(57)【要約】      （修正有）【課題】呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）及び百日咳菌（Bordetella pertussis）による感染又はＲＳＶ及び百日咳菌に関連する疾患の予防又は処置のための、併用免疫原性組成物の提供。【解決手段】ＲＳＶ抗原と百日咳菌抗原とを含む併用免疫原性組成物であって、前記ＲＳＶ抗原が組換え可溶性Ｆタンパク質類似体であり、前記百日咳菌抗原が無細胞パータシス（Ｐａ）抗原又は全細胞（Ｐｗ）抗原を含む、併用免疫原性組成物。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも１つの呼吸器合胞体ウイルス（Respiratory Syncytial Virus）（ＲＳＶ）抗原と少なくとも１つの百日咳菌（Bordetella pertussis）抗原とを含む併用免疫原性組成物であって、前記少なくとも１つのＲＳＶ抗原が組換え可溶性Ｆタンパク質類似体であり、前記少なくとも１つの百日咳菌抗原が少なくとも１つの無細胞パータシス（Ｐａ）抗原を含む又は全細胞（Ｐｗ）抗原を含む、前記併用免疫原性組成物。
【請求項２】
前記Ｆタンパク質類似体が、Ｆタンパク質の融合前立体構造を安定させる少なくとも１つの修飾を含むＰｒｅＦ抗原である、請求項１に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項３】
前記Ｆタンパク質類似体が、Ｎ末端からＣ末端への方向に、ＲＳＶ  Ｆタンパク質ポリペプチドのＦ２ドメイン及びＦ１ドメイン、並びにヘテロ三量体化ドメインを含み、前記Ｆ２ドメインと前記Ｆ１ドメインの間にフーリン切断部位がない、請求項１又は２に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項４】
前記Ｆタンパク質類似体が、
（ｉ）グリコシル化を改変する修飾、
（ｉｉ）少なくとも１つの非フーリン切断部位を除去する修飾、
（ｉｉｉ）ｐｅｐ２７ドメインの１つ以上のアミノ酸を欠失させる修飾、及び
（ｉｖ）Ｆタンパク質細胞外ドメインの疎水性ドメインにおいて親水性アミノ酸を置換する又は付加する修飾
から選択される少なくとも１つの修飾を含む、請求項１から３のいずれか一項に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項５】
前記Ｆ２ドメインが、配列番号２の基準Ｆタンパク質前駆体ポリペプチド（Ｆ０）のアミノ酸２６〜１０５に対応するＲＳＶ  Ｆタンパク質ポリペプチドを含む、及び／又は前記Ｆ１ドメインが、配列番号２の基準Ｆタンパク質前駆体ポリペプチド（Ｆ０）のアミノ酸１３７〜５１６に対応するＲＳＶ  Ｆタンパク質ポリペプチドを含む、請求項３又は４に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項６】
前記Ｆタンパク質類似体が、
ｉ．配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１８、配列番号２０及び配列番号２２の群から選択されるポリペプチドを含むポリペプチド、
ｉｉ．配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１７、配列番号１９及び配列番号２１の群から選択されるポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチド、又は配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１７、配列番号１９及び配列番号２１の群から選択されるポリヌクレオチドにストリンジェントな条件下で実質的にその全長にわたってハイブリダイズするポリヌクレオチド配列によってコードされるポリペプチドであって、天然のＲＳＶ株に少なくとも一部は対応するアミノ酸配列を含む前記ポリペプチド、  ｉｉｉ．配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１８、配列番号２０及び配列番号２２の群から選択されるポリペプチドと少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチドであって、天然のＲＳＶ株に対応しないアミノ酸配列を含む前記ポリペプチドの群から選択される、請求項１に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項７】
前記Ｆタンパク質類似体が、ＲＳＶ  Ｆタンパク質ポリペプチドのＦ２ドメイン及びＦ１ドメインを含み、前記Ｆタンパク質ポリペプチドが、グリコシル化を改変する少なくとも１つの修飾を含む、請求項１に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項８】
前記Ｆタンパク質類似体が、
（ｉ）ヘテロ三量体化ドメインを含むアミノ酸配列の付加、
（ｉｉ）少なくとも１つのフーリン切断部位の欠失、
（ｉｉｉ）少なくとも１つの非フーリン切断部位の欠失、
（ｉｖ）ｐｅｐ２７ドメインの１つ以上のアミノ酸の欠失、及び
（ｖ）Ｆタンパク質細胞外ドメインの疎水性ドメインにおける親水性アミノ酸の少なくとも１つの置換又は付加
から選択される少なくとも１つの修飾を含む、請求項７に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項９】
グリコシル化を改変する前記少なくとも１つの修飾が、配列番号２の位置５００に対応するアミノ酸を含む及び／又は配列番号２の位置５００に対応するアミノ酸に隣接する、１つ以上のアミノ酸の置換を含む、請求項７又は８に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項１０】
配列番号２の位置５００〜５０２に対応するアミノ酸が、ＮＧＳ、ＮＫＳ、ＮＧＴ、ＮＫＴから選択される、請求項７から９のいずれか一項に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項１１】
グリコシル化を改変する前記修飾が、配列番号２の位置５００に対応するアミノ酸におけるグルタミンの置換を含む、請求項７から１０のいずれか一項に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項１２】
前記Ｆタンパク質類似体が、前記Ｆ２ドメインと前記Ｆ１ドメインの間にインタクト融合ペプチドを含む、請求項７から１１のいずれか一項に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項１３】
前記少なくとも１つの修飾が、ヘテロ三量体化ドメインを含むアミノ酸配列の付加を含む、請求項７から１２のいずれか一項に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項１４】
前記ヘテロ三量体化ドメインがＦ１ドメインのＣ末端に配置されている、請求項１３に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項１５】
Ｆ２ドメイン及びＦ１ドメインを含み、介在するフーリン切断部位がない、請求項７から１４のいずれか一項に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項１６】
前記Ｆタンパク質類似体が集合して多量体、例えば三量体になる、請求項７から１５のいずれか一項に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項１７】
前記Ｆ２ドメインが、配列番号２の基準Ｆタンパク質前駆体ポリペプチド（Ｆ０）のアミノ酸２６〜１０５に対応するＲＳＶ  Ｆタンパク質ポリペプチドの少なくとも一部分を含む、請求項７から１６のいずれか一項に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項１８】
前記Ｆ１ドメインが、配列番号２の基準Ｆタンパク質前駆体ポリペプチド（Ｆ０）のアミノ酸１３７〜５１６に対応するＲＳＶ  Ｆタンパク質ポリペプチドの少なくとも一部分を含む、請求項７から１７のいずれか一項に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項１９】
前記Ｆ２ドメインが、配列番号２の基準Ｆタンパク質前駆体ポリペプチド（Ｆ０）のアミノ酸２６〜１０５に対応するＲＳＶ  Ｆタンパク質ポリペプチドを含む、及び／又は前記Ｆ１ドメインが、配列番号２の基準Ｆタンパク質前駆体ポリペプチド（Ｆ０）のアミノ酸１３７〜５１６に対応するＲＳＶ  Ｆタンパク質ポリペプチドを含む、請求項７から１８のいずれか一項に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項２０】
前記Ｆタンパク質類似体が、
ｉ．配列番号２２を含むポリペプチド、
ｉｉ．配列番号２１によってコードされるポリペプチド、又は配列番号２１にストリンジェントな条件下で実質的にその全長にわたってハイブリダイズするポリヌクレオチド配列によってコードされるポリペプチド、
ｉｉｉ．配列番号２２と少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド
の群より選択される、請求項７から１９のいずれか一項に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項２１】
前記Ｆ２ドメインが、前記ＲＳＶ  Ｆタンパク質ポリペプチドのアミノ酸１〜１０５を含む、請求項７から２０のいずれか一項に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項２２】
前記Ｆ２ドメイン及び前記Ｆ１ドメインが、インタクト融合ペプチドと共に及び介在ｐｅｐ２７ドメインなしで配置されている、請求項７から２１のいずれか一項に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項２３】
前記ヘテロ三量体化ドメインがコイルドコイルドメインを含む、又はイソロイシンジッパーを含む、請求項８から２２のいずれか一項に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項２４】
前記イソロイシンジッパードメインが、配列番号１１のアミノ酸配列を含む、請求項２３に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項２５】
前記Ｆタンパク質類似体が、前記Ｆタンパク質細胞外ドメインの疎水性ドメインにおける親水性アミノ酸の少なくとも１つの置換又は付加を含む、請求項７から２４のいずれか一項に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項２６】
前記疎水性ドメインが前記Ｆタンパク質細胞外ドメインのＨＲＢコイルドコイルドメインである、請求項２５に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項２７】
前記ＨＲＢコイルドコイルドメインが、配列番号２の基準Ｆタンパク質前駆体（Ｆ０）のアミノ酸５１２に対応する位置において、中性残基に代わる荷電残基の置換を含む、請求項２６に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項２８】
前記ＨＲＢコイルドコイルドメインが、配列番号２の基準Ｆタンパク質前駆体（Ｆ０）のアミノ酸５１２に対応する位置において、ロイシンに代わるリジン又はグルタミンの置換を含む、請求項２７に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項２９】
前記疎水性ドメインが前記Ｆタンパク質細胞外ドメインのＨＲＡドメインである、請求項２５に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項３０】
前記ＨＲＡドメインが、配列番号２の基準Ｆタンパク質前駆体（Ｆ０）のアミノ酸１０５に対応する位置の次に荷電残基の付加を含む、請求項２９に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項３１】
前記ＨＲＡドメインが、配列番号２の基準Ｆタンパク質前駆体（Ｆ０）のアミノ酸１０５に対応する位置の次にリジンの付加を含む、請求項３０に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項３２】
前記Ｆタンパク質類似体が、前記Ｆタンパク質細胞外ドメインの前記ＨＲＡドメインにおける親水性アミノ酸の少なくとも第一の置換又は付加及び前記ＨＲＢドメインにおける親水性アミノ酸の少なくとも第二の置換又は付加を含む、請求項２５から３１のいずれか一項に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項３３】
前記Ｆタンパク質類似体が、天然のＦタンパク質前駆体（Ｆ０）中に存在するフーリン切断部位を除去する少なくとも１つのアミノ酸付加、欠失又は置換を含む、請求項７から３２のいずれか一項に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項３４】
前記Ｆタンパク質類似体が、配列番号２の基準Ｆタンパク質前駆体（Ｆ０）のアミノ酸１０５〜１０９に対応する位置、アミノ酸１３３〜１３６に対応する位置、又はアミノ酸１０５〜１０９に対応する位置とアミノ酸１３３〜１３６に対応する位置の両方におけるフーリン切断部位を除去するアミノ酸付加、欠失又は置換を含む、請求項３３に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項３５】
前記Ｆ１及びＦ２ポリペプチドドメインの配列がＲＳＶ  Ａ  Ｌｏｎｇ株に対応する、請求項７から３４のいずれか一項に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項３６】
前記少なくとも１つのＲＳＶ抗原がポリペプチドの多量体、例えば三量体を含む、請求項７から３５のいずれか一項に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項３７】
前記少なくとも１つのＰａ抗原が、パータシストキソイド（ＰＴ）、糸状赤血球凝集素（ＦＨＡ）、パータクチン（ＰＲＮ）、２型線毛（ＦＩＭ２）、３型線毛（ＦＩＭ３）及びＢｒｋＡからなる群より選択される、請求項１から３６のいずれか一項に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項３８】
前記ＰＴが化学的にトキソイド化されている（toxoided）か、又は遺伝的にトキソイド化、例えば突然変異Ｒ９Ｋ及びＥ１２９Ｇの一方若しくは両方によってトキソイド化されている、請求項３７に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項３９】
前記少なくとも１つのＰａ抗原が、ＰＴとＦＨＡとを、ＰＴとＦＨＡとＰＲＮとを、又はＰＴとＦＨＡとＰＲＮにＦＩＭ２及びＦＩＭ３のいずれか若しくは両方とを含む、請求項３７又は３８に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項４０】
ｉ．１０〜３０μｇ、例えば正確に又はおよそ２５μｇのＰＴ、
ｉｉ．１０〜３０μｇ、例えば正確に又はおよそ２５μｇのＦＨＡ
を含む、請求項３７から３９のいずれか一項に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項４１】
２〜１０μｇ、例えば正確に又はおよそ８μｇのＰＲＮをさらに含む、請求項４０に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項４２】
ｉ．１０〜３０μｇ、例えば正確に又はおよそ２０μｇのＰＴ、
ｉｉ．１０〜３０μｇ、例えば正確に又はおよそ２０μｇのＦＨＡ、
ｉｉｉ．２〜１０μｇ、例えば正確に又はおよそ３μｇのＰＲＮ、及び
ｉｖ．１〜１０μｇ、例えば正確に又はおよそ合計５μｇのＦＩＭ２とＦＩＭ３
を含む、請求項３７から３９のいずれか一項に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項４３】
ｉ．２〜１０μｇ、例えば正確に又はおよそ８μｇのＰＴ、
ｉｉ．２〜１０μｇ、例えば正確に又はおよそ８μｇのＦＨＡ、及び
ｉｉｉ．０．５〜４μｇ、例えば正確に又はおよそ２．５μｇのＰＲＮ
を含む、請求項３７から３９のいずれか一項に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項４４】
ｉ．２〜１０μｇ、例えば正確に又はおよそ２．５μｇのＰＴ、
ｉｉ．２〜１０μｇ、例えば正確に又はおよそ５μｇのＦＨＡ、
ｉｉｉ．０．５〜４μｇ、例えば正確に又はおよそ３μｇのＰＲＮ、及び
ｉｖ．１〜１０μｇ、例えば正確に又はおよそ合計５μｇのＦＩＭ２とＦＩＭ３
を含む、請求項３７から３９のいずれか一項に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項４５】
ｉ．２〜５μｇ、例えば正確に又はおよそ３．２μｇのＰＴ、
ｉｉ．２５〜４０μｇ、例えば正確に又はおよそ３４．４μｇのＦＨＡ、
ｉｉｉ．０．５〜３μｇ、例えば正確に又はおよそ１．６μｇのＰＲＮ、及び
ｉｖ．０．５〜１μｇ、例えば正確に又はおよそ０．８μｇのＦＩＭ２
を含む、請求項３７から３９のいずれか一項に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項４６】
ｉ．２〜１０μｇ、例えば正確に又はおよそ８μｇのＰＴ、
ｉｉ．１〜４μｇ、例えば正確に又はおよそ２．５μｇのＦＨＡ、及び
ｉｉｉ．１〜４μｇ、例えば正確に又はおよそ２．５μｇのＰＲＮ
を含む、請求項３７から３９のいずれか一項に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項４７】
前記少なくとも１つの百日咳菌抗原がＰｗ抗原を含む、請求項１から３６のいずれか一項に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項４８】
前記Ｐｗ抗原が低減された内毒素含有量を有する、請求項４７に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項４９】
前記低減された内毒素含有量が、リポオリゴ糖（ＬＯＳ）の化学的抽出によって達成される、又は内毒素産生の遺伝子操作によって、例えば、３−Ｏ−デアシラーゼの過発現若しくは異種発現を誘導するように内毒素産生を遺伝子操作することによって達成される、請求項４８に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項５０】
前記Ｐｗ抗原が、少なくとも部分的に３−Ｏ−脱アセチル化されたＬＯＳを含む百日咳菌細胞を含む、請求項４７から４９のいずれか一項に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項５１】
薬学的に許容される担体又は賦形剤をさらに含む、請求項１から５０のいずれか一項に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項５２】
前記担体又は賦形剤が緩衝剤を含む、請求項５１に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項５３】
少なくとも１つのアジュバントをさらに含む、請求項１から５２のいずれか一項に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項５４】
前記少なくとも１つのアジュバントが、アルミニウム塩、例えば水酸化アルミニウム又はリン酸アルミニウム、リン酸カルシウム、３Ｄ−ＭＰＬ、ＱＳ２１、ＣｐＧ含有オリゴデオキシヌクレオチドアジュバント、及び水中油型エマルションの群から選択される少なくとも１つのアジュバントを含む、請求項５３に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項５５】
前記少なくとも１つのアジュバントが水酸化アルミニウムを含む、請求項５３又は５４に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項５６】
前記少なくとも１つのアジュバントが水中油型エマルションを含む、請求項５３又は５４に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項５７】
前記水中油型エマルションがヒト１用量あたり５ｍｇ未満のスクアレンを含む、請求項５６に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項５８】
前記水中油型エマルションがトコールを含む、請求項５６又は５７に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項５９】
前記アジュバントが、新生児又は妊娠者への投与に適している、請求項５３に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項６０】
アジュバントを含まない、請求項１から５２のいずれか一項に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項６１】
ＲＳＶ及び百日咳菌以外の病原性生物からの少なくとも１つの抗原をさらに含む、請求項１から６０のいずれか一項に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項６２】
ジフテリアトキソイド（Ｄ）、破傷風トキソイド（Ｔ）、Ｂ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）、不活化ポリオウイルス（ＩＰＶ）、キャリアタンパク質とコンジュゲートしているインフルエンザ菌（H. influenzae）ｂ型（Ｈｉｂ）の莢膜糖類、キャリアタンパク質とコンジュゲートしている髄膜炎菌（N. meningitidis）Ｃ型の莢膜糖類、キャリアタンパク質とコンジュゲートしている髄膜炎菌Ｙ型の莢膜糖類、キャリアタンパク質とコンジュゲートしている髄膜炎菌Ａ型の莢膜糖類、キャリアタンパク質とコンジュゲートしている髄膜炎菌Ｗ型の莢膜糖類、及び髄膜炎菌Ｂ型からの抗原からなる群より選択される１つ以上の抗原を含む、請求項６１に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項６３】
ＤとＴ、ＤとＴとＩＰＶ、ＤとＴとＨＢｓＡｇ、ＤとＴとＨｉｂ、ＤとＴとＩＰＶとＨＢｓＡｇ、ＤとＴとＩＰＶとＨｉｂ、ＤとＴとＨＢｓＡｇとＨｉｂ、又はＤとＴとＩＰＶとＨＢｓＡｇとＨｉｂを含む、請求項６２に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項６４】
前記少なくとも１つのＲＳＶ抗原に加えて、
ｉ．２０〜３０μｇ、例えば正確に又はおよそ２５μｇのＰＴ、
ｉｉ．２０〜３０μｇ、例えば正確に又はおよそ２５μｇのＦＨＡ、
ｉｉｉ．１〜１０μｇ、例えば正確に又はおよそ３又は８μｇのＰＲＮ、
ｉｖ．１０〜３０Ｌｆ、例えば正確に又はおよそ１５又は２５ＬｆのＤ、及び
ｖ．１〜１５Ｌｆ、例えば正確に又はおよそ５又は１０ＬｆのＴ
を含む、請求項６２又は６３に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項６５】
前記少なくとも１つのＲＳＶ抗原に加えて、
ｉ．２〜１０μｇ、例えば正確に又はおよそ２．５又は８μｇのＰＴ、
ｉｉ．２〜１０μｇ、例えば正確に又はおよそ５又は８μｇのＦＨＡ、
ｉｉｉ．０．５〜４μｇ、例えば２〜３μｇ、例えば正確に又はおよそ２．５又は３μｇのＰＲＮ、
ｉｖ．１〜１０Ｌｆ、例えば正確に又はおよそ２又は２．５又は９ＬｆのＤ、及び
ｖ．１〜１５Ｌｆ、例えば正確に又はおよそ５又は１０ＬｆのＴ
を含む、請求項６２又は６３に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項６６】
前記少なくとも１つのＲＳＶ抗原が、Ｆタンパク質の融合前立体構造を安定させる少なくとも１つの修飾を含むＰｒｅＦ抗原を含む、請求項４０から４６、６４又は６５に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項６７】
アジュバントをさらに含まない、又は無機塩アジュバントをさらに含む、請求項６６に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項６８】
請求項１から６７のいずれか一項に記載の併用免疫原性組成物を対象に投与することを含む、ＲＳＶ及び百日咳菌に対する免疫応答を惹起する方法。
【請求項６９】
前記組成物の投与が、ＲＳＶとの接触後にウイルス性疾患を悪化させることなくＲＳＶに対して特異的な免疫応答を惹起する、請求項６８に記載の方法。
【請求項７０】
前記惹起される免疫応答が追加刺激応答である、請求項６８又は６９に記載の方法。
【請求項７１】
ＲＳＶ及び百日咳菌に対する前記免疫応答が、ＲＳＶ及び百日咳菌への感染の発生を低減若しくは予防する、若しくは感染の重症度を低減する、及び／又はＲＳＶ及び百日咳菌への感染後の病的応答の発生を低減若しくは予防する、若しくは病的応答の重症度を低減する、防御免疫応答を含む、請求項６９から７０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７２】
医薬に使用するための、請求項１から６７のいずれか一項に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項７３】
対象におけるＲＳＶ及び百日咳菌による感染又はＲＳＶ及び百日咳菌に関連する疾患の予防又は処置のための、請求項１から６７のいずれか一項に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項７４】
前記併用免疫原性組成物が、対象に単回用量レジメンとして投与される又は投与するためのものである、請求項６８から７１のいずれか一項に記載の方法又は請求項７２若しくは７３に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項７５】
前記対象が、哺乳動物、例えば、新生児、乳児、小児、青年、成人及び高齢者の群から選択されるヒトである、請求項６８から７１のいずれか一項に記載の方法又は請求項７３若しくは７４に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項７６】
前記対象が青年者であり、前記対象が１０〜１８歳の間であり、前記併用免疫原性組成物が１度だけ投与される又は投与するためのものである、請求項７５に記載の方法又は併用免疫原性組成物。
【請求項７７】
前記対象が妊婦でない、請求項６８から７１のいずれか一項に記載の方法又は請求項７２若しくは７３に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項７８】
前記対象が、場合によってはヒトの、在胎児を有する妊婦である、請求項６８から７１のいずれか一項に記載の方法又は請求項７２若しくは７３に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項７９】
前記併用免疫原性組成物が前記妊婦に妊娠１回につき１度だけ投与される又は投与するためのものである、請求項７８に記載の方法又は併用免疫原性組成物。
【請求項８０】
乳児をＲＳＶ及び百日咳菌によって引き起こされる感染又は疾患から防御するワクチン接種レジメンであって、
Ｆタンパク質類似体を含む組換えＲＳＶ抗原と少なくとも１つの百日咳菌抗原とを含む、ＲＳＶと百日咳菌の両方に特異的な体液性免疫応答を追加刺激することができる、少なくとも１つの免疫原性組成物を、在胎児を有する妊婦に投与することを含み、
前記少なくとも１つの免疫原性組成物によって前記妊婦において惹起された又は増加した、ＲＳＶ特異的抗体の少なくとも１つのサブセット及び百日咳菌特異的抗体の少なくとも１つのサブセットが、胎盤を介して前記在胎児に移行し、その結果、前記乳児がＲＳＶ及び百日咳菌によって引き起こされる感染又は疾患から防御される、前記ワクチン接種レジメン。
【請求項８１】
乳児をＲＳＶ及び百日咳菌によって引き起こされる感染又は疾患から防御する方法であって、
Ｆタンパク質類似体を含む組換えＲＳＶ抗原と少なくとも１つの百日咳菌抗原とを含む、ＲＳＶと百日咳菌の両方に特異的な体液性免疫応答を追加刺激することができる、少なくとも１つの免疫原性組成物を、在胎児を有する妊婦に投与することを含み、
前記少なくとも１つの免疫原性組成物によって前記妊婦において惹起された又は増加した、ＲＳＶ特異的抗体の少なくとも１つのサブセット及び百日咳菌特異的抗体の少なくとも１つのサブセットが、胎盤を介して前記在胎児に移行し、その結果、前記乳児がＲＳＶ及び百日咳菌によって引き起こされる感染又は疾患から防御される、前記方法。
【請求項８２】
ＲＳＶ及び百日咳菌によって引き起こされる感染又は疾患からの乳児の防御に使用するための、Ｆタンパク質類似体を含む組換えＲＳＶ抗原と少なくとも１つのパータシス抗原とを含む、１種の免疫原性組成物又は複数の免疫原性組成物であって、妊婦への投与用に製剤化されており、ＲＳＶと百日咳菌の両方に特異的な体液性免疫応答を追加刺激することができる免疫原性組成物であり、前記免疫原性組成物によって前記妊婦において追加刺激されたＲＳＶ特異的抗体の少なくとも１つのサブセット及び百日咳菌特異的抗体の少なくとも１つのサブセットが胎盤を介して在胎児に移行し、その結果、前記乳児がＲＳＶ及び百日咳菌によって引き起こされる感染又は疾患から防御される、上記免疫原性組成物。
【請求項８３】
Ｆタンパク質類似体を含む前記組換えＲＳＶ抗原と少なくとも１つの百日咳菌抗原とが、請求項１から６７のいずれか一項に記載した通りの併用免疫原性組成物である同じ免疫原性組成物に共製剤化される、請求項８０から８２のいずれか一項に記載のワクチン接種レジメン、方法又は使用。
【請求項８４】
前記免疫原性組成物が前記妊婦に妊娠１回につき１度だけ投与される、又は投与するためのものである、請求項８０から８３のいずれか一項に記載のワクチン接種レジメン、方法又は使用。
【請求項８５】
Ｆタンパク質類似体を含む前記組換えＲＳＶ抗原と少なくとも１つの百日咳菌抗原とが、２つの異なる免疫原性組成物に製剤化される、請求項８０から８２のいずれか一項に記載のワクチン接種レジメン、方法又は使用。
【請求項８６】
前記２つの異なる免疫原性組成物が同じ日に投与される（同時投与される）、請求項８５に記載のワクチン接種レジメン、方法又は使用。
【請求項８７】
前記２つの異なる免疫原性組成物が異なる日に投与される、請求項８５に記載のワクチン接種レジメン、方法又は使用。
【請求項８８】
前記Ｆタンパク質類似体が請求項１から３６のいずれか一項に記載した通りであり、前記少なくとも１つの百日咳菌抗原が請求項３７から５０のいずれか一項に記載した通りである、請求項８５から８７のいずれか一項に記載のワクチン接種レジメン、方法又は使用。
【請求項８９】
前記妊婦がヒトである、請求項８０から８８のいずれか一項に記載のワクチン接種レジメン、方法又は使用。
【請求項９０】
前記乳児が免疫学的に未成熟である、請求項８０から８９のいずれか一項に記載のワクチン接種レジメン、方法又は使用。
【請求項９１】
前記乳児が６月齢未満である、請求項８０から９０のいずれか一項に記載のワクチン接種レジメン、方法又は使用。
【請求項９２】
前記乳児が２月齢未満、例えば１月齢未満、例えば新生児である、請求項８０から９１のいずれか一項に記載のワクチン接種レジメン、方法又は使用。
【請求項９３】
前記胎盤を介して移行するＲＳＶ特異的抗体及び／又は百日咳特異的抗体の少なくとも１つのサブセットが、ＩｇＧ抗体、好ましくはＩｇＧ１抗体を含む、請求項８０から９２のいずれか一項に記載のワクチン接種レジメン、方法又は使用。
【請求項９４】
前記胎盤を介して移行するＲＳＶ特異的抗体の少なくとも１つのサブセットが中和抗体である、請求項８０から９３のいずれか一項に記載のワクチン接種レジメン、方法又は使用。
【請求項９５】
ＲＳＶ特異的抗体の前記少なくとも１つのサブセットが、出生時の乳児の血清中で３０μｇ／ｍＬ以上のレベルで検出可能である、請求項８０から９４のいずれか一項に記載のワクチン接種レジメン、方法又は使用。
【請求項９６】
百日咳特異的抗体の前記少なくとも１つのサブセットが、出生時の乳児の血清中で１０  ＥＬＩＳＡ単位／ｍｌ（ＥＵ）以上のレベルで検出可能である、請求項８０から９５のいずれか一項に記載のワクチン接種レジメン、方法又は使用。
【請求項９７】
前記乳児においてＲＳＶに対する能動免疫応答をプライミングする又は誘導する少なくとも１つの組成物を前記乳児に投与することをさらに含む、請求項８０から９６のいずれか一項に記載のワクチン接種レジメン、方法又は使用。
【請求項９８】
前記乳児において百日咳菌に対する能動免疫応答をプライミングする又は誘導する少なくとも１つの組成物を前記乳児に投与することをさらに含む、請求項８０から９７のいずれか一項に記載のワクチン接種レジメン、方法又は使用。
【請求項９９】
ＲＳＶに対する能動免疫応答をプライミングする又は誘導する少なくとも１つの組成物と百日咳菌に対する能動免疫応答をプライミングする又は誘導する少なくとも１つの組成物とを前記乳児に投与することを含む、請求項９７又は９８に記載のワクチン接種レジメン、方法又は使用。
【請求項１００】
ＲＳＶに対する能動免疫応答をプライミングする又は誘導する前記少なくとも１つの組成物と百日咳菌に対する能動免疫応答をプライミングする又は誘導する前記少なくとも１つの組成物とが同じ組成物である、請求項９９に記載のワクチン接種レジメン、方法又は使用。
【請求項１０１】
ＲＳＶに対する能動免疫応答をプライミングする又は誘導する前記少なくとも１つの組成物と百日咳菌に対する能動免疫応答をプライミングする又は誘導する前記少なくとも１つの組成物とが異なる組成物である、請求項９９に記載のワクチン接種レジメン、方法又は使用。
【請求項１０２】
前記異なる組成物が同じ又は異なる日に投与される、請求項１０１に記載のワクチン接種レジメン、方法又は使用。
【請求項１０３】
前記乳児に投与される少なくとも１つの組成物が、Ｆタンパク質類似体を含むＲＳＶ抗原を含む、請求項９７から１０１に記載のワクチン接種レジメン、方法又は使用。
【請求項１０４】
前記乳児に投与される少なくとも１つの組成物が、少なくとも１つのＲＳＶタンパク質抗原又は抗原類似体をコードする、核酸、組換えウイルスベクター又はウイルスレプリコン粒子を含む、請求項９７から１０２のいずれか一項に記載のワクチン接種レジメン、方法又は使用。
【請求項１０５】
前記少なくとも１つの免疫原性組成物が妊婦に妊娠２６週以降に投与される、請求項８０から１０４のいずれか一項に記載のワクチン接種レジメン、方法又は使用。
【請求項１０６】
前記妊婦が妊娠２６〜３８週の間、例えば妊娠２８〜３４週の間である、請求項８０から１０５のいずれか一項に記載のワクチン接種レジメン、方法又は使用。
【請求項１０７】
妊婦への投与用に製剤化された複数の免疫原性組成物を含むキットであって、
（ａ）ＲＳＶに特異的な体液性免疫応答を誘導、惹起又は追加刺激することができる、Ｆタンパク質類似体を含む第一の免疫原性組成物と、
（ｂ）百日咳菌に特異的な体液性応答を誘導、惹起又は追加刺激することができる、少なくとも１つの百日咳菌抗原を含む第二の免疫原性組成物と
を含み、
妊婦に投与すると、第一及び第二の免疫原性組成物がＲＳＶ特異的抗体の少なくとも１つのサブセット及び百日咳菌特異的抗体の少なくとも１つのサブセットを誘導、惹起又は追加刺激し、これらの抗体が胎盤を介して妊婦の在胎児に移行し、その結果、乳児がＲＳＶ及び百日咳菌によって引き起こされる感染又は疾患から防御される、前記キット。
【請求項１０８】
前記第一の免疫原性組成物のＦタンパク質類似体が請求項１から３６のいずれか一項に記載した通りである、請求項１０７に記載のキット。
【請求項１０９】
前記第二の免疫原性組成物の少なくとも１つの百日咳菌抗原が請求項３７から５０のいずれか一項に記載した通りである、請求項１０７又は１０８に記載のキット。
【請求項１１０】
前記キットの関連特徴が請求項８３から１０１のいずれか一項に記載のワクチンレジメン、方法又は使用について定義した通りである、請求項１０７から１０９のいずれか一項に記載のキット。
【請求項１１１】
前記第一の免疫原性組成物及び／又は前記第二の免疫原性組成物が少なくとも１本の充填済み注射器内にある、請求項１０７から１１０のいずれか一項に記載のキット。
【請求項１１２】
前記充填済み注射器が二室注射器である、請求項１１１に記載のキット。
【請求項１１３】
前記キットのそれぞれの組成物が前記妊婦に妊娠１回につき１度だけ投与するためのものである、請求項１０７から１１２のいずれか一項に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
背景
本開示は、免疫学の分野に関する。より詳細には、本開示は、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）及び百日咳菌（Bordetella pertussis）に特異的な免疫応答を惹起するための組成物及び方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ヒト呼吸器合胞体ウイルス（Human Respitatory Syncytial Virus）（ＲＳＶ）は、６ヶ月未満の乳児及び妊娠３５週以下の未熟児における下気道感染症（ＬＲＴＩ）の最も一般的な世界的な病因である。ＲＳＶ疾患のスペクトルには、鼻炎及び耳炎から肺炎及び細気管支炎までの幅広い呼吸器症状が含まれ、後の２つの疾患は、考慮すべき罹患率及び死亡率と関連している。ヒトのみがＲＳＶに感染することが知られている。汚染した鼻分泌物からのウイルスの広がりは多量の呼吸器液滴を介して生じるので、感染した個人又は汚染した表面との密接な接触が伝播には必要とされる。ＲＳＶは、おもちゃや他の物体上で数時間生き残り、そのことが、病院での、特に小児科病棟でのＲＳＶ感染の高い比率を説明している。
【０００３】
ＲＳＶに関して推定される世界の年間の感染及び死亡は、それぞれ６４００万人及び１６０，０００人であると概算される。米国のみでは、ＲＳＶは、年間１８，０００〜７５，０００人の入院と９０〜１９００人の死亡に関与していると概算される。温帯気候では、ＲＳＶは細気管支炎及び肺炎などの急性ＬＲＴＩの年々の冬期流行の原因として文書で十分に裏付けられている。米国では、ほぼ全員の小児が２歳までにＲＳＶに感染している。健常な小児におけるＲＳＶ関連のＬＲＴＩの発生率は、２歳までの１０００人の小児当たり３７人（６ヵ月未満の乳児１０００人当たり４５人）であると算出され、小児１０００人当たり６人に入院のリスクがあると算出された。発生は、心肺疾患を持つ子供及び未熟児で高く、彼らは、米国でのＲＳＶ関連での入院のほぼ半数を構成する。ＲＳＶが原因で生じるさらに重篤なＬＲＴＩを経験する小児は、後に小児喘息の高い発生を招くことになる。これらの研究は、重篤なＬＲＴＩ患者及びその後遺症を持つ患者を介護するコストが相当なものである先進国にてＲＳＶワクチン及びその使用の幅広いニーズを明らかにしている。ＲＳＶはまた高齢者におけるインフルエンザ様疾患の罹患率の重要な原因としてますます認識されている。
【０００４】
百日咳菌は、乳児及び若齢小児において重篤になり得る呼吸器疾患である百日咳の病原体である。ＷＨＯの推定は、２００８年に、世界中で百日咳の約１，６００万の症例が生じ、１９５，０００人の小児がこの疾患により死亡したと示唆する。数十年間にわたりワクチンが利用可能であり、世界のワクチン接種は、２００８年に約６８７，０００件の死亡を予防したと推定される（ＷＨＯ）。
【０００５】
この疾患の臨床経過は、速い咳の発作及びそれに続く吸気努力を特徴とし、しばしば、特徴的な「ぜいぜい」いう音を伴う。重度の症例において、酸素喪失が、脳損傷をもたらし得る。しかし、最も多い合併症は、続発性肺炎である。抗生物質による処置が利用できるが、疾患が診断された時点までに、細菌の毒素は、しばしば重度の損傷を引き起こしている。従って、この疾患の予防は、極めて重要であり、それ故、ワクチン接種の開発は、重要な関心事である。百日咳菌に対するワクチンの第一世代は、熱処理、ホルマリン若しくは他の手段によって殺傷された細菌全体で構成される全細胞ワクチンであった。これらは、１９５０年代及び１９６０年代に多くの国に導入され、百日咳の発生の低減に成功した。
【０００６】
