(57)【要約】      （修正有）【課題】血液中に含まれる活性化白血球−活性化血小板複合体を高効率に除去できる材料を提供する。【解決手段】リガンドと基材とを含む水不溶性担体を含み、リガンドは、ハロゲン原子、ヒドロキシ基、ケトン基、エーテル基及びエステル基からなる群から選択される置換基で置換されていてもよい炭化水素基が２級アミド基の炭素原子と結合した構造を有している、活性化白血球−活性化血小板複合体の除去材料。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
リガンドと基材とを含む水不溶性担体を含み、
前記リガンドは、ハロゲン原子、ヒドロキシ基、ケトン基、エーテル基及びエステル基からなる群から選択される置換基で置換されていてもよい炭化水素基が２級アミド基の炭素原子と結合した構造を有している、活性化白血球−活性化血小板複合体の除去材料。
【請求項２】
前記リガンドは、以下の一般式（Ｉ）で示される構造で前記基材に結合している、請求項１記載の除去材料。
【化１】
2019136499.tif 000015
[式（Ｉ）中、Ｒは、ハロゲン原子、ヒドロキシ基、ケトン基、エーテル基及びエステル基からなる群から選択される置換基で置換されていてもよい炭化水素基を表し、波線は基材との結合位置を表し、ｎは、１〜６の整数を表す。]
【請求項３】
前記一般式（Ｉ）中のＲは、ヒドロキシ基、ケトン基、エーテル基及びエステル基からなる群から選択される置換基で置換されていてもよい炭化水素基である、請求項２記載の除去材料。
【請求項４】
前記一般式（Ｉ）中のＲは、炭素数１〜６のアルキル基又はフェニル基である、請求項２記載の除去材料。
【請求項５】
前記水不溶性担体に含まれるアミド基量は、前記水不溶性担体の乾燥重量１．０ｇ当たり１．０〜７．０ｍｍｏｌである、請求項１〜４のいずれか一項記載の除去材料。
【請求項６】
前記水不溶性担体に含まれる荷電を有する官能基量は、前記水不溶性担体の乾燥重量１．０ｇ当たり０．４ｍｍｏｌ以下である、請求項１〜５のいずれか一項記載の除去材料。
【請求項７】
請求項１〜６のいずれか一項記載の除去材料を備える、血液浄化器。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、活性化白血球−活性化血小板複合体の除去材料に関する。
【背景技術】
【０００２】
これまで、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、急性肺傷害（ＡＬＩ）、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、多発性硬化症、潰瘍性大腸炎、クローン病等の炎症性疾患の鎮静方法として、サイトカインの供給源である白血球や血小板等の血球成分を生体内から除去可能な材料を用いた体外循環療法が用いられている。
【０００３】
近年、炎症性疾患を引き起こす新しい原因物質として、活性化白血球−活性化血小板複合体（ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｐｌａｔｅｌｅｔ  ｃｏｍｐｌｅｘ）が注目されている。活性化白血球−活性化血小板複合体は、白血球単独又は活性化白血球単独と比較して炎症反応を呈している組織への遊走能が高く、活性化白血球と活性化血小板の相互作用により、白血球単独又は活性化白血球単独と比較してサイトカインの放出量が増加することが報告されている（非特許文献１）。
【０００４】
体外循環療法用途の材料としては、例えば、特許文献１には、親水性アミン残基が結合した白血球及びサイトカインを吸着または除去する水不溶性材料が開示されている。
【０００５】
特許文献２には、アミド基と活性ハロゲンを含む官能基を有する芳香核ビニル系重合体からなるエンドトキシン除去用材料が開示されている。
【０００６】
特許文献３には、疎水性構造単位と親水性構造単位とを有するポリマーと多孔質基材よりなる血液フィルターが開示されている。
【０００７】
特許文献４には、アミド基と活性ハロゲンを含む官能基を有する芳香核ビニル系重合体からなる癌胎児性抗原吸着材が開示されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特開２００７−２２２５９６号公報
【特許文献２】特公平６−２２６２３号公報
【特許文献３】国際公開０１／０６６１７１号
【特許文献４】特開２００３−３１０７５１号公報
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】Ａｌｅｘａｎｄｅｒ  Ｚａｒｂｏｃｋら、Ｊ.  Ｃｌｉｎ.  Ｉｎｖｅｓｔ. ２００６年、第１１６巻、Ｐ．３２１１−３２１９
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
しかしながら、特許文献１には、アミノ基以外の構造を有するリガンドが結合した水不溶性材料と活性化白血球−活性化血小板複合体の関係、さらに活性化白血球−活性化血小板複合体の除去に関して一切記載がない。さらに、特許文献１では、その除去性能を発揮するためにアミノ基（陽性荷電）が必須であるため、血液と接触した際に荷電を有する抗凝固剤が吸着する可能性がある。したがって、本材料を血液体外循環による炎症性疾患治療用途に用いる場合には、血液中の抗凝固剤濃度を適切に管理する必要がある。 
【００１１】
特許文献２には、エンドトキシン除去用材料と活性化白血球−活性化血小板複合体の関係、さらに活性化白血球−活性化血小板複合体の除去に関して一切記載がない。エンドトキシンは、主に敗血症患者の血液中に存在し、活性化白血球−活性化血小板複合体は、主に炎症性疾患患者の血液中に存在することが知られており、糖脂質であるエンドトキシンと、表面の大部分をリン脂質が占める活性化白血球−活性化血小板複合体とでは化学的性質が異なり、また、分子であるエンドトキシンと、細胞の複合体である活性化白血球−活性化血小板複合体とでは、その大きさ等、物理的性質も異なる。そのため、エンドトキシンと活性化白血球−活性化血小板複合体には、これまで除去対象として関連性は認められてない。
【００１２】
特許文献３に記載の血液フィルターは、高い白血球除去能と高い血小板回収能を両立していることを特徴としているが、上記血液フィルターと活性化白血球−活性化血小板複合体の関係、さらに活性化白血球−活性化血小板複合体の除去については、一切記載がない。また、特許文献３に記載の白血球除去フィルターは、当該フィルターを構成する成分の一つであるポリマーの原料であるモノマー自体に除去性能に寄与する各種官能基を有する構造であり、低分子であるリガンドと基材とを含む水不溶性担体、すなわち、特定の炭化水素基が２級アミド基の炭素原子と結合している構造を有するリガンドと基材とを含む水不溶性担体については具体的な開示はない。また、白血球と活性化白血球−活性化血小板複合体とでは細胞表面に発現しているタンパク質の種類が異なり、細胞の大きさも異なるため、白血球を除去する場合と活性化白血球−活性化血小板複合体を除去する場合とで、そのメカニズムは同一ではないと考えられる。
【００１３】
特許文献４には、アミド基を有する癌胎児性抗原吸着材が記載されているが、上記癌胎児性抗原吸着材と活性化白血球−活性化血小板複合体の関係、さらに活性化白血球−活性化血小板複合体の除去に関して一切記載がない。また、１８万〜２０万ダルトンのタンパク質である癌胎児性抗原と、細胞の複合体である活性化白血球−活性化血小板複合体とでは、物理的性質が異なる。また、癌胎児性抗原は免疫抑制性物質であるのに対し、活性化白血球−活性化血小板複合体は免疫細胞であるため、両者の性質は相反する。また、癌胎児性抗原は、主に癌患者の血液中に存在し、活性化白血球−活性化血小板複合体は、主に炎症性疾患患者の血液中に存在するため、癌胎児性抗原吸着材と活性化白血球−活性化血小板複合体の除去材料とでは、適用する患者の疾患が異なるといえる。
【００１４】
以上のような背景の下、炎症性疾患の患者等の血液中に含まれる活性化白血球−活性化血小板複合体を高効率に除去できる材料の開発が切望されている。
【００１５】
そこで本発明は、活性化白血球−活性化血小板複合体を高効率に除去できる材料を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
本発明者らは上記課題を解決すべく、鋭意検討を進めた結果、特定のアミド基構造を有しているリガンドと基材とを含む水不溶性担体を含む材料が、活性化白血球−活性化血小板複合体を高効率に除去できることを見出した。
【００１７】
すなわち、本発明は、以下の（１）〜（７）を提供する。
（１）リガンドと基材とを含む水不溶性担体を含み、上記リガンドは、ハロゲン原子、ヒドロキシ基、ケトン基、エーテル基及びエステル基からなる群から選択される置換基で置換されていてもよい炭化水素基が２級アミド基の炭素原子と結合した構造を有している、活性化白血球−活性化血小板複合体の除去材料。
（２）上記リガンドは、以下の一般式（Ｉ）で示される構造で上記基材に結合している、（１）記載の除去材料。
【化１】
2019136499.tif 000002
[式（Ｉ）中、Ｒは、ハロゲン原子、ヒドロキシ基、ケトン基、エーテル基及びエステル基からなる群から選択される置換基で置換されていてもよい炭化水素基を表し、波線は基材との結合位置を表し、ｎは、１〜６の整数を表す。]
（３）上記一般式（Ｉ）中のＲは、ヒドロキシ基、ケトン基、エーテル基及びエステル基からなる群から選択される置換基で置換されていてもよい炭化水素基である、（２）記載の除去材料。
（４）上記一般式（Ｉ）中のＲは、炭素数１〜６のアルキル基又はフェニル基である、（２）記載の除去材料。
（５）上記水不溶性担体に含まれるアミド基量は、上記水不溶性担体の乾燥重量１．０ｇ当たり１．０〜７．０ｍｍｏｌである、（１）〜（４）のいずれかに記載の除去材料。
（６）上記水不溶性担体に含まれる荷電を有する官能基量は、上記水不溶性担体の乾燥重量１．０ｇ当たり０．４ｍｍｏｌ以下である、（１）〜（５）のいずれかに記載の除去材料。
（７）（１）〜（６）のいずれかに記載の除去材料を備える、血液浄化器。
【発明の効果】
【００１８】
