(57)【要約】【課題】本発明の課題は、腸内環境を改善することができる魚肉練製品及びその製造方法を提供することである。【解決手段】魚肉のすり身を主原材料とする魚肉練製品であって、魚肉のすり身と加熱殺菌処理された乳酸菌とを含むように構成されている。【選択図】  図１
2019076089.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
魚肉のすり身を主原材料とする魚肉練製品であって、前記魚肉のすり身と加熱殺菌処理された乳酸菌とを含むことを特徴とする魚肉練製品。
【請求項２】
前記乳酸菌は、植物性乳酸菌であることを特徴とする請求項１記載の魚肉練製品。
【請求項３】
前記乳酸菌は、キムチ由来の植物性乳酸菌であることを特徴とする請求項１記載の魚肉練製品。
【請求項４】
前記乳酸菌は、分散処理され、凍結又は噴霧乾燥され、粉末化されていることを特徴とする請求項１記載の魚肉練製品。
【請求項５】
前記乳酸菌は、０．５〜１．０μｍの範囲の粒度分布を有する微粉末であることを特徴とする請求項１記載の魚肉練製品。
【請求項６】
原料である魚肉のすり身を解凍する工程と、前記解凍した魚肉のすり身を擂潰する工程と、前記擂潰する工程後に、前記魚肉のすり身を成型する工程と、前記成型した魚肉のすり身を加熱処理する工程、前記加熱処理した魚肉のすり身を冷却する工程とを有する魚肉練製品の製造方法であって、前記解凍した魚肉のすり身を擂潰する工程は、加熱殺菌処理された乳酸菌を添加する工程を含むことを特徴とする魚肉練製品の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、魚肉練製品に係り、特に、加熱殺菌処理された乳酸菌を含む魚肉練製品に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
近年の健康志向に伴い、腸内環境を整えることに注目が集まっている。腸内環境を整えるには「乳酸菌」が有効であり、「生きた乳酸菌を腸まで届ける」という乳酸菌関連の製品が数多く発売されている。
しかしながら、「生きた乳酸菌」はタンパク質を分解する作用があるため、流通過程における保存の観点から肉類、特に、魚肉練製品には使用することができない、という不具合があった。
【０００３】
本件出願人は、このような観点から先行技術の調査を行い、特許文献１及び２のような文献を発見した。
【０００４】
例えば、特許文献１には、魚肉を擂潰する際に、有胞子性乳酸菌を添加し、容器に充填し、又は充填することなく形成した後加熱し有胞子性乳酸菌を発芽させると同時にゲル化させた魚肉練製品が開示されている。
【０００５】
特許文献２には、肉製品又は肉製品原料を耐塩性乳酸菌で処理することを特徴とする乳酸菌を用いた肉製品の製造法及びかまぼこ、ハンバーグその他の肉を主原料とした練製品の製造に当り、加熱前の練製品原料に対し、耐塩性乳酸菌を添加して練込むことを特徴とする乳酸菌を用いた肉製品の製造法が開示されている。
【０００６】
しかしながら、特許文献１に開示されている魚肉練製品は、常温では発芽しない有胞子性乳酸菌を使用しているため、活性化させるためヒートショックが必要であり、８５℃の温湯中に３０分間加熱しなければならず、製造工程における温度設定が煩雑になる、という不具合があった。
また、１ｇ中に５０億個の活性有胞子性乳酸菌しか添加することができない、という不具合があった。
【０００７】
