(57)【要約】【課題】体重減少を伴う肝炎末期、特に脂肪肝末期の患者の治療又は症状改善に有効な組成物を提供することを課題とする。前記組成物は、医薬品組成物や飲食品組成物の形態として好適である。【手段】ロフェノール化合物及びシクロラノスタン化合物からなる群から選択される１又は複数の化合物を、体重減少を伴う肝炎末期の治療又は症状改善のために用いられる組成物に有効成分として含有させる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ロフェノール化合物及びシクロラノスタン化合物からなる群から選択される１又は複数の化合物を有効成分として含有し、
体重減少を伴う肝炎末期の治療又は症状改善のために用いられる組成物。
【請求項２】
シクロラノスタン化合物が、９，１９−シクロラノスタン−３−オール、及び２４−メチレン−９，１９−シクロラノスタン−３−オールからなる群から選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
ロフェノール化合物が、４−メチルコレスト−７−エン−３−オール、４−メチルエルゴスト−７−エン−３−オール、及び４−メチルスチグマスト−７−エン−３−オールからなる群から選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
ロフェノール化合物及びシクロラノスタン化合物からなる群から選択される１又は複数の化合物を合計で組成物全体の０．００００１質量％以上含有する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５】
肝炎末期の腹部の張り、腹部痛、黄疸、及び／又は倦怠感の予防及び／又は緩和のために用いられる、請求項１〜４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６】
医薬組成物である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７】
飲食品組成物である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項８】
体重減少を伴う肝炎末期の治療又は症状改善のために用いられる組成物の製造における、ロフェノール化合物及びシクロラノスタン化合物からなる群から選択される１又は複数の化合物の使用。
【請求項９】
体重減少を伴う肝炎末期の治療又は症状改善における、ロフェノール化合物及びシクロラノスタン化合物からなる群から選択される１又は複数の化合物の使用。
【請求項１０】
体重減少を伴う肝炎末期の治療又は症状改善に用いられる、ロフェノール化合物及びシクロラノスタン化合物からなる群から選択される１又は複数の化合物。
【請求項１１】
ロフェノール化合物及びシクロラノスタン化合物からなる群から選択される１又は複数の化合物を、患者に投与することを含む、体重減少を伴う肝炎末期の治療又は症状改善方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、肝炎末期の治療又は症状改善のために用いられる組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
肝臓は、約３０００億個の細胞から構成され、体重の約３％を占めるヒト最大の臓器であり、その働きは、栄養素の代謝及び貯蔵、胆汁酸の生成、解毒、クッパー細胞による異物の貪食、血液循環量の調節など多岐にわたる。肝腫大は肝容積の異常な増大を意味する。高度の肝腫大のときは、腹部の張りや腹部の強い痛み、黄疸や全身の強い倦怠感を生じる。肝腫大の原因となる病態としては、うっ血、炎症、代謝異常・物質沈着、胆汁うっ滞、腫瘤、細胞浸潤などに分類できる。そのうち頻度が高い疾患としては、非アルコール性脂肪性肝疾患（Non-Alcoholic Fatty Liver Disease、以下ＮＡＦＬＤ）のうち脂肪肝及び非アルコール性脂肪性肝炎（Non-Alcoholic SteatoHepatitis、以下ＮＡＳＨ）、アルコール性肝障害、急性ウイルス性肝炎、慢性ウイルス性肝炎、肝硬変、右心不全、心不全収縮機能障害、心不全拡張機能障害などが挙げられる（非特許文献１、２）。
【０００３】
脂肪肝は、肝細胞障害（風船様変性）や線維化をみとめないＮＡＦＬＤを指し、多くの場合、過剰なエネルギー摂取による肥満が原因であるメタボリックシンドロームの肝病変として捉えられている。一方で、食事制限や疾病による栄養不足から、急激な体重減少が起きた際も脂肪肝が生じることが報告されている。脂肪肝を呈する患者においては、肝機能マーカーであるＡＳＴ（ＧＯＴ）値やＡＬＴ（ＧＰＴ）の値が正常の場合もあるが、通常は軽度の上昇がみられる場合が多い（非特許文献３）。
【０００４】
肝炎とは、肝細胞に炎症が生じ、肝細胞が破壊される病態である。その原因には、ウイルスや自己免疫疾患、過剰なアルコール摂取やエネルギー摂取であるといわれている。近年は、衛生環境の改善や抗ウイルス薬の発展により、ウイルス性肝炎の新規発症が減少している。しかし近年我が国では、食生活の欧米化に伴うメタボリックシンドロームが増加し、慢性肝炎の中に占めるＮＡＳＨの割合が増加している。
ＮＡＳＨも脂肪肝と同様、肥満が原因の一つであるとされている。実際ＢＭＩ３０以上の高度肥満者におけるＮＡＳＨの発症リスクは、健常者の５１倍であるとも言われている。一方で、アジア人の特性として、３０＞ＢＭＩ＞２５の高度肥満者でない症例でも高度肥満をともなった症例とほぼ同数の症例数が観察できることが報告されている。我が国におけるＮＡＳＨの特徴の一つに、肥満を伴わない症例や体重減少を伴う症例が多数観察されることが挙げられる。その原因の一つとして、糖尿病による耐糖能の悪化による場合が知られている一方で、耐糖能が正常で、インスリン抵抗性を示すこともないことから、肥満に伴うＮＡＳＨとは別のメカニズムで発症したと考えられる症例がいくつも報告されている。その原因として先天的遺伝子変異や、なんらかの基礎疾患による代謝異常などが考えられるが、多くの場合未だ明らかでない。また、心身症として知られる神経性食思不振症において、ＮＡＳＨがみとめられる症例がいくつも報告されていることから、栄養不良もＮＡＳＨの要因の一つであることが示唆されている（非特許文献３、４、５）。
【０００５】
ＮＡＳＨ及び脂肪肝と診断された患者は、食生活の指導や運動療法などといった治療が主体となり、その他有用な有効な治療が確立されていない。また、脂肪肝及びＮＡＳＨを肥満でない状態で発症するケースにおいては、既存のメタボリックシンドロームの治療で症状の改善が期待できないと考えられることから、新たな治療法の開発が重要である。
【０００６】
ＮＡＳＨの治療では、肥満を同時に呈する場合は一般にインスリン抵抗性改善薬やスタチン、エゼチミブなどの脂質異常症治療薬の投与、アンジオテンシンＩＩ拮抗阻害剤の投