本発明の除去材料は、炎症性疾患の患者等の血液中に含まれる活性化白血球−活性化血小板複合体を除去することができ、血液浄化器の吸着担体として利用できる。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
以下、本発明について詳細に説明する。
【００２０】
本発明の活性化白血球−活性化血小板複合体の除去材料は、リガンドと基材とを含む水不溶性担体を含み、上記リガンドは、ハロゲン原子、ヒドロキシ基、ケトン基、エーテル基及びエステル基からなる群から選択される置換基で置換されていてもよい炭化水素基が２級アミド基の炭素原子と結合した構造を有していることを特徴としている。
【００２１】
「リガンド」とは、活性化白血球−活性化血小板複合体の除去性能を付与するために、水不溶性担体に含まれる化学構造を意味する。上記リガンドは、ハロゲン原子、ヒドロキシ基、ケトン基、エーテル基及びエステル基からなる群から選択される置換基で置換されていてもよい炭化水素基が、２級アミド基の炭素原子と結合した構造を有している。上記置換基は、いずれも酸性官能基又は塩基性官能基ではない点が共通している。
【００２２】
「基材」とは、リガンドと相互作用が可能である材料を表す。基材としては、例えば、芳香環、水酸基等、炭素カチオンとの反応性を有する官能基を繰り返し構造中に含む高分子材料であり、ポリ（芳香族ビニル化合物）（例えば、ポリスチレン）、ポリエステル（例えば、ポリエチレンテレフタレート、ポリブチレンテレフタレート）、ポリスルホン、ポリエーテルスルホン、ポリビニルアルコール等の合成高分子材料や、セルロース、コラーゲン、キチン、キトサン、デキストラン等の天然高分子材料、さらに、上記合成高分子材料や上記天然高分子材料にアルキル基、ハロゲン原子、ハロゲン化アルキル基、アセタール基、エーテル基等が付与された誘導体でもよく、例えば、ポリスチレン誘導体であれば、ポリｐ−クロロメチルスチレン、ポリα−メチルスチレン、ポリβ−メチルスチレン、ポリｐ−ｔｅｒｔ−ブトキシスチレン、ポリｐ−アセトキシスチレン、ポリｐ−（１−エトキシエトキシ）スチレンが挙げられる。これらの高分子材料の組成に、特に制限はなく、単独重合体、上記高分子材料のモノマーを複数種類用いた共重合体又は複数の上記高分子材料を物理的にブレンドして用いてもよい。特に、活性化白血球−活性化血小板複合体の除去材料において、ポリ（芳香族ビニル化合物）（例えば、ポリスチレン）若しくはその誘導体、ポリエステル（例えば、ポリエチレンテレフタレート、ポリブチレンテレフタレート）若しくはその誘導体、ポリスルホン若しくはその誘導体又はポリエーテルスルホン若しくはその誘導体が好ましく、ポリスチレン若しくはポリスルホン又はそれらの誘導体、つまりポリスチレン若しくはその誘導体又はポリスルホン若しくはその誘導体がより好ましい。中でも単位重量当たりの芳香環の数が多く、リガンドが導入しやすいことから、ポリスチレン又はその誘導体がさらに好ましい。
【００２３】
また、基材に用いる材料は、架橋構造を含んでいてもよい。当該架橋構造に制限はないが、例えば、ジビニルベンゼン等の二官能性モノマーを共重合することで架橋構造を導入した材料や、アルデヒドのような架橋剤を材料中の芳香環、水酸基等の官能基と反応させることで架橋構造を導入した材料が好ましく、調達の容易性から二官能性化合物を材料中の芳香環、水酸基等の官能基と反応させることで架橋構造を導入した材料がより好ましく、ホルムアルデヒドを架橋剤として用いるのがさらに好ましい。
【００２４】
「担体」とは、活性化白血球−活性化血小板複合体の除去性能を有するリガンド及びリガンドを担持する基材を含む材料を意味する。
【００２５】
「水不溶性担体」とは、水に不溶性の担体である。ここで、水に不溶とは、水不溶性担体を水に入れた前後の乾燥重量変化が１％以下であることを意味する。この乾燥重量変化は水不溶性担体を乾燥重量の９倍量の３７℃の水に１時間浸漬した後にピンセット等で引き上げ、残った水を５０℃以下で真空乾燥させた後に残った固形分の乾燥重量の浸漬前の材料乾燥重量に対する割合である。不溶化されていない場合は、実際に使用する場合に材料由来の溶出物が多くなる危険性があり、安全上好ましくない。水不溶性担体の形状に特に限定はないが、フィルム形状、粒子形状又は繊維形状が好ましく、繊維形状がより好ましい。体外循環の治療で使用することを考えると、比表面積が大きく、柔軟に変形可能で取り扱い性に優れる繊維形状、特に海島繊維形状が好ましい。さらに、上記繊維形状を加工した形状としては、糸束、ヤーン、ネット、編地、織物又は不織布が好ましく、表面積が大きく、流路抵抗の小ささを考慮すると糸束、編地、織物又は不織布がより好ましい。さらに、使用する際の除去材料の充填や液体の流路の均一性を考慮すると、編地又は織物が好ましい。
【００２６】
「乾燥重量」とは、乾燥状態の固体の重量を意味する。ここで乾燥状態の固体とは、当該固体中に含まれる液体成分の量が１重量％以下の状態の固体を表し、固体の重量を測定した後に８０℃、大気圧で２４時間加熱乾燥し、残存した固体の重量減少量が乾燥前の重量の１重量％以下であるとき、当該固体は乾燥状態とみなす。
【００２７】
「リガンドと基材とを含む水不溶性担体」とは、リガンドと基材とを構成成分として含む水不溶性担体を表し、リガントと基材が、共有結合、イオン結合、水素結合、ファンデルワールス結合又は疎水性相互作用等で相互作用している構造を含む担体を表す。水不溶性担体の安定性の観点から、リガンドと基材とは、共有結合、イオン結合、水素結合又はファンデルワールス結合により結合していることが好ましく、共有結合又はイオン結合により結合していることがより好ましい。
【００２８】
活性化白血球−活性化血小板複合体との相互作用のしやすさから、リガンドは、共有結合、イオン結合、水素結合又はファンデルワールス結合により基材の表面に結合していることが好ましく、共有結合又はイオン結合により基材の表面に結合していることがより好ましい。
【００２９】
「ハロゲン原子」とは、フッ素原子、塩素原子、臭素原子又はヨウ素原子を意味する。
【００３０】
「炭化水素基」とは、水素原子と炭素原子から構成される化学構造を表し、直鎖又は分岐構造を有するアルキル基、シクロアルキル基、直鎖又は分岐構造を有するアルケニル基、アリール基及びアリールアルキル基を含む。アルキル基の例としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｓ−ブチル基、ｔ−ブチル基、ペンチル基、イソペンチル基、ネオペンチル基、ｔ−ペンチル基、ヘキシル基、ヘプチル基、オクチル基、ノニル基又はデシル基の直鎖又は分岐のアルキル基が挙げられる。シクロアルキル基の例としては、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基又はシクロヘキシル基が挙げられる。アルケニル基の例としては、ビニル基又はアリル基が挙げられる。アリール基の例としては、フェニル基、トリル基、１−ナフチル基、２−ナフチル基又はトリチル基が挙げられる。アリールアルキル基の例としては、ベンジル基又はフェネチル基が挙げられる。また、さらにポリスチレン、ポリエチレン、ポリプロピレンのように上記構造を組み合わせたポリマー構造を有していてもよい。活性化白血球−活性化血小板複合体の除去性能の観点からは、２級アミド基周辺の立体障害が少ないことが好ましいため、炭素数１〜１０の炭化水素基、つまり、炭素数１〜１０のアルキル基（例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、ヘプチル基、オクチル基、ノニル基又はデシル基）、炭素数３〜１０のシクロアルキル基（例えば、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基又はシクロヘキシル基）、炭素数２〜１０のアルケニル基（例えば、ビニル基又はアリル基）、炭素数６〜１０のアリール基（例えば、フェニル基又はトリル基）又は炭素数７〜１０のアリールアルキル基(例えば、ベンジル基又はフェネチル基)が好ましい。サイトカインの吸着能の観点で炭素数１〜６のアルキル基又はフェニル基がより好ましい。ここで、炭素数１〜６のアルキル基の例としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｓ−ブチル基、ｔ−ブチル基、ペンチル基、イソペンチル基、ネオペンチル基、ｔ−ペンチル基又はヘキシル基が挙げられる。
【００３１】
「ハロゲン原子、ヒドロキシ基、ケトン基、エーテル基及びエステル基からなる群から選択される置換基で置換されていてもよい炭化水素基」とは、上記の炭化水素基、又は、上記の炭化水素基の一部が、上記のハロゲン原子、ヒドロキシ基、ケトン基、エーテル基及びエステル基からなる群から選択される置換基により置換された炭化水素基を表す。置換基の位置や数に特に制限はなく、複数種類の置換基によって置換されていてもよい。ハロゲン原子で置換されていてもよい炭化水素基としては、例えば、上記の炭化水素基に加えて、クロロメチル基、１−クロロエチル基、２−クロロエチル基、１−クロロプロピル基、２−クロロプロピル基、３−クロロプロピル基、１−クロロブチル基、２−クロロブチル基、３−クロロブチル基、４−クロロブチル基、ブロモメチル基、１−ブロモエチル基、２−ブロモエチル基、１−ブロモプロピル基、２−ブロモプロピル基、３−ブロモプロピル基、１−ブロモブチル基、２−ブロモブチル基、３−ブロモブチル基又は４−ブロモブチル基が挙げられる。ヒドロキシ基で置換されていてもよい炭化水素基としては、例えば、上記の炭化水素基に加えて、ヒドロキシメチル基、１−ヒドロキシエチル基、２−ヒドロキシエチル基、１−ヒドロキシプロピル基、２−ヒドロキシプロピル基、３−ヒドロキシプロピル基、１−ヒドロキシブチル基、２−ヒドロキシブチル基、３−ヒドロキシブチル基又は４−ヒドロキシブチル基が挙げられる。ケトン基で置換されていてもよい炭化水素基としては、例えば、上記の炭化水素基に加えて、プロパノン基又はブタノン基が挙げられる。エーテル基で置換されていてもよい炭化水素基としては、例えば、上記の炭化水素基に加えて、メトキシメチル基、メトキシエチル基、メトキシプロピル基、エトキシメチル基、エトキシエチル基、エトキシプロピル基、プロポキシメチル基、プロポキシエチル基、プロポキシプロピル基、イソプロポキシメチル基、イソプロポキシエチル基、イソプロポキシプロピル基、ブトキシメチル基、ブトキシエチル基又はブトキシプロピル基が挙げられる。エステル基で置換されていてもよい炭化水素基としては、例えば、上記の炭化水素基に加えて、アセチル基、プロピオニル基、アクリロイル基又はメタクリロイル基が挙げられる。