特許文献２に開示されている肉製品の製造法にあっては、他の微生物の繁殖を抑制しつつ、耐塩性乳酸菌を発育させるためには１０％以上の食塩濃度にする必要があることから、食品に添加する際にも同程度の塩分濃度が必要であることから、食事で摂取する塩分量が多くなってしまう、という不具合があった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】公開特許公報  特開昭６２−２１０９６７号公報
【特許文献２】公開特許公報  特開昭５２−１８８５９号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明の課題は、上記各文献記載の技術の問題点を解消し、腸内環境を改善することができる魚肉練製品及びその製造方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
前記課題達成のため、請求項１記載の発明にあっては、魚肉のすり身を主原材料とする魚肉練製品であって、前記魚肉のすり身と加熱殺菌処理された乳酸菌とを含むことを特徴とする。
【００１１】
従って、請求項１記載の発明にあっては、前記魚肉のすり身と加熱殺菌処理された乳酸菌とを含む魚肉練製品であることから、ヨーグルトやチーズ等の発酵食品から乳酸菌を摂取しなくとも通常の食事の中で乳酸菌を摂取することができる。
【００１２】
また、請求項１記載の発明にあっては、前記乳酸菌は、加熱殺菌処理により死菌化していることから、生菌よりも1菌あたりの体積が小さくなる。
【００１３】
さらに、前記乳酸菌は、加熱殺菌処理により死滅していることから、酸性条件下であっても、加熱条件下であっても影響を受けることはない。
【００１４】
請求項２記載の発明にあっては、前記乳酸菌は、植物性乳酸菌であることを特徴とする。
【００１５】
従って、請求項２記載の発明にあっては、前記乳酸菌は植物性乳酸菌であることから、動物性乳酸菌と異なり胆汁や胃酸では分解されないので、より多くの乳酸菌を腸、特に、小腸まで届ける。
【００１６】
請求項３記載の発明にあっては、前記乳酸菌は、キムチ由来の植物性乳酸菌であることを特徴とする。
【００１７】
従って、請求項３記載の発明にあっては、前記キムチ由来の植物性乳酸菌は、植物性乳酸菌の中でも１ｇあたりの乳酸菌数が多いので、乳酸菌を含む食品を多量に摂取する必要がない。
【００１８】
請求項４記載の発明にあっては、前記乳酸菌は、分散処理され、凍結又は噴霧乾燥され、粉末化されていることを特徴とする。
【００１９】
従って、請求項４記載の発明にあっては、前記乳酸菌は、分散処理された後、凍結乾燥又は噴霧乾燥により粉末化されているので、水に対する分散性に優れることから、食品内に均一に存在することができる。
【００２０】
請求項５記載の発明にあっては、前記乳酸菌は、０．５〜１．０μｍの範囲の粒度分布を有する微粉末であることを特徴とする。
【００２１】
従って、請求項５記載の発明にあっては、均一な粒子で構成されていることから、分散しやすいので腸内の隅々まで行き渡ると共に、無数の腸絨毛の中まで入り込むことができ、さらには粒子径が小さいので、小腸に吸収されやすい。
【００２２】
請求項６記載の発明にあっては、原料である魚肉のすり身を解凍する工程と、前記解凍した魚肉のすり身を擂潰する工程と、前記擂潰する工程後に、前記魚肉のすり身を成型する工程と、前記成型した魚肉のすり身を加熱処理する工程、前記加熱処理した魚肉のすり身を冷却する工程とを有する魚肉練製品の製造方法であって、前記解凍した魚肉のすり身を擂潰する工程は、加熱殺菌処理された乳酸菌を添加する工程を含むことを特徴とする。
【００２３】
