(57)【要約】【課題】１−（２，２−ジヒドロキシメチル−３−［１８Ｆ］フルオロプロピル）−２−ニトロイミダゾール（［１８Ｆ］ＤｉＦＡ）の臨床適用可能な放射性フッ素標識体をより簡便な方法で製造する技術を提供する。【解決手段】［１８Ｆ］ＤｉＦＡ又はその塩を有効成分として含有する放射性医薬組成物の製造方法であって、［１８Ｆ］ＤｉＦＡの標識前駆体化合物から［１８Ｆ］ＤｉＦＡの粗生成物を得る合成工程と、前記放射性フッ素標識化合物を精製する精製工程と、を含み、前記精製工程は、二種以上の異なる逆相系固相抽出カートリッジを用いて放射性フッ素標識化合物を精製することを含む放射性医薬組成物の製造方法。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式（１）で表される放射性フッ素標識化合物又はその塩を有効成分として含有する放射性医薬組成物の製造方法であって、
下記式（２）で表される標識前駆体化合物から前記放射性フッ素標識化合物の粗生成物を得る合成工程と、
前記放射性フッ素標識化合物を精製する精製工程と、
を含み、
前記精製工程は、異なる二種以上の逆相系固相抽出カートリッジを用いて前記放射性フッ素標識化合物を精製することを含む、放射性医薬組成物の製造方法。
【化１】
2019156717.tif 000008
〔式中、Ｘは、放射性フッ素原子である。〕
【化２】
2019156717.tif 000009
〔式中、Ｐ１、Ｐ２はヒドロキシ基の保護基であり、Ｌは、脱離基である。〕 
【請求項２】
前記精製工程は、
逆相系固相抽出カートリッジを用いて、前記放射性フッ素標識化合物よりも疎水性の低い不純物を除去する第一の精製工程と、
前記第一の精製工程で用いた前記固相抽出カートリッジとは異なる逆相系固相抽出カートリッジを用いて、前記放射性フッ素標識化合物よりも疎水性の高い不純物を除去する第二の精製工程と
を含む、請求項１に記載の放射性医薬組成物の製造方法。 
【請求項３】
前記第一の精製工程で用いる前記逆相系固相抽出カートリッジが、ポリ（ジビニルベンゼン−コ−Ｎ−ビニルピロリドン）ポリマーが充填された逆相系固相抽出カートリッジであり、
前記第二の精製工程で用いる前記逆相系固相抽出カートリッジが、オクタデシルシリル化シリカゲルが充填された逆相系固相抽出カートリッジである、請求項２に記載の放射性医薬組成物の製造方法。 
【請求項４】
前記第一の精製工程は、
前記逆相系固相抽出カートリッジに前記放射性フッ素標識化合物を吸着させる工程と、
前記放射性フッ素標識化合物が吸着した前記逆相系固相抽出カートリッジを洗浄液で洗浄する工程と、
前記逆相系固相抽出カートリッジに溶離液を通液することにより、前記逆相系固相抽出カートリッジから前記放射性フッ素標識化合物を溶出する工程と、
を含み、
前記洗浄液および前記溶離液として、それぞれエタノール濃度の異なるエタノール水溶液が用いられる、請求項２または３に記載の放射性医薬組成物の製造方法。 
【請求項５】
前記第二の精製工程は、前記第一の精製工程で得られた前記放射性フッ素標識化合物の溶出液を前記逆相系固相抽出カートリッジに通液することにより行われる、請求項２乃至４の何れか一項に記載の放射性医薬組成物の製造方法。 
【請求項６】
前記精製工程は、イオン交換系固相抽出カートリッジを用いて、イオン性の不純物を除去する第三の精製工程をさらに含む、請求項１乃至５の何れか一項に記載の放射性医薬組成物の製造方法。 
【請求項７】
前記精製工程において、高速液体クロマトグラフィー法による精製を実行しない、請求項１乃至６の何れか一項に記載の放射性医薬組成物の製造方法。 
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、放射性フッ素標識化合物を有効成分として含有する、放射性医薬組成物の製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
