(57)【要約】【課題】ヒトＬＭＮＡを標的とするオリゴヌクレオチド類似体を使用する早老性ラミノパシーを処置するための方法を提供すること。【解決手段】プロジェリンをコードする１つまたは複数の異常にスプライスされたＬＭＮＡ  ｍＲＮＡアイソフォームの発現を低減させるための、ＬＭＮＡを標的としたアンチセンスオリゴヌクレオチドに依拠する、早老性疾患および関連する状態を有する被験体における処置の方法を提供する。本発明は全般的に、ヒトラミンＡを標的とするアンチセンス化合物および関連する組成物を使用した、ハッチンソン−ギルフォード早老症候群を含めた早老性ラミノパシーの処置の方法に関する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
本願図面に記載の発明。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
配列表に関する記述
本出願と関連する配列表は、紙のコピーの代わりにテキスト形式で提供され、参照によ
り本明細書に組み込まれている。配列表を含有するテキストファイルの名称は、１２０１
７８＿４９４０１ＷＯ＿  ＳＥＱＵＥＮＣＥ＿ＬＩＳＴＩＮＧ．ｔｘｔである。テキスト
ファイルは約１４ＫＢであり、２０１２年１２月６日に作製され、ＥＦＳウェブを介して
電子的に提出されている。
【０００２】
本発明は全般的に、ヒトラミンＡを標的とするアンチセンス化合物および関連する組成
物を使用した、ハッチンソン−ギルフォード早老症候群を含めた早老性ラミノパシー（ｐ
ｒｏｇｅｒｏｉｄ  ｌａｍｉｎｏｐａｔｈｙ）の処置の方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
ハッチンソン−ギルフォード早老症候群（ＨＧＰＳ）は、早発の動脈硬化および血管平
滑筋細胞（ＳＭＣ）の変性によって特徴付けられる稀な遺伝性障害である。ＨＧＰＳは、
罹患した小児において加速度的な早期加齢として最も著しく現れる。ＨＧＰＳを有する小
児は、進行性の症状、例えば、成長遅滞、脱毛症、皮下脂肪の喪失、および骨の異常を有
する。平均寿命は１２歳であり、死亡の最も一般の原因は、心筋梗塞または脳卒中である
。
【０００４】
大部分のＨＧＰＳの症例は、ラミンＡ（ＬＭＮＡ）遺伝子における単一点変異に起因し
、ラミンＡの切断されたスプライシング変異体であるプロジェリンの生成をもたらす。単
一点変異は、ラミンＡ（ＬＭＮＡ）遺伝子のエキソン１１における新規のサイレント置換
（１８２４Ｃ＞Ｔ、Ｇｌｙ６０８Ｇｌｙ）である。置換は潜在的スプライスドナー部位を
活性化し、これは５０個のアミノ酸の内部欠失を伴うドミナントネガティブ変異体である
ラミンＡタンパク質の産生をもたらす。プロジェリンと称される変異タンパク質は、核膜
上に蓄積し、特徴的な核の小疱形成をもたらす（ＳｃａｆｆｉｄｉおよびＭｉｓｔｅｌｉ
、２００５年；Ｃａｏ、Ｂｌａｉｒら、２０１１年）。
【０００５】
異常なスプライシングは、ホスホロジアミデートモルホリノオリゴヌクレオチド（ＰＭ
Ｏ）、またはさらに具体的には、スプライススイッチングオリゴヌクレオチド（ｓｐｌｉ
ｃｅ−ｓｗｉｔｃｈｉｎｇ  ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ）（ＳＳＯ）を使用して
補正することができることは公知である。ＳＳＯは、部位において、または部位の近くに
おいてハイブリダイズすることによって異常なスプライシング部位をブロックし、それに
よって細胞のスプライシング機構によって認識されることを防止する。好ましいＳＳＯは
、ヌクレアーゼに対して耐性であり、このように得られた二本鎖構造は、リボヌクレアー
ゼＨによるＲＮＡ切断の可能性を排除する。サラセミアおよびデュシェンヌ型筋ジストロ
フィーについて、ＳＳＯはスプライシングパターンをインビトロおよびインビボの両方で
効果的に修復することが示されてきた（Ｋｉｎａｌｉ、Ａｒｅｃｈａｖａｌａ−Ｇｏｍｅ
ｚａら、２００９年；Ｓｖａｓｔｉ、Ｓｕｗａｎｍａｎｅｅら、２００９年）。ＨＧＰＳ
と関連するＬＭＮＡの異常なスプライシングは、細胞培養物（ＳｃａｆｆｉｄｉおよびＭ
ｉｓｔｅｌｉ、２００５年）において、ならびに関連する動物モデル（Ｏｓｏｒｉｏ、Ｎ
ａｖａｒｒｏら、２０１１年）においての両方で、活性化された潜在的スプライス部位を
標的とした修飾されたアンチセンスオリゴヌクレオチドを使用して、異常なスプライシン
グ事象の補正によって低減されることが示されてきた。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Ｓｃａｆｆｉｄｉ，Ｐ．およびＴ．Ｍｉｓｔｅｌｉ．Ｎａｔ  Ｍｅｄ（２００５）１１（４）：４４０〜５
【非特許文献２】Ｋｉｎａｌｉ，Ｍ．、Ｖ．Ａｒｅｃｈａｖａｌａ−Ｇｏｍｅｚａら、Ｌａｎｃｅｔ  Ｎｅｕｒｏｌ（２００９）８（１０）：９１８〜２８
【非特許文献３】Ｓｖａｓｔｉ，Ｓ．、Ｔ．Ｓｕｗａｎｍａｎｅｅら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ（２００９）１０６（４）：１２０５〜１０
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
ＨＧＰＳにおけるＬＭＮＡの役割を考慮すると、ＬＭＮＡプレｍＲＮＡを標的とする改
善されたオリゴヌクレオチドをベースとする処置の方法が必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明の実施形態は全般的に、その必要がある被験体において早老性疾患または関連す
る状態を処置するための方法に関し、その方法は、被験体にアンチセンスオリゴヌクレオ
チドを投与することを含み、オリゴヌクレオチドは、ヒトＬＭＮＡプレｍＲＮＡの異常な
スプライシングをモジュレートし、オリゴヌクレオチドは、モルホリノサブユニット、お
よび１つのサブユニットのモルホリノ窒素と隣接するサブユニットの５’環外炭素とを接
合するリン含有サブユニット間連結から構成され、かつ
（ｉ）実質的に荷電していない、ヌクレアーゼ耐性骨格を有し、
（ｉｉ）哺乳動物宿主細胞による取込みが可能であり、
（ｉｉｉ）約１２〜４０のヌクレオチド塩基を含有し、
（ｉｖ）ヒトＬＭＮＡプレｍＲＮＡのエキソン１０、イントロン１０、エキソン１１、ま
たはこれらの組合せに対して相補的である少なくとも約１２の連続的なサブユニットの標
的化配列を有する。
【０００９】
本発明の方法は、疾患、例えば、ヒトＬＭＮＡと関連する疾患または状態の処置のため
に使用することができる。特定の実施形態において、方法は、早老性疾患または関連する
状態、例えば、早老性ラミノパシー（例えば、ＨＧＰＳ）、年齢に関連する状態、または
心血管疾患（例えば、アテローム性動脈硬化症）の処置において使用される。
【００１０】
方法のより特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドの標的化配列は、ヒトＬＭＮ
ＡプレｍＲＮＡのエキソン１１潜在的スプライス部位の上流の塩基に対して相補的である
。他の特定の実施形態において、標的化配列は、ヒトＬＭＮＡプレｍＲＮＡのエキソン１
１潜在的スプライス部位の下流の塩基に対して相補的である。また他の特定の実施形態に
おいて、標的化配列は、ヒトＬＭＮＡプレｍＲＮＡのエキソン１１潜在的スプライス部位
と重複しない。
【００１１】
本明細書における方法のさらなる実施形態において、早老性疾患は、ヒトＬＭＮＡプレ
ｍＲＮＡのエキソン１１潜在的スプライス部位内の１８２４Ｃ＞Ｔ変異と関連する。関連
する実施形態において、本発明の方法において使用されるオリゴヌクレオチド中の標的化
配列は、１８２４Ｃ＞Ｔ変異と重複しない。
【００１２】
別の特定の実施形態において、標的化配列の最も３’側の塩基は、ヒトＬＭＮＡプレｍ
ＲＮＡのエキソン１１潜在的スプライス部位の約１〜３０塩基下流であるＬＭＮＡエキソ
ン１１中の塩基に対して相補的である。
【００１３】
また別の特定の実施形態において、標的化配列の最も３’側の塩基は、ヒトＬＭＮＡプ
レｍＲＮＡのエキソン１１潜在的スプライス部位の約１０〜４０塩基上流であるＬＭＮＡ
エキソン１１中の塩基に対して相補的である。
【００１４】
また別の特定の実施形態において、標的化配列の最も３’側の塩基は、ＬＭＮＡエキソ
ン１１の約１〜６０塩基上流であるＬＭＮＡイントロン１０中の塩基に対して相補的であ
る。
【００１５】
別の特定の実施形態において、標的化配列の最も３’側の塩基は、ＬＭＮＡイントロン
１０の約１〜３０塩基上流であるＬＭＮＡエキソン１０中の塩基に対して相補的である。
【００１６】
また別の特定の実施形態において、標的化配列は、ＬＭＮＡプレｍＲＮＡのエキソン１
０および１１のスプライスドナー（ＳＤ）部位またはスプライスアクセプター（ＳＡ）部
位のスプライスジャンクションと重複する領域に対して相補的であり、かつプロセシング
を受ける前のｍＲＮＡのエキソン領域の一部およびイントロン領域の一部に対して相補的
である。
【００１７】
方法において使用されるオリゴヌクレオチドの標的化配列は、本発明のさらにより特定
の実施形態において、配列番号３〜３４のいずれか１つの、少なくとも１２の連続的な塩
基に対して相補的であるか、または配列番号３〜３４のいずれか１つに対して少なくとも
９０％同一であるか、または配列番号３〜３４のいずれか１つを含むか、または配列番号
３〜３４のいずれか１つからなる。
【００１８】
方法のいずれかにおいて使用されるオリゴヌクレオチドの標的化配列は、本発明のさら
により特定の実施形態において、配列番号３〜７もしくは１４〜１６のいずれか１つの、
少なくとも１２の連続的な塩基に対して相補的であるか、または配列番号３〜７もしくは
１４〜１６のいずれか１つに対して少なくとも９０％同一であるか、または配列番号３〜
７もしくは１４〜１６のいずれか１つを含むか、または配列番号３〜７もしくは１４〜１
６のいずれか１つからなる。
【００１９】
方法のいずれかにおいて使用されるオリゴヌクレオチドの標的化配列は、本発明のさら
により特定の実施形態において、配列番号４の、少なくとも１２の連続的な塩基に対して
相補的であるか、または配列番号４に対して少なくとも９０％同一であるか、または配列
番号４を含むか、または配列番号４からなる。
【００２０】
方法のいずれかにおいて使用されるオリゴヌクレオチドの標的化配列は、本発明のさら
により特定の実施形態において、配列番号１１の、少なくとも１２の連続的な塩基に対し
て相補的であるか、または配列番号１１に対して少なくとも９０％同一であるか、または
配列番号１１を含むか、または配列番号１１からなる。
【００２１】
他の実施形態において、方法において使用されるオリゴヌクレオチドは、ホスホロジア
ミデートモルホリノオリゴヌクレオチド（ＰＭＯ）、または１つもしくは複数のピペラジ
ン含有サブユニット間連結を含むＰＭＯ（ＰＭＯプラス）、またはＰＭＯ−Ｘオリゴヌク
レオチドである。
【００２２】
本発明の特定の方法による例示的なモルホリノサブユニットは、下記の構造：  
【００２３】
【化１】
2019172691.tif 000002
【００２４】
に従ってホスホロジアミデート連結によって接合しており、式中、
Ｚは、ＳまたはＯであり、
Ｘ＝ＮＲ１Ｒ２またはＯＲ６であり、
Ｙ＝ＯまたはＮＲ７であり、
それぞれの前記連結は、以下：
（ａ）荷電していない連結（ａ）［Ｒ１、Ｒ２、Ｒ６、およびＲ７のそれぞれは、水素お
よび低級アルキルから独立に選択される］；
（ｂ１）カチオン性連結（ｂ１）［Ｘ＝ＮＲ１Ｒ２であり、Ｙ＝Ｏであり、ＮＲ１Ｒ２は
、Ｒ１Ｒ２＝−ＣＨＲＣＨＲＮ（Ｒ３）（Ｒ４）ＣＨＲＣＨＲ−であるように、任意選択
で置換されているピペラジノ基を表し、
各Ｒ４は、Ｈ、ＣＨ３であるかまたは存在せず、
Ｒ３は、Ｈ、低級アルキル、Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、Ｚ−Ｌ−ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２、お
よび［Ｃ（Ｏ）ＣＨＲ’ＮＨ］ｍＨから選択され、Ｚは、カルボニル（Ｃ（Ｏ））または
直接結合であり、Ｌは、アルキル、アルコキシ、およびアルキルアミノから選択される結
合を有する長さが１８原子までの任意選択のリンカーであり、Ｒ’は、天然アミノ酸また
はその１もしくは２炭素ホモログの側鎖であり、ｍは、１〜６である］；
（ｂ２）カチオン性連結（ｂ２）［Ｘ＝ＮＲ１Ｒ２であり、Ｙ＝Ｏであり、Ｒ１＝Ｈまた
はＣＨ３であり、Ｒ２＝ＬＮＲ３Ｒ４Ｒ５であり、Ｌ、Ｒ３、およびＲ４は、上記のよう
に定義され、Ｒ５は、Ｈ、低級アルキル、または低級（アルコキシ）アルキルである］、
ならびに
（ｂ３）カチオン性連結（ｂ３）［Ｙ＝ＮＲ７であり、Ｘ＝ＯＲ６であり、Ｒ７＝ＬＮＲ
３Ｒ４Ｒ５であり、Ｌ、Ｒ３、およびＲ４およびＲ５は、上記のように定義され、Ｒ６は
、Ｈまたは低級アルキルである］
から選択され、
少なくとも１つの前記連結は、カチオン性連結（ｂ１）、（ｂ２）、および（ｂ３）から
選択される。
【００２５】
上記の構造のより特定の実施形態において、タイプ（ａ）の連結におけるＲ１およびＲ
２のそれぞれは、メチルである。
【００２６】
上記の構造の別の特定の実施形態において、少なくとも１つの連結は、タイプ（ｂ１）
のものであり、各Ｒは、Ｈであり、Ｒ４は、Ｈ、ＣＨ３、または電子対であり、Ｒ３は、
Ｈ、ＣＨ３、Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、およびＣ（Ｏ）−Ｌ−ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２から選
択される。
【００２７】
上記の構造の別の特定の実施形態において、少なくとも１つの連結は、タイプ（ｂ１）
のものであり、各Ｒは、Ｈであり、Ｒ４は、電子対であり、Ｒ３は、Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２
およびＣ（Ｏ）−Ｌ−ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２から選択される。
【００２８】
上記の構造のまた別の特定の実施形態において、少なくとも１つの連結は、タイプ（ｂ
１）のものであり、各Ｒは、Ｈであり、Ｒ４は、電子対であり、Ｒ３は、Ｃ（＝ＮＨ）Ｎ
Ｈ２およびＣ（Ｏ）−Ｌ−ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２から選択される。
【００２９】
上記の構造のまた別の特定の実施形態において、Ｒ３は、Ｃ（Ｏ）−Ｌ−ＮＨＣ（ＮＨ
）ＮＨ２であり、Ｌは、構造−（ＣＨ２）ｎ−を有する炭化水素であり、ｎは、１〜１２
である。
【００３０】
上記の構造の別の特定の実施形態において、少なくとも１つの連結は、タイプ（ｂ１）
のものであり、各Ｒは、Ｈであり、Ｒ３およびＲ４のそれぞれは独立に、ＨまたはＣＨ３
である。
【００３１】
本発明の他の実施形態において、本発明の方法において使用されるアンチセンスオリゴ
ヌクレオチドは、細胞透過性ペプチド、例えば、アルギニンに富んだペプチドに共有結合
的に付着している。より特定の実施形態において、アルギニンに富んだペプチドは、１つ
または２つのアミノ酸リンカーを介して、そのＣ末端においてオリゴヌクレオチドの５’
端に付着している。代わりに、別の実施形態において、ペプチドは、１つまたは２つのア
ミノ酸リンカーを介して、そのＣ末端において本発明の方法において使用されるオリゴヌ
クレオチドの３’端に付着している。好ましい実施形態において、細胞透過性ペプチドは
、グリシンアミノ酸を介して、オリゴヌクレオチドに連結している。
【００３２】
本発明の方法のさらなる実施形態において、骨格を含むオリゴヌクレオチドを提供し、
骨格は、サブユニット間連結によって接合されているモルホリノ環構造の配列を含み、サ
ブユニット間連結は、１つのモルホリノ環構造の３’端と隣接するモルホリノ環構造の５
’端とを接合し、各モルホリノ環構造は、オリゴヌクレオチドが、配列番号１〜３４のい
ずれか１つにおいて記載した配列の少なくとも１２塩基に対して相補的であるか、または
配列番号３〜３４の任意の１つもしくは複数を含む標的化配列を含む標的核酸に配列特異
的様式で結合することができるように、塩基対合部分に結合し、サブユニット間連結は、
下記の一般構造（Ｉ）：
【００３３】
【化２】
2019172691.tif 000003
【００３４】
またはその塩もしくは異性体を有し、サブユニット間連結（Ｉ）のそれぞれは、独立に、
連結（Ａ）または連結（Ｂ）であり、
連結（Ａ）について：
Ｗは、それぞれの出現において独立に、ＳまたはＯであり、
Ｘは、それぞれの出現において独立に、−Ｎ（ＣＨ３）２、−ＮＲ１Ｒ２、−ＯＲ３また
は、
【００３５】
【化３】
2019172691.tif 000004
【００３６】
であり、
Ｙは、それぞれの出現において独立に、Ｏまたは−ＮＲ２であり、
Ｒ１は、それぞれの出現において独立に、水素またはメチルであり、
Ｒ２は、それぞれの出現において独立に、水素または−ＬＮＲ４Ｒ５Ｒ７であり、
Ｒ３は、それぞれの出現において独立に、水素またはＣ１〜Ｃ６アルキルであり、
Ｒ４は、それぞれの出現において独立に、水素、メチル、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、−Ｚ−
Ｌ−ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２または−［Ｃ（Ｏ）ＣＨＲ’ＮＨ］ｍＨであり、Ｚは、カル
ボニル（Ｃ（Ｏ））または直接結合であり、Ｒ’は、天然アミノ酸またはその１もしくは
２炭素ホモログの側鎖であり、ｍは、１〜６であり、