従って、請求項６記載の発明にあっては、乳酸菌が添加されていない魚肉練製品の製造工程及び製造機を使用して、加熱殺菌処理された乳酸菌を添加した魚肉練製品を製造することができる。
【発明の効果】
【００２４】
請求項１記載の魚肉練製品にあっては、生菌としての乳酸菌を添加した場合には、魚肉練製品のタンパク質を分解してしまい、魚肉練製品として成立しなくなるのに対し、加熱殺菌処理により死菌化した乳酸菌を添加するように構成されているため、魚肉練製品中のタンパク質は分解されることがなく、乳酸菌が添加された魚肉練製品を提供することが可能となる。
【００２５】
さらに、請求項１記載の魚肉練製品にあっては、前記魚肉のすり身と加熱殺菌処理された乳酸菌とを含む魚肉練製品であることから、ヨーグルトやチーズ等の発酵食品から乳酸菌を摂取しなくとも、魚肉練製品を摂取することにより通常の食事の中で乳酸菌を摂取することができるので、乳製品のアレルギーがある人であっても乳酸菌を容易に摂取することができる。
【００２６】
さらに、請求項１記載の魚肉練製品にあっては、前記乳酸菌は、加熱殺菌処理により死菌化していることから、生菌よりも1菌あたりの体積が小さくなるので、魚肉練製品中に大量に乳酸菌を添加することができる。
【００２７】
その結果、腸内環境を改善することができる魚肉練製品を提供することができる。
【００２８】
請求項２記載の魚肉練製品にあっては、前記乳酸菌は、植物性乳酸菌であり、動物性乳酸菌とは異なり胆汁や胃酸では分解されないことから、小腸まで届く乳酸菌の量は多くなるので、小腸は多くの乳酸菌を吸収することができる。
【００２９】
その結果、食事を介して容易に腸内環境を整えることができる。
【００３０】
請求項３記載の魚肉練製品にあっては、キムチ由来の植物性乳酸菌は、植物性乳酸菌の中でも１ｇあたりの乳酸菌数が多いことから、一度の食事で十分な乳酸菌の量を摂取することができるので、小腸はより多くの乳酸菌を吸収して、小腸にある免疫システムを働かすことができる。
【００３１】
その結果、小腸はより多くの乳酸菌を吸収して、腸内に棲み付いている常在菌を増殖させることができるので、腸内腐敗菌の抑制効果や免疫機能の活性化を通じた腸内環境の改善効果を得ることができる。
【００３２】
請求項４記載の魚肉練製品にあっては、前記乳酸菌は、分散処理されていることから、乳酸菌の再凝集を防ぐことができるので、小腸に吸収されやすい粒子径を維持することができる。
【００３３】
また、請求項４記載の魚肉練製品にあっては、凍結乾燥又は噴霧乾燥により粉末化され、水に対する分散性に優れていることから、魚肉練製内に均一に存在させることができるので、違和感なく食事をすることができる。
【００３４】
その結果、乳酸菌が含まれていても風味及び触感が損なわれていない魚肉練製品を提供することができる。
【００３５】
請求項５記載の魚肉練製品にあっては、前記乳酸菌は、０．５〜１．０μｍの範囲の粒度分布を有する、均一な粒子で構成されていることから、分散しやすいので腸内の隅々まで行き渡ると共に、無数の腸絨毛の中まで入り込むことができ、さらには粒子径が小さいので、小腸に吸収されやすいことから、腸内環境の優れた改善効果を得ることができる。
【００３６】
さらに、前記乳酸菌は、０．５〜１．０μｍの範囲の粒度分布を有する微粉末であることから、添加する量を調整しやすく、魚肉練製品に含める濃度調整を容易に行うことができる。
【００３７】
その結果、腸内吸収率の高い乳酸菌を含んだ魚肉練製品を提供することができる。
【００３８】
