(57)【要約】      （修正有）【課題】手術以外の治療方法や、手術後の治療において、より効果的な前記治療方法を選択し、過度な前記治療を避けるための、肝細胞癌に罹患した対象の予後の良、又は不良を診断するためのバイオマーカーの提供。【解決手段】予後の良、又は不良を診断する前記バイオマーカーとしての、ＡＲＩＤ２変異遺伝子及び／又はＭＵＣ１７変異遺伝子。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＡＲＩＤ２変異遺伝子および／またはＭＵＣ１７変異遺伝子を含む、肝細胞癌に罹患した対象の予後の良または不良を診断するためのバイオマーカー。
【請求項２】
ＡＲＩＤ２変異遺伝子が下記変異の一以上を含むものである、請求項１に記載のバイオマーカー：
（ｉ）ＡＲＩＤ２遺伝子のコードされる配列番号１で示されるヌクレオチド配列の６７４番目のグアニンがアデニンに置換されたナンセンス変異、
（ｉｉ）ＡＲＩＤ２遺伝子のコードされる配列番号１で示されるヌクレオチド配列の１３２２番のアデニンがグアニンに置換されたミスセンス変異、
（ｉｉｉ）ＡＲＩＤ２遺伝子のコードされる配列番号１で示されるヌクレオチド配列の１０８８番のチミンがシトシンに置換されたミスセンス変異、
（ｉｖ）ＡＲＩＤ２遺伝子のコードされる配列番号１で示されるヌクレオチド配列の５３６２番のアデニンがチミンに置換されたナンセンス変異、および
（ｖ）ＡＲＩＤ２遺伝子のコードされる配列番号１で示されるヌクレオチド配列の７９２番のグアニンがアデニンに置換されたナンセンス変異。
【請求項３】
ＭＵＣ１７変異遺伝子が下記変異の一以上を含むものである、請求項１または２に記載のバイオマーカー：
（ｉ）ＭＵＣ１７遺伝子のコードされる配列番号３で示されるヌクレオチド配列の１６２２番目のシトシンがチミンに置換されたミスセンス変異、
（ｉｉ）ＭＵＣ１７遺伝子のコードされる配列番号３で示されるヌクレオチド配列の３３３２番目のグアニンがチミンに置換されたミスセンス変異、
（ｉｉｉ）ＭＵＣ１７遺伝子のコードされる配列番号３で示されるヌクレオチド配列の９６９２番目のアデニンがシトシンに置換されたミスセンス変異、
（ｉｖ）ＭＵＣ１７遺伝子のコードされる配列番号３で示されるヌクレオチド配列の２２３８番目のシトシンがアデニンに置換されたミスセンス変異、
（ｖ）ＭＵＣ１７遺伝子のコードされる配列番号３で示されるヌクレオチド配列の６５９５番目のシトシンがアデニンに置換されたミスセンス変異、
（ｖｉ）ＭＵＣ１７遺伝子のコードされる配列番号３で示されるヌクレオチド配列の２９０９番目のグアニンがチミンに置換されたミスセンス変異、
（ｖｉｉ）ＭＵＣ１７遺伝子のコードされる配列番号３で示されるヌクレオチド配列の８９１９番目のアデニンがシトシンに置換されたミスセンス変異、
（ｖｉｉｉ）ＭＵＣ１７遺伝子のコードされる配列番号３で示されるヌクレオチド配列の３５３３番目のアデニンがグアニンに置換されたミスセンス変異、および
（ｉｘ）ＭＵＣ１７遺伝子のコードされる配列番号３で示されるヌクレオチド配列の７７５１番目のアデニンがチミンに置換されたミスセンス変異。
【請求項４】
腫瘍組織の外科的切除後の、肝細胞癌に罹患した対象の予後の良または不良を診断するための、請求項１〜３のいずれか一項に記載のバイオマーカー。
【請求項５】
肝細胞癌が非Ｂ非Ｃ（ＮＢＮＣ）型肝細胞癌である、請求項１〜４のいずれか一項に記載のバイオマーカー。
【請求項６】
肝細胞癌に罹患した対象から得られた腫瘍組織中のＡＲＩＤ２遺伝子および／またはＭＵＣ１７遺伝子の変異の有無を検出することを含む、肝細胞癌に罹患した該対象の予後の良または不良の診断方法。
【請求項７】
腫瘍組織の外科的切除後の、肝細胞癌に罹患した対象の予後の良または不良の診断を行う、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
無再発生存期間が２年以上の場合に肝細胞癌に罹患した対象の予後が良いと診断される、請求項６または７に記載の方法。
【請求項９】
肝細胞癌が非Ｂ非Ｃ（ＮＢＮＣ）型肝細胞癌である、請求項６〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
