(57)【要約】      （修正有）【課題】変形性関節症、乾癬、アトピー性皮膚炎、及び腸上皮疾患又は膀胱疾患から選択される慢性全身性炎症性疾患の治療における使用のための微粒子化形態の、又はクルクミンと共微粒子化した、又はポリダチンと共微粒子化したＮ−パルミトイル−Ｄ−グルコサミンに関する。【解決手段】任意にクルクミンと組み合わせた微粒子化形態のＮ−パルミトイル−Ｄ−グルコサミンベースの組成物に関する。特に、本発明は、微粒子化形態又はクルクミンとの共微粒子化形態のＮ−パルミトイル−Ｄ−グルコサミンに関する。かかる生成物は、上皮及び滑膜の機能不全に起因する、ヒト及び動物における慢性全身性炎症性疾患の治療のためのヒト又は動物用医薬組成物、食事療法用製品、フードサプリメント若しくは特別医療目的用食品（ＦＳＭＰ）、又は動物用の飼料若しくは栄養補給剤に配合することができる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
微粒子化形態のＮ−パルミトイル−Ｄ−グルコサミン。
【請求項２】
少なくとも９６体積％の粒子が０．６ミクロン〜１０ミクロンの粒径を有する、ミー計算アルゴリズムを用いるＭａｌｖｅｒｎ  Ｍａｓｔｅｒｓｉｚｅｒ  ３０００ツールによって測定された粒径分布を有する、請求項１に記載のＮ−パルミトイル−Ｄ−グルコサミン（ＰＧＡ）。
【請求項３】
３．１ミクロン〜３．５ミクロンのモードを有し、少なくとも９７体積％の粒子が１０ミクロンよりも小さく、好ましくは少なくとも５０体積％の粒子が３．５ミクロンよりも小さい粒径分布曲線を有する、請求項２に記載のＮ−パルミトイル−Ｄ−グルコサミン。
【請求項４】
ＰＧＡに対して３％〜２０％、又は４％〜１５％、又は４．５％〜６％の重量百分率の脂肪酸を添加し、該脂肪酸が好ましくはパルミチン酸である、請求項１〜３のいずれか一項に記載のＮ−パルミトイル−Ｄ−グルコサミン。
【請求項５】
クルクミン（ＣＵＲ）及び／又はポリダチン（ＰＯＬ）との共微粒子化形態である、請求項１〜４のいずれか一項に記載のＮ−パルミトイル−Ｄ−グルコサミン。
【請求項６】
Ｎ−パルミトイル−Ｄ−グルコサミン及びクルクミンが３：１〜１：３又は２：１〜１：１の重量比である、請求項５に記載のＮ−パルミトイル−Ｄ−グルコサミン。
【請求項７】
Ｎ−パルミトイル−Ｄ−グルコサミン及びポリダチンが２０：１〜５：１又は１２：１〜８：１の重量比である、請求項５に記載のＮ−パルミトイル−Ｄ−グルコサミン。
【請求項８】
共微粒子化ＰＧＡ／ＣＵＲ混合物が、ミー計算アルゴリズムを用いるＭａｌｖｅｒｎ  Ｍａｓｔｅｒｓｉｚｅｒ  ３０００ツールによって測定したときに、３．１ミクロン〜３．８ミクロンのモードの粒径分布曲線を有し、少なくとも９８体積％の粒子が１０ミクロンよりも小さく、好ましくは少なくとも５０体積％の粒子が３．５ミクロンよりも小さい、請求項５又は６に記載のＮ−パルミトイル−Ｄ−グルコサミン。
【請求項９】
共微粒子化ＰＧＡ／ＰＯＬ混合物が、ミー計算アルゴリズムを用いるＭａｌｖｅｒｎ  Ｍａｓｔｅｒｓｉｚｅｒ  ３０００ツールによって測定したときに、３．１ミクロン〜３．８ミクロンのモードの粒径分布曲線を有し、少なくとも９８体積％の粒子が１０ミクロンよりも小さく、好ましくは少なくとも５０体積％の粒子が３．５ミクロンよりも小さい、請求項５又は７に記載のＮ−パルミトイル−Ｄ−グルコサミン。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれか一項に記載のＮ−パルミトイル−Ｄ−グルコサミンを含むヒト用の又は動物用の医薬組成物。
【請求項１１】
経口投与、口腔投与、非経口投与、直腸投与又は経皮投与用の剤形に配合されている、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
請求項１〜９のいずれか一項に記載のＮ−パルミトイル−Ｄ−グルコサミンを含む、食事療法用組成物、ダイエタリーサプリメント若しくは特別医療目的用食品（ＦＳＭＰ）、又は動物用の飼料若しくは栄養補給剤。
【請求項１３】
請求項１〜９のいずれか一項に記載のＮ−パルミトイル−Ｄ−グルコサミンを含む化粧品組成物。
【請求項１４】
上皮及び滑膜の機能不全に起因するヒト及び動物の慢性全身性炎症性疾患の治療における使用のための、請求項１〜９のいずれか一項に記載のＮ−パルミトイル−Ｄ−グルコサミン又は請求項１０〜１２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１５】
前記疾患が、
滑膜の機能不全に起因する炎症性疾患、
腸粘膜の機能不全に起因する炎症性疾患、
尿路上皮粘膜の機能不全に起因する炎症性疾患、
ケラチン性上皮の機能不全に起因する炎症性疾患、
から選択される、請求項１４に記載の使用のための請求項１〜９のいずれか一項に記載のＮ−パルミトイル−Ｄ−グルコサミン又は請求項１０〜１２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１６】
Ｎ−パルミトイル−Ｄ−グルコサミンを脂肪酸の存在下で結晶化させる方法であって、
ａ）Ｎ−パルミトイル−Ｄ−グルコサミン、好ましくはＴＬＣ分析によって決定される純度が９８％を超えるＮ−パルミトイル−Ｄ−グルコサミンを準備する工程と、
ｂ）Ｎ−パルミトイル−Ｄ−グルコサミンを脂肪酸又はその塩と共に極性溶媒に懸濁する工程であって、該脂肪酸又はその塩がＮ−パルミトイル−Ｄ−グルコサミンに対して２重量％〜２０重量％又は４重量％〜１０％重量の量で存在する工程と、