与、高度の肥満の場合は外科治療による体脂肪の除去などが用いられる。しかしこれらの治療は肥満者および糖尿病、高血圧、脂質代謝異常などの疾患が認められる場合に行われる治療であるため、肥満状態でない又は体重減少状態であるＮＡＳＨ患者に対しては、有効な治療法は確立されていない（非特許文献３）。
【０００７】
また、天然抽出物由来のＮＡＳＨ改善および肝機能改善剤としては高分子多糖類物質ＭＰＳ−８０を有効成分とする脂肪肝抑制剤（特許文献１）、ラクトバチルス・ガセリを培養して得られる培養物及び／又は菌体を有効成分とする脂肪肝抑制剤（特許文献２）、オリーブ又はその抽出物を有効成分とする脂肪肝の予防及び／又は改善剤（特許文献３）、キサントシン類を有効成分として含有する肝機能改善用製剤（特許文献４）、冬虫夏草と黄耆とを含有する肝線維化又は非アルコール性脂肪肝を予防用又は治療用の医薬品組成物（特許文献５）などが知られている。
【０００８】
ところで、シクロラノスタン骨格を有する化合物やロフェノール骨格を有する化合物には、糖尿病や肥満症等の疾患に対する予防又は治療への利用が提案されている（特許文献６、７）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】特開昭５９−２２５１２０号公報
【特許文献２】特開２００８−２４６８０号公報
【特許文献３】特開２００９−２６３２５７号公報
【特許文献４】特開２００５−１００６７号公報
【特許文献５】特開２０１７−３１１７１号公報
【特許文献６】特許４１６２７０３号
【特許文献７】特許３８８３５６３号
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Molecular aspect of Medicine, 25, 221-360, (2004)
【非特許文献２】Pediatric Clinics of North America,Volume 22, Issue 4, November 1975, Pages 929-942
【非特許文献３】肝臓 39巻1号 p.1-4 (1998)
【非特許文献４】日本消化器病学会  ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨ治療ガイドライン2014
【非特許文献５】肝臓 45巻2号 p.82-85 (2004)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
かかる状況に鑑みて、本発明は、体重減少を伴う肝炎末期、特に脂肪肝末期の患者を治療又は症状改善に有効な組成物を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明者らは、上記の課題を解決すべく鋭意研究を行った結果、ロフェノール化合物及びシクロラノスタン化合物からなる群から選択される１又は複数の化合物が、体重減少を伴う肝炎末期における治療又は症状改善に有効であることを見出し、本発明を完成するに至った。
【００１３】
すなわち、本発明は、ロフェノール化合物及びシクロラノスタン化合物からなる群から選択される１又は複数の化合物を有効成分として含有する、組成物であって、体重減少を伴う肝炎末期の治療又は症状改善のために用いられる、組成物である。
また、本発明において、シクロラノスタン化合物は、９，１９−シクロラノスタン−３
−オール、及び２４−メチレン−９，１９−シクロラノスタン−３−オールからなる群から選択されるものであることが好ましい。
また、本発明において、ロフェノール化合物は、４−メチルコレスト−７−エン−３−オール、４−メチルエルゴスト−７−エン−３−オール、及び４−メチルスチグマスト−７−エン−３−オールからなる群から選択されるものであることが好ましい。
また、本発明の組成物は、ロフェノール化合物及びシクロラノスタン化合物からなる群から選択される１又は複数の化合物を合計で組成物全体の０．００００１質量％以上含有することが好ましい。
また、本発明の組成物は、好ましくは、肝炎末期の腹部の張り、腹部痛、黄疸、及び／又は倦怠感の予防及び／又は緩和のために用いられる。
本発明の組成物は、医薬品組成物又は飲食品組成物の形態に好適である。
【発明の効果】
【００１４】
本発明によれば、体重減少を伴う肝炎末期の治療又は症状改善に有用な優れた組成物が提供される。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】試験例１の中性脂肪合成遺伝子群の発現量を表すグラフ。
【図２】試験例２の体重の経時変化を表すグラフ。
【図３】試験例２の肝機能マーカー値を表すグラフ。
【図４】試験例３の肝機能マーカー値を表すグラフ。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
次に、本発明を詳細に説明する。ただし、本発明は以下の実施形態に限定されず、本発明の範囲内で自由に変更することができるものである。なお、本明細書において百分率は特に断りのない限り質量による表示である。
【００１７】
本発明の組成物は、ロフェノール化合物（化合物１）及びシクロラノスタン化合物（化合物２）からなる群から選択される１又は複数の化合物を有効成分として含有する。
ロフェノール化合物（化合物１）は、以下の一般式（１）で表される。
【００１８】
【化１】
2019156750.tif 000002
【００１９】
一般式（１）中、Ｒ１は、炭素数５〜１６の直鎖若しくは分岐鎖状のアルキル基、又は２重結合を１つ若しくは２つ含むアルケニル基である。また、前記アルキル基又はアルケニル基は、１又は２の水素原子がヒドロキシル基及び／又はカルボニル基に置換された置換アルキル基又は置換アルケニル基であってもよい。
また、Ｒ２及びＲ３は各々独立に水素原子又は炭素数１〜３のアルキル基である。ここで、前記炭素原子数１〜３のアルキル基としては、メチル基、エチル基等が好ましく、メチル基が特に好ましい。また、前記アルキル基は、少なくとも１の水素原子がヒドロキシル基及び／又はカルボニル基に置換された置換アルキル基であってもよく、具体的には以下の式で表される基が挙げられる。
【００２０】
【化２】
2019156750.tif 000003
【００２１】
また、Ｒ４は環を構成する炭素原子とともにＣ＝Ｏを形成する基、−ＯＨ、及び−ＯＣＯＣＨ３の何れかである。
【００２２】
前記一般式（１）中、Ｒ１は、下記式で表される基の何れかであることが好ましい。
【００２３】
【化３】
2019156750.tif 000004
【００２４】
また、前記一般式（１）中、Ｒ２及びＲ３の一方が水素原子であり、他方がメチル基であることが好ましく、Ｒ４が水酸基であることが好ましい。
【００２５】
化合物１として、好ましくは、４−メチルコレスト−７−エン−３−オール、４−メチルエルゴスト−７−エン−３−オール及び４−メチルスチグマスト−７−エン−３−オールが挙げられる。各化合物は、それぞれ、以下の式で表される構造を有する。
【化４】
2019156750.tif 000005
【００２６】
【化５】
2019156750.tif 000006
【００２７】