請求項６記載の魚肉練製品にあっては、原料である魚肉のすり身を解凍する工程と、前記解凍した魚肉のすり身を擂潰する工程と、前記擂潰する工程後に、前記魚肉のすり身を成型する工程と、前記成型した魚肉のすり身を加熱処理する工程、前記加熱処理した魚肉のすり身を冷却する工程とを有する魚肉練製品の製造方法であって、前記解凍した魚肉のすり身を擂潰する工程は、加熱殺菌処理された乳酸菌を添加する工程を含むことから、乳酸菌が添加されていない魚肉練製品の製造工程及び製造機を使用して、加熱殺菌処理された乳酸菌を添加した魚肉練製品を製造することができるので、新規に製造設備を設置する必要がない。
【００３９】
その結果、専用の工場、製造機等の設備投資をかけることなく、加熱殺菌処理された乳酸菌を含む魚肉練製品を製造することができる。
【図面の簡単な説明】
【００４０】
【図１】図１は、本発明に係る魚肉練製品の製造方法の工程の一実施の形態を示すフローチャートである。
【図２】図２は、本発明に使用する乳酸菌の製造方法の工程の一実施の形態を示すフローチャートである。
【図３】図３は、本発明に使用するキムチ由来の加熱殺菌乳酸菌（ｎＦ１）の効果を検証する際の投与プロトコール（手順）を示す説明図である。
【図４】図４は、本発明に使用するキムチ由来の加熱殺菌乳酸菌（ｎＦ１）の投与結果における被検体の便臭に関する比較グラフ図である。
【図５】図５は、本発明に使用するキムチ由来の加熱殺菌乳酸菌（ｎＦ１）の投与結果における被検体の睾丸増大率に関する比較グラフ図である。
【図６】図６は、本発明に使用するキムチ由来の加熱殺菌乳酸菌（ｎＦ１）の投与結果における被検体の精子数増加に関する比較グラフ図である。
【発明を実施するための形態】
【００４１】
以下、本発明を詳細に説明する。
本実施の形態に係る魚肉練製品にあっては、魚肉のすり身を主原材料とする魚肉練製品であって、魚肉のすり身と加熱殺菌処理された乳酸菌とを含むように構成されている。
【００４２】
本実施の形態に係る魚肉練製品にあっては、魚肉としては、スケトウダラ、ホッケ、キントキダイ、イトヨリダイ、アジ、イワシ、サバ等があり、特に、スケトウダラが使用される。
【００４３】
本実施の形態に係る魚肉練製品にあっては、乳酸菌は、植物性乳酸菌である。
【００４４】
本実施の形態に係る魚肉練製品にあっては、乳酸菌は、キムチ由来の植物性乳酸菌である。
【００４５】
本実施の形態に係る魚肉練製品にあっては、乳酸菌は、キムチ由来の植物性乳酸菌であり、グラム陽性桿菌の形態を有し、１６ＳｒＲＮＡ塩基配列を有することを特徴とするラクトバチルスプランタルム（Ｌ．ｐｌａｎｔａｒｕｍ）ｎＦ１菌株（以下、単に「ｎＦ１」とも称する。）である。
【００４６】
本実施の形態に係る魚肉練製品にあっては、乳酸菌は、分散処理され、凍結又は噴霧乾燥され、粉末化されている。
【００４７】
本実施の形態に係る魚肉練製品にあっては、乳酸菌は、０．５〜１．０μｍの範囲の粒度分布を有する微粉末である。
【００４８】
本実施の形態に係る魚肉練製品にあっては、キムチ由来の植物性乳酸菌粉末は、粉末１ｇあたりラクトバチルスプランタルムｎＦ１菌株を１兆個〜５兆個を含む。
【００４９】
本実施の形態に係る魚肉練製品にあっては、キムチ由来の植物性乳酸菌粉末の菌株は、黄色ブドウ球菌の形態である。
【００５０】
本実施の形態に係る魚肉練製品の製造方法にあっては、図１に示すように、原料である魚肉のすり身を解凍する工程（Ｓ１０）と、解凍した魚肉のすり身を擂潰する工程と共に、擂潰工程中に塩等の調味料及び加熱殺菌処理された乳酸菌を添加する工程（Ｓ１１）と、擂潰工程後に、魚肉のすり身を製品に合わせた形状に成型する工程（Ｓ１２）と、成型した魚肉のすり身を加熱処理する工程（Ｓ１３）と、加熱処理した魚肉のすり身を冷却する工程（Ｓ１４）とを有し、工程Ｓ１０〜工程Ｓ１４で示した順で行われる。