ｃ）工程ｂ）の懸濁液を５０℃〜９０℃の温度又は溶媒の還流温度で、１５分又は３０分又は１時間よりも長い時間にわたって加熱する工程と、
ｄ）結晶化混合物をゆっくりと１０℃未満の温度にする工程と、
ｅ）Ｎ−パルミトイル−Ｄ−グルコサミンと脂肪酸との均質混合物の形態の結晶化物を回収する工程と、
を含む、方法。
【請求項１７】
前記極性溶媒がメタノール、エタノール、アセトン及び酢酸エチルから選択される、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記脂肪酸がパルミチン酸である、請求項１６又は１７に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、微粒子化形態のＮ−パルミトイル−Ｄ−グルコサミンベースの組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
生物の最外表面から内臓器官の最小表面までの自由表面を被覆する（lining）組織は、上皮及び膜に分けられる。膜は、外部と連絡する又は連絡しない体腔を覆う。典型例は腸粘膜、並びに関節包の内表面、及び関節腔に含まれる腱及び靱帯を被覆する滑膜である。
【０００３】
これらは主に、配置に応じて、滑り及び潤滑機能（例えば、可動関節（mobile joints）の滑膜における）又は吸収機能（例えば、腸粘膜における）と関連する保護組織である。
【０００４】
この防御機能が損なわれると（例えば、機械的傷害又は微生物不全（dismicrobism）状態の後）、機能不全状態が生じ、これには近年、最先端の生物医学研究において特別の注意が払われている。
【０００５】
ごく最近になって、これらの機能不全が局所的だけでなく、全身レベルでも影響を有し、慢性炎症反応（ＣＳＩ）を引き起こすことが証明されている。ＣＳＩは、滑膜の変化（特に変形性関節症中）及び種々の上皮の機能不全の両方によって生じることが示されている。
【０００６】
被覆組織の細胞は、種々のストレス（病毒）を受けると炎症誘発性因子を放出し、これが隣接免疫細胞との双方向のクロストークにより反応を異なる器官、更には遠隔器官にまで拡大する。滑膜及び上皮組織の機能不全によって引き起こされる炎症状態の全身的増幅に主に関与する因子の中でも、特定のサイトカイン、及びフリーラジカル又は活性酸素種（ＲＯＳ）が特に重要視される。
【０００７】
免疫炎症性（immunoinflammatory）細胞によって放出されたプロテアーゼ及びｉｎ  ｓｉｔｕで生成したＲＯＳの両方が、細胞外基質のグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）を分解し、構造的及び機能的障壁の弱体化、並びに損傷の増大を生じる。
【０００８】
これらの最近の知識により、慢性全身性炎症（ＣＳＩ）の発生を引き起こす上皮組織及び膜の機能不全に起因する疾患について、診断並びに予防及び療法のいずれの観点からも全く新しい考え方が特定される。
【０００９】
滑膜の機能不全によって引き起こされる最も一般的な慢性全身性炎症は、ヒト及び愛玩動物の両方に非常によく見られる疾患である変形性関節症（ＯＡ）である。ＯＡを示す放射線学的兆候は、高齢ヒト集団（６５歳超）の７０％に存在し、獣医学分野においては、ネコ集団の３０％弱に存在する。さらに、６０歳超の男性の１０％及び女性の１３％が症候性ＯＡに罹患し、獣医学分野においては、１歳超のイヌの２０％もが症候性ＯＡに罹患する。ＯＡは当初、変性疾患に分類され、したがって関節軟骨のみに限られていたが（prerogative）、現在では軟骨だけでなく滑膜から腱、筋肉、靱帯及び軟骨下骨までの関節組織の全てを侵す炎症性障害として認識されている。
【００１０】
また、皮膚科分野では、上皮の機能不全によって引き起こされる最も頻度の高い慢性全身性炎症として、アトピー性皮膚炎及び乾癬が挙げられる。
【００１１】
アトピー性皮膚炎は、ヒト及び愛玩動物の両方で頻度の高い疾患であり、有病率は小児で約２０％、イヌで８％〜１５％であり（品種によって異なる）、ネコにもよく認められる。上皮起源の慢性全身性炎症（ＣＳＩ）が、アトピー性皮膚炎と他の器官の炎症性及び／又は神経炎症性障害との間の共存症に確認される。
【００１２】
乾癬は、人口の２％〜４％が罹患している慢性炎症性皮膚疾患である。アトピー性皮膚炎と同様、多くの最近の証拠から、ＩＬ−１７等のインターロイキンの全身レベルの上昇を伴う、皮膚細胞及び免疫炎症性細胞による炎症性サイトカインの産生に基づくＣＳＩ状態の起源が乾癬においても認識されている。関節、心臓血管、腎臓、肝臓及び代謝レベルでの乾癬の皮膚外への影響は、このサイトカインによるものである。
【００１３】
炎症性腸疾患（ＩＢＤ）は、ヒトにおいて疫学的に増加している障害であり、イヌ及びネコにもよく認められる。ＩＢＤは、慢性全身性炎症疾患とみなされ、ＩＢＤと整形外科的疾患との間の共存症が慢性全身性炎症性の状況の重要な確証となる。
【００１４】
同様の観察結果が他の被覆上皮、特に膀胱尿路上皮の障害についても得られている。間質性膀胱炎及び再発性膀胱炎を患う患者は、随伴する外陰部痛、線維筋痛、胃食道逆流を訴えることが多い。ヒト集団及びネコ集団の両方に見られる痛みを伴う障害である間質性膀胱炎及び再発性膀胱炎は実際に、全身性（血清）炎症マーカーレベルの上昇及び免疫細胞の活性化を伴う高度の組織炎症と関連する膀胱尿路上皮構造の変化を特徴とする。
