにより決定可能である。１つの実施形態では、
正の選択が抗体の開発において用いられる。本明細書中で使用されるように、用語「正の
選択」は、標的部位を含有する抗原への親和性に基づいてディスプレイライブラリから抗
体及びそのフラグメントのうち少なくともいずれかが選択されるプロセスを指す。いくつ
かの実施形態では、負の選択が抗体の開発において用いられる。本明細書中で使用される
ように、用語「負の選択」は、抗体の開発の際に所与のディスプレイライブラリから抗体
及びそのフラグメントのうち少なくともいずれかを除外するために抗体産生のための標的
部位を欠く抗原が使用されるプロセスを指す。いくつかの実施形態では、ディスプレイラ
イブラリを用いた抗体の開発における複数回の選択の際に正負両方の選択が利用される。
【０１４７】
酵母ディスプレイでは、種々の抗体フラグメントをコードしているｃＤＮＡは該抗体フ
ラグメントが発現される場である酵母細胞に導入され、抗体フラグメントはチャオ（Ｃｈ
ａｏ）らにより記載されるように細胞表面上に「ディスプレイ」される（チャオ（Ｃｈａ
ｏ）、Ｇ．ら、「酵母表面ディスプレイを用いたヒト抗体の単離及びエンジニアリング（
Ｉｓｏｌａｔｉｎｇ  ａｎｄ  ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ｈｕｍａｎ  ａｎｔｉｂｏｄｉ
ｅｓ  ｕｓｉｎｇ  ｙｅａｓｔ  ｓｕｒｆａｃｅ  ｄｉｓｐｌａｙ）」、ネイチャー・プ
ロトコール（Ｎａｔ  Ｐｒｏｔｏｃ．）、２００６年、第１巻、第２号、ｐ．７５５−６
８）。酵母表面ディスプレイでは、発現される抗体フラグメントは酵母のアグルチニンタ
ンパク質Ａｇａ２ｐを含んでなる付加ドメインを包含する。このドメインは、該抗体フラ
グメント融合タンパク質が表面に発現されたＡｇａ１ｐとのジスルフィド結合の形成によ
って酵母細胞の外側表面に付着することを可能にする。その結果が、特定の抗体フラグメ
ントにコーティングされた酵母細胞である。これらの抗体フラグメントをコードしている
ｃＤＮＡのディスプレイライブラリが最初に利用されるが、該抗体フラグメントは各々独
自の配列を有している。これらの融合タンパク質は何百万もの酵母細胞の細胞表面上で発
現され、該細胞表面上において該タンパク質は、該細胞とともにインキュベートされた所
望の抗原標的ペプチドと相互作用することができる。標的ペプチドは、適当な抗体フラグ
メントとの結合に成功した後の効率的な細胞選別を可能にするために、化学基又は磁性基
（ｍａｇｎｅｔｉｃ  ｇｒｏｕｐ）を用いて共有結合又は他の方法で修飾されてもよい。
回収は、磁気細胞分離法（ＭＡＣＳ）、蛍光細胞分離法（ＦＡＣＳ）又は当分野で既知の
他の細胞選別方法によるものであってよい。酵母細胞の部分集団が選択されれば、ＣＤＲ
配列を決定するために対応するプラスミドが分析されればよい。
【０１４８】
バクテリオファージディスプレイ法は、典型的にはｆｄ、Ｆ１及びＭ１３ビリオンなど
の繊維状ファージを利用する。そのような株は非細胞溶解性であり、宿主の継続的な増殖
及びウイルス力価の上昇を可能にする。本発明の抗体を作製するために使用可能なファー
ジディスプレイ法の例には、ミエリヒ（Ｍｉｅｒｓｃｈ）ら（ミエリヒ（Ｍｉｅｒｓｃｈ
）、Ｓ．ら、「合成抗体：概念、可能性及び実践的考察（Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  ａｎｔｉ
ｂｏｄｉｅｓ：  Ｃｏｎｃｅｐｔｓ，  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ａｎｄ  ｐｒａｃｔｉｃａ
ｌ  ｃｏｎｓｉｄｅｒａｔｉｏｎｓ）」、メソッズ（Ｍｅｔｈｏｄｓ）、２０１２年８月
、第５７巻、第４号、ｐ．４８６−９８）、ブラッドベリー（Ｂｒａｄｂｕｒｙ）ら（ブ
ラッドベリー（Ｂｒａｄｂｕｒｙ）、Ａ．Ｒ．ら、「自然抗体を越えて：ｉｎ  ｖｉｔｒ
ｏディスプレイ技術の力（Ｂｅｙｏｎｄ  ｎａｔｕｒａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  ｔ
ｈｅ  ｐｏｗｅｒ  ｏｆ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ｄｉｓｐｌａｙ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅ
ｓ）」、ネイチャー・バイオテクノロジー（Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ）、２０１１
年３月、第２９巻、第３号、ｐ．２４５−５４）、ブリンクマン（Ｂｒｉｎｋｍａｎ）ら
（ブリンクマン（Ｂｒｉｎｋｍａｎ）、Ｕ．ら、「ジスルフィド安定化Ｆｖフラグメント
のファージディスプレイ（Ｐｈａｇｅ  ｄｉｓｐｌａｙ  ｏｆ  ｄｉｓｕｌｆｉｄｅ−ｓ
ｔａｂｉｌｉｚｅｄ  Ｆｖ  ｆｒａｇｍｅｎｔｓ）」、ジャーナル・オブ・イムノロジカ
ル・メソッズ（Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ）、１９９５年５月１１日、第１８
２巻、第１号、ｐ．４１−５０）；エームズ（Ａｍｅｓ）ら（エームズ（Ａｍｅｓ）、Ｒ
．Ｓ．ら、「コンビナトリアルファージディスプレイライブラリから単離されたネズミ科
動物Ｆａｂの完全長免疫グロブリンへの変換（Ｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ  ｏｆ  ｍｕｒｉｎ
ｅ  Ｆａｂｓ  ｉｓｏｌａｔｅｄ  ｆｒｏｍ  ａ  ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ  ｐｈａ
ｇｅ  ｄｉｓｐｌａｙ  ｌｉｂｒａｒｙ  ｔｏ  ｆｕｌｌ  ｌｅｎｇｔｈ  ｉｍｍｕｎｏ
ｇｌｏｂｕｌｉｎｓ）」、ジャーナル・オブ・イムノロジカル・メソッズ（Ｊ  Ｉｍｍｕ
ｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ）、１９９５年８月１８日、第１８４巻、第２号、ｐ．１７７−
８６）；ケトルボロー（Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈ）ら（ケトルボロー（Ｋｅｔｔｌｅ
ｂｏｒｏｕｇｈ）、Ｃ．Ａ．ら、「ファージ抗体ライブラリを用いた免疫化マウスからの
腫瘍細胞特異的な一本鎖Ｆｖの単離及びこれらの抗体フラグメントからの完全抗体の再構
築（Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｕｍｏｒ  ｃｅｌｌ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｓｉｎｇｌ
ｅ−ｃｈａｉｎ  Ｆｖ  ｆｒｏｍ  ｉｍｍｕｎｉｚｅｄ  ｍｉｃｅ  ｕｓｉｎｇ  ｐｈａ
ｇｅ−ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｌｉｂｒａｒｉｅｓ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｒｅｃｏｎｓｔｒｕｃ
ｔｉｏｎ  ｏｆ  ｗｈｏｌｅ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｆｒｏｍ  ｔｈｅｓｅ  ａｎｔｉ
ｂｏｄｙ  ｆｒａｇｍｅｎｔｓ）」、ヨーロピアン・ジャーナル・オブ・イムノロジー（
Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ）、１９９４年４月、第２４巻、第４号、ｐ．９５２−８）
；ペルシク（Ｐｅｒｓｉｃ）ら（ペルシク（Ｐｅｒｓｉｃ）、Ｌ．ら、「ファージディス
プレイライブラリからの選択後の抗体又はそのフラグメントの真核生物における発現のた
めの統合型ベクターシステム（Ａｎ  ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ  ｖｅｃｔｏｒ  ｓｙｓｔｅ
ｍ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｅｕｋａｒｙｏｔｉｃ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ａｎｔｉｂ
ｏｄｉｅｓ  ｏｒ  ｔｈｅｉｒ  ｆｒａｇｍｅｎｔｓ  ａｆｔｅｒ  ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ
ｆｒｏｍ  ｐｈａｇｅ  ｄｉｓｐｌａｙ  ｌｉｂｒａｒｉｅｓ）」、ジーン（Ｇｅｎｅ
）、１９９７年３月１０日、第１８７巻、第１号、ｐ．９−１８）；ＰＣＴ出願番号第Ｐ
ＣＴ／ＧＢ９１／０１１３４号；ＰＣＴ国際公開第９０／０２８０９号；同第９１／１０
７３７号；同第９２／０１０４７号；同第９２／１８６１９号；同第９３／１１２３６号
；同第９５／１５９８２号；同第９５／２０４０１号；並びに米国特許第５，６９８，４
２６号；同第５，２２３，４０９号；同第５，４０３，４８４号；同第５，５８０，７１
７号；同第５，４２７，９０８号；同第５，７５０，７５３号；同第５，８２１，０４７
号；同第５，５７１，６９８号；同第５，４２７，９０８号；同第５，５１６，６３７号
；同第５，７８０，２２５号；同第５，６５８，７２７号；同第５，７３３，７４３号及
び同第５，９６９，１０８号明細書に開示されたものが含まれ、前記文献は参照によりそ
の全体が本願に組み込まれる。バクテリオファージ上での抗体フラグメントの発現は、該
フラグメントをコードするｃＤＮＡを、ウイルスコートタンパク質を発現する遺伝子に挿
入することにより実行されうる。繊維状バクテリオファージのウイルスコートは、一本鎖
のゲノムによってコードされた５個のコートタンパク質から構成される。コートタンパク
質ｐＩＩＩは、典型的にはＮ末端における抗体フラグメントの発現に好適なタンパク質で
ある。抗体フラグメントの発現がｐＩＩＩの機能を損なう場合、ウイルスの機能は野生型
ｐＩＩＩの共発現によって回復されうるが、そのような発現はウイルスコート上に発現さ
れる抗体フラグメントの数を低減し、とはいえ標的抗原による抗体フラグメントへのアク
セスを増強する場合がある。ウイルスタンパク質及び抗体フラグメントタンパク質の発現
は、別例として複数のプラスミド上にコードされてもよい。この方法は、感染性プラスミ
ドの全体的な大きさを縮小し、かつ形質転換効率を高めるために使用されうる。
【０１４９】
上記に記載されたように、高親和性の抗体又は抗体フラグメントを発現する宿主の選択
後、該抗体又は抗体フラグメント由来のコード領域は、単離されて完全な抗体、例えばヒ
ト抗体、又は任意の他の所望の抗原結合性フラグメントを生成するために使用され、任意
の所望の宿主、例えば哺乳動物細胞、昆虫細胞、植物細胞、酵母、及び細菌などにおいて
、例えば下記に詳述されるようにして発現されることが可能である。
【０１５０】
高親和性の抗体をコードするＤＮＡ配列は、親和性成熟として知られるプロセスにおけ
るさらに数回の選択について突然変異せしめられることが可能である。用語「親和性成熟
」は、本明細書中で使用されるように、連続数回の突然変異及び抗体又は抗体フラグメン
トをコードするｃＤＮＡ配列の選択を通じて所与の抗原への親和性を高めて抗体が生産さ
れる方法を指す。好ましい実施形態では、このプロセスはｉｎ  ｖｉｔｒｏで行なわれる
。これを遂行するために、ＣＤＲコード配列の増幅がエラープローンＰＣＲを使用して実
行されて、突然変異、例えば、限定するものではないが点突然変異、局所的な突然変異、
挿入突然変異及び欠失突然変異を含有する何百万ものコピーが生産されうる。本明細書中
で使用されるように、用語「点突然変異」は、ヌクレオチド配列内の１つのヌクレオチド
が異なるヌクレオチドに変化する核酸突然変異を指す。本明細書中で使用されるように、
用語「局所的な突然変異」は、２以上の連続したヌクレオチドが異なるヌクレオチドに変
化する核酸突然変異を指す。本明細書中で使用されるように、用語「挿入突然変異」は、
１以上のヌクレオチドがヌクレオチド配列中に挿入される核酸突然変異を指す。本明細書
中で使用されるように、用語「欠失突然変異」は、１以上のヌクレオチドがヌクレオチド
配列から取り除かれる核酸突然変異を指す。挿入突然変異又は欠失突然変異には、コドン
全体の完全な置き換え、又は開始コドンの１個若しくは２個のヌクレオチドの変更による
あるコドンの別のコドンへの変化、が含まれうる。
【０１５１】
ＣＤＲの重鎖及び軽鎖領域に単一の突然変異を備えた何百万もの突然変異体を作出する
ために、ＣＤＲをコードするｃＤＮＡ配列に対して突然変異誘発が実行されてもよい。別
の手法では、最も親和性を改善しそうなＣＤＲ残基にのみ突然変異が導入される。これら
の新たに生成された突然変異ライブラリは、標的ペプチドへのさらに高い親和性を備えた
抗体フラグメントをコードするクローンをスクリーニングするためのプロセスを繰り返す
ために使用可能である。突然変異及び選択を数回継続することにより、さらにより高い親
和性を備えたクローンの合成が促進される（チャオ（Ｃｈａｏ）、Ｇ．ら、「酵母表面デ
ィスプレイを用いたヒト抗体の単離及びエンジニアリング（Ｉｓｏｌａｔｉｎｇ  ａｎｄ
ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ｈｕｍａｎ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｕｓｉｎｇ  ｙｅａｓ
ｔ  ｓｕｒｆａｃｅ  ｄｉｓｐｌａｙ）」、ネイチャー・プロトコール（Ｎａｔ  Ｐｒｏ
ｔｏｃ）、２００６年、第１巻、第２号、ｐ．７５５−６８）。
【０１５２】
抗体及び抗体フラグメント、例えばＦａｂ及びｓｃＦｖを生産するために使用可能な技
法の例は、米国特許第４，９４６，７７８号及び同第５，２５８、４９８号明細書；ミエ
リヒ（Ｍｉｅｒｓｃｈ）ら（ミエリヒ（Ｍｉｅｒｓｃｈ）、Ｓ．ら、「合成抗体：概念、
可能性及び実践的考察（Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  Ｃｏｎｃｅｐｔ
ｓ，  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ａｎｄ  ｐｒａｃｔｉｃａｌ  ｃｏｎｓｉｄｅｒａｔｉｏｎ
ｓ）」、メソッズ（Ｍｅｔｈｏｄｓ）、２０１２年８月、第５７巻、第４号、ｐ．４８６
−９８）、チャオ（Ｃｈａｏ）ら（チャオ（Ｃｈａｏ）、Ｇ．ら、「酵母表面ディスプレ
イを用いたヒト抗体の単離及びエンジニアリング（Ｉｓｏｌａｔｉｎｇ  ａｎｄ  ｅｎｇ
ｉｎｅｅｒｉｎｇ  ｈｕｍａｎ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｕｓｉｎｇ  ｙｅａｓｔ  ｓｕ
ｒｆａｃｅ  ｄｉｓｐｌａｙ）」、ネイチャー・プロトコール（Ｎａｔ  Ｐｒｏｔｏｃ．
）、２００６年、第１巻、第２号、ｐ．７５５−６８）、ヒューストン（Ｈｕｓｔｏｎ）
ら（ヒューストン（Ｈｕｓｔｏｎ）、Ｊ．Ｓ．ら、「一本鎖Ｆｖアナログ及び融合タンパ
ク質のタンパク質工学（Ｐｒｏｔｅｉｎ  ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ｏｆ  ｓｉｎｇｌｅ
−ｃｈａｉｎ  Ｆｖ  ａｎａｌｏｇｓ  ａｎｄ  ｆｕｓｉｏｎ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ）」、
メソッズ・イン・エンザイモロジー（Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．）、１９９１年
、第２０３巻、ｐ．４６−８８）；シュー（Ｓｈｕ）ら（シュー（Ｓｈｕ）、Ｌ．ら、「
骨髄腫細胞からの単一遺伝子にコードされた免疫グロブリンの分泌（Ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ
ｏｆ  ａ  ｓｉｎｇｌｅ−ｇｅｎｅ−ｅｎｃｏｄｅｄ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ
ｆｒｏｍ  ｍｙｅｌｏｍａ  ｃｅｌｌｓ）」、米国科学アカデミー紀要（Ｐｒｏｃ  Ｎ
ａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ）、１９９３年９月１日、第９０巻、第１７号、
ｐ．７９９５−９）及びスケラ（Ｓｋｅｒｒａ）ら（スケラ（Ｓｋｅｒｒａ）、Ａ．ら、
「大腸菌における機能的免疫グロブリンＦｖフラグメントのアセンブリ（Ａｓｓｅｍｂｌ
ｙ  ｏｆ  ａ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  Ｆｖ  ｆｒａｇ
ｍｅｎｔ  ｉｎ  Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）」、サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ
）、１９８８年５月２０日、第２４０巻、第４８５５号、ｐ．１０３８−４１）に記載さ
れた技法が含まれ、前記文献はそれぞれ全体が参照により本願に組込まれる。
【０１５３】
いくつかの用途、例えばヒトにおける抗体のｉｎ  ｖｉｖｏの用途及びｉｎ  ｖｉｔｒ
ｏの検出アッセイについては、キメラ抗体、ヒト化抗体、又はヒト抗体を使用することが
望ましい場合がある。キメラ抗体は、ネズミ科動物の単一クローン性免疫グロブリンに由
来する可変領域とヒト免疫グロブリンの定常領域とを有する抗体のような、抗体の異なる
部分が異なる動物種に由来する分子である。キメラ抗体を生産する方法は、当分野におい
て既知である。（モリソン（Ｍｏｒｒｉｓｏｎ）、Ｓ．Ｌ．、「トランスフェクトーマは
新規なキメラ抗体を提供する（Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｏｍａｓ  ｐｒｏｖｉｄｅ  ｎｏｖｅ
ｌ  ｃｈｉｍｅｒｉｃ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）」、サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）、１
９８５年９月２０日、第２２９巻、第４７１９号、ｐ．１２０２−７；ギリエス（Ｇｉｌ
ｌｉｅｓ）、Ｓ．Ｄ．ら、「適合型ｃＤＮＡ可変領域カセットを用いるキメラ抗体の高レ
ベル発現（Ｈｉｇｈ−ｌｅｖｅｌ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｃｈｉｍｅｒｉｃ  ａ
ｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｕｓｉｎｇ  ａｄａｐｔｅｄ  ｃＤＮＡ  ｖａｒｉａｂｌｅ  ｒｅ
ｇｉｏｎ  ｃａｓｓｅｔｔｅｓ）」、ジャーナル・オブ・イムノロジカル・メソッズ（Ｊ
Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ）、１９８９年１２月２０日、第１２５巻、第１−２
号、ｐ．１９１−２０２；並びに米国特許第５，８０７，７１５号；同第４，８１６，５
６７号；及び同第４，８１６，３９７号明細書、これらは参照により全体が本願に組み込
まれる）。ヒト化抗体とは、ヒト以外の生物種由来の抗体分子であって、所望の抗原に結
合し、かつヒト以外の生物種由来の１以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）とヒト免疫グロブ
リン分子由来のフレームワーク領域とを有するものである。多くの場合、ヒトのフレーム
ワーク領域のフレームワーク残基は、抗原との結合を変更、好ましくは改善するために、
ドナー抗体のＣＤＲ及びフレームワーク領域由来の対応する残基で置換される。上記のフ
レームワーク置換は、当分野において良く知られた方法により、例えば抗原との結合にと
って重要なフレームワーク残基を同定するためにＣＤＲとフレームワーク残基との相互作
用をモデル化することにより、また特定部位における他と異なるフレームワーク残基を同
定するための配列比較により、同定される。（米国特許第５，６９３，７６２号及び同第
５，５８５，０８９号明細書；リーヒマン（Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ）、Ｌ．ら、「治療のた
めのヒト抗体の再形成（Ｒｅｓｈａｐｉｎｇ  ｈｕｍａｎ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｆｏ
ｒ  ｔｈｅｒａｐｙ）」、ネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ）、１９８８年３月２４日、第３３
２巻、第６１６２号、ｐ．３２３−７、これらの文献は参照により全体が本願に組み込ま
れる）。抗体は、当分野において既知の様々な技法、例えば、ＣＤＲ移植（欧州特許第２
３９，４００号明細書；ＰＣＴ国際公開第９１／０９９６７号；米国特許第５，２２５，
５３９号；同第５，５３０，１０１号；及び同第５，５８５，０８９号明細書）；ベニア
リング（ｖｅｎｅｅｒｉｎｇ）又は表面再装（ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ）（欧州特許第５
９２，１０６号明細書；欧州特許第５１９，５９６号明細書；パドラン（Ｐａｄｌａｎ）
、Ｅ．Ａ．、「抗体可変領域のリガンド結合性を保存しつつ免疫原性を低減するための可
能な手法（Ａ  ｐｏｓｓｉｂｌｅ  ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ  ｆｏｒ  ｒｅｄｕｃｉｎｇ  ｔ
ｈｅ  ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ  ｏｆ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｖａｒｉａｂｌｅ  ｄ
ｏｍａｉｎｓ  ｗｈｉｌｅ  ｐｒｅｓｅｒｖｉｎｇ  ｔｈｅｉｒ  ｌｉｇａｎｄ−ｂｉｎ
ｄｉｎｇ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ）」、モレキュラー・イムノロジー（Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕ
ｎｏｌ．）、１９９１年４月−５月、第２８巻、第４−５号、ｐ．４８９−９８；ストゥ
ドニチカ（Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ）、Ｇ．Ｍ．ら、「人為操作型モノクローナル抗体はＣＤ
Ｒ以外の相補性変調残基の保存により完全な特異結合活性を保持する（Ｈｕｍａｎ−ｅｎ
ｇｉｎｅｅｒｅｄ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｒｅｔａｉｎ  ｆｕ
ｌｌ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｂｙ  ｐｒｅｓｅｒｖｉ
ｎｇ  ｎｏｎ−ＣＤＲ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｉｔｙ−ｍｏｄｕｌａｔｉｎｇ  ｒｅ
ｓｉｄｕｅｓ）」、プロテイン・エンジニアリング（Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．）、１９
９４年６月、第７巻、第６号、ｐ．８０５−１４；ログスカ（Ｒｏｇｕｓｋａ）、Ｍ．Ａ
．ら、「可変領域の表面再装によるネズミ科動物モノクローナル抗体のヒト化（Ｈｕｍａ
ｎｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍｕｒｉｎｅ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ
ｔｈｒｏｕｇｈ  ｖａｒｉａｂｌｅ  ｄｏｍａｉｎ  ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ）」、米
国アカデミー紀要（Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ）、１９９４年
２月１日、第９１巻、第３号、ｐ．９６９−７３）；並びにチェーン・シャフリング（ｃ
ｈａｉｎ  ｓｈｕｆｆｌｉｎｇ）（米国特許第５，５６５，３３２号明細書）；を使用し
てヒト化されることが可能であり、前記文献はそれぞれ参照により全体が本願に組込まれ
る。
【０１５４】
完全なヒト抗体は、外来タンパク質に対する免疫反応を回避又は緩和するために、ヒト
患者の治療的処置に特に望ましい。ヒト抗体は、上述の抗体ディスプレイ法を含む当分野
において既知の様々な方法によって、ヒト免疫グロブリン配列に由来する抗体ライブラリ
を使用して作製可能である。さらに、それぞれ参照により全体が本願に組み込まれる米国
特許第４，４４４，８８７号及び同第４，７１６，１１１号明細書；並びにＰＣＴ国際公
開第９８／４６６４５号、同第９８／５０４３３号、同第９８／２４８９３号、同第９８
／１６６５４号、同第９６／３４０９６号、同第９６／３３７３５号及び同第９１／１０
７４１号も参照のこと。
【０１５５】
ヒト抗体は、機能的な内因性の免疫グロブリンを発現することはできないがヒト免疫グ
ロブリンポリヌクレオチドを発現することは可能であるトランスジェニックマウスを使用
して、生産されることも可能である。例えば、ヒトの重鎖及び軽鎖免疫グロブリンポリヌ
クレオチド複合体は、マウスの胚性幹細胞へ、無作為に、又は相同組換えにより、導入さ
れることが可能である。別例として、ヒトの可変領域、定常領域、及びダイバーシティ領
域（ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｒｅｇｉｏｎ）がヒトの重鎖及び軽鎖のポリヌクレオチドに加
えてマウスの胚性幹細胞に導入されてもよい。マウスの重鎖及び軽鎖免疫グロブリンポリ
ヌクレオチドは、相同組換えによるヒト免疫グロブリン遺伝子座の導入を用いて別個又は
同時に機能しないようになされうる。特に、ＪＨ領域のホモ接合性の欠失は内因性の抗体
産生を妨げる。改変された胚性幹細胞は増殖せしめられて、キメラマウスを生産するため
に胚盤胞に顕微鏡下注入される。このキメラマウスは次に、ヒト抗体を発現するホモ接合
体の子孫を生じるために繁殖せしめられる。該トランスジェニックマウスは、選択された
抗原、例えば本発明のポリペプチドのうち全て又は一部を用いて通常の方法で免疫化され
る。
【０１５６】
よって、そのような技法を使用して、有用なヒトＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤ及び
ＩｇＥ抗体を生産することが可能である。ヒト抗体を生産するための技術の概観について
は、ロンバーグ（Ｌｏｎｂｅｒｇ）及びフサール（Ｈｕｓｚａｒ）（ロンバーグ（Ｌｏｎ
ｂｅｒｇ）、Ｎ．ら、「トランスジェニックマウス由来のヒト抗体（Ｈｕｍａｎ  ａｎｔ
ｉｂｏｄｉｅｓ  ｆｒｏｍ  ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ  ｍｉｃｅ）」、インターナショナル
・レビュー・オブ・イムノロジー（Ｉｎｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．）、１９９５年、
第１３巻、第１号、ｐ．６５−９３）を参照されたい。ヒト抗体およびヒトモノクローナ
ル抗体を生産するための技術の詳細な議論及びそのような抗体を生産するためのプロトコ
ールについては、例えば、それぞれ参照により全体が本願に組み込まれるＰＣＴ国際公開
第９８／２４８９３号；同第９２／０１０４７号；同第９６／３４０９６号；同第９６／
３３７３５号；米国特許第５，４１３，９２３号；同第５，６２５，１２６号；同第５，
６３３，４２５号；同第５，５６９，８２５号；同第５，６６１，０１６号；同第５，５
４５，８０６号；同第５，８１４，３１８号；同第５，８８５，７９３号；同第５，９１
６，７７１号；同第５，９３９，５９８号；同第６，０７５，１８１号；及び同第６，１
１４，５９８号明細書を参照のこと。加えて、アブジェニクス社（Ａｂｇｅｎｉｘ，  Ｉ
ｎｃ．）（米国カリフォルニア州フリーモント）、プロテイン・デザイン・ラブズ社（Ｐ
ｒｏｔｅｉｎ  Ｄｅｓｉｇｎ  Ｌａｂｓ，  Ｉｎｃ．）（米国カリフォルニア州マウンテ
ンビュー）及びジェンファーム（Ｇｅｎｐｈａｒｍ）（米国カリフォルニア州サンホセ）
のような会社は、上述の技術に類似の技術を使用した、選択抗原に対するヒト抗体の提供
に従事することができる。
【０１５７】
本発明の抗体分子が動物、細胞株によって産生され、化学合成され、又は組換え発現さ
れたら、該抗体分子は、免疫グロブリン又はポリペプチド分子の精製のための当分野で既
知の任意の方法によって、例えば、クロマトグラフィー（例えばイオン交換クロマトグラ
フィー、親和性クロマトグラフィー、特に特異的抗原、プロテインＡへの親和性によるも
の、及びサイズ選別（ｓｉｚｉｎｇ）カラムクロマトグラフィー）、遠心分離、溶解度差
によって、又はタンパク質精製のための任意の他の標準的技法によって、精製（すなわち
単離）されることが可能である。加えて、本発明の抗体又はそのフラグメントは、精製を
容易にするために、本明細書中に記載されているか又はその他の当分野で既知の異種ポリ
ペプチド配列に融合される場合もある。
【０１５８】
〔核酸〕
本発明は核酸分子を包含する。いくつかの実施形態では、核酸はＧＤＡをコードする。
そのような核酸分子には、限定するものではないが、ＤＮＡ分子、ＲＮＡ分子、ポリヌク
レオチド、オリゴヌクレオチド、ｍＲＮＡ分子、ベクター、プラスミドなどが含まれる。
いくつかの実施形態では、核酸はそれ自身がＧＤＡである。そのようなＧＤＡは核酸アプ
タマーを含んでなることができる。さらに含まれるのは、上記に開示された核酸分子を発
現するようにプログラム又は生成された細胞である。
【０１５９】
ＩＩ．本発明の標的
概して、本発明のＧＤＡ組成物によって結合、隔離、接触又は変更されうる任意の生体
分子、細胞構造、細胞シグナル伝達経路又は細胞ニッチは、本発明の「標的」と考えられ
る。本発明の標的としては、抗体のようなＧＤＡとの結合又は相互作用を指す場合、ＥＣ
ＣＭシグナル伝達分子、具体的にはＴＧＦ‐β及びインテグリンファミリーのＥＣＣＭシ
グナル伝達分子が挙げられる。
【０１６０】
〔ＴＧＦ‐βファミリー〕
ＴＧＦ‐βファミリーは広く重要である。胚発生においては、該ファミリーの３３個の
メンバーが主要な発生プロセス全てについて、かつほとんど全ての器官の形成の詳細につ
いて調節する。このファミリーによって調節される重要な働きの多くは出生時までに遂行
されるが、その後該ファミリーは、免疫応答、創傷治癒、骨成長、内分泌機能、及び筋肉
量を含む数多くのプロセスを調節し続ける。
【０１６１】
一部のサイトカインファミリーでは、リガンド又は受容体の発現の制限はシグナル伝達
を調節する鍵である。しかしながら、多くのＴＧＦ‐βスーパーファミリーのリガンド及
び受容体は広く発現されており、細胞外に蓄えられた潜在型からのリガンドの放出は重要
な活性化ステップである。該リガンドの重要性は、ＴＧＦ‐βシグナル伝達経路の構成要
素の進化における該リガンドの広がりによって、際立っている。ＴＧＦ‐βは単独では線
維化に関係するとされており、かつ、それぞれ未だ満たされぬ大きな医学的必要性として
認識されている腎臓線維症、肺線維症及び骨髄線維症における主な標的である。
【０１６２】
ＴＧＦ‐βスーパーファミリーの３３個のメンバーが、グリア細胞由来の神経栄養因子
（ＧＤＮＦ）に関係する４個のリガンドとともに表３に列挙されている。
【０１６３】
【表３】
2019163317.tif 000010
１つの実施形態では、ＧＤＡ抗体はミオスタチン活性を変調するように設計される。ミ
オスタチンは損傷した筋原線維の分解の調節に関与し、その欠失は筋肉量を増大させる（
ロディノ‐クラパク（Ｒｏｄｉｎｏ−Ｋｌａｐａｃ）、Ｌ．Ｒ．ら、「筋肉疾患の治療法
としてホリスタチンに重点を置いたミオスタチンの阻害（Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  
ｍｙｏｓｔａｔｉｎ  ｗｉｔｈ  ｅｍｐｈａｓｉｓ  ｏｎ  ｆｏｌｌｉｓｔａｔｉｎ  ａ
ｓ  ａ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  ｍｕｓｃｌｅ  ｄｉｓｅａｓｅ）」、マッスル・アン
ド・ナーブ（Ｍｕｓｃｌｅ  Ｎｅｒｖｅ）、２００９年３月、第３９巻、第３号、ｐ．２
８３−９６）。いくつかの実施形態では、ＧＤＡ抗体は、ミオスタチン‐プロドメイン複
合体の分解の誘発、及びミオスタチンの活性化の防止のうち少なくともいずれかに役立つ
。さらなる実施形態では、ＧＤＡ抗体は、ＢＭＰ１／トロイドプロテアーゼファミリーの
メンバーによって認識されるプロテアーゼ開裂部位を封鎖する。潜在型ＴＧＦ‐β又は潜
在型ミオスタチンに対するそのような抗体は、細胞による分泌後及び細胞外マトリックス
中での沈積前に、潜在型ＴＧＦ‐β‐ＬＴＢＰ複合体、又はプロテオグリカンとの潜在型
ミオスタチン複合体の分解を誘発するために使用される可能性も考えられる。ミオスタチ
ン活性を阻害するようなＧＤＡは、筋組織の修復及び増強のうち少なくともいずれかに使
用されてもよい。
【０１６４】
〔インテグリン〕
インテグリンはαサブユニット及びβサブユニットによって形成された細胞表面のヘテ
ロ二量体であり、該サブユニットはそれぞれ膜貫通ドメインを有し、細胞外ドメインのＮ
末端部分において集合してリガンド結合部位を形成する。よって、αＶ及びβ６の両方の
サブユニットがαＶβ６インテグリンのリガンド結合部位を形成する。
【０１６５】
インテグリンαＩＩｂβ３、α５β１及びα８β１と同様に、αＶインテグリンはＡｒ
ｇ‐Ｇｌｙ‐ＡｓｐすなわちＲＧＤ配列をリガンドの鍵成分として認識する。しかしなが
ら、αＶβ６及びαＶβ８はＴＧＦ‐β中のＲＧＤだけを認識するにとどまらず、また活
性化を必要とせずにＴＧＦ‐β１及び３に高い親和性をもって結合するという点で極めて
異例でもある。基本的に全ての他のインテグリンは、インテグリンのエクトドメインの構
造変化を誘導してリガンドへの親和性を約１，０００〜１０，０００倍に増大させる「イ
ンサイド‐アウト」シグナルについて、アクチン細胞骨格との関連によって提供される活
性化シグナルを必要とする。β６及びβ８サブユニットのノックアウトにより、前記サブ
ユニットがそれぞれ肺線維症及び樹状細胞による免疫寛容誘導において非常に重要である
ことが示されている。
【０１６６】
更に、ＲＧＤモチーフの重要な役割並びに従ってαＶβ６及びαＶβ８による活性化は
、ＲＧＤ／ＲＧＥのＴＧＦβ１のノックイン並びにβ６／β８及びＴＧＦβ１のノックア
ウトの表現型における類似性によって示される。β６及びβ８（及びβ５）サブユニット
はａｖのみと関連する。
【０１６７】
インテグリンαサブユニットの半分のサブセットは、存在する場合はリガンド結合ドメ
インである、挿入された（又はαＩ）ドメインを含有している。そのようなインテグリン
には、αＬβ２のような白血球上で選択的に発現されるβ２インテグリン、並びにコラー
ゲン結合性インテグリンであるα１β１、α２β１、α１０β１、及びα１１β１が含ま
れる。その名称である最晩期活性化抗原（ｖｅｒｙ  ｌａｔｅ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  
ａｎｔｉｇｅｎ）‐１（ＶＬＡ‐１）が意味するように、α１β１は特異抗原による活性
化後の晩期（数日の間）のみにリンパ球上で発現される。４つのコラーゲン結合性インテ
グリン全ての中で、α１に対する抗体は、ｉｎ  ｖｉｖｏの動物疾患モデルを阻害する圧
倒的に強い能力を有している。
【０１６８】
数多くのインテグリンの結晶構造が決定済みである。これらには、低分子アンタゴニス
ト並びに治療用抗体ナタリズマブ及びベドリズマブに結合したインテグリンα４β７の複
合体が含まれる（ユ（Ｙｕ）、Ｙ．ら、「回転接着を仲介するインテグリンα（４）β（
７）の構造的特殊化（Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  ｓｐｅｃｉａｌｉｚａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  
α（４）β（７），  ａｎ  ｉｎｔｅｇｒｉｎ  ｔｈａｔ  ｍｅｄｉａｔｅｓ  ｒｏｌｌ
ｉｎｇ  ａｄｈｅｓｉｏｎ）」、ザ・ジャーナル・オブ・セル・バイオロジー（Ｊ  Ｃｅ
ｌｌ  Ｂｉｏｌ．）、２０１２年１月９日、第１９６巻、第１号、ｐ．１３１−４６）。
【０１６９】
しかしながら、当分野の抗体のいずれも、α４サブユニットとβ７サブユニットとの間
の接触面の裂け目の中の低分子アンタゴニストによって定義されるリガンド結合部位には
結合しない。代わりに、該抗体はヒト／げっ歯動物アミノ酸置換を含有するエピトープに
結合し、該エピトープは抗体のＦａｂフラグメントがリガンドのドメインのうちの１つを
立体的に障害するのには十分にリガンド結合部位に近接している。このドメインは多くの
場合、インテグリンに結合するドメイン１ではなく近隣のドメイン２である。同様に、乾
癬の治療用に数年間クリニックにあった（ｗａｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｃｌｉｎｉｃ）ＬＦＡ
１のＩドメインに対する抗体は、結合を直接的には阻止しなかった。代わりに該抗体は、
ＩＣＡＭ‐１のドメイン２がＩＣＡＭ‐１のドメイン１の結合を可能にするのに十分なだ
けＬＦＡ‐１に接近するのを立体的に防止した。インテグリンに対する抗体治療薬の開発
の歴史はこのように、抗体が誘発されるのを可能にした特定のヒト／げっ歯動物アミノ酸
置換に、また第二にはリガンド結合を阻止する性質をも有していた抗体の機能的選択に、
限定されている。
【０１７０】
１つの実施形態では、特にリガンド結合部位又は他のＧＰＣ上の特異的な場所と結合又
は相互作用するように機能する抗体が企図される。
インテグリンは、ＴＧＦ‐βファミリーのメンバーほどは保存されていない。コラーゲ
ン結合性のインテグリンαサブユニットの中では、α１は、α２、α１０、及びα１１に
それぞれ３８、３４、及び３７％同一である。しかしながら、リガンド結合性のαＩドメ
インの保存はより高く、５４〜５６％である。ヒトとマウスとの間では、完全なα１エク
トドメイン及びリガンド結合性のαＩドメインはそれぞれ８８％及び９４％同一である。
αＶサブユニットは他のＲＧＤ結合性のインテグリンαサブユニットと３６〜４６％同一
であり、他のインテグリンサブファミリーのαサブユニットと１９〜２５％同一である。
ヒトとマウスとの間では、αＶ及びβ６エクトドメインはそれぞれ９３及び９０％同一で
ある。
【０１７１】
最近、ＶＬＡ‐１もセマフォリン７Ａの受容体として同定された。神経系における軸索
