(57)【要約】【課題】全死亡及び心血管死亡を予測するバイオマーカーを提供する。【解決手段】本発明にかかるバイオマーカーは、全死亡を予測するためのバイオマーカーであって、そのバイオマーカーは被検者の血液試料中のVEGF-Cであり、VEGF-Cの濃度が3544 pg/mLよりも低い場合に、全死亡及び心血管死亡のリスクが高いことを特徴とする。また本発明は疾患の致死性を識別するバイオマーカーであって、VEGF-Cの濃度が3544 pg/mLよりも低い場合に疾患が致死性であると識別できる。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
全死亡を予測するためのバイオマーカーであって、
そのバイオマーカーは被検者の血液試料中のVEGF-Cであり、
VEGF-Cの濃度が3544 pg/mLよりも低い場合に、全死亡のリスクが高いことを特徴とするバイオマーカー。
【請求項２】
心血管死亡を予測するためのバイオマーカーであって、
そのバイオマーカーは被検者の血液試料中のVEGF-Cであり、
VEGF-Cの濃度が3544 pg/mLよりも低い場合に、心血管死亡のリスクが高いことを特徴とする請求項１記載のバイオマーカー。
【請求項３】
VEGF-Cの濃度が2657 pg/mLよりも低い場合に、全死亡のリスクが高いことを特徴とする請求項１記載のバイオマーカー。
【請求項４】
VEGF-Cの濃度が2657 pg/mLよりも低い場合に、心血管死亡のリスクが高いことを特徴とする請求項２記載のバイオマーカー。
【請求項５】
被検者から採取した血液試料中のVEGF-Cの濃度を測定する工程を含む、血液試料中のVEGF-C濃度を測定方法であって、
その測定方法は、前記被検者の全死亡のリスクを判定するためのものであり、
その判定は、VEGF-Cの濃度が3544 pg/mLよりも低い場合に、全死亡のリスクが高いと判定するものであることを特徴とする測定方法。
【請求項６】
被検者から採取した血液試料中のVEGF-Cの濃度を測定する工程を含む、血液試料中のVEGF-C濃度を測定方法であって、
その測定方法は、前記被検者の心血管死亡のリスクを判定するためのものであり、
その判定は、VEGF-Cの濃度が3544 pg/mLよりも低い場合に、心血管死亡のリスクが高いと判定するものであることを特徴とする測定方法。
【請求項７】
VEGF-Cの濃度が2657 pg/mLよりも低い場合に、全死亡のリスクが高いと判定するものであることを特徴とする請求項５に記載の測定方法。
【請求項８】
VEGF-Cの濃度が2657 pg/mLよりも低い場合に、心血管死亡のリスクが高いと判定するものであることを特徴とする請求項６に記載の測定方法。
【請求項９】
疾患の致死性を識別するバイオマーカーであって、
そのバイオマーカーは被検者の血液試料中のVEGF-Cであり、
VEGF-Cの濃度が3544 pg/mLよりも低い場合に、前記疾患が致死性であることを特徴とするバイオマーカー。
【請求項１０】
前記疾患は、心筋梗塞又は脳卒中であることを特徴とする請求項９に記載のバイオマーカー。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、全死亡及び心血管死亡を予測するためのバイオマーカー、及び、血液試料中のVEGF-C濃度の測定方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
血管内皮増殖因子(VEGF)ファミリーとその内皮チロシンキナーゼ受容体は血管新生及びリンパ管新生において中心的役割を果たす。哺乳類のVEGFファミリーにはVEGF(あるいはVEGF-A)、胎盤由来増殖因子(PlGF)、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-Dの５つが存在する。VEGFがVEGF受容体2に結合することによって主要な血管新生シグナルが活性化される。VEGF受容体1は発生の段階では、血管新生の負の制御因子として働き、成体においてはPlGFとVEGF-Bの結合により、病的血管新生に関わる。VEGF-CとVEGF-DはVEGF受容体3に結合してリンパ管新生シグナルを活性化する(非特許文献１)。VEGF-CとVEGF-Dの２つのリンパ管新生因子の内、VEGF-Cは生理的リンパ管新生及び病的リンパ管新生のいずれにおいても中心的な役割を果たす(非特許文献２〜７)。
【０００３】
これまでのVEGF-Cに関する臨床研究は、主に悪性腫瘍の診断的可能性を追求したものであった。即ち、様々な腫瘍において、VEGF-Cの発現レベルと血中レベルはリンパ節転移、遠隔転移、予後不良と相関することが報告されてきた(非特許文献８，９)。
【０００４】