【００１５】
末梢カンナビノイド受容体ＣＢ２の調節異常と関連がある疾患において活性を有する分子群に含まれるＮ−パルミトイル−Ｄ−グルコサミン（ＰＧＡ）が特許文献１に記載されている。治療される可能性がある疾患として、関節リウマチ等の慢性又は急性の関節炎が記載されている。しかしながら、この分子についての実験データは報告されておらず、変形性関節症、乾癬、アトピー性皮膚炎、腸上皮疾患又は膀胱疾患等の慢性全身性炎症性疾患に対する効果も示されていない。
【００１６】
さらに、特許文献１は、微粒子化形態のＮ−パルミトイル−Ｄ−グルコサミンを記載していない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１７】
【特許文献１】国際公開第９６／１８６００号
【発明の概要】
【００１８】
本発明は、微粒子化形態のＮ−パルミトイル−Ｄ−グルコサミンに関する。
【００１９】
本発明は、共微粒子化形態のＮ−パルミトイル−Ｄ−グルコサミンとクルクミンとの組成物にも関する。
【００２０】
本発明は、好ましくは変形性関節症、乾癬、アトピー性皮膚炎、及び腸上皮疾患又は膀胱疾患から選択される慢性全身性炎症性疾患の治療における使用のための微粒子化形態の、又はクルクミンと共微粒子化した、又はポリダチンと共微粒子化したＮ−パルミトイル−Ｄ−グルコサミンに更に関する。
【００２１】
さらに、本発明は、微粒子化形態の又はクルクミン若しくはポリダチンと共微粒子化したＮ−パルミトイル−Ｄ−グルコサミンを含むヒト若しくは動物用の医薬配合物、規定食若しくはサプリメント、又は動物用の飼料若しくは栄養補給剤にも関する。
【００２２】
本発明は、微粒子化形態の又はクルクミン若しくはポリダチンと共微粒子化したＮ−パルミトイル−Ｄ−グルコサミンの製造のために特別に設計された微粒子化又は共微粒子化プロセスにも関する。
【００２３】
添付の特許請求の範囲で概説される、これらの目的及び更なる目的は、以下の記載において説明される。特許請求の範囲の文言は、記載の十分性を評価する目的で本明細書に含まれるとみなすべきである。
【００２４】
本発明の更なる特徴及び利点が、非限定的な例として与えられる以下の好ましい実施形態の説明から明らかとなる。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１】微粒子化形態のＮ−パルミトイル−Ｄ−グルコサミンの粒径分布曲線Ｖ％／サイズを示す図である。
【図２】クルクミンと共微粒子化したＮ−パルミトイル−Ｄ−グルコサミンの粒径分布曲線Ｖ％／サイズを示す図である。
【図３】微粒子化クルクミンの粒径分布曲線Ｖ％／サイズを示す図である。
【図４】サブミクロン微粒子化形態のＮ−パルミトイル−Ｄ−グルコサミンの粒径分布曲線Ｉ％／サイズを示す図である。
【図５】サブミクロン微粒子化形態のＮ−パルミトイル−Ｄ−グルコサミンの粒径分布曲線Ｖ％／サイズを示す図である。
【図６】非微粒子化形態のＮ−パルミトイル−Ｄ−グルコサミンの粒径分布曲線Ｖ％／サイズを示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００２６】
第１の態様では、本発明は、微粒子化形態のＮ−パルミトイル−Ｄ−グルコサミン化合物（以下、ＰＧＡとも称される）に関する。
【００２７】
「微粒子化形態の化合物」という一般用語は、１０ミクロン未満であるが０．６ミクロン超のモードを有する分布曲線によって表される、体積百分率として規定され、レーザー光散乱法によって測定される粒径分布を有する化合物を指す。
【００２８】
一実施形態では、ＰＧＡは、少なくとも９６体積％の粒子が０．６ミクロン〜１０ミクロンの粒径を有する、ミー計算アルゴリズムを用いるＭａｌｖｅｒｎ  Ｍａｓｔｅｒｓｉｚｅｒ  ３０００ツールで測定される上に規定した粒径分布を有する。
【００２９】
好ましい実施形態では、ＰＧＡは、３．１ミクロン〜３．５ミクロンのモードを有し、少なくとも９７体積％の粒子が１０ミクロンよりも小さく、好ましくは少なくとも５０体積％の粒子が３．５ミクロンよりも小さい、ミー計算アルゴリズムを用いるＭａｌｖｅｒｎ  Ｍａｓｔｅｒｓｉｚｅｒ  ３０００ツールで測定される上に規定した粒径分布を有する。この粒径分布の一例を図１のグラフ及び付表に示す。
【００３０】
微粒子化は、Ｎ−パルミトイル−Ｄ−グルコサミン粒子を破砕するために力学的エネルギーの代わりに運動エネルギーを利用することが可能な、圧縮空気ジェット「スパイラル技術（spiral technology）」で作動する流体ジェットシステム（例えば、Ｊｅｔｍｉｌｌ（商標）モデル）において行うことができる。これらのデバイスは従来のものであるため、更に説明しない。
【００３１】
しかしながら、そのようにＰＧＡの微粒子化を行っても上に規定した微粒子化生成物に適合する粒径分布を得ることができないことが見出された。実際には、図６の粒径分布曲線に示されるように、１０ミクロンを明らかに上回る、特に３１ミクロン〜４０ミクロンのモードを有する不規則なガウス曲線を特徴とする生成物が得られる。
【００３２】
しかしながら、驚くべきことに、ＰＧＡを脂肪酸の存在下で予め結晶化させ、次いで結晶化生成物を、例えば圧縮空気ジェットスパイラル技術で作動する流体ジェットシステムを用いた従来の微粒子化プロセスに供することによって、上記の粒径分布を有する微粒子化形態のＰＧＡを得ることができることが見出された。