誘導及びシナプス形成を仲介する、セマフォリンのサブセットは、免疫系において機能し
、かつ阻止抗体としての本発明の標的でもある。
【０１７２】
インテグリンα４β１、α４β７、及びαＬβ２（ＬＦＡ‐１）は、多発性硬化症、ク
ローン病、及び乾癬を含むリンパ球を介した自己免疫性疾患の標的であることが既に証明
されている。インテグリンα１β１（ＶＬＡ‐１）及びαＶインテグリン（αＶβ６及び
αＶβ８）は線維症の有望な標的であり、これらそれぞれに対する抗体が本発明によって
企図されている。
【０１７３】
本発明のインテグリンサブユニット標的は表４に列挙されている。
【０１７４】
【表４】
2019163317.tif 000011
〔タイプＩ、タイプＩＩ及びタイプＩＩＩ受容体〕
タイプＩ、ＩＩ及びＩＩＩ受容体も本発明の標的として企図される。細胞の外側では、
ＴＧＦ‐βはタイプＩＩＩのＴＧＦ‐β受容体（ＲＩＩＩ）又はタイプＩＩのＴＧＦ‐β
受容体（ＲＩＩ）のいずれかに結合することができる。ＲＩＩＩは単にＲＩＩ受容体への
ＴＧＦ‐βの呈示において機能する。ＲＩＩＩタンパク質は最も豊富であり、ＴＧＦ‐β
シグナル伝達活性全体を決定するのに重要な因子である。それらは高い親和性をもってＴ
ＧＦ‐βに結合し、異なる種類の細胞で発現される異なる種類が存在する。βグリカンと
しても知られるＴＧＦ‐β受容体３（ＴＧＦＢＲ３）は遍在的に発現される一方、別のＲ
ＩＩＩであるエンドグリンは主として血管内皮細胞で発現されている。いずれも、小さな
細胞内ドメインと大きな細胞外ドメインとを備えたタイプＩの膜貫通型タンパク質である
。これらはさらに、いずれもその細胞外ドメインの開裂を生じやすく、該ドメインは可溶
性のアンタゴニストとなって、ＴＧＦ‐βが細胞と相互作用することができる前にＴＧＦ
‐βに結合して中和する。
【０１７５】
ＲＩＩへのＴＧＦ‐βの結合は、タイプＩのＴＧＦ‐β受容体（ＲＩ）の動員をもたら
す。アクチビン様受容体キナーゼ（ＡＬＫ）としても知られる７種のＲＩタンパク質及び
多数のＲＩＩタンパク質がある（表５に列挙）。ともに、ＴＧＦ‐β、ＲＩ及びＲＩＩは
組み合わさって成長因子‐受容体複合体（ＧＲＣ）を形成する。ＧＲＣの形成は、ＲＩタ
ンパク質キナーゼによるＲＩのチロシン及びセリン／トレオニン残基におけるリン酸化を
刺激する。リン酸化されると、ＲＩ自身がキナーゼ活性を示してＳｍａｄ転写因子のリン
酸化及び活性化をもたらす。
【０１７６】
Ｒ‐Ｓｍａｄ（受容体に関連するＳｍａｄ）、Ｃｏ‐Ｓｍａｄ（協働的Ｓｍａｄ）及び
Ｉ‐Ｓｍａｄ（阻害性Ｓｍａｄ）を含む３群のＳｍａｄが存在する。Ｒ‐Ｓｍａｄは、Ｒ
Ｉリン酸化による活性化の前は細胞質において不活性なままである転写因子である。Ｒ‐
Ｓｍａｄの中には、Ｓｍａｄ１、Ｓｍａｄ２、Ｓｍａｄ３、Ｓｍａｄ５及びＳｍａｄ８が
ある。リン酸化されたＲ‐ＳｍａｄはＣｏ‐ＳｍａｄであるＳｍａｄ４に結合し、その後
ともに核へと移動してＴＧＦ‐β応答性遺伝子の発現において他の転写因子と連携する。
発現される遺伝子の中には、Ｉ‐ＳｍａｄであるＳｍａｄ６及びＳｍａｄ７の遺伝子があ
る。それらの発現は、継続的ＴＧＦ‐βシグナル伝達を抑制するネガティブフィードバッ
クループの一部である（サンティバニェス（Ｓａｎｔｉｂａｎｅｚ）、Ｊ．Ｆ．ら、「Ｔ
ＧＦ‐β／ＴＧＦ‐β受容体システム及び生理的・病理学的状態における該システムの役
割（ＴＧＦ−ｂｅｔａ／  ＴＧＦ−ｂｅｔａ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｓｙｓｔｅｍ  ａｎｄ
ｉｔｓ  ｒｏｌｅ  ｉｎ  ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｎｄ  ｐａｔｈｏｌｏｇｉ
ｃａｌ  ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ）」、クリニカル・サイエンス（Ｃｌｉｎ  Ｓｃｉ）（英
国ロンドン）、２０１１年９月、第１２１巻、第６号、ｐ．２３３−５１；ブローブ（Ｂ
ｌｏｂｅ）、Ｇ．Ｃ．ら、「ヒトの疾患における形質転換成長因子βの役割（Ｒｏｌｅ  
ｏｆ  ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ｂｅｔａ  ｉｎ  ｈｕ
ｍａｎ  ｄｉｓｅａｓｅ）」、ザ・ニュー・イングランド・ジャーナル・オブ・メディシ
ン（Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ）、２０００年５月４日、第３４２巻、第１８号、ｐ．１
３５０−８）。
【０１７７】
【表５】
2019163317.tif 000012
本発明によれば、ＲＩ、ＲＩＩ又はＲＩＩＩ受容体の結合部位のみを選択的に封鎖する
抗体が設計されてもよく、かつそういうものとしてこれらの抗体はアンタゴニストとして
作用して、いずれの部位への結合も阻止する抗体よりも優れた機能を果たすであろう。単
一の受容体結合部位に特異的な抗体であって、現在臨床試験中であり有効性を示している
受容体‐Ｆｃ融合タンパク質と同様にアンタゴニストとして使用されうる抗体も企図され
る。加えて、受容体のタイプ間の相互作用部位に結合してＧＲＣ形成を増強又は混乱させ
る抗体が企図される。
【０１７８】
〔Ｎｏｔｃｈ（ノッチ）及びＷｎｔ（ウィント）経路のメンバー〕
Ｎｏｔｃｈ及びＷｎｔシグナル経路のタンパク質はマウスとヒトとの間で９０％以上同
一である。Ｎｏｔｃｈ１は急性リンパ性白血病の５０％において突然変異しており、該突
然変異は活性化している。古典的なＮｏｔｃｈシグナル伝達は、Ｎｏｔｃｈ膜貫通型受容
体へのリガンドタンパク質の結合を伴う。結合によりタンパク質分解性の開裂が始まり、
細胞内ドメインが放出されるが、該ドメインは核へ移行してＮｏｔｃｈ依存性の遺伝子調
節に参加することが可能な部位である（アンデション（Ａｎｄｅｒｓｓｏｎ）、Ｅ．Ｒ．
ら、「Ｎｏｔｃｈシグナル伝達：設計の簡潔性、機能の万能性（Ｎｏｔｃｈ  ｓｉｇｎａ
ｌｉｎｇ：  ｓｉｍｐｌｉｃｉｔｙ  ｉｎ  ｄｅｓｉｇｎ，  ｖｅｒｓａｔｉｌｉｔｙ  
ｉｎ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ）」、ディベロプメント（Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ）、２０１１
年９月、第１３８巻、第１７号、ｐ．３５９３−６１２）。いくつかの実施形態では、Ｎ
ｏｔｃｈ膜貫通型受容体は、該受容体のタンパク質分解性の開裂を変調する調節要素を含
んでなる。Ｎｏｔｃｈ抗体の開発においてはすでにいくらかの進歩がなされてきた。「Ｗ
ｎｔ」タンパク質は、本明細書中で言及されるように、細胞の極性、可塑性、成長および
増殖を方向付けることが知られた細胞シグナル伝達タンパク質群である。いくつかの実施
形態では、Ｗｎｔタンパク質は成長因子であってよい。該タンパク質は、ハエで同定され
た遺伝子Ｗｉｎｇｌｅｓｓ（ウィングレス）と、ウイルス誘導性の乳房腫瘍におけるアッ
プレギュレーションにより同定されたＩｎｔ‐１遺伝子との組み合わせによって命名され
ている。古典的なＷｎｔシグナル伝達は、対応するＦｒｉｚｚｌｅｄ（Ｆｚ）受容体及び
共受容体である低密度リポタンパク質受容体様タンパク質（ＬＲＰ）５又は６へのＷｎｔ
タンパク質の結合を伴う。細胞内での効果は、β‐カテニンを分解から救済してβ‐カテ
ニンが核に移動して遺伝調節に参加するのを可能にすることである。Ｗｎｔシグナル伝達
は、いくつかの疾患において混乱を来していることが示されている。そのような疾患の例
には、限定するものではないが、がん、糖尿病及び冠動脈疾患が挙げられる（クレバーズ
（Ｃｌｅｖｅｒｓ）、Ｈ．ら、「Ｗｎｔ／β‐カテニンシグナル伝達と疾患（Ｗｎｔ／β
−ｃａｔｅｎｉｎ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ａｎｄ  ｄｉｓｅａｓｅ）」、セル（Ｃｅｌｌ
）、２０１２年６月８日、第１４９巻、第６号、ｐ．１１９２−２０５）。いくつかの実
施形態では、Ｗｎｔタンパク質は調節要素を含んでなる。そのような要素はＷｎｔの他の
因子との関連付けに必要とされる場合がある。１つの実施形態では、Ｗｎｔ調節要素は、
Ｗｎｔの、ＥＣＣＭ構成要素、例えば、限定するものではないが糖部分及びプロテオグリ
カンのうち少なくともいずれかとの相互作用を変調する。いくつかの実施形態では、ＧＤ
Ａは、Ｎｏｔｃｈ及びＷｎｔのうち少なくともいずれかの調節要素を標的として、Ｎｏｔ
ｃｈ及びＷｎｔのうち少なくともいずれかの活性の刺激、増強、阻害及び阻止のうち少な
くともいずれかをもたらしうる。いくつかの実施形態では、ＧＤＡは、Ｗｎｔ及びＮｏｔ
ｃｈ依存的な細胞シグナル伝達に関与するタンパク質を標的とすることにより、Ｎｏｔｃ
ｈ又はＷｎｔの活性を変調するように作用することができる。そのような標的は表６に列
挙されている。
【０１７９】
【表６】
2019163317.tif 000013
2019163317.tif 000014
2019163317.tif 000015
2019163317.tif 000016
〔天然のアンタゴニスト〕
いくつかの天然のアンタゴニスト、例えば骨形態形成タンパク質（ＢＭＰ）アンタゴニ
ストであるコーディン（ｃｈｏｒｄｉｎ）、ノギン（ｎｏｇｇｉｎ）、グレムリン（ｇｒ
ｅｍｌｉｎ）、スクレロスチン（ｓｃｌｅｒｏｓｔｉｎ）、及びツイステッドガスツラレ
イション（ｔｗｉｓｔｅｄ  ｇａｓｔｒｕｌａｔｉｏｎ）はｉｎ  ｖｉｖｏにおいて発生
を調節するために機能する。システインノットモチーフはこれらのアンタゴニストの多く
に存在し、該アンタゴニストは主にリガンドが受容体と相互作用するのを妨げる。一部の
アンタゴニストは成熟型リガンドのプロセシングを妨げる。また、強力なＷｎｔ経路阻害
剤でもあるスクレロスチンに対する、あるモノクローナル抗体は、骨粗鬆症において骨量
を増加させるための新たなアプローチとして臨床試験中であるが、その他の天然アンタゴ
ニストに対する抗体も依然として必要とされている。
【０１８０】
例えば、ディックコプフ（Ｄｉｃｋｋｏｐｆ）１（ＤＫＫ１）及び分泌型フリズルド関
連タンパク質（ＳＦＲＰ１）は骨量を負に調節するような２つの阻害因子であり、骨粗鬆
症において拮抗の対象となされることが考えられる。標的となされうる別の天然のアンタ
ゴニストはホリスタチンである。ホリスタチンは、高い親和性を伴ってアクチビン依存性
のシグナル伝達と相互作用し、かつ該シグナル伝達を阻止するアクチビン結合タンパク質
である。ホリスタチン遺伝子はアクチビンシグナル伝達によってもアップレギュレートさ
れて、該経路に負のフィードバック阻害を提供する。ホリスタチンの発現は身体全体にわ
たって比較的遍在し、かつアクチビン‐ホリスタチン系は様々な組織における多数の障害
に関係しており、ホリスタチンを潜在的治療薬の魅力的な標的たらしめている（アオキ（
Ａｏｋｉ）、Ｆ．ら、「組織再生の促進及び組織線維症の防止のためのホリスタチンの治
療的潜在性（Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｏｆ  ｆｏｌｌｉｓｔａｔ
ｉｎ  ｔｏ  ｐｒｏｍｏｔｅ  ｔｉｓｓｕｅ  ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｐｒ
ｅｖｅｎｔ  ｔｉｓｓｕｅ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ）」、エンドクライン・ジャーナル（Ｅｎ
ｄｏｃｒ  Ｊ．）、２００７年１２月、第５４巻、第６号、ｐ．８４９−５４、電子出版
（Ｅｐｕｂ）２００７年１０月１５日）。
【０１８１】
本発明のＧＤＡは、そのような天然のアンタゴニストを対象とするように設計されても
よい。これらの組成物は、阻害因子（天然のアンタゴニスト）を阻止することによりシグ
ナル伝達の阻害を軽減し、成長因子の放出という最終的な結果をもたらすように機能する
ことになろう。
【０１８２】
抗体を作製するために使用されうる天然のアンタゴニストには、表７に列挙されたもの
が挙げられる。
【０１８３】
【表７】
2019163317.tif 000017
ＩＩＩ．方法及び用途
〔治療薬〕
本発明の組成物及び方法は種々様々の障害及び状態を治療するために使用されうる。こ
れらには、限定するものではないが、線維症、高齢者の貧血、がん、化学療法後の迅速な
造血の促進、骨治癒、血管内膜増殖症候群及び希少適応のマルファン症候群、カムラチ・
エンゲルマン病が挙げられる。疾患の治療又は軽快という有効性は、例えば、疾患の進行
、疾患の緩解、症状の重症度、疼痛の低減、生活の質、治療効果を保持するために必要な
薬物の用量、疾患マーカーのレベル、又は治療対象若しくは予防対象である所与の疾患に
関して適切な任意の他の測定可能なパラメータ、を測定することによって評価可能である
。そのようなパラメータのうち任意のもの又はパラメータの任意の組み合わせを測定する
ことによる、治療又は予防の有効性のモニタリングは、十分に当業者の能力の範囲内にあ
る。ＧＤＡ又はＧＤＡの医薬組成物の投与に関して、例えばがんに「対して有効である」
とは、臨床的に適切な方法での投与が、少なくとも統計的に有意な割合の患者について有
益な効果を、例えば症状の好転、治癒、疾病負荷（ｄｉｓｅａｓｅ  ｌｏａｄ）の低減、
腫瘍の重量若しくは細胞数の低減、寿命の延長、生活の質の改善、又は、特定のタイプの
がんの治療に精通している医師が肯定的であるとして概ね認識するその他の効果をもたら
すということを示している。
【０１８４】
治療効果又は予防効果は、疾患の状態の１以上のパラメータに統計的に有意な改善があ
る場合、又は本来であれば予想される症状の悪化若しくは発症の不在によって、明白であ
る。例としては、疾患の測定可能なパラメータの少なくとも１０％、及び好ましくは少な
くとも２０％、３０％、４０％、５０％又はそれ以上の望ましい変化が、有効な治療を示
す可能性がある。所与のＧＤＡ薬又はその薬物の調合物についての有効性は、当分野で知
られているような所与の疾患に関する実験動物モデルを使用して判断することも可能であ
る。実験動物モデルを使用する場合、治療の有効性は統計的に有意な変化が観察される場
合に証明される。
【０１８５】
〔線維症の治療薬〕
ＴＧＦ‐βのアンタゴニストの主な適用は線維症の治療である。ＴＧＦ‐βは線維化反
応の中心的な首謀者であると認識されている。
【０１８６】
線維症の興味深い１つの側面は、ＴＧＦ‐βファミリーの複数のメンバーが互いの作用
に特異的に拮抗しうるということである。例えば、ＢＭＰ経路は線維症に対するＴＧＦ‐
βの影響に拮抗することができる。ＢＭＰは、ＳＭＡＤ２及び３を活性化するＴＧＦ‐β
とは対照的に、ＳＭＡＤ１、５及び８を活性化することが知られている。これらのＳＭＡ
Ｄシグナル伝達転写因子は、各々とともに二量体化する共有のＳＭＡＤ４について競合す
る。
【０１８７】
実験的腎線維症のモデルでは、ＴＧＦ‐βはアップレギュレートされ、ＢＭＰ７はダウ
ンレギュレートされる。正常な腎臓においてすら、ＢＭＰ７はフィブロネクチン及びコラ
ーゲンＩＩＩを抑制することが示されている。ＢＭＰ７は、いくつかの腎障害モデルにお
いて腎臓を線維症から防御するように見える。ＢＭＰシグナル伝達を誘導するための開発
中の方法は線維症を変化させる可能性がある。
【０１８８】
線維症は多くの種類の組織破壊的な疾患の、共通の続発症である。通常は組織内のニッ
チを占めている分化細胞、前駆細胞又は幹細胞の崩壊によって新たな空間が作り出された
とき、既定の道筋はその空いた空間を埋めるための結合組織細胞（例えば線維芽細胞）の
増殖であるようである。これは、組織の瘢痕化及び恒久的な退縮（ｅｆｆａｃｅｍｅｎｔ
）をもたらすコラーゲンを含む細胞外マトリックス構成分子の産生を伴う。
【０１８９】
線維症の困難な側面はその慢性化であり、慢性化は、実質細胞の根本的な破壊が終了す
るか、又は細胞が幹細胞プールによって、若しくは移植によって置き換えられるまで、継
続的な治療を必要とする場合がある。線維症は回復させるよりも阻止するほうがはるかに
簡単であると思われる。ＴＧＦ‐βファミリーは、線維芽細胞の成長及びコラーゲンを含
む細胞外マトリックス構成分子の産生を調節する際に非常に重要である。インテグリンα
Ｖβ６及びαＶβ８はＴＧＦ‐β１及び３の活性化に必要である。インテグリンＶＬＡ‐
１はコラーゲンの受容体であってリンパ球の活性化後晩期にのみリンパ球上で発現され、
線維化疾患の発症に強く関わっている。
【０１９０】
いくつかの実施形態では、ＧＤＡ抗体は、線維化を阻害するためにインテグリンαＶβ
６のＴＧＦ‐β活性化を阻止するように設計される。いくつかの実施形態では、ＧＤＡ抗
体は、ＧＰＣとＬＴＢＰとの間の相互作用部位を標的とするがＧＰＣとＧＡＲＰとの間の
相互作用部位には影響しないままであるように設計される。そのようなＧＤＡ抗体は阻害
抗体として作用して、成長因子シグナル伝達を防止して線維化を阻害することができる。
【０１９１】
線維症の治療についてのＧＤＡの有効性を判定するのに有用なアッセイには、当分野で
既知の線維芽細胞計数用の組織学的アッセイ及び基礎的な免疫組織化学法が含まれる。
動物モデルはさらに、線維症の治療におけるＧＤＡの有効性の分析にも利用可能である
。そのようなモデルにおいては（Ｏｎ  ｓｕｃｈ  ｍｏｄｅｌ  ｉｓ）、ホーラン（Ｈｏ
ｒａｎ）らによって記載されるようなブレオマイシン誘導肺損傷モデルがある（ホーラン
（Ｈｏｒａｎ）Ｇ．Ｓ．ら、「インテグリンα（ｖ）β６の部分阻害は炎症を悪化させる
ことなく肺線維症を防止する（Ｐａｒｔｉａｌ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｉｎｔｅ
ｇｒｉｎ  ａｌｐｈａ（ｖ）ｂｅｔａ６  ｐｒｅｖｅｎｔｓ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｆｉ
ｂｒｏｓｉｓ  ｗｉｔｈｏｕｔ  ｅｘａｃｅｒｂａｔｉｎｇ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ
）」、アメリカン・ジャーナル・オブ・レスピラトリー・アンド・クリティカル・ケア・
メディシン（Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ）、２００８年１月
１日、第１７７巻、第１号、ｐ．５６−６５、電子出版２００７年１０月４日）。このモ
デルでは、ＳＶ１２９マウスは、肺線維症の発症をもたらすブレオマイシンに経気管的に
曝露される。このモデルを用いて、治療薬候補が腹腔内注射によって投与され、一方で死
後肺組織又は気管支肺胞洗浄収集物が線維化活性の指標としてヒドロキシプロリンのレベ
ルについてアッセイされることが可能である。同じ技法を使用して、コラーゲンＩα２遺
伝子プロモータによって駆動されるルシフェラーゼレポーター遺伝子を担持するマウスが
該モデルに使用されて、線維化活性がコラーゲン遺伝子誘導に応じたルシフェラーゼ活性
のアッセイによって判定されてもよい。
【０１９２】
よく確立された腎線維症のモデルは、一側尿管結紮（ＵＵＯ）モデルである。このモデ
ルでは、マウスには近位尿管の結紮が施される。数時間〜数日の期間の後、結紮によって
塞がれた領域において線維化の検査が行われる。１例では、この方法は腎線維症における
Ｓｍａｄ２の役割を調べるためにモウ（Ｍｅｎｇ）、Ｘ．Ｍ．らによって利用された（モ
ウ（Ｍｅｎｇ）、Ｘ．Ｍ．ら、「ＴＧＦ‐β／Ｓｍａｄ３介在型の腎線維症に対するＳｍ
ａｄ２防御（Ｓｍａｄ２  Ｐｒｏｔｅｃｔｓ  ａｇａｉｎｓｔ  ＴＧＦ−ｂｅｔａ／Ｓｍ
ａｄ３−Ｍｅｄｉａｔｅｄ  Ｒｅｎａｌ  Ｆｉｂｒｏｓｉｓ）」、ジャーナル・オブ・ジ
・アメリカン・ソサイエティ・オブ・ネフロロジー（Ｊ  Ａｍ  Ｓｏｃ  Ｎｅｐｈｒｏｌ
）、２０１０年９月、第２１巻、第９号、ｐ．１４７７−８７、電子出版２０１０年７月
１日）。Ｓｍａｄ２はＴＧＦ‐β細胞シグナル伝達経路の細胞内のメンバーである。
【０１９３】
〔貧血、血小板減少症及び好中球減少症の治療薬〕
１つの実施形態では、ＧＤＡは、貧血（赤血球の減少）、血小板減少症（血小板数の減
少）及び好中球減少症（好中性数の減少）のうち少なくともいずれかに罹患している患者
を治療するために設計されうる。
【０１９４】
化学療法の際、がん細胞の成長及び拡散を防止するために細胞分裂は一時的に停止せし
められる。不運な副作用は、骨髄細胞の活発な細胞分裂に依存している赤血球、血小板及
び白血球の減少である。ＢＭＰは、硬骨の健康及び治癒の重要な調節因子である（リッセ
ンバーグ‐トゥンニッセン（Ｌｉｓｓｅｎｂｅｒｇ−Ｔｈｕｎｎｉｓｓｅｎ）、Ｓ．Ｎ．
ら、「骨折治癒における骨形態形成タンパク質の使用及び有効性（Ｕｓｅ  ａｎｄ  ｅｆ
ｆｉｃａｃｙ  ｏｆ  ｂｏｎｅ  ｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｔｉｃ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｉｎ
ｆｒａｃｔｕｒｅ  ｈｅａｌｉｎｇ）」、インターナショナル・オルソペディクス（Ｉ
ｎｔ  Ｏｒｔｈｏｐ）、２０１１年９月、第３５巻、第９号、ｐ．１２７１−８０）。本
発明のＧＤＡは、ＢＭＰ（好ましくはＢＭＰ２及びＢＭＰ７のうち少なくともいずれか）
アゴニストとして機能することによって、化学療法後の骨髄細胞の回復、ひいては好中性
及び血小板の機能の産生の、速度を上げることができる。そのようなＧＤＡは、化学療法
を受けているか又は化学療法の影響から回復しつつある個体のための重要な治療薬である
かもしれない。
【０１９５】
ＢＭＰ機能に拮抗するための特に興味深い適用は高齢者の貧血の治療にある。体内での
鉄の輸送は長年研究された経路によって調節されている。ヘプシジンは、年配者の慢性炎
症において異常にアップレギュレートされる急性期タンパク質であり、鉄の平衡失調をも
たらす。ヘプシジンは鉄の排出体であるフェロポーチンに結合し、この排出体の内在化を
引き起こす。多くの組織中の細胞は鉄過剰の状態に固定され、ヘモグロビンを作るために
鉄を必要とする赤血球系に鉄を送達することができない。これらの患者への鉄の供給は、
鉄過剰をより悪化させる以外の効果がない。何百万人もの患者が慢性疾患性貧血を有して
おり、現在有効な治療法はない。ヘプシジン合成については、肝細胞表面上のネオゲニン
（ｎｅｏｇｅｎｉｎ）及びヘモジュベリン（ｈｅｍｏｊｕｖｅｌｉｎ）と共にＢＭＰ６に
よってシグナルが送られる（チャン（Ｚｈａｎｇ）Ａ．Ｓ．ら、「ヘモジュベリン‐ヘプ
シジンを軸とした全身的な鉄ホメオスタシスの制御（Ｃｏｎｔｒｏｌ  ｏｆ  ｓｙｓｔｅ
ｍｉｃ  ｉｒｏｎ  ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ  ｂｙ  ｔｈｅ  ｈｅｍｏｊｕｖｅｌｉｎ−
ｈｅｐｃｉｄｉｎ  ａｘｉｓ）」、アドバンシズ・イン・ニュートリション（Ａｄｖ  Ｎ
ｕｔｒ）、２０１０年１１月、第１巻、第１号、ｐ．３８−４５、電子出版２０１０年１
１月１６日）。ヘモジュベリンは、ごく最近同定され、かつ抗体についての記述がほとん
どない、高度に保存されたタンパク質である。その発現は肝臓及び骨格筋に限定されてお
り、肝臓及び骨格筋のいずれにおいても鉄の調節における役割を果たしているが、肝臓が
最も重要な部位である。
【０１９６】
従って、ヘモジュベリンに結合し、かつヘモジュベリンとＢＭＰ６又はネオゲニンのい
ずれかとの相互作用を阻止する抗体は、高齢者の貧血を防止する高度に特異的なアンタゴ
ニストになるであろう。そのような抗体は本明細書中で企図されている。
【０１９７】
マウスのほかにヒトのモデルもそのような抗体の最適化を可能にすることが当分野にお
いて知られている。そのようなモデルには、鉄欠乏症の食餌性モデルが挙げられる。マウ
スでは、３週間以上にわたって鉄を含まない食餌及び脱イオン水に制限すれば、鉄欠乏症
を引き起こすのに十分である（カウツ（Ｋａｕｔｚ）、Ｌ．ら、「鉄はマウス肝臓におけ
るＳｍａｄ１／５／８のリン酸化並びにＢｍｐ６、Ｓｍａｄ７、Ｉｄ１及びＡｔｏｈ８の
遺伝子発現を調節する（Ｉｒｏｎ  ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏ
ｎ  ｏｆ  Ｓｍａｄ１／５／８  ａｎｄ  ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｂｍ
ｐ６，  Ｓｍａｄ７，  Ｉｄ１，  ａｎｄ  Ａｔｏｈ８  ｉｎ  ｔｈｅ  ｍｏｕｓｅ  ｌ
ｉｖｅｒ）」、ブラッド（Ｂｌｏｏｄ）、２００８年８月１５日、第１１２巻、第４号、
ｐ．１５０３−９、電子出版２００８年６月６日）。マウスの鉄過剰は、約８か月の間カ
ルボニル鉄を食餌で補給することによって誘導可能である。例として、この期間の間３％
のカルボニル鉄を補給することにより、約１０倍の血清中鉄濃度の増加がもたらされる（
ピジョン（Ｐｉｇｅｏｎ）、Ｃ．ら、「ヒト抗微生物ペプチドのヘプシジンに相同なタン
パク質をコードする新たなマウス肝臓特異遺伝子は鉄過剰の際に過剰発現する（Ａ  ｎｅ
ｗ  ｍｏｕｓｅ  ｌｉｖｅｒ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｇｅｎｅ，  ｅｎｃｏｄｉｎｇ  ａ  
ｐｒｏｔｅｉｎ  ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ  ｔｏ  ｈｕｍａｎ  ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａ
ｌ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｈｅｐｃｉｄｉｎ，  ｉｓ  ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ｄｕｒ
ｉｎｇ  ｉｒｏｎ  ｏｖｅｒｌｏａｄ）」、ザ・ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケ
ミストリー（Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ）、２００１年３月１６日、第２７６巻、第１１号
、ｐ．７８１１−９、電子出版２０００年１２月１１日）。
【０１９８】
ヒトにおいて鉄レベルの上昇を研究する方法も利用可能である。リン（Ｌｉｎ）Ｌらに
よるそのような１つの研究では（リン（Ｌｉｎ）、Ｌ．ら、「鉄トランスフェリンはヘモ
ジュベリン及びＢＭＰ２／４を通じて初代肝細胞培養物におけるヘプシジン合成を調節す
る（Ｉｒｏｎ  ｔｒａｎｓｆｅｒｒｉｎ  ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  ｈｅｐｃｉｄｉｎ  ｓｙ
ｎｔｈｅｓｉｓ  ｉｎ  ｐｒｉｍａｒｙ  ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ  ｃｕｌｔｕｒｅ  ｔｈ
ｒｏｕｇｈ  ｈｅｍｏｊｕｖｅｌｉｎ  ａｎｄ  ＢＭＰ２／４）」、ブラッド（Ｂｌｏｏ
ｄ）、２００７年９月１５日、第１１０巻、第６号、ｐ．２１８２−９、電子出版２００
７年５月３１日）、硫酸鉄の形態の６５ｍｇの鉄（米国カリフォルニア州ミッション・ヒ
ルズのネイチャーメイド（Ｎａｔｕｒｅ  Ｍａｄｅ））が健康なボランティアに提供され
た。ヘプシジンの発現が変更されたマウス系統も当分野において知られており、それぞれ
ＢＭＰ６及びヘモジュベリンの発現を欠いている、Ｂｍｐ６機能喪失（ｎｕｌｌ）（Ｂｍ
ｐ６ｍ１Ｒｏｂ）マウス（アンドリオポーロス（Ａｎｄｒｉｏｐｏｕｌｏｓ）、Ｂ．Ｊｒ
．ら、「ＢＭＰ６はヘプシジン発現及び鉄代謝の重要な内因性調節因子である（ＢＭＰ６
ｉｓ  ａ  ｋｅｙ  ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒ  ｏｆ  ｈｅｐｃｉｄ
ｉｎ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  ｉｒｏｎ  ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ．）」、ネイチ
ャー・ジェネティクス（Ｎａｔ  Ｇｅｎｅｔ．）、２００９年４月、第４１巻、第４号、
ｐ．４８２−７、電子出版２００９年３月１日）並びにヘモジュベリン機能喪失（Ｈｊｖ
−／−）マウス（ホアン（Ｈｕａｎｇ）、Ｆ．Ｗ．ら、「若年性血色素症のマウスモデ
ル（Ａ  ｍｏｕｓｅ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ｊｕｖｅｎｉｌｅ  ｈｅｍｏｃｈｒｏｍａｔｏ
ｓｉｓ．）」、ザ・ジャーナル・オブ・クリニカル・インベスティゲーション（Ｊ  Ｃｌ
ｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．）、２００５年８月、第１１５巻、第８号、ｐ．２１８７−９１）
が挙げられる。野生型マウスと比較すると、若いＢｍｐ６機能喪失マウスは肝臓のヘプシ
ジンｍＲＮＡのレベルの著しい減少（１０倍）及び血清中の鉄レベルの増加を示す。ヘモ
ジュベリン機能喪失マウスは鉄の急速かつ全身性の蓄積を患う。加えて、肝臓のヘプシジ
ンレベルはダウンレギュレートされる。
【０１９９】
ほとんどのＢＭＰについては、その後の成長因子の放出は受容体が存在する状態で起き
ることになろう。別例として、ＢＭＰに拮抗する多数のタンパク質が、ＢＭＰシグナル伝
達を活性化するために、阻害性のＧＤＡ抗体を用いた標的とされることも考えられる。
【０２００】
ＢＭＰ又はヘモジュベリンのシグナル伝達を対象とする抗体の検出又は有効性の判定の
うち少なくともいずれかのためのアッセイには、標準的なＳｍａｄシグナル伝達アッセイ
、鉄代謝の測定、赤血球指数、酵素結合免疫吸着定量法（ＥＬＩＳＡ）、遺伝子及びタン
パク質の発現分析、細胞の形状の判定、血色素量などが含まれ、これらはそれぞれ当業者
に周知である。筋肉の消耗、サテライト細胞の計数及び筋肉量の決定も使用されうる。
【０２０１】
〔がんの治療薬〕
様々ながんが本発明のＧＤＡを用いて治療される可能性がある。例えば、ＧＤＡを含有
する組成物ががんの治療に使用される。本明細書中で使用されるように、がんとは、周囲
の組織に侵入して新たな身体部位へと転移する傾向を有する未分化細胞の増殖という特性
を有する様々な悪性新生物のうち任意のものを指し、かつそのような悪性新生物の成長と
いう特性を有する病理学的状態をも指している。がんは腫瘍である場合もあれば悪性血液
疾患である場合もあり、限定されるものではないが、すべての種類のリンパ腫／白血病、
癌腫及び肉腫、例えばがん又は腫瘍であって肛門、膀胱、胆管、硬骨、脳、乳房、頚部、
結腸／直腸、子宮内膜、食道、目、胆嚢、頭頚部、肝臓、腎臓、喉頭、肺、縦隔（胸部）
、口腔、卵巣、膵臓、陰茎、前立腺、皮膚、小腸、胃、脊髄、尾骨、睾丸、甲状腺及び子
宮に見出されるものが挙げられる。
【０２０２】
白血病、すなわち白血球（つまりロイコサイト）の異常増殖という特性を有する血液又
は骨髄のがんは、４つの主な分類、すなわち急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リ
ンパ球性白血病（ＣＬＬ）、急性骨髄性白血病若しくは急性骨髄白血病（ＡＭＬ）（ＡＭ
Ｌであって転座を染色体１０と１１の間［ｔ（１０，１１）］、染色体８と２１の間［ｔ
（８；２１）］、染色体１５と１７の間［ｔ（１５；１７）］に、また逆位を染色体１６
に［ｉｎｖ（１６）］伴うもの；ＡＭＬであって多血球系異形成を伴うもの（ＡＭＬへと
移行する骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）若しくは脊髄増殖性疾患を事前に有していた患者を
含む）；治療関連ＡＭＬ・骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）であって、この区分は事前に化学
療法及び放射線照射のうち少なくともいずれかを受けておりその後ＡＭＬ若しくはＭＤＳ
を発症した患者を含む；ｄ）その他の区分のＡＭＬであって、上記の区分に分類されない
ＡＭＬの亜型を含むもの；並びにｅ）系統が曖昧な急性白血病であって、白血病細胞を骨
髄性細胞若しくはリンパ球系細胞のいずれにも分類することができない場合、又は両方の
種類の細胞が存在する場合に生じるもの）；並びに、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）に分け
られる。
【０２０３】
癌の種類には、限定するものではないが、乳頭腫／乳頭癌、絨毛癌、内胚葉洞腫瘍、奇
形腫、腺腫／腺癌、黒色腫、線維腫、脂肪腫、平滑筋腫、横紋筋腫、中皮腫、血管腫、骨
腫、軟骨腫、神経膠腫、リンパ腫／白血病、扁平上皮癌、小細胞癌、大細胞未分化癌、基
底細胞癌及び副鼻腔未分化癌が挙げられる。
【０２０４】
肉腫の種類には、限定するものではないが、軟部組織肉腫、例えば胞状軟部肉種、血管
肉腫（ａｎｇｉｏｓａｒｃｏｍａ）、皮膚線維肉腫、類腱腫、線維形成性小円形細胞腫瘍
、骨外性軟骨肉腫、骨外性骨肉腫、線維肉腫、血管周皮細胞腫、血管肉腫（ｈｅｍａｎｇ
ｉｏｓａｒｃｏｍａ）、カポジ肉腫、平滑筋肉腫、脂肪肉腫、リンパ管肉腫、リンパ肉腫
、悪性線維性組織球腫、神経線維肉腫、横紋筋肉腫、滑膜肉腫、及びアスキン腫瘍、ユー
イング肉腫（原始神経上皮腫瘍）、悪性血管内皮腫、悪性シュワン腫、骨肉腫、並びに軟
骨肉腫が挙げられる。
【０２０５】
本発明はさらに、例えばがんを、他の医薬品及び他の治療方法のうち少なくともいずれ
かと、例えば既知の医薬品及び既知の治療方法のうち少なくともいずれかであって例えば
上記の障害を治療するために現在使用されているものと組み合わせて治療するための、Ｇ
ＤＡ又はその医薬組成物の使用に関する。例えば、ＧＤＡ又はその医薬組成物は、１以上
の追加の抗がん治療、例えば生物学的療法、化学療法及び放射線療法と併せて投与可能で
ある。従って、治療には、例えば、イマチニブ（Ｇｌｅｅｖａｃ（登録商標））、オール
トランス型レチノイン酸、モノクローナル抗体治療（ゲムツズマブ、オゾガマイシン）、
化学療法（例えばクロラムブチル、プレドニゾン、プレドニゾロン、ビンクリスチン、シ
タラビン、クロファラビン、ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤、デシタビン、ＭＤ
Ｒ１の阻害剤）、リツキシマブ、インターフェロン‐α、アントラサイクリン系薬（ダウ
ノルビシン又はイダルビシンなど）、Ｌ‐アスパラギナーゼ、ドキソルビシン、シクロホ
スファミド、ドキソルビシン、ブレオマイシン、フルダラビン、エトポシド、ペントスタ
チン、若しくはクラドリビン）、骨髄移植、幹細胞移植、放射線照射療法、代謝拮抗薬（
メトトレキサート及び６‐メルカプトプリン）、又はこれらの任意の組み合わせが含まれ
る。
【０２０６】
放射線照射療法（放射線療法（ｒａｄｉｏｔｈｅｒａｐｙ）、Ｘ線療法（Ｘ−ｒａｙ  
ｔｈｅｒａｐｙ）、又は放射線照射（ｉｒｒａｄｉａｔｉｏｎ）とも呼ばれる）は、がん
細胞を殺滅して腫瘍を縮小するための電離放射線の使用である。放射線照射療法は、外部
ビーム放射線療法（ＥＢＲＴ）によって外部的に、又は小線源治療によって内部的に施す
ことが可能である。放射線照射療法の効果は局所化され、治療されている領域に限られる
。放射線照射療法はほとんどすべての種類の固形腫瘍、例えば脳、乳房、頚部、喉頭、肺
、膵臓、前立腺、皮膚、胃、子宮、又は軟部組織肉腫のがんを治療するために使用されう
る。放射線照射は白血病及びリンパ腫を治療するためにも使用される。
【０２０７】
化学療法は、がん細胞を破壊することができる薬物を用いたがんの治療である。現行の
使用法では、用語「化学療法」とは通常、標的療法とは対照的に、急速に分裂する細胞全
般に作用する細胞毒を指す。化学療法剤は様々な可能な方法で細胞分裂を、例えばＤＮＡ
の複製又は新たに形成された染色体の分離を妨害する。多くのがん細胞はＤＮＡ損傷を修
復する能力がないのに対して正常細胞は一般に修復できることからある程度の特異性は生
じうるとはいえ、ほとんどの形式の化学療法は急速に分裂する細胞全てを標的とし、がん
細胞に特異的ではない。
【０２０８】
ほとんどの化学療法レジメンは組み合わせて施用される。典型的な化学療法剤には、限
定されるものではないが、５‐ＦＵ増強剤、９‐ＡＣ、ＡＧ２０３７、ＡＧ３３４０、ア
グリカナーゼ阻害剤、アミノグルテチミド、アムサクリン（ｍ‐ＡＭＳＡ）、アスパラギ
ナーゼ、アザシチジン、バチマスタット（ＢＢ９４）、ＢＡＹ１２‐９５６６、ＢＣＨ‐
４５５６、ビスナフタルイミド、ブスルファン、カペシタビン、カルボプラチン、カルム
スタイン＋ポリフェプル・オサン（Ｃａｒｍｕｓｔａｉｎｅ＋Ｐｏｌｉｆｅｐｒ  Ｏｓａ
ｎ）、ｃｄｋ４／ｃｄｋ２阻害剤、クロラムブチル、ＣＩ‐９９４、シスプラチン、クラ
ドリビン、ＣＳ‐６８２、シタラビン塩酸塩、Ｄ２１６３、ダクチノマイシン、ダウノル
ビシン塩酸塩、ＤｅｐｏＣｙｔ（商標）、デキシフォサミド（Ｄｅｘｉｆｏｓａｍｉｄｅ
）、ドセタキセル、ドラスタイン（Ｄｏｌａｓｔａｉｎ）、ドキシフルリジン、ドキソル
ビシン、ＤＸ８９５１ｆ、Ｅ７０７０、ＥＧＦＲ、エピルビシン、エリトロポイエチン、
リン酸エストラムスチンナトリウム、エトポシド（ＶＰ１６‐２１３）、ファルネシルト
ランスフェラーゼ阻害剤、ＦＫ３１７、フラボピリドール、フロクスウリジン、フルダラ
ビン、フルオロウラシル（５‐ＦＵ）、フルタミド、フラギリン（Ｆｒａｇｙｌｉｎｅ）
、ゲムシタビン、ヘキサメチルメラミン（ＨＭＭ）、ヒドロキシ尿素（ヒドロキシカルバ
ミド）、イホスファミド、インターフェロン・アルファ‐２ａ、インターフェロン・アル
ファ‐２ｂ、インターロイキン‐２、イリノテカン、ＩＳＩ６４１、クレスチン、レモナ
ール（Ｌｅｍｏｎａｌ）ＤＰ２２０２、リュープロリド酢酸塩（ＬＨＲＨ放出因子アナロ
グ）、レバミソール、ＬｉＧＬＡ（リチウム‐γリノレン酸）、ロディンシード（Ｌｏｄ
ｉｎｅ  Ｓｅｅｄ）、ロメテキソール（Ｌｏｍｅｔｅｘｏｌ）、ロムスチン（ＣＣＮＵ）
、マリミスタット（Ｍａｒｉｍｉｓｔａｔ）、メクロレタミン塩酸塩（ナイトロジェンマ
スタード）、酢酸メゲストロール、メグラミン（Ｍｅｇｌａｍｉｎｅ）ＧＬＡ、メルカプ
トプリン、メスナ、ミトグアゾン（メチル‐ＧＡＧ；）メチルグリオキサールビス‐グア
ニルヒドラゾン；ＭＧＢＧ）、ミトタン（ｏ．ｐ’‐ＤＤＤ）、ミトキサントロン、ミト
キサントロン塩酸塩、ＭＭＩ２７０、ＭＭＰ、ＭＴＡ／ＬＹ２３１５１４、オクトレオチ
ド、ＯＤＮ６９８、ＯＫ‐４３２、経口プラチナ製剤、経口タキソイド、パクリタキセル
（ＴＡＸＯＬ（登録商標））、ＰＡＲＰ阻害剤、ＰＤ１８３８０５、ペントスタチン（２
’デオキシコホルマイシン）、ＰＫＣ４１２、プリカマイシン、プロカルバジン塩酸塩、
ＰＳＣ８３３、ラリトレキセド（Ｒａｌｉｔｒｅｘｅｄ）、ＲＡＳファルネシルトランス
フェラーゼ阻害剤、ＲＡＳ腫瘍誘発遺伝子阻害剤、セムスチン（メチル‐ＣＣＮＵ）、ス