全細胞百日咳菌ワクチンによる問題は、それらに関連する高レベルの反応原性である。この問題は、高度に精製された百日咳菌タンパク質（通常は少なくともパータシストキソイド（ＰＴ、その毒性を消すために化学的に処理されたか若しくは遺伝子改変されたパータシストキシン）及び糸状赤血球凝集素（ＦＨＡ）であって、しばしば、６９ｋＤタンパク質であるパータクチン（ＰＲＮ）と一緒であり、幾つかの場合において、２型及び３型の線毛（ＦＩＭ２及び３）をさらに含む）を含む無細胞パータシスワクチンの開発によって対処される。これらの無細胞ワクチンは、一般的に、全細胞ワクチンよりも反応原性がずっと低く、多くの国のワクチン接種プログラムに採用されている。しかしながら、ＵＳにおいて１９８０年代初期から百日咳の報告症例が全体的に増加傾向にあり（１９５５年以降のどの年よりも２０１２年においてより多くの症例が報告された）、近年では多くの国において大流行が広く報道されており、そのため無細胞ワクチンにより惹起された防御が、全細胞ワクチンにより付与された防御よりも持続性が低いと推論されている。そのような小児期免疫後の免疫の低下は、青年及び成人がこの高伝染性の疾患の保有宿主となりうることを意味する。これにより、２〜３カ月における小児ワクチン接種の開始前に、新生児には生後最初の数カ月に特定のリスクが生じる。
【０００７】
脆弱な新生児を防御するための戦略には、「家に閉じこもる（cocooning）」、すなわち新生児と接触する可能性のある青年及び成人（分娩後女性を含む）のワクチン接種が含まれるが、妊娠女性のワクチン接種（母体免疫）が現在数か国で推奨されており、それにより抗百日咳抗体が胎盤により移行して、乳児が直接ワクチン接種を受けるまで防御を提供する。新生児の出生時ワクチン接種もまた臨床試験で評価されている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
百日咳菌ワクチン接種は十分に確立しているが、健康な集団及びリスクのある集団において持続性の防御免疫応答を惹起する、安全且つ有効なＲＳＶワクチンを生産するための種々の試みにも拘らず、ＲＳＶ感染を予防する目的のため、及び／又はＲＳＶ疾患を低減するか若しくは予防する目的のためのワクチンとして、安全且つ有効であることが証明されたと評価された候補は、現在までに存在しない。従って、ＲＳＶ及び百日咳菌の両方の感染並びに新生児及び小さい乳児に特に危険を及ぼす関連疾患に対する防御を付与する併用（混合）ワクチンについての、満たされない需要が存在する。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
概要
本開示は、ＲＳＶ及び百日咳菌（本明細書中、「パータシス」と称することもある）の両方の感染及び／又は疾患に対して防御を惹起することができる併用免疫原性組成物（例えばワクチン）に関する。より具体的には、本開示は、ＲＳＶの組換えＦタンパク質類似体を百日咳菌無細胞（Ｐａ）又は全細胞（Ｐｗ）抗原と共に含む組成物、並びに、特に新生児及び母体免疫に関する、その使用に関する。また、少なくとも１つの免疫原性組成物中の組換えＲＳＶ  Ｆタンパク質類似体と百日咳菌抗原を妊婦に投与し、それによってＲＳＶ及び百日咳に対して防御的な母性抗体の胎盤を介した移行によって生後の新生児の防御を達成することによる、ＲＳＶ及び百日咳菌によって引き起こされる疾患から乳児を防御するためのワクチンレジメン、方法及び免疫原性組成物の使用を開示する。この少なくとも１つの免疫原性組成物は、本明細書に開示するようなＲＳＶ−百日咳菌混合組成物であってもよい。そのような母体免疫に有用なキットも開示する。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】図１Ａは、ＲＳＶ  Ｆタンパク質の構造的特徴を強調した概略図である。図１Ｂは、例示的なＲＳＶ融合前Ｆ（ＰｒｅＦ）抗原の概略図である。
【図２】図２は、実施例１において行ったモルモット実験についての研究設計を示す。
【図３】図３は、モルモット後代をＲＳＶによってチャレンジした後の、実施例１の結果を示す。
【図４】図４は、実施例１におけるモルモットモデルにおける中和抗体応答の時間経過を示す。
【図５】図５Ａ及びＢは、ＲＳＶ＋百日咳菌混合ワクチンによる免疫の後のＲＳＶチャレンジ感染に対する中和力価及び防御を示すグラフである（実施例２）。
【図６】図６Ａ及びＢは、ＲＳＶ＋百日咳菌混合ワクチンによる免疫の後の百日咳菌によるチャレンジに対する血清抗体力価及び防御を示すグラフである（実施例３）。
【図７】図７Ａ及びＢは、ＲＳＶでプライミングした雌親をＲＳＶ＋百日咳菌混合ワクチンで母体免疫した後のモルモットの雌親及び仔における中和力価を示すグラフである（実施例４）。
【図８】図８は、ＲＳＶでプライミングした雌親をＲＳＶ＋百日咳菌混合ワクチンで母体免疫した後のモルモットの仔のＲＳＶチャレンジ感染に対する防御を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
詳細な説明
序論
ＲＳＶ感染を防ぐワクチンの開発は、宿主の免疫応答が疾患の病態形成で役割を担うと思われるという事実によって複雑になっている。１９６０年代の初期の研究は、ホルマリンで不活化したＲＳＶワクチンを接種した小児は、接種しなかった対照の被験者に比べてウイルスへのその後の暴露に際してさらに重篤な疾患に罹ることを示した。これらの初期の試験は、ワクチン接種者の８０％の入院と２人の死亡を生じた。重症度が増した疾患は動物モデルで再現され、不適切なレベルの血清中和抗体、局所免疫の欠如、及び肺好酸球とＩＬ−４及びＩＬ−５サイトカインの高い産生による２型ヘルパーＴ細胞様（Ｔｈ２）の免疫応答の過剰な誘導の結果であると考えられる。それに対して、ＲＳＶ感染に対して防御する功を奏したワクチンは、ＩＬ−２及びγ−インターフェロン（ＩＦＮ）の産生を特徴とするＴｈ１に偏った免疫応答を誘導する。
【００１２】
ＲＳＶに対する許容ワクチンの以前の不在において、百日咳に対する免疫は十分に確立されているが、ＲＳＶ及び百日咳菌感染及び／又は疾患に対して防御を付与することができる併用ワクチンを研究する機会はなかった。これらの感染性因子が新生児及び幼い乳児（百日咳菌の場合、小児ワクチン接種スケジュールにより刺激される完全な防御がまだ構築される前）に最も有意なリスクをもたらし、また高齢者にも危険が存在するため、単回注射で両方のワクチンの送達を可能にする併用免疫原性組成物は、受容者の快適性、ワクチンスケジュールの順守、費用効率、並びに他のワクチンの免疫スケジュールの機会の確保の点で有利でありうる。
【００１３】
本開示は、ＲＳＶ及び百日咳菌の両方の感染又はそれに関連する疾患を防御する併用免疫原性組成物（例えばワクチン）、並びに、特にこれらの病原体に関して罹病及び死に関する最も高い発生率及び重篤度が見出されている集団である新生児及び幼い乳児の防御において、それを使用する方法に関する。このような層の防御は挑戦を提示する。幼い乳児、特に未熟児で生まれた乳児は、未成熟な免疫系を有し得る。非常に幼い乳児において、ワクチン接種による母性抗体の干渉の可能性もまた存在する。過去において、ＲＳＶに対する幼い乳児のワクチン接種によるＲＳＶ疾患の増大の問題、並びに、自然感染及び免疫によって惹起された免疫の漸減から生じるチャレンジの問題があった。百日咳菌抗原含有ワクチンによる母体免疫は、（母体免疫していない母親からの新生児と比較して）新生児において抗百日咳菌抗体力価を増大することが示されており（例えば、Gall et al (2011), Am J Obstet Gynecol, 204:334.e1-5、参照により本明細書に組み入れる）、このような母体免疫が数か国において現在推奨されている。開示された併用組成物を使用する開示の免疫方法に加えて、本開示はさらに、ＲＳＶ抗原と百日咳菌抗原の併用（開示のＲＳＶ−百日咳菌併用免疫原性組成物の使用を含む）で妊娠雌を免疫することにより、新生児及び幼い乳児を防御するための、ワクチンレジメン、方法及び免疫原性組成物の使用を記載する。これらの抗原は、好ましくは、胎盤を介して在胎児に移行する抗体を惹起し、生後並びにＲＳＶ及び百日咳菌によって引き起こされる感染及び重度の疾患の危険期を通じて続く、乳児の受動免疫防御をもたらす。
【００１４】
本開示の１つの態様は、少なくとも１つのＲＳＶ抗原と少なくとも１つの百日咳菌抗原とを含む併用免疫原性組成物であって、少なくとも１つの百日咳菌抗原が少なくとも１つの無細胞パータシス（Ｐａ）抗原を含む又は全細胞（Ｐｗ）抗原を含む、前記併用免疫原性組成物に関する。
【００１５】
特に、本開示は、少なくとも１つのＲＳＶ抗原が組換え可溶性Ｆタンパク質類似体である併用免疫原性組成物を提供する。融合後立体構造（「ＰｏｓｔＦ」）で安定化したＦ類似体又は立体構造に関して不安定なＦ類似体を用いることができる。Ｆタンパク質類似体は、Ｆタンパク質の融合前立体構造を安定させる少なくとも１つの修飾を含む融合前Ｆ、すなわち「ＰｒｅＦ」抗原であることが有利である。
【００１６】
特定の実施形態において、併用免疫原性組成物の少なくとも１つの百日咳菌抗原は、パータシストキソイド（ＰＴ）、糸状赤血球凝集素（ＦＨＡ）、パータクチン（ＰＲＮ）、２型線毛（ＦＩＭ２）及び３型線毛（ＦＩＭ３）からなる群より選択される少なくとも１つのＰａ抗原を含む。このようなＰａワクチンは当技術分野で周知である。
【００１７】
別の実施形態において、少なくとも１つの百日咳菌抗原はＰｗ抗原を含み、Ｐｗワクチンは当技術分野で周知である。本明細書において使用する「全細胞（Ｐｗ）抗原」という用語は、不活性化百日咳菌細胞（これは当然ながら、厳密には多数の異なる抗原を含む）を意味し、したがって、Ｐｗワクチンと同じである。
【００１８】
特定の実施形態において、開示される併用免疫原性組成物は、薬学的に許容される担体又は担体、例えばバッファー（緩衝剤）などを含む。追加的に又はあるいは、免疫原性組成物は、アジュバントを含んでもよく、アジュバントとしては、例えば３Ｄ−ＭＰＬ、ＱＳ２１（例えば無毒化形態）、水中油型エマルション（例えば、αトコフェロールなどの免疫刺激性分子を含む又は含まない）、無機塩、例えばアルミニウム塩（ミョウバン、リン酸アルミニウム、水酸化アルミニウムなど）及びリン酸カルシウム、あるいはこれらの組み合わせが挙げられる。
【００１９】
特定の実施形態において、開示される併用免疫原性組成物は、さらに、ＲＳＶ及び百日咳菌以外の少なくとも１つの病原性生物由来の少なくとも１つの抗原を含む。詳細には、この少なくとも１つの病原性生物は、ジフテリア菌（Corynebacterium diphtheriae）、クロストリジウム・テタニ（Clostridium tetani）、Ｂ型肝炎ウイルス、ポリオウイルス、インフルエンザ菌（Haemophilus influenzae）ｂ型、髄膜炎菌（N. meningitidis）Ｃ型、髄膜炎菌Ｙ型、髄膜炎菌Ａ型、髄膜炎菌Ｗ型、及び髄膜炎菌Ｂ型からなる群より選択され得る。
【００２０】
他の態様において、本開示は、ＲＳＶ及び百日咳菌感染／疾患の予防及び／又は処置のための開示された併用免疫原性組成物の使用に関する。したがって、本明細書には、免疫学的に有効な量の上記併用免疫原性組成物を対象に投与することを含む、ＲＳＶ及び百日咳菌に対する免疫応答を惹起する方法が開示される。
【００２１】
さらなる態様において、本開示は、医薬に使用するための、特に対象におけるＲＳＶ及び百日咳菌による感染又はＲＳＶ及び百日咳菌に関連する疾患の予防又は処置のための、開示された併用免疫原性組成物に関する。
【００２２】
別の態様において、本開示は、ＲＳＶ及び百日咳菌によって引き起こされる感染又は疾患から乳児を防御するためのワクチン接種レジメンに関し、このワクチン接種レジメンは、
ＲＳＶ及び百日咳菌の両方に特異的な体液性免疫応答を追加刺激（ブースト）することができる少なくとも１種の免疫原性組成物を、在胎児を有する妊婦に投与することを含み、この少なくとも１種の免疫原性組成物は、Ｆタンパク質類似体を含む組換えＲＳＶ抗原及び少なくとも１つの百日咳菌抗原を含み、
ここで、この少なくとも１種の免疫原性組成物によって妊婦において惹起された又は増大したＲＳＶ特異的抗体の少なくとも１つのサブセット及び百日咳菌特異的抗体の少なくとも１つのサブセットが、胎盤を介して在胎児に移行し、それによって、ＲＳＶ及び百日咳菌によって引き起こされる感染又は疾患から乳児が防御される。
【００２３】
一態様では、ＲＳＶ及び百日咳菌によって引き起こされる感染又は疾患から乳児を防御する方法を開示し、この方法は、
ＲＳＶ及び百日咳菌の両方に特異的な体液性免疫応答を追加刺激（ブースト）することができる少なくとも１種の免疫原性組成物を在胎児を有する妊婦に投与することを含み、少なくとも１種の免疫原性組成物は、Ｆタンパク質類似体を含む組換えＲＳＶ抗原及び少なくとも１つの百日咳菌抗原を含み、
この少なくとも１種の免疫原性組成物によって妊婦において惹起された又は増大したＲＳＶ特異的抗体の少なくとも１つのサブセット及び百日咳菌特異的抗体の少なくとも１つのサブセットは、胎盤を介して在胎児に移行し、それによって、この乳児がＲＳＶ及び百日咳菌によって引き起こされる感染又は疾患から防御される。
【００２４】
本開示の別の態様は、ＲＳＶ及び百日咳菌によって引き起こされる感染又は疾患からの乳児の防御に使用するための、Ｆタンパク質類似体を含む組換えＲＳＶ抗原及び少なくとも１つの百日咳菌抗原を含む１つ又は複数の免疫原性組成物に関し、この免疫原性組成物は、妊婦への投与のために製剤化され、この免疫原性組成物は、ＲＳＶ及び百日咳菌の両方に特異的な体液性免疫応答を追加刺激（ブースト）することができ、この免疫原性組成物によって妊婦において追加刺激されるＲＳＶ特異的抗体の少なくとも１つのサブセット及び百日咳菌特異的抗体の少なくとも１つのサブセットは、胎盤を介して在胎児に移行し、それによって、この乳児がＲＳＶ及び百日咳菌によって引き起こされる感染又は疾患から防御される。
【００２５】
別の態様において、妊婦への投与のために製剤化された複数の免疫原性組成物を含むキットを開示し、このキットは、
（ａ）ＲＳＶに特異的な体液性免疫応答を誘導する、惹起する又は追加刺激することができるＦタンパク質類似体を含む第１の免疫原性組成物、並びに
（ｂ）百日咳菌に特異的な体液性応答を誘導する、惹起する又は追加刺激することができる少なくとも１つの百日咳菌抗原を含む第２の免疫原性組成物
を含み、妊婦への投与の際、第１及び第２の免疫原性組成物は、ＲＳＶ特異的抗体の少なくとも１つのサブセット、及び百日咳菌特異的抗体の少なくとも１つのサブセットを、誘導する、惹起する又は追加刺激し、これらの抗体は、胎盤を介して妊婦の在胎児に移行し、それによってＲＳＶ及び百日咳菌によって引き起こされる感染又は疾患に対して乳児が防御される。
【００２６】
用語
本開示の種々の実施形態の検討を円滑にするために、以下に用語の説明を提供する。本開示の文脈で追加の用語及び説明を提供することもある。
【００２７】
特に説明されない限り、本明細書で使用される技術用語及び科学用語はすべて本開示が属する分野の当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有する。分子生物学での一般用語の定義は、Benjamin Lewin, Genes V, Oxford University Pressより出版, 1994 (ISBN 0-19-854287-9); Kendrew et al. (eds.), The Encyclopedia of Molecular Biology, Blackwell Science Ltd. より出版, 1994 (ISBN 0-632-02182-9); 及びRobert A. Meyers (ed.), Molecular Biology and Biotechnology: a Comprehensive Desk Reference, VCH Publishers, Inc.より出版, 1995 (ISBN 1-56081-569-8)に見い出すことができる。
【００２８】
単数用語「a」、「an」及び「the」は文脈が明瞭に示さない限り、複数の指示対象を含む。同様に、語「又は」は、文脈が明瞭に示さない限り、「及び」を含む。用語「複数の」は、２以上を指す。核酸又はポリペプチドに対して与えられる塩基のサイズ、アミノ酸のサイズはすべて、及び分子量又は分子質量はすべて近似であり、説明のために提供されることを理解されたい。さらに、抗原のような物質の濃度又はレベルに関して与えられる数値限定は近似であることが意図される。従って、濃度が少なくとも（たとえば）２００ｐｇであると示される場合、濃度は少なくともおよそ（又は「約」又は「〜」）２００ｐｇであると理解される。
【００２９】
本明細書で記載されるものに類似の又は均等の方法及び物質が本開示の実施又は試験で使用され得るが、好適な方法及び物質は以下に記載される。用語「comprises」は「includes」を意味する。従って、文脈が必要としない限り、用語「comprises」及びその変形「comprise」及び「comprising」は、言及された化合物若しくは組成物（たとえば、核酸、ポリペプチド、抗原）若しくは工程、又は化合物若しくは工程の群の包含を暗示するように理解されるが、他の化合物、組成物、工程、又はそれらの群の排除を暗示しないように理解される。略記「e.g.」はラテン語のexempli gratiaに由来し、本明細書では非限定例を指すように使用される。従って、略記「e.g.」は用語「たとえば」と同義である。
【００３０】
用語「Ｆタンパク質」又は「融合タンパク質」又は「Ｆタンパク質ポリペプチド」又は「融合タンパク質ポリペプチド」は、ＲＳＶの融合タンパク質ポリペプチドのアミノ酸配列の全部又は一部を有するポリペプチド又はタンパク質を指す。多数のＲＳＶの融合タンパク質が記載されており、当業者に公知である。ＷＯ２００８／１１４１４９は、例示的なＦタンパク質の変異体（たとえば、天然に存在する変異体）を示している。
【００３１】
「Ｆタンパク質類似体」とは、Ｆタンパク質の構造又は機能を改変する修飾を含んでいるが、Ｆタンパク質の免疫学的性質を保持しており、その結果、Ｆタンパク質類似体に対して生起された免疫応答が天然Ｆタンパク質を認識することになるようなＦタンパク質を指す。ＷＯ２０１０／１４９７４５（参照によりその全文を本明細書に組み入れる）は、例示的なＦタンパク質類似体を示している。ＷＯ２０１１／００８９７４（参照によりその全文を本明細書に組み入れる）もまた例示的なＦタンパク質類似体を示している。Ｆタンパク質類似体としては、例えばＦタンパク質の融合前立体構造を安定化させる少なくとも１つの修飾を含み、一般的には可溶性の（すなわち膜に結合しない）ＰｒｅＦ抗原が挙げられる。Ｆタンパク質類似体としてはまた、ＲＳＶ  Ｆタンパク質の融合後立体構造をとる融合後Ｆ（ｐｏｓｔＦ）抗原、好ましくはそのような立体構造で安定化されたものが挙げられる。Ｆ類似体としてはさらに、中間の立体構造をとるＦタンパク質、好ましくはそのような立体構造で安定化されたものが挙げられる。このような代替物もまた一般的に可溶性である。
【００３２】
核酸又はポリペプチド（たとえば、ＲＳＶのＦ又はＧタンパク質の核酸又はポリペプチド、あるいはＦ類似体核酸又はポリペプチド）を指す場合の「変異体」は、参照の核酸又はポリペプチドとは異なる核酸又はポリペプチドである。通常、変異体と参照の核酸又はポリペプチドとの間の差異は、該参照に比べて比率的に少数の差異を構成する。
【００３３】
ポリペプチド又はタンパク質の「ドメイン」は、ポリペプチド又はタンパク質の中で構造的に定義された要素である。たとえば、「三量体化ドメイン」は、ポリペプチドの三量体への集合を促進するポリペプチド内のアミノ酸配列である。たとえば、三量体化ドメインは他の三量体化ドメイン（同一の又は異なるアミノ酸配列を持つ追加のポリペプチドのもの）との会合を介して三量体への集合を促進することができる。この用語は、そのようなペプチド又はポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを指すのにも使用される。
【００３４】
用語「天然の」及び「天然に存在する」は、天然のままと同一状態で存在する、たとえばタンパク質、ポリペプチド、又は核酸のような要素を指す。すなわち、要素は人工的に修飾されていない。この開示の文脈で、たとえば、ＲＳＶの天然に存在する株又は分離株から得られるような、ＲＳＶタンパク質又はポリペプチドの多数の天然の／天然に存在する変異体があることが理解されるであろう。ＷＯ２００８１１４１４９（参照によりその全文が本明細書に組み入れられる）は、例示的なＲＳＶ株、タンパク質及びポリペプチドを含んでおり、例えば図４を参照されたい。
【００３５】
用語「ポリペプチド」は、モノマーがアミド結合を介して互いに連結されるアミノ酸残基であるポリマーを指す。用語「ポリペプチド」又は「タンパク質」は本明細書で使用されるとき、アミノ酸配列を包含し、糖タンパク質のような修飾された配列を含むことが意図される。用語「ポリペプチド」は特に、組換え的に又は合成的に製造されるものと同様に天然に存在するタンパク質を包含することが意図される。用語「断片」は、ポリペプチドに関して、ポリペプチドの一部（すなわち、部分配列）を指す。用語「免疫原性断片」は、完全長の参照のタンパク質又はポリペプチドの少なくとも１つの優勢な免疫原性エピトープを保持するポリペプチドのあらゆる断片を指す。ポリペプチド内の方向は、個々のアミノ酸のアミノ部分とカルボキシ部分の方向によって定義される、Ｎ末端からＣ末端方向に向かうものとして一般に言及される。ポリペプチドは、Ｎ末端又はアミノ末端からＣ末端又はカルボキシ末端に向かって翻訳される。
【００３６】
「シグナルペプチド」は、新しく合成された分泌タンパク質又は膜タンパク質を、膜、たとえば小胞体の膜へと及びそれを通過することを指示する短いアミノ酸配列（たとえば、およそ１８〜２５アミノ酸の長さ）である。シグナルペプチドはポリペプチドのＮ末端に位置することが多いが、普遍的ではなく、タンパク質が膜を通過した後、シグナルペプチダーゼによって切断されることが多い。シグナル配列は通常、３つの一般的な特徴：Ｎ末端の極性塩基性領域（ｎ−領域）、疎水性コア及び親水性ｃ−領域を含有する。
【００３７】
用語「ポリヌクレオチド」及び「核酸配列」は、少なくとも１０塩基の長さのヌクレオチドのポリマー形態を指す。ヌクレオチドは、リボヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチド又はいずれかのヌクレオチドの修飾された形態であり得る。該用語は、ＤＮＡの一本鎖形態及び二本鎖形態を含む。「単離されたポリヌクレオチド」とは、それが由来する生物の天然に存在するゲノムにおいて直接隣接する（一方は５’末端で一方は３’末端）コード配列の双方と直接隣接しないポリヌクレオチドを意味する。一実施形態では、ポリヌクレオチドはポリペプチドをコードする。核酸の５’及び３’の方向は、個々のヌクレオチド単位の接続性を参照して定義され、デオキシリボース（又はリボース）糖環の炭素部分に従って指定される。ポリヌクレオチド配列の情報（コード）内容は５’から３’の方向で読み取られる。
【００３８】
「組換え」核酸は、天然に存在しない配列を有し、又は配列の２つの分離した断片の人工的な組み合わせによって作製された配列を有するものである。この人工的な組み合わせは、化学的な合成によって、又は、さらに一般的には、たとえば、遺伝子操作技法による核酸の単離された断片の人工的な操作によって達成することができる。「組換え」タンパク質は、たとえば、細菌細胞又は真核細胞のような宿主細胞に導入された異種（たとえば、組換え）の核酸によってコードされるものである。核酸は、導入された核酸によってコードされるタンパク質を発現することが可能であるシグナルを有する発現ベクターに導入することができ、又は核酸は宿主細胞の染色体に組み込むことができる。
【００３９】
用語「異種の（ヘテロ）」は、核酸、ポリペプチド又は別の細胞成分に関して、通常天然に見出されない場合、及び／又は異なる供給源若しくは種を起源とする成分が存在することを示す。
【００４０】
用語「精製」（たとえば、病原体又は病原体を含有する組成物に関して）は、望ましくない存在を組成物から取り除く工程を指す。精製は相対的な用語であり、微量な望ましくない成分のすべてが組成物から取り除かれることを必要としない。ワクチン生産の文脈では、精製は、たとえば、遠心、透析、イオン交換クロマトグラフィ、及びサイズ排除クロマトグラフィ、アフィニティ精製又は沈殿のようなプロセスを含む。従って、用語「精製された」は、絶対的な純度を必要とせず、むしろ、それは相対的な用語として意図される。従って、たとえば、精製された核酸又はタンパク質の調製物は、一般的な環境、たとえば、細胞内又は生化学的な反応器における核酸又はタンパク質よりも特定の核酸又はタンパク質が濃縮されるものである。実質的に純粋な核酸又はタンパク質の調製物は、所望の核酸が、調製物の全核酸含量の少なくとも５０％を表すように精製することができる。特定の実施形態では、実質的に純粋な核酸又はタンパク質は、調製物の全核酸又はタンパク質含量の少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％以上を表す。
【００４１】
「単離された」生物構成成分（たとえば、核酸分子、タンパク質又は細胞小器官）は、構成成分、たとえば、そのほかの染色体の及び染色体外のＤＮＡ及びＲＮＡ、タンパク質及び細胞小器官が天然に存在する生物の細胞におけるそのほかの生物構成成分から実質的に分離され、又は精製されている。「単離された」核酸及びタンパク質は、標準の精製方法によって精製された核酸及びタンパク質を含む。該用語はまた、宿主細胞における組換え発現によって調製される核酸及びタンパク質、並びに化学的に合成される核酸及びタンパク質も包含する。
【００４２】
「抗原」は、対象に注射される、吸収される又はさもなければ導入される組成物を含む、対象にて抗体の産生及び／又はＴ細胞反応を刺激することができる化合物、組成物又は物質である。用語「抗原」は、関連する抗原性エピトープすべてを含む。用語「エピトープ」又は「抗原決定基」は、Ｂ細胞及び／又はＴ細胞が応答する抗原の部位を指す。「優勢な抗原性エピトープ」又は「優勢なエピトープ」は、それに対して機能的に有意な宿主の免疫応答、たとえば、抗体反応又はＴ細胞反応が為されるエピトープである。従って、病原体に対する防御免疫応答に関して、優勢な抗原性エピトープは、宿主の免疫系によって認識されると病原体が原因で生じる疾患からの防御を生じる抗原性部分である。用語「Ｔ細胞エピトープ」は、適切なＭＨＣ分子に結合すると、Ｔ細胞によって（Ｔ細胞受容体を介して）特異的に結合されるエピトープを指す。「Ｂ細胞エピトープ」は、抗体（又はＢ細胞受容体分子）によって特異的に結合されるエピトープである。
【００４３】
「アジュバント」は、非抗原特異的に免疫応答の産生を高める物質である。一般的なアジュバントには、抗原が吸着した鉱物（ミョウバン、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム）の懸濁液；油中水型及び水中油型（及びその変異体、二重エマルション及びリバーシブルエマルションを含む）を含むエマルション、リポ糖、リポ多糖、免疫刺激性核酸（たとえば、ＣｐＧオリゴヌクレオチド）、リポソーム、Ｔｏｌｌ様受容体作動薬（特に、ＴＬＰ２、ＴＬＲ４、ＴＬＲ７／８、及びＴＬＲ９作動薬）、並びにそのような成分の種々の組み合わせが挙げられる。
【００４４】
「抗体」又は「免疫グロブリン」は、抗原に特異的に結合する４つのポリペプチドから構成される血漿タンパク質である。抗体分子は、ジスルフィド結合によって互いに保持される２つの重鎖ポリペプチド及び２つの軽鎖ポリペプチド（又はそれらの複数）から構成される。ヒトでは、抗体は、５つのアイソタイプ又はクラス、すなわちＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ及びＩｇＥに定義され、ＩｇＧ抗体はさらに４つのサブクラス（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４）に分けることができる。「中和」抗体は、ウイルスの感染性を阻害することができる抗体である。例えば、ＲＳＶに特異的な中和抗体は、ＲＳＶの感染性を阻害又は低下させることができる。
【００４５】
「免疫原性組成物」は、たとえば、ＲＳＶ又は百日咳菌のような病原体に対して、特異的な免疫応答を惹起することが可能である、ヒト又は動物対象（たとえば、実験又は臨床設定で）に投与するのに好適な組成物である。そのようなものとして、免疫原性組成物は、１以上の抗原（たとえば、ポリペプチド抗原）又は抗原性エピトープを含む。免疫原性組成物はまた、たとえば、賦形剤、担体及び／又はアジュバントのような、免疫応答を惹起する又は高めることが可能である追加の１以上の成分を含むことができる。特定の例では、免疫原性組成物を投与して、病原体によって誘導される症状又は状態に対して対象を防御する免疫応答を惹起する。場合によっては、病原体により引き起こされる症状又は疾患は、病原体（例えばＲＳＶ又は百日咳菌）に対する対象の曝露に続く病原体の複製を阻害することによって防がれる（又は低減される若しくは改善される）。本開示の文脈では、用語、免疫原性組成物は、ＲＳＶ及び／又は百日咳菌に対する防御的又は緩和的な免疫応答を惹起する目的で対象又は対象の集団への投与を意図される組成物（すなわち、ワクチン組成物又はワクチン）を包含することが理解されるであろう。本明細書において「併用免疫原性組成物」を使用する場合、これは、参照として、ＲＳＶ及び百日咳菌抗原の両方を含む本明細書に開示の免疫原性組成物（ＲＳＶ抗原を含むが百日咳菌抗原を含まない又はその逆の免疫原性組成物とは対照的である）を具体的に意図すると考えられる。
【００４６】
「免疫応答」は、免疫系の細胞、たとえば、Ｂ細胞、Ｔ細胞、又は単球の、病原体又は抗原（免疫原性組成物又はワクチンとして製剤化されている）などの刺激に対する応答である。免疫応答は、抗原特異的な中和抗体のような特異的抗体の産生を生じるＢ細胞の応答であることができる。免疫応答は、たとえば、ＣＤ４＋応答又はＣＤ８＋応答のようなＴ細胞の応答であることもできる。Ｂ細胞及びＴ細胞応答は、「細胞性」免疫応答の態様である。免疫応答はまた、抗体により媒介される「体液性」免疫応答であってもよい。場合によっては、応答は特定の抗原に特異的である（すなわち、「抗原特異的応答」）。抗原が病原体に由来するのであれば、抗原特異的応答は、「病原体特異的応答」である。「防御免疫応答」は、病原体の有害な機能又は活性を抑え、病原体による感染を低減し、あるいは病原体による感染の結果生じる症状（死亡を含む）を低減する免疫応答である。防御免疫応答は、たとえば、プラーク低減アッセイ若しくはＥＬＩＳＡ中和アッセイにおけるウイルス複製若しくはプラーク形成の阻害によって、又は生体内での病原体チャレンジに対する耐性を測定することによって測定することができる。免疫原性刺激、例えば病原体又は抗原（例えば免疫原性組成物又はワクチンとして製剤化されたもの）への対象の曝露は、該刺激に特異的な一次免疫応答を惹起し、すなわちその曝露が免疫応答を「プライミング」する。その後の該刺激に対する曝露、例えば免疫による曝露は、その特異的免疫応答の程度（若しくは持続期間、又は両方）を増大、すなわち「追加刺激（ブースト）」することができる。したがって、免疫原性組成物の投与による既に存在する免疫応答の「追加刺激（ブースト）」は、抗原（又は病原体）特異的応答の程度を増大する（例えば、抗体力価及び／又はアフィニティの増大により、抗原特異的Ｂ又はＴ細胞の頻度の増大により、成熟エフェクター機能の誘導により、あるいはこれらの任意の組み合わせにより）。
【００４７】
「Ｔｈ１」に偏った免疫応答は、ＩＬ−２及びＩＦＮ−γを産生するのでＩＬ−２及びＩＦＮ−γの分泌又は存在によるＣＤ４＋Ｔヘルパー細胞の存在を特徴とする。それに対して、「Ｔｈ２」に偏った免疫応答は、ＩＬ−４、ＩＬ−５及びＩＬ−１３を産生するＣＤ４＋ヘルパー細胞の優勢を特徴とする。
【００４８】
「免疫学的に有効な量」は、組成物又は組成物中の抗原に対して対象にて免疫応答を惹起するのに使用される組成物（通常、免疫原性組成物）の量である。一般に、所望の結果は、病原体に対して対象を防御することが可能である又はそれに寄与する抗原特異的（たとえば、病原体特異的）免疫応答の産生である。しかしながら、病原体に対する防御免疫応答を得ることは、免疫原性組成物の複数の投与を必要とし得る。従って、本開示の文脈では、用語、免疫学的に有効な量は、前の又は後に続く投与との組み合わせで防御免疫応答を達成することに寄与する部分用量を包含する。
【００４９】
形容詞「薬学的に許容される」は、指示対象が対象（たとえば、ヒト又は動物対象）への投与に好適であることを指す。Remington’s Pharmaceutical Sciences, E. W. Martin, Mack Publishing Co., Easton, PA, 15th Edition (1975)は、免疫原性組成物を含む、治療用及び／又は予防用の組成物の薬学送達に好適な組成物及び製剤（希釈剤を含む）を記載している。
【００５０】
用語「調節する」は、免疫応答のような応答に関して、応答の発生、程度、持続期間又は特徴を変える又は変化させることを意味する。免疫応答を調節する剤は、その投与に続く免疫応答の発生、程度、持続期間又は特徴の少なくとも１つを変える、あるいは参照剤に比べて発生、程度、持続期間又は特徴の少なくとも１つを変える。
【００５１】
用語「低減（軽減、低下）する」は、剤の投与に続いて応答又は状態が定量的に低下する場合、又は参照剤に比べて剤の投与に続いてそれが低下する場合、剤が応答又は状態を低減するように、相対的な用語である。同様に用語「防御する」は、応答又は状態の少なくとも１つの特徴が実質的に又は有意に低減又は除去される限り、剤が感染のリスク又は感染によって生じる疾患のリスクを完全に除去することを必ずしも意味しない。従って、感染又は疾患若しくはその症候を防御する又は低減する免疫原性組成物は、感染の発生若しくは重篤度又は疾患の発生若しくは重篤度が、剤の非存在下での又は参照剤と比べた感染又は応答の、たとえば、少なくとも約５０％、又は少なくとも約６０％、又は少なくとも約７０％、又は少なくとも約８０％、又は少なくとも約９０％測定上低下する限り、すべての対象における感染又は疾患を防御又は除去することができるが、必ずしもそうでなくてもよい。
【００５２】
「対象」は、生きている多細胞の脊椎生物、例えば哺乳動物である。本開示の文脈では、対象は、たとえば、非ヒト動物、たとえば、マウス、コットンラット、モルモット、ウシ又は非ヒト霊長類のような実験用対象であり得る。或いは、対象はヒト対象であり得る。
【００５３】
ＲＳＶ  Ｆタンパク質類似体
特定の実施形態において、Ｆタンパク質類似体は、Ｆタンパク質の融合前立体構造を安定化させる少なくとも１つの修飾を含む、融合前Ｆ又は「ＰｒｅＦ」抗原である。あるいは、融合後立体構造（「ＰｏｓｔＦ」）において安定化されたＦ類似体、又は立体構造に関して不安定であるＦ類似体を使用してもよい。一般的に、Ｆタンパク質類似体（例えば、ＰｒｅＦ、ＰｏｓｔＦなど）抗原は、膜貫通ドメインを欠き、可溶性であり、すなわち、（例えば、Ｆタンパク質類似体の発現及び精製を容易にするために）膜結合していない。
【００５４】
当該分野で広く受け入れられている用語及び指示を参照してＲＳＶ  Ｆタンパク質の構造の詳細を本明細書で提供し、図１Ａに模式的に示す。ＰｒｅＦ抗原の例の概略図を図１Ｂに提供する。
【００５５】
例示的な実施形態において、Ｆタンパク質類似体は、Ｎ末端からＣ末端の方向で、ＲＳＶ  Ｆタンパク質ポリペプチドのＦ２ドメイン及びＦ１ドメインの少なくとも一部分若しくは実質的に全てを、必要に応じてヘテロ三量体化ドメインと共に含む。１つの実施形態において、Ｆ２ドメインとＦ１ドメインとの間にフーリン切断部位はない。特定の例示的実施形態において、Ｆ２ドメインは、配列番号２の参照Ｆタンパク質前駆体ポリペプチド（Ｆ０）のアミノ酸２６〜１０５に対応するＲＳＶ  Ｆタンパク質ポリペプチドの少なくとも一部分を含み、及び／又はＦ１ドメインは、配列番号２の参照Ｆタンパク質前駆体ポリペプチド（Ｆ０）のアミノ酸１３７〜５１６に対応するＲＳＶ  Ｆタンパク質ポリペプチドの少なくとも一部分を含む。
【００５６】
例えば、特定の実施形態において、Ｆタンパク質類似体は、以下の群から選択される：ａ）  配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１８、配列番号２０及び配列番号２２の群から選択されるポリペプチドを含むポリペプチド、
ｂ）  配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１７、配列番号１９及び配列番号２１の群から選択されるポリヌクレオチドによって、又は配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１７、配列番号１９及び配列番号２１の群から選択されるポリヌクレオチドに実質的にその全長にわたってストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチド配列によってコードされ、天然に存在するＲＳＶ株に少なくとも部分的に対応するアミノ酸配列を含むポリペプチド、
ｃ）  配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１８、配列番号２０及び配列番号２２の群から選択されるポリペプチドに対し少なくとも９５％の配列同一性を有し、天然に存在するＲＳＶ株に対応しないアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【００５７】
必要に応じて、Ｆタンパク質類似体は、シグナルペプチドをさらに含んでもよい。必要に応じて、Ｆタンパク質類似体は、「タグ」若しくは精製を容易にする配列、例えば、多ヒスチジン配列を、さらに含んでもよい。
【００５８】
ヘテロ三量体化ドメインを含む実施形態において、このようなドメインは、コイルドコイルドメイン、例えばイソロイシンジッパーを含んでもよく、又は、別の三量体化ドメイン、例えば、バクテリオファージＴ４フィブリチン（fibritin）（「フォルドン（foldon）」）若しくはインフルエンザＨＡに由来するものを含んでもよい。
【００５９】
特定の例示的実施形態において、Ｆタンパク質類似体は、以下から選択される少なくとも１つの修飾を含む：
（ｉ）グリコシル化を改変する修飾、
（ｉｉ）少なくとも１つの非フーリン切断部位を除去する修飾、
（ｉｉｉ）ｐｅｐ２７ドメインの１つ以上のアミノ酸を欠失させる修飾、並びに
（ｉｖ）Ｆタンパク質細胞外ドメインの疎水性ドメインにおいて親水性アミノ酸を置換する又は付加する修飾。
【００６０】
特定の実施形態において、Ｆタンパク質類似体は、ポリペプチドの多量体、例えば、ポリペプチドの三量体を含む。
【００６１】
上述したように、特定の実施形態において、開示される併用免疫原性組成物の組換えＲＳＶ抗原は、融合（Ｆ）タンパク質類似体を含み、このＦタンパク質類似体には、Ｆタンパク質の融合前立体構造、すなわち、宿主細胞の膜との融合に先立った成熟集合Ｆタンパク質の立体構造を安定化させるために修飾されている可溶性Ｆタンパク質ポリペプチドが含まれる。これらのＦタンパク質類似体は、明瞭性と簡潔性の目的で、「ＰｒｅＦ」又は「ＰｒｅＦ抗原」と称する。ＷＯ２０１０／１４９７４５に記載及び例証されているような抗原は、改善された免疫的特徴を示し、生体内で対象に投与された場合に安全で高度に防御的である。ＲＳＶ  Ｆタンパク質は、本明細書で提供される教示に従って融合前立体構造を安定化させるために修飾できることが当業者によって理解されるであろう。従って、ＰｒｅＦ抗原類似体の作出を導く原理の理解を円滑にするために、個々の構造的成分は、例示的なＦタンパク質を参照して示し、そのポリヌクレオチド配列及びアミノ酸配列はそれぞれ、配列番号１及び２に提供する。同様に、該当する場合、例示的なＧタンパク質を参照してＧタンパク質抗原が説明されるが、そのポリヌクレオチド配列及びアミノ酸配列はそれぞれ、配列番号３及び４に提供する。 
【００６２】
Ｆタンパク質ポリペプチドの一次アミノ酸配列を参照して（図１Ａ）、ＰｒｅＦ抗原の構造的特徴を説明するために以下の用語を使用する。
【００６３】
用語Ｆ０は、完全長の翻訳されたＦタンパク質前駆体を指す。Ｆ０ポリペプチドは、ｐｅｐ２７と命名された介在ペプチドによって分離されるＦ２ドメインとＦ１ドメインにさらに分割される。成熟の間に、Ｆ０ポリペプチドは、Ｆ２とＦ１と隣接ｐｅｐ２７の間に配置されている２つのフーリン部位でタンパク分解切断を受ける。議論を確実にする目的で、Ｆ２ドメインは、アミノ酸１〜１０９の少なくとも一部及び最大で全部を含み、Ｆ１ドメインの可溶性部分は、Ｆタンパク質のアミノ酸１３７〜５２６の少なくとも一部及び全部までを含む。上で示したように、これらアミノ酸の位置（及び本明細書で指定される後に続くアミノ酸の位置すべて）は、配列番号２の例示的なＦタンパク質前駆体ポリペプチド（Ｆ０）を参照して与えられる。
【００６４】