【化６】
2019156750.tif 000007
【００２８】
化合物１は、公知の製造方法に準じて化学的に製造することができる。
例えば、Ｖｉｔａｌｉ Ｍａｔｙａｓｈ ｅｔ．ａｌ， ＰＬＯＳ ＢＩＯＬＯＧＹ， Ｖｏｌｕｍｅ ２， Ｉｓｓｕｅ １０, ｅ２８０, ２００４に記載されたサプリメントデータに準じて、合成することが可能である。
【００２９】
また、化合物１は植物に含まれていることは公知であり、公知のロフェノールの製造方法に準じて、化合物１を製造することができる（生物化学実験法２４、脂肪脂質代謝実験法、山田晃弘著、学会出版センター、第１７４ページ、１９８９年）。
例えば、化合物１が含まれている植物より、熱水抽出法、有機溶媒抽出法、超臨界抽出法又は亜臨界抽出法などの方法を用いて抽出することが可能である（例えば、特許第３９
０５９１３号公報参照）。化合物１は、例えばユリ科、マメ科、イネ科、ナス科及びバショウ科の植物から抽出することができる。
前記のようにして製造した化合物１は、例えば、マススペクトル（ＭＳ）法、及び核磁気共鳴スペクトル（ＮＭＲ）法等によって、その分子量や構造等を決定又は確認することができる。
【００３０】
また、化合物１は、医薬に許容される塩であってもよい。医薬に許容される塩として、金属塩（無機塩）と有機塩との両方が含まれ、それらのリストは「レミントン・ファーマシューティカル・サイエンシーズ（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ‘ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）、第１７版、１９８５年、第１４１８貢」に掲載されているものが例示される。
具体的には塩酸塩、硫酸塩、リン酸塩、二リン酸塩、及び臭化水素酸塩などの無機酸塩や、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、酒石酸塩、コハク酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、乳酸塩、メタンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、パモ酸塩、サリチル酸塩、及びステアリン酸塩などの有機酸塩が非限定的に含まれる。
また、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、アルミニウム等の金属の塩、リジン等のアミノ酸との塩とすることもできる。また、前記化合物若しくはその医薬に許容される塩の水和物等の溶媒和物も使用できる。
【００３１】
シクロラノスタン化合物（化合物２）は、以下の一般式（２）で表される。
【００３２】
【化７】
2019156750.tif 000008
【００３３】
一般式（２）中、Ｒ５は、炭素数６〜８の直鎖状又は分岐鎖状のアルキル基、２重結合を１つ又は２つ含むアルケニル基である。また、前記アルキル基又はアルケニル基は、１又は２の水素原子がヒドロキシル基及び／又はカルボニル基に置換された置換アルキル基又は置換アルケニル基であってもよい。
また、Ｒ６及びＲ７は各々独立に水素原子又はメチル基である。また、Ｒ８は環を構成する炭素原子とともにＣ＝Ｏを形成する基、又は下記の基の何れかである。
【００３４】
【化８】
2019156750.tif 000009
【００３５】
前記一般式（２）中、Ｒ５は、下記式で表される基の何れかであることが好ましい。
【００３６】
【化９】
2019156750.tif 000010
【００３７】
また、前記一般式（２）中、Ｒ６及びＲ７の一方が水素原子であり、他方がメチル基であることが好ましく、Ｒ８が水酸基であることが好ましい。
【００３８】
化合物２としては、好ましくは、９，１９−シクロラノスタン−３−オール、及び２４−メチレン−９，１９−シクロラノスタン−３−オールが挙げられる。各化合物は、それぞれ、以下の式で表される構造を有する。
【００３９】
【化１０】
2019156750.tif 000011
【化１１】
2019156750.tif 000012
【００４０】
化合物２は、公知の製造方法に準じて化学的に製造することができる。例えば、２４−メチレン−９，１９−シクロラノスタン−３−オール（慣用名：２４−メチレンシクロアルタノール）は、特開昭５７−０１８６１７号公報や国際公開第２０１２／０２３５９９号（γ−オリザノールから合成する方法）に開示される方法にて製造することが可能である。また、化合物２は、特開２００３−２７７２６９号公報に開示される方法にて、シクロアルテノールフェルレートの加水分解物を出発物質として製造することが可能である。
【００４１】
【化１２】
2019156750.tif 000013
【００４２】
また、化合物２も、ユリ科、マメ科、イネ科、ナス科及びバショウ科などの植物に含まれていることが知られている（［フィトケミストリー（Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ），米国、１９７７年、第１６巻、第１４０〜１４１ページ］、［ハンドブック・オブ・フィトケミカル・コンスティチュエンツ・オブ・ＧＲＡＳ・ハーブ・アンド・アザー・エコノミック・プランツ（Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓ ｏｆ ＧＲＡＳ ｈｅｒｂｓ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｅｃｏｎｏｍｉｃ ｐｌａｎｔｓ），１９９２年、米国、シーアールシープレス］、又は［ハーゲルス・ハントブ
ーフ・デア・ファルマツォイティシェン・プラクシス（Ｈａｇｅｒ‘ｓ  Ｈａｎｄｂｕｃｈ ｄｅｒ Ｐｈａｒｍａｚｅｕｔｉｓｃｈｅｎ Ｐｒａｘｉｓ）、第２〜６巻、１９６９〜１９７９年、ドイツ、シュプリンガー・フェアラークベルリン］参照）。よって、化合物２は、これらの植物より、有機溶媒抽出法又は熱水抽出法などの公知の方法を用いて抽出することが可能である（例えば、特許第３９２４３１０号公報参照）。化合物２は、ユリ科アロエ属の植物から抽出することが好ましい。
前記のようにして製造した化合物は、例えば、マススペクトル（ＭＳ）法、及び核磁気共鳴スペクトル（ＮＭＲ）法等によって、その分子量や構造等を決定又は確認することができる。
【００４３】
また、化合物２は、医薬に許容される塩であってもよい。このような塩は化合物１について例示したものと同様である。
【００４４】
本発明の組成物は、化合物１の１種又は２種以上、及び化合物２の１種又は２種以上から、１種又は２種以上を選択される化合物を有効成分として含有する。有効成分は、化合物１又は化合物２のいずれか単独であっても化合物１及び化合物２の混合物であってもよく、化合物１及び化合物２の混合物がより好ましい。すなわち、好ましい態様において、有効成分は、化合物１の１種又は２種以上と、化合物２の１種又は２種以上とを含有する。
【００４５】