Ｒ５は、それぞれの出現において独立に、水素、メチルまたは電子対であり、
Ｒ６は、それぞれの出現において独立に、水素またはメチルであり、
Ｒ７は、それぞれの出現において独立に、水素、Ｃ１〜Ｃ６アルキルまたはＣ１〜Ｃ６ア
ルコキシアルキルであり、
Ｌは、アルキル、アルコキシまたはアルキルアミノ基、またはこれらの組合せを含む長さ
が１８原子までの任意選択のリンカーであり、
連結（Ｂ）について：
Ｗは、それぞれの出現において独立に、ＳまたはＯであり、
Ｘは、それぞれの出現において独立に、−ＮＲ８Ｒ９または−ＯＲ３であり、
Ｙは、それぞれの出現において独立に、Ｏまたは−ＮＲ１０であり、
Ｒ８は、それぞれの出現において独立に、水素またはＣ２〜Ｃ１２アルキルであり、
Ｒ９は、それぞれの出現において独立に、水素、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、Ｃ１〜Ｃ１２ア
ラルキルまたはアリールであり、
Ｒ１０は、それぞれの出現において独立に、水素、Ｃ１〜Ｃ１２アルキルまたは−ＬＮＲ
４Ｒ５Ｒ７であり、
Ｒ８およびＲ９は接合して、５〜１８員の単環式または二環式複素環を形成し得るか、あ
るいはＲ８、Ｒ９またはＲ３はＲ１０と接合して、５〜７員の複素環を形成し得、Ｘが４
−ピペラジノであるとき、Ｘは、下記の構造（ＩＩＩ）：
【化４】
2019172691.tif 000005
【００３７】
を有し、式中、
Ｒ１１は、それぞれの出現において独立に、Ｃ２〜Ｃ１２アルキル、Ｃ１〜Ｃ１２アミノ
アルキル、Ｃ１〜Ｃ１２アルキルカルボニル、アリール、ヘテロアリールまたはヘテロシ
クリルであり、
Ｒは、それぞれの出現において独立に、電子対、水素またはＣ１〜Ｃ１２アルキルであり
、
Ｒ１２は、それぞれの出現において独立に、水素、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、Ｃ１〜Ｃ１２
アミノアルキル、−ＮＨ２、−ＮＲ１３Ｒ１４、−ＮＲ１３Ｒ１４Ｒ１５、Ｃ１〜Ｃ１２
アルキルカルボニル、オキソ、−ＣＮ、トリフルオロメチル、アミジル、アミジニル、ア
ミジニルアルキル、アミジニルアルキルカルボニルグアニジニル、グアニジニルアルキル
、グアニジニルアルキルカルボニル、コレート、デオキシコレート、アリール、ヘテロア
リール、複素環、−ＳＲ１３またはＣ１〜Ｃ１２アルコキシであり、Ｒ１３、Ｒ１４およ
びＲ１５は、それぞれの出現において独立に、Ｃ１〜Ｃ１２アルキルであり、
サブユニット間連結の少なくとも１つは、連結（Ｂ）である。
【００３８】
上記の構造を使用するいくつかの実施形態において、サブユニット間連結の少なくとも
５％は、連結（Ｂ）である。関連する実施形態において、サブユニット間連結の１０％〜
５０％は、連結（Ｂ）である。別の関連する実施形態において、各連結（Ｂ）は、それぞ
れの出現において同じ構造を有する。上記の構造のまた別の特定の実施形態において、各
Ｙおよび各Ｗは、Ｏである。
【００３９】
本発明の方法のまた他の実施形態は、ヒトＬＭＮＡ遺伝子におけるエキソン１０または
エキソン１１の１つまたは複数の塩基に対して相補的であり、かつ配列番号３〜３４のい
ずれか１つにおいて記載した配列に対して相補的である少なくとも１２の連続的な塩基を
含有する、標的化配列を含むアンチセンスオリゴヌクレオチドを提供する。
【００４０】
本発明の方法のさらなる実施形態は、骨格を含むアンチセンスオリゴヌクレオチドを提
供し、骨格は、タイプ（Ａ）、（Ｂ）、またはこれらの組合せのサブユニット間連結によ
って接合されているモルホリノ環構造の配列を含み、各モルホリノ環構造は、オリゴヌク
レオチド化合物が、配列番号１〜３４のいずれか１つの少なくとも１２塩基に対して相補
的であるか、または配列番号３〜３４の任意の１つもしくは複数を含む、標的配列を含む
標的核酸に配列特異的様式で結合することができるように、塩基対合部分を支持し、オリ
ゴヌクレオチドは、３’末端、５’末端を含み、下記の構造（ＸＶＩＩ）：
【００４１】
【化５】
2019172691.tif 000006
【００４２】
またはその塩もしくは異性体を有し、
連結（Ａ）について：
Ｗは、それぞれの出現において独立に、ＳまたはＯであり、
Ｘは、それぞれの出現において独立に、−Ｎ（ＣＨ３）２、−ＮＲ１Ｒ２、−ＯＲ３また
は、
【００４３】
【化６】
2019172691.tif 000007
【００４４】
であり、
Ｙは、それぞれの出現において独立に、Ｏまたは−ＮＲ２であり、
Ｒ１は、それぞれの出現において独立に、水素またはメチルであり、
Ｒ２は、それぞれの出現において独立に、水素または−ＬＮＲ４Ｒ５Ｒ７であり、
Ｒ３は、それぞれの出現において独立に、水素またはＣ１〜Ｃ６アルキルであり、
Ｒ４は、それぞれの出現において独立に、水素、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、−Ｃ（＝ＮＨ）Ｎ
Ｈ２、−Ｚ−Ｌ−ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２または−［Ｃ（Ｏ）ＣＨＲ’ＮＨ］ｍＨであり
、Ｚは、カルボニル（Ｃ（Ｏ））または直接結合であり、Ｒ’は、天然アミノ酸またはそ
の１もしくは２炭素ホモログの側鎖であり、ｍは、１〜６であり、
Ｒ５は、それぞれの出現において独立に、水素、メチルまたは電子対であり、
Ｒ６は、それぞれの出現において独立に、水素またはメチルであり、
Ｒ７は、それぞれの出現において独立に、水素、Ｃ１〜Ｃ６アルキルまたはＣ１〜Ｃ６ア
ルコキシアルキルであり、
Ｌは、アルキル、アルコキシまたはアルキルアミノ基、またはこれらの組合せを含む長さ
が１８原子までの任意選択のリンカーであり、
連結（Ｂ）について：
Ｗは、それぞれの出現において独立に、ＳまたはＯであり、
Ｘは、それぞれの出現において独立に、−ＮＲ８Ｒ９または−ＯＲ３であり、
Ｙは、それぞれの出現において独立に、Ｏまたは−ＮＲ１０であり、
Ｒ８は、それぞれの出現において独立に、水素またはＣ２〜Ｃ１２アルキルであり、
Ｒ９は、それぞれの出現において独立に、水素、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、Ｃ１〜Ｃ１２ア
ラルキルまたはアリールであり、
Ｒ１０は、それぞれの出現において独立に、水素、Ｃ１〜Ｃ１２アルキルまたは−ＬＮＲ
４Ｒ５Ｒ７であり、
Ｒ８およびＲ９は接合して、５〜１８員の単環式または二環式複素環を形成し得るか、あ
るいはＲ８、Ｒ９またはＲ３はＲ１０と接合して、５〜７員の複素環を形成し得、Ｘが４
−ピペラジノであるとき、Ｘは、下記の構造（ＩＩＩ）：
【００４５】
【化７】
2019172691.tif 000008
【００４６】
を有し、式中、
Ｒ１０は、それぞれの出現において独立に、Ｃ２〜Ｃ１２アルキル、Ｃ１〜Ｃ１２アミノ
アルキル、Ｃ１〜Ｃ１２アルキルカルボニル、アリール、ヘテロアリールまたはヘテロシ
クリルであり、
Ｒ１１は、それぞれの出現において独立に、電子対、水素またはＣ１〜Ｃ１２アルキルで
あり、
Ｒ１２は、それぞれの出現において独立に、水素、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、Ｃ１〜Ｃ１２
アミノアルキル、−ＮＨ２、−ＮＲ１３Ｒ１４、−ＮＲ１３Ｒ１４Ｒ１５、Ｃ１〜Ｃ１２
アルキルカルボニル、−ＣＮ、トリフルオロメチル、アミジル、アミジニル、アミジニル
アルキル、アミジニルアルキルカルボニル、グアニジニル、グアニジニルアルキル、グア
ニジニルアルキルカルボニル、コレート、デオキシコレート、アリール、ヘテロアリール
、複素環、−ＳＲ１３またはＣ１〜Ｃ１２アルコキシであり、Ｒ１３、Ｒ１４およびＲ１
５は、それぞれの出現において独立に、Ｃ１〜Ｃ１２アルキルであり、
Ｒ１７は、それぞれの出現において独立に、非存在、水素またはＣ１〜Ｃ６アルキルであ
り、
Ｒ１８およびＲ１９は、それぞれの出現において独立に、非存在、水素、細胞透過性ペプ
チド、天然もしくは非天然のアミノ酸、Ｃ２〜Ｃ３０アルキルカルボニル、−Ｃ（＝Ｏ）
ＯＲ２１またはＲ２０であり、
Ｒ２０は、それぞれの出現において独立に、グアニジニル、ヘテロシクリル、Ｃ１〜Ｃ３
０アルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル；Ｃ６〜Ｃ３０アリール、Ｃ７〜Ｃ３０アラルキ
ル、Ｃ３〜Ｃ３０アルキルカルボニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキルカルボニル、Ｃ３〜Ｃ
８シクロアルキルアルキルカルボニル、Ｃ７〜Ｃ３０アリールカルボニル、Ｃ７〜Ｃ３０
アラルキルカルボニル、Ｃ２〜Ｃ３０アルキルオキシカルボニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアル
キルオキシカルボニル、Ｃ７〜Ｃ３０アリールオキシカルボニル、Ｃ８〜Ｃ３０アラルキ
ルオキシカルボニル、または−Ｐ（＝Ｏ）（Ｒ２２）２
であり、
Ｒ２１は、１個もしくは複数の酸素またはヒドロキシル部分またはこれらの組合せを含む
Ｃ１〜Ｃ３０アルキルであり、
各Ｒ２２は独立に、Ｃ６〜Ｃ１２アリールオキシであり、
Ｂは、塩基対合部分であり、
Ｌ１は、アルキル、ヒドロキシル、アルコキシ、アルキルアミノ、アミド、エステル、カ
ルボニル、カルバメート、ホスホロジアミデート、ホスホロアミデート（ｐｈｏｓｐｈｏ
ｒｏａｍｉｄａｔｅ）、ホスホロチオエート、ピペラジンおよびホスホジエステルから選
択される結合を含む長さが１８原子までの任意選択のリンカーであり、
ｘは、０以上の整数であり、
Ｒ１８またはＲ１９の少なくとも１つは、Ｒ２０であり、ただし、Ｒ１７およびＲ１８の
両方が非存在ではない。
【００４７】
本発明はまた、他の実施形態において、本明細書に記載のアンチセンスオリゴヌクレオ
チドおよび薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物を投与することによって、早老性
ラミノパシーを処置するための方法を提供する。
【００４８】
別の例示的な実施形態において、その必要がある被験体において早老性ラミノパシーを
処置するための方法を提供し、その方法は、被験体に本明細書に記載のアンチセンスオリ
ゴヌクレオチドまたは医薬組成物を投与することを含み、オリゴヌクレオチドは、ＬＭＮ
ＡプレｍＲＮＡのスプライシングをモジュレートすることによって、変異体ＬＭＮＡタン
パク質ｍＲＮＡの発現を阻害する。
【００４９】
本発明のこのような態様および他の態様は、下記の詳細な説明を参照することによって
明らかである。このために、様々な参照文献を、本明細書において記載するが、これらは
より詳細に、特定の背景的情報、手順、化合物および／または組成物を記載しており、そ
れぞれは参照によりその全体が本明細書に組み込まれている。
特定の実施形態では、例えば以下が提供される：
（項目１）
早老性疾患または関連する状態の処置を必要とする被験体において早老性疾患または関
連する状態を処置するための方法であって、前記被験体にアンチセンスオリゴヌクレオチ
ドを投与することを含み、前記オリゴヌクレオチドは、ヒトＬＭＮＡプレｍＲＮＡの異常
なスプライシングをモジュレートし、前記オリゴヌクレオチドは、モルホリノサブユニッ
ト、および１つのサブユニットのモルホリノ窒素と隣接するサブユニットの５’環外炭素
とを接合するリン含有サブユニット間連結から構成され、かつ以下：
（ｉ）実質的に荷電していない、ヌクレアーゼ耐性骨格を有し、
（ｉｉ）哺乳動物宿主細胞による取込みが可能であり、
（ｉｉｉ）約１２〜４０のヌクレオチド塩基を含有し、かつ
（ｉｖ）ヒトＬＭＮＡプレｍＲＮＡのエキソン１０、イントロン１０、エキソン１１、
またはこれらの組合せに対して相補的である少なくとも約１２の連続的なサブユニットの
標的化配列を有する、方法。
（項目２）
前記標的化配列が、ヒトＬＭＮＡプレｍＲＮＡのエキソン１１潜在的スプライス部位の
上流の塩基に対して相補的である、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記標的化配列が、ヒトＬＭＮＡプレｍＲＮＡのエキソン１１潜在的スプライス部位の
下流の塩基に対して相補的である、項目１に記載の方法。
（項目４）
前記標的化配列が、前記ヒトＬＭＮＡプレｍＲＮＡのエキソン１１潜在的スプライス部
位と重複しない、項目１に記載の方法。
（項目５）
前記早老性疾患が、前記ヒトＬＭＮＡプレｍＲＮＡのエキソン１１潜在的スプライス部
位内の１８２４Ｃ＞Ｔ変異と関連し、前記標的化配列が、前記１８２４Ｃ＞Ｔ変異と重複
しない、項目１に記載の方法。
（項目６）
前記標的化配列の最も３’側の塩基が、ヒトＬＭＮＡプレｍＲＮＡのエキソン１１潜在
的スプライス部位の約１〜３０塩基下流であるＬＭＮＡエキソン１１中の塩基に対して相
補的である、項目１に記載の方法。
（項目７）
前記標的化配列の最も３’側の塩基が、ヒトＬＭＮＡプレｍＲＮＡのエキソン１１潜在
的スプライス部位の約１０〜４０塩基上流であるＬＭＮＡエキソン１１中の塩基に対して
相補的である、項目１に記載の方法。
（項目８）
前記標的化配列の最も３’側の塩基が、ＬＭＮＡエキソン１１の約１〜６０塩基上流で
あるＬＭＮＡイントロン１０中の塩基に対して相補的である、項目１に記載の方法。
（項目９）
前記標的化配列の最も３’側の塩基が、ＬＭＮＡイントロン１０の約１〜３０塩基上流
であるＬＭＮＡエキソン１０中の塩基に対して相補的である、項目１に記載の方法。
（項目１０）
前記標的化配列が、ＬＭＮＡプレｍＲＮＡのエキソン１０および１１のスプライスドナ
ー（ＳＤ）部位またはスプライスアクセプター（ＳＡ）部位のスプライスジャンクション
と重複する領域に対して相補的であり、かつプロセシングを受ける前の前記ｍＲＮＡのエ
キソン領域の一部およびイントロン領域の一部に対して相補的である、項目１に記載の方
法。
（項目１１）
前記標的化配列が、配列番号３〜３４のいずれか１つを含む、項目１に記載の方法。
（項目１２）
前記標的化配列が、配列番号３〜７または１４〜１６のいずれか１つを含む、項目１に
記載の方法。
（項目１３）
前記標的化配列が、配列番号４から本質的になる、項目１に記載の方法。
（項目１４）
前記標的化配列が、配列番号１１から本質的になる、項目１に記載の方法。
（項目１５）
前記オリゴヌクレオチドが、ホスホロジアミデートモルホリノオリゴヌクレオチド（Ｐ
ＭＯ）、１つもしくは複数のピペラジン含有サブユニット間連結を含むＰＭＯ（ＰＭＯプ
ラス）またはＰＭＯ−Ｘオリゴヌクレオチドである、項目１に記載の方法。
（項目１６）
前記オリゴヌクレオチドが、約１０％〜５０％のサブユニット間カチオン性連結を含有
する、項目１に記載の方法。
（項目１７）
前記オリゴヌクレオチド中の前記モルホリノサブユニットが、下記の構造：
【化４３】
2019172691.tif 000009
に従ってホスホロジアミデート連結によって接合しており、
式中、Ｚは、ＳまたはＯであり、
Ｘ＝ＮＲ１Ｒ２またはＯＲ６であり、
Ｙ＝ＯまたはＮＲ７であり、そして
それぞれの前記連結は、以下：
（ａ）荷電していない連結（ａ）であって、ここで、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ６、およびＲ７の
それぞれは、水素および低級アルキルから独立に選択される、荷電していない連結（ａ）
；
（ｂ１）カチオン性連結（ｂ１）であって、ここで、Ｘ＝ＮＲ１Ｒ２であり、Ｙ＝Ｏで
あり、ＮＲ１Ｒ２は、Ｒ１Ｒ２＝−ＣＨＲＣＨＲＮ（Ｒ３）（Ｒ４）ＣＨＲＣＨＲ−であ
るように、任意選択で置換されているピペラジノ基を表し、
各Ｒ４は、Ｈ、ＣＨ３であるかまたは存在せず、かつ
Ｒ３は、Ｈ、低級アルキル、Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、Ｚ−Ｌ−ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２
、および［Ｃ（Ｏ）ＣＨＲ’ＮＨ］ｍＨから選択され、ここで、Ｚは、カルボニル（Ｃ（
Ｏ））または直接結合であり、Ｌは、アルキル、アルコキシ、およびアルキルアミノから
選択される結合を有する長さが１８原子までの任意選択のリンカーであり、Ｒ’は、天然
アミノ酸またはその１もしくは２炭素ホモログの側鎖であり、かつｍは、１〜６である、
カチオン性連結（ｂ１）；
（ｂ２）カチオン性連結（ｂ２）であって、ここで、Ｘ＝ＮＲ１Ｒ２であり、Ｙ＝Ｏで
あり、Ｒ１＝ＨまたはＣＨ３であり、かつＲ２＝ＬＮＲ３Ｒ４Ｒ５であり、ここで、Ｌ、
Ｒ３、およびＲ４は、上記のように定義され、かつＲ５は、Ｈ、低級アルキル、または低
級（アルコキシ）アルキルである、カチオン性連結（ｂ２）；ならびに
（ｂ３）カチオン性連結（ｂ３）であって、ここで、Ｙ＝ＮＲ７であり、Ｘ＝ＯＲ６で
あり、かつＲ７＝ＬＮＲ３Ｒ４Ｒ５であり、ここで、Ｌ、Ｒ３、およびＲ４およびＲ５は
、上記のように定義され、かつＲ６は、Ｈまたは低級アルキルである、カチオン性連結（
ｂ３）；
から選択され、
少なくとも１つの前記連結は、カチオン性連結（ｂ１）、カチオン性連結（ｂ２）、お
よびカチオン性連結（ｂ３）から選択される、項目１に記載の方法。
（項目１８）
タイプ（ａ）の連結におけるＲ１およびＲ２のそれぞれが、メチルである、項目１７に
記載の方法。
（項目１９）
少なくとも１つの連結が、タイプ（ｂ１）のものであり、各Ｒが、Ｈであり、Ｒ４が、
Ｈ、ＣＨ３、または電子対であり、かつＲ３が、Ｈ、ＣＨ３、Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、およ
びＣ（Ｏ）−Ｌ−ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２から選択される、項目１７に記載の方法。