トレプトゾシン、スラミン、クエン酸タモキシフェン、タキサンアナログ、テモゾロミド
、テニポシド（ＶＭ‐２６）、チオグアニン、チオテパ、トポテカン、チロシンキナーゼ
、ＵＦＴ（テガフール／ウラシル）、バルルビシン、硫酸ビンブラスチン、硫酸ビンデシ
ン、ＶＸ‐７１０、ＶＸ‐８５３、ＹＭ１１６、ＺＤ０１０１、ＺＤ０４７３／アノルメ
ド（Ａｎｏｒｍｅｄ）、ＺＤ１８３９、ＺＤ９３３１が挙げられる。
【０２０９】
生物学的療法は、がんと戦うため、又は何らかのがん治療を原因とする場合のある副作
用を軽減するために、直接的又は間接的に身体の免疫系を使用する。一面において、ＧＤ
Ａは、例えばＧＤＡが腫瘍に対する免疫系の作用を刺激することが可能であるという点で
このグループの治療法と考えることができる。しかしながら、この手法は他のそのような
生物学的手法、例えばインターフェロン、インターロイキン、コロニー刺激因子、他のモ
ノクローナル抗体、ワクチン剤、遺伝子療法の投与のような免疫応答を修飾する治療法と
併せて考えることも可能であり、非特異的な免疫変調作用薬もＧＤＡと組み合わされる抗
がん治療として想定される。
【０２１０】
小分子の標的治療薬物は一般に、がん細胞内の、突然変異しているか、過剰発現してい
るか、又はその他のかたちで重要なタンパク質上の酵素ドメインの阻害剤であって、例え
ばチロシンキナーゼ阻害剤であるイマチニブ（Ｇｌｅｅｖｅｃ（登録商標）／グリベック
（登録商標））及びゲフィチニブ（Ｉｒｅｓｓａ（登録商標））のようなものである。Ｇ
ＤＡ又はその医薬組成物と共に使用可能なモノクローナル抗体療法の例には、限定するも
のではないが、乳がんで使用される抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体のトラスツズマブ（Ｈｅｒｃ
ｅｐｔｉｎ（登録商標））、及び様々なＢ細胞悪性腫瘍において使用される抗ＣＤ２０抗
体のリツキシマブが挙げられる。一部のがんの成長は、ある種のホルモンを提供又は阻止
することによって阻害可能である。ホルモン感受性の腫瘍の一般的な例にはある種類の乳
がん及び前立腺がんが挙げられる。エストロゲン又はテストステロンの除去又は阻止は重
要な追加治療であることが多い。ある種のがんでは、プロゲストゲンのようなホルモンア
ゴニストの投与が治療上有益な場合もある。
【０２１１】
がん免疫療法は、患者自身の免疫系を腫瘍と戦うように誘導することを目指した治療戦
略の多様な集合を指し、該療法には例えば、限定するものではないが、表在性膀胱がんに
対する膀胱内ＢＣＧ免疫療法、悪性黒色腫及び腎細胞癌などに対する特異的な免疫応答を
生成するワクチン剤、並びに、前立腺由来の細胞に対する特異的免疫応答を誘導するため
に患者由来の樹状細胞に前立腺性酸性ホスファターゼペプチドが装荷される、前立腺がん
についてのシプリューセル‐Ｔの使用が挙げられる。
【０２１２】
いくつかの実施形態では、ＧＤＡ抗体はＴ細胞阻害を妨げるように設計される。そのよ
うな抗体は、ＧＰＣのプロドメインから、又はＧＡＲＰを含むがこれに限定されないＥＣ
ＣＭ構成要素から、成長因子が解離するのを妨げることができる。
【０２１３】
〔骨治癒のための治療法〕
本発明のＧＤＡ組成物は、硬骨の障害の治療及び硬骨の治癒又は修復の改善のうち少な
くともいずれかを行うために使用されてもよい。硬骨の細胞リモデリングは、骨格の完全
性の維持を支援する生涯続くプロセスである。このプロセスは、硬骨の欠損部及び脆弱な
領域を修復するために機能する、破骨細胞の骨吸収と骨新形成とのサイクルを伴っている
。ＴＧＦ‐βファミリーのメンバー、好ましくはＢＭＰは、破骨細胞による吸収及び形成
のプロセスのカップリングにおける重要な因子であると考えられている。ＴＧＦ‐βファ
ミリーのメンバーは骨基質に広く見られ、骨の損傷によってアップレギュレートされる。
ＴＧＦ‐βファミリーのメンバーはさらに、完全に形成された骨基質に強度を与えて骨折
に対する抵抗を付与しているとも考えられている。骨リモデリングにおけるＴＧＦ‐βフ
ァミリーメンバーの役割から、ＴＧＦ‐βファミリーメンバーは硬骨の障害及び疾患を治
療するための潜在的な治療薬の魅力的な標的となっている。
【０２１４】
多数の疾患及び障害が硬骨及び関節に影響を及ぼす。そのような疾患及び障害は先天性
、遺伝性及び後天性のうち少なくともいずれかとなりうる。そのような疾患及び障害には
、限定するものではないが、骨嚢胞、感染性関節炎、骨パジェット病、オズグッド‐シュ
ラッター病、ケーラー病、骨棘（骨増殖体）、骨腫瘍、先天性頭蓋顔面骨異常、進行性骨
化性線維異形成症、線維性異形成症、骨巨細胞腫、低ホスファターゼ症、クリペル‐フェ
ーユ症候群、代謝性骨疾患、変形性関節症、変形性骨炎、嚢胞性線維性骨炎、恥骨骨炎、
硬化性骨炎、硬化性腸骨炎、離断性骨軟骨炎、骨軟骨腫、骨形成不全症、骨軟化症、骨髄
炎、骨減少症、大理石骨病、骨粗鬆症、骨肉腫、多孔性骨過形成症、原発性副甲状腺機能
亢進症、腎性骨形成異常症及び膝関節水腫が挙げられる。
【０２１５】
硬骨の発生及び修復に対する治療薬の有効性を評価するためのマウスモデルは、当分野
において周知である。モハマド（Ｍｏｈａｍｍａｄ）らによって実証された１つのそのよ
うなモデル（モハマド（Ｍｏｈａｍｍａｄ）、Ｋ．Ｓ．ら、「ＴＧＦ‐βタイプＩ受容体
キナーゼの薬理学的阻害は硬骨に対して同化作用及び抗異化作用を有する（Ｐｈａｒｍａ
ｃｏｌｏｇｉｃ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＴＧＦ−ｂｅｔａ  ｔｙｐｅ  
Ｉ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｋｉｎａｓｅ  ｈａｓ  ａｎａｂｏｌｉｃ  ａｎｄ  ａｎｔｉ−
ｃａｔａｂｏｌｉｃ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｎ  ｂｏｎｅ．）」、プロス・ワン（ＰＬｏＳ
Ｏｎｅ）、２００９年、第４巻、第４号、ｐ．ｅ５２７５、電子出版２００８年４月１
６日）において、ＴＧＦ‐βタイプＩ受容体の阻害は、Ｃ５７Ｂｌ／６マウスにおいて強
力な阻害剤ＳＤ‐２０８の１日２回の強制経口投与により実行された。続いて、骨ミネラ
ル密度（ＢＭＤ）がＰＩＸＩｍｕｓマウス用デンシトメータ（ＧＥ  Ｌｕｎａｒ  ＩＩ、
米国イリノイ州ホイーリングのファキシトロン・コーポレイション（Ｆａｘｉｔｒｏｎ  
Ｃｏｒｐ．））を使用して分析された。ＢＭＤの変化は走査されたエリアにおける変化率
（％）として表される。本研究は、治療処置の６週間後にオスのマウスが４．１２％の硬
骨増加の上昇を示し、メスのマウスが５．２％の増加を示すことが分かった。
【０２１６】
本発明のＧＤＡは、単純骨折及び複雑骨折並びに骨修復のうち少なくともいずれかのた
めの治療法に関するものであってよい。そのような治療においては、ＧＤＡは、直接損傷
部位へ、又は移植デバイス及びコーティング済み生体マトリックスへの組み込みによって
、導入されうる。加えて、ＧＤＡがそのＧＰＣと一緒に治療域に供給されてＧＰＣからの
成長因子の緩徐な放出を促す治療が企図される。
【０２１７】
〔血管新生性及び血管内膜増殖性の状態のための治療薬〕
本発明のＧＤＡ組成物は血管新生性かつ血管内膜増殖性の症候群、疾患又は障害を治療
するために使用されうる。用語「血管新生」は、本明細書中で使用されるように、新たな
血管の形成及び再組織のうち少なくともいずれかを指す。血管新生性の疾患は、体内の血
管新生に対する制御不能を伴う。そのような場合、血管の成長、形成又は再組織は、健康
な組織を保持するには過度に活動的である場合（腫瘍の成長時、及び制御不能な細胞の成
長が血液供給の増大を要求する（ｒｅｑｕｉｒｅｓ  ｉｎｃｒｅａｓｅｓ  ｂｌｏｏｄ  
ｓｕｐｐｌｙ）場であるがんなど）もあれば不十分な場合もある。そのような状態には、
限定するものではないが血管腫、血管肉腫、毛細血管拡張症、リンパ管腫、先天性血管異
常、腫瘍血管新生及び手術後の血管構造が挙げられる。過度の血管新生は、がん、黄斑変
性、糖尿病性失明、慢性関節リウマチ、乾癬及びその他数多くの状態においてみられる。
過度の血管新生は、過度の血管新生性成長因子の発現によって促進されることが多い。本
発明のＧＤＡは過度の血管新生に関与する成長因子を阻止するために作用しうる。別例と
して、本発明のＧＤＡは、血管新生が阻害されている状態において血管新生を増強するべ
く成長因子シグナル伝達を促進するために利用される場合もある。そのような状態には、
限定するものではないが、冠動脈疾患、卒中、糖尿病及び慢性創傷が挙げられる。
【０２１８】
〔希少適応及び希少疾患のための治療薬〕
本発明のＧＤＡ組成物は希少な適応及び疾患のうち少なくともいずれかを治療するため
に使用されてもよい。そのような疾患にはマルファン症候群が含まれる。この症候群は、
身体の成長及び発達をもたらす（ｅｆｆｅｃｔｉｎｇ）結合組織障害である。最も激しく
損なわれる組織及び器官には、心臓、血管、硬骨、目、肺、及び脊髄周囲の結合組織が含
まれる。不運にも、その影響は生命に関わる可能性がある。マルファン症候群は、身体の
結合組織の主成分であるフィブリリンを産生する遺伝子の遺伝子突然変異を原因とする。
潜在型ＴＧＦ‐β結合タンパク質（ＬＴＢＰ）は、フィブリリンタンパク質ファミリーの
メンバーに高い同一性を示す、ＴＧＦ‐βシグナル伝達の重要な調節因子である。機能的
ＬＴＢＰは、活性ＴＧＦ‐βの放出の制御に必要である（オクル（Ｏｋｌｕ）、Ｒ．ら、
「潜在型形質転換成長因子β結合タンパク質（ＬＴＢＰ）ファミリー（Ｔｈｅ  ｌａｔｅ
ｎｔ  ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ｂｅｔａ  ｂｉｎｄｉ
ｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ  （ＬＴＢＰ）  ｆａｍｉｌｙ）」、バイオケミカル・ジャーナル
（Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｊ．）、２０００年１２月１５日、第３５２巻、第３号、ｐ．６０１
−１０）。この実施形態では、ＧＤＡ組成物は、ＴＧＦ‐βの放出プロファイルを変更す
るように設計される。そのような場合、ＧＤＡ抗体は阻害抗体となるであろう。
【０２１９】
別の適応はカムラチ・エンゲルマン病（ＣＥＤ）である。この疾患は主として硬骨を侵
し、骨密度の増大をもたらす。特に影響を受けるのは、脚及び腕の長骨であるが；スキル
（ｓｋｉｌｌ）及び臀部の硬骨も侵される場合がある。この疾患は、脚及び腕の疼痛並び
に様々な他の症状をもたらす。ＣＥＤは非常にまれで、世界中でおよそ２００人において
報告されており、ＴＧＦ‐β遺伝子の突然変異を原因とする。これらの人の体内で生産さ
れるＴＧＦ‐βは不完全なプロドメインを有し、過度に活動的なＴＧＦ‐βシグナル伝達
の原因となっている（ジャンセン（Ｊａｎｓｓｅｎｓ）、Ｋ．ら、「カムラチ・エンゲル
マン病における形質転換成長因子β１の突然変異は突然変異タンパク質の活性化又は分泌
を変更することによりシグナル伝達の増加をもたらす（Ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ  ｇｒ
ｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ−ｂｅｔａ  １  ｍｕｔａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  Ｃａｍｕｒａｔｉ
−Ｅｎｇｅｌｍａｎｎ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｌｅａｄ  ｔｏ  ｉｎｃｒｅａｓｅｄ  ｓｉｇ
ｎａｌｉｎｇ  ｂｙ  ａｌｔｅｒｉｎｇ  ｅｉｔｈｅｒ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｒ  
ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｍｕｔａｎｔ  ｐｒｏｔｅｉｎ）」、ザ・ジャーナ
ル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．）、２００３年２
月２８日、第２７８巻、第９号、ｐ．７７１８−２４、電子出版２００２年１２月１８日
）。シャイ（Ｓｈｉ）らにより述べられているように（シャイ（Ｓｈｉ）、Ｍ．ら、「潜
在型ＴＧＦ‐βの構造及び活性化（Ｌａｔｅｎｔ  ＴＧＦ−ｂｅｔａ  ｓｔｒｕｃｔｕｒ
ｅ  ａｎｄ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ）」、ネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ）、２０１１年６月
１５日、第４７４巻、第７３５１号、ｐ．３４３−９、ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎａｔ
ｕｒｅ１０１５２）、ＣＥＤ突然変異の中でもＹ５２ＨはＴＧＦ‐βフィンガーを包み込
むα２‐ヘリックス残基を破壊する。電荷が逆転するＥ１４０Ｋ及びＨ１９３Ｄ突然変異
は、プロドメインの二量体化接触面のＧｌｕ１４０とＨｉｓ１９３との間のｐＨで調節さ
れた塩橋を破壊する。残基Ａｒｇ１８９はほぼ埋没しているが：これはＴｙｒ１４２との
カチオンπ結合及び成長因子プロドメイン複合体（ＧＰＣ）の「ボウタイ」領域の残基Ａ
ｓｐ１９７との二量体接触面を横切る塩橋を形成する。さらに、Ｃｙｓ１９４及びＣｙｓ
１９６におけるＣＥＤ突然変異は、ＴＧＦ‐βを不活性型に保持するためのボウタイ領域
のジスルフィド結合の重要性を実証している。この実施形態では、阻害性のＧＤＡ抗体は
症状を緩和する役割を果たすことになろう。さらにこの実施形態では、投与は新生児の対
象者に対するものとなろう。
【０２２０】
さらに別の実施形態では、ＧＤＡ抗体は、５，０００人に約１人に発症する遺伝的血管
障害である遺伝性出血性毛細管拡張症（ＨＨＴ）を治療するために設計される。ＨＨＴの
突然変異遺伝子は血管内皮のＴＧＦ‐βシグナル伝達の変調因子である。患者は、微細血
管の拡張から肥大した動静脈奇形に及ぶ異常な血管構造物を発症する。これらの血管の壁
は脆弱であるため該血管は出血しやすくなる（ゴバニ（Ｇｏｖａｎｉ）、Ｆ．Ｓ．ら、「
遺伝性出血性毛細管拡張症：臨床的かつ科学的総説（Ｈｅｒｅｄｉｔａｒｙ  ｈａｅｍｏ
ｒｒｈａｇｉｃ  ｔｅｌａｎｇｉｅｃｔａｓｉａ：  ａ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｎｄ  ｓ
ｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  ｒｅｖｉｅｗ）」、ヨーロピアン・ジャーナル・オブ・ヒューマン
・ジェネティクス（Ｅｕｒ  Ｊ  Ｈｕｍ  Ｇｅｎｅｔ．）、２００９年７月、第１７巻、
第７号、ｐ．８６０−７１、電子出版２００９年４月１日）。該障害の１形態では、ＨＨ
Ｔは、内皮特異的ＴＧＦ‐βタイプ１受容体であるアクチビン受容体様キナーゼ１（ＡＬ
Ｋ１）の突然変異によって引き起こされる。この受容体の生理的なリガンドはＴＧＦ‐β
ファミリーのメンバーのＢＭＰ９である。ＢＭＰ９の過剰発現は内皮細胞の遊走を低減す
ることが示されている。１つの実施形態では、ＨＨＴの症状はＢＭＰ９シグナル伝達を変
更することにより緩和されるであろう。
【０２２１】
〔免疫性及び自己免疫性の疾患及び障害のための治療薬〕
本発明のＧＤＡ組成物は免疫性及び自己免疫性の疾患を治療するために使用されてもよ
い。そのような障害には、限定するものではないが、急性散在性脳脊髄膜炎（ＡＤＥＭ）
、急性壊死性出血性白質脳炎、アジソン病、無ガンマグロブリン血症、円形脱毛症、アミ
ロイドーシス、強直性脊椎炎、抗ＧＢＭ／抗ＴＢＭ腎炎、抗リン脂質症候群（ＡＰＳ）、
自己免疫性血管浮腫、自己免疫性再生不良性貧血、自己免疫性自律神経異常症、自己免疫
性肝炎、自己免疫性高脂血症、自己免疫性免疫不全、自己免疫性内耳疾患（ＡＩＥＤ）、
自己免疫性心筋炎、自己免疫性膵炎、自己免疫性網膜症、自己免疫性血小板減少性紫斑病
（ＡＴＰ）、自己免疫性甲状腺疾患、自己免疫性蕁麻疹、軸索及びニューロンの神経障害
、バロー病、ベーチェット病、水疱性類天疱瘡、心筋症、キャッスルマン病、セリアック
病、シャーガス病、慢性疲労症候群、慢性炎症性脱髄性多発神経障害（ＣＩＤＰ）、慢性
再発性多発性オストマイエライティス（Ｃｈｒｏｎｉｃ  ｒｅｃｕｒｒｅｎｔ  ｍｕｌｔ
ｉｆｏｃａｌ  ｏｓｔｏｍｙｅｌｉｔｉｓ）（ＣＲＭＯ）、チャーグ‐ストラウス症候群
、瘢痕性類天疱瘡／良性粘膜類天疱瘡、クローン病、コーガン症候群、寒冷凝集素症、先
天性心伝導障害、コクサッキー心筋炎、ＣＲＥＳＴ病、本態性混合型クリオグロブリン血
症、脱髄性神経障害、疱疹状皮膚炎、皮膚筋炎、デビック病（視神経脊髄炎）、１型糖尿
病、円板状ループス、ドレスラー症候群、子宮内膜症、好酸球性食道炎、好酸球性筋膜炎
、結節性紅斑、実験的アレルギー性脳脊髄炎、エバンス症候群、線維筋痛症、線維化性肺
胞炎、巨細胞性動脈炎（側頭動脈炎）、糸球体腎炎、グッドパスチャー症候群、多発血管
炎性肉芽腫症（ＧＰＡ）ウェゲナーを参照（ｓｅｅ  Ｗｅｇｅｎｅｒ’ｓ）、グレーブス
病、ギラン‐バレー症候群、橋本脳炎（Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ’ｓ  ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔ
ｉｓ）、橋本甲状腺炎、溶血性貧血、ヘノッホ‐シェーンライン紫斑病、妊娠疱疹、低ガ
ンマグロブリン血症、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、ＩｇＡ腎症、ＩｇＧ４関連
硬化性疾患、免疫調節性リポタンパク質（Ｉｍｍｕｎｏｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  ｌｉｐｏ
ｐｒｏｔｅｉｎｓ）、封入体筋炎、インスリン依存型糖尿病（１型）、間質性膀胱炎、若
年性関節炎、若年型糖尿病、川崎病、ランバート‐イートン症候群、大型血管炎（Ｌａｒ
ｇｅ  ｖｅｓｓｅｌ  ｖａｓｃｕｌｏｐａｔｈｙ）、白血球破砕性血管炎、扁平苔癬、硬
化性苔癬、木質性結膜炎、線状ＩｇＡ病（ＬＡＤ）、狼瘡（ＳＬＥ）、慢性ライム病、メ
ニエール病、顕微鏡的多発血管炎、混合性結合組織病（ＭＣＴＤ）、モーレン潰瘍、ムッ
ハ‐ハーベルマン病、多発性内分泌腫瘍症候群、多発性硬化症、筋炎、重症筋無力症、ナ
ルコレプシー、視神経脊髄炎（デビック病）、好中球減少症、眼部瘢痕性類天疱瘡、視神
経炎、回帰性リウマチ、ＰＡＮＤＡＳ（小児自己免疫性溶連菌関連性神経精神障害）、腫
瘍随伴性小脳変性症、発作性夜間血色素尿症（ＰＮＨ）、パリー・ロンベルグ症候群、パ
ーソネージ‐ターナー症候群、扁平部炎（周辺性ブドウ膜炎）、天疱瘡、末梢神経障害、
静脈周囲性脳脊髄炎、悪性貧血、ＰＯＥＭＳ症候群、結節性多発性動脈炎、Ｉ型、ＩＩ型
及びＩＩＩ型多腺性自己免疫症候群、多内分泌症、リウマチ性多発性筋痛、多発性筋炎、
心筋梗塞後症候群、心膜切開後症候群、プロゲステロン皮膚炎、原発性胆汁性肝硬変症、
原発性硬化性胆管炎、乾癬、乾癬性関節炎、特発性肺線維症、壊疽性膿皮症、赤芽球ろう
、レイノー現象、反応性関節炎、反射性交感神経性ジストロフィー、ライター症候群、再
発性多発性軟骨炎、不隠下肢症候群、後腹膜線維症、リウマチ熱、リウマチ性関節炎、サ
ルコイドーシス、シュミット症候群、強膜炎、強皮症、シェーグレン症候群、小血管性血
管症、精子及び精巣の自己免疫、スティッフパーソン症候群、亜急性細菌性心内膜炎（Ｓ
ＢＥ）、スザック症候群、交感性眼炎、高安動脈炎、側頭動脈炎／巨細胞性動脈炎、血小
板減少性紫斑病（ＴＴＰ）、トローザ‐ハント症候群、横断脊髄炎、尿細管自己免疫障害
（Ｔｕｂｕｌａｒ  ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  ｄｉｓｏｒｄｅｒ）、潰瘍性大腸炎、未分化
結合組織疾患（ＵＣＴＤ）、ブドウ膜炎、水疱性皮膚病、脈管炎、白斑並びにウェゲナー
肉芽腫症（多発血管炎性肉芽腫症（ＧＰＡ）としても知られる）が挙げられる。
【０２２２】
ＴＧＦ‐βは、白血球の分化、増殖及び活性化に積極的役割を果たして、白血球を免疫
性疾患及び自己免疫性疾患における重要な因子としている。加えて、ＴＧＦ‐βは、白血
球の走化性を促進し、かつ接着分子を介した局在化に影響を及ぼす。心臓、肺及び胃の炎
症におけるＴＧＦ‐βの役割は実証済みである。更に、Ｓｍａｄ３欠損マウスは、Ｔ細胞
活性化の障害及び粘膜免疫の低下の結果として慢性的な粘膜感染を生じやすい（ブローブ
（Ｂｌｏｂｅ）、Ｇ．Ｃ．ら、「ヒトの疾患における形質転換成長因子βの役割（Ｒｏｌ
ｅ  ｏｆ  ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ｂｅｔａ  ｉｎ  
ｈｕｍａｎ  ｄｉｓｅａｓｅ）」、ザ・ニュー・イングランド・ジャーナル・オブ・メデ
ィシン（Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ）、２０００年５月４日、第３４２巻、第１８号、ｐ
．１３５０−８）。免疫抑制因子として、ＴＧＦ‐βは炎症細胞の機能の阻害及び調節性
Ｔ細胞の機能の増強のいずれも行うことが示されている。最近の研究から、潜在型ＴＧＦ
‐β成長因子プロドメイン複合体（ＧＰＣ）はＧＡＲＰ（Ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ−  
Ａ  ｒｅｐｅｔｉｔｉｏｎｓ  ａｎｏｎｙｍｏｕｓ  ｐｒｏｔｅｉｎ）との相互作用によ
って調節性Ｔ細胞に結合することが示された。この相互作用はインテグリン依存的な方式
でＧＰＣから活性ＴＧＦ‐βを放出するのに必要な基盤を提供する（ワング（Ｗａｎｇ）
、Ｒ．ら、「ＧＡＲＰはＴＧＦβの生物学的利用能及び活性化を調節する（ＧＡＲＰ  ｒ
ｅｇｕｌａｔｅｓ  ｔｈｅ  ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ  ａｎｄ  ａｃｔｉｖａｔ
ｉｏｎ  ｏｆ  ＴＧＦβ．）」、モレキュラー・バイオロジー・オブ・ザ・セル（Ｍｏｌ
Ｂｉｏｌ  Ｃｅｌｌ）、２０１２年３月、第２３巻、第６号、ｐ．１１２９−３９、電
子出版２０１２年１月２５日）。１つの実施形態では、ＧＤＡは免疫性又は自己免疫性の
疾患の治療に使用されうる。別の実施形態では、ＧＤＡは、特にＧＡＲＰに結合したＧＰ
Ｃ、ＧＡＲＰ又はＧＡＲＰとＧＰＣとの間の相互作用部位を標的としてもよい。１つの実
施形態では、ＧＤＡ抗体は、ＧＡＲＰに結合したＧＰＣからの成長因子（ＴＧＦ‐βを含
むがこれに限定はされない）の放出を促進するがＬＴＢＰに結合したＧＰＣからの成長因
子の放出には影響しないように設計される。ＧＤＡ組成物を用いた免疫性及び自己免疫性
の疾患の治療は、標準的治療（ＳＯＣ）との組み合わせ又は相乗的な組み合わせであって
もよいし、コンパニオン診断を伴ってもよい。
【０２２３】
〔感染性病原体に関する治療薬〕
本発明はさらに、例えば感染症に罹患している対象者における、感染性の疾患又は障害
の治療のためのＧＤＡの使用に関する。いくつかの好ましい実施形態では、対象者は感染
症に罹患しているか、又は感染症に罹患するリスクを有している。「感染症」は、本明細
書中で使用されるように、宿主体内で複製する外来の生物体又は病原体が宿主に存在する
ことに起因する疾患又は状態を指す。感染症は、典型的には感染性の生物体又は病原体に
よる正常な粘膜又は他の組織の障壁の突破を伴う。感染症に罹患している対象者とは、対
象者の体内に存在する客観的に測定可能な感染性の生物体又は病原体を有している対象者
である。感染症に罹患するリスクを有している対象者とは、感染症を発症しやすい素因を
有している対象者である。そのような対象者には、例えば、感染性の生物体又は病原体へ
の曝露が既知であるか又は疑わしい対象者が含まれうる。感染症に罹患するリスクを有し
ている対象者にはさらに、感染性の生物体又は病原体に対する免疫応答を開始する能力の
低下を伴う状態を備えた対象者、例えば先天性又は後天性の免疫不全症の対象者、放射線
照射療法又は化学療法を受けている対象者、熱傷の対象者、外傷を負った対象者、手術若
しくは他の侵襲的な医療処置若しくは歯科処置を受けている対象者も含まれうる。
【０２２４】
感染症は、関与する感染性の生物体又は病原体の区分に基づいて、おおむね細菌性、ウ
イルス性、真菌性、又は寄生生物性に分類される。その他のさほど一般的でない種類の感
染症も当分野で知られており、例えばリケッチア類、マイコプラズマ類、並びにスクレイ
ピー、牛海綿状脳症（ＢＳＥ）、及びプリオン病（例えばクールー病及びクロイツフェル
ト・ヤコブ病）を引き起こす病原体を伴う感染症がある。感染症を引き起こす細菌、ウイ
ルス、真菌及び寄生生物の例は当分野において良く知られている。感染症は、急性、亜急
性、慢性、又は潜伏性である可能性があり、局在性の場合もあれば全身性の場合もある。
本明細書中で定義されるように、「慢性感染症」は、生得的又は適応的な免疫応答の正常
な作用によって取り除かれず、およそ数週間、数か月間及び数年の長期間にわたって対象
者に持続する感染症を指す。慢性感染症は、感染性病原体の潜伏期を反映する場合もあり
、感染症状が存在しない期間すなわち無症候性の期間を含みうる。慢性感染症の例には、
限定するものではないが、ＨＩＶ感染症及びヘルペスウイルス感染が挙げられる。更に、
感染症は、感染性の生物体又は病原体の宿主内における生活環の少なくとも１つの相の間
、細胞内感染が優位であってもよいし細胞外感染が優位であってもよい。
【０２２５】
典型的なウイルスには、限定するものではないが、レトロウイルス科（例えばヒト免疫
不全ウイルス、例えばＨＩＶ‐１（ＨＴＬＶ‐ＩＩＩとも呼ばれる）、ＨＩＶ‐２、ＬＡ
Ｖ若しくはＨＴＬＶ‐ＩＩＩ／ＬＡＶ、又はＨＩＶ‐ＩＩＩ、及び他の分離株であって例
えばＨＩＶ‐ＬＰなど；ピコルナウイルス科（例えばポリオウイルス、Ａ型肝炎ウイルス
；エンテロウイルス、ヒトコクサッキーウイルス、ライノウイルス、エコーウイルス）；
カルシウイルス科（Ｃａｌｃｉｖｉｒｉｄａｅ）（例えば胃腸炎の原因株）；トガウイル
ス科（例えば馬脳炎ウイルス、風疹ウイルス）；フラビウイルス科（例えばデングウイル
ス、脳炎ウイルス、黄熱病ウイルス）；コロナウイルス科（例えばコロナウイルス）；ラ
プドウイルス科（例えば水疱性口内炎ウイルス、狂犬病ウイルス）；フィロウイルス科（
例えばエボラウイルス）；パラミクソウイルス科（例えばパラインフルエンザウイルス、
ムンプスウイルス、麻疹ウイルス、呼吸器合胞体ウイルス）；アデノウイルス；オルソミ
クソウイルス科（例えばインフルエンザウイルス）；ブンガウイルス科（Ｂｕｎｇａｖｉ
ｒｉｄａｅ）（例えばハンターンウイルス、ブンガウイルス（ｂｕｎｇａ  ｖｉｒｕｓ）
、フレボウイルス及びナイロウイルス）；アレナウイルス科（出血熱ウイルス）；レオウ
イルス科（例えばレオウイルス、オルビウイルス（ｏｒｂｉｖｉｕｒｓｅｓ）及びロタウ
イルスすなわちロタウイルスＡ、ロタウイルスＢ．ロタウイルスＣ）；ビルナウイルス科
；ヘパドナウイルス科（Ａ型及びＢ型肝炎ウイルス）；パルボウイルス科（パルボウイル
ス）；パポバウイルス科（乳頭腫ウイルス、ポリオーマウイルス）；アデノウイルス科（
ほとんどのアデノウイルス）；ヘルペスウイルス科（単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）１
及び２、ヒトヘルペスウイルス６、ヒトヘルペスウイルス７、ヒトヘルペスウイルス８、
帯状疱疹ウイルス、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、ヘルペスウイルス；エプスタイン
‐バーウイルス  ；ラウス肉腫ウイルス；西ナイルウイルス；日本馬脳炎、ノーウォーク
、乳頭腫ウイルス、パルボウイルスＢ１９；ポキシイリダエ（Ｐｏｘｙｉｒｉｄａｅ）（
痘瘡ウイルス、ワクシニアウイルス、ポックスウイルス）；及びイリドウイルス科（例え
ばアフリカ豚コレラウイルス）；Ｄ型肝炎ウイルス、Ｅ型肝炎ウイルス、並びに分類不能
ウイルス（例えば、海綿状脳症の原因病原体、デルタ肝炎の病原体（Ｂ型肝炎ウイルスの
不完全サテライトであると考えられる）、非Ａ非Ｂ型肝炎の病原体（クラス１＝経腸感染
型；クラス２＝非経口感染型（すなわちＣ型肝炎）；ノーウォークウイルス及び近縁のウ
イルス、及びアストロウイルス）が挙げられる。
【０２２６】
細菌にはグラム陰性細菌及びグラム陽性細菌の両方が含まれる。グラム陽性細菌の例に
は、限定するものではないがパスツレラ属細菌、ブドウ球菌属細菌、及びストレプトコッ
カス属細菌が挙げられる。グラム陰性細菌の例には、限定するものではないが、大腸菌（
Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）、シュードモナス属細菌、及びサルモネラ属細菌が
挙げられる。感染性細菌の具体例には、限定するものではないが：ヘリコバクター・ピロ
リ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉｓ）、ボレリア・ブルグドルフェリ（Ｂｏ
ｒｒｅｌｉａ  ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ）、レジオネラ・ニューモフィリア（Ｌｅｇｉｏ
ｎｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌｉａ）、マイコバクテリウム属細菌（例えばＭ．ツベ
ルクローシス（Ｍ．  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、Ｍ．アビウム（Ｍ．  ａｖｉｕｍ）
、Ｍ．イントラセルラーレ（Ｍ．  ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ）、Ｍ．カンサシイ（
Ｍ．  ｋａｎｓａｓｉｉ）、Ｍ．ゴルドナエ（Ｍ．  ｇｏｒｄｏｎａｅ）、Ｍ．レプラエ
（Ｍ．  ｌｅｐｒａｅ））、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅ
ｕｓ）、淋菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ）、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓ
ｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、リステリア菌（Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃ
ｙｔｏｇｅｎｅｓ）、化膿連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ）
（Ａ群連鎖球菌）、ストレプトコッカス・アガラクティエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ
ａｇａｌａｃｔｉａｅ）（Ｂ群連鎖球菌）、連鎖球菌（ビリダンス群）、糞便連鎖球菌
（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ）、ストレプトコッカス・ボヴィス（
Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｂｏｖｉｓ）、連鎖球菌（嫌気性菌の一種）、肺炎連鎖球
菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、病原性カンピロバクター属
細菌、エンテロコッカス属細菌、インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌ
ｕｅｎｚａｅ）（インフルエンザＢ型菌、及び無莢膜型インフルエンザ菌）、炭疽菌（Ｂ
ａｃｉｌｌｕｓ  ａｎｔｈｒａｃｉｓ）、ジフテリア菌（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕ
ｍ  ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ）、コリネバクテリウム属細菌、豚丹毒菌（Ｅｒｙｓｉｐｅ
ｌｏｔｈｒｉｘ  ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）、ウェルシュ菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕ
ｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）、破傷風菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｔｅｔａｎｉ）、
エンテロバクター・アエロゲネス（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ａｅｒｏｇｅｎｅｓ）、
肺炎桿菌（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、パスツレラ・ムルトシダ（
Ｐａｓｔｕｒｅｌｌａ  ｍｕｌｔｏｃｉｄａ）、バクテロイデス属細菌、フソバクテリウ
ム・ヌクレアトゥム（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｎｕｃｌｅａｔｕｍ）、ストレプト
バシラス・モニリフォルミス（Ｓｔｒｅｐｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｍｏｎｉｌｉｆｏｒｍ
ｉｓ）、梅毒トレポネーマ（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｐａｌｌｉｄｕｍ）、フランベジアト
レポネーマ（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｐｅｒｔｅｎｕｅ）、レプトスピラ、リケッチア、ア
クチノマイセス・イスラエリイ（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ  ｉｓｒａｅｌｉｉ）、髄膜炎
菌、百日咳菌、肺炎球菌、シゲラ菌、破傷風菌、コレラ菌（Ｖｉｂｒｉｏ  ｃｈｏｌｅｒ
ａｅ）、エルシニア、シュードモナス属細菌、クロストリジウム属細菌、チフス菌（Ｓａ
ｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉ）、志賀赤痢菌（Ｓｈｉｇｅｌｌａ  ｄｙｓｅｎｔｅｒｉ
ａｅ）、ペスト菌（Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｐｅｓｔｉｓ）、ブルセラ属細菌、レジオネラ・
ニューモフィラ（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ）、リケッチア属、ク
ラミジア、ウェルチ菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）、ボツリヌ
ス菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ）、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙ
ｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎ
ｏｓａ）、クリプトスポリジウム・パルバム（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ  ｐａｒ
ｖｕｍ）、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、並び
に百日咳菌（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）が挙げられる。
【０２２７】
典型的な真菌及び酵母には、限定するものではないが、クリプトコックス・ネオフォル
マンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）、カンジダ・アルビカンス
（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ）、カンジダ・トロピカリス（Ｃａｎｄｉｄａ  ｔ
ｒｏｐｉｃａｌｉｓ）、カンジダ・ステラトイデア（Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｔｅｌｌａｔｏ
ｉｄｅａ）、カンジダ・グラブラータ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｇｌａｂｒａｔａ）、カンジダ
・クルセイ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｋｒｕｓｅｉ）、カンジダ・パラシローシス（Ｃａｎｄｉ
ｄａ  ｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓ）、カンジダ・ギリエルモンジィ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｇ
ｕｉｌｌｉｅｒｍｏｎｄｉｉ）、カンジダ・ヴィスワナティ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｖｉｓｗ
ａｎａｔｈｉｉ）、カンジダ・ルシタニエ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｌｕｓｉｔａｎｉａｅ）、
ロドトルラ・ムチラギノーサ（Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ  ｍｕｃｉｌａｇｉｎｏｓａ）、
アスペルギルス・フミガーツス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｕｍｉｇａｔｕｓ）、アス
ペルギルス・フラブス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｌａｖｕｓ）、ブラストミセス・デ
ルマティティディス（Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ  ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓ）、アスペル
ギルス・クラバツス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｃｌａｖａｔｕｓ）、クリプトコックス
・ネオフォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）、クラミジア