化合物１又は化合物２を単独で用いる場合としては、化合物１（主に、４−メチルコレスト−７−エン−３−オール、４−メチルエルゴスト−７−エン−３−オール、若しくは４−メチルスチグマスト−７−エン−３−オール）、又は化合物２（主に、９，１９−シクロラノスタン−３−オール、若しくは２４−メチレン−９，１９−シクロラノスタン−３−オール）の何れかであることが好ましい。
これらのうち、溶解性等の物性の観点から、化合物１としては４−メチルコレスト−７−エン−３−オールが特に好ましく、化合物２としては９，１９−シクロラノスタン−３−オールが特に好ましい。
また、化合物１と化合物２を対比した場合では、化合物１（主に、４−メチルコレスト−７−エン−３−オール、４−メチルエルゴスト−７−エン−３−オール、又は４−メチルスチグマスト−７−エン−３−オール）であることがより好ましい。
【００４６】
本発明の組成物は、４−メチルコレスト−７−エン−３−オール、４−メチルエルゴスト−７−エン−３−オール、４−メチルスチグマスト−７−エン−３−オール、９，１９−シクロラノスタン−３−オール、及び２４−メチレン−９，１９−シクロラノスタン−３−オールからなる群から選択される１種又は２種以上の化合物を有効成分として含有することが好ましい。
【００４７】
本発明の組成物における前記化合物の含有量は、対象患者や剤形等に応じて適宜選択することができるが、総量で、好ましくは０．００００１質量％以上、より好ましくは０．０００１質量％以上、さらに好ましくは０．０００５質量％以上、特に好ましくは０．００１質量％以上である。また本発明の組成物における当該量の上限は特に制限されないが、総量で、９０質量％以下、好ましくは７０質量％以下、より好ましくは５０質量％以下が例示される。
【００４８】
化合物１及び化合物２の両者を組み合わせる場合（化合物１と化合物２との混合物）において、化合物１及び化合物２の質量比（化合物１：化合物２）は、好ましくは５：１〜１：５、さらに好ましくは３：１〜１：３、特に好ましくは２：１〜１：２の範囲である。
【００４９】
例えば、天然の植物に含まれる例として、アロエベラ中には、化合物１（主に、４−メチルコレスト−７−エン−３−オール、４−メチルエルゴスト−７−エン−３−オール、及び４−メチルスチグマスト−７−エン−３−オール）、並びに化合物２（主に、９，１９−シクロラノスタン−３−オール、及び２４−メチレン−９，１９−シクロラノスタン−３−オール）が含まれていることが知られている。
【００５０】
そのため、アロエベラを原料として、４−メチルコレスト−７−エン−３−オール、４−メチルエルゴスト−７−エン−３−オール、若しくは４−メチルスチグマスト−７−エン−３−オール（化合物１）の何れか、又は９，１９−シクロラノスタン−３−オール、若しくは２４−メチレン−９，１９−シクロラノスタン−３−オール（化合物２）の何れかをそれぞれ精製して、化合物１：化合物２を、５：１〜１：５、好ましくは３：１〜１：３、特に好ましくは２：１〜１：２の質量比で含む混合物を得ることができる。このようにして得られた混合物は、本発明の組成物の有効成分として好適である。
【００５１】
本発明の組成物は、体重減少を伴う肝炎末期、特に脂肪性肝炎の末期の治療又は症状改善に有効である。これは、従来知られていた化合物１及び２の肥満症や肥満を伴う肝炎の改善に加え、新たに見出された化合物１及び／又は化合物２の用途である。
体重減少を伴う肝炎は、末期において、腹部の張りや腹部の強い痛み、黄疸や全身の強い倦怠感等の症状が現れる。本発明の組成物の適用により、肝臓における中性脂肪の蓄積が抑制され、肝機能が改善するため、前記症状が緩和され得る。
【００５２】
本発明の別の側面は、ロフェノール化合物及びシクロラノスタン化合物からなる群から選択される１又は複数の化合物又は本発明の組成物を患者に投与することを含む、体重減少を伴う肝炎末期の治療又は症状改善方法である。本側面のより好ましい態様は、ロフェノール化合物及びシクロラノスタン化合物からなる群から選択される１又は複数の化合物又は本発明の組成物を患者に投与することを含む、肝炎末期の腹部の張り、腹部痛、黄疸、及び／又は倦怠感を予防及び／又は緩和する方法である。
また、本発明の別の側面は、体重減少を伴う肝炎末期の治療又は症状改善のために用いられる組成物の製造における、ロフェノール化合物及びシクロラノスタン化合物からなる群から選択される１又は複数の化合物の使用である。
また、本発明の別の側面は、体重減少を伴う肝炎末期の治療又は症状改善における、ロフェノール化合物及びシクロラノスタン化合物からなる群から選択される１又は複数の化合物の使用である。
また、本発明の別の側面は、体重減少を伴う肝炎末期の治療又は症状改善に用いられる、ロフェノール化合物及びシクロラノスタン化合物からなる群から選択される１又は複数の化合物である。
【００５３】
＜医薬品組成物＞
本発明の組成物は、医薬品組成物の形態とすることが好ましい。
本発明の医薬品組成物の投与形態は、経口投与及び非経口投与のいずれでもよいが、経口投与が好ましい。非経口投与としては、例えば、静脈注射や胃又は小腸への直接投与等が好ましく挙げられる。
また、投与対象は、ヒトを含む哺乳動物とすることができる。
【００５４】
かかる医薬品組成物は、投与方法に応じて、適宜所望の剤形に製剤化することができる。例えば、経口投与の場合は、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤等の固形製剤；溶液剤、シロップ剤、懸濁剤、乳剤等の液剤等に製剤化することができる。また、非経口投与の場合は、注射剤、座剤、軟膏剤等に製剤化することができる。
加えて、製剤化は剤形に応じて適宜公知の方法により実施できる。製剤化に際しては、適宜、製剤担体を配合して製剤化してもよい。
【００５５】
本発明の医薬品組成物の投与時期は特に限定されず、対象となる疾患に応じて、適宜選択することが可能である。また、投与量は製剤形態、用法、患者の年齢、性別、その他の条件、症状の程度等に応じて決定されることが好ましい。
本発明の医薬品組成物の投与量は、用法、患者の年齢、性別、疾患の程度、その他の条件等により適宜選択される。通常、有効成分の量に換算して、好ましくは０．０００１〜１００ｍｇ／日、より好ましくは、０．００１〜５０ｍｇ／日、特に好ましくは０．０１〜１０ｍｇ／日の範囲を目安とする。
【００５６】
本発明の医薬品組成物は、前記化合物を有効成分として医薬用担体に配合することで製造することができる。本発明の医薬品組成物は、例えば、前記化合物を、前述した添加剤と共に製剤化することで製造することができる。
製剤化に際しては、本発明の医薬品組成物の有効成分の他に、剤形に応じて、本発明の効果を損なわない限り、薬理学上許容可能な各種有機又は無機の担体や医薬に汎用される添加剤を用いることができる。固形製剤の場合の担体としては、例えば、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、安定剤、矯味矯臭剤、希釈剤、界面活性剤、注射剤用溶剤等が挙げられる。また、通常製剤化に用いられているｐＨ調整剤、着色剤等の成分も含有させることができる。