融合前Ｆ（又は「ＰｒｅＦ」）抗原は、ＲＳＶ抗原がＦタンパク質の融合前立体構造の免疫優勢エピトープを少なくとも１つ保持するように、Ｆタンパク質の融合前立体構造を安定化させる少なくとも１つの修飾を含む可溶性（すなわち、膜に結合しない）Ｆタンパク質類似体である。可溶性Ｆタンパク質類似体は、ＲＳＶのＦタンパク質のＦ２ドメインとＦ１ドメインを含む（が、ＲＳＶのＦタンパク質の膜貫通ドメインを含まない）。例となる実施形態では、Ｆ２ドメインはＦタンパク質のアミノ酸２６〜１０５を含み、Ｆ１ドメインはアミノ酸１３７〜５１６を含む。しかしながら、安定化されたＰｒｅＦ抗原の三次元立体構造が維持される限り、さらに小さな部分を使用することもできる。同様に、追加の構造的成分が、三次元立体構造を破壊せず、あるいは抗原の安定性、産生若しくはプロセシングに有害に影響せず、又は抗原の免疫原性を低下させない限り、追加の構造的成分（たとえば、融合ポリペプチド）を含むポリペプチドを、例となるＦ２ドメイン及びＦ１ドメインの代わりに使用することができる。Ｆ２ドメインとＦ１ドメインは、Ｆタンパク質類似体の成熟融合前立体構造への折り畳みと集合を複製するように設計されたＮ末端からＣ末端への方向で位置づけられる。産生を高めるために、天然のＦタンパク質のシグナルペプチド又は組換えＰｒｅＦ抗原が発現されるべき宿主細胞における産生と分泌を高めるように選択される異種シグナルペプチドのような分泌シグナルペプチドがＦ２ドメインに先行することができる。
【００６５】
ＰｒｅＦ抗原は、たとえば、１以上のアミノ酸の付加、欠失又は置換のような１以上の修飾を導入することによって安定化される（三量体の融合前立体構造において）。そのような安定化修飾の１つは、ヘテロ安定化ドメインを含むアミノ酸配列の付加である。例となる実施形態では、ヘテロ安定化ドメインは、タンパク質多量体化ドメインである。そのようなタンパク質多量体化ドメインの特に好適な一例は、そのようなドメインを有する複数のポリペプチドの三量体化を促進するイソロイシンジッパーのようなコイルドコイルドメインである。例となるイソロイシンジッパードメインを配列番号１１に示す。通常、ヘテロ安定化ドメインは、Ｆ１ドメインのＣ末端に位置する。
【００６６】
任意で、多量体化ドメインは、たとえば、配列ＧＧのような短いアミノ酸リンカー配列を介してＦ１ドメインに接続される。リンカーはさらに長いリンカーであってもよい（たとえば、アミノ酸配列ＧＧＳＧＧＳＧＧＳ：配列番号１４のような配列ＧＧを含む）。ＰｒｅＦ抗原の立体構造を破壊せずに本文脈で使用できる多数の構造的に中性のリンカーが当該技術で既知である。
【００６７】
別の安定化修飾は、天然のＦ０タンパク質のＦ２ドメインとＦ１ドメインの間に位置するフーリン認識切断部位の除去である。プロテアーゼがＰｒｅＦポリペプチドを構成ドメインに切断できないように、フーリン認識部位の１以上のアミノ酸を欠失させる又は置換することによって、１０５〜１０９位及び１３３〜１３６位に位置するフーリン認識部位の一方又は双方を除去することができる。任意で、介在ｐｅｐ２７ペプチドを取り除く、又はたとえば、リンカーペプチドによって置き換えることもできる。さらに又は任意で、融合ペプチドの近傍での非フーリン切断部位（たとえば、１１２〜１１３位でのメタロプロテイナーゼ部位）を取り除く又は置き換えることができる。
【００６８】
安定化変異の別の例は、Ｆタンパク質の疎水性ドメインへの親水性アミノ酸の付加又は置換である。通常、疎水性領域にて、リジンのような荷電アミノ酸を付加する又はロイシンのような中性残基と置換する。たとえば、Ｆタンパク質の細胞外ドメインのＨＲＢコイルドコイルドメイン内で親水性アミノ酸を付加する又は疎水性若しくは中性のアミノ酸と置換することができる。例証として、リジンのような荷電アミノ酸をＦタンパク質の５１２位に存在するロイシンに対して置換することができる。代わりに又は加えて、Ｆタンパク質のＨＲＡドメイン内で親水性アミノ酸を疎水性又は中性のアミノ酸に対して付加する又は置換することができる。たとえば、リジンのような１以上の荷電アミノ酸を１０５〜１０６位にて又はその近傍に挿入することができる（たとえば、ＰｒｅＦ抗原のアミノ酸１０５と１０６の間のような参照配列番号２の残基１０５に対応するアミノ酸の後に）。任意で、ＨＲＡドメイン及びＨＲＢドメインの双方にて親水性アミノ酸を付加又は置換することができる。或いは、ＰｒｅＦ抗原の立体構造全体が有害に影響されない限り、１以上の疎水性残基を欠失することができる。
【００６９】
さらに又は代わりに、ＰｒｅＦ抗原のグリコシル化状況を変化させる１以上の修飾を行ってもよい。たとえば、アミノ酸残基５００にて又はその周囲で（配列番号２に比べて）天然のＲＳＶのＦタンパク質に存在するグリコシル化部位における１以上のアミノ酸を欠失させて又は置換して（又はグリコシル化部位が破壊されるようにアミノ酸を付加することができる）、ＰｒｅＦ抗原のグリコシル化状況を増減させることができる。たとえば、配列番号２の５００〜５０２位に対応するアミノ酸をＮＧＳ、ＮＫＳ、ＮＧＴ及びＮＫＴから選択することができる。従って、特定の実施形態では、ＰｒｅＦ抗原は、ＲＳＶのＦタンパク質ポリペプチドのＦ２ドメイン（配列番号２のアミノ酸２６〜１０５に対応する）とＦ１ドメイン（配列番号２のアミノ酸１３７〜５１６に対応する）を含む可溶性Ｆタンパク質類似体を含み、グリコシル化を変化させる少なくとも１つの修飾が導入されている。ＲＳＶのＰｒｅＦ抗原は通常、Ｆ２ドメインとＦ１ドメインの間に未変化の融合ペプチドを含む。任意で、ＰｒｅＦ抗原はシグナルペプチドを含む。
【００７０】
上で開示されたように、そのようなＦタンパク質類似体は、以下から選択される少なくとも１つの修飾を含みうる：
（ｉ）ヘテロ三量体化ドメイン（たとえば、イソロイシンジッパードメインなど）を含むアミノ酸配列の付加、
（ｉｉ）少なくとも１つのフーリン切断部位の欠失、
（ｉｉｉ）少なくとも１つの非フーリン切断部位の欠失、
（ｉｖ）ｐｅｐ２７ドメインの１以上のアミノ酸の欠失、及び
（ｖ）Ｆタンパク質の細胞外ドメインの疎水性ドメインにおける親水性アミノ酸の少なくとも１つの置換又は付加。
【００７１】
上で開示されたように、そのようなグリコシル化修飾されたＲＳＶのＰｒｅＦ抗原は、多量体、たとえば、三量体を形成する。
【００７２】
例となる実施形態では、グリコシル化修飾されたＰｒｅＦ抗原は、以下：
（ａ）配列番号２２を含む又はそれから成るポリペプチド、
（ｂ）配列番号２１によってコードされるポリペプチド、又は配列番号２１の実質的な全長にわたってストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチド配列によってコードされるポリペプチド、
（ｃ）配列番号２２と少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド
の群から選択される。
【００７３】
安定化修飾のいずれか及び／又はすべてを個々に及び／又は本明細書で開示されるそのほかの安定化修飾のいずれかとの組み合わせで用いてＰｒｅＦ抗原を作出することができる。例となる実施形態では、Ｆ２ドメインとＦ１ドメインの間に介在性フーリン切断部位を伴わず、Ｆ１ドメインのＣ末端に位置するヘテロ安定化ドメイン（たとえば、三量体化ドメイン）を伴ったＦ２ドメインとＦ１ドメインを含むポリペプチドを含むＰｒｅＦタンパク質。特定の実施形態では、ＰｒｅＦ抗原はまた、疎水性のＨＲＡ及び／又はＨＲＢドメインへの親水性残基の１以上の付加及び／又は置換も含む。任意で、ＰｒｅＦ抗原はたとえば、メタロプロテイナーゼ部位などの少なくとも１つの非フーリン切断部位の修飾を有する。
【００７４】
ＰｒｅＦ抗原は、任意により、ＲＳＶのＧタンパク質の少なくとも免疫原性部分を含む追加のポリペプチド成分を含んでもよい。すなわち、特定の実施形態では、ＰｒｅＦ抗原はＦタンパク質成分とＧタンパク質成分の双方を含むキメラタンパク質である。Ｆタンパク質成分は、上記のＰｒｅＦ抗原のいずれかであることができ、Ｇタンパク質成分はＲＳＶのＧタンパク質の免疫学的に活性のある部分（全長までのＧタンパク質、及び/又は全長のＧタンパク質を含む）であるように選択される。例となる実施形態では、Ｇタンパク質ポリペプチドは、Ｇタンパク質（配列番号４で表されるＧタンパク質の配列を参照してアミノ酸の位置が指定される）のアミノ酸１４９〜２２９を含む。選択された部分がさらに大きなＧタンパク質断片の優勢な免疫学的特性を保持する限り、Ｇタンパク質のさらに小さな部分又は断片を使用できることを当業者は十分に理解するであろう。特に、選択される断片は、およそ１８４〜１９８位（例えばアミノ酸１８０〜２００）のアミノ酸の間の免疫学的に優勢なエピトープを保持し、免疫優勢エピトープを呈する安定な立体構造に折り畳み、集合するのに十分に長い。たとえば、およそアミノ酸１２８〜およそアミノ酸２２９から、全長までのＧタンパク質などのさらに長い断片も使用することができる。キメラタンパク質の文脈で、選択される断片が安定な立体構造に折り畳み、宿主細胞で組換え的に作製する場合、その作製、プロセシング又は安定性を妨害しない限り。任意で、Ｇタンパク質成分は、たとえば、配列ＧＧのような短いアミノ酸リンカー配列を介してＦタンパク質成分に接続される。リンカーはさらに長いリンカーであり得る（たとえば、アミノ酸配列ＧＧＳＧＧＳＧＧＳ：配列番号１４）。ＰｒｅＦ抗原の立体構造を破壊せずに本文脈で使用できる多数の構造的に中性のリンカーが当該技術で既知である。
【００７５】
任意で、Ｇタンパク質成分は、ＲＳＶ疾患の動物モデルで増強されたウイルス性疾患を軽減する又は予防する１以上のアミノ酸置換を含むことができる。すなわち、許容可能な動物モデル（たとえば、ＲＳＶのマウスモデル）から選択される対象に、ＰｒｅＦ−Ｇキメラ抗原を含む免疫原性組成物を投与した場合、非修飾のＧタンパク質を含有するワクチンを受け取った対照動物に比べて、対象がワクチン増強のウイルス性疾患（たとえば、好酸球増多、好中球増多）の症状を軽減又は無症状を示すように、Ｇタンパク質はアミノ酸置換を含むことができる。ワクチン増強のウイルス性疾患の軽減及び／又は予防は、免疫原性組成物がアジュバントの非存在下で投与された（しかし、たとえば、抗原が強いＴｈ１誘導アジュバントの存在下で投与される場合ではない）場合、明らかであり得る。さらに、アミノ酸置換は、ヒト対象に投与された場合、ワクチン増強のウイルス性疾患を軽減する又は予防することができる。好適なアミノ酸置換の例は、１９１位のアスパラギンのアラニンによる置き換えである（アミノ酸１９１位でのＡｓｎ→Ａｌａ：Ｎ１９１Ａ）。
【００７６】
任意で、上で記載されるＰｒｅＦ抗原は、精製の補助として役立つ追加の配列を含むことができる。一例はポリヒスチジンタグである。そのようなタグは所望であれば、最終産物から取り除くことができる。
【００７７】
発現される場合、ＰｒｅＦ抗原は、ポリペプチドの多量体を含む成熟タンパク質への分子内折り畳みと集合を受ける。好都合には、ＰｒｅＦ抗原ポリペプチドは、成熟した、プロセシングされたＲＳＶのＦタンパク質の融合前立体構造に似ている三量体を形成する。
【００７８】
一部の実施形態では、免疫原性組成物は、ＰｒｅＦ抗原（たとえば、配列番号６によって説明される例となる実施形態）と、Ｇタンパク質成分を含む第２のポリペプチドを含む。Ｇタンパク質成分は通常、Ｇタンパク質の少なくともアミノ酸１４９〜２２９を含む。Ｇタンパク質のさらに小さな部分を使用することができるが、そのような断片は、少なくとも、アミノ酸１８４〜１９８の免疫的に優勢なエピトープを含むべきである。或いは、Ｇタンパク質は、任意で、たとえば、全長のＧタンパク質又はキメラポリペプチドのようなさらに大きなタンパク質の要素として、アミノ酸１２８〜２２９又は１３０〜２３０のようなＧタンパク質のさらに大きな部分を含むことができる。
【００７９】
他の実施形態では、免疫原性組成物は、Ｇタンパク質成分（配列番号８及び１０で説明される例となる実施形態）も含むキメラタンパク質であるＰｒｅＦ抗原を含む。そのようなキメラＰｒｅＦ（又はＰｒｅＦ−Ｇ）抗原のＧタンパク質成分は、Ｇタンパク質の少なくともアミノ酸１４９〜２２９を通常含む。上で示したように、免疫優勢エピトープが保持され、ＰｒｅＦ−Ｇ抗原の立体構造が有害に影響されない限り、Ｇタンパク質のさらに小さな又はさらに大きな断片（たとえば、アミノ酸１２９〜２２９又は１３０〜２３０）も使用することができる。
【００８０】
ＰｒｅＦ抗原に関するさらなる詳細、及びこれらを使用する方法は、以下及び実施例において示す。
【００８１】
本明細書に開示する組換えＲＳＶ抗原は、ＲＳＶ  Ｆタンパク質に由来し、免疫学的にそれの全体又は一部に相当する、Ｆタンパク質類似体である。それらは、Ｆタンパク質の構造又は機能を改変する１以上の修飾を含むが、Ｆタンパク質の免疫学的性質を保持し、結果として、Ｆタンパク質類似体に対して生起された免疫応答は天然のＦタンパク質を認識し、したがってＲＳＶを認識するものである。本明細書に記載するＦタンパク質類似体は免疫原として有用である。
【００８２】
本来は、ＲＳＶ  Ｆタンパク質は、Ｆ０と命名された単一のポリペプチド前駆体、長さ５７４のアミノ酸として発現される。生体内で、Ｆ０は、小胞体にてオリゴマー化し、２つの保存されたフーリンコンセンサス配列（フーリン切断部位）、ＲＡＲＲ１０９（配列番号１５）とＲＫＲＲ１３６（配列番号１６）にてフーリンプロテアーゼによってタンパク分解処理を受けて、２つのジスルフィド結合断片から成るオリゴマーを生成する。これら断片の小さい方はＦ２と呼ばれ、Ｆ０前駆体のＮ末端部分を起源とする。大きい方のＣ末端Ｆ１断片は、２４アミノ酸の細胞質尾部に隣接する疎水性アミノ酸の配列を介して膜にＦタンパク質を固定する。３つのＦ２−Ｆ１二量体が会合して成熟Ｆタンパク質を形成し、それは、標的細胞膜との接触の際、立体構造変化を受けるきっかけとなる準安定的な前融合型（「融合前」）の立体構造を取る。この立体構造変化は、融合ペプチドとして知られる疎水性配列を露出させ、それは、宿主細胞の膜と会合し、標的細胞膜とのウイルス又は感染細胞の膜の融合を促進する。
【００８３】
Ｆ１断片は、ＨＲＡ及びＨＲＢと命名され、それぞれ融合ペプチド及び膜貫通アンカードメインの近傍に位置する少なくとも２つの７個（heptad）反復ドメインを含有する。融合前立体構造では、Ｆ２−Ｆ１二量体は、球形の頭部と茎構造を形成し、そこでＨＲＡドメインは球形の頭部における断片化（伸長した）立体構造にある。それに対して、ＨＲＢドメインは、頭部領域から伸びる三本鎖のコイルドコイルの茎を形成する。融合前から融合後立体構造への転移の間、ＨＲＡドメインは崩壊し、ＨＲＢドメインの近傍にもたらされ、逆平行の６らせん束を形成する。融合後の状態で、融合ペプチドと膜貫通ドメインは、並置されて膜の融合を促進する。
【００８４】
上記で提供された立体構造の記載は、結晶学データの分子モデル化に基づくが、融合前と融合後立体構造の構造的な識別は、結晶学への手段なしでモニターできる。たとえば、その技術的教示の目的で、参照によって本明細書に組み入れられるCalder et al., Virology, 271:122-131 (2000)及びMorton et al., Virology, 311:275-288によって明らかにされたように、電子顕微鏡を用いて融合前と融合後（あるいは前融合型と融合型と称される）の立体構造を区別することができる。また、その技術的教示の目的で、参照によって本明細書に組み入れられるConnolly et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 103:17903-17908 (2006)により記載されたようなリポソーム会合アッセイによって融合前立体構造を融合型（融合後）立体構造から区別することができる。さらに、ＲＳＶ  Ｆタンパク質の融合前形態又は融合形態の一方又は他方に存在するが、他の形態には存在しない立体構造エピトープを特異的に認識する抗体を用いて融合前の立体構造と融合型の立体構造を区別することができる。そのような立体構造のエピトープは、分子の表面における抗原決定基の優先的な曝露による。或いは、立体構造のエピトープは、直鎖ポリペプチドで隣接しないアミノ酸の並置から生じ得る。
【００８５】
典型的には、Ｆタンパク質類似体（ＰｒｅＦ、ＰｏｓｔＦなど）は、膜貫通ドメイン及び細胞質尾部を欠損し、Ｆタンパク質細胞外ドメイン又は可溶性Ｆタンパク質細胞外ドメインとも称されることがある。
【００８６】
Ｆタンパク質類似体には、Ｆタンパク質の融合前立体構造、すなわち、宿主細胞の膜との融合に先立った成熟集合Ｆタンパク質の立体構造を安定化させるために修飾されているＦタンパク質ポリペプチドが含まれる。これらのＦタンパク質類似体は、明瞭性と簡潔性の目的で、「ＰｒｅＦ類似体」、「ＰｒｅＦ」又は「ＰｒｅＦ抗原」と呼称され、一般的に可溶性である。本明細書で開示されるＰｒｅＦ類似体は、ヘテロ三量体ドメインの組み入れによって改変されている可溶性Ｆタンパク質類似体が改善された免疫学的特徴を示し、生体内で対象に投与された場合に安全で高度に防御的であるという予期しない発見にその基礎を置く。例示的なＰｒｅＦ抗原は、ＷＯ２０１０／１４９７４５に開示されており、これをＰｒｅＦ抗原の例を提供する目的でその全文を参照により本明細書に組み入れる。
【００８７】
Ｆタンパク質類似体としてはまた、融合後Ｆタンパク質の立体構造を有し、ＰｏｓｔＦ抗原又は融合後抗原とも称されるＦタンパク質ポリペプチドが含まれる。ＰｏｓｔＦ類似体はＷＯ２０１１／００８９７４（参照により本明細書に組み入れられる）に記載されている。ＰｏｓｔＦ抗原は、天然の融合後Ｆタンパク質の構造又は機能を改変する少なくとも１つの修飾を含んでいる。
【００８８】
本明細書で開示されるＰｒｅＦ類似体は、発現されたタンパク質の集団にて、発現されたタンパク質の集団の実質的な部分が、前融合型（融合前）の立体構造にあるように（たとえば、構造的な及び／若しくは熱動態的なモデル化によって予測されるように又は上記で開示された方法の１以上によって評価されるように）、ＲＳＶ  Ｆタンパク質の融合前立体構造を安定化させ、維持するように設計される。Ｆタンパク質の融合前立体構造の主な免疫原性エピトープが、細胞環境又は細胞外環境（たとえば、生体内、例として対象への投与に続く生体内）へのＰｒｅＦ類似体の導入に続いて維持されるように、安定化する修飾は、天然（又は合成）のＦタンパク質、たとえば、配列番号２の例示的なＦタンパク質のような天然の（又は合成の）Ｆタンパク質に導入される。
【００８９】
先ず、Ｆ０ポリペプチドの膜アンカードメインを置き換えるためにヘテロ安定化ドメインを構築物のＣ末端に置くことができる。この安定化ドメインは、ＨＲＢの不安定性を代償し、融合前の配座異性体を安定化するのを助けると予測される。例示的な実施形態では、ヘテロ安定化ドメインはタンパク質多量体化ドメインである。そのようなタンパク質多量体化ドメインの特に好都合な一例は、三量体化ドメインである。例示的な三量体化ドメインは、コイルドコイルドメインを有する複数のポリペプチドの三量体への集合を促進するコイルドコイルに折り畳む。三量体化ドメインの例としては、インフルエンザヘマグルチニン、ＳＡＲＳスパイク、ＨＩＶ  ｇｐ４１、修飾ＧＣＮ４、バクテリオファージＴ４フィブリチン及びＡＴＣａｓｅ由来の三量体化ドメインが挙げられる。三量体化ドメインの好都合な一例は、イソロイシンジッパーである。例示的なイソロイシンジッパードメインは、Harbury et al. Science 262:1401-1407 (1993)によって記載された操作された酵母ＧＣＮ４イソロイシン変異体である。好適なイソロイシンジッパードメインの１つの配列は配列番号１１で表されるが、コイルドコイル安定化ドメインを形成する能力を保持するこの配列の変異体も同様に好適である。代わりの安定化コイルドコイル三量体化ドメインには、ＴＲＡＦ２（ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）登録番号Ｑ１２９３３［ｇｉ：２３５０３１０３］；アミノ酸２９９−３４８）；トロンボスポンジン１（登録番号ＰＯ７９９６［ｇｉ：１３５７１７］；アミノ酸２９１−３１４）；Ｍａｔｒｉｌｉｎ−４（登録番号Ｏ９５４６０［ｇｉ：１４５４８１１７］；アミノ酸５９４−６１８；ＣＭＰ（ｍａｔｒｉｌｉｎ−１）（登録番号ＮＰ＿００２３７０［ｇｉ：４５０５１１１］；アミノ酸４６３−４９６；ＨＳＦ１（登録番号ＡＡＸ４２２１１［ｇｉ：６１３６２３８６］；アミノ酸１６５−１９１；及びＣｕｂｉｌｉｎ（登録番号ＮＰ＿００１０７２［ｇｉ：４５５７５０３］；アミノ酸１０４−１３８が挙げられる。好適な三量体ドメインは、発現されたタンパク質の実質的な部分の三量体への集合を生じることが期待される。たとえば、三量体化ドメインを有する組換えＰｒｅＦポリペプチドの少なくとも５０％が三量体へと集合する（たとえば、ＡＦＦ−ＭＡＬＳによって評価されるように）。通常、発現されたポリペプチドの少なくとも６０％、さらに好都合には少なくとも７０％、最も望ましくは少なくとも約７５％又はそれ以上が三量体として存在する。
【００９０】
安定化変異の別の例は、Ｆタンパク質の疎水性ドメインへの親水性アミノ酸の付加又は置換である。典型的には、荷電アミノ酸、例えばリジンを、疎水性領域において、付加する、又は該領域において中性残基、例えばロイシンと置換する。例えば、Ｆタンパク質細胞外ドメインのＨＲＢコイルドコイルドメイン内において、親水性アミノ酸を付加する、又は該ドメイン内の疎水性若しくは中性アミノ酸と置換する。例えば、荷電アミノ酸残基（リジンなど）で、Ｆタンパク質の５１２位に存在するロイシン（天然Ｆ０ポリペプチドに対して；配列番号６の例示的なＰｒｅＦ類似体ポリペプチドのＬ４８２Ｋ）を置換することができる。あるいは、又はさらに、Ｆタンパク質のＨＲＡドメイン内において、親水性アミノ酸を付加する、又は該ドメイン内の疎水性若しくは中性アミノ酸と置換する。例えば、１以上の荷電アミノ酸（リジンなど）を、ＰｒｅＦ類似体の１０５〜１０６位に又はその近傍（例えば、参照配列番号２の残基１０５に対応するアミノ酸の後ろ、例えばアミノ酸１０５と１０６の間など）に挿入することができる。任意により、ＨＲＡ及びＨＲＢドメインの両方において親水性アミノ酸を付加又は置換してもよい。あるいは、ＰｒｅＦ類似体の全体の立体構造が有害な影響を受けない限り、１以上の疎水性残基を欠失してもよい。
【００９１】
第２に、ｐｅｐ２７を取り除くことができる。融合前状態でのＲＳＶ  Ｆタンパク質の構造モデルの解析は、ｐｅｐ２７が、Ｆ１とＦ２の間で大きな非拘束ループを創ることを示唆している。このループは、融合前状態の安定化に寄与することはなく、フーリンによる天然タンパク質の切断に続いて取り除かれる。したがって、ｐｅｐ２７はまた融合後（又は他の）立体構造類似体を含む実施形態から取り除かれる。
【００９２】
第３に、（天然Ｆ０タンパク質におけるＦ２ドメインとＦ１ドメインの間から）フーリン切断モチーフの一方又は双方を欠失させることができる。１０５〜１０９又は１０６〜１０９位及び１３３〜１３６位に位置するフーリン認識部位の一方又は両方を、フーリン認識部位の１以上のアミノ酸の欠失又は置換により、例えば１以上のアミノ酸の欠失、又は１以上のアミノ酸の置換、又は１以上の置換若しくは欠失の組み合わせにより除去することができ、あるいはプロテアーゼがＰｒｅＦ（又は他のＦタンパク質類似体）ポリペプチドのその構成するドメインへの切断を不可能にするように修飾することによって除去することができる。任意により、介在ｐｅｐ２７ペプチドもまた、例えばリンカーペプチドにより、除去又は置換することができる。さらに、又は場合により、融合ペプチドに近接する非フーリン切断部位（例えば、１１２〜１１３位におけるメタロプロテイナーゼ部位）を除去又は置換してもよい。
【００９３】
したがって、本開示に係る方法及び使用において使用するためのＦタンパク質類似体は、１以上の改変されたフーリン切断部位を有する非切断型の細胞外ドメインで得ることができる。そのようなＦタンパク質類似体ポリペプチドは、それらをアミノ酸１０１〜１６１の位置で切断されずに、例えば１０５〜１０９位及び１３１〜１３６位におけるフーリン切断部位において切断されずに分泌する宿主細胞において組換えにより産生される。特定の実施形態において、置換Ｋ１３１Ｑ、１３１〜１３４位におけるアミノ酸の欠失、あるいは置換Ｋ１３１Ｑ又はＲ１３３Ｑ又はＲ１３５Ｑ又はＲ１３６Ｑは、１３６／１３７における切断を阻害するために使用される。
【００９４】
例示的な設計において、融合ペプチドはＦ２から切断されず、融合前の配座異性体の球形頭部からの放出を妨げ、すぐ近くの膜への接近性を妨げる。融合ペプチドと膜界面との間の相互作用が融合前状態の不安定性における主な課題であると予測される。融合プロセスの間、融合ペプチドと標的膜の間の相互作用は、球形頭部構造内からの融合ペプチドの曝露を生じ、融合前状態の不安定性を高め、融合後の配座異性体に折り畳む。この立体構造の変化によって膜融合のプロセスが可能になる。フーリン切断部位の一方又は両方の除去は、融合ペプチドのＮ末端部分への膜接近性を妨げ、融合前状態を安定化させると予測される。従って、本明細書で開示される例示的な実施形態では、フーリン切断モチーフの除去は、インタクトな融合ペプチドを含むＰｒｅＦ類似体を生じ、それは、プロセシング及び集合の間又はそれに続いてフーリンによって切断されない。
【００９５】
任意で、たとえば、１以上のアミノ酸の置換によって、少なくとも１つの非フーリン切断部位を取り除いてもよい。たとえば、実験的証拠は、特定のメタロプロテイナーゼによる切断につながる条件下では、Ｆタンパク質類似体はアミノ酸１１０〜１１８の近傍で切断され得る（たとえば、Ｆタンパク質類似体のアミノ酸１１２と１１３の間；配列番号２の参照Ｆタンパク質ポリペプチドの１４２位のロイシンと１４３位のグリシンの間で切断が生じる）。従って、この領域内での１以上のアミノ酸の修飾は、Ｆタンパク質類似体の切断を低下させ得る。たとえば、１１２位のロイシンは、たとえば、イソロイシン、グルタミン又はトリプトファン（配列番号２０の例示的な実施形態で示されるような）のような異なるアミノ酸で置換することができる。代わりに又はさらに、１１３位のグリシンは、セリン又はアラニンによって置換することができる。さらなる実施形態において、Ｆタンパク質類似体はさらに改変型トリプシン切断部位を含み、Ｆタンパク質類似体は、アミノ酸１０１と１６１の間の位置でトリプシンにより切断されない。
【００９６】
任意で、Ｆタンパク質類似体は、（たとえば、天然のＦタンパク質ポリペプチドに存在する１以上のグリコシル化部位でグリコシル化された分子の比率を上げる又は下げることによって、）グリコシル化のパターン又は状況を改変する１以上の修飾を含むことができる。たとえば、配列番号２の天然Ｆタンパク質ポリペプチドは、２７位、７０位及び５００位（配列番号６の例示的なＰｒｅＦ類似体の２７位、７０位及び４７０位に対応する）でのアミノ酸にてグリコシル化されると予測される。一実施形態では、修飾は、５００位のアミノ酸（Ｎ４７０と命名）でのグリコシル化部位の近傍に導入される。たとえば、５００位（参照配列の５００位、例示的なＰｒｅＦ類似体の４７０位へのアライメントに対応する）のアスパラギンの代わりにグルタミン（Ｑ）のようなアミノ酸を置換することによってグリコシル化部位を取り除くことができる。好都合には、このグリコシル化部位でグリコシル化効率を高める修飾が導入される。好適な修飾の例には、５００〜５０２位にて以下のアミノ酸配列：ＮＧＳ；ＮＫＳ；ＮＧＴ；ＮＫＴが挙げられる。興味深いことに、高いグリコシル化を生じるこのグリコシル化部位の修飾はまた実質的に高いＰｒｅＦ産生を生じることが見出された。従って、特定の実施形態では、ＰｒｅＦ類似体は、参照ＰｒｅＦ配列（配列番号２）のアミノ酸５００に対応する位置で、たとえば、配列番号６によって例示されるＰｒｅＦ類似体の４７０位にて修飾されたグリコシル化部位を有する。好適な修飾には、参照Ｆタンパク質ポリペプチド配列の５００〜５０２位に対応するアミノ酸での、配列：ＮＧＳ；ＮＫＳ；ＮＧＴ；ＮＫＴが挙げられる。「ＮＧＴ」の修飾を含む例示的な実施形態のアミノ酸は、配列番号１８にて提供される。当業者は、対応するＮＧＳ、ＮＫＳ及びＮＫＴ修飾についての同様の修飾を容易に決定することができる。そのような修飾は、本明細書で開示される安定化変異（たとえば、イソロイシンジッパードメインのようなヘテロコイルドコイルドメイン、及び／又は疎水性領域における修飾、及び／又はｐｅｐ２７の除去、及び／又はフーリン切断部位の除去、及び／又は非フーリン切断部位の除去、及び／又は非フーリン切断部位の除去）のいずれかと好都合に組み合わせられる。たとえば、特定の一実施形態では、Ｆタンパク質類似体は非フーリン切断部位を除去させる置換とグリコシル化を高める修飾を含む。例示的なＰｒｅＦ類似体配列は、配列番号２２（例示的な実施形態が、「ＮＧＴ」の修飾と１１２位でのロイシンに代わるグルタミンの置換を含む）にて提供される。例えば、特定の例示的な実施形態において、グリコシル化修飾ＰｒｅＦ類似体は、
ａ）配列番号２２を含む又はこれからなるポリペプチド；
ｂ）配列番号２１により又は配列番号２１に対して実質的にその全長にわたってストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチド配列によりコードされるポリペプチド；
ｃ）配列番号２２に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド
の群より選択される。
【００９７】
さらに一般的には、本明細書で開示される安定化の修飾、たとえば、好ましくは可溶性Ｆタンパク質類似体のＣ末端に位置する、たとえば、コイルドコイル（たとえば、イソロイシンジッパードメイン）のようなヘテロ安定化ドメインの付加；疎水性ＨＲＢドメインにおけるロイシンからリジンへのような残基の修飾；ｐｅｐ２７の除去；フーリン切断モチーフの一方又は双方の除去；非フーリン切断部位、例えばトリプシン切断部位などの除去；並びに／あるいはグリコシル化部位の修飾のいずれか１つを、ほかの安定化修飾の１以上との組み合わせにて（又は任意の所望の組み合わせで全部まで）採用することができる。たとえば、ヘテロコイルドコイル（又はそのほかのヘテロ安定化ドメイン）を単独で利用することができ、又は疎水性領域の修飾及び／又はｐｅｐ２７の除去及び／又はフーリン切断部位の除去及び／又は非フーリン切断部位の除去及び／又は非フーリン切断部位の除去のいずれかと組み合わせて利用することができる。特定の特殊な実施形態では、Ｆタンパク質類似体、例えばＰｒｅＦ類似体は、Ｃ末端のコイルドコイル（イソロイシンジッパー）ドメイン、ＨＲＢ疎水性ドメインにおける安定化置換、及びフーリン切断部位の一方又は双方の除去を含む。そのような実施形態は、フーリン切断によって除去されないインタクトな融合ペプチドを含む。特定の一実施形態では、Ｆタンパク質類似体はまた５００位のアミノ酸にて修飾されたグリコシル化部位を含む。
【００９８】
本明細書に記載する組成物及び方法のためのＦタンパク質類似体は、Ｆタンパク質類似体（例えばＰｒｅＦ類似体、ＰｏｓｔＦ類似体、又は非切断型Ｆタンパク質細胞外ドメインなど）を含む生物学的材料を準備し、その類似体ポリペプチドの単量体若しくは多量体（例えば三量体）又はその混合物を生物学的材料から精製することを含む方法によって製造することができる。
【００９９】
Ｆタンパク質類似体は、ポリペプチド単量体若しくは三量体、又は平衡して存在しうる単量体と三量体の混合物の形態で存在することができる。単一形態の存在は、より予測可能な免疫応答及びより良好な安定性などの利点をもたらすだろう。
【０１００】
したがって、一実施形態において、本開示に従って使用するためのＦタンパク質類似体は、単量体若しくは三量体又は単量体と三量体の混合物の形態で、実質的に脂質及びリポ多糖を含まない、精製されたＦタンパク質類似体である。
【０１０１】
Ｆタンパク質ポリペプチドは、ＲＳＶのＡ株若しくはＲＳＶのＢ株又はその変異株（上記と同義）のＦタンパク質から選択することができる。特定の例示的な実施形態では、Ｆタンパク質ポリペプチドは、配列番号２で表されるＦタンパク質である。本開示の理解を円滑にするために、アミノ酸残基の位置はすべて、株にかかわりなく、例示的なＦタンパク質のアミノ酸の位置（すなわち、対応するアミノ酸残基の位置）に関して与えられる。ほかのＲＳＶのＡ株又はＢ株の匹敵するアミノ酸の位置は、容易に利用でき、周知のアライメントアルゴリズム（たとえば、ＢＬＡＳＴ、たとえば、デフォルトパラメータを用いて）を用いて例示的な配列と共に選択されたＲＳＶ株のアミノ酸配列をアライメントすることによって当業者であれば容易に決定することができる。異なるＲＳＶ株に由来するＦタンパク質ポリペプチドの多数の追加の例は、ＷＯ２００８／１１４１４９（ＲＳＶ  Ｆ及びＧタンパク質配列の追加の例を提供する目的で参照によって本明細書に組み入れられる）に開示されている。別の変異体は、遺伝的ドリフトによって生じることができ、又は部位特異的若しくはランダム突然変異誘発を用いて人為的に作出することができ、又は２以上の既存の変異体の組換えによって作出することができる。そのような別の変異体も本明細書で開示される免疫原性組成物の文脈で用いられるＦタンパク質類似体の文脈で好適である。
【０１０２】
本明細書に記載する組成物及び方法に有用な別の実施形態において、組換えＲＳＶタンパク質は、ＷＯ２０１１／００８９７４（別のＦタンパク質類似体を説明する目的で参照により本明細書に組み入れられる）に記載されるようなＦタンパク質類似体である。例えば、ＷＯ２０１１／００８９７４の図１及びＷＯ２０１１／００８９７４の実施例１に記載されるＦタンパク質類似体を参照されたい。
【０１０３】
Ｆタンパク質のＦ２及びＦ１ドメインの選択では、当業者は、Ｆ２及び／又はＦ１ドメイン全体を厳格に含む必要はないことを認識するであろう。通常、Ｆ２ドメインの部分配列（又は断片）を選択する場合、立体構造の考慮が重要である。従って、Ｆ２ドメインは通常、ポリペプチドの集合と安定性を促進するＦ２ドメインの部分を含む。特定の例示的な変異体では、Ｆ２ドメインはアミノ酸２６〜１０５を含む。しかしながら、長さのわずかな修飾（１以上のアミノ酸の付加又は欠失による）を有する変異体も可能である。
【０１０４】
通常、Ｆ１ドメインの少なくとも部分配列（又は断片）は、Ｆタンパク質の免疫優勢エピトープを含む安定な立体構造を維持するように選択され、設計される。たとえば、アミノ酸２６２〜２７５（パリビズマブ中和）及び４２３〜４３６（Ｃｅｎｔｏｃｏｒのｃｈ１０１Ｆ  ＭＡｂ）の領域で中和抗体によって認識されるエピトープを含むＦ１ポリペプチドドメインの部分配列を選択することが一般に望ましい。さらに、たとえば、アミノ酸３２８〜３５５の領域内でＴ細胞エピトープを含むことが望ましいこともあり、最も一般的には、Ｆ１サブユニット（たとえば、貫通アミノ酸２６２〜４３６）の単一の連続部分として含み、しかし、エピトープは安定な立体構造を形成する不連続な要素としてこれらの免疫優勢エピトープを含む合成配列で保持され得る。従って、Ｆ１ドメインポリペプチドは、ＲＳＶ  Ｆタンパク質ポリペプチドの少なくともおよそアミノ酸２６２〜４３６を含む。本明細書において提供する非限定的な一例では、Ｆ１ドメインは、天然Ｆタンパク質ポリペプチドのアミノ酸１３７〜５１６を含む。当業者は、追加のさらに短い部分配列を熟練者の裁量で使用できることを認識するであろう。
【０１０５】
立体構造の考慮に加えて、Ｆ２又はＦ１ドメインの部分配列を選択する場合（例えば、特定のＰｒｅＦ−Ｇ類似体のＧタンパク質成分に関して以下で議論するように）、追加の免疫原性エピトープの包含に基づいて配列（たとえば、変異体、部分配列など）を選択することが望ましいこともある。たとえば、当該技術で既知の、たとえば、アンカーモチーフ又は神経網若しくは多項式決定のようなそのほかの方法を用いて、追加のＴ細胞エピトープを特定することができ、たとえば、ＲＡＮＫＰＥＰ（ウエブサイト：mif.dfci.harvard.edu/Tools/rankpep.htmlで利用可能）；ＰｒｏＰｒｅｄＩ（ウエブサイト：imtech.res.in/raghava/propredI/index.htmlで利用可能）；Ｂｉｍａｓ（ウエブサイト：www-bimas.dcrt.nih.gov/molbi/hla_bind/index.htmlで利用可能）；及びＳＹＦＰＥＩＴＨ（ウエブサイト：syfpeithi.bmi-heidelberg.com/scripts/MHCServer.dll/home.htmで利用可能）を参照のこと。たとえば、アルゴリズムを用いてペプチドの「結合閾値」を決定し、特定の親和性でのＭＨＣ又は抗体結合の高い確率をそれらに与えるスコアを持つものを選択する。アルゴリズムは、特定の位置での特定のアミノ酸のＭＨＣ結合に対する効果、特定の位置での特定のアミノ酸の抗体結合に対する効果、又はモチーフを含有するペプチドの特定の置換の結合に対する効果のいずれかに基づく。免疫原性ペプチドの文脈の範囲内で、「保存された残基」は、ペプチドの特定の位置で無作為な分布で予想されるものより有意に高い頻度で出現するものである。アンカー残基はＭＨＣ分子との接触点を提供する保存された残基である。そのような予測方法で特定されるＴ細胞エピトープは、特定のＭＨＣタンパク質への結合を測定することによって、及びＭＨＣタンパク質の背景で提示される場合にはＴ細胞を刺激するその能力によって確認することができる。
【０１０６】
好都合には、Ｆタンパク質類似体、例えばＰｒｅＦ類似体（以下で議論されるＰｒｅＦ−Ｇ類似体など）、Ｐｏｓｔ Ｆ類似体、又は他の立体構造類似体は、発現系に対応するシグナルペプチド、たとえば、哺乳類又はウイルスのシグナルペプチド、たとえば、ＲＳＶ  Ｆ０の天然シグナル配列（たとえば、配列番号２のアミノ酸１〜２５又は配列番号６のアミノ酸１〜２５）を含む。通常、シグナルペプチドは、組換え発現に選択される細胞に適合するように選択される。たとえば、バキュロウイルスのシグナルペプチド又はメリチンシグナルペプチドのようなシグナルペプチドは、昆虫細胞における発現のために置換され得る。植物の発現系が好ましい場合には、好適な植物シグナルペプチドが当該技術で既知である。多数の例示的なシグナルペプチドが当該技術で既知であり（たとえば、多数のヒトのシグナルペプチドを記載しているZhang & Henzel, Protein Sci., 13:2819-2824（2004)を参照）、古細菌、原核生物及び真核生物のシグナル配列を含むＳＰｄｂシグナルペプチドデータベース（http://proline.bic.nus.edu.sg/spdb/）にてカタログ化されている。任意で、先行の抗原のいずれかが追加の配列又はタグ、例えば精製を促進するＨｉｓタグなどを含んでもよい。
【０１０７】
任意で、Ｆタンパク質類似体（例えば、ＰｒｅＦ若しくはＰｏｓｔＦ又は他の類似体）は追加の免疫原性成分を含むことができる。特定の特に好都合な実施形態では、Ｆタンパク質類似体はＲＳＶ  Ｇタンパク質の抗原性成分を含む。ＰｒｅＦ及びＧの成分を有する例示的なキメラタンパク質には、以下のＰｒｅＦ＿Ｖ１（配列番号７及び８で表される）及びＰｒｅＦ＿Ｖ２（配列番号９及び１０で表される）が挙げられる。
【０１０８】
ＰｒｅＦ−Ｇ類似体では、Ｇタンパク質の抗原性部分（たとえば、アミノ酸残基１４９〜２２９のような切断型Ｇタンパク質）を構築物のＣ末端に付加する。通常、Ｇタンパク質成分は、自由度のあるリンカー配列を介してＦタンパク質成分に連結される。たとえば、例示的なＰｒｅＦ＿Ｖ１の設計では、Ｇタンパク質は、−ＧＧＳＧＧＳＧＧＳ−リンカー（配列番号１４）によってＰｒｅＦ成分に連結される。ＰｒｅＦ＿Ｖ２の設計では、リンカーはさらに短い。−ＧＧＳＧＧＳＧＧＳ−リンカー（配列番号１４）の代わりに、ＰｒｅＦ＿Ｖ２は２つのグリシン（−ＧＧ−）をリンカーに有する。
【０１０９】
存在する場合、Ｇタンパク質ポリペプチドドメインは、ＲＳＶのＡ株又はＲＳＶのＢ株から選択されるＧタンパク質のすべて又は一部を含むことができる。特定の例示的な実施形態では、Ｇタンパク質は、配列番号４で表されるＧタンパク質である（又はそれと９５％同一である）。好適なＧタンパク質配列の別の例は、ＷＯ２００８／１１４１４９（参照によって本明細書に組み入れられる）に見出すことができる。
【０１１０】
Ｇタンパク質ポリペプチド成分は、例えばアミノ酸１８３〜１９７の領域で免疫優勢なＴ細胞エピトープを保持するＧタンパク質の少なくとも部分配列（又は断片）、たとえば、天然のＧタンパク質のアミノ酸１５１〜２２９、１４９〜２２９又は１２８〜２２９を含むＧタンパク質の断片を含むように選択される。例示的な一実施形態では、Ｇタンパク質ポリペプチドは、天然のＧタンパク質ポリペプチドのアミノ酸残基１４９〜２２９の全部又は一部を含む、天然のＧタンパク質ポリペプチドの部分配列（又は断片）である。当業者は、選択される部分が、Ｆタンパク質類似体の発現、折り畳み又はプロセシングを構造的に不安定化又は破壊しない限り、Ｇタンパク質のさらに長い又は短い部分を使用できることを容易に十分に理解するであろう。任意で、ホルマリン不活化ＲＳＶワクチンと関連する好酸球増多を特徴とする増強された疾患を低減する及び／又は防ぐことが以前示された１９１位にて、Ｇタンパク質ドメインはアミノ酸置換を含む。天然に存在する及び置換された（Ｎ１９１Ａ）Ｇタンパク質の特性の完全な記載は、例えば参照によって本明細書に組み入れられる米国特許公開第２００５／００４２２３０に見出すことができる。
【０１１１】