・トラコマーティス（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ）、コクシジオイデ
ス・イミチス（Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ  ｉｍｍｉｔｉｓ）、クリプトコックス・ラウ
レンティ（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｌａｕｒｅｎｔｉｉ）、クリプトコックス・アル
ビズス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｌｂｉｄｕｓ）、クリプトコックス・ガッティ（
Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｇａｔｔｉｉ）、ノカルディア属菌類、ヒストプラスマ・カ
プスラーツム（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ  ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ）、ニューモシスティス
・イロベチー（Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ  ｊｉｒｏｖｅｃｉｉ）（又はニューモシステ
ィス・カリニ（Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ  ｃａｒｉｎｉｉ））、スタキボトリス・チャ
ルタルム（Ｓｔａｃｈｙｂｏｔｒｙｓ  ｃｈａｒｔａｒｕｍ）、並びにこれらの任意の組
み合わせが挙げられる。
【０２２８】
典型的な寄生生物には、限定するものではないが：エントアメーバ・ヒストリティカ（
Ｅｎｔａｍｏｅｂａ  ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃａ）；プラスモディウム属原虫（熱帯熱マラ
リア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ）、四日熱マラリア原虫（Ｐｌ
ａｓｍｏｄｉｕｍ  ｍａｌａｒｉａｅ）、卵形マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｏ
ｖａｌｅ）、三日熱マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｖｉｖａｘ））、リーシュマ
ニア属原虫（熱帯リーシュマニア（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｔｒｏｐｉｃａ）、ブラジル
リーシュマニア（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｂｒａｚｉｌｉｅｎｓｉｓ）、リーシュマニア
・ドノバニ（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ））、トキソプラズマ（トキソプ
ラズマ・ゴンディ（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ））、ガンビアトリパノソーマ
（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｇａｍｂｉｅｎｓｅ）、ローデシアトリパノソーマ（Ｔｒｙ
ｐａｎｏｓｏｍａ  ｒｈｏｄｅｓｉｅｎｓｅ）（アフリカ睡眠病）、クルーズトリパノソ
ーマ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｃｒｕｚｉ）（シャーガス病）、蠕虫（扁虫、回虫）、
バベシア・ミクロチ（Ｂａｂｅｓｉａ  ｍｉｃｒｏｔｉ）、多型バベシア（Ｂａｂｅｓｉ
ａ  ｄｉｖｅｒｇｅｎｓ）、ランブル鞭毛虫（Ｇｉａｒｄｉａ  ｌａｍｂｌｉａ）、及び
これらの任意の組み合わせが挙げられる。
【０２２９】
本発明はさらに、Ｂ型肝炎又は慢性細菌感染のような感染症の、他の医薬品及び他の治
療方法のうち少なくともいずれか、例えば既知の医薬品及び既知の治療方法のうち少なく
ともいずれかであって例えばそのような感染症又は障害を治療するのに現在使用されるも
の（例えば抗生物質、抗ウイルス剤）と、組み合わせた治療のためのＧＤＡの使用に関す
る。例えば、ある実施形態では、ＧＤＡは抗細菌剤と組み合わせて投与される。本明細書
中に記載の方法に有用な抗細菌剤の例には、限定するものではないが、天然ペニシリン、
半合成ペニシリン、クラブラン酸、セファロスポリン、バシトラシン、アンピシリン、カ
ルベニシリン、オキサシリン、アズロシリン、メズロシリン、ピペラシリン、メチシリン
、ジクロキサシリン、ナフシリン、セファロチン、セファピリン、セファレキシン、セフ
ァマンドール、セファクロル、セファゾリン、セフロキシン（ｃｅｆｕｒｏｘｉｎｅ）、
セフォキシチン、セフォタキシム、セフスロジン、セフェタメト、セフィキシム、セフト
リアキソン、セフォペラゾン、セフタジジン（ｃｅｆｔａｚｉｄｉｎｅ）、モキサラクタ
ム、カルバペネム、イミペネム、モノバクテム（ｍｏｎｏｂａｃｔｅｍ）、エウズトレオ
ナム（ｅｕｚｔｒｅｏｎａｍ）、バンコマイシン、ポリミキシン、アムホテリシンＢ、ナ
イスタチン、イミダゾール、クロトリマゾール、ミコナゾール、ケトコナゾール、イトラ
コナゾール、フルコナゾール、リファンピン、エタンブトール、テトラサイクリン、クロ
ラムフェニコール、マクロライド、アミノグリコシド、ストレプトマイシン、カナマイシ
ン、トブラマイシン、アミカシン、ゲンタミシン、テトラサイクリン、ミノサイクリン、
ドキシサイクリン、クロルテトラサイクリン、エリスロマイシン、ロキシスロマイシン、
クラリスロマイシン、オレアンドマイシン、アジスロマイシン、クロラムフェニコール、
キノロン、コトリモキサゾール、ノルフロキサシン、シプロフロキサシン、エノキサシン
、ナリジキシン酸、テマフロキサシン、スルホンアミド、ｇａｎｔｒｉｓｉｎ（商品名）
、及びトリメトプリム；アセタプソン；アセトスルホンナトリウム；アラメシン（Ａｌａ
ｍｅｃｉｎ）；アレキシジン；アムジノシリン；アムジノシリンピボキシル；アミシクリ
ン；アミフロキサシン；メシル酸アミフロキサシン；アミカシン；硫酸アミカシン；アミ
ノサリチル酸；アミノサリチル酸ナトリウム；アモキシシリン；アンホマイシン；アンピ
シリン；アンピシリンナトリウム；アパルシリンナトリウム；アプラマイシン；アスパル
トシン；硫酸アストロマイシン；アビラマイシン；アボパルシン；アジスロマイシン；ア
ズロシリン；アズロシリンナトリウム；塩酸バカンピシリン；バシトラシン；バシトラシ
ンメチレンジサリチル酸塩；亜鉛バシトラシン；バンベリマイシン；ベンゾイルパスカル
シウム；ベリスロマイシン；ベタマイシン硫酸塩；ビアペネム；ビニラマイシン；塩酸ビ
フェナミン；ビスピリチオンマグスルフェクス；ブチカシン；ブチロシン硫酸塩；硫酸カ
プレオマイシン；カルバドックス；カルベニシリン二ナトリウム；カルベニシリンインダ
ニルナトリウム；カルベニシリンフェニルナトリウム；カルベニシリンカリウム；カルモ
ナムナトリウム；セファクロル；セファドロキシル；セファマンドール；セファマンドー
ルナファート；セファマンドールナトリウム；セファパロール；セファトリジン；セファ
ザフルールナトリウム；セファゾリン；セファゾリンナトリウム；セフブペラゾン；セフ
ジニル；セフェピム；セフェピム塩酸塩；セフェテコール；セフィキシム；セフィネノキ
シム（Ｃｅｆｉｎｅｎｏｘｉｍｅ）塩酸塩；セフィネタゾール（Ｃｅｆｉｎｅｔａｚｏｌ
ｅ）；セフィネタゾール（Ｃｅｆｉｎｅｔａｚｏｌｅ）ナトリウム；セフォニシド一ナト
リウム；セフォニシドニナトリウム；セフォペラゾンナトリウム；セフォラニド；セフォ
タキシムナトリウム；セフォテタン；セフォテタンジナトリウム；塩酸セフォチアム；セ
フォキシチン；セフォキシチンナトリウム；セフピミゾール；セフピミゾールナトリウム
；セフピラミド；セフピラミドナトリウム；硫酸セフピロム；セフポドキシムプロキセチ
ル；セフプロジル；セフロキサジン；セフスロジンナトリウム；セフタジジム；セフチブ
テン；セフチゾキシムナトリウム；セフトリアキソンナトリウム；セフロキシム；セフロ
キシムアキセチル；セフロキシムピボキセチル；セフロキシムナトリウム；セファセトリ
ルナトリウム；セファレキシン；セファレキシン塩酸塩；セファグリシン；セファロリジ
ン；セファロチンナトリウム；セファピリンナトリウム；セフラジン；セトシクリン塩酸
塩；セトフェニコール；クロラムフェニコール；パルミチン酸クロラムフェニコール；パ
ントテン酸クロラムフェニコール複合体；コハク酸クロラムフェニコールナトリウム；ク
ロルヘキシジンホスファニル酸塩；クロロキシレノール；重硫酸クロルテトラサイクリン
；塩酸クロルテトラサイクリン；シノキサシン；シプロフロキサシン；塩酸シプロフロキ
サシン；シロレマイシン；クラリスロマイシン；クリナフロキサシン塩酸塩；クリンダマ
イシン；塩酸クリンダマイシン；塩酸パルミチン酸クリンダマイシン；リン酸クリンダマ
イシン；クロファジミン；クロキサシリンベンザチン；クロキサシリンナトリウム；クロ
キシキン；コリスチンメタナトリウム；硫酸コリスチン；クメルマイシン；クメルマイシ
ンナトリウム；シクラシリン；サイクロセリン；ダルホプリスチン；ダプソン；ダプトマ
イシン；デメクロサイクリン；デメクロサイクリン塩酸塩；デメサイクリン；デノフンギ
ン；ジアベリジン；ジクロキサシリン；ジクロキサシリンナトリウム；ジヒドロストレプ
トマイシン硫酸塩；ジピリチオン；ジリスロマイシン；ドキシサイクリン；ドキシサイク
リンカルシウム；ドキシサイクリンフォスファテックス；ドキシサイクリン塩酸塩水和物
；ドロキサシンナトリウム；エノキサシン；エピシリン；エピテトラサイクリン塩酸塩；
エリスロマイシン；エリスロマイシンアシストラート；エリスロマイシンエストレート；
エチルコハク酸エリスロマイシン；グルコヘプトン酸エリスロマイシン；ラクトビオン酸
エリスロマイシン；エリスロマイシンプロピオナート；ステアリン酸エリスロマイシン；
塩酸エタンブトール；エチオナミド；フレロキサシン；フロキサシリン；フルダラニン；
フルメキン；ホスホマイシン；ホスホマイシントロメタミン；フモキシシリン；塩化フラ
ゾリウム；酒石酸フラゾリウム；フシジン酸ナトリウム；フシジン酸；硫酸ゲンタマイシ
ン；グロキシモナム；グラミシジン；ハロプロジン；ヘタシリン；ヘタシリンカリウム；
ヘキセジン；イバフロキサシン；イニペネム（Ｉｎｉｐｅｎｅｍ）；イソコナゾール；イ
セパマイシン；イソニアジド；ジョサマイシン；硫酸カナマイシン；キタサマイシン；レ
ボフラルタドン；レボプロピルシリンカリウム；レキシスロマイシン；リンコマイシン；
塩酸リンコマイシン；ロメフロキサシン；塩酸ロメフロキサシン；メシル酸ロメフロキサ
シン；ロラカルベフ；マフェナイド；メクロサイクリン；メクロサイクリンスルホサリチ
ラート；メガロマイシンカリウムホスファート；メキドクス；メロペネム；メタサイクリ
ン；塩酸メタサイクリン；メテナミン；馬尿酸メテナミン；マンデル酸メテナミン；メチ
シリンナトリウム；メチオプリム；メトロニダゾール塩酸塩；リン酸メトロニダゾール；
メズロシリン；メズロシリンナトリウム；ミノサイクリン；塩酸ミノサイクリン；ミリン
カマイシン塩酸塩；モネンシン；モネンシンナトリウム；ナフシリンナトリウム；ナリジ
クス酸ナトリウム；ナリジキシン酸；ナタマイシン；ネブラマイシン；パルミチン酸ネオ
マイシン；硫酸ネオマイシン；ウンデシレン酸ネオマイシン；硫酸ネチルマイシン；ノイ
トラマイシン；ニフラデン；ニフラルデゾン；ニフラテル；ニフラトロン；ニフルダジル
；ニフリミド；ニフルピリノール；ニフルキナゾール；ニフルチアゾール；ニトロシクリ
ン；ニトロフラントイン；ニトロミド；ノルフロキサシン；ノボビオシンナトリウム；オ
フロキサシン；オルメトプリム；オキサシリンナトリウム；オキシモナム；オキシモナム
ナトリウム；オキソリン酸；オキシテトラサイクリン；オキシテトラサイクリンカルシウ
ム；塩酸オキシテトラサイクリン；パルジマイシン；パラクロロフェノール；パウロマイ
シン；ペフロキサシン；メシル酸ペフロキサシン；ペナメシリン；ペニシリンＧベンザチ
ン；ペニシリンＧカリウム；ペニシリンＧプロカイン；ペニシリンＧナトリウム；ペニシ
リンＶ；ペニシリンＶベンザチン；ペニシリンＶヒドラバミン；ペニシリンＶカリウム；
ペンチジドンナトリウム；アミノサリチル酸フェニル；ピペラシリンナトリウム；ピルベ
ニシリンナトリウム；ピリジシリンナトリウム；ピルリマイシン塩酸塩；ピバンピシリン
塩酸塩；ピバンピシリンパモ酸塩；ピバンピシリンプロベナート；ポリミキシンＢ硫酸塩
；ポルフィロマイシン；プロピカシン；ピラジナミド；ピリチオン亜鉛；酢酸キンデカミ
ン；キヌプリスチン；ラセフェニコール；ラモプラニン；ラニマイシン；レロマイシン；
レプロマイシン；リファブチン；リファメタン；リファメキシル；リファミド；リファン
ピン；リファペンチン；リファキシミン；ロリテトラサイクリン；硝酸ロリテトラサイク
リン；ロサラミシン；ロサラミシンブチラート；ロサラミシンプロピオナート；ロサラミ
シンリン酸ナトリウム塩；ロサラミシンステアラート；ロソキサシン；ロキサルソン；ロ
キシスロマイシン；サンサイクリン；サンフェトリネムナトリウム；サルモキシシリン；
サルピシリン；スコパフンギン；シソマイシン；硫酸シソマイシン；スパルフロキサシン
；塩酸スペクチノマイシン；スピラマイシン；スタリマイシン塩酸塩；ステフィマイシン
；硫酸ストレプトマイシン；ストレプトニコジド（Ｓｔｒｅｐｔｏｎｉｃｏｚｉｄ）；ス
ルファベンズ；スルファベンザミド；スルファセタミド；スルファセタミドナトリウム；
スルファシチン；スルファジアジン；スルファジアジンナトリウム；スルファドキシン；
スルファレン；スルファメラジン；スルファメータ；スルファメタジン；スルファメチゾ
ール；スルファメトキサゾール；スルファモノメトキシン；スルファモキソール；スルフ
ァニラート亜鉛；スルファニトラン；スルファサラジン；スルファソミゾール；スルファ
チアゾール；スルファザメト；スルフイソキサゾール；アセチルスルフイソキサゾール；
スルフイソキサゾールジオラミン；スルホミキシン；スロペネム；スルタミシリン；サン
シリンナトリウム；塩酸タランピシリン；テイコプラニン；テマフロキサシン塩酸塩；テ
モシリン；テトラサイクリン；塩酸テトラサイクリン；テトラサイクリンリン酸塩複合体
；テトロキソプリム；チアンフェニコール；チフェンシリンカリウム；チカルシリンクレ
シルナトリウム；チカルシリン二ナトリウム；チカルシリン一ナトリウム；チクラトン；
塩化チオドニウム；トブラマイシン；トブラマイシン硫酸塩；トスフロキサシン；トリメ
トプリム；トリメトプリム硫酸塩；トリスルファピリミジン；トロレアンドマイシン；ト
ロスペクトマイシン硫酸塩；チロトリシン；バンコマイシン；塩酸バンコマイシン；バー
ジニアマイシン；及びゾルバマイシン、が挙げられる。
【０２３０】
他の実施形態では、ＧＤＡの投与は抗ウイルス性の薬剤又は作用薬と組み合わせて実施
される。本明細書中に記載の方法に有用な典型的な抗ウイルス剤には、限定するものでは
ないが、免疫グロブリン、アマンタジン、インターフェロン、ヌクレオシドアナログ、及
びプロテアーゼ阻害剤が含まれる。抗ウイルス剤の具体例には、限定するものではないが
、エースマンナン；アシクロビル；アシクロビルナトリウム；アデホビル；アロブジン；
アルビルセプトスドトックス；塩酸アマンタジン；アラノチン；アリルドン；メシル酸ア
テビルジン；アブリジン；シドフォビル；シパムフィリン；塩酸シタラビン；デラビルジ
ンメシル酸塩；デスシクロビル；ジダノシン；ジソキサリル；エドクスジン；エンビラデ
ン；エンビロキシム；ファムシクロビル；塩酸ファモチン；フィアシタビン；フィアルリ
ジン；ホサリラート；ホスカメット（Ｆｏｓｃａｍｅｔ）ナトリウム；ホスホネットナト
リウム；ガンシクロビル；ガンシクロビルナトリウム；イドクスウリジン；ケトキサール
；ラミブジン；ロブカビル；塩酸メモチン；メチサゾン；ネビラピン；ペンシクロビル；
ピロダビル；リバビリン；塩酸リマンタジン；サキナビルメシル酸塩；ソマンタジン塩酸
塩；ソリブジン；スタトロン；スタブジン；チロロン塩酸塩；トリフルリジン；バラシク
ロビル塩酸塩；ビダラビン；ビダラビンリン酸；ビダラビンナトリウムリン酸塩；ビロキ
シム；ザルシタビン；ジドブジン；及びジンビロキシムが挙げられる。
【０２３１】
他の実施形態では、ＧＤＡの投与は抗真菌性の薬剤又は作用薬と組み合わせて実施され
る。「抗真菌性の薬剤」とは、感染性真菌を殺滅するか又は感染性真菌の成長若しくは機
能を阻害する作用薬である。抗真菌性の薬剤は時にその作用機構によって分類される。一
部の抗真菌剤はグルコースシンターゼを阻害することにより細胞壁阻害剤として機能し、
他の抗真菌剤は細胞膜の完全性を不安定にすることにより機能し、また他の抗真菌剤はキ
チンの破壊（例えばキチナーゼ）又は免疫抑制（５０１クリーム（５０１  ｃｒｅａｍ）
）により機能する。よって、本明細書中に記載の方法に有用な典型的な抗真菌性の薬剤に
は、限定するものではないが、イミダゾール、５０１クリーム、及びアクリゾルシン、ア
ンブルチシン、アモロルフィン、アムホテリシンＢ、アザコナゾール、アザセリン、バシ
フンギン（Ｂａｓｉｆｕｎｇｉｎ）、ＢＡＹ３８−９５０２、ビホナゾール、塩酸ビフェ
ナミン、ビスピリチオンマグスルフェクス、ブテナフィン、硝酸ブトコナゾール、ウンデ
シレン酸カルシウム、カンジシジン、カルボールフクシン、キチナーゼ、クロルダントイ
ン、シクロピロックス、シクロピロクスオラミン、シロフンギン、シスコナゾール、クロ
トリマゾール、クプリミキシン、デノフンギン、ジピリチオン、ドコナゾール、エコナゾ
ール、硝酸エコナゾール、エニルコナゾール、エトナム硝酸塩、フェンチコナゾール硝酸
塩、フィリピン、ＦＫ４６３、フルコナゾール、フルシトシン、フンギマイシン、グリセ
オフルビン、ハマイシン、イソコナゾール、イトラコナゾール、カラフンギン、ケトコナ
ゾール、ロモフンギン、リジマイシン、メパルトリシン、ミコナゾール、硝酸ミコナゾー
ス、ＭＫ９９１、モネンシン、モネンシンナトリウム、塩酸ナフチフィン、ウンデシレン
酸ネオマイシン、ニフラテル、ニフルメロン、ニトララミン塩酸塩、ナイスタチン、オク
タン酸、硝酸オルコナゾール、硝酸オキシコナゾール、オキシフンギン塩酸塩、パルコナ
ゾール塩酸塩、パルトリシン、ヨウ化カリウム、プラディマイシン、プロクロノール、ピ
リチオン亜鉛、ピロルニトリン、ルタマイシン、塩化サングイナリウム、サペルコナゾー
ル、スコパフンギン、硫化セレン、セルタコナゾール、シネフンギン、硝酸スルコナゾー
ル、テルビナフィン、テルコナゾール、チラム、チクラトン、チオコナゾール、トルシク
ラート、トリンダート、トルナフテート、トリアセチン、トリアフンギン、ＵＫ２９２、
ウンデシレン酸、ビリドフルビン、ボリコナゾール、ウンデシレン酸亜鉛、及びジノコナ
ゾール塩酸塩が挙げられる。
【０２３２】
さらなる実施形態では、ＧＤＡの投与は抗寄生生物性の薬剤又は作用薬とともに実施さ
れる。「抗寄生生物性の薬剤」とは、感染性寄生生物を殺滅するか又は該生物の成長若し
くは機能を阻害する作用薬を指す。本明細書中に記載の方法に有用な、殺寄生虫薬とも呼
ばれる抗寄生生物性の薬剤の例には、限定するものではないが、アルベンダゾール、アム
ホテリシンＢ、ベンズニダゾール、ビチオノール、クロロキンＨＣｌ、リン酸クロロキン
、クリンダマイシン、デヒドロエメチン、ジエチルカルバマジン、ジロキサニドフエロー
ト、ドキシサイクリン、エフロミチン（ｅｆｌｏｍｉｔｈｉｎｅ）、フラゾリダオン（ｆ
ｕｒａｚｏｌｉｄａｏｎｅ）、グルココルチコイド、ハロファントリン、ヨードキノール
、イベルメクチン、メベンダゾール、メフロキン、メグルミンアンチモニアート（ｍｅｇ
ｌｕｍｉｎｅ  ａｎｔｉｍｏｎｉａｔｅ）、メラルソプロール、メトリホネート、メトロ
ニダゾール、ニクロサミド、ニフルチモックス、オキサムニキン、パロモマイシン、ペン
タミジンイセチオネート、ピペラジン、プラジカンテル、リン酸プリマキン、プログアニ
ル、パモ酸ピランテル、ピリメタンミン（ｐｙｒｉｍｅｔｈａｎｍｉｎｅ）‐スルホンア
ミド、ピリメタンミン（ｐｙｒｉｍｅｔｈａｎｍｉｎｅ）‐スルファドキシン、
キナクリンＨＣ１、硫酸キニーネ、グルコン酸キニジン、スピラマイシン、スチボグルコ
ン酸ナトリウム（グルコン酸アンチモンナトリウム）、スラミン、テトラサイクリン、チ
アベンダゾール、チミダゾール（ｔｉｍｉｄａｚｏｌｅ）、トリメトロプリム（ｔｒｉｍ
ｅｔｈｒｏｐｒｉｍ）‐スルファメトキサゾール、及びトリパルサミドが含まれ、これら
のうちいくつかは単独で使用されてもよいし他のものと組み合わせて使用されてもよい。
【０２３３】
ＧＤＡ及び追加の治療薬は、同じ組成物中に組み合わされて、例えば非経口的に投与さ
れてもよいし、追加の治療薬が別個の組成物の一部として、又は本明細書中に記載の別の
方法によって、投与されてもよい。
【０２３４】
〔獣医学的適用〕
本発明の組成物及び方法は、ヒト以外の脊椎動物の介護及び治療を含む獣医医療の領域
における有用性を見出すことになろうことも企図されている。本明細書中に記載されるよ
うに、用語「ヒト以外の脊椎動物」には、ヒトを除く全ての脊椎動物、例えば野生生物、
並びにコンパニオンアニマル及び家畜のような飼育生物が含まれる。ヒト以外の脊椎動物
には、哺乳動物、例えばアルパカ、バンテン、バイソン、ラクダ、ネコ、畜牛、シカ、イ
ヌ、ロバ、ガヤール、ヤギ、モルモット、ウマ、ラマ、ラバ、ブタ、ラビット、トナカイ
、ヒツジ  水牛、及びヤクが挙げられる。家畜には、食物のような物資、労働、並びに繊
維及び化学製品のような派生製品を生産するために農業環境において育てられた飼育動物
が含まれる。一般に、家畜には潜在的な農業的意義を有している全ての哺乳動物、鳥、及
び魚が含まれる。特に、４本足の食肉処理用動物には去勢牛、若雌牛、雌牛、子牛、雄牛
、畜牛、ブタ及びヒツジが含まれる。
【０２３５】
〔バイオプロセシング〕
本発明の１つの実施形態には、宿主細胞内で生物学的製品を生産する方法であって、該
細胞を、標的遺伝子の発現を変調すること又は成長因子シグナル伝達分子のレベルを変更
することが可能なＧＤＡ（抗体又は融合タンパク質など）と接触せしめることにより、そ
のような変調又は変更が生物学的製品の生産を増強する方法がある。本発明によれば、バ
イオプロセシング方法は、１以上の本発明のＧＤＡの使用により改善されうる。バイオプ
ロセシング方法はさらに、１以上のＧＤＡの補足、交換、又は追加によっても改善されう
る。
【０２３６】
ＩＶ．  医薬組成物
本明細書中に記載された医薬組成物は、生物学的利用能、治療濃度域及び分布容積のう
ち１以上の特性を有することができる。
【０２３７】
〔生物学的利用能〕
１つの実施形態では、医薬組成物はＧＰＣを伴ったＧＤＡ複合体で構成されている。そ
のような実施形態では、ＧＤＡ：ＧＰＣ複合体は、ＧＤＡからのＧＰＣ及び成長因子の安
定した解離が所望の期間にわたって生じる場である所望の治療部位に移植されうる。別の
実施形態では、ＧＤＡ：ＧＰＣ複合体の移植は海綿マトリックス又は硬骨状マトリックス
と関連付けられていてもよい。そのような移植部位には、限定するものではないが歯科イ
ンプラント部位及び骨修復部位が挙げられる。
【０２３８】
別の実施形態では、ＧＰＣはフューリン欠損細胞において作製される。そのようなプロ
セシングを受けていないＧＰＣは、ｉｎ  ｖｉｖｏでのフューリンの開裂がＧＰＣプロセ
シング時に律速であるという事実ゆえに放出が緩徐となるエリアにおける治療に有用な場
合がある。さらなる実施形態では、ＧＰＣ中のトロイド部位又はフューリン部位のうち一
方又は両方が突然変異せしめられて、内因性のトロイドプロテアーゼ及びフューリンプロ
テアーゼのうち少なくともいずれかの作用を遅らせる結果、移植部位におけるさらに緩徐
な放出がもたらされる。
【０２３９】
ＧＤＡは、本明細書中に記載されるような送達／調合用の作用薬又はビヒクルとともに
組成物へと調合された時、本明細書中に記載されるような送達作用薬を欠く組成物と比較
して、生物学的利用能の増大を示す可能性がある。本明細書中で使用されるように、用語
「生物学的利用能」は、哺乳動物に投与された所定量のＧＤＡの全身的な利用能を指す。
生物学的利用能は、哺乳動物への化合物の投与後の、該化合物の未変化体の曲線下面積（
ＡＵＣ）又は血清中若しくは血漿中の最大濃度（Ｃｍａｘ）を測定することにより評価可
能である。ＡＵＣは、横座標（Ｘ軸）に沿った時間に対して縦座標（Ｙ軸）に沿って化合
物の血清中又は血漿中濃度をプロットしている曲線下の面積の定量である。一般に、特定
の化合物についてのＡＵＣは、当業者に既知でありかつＧ．Ｓ．バンカー（Ｂａｎｋｅｒ
）、「現代の薬剤学、薬物及び薬学（Ｍｏｄｅｒｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，  Ｄ
ｒｕｇｓ  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）」、第
７２巻、マルセル・デッカー、ニューヨーク、インコーポレイテッド（Ｍａｒｃｅｌ  Ｄ
ｅｋｋｅｒ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  Ｉｎｃ．）、１９９６年（参照により本願に組み込
まれる）に記載されるような方法を使用して計算可能である。
【０２４０】
Ｃｍａｘ値は、哺乳動物に化合物を投与した後にその哺乳動物の血清又は血漿中で達せ
られた該化合物の最大濃度である。特定の化合物のＣｍａｘ値は、当業者に既知の方法を
使用して測定可能である。「生物学的利用能の増大」又は「薬物動態の改善」という表現
は、本明細書中で使用されるように、哺乳動物におけるＡＵＣ、Ｃｍａｘ、又はＣｍｉｎ
として測定されるＧＤＡの全身的な利用能が、本明細書中に記載されるような送達作用薬
と同時投与された場合に、そのような同時投与がなされない場合よりも大きいことを意味
する。いくつかの実施形態では、ＧＤＡの生物学的利用能は、少なくとも約２％、少なく
とも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくと
も約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくと
も約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくと
も約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくと
も約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、又は約１００％増大する可能性
がある。
【０２４１】
〔治療濃度域〕
ＧＤＡは、本明細書中に記載されるような送達作用薬とともに組成物へと調合された時
、投与されたＧＤＡ組成物の治療濃度域において、本明細書中に記載されるような送達作
用薬を欠いて投与されたＧＤＡ組成物の治療濃度域と比較して増大を示すことができる。
本明細書中で使用されるように「治療濃度域」とは、治療効果を誘発する可能性の高い、
血漿中濃度の範囲、又は作用部位における治療効果のある成分のレベルの範囲を指す。い
くつかの実施形態では、本明細書中に記載されるような送達作用薬と同時投与された時の
ＧＤＡの治療濃度域は、少なくとも約２％、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少
なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少
なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少
なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少
なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少
なくとも約９５％、又は約１００％増大する可能性がある。
【０２４２】
〔分布容積〕
ＧＤＡは、本明細書中に記載されるような送達作用薬とともに組成物へと調合された時
、本明細書中に記載されるような送達作用薬を欠く組成物に比べて、改善された分布容積
（Ｖｄｉｓｔ）、例えば低い分布容積又は目標の分布容積、を示す可能性がある。分布容
積（Ｖｄｉｓｔ）は、体内の薬物の量を血液又は血漿中の薬物の濃度に関係付けている。
本明細書中で使用されるように、用語「分布容積」は、体内の薬物の総量を血液又は血漿
中と同じ濃度で含有するのに必要とされる流体の体積を指し：Ｖｄｉｓｔは、体内の薬物
量／血液又は血漿中の薬物濃度に等しい。例えば、１０ｍｇの投与量で１０ｍｇ／Ｌの血
漿中濃度については、分布容積は１リットルとなる。分布容積は、薬物が血管外の組織中
に存在する程度を反映する。大きな分布容積は、化合物が血漿タンパク質との結合と比較
して組織の構成成分に結合する傾向があることを反映する。臨床状況においては、Ｖｄｉ
ｓｔは定常状態の濃度を達成するための負荷用量を決定するために使用可能である。いく
つかの実施形態では、本明細書中に記載されるような送達作用薬と同時投与された時のＧ
ＤＡの分布容積は、少なくとも約２％、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なく
とも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なく
とも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なく
とも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％低下する
可能性がある。
【０２４３】
〔調合、投与、送達及び投薬〕
いくつかの実施形態では、ＧＤＡは１以上の薬学的に許容可能な添加剤との組み合わせ
で組成物及び複合体のうち少なくともいずれかを構成する。医薬組成物は、１以上の追加
の活性物質、例えば治療的に活性及び予防的に活性のうち少なくともいずれかである物質
を任意選択で含んでなることができる。医薬品の調合及び製造のうち少なくともいずれか
における一般的な考察は、例えば、「レミントン：薬学の科学と実践（Ｒｅｍｉｎｇｔｏ
ｎ：  Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ）
」、第２１版、リッピンコット・ウィリアムズ・アンド・ウィルキンズ（Ｌｉｐｐｉｎｃ
ｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ａｎｄ  Ｗｉｌｋｉｎｓ）、２００５年（参照により本願に
組込まれる）に見出すことができる。
【０２４４】
いくつかの実施形態では、組成物はヒト、ヒトの患者又は対象者に投与される。本開示
の目的において、「有効成分」は一般に、本明細書中に記載されるようにして送達される
べきＧＤＡを指す。
【０２４５】
本明細書中に提供される医薬組成物の説明は主としてヒトへの投与に適した医薬組成物
に関するものであるが、当業者には当然のことながら、そのような組成物は概して任意の
他の動物、例えばヒト以外の動物、例えばヒト以外の哺乳動物への投与に適している。ヒ
トへの投与に適した医薬組成物について、該組成物を様々な動物への投与に適するように
するための改変はよく解明されており、通常の獣医薬理学者は、行うとしてもごく通常の
実験作業だけでそのような改変の設計及び実行のうち少なくともいずれかを行なうことが
可能である。医薬組成物の投与が企図される対象者には、限定するものではないが、ヒト
及び他の霊長類のうち少なくともいずれか；哺乳動物、例えばウシ、ブタ、ウマ、ヒツジ
、ネコ、イヌ、マウス、及びラットのうち少なくともいずれかのような商業的に意義のあ
る哺乳動物；並びに鳥類、例えば家禽、ニワトリ、ダック、ガチョウ、及びシチメンチョ
ウのうち少なくともいずれかのような商業的に意義のある鳥、のうち少なくともいずれか
が挙げられる。
【０２４６】
本明細書中に記載された医薬組成物の調合物は、薬理学の分野で既知又は今後開発され
る任意の方法によって調製されうる。一般に、そのような調製方法は、有効成分を添加剤
及び１以上の他の副成分のうち少なくともいずれかと合わせるステップと、次いで、必要
である場合及び望ましい場合のうち少なくともいずれかについて、該生成物に分割、成形
及び包装のうち少なくともいずれかを行って所望の単回又は複数回投与単位とするステッ
プとを含む。
【０２４７】
本発明による医薬組成物は、調製、包装、販売のうち少なくともいずれかが、バルク、
単回単位用量、及び複数の単回単位用量のうち少なくともいずれかとして、行われうる。
本明細書中で使用されるように、「単位用量」とは、所定量の有効成分を含んでなる個別
の量の医薬組成物である。その有効成分の量は一般に、対象者に投与される予定の有効成
分の投与量、及びそのような投与量の好都合な分数分、例えばそのような投与量の２分の
１又は３分の１に等しい。
【０２４８】
本発明による医薬組成物中の有効成分、薬学的に許容可能な添加剤、及び任意の追加成
分のうち少なくともいずれかの相対量は、治療される対象者が誰であるか、該対象者の体
格及び状態のうち少なくともいずれかに応じて、またさらに組成物が投与される経路に応
じて、変化しうる。例を挙げると、組成物は０．１％〜１００％、例えば、０．５〜５０
％、１〜３０％、５〜８０％、又は少なくとも８０％（ｗ／ｗ）の有効成分を含んでなる
ことができる。１つの実施形態では、有効成分は調節要素及びＧＰＣのうち少なくともい
ずれかに対する抗体である。
【０２４９】
〔調合物〕
本発明のＧＤＡは、以下すなわち：（１）安定性の増大；（２）細胞透過性の増大；（
３）（例えばＧＤＡの調合物からの）持続放出又は遅延放出を可能にすること；及び（４
）生体内分布の変更（例えば、特定の組織又は細胞種をＧＤＡの標的とすること）、のう
ち少なくともいずれかのための１以上の添加剤を使用して調合可能である。従来の添加剤
、例えばあらゆる溶媒、分散媒、希釈剤、又はその他の液体ビヒクル、分散又は懸濁助剤
、界面活性剤、等張剤、増粘剤又は乳化剤、保存剤などに加えて、本発明の調合物は、限
定するものではないが、リポソーム、脂質ナノ粒子、ポリマー、リポプレックス、コア‐
シェルナノ粒子、ペプチド、タンパク質、ＧＤＡがトランスフェクションされた細胞（例
えば対象者への移植用）及びこれらの組み合わせを含みうる。
【０２５０】
〔添加剤〕
医薬組成物を調合するための様々な添加剤及び該組成物を調製するための技法は当分野
において周知である（Ａ．Ｒ．ジェンナーロ（Ｇｅｎｎａｒｏ）、「レミントン：薬学の
科学と実践（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：  Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃ
ｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ）」、第２１版、米国メリーランド州バルチモアのリッピン
コット・ウィリアムズ・アンド・ウィルキンズ（Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍ
ｓ  ａｎｄ  Ｗｉｌｋｉｎｓ）、２００６年を参照のこと）。
【０２５１】
従来の賦形媒の使用は、任意の従来の賦形媒が、何らかの望ましからぬ生物学的作用を
生じるか又はその他医薬組成物の任意の他の構成成分と有害な様式で相互作用することに
より物質又はその誘導体と混合できない場合を除いて、本開示の範囲内で企図される。
【０２５２】
本明細書中に記載された医薬組成物の調合物は、薬理学の分野で既知であるか又は今後
開発される任意の方法によって調製されうる。一般に、そのような調製方法は、有効成分
を添加剤及び１以上の他の副成分のうち少なくともいずれかと関連させるステップを含む
。
【０２５３】
本開示による医薬組成物は、調製、包装、販売のうち少なくともいずれかが、バルク、
単回単位用量、及び複数の単回単位用量のうち少なくともいずれかとして、行われうる。
本開示による医薬組成物中の有効成分、薬学的に許容可能な添加剤、及び任意の追加成
分のうち少なくともいずれかの相対量は、治療されている対象者が誰であるか、該対象者
の体格及び状態のうち少なくともいずれかに応じて、またさらに組成物が投与される経路
に応じて、変化しうる。
【０２５４】
いくつかの実施形態では、薬学的に許容可能な添加剤は、少なくとも９５％、少なくと
も９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の純
度である。いくつかの実施形態では、添加剤はヒトでの使用及び獣医学的使用について承
認されている。いくつかの実施形態では、添加剤は米国食品医薬品局によって承認されて
いる。いくつかの実施形態では、添加剤は製薬グレードである。いくつかの実施形態では
、添加剤は、米国薬局方（ＵＳＰ）、ヨーロッパ薬局方（ＥＰ）、英国薬局方、及び国際
薬局方のうち少なくともいずれかの基準を満たしている。
【０２５５】
医薬組成物の製造において使用される薬学的に許容可能な添加剤には、限定するもので
はないが、不活性な希釈剤、分散及び／又は造粒剤、界面活性剤及び／又は乳化剤、崩壊
剤、結着剤、保存剤、緩衝剤、平滑剤、並びに油のうち少なくともいずれかが挙げられる
。そのような添加剤は、医薬組成物中に任意選択で含まれうる。
【０２５６】
典型的な希釈剤には、限定するものではないが、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、リ
ン酸カルシウム、第二リン酸カルシウム、硫酸カルシウム、リン酸水素カルシウム、リン
酸ナトリウム  ラクトース、スクロース、セルロース、微結晶性セルロース、カオリン、
マンニトール、ソルビトール、イノシトール、塩化ナトリウム、乾燥デンプン、トウモロ
コシデンプン、粉砂糖など、及びこれらの組み合わせのうち少なくともいずれかが挙げら
れる。
【０２５７】
典型的な造粒及び／又は分散剤には、限定するものではないが、ジャガイモデンプン、
トウモロコシデンプン、タピオカデンプン、デンプングリコール酸ナトリウム、粘土、ア
ルギン酸、グアーガム、柑橘パルプ、寒天、ベントナイト、セルロース及び木材製品、天
然のスポンジ、陽イオン交換樹脂、炭酸カルシウム、ケイ酸塩、炭酸ナトリウム、架橋ポ
リビニルピロリドン（クロスポビドン）、カルボキシメチルスターチナトリウム（デンプ
ングリコール酸ナトリウム）、カルボキシメチルセルロース、架橋カルボキシルメチルセ
ルロースナトリウム（クロスカルメロース）、メチルセルロース、α化デンプン（スター
チ１５００（商標））、微晶質デンプン、非水溶性デンプン、カルボキシルメチルセルロ
ースカルシウム、ケイ酸アルミニウムマグネシウム（ＶＥＥＧＵＭ（登録商標））、ラウ
リル硫酸ナトリウム、第四アンモニウム化合物など、及びこれらの組み合わせのうち少な
くともいずれかが挙げられる。
【０２５８】