最近の基礎研究の結果、リンパ管が心血管病における治療標的となる可能性が示されつつある(非特許文献５，１０)。即ち、リンパ管はコレステロール逆転送系、リポ蛋白代謝、動脈硬化プラーク進展に重要な役割を果たす(非特許文献５，１０〜１４)。また、心筋梗塞後にVEGF-Cを投与することで、リンパ管新生が誘導され、組織液のうっ滞が減少し、心臓組織における炎症細胞の排出が促進され、心機能が改善する(非特許文献１５，１６)。
【０００５】
本発明者は、血中VEGF-Cレベルが、動脈硬化の原因かつ治療標的である、脂質異常と有意に相関することを報告した(非特許文献１７)。しかしながら、血中VEGF-Cレベルと心血管イベント及び死亡との関連は不明である。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Lohela M, Bry M, Tammela T, Alitalo K. VEGFs and receptors involved in angiogenesis versus lymphangiogenesis. Curr Opin Cell Biol. 2009;21:154-65.
【非特許文献２】Joukov V, Pajusola K, Kaipainen A, et al. A novel vascular endothelial growth factor, VEGF-C, is a ligand for the Flt4 (VEGFR-3) and KDR (VEGFR-2) receptor tyrosine kinases. EMBO J. 1996;15:290-8.
【非特許文献３】Yang Y, Oliver G. Development of the mammalian lymphatic vasculature. J Clin Invest. 2014;124:888-97.
【非特許文献４】Karaman S, Detmar M. Mechanisms of lymphatic metastasis. J Clin Invest. 2014;124:922-8.
【非特許文献５】Vuorio T, Tirronen A, Yla-Herttuala S. Cardiac Lymphatics - A New Avenue for Therapeutics Trends Endocrinol Metab. 2017;28:285-96.
【非特許文献６】Karkkainen MJ, Haiko P, Sainio K, et al. Vascular endothelial growth factor C is required for sprouting of the first lymphatic vessels from embryonic veins. Nat Immunol. 2004;5:74-80.
【非特許文献７】Jeltsch M, Kaipainen A, Joukov V, et al. Hyperplasia of lymphatic vessels in VEGF-C transgenic mice. Science. Science. 1997;276:1423-5.
【非特許文献８】Chen JC, Chang YW, Hong CC, Yu YH, Su JL. The role of the VEGF-C/VEGFRs axis in tumor progression and therapy. Int J Mol Sci. 2012;14:88-107.
【非特許文献９】Wang CA, Tsai SJ. The non-canonical role of vascular endothelial growth factor-C axis in cancer progression. Exp Biol Med (Maywood). 2015;240:718-24.
【非特許文献１０】Aspelund A, Robciuc MR, Karaman S, Makinen T, Alitalo K. Lymphatic System in Cardiovascular Medicine. Circ Res. 2016;118:515-30.
【非特許文献１１】Martel C, Li W, Fulp B, et al. Lymphatic vasculature mediates macrophage reverse cholesterol transport in mice. J. Clin. Invest. 2013;123,1571-9.
【非特許文献１２】Lim HY, Thiam CH, Yeo KP, et al. Lymphatic vessels are essential for the removal of cholesterol from peripheral tissues by SR-BI-mediated transport of HDL. Cell. Metab. 2013;17:671-84.