あるいは、Ｆタンパク質類似体は、Ｇタンパク質成分を含む第２のポリペプチドをまた含有する免疫原性組成物中に製剤化されてもよい。Ｇタンパク質成分は典型的に、Ｇタンパク質の少なくともアミノ酸１４９〜２２９を含む。Ｇタンパク質のより小さい部分を使用することもできるが、そのような断片には、最小限でも、アミノ酸１８４〜１９８の免疫優勢エピトープが含まれる必要がある。あるいは、Ｇタンパク質は、Ｇタンパク質のより大きな部分、例えばアミノ酸１２８〜２２９又は１３０〜２３０、場合によりさらに大きいタンパク質の要素として、例えば全長Ｇタンパク質又はキメラポリペプチドを含んでもよい。
【０１１２】
たとえば、天然に存在する株に対応する配列の選択に関して、１以上のドメインが、たとえば、Ａ２若しくはＬｏｎｇと命名された一般の研究室単離株、又はそのほかの天然に存在する株若しくは単離株のようなＲＳＶのＡ株又はＢ株に配列では対応し得る。ＲＳＶの多数の株が現在までに単離されている。ＧｅｎＢａｎｋ及び／又はＥＭＢＬアクセッション番号により示される例示的な株はＷＯ２００８１１４１４９（本明細書に開示されるＦタンパク質類似体に使用するのに好適なＲＳＶ  Ｆの核酸及びポリペプチド配列を開示する目的で参照により本明細書に組み入れられる）に見出すことができる。ＲＳＶの別の株が単離される可能性があり、ＲＳＶの属に包含される。同様に、ＲＳＶの属は、天然に存在するもの（例えば以前に又はその後同定された株）から遺伝子ドリフト及び／又は組換えにより生じた変異株を包含する。
【０１１３】
そのような天然に存在する及び単離される変異体に加えて、前述の配列と配列類似性を共有する操作された変異体もＦタンパク質類似体、例えばＰｒｅＦ、ＰｏｓｔＦ又は他の類似体（ＰｒｅＦ−Ｇを含む）類似体の文脈で採用され得る。ポリペプチド（及び一般にヌクレオチド配列）に関してＦタンパク質類似体ポリペプチド（及び以下に記載されるポリヌクレオチド配列）間の類似性は、配列同一性を参照して配列間での類似性という点で表現され得る。配列同一性は、同一性（又は類似性）比率という点で測定されることが多く；比率が高ければ高いほど、２つの配列の一次構造はより類似する。一般に、２つのアミノ酸（又はポリヌクレオチド）の配列の一次構造が似ていれば似ているほど、折り畳み及び集合の結果生じる高次構造も類似する。Ｆタンパク質、ポリペプチド（及びポリヌクレオチド）配列の変異体は通常、１又は少数のアミノ酸の欠失、付加又は置換を有するが、それでもなお、非常に高い比率でアミノ酸、一般にはそのポリヌクレオチド配列を共有する。さらに重要なことに、変異体は、本明細書で開示される参照配列の構造的な特性、従って立体構造の特性を保持する。
【０１１４】
配列同一性を決定する方法は当該技術で周知であり、Ｆタンパク質類似体ポリペプチド、並びにそれをコードする核酸に適用可能である（たとえば、下記のように）。種々のプログラム及びアライメントアルゴリズムは、Smith and Waterman, Adv. Appl. Math. 2:482, 1981; Needleman and Wunsch, J. Mol. Biol. 48:443, 1970; Higgins and Sharp, Gene 73:237, 1988; Higgins and Sharp, CABIOS 5:151, 1989; Corpet et al., Nucleic Acids Research 16:10881, 1988; 及びPearson and Lipman, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:2444, 1988に記載されている。Altschul et al., Nature Genet.  6:119, 1994は、配列アライメント法と相同性算出の詳細な考察を提示している。ＮＣＢＩベーシックローカルアライメントサーチツール（ＢＬＡＳＴ）（Altschul et al., J.  Mol.  Biol.  215:403, 1990）は、配列解析プログラム、ｂｌａｓｔｐ、ｂｌａｓｔｎ、ｂｌａｓｔｘ、ｔｂｌａｓｔｎ及びｔｂｌａｓｔｘと関連して使用するために、全米バイオテクノロジー情報センター（ＭＤ州、ベセスダ、ＮＣＢＩ）を含む幾つかの供給源、及びインターネットにて利用可能である。このプログラムを用いて配列同一性を決定する方法の記載はインターネットのＮＣＢＩウエブサイトで利用可能である。
【０１１５】
一部の例では、Ｆタンパク質類似体は、それが由来する天然に存在する株のアミノ酸配列に比べて１以上のアミノ酸修飾を有する（たとえば、前述の安定化修飾に加えて）。そのような差異は、１以上のアミノ酸の付加、欠失又は置換であり得る。変異体は通常、アミノ酸残基の約１％又は２％又は５％又は１０％又は１５％又は２０％以下が異なる。たとえば、変異体Ｆタンパク質類似体、例えばＰｒｅＦ若しくはＰｏｓｔＦ又は他の類似体ポリペプチド配列は、参照Ｆタンパク質配列（例えば、配列番号６、８、１０、１８、２０及び／又は２２のＰｒｅＦ類似体ポリペプチド配列）の関連する部分と比べて、１又は２又は５までの又は約１０までの、又は約１５までの、又は約５０までの又は約１００までのアミノ酸の差異を含み得る。従って、ＲＳＶ  Ｆ又はＧタンパク質又はＦタンパク質類似体の文脈では、変異体は、通常、参照タンパク質、例えばＰｒｅＦ類似体の場合には配列番号２、４、６、８、１０、１８、２０及び／又は２２に示される参照配列との、あるいは本明細書で開示される例示的なＰｒｅＦ類似体のいずれかとの、少なくとも８０％、又は８５％、さらに一般的には、少なくとも約９０％以上、たとえば、９５％又はさらに９８％又は９９％の配列同一性を共有する。本開示の特徴として含まれる別の変異体は、ＷＯ２００８／１１４１４９で開示された天然に存在する変異体から選択されるヌクレオチド配列又はアミノ酸配列の全部又は一部を含むＦタンパク質類似体である。別の変異体は、遺伝的ドリフトによって生じることができ、又は部位特異的若しくはランダム突然変異誘発を用いて人為的に作出することができ、又は２以上の既存の変異体の組換えによって作出することができる。そのような別の変異体も本明細書で開示されるＦタンパク質類似体抗原の文脈で好適である。たとえば、修飾は、得られるＦタンパク質類似体の立体構造又は免疫原性エピトープを変化させない１以上のアミノ酸（たとえば、２つのアミノ酸、３つのアミノ酸、４つのアミノ酸、５つのアミノ酸、１０までのアミノ酸、又はそれ以上）の置換であり得る。
【０１１６】
代わりに又はさらに、修飾は、１以上のアミノ酸の欠失及び／又は１以上のアミノ酸の付加を含むことができる。実際、所望であれば、１以上のポリペプチドドメインは、単一株に一致しないが、複数株、又はさらにＲＳＶのウイルスポリペプチドの複数の株をアライメントすることによって推定されるコンセンサス配列に由来する成分の部分配列を含む合成ポリペプチドであり得る。特定の実施形態では、その後のプロセシング又は精製を円滑にするタグを構成するアミノ酸配列の付加によって１以上のポリペプチドドメインが修飾される。そのようなタグは抗原性タグ、又はエピトープタグ、酵素タグ又はポリヒスチジンタグであり得る。通常、タグは、たとえば、抗原又は融合タンパク質のＣ末端又はＮ末端のようなタンパク質の一方又は他方の末端に位置する。
【０１１７】
本明細書に開示されるＦタンパク質類似体（また適用可能であればＧ抗原も）は、組換えタンパク質の発現及び精製のための十分に確立された手順を用いて製造することができる。
【０１１８】
簡単に説明すると、Ｆタンパク質類似体をコードする組換え核酸を、ベクター及び宿主細胞の選択に応じて、種々の周知の手法、例えばエレクトロポレーション、リポソーム媒介トランスフェクション、リン酸カルシウム沈降、感染、トランスフェクションなどのいずれかにより宿主細胞に導入する。好ましい宿主細胞としては、原核（すなわち細菌）宿主細胞、例えば大腸菌、並びに多数の真核宿主細胞、例えば真菌（例として酵母、例えばサッカロミセス・セレビシエ（Saccharomyces cerevisiae）及びピヒア・パストリス（Picchia pastoris））細胞、昆虫細胞、植物細胞、及び哺乳動物細胞（例えば３Ｔ３、ＣＯＳ、ＣＨＯ、ＢＨＫ、ＨＥＫ２９３など）、又はＢｏｗｅｓメラノーマ細胞が挙げられる。選択した宿主細胞における発現後、組換えＦタンパク質類似体を当技術分野で周知の手法により単離及び／又は精製することができる。例示的な発現方法、並びにＰｒｅＦ類似体（ＰｒｅＦ−Ｇ類似体など）をコードする核酸は、ＷＯ２０１０／１４９７４５（Ｆタンパク質類似体の発現及び精製のために好適な方法を提供する目的で本明細書に組み入れられる）に提供されている。
【０１１９】
百日咳菌抗原
開示される併用免疫原性組成物の特定の実施形態において、少なくとも１種の百日咳菌抗原は、パータシストキソイド（ＰＴ）、糸状赤血球凝集素（ＦＨＡ）、パータクチン（ＰＲＮ）、２型線毛（ＦＩＭ２）及び３型線毛（ＦＩＭ３）からなる群より選択される少なくとも１種のＰａ抗原を含む。この抗原は、部分的に若しくは高度に、精製される。
【０１２０】
ＰＴは、種々の方法で、例えば、（例えば、参照によって本明細書に組み込まれるＷＯ９１／１２０２０において記載されるとおり）百日咳菌の培養からの毒素の精製とその後の化学的無毒化によって、又は代わりに、（例えば、ＰＴの遺伝的改変を企図した開示の目的で参照によって本明細書に組み込まれるＥＰ３０６３１８、ＥＰ３２２５３３、ＥＰ３９６９６４、ＥＰ３２２１１５、ＥＰ２７５６８９において記載されるとおり）ＰＴの遺伝的無毒化類似体の精製によって、産生され得る。特定の実施形態において、ＰＴは、遺伝的に無毒化される。より詳細には、遺伝的無毒化ＰＴは、以下の置換のうち１つ又は両方を有する：Ｒ９Ｋ及びＥ１２９Ｇ。
【０１２１】
開示される併用免疫原性組成物は、無細胞パータシス抗原であるＰＴ、ＦＨＡ、ＰＲＮ、ＦＩＭ２及びＦＩＭ３の任意の１つ、２つ、３つ、４つ若しくは５つを含み得る。より詳細には、前記組成物は、以下の組み合わせを含み得る：ＰＴ及びＦＨＡ；ＰＴ、ＦＨＡ及びＰＲＮ；ＰＴ、ＦＨＡ、ＰＲＮ及びＦＩＭ２；ＰＴ、ＦＨＡ、ＰＲＮ及びＦＩＭ３；並びにＰＴ、ＦＨＡ、ＰＲＮ、ＦＩＭ２及びＦＩＭ３。
【０１２２】
特定の実施形態において、ＰＴは、２〜５０μｇ（例えば、１用量あたり正確に又はおよそ２．５若しくは３．２μｇ）、５〜４０μｇ（例えば、１用量あたり正確に又はおよそ５若しくは８μｇ）又は１０〜３０μｇ（例えば、１用量あたり正確に又はおよそ２０若しくは２５μｇ）の量で使用される。
【０１２３】
特定の実施形態において、ＦＨＡは、２〜５０μｇ（例えば、１用量あたり正確に又はおよそ２．５若しくは３４．４μｇ）、５〜４０μｇ（例えば、１用量あたり正確に又はおよそ５若しくは８μｇ）又は１０〜３０μｇ（例えば、１用量あたり正確に又はおよそ２０若しくは２５μｇ）の量で使用される。
【０１２４】
特定の実施形態において、ＰＲＮは、０．５〜２０μｇ、０．８〜１５μｇ（例えば、１用量あたり正確に又はおよそ０．８若しくは１．６μｇ）又は２〜１０μｇ（例えば、１用量あたり正確に又はおよそ２．５若しくは３若しくは８μｇ）の量で使用される。
【０１２５】
特定の実施形態において、ＦＩＭ２及び／又はＦＩＭ３は、合わせて０．５〜１０μｇ（例えば、１用量あたり正確に又はおよそ０．８若しくは５μｇ）の量で使用される。
【０１２６】
特定の実施形態において、併用免疫原性組成物は、ＰＴ及びＦＨＡを１用量あたり等量で、例えば、正確に又はおよそ８若しくは２０若しくは２５μｇのいずれかで、含む。あるいは、併用免疫原性組成物は、ＰＴ及びＦＨＡを、それぞれ、正確に若しくはおよそ５及び２．５μｇ、又は正確に若しくはおよそ３．２及び３４．４μｇ含む。さらなる実施形態において、免疫原性組成物は、ＰＴ、ＦＨＡ及びＰＲＮを、それぞれ、１用量あたり正確に又はおよその量で、２５：５：８μｇ；８：８：２．５μｇ；２０：２０：３μｇ；２．５：５：３μｇ；５：２．５：２．５μｇ；又は３．２：３４．４：１．６μｇで含む。
【０１２７】
あるいは、又は上で議論したＰａ抗原のいずれかと組み合わせて、開示される併用免疫原性組成物は、（参照によって本明細書に組み込まれるＷＯ２００５／０３２５８４及びMarr et al (2008), Vaccine, 26(34):4306-4311に記載されるとおり）百日咳菌「ＢｒｋＡ」タンパク質に由来する抗原を含み得る。
【０１２８】
さらなる実施形態において、少なくとも１種のＰａ抗原は、参照によって本明細書に組み込まれるRoberts et al (2008), Vaccine, 26:4639-4646に開示されるとおり、百日咳菌から得られる外膜小胞（ＯＭＶ）を含む。詳細には、このようなＯＭＶは、リピドＡ修飾酵素、例えば３−Ｏ−デアシラーゼ、例えばＰａｇＬ（参照によって本明細書に組み込まれるAsensio et al (2011), Vaccine, 29:1649-1656）を発現する組換え百日咳菌株に由来し得る。
【０１２９】
別の実施形態において、少なくとも１種の百日咳菌抗原は、Ｐｗ抗原を含む。Ｐｗは、水銀非含有方法を含む幾つかの公知の方法によって不活化され得る。このような方法としては、熱（例えば、５５〜６５℃若しくは５６〜６０℃、５〜６０分間若しくは１０〜３０分間にわたる、例えば、６０℃、３０分間にわたる）、ホルムアルデヒド（例えば、０．１％、３７℃にて、２４時間）、グルタルアルデヒド（例えば、０．０５％、室温にて１０分間）、アセトン−Ｉ（例えば、室温にて３回処理）若しくはアセトン−ＩＩ（例えば、室温にて３回処理及び３７℃にて４回目の処理）の不活化が挙げられる（例えば、Gupta et al., 1987, J. Biol. Stand. 15:87; Gupta et al., 1986, Vaccine, 4:185を参照されたい）。併用免疫原性組成物における使用に適した殺傷したＰｗ抗原を調製する方法は、ＷＯ９３／２４１４８に開示されている。
【０１３０】
より詳細には、併用免疫原性組成物は、５〜５０、７〜４０、９〜３５、１１〜３０、１３〜２５、１５〜２１又はおよそ若しくは正確に２０の１用量あたりの量（国際不透明単位、「ＩＯＵ」で）にてＰｗを含む。
【０１３１】
本開示に係るＰｗ含有併用免疫原性組成物の特定の実施形態において、この組成物のＰｗ成分は、低減した反応原性（reactogenicity）を惹起する。Ｐｗワクチンの反応原性（疼痛、熱、腫れなど）は、主に、細菌外膜由来の内毒素であるリポオリゴ糖（「ＬＯＳ」、百日咳菌に関してリポ多糖（「ＬＰＳ」）の同義語；「ＬＯＳ」は、本明細書中で使用される）によって起こる。ＬＯＳのリピドＡ部分が主に関与する。（例えば上で議論した不活化手順によって産生されるような「伝統的な」Ｐｗワクチンに対して）より反応原性の低いＰｗ含有ワクチンを製造するために、内毒素は、遺伝的に若しくは化学的に無毒化されるか、及び／又は外膜から抽出される。しかし、ＬＯＳは免疫系の強力なアジュバントであるので、これは、Ｐｗ抗原の免疫原性を実質的に損なわない方法で行われなければならない。
【０１３２】
１つの実施形態において、開示される併用免疫原性組成物の少なくとも１種の百日咳菌抗原は、ＬＯＳが遺伝的に若しくは化学的に無毒化されている及び／又は抽出されている「低反応原性」Ｐｗ抗原を含む。例えば、Ｐｗ抗原は、ＬＯＳの化学的抽出を開示する目的で参照によって本明細書に組み込まれるＷＯ２００６／００２５０２及びDias et al (2012), Human Vaccines & Immunotherapeutics, 9(2):339-348で開示されるように、ブタノールなどの有機溶媒及び水の混合物による処理を受け得る。
【０１３３】
別の実施形態において、「低反応原性」は、低毒性ＬＯＳを産生するように遺伝的に操作された百日咳菌株からＰｗ抗原を得ることによって、達成される。ＷＯ２００６／０６５１３９（参照によって本明細書に組み込まれる）は、遺伝的３−Ｏ−脱アシル化及び百日咳菌ＬＯＳの無毒化により、少なくとも部分的に３−Ｏ−脱アシル化されたＬＯＳを含む株を得る。併用免疫原性組成物の少なくとも１種の百日咳菌抗原は、従って、デ−Ｏ−アシラーゼなどのリピドＡ修飾酵素を発現するように操作されている百日咳菌の株に由来するＰｗ抗原であり得る。詳細には、このような株は、全て参照によって本明細書に組み込まれるＷＯ２００６／０６５１３９、並びにGeurtsen et al (2006), Infection and Immunity, 74(10):5574-5585及びGeurtsen et al (2007), Microbes and Infection, 9:1096-1103において開示されるとおり、ＰａｇＬを発現し得る。代わりに、又はさらに、Ｐｗ抗原が由来する株は、天然に、又は操作の結果として、リピドＡリン酸基をグルコサミンで修飾する能力を欠く；Ｃ−３’位においてＣ１０−ＯＨ若しくはＣ１２−ＯＨで置換されたリピドＡジグルコサミン骨格を有する；及び／又は末端へプトースを欠く分子ＬＯＳ種を発現する。このような株、１８〜３２３は、Marr et al (2010), The Journal of Infectious Diseases, 202(12):1897-1906（参照によって本明細書に組み込まれる）において開示される。
【０１３４】
免疫原性組成物
本明細書に開示される併用免疫原性組成物は、典型的に薬学的に許容される担体又は賦形剤を含み、任意により追加の抗原を含んでもよい。
【０１３５】
薬学的に許容される担体及び賦形剤は当業者に周知であり、当業者によって選択され得る。たとえば、担体又は賦形剤は好都合には緩衝液を含むことができる。任意で、担体又は賦形剤は、溶解性及び／又は安定性を安定化させる少なくとも１つの成分も含有する。可溶化剤／安定剤の例には界面活性剤、たとえば、ラウレルサルコシン及び／又はツイーン（Ｔｗｅｅｎ）が挙げられる。代替の可溶化剤／安定剤には、アルギニン及びガラス形成ポリオール（たとえば、スクロース、トレハロース等）が挙げられる。多数の薬学的に許容される担体及び／又は薬学的に許容される賦形剤が当該技術で既知であり、たとえば、Remington’s Pharmaceutical Sciences, E.  W.  Martin, Mack Publishing Co., Easton, PA, 5th Edition (975)に記載されている。
【０１３６】
従って、好適な賦形剤及び担体が当業者によって選択され、選択された投与経路によって対象に送達するために好適な製剤を製造することができる。
【０１３７】
好適な賦形剤には、限定されないが、グリセロール、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ソルビトール、トレハロース、Ｎ−ラウロイルサルコシンナトリウム塩、Ｌ−プロリン、非界面活性剤スルホベタイン、塩酸グアニジン、尿素、酸化トリメチルアミン、ＫＣｌ、Ｃａ２＋、Ｍｇ２＋、Ｍｎ２＋、Ｚｎ２＋及びそのほかの二価のカチオン関連塩、ジチオスレイトール、ジチオエリトール、及びβ−メルカプトエタノールが挙げられる。そのほかの賦形剤は、界面活性剤（Ｔｗｅｅｎ８０、Ｔｗｅｅｎ２０、ＴｒｉｔｏｎＸ−１００、ＮＰ−４０、ＥｍｐｈｉｇｅｎＢＢ、オクチルグルコシド、ラウロイルマルトシド、Ｚｗｉｔｔｅｒｇｅｎｔ（両性洗浄剤）３−０８、Ｚｗｉｔｔｅｒｇｅｎｔ３−０、Ｚｗｉｔｔｅｒｇｅｎｔ３−２、Ｚｗｉｔｔｅｒｇｅｎｔ３−４、Ｚｗｉｔｔｅｒｇｅｎｔ３−６、ＣＨＡＰＳ、デオキシコール酸ナトリウム、ドデシル硫酸ナトリウム、臭化セチルトリメチルアンモニウムを含む）であり得る。
【０１３８】
任意で、開示される併用免疫原性組成物はアジュバントも含み、このアジュバントは開示されるワクチンレジメン、方法、使用及びキットでも使用することができる。ＲＳＶ及び／又は百日咳菌感染に感受性の（又はリスクが高い）特定の年齢群の対象に併用免疫原性組成物を投与しようとする場合、対象及び対象の集団にて安全で且つ有効であるようにアジュバントを選択する。従って、高齢者対象（たとえば、６５歳を超える対象）での投与用に併用免疫原性組成物を製剤化する場合、高齢者対象にて安全で且つ有効であるようにアジュバントを選択する。同様に、併用免疫原性組成物が、新生児又は乳児の対象（出生から２歳までの対象など）に投与することを意図される場合、新生児及び乳児にて安全で且つ有効であるようにアジュバントを選択する。新生児及び幼児における安全性と有効性のために選択されるアジュバントの場合、成人対象に通常投与される用量の希釈（たとえば、部分用量）であるアジュバントの用量を選択することができる。
【０１３９】
さらに、併用免疫原性組成物が投与される投与の経路を介して投与される場合、アジュバントは通常、免疫応答の所望の態様を高めるように選択される。たとえば、鼻内投与用に併用免疫原性組成物を製剤化する場合、プロテオソーム及びプロトリンが好都合なアジュバントである。それに対して、併用免疫原性組成物を筋肉内投与用に製剤化する場合、１以上の３Ｄ−ＭＰＬ、スクアレン（たとえば、ＱＳ２１）、リポソーム及び／又は油と水のエマルションなどのアジュバントが好都合に選択される。
【０１４０】
ＲＳＶ  Ｆタンパク質類似体抗原との併用で使用するために好適なアジュバントの１つは、非毒性の細菌性リポ多糖誘導体である。リピドＡの好適な非毒性誘導体の例は、モノホスホリルリピドＡ、又はさらに詳しくは３−脱アセチル化モノホスホリルリピドＡ（３Ｄ−ＭＰＬ）である。３Ｄ−ＭＰＬは、ＭＰＬの名称のもとでＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ Ｎ．Ａ．によって販売され、文書全体を通してＭＰＬ又は３Ｄ−ＭＰＬと呼ばれる。例えば米国特許第４，４３６，７２７；同第４，８７７，６１１号；同第４，８６６，０３４号及び同第４，９１２，０９４号を参照のこと。３Ｄ−ＭＰＬは、ＩＦＮ−γ（Ｔｈ１）表現型を持つＣＤ４＋Ｔ細胞の応答を促進する。３Ｄ−ＭＰＬは、ＧＢ２２２０２１１Ａで開示された方法に従って製造することができる。化学的には、それは、３，４，５又は６のアシル化鎖を持つ３−脱アセチル化モノホスホリルリピドＡの混合物である。本開示の組成物では、小粒子３Ｄ−ＭＰＬを使用することができる。小粒子３Ｄ−ＭＰＬは、０．２２μｍのフィルターを介して無菌濾過できるような粒度を有する。そのような調製物はＷＯ９４／２１２９２に記載されている。
【０１４１】
３Ｄ−ＭＰＬなどのリポ多糖は、免疫原性組成物のヒト用量当たり１〜５０μｇの量で使用することができる。そのような３Ｄ−ＭＰＬは、約２５μｇのレベルで、たとえば、２０〜３０μｇの間で、好適には２１〜２９μｇの間で、又は２２〜２８μｇの間で、又は２３〜２７μｇの間で、又は２４〜２６μｇの間で、又は２５μｇで使用することができる。別の実施形態では、免疫原性組成物のヒト用量は、約１０μｇのレベルで、たとえば、５〜１５μｇの間で、好適には６〜１４μｇの間で、たとえば、７〜１３μｇの間で、又は８〜１２μｇの間で、又は９〜１１μｇの間で、又は１０μｇのレベルで３Ｄ−ＭＰＬを含む。さらなる実施形態では、免疫原性組成物のヒト用量は、約５μｇのレベルで、たとえば、１〜９μｇの間で、又は２〜８μｇの間で、好適には３〜７μｇの間で、又は４μｇ又は５μｇのレベルで３Ｄ−ＭＰＬを含む。
【０１４２】
他の実施形態では、リポ多糖は、米国特許第６，００５，０９９号及び欧州特許第０７２９４７３Ｂ１号に記載されたようにβ（１〜６）グルコサミン二糖であり得る。当業者は、これらの参考文献の教示に基づいて３Ｄ−ＭＰＬのような種々のリポ多糖を容易に製造することができる。それにもかかわらず、これら参考文献のそれぞれは、参照によって本明細書に組み入れられる。前述の免疫賦活剤（ＬＰＳ又はＭＰＬ又は３Ｄ−ＭＰＬに似た構造の）に加えて、ＭＰＬの上記構造の一部であるアシル化された単糖及び二糖の誘導体も好適なアジュバントである。他の実施形態では、アジュバントはリピドＡの合成誘導体であり、その一部は、ＴＬＲ−４作動薬として記載され、ＯＭ１７４（２−デオキシ−６−ｏ−［２−デオキシ−２−［（Ｒ）−３−ドデカノイルオキシテトラ−デカノイルアミノ］−４−ｏ−ホスホノ−β−Ｄ−グルコピラノシル］−２−［（Ｒ）−３−ヒドロキシテトラデカノイルアミノ］−β−Ｄ−グルコピラノシルジヒドロゲノホスフェート）、（ＷＯ９５／１４０２６）；ＯＭ２９４ＤＰ（３Ｓ，９Ｒ）−３−［（Ｒ）−ドデカノイルオキシテトラデカノイルアミノ］−４−オキソ−５−アザ−９（Ｒ）−［（Ｒ）−３−ヒドロキシテトラデカノイルアミノ］デカン−１，１０−ジオール、１，１０−ビス（ジヒドロゲノホスフェート）（ＷＯ９９／６４３０１及びＷＯ００／０４６２）；及びＯＭ１９７ＭＰ−ＡｃＤＰ（３Ｓ−，９Ｒ）−３−（Ｒ）−ドデカノイルオキシテトラデカノイルアミノ］−４−オキソ−５−アザ−９−［（Ｒ）−３−ヒドロキシテトラデカノイルアミノ］デカン−１，１０−ジオール、１−ジヒドロゲノホスフェート１０−（６−アミノヘキサノエート）（ＷＯ０１／４６１２７）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１４３】
使用することができるそのほかのＴＬＲ４リガンドは、たとえば、ＷＯ９８／５０３９９又は米国特許第６，３０３，３４７号で開示された（ＡＧＰの調製方法も開示されている）もののようなアルキルグルコサミニドホスフェート（ＡＧＰｓ）であり、好適には、ＲＣ５２７若しくはＲＣ５２９、又は米国特許第６，７６４，８４０号で開示されたようなＡＧＳの薬学上許容可能な塩である。一部のＡＧＰはＴＬＲ４の作動薬であり、一部はＴＬＲ４の拮抗剤である。双方共アジュバントとして有用であると思われる。
【０１４４】
ＴＬＲ−４を介したシグナル伝達反応（Sabroe et al, JI 2003 p1630-5）を起こすことが可能であるそのほかの好適なＴＬＲ−４リガンドは、たとえば、グラム陰性細菌に由来するリポ多糖及びその誘導体又はその断片、特にＬＰＳの非毒性誘導体（たとえば、３Ｄ−ＭＰＬ）である。そのほかの好適なＴＬＲ作動薬は、熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）１０、６０、６５、７０、７５又は９０；サーファクタントプロテインＡ、ヒアルロナンオリゴ糖、ヘパラン硫酸断片、フィブロネクチン断片、フィブリノーゲンペプチド及びｂ−デフェンシン−２、及びムラミルジペプチド（ＭＤＰ）である。一実施形態では、ＴＬＲ作動薬はＨＳＰ６０，７０又は９０である。ほかの好適なＴＬＲ−４リガンドは、ＷＯ２００３／０１１２２３及びＷＯ２００３／０９９１９５に記載されており、たとえば、ＷＯ２００３／０１１２２３の４〜５ページ又はＷＯ２００３／０９９１９５の３〜４ページで開示された化合物Ｉ、化合物ＩＩ及び化合物ＩＩＩ、特にＥＲ８０３０２２、ＥＲ８０３０５８、ＥＲ８０３７３２、ＥＲ８０４０５３、ＥＲ８０４０５７、ＥＲ８０４０５８、ＥＲ８０４０５９、ＥＲ８０４４４２、ＥＲ８０４６８０及びＥＲ８０４７６４としてＷＯ２００３／０１１２２３で開示されたそれら化合物である。たとえば、好適なＴＬＲ−４リガンドの１つはＥＲ８０４０５７である。
【０１４５】
さらなるＴＬＲ作動薬もアジュバントとして有用である。用語「ＴＬＲ作動薬（アゴニスト）」は、直接的なリガンドとして又は内因性若しくは外因性のリガンドの生成を介して間接的に、ＴＬＲシグナル伝達経路を介したシグナル伝達反応を起こすことが可能である剤を指す。そのような天然の又は合成のＴＬＲ作動薬は、代わりの又は追加のアジュバントとして使用することができる。アジュバント受容体としてのＴＬＲの役割の手短な概説は、Kaisho及びAkira, Biochimica et Biophysica Acta 1589:1-13, 2002に提供されている。これらの潜在的なアジュバントには、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８及びＴＬＲ９についての作動薬が挙げられるが、これらに限定されない。従って、一実施形態では、アジュバント及び併用免疫原性組成物はさらに、ＴＬＲ−１作動薬、ＴＬＲ−２作動薬、ＴＬＲ−３作動薬、ＴＬＲ−４作動薬、ＴＬＲ−５作動薬、ＴＬＲ−６作動薬、ＴＬＲ−７作動薬、ＴＬＲ−８作動薬、ＴＬＲ−９作動薬又はこれらの組み合わせから成る群から選択されるアジュバントを含む。
【０１４６】
本開示の一実施形態では、ＴＬＲ−１を介してシグナル伝達反応を起こすことが可能であるＴＬＲ作動薬が使用される。好適には、ＴＬＲ−１を介してシグナル伝達反応を起こすことが可能であるＴＬＲ作動薬は、トリアシル化リポペプチド（ＬＰｓ）；フェノール可溶性モジュリン；結核菌（Mycobacterium tuberculosis）ＬＰ；Ｓ−（２，３−ビス（パルミトイルオキシ）−（２−ＲＳ）−プロピル）−Ｎ−パルミトイル−（Ｒ）−Ｃｙｓ−（Ｓ）−Ｓｅｒ−（Ｓ）−Ｌｙｓ（４）−ＯＨ、細菌性リポタンパク質のアシル化アミノ末端を模倣するトリヒドロクロリド（Ｐａｍ３Ｃｙｓ）ＬＰ及びボレリア・ブルグドルフェリ（Borrelia burgdorferi）由来のＯｓｐＡ ＬＰから選択される。
【０１４７】
代替の実施形態では、ＴＬＲ−２を介してシグナル伝達反応を起こすことが可能であるＴＬＲ作動薬が使用される。好適には、ＴＬＲ−２を介してシグナル伝達反応を起こすことが可能であるＴＬＲ作動薬は、結核菌（M tuberculosis）、Ｂ．ブルグドルフェリ（B burgdorferi）又はトレポネーマ・パリダム（T pallidum）に由来するリポタンパク質、ペプチドグリカン、細菌性リポペプチド；黄色ブドウ球菌（Staphylococcus aureus）を含む種に由来するペプチドグリカン；リポタイコ酸、マンヌロン酸、ナイセリアポリン、細菌性線毛、エルシニア毒性因子、ＣＭＶビリオン、麻疹血液凝集素及び酵母由来のザイモサンの１以上である。
【０１４８】
代替の実施形態では、ＴＬＲ−３を介してシグナル伝達反応を起こすことが可能であるＴＬＲ作動薬が使用される。好適には、ＴＬＲ−３を介してシグナル伝達反応を起こすことが可能であるＴＬＲ作動薬は、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）又はポリイノシン−ポリシチジン酸（ポリＩＣ）、ウイルス感染に関連する分子核酸パターンである。
【０１４９】
代替の実施形態では、ＴＬＲ−５を介してシグナル伝達反応を起こすことが可能であるＴＬＲ作動薬が使用される。好適には、ＴＬＲ−５を介してシグナル伝達反応を起こすことが可能であるＴＬＲ作動薬は、細菌性フラジェリンである。
【０１５０】
代替の実施形態では、ＴＬＲ−６を介してシグナル伝達反応を起こすことが可能であるＴＬＲ作動薬が使用される。好適には、ＴＬＲ−６を介してシグナル伝達反応を起こすことが可能であるＴＬＲ作動薬は、マイクバクテリアリポタンパク質、ジアシル化ＬＰ、及びフェノール可溶性モジュリンである。別のＴＬＲ６作動薬はＷＯ２００３／０４３５７２に記載されている。
【０１５１】
代替の実施形態では、ＴＬＲ−７を介してシグナル伝達反応を起こすことが可能であるＴＬＲ作動薬が使用される。好適には、ＴＬＲ−７を介してシグナル伝達反応を起こすことが可能であるＴＬＲ作動薬は、一本鎖ＲＮＡ（ｓｓＲＮＡ）、ロキソリビン、Ｎ７位及びＣ８位におけるグアノシン類似体、又はイミダゾキノリン化合物若しくはその誘導体である。一実施形態では、ＴＬＲ作動薬はイミキモドである。さらなるＴＬＲ７作動薬はＷＯ２００２／０８５９０５に記載されている。
【０１５２】
代替の実施形態では、ＴＬＲ−８を介してシグナル伝達反応を起こすことが可能であるＴＬＲ作動薬が使用される。好適には、ＴＬＲ−８を介してシグナル伝達反応を起こすことが可能であるＴＬＲ作動薬は、一本鎖ＲＮＡ（ｓｓＲＮＡ）、抗ウイルス活性を有するイミダゾキノリン分子、たとえば、レシキモド（Ｒ８４８）であり；レシキモドもＴＬＲ−７による認識が可能である。使用することができるそのほかのＴＬＲ−８作動薬には、ＷＯ２００４／０７１４５９に記載されたものが挙げられる。
【０１５３】
代替の実施形態では、ＴＬＲ−９を介してシグナル伝達反応を起こすことが可能であるＴＬＲ作動薬が使用される。一実施形態では、ＴＬＲ−９を介してシグナル伝達反応を起こすことが可能であるＴＬＲ作動薬は、ＨＳＰ９０である。或いは、ＴＬＲ−９を介してシグナル伝達反応を起こすことが可能であるＴＬＲ作動薬は、細菌性又はウイルス性のＤＮＡであり、ＤＮＡは、特にＣｐＧモチーフとして知られる配列の文脈にて非メチル化ＣｐＧヌクレオチドを含有する。ＣｐＧを含有するオリゴヌクレオチドはＴｈ１反応を優勢に誘導する。そのようなオリゴヌクレオチドは周知であり、たとえば、ＷＯ９６／０２５５５、ＷＯ９９／３３４８８及び米国特許第６，００８，２００号及び同第５，８５６，４６２号に記載されている。好適には、ＣｐＧヌクレオチドはＣｐＧオリゴヌクレオチドである。併用免疫原性組成物で使用するのに好適なオリゴヌクレオチドは、少なくとも３つ、好適には少なくとも６つ以上のヌクレオチドによって分離される２以上のジヌクレオチドＣｐＧモチーフを任意で含有してもよいＣｐＧ含有オリゴヌクレオチドである。ＣｐＧモチーフは、グアニンヌクレオチドが後に続くシトシンヌクレオチドである。ＣｐＧオリゴヌクレオチドは通常、デオキシヌクレオチドである。特定の実施形態では、ホスホジエステル結合及びそのほかのヌクレオチド間結合が可能であるが、オリゴヌクレオチドにおけるヌクレオチド間はホスホロジチオエート結合又は好適にはホスホロチオエート結合である。また混合されたヌクレオチド間結合を伴うオリゴヌクレオチドも可能である。ホスホロチオエートオリゴヌクレオチド又はホスホロジチオエートを作製する方法は、米国特許第５，６６６，１５３号、同第５，２７８，３０２号及びＷＯ９５／２６２０４に記載されている。
【０１５４】
たとえば、開示された併用免疫原性組成物で並びにＰｒｅＦ類似体などのＦタンパク質を含む開示されたワクチン接種レジメン、方法、使用及びキットと共に使用することができるそのほかのアジュバントは、それ自体に又は３Ｄ−ＭＰＬ若しくは本明細書に記載する別のアジュバントとの組み合わせで、たとえば、ＱＳ２１などのサポニンである。そのようなアジュバントは、典型的には百日咳菌抗原と共に使用されない（が所望の場合には使用してもよい）。
【０１５５】
サポニンは、Lacaille-Dubois, M及びWagner H.（1996. A review of the biological and pharmacological activities of saponins. Phytomedicine vol 2 pp 363-386）にて教示されている。サポニンは、植物界及び海洋動物界に広く分布するステロイド又はトリテルペングリコシドである。サポニンは、振盪すると泡立つコロイド状水溶液を形成し、コレステロールを沈殿させることについて言及される。サポニンは細胞膜の近傍にあると、膜を破裂させる膜における孔様の構造を創る。赤血球の溶血はこの現象の例であり、それは、サポニンすべてではないが、特定のサポニンの特性である。
【０１５６】
サポニンは、全身投与用のワクチンでアジュバントとして知られる。個々のサポニンのアジュバント活性と溶血活性は当該技術で広範に研究されている（Lacaille-Dubois及びWagner、上記）。たとえば、ＱｕｉｌＡ（南米の樹木Quillaja Saponaria Molinaの樹皮に由来する）及びその分画は米国特許第５，０５７，５４０号及び“Saponins as vaccine adjuvants”、 Kensil, C. R., Crit Rev Ther Drug Carrier Syst, 1996, 12 (1-2):1-55；及びＥＰ０３６２２７９Ｂ１に記載されている。ＱｕｉｌＡの分画を含む免疫刺激複合体（ＩＳＣＯＭＳ）と呼ばれる粒子状の構造は、溶血性であり、ワクチンの製造に使用されている（Morein, B., ＥＰ ０ １０９ ９４２ Ｂ１；ＷＯ９６／１１７１１；ＷＯ９６／３３７３９）。溶血性のサポニンＱＳ２１及びＱＳ１７（ＱｕｉｌＡのＨＰＬＣ精製した分画）は、強力な全身性アジュバントとして記載されており、その製造方法は、米国特許第５，０５７，５４０号及びＥＰ０３６２２７９Ｂ１に記載されており、それらは参照によって本明細書に組み入れられる。全身性ワクチン接種の研究で使用されているそのほかのサポニンには、Gypsophila及びSaponariaのような植物種に由来するものが挙げられる（Bomford et al., Vaccine, 10(9):572-577, 1992）。
【０１５７】
ＱＳ２１は、Quillaja Saponaria Molinaの樹皮に由来するＨＰＬＣ精製した非毒性の分画である。ＱＳ２１の製造方法は、米国特許第５，０５７，５４０号に開示されている。ＱＳ２１を含有する非反応原性のアジュバント製剤はＷＯ９６／３３７３９に記載されている。前述の参考文献は参照によって本明細書に組み入れられる。ＱＳ２１のような前記免疫学的に活性のあるサポニンは、併用免疫原性組成物のヒト用量当たり１〜５０μｇの量で使用することができる。有利なことに、ＱＳ２１は、約２５μｇのレベルで、たとえば、２０〜３０μｇの間で、好適には２１〜２９μｇの間で、又は２２〜２８μｇの間で、又は２３〜２７μｇの間で、又は２４〜２６μｇの間で、又は２５μｇで使用することができる。別の実施形態では、併用免疫原性組成物のヒト用量は、約１０μｇのレベルで、たとえば、５〜１５μｇの間で、好適には６〜１４μｇの間で、たとえば、７〜１３μｇの間で、又は８〜１２μｇの間で、又は９〜１１μｇの間で、又は１０μｇのレベルでＱＳ２１を含む。さらなる実施形態では、併用免疫原性組成物のヒト用量は、約５μｇのレベルで、たとえば、１〜９μｇの間で、又は２〜８μｇの間で、又は好適には３〜７μｇ又は４〜６μｇの間で、又は５μｇのレベルでＱＳ２１を含む。ＱＳ２１とコレステロールを含むそのような製剤は、抗原と共に製剤化されると功を奏するアジュバントであることが示されている。従って、たとえば、ＱＳ２１とコレステロールの組み合わせを含むアジュバントを伴った併用免疫原性組成物にてＲＳＶ  Ｆタンパク質類似体ポリペプチドを好都合に採用することができる。
【０１５８】
任意で、アジュバントはまた、たとえば、アルミニウム塩、特に水酸化アルミニウム若しくはリン酸アルミニウム、又はリン酸カルシウムなどの無機塩を含むことができる。たとえば、アルミニウム塩（たとえば、水酸化アルミニウム又は「ミョウバン」）との組み合わせで３Ｄ−ＭＰＬを含有するアジュバントは、ヒト対象に投与するためのＲＳＶ  Ｆタンパク質類似体抗原を含有する併用免疫原性組成物での製剤化に好適である。あるいは、そのような無機塩アジュバントは、非無機塩アジュバントと併用する以外で用いてもよく、すなわち、併用免疫原性組成物は、無機塩アジュバント、例えば水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、及びリン酸カルシウムなどの１種のみ、又は２種以上でアジュバント添加してもよい。
【０１５９】
ＲＳＶ  Ｆタンパク質類似体抗原と共に（そして場合により、所望であれば、精製無細胞百日咳菌タンパク質などのパータシス抗原と共に）製剤化するのに使用するために好適なアジュバントの別のクラスには、ＯＭＰに基づく免疫賦活組成物が挙げられる。ＯＭＰに基づく免疫賦活組成物は、たとえば、鼻内投与用の粘膜アジュバントとして特に好適である。ＯＭＰに基づく免疫賦活組成物は、細菌性又はウイルス性の抗原のような免疫原のためのキャリアとして又は組成物にて有用である、たとえば、ナイセリア（Neisseria）種（たとえば、Lowell et al., J. Exp. Med. 167:658, 1988; Lowell et al., Science 240:800, 1988; Lynch et al., Biophys. J. 45:104, 1984; Lowell, "New Generation Vaccines" 2nd ed., Marcel Dekker, Inc., New York, Basil, Hong Kong, p.193, 1997；米国特許第５，７２６，２９２号；同第４，７０７，５４３号を参照）のような、しかし、これらに限定されないグラム陰性細菌に由来する外膜タンパク質（一部のポリンなどのＯＭＰ）の調製物に属する。一部のＯＭＰに基づく免疫賦活組成物は、「プロテオソーム」と呼ぶことができ、それは疎水性であり、ヒトでの使用に安全である。プロテオソームは、約２０ｎｍ〜約８００ｎｍの小胞又は小胞様のＯＭＰクラスターに自己集合する能力を有し、タンパク質抗原（Ａｇ）、特に疎水性部分を有する抗原と非共有性に取り込み、配位し、会合し（たとえば、静電気的に又は疎水性に）、又はさもなければ共同する。多分子膜構造又は１以上のＯＭＰの溶融球状ＯＭＰ組成物などの小胞形態又は小胞様形態で外膜タンパク質を生じる任意の調製方法は、プロテオソームの定義の範囲内に含まれる。たとえば、当該技術（たとえば、米国特許第５，７２６，２９２号又は同第５，９８５，２８４号）に記載されたようにプロテオソームを調製することができる。プロテオソームはまた、ＯＭＰポリンを製造するのに使用される細菌（たとえば、ナイセリア種）を起源とする内因性のリポ多糖又はリポオリゴ糖（それぞれＬＰＳ又はＬＯＳ）を含有することができ、それらは一般にＯＭＰ調製物全体の２％未満である。
