(57)【要約】【課題】視神経障害の発症リスク及び発症の有無や、視神経障害の重症度を精度よく判定できる、視神経障害の診断用バイオマーカーを提供すること。【解決手段】生体試料中の本件代謝物質群（例えば、脂肪酸、Ｌ−アセチルカルニチン、モノアシルグリセリド）の濃度変動を解析することにより、視神経障害の発症リスク及び発症の有無や、視神経障害の重症度を判定する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の工程（ａ−１）〜（ｃ−１）を含むことを特徴とする視神経障害の発症リスク、又は発症の有無の判定方法。
（ａ−１）被験者から採取された生体試料中の、以下の［Ｉグループ］、［Ａグループ］〜［Ｈグループ］、及び［Ｊグループ］から選択される１又は２種以上の代謝物質の濃度を測定する工程；
［Ｉグループ］
脂肪酸、ＬＰＣ（１８：０）、パルミチン酸メチル、ミリスチン酸イソプロピル、ＬＰＥ（２２：６）、ＬＰＣ（１７：０）ｓｎ−１、ＬＰＣ（１４：０）、ＬＰＣ（１７：０）ｓｎ−２、ＬＰＣ（１５：０）、ｐ−クレゾール硫酸、インドキシル硫酸、ヒドロキシ酪酸、ヒドロキシ安息香酸、Ｎ-フェニルアセチルグルタミン、アコニット酸、ピリドキサール、ＬＰＣ（１６：０）、ＰＣ（３６：２）、ＰＣ（３８：４）、ＰＣ（４０：６）、プロリンベタイン、セラミド（ｄ１８:１／１６:０）
［Ａグループ］
Ｌ−アセチルカルニチン（Acetylcarnitine）、９−ヘキサデセノイルカルニチン（Hexadecenoylcarnitine）、ヒドロキシブチリルカルニチン（Hydroxybutyrylcarnitine）、トリアシルグリセロール（６２：１２）、Ｌ−オクタノイルカルニチン（Octanoylcarnitine）、アスパラギン−アスパラギン酸  ジペプチド、ｍ−アミノ安息香酸（Aminobenzoic acid）
［Ｂグループ］
ホスファチジルコリン（Phosphatidylcholine；ＰＣ）（３８：７）、ホスファチジルグリセロール（Phosphatidylglycerol；ＰＧ）（４０：６）、リゾホスファチジルコリン（lysoＰＣ；ＬＰＣ）（１８：２）、ＰＧ（３２：０）、Ｓ−アデノシルメチオニン（Adenosylmethionine）、ホスファチジルエタノールアミン（Phosphatidylethanolamine；ＰＥ）（４２：８）、ＰＧ（３８：６）
［Ｃグループ］
ＰＣ（４６：６）、スフィンゴミエリン（Sphingomyelin；ＳＭ)（ｄ１８：０／２４：０）、8,8-ジエトキシ-2,6-ジメチル-2-オクタノール、グリセロホスホコリン（Glycerophosphocholine；ＧＰＣ）、β−ラクトシルセラミド（Lactosylceramide）（ｄ１８：１／２２：０）、ＰＣ（４４：９）
［Ｄグループ］
モノアシルグリセリド（Monoacylglyceride）（１８：０／０：０／０：０）、Ｄ−グルコース、グアノシン、アデニン、アデノシン、グルタチオン、Ｓ−ホルミルグルタチオン（Formylglutathione）、メチオニン−ヒスチジン  ジペプチド
［Ｅグループ］
３−スルホ乳酸、ジメチルスルホン、リボン酸、アラビノン酸、キシロン酸、Ｌ−ヒドロキシグルタル酸、ヒドロキシクエン酸、グルカル酸、ガラクタル酸、オクテノイルカルニチン、ベタイン、Ｌ−アセチルカルニチン、メチルマロニルカルニチン、Ｌ−カルニチン、N,N-ジエチルエタノールアミン、Ｌ−シスチン
［Ｆグループ］
ピログルタミン、ＬＰＣ（１８：２）ｓｎ−１、リゾホスファチジルエタノールアミン（lysoＰＥ；ＬＰＥ）（１８：２）、ＬＰＣ（１８：２）ｓｎ−２、アンドロステロン硫酸、テストステロン硫酸、フェノール硫酸、乳酸、Ｄ−グルコース、ヒドロペルオキシリノール酸、ＰＣ（３４：２）、チオモルホリン−３−カルボン酸、ＬＰＣ（１８：２）、Ｌ−カルニチン
［Ｇグループ］
メチルアデノシン、スクシニルアデノシン、ドデカノイルカルニチン、Ｏ−(７−カルボキシヘプタノイル)カルニチン、Ｏ−(８−カルボキシオクタノイル)カルニチン、Ｏ−(１１−カルボキシウンデカノイル)カルニチン、マレイン酸、フマル酸
［Ｈグループ］
ジクロロメタン、グルタチオン、Ｌ−チロシン、Ｌ−フェニルアラニン、３−メルカプト乳酸、ウリジン、タウリン、アミノ酪酸
［Ｊグループ］
クエン酸
（ｂ−１）工程（ａ−１）で測定した代謝物質の濃度を、視神経障害を発症しない対照者における前記代謝物質の濃度と比較する工程；
（ｃ−１）工程（ａ−１）で測定した代謝物質が［Ａグループ］、［Ｂグループ］、又は［Ｅグループ］〜［Ｇグループ］の代謝物質である場合、工程（ａ−１）で測定した代謝物質の濃度が、前記対照者における代謝物質の濃度よりも高いとき、前記被験者は、視神経障害を発症するリスクが高い、又は視神経障害を発症している可能性が高いと評価し、
工程（ａ−１）で測定した代謝物質が［Ｉグループ］、［Ｃグループ］、［Ｄグループ］、［Ｈグループ］、又は［Ｊグループ］の代謝物質である場合、工程（ａ−１）で測定した代謝物質の濃度が、前記対照者における代謝物質の濃度よりも低いとき、前記被験者は、視神経障害を発症するリスクが高い、又は視神経障害を発症している可能性が高いと評価する工程；
【請求項２】
以下の工程（ａ−２）〜（ｃ−２）を含むことを特徴とする視神経障害の重症度の判定方法。
（ａ−２）視神経障害を発症している被験者から採取された生体試料中の、以下の［Ａグループ］〜［Ｄグループ］から選択される１又は２種以上の代謝物質の濃度を測定する工程；
［Ａグループ］
Ｌ−アセチルカルニチン（Acetylcarnitine）、９−ヘキサデセノイルカルニチン（Hexadecenoylcarnitine）、ヒドロキシブチリルカルニチン（Hydroxybutyrylcarnitine）、トリアシルグリセロール（６２：１２）、Ｌ−オクタノイルカルニチン（Octanoylcarnitine）、アスパラギン−アスパラギン酸  ジペプチド、ｍ−アミノ安息香酸（Aminobenzoic acid）
［Ｂグループ］
ホスファチジルコリン（Phosphatidylcholine；ＰＣ）（３８：７）、ホスファチジルグリセロール（Phosphatidylglycerol；ＰＧ）（４０：６）、リゾホスファチジルコリン（lysoＰＣ；ＬＰＣ）（１８：２）、ＰＧ（３２：０）、Ｓ−アデノシルメチオニン（Adenosylmethionine）、ホスファチジルエタノールアミン（Phosphatidylethanolamine；ＰＥ）（４２：８）、ＰＧ（３８：６）
［Ｃグループ］
ＰＣ（４６：６）、スフィンゴミエリン（Sphingomyelin；ＳＭ)（ｄ１８：０／２４：０）、8,8-ジエトキシ-2,6-ジメチル-2-オクタノール、グリセロホスホコリン（Glycerophosphocholine；ＧＰＣ）、β−ラクトシルセラミド（Lactosylceramide）（ｄ１８：１／２２：０）、ＰＣ（４４：９）
［Ｄグループ］
モノアシルグリセリド（Monoacylglyceride）（１８：０／０：０／０：０）、Ｄ−グルコース、グアノシン、アデニン、アデノシン、グルタチオン、Ｓ−ホルミルグルタチオン（Formylglutathione）、メチオニン−ヒスチジン  ジペプチド
（ｂ−２）工程（ａ−２）で測定した代謝物質の濃度を、視神経障害を発症している対照者における前記代謝物質の濃度と比較する工程；
（ｃ−２）工程（ａ−２）で測定した代謝物質が［Ａグループ］又は［Ｄグループ］の代謝物質である場合、工程（ａ−２）で測定した代謝物質の濃度が、前記対照者における代謝物質の濃度よりも高いとき、前記被験者は、前記対照者よりも視神経障害が重症化している可能性が高いと評価し、
工程（ａ−２）で測定した代謝物質が［Ｂグループ］又は［Ｃグループ］の代謝物質である場合、工程（ａ−２）で測定した代謝物質の濃度が、前記対照者における代謝物質の濃度よりも低いとき、前記被験者は、前記対照者よりも視神経障害が重症化している可能性が高いと評価する工程；
【請求項３】
生体試料が、血液試料、尿試料、前房水試料、又は網膜試料であることを特徴とする請求項１又は２に記載の判定方法。
【請求項４】
工程（ａ−１）において、脂肪酸又はＬ−アセチルカルニチンを測定し、工程（ａ−２）において、Ｌ−アセチルカルニチンを測定することを特徴とする請求項１〜３のいずれかに記載の判定方法。
【請求項５】
脂肪酸が、オレイン酸、パルミチン酸、リノール酸、ステアリン酸、ドコサヘキサエン酸、ミリスチン酸、及びアラキドン酸からなる群から選択される１又は２種以上の脂肪酸であることを特徴とする請求項４に記載の判定方法。
【請求項６】
以下の［Ｉグループ］、［Ａグループ］〜［Ｈグループ］、及び［Ｊグループ］から選択される１又は２種以上の代謝物質からなることを特徴とする視神経障害の発症リスク、又は発症の有無の判定用バイオマーカーであって、
代謝物質が［Ａグループ］、［Ｂグループ］、又は［Ｅグループ］〜［Ｇグループ］の代謝物質である場合、視神経障害を発症するリスクが高い者、又は視神経障害を発症している者から採取された生体試料中の前記代謝物質の濃度が、視神経障害を発症しない対照者における前記代謝物質の濃度と比べ、高く、
代謝物質が［Ｉグループ］、［Ｃグループ］、［Ｄグループ］、［Ｈグループ］、又は［Ｊグループ］の代謝物質である場合、視神経障害を発症するリスクが高い者、又は視神経障害を発症している者から採取された生体試料中の前記代謝物質の濃度が、視神経障害を発症しない対照者における前記代謝物質の濃度と比べ、低い、
前記判定用バイオマーカー。
［Ｉグループ］
脂肪酸、ＬＰＣ（１８：０）、パルミチン酸メチル、ミリスチン酸イソプロピル、ＬＰＥ（２２：６）、ＬＰＣ（１７：０）ｓｎ−１、ＬＰＣ（１４：０）、ＬＰＣ（１７：０）ｓｎ−２、ＬＰＣ（１５：０）、ｐ−クレゾール硫酸、インドキシル硫酸、ヒドロキシ酪酸、ヒドロキシ安息香酸、Ｎ-フェニルアセチルグルタミン、アコニット酸、ピリドキサール、ＬＰＣ（１６：０）、ＰＣ（３６：２）、ＰＣ（３８：４）、ＰＣ（４０：６）、プロリンベタイン、セラミド（ｄ１８:１／１６:０）
［Ａグループ］
Ｌ−アセチルカルニチン（Acetylcarnitine）、９−ヘキサデセノイルカルニチン（Hexadecenoylcarnitine）、ヒドロキシブチリルカルニチン（Hydroxybutyrylcarnitine）、トリアシルグリセロール（６２：１２）、Ｌ−オクタノイルカルニチン（Octanoylcarnitine）、アスパラギン−アスパラギン酸  ジペプチド、ｍ−アミノ安息香酸（Aminobenzoic acid）
［Ｂグループ］
ホスファチジルコリン（Phosphatidylcholine；ＰＣ）（３８：７）、ホスファチジルグリセロール（Phosphatidylglycerol；ＰＧ）（４０：６）、リゾホスファチジルコリン（lysoＰＣ；ＬＰＣ）（１８：２）、ＰＧ（３２：０）、Ｓ−アデノシルメチオニン（Adenosylmethionine）、ホスファチジルエタノールアミン（Phosphatidylethanolamine；ＰＥ）（４２：８）、ＰＧ（３８：６）
［Ｃグループ］
ＰＣ（４６：６）、スフィンゴミエリン（Sphingomyelin；ＳＭ)（ｄ１８：０／２４：０）、8,8-ジエトキシ-2,6-ジメチル-2-オクタノール、グリセロホスホコリン（Glycerophosphocholine；ＧＰＣ）、β−ラクトシルセラミド（Lactosylceramide）（ｄ１８：１／２２：０）、ＰＣ（４４：９）
［Ｄグループ］
モノアシルグリセリド（Monoacylglyceride）（１８：０／０：０／０：０）、Ｄ−グルコース、グアノシン、アデニン、アデノシン、グルタチオン、Ｓ−ホルミルグルタチオン（Formylglutathione）、メチオニン−ヒスチジン  ジペプチド
［Ｅグループ］
３−スルホ乳酸、ジメチルスルホン、リボン酸、アラビノン酸、キシロン酸、Ｌ−ヒドロキシグルタル酸、ヒドロキシクエン酸、グルカル酸、ガラクタル酸、オクテノイルカルニチン、ベタイン、Ｌ−アセチルカルニチン、メチルマロニルカルニチン、Ｌ−カルニチン、N,N-ジエチルエタノールアミン、Ｌ−シスチン
［Ｆグループ］
ピログルタミン、ＬＰＣ（１８：２）ｓｎ−１、リゾホスファチジルエタノールアミン（lysoＰＥ；ＬＰＥ）（１８：２）、ＬＰＣ（１８：２）ｓｎ−２、アンドロステロン硫酸、テストステロン硫酸、フェノール硫酸、乳酸、Ｄ−グルコース、ヒドロペルオキシリノール酸、ＰＣ（３４：２）、チオモルホリン−３−カルボン酸、ＬＰＣ（１８：２）、Ｌ−カルニチン
［Ｇグループ］
メチルアデノシン、スクシニルアデノシン、ドデカノイルカルニチン、Ｏ−(７−カルボキシヘプタノイル)カルニチン、Ｏ−(８−カルボキシオクタノイル)カルニチン、Ｏ−(１１−カルボキシウンデカノイル)カルニチン、マレイン酸、フマル酸
［Ｈグループ］
ジクロロメタン、グルタチオン、Ｌ−チロシン、Ｌ−フェニルアラニン、３−メルカプト乳酸、ウリジン、タウリン、アミノ酪酸
［Ｊグループ］
クエン酸
【請求項７】
以下の［Ａグループ］〜［Ｄグループ］から選択される１又は２種以上の代謝物質からなることを特徴とする視神経障害の重症度の判定用バイオマーカーであって、
代謝物質が［Ａグループ］又は［Ｄグループ］の代謝物質である場合、視神経障害の重症度が高い者から採取された生体試料中の前記代謝物質の濃度が、視神経障害の重症度が低い者における前記代謝物質の濃度と比べ、高く、
代謝物質が［Ｂグループ］又は［Ｃグループ］の代謝物質である場合、視神経障害の重症度が高い者から採取された生体試料中の前記代謝物質の濃度が、視神経障害の重症度が低い者における前記代謝物質の濃度と比べ、低い、
前記判定用バイオマーカー。
［Ａグループ］
Ｌ−アセチルカルニチン（Acetylcarnitine）、９−ヘキサデセノイルカルニチン（Hexadecenoylcarnitine）、ヒドロキシブチリルカルニチン（Hydroxybutyrylcarnitine）、トリアシルグリセロール（６２：１２）、Ｌ−オクタノイルカルニチン（Octanoylcarnitine）、アスパラギン−アスパラギン酸  ジペプチド、ｍ−アミノ安息香酸（Aminobenzoic acid）
［Ｂグループ］
ホスファチジルコリン（Phosphatidylcholine；ＰＣ）（３８：７）、ホスファチジルグリセロール（Phosphatidylglycerol；ＰＧ）（４０：６）、リゾホスファチジルコリン（lysoＰＣ；ＬＰＣ）（１８：２）、ＰＧ（３２：０）、Ｓ−アデノシルメチオニン（Adenosylmethionine）、ホスファチジルエタノールアミン（Phosphatidylethanolamine；ＰＥ）（４２：８）、ＰＧ（３８：６）
［Ｃグループ］
ＰＣ（４６：６）、スフィンゴミエリン（Sphingomyelin；ＳＭ)（ｄ１８：０／２４：０）、8,8-ジエトキシ-2,6-ジメチル-2-オクタノール、グリセロホスホコリン（Glycerophosphocholine；ＧＰＣ）、β−ラクトシルセラミド（Lactosylceramide）（ｄ１８：１／２２：０）、ＰＣ（４４：９）
［Ｄグループ］
モノアシルグリセリド（Monoacylglyceride）（１８：０／０：０／０：０）、Ｄ−グルコース、グアノシン、アデニン、アデノシン、グルタチオン、Ｓ−ホルミルグルタチオン（Formylglutathione）、メチオニン−ヒスチジン  ジペプチド
【請求項８】
生体試料が、血液試料、尿試料、前房水試料、又は網膜試料であることを特徴とする請求項６又は７に記載の判定用バイオマーカー。
【請求項９】
代謝物質が、脂肪酸又はＬ−アセチルカルニチンであることを特徴とする請求項６〜８のいずれかに記載の判定用バイオマーカー。
【請求項１０】
脂肪酸が、オレイン酸、パルミチン酸、リノール酸、ステアリン酸、ドコサヘキサエン酸、ミリスチン酸、及びアラキドン酸からなる群から選択される１又は２種以上の脂肪酸であることを特徴とする請求項９に記載の判定用バイオマーカー。
【請求項１１】
以下の工程（Ａ）〜（Ｃ）を含むことを特徴とする視神経障害発症の予防剤、又は視神経障害の治療剤のスクリーニング方法。
（Ａ）被検物質を投与した視神経障害非ヒト動物から採取された生体試料中の、以下の［Ｉグループ］、［Ａグループ］〜［Ｈグループ］、及び［Ｊグループ］から選択される１又は２種以上の代謝物質の濃度を測定する工程；
［Ｉグループ］
脂肪酸、ＬＰＣ（１８：０）、パルミチン酸メチル、ミリスチン酸イソプロピル、ＬＰＥ（２２：６）、ＬＰＣ（１７：０）ｓｎ−１、ＬＰＣ（１４：０）、ＬＰＣ（１７：０）ｓｎ−２、ＬＰＣ（１５：０）、ｐ−クレゾール硫酸、インドキシル硫酸、ヒドロキシ酪酸、ヒドロキシ安息香酸、Ｎ-フェニルアセチルグルタミン、アコニット酸、ピリドキサール、ＬＰＣ（１６：０）、ＰＣ（３６：２）、ＰＣ（３８：４）、ＰＣ（４０：６）、プロリンベタイン、セラミド（ｄ１８:１／１６:０）
［Ａグループ］
Ｌ−アセチルカルニチン（Acetylcarnitine）、９−ヘキサデセノイルカルニチン（Hexadecenoylcarnitine）、ヒドロキシブチリルカルニチン（Hydroxybutyrylcarnitine）、トリアシルグリセロール（６２：１２）、Ｌ−オクタノイルカルニチン（Octanoylcarnitine）、アスパラギン−アスパラギン酸  ジペプチド、ｍ−アミノ安息香酸（Aminobenzoic acid）
［Ｂグループ］
ホスファチジルコリン（Phosphatidylcholine；ＰＣ）（３８：７）、ホスファチジルグリセロール（Phosphatidylglycerol；ＰＧ）（４０：６）、リゾホスファチジルコリン（lysoＰＣ；ＬＰＣ）（１８：２）、ＰＧ（３２：０）、Ｓ−アデノシルメチオニン（Adenosylmethionine）、ホスファチジルエタノールアミン（Phosphatidylethanolamine；ＰＥ）（４２：８）、ＰＧ（３８：６）
［Ｃグループ］
ＰＣ（４６：６）、スフィンゴミエリン（Sphingomyelin；ＳＭ)（ｄ１８：０／２４：０）、8,8-ジエトキシ-2,6-ジメチル-2-オクタノール、グリセロホスホコリン（Glycerophosphocholine；ＧＰＣ）、β−ラクトシルセラミド（Lactosylceramide）（ｄ１８：１／２２：０）、ＰＣ（４４：９）
［Ｄグループ］
モノアシルグリセリド（Monoacylglyceride）（１８：０／０：０／０：０）、Ｄ−グルコース、グアノシン、アデニン、アデノシン、グルタチオン、Ｓ−ホルミルグルタチオン（Formylglutathione）、メチオニン−ヒスチジン  ジペプチド
［Ｅグループ］
３−スルホ乳酸、ジメチルスルホン、リボン酸、アラビノン酸、キシロン酸、Ｌ−ヒドロキシグルタル酸、ヒドロキシクエン酸、グルカル酸、ガラクタル酸、オクテノイルカルニチン、ベタイン、Ｌ−アセチルカルニチン、メチルマロニルカルニチン、Ｌ−カルニチン、N,N-ジエチルエタノールアミン、Ｌ−シスチン
［Ｆグループ］
ピログルタミン、ＬＰＣ（１８：２）ｓｎ−１、リゾホスファチジルエタノールアミン（lysoＰＥ；ＬＰＥ）（１８：２）、ＬＰＣ（１８：２）ｓｎ−２、アンドロステロン硫酸、テストステロン硫酸、フェノール硫酸、乳酸、Ｄ−グルコース、ヒドロペルオキシリノール酸、ＰＣ（３４：２）、チオモルホリン−３−カルボン酸、ＬＰＣ（１８：２）、Ｌ−カルニチン
［Ｇグループ］
メチルアデノシン、スクシニルアデノシン、ドデカノイルカルニチン、Ｏ−(７−カルボキシヘプタノイル)カルニチン、Ｏ−(８−カルボキシオクタノイル)カルニチン、Ｏ−(１１−カルボキシウンデカノイル)カルニチン、マレイン酸、フマル酸
［Ｈグループ］
ジクロロメタン、グルタチオン、Ｌ−チロシン、Ｌ−フェニルアラニン、３−メルカプト乳酸、ウリジン、タウリン、アミノ酪酸
［Ｊグループ］
クエン酸
（Ｂ）工程（Ａ）で測定した代謝物質の濃度を、前記被検物質を投与しない視神経障害非ヒト動物における前記代謝物質の濃度と比較する工程；
（Ｃ）工程（Ａ）で測定した代謝物質が［Ａグループ］、［Ｂグループ］、又は［Ｅグループ］〜［Ｇグループ］の代謝物質である場合、工程（Ａ）で測定した代謝物質の濃度が、前記被検物質を投与しない視神経障害非ヒト動物における代謝物質の濃度よりも低いとき、前記被検物質は、視神経障害発症の予防、又は視神経障害の治療に有効であると評価し、
工程（Ａ）で測定した代謝物質が［Ｉグループ］、［Ｃグループ］、［Ｄグループ］、［Ｈグループ］、又は［Ｊグループ］の代謝物質である場合、工程（Ａ）で測定した代謝物質の濃度が、前記被検物質を投与しない視神経障害非ヒト動物における代謝物質の濃度よりも高いとき、前記被検物質は、視神経障害発症の予防、又は視神経障害の治療に有効であると評価する工程；
【請求項１２】
生体試料が、血液試料、尿試料、前房水試料、又は網膜試料であることを特徴とする請求項１１に記載のスクリーニング方法。
【請求項１３】
工程（Ａ）において、脂肪酸又はＬ−アセチルカルニチンを測定することを特徴とする請求項１１又は１２に記載のスクリーニング方法。
【請求項１４】