検出が全エキソン解析により行われる、請求項６〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
肝細胞癌に罹患した対象から得られた腫瘍組織中のＡＲＩＤ２遺伝子および／またはＭＵＣ１７遺伝子の変異の有無を検出することを含む、肝細胞癌に罹患した該対象の予後の良または不良の診断を補助する方法。
【請求項１２】
肝細胞癌に罹患した対象から得られた腫瘍組織中のＡＲＩＤ２遺伝子および／またはＭＵＣ１７遺伝子の変異の有無を検出することを含む、肝細胞癌に罹患した該対象の予後の良または不良のインビトロ分析方法。
【請求項１３】
以下の工程を含む、肝細胞癌に罹患した対象の予後推定方法：
（１）対象から腫瘍組織および血球細胞を得る工程、
（２）血球細胞を正常組織として、腫瘍組織中のＡＲＩＤ２遺伝子および／またはＭＵＣ１７遺伝子の変異の有無を全エキソン解析により検出する工程、および
（３）変異がある場合には肝細胞癌に罹患した該対象の予後が不良であると推定し、変異が無い場合には肝細胞癌に罹患した該対象の予後が良いと推定する工程。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＡＲＩＤ２変異遺伝子および／またはＭＵＣ１７変異遺伝子を含む、肝細胞癌に罹患した対象の予後の良または不良を診断するためのバイオマーカーに関する。
【背景技術】
【０００２】
肝細胞癌は、世界的に罹患者数が極めて多い癌であり、毎年約１００万人の新たな発症例があるとされている。また、癌の進行度合（ステージ）により異なるものの、肝細胞癌に罹患した対象の５年生存率は悪い。
【０００３】
肝細胞癌は、化学療法や放射線療法に抵抗性を示し、手術が唯一の完全寛解療法とされてきたが、肝細胞癌に罹患した対象の予後の良または不良を的確に診断することができれば、手術以外の治療方法や、手術後の治療についてもより効果的な治療方法を選択し、過度な治療を避けることができる。
【０００４】
これまでに、癌患者の予後を予測する方法は色々と試みられてきたが（例えば、特許文献１参照）、特に肝細胞癌患者の治療後の予後を予測する方法について満足できるものではなく、更なる改良や別のアプローチが求められている。
【０００５】
また、癌抑制遺伝子はその遺伝子機能を不活化することにより癌の発生を誘引するものとして知られているが、癌の発生以外にも癌の治療後の予後に関与する因子は多岐に渡ることから、癌抑制遺伝子と治療後の予後との関係、特に特定の癌抑制遺伝子と肝細胞癌治療後の予後との関係についてはこれまでに全く知られていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開２００９−１５６６２７号
【発明の概要】
【０００７】
本発明は、ＡＲＩＤ２変異遺伝子および／またはＭＵＣ１７変異遺伝子を含む、肝細胞癌に罹患した対象の予後の良または不良を診断するためのバイオマーカーを提供すること等を目的とする。
【０００８】
本発明者らは、肝細胞癌切除例において、全エキソン解析（ＷＥＳ; whole exome sequencing）の結果と、予後との関連について検討したところ、ＡＲＩＤ２変異遺伝子およびＭＵＣ１７変異遺伝子が、肝細胞癌（特に、非Ｂ非Ｃ（ＮＢＮＣ）型肝細胞癌）に罹患した対象の予後の良または不良を診断するためのバイオマーカーとなり得ることを見出した。本発明はこれらの知見によるものである。
【０００９】
すなわち、本発明によれば、以下の発明が提供される。
［１］ＡＲＩＤ２変異遺伝子および／またはＭＵＣ１７変異遺伝子を含む、肝細胞癌に罹患した対象の予後の良または不良を診断するためのバイオマーカー。
［２］ＡＲＩＤ２変異遺伝子が下記変異の一以上を含むものである、［１］に記載のバイオマーカー：
（ｉ）ＡＲＩＤ２遺伝子のコードされる配列番号１で示されるヌクレオチド配列の６７４番目のグアニンがアデニンに置換されたナンセンス変異、
（ｉｉ）ＡＲＩＤ２遺伝子のコードされる配列番号１で示されるヌクレオチド配列の１３２２番のアデニンがグアニンに置換されたミスセンス変異、
（ｉｉｉ）ＡＲＩＤ２遺伝子のコードされる配列番号１で示されるヌクレオチド配列の１０８８番のチミンがシトシンに置換されたミスセンス変異、