【００３２】
上記炭化水素基において、ハロゲン原子、ヒドロキシ基、ケトン基、エーテル基及びエステル基からなる群から選択される置換基の置換位置は、２級アミド基と結合していない側の末端が好ましい。
【００３３】
上記リガンドにおける炭化水素基としては、ヒドロキシ基、ケトン基、エーテル基及びエステル基からなる群から選択される置換基で置換されていてもよい炭化水素基が好ましく、ヒドロキシ基で置換されていてもよい炭化水素基がより好ましく、ヒドロキシ基で置換されていてもよい炭素数１〜１０の炭化水素基がより好ましく、炭素数１〜６のアルキル基又はフェニル基がより好ましい。サイトカイン除去性能の観点からは、上記２級アミド基の炭素原子と結合する炭化水素基は、無置換体が好ましい。
【００３４】
本発明の活性化白血球−活性化血小板複合体の除去材料は、活性化白血球−活性化血小板複合体の除去性能を阻害しない範囲で、上記リガンド中、上記炭化水素基は、ハロゲン原子、ヒドロキシ基、ケトン基、エーテル基及びエステル基からなる群から選択される置換基に加えて、荷電を有する官能基（例えば、アミノ基、カルボキシル基、スルホン酸基）で一部が置換されていてもよい。水不溶性担体に含まれる上記荷電を有する官能基量は、活性化白血球−活性化血小板複合体の除去の亢進、血小板の除去の抑制の観点から、水不溶性担体の乾燥重量１．０ｇ当たり０．９ｍｍｏｌ以下であることが好ましく、０．８ｍｍｏｌ以下であることがより好ましく、０．４ｍｍｏｌ以下であることがさらに好ましく、０ｍｍｏｌであることが最も好ましい。つまり、本発明の一態様としては、リガンドと基材とを含む水不溶性担体を含み、上記リガンドは、ハロゲン原子、ヒドロキシ基、ケトン基、エーテル基及びエステル基からなる群から選択される置換基で置換されていてもよい炭化水素基が、２級アミド基の炭化水素基と結合している構造であり、上記置換基に加えて、アミノ基やスルホン酸基等の荷電を有する官能基で置換された炭化水素基が上記２級アミド基の炭化水素基と結合していてもよく、但し、上記水不溶性担体に含まれる上記官能基量は、上記水不溶性担体の乾燥重量１．０ｇ当たり０．９ｍｍｏｌ以下である、活性化白血球−活性化血小板複合体の除去材料である。本発明の別の態様としては、リガンドと基材とを含む水不溶性担体を含み、上記リガンドは、ハロゲン原子、ヒドロキシ基、ケトン基、エーテル基及びエステル基からなる群から選択される置換基で置換されていてもよい炭化水素基が、２級アミド基の炭化水素基と結合している構造であり、上記置換基に加えて、アミノ基やスルホン酸基等の荷電を有する官能基で置換された炭化水素基が上記２級アミド基の炭化水素基と結合していてもよく、但し、上記水不溶性担体に含まれる上記官能基量は、上記水不溶性担体の乾燥重量１．０ｇ当たり０．４ｍｍｏｌ以下である、活性化白血球−活性化血小板複合体の除去材料である。
【００３５】
「荷電を有する官能基」とは、陽性荷電又は陰性荷電を有する官能基を意味し、その化学構造としては、例えば、陽性荷電を有する官能基（塩基性官能基）であるアミノ基又は陰性荷電を有する官能基（酸性官能基）であるスルホン酸基若しくはカルボキシル基が挙げられ、荷電を有する官能基としては、アミノ基又はスルホン酸基が好ましい。なお、上記官能基は、同一又は異なる官能基を複数組み合わせていてもよい。
【００３６】
「アミノ基」とは、アミンを部分構造として一つ以上含む構造を意味し、例えば、アンモニア由来のアミノ基、アミノメタン、アミノエタン、アミノプロパン、アミノブタン、アミノペンタン、アミノヘキサン、アミノヘプタン、アミノオクタン、アミノドデカン等の１級アミン由来のアミノ基、ジメチルアミン、ジエチルアミン、ジプロピルアミン、フェニルエチルアミン、モノメチルアミノヘキサン、３−アミノ−１−プロペン等の２級アミン由来のアミノ基、トリエチルアミン、フェニルジエチルアミン、アミノジフェニルメタン等の３級アミン由来のアミノ基、エチレンジアミン、ジエチレントリアミン、トリエチレンテトラミン、テトラエチレンペンタミン、ジプロピレントリアミン、ポリエチレンイミン（重量平均分子量５００〜１０００００）、Ｎ−メチル−２，２’−ジアミノジエチルアミン、Ｎ−アセチルエチレンジアミン若しくは１，２−ビス（２−アミノエトキシエタン）等のアミノ基を複数有する化合物（以下、ポリアミン）由来のアミノ基が挙げられる。ポリアミンの分子量が大きいとアミノ基自体の立体障害が大きくなり、活性化白血球−活性化血小板複合体の除去性能を阻害してしまうことから、ポリアミンに含まれるアミノ基の数が２〜７であり、かつポリアミン全体が直鎖構造である事が好ましく、例えば、エチレンジアミン、ジエチレンジアミン、トリエチレンジアミン、ジエチレントリアミン、トリエチレントリアミン、テトラエチレントリアミン、トリエチレンテトラミン、テトラエチレンテトラミン、ペンタエチレンテトラミン、テトラエチレンペンタミン、ペンタエチレンペンタミン、ヘキサエチレンペンタミン、ペンタエチレンヘキサミン、ヘキサエチレンヘキサミン、ヘプタエチレンヘキサミン、ヘキサエチレンヘプタミン、ヘプタエチレンヘプタミン又はオクタエチレンヘプタミン由来のアミノ基が好ましく、エチレンジアミン、ジエチレントリアミン、トリエチレンテトラミン、テトラエチレンペンタミン、ペンタエチレンヘキサミン又はポリエチレンイミン由来のアミノ基が好ましく、テトラエチレンペンタミン由来のアミノ基がさらに好ましい。また、上記アミノ基は、１級又は２級アミン由来のアミノ基であることがより好ましい。
【００３７】
「スルホン酸基」とは、スルホン酸を部分構造として一つ以上含む構造を意味し、例えば、スルホン酸、メタンスルホン酸等の脂肪族スルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−フェノールスルホン酸、２−メチルベンゼンスルホン酸、４−メチルベンゼンスルホン酸等の芳香族スルホン酸又はフルオロスルホン酸、クロロスルホン酸等のハロスルホン酸が挙げられる。
【００３８】
「２級アミド基」とは、アミド基の窒素原子に水素原子以外の置換基が一つ結合した構造を意味する。当該置換基としては、炭素数１〜６のアルキル基又は炭素数１〜６のアルキレン基が好ましく、炭素数１〜６の直鎖アルキル基（メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基又はヘキシル基）又は炭素数１〜６の直鎖アルキレン基（例えば、メチレン基、エチレン基、ｎ−プロピレン基、ｎ−ブチレン基、ｎ−ペンチレン基又はｎ−ヘキシレン基）であることがより好ましく、炭素数１〜３の直鎖アルキル基（メチル基、エチル基又はプロピル基）がさらに好ましい。２級アミド基において、上記置換基（例えば、炭素数１〜６のアルキル基又は炭素数１〜６のアルキレン基）側で基材と結合していることが好ましい。
【００３９】
水不溶性担体に含まれるアミド基量は、活性化白血球−活性化血小板複合体の除去性能の観点から、水不溶性担体の乾燥重量１．０ｇ当たり１．０〜７．０ｍｍｏｌであることが好ましい。
【００４０】
リガンドと基材とを含む水不溶性担体の構造の好ましい様式として、例えば、以下の一般式（Ｉ）で示される構造が挙げられる。
【化２】
2019136499.tif 000003
[式（Ｉ）中、Ｒは、ハロゲン原子、ヒドロキシ基、ケトン基、エーテル基及びエステル基からなる群から選択される置換基で置換されていてもよい炭化水素基を表し、波線は基材との結合位置を表し、ｎは、１〜６の整数を表す。]
【００４１】
Ｒは、ヒドロキシ基、ケトン基、エーテル基及びエステル基からなる群から選択される置換基で置換されていてもよい炭化水素基であることが好ましく、ヒドロキシ基で置換されていてもよい炭化水素基であることがより好ましく、ヒドロキシ基で置換されていてもよい炭素数１〜１０の炭化水素基がより好ましく、炭素数１〜６のアルキル基又はフェニル基であることがより好ましい。
【００４２】
ｎは、１〜３の整数であることが好ましい。
【００４３】
Ｒは、ヒドロキシ基、ケトン基、エーテル基及びエステル基からなる群から選択される置換基で置換されていてもよい炭化水素基であり、ｎは、１〜６の整数であることが好ましく、Ｒは、ヒドロキシ基で置換されていてもよい炭化水素基であり、ｎは、１〜３の整数であることがより好ましく、Ｒは、ヒドロキシ基で置換されていてもよい炭素数１〜１０の炭化水素基であり、ｎは、１〜３の整数であることがより好ましく、Ｒは、炭素数１〜６のアルキル基又はフェニル基であり、ｎは、１〜３の整数であることがより好ましい。
【００４４】
活性化白血球−活性化血小板複合体の除去性能の観点から、Ｒは、ヒドロキシ基、ケトン基、エーテル基及びエステル基からなる群から選択される置換基で置換されていてもよい炭化水素基であり、ｎは、１〜６の整数であり、水不溶性担体に含まれるアミド基量は、水不溶性担体の乾燥重量１．０ｇ当たり１．０〜７．０ｍｍｏｌであることが好ましく、Ｒは、ヒドロキシ基で置換されていてもよい炭化水素基であり、ｎは、１〜３の整数であり、水不溶性担体に含まれるアミド基量は、水不溶性担体の乾燥重量１．０ｇ当たり１．０〜７．０ｍｍｏｌであることがより好ましく、Ｒは、ヒドロキシ基で置換されていてもよい炭素数１〜１０の炭化水素基であり、ｎは、１〜３の整数であり、水不溶性担体に含まれるアミド基量は、水不溶性担体の乾燥重量１．０ｇ当たり１．０〜７．０ｍｍｏｌであることがより好ましく、Ｒは、炭素数１〜６のアルキル基又はフェニル基であり、ｎは、１〜３の整数であり、水不溶性担体に含まれるアミド基量は、水不溶性担体の乾燥重量１．０ｇ当たり１．０〜７．０ｍｍｏｌであることがより好ましい。
【００４５】
「白血球」とは、顆粒球、単球又はリンパ球のことを表す。炎症性疾患の治療を目的とする場合は顆粒球及び／又は単球が血液中から除去されることが好ましい。
【００４６】