脂肪酸が、オレイン酸、パルミチン酸、リノール酸、ステアリン酸、ドコサヘキサエン酸、ミリスチン酸、及びアラキドン酸からなる群から選択される１又は２種以上の脂肪酸であることを特徴とする請求項１３に記載のスクリーニング方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、視神経障害の発症リスク、及び／又は視神経障害の発症の有無を判定する方法；視神経障害の重症度を判定する方法；視神経障害の発症リスクの判定用、及び／又は視神経障害発症の有無の判定用バイオマーカー；視神経障害の重症度の判定用バイオマーカー；並びに視神経障害発症の予防剤、及び／又は視神経障害の治療剤をスクリーニングする方法；に関する。
【背景技術】
【０００２】
網膜は、内境界膜、神経線維層、神経節細胞層、内網状層、内顆粒層、外網状層、外顆粒層、外境界膜、視細胞層及び網膜色素上皮層の１０層から構成される、厚さ０．１〜０．５ｍｍの組織であり、その中には視細胞、双極細胞、神経節細胞、水平細胞、アマクリン細胞等の網膜神経細胞が存在する。網膜神経細胞は、光刺激を電気信号に変換して、脳へ伝達するといった視覚情報の受容と伝達において重要な役割を果たしている。目から入った視覚情報は、視細胞により電気信号化されて、水平細胞や、双極細胞や、アマクリン細胞を経由した後に神経節細胞に伝達される。次いで、その電気信号は、神経節細胞の軸索を含む視神経線維の束（視神経）を経由して脳に伝達される。
【０００３】
視神経が何らかの原因により障害を受けると、視神経の恒常性が維持できなくなり、視覚情報の脳への伝達が妨げられて、失明、視野狭窄といった視野障害を生じる。視神経障害の主な原因として、眼内圧（単に「眼圧」ともいう）の上昇（高眼内圧［High intraocular pressure；ＩＯＰ］）、網膜血流循環障害・網膜虚血、興奮性アミノ酸上昇等が知られており、これら病態に伴い、グルタミン酸シグナルカスケードが活性化し、網膜神経節細胞（retinal ganglion cell；ＲＧＣ）の軸索が障害を受け、ＲＧＣの細胞死（アポトーシス）が誘導され、視神経が障害を受けると考えられている。
【０００４】
視神経障害の代表例として、世界中で失明の主要な原因の１つである緑内障が知られている（非特許文献１）。緑内障は、自覚症状がないため早期発見が難しく、また失明につながる疾患であるため、早期に診断を行うことが非常に重要である。従来、緑内障の診断においては、眼底検査が中心に行われており、患者が検査の前に瞳孔を開くための散瞳薬をさした後に、眼底鏡や眼底カメラで医師が直接、網膜を観察している。しかしながら、散瞳薬によって瞳孔を広げると房水の流れが悪くなって眼圧が上がり、さらに病状を悪化させる可能性が全くないとは言えないのが現状である。また、医師による網膜の直接観察は、必ずしも客観的な検定方法とはいえず、一人一人の患者について医師が対応しなければならないために大勢の被験者を扱う集団検診などへの展開が難しい。
【０００５】
このように、既存の検査方法は少なからず問題を抱えており、早期診断のための、患者の病態の進行度合いや、治療中の経時変化をより客観的かつ定量的に示すことのできる、患者負担の少ないハイスループットな検定方法が望まれている。
【０００６】
バイオマーカーを用いた検定方法は、客観的でハイスループットな方法の一つである。これまでに、ミオシリン（ＭＹＯＣ）遺伝子の変異を指標として、緑内障が発症する前に診断する方法（特許文献１）や、オプティニューリン遺伝子（ＯＰＴＮ）の変異が緑内障の原因遺伝子であることに関連すること(非特許文献２)や、緑内障の進行に関連する遺伝子多型が存在すること（特許文献２〜４）が報告されている。しかし、診断できる緑内障は、これら遺伝子を原因とするものに限られる。また、これら文献においては、緑内障を発症した患者由来の試料を用いて検証しており、緑内障発症リスクを判定できるかどうかはわからない。また、緑内障患者において、発現が増減するタンパク質を指標として、緑内障を検出する方法（特許文献５）が開示されている。しかしながら、かかる文献においても、緑内障を発症した患者由来の試料を用いて検証しており、緑内障発症リスクを判定できるかどうかはわからない。
【０００７】
一方、軸索障害（損傷）により、緑内障の病態の中心である網膜神経節細胞（retinal ganglion cell；ＲＧＣ）死が誘導されるが、軸索障害後数日間は、ＲＧＣ数は維持される。このＲＧＣ数が維持される時期は、ＲＧＣ死に直接関与する遺伝子のｍＲＮＡの発現が変動することが予想され、注目されている（非特許文献３）。最近、本発明者らは、視神経挫滅（optic nerve crush；ＯＮＣ）による軸索損傷処理を行ったＯＮＣモデルマウスを用いて、視神経障害発症リスクを判定できる遺伝子を見いだしている（特許文献６）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特開２００２−３０６１６５号公報
【特許文献２】特開２０１０−１１５１９４号公報
【特許文献３】特開２０１３−１５０６２８号公報
【特許文献４】特開２０１５−１８０２１９号公報
【特許文献５】特開２００９−２４４１２５号公報
【特許文献６】特開２０１５−１４２５４０号公報
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】Kwon, Y.H. et al, New England Journal of Medicine 2009, 360(11):1113-1124.
【非特許文献２】Rezaie, T. et al, Science 2002, 295(5557):1077-1079
【非特許文献３】Fischer, D. et al, The Journal of neuroscience 2004, 24(40):8726-8740
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明の課題は、視神経障害の発症リスク及び発症の有無や、視神経障害の重症度を精度よく判定できる、視神経障害の診断用バイオマーカーを提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
前述のとおり、本発明者らは、ＯＮＣによる軸索損傷処理を行ったＯＮＣモデルマウスを用いて、視神経障害発症リスクを判定できる遺伝子を見いだしている。今回、本発明者らは、液体クロマトグラフ（liquid chromatograph；ＬＣ）−質量分析計（mass spectrometry；ＭＳ）と、イメージングＭＳ（ＩＭＳ）を用いた質量分析技術を駆使し、ＯＮＣモデルマウスと、正常マウスとの間で、生体試料中の濃度が変動する代謝物質について解析を進めた。その結果、以下の［Ａグループ］〜［Ｄグループ］の代謝物質群は、視神経障害の発症リスクや、視神経障害の重症度を精度よく判定できるバイオマーカーであることを見いだした。また、視神経障害を発症した緑内障患者由来の生体試料を用いた質量分析法により、以下の［Ｅグループ］〜［Ｊグループ］の代謝物質群は、視神経障害の発症の有無を精度よく判定できるバイオマーカーであることも確認した。本発明は、これらの知見に基づき、完成するに至ったものである。
［Ａグループ］
Ｌ−アセチルカルニチン、９−ヘキサデセノイルカルニチン、ヒドロキシブチリルカルニチン、トリアシルグリセロール（６２：１２）、Ｌ−オクタノイルカルニチン、アスパラギン−アスパラギン酸  ジペプチド、ｍ−アミノ安息香酸
［Ｂグループ］
ホスファチジルコリン（３８：７）、ホスファチジルグリセロール（４０：６）、リゾホスファチジルコリン（１８：２）、ホスファチジルグリセロール（３２：０）、Ｓ−アデノシルメチオニン、ホスファチジルエタノールアミン（４２：８）、ホスファチジルグリセロール（３８：６）
［Ｃグループ］
ホスファチジルコリン（４６：６）、スフィンゴミエリン（ｄ１８：０／２４：０）、8,8-ジエトキシ-2,6-ジメチル-2-オクタノール、グリセロホスホコリン、β−ラクトシルセラミド（ｄ１８：１／２２：０）、ホスファチジルコリン（４４：９）
［Ｄグループ］
モノアシルグリセリド（１８：０／０：０／０：０）、Ｄ−グルコース、グアノシン、アデニン、アデノシン、グルタチオン、Ｓ−ホルミルグルタチオン、メチオニン−ヒスチジン  ジペプチド
［Ｅグループ］
３−スルホ乳酸、ジメチルスルホン、リボン酸、アラビノン酸、キシロン酸、Ｌ−ヒドロキシグルタル酸、ヒドロキシクエン酸、グルカル酸、ガラクタル酸、オクテノイルカルニチン、ベタイン、Ｌ−アセチルカルニチン、メチルマロニルカルニチン、Ｌ−カルニチン、N,N-ジエチルエタノールアミン、Ｌ−シスチン
［Ｆグループ］
ピログルタミン、リゾホスファチジルコリン（１８：２）ｓｎ−１、リゾホスファチジルエタノールアミン（１８：２）、リゾホスファチジルコリン（１８：２）ｓｎ−２、アンドロステロン硫酸、テストステロン硫酸、フェノール硫酸、乳酸、Ｄ−グルコース、ヒドロペルオキシリノール酸、ホスファチジルコリン（３４：２）、チオモルホリン−３−カルボン酸、リゾホスファチジルコリン（１８：２）、Ｌ−カルニチン
［Ｇグループ］
メチルアデノシン、スクシニルアデノシン、ドデカノイルカルニチン、Ｏ−(７−カルボキシヘプタノイル)カルニチン、Ｏ−(８−カルボキシオクタノイル)カルニチン、Ｏ−(１１−カルボキシウンデカノイル)カルニチン、マレイン酸、フマル酸
［Ｈグループ］
ジクロロメタン、グルタチオン、Ｌ−チロシン、Ｌ−フェニルアラニン、３−メルカプト乳酸、ウリジン、タウリン、アミノ酪酸
［Ｉグループ］
リゾホスファチジルコリン（１８：０）、パルミチン酸メチル、ミリスチン酸イソプロピル、リゾホスファチジルエタノールアミン（２２：６）、リゾホスファチジルコリン（１７：０）ｓｎ−１、リゾホスファチジルコリン（１４：０）、リゾホスファチジルコリン（１７：０）ｓｎ−２、リゾホスファチジルコリン（１５：０）、脂肪酸、ｐ−クレゾール硫酸、インドキシル硫酸、ヒドロキシ酪酸、ヒドロキシ安息香酸、Ｎ-フェニルアセチルグルタミン、アコニット酸、ピリドキサール、リゾホスファチジルコリン（１６：０）、ホスファチジルコリン（３６：２）、ホスファチジルコリン（３８：４）、ホスファチジルコリン（４０：６）、プロリンベタイン、セラミド（ｄ１８:１／１６:０）
［Ｊグループ］
クエン酸
（［Ａグループ］〜［Ｊグループ］の代謝物質群を総称して、以下、「本件代謝物質群」ということがある）
【００１２】
すなわち、本発明は、以下のとおりである。
〔１〕以下の工程（ａ−１）〜（ｃ−１）を含むことを特徴とする視神経障害の発症リスク、又は発症の有無の判定方法。
（ａ−１）被験者から採取された生体試料中の、以下の［Ｉグループ］、［Ａグループ］〜［Ｈグループ］、及び［Ｊグループ］から選択される１又は２種以上の代謝物質の濃度を測定する工程；
［Ｉグループ］
脂肪酸、ＬＰＣ（１８：０）、パルミチン酸メチル、ミリスチン酸イソプロピル、ＬＰＥ（２２：６）、ＬＰＣ（１７：０）ｓｎ−１、ＬＰＣ（１４：０）、ＬＰＣ（１７：０）ｓｎ−２、ＬＰＣ（１５：０）、ｐ−クレゾール硫酸、インドキシル硫酸、ヒドロキシ酪酸、ヒドロキシ安息香酸、Ｎ-フェニルアセチルグルタミン、アコニット酸、ピリドキサール、ＬＰＣ（１６：０）、ＰＣ（３６：２）、ＰＣ（３８：４）、ＰＣ（４０：６）、プロリンベタイン、セラミド（ｄ１８:１／１６:０）
［Ａグループ］
Ｌ−アセチルカルニチン（Acetylcarnitine）、９−ヘキサデセノイルカルニチン（Hexadecenoylcarnitine）、ヒドロキシブチリルカルニチン（Hydroxybutyrylcarnitine）、トリアシルグリセロール（６２：１２）、Ｌ−オクタノイルカルニチン（Octanoylcarnitine）、アスパラギン−アスパラギン酸  ジペプチド、ｍ−アミノ安息香酸（Aminobenzoic acid）
［Ｂグループ］
ホスファチジルコリン（Phosphatidylcholine；ＰＣ）（３８：７）、ホスファチジルグリセロール（Phosphatidylglycerol；ＰＧ）（４０：６）、リゾホスファチジルコリン（lysoＰＣ；ＬＰＣ）（１８：２）、ＰＧ（３２：０）、Ｓ−アデノシルメチオニン（Adenosylmethionine）、ホスファチジルエタノールアミン（Phosphatidylethanolamine；ＰＥ）（４２：８）、ＰＧ（３８：６）
［Ｃグループ］
ＰＣ（４６：６）、スフィンゴミエリン（Sphingomyelin；ＳＭ)（ｄ１８：０／２４：０）、8,8-ジエトキシ-2,6-ジメチル-2-オクタノール、グリセロホスホコリン（Glycerophosphocholine；ＧＰＣ）、β−ラクトシルセラミド（Lactosylceramide）（ｄ１８：１／２２：０）、ＰＣ（４４：９）
［Ｄグループ］
モノアシルグリセリド（Monoacylglyceride）（１８：０／０：０／０：０）、Ｄ−グルコース、グアノシン、アデニン、アデノシン、グルタチオン、Ｓ−ホルミルグルタチオン（Formylglutathione）、メチオニン−ヒスチジン  ジペプチド
［Ｅグループ］
３−スルホ乳酸、ジメチルスルホン、リボン酸、アラビノン酸、キシロン酸、Ｌ−ヒドロキシグルタル酸、ヒドロキシクエン酸、グルカル酸、ガラクタル酸、オクテノイルカルニチン、ベタイン、Ｌ−アセチルカルニチン、メチルマロニルカルニチン、Ｌ−カルニチン、N,N-ジエチルエタノールアミン、Ｌ−シスチン
［Ｆグループ］
ピログルタミン、ＬＰＣ（１８：２）ｓｎ−１、リゾホスファチジルエタノールアミン（lysoＰＥ；ＬＰＥ）（１８：２）、ＬＰＣ（１８：２）ｓｎ−２、アンドロステロン硫酸、テストステロン硫酸、フェノール硫酸、乳酸、Ｄ−グルコース、ヒドロペルオキシリノール酸、ＰＣ（３４：２）、チオモルホリン−３−カルボン酸、ＬＰＣ（１８：２）、Ｌ−カルニチン
［Ｇグループ］
メチルアデノシン、スクシニルアデノシン、ドデカノイルカルニチン、Ｏ−(７−カルボキシヘプタノイル)カルニチン、Ｏ−(８−カルボキシオクタノイル)カルニチン、Ｏ−(１１−カルボキシウンデカノイル)カルニチン、マレイン酸、フマル酸
［Ｈグループ］
ジクロロメタン、グルタチオン、Ｌ−チロシン、Ｌ−フェニルアラニン、３−メルカプト乳酸、ウリジン、タウリン、アミノ酪酸
［Ｊグループ］
クエン酸
（ｂ−１）工程（ａ−１）で測定した代謝物質の濃度を、視神経障害を発症しない対照者における前記代謝物質の濃度と比較する工程；
（ｃ−１）工程（ａ−１）で測定した代謝物質が［Ａグループ］、［Ｂグループ］、又は［Ｅグループ］〜［Ｇグループ］の代謝物質である場合、工程（ａ−１）で測定した代謝物質の濃度が、前記対照者における代謝物質の濃度よりも高いとき、前記被験者は、視神経障害を発症するリスクが高い、又は視神経障害を発症している可能性が高いと評価し、
工程（ａ−１）で測定した代謝物質が［Ｉグループ］、［Ｃグループ］、［Ｄグループ］、［Ｈグループ］、又は［Ｊグループ］の代謝物質である場合、工程（ａ−１）で測定した代謝物質の濃度が、前記対照者における代謝物質の濃度よりも低いとき、前記被験者は、視神経障害を発症するリスクが高い、又は視神経障害を発症している可能性が高いと評価する工程；
〔２〕以下の工程（ａ−２）〜（ｃ−２）を含むことを特徴とする視神経障害の重症度の判定方法。
（ａ−２）視神経障害を発症している被験者から採取された生体試料中の、以下の［Ａグループ］〜［Ｄグループ］から選択される１又は２種以上の代謝物質の濃度を測定する工程；
［Ａグループ］
Ｌ−アセチルカルニチン（Acetylcarnitine）、９−ヘキサデセノイルカルニチン（Hexadecenoylcarnitine）、ヒドロキシブチリルカルニチン（Hydroxybutyrylcarnitine）、トリアシルグリセロール（６２：１２）、Ｌ−オクタノイルカルニチン（Octanoylcarnitine）、アスパラギン−アスパラギン酸  ジペプチド、ｍ−アミノ安息香酸（Aminobenzoic acid）
［Ｂグループ］
ホスファチジルコリン（Phosphatidylcholine；ＰＣ）（３８：７）、ホスファチジルグリセロール（Phosphatidylglycerol；ＰＧ）（４０：６）、リゾホスファチジルコリン（lysoＰＣ；ＬＰＣ）（１８：２）、ＰＧ（３２：０）、Ｓ−アデノシルメチオニン（Adenosylmethionine）、ホスファチジルエタノールアミン（Phosphatidylethanolamine；ＰＥ）（４２：８）、ＰＧ（３８：６）
［Ｃグループ］
ＰＣ（４６：６）、スフィンゴミエリン（Sphingomyelin；ＳＭ)（ｄ１８：０／２４：０）、8,8-ジエトキシ-2,6-ジメチル-2-オクタノール、グリセロホスホコリン（Glycerophosphocholine；ＧＰＣ）、β−ラクトシルセラミド（Lactosylceramide）（ｄ１８：１／２２：０）、ＰＣ（４４：９）
［Ｄグループ］
モノアシルグリセリド（Monoacylglyceride）（１８：０／０：０／０：０）、Ｄ−グルコース、グアノシン、アデニン、アデノシン、グルタチオン、Ｓ−ホルミルグルタチオン（Formylglutathione）、メチオニン−ヒスチジン  ジペプチド
（ｂ−２）工程（ａ−２）で測定した代謝物質の濃度を、視神経障害を発症している対照者における前記代謝物質の濃度と比較する工程；
（ｃ−２）工程（ａ−２）で測定した代謝物質が［Ａグループ］又は［Ｄグループ］の代謝物質である場合、工程（ａ−２）で測定した代謝物質の濃度が、前記対照者における代謝物質の濃度よりも高いとき、前記被験者は、前記対照者よりも視神経障害が重症化している可能性が高いと評価し、
工程（ａ−２）で測定した代謝物質が［Ｂグループ］又は［Ｃグループ］の代謝物質である場合、工程（ａ−２）で測定した代謝物質の濃度が、前記対照者における代謝物質の濃度よりも低いとき、前記被験者は、前記対照者よりも視神経障害が重症化している可能性が高いと評価する工程；
〔３〕生体試料が、血液試料、尿試料、前房水試料、又は網膜試料であることを特徴とする上記〔１〕又は〔２〕に記載の判定方法。
〔４〕工程（ａ−１）において、脂肪酸又はＬ−アセチルカルニチンを測定し、工程（ａ−２）において、Ｌ−アセチルカルニチンを測定することを特徴とする上記〔１〕〜〔３〕のいずれかに記載の判定方法。
〔５〕脂肪酸が、オレイン酸、パルミチン酸、リノール酸、ステアリン酸、ドコサヘキサエン酸、ミリスチン酸、及びアラキドン酸からなる群から選択される１又は２種以上の脂肪酸であることを特徴とする上記〔４〕に記載の判定方法。
〔６〕以下の［Ｉグループ］、［Ａグループ］〜［Ｈグループ］、及び［Ｊグループ］から選択される１又は２種以上の代謝物質からなることを特徴とする視神経障害の発症リスク、又は発症の有無の判定用バイオマーカーであって、
代謝物質が［Ａグループ］、［Ｂグループ］、又は［Ｅグループ］〜［Ｇグループ］の代謝物質である場合、視神経障害を発症するリスクが高い者、又は視神経障害を発症している者から採取された生体試料中の前記代謝物質の濃度が、視神経障害を発症しない対照者における前記代謝物質の濃度と比べ、高く、
代謝物質が［Ｉグループ］、［Ｃグループ］、［Ｄグループ］、［Ｈグループ］、又は［Ｊグループ］の代謝物質である場合、視神経障害を発症するリスクが高い者、又は視神経障害を発症している者から採取された生体試料中の前記代謝物質の濃度が、視神経障害を発症しない対照者における前記代謝物質の濃度と比べ、低い、
前記判定用バイオマーカー。
［Ｉグループ］
脂肪酸、ＬＰＣ（１８：０）、パルミチン酸メチル、ミリスチン酸イソプロピル、ＬＰＥ（２２：６）、ＬＰＣ（１７：０）ｓｎ−１、ＬＰＣ（１４：０）、ＬＰＣ（１７：０）ｓｎ−２、ＬＰＣ（１５：０）、ｐ−クレゾール硫酸、インドキシル硫酸、ヒドロキシ酪酸、ヒドロキシ安息香酸、Ｎ-フェニルアセチルグルタミン、アコニット酸、ピリドキサール、ＬＰＣ（１６：０）、ＰＣ（３６：２）、ＰＣ（３８：４）、ＰＣ（４０：６）、プロリンベタイン、セラミド（ｄ１８:１／１６:０）
［Ａグループ］
Ｌ−アセチルカルニチン（Acetylcarnitine）、９−ヘキサデセノイルカルニチン（Hexadecenoylcarnitine）、ヒドロキシブチリルカルニチン（Hydroxybutyrylcarnitine）、トリアシルグリセロール（６２：１２）、Ｌ−オクタノイルカルニチン（Octanoylcarnitine）、アスパラギン−アスパラギン酸  ジペプチド、ｍ−アミノ安息香酸（Aminobenzoic acid）
［Ｂグループ］
ホスファチジルコリン（Phosphatidylcholine；ＰＣ）（３８：７）、ホスファチジルグリセロール（Phosphatidylglycerol；ＰＧ）（４０：６）、リゾホスファチジルコリン（lysoＰＣ；ＬＰＣ）（１８：２）、ＰＧ（３２：０）、Ｓ−アデノシルメチオニン（Adenosylmethionine）、ホスファチジルエタノールアミン（Phosphatidylethanolamine；ＰＥ）（４２：８）、ＰＧ（３８：６）
［Ｃグループ］
ＰＣ（４６：６）、スフィンゴミエリン（Sphingomyelin；ＳＭ)（ｄ１８：０／２４：０）、8,8-ジエトキシ-2,6-ジメチル-2-オクタノール、グリセロホスホコリン（Glycerophosphocholine；ＧＰＣ）、β−ラクトシルセラミド（Lactosylceramide）（ｄ１８：１／２２：０）、ＰＣ（４４：９）
［Ｄグループ］