低酸素領域をインビボで検出する試みとして、放射性核種で標識した放射性標識化合物を用いた、単一光子放射断層撮影（ＳＰＥＣＴ）や陽電子放射断層撮影（ＰＥＴ）が行われている。
【０００３】
１−（２，２−ジヒドロキシメチル−３−［１８Ｆ］フルオロプロピル）−２−ニトロイミダゾール（以下、「［１８Ｆ］ＤｉＦＡ」と省略することもある。）は、生体内の低酸素領域を精度よく定量評価できる化合物の一つとして、本出願人らにより報告されている（特許文献１）。
【０００４】
臨床適用可能な純度の［１８Ｆ］ＤｉＦＡを製造できる方法として、特許文献２には、以下の方法が記載されている。すなわち、２，２−ジメチル−５−［（２−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）メチル］−５−（ｐ−トルエンスルホニルオキシメチル）−１，３−ジオキサンを標識前駆体化合物とし、［１８Ｆ］フッ素標識反応を行った後、塩酸でアセトナイド保護基を除去する。反応終了後、オクタデシルシリル化シリカゲルを固定相とし、水とエタノールとの混液を溶離液として用いたクロマトグラフィーによりトシル酸や類縁物質を溶出させた後、［１８Ｆ］ＤｉＦＡを溶出させることにより、高度に精製された［１８Ｆ］ＤｉＦＡを得る。
【０００５】
特許文献３には、［１８Ｆ］ＤｉＦＡに関する開示はないが、固相抽出カラムを用いて１８Ｆ標識化合物を精製することが記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】国際公開第２０１３／０４２６６８パンフレット
【特許文献２】特開２０１５−８１２４２号公報
【特許文献３】特表２０１５−５０４４４３号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
しかし、特許文献２記載の方法は、大掛かりなＨＰＬＣ装置を必要するため、ハンドリングの点で課題がある。
また、ＨＰＬＣ装置から溶出される［１８Ｆ］ＤｉＦＡには多量の溶離液が含まれているので、製剤化するためには濃縮工程が必要となり、製造時間が長くなる。また、短時間で濃縮するため加熱することで、放射化学的異物が生じることが発明者らの知見により明らかとなった。
【０００８】
本発明は、上記事情に鑑みてなされたものであり、１−（２，２−ジヒドロキシメチル−３−［１８Ｆ］フルオロプロピル）−２−ニトロイミダゾール（［１８Ｆ］ＤｉＦＡ）の臨床適用可能な放射性フッ素標識体をより簡便な方法で製造する技術を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、従来のＨＰＬＣ法の代わりに、異なる二種以上の逆相系の固相抽出カートリッジを用いた固相抽出法により、不純物が除去された［１８Ｆ］ＤｉＦＡが得られることを見出し、本発明を完成させた。
【００１０】
すなわち、本発明の一態様は、下記一般式（１）で表される放射性フッ素標識化合物又はその塩を有効成分として含有する放射性医薬組成物の製造方法であって、下記式（２）で表される標識前駆体化合物から前記放射性フッ素標識化合物の粗生成物を得る合成工程と、
前記放射性フッ素標識化合物を精製する精製工程と、を含み、前記精製工程は、異なる二種以上の逆相系固相抽出カートリッジを用いて前記放射性フッ素標識化合物を精製することを含む、放射性医薬組成物の製造方法が提供される。
【００１１】
【化１】
2019156717.tif 000002
〔式中、Ｘは、放射性フッ素原子である。〕
【００１２】
【化２】
2019156717.tif 000003
〔式中、Ｐ１、Ｐ２はヒドロキシ基の保護基であり、Ｌは、脱離基である。〕 
【００１３】
ここで、本発明において「放射性フッ素」とは、フッ素の放射性同位体であり、具体的には、フッ素−１８が用いられる。フッ素−１８を用いることで、［１８Ｆ］ＤｉＦＡの体内分布を陽電子放射断層撮影（ＰＥＴ）により画像化することができる。