【００５７】
賦形剤としては、例えば、乳糖、白糖、ブドウ糖、マンニット、ソルビット等の糖誘導体；トウモロコシデンプン、馬鈴薯デンプン、α−デンプン、デキストリン、カルボキシメチルデンプン等のデンプン誘導体；結晶セルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム等のセルロース誘導体；アラビアゴム；デキストラン；プルラン；軽質無水珪酸、合成珪酸アルミニウム、メタ珪酸アルミン酸マグネシウム等の珪酸塩誘導体；リン酸カルシウム等のリン酸塩誘導体；炭酸カルシウム等の炭酸塩誘導体；硫酸カルシウム等の硫酸塩誘導体等が挙げられる。
【００５８】
結合剤としては、例えば、上記賦形剤の他、ゼラチン；ポリビニルピロリドン；マクロゴール等が挙げられる。
【００５９】
崩壊剤としては、例えば、上記賦形剤の他、クロスカルメロースナトリウム、カルボキシメチルスターチナトリウム、架橋ポリビニルピロリドン等の化学修飾されたデンプン又はセルロース誘導体等が挙げられる。
【００６０】
滑沢剤としては、例えば、タルク；ステアリン酸；ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム等のステアリン酸金属塩；コロイドシリカ；ピーガム、ゲイロウ等のワックス類；硼酸；グリコール；フマル酸、アジピン酸等のカルボン酸類；安息香酸ナトリウム等のカルボン酸ナトリウム塩；硫酸ナトリウム等の硫酸塩類；ロイシン；ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリル硫酸マグネシウム等のラウリル硫酸塩；無水珪酸、珪酸水和物等の珪酸類；デンプン誘導体等が挙げられる。
【００６１】
安定剤としては、例えば、メチルパラベン、プロピルパラベン等のパラオキシ安息香酸エステル類；クロロブタノール、ベンジルアルコール、フェニルエチルアルコール等のアルコール類；塩化ベンザルコニウム；無水酢酸；ソルビン酸等が挙げられる。
矯味矯臭剤としては、例えば、甘味料、酸味料、香料等が挙げられる。
希釈剤や注射剤用溶剤としては、水やエタノール等の溶媒が挙げられる。
【００６２】
また、本発明の医薬品組成物は、前記化合物を含む公知の植物等を原料として、熱水や各種溶媒を用いた抽出、超臨界抽出、亜臨界抽出することにより得た抽出物を、前述した
添加剤と共に製剤化することで製造することもできる。
特に、化合物１及び化合物２を前記特定の質量比の範囲で含む本発明の医薬品組成物は、各化合物を前記質量比の範囲で混合することで製造することができる。また、このような医薬は、化合物１及び化合物２が含まれている公知の植物等を原料として、熱水や各種溶媒を用いた抽出、超臨界抽出、亜臨界抽出等の方法にて製造することも可能である。
かかる植物原料としては、例えば、ユリ科、マメ科、イネ科、ナス科及びバショウ科などの植物が挙げられる。
【００６３】
本発明の別の側面は、本発明の医薬品組成物を患者に投与することを含む、体重減少を伴う肝炎末期の治療方法である。
また、本発明の別の側面は、体重減少を伴う肝炎末期の治療のために用いられる医薬品組成物の製造における、ロフェノール化合物及びシクロラノスタン化合物からなる群から選択される１又は複数の化合物の使用である。
また、本発明の別の側面は、体重減少を伴う肝炎末期の治療における、ロフェノール化合物及びシクロラノスタン化合物からなる群から選択される１又は複数の化合物の使用である。
また、本発明の別の側面は、体重減少を伴う肝炎末期の治療に用いられる、ロフェノール化合物及びシクロラノスタン化合物からなる群から選択される１又は複数の化合物である。
【００６４】
＜飲食品組成物＞
本発明の組成物は、飲食品組成物の形態とすることが好ましい。
この形態において、本発明の組成物を有効成分として飲食品に配合してもよいし、組成物自体を飲食品組成物の態様としてもよい。
なお、本明細書における飲食品組成物には、ヒト用の飲食品の他に、ヒト以外の動物が摂取する飼料も含まれる。
【００６５】
飲食品組成物を製造する場合には、これらにおける前記化合物の量は、総量で、好ましくは少なくとも０．００００１質量％以上、より好ましくは少なくとも０．０００１質量％以上、さらに好ましくは少なくとも０．０００５質量％以上、特に好ましくは少なくとも０．００１質量％以上である。また本発明の飲食品組成物における当該量の上限は特に制限されないが、総量で、９０質量％以下、好ましくは７０質量％以下、より好ましくは５０質量％以下が例示される。
【００６６】
また、飲食品組成物における前記化合物の量は、その形態に応じて、前記化合物を、総量で、好ましくは０．０００１〜１００ｍｇ／日、より好ましくは０．００１〜５０ｍｇ／日、特に好ましくは０．０１〜１０ｍｇ／日の範囲で摂取するのに適した量とすることもできる。したがって、本発明の飲食品組成物の好ましい形態の一つは、前記化合物を、総量で、好ましくは０．０００１〜１００ｍｇ／日、より好ましくは０．００１〜５０ｍｇ／日、特に好ましくは０．０１〜１０ｍｇ／日摂取するように用いられる飲食品組成物である。
【００６７】
前記飲食品組成物は、化合物１及び化合物２から選択される１又は複数の化合物を、有効成分として配合することで製造することができる。本発明の飲食品組成物は、例えば、前記化合物を、飲食品原料に混合して、加工することで製造することができる。
また、前記飲食品組成物は、前記化合物を含む公知の植物等を原料として、熱水や各種溶媒を用いた抽出、超臨界抽出、亜臨界抽出することにより得た抽出物を、飲食品原料と共に加工することで製造することもできる。特に、化合物１及び化合物２を前記特定の質量比の範囲で含む本発明の組成物は、各化合物を前記質量比の範囲で混合することで製造することができる。かかる植物原料としては、例えば、ユリ科、マメ科、イネ科、ナス科
及びバショウ科などの植物が挙げられる。
【００６８】
また、本発明の飲食品組成物は、体重減少を伴う肝炎末期の症状改善のために用いられる治用途等の保健用途が表示された飲食品として提供・販売されることが可能である。
「表示」行為には、需要者に対して前記用途を知らしめるための全ての行為が含まれ、前記用途を想起・類推させうるような表現であれば、表示の目的、表示の内容、表示する対象物・媒体等の如何に拘わらず、全て本発明の「表示」行為に該当する。
【００６９】
また、「表示」は、需要者が上記用途を直接的に認識できるような表現により行われることが好ましい。前記用途を想起・類推させうるような表示であれば、表示の目的、表示の内容、表示する対象物・媒体等の如何に拘わらず、すべて前記「表示」に該当する。また、前記「表示が付された」とは、前記表示と飲食品（製品）を関連付けて認識させようとする表示行為が存在していることをいう。表示行為は、需要者が前記用途を直接的に認識できるものであることが好ましい。具体的には、飲食品に係る商品又は商品の包装に前記用途を記載したものを譲渡し、引き渡し、譲渡若しくは引き渡しのために展示し、輸入する行為、商品に関する広告、価格表若しくは取引書類に上記用途を記載して展示し、若しくは頒布し、又はこれらを内容とする情報に上記用途を記載して電磁気的（インターネット等）方法により提供する行為等が挙げられる。