モノアシルグリセリド（Monoacylglyceride）（１８：０／０：０／０：０）、Ｄ−グルコース、グアノシン、アデニン、アデノシン、グルタチオン、Ｓ−ホルミルグルタチオン（Formylglutathione）、メチオニン−ヒスチジン  ジペプチド
［Ｅグループ］
３−スルホ乳酸、ジメチルスルホン、リボン酸、アラビノン酸、キシロン酸、Ｌ−ヒドロキシグルタル酸、ヒドロキシクエン酸、グルカル酸、ガラクタル酸、オクテノイルカルニチン、ベタイン、Ｌ−アセチルカルニチン、メチルマロニルカルニチン、Ｌ−カルニチン、N,N-ジエチルエタノールアミン、Ｌ−シスチン
［Ｆグループ］
ピログルタミン、ＬＰＣ（１８：２）ｓｎ−１、リゾホスファチジルエタノールアミン（lysoＰＥ；ＬＰＥ）（１８：２）、ＬＰＣ（１８：２）ｓｎ−２、アンドロステロン硫酸、テストステロン硫酸、フェノール硫酸、乳酸、Ｄ−グルコース、ヒドロペルオキシリノール酸、ＰＣ（３４：２）、チオモルホリン−３−カルボン酸、ＬＰＣ（１８：２）、Ｌ−カルニチン
［Ｇグループ］
メチルアデノシン、スクシニルアデノシン、ドデカノイルカルニチン、Ｏ−(７−カルボキシヘプタノイル)カルニチン、Ｏ−(８−カルボキシオクタノイル)カルニチン、Ｏ−(１１−カルボキシウンデカノイル)カルニチン、マレイン酸、フマル酸
［Ｈグループ］
ジクロロメタン、グルタチオン、Ｌ−チロシン、Ｌ−フェニルアラニン、３−メルカプト乳酸、ウリジン、タウリン、アミノ酪酸
［Ｊグループ］
クエン酸
〔７〕以下の［Ａグループ］〜［Ｄグループ］から選択される１又は２種以上の代謝物質からなることを特徴とする視神経障害の重症度の判定用バイオマーカーであって、
代謝物質が［Ａグループ］又は［Ｄグループ］の代謝物質である場合、視神経障害の重症度が高い者から採取された生体試料中の前記代謝物質の濃度が、視神経障害の重症度が低い者における前記代謝物質の濃度と比べ、高く、
代謝物質が［Ｂグループ］又は［Ｃグループ］の代謝物質である場合、視神経障害の重症度が高い者から採取された生体試料中の前記代謝物質の濃度が、視神経障害の重症度が低い者における前記代謝物質の濃度と比べ、低い、
前記判定用バイオマーカー。
［Ａグループ］
Ｌ−アセチルカルニチン（Acetylcarnitine）、９−ヘキサデセノイルカルニチン（Hexadecenoylcarnitine）、ヒドロキシブチリルカルニチン（Hydroxybutyrylcarnitine）、トリアシルグリセロール（６２：１２）、Ｌ−オクタノイルカルニチン（Octanoylcarnitine）、アスパラギン−アスパラギン酸  ジペプチド、ｍ−アミノ安息香酸（Aminobenzoic acid）
［Ｂグループ］
ホスファチジルコリン（Phosphatidylcholine；ＰＣ）（３８：７）、ホスファチジルグリセロール（Phosphatidylglycerol；ＰＧ）（４０：６）、リゾホスファチジルコリン（lysoＰＣ；ＬＰＣ）（１８：２）、ＰＧ（３２：０）、Ｓ−アデノシルメチオニン（Adenosylmethionine）、ホスファチジルエタノールアミン（Phosphatidylethanolamine；ＰＥ）（４２：８）、ＰＧ（３８：６）
［Ｃグループ］
ＰＣ（４６：６）、スフィンゴミエリン（Sphingomyelin；ＳＭ)（ｄ１８：０／２４：０）、8,8-ジエトキシ-2,6-ジメチル-2-オクタノール、グリセロホスホコリン（Glycerophosphocholine；ＧＰＣ）、β−ラクトシルセラミド（Lactosylceramide）（ｄ１８：１／２２：０）、ＰＣ（４４：９）
［Ｄグループ］
モノアシルグリセリド（Monoacylglyceride）（１８：０／０：０／０：０）、Ｄ−グルコース、グアノシン、アデニン、アデノシン、グルタチオン、Ｓ−ホルミルグルタチオン（Formylglutathione）、メチオニン−ヒスチジン  ジペプチド
〔８〕生体試料が、血液試料、尿試料、前房水試料、又は網膜試料であることを特徴とする上記〔６〕又は〔７〕に記載の判定用バイオマーカー。
〔９〕代謝物質が、脂肪酸又はＬ−アセチルカルニチンであることを特徴とする上記〔６〕〜〔８〕のいずれかに記載の判定用バイオマーカー。
〔１０〕脂肪酸が、オレイン酸、パルミチン酸、リノール酸、ステアリン酸、ドコサヘキサエン酸、ミリスチン酸、及びアラキドン酸からなる群から選択される１又は２種以上の脂肪酸であることを特徴とする上記〔９〕に記載の判定用バイオマーカー。
〔１１〕以下の工程（Ａ）〜（Ｃ）を含むことを特徴とする視神経障害発症の予防剤、又は視神経障害の治療剤のスクリーニング方法。
（Ａ）被検物質を投与した視神経障害非ヒト動物から採取された生体試料中の、以下の［Ｉグループ］、［Ａグループ］〜［Ｈグループ］、及び［Ｊグループ］から選択される１又は２種以上の代謝物質の濃度を測定する工程；
［Ｉグループ］
脂肪酸、ＬＰＣ（１８：０）、パルミチン酸メチル、ミリスチン酸イソプロピル、ＬＰＥ（２２：６）、ＬＰＣ（１７：０）ｓｎ−１、ＬＰＣ（１４：０）、ＬＰＣ（１７：０）ｓｎ−２、ＬＰＣ（１５：０）、ｐ−クレゾール硫酸、インドキシル硫酸、ヒドロキシ酪酸、ヒドロキシ安息香酸、Ｎ-フェニルアセチルグルタミン、アコニット酸、ピリドキサール、ＬＰＣ（１６：０）、ＰＣ（３６：２）、ＰＣ（３８：４）、ＰＣ（４０：６）、プロリンベタイン、セラミド（ｄ１８:１／１６:０）
［Ａグループ］
Ｌ−アセチルカルニチン（Acetylcarnitine）、９−ヘキサデセノイルカルニチン（Hexadecenoylcarnitine）、ヒドロキシブチリルカルニチン（Hydroxybutyrylcarnitine）、トリアシルグリセロール（６２：１２）、Ｌ−オクタノイルカルニチン（Octanoylcarnitine）、アスパラギン−アスパラギン酸  ジペプチド、ｍ−アミノ安息香酸（Aminobenzoic acid）
［Ｂグループ］
ホスファチジルコリン（Phosphatidylcholine；ＰＣ）（３８：７）、ホスファチジルグリセロール（Phosphatidylglycerol；ＰＧ）（４０：６）、リゾホスファチジルコリン（lysoＰＣ；ＬＰＣ）（１８：２）、ＰＧ（３２：０）、Ｓ−アデノシルメチオニン（Adenosylmethionine）、ホスファチジルエタノールアミン（Phosphatidylethanolamine；ＰＥ）（４２：８）、ＰＧ（３８：６）
［Ｃグループ］
ＰＣ（４６：６）、スフィンゴミエリン（Sphingomyelin；ＳＭ)（ｄ１８：０／２４：０）、8,8-ジエトキシ-2,6-ジメチル-2-オクタノール、グリセロホスホコリン（Glycerophosphocholine；ＧＰＣ）、β−ラクトシルセラミド（Lactosylceramide）（ｄ１８：１／２２：０）、ＰＣ（４４：９）
［Ｄグループ］
モノアシルグリセリド（Monoacylglyceride）（１８：０／０：０／０：０）、Ｄ−グルコース、グアノシン、アデニン、アデノシン、グルタチオン、Ｓ−ホルミルグルタチオン（Formylglutathione）、メチオニン−ヒスチジン  ジペプチド
［Ｅグループ］
３−スルホ乳酸、ジメチルスルホン、リボン酸、アラビノン酸、キシロン酸、Ｌ−ヒドロキシグルタル酸、ヒドロキシクエン酸、グルカル酸、ガラクタル酸、オクテノイルカルニチン、ベタイン、Ｌ−アセチルカルニチン、メチルマロニルカルニチン、Ｌ−カルニチン、N,N-ジエチルエタノールアミン、Ｌ−シスチン
［Ｆグループ］
ピログルタミン、ＬＰＣ（１８：２）ｓｎ−１、リゾホスファチジルエタノールアミン（lysoＰＥ；ＬＰＥ）（１８：２）、ＬＰＣ（１８：２）ｓｎ−２、アンドロステロン硫酸、テストステロン硫酸、フェノール硫酸、乳酸、Ｄ−グルコース、ヒドロペルオキシリノール酸、ＰＣ（３４：２）、チオモルホリン−３−カルボン酸、ＬＰＣ（１８：２）、Ｌ−カルニチン
［Ｇグループ］
メチルアデノシン、スクシニルアデノシン、ドデカノイルカルニチン、Ｏ−(７−カルボキシヘプタノイル)カルニチン、Ｏ−(８−カルボキシオクタノイル)カルニチン、Ｏ−(１１−カルボキシウンデカノイル)カルニチン、マレイン酸、フマル酸
［Ｈグループ］
ジクロロメタン、グルタチオン、Ｌ−チロシン、Ｌ−フェニルアラニン、３−メルカプト乳酸、ウリジン、タウリン、アミノ酪酸
［Ｊグループ］
クエン酸
（Ｂ）工程（Ａ）で測定した代謝物質の濃度を、前記被検物質を投与しない視神経障害非ヒト動物における前記代謝物質の濃度と比較する工程；
（Ｃ）工程（Ａ）で測定した代謝物質が［Ａグループ］、［Ｂグループ］、又は［Ｅグループ］〜［Ｇグループ］の代謝物質である場合、工程（Ａ）で測定した代謝物質の濃度が、前記被検物質を投与しない視神経障害非ヒト動物における代謝物質の濃度よりも低いとき、前記被検物質は、視神経障害発症の予防、又は視神経障害の治療に有効であると評価し、
工程（Ａ）で測定した代謝物質が［Ｉグループ］、［Ｃグループ］、［Ｄグループ］、［Ｈグループ］、又は［Ｊグループ］の代謝物質である場合、工程（Ａ）で測定した代謝物質の濃度が、前記被検物質を投与しない視神経障害非ヒト動物における代謝物質の濃度よりも高いとき、前記被検物質は、視神経障害発症の予防、又は視神経障害の治療に有効であると評価する工程；
〔１２〕生体試料が、血液試料、尿試料、前房水試料、又は網膜試料であることを特徴とする上記〔１１〕に記載のスクリーニング方法。
〔１３〕工程（Ａ）において、脂肪酸又はＬ−アセチルカルニチンを測定することを特徴とする上記〔１１〕又は〔１２〕に記載のスクリーニング方法。
〔１４〕脂肪酸が、オレイン酸、パルミチン酸、リノール酸、ステアリン酸、ドコサヘキサエン酸、ミリスチン酸、及びアラキドン酸からなる群から選択される１又は２種以上の脂肪酸であることを特徴とする上記〔１３〕に記載のスクリーニング方法。
【００１３】
また本発明の実施の他の形態として、
被験者から採取された生体試料中の本件代謝物質群から選択される１又は２種以上の代謝物質の濃度を測定する工程（ａ−１）を含む、視神経障害の発症リスク、又は視神経障害の発症の有無を判定する方法；や、
視神経障害を発症している被験者から採取された生体試料中の本件代謝物質群から選択される１又は２種以上の代謝物質の濃度を測定する工程（ａ−２）を含む、視神経障害の重症度を判定する方法；や、
本件代謝物質群から選択される１又は２種以上の代謝物質からなる、視神経障害の発症リスクの判定用、視神経障害発症の有無の判定用、又は視神経障害の重症度の判定用バイオマーカー；や、
被検物質を投与した視神経障害非ヒト動物から採取された生体試料中の本件代謝物質群から選択される１又は２種以上の代謝物質の濃度を測定する工程（Ａ）を含む、視神経障害発症の予防剤、又は視神経障害の治療剤をスクリーニングする方法や、
上記工程（ａ−１）〜（ｃ−１）を含む、視神経障害の発症リスク、又は発症の有無を診断するためのデータを収集する方法；や、
上記工程（ａ−１）〜（ｃ−１）を含み、さらに、工程（ｃ−１）において、視神経障害を発症するリスクが高い、又は視神経障害を発症している可能性が高いと評価（診断）された被験者に対して、視神経障害の発症を予防する処置、又は視神経障害を治療する処置（例えば、眼圧降下剤や、ＲＧＣ軸索の再生又は可塑性を促す神経再生剤の点眼等）を施す工程（ｐ−１）を任意で含む、視神経障害の発症リスク、又は発症の有無の診断方法；や、
上記工程（ａ−２）〜（ｃ−２）を含む、視神経障害の重症度を診断するためのデータを収集する方法；や、
上記工程（ａ−２）〜（ｃ−２）を含み、さらに、工程（ｃ−２）において、視神経障害が重症化している可能性が高いと評価（診断）された被験者に対して、視神経障害を治療する処置（例えば、眼圧降下剤や、ＲＧＣ軸索の再生又は可塑性を促す神経再生剤の点眼等）を施す工程（ｐ−２）を任意で含む、視神経障害の重症度の診断方法；や、
視神経障害の発症リスク、又は発症の有無の判定（診断）方法におけるバイオマーカーとして使用するための、本件代謝物質群から選択される１又は２種以上の代謝物質であって、代謝物質が［Ａグループ］、［Ｂグループ］、又は［Ｅグループ］〜［Ｇグループ］の代謝物質である場合、視神経障害を発症するリスクが高い者、又は視神経障害を発症している者から採取された生体試料中の前記代謝物質の濃度が、視神経障害を発症しない対照者における前記代謝物質の濃度と比べ、高く、代謝物質が［Ｃグループ］、［Ｄグループ］、又は［Ｈグループ］〜［Ｊグループ］の代謝物質である場合、視神経障害を発症するリスクが高い者、又は視神経障害を発症している者から採取された生体試料中の前記代謝物質の濃度が、視神経障害を発症しない対照者における前記代謝物質の濃度と比べ、低い、前記代謝物質；や、
視神経障害の重症度の判定（診断）方法におけるバイオマーカーとして使用するための、本件代謝物質群から選択される１又は２種以上の代謝物質であって、代謝物質が［Ａグループ］又は［Ｄグループ］の代謝物質である場合、視神経障害の重症度が高い者から採取された生体試料中の前記代謝物質の濃度が、視神経障害の重症度が低い者における前記代謝物質の濃度と比べ、高く、
代謝物質が［Ｂグループ］又は［Ｃグループ］の代謝物質である場合、視神経障害の重症度が高い者から採取された生体試料中の前記代謝物質の濃度が、視神経障害の重症度が低い者における前記代謝物質の濃度と比べ、低い、前記代謝物質；や、
上記工程（Ａ）〜（Ｃ）を含む、視神経障害の予防又は治療剤（薬）の有効性を判定する方法、或いは視神経障害の予防剤（薬）候補又は治療剤（薬）候補のスクリーニング方法；
を挙げることができる。
【発明の効果】
【００１４】
本発明の判定方法又は判定用バイオマーカーによると、視神経障害の発症リスク及び発症の有無や、視神経障害の重症度を精度よく判定することができるため、緑内障等の視神経障害が発症する前や発症後初期段階で適切な治療を受けることができ、視神経障害発症を予防したり、視神経障害を早期治療することにつながる。また、本発明のスクリーニング方法は、視神経障害の予防（保護）又は治療剤（薬）の開発に資するものである。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】図１Ａは、ＣＴ群及び３種類のＯＮＣ群（ＯＮＣ群２日目、ＯＮＣ群４日目、及びＯＮＣ群７日目）について、網膜試料中のＲＢＰＭＳ（RNA binding protein with multiple splicing）の発現レベルを、間接蛍光抗体法により解析した結果を示す図である。図中の「ＲＢＰＭＳ」は、ＲＢＰＭＳ蛍光画像を示し、「ＤＡＰＩ」は、ＤＡＰＩ蛍光画像を示し、「Ｍｅｒｇｅ」は、ＲＢＰＭＳ蛍光画像とＤＡＰＩ蛍光画像とを重ねた画像を示す。図１Ｂは、ＣＴ群及び上記３種類のＯＮＣ群について、ＲＢＰＭＳ蛍光画像を基に、網膜試料中のＲＢＰＭＳ陽性網膜細胞数を測定した結果を示す図である。図中の「＊」及び「＊＊」は、それぞれ統計学的に有意差（Ｐ＜０．０５、及びＰ＜０．０１）があることを示す。図１Ｃは、網膜試料中のＲＢＰＭＳの発現レベルを、ウエスタンブロッティング法により解析した結果を示す図である。図中の「ＮＣ」は、視神経を挫滅した右眼の網膜試料を示し、「Ｓ」は、視神経を挫滅しない左眼の網膜試料を示す。
【図２】ＣＴ群（図中の「ＣＴ」）及び３種類のＯＮＣ群（ＯＮＣ群２日目［図中のＯＮＣ２］、ＯＮＣ群４日目［図中のＯＮＣ４］、及びＯＮＣ群７日目［図中のＯＮＣ７］）について、網膜試料中の本件代謝物質群（Ａ〜Ｄグループの代謝物質）の濃度を、液体クロマトグラフ質量分析計（ＬＣ−ＭＳ）を用いた質量分析法により定量し、得られた定量結果を基に、階層的クラスタリング解析を行い、作成したヒートマップを示す図である。
【図３】ＣＴ群及び上記３種類のＯＮＣ群について、網膜試料中の４種類のＡグループ代謝物質（Ｌ−アセチルカルニチン、９−ヘキサデセノイルカルニチン、ヒドロキシブチリルカルニチン、及びトリアシルグリセロール［６２：１２］）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。
【図４】ＣＴ群及び上記３種類のＯＮＣ群について、網膜試料中の３種類のＡグループ代謝物質（Ｌ−オクタノイルカルニチン、アスパラギン−アスパラギン酸  ジペプチド、及びｍ−アミノ安息香酸）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。
【図５】ＣＴ群及び上記３種類のＯＮＣ群について、網膜試料中の４種類のＢグループ代謝物質（ＰＣ［３８：７］、ＰＧ［４０：６］、ＬＰＣ［１８：２］、及びＰＧ［３２：０］）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。
【図６】ＣＴ群及び上記３種類のＯＮＣ群について、網膜試料中の３種類のＢグループ代謝物質（Ｓ−アデノシルメチオニン、ＰＥ［４２：８］、及びＰＧ［３８：６］）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。
【図７】ＣＴ群及び上記３種類のＯＮＣ群について、網膜試料中の３種類のＣグループ代謝物質（ＰＣ［４６：６］、ＳＭ［ｄ１８：０／２４：０］、及び８，８−ジエトキシ−２，６−ジメチル−２−オクタノール）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。
【図８】ＣＴ群及び上記３種類のＯＮＣ群について、網膜試料中の３種類のＣグループ代謝物質（ＧＰＣ、β−ラクトシルセラミド［ｄ１８：１／２２：０］、及びＰＣ［４４：９］）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。
【図９】ＣＴ群及び上記３種類のＯＮＣ群について、網膜試料中の４種類のＤグループ代謝物質（モノアシルグリセリド［１８：０／０：０／０：０］、Ｄ−グルコース、グアノシン、及びアデニン）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。
【図１０】ＣＴ群及び上記３種類のＯＮＣ群について、網膜試料中の４種類のＤグループ代謝物質（アデノシン、グルタチオン、Ｓ−ホルミルグルタチオン、及びメチオニン−ヒスチジン  ジペプチド）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。
【図１１】ＣＴ群及びＯＮＣ群２日目について、網膜試料中の３種類の本件代謝物質群（Ｌ−アセチルカルチニン［図１１Ａ］、ＰＣ［３８：７］［図１１Ｂ］、及びＰＧ［４０：６］［図１１Ｃ］）の分布を、ＩＭＳを用いた質量分析法により解析した結果を示す図である。図１１Ａ〜Ｃの各群について、下図は、ヘマトキシリン・エオジン（ＨＥ）染色した網膜試料の光学顕微鏡画像であり、右図は、下図の四角で囲った領域を拡大した光学顕微鏡画像であり、左図は、右図の光学顕微鏡画像に対応するＩＭＳ解析画像である。
【図１２】健常群及び緑内障群について、前房水試料中の本件代謝物質群（Ｌ−アセチルカルチニン）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。縦軸のＬ−アセチルカルチニン濃度レベルは、Ｌ−アセチルカルチニンのピーク強度を示す。図中の「＊＊＊」は、統計学的に有意差（Ｐ＝０．０００１３５２）があることを示す。
【図１３】図１３Ａは、健常群及び緑内障群について、前房水試料中の本件代謝物質群（３−スルホ乳酸）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図１３Ａの「＊＊＊」は、統計学的に有意差（Ｐ＝０．０００３）があることを示す。図１３Ｂは、健常群、ＮＴＧ群及びＰＯＡＧ群について、前房水試料中の本件代謝物質群（３−スルホ乳酸）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図１３Ｂの「＊」及び「＊＊＊」は、それぞれSteel-Dwass testにより統計学的に有意差（Ｐ＝０．０２４２、及びＰ＜０．０００１）があることを示す。図中の各黒丸（●）は、被験者一人ひとりを示す（以下、同じ）。図中の縦軸の３−スルホ乳酸濃度レベルは、３−スルホ乳酸のピーク強度を示す。
【図１４】図１４Ａは、健常群及び緑内障群について、前房水試料中の本件代謝物質群（ジメチルスルホン）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図１４Ｂは、健常群、ＮＴＧ群及びＰＯＡＧ群について、前房水試料中の本件代謝物質群（ジメチルスルホン）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図中の「＃＃＃」及び「＊＊＊」は、それぞれSteel-Dwass testにより統計学的に有意差（Ｐ＝０．０００４、及びＰ＜０．０００１）があることを示す。図中の縦軸のジメチルスルホン濃度レベルは、ジメチルスルホンのピーク強度を示す。
【図１５】図１５Ａは、健常群及び緑内障群について、前房水試料中の本件代謝物質群（リボン酸、アラビノン酸、又はキシロン酸）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図１５Ｂは、健常群、ＮＴＧ群及びＰＯＡＧ群について、前房水試料中の本件代謝物質群（リボン酸、アラビノン酸、又はキシロン酸）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図中の「＊＊＊」は、Steel-Dwass testにより統計学的に有意差（Ｐ＜０．０００１）があることを示す。図中の縦軸のリボン酸、アラビノン酸、又はキシロン酸濃度レベルは、リボン酸、アラビノン酸、又はキシロン酸のピーク強度を示す。