【発明の効果】
【００１４】
本発明によれば、異なる二種以上の逆相系の固相抽出カートリッジを用いた精製を行うこととしたので、従来のＨＰＬＣ法による精製に比べて、簡便に不純物が除去された［１８Ｆ］ＤｉＦＡを得ることができる。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
本発明は、上記一般式（１）で表される、１−（２,２−ジヒドロキシメチル−３−［１８Ｆ］フルオロプロピル）−２−ニトロイミダゾール（［１８Ｆ］ＤｉＦＡ）又はその塩を有効成分として含有する放射性医薬組成物を製造する方法である。
【００１６】
本発明において「放射性医薬組成物」とは、［１８Ｆ］ＤｉＦＡを生体内への投与に適した形態で含む処方物であると定義することができる。この放射性医薬組成物は、非経口的に、即ち注射によって投与することが好ましく、水溶液であることがより好ましい。
【００１７】
［１８Ｆ］ＤｉＦＡは塩を形成していてもよい。塩としては、具体的には、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸等の無機塩や、ギ酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、アスパラギン酸、グルタミン酸等の有機酸塩が挙げられる。
【００１８】
本発明において「有効成分として含有する」とは、［１８Ｆ］ＤｉＦＡが薬効を発揮できる程度に含有されていればよく、具体的には、［１８Ｆ］ＤｉＦＡが所定範囲の放射能濃度で含有されていればよい。例えば、使用時における［１８Ｆ］ＤｉＦＡの放射能濃度を１０〜１０００ＭＢｑ／ｍＬとすることが好ましく、より好ましくは５０〜５００ＭＢｑ／ｍＬである。
【００１９】
本発明の製造方法は、上記式（２）で表される化合物、例えば、２，２−ジメチル−５−［（２−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）メチル］−５−（ｐ−トルエンスルホニルオキシメチル）−１，３−ジオキサン（標識前駆体化合物）から［１８Ｆ］ＤｉＦＡの粗生成物を得る合成工程と、［１８Ｆ］ＤｉＦＡを精製する精製工程とを含む。そして、精製工程において、異なる二種以上の逆相系固相抽出カートリッジによる精製を行う。本発明の精製工程においては、ＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）法による精製を行うことは必要ない。
【００２０】
［合成工程］
合成工程は、具体的には、以下の［１８Ｆ］フッ素化工程と、脱保護工程とを含む。
［１８Ｆ］フッ素化工程：標識前駆体と［１８Ｆ］フッ化物イオンとを反応させて、［１８Ｆ］ＤｉＦＡ保護体を得る。
脱保護工程：［１８Ｆ］ＤｉＦＡ保護体からヒドロキシ基の保護基を除去して［１８Ｆ］ＤｉＦＡの粗生成物を得る。
【００２１】
標識前駆体化合物は、２−ブロモメチル−２−ヒドロキシメチル−１，３−プロパンジオールを出発物質とし、ジオールを保護した後、２−ニトロイミダゾールおよび脱離基を導入して得ることができる。具体的には、例えば、特許文献１記載の方法により合成することができる。
【００２２】
上記式（２）中、Ｐ１及びＰ２は、同一若しくは互いに異なるヒドロキシ基の保護基、または、Ｐ１及びＰ２が一緒になってジオールの保護基を表す。ヒドロキシ基の保護基、及び、ジオールの保護基には、Ｇｒｅｅｎｅ'ｓ  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（John Wiley & Sons Inc；５版）に記載されたものを用いることができる。