【００７０】
一方、表示内容としては、行政等によって認可された表示（例えば、行政が定める各種制度に基づいて認可を受け、そのような認可に基づいた態様で行う表示等）であることが好ましい。また、そのような表示内容を、包装、容器、カタログ、パンフレット、ＰＯＰ等の販売現場における宣伝材、その他の書類等へ付することが好ましい。
【００７１】
また、「表示」には、健康食品、機能性食品、経腸栄養食品、特別用途食品、保健機能食品、特定保健用食品、栄養機能食品、機能性表示食品、医薬用部外品等としての表示も挙げられる。この中でも特に、消費者庁によって認可される表示、例えば、特定保健用食品、栄養機能食品、若しくは機能性表示食品に係る制度、又はこれらに類似する制度にて認可される表示等が挙げられる。具体的には、特定保健用食品としての表示、条件付き特定保健用食品としての表示、身体の構造や機能に影響を与える旨の表示、疾病リスク減少表示、科学的根拠に基づいた機能性の表示等を挙げることができ、より具体的には、健康増進法に規定する特別用途表示の許可等に関する内閣府令（平成二十一年八月三十一年内閣府令第五十七号）に定められた特定保健用食品としての表示（特に保健の用途の表示）及びこれに類する表示が典型的な例である。
したがって、本発明の飲食品組成物としては、前述した機能性食品等の態様に好ましくすることができる。
【００７２】
また、本発明にかかる機能性飲食品には、「体重減少を伴う肝炎末期の症状改善のために用いられる」の用途の表示が付された形態とすることも好ましい。すなわち、本発明の飲食品組成物は、例えば「体重減少を伴う肝炎末期の症状改善のために用いられる」の用途が付された、化合物１及び／又は化合物２からなる群から選択される１又は複数の化合物を有効成分として含有する、体重減少を伴う肝炎末期の症状改善のために用いられる飲食品として販売することが好ましい。
前記用途を表す文言は、「体重減少を伴う肝炎末期の症状改善のために用いられる」という文言に限られるものでなく、それ以外の文言であっても、体重減少を伴う肝炎末期に生じる症状を予防、改善する作用又は効果を表現する文言であれば、本発明の範囲に包含されることは言うまでもない。
【００７３】
また、本発明の飲食品組成物に付する「表示」には、前述した用途の表示に加え、前記有効成分の表示、さらには、前記用途と前記有効成分の関連性を示す表示を含むことも好
ましい。
【００７４】
本発明の飲食品組成物は、液状、ペースト状、固体、粉末等の形態を問わず、錠菓、流動食、飼料（ペット用を含む）等のほか、例えば、小麦粉製品、即席食品、農産加工品、水産加工品、畜産加工品、乳・乳製品、油脂類、基礎調味料、複合調味料・食品類、冷凍食品、菓子類、飲料、これら以外の市販品等が挙げられる。
これらのうち、清涼飲料、炭酸飲料、栄養飲料、果汁飲料、乳酸菌飲料等の飲料（これらの飲料の濃縮原液及び調製用粉末を含む）が、前記化合物を効率よく摂取する観点から特に好ましい。
また、前述した機能性飲食品等の態様とする場合は、顆粒状、タブレット状又は液状のサプリメントであることも、摂取者が有効成分の摂取量を把握し易いという点で好ましい。
【００７５】
また、本発明の飲食品組成物は、本発明の体重減少を伴う肝炎末期の症状改善のために用いられる組成物の他に、食品衛生法などの食品規定で飲食品への使用が認められているものであれば本発明の効果を損なわない限りにおいて、特に制限なく含むことができる。たとえば、ラクチュロース、マルチトール、及びラクチトール等の糖類、及びそれ以外の糖類；デキストリン、デンプン等の炭水化物；ゼラチン、大豆タンパク、トウモロコシタンパク等のたんぱく質；アラニン、グルタミン、イソロイシン等のアミノ酸類；セルロース、アラビアゴム等の多糖類；大豆油、中鎖脂肪酸トリグリセリド等の油脂類等を含有させることができ、これらは本発明の飲食品組成物の形態を顆粒状、タブレット状、又は液状のサプリメントとする場合に製剤化に際して好適に用い得る。
【００７６】
また、本発明の別の側面は、体重減少を伴う肝炎末期の症状改善のために用いられる飲食品組成物の製造における、ロフェノール化合物及びシクロラノスタン化合物からなる群から選択される１又は複数の化合物の使用である。
また、別の側面は、体重減少を伴う肝炎末期の症状改善のために用いられるロフェノール化合物及びシクロラノスタン化合物からなる群から選択される１又は複数の化合物の使用である。
また、別の側面は、体重減少を伴う肝炎末期の症状改善のために用いられるロフェノール化合物及びシクロラノスタン化合物からなる群から選択される１又は複数の化合物である。
【実施例】
【００７７】
以下に実施例を用いて本発明をさらに具体的に説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。
【００７８】
［製造例１］ロフェノール化合物（化合物１）の製造
アロエベラゲルの葉肉（透明ゲル部分）１００ｋｇを、ホモジナイザーを用いて液状化し、ここに１００Ｌの酢酸エチル／ブタノール（３：１）の混合液を添加して撹拌した。一晩放置した後、酢酸エチル／ブタノール混合液と水層を分液して、酢酸エチル／ブタノール混合液を回収した。この酢酸エチル／ブタノール混合液を減圧下で濃縮した。回収された酢酸エチル／ブタノール混合液抽出物の質量は、１３．５ｇであった。
シリカゲル６０（メルク社製）を４００ｇ充填したカラムに、当該抽出物１３ｇを１ｍＬのクロロホルム／メタノール（１：１）混合液に溶解させた溶液を通液し、カラムに吸着させた後、クロロホルム／メタノール混合液（クロロホルム：メタノール＝１００：１、２５：１、１０：１、５：１及び１：１の各混合比）を使用して、メタノール濃度を段階的に上昇させるステップワイズグラジエント法により溶出し、前記混合液の混合比毎に溶出液を分画した。これらのフラクションのうち、クロロホルム：メタノール＝２５：１で溶出してきたフラクションに本発明のロフェノール化合物が存在することを、順相及び
逆相薄層クロマトグラフィー（メルク社製シリカゲル６０Ｆ２５４及びＲＰ−１８Ｆ２５４３）にて確認した。
【００７９】
このフラクションの溶媒を除去した後、１ｍＬのクロロホルム／メタノール（１：１）混合液に溶解し、シリカゲル６０を１００ｇ充填したカラムに通液し、カラムに吸着させた後、ヘキサン／酢酸エチル（４：１）混合液１１００ｍＬで溶出した。溶出フラクションを順に３００ｍＬ（フラクションＡ）、３００ｍＬ（フラクションＢ）、５００ｍＬ（フラクションＣ）ずつ分取した。