「活性化白血球」とは、サイトカインやｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ（以下、ＬＰＳ）等によりサイトカインや活性酸素等を放出する白血球を意味し、例えば、活性化顆粒球や活性化単球が挙げられる。活性化の程度は、活性化白血球が放出する活性化酸素量を測定することで判別できる。また、活性化白血球と活性化していない白血球の表面抗原は異なるため、活性化白血球特有の表面抗原の発現を免疫蛍光染色やフローサイトメトリー等で測定することで判別でき、例えば、ＣＤ１１ｂ（ａｃｔｉｖａｔｅｄ）陽性細胞を活性化白血球とすることができる。
【００４７】
「活性化血小板」とは、サイトカイン、アデノシン二リン酸及びセロトニン等を放出する血小板を意味する。活性化の程度は、活性化血小板が放出するサイトカイン量を測定することで判別できる。また、活性化血小板と活性化していない血小板の表面抗原は異なるため、活性化血小板特有の表面抗原の発現を免疫蛍光染色やフローサイトメトリー等で測定することで判別でき、例えば、ＣＤ６２Ｐ陽性細胞を活性化血小板とすることができる。
【００４８】
「活性化白血球−活性化血小板複合体」とは、活性化白血球と活性化血小板とが結合した複合体であれば特に限定されないが、例えば、活性化顆粒球−活性化血小板複合体や活性化単球−活性化血小板複合体が挙げられる。炎症性疾患の患者においては、自己組織への貪食及びサイトカインを放出して病態に直接関与していると考えられる活性化白血球−活性化血小板複合体を除去することが、その治療に必要と考えられる。
【００４９】
「サイトカイン」とは、感染や外傷等の刺激により、免疫細胞を始めとする各種の細胞から産生され細胞外に放出されて作用する一群のタンパク質を意味し、インターフェロンα、インターフェロンβ、インターフェロンγ、インターロイキン１〜インターロイキン１５、腫瘍壊死因子−α、腫瘍壊死因子−β、ハイモビリティーグループボックス−１、エリスロポエチン及び単球走化因子等が挙げられ、特に、インターロイキン６、インターロイキン８（ＩＬ−８）、ハイモビリティーグループボックス−１が炎症性疾患の原因物質とされている。
【００５０】
本実施形態に係る活性化白血球−活性化血小板複合体の除去材料は、炎症性疾患を効率的に治療する観点で、活性化白血球−活性化血小板複合体の除去に加えて、炎症性疾患の原因の一つである白血球も除去できることが好ましい。そして、炎症性疾患をより効率的に治療する観点で、活性化白血球−活性化血小板複合体及び白血球の除去に加えて、活性化白血球−活性化血小板複合体が産生するサイトカインも除去できることがより好ましく、サイトカインの中でも、炎症性疾患の主要原因物質であるインターロイキン８を除去できることがさらに好ましい。つまり、本実施形態に係る活性化白血球−活性化血小板複合体の除去材料は、白血球及び活性化白血球−活性化血小板複合体の除去材料であることが好ましく、白血球、サイトカイン及び活性化白血球−活性化血小板複合体の除去材料であることがより好ましく、白血球、インターロイキン８及び活性化白血球−活性化血小板複合体の除去材料であることがさらに好ましい。
【００５１】
「除去材料」とは、除去対象物を除去することが可能な材料であり、少なくとも当該材料の一部に水不溶性担体を含む材料を意味し、水不溶性担体単独及び適当な補強材に水不溶性担体を固定化又は混合されたものも含む。固定化又は混合の操作は、形状に加工する前に行ってもよいし、加工した後に行ってもよい。
【００５２】
上記除去材料の形状に特に限定はないが、フィルム形状、粒子形状又は繊維形状が好ましく、繊維形状がより好ましい。体外循環の治療で使用することを考えると、比表面積が大きく、柔軟に変形可能で取り扱い性に優れる繊維形状、特に海島繊維形状が好ましい。さらに、上記繊維形状を加工した形状としては、糸束、ヤーン、ネット、編地、織物又は不織布が好ましく、表面積が大きく、流路抵抗の小ささを考慮すると糸束、編地、織物又は不織布がより好ましい。さらに、使用する際の除去材料の充填や液体の流路の均一性を考慮すると、編地又は織物が好ましい。除去の方法としては、例えば、吸着や濾過によって除去対象物を除去する方法が挙げられる。
【００５３】
補強材の化学構造としては、例えば、芳香環又は水酸基を繰り返し構造中に含まない高分子等が挙げられ、その材料としては、例えば、ポリアクリロニトリル、ポリエチレン、ポリプロピレン、ナイロン、ポリメチルメタクリレート若しくはポリテトラフルオロエチレン等の単独重合体、上記高分子材料のモノマーを複数種類用いた共重合体、又は上記単独重合体及び上記共重合体からなる群から選択される複数種類の材料を物理的にブレンドした材料等が挙げられる。中でも、ポリエチレン又はポリプロピレンが好ましい。
【００５４】
「吸着」とは、除去対象物が除去材料に付着し、容易に剥離しない状態を意味する。具体的にはイオン結合、疎水性相互作用、水素結合、ファンデルワールス結合等の分子間相互作用によって除去対象物が除去材料に付着した状態を指すが、吸着の様式はこれに限定されない。
【００５５】
除去材料が繊維形状である場合は、当該繊維の繊維径はいずれの太さであってもよいが、血球が通過できる流路の確保という観点からは、３μｍ以上が好ましく、５μｍ以上がより好ましく、１ｍｍ以下が好ましい。
【００５６】
「繊維径」とは、水不溶性担体を構成している織物、不織布又は編地等を形成する繊維の小片サンプル１０個をランダムに採取して、走査型電子顕微鏡を用いて２０００倍の写真をそれぞれ撮影し、各写真あたり１０箇所（計１００箇所）の繊維の直径を測定した値の平均値をいう。
【００５７】
上記一般式（Ｉ）で示される構造でリガンドが基材に結合している水不溶性担体は、例えば、スキーム１に示すように、基材（ＩＩ）へのＮ−ヒドロキシアルキルアミド誘導体（ＩＩＩ）の導入反応によって製造することができる。
【化３】
2019136499.tif 000004
[式中、Ｒは、ハロゲン原子、ヒドロキシ基、ケトン基、エーテル基及びエステル基からなる群から選択される置換基で置換されていてもよい炭化水素基を表し、波線は、基材との結合位置を表し、ｎは、１〜６の整数を表す。]
【００５８】
基材（ＩＩ）及びＮ−ヒドロキシアルキルアミド誘導体（ＩＩＩ）は、購入することができるか、又は公知の方法で製造することができる。なお、基材は、繊維形状に成形されたものが好ましく、ポリスチレン又はその誘導体を含む繊維がより好ましい。
【００５９】
酸（Ａｃｉｄ）としては、例えば、硫酸、塩酸若しくは硝酸又はハロゲン化アルミニウム（ＩＩＩ）（例えば、塩化アルミニウム（ＩＩＩ））若しくはハロゲン化鉄（ＩＩＩ）（例えば、塩化鉄（ＩＩＩ））等のルイス酸が挙げられ、硫酸又は塩化鉄（ＩＩＩ）が好ましい。
【００６０】
導入反応に用いる反応溶媒としては、例えば、ニトロベンゼン、ニトロプロパン、クロロベンゼン、トルエン又はキシレンが挙げられるが、ニトロベンゼン又はニトロプロパンが好ましい。
【００６１】
導入反応の反応温度は、０〜９０℃が好ましく、５〜４０℃がより好ましい。
【００６２】
導入反応の反応時間は、１分間〜１２０時間が好ましく、５分間〜２４時間がより好ましい。
【００６３】
また、反応溶液中に基材を添加する前にパラホルムアルデヒドが溶解した溶液を反応溶液に添加してもよい。パラホルムアルデヒドを溶解させる溶媒に制限はないが、反応溶液の溶媒組成と同じであることが好ましい。パラホルムアルデヒド溶液を添加してから基材を添加するまでの時間は１〜３０分間が好ましく、１〜５分間がより好ましい。
【００６４】
また、スキーム２に示すように、上記一般式（Ｉ）で示される構造でリガンドが基材に結合している水不溶性担体を酸加水分解し、アルキルアミン化基材（ＩＶ）を製造し、得られたアルキルアミン化基材（ＩＶ）とカルボン酸誘導体（Ｖ）とを縮合反応することで、上記一般式（Ｉ）で示される構造でリガンドが基材に結合している水不溶性担体を得ることができる。
【化４】
2019136499.tif 000005
[式中、Ｒは、ハロゲン原子、ヒドロキシ基、ケトン基、エーテル基及びエステル基からなる群から選択される置換基で置換されていてもよい炭化水素基を表し、波線は、基材との結合位置を表し、ｎは、１〜６の整数を表す。]
【００６５】
無機酸としては、硫酸又は塩酸が好ましい。
【００６６】
酸加水分解の反応温度は、８０〜１３０℃が好ましい。
【００６７】
酸加水分解の反応時間は、１０〜３０時間が好ましい。
【００６８】
縮合反応に用いるカルボン酸誘導体（Ｖ）の量は、アルキルアミン化基材（ＩＶ）に対して３〜３０当量が好ましく、５〜１５当量がより好ましい。
【００６９】
縮合反応に用いる縮合剤（Ｃｏｎｄｅｎｓｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）としては、例えば、４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロリドｎ−水和物、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩又はジシクロヘキシルカルボジイミドが挙げられるが、４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロリドｎ−水和物が好ましい。
【００７０】
縮合反応に用いる縮合剤（Ｃｏｎｄｅｎｓｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）の量は、アルキルアミン化基材（ＩＶ）に対して、３〜１０当量が好ましく、５〜７当量がより好ましい。
【００７１】
縮合反応に用いる反応溶媒としては、例えば、水、メタノール、エタノール、ジメチルスルホキシド（以下、ＤＭＳＯ）又はこれらの混合溶媒等が挙げられるが、水又はメタノールが好ましい。
【００７２】
縮合反応の反応温度は、２０〜５０℃が好ましい。
【００７３】
縮合反応の反応時間は、２〜２４時間が好ましい。
【００７４】
縮合反応に用いる縮合剤（Ｃｏｎｄｅｎｓｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）及びカルボン酸誘導体（Ｖ）は、購入することができるか、又は公知の方法で製造することができる。
【００７５】
活性化白血球−活性化血小板複合体の除去材料中、水不溶性担体に含まれるアミド基量は、当該除去材料に含まれる補強材を、補強材のみが溶解する溶媒に溶かすことで水不溶性担体のみを取り出して、乾燥後に、乾燥重量を測定し、当該水不溶性担体を塩酸中で加熱することによりアミド基を加水分解し、生成したアミノ基を塩酸でイオン交換し、水酸化ナトリウム水溶液で逆滴定することで決定することができる。補強材を含まない除去材料の場合は補強材を溶媒に溶かす操作は不要である。