【００３３】
脂肪酸は、パルミチン酸であるのが好ましい。
【００３４】
好ましい実施形態では、脂肪酸は、ＰＧＡに対して３％〜２０％、又は４％〜１５％、又は４．５％〜６％の重量百分率（基準（authentic）パルミチン酸を含有する標準液に対する逆相ＨＰＬＣ法によって最終生成物について決定される）で存在する。
【００３５】
脂肪酸の存在下でのＰＧＡの結晶化は、ＰＧＡと脂肪酸とを均質に（intimately）混合する工程を含み、脂肪酸はＰＧＡに対して２％〜２０％、好ましくは４％〜１０％の重量百分率である。
【００３６】
好ましい実施形態では、結晶化方法は、
ａ）ＰＧＡ、好ましくはＴＬＣ分析によって決定される純度が９８％を超えるＰＧＡを準備する工程と、
ｂ）ＰＧＡを脂肪酸又はその塩と共に極性溶媒に懸濁する工程であって、該脂肪酸又はその塩がＰＧＡに対して２重量％〜２０重量％又は４重量％〜１０％重量の量で存在する、工程と、
ｃ）工程ｂ）の懸濁液を５０℃〜９０℃の温度又は溶媒の還流温度で、１５分又は３０分又は１時間よりも長い時間にわたって加熱する工程と、
ｄ）結晶化混合物をゆっくりと１０℃未満の温度にする工程と、
ｅ）ＰＧＡと脂肪酸との均質混合物の形態の結晶化物（crystallisate）を回収する工程と、
を含む。
【００３７】
上述のように、脂肪酸はパルミチン酸であるのが好ましい。
【００３８】
極性溶媒はメタノール、エタノール、アセトン又は酢酸エチルから選択されるのが好ましい。
【００３９】
工程ｄ）は２０分、より好ましくは３０分にわたって行うのが好ましい。
【００４０】
脂肪酸の存在下でのＰＧＡの合成及び結晶化は、以下の実施例（experimental part）において詳細に説明する。
【００４１】
上に説明及び規定した微粒子化ＰＧＡを、上皮及び滑膜の機能不全に起因するヒト及び動物の慢性全身性炎症性疾患の治療に使用することができることも見出された。
【００４２】
特に、これらの疾患は、
滑膜の機能不全に起因する炎症性疾患、
腸粘膜の機能不全に起因する炎症性疾患、
尿路上皮粘膜の機能不全に起因する炎症性疾患、
ケラチン性上皮の機能不全に起因する炎症性疾患、
から選択されるのが好ましい。
【００４３】
したがって、本発明は上皮及び／又は滑膜の機能不全に起因するヒト及び動物の炎症性疾患、好ましくは慢性全身性炎症性疾患の治療における使用のための微粒子化形態のＰＧＡ、好ましくは３重量％〜２０重量％の脂肪酸を含む微粒子化形態のＰＧＡに更に関する。
【００４４】
驚くべきことに、ＰＧＡとクルクミン又はポリダチンとの組合せが炎症性疾患の治療において明らかな相乗効果を有することも見出された。
【００４５】
クルクミンは、色が黄色であることから主に植物性染料として使用される、ウコン（Curcuma longa）から抽出された分子である。クルクミンは、以下の化学構造を有する：
【化１】
2019172663.tif 000002
【００４６】
クルクミンは、例えば６０％〜７５％のクルクミン自体、１５％〜２５％のデスメトキシクルクミン及び２％〜５％のビスデスメトキシクルクミンを含有する、総クルクミノイドの力価が約９５％の市販品である。
【００４７】
ポリダチン又はピセイドは、レスベラトロールから誘導され、ブドウ果汁中に存在するスチルベノイドのグルコシドである。これは植物のイタドリ（Polygonum cuspidatum）からも単離することができる。その構造式は、以下の通りである：
【化２】
2019172663.tif 000003
【００４８】
ポリダチンは、酵素的酸化に対する耐性がより高く、グルコース輸送体を用いた能動輸送機構によって細胞内に入り込み、より水溶性であることから腸内でより容易に吸収されるため、レスベラトロールよりも安定し、生物学的に利用可能である。
【００４９】
したがって、本発明は、上皮及び／又は滑膜の機能不全に起因するヒト及び動物の炎症性疾患、好ましくは慢性全身性炎症性疾患の治療における使用のためのクルクミンと組み合わせたＰＧＡに更に関する。
【００５０】
したがって、本発明は、上皮及び／又は滑膜の機能不全に起因するヒト及び動物の炎症性疾患、好ましくは慢性全身性炎症性疾患の治療における使用のためのポリダチンと組み合わせたＰＧＡにも関する。
【００５１】
或る特定の実施形態では、ＰＧＡ及びクルクミン及び／又はポリダチンを、例えば粉体混合装置又は同様の機器を用いて均質に混合し、乾燥混合物を形成する。
【００５２】
ＰＧＡ及びクルクミン（以下、ＣＵＲと称される）は３：１〜１：３、好ましくは２：１〜１：１のＰＧＡ／ＣＵＲ重量比で用いられる。
【００５３】
ＰＧＡ及びポリダチン（以下、ＰＯＬと称される）は２０：１〜５：１、好ましくは１２：１〜８：１のＰＧＡ／ＰＯＬ重量比で用いられる。
【００５４】
好ましい実施形態では、本発明は、クルクミンとの共微粒子化形態のＰＧＡ、好ましくは３重量％〜２０重量％の脂肪酸を含むＰＧＡに関する。
【００５５】
更なる好ましい実施形態では、本発明は、ポリダチンとの共微粒子化形態のＰＧＡ、好ましくは３重量％〜２０重量％の脂肪酸を含むＰＧＡに関する。
【００５６】
一実施形態では、共微粒子化混合物ＰＧＡ／ＣＵＲ及び共微粒子化混合物ＰＧＡ／ＰＯＬは、少なくとも９６体積％の粒子が０．６ミクロン〜１０ミクロンの粒径を有する、ミー計算アルゴリズムを用いるＭａｌｖｅｒｎ  Ｍａｓｔｅｒｓｉｚｅｒ  ３０００ツールで測定される上に規定した粒径分布を有する。