典型的な界面活性剤及び／又は乳化剤には、限定するものではないが、天然の乳化剤（
例えばアラビアゴム、寒天、アルギン酸、アルギン酸ナトリウム、トラガント、コンドル
クス（ｃｈｏｎｄｒｕｘ）、コレステロール、キサンタン、ペクチン、ゼラチン、卵黄、
カゼイン、羊毛脂、コレステロール、ワックス、及びレシチン）、コロイドクレー（例え
ばベントナイト［ケイ酸アルミニウム］およびＶＥＥＧＵＭ（登録商標）［ケイ酸アルミ
ニウムマグネシウム］）、長鎖アミノ酸誘導体、高分子量アルコール（例えばステアリル
アルコール、セチルアルコール、オレイルアルコール、トリアセチンモノステアラート、
エチレングリコールジステアラート、グリセリンモノステアラート、及びプロピレングリ
コールモノステアラート、ポリビニルアルコール）、カルボマー（例えばカルボキシポリ
メチレン、ポリアクリル酸、アクリル酸ポリマー、及びカルボキシビニルポリマー）、カ
ラギーナン、セルロース誘導体（例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、粉末セ
ルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプ
ロピルメチルセルロース、メチルセルロース）、ソルビタン脂肪酸エステル（例えばポリ
オキシエチレンソルビタンモノラウラート［ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０］、ポリオキシ
エチレンソルビタン［ＴＷＥＥＮｎ（登録商標）６０］、ポリオキシエチレンソルビタン
モノオレアート［ＴＷＥＥＮ（登録商標）８０］、ソルビタンモノパルミタート［ＳＰＡ
Ｎ（登録商標）４０］、ソルビタンモノステアラート［Ｓｐａｎ（登録商標）６０］、ソ
ルビタントリステアラート［Ｓｐａｎ（登録商標）６５］、グリセリルモノオレアート、
ソルビタンモノオレアート［ＳＰＡＮ（登録商標）８０］）、ポリオキシエチレンエステ
ル（例えばポリオキシエチレンモノステアラート［ＭＹＲＪ（登録商標）４５］、ポリオ
キシエチレン硬化ヒマシ油、ポリエトキシ化ヒマシ油、ポリオキシメチレンステアラート
、及びＳＯＬＵＴＯＬ（登録商標））、スクロース脂肪酸エステル、ポリエチレングリコ
ール脂肪酸エステル（例えばＣＲＥＭＯＰＨＯＲ（登録商標））、ポリオキシエチレンエ
ーテル（例えばポリオキシエチレンラウリルエーテル［ＢＲＩＪ（登録商標）３０］）、
ポリビニルピロリドン、モノラウリン酸ジエチレングリコール、トリエタノールアミンオ
レアート、オレイン酸ナトリウム、オレイン酸カリウム、オレイン酸エチル、オレイン酸
、ラウリン酸エチル、ラウリル硫酸ナトリウム、ＰＬＵＯＲＩＮＣ（登録商標）Ｆ６８、
ＰＯＬＯＸＡＭＥＲ（登録商標）１８８、臭化セトリモニウム、塩化セチルピリジウム、
塩化ベンザルコニウム、ドキュセートナトリウムなど、並びにこれらの組み合わせのうち
少なくともいずれかが挙げられる。
【０２５９】
典型的な結着剤には、限定するものではないが、デンプン（例えばトウモロコシデンプ
ン及びデンプン糊）；ゼラチン；糖類（例えばスクロース、グルコース、デキストロース
、デキストリン、糖蜜、ラクトース、ラクチトール、マンニトール）；天然ゴム及び合成
ゴム（例えばアラビアゴム、アルギン酸ナトリウム、アイリッシュモスの抽出物、パンワ
ール（ｐａｎｗａｒ）ゴム、ガティゴム、インドオオバコ（ｉｓａｐｏｌ）種皮の粘液、
カルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシエチル
セルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、微
結晶性セルロース、酢酸セルロース、ポリビニルピロリドン、ケイ酸アルミニウムマグネ
シウム（Ｖｅｅｇｕｍ（登録商標））、及びカラマツのアラボガラクタン（ａｒａｂｏｇ
ａｌａｃｔａｎ））；アルギナート；ポリエチレンオキシド；ポリエチレングリコール；
無機カルシウム塩；ケイ酸；ポリメタクリラート；ワックス；水；アルコールなど；並び
にこれらの組み合わせが挙げられる。
【０２６０】
典型的な保存剤には、限定するものではないが、酸化防止剤、キレート剤、抗微生物性
保存剤、抗真菌性保存剤、アルコール性保存剤、酸性保存剤及びその他の保存剤のうち少
なくともいずれかが挙げられる。典型的な酸化防止剤には、限定するものではないが、α
トコフェロール、アスコルビン酸、パルミチン酸アコルビル（ａｃｏｒｂｙｌ  ｐａｌｍ
ｉｔａｔｅ）、ブチルヒドロキシアニソール、ブチルヒドロキシトルエン、モノチオグリ
セロール、メタ重亜硫酸カリウム、プロピオン酸、没食子酸プロピル、アスコルビン酸ナ
トリウム、亜硫酸水素ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、及び亜硫酸ナトリウムのう
ち少なくともいずれかが挙げられる。典型的なキレート剤には、エチレンジアミン四酢酸
（ＥＤＴＡ）、クエン酸一水塩、エデト酸二ナトリウム、エデト酸二カリウム、エデト酸
、フマル酸、リンゴ酸、リン酸、エデト酸ナトリウム、酒石酸、及びエデト酸三ナトリウ
ムのうち少なくともいずれかが挙げられる。典型的な抗微生物性保存剤には、限定するも
のではないが、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、ベンジルアルコール、ブロ
ノポール、セトリミド、塩化セチルピリジウム、クロルヘキシジン、クロロブタノール、
クロロクレゾール、クロロキシレノール、クレゾール、エチルアルコール、グリセリン、
ヘキセチジン、イミド尿素、フェノール、フェノキシエタノール、フェニルエチルアルコ
ール、硝酸フェニル水銀、プロピレングリコール、及びチメロサールのうち少なくともい
ずれかが挙げられる。典型的な抗真菌性保存剤には、限定するものではないが、ブチルパ
ラベン、メチルパラベン、エチルパラベン、プロピルパラベン、安息香酸、ヒドロキシ安
息香酸、安息香酸カリウム、ソルビン酸カリウム、安息香酸ナトリウム、プロピオン酸ナ
トリウム、及びソルビン酸のうち少なくともいずれかが挙げられる。典型的なアルコール
性保存剤には、限定するものではないが、エタノール、ポリエチレングリコール、フェノ
ール、フェノール系化合物、ビスフェノール、クロロブタノール、ヒドロキシベンゾアー
ト、及びフェニルエチルアルコールのうち少なくともいずれかが挙げられる。典型的な酸
性保存剤には、限定するものではないが、ビタミンＡ、ビタミンＣ、ビタミンＥ、β‐カ
ロテン、クエン酸、酢酸、デヒドロ酢酸、アスコルビン酸、ソルビン酸、及びフィチン酸
のうち少なくともいずれかが挙げられる。その他の保存剤には、限定するものではないが
、トコフェロール、酢酸トコフェロール、デテロキシム（ｄｅｔｅｒｏｘｉｍｅ）メシル
酸塩、セトリミド、ブチルヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエ
ン（ｂｕｔｙｌａｔｅｄ  ｈｙｄｒｏｘｙｔｏｌｕｅｎｅｄ）（ＢＨＴ）、エチレンジア
ミン、ラウリル硫酸ナトリウム（ＳＬＳ）、ラウリルエーテル硫酸ナトリウム（ＳＬＥＳ
）、亜硫酸水素ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸カリウム、メタ重亜硫酸カ
リウム、ＧＬＹＤＡＮＴ  ＰＬＵＳ（登録商標）、ＰＨＥＮＯＮＩＰ（登録商標）、メチ
ルパラベン、ＧＥＲＭＡＬＬ（登録商標）１１５、ＧＥＲＭＡＢＥＮ（登録商標）ＩＩ、
ＮＥＯＬＯＮＥ（商標）、ＫＡＴＨＯＮ（商標）、及びＥＵＸＹＬ（登録商標）のうち少
なくともいずれかが挙げられる。
【０２６１】
典型的な緩衝剤には、限定するものではないが、クエン酸緩衝液、酢酸緩衝液、リン酸
緩衝液、塩化アンモニウム、炭酸カルシウム、塩化カルシウム、クエン酸カルシウム、グ
ルビオン酸カルシウム、グルセプト酸カルシウム、グルコン酸カルシウム、Ｄ‐グルコン
酸、グリセロリン酸カルシウム、乳酸カルシウム、プロパン酸、レブリン酸カルシウム、
ペンタン酸、第二リン酸カルシウム、リン酸、第三リン酸カルシウム、水酸化リン酸カル
シウム、酢酸カリウム、塩化カリウム、グルコン酸カリウム、カリウム混合物、リン酸一
水素カリウム、リン酸二水素カリウム、リン酸カリウム混合物、酢酸ナトリウム、炭酸水
素ナトリウム、塩化ナトリウム、クエン酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、リン酸水素ナト
リウム、リン酸二水素ナトリウム、リン酸ナトリウム混合物、トロメタミン、水酸化マグ
ネシウム、水酸化アルミニウム、アルギン酸、発熱性物質除去水、等張生理食塩水、リン
ゲル液、エチルアルコールなど、及びこれらの組み合わせ、のうち少なくともいずれかが
挙げられる。
【０２６２】
典型的な平滑剤としては、限定するものではないが、ステアリン酸マグネシウム、ステ
アリン酸カルシウム、ステアリン酸、シリカ、タルク、麦芽、グリセリルベハナート（ｇ
ｌｙｃｅｒｙｌ  ｂｅｈａｎａｔｅ）、水素化植物油、ポリエチレングリコール、安息香
酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、ロイシン、ラウリル硫酸マグネシウム
、ラウリル硫酸ナトリウムなど、及びこれらの組み合わせが挙げられる。
【０２６３】
典型的な油には、限定するものではないが、アーモンド、杏仁、アボカド、ババスーヤ
シ、ベルガモット、ブラックカレント（ｂｌａｃｋ  ｃｕｒｒｅｎｔ）種子、ルリヂサ、
ケード、カモミール、キャノーラ、キャラウェイ、カルナウバ、キャスター、シナモン、
ココアバター、ココナッツ、たら肝油、コーヒー、トウモロコシ、綿実、エミュー、ユー
カリ、マツヨイグサ、魚、アマニ、ゲラニオール、ヒョウタン、ブドウ種子、ヘーゼルナ
ッツ、ヒソップ、ミリスチン酸イソプロピル、ホホバ、ククイナッツ、ラバンディン、ラ
ベンダー、レモン、リツェア・クベバ、マカデミア（ｍａｃａｄｅｍｉａ）ナッツ、マロ
ウ、マンゴー種子、メドウフォーム種子、ミンク、ナツメグ、オリーブ、オレンジ、オレ
ンジラフィー、パーム、パーム実、桃仁、ピーナッツ、ケシの実、パンプキンシード、菜
種、米糠、ローズマリー、ベニバナ、ビャクダン、サスカナ（ｓａｓｑｕａｎａ）、セイ
ボリー、シーバックソーン、ゴマ、シアバター、シリコーン、ダイズ、ヒマワリ、チャノ
キ、アザミ、ツバキ、ベチベルソウ、クルミ、及び麦芽の油が挙げられる。典型的な油に
は、限定するものではないが、ステアリン酸ブチル、カプリル酸トリグリセリド、カプリ
ン酸トリグリセリド、シクロメチコン、セバシン酸ジエチル、ジメチコン３６０、ミリス
チン酸イソプロピル、鉱油、オクチルドデカノール、オレイルアルコール、シリコーンオ
イル、及びこれらの組み合わせのうち少なくともいずれかが挙げられる。
【０２６４】
ココアバター及び坐薬用ワックス、着色剤、コーティング剤、甘味料、調味料、及び芳
香剤のうち少なくともいずれかのような添加剤は、製剤担当者の判断に応じて組成物中に
存在することができる。
【０２６５】
〔調合用ビヒクル：リポソーム、リポプレックス及び脂質ナノ粒子〕
本発明のＧＤＡは、１以上のリポソーム、リポプレックス又は脂質ナノ粒子を使用して
調合可能である。１つの実施形態では、ＧＤＡの医薬組成物はリポソームを含む。リポソ
ームは、主として脂質二分子膜で構成されかつ栄養素及び医薬調合物の投与のための送達
手段として使用されうる人為的に調製された小胞である。リポソームは、様々なサイズの
もの、例えば、限定するものではないが、直径数百ナノメートルであり狭い水性コンパー
トメントによって分離された同心性二分子層の重なりを含んでいる多層ベシクル（ＭＬＶ
）、直径５０ｎｍ未満の小さな単細胞の（ｕｎｉｃｅｌｌｕｌａｒ）小胞（ＳＵＶ）、及
び直径５０〜５００ｎｍである大きな単層の小胞（ＬＵＶ）であってよい。リポソームの
設計には、限定するものではないが、病変組織へのリポソームの付着を改善するための、
又は限定するものではないがエンドサイトーシスのような事象を活性化するための、オプ
ソニン又はリガンドが含まれうる。リポソームは医薬調合物の送達を改善するために低い
ｐＨ又は高いｐＨを含むことができる。
【０２６６】
リポソームの形成は、物理化学的特性、例えば、限定するものではないが、封入される
医薬調合物及びリポソーム成分、脂質小胞が分散せしめられる媒体の性質、封入される物
質の有効濃度及びその潜在的毒性、小胞の適用及び送達のうち少なくともいずれかの際に
伴う任意の追加のプロセス、意図される適用のための小胞の最適なサイズ、多分散性及び
貯蔵寿命、並びに安全かつ有効なリポソーム生成物のバッチ毎の再現性及び大規模生産の
可能性、に応じて様々であってよい。
【０２６７】
１つの実施形態では、そのような調合物は、該調合物がｉｎ  ｖｉｖｏで受動的又は能
動的に異なる種類の細胞に方向付けられるように、構築又は組成変更されてもよい。
調合物は、その表面上での様々なリガンドの発現を通じて、例えば、限定するものでは
ないが、葉酸、トランスフェリン、Ｎ‐アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）、及び
抗体を標的とした手法で例証されるようにして、選択的に標的化されることが可能である
。
【０２６８】
リポソーム、リポプレックス、又は脂質ナノ粒子は、これらの調合物がＧＤＡによる細
胞トランスフェクションを高めることができる可能性があるので、ＧＤＡ機能の有効性を
改善するために使用されうる。リポソーム、リポプレックス、又は脂質ナノ粒子はＧＤＡ
の安定性を高めるために使用される場合もある。
【０２６９】
抗体という積荷用に特別に調合されるリポソームは、例えばエップシュタイン（Ｅｐｐ
ｓｔｅｉｎ）ら（エップシュタイン（Ｅｐｐｓｔｅｉｎ）、Ｄ．Ａ．ら、「リポソームに
封入されたネズミ科動物インターフェロンγの生物活性は細胞膜受容体によって仲介され
る（Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ｌｉｐｏｓｏｍｅ−ｅｎｃａｐｓ
ｕｌａｔｅｄ  ｍｕｒｉｎｅ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  ｇａｍｍａ  ｉｓ  ｍｅｄｉａｔ
ｅｄ  ｂｙ  ａ  ｃｅｌｌ  ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ）」、米国アカデミー
紀要（Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ）、１９８５年６月、第８２巻、
第１１号、ｐ．３６８８−９２）；ホワン（Ｈｗａｎｇ）ら（ホワン（Ｈｗａｎｇ）、Ｋ
．Ｊ．ら、「単層のスフィンゴミエリン／コレステロールリポソームの肝摂取及び分解：
速度論的研究（Ｈｅｐａｔｉｃ  ｕｐｔａｋｅ  ａｎｄ  ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ  ｏｆ
ｕｎｉｌａｍｅｌｌａｒ  ｓｐｈｉｎｇｏｍｙｅｌｉｎ／  ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ  
ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ：  ａ  ｋｉｎｅｔｉｃ  ｓｔｕｄｙ）」、米国アカデミー紀要（Ｐ
ｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ）、１９８０年７月、第７７巻、第７号、
ｐ．４０３０−４）；米国特許第４，４８５，０４５号明細書及び米国特許第４，５４４
，５４５号明細書に記載されるような、当分野で既知の技法によって調製される。循環時
間の長いリポソームの生産は米国特許第５，０１３，５５６号明細書にも記載されている
。
【０２７０】
本発明の抗体含有リポソームは、脂質、例えばホスファチジルコリン、コレステロール
のほかにポリエチレングリコールで誘導体化されたホスファチジルエタノールアミンなど
を利用する逆相蒸発を使用して生成されうる。所望の直径のリポソームを押出し加工する
ために規定の細孔径を備えたフィルタが使用される。別の実施形態では、本発明のＧＤＡ
は、マーティン（Ｍａｒｔｉｎ）らが述べるようなジスルフィド相互交換反応によってリ
ポソームの外部表面にコンジュゲートされることが可能である（マーティン（Ｍａｒｔｉ
ｎ）、Ｆ．Ｊ．ら、「予め成形された小胞への免疫グロブリンフラグメントの不可逆的カ
ップリング。リポソームを標的化するための改良法（Ｉｒｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ  ｃｏｕ
ｐｌｉｎｇ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  ｆｒａｇｍｅｎｔｓ  ｔｏ  ｐｒｅ
ｆｏｒｍｅｄ  ｖｅｓｉｃｌｅｓ．  Ａｎ  ｉｍｐｒｏｖｅｄ  ｍｅｔｈｏｄ  ｆｏｒ  
ｌｉｐｏｓｏｍｅ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ）」、ザ・ジャーナル・オブ・バイオロジカル・
ケミストリー（Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．）、１９８２年１月１０日、第２５７巻、第１
号、ｐ．２８６−８）。
【０２７１】
〔調合用ビヒクル：ポリマー及びナノ粒子〕
本発明のＧＤＡは天然ポリマー及び合成ポリマーのうち少なくともいずれかを使用して
調合可能である。送達に使用されうるポリマーの非限定的な例には、限定するものではな
いが、ＤＭＲＩ／ＤＯＰＥ、ポロキサマー、キトサン、シクロデキストリン及びポリ（乳
酸‐グリコール酸）共重合体（ＰＬＧＡ）が挙げられる。これらは生物分解性となりうる
。
【０２７２】
ポリマー調合物により、（例えば筋肉内注射又は皮下注射後の）ＧＤＡの持続放出又は
遅延放出が可能となりうる。ＧＤＡの放出プロファイルの変更は、例えば、長期間にわた
るＧＤＡの放出をもたらすことが可能である。ポリマー調合物は、ＧＤＡの安定性を増大
させるために使用されてもよい。
【０２７３】
ポリマー調合物は、様々なリガンド、例えば、限定するものではないが、葉酸、トラン
スフェリン、及びＮ‐アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）で例示されるようなリガ
ンドの発現を通じて選択的に標的化されることも可能である（ブノア（Ｂｅｎｏｉｔ）ら
、バイオマクロモレキュールズ（Ｂｉｏｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ）、２０１１年、
第１２巻、ｐ．２７０８−２７１４；ロゼマ（Ｒｏｚｅｍａ）ら、米国アカデミー紀要（
Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ）、２００７年、第１０４巻、ｐ．１２
９８２−１２８８７；デイビス（Ｄａｖｉｓ）、モレキュラー・ファーマシューティクス
（Ｍｏｌ  Ｐｈａｒｍ．）、２００９年、第６巻、ｐ．６５９−６６８；デイビス（Ｄａ
ｖｉｓ）、ネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ）、２０１０年、第４６４巻、ｐ．１０６７−１０
７０；参照により全体が本願に組み込まれる）。
【０２７４】
本発明のＧＤＡは、ポリマー、脂質、及び他の生物分解性作用薬、例えば、限定するも
のではないがリン酸カルシウム、のうち少なくともいずれかの組み合わせを使用するナノ
粒子として調合されることも可能である。構成成分は、組み合わされてコア‐シェル構造
、ハイブリッド構造、及び多層構造のうち少なくともいずれかとされて、ＧＤＡの送達が
増強されうるように該ナノ粒子の微調整を可能にすることができる。ＧＤＡ抗体について
は、生理的ｐＨで自己アセンブリしてポリマーソームとしても知られるナノメートルサイ
ズの小胞を形成するｐＨ感受性のジブロック共重合体である、ポリ（２‐（メタクリロイ
ルオキシ）エチルフォスフォリルコリン）‐ブロック‐（２‐（ジイソプロピルアミノ）
エチルメタクリラート）（ＰＭＰＣ‐ＰＤＰＡ）に基づいたシステムが使用されうる。こ
れらのポリマーソームは、生きている細胞内で比較的大量の抗体積載物を成功裡に送達す
ることが示されている。（マシニャーニ（Ｍａｓｓｉｇｎａｎｉ）ら、「抗体の細胞送達
：有効な標的化細胞内イメージング及び新しい治療ツール（Ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｄｅｌｉ
ｖｅｒｙ  ｏｆ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ  ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｓ
ｕｂｃｅｌｌｕｌａｒ  ｉｍａｇｉｎｇ  ａｎｄ  ｎｅｗ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｔ
ｏｏｌ）」、ネイチャー・プロシーディングス（Ｎａｔｕｒｅ  Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ
）、２０１０年５月）。
【０２７５】
１つの実施形態では、本発明のＧＤＡを送達するナノ粒子を形成するためにＰＥＧ‐電
荷反転型ポリマー（ピテラ（Ｐｉｔｅｌｌａ）ら、バイオマテリアルズ（Ｂｉｏｍａｔｅ
ｒｉａｌｓ）、２０１１年、第３２巻、ｐ．３１０６−３１１４）が使用されてもよい。
ＰＥＧ‐電荷反転型ポリマーは、酸性のｐＨで開裂されてポリカチオンとなることにより
ＰＥＧ‐ポリアニオンブロック共重合体を改善し、エンドソーム脱出を増強することがで
きる。
【０２７６】
コア‐シェル型ナノ粒子の使用は、カチオン性の架橋型ナノゲルコア及び様々なシェル
を合成するためのハイスループット手法にさらに焦点を当ててきた（ジークバルト（Ｓｉ
ｅｇｗａｒｔ）ら、米国アカデミー紀要（Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳ
Ａ）、２０１１年、第１０８巻、ｐ．１２９９６−１３００１）。ポリマーナノ粒子の複
合体形成、送達、及び内在化は、該ナノ粒子のコア及びシェルの両方の構成成分中の化学
組成を変更することにより正確に制御可能である。
【０２７７】
１つの実施形態では、本発明のＧＤＡを送達するためにエチレン酢酸ビニル共重合体の
マトリックスが使用される。そのようなマトリックスは、ネイチャー・バイオテクノロジ
ー（Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、１９９２年、第１０巻、ｐ．１４４
６−１４４９に記載されている。
【０２７８】
〔抗体調合物〕
本発明の抗体ＧＤＡは静脈内投与又は血管外投与のために調合されうる（ドーアティ（
Ｄａｕｇｈｅｒｔｙ）ら、「モノクローナル抗体治療薬に関する調合及び送達の問題（Ｆ
ｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｉｓｓｕｅｓ  ｆｏｒ  ｍｏｎｏｃ
ｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）」、アドバンスト・ドラッ
グ・デリバリー・レビューズ（Ａｄｖ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ  Ｒｅｖ）、２００６年８
月７日、第５８巻、第５−６号、ｐ．６８６−７０６、米国特許出願公開第２０１１／０
１３５５７０号明細書、これらはすべて全体が本願に組込まれる）。血管外投与経路には
、限定するものではないが、皮下投与、腹腔内投与、脳内投与、眼内投与、病巣内投与、
局所投与及び筋内投与が挙げられる。
【０２７９】
抗体構造物は、治療薬としての該構造物の有効性を改善するために修飾されうる。改善
には、限定するものではないが、熱力学的安定性の改善、Ｆｃ受容体結合性の低減、及び
フォールディング効率の改善が挙げられる。修飾には、限定するものではないが、アミノ
酸置換、グリコシル化、パルミトイル化及びタンパク質コンジュゲーションが挙げられる
。
【０２８０】
抗体ＧＤＡは、抗体酸化作用を低減するために酸化防止剤を用いて調合されてもよい。
抗体ＧＤＡはさらに、タンパク質凝集を低減するために添加物を用いて調合されてもよい
。そのような添加物には、限定するものではないが、アルブミン、アミノ酸、糖、尿素、
塩化グアニジニウム、ポリアルコール、ポリマー（ポリエチレングリコール及びデキスト
ランなど）、界面活性剤（例えば、限定するものではないがポリソルベート２０及びポリ
ソルベート８０）、又はさらに他の抗体、が挙げられる。
【０２８１】
本発明の抗体ＧＤＡは抗体の構造及び機能への水の影響を低減するために調合されうる
。そのような調合物における抗体の調製物（ｐｒｅｐａｒａｒｔｉｏｎ）は凍結乾燥され
うる。凍結乾燥に供される調合物は、抗体構造を保護及び安定化するために炭水化物又は
ポリオール化合物を含みうる。そのような化合物には、限定するものではないがスクロー
ス、トレハロース及びマンニトールが挙げられる。
【０２８２】
本発明の抗体ＧＤＡはポリマーを用いて調合されてもよい。１つの実施形態では、ポリ
マー調合物は疎水性ポリマーを含有しうる。そのようなポリマーは、ポリラクチド‐コ‐
グリコリドを用いて水中油中固体型（ｓｏｌｉｄ−ｉｎ−ｏｉｌ−ｉｎ−ｗａｔｅｒ）カ
プセル化法により調合されたミクロスフェアであってもよい。エチレン酢酸ビニル共重合
体を含んでなるミクロスフェアも抗体送達用に企図され、送達部位における抗体放出の時
間経過を延長するために使用されうる。別の実施形態では、ポリマーは水性ゲルであって
よい。そのようなゲルは、例えば、カルボキシメチルセルロースを含んでなることができ
る。水性ゲルはさらにヒアルロン酸ヒドロゲルを含んでなることもできる。抗体は、その
ようなゲルに、限定するものではないが中枢神経系の組織などの組織内での持続送達を可
能にするヒドラゾン結合によって共有結合されてもよい。
【０２８３】
〔調合用ビヒクル：ペプチド及びタンパク質〕
本発明のＧＤＡはペプチド及びタンパク質のうち少なくともいずれかとともに調合可能
である。１つの実施形態では、ペプチド、例えば、限定するものではないが、細胞膜透過
性のペプチド並びに細胞内送達を可能にするタンパク質及びペプチドが、医薬調合物を送
達するために使用されうる。本発明の医薬調合物と共に使用されうる細胞膜透過性ペプチ
ドの非限定的な例には、細胞内空間への送達を容易にする、ポリカチオンに取り付けられ
た細胞膜透過性ペプチド配列、例えばＨＩＶ由来ＴＡＴペプチド、ペネトラチン、トラン
スポータン、又はｈＣＴ由来の細胞膜透過性ペプチドが挙げられる（例えば、キャロン（
Ｃａｒｏｎ）ら、モレキュラー・セラピー（Ｍｏｌ．  Ｔｈｅｒ．）、２００１年、第３
巻、第３号、ｐ．３１０−８；ランゲル（Ｌａｎｇｅｌ）、「細胞膜透過性ペプチド：プ
ロセス及び適用（Ｃｅｌｌ−Ｐｅｎｅｔｒａｔｉｎｇ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ：  Ｐｒｏｃｅ
ｓｓｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ）」、米国フロリダ州ボカラトンのＣＲＣ
プレス（ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ）、２００２年；エル‐アンダロッシ（Ｅｌ−Ａｎｄａｌｏ
ｕｓｓｉ）ら、カレント・ファーマシューティカル・デザイン（Ｃｕｒｒ．  Ｐｈａｒｍ
．  Ｄｅｓ．）、２００３年、第１１巻、第２８号、ｐ．３５９７−６１１；及びデシャ
イエ（Ｄｅｓｈａｙｅｓ）ら、セルラー・アンド・モレキュラー・ライフ・サイエンシズ
（Ｃｅｌｌ．  Ｍｏｌ．  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ．）、２００５年、第６２巻、第１６号、ｐ
．１８３９−４９（これらはすべて参照により本願に組込まれる）を参照されたい）。組
成物は、細胞内空間への該組成物の送達を増強する細胞膜透過性の作用物質（例えばリポ
ソーム）を含めるために調合されることも可能である。本発明のＧＤＡは、細胞内送達を
可能にするために、ペプチド及びタンパク質のうち少なくともいずれか、例えば、限定す
るものではないが、エルロン・セラピューティクス（Ａｉｌｅｒｏｎ  Ｔｈｅｒａｐｅｕ
ｔｉｃｓ）（米国マサチューセッツ州ケンブリッジ）及びパーメオン・バイオロジクス（
Ｐｅｒｍｅｏｎ  Ｂｉｏｌｏｇｉｅｓ）（米国マサチューセッツ州ケンブリッジ）由来の
ペプチド及びタンパク質のうち少なくともいずれかに複合体化されてもよい（クロニカン
（Ｃｒｏｎｉｃａｎ）ら、ＡＣＳケミカル・バイオロジー（ＡＣＳ  Ｃｈｅｍ．  Ｂｉｏ
ｌ．）、２０１０年、第５巻、ｐ．７４７−７５２；マクノートン（ＭｃＮａｕｇｈｔｏ
ｎ）ら、米国科学アカデミー紀要（Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  Ｕ
ＳＡ）、２００９年、第１０６巻、ｐ．６１１１−６１１６；ソーヤー（Ｓａｗｙｅｒ）
、ケミカル・バイオロジー・アンド・ドラッグ・デザイン（Ｃｈｅｍ  Ｂｉｏｌ  Ｄｒｕ
ｇ  Ｄｅｓ）、２００９年、第７３巻、ｐ．３−６；バーダイン（Ｖｅｒｄｉｎｅ）及び
ハイリンスキー（Ｈｉｌｉｎｓｋｉ）、メソッズ・イン・エンザイモロジー（Ｍｅｔｈｏ
ｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．）、２０１２年、第５０３巻、ｐ．３−３３；これらはすべて全
体が参照により本願に組込まれる）。
【０２８４】
１つの実施形態では、細胞膜透過性のポリペプチドは第１のドメインと第２のドメイン
とを含んでなる場合がある。第１のドメインは過度に荷電したポリペプチドを含んでなる
ことができる。第２のドメインはタンパク質結合性のパートナーを含んでなることができ
る。本明細書中で使用されるように、「タンパク質結合性のパートナー」には、限定する
ものではないが、抗体及びその機能性フラグメント、スカフォールドタンパク質、又はペ
プチドが挙げられる。細胞膜透過性のポリペプチドはさらに、タンパク質結合性のパート
ナーのための細胞内の結合パートナーを含んでなることができる。細胞膜透過性のポリペ
プチドは、ＧＤＡが導入される細胞から分泌されることが可能であってもよい。
【０２８５】
このペプチド又はタンパク質を含めた調合物は、ＧＤＡによる細胞トランスフェクショ
ンを高めるため、又はＧＤＡの生体内分布を（例えば特定の組織又は細胞種を標的とする
ことにより）変更するために、使用されうる。
【０２８６】
〔調合用ビヒクル：細胞〕
本発明のＧＤＡ組成物の細胞ベースの調合物は、細胞トランスフェクションを（例えば
細胞内輸送体に含めて）確実にするために、又は該組成物の生体内分布を（例えば細胞内
輸送体を特定の組織若しくは細胞種に対して標的化することにより）変更するために、使
用されうる。
【０２８７】
〔細胞移入方法〕
核酸又はタンパク質を細胞内に導入するための、例えばウイルス及び非ウイルスを仲介
する技法などの様々な方法が、当分野で既知かつ適切である。典型的な非ウイルスを仲介
する技法の例には、限定するものではないが、エレクトロポレーション、リン酸カルシウ
ム仲介型の移入、ヌクレオフェクション、ソノポレーション、熱ショック、マグネトフェ
クション、リポソーム仲介型の移入、マイクロインジェクション、マイクロプロジェクテ
ィル（ｍｉｃｒｏｐｒｏｊｅｃｔｉｌｅ）仲介型の移入（ナノ粒子）、カチオン性ポリマ
ー仲介型の移入（ＤＥＡＥデキストラン、ポリエチレンイミン、ポリエチレングリコール
（ＰＥＧ）など）又は細胞融合が挙げられる。
【０２８８】
ソノポレーション（すなわち細胞の音波処理）の技法は、細胞原形質膜の透過性を改変
するための音（例えば超音波周波数）の使用である。ソノポレーション法は当業者には周
知であり、ｉｎ  ｖｉｖｏで核酸を送達するために使用される（ヨン（Ｙｏｏｎ）及びパ
ク（Ｐａｒｋ）、エキスパート・オピニオン・オン・ドラッグ・デリバリー（Ｅｘｐｅｒ
ｔ  Ｏｐｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ）、２０１０年、第７巻、ｐ．３２１−３３０；ポ
ステマ（Ｐｏｓｔｅｍａ）及びギリヤ（Ｇｉｌｊａ）、カレント・ファーマシューティカ
ル・バイオテクノロジー（Ｃｕｒｒ  Ｐｈａｒｍ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．）、２００７
年、第８巻、ｐ．３５５−３６１；ニューマン（Ｎｅｗｍａｎ）及びベッティンガー（Ｂ
ｅｔｔｉｎｇｅｒ）、ジーン・セラピー（Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．）、２００７年、第１４
巻、ｐ．４６５−４７５；いずれも参照により全体が本願に組み込まれる）。ソノポレー
ション法は当分野において周知であり、例えば米国特許出願公開第２０１００１９６９８
３号明細書における細菌に関するように、また例えば米国特許出願公開第２０１００００
９４２４号明細書におけるその他の細胞種に関するようにも教示されており、前記文献は
各々全体が参照により本願に組込まれる。
【０２８９】
エレクトロポレーション技法も当分野において良く知られており、ｉｎ  ｖｉｖｏ及び
臨床的に核酸を送達するために使用される（アンドレ（Ａｎｄｒｅ）ら、カレント・ジー
ン・セラピー（Ｃｕｒｒ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ）、２０１０年、第１０巻、ｐ．２６７−
２８０；キャレーラ（Ｃｈｉａｒｅｌｌ）ら、カレント・ジーン・セラピー、２０１０年
、第１０巻、ｐ．２８１−２８６；ホフマン（Ｈｏｊｍａｎ）、カレント・ジーン・セラ
ピー、２０１０年、第１０巻、ｐ．１２８−１３８；いずれも参照により全体が本願に組
み込まれる）。１つの実施形態では、ＧＤＡはエレクトロポレーションによって送達され
てもよい。
【０２９０】
〔投与及び送達〕
本発明の組成物は、当分野で既知の標準的な方法又は経路のうちのいずれによっても投
与されうる。
【０２９１】
本発明のＧＤＡは、治療上有効な成果をもたらす任意の経路によって投与されうる。こ
れらには、限定するものではないが、腸内、胃腸内、硬膜外、経口、経皮、硬膜外（硬膜
周囲）、大脳内（大脳の中への）、脳室内（脳室の中への）、上皮（皮膚上への適用）、
皮内、（皮膚自体への）、皮下（皮膚の下への）鼻腔投与（経鼻）、静脈内（静脈の中へ
の）、動脈内（動脈の中への）、筋肉内（筋肉の中への）、心臓内の（心臓の中への）、
骨内注入（骨髄の中への）、鞘内（脊椎管の中への）、腹腔内、（腹膜の中への注入又は
注射）、膀胱内注入、硝子体内、（経眼）、陰茎海綿体注射、（陰茎の基部の中への）、
膣内投与、子宮内、羊膜外投与、経皮（全身的分布のための無傷の皮膚を通じた拡散）、
経粘膜（粘膜を通じた拡散）、吸入（鼻からの吸引）、舌下、口唇下、浣腸、点眼液（結
膜上への）、又は点耳液によるもの、が挙げられる。特定の実施形態では、組成物は該組
成物が血液脳関門、血管関門、又はその他の上皮性関門を横切ることが可能となる方法で
投与されうる。本発明のＧＤＡのための非限定的な投与経路は以下に記載されている。
【０２９２】
〔非経口的及び注射可能な投与〕
経口及び非経口投与のための液体投与形態には、限定するものではないが、薬学的に許
容可能な乳剤、マイクロエマルジョン、溶液、懸濁液、シロップ剤、及びエリキシル剤の
うち少なくともいずれかが含まれる。有効成分に加えて、液体投与形態は、当分野におい
て一般に使用される不活性の希釈剤、例えば水又はその他の溶剤、可溶化剤及び乳化剤、
例えばエチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジル
アルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３‐ブチレングリコール、
ジメチルホルムアミド、油類（特に綿実油、落花生油、トウモロコシ油、麦芽、オリーブ
油、ヒマシ油、及びゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリ
エチレングリコール及びソルビタン脂肪酸エステル、並びにこれらの混合物を含んでなる
ことができる。不活性の希釈剤に加えて、経口組成物は、アジュバント、例えば湿潤剤、
乳化及び懸濁化剤、甘味料、香味料、並びに賦香剤などを含むことができる。非経口投与
のためのある実施形態では、組成物は、可溶化剤、例えばＣＲＥＭＯＰＨＯＲ（登録商標
）、アルコール、油、変性油、グリコール、ポリソルベート、シクロデキストリン、ポリ
マー、及びこれらの組み合わせと混合される。他の実施形態では、ヒドロキシプロピルセ
ルロースのような界面活性剤が含められる。
【０２９３】
注射可能な調製物、例えば、水性の無菌注射剤又は油性の懸濁液は、適切な分散剤、湿
潤剤、及び懸濁化剤のうち少なくともいずれかを使用して、既知の技術に従って調合され
うる。無菌注射剤調製物は、無毒の非経口的に許容可能な希釈剤及び溶媒のうち少なくと
もいずれかにおける、無菌の注射可能な溶液、懸濁液、及び乳剤のうち少なくともいずれ
か、例えば１，３‐ブタンジオール中の溶液であってよい。使用されうる許容可能なビヒ
クル及び溶媒の中には、水、リンゲル液（ＵＳＰ）、及び等張食塩水がある。無菌の固定
油は溶媒又は懸濁媒として従来通りに使用される。この目的については、合成のモノグリ
セリド又はジグリセリドを含む任意の無刺激の固定油が使用可能である。オレイン酸のよ
うな脂肪酸は、注射剤の調製に使用可能である。
【０２９４】
注射可能な調合物は、例えば、細菌保持フィルタによる濾過によって、及び／又は使用
前に滅菌水若しくは他の無菌の注射可能な媒体に溶解若しくは分散可能な無菌の固形組成
物の形で滅菌剤を組込むことにより、滅菌可能である。
【０２９５】
有効成分の効果を延長するために、皮下注射又は筋肉内注射からの有効成分の吸収を遅
延させることが望ましい場合が多い。これは、水溶性に乏しい結晶質又は非晶質の液体懸
濁物の使用によって為されうる。このとき薬物の吸収速度は溶解速度に依存し、その溶解
速度は結晶の大きさ及び結晶形態に依存しうる。別例として、非経口的に投与される薬物
形態の遅延吸収は、油性ビヒクル中に薬物を溶解又は懸濁することにより行われる。注射
可能なデポー形態は、ポリラクチド‐ポリグリコリドのような生分解性ポリマー中の薬物
のマイクロカプセルマトリックスを形成することにより作製される。薬物対ポリマーの比
率及び使用される特定のポリマーの性質に応じて、薬物放出の速度を制御することが可能
である。その他の生分解性ポリマーの例にはポリオルトエステル及びポリ無水物が挙げら
れる。注射可能なデポー調合物は、体内組織との適合性を有するリポソーム又はマイクロ
エマルジョン中に薬物を封入することにより調製される。
【０２９６】
〔直腸投与及び膣内投与〕