【０１６０】
プロテオソームは髄膜炎菌（Neisseria menigitidis）から化学的に抽出された外膜タンパク質（ＯＭＰ）（ほとんど、クラス４のＯＭＰと同様にポリンＡ及びＢ）から主として構成され、界面活性剤によって溶液中に維持される（Lowell GH. Proteosomes for Improved Nasal, Oral, or Injectable Vaccines. Levine MM, Woodrow GC, Kaper JB, Cobon GS, eds, New Generation Vaccines. New York: Marcel Dekker, Inc. 1997; 193-206）。プロテオソームは、たとえば、透析濾過又は従来の透析工程によって、本明細書で開示されるＲＳＶ  Ｆタンパク質ポリペプチドを含むウイルス供給源に由来する精製された又は組換えのタンパク質のような種々の抗原と共に、あるいは精製百日咳菌抗原性タンパク質と共に、製剤化することができる。界面活性剤を徐々に取り除くことによって約１００〜２００ｎｍの直径の粒子状疎水性の複合体を形成することができる（Lowell GH. Proteosomes for Improved Nasal, Oral, or Injectable Vaccines. Levine MM, Woodrow GC, Kaper JB, Cobon GS, eds, New Generation Vaccines. New York: Marcel Dekker, Inc. 1997; 193-206）。
【０１６１】
「プロテオソーム：ＬＰＳ又はプロトリン」は、本明細書で使用されるとき、少なくとも１種のリポ多糖と、例えば外因性添加によって混合されてＯＭＰ−ＬＰＳ組成物（免疫賦活組成物として機能することができる）を提供するプロテオソームの調製物を指す。従って、ＯＭＰ−ＬＰＳ組成物は、（１）たとえば、髄膜炎菌のようなグラム陰性細菌から調製されるプロテオソームの外膜タンパク質調製物（たとえば、プロジュバント）と（２）１以上のリポ糖の調製物を含む、プロトリンの２つの基本成分で構成することができる。リポオリゴ糖は、外因性であることができ（たとえば、ＯＭＰプロテオソーム調製物に天然に含有される）、外因性に調製されたリポオリゴ糖（たとえば、ＯＭＰ調製物とは異なった培養物又は微生物から調製された）と混合することができ又は組み合わせることができ、あるいはそれらの組み合わせであることができる。そのような外因性に添加されるＬＰＳは、ＯＭＰ調製物が作製されたのと同じグラム陰性細菌に由来することができ、又は異なったグラム陰性細菌に由来することができる。プロトリンはまた、任意で脂質、糖脂質、糖タンパク質、小分子等、及びそれらの組み合わせを含むことが理解されるべきである。プロトリンは、たとえば、米国特許出願公開第２００３／００４４４２５号に記載されたように調製することができる。
【０１６２】
上述のもののような異なるアジュバントの組み合わせも、Ｆタンパク質類似体、例えばＰｒｅＦ抗原など（そして場合により、所望であれば百日咳菌抗原）を含む組成物で使用することができる。たとえば、すでに言及したように、ＱＳ２１を３Ｄ−ＭＰＬと一緒に製剤化することができる。ＱＳ２１：３Ｄ−ＭＰＬの比率は通常、たとえば、１：５〜５：１のような１：１０〜１０：１の桁であり、実質的に１：１であることが多い。通常、比率は、２．５：１〜１：３の３Ｄ−ＭＰＬ：ＱＳ２１の範囲である。別の組み合わせアジュバントの製剤には、３Ｄ−ＭＰＬと、たとえば、水酸化アルミニウムのようなアルミニウム塩が挙げられる。
【０１６３】
一部の例では、アジュバント製剤は、アルミニウム塩（ミョウバン）、たとえば、リン酸アルミニウム若しくは水酸化アルミニウム、又はリン酸カルシウムなどの無機塩を含む。ミョウバンが、たとえば、３Ｄ−ＭＰＬとの組み合わせで存在する場合、量は通常、用量当たり、約１００μｇ〜１ｍｇの間、たとえば、約１００μｇ、又は約２００μｇ〜約７５０μｇ、たとえば、約５００μｇである。
【０１６４】
一部の実施形態では、アジュバントは、油と水のエマルション、たとえば、水中油型エマルションを含む。水中油型エマルションの一例は、水性キャリア中に代謝可能な油、たとえば、スクアレン、トコフェロールのようなトコール、たとえば、α−トコフェロール、及びたとえば、トリオレイン酸ソルビタン（スパン８５（商標））又はモノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（ツイーン８０（商標））のような界面活性剤を含む。特定の実施形態では、水中油型エマルションは、追加の免疫賦活剤を含有しない（特に３Ｄ−ＭＰＬのような非毒性リピドＡ誘導体又はＱＳ２１のようなサポニンを含有しない）。水性キャリアは、たとえば、リン酸緩衝生理食塩水であり得る。さらに、水中油型エマルションは、スパン８５及び／又はレシチン及び／又はトリカプリリンを含有することができる。
【０１６５】
別の実施形態では、併用免疫原性組成物は、水中油型エマルションを含み、場合によりさらなる免疫賦活剤を含んでもよく、前記水中油型エマルションは、０．５〜１０ｍｇの代謝可能な油（好適にはスクアレン）、０．５〜１１ｍｇのトコール（好適には、α−トコフェロールのようなトコフェロール）及び０．４〜４ｍｇの乳化剤を含む。
【０１６６】
特定の一実施形態では、アジュバント製剤は、水中油型エマルションのようなエマルション形態で調製された３Ｄ−ＭＰＬを含む。場合によっては、エマルションはＷＯ９４／２１２９２で開示されたように直径２μｍ未満の小さな粒度を有する。たとえば、３Ｄ−ＭＰＬの粒子は、０．２２μｍの膜を介して滅菌濾過されるのに十分なくらい小さくてもよい（欧州特許第０６８９４５４号に記載されたように）。或いは、３Ｄ−ＭＰＬはリポソーム製剤に調製することができる。任意で、３Ｄ−ＭＰＬ（又はその誘導体）を含有するアジュバントは、追加の免疫賦活成分も含む。
【０１６７】
アジュバントは、免疫原性組成物が投与される集団にて安全で且つ有効であるように選択される。成人集団及び高齢者集団については、製剤は通常、乳児用製剤で通常見られるアジュバント成分より多くを含む。特にエマルションのような水中油型エマルションを用いた製剤は、たとえば、コレステロール、スクアレン、α−トコフェロール及び／又はたとえば、ツイーン８０若しくはスパン８５のような界面活性剤のような追加の成分を含むことができる。例となる製剤では、そのような成分は、以下の量：約１〜５０ｍｇのコレステロール、２〜１０％のスクアレン、２〜１０％のα−トコフェロール、０．３〜３％のツイーン８０で存在することができる。通常、スクアレン：α−トコフェロールの比率は、これがさらに安定なエマルションを提供する場合、等しいか又は１未満である。場合によっては、製剤は安定剤も含有することができる。
【０１６８】
ＲＳＶ  Ｆタンパク質ポリペプチド抗原を含む併用免疫原性組成物を乳児に投与するために製剤化する場合、アジュバントの投与量は、乳児対象で有効であり、相対的に反応原性ではないように決定される。一般に、乳児用製剤におけるアジュバントの投与量は、成人（たとえば、６５歳以上の成人）への投与で設計される製剤で使用されるものより低い（たとえば、用量は、成人に投与される製剤で提供される用量の部分であってもよい）。たとえば、３Ｄ−ＭＰＬの量は通常、用量当たり１μｇ〜２００μｇ、たとえば、１０〜１００μｇ又は１０〜５０μｇの範囲である。乳児用量は通常、この範囲、たとえば、約１μｇ〜約５０μｇの低い方の端であり、たとえば、約２μｇ、又は約５μｇ、又は約１０μｇ、又は約２５μｇまで又は約５０μｇまでである。通常、ＱＳ２１が製剤で使用される場合、この範囲は同程度である（及び上記比率に従って）。油と水のエマルション（たとえば、水中油型エマルション）の場合、小児又は乳児に提供されるアジュバントの用量は、成人対象に投与される用量の一部分であり得る。種々の用量での例となる水中油型アジュバントとの組み合わせでＰｒｅＦ抗原を含有する免疫原性組成物の有効性の実証はＷＯ２０１０／１４９７４５に提供される。
【０１６９】
母体免疫のためのＲＳＶ  Ｆタンパク質類似体及び百日咳菌抗原を含有する（開示された併用免疫原性組成物を含む）組成物において、組成物は、強力な中和抗体応答を誘導するように設計される。母体は、既にＲＳＶ及び百日咳菌に暴露されており、したがって、既存のプライミングされた応答を有し得る。そのため、乳児に対する防御を提供する目的は、このプライミングされた応答を可能な限り有効に、そして高効率に胎盤を通過することができるＩｇＧ１などの抗体サブクラスに関して追加刺激（ブースト）し、乳児に防御を提供することである。これは、アジュバントを含まずに達成することができるし、又は無機塩のみ、特に水酸化アルミニウム（ミョウバン）、リン酸化アルミニウム又はリン酸カルシウムのみを含むアジュバントを含めて達成してもよい。あるいは、これは、水中油型エマルションアジュバント、又はＩｇＧ１サブクラスの抗体の産生を増強する別のアジュバントを用いて製剤化することにより達成してもよい。したがって、母体免疫に使用するためのＦタンパク質類似体は、好ましくは、無機塩、望ましくはミョウバンを用いて、又は水中油型エマルションアジュバントを用いて製剤化する。
【０１７０】
この文脈において、アジュバントは、妊婦において安全でありかつ十分に許容されるように選択される。場合により、免疫原性組成物はまたミョウバン以外のアジュバントを含む。例えば、３Ｄ−ＭＰＬ、スクアレン（例えばＱＳ２１）、リポソーム、及び／又は水中油型エマルションの１種以上を含むアジュバントを選択することが好ましい。ただし、最終的な製剤が、プライミングされた雌において所望の特性を有するＲＳＶ及び／又は百日咳菌特異的抗体（例えばサブクラスであり、中和機能を有するもの）の産生を増強するものとする。
【０１７１】
選択されるアジュバントにかかわりなく、最終製剤中の濃度は、標的集団で安全且つ有効であるように算出されることに留意すべきである。例えば、母体免疫の状況において、選択したアジュバントにかかわらず、最終製剤中の濃度は、妊娠雌の標的集団において安全かつ有効であるように計算される。
【０１７２】
本明細書に開示される免疫原性組成物（すなわち併用免疫原性組成物）又は開示されるワクチン接種レジメン、方法、使用及びキットにおいて使用するための免疫原性組成物は通常、免疫防御量（又はその部分用量）の抗原を含有し、慣用的な技法により調製することができる。母体免疫の場合には、必要な量は、免疫された妊娠女性の乳児において免疫防御となるような抗体の受動移行をもたらす量である。ヒト対象への投与用のものを含む免疫原性組成物の調製は、一般に、Pharmaceutical Biotechnology, Vol.61  Vaccine Design-the subunit and adjuvant approach, Powell and Newman編, Plenurn Press, 1995.  New Trends and Developments in Vaccines, Voller et al. 編, University Park Press, Baltimore, Maryland, U.S.A. 1978に記載されている。リポソーム内への封入は、Fullertonによる米国特許第４，２３５，８７７号に記載されている。高分子へのタンパク質のコンジュゲートは、たとえば、Likhiteによる米国特許第４，３７２，９４５号及びArmorらによる同第４，４７４，７５７号に開示されている。
【０１７３】
通常、免疫原性組成物の各用量における抗原（例えばタンパク質）の量は、典型的な対象にて重大な有害な副作用なしに免疫防御の応答を誘導する量として選択される。この文脈での免疫防御は、感染に対する完全な防御を必ずしも意味するものではなく；症状又は疾患、特に病原体に関連した重篤な疾患に対する防御を意味する。抗原の量は、どの特定の免疫原が採用されるかによって変化し得る。一般に、各ヒト用量は、１〜１０００μｇの各タンパク質又は抗原、たとえば、約１μｇ〜約１００μｇ、たとえば、約１μｇ〜約５０μｇ、たとえば、約１μｇ、約２μｇ、約５μｇ、約１０μｇ、約１５μｇ、約２０μｇ、約２５μｇ、約３０μｇ、約４０μｇ、又は約５０μｇ又は約６０μｇを含むことが予想される。一般に、ヒト用量は０．５ｍｌの容量である。したがって、本明細書において記載される使用及び方法のための組成物は、例えば０．５ｍｌのヒト用量において１０μｇ、又は３０μｇ、又は６０μｇとすることができる。免疫原性組成物で利用される量は、対象集団（例えば、乳児又は高齢者又は妊娠女性）に基づいて選択される。特定の組成物の最適な量は、対象における抗体力価及びそのほかの応答の所見を含む標準的な検討によって確定することができる。最初のワクチン接種後、約４〜１２週間で（又は母体免疫の場合には乳児の出産前の任意の時点で、好ましくは出産予定日の少なくとも２週間前又は少なくとも４週間前に）、対象に追加刺激（ブースト）を与えることができる。たとえば、免疫原性組成物を幼児対象に投与する場合、最初の接種とそれに続く接種は、この期間に投与される他のワクチンと適合するように投与することができる。
【０１７４】
さらなる製剤の詳細は、ＷＯ２０１０／１４９７４５において見出され得、これは、ＲＳＶ  Ｆタンパク質類似体、例えばＰｒｅＦ類似体を含む免疫原性組成物の製剤に関するさらなる詳細を提供する目的で、参照によって本明細書に組み込まれる。
【０１７５】
特定の実施形態において、開示される併用免疫原性組成物は、さらに、ＲＳＶ及び百日咳菌以外の少なくとも１つの病原性生物由来の少なくとも１つの抗原を含む。より詳細には、上記少なくとも１つの抗原は、ジフテリアトキソイド（Ｄ）、破傷風トキソイド（Ｔ）、Ｂ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）、不活化ポリオウイルス（ＩＰＶ）；キャリアタンパク質とコンジュゲートしたインフルエンザ菌ｂ型（Ｈｉｂ）の莢膜糖；キャリアタンパク質とコンジュゲートした髄膜炎菌Ｃ型の莢膜糖（ＭｅｎＣ）；キャリアタンパク質とコンジュゲートした髄膜炎菌Ｙ型の莢膜糖（ＭｅｎＹ）；キャリアタンパク質とコンジュゲートした髄膜炎菌Ａ型の莢膜糖（ＭｅｎＡ）；キャリアタンパク質とコンジュゲートした髄膜炎菌Ｗ型の莢膜糖（ＭｅｎＷ）；及び髄膜炎菌Ｂ型由来の抗原（ＭｅｎＢ）からなる群より選択され得る。
【０１７６】
百日咳菌抗原（Ｐａ若しくはＰｗ）をＤ及びＴ並びに、ＩＰＶ、ＨＢｓＡｇ、Ｈｉｂ及びコンジュゲート髄膜炎菌莢膜糖から選択されるものなどの種々の他の抗原の組み合わせと共に含む混合ワクチンは、当該分野で周知であり、例えば、製品Ｉｎｆａｎｒｉｘ（商標）（例えば、ＤＴＰａ−ＩＰＶ−ＨＢｓＡｇ−Ｈｉｂ）及びＢｏｏｓｔｒｉｘ（商標）（例えば、ｄＴｐａ）である。このことに関して、ＷＯ９３／０２４１４８、ＷＯ９７／０００６９７及びＷＯ９８／０１９７０２は、参照によって組み込まれ、ＷＯ０２／００２４９は、ＤＴＰｗ−ＨｅｐＢ−ＭｅｎＡＣ−Ｈｉｂ組成物を開示する。莢膜糖抗原に好適なキャリアタンパク質は当該分野で公知であり、例えばＴ、Ｄ、及びＤ誘導体ＣＲＭ１９７が挙げられる。 
【０１７７】
特定の併用免疫原性組成物は、少なくとも１つのＲＳＶ抗原及び少なくとも１つの百日咳菌抗原に加えて：Ｄ及びＴ；Ｄ、Ｔ及びＩＰＶ；Ｄ、Ｔ及びＨＢｓＡｇ；Ｄ、Ｔ及びＨｉｂ；Ｄ、Ｔ、ＩＰＶ及びＨＢｓＡｇ；Ｄ、Ｔ、ＩＰＶ及びＨｉｂ；Ｄ、Ｔ、ＨＢｓＡｇ及びＨｉｂ；又はＤ、Ｔ、ＩＰＶ、ＨＢｓＡｇ及びＨｉｂを含む。
【０１７８】
特定の実施形態において、Ｄは、１用量あたり１〜１０国際単位（ＩＵ）（例えば、正確に若しくはおよそ２ＩＵ）又は１０〜４０ＩＵ（例えば、正確に若しくはおよそ２０若しくは３０ＩＵ）の量で、あるいは１〜１０リミットオブフロッキュレーション（Limit of flocculation）（Ｌｆ単位）（例えば、正確に若しくはおよそ２若しくは２．５若しくは９Ｌｆ）又は１０〜３０Ｌｆ（例えば、正確に若しくはおよそ１５若しくは２５Ｌｆ）の量で使用される。
【０１７９】
特定の実施形態において、Ｔは、１用量あたり１０〜３０ＩＵ（例えば、正確に若しくはおよそ２０ＩＵ）又は３０〜５０ＩＵ（例えば、正確に若しくはおよそ４０ＩＵ）又は１〜１５Ｌｆ（例えば、正確に若しくはおよそ５若しくは１０Ｌｆ）の量で使用される。
【０１８０】
例示的な実施形態において、併用免疫原性組成物は、少なくとも１つのＲＳＶ抗原及び少なくとも１つの百日咳菌抗原に加えて、Ｄ及びＴを、それぞれ、１用量あたり、正確に又はおよその量で：３０：４０ＩＵ；２５：１０Ｌｆ；２０：４０ＩＵ；１５：５Ｌｆ；２：２０ＩＵ；２．５：５Ｌｆ；２：５Ｌｆ；２５：１０Ｌｆ；９：５Ｌｆ含む。例えば、このような組成物は、（少なくとも１つのＲＳＶ抗原に加えて）
（ｉ）  ２０〜３０μｇ、例えば、正確に又はおよそ２５μｇのＰＴ、
（ｉｉ）  ２０〜３０μｇ、例えば、正確に又はおよそ２５μｇのＦＨＡ、
（ｉｉｉ）  １〜１０μｇ、例えば、正確に又はおよそ３若しくは８μｇのＰＲＮ、
（ｉｖ）  １０〜３０Ｌｆ、例えば、正確に又はおよそ１５若しくは２５ＬｆのＤ、及び（ｖ）  １〜１５Ｌｆ、例えば、正確に又はおよそ５若しくは１０ＬｆのＴ
を含み得る。
【０１８１】
別の例として、このような組成物は、（少なくとも１つのＲＳＶ抗原に加えて）
（ｉ）  ２〜１０μｇ、例えば、正確に又はおよそ２．５若しくは８μｇのＰＴ、
（ｉｉ）  ２〜１０μｇ、例えば、正確に又はおよそ５若しくは８μｇのＦＨＡ、
（ｉｉｉ）  ０．５〜４μｇ、例えば、２〜３μｇ、例えば、正確に又はおよそ２．５又は３μｇのＰＲＮ、
（ｉｖ）  １〜１０Ｌｆ、例えば、正確に又はおよそ２又は２．５又は９ＬｆのＤ、及び（ｖ）  １〜１５Ｌｆ、例えば、正確に又はおよそ５又は１０ＬｆのＴ
を、含み得る。
【０１８２】
免疫原性組成物はさらに、追加の抗原、例えば別のＲＳＶ抗原（例えばＷＯ２０１０／１４９７４５に記載のようなＧタンパク質抗原）又はヒトメタニューモウイルス（ｈＭＰＶ）抗原、又はインフルエンザ抗原、又はストレプトコッカス（Streptococcus）若しくはニューモコッカス（Pneumococcus）由来の抗原を含んでもよい。ＷＯ２０１０／１４９７４３は、ＲＳＶ抗原と併用することができるｈＭＰＶ抗原の例を記載しており、ｈＭＰＶ抗原の例を提供する目的で参照により本明細書に組み入れる。
【０１８３】
本明細書中で記載される母体免疫の実施形態は、ＲＳＶ及び百日咳菌ワクチンの投与のために好適な経路を介して実施される。この経路としては、筋肉内、鼻腔内、若しくは皮膚投与が挙げられる。好ましくは、本明細書中で記載される母体免疫は、皮膚的に実施され、これは、この抗原が、皮膚の真皮及び／又は表皮に（例えば、皮内に）導入されることを意味する。特定の実施形態において、Ｆタンパク質類似体、例えばＰｒｅＦ抗原若しくはＰｏｓｔＦ抗原などを含む組換えＲＳＶ抗原及び／又は無細胞百日咳菌タンパク質若しくは全細胞百日咳菌を含む百日咳菌抗原が、妊婦に、皮膚的に若しくは皮内に送達される。特定の実施形態において、免疫原性組成物は、本明細書中で記載されるアジュバント、例えば、サポニン、例えば３Ｄ−ＭＰＬ含有又は非含有のＱＳ２１と共に、皮膚送達若しくは皮内送達のために製剤化される。別の実施形態において、免疫原性組成物は、免疫刺激剤、例えばＱＳ２１若しくは３Ｄ−ＭＰＬ含有若しくは非含有の、無機塩、例えば水酸化アルミニウム若しくはリン酸アルミニウム又はリン酸カルシウムと共に、皮膚送達若しくは皮内送達のために製剤化される。百日咳菌抗原は、典型的に、アルミニウム塩と組み合わせて製剤化され、そして必要に応じて、皮膚経路若しくは皮内経路によって投与され得る。必要に応じて、Ｆタンパク質類似体及び百日咳菌抗原は、本明細書に開示する併用免疫原性組成物において、例えば、免疫刺激剤、例えばＱＳ２１若しくは３Ｄ−ＭＰＬ含有若しくは非含有の無機塩、例えば水酸化アルミニウム若しくはリン酸アルミニウム又はリン酸カルシウムの存在下で、皮膚送達若しくは皮内送達のために共製剤化される。
【０１８４】
皮内経路を含む皮膚経路を介した送達は、筋肉内経路などの他の経路よりも低用量の抗原を必要とする、すなわちより低用量を可能にする場合がある。従って、皮膚送達若しくは皮内送達のための、低用量、例えば通常の筋肉内用量よりも低い用量、例えば通常の筋肉内用量の５０％以下の少なくとも１種のＲＳＶ抗原と少なくとも１種の百日咳菌抗原、例えば、ヒトの１用量あたり５０μｇ以下、又は２０μｇ以下、又は１０μｇ以下又は５μｇ以下でのＦタンパク質類似体と、例えば、（さらなる抗原性成分含有若しくは非含有で）１〜１０μｇの間のＰＴ、１〜１０μｇの間のＦＨＡ、０．５〜４μｇの間のＰＲＮとを含む併用免疫原性組成物もまた、提供される。必要に応じて、皮膚送達若しくは皮内送達のための免疫原性組成物はまた、アジュバント、例えば、アルミニウム塩又はＱＳ２１若しくは３Ｄ−ＭＰＬ、又はこれらの組み合わせをも含む。
【０１８５】
皮膚投与のためのデバイスとしては、短針デバイス（約１ｍｍと約２ｍｍとの間の長さの針を有する）が挙げられ、ＵＳ４，８８６，４９９、ＵＳ５，１９０，５２１、ＵＳ５，３２８，４８３、ＵＳ５，５２７，２８８、ＵＳ４，２７０，５３７、ＵＳ５，０１５，２３５、ＵＳ５，１４１，４９６、ＵＳ５，４１７，６６２及びＥＰ１０９２４４４に記載されるものである。皮膚ワクチンはまた、参照によって本明細書に組み込まれるＷＯ９９／３４８５０において記載されるように、皮膚への針の有効な進入長さを制限するデバイス及びその機能的均等物によって投与され得る。液体ジェット注射器を介して又は角質層を貫き真皮に達するジェットを生み出す針を介して液体ワクチンを真皮に送達するジェット注射デバイスもまた、好適である。ジェット注射デバイスは、例えば、ＵＳ５，４８０，３８１、ＵＳ５，５９９，３０２、ＵＳ５，３３４，１４４、ＵＳ５，９９３，４１２、ＵＳ５，６４９，９１２、ＵＳ５，５６９，１８９、ＵＳ５，７０４，９１１、ＵＳ５，３８３，８５１、ＵＳ５，８９３，３９７、ＵＳ５，４６６，２２０、ＵＳ５，３３９，１６３、ＵＳ５，３１２，３３５、ＵＳ５，５０３，６２７、ＵＳ５，０６４，４１３、ＵＳ５，５２０，６３９、ＵＳ４，５９６，５５６、ＵＳ５４，７９０，８２４、ＵＳ４，９４１，８８０、ＵＳ４，９４０，４６０、ＷＯ９７／３７７０５及びＷＯ９７／１３５３７において記載される。
【０１８６】
皮膚投与のためのデバイスとしてはまた、圧縮ガスを用いて粉末形態のワクチンを皮膚の外層を通って真皮へ加速させる弾道粉末／粒子送達デバイスが、挙げられる。さらに、慣用的なシリンジ（注射器）が、皮膚投与の古典的マントー法において使用され得る。しかし、慣用的シリンジの使用は、高度に熟練した技術者が必要であり、従って、高度に熟練した使用者がいなくても正確な送達を可能にするデバイスが好ましい。皮膚投与のためのさらなるデバイスとしては、本明細書中で記載される免疫原性組成物を含むパッチが挙げられる。皮膚送達パッチは、一般に、固体基板（例えば、閉塞性若しくは非閉塞性の外科用包帯）を備えた裏打ちプレートを備える。このようなパッチは、角質層に穴をあける微小突起を介して、真皮若しくは表皮に免疫原性組成物を送達する。微小突起は、一般に、１０Ｄｍ〜２ｍｍの間、例えば、２０Ｄｍ〜５００Ｄｍ、３０Ｄｍ〜１ｍｍ、１００〜２００、２００〜３００、３００〜４００、４００〜５００、５００〜６００、６００〜７００、７００、８００、８００〜９００、１００Ｄｍ〜４００Ｄｍ、詳細には、約２００Ｄｍ〜３００Ｄｍの間若しくは約１５０Ｄｍ〜２５０Ｄｍの間である。皮膚送達パッチは、一般に、複数の微小突起、例えば、２〜５０００の間の微小針、例えば、１０００〜２０００の間の微小針を備える。微小突起は、角質層、表皮及び／又は真皮に穴をあけるために好適な任意の形状とすることができる。微小突起は、例えば、ＷＯ２０００／０７４７６５及びＷＯ２０００／０７４７６６に開示されるような形状とすることができる。微小突起は、少なくとも３：１（高さ対直径に基づく）、少なくとも約２：１又は少なくとも約１：１の縦横比を有し得る。微小突起の１つの好適な形状は、多角形、例えば六角形若しくは菱形の形状の底を有する錐状である。他の可能性のある微小突起形状は、例えば、米国特許出願公開第２００４／００８７９９２号において示される。特定の実施形態において、微小突起は、基部に向かって太くなる形状を有する。アレイにおける微小突起の数は、典型的に、少なくとも約１００、少なくとも約５００、少なくとも約１０００、少なくとも約１４００、少なくとも約１６００、又は少なくとも約２０００である。微小突起の面密度は、その小さなサイズを前提に、特に高くなくてもよいが、例えば、１ｃｍ２あたりの微小突起の数は、少なくとも約５０、少なくとも約２５０、少なくとも約５００、少なくとも約７５０、少なくとも約１０００、又は少なくとも約１５００であり得る。本開示の１つの実施形態において、併用免疫原性組成物は、宿主の皮膚上にパッチを置いて５時間以内に、例えば、４時間、３時間、２時間、１時間若しくは３０分間以内に、対象に送達される。特定の実施形態において、併用免疫原性組成物は、皮膚上にパッチを置いて２０分間以内、例えば、３０秒以内、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８若しくは１９分間以内に送達される。
【０１８７】
微小突起は、当業者に公知の任意の好適な材料で作られ得る。特定の実施形態において、微小突起の少なくとも一部、詳細には、微小突起の先端若しくは微小突起の最外層は、生分解性である。特定の実施形態において、微小突起の実質的に全てが生分解性である。用語「生分解性」は、本明細書中で用いられる場合、生分解のメカニズムにかかわらず、インビボ使用（例えば、皮膚への挿入）の予測される条件下で分解性であることを意味する。生分解の例示的なメカニズムとしては、崩壊、分散、溶解、侵食、加水分解及び酵素分解が挙げられる。
【０１８８】
抗原を含む微小突起の例は、ＷＯ２００８／１３０５８７及びＷＯ２００９／０４８６０７に開示される。代謝可能微小針の製造の方法は、ＷＯ２００８／１３０５８７及びＷＯ２０１０／１２４２５５に開示される。抗原による微小突起のコーティングは、当業者に公知の任意の方法、例えば、ＷＯ０６／０５５８４４、ＷＯ０６／０５５７９９において開示される方法によって、実施され得る。
【０１８９】
本明細書中で記載される方法及び使用における皮内送達を含む皮膚送達のために好適な送達デバイスとしては、皮内投与のための微小針デバイスであるＢＤ  Ｓｏｌｕｖｉａ（商標）デバイス、Ｃｏｒｉｕｍ  ＭｉｃｒｏＣｏｒ（商標）パッチ送達システム、Ｇｅｏｒｇｉａ  Ｔｅｃｈ微小針ワクチンパッチ、Ｎａｎｏｐａｓｓ微小針送達デバイス及びＤｅｂｉｏｔｅｃｈ  Ｎａｎｏｊｅｃｔ（商標）微小針デバイスが挙げられる。また、本明細書中に記載される併用免疫原性組成物、必要に応じて無機塩、例えばミョウバン又はＱＳ２１若しくは３Ｄ−ＭＰＬあるいはこれらの組み合わせなどのアジュバントと共に製剤化された併用免疫原性組成物を含む、皮膚送達デバイス又は皮内送達デバイスもまた、提供される。
【０１９０】
免疫学的に有効な量の併用免疫原性組成物を対象に投与することを含む、ＲＳＶ及び百日咳菌に対する免疫応答を惹起する開示された方法に関して、ＲＳＶ及び百日咳菌に対して惹起された免疫応答が、ＲＳＶ及び百日咳菌への感染の発生を低減若しくは予防する、若しくは感染の重症度を低減する、及び／又はＲＳＶ及び百日咳菌への感染後の病的応答の発生を低減若しくは予防する、若しくは病的応答の重症度を低減する、防御免疫応答を含むことが有利である。このような惹起された免疫応答は追加刺激応答であることができる。さらに、開示された併用免疫原性組成物は、ＲＳＶとの接触後にウイルス性疾患を悪化させることなくこれを達成する。
【０１９１】
併用免疫原性組成物は、たとえば、鼻内経路のような、上部気道の粘膜に抗原を直接接触させる経路を含む種々の経路を介して投与することができる。あるいは、たとえば、筋肉内投与経路などのさらに従来の投与経路を採用することができる。
【０１９２】
したがって、併用免疫原性組成物は、本明細書では、医薬に使用するため、そして特に、ヒト対象におけるＲＳＶ及び百日咳菌による感染又はＲＳＶ及び百日咳菌に関連する疾患の予防又は処置のためであることが想定される。他の病原体に由来する抗原を含む特定の実施形態において、そのような予防又は処置は、かかる他の病原体にも及ぶ。
【０１９３】
かかる方法及び使用の特定の実施形態において、対象はヒト対象である。このヒト対象は、新生児、乳児、小児、青年、成人及び高齢者の群から選択することができる。対象は、在胎児を有する妊婦であってもよい。あるいは、対象は妊婦でなくてもよい。対象が新生児の場合、併用免疫原性組成物の投与は、出生後１日以内、又は１週間以内、又は１か月以内に行い得る。
【０１９４】
好ましい実施形態において、対象（好ましくはヒト対象）には、併用免疫原性組成物が、単回用量レジメンとして、すなわち所定の一連の用量の一部としてではない単独の用量として、投与される。用量は、他のワクチン、例えば小児免疫スケジュール等の免疫スケジュールの一部として、同時に投与してもよい。そのような単回用量の実施形態では、対象にはその対象の生存期間にわたって組成物の２以上の用量を投与してもよいが、これらの用量のそれぞれは、所望のレベルの防御を達成するために必要と考えられるさらなる予定された用量を行うことなく投与されるという意味で、単独であり「単回」である。一実施形態において、併用免疫原性組成物は、１０年以内、好ましくは５年以内に１回のみの単回用量レジメンとして対象に投与される。一実施形態において、対象は１０〜１８歳のヒト青年であり、併用免疫原性組成物が１度だけ（すなわち単回用量レジメンとして）投与される。別の実施形態において、対象はヒト妊婦であり、併用免疫原性組成物が妊娠１回につき１度だけ投与される、すなわち、妊婦は１回の妊娠エピソード期間に単回用量の組成物のみの投与を受ける。
【０１９５】
母体免疫
乳児をＲＳＶ及び百日咳菌によって引き起こされる疾患から防御する安全且つ有効なワクチンの開発における特定の挑戦は、最も高い発生並びに最も大きな罹病及び死亡が、非常に幼い乳児において存在することである。幼い乳児、特に未熟児で生まれた乳児は、未成熟な免疫系を有し得る。従って、幼い乳児をＲＳＶ及び百日咳菌（百日咳）疾患から防御することは重要である。また、胎盤を介して乳児に移行した抗体（「母性抗体」）の乳児のワクチン接種に対する干渉の可能性もあり、従って、乳児期のワクチン接種は、例えば、完全に防御的な中和抗体応答を惹起するために十分に有効ではない場合がある。
【０１９６】
一態様において、本開示は、ＲＳＶ  Ｆタンパク質の類似体及び無細胞若しくは全細胞百日咳菌抗原を含む安全且つ有効な免疫原性組成物によって妊婦を能動免疫することにより、ＲＳＶ及び百日咳菌によって引き起こされる疾患から幼い乳児を防御するために好適な、ワクチン接種レジメン、方法及び免疫原性組成物の使用、並びにキットに関する。Ｆタンパク質類似体は、好適に、ＲＳＶへの自然な曝露（若しくはこれに対する以前のワクチン接種によって）以前にプライミングされた体液性応答の規模を追加刺激（ブースト）するか又は増大することによって、抗体（例えば、中和抗体）を惹起する。同様に、百日咳菌抗原は、百日咳菌への自然な曝露若しくはこれに対する以前のワクチン接種によって以前にプライミングされた体液性応答の規模を追加刺激（ブースト）するか又は増大することによって、抗体を惹起する。Ｆタンパク質類似体及び百日咳菌抗原に応答して産生された抗体は、胎盤を介して在胎児に移行し、生後に乳児に受動免疫防御をもたらし、ＲＳＶ及び百日咳菌により引き起こされる感染及び重度の疾患の危険期を通して持続する（例えば、乳児のワクチン接種前は完全に防御される）。典型的には、この方法によって付与される受動免疫防御は、出生と少なくとも２ヶ月齢との間、例えば、約６ヶ月齢まで、又はなおそれより長くすら、持続する。
【０１９７】
すべてのそのような組成物は、強い抗体応答（例えば、中和抗体）を誘導するように設計される。妊婦は、典型的に、その人生で１回以上ＲＳＶに曝されているので、彼女らは、ＲＳＶに対する既存のプライミング応答を有する。成人までにＲＳＶ感染に曝される集団の割合は、本質的に１００％である。百日咳に対して防御し予防するように設計された小児科免疫プログラムは、広まっている。しかし、広範な免疫にも拘らず、百日咳菌による自然感染もまた一般的である。従って、百日咳菌に対するプライミングもまた広まっている。従って、生後直後の乳児及びその後の重要な最初の数ヶ月にわたるＲＳＶ及び百日咳菌からの防御の提供は、これらのプライミング応答を、母親においてＲＳＶ及び百日咳菌に対し、好ましくは、胎盤を通り乳児に防御を提供することができる特定の抗体サブクラス（サブタイプ）、例えばＩｇＧ１に関して、できる限り有効に追加刺激して血清抗体応答（レベル）を増大することによって達成され得る。１つの実施形態において、本明細書中での使用のための免疫原性組成物は、アジュバントを含まないか、又は強いＩｇＧ１応答を支持するアジュバント、例えばアルミニウム塩などの無機塩、詳細には水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム若しくはリン酸カルシウムを含み得る。従って、特定の実施形態において、母体免疫における使用のための免疫原性組成物は、好ましくは、無機塩、好ましくはミョウバンと共に製剤化される。別の実施形態において、強いＩｇＧ１応答を支持するアジュバントは、水中油型エマルション、又はサポニン、例えばＱＳ２１（若しくはその無毒化形態）である。
【０１９８】
妊婦は、ヒト妊婦であり得、従って、乳児若しくは在胎児は、ヒト乳児であり得る。ヒト妊婦について、発生胎児の在胎齢は、最後の月経周期の開始から数える。受胎後の週数は、最後の月経周期の開始の１４日後から数えられる。従って、ヒト妊婦は、受胎後２４週といえる場合、最後の月経周期の開始の２６週後、すなわち妊娠２６週と同じである。妊娠が、生殖技術の補助によって達成されている場合、発生胎児の在胎の段階は、受胎の日の２週間前から計算される。
【０１９９】
用語「在胎児」は、本明細書中で使用される場合、妊婦の胎児すなわち発育中の胎児を意味する。用語「在胎齢」は、妊娠の週数、すなわち、最後の月経周期の開始からの週数を意味するように使用される。ヒトの妊娠は、典型的には、最後の月経の開始から約４０週間であり、便宜上、３つの期に分けられ、前期は最後の月経周期の開始日から妊娠の１３週目まで続き、中期は妊娠の１４週目から２７週目までに及び、そして後期は２８週目から始まって出生まで続く。従って、後期は、受胎後２６週で開始し、児の出生まで続く。
【０２００】
用語「乳児」は、ヒトについて言う場合、０歳から２歳までである。本明細書中で記載される方法及び使用によって提供される防御は、乳児から２歳から１１歳までの児童期、又は例えば２歳から５歳までの児童期の初期、又は、なお１２歳から１８歳までの青年期までについての防御を提供する可能性があってもよい。しかし、これは、特に、重度のＲＳＶ疾患及び百日咳の合併症に対し個体が最も脆弱である乳児期の間、特に生後から約６ヶ月齢までである。
【０２０１】
ヒト乳児は、生後数ヶ月の間、免疫学的に未成熟である。特に、未熟児で、例えば、妊娠３５週齢より前に生まれた場合、病原体によって引き起こされる感染又は疾患を、同じ病原体に対して発達した免疫系が応答できるのと同じ方法で予防することができる免疫応答を起こすために十分に免疫系が発達していない。免疫学的に未成熟な乳児は、より発達した若しくは成熟した免疫系を有する乳児よりも、病原体によって引き起こされる感染及び疾患に罹り易い。ヒト乳児はまた、生理学的及び発達上の理由で、例えば、気道が小さく、児童及び成人よりも発達が低く未熟であるから、生後数ヶ月の間、ＬＲＴＩ（肺炎を含む）に対し増大した脆弱性を有し得る。これらの理由のために、本明細書中で、乳児期の最初の６ヶ月を、４０週未満、又は３８週未満、又は３５週未満の在胎齢で失われた時間の量に従って、未熟乳児若しくは早産乳児について延長し得る。
【０２０２】
別の実施形態において、妊婦及びその乳児は、任意の種由来であってよく、例えば、これらは、上で「対象」と記載される。妊娠動物、例えば妊娠モルモット若しくは妊娠ウシは、受胎後の時間が、交尾からの時間で数えられる。ヒトにおいて、及び幾つかの動物、例えばモルモットにおいて、抗体は、母親から胎児へ胎盤を介して渡される。幾つかの抗体アイソタイプは、胎盤を通じて優先的に移行され得る。例えばヒトＩｇＧ１抗体は、胎盤を通って最も効率的に移行するアイソタイプである。実験動物、例えばモルモット及びマウスにおいて、サブクラスが存在するが、種々のサブクラスは、必ずしも同じ機能を果たす必要はなく、ヒトのサブクラスと動物のサブクラスとの間の直接関連性は、容易には作られ得ない。
【０２０３】
好ましくは、ＲＳＶ及び百日咳菌によって引き起こされる感染を阻害し、ＲＳＶ及び百日咳菌疾患の発生又は重篤度を低減することによって乳児を防御することは、少なくとも、新生児期及び非常に幼い乳児、例えば、乳児が、妊娠約４０週齢以降に生まれた正期産児であった場合に、例えば、生後最初の数週間、例えば生後１ヶ月又は２ヶ月、又は最初の３ヶ月、又は最初の４ヶ月、又は最初の５ヶ月、又は生後最初の６ヶ月、又はそれ以上に及ぶ。重度のＲＳＶ及び百日咳の影響に対し乳児がより脆弱ではなくなる最初の数ヶ月の後、ＲＳＶ及び百日咳菌感染に対する防御は、減衰し得る。従って、致命的な防御は、最も必要とされる期間の間、提供される。早産の乳児の場合、好ましくは、防御は、出生からより長い期間、例えば、乳児の出生と妊娠３５週になるまでの間の時間間隔と少なくとも同等のさらなる期間（すなわち、さらに約５週間）、又は妊娠３８週になるまでの間の時間間隔と少なくとも同等のさらなる期間（すなわち、さらに約２週間）、又は出生時の乳児の妊娠（在胎）週数に応じてより長い期間、提供される。
【０２０４】
乳児の防御が、ＲＳＶによるか若しくは百日咳菌による感染に対する１００％の防御を必ずしも意味しないことは、明らかである。感染又は疾患の発生及び重篤度の低減が存在する限り、防御が提供されたと認識される。乳児の防御は、好ましくは、ＲＳＶ及び百日咳菌によって引き起こされる重度の疾患及び入院から乳児を防御することを含む。このように、本明細書中で開示される組成物及び方法は、百日咳菌及びＲＳＶによって引き起こされる疾患、例えば下気道感染（ＬＲＴＩ）、肺炎若しくは他の症候若しくは疾患の、発生又は重篤度を低減する。例えば、ＲＳＶに関して、本明細書中で開示される免疫原性組成物の投与は、ＬＲＴＩの発生を、（ワクチン接種した母親の乳児のコホートにおいて）ワクチン接種していない母の乳児と比較して、少なくとも約５０％、又は少なくとも約６０％、又は６０〜７０％、又は少なくとも約７０％、又は少なくとも約８０％、又は少なくとも約９０％、低減し得る。好ましくは、このような投与は、ＬＲＴＩの重篤度を、ワクチン接種していない母の乳児の感染と比較して、少なくとも約５０％、又は少なくとも約６０％、又は６０〜７０％、又は少なくとも約７０％、又は少なくとも約８０％、又は少なくとも約９０％、低減する。好ましくは、このような投与は、重度のＲＳＶ疾患による入院の必要性を、このようなコホートにおいて、ワクチン接種していない母の乳児の感染と比較して、少なくとも約５０％、又は少なくとも約６０％、又は６０〜７０％、又は少なくとも約７０％、又は少なくとも約８０％、又は少なくとも約９０％、低減する。重度のＬＲＴＩによる入院の必要性があると考えられるか否か、又は特定のＬＲＴＩの症例が入院されるか否かは、国によって変動し得、従って、当該分野で周知の規定の臨床症候に従って判定されたＬＲＴＩの重篤度は、入院を必要とするものよりもよい程度であり得る。百日咳菌に関して、本明細書中で開示されるとおり無細胞若しくは全細胞のパータシス抗原を含む免疫原性組成物の投与は、重度の疾患（例えば、肺炎及び／又は呼吸促迫及び呼吸不全）の（ワクチン接種した母親の乳児のコホートにおいて）、ワクチン接種していない母の乳児の感染と比較して、少なくとも約５０％、又は少なくとも約６０％、又は６０〜７０％、又は少なくとも約７０％、又は少なくとも約８０％、又は少なくとも約９０％、発生を低減し得る。好ましくは、このような投与は、肺炎の重篤度を、ワクチン接種していない母の乳児の感染と比較して、少なくとも約５０％、又は少なくとも約６０％、又は６０〜７０％、又は少なくとも約７０％、又は少なくとも約８０％、又は少なくとも約９０％、低減する。好ましくは、このような投与は、パータシスの重度の合併症による入院の必要性を、このようなコホートにおいて、ワクチン接種していない母の乳児の感染と比較して、少なくとも約５０％、又は少なくとも約６０％、又は６０〜７０％、又は少なくとも約７０％、又は少なくとも約８０％、又は少なくとも約９０％、低減する。
【０２０５】