【図１６】図１６Ａは、健常群及び緑内障群について、前房水試料中の本件代謝物質群（Ｌ−ヒドロキシグルタル酸）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図１６Ｂは、健常群、ＮＴＧ群及びＰＯＡＧ群について、前房水試料中の本件代謝物質群（Ｌ−ヒドロキシグルタル酸）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図中の「＊」及び「＊＊＊」は、それぞれSteel-Dwass testにより統計学的に有意差（Ｐ＝０．０４５０、及びＰ＜０．０００１）があることを示す。図中の縦軸のＬ−ヒドロキシグルタル酸濃度レベルは、Ｌ−ヒドロキシグルタル酸のピーク強度を示す。
【図１７】図１７Ａは、健常群及び緑内障群について、前房水試料中の本件代謝物質群（ヒドロキシクエン酸）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図１７Ｂは、健常群、ＮＴＧ群及びＰＯＡＧ群について、前房水試料中の本件代謝物質群（ヒドロキシクエン酸）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図中の「＊＊」及び「＊＊＊」は、それぞれSteel-Dwass testにより統計学的に有意差（Ｐ＝０．０１３５、及びＰ＜０．０００１）があることを示す。図中の縦軸のヒドロキシクエン酸濃度レベルは、ヒドロキシクエン酸のピーク強度を示す。
【図１８】図１８Ａは、健常群及び緑内障群について、前房水試料中の本件代謝物質群（グルカル酸又はガラクタル酸）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図１８Ｂは、健常群、ＮＴＧ群及びＰＯＡＧ群について、前房水試料中の本件代謝物質群（グルカル酸又はガラクタル酸）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図中の「＊」及び「＊＊＊」は、それぞれSteel-Dwass testにより統計学的に有意差（Ｐ＝０．０１１１、及びＰ＜０．０００１）があることを示す。図中の縦軸のグルカル酸又はガラクタル酸濃度レベルは、グルカル酸又はガラクタル酸のピーク強度を示す。
【図１９】図１９Ａは、健常群及び緑内障群について、前房水試料中の本件代謝物質群（オクテノイルカルニチン）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図１９Ａの「＊」は、統計学的に有意差（Ｐ＝０．０２８４）があることを示す。図１９Ｂは、健常群、ＮＴＧ群及びＰＯＡＧ群について、前房水試料中の本件代謝物質群（オクテノイルカルニチン）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図１９Ｂの「＊」及び「＊＊」は、それぞれSteel-Dwass testにより統計学的に有意差（Ｐ＝０．０２８２、及びＰ＝０．００８４）があることを示す。図中の縦軸のオクテノイルカルニチン濃度レベルは、オクテノイルカルニチンのピーク強度を示す。
【図２０】図２０Ａは、健常群及び緑内障群について、前房水試料中の本件代謝物質群（ベタイン）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図１９Ｂは、健常群、ＮＴＧ群及びＰＯＡＧ群について、前房水試料中の本件代謝物質群（ベタイン）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図中の縦軸のベタイン濃度レベルは、ベタインのピーク強度を示す。
【図２１】図２１Ａは、健常群及び緑内障群について、前房水試料中の本件代謝物質群（Ｌ−アセチルカルニチン）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図２１Ａの「＊＊＊」は、統計学的に有意差（Ｐ＝０．０００３）があることを示す。図２１Ｂは、健常群、ＮＴＧ群及びＰＯＡＧ群について、前房水試料中の本件代謝物質群（Ｌ−アセチルカルニチン）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図２１Ｂの「＊」及び「＊＊＊」は、それぞれTukey-Kramer testにより統計学的に有意差（Ｐ＝０．０２８９、及びＰ＜０．０００１）があることを示す。図中の縦軸のＬ−アセチルカルニチン濃度レベルは、Ｌ−アセチルカルニチンのピーク強度を示す。
【図２２】図２２Ａは、健常群及び緑内障群について、前房水試料中の本件代謝物質群（メチルマロニルカルニチン）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図２２Ａの「＊」は、統計学的に有意差（Ｐ＝０．０１）があることを示す。図２２Ｂは、健常群、ＮＴＧ群及びＰＯＡＧ群について、前房水試料中の本件代謝物質群（メチルマロニルカルニチン）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図２２Ｂの「＊＊＊」は、Steel-Dwass testにより統計学的に有意差（Ｐ＝０．０００６）があることを示す。図中の縦軸のメチルマロニルカルニチン濃度レベルは、メチルマロニルカルニチンのピーク強度を示す。
【図２３】図２３Ａは、健常群及び緑内障群について、前房水試料中の本件代謝物質群（Ｌ−カルニチン）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図２３Ａの「＊＊」は、統計学的に有意差（Ｐ＝０．００２３）があることを示す。図２３Ｂは、健常群、ＮＴＧ群及びＰＯＡＧ群について、前房水試料中の本件代謝物質群（Ｌ−カルニチン）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図２３Ｂの「＊」及び「＊＊＊」は、それぞれTukey-Kramer testにより統計学的に有意差（Ｐ＝０．０１９６、及びＰ＝０．０００４）があることを示す。図中の縦軸のＬ−カルニチン濃度レベルは、Ｌ−カルニチンのピーク強度を示す。
【図２４】図２４Ａは、健常群及び緑内障群について、前房水試料中の本件代謝物質群（N,N-ジエチルエタノールアミン）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図２４Ｂは、健常群、ＮＴＧ群及びＰＯＡＧ群について、前房水試料中の本件代謝物質群（N,N-ジエチルエタノールアミン）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図中の「＊＊＊」は、Steel-Dwass testにより統計学的に有意差（Ｐ＜０．０００１）があることを示す。図中の縦軸のN,N-ジエチルエタノールアミン濃度レベルは、N,N-ジエチルエタノールアミンのピーク強度を示す。
【図２５】図２５Ａは、健常群及び緑内障群について、前房水試料中の本件代謝物質群（Ｌ−シスチン）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図２５Ｂは、健常群、ＮＴＧ群及びＰＯＡＧ群について、前房水試料中の本件代謝物質群（Ｌ−シスチン）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図中の「＊」及び「＊＊＊」は、それぞれSteel-Dwass testにより統計学的に有意差（Ｐ＝０．０３４６、及びＰ＜０．０００１）があることを示す。図中の縦軸のＬ−シスチン濃度レベルは、Ｌ−シスチンのピーク強度を示す。
【図２６】図２６Ａは、健常群及び緑内障群について、前房水試料中の本件代謝物質群（ジクロロメタン）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図２６Ｂは、健常群、ＮＴＧ群及びＰＯＡＧ群について、前房水試料中の本件代謝物質群（ジクロロメタン）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図２６Ｂの「＊」は、Steel-Dwass testにより統計学的に有意差（Ｐ＝０．０４９５）があることを示す。図中の縦軸のジクロロメタン濃度レベルは、ジクロロメタンのピーク強度を示す。
【図２７】図２７Ａは、健常群及び緑内障群について、前房水試料中の本件代謝物質群（グルタチオン）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図２７Ｂは、健常群、ＮＴＧ群及びＰＯＡＧ群について、前房水試料中の本件代謝物質群（グルタチオン）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図中の「＃＃＃」及び「＊＊＊」は、それぞれTukey-Kramer testにより統計学的に有意差（Ｐ＝０．０００５、及びＰ＜０．０００１）があることを示す。図中の縦軸のグルタチオン濃度レベルは、グルタチオンのピーク強度を示す。
【図２８】図２８Ａは、健常群及び緑内障群について、前房水試料中の本件代謝物質群（Ｌ−チロシン）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図２８Ｂは、健常群、ＮＴＧ群及びＰＯＡＧ群について、前房水試料中の本件代謝物質群（Ｌ−チロシン）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図中の縦軸のＬ−チロシン濃度レベルは、Ｌ−チロシンのピーク強度を示す。
【図２９】図２９Ａは、健常群及び緑内障群について、前房水試料中の本件代謝物質群（Ｌ−フェニルアラニン）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図２９Ｂは、健常群、ＮＴＧ群及びＰＯＡＧ群について、前房水試料中の本件代謝物質群（Ｌ−フェニルアラニン）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図中の縦軸のＬ−フェニルアラニン濃度レベルは、Ｌ−フェニルアラニンのピーク強度を示す。
【図３０】図３０Ａは、健常群及び緑内障群について、前房水試料中の本件代謝物質群（３−メルカプト乳酸）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図３０Ａの「＊＊＊」は、統計学的に有意差（Ｐ＜０．０００１）があることを示す。図３０Ｂは、健常群、ＮＴＧ群及びＰＯＡＧ群について、前房水試料中の本件代謝物質群（３−メルカプト乳酸）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図３０Ｂの「＃＃」及び「＊＊」は、それぞれSteel-Dwass testにより統計学的に有意差（Ｐ＝０．００２７、及びＰ＝０．００１６）があることを示す。図中の縦軸の３−メルカプト乳酸濃度レベルは、３−メルカプト乳酸のピーク強度を示す。
【図３１】図３１Ａは、健常群及び緑内障群について、前房水試料中の本件代謝物質群（ウリジン）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図３１Ｂは、健常群、ＮＴＧ群及びＰＯＡＧ群について、前房水試料中の本件代謝物質群（ウリジン）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図中の「＊＊」及び「＊＊＊」は、それぞれTukey-Kramer testにより統計学的に有意差（Ｐ＝０．００２９、及びＰ＜０．０００１）があることを示す。図中の縦軸のウリジン濃度レベルは、ウリジンのピーク強度を示す。
【図３２】図３２Ａは、健常群及び緑内障群について、前房水試料中の本件代謝物質群（タウリン）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図３２Ａの「＊＊」は、統計学的に有意差（Ｐ＝０．００１８）があることを示す。図３２Ｂは、健常群、ＮＴＧ群及びＰＯＡＧ群について、前房水試料中の本件代謝物質群（タウリン）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図３２Ｂの「＊」及び「＊＊＊」は、それぞれTukey-Kramer testにより統計学的に有意差（Ｐ＝０．０４４３及びＰ＝０．００１１）があることを示す。図中の縦軸のタウリン濃度レベルは、タウリンのピーク強度を示す。
【図３３】図３３Ａは、健常群及び緑内障群について、前房水試料中の本件代謝物質群（アミノ酪酸）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図３３Ａの「＊＊＊」は、統計学的に有意差（Ｐ＜０．０００１）があることを示す。図３３Ｂは、健常群、ＮＴＧ群及びＰＯＡＧ群について、前房水試料中の本件代謝物質群（アミノ酪酸）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図３３Ｂの「＊＊＊」は、Steel-Dwass testにより統計学的に有意差（Ｐ＜０．０００１）があることを示す。図中の縦軸のアミノ酪酸濃度レベルは、アミノ酪酸のピーク強度を示す。
【図３４】図３４Ａは、健常群及び緑内障群について、血漿試料中の本件代謝物質群（ピログルタミン）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図３４Ｂは、健常群、ＮＴＧ群及びＰＯＡＧ群について、血漿試料中の本件代謝物質群（ピログルタミン）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図３４Ｂの「＃」及び「＊」は、それぞれSteel-Dwass testにより統計学的に有意差（Ｐ＝０．０１５、及びＰ＝０．０２３１）があることを示す。図中の縦軸のピログルタミン濃度レベルは、ピログルタミンのピーク強度を示す。
【図３５】図３５Ａは、健常群及び緑内障群について、血漿試料中の本件代謝物質群（ＬＰＣ（１８：２）ｓｎ−１）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図３５Ａの「＊」は、統計学的に有意差（Ｐ＝０．０３８３）があることを示す。図３５Ｂは、健常群、ＮＴＧ群及びＰＯＡＧ群について、血漿試料中の本件代謝物質群（ＬＰＣ（１８：２）ｓｎ−１）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図中の縦軸のＬＰＣ（１８：２）ｓｎ−１濃度レベルは、ＬＰＣ（１８：２）ｓｎ−１のピーク強度を示す。
【図３６】図３６Ａは、健常群及び緑内障群について、血漿試料中の本件代謝物質群（ＬＰＥ（１８：２））の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図３６Ｂは、健常群、ＮＴＧ群及びＰＯＡＧ群について、血漿試料中の本件代謝物質群（ＬＰＥ（１８：２））の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図中の縦軸のＬＰＥ（１８：２）濃度レベルは、ＬＰＥ（１８：２）のピーク強度を示す。
【図３７】図３７Ａは、健常群及び緑内障群について、血漿試料中の本件代謝物質群（ＬＰＣ（１８：２）ｓｎ−２）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図３７Ｂは、健常群、ＮＴＧ群及びＰＯＡＧ群について、血漿試料中の本件代謝物質群（ＬＰＣ（１８：２）ｓｎ−２）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図中の縦軸のＬＰＣ（１８：２）ｓｎ−２濃度レベルは、ＬＰＣ（１８：２）ｓｎ−２のピーク強度を示す。
【図３８】図３８Ａは、健常群及び緑内障群について、血漿試料中の本件代謝物質群（アンドロステロン硫酸）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図３８Ｂは、健常群、ＮＴＧ群及びＰＯＡＧ群について、血漿試料中の本件代謝物質群（アンドロステロン硫酸）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図中の縦軸のアンドロステロン硫酸濃度レベルは、アンドロステロン硫酸のピーク強度を示す。
【図３９】図３９Ａは、健常群及び緑内障群について、血漿試料中の本件代謝物質群（テストステロン硫酸）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図３９Ｂは、健常群、ＮＴＧ群及びＰＯＡＧ群について、血漿試料中の本件代謝物質群（テストステロン硫酸）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図中の縦軸のテストステロン硫酸濃度レベルは、テストステロン硫酸のピーク強度を示す。
【図４０】図４０Ａは、健常群及び緑内障群について、血漿試料中の本件代謝物質群（フェノール硫酸）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図４０Ｂは、健常群、ＮＴＧ群及びＰＯＡＧ群について、血漿試料中の本件代謝物質群（フェノール硫酸）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図中の縦軸のフェノール硫酸濃度レベルは、フェノール硫酸のピーク強度を示す。
【図４１】図４１Ａは、健常群及び緑内障群について、血漿試料中の本件代謝物質群（乳酸）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図４１Ｂは、健常群、ＮＴＧ群及びＰＯＡＧ群について、血漿試料中の本件代謝物質群（乳酸）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図中の縦軸の乳酸濃度レベルは、乳酸のピーク強度を示す。
【図４２】図４２Ａは、健常群及び緑内障群について、血漿試料中の本件代謝物質群（Ｄ−グルコース）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図４２Ｂは、健常群、ＮＴＧ群及びＰＯＡＧ群について、血漿試料中の本件代謝物質群（Ｄ−グルコース）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図中の縦軸のＤ−グルコース濃度レベルは、Ｄ−グルコースのピーク強度を示す。
【図４３】図４３Ａは、健常群及び緑内障群について、血漿試料中の本件代謝物質群（ヒドロペルオキシリノール酸）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図４３Ｂは、健常群、ＮＴＧ群及びＰＯＡＧ群について、血漿試料中の本件代謝物質群（ヒドロペルオキシリノール酸）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図中の縦軸のヒドロペルオキシリノール酸濃度レベルは、ヒドロペルオキシリノール酸のピーク強度を示す。
【図４４】図４４Ａは、健常群及び緑内障群について、血漿試料中の本件代謝物質群（ＰＣ（３４：２））の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図４４Ｂは、健常群、ＮＴＧ群及びＰＯＡＧ群について、血漿試料中の本件代謝物質群（ＰＣ（３４：２））の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図中の縦軸のＰＣ（３４：２）濃度レベルは、ＰＣ（３４：２）のピーク強度を示す。
【図４５】図４５Ａは、健常群及び緑内障群について、血漿試料中の本件代謝物質群（チオモルホリン−３−カルボン酸）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図４５Ｂは、健常群、ＮＴＧ群及びＰＯＡＧ群について、血漿試料中の本件代謝物質群（チオモルホリン−３−カルボン酸）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図中の縦軸のチオモルホリン−３−カルボン酸濃度レベルは、チオモルホリン−３−カルボン酸のピーク強度を示す。
【図４６】図４６Ａは、健常群及び緑内障群について、血漿試料中の本件代謝物質群（ＬＰＣ（１８：２））の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図４６Ｂは、健常群、ＮＴＧ群及びＰＯＡＧ群について、血漿試料中の本件代謝物質群（ＬＰＣ（１８：２））の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図中の縦軸のＬＰＣ（１８：２）濃度レベルは、ＬＰＣ（１８：２）のピーク強度を示す。
【図４７】図４７Ａは、健常群及び緑内障群について、血漿試料中の本件代謝物質群（Ｌ−カルニチン）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図４７Ｂは、健常群、ＮＴＧ群及びＰＯＡＧ群について、血漿試料中の本件代謝物質群（Ｌ−カルニチン）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図中の縦軸のＬ−カルニチン濃度レベルは、Ｌ−カルニチンのピーク強度を示す。