（項目２０）
少なくとも１つの連結が、タイプ（ｂ１）のものであり、各Ｒが、Ｈであり、Ｒ４が、
電子対であり、かつＲ３が、Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２およびＣ（Ｏ）−Ｌ−ＮＨＣ（＝ＮＨ）
ＮＨ２から選択される、項目１７に記載の方法。
（項目２１）
少なくとも１つの連結が、タイプ（ｂ１）のものであり、各Ｒが、Ｈであり、Ｒ４が、
電子対であり、かつＲ３が、Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２およびＣ（Ｏ）−Ｌ−ＮＨＣ（＝ＮＨ）
ＮＨ２から選択される、項目１７に記載の方法。
（項目２２）
Ｒ３が、Ｃ（Ｏ）−Ｌ−ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ２であり、Ｌが、構造−（ＣＨ２）ｎ−を
有する炭化水素であり、ｎが、１〜１２である、項目２１に記載の方法。
（項目２３）
少なくとも１つの連結が、タイプ（ｂ１）のものであり、各Ｒが、Ｈであり、かつＲ３
およびＲ４のそれぞれが独立に、ＨまたはＣＨ３である、項目１７に記載の方法。
（項目２４）
前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが、細胞透過性ペプチドに共有結合的に付着して
いる、項目１から２３のいずれか一項に記載の方法。
（項目２５）
前記細胞透過性ペプチドが、アルギニンに富んだペプチドである、項目２４に記載の方
法。
（項目２６）
前記アルギニンに富んだペプチドが、１つまたは２つのアミノ酸リンカーを介してその
Ｃ末端において前記オリゴヌクレオチドの５’端に付着している、項目２５に記載の方法
。
（項目２７）
前記ペプチドが、１つまたは２つのアミノ酸リンカーを介してそのＣ末端において前記
オリゴヌクレオチドの３’端に付着している、項目２５に記載の方法。
（項目２８）
前記早老性疾患または前記関連する状態が、早老性ラミノパシー、年齢に関連する状態
、心血管疾患、ＨＧＰＳまたはアテローム性動脈硬化症から選択される、項目１に記載の
方法。
（項目２９）
早老性ラミノパシーの処置を必要とする被験体において早老性ラミノパシーを処置する
ための方法であって、前記方法は、前記被験体にアンチセンスオリゴヌクレオチド、また
はこれを含む医薬組成物を投与することを含み、前記オリゴヌクレオチドは、ヒトＬＭＮ
ＡプレｍＲＮＡの異常なスプライシングをモジュレートし、前記オリゴヌクレオチドは、
骨格を含み、前記骨格は、サブユニット間連結によって接合されているモルホリノ環構造
の配列を含み、前記サブユニット間連結は、１つのモルホリノ環構造の３’端と隣接する
モルホリノ環構造の５’端とを接合し、各モルホリノ環構造は、前記オリゴヌクレオチド
が、配列番号１〜３４のいずれか１つにおいて記載した配列の少なくとも１２塩基に対し
て相補的であるか、または配列番号３〜３４の任意の１つもしくは複数を含む標的化配列
を含む標的核酸に配列特異的様式で結合することができるように、塩基対合部分に結合し
ており、前記サブユニット間連結は、以下の一般構造（Ｉ）：
【化４４】
2019172691.tif 000010
またはその塩もしくは異性体を有し、前記サブユニット間連結（Ｉ）のそれぞれは、独立
に、連結（Ａ）または連結（Ｂ）であり、
ここで連結（Ａ）について：
Ｗは、それぞれの出現において独立に、ＳまたはＯであり、
Ｘは、それぞれの出現において独立に、−Ｎ（ＣＨ３）２、−ＮＲ１Ｒ２、−ＯＲ３ま
たは、
【化４５】
2019172691.tif 000011
であり、
Ｙは、それぞれの出現において独立に、Ｏまたは−ＮＲ２であり、
Ｒ１は、それぞれの出現において独立に、水素またはメチルであり、
Ｒ２は、それぞれの出現において独立に、水素または−ＬＮＲ４Ｒ５Ｒ７であり、
Ｒ３は、それぞれの出現において独立に、水素またはＣ１〜Ｃ６アルキルであり、
Ｒ４は、それぞれの出現において独立に、水素、メチル、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、−Ｚ
−Ｌ−ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２または−［Ｃ（Ｏ）ＣＨＲ’ＮＨ］ｍＨであり、ここで、
Ｚは、カルボニル（Ｃ（Ｏ））または直接結合であり、Ｒ’は、天然アミノ酸またはその
１もしくは２炭素ホモログの側鎖であり、かつｍは、１〜６であり、
Ｒ５は、それぞれの出現において独立に、水素、メチルまたは電子対であり、
Ｒ６は、それぞれの出現において独立に、水素またはメチルであり、
Ｒ７は、それぞれの出現において独立に、水素、Ｃ１〜Ｃ６アルキルまたはＣ１〜Ｃ６
アルコキシアルキルであり、
Ｌは、アルキル、アルコキシまたはアルキルアミノ基、またはこれらの組合せを含む長
さが１８原子までの任意選択のリンカーであり、そして
連結（Ｂ）について：
Ｗは、それぞれの出現において独立に、ＳまたはＯであり、
Ｘは、それぞれの出現において独立に、−ＮＲ８Ｒ９または−ＯＲ３であり、
Ｙは、それぞれの出現において独立に、Ｏまたは−ＮＲ１０であり、
Ｒ８は、それぞれの出現において独立に、水素またはＣ２〜Ｃ１２アルキルであり、
Ｒ９は、それぞれの出現において独立に、水素、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、Ｃ１〜Ｃ１２
アラルキルまたはアリールであり、
Ｒ１０は、それぞれの出現において独立に、水素、Ｃ１〜Ｃ１２アルキルまたは−ＬＮ
Ｒ４Ｒ５Ｒ７であり、
ここで、Ｒ８およびＲ９は接合して、５〜１８員の単環式または二環式複素環を形成し
得るか、あるいはＲ８、Ｒ９またはＲ３はＲ１０と接合して、５〜７員の複素環を形成し
得、そしてＸが４−ピペラジノであるとき、Ｘは、下記の構造（ＩＩＩ）：
【化４６】
2019172691.tif 000012
を有し、式中、
Ｒ１１は、それぞれの出現において独立に、Ｃ２〜Ｃ１２アルキル、Ｃ１〜Ｃ１２ア
ミノアルキル、Ｃ１〜Ｃ１２アルキルカルボニル、アリール、ヘテロアリールまたはヘテ
ロシクリルであり、かつ
Ｒは、それぞれの出現において独立に、電子対、水素またはＣ１〜Ｃ１２アルキルで
あり、かつ
Ｒ１２は、それぞれの出現において独立に、水素、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、Ｃ１〜Ｃ
１２アミノアルキル、−ＮＨ２、−ＮＲ１３Ｒ１４、−ＮＲ１３Ｒ１４Ｒ１５、Ｃ１〜Ｃ
１２アルキルカルボニル、オキソ、−ＣＮ、トリフルオロメチル、アミジル、アミジニル
、アミジニルアルキル、アミジニルアルキルカルボニルグアニジニル、グアニジニルアル
キル、グアニジニルアルキルカルボニル、コレート、デオキシコレート、アリール、ヘテ
ロアリール、複素環、−ＳＲ１３またはＣ１〜Ｃ１２アルコキシであり、ここで、Ｒ１３
、Ｒ１４およびＲ１５は、それぞれの出現において独立に、Ｃ１〜Ｃ１２アルキルであり
、そして
前記サブユニット間連結の少なくとも１つは、連結（Ｂ）である、方法。
（項目３０）
前記サブユニット間連結の少なくとも５％が、連結（Ｂ）である、項目２９に記載の方
法。
（項目３１）
前記サブユニット間連結の１０％〜５０％が、連結（Ｂ）である、項目２９に記載の方
法。
（項目３２）
各連結（Ｂ）が、それぞれの出現において同じ構造を有する、項目２９に記載の方法。
（項目３３）
各Ｙおよび各Ｗが、Ｏである、項目２９に記載の方法。
（項目３４）
前記標的化配列が、配列番号３〜７または１４〜１６のいずれか１つを含む、項目２９
に記載の方法。
（項目３５）
前記標的化配列が、配列番号４から本質的になる、項目２９に記載の方法。
（項目３６）
前記標的化配列が、配列番号１１から本質的になる、項目２９に記載の方法。
（項目３７）
前記早老性疾患または前記関連する状態が、早老性ラミノパシー、年齢に関連する状態
、心血管疾患、ＨＧＰＳまたはアテローム性動脈硬化症から選択される、項目２９に記載
の方法。
【図面の簡単な説明】
【００５０】
【図１Ａ】図１Ａは、ホスホロジアミデート連結を有する例示的なモルホリノオリゴマー構造を示す。
【図１Ｂ】図１Ｂは、図１Ａにおけるようなモルホリノオリゴマーを示すが、骨格連結は、（ピペラジノ）ホスホロジアミデート連結の形態で、１つの正に荷電している基を含有する。
【図１Ｃ】図１Ｃは、本発明の一実施形態によるアルギニンに富んだペプチドおよびアンチセンスオリゴマーの結合体を示す。
【図１Ｄ】図１Ｄ〜Ｇは、Ｄ〜Ｇと呼称される、例示的なモルホリノオリゴヌクレオチドの繰り返しサブユニットセグメントを示す。
【図１Ｅ】図１Ｄ〜Ｇは、Ｄ〜Ｇと呼称される、例示的なモルホリノオリゴヌクレオチドの繰り返しサブユニットセグメントを示す。
【図１Ｆ】図１Ｄ〜Ｇは、Ｄ〜Ｇと呼称される、例示的なモルホリノオリゴヌクレオチドの繰り返しサブユニットセグメントを示す。
【図１Ｇ】図１Ｄ〜Ｇは、Ｄ〜Ｇと呼称される、例示的なモルホリノオリゴヌクレオチドの繰り返しサブユニットセグメントを示す。
【図２】図２は、プロジェリンおよびラミンＡ／Ｃの免疫蛍光スクリーニングについての結果を示す。
【図３】図３は、ラミンＡおよびプロジェリンのウエスタン分析についての結果を示す。
【図４】図４は、ラミンＡおよびプロジェリンのＲＴ−ｑＰＣＲ分析についての結果を示す。
【図５】図５は、ラミンＡ、ラミンＣおよびプロジェリンのウエスタン分析についての結果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００５１】
本発明は、その必要がある被験体に本明細書に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド
、またはこれを含有する医薬組成物を投与することによって、被験体において早老性ラミ
ノパシーを処置するための方法に関し、オリゴヌクレオチドは、ＬＭＮＡプレｍＲＮＡの
スプライシングをモジュレートすることによって、変異体ＬＭＮＡタンパク質ｍＲＮＡの
発現を阻害する。特定の態様において、例えば、これらおよび関連する方法は、プロジェ
リン発現が疾患、例えば、ＨＧＰＳと関連する臨床状況における早老性ラミノパシーの処
置に適用することができる。これらおよび関連する実施形態はまた、本発明の方法を他の
処置と共に併行的または逐次的に行うことによって、早老性（ｐｒｏｇｅｒｉｏｄ）ラミ
ノパシーを処置または低減させる方法と合わせることができる。
【００５２】
定義
他に定義しない限り、本明細書において使用する全ての技術および科学用語は、本発明
が属する分野の当業者によって通常理解されるのと同じ意味を有する。本明細書に記載さ
れているものと同様または同等である任意の方法および材料を、本発明の実施または試験
において使用することができるが、好ましい方法および材料を記載する。本発明の目的の
ために、下記の用語を、下記で定義する。
【００５３】
冠詞「ａ」および「ａｎ」は、本明細書において、冠詞の文法的対象の１つまたは複数
（すなわち、少なくとも１つ）について言及するために使用される。例として、「１つの
要素」は、１つの要素または複数の要素を意味する。
【００５４】
「約」とは、参照の分量、レベル、値、数、頻度、百分率、寸法、サイズ、量、重量ま
たは長さに対して、３０％、２５％、２０％、２５％、１０％、９％、８％、７％、６％
、５％、４％、３％、２％または１％ほど変動する、分量、レベル、値、数、頻度、百分
率、寸法、サイズ、量、重量または長さを意味する。
【００５５】
「コード配列」とは、遺伝子のポリペプチド産物のためのコードに寄与する任意の核酸
配列を意味する。対照的に、「非コード配列」という用語は、遺伝子のポリペプチド産物
のためのコードに寄与しない任意の核酸配列を指す。
【００５６】
本明細書を通して、文脈上他の意味に解すべき場合を除き、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ
）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」および「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」と
いう語は、記述したステップもしくは要素、またはステップもしくは要素の群を含むこと
を暗示するが、任意の他のステップもしくは要素、またはステップもしくは要素の群を排
除することを暗示しないと理解される。
【００５７】
「からなる」とは、「からなる」という語句に続く何らかを含み、これらに限定される
ことを意味する。したがって、「からなる」という語句は、列挙された要素が必要とされ
または必須であり、他の要素が存在し得ないことを示す。「から本質的になる」とは、こ
の語句の後に列挙した任意の要素を含むことを意味し、列挙された要素について開示にお
いて特定された活性もしくは作用を妨害せず、またはこの活性もしくは作用に寄与しない
他の要素に限定される。したがって、「から本質的になる」という語句は、列挙された要
素が必要とされ、または必須であるが、他の要素は任意選択であり、他の要素が列挙され
た要素の活性または作用に具体的に影響を与えるかどうかによって、存在しても、または
存在しなくてもよいことを示す。
【００５８】
「相補的」および「相補性」という用語は、塩基対合則によって関連するポリヌクレオ
チド（すなわち、ヌクレオチドの配列）を指す。例えば、配列「Ａ−Ｇ−Ｔ」は、配列「
Ｔ−Ｃ−Ａ」に対して相補的である。相補性は、「部分的」であり得、ここでは、核酸の
塩基のいくつかのみが、塩基対合則によってマッチする。あるいは、核酸の間に「完全な
」または「全体的」相補性が存在し得る。核酸鎖の間の相補性の程度は、核酸鎖の間のハ
イブリダイゼーションの効率および強度に対して有意な効果を有する。完全な相補性が所
望であることが多い一方で、いくつかの実施形態は、標的ＲＮＡに関して、１つまたは複
数ではあるが、好ましくは６つ、５つ、４つ、３つ、２つ、または１つのミスマッチを含
むことができる。オリゴマー内の任意の場所におけるバリエーションが含まれる。特定の
実施形態において、オリゴマーの末端近くの配列におけるバリエーションは一般に、内部
におけるバリエーションより好ましく、存在する場合、典型的には、５’末端および／ま
たは３’末端の約６ヌクレオチド、５ヌクレオチド、４ヌクレオチド、３ヌクレオチド、
２ヌクレオチドまたは１ヌクレオチド以内である。
【００５９】
「細胞透過性ペプチド」または「ＣＰＰ」という用語は互換的に使用され、輸送ペプチ
ド、担体ペプチド、またはペプチド伝達ドメインとまた称されるカチオン性細胞透過性ペ
プチドを指す。ペプチドは、本明細書に示されているように、所与の細胞培養集団の、中
間の全ての整数を含めて、細胞の３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９
０％、または１００％において細胞透過を誘発する能力を有し、全身投与によってインビ
ボで複数の組織内での巨大分子のトランスロケーションを可能とする。
【００６０】
「アンチセンスオリゴマー」または「アンチセンス化合物」または「アンチセンスオリ
ゴヌクレオチド」または「オリゴヌクレオチド」という用語は互換的に使用され、環状サ
ブユニットの配列を指し、これはそれぞれが、サブユニット間連結によって連結される塩
基対合部分を担持し、サブユニット間連結は、塩基対合部分がワトソン−クリック塩基対
合によって核酸（典型的にはＲＮＡ）中の標的配列にハイブリダイズし、標的配列内で核
酸：オリゴマーヘテロ二重鎖を形成することを可能とする。環状サブユニットは、リボー
スもしくは別のペントース糖、または特定の実施形態において、モルホリノ基（下記のモ
ルホリノオリゴマーの記載を参照されたい）をベースとし得る。また意図されるのは、ペ
プチド核酸（ＰＮＡ）、ロックド核酸（ＬＮＡ）、および２’−Ｏ−メチルオリゴヌクレ
オチド、および当技術分野において公知の他のアンチセンス薬剤である。
【００６１】
このようなアンチセンスオリゴマーは、ｍＲＮＡの翻訳をブロックもしくは阻害し、ま
たは天然のプレｍＲＮＡスプライスプロセシングを阻害し、または標的とされたｍＲＮＡ
の分解を誘発するように設計することができ、このようなアンチセンスオリゴマーは、ハ
イブリダイズする標的配列に「向けられ」または「標的として」いると言われてもよい。
特定の実施形態において、標的配列は、ｍＲＮＡのＡＵＧ開始コドン、プロセシングを受
ける前のｍＲＮＡの３’もしくは５’スプライス部位、または分岐点の周囲の領域、また
はこれらを含む領域である。標的配列は、エキソン内またはイントロン内または組合せで
あり得る。スプライス部位のための標的配列は、プロセシングを受ける前のｍＲＮＡ中の
通常のスプライスアクセプタージャンクションの１〜約２５塩基対下流にその５’端を有
するｍＲＮＡ配列を含み得る。スプライスのための好ましい標的配列は、スプライス部位
を含むプロセシングを受ける前のｍＲＮＡの任意の領域であるか、またはエキソンコード
配列内に完全に含有され、またはスプライスアクセプター部位もしくはドナー部位にまた
がる。オリゴマーが上記の様式で標的の核酸を標的としているとき、オリゴマーはより一
般に、生物学的に関連する標的、例えば、本発明において、ラミンＡタンパク質をコード
するヒトＬＭＮＡ遺伝子プレｍＲＮＡを「標的として」いると言われる。例示的な標的化
配列は、配列番号３〜３４を含む。
【００６２】
含まれるのは、配列番号３〜３４の１つもしくは複数を含む、配列番号３〜３４の１つ
もしくは複数から本質的になる、または配列番号３〜３４の１つもしくは複数からなるア
ンチセンスオリゴヌクレオチドである。また含まれるのは、配列番号３〜３４の任意の１