（ｉｖ）ＡＲＩＤ２遺伝子のコードされる配列番号１で示されるヌクレオチド配列の５３６２番のアデニンがチミンに置換されたナンセンス変異、および
（ｖ）ＡＲＩＤ２遺伝子のコードされる配列番号１で示されるヌクレオチド配列の７９２番のグアニンがアデニンに置換されたナンセンス変異。
［３］ＭＵＣ１７変異遺伝子が下記変異の一以上を含むものである、［１］または［２］に記載のバイオマーカー：
（ｉ）ＭＵＣ１７遺伝子のコードされる配列番号３で示されるヌクレオチド配列の１６２２番目のシトシンがチミンに置換されたミスセンス変異、
（ｉｉ）ＭＵＣ１７遺伝子のコードされる配列番号３で示されるヌクレオチド配列の３３３２番目のグアニンがチミンに置換されたミスセンス変異、
（ｉｉｉ）ＭＵＣ１７遺伝子のコードされる配列番号３で示されるヌクレオチド配列の９６９２番目のアデニンがシトシンに置換されたミスセンス変異、
（ｉｖ）ＭＵＣ１７遺伝子のコードされる配列番号３で示されるヌクレオチド配列の２２３８番目のシトシンがアデニンに置換されたミスセンス変異、
（ｖ）ＭＵＣ１７遺伝子のコードされる配列番号３で示されるヌクレオチド配列の６５９５番目のシトシンがアデニンに置換されたミスセンス変異、
（ｖｉ）ＭＵＣ１７遺伝子のコードされる配列番号３で示されるヌクレオチド配列の２９０９番目のグアニンがチミンに置換されたミスセンス変異、
（ｖｉｉ）ＭＵＣ１７遺伝子のコードされる配列番号３で示されるヌクレオチド配列の８９１９番目のアデニンがシトシンに置換されたミスセンス変異、
（ｖｉｉｉ）ＭＵＣ１７遺伝子のコードされる配列番号３で示されるヌクレオチド配列の３５３３番目のアデニンがグアニンに置換されたミスセンス変異、および
（ｉｘ）ＭＵＣ１７遺伝子のコードされる配列番号３で示されるヌクレオチド配列の７７５１番目のアデニンがチミンに置換されたミスセンス変異。
［４］腫瘍組織の外科的切除後の、肝細胞癌に罹患した対象の予後の良または不良を診断するための、［１］〜［３］のいずれかに記載のバイオマーカー。
［５］肝細胞癌が非Ｂ非Ｃ（ＮＢＮＣ）型肝細胞癌である、［１］〜［４］のいずれかに記載のバイオマーカー。
［６］肝細胞癌に罹患した対象から得られた腫瘍組織中のＡＲＩＤ２遺伝子および／またはＭＵＣ１７遺伝子の変異の有無を検出することを含む、肝細胞癌に罹患した該対象の予後の良または不良の診断方法。
［７］腫瘍組織の外科的切除後の、肝細胞癌に罹患した対象の予後の良または不良の診断を行う、［６］に記載の方法。
［８］無再発生存期間が２年以上の場合に肝細胞癌に罹患した対象の予後が良いと診断される、［６］または［７］に記載の方法。
［９］肝細胞癌が非Ｂ非Ｃ（ＮＢＮＣ）型肝細胞癌である、［６］〜［８］のいずれかに記載の方法。
［１０］検出が全エキソン解析により行われる、［６］〜［９］のいずれかに記載の方法。
［１１］肝細胞癌に罹患した対象から得られた腫瘍組織中のＡＲＩＤ２遺伝子および／またはＭＵＣ１７遺伝子の変異の有無を検出することを含む、肝細胞癌に罹患した該対象の予後の良または不良の診断を補助する方法。
［１２］肝細胞癌に罹患した対象から得られた腫瘍組織中のＡＲＩＤ２遺伝子および／またはＭＵＣ１７遺伝子の変異の有無を検出することを含む、肝細胞癌に罹患した該対象の予後の良または不良のインビトロ分析方法。
［１３］以下の工程を含む、肝細胞癌に罹患した対象の予後推定方法：
（１）対象から腫瘍組織および血球細胞を得る工程、
（２）血球細胞を正常組織として、腫瘍組織中のＡＲＩＤ２遺伝子および／またはＭＵＣ１７遺伝子の変異の有無を全エキソン解析により検出する工程、および
（３）変異がある場合には肝細胞癌に罹患した該対象の予後が不良であると推定し、変異が無い場合には肝細胞癌に罹患した該対象の予後が良いと推定する工程。
【００１０】
本発明によれば、ＡＲＩＤ２変異遺伝子および／またはＭＵＣ１７変異遺伝子を含むバイオマーカーを用いることにより、肝細胞癌、特に非Ｂ非Ｃ（ＮＢＮＣ）型肝細胞癌に罹患した対象の予後の良または不良を診断することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】図１は、ＭＵＣ１７遺伝子における変異の有無による無再発生存期間（ＲＦＳ）の比較を表す。縦軸は無再発生存率を表し、横軸は期間（月）を表す。