Ｐ１およびＰ２がそれぞれ同一又は互いに異なる独立の水酸基の保護基を表す場合、好ましくは、Ｐ１およびＰ２は、トリチル基、モノメトキシトリチル基、ジメトキシトリチル基、トリメトキシトリチル基、メトキシメチル基、１−エトキシエチル基、メトキシエトキシメチル基、ベンジル基、ｐ−メトキシベンジル基、２−テトラヒドロピラニル基、トリメチルシリル基、トリエチルシリル基、ｔ−ブチルジメチルシリル基、ｔ−ブチルジフェニルシリル基、アセチル基、プロパノイル基、ピバロイル基、パルミトイル基、ジメチルアミノメチルカルボニル基、アラニル基、２，２，２，−トリクロロエトキシカルボニル基、ベンゾイル基及びアリルオキシカルボニル基からなる群から選択することができる。また、上記式（２）中、Ｐ１およびＰ２が一緒になってジオールの保護基を表す場合、例えば、Ｐ１およびＰ２が一緒になって、メチレン基［−ＣＨ２−］、１−メチルエタン−１，１−ジイル基［−Ｃ（ＣＨ３）２−］、エタン−１，１−ジイル基［−ＣＨ（ＣＨ３）−］、または１−フェニルメタン−１，１−ジイル基［−ＣＨＰｈ］を表し、その結果、１，３−ジオキサン環を形成したものとすることができる。中でも、Ｐ１およびＰ２は、アセトナイド基であることが好ましい。
【００２３】
式（２）中、Ｌは、求核置換反応を起こすことのできる官能基であれば特に限定され
ず、非放射性ハロゲン原子、炭素数３〜１２のトリアルキルアンモニウム、炭素数１〜１０の直鎖もしくは分岐鎖のアルキルスルホニルオキシ基、炭素数１〜１０の直鎖若しくは分岐鎖のハロゲノアルキルスルホニルオキシ基、置換若しくは非置換アリールスルホニルオキシ基または炭素数２〜８のジアルキルスルホニルオキシ基である。好ましくは、Ｌは、クロル（Ｃｌ）、ブロム（Ｂｒ）、ヨード（Ｉ）、トシレート（ＯＴｓ）、メシレート（ＯＭｓ）、トリフレート（ＯＴｆ）から選択され、ＯＴｓがより好ましい。
【００２４】
［１８Ｆ］フッ化物イオンは、公知の方法により調製することができるが、例えば、以下の方法が挙げられる。まず、サイクロトロンにより［18Ｏ］水から［18Ｆ］フッ化物イオンを製造し、これを炭酸型の陰イオン交換樹脂に捕集する。次いで、炭酸カリウム水溶液を通液して［18Ｆ］フッ化物イオンを溶出する。これにより、［18Ｆ］フッ化物イオンを［18Ｆ］フッ化カリウム水溶液として得ることができる。得られた［18Ｆ］フッ化物イオンは、［18Ｆ］フッ素化標識効率を向上させるため、以下の操作を加え、活性化させることが好ましい。すなわち、［18Ｆ］フッ化物イオンの溶出液にクリプトフィックス２２２（商品名。１，１０−ジアザ−４，７，１３，１６，２１，２４−ヘキサオキサビシクロ［８．８．８］ヘキサコサン）を加え、アセトニトリルを用いて共沸する。これにより、［18Ｆ］フッ化物イオンを、炭酸カリウムとクリプトフィクス２２２との混合物として得ることができる。なお、クリプトフィックス２２２は、炭酸カリウム水溶液とともに陰イオン交換樹脂に通液させてもよい。また、炭酸水素型の陰イオン交換樹脂に［18Ｆ］フッ化物イオンを捕集し、テトラアンモニウム炭酸水素塩水溶液を通液して［18Ｆ］フッ化物イオンを溶出し、アセトニトリルを用いて共沸してもよい。
【００２５】
このようにして得られた［18Ｆ］フッ化物イオンと標識前駆体化合物とを混合させて、［18Ｆ］フッ素化反応を行う。反応は、アセトニトリル、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド又はジメチルスルホキシドのような非プロトン性溶媒等の適当な溶媒中に、２０〜１２０℃の温度下に行うことが好ましい。反応終了後、溶媒を蒸散させることで、［１８Ｆ］ＤｉＦＡ保護体を得る。
【００２６】
脱保護工程はヒドロキシ基の保護基が除去できる条件であれば特に制限されず、一般的には酸または塩基を使用した加水分解が行われるが、保護基としてアセトナイド基を用いた場合は、酸加水分解により行うことが好ましい。この場合、使用できる酸は特に限定されないが、塩酸が好ましい。反応条件は、反応時間を短縮できる観点から、室温より高温下で行うことが好ましく、例えば、５０〜１００℃の温度下に行うことができる。
【００２７】