つに対して８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、もしくは９９％（中間の
全ての整数を含めて）の配列同一性もしくは配列相同性を有するバリアントオリゴマー、
および／または約１、２、３、４、５、６、７、８、９、もしくは１０のヌクレオチドだ
けこれらの配列と異なるバリアント、好ましくは、細胞におけるプロジェリン発現をモジ
ュレートするバリアントを含めた、これらのアンチセンスオリゴマーのバリアントである
。また含まれるのは、例えば、２〜５の荷電していない連結毎に約１つまで、例えば、１
０の荷電していない連結毎に約４〜５つの本明細書に記載の適切な数のカチオン性連結も
しくは他の修飾された連結を含み、かつ／またはまた本明細書に記載されているような付
着したＡｒｇに富んだ細胞透過性輸送ペプチドを含む、配列番号３〜３４の任意の１つま
たは複数のオリゴヌクレオチドである。
【００６３】
「モルホリノオリゴマー」または「ＰＭＯ」（ホスホロアミデート（ｐｈｏｓｐｈｏｒ
ａｍｉｄａｔｅ）モルホリノオリゴマーまたはホスホロジアミデートモルホリノオリゴマ
ー）という用語は、モルホリノサブユニット構造から構成されるオリゴヌクレオチド類似
体を指し、（ｉ）構造は、１〜３個の原子長、好ましくは２個の原子長であり、好ましく
は荷電しておらず、またはカチオン性であり、１つのサブユニットのモルホリノ窒素と隣
接するサブユニットの５’環外炭素とを接合する、リン含有連結によって一緒に連結され
ており、（ｉｉ）各モルホリノ環は、塩基特異的水素結合によって、ポリヌクレオチド中
の塩基に結合するのに有効なプリンまたはピリミジンまたは同等の塩基対合部分を担持す
る。バリエーションが結合または活性を妨害しない限り、この連結に対してバリエーショ
ンを作製することができる。例えば、リンに付着している酸素は、硫黄で置換し得る（チ
オホスホロジアミデート）。５’酸素は、アミノまたは低級アルキル置換アミノで置換さ
れていてもよい。リンに付着しているペンダント窒素は、置換されていないか、（任意選
択で置換された）低級アルキルで一置換、または二置換されていてもよい。下記のカチオ
ン性連結についての考察をまた参照されたい。プリンまたはピリミジン塩基対合部分は典
型的には、アデニン、シトシン、グアニン、ウラシル、チミンまたはイノシンである。モ
ルホリノオリゴマーの合成、構造、および結合特徴は、これらの全てが参照により本明細
書中に組み込まれている米国特許第５，６９８，６８５号、同第５，２１７，８６６号、
同第５，１４２，０４７号、同第５，０３４，５０６号、同第５，１６６，３１５号、同
第５，５２１，０６３号、および同第５，５０６，３３７号、ならびにＰＣＴ公開第ＰＣ
Ｔ／ＵＳ０７／１１４３５号（カチオン性連結）ならびにＵＳ０８／０１２８０４（改善
された合成）において詳述されている。
【００６４】
「ＰＭＯ＋」は、従前記載されてきた任意の数の（１−ピペラジノ）ホスフィニリデン
オキシ、（１−（４−（ω−グアニジノ−アルカノイル））−ピペラジノ）ホスフィニリ
デンオキシ連結（Ａ２およびＡ３）を含むホスホロジアミデートモルホリノオリゴマーを
指す（例えば、参照により本明細書中にその全体が組み込まれているＰＣＴ公開ＷＯ／２
００８／０３６１２７を参照されたい）。
【００６５】
「ＰＭＯ−Ｘ」は、少なくとも１つの（Ｂ）連結、または開示されている末端修飾、な
らびに参照によりその全体が本明細書中に組み込まれているＷＯ２０１１／１５０４０８
およびＵＳ２０１２／００６５１６９において開示されているようなものの少なくとも１
つを含む、本明細書において開示されているホスホロジアミデートモルホリノオリゴマー
を指す。本明細書において有用なさらなるＰＭＯ−Ｘホスホロジアミデートモルホリノオ
リゴマーは、参照により本明細書中にその全体が組み込まれている２０１１年１１月１８
日に出願された米国特許仮出願第６１／５６１，８０６号において見出し得る。
【００６６】
「ホスホロアミデート」基は、３個の付着した酸素原子および１個の付着した窒素原子
を有するリンを含み、一方、「ホスホロジアミデート」基は、２個の付着した酸素原子お
よび２個の付着した窒素原子を有するリンを含む。本明細書および同時係属中の米国特許
出願第６１／３４９，７８３号および同第１１／８０１，８８５号に記載されているオリ
ゴマーの荷電していないまたは修飾されたサブユニット間連結において、１個の窒素は、
常に骨格鎖に対してペンダントである。ホスホロジアミデート連結における第２の窒素は
典型的には、モルホリノ環構造における環窒素である。
【００６７】
「チオホスホロアミデート（Ｔｈｉｏｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄａｔｅ）」または「チ
オホスホロジアミデート」連結は、それぞれホスホロアミデートまたはホスホロジアミデ
ート連結であり、１個の酸素原子、典型的には骨格に対してペンダントである酸素は、硫
黄で置き換えられている。
【００６８】
「サブユニット間連結」は、２つのモルホリノサブユニット、例えば、構造（Ｉ）を接
続している連結を指す。
【００６９】
「荷電している」、「荷電していない」、「カチオン性」および「アニオン性」は、本
明細書において使用する場合、概ね中性のｐＨ、例えば、約６〜８での化学部分の主な状
態を指す。例えば、この用語は、生理学的ｐＨ、すなわち、約７．４での化学部分の主な
状態を指し得る。
【００７０】
「オリゴヌクレオチド類似体」という用語は、（ｉ）修飾された骨格構造、例えば、天
然のオリゴヌクレオチドおよびポリヌクレオチドにおいて見出される標準的なホスホジエ
ステル連結以外の骨格、ならびに（ｉｉ）任意選択で、修飾された糖部分、例えば、リボ
ース部分でもデオキシリボース部分でもなくモルホリノ部分を有するオリゴヌクレオチド
を指す。オリゴヌクレオチド類似体は、ワトソン−クリック塩基対合によって標準的なポ
リヌクレオチド塩基に水素結合をすることができる塩基を支持し、類似体骨格は、オリゴ
ヌクレオチド類似体分子と、標準的なポリヌクレオチド（例えば、一本鎖ＲＮＡまたは一
本鎖ＤＮＡ）中の塩基との間のこのような水素結合を配列特異的様態で可能にする様式で
塩基を提示する。好ましい類似体は、実質的に荷電していない、リン含有骨格を有するも
のである。
【００７１】
オリゴヌクレオチド類似体中の実質的に荷電していないリン含有骨格は、サブユニット
連結の大部分、例えば、その連結の５０〜１００％、典型的には少なくとも６０％〜１０
０％、または７５％または８０％が荷電しておらず、単一のリン原子を含有するものであ
る。アンチセンスオリゴヌクレオチドおよびオリゴヌクレオチド類似体は、約８〜４０の
サブユニット、典型的には約８〜２５のサブユニット、好ましくは約１２〜２５のサブユ
ニット（中間の全ての整数および範囲を含めた）を含有し得る。特定の実施形態において
、オリゴヌクレオチドは、下記で定義するように、標的配列に対して正確な配列相補性ま
たは概ねの相補性を有し得る。
【００７２】
オリゴヌクレオチドの「サブユニット」は、１つのヌクレオチド（またはヌクレオチド
類似体）単位を指す。この用語は、付着したサブユニット間連結を伴う、または伴わない
ヌクレオチド単位を指し得るが、「荷電しているサブユニット」に言及するとき、電荷は
典型的には、サブユニット間連結（例えば、ホスフェートもしくはホスホロチオエート連
結またはカチオン性連結）内にある。
【００７３】
プリンまたはピリミジン塩基対合部分は典型的には、アデニン、シトシン、グアニン、
ウラシル、チミンまたはイノシンである。また含まれるのは、塩基、例えば、ピリジン−
４−オン、ピリジン−２−オン、フェニル、プソイドウラシル、２，４，６−トリメトキ
シベンゼン、３−メチルウラシル、ジヒドロウリジン、ナフチル、アミノフェニル、５−
アルキルシチジン（例えば、５−メチルシチジン）、５−アルキルウリジン（例えば、リ
ボチミジン）、５−ハロウリジン（例えば、５−ブロモウリジン）または６−アザピリミ
ジンまたは６−アルキルピリミジン（例えば、６−メチルウリジン）、プロピン、クエソ
シン、２−チオウリジン、４−チオウリジン、ワイブトシン、ワイブトキソシン、４−ア
セチルチジン、５−（カルボキシヒドロキシメチル）ウリジン、５’−カルボキシメチル
アミノメチル−２−チオウリジン、５−カルボキシメチルアミノメチルウリジン、β−Ｄ
−ガラクトシルクエオシン、１−メチルアデノシン、１−メチルイノシン、２，２−ジメ
チルグアノシン、３−メチルシチジン、２−メチルアデノシン、２−メチルグアノシン、
Ｎ６−メチルアデノシン、７−メチルグアノシン、５−メトキシアミノメチル−２−チオ
ウリジン、５−メチルアミノメチルウリジン、５−メチルカルボニルメチルウリジン（ｍ
ｅｔｈｙｌｃａｒｂｏｎｙｈｎｅｔｈｙｌｕｒｉｄｉｎｅ）、５−メチルオキシウリジン
、５−メチル−２−チオウリジン、２−メチルチオ−Ｎ６−イソペンテニルアデノシン、
β−Ｄ−マンノシルクエオシン、ウリジン−５−オキシ酢酸、２−チオシチジン、トレオ
ニン誘導体およびその他である（Ｂｕｒｇｉｎら、１９９６年、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒ
ｙ、３５巻、１４０９０頁；Ｕｈｌｍａｎ  ＆  Ｐｅｙｍａｎ、上述）。「修飾塩基」と
は、この態様において、上記で例示したような、アデニン（Ａ）、グアニン（Ｇ）、シト
シン（Ｃ）、チミン（Ｔ）、およびウラシル（Ｕ）以外のヌクレオチド塩基を意味する。
このような塩基は、アンチセンス分子中の任意の位置において使用することができる。オ
リゴマーの使用によって、ＴｓおよびＵｓは互換的であることを当業者は認識する。例え
ば、他のアンチセンス化学物質、例えば、よりＲＮＡ様である２’−Ｏ−メチルアンチセ
ンスオリゴヌクレオチドによって、Ｔ塩基は、Ｕと示し得る（例えば、配列表を参照され
たい）。
【００７４】
「アミノ酸サブユニット」または「アミノ酸残基」は、α−アミノ酸残基（−ＣＯ−Ｃ
ＨＲ−ＮＨ−）またはβ−アミノ酸残基または他のアミノ酸残基（例えば、−ＣＯ−（Ｃ
Ｈ２）ｎＣＨＲ−ＮＨ−）を指すことができ、Ｒは、側鎖（水素を含み得る）であり、ｎ
は、１〜７、好ましくは１〜４である。
【００７５】
「天然アミノ酸」という用語は、天然に見出されるタンパク質中に存在するアミノ酸、
例えば、タンパク質生合成の間に利用される２０種の（Ｌ）−アミノ酸、ならびにその他
、例えば、４−ヒドロキシプロリン、ヒドロキシリシン、デスモシン、イソデスモシン、
ホモシステイン、シトルリンおよびオルニチンを指す。「非天然アミノ酸」という用語は
、天然に見出されるタンパク質において存在しないアミノ酸を指し、例には、β−アラニ
ン（β−Ａｌａ）、６−アミノヘキサン酸（Ａｈｘ）および６−アミノペンタン酸が含ま
れる。「非天然アミノ酸」のさらなる例には、これらに限定されないが、当業者には公知
の（Ｄ）−アミノ酸、ノルロイシン、ノルバリン、ｐ−フルオロフェニルアラニン、エチ
オニンなどが含まれる。
【００７６】
「単離した」とは、その天然の状態において材料に通常伴う構成要素が実質的または本
質的にない材料を意味する。例えば、「単離したポリヌクレオチド」または「単離したオ
リゴヌクレオチド」は、本明細書において使用する場合、天然の状態においてポリヌクレ
オチドに隣接する配列から精製または取り出されたポリヌクレオチド、例えば、フラグメ
ントに通常隣接する配列から取り出されたＤＮＡフラグメントを指し得る。
【００７７】
「有効量」または「治療有効量」は、単回用量として、または一連の用量の一部として
、所望の治療効果（例えば、化学療法剤に対するがん細胞の感作）を生じさせるのに有効
な、哺乳動物被験体に投与される治療化合物、例えば、アンチセンスオリゴマーの量を指
す。アンチセンスオリゴマーについて、この効果は典型的には、選択した標的配列の翻訳
または天然のスプライス−プロセシングを阻害することによってもたらされる。ＬＭＮＡ
ｍＲＮＡを標的とした「有効量」はまた、プロジェリンの発現をモジュレートするのに
有効な量に関する。
【００７８】
「増強する」もしくは「増強すること」または「増大する」もしくは「増大すること」
または「刺激する」もしくは「刺激すること」とは一般に、非アンチセンス化合物または
対照化合物によってもたらされる反応と比較して、細胞においてより大きな生理学的反応
（すなわち、下流の効果）を生じさせ、またはもたらす１つまたは複数のアンチセンス化
合物または組成物の能力を指す。「増大した」または「増強された」量は典型的には、「
統計的に有意な」量であり、非アンチセンス化合物（薬剤が存在しないこと）または対照
化合物によってもたらされる量の１．１倍、１．２倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、
７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍またはそれを超え
る倍（例えば、５００倍、１０００倍）（中間および１超の、全ての整数および小数点を
含めた、例えば、１．５、１．６、１．７、１．８など）である増大を含み得る。
【００７９】
「低減する」または「阻害する」という用語は全般的に、診断の技術分野における通例
の技術によって測定して、関連する生理学的反応または細胞反応を「減少させる」１種ま
たは複数種の本発明のアンチセンス化合物の能力に関し得る。関連する生理学的反応また
は細胞反応（インビボもしくはインビトロ）は、当業者には明らかであり、例えば、ｍＲ
ＮＡおよび／またはタンパク質レベルによって測定した、プロジェリンの発現における低
減を含み得る。反応における「減少」は、非アンチセンス化合物または対照組成物によっ
て生じる反応と比較して「統計的に有意」であり得、１％、２％、３％、４％、５％、６
％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１
７％、１８％、１９％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５
５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１０
０％の減少（中間の全ての整数を含めた）を含み得る。
【００８０】
「標的配列」という用語は、それに対してオリゴヌクレオチドまたはアンチセンス薬剤
が向けられる標的ＲＮＡの一部、すなわち、オリゴヌクレオチドが、相補的配列のワトソ
ン−クリック塩基対合によってハイブリダイズする配列を指す。特定の実施形態において
、標的配列は、イントロンおよびエキソン両方の標的配列を含むプレｍＲＮＡの連続的な
領域であり得る。特定の他の実施形態において、標的配列は、もっぱらイントロンまたは
エキソン配列からなる。
【００８１】
「標的化配列」または「アンチセンス標的化配列」という用語は、ＲＮＡゲノムにおけ
る標的配列に対して相補的（さらに、実質的に相補的であることを意味する）である、オ
リゴヌクレオチドまたは他のアンチセンス薬剤における配列を指す。アンチセンス化合物
の全配列、または一部のみが、標的配列に対して相補的であり得る。例えば、２０〜３０
の塩基を有するオリゴヌクレオチドにおいて、約６、７、８、９、１０、１１、１２、１
３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６
、２７、２８、または２９は、標的領域に対して相補的である標的化配列であり得る。典
型的には、標的化配列は、連続的な塩基で形成されてもよいが、代わりに、例えば、オリ
ゴヌクレオチドの反対の末端から一緒に置かれたときに、標的配列をまたがる配列を構成
する、非連続的な配列で形成されてもよい。
【００８２】
標的配列および標的化配列は、ハイブリダイゼーションが逆平行構成で起こるとき、互
いに「相補的」であると記載される。標的化配列は、標的配列に対して「概ねの」または
「実質的な」相補性を有し得、まだ本発明の目的のために機能し得る。すなわち、標的化
配列は、まだ機能的に「相補的」であり得る。特定の実施形態において、オリゴヌクレオ
チドは、１０ヌクレオチド中、標的配列と最大で１つのミスマッチ、好ましくは２０ヌク
レオチド中、最大で１つのミスマッチを有し得る。代わりに、オリゴヌクレオチドは、本
明細書に記載されている例示的なアンチセンス標的化配列と、少なくとも９０％の配列相
同性、好ましくは少なくとも９５％の配列相同性を有し得る。
【００８３】
オリゴマーが生理学的条件下で標的にハイブリダイズする場合、オリゴヌクレオチドは
、実質的に４５℃超、好ましくは少なくとも５０℃、典型的には６０℃〜８０℃またはよ
り高いＴｍを伴い、標的ポリヌクレオチドに「特異的にハイブリダイズ」する。このよう
なハイブリダイゼーションは好ましくは、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条
件に相当する。所与のイオン強度およびｐＨで、Ｔｍは、標的配列の５０％が相補的ポリ
ヌクレオチドにハイブリダイズする温度である。また、このようなハイブリダイゼーショ
ンは、標的配列に対するアンチセンスオリゴマーの「概ねの」または「実質的な」相補性
によって、ならびに正確な相補性によって起こり得る。
【００８４】
「相同性」は、同一であるか、または保存的置換を構成する、アミノ酸の百分率数を指
す。相同性は、配列比較プログラム、例えば、ＧＡＰを使用して決定し得る（Ｄｅｖｅｒ
ａｕｘら、１９８４年、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、１２巻、３８
７〜３９５頁）。このように、本明細書において引用したものと同様または実質的に異な
る長さの配列は、アラインメント中にギャップを挿入することによって比較することがで