本発明の化合物１であるロフェノール化合物が、フラクションＡに濃縮されたことを、順相及び逆相薄層クロマトグラフィーにて確認し、さらに、コスモシールＣ１８（ナカライテスク社製）を装着したＨＰＬＣを用いて、クロロホルム／ヘキサン（８５：１５）混合液にて分離し、４−メチルコレスト−７−エン−３−オール、４−メチルエルゴスト−７−エン−３−オール、及び４−メチルスチグマスト−７−エン−３−オールを、それぞれ１．３ｍｇ、１．２ｍｇ、１ｍｇ得た。各々の化合物の構造は質量（ＭＳ）分析及びＮＭＲにて確認した。
【００８０】
［製造例２］シクロラノスタン化合物（化合物２）の製造
γ−オリザノール（オリザ油化社製）８．０ｇに蒸留水を２５０ｍＬ、水酸化ナトリウム５０ｇ、イソプロパノール１５０ｍＬ、エタノール１５０ｍＬ、メタノール１５０ｍＬを加え、マントルヒーターを用いて２時間加熱還流を行った。反応後に、反応液を１３００ｍＬの水に添加し、生じた白色の析出物を吸引ろ過し、固形物を得た。残存するアルカリを洗浄するために、得られた残渣を１０００ｍＬの水の中に懸濁させた後、再び吸引ろ過を行った。この操作を２回繰り返し、最終的な残渣を凍結減圧乾燥させることによりオリザノール加水分解物５．９１ｇを得た。当該加水分解物はＨＰＬＣにて精製を行い、２４３５ｍｇのシクロアルテノール、及び１５４３ｍｇの２４−メチレン−９，１９−シクロラノスタン−３−オール（化合物２）を得た。
次に、得られたシクロアルテノールを用いて、９，１９−シクロラノスタン−３−オール（化合物２）の合成を行った。
シクロアルテノールを３０２ｍｇ、イソプロパノールを１５０ｍＬ、及び粉末状の５％パラジウム担持炭素触媒１．０ｇを仕込み、これをオートクレーブ内で密閉して、窒素ガスで置換した後、水素ガス３ｋｇ／ｃｍ２の圧力をかけながら導入した。撹拌しながら加熱していき、５０℃になったところで、水素の圧力を５ｋｇ／ｃｍ２とし、吸収された水素を補うことで圧力を保ちながら６時間反応させた。反応液について、ろ過により触媒を除去し、濃縮した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒：クロロホルム１００％）により精製を行い、９，１９−シクロラノスタン−３−オール２７５ｍｇを得た。
【００８１】
［試験例１］肝がん由来細胞における脂質蓄積試験
（１）被検物質の調製
アロエベラ６０ｋｇについて、葉皮を剥き取って葉肉部分を回収し、回収した葉肉部分を凍結乾燥してアロエベラ葉肉粉末３００ｇを調製した。次いで、調製したアロエベラ葉肉粉末２０ｇを用いて超臨界抽出法により抽出を行った。超臨界抽出は、日本分光社製CO2 delivery pump（SCF-GET）、PU-2080 pump（PU-2080 plus）、Back Pressure Regulator（SCF-BPG）、及び東洋高圧社製ブランジを用い、抽出溶媒として炭酸ガス、抽出温度５０℃、抽出圧力１５ＭＰａ、抽出時間６０分の条件で、エントレーナーを使用しないで実施した。その結果、アロエベラ超臨界抽出物（以下、ＳＣＤと記す）を３３ｍｇ製造した。抽出条件および本製造方法は特許第４０９５１１５号にて開示されている。
製造したアロエベラ超臨界抽出物についてＬＣ−ＭＳを使用して組成分析を行ったところ、シクロラノスタン化合物である９，１９−シクロラノスタン−３−オール及び２４−メチレン−９，１９−シクロラノスタン−３−オール、また、ロフェノール化合物である
４−メチルコレスト−７−エン−３−オール、４−メチルエルゴスト−７−エン−３−オール、及び４−メチルスチグマスト−７−エン−３−オールがそれぞれ含まれていることが判明し、該アロエベラ超臨界抽出物に含まれる９，１９−シクロラノスタン−３−オール、２４−メチレン−９，１９−シクロラノスタン−３−オール、４−メチルコレスト−７−エン−３−オール、４−メチルエルゴスト−７−エン−３−オール、及び４−メチルスチグマスト−７−エン−３−オールの割合は、それぞれ０．４３７質量％、０．３２６質量％、０．１８２質量％、０．１５８質量％、０．１６１質量％であることが判明した。
前記ＳＣＤをＤＭＳＯに２．０ｍｇ／ｍＬ溶解したものを、所定の濃度となるようにＤＭＥＭ（ＤＳファーマバイオメディカル社製）に添加した。
【００８２】
（２）肝がん由来細胞ＨｅｐＧ２脂質蓄積試験
肝がん由来細胞ＨｅｐＧ２（ＤＳファーマバイオメディカル社）を、１２ｗｈｅｌｌ Ｐｌａｔｅ （Ｆａｌｃｏｎ社製）に２×１０５個ずつ播種し、ウシ胎児血清（以下、「ＦＢＳ」と記す）１０％を含有するＤＭＥＭにて３７℃、５%ＣＯ２条件下で１日培養した。培養２日目にＦＢＳ不含ＤＭＥＭにて１日間３７℃、５%ＣＯ２条件下で前培養した。培養３日目からは、オレイン酸アルブミンを１０％含有するＤＭＥＭに前記ＳＣＤを添加した培養液（ＳＣＤ濃度０．０５μg／ｍＬ又は０．５μg／ｍＬ、ＤＭＳＯ濃度 １．０％）に切り替えて、４８時間培養し、培養５日目に回収し、定量ＰＣＲ法にて、肝臓における脂肪蓄積に関連する中性脂肪合成遺伝子群の遺伝子発現変化を観察した。なお、前記中性脂肪合成遺伝子は、脂肪酸合成に関わるFatty acid Synthase（ＦＡＳＮ）、エステル化に関わるdiacylglycerol acyltransferase2（ＤＧＡＴ２）、及び脂質不飽和伸張反応に関連するStearoyl-CoA desaturase-1（ＳＣＤ−１）である。また、陰性対照にはＤＭＳＯ濃度 １．０％含有ＤＭＥＭを用いた。
【００８３】
（３）統計解析
実験群間の比較は、t検定で実施した。
【００８４】
（４）試験結果
各遺伝子発現量の結果を、陰性対照を１としたときの相対値として図１に示す。ＦＡＳＮ及びＤＧＡＴ２は、陽性対照（ＰＣ）群で有意な増加が見られたが、ＳＣＤを添加すると濃度依存的に遺伝子発現が抑制された。ＳＣＤ−１は、陽性対照群で有意な増加が見られたが、ＳＣＤ０．５μg／ｍＬ群において遺伝子発現が抑制された。
【００８５】
［試験例２］脂肪性肝炎モデルマウスにおける肝機能評価１
（１）被験物質の調製
試験例１の被験物質の調製と同様の方法により、アロエベラゲル超臨界抽出物（以下「ＳＣＤ」と記す）を取得した。該ＳＣＤには、シクロラノスタン化合物である９，１９−シクロラノスタン−３−オール及び２４−メチレン−９，１９−シクロラノスタン−３−オール、また、ロフェノール化合物である４−メチルコレスト−７−エン−３−オール、４−メチルエルゴスト−７−エン−３−オール、及び４−メチルスチグマスト−７−エン−３−オールがそれぞれ含まれていることが判明し、アロエベラ抽出物に含まれる９，１９−シクロラノスタン−３−オール、２４−メチレン−９，１９−シクロラノスタン−３−オール、４−メチルコレスト−７−エン−３−オール、４−メチルエルゴスト−７−エン−３−オール、及び４−メチルスチグマスト−７−エン−３−オールの割合は、それぞれ０．４３７質量％、０．３２６質量％、０．１８２質量％、０．１５８質量％、０．１６１質量％が含まれていた。
前記ＳＣＤを注射用蒸留水（大塚製薬工場社製）に溶解し、２３．５ ｍｇ／ｍＬに調製し、これを飼育用飲料水とした。それぞれの飲料水を４２週間経口自由摂取させた。
【００８６】
（２）試験動物