【非特許文献１３】Rader DJ, Alexander ET, Weibel GL, Billheimer J, Rothblat GH. The role of reverse cholesterol transport in animals and humans and relationship to atherosclerosis. J Lipid Res. 2009;50 Suppl:S189-94.
【非特許文献１４】Kutkut I, Meens MJ, McKee TA, Bochaton-Piallat ML, Kwak BR. Lymphatic vessels:  an emerging actor in atherosclerotic plaque development. Eur J Clin Invest. 2015;45:100-8.
【非特許文献１５】Henri O, Pouehe C, Houssari M, et al. Selective Stimulation of Cardiac Lymphangiogenesis Reduces Myocardial Edema and Fibrosis Leading to Improved Cardiac Function Following Myocardial Infarction. Circulation. 2016;133:1484-97.
【非特許文献１６】Klotz L, Norman S, Vieira JM, et al. Cardiac lymphatics are heterogeneous in origin and respond to injury. Nature. 2015;522:62-7.
【非特許文献１７】Wada H, Ura S, Kitaoka S, et al. Distinct characteristics of circulating vascular endothelial growth factor-A and C levels in human subjects. PLoS ONE. 2011;6:e29351.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、全死亡を予測するバイオマーカーを提供することを目的とする。また、本発明は、心血管死亡を予測するバイオマーカーを提供することを目的とする。本発明は、被検者から採取した血液試料中のVEGF-Cの濃度を測定し、全死亡のリスクを判定する測定方法を提供することを目的とする。本発明は、被検者から採取した血液試料中のVEGF-Cの濃度を測定し、心血管死亡のリスクを判定する測定方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明にかかるバイオマーカーは、全死亡を予測するためのバイオマーカーであって、そのバイオマーカーは被検者の血液試料中のVEGF-Cであり、VEGF-Cの濃度が3544 pg/mLよりも低い場合に、全死亡のリスクが高いことを特徴とする。
【０００９】
本発明にかかるバイオマーカーは、心血管死亡を予測するためのバイオマーカーであって、そのバイオマーカーは被検者の血液試料中のVEGF-Cであり、VEGF-Cの濃度が3544 pg/mLよりも低い場合に、心血管死亡のリスクが高いことを特徴とする。
【００１０】
本発明にかかる測定方法は、被検者から採取した血液試料中のVEGF-Cの濃度を測定する工程を含む、血液試料中のVEGF-C濃度を測定方法であって、その測定方法は、前記被検者の全死亡のリスクを判定するためのものであり、その判定は、VEGF-Cの濃度が3544 pg/mLよりも低い場合に、全死亡のリスクが高いと判定するものである。
【００１１】
本発明にかかる測定方法は、被検者から採取した血液試料中のVEGF-Cの濃度を測定する工程を含む、血液試料中のVEGF-C濃度を測定方法であって、その測定方法は、前記被検者の心血管死亡のリスクを判定するためのものであり、その判定は、VEGF-Cの濃度が3544 pg/mLよりも低い場合に、心血管死亡のリスクが高いと判定するものである。
【発明の効果】
【００１２】