【００５１】
図１に示すように、本実施の形態に係る魚肉練製品を製造する場合には、まず原料である魚肉のすり身を解凍する工程において、原料である魚肉のすり身を解凍し（Ｓ１０）、次に、解凍した魚肉のすり身を擂潰する工程及び擂潰工程中に塩等の調味料及び加熱殺菌処理された乳酸菌を添加する工程において、解凍した魚肉のすり身を擂潰し、塩等の調味料及び加熱殺菌した乳酸菌を投入する（Ｓ１１）。
【００５２】
次に、擂潰工程後（Ｓ１１）に、魚肉のすり身を製品に合わせた形状に成型する工程において、魚肉のすり身を成型し（Ｓ１２）、次に、成型した魚肉のすり身を加熱処理する工程において、成型した魚肉のすり身を加熱処理し（Ｓ１３）、最後に、加熱処理した魚肉のすり身を冷却する工程において、加熱処理した魚肉のすり身を冷却する（Ｓ１４）。
【００５３】
本実施の形態に係る魚肉練製品に使用される乳酸菌の製造方法にあっては、図２に示すように、培養液を製造する工程（Ｓ２０）と、培養液滅菌処理する工程（Ｓ２１）と、種菌の摂取及び培養する工程（Ｓ２２）と、菌体をナノ化処理する工程（Ｓ２３）と、殺菌及び噴霧処理をする工程（Ｓ２４）とを有し、工程Ｓ２０〜工程Ｓ２４で示した順で行われる。
【００５４】
図２に示すように、本実施の形態に係る魚肉練製品に使用される乳酸菌を製造する場合には、まず、培養液を製造する工程において、培養液を製造し（Ｓ２０）、次に、培養液滅菌処理する工程において、培養液滅菌処理し（Ｓ２１）、次に、種菌の摂取及び培養する工程において、種菌の摂取及び培養し（Ｓ２２）、次に、菌体をナノ化処理する工程において、菌体をナノ化処理し（Ｓ２３）、最後に、殺菌及び噴霧処理をする工程において、殺菌及び噴霧処理をする（Ｓ２４）。
【実施例】
【００５５】
以下に、本発明に使用される加熱殺菌処理された乳酸菌の実施例を記載する。
【００５６】
（実施例１：ナノ型キムチ乳酸菌ｎＦ１粉末の製造方法）
５質量％グルコースを添加した公知の栄養培地で、２０質量％水酸化ナトリウム水溶液で培養し（ｐＨ５〜７、培養温度３６.５℃）、グルコースが消費された時点を培養終点とした。培養終了後、培養液を８０℃で８〜１２分間加熱し、滅菌処理した後、菌体をリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で洗浄し、菌体質量に対して９倍のデキストリンを賦形剤として添加した後、１４０〜１６０ｋｇｆ／ｃｍ２の高圧ホモジナイザーで分散し、分散された培養液を凍結乾燥して粉末試料を調製した。
【００５７】
以下に、本発明の魚肉練製品の製造方法の具体例を記載する。
【００５８】
（具体例１：板付き蒲鉾の製造方法）
原料である魚肉のすり身を−３０℃〜から−１℃に解凍し、まず、温度上昇を防ぎながら解凍した魚肉のすり身だけを擂潰し、次に、２〜３％の塩、調味料及び加熱殺菌処理された乳酸菌を投入して魚肉のすり身を擂る。擂潰後、すり身を成型し、低温で蒸し始め（坐り工程）、最終的に中心温度が７５℃以上になるように蒸し、最後に、冷却し５℃以下の温度にした。
【００５９】
以下、本実施の形態に係る魚肉練製品の作用について説明する。
本実施の形態に係る魚肉練製品にあっては、魚肉のすり身を主原材料とする魚肉練製品であって、魚肉のすり身と加熱殺菌処理された乳酸菌とを含むように構成され、魚肉のすり身と加熱殺菌処理された乳酸菌とを含む魚肉練製品であることから、ヨーグルトやチーズ等の発酵食品から乳酸菌を摂取しなくとも通常の食事の中で乳酸菌を摂取することができる。