アセトナイド保護基の脱保護終了後は、水で希釈し、［１８Ｆ］ＤｉＦＡの粗生成物を得る。従来行っていた酢酸ナトリウムなどの塩基を用いた中和は行なってもよいが、行わなくてもよい。本明細書において「粗生成物」とは、未精製の［１８Ｆ］ＤｉＦＡであればよく、不純物として、少なくとも一種の無機化合物、又は、［１８Ｆ］ＤｉＦＡ以外の有機化合物を含むものである。これらの不純物は、合成工程で使用した反応試薬や反応副生成物などに由来するものである。この粗生成物は、［１８Ｆ］ＤｉＦＡの溶液であることが好ましく、水溶液がより好ましい。
【００２８】
［１８Ｆ］ＤｉＦＡ以外の有機化合物としては、上記（２）で表される標識前駆体、下記式（３）で表される１−（２，２−ジヒドロキシメチル−３−ヒドロキシプロピル）−２−ニトロイミダゾール（以下、「ＯＨ体」ともいう。）、当該ＯＨ体の保護体、下記式（４）で表される２−クロロメチル−２−ヒドロキシメチル−３−ヒドロキシプロピル−２−ニトロイミダゾール（以下、「Ｃｌ体」ともいう。）、上記［１８Ｆ］ＤｉＦＡ保護体などが挙げられる。
【００２９】
【化３】
2019156717.tif 000004
【化４】
2019156717.tif 000005
【００３０】
［精製工程］
精製工程では、合成工程で粗生成物として得られた［１８Ｆ］ＤｉＦＡの精製を行う。具体的には、異なる二種以上の逆相系固相抽出カートリッジを用いた固相抽出法による精製を行なうことにより、［１８Ｆ］ＤｉＦＡと上記の少なくとも一種以上の不純物との分離を実行する。
【００３１】
本発明において、逆相系固相抽出カートリッジとは、シリカ系またはポリマー系の非イオン性で極性が低い吸着剤が固定相として充填されたカートリッジであり、疎水性が高いものをより強く吸着する性質を備える。ポリマー系の吸着剤の具体例としては、ポリ（ジビニルベンゼン−コ−Ｎ−ビニルピロリドン）ポリマー、Ｎ−ビニルピロリドン官能基を有するスチレン−ジビニルベンゼンポリマーが挙げられる。シリカ系の吸着剤の具体例として、ブチル基（Ｃ４）、オクチル基（Ｃ８）、オクタデシル基（Ｃ１８）、若しくはトリアコンチル基（Ｃ３０）で化学修飾されたシリカゲルが挙げられる。
【００３２】
本発明の精製工程は、二種以上の異なる逆相系固相抽出カートリッジを用い、固相抽出法により、［１８Ｆ］ＤｉＦＡを精製する。固相抽出カートリッジの組み合わせ、および、移動相は、疎水性の低い不純物から順に溶出させて、［１８Ｆ］ＤｉＦＡを回収するように、条件を設定すればよいが、ポリマー系の逆相系固相抽出カートリッジと、シリカ系の逆相系固相抽出カートリッジとの組み合わせが好ましく、ポリ（ジビニルベンゼン−コ−Ｎ−ビニルピロリドン）ポリマーを吸着剤とする逆相系固相抽出カートリッジと、オクタデシルシリル化シリカゲルを吸着剤とする逆相系固相抽出カートリッジとの組み合わせがより好ましい。
【００３３】
また、本発明の精製工程は、好ましくは、第一の逆相系固相抽出カートリッジで、［１８Ｆ］ＤｉＦＡよりも疎水性の低い不純物（例えば、ＯＨ体）を除去し（第一の精製工程）、第二の逆相系固相抽出カートリッジで、［１８Ｆ］ＤｉＦＡよりも疎水性の高い不純物（例えば、Ｃｌ体、標識前駆体、［１８Ｆ］ＤｉＦＡ保護体）を除去する（第二の精製工程）。第一の逆相系固相抽出カートリッジとしては、ポリマー系の吸着剤が固定相として充填されたものが好ましく、ポリ（ジビニルベンゼン−コ−Ｎ−ビニルピロリドン）ポリマーを吸着剤とする逆相系固相抽出カートリッジがより好ましい。また、第二の逆相系固相抽出カートリッジとしては、シリカ系の吸着剤が固定相として充填されたものが好ましく、オクタデシルシリル化シリカゲルを吸着剤とする逆相系固相抽出カートリッジがより好ましい。第一の精製工程及び第二の精製工程を行う順序は特に限定されないが、第一の精製工程の後に第二の精製工程を行うことが好ましく、第一の精製工程の後、これに連続して第二の精製工程を行うことが好ましい。本発明において「これに連続して」とは、連続する２つの精製工程の間に別の精製工程が介在しないことを意味する。