【図２】図２は、ＡＲＩＤ２遺伝子における変異の有無による無再発生存期間（ＲＦＳ）の比較を表す。縦軸は無再発生存率を表し、横軸は期間（月）を表す。
【発明の具体的説明】
【００１２】
本発明によれば、ＡＲＩＤ２遺伝子および／またはＭＵＣ１７遺伝子の変異の有無を調べることにより、肝細胞癌（好ましくは、ＮＢＮＣ型肝細胞癌）に罹患した対象の予後の良または不良を診断することができる。すなわち、ＡＲＩＤ２遺伝子および／またはＭＵＣ１７遺伝子に変異があれば、肝細胞癌（好ましくは、ＮＢＮＣ型肝細胞癌）に罹患した対象の予後が不良と推定することができ、ＡＲＩＤ２遺伝子および／またはＭＵＣ１７遺伝子に変異がなければ、肝細胞癌（好ましくは、ＮＢＮＣ型肝細胞癌）に罹患した対象の予後が良いと推定することができる。本発明において、対象とはヒト以外の動物（馬、牛などの家畜、犬、猫などの愛玩動物、動物園などで飼育されている鑑賞動物など）であってもよいが、好ましくはヒトである。
【００１３】
本発明によれば、ＡＲＩＤ２変異遺伝子（ＤＮＡ）および／またはＭＵＣ１７変異遺伝子（ＤＮＡ）を含む、肝細胞癌に罹患した対象の予後の良または不良を診断するためのバイオマーカーを提供することができる。
【００１４】
本発明によれば、ＡＲＩＤ２変異遺伝子（ＤＮＡ）および／またはＭＵＣ１７変異遺伝子（ＤＮＡ）である、肝細胞癌に罹患した対象の予後の良または不良を診断するためのバイオマーカーを提供することができる。
【００１５】
本発明のバイオマーカーの好ましい態様によれば、ＡＲＩＤ２変異遺伝子は下記変異の一以上を含むものである：
（ｉ）ＡＲＩＤ２遺伝子のコードされる配列番号１で示されるヌクレオチド配列の６７４番目のグアニンがアデニンに置換されたナンセンス変異、
（ｉｉ）ＡＲＩＤ２遺伝子のコードされる配列番号１で示されるヌクレオチド配列の１３２２番のアデニンがグアニンに置換されたミスセンス変異、
（ｉｉｉ）ＡＲＩＤ２遺伝子のコードされる配列番号１で示されるヌクレオチド配列の１０８８番のチミンがシトシンに置換されたミスセンス変異、
（ｉｖ）ＡＲＩＤ２遺伝子のコードされる配列番号１で示されるヌクレオチド配列の５３６２番のアデニンがチミンに置換されたナンセンス変異、および
（ｖ）ＡＲＩＤ２遺伝子のコードされる配列番号１で示されるヌクレオチド配列の７９２番のグアニンがアデニンに置換されたナンセンス変異。
【００１６】
本発明のバイオマーカーのより好ましい態様によれば、ＡＲＩＤ２変異遺伝子は下記変異のいずれか一つを含むものである：
（ｉ）ＡＲＩＤ２遺伝子のコードされる配列番号１で示されるヌクレオチド配列の６７４番目のグアニンがアデニンに置換されたナンセンス変異、
（ｉｉ）ＡＲＩＤ２遺伝子のコードされる配列番号１で示されるヌクレオチド配列の１３２２番のアデニンがグアニンに置換されたミスセンス変異、
（ｉｉｉ）ＡＲＩＤ２遺伝子のコードされる配列番号１で示されるヌクレオチド配列の１０８８番のチミンがシトシンに置換されたミスセンス変異、
（ｉｖ）ＡＲＩＤ２遺伝子のコードされる配列番号１で示されるヌクレオチド配列の５３６２番のアデニンがチミンに置換されたナンセンス変異、および
（ｖ）ＡＲＩＤ２遺伝子のコードされる配列番号１で示されるヌクレオチド配列の７９２番のグアニンがアデニンに置換されたナンセンス変異。
すなわち、本発明のバイオマーカーのより好ましい態様によれば、上記変異を一つ含むＡＲＩＤ２変異遺伝子をバイオマーカーとして提供することができる。ここで、ミスセンス変異とは、遺伝子上のあるアミノ酸に対応するコドンの塩基配列が突然変異により変化し、別のアミノ酸に対応したコドン（missense codon）になることをいう。また、ナンセンス変異とはアミノ酸を指定しているコドンを停止コドンへ変化させる突然変異をいう。
【００１７】
本発明のバイオマーカーの別の好ましい態様によれば、ＡＲＩＤ２変異遺伝子は下記変異の一以上を含むものである：
（ｉ）ＡＲＩＤ２遺伝子の配列番号２のアミノ酸配列の４４１番のリジン（Ｌｙｓ）がアルギニン（Ａｒｇ）に置換された変異、
（ｉｉ）ＡＲＩＤ２遺伝子の配列番号２のアミノ酸配列の４４１番のリジン（Ｌｙｓ）がアルギニン（Ａｒｇ）に置換された変異、