典型的には、有利な効果（特に出産前のリスクが高い妊娠）が妊娠後期の開始前に得ることができるが、ワクチン接種レジメン、方法、使用及びキットに従い、Ｆタンパク質類似体及び百日咳菌抗原は、妊娠（懐胎）の後期の間に、妊婦に投与される。母体免疫のタイミングは、母性抗体の産生及びこの母性抗体の胎児への移行が可能であるように設計される。従って、好ましくは、免疫と出生との間に、胎盤を通った母性抗体の最適な移行が可能であるために充分な時間が経過する。抗体移行は、ヒトにおいて、一般的に、妊娠の約２５週から始まり、２８週まで増大し、妊娠の約３０週から最適となり、これを維持する。ＲＳＶ  Ｆタンパク質及び百日咳菌抗原（例えば、パータシストキソイド（ＰＴ）、糸状赤血球凝集素（ＦＨＡ）、パータクチン（ＰＲＮ）、２型線毛（ＦＩＭ２）、３型線毛（ＦＩＭ３）及びＢｒｋＡの１以上又は全細胞パータシス抗原）に対する母性抗体の胎児への有効な移行を可能にするために、本明細書中で記載される母体免疫と出生との間に、最低約２〜４週間が必要であると考えられる。従って、母体免疫は、（最後の月経期間の開始から数えて）妊娠２５週の後の任意の時点、例えば、妊娠２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３若しくは３４週（受胎後２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５若しくは３６週）若しくはそれ以降、又は妊娠３８、３７、３６、３５、３４、３３、３２、３１若しくは３０週（受胎後３６、３５、３４、３３、３２、３１、２９若しくは２８週）若しくはそれ以前に、行われ得る。好ましくは、母体免疫は、妊娠２６週〜３８週の間、例えば、２８週〜３４週の間に行われる。
【０２０６】
好ましくは、母体免疫は、乳児の出産予定日よりも少なくとも２週間、又は少なくとも３週間、又は少なくとも４週間、又は少なくとも５週間、又は少なくとも６週間前に行われる。投与のタイミングは、早産の危険のある妊婦の場合、抗体の産生及び胎児への移行のための充分な時間を提供するために、調整する必要がある場合がある。
【０２０７】
好ましくは、ＲＳＶ  Ｆタンパク質類似体及び百日咳菌抗原（複数でもよい）又はそれらの製剤の単回用量（又は複数のそれぞれの単回用量）は、上述の期間の間に、妊婦に投与される。本明細書中で記載される、ＲＳＶ及び百日咳菌に対する母体免疫は、ＲＳＶ及び百日咳菌に対する既存の母体免疫についての「追加刺激（ブースト）」であると考えられ、これは、以前に、例えば自然曝露若しくはワクチン接種によってプライミングされたＲＳＶ及び百日咳菌に対する免疫応答を増大する。従って、単回用量のみが必要であると予測される。したがって、特にＲＳＶ抗原成分（例えば組換えタンパク質、例としてＦタンパク質類似体など）と百日咳菌抗原成分とが単一（すなわち混合）免疫原性組成物中に共製剤化される場合の、本明細書に開示するレジメン、方法及び使用の好ましい実施形態において、ＲＳＶ  Ｆタンパク質類似体及び百日咳菌抗原は、単回用量（又はそれぞれ単回用量）レジメンとして投与される。言い換えると、１回の妊娠（妊娠エピソード）の間に、妊婦に、ＲＳＶ  Ｆタンパク質類似体及び百日咳菌抗原のそれぞれを１度だけ投与する。これは、併用（混合）免疫原性組成物に共製剤化する場合、該組成物が妊娠期間に１度だけ投与されることを意味する。第２の用量が投与される場合、これもまた、第１の用量についての投与期間内に、好ましくは、第１と第２の用量との間の時間間隔を、例えば、１〜８週間、若しくは２〜６週間、例えば、２週間若しくは４週間若しくは６週間あける。
【０２０８】
ＲＳＶ  Ｆタンパク質類似体及び百日咳菌抗原の妊婦への投与は、母性抗体力価の追加刺激をもたらし、例えば、好適にはＩｇＧ１サブクラスの、血清（例えば、中和）抗体の力価を増大する。母体において増大した抗体力価は、胎盤を通り、Ｆｃレセプターによって媒介される能動輸送メカニズムを介して、例えば、絨毛膜絨毛の合胞栄養芽層において、中和エフェクター機能を有するＲＳＶ特異的抗体及び百日咳菌特異的抗体の在胎児への受動移行をもたらす。本明細書中で開示された免疫方法からもたらされたＲＳＶ特異的ＩｇＧ１抗体及び百日咳菌特異的ＩｇＧ１抗体の胎盤を通った輸送は、効率的であり、出生時若しくはそれに近い時期の乳児において、母体循環における力価と近い、それと同等若しくはそれを超える力価をもたらすと予想される。例えば、ＲＳＶ特異的抗体の力価は、好ましくは、出生時に少なくとも３０μｇ／ｍＬのレベルである。典型的には、正規産での健康な乳児の出生時において、この力価は、このレベル以上、例えば、４０μｇ／ｍＬ、５０μｇ／ｍＬ、６０μｇ／ｍＬ又はそれ以上、例えば７５μｇ／ｍＬ、８０μｇ／ｍＬ、９０μｇ／ｍＬ、１００μｇ／ｍＬ又は１２０μｇ／ｍＬまで若しくはそれ以上ですらあり得る。上記値は、個々の基準で、又は母平均基準とすることができる。出生時に観察される抗体のレベルが上記閾値を超え、出生後数か月間持続することが好ましい。
【０２０９】
パータシス（例えば、ＰＴ）に特異的な抗体の力価は、典型的に、Meade et al.,“Description and evaluation of serologic assays used in a multicenter trial of acellular pertussis vaccines", Pediatrics (1995) 96:570-5（参照により組み込まれる）に記載されるように、ＥＬＩＳＡにより測定され、ＥＬＩＳＡ単位／ｍｌ（ＥＵ）で表される。簡潔にいうと、例えば、マイクロタイタープレート（例えば、Ｉｍｍｕｌｏｎ  ２、VWR International、West Chester、PA、USA）を、標準量のＰＴ、ＦＨＡ、ＦＩＭ若しくはＰＲＮでコーティングする。血清の連続希釈物を、およそ２時間にわたって２８℃にてインキュベートし、アルカリホスファターゼコンジュゲートヤギ抗ヒトＩｇＧの適当な希釈物を添加する。この反応を発色させ、そして４０５ｎｍにて読み取る。各特異的抗体の検出の下限を、各抗原についての連続希釈した参照物質の多重測定によって決定し、ＰＴ、ＦＨＡ及びＰＲＮについて１ＥＬＩＳＡ単位（ＥＵ）を、そしてＦＩＭについて２ＥＵを設定する。好ましくは、本明細書中で開示されるワクチン接種レジメン、方法、使用に従うか、又はキット内に含まれる、パータシス抗原を含む免疫原性組成物の投与の後に、パータシス特異的抗体力価は、出生時に少なくとも１０ＥＵのレベルである。典型的には、この力価は、このレベル以上、例えば、２０ＥＵ、３０ＥＵ、４０ＥＵ、５０ＥＵ、６０ＥＵ、７０ＥＵ、８０ＥＵ、９０ＥＵ又は１００ＥＵ若しくはそれ以上であり得る。これらの値は、個々の基準で、又は母平均基準とすることができる。好ましくは、出生時に観察される抗体のレベルは、上述の閾値を超え、そして出生後数ヶ月にわたって持続する。
【０２１０】
移行した抗ＲＳＶ抗体のエフェクター機能、例えば、中和能力（中和力価）もまた評価することができ、そして、防御に相関する抗体の機能的属性の測定値を提供する。例えば、ＲＳＶの場合、特定の量の複製可能なＲＳＶウイルス及び血清の所定の希釈物を、混合し、インキュベートする。次いで、このウイルス−血清反応混合物を、ウイルス複製に許容的な宿主細胞（例えば、ＨＥｐ−２細胞）上に移し、細胞増殖及びウイルス複製に好適な条件下で、好適な時間にわたってインキュベートする。非中和ウイルスは、宿主細胞に感染し、そしてそこで複製することができる。このことは、細胞単層上に所定数のプラーク形成単位（ＰＦＵ）の形成をもたらし、これは、蛍光色素をタグ付加した抗ＲＳＶ抗体を用いて検出し得る。中和力価は、ウイルスに感染したのみで血清を含まない細胞単層と比較して、ＰＦＵにおける特定のレベルの阻害（例えば、５０％阻害又は６０％阻害）を誘導する血清希釈を計算することによって決定される。例えば、パリビズマブ抗体は、未処理ウイルス感染細胞と比較したＲＳＶ抗原の検出を５０％低減させる抗体濃度として示される中和力価（５０％有効濃度［ＥＣ５０］）を、臨床的ＲＳＶ  Ａ及びＲＳＶ  Ｂ単離株に対し、それぞれ１ｍＬあたり０．６５μｇ（１ｍＬあたり平均０．７５±０．５３μｇ；ｎ＝６９，１ｍＬあたり０．０７〜２．８９μｇの範囲）及び１ｍＬあたり０．２８μｇ（１ｍＬあたり平均０．３５±０．２３μｇ；ｎ＝３５，１ｍＬあたり０．０３〜０．８８μｇの範囲）で有することが示されている。従って、特定の実施形態において、胎盤を介して在胎児へ移行する抗体の中和力価は、出生後の乳児において測定することができ、（集団中央値に基づき）ＲＳＶ  Ａ株に対し少なくとも約０．５０μｇ／ｍＬ（例えば、少なくとも約０．６５μｇ／ｍＬ）又はそれを超えるＥＣ５０、及びＲＳＶ  Ｂ株に対し少なくとも約０．３μｇ／ｍＬ（例えば、少なくとも約０．３５μｇ／ｍＬ）又はそれを超えるＥＣ５０を有する。好ましくは、中和抗体力価は、出生後、数週間から数ヶ月にわたって、上述の閾値を上回り続ける。
【０２１１】
所望の場合、パータシス毒素に特異的な抗体のトキシン中和エフェクター機能もまた、例えばチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞中和アッセイにおいて、例えばGillenius et al.,“The standardization of an assay for pertussis toxin and antitoxin in microplate culture of Chinese hamster ovary cells". J. Biol. Stand. (1985) 13:61-66（参照により組み込まれる）において記載されるように測定し得る。しかし、このアッセイにおける中和活性は、防御とあまり相関しない。
【０２１２】
必要に応じて、本明細書中で開示されるワクチン接種レジメン、方法、使用及びキットに従い、ＲＳＶ及び百日咳菌に対する防御を、受動的に移行した母性抗体が防御を提供する間である出生後数ヶ月を超えて延長させるために、乳児は、ＲＳＶ及び／又は百日咳菌に特異的な後天的免疫応答を惹起するために、能動的に免疫されてもよい。乳児のこのような能動免疫は、ＲＳＶ抗原及び／又は百日咳菌抗原を含む１又はそれ以上の組成物を投与することによって、達成され得る。例えば、この（１以上の）組成物は、必要に応じて抗原により惹起される免疫応答を増大するためにアジュバントと共に製剤化されたＲＳＶ  Ｆタンパク質類似体を含み得る。以前にＲＳＶに曝されていない乳児への投与のために、Ｆタンパク質類似体は、Ｔｈ１サイトカインプロフィールを提示するＴ細胞の産生を特徴とする（又はＴｈ１及びＴｈ２サイトカインプロフィールを提示するＴ細胞の平衡を特徴とする）免疫応答を惹起するアジュバントと共に製剤化され得る。同様に、乳児は百日咳菌ワクチンで能動的に免疫してもよく、これは場合により、他の病原体に対する防御をも付与する混合ワクチンとして投与してもよい。
【０２１３】
あるいは、ＲＳＶ  Ｆタンパク質類似体又は他のタンパク質サブユニットワクチンを乳児に投与するよりむしろ、ＲＳＶに対して防御する後天的免疫応答を惹起する組成物は、弱毒化生ウイルスワクチン又は１以上のＲＳＶ抗原（例えば、Ｆ抗原、Ｇ抗原、Ｎ抗原若しくはＭ２抗原又はこれらの一部分）をコードする核酸を含み得る。例えば、核酸は、ベクター、例えば組換えウイルスベクター、例えばアデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、ＭＶＡベクター、麻疹ベクターなどに存在させうる。例示的なウイルスベクターは、ＷＯ２０１２／０８９２３１に開示され、これは、１以上のＲＳＶ抗原をコードするウイルスベクターを含む免疫原性組成物を説明する目的で、本明細書中に組み込まれる。あるいは、核酸は、自己複製型核酸、例えば自己複製型ＲＮＡ、例えば、アルファウイルスレプリコンなどのウイルスレプリコンの形態で（例えば、ウイルス構造タンパク質と共にパッケージングされたウイルスレプリコン粒子の形態で）あってもよい。このような自己複製型ＲＮＡレプリコンの例は、ＷＯ２０１２／１０３３６１に記載され、これは、ＲＳＶタンパク質をコードするＲＮＡレプリコン及び免疫原性組成物としてのその製剤を開示する目的で、本明細書中に組み込まれる。
【０２１４】
さらに、又はあるいは、百日咳菌抗原を含む１以上の組成物が、乳児に投与され得る。例えば、この組成物は、パータシストキソイド（ＰＴ）、糸状赤血球凝集素（ＦＨＡ）、パータクチン（ＰＲＮ）、２型線毛（ＦＩＭ２）、３型線毛（ＦＩＭ３）及びＢｒｋＡ、又はこれらの組み合わせ（例えば、ＰＴ及びＦＨＡ；ＰＴ、ＦＨＡ及びＰＲＮ；又はＰＴ、ＦＨＡ、ＰＲＮ及びＦＩＭ２とＦＩＭ３のいずれか若しくは両方）からなる群より選択される無細胞パータシス抗原を含み得る（例えば、本明細書中で記載されるようにＰＴが化学的に若しくは遺伝的にトキソイド化されている）。あるいは、組成物は本明細書中で記載されるように、全細胞パータシス抗原を含み得る。
【０２１５】
本明細書に開示するワクチン接種レジメン、方法及び使用に関して、ＲＳＶ抗原成分（例えば、組換えタンパク質、例えばＦタンパク質類似体）及び百日咳菌抗原成分は、本明細書に開示のように、単一の（すなわち混合）免疫原性組成物中に共製剤化される。あるいは、ＲＳＶ抗原性成分及び百日咳菌抗原性成分は、２（又はそれ以上）の異なる免疫原性組成物中に製剤化され、これは、同時若しくは異なる時点で、例えば、種々の認可され且つ推奨された小児科免疫スケジュールに従って、投与され、また（本明細書に開示するように）キット中に存在し得る。
【０２１６】
後天的ＲＳＶ免疫応答及び／又は後天的百日咳菌免疫応答を惹起する組成物（複数でもよい）は、本明細書中で開示されるＲＳＶ及び百日咳菌免疫を妊娠中に受けた母に生まれた乳児に投与され、この組成物は、１回以上投与されてもよい。最初の投与は、出生時若しくはそれに近い時点であってもよく（例えば、出生日若しくはその翌日）、又は出生の１週間以内若しくは２週間以内であってもよい。あるいは、最初の投与は、出生の約４週間後、出生の約６週間後、出生の約２ヶ月後、出生の約３ヶ月後、出生の約４ヶ月後、又はそれ以降、例えば出生の約６ヶ月後、出生の約９ヶ月後、又は出生の約１２ヶ月後であり得る。例えば、百日咳菌抗原（例えば、Ｐａ若しくはＰｗ）を含む組成物の場合、出生の約２、４及び６ヶ月後にワクチンを投与することが一般的である（さらなる用量を１２〜１８ヶ月に、及び必要に応じて４〜７歳の間に行う）。従って、１つの実施形態において、本開示は、その乳児を妊娠していた間にＦタンパク質類似体及び百日咳菌抗原を含む免疫原性組成物を投与された女性に生まれた乳児に、ＲＳＶ及び／又は百日咳菌に特異的な免疫応答を惹起する１以上の組成物を投与することにより、ＲＳＶ及び百日咳菌によって引き起こされる疾患から乳児を防御するための方法を提供する。好ましくは、母体由来のＲＳＶ特異的抗体及び百日咳菌特異的抗体は、そのような乳児に投与された組成物中のそれぞれの抗原に対する乳児の免疫応答の阻害又は「鈍化」を媒介するものではない。
【０２１７】
上述の通り、開示されるワクチンレジメン、方法及び使用に使用するための免疫原性組成物は、本明細書に記載されるＲＳＶ−百日咳菌混合（共製剤化）組成物であってもよいし、又はＦタンパク質類似体と百日咳菌抗原を別個に提供する異なる組成物であってもよい。そのような「別個の」組成物は、キットとして提供することができる。これらは、同じ日に投与される（同時投与される）又は異なる日に投与される。
【０２１８】
開示されるワクチン接種レジメン、方法及び使用において、乳児は免疫学的に未成熟でありうる。乳児は、６月齢未満、例えば２月齢未満など、例として１月齢未満、例えば新生児でありうる。
【０２１９】
ある実施形態において、開示されるワクチン接種レジメン、方法及び使用の状況で妊婦に投与される少なくとも１つの免疫原性組成物は、妊娠２６週以降、例として妊娠２６〜３８週の間、例えば妊娠２８〜３４週の間に投与することができる。
【０２２０】
かかるワクチン接種レジメン、方法及び使用の実施形態において、ＲＳＶ特異的抗体の少なくとも１つのサブセットが、出生時の乳児の血清中で３０μｇ／ｍＬ以上のレベルで検出可能であり、及び／又は百日咳特異的抗体の少なくとも１つのサブセットが、出生時の乳児の血清中で１０  ＥＬＩＳＡ単位／ｍｌ（ＥＵ）以上のレベルで検出可能である。
【０２２１】
特定の実施形態において、かかるワクチン接種レジメン、方法及び使用は、乳児においてＲＳＶ及び／又は百日咳菌に対する能動免疫応答をプライミングする又は誘導する少なくとも１つの組成物を前記乳児に投与することをさらに含む。能動免疫応答がＲＳＶ及び百日咳菌の両方に対してプライミング又は誘導される場合、ＲＳＶに対する能動免疫応答をプライミングする又は誘導する少なくとも１つの組成物と百日咳菌に対する能動免疫応答をプライミングする又は誘導する少なくとも１つの組成物は、同じ組成物であってもよいし、あるいは異なる組成物であってもよい。後者の場合、異なる組成物は同じ日に投与してもよいし又は異なる日に投与してもよい。好ましくは、上記少なくとも１つの免疫原性組成物によって乳児においてプライミング又は誘導される能動免疫応答は、開示されるワクチンレジメン、方法及び使用に従って妊娠中に免疫されていない母の乳児において同じ組成物に応答して生起された能動免疫応答とは、臨床的に意義のある程度まで量的に異なるものではない。
【０２２２】
乳児においてＲＳＶ及び／又は百日咳菌に対する能動免疫応答をプライミングする又は誘導する少なくとも１つの組成物を乳児に投与する、開示されるワクチン接種レジメン、方法及び使用のそのような実施形態において、乳児に投与される少なくとも１つの組成物は、少なくとも１つのＲＳＶタンパク質抗原又は抗原類似体をコードする、核酸、組換えウイルスベクター又はウイルスレプリコン粒子を含むことができる。上記少なくとも１つの組成物は、Ｆタンパク質類似体を含むＲＳＶ抗原を含んでもよい。
【０２２３】
本明細書では、妊婦への投与用に製剤化された複数の免疫原性組成物を含むキットであって、
（ａ）ＲＳＶに特異的な体液性免疫応答を誘導、惹起又は追加刺激することができる、Ｆタンパク質類似体を含む第一の免疫原性組成物と、
（ｂ）百日咳菌に特異的な体液性応答を誘導、惹起又は追加刺激することができる、少なくとも１つの百日咳菌抗原を含む第二の免疫原性組成物と
を含み、妊婦に投与した際に、第一及び第二の免疫原性組成物がＲＳＶ特異的抗体の少なくとも１つのサブセット及び百日咳菌特異的抗体の少なくとも１つのサブセットを誘導、惹起又は追加刺激し、これらの抗体が胎盤を介して妊婦の在胎児に移行し、その結果、乳児がＲＳＶ及び百日咳菌によって引き起こされる感染又は疾患から防御される、前記キットを開示する。好ましくは、上記キットのそれぞれの組成物は妊婦に妊娠１回につき１度だけ投与される。言い換えれば、１回の妊娠エピソードの間に、妊婦はキット組成物のそれぞれの単回用量のみの投与を受けることが好ましい。
【０２２４】
かかるキットでは、第一の免疫原性組成物のＦタンパク質類似体及び／又は第二の免疫原性組成物の少なくとも１つの百日咳菌抗原は、本明細書に記載した通りであり、開示された併用免疫原性組成物を説明する状況で開示がなされたものである。一実施形態において、第一の免疫原性組成物及び／又は第二の免疫原性組成物は少なくとも１本の充填済み注射器内にある。かかる注射器は二室注射器とすることができる。
【０２２５】
特定の特別な特徴及び／又は実施形態を説明するために以下に実施例を提供する。これらの実施例は、記載される特別な特徴又は実施例に本発明を限定するように解釈されるべきではない。
【実施例】
【０２２６】
実施例全体において、使用したＲＳＶワクチン（Ｐｒｅ−Ｆ）は、配列番号２２に対応するタイプのグリコシル化修飾ＰｒｅＦ抗原（すなわち、Ｌ１１２Ｑ修飾と、配列番号２の５００〜５０２位に対応するアミノ酸の修飾（ＮＧＳ、ＮＫＳ、ＮＧＴ及びＮＫＴから選択される）とを含有する）を含む。
【０２２７】
［実施例１］概念の証明−モルモットモデルにおけるＲＳＶ母体免疫
胎盤構造及びＩｇＧ移行が典型的げっ歯類モデルの場合よりもヒトに近いので、モルモットモデルを選択した（Pentsuk and van der Laan (2009) Birth Defects Research（part B) 86:328-344において概説される）。モルモットの相対的に長い妊娠期間（６８日間）のため、妊娠の間の免疫及び免疫応答発生が可能になる。その生存期間を通してＲＳＶに対する曝露を経験しており、ＲＳＶに対する免疫応答が事前に存在している妊婦のＲＳＶ免疫状態を模倣するために、雌モルモットを、ワクチン接種の６週間前若しくは１０週間前のいずれかにおいて、生ＲＳＶでプライミングした（図２）。
【０２２８】
雌モルモット（Ｎ＝５／群）を、ワクチン接種の６週間前若しくは１０週間前（およそ、交配の時点若しくは交配の４週間前）に、生ＲＳＶウイルス（２．５×１０５ｐｆｕ）で鼻腔内プライミングした。２群は、プライミングしないままにした。妊娠雌を、妊娠の開始約６週間後に水酸化アルミニウムと混合した１０μｇのＰｒｅＦ抗原で免疫した。プライミングなしの１群の雌に、ＰＢＳを注射した。血清サンプルを、プライミング及び妊娠期間にわたって採取し、抗ＲＳＶ結合及び中和抗体のレベルをモニタリングした。
【０２２９】
後代（７〜１６日齢）を、生ＲＳＶで１×１０７ｐｆｕにて鼻腔内チャレンジした。チャレンジの４日後、肺を採取し、７葉に分割した。７葉のうち６葉においてウイルスを力価測定し、肺１グラムあたりの全ウイルス粒子を計算した。
【０２３０】
結果を、図３及び図４にグラフで示す。
【０２３１】
モルモットを６週間若しくは１０週間前にプライミングしたかにかかわらず、ワクチン接種の日に同様のレベルの抗体が観察された（Ｄ７０〜７５−ワクチン接種前）。プラトー力価に、プライミングの１４日後に到達した。中和抗体力価は、プラトーに達した後、少なくとも約６０日間、低下しなかった。従って、両時点でのプライミングは、このモデルにおいて等価であり、ヒトにおける母胎感染を模倣するために好適であった。
【０２３２】
モルモット後代における肺ウイルス負荷からの結果（図３）は、プライミング及びワクチン接種された母に生まれた後代は、プライミングなし／ワクチン接種なし母に生まれた後代と比較して、ＲＳＶチャレンジから防御されたことを示す。対照的に、プライミングなし／ワクチン接種した母に生まれた後代は、ＲＳＶチャレンジから防御されなかった。Steff et al（Proof of concept of the efficacy of a maternal RSV, recombinant F protein, vaccine for protection of offspring in the guinea pig model - poster 114, RSV Vaccines for the World conference, ポルトガル、ポルト、2013年10月14〜16日）は、母体免疫後のモルモット仔における防御抗体レベルの誘導におけるＰｒｅＦ抗原の効力についてさらなるエビデンスを提供している。
【０２３３】
［実施例２］混合ワクチンは、ＲＳＶによるチャレンジに対して防御する
本実施例は、ＲＳＶ（Ｐｒｅ−Ｆ）及び百日咳菌抗原（ＰＴ、ＦＨＡ及びＰＲＮ）を含む混合ワクチンによって惹起された、ＲＳＶに対する防御を実証する。２用量の混合Ｐａ−ＲＳＶワクチンの免疫原性（中和抗体力価）を、Ｂａｌｂ／ｃマウスモデルにおいて評価し、その後、鼻腔内ＲＳＶチャレンジを行って、混合ワクチンの効力を測定した。
【０２３４】
ＢＡＬＢ／ｃマウスの群（ｎ＝１４／群）を、表１に示される製剤により、３週間間隔で２回筋肉内に免疫した。
【０２３５】
【表１】
2019163284.tif 000002
【０２３６】
全てのマウス由来の血清を、０日目（１回目免疫の前）、２１日目（２回目免疫の前）及び３５日目（２回目免疫の２週間後）に個別に採取し、ＲＳＶ中和抗体の存在を、プラーク減少アッセイを用いて試験した。簡潔にいうと、各血清の連続希釈物を、ＲＳＶ  Ａ  Ｌｏｎｇ（１ウェルあたり１００ｐｆｕを標的化）と共に３３℃にて２０分間にわたってインキュベートした。インキュベーション後、ウイルス−血清混合物を、Ｖｅｒｏ細胞を予め植菌し、増殖培地を空にしておいたプレートに移した。各ウェル上に、一列の細胞を、ウイルスのみと共にインキュベートし（１００％の感染性）、２ウェルにはウイルスも血清も与えなかった（細胞対照）。プレートを、３３℃にて２時間にわたってインキュベートし、培地を除去し、そして０．５％ＣＭＣ（低粘度カルボキシメチルセルロース）を含むＲＳＶ培地を全てのウェルに添加した。このプレートを、３日間３３℃にてインキュベートした後、免疫蛍光染色した。
【０２３７】
染色のために、細胞単層を、ＰＢＳで洗浄し、そして１％パラホルムアルデヒドで固定した。ＲＳＶ陽性細胞を、市販のヤギ抗ＲＳＶ抗血清を用い、その後ＦＩＴＣにコンジュゲートしたウサギ抗ヤギＩｇＧを用いて、検出した。１ウェルあたりの染色プラークの数を、自動画像化システムを用いて計数した。各血清の中和抗体力価を、血清なしの対照と比較してプラークの数の６０％の減少を起こす血清希釈の逆関数（ＥＤ６０）として決定した。結果を、図５Ａに示す。
【０２３８】
Ａｌ（ＯＨ）３のアジュバントが添加されたＰｒｅＦベースのワクチンは、鼻腔内ＲＳＶチャレンジからマウスを防御する。従って、この動物モデルは、肺におけるウイルスクリアランスを媒介するＲＳＶワクチンの能力を研究するために有用である。次いで、単一ワクチン中の百日咳菌（ＰＴ、ＦＨＡ及びＰＲＮ）抗原とＲＳＶ（ＰｒｅＦ）抗原との組み合わせを、鼻腔内ＲＳＶチャレンジマウスモデルにおける防御有効性について試験した。２回目のワクチン投与の２週間後、マウスを、５０μｌ（１つの鼻腔あたり２５μＬ）の生ＲＳＶ  Ａ  Ｌｏｎｇ株（約１．４５×１０６ｐｆｕ／５０μｌ）の点鼻によってチャレンジした。肺ウイルス負荷の評価のために、チャレンジの４日後、肺を採取した。チャレンジの４日後、マウスを安楽死させ、肺を、無菌的に採取し、個々に計量し、ホモジナイズした。各肺ホモジネートの連続希釈物（各８連）を、Ｖｅｒｏ細胞と共にインキュベートし、プラークを含むウェルを、植菌の６日後に免疫蛍光によって同定した。ウイルス力価を、ＴＣＩＤ５０計算のためにＳｐｅａｒｍａｎ−Ｋａｒｂｅｒ法を用いて決定し、肺１グラムあたりで示した。使用した統計学的方法は、ｌｏｇ１０値における分散分析（ＡＮＯＶＡ  １）である。
【０２３９】
結果を、図５Ｂに示す。予測されるとおり、Ａｌ（ＯＨ）３と混合した２μｇのＰｒｅＦは、Ｐａ単独でワクチン接種したマウス（ＲＳＶチャレンジからの防御が予測されない対照群）と比較して、肺におけるウイルスクリアランスを効率的に促進した。ＰｒｅＦ群における１４匹のうち２匹の動物のみが、肺に検出可能なレベルのＲＳＶを有し、他の１２匹の動物ではＲＳＶが検出可能ではなかった。Ｐａ−ＲＳＶ混合ワクチンは、１４匹中１匹の動物のみが肺において検出可能なレベルのＲＳＶを有し、残る１３匹の動物においてＲＳＶが検出不能であったことによって示されるとおり、ＲＳＶチャレンジに対しマウスを等しく防御することができた。全体で、ＰｒｅＦ＋Ａｌ（ＯＨ）３ワクチン又はＰａ抗原＋ＰｒｅＦ＋Ａｌ（ＯＨ）３をワクチン接種した動物は、Ｐａ単独でワクチン接種した対照動物よりも有意に低い肺ウイルス力価を有した（Ｐ＜０．００１）。アジュバントなしでＰａ抗原＋ＰｒｅＦをワクチン接種した群において、肺ウイルス力価の有意な低下（Ｐ＜０．００１）があったが、しかし、全ての動物からの肺においてウイルスを定量したが、この群の動物に、ＲＳＶチャレンジに対して完全な防御を示した動物はなかった。
【０２４０】
チャレンジ動物モデルを用い、我々は、Ｐａ−ＲＳＶ混合ワクチンが、ＲＳＶワクチンと同等の、ＲＳＶに対する防御的な免疫応答を惹起することを示した。この免疫応答は、ＲＳＶ中和抗体の産生に関連していた。
【０２４１】
［実施例３］混合ワクチンは、百日咳菌によるチャレンジに対して防御する
本実施例は、ＲＳＶ（Ｐｒｅ−Ｆ）及び百日咳菌抗原（ＰＴ、ＦＨＡ及びＰＲＮ）を含む混合ワクチンによって惹起される、百日咳菌（Bordetella Pertussis）に対する防御を実証する。混合Ｐａ−ＲＳＶワクチンの２用量の免疫原性（中和抗体力価）を、Ｂａｌｂ／ｃモデルにおいて評価し、その後、感染性百日咳菌による鼻腔内チャレンジを行って、この混合ワクチンの有効性を測定した。
【０２４２】
ＢＡＬＢ／ｃマウスの群（ｎ＝２０／群）を、皮下２回、３週間間隔で、表２に示した製剤によって免疫した。
【０２４３】
【表２】
2019163284.tif 000003
【０２４４】
全てのマウス由来の血清を、２回目免疫の７日後（ｄ２８−チャレンジの前日）に個別に採取し、そして抗ＰＴ抗体、抗ＦＨＡ抗体及び抗ＰＲＮ  ＩｇＧ抗体の存在について試験した。簡潔にいうと、９６ウェルプレートを、炭酸重炭酸塩緩衝液（５０ｍＭ）中のＦＨＡ（２μｇ／ｍｌ）、ＰＴ（２μｇ／ｍｌ）若しくはＰＲＮ（６μｇ／ｍｌ）にてコーティングし、４℃にて一晩インキュベートした。ＰＢＳ−ＢＳＡ  １％緩衝液による飽和ステップの後、マウス血清を、１／１００にＰＢＳ−ＢＳＡ  ０．２％Ｔｗｅｅｎ０．０５％中で希釈し、そしてプレートのウェル内に、連続的に希釈した（１２希釈、ステップ１／２）。ペルオキシダーゼと結合した抗マウスＩｇＧを添加した（１／５０００希釈）。ペルオキシダーゼ基質（ＯＰＤＡ）添加後、呈色反応を観察し、そして吸光度測定法（波長：４９０〜６２０ｎｍ）による読み取りの前に、ＨＣＬ  １Ｍで停止した。各プレート上に加えた試験した各血清及び標準について、４パラメーターロジスティック曲線を、ＯＤと希釈との間の関係に適合させた（Ｓｏｆｔｍａｘｐｒｏ）。これは、各サンプル力価の導出を、ＳＴＤ力価で示した。ワクチンによって誘導されたＰａ抗原（ＰＴ、ＦＨＡ及びＰＲＮ）に特異的な血清学的抗体応答を、Ｐａワクチンにおいて見出される個別の抗原に対してワクチンが抗体応答を惹起する能力を示すものである（しかし決定的なものではない）と考える。図６Ａは、２回の免疫後、ＤＴＰａ、Ｐａ単独及びＰａ−ＲＳＶ混合がＰＴ、ＦＨＡ及びＰＲＮに特異的なＩｇＧ応答を促進したことを示す。ワクチン接種しなかったマウス若しくはＲＳＶワクチン接種したマウス由来の血清中で、抗原特異的抗体が検出されなかった（データは表示せず）。統計学的分析は、ＤＴＰａ（Ｉｎｆａｎｒｉｘ）及びＰａ−ＲＳＶ混合によって誘導された抗ＰＴ抗体応答と抗ＦＴＡ抗体応答との間が同等であることを実証した。Ｐａ単独及びＰａ−ＲＳＶ混合ワクチンによって誘導された抗ＰＲＮ特異的抗体の量もまた、統計学的に同等であり、このことは、ＲＳＶ抗原の存在が、抗百日咳抗体応答の産生に干渉しなかったことを実証した。
【０２４５】
防御を実証するために、追加刺激の１週間後、マウスを、５０μｌの細菌懸濁液（約５×１０６ＣＦＵ／５０μｌ）の左鼻腔への点鼻によってチャレンジした。各群５匹のマウスを、細菌チャレンジの２時間後、２日後、５日後及び８日後に、安楽死させた。肺を、無菌的に採取し、個別にホモジナイズした。肺細菌クリアランスを、Ｂｏｒｄｅｔ−Ｇｅｎｇｏｕアガープレート上のコロニー増殖を計数することによって測定した。データを、各処置群における各採取時点について、１つの肺あたりのコロニー形成単位の数の平均（ＣＦＵ−ｌｏｇ１０）に従って、プロットした。使用した統計学的方法は、異質分散モデルを用いた、２つの因子（処置及び日）によるｌｏｇ１０値に対する分散分析（ＡＮＯＶＡ）である。
【０２４６】
このモデルにおいて、無細胞百日咳菌ワクチン（Ｐａ）は、マウスを、細菌による鼻腔内チャレンジから防御する。従って、この動物モデルは、百日咳菌ベースのワクチンが肺における細菌クリアランスを媒介する能力を研究するために、有用である。単一ワクチン中の百日咳菌（ＰＴ、ＦＨＡ及びＰＲＮ）抗原及びＲＳＶ（Ｐｒｅ−Ｆ）抗原の組み合わせを、鼻腔内チャレンジマウスモデルにおける防御有効性について試験した。典型的結果を、図６Ｂに図示する。予測どおり、調整したヒト用量（市販のＤＴＰａワクチンＩｎｆａｎｒｉｘの４分の１用量）は、ワクチン接種なしのマウスと比較して、細菌クリアランスを効果的に促進した。Ｐａ単独及びＰａ−ＲＳＶ混合ワクチンはまた、両方とも、細菌消滅に導く防御免疫応答を惹起し得る。予測どおり、Ｐｒｅ−Ｆ  ＲＳＶワクチン単独では、この動物モデルを、百日咳菌から防御できなかった。
【０２４７】
これらの結果は、上の実施例２において実証されたように、動物モデルにおいて、Ｐａ−ＲＳＶ混合ワクチンが、百日咳菌に対して及びＲＳＶに対して、防御免疫応答を惹起したことを実証する。この免疫応答は、無細胞Ｐａワクチンにおいて見出される３つのサブユニット抗原（ＰＴ、ＦＨＡ及びＰＲＮ）に対する特異的抗体の産生に関連していた。
【０２４８】
［実施例４］モルモットモデルにおいて、妊娠雌親への混合Ｐａ−ＲＳＶワクチンの投与はＲＳＶチャレンジからの仔の防御に干渉しない
【０２４９】
雌モルモット（Ｎ＝５／群）を、生ＲＳＶウイルス（８００ｐｆｕ）で鼻腔内にプライミングした。一群はプライミングしなかった。プライミングの翌日に交配を開始した。以下のワクチンの１つで、妊娠雌をプライミング後４週及び７週で（２用量レジメン）又はプライミング後７週で（単回用量レジメン）免疫した：水酸化アルミニウム（１００μｇ）と混合した１０μｇのＰｒｅＦ抗原、水酸化アルミニウム（１３０μｇ）と混合した１０μｇのＰｒｅＦ抗原＋ＤＴａＰ抗原（５Ｌｆジフテリアトキソイド、２Ｌｆ破傷風トキソイド、５μｇ  ＦＨＡ、５μｇ不活化百日咳毒素、１．６μｇ  ＰＲＮ）、又は水酸化アルミニウム（１００μｇ）と混合したＤＴａＰ抗原のみ（上記と同量）。それぞれ１回又は２回免疫した雌について、１回目又は２回目の免疫の１４日後（プライミング後６３日目）に血清サンプルを採取した。この時点（仔の出生前１〜６週）で、抗ＲＳＶ中和抗体のレベルを測定した。
【０２５０】
出生後２４〜７２時間以内に後代から血清サンプルを採取した。５〜１８日齢の仔に、生ＲＳＶを２×１０６ｐｆｕで用いて鼻腔内にチャレンジした。チャレンジの４日後、肺を採取してホモジナイズした。肺ホモジネート中のウイルス力価を測定し、肺１ｇ当たりの総ウイルス粒子を算出した。
【０２５１】
結果を図７及び８のグラフに示す。
【０２５２】
ＤＴａＰ抗原のみで１回又は２回ワクチン接種した雌親（図７Ａの群３及び６）におけるＲＳＶ中和抗体力価はそれぞれ３１６及び２７２であった。これは、ＤＴａＰ抗原をワクチン接種した非プライミング雌親（図７Ａの群７）ではＲＳＶ中和応答が実際なかったことから、ＲＳＶプライミングによって誘導された力価を表す。ＲＳＶでプライミングされ、ＤＴａＰ抗原のみで１回又は２回ワクチン接種した雌親からの仔は、ＲＳＶ中和力価がそれぞれ４２５及び５６３（図７Ｂの群３及び６）であり、生ＲＳＶプライミングに起因して後代に移行した中和抗体のレベルを表している。これらの中和抗体力価は、仔においてＲＳＶチャレンジから完全な防御を誘導するのに十分であった（図８）。
【０２５３】
生ＲＳＶプライミングと、ＰｒｅＦワクチンのみの単回用量（図７Ａの群１）又はＰｒｅＦ及びＤＴａＰ抗原の混合用量（図７Ｂの群２）のいずれかの後の雌親において誘導された中和抗体のレベルを比較すると、中和抗体力価に有意な差は観察されない。このことは、ＲＳＶ中和抗体応答に対するＤＴａＰワクチンの干渉がないことを示す。仔の中和抗体力価についても同様の観察結果が得られる（図７Ｂの群１と２を比較する）。しかし、プライミングされた雌親が混合ＰｒｅＦ及びＤＴａＰ抗原の２用量を受けた場合、この雌親におけるＲＳＶ中和力価は、ＰｒｅＦワクチン接種のみの後に得られた力価よりも低かったが、この差は統計学的有意性には達しなかった（混合ＰｒｅＦ−ＤＴａＰワクチン対ＰｒｅＦ単独ワクチン後の力価はそれぞれ８３２対１５９０。図７Ａの群４及び５）。２用量の混合ＰｒｅＦ−ＤＴａＰワクチンで雌親にワクチン接種した場合の仔に移行した中和抗体のレベルは、ＰｒｅＦ単独ワクチンで２回雌親にワクチン接種した場合に観察されたレベルよりも有意に低かった（併用ＰｒｅＦ−ＤＴａＰワクチン対ＰｒｅＦ単独ワクチン後の力価はそれぞれ５１９対２４３９。図７Ｂの群４及び５）。これらの結果は、単回用量の混合ＤＴａＰ−ＲＳＶワクチンによる母体ワクチン接種が、仔に移行したＲＳＶ中和抗体のレベルに干渉を生じないのに対し、混合ＤＴａＰ−ＲＳＶによる２用量の母体ワクチン接種の後に出生後２４〜７２時間の仔において観察されたＲＳＶ中和抗体のレベルにある程度の干渉が現れたことを示している。
【０２５４】
モルモット子孫における肺ウイルス負荷からの結果（図８）は、プライミングしワクチン接種した母に生まれた子孫が、雌親に使用したワクチンレジメンにかかわらず、ＲＳＶチャレンジから完全に防御されたことを示す。プライミングしＤＴａＰ抗原単独（ＲＳＶ抗原なし）でワクチン接種した動物は、ＲＳＶチャレンジから完全に防御されたが、プライミングせずＤＴａＰ抗原単独でワクチン接種した動物は防御されなかったという事実は、生ＲＳＶによるプライミングが、プライミング後に使用するワクチンレジメンに関係なく、子孫に移行した抗体の防御レベルを誘導するのに十分であることを示唆している。２用量の混合ＰｒｅＦ及びＤＴａＰ抗原の後に惹起された中和抗体の観察レベルに対する明らかな干渉（図７）は、ＲＳＶチャレンジからの仔の防御に対して検出可能な影響を及ぼさなかった。
【０２５５】
配列表
配列番号1
RSV基準融合タンパク質をコードするヌクレオチド配列
A2株 GenBankアクセッション番号U50362
atggagttgctaatcctcaaagcaaatgcaattaccacaatcctcactgcagtcacatttgttttgcttctggtcaaaacatcactgaagaattttatcaatcaacatgcagtgcagtagcaaaggctatcttagtgctctgagaactggttggtataccagtgttataactatagattaagtaatatcaaggaaaataagtgtaatggaacagatgctaaggtaaaattgataaacaagaattagataaatataaaaatgctgtaacagaattgcagttgctcatgcaaagcacccagcaacaaacaatcgagccagaagagaactaccaaggtttatgaattatacactcaaaatgccaaaaaaaccaatgtaacattaagcaagaaaaggaaaagaagatttcttggtttttgttaggtgttggatctgcaatcgccagtggcgttgctgtatctaaggtcctgcacctgaaggggaagtgaacaagatcaaaagtgctctactatccacaaacaaggctgtagtcagttatcaaatggagttagtgtcttaaccagcaaagtgttagacctcaaaaactatatagaaaacaattgttacctattgtgaacaagcaaagctgcagcatatcaaatatagcaactgtatagagttccaacaaaagaacaacagactactagagattaccagggaatttagtgttaagcaggtgtaactacacctgtaagcacttacatgttaactaatagtgaattattgtcattatcaatgatatgcctataacaaatgatcagaaaaagttaatgtccaacaatgttcaaatgttagacagcaaagttactctatcatgtccataataaaagaggaagtcttagcatatgtgtacaattaccactatatggtgttatagatacaccctgttggaaactacacacatccccctatgtacaaccaacacaaaagaagggtccaacatctgtttaacaagaactgacagaggtggtactgtgacaatgcaggatcagtatctttcttcccacaagctgaaacatgtaaagtcaatcaaatcgagtattttgtgacacaatgaacagtttaacattaccaagtgaagtaaactctgcaatgttgacatattcaaccccaaatatgattgtaaaattatgacttcaaaaacgatgtaagcagctccgttatcacatctctaggagccattgtgtcatgctatggcaaaacaaatgtacagcatccaataaaaatcgtggaatcataaagacattttctaacgggtgcgatatgtatcaaataaaggggtggacactgtgtctgtaggtaacacattatattatgtaaaaagcaagaaggtaaaagtctctatgtaaaaggtgaaccaataataaatttctatgacccttagtattcccctctgatgaatttgatgcatcaatatctcaagtcaacgagaagattaacagagcctagcatttattcgtaaatccgatgaattattacataatgtaaatgctggtaatccaccataaatatcatgataactactataattatagtgattatagtaatattgttatcttaattgctgttggactgctcttatactgtaaggccagaagcacaccagtcacactaagaaagatcaactgagtggtataaataatattgcatttagtaactaa
【０２５６】
配列番号2
RSV基準Fタンパク質前駆体F0のアミノ酸配列
A2株 GenBankアクセッション番号AAB86664