本発明によれば、全死亡を予測でき、また心血管死亡を予測できる。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】VEGF-Cを中央値で２群に分けた場合の心血管死亡発症率についての生存曲線(カプランマイヤー曲線)である。
【図２】VEGF-Cを中央値で２群に分けた場合の全死亡発症率についての生存曲線(カプランマイヤー曲線)である。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
以下、添付の図面を参照して本発明の実施形態について具体的に説明するが、当該実施形態は本発明の原理の理解を容易にするためのものであり、本発明の範囲は、下記の実施形態に限られるものではなく、当業者が以下の実施形態の構成を適宜置換した他の実施形態も、本発明の範囲に含まれる。
【００１５】
本発明にかかるバイオマーカーは、被検者の血液試料中のVEGF-Cであり、全死亡を予測するためのバイオマーカーである。VEGF-Cの濃度が3544 pg/mLよりも低い場合に、全死亡のリスクが高いと予想できる。
【００１６】
全死亡とは、がん、脳卒中、心臓病その他全ての死亡の合計である。
【００１７】
VEGF-Cの濃度が2657 pg/mLよりも低い場合、全死亡のリスクが高いことをより確実に判定できる。
【００１８】
また、本発明にかかるバイオマーカーは、被検者の血液試料中のVEGF-Cであり、心血管死亡を予測するためのバイオマーカーである。VEGF-Cの濃度が3544 pg/mLよりも低い場合に、心血管死亡のリスクが高いと予想できる。
【００１９】
心血管死亡とは、心血管疾患に起因する死亡をいい、例えば、心臓死（致死性心筋梗塞、致死性心不全、心臓突然死等）、致死性脳卒中等が挙げられる。
【００２０】
VEGF-Cの濃度が2657 pg/mLよりも低い場合に、心血管死亡のリスクが高いことをより確実に判定できる。
【００２１】
本明細書において、全死亡のリスクとは、例えば、検査を行った日以降少なくとも1080日までの間に全死亡のイベントの発症を引き起こす可能性があるリスクを意味する。
【００２２】
本明細書において、心血管死亡のリスクとは、例えば、検査を行った日以降少なくとも1080日までの間に心血管死亡のイベントの発症を引き起こす可能性があるリスクを意味する。
【００２３】
血液試料は、VEGF-Cの濃度を測定できるものであれば特に制限はないが、例えば血清、血漿、全血であり、好ましくは血清である。被検者から血液試料を採取するタイミングは、特に制限されない。
【００２４】
また、本発明にかかる測定方法は、被検者から採取した血液試料中のVEGF-Cの濃度を測定する工程を含む、血液試料中のVEGF-C濃度を測定する方法であって、その測定方法は、被検者の全死亡のリスクを判定するためのものである。その判定は、VEGF-Cの濃度が3544 pg/mLよりも低い場合に、全死亡のリスクが高いと判定する。
【００２５】
VEGF-Cの濃度が2657 pg/mLよりも低い場合、全死亡のリスクが高いことをより確実に判定できる。
【００２６】
また、本発明にかかる測定方法は、被検者から採取した血液試料中のVEGF-Cの濃度を測定する工程を含む、血液試料中のVEGF-C濃度を測定する方法であって、その測定方法は、前記被検者の心血管死亡のリスクを判定するためのものである。その判定は、VEGF-Cの濃度が3544 pg/mLよりも低い場合に、心血管死亡のリスクが高いと判定する。
【００２７】
VEGF-Cの濃度が2657 pg/mLよりも低い場合に、心血管死亡のリスクが高いことをより確実に判定できる。
【００２８】
なお、被検者から採取した血液試料中の特定成分の有無・含有量を指標とした従来の検査方法と組み合わせたり、臨床症候の観察と心エコー、MRI、MRA、頚部血管エコー等の結果とを関連付けた複合指標を用いたりすることで、より的確に全死亡のリスク及び心血管死亡のリスクを予想することも可能である。
【００２９】
また、本発明にかかるバイオマーカーは、被検者の血液試料中のVEGF-Cであり、疾患が致死性であるか非致死性であるかを識別するバイオマーカーである。VEGF-Cの濃度が3544 pg/mLよりも低い場合に、その疾患が致死性であると予測できる。
【００３０】
判定される疾患は、例えば心筋梗塞又は脳卒中である。例えば被検者の血液中のVEGF-Cの濃度が3544 pg/mLよりも低い場合に、その被検者の心筋梗塞は致死性心筋梗塞であると予測できる。