【００７６】
活性化白血球−活性化血小板複合体の除去材料中、水不溶性担体に含まれる陽性荷電を有する官能基量（例えば、アミノ基量）は、当該除去材料に含まれる補強材を、補強材のみが溶解する溶媒に溶かすことで水不溶性担体のみを取り出して、乾燥後に、乾燥重量を測定し、当該水不溶性担体中の塩基性官能基（例えば、アミノ基）を塩酸でイオン交換し、水酸化ナトリウム水溶液で逆滴定することより決定することができる。固体の重量を測定した後に８０℃、大気圧で２４時間加熱乾燥し、残存した固体の重量減少量が乾燥前の重量の１重量％以下であるとき、当該固体は乾燥状態とみなす。また、重量減少量が１重量％を上回る場合は、再度８０℃、大気圧で２４時間加熱乾燥し、重量減少量が１重量％を下回るまで繰り返すことで乾燥状態にできる。補強材を含まない除去材料の場合は補強材を溶媒に溶かす操作は不要である。
【００７７】
活性化白血球−活性化血小板複合体の除去材料中、水不溶性担体に含まれる陰性荷電を有する官能基量（例えば、スルホン酸基量）は、当該除去材料に含まれる補強材を、補強材のみが溶解する溶媒に溶かすことで水不溶性担体のみを取り出して、乾燥後に、乾燥重量を測定し、当該水不溶性担体中の酸性官能基（例えば、スルホン酸基）を水酸化ナトリウム水溶液でイオン交換し、塩酸で逆滴定することより決定することができる。固体の重量を測定した後に８０℃、大気圧で２４時間加熱乾燥し、残存した固体の重量減少量が乾燥前の重量の１重量％以下であるとき、当該固体は乾燥状態とみなす。また、重量減少量が１重量％を上回る場合は、再度８０℃、大気圧で２４時間加熱乾燥し、重量減少量が１重量％を下回るまで繰り返すことで乾燥状態にできる。補強材を含まない除去材料の場合は補強材を溶媒に溶かす操作は不要である。
【００７８】
活性化白血球−活性化血小板複合体の除去材料中、水不溶性担体に陽性荷電を有する官能基と陰性荷電を有する官能基の両方が含まれる場合、当該水不溶性担体に含まれる荷電を有する官能基量は、活性化白血球−活性化血小板複合体の除去材料に含まれる補強材を、補強材のみが溶解する溶媒に溶かすことで水不溶性担体のみを取り出して乾燥後に、その乾燥重量を測定し、当該水不溶性担体中の荷電を有する官能基を塩酸でイオン交換し、水酸化ナトリウム水溶液で逆滴定することより決定することができる。固体の重量を測定した後に８０℃、大気圧で２４時間加熱乾燥し、残存した固体の重量減少量が乾燥前の重量の１重量％以下であるとき、当該固体は乾燥状態とみなす。また、重量減少量が１重量％を上回る場合は、再度８０℃、大気圧で２４時間加熱乾燥し、重量減少量が１重量％を下回るまで繰り返すことで乾燥状態にできる。補強材を含まない除去材料の場合は補強材を溶媒に溶かす操作は不要である。
【００７９】
また、本発明は、上記の活性化白血球−活性化血小板複合体の除去材料を備える血液浄化器を提供することを特徴としている。
【００８０】
「血液浄化器」とは、血液を体外に循環させて、血液中の老廃物や有害物質を取り除くことを目的とする医療材料を少なくとも一部に有する製品のことをいい、例えば、人工腎臓用モジュールや体外循環カラム等が挙げられる。
【００８１】
さらに、上記の活性化白血球−活性化血小板複合体の除去材料を備える血液浄化器は、炎症性疾患治療用途に好適に用いることができる。炎症性疾患治療用として使用する場合、上記の活性化白血球−活性化血小板複合体の除去材料を備える血液浄化器と患者とを血液回路で接続し、本発明の血液浄化器に当該患者から取り出した血液を通過させ、これを患者に戻すという血液体外循環方法が好ましい。血液等の処理時間としては、血液成分によるさらなる炎症誘発を抑制する観点から、持続的な処理が好ましく、４時間以上がより好ましく、２４時間以上がさらに好ましい。
【００８２】
上記の活性化白血球−活性化血小板複合体の除去材料を備える血液浄化器は、他の体液処理方法や医療機器と併用しても構わない。他の体液処理方法や医療機器としては、例えば、血漿交換、腹膜透析、血漿分離器、ヘモフィルター、人工心肺又はＥＣＭＯ（Ｅｘｔｔａｃｏｒｐｏｒｅａｌ  ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｏｘｙｇｅｎａｔｉｏｎ）が挙げられる。
【００８３】
上記の活性化白血球−活性化血小板複合体の除去材料の、活性化白血球−活性化血小板複合体の除去性能、白血球の除去性能、血小板の除去性能の評価方法としては、例えば、活性化白血球−活性化血小板複合体、白血球及び血小板を含む液体に上記除去材料を含浸し、含浸後に液体中の活性化白血球−活性化血小板複合体、白血球及び血小板の減少量を評価し、それらの除去率をそれぞれ算出する方法が挙げられる。また、入口及び出口を有する容器に上記除去材料を充填し、活性化白血球−活性化血小板複合体、白血球及び血小板を含む液体を通液させて、入口及び出口でのそれらの濃度の変化からそれらの除去率をそれぞれ算出する方法を用いることもできる。
【００８４】
活性化白血球−活性化血小板複合体の濃度の測定は、例えば、活性化白血球−活性化血小板複合体を含む液体に活性化血小板と特異的に結合する活性化検出試薬（活性化血小板検出試薬）と、活性化白血球と特異的に結合する活性化検出試薬（活性化白血球検出試薬／活性化顆粒球検出試薬／活性化単球検出試薬）を反応させ、両方の試薬と結合した血球分画を測定することにより行われる。当該測定には、フローサイトメーターを用いることができる。
【００８５】
白血球の濃度の測定は、例えば、白血球を含む液体に白血球検出試薬を反応させ、試薬と結合した血球分画を測定することにより行われる。当該測定には、フローサイトメーターや血球計算機を用いることができる。
【００８６】
血小板の濃度の測定は、例えば、血小板を含む液体に血小板検出試薬を反応させ、試薬と結合した血球分画を測定することにより行われる。当該測定には、フローサイトメーターや血球計算機を用いることができる。
【００８７】
活性化血小板検出試薬は、非活性化血小板及び白血球と結合せず、活性化血小板と結合性を有するものであり、例えば、活性化血小板特異的な細胞表面マーカーを認識する抗ＣＤ６２Ｐ抗体（Ａｎｔｉ−ｈｕｍａｎ  ＣＤ６２Ｐ（Ｐ−Ｓｅｌｅｃｔｉｎ）Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｄａｔａ  Ｓｈｅｅｔ，ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ．）を用いることができる。また、活性化白血球検出試薬は、非活性化白血球及び血小板と結合せず、活性化白血球と結合性を有するものであり、所望の白血球成分に特異的な又は共通の細胞表面マーカーの抗体が挙げられ、活性化顆粒球及び活性化単球の検出試薬としては、例えば、抗ＣＤ１１ｂ抗体を用いることができる。なかでも、活性化したコンフォメーションを特異的に検出することができるａｃｔｉｖａｔｅｄ抗ＣＤ１１ｂ抗体を用いることで活性化顆粒球及び活性化単球を特異的に検出することが可能となる（Ａｎｔｉ−ｈｕｍａｎ  ＣＤ１１ｂ（ａｃｔｉｖａｔｅｄ）Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｄａｔａ  Ｓｈｅｅｔ，ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ．）。また、白血球の検出には抗ＣＤ４５抗体を用いることができる。顆粒球の検出には、前方散乱光と側方散乱光を組み合わせてもよいが、抗ＣＤ４５抗体と側方散乱光を組み合わせてもよく、抗ＣＤ４５抗体と抗ＣＤ６６ｂ抗体を組み合わせてもよい。単球の検出には、前方散乱光と側方散乱光を組み合わせてもよいが、抗ＣＤ４５抗体と側方散乱光を組み合わせてもよく、抗ＣＤ４５抗体と抗ＣＤ１４抗体を組み合わせてもよい。リンパ球の検出には、前方散乱光と側方散乱光を組み合わせてもよいが、抗ＣＤ４５抗体と側方散乱光を組み合わせてもよく、抗ＣＤ４抗体や抗ＣＤ８抗体を組み合わせてもよく、また、ＣＤ４５陽性細胞からＣＤ６６ｂ陽性細胞とＣＤ１４陽性細胞を差し引いた細胞集団をリンパ球とすることも可能である。血小板の検出には抗ＣＤ４１抗体を用いることができる。
【００８８】
前記検出試薬には、結合の確認のための指標が付されているのが好ましい。当該指標は、採用する検出方法に従い、任意に選択される。操作の簡便さや定量性からフローサイトメーターによる測定を用いるが、この場合に、検出試薬は蛍光標識される。蛍光標識も特に限定はなく、例えば、ＦＩＴＣ（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ  ｉｓｏｔｈｉｏｃｙａｎａｔｅ）、ＰＥ（ｐｈｙｃｏｅｒｙｔｈｒｉｎ）、若しくはＡＰＣ（Ａｌｌｏｐｈｙｃｏｃｙａｎｉｎ）による標識を採用することができる。活性化白血球検出試薬と活性化血小板検出試薬とは異なる蛍光物質で標識される。これらの標識された検出試薬は、常法に従い製造できるが、市販品としても入手できる。
【００８９】
活性化白血球−活性化血小板複合体検出試薬及び白血球と前記の検出試薬との反応は、採用する検出試薬に応じて適宜設定される。前記の検出試薬が抗体である場合は、通常の免疫反応に従えばよい。活性化白血球−活性化血小板複合体検出試薬及び白血球検出試薬の反応液は特に限定されないが、所望により、検出反応中の細胞成分の活性化を抑制するのに有効量のアジ化ナトリウムやホルムアルデヒドを含ませてもよい。また、反応温度は、特に限定されないが、細胞成分の活性化を抑制する上で、４℃程度にて行うのが好ましい。
【００９０】
活性化白血球−活性化血小板複合体の除去材料を使用する際の安全性を考慮すると、除去材料が接触する液体のｐＨを変化させないこと、例えば、当該除去材料を、液性が中性付近の液体に含浸した場合に、含浸後の液体の液性は中性付近であることが望ましい。
【００９１】
上記除去材料の安全性の評価方法として、例えば、当該除去材料を一定時間、一定温度で液体中に含浸し、含浸後の液体中のｐＨを測定する方法が挙げられる。
【００９２】