き、このようなギャップは、例えば、ＧＡＰによって使用される比較アルゴリズムによっ
て決定することができる。
【００８５】
「配列同一性」または、例えば、「５０％同一の配列」を含むという用語は、本明細書
において使用する場合、配列が、比較のウィンドウに亘り、ヌクレオチド１つずつのベー
スでまたはアミノ酸１つずつのベースで同一である程度を指す。したがって、「配列同一
性の百分率」は、比較のウィンドウに亘り２つの最適に整列した配列を比較し、同一の核
酸塩基（例えば、Ａ、Ｔ、Ｃ、Ｇ、Ｉ）または同一のアミノ酸残基（例えば、Ａｌａ、Ｐ
ｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｌ
ｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、ＣｙｓおよびＭｅｔ）が両方
の配列において起こる位置の数を決定して、マッチした位置の数を得て、マッチした位置
の数を比較のウィンドウにおける位置の総数（すなわち、ウィンドウサイズ）で割り、結
果を１００で乗じて、配列同一性の百分率を得ることによって計算し得る。
【００８６】
２つ以上のポリヌクレオチドまたはポリペプチドの間の配列関係を記載するのに使用さ
れる用語には、「参照配列」、「比較ウィンドウ」、「配列同一性」、「配列同一性の百
分率」および「実質的な同一性」が含まれる。「参照配列」は、長さが、少なくとも８ま
たは１０であるが、１５〜１８であることが頻繁であり、少なくとも２５のヌクレオチド
およびアミノ酸残基を含めたモノマー単位であることが多い。２つのポリヌクレオチドは
それぞれ、（１）２つのポリヌクレオチドの間で同様の配列（すなわち、完全なポリヌク
レオチド配列の一部のみ）、および（２）２つのポリヌクレオチドの間で相違している配
列を含み得るため、２つ（またはそれ超）のポリヌクレオチドの間の配列比較は典型的に
は、２つのポリヌクレオチドの配列を、「比較ウィンドウ」に亘り比較することによって
行い、配列類似性の局所領域を同定および比較する。「比較ウィンドウ」は、少なくとも
６、通常では約５０〜約１００、より通常では約１００〜約１５０の連続的な位置の概念
的セグメントを指し、その中で、２つの配列を最適に整列させた後に、配列を同じ数の連
続的な位置の参照配列と比較する。比較ウィンドウは、参照配列（付加も欠失も含まない
）と比較して、２つの配列の最適なアラインメントについて約２０％以下の付加または欠
失（すなわち、ギャップ）を含み得る。
【００８７】
比較ウィンドウを整列させるための配列の最適なアラインメントは、選択した様々な方
法のいずれかによって生じる、アルゴリズムのコンピュータ化した実行（Ｗｉｓｃｏｎｓ
ｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓソフトウェアパッケージリリース７．０におけるＧＡＰ、ＢＥＳ
ＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、およびＴＦＡＳＴＡ、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇ
ｒｏｕｐ、５７５Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｄｒｉｖｅ  Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ、ＵＳＡ）によっ
て、または点検および最良のアラインメント（すなわち、比較ウィンドウに亘り最も高い
相同性百分率をもたらす）によって行い得る。例えば、Ａｌｔｓｃｈｕｌら、１９９７年
、Ｎｕｃｌ．  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．、２５巻：３３８９頁によって開示されているよう
な、プログラムのＢＬＡＳＴファミリーをまた参照し得る。配列分析の詳細な考察は、Ａ
ｕｓｕｂｅｌら、「Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  
Ｂｉｏｌｏｇｙ」、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ  Ｉｎｃ、１９９４〜１９９８
年、第１５章のユニット１９．３において見出すことができる。
【００８８】
「ヌクレアーゼ−耐性」オリゴマー分子（オリゴマー）は、ハイブリダイズされていな
い形態またはハイブリダイズされた形態で、その骨格が、体内の一般の細胞外および細胞
内のヌクレアーゼによるヌクレアーゼ切断に対して実質的に耐性であるものを指す。すな
わち、オリゴマーは、オリゴマーが曝露される体内の通常のヌクレアーゼ条件下でヌクレ
アーゼ切断を殆ど示さないか、または全く示さない。
【００８９】
薬剤が細胞膜を横切る受動拡散以外の機構によって細胞に入ることができるとき、薬剤
は、「哺乳動物細胞によって能動的に取り込まれる」。薬剤は、例えば、ＡＴＰ−依存性
輸送機構による哺乳動物細胞膜を横切る薬剤の輸送をいう「能動輸送」によって、または
輸送タンパク質への薬剤の結合を必要とし、次いで、これによって膜を横切る結合した薬
剤の通過を促進する輸送機構による細胞膜を越えるアンチセンス薬剤の輸送をいう「促進
輸送」によって輸送し得る。能動輸送および促進輸送の両方のために、オリゴヌクレオチ
ド類似体は好ましくは、下記に定義されているような実質的に荷電していない骨格を有す
る。
【００９０】
「ヘテロ二重鎖」は、アンチセンスオリゴヌクレオチドと標的ＲＮＡの相補的部分との
間の二重鎖を指す。「ヌクレアーゼ−耐性ヘテロ二重鎖」は、ヘテロ二重鎖が、細胞内お
よび細胞外ヌクレアーゼ、例えば、二本鎖ＲＮＡ／ＲＮＡまたはＲＮＡ／ＤＮＡ複合体を
切断することができるリボヌクレアーゼＨによるインビボの分解に対して実質的に耐性で
あるように、その相補的標的へのアンチセンスオリゴマーの結合によって形成されるヘテ
ロ二重鎖を指す。
【００９１】
本明細書において使用する場合、「体液」という用語は、尿、唾液、血漿、血液、脊髄
液、または生物由来の他の試料、例えば、皮膚細胞または皮膚細片を含めた被験体から得
た種々の試料タイプを包含し、その中に懸濁した細胞または細胞フラグメント、または液
体媒体およびその溶質を指し得る。
【００９２】
「相対量」という用語は、比較が試験測定と対照測定との間で行われる場合に使用され
る。反応における複合体を形成する試薬の相対量は、対照標本と反応する量と比較した、
試験標本と反応する量である。対照標本は、同じアッセイにおいて別々に試行し得、また
はこれは、同じ試料の部分（例えば、組織切片における悪性領域の周囲の正常組織）であ
り得る。
【００９３】
個体または細胞の「処置」は、個体または細胞における疾患または病態の自然の成り行
きを変化させる手段として提供される任意のタイプの介入である。処置には、これらに限
定されないが、例えば、医薬組成物の投与が含まれ、予防的に、または病的事象の開始も
しくは病原体との接触に続いて行い得る。処置は、本明細書に記載されているものの中で
もとりわけ、炎症と関連する疾患または状態の症状または病態に対する任意の望ましい効
果を含む。
【００９４】
また含まれるのは、処置されている疾患もしくは状態の進行の速度を低減させ、その疾
患もしくは状態の発症を遅延し、またはその発症の重症度を低減させることに向けること
ができる「予防的」処置である。「処置」または「予防法」は、疾患または状態、または
その関連する症状の完全な根絶、治癒、または予防を必ずしも示さない。
【００９５】
野生型遺伝子または遺伝子産物は、集団において最も頻繁に観察されるものであり、こ
のように、遺伝子の「通常型」または「野生型」形態が適宜設計される。
【００９６】
下記の化学用語は、他に示さない限り、下記の意味を有する。
【００９７】
「アミノ」は、−ＮＨ２ラジカルを指す。
【００９８】
「シアノ」または「ニトリル」は、−ＣＮラジカルを指す。
【００９９】
「ヒドロキシ」または「ヒドロキシル」は、−ＯＨラジカルを指す。
【０１００】
「イミノ」は、＝ＮＨ置換基を指す。
【０１０１】
「グアニジニル」は、−ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２置換基を指す。
【０１０２】
「アミジニル」は、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２置換基を指す。
【０１０３】
「ニトロ」は、−ＮＯ２ラジカルを指す。
【０１０４】
「オキソ」は、＝Ｏ置換基を指す。
【０１０５】
「チオキソ」は、＝Ｓ置換基を指す。
【０１０６】
「コレート」は、下記の構造：  
【０１０７】
【化８】
2019172691.tif 000013
【０１０８】
を指す。
【０１０９】
「デオキシコレート」は、下記の構造：  
【０１１０】
【化９】
2019172691.tif 000014
【０１１１】
を指す。
【０１１２】
「アルキル」は、飽和または不飽和（すなわち、１つまたは複数の二重結合および／ま
たは三重結合を含有）であり、１〜３０個の炭素原子を有し、単結合によって分子の残部
に付着している、直鎖状または分岐状の炭化水素鎖ラジカルを指す。１〜３０個の任意の
数の炭素原子を含むアルキルが含まれる。３０個までの炭素原子を含むアルキルは、Ｃ１
〜Ｃ３０アルキルと称され、同様に、例えば、１２個までの炭素原子を含むアルキルは、
Ｃ１〜Ｃ１２アルキルである。他の数の炭素原子を含むアルキル（および本明細書におい
て定義される他の部分）は、同様に表される。アルキル基には、これらに限定されないが
、Ｃ１〜Ｃ３０アルキル、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ１〜Ｃ１５アルキル、Ｃ１〜Ｃ１０
アルキル、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ３
アルキル、Ｃ１〜Ｃ２アルキル、Ｃ２〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ８アルキルおよびＣ４〜
Ｃ８アルキルが含まれる。代表的なアルキル基には、これらに限定されないが、メチル、
エチル、ｎ−プロピル、１−メチルエチル（イソ−プロピル）、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル
、ｓ−ブチル、ｎ−ペンチル、１，１−ジメチルエチル（ｔ−ブチル）、３−メチルヘキ
シル、２−メチルヘキシル、エテニル、プロパ−１−エニル、ブタ−１−エニル、ペンタ
−１−エニル、ペンタ−１，４−ジエニル、エチニル、プロピニル、ブタ−２−イニル、
ブタ−３−イニル、ペンチニル、ヘキシニルなどが含まれる。本明細書において他に特に
断りのない限り、アルキル基は、下記のように任意選択で置換されていてもよい。
【０１１３】
「アルキレン」または「アルキレン鎖」は、分子の残部をラジカル基に連結している直
鎖状または分岐状の二価炭化水素鎖を指す。アルキレンは、飽和または不飽和（すなわち
、１つまたは複数の二重結合および／または三重結合を含有）であり得る。代表的なアル
キレンには、これらに限定されないが、Ｃ１〜Ｃ１２アルキレン、Ｃ１〜Ｃ８アルキレン
、Ｃ１〜Ｃ６アルキレン、Ｃ１〜Ｃ４アルキレン、Ｃ１〜Ｃ３アルキレン、Ｃ１〜Ｃ２ア
ルキレン、Ｃ１アルキレンが含まれる。代表的なアルキレン基には、これらに限定されな
いが、メチレン、エチレン、プロピレン、ｎ−ブチレン、エテニレン、プロペニレン、ｎ
−ブテニレン、プロピニレン、ｎ−ブチニレンなどが含まれる。アルキレン鎖は、単結合
または二重結合を介して分子の残部に、および単結合または二重結合を介してラジカル基
に付着している。分子の残部への、およびラジカル基へのアルキレン鎖の付着点は、鎖中
の１個の炭素または任意の２個の炭素を介してでよい。本明細書において他に特に断りの
ない限り、アルキレン鎖は、下記のように任意選択で置換されていてもよい。
【０１１４】
「アルコキシ」は、式−ＯＲａのラジカルを指し、Ｒａは、定義されているようなアル
キルラジカルである。本明細書において他に特に断りのない限り、アルコキシ基は、下記
のように任意選択で置換されていてもよい。
【０１１５】
アルコキシアルキル」は、式−ＲｂＯＲａのラジカルを指し、Ｒａは、定義されている
ようなアルキルラジカルであり、Ｒｂは、定義されているようなアルキレンラジカルであ
る。本明細書において他に特に断りのない限り、アルコキシアルキル基は、下記のように
任意選択で置換されていてもよい。
【０１１６】
「アルキルカルボニル」は、式−Ｃ（＝Ｏ）Ｒａのラジカルを指し、Ｒａは、上記に定
義されているようなアルキルラジカルである。本明細書において他に特に断りのない限り
、アルキルカルボニル基は、下記のように任意選択で置換されていてもよい。
【０１１７】
「アルキルオキシカルボニル」は、式−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲａのラジカルを指し、Ｒａは、
定義されているようなアルキルラジカルである。本明細書において他に特に断りのない限
り、アルキルオキシカルボニル基は、下記のように任意選択で置換されていてもよい。
【０１１８】
「アルキルアミノ」は、式−ＮＨＲａまたは−ＮＲａＲａのラジカルを指し、各Ｒａは
独立に、上記に定義されているようなアルキルラジカルである。本明細書において他に特
に断りのない限り、アルキルアミノ基は、下記のように任意選択で置換されていてもよい
。
【０１１９】
「アミジル」は、式−Ｎ（Ｈ）Ｃ（＝Ｏ）Ｒａのラジカルを指し、Ｒａは、本明細書に
定義されているようなアルキルまたはアリールラジカルである。本明細書において他に特
に断りのない限り、アミジル基は、下記のように任意選択で置換されていてもよい。
【０１２０】
「アミジニルアルキル」は、式−Ｒｂ−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２のラジカルを指し、Ｒｂは
、上記に定義されているようなアルキレンラジカルである。本明細書において他に特に断
りのない限り、アミジニルアルキル基は、下記のように任意選択で置換されていてもよい
。
【０１２１】
「アミジニルアルキルカルボニル」は、式−Ｃ（＝Ｏ）Ｒｂ−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２のラ
ジカルを指し、Ｒｂは、上記に定義されているようなアルキレンラジカルである。本明細
書において他に特に断りのない限り、アミジニルアルキルカルボニル基は、下記のように
任意選択で置換されていてもよい。
【０１２２】
「アミノアルキル」は、式−Ｒｂ−ＮＲａＲａのラジカルを指し、Ｒｂは、上記に定義
されているようなアルキレンラジカルであり、各Ｒａは独立に、水素またはアルキルラジ
カルである。
【０１２３】
「チオアルキル」は、式−ＳＲａのラジカルを指し、Ｒａは、上記に定義されているよ
うなアルキルラジカルである。本明細書において他に特に断りのない限り、チオアルキル
基は、任意選択で置換されていてもよい。
【０１２４】
「アリール」は、水素、６〜３０個の炭素原子および少なくとも１つの芳香族環を含む
炭化水素環系に由来するラジカルを指す。アリールラジカルは、単環式、二環式、三環式
または四環式環系であり得、これは縮合または架橋環系を含み得る。アリールラジカルに
は、これらに限定されないが、アセアントリレン、アセナフチレン、アセフェナントリレ
ン、アントラセン、アズレン、ベンゼン、クリセン、フルオランテン、フルオレン、ａｓ
−インダセン、ｓ−インダセン、インダン、インデン、ナフタレン、フェナレン、フェナ
ントレン、プレイアデン、ピレン、およびトリフェニレンの炭化水素環系に由来するアリ
ールラジカルが含まれる。本明細書において他に特に断りのない限り、「アリール」また
は接頭辞「ａｒ−」（例えば、「アラルキル」中）という用語は、任意選択で置換されて
いるアリールラジカルを含むことを意味する。
【０１２５】
「アラルキル」は、式−Ｒｂ−Ｒｃのラジカルを指し、Ｒｂは、上記に定義されている
ようなアルキレン鎖であり、Ｒｃは、１つまたは複数の上記に定義されているようなアリ
ールラジカル、例えば、ベンジル、ジフェニルメチル、トリチルなどである。本明細書に
おいて他に特に断りのない限り、アラルキル基は、任意選択で置換されていてもよい。
【０１２６】
「アリールカルボニル」は、式−Ｃ（＝Ｏ）Ｒｃのラジカルを指し、Ｒｃは、１つまた
は複数の上記に定義されているようなアリールラジカル、例えば、フェニルである。本明
細書において他に特に断りのない限り、アリールカルボニル基は、任意選択で置換されて
いてもよい。
【０１２７】
「アリールオキシカルボニル」は、式−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲｃのラジカルを指し、Ｒｃは、
１つまたは複数の上記に定義されているようなアリールラジカル、例えば、フェニルであ
る。本明細書において他に特に断りのない限り、アリールオキシカルボニル基は、任意選
択で置換されていてもよい。
【０１２８】
「アラルキルカルボニル」は、式−Ｃ（＝Ｏ）Ｒｂ−Ｒｃのラジカルを指し、Ｒｂは、
上記に定義されているようなアルキレン鎖であり、Ｒｃは、１つまたは複数の上記に定義
されているようなアリールラジカル、例えば、フェニルである。本明細書において他に特
に断りのない限り、アラルキルカルボニル基は、任意選択で置換されていてもよい。
【０１２９】
「アラルキルオキシカルボニル」は、式−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲｂ−Ｒｃのラジカルを指し、
Ｒｂは、上記に定義されているようなアルキレン鎖であり、Ｒｃは、１つまたは複数の上