（ｉｉｉ）ＡＲＩＤ２遺伝子の配列番号２のアミノ酸配列の３６３番のロイシン（Ｌｅｕ）がプロリン（Ｐｒｏ）に置換された変異、
（ｉｖ）ＡＲＩＤ２遺伝子の配列番号２のアミノ酸配列の１７８８番のアルギニン（Ａｒｇ）が停止コドンに置換された変異、および
（ｖ）ＡＲＩＤ２遺伝子の配列番号２のアミノ酸配列の２６４番のトリプトファン（Ｔｒｐ）が停止コドンに置換された変異。
【００１８】
本発明のバイオマーカーの別のより好ましい態様によれば、ＡＲＩＤ２変異遺伝子は下記変異のいずれか一つを含むものである：
（ｉ）ＡＲＩＤ２遺伝子の配列番号２のアミノ酸配列の４４１番のリジン（Ｌｙｓ）がアルギニン（Ａｒｇ）に置換された変異、
（ｉｉ）ＡＲＩＤ２遺伝子の配列番号２のアミノ酸配列の４４１番のリジン（Ｌｙｓ）がアルギニン（Ａｒｇ）に置換された変異、
（ｉｉｉ）ＡＲＩＤ２遺伝子の配列番号２のアミノ酸配列の３６３番のロイシン（Ｌｅｕ）がプロリン（Ｐｒｏ）に置換された変異、
（ｉｖ）ＡＲＩＤ２遺伝子の配列番号２のアミノ酸配列の１７８８番のアルギニン（Ａｒｇ）が停止コドンに置換された変異、および
（ｖ）ＡＲＩＤ２遺伝子の配列番号２のアミノ酸配列の２６４番のトリプトファン（Ｔｒｐ）が停止コドンに置換された変異。
【００１９】
ここで、配列番号１で示されるヌクレオチド配列は、ＡＲＩＤ２遺伝子のイントロン部分の配列を含まないｃＤＮＡ配列である。また、配列番号２で示されるアミノ酸配列は、配列番号１のｃＤＮＡ配列に対応するアミノ酸配列である。ＡＲＩＤ２遺伝子中の変異は、例えば、肝細胞癌に罹患した対象から得られた腫瘍組織中のＡＲＩＤ２遺伝子について、全エキソン解析を行うことにより、変異を検出することができる。この全エキソン解析はどのような方法を用いてもよいが、好ましくは、血球細胞を正常組織として腫瘍特異的遺伝子変異を特定して、腫瘍特異的一塩基変異数を算出することにより行うことができる。
【００２０】
本発明のバイオマーカーの好ましい態様によれば、ＭＵＣ１７変異遺伝子は下記変異の一以上を含むものである：
（ｉ）ＭＵＣ１７遺伝子のコードされる配列番号３で示されるヌクレオチド配列の１６２２番目のシトシンがチミンに置換されたミスセンス変異、
（ｉｉ）ＭＵＣ１７遺伝子のコードされる配列番号３で示されるヌクレオチド配列の３３３２番目のグアニンがチミンに置換されたミスセンス変異、
（ｉｉｉ）ＭＵＣ１７遺伝子のコードされる配列番号３で示されるヌクレオチド配列の９６９２番目のアデニンがシトシンに置換されたミスセンス変異、
（ｉｖ）ＭＵＣ１７遺伝子のコードされる配列番号３で示されるヌクレオチド配列の２２３８番目のシトシンがアデニンに置換されたミスセンス変異、
（ｖ）ＭＵＣ１７遺伝子のコードされる配列番号３で示されるヌクレオチド配列の６５９５番目のシトシンがアデニンに置換されたミスセンス変異、
（ｖｉ）ＭＵＣ１７遺伝子のコードされる配列番号３で示されるヌクレオチド配列の２９０９番目のグアニンがチミンに置換されたミスセンス変異、
（ｖｉｉ）ＭＵＣ１７遺伝子のコードされる配列番号３で示されるヌクレオチド配列の８９１９番目のアデニンがシトシンに置換されたミスセンス変異、
（ｖｉｉｉ）ＭＵＣ１７遺伝子のコードされる配列番号３で示されるヌクレオチド配列の３５３３番目のアデニンがグアニンに置換されたミスセンス変異、および
（ｉｘ）ＭＵＣ１７遺伝子のコードされる配列番号３で示されるヌクレオチド配列の７７５１番目のアデニンがチミンに置換されたミスセンス変異。
【００２１】
本発明のバイオマーカーのより好ましい態様によれば、ＭＵＣ１７変異遺伝子は、下記変異のいずれか一つを含むものである：
（ｉ）ＭＵＣ１７遺伝子のコードされる配列番号３で示されるヌクレオチド配列の１６２２番目のシトシンがチミンに置換されたミスセンス変異、
（ｉｉ）ＭＵＣ１７遺伝子のコードされる配列番号３で示されるヌクレオチド配列の３３３２番目のグアニンがチミンに置換されたミスセンス変異、
（ｉｉｉ）ＭＵＣ１７遺伝子のコードされる配列番号３で示されるヌクレオチド配列の９６９２番目のアデニンがシトシンに置換されたミスセンス変異、
（ｉｖ）ＭＵＣ１７遺伝子のコードされる配列番号３で示されるヌクレオチド配列の２２３８番目のシトシンがアデニンに置換されたミスセンス変異、