【００５７】
好ましい実施形態では、共微粒子化混合物ＰＧＡ／ＣＵＲ及び共微粒子化混合物ＰＧＡ／ＰＯＬは、３．１ミクロン〜３．８ミクロンのモードを有し、少なくとも９８体積％の粒子が１０ミクロンよりも小さく、好ましくは少なくとも５０体積％の粒子が３．５ミクロンよりも小さい、ミー計算アルゴリズムを用いるＭａｌｖｅｒｎ  Ｍａｓｔｅｒｓｉｚｅｒ  ３０００ツールで測定される上に規定した粒径分布を有する。この混合物ＰＧＡ／ＣＵＲについての粒径分布の一例を図２のグラフ及び付表に示す。
【００５８】
サブミクロン形態のＰＧＡも調製した。「サブミクロン形態のＰＧＡ」という用語は、モードが３００ナノメートル未満の分布曲線によって表される、レーザー光散乱法によって測定され、粒子の体積百分率／寸法として規定される粒径分布を有するＰＧＡを指す。
【００５９】
本実施形態では、ＰＧＡは、少なくとも９８体積％の粒子が０．０６ミクロン〜１ミクロンの粒径を有する、ミー計算アルゴリズムを用いるＭａｌｖｅｒｎ  Ｍａｓｔｅｒｓｉｚｅｒ  ３０００ツールで測定される上に規定した粒径分布を有する。
【００６０】
この粒径分布の一例を図５のグラフ及び付表に示す。
【００６１】
更なる対照として、サブミクロン形態のＰＧＡの粒径分布を、ナノメートル範囲の粒径の研究に特別に使用される別の計器であるＭａｌｖｅｒｎ  Ｎａｎｏｓｉｚｅｒも用いて測定した。図４に、ミー計算アルゴリズムを用いた、散乱光の強度のパーセンテージ／寸法として表される相対分布グラフを示す。グラフから、得られるモードが１７０ｎｍ〜２２０ｎｍであり、図５のグラフによって決定されるのと同じ粒径分布が実質的に確認されることが分かる。
【００６２】
サブミクロンＰＧＡは、以下の実施例に記載のようにミクロスフェアミル（microsphere mill）を用いた湿式粉砕法によるサブミクロン化プロセスによって得た。この場合にも、サブミクロン形態のＰＧＡを２重量％〜２０重量％、好ましくは４重量％〜１０重量％の脂肪酸を用いて、前述のように脂肪酸、好ましくはパルミチン酸を添加した後に得た。
【００６３】
サブミクロンＰＧＡは驚くべきことに、実際に予測可能であったように、前述のような微粒子化ＰＧＡと比較して改善された活性を示さなかった。それどころか、サブミクロンＰＧＡは、同じ投与用量の微粒子化ＰＧＡと比較して顕著に悪化した（pejorative）活性を示した。
【実施例】
【００６４】
高純度Ｎ−パルミトイル−Ｄ−グルコサミン（ＨＰＰＧＡ）の調製
７９４．３ｇのグルコサミン塩酸塩（３．６８モル）を、６７００ｍｌの水に撹拌下で可溶化する。
【００６５】
溶液を−５℃に冷却し、２１０４ｇの炭酸ナトリウム十水和物（７．３６モル）を添加する。
【００６６】
３０００ｍｌのテトラヒドロフランに可溶化した１１１４ｇの塩化パルミトイル（４．０５モル；１２２８ｍｌに等しい）を、グルコサミン溶液に非常に激しい撹拌下で１時間かけてゆっくりと添加する。混合物を−５℃で２時間、次いで室温で更に２時間にわたって激しい撹拌下に置く。１７５００ｍｌの水を添加し、混合物を一晩、穏やかな撹拌下に置く。
【００６７】
形成された沈殿物を濾過によって回収し、３０００ｍｌの水で３回洗浄する。母液及び洗浄水を捨てる。
【００６８】
固体を連続撹拌下で２時間還流させながら５０００ｍｌのメタノールから結晶化させた後、熱濾過によって分離し、２０００ｍｌの熱メタノールで２回洗浄し、最後に高真空下で乾燥させる。
【００６９】
およそ１２００ｇの乾燥生成物が回収される。
【００７０】
このようにして得られたＮ−パルミトイル−Ｄ−グルコサミン生成物は、以下の特性を有する：
物理的状態：白色の粉末
分子式：Ｃ22Ｈ43ＮＯ6
分子量：４１７．６
元素分析：Ｃ＝６３．２８％  Ｈ＝１０．３８％  Ｎ＝３．３５％  Ｏ＝２２．９９％
融点：２０２℃（ｄｅｃ．）
ＴＬＣ、溶離液クロロホルム／メタノール／水／ＮＨ3（２８％）  ８０：２５：２：１  Ｒｆ＝０．３０
ＴＬＣ純度：９８％超
【００７１】
パルミチン酸ナトリウムを添加したＮ−パルミトイル−Ｄ−グルコサミン（ＰＧＡ）の調製
９５０ｇの高純度Ｎ−パルミトイル−Ｄ−グルコサミン（ＨＰＰＧＡ）に、５０ｇのパルミチン酸ナトリウム塩（混合物の総重量に対して５重量％）を添加する。混合物を４リットルのメタノールに効率的な撹拌下で懸濁し、２時間還流させる。次いで、撹拌を行いながら、混合物を１時間のうちに５℃まで徐々に冷却する。次いで、固体を濾過によって分離し、高真空下で乾燥させる。
【００７２】
パルミチン酸含量を以下のような基準パルミチン酸標準品に対するＨＰＬＣ分析によって制御する：
カラムＺＯＲＢＡＸ  ＳＢ−Ｃ１８  ４．６  １５０ｍｍ  ５ミクロン又は同等物、
移動相：Ａ（０．０１Ｍアンモニア緩衝液−メタノール  ２対１）；Ｂ（アセトニトリル）。０分時点：Ａ  ３０％  Ｂ  ７０％；２５分時点：Ａ  １０％  Ｂ  ９０％；平衡時間：５分間、
流量：１．０ｍｌ／分、
カラム温度調節（thermostatation）：４０℃、
分析時間：２５分、
注入量：５０μｌ、
検出器：蒸発光散乱検出器：温度４０℃、ガス流量１．５ｍｌ／分、ゲイン４。
【００７３】
微粒子化プロセス
ＰＧＡを上記のような均質ＰＧＡ／脂肪酸混合物として微粒子化した。
【００７４】
また、微粒子化クルクミンを後続の生物学的実験のための比較化合物として調製した。クルクミノイドの力価が少なくとも９０％の市販のクルクミンを使用した。このようにして得られた微粒子化クルクミンの粒径分布を図３に示す。