また、体外循環療法を行う際、患者の出血リスクを低減するために一定数以上の血小板数を患者の血液中に維持する必要がある。体外循環療法を実施することで血小板が２０％以上除去されてしまう場合には血小板輸血等の血小板数を増やす処置により、出血のリスクを抑えることが必要になる。そのため、血小板の吸着量が少ない材料を用いて体外循環療法を実施できれば、追加の処置なしで患者の血液中に一定数以上の血小板数を維持することが可能となるため、追加の処置に起因する患者への副作用を除外でき、さらに、臨床現場での作業負担も軽減できると考えられる。
【００９３】
さらに、抗凝固剤の吸着能を有する材料を用いて体外循環療法を行う場合、体外循環療法中の血液凝固防止を目的として、血液中の抗凝固剤の濃度管理が必要である。抗凝固剤の吸着量が２０％を上回る材料を用いる場合には、血液凝固を防止するために専門的な管理が必要とされる。そのため、抗凝固剤の吸着量が低い材料を用いて体外循環療法を実施できれば、抗凝固剤吸着による抗凝固剤の濃度減少が抑えられるため、血液中の抗凝固剤の濃度管理が簡便になり、体外循環療法中の血液凝固のリスクをより低減できる。
【００９４】
上記除去材料の抗凝固剤除去性能の評価方法としては、例えば抗凝固剤を溶解した生理食塩液に除去材料を含浸し、含浸後の生理食塩液中の抗凝固剤濃度減少量を評価し、抗凝固剤の除去率を算出する方法が挙げられる。
【００９５】
「抗凝固剤」とは、血液凝固を阻害する物質であり、例えば、ヘパリン、低分子ヘパリン、メシル酸ナファモスタット又はアルガトロバンが挙げられる。
【００９６】
活性化白血球−活性化血小板複合体の除去材料のサイトカイン除去性能の評価方法としては、例えば、サイトカインを溶解したウシ胎児血清（以下、ＦＢＳ）に当該除去材料を含浸し、含浸前後のＦＢＳ中のサイトカイン濃度を測定し、含浸前後のサイトカイン濃度からサイトカインの除去率を算出する方法が挙げられる。
【実施例】
【００９７】
以下、本発明の活性化白血球−活性化血小板複合体の除去材料について、実施例により具体的に説明するが、本発明はこれらの例によって限定されるものではない。
【００９８】
（紡糸）
以下の成分を用いて、紡糸速度１２５０ｍ／分の製糸条件で、１フィラメントあたり７０４島の海島繊維（繊維径：３ｄｔｅｘ、２０μｍ）を３６フィラメント束ねた繊維（以下、繊維Ａ）を得た。
島成分：  ポリプロピレン
海成分：  ポリスチレン
複合比率（重量比率）：  島：海＝５０：５０
【００９９】
（編地の作製）
得られた繊維Ａを用いて、筒編み機（機種名：丸編み機  ＭＲ−１、丸善産業株式会社）を用いて、横編で編地（以下、編地Ａ）を作製した。
【０１００】
（アミド化編地の作製）
ニトロベンゼン４６ｗｔ％、硫酸４６ｗｔ％、パラホルムアルデヒド１ｗｔ％及びＮ−メチロール−α−クロルアセトアミド（以下、ＮＭＣＡ）７ｗｔ％を１０℃以下で混合、撹拌、溶解させた反応液（以下、ＮＭＣＡ化反応液）を調製した。５℃に冷却した当該ＮＭＣＡ化反応液４０ｍＬに、１．０ｇの上記編地Ａを加え、反応液を５℃に保ったまま２時間反応させた。その後、反応液から編地Ａを取り出し、４０ｍＬのニトロベンゼンに編地Ａを浸漬し洗浄した。続いて編地Ａを取り出し、メタノールに浸漬し洗浄を行い、除去材料Ａを得た。
【０１０１】
ＮＭＣＡを添加しない以外は、除去材料Ａの製法と同操作を行うことで、除去材料Ｂを得た。
【０１０２】
ＮＭＣＡの添加濃度を７ｗｔ％から０．７ｗｔ％とした以外は、除去材料Ａの製法と同操作を行うことで、除去材料Ｃを得た。
【０１０３】
ＮＭＣＡ化反応液と編地Ａとの反応時間を２時間から２４時間とした以外は、除去材料Ａの製法と同操作を行うことで、除去材料Ｄを得た。
【０１０４】
１．０ｇの除去材料Ａに対し、６Ｍ水酸化ナトリウム水溶液５０ｍＬを添加して、２５℃で３０分間攪拌し、反応後の除去材料Ａを取り出し、水に浸漬し洗浄を行い、除去材料Ｅを得た。
【０１０５】
除去材料Ｃ１．０ｇ及び６Ｍ塩酸１００ｍＬを、２００ｍＬナスフラスコに添加し、２４時間１３０℃で加熱還流し、還流後に濾紙で濾別することで、酸加水分解後の除去材料Ｃを得た。次に、１．０ｇの酸加水分解後の除去材料Ｃに対し、６Ｍ水酸化ナトリウム水溶液５０ｍＬを添加して、２５℃で３０分間攪拌し、濾紙を用いて濾別し、除去材料Ｆを得た。
【０１０６】
除去材料Ｃを除去材料Ａとした以外は除去材料Ｆの製法と同操作を行うことで、除去材料Ｇを得た。
【０１０７】
除去材料Ｃを除去材料Ｄとした以外は除去材料Ｆの製法と同操作を行うことで、除去材料Ｈを得た。
【０１０８】
除去材料Ｈ１．０ｇ、酢酸０．６３ｍＬをメタノール２５ｍＬに添加し、２５℃で1時間攪拌した。当該反応液に、４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロリドｎ水和物を１．４ｇ添加し、３０℃で２４時間攪拌し、反応させた。その後、反応液から反応後の除去材料Ｈを取り出し、反応後の除去材料Ｈ１．０ｇに対し、６Ｍ水酸化ナトリウム水溶液５０ｍＬを添加して、２５℃で３０分間攪拌し、除去材料Ｉを得た。
【０１０９】
酢酸０．６３ｍＬを安息香酸１．２ｇとした以外は、除去材料Ｉの製法と同操作を行うことで、除去材料Ｊを得た。
【０１１０】
酢酸０．６３ｍＬをヘキサン酸１．１ｍＬとし、除去材料Ｈを除去材料Ｆとした以外は、除去材料Ｉの製法と同操作を行うことで、除去材料Ｋを得た。
【０１１１】
除去材料Ｆを除去材料Ｇとした以外は、除去材料Ｋの製法と同操作を行うことで、除去材料Ｌを得た。
【０１１２】
除去材料Ｆを除去材料Ｈとした以外は、除去材料Ｋの製法と同操作を行うことで、除去材料Ｍを得た。
【０１１３】
（テトラエチレンペンタミン化編地の作製）
テトラエチレンペンタミン（以下、ＴＥＰＡ）の濃度が３ｍＭ、トリエチルアミンの濃度が４７４ｍＭとなるようにそれぞれを５００ｍＬのＤＭＳＯに溶解した液に、１０ｇの除去材料Ａを浸して４０℃で３時間反応させた。その後、反応液から反応後の除去材料Ａを取り出し、５００ｍＬのＤＭＳＯに浸漬し洗浄、５００ｍＬのメタノールに浸漬し洗浄、５００ｍＬの水に浸漬し洗浄して、除去材料Ｎを得た。
【０１１４】
ＴＥＰＡの濃度を３ｍＭから５ｍＭとした以外は、除去材料Ｎの製法と同操作を行うことで、除去材料Ｏを得た。
【０１１５】
ＴＥＰＡの濃度を３ｍＭから２０ｍＭとした以外は、除去材料Ｎの製法と同操作を行うことで、除去材料Ｐを得た。
【０１１６】
ＴＥＰＡの濃度を３ｍＭから２ｍＭとした以外は、除去材料Ｎの製法と同操作を行うことで、除去材料Ｑを得た。
【０１１７】
（スルホン酸置換アミド化編地の作製）
除去材料Ｈを除去材料Ｇとし、酢酸０．６３ｍＬを酢酸０．３２ｍＬおよびα−スルフォフェニル酢酸０．５３ｇとした以外は、除去材料Ｉの製法と同操作を行うことで、除去材料Ｒを得た。
【０１１８】
除去材料Ｈを除去材料Ｇとし、酢酸０．６３ｍＬを酢酸０．３２ｍＬおよびα−スルフォフェニル酢酸１．０６ｇとした以外は、除去材料Ｉの製法と同操作を行うことで、除去材料Ｓを得た。
【０１１９】
除去材料Ｈを除去材料Ｇとし、酢酸０．６３ｍＬを酢酸０．３２ｍＬおよびα−スルフォフェニル酢酸１．５９ｇとした以外は、除去材料Ｉの製法と同操作を行うことで、除去材料Ｔを得た。
【０１２０】
上記製法により得られた除去材料Ｎ〜Ｔは、いずれも水不溶性担体に含まれる荷電を有する官能基量よりもリガンド導入量（アミド基導入量と同値）の方が多いことから、いずれも除去材料Ａ由来のクロロメチル基がリガンド中に残存している。例えば、除去材料Ｎの場合、後述の表７に記載の通り、アミド基量が４．７ｍｍｏｌ／ｇに対し、荷電を有するテトラエチレンペンチル基量（アミノ基量の５分の１の値）が０．１６ｍｍｏｌ／ｇとなるので、リガンドに含まれるクロロメチル基の一部がテトラエチレンペンチル基で置換された構造となっており、４．５４ｍｍｏｌ／ｇは、クロロメチル基のまま残存している。また、除去材料Ｒの場合、後述の表９に記載の通り、アミド基量が４．７ｍｍｏｌ／ｇに対し、荷電を有するα−スルフォフェニル基量（スルホン酸基量と同値）が０．４ｍｍｏｌ／ｇとなるので、リガンドに含まれクロロメチル基の一部がα−スルフォフェニル基で置換された構造となっており、４．３ｍｍｏｌ／ｇは、クロロメチル基のまま残存している。
【０１２１】
（水不溶性担体に含まれるアミド基量の測定）
除去材料Ａに含まれる水不溶性担体Ａに含まれるアミド基量は、当該水不溶性担体Ａ中のアミド基を加水分解することで生成したアミノ基量を、酸塩基逆滴定により測定することで決定した。２００ｍＬナスフラスコに除去材料Ａを５．０ｇ、１００ｍＬのトルエンを添加し、１５０℃で２４時間還流し、補強材として添加されているポリプロピレンを溶解させ除去した。還流後の除去材料Ａを、１００℃に加温した２Ｌのトルエンにすみやかに添加、洗浄し、補強材を含まない除去材料Ａを単離した。そして、得られた補強材除去後の除去材料Ａをメタノールで洗浄し、乾燥機にて８０℃で４８時間静置することで水不溶性担体Ａを得た。次に、当該水不溶性担体Ａ１．０ｇと６Ｍ塩酸１００ｍＬを２００ｍＬナスフラスコに添加し、２４時間１３０℃で還流した。還流後、濾紙で濾別することで水不溶性担体Ａを回収し、酸加水分解後の水不溶性担体Ａを得た。次に、ポリプロピレン製容器に対し、得られた酸加水分解後の水不溶性担体Ａを全量、６Ｍ水酸化ナトリウム水溶液５０ｍＬを添加して３０分攪拌後、濾紙を用いて濾別した。次にイオン交換水５０ｍＬに濾別した酸加水分解後の水不溶性担体Ａを添加して３０分間攪拌し、濾紙を用いて濾別した。酸加水分解後の水不溶性担体Ａを添加したイオン交換水のｐＨが７になるまでイオン交換水に添加、濾別を繰り返し、酸加水分解後の水不溶性担体Ａを添加したイオン交換水のｐＨが７になった後に、酸加水分解後の水不溶性担体Ａを８０℃常圧条件で４８時間静置し、乾燥させた。次に、ポリプロピレン製容器に当該水不溶性担体Ａを全量と０．１Ｍ塩酸を６０ｍＬ添加し、１０分間攪拌した。攪拌後、溶液のみを５ｍＬ抜き取って、ポリプロピレン製容器に移した。次に、得られた溶液に対して、０．１Ｍの水酸化ナトリウム水溶液を０．１ｍＬ滴下した。滴下後１０分間攪拌し、溶液のｐＨを測定した。滴下後１０分間の攪拌、ｐＨの測定を同様に１００回繰り返した。溶液のｐＨが８．５を越えた際の水酸化ナトリウム水溶液滴下量を１．０ｇ当たりの滴定量とした。１．０ｇ当たりの滴定量と以下の式１を用いて、水不溶性担体Ａの乾燥重量１．０ｇ当たりのアミド基の含量を算出した。同様の操作を除去材料Ｂ〜Ｅ及びＩ〜Ｔで行った。結果を表２、表３、表５、表７〜表９に示す。