記に定義されているようなアリールラジカル、例えば、フェニルである。本明細書におい
て他に特に断りのない限り、アラルキルオキシカルボニル基は、任意選択で置換されてい
てもよい。
【０１３０】
「アリールオキシ」は、式−ＯＲｃのラジカルを指し、Ｒｃは、１つまたは複数の上記
に定義されているようなアリールラジカル、例えば、フェニルである。本明細書において
他に特に断りのない限り、アリールカルボニル基は、任意選択で置換されていてもよい。
【０１３１】
「シクロアルキル」は、縮合または架橋環系を含み得、飽和または不飽和であり、単結
合によって分子の残部に付着している、安定的な非芳香族、単環式または多環式の炭素環
式環を指す。代表的なシクロアルキルには、これらに限定されないが、３〜１５個の炭素
原子および３〜８個の炭素原子を有するシクロアルキル（ｃｙｃｌｏａｋｌｙｌｓ）が含
まれ、単環式シクロアルキル（ｃｙｃｌｃｏａｌｋｙｌ）ラジカルには、例えば、シクロ
プロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、およびシ
クロオクチルが含まれる。多環式ラジカルには、例えば、アダマンチル、ノルボルニル、
デカリニル、および７，７−ジメチル−ビシクロ［２．２．１］ヘプタニルが含まれる。
本明細書において他に特に断りのない限り、シクロアルキル基は、任意選択で置換されて
いてもよい。
【０１３２】
「シクロアルキルアルキル」は、式−ＲｂＲｄのラジカルを指し、Ｒｂは、上記に定義
されているようなアルキレン鎖であり、Ｒｄは、上記に定義されているようなシクロアル
キルラジカルである。本明細書において他に特に断りのない限り、シクロアルキルアルキ
ル基は、任意選択で置換されていてもよい。
【０１３３】
「シクロアルキルカルボニル」は、式−Ｃ（＝Ｏ）Ｒｄのラジカルを指し、Ｒｄは、上
記に定義されているようなシクロアルキルラジカルである。本明細書において他に特に断
りのない限り、シクロアルキルカルボニル基は、任意選択で置換されていてもよい。
【０１３４】
シクロアルキルオキシカルボニル」は、式−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲｄのラジカルを指し、Ｒｄ
は、上記に定義されているようなシクロアルキルラジカルである。本明細書において他に
特に断りのない限り、シクロアルキルオキシカルボニル基は、任意選択で置換されていて
もよい。
【０１３５】
「縮合された」は、現存する環構造に縮合している本明細書に記載されている任意の環
構造を指す。縮合環が、ヘテロシクリル環またはヘテロアリール環であるとき、縮合ヘテ
ロシクリル環または縮合ヘテロアリール環の一部となる現存する環構造上の任意の炭素原
子は、窒素原子で置き換えられていてもよい。
【０１３６】
「グアニジニルアルキル」は、式−Ｒｂ−ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２のラジカルを指し、
Ｒｂは、上記に定義されているようなアルキレンラジカルである。本明細書において他に
特に断りのない限り、グアニジニルアルキル基は、下記のように任意選択で置換されてい
てもよい。
【０１３７】
「グアニジニルアルキルカルボニル」は、式−Ｃ（＝Ｏ）Ｒｂ−ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ
２のラジカルを指し、Ｒｂは、上記に定義されているようなアルキレンラジカルである。
本明細書において他に特に断りのない限り、グアニジニルアルキルカルボニル基は、下記
のように任意選択で置換されていてもよい。
【０１３８】
「ハロ」または「ハロゲン」は、ブロモ、クロロ、フルオロまたはヨードを指す。
【０１３９】
「ハロアルキル」は、１つまたは複数の上記に定義されているようなハロラジカルで置
換されている上記に定義されているようなアルキルラジカル、例えば、トリフルオロメチ
ル、ジフルオロメチル、フルオロメチル、トリクロロメチル、２，２，２−トリフルオロ
エチル、１，２−ジフルオロエチル、３−ブロモ−２−フルオロプロピル、１，２−ジブ
ロモエチルなどを指す。本明細書において他に特に断りのない限り、ハロアルキル基は、
任意選択で置換されていてもよい。
【０１４０】
「ペルハロ」または「ペルフルオロ」は、各水素原子がそれぞれ、ハロ原子またはフッ
素原子によって置き換えられている部分を指す。
【０１４１】
「ヘテロシクリル」または「複素環式環」は、２〜２３個の炭素原子、ならびに窒素、
酸素、リンおよび硫黄からなる群から選択される１〜８個のヘテロ原子を含む安定的な３
員〜２４員の非芳香族環ラジカルを指す。本明細書において他に特に断りのない限り、ヘ
テロシクリルラジカルは、単環式、二環式、三環式または四環式環系であり得、これは、
縮合または架橋環系を含み得る。ヘテロシクリルラジカル中の窒素、炭素または硫黄原子
は、任意選択で酸化し得る。窒素原子は、任意選択で四級化し得る。ヘテロシクリルラジ
カルは、部分的または完全に飽和し得る。このようなヘテロシクリルラジカルの例には、
これらに限定されないが、ジオキソラニル、チエニル［１，３］ジチアニル、デカヒドロ
イソキノリル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、イソチアゾリジニル、イソオキサゾ
リジニル、モルホリニル、オクタヒドロインドリル、オクタヒドロイソインドリル、２−
オキソピペラジニル、２−オキソピペリジニル、２−オキソピロリジニル、オキサゾリジ
ニル、ピペリジニル、ピペラジニル、４−ピペリドニル、ピロリジニル、ピラゾリジニル
、キヌクリジニル、チアゾリジニル、テトラヒドロフリル、トリチアニル、テトラヒドロ
ピラニル、チオモルホリニル、チアモルホリニル、１−オキソ−チオモルホリニル、１，
１−ジオキソ−チオモルホリニル、１２−クラウン−４、１５−クラウン−５、１８−ク
ラウン−６、２１−クラウン−７、アザ−１８−クラウン−６、ジアザ−１８−クラウン
−６、アザ−２１−クラウン−７、およびジアザ−２１−クラウン−７が含まれる。本明
細書において他に特に断りのない限り、ヘテロシクリル基は、任意選択で置換されていて
もよい。
【０１４２】
「ヘテロアリール」は、水素原子、１〜１３個の炭素原子、窒素、酸素、リンおよび硫
黄からなる群から選択される１〜６個のヘテロ原子、ならびに少なくとも１つの芳香族環
を含む５員〜１４員の環系ラジカルを指す。本発明の目的のために、ヘテロアリールラジ
カルは、単環式、二環式、三環式または四環式環系であり得、これは、縮合または架橋環
系を含み得る。ヘテロアリールラジカルにおける窒素、炭素または硫黄原子は、任意選択
で酸化し得、窒素原子は、任意選択で四級化し得る。例には、これらに限定されないが、
アゼピニル、アクリジニル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾインドリル
、ベンゾジオキソリル、ベンゾフラニル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾチアゾリル、ベン
ゾチアジアゾリル、ベンゾ［ｂ］［１，４］ジオキセピニル、１，４−ベンゾジオキサニ
ル、ベンゾナフトフラニル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾジオキソリル、ベンゾジオキシ
ニル、ベンゾピラニル、ベンゾピラノニル、ベンゾフラニル、ベンゾフラノニル、ベンゾ
チエニル（ベンゾチオフェニル）、ベンゾトリアゾリル、ベンゾ［４，６］イミダゾ［１
，２−ａ］ピリジニル、カルバゾリル、シンノリニル、ジベンゾフラニル、ジベンゾチオ
フェニル、フラニル、フラノニル、イソチアゾリル、イミダゾリル、インダゾリル、イン
ドリル、インダゾリル、イソインドリル、インドリニル、イソインドリニル、イソキノリ
ル、インドリジニル、イソオキサゾリル、ナフチリジニル、オキサジアゾリル、２−オキ
ソアゼピニル、オキサゾリル、オキシラニル、１−オキシドピリジニル、１−オキシドピ
リミジニル、１−オキシドピラジニル、１−オキシドピリダジニル、１−フェニル−１Ｈ
−ピロリル、フェナジニル、フェノチアジニル、フェノキサジニル、フタラジニル、プテ
リジニル、プリニル、ピロリル、ピラゾリル、ピリジニル、ピラジニル、ピリミジニル、
ピリダジニル、キナゾリニル、キノキサリニル、キノリニル、キヌクリジニル、イソキノ
リニル、テトラヒドロキノリニル、チアゾリル、チアジアゾリル、トリアゾリル、テトラ
ゾリル、トリアジニル、およびチオフェニル（すなわち、チエニル）が含まれる。本明細
書において他に特に断りのない限り、ヘテロアリール基は、任意選択で置換されていても
よい。
【０１４３】
全ての上記の基は、置換されていても、または置換されていなくてもよい。「置換され
ている」という用語は、本明細書において使用する場合、上記の基のいずれか（すなわち
、アルキル、アルキレン、アルコキシ、アルコキシアルキル、アルキルカルボニル、アル
キルオキシカルボニル、アルキルアミノ、アミジル、アミジニルアルキル、アミジニルア
ルキルカルボニル、アミノアルキル、アリール、アラルキル、アリールカルボニル、アリ
ールオキシカルボニル、アラルキルカルボニル、アラルキルオキシカルボニル、アリール
オキシ、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルキルカルボニル、シクロ
アルキルアルキルカルボニル、シクロアルキルオキシカルボニル、グアニジニルアルキル
、グアニジニルアルキルカルボニル、ハロアルキル、ヘテロシクリルおよび／またはヘテ
ロアリール）を意味し、さらに官能化してもよく、少なくとも１個の水素原子は、非水素
原子置換基への結合で置き換えられている。本明細書において特に断りのない限り、置換
されている基は、オキソ、−ＣＯ２Ｈ、ニトリル、ニトロ、ヒドロキシル、チオオキシ、
アルキル、アルキレン、アルコキシ、アルコキシアルキル、アルキルカルボニル、アルキ
ルオキシカルボニル、アリール、アラルキル、アリールカルボニル、アリールオキシカル
ボニル、アラルキルカルボニル、アラルキルオキシカルボニル、アリールオキシ、シクロ
アルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルキルカルボニル、シクロアルキルアルキ
ルカルボニル、シクロアルキルオキシカルボニル、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、ジ
アルキルアミン、アリールアミン、アルキルアリールアミン、ジアリールアミン、Ｎ−オ
キシド、イミド、およびエナミン；基、例えば、トリアルキルシリル基、ジアルキルアリ
ールシリル基、アルキルジアリールシリル基、トリアリールシリル基におけるケイ素原子
、ペルフルオロアルキルまたはペルフルオロアルコキシ、例えば、トリフルオロメチルま
たはトリフルオロメトキシから選択される１個または複数の置換基を含み得る。「置換さ
れている」はまた、１個または複数個の水素原子が、高次結合（例えば、二重結合または
三重結合）によって、ヘテロ原子、例えば、オキソ、カルボニル、カルボキシル、および
エステル基における酸素；ならびに基、例えば、イミン、オキシム、ヒドラゾン、および
ニトリルなどの基における窒素に置き換えられている上記の基のいずれかを意味する。例
えば、「置換されている」は、１個または複数個の水素原子が、−ＮＲｇＣ（＝Ｏ）ＮＲ
ｇＲｈ、−ＮＲｇＣ（＝Ｏ）ＯＲｈ、−ＮＲｇＳＯ２Ｒｈ、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲｇＲｈ、
−ＯＲｇ、−ＳＲｇ、−ＳＯＲｇ、−ＳＯ２Ｒｇ、−ＯＳＯ２Ｒｇ、−ＳＯ２ＯＲｇ、＝
ＮＳＯ２Ｒｇ、および−ＳＯ２ＮＲｇＲｈで置き換えられている上記の基のいずれかを含
む。「置換されている」はまた、１個または複数個の水素原子が、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒｇ、−
Ｃ（＝Ｏ）ＯＲｇ、−ＣＨ２ＳＯ２Ｒｇ、−ＣＨ２ＳＯ２ＮＲｇＲｈ、−ＳＨ、−ＳＲｇ
または−ＳＳＲｇで置き換えられている上記の基のいずれかを意味する。上記において、
ＲｇおよびＲｈは、同じまたは異なり、独立に、水素、アルキル、アルコキシ、アルキル
アミノ、チオアルキル、アリール、アラルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキ
ル、ハロアルキル、ヘテロシクリル、Ｎ−ヘテロシクリル、ヘテロシクリルアルキル、ヘ
テロアリール、Ｎ−ヘテロアリールおよび／またはヘテロアリールアルキルである。さら
に、上記の置換基のそれぞれはまた、上記の置換基の１つまたは複数で任意選択で置換さ
れていてもよい。さらに、上記の基のいずれかは、１個もしくは複数個の内部酸素原子ま
たは硫黄原子を含むように置換されていてもよい。例えば、アルキル基は、１個または複
数個の内部酸素原子で置換され、エーテルまたはポリエーテル基を形成し得る。同様に、
アルキル基は、１個または複数個の内部硫黄原子で置換され、チオエーテル、ジスルフィ
ドなどを形成し得る。アミジル部分は、２個までのハロ原子で置換されていてもよく、一
方、上記の他の基は、１個または複数個のハロ原子で置換されていてもよい。アルキル基
を例外として、全ての他の基はまた、アミノまたはモノアルキルアミノ（ｍｏｎｏａｌｋ
ｌｙａｍｉｎｏ）で置換されていてもよい。アルキルおよびアルキルカルボニル基を例外
として、全ての他の基はまた、グアニジニルまたはアミジニル（ａｍｉｄｙｎｙｌ）で置
換されていてもよい。上記の基のいずれかのための任意選択の置換基はまた、アリールホ
スホリル、例えば、−ＲａＰ（Ａｒ）３を含み、Ｒａは、アルキレンであり、Ａｒは、ア
リール部分、例えば、フェニルである。
【０１４４】
「低級アルキル」は、メチル、エチル、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル、ｔ−ブチル、イソア
ミル、ｎ−ペンチル、およびイソペンチルによって例示されるような、１〜６個の炭素原
子のアルキルラジカルを指す。特定の実施形態において、「低級アルキル」基は、１〜４
個の炭素原子を有する。他の実施形態において、「低級アルキル」基は、１〜２個の炭素
原子を有し、すなわち、メチルまたはエチルである。類似して、「低級アルケニル」は、
アリルおよびブテニルによって例示されるような、２〜６個、好ましくは、３個または４
個の炭素原子のアルケニルラジカルを指す。
【０１４５】
「非妨害」置換基は、その意図した標的に結合する本明細書に記載のアンチセンスオリ
ゴマーの能力に悪影響を与えないものである。このような置換基には、小さなおよび／ま
たは相対的に極性のない基、例えば、メチル、エチル、メトキシ、エトキシ、またはフル
オロが含まれる。
【０１４６】
ＬＭＮＡ標的化
本発明の方法において使用するための例には、下記で考察する、配列番号１および／ま
たは２を標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドが含まれる。
【０１４７】
本発明の方法において使用するための特定のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、野生
型配列（配列番号１）および／または配列番号２において示されるような、ＨＧＰＳ患者
において見出される配列を含めた、ヒトＬＭＮＡ遺伝子におけるエキソン１１の１つまた
は複数の塩基に対して相補的である標的化配列を含み得る。これらの標的配列を、下記の
表１において示す。
【０１４８】
【表１】
2019172691.tif 000015
【０１４９】
例には、表１における配列番号１および２において下線を引かれたＬＭＮＡエキソン１
１の潜在的スプライス部位
【０１５０】
【化１０】
2019172691.tif 000016
【０１５１】
に対してまた相補的であるものを含めて、ＬＭＮＡエキソン１１（配列番号１または２）
に対して完全に相補的であるアンチセンスオリゴヌクレオチドが含まれる。特定のアンチ
センスオリゴヌクレオチドは、最も３’側の塩基が、配列番号１または２における下線を
引かれた潜在的スプライス部位の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１
２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５
、２６、２７、２８、２９、もしくは３０塩基下流である、ＬＭＮＡエキソン１１におけ
る塩基に対して相補的であり（表１を参照されたい）、または潜在的スプライス部位の１
０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３
、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、
３７、３８、３９もしくは４０上流である、ＬＭＮＡエキソン１１における塩基に対して
相補的である標的化配列を含み得る。このタイプの例示的なオリゴヌクレオチドは、配列
番号３〜１６として下記で列挙したものの中にある。特定のアンチセンスオリゴヌクレオ
チドは、最も３’側の塩基が、ＬＭＮＡエキソン１１配列番号１または２の１、２、３、
４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４，１５、１６、１７、１８、１
９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２
、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、