【００７５】
微粒子化及び共微粒子化は、いずれの場合にも圧縮空気ジェット「スパイラル技術」で作動する流体ジェットシステム（特に、Ｊｅｔｍｉｌｌ（商標）モデル）において行った。
【００７６】
微粒子化条件：
微粒子化チャンバ内径３００ｍｍ、
流体ジェット圧８バール、
生成物供給量２０ｋｇ／時間〜２５ｋｇ／時間。
【００７７】
サブミクロン化プロセス
ＰＧＡ（脂肪酸を添加した）のサブミクロン化プロセスを、WA BACHOFEN（スイス、ムッテンツ）のＤＹＮＯ−ＭＩＬＬ  ＭＵＬＴＩＬＡＢミクロスフェアミル、１２５９．７ｇの０．３ｍｍ径ジルコニアビーズを用いた「湿式粉砕」法によって行った。
【００７８】
５０ｇの生成物を１０００ｍｌの蒸留水に懸濁し、４０℃で４時間粉砕する。得られる懸濁液を取り出し、凍結乾燥によって乾燥させる。
【００７９】
粒径分布の決定
粒径分布の決定を、１分間の超音波処理後に湿潤サンプルに対して行った。
【００８０】
ＬＡＬＬＳ（低角レーザー光散乱）法及びミー計算アルゴリズムを用いるＭａｌｖｅｒｎ  Ｍａｓｔｅｒｓｉｚｅｒ  ３０００ツールを使用した。サブミクロン形態のＰＧＡの粒径分布の決定については、Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｎａｎｏｓｉｚｅｒツールも比較として使用した。
【００８１】
粒径分布のグラフを図１〜図６に示す。
【００８２】
生物学的実験
上皮機能不全依存性炎症に対する種々の物理的形態のＮ−パルミトイル−Ｄ−グルコサミン（ＰＧＡ）の薬理効果
上皮機能不全が足レベルで決定されるラットの足におけるカラギーナン浮腫の実験モデルを用いた。
【００８３】
足におけるカラギーナン浮腫の実験モデルを、動物（ラット）の右足へのカラギーナン溶液（１％カラギーナンを含有する５０μｌの滅菌生理食塩水を含有する）の足底下（sub-plantar）注射によって誘導した。
【００８４】
特定の時間間隔で、足底体積（plantar volume）をプレチスモメーター（plethysmometer）（Ugo Basile、イタリア、ミラン）によって測定した。足底体積の増加を、特定の時間間隔で得られた値と、カラギーナン投与の直前に測定されたベースライン時（時点０）の体積との差として評価した。
【００８５】
以下の物理的形態のＮ−パルミトイル−Ｄ−グルコサミンを試験した：
非微粒子化Ｎ−パルミトイル−Ｄ−グルコサミン（ＰＧＡ）、
微粒子化Ｎ−パルミトイル−Ｄ−グルコサミン（ＰＧＡ−ｍ）、
クルクミンと共微粒子化したＮ−パルミトイル−Ｄ−グルコサミン（ＰＧＡＣＵＲ−ｍ）、
サブミクロン形態のＮ−パルミトイル−Ｄ−グルコサミン（ＰＧＡ−ｓｍ）。
【００８６】
以下の物理的形態のクルクミンも試験した：
微粒子化クルクミン（ＣＵＲ−ｍ）。
【００８７】
いずれの場合にも、ＰＧＡをＰＧＡ／脂肪酸混合物として試験した。
【００８８】
ラット（１群当たり１０匹の動物）を表１に示す実験群に分けた。
【００８９】
カラギーナンのみによって生じた浮腫のパーセンテージとして表される（１００に対する値で示す）、このようにして得られた結果は、以下の通りである：
【００９０】
【表１】
2019172663.tif 000004
【００９１】
データから、非微粒子化ＰＧＡが完全に不活性であり、サブミクロン化ＰＧＡ及び微粒子化クルクミンの両方がほぼ完全に不活性であることが示される。
【００９２】
微粒子化ＰＧＡがカラギーナン浮腫の２４．５％の低減を示す一方で、クルクミンと共微粒子化したＰＧＡでは、単独試験に用いた用量に等しい２つの有効成分の用量（ＰＧＡ−ｍ  ２０ｍｇ／ｋｇ；ＣＵＲ  １０ｍｇ／ｋｇ）で、浮腫の５１．５％の低減が強調される。
【００９３】
したがって、２つの有効成分の組合せによる明らかな相乗効果が実証された。
【００９４】
実際に、
３０ｍｇ／ｋｇ用量のＰＧＡ（非微粒子化）による処置は、薬理効果を生じず、
２０ｍｇ／ｋｇ用量のＰＧＡ−ｍによる処置は、明らかな薬理効果を生じ、
２０ｍｇ／ｋｇ用量のＰＧＡ−ｓｍによる処置は、顕著な薬理効果を生じず、
１０ｍｇ／ｋｇ用量の微粒子化ＣＵＲ単独による処置は、顕著な薬理効果を生じず、
３０ｍｇ／ｋｇ（２０ｍｇ／ｋｇのＰＧＡ−ｍ及び１０ｍｇ／ｋｇのＣＵＲ−ｍに相当する）用量のＰＧＡＣＵＲ−ｍによる処置は、ＰＧＡ−ｍ単独で得られるよりも明らかに優れた顕著な薬理効果を生じる。
【００９５】
カラギーナン浮腫におけるポリダチンと共微粒子化したＮ−パルミトイル−Ｄ−グルコサミンの薬理学的相乗効果
この場合にも、上皮機能不全が足レベルで決定されるラットの足におけるカラギーナン浮腫の実験モデルを用いた。
【００９６】
浮腫を５０μｌの１％カラギーナン水溶液の足底下注射によって誘導した。３０分、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間の時間間隔で、注射を受けた足の体積を、プレチスモメーター（Ugo Basile、イタリア、ミラン）を用いて評価した。ポリダチンを含む又は含まない、以下の物理的形態のＮ−パルミトイル−Ｄ−グルコサミンを、各群１０匹の動物（体重１３０ｇ〜１６０ｇのウィスター系）の群において括弧内に示す投与量で試験した：
群Ａ）カラギーナン
群Ｂ）カラギーナン＋微粒子化パルミトイルグルコサミン（１０ｍｇ／ｋｇ）