【０１２２】
水不溶性担体の乾燥重量１．０ｇ当たりのアミド基量（ｍｍｏｌ／ｇ）＝｛添加した０．１Ｍ塩酸の液量（６０ｍＬ）／抜き取った塩酸の液量（５ｍＬ）｝×１．０ｇ当たりの滴定量（ｍＬ）×水酸化ナトリウム水溶液濃度（０．１Ｍ）  ・・・式１
【０１２３】
（水不溶性担体に含まれるアミノ基量の測定）
除去材料Ａに含まれる水不溶性担体Ａに含まれるアミノ基量は、当該水不溶性担体Ａ中のアミノ基量を、酸塩基逆滴定することより決定した。水不溶性担体Ａに含まれるアミド基量の測定と同様の操作で、除去材料Ａから水不溶性担体Ａを得た。脱塩後の水不溶性担体Ａを８０℃常圧条件で４８時間静置した後、ポリプロピレン製容器に当該水不溶性担体Ａを１．０ｇと０．１Ｍ塩酸を３０ｍＬ添加し、１０分間攪拌した。攪拌後、溶液のみを５ｍＬ抜き取って、ポリプロピレン製容器に移した。次に、得られた溶液に対して、０．１Ｍの水酸化ナトリウム水溶液を０．１ｍＬ滴下した。滴下後１０分間攪拌し、溶液のｐＨを測定した。滴下後１０分間の攪拌、ｐＨの測定を同様に１００回繰り返した。溶液のｐＨが８．５を越えた際の水酸化ナトリウム水溶液滴下量を１．０ｇ当たりの滴定量とした。１．０ｇ当たりの滴定量と以下の式２を用いて、水不溶性担体Ａの乾燥重量１．０ｇ当たりのアミノ基量を算出した。同様の操作を除去材料Ｅ、Ｍ、Ｎ、Ｏ、Ｐ及びＱで行った。結果を表３、表５及び表７に示す。
【０１２４】
水不溶性担体の乾燥重量１．０ｇ当たりのアミノ基量（ｍｍｏｌ／ｇ）＝｛添加した０．１Ｍ塩酸の液量（３０ｍＬ）／抜き取った塩酸の液量（５ｍＬ）｝×１．０ｇ当たりの滴定量（ｍＬ）×水酸化ナトリウム水溶液濃度（０．１Ｍ）  ・・・式２
【０１２５】
（水不溶性担体に含まれるスルホン酸基量の測定）
除去材料Ａに含まれる水不溶性担体Ａに含まれるスルホン酸基量は、当該水不溶性担体Ａ中のスルホン酸基量を、酸塩基逆滴定することより決定した。水不溶性担体Ａに含まれるアミド基量の測定と同様の操作で、除去材料Ａから水不溶性担体Ａを得た。脱塩後の水不溶性担体Ａを８０℃常圧条件で４８時間静置した後、ポリプロピレン製容器に当該水不溶性担体Ａ１．０ｇと６Ｍ塩酸を５０ｍＬ添加し、１０分間攪拌した。攪拌後、塩酸溶液から不溶性担体Ａを取り出し、イオン交換水５０ｍＬに入ったポリプロピレン製容器に入れ、１０分間攪拌した。次に、イオン交換水から不溶性担体Ａ１．０ｇを取り出し、０．１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液３０ｍＬの入ったポリプロピレン製容器に入れ、１０分間攪拌した。次に、水酸化ナトリウム水溶液の溶液のみを５ｍＬ抜き取って、ポリプロピレン製容器に移した。得られた水酸化ナトリウム水溶液に対して、０．１Ｍの塩酸を０．１ｍＬ滴下した。滴下後１０分間攪拌し、溶液のｐＨを測定した。滴下後１０分間の攪拌、ｐＨの測定を同様に１００回繰り返した。溶液のｐＨが６．０を下回った際の塩酸滴下量を１．０ｇ当たりの滴定量とした。１．０ｇ当たりの滴定量と以下の式３を用いて、水不溶性担体Ａの乾燥重量１．０ｇ当たりのスルホン酸基量を算出した。同様の操作を除去材料Ｒ、Ｓ及びＴで行った。結果を表８及び表９に示す。
【０１２６】
水不溶性担体の乾燥重量１．０ｇ当たりのスルホン酸基量（ｍｍｏｌ／ｇ）＝｛添加した０．１Ｍ水酸化ナトリウムの液量（３０ｍＬ）／抜き取った水酸化ナトリウム水溶液の液量（５ｍＬ）｝×１．０ｇ当たりの滴定量（ｍＬ）×塩酸濃度（０．１Ｍ）  ・・・式３
【０１２７】
（実施例１）
除去材料Ｃの活性化白血球−活性化血小板複合体及び白血球の除去性能を確認するため、健常ヒトボランティア血液に除去材料Ｃを所定時間含浸して取り出し、含浸前後の溶液中の活性化白血球−活性化血小板複合体及び白血球の減少量を測定した。以下に測定方法を示す。
【０１２８】
除去材料Ｃを直径１０ｍｍの円板状に切り抜いた後、これを３枚ずつポリプロピレン製の容器に入れた。ＬＰＳを７０ＥＵ／ｍＬになるよう添加した健常ヒトボランティア血液を３７℃、３０分間、６５ｒｐｍで振とうすることで、血液を活性化させた。次に、除去材料Ｃを入れた前記容器に、除去材料Ｃ１．０ｃｍ３に対して１０ｍＬとなるように活性化させた血液を添加し、３７℃のインキュベータ内で１時間転倒混和した。その後、血液中から除去材料Ｃを取り除き、血液サンプルを回収した。通液後得られたサンプルを細胞の表面抗原を表１に示した蛍光標識抗体にて染色後にＶｅｒｓａＬｙｓｅを用いて溶血処理をして、静置後は氷冷、暗所に保管し、速やかに各サンプルに含まれる細胞数を測定した。なお、生細胞の判定には、ｅｔｈｉｄｉｕｍ  ｍｏｎｏａｚｉｄｅ  ｂｒｏｍｉｄｅを、細胞数のカウントには、Ｆｌｏｗ Ｃｏｕｎｔ（ＢＥＣＫＭＡＮ  ＣＯＵＬＴＥＲ）を用いた。測定にはフローサイトメトリー（ＢＤ  ＦＡＣＤＣａｌｉｂｕｒＩＩ（Ｂｅｃｔｏｎ,  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ））を用いた。解析には、ＦＬＯＷＪＯ（トミーデジタルバイオロジー株式会社）を使用した。活性化顆粒球−活性化血小板複合体、活性化単球−活性化血小板複合体、顆粒球及び単球の濃度を算出した。除去材料Ｃをいれずに、活性化させた血液を３７℃のインキュベータ内で１時間転倒混和した血液サンプルをブランクサンプルとし、除去材料Ｃと同様の操作により、活性化顆粒球−活性化血小板複合体、活性化単球−活性化血小板複合体、顆粒球及び単球の濃度を算出した。除去材料Ｃの各血球成分の除去率を、次に示す式４〜式７によりそれぞれ算出した。結果を表２に示す。
【０１２９】
活性化顆粒球−活性化血小板複合体除去率（％）＝｛（ブランクサンプルの活性化顆粒球−活性化血小板複合体濃度）−（除去材料Ｃと反応後の活性化顆粒球−活性化血小板複合体濃度）｝／（ブランクサンプルの活性化顆粒球−活性化血小板複合体濃度）×１００  ・・・式４
活性化単球−活性化血小板複合体除去率（％）＝｛（ブランクサンプルの活性化単球−活性化血小板複合体濃度）−（除去材料Ｃと反応後の活性化単球−活性化血小板複合体濃度）｝／（ブランクサンプルの活性化単球−活性化血小板複合体濃度）×１００  ・・・式５
顆粒球除去率（％）＝｛（ブランクサンプルの顆粒球濃度）−（除去材料Ｃと反応後の顆粒球濃度）｝／（ブランクサンプルの顆粒球濃度）×１００  ・・・式６
単球除去率（％）＝｛（ブランクサンプルの単球濃度）−（除去材料Ｃと反応後の単球濃度）｝／（ブランクサンプルの単球濃度）×１００  ・・・式７
【０１３０】
【表１】
2019136499.tif 000006
【０１３１】
（実施例２）
除去材料Ａについて、実施例１と同様の操作を行い、活性化顆粒球−活性化血小板複合体、活性化単球−活性化血小板複合体、顆粒球及び単球の除去率を示した。結果を表２、表３及び表８に示す。
【０１３２】
（実施例３）
除去材料Ｄについて、実施例１と同様の操作を行い、活性化顆粒球−活性化血小板複合体、活性化単球−活性化血小板複合体、顆粒球及び単球の除去率を示した。結果を表２に示す。
【０１３３】
（実施例４）
除去材料Ｅについて、実施例１と同様の操作を行い、活性化顆粒球−活性化血小板複合体、活性化単球−活性化血小板複合体、顆粒球及び単球の除去率を示した。結果を表２に示す。
【０１３４】
（実施例５）
除去材料Ｉについて、実施例１と同様の操作を行い、活性化顆粒球−活性化血小板複合体、活性化単球−活性化血小板複合体、顆粒球及び単球の除去率を示した。結果を表２に示す。
【０１３５】
（実施例６）
除去材料Ｊについて、実施例１と同様の操作を行い、活性化顆粒球−活性化血小板複合体、活性化単球−活性化血小板複合体、顆粒球及び単球の除去率を示した。結果を表２に示す。
【０１３６】
（実施例７）
除去材料Ｋについて、実施例１と同様の操作を行い、活性化顆粒球−活性化血小板複合体、活性化単球−活性化血小板複合体、顆粒球及び単球の除去率を示した。結果を表２に示す。
【０１３７】
（実施例８）
除去材料Ｌについて、実施例１と同様の操作を行い、活性化顆粒球−活性化血小板複合体、活性化単球−活性化血小板複合体、顆粒球及び単球の除去率を示した。結果を表２に示す。
【０１３８】
（実施例９）
除去材料Ｍについて、実施例１と同様の操作を行い、活性化顆粒球−活性化血小板複合体、活性化単球−活性化血小板複合体、顆粒球及び単球の除去率を示した。結果を表２に示す。
【０１３９】
（実施例１０）
除去材料Ｎについて、実施例１と同様の操作を行い、活性化顆粒球−活性化血小板複合体、活性化単球−活性化血小板複合体、顆粒球及び単球の除去率を示した。結果を表３に示す。
【０１４０】
（実施例１１）
除去材料Ｏについて、実施例１と同様の操作を行い、活性化顆粒球−活性化血小板複合体、活性化単球−活性化血小板複合体、顆粒球及び単球の除去率を示した。結果を表３に示す。
【０１４１】
（比較例１）
除去材料Ｂについて、実施例１と同様の操作を行い、活性化顆粒球−活性化血小板複合体、活性化単球−活性化血小板複合体、顆粒球及び単球の除去率を示した。結果を表２に示す。
【０１４２】
【表２】
2019136499.tif 000007
【０１４３】
表２において、アミド基量とは、水不溶性担体に含まれる水不溶性担体の乾燥重量１．０ｇ当たりのアミド基量を意味し、リガンドに含まれる炭化水素基とは、２級アミド基の炭素原子と結合している、ハロゲン原子、ヒドロキシ基、ケトン基、エーテル基及びエステル基からなる群から選択される置換基で置換されていてもよい炭化水素基を意味する。
【０１４４】
表２の結果から、本願の除去材料は、活性化白血球−活性化血小板複合体の除去性能に優れていることが明らかとなり、さらに、白血球の除去性能も有していることが明らかとなった。
【０１４５】
【表３】
2019136499.tif 000008
【０１４６】
表３において、アミド基量とは、水不溶性担体に含まれる水不溶性担体の乾燥重量１．０ｇ当たりのアミド基量を意味し、アミノ基量とは、水不溶性担体に含まれる水不溶性担体の乾燥重量１．０ｇ当たりのアミノ基量を意味する。
【０１４７】
表３の結果から、本願の除去材料は、一部にアミノ基を有している官能基を導入されていても、活性化白血球−活性化血小板複合体及び白血球の除去性能を維持できることが明らかとなった。
【０１４８】
（実施例１２）