直腸投与又は膣内投与のための組成物は、典型的には、組成物を、周囲温度では固体で
あるが体温では液体であり、したがって直腸又は膣腔の中で融解して有効成分を放出する
、ココアバター、ポリエチレングリコール又は坐剤用ワックスのような適切な無刺激性添
加剤と混合することにより調製可能な坐剤である。
【０２９７】
〔経口投与〕
経口投与用の固体投薬形態には、カプセル剤、錠剤、丸剤、散剤、及び果粒剤が挙げら
れる。そのような固体投薬形態では、有効成分は、少なくとも１つの不活性で薬学的に許
容可能な添加剤、例えばクエン酸ナトリウム又はリン酸カルシウム、及び／又は充填剤若
しくは増量剤（例えばデンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール、
及びケイ酸）、結合剤（例えばカルボキシメチルセルロース、アルギナート、ゼラチン、
ポリビニルピロリジノン、スクロース、及びアラビアゴム）、湿潤剤（例えばグリセロー
ル）、崩壊剤（例えば寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモデンプン若しくはタピオカデン
プン、アルギン酸、ある種のケイ酸塩、及び炭酸ナトリウム）、溶解遅延剤（ｓｏｌｕｔ
ｉｏｎ  ｒｅｔａｒｄｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）（例えばパラフィン）、吸収促進剤（例えば
第四アンモニウム化合物）、湿潤剤（例えばセチルアルコール及びモノステアリン酸グリ
セロール）、吸収剤（例えばカオリン及びベントナイト粘土）、並びに滑沢剤（例えばタ
ルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコー
ル、ラウリル硫酸ナトリウム）、並びにこれらの混合物、と混合される。カプセル剤、錠
剤及び丸剤の場合、その投与形態は緩衝剤を含んでなる場合もある。
【０２９８】
〔局所的又は経皮的投与〕
本明細書中に記載されるように、本発明のＧＤＡを含有する組成物は局所投与用に調合
されてもよい。皮膚は、容易にアクセス可能であるので送達の理想的な標的部位となりう
る。遺伝子発現は、皮膚に限定されて非特異的な毒性を潜在的に回避するだけでなく、皮
膚内の特定の層及び細胞種に限定される場合もある。
【０２９９】
送達される組成物の皮膚発現の部位は、核酸送達の経路に応じて様々となろう。皮膚に
ＧＤＡを送達するためには、３つの経路：（ｉ）局所適用（例えば局所／局部の治療及び
化粧用途のうち少なくともいずれかに関するもの）；（ｉｉ）皮内注射（例えば局所／局
部の治療及び化粧用途のうち少なくともいずれかに関するもの）；並びに（ｉｉｉ）全身
送達（例えば皮膚及び皮膚以外の両領域に影響を及ぼす皮膚疾患の治療に関するもの）が
一般に考えられる。ＧＤＡは当分野で既知のいくつかの異なる手法によって皮膚に送達可
能である。
【０３００】
１つの実施形態では、本発明は、本発明の方法を好都合かつ／又は効果的に実行するた
めの様々な被覆材（例えば、創傷被覆材）又は包帯（例えば粘着包帯）を提供する。典型
的には、被覆材又は包帯は、ユーザが対象者の複合的治療を実施するのを可能にするのに
十分な量の、本明細書中に記載の医薬組成物及びＧＤＡのうち少なくともいずれかを含ん
でなることができる。
【０３０１】
１つの実施形態では、本発明は２回以上の注射で送達されるＧＤＡ組成物を提供する。
組成物の局所的及び経皮的のうち少なくともいずれかの投与のための投薬形態には、軟
膏剤、パスタ剤、クリーム剤、ローション剤、ゲル剤、散剤、溶液、スプレー、吸入薬及
びパッチ剤のうち少なくともいずれかが挙げられる。一般に、有効成分は、必要に応じて
、薬学的に許容可能な添加剤、並びに任意の必要とされる保存剤及び／又は緩衝剤のうち
少なくともいずれかと、無菌条件下において混合される。加えて、本発明は、身体への化
合物の制御された送達を提供するというさらなる長所を有することの多い経皮的パッチ剤
の使用を企図している。そのような投薬形態は、例えば、適切な媒体における化合物の溶
解及び調剤（ｄｉｓｐｅｎｓｉｎｇ）のうち少なくともいずれかにより調製されうる。別
例として、又は追加として、速度は、律速メンブレンの提供、並びに、ポリマーマトリク
ス及びゲルのうち少なくともいずれかにおける化合物の分散、のうち少なくともいずれか
によって制御されうる。
【０３０２】
局所投与に適した調合物には、限定するものではないが、液体及び／又は半液体の調製
物、例えばリニメント剤、ローション剤、水中油型及び／又は油中水型乳剤、例えばクリ
ーム剤、軟膏剤及び／又はパスタ剤、並びに溶液及び／又は懸濁液のうち少なくともいず
れかが挙げられる。
【０３０３】
局所投与可能な調合物は、例えば、約１％〜約１０％（ｗ／ｗ）の有効成分を含んでな
ることができるが、有効成分の濃度はその溶媒中における該有効成分の溶解限度と同じく
らい高くてもよい。局所投与のための調合物は、本明細書中に記載された追加成分のうち
１以上をさらに含んでなることができる。
【０３０４】
〔デポー投与〕
本明細書中に記載されるように、いくつかの実施形態では、組成物は持続放出のための
デポー剤に調合される。一般に、特定の器官又は組織（「標的組織」）が投与の標的とさ
れる。
【０３０５】
本発明のいくつかの態様では、ＧＤＡは標的組織の内部又は近位に空間的に保持される
。提供されるのは、哺乳類の対象者の標的組織に組成物を提供する方法であって、標的組
織（１以上の標的細胞を含有する）を、組成物と、該組成物（特に組成物のＧＤＡ構成成
分）が標的組織中にほぼ保持される条件であって組成物の少なくとも１０、２０、３０、
４０、５０、６０、７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９、９９．９
、９９．９９％又は９９．９９％超が標的組織中に保持されることを意味している条件下
で接触させることによる方法である。好都合には、保持は、１以上の標的細胞に入る組成
物中に存在するＧＤＡの量を測定することにより決定される。例えば、対象者に投与され
たＧＤＡのうち少なくとも１、５、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、
８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９、９９．９、９９．９９％又は９９．９９％
超が、投与後のある期間に細胞内に存在する。例えば、哺乳類の対象者への筋肉内注射は
ＧＤＡ及びトランスフェクション作用薬を含有している水性組成物を使用して実施され、
該組成物の保持は筋細胞中に存在するＧＤＡの量を測定することにより決定される。
【０３０６】
本発明のある態様は、哺乳類の対象者の標的組織に組成物を提供する方法であって、該
標的組織（１以上の標的細胞を含んでいる）を、組成物と、該組成物が標的組織中にほぼ
保持される条件下で接触させることによる方法に関する。該組成物は有効な量のＧＤＡを
含有して、対象とする効果が少なくとも１つの標的細胞中で生じるようになっている。組
成物は一般に、「裸の」ＧＤＡ（例えば細胞膜透過剤又はその他の作用薬を伴わないＧＤ
Ａ）も企図されるものの、細胞膜透過剤と、薬学的に許容可能な担体とを含有する。
【０３０７】
状況によっては、組織中の細胞内に存在する成長因子の量は所望のとおりに増大せしめ
られる。好ましくは、成長因子のこの増大は、標的組織内の細胞に空間的に限定される。
よって、提供されるのは、哺乳類の対象者の組織において対象とする成長因子の量を増大
させる方法である。ＧＤＡを含有する組成物であって、単位量の組成物が、所定の体積の
標的組織中に含まれる細胞のうち十分な割合において、その水準の対象とする成長因子を
生産することが判定済みであるという特性を有する組成物が提供される。
【０３０８】
いくつかの実施形態では、組成物は複数の異なるＧＤＡを含み、１又は２以上のＧＤＡ
が対象の生体分子を標的としている。任意選択で、組成物は、組成物の細胞内送達を助け
るための細胞膜透過剤をさらに含有する。所定の体積の標的組織中に含まれる十分な割合
の細胞の中の対象の生体分子を標的とするのに必要な、組成物の用量の決定がなされる（
一般に、その所定の体積に隣接している、又は標的組織より遠位の、組織中の対象とする
生体分子は標的としない）。この決定に続いて、決定された用量が哺乳類の対象者の組織
内へ直接導入される。
【０３０９】
１つの実施形態では、本発明は、２回以上の注射で、すなわち分割用量の注射によって
、送達されるＧＤＡを提供する。
〔経肺投与〕
医薬組成物は、口腔を介した経肺投与に適した調合物として調製、包装、及び販売のう
ち少なくともいずれかがなされてもよい。そのような調合物は、有効成分を含んでなり、
かつ約０．５ｎｍ〜約７ｎｍ又は約１ｎｍ〜約６ｎｍの範囲の直径を有する乾燥粒子を含
んでなることができる。そのような組成物は、適切には、乾燥散剤を散布するために推進
薬が流れ込むように方向付けられた乾燥散剤リザーバを含んでなるデバイスを使用して、
かつ／又は、自己推進性溶媒／散剤調剤コンテナ、例えば密閉容器中で低沸点推進薬に溶
解及び／若しくは懸濁された有効成分を含んでなるデバイスを使用して、投与するための
乾燥散剤の形態である。そのような散剤は粒子を含んでなり、該粒子の重量比で少なくと
も９８％が０．５ｎｍより大きい直径を有し、かつ該粒子の数の少なくとも９５％が７ｎ
ｍ未満の直径を有している。別例として、粒子の重量比で少なくとも９５％は１ｎｍより
大きい直径を有し、かつ該粒子の数の少なくとも９０％は６ｎｍ未満の直径を有している
。乾燥散剤組成物は、糖のような固形微細粉末希釈剤を含む場合があり、好都合には単位
用量の形態で提供される。
【０３１０】
低沸点推進薬には、一般に、大気圧で１８．３℃（華氏６５度）未満の沸点を有する液
体推進薬が挙げられる。一般に、推進薬は組成物の５０％〜９９．９％（ｗ／ｗ）を構成
する場合があり、有効成分は組成物の０．１％〜２０％（ｗ／ｗ）を構成する場合がある
。推進薬は、追加の成分、例えば液体の非イオン性及び／又は固体の陰イオン性の界面活
性剤、並びに固体の希釈剤（有効成分を含んでなる粒子と同程度の粒径を有しうる）のう
ち少なくともいずれかをさらに含んでなることができる。
【０３１１】
経肺送達用に調合された医薬組成物は、溶液及び懸濁液のうち少なくともいずれかの小
滴の形態の有効成分を提供することができる。そのような調合物は、有効成分を含んでな
る任意選択で無菌の水性及び／又は希アルコール性の溶液及び／又は懸濁液として、調製
、包装、及び販売のうち少なくともいずれかがなされてもよく、かつ好都合には任意の噴
霧化デバイス及び／又は微粒化デバイスを使用して投与されうる。そのような調合物は、
１以上の追加の成分、例えば、限定するものではないが、サッカリンナトリウムのような
香味料、揮発性油、緩衝剤、界面活性剤、及びメチルヒドロキシベンゾアートのような防
腐剤、のうち少なくともいずれかをさらに含んでなることができる。この投与経路によっ
て提供される小滴は約０．１ｎｍ〜約２００ｎｍの範囲の平均直径を有しうる。
【０３１２】
〔鼻内、鼻腔及び口腔投与〕
経肺送達に有用であるとして本明細書中に記載された調合物は、医薬組成物の鼻内送達
に有用である。鼻内投与に適した別の調合物は、有効成分を含んでなり、約０．２μｍ〜
５００μｍの平均粒子を有している粗粉である。そのような調合物は、鼻吸入がなされる
方式で、すなわち鼻の近くに置かれた散剤のコンテナからの鼻通路を通した迅速な吸入に
よって、投与される。
【０３１３】
鼻腔投与に適した調合物は、例えば、約０．１％（ｗ／ｗ）ほど〜１００％（ｗ／ｗ）
ほどの有効成分を含んでなることが可能であり、かつ本明細書中に記載された追加成分の
うち１以上を含んでなることができる。医薬組成物は、口腔投与に適した調合物として調
製、包装、及び販売のうち少なくともいずれかがなされてもよい。そのような調合物は、
例えば、従来の方法を使用して作製された錠剤及びロゼンジのうち少なくともいずれかの
形態であってよく、かつ例えば、口腔内で溶解可能及び分解可能のうち少なくともいずれ
かである組成物を構成するバランスである０．１％〜２０％（ｗ／ｗ）の有効成分、及び
任意選択で本明細書中に記載された追加成分のうち１以上である。別例として、口腔投与
に適した調合物は、有効成分を含んでなる散剤並びにエアロゾル状及び／又は霧状の溶液
及び／又は懸濁液のうち少なくともいずれかを含んでなることができる。そのような粉末
状、エアロゾル状、及び／又はエアロゾル状の調合物は、分散せしめられた時、約０．１
ｎｍ〜約２００ｎｍの範囲の平均の粒径及び／又は小滴径を有することが可能であり、か
つ本明細書中に記載された任意の追加成分のうち１以上をさらに含んでなることができる
。
【０３１４】
〔点眼又は経耳投与〕
医薬組成物は、点眼又は経耳投与に適した調合物として調製、包装、及び販売のうち少
なくともいずれかがなされてもよい。そのような調合物は、例えば、点眼剤又は点耳剤の
形態、例えば、水性又は油性の液体添加剤中における有効成分の０．１／１．０％（ｗ／
ｗ）の溶液及び懸濁液のうち少なくともいずれかであってよい。そのような滴剤は、緩衝
剤、塩類、及び他の本明細書中に記載された任意の追加成分のうち１以上、のうち少なく
ともいずれかをさらに含んでなることができる。有用なその他の点眼投与可能な調合物に
は、微晶質形態及びリポソーム調製物のうち少なくともいずれかの有効成分を含んでなる
ものが挙げられる。網膜下挿入物も投与の形態として使用されうる。
【０３１５】
〔積載物投与：検出可能な作用薬及び治療薬〕
本明細書中に記載されたＧＤＡは、生物学的標的への物質（「積載物」）の送達、例え
ば標的を検出するための検出可能な物質の送達、又は治療薬若しくは診断薬の送達が望ま
れるいくつかの異なる状況において使用可能である。検出方法には、限定するものではな
いが、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの画像化及びｉｎ  ｖｉｖｏ画像化の両方法、例えば免疫組織
化学法、生物発光画像化法（ＢＬＩ）、磁気共鳴画像化法（ＭＲＩ）、陽電子射出断層撮
影法（ＰＥＴ）、電子顕微鏡法、Ｘ線断層撮影法、ラマン撮像法、光干渉断層撮影法、吸
収画像化法、熱感知画像化法、蛍光反射画像化法、蛍光顕微鏡法、蛍光分子断層撮影法、
核磁気共鳴像法、Ｘ線画像化法、超音波画像化法、光音響イメージング、研究室アッセイ
（ｌａｂ  ａｓｓａｙ）、又はタグ付け／染色／画像化が必要とされるあらゆる状況のも
の、が挙げられる。
【０３１６】
ＧＤＡは、任意の有用な配位にリンカー及び積載物の両方を備えるように設計可能であ
る。例えば、２つの端部を有するリンカーが、一方の端部を積載物に取り付け、他方の端
部をＧＤＡに取り付けるために使用される。本発明のＧＤＡは、２以上の積載物及び開裂
可能なリンカーを備えることも可能である。別の例において、リンカーを介してＧＤＡに
取り付け可能かつ蛍光標識されうる薬物は、該薬物をｉｎ  ｖｉｖｏで、例えば、細胞内
で追跡するために使用されることも可能である。
【０３１７】
他の例には、限定するものではないが、細胞内への可逆的薬物送達におけるＧＤＡの使
用が挙げられる。
本明細書中に記載されたＧＤＡは、特定の細胞小器官に対する、積載物、例えば検出薬
又は治療薬の細胞内標的化に使用可能である。加えて、本明細書中に記載されたＧＤＡは
、例えば生きた動物において、細胞又は組織に治療薬を送達するために使用可能である。
例えば、本明細書中に記載されたＧＤＡは、がん細胞を殺す化学療法剤を送達するために
使用可能である。リンカーによって治療薬に取り付けられたＧＤＡは、該治療薬が細胞内
の標的に到達するために細胞の中へと移動するのを可能にするメンバーの透過を促進する
ことが可能である。
【０３１８】
いくつかの実施形態では、積載物は、治療薬、例えば細胞毒素、放射性イオン、化学療
法薬、又はその他の治療薬であってよい。細胞毒素又は細胞毒性薬には、細胞に有害とな
りうる任意の作用薬が含まれる。例としては、限定するものではないが、タキソール、サ
イトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポ
シド、テニポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダ
ウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン（ｄｉｈｙｄｒｏｘｙａｎｔｈｒａｃｉ
ｎｅｄｉｏｎｅ）、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１‐デヒ
ドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プ
ロプラノロール、ピューロマイシン、メイタンシノイド類、例えばメイタンシノール（全
体が本願に援用される米国特許第５，２０８，０２０号明細書を参照）、ラシェルマイシ
ン（ＣＣ‐１０６５、いずれも本願に援用される米国特許第５，４７５，０９２号、同第
５，５８５，４９９号、及び同第５，８４６，５４５号明細書を参照）、並びにこれらの
アナログ体若しくは相同体が挙げられる。放射性イオンには、限定するものではないがヨ
ウ素（例えばヨウ素１２５又はヨウ素１３１）、ストロンチウム８９、リン、パラジウム
、セシウム、イリジウム、リン酸、コバルト、イットリウム９０、サマリウム１５３、及
びプラセオジム。他の治療薬には、限定するものではないが、代謝拮抗薬（例えばメトト
レキサート、６‐メルカプトプリン、６‐チオグアニン、シタラビン、５‐フルオロウラ
シル  デカルバジン（ｄｅｃａｒｂａｚｉｎｅ））、アルキル化薬（例えばメクロレタミ
ン、チオテパ  クロラムブシル、
ラシェルマイシン（ＣＣ‐１０６５）、メルファラン、カルマスティン（ＢＳＮＵ）、ロ
ムスチン（ＣＣＮＵ）、シクロホスファミド、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ス
トレプトゾトシン、マイトマイシンＣ、及びシス‐ジクロロジアミン白金（ＩＩ）（ＤＤ
Ｐ）シスプラチンＩ、アントラサイクリン（例えばダウノルビシン（以前はダウノマイシ
ン）及びドキソルビシン）、抗生物質（例えばダクチノマイシン（以前はアクチノマイシ
ン）、ブレオマイシン、ミトラマイシン、及びアントラマイシン（ＡＭＣ））、並びに抗
有系分裂剤（例えばビンクリスチン、ビンブラスチン、タキソール及びメイタンシノイド
）が挙げられる。
【０３１９】
いくつかの実施形態では、積載物は、検出可能な作用薬、例えば様々な有機小分子、無
機化合物、ナノ粒子、酵素又は酵素基質、蛍光体、発光材料（例えばルミノール）、生物
発光材料（例えばルシフェラーゼ、ルシフェリン、及びエクオリン）、化学発光材料、放
射性物質（例えば１８Ｆ、６７Ｇａ、８１ｍＫｒ、８２Ｒｂ、１１１Ｉｎ、１２３Ｉ、１
３３Ｘｅ、２０１Ｔｌ、１２５Ｉ、３５Ｓ、１４Ｃ、３Ｈ、又は９９ｍＴｃ（例えば過テ
クネチウム酸（テクネチウム酸（ＶＩＩ）、（ＴｃＯ４−）として）、並びに造影剤（例
えば、金（例えば金ナノ粒子）、ガドリニウム（例えばキレート化Ｇｄ）、酸化鉄（例え
ば、超常磁性酸化鉄（ＳＰＩＯ）、単結晶性酸化鉄ナノ粒子（ＭＩＯＮ）、及び超微小超
常磁性酸化鉄（ＵＳＰＩＯ））、マンガンキレート（例えばＭｎ‐ＤＰＤＰ）、硫酸バリ
ウム、ヨード造影剤（イオヘキソール）、マイクロバブル、又はパーフルオロカーボン）
であってよい。そのような光学的に検出可能な標識には、例えば、限定はしないが、４‐
アセトアミド‐４’‐イソチオシアン酸スチルベン‐２，２’ジスルホン酸；アクリジン
及び誘導体（例えばアクリジン及びアクリジンイソチオシアナート）；５‐（２’‐アミ
ノエチル）アミノナフタレン‐１‐スルホン酸（ＥＤＡＮＳ）；４‐アミノ‐Ｎ‐［３‐
ビニルスルホニル）フェニル］ナフタルイミド‐３，５ジスルホン酸；Ｎ‐（４‐アニリ
ノ‐１‐ナフチル）マレイミド；アントラニルアミド；ＢＯＤＩＰＹ；ブリリアントイエ
ロー；クマリン及び誘導体（例えばクマリン、７‐アミノ‐４‐メチルクマリン（ＡＭＣ
、クマリン１２０）、及び７‐アミノ‐４‐トリフルオロメチルクマリン（クマリン１５
１））；シアニン色素；シアノシン；４’，６‐ジアミニジノ（ｄｉａｍｉｎｉｄｉｎｏ
）‐２‐フェニルインドール（ＤＡＰＩ）；５’５”‐ジブロモピロガロール‐スルホナ
フタレイン（ｓｕｌｆｏｎａｐｈｔｈａｌｅｉｎ）（ジブロモピロガロールレッド）；７
‐ジエチルアミノ‐３‐（４’‐イソチオシアナトフェニル）‐４‐メチルクマリン）；
ジエチレントリアミンペンタアセタート；４，４’‐ジイソチオシアナトジヒドロ‐スチ
ルベン‐２，２’‐ジスルホン酸；４，４’‐ジイソチオシアナトスチルベン‐２，２’
‐ジスルホン酸；５‐［ジメチルアミノ］‐ナフタレン‐１‐スルホニルクロリド（ＤＮ
Ｓ、ダンシルクロリド）；４‐ジメチルアミノフェニルアゾフェニル‐４’‐イソチオシ
アナート（ＤＡＢＩＴＣ）；エオシン及び誘導体（例えば、エオシン及びエオシンイソチ
オシアナート）；エリトロシン及び誘導体（例えば、エリトロシンＢ及びエリトロシンイ
ソチオシアナート）；エチジウム；フルオレセイン及び誘導体（例えば、５‐カルボキシ
フルオレセイン（ＦＡＭ）、５‐（４，６‐ジクロロトリアジン‐２‐イル）アミノフル
オレセイン（ＤＴＡＦ）、２’，７’‐ジメトキシ４’５’‐ジクロロ‐６‐カルボキシ
フルオレセイン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアナート、Ｘ‐ローダミン
‐５‐（及び‐６）‐イソチオシアナート（ＱＦＩＴＣ又はＸＲＩＴＣ）、及びフルオレ
サミン）；２‐［２‐［３‐［［１，３‐ジヒドロ‐１，１‐ジメチル‐３‐（３‐スル
ホプロピル）‐２Ｈ‐ベンゾ［ｅ］インドール‐２‐イリデン］エチリデン］‐２‐［４
‐（エトキシカルボニル）‐１‐ピペラジニル］‐１‐シクロペンテン‐１‐イル］エテ
ニル］‐１，１‐ジメチル‐３‐（３‐スルホプロピル）‐１Ｈ‐ベンゾ［ｅ］インドリ
ウムヒドロキシド、分子内塩、ｎ，ｎ‐ジエチルエタンアミンとの化合物（１：１）（Ｉ
Ｒ１４４）；５‐クロロ‐２‐［２‐［３‐［（５‐クロロ‐３‐エチル‐２（３Ｈ）‐
ベンゾチアゾール‐イリデン）エチリデン］‐２‐（ジフェニルアミノ）‐１‐シクロペ
ンテン‐１‐イル］エテニル］‐３‐エチルベンゾチアゾリウム過塩素酸塩（ＩＲ１４０
）；マラカイトグリーンイソチオシアン酸塩；４‐メチルウンベリフェロンオルトクレゾ
ールフタレイン；ニトロチロシン；パラローザニリン；フェノールレッド；Ｂ‐フィコエ
リトリン；ｏ‐フタルジアルデヒド；ピレン及び誘導体（例えば、ピレン、ピレン酪酸、
及びスクシンイミジル１‐ピレン）；酪酸  量子ドット；リアクティブレッド４（ＣＩＢ
ＡＣＲＯＮ（商標）ブリリアントレッド３Ｂ‐Ａ）；ローダミン及び誘導体（例えば６‐
カルボキシ‐Ｘ‐ローダミン（ＲＯＸ）、６‐カルボキシローダミン（Ｒ６Ｇ）、リサミ
ンローダミンＢスルホニルクロリド  ロダルニン（ｒｈｏｄａｒｎｉｎｅ）（Ｒｈｏｄ）
、ローダミンＢ、ローダミン１２３、ローダミンＸイソチオシアナート、スルホローダミ
ンＢ、スルホローダミン１０１、スルホローダミン１０１のスルホニルクロライド誘導体
（テキサスレッド）、Ν，Ν，Ν’Ν’テトラメチル‐６‐カルボキシローダミン（ＴＡ
ＭＲＡ）  テトラメチルローダミン、及びイソチオシアン酸テトラメチルローダミン（Ｔ
ＲＩＴＣ））；リボフラビン；ロゾール酸；テルビウムキレート誘導体；シアニン‐３（
Ｃｙ３）；シアニン‐５（Ｃｙ５）；シアニン‐５．５（Ｃｙ５．５）、シアニン‐７（
Ｃｙ７）；ＩＲＤ７００；ＩＲＤ８００；アレクサ６４７；Ｌａ  Ｊｏｌｔａブルー；フ
タロシアニン；並びにナフタロシアニンが挙げられる。
【０３２０】
いくつかの実施形態では、検出可能な作用薬は、活性化されると検出可能となる検出不
可能な前駆物質（例えば、蛍光性テトラジン‐発蛍光団構築物（例えばテトラジン‐ＢＯ
ＤＩＰＹ  ＦＬ、テトラジン‐オレゴングリーン４８８、若しくはテトラジン‐ＢＯＤＩ
ＰＹ  ＴＭＲ‐Ｘ）又は酵素で活性化可能な蛍光性作用薬（例えばＰＲＯＳＥＮＳＥ（登
録商標）（ビゼン・メディカル（ＶｉｓＥｎ  Ｍｅｄｉｃａｌ）））であってもよい。酵
素標識された組成物を使用可能なｉｎ  ｖｉｔｒｏのアッセイには、限定するものではな
いが、酵素結合免疫吸着法（ＥＬＩＳＡ）、免疫沈降アッセイ、免疫蛍光法、酵素免疫定
量法（ＥＩＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、及びウエスタンブロット解析が挙げ
られる。
【０３２１】
〔併用（組み合わせ）〕
ＧＤＡは１以上の他の治療薬、予防薬、診断薬、又は造影剤と組み合わせて使用されて
もよい。「組み合わせて」という場合、その作用薬が同時に投与されなければならないこ
と、及び／又は共に送達するために調合されなければならないことを示唆するようには意
図されないが、これらの送達方法は本開示の範囲内にある。組成物は、１以上の他の所望
の治療薬又は医療手技と同時に、その前に、又はその後に、投与可能である。一般に、作
用薬はそれぞれ、その作用薬について決定された用量及び予定時間のうち少なくともいず
れかのとおりに投与されることになろう。いくつかの実施形態では、本開示は、医薬組成
物、予防薬組成物、診断薬組成物、又は造影剤組成物を、該組成物の生物学的利用能の改
善、該組成物の代謝の低減及び／又は改変、該組成物の排出の阻害、並びに、該組成物の
体内分布の改変、のうち少なくともいずれかをなしうる作用薬と組み合わせて送達するこ
とを包含する。
【０３２２】
〔投薬及び投薬形態〕
本開示は、薬物送達の科学の有望な進歩を考慮に入れた任意の適切な経路による治療薬
、医薬、診断薬、造影剤のうちいずれかのためのＧＤＡの送達を包含する。送達物はその
まま（裸）でもよいし調合されてもよい。
【０３２３】
〔裸の送達物〕
本発明のＧＤＡは、裸の形態で細胞、組織、器官又は生物体に送達されうる。本明細書
中で使用されるように、用語「裸の（ｎａｋｅｄ）」は、トランスフェクション又は透過
性を促進する作用薬又は修飾を伴わずに送達されるＧＤＡを指す。裸のＧＤＡは、当分野
で既知であり本明細書中に記載された投与経路を使用して、細胞、組織、器官又は生物体
に送達されうる。裸の送達物には生理食塩水又はＰＢＳのような単純なバッファー中の調
合物が挙げられる。
【０３２４】
〔調合された送達物〕
本発明のＧＤＡは本明細書中に記載された方法を使用して調合されうる。調合物は、修
飾及び／又は未修飾のＧＤＡを含有することができる。調合物はさらに、限定するもので
はないが、細胞膜透過作用薬、薬学的に許容可能な担体、送達作用薬、生体内分解性又は
生体適合性のポリマー、溶媒、並びに徐放送達デポーを含みうる。調合されたＧＤＡは、
当分野で既知であり本明細書中に記載された投与経路を使用して細胞に送達されうる。
【０３２５】
組成物はさらに、当分野のいくつかの方法のうち任意の方法で、例えば、限定するもの
ではないが、直接的な浸漬又は浴、カテーテルを介して、ゲル剤、散剤、軟膏剤、クリー
ム剤、ゲル剤、ローション剤、及び滴剤のうち少なくともいずれかにより、組成物でコー
ティング又は含浸がなされた織物又は生物分解性材料のような基材の使用、などにより、
器官又は組織へ直接送達するために調合されうる。
【０３２６】
〔投薬〕
本発明は、本発明による１以上のＧＤＡを、該ＧＤＡを必要とする対象者に投与するこ
とを含んでなる方法を提供する。ＧＤＡをコードする核酸、ＧＤＡを含んでなるタンパク
質若しくは複合体、又はこれらの医薬、撮像用、診断用、若しくは予防用組成物は、疾患
、障害、及び状態のうち少なくともいずれかの予防、治療、診断、又は撮像に有効な任意
の投与量及び任意の投与経路を使用して対象者に投与されうる。正確な必要量は、対象者
の生物種、年齢、及び全体的な状態、その疾患の重症度、その特定の組成物、その投与様
式、その活性の様式などによって、対象者ごとに変わることになろう。本発明による組成
物は、典型的には投与のしやすさ及び投薬の画一性のために投薬単位形態に調合される。
しかしながら、本発明の組成物の１日当たりの合計使用量は理にかなった医学的判断の範
囲内で主治医によって決定されるであろうことは理解されよう。任意の特定の患者につい
て特に治療上有効であるか、予防上有効であるか、又は適切に画像化する用量レベルは、
様々な要因、例えば治療される障害及び該障害の重症度；使用される具体的な化合物の活
性；使用される具体的な組成物；患者の年齢、体重、健康状態、性別及び食事；使用され
る具体的な化合物の投与時間、投与経路、及び排出速度；治療期間；使用される具体的な
化合物と組み合わせて、又は該化合物と同時に使用される薬物；並びに医学分野において
良く知られた同様の要因に応じて変化しうる。
【０３２７】
ある実施形態では、本発明による組成物は、所望の治療的、診断的、予防的、又は撮像
上の効果を得るために、１日に１回以上、１日当たり対象者の体重について約０．０００
１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇ、約０．
１ｍｇ／ｋｇ〜約４０ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１
ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、又は約１ｍ
ｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇを送達するのに十分な用量レベルで投与されうる。所望の用
量は、１日３回、１日２回、１日１回、１日おき、３日毎、毎週、２週毎、３週毎、又は
４週毎に送達されてもよい。ある実施形態では、所望の用量は、複数回投与（例えば２、
３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４回又はそれ以上の投与）を
使用して送達されてもよい。
【０３２８】
本発明によれば、ＧＤＡは分割用量のレジメンで投与されてもよい。本明細書中で使用
されるように、「分割用量」は、単回単位用量又は合計１日用量の２回分以上の用量への
、例えば単回単位用量の２回以上の投与への、分割である。本明細書中で使用されるよう
に、「単回単位用量」は、１用量／１回／単一経路／単一接点、すなわち単回の投与事象
において投与される任意の治療薬の用量である。本明細書中で使用されるように、「合計
１日用量」は２４時間の間に投薬又は処方される量である。合計１日用量は単回単位用量
として投与されてもよい。１つの実施形態では、本発明のＧＤＡは分割用量で対象者に投
与される。ＧＤＡはバッファーのみの中で調合されてもよいし、本明細書中に記載された
調合物へと調合されてもよい。本明細書中に記載されたＧＤＡ医薬組成物は、本明細書中
に記載された投薬形態、例えば、局所用、鼻内用、気管内用、又は注射用（例えば、静脈
内、眼内、硝子体内、筋肉内、心臓内、腹腔内、皮下）の投与形態に調合可能である。医
薬品の調合及び製造のうち少なくともいずれかにおける一般的な考察は、例えば、「レミ
ントン：薬学の科学と実践（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：  Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  
Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ）」、第２１版、リッピンコット・ウィリア
ムズ・アンド・ウィルキンズ（Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ａｎｄ  Ｗｉ
ｌｋｉｎｓ）、２００５年（参照により本願に組込まれる）に見出すことができる。
【０３２９】
〔コーティング又はシェル〕
錠剤、ドラジェ、カプセル剤、丸剤、及び果粒剤という固形の投与形態は、コーティン
グ及びシェル、例えば腸溶コーティング及び医薬製剤化の分野において良く知られたその
他のコーティングを備えて調製可能である。該コーティングは任意選択で乳白剤を含んで
なることが可能であり、かつ該コーティングは有効成分のみ又は有効成分を優先的に、腸
管のある特定の部分で、任意選択で遅延方式で、放出する組成のものであってよい。使用
可能な包埋組成物の例にはポリマー性の物質及びワックスが挙げられる。同様の種類の固
形組成物は、ラクトース又は乳糖のほかに高分子量ポリエチレングリコールなどのような
添加剤を使用して、軟ゼラチンカプセル及び硬ゼラチンカプセル中の充填剤として使用さ
れうる。
【０３３０】
Ｖ．キット及びデバイス
〔キット〕
本明細書中に記載された組成物はいずれもキットに含まれることができる。非限定的な
例において、抗原分子などのＧＤＡを生成するための試薬はキットに含まれる。キットは
、ＧＤＡを作出又は合成するための試薬又は説明書をさらに含むことができる。キットは
さらに１以上のバッファーを含みうる。本発明の他のキットは、ＧＤＡタンパク質又は核
酸のアレイ又はライブラリを作製するための構成要素を含んでもよく、よって例えば固体
支持体を含んでもよい。
【０３３１】
キットの構成要素は、水性溶媒中又は凍結乾燥形態のいずれかで包装されうる。キット
のコンテナ手段には、一般に、少なくとも１つのバイアル、試験管、フラスコ、ボトル、
シリンジ又はその他のコンテナ手段であって、構成要素がその中に入れられて、かつ好ま
しくは適切に等分されているものが挙げられる。キット内に２以上の構成要素がある場合
（標識試薬及び標識が一緒に包装されることもある）、キットはさらに、追加の構成要素
を別々に入れることができる第２、第３、又はその他の追加のコンテナを一般に含むこと
になろう。キットはさらに、無菌の薬学的に許容可能なバッファー及び他の希釈剤のうち
少なくともいずれかを入れるための第２のコンテナ手段を含んでなることもできる。しか
しながら、様々な組み合わせの構成要素がバイアル中に含まれうる。本発明のキットはさ
らに、典型的には、ＧＤＡを含有するための手段、例えば市販用に厳重に密閉されたタン
パク質、核酸、及び任意の他の試薬のコンテナを備えることになろう。そのようなコンテ
ナには、所望のバイアルがその中に保持される射出成形又はブロー成形されたプラスチッ
クコンテナが挙げられる。
【０３３２】
キットの構成要素が１及びそれ以上のうち少なくともいずれかの溶液で提供される場合
、該溶液は水溶液であり、特に好ましくは無菌の水溶液である。しかしながら、キットの
構成要素は乾燥粉末として提供されてもよい。試薬及び構成要素のうち少なくともいずれ
かが乾燥粉末として提供される場合、該粉末は適切な溶媒の添加によって再構成可能であ
る。該溶媒も別のコンテナ手段に入れて提供されうることが想定される。いくつかの実施
形態では、標識用の色素が乾燥パワー（ｐｏｗｅｒ）として提供される。１０、２０、３
０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１２０、１２０、１３０、１４０、
１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、３００、４００、５００、６００、
７００、８００、９００、１０００マイクログラム又は少なくともこれらの量若しくは最
大でこれらの量の乾燥色素が本発明のキットに提供されることが企図される。該色素はそ
の後、ＤＭＳＯのような任意の適切な溶媒中で再懸濁されうる。
【０３３３】
キットは、キットの構成要素を使用することのほかに（ａｓ  ｗｅｌｌ）該キットに含
まれていない他の試薬の使用についての説明書を含むことができる。説明書は、実施可能
な変法を含む場合もある。
【０３３４】
〔デバイス〕
本明細書中に記載された組成物のうち任意のものは、デバイスと組み合わされてもよい
し、デバイス上にコーティングされてもよいし、デバイス中に埋め込まれてもよい。デバ
イスには、限定するものではないが、歯科インプラント、ステント、骨置換物、人工関節
、弁膜、ペースメーカー又はその他の移植式治療用デバイスが挙げられる。
【０３３５】
ＶＩ．定義
本明細書中の様々な場所において、本開示の化合物の置換基が群として、又は範囲で開
示されている。本開示がそのような群及び範囲に属するメンバーのあらゆる個々の部分的
組み合わせを含むことは明確に意図されている。下記は用語定義の非限定的なリストであ
る。
【０３３６】
活性：本明細書中で使用されるように、用語「活性」は物事が発生しているか又は行わ
れている状態を意味する。本発明の組成物は活性を有することが可能であり、この活性は
、成長因子、受容体、ＧＤＡ、ＧＰＣ及びＧＰＣ変調因子のうち少なくともいずれかに影
響を及ぼす１以上の生物学的事象を伴うことができる。いくつかの実施形態では、生物学
的事象には、成長因子と受容体との相互作用に関連した細胞シグナル伝達事象が挙げられ
る。いくつかの実施形態では、生物学的事象には、ＴＧＦ‐β又はＴＧＦ‐βファミリー
のメンバーと１以上の対応する受容体との相互作用に関連した細胞シグナル伝達事象が挙
げられる。
【０３３７】
組み合わせて投与される：本明細書中で使用されるように、用語「組み合わせて投与さ
れる」又は「併用投与」とは、対象者が、２以上の作用薬であって同時に投与されたか又
は該対象者がある時点において両作用薬に同時に曝露されるような間隔及び／若しくは患
者に対する各作用薬の効果において重なり合いが存在しうるような間隔で投与された作用
薬に、同時に曝露されることを意味する。いくつかの実施形態では、１以上の作用薬のう
ち少なくとも１回の投与は、１以上の他の作用薬の少なくとも１回の投与から約２４時間
、１２時間、６時間、３時間、１時間、３０分、１５分、１０分、５分、又は１分以内に
投与される。いくつかの実施形態では、投与は重なり合った投薬レジメンで行われる。本
明細書中で使用されるように、用語「投薬レジメン」は時間間隔を置いた複数回の投与を
指す。そのような投与は一定間隔で行われてもよいし、施用中に１回以上の中断を含んで
もよい。いくつかの実施形態では、１以上のＧＤＡの個々の投与の実施は、本明細書中に
記載されたように、組み合わせの（例えば、相乗的な）効果が達成されるように互いに十
分に接近した間隔でなされる。
【０３３８】
動物：本明細書中で使用されるように、用語「動物」は動物界に属する任意のメンバー
を指す。いくつかの実施形態では、「動物」は任意の発生段階のヒトを指す。いくつかの
実施形態では、「動物」は任意の発生段階のヒト以外の動物を指す。ある実施形態では、
ヒト以外の動物は、哺乳動物（例えばげっ歯動物、マウス、ラット、ラビット、サル、イ
ヌ、ネコ、ヒツジ、畜牛、霊長類、又はブタ）である。いくつかの実施形態では、動物に
は、限定するものではないが、哺乳動物、鳥、爬虫類、両生類、魚類、及び蠕虫が挙げら
れる。いくつかの実施形態では、動物はトランスジェニック動物、遺伝子操作がなされた
動物、又はクローンである。
【０３３９】
対象とする抗原又は所望の抗原：本明細書中で使用されるように、「対象とする抗原」
又は「所望の抗原」という用語には、本明細書中に記載された抗体並びにそのフラグメン