群Ｃ）カラギーナン＋微粒子化ポリダチン（１ｍｇ／ｋｇ）
群Ｄ）カラギーナン＋パルミトイルグルコサミン（１０ｍｇ／ｋｇ）＋ポリダチン（１ｍｇ／ｋｇ）（混合）
群Ｅ）カラギーナン＋パルミトイルグルコサミン及び共微粒子化ポリダチン（１０：１）（１１ｍｇ／ｋｇ）
【００９７】
【表２】
2019172663.tif 000005
【００９８】
２つの物質を共微粒子化形態で投与した場合に、２つの物質を別個に投与した場合又は単に混合した場合と比較して、明らかな相乗効果が示される。
【００９９】
したがって、微粒子化形態の、又はクルクミン及び／又はポリダチンと組み合わせた、特にクルクミン若しくはポリダチンと共微粒子化した形態のＰＧＡ（但し、サブミクロン形態のＰＧＡではない）を、上皮及び滑膜の機能不全に起因するヒト及び動物の慢性全身性炎症性疾患、特に好ましくは以下から選択される疾患の治療に用いることができることが明らかである：
滑膜の機能不全に起因する炎症性疾患、
腸粘膜の機能不全に起因する炎症性疾患、
尿路上皮粘膜の機能不全に起因する炎症性疾患、
ケラチン性上皮の機能不全に起因する炎症性疾患。
【０１００】
微粒子化形態の、又はクルクミン及び／又はポリダチンと組み合わせた、特にクルクミン若しくはポリダチンとの共微粒子化形態のＰＧＡは、医薬組成物又は動物用組成物に加えることができ、経口投与、口腔投与、非経口投与、直腸投与又は経皮投与用の剤形に配合することができる。
【０１０１】
経口投与については、医薬組成物は例えば、結合剤（例えばアルファ化トウモロコシデンプン、ポリビニルピロリドン又はヒドロキシプロピルメチルセルロース）、充填剤（例えばラクトース、微結晶性セルロース又はリン酸水素カルシウム）、滑沢剤（例えばステアリン酸マグネシウム、タルク又はシリカ）、崩壊剤（例えば、ジャガイモデンプン又はデンプングリコール酸ナトリウム）、又は阻害剤（inhibiting agents）（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム）のような薬学的に許容可能な賦形剤を用いて従来の方法で調製される錠剤、又は硬カプセル若しくは軟カプセルのいずれかの形態とすることができる。錠剤は、当該技術分野で既知の方法によってコーティングすることができる。経口投与用の液体調製物は例えば溶液、シロップ若しくは懸濁液の形態としてもよく、又は使用前に水若しくは他の好適なビヒクルで再構成される凍結乾燥品として与えてもよい。かかる液体調製物は、懸濁化剤（例えばソルビトールシロップ、セルロース誘導体又は食用硬化油脂）、乳化剤（例えば、レシチン又はアラビアゴム）、非水性ビヒクル（例えば扁桃油、油性エステル（oily esters）、エチルアルコール又は分留植物油）、及び保存料（例えば、メチル−ｐ−ヒドロキシベンゾエート若しくはプロピル−ｐ−ヒドロキシベンゾエート、又はソルビン酸）等の薬学的に許容可能な添加物を用いて従来の方法によって調製することができる。調製物が香料、着色料及び甘味料を含有することが好都合な場合もある。
【０１０２】
経口投与用の調製物は、有効成分の制御放出を可能にする適切な方法で配合することができる。
【０１０３】
口腔投与については、組成物は、頬粘膜への吸収に好適な従来の方法で配合された錠剤又はトローチ剤の形態とすることができる。典型的な口腔用配合物は、舌下投与用の錠剤である。
【０１０４】
微粒子化形態の、又はクルクミン及び／又はポリダチンと組み合わせた、特にクルクミン若しくはポリダチンとの共微粒子化形態のＰＧＡは、注射による非経口投与のために配合することができる。注射用の配合物は、保存料を添加した、例えばバイアル内の一回量の形態で与えてもよい。組成物は、油性又は水性ビヒクル中の懸濁液、溶液又はエマルション等の形態とすることができ、懸濁化剤、安定化剤及び／又は分散剤等の製剤化剤（formulary agents）を含有していてもよい。代替的には、有効成分を使用前に好適なビヒクル、例えば滅菌水で再構成される粉末としてもよい。
【０１０５】
本発明によると、微粒子化形態の、又はクルクミン及び／又はポリダチンと組み合わせた、特にクルクミン若しくはポリダチンとの共微粒子化形態のＰＧＡは、例えばココアバター又は他のグリセリド等の一般的な坐剤の主要成分を含有する坐剤又は停留浣腸等の直腸用組成物に応じて配合することもできる。
【０１０６】
上記の組成物に加えて、微粒子化形態、又はクルクミン及び／又はポリダチンと組み合わせた、特にクルクミン若しくはポリダチンとの共微粒子化形態のＰＧＡは、デポ剤としても配合することができる。かかる長時間作用型配合物は、注入（例えば皮下、経皮的又は筋肉内）によって、又は筋肉内注射によって投与することができる。このため、例えば、微粒子化形態の、又はクルクミン及び／又はポリダチンと組み合わせた、特にクルクミン若しくはポリダチンとの共微粒子化形態のＰＧＡは、適切なポリマー材料若しくは疎水性材料（例えば、好適な油中のエマルションの形態）若しくはイオン交換樹脂を用いて、又は最小限に可溶性の（minimally soluble）誘導体として配合することができる。
【０１０７】
本発明によると、ヒト（体重約７０ｋｇ）への投与について提案される、微粒子化形態の、又はクルクミン及び／又はポリダチンと組み合わせた、特にクルクミン若しくはポリダチンとの共微粒子化形態のＰＧＡの用量は、用量単位当たり１ｍｇ〜７ｇ又は１０ｍｇ〜７００ｍｇの有効成分の範囲である。用量単位は、例えば１日１回〜４回投与することができる。用量は、投与に選択される経路に応じて異なる。患者の年齢及び体重、更には治療すべき病態の重症度に応じて投与量を常に変化させる必要があり得ることを考慮すべきである。正確な用量及び投与経路は、最終的に担当の医師又は獣医師の判断により決定される。