【図４８】図４８Ａは、健常群及び緑内障群について、血漿試料中の本件代謝物質群（ＬＰＣ（１８：０））の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図４８Ｂは、健常群、ＮＴＧ群及びＰＯＡＧ群について、血漿試料中の本件代謝物質群（ＬＰＣ（１８：０））の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図中の縦軸のＬＰＣ（１８：０）濃度レベルは、ＬＰＣ（１８：０）のピーク強度を示す。
【図４９】図４９Ａは、健常群及び緑内障群について、血漿試料中の本件代謝物質群（パルミチン酸メチル又はミリスチン酸イソプロピル）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図４９Ａ中の「＊＊＊」は、統計学的に有意差（Ｐ＜０．０００１）があることを示す。図４９Ｂは、健常群、ＮＴＧ群及びＰＯＡＧ群について、血漿試料中の本件代謝物質群（パルミチン酸メチル又はミリスチン酸イソプロピル）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図４９Ｂの「＊＊＊」は、Tukey-Kramer testにより統計学的に有意差（Ｐ＜０．０００１）があることを示す。図中の縦軸のパルミチン酸メチル又はミリスチン酸イソプロピル濃度レベルは、パルミチン酸メチル又はミリスチン酸イソプロピルのピーク強度を示す。
【図５０】図５０Ａは、健常群及び緑内障群について、血漿試料中の本件代謝物質群（ＬＰＥ（２２：６））の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図５０Ｂは、健常群、ＮＴＧ群及びＰＯＡＧ群について、血漿試料中の本件代謝物質群（ＬＰＥ（２２：６））の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図中の縦軸のＬＰＥ（２２：６）濃度レベルは、ＬＰＥ（２２：６）のピーク強度を示す。
【図５１】図５１Ａは、健常群及び緑内障群について、血漿試料中の本件代謝物質群（ＬＰＣ（１７：０）ｓｎ−１）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図５１Ｂは、健常群、ＮＴＧ群及びＰＯＡＧ群について、血漿試料中の本件代謝物質群（ＬＰＣ（１７：０）ｓｎ−１）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図中の縦軸のＬＰＣ（１７：０）ｓｎ−１濃度レベルは、ＬＰＣ（１７：０）ｓｎ−１のピーク強度を示す。
【図５２】図５２Ａは、健常群及び緑内障群について、血漿試料中の本件代謝物質群（ＬＰＣ（１４：０））の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図５２Ｂは、健常群、ＮＴＧ群及びＰＯＡＧ群について、血漿試料中の本件代謝物質群（ＬＰＣ（１４：０））の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図中の縦軸のＬＰＣ（１４：０）濃度レベルは、ＬＰＣ（１４：０）のピーク強度を示す。
【図５３】図５３Ａは、健常群及び緑内障群について、血漿試料中の本件代謝物質群（ＬＰＣ（１７：０）ｓｎ−２）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図５３Ｂは、健常群、ＮＴＧ群及びＰＯＡＧ群について、血漿試料中の本件代謝物質群（ＬＰＣ（１７：０）ｓｎ−２）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図中の縦軸のＬＰＣ（１７：０）ｓｎ−２濃度レベルは、ＬＰＣ（１７：０）ｓｎ−２のピーク強度を示す。
【図５４】図５４Ａは、健常群及び緑内障群について、血漿試料中の本件代謝物質群（ＬＰＣ（１５：０））の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図５４Ａの「＊」は、統計学的に有意差（Ｐ＝０．０４９７）があることを示す。図５４Ｂは、健常群、ＮＴＧ群及びＰＯＡＧ群について、血漿試料中の本件代謝物質群（ＬＰＣ（１５：０））の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図中の縦軸のＬＰＣ（１５：０）濃度レベルは、ＬＰＣ（１５：０）のピーク強度を示す。
【図５５】図５５Ａは、健常群及び緑内障群について、血漿試料中の本件代謝物質群（オレイン酸）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図５５Ａの「＊＊」は、統計学的に有意差（Ｐ＝０．００７）があることを示す。図５５Ｂは、健常群、ＮＴＧ群及びＰＯＡＧ群について、血漿試料中の本件代謝物質群（オレイン酸）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図５５Ｂの「＊」は、Tukey-Kramer testにより統計学的に有意差（Ｐ＝０．０１０１）があることを示す。図中の縦軸のオレイン酸濃度レベルは、オレイン酸のピーク強度を示す。
【図５６】図５６Ａは、健常群及び緑内障群について、血漿試料中の本件代謝物質群（ｐ−クレゾール硫酸）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図５６Ｂは、健常群、ＮＴＧ群及びＰＯＡＧ群について、血漿試料中の本件代謝物質群（ｐ−クレゾール硫酸）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図中の縦軸のｐ−クレゾール硫酸濃度レベルは、ｐ−クレゾール硫酸のピーク強度を示す。
【図５７】図５７Ａは、健常群及び緑内障群について、血漿試料中の本件代謝物質群（パルミチン酸）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図５７Ａの「＊＊」は、統計学的に有意差（Ｐ＝０．００９３）があることを示す。図５７Ｂは、健常群、ＮＴＧ群及びＰＯＡＧ群について、血漿試料中の本件代謝物質群（パルミチン酸）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図５７Ｂの「＊」は、Tukey-Kramer testにより統計学的に有意差（Ｐ＝０．０２５１）があることを示す。図中の縦軸のパルミチン酸濃度レベルは、パルミチン酸のピーク強度を示す。
【図５８】図５８Ａは、健常群及び緑内障群について、血漿試料中の本件代謝物質群（リノール酸）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図５８Ｂは、健常群、ＮＴＧ群及びＰＯＡＧ群について、血漿試料中の本件代謝物質群（リノール酸）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図中の縦軸のリノール酸濃度レベルは、リノール酸のピーク強度を示す。
【図５９】図５９Ａは、健常群及び緑内障群について、血漿試料中の本件代謝物質群（ステアリン酸）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図５９Ａの「＊＊」は、統計学的に有意差（Ｐ＝０．００６３）があることを示す。図５９Ｂは、健常群、ＮＴＧ群及びＰＯＡＧ群について、血漿試料中の本件代謝物質群（ステアリン酸）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図５９Ｂの「＊＊」は、Tukey-Kramer testにより統計学的に有意差（Ｐ＝０．００８３）があることを示す。図中の縦軸のステアリン酸濃度レベルは、ステアリン酸のピーク強度を示す。
【図６０】図６０Ａは、健常群及び緑内障群について、血漿試料中の本件代謝物質群（インドキシル硫酸）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図６０Ｂは、健常群、ＮＴＧ群及びＰＯＡＧ群について、血漿試料中の本件代謝物質群（インドキシル硫酸）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図中の縦軸のインドキシル硫酸濃度レベルは、インドキシル硫酸のピーク強度を示す。
【図６１】図６１Ａは、健常群及び緑内障群について、血漿試料中の本件代謝物質群（ヒドロキシ酪酸）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図６１Ａの「＊」は、統計学的に有意差（Ｐ＝０．０２０９）があることを示す。図６１Ｂは、健常群、ＮＴＧ群及びＰＯＡＧ群について、血漿試料中の本件代謝物質群（ヒドロキシ酪酸）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図６１Ｂの「＊」は、Steel-Dwass testにより統計学的に有意差（Ｐ＝０．０２６）があることを示す。図中の縦軸のヒドロキシ酪酸濃度レベルは、ヒドロキシ酪酸のピーク強度を示す。
【図６２】図６２Ａは、健常群及び緑内障群について、血漿試料中の本件代謝物質群（ドコサヘキサエン酸）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図６２Ａの「＊」は、統計学的に有意差（Ｐ＝０．０２０９）があることを示す。図６２Ｂは、健常群、ＮＴＧ群及びＰＯＡＧ群について、血漿試料中の本件代謝物質群（ドコサヘキサエン酸）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図中の縦軸のドコサヘキサエン酸濃度レベルは、ドコサヘキサエン酸のピーク強度を示す。
【図６３】図６３Ａは、健常群及び緑内障群について、血漿試料中の本件代謝物質群（ミリスチン酸）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図６３Ａの「＊＊」は、統計学的に有意差（Ｐ＝０．００８６）があることを示す。図６３Ｂは、健常群、ＮＴＧ群及びＰＯＡＧ群について、血漿試料中の本件代謝物質群（ミリスチン酸）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図６３Ｂの「＊」は、Steel-Dwass testにより統計学的に有意差（Ｐ＝０．０１５９）があることを示す。図中の縦軸のミリスチン酸濃度レベルは、ミリスチン酸のピーク強度を示す。
【図６４】図６４Ａは、健常群及び緑内障群について、血漿試料中の本件代謝物質群（ヒドロキシ安息香酸）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図６４Ｂは、健常群、ＮＴＧ群及びＰＯＡＧ群について、血漿試料中の本件代謝物質群（ヒドロキシ安息香酸）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図中の縦軸のヒドロキシ安息香酸濃度レベルは、ヒドロキシ安息香酸のピーク強度を示す。
【図６５】図６５Ａは、健常群及び緑内障群について、血漿試料中の本件代謝物質群（Ｎ-フェニルアセチルグルタミン）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図６５Ｂは、健常群、ＮＴＧ群及びＰＯＡＧ群について、血漿試料中の本件代謝物質群（Ｎ-フェニルアセチルグルタミン）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図中の縦軸のＮ-フェニルアセチルグルタミン濃度レベルは、Ｎ-フェニルアセチルグルタミンのピーク強度を示す。
【図６６】図６６Ａは、健常群及び緑内障群について、血漿試料中の本件代謝物質群（アラキドン酸）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図６６Ａの「＊＊」は、統計学的に有意差（Ｐ＝０．００８９）があることを示す。図６６Ｂは、健常群、ＮＴＧ群及びＰＯＡＧ群について、血漿試料中の本件代謝物質群（アラキドン酸）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図６６Ｂの「＊」は、Steel-Dwass testにより統計学的に有意差（Ｐ＝０．０２９３）があることを示す。図中の縦軸のアラキドン酸濃度レベルは、アラキドン酸のピーク強度を示す。
【図６７】図６７Ａは、健常群及び緑内障群について、血漿試料中の本件代謝物質群（アコニット酸）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図６７Ｂは、健常群、ＮＴＧ群及びＰＯＡＧ群について、血漿試料中の本件代謝物質群（アコニット酸）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図中のアコニット酸濃度レベルは、アコニット酸のピーク強度を示す。
【図６８】図６８Ａは、健常群及び緑内障群について、血漿試料中の本件代謝物質群（ピリドキサール）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図６８Ｂは、健常群、ＮＴＧ群及びＰＯＡＧ群について、血漿試料中の本件代謝物質群（ピリドキサール）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図中の縦軸のピリドキサール濃度レベルは、ピリドキサールのピーク強度を示す。
【図６９】図６９Ａは、健常群及び緑内障群について、血漿試料中の本件代謝物質群（ＬＰＣ（１６：０））の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図６９Ｂは、健常群、ＮＴＧ群及びＰＯＡＧ群について、血漿試料中の本件代謝物質群（ＬＰＣ（１６：０））の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図中の縦軸のＬＰＣ（１６：０）濃度レベルは、ＬＰＣ（１６：０）のピーク強度を示す。
【図７０】図７０Ａは、健常群及び緑内障群について、血漿試料中の本件代謝物質群（ＰＣ（３６：２））の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図７０Ｂは、健常群、ＮＴＧ群及びＰＯＡＧ群について、血漿試料中の本件代謝物質群（ＰＣ（３６：２））の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図中の縦軸のＰＣ（３６：２）濃度レベルは、ＰＣ（３６：２）のピーク強度を示す。
【図７１】図７１Ａは、健常群及び緑内障群について、血漿試料中の本件代謝物質群（ＰＣ（３８：４））の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図７１Ａの「＊」は、統計学的に有意差（Ｐ＝０．０４７２）があることを示す。図７１Ｂは、健常群、ＮＴＧ群及びＰＯＡＧ群について、血漿試料中の本件代謝物質群（ＰＣ（３８：４））の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図中の縦軸のＰＣ（３８：４）濃度レベルは、ＰＣ（３８：４）のピーク強度を示す。
【図７２】図７２Ａは、健常群及び緑内障群について、血漿試料中の本件代謝物質群（ＰＣ（４０：６））の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図７２Ｂは、健常群、ＮＴＧ群及びＰＯＡＧ群について、血漿試料中の本件代謝物質群（ＰＣ（４０：６））の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図中の縦軸のＰＣ（４０：６）濃度レベルは、ＰＣ（４０：６）のピーク強度を示す。
【図７３】図７３Ａは、健常群及び緑内障群について、血漿試料中の本件代謝物質群（プロリンベタイン）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図７３Ｂは、健常群、ＮＴＧ群及びＰＯＡＧ群について、血漿試料中の本件代謝物質群（プロリンベタイン）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図中の縦軸のプロリンベタイン濃度レベルは、プロリンベタインのピーク強度を示す。
【図７４】図７４Ａは、健常群及び緑内障群について、血漿試料中の本件代謝物質群（セラミド（ｄ１８:１／１６:０））の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図７４Ｂは、健常群、ＮＴＧ群及びＰＯＡＧ群について、血漿試料中の本件代謝物質群（セラミド（ｄ１８:１／１６:０））の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図中の縦軸のセラミド（ｄ１８:１／１６:０）濃度レベルは、セラミド（ｄ１８:１／１６:０）のピーク強度を示す。
【図７５】図７５Ａは、健常群及び緑内障群について、尿試料中の本件代謝物質群（メチルアデノシン）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図７５Ａの「＊＊」は、統計学的に有意差（Ｐ＝０．００１８）があることを示す。図７５Ｂは、健常群、ＮＴＧ群及びＰＯＡＧ群について、尿試料中の本件代謝物質群（メチルアデノシン）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図７５Ｂの「＊＊＊」は、Tukey-Kramer testにより統計学的に有意差（Ｐ＝０．０００７）があることを示す。図中の縦軸のメチルアデノシン濃度レベルは、メチルアデノシンのピーク強度を示す。
【図７６】図７６Ａは、健常群及び緑内障群について、尿試料中の本件代謝物質群（スクシニルアデノシン）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図７６Ａの「＊＊」は、統計学的に有意差（Ｐ＝０．００７８）があることを示す。図７６Ｂは、健常群、ＮＴＧ群及びＰＯＡＧ群について、尿試料中の本件代謝物質群（スクシニルアデノシン）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図７６Ｂの「＊＊」は、Steel-Dwass testにより統計学的に有意差（Ｐ＝０．００２８）があることを示す。図中の縦軸のスクシニルアデノシン濃度レベルは、スクシニルアデノシンのピーク強度を示す。
【図７７】図７７Ａは、健常群及び緑内障群について、尿試料中の本件代謝物質群（ドデカノイルカルニチン）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図７７Ａの「＊」は、統計学的に有意差（Ｐ＝０．０１２３）があることを示す。図７７Ｂは、健常群、ＮＴＧ群及びＰＯＡＧ群について、尿試料中の本件代謝物質群（ドデカノイルカルニチン）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図中の縦軸のドデカノイルカルニチン濃度レベルは、ドデカノイルカルニチンのピーク強度を示す。
【図７８】図７８Ａは、健常群及び緑内障群について、尿試料中の本件代謝物質群（Ｏ−(７−カルボキシヘプタノイル)カルニチン）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図中の「＊」は、統計学的に有意差（Ｐ＝０．０２０４）があることを示す。図７８Ｂは、健常群、ＮＴＧ群及びＰＯＡＧ群について、尿試料中の本件代謝物質群（Ｏ−(７−カルボキシヘプタノイル)カルニチン）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図中の縦軸のＯ−(７−カルボキシヘプタノイル)カルニチン濃度レベルは、Ｏ−(７−カルボキシヘプタノイル)カルニチンのピーク強度を示す。
【図７９】図７９Ａは、健常群及び緑内障群について、尿試料中の本件代謝物質群（Ｏ−(８−カルボキシオクタノイル)カルニチン）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図７９Ａの「＊＊」は、統計学的に有意差（Ｐ＝０．００３５）があることを示す。図８０Ｂは、健常群、ＮＴＧ群及びＰＯＡＧ群について、尿試料中の本件代謝物質群（Ｏ−(８−カルボキシオクタノイル)カルニチン）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図８０Ｂの「＊」は、Steel-Dwass testにより統計学的に有意差（Ｐ＝０．０１０５）があることを示す。図中の縦軸のＯ−(８−カルボキシオクタノイル)カルニチン濃度レベルは、Ｏ−(８−カルボキシオクタノイル)カルニチンのピーク強度を示す。