４６、４７、４８、４９，５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５
９または６０塩基上流である、ＬＭＮＡイントロン１０における塩基に対して相補的であ
る標的化配列を含み得る（表１を参照されたい）。特定のアンチセンスオリゴヌクレオチ
ドは、最も３’側の塩基が、ＬＭＮＡイントロン１０の１、２、３、４、５、６、７、８
、９、１０、１１、１２、１３、１４，１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２
２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９または３０塩基上流である、ＬＭＮＡエ
キソン１０における塩基に対して相補的である標的化配列を含み得る。特定の実施形態は
、これらのアンチセンス薬剤の組合せの使用に関する。特定の実施形態は、配列番号１お
よび／または２の全てまたは一部（例えば、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６
、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、
３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、もしくは４０塩基）を
含むアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む。
【０１５２】
本発明の方法において使用するためのアンチセンスオリゴヌクレオチドはまた、プロセ
シングを受ける前のＬＭＮＡ  ｍＲＮＡ、例えば、エキソン、イントロン、エキソン−イ
ントロンジャンクション、またはスプライスジャンクションにおける種々の領域（複数可
）に対して標的化され得るか、または相補的であることができる。例えば、特定のアンチ
センスオリゴヌクレオチドは、ＬＭＮＡプレｍＲＮＡのエキソン１０および１１のスプラ
イスドナー（ＳＤ）部位またはスプライスアクセプター（ＳＡ）部位のスプライスジャン
クションと重複する領域（標的配列）に対して相補的である標的化配列を含み得、これは
、プロセシングを受ける前のｍＲＮＡのエキソン領域の一部（例えば、１、２、３、４、
５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、
２０、２１、２２、２３、２４または２５のヌクレオチド）およびイントロン領域の一部
（例えば、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２
０、２１、２２、２３、２４または２５のヌクレオチド）に対して相補的である。上記の
タイプの例示的な標的化配列は、配列番号１７〜３４として下記に列挙する。
【０１５３】
選択されたアンチセンス標的化配列は、より短く、例えば、約１２の塩基、またはより
長く、例えば、約４０の塩基で作製することができ、配列が、スプライシング、および／
または標的とのハイブリダイゼーションの際に他の形態の阻害をもたらすのに十分に相補
的であり、かつ標的ＲＮＡと４５℃以上のＴｍを有するヘテロ二重鎖を形成する限り、少
数のミスマッチを含む。
【０１５４】
特定の実施形態において、標的配列とアンチセンス標的化配列との間の相補性の程度は
、安定的な二重鎖を形成するのに十分である。アンチセンスオリゴマーと標的ＲＮＡ配列
との相補性の領域は、８〜１１の塩基ほど短くあり得るが、好ましくはこれらの範囲の中
間の全ての整数および範囲を含めて、１２〜１５の塩基以上、例えば、１２〜２０の塩基
、１２〜２５の塩基、または１５〜２５の塩基である。約１４〜１５の塩基のアンチセン
スオリゴマーは一般に、標的ｍＲＮＡにおいて独特の相補的配列を有するのに十分に長い
。特定の実施形態において、下記で考察するように、必要な結合Ｔｍを達成するのに最小
の長さの相補的塩基を必要とし得る。
【０１５５】
特定の実施形態において、４０の塩基ほどの長さのオリゴマーが適切であり得、少なく
とも最小数の塩基、例えば、１０〜１２の塩基は、標的配列に対して相補的である。しか
し、一般に、細胞における促進された取込みまたは能動的取込みは、約３０未満のオリゴ
マーの長さで最適化される。下記でさらに記載するＰＭＯオリゴマーについて、結合安定
性および取込みの最適なバランスは一般に、１８〜３０の塩基の長さで起こる。含まれる
のは、約１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、
２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３
５、３６、３７、３８、３９、または４０の塩基からなるアンチセンスオリゴマー（例え
ば、ＰＮＡ、ＬＮＡ、２’−ＯＭｅ、ＭＯＥ、ＰＭＯ）であり、少なくとも約６、８、９
、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、
２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３
６、３７、３８、３９、または４０の連続的および／または非連続的な塩基は、配列番号
１および／もしくは２の標的配列、またはそのバリアントを含めた本明細書に記載されて
いる標的配列に対して相補的である。
【０１５６】
特定の実施形態において、本発明の方法において使用するためのアンチセンスオリゴマ
ーは、ＬＭＮＡプレｍＲＮＡ核酸標的配列に対して１００％相補的であり得、またはアン
チセンスオリゴマーは、オリゴマーと標的配列との間で形成されるヘテロ二重鎖が、イン
ビボで起こり得る、細胞ヌクレアーゼの作用、および他のモードの分解または置き換えに
耐えるのに十分に安定的である限り、ミスマッチを含み、例えば、バリアントを収容し得
る。ヌクレアーゼによる切断により感受性ではないオリゴマー骨格を下記で考察する。存
在する場合、ミスマッチは、中央よりもハイブリッド二重鎖の末端領域に向かってより不
安定にしにくくなる。許容されるミスマッチの数は、二重鎖の安定性のよく理解された原
理によって、オリゴマーの長さ、二重鎖中のＧ：Ｃ塩基対の百分率、および二重鎖中のミ
スマッチ（複数可）の位置に依存する。このようなアンチセンスオリゴマーは、必ずしも
標的配列に対して１００％相補的でないが、核酸標的の生物活性、例えば、プロジェリン
タンパク質（複数可）の発現がモジュレートされるように、標的配列に安定的および特異
的に結合させるのに有効である。
【０１５７】
オリゴマーと標的配列との間で形成される二重鎖の安定性は、結合Ｔｍ、および細胞の
酵素切断に対する二重鎖の感受性の関数である。相補的配列ＲＮＡに関して、アンチセン
ス化合物のＴｍは、従来の方法、例えば、Ｈａｍｅｓら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｈ
ｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ、ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ、１９８５年、１０７〜１０８頁によっ
て記載されたものによって、またはＭｉｙａｄａ  Ｃ．Ｇ．およびＷａｌｌａｃｅ  Ｒ．
Ｂ．、１９８７年、Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ  ｔ
ｅｃｈｎｉｑｕｅｓ、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．、第１５４巻、９４〜１０７頁
において記載されているように測定し得る。特定の実施形態において、アンチセンスオリ
ゴマーは、相補的配列ＲＮＡに関して、体温を超えた、好ましくは５０℃超の結合Ｔｍを
有し得る。６０〜８０℃の範囲またはそれを超えるＴｍが好ましい。周知の原理によると
、相補性をベースとするＲＮＡハイブリッドに関して、オリゴマー化合物のＴｍは、二重
鎖中のＣ：Ｇ対の塩基の比を増大させることによって、かつ／またはヘテロ二重鎖の長さ
（塩基対での）を増大させることによって上昇させることができる。同時に、細胞の取込
みを最適化する目的のために、オリゴマーのサイズを限定することが有利であり得る。こ
の理由のために、２５塩基以下の長さで高いＴｍ（５０℃以上）を示す化合物は一般に、
高いＴｍ値のために２５超の塩基を必要とするものより好ましい。
【０１５８】
特定の実施形態、例えば、ＰＭＯオリゴマーにおいて、オリゴマーのアンチセンス活性
は、図１Ｃにおいて例示するような荷電していない、およびカチオン性のホスホロジアミ
デート連結の混合物を使用することによって増強し得る。オリゴマー中のカチオン性連結
の総数は、１〜１０（中間の全ての整数を含めて）で変動し、オリゴマーを通して散在さ
せることができる。好ましくは荷電している連結の数は、少なくとも２つ、および総骨格
連結の半分以下、例えば、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、または８つの間の正に
荷電している連結であり、好ましくはそれぞれの荷電している連結は、骨格に沿って少な
くとも１つ、２つ、３つ、４つ、または５つの荷電していない連結によって分離されてい
る。本発明の好ましいカチオン性連結は、表３において示すように、ａｐｎ連結Ｂ１０を
含む。
【０１５９】
ヒトＬＭＮＡプレｍＲＮＡを標的とするための本発明の方法において使用するための例
示的なアンチセンス配列を、下記の表２において示す。アンチセンスオリゴヌクレオチド
は、これらの標的化配列の全てまたは一部を含み得る。
【０１６０】
【表２】
2019172691.tif 000017
【０１６１】
本発明の方法において使用するためのアンチセンスオリゴヌクレオチド化合物
本発明の方法において使用するためのアンチセンスオリゴヌクレオチドは典型的には、
（ａ）哺乳動物細胞によって能動的に取り込まれる能力を有し、（ｂ）取り込まれると、
標的ＲＮＡと約４５℃超のＴｍを有する二重鎖を形成する。特定の実施形態において、オ
リゴマー骨格は、実質的に荷電していなくてもよく、好ましくは、細胞膜を横切る能動輸
送または促進輸送のための基質として認識し得る。標的ＲＮＡと安定的な二重鎖を形成す
るオリゴマーの能力はまた、標的に関するアンチセンスオリゴマーの長さおよび相補性の
程度、Ｇ：Ｃ塩基マッチとＡ：Ｔ塩基マッチとの比、ならびに任意のミスマッチの塩基の
位置を含めた、オリゴマー骨格の他の特色に関し得る。細胞ヌクレアーゼに抵抗するアン
チセンスオリゴマーの能力は、生存、および細胞の細胞質への薬剤の最終的な送達を促進
し得る。含まれるのは、本明細書に記載されているＰＭＯ、ＰＭＯ＋（ＰＭＯプラス）、
ＰＭＯ−Ｘ、ＬＮＡ、ＰＮＡ、および／または２’Ｏ−Ｍｅをベースとする化学物質から
構成されるアンチセンスオリゴマーである。一般に、ＰＮＡおよびＬＮＡ化学物質は、Ｐ
ＭＯおよび２’Ｏ−Ｍｅオリゴマーと比較してこれらの相対的に高い標的結合強度によっ
て、より短い標的化オリゴマーを利用する。
【０１６２】
ペプチド核酸（ＰＮＡ）は、骨格が、ピリミジンまたはプリン塩基が付着しているＮ−
（２−アミノエチル）グリシン単位からなるデオキシリボース骨格と構造的に同形である
、ＤＮＡの類似体である。天然ピリミジンおよびプリン塩基を含有するＰＮＡは、ワトソ
ン−クリック塩基対合則に従って相補的オリゴヌクレオチドにハイブリダイズし、塩基対
認識に関してＤＮＡを模倣する（Ｅｇｈｏｌｍ、Ｂｕｃｈａｒｄｔら、１９９３年）。Ｐ
ＮＡの骨格は、ホスホジエステル結合よりむしろペプチド結合によって形成され、ＰＮＡ
をアンチセンス用途に良好に適しているものとする（下記の構造を参照されたい）。骨格
は荷電しておらず、通常の熱安定性を超えるものを示すＰＮＡ／ＤＮＡまたはＰＮＡ／Ｒ
ＮＡ二重鎖がもたらされる。ＰＮＡは、ヌクレアーゼまたはプロテアーゼによって認識さ
れない。
【０１６３】
ＰＮＡは、当技術分野において公知の任意の技術を使用して合成的に生成される。ＰＮ
Ａは、ポリアミド骨格が下記で示すようなＤＮＡの伝統的なホスフェートリボース環を置
き換えたＤＮＡ類似体である。
【０１６４】
【化１１】
2019172691.tif 000018
【０１６５】
天然のＲＮＡまたはＤＮＡ構造への過激な構造的変化に関わらず、ＰＮＡは、ヘリック
ス形態で、ＤＮＡまたはＲＮＡへの配列特異的結合が可能である。ＰＮＡの特徴は、相補
的ＤＮＡまたはＲＮＡへの高い結合親和性、一塩基ミスマッチによってもたらされる不安
定化効果、ヌクレアーゼおよびプロテアーゼへの耐性、塩濃度およびホモプリンＤＮＡと
の三重鎖形成と無関係であるＤＮＡまたはＲＮＡとのハイブリダイゼーションを含む。Ｐ
ａｎａｇｅｎｅ（商標）は、その専売のＢｔｓ  ＰＮＡモノマー（Ｂｔｓ；ベンゾチアゾ
ール−２−スルホニル基）および専売のオリゴマー化工程を開発してきた。Ｂｔｓ  ＰＮ
Ａモノマーを使用したＰＮＡオリゴマー化は、脱保護、カップリングおよびキャッピング
の反復的サイクルから構成される。この技術に対するＰａｎａｇｅｎｅの特許には、ＵＳ
６９６９７６６、ＵＳ７２１１６６８、ＵＳ７０２２８５１、ＵＳ７１２５９９４、ＵＳ
７１４５００６およびＵＳ７１７９８９６が含まれる。ＰＮＡ化合物の調製を教示する代
表的な米国特許には、これらに限定されないが、それぞれが参照により本明細書中に組み
込まれている米国特許第５，５３９，０８２号；同第５，７１４，３３１号；および同第
５，７１９，２６２号が含まれる。ＰＮＡ化合物のさらなる教示は、Ｎｉｅｌｓｅｎら、
Ｓｃｉｅｎｃｅ、１９９１年、２５４巻、１４９７頁において見出すことができる。
【０１６６】
本発明の方法において使用するためのオリゴヌクレオチド化合物はまた、「ロックド核
酸」サブユニット（ＬＮＡ）を含有し得る。ＬＮＡの構造は、当技術分野において公知で
ある。例えば、Ｗｅｎｇｅｌら、Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ（１
９９８年）４５５頁；Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ（１９９８年）５４巻、３６０７頁、およ
びＡｃｃｏｕｎｔｓ  ｏｆ  Ｃｈｅｍ．  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（１９９９年）３２巻、３０
１頁）；Ｏｂｉｋａら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ（１９９７年）３８巻
、８７３５頁；（１９９８年）３９巻、５４０１頁、およびＢｉｏｏｒｇａｎｉｃ  Ｍｅ
ｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（２００８年）１６巻、９２３０頁。例示的で非限
定的ＬＮＡ構造を、下記で例示する。
【０１６７】
【化１２】
2019172691.tif 000019
【０１６８】
本発明の方法において使用するための化合物は、１つまたは複数のＬＮＡを組み込み得
る。場合によっては、化合物は、全体的にＬＮＡから構成され得る。個々のＬＮＡヌクレ
オシドサブユニットの合成、およびオリゴヌクレオチド中へのこれらの組込みのための方
法は、当技術分野において公知である：米国特許第７，５７２，５８２号；同第７，５６
９，５７５号；同第７，０８４，１２５号；同第７，０６０，８０９号；同第７，０５３
，２０７号；同第７，０３４，１３３号；同第６，７９４，４９９号および同第６，６７
０，４６１号。典型的なサブユニット間リンカーは、ホスホジエステルおよびホスホロチ
オエート部分を含む。代わりに、リン非含有リンカーを用い得る。好ましい一実施形態は
、ＬＮＡ含有化合物であり、各ＬＮＡサブユニットは、ＤＮＡサブユニット（すなわち、
デオキシリボースヌクレオチド）によって分離している。さらに好ましい化合物は、交互
になっているＬＮＡおよびＤＮＡサブユニットから構成され、サブユニット間リンカーは
、ホスホロチオエートである。
【０１６９】
本発明の方法において使用するための好ましいオリゴマー構造は、上記のような荷電し
ていない連結によって接合されている、塩基対合部分を担持するモルホリノをベースとす
るサブユニットを用いる。特に好ましいのは、実質的に荷電していないホスホロジアミデ
ート−連結モルホリノオリゴマー（ＰＭＯ）である。アンチセンスオリゴマーを含めたモ
ルホリノオリゴヌクレオチドは、例えば、これらの全てが参照により組み込まれている、
共有の米国特許第５，６９８，６８５号、同第５，２１７，８６６号、同第５，１４２，
０４７号、同第５，０３４，５０６号、同第５，１６６，３１５号、同第５，１８５、４
４４号、同第５，５２１，０６３号、および同第５，５０６，３３７号において、ならび
にＰＣＴ出願第ＵＳ０８／０８８３３９号において詳述されている。
【０１７０】
モルホリノをベースとするサブユニットの特定の特性には、オリゴマー形態で安定的な
荷電していない骨格連結によって連結される能力；形成されたポリマーが、高いＴｍを有
する標的ＲＮＡを含めた相補的塩基標的核酸と、１０〜１４の塩基ほど短いオリゴマーさ
えともハイブリダイズすることができるように、ヌクレオチド塩基（例えば、アデニン、
シトシン、グアニンまたはウラシル）を支持する能力；オリゴマーが哺乳動物細胞中に能
動的に輸送される能力；ならびにリボヌクレアーゼ分解に抵抗するオリゴマー：ＲＮＡヘ
テロ二重鎖の能力が含まれる。
【０１７１】
モルホリノをベースとするサブユニットの特性には、１）オリゴマー形態で安定的な荷
電していない、または正に荷電している骨格連結によって連結される能力；２）形成され
たポリマーが、相対的に短いオリゴヌクレオチド（例えば、１０〜１５の塩基）における