（ｖ）ＭＵＣ１７遺伝子のコードされる配列番号３で示されるヌクレオチド配列の６５９５番目のシトシンがアデニンに置換されたミスセンス変異、
（ｖｉ）ＭＵＣ１７遺伝子のコードされる配列番号３で示されるヌクレオチド配列の２９０９番目のグアニンがチミンに置換されたミスセンス変異、
（ｖｉｉ）ＭＵＣ１７遺伝子のコードされる配列番号３で示されるヌクレオチド配列の８９１９番目のアデニンがシトシンに置換されたミスセンス変異、
（ｖｉｉｉ）ＭＵＣ１７遺伝子のコードされる配列番号３で示されるヌクレオチド配列の３５３３番目のアデニンがグアニンに置換されたミスセンス変異、および
（ｉｘ）ＭＵＣ１７遺伝子のコードされる配列番号３で示されるヌクレオチド配列の７７５１番目のアデニンがチミンに置換されたミスセンス変異。
すなわち、本発明のバイオマーカーのより好ましい態様によれば、上記変異を一つ含むＭＵＣ１７変異遺伝子を含むバイオマーカーを提供することができる。
【００２２】
本発明のバイオマーカーの好ましい別の態様によれば、ＭＵＣ１７変異遺伝子は下記変異の一以上を含むものである：
（ｉ）ＭＵＣ１７遺伝子の配列番号４のアミノ酸配列の５４１番のプロリン（Ｐｒｏ）がロイシン（Ｌｅｕ）に置換された変異、
（ｉｉ）ＭＵＣ１７遺伝子の配列番号４のアミノ酸配列の１１１１番のアルギニン（Ａｒｇ）がメチオニン（Ｍｅｔ）に置換された変異、
（ｉｉｉ）ＭＵＣ１７遺伝子の配列番号４のアミノ酸配列の３２３１番のアスパラギン（Ａｓｎ）がトレオニン（Ｔｈｒ）に置換された変異、
（ｉｖ）ＭＵＣ１７遺伝子の配列番号４のアミノ酸配列の７４６番のセリン（Ｓｅｒ）がアルギニン（Ａｒｇ）に置換された変異、
（ｖ）ＭＵＣ１７遺伝子の配列番号４のアミノ酸配列の２１９９番のアルギニン（Ａｒｇ）がセリン（Ｓｅｒ）に置換された変異、
（ｖｉ）ＭＵＣ１７遺伝子の配列番号４のアミノ酸配列の９７０番のグリシン（Ｇｌｙ）がバリン（Ｖａｌ）に置換された変異、
（ｖｉｉ）ＭＵＣ１７遺伝子の配列番号４のアミノ酸配列の２９７３番のグルタミン酸（Ｇｌｕ）がアスパラギン酸（Ａｓｐ）に置換された変異、
（ｖｉｉｉ）ＭＵＣ１７遺伝子の配列番号４のアミノ酸配列の１１７８番のアスパラギン（Ａｓｎ）がセリン（Ｓｅｒ）に置換された変異、および
（ｉｘ）ＭＵＣ１７遺伝子の配列番号４のアミノ酸配列の２５８４番のリシン（Ｌｙｓ）がメチオニン（Ｍｅｔ）に置換された変異。
【００２３】
本発明のバイオマーカーの別の好ましい態様によれば、ＭＵＣ１７変異遺伝子は下記変異のいずれか一つを含むものである：
（ｉ）ＭＵＣ１７遺伝子の配列番号４のアミノ酸配列の５４１番のプロリン（Ｐｒｏ）がロイシン（Ｌｅｕ）に置換された変異、
（ｉｉ）ＭＵＣ１７遺伝子の配列番号４のアミノ酸配列の１１１１番のアルギニン（Ａｒｇ）がメチオニン（Ｍｅｔ）に置換された変異、
（ｉｉｉ）ＭＵＣ１７遺伝子の配列番号４のアミノ酸配列の３２３１番のアスパラギン（Ａｓｎ）がトレオニン（Ｔｈｒ）に置換された変異、
（ｉｖ）ＭＵＣ１７遺伝子の配列番号４のアミノ酸配列の７４６番のセリン（Ｓｅｒ）がアルギニン（Ａｒｇ）に置換された変異、
（ｖ）ＭＵＣ１７遺伝子の配列番号４のアミノ酸配列の２１９９番のアルギニン（Ａｒｇ）がセリン（Ｓｅｒ）に置換された変異、
（ｖｉ）ＭＵＣ１７遺伝子の配列番号４のアミノ酸配列の９７０番のグリシン（Ｇｌｙ）がバリン（Ｖａｌ）に置換された変異、
（ｖｉｉ）ＭＵＣ１７遺伝子の配列番号４のアミノ酸配列の２９７３番のグルタミン酸（Ｇｌｕ）がアスパラギン酸（Ａｓｐ）に置換された変異、
（ｖｉｉｉ）ＭＵＣ１７遺伝子の配列番号４のアミノ酸配列の１１７８番のアスパラギン（Ａｓｎ）がセリン（Ｓｅｒ）に置換された変異、および
（ｉｘ）ＭＵＣ１７遺伝子の配列番号４のアミノ酸配列の２５８４番のリシン（Ｌｙｓ）がメチオニン（Ｍｅｔ）に置換された変異。
【００２４】