【図８０】図８０Ａは、健常群及び緑内障群について、尿試料中の本件代謝物質群（Ｏ−(１１−カルボキシウンデカノイル)カルニチン）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図８０Ａの「＊＊」は、統計学的に有意差（Ｐ＝０．００９１）があることを示す。図８０Ｂは、健常群、ＮＴＧ群及びＰＯＡＧ群について、尿試料中の本件代謝物質群（Ｏ−(１１−カルボキシウンデカノイル)カルニチン）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図中の縦軸のＯ−(１１−カルボキシウンデカノイル)カルニチン濃度レベルは、Ｏ−(１１−カルボキシウンデカノイル)カルニチンのピーク強度を示す。
【図８１】図８１Ａは、健常群及び緑内障群について、尿試料中の本件代謝物質群（マレイン酸又はフマル酸）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図８１Ａの「＊」は、統計学的に有意差（Ｐ＝０．０４５８）があることを示す。図８１Ｂは、健常群、ＮＴＧ群及びＰＯＡＧ群について、尿試料中の本件代謝物質群（マレイン酸又はフマル酸）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図中の縦軸のマレイン酸又はフマル酸濃度レベルは、マレイン酸又はフマル酸のピーク強度を示す。
【図８２】図８２Ａは、健常群及び緑内障群について、尿試料中の本件代謝物質群（クエン酸）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図８２Ｂは、健常群、ＮＴＧ群及びＰＯＡＧ群について、尿試料中の本件代謝物質群（クエン酸）の濃度を、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により定量した結果を示す図である。図中の縦軸のクエン酸濃度レベルは、クエン酸のピーク強度を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
本発明の視神経障害の発症リスク、又は発症の有無の判定方法としては、被験者から採取された生体試料中の、以下の［Ａグループ］〜［Ｊグループ］から選択される１又は２種以上の代謝物質の濃度（以下、「被験者における代謝物質濃度」ということがある）を測定し、必要に応じて定量する工程（ａ−１）；「被験者における代謝物質濃度」を、視神経障害を発症しない対照者における前記代謝物質の濃度（以下、「対照者における代謝物質濃度」ということがある）と比較する工程（ｂ−１）；及び工程（ａ−１）で測定した代謝物質が以下の［Ａグループ］、［Ｂグループ］、又は［Ｅグループ］〜［Ｇグループ］の代謝物質である場合、「被験者における代謝物質濃度」が、「対照者における代謝物質濃度」よりも高いとき、前記被験者は、視神経障害を発症するリスクが高い、又は視神経障害を発症している可能性が高いと評価し、工程（ａ−１）で測定した代謝物質が以下の［Ｃグループ］、［Ｄグループ］、又は［Ｈグループ］〜［Ｊグループ］の代謝物質である場合、「被験者における代謝物質濃度」が、「対照者における代謝物質濃度」よりも低いとき、前記被験者は、視神経障害を発症するリスクが高い、又は視神経障害を発症している可能性が高いと評価する工程（ｃ−１）；の工程（ａ−１）〜（ｃ−１）を含む方法（以下、「本件判定方法１」ということがある）であれば特に制限されない。
また、本発明の視神経障害の重症度の判定方法としては、視神経障害を発症している被験者から採取された生体試料中の、以下の［Ａグループ］〜［Ｄグループ］から選択される１又は２種以上の代謝物質の濃度（以下、「視神経障害被験者における代謝物質濃度」ということがある）を測定し、必要に応じて定量する工程（ａ−２）；「視神経障害被験者における代謝物質濃度」を、視神経障害を発症している対照者における前記代謝物質の濃度（以下、「視神経障害対照者における代謝物質濃度」ということがある）と比較する工程（ｂ−２）；及び工程（ａ−２）で測定した代謝物質が以下の［Ａグループ］又は［Ｄグループ］の代謝物質である場合、「視神経障害被験者における代謝物質濃度」が、「視神経障害対照者における代謝物質濃度」よりも高いとき、前記被験者は、前記対照者よりも視神経障害が重症化している可能性が高いと評価し、工程（ａ−２）で測定した代謝物質が［Ｂグループ］又は［Ｃグループ］の代謝物質である場合、「視神経障害被験者における代謝物質濃度」が、「視神経障害対照者における代謝物質濃度」よりも低いとき、前記被験者は、前記対照者よりも視神経障害が重症化している可能性が高いと評価する工程；の工程（ａ−２）〜（ｃ−２）を含む方法（以下、「本件判定方法２」ということがある）であれば特に制限されない（本件判定方法１と本件判定方法２を総称して、以下「本件判定方法」ということがある）。本件判定方法は、医師による視神経障害発症リスクの診断、又は視神経障害発症の有無の診断を補助する方法であって、医師による診断行為を含まない。
［Ａグループ］
Ｌ−アセチルカルニチン（ＨＭＤＢ  ＩＤ番号；ＨＭＤＢ００００２０１）、９−ヘキサデセノイルカルニチン（ＨＭＤＢ  ＩＤ番号；ＨＭＤＢ００１３２０７）、ヒドロキシブチリルカルニチン（ＨＭＤＢ  ＩＤ番号；ＨＭＤＢ００１３１２７）、トリアシルグリセロール（６２：１２）、Ｌ−オクタノイルカルニチン（ＨＭＤＢ  ＩＤ番号；ＨＭＤＢ００００７９１）、アスパラギン−アスパラギン酸  ジペプチド（ＨＭＤＢ  ＩＤ番号；ＨＭＤＢ００２８７２７）、ｍ−アミノ安息香酸（ＨＭＤＢ  ＩＤ番号；ＨＭＤＢ０００１８９１）
［Ｂグループ］
ＰＣ（３８：７）（ＣＨＥＢＩ  ＩＤ番号；ＣＨＥＢＩ：６４４９８）、ＰＧ（４０：６）、ＬＰＣ（１８：２）（ＨＭＤＢ  ＩＤ番号；ＨＭＤＢ００１０３８６）、ＰＧ（３２：０）（ＨＭＤＢ  ＩＤ番号；ＨＭＤＢ００１０５７０）、Ｓ−アデノシルメチオニン（ＨＭＤＢ  ＩＤ番号；ＨＭＤＢ０００１１８５）、ＰＥ（４２：８）、ＰＧ（３８：６）
［Ｃグループ］
ＰＣ（４６：６）、ＳＭ（ｄ１８：０／２４：０）（ＨＭＤＢ  ＩＤ番号；ＨＭＤＢ００１２０９４）、8,8-ジエトキシ-2,6-ジメチル-2-オクタノール（ＨＭＤＢ  ＩＤ番号；ＨＭＤＢ００３４５５７）、ＧＰＣ（ＨＭＤＢ  ＩＤ番号；ＨＭＤＢ０００００８６）、β−ラクトシルセラミド（ｄ１８：１／２２：０）（ＨＭＤＢ  ＩＤ番号；ＨＭＤＢ００１１５９４）、ＰＣ（４４：９）
［Ｄグループ］
モノアシルグリセリド（１８：０／０：０／０：０）（ＨＭＤＢ  ＩＤ番号；ＨＭＤＢ００１１１３１）、Ｄ−グルコース（ＨＭＤＢ  ＩＤ番号；ＨＭＤＢ００００１２２）、グアノシン（ＨＭＤＢ  ＩＤ番号；ＨＭＤＢ００００１３３）、アデニン（ＨＭＤＢ  ＩＤ番号；ＨＭＤＢ０００００３４）、アデノシン（ＨＭＤＢ  ＩＤ番号；ＨＭＤＢ０００００５０）、グルタチオン（ＨＭＤＢ  ＩＤ番号；ＨＭＤＢ００００１２５）、Ｓ−ホルミルグルタチオン（ＨＭＤＢ  ＩＤ番号；ＨＭＤＢ０００１５５０）、メチオニン−ヒスチジン  ジペプチド（ＨＭＤＢ  ＩＤ番号；ＨＭＤＢ００２８９７５）
［Ｅグループ］
３−スルホ乳酸（Sulfolactic acid）（ＨＭＤＢ  ＩＤ番号；ＨＭＤＢ００６０１７６）、ジメチルスルホン（Dimethyl sulfone）（ＨＭＤＢ０００４９８３）、リボン酸（Ribonic acid）（ＨＭＤＢ  ＩＤ番号；ＨＭＤＢ００００８６７）、アラビノン酸（Arabinonic acid）（ＨＭＤＢ  ＩＤ番号；ＨＭＤＢ００００５３９）、キシロン酸（Xylonate）（ＨＭＤＢ  ＩＤ番号；ＨＭＤＢ００６０２５６）、Ｌ−ヒドロキシグルタル酸（Hydroxyglutaric acid）（ＨＭＤＢ  ＩＤ番号；ＨＭＤＢ００００６９４）、ヒドロキシクエン酸（Hydroxycitric acid）（ＨＭＤＢ  ＩＤ番号；ＨＭＤＢ００３１１５９）、グルカル酸（Glucaric acid）（ＨＭＤＢ  ＩＤ番号；ＨＭＤＢ００００６６３）、ガラクタル酸（Galactaric acid）（ＨＭＤＢ  ＩＤ番号；ＨＭＤＢ００００６３９）、オクテノイルカルニチン（Octenoylcarnitine）（ＨＭＤＢ  ＩＤ番号；ＨＭＤＢ００１３３２４）、ベタイン（Betaine）（ＨＭＤＢ  ＩＤ番号；ＨＭＤＢ０００００４３）、Ｌ−アセチルカルニチン（Acetylcarnitine）（ＨＭＤＢ  ＩＤ番号；ＨＭＤＢ００００２０１）、メチルマロニルカルニチン（Methylmalonylcarnitine）（ＨＭＤＢ  ＩＤ番号；ＨＭＤＢ００１３１３３）、Ｌ−カルニチン（Carnitine）（ＨＭＤＢ  ＩＤ番号；ＨＭＤＢ０００００６２）、N,N-ジエチルエタノールアミン（Diethylethanolamine）（ＨＭＤＢ  ＩＤ番号；ＨＭＤＢ００３３９７１）、Ｌ−シスチン（Cystine）（ＨＭＤＢ  ＩＤ番号；ＨＭＤＢ００００１９２）
［Ｆグループ］
ピログルタミン（Pyroglutamine）（ＨＭＤＢ  ＩＤ番号；ＨＭＤＢ０００００７９）、ＬＰＣ（１８：２）ｓｎ−１（ＨＭＤＢ  ＩＤ番号；ＨＭＤＢ００１０３８６）、ＬＰＥ（１８：２）（ＨＭＤＢ  ＩＤ番号；ＨＭＤＢ００１１５０７）、ＬＰＣ（１８：２）ｓｎ−２（ＨＭＤＢ  ＩＤ番号；ＨＭＤＢ００１０３８６）、アンドロステロン硫酸（Androsterone sulfate）（ＨＭＤＢ  ＩＤ番号；ＨＭＤＢ０００２７５９）、テストステロン硫酸（Testosterone sulfate）（ＨＭＤＢ  ＩＤ番号；ＨＭＤＢ０００２８３３）、フェノール硫酸（Phenol sulphate）（ＨＭＤＢ  ＩＤ番号；ＨＭＤＢ００６００１５）、乳酸（Lactic acid）（ＨＭＤＢ  ＩＤ番号；ＨＭＤＢ００００１９０）、Ｄ−グルコース（ＨＭＤＢ  ＩＤ番号；ＨＭＤＢ００００１２２）、ヒドロペルオキシリノール酸（Hydroperoxylinoleic acid）（ＨＭＤＢ  ＩＤ番号；ＨＭＤＢ０００４７０６）、ＰＣ（３４：２）（ＨＭＤＢ  ＩＤ番号；ＨＭＤＢ０００７８８０）、チオモルホリン（Thiomorpholine）−３−カルボン酸（carboxylate）（ＨＭＤＢ  ＩＤ番号；ＨＭＤＢ００５９６１１）、ＬＰＣ（１８：２）（ＨＭＤＢ  ＩＤ番号；ＨＭＤＢ００１０３８６）、Ｌ−カルニチン（Carnitine）（ＨＭＤＢ  ＩＤ番号；ＨＭＤＢ０００００６２）
［Ｇグループ］
メチルアデノシン（Methyladenosine）（ＨＭＤＢ  ＩＤ番号；ＨＭＤＢ０００３３３１）、スクシニルアデノシン（Succinyladenosine）（ＨＭＤＢ  ＩＤ番号；ＨＭＤＢ００００９１２）、ドデカノイルカルニチン（Dodecanoylcarnitine）（ＨＭＤＢ  ＩＤ番号；ＨＭＤＢ０００２２５０）、Ｏ−(７−カルボキシヘプタノイル［carboxyheptanoyl］)カルニチン、Ｏ−(８−カルボキシオクタノイル［carboxyoctanoyl］)カルニチン、Ｏ−(１１−カルボキシウンデカノイル［carboxyundecanoyl］)カルニチン、マレイン酸（Maleic acid）（ＨＭＤＢ  ＩＤ番号；ＨＭＤＢ００００１７６）、フマル酸（Fumaric acid）（ＨＭＤＢ００００１３４）
［Ｈグループ］
ジクロロメタン（Dichloromethane）（ＨＭＤＢ  ＩＤ番号；ＨＭＤＢ００３１５４８）、グルタチオン（ＧＳＨ；Glutathione）（ＨＭＤＢ  ＩＤ番号；ＨＭＤＢ００００１２５）、Ｌ−チロシン（Tyrosine）（ＨＭＤＢ  ＩＤ番号；ＨＭＤＢ００００１５８）、Ｌ−フェニルアラニン（Phenylalanine）（ＨＭＤＢ  ＩＤ番号；ＨＭＤＢ００００１５９）、３−メルカプト乳酸（Mercaptolactic acid）（ＨＭＤＢ  ＩＤ番号；ＨＭＤＢ０００２１２７）、ウリジン（Uridine）（ＨＭＤＢ  ＩＤ番号；ＨＭＤＢ００００２９６）、タウリン（Taurine）（ＨＭＤＢ  ＩＤ番号；ＨＭＤＢ００００２５１）、アミノ酪酸（Aminobutyric acid）（ＨＭＤＢ  ＩＤ番号；ＨＭＤＢ００００１１２）
［Ｉグループ］
ＬＰＣ（１８：０）（ＨＭＤＢ  ＩＤ番号；ＨＭＤＢ００１０３８４）、パルミチン酸メチル（Methyl palmitic acid）（ＨＭＤＢ  ＩＤ番号；ＨＭＤＢ００６１８５９）、ミリスチン酸イソプロピル（Isopropyl myristate）（ＨＭＤＢ  ＩＤ番号；ＨＭＤＢ００４０３９２）、ＬＰＥ（２２：６）（ＨＭＤＢ  ＩＤ番号；ＨＭＤＢ００１１４９６）、ＬＰＣ（１７：０）ｓｎ−１（ＨＭＤＢ  ＩＤ番号；ＨＭＤＢ００１２１０８）、ＬＰＣ（１４：０）（ＨＭＤＢ  ＩＤ番号；ＨＭＤＢ００１０３７９）、ＬＰＣ（１７：０）ｓｎ−２（ＨＭＤＢ  ＩＤ番号；ＨＭＤＢ００１２１０８）、ＬＰＣ（１５：０）（ＨＭＤＢ  ＩＤ番号；ＨＭＤＢ００１０３８１）、脂肪酸（例えば、オレイン酸、パルミチン酸、リノール酸、ステアリン酸、ドコサヘキサエン酸、ミリスチン酸［Myristic acid］、アラキドン酸、ステアリン酸、α−リノレン酸、γ−リノレン酸、ドコサペンタエン酸、エイコサテトラエン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサテトラエン酸、ステアリドン酸）、ｐ−クレゾール硫酸（Cresol sulfate）（ＨＭＤＢ  ＩＤ番号；ＨＭＤＢ００１１６３５）、インドキシル硫酸（Indoxyl sulfate）（ＨＭＤＢ  ＩＤ番号；ＨＭＤＢ００００６８２）、ヒドロキシ酪酸（Hydroxybutyric acid）（ＨＭＤＢ  ＩＤ番号；ＨＭＤＢ００００００８）、ヒドロキシ安息香酸（Hydroxybenzoic acid）（ＨＭＤＢ  ＩＤ番号；ＨＭＤＢ００００５００）、Ｎ-フェニルアセチルグルタミン（Phenylacetylglutamine）（ＨＭＤＢ  ＩＤ番号；ＨＭＤＢ０００６３４４）、アコニット酸（Aconitic acid）（ＨＭＤＢ  ＩＤ番号；ＨＭＤＢ０００００７２）、ピリドキサール（Pyridoxal）（ＨＭＤＢ  ＩＤ番号；ＨＭＤＢ０００１５４５）、ＬＰＣ（１６：０）（ＨＭＤＢ  ＩＤ番号；ＨＭＤＢ００１０３８２）、ＰＣ（３６：２）（ＨＭＤＢ  ＩＤ番号；ＨＭＤＢ０００８３３１）、ＰＣ（３８：４）（ＨＭＤＢ  ＩＤ番号；ＨＭＤＢ０００８６２６）、ＰＣ（４０：６）（ＨＭＤＢ  ＩＤ番号；ＨＭＤＢ０００８７２７）、プロリンベタイン（Proline Betaine）（ＨＭＤＢ  ＩＤ番号；ＨＭＤＢ０００４８２７）、セラミド（Ceramide）（ｄ１８:１／１６:０）（ＨＭＤＢ  ＩＤ番号；ＨＭＤＢ０００４９４９）
［Ｊグループ］
クエン酸（ＨＭＤＢ  ＩＤ番号；ＨＭＤＢ０００００９４）
【００１７】
また、本発明の視神経障害の発症リスク、又は発症の有無の判定用バイオマーカーとしては、上記［Ａグループ］〜［Ｊグループ］から選択される１又は２種以上の代謝物質からなる、視神経障害の発症リスク、又は発症の有無の判定（診断）用バイオマーカーであって、代謝物質が上記［Ａグループ］、［Ｂグループ］、又は［Ｅグループ］〜［Ｇグループ］の代謝物質である場合、視神経障害を発症するリスクが高い者、又は視神経障害を発症している者から採取された生体試料中の前記代謝物質の濃度が、視神経障害を発症しない対照者における前記代謝物質の濃度と比べ、高く、代謝物質が上記［Ｃグループ］、［Ｄグループ］、又は［Ｈグループ］〜［Ｊグループ］の代謝物質である場合、視神経障害を発症するリスクが高い者、又は視神経障害を発症している者から採取された生体試料中の前記代謝物質の濃度が、視神経障害を発症しない対照者における前記代謝物質の濃度と比べ、低い、前記判定用バイオマーカー（以下、「本件判定用バイオマーカー１」ということがある）であれば特に制限されない。
また、本発明の視神経障害の重症度の判定用バイオマーカーとしては、上記［Ａグループ］〜［Ｄグループ］から選択される１又は２種以上の代謝物質からなる、視神経障害の重症度の判定用バイオマーカーであって、代謝物質が上記［Ａグループ］又は［Ｄグループ］の代謝物質である場合、視神経障害の重症度が高い者から採取された生体試料中の前記代謝物質の濃度が、視神経障害の重症度が低い者における前記代謝物質の濃度と比べ、高く、代謝物質が上記［Ｂグループ］又は［Ｃグループ］の代謝物質である場合、視神経障害の重症度が高い者から採取された生体試料中の前記代謝物質の濃度が、視神経障害の重症度が低い者における前記代謝物質の濃度と比べ、低い、前記判定用バイオマーカー（以下、「本件判定用バイオマーカー２」ということがある）であれば特に制限されない（本件判定用バイオマーカー１と本件判定用バイオマーカー２を総称して、以下「本件判定用バイオマーカー」ということがある）。
【００１８】
また、本発明の視神経障害発症の予防剤、又は視神経障害の治療剤のスクリーニング方法としては、被検物質（被検薬剤）を投与した視神経障害非ヒト動物から採取された生体試料中の、上記［Ａグループ］〜［Ｊグループ］から選択される１又は２種以上の代謝物質の濃度（以下、「被検物質投与動物における代謝物質濃度」ということがある）を測定し、必要に応じて定量する工程（Ａ）；「被検物質投与動物における代謝物質濃度」を、前記被検物質を投与しない視神経障害非ヒト動物における前記代謝物質の濃度（以下、「被検物質未投与動物における代謝物質濃度」ということがある）と比較する工程（Ｂ）；工程（Ａ）で測定した代謝物質が［Ａグループ］、［Ｂグループ］、又は［Ｅグループ］〜［Ｇグループ］の代謝物質である場合、「被検物質投与動物における代謝物質濃度」が、「被検物質未投与動物における代謝物質濃度」よりも低いとき、前記被検物質は、視神経障害発症の予防、又は視神経障害の治療に有効であると評価し、工程（Ａ）で測定した代謝物質が［Ｃグループ］、［Ｄグループ］、又は［Ｈグループ］〜［Ｊグループ］の代謝物質である場合、「被検物質投与動物における代謝物質濃度」が、「被検物質未投与動物における代謝物質濃度」よりも高いとき、前記被検物質は、視神経障害発症の予防、又は視神経障害の治療に有効であると評価する工程（Ｃ）；の工程（Ａ）〜（Ｃ）を含む方法（以下、「本件スクリーニング方法」ということがある）であれば特に制限されない。
【００１９】
本発明において生体試料としては、例えば、涙、血液（例えば、血漿、血清）、眼房水（前房水又は後房水）、硝子体液、尿等の液性試料や、ＲＧＣを含む網膜、目ヤニ、硝子体等の非液性試料を挙げることができ、血液試料、尿試料、前房水試料、網膜試料が好ましい。
【００２０】
本件判定方法１における被験者としては、視神経障害の発症リスクを判定する場合、通常、視神経障害を発症しておらず、かつ、将来視神経障害を発症するか否かが不明な被験者を挙げることができ、また、視神経障害の発症の有無を判定する場合、通常、視神経障害を発症しているか否かが不明な被験者を挙げることができ、好ましくは、本発明の発症リスクの判定方法により、視神経障害を発症するリスクが高いと評価（判定）された者である。また、本件判定方法２における被験者としては、例えば、視神経障害を発症しているものの、視神経障害の重症度が不明な被験者を挙げることができる。
【００２１】
本件スクリーニング方法における視神経障害非ヒト動物としては、視神経障害を自然に発症した非ヒト動物であってもよいし、本願明細書の実施例の［ＯＮＣモデルマウスの作製］の項目に記載の方法に従って、視神経障害発症を誘導した非ヒト動物であってもよい。上記非ヒト動物としては、マウスの他、ラット、ハムスター、モルモット、サル、ウシ、ブタ、ウマ、ウサギ、ヒツジ、ヤギ、ネコ、イヌ等の非ヒト哺乳動物を例示することができる。
【００２２】
本発明において、「視神経障害を発症する」とは、網膜神経節細胞（retinal ganglion cell；ＲＧＣ）の軸索が、眼圧の上昇等の何らかの原因で損傷（変性）し、ＲＧＣの細胞死（アポトーシス）が誘発されることにより生じる、眼の機能的及び／又は構造的異常（例えば、ＲＧＣ軸索の損傷及びＲＧＣの細胞死）に起因する症候又は症状（例えば、視野狭窄、失明等）が現れた状態を意味する。視神経障害としては、具体的に、緑内障（原発緑内障［例えば、原発開放隅角緑内障［Primary open angle glaucoma；ＰＯＡＧ］、正常眼圧緑内障［Normal tension glaucoma；ＮＴＧ］、原発閉塞隅角緑内障］、続発緑内障、発達緑内障）、血流循環不全に起因する視神経障害、虚血性視神経障害、網膜血管閉塞症（網膜中心動脈閉塞症、網膜動脈分枝閉塞症、網膜中心静脈閉塞症、網膜静脈分枝閉塞症等）、網膜色素変性症、レーベル病、未熟児網膜症、網膜剥離、網膜色素上皮剥離、黄斑変性、糖尿病網膜症などの視神経障害を挙げることができる。かかる緑内障とは、通常眼圧を低下（下降）させることにより、上述の眼の機能的及び／又は構造的異常を改善若しくは抑制し得る視神経障害を意味する。なお、本発明の「視神経障害」には、遺伝性の視神経障害や非遺伝性（孤発性）の視神経障害が含まれる。
【００２３】