【００６０】
また、本実施の形態に係る魚肉練製品にあっては、乳酸菌は、加熱殺菌処理により死菌化していることから、生菌よりも1菌あたりの体積が小さくなる。
【００６１】
さらに、本実施の形態に係る魚肉練製品にあっては、乳酸菌は、加熱殺菌処理により死滅していることから、酸性条件下であっても、加熱条件下であっても影響を受けることはない。
【００６２】
本実施の形態に係る魚肉練製品にあっては、キムチ由来の植物性乳酸菌は、植物性乳酸菌の中でも１ｇあたりの乳酸菌数が多いので、乳酸菌を含む食品を多量に摂取する必要がない。
【００６３】
本実施の形態に係る魚肉練製品にあっては、乳酸菌は、分散処理された後、凍結乾燥又は噴霧乾燥により粉末化されているので、水に対する分散性に優れることから、食品内に均一に存在することができる。
【００６４】
本実施の形態に係る魚肉練製品にあっては、均一な粒子で構成されていることから、分散しやすいので腸内の隅々まで行き渡ると共に、無数の腸絨毛の中まで入り込むことができ、さらには粒子径が小さいので、小腸に吸収されやすい。
【００６５】
本実施の形態に係る魚肉練製品の製造方法にあっては、乳酸菌が添加されていない魚肉練製品の製造工程及び製造機を使用して、加熱殺菌処理された乳酸菌を添加した魚肉練製品を製造することができる。
【００６６】
以下、本実施の形態に係る魚肉練製品の効果について説明する。
本実施の形態に係る魚肉練製品にあっては、生菌としての乳酸菌を添加した場合には、魚肉練製品のタンパク質を分解してしまい、魚肉練製品として成立しなくなるのに対し、加熱殺菌処理により死菌化した乳酸菌を添加するように構成されているため、魚肉練製品中のタンパク質は分解されることがなく、乳酸菌が添加された魚肉練製品を提供することが可能となる。
【００６７】
さらに、本実施の形態に係る魚肉練製品にあっては、魚肉のすり身と加熱殺菌処理された乳酸菌とを含む魚肉練製品であることから、ヨーグルトやチーズ等の発酵食品から乳酸菌を摂取しなくとも、魚肉練製品を摂取することにより通常の食事の中で乳酸菌を摂取することができるので、乳製品のアレルギーがある人であっても乳酸菌を容易に摂取することができる。
【００６８】
さらに、本実施の形態に係る魚肉練製品にあっては、乳酸菌は、加熱殺菌処理により死菌化していることから、生菌よりも1菌あたりの体積が小さくなるので、魚肉練製品中に大量に乳酸菌を添加することができる。
【００６９】
従って、腸内環境を改善することができる魚肉練製品を提供することができる。
【００７０】
本実施の形態に係る魚肉練製品にあっては、乳酸菌は、植物性乳酸菌であり、動物性乳酸菌とは異なり胆汁や胃酸では分解されないことから、小腸まで届く乳酸菌の量は多くなるので、小腸は多くの乳酸菌を吸収することができる。
【００７１】
本実施の形態に係る魚肉練製品にあっては、キムチ由来の植物性乳酸菌は、植物性乳酸菌の中でも１ｇあたりの乳酸菌数が多いことから、一度の食事で十分な乳酸菌の量を摂取することができるので、小腸はより多くの乳酸菌を吸収して、小腸にある免疫システムを働かすことができる。
【００７２】
従って、小腸はより多くの乳酸菌を吸収して、腸内に棲み付いている常在菌を増殖させることができるので、腸内腐敗菌の抑制効果や免疫機能の活性化を通じた腸内環境の改善効果を得ることができる。
【００７３】
本実施の形態に係る魚肉練製品にあっては、乳酸菌は、分散処理されていることから、乳酸菌の再凝集を防ぐことができるので、小腸に吸収されやすい粒子径を維持することができる。