除去材料Ｅ１ｇを蒸留水２０ｍＬに５０℃で２４時間浸漬した。浸漬後に除去材料Ｅを蒸留水から取り出し、得られた蒸留水のｐＨを卓上型ｐＨメーター（ＬＡＱＵＡ、ｐＨ  ＭＥＴＥＲ  Ｆ−５２、ＨＯＲＩＢＡ）を用いて測定した。測定は、ｐＨメーターの電極を２５℃の溶液に浸すことで行った。また、ｐＨ測定前には中性リン酸塩標準液（リン酸一カリウム水溶液（３．４０ｇ／Ｌ）、和光純薬工業（株）社製）及びフタル酸塩標準液（フタル酸水素カリウム水溶液（１０．２１ｇ／Ｌ）、和光純薬工業（株）社製）を用いて校正を行った。結果を表４に示す。
【０１４９】
（実施例１３）
除去材料Ｊについて、実施例１２と同様の操作を行い、溶液のｐＨを測定した。結果を表４に示す。
【０１５０】
（実施例１４）
除去材料Ｍについて、実施例１２と同様の操作を行い、溶液のｐＨを測定した。結果を表４に示す。
【０１５１】
【表４】
2019136499.tif 000009
【０１５２】
表４において、リガンドに含まれる炭化水素基とは、２級アミド基の炭素原子と結合している、ハロゲン原子、ヒドロキシ基、ケトン基、エーテル基及びエステル基からなる群から選択される置換基で置換されていてもよい炭化水素基を意味する。
【０１５３】
表４の結果から、ヒドロキシ基で置換されていてもよい炭化水素基が、２級アミド基の炭素原子と結合している構造であるリガンドを含む除去材料では、いずれもｐＨが中性付近であったため、使用時に接触する液体（例えば、血液）のｐＨ変化を誘発するリスクが少なく、安全性に優れることが明らかとなった。
【０１５４】
（実施例１５）
除去材料Ａを直径６ｍｍの円板状に切り抜いた後、これを３枚ずつポリプロピレン製の容器に入れた。ヘパリンナトリウムを４Ｕ／ｍＬになるように生理食塩液を添加して調製し、円板状に切り抜いた除去材料Ａを、除去材料Ａ１．０ｃｍ３に対して３０ｍＬとなるように４Ｕ／ｍＬのヘパリン溶液に添加し、３７℃のインキュベータ内で２時間転倒混和した。その後、血液中から除去材料Ａを取り除き、反応後の溶液を回収した。次に、反応後の溶液のヘパリン濃度を吸光度計で測定した。ヘパリン濃度の指標として２１０ｎｍの波長の吸光度を用いた。結果を表５に示す。また、除去材料Ａを添加しない以外は同操作を行ったサンプルを、ブランクサンプルとした。ブランクサンプルのヘパリン濃度から以下の式８によりヘパリン除去率を算出した。
【０１５５】
除去材料Ａのヘパリン除去率（％）＝｛ブランクサンプルのヘパリン濃度（Ｕ／ｍＬ）―転倒混和後のヘパリン濃度（Ｕ／ｍＬ）｝／ブランクサンプルのヘパリン濃度（Ｕ／ｍＬ）×１００  ・・・式８
【０１５６】
（実施例１６）
除去材料Ｅについて、実施例１５と同様の操作を行い、ヘパリン除去率を示した。結果を表５に示す。
【０１５７】
（実施例１７）
除去材料Ｍについて、実施例１５と同様の操作を行い、ヘパリン除去率を示した。結果を表５に示す。
【０１５８】
（実施例１８）
除去材料Ｏについて、実施例１５と同様の操作を行い、ヘパリン除去率を示した。結果を表５に示す。
【０１５９】
（実施例１９）
除去材料Ｐについて、実施例１５と同様の操作を行い、ヘパリン除去率を示した。結果を表５に示す。
【０１６０】
【表５】
2019136499.tif 000010
【０１６１】
表５において、アミド基量とは、水不溶性担体に含まれる水不溶性担体の乾燥重量１．０ｇ当たりのアミド基量を意味し、アミノ基量とは、水不溶性担体に含まれる水不溶性担体の乾燥重量１．０ｇ当たりのアミノ基量を意味する。
【０１６２】
表５の結果から、アミノ基量が低いほどヘパリンの吸着能が低くなることが明らかとなった。
【０１６３】
（実施例２０）
除去材料Ａのサイトカイン除去性能を確認するため、サイトカインを含む液体に除去材料Ａを所定時間含浸して取り出し、含浸前後の溶液中のサイトカイン減少量を測定した。以下に測定方法を示す。
【０１６４】
除去材料Ａを直径６ｍｍの円板状に切り抜いた後、これを４枚ずつポリプロピレン製の容器に入れた。この容器に、サイトカインの一種であるインターロイキン８（以下、ＩＬ−８）の濃度が２０００ｐｇ／ｍＬなるように調製した牛胎児血清（Ｆｅｔａｌ  Ｂｏｖｉｎｅ  Ｓｅｒｕｍ、以下、ＦＢＳ）を除去材料１ｃｍ３に対して３０ｍＬとなるように添加し、３７℃のインキュベータ内で２時間転倒混和した後、ＥＬＩＳＡ法にてＦＢＳ中のＩＬ−８濃度を測定した。転倒混和前のＩＬ−８濃度から以下の式９によりＩＬ−８除去率を算出した。結果を表６に示す。
【０１６５】
除去材料ＡのＩＬ−８除去率（％）＝｛転倒混和前のＩＬ−８濃度（ｐｇ／ｍＬ）―転倒混和後のＩＬ−８濃度（ｐｇ／ｍＬ）｝／転倒混和前のＩＬ−８濃度（ｐｇ／ｍＬ）×１００  ・・・式９
【０１６６】
（実施例２１）
除去材料Ｅについて、実施例２０と同様の操作を行い、ＩＬ−８除去率を示した。結果を表６に示す。
【０１６７】
（実施例２２）
除去材料Ｊについて、実施例２０と同様の操作を行い、ＩＬ−８除去率を示した。結果を表６に示す。
【０１６８】
（実施例２３）
除去材料Ｍについて、実施例２０と同様の操作を行い、ＩＬ−８除去率を示した。結果を表６に示す。
【０１６９】
（比較例２）
除去材料Ｂについて、実施例２０と同様の操作を行い、ＩＬ−８除去率を示した。結果を表６に示す。
【０１７０】
【表６】
2019136499.tif 000011
【０１７１】
表６において、リガンドに含まれる炭化水素基とは、２級アミド基の炭素原子と結合している、ハロゲン原子、ヒドロキシ基、ケトン基、エーテル基及びエステル基からなる群から選択される置換基で置換されていてもよい炭化水素基を意味する。
【０１７２】
表６の結果から、炭素数１〜６のアルキル基又はフェニル基が２級アミド基の炭素原子と結合している構造であるリガンドを有している除去材料は、サイトカイン除去性能も有していることが明らかとなった。
【０１７３】
（実施例２４）
除去材料Ａを直径６ｍｍの円板状に切り抜いた後、これを４枚ずつポリプロピレン製の容器に入れた。ＬＰＳを７０ＥＵ／ｍＬになるよう添加した健常ヒトボランティア血液を３７℃のインキュベータ内で３０分間転倒混和することで、血液を活性化させた。次に、除去材料Ａを入れた前記容器に、除去材料Ａ１．０ｃｍ３に対して２０ｍＬとなるように活性化させた血液を添加し、３７℃のインキュベータ内で１時間転倒混和した。その後、血液中から除去材料Ａを取り除き、血液サンプルを回収した。通液後得られたサンプルを、血球計算機（シスメックス，多項目自動血球分析装置  ＸＴ−１８００ｉ）で測定し、血小板の濃度を算出した。除去材料Ａをいれずに、活性化させた血液を３７℃のインキュベータ内で１時間転倒混和した血液サンプルをブランクサンプルとし、除去材料Ａと同様の操作により、血小板の濃度を算出した。除去材料Ａの血小板除去率を、次に示す式１０により算出した。結果を表７、表９に示す。
【０１７４】
血小板除去率（％）＝｛（ブランクサンプルの血小板濃度）−（除去材料Ａと反応後の化血小板濃度）｝／（ブランクサンプルの血小板濃度）×１００  ・・・式１０
【０１７５】
（実施例２５）
除去材料Ｑについて、実施例２４と同様の操作を行い、血小板除去率を示した。結果を表７に示す。
【０１７６】
（実施例２６）
除去材料Ｎについて、実施例２４と同様の操作を行い、血小板除去率を示した。結果を表７に示す。
【０１７７】
【表７】
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【０１７８】
表７において、アミド基量とは、水不溶性担体に含まれる水不溶性担体の乾燥重量１．０ｇ当たりのアミド基量を意味し、アミノ基量とは、水不溶性担体に含まれる水不溶性担体の乾燥重量１．０ｇ当たりのアミノ基量を意味する。
【０１７９】
表７の結果から、アミノ基量が少ないほど血小板除去性能が低くなることが示された。
【０１８０】
（実施例２７）
除去材料Ｑについて、実施例１と同様の操作を行い、活性化顆粒球−活性化血小板複合体、活性化単球−活性化血小板複合体、顆粒球及び単球の除去率を示した。結果を表３に示す。
【０１８１】
（実施例２８）
除去材料Ｒについて、実施例１と同様の操作を行い、活性化顆粒球−活性化血小板複合体、活性化単球−活性化血小板複合体、顆粒球及び単球の除去率を示した。結果を表８に示す。
【０１８２】
（実施例２９）
除去材料Ｓについて、実施例１と同様の操作を行い、活性化顆粒球−活性化血小板複合体、活性化単球−活性化血小板複合体、顆粒球及び単球の除去率を示した。結果を表８に示す。
【０１８３】
（実施例３０）
除去材料Ｔについて、実施例１と同様の操作を行い、活性化顆粒球−活性化血小板複合体、活性化単球−活性化血小板複合体、顆粒球及び単球の除去率を示した。結果を表８に示す。
【０１８４】
【表８】
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【０１８５】
表８において、アミド基量とは、水不溶性担体に含まれる水不溶性担体の乾燥重量１．０ｇ当たりのアミド基量を意味し、スルホン酸基量とは、水不溶性担体に含まれる水不溶性担体の乾燥重量１．０ｇ当たりのスルホン酸基量を意味する。
【０１８６】
表８の結果から、本願の除去材料は、一部にスルホン酸基を有している官能基を導入されていても、活性化白血球−活性化血小板複合体及び白血球の除去性能を維持できることが明らかとなった。
【０１８７】
（実施例３１）
除去材料Ｒについて、実施例２４と同様の操作を行い、血小板除去率を示した。結果を表９に示す。
【０１８８】
（実施例３２）
除去材料Ｓについて、実施例２４と同様の操作を行い、血小板除去率を示した。結果を表９に示す。
【０１８９】
【表９】
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【０１９０】
表９において、アミド基量とは、水不溶性担体に含まれる水不溶性担体の乾燥重量１．０ｇ当たりのアミド基量を意味し、スルホン酸基量とは、水不溶性担体に含まれる水不溶性担体の乾燥重量１．０ｇ当たりのスルホン酸基量を意味する。
【０１９１】
表９の結果から、スルホン酸基量が少ないほど血小板除去性能が低くなることが示された。
【産業上の利用可能性】
【０１９２】
本発明の活性化白血球−活性化血小板複合体の除去材料は、活性化白血球−活性化血小板複合体除去用途に好適に用いることができるため、炎症性疾患、特にＡＲＤＳの治療用の体外循環カラムとして利用できる。