本件判定方法及び本件判定用バイオマーカーにおいて、生体試料中の本件代謝物質群の濃度は、採取された生体由来の試料（サンプル）を前処理し、本件代謝物質群を特異的に検出できる公知の方法、例えば、質量分析法を用いて測定することができる。かかる質量分析法とは、生体試料中に含まれる本件代謝物質群を、イオン源を用いて気体状のイオンとし（イオン化）、分析部において、真空中で運動させ電磁気力を用いて、或いは飛行時間差によりイオン化した生体試料を質量電荷比に応じて分離し、検出できる質量分析計を用いた測定方法のことをいう。上記イオン源を用いてイオン化する方法としては、例えば、電子イオン化（ＥＩ）法、化学イオン化（ＣＩ）法、電界脱離イオン化（ＦＤ）法、高速原子衝撃（ＦＡＢ）法、マトリックス支援レーザー脱離イオン化（ＭＡＬＤＩ）法、エレクトロスプレーイオン化（ＥＳＩ）法を挙げることができる。また、分析部において、各種イオン化法によりイオン化した本件代謝物質群は、アナライザーで質量に応じて分離される。かかるアナライザーとしては、例えば、磁場型質量分離装置（Ｓｅｃｔｏｒ ＭＳ）、四重極型質量分離装置（ＱＭＳ）、飛行時間型質量分離装置（ＴＯＦＭＳ）、フーリエ変換イオンサイクロトロン型質量分離装置（ＦＴ−ＩＣＲＭＳ）を挙げることができ、さらにこれらを組み合わせたものでもよい。また、２以上の質量分析法を組み合わせたタンデム型質量分析（ＭＳ／ＭＳ）を利用することができる。また、ガスクロマトグラフ（ＧＣ）、液体クロマトグラフ（ＬＣ）、高速液体クロマトグラフ（ＨＰＬＣ）、超高速液体クロマトグラフ（ＵＨＰＬＣ）により、生体試料中に含まれる本件代謝物質群を、夾雑物から分離・精製して分析することができる。かかるＬＣ、ＨＰＬＣ、及びＵＨＰＬＣとしては、陽イオン又は陰イオン交換クロマトグラフや、順相又は逆相クロマトグラフを挙げることができ、これらを組み合わせたものであってもよい。また、生体試料の切片上で直接質量分析を行うことにより、生体組織上の本件代謝物質群をイメージングＭＳ（ＩＭＳ）解析を行うこともできる。
【００２４】
本発明において、生体試料中の本件代謝物質群の濃度は、絶対値であっても、相対値であってもよく、相対値とする場合、例えば、濃度が既知の本件代謝物質群（内部標準）を基準とした相対値を挙げることができる。
【００２５】
本件判定方法及び本件判定用バイオマーカーにおいて、比較する両者（被験者と対照者；視神経障害を発症するリスクが高い者又は視神経障害を発症している者と、対照者；及び視神経障害の重症度が高い者と、視神経障害の重症度が低い者）における代謝物質の濃度は、互いに対応するものを用いる。このため、一方が、絶対値又は相対値である場合、もう一方も、それぞれ絶対値、相対値である。比較する両者のうち、比較対照における代謝物質の濃度は、本件判定方法を実施する際、調製した生体試料を基に、その都度測定してもよいが、予め測定したものを用いてもよい。また、生体試料は、比較する両者で実質的に同じ方法により調製されたものが好ましい。また、代謝物質の濃度の測定方法は、比較する両者で実質的に同じものが好ましい。
【００２６】
また、本件スクリーニング方法において、比較する両者（被検物質投与の視神経障害非ヒト動物と、被検物質未投与の視神経障害非ヒト動物）における代謝物質の濃度は、互いに対応するものを用いる。このため、一方が、絶対値又は相対値である場合、もう一方も、それぞれ絶対値、相対値である。比較する両者のうち、比較対照における代謝物質の濃度は、本件スクリーニング方法を実施する際、調製した生体試料を基に、その都度測定してもよいが、予め測定したものを用いてもよい。また、生体試料は、比較する両者で実質的に同じ方法により調製されたものが好ましい。また、代謝物質の濃度の測定方法は、比較する両者で実質的に同じものが好ましい。
【００２７】
本件判定方法１の工程（ｃ−１）において、工程（ａ−１）で測定した代謝物質が上記［Ａグループ］、［Ｂグループ］、又は［Ｅグループ］〜［Ｇグループ］の代謝物質である場合、「被験者における代謝物質濃度」が、「対照者における代謝物質濃度」よりも高いとき、被験者は、視神経障害を発症するリスクが高い、又は視神経障害を発症している可能性が高いと評価（判定）し、「被験者における代謝物質濃度」が、「対照者における代謝物質濃度」よりも高くないとき、被験者は、視神経障害を発症するリスクが低い、又は視神経障害を発症している可能性が低いと評価する。また、本件判定方法１の工程（ｃ−１）において、工程（ａ−１）で測定した代謝物質が上記［Ｃグループ］、［Ｄグループ］、又は［Ｈグループ］〜［Ｊグループ］の代謝物質である場合、「被験者における代謝物質濃度」が、「対照者における代謝物質濃度」よりも低いとき、被験者は、視神経障害を発症するリスクが高い、又は視神経障害を発症している可能性が高いと評価し、「被験者における代謝物質濃度」が、「対照者における代謝物質濃度」よりも低くないとき、被験者は、視神経障害を発症するリスクが低い、又は視神経障害を発症している可能性が低いと評価する。
【００２８】
「被験者における代謝物質濃度」が、「対照者における代謝物質濃度」よりも高いか否か、或いは低いか否かを評価（判定）するために、閾値（カットオフ値）は任意のものを設定することができ、かかる閾値としては、例えば、「対照者における代謝物質濃度」の平均値、「平均値＋標準偏差（ＳＤ）」、「平均値＋２ＳＤ」、「平均値＋３ＳＤ」、中央値、「中央値＋ＳＤ」、「中央値＋２ＳＤ」、「中央値＋３ＳＤ」等を挙げることができる。また、閾値は、感度（視神経障害をその後発症する者や、視神経障害を発症している者を、正しく陽性と判定できる割合）及び特異度（視神経障害をその後発症しない者や、視神経障害を発症していない者を、正しく陰性と判定できる割合）が高くなるように、「被験者における代謝物質濃度」のデータと、「対照者における代謝物質濃度」のデータを基に、統計解析ソフトウェアを用いたＲＯＣ（Receiver Operating Characteristic）曲線を用いて算出することもできる。
【００２９】
本明細書において、「視神経障害を発症しない対照者」とは、視神経障害を発症するリスクが低い又はほとんど無い、視神経障害を発症していない健常者を意味し、より具体的には、生体試料中の上記［Ａグループ］、［Ｂグループ］、及び［Ｅグループ］〜［Ｇグループ］から選択される１若しくは２種以上の代謝物質の濃度が、上記閾値（「被験者における代謝物質濃度」が、「対照者における代謝物質濃度」よりも高いか否か、或いは低いか否かを評価するための閾値）と比べ、低く；並びに／又は、生体試料中の上記［Ｃグループ］、［Ｄグループ］、及び［Ｈグループ］〜［Ｊグループ］から選択される１若しくは２種以上の代謝物質の濃度が、上記閾値と比べ、高い；視神経障害を発症していない健常者を意味する。なお、「視神経障害を発症しない対照者」としては、年齢、最良矯正視力（ＢＣＶＡ）、眼軸長等が被験者と類似した者（統計学的な有意差が無い状態の者）が好ましい。
【００３０】
本件判定方法２の工程（ｃ−２）において、工程（ａ−２）で測定した代謝物質が上記［Ａグループ］又は［Ｄグループ］の代謝物質である場合、「視神経障害被験者における代謝物質濃度」が、「視神経障害対照者における代謝物質濃度」よりも高いとき、被験者は、対照者よりも視神経障害が重症化（進行）している可能性が高いと評価（判定）し、「視神経障害被験者における代謝物質濃度」が、「視神経障害対照者における代謝物質濃度」よりも高くないとき、被験者は、対照者よりも視神経障害が重症化している可能性が低いと評価する。また、本件判定方法２の工程（ｃ−２）において、工程（ａ−２）で測定した代謝物質が［Ｂグループ］又は［Ｃグループ］の代謝物質である場合、「視神経障害被験者における代謝物質濃度」が、「視神経障害対照者における代謝物質濃度」よりも低いとき、被験者は、対照者よりも視神経障害が重症化（進行）している可能性が高いと評価し、「視神経障害被験者における代謝物質濃度」が、「視神経障害対照者における代謝物質濃度」よりも低くないとき、被験者は、対照者よりも視神経障害が重症化している可能性が低いと評価する。
【００３１】
「視神経障害被験者における代謝物質濃度」が、「視神経障害対照者における代謝物質濃度」よりも高いか否か、或いは低いか否かを評価（判定）するために、閾値（カットオフ値）は任意のものを設定することができ、かかる閾値としては、例えば、「視神経障害対照者における代謝物質濃度」の平均値、「平均値＋標準偏差（ＳＤ）」、「平均値＋２ＳＤ」、「平均値＋３ＳＤ」、中央値、「中央値＋ＳＤ」、「中央値＋２ＳＤ」、「中央値＋３ＳＤ」等を挙げることができる。また、閾値は、感度（視神経障害が重症化している者を、正しく陽性と判定できる割合）及び特異度（視神経障害が重症化していない者を、正しく陰性と判定できる割合）が高くなるように、「視神経障害被験者における代謝物質濃度」のデータと、「視神経障害対照者における代謝物質濃度」のデータを基に、統計解析ソフトウェアを用いたＲＯＣ曲線を用いて算出することもできる。
【００３２】
上記「視神経障害を発症している対照者」としては、年齢、最良矯正視力（ＢＣＶＡ）、眼軸長等が被験者と類似した他人（統計学的な有意差が無い状態の他人）であってもよいが、視神経障害を発症している被験者と同一人が好ましい。この場合、「視神経障害対照者における代謝物質濃度」は、視神経障害を発症している被験者から生体試料を採取した時期よりも過去に、当該被験者から採取された生体試料における代謝物質の濃度である。
【００３３】
本件スクリーニング方法の工程（Ｃ）において、工程（Ａ）で測定した代謝物質が［Ａグループ］、［Ｂグループ］、又は［Ｅグループ］〜［Ｇグループ］の代謝物質である場合、「被検物質投与動物における代謝物質濃度」が、「被検物質未投与動物における代謝物質濃度」よりも低いとき、被検物質は、視神経障害発症の予防、又は視神経障害の治療に有効であると評価（判定）し、「被検物質投与動物における代謝物質濃度」が、「被検物質未投与動物における代謝物質濃度」よりも低くないとき、被検物質は、視神経障害発症の予防、又は視神経障害の治療に有効ではないと評価（判定）する。また、本件スクリーニング方法の工程（Ｃ）において、工程（Ａ）で測定した代謝物質が［Ｃグループ］、［Ｄグループ］、又は［Ｈグループ］〜［Ｊグループ］の代謝物質である場合、「被検物質投与動物における代謝物質濃度」が、「被検物質未投与動物における代謝物質濃度」よりも高いとき、被検物質は、視神経障害発症の予防、又は視神経障害の治療に有効であると評価（判定）し、「被検物質投与動物における代謝物質濃度」が、「被検物質未投与動物における代謝物質濃度」よりも高くないとき、被検物質は、視神経障害発症の予防、又は視神経障害の治療に有効ではないと評価（判定）する。
【００３４】
「被検物質投与動物における代謝物質濃度」が、「被検物質未投与動物における代謝物質濃度」よりも低いか否か、或いは高いか否かを評価（判定）するために、閾値は任意のものを設定することができ、かかる閾値としては、例えば、「被検物質未投与動物における代謝物質濃度」の平均値、「平均値＋標準偏差（ＳＤ）」、「平均値＋２ＳＤ」、「平均値＋３ＳＤ」、中央値、「中央値＋ＳＤ」、「中央値＋２ＳＤ」、「中央値＋３ＳＤ」等を挙げることができる。また、閾値は、感度（視神経障害発症の予防、又は視神経障害の治療に有効である物質を、正しく陽性と判定できる割合）及び特異度（視神経障害発症の予防、又は視神経障害の治療に有効ではない物質を、正しく陰性と判定できる割合）が高くなるように、「被検物質投与動物における代謝物質濃度」のデータと、「被検物質未投与動物における代謝物質濃度」のデータを基に、統計解析ソフトウェアを用いたＲＯＣ曲線を用いて算出することもできる。
【００３５】
本発明において、上記［Ａグループ］〜［Ｊグループ］から選択される１又は２種以上の代謝物質としては、例えば、上記［Ａグループ］〜［Ｊグループ］から選択される１種、２種、３種、４種、５種、６種、７種、８種、９種、１０種、１１種、１２種、１３種、１４種、１５種、１６種、１７種、１８種、１９種、２０種、２１種、２２種、２３種、２４種、２５種、２６種、２７種、２８種、２９種、３０種、３１種、３２種、３３種、３４種、３５種、３６種、３７種、３８種、３９種、４０種、４１種、４２種、４３種、４４種、４５種、４６種、４７種、４８種、４９種、５０種、５１種、５２種、５３種、５４種、５５種、５６種、５７種、５８種、５９種、６０種、６１種、６２種、６３種、６４種、６５種、６６種、６７種、６８種、６９種、７０種、７１種、７２種、７３種、７４種、７５種、７６種、７７種、７８種、７９種、８０種、８１種、８２種、８３種、８４種、８５種、８６種、８７種、８８種、８９種、９０種、９１種、９２種、９３種、又は９４種の代謝物質を挙げることができ、また、上記［Ａグループ］〜［Ｄグループ］から選択される１又は２種以上の代謝物質としては、例えば、上記［Ａグループ］〜［Ｄグループ］から選択される１種、２種、３種、４種、５種、６種、７種、８種、９種、１０種、１１種、１２種、１３種、１４種、１５種、１６種、１７種、１８種、１９種、２０種、２１種、２２種、２３種、２４種、２５種、２６種、２７種、又は２８種の代謝物質を挙げることができ、少なくとも脂肪酸又はＬ−アセチルカルニチンを含むものが好ましく、かかる脂肪酸としては、オレイン酸、パルミチン酸、リノール酸、ステアリン酸、ドコサヘキサエン酸、ミリスチン酸、及びアラキドン酸からなる群から選択される１又は２種以上の脂肪酸を好適に例示することができる。また、Ｌ−アセチルカルニチンを含む代謝物質としては、具体的には、Ｌ−アセチルカルニチンの１種；Ｌ−アセチルカルニチンとＰＣ（３８：７）との２種の組合せ；Ｌ−アセチルカルニチンとＰＧ（４０：６）との２種の組合せ；Ｌ−アセチルカルニチンと、ＰＣ（３８：７）と、ＰＧ（４０：６）との３種の組合せを挙げることができる。
【００３６】
以下、実施例により本発明をより具体的に説明するが、本発明の技術的範囲はこれらの例示に限定されるものではない。
【実施例１】
【００３７】
１．本件代謝物質群は、視神経障害の判定用バイオマーカーとして有用であることの確認１
視神経障害の判定用バイオマーカーを同定するために、ＯＮＣモデルマウスの網膜試料を用いて質量分析法を行った。
【００３８】
１−１  材料及び方法
［モデル動物］
本実施例のモデル動物として、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス（雄、８〜１２週齢；日本クレア社製）を用いた。全てのマウスの扱い及び実験は、米国視覚眼科研究学会（ＡＲＶＯ）のStatement Guidelines for the Use of Animals in Ophthalmic and Vision Researchと、東北大学大学院医学系研究科及び動物実験専門委員会のガイドラインに従って行った。
【００３９】
［ＯＮＣモデルマウスの作製］
Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスに、ケタミン（１００ｍｇ／ｋｇ）とキシラジン（９ｍｇ／ｋｇ）の混合液を筋肉内投与し、文献「Ryu, M. et al. J Neurosci Res 90, 802-815, doi:10.1002/jnr.22800 (2012).」や文献「Fujita, K. et al. Sci Rep 5, 18141, doi:10.1038/srep18141 (2015).」に記載の方法に従って、視神経挫滅（optic nerve crush；ＯＮＣ）による軸索損傷を行い、ＯＮＣモデルマウスを作製した。要約すると、右眼の視神経を露出させ、眼球の約２ｍｍ後部の視神経を鑷子で５秒間挫滅した（ＯＮＣ群：ｎ＝１６）。手術後、抗生物質（レボフロキサシン）含有軟膏を塗布し、マウスを加温パット上で維持した。なお、コントロールとして視神経を挫滅しないで処理を行ったＣ５７ＢＬ／６マウスを用いた（ＣＴ群：ｎ＝８）。ＣＴ群から単離した網膜と、ＯＮＣ処理後２日目、４日目、及び７日目（それぞれＯＮＣ群２日目：ｎ＝８、ＯＮＣ群４日目：ｎ＝４、及びＯＮＣ群７日目：ｎ＝４）に、各群から単離した網膜とを、以下の項目［間接蛍光抗体法］、［ウエスタンブロッティング法］、及び［ＬＣ−ＭＳ用生体試料の調製］に記載の方法に用いた。
【００４０】
［間接蛍光抗体法］
マウス網膜を、文献「Sato, K. et al, J Neurosci. 2013, 33(44):17458-68.」に記載の方法に従って、４％パラホルムアルデヒド溶液中で固定処理した後、凍結切片を作製し、抗ＲＢＰＭＳ抗体を用いた間接蛍光抗体法を行った。要約すると、網膜の凍結切片を、ラビット抗ＲＢＰＭＳ抗体（１／２００倍希釈して使用、Abcam社製）を含む溶液中で１次抗体反応処理した後、Alexa Fluor 488がコンジュゲートした２次抗体（goat anti-rabbit IgG Alexa Fluor 488、Abcam社製）を含む溶液中で２次抗体反応処理を行った。その後、ＤＡＰＩ（4',6-diamidino-2-phenylindole）を含む封入剤（Vectashield社製）で封入し、間接蛍光抗体法用の試料を作製した。蛍光画像は、蛍光顕微鏡（「Axiovert 200、Carl Zeiss社製」、又は「BZ-9000、Keyence社製」）を用いて取得した。
【００４１】
［ウエスタンブロッティング法］
マウス網膜を、文献「Sato, K. et al, J Neurosci. 2013, 33(44):17458-68.」に記載の方法に従って、ホモジナイズし、抽出したタンパク質濃度を測定した後、網膜タンパク質をＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分離し、ＰＶＤＦメンブレンに転写した。かかるメンブレンを、１％スキムミルクを含むＴｗ−ＰＢＳ（０．０５％Tween 20を含むＰＢＳ［Phosphate buffered saline］）溶液中で１時間、室温でブロッキング処理を行った後、ラビット抗ＲＢＰＭＳ抗体（１／１０００倍希釈して使用、Abcam社製）を含むＴｗ−ＰＢＳ溶液中で一晩、４℃で１次抗体反応処理を行った。その後、メンブレンをＴｗ−ＰＢＳ溶液で洗浄し、ＨＲＰ（Horseradish peroxidase）がコンジュゲートした２次抗体（１／５０００倍希釈して使用、HRP-conjugated donkey anti-rabbit IgG［Sigma社製］）を含むＴｗ−ＰＢＳ溶液中で１時間、室温で２次抗体反応処理を行い、Ｔｗ−ＰＢＳ溶液で洗浄した後、発行検出試薬（ECL prime、GE Healthcare社製）を用いて、ＲＢＰＭＳタンパク質由来のシグナルを検出した。また、メンブレンをRestore Western Blot Stripping Buffer（Thermo Scientific社製）で処理することにより１次抗体及び２次抗体を除去した後、内部標準としてマウス抗β−アクチン抗体（１／５０００倍希釈して使用、Sigma社製）を用いたウエスタンブロッティング法を同様に行った。
【００４２】
［ＬＣ−ＭＳ用試薬］
ＬＣ−ＭＳ用のメタノール、クロロフォルム、及びアセトニトリルは、関東化学社より購入し、ＬＣ−ＭＳ用のギ酸アンモニウム（１モル／Ｌ１）及びギ酸は、和光純薬工業社より購入した。また、ＬＣ−ＭＳ用の化学標準物質は、全て市販品を用いた。具体的には、化学標準物質ホスファチジルコリン（ＰＣ）は、Avanti Polar Lipids社より購入し、スペルミン、カルニチン、及びα−シアノ−４−ヒドロキシケイ皮酸（α-cyano-4-hydroxycinnamic acid；ＣＨＣＡ）を含む化学標準物質は、Sigma-Aldrich社より購入し、９−アミノアクリジン（9-Aminoacridine；９−ＡＡ）は、メルク社より購入した。
【００４３】
［ＬＣ−ＭＳ用生体試料の調製］
マウスの網膜を２．０ｍＬチューブに入れ、凍結保存した。解凍後の網膜に、２００μＬの０．１％ギ酸含有メタノールを添加し、ビーズ式ホモジナイザー（Precellys）を用いたLysis and Homogenization System（５０００×ｒｐｍ、１５秒、２Ｚｒビーズ）（Bertin社製）により、ホモジナイズした。さらに、超音波洗浄機で１０分間ホモジナイズした後、１６４００ｇで２０分、４℃で遠心分離し、上清を回収した後、Sirocco除タンパク９６ウェルプレート（Waters社製）を通過させ、その後１００μＬの０．１％ギ酸含有メタノールで３回洗浄した。各試料３０μＬを、９６ウェルプレートから回収し、１５ｍＬチューブ中で混合することにより、品質管理研究（study quality control；ＳＱＣ）のＬＣ−ＭＳ用網膜試料を調製した。かかるＳＱＣを基に、希釈液（０．１％ギ酸含有５０％メタノール）を用いて、４種類の希釈品質管理（dilution quality control；ｄＱＣ）、すなわち、２倍希釈（ｄ２ＱＣ）、４倍希釈ＱＣ（ｄ４ＱＣ）、８倍希釈ＱＣ（ｄ８ＱＣ）、及び１６倍希釈ＱＣ（ｄ１６ＱＣ）を調製した。
【００４４】
［ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法］
２種類のＬＣ−ＭＳ、すなわち、逆相（Ｃ１８）カラムを装備した超高速液体クロマトグラフ−四重極飛行時間型質量分析計（ultra high performance liquid chromatograph-quadrupole time of flight mass spectrometry（ＵＨＰＬＣ−ＱＴＯＦ／ＭＳ）と、順相（hydrophilic interaction chromatography；ＨＩＬＩＣ）カラムを装備した液体クロマトグラフ−電場型フーリエ変換質量分析計（liquid chromatograph-Fourier transform type mass spectrometry；ＬＣ−ＦＴ／ＭＳ）とを用いた質量分析法を、文献「Saigusa, D. et al. PLoS One 11, e0160555, doi:10.1371/journal.pone.0160555 (2016).」に記載の方法に従って行った。なお、Ｃ１８カラムを装備したＵＨＰＬＣ−ＱＴＯＦ／ＭＳを用いた質量分析法には、上記ＳＱＣを使用し、ＨＩＬＩＣカラムを装備したＬＣ−ＦＴ／ＭＳを用いた質量分析法には、上記４種類のｄＱＣを使用した。