【００７４】
また、本実施の形態に係る魚肉練製品にあっては、凍結乾燥又は噴霧乾燥により粉末化され、水に対する分散性に優れていることから、魚肉練製内に均一に存在させることができるので、違和感なく食事をすることができる。
【００７５】
従って、乳酸菌が含まれていても風味及び触感が損なわれていない魚肉練製品を提供することができる。
【００７６】
本実施の形態に係る魚肉練製品にあっては、乳酸菌は、０．５〜１．０μｍの範囲の粒度分布を有する、均一な粒子で構成されていることから、分散しやすいので腸内の隅々まで行き渡ると共に、無数の腸絨毛の中まで入り込むことができ、さらには粒子径が小さいので、小腸に吸収されやすいことから、腸内環境の優れた改善効果を得ることができる。
【００７７】
さらに、本実施の形態に係る魚肉練製品にあっては、乳酸菌は、０．５〜１．０μｍの範囲の粒度分布を有する微粉末であることから、添加する量を調整しやすく、魚肉練製品に含める濃度調整を容易に行うことができる。
【００７８】
従って、腸内吸収率の高い乳酸菌を含んだ魚肉練製品を提供することができる。
【００７９】
本実施の形態に係る魚肉練製品の製造方法にあっては、乳酸菌が添加されていない魚肉練製品の製造工程及び製造機を使用して、加熱殺菌処理された乳酸菌を添加した魚肉練製品を製造することができるので、新規に製造設備を設置する必要がない。
【００８０】
従って、専用の工場、製造機等の設備投資をかけることなく、乳酸菌を含む魚肉練製品を製造することができる。
【００８１】
ここで、上記実施例に示した加熱殺菌乳酸菌ｎＦ１の効果について犬の造精能に及ぼす検証を行った。
【００８２】
＜方法＞
１．健常犬
・６頭［３頭×２グループ（前半、後半）］（雄、２〜７歳齢、ビーグル犬、体重１０〜１４ｋｇ）
・事前に精液検査を実施し前半グループの３頭を選別する。
２．乳酸菌製剤
・ｎＦ１（乳酸菌：２．５×１０１２個／ｇ）
３．投与量
・低用量（２０ｍｇ／頭＝乳酸菌：５×１０１０／頭）
・高用量（２００ｍｇ／頭＝乳酸菌：５×１０１１／頭）
４．投与回数
・１日１回、食事とともに経口投与
５．投与期間
・２８日間
６．投与プロトコール（手順）
・図３参照
７．評価項目
・便臭：５段階で主観的に評価
・造精能に対する評価
・精巣の大きさ：定規で計測（縦×横×幅）
・精液の性状検査：用手法で精液を採取
（Ａ）精液量：第２分画液の量
（Ｂ）精子数：精液を１％ホルマリン加生理食塩水で希釈し血球計算盤により算定
（Ｃ）精子濃度：精子量および精子数から算出
（Ｄ）精子運動性：前進運動精子、非前進運動精子および不動精子の割合を算出
（Ｅ）精子生存率：エオシン染色により死滅精子を判定し精子生存率を算出
（Ｆ）精子奇形率：塗抹標本上で精子の奇形率を算出
【００８３】
＜条件＞
（Ａ）精液量
・用手法で採取した第２分画液を紙コップで採取する。
・精液量を注射用シリンジ（２．５ｍＬまたは５ｍＬ）を用いて計測する。
（Ｂ）精子数の算定方法
・採取した精液を１％ホルマリン添加生理食塩液で希釈する。
・位相差顕微鏡下で血球計算盤を用いて算定する
（Ｃ）精子濃度
・精液量および精子数から算出する。
（Ｄ）精子運動性
・運動性を評価するための簡単な分類方法として、不動精子から区別して前進運動精子あるいは非前進運動精子とすることが推奨されている。各精子の運動性は次の通り分類できる。
・前進運動精子（ＰＲ）：速度に関わりなく、非常に活発に、直線的にあるいは大きな円を描くように動いている精子。