ストレプトゾトシン処理高脂肪食マウス（ＳＴＡＭマウス）は、ヒトＮＡＳＨに極めて類似した病態を示し、脂肪性肝炎の予防、改善の評価に一般的によく使用される疾患モデル動物である。チャールスリバー社より購入した６週齢ＳＴＡＭマウスにＮＡＳＨを誘導する特殊飼料である高コレステロール食（ＣＬ食）を摂取させた。ＣＬには、オリエンタル酵母社製（ココアバター４０％、コレステロール１．２５％、コール酸Ｎａ０．５％、ＣＲＦ−１ ５８．２５％）を用いた。
【００８７】
（３）試験方法
ＳＴＡＭマウスを１週間馴化させた後、ＣＬ食＋ＳＣＤ非投与群（ＳＴＡＭ＋Control群、ｎ＝１０）、ＣＬ食＋ＳＣＤ投与群（ＳＴＡＭ＋ＳＣＤ群、ｎ＝１２）の２群に分けた。また、陰性対照として、Ｃ５７ＢＬ６Ｊマウスに通常食を投与する群（Normal群、ｎ＝１０）を設定し、計３群に対して３００日間試験を行った。１日あたりＳＴＡＭ＋ＳＣＤ群はシクロラノスタン化合物及びロフェノール化合物を７１５μｇ／ｋｇを摂取した。
【００８８】
（４）評価項目
１４日毎に体重を測定した。各試験群の半数について、試験３４日目に剖検を行い、肝臓中の中性脂肪（ＴＧ）、遊離脂肪酸（ＮＥＦＡ）、及び総コレステロール（Ｔ−Ｃｈｏ）をＥＬＩＳＡキット（Ｗａｋｏ社製）を用いて測定した。
【００８９】
（５）統計解析
実験群間の比較は、t検定で実施した。
【００９０】
（６）試験結果
図２に体重の経時変化を示す。Normal群と比較し、ＳＴＡＭ＋Control群は、飼育３０日頃から体重の顕著な減少がみられた。これは、ＮＡＳＨの進展により、肝機能障害をきたし胃腸食道の消化と吸収機能に障害がおきたことによるものと考えられる。一方で、ＳＴＡＭ＋ＳＣＤ群はNormal群と同程度の継時的な体重増加を示したことから、ＳＣＤ投与によってＮＡＳＨの改善がされたことで肝機能障害が抑制されたことによると考えられる。
図３に各群の試験３４日目の肝機能マーカー（ＴＧ、ＮＥＦＡ、及びＴ−Ｃｈｏ）を示す。Normal群と比較し、ＳＴＡＭ＋Control群は顕著な増加を示したが、ＳＴＡＭ＋ＳＣＤ群においてはその増加が抑制された。
【００９１】
［試験例３］脂肪性肝炎モデルマウスにおける肝機能評価２
（１）試験動物
Ｚｎを欠乏させた高脂肪食を投与したマウスは、ヒトＮＡＳＨに極めて類似した病態を示すことが知られている。オリエンタル酵母社より購入した４週齢雄性Ｃ５７／ＢＬ６ＪマウスにＮＡＳＨを誘導する特殊飼料であるＺｎ欠乏高脂肪食（ＺｎＤ）を摂取させた。ＺｎＤには、オリエンタル酵母社製カロリー比６０％特注飼料（AIN−９３−MXベースでミネラル無添加、ラード３３％、大豆油２％）を用いた。
【００９２】
（２）被験物質の調製
試験例２と同じＳＣＤ（シクロラノスタン化合物及びロフェノール化合物を合計１．２６質量％含有）を注射用蒸留水（大塚製薬工場社製）に溶解し、ＳＣＤ１２ ｍｇ／ｍＬになるよう調製し、これを飼育用飲料水とした。それぞれの飲料水を４２週間経口自由摂取させた。
【００９３】
（３）試験方法
チャールスリバー社から購入した４週齢雄性Ｃ５７／ＢＬ６Ｊマウスを1週間馴化させ
た後、ＺｎＤ＋ＳＣＤ非投与群（ＺｎＤ＋Control群、ｎ＝１５）、ＺｎＤ＋ＳＣＤ投与群（ＺｎＤ＋ＳＣＤ群、ｎ＝１５）の２群に分けた。また、陰性対照として、Ｃ５７ＢＬ６Ｊに通常食を投与する群（Normal群、ｎ＝１５）を設定し、計３群に対して３００日間試験を行った。１日あたりＺｎＤ＋ＳＣＤ群はシクロラノスタン化合物及びロフェノール化合物を８７．５μｇ／ｋｇを摂取した。
【００９４】
（４）評価項目
試験１５５日目に血清中のＧＯＴ、ＧＰＴ、及びＬＤＨを測定した。
【００９５】
（５）試験結果
図４に各群の肝機能マーカー（血清中のＧＯＴ、ＧＰＴ、及びＬＤＨ）を示す。ＧＯＴ、ＧＰＴ、及びＬＤＨのいずれも、Normal群と比較して、ＺｎＤ＋Control群は増加傾向を示したが、ＺｎＤ＋ＳＣＤ群においてはその増加が抑制された。
【００９６】
［実施例１］
本発明の医薬品組成物の製造方法の一例を以下に記載する。
製造例１で製造した化合物１と、及び製造例２で製造した化合物２とを、化合物１：化合物２＝１：１の割合で含有した混合物に、カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ：第一工業製薬株式会社製）を添加し分散させて、前記混合物を０．００１質量％含有する組成物を調製する。前記組成物を２質量％、中鎖脂肪酸（ＭＣＴ：理研ビタミン株式会社製）を２質量％、グリセリン脂肪酸エステル（理研ビタミン株式会社製）を４質量％、サポニン（丸善製薬株式会社製）を０．５質量％、エタノール（日本アルコール産業株式会社製）を０．２％、マルチトール（株式会社林原製）を１．３質量％、グリセリン（日油株式会社製）を７８％、さらに水を添加して全量が１００質量％となるように混合して、ロフェノール化合物（化合物１）及びシクロラノスタン化合物（化合物２）の混合物が最終濃度で０．００００２質量％含有するシロップ状の製剤を製造する。
本実施例の医薬品組成物は、体重減少を伴う肝炎末期の治療に有効である。
【００９７】
［実施例２］
本発明の飲食品組成物は、以下の方法により製造される。
製造例１で製造した化合物１と、及び製造例２で製造した化合物２とを、化合物１：化合物２＝６．１：３．９で含有する混合物を４％、中鎖脂肪酸（ＭＣＴ：理研ビタミン株式会社製）を２％、グリセリン脂肪酸エステル（理研ビタミン株式会社製）を４％、サポニン（丸善製薬株式会社製）を０．５％、エタノール（日本アルコール産業株式会社製）を０．２％、マルチトール（株式会社林原製）を１．３％、グリセリン（日油株式会社製）を７８％、及び水を１０％混合して、シクロラノスタン化合物及びロフェノール化合物の混合物を含有する食品添加剤を製造する。
製造した食品添加剤を飲料に加えて均一に混合することにより、ロフェノール化合物（化合物１）及びシクロラノスタン化合物（化合物２）の混合物を最終濃度で０．００００２質量％含有する飲食品組成物を製造する。
本実施例の飲食品組成物は、体重減少を伴う肝炎末期の症状の改善及び／又は予防に有効である。
【００９８】
［実施例３］
本発明の飲食品組成物は、以下の方法によっても製造される。
製造例３で製造した試験試料１を０．２％、中鎖脂肪酸（ＭＣＴ：理研ビタミン株式会社製）を２％、グリセリン脂肪酸エステル（理研ビタミン株式会社製）を４％、サポニン（丸善製薬株式会社製）を０．５％、エタノール（日本アルコール産業株式会社製）を０．２％、マルチトール（株式会社林原製）を１．３％、グリセリン（日油株式会社製）を７８％、及び水１０％を混合して、シクロラノスタン化合物（化合物１）及びロフェノー
ル化合物（化合物２）の混合物を含有する飲食品組成物を製造する。
本実施例の飲食品組成物は、体重減少を伴う肝炎末期の症状の改善及び／又は予防に有効である。
【図１】
2019156750.tif 000014
【図２】
2019156750.tif 000015
【図３】
2019156750.tif 000016
【図４】
2019156750.tif 000017