【００４５】
［データ処理］
上記２種類のＬＣ−ＭＳを用いて、それぞれ陽イオンモード及び陰イオンモードの両方で得られた全てのデータは、ピークピッキング、アライメント、及び正規化（normalization）のために、Progenesis QIソフトウェア（Nonlinear Dynamics社製）で処理し、保持時間（retention times；ＲＴ）（溶出時間ともいう）及び質量電荷比（ｍ／ｚ）対にピーク強度を産出した（文献「Saigusa, D. et al. PLoS One 11, e0160555, doi:10.1371/journal.pone.0160555 (2016).」参照）。
【００４６】
［階層的クラスタリング解析］
ＣＴ群及び３種類のＯＮＣ群（ＯＮＣ群２日目、ＯＮＣ群４日目、及びＯＮＣ群７日目）について、各代謝物質のＺスコアのリスト用にヒートマップを作成した。Ｚスコアは、Ｒプログラム（バージョン3.2.0）のgplotsパッケージを使用し、各群において、変動係数（ＣＶ）が３０％より低いときに、Kruskal-Wallis test（ｐ＜０．００４）により選択した。代謝産物の系統樹は、完全連結クラスタリング法と、amapパッケージでの相関距離測定により作成した（図１Ｂ参照）。色のついたスケールバー（図１Ａ参照）は、青（左側）から、白（中央）、赤（右側）へと変化し、それぞれ、低度、中程度、高度の強度の代謝物質を示す。
【００４７】
［統計学的解析］
同定された代謝物質の強度は、多変数分析のために、SIMCA 13.0ソフトウェア (Umetrcxs社製)にインポートし、それらの相対量を、主成分分析（principal component analysis；ＰＣＡ）及び直交部分最小二乗判別分析（orthogonal partial least square-discriminant analysis；ＯＰＬＳ−ＤＡ）で評価した。Ｐ値は、Student’s t-test、Welch’s t-test、Wilcoxon rank sum test、Tukey-Kramer test、又はSteel-Dwass testで計算した。
【００４８】
［ＩＭＳ用生体試料の調製］
ＯＮＣ処理後２日目に、マウスの網膜組織の８μｍ切片を、クリオスタット（ＣＭ３０５０Ｓ；Leica Microsystems社製）を用いて作製した後、インジウムスズ酸化物スライドグラス(松浪硝子工業社製)上に置き、シリカゲルを含む５０ｍＬプラスチックチューブに入れ、マトリックスを塗布した。その後、６６０ｍｇのＣＨＣＡ又は９−ＡＡを、自動前処理装置iMLayer（島津製作所社製）を用いて、１．４μｍの厚さとなるようにスライドグラス上に付着さた後、ろ紙を備えたボックスに入れ、３５０μＬの水／メタノール＝９５／５（ｖ/ｖ）に浸透させた。その後、網膜試料を含むスライドグラスを、ＣＨＣＡを付着させたものについては８５℃で３分間、９−ＡＡを付着させたものについては４０℃で３分間インキュベートし、デシケーターで３０分乾燥することにより、ＩＭＳ用網膜試料を調製した。
【００４９】
［ＩＭＳを用いた質量分析法］
乾燥処理後のＩＭＳ用網膜試料を、直ぐにＭＡＬＤＩ−ＩＭＳ（島津製作所社製）を用い、陽イオンモード及び陰イオンモードで質量分析法を行った。得られたデータを、imaging MS solutionソフトウェア（島津製作所社製）を用いて画像処理した。なお、レーザー照射に暴露された網膜試料の部位は、網膜試料をＨＥ染色後、光学顕微鏡による観察で特定した。
【００５０】
１−２  結果
［抗ＲＢＰＭＳ抗体を用いた間接蛍光抗体法及びウエスタンブロッティング法］
ＯＮＣモデルマウスにおいて、視神経障害が生じていることを確認するために、ＣＴ群、及び３種類のＯＮＣ群（ＯＮＣ群２日目、ＯＮＣ群４日目、及びＯＮＣ群７日目）について、網膜神経節細胞マーカーの１つであるＲＢＰＭＳを発現する網膜細胞（ＲＢＰＭＳ陽性網膜細胞）数（図１Ｂ参照）と、網膜試料中のＲＢＰＭＳ発現量（図１Ａ及びＣ参照）を解析した。その結果、ＯＮＣ群２日目においては、ＣＴ群とほぼ同レベルのＲＢＰＭＳが検出されたのに対して、ＯＮＣ群４日目においては、ＣＴ群よりもＲＢＰＭＳの発現レベルが低下し、ＯＮＣ群７日目においては、さらにその低下レベルが増加することが示された（図１参照）。
この結果は、ＯＮＣ群２日目は、発症後極初期を示し、それ以降は時間の経過とともに、視神経障害が重症化していることを示している。
【００５１】
［ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法］
次に、ＣＴ群と、上記３種類のＯＮＣ群との間で、網膜中の濃度が変動する代謝物質を、２種類のＬＣ−ＭＳ（ＵＨＰＬＣ−ＱＴＯＦ／ＭＳ及びＬＣ−ＦＴ／ＭＳ）を用いた質量分析法により解析したところ、２８種類の本件代謝物質群が同定された（表１参照）。これら代謝物質について、階層的クラスタリング解析を行ったところ、４種類のグループ（Ａ〜Ｄグループ）に分類された（表１及び図２Ｂ参照）。
【００５２】
【表１】
2019105639.tif 000002
【００５３】
網膜中のグループＡ及びＢの代謝物質濃度は、ＣＴ群よりもＯＮＣ群の方が高く、特に、グループＡの代謝物質の場合、ＯＮＣ処理後４日目にかけて高くなり（図２Ｂ、３、及び４参照）、グループＢの代謝物質の場合、ＯＮＣ処理後２日間高くなることが示された（図２Ｂ、５、及び６参照）。一方、網膜中のグループＣ及びＤの代謝物質濃度は、ＣＴ群よりもＯＮＣ群の方が低く、特に、グループＣの代謝物質の場合、ＯＮＣ処理後７日間低くなり（図２Ｂ、７、及び８参照）、グループＤの代謝物質の場合、ＯＮＣ処理後２日目では低くなるものの、その後７日目にかけて高くなることが示された（図２Ｂ、９、及び１０参照）。
これらの結果は、ＲＧＣ軸索の損傷に起因する視神経障害の発症リスク（ＯＮＣ処理後２日目）は、網膜中のグループＡ及びＢの代謝物質濃度が正常レベル（ＣＴ群）と比べ高くなると、高くなり、網膜中のグループＣ及びＤの代謝物質濃度が正常レベルと比べ低くなると、高くなることを示している。また、ＲＧＣ軸索の損傷に起因する視神経障害の重症度は、網膜中のグループＡ及びＤの代謝物質濃度がより高くなるにしたがって高くなり、網膜中のグループＢ及びＣの代謝物質濃度が低下するにしたがって高くなることを示している。
【００５４】
［ＩＭＳ解析］
次に、ＩＭＳを用いた質量分析法により、網膜切片中の本件代謝物質群の分布を解析した。本件代謝物質群のうち、グループＡの代謝物質（Ｌ−アセチルカルチニン）、及びグループＢの代謝物質（ＰＣ［３８：７］及びＰＧ［４０：６］）を代表例として解析したところ、いずれの代謝物質についても、ＣＴ群よりもＯＮＣ群の方が多く分布することが示された（図１１参照）。これらの結果は、ＬＣ−ＭＳを用いた質量分析法により得られた結果を支持している。
【実施例２】
【００５５】
２．本件代謝物質群は、視神経障害の判定用バイオマーカーとして有用であることの確認２
本件代謝物質群は、視神経障害の判定用バイオマーカーとして有用であることが、ＯＮＣモデルマウスを用いた解析により示されたので、次に、緑内障患者の前房水試料を用いた質量分析法による解析を行った。具体的には、緑内障患者３４名（緑内障群；表２参照）、及び健常者３７名（健常群；表２参照）のそれぞれについて、前房水を採取し、メタノール溶液（ぎ酸を０．１％含む）で３倍に希釈した後、遠心分離によりタンパク質を除去後、超純水（ぎ酸を０．１％含む）により２倍希釈することでＬＣ−ＭＳ用前房水試料を調製し、Ｃ１８カラムを装備したＵＨＰＬＣ−ＱＴＯＦ／ＭＳを用いた質量分析法、又はＨＩＬＩＣカラムを装備したLC-FT/MSを用いた質量分析法（文献「Saigusa, D. et al. PLoS One 11, e0160555, doi:10.1371/journal.pone.0160555 (2016).」参照）により、本件代謝物質群（Ｌ−アセチルカルチニン）の濃度を測定した。また、データ処理は、実施例１の［データ処理］の項目に記載の方法に従って行った。
【００５６】
その結果、緑内障群における、前房水試料中のＬ−アセチルカルチニンの濃度は、４１０１±１３０１（平均値±標準偏差）であり、健常群における値（３１０２±７１０）と比べ、１．３倍増加し、有意差（Ｐ＝０．０００１３５２）が認められた（図１２参照）。この結果は、視神経障害の発症リスクや視神経障害の重症度の判定用バイオマーカーとして有用である、［Ａグループ］〜［Ｄグループ］の本件代謝物質群は、視神経障害（例えば緑内障）の発症の有無の判定用バイオマーカーとしても有用であることを示している。
【００５７】
【表２】
2019105639.tif 000003
【実施例３】
【００５８】
３．本件代謝物質群は、視神経障害の判定用バイオマーカーとして有用であることの確認３
次に、実施例２の緑内障群及び健常者群の間で、Ｌ−アセチルカルチニン以外にも濃度変動する代謝物質について解析を行った。具体的には、正常眼圧緑内障（ＮＴＧ）群及び原発開放隅角緑内障（ＰＯＡＧ）群からなる緑内障群（表３参照）と、健常者群のそれぞれから、前房水試料と、血漿試料及び尿試料とを定法に従って採取し、Ｃ１８カラムを装備したＵＨＰＬＣ−ＱＴＯＦ／ＭＳを用いた質量分析法、又はＨＩＬＩＣカラムを装備したLC-FT/MSを用いた質量分析法（文献「Saigusa, D. et al. PLoS One 11, e0160555, doi:10.1371/journal.pone.0160555 (2016).」参照）を行い、実施例１の［データ処理］の項目に記載の方法に従ってデータ処理を行い、代謝物質の濃度を測定した。
【００５９】
その結果、前房水試料中において、１６種類の本件代謝物質群（３−スルホ酢酸、ジメチルスルホン、リボン酸、アラビノン酸、キシロン酸、Ｌ−ヒドロキシグルタル酸、ヒドロキシクエン酸、グルカル酸、ガラクタル酸、オクテノイルカルニチン、ベタイン、Ｌ−アセチルカルニチン、メチルマロニルカルニチン、Ｌ−カルニチン、N,N-ジエチルエタノールアミン、及びＬ−シスチン）は、健常群と比べ、緑内障群（すなわち、ＮＴＧ群及び／又はＰＯＡＧ群）の方が増加することが示された（表４及び図１３〜２５参照）。
【００６０】
また、前房水試料中において、８種類の本件代謝物質群（ジクロロメタン、グルタチオン、Ｌ−チロシン、Ｌ−フェニルアラニン、３−メルカプト乳酸、ウリジン、タウリン、及びアミノ酪酸）は、健常群と比べ、緑内障群（すなわち、ＮＴＧ群及び／又はＰＯＡＧ群）の方が減少することが示された（表５及び図２６〜３３参照）。
【００６１】
また、血漿試料中において、１４種類の本件代謝物質群（ピログルタミン、ＬＰＣ（１８：２）ｓｎ−１、ＬＰＥ（１８：２）、ＬＰＣ（１８：２）ｓｎ−２、アンドロステロン硫酸、テストステロン硫酸、フェノール硫酸、乳酸、Ｄ−グルコース、ヒドロペルオキシリノール酸、ＰＣ（３４：２）、チオモルホリン−３−カルボン酸、ＬＰＣ（１８：２）、及びＬ−カルニチン）は、健常群と比べ、緑内障群（すなわち、ＮＴＧ群及び／又はＰＯＡＧ群）の方が増加することが示された（表６及び図３４〜４７参照）。
【００６２】
また、血漿試料中において、２９種類の本件代謝物質群（ＬＰＣ（１８：０）、パルミチン酸メチル、ミリスチン酸イソプロピル、ＬＰＥ（２２：６）、ＬＰＣ（１７：０）ｓｎ−１、ＬＰＣ（１４：０）、ＬＰＣ（１７：０）ｓｎ−２、ＬＰＣ（１５：０）、オレイン酸、ｐ−クレゾール硫酸、パルミチン酸、リノール酸、ステアリン酸、インドキシル硫酸、ヒドロキシ酪酸、ドコサヘキサエン酸、ミリスチン酸、ヒドロキシ安息香酸、Ｎ-フェニルアセチルグルタミン、アラキドン酸、アコニット酸、ピリドキサール、ＬＰＣ（１６：０）、ＰＣ（３６：２）、ＰＣ（３８：４）、ＰＣ（４０：６）、プロリンベタイン、及びセラミド（ｄ１８:１／１６:０））は、健常群と比べ、緑内障群（すなわち、ＮＴＧ群及び／又はＰＯＡＧ群）の方が減少することが示された（表７及び図４８〜７４参照）。
【００６３】
また、尿試料中において、８種類の本件代謝物質群（メチルアデノシン、スクシニルアデノシン、ドデカノイルカルニチン、Ｏ−(７−カルボキシヘプタノイル)カルニチン、Ｏ−(８−カルボキシオクタノイル)カルニチン）、Ｏ−(１１−カルボキシウンデカノイル)カルニチン、マレイン酸、及びフマル酸）は、健常群と比べ、緑内障群（すなわち、ＮＴＧ群及び／又はＰＯＡＧ群）の方が増加することが示された（表８及び図７５〜８１参照）。
【００６４】
また、尿試料中において、１種類の本件代謝物質群（クエン酸）は、健常群と比べ、緑内障群（すなわち、ＮＴＧ群及び／又はＰＯＡＧ群）の方が減少することが示された（表９及び図８２参照）。
【００６５】
以上の結果は、［Ｅグループ］〜［Ｊグループ］の本件代謝物質群は、視神経障害（例えば、ＮＴＧ、ＰＯＡＧ等の緑内障）の発症の有無の判定用バイオマーカーとして有用であることを示している。
【００６６】
【表３】
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【００６７】
【表４】
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【００６８】
【表５】
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【００６９】
【表６】
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【００７０】
【表７】
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【００７１】
【表８】
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【００７２】
【表９】
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【産業上の利用可能性】
【００７３】
本発明の判定方法又は判定用バイオマーカーによると、視神経障害発症リスク及び発症の有無や、視神経障害の重症度を精度よく判定することができるため、視神経障害が発症する前や発症後初期段階で適切な治療を受けることができ、視神経障害による失明者数を減少できることが期待される。また、本発明のスクリーニング方法は、視神経障害の予防（保護）又は治療剤（薬）の開発に資するものである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６】
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【図３７】
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【図３８】
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【図３９】
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【図４０】
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【図４１】
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【図４２】
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【図４３】
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【図４４】
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【図４５】
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【図４６】
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【図４７】
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【図４８】
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【図４９】
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【図５０】
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【図５１】
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【図５２】
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【図５３】
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【図５４】
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【図５５】
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【図５６】
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【図５７】
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【図５８】
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【図５９】
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【図６０】
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【図６１】
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【図６２】
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【図６３】
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【図６４】
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【図６５】
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【図６６】
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【図６７】
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【図６８】
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【図６９】
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【図７０】
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【図７１】
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【図７２】
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【図７３】
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【図７４】
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【図７５】
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【図７６】
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【図７７】
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【図７８】
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【図７９】
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【図８０】
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【図８１】
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【図８２】
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