【００３４】
本発明で使用されるポリ（ジビニルベンゼン−コ−Ｎ−ビニルピロリドン）ポリマーを吸着剤とする逆相系固相抽出カートリッジとしては、例えば、Waters社が製造販売しているOasis HLB  Plus Short Cartridge 225 mg、 Oasis HLB Plus Light Cartridge 30 mg、GL science社が製造販売しているInertSep SlimJ PLS-2 230 mg、Agilent社が製造販売しているNEXUS, Bond Elute Jr 200 mgなどを使用することができる。また、オクタデシルシリル化シリカゲルを吸着剤とする逆相系固相抽出カートリッジとしては、例えば、Waters社が製造販売しているSep-pak C18 Plus Short Cartridge 360 mg、Sep-pak tC18 Plus Short Cartridge 360 mg、GL science社が製造販売しているInertSep Slim C18 400 mg、InertSep SlimJ C18 400 mg、Bond Elut C18, Bond Elute Jr 500 mg, Agilent社が製造販売しているBond Elut C18 OH, Bond Elute Jr 500 mgなどを使用することができる。
【００３５】
第一の精製工程は、例えば、逆相系固相抽出カートリッジに粗生成物を注入して［１８Ｆ］ＤｉＦＡを吸着させる工程と、［１８Ｆ］ＤｉＦＡが吸着した逆相系固相抽出カートリッジに洗浄液を通液してこの逆相系固相抽出カートリッジを洗浄する工程と、この逆相系固相抽出カートリッジに溶離液を通液することにより、この逆相系固相抽出カートリッジから［１８Ｆ］ＤｉＦＡを溶出する工程とを含むことができる。
【００３６】
第一の精製工程で用いる洗浄液は、［１８Ｆ］ＤｉＦＡが溶出せず、［１８Ｆ］ＤｉＦＡより極性の高い物質を溶出させるものであればよいが、水、生理食塩液、エタノール水溶液を用いることができる。洗浄液としてのエタノール水溶液のエタノール濃度は、好ましくは３〜１５体積％であり、より好ましくは、４〜１０体積％である。第一の精製工程における逆相系固相抽出カートリッジの洗浄は、同一の洗浄液で、１回又は複数回行ってもよく、または、異なる洗浄液を用いて複数回洗浄してもよい。
【００３７】
第一の精製工程で用いる溶離液は、逆相系固相抽出カートリッジに吸着した［１８Ｆ］ＤｉＦＡを溶出できるものであれば特に限定されないが、エタノール水溶液が好ましい。溶離液としてのエタノール水溶液のエタノール濃度は、洗浄液とは異なることが好ましく、洗浄液より高くすることがより好ましい。具体的には、１５体積％以上のエタノールを含むエタノール水溶液が好ましく、１８体積％以上のエタノール水溶液が特に好ましい。
【００３８】
第二の精製工程は、例えば、第一の精製工程で得られた［１８Ｆ］ＤｉＦＡの溶出液を逆相系固相抽出カートリッジに通液することにより行われる。ここでは、［１８Ｆ］ＤｉＦＡよりも疎水性の高い不純物を逆相系固相抽出カートリッジに捕集させる。なお、逆相系固相抽出カートリッジに通液する前に、第一の精製工程で得られた［１８Ｆ］ＤｉＦＡの溶出液に水、生理食塩液またはエタノールなどを加えて、溶媒の極性を調整してもよく、また、後記する調製工程で記述するアスコルビン酸、マンニトール等の安定剤を添加しておいてもよい。
【００３９】
本発明の精製工程は、イオン交換系固相抽出カートリッジを用いてイオン性の不純物を除去する第三の精製工程をさらに含んでもよい。第三の精製工程は、例えば、イオン交換系固相抽出カートリッジに通液させることにより行うことができ、塩酸を用いた酸加水分解により脱保護を行った場合には、これにより、塩化物イオンを除去することができる。
【００４０】