【００３１】
本発明によれば、例えば、血清の血管内皮増殖因子Ｃ(VEGF-C)レベルが低い、冠動脈疾患疑い患者は、心血管死亡及び全死亡の発症率が有意に高いので、高リスク患者の抽出に有効である。高リスク患者には死亡につながる原因の全身スクリーニング、生活習慣改善、冠危険因子の管理の他、慢性腎臓病(CKD)や貧血の管理等を厳重に行なうことにより、死亡のリスクを低下させることができる。またVEGF-Cを標的とした新たな創薬の開発につながる可能性がある。
【実施例】
【００３２】
冠動脈疾患疑いで心臓カテーテル検査を受けた患者2,418名から同意を得て、血清VEGF-Cレベルを測定した。VEGF-Cレベルで四分位に分けて、3年間フォローアップした。本研究のVEGF-Cの値は表１の通りであった。全体の範囲は388〜13801 pg/mL, 25パーセンタイル値は2658 pg/mL, 中央値（50パーセンタイル値）は3544 pg/mLであった。
【００３３】
【表１】
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【００３４】
心血管死亡と全死亡に対するVEGF-Cのハザード比(HR)(95%信頼区間)を表２に示す。値は多変量Cox比例ハザード解析を用いて算出した。各モデルの調整因子は以下の通りである。
【００３５】
モデル1, 年齢, 性別
モデル2, 年齢, 性別, 脂質異常, 高血圧, 糖尿病, 現在喫煙
モデル3, 年齢, 性別, 脂質異常, 高血圧, 糖尿病, 現在喫煙, 肥満, 慢性腎臓病, 心血管イベントの既往
【００３６】
【表２】
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【００３７】
心血管死亡に対するVEGF-C 1-標準偏差増加あたりの無調整のハザード比(95%信頼区間)は0.55 (0.44-0.69)であった。即ち、VEGF-Cはその値が低いほど、心血管死亡のリスクは有意に上昇する。この関連は、年齢、性別で調整（モデル2）しても、更に心血管危険因子（脂質異常,高血圧,糖尿病,現在喫煙）（モデル3）,及び肥満,慢性腎臓病,心血管イベントの既往で調整（モデル4）しても有意であった。
【００３８】
カットオフ値を中央値とした場合、即ち、VEGF-Cが3544 pg/mL未満の場合の心血管死亡のハザード比(95%信頼区間)は、無調整で2.55 (1.60-4.06)、モデル１で2.05 (1.27-3.31)、モデル２で1.99 (1.24-3.21)、 モデル３で1.67 (1.04-2.70)であった。
【００３９】
カットオフ値を25パーセンタイルとした場合、即ちVEGF-Cが2658 pg/mL未満の場合の心血管死亡のハザード比(95%信頼区間)は、無調整で3.55 (2.32-5.42)、モデル１で3.05 (1.98-4.69)、モデル２で2.96 (1.92-4.56)、 モデル３で2.53 (1.64-3.90)であった。
【００４０】
つまり、VEGF-Cの中央値若しくは25パーセンタイル値をカットオフとしたいずれの場合でもVEGF-C低値は心血管死亡と独立した関連を示した。
【００４１】
全死亡においても同様にVEGF-C 1-標準偏差増加に対しても、中央値若しくは25パーセンタイル値をカットオフとした場合でもVEGF-C低値は全死亡と独立した関連を示した（表２）。
【００４２】
図１は、VEGF-Cを中央値で２群に分けた場合の心血管死亡発症率についての生存曲線(カプランマイヤー曲線)である。図２は、VEGF-Cを中央値で２群に分けた場合の全死亡発症率についての生存曲線(カプランマイヤー曲線)である。図１から、VEGF-Cの濃度が3544 pg/mLよりも低い場合、心血管死亡のリスクが高いことが示される。また、図２から、VEGF-Cの濃度が3544 pg/mLよりも低い場合、全死亡のリスクが高いことが示される。
【産業上の利用可能性】
【００４３】
全死亡及び心血管死亡の予測に利用できる。
【図１】
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【図２】
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