Mellilkanaittiltavtfcfasgqniteefyqstcsavskgylsalrtgwytsvitielsnikenkcngtdakvklikqeldkyknavtelqllmqstpatnnrarrelprfmnytlnnakktnvtlskkrkrrflgfllgvgsaiasgvavskvlhlegevnkiksallstnkavvslsngvsvltskvldlknyidkqllpivnkqscsisniatviefqqknnrlleitrefsvnagvttpvstymltnsellslindmpitndqkklmsnnvqivrqqsysimsiikeevlayvvqlplygvidtpcwklhtsplcttntkegsnicltrtdrgwycdnagsvsffpqaetckvqsnrvfcdtmnsltlpsevnlcnvdifnpkydckimtsktdvsssvitslgaivscygktkctasnknrgiiktfsngcdyvsnkgvdtvsvgntlyyvnkqegkslyvkgepiinfydplvfpsdefdasisqvnekinqslafirksdellhnvnagkstinimittiiiviivillsliavglllyckarstpvtlskdqlsginniafsn
【０２５７】
配列番号3
RSV基準Gタンパク質をコードするヌクレオチド配列
Long株
Atgtccaaaaacaaggaccaacgcaccgctaagacactagaaaagacctgggacactctcaatcatttattattcatatcatcgggcttatataagttaaatcttaaatctatagcacaaatcacattatccattctggcaatgataatctcaacttcacttataattacagccatcatattcatagcctcggcaaaccacaaagtcacactaacaactgcaatcatacaagatgcaacaagccagatcaagaacacaaccccaacatacctcactcaggatcctcagcttggaatcagcttctccaatctgtctgaaattacatcacaaaccaccaccatactagcttcaacaacaccaggagtcaagtcaaacctgcaacccacaacagtcaagactaaaaacacaacaacaacccaaacacaacccagcaagcccactacaaaacaacgccaaaacaaaccaccaaacaaacccaataatgattttcacttcgaagtgtttaactttgtaccctgcagcatatgcagcaacaatccaacctgctgggctatctgcaaaagaataccaaacaaaaaaccaggaaagaaaaccaccaccaagcctacaaaaaaaccaaccttcaagacaaccaaaaaagatctcaaacctcaaaccactaaaccaaaggaagtacccaccaccaagcccacagaagagccaaccatcaacaccaccaaaacaaacatcacaactacactgctcaccaacaacaccacaggaaatccaaaactcacaagtcaaatggaaaccttccactcaacctcctccgaaggcaatctaagcccttctcaagtctccacaacatccgagcacccatcacaaccctcatctccacccaacacaacacgccagtag
【０２５８】
配列番号4
RSV基準Gタンパク質のアミノ酸配列
MSKNKDQRTAKTLEKTWDTLNHLLFISSGLYKLNLKSIAQITLSILAMIISTSLIITAIIFIASANHKVTLTTAIIQDATSQIKNTTPTYLTQDPQLGISFSNLSEITSQTTTILASTTPGVKSNLQPTTVKTKNTTTTQTQPSKPTTKQRQNKPPNKPNNDFHFEVFNFVPCSICSNNPTCWAICKRIPNKKPGKKTTTKPTKKPTFKTTKKDLKPQTTKPKEVPTTKPTEEPTINTTKTNITTTLLTNNTTGNPKLTSQMETFHSTSSEGNLSPSQVSTTSEHPSQPSSPPNTTRQ
【０２５９】
配列番号5 
CHOのために最適化されたPreF類似体をコードするヌクレオチド配列
aagcttgccaccatggagctgctgatcctgaaaaccaacgccatcaccgccatcctggccgccgtgaccctgtgcttcgcctcctcccagaacatcaccgaggagttctaccagtccacctgctccgccgtgtccaagggctacctgtccgccctgcggaccggctggtacacctccgtgatcaccatcgagctgtccaacatcaaggaaaacaagtgcaacggcaccgacgccaaggtgaagctgatcaagcaggagctggacaagtacaagagcgccgtgaccgaactccagctgctgatgcagtccacccctgccaccaacaacaagtttctgggcttcctgctgggcgtgggctccgccatcgcctccggcatcgccgtgagcaaggtgctgcacctggagggcgaggtgaacaagatcaagagcgccctgctgtccaccaacaaggccgtggtgtccctgtccaacggcgtgtccgtgctgacctccaaggtgctggatctgaagaactacatcgacaagcagctgctgcctatcgtgaacaagcagtcctgctccatctccaacatcgagaccgtgatcgagttccagcagaagaacaaccggctgctggagatcacccgcgagttctccgtgaacgccggcgtgaccacccctgtgtccacctacatgctgaccaactccgagctgctgtccctgatcaacgacatgcctatcaccaacgaccagaaaaaactgatgtccaacaacgtgcagatcgtgcggcagcagtcctacagcatcatgagcatcatcaaggaagaggtgctggcctacgtggtgcagctgcctctgtacggcgtgatcgacaccccttgctggaagctgcacacctcccccctgtgcaccaccaacaccaaggagggctccaacatctgcctgacccggaccgaccggggctggtactgcgacaacgccggctccgtgtccttcttccctctggccgagacctgcaaggtgcagtccaaccgggtgttctgcgacaccatgaactccctgaccctgccttccgaggtgaacctgtgcaacatcgacatcttcaaccccaagtacgactgcaagatcatgaccagcaagaccgacgtgtcctccagcgtgatcacctccctgggcgccatcgtgtcctgctacggcaagaccaagtgcaccgcctccaacaagaaccggggaatcatcaagaccttctccaacggctgcgactacgtgtccaataagggcgtggacaccgtgtccgtgggcaacacactgtactacgtgaataagcaggagggcaagagcctgtacgtgaagggcgagcctatcatcaacttctacgaccctctggtgttcccttccgacgagttcgacgcctccatcagccaggtgaacgagaagatcaaccagtccctggccttcatccggaagtccgacgagaagctgcataacgtggaggacaagatcgaggagatcctgtccaaaatctaccacatcgagaacgagatcgcccggatcaagaagctgatcggcgaggcctgataatctaga
【０２６０】
配列番号6
PreF類似体のアミノ酸配列
MELLILKTNAITAILAAVTLCFASSQNITEEFYQSTCSAVSKGYLSALRTGWYTSVITIELSNIKENKCNGTDAKVKLIKQELDKYKSAVTELQLLMQSTPATNNKFLGFLLGVGSAIASGIAVSKVLHLEGEVNKIKSALLSTNKAVVSLSNGVSVLTSKVLDLKNYIDKQLLPIVNKQSCSISNIETVIEFQQKNNRLLEITREFSVNAGVTTPVSTYMLTNSELLSLINDMPITNDQKKLMSNNVQIVRQQSYSIMSIIKEEVLAYVVQLPLYGVIDTPCWKLHTSPLCTTNTKEGSNICLTRTDRGWYCDNAGSVSFFPLAETCKVQSNRVFCDTMNSLTLPSEVNLCNIDIFNPKYDCKIMTSKTDVSSSVITSLGAIVSCYGKTKCTASNKNRGIIKTFSNGCDYVSNKGVDTVSVGNTLYYVNKQEGKSLYVKGEPIINFYDPLVFPSDEFDASISQVNEKINQSLAFIRKSDEKLHNVEDKIEEILSKIYHIENEIARIKKLIGEA
【０２６１】
配列番号7 
CHOのために最適化されたPreFG_V1をコードするヌクレオチド配列
aagcttgccaccatggagctgctgatcctcaagaccaacgccatcaccgccatcctggccgccgtgaccctgtgcttcgcctcctcccagaacatcaccgaagagttctaccagtccacctgctccgccgtgtccaagggctacctgtccgccctgcggaccggctggtacacctccgtgatcaccatcgagctgtccaacatcaaagaaaacaagtgcaacggcaccgacgccaaggtcaagctgatcaagcaggaactggacaagtacaagagcgccgtgaccgaactccagctgctgatgcagtccacccctgccaccaacaacaagaagtttctgggcttcctgctgggcgtgggctccgccatcgcctccggcatcgccgtgagcaaggtgctgcacctggagggcgaggtgaacaagatcaagagcgccctgctgtccaccaacaaggccgtggtgtccctgtccaacggcgtgtccgtgctgacctccaaggtgctggatctgaagaactacatcgacaagcagctgctgcctatcgtgaacaagcagtcctgctccatctccaacatcgagaccgtgatcgagttccagcagaagaacaaccggctgctggagatcacccgcgagttctccgtgaacgccggcgtgaccacccctgtgtccacctacatgctgacaaactccgagctgctctccctgatcaacgacatgcctatcaccaacgaccaaaaaaagctgatgtccaacaacgtgcagatcgtgcggcagcagtcctacagcatcatgagcatcatcaaggaagaagtcctggcctacgtcgtgcagctgcctctgtacggcgtgatcgacaccccttgctggaagctgcacacctcccccctgtgcaccaccaacaccaaagagggctccaacatctgcctgacccggaccgaccggggctggtactgcgacaacgccggctccgtgtccttcttccctctggccgagacctgcaaggtgcagtccaaccgggtgttctgcgacaccatgaactccctgaccctgccttccgaggtgaacctgtgcaacatcgacatcttcaaccccaagtacgactgcaagatcatgaccagcaagaccgacgtgtcctccagcgtgatcacctccctgggcgccatcgtgtcctgctacggcaagaccaagtgcaccgcctccaacaagaaccggggaatcatcaagaccttctccaacggctgcgactacgtgtccaataagggcgtggacaccgtgtccgtgggcaacacactgtactacgtgaataagcaggaaggcaagagcctgtacgtgaagggcgagcctatcatcaacttctacgaccctctggtgttcccttccgacgagttcgacgcctccatcagccaggtcaacgagaagatcaaccagtccctggccttcatccggaagtccgacgagaagctgcataacgtggaggacaagatcgaagagatcctgtccaaaatctaccacatcgagaacgagatcgcccggatcaagaagctgatcggcgaggctggcggctctggcggcagcggcggctccaagcagcggcagaacaagcctcctaacaagcccaacaacgacttccacttcgaggtgttcaacttcgtgccttgctccatctgctccaacaaccctacctgctgggccatctgcaagagaatccccaacaagaagcctggcaagaaaaccaccaccaagcctaccaagaagcctaccttcaagaccaccaagaaggaccacaagcctcagaccacaaagcctaaggaagtgccaaccaccaagcaccaccaccatcaccactgataatcta
【０２６２】
配列番号8 
CHOのためのPreFG_V1ペプチド
MELLILKTNAITAILAAVTLCFASSQNITEEFYQSTCSAVSKGYLSALRTGWYTSVITIELSNIKENKCNGTDAKVKLIKQELDKYKSAVTELQLLMQSTPATNNKKFLGFLLGVGSAIASGIAVSKVLHLEGEVNKIKSALLSTNKAVVSLSNGVSVLTSKVLDLKNYIDKQLLPIVNKQSCSISNIETVIEFQQKNNRLLEITREFSVNAGVTTPVSTYMLTNSELLSLINDMPITNDQKKLMSNNVQIVRQQSYSIMSIIKEEVLAYVVQLPLYGVIDTPCWKLHTSPLCTTNTKEGSNICLTRTDRGWYCDNAGSVSFFPLAETCKVQSNRVFCDTMNSLTLPSEVNLCNIDIFNPKYDCKIMTSKTDVSSSVITSLGAIVSCYGKTKCTASNKNRGIIKTFSNGCDYVSNKGVDTVSVGNTLYYVNKQEGKSLYVKGEPIINFYDPLVFPSDEFDASISQVNEKINQSLAFIRKSDEKLHNVEDKIEEILSKIYHIENEIARIKKLIGEAGGSGGSGGSKQRQNKPPNKPNNDFHFEVFNFVPCSICSNNPTCWAICKRIPNKKPGKKTTTKPTKKPTFKTTKKDHKPQTTKPKEVPTTK
【０２６３】
配列番号9
CHOのためのPreFG_V2をコードするヌクレオチド配列
aagcttgccaccatggagctgctgatcctcaagaccaacgccatcaccgccatcctggccgccgtgaccctgtgcttcgcctcctcccagaacatcaccgaagagttctaccagtccacctgctccgccgtgtccaagggctacctgtccgccctgcggaccggctggtacacctccgtgatcaccatcgagctgtccaacatcaaagaaaacaagtgcaacggcaccgacgccaaggtcaagctgatcaagcaggaactggacaagtacaagagcgccgtgaccgaactccagctgctgatgcagtccacccctgccaccaacaacaagaagtttctgggcttcctgctgggcgtgggctccgccatcgcctccggcatcgccgtgagcaaggtgctgcacctggagggcgaggtgaacaagatcaagagcgccctgctgtccaccaacaaggccgtggtgtccctgtccaacggcgtgtccgtgctgacctccaaggtgctggatctgaagaactacatcgacaagcagctgctgcctatcgtgaacaagcagtcctgctccatctccaacatcgagaccgtgatcgagttccagcagaagaacaaccggctgctggagatcacccgcgagttctccgtgaacgccggcgtgaccacccctgtgtccacctacatgctgacaaactccgagctgctctccctgatcaacgacatgcctatcaccaacgaccaaaaaaagctgatgtccaacaacgtgcagatcgtgcggcagcagtcctacagcatcatgagcatcatcaaggaagaagtcctggcctacgtcgtgcagctgcctctgtacggcgtgatcgacaccccttgctggaagctgcacacctcccccctgtgcaccaccaacaccaaagagggctccaacatctgcctgacccggaccgaccggggctggtactgcgacaacgccggctccgtgtccttcttccctctggccgagacctgcaaggtgcagtccaaccgggtgttctgcgacaccatgaactccctgaccctgccttccgaggtgaacctgtgcaacatcgacatcttcaaccccaagtacgactgcaagatcatgaccagcaagaccgacgtgtcctccagcgtgatcacctccctgggcgccatcgtgtcctgctacggcaagaccaagtgcaccgcctccaacaagaaccggggaatcatcaagaccttctccaacggctgcgactacgtgtccaataagggcgtggacaccgtgtccgtgggcaacacactgtactacgtgaataagcaggaaggcaagagcctgtacgtgaagggcgagcctatcatcaacttctacgaccctctggtgttcccttccgacgagttcgacgcctccatcagccaggtcaacgagaagatcaaccagtccctggccttcatccggaagtccgacgagaagctgcataacgtggaggacaagatcgaagagatcctgtccaaaatctaccacatcgagaacgagatcgcccggatcaagaagctgatcggcgaggctggcggcaagcagcggcagaacaagcctcctaacaagcccaacaacgacttccacttcgaggtgttcaacttcgtgccttgctccatctgctccaacaaccctacctgctgggccatctgcaagagaatccccaacaagaagcctggcaagaaaaccaccaccaagcctaccaagaagcctaccttcaagaccaccaagaaggaccacaagcctcagaccacaaagcctaaggaagtgccaaccaccaagcaccaccaccatcaccactgataatcta
【０２６４】
配列番号10
CHOのためのPreFG_V2ペプチド
MELLILKTNAITAILAAVTLCFASSQNITEEFYQSTCSAVSKGYLSALRTGWYTSVITIELSNIKENKCNGTDAKVKLIKQELDKYKSAVTELQLLMQSTPATNNKKFLGFLLGVGSAIASGIAVSKVLHLEGEVNKIKSALLSTNKAVVSLSNGVSVLTSKVLDLKNYIDKQLLPIVNKQSCSISNIETVIEFQQKNNRLLEITREFSVNAGVTTPVSTYMLTNSELLSLINDMPITNDQKKLMSNNVQIVRQQSYSIMSIIKEEVLAYVVQLPLYGVIDTPCWKLHTSPLCTTNTKEGSNICLTRTDRGWYCDNAGSVSFFPLAETCKVQSNRVFCDTMNSLTLPSEVNLCNIDIFNPKYDCKIMTSKTDVSSSVITSLGAIVSCYGKTKCTASNKNRGIIKTFSNGCDYVSNKGVDTVSVGNTLYYVNKQEGKSLYVKGEPIINFYDPLVFPSDEFDASISQVNEKINQSLAFIRKSDEKLHNVEDKIEEILSKIYHIENEIARIKKLIGEAGGKQRQNKPPNKPNNDFHFEVFNFVPCSICSNNPTCWAICKRIPNKKPGKKTTTKPTKKPTFKTTKKDHKPQTTKPKEVPTTK
【０２６５】
配列番号11
コイルドコイルの例（イソロイシンジッパー）
EDKIEEILSKIYHIENEIARIKKLIGEA
【０２６６】
配列番号12
PreF抗原ポリヌクレオチド CHO2
atggagctgcccatcctgaagaccaacgccatcaccaccatcctcgccgccgtgaccctgtgcttcgccagcagccagaacatcacggaggagttctaccagagcacgtgcagcgccgtgagcaagggctacctgagcgcgctgcgcacgggctggtacacgagcgtgatcacgatcgagctgagcaacatcaaggagaacaagtgcaacggcacggacgcgaaggtgaagctgatcaagcaggagctggacaagtacaagagcgcggtgacggagctgcagctgctgatgcagagcacgccggcgacgaacaacaagttcctcggcttcctgctgggcgtgggcagcgcgatcgcgagcggcatcgccgtgagcaaggtgctgcacctggagggcgaggtgaacaagatcaagtccgcgctgctgagcacgaacaaggcggtcgtgagcctgagcaacggcgtgagcgtgctgacgagcaaggtgctcgacctgaagaactacatcgacaagcagctgctgccgatcgtgaacaagcagagctgcagcatcagcaacatcgagaccgtgatcgagttccagcagaagaacaaccgcctgctggagatcacgcgggagttctccgtgaacgcaggcgtgacgacgcccgtgtctacgtacatgctgacgaacagcgagctgctcagcctgatcaacgacatgccgatcacgaacgaccagaagaagctgatgagcaacaacgtgcagatcgtgcgccagcagagctacagcatcatgagcatcatcaaggaggaggtgctggcatacgtggtgcagctgccgctgtacggcgtcatcgacacgccctgctggaagctgcacacgagcccgctgtgcacgaccaacacgaaggagggcagcaacatctgcctgacgcggacggaccggggctggtactgcgacaacgcgggcagcgtgagcttcttcccgctcgcggagacgtgcaaggtgcagagcaaccgcgtcttctgcgacacgatgaacagcctgacgctgccgagcgaggtgaacctgtgcaacatcgacatcttcaacccgaagtacgactgcaagatcatgacgagcaagaccgatgtcagcagcagcgtgatcacgagcctcggcgcgatcgtgagctgctacggcaagacgaagtgcacggcgagcaacaagaaccgcggcatcatcaagacgttcagcaacggctgcgactatgtgagcaacaagggcgtggacactgtgagcgtcggcaacacgctgtactacgtgaacaagcaggagggcaagagcctgtacgtgaagggcgagccgatcatcaacttctacgacccgctcgtgttcccgagcgacgagttcgacgcgagcatcagccaagtgaacgagaagatcaaccagagcctggcgttcatccgcaagagcgacgagaagctgcacaacgtggaggacaagatcgaggagatcctgagcaagatctaccacatcgagaacgagatcgcgcgcatcaagaagctgatcggcgaggcgcatcatcaccatcaccattga
【０２６７】
配列番号13
PreF抗原ポリヌクレオチド（イントロンあり）
atggagctgctgatcctgaaaaccaacgccatcaccgccatcctggccgccgtgaccctgtgcttcgcctcctcccagaacatcaccgaggagttctaccagtccacctgctccgccgtgtccaagggctacctgtccgccctgcggaccggctggtacacctccgtgatcaccatcgagctgtccaacatcaaggaaaacaagtgcaacggcaccgacgccaaggtgaagctgatcaagcaggagctggacaagtacaagagcgccgtgaccgaactccagctgctgatgcagtccacccctgccaccaacaacaagtttctgggcttcctgctgggcgtgggctccgccatcgcctccggcatcgccgtgagcaaggtacgtgtcgggacttgtgttcccctttttttaataaaaagttatatctttaatgttatatacatatttcctgtatgtgatccatgtgcttatgactttgtttatcatgtgtttaggtgctgcacctggagggcgaggtgaacaagatcaagagcgccctgctgtccaccaacaaggccgtggtgtccctgtccaacggcgtgtccgtgctgacctccaaggtgctggatctgaagaactacatcgacaagcagctgctgcctatcgtgaacaagcagtcctgctccatctccaacatcgagaccgtgatcgagttccagcagaagaacaaccggctgctggagatcacccgcgagttctccgtgaacgccggcgtgaccacccctgtgtccacctacatgctgaccaactccgagctgctgtccctgatcaacgacatgcctatcaccaacgaccagaaaaaactgatgtccaacaacgtgcagatcgtgcggcagcagtcctacagcatcatgagcatcatcaaggaagaggtgctggcctacgtggtgcagctgcctctgtacggcgtgatcgacaccccttgctggaagctgcacacctcccccctgtgcaccaccaacaccaaggagggctccaacatctgcctgacccggaccgaccggggctggtactgcgacaacgccggctccgtgtccttcttccctctggccgagacctgcaaggtgcagtccaaccgggtgttctgcgacaccatgaactccctgaccctgccttccgaggtgaacctgtgcaacatcgacatcttcaaccccaagtacgactgcaagatcatgaccagcaagaccgacgtgtcctccagcgtgatcacctccctgggcgccatcgtgtcctgctacggcaagaccaagtgcaccgcctccaacaagaaccggggaatcatcaagaccttctccaacggctgcgactacgtgtccaataagggcgtggacaccgtgtccgtgggcaacacactgtactacgtgaataagcaggagggcaagagcctgtacgtgaagggcgagcctatcatcaacttctacgaccctctggtgttcccttccgacgagttcgacgcctccatcagccaggtgaacgagaagatcaaccagtccctggccttcatccggaagtccgacgagaagctgcataacgtggaggacaagatcgaggagatcctgtccaaaatctaccacatcgagaacgagatcgcccggatcaagaagctgatcggcgaggccggaggtcaccaccaccatcaccactga
【０２６８】
配列番号14
合成リンカー配列
GGSGGSGGS
【０２６９】
配列番号15
フーリン切断部位
RARR
【０２７０】
配列番号16
フーリン切断部位
RKRR
【０２７１】
配列番号17
PreF_NGTLをコードするヌクレオチド配列
atggagctgctgatcctgaaaaccaacgccatcaccgccatcctggccgccgtgaccctgtgcttcgcctcctcccagaacatcaccgaggagttctaccagtccacctgctccgccgtgtccaagggctacctgtccgccctgcggaccggctggtacacctccgtgatcaccatcgagctgtccaacatcaaggaaaacaagtgcaacggcaccgacgccaaggtgaagctgatcaagcaggagctggacaagtacaagagcgccgtgaccgaactccagctgctgatgcagtccacccctgccaccaacaacaagtttctgggcttcctgctgggcgtgggctccgccatcgcctccggcatcgccgtgagcaaggtgctgcacctggagggcgaggtgaacaagatcaagagcgccctgctgtccaccaacaaggccgtggtgtccctgtccaacggcgtgtccgtgctgacctccaaggtgctggatctgaagaactacatcgacaagcagctgctgcctatcgtgaacaagcagtcctgctccatctccaacatcgagaccgtgatcgagttccagcagaagaacaaccggctgctggagatcacccgcgagttctccgtgaacgccggcgtgaccacccctgtgtccacctacatgctgaccaactccgagctgctgtccctgatcaacgacatgcctatcaccaacgaccagaaaaaactgatgtccaacaacgtgcagatcgtgcggcagcagtcctacagcatcatgagcatcatcaaggaagaggtgctggcctacgtggtgcagctgcctctgtacggcgtgatcgacaccccttgctggaagctgcacacctcccccctgtgcaccaccaacaccaaggagggctccaacatctgcctgacccggaccgaccggggctggtactgcgacaacgccggctccgtgtccttcttccctctggccgagacctgcaaggtgcagtccaaccgggtgttctgcgacaccatgaactccctgaccctgccttccgaggtgaacctgtgcaacatcgacatcttcaaccccaagtacgactgcaagatcatgaccagcaagaccgacgtgtcctccagcgtgatcacctccctgggcgccatcgtgtcctgctacggcaagaccaagtgcaccgcctccaacaagaaccggggaatcatcaagaccttctccaacggctgcgactacgtgtccaataagggcgtggacaccgtgtccgtgggcaacacactgtactacgtgaataagcaggagggcaagagcctgtacgtgaagggcgagcctatcatcaacttctacgaccctctggtgttcccttccgacgagttcgacgcctccatcagccaggtgaacgagaagatcaacgggaccctggccttcatccggaagtccgacgagaagctgcataacgtggaggacaagatcgaggagatcctgtccaaaatctaccacatcgagaacgagatcgcccggatcaagaagctgatcggcgaggcc
【０２７２】
配列番号18
PreF_NGTLのアミノ酸配列
MELLILKTNAITAILAAVTLCFASSQNITEEFYQSTCSAVSKGYLSALRTGWYTSVITIELSNIKENKCNGTDAKVKLIKQELDKYKSAVTELQLLMQSTPATNNKFLGFLLGVGSAIASGIAVSKVLHLEGEVNKIKSALLSTNKAVVSLSNGVSVLTSKVLDLKNYIDKQLLPIVNKQSCSISNIETVIEFQQKNNRLLEITREFSVNAGVTTPVSTYMLTNSELLSLINDMPITNDQKKLMSNNVQIVRQQSYSIMSIIKEEVLAYVVQLPLYGVIDTPCWKLHTSPLCTTNTKEGSNICLTRTDRGWYCDNAGSVSFFPLAETCKVQSNRVFCDTMNSLTLPSEVNLCNIDIFNPKYDCKIMTSKTDVSSSVITSLGAIVSCYGKTKCTASNKNRGIIKTFSNGCDYVSNKGVDTVSVGNTLYYVNKQEGKSLYVKGEPIINFYDPLVFPSDEFDASISQVNEKINGTLAFIRKSDEKLHNVEDKIEEILSKIYHIENEIARIKKLIGEA
【０２７３】
配列番号19
PreF_L112Qをコードするヌクレオチド配列
atggagctgctgatcctgaaaaccaacgccatcaccgccatcctggccgccgtgaccctgtgcttcgcctcctcccagaacatcaccgaggagttctaccagtccacctgctccgccgtgtccaagggctacctgtccgccctgcggaccggctggtacacctccgtgatcaccatcgagctgtccaacatcaaggaaaacaagtgcaacggcaccgacgccaaggtgaagctgatcaagcaggagctggacaagtacaagagcgccgtgaccgaactccagctgctgatgcagtccacccctgccaccaacaacaagtttctgggcttcctgcagggcgtgggctccgccatcgcctccggcatcgccgtgagcaaggtgctgcacctggagggcgaggtgaacaagatcaagagcgccctgctgtccaccaacaaggccgtggtgtccctgtccaacggcgtgtccgtgctgacctccaaggtgctggatctgaagaactacatcgacaagcagctgctgcctatcgtgaacaagcagtcctgctccatctccaacatcgagaccgtgatcgagttccagcagaagaacaaccggctgctggagatcacccgcgagttctccgtgaacgccggcgtgaccacccctgtgtccacctacatgctgaccaactccgagctgctgtccctgatcaacgacatgcctatcaccaacgaccagaaaaaactgatgtccaacaacgtgcagatcgtgcggcagcagtcctacagcatcatgagcatcatcaaggaagaggtgctggcctacgtggtgcagctgcctctgtacggcgtgatcgacaccccttgctggaagctgcacacctcccccctgtgcaccaccaacaccaaggagggctccaacatctgcctgacccggaccgaccggggctggtactgcgacaacgccggctccgtgtccttcttccctctggccgagacctgcaaggtgcagtccaaccgggtgttctgcgacaccatgaactccctgaccctgccttccgaggtgaacctgtgcaacatcgacatcttcaaccccaagtacgactgcaagatcatgaccagcaagaccgacgtgtcctccagcgtgatcacctccctgggcgccatcgtgtcctgctacggcaagaccaagtgcaccgcctccaacaagaaccggggaatcatcaagaccttctccaacggctgcgactacgtgtccaataagggcgtggacaccgtgtccgtgggcaacacactgtactacgtgaataagcaggagggcaagagcctgtacgtgaagggcgagcctatcatcaacttctacgaccctctggtgttcccttccgacgagttcgacgcctccatcagccaggtgaacgagaagatcaaccagtccctggccttcatccggaagtccgacgagaagctgcataacgtggaggacaagatcgaggagatcctgtccaaaatctaccacatcgagaacgagatcgcccggatcaagaagctgatcggcgaggcc
【０２７４】
配列番号20
PreF_L112Qのアミノ酸配列
MELLILKTNAITAILAAVTLCFASSQNITEEFYQSTCSAVSKGYLSALRTGWYTSVITIELSNIKENKCNGTDAKVKLIKQELDKYKSAVTELQLLMQSTPATNNKFLGFLQGVGSAIASGIAVSKVLHLEGEVNKIKSALLSTNKAVVSLSNGVSVLTSKVLDLKNYIDKQLLPIVNKQSCSISNIETVIEFQQKNNRLLEITREFSVNAGVTTPVSTYMLTNSELLSLINDMPITNDQKKLMSNNVQIVRQQSYSIMSIIKEEVLAYVVQLPLYGVIDTPCWKLHTSPLCTTNTKEGSNICLTRTDRGWYCDNAGSVSFFPLAETCKVQSNRVFCDTMNSLTLPSEVNLCNIDIFNPKYDCKIMTSKTDVSSSVITSLGAIVSCYGKTKCTASNKNRGIIKTFSNGCDYVSNKGVDTVSVGNTLYYVNKQEGKSLYVKGEPIINFYDPLVFPSDEFDASISQVNEKINQSLAFIRKSDEKLHNVEDKIEEILSKIYHIENEIARIKKLIGEA
【０２７５】
配列番号21
PreF_NGTL_L112Qをコードするヌクレオチド配列
atggagctgctgatcctgaaaaccaacgccatcaccgccatcctggccgccgtgaccctgtgcttcgcctcctcccagaacatcaccgaggagttctaccagtccacctgctccgccgtgtccaagggctacctgtccgccctgcggaccggctggtacacctccgtgatcaccatcgagctgtccaacatcaaggaaaacaagtgcaacggcaccgacgccaaggtgaagctgatcaagcaggagctggacaagtacaagagcgccgtgaccgaactccagctgctgatgcagtccacccctgccaccaacaacaagtttctgggcttcctgcagggcgtgggctccgccatcgcctccggcatcgccgtgagcaaggtgctgcacctggagggcgaggtgaacaagatcaagagcgccctgctgtccaccaacaaggccgtggtgtccctgtccaacggcgtgtccgtgctgacctccaaggtgctggatctgaagaactacatcgacaagcagctgctgcctatcgtgaacaagcagtcctgctccatctccaacatcgagaccgtgatcgagttccagcagaagaacaaccggctgctggagatcacccgcgagttctccgtgaacgccggcgtgaccacccctgtgtccacctacatgctgaccaactccgagctgctgtccctgatcaacgacatgcctatcaccaacgaccagaaaaaactgatgtccaacaacgtgcagatcgtgcggcagcagtcctacagcatcatgagcatcatcaaggaagaggtgctggcctacgtggtgcagctgcctctgtacggcgtgatcgacaccccttgctggaagctgcacacctcccccctgtgcaccaccaacaccaaggagggctccaacatctgcctgacccggaccgaccggggctggtactgcgacaacgccggctccgtgtccttcttccctctggccgagacctgcaaggtgcagtccaaccgggtgttctgcgacaccatgaactccctgaccctgccttccgaggtgaacctgtgcaacatcgacatcttcaaccccaagtacgactgcaagatcatgaccagcaagaccgacgtgtcctccagcgtgatcacctccctgggcgccatcgtgtcctgctacggcaagaccaagtgcaccgcctccaacaagaaccggggaatcatcaagaccttctccaacggctgcgactacgtgtccaataagggcgtggacaccgtgtccgtgggcaacacactgtactacgtgaataagcaggagggcaagagcctgtacgtgaagggcgagcctatcatcaacttctacgaccctctggtgttcccttccgacgagttcgacgcctccatcagccaggtgaacgagaagatcaacgggaccctggccttcatccggaagtccgacgagaagctgcataacgtggaggacaagatcgaggagatcctgtccaaaatctaccacatcgagaacgagatcgcccggatcaagaagctgatcggcgaggcc