ここで、配列番号３で示されるヌクレオチド配列は、ＭＵＣ１７遺伝子のイントロン部分の配列を含まないｃＤＮＡ配列である。また、配列番号４で示されるアミノ酸配列は、配列番号３のｃＤＮＡ配列に対応するアミノ酸配列である。ＭＵＣ１７遺伝子中の変異は、例えば、肝細胞癌に罹患した対象から得られた腫瘍組織中のＭＵＣ１７遺伝子について、全エキソン解析を行うことにより、変異を検出することができる。この全エキソン解析はどのような方法を用いてもよいが、好ましくは、血球細胞を正常組織として腫瘍特異的遺伝子変異を特定して、腫瘍特異的一塩基変異数（SNV: Single Nucleotide Variant）を算出することにより行うことができる。
【００２５】
本明細書において、「予後が良い（予後の良）」とは、肝細胞癌の治療後の経過の見通しが良いことをいい、好ましくは無再発生存期間が長いことをいう。無再発生存期間は、長いほど良いが、２年以上であることが好ましい。
【００２６】
本明細書において、「予後が不良（予後の不良）」とは、肝細胞癌の治療後の経過の見通しが悪いことをいい、好ましくは無再発生存期間が短いことをいう。
肝細胞癌の治療後の無再発生存期間が短いと予後が悪く、とりわけ２年未満であると特に予後が悪いとされる。
【００２７】
本発明の好ましい態様によれば、本発明のバイオマーカーは、腫瘍組織の外科的切除後の、肝細胞癌に罹患した対象の予後の良または不良を診断するための用いることができる。
【００２８】
また、本発明の好ましい態様によれば、本発明のバイオマーカーは、非Ｂ非Ｃ（ＮＢＮＣ）（Non B Non C Hepatocellular Carcinoma）型肝細胞癌に罹患した対象の予後の良または不良を診断するための用いることができる。ここで、非Ｂ非Ｃ型肝細胞癌とは、Ｂ型肝炎やＣ型肝炎に基づかない肝細胞癌をいう。
【００２９】
本発明の別の態様によれば、肝細胞癌に罹患した対象から得られた腫瘍組織中のＡＲＩＤ２遺伝子および／またはＭＵＣ１７遺伝子の変異の有無を検出することを含む、肝細胞癌に罹患した該対象の予後の良または不良の診断方法が提供される。
【００３０】
本発明の診断方法の好ましい態様によれば、腫瘍組織の外科的切除後の、肝細胞癌に罹患した対象の予後の良または不良の診断を行う。
【００３１】
本発明の診断方法の好ましい態様によれば、無再発生存期間が２年以上の場合に肝細胞癌に罹患した対象の予後が良いと診断される。
【００３２】
本発明の診断方法の好ましい態様によれば、肝細胞癌が非Ｂ非Ｃ（ＮＢＮＣ）型肝細胞癌である。
【００３３】
本発明の診断方法の好ましい態様によれば、検出が全エキソン解析により行われる。この全エキソン解析はどのような方法を用いてもよいが、好ましくは、血球細胞を正常組織として腫瘍特異的遺伝子変異を特定して、腫瘍特異的一塩基変異数を算出することにより行うことができる。また、ＡＲＩＤ２遺伝子および／またはＭＵＣ１７遺伝子の変異等は、本発明のバイオマーカーと同じであってもよい。
【００３４】
本発明の別の態様によれば、肝細胞癌に罹患した対象から得られた腫瘍組織中のＡＲＩＤ２遺伝子および／またはＭＵＣ１７遺伝子の変異の有無を検出することを含む、肝細胞癌に罹患した該対象の予後の良または不良の診断を補助する方法が提供される。ここで、補助とは、医師等の判断を補助することを意味する。また、ＡＲＩＤ２遺伝子および／またはＭＵＣ１７遺伝子の変異等は、本発明のバイオマーカーと同じであってもよい。
【００３５】
本発明の別の態様によれば、肝細胞癌に罹患した対象から得られた腫瘍組織中のＡＲＩＤ２遺伝子および／またはＭＵＣ１７遺伝子の変異の有無を検出することを含む、肝細胞癌に罹患した該対象の予後の良または不良のインビトロ分析方法が提供される。また、ＡＲＩＤ２遺伝子および／またはＭＵＣ１７遺伝子の変異等は、本発明のバイオマーカーと同じであってもよい。
【００３６】
本発明の別の態様によれば、以下の工程を含む、肝細胞癌に罹患した対象の予後推定方法が提供される：
（１）対象から腫瘍組織および血球細胞を得る工程、
（２）血球細胞を正常組織として、腫瘍組織中のＡＲＩＤ２遺伝子および／またはＭＵＣ１７遺伝子の変異の有無を全エキソン解析により検出する工程、および
（３）変異がある場合には肝細胞癌に罹患した該対象の予後が不良であると推定し、変異が無い場合には肝細胞癌に罹患した該対象の予後が良いと推定する工程。
【００３７】
本発明の予後推定方法の好ましい態様によれば、非腫瘍組織が血球細胞であることが好ましい。また、ＡＲＩＤ２遺伝子および／またはＭＵＣ１７遺伝子の変異等は、本発明のバイオマーカーと同じであってもよい。