約４５℃超のＴｍ値の標的ＲＮＡを含めた相補的塩基標的核酸とハイブリダイズすること
ができるように、ヌクレオチド塩基（例えば、アデニン、シトシン、グアニン、チミジン
、ウラシルおよびヒポキサンチン）を支持する能力；３）オリゴヌクレオチドが哺乳動物
細胞中に能動的または受動的に輸送される能力；ならびに４）それぞれ、リボヌクレアー
ゼおよびリボヌクレアーゼＨ分解に抵抗するアンチセンスオリゴヌクレオチド：ＲＮＡヘ
テロ二重鎖の能力が含まれる。
【０１７２】
リン含有骨格連結を有する本発明の方法において使用するためのモルホリノオリゴヌク
レオチドの例を、図１Ａ〜１Ｃにおいて例示する。本発明の一態様によって、その骨格連
結の好ましくは１０％〜５０％において正に荷電している基を含有するように修飾された
、好ましいホスホロジアミデート−連結モルホリノオリゴヌクレオチドを、図１Ｃに示す
。特許請求した主題のアンチセンスオリゴヌクレオチドについての例示的な骨格構造は、
それぞれ荷電していないまたは正に荷電しているリン含有サブユニット連結によって連結
している図１Ａ〜１Ｃにおいて示すモルホリノサブユニットタイプを含む。図１Ｄは、５
原子繰返し単位骨格を形成するリン含有連結を示し、モルホリノ環は、１原子ホスホアミ
ド連結によって連結している。図１Ｅは、６原子繰返し単位骨格を生じさせる連結を示す
。この構造において、５’モルホリノ炭素をリン基と連結する原子Ｙは、硫黄、窒素、炭
素、または好ましくは酸素であり得る。リンからペンダントであるＸ部分は、フッ素、ア
ルキルもしくは置換アルキル、アルコキシもしくは置換アルコキシ、チオアルコキシもし
くは置換チオアルコキシ、または非置換、一置換、もしくは二置換窒素（モルホリンもし
くはピペリジンなどの環状構造を含む）であり得る。アルキル、アルコキシおよびチオア
ルコキシは好ましくは、１〜６個の炭素原子を含む。Ｚ部分は硫黄または酸素であり、好
ましくは酸素である。
【０１７３】
図１Ｆおよび１Ｇにおいて示される連結は、７原子単位長さの骨格のために設計される
。図１Ｆにおいて、Ｘ部分は、図１Ｅにおける通りであり、Ｙ部分は、メチレン、硫黄、
または好ましくは、酸素であり得る。図１Ｇにおいて、Ｘ部分およびＹ部分は、図１Ｅに
おける通りである。特に好ましいモルホリノオリゴヌクレオチドは、図１Ｅにおいて示さ
れる形態のモルホリノサブユニット構造から構成されるものを含み、Ｘ＝ＮＨ２、Ｎ（Ｃ
Ｈ３）２、または１−ピペラジンまたは他の荷電している基であり、Ｙ＝Ｏであり、Ｚ＝
Ｏである。
【０１７４】
上で述べたように、実質的に荷電していないオリゴヌクレオチドを、本発明の一態様に
よって修飾し、例えば、２〜５の荷電していない連結毎に約１まで、例えば、１０の荷電
していない連結毎に約４〜５の荷電している連結を含み得る。特定の実施形態において、
骨格連結の約２５％がカチオン性であるとき、アンチセンス活性における最適な改善を見
ることができる。特定の実施形態において、増強は、少数、例えば、１０〜２０％のカチ
オン性連結において見ることができ、またはカチオン性連結の数は、５０〜８０％の範囲
内、例えば、約６０％である。加えられたカチオン性骨格の電荷によって見られる増強は
、場合によっては、アンチセンスオリゴヌクレオチドの「中央領域」骨格連結近くに大量
の電荷を分配することによってさらに増強し得、例えば、８つのカチオン性骨格連結を有
する２０マーのオリゴヌクレオチドにおいて、これらの荷電している連結の少なくとも７
０％は、１０の真ん中の連結において局在化している。
【０１７５】
特定の実施形態において、混合物または荷電していない骨格連結およびカチオン性骨格
連結を有するオリゴヌクレオチドの合成に関して上および下で引用した参照文献において
詳述した方法を用いて、本発明の方法において使用するためのアンチセンス化合物は、段
階的固相合成によって調製することができる。場合によっては、さらなる化学部分をアン
チセンス化合物に加えて、例えば、薬物動態を増強し、または化合物の捕獲または検出を
促進することが望ましくあり得る。このような部分は典型的には、標準的な合成法によっ
てオリゴマーの末端に共有結合的に付着させ得る。例えば、ポリエチレングリコール部分
または他の親水性ポリマー、例えば、１０〜１００のモノマーサブユニットを有するもの
の付加は、溶解度の増強において有用であり得る。１つまたは複数の荷電している基、例
えば、アニオン性の荷電している基、例えば、有機酸は、細胞取込みを増強し得る。
【０１７６】
レポーター部分、例えば、フルオレセインまたは放射標識した基を、検出の目的のため
に付着し得る。代わりに、オリゴマーに付着したレポーター標識は、標識抗体またはスト
レプトアビジンを結合することができるリガンド、例えば、抗原またはビオチンであり得
る。アンチセンス化合物の付着または修飾のための部分の選択において、一般に当然なが
ら、生体適合性であり、望ましくない副作用を伴わずに被験体において耐容性を示す可能
性が高い基の化合物を選択することが望ましい。
【０１７７】
上で述べたように、本発明の方法において使用するためのアンチセンス化合物のいくつ
かは、上記のタイプの荷電していない連結が散在する選択した数のカチオン性連結を含有
するように構築することができる。サブユニット間連結（荷電していないおよびカチオン
性の両方）は好ましくは、構造：  
【０１７８】
【化１３】
2019172691.tif 000020
【０１７９】
を有するリン含有連結であり、式中、
Ｗは、ＳまたはＯであり、好ましくはＯであり、
Ｘ＝ＮＲ１Ｒ２またはＯＲ６であり、
Ｙ＝ＯまたはＮＲ７であり、
オリゴマー中のそれぞれの前記連結は、
（ａ）荷電していない連結（ａ）［Ｒ１、Ｒ２、Ｒ６およびＲ７のそれぞれは、水素およ
び低級アルキルから独立に選択される］；
（ｂ１）カチオン性連結（ｂ１）［Ｘ＝ＮＲ１Ｒ２であり、Ｙ＝Ｏであり、ＮＲ１Ｒ２は
、Ｒ１Ｒ２＝−ＣＨＲＣＨＲＮ（Ｒ３）（Ｒ４）ＣＨＲＣＨＲ−であるように、任意選択
で置換されているピペラジノ基を表し、
各Ｒは独立に、ＨまたはＣＨ３であり、
Ｒ４は、Ｈ、ＣＨ３、または電子対であり、
Ｒ３は、Ｈ、低級アルキル、例えば、ＣＨ３、Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、Ｚ−Ｌ−ＮＨＣ（＝
ＮＨ）ＮＨ２、および［Ｃ（Ｏ）ＣＨＲ’ＮＨ］ｍＨから選択され、Ｚは、Ｃ（Ｏ）また
は直接結合であり、Ｌは、アルキル、アルコキシ、およびアルキルアミノから選択される
結合を有する長さが１８原子まで、好ましくは１２原子まで、より好ましくは長さが８原
子までの任意選択のリンカーであり、Ｒ’は、天然アミノ酸またはその１もしくは２炭素
ホモログの側鎖であり、ｍは、１〜６、好ましくは１〜４である］；
（ｂ２）カチオン性連結（ｂ２）［Ｘ＝ＮＲ１Ｒ２であり、Ｙ＝Ｏであり、Ｒ１＝Ｈまた
はＣＨ３であり、Ｒ２＝ＬＮＲ３Ｒ４Ｒ５であり、Ｌ、Ｒ３、およびＲ４は、上記に定義
されている通りであり、Ｒ５は、Ｈ、低級アルキル、または低級（アルコキシ）アルキル
である］、ならびに
（ｂ３）カチオン性連結（ｂ３）［Ｙ＝ＮＲ７であり、Ｘ＝ＯＲ６であり、Ｒ７＝ＬＮＲ
３Ｒ４Ｒ５であり、Ｌ、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５は、上記に定義されている通りであり、Ｒ
６は、Ｈまたは低級アルキルである］
から選択され、
少なくとも１つの前記連結は、カチオン性連結（ｂ１）、（ｂ２）、および（ｂ３）から
選択される。
【０１８０】
特定の実施形態において、オリゴマーは、少なくとも２つのタイプ（ａ）の連続的な連
結（すなわち、荷電していない連結）を含み得る。さらなる実施形態において、オリゴマ
ー中の連結の少なくとも５％は、カチオン性連結（すなわち、タイプ（ｂ１）、（ｂ２）
、または（ｂ３））であり、例えば、１０％〜６０％、好ましくは２０〜５０％の連結は
、カチオン性連結であり得る。
【０１８１】
一実施形態において、少なくとも１つの連結は、タイプ（ｂ１）のものであり、好まし
くは、各Ｒは、Ｈであり、Ｒ４は、Ｈ、ＣＨ３、または電子対であり、Ｒ３は、Ｈ、低級
アルキル、例えば、ＣＨ３、Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、およびＣ（Ｏ）−Ｌ−ＮＨＣ（＝ＮＨ
）ＮＨ２から選択される。Ｒ３の後者の２つの実施形態は、それぞれ、ピペラジン環に直
接付着しているか、またはリンカー基Ｌに対してペンダントであるグアニジノ部分を提供
する。合成の容易さのために、Ｒ３中の変数Ｚは好ましくは、示すように、Ｃ（Ｏ）（カ
ルボニル）である。
【０１８２】
リンカー基Ｌは、上で述べたように、アルキル（例えば、−ＣＨ２−ＣＨ２−）、アル
コキシ（−Ｃ−Ｏ−）、およびアルキルアミノ（例えば、−ＣＨ２−ＮＨ−）から選択さ
れるその骨格において結合を含有するが、ただし、Ｌにおける末端原子（例えば、カルボ
ニルまたは窒素に隣接するもの）は、炭素原子である。分岐状連結（例えば、−ＣＨ２−
ＣＨＣＨ３−）が可能であるが、リンカーは、好ましくは非分岐状である。一実施形態に
おいて、リンカーは、炭化水素リンカーである。このようなリンカーは、構造−（ＣＨ２
）ｎ−を有してもよく、ｎは、１〜１２、好ましくは２〜８、より好ましくは２〜６であ
る。
【０１８３】
モルホリノサブユニットは、構造：
【０１８４】
【化１４】
2019172691.tif 000021
【０１８５】
を有してもよく、式中、Ｐｉは、塩基対合部分であり、上記で示した連結は、（ｉ）の窒
素原子と隣接するサブユニットの５’炭素とを接続する。塩基対合部分Ｐｉは、同一でも
異なってもよく、一般に標的核酸に結合する配列を提供するように設計される。モルホリ
ノサブユニットを連結する上記の連結タイプ（ｂ１）、（ｂ２）および（ｂ３）の実施形
態の使用を、以下、図示によって例示し得る。
【０１８６】
【化１５】
2019172691.tif 000022
【０１８７】
好ましくは、オリゴマー中の全てのカチオン性連結は、同じタイプのもの、すなわち、
全てタイプ（ｂ１）、全てタイプ（ｂ２）、または全てタイプ（ｂ３）である。
【０１８８】
さらなる実施形態において、カチオン性連結は、下記で示したような連結（ｂ１’）お
よび（ｂ１’’）から選択され、（ｂ１’’）は、本明細書において「Ｐｉｐ」連結と称
され、（ｂ１’’）は、本明細書において「ＧｕＸ」連結と称される。
【０１８９】
【化１６】
2019172691.tif 000023
【０１９０】
上記構造において、Ｗは、ＳまたはＯであり、好ましくはＯであり、Ｒ１およびＲ２の
それぞれは、水素および低級アルキルから独立に選択され、好ましくはメチルであり、Ａ
は、（ｂ１’）および（ｂ１’’）における１個または複数個の炭素原子上の水素または
非妨害置換基を表す。好ましくは、ピペラジン環中の環炭素は、置換されていない。しか
し、これらは、非妨害置換基、例えば、メチルまたはフッ素を含み得る。好ましくは、最
大で１個または２個の炭素原子は、このように置換されている。さらなる実施形態におい
て、連結の少なくとも１０％は、タイプ（ｂ１’）または（ｂ１’’）のものであり、例
えば、連結の１０％〜６０％、好ましくは２０％〜５０％は、タイプ（ｂ１’）または（
ｂ１’’）であり得る。
【０１９１】
特定の実施形態において、オリゴマーは、上記のタイプ（ｂ１’）の連結を含有しない
。代わりに、オリゴマーは、タイプ（ｂ１）の連結を含有せず、各Ｒは、Ｈであり、Ｒ３
は、ＨまたはＣＨ３であり、Ｒ４は、Ｈ、ＣＨ３、または電子対である。
【０１９２】
モルホリノサブユニットはまた、下記でさらに記載するように、リンをベースとしない
サブユニット間連結によって連結し得、少なくとも１つの連結は、上記のようなペンダン
トカチオン基で修飾されている。
【０１９３】
これらの非修飾の状態で荷電していないが、ペンダントアミン置換基をまた担持するこ
とができる他のオリゴヌクレオチド類似体連結を使用することができる。例えば、モルホ
リノ環上の５’窒素原子は、スルファミド連結または尿素連結（リンは、それぞれ、炭素
または硫黄で置き換えられている）において用いられ、上記の構造（ｂ３）における５’
−窒素原子と類似した様式で修飾することができる。
【０１９４】
完全なカチオン性連結オリゴマーを含めた任意の数のカチオン性連結を有するオリゴマ
ーを提供する。しかし好ましくは、オリゴマーは、部分的に荷電している（例えば、１０
％〜８０％）。好ましい実施形態において、連結の約１０％〜６０％、好ましくは２０％
〜５０％は、カチオン性である。
【０１９５】
一実施形態において、カチオン性連結は、骨格に沿って散在している。部分的に荷電し
ているオリゴマーは好ましくは、少なくとも２つの連続的な荷電していない連結を含有す
る。すなわち、オリゴマーは好ましくは、その全体の長さに沿って厳密に交互になってい
るパターンを有さない。
【０１９６】
また考慮されるのは、カチオン性連結のブロックおよび荷電していない連結のブロック
を有するオリゴマーである。例えば、荷電していない連結の中央ブロックは、カチオン性
連結のブロックが隣接してもよく、または逆もまた同じである。一実施形態において、オ
リゴマーは、ほぼ等しい長さの５’、３’および中央領域を有し、中央領域におけるカチ
オン性連結の百分率は、約５０％超、好ましくは約７０％超である。
【０１９７】
本発明の方法において使用するためのオリゴマーは一般に、長さが約１０〜約４０のサ
ブユニット、より好ましくは約１０〜３０のサブユニット、および典型的には１５〜２５
の塩基の範囲である。例えば、アンチセンス化合物のために有用な長さである１９〜２０
のサブユニットを有する本発明のオリゴマーは理想的に、２〜１０つ、例えば、４〜８つ
のカチオン性連結、および残りの荷電していない連結を有し得る。１４〜１５のサブユニ
ットを有するオリゴマーは理想的に、２〜７つ、例えば、３つ、４つ、または５つのカチ
オン性連結、および残りの荷電していない連結を有し得る。
【０１９８】
各モルホリノ環構造は、塩基対合部分を支持し、典型的には細胞におけるまたは処置さ
れている被験体における選択したアンチセンス標的にハイブリダイズするように設計され
る塩基対合部分の配列を形成する。塩基対合部分は、天然ＤＮＡまたはＲＮＡにおいて見
出されるプリンまたはピリミジン（例えば、Ａ、Ｇ、Ｃ、ＴまたはＵ）、あるいは類似体
、例えば、ヒポキサンチン（ヌクレオシドイノシンの塩基構成要素）または５−メチルシ
トシンであり得る。
【０１９９】
上で述べたように、特定の実施形態は、ＰＭＯ−Ｘオリゴマーおよび修飾された末端基
を有するものを含めた、新規なサブユニット間連結を含むオリゴマーを対象とする。いく
つかの実施形態において、これらのオリゴマーは、対応する無修飾オリゴマーよりＤＮＡ
およびＲＮＡに対してより高い親和性を有し、他のサブユニット間連結を有するオリゴマ
ーと比較して、改善された細胞送達、効力、および／または組織分布特性を示す。一実施
形態において、オリゴマーは、本明細書に定義されているようなタイプ（Ｂ）の少なくと
も１つのサブユニット間連結を含む。オリゴマーはまた、１つまたは複数の本明細書に定
義されているようなタイプ（Ａ）のサブユニット間連結を含み得る。様々な連結タイプお
よびオリゴマーの構造的特徴および特性は、下記の考察においてより詳細に記載する。こ
れらおよび関連するオリゴマーの合成は、参照によりその全体が組み込まれている共有の
米国特許出願第１３／１１８，２９８号に記載されている。
【０２００】
連結（Ａ）
アンチセンス活性の増強、体内分布および／または他の望ましい特性は、様々なサブユ
ニット間連結を有するオリゴマーを調製することによって最適化することができることを
出願人等は見出した。例えば、本発明の方法において使用するためのオリゴマーは、１つ
または複数のタイプ（Ａ）のサブユニット間連結を任意選択で含み得、特定の実施形態に
おいて、オリゴマーは、少なくとも１つのタイプ（Ａ）の連結を含む。いくつかの他の実
施形態において、タイプ（Ａ）の各連結は、同じ構造を有する。タイプ（Ａ）の連結は、
参照により本明細書にその全体が組み込まれている共有の米国特許第７，９４３，７６２
号に開示されている連結を含み得る。連結（Ａ）は、下記の構造（Ｉ）：
【０２０１】
【化１７】
2019172691.tif 000024
【０２０２】
またはその塩もしくは異性体を有し、ここで、３’および５’は、モルホリノ環（すなわ
ち、下記で考察する構造（ｉ））のそれぞれ３’端および５’端への付着点を示し、式中
、
Ｗは、それぞれの出現において独立に、ＳまたはＯであり、
Ｘは、それぞれの出現において独立に、−Ｎ（ＣＨ３）２、−ＮＲ１Ｒ２、−ＯＲ３また
は、
【０２０３】
【化１８】
2019172691.tif 000025
【０２０４】
であり、
Ｙは、それぞれの出現において独立に、Ｏまたは−ＮＲ２であり、
Ｒ１は、それぞれの出現において独立に、水素またはメチルであり、
Ｒ２は、それぞれの出現において独立に、水素または−ＬＮＲ４Ｒ５Ｒ７であり、
Ｒ３は、それぞれの出現において独立に、水素またはＣ１〜Ｃ６アルキルであり、
Ｒ４は、それぞれの出現において独立に、水素、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、−Ｃ（＝ＮＨ）Ｎ
Ｈ２、−Ｚ−Ｌ−ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２または−［Ｃ（＝Ｏ）ＣＨＲ’ＮＨ］ｍＨであ
り、Ｚは、−Ｃ（＝Ｏ）−または直接結合であり、Ｒ’は、天然アミノ酸またはその１も
しくは２炭素ホモログの側鎖であり、ｍは、１〜６であり、
Ｒ５は、それぞれの出現において独立に、水素、メチルまたは電子対であり、
Ｒ６は、それぞれの出現において独立に、水素またはメチルであり、
Ｒ７は