ト、突然変異体、バリアント、及び変形体が免疫特異的に結合又は相互作用する、本明細
書中に提供されるタンパク質及び他の生体分子が含まれる。いくつかの実施形態では、対
象とする抗原は、成長因子、成長因子調節要素、プロドメイン、ＧＰＣ、ＧＰＣ変調因子
、ＥＣＣＭ又はこれらの間で重なり合う領域を含んでなることができる。
【０３４０】
およそ：本明細書中で使用されるように、用語「およそ」又は「約」は、１以上の対象
とする値に適用されたとき、明示された参照値に類似の値を指す。ある実施形態では、用
語「およそ」又は「約」は、そうでないことが明示されるか又は文脈からそうでないこと
が明白でないかぎり、明示された参照値のいずれの方向にも（より大きい方向又はより小
さい方向に）２５％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３
％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％
又は１％未満以内にある一連の値を指す（そのような数が可能な値の１００％を超過する
場合を除く）。
【０３４１】
〜に関連した：本明細書中で使用されるように、用語「〜に関連した」、「コンジュゲ
ートした」、「連結した」、「取り付けられた」、及び「係留された」は、２以上の構成
部分に関して使用される場合、その構成部分が互いに、直接又は連結剤としての役割を果
たす１以上の追加の構成部分を介して、物理的に関連又は接続して構造物を形成し、該構
造物は該構造物が使用される条件（例えば、生理学的条件）において構成部分が物理的に
関連し続けるのに十分に安定であることを意味する。「関連」とは、厳密に直接的な共有
結合の化学結合によるものである必要はない。「関連」はさらに、イオン結合若しくは水
素結合、又は「関連した」実体が物理的に関連し続けるのに十分に安定なハイブリダイゼ
ーションに基づいた接続も示唆しうる。
【０３４２】
二機能性：本明細書中で使用されるように、用語「二機能性」は、少なくとも２つの機
能を果たすことができるか又は維持している任意の物質、分子又は構成部分を指す。該機
能は同じ成果に影響する場合もあれば異なる成果に影響する場合もある。機能を生じる構
造は同じであっても異なっていてもよい。
【０３４３】
生体分子：本明細書中で使用されるように、用語「生体分子」は、アミノ酸に基づくも
の、核酸に基づくもの、炭水化物に基づくもの、又は脂質に基づくものなど、任意の天然
分子である。
【０３４４】
生物学的に活性：本明細書中で使用されるように、「生物学的に活性」という言葉は、
生物系及び生物体のうち少なくともいずれかにおいて活性を有している任意の物質の特性
を指す。例を挙げると、生物体に投与された時にその生物体に対して生物学的作用を有し
ている物質は、生物学的に活性であると考えられる。特定の実施形態では、本発明のＧＤ
Ａは、ＧＤＡの一部分でも生物学的に活性であるか又は生物学的に関係するとみなされる
活性を模倣する場合、生物学的に活性であると考えられることができる。
【０３４５】
生物系：本明細書中で使用されるように、用語「生物系」は、一群の器官、組織、細胞
、細胞内構成要素、タンパク質、核酸、分子（生体分子を含むがこれに限定はされない）
であって、細胞膜、細胞コンパートメント、細胞、組織、器官、臓器系、多細胞生物、又
は任意の生物学的実体の内部においてある種の生物学的作業を実施するためにともに機能
するものを指す。いくつかの実施形態では、生物系は、細胞内及び細胞外のうち少なくと
もいずれかの細胞シグナル伝達生体分子を含んでなる細胞シグナル伝達経路である。いく
つかの実施形態では、生物系は、ＥＣＣＭ及び細胞ニッチのうち少なくともいずれかの内
部における成長因子シグナル伝達事象を含んでなる。
【０３４６】
化合物：本明細書中で使用されるように、用語「化合物」は個別の化学物質を指す。い
くつかの実施形態では、特定の化合物は、１以上の異性体又は同位体の形態（例えば、限
定するものではないが立体異性体、幾何異性体及び同位体）として存在しうる。いくつか
の実施形態では、化合物は単一のそのような形態のみとして提供又は利用される。いくつ
かの実施形態では、化合物は、２以上のそのような形態の混合物（例えば、限定するもの
ではないが立体異性体のラセミ混合物）として提供又は利用される。当業者には当然のこ
とであるが、いくつかの化合物は、種々のそのような形態で存在し、種々の性質及び活性
のうち少なくともいずれか（例えば、限定するものではないが生物活性）を示す。そのよ
うな場合、本発明による使用のために化合物の特定の形態を選択又は回避することは当業
者の通常の技術の範囲内にある。例えば、非対称的に置換された炭素原子を含有する化合
物は光学活性体又はラセミ体に単離可能である。光学活性の出発物質から光学活性体をど
のように調製すべきかについての方法は当分野において既知であり、例えばラセミ混合物
の分割によるか又は立体選択的合成による。
【０３４７】
保存された：本明細書中で使用されるように、用語「保存された」は、ポリヌクレオチ
ド配列又はポリペプチド配列の、それぞれヌクレオチド又はアミノ酸残基であって、比較
されている２以上の配列の同じ部位において不変であるものを指す。比較的保存されたヌ
クレオチド又はアミノ酸とは、配列中の他所に現われるヌクレオチド又はアミノ酸よりも
多くの近縁の配列間で保存されているものである。
【０３４８】
いくつかの実施形態では、２以上の配列は、それらが互いに１００％同一である場合に
「完全に保存された」と言われる。いくつかの実施形態では、２以上の配列は、それらが
互いに少なくとも７０％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも９０％同一、又は少な
くとも９５％同一である場合に「高度に保存された」と言われる。いくつかの実施形態で
は、２以上の配列は、それらが互いに約７０％同一、約８０％同一、約９０％同一、約９
５％、約９８％、又は約９９％同一である場合に「高度に保存された」と言われる。いく
つかの実施形態では、２以上の配列は、それらが互いに少なくとも３０％同一、少なくと
も４０％同一、少なくとも５０％同一、少なくとも６０％同一、少なくとも７０％同一、
少なくとも８０％同一、少なくとも９０％同一、又は少なくとも９５％同一である場合に
「保存された」と言われる。いくつかの実施形態では、２以上の配列は、それらが互いに
約３０％同一、約４０％同一、約５０％同一、約６０％同一、約７０％同一、約８０％同
一、約９０％同一、約９５％同一、約９８％同一、又は約９９％同一である場合に「保存
された」と言われる。配列の保存はオリゴヌクレオチド又はポリペプチドの全長に当ては
まる場合もあれば、その一部分、領域又はその主要部に当てはまる場合もある。
【０３４９】
１つの実施形態では、保存された配列は連続的ではない。当業者は、連続的なアライン
メントにおけるギャップが配列の間に存在する場合にアラインメントをどのようにして達
成するか、また存在する挿入又は欠失に逆らうことなく対応する残基をどのようにアライ
ンするかについて認識する（ａｐｐｒｉｃａｔｅ）ことができる。
【０３５０】
環状又は環化された：本明細書中で使用されるように、用語「環状」は連続的なループ
の存在を指す。環状分子は円形である必要はなく、単に連結されて切れ目の無いサブユニ
ットの鎖を形成するにすぎない。本明細書中に記載されるようなある種のＧＤＡのような
環状分子は、単一ユニットでも多量体でもよいし、又は複合体若しくは高次構造の１以上
の構成要素を含んでなることもできる。
【０３５１】
静細胞性：本明細書中で使用されるように、用語「静細胞性」は、細胞（例えば哺乳動
物細胞（例えばヒト細胞））、細菌、ウイルス、真菌、原生動物、寄生生物、プリオン、
又はこれらの組み合わせの成長、分裂又は増殖を阻害、低減又は抑制する作用薬を指すた
めに使用される。
【０３５２】
細胞毒性：本明細書中で使用されるように、用語「細胞毒性」は、細胞（例えば哺乳動
物細胞（例えばヒト細胞））、細菌、ウイルス、真菌、原生動物、寄生生物、プリオン、
又はこれらの組み合わせを殺滅するか又はこれらに対する有害、有毒、若しくは致命的な
影響を引き起こす作用薬を指すために使用される。
【０３５３】
送達：本明細書中で使用されるように、「送達」は化合物、物質、実体、構成部分、積
荷又は積載物を送達する行為又は方法を指す。
送達作用薬：本明細書中で使用されるように、「送達作用薬」は、標的細胞への作用薬
（例えばＧＤＡが挙げられるがこれに限定はされない）のｉｎ  ｖｉｖｏ送達を少なくと
も部分的に促進する任意の物質を指す。
【０３５４】
不安定化された：本明細書中で使用されるように、用語「不安定な（ｄｅｓｔａｂｌｅ
）」、「不安定化する」又は「不安定化領域」は、同じ領域又は分子の出発形態、基準形
態、野生型又は未変性の形態ほどは安定でない領域又は分子を意味する。
【０３５５】
検出可能な標識：本明細書中で使用されるように、「検出可能な標識」は、別の実体に
取り付けられ、組み込まれ、又は関連付けられる１以上のマーカー、シグナル、又は構成
部分であって、当分野で既知の方法、例えばＸ線撮影、蛍光、化学発光、酵素活性、吸収
度などによって容易に検出されるものを指す。検出可能な標識には、放射性同位元素、発
蛍光団、発色団、酵素、色素、金属イオン、リガンド、例えばビオチン、アビジン、スト
レプトアビジン及びハプテン、量子ドットなどが挙げられる。検出可能な標識は、該標識
が取り付けられ、組み込まれ、又は関連付けられる実体の任意の部位に位置することがで
きる。例えば、ペプチド又はタンパク質に取り付けられ、組み込まれ、又は関連付けられ
るとき、標識はアミノ酸、ペプチド、又はタンパク質の内部にあってもよいし、Ｎ末端又
はＣ末端にあってもよい。
【０３５６】
遠位（の）：本明細書中で使用されるように、用語「遠位（の）」は、中心から離れる
か又は対象とする地点又は領域から離れて位置していることを意味する。
人為操作された：本明細書中で使用されるように、本発明の実施形態は、該実施形態が
、出発時点、野生型又は未変性の分子とは異なった、構造的であれ化学的であれ特徴又は
性質を有するように設計される場合、「（人為）操作されている」。よって、人為操作さ
れた作用薬又は実体は、その設計及び生産のうち少なくともいずれかが人の手による行為
を含むものである。
【０３５７】
発現：本明細書中で使用されるように、核酸配列の「発現」は、以下の事象すなわち：
（１）ＤＮＡ塩基配列からの（例えば転写による）ＲＮＡ鋳型の生産；（２）ＲＮＡ転写
物の（例えば、スプライシング、エディティング、５’キャップ形成、及び３’端プロセ
シングのうち少なくともいずれかによる）プロセシング；（３）ポリペプチド又はタンパ
ク質へのＲＮＡの翻訳；（４）ポリペプチド又はタンパク質のフォールディング；及び（
５）ポリペプチド又はタンパク質の翻訳後修飾、のうち１つ以上を指す。
【０３５８】
特徴：本明細書中で使用されるように、「特徴」は特性、性質、又は特殊な要素を指す
。
調合物：本明細書中で使用されるように、「調合物」は少なくともＧＤＡ及び送達作用
薬を含んでいる。
【０３５９】
フラグメント：「フラグメント」は、本明細書中で使用されるように、部分を指す。例
えば、タンパク質のフラグメントは、培養細胞から単離された完全長タンパク質を消化す
ることにより得られたポリペプチドを含んでなることができる。いくつかの実施形態では
、タンパク質のフラグメントは、少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、
１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、４
５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１５０、
２００、２５０個又はそれ以上のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、抗体のフラ
グメントは、酵素消化に供された、又はそういうものとして合成された、抗体の部分を含
む。
【０３６０】
機能的（機能性）：本明細書中で使用されるように、「機能的（機能性）」生体分子と
は、該分子が有する特性である性質及び活性のうち少なくともいずれかを該分子が示す構
造及び形態をとっている、生物学的実体である。
【０３６１】
相同性：本明細書中で使用されるように、用語「相同性」は、ポリマー性分子の間、例
えば核酸分子（例えば、ＤＮＡ分子及びＲＮＡ分子のうち少なくともいずれか）の間、並
びに、ポリペプチド分子の間のうち少なくともいずれかの、全体的な類似度を指す。いく
つかの実施形態では、ポリマー性分子は、該分子の配列が少なくとも２５％、３０％、３
５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８
５％、９０％、９５％、又は９９％同一であるか類似している場合、互いに「相同」であ
ると考えられる。用語「相同」は、必然的に少なくとも２つの配列（ポリヌクレオチド配
列又はポリペプチド配列）の間の比較を指す。本発明によれば、２つのポリヌクレオチド
配列は、それらがコードするポリペプチドが、少なくとも１つの一続きの少なくとも約２
０アミノ酸について、少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、
又は実に９９％である場合、相同であるとみなされる。いくつかの実施形態では、相同な
ポリヌクレオチド配列は、一続きの少なくとも４〜５個の他にはない特定のアミノ酸をコ
ードすることができるという特性を有している。長さ６０ヌクレオチド未満のポリヌクレ
オチド配列については、相同性は、典型的には一続きの少なくとも４〜５個の他にはない
特定のアミノ酸をコードする能力によって決定される。本発明によれば、２つのタンパク
質配列は、該タンパク質が少なくとも１個の一続きの少なくとも約２０アミノ酸について
少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、又は９０％同一である場合、相同である
とみなされる。多くの実施形態において、相同タンパク質は、かなりの全体的相同性及び
少なくとも１個の短い一続きの少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１
２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、４５
、５０アミノ酸又はそれ以上にわたる高度の相同性を示しうる。多くの実施形態において
、相同タンパク質は１以上の特有の配列要素を共有する。本明細書中で使用されるように
、用語「特有の配列要素」は類似タンパク質中に存在するモチーフを指す。いくつかの実
施形態では、そのようなモチーフの存在は特定の活性（例えば生物活性）と相関する。
【０３６２】
同一性：本明細書中で使用されるように、用語「同一性」は、ポリマー性分子間、例え
ば、オリゴヌクレオチド分子（例えば、ＤＮＡ分子及びＲＮＡ分子のうち少なくともいず
れか）の間、及びポリペプチド分子の間のうち少なくともいずれかにおける全体的な類似
度を指す。２つのポリヌクレオチド配列の同一性（％）の計算は、例えば、最適な比較の
ためにその２つの配列をアラインメントすることにより実施可能である（例えば、最適な
アラインメントのために第１及び第２の核酸配列のうち一方又は両方にギャップを導入す
ることが可能であり、また比較のために同一でない配列を無視することが可能である）。
ある実施形態では、比較の目的でアラインメントされる配列の長さは、参照配列の長さの
少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくと
も７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％であ
る。次いで、対応するヌクレオチド部位のヌクレオチドが比較される。第１の配列中の部
位が第２の配列中の対応する位置と同じヌクレオチドで占められていれば、これらの分子
はその部位について同一である。２つの配列の間の同一性（％）は、２つの配列の最適な
アラインメントのために導入する必要のあるギャップの数及び各ギャップの長さを考慮に
入れた、両配列によって共有される同一部位の数の関数である。配列の比較、及び２つの
配列の間の同一性（％）の決定は、数学的アルゴリズムを使用して遂行可能である。例え
ば、２つのヌクレオチド配列間の同一性（％）は、レスク（Ｌｅｓｋ）、Ａ．Ｍ．編、「
分子計算生物学（Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ）
」、米国ニューヨークのオックスフォード大学出版局（Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉ
ｔｙ  Ｐｒｅｓｓ）、１９８８年；スミス、Ｄ．Ｗ．編、「バイオコンピューティング：
情報科学とゲノムプロジェクト（Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ：  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ
ａｎｄ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｐｒｏｊｅｃｔｓ）」、米国ニューヨークのアカデミック・プ
レス（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ）、１９９３年；フォン・ハインイェ（ｖｏｎ  Ｈ
ｅｉｎｊｅ）、Ｇ．編、「分子生物学における配列分析（Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙ
ｓｉｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ）」、アカデミック・プレス、１９
８７年；グリフィン（Ｇｒｉｆｆｉｎ）、Ａ．Ｍ．及びグリフィン（Ｇｒｉｆｆｉｎ）、
Ｈ．Ｇ．編、「配列データのコンピュータ分析、パートＩ（Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ａｎａｌ
ｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄａｔａ，  Ｐａｒｔ  Ｉ）」、米国ニュージャー
ジーのヒューマナ・プレス（Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ）、１９９４年；並びにグリブス
コフ（Ｇｒｉｂｓｋｏｖ）、Ｍ．及びデヴェルー（Ｄｅｖｅｒｅｕｘ）、Ｊ．編、「配列
分析プライマー（Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｐｒｉｍｅｒ）」、米国ニュー
ヨークのエム・ストックトン・プレス（Ｍ  Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ）、１９９１
年；に記載される方法のような方法を使用して決定可能であり、前記文献はそれぞれ参照
により本願に組込まれる。例えば、２つのヌクレオチド配列間の同一性（％）は、例えば
マイヤーズ（Ｍｅｙｅｒｓ）及びミラー（Ｍｉｌｌｅｒ）のアルゴリズム（コンピュータ
・アプリケーションズ・イン・ザ・バイオサイエンシズ（ＣＡＢＩＯＳ）、１９８９年、
第４巻、ｐ．１１−１７）を使用して決定可能であり、前記アルゴリズムはＰＡＭ１２０
の重み残基テーブル（ＰＡＭ１２０  ｗｅｉｇｈｔ  ｒｅｓｉｄｕｅ  ｔａｂｌｅ）、ギ
ャップ長ペナルティ１２及びギャップペナルティ４を使用して、ＡＬＩＧＮプログラム（
バージョン２．０）に組み込まれている。２つのヌクレオチド配列間の同一性（％）は、
別例として、ＮＷＳｇａｐｄｎａ．ＣＭＰマトリックスを使用して、ＧＣＧソフトウェア
・パッケージ中のギャップ・プログラムを使用して決定可能である。配列間の同一性（％
）を決定するために一般に使用される方法には、限定するものではないが、カリロ（Ｃａ
ｒｉｌｌｏ）、ＦＬ及びリプマン（Ｌｉｐｍａｎ）、Ｄ．、ＳＩＡＭジャーナル・オン・
アプライド・マスマティックス（ＳＩＡＭ  Ｊ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍａｔｈ．）、１９８
８年、第４８巻、ｐ．１０７３（参照により本願に組み込まれる）に開示されたものが挙
げられる。同一性を決定するための技法は公的に利用可能なコンピュータ・プログラムに
盛り込まれている。２つの配列の間の相同性を決定する典型的なコンピュータ・ソフトウ
ェアには、限定するものではないが、ＧＣＧプログラムパッケージ、デヴェルー（Ｄｅｖ
ｅｒｅｕｘ）、Ｊ．ら、ヌクレイック・アシッズ・リサーチ（Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ
ｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）、１９８４年、第１２巻、第１号、ｐ．３８７）、ＢＬＡＳＴＰ
、ＢＬＡＳＴＮ、及びＦＡＳＴＡ  アルトシュル（Ａｌｔｓｃｈｕｌ）、Ｓ．Ｆ．ら、ジ
ャーナル・オブ・モレキュラー・バイオテクノロジー（Ｊ．  Ｍｏｌｅｃ．  Ｂｉｏｌ．
）、１９９０年、第２１５巻、ｐ．４０３）が挙げられる。
【０３６３】
遺伝子の発現阻害：本明細書中で使用されるように、「遺伝子の発現を阻害する」とい
う言葉は、遺伝子の発現産物の量の低減を引き起こすことを意味する。発現産物は、遺伝
子から転写されたＲＮＡ（例えばｍＲＮＡ）又は遺伝子から転写されたｍＲＮＡから翻訳
されたポリペプチドとなりうる。典型的には、ｍＲＮＡのレベルでの低減は、そこから翻
訳されるポリペプチドのレベルの低減をもたらす。発現のレベルは、ｍＲＮＡ又はタンパ
ク質の測定のための標準的な技法を使用して決定されうる。
【０３６４】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ：本明細書中で使用されるように、用語「ｉｎ  ｖｉｔｒｏ」は、生
物体（例えば動物、植物、又は微生物）の内部ではなく、人工環境において、例えば試験
管又は反応槽中、細胞培養中、ペトリ皿中などにおいて生じる事象を指す。
【０３６５】
ｉｎ  ｖｉｖｏ：本明細書中で使用されるように、用語「ｉｎ  ｖｉｖｏ」は、生物体
（例えば動物、植物、若しくは微生物又はこれらの細胞若しくは組織）の内部で生じる事
象を指す。
【０３６６】
単離された：本明細書中で使用されるように、用語「単離された」は、「分離された」
と同義であるが、分離が人の手によって実行されたという推論を伴っている。１つの実施
形態では、単離された物質又は実体とは、それがかつて（自然界においてであれ実験的環
境においてであれ）関連していた構成要素のうち少なくとも一部から分離されているもの
である。単離された物質は、それが関連していた物質に関して様々なレベルの純度を有し
うる。単離された物質及び実体のうち少なくともいずれかは、それらが当初関連していた
他の構成要素のうち少なくとも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約
６０％、約７０％、約８０％、約９０％又はそれ以上から分離されうる。いくつかの実施
形態では、単離された作用薬は、約８０％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、
約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約９９
％を超える純度である。本明細書中で使用されるように、物質はそれが他の構成要素をほ
とんど伴わない場合、「純粋」である。
【０３６７】
ほぼ単離された：「ほぼ単離された」によって意味されるのは、化合物が、該化合物の
形成又は検出がなされた環境からほぼ分離されていることである。部分的な分離には、例
えば、本開示の化合物が豊化された組成物が含まれうる。ほぼ分離することとは、本開示
の化合物又はその塩を重量比で少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約
７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約
９７％、又は少なくとも約９９％含有している組成物を含みうる。化合物及びその塩を単
離する方法は当分野において日常的作業である。いくつかの実施形態では、物質又は実体
の単離には、化学的な関連及び結合の分断が含まれる。いくつかの実施形態では、単離に
は、単離される物質又は実体がかつて組み合わさっていた構成要素からの分離のみを含み
、そのような分断は含まない。
【０３６８】
リンカー：本明細書中で使用されるように、リンカーは２以上のドメイン、構成部分又
は実体を接続する構成部分を指す。１つの実施形態では、リンカーは１０以上の原子を含
んでなることができる。さらなる実施形態では、リンカーは、原子団、例えば１０〜１，
０００個の原子を含んでなり、例えば、限定するものではないが、炭素、アミノ、アルキ
ルアミノ、酸素、硫黄、スルホキシド、スルホニル、カルボニル、及びイミンのような原
子又は基で構成されることが可能である。いくつかの実施形態では、リンカーは、１以上
のヌクレオチドを含んでなる１以上の核酸を含んでなる場合もある。いくつかの実施形態
では、リンカーはアミノ酸、ペプチド、ポリペプチド又はタンパク質を含んでなる場合も
ある。いくつかの実施形態では、リンカーによって結合せしめられる構成部分には、限定
するものではないが原子、化学基、ヌクレオシド、ヌクレオチド、核酸塩基、糖、核酸、
アミノ酸、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、タンパク質複合体、積載物（例えば治
療薬）、又はマーカー（例えば、限定するものではないが化学マーカー、蛍光マーカー、
放射性マーカー若しくは生物発光マーカー）が挙げられる。リンカーは、任意の有用な目
的に、例えば、本明細書中に記載されるように、多量体又はコンジュゲートを形成するた
めに、及び積載物を投与するために、使用可能である。リンカーに組み込むことが可能な
化学基の例には、限定するものではないが、アルキル、アルケニル、アルキニル、アミド
、アミノ、エーテル、チオエーテル、エステル、アルキレン、ヘテロアルキレン、アリー
ル、又はヘテロシクリルが含まれ、これらはそれぞれ任意選択で、本明細書中に記載され
るように、置換されることが可能である。リンカーの例には、限定するものではないが、
不飽和アルカン、ポリエチレングリコール（例えばエチレン又はプロピレングリコール単
量体単位、例えばジエチレングリコール、ジプロピレングリコール、トリエチレングリコ
ール、トリプロピレングリコール、テトラエチレングリコール、テトラエチレングリコー
ル）、及びデキストランポリマーが挙げられる。他の例には、限定するものではないが、
リンカー内の開裂可能な構成部分、例えば、還元剤又は光分解を使用して開裂可能である
ジスルフィド結合（‐Ｓ‐Ｓ‐）又はアゾ結合（‐Ｎ＝Ｎ‐）が挙げられる。選択的に開
裂可能な結合の非限定的な例には、例えばトリス（２‐カルボキシエチル）ホスフィン（
ＴＣＥＰ）、又は他の還元剤、及び光分解のうち少なくともいずれかの使用によって開裂
されうるアミド結合、並びに例えば酸性又は塩基性の加水分解によって開裂されうるエス
テル結合が挙げられる。
【０３６９】
修飾された：本明細書中で使用されるように、用語「修飾された」は、分子又は実体の
、親又は基準の分子又は実体と比較して変化した、状態又は構造を指す。分子は数多くの
方法で、例えば化学的、構造的、及び機能的に修飾されうる。いくつかの実施形態では、
本発明のＧＤＡは非天然アミノ酸の導入によって修飾される。
【０３７０】
天然に存在する：本明細書中で使用されるように、「天然に存在する」とは、人為的な
助力、又は人の手の関与を伴わずに自然界に存在することを意味する。
ヒト以外の脊椎動物：本明細書中で使用されるように、「ヒト以外の脊椎動物」には、
野生の生物種及び飼育された生物種を含む、ホモ・サピエンス（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎ
ｓ）以外の全ての脊椎動物が含まれる。ヒト以外の脊椎動物の例には、限定するものでは
ないが、哺乳動物、例えばアルパカ、バンテン、バイソン、ラクダ、ネコ、ウシ、シカ、
イヌ、ロバ、ガヤール、ヤギ、モルモット、ウマ、ラマ、ラバ、ブタ、ラビット、トナカ
イ、ヒツジ  水牛、及びヤクが挙げられる。
【０３７１】
オフターゲット：本明細書中で使用されるように、「オフターゲット」とは、任意の１
以上の標的、遺伝子、又は細胞転写物に対する何らかの意図せぬ効果を指す。
作動可能なように連結された：本明細書中で使用されるように、「作動可能なように連
結された」という言葉は、２以上の分子、構築物、転写物、実体、構成部分又はその他同
種のものの間の機能的な接続を指す。
【０３７２】
パラトープ：本明細書中で使用されるように、「パラトープ」とは抗体の抗原結合部位
を指す。
患者：本明細書中で使用されるように、「患者」とは、治療を探しているか若しくは治
療の必要がある可能性があるか、治療を必要としているか、治療を受けているか、治療を
必要とすることになろう対象者、又は特定の疾患若しくは状態の熟練した（例えば、有資
格の）専門家によるケアを受けている対象者を指す。
【０３７３】
ペプチド：本明細書中で使用されるように、「ペプチド」は、５０アミノ酸以下の長さ
、例えば約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、又は５０アミノ酸の
長さである。
【０３７４】
薬学的に許容可能な：「薬学的に受理可能な」という言葉は、化合物、物質、組成物及
び投薬形態のうち少なくともいずれかであって、正当な医学的判断の範囲内において、合
理的なベネフィットリスク比に見合った、過度の毒性、炎症、アレルギー反応、又は他の
問題若しくは合併症を伴わずに人間及び動物の組織と接触した状態で使用するのに適して
いるもの、を指すために本明細書中で使用される。
【０３７５】
薬学的に許容可能な添加剤：「薬学的に許容可能な添加剤」という言葉は、本明細書中
で使用されるように、医薬組成物中に存在し、患者においてほぼ無毒かつ非炎症性である
という性質を有している、（例えば本明細書中に記載されるような）活性作用薬以外の任
意の成分を指す。いくつかの実施形態では、薬学的に許容可能な添加剤は活性作用薬を懸
濁又は溶解することが可能なビヒクルである。添加剤には、例えば：固結防止剤（ａｎｔ
ｉａｄｈｅｒｅｎｔ）、酸化防止剤、結合剤、コーティング、圧縮助剤、崩壊剤、色素（
顔料）、緩和剤、乳化剤、充填剤（希釈剤）、塗膜形成物又はコーティング、香味料、着
香料、流動促進剤（流動増強剤（ｆｌｏｗ  ｅｎｈａｎｃｅｒ））、滑沢剤、保存剤、印
刷インキ、吸着剤、懸濁化剤又は分散剤、甘味料、及び水和水が挙げられる。典型的な添
加剤には、限定するものではないが、ブチルヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、炭酸カルシ
ウム、リン酸カルシウム（二塩基性）、ステアリン酸カルシウム、クロスカルメロース、
架橋ポリビニルピロリドン、クエン酸、クロスポビドン、システイン、エチルセルロース
、ゼラチン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ラ
クトース、ステアリン酸マグネシウム、マルチトール、マンニトール、メチオニン、メチ
ルセルロース、メチルパラベン、微結晶性セルロース、ポリエチレングリコール、ポリビ
ニルピロリドン、ポビドン、α化デンプン、プロピルパラベン、パルミチン酸レチニル、
セラック、二酸化ケイ素、カルボキシルメチルセルロースナトリウム、クエン酸ナトリウ
ム、デンプングリコール酸ナトリウム、ソルビトール、デンプン（トウモロコシ）、ステ
アリン酸、スクロース、タルク、二酸化チタン、ビタミンＡ、ビタミンＥ、ビタミンＣ、
及びキシリトールが挙げられる。
【０３７６】
薬学的に許容可能な塩：本明細書中に記載された化合物の薬学的に許容可能な塩は、酸
又は塩基の構成部分がその塩の形態（例えば遊離の塩基官能基を適切な有機酸と反応させ
ることにより生成されるようなもの）である、開示された化合物の形態である。薬学的に
許容可能な塩の例には、限定するものではないが、アミンのような塩基性残基の無機塩又
は有機酸塩；カルボン酸のような酸性残基のアルカリ塩又は有機塩；及び同種のものが挙
げられる。代表的な酸付加塩には、酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコルビン
酸塩、アスパラギン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、重硫酸塩、ホウ酸塩、酪
酸塩、樟脳酸塩、樟脳スルホン酸塩、クエン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグ
ルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、フマル酸塩、グルコヘプトン酸塩、
グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプトン酸塩、ヘキサン酸塩、臭化水素酸塩、塩酸塩、
ヨウ化水素酸塩、２‐ヒドロキシエタンスルホン酸塩、ラクトビオン酸塩、乳酸塩、ラウ
リン酸塩、ラウリル硫酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸
塩、２‐ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、
パルミチン酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３‐フェニルプロピオン酸塩、リ
ン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、硫
酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トルエンスルホン酸塩、ウンデカン酸塩、吉草酸塩な
どが挙げられる。代表的なアルカリ又はアルカリ土類金属塩には、ナトリウム、リチウム
、カリウム、カルシウム、マグネシウムなどのほかに、無毒なアンモニウム、第四級アン
モニウム、及びアミンのカチオン、例えば、限定するものではないが、アンモニウム、テ
トラメチルアンモニウム、テトラエチルアンモニウム、メチルアミン、ジメチルアミン、
トリメチルアミン、トリエチルアミン、エチルアミンなどが挙げられる。薬学的に許容可
能な塩には、例えば無毒の無機酸又は有機酸に由来する、従来の無毒の塩類が挙げられる
。いくつかの実施形態では、薬学的に許容可能な塩は、従来の化学的手法によって塩基性
又は酸性の構成部分を含む親化合物から調製される。一般に、そのような塩は、遊離の酸
又は塩基の形態のこれらの化合物を、化学量論量の適当な塩基又は酸と、水中若しくは有
機溶媒中、又はその２つの混合物中で反応させることにより調製可能であり；一般に、エ
ーテル、酢酸エチル、エタノール、イソプロパノール、又はアセトニトリルのような非水
性の媒体が好ましい。適切な塩の一覧は、「レミントンの薬剤科学（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ
’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）」、第１７版、米国ペンシ
ルバニア州イーストンのマック・パブリシング・カンパニー（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈ
ｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ）、１９８５年、ｐ．１４１８、Ｐ．Ｈ．シュタール（Ｓｔａｈ
ｌ）及びＣ．Ｇ．ヴェルムス（Ｗｅｒｍｕｔｈ）編、「製剤塩：性質、選択、及び用途（
Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ：  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，  Ｓｅｌｅｃｔ
ｉｏｎ，  ａｎｄ  Ｕｓｅ）」、ワイリー‐ＶＣＨ（Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ）、２００８年
、及びバージ（Ｂｅｒｇｅ）ら、ジャーナル・オブ・ファーマシューティカル・サイエン
ス（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ）、１９７
７年、第６６巻、ｐ．１−１９に見られ、前記文献はそれぞれ全体が参照により本願に組
込まれる。薬学的に許容可能な溶媒和物：用語「薬学的に許容可能な溶媒和物」は、本明
細書中で使用されるように、化合物の結晶形態であって適切な溶媒の分子が結晶格子に組
み込まれているものを指す。例えば、溶媒和物は、有機溶媒、水、又はこれらの混合物を
含む溶液からの結晶化、再結晶化、又は沈澱反応によって調製されうる。適切な溶媒の例
は、エタノール、水（例えばモノ‐、ジ‐、及びトリ水和物）、Ｎ‐メチルピロリジノン
（ＮＭＰ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、Ｎ，Ｎ’‐ジメチルホルムアミド（Ｄ
ＭＦ）、Ｎ，Ｎ’‐ジメチルアセトアミド（ＤＭＡＣ）、１，３‐ジメチル‐２‐イミダ
ゾリジノン（ＤＭＥＵ）、１，３‐ジメチル‐３，４，５，６‐テトラヒドロ‐２‐（１
Ｈ）‐ピリミジノン（ＤＭＰＵ）、アセトニトリル（ＡＣＮ）、プロピレングリコール、
酢酸エチル、ベンジルアルコール、２‐ピロリドン、安息香酸ベンジルなどである。水が
溶媒である場合、溶媒和物は「水和物」と呼ばれる。いくつかの実施形態では、溶媒和物
に組み込まれる溶媒は、その溶媒和物が（例えば医薬組成物の単位投薬形態で）投与され
る生物体に生理的に耐容可能な種類又はレベルのものである。
【０３７７】
薬物動態：本明細書中で使用されるように、「薬物動態」は、生体に投与された物質の
運命の決定に関するとき、分子又は化合物の任意の１以上の性質を指す。薬物動態は、吸
収、分布、代謝及び排泄の程度及び速度を含むいくつかの領域に分割される。これは一般
にＡＤＭＥと呼ばれ：（Ａ）吸収（Ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ）は血液循環に入る物質のプロ
セスであり；（Ｄ）分布（Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ）は身体の流体及び組織全体にわた
る分散又は伝播であり；（Ｍ）代謝（Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ）（又は生体内変化）は親化