・非前進運動精子（ＮＰ）：前進性を欠いた様々な運動性を有する精子。例えば、小さな円を描くように動く、精子頭部の位置をほとんど動かすこともできない程度の尾部の運動性、鞭毛運動だけが観察される精子。
・不動精子（ＩＭ）：動きが見られない精子。
（ａ）血球計算盤および位相差顕微鏡を使用し、２００倍または４００倍の倍率下でスライドを観察する。
（ｂ）精液サンプルの流動が静止するまで待つ。
（ｃ）乾燥による運動性への悪影響を防止するためにカバーグラスの縁から少なくとも５ｍｍ内側の精子を観察する。
（ｄ）繰り返し同じ領域を観察しないように、規則正しくスライドグラスを観察する。そして、たびたび観察領域を変更して観察する。運動精子の存在する視野だけ観察することを避ける（観察領域の選択はランダムに行う）。
（ｅ）ランダムに選択した観察領域を決定後は直ちに評価を開始する。精子が、顕微鏡の視野内や格子内に泳いでくるのを待った上で検査を開始してはならない。
（ｆ）観察領域内のすべての運動精子を評価する。これは、接眼マイクロメーターを使用すれば、最も容易に実施できる。精子濃度を見て測定する領域やグリッドの位置を選択する。もし精子濃度が高ければグリッドの一番上の列だけを評価し、もし精子濃度が低ければグリッド全体を評価する。
（ｇ）運動精子数を重複測定するのを避けるために、迅速にカウントする。目的は領域内のすべての運動精子をカウントするためである。すなわち、カウントしている間に領域に他から進入してきた運動精子をカウントしないためである。運動精子を多くカウントする結果になってしまう。
（ｈ）最初、ＰＲをカウントする。次に、同じ領域の中でＮＰをカウントし、最後にＩＭをカウントする。
（ｉ）異なる５視野で合計２００個の精子を評価する。
（ｊ）測定後、各運動性評価（ＰＲ、ＮＰ、ＩＭ）の頻度についてパーセントを計算する。
（Ｅ）精子生存率
・精液サンプルをよく混和する。
・精液５μＬとエオシン染色（０．５％エオシンＹ生理食塩水）５μＬをスライドグラス上に乗せる。スライドグラス上で検体をピペットにより円を描くように混ぜ合わせる。
・カバーグラスで覆い、３０秒放置する。
・スライドを位相差顕微鏡または通常の顕微鏡（コントラストをつける）で観察する。
・染まった（死滅）細胞と染まらない（生存）細胞数をカウンターを用い計測する。
・合計２００個の精子をカウントする。
（Ｆ）精子奇形率
・採取した精液１滴の塗抹標本を作製する。
・塗抹標本をメタノール固定後、Ｄｉｆｆ−Ｑｕｉｋ液で染色する。
・塗抹標本上で精子を２００個カウントし、そのうち精子の頭部・頚部または尾部に奇形がある精子数をカウントして奇形率を算出する。
【００８４】
＜結果＞
ｎＦ１高用量投与群において、統計学的に有意な便臭の改善（図４参照）及び睾丸の増大（図５参照）が認められた。また、ｎＦ１高用量投与群において、精子数の増加傾向が認めらえれた（図６参照）。以上の結果、ｎＦ１による犬の消化器疾患改善効果および繁殖力増強効果の可能性を認めることができる。なお、ｎＦ１の投与による精子の死滅や奇形率の増加はみられなかった。
【産業上の利用可能性】
【００８５】
本発明は、加熱殺菌処理された乳酸菌を含む魚肉練製品であることから産業上の利用可能性を有している。
【図１】
2019076089.tif 000003
【図２】
2019076089.tif 000004
【図３】
2019076089.tif 000005
【図４】
2019076089.tif 000006
【図５】
2019076089.tif 000007
【図６】
2019076089.tif 000008