【０１０８】
本発明は、微粒子化形態の、又はクルクミン及び／又はポリダチンと組み合わせた、特にクルクミン若しくはポリダチンとの共微粒子化形態のＰＧＡを含む、食事療法用組成物（dietetic compositions）、フードサプリメント、特別医療目的用食品（ＦＳＭＰ）及び化粧品組成物（例えば、クリームの形態）に更に関する。
【０１０９】
「特別医療目的用食品」という用語は、欧州委員会の加盟国に対する指令第１９９９／２１／ＣＥ号及び以下の項目に従って承認された製品を指す。この用語は、特定の病的状態を治癒する又はその治療を促すために、「疾患、障害又は特定の病的状態を患う人々の特定の栄養のニーズに応えるように設計された」製品を指し、このＦＳＭＰ製品は薬物に組み込まれる。
【０１１０】
本発明による配合物は、Remington's Pharmaceutical Sciences Handbook, Mack Pub. Co., N.Y., USA, 17th edition, 1985に記載されるような従来の方法に従って調製することができる。
【０１１１】
本発明をここで、以下の配合例を用いて更に説明する。
【０１１２】
配合例
実施例１  −  経口用シロップ
１本の１００ｍｌ容ボトルが以下のものを含有する：
ＰＧＡＣＵＲ−ｍ  ４０００ｍｇ、
カルボキシメチルセルロース  ３０００ｍｇ、
Ｎｏｖｅｏｎ  ＡＡ１  １５０ｍｇ、
甘味料  １０ｍｇ、
蒸留水  １００ｍｌまで適量。
【０１１３】
実施例２  −  動物用の顆粒
１００ｇの顆粒が以下のものを含有する：
ＰＧＡＣＵＲ−ｍ  ６０００ｍｇ、
ソルビトール粉末  ４００ｍｇ、
パルミチン酸サッカロース  ２０ｍｇ、
動物にとって魅力的な成分  ３０ｍｇ。
【０１１４】
実施例３  −  ヒト又は動物用の経口用錠剤
１つの錠剤が以下のものを含有する：
ＰＧＡ−ｍ  ６００ｍｇ、
微結晶性セルロース  ２００ｍｇ、
クロスカルメロースナトリウム  ７０ｍｇ、
ポリビニルピロリドン  １０ｍｇ、
ステアリン酸マグネシウム  ４ｍｇ。
【０１１５】
実施例４  −  ヒト又は動物用の経口用錠剤
１つの錠剤が以下のものを含有する：
ＰＧＡＣＵＲ−ｍ  ６００ｍｇ、
微結晶性セルロース  ２００ｍｇ、
クロスカルメロースナトリウム  ７０ｍｇ、
ポリビニルピロリドン  １０ｍｇ、
ステアリン酸マグネシウム  ４ｍｇ。
【０１１６】
実施例５  −  ヒト又は動物用の経口用錠剤
１つの錠剤が以下のものを含有する：
ＰＧＡＣＵＲ−ｍ  ３００ｍｇ、
微結晶性セルロース  １８０ｍｇ、
クロスカルメロースナトリウム  ６０ｍｇ、
ポリビニルピロリドン  １０ｍｇ、
ステアリン酸マグネシウム  ４ｍｇ。
【０１１７】
実施例６  −  ヒト又は動物用の経口用硬ゼラチンカプセル
１つのカプセルが以下のものを含有する：
ＰＧＡＣＵＲ−ｍ  ４００ｍｇ。
【０１１８】
実施例７  −  軟ゼラチンカプセル
１つのカプセルが以下のものを含有する：
ＰＧＡＣＵＲ−ｍ  ３００ｍｇ、
植物油  ２００ｍｇ、
ダイズレシチン  ５０ｍｇ。
【０１１９】
実施例８  −  軟ゼラチンカプセル
１つのカプセルが以下のものを含有する：
ＰＧＡＣＵＲ−ｍ  ４００ｍｇ、
植物油  ２００ｍｇ、
ダイズレシチン  ５０ｍｇ。
【０１２０】
実施例９  −  直腸用坐剤
ＰＧＡＣＵＲ−ｍ  ２００ｍｇ、
坐剤用の脂肪塊（Fat mass）  １２００ｍｇ。
【０１２１】
実施例１０  −  皮膚への局所外用クリーム
１００ｇのクリームが以下のものを含有する：
ＰＧＡＣＵＲ−ｍ  ２０００ｍｇ、
脱塩水  ７１ｇ、
ワセリン油  １０ｇ、
ＰＥＧ−５植物性ステロール  ４ｇ、
ピログルタミン酸ナトリウム  ２ｇ、
ステアリン酸  ２．５ｇ、
セトステアリルアルコール  ２．５ｇ、
ポリソルベート８０  ２％、
モノステアリン酸グリセリル  １．５ｇ、
シリコーン油  １％、
カルボマー  ０．５％、
２−フェノキシエタノール  １％。
【０１２２】
実施例１１  −  ヒト又は動物用の経口用錠剤
１つの錠剤が以下のものを含有する：
ＰＧＡＰＯＬ−ｍ  ４００ｍｇ、
微結晶性セルロース  ２５０ｍｇ、
クロスカルメロースナトリウム  ８０ｍｇ、
ポリビニルピロリドン  １５ｍｇ、
ステアリン酸マグネシウム  ５ｍｇ。
【図１】
2019172663.tif 000006
【図２】
2019172663.tif 000007
【図３】
2019172663.tif 000008
【図４】
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【図５】
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【図６】
2019172663.tif 000011
【外国語明細書】
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2019172663000002.pdf
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