合物の娘代謝産物への不可逆的変換であり；（Ｅ）排泄（Ｅｘｃｒｅｔｉｏｎ）（又は排
除）は身体からの物質の排除を指す。まれな事例においては、体組織中に不可逆的に蓄積
する薬物もある。
【０３７８】
物理化学的：本明細書中で使用されるように、「物理化学的」とは物理的及び化学的の
うち少なくともいずれかの性質を、又は該性質に関係していることを意味する。
予防：本明細書中で使用されるように、用語「予防」は、感染、疾患、障害、及び状態
のうち少なくともいずれかの発症を部分的又は完全に遅延させること；特定の感染、疾患
、障害、及び状態のうち少なくともいずれかの１以上の症状、特徴、又は臨床徴候の発症
を部分的又は完全に遅延させること；特定の感染、疾患、障害、及び状態のうち少なくと
もいずれかの１以上の症状、特徴、又は徴候の発症を部分的又は完全に遅延させること；
感染、特定の疾患、障害、及び状態のうち少なくともいずれかからの進行を部分的又は完
全に遅延させること；並びに、感染、疾患、障害、及び状態のうち少なくともいずれかに
関連した病変の発生のリスクを減少させること、のうち少なくともいずれかを指す。
【０３７９】
プロドラッグ：本開示はさらに、本明細書中に記載された化合物のプロドラッグも含む
。本明細書中で使用されるように、「プロドラッグ」とは、任意の物質、分子又は実体で
あってその物質、分子又は実体が化学的又は物理的な変質を生じると治療薬として作用す
ると予見される（ｐｒｅｄｉｃａｔｅ）形態であるものを指す。プロドラッグは、共有結
合している（ｂｙ  ｃｏｖａｌｅｎｔｌｙ  ｂｏｎｄｅｄ）か又は何らかの方法で隔離さ
れていてよく、哺乳類の対象者への投与の前、投与時又は投与後に活性薬物部分を放出す
るか又は活性薬物部分へと変換される。プロドラッグは、修飾が日常的な手技又はｉｎ  
ｖｉｖｏのいずれかにおいて開裂されて親化合物となるような方法で該化合物中に存在す
る官能基を修飾することにより、調製可能である。プロドラッグには、ヒドロキシル、ア
ミノ、スルフヒドリル、又はカルボキシル基が任意の基に結合している化合物であって、
その任意の基は、哺乳類の対象者に投与された時に開裂して遊離のヒドロキシル、アミノ
、スルフヒドリル、又はカルボキシル基をそれぞれ形成する、化合物が挙げられる。プロ
ドラッグの調製及び使用については、Ｔ．ヒグチ（Ｈｉｇｕｃｈｉ）及びＶ．ステラ（Ｓ
ｔｅｌｌａ）、「新規な送達システムとしてのプロドラッグ（Ｐｒｏ−ｄｒｕｇｓ  ａｓ
Ｎｏｖｅｌ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）」、Ａ．Ｃ．Ｓ．シンポジウム・シ
リーズ第１４巻（Ｖｏｌ．  １４  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａ．Ｃ．Ｓ．  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  
Ｓｅｒｉｅｓ）、並びにエドワード  Ｂ．ロッシュ（Ｅｄｗａｒｄ  Ｂ．  Ｒｏｃｈｅ）
編、「薬物設計における体内可逆性担体（Ｂｉｏｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ  Ｃａｒｒｉｅｒ
ｓ  ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ）」、アメリカン・ファーマシューティカル・アソシ
エーション・アンド・ペルガモン・プレス（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉ
ｃａｌ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ）、１９８７
年において議論されており、前記文献はいずれも参照により全体が本願に組み込まれる。
【０３８０】
増殖する：本明細書中で使用されるように、用語「増殖する」は、成長、拡充（ｅｘｐ
ａｎｄ）、複製若しくは増加すること、又は成長、拡充、複製若しくは増加を引き起こす
ことを意味する。「増殖性」は増殖する能力を有していることを意味する。「抗増殖性」
は、増殖性とは逆すなわち増殖性に反する性質を有していることを意味する。
【０３８１】
対象とするタンパク質：本明細書中で使用されるように、用語「対象とするタンパク質
」又は「所望のタンパク質」には、本明細書中に提供されるタンパク質並びにそのフラグ
メント、突然変異体、バリアント及び変形体が含まれる。
【０３８２】
近位（の）：本明細書中で使用されるように、用語「近位（の）」は、中心又は対象と
する地点若しくは領域のより近くに位置していることを意味する。
精製された：本明細書中で使用されるように、「精製する」は、ほぼ純粋にすること、
又は望ましくない構成要素、物質汚染、混合物若しくは不完全状態から清浄化することを
意味する。「精製された」とは純粋である状態を指す。「精製」は、純粋にするプロセス
を指す。
【０３８３】
試料：本明細書中で使用されるように、用語「試料」は、供給源からの採取、及び分析
又は処理のための提供のうち少なくともいずれかが為される、アリコート又は部分を指す
。いくつかの実施形態では、試料は、生物学的供給源、例えば組織、細胞又は構成要素部
分（例えば体液であって、限定するものではないが血液、粘液、リンパ液、関節液、脳脊
髄液、唾液、羊水、羊膜内の臍帯血、尿、膣液及び精液など）に由来する。いくつかの実
施形態では、試料は、生物体全体又はその組織、細胞若しくは構成要素部分の部分集合体
、又はこれらの画分若しくは部分であって、例えば、限定するものではないが例を挙げる
と血漿、血清、髄液、リンパ液、皮膚の外部切片、気管、腸管及び尿生殖器管、涙液、唾
液、乳汁、血球、腫瘍、器官などから調製されたホモジネート、溶解産物又は抽出物であ
ってもよいし、該ホモジネート、溶解産物又は抽出物を含んでなることもできる。いくつ
かの実施形態では、試料は、タンパク質又は核酸分子のような細胞の構成要素を含有する
可能性のある栄養ブイヨン又はゲルのような培地であるか、又は該培地を含んでなる。い
くつかの実施形態では、「一次」試料は供給源のアリコートである。いくつかの実施形態
では、一次試料は、分析又はその他の用途のために試料を調製する１以上の処理（例えば
分離、精製などの）ステップに供される。
【０３８４】
シグナル配列：本明細書中で使用されるように、「シグナル配列」という言葉はタンパ
ク質の輸送又は局在化を導くことができる配列を指す。
単回単位用量：本明細書中で使用されるように、「単回単位用量」は、１用量／１回／
単一経路／単一接点、すなわち単回の投与事象において投与される任意の治療薬の用量で
ある。いくつかの実施形態では、単回単位用量は、個別の投薬形態（例えば錠剤、カプセ
ル剤、パッチ剤、装填済みシリンジ、バイアルなど）として提供される。
【０３８５】
類似性：本明細書中で使用されるように、用語「類似性」は、ポリマー性分子の間、例
えば、ポリヌクレオチド分子（例えば、ＤＮＡ分子及びＲＮＡ分子のうち少なくともいず
れか）の間、及びポリペプチド分子の間のうち少なくともいずれかにおける全体的な類似
度を指す。ポリマー性分子同士の類似性（％）の計算は、当分野で理解されているように
類似性（％）の計算が保存的置換を考慮に入れることを除けば同一性（％）の計算と同じ
方法で実施可能である。
【０３８６】
分割用量：本明細書中で使用されるように、「分割用量」は、単回単位用量又は合計１
日用量の２回分以上の用量への分割である。
安定な：本明細書中で使用されるように、「安定な」は、反応混合物からの有用な程度
の純度への単離を経ても残存するのに十分に強健であり、かつ好ましくは効果的な治療薬
への調合が可能な化合物又は実体を指す。
【０３８７】
安定化された：本明細書中で使用されるように、用語「安定化する」「安定化された」
「安定化された領域」は、安定的にすること又は安定することを意味する。いくつかの実
施形態では、安定性は絶対値と比較して測定される。いくつかの実施形態では、安定性は
基準の化合物又は実体と比較して測定される。
【０３８８】
対象者：本明細書中で使用されるように、用語「対象者」又は「患者」は、本発明によ
る組成物が例えば実験、診断、予防、又は治療を目的として投与される可能性のある任意
の生物体を指す。典型的な対象者には、動物（例えばマウス、ラット、ラビット、ヒト以
外の霊長類、及びヒトのような哺乳動物）並びに植物のうち少なくともいずれかが挙げら
れる。
【０３８９】
ほぼ：本明細書中で使用されるように、用語「ほぼ」は、対象とする特性又は性質の全
面的又は全面的に近い範囲又は程度を示している質的状態を指す。生物学分野の当業者で
あれば、生物学的かつ化学的な現象は、あるとしてもまれにしか、完了への到達、及び完
全状態までの進行又は絶対的な結果の達成若しくは回避を為すことはないということを理
解するであろう。したがって、用語「ほぼ」は、多くの生物学的かつ化学的な現象に本来
備わっている潜在的な完全性欠如をとらえるために本明細書中で使用される。
【０３９０】
ほぼ等しい：投薬の間の時差に関するときに本明細書中で使用されるように、該用語は
プラスマイナス２％を意味する。
ほぼ同時に：本明細書中で使用されるように、かつ複数回の投薬に関するとき、該用語
は典型的には約２秒以内を意味する。
【０３９１】
〜に罹患している：疾患、障害、及び状態のうち少なくともいずれか「に罹患している
」個体は、疾患、障害及び状態のうち少なくともいずれかであると診断されているか、疾
患、障害及び状態のうち少なくともいずれかの１以上の症状を示している。
【０３９２】
〜を生じやすい（に罹患しやすい）：疾患、障害及び状態のうち少なくともいずれか「
を生じやすい」個体は、疾患、障害及び状態のうち少なくともいずれかであると診断され
ていない、並びに／又は、疾患、障害及び状態のうち少なくともいずれかの症状を示して
いないが、疾患又はその症状の発症傾向を有している。いくつかの実施形態では、疾患、
障害及び状態のうち少なくともいずれか（例えば、がん）を生じやすい個体は、下記すな
わち：（１）疾患、障害及び状態のうち少なくともいずれかの発症に関連した遺伝子突然
変異；（２）疾患、障害及び状態のうち少なくともいずれかの発症に関連した遺伝的多型
；（３）疾患、障害及び状態のうち少なくともいずれかに関連したタンパク質及び核酸の
うち少なくともいずれかの発現及び活性のうち少なくともいずれかの増大及び減少のうち
少なくともいずれか；（４）疾患、障害及び状態のうち少なくともいずれかの発症に関連
した習慣及び生活様式のうち少なくともいずれか；（５）疾患、障害及び状態のうち少な
くともいずれかの家族歴；並びに（６）疾患、障害及び状態のうち少なくともいずれかの
発症に関連した微生物への曝露及び感染のうち少なくともいずれか、のうち１以上の特性
を有しうる。いくつかの実施形態では、疾患、障害及び状態のうち少なくともいずれかを
生じやすい個体は、該疾患、障害及び状態のうち少なくともいずれかを発症することにな
る。いくつかの実施形態では、疾患、障害及び状態のうち少なくともいずれかを生じやす
い個体は、該疾患、障害及び状態のうち少なくともいずれかを発症しない。
【０３９３】
合成（の）：用語「合成（の）」は、人の手によって生産、調製、及び製造のうち少な
くともいずれかが為されることを意味する。ポリヌクレオチド若しくはポリペプチド又は
本発明の他の分子の合成は、化学合成でもよいし酵素的合成でもよい。
【０３９４】
標的細胞：本明細書中で使用されるように、「標的細胞」は対象とする任意の１以上の
細胞を指す。該細胞は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｉｎ  ｖｉｖｏ、ｉｎ  ｓｉｔｕ又は生物体
の組織若しくは器官において見出されうる。該生物体は、動物、好ましくは哺乳動物、よ
り好ましくはヒト、及び最も好ましくは患者であってよい。
【０３９５】
治療薬：用語「治療薬」は、任意の作用薬であって、対象者に投与された時、治療的、
診断的、及び予防的のうち少なくともいずれかの効果を有する、並びに／又は、所望の生
物学的及び薬理学的のうち少なくともいずれかの効果を誘発する、作用薬を指す。
【０３９６】
治療上有効な量：本明細書中で使用されるように、用語「治療上有効な量」は、送達さ
れるべき作用薬（例えば核酸、薬物、治療薬、診断薬、予防薬など）の量であって、感染
、疾患、障害、及び状態のうち少なくともいずれかに罹患しているかまたは罹患しやすい
対象者に投与された時、該感染、疾患、障害、及び状態のうち少なくともいずれかの治療
、症状の改善、診断、予防、及び発症の遅延のうち少なくともいずれかを為すのに十分な
量を意味する。いくつかの実施形態では、治療上有効な量は単回投与で提供される。いく
つかの実施形態では、治療上有効な量は複数回投与を含んでなる投薬レジメンで投与され
る。当業者には当然のことであろうが、いくつかの実施形態では、単位投与形態は、その
ような投薬レジメンの一部として投与された時に有効である量を含んでなる場合、治療上
有効な量の特定の作用薬又は実体を含んでなるとみなされうる。
【０３９７】
治療上有効な成果：本明細書中で使用されるように、用語「治療上有効な成果」は、感
染、疾患、障害、及び状態のうち少なくともいずれかに罹患しているか又は罹患しやすい
対象者における、該感染、疾患、障害、及び状態のうち少なくともいずれかの治療、症状
の改善、診断、予防、及び発症の遅延のうち少なくともいずれかを為すのに十分である成
果を意味する。
【０３９８】
合計１日用量：本明細書中で使用されるように、「合計１日用量」は２４時間の間に投
薬又は処方される量である。合計１日用量は単回単位用量として投与されてもよい。
転写因子：本明細書中で使用されるように、用語「転写因子」は、例えば転写の活性化
又は抑制によってＤＮＡのＲＮＡへの転写を調節する、ＤＮＡ結合タンパク質を指す。い
くつかの転写因子は単独で転写の調節を行うが、他の転写因子は他のタンパク質と協力し
て作用する。転写因子によっては、ある一定の条件下で転写の活性化及び抑制の両方を行
うことができる。一般に、転写因子は、標的遺伝子の調節領域内の特定の共通配列に極め
て類似している特定の１又は複数の標的配列に結合する。転写因子は、標的遺伝子の転写
を単独で調節する場合もあれば他の分子との複合体として調節する場合もある。
【０３９９】
治療：本明細書中で使用されるように、用語「治療」は、特定の感染、疾患、障害、及
び状態のうち少なくともいずれかの１以上の症状又は特徴の、部分的又は完全な緩和、軽
快、改善、軽減、発症の遅延、進行の抑制、重症度の低減、及び発生率低減のうち少なく
ともいずれかを為すことを指す。例えば、がんの「治療」は、腫瘍の生存、成長、及び拡
散のうち少なくともいずれかを阻害することを指すことができる。治療は、疾患、障害及
び状態のうち少なくともいずれかの兆候を示していない対象者、並びに、疾患、障害及び
状態のうち少なくともいずれかの初期兆候のみを示す対象者、のうち少なくともいずれか
に対して、該疾患、障害及び状態のうち少なくともいずれかに関連した病変の発生のリス
クを減少させる目的で、施されてもよい。
【０４００】
未修飾：本明細書中で使用されるように、「未修飾」は、何らかの方法で変化せしめら
れる前の任意の物質、化合物又は分子を指す。未修飾は、常にというわけではないが、野
生型又は未変性の生体分子又は実体を指す。分子又は実体は、一連の修飾を受けることに
よって、それぞれの修飾生成物がその後の修飾のための「未修飾」の出発時の分子又は実
体としての役割を果たすこともある。
【０４０１】
ＶＩＩ．等価物及び範囲
当業者であれば、本明細書中に記載された本発明による特定の実施形態の多数の等価物
を、認識するであろうし、又は日常的な実験作業程度を用いれば確認することができるで
あろう。本発明の範囲は、上述の説明に限定されるようには意図されず、添付の特許請求
の範囲に述べられた通りである。
【０４０２】
特許請求の範囲において、「１つの（ａ，  ａｎ）」及び「その（ｔｈｅ）」のような
冠詞は、それと反対の趣旨が示されるか又は文脈からそうでないことが明白でないかぎり
、１又は２以上を意味することができる。ある群の１以上のメンバーの間に「又は、若し
くは（ｏｒ）」を備えている請求項又は記述は、反対の趣旨が示されるか又は文脈からそ
うでないことが明白でないかぎり、その群のメンバーのうち１つ、２以上又は全部が、所
与の生成物若しくはプロセス中に存在するか、該生成物若しくはプロセスにおいて使用さ
れるか、又は他のかたちで該生成物若しくはプロセスに関係している場合に満たされると
みなされる。本発明は、その群の正確に１つのメンバーが所与の生成物若しくはプロセス
中に存在し、該生成物若しくはプロセスにおいて使用され、又は他のかたちで該生成物若
しくはプロセスに関係している実施形態を含む。本発明は、２以上の、又は全部の群のメ
ンバーが、所与の生成物若しくはプロセス中に存在し、該生成物若しくはプロセスにおい
て使用され、又は他のかたちで該生成物若しくはプロセスに関係している実施形態を含む
。
【０４０３】
用語「〜を含んでなる」は、オープンであるものと意図され、かつ追加の要素又はステ
ップを含めることを許容するが必要とはしない、ということも留意される。用語「〜を含
んでなる」が本明細書中で使用される場合、用語「〜で構成されている」も包含及び開示
される。
【０４０４】
範囲が与えられる場合は、端点が含まれる。更に、了解されるべきなのは、そうでない
ことが示されるか又は文脈及び当業者の理解からそうでないことが明らかでないかぎり、
範囲として表現される値は、本発明の様々な実施形態における明示された範囲内の任意の
特定の値又は部分的範囲を、文脈からそうでないことが明白に示されないかぎりその範囲
の下限値の単位の１０分の１まで、とることが可能である。
【０４０５】
加えて、当然のことであるが、先行技術の範囲内にある本発明の任意の特定の実施形態
は、請求項のうち任意の１つ以上から明示的に除外されうる。そのような実施形態は当業
者に既知であると考えられるので、該実施形態は本明細書中で除外が明示的に述べられな
くとも除外されうる。本発明の組成物の任意の特定の実施形態（例えば任意の核酸又は該
核酸によりコードされたタンパク質；任意の生産方法；任意の使用方法；など）は、先行
技術の存在に関係しているか否かに関わらず、任意の理由で、任意の１以上の請求項から
除外可能である。
【０４０６】
全ての引用された出典、例えば参照文献、出版物、データベース、データベース項目、
及び本明細書中で引用された技術は、引用部において明記されていなくとも、参照により
本願に組み込まれる。引用された出典と本願とで記述が矛盾している場合には、本願の記
述が御するものとする。
【０４０７】
節及び表の見出しは、限定的であるようには意図されない。
実施例
実施例１．抗原の同定及び選択
本発明のＧＤＡ抗体の調製において使用される抗原を同定及び選択するために、ＴＧＦ
‐βファミリーの構造活性相関の調査がなされた。使用された方法はシャイ（Ｓｈｉ）、
Ｍ．ら、「潜在型ＴＧＦ‐β構造及び活性化（Ｌａｔｅｎｔ  ＴＧＦ−β  ｓｔｒｕｃｔ
ｕｒｅ  ａｎｄ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ）」、ネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ）、２０１１年
６月１５日、第４７４巻、第７３５１号、ｐ．３４３−９に記載された方法である。
【０４０８】
〔ＴＧＦ‐βの構造分析〕
プロＴＧＦ‐β１の構造はリング様の形状を有している。２つのプロドメインアームド
メインが肘部において、２つの成長因子モノマーによって、かつそれぞれの成長因子モノ
マーを囲むプロドメイン「ストレイトジャケット（拘束衣）」要素によって形成された、
交差した「前腕」に接続する。リングの中心は溶媒を包含している。両アームはネック部
において集合し、ネック部でボウタイ型にジスルフィド結合され、かつＲＧＤモチーフが
各肩部に位置する。拘束された前腕が交差しているリングの反対側には、ＬＴＢＰがα１
ヘリックスの拘束残基Ｃｙｓ４に連結する部位がある。
【０４０９】
〔ＴＧＦ‐βファミリーメンバー間の構造的アラインメント〕
ＴＧＦ‐β１の結晶構造分析及び抗体開発のための標的部位の同定から得られた構造上
の洞察を前提とすると、対応する標的を同定するためにＴＧＦ‐βファミリーの他のメン
バーとともに配列アラインメントを行うことは興味深いものであった。ＴＧＦ‐βファミ
リーは３３個のメンバーで構成されている。成長因子ドメインは高度に保存されているが
、プロドメインは長さが様々で１６９〜４３３残基であり、配列において関連性がない、
又は相同性が低いものとして種々に記載されている。しかしながら、アラインメントは全
てのプロドメインが類似の折りたたみ構造を有することを示している。アームドメインの
コア二次構造要素、すなわちα２ヘリックス及びβストランド１〜３、６、７及び１０の
、深く埋没した疎水性残基は、全メンバーにおいて保存されている。
【０４１０】
ほとんどのファミリーメンバーはさらに、２つの成長因子モノマーの間に密接に挿入さ
れるα１ヘリックスの両親媒性のＣ末端部分についての明瞭な配列シグネチャをも包含し
ている。インヒビン‐α及びインヒビン‐βＡにおける同様の挿入は、ＴＧＦ‐βのＩｌ
ｅ２４及びＬｅｕ２８の等価物に対して破壊性突然変異をマッピングすることにより実証
済みである。多数のファミリーメンバーが、成長因子β‐フィンガーの包囲に対応しうる
長さのプロリンに富む潜在期の投げ縄型ループ（ｌａｔｅｎｃｙ  ｌａｓｓｏ  ｌｏｏｐ
）をも含有している。よって、ストレイトジャケットの一部など、プロＴＧＦ‐βの構造
に類似のプロドメイン構造は、ＴＧＦ‐βファミリーにおいて広く存在する。しかしなが
ら、配列同一性の低さ並びに多数の挿入及び欠失はかなりの特殊化を示している。
【０４１１】
ファミリーメンバーの間のプロドメイン二量体化における違いはシステイン部位の変動
によって示される。ボウタイ（βストランド８及び９）並びにそのジスルフィドは特殊化
部分である。インヒビン‐α及びβサブユニットは同様の部位にシステインを有している
が、他のファミリーメンバーはβ７ストランドにシステイン残基を有しているかこの領域
にはシステインを完全に欠いているかのいずれかである。
【０４１２】
β４ストランド及びβ５ストランドにおける２つのアームドメイン間の接触面は、大き
さは適度であり疎水性かつ保存された残基はほとんどない。ＧＤＦ１及びＧＤＦ１５は特
に、βシートの端の、配列及び構造において隣接しているβ４ストランド及びβ５ストラ
ンドを欠いている。したがって、アームドメインの二量体化は一部のファミリーメンバー
においては可変的であるか又は存在しないようである。
【０４１３】
ＴＧＦ‐β、ミオスタチン及びＧＤＦ１１という、潜在型でもある近縁分子は、ファス
ナー残基Ｌｙｓ２７及びＴｙｒ７５の保存を示している。ミオスタチンは筋肉量を調節し
、細胞外マトリックス中に、ＬＴＢＰ３に結合して蓄えられる。潜在期からのミオスタチ
ン及びＧＤＦ１１の放出には、ＢＭＰ１／トロイドメタロプロテイナーゼによるプロドメ
インのＡｒｇ７５とＡｓｐ７６との間での開裂を必要とする。この開裂はα２ヘリックス
とファスナーとの間である。よって、ストレイトジャケットを解く少なくとも２つの異な
る方法、力及びタンパク質分解によって、ファミリーメンバーが潜在期から放出されるこ
とが可能である。
【０４１４】
ＢＭＰ４、ＢＭＰ７、ＢＭＰ１０、ＧＤＦ２、ＧＤＦ５及びＧＤＦ８を含むますます多
くのＴＧＦ‐βファミリーのメンバーが、分泌後もそのプロドメインに関連し続けている
ことが認識されている。更に、これらのプロドメインの多くはフィブリリン‐１およびフ
ィブリリン‐２に高い親和性で結合する。該細胞外マトリックスへのプロドメインによる
標的化は、ＴＧＦ‐βファミリーの生物活性を調節する際に広く重要であるかもしれない
。さらに、ＬＴＢＰ又はフィブリリンへの結合は、プロドメイン‐成長因子複合体を強化
するように思われる。よって、わずかに限られた数のＴＧＦ‐βファミリーメンバーはプ
ロドメイン‐成長因子複合体として潜在するが、潜在期の概念は、他のメンバーの、ＬＴ
ＢＰ及びフィブリリンとの生理学的に関連性のある複合体が考慮される場合にはそのメン
バーにも及ぶ場合もある。
【０４１５】
ｉｎ  ｖｉｖｏでのＢＭＰ４のシグナル伝達範囲は、プロドメイン‐成長因子開裂部位
の上流の第２の部位におけるフューリン様プロテアーゼによるプロドメインの細胞外開裂
によって増大せしめられる。注目すべきことに、この第２の部位は、ＴＧＦ‐β１のＲＧ
Ｄのアルギニンを有している乱雑なループ内にある。この２つの開裂部位の間の中心であ
るβ１０ストランドが失われると、ＢＭＰ４プロドメインの、その成長因子への結合が失
われる。
【０４１６】
クリプト（Ｃｒｉｐｔｏ）に結合するノーダルのプロドメインは、ノーダルを近隣の細
胞によって分泌されたプロテアーゼによる開裂の標的とする。ＡＭＨは大部分は未開裂で
分泌され、プロドメインとの関連によりｉｎ  ｖｉｖｏにおけるその活性が大幅に高まる
。左右非対称性の確立に関与するレフティタンパク質は、アームドメインと成長因子ドメ
インとの間では開裂されず、代わりにα２ヘリックスとファスナーとの間で開裂される。
特に、ストレイトジャケットの放出は成長因子ドメインへのタイプＩＩ受容体のアクセス
を可能にするのに十分なはずである。
【０４１７】
実施例２．治療処置のための抗体の生成
〔標準的なモノクローナル抗体生成により生産される抗体ＧＤＡ〕
本発明のＧＤＡは、ＴＧＦ‐βファミリーのメンバー、そのＧＰＣ又は他の標的を特異
的標的とする抗体であってよい。１つの実施形態では、そのような抗体は所望の標的抗原
をコードする遺伝子を欠いているノックアウトマウスにおいて生成される。そのようなマ
ウスは該標的抗原に対して寛容が成立しないことになり、したがって該抗原のヒト型及び
マウス型と交差反応する可能性のある、該抗原に対する抗体を生成することになる。モノ
クローナル抗体の生産については、宿主マウスは、標的ペプチドに特異的に結合するリン
パ球を誘発するためにその標的ペプチドで免疫化される。リンパ球は収集されて不死化細
胞株と融合せしめられる。得られたハイブリドーマ細胞は、融合細胞だけが成長するのを
支援する選択剤を伴った適切な培地において培養される。
【０４１８】
その後、所望のハイブリドーマ細胞株は、分泌される抗体の標的ペプチドについての結
合特異性分析によって同定され、これらの細胞のクローンは限界希釈法を通じてサブクロ
ーニングされて標準的な方法で成長せしめられる。これらの細胞によって産生された抗体
は、標準的な免疫グロブリン精製手法によって培地から単離及び精製される。
【０４１９】
〔組換え生産される抗体ＧＤＡ〕
組換え抗体ＧＤＡは上記で生産されたハイブリドーマ細胞を使用して生産される。抗体
ＧＤＡの重鎖及び軽鎖可変領域のｃＤＮＡ配列は標準的な生化学的技法を使用して決定さ
れる。全ＲＮＡは抗体ＧＤＡを産生するハイブリドーマ細胞から抽出されて、逆転写酵素
（ＲＴ）ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によってｃＤＮＡに変換される。ＰＣＲ増幅は
、得られたｃＤＮＡについて、重鎖及び軽鎖の配列の増幅用の特異的プライマーを使用し
て行なわれることになる。ＰＣＲ産物は次に、配列分析用のプラスミドにサブクローニン
グされる。配列決定がなされたら、抗体ＧＤＡをコードする配列は発現ベクターに組み込
まれる。生産される抗体のヒト化については、ヒトの重鎖及び軽鎖不変領域のコード配列
が相同なネズミ科動物の配列と置き換えるために使用される。得られる構築物は、抗体Ｇ
ＤＡの大規模翻訳を為すことができる哺乳動物細胞にトランスフェクトされる。
【０４２０】
〔抗体フラグメントディスプレイライブラリのスクリーニング技法を使用することによ
り生産されるＧＤＡ〕
本発明のＧＤＡは、ハイスループットな発見方法を使用して生産されてもよい。１つの
実施形態では、合成抗体を含んでなるＧＤＡは、ファージディスプレイライブラリを使用
して標的抗原をスクリーニングすることにより設計される。ファージディスプレイライブ
ラリは、それぞれがそのウイルスコート上に独自のＦａｂ抗体フラグメントを発現してい
る何百万〜何十億ものファージ粒子で構成されている。各ＦａｂをコードするｃＤＮＡは
、相補性決定領域（ＣＤＲ）の可変ループをコードする独自配列を除いて同一の配列を含
んでいる。ＣＤＲのＶＨ鎖は、ウイルスのｐＩＩＩコートタンパク質のＮ末端に連結され
た、融合タンパク質として発現される。ＶＬ鎖は別個に発現されて、ペリプラズム中でＶ
Ｈ鎖とアセンブリした後に該複合体がウイルスコートに取り込まれる。標的抗原はファー
ジディスプレイライブラリのメンバーと共にｉｎ  ｖｉｔｒｏでインキュベートされ、結
合したファージ粒子は沈殿せしめられる。結合したＦａｂサブユニットのＣＤＲをコード
するｃＤＮＡは、結合したファージから配列決定される。これらの配列は、組換え抗体の
生産のため抗体配列に直接組み込まれてもよいし、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの親和性成熟によ
ってさらに最適化するために変異せしめられて利用されてもよい。
【０４２１】
〔親和性成熟技法を使用して生産されるＧＤＡ〕
標的抗原に結合する能力を有するＦａｂは上述のライブラリを使用して同定され、これ
らから親和性成熟のプロセスを通じて高親和性の突然変異体が誘導される。親和性成熟技
術は、標的抗原に対して最も高い親和性を有するＣＤＲをコードする配列を同定するため
に使用される。この技術を使用して、上述のファージディスプレイライブラリ選択プロセ
スを使用して単離されたＣＤＲ配列は全体的又は特定残基について無作為に突然変異せし
められて、何百万〜何十億ものバリアントが作出される。これらのバリアントは、ファー
ジディスプレイライブラリにおいてＦａｂ抗体フラグメント融合タンパク質の中で発現さ
れ、標的抗原に結合する能力についてスクリーニングされる。選択、突然変異及び発現は
数回にわたって行なわれて、標的抗原に対する最も高い親和性を備えた抗体フラグメント
配列が同定される。これらの配列は、組換え抗体の生産及びＧＤＡ中への組み込みのため
の抗体配列中に直接組み込まれることが可能である。
【０４２２】
実施例３．ＧＤＡのｉｎ  ｖｉｖｏ試験
〔肺線維症の治療におけるＧＤＡの有効性の判定〕
本発明のＧＤＡはマウスの疾患モデルと併せて利用されて、該疾患の治療におけるその
有効性が評価される。１つのそのような事例では、肺線維症を治療するために生産された
ＧＤＡは、ブレオマイシン誘発性の肺損傷を受けたマウスを治療するために使用される。
被損傷マウス及び偽損傷がなされたマウスに、ＴＧＦ‐β指向性のＧＤＡが週１回腹膜腔
内注射される。３０日後、死後肺組織が収集され、繊維症の活性の指標としてヒドロキシ
プロリンのレベルについてアッセイがなされる。次いでヒドロキシプロリンのレベルは有
効性を判定するためにＧＤＡ用量との関係付けがなされる。
【０４２３】
〔ＧＤＡが骨密度を変更する能力の判定〕
本発明のＧＤＡは、注射によってＣ５７Ｂ１／６マウスに毎日投与される。その後、骨
ミネラル密度が他文献により記載されるようなデンシトメータ（モハマド（Ｍｏｈａｍｍ
ａｄ）、Ｋ．Ｓ．ら、「ＴＧＦ‐βタイプＩ受容体キナーゼの薬理学的阻害は硬骨に対す
る同化作用及び抗異化作用を有する（Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏ
ｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＴＧＦ−ｂｅｔａ  ｔｙｐｅ  Ｉ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｋｉｎａｓｅ
ｈａｓ  ａｎａｂｏｌｉｃ  ａｎｄ  ａｎｔｉ−ｃａｔａｂｏｌｉｃ  ｅｆｆｅｃｔｓ
ｏｎ  ｂｏｎｅ．）」、プロス・ワン（ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ）、２００９年、第４巻、第
４号、ｅ５２７５）を使用して分析され、骨ミネラル密度の変化が走査エリアにおける変
化率（％）として評価される。
【０４２４】
〔ヒトの疾患を治療するためのＧＤＡの使用〕
本発明のＧＤＡはヒトの疾患の治療において使用されてもよい。１つのそのような疾患
はカムラチ・エンゲルマン病（ＣＥＤ）である。ＣＥＤに罹患している患者は、過度に活
動的なＴＧＦ‐βシグナル伝達に関係する症状を経験する。これらの患者を治療すること
を目指したＧＤＡは、ＴＧＦ‐βシグナル伝達を減少させるためにＴＧＦ‐βのＧＰＣを
安定化するように設計される。そのようなＧＤＡは、ＣＥＤの患者におけるＹ５２Ｈ突然
変異を含有するＧＰＣ領域に対して指向性であってよく、この場合ＧＤＡは具体的にはα
２‐ヘリックスとＴＧＦ‐βフィンガーとの間の関連を安定化するように設計される。Ｇ
ＤＡは、ＣＥＤ患者ではＨ１９３Ｄ及びＥ１４０Ｋ突然変異が原因で崩壊しているＧＰＣ
のＧｌｕ１４０とＨｉｓ１９３との間のｐＨ調節性の塩橋を、標的とするように設計され
てもよい。そのようなＧＤＡは、その領域を安定化してＧＰＣからのＴＧＦ‐βの放出を
低減するように設計されることになろう。
【０４２５】
実施例４．フューリン開裂アッセイ
本発明は、ＧＰＣのフューリン依存性の開裂について検査するために開発されたアッセ
イを含む。このアッセイはポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＰＡＧＥ）技術を使用して
実行される。該アッセイはＧＰＣプロセシングのレベルを決定するのに有用である。ＴＧ
Ｆ‐βの場合、ＧＰＣは前駆体ポリペプチドとして合成される。二量体化すると、フュー
リン依存性の開裂が生じて、該二量体をプロドメイン二量体と成長因子二量体とを含む４
つのポリペプチドの緊密に関連付けられた複合体へと変換する。アッセイされる試料は可
溶化され、還元条件又は非還元条件（複合体がジスルフィド結合したままでいることを可
能にするため）においてＰＡＧＥによって分離される。フューリン依存性の開裂を経てい
ないＧＰＣは、２つの開裂された構成要素よりもゆっくりと移動する。得られるタンパク
質のバンドは、標準的な抗体ブロット法又は総タンパク質染色を使用して視覚化可能であ
り、またゲル上の該バンドの位置がタンパク質標準物の移動と相関せしめられて各バンド
に含まれるＧＰＣ画分が決定されることが可能である。バンドの密度はデンシトメトリー
分析を通じて決定されてもよく、値はＧＰＣプロセシング又は全体的なフューリン開裂活
性のレベルを決定するために使用可能である。
【０４２６】
実施例５．ＴＧＦ‐βリポーターアッセイ
形質転換されたミンク肺ＴＧＦ‐βリポーター細胞（ＴＭＬＣ）株は、白色の不透明な
アッセイプレートの各ウェル中で培養される。ＴＭＬＣ細胞はルシフェラーゼレポーター
プラスミドを含んでなり、該プラスミドはプラスミノゲン活性化因子インヒビター‐１（
ＰＡＩ‐１）遺伝子プロモータによって制御されたルシフェラーゼ遺伝子をさらに含んで
なる（アベ（Ａｂｅ）、Ｍ．ら、「プラスミノゲン活性化因子インヒビター‐１プロモー
タ‐ルシフェラーゼ構築物でトランスフェクトされた細胞を用いた形質転換成長因子‐β
のアッセイ（Ａｎ  ａｓｓａｙ  ｆｏｒ  ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆ
ａｃｔｏｒ−ｂｅｔａ  ｕｓｉｎｇ  ｃｅｌｌｓ  ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ  ｗｉｔｈ  
ａ  ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ  ａｃｔｉｖａｔｏｒ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ−１  ｐｒｏｍ
ｏｔｅｒ−ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ  ｃｏｎｓｔｒｕｃｔ．）」、アナリティカル・バイオ
ケミストリー（Ａｎａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ）、１９９４年２月１日、第２１６巻、第２号
、ｐ．２７６−８４）。ＰＡＩ‐１遺伝子プロモータはＴＧＦ‐β誘導性の細胞シグナル
伝達に応答性であり、ＴＧＦ‐βリガンドに応答してＴＭＬＣ細胞によるルシフェラーゼ
の産生をもたらす。
【０４２７】
ＴＧＦ‐βの活性に関して試験される生体試料が得られる。いくつかの実施形態では、
試料は組織ホモジネート、体液（例えば、限定するものではないが血液、尿及び髄液など
）、細胞培養培地、バッファーなどを含んでなる。いくつかの実施形態では、試料は、Ｇ
ＤＡを用いて、又は用いずに治療された患者から得られる。いくつかの実施形態では、試
料は、ＧＤＡ若しくは市販のＴＧＦ‐βへの曝露を伴った、又は伴わない培養物中で成長
又は維持された、細胞及び組織のうち少なくともいずれかから得られる。いくつかの実施
形態では、試料は、ＧＤＡを用いて、又は用いずに治療された動物から得られる。
【０４２８】
様々な量の希釈剤を含む試料が、ＴＭＬＣ培養プレートにおいて少なくとも４時間にわ
たって培養される。細胞溶解産物が収集されて、ワング（Ｗａｎｇ）らが述べた方法（ワ
ング、Ｒ．ら、「ＧＡＲＰはＴＧＦ‐βの生物学的利用能及び活性化を調節する（ＧＡＲ
Ｐ  ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  ｔｈｅ  ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ  ａｎｄ  ａｃｔｉ
ｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＴＧＦβ．）」、モレキュラー・バイオロジー・オブ・ザ・セル（
Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  Ｃｅｌｌ）、２０１２年３月、第２３巻、第６号、ｐ．１１２９−３
９）に従って、ルシフェラーゼ・アッセイ・システム（米国ウィスコンシン州マディソン
のプロメガ（Ｐｒｏｍｅｇａ））及びシナジー２マルチモード・マイクロプレート・リー
ダ（米国バーモント州ウィヌースキーのバイオテク（ＢｉｏＴｅｋ））を使用してルシフ
ェラーゼ活性について分析がなされる。データは試験された三連の試料の平均として示さ
れる（±ＳＥＭ）。
【図１】
2019163317.tif 000018
【図２】
2019163317.tif 000019
【図３】
2019163317.tif 000020
【配列表】
2019163317000001.app
【手続補正書】
【提出日】令和1年6月28日(2019.6.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
明細書に記載の発明。