本発明の精製工程において、第一の精製工程、第二の精製工程、及び第三の精製工程はいずれの順番で行ってもよいが、第三の精製工程は最初又は最後の工程として行うことが好ましく、最初の工程として行うことがより好ましい。また、第二の精製工程は第一の精製工程の後に行うことが好ましい。最も好ましい態様は、第三の精製工程の後、これに連続して第一の精製工程を行った後、これに連続して第二の精製工程を行うことである。
【００４１】
［調製工程］
調製工程では、精製工程で得られた［１８Ｆ］ＤｉＦＡ溶液を濃縮せずに、そのまま注射用水や生理食塩水を加えて［１８Ｆ］ＤｉＦＡの放射能濃度を調整する。その後、メンブレンフィルターで滅菌濾過を行うことにより、［１８Ｆ］ＤｉＦＡを注射剤として得ることができる。
【００４２】
調製工程では、［１８Ｆ］ＤｉＦＡと、アスコルビン酸、又は、マンニトールなどの安定剤とを混合する安定化工程を更に含んでいてもよい。これにより、［１８Ｆ］ＤｉＦＡの放射線分解を抑制し、使用時においても放射性不純物の少ない放射性医薬組成物を得ることができる。この安定化工程は、第二、第三精製工程においては固相抽出カートリッジに［１８Ｆ］ＤｉＦＡを含む溶液を注入する際に、［１８Ｆ］ＤｉＦＡを含む溶液に安定剤を添加することで行ってもよいし、第一精製工程においては［１８Ｆ］ＤｉＦＡを溶出する工程において溶離液に安定剤を添加することにより行ってもよい。
【００４３】
安定剤としてのアスコルビン酸およびマンニトールの濃度は、本発明の製造方法により得られる放射性医薬組成物中、５〜７０μｍｏｌ／ｍＬの範囲が好ましい。アスコルビン酸の濃度は、５０〜７０μｍｏｌ／ｍＬの範囲がより好ましく、マンニトールの濃度は、５〜１５μｍｏｌ／ｍＬの範囲がより好ましい。
【００４４】
〔放射性医薬組成物〕
上記の製造方法を用いることにより、［１８Ｆ］ＤｉＦＡを有効成分として含有する、放射性医薬組成物を提供することができる。
【００４５】
かかる組成物は、適宜、ｐＨ調節剤、製薬学的に許容される可溶化剤、安定剤又は酸化防止剤などの追加成分を含んでいてもよい。例えば、この放射性医薬組成物は、安定剤としてアスコルビン酸、または、マンニトールを含有していてもよい。これらの濃度は、好ましくは、前述の調製工程で採用できる範囲とすることができる。
【００４６】
本発明の方法では、臨床可能な程度に不純物が除去されている。したがって、本発明の放射性医薬組成物は、安全性が高く、人体への投与が可能である。投与後、体内から放出される放射線をＰＥＴ装置で検出することにより、体内の低酸素領域を非侵襲的に検出することができ、がんなどの疾患の診断や治療方針の決定を行うことが可能になる。
【実施例】
【００４７】
以下、実施例を記載して本発明をさらに詳しく説明するが、本発明はこれらの内容に限定されるものではない。
【００４８】
以下、実施例で使用する２，２−ジメチル−５−［（２−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）メチル］−５−（ｐ−トルエンスルホニルオキシメチル）−１，３−ジオキサン（式（１）において、Ｐ１、Ｐ２が一緒になってアセトニド基を形成し、Ｌがトシル基である化合物、トシル体）は、特許文献１（ＷＯ２０１３／０４２６６８）の実施例１の方法に従い合成した。また、１−（２,２−ジヒドロキシメチル−３−フルオロプロピル）−２−ニトロイミダゾール（［１８Ｆ］ＤｉＦＡのフッ素１８をフッ素１９に換えた化合物。以下、「ＤｉＦＡ標品」とも言う。）は、上記特許文献１の実施例２の方法に従い合成した。
【００４９】
［実施例１〜４］［１８Ｆ］ＤｉＦＡ製剤の製造