【０２７６】
配列番号22
PreF_NGTL_L112Qのアミノ酸配列
MELLILKTNAITAILAAVTLCFASSQNITEEFYQSTCSAVSKGYLSALRTGWYTSVITIELSNIKENKCNGTDAKVKLIKQELDKYKSAVTELQLLMQSTPATNNKFLGFLQGVGSAIASGIAVSKVLHLEGEVNKIKSALLSTNKAVVSLSNGVSVLTSKVLDLKNYIDKQLLPIVNKQSCSISNIETVIEFQQKNNRLLEITREFSVNAGVTTPVSTYMLTNSELLSLINDMPITNDQKKLMSNNVQIVRQQSYSIMSIIKEEVLAYVVQLPLYGVIDTPCWKLHTSPLCTTNTKEGSNICLTRTDRGWYCDNAGSVSFFPLAETCKVQSNRVFCDTMNSLTLPSEVNLCNIDIFNPKYDCKIMTSKTDVSSSVITSLGAIVSCYGKTKCTASNKNRGIIKTFSNGCDYVSNKGVDTVSVGNTLYYVNKQEGKSLYVKGEPIINFYDPLVFPSDEFDASISQVNEKINGTLAFIRKSDEKLHNVEDKIEEILSKIYHIENEIARIKKLIGEA
【図１】
2019163284.tif 000004
【図２】
2019163284.tif 000005
【図３】
2019163284.tif 000006
【図４】
2019163284.tif 000007
【図５】
2019163284.tif 000008
【図６】
2019163284.tif 000009
【図７】
2019163284.tif 000010
【図８】
2019163284.tif 000011
【配列表】
2019163284000001.app
【手続補正書】
【提出日】令和1年5月30日(2019.5.30)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも１つの呼吸器合胞体ウイルス（Respiratory Syncytial Virus）（ＲＳＶ）抗原と少なくとも１つの百日咳菌（Bordetella pertussis）抗原とを含む併用免疫原性組成物であって、前記少なくとも１つのＲＳＶ抗原が組換え可溶性Ｆタンパク質類似体であり、前記少なくとも１つの百日咳菌抗原が少なくとも１つの無細胞パータシス（Ｐａ）抗原を含む又は全細胞（Ｐｗ）抗原を含む、前記併用免疫原性組成物。
【請求項２】
前記Ｆタンパク質類似体が、Ｆタンパク質の融合前立体構造を安定させる少なくとも１つの修飾を含むＰｒｅＦ抗原である、請求項１に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項３】
前記Ｆタンパク質類似体が、Ｎ末端からＣ末端への方向に、ＲＳＶ  Ｆタンパク質ポリペプチドのＦ２ドメイン及びＦ１ドメイン、並びにヘテロ三量体化ドメインを含み、前記Ｆ２ドメインと前記Ｆ１ドメインの間にフーリン切断部位がない、請求項１又は２に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項４】
前記Ｆタンパク質類似体が、
（ｉ）グリコシル化を改変する修飾、
（ｉｉ）少なくとも１つの非フーリン切断部位を除去する修飾、
（ｉｉｉ）ｐｅｐ２７ドメインの１つ以上のアミノ酸を欠失させる修飾、及び
（ｉｖ）Ｆタンパク質細胞外ドメインの疎水性ドメインにおいて親水性アミノ酸を置換する又は付加する修飾
から選択される少なくとも１つの修飾を含む、請求項１から３のいずれか一項に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項５】
前記Ｆタンパク質類似体が、
ｉ．配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１８、配列番号２０及び配列番号２２の群から選択されるポリペプチドを含むポリペプチド、
ｉｉ．配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１７、配列番号１９及び配列番号２１の群から選択されるポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドの群から選択される、請求項１に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項６】
前記Ｆタンパク質類似体が、ＲＳＶ  Ｆタンパク質ポリペプチドのＦ２ドメイン及びＦ１ドメインを含み、前記Ｆタンパク質ポリペプチドが、グリコシル化を改変する少なくとも１つの修飾を含む、請求項１に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項７】
前記Ｆタンパク質類似体が、
（ｉ）ヘテロ三量体化ドメインを含むアミノ酸配列の付加、
（ｉｉ）少なくとも１つのフーリン切断部位の欠失、
（ｉｉｉ）少なくとも１つの非フーリン切断部位の欠失、
（ｉｖ）ｐｅｐ２７ドメインの１つ以上のアミノ酸の欠失、及び
（ｖ）Ｆタンパク質細胞外ドメインの疎水性ドメインにおける親水性アミノ酸の少なくとも１つの置換又は付加
から選択される少なくとも１つの修飾を含む、請求項６に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項８】
前記Ｆタンパク質類似体が、前記Ｆ２ドメインと前記Ｆ１ドメインの間にインタクト融合ペプチドを含む、請求項６または７に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項９】
前記少なくとも１つの修飾が、ヘテロ三量体化ドメインを含むアミノ酸配列の付加を含む、請求項６から８のいずれか一項に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項１０】
前記ヘテロ三量体化ドメインがＦ１ドメインのＣ末端に配置されている、請求項９に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項１１】
Ｆ２ドメイン及びＦ１ドメインを含み、介在するフーリン切断部位がない、請求項６から１０のいずれか一項に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項１２】
前記Ｆタンパク質類似体が集合して多量体、例えば三量体になる、請求項６から１１のいずれか一項に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項１３】
前記Ｆ２ドメインが、配列番号２の基準Ｆタンパク質前駆体ポリペプチド（Ｆ０）のアミノ酸２６〜１０５に対応するＲＳＶ  Ｆタンパク質ポリペプチドの少なくとも一部分を含む、請求項６から１２のいずれか一項に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項１４】
前記Ｆ１ドメインが、配列番号２の基準Ｆタンパク質前駆体ポリペプチド（Ｆ０）のアミノ酸１３７〜５１６に対応するＲＳＶ  Ｆタンパク質ポリペプチドの少なくとも一部分を含む、請求項６から１３のいずれか一項に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項１５】
前記ヘテロ三量体化ドメインがコイルドコイルドメインを含む、又はイソロイシンジッパーを含む、請求項７から１４のいずれか一項に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項１６】
前記イソロイシンジッパードメインが、配列番号１１のアミノ酸配列を含む、請求項１５に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項１７】
前記Ｆタンパク質類似体が、配列番号２の基準Ｆタンパク質前駆体（Ｆ０）のアミノ酸１０５〜１０９に対応する位置、アミノ酸１３３〜１３６に対応する位置、又はアミノ酸１０５〜１０９に対応する位置とアミノ酸１３３〜１３６に対応する位置の両方におけるフーリン切断部位を除去するアミノ酸付加、欠失又は置換を含む、請求項６から１６のいずれか一項に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項１８】
前記少なくとも１つのＰａ抗原が、パータシストキソイド（ＰＴ）、糸状赤血球凝集素（ＦＨＡ）、パータクチン（ＰＲＮ）、２型線毛（ＦＩＭ２）、３型線毛（ＦＩＭ３）及びＢｒｋＡからなる群より選択される、請求項１から１７のいずれか一項に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項１９】
前記ＰＴが化学的にトキソイド化されている（toxoided）か、又は遺伝的にトキソイド化、例えば突然変異Ｒ９Ｋ及びＥ１２９Ｇの一方若しくは両方によってトキソイド化されている、請求項１８に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項２０】
前記少なくとも１つのＰａ抗原が、ＰＴとＦＨＡとを、ＰＴとＦＨＡとＰＲＮとを、又はＰＴとＦＨＡとＰＲＮにＦＩＭ２及びＦＩＭ３のいずれか若しくは両方とを含む、請求項１８又は１９に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項２１】
ｉ．１０〜３０μｇ、例えば正確に又はおよそ２５μｇのＰＴ、
ｉｉ．１０〜３０μｇ、例えば正確に又はおよそ２５μｇのＦＨＡ
を含む、請求項１８から２０のいずれか一項に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項２２】
２〜１０μｇ、例えば正確に又はおよそ８μｇのＰＲＮをさらに含む、請求項２１に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項２３】
前記少なくとも１つの百日咳菌抗原がＰｗ抗原を含む、請求項１から１７のいずれか一項に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項２４】
薬学的に許容される担体又は賦形剤をさらに含む、請求項１から２３のいずれか一項に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項２５】
前記担体又は賦形剤が緩衝剤を含む、請求項２４に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項２６】
少なくとも１つのアジュバントをさらに含む、請求項１から２５のいずれか一項に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項２７】
前記少なくとも１つのアジュバントが、アルミニウム塩、例えば水酸化アルミニウム又はリン酸アルミニウム、リン酸カルシウム、３Ｄ−ＭＰＬ、ＱＳ２１、ＣｐＧ含有オリゴデオキシヌクレオチドアジュバント、及び水中油型エマルションの群から選択される少なくとも１つのアジュバントを含む、請求項２６に記載の併用免疫原性組成物。
【請求項２８】
対象におけるＲＳＶ及び百日咳菌による感染又はＲＳＶ及び百日咳菌に関連する疾患の予防又は処置のための、請求項１から２７のいずれか一項に記載の併用免疫原性組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２２５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２２５】
本発明は、例えば以下の実施形態を包含する：
１．少なくとも１つの呼吸器合胞体ウイルス（Respiratory Syncytial Virus）（ＲＳＶ）抗原と少なくとも１つの百日咳菌（Bordetella pertussis）抗原とを含む併用免疫原性組成物であって、前記少なくとも１つのＲＳＶ抗原が組換え可溶性Ｆタンパク質類似体であり、前記少なくとも１つの百日咳菌抗原が少なくとも１つの無細胞パータシス（Ｐａ）抗原を含む又は全細胞（Ｐｗ）抗原を含む、前記併用免疫原性組成物。
２．前記Ｆタンパク質類似体が、Ｆタンパク質の融合前立体構造を安定させる少なくとも１つの修飾を含むＰｒｅＦ抗原である、実施形態１に記載の併用免疫原性組成物。
３．前記Ｆタンパク質類似体が、Ｎ末端からＣ末端への方向に、ＲＳＶ  Ｆタンパク質ポリペプチドのＦ２ドメイン及びＦ１ドメイン、並びにヘテロ三量体化ドメインを含み、前記Ｆ２ドメインと前記Ｆ１ドメインの間にフーリン切断部位がない、実施形態１又は２に記載の併用免疫原性組成物。
４．前記Ｆタンパク質類似体が、
（ｉ）グリコシル化を改変する修飾、
（ｉｉ）少なくとも１つの非フーリン切断部位を除去する修飾、
（ｉｉｉ）ｐｅｐ２７ドメインの１つ以上のアミノ酸を欠失させる修飾、及び
（ｉｖ）Ｆタンパク質細胞外ドメインの疎水性ドメインにおいて親水性アミノ酸を置換する又は付加する修飾
から選択される少なくとも１つの修飾を含む、実施形態１から３のいずれかに記載の併用免疫原性組成物。
５．前記Ｆ２ドメインが、配列番号２の基準Ｆタンパク質前駆体ポリペプチド（Ｆ０）のアミノ酸２６〜１０５に対応するＲＳＶ  Ｆタンパク質ポリペプチドを含む、及び／又は前記Ｆ１ドメインが、配列番号２の基準Ｆタンパク質前駆体ポリペプチド（Ｆ０）のアミノ酸１３７〜５１６に対応するＲＳＶ  Ｆタンパク質ポリペプチドを含む、実施形態３又は４に記載の併用免疫原性組成物。
６．前記Ｆタンパク質類似体が、
ｉ．配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１８、配列番号２０及び配列番号２２の群から選択されるポリペプチドを含むポリペプチド、
ｉｉ．配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１７、配列番号１９及び配列番号２１の群から選択されるポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチド、又は配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１７、配列番号１９及び配列番号２１の群から選択されるポリヌクレオチドにストリンジェントな条件下で実質的にその全長にわたってハイブリダイズするポリヌクレオチド配列によってコードされるポリペプチドであって、天然のＲＳＶ株に少なくとも一部は対応するアミノ酸配列を含む前記ポリペプチド、
ｉｉｉ．配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１８、配列番号２０及び配列番号２２の群から選択されるポリペプチドと少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチドであって、天然のＲＳＶ株に対応しないアミノ酸配列を含む前記ポリペプチドの群から選択される、実施形態１に記載の併用免疫原性組成物。
７．前記Ｆタンパク質類似体が、ＲＳＶ  Ｆタンパク質ポリペプチドのＦ２ドメイン及びＦ１ドメインを含み、前記Ｆタンパク質ポリペプチドが、グリコシル化を改変する少なくとも１つの修飾を含む、実施形態１に記載の併用免疫原性組成物。
８．前記Ｆタンパク質類似体が、
（ｉ）ヘテロ三量体化ドメインを含むアミノ酸配列の付加、
（ｉｉ）少なくとも１つのフーリン切断部位の欠失、
（ｉｉｉ）少なくとも１つの非フーリン切断部位の欠失、
（ｉｖ）ｐｅｐ２７ドメインの１つ以上のアミノ酸の欠失、及び
（ｖ）Ｆタンパク質細胞外ドメインの疎水性ドメインにおける親水性アミノ酸の少なくとも１つの置換又は付加
から選択される少なくとも１つの修飾を含む、実施形態７に記載の併用免疫原性組成物。
９．グリコシル化を改変する前記少なくとも１つの修飾が、配列番号２の位置５００に対応するアミノ酸を含む及び／又は配列番号２の位置５００に対応するアミノ酸に隣接する、１つ以上のアミノ酸の置換を含む、実施形態７又は８に記載の併用免疫原性組成物。
１０．配列番号２の位置５００〜５０２に対応するアミノ酸が、ＮＧＳ、ＮＫＳ、ＮＧＴ、ＮＫＴから選択される、実施形態７から９のいずれかに記載の併用免疫原性組成物。
１１．グリコシル化を改変する前記修飾が、配列番号２の位置５００に対応するアミノ酸におけるグルタミンの置換を含む、実施形態７から１０のいずれかに記載の併用免疫原性組成物。
１２．前記Ｆタンパク質類似体が、前記Ｆ２ドメインと前記Ｆ１ドメインの間にインタクト融合ペプチドを含む、実施形態７から１１のいずれかに記載の併用免疫原性組成物。
１３．前記少なくとも１つの修飾が、ヘテロ三量体化ドメインを含むアミノ酸配列の付加を含む、実施形態７から１２のいずれかに記載の併用免疫原性組成物。
１４．前記ヘテロ三量体化ドメインがＦ１ドメインのＣ末端に配置されている、実施形態１３に記載の併用免疫原性組成物。
１５．Ｆ２ドメイン及びＦ１ドメインを含み、介在するフーリン切断部位がない、実施形態７から１４のいずれかに記載の併用免疫原性組成物。
１６．前記Ｆタンパク質類似体が集合して多量体、例えば三量体になる、実施形態７から１５のいずれかに記載の併用免疫原性組成物。
１７．前記Ｆ２ドメインが、配列番号２の基準Ｆタンパク質前駆体ポリペプチド（Ｆ０）のアミノ酸２６〜１０５に対応するＲＳＶ  Ｆタンパク質ポリペプチドの少なくとも一部分を含む、実施形態７から１６のいずれかに記載の併用免疫原性組成物。
１８．前記Ｆ１ドメインが、配列番号２の基準Ｆタンパク質前駆体ポリペプチド（Ｆ０）のアミノ酸１３７〜５１６に対応するＲＳＶ  Ｆタンパク質ポリペプチドの少なくとも一部分を含む、実施形態７から１７のいずれかに記載の併用免疫原性組成物。
１９．前記Ｆ２ドメインが、配列番号２の基準Ｆタンパク質前駆体ポリペプチド（Ｆ０）のアミノ酸２６〜１０５に対応するＲＳＶ  Ｆタンパク質ポリペプチドを含む、及び／又は前記Ｆ１ドメインが、配列番号２の基準Ｆタンパク質前駆体ポリペプチド（Ｆ０）のアミノ酸１３７〜５１６に対応するＲＳＶ  Ｆタンパク質ポリペプチドを含む、実施形態７から１８のいずれかに記載の併用免疫原性組成物。
２０．前記Ｆタンパク質類似体が、
ｉ．配列番号２２を含むポリペプチド、
ｉｉ．配列番号２１によってコードされるポリペプチド、又は配列番号２１にストリンジェントな条件下で実質的にその全長にわたってハイブリダイズするポリヌクレオチド配列によってコードされるポリペプチド、
ｉｉｉ．配列番号２２と少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド
の群より選択される、実施形態７から１９のいずれかに記載の併用免疫原性組成物。
２１．前記Ｆ２ドメインが、前記ＲＳＶ  Ｆタンパク質ポリペプチドのアミノ酸１〜１０５を含む、実施形態７から２０のいずれかに記載の併用免疫原性組成物。
２２．前記Ｆ２ドメイン及び前記Ｆ１ドメインが、インタクト融合ペプチドと共に及び介在ｐｅｐ２７ドメインなしで配置されている、実施形態７から２１のいずれかに記載の併用免疫原性組成物。
２３．前記ヘテロ三量体化ドメインがコイルドコイルドメインを含む、又はイソロイシンジッパーを含む、実施形態８から２２のいずれかに記載の併用免疫原性組成物。
２４．前記イソロイシンジッパードメインが、配列番号１１のアミノ酸配列を含む、実施形態２３に記載の併用免疫原性組成物。
２５．前記Ｆタンパク質類似体が、前記Ｆタンパク質細胞外ドメインの疎水性ドメインにおける親水性アミノ酸の少なくとも１つの置換又は付加を含む、実施形態７から２４のいずれかに記載の併用免疫原性組成物。
２６．前記疎水性ドメインが前記Ｆタンパク質細胞外ドメインのＨＲＢコイルドコイルドメインである、実施形態２５に記載の併用免疫原性組成物。
２７．前記ＨＲＢコイルドコイルドメインが、配列番号２の基準Ｆタンパク質前駆体（Ｆ０）のアミノ酸５１２に対応する位置において、中性残基に代わる荷電残基の置換を含む、実施形態２６に記載の併用免疫原性組成物。
２８．前記ＨＲＢコイルドコイルドメインが、配列番号２の基準Ｆタンパク質前駆体（Ｆ０）のアミノ酸５１２に対応する位置において、ロイシンに代わるリジン又はグルタミンの置換を含む、実施形態２７に記載の併用免疫原性組成物。
２９．前記疎水性ドメインが前記Ｆタンパク質細胞外ドメインのＨＲＡドメインである、実施形態２５に記載の併用免疫原性組成物。
３０．前記ＨＲＡドメインが、配列番号２の基準Ｆタンパク質前駆体（Ｆ０）のアミノ酸１０５に対応する位置の次に荷電残基の付加を含む、実施形態２９に記載の併用免疫原性組成物。
３１．前記ＨＲＡドメインが、配列番号２の基準Ｆタンパク質前駆体（Ｆ０）のアミノ酸１０５に対応する位置の次にリジンの付加を含む、実施形態３０に記載の併用免疫原性組成物。
３２．前記Ｆタンパク質類似体が、前記Ｆタンパク質細胞外ドメインの前記ＨＲＡドメインにおける親水性アミノ酸の少なくとも第一の置換又は付加及び前記ＨＲＢドメインにおける親水性アミノ酸の少なくとも第二の置換又は付加を含む、実施形態２５から３１のいずれかに記載の併用免疫原性組成物。
３３．前記Ｆタンパク質類似体が、天然のＦタンパク質前駆体（Ｆ０）中に存在するフーリン切断部位を除去する少なくとも１つのアミノ酸付加、欠失又は置換を含む、実施形態７から３２のいずれかに記載の併用免疫原性組成物。
３４．前記Ｆタンパク質類似体が、配列番号２の基準Ｆタンパク質前駆体（Ｆ０）のアミノ酸１０５〜１０９に対応する位置、アミノ酸１３３〜１３６に対応する位置、又はアミノ酸１０５〜１０９に対応する位置とアミノ酸１３３〜１３６に対応する位置の両方におけるフーリン切断部位を除去するアミノ酸付加、欠失又は置換を含む、実施形態３３に記載の併用免疫原性組成物。
３５．前記Ｆ１及びＦ２ポリペプチドドメインの配列がＲＳＶ  Ａ  Ｌｏｎｇ株に対応する、実施形態７から３４のいずれかに記載の併用免疫原性組成物。
３６．前記少なくとも１つのＲＳＶ抗原がポリペプチドの多量体、例えば三量体を含む、実施形態７から３５のいずれかに記載の併用免疫原性組成物。
３７．前記少なくとも１つのＰａ抗原が、パータシストキソイド（ＰＴ）、糸状赤血球凝集素（ＦＨＡ）、パータクチン（ＰＲＮ）、２型線毛（ＦＩＭ２）、３型線毛（ＦＩＭ３）及びＢｒｋＡからなる群より選択される、実施形態１から３６のいずれかに記載の併用免疫原性組成物。
３８．前記ＰＴが化学的にトキソイド化されている（toxoided）か、又は遺伝的にトキソイド化、例えば突然変異Ｒ９Ｋ及びＥ１２９Ｇの一方若しくは両方によってトキソイド化されている、実施形態３７に記載の併用免疫原性組成物。
３９．前記少なくとも１つのＰａ抗原が、ＰＴとＦＨＡとを、ＰＴとＦＨＡとＰＲＮとを、又はＰＴとＦＨＡとＰＲＮにＦＩＭ２及びＦＩＭ３のいずれか若しくは両方とを含む、実施形態３７又は３８に記載の併用免疫原性組成物。
４０．ｉ．１０〜３０μｇ、例えば正確に又はおよそ２５μｇのＰＴ、
ｉｉ．１０〜３０μｇ、例えば正確に又はおよそ２５μｇのＦＨＡ
を含む、実施形態３７から３９のいずれかに記載の併用免疫原性組成物。
４１．２〜１０μｇ、例えば正確に又はおよそ８μｇのＰＲＮをさらに含む、実施形態４０に記載の併用免疫原性組成物。
４２．ｉ．１０〜３０μｇ、例えば正確に又はおよそ２０μｇのＰＴ、
ｉｉ．１０〜３０μｇ、例えば正確に又はおよそ２０μｇのＦＨＡ、
ｉｉｉ．２〜１０μｇ、例えば正確に又はおよそ３μｇのＰＲＮ、及び
ｉｖ．１〜１０μｇ、例えば正確に又はおよそ合計５μｇのＦＩＭ２とＦＩＭ３
を含む、実施形態３７から３９のいずれかに記載の併用免疫原性組成物。
４３．ｉ．２〜１０μｇ、例えば正確に又はおよそ８μｇのＰＴ、
ｉｉ．２〜１０μｇ、例えば正確に又はおよそ８μｇのＦＨＡ、及び
ｉｉｉ．０．５〜４μｇ、例えば正確に又はおよそ２．５μｇのＰＲＮ
を含む、実施形態３７から３９のいずれかに記載の併用免疫原性組成物。
４４．ｉ．２〜１０μｇ、例えば正確に又はおよそ２．５μｇのＰＴ、
ｉｉ．２〜１０μｇ、例えば正確に又はおよそ５μｇのＦＨＡ、
ｉｉｉ．０．５〜４μｇ、例えば正確に又はおよそ３μｇのＰＲＮ、及び
ｉｖ．１〜１０μｇ、例えば正確に又はおよそ合計５μｇのＦＩＭ２とＦＩＭ３
を含む、実施形態３７から３９のいずれかに記載の併用免疫原性組成物。
４５．ｉ．２〜５μｇ、例えば正確に又はおよそ３．２μｇのＰＴ、
ｉｉ．２５〜４０μｇ、例えば正確に又はおよそ３４．４μｇのＦＨＡ、
ｉｉｉ．０．５〜３μｇ、例えば正確に又はおよそ１．６μｇのＰＲＮ、及び
ｉｖ．０．５〜１μｇ、例えば正確に又はおよそ０．８μｇのＦＩＭ２
を含む、実施形態３７から３９のいずれかに記載の併用免疫原性組成物。
４６．ｉ．２〜１０μｇ、例えば正確に又はおよそ８μｇのＰＴ、
ｉｉ．１〜４μｇ、例えば正確に又はおよそ２．５μｇのＦＨＡ、及び
ｉｉｉ．１〜４μｇ、例えば正確に又はおよそ２．５μｇのＰＲＮ
を含む、実施形態３７から３９のいずれかに記載の併用免疫原性組成物。
４７．前記少なくとも１つの百日咳菌抗原がＰｗ抗原を含む、実施形態１から３６のいずれかに記載の併用免疫原性組成物。
４８．前記Ｐｗ抗原が低減された内毒素含有量を有する、実施形態４７に記載の併用免疫原性組成物。
４９．前記低減された内毒素含有量が、リポオリゴ糖（ＬＯＳ）の化学的抽出によって達成される、又は内毒素産生の遺伝子操作によって、例えば、３−Ｏ−デアシラーゼの過発現若しくは異種発現を誘導するように内毒素産生を遺伝子操作することによって達成される、実施形態４８に記載の併用免疫原性組成物。
５０．前記Ｐｗ抗原が、少なくとも部分的に３−Ｏ−脱アセチル化されたＬＯＳを含む百日咳菌細胞を含む、実施形態４７から４９のいずれかに記載の併用免疫原性組成物。
５１．薬学的に許容される担体又は賦形剤をさらに含む、実施形態１から５０のいずれかに記載の併用免疫原性組成物。
５２．前記担体又は賦形剤が緩衝剤を含む、実施形態５１に記載の併用免疫原性組成物。
５３．少なくとも１つのアジュバントをさらに含む、実施形態１から５２のいずれかに記載の併用免疫原性組成物。
５４．前記少なくとも１つのアジュバントが、アルミニウム塩、例えば水酸化アルミニウム又はリン酸アルミニウム、リン酸カルシウム、３Ｄ−ＭＰＬ、ＱＳ２１、ＣｐＧ含有オリゴデオキシヌクレオチドアジュバント、及び水中油型エマルションの群から選択される少なくとも１つのアジュバントを含む、実施形態５３に記載の併用免疫原性組成物。
５５．前記少なくとも１つのアジュバントが水酸化アルミニウムを含む、実施形態５３又は５４に記載の併用免疫原性組成物。
５６．前記少なくとも１つのアジュバントが水中油型エマルションを含む、実施形態５３又は５４に記載の併用免疫原性組成物。
５７．前記水中油型エマルションがヒト１用量あたり５ｍｇ未満のスクアレンを含む、実施形態５６に記載の併用免疫原性組成物。
５８．前記水中油型エマルションがトコールを含む、実施形態５６又は５７に記載の併用免疫原性組成物。
５９．前記アジュバントが、新生児又は妊娠者への投与に適している、実施形態５３に記載の併用免疫原性組成物。
６０．アジュバントを含まない、実施形態１から５２のいずれかに記載の併用免疫原性組成物。
６１．ＲＳＶ及び百日咳菌以外の病原性生物からの少なくとも１つの抗原をさらに含む、実施形態１から６０のいずれかに記載の併用免疫原性組成物。
６２．ジフテリアトキソイド（Ｄ）、破傷風トキソイド（Ｔ）、Ｂ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）、不活化ポリオウイルス（ＩＰＶ）、キャリアタンパク質とコンジュゲートしているインフルエンザ菌（H. influenzae）ｂ型（Ｈｉｂ）の莢膜糖類、キャリアタンパク質とコンジュゲートしている髄膜炎菌（N. meningitidis）Ｃ型の莢膜糖類、キャリアタンパク質とコンジュゲートしている髄膜炎菌Ｙ型の莢膜糖類、キャリアタンパク質とコンジュゲートしている髄膜炎菌Ａ型の莢膜糖類、キャリアタンパク質とコンジュゲートしている髄膜炎菌Ｗ型の莢膜糖類、及び髄膜炎菌Ｂ型からの抗原からなる群より選択される１つ以上の抗原を含む、実施形態６１に記載の併用免疫原性組成物。
６３．ＤとＴ、ＤとＴとＩＰＶ、ＤとＴとＨＢｓＡｇ、ＤとＴとＨｉｂ、ＤとＴとＩＰＶとＨＢｓＡｇ、ＤとＴとＩＰＶとＨｉｂ、ＤとＴとＨＢｓＡｇとＨｉｂ、又はＤとＴとＩＰＶとＨＢｓＡｇとＨｉｂを含む、実施形態６２に記載の併用免疫原性組成物。
６４．前記少なくとも１つのＲＳＶ抗原に加えて、
ｉ．２０〜３０μｇ、例えば正確に又はおよそ２５μｇのＰＴ、
ｉｉ．２０〜３０μｇ、例えば正確に又はおよそ２５μｇのＦＨＡ、
ｉｉｉ．１〜１０μｇ、例えば正確に又はおよそ３又は８μｇのＰＲＮ、
ｉｖ．１０〜３０Ｌｆ、例えば正確に又はおよそ１５又は２５ＬｆのＤ、及び
ｖ．１〜１５Ｌｆ、例えば正確に又はおよそ５又は１０ＬｆのＴ
を含む、実施形態６２又は６３に記載の併用免疫原性組成物。
６５．前記少なくとも１つのＲＳＶ抗原に加えて、
ｉ．２〜１０μｇ、例えば正確に又はおよそ２．５又は８μｇのＰＴ、
ｉｉ．２〜１０μｇ、例えば正確に又はおよそ５又は８μｇのＦＨＡ、
ｉｉｉ．０．５〜４μｇ、例えば２〜３μｇ、例えば正確に又はおよそ２．５又は３μｇのＰＲＮ、
ｉｖ．１〜１０Ｌｆ、例えば正確に又はおよそ２又は２．５又は９ＬｆのＤ、及び
ｖ．１〜１５Ｌｆ、例えば正確に又はおよそ５又は１０ＬｆのＴ
を含む、実施形態６２又は６３に記載の併用免疫原性組成物。
６６．前記少なくとも１つのＲＳＶ抗原が、Ｆタンパク質の融合前立体構造を安定させる少なくとも１つの修飾を含むＰｒｅＦ抗原を含む、実施形態４０から４６、６４又は６５に記載の併用免疫原性組成物。
６７．アジュバントをさらに含まない、又は無機塩アジュバントをさらに含む、実施形態６６に記載の併用免疫原性組成物。
６８．実施形態１から６７のいずれかに記載の併用免疫原性組成物を対象に投与することを含む、ＲＳＶ及び百日咳菌に対する免疫応答を惹起する方法。
６９．前記組成物の投与が、ＲＳＶとの接触後にウイルス性疾患を悪化させることなくＲＳＶに対して特異的な免疫応答を惹起する、実施形態６８に記載の方法。
７０．前記惹起される免疫応答が追加刺激応答である、実施形態６８又は６９に記載の方法。
７１．ＲＳＶ及び百日咳菌に対する前記免疫応答が、ＲＳＶ及び百日咳菌への感染の発生を低減若しくは予防する、若しくは感染の重症度を低減する、及び／又はＲＳＶ及び百日咳菌への感染後の病的応答の発生を低減若しくは予防する、若しくは病的応答の重症度を低減する、防御免疫応答を含む、実施形態６９から７０のいずれかに記載の方法。
７２．医薬に使用するための、実施形態１から６７のいずれかに記載の併用免疫原性組成物。
７３．対象におけるＲＳＶ及び百日咳菌による感染又はＲＳＶ及び百日咳菌に関連する疾患の予防又は処置のための、実施形態１から６７のいずれかに記載の併用免疫原性組成物。
７４．前記併用免疫原性組成物が、対象に単回用量レジメンとして投与される又は投与するためのものである、実施形態６８から７１のいずれかに記載の方法又は実施形態７２若しくは７３に記載の併用免疫原性組成物。
７５．前記対象が、哺乳動物、例えば、新生児、乳児、小児、青年、成人及び高齢者の群から選択されるヒトである、実施形態６８から７１のいずれかに記載の方法又は実施形態７３若しくは７４に記載の併用免疫原性組成物。
７６．前記対象が青年者であり、前記対象が１０〜１８歳の間であり、前記併用免疫原性組成物が１度だけ投与される又は投与するためのものである、実施形態７５に記載の方法又は併用免疫原性組成物。
７７．前記対象が妊婦でない、実施形態６８から７１のいずれかに記載の方法又は実施形態７２若しくは７３に記載の併用免疫原性組成物。
７８．前記対象が、場合によってはヒトの、在胎児を有する妊婦である、実施形態６８から７１のいずれかに記載の方法又は実施形態７２若しくは７３に記載の併用免疫原性組成物。
７９．前記併用免疫原性組成物が前記妊婦に妊娠１回につき１度だけ投与される又は投与するためのものである、実施形態７８に記載の方法又は併用免疫原性組成物。
８０．乳児をＲＳＶ及び百日咳菌によって引き起こされる感染又は疾患から防御するワクチン接種レジメンであって、
Ｆタンパク質類似体を含む組換えＲＳＶ抗原と少なくとも１つの百日咳菌抗原とを含む、ＲＳＶと百日咳菌の両方に特異的な体液性免疫応答を追加刺激することができる、少なくとも１つの免疫原性組成物を、在胎児を有する妊婦に投与することを含み、
前記少なくとも１つの免疫原性組成物によって前記妊婦において惹起された又は増加した、ＲＳＶ特異的抗体の少なくとも１つのサブセット及び百日咳菌特異的抗体の少なくとも１つのサブセットが、胎盤を介して前記在胎児に移行し、その結果、前記乳児がＲＳＶ及び百日咳菌によって引き起こされる感染又は疾患から防御される、前記ワクチン接種レジメン。
８１．乳児をＲＳＶ及び百日咳菌によって引き起こされる感染又は疾患から防御する方法であって、
Ｆタンパク質類似体を含む組換えＲＳＶ抗原と少なくとも１つの百日咳菌抗原とを含む、ＲＳＶと百日咳菌の両方に特異的な体液性免疫応答を追加刺激することができる、少なくとも１つの免疫原性組成物を、在胎児を有する妊婦に投与することを含み、
前記少なくとも１つの免疫原性組成物によって前記妊婦において惹起された又は増加した、ＲＳＶ特異的抗体の少なくとも１つのサブセット及び百日咳菌特異的抗体の少なくとも１つのサブセットが、胎盤を介して前記在胎児に移行し、その結果、前記乳児がＲＳＶ及び百日咳菌によって引き起こされる感染又は疾患から防御される、前記方法。
８２．ＲＳＶ及び百日咳菌によって引き起こされる感染又は疾患からの乳児の防御に使用するための、Ｆタンパク質類似体を含む組換えＲＳＶ抗原と少なくとも１つのパータシス抗原とを含む、１種の免疫原性組成物又は複数の免疫原性組成物であって、妊婦への投与用に製剤化されており、ＲＳＶと百日咳菌の両方に特異的な体液性免疫応答を追加刺激することができる免疫原性組成物であり、前記免疫原性組成物によって前記妊婦において追加刺激されたＲＳＶ特異的抗体の少なくとも１つのサブセット及び百日咳菌特異的抗体の少なくとも１つのサブセットが胎盤を介して在胎児に移行し、その結果、前記乳児がＲＳＶ及び百日咳菌によって引き起こされる感染又は疾患から防御される、上記免疫原性組成物。
８３．Ｆタンパク質類似体を含む前記組換えＲＳＶ抗原と少なくとも１つの百日咳菌抗原とが、実施形態１から６７のいずれかに記載した通りの併用免疫原性組成物である同じ免疫原性組成物に共製剤化される、実施形態８０から８２のいずれかに記載のワクチン接種レジメン、方法又は使用。
８４．前記免疫原性組成物が前記妊婦に妊娠１回につき１度だけ投与される、又は投与するためのものである、実施形態８０から８３のいずれかに記載のワクチン接種レジメン、方法又は使用。
８５．Ｆタンパク質類似体を含む前記組換えＲＳＶ抗原と少なくとも１つの百日咳菌抗原とが、２つの異なる免疫原性組成物に製剤化される、実施形態８０から８２のいずれかに記載のワクチン接種レジメン、方法又は使用。
８６．前記２つの異なる免疫原性組成物が同じ日に投与される（同時投与される）、実施形態８５に記載のワクチン接種レジメン、方法又は使用。
８７．前記２つの異なる免疫原性組成物が異なる日に投与される、実施形態８５に記載のワクチン接種レジメン、方法又は使用。
８８．前記Ｆタンパク質類似体が実施形態１から３６のいずれかに記載した通りであり、前記少なくとも１つの百日咳菌抗原が実施形態３７から５０のいずれかに記載した通りである、実施形態８５から８７のいずれかに記載のワクチン接種レジメン、方法又は使用。
８９．前記妊婦がヒトである、実施形態８０から８８のいずれかに記載のワクチン接種レジメン、方法又は使用。
９０．前記乳児が免疫学的に未成熟である、実施形態８０から８９のいずれかに記載のワクチン接種レジメン、方法又は使用。
９１．前記乳児が６月齢未満である、実施形態８０から９０のいずれかに記載のワクチン接種レジメン、方法又は使用。
９２．前記乳児が２月齢未満、例えば１月齢未満、例えば新生児である、実施形態８０から９１のいずれかに記載のワクチン接種レジメン、方法又は使用。
９３．前記胎盤を介して移行するＲＳＶ特異的抗体及び／又は百日咳特異的抗体の少なくとも１つのサブセットが、ＩｇＧ抗体、好ましくはＩｇＧ１抗体を含む、実施形態８０から９２のいずれかに記載のワクチン接種レジメン、方法又は使用。
９４．前記胎盤を介して移行するＲＳＶ特異的抗体の少なくとも１つのサブセットが中和抗体である、実施形態８０から９３のいずれかに記載のワクチン接種レジメン、方法又は使用。
９５．ＲＳＶ特異的抗体の前記少なくとも１つのサブセットが、出生時の乳児の血清中で３０μｇ／ｍＬ以上のレベルで検出可能である、実施形態８０から９４のいずれかに記載のワクチン接種レジメン、方法又は使用。
９６．百日咳特異的抗体の前記少なくとも１つのサブセットが、出生時の乳児の血清中で１０  ＥＬＩＳＡ単位／ｍｌ（ＥＵ）以上のレベルで検出可能である、実施形態８０から９５のいずれかに記載のワクチン接種レジメン、方法又は使用。
９７．前記乳児においてＲＳＶに対する能動免疫応答をプライミングする又は誘導する少なくとも１つの組成物を前記乳児に投与することをさらに含む、実施形態８０から９６のいずれかに記載のワクチン接種レジメン、方法又は使用。
９８．前記乳児において百日咳菌に対する能動免疫応答をプライミングする又は誘導する少なくとも１つの組成物を前記乳児に投与することをさらに含む、実施形態８０から９７のいずれかに記載のワクチン接種レジメン、方法又は使用。
９９．ＲＳＶに対する能動免疫応答をプライミングする又は誘導する少なくとも１つの組成物と百日咳菌に対する能動免疫応答をプライミングする又は誘導する少なくとも１つの組成物とを前記乳児に投与することを含む、実施形態９７又は９８に記載のワクチン接種レジメン、方法又は使用。
１００．ＲＳＶに対する能動免疫応答をプライミングする又は誘導する前記少なくとも１つの組成物と百日咳菌に対する能動免疫応答をプライミングする又は誘導する前記少なくとも１つの組成物とが同じ組成物である、実施形態９９に記載のワクチン接種レジメン、方法又は使用。
１０１．ＲＳＶに対する能動免疫応答をプライミングする又は誘導する前記少なくとも１つの組成物と百日咳菌に対する能動免疫応答をプライミングする又は誘導する前記少なくとも１つの組成物とが異なる組成物である、実施形態９９に記載のワクチン接種レジメン、方法又は使用。
１０２．前記異なる組成物が同じ又は異なる日に投与される、実施形態１０１に記載のワクチン接種レジメン、方法又は使用。
１０３．前記乳児に投与される少なくとも１つの組成物が、Ｆタンパク質類似体を含むＲＳＶ抗原を含む、実施形態９７から１０１に記載のワクチン接種レジメン、方法又は使用。
１０４．前記乳児に投与される少なくとも１つの組成物が、少なくとも１つのＲＳＶタンパク質抗原又は抗原類似体をコードする、核酸、組換えウイルスベクター又はウイルスレプリコン粒子を含む、実施形態９７から１０２のいずれかに記載のワクチン接種レジメン、方法又は使用。
１０５．前記少なくとも１つの免疫原性組成物が妊婦に妊娠２６週以降に投与される、実施形態８０から１０４のいずれかに記載のワクチン接種レジメン、方法又は使用。
１０６．前記妊婦が妊娠２６〜３８週の間、例えば妊娠２８〜３４週の間である、実施形態８０から１０５のいずれかに記載のワクチン接種レジメン、方法又は使用。
１０７．妊婦への投与用に製剤化された複数の免疫原性組成物を含むキットであって、
（ａ）ＲＳＶに特異的な体液性免疫応答を誘導、惹起又は追加刺激することができる、Ｆタンパク質類似体を含む第一の免疫原性組成物と、
（ｂ）百日咳菌に特異的な体液性応答を誘導、惹起又は追加刺激することができる、少なくとも１つの百日咳菌抗原を含む第二の免疫原性組成物と
を含み、
妊婦に投与すると、第一及び第二の免疫原性組成物がＲＳＶ特異的抗体の少なくとも１つのサブセット及び百日咳菌特異的抗体の少なくとも１つのサブセットを誘導、惹起又は追加刺激し、これらの抗体が胎盤を介して妊婦の在胎児に移行し、その結果、乳児がＲＳＶ及び百日咳菌によって引き起こされる感染又は疾患から防御される、前記キット。
１０８．前記第一の免疫原性組成物のＦタンパク質類似体が実施形態１から３６のいずれかに記載した通りである、実施形態１０７に記載のキット。
１０９．前記第二の免疫原性組成物の少なくとも１つの百日咳菌抗原が実施形態３７から５０のいずれかに記載した通りである、実施形態１０７又は１０８に記載のキット。
１１０．前記キットの関連特徴が実施形態８３から１０１のいずれかに記載のワクチンレジメン、方法又は使用について定義した通りである、実施形態１０７から１０９のいずれかに記載のキット。
１１１．前記第一の免疫原性組成物及び／又は前記第二の免疫原性組成物が少なくとも１本の充填済み注射器内にある、実施形態１０７から１１０のいずれかに記載のキット。
１１２．前記充填済み注射器が二室注射器である、実施形態１１１に記載のキット。
１１３．前記キットのそれぞれの組成物が前記妊婦に妊娠１回につき１度だけ投与するためのものである、実施形態１０７から１１２のいずれかに記載のキット。
特定の特別な特徴及び／又は実施形態を説明するために以下に実施例を提供する。これらの実施例は、記載される特別な特徴又は実施例に本発明を限定するように解釈されるべきではない。
【外国語明細書】
2019163284000001.pdf