【実施例】
【００３８】
以下の例に基づいて本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらの例に限定されるものではない。
【００３９】
試験例１
静岡県立静岡がんセンターにて、２０１４年１月〜２０１６年５月までの間に肝細胞癌患者に対して根治切除が行われた１０６例のうち、非Ｂ非Ｃ（ＮＢＮＣ）型肝細胞癌患者の５５例から得られたサンプルに基づいて以下の実験を行った。ＮＢＮＣ型肝細胞癌患者の患者背景については下記表１の通りである。
得られたサンプルから全エキソン解析（ＷＥＳ）により一塩基変異(SNV: Single Nucleotide Variant)が認められる遺伝子を抽出した。
腫瘍組織のＷＥＳにはLife Technologies社製のIon Protonを用い、血球細胞を正常組織として腫瘍特異的遺伝子変異を特定して、腫瘍特異的一塩基変異数の算定を行った。
【表１】
2019041653.tif 000002
【００４０】
上記において全エキソン解析（ＷＥＳ）により抽出した遺伝子と、病理学的因子とが、無再発生存率（ＲＦＳ）に与える影響について検討し、その結果を下記表２〜４に示す。
【００４１】
【表２】
2019041653.tif 000003
【００４２】
ＮＢＮＣ型肝細胞癌患者の５５例中、ＭＵＣ１７変異遺伝子を有する９例では、野生型のＭＵＣ１７遺伝子の以下の位置に変異を有することが分かった。
（１）コードされるＤＮＡの位置：ｃ．１６２２Ｃ＞Ｔ・・・ミスセンス、
蛋白コード：ｐ．Ｐｒｏ５４１Ｌｅｕ
（２）コードされるＤＮＡの位置：ｃ．３３３２Ｇ＞Ｔ・・・ミスセンス、
蛋白コード：ｐ．Ａｒｇ１１１１Ｍｅｔ
（３）コードされるＤＮＡの位置：ｃ．９６９２Ａ＞Ｃ・・・ミスセンス、
蛋白コード：ｐ．Ａｓｎ３２３１Ｔｈｒ
（４）コードされるＤＮＡの位置：ｃ．２２３８Ｃ＞Ａ・・・ミスセンス、
蛋白コード：ｐ．Ｓｅｒ７４６Ａｒｇ
（５）コードされるＤＮＡの位置：ｃ．６５９５Ｃ＞Ａ・・・ミスセンス、
蛋白コード：ｐ．Ａｒｇ２１９９Ｓｅｒ
（６）コードされるＤＮＡの位置：ｃ．２９０９Ｇ＞Ｔ・・・ミスセンス、
蛋白コード：ｐ．Ｇｌｙ９７０Ｖａｌ
（７）コードされるＤＮＡの位置：ｃ．８９１９Ａ＞Ｃ・・・ミスセンス、
蛋白コード：ｐ．Ｇｌｕ２９７３Ａｓｐ
（８）コードされるＤＮＡの位置：ｃ．３５３３Ａ＞Ｇ・・・ミスセンス、
蛋白コード：ｐ．Ａｓｎ１１７８Ｓｅｒ
（９）コードされるＤＮＡの位置：ｃ．７７５１Ａ＞Ｔ・・・ミスセンス、
蛋白コード：ｐ．Ｌｙｓ２５８４Ｍｅｔ
【００４３】
ＮＢＮＣ型肝細胞癌患者の５５例中、ＡＲＩＤ２変異遺伝子を有する５例では、野生型のＡＲＩＤ２遺伝子の以下の位置に変異を有することが分かった。
（１）コードされるＤＮＡの位置：ｃ．６７４Ｇ＞Ａ・・・ナンセンス、
蛋白コード：ｐ．Ｌｙｓ４４１Ａｒｇ
（２）コードされるＤＮＡの位置：ｃ．１３２２Ａ＞Ｇ・・・ミスセンス、
蛋白コード：ｐ．Ｌｙｓ４４１Ａｒｇ
（３）コードされるＤＮＡの位置：ｃ．１０８８Ｔ＞Ｃ・・・ミスセンス、
蛋白コード：ｐ．Ｌｅｕ３６３Ｐｒｏ
（４）コードされるＤＮＡの位置：ｃ．５３６２Ａ＞Ｔ・・・ナンセンス、
蛋白コード：ｐ．Ａｒｇ１７８８＊
（５）コードされるＤＮＡの位置：ｃ．７９２Ｇ＞Ａ・・・ナンセンス、
蛋白コード：ｐ．Ｔｒｐ２６４＊
【００４４】
【表３】
2019041653.tif 000004
【００４５】
【表４】
2019041653.tif 000005
【００４６】
上記表３および４における、単変量解析はログランク検定を用い、多変量解析はＣｏｘ回帰分析を用いて行った。
【００４７】
また、上記表２〜４に加え、ＭＵＣ１７遺伝子およびＡＲＩＤ２遺伝子における変異の有無による無再発生存期間（ＲＦＳ）の比較を、それぞれ図１および図２に示す。
【００４８】
以上の結果から、ＭＵＣ１７遺伝子またはＡＲＩＤ２遺伝子に変異がある場合には、ＲＦＳが短くなることが分かった。
【図１】
2019041653.tif 000006
【図２】
2019041653.tif 000007
【配列表】
2019041653000001.app