サイクロトロン（製品名ＨＭ‐１８，住友重機械社製，照射条件２５μＡ，２０分）から取り出した［１８Ｆ］フッ化物イオン含有［１８Ｏ］水（放射能量は、表２を参照）を、陰イオン交換カートリッジ（Ｓｅｐ―Ｐａｋ（登録商標） Ａｃｃｅｌｌ Ｐｌｕｓ ＱＭＡ ｃａｒｂｏｎａｔｅ Ｐｌｕｓ Ｌｉｇｈｔ（商品名），日本ウォーターズ株式会社製）に通液し、［１８Ｆ］フッ化物イオンを吸着捕集した。次いで、該カラムに炭酸カリウム水溶液（０．２ｍＬ、使用した炭酸カリウムの量は表１のＫ２ＣＯ３を参照）及びクリプトフィックス２２２（商品名、メルク社製）のアセトニトリル溶液（０．７ｍＬ、使用したクリプトフィックス２２２の量は表１のＫ２２２を参照）を通液して、［１８Ｆ］フッ化物イオンを溶出した。これを窒素の通気下１１０℃７．５分加熱して水を蒸発させた後、アセトニトリル（０．３ｍＬ×２）を加えて共沸、乾固した。ここにトシル体（５ｍｇ，１１．４μｍｏｌ）を溶解したアセトニトリル溶液（０．９ｍＬ）を加え、１１０℃で表１の標識時間、加熱した。１１０℃で３分加熱して濃縮した後、１ｍｏｌ／Ｌ塩酸（１．０ｍＬ）を加え、１１０℃で３分間加熱した。反応終了後、注射用水（１４ｍＬ）で希釈し、陰イオン交換カートリッジ（Ｓｅｐ―Ｐａｋ（登録商標） Ａｃｃｅｌｌ Ｐｌｕｓ ＱＭＡ ｃａｒｂｏｎａｔｅ Ｐｌｕｓ Ｌｉｇｈｔ（商品名）、日本ウォーターズ株式会社製）およびポリ（ジビニルベンゼン−コ−Ｎ−ビニルピロリドン）ポリマーを吸着剤とする逆相系固相抽出カートリッジ（Oasis HLB Plus Short Cartridge 225 mg，Waters社製）（以下、「ＨＬＢカートリッジ」という。）に通液した。次いで、注射用水（１０ｍＬ）を通液した後、および、表１に示す洗浄液を用いてＨＬＢカートリッジを洗浄した。その後、２０体積％エタノールを含有する生理食塩液（５ｍＬ）で溶出し、オクタデシルシリル化シリカゲルを吸着剤とする逆相系固相抽出カートリッジ（Sep-pak C18 Plus Short Cartridge 360 mg，Waters社製）に通液した。さらにＨＬＢカートリッジを生理食塩液（１０ｍＬ）で通液し、オクタデシルシリル化シリカゲルを吸着剤とする逆相系固相抽出カートリッジ（Ｓｅｐ―Ｐａｋ（登録商標）Ｃ１８（商品名）、日本ウォーターズ株式会社製）に通液し、溶出液をあわせて無菌濾過して、［１８Ｆ］ＤｉＦＡ注射液（放射能量は、表２の回収放射能量を参照）を得た。
【００５０】
結果を表２に示す。なお、TLCの分析条件およびHPLCの分析条件は、以下のとおりである。放射化学的収率は、合成開始時の放射能量に対する［１８Ｆ］ＤｉＦＡ注射液の放射能量（減衰補正なし）の割合の百分率として算出した。また、類縁物質の濃度は、ＤｉＦＡ標品のＨＰＬＣの分析値を用いて算出した。
＜ＴＬＣ分析条件＞
担体：シリカゲル60F254
移動相：酢酸エチル/メタノール/トリエチルアミン＝5：1：0.5（体積比）
展開距離：10 cm
＜ＨＰＬＣ分析条件＞
検出器 ：紫外可視吸光検出器（325 nm）
カラム ：YMC TriartC18(4.6mmi.d x 150mm，5 μm)
カラム温度    ：室温（25℃付近の一定温度）
流量   ：毎分1mL
移動相 ：50 mM炭酸アンモニウム水溶液／アセトニトリル＝9：1（体積比）
注入量 ：10 μL
【００５１】
【表１】
2019156717.tif 000006
【００５２】
【表２】
2019156717.tif 000007
【００５３】
特許文献２の実施例４の方法による製造実績は、約２０ＧＢｑの仕込み放射能量で、放射化学的収率が平均３０％、放射化学的純度が９６〜９８％、製造時間が約８０分、類縁物質の総量が約０．５μｇ／ｍＬであるが、実施例１〜４の方法では、放射化学的収率がほぼ同等である一方、放射化学的純度は向上し、製造時間が３９〜４８分まで短縮できた。また、類縁物質については、実施例１〜４の量であれば、臨床投与液量が最大３ｍＬであることから、最大でも５０μｇ以下の投与量になる。この量は「マイクロドーズ臨床試験の実施に関するガイダンス（薬食審査発第０６０３００１号、平成２０年６月３日）」では、臨床投与が可能な量となる。
以上のことから、本発明の方法によれば、臨床適用可能な［１８Ｆ］ＤｉＦＡ製剤を簡便に収率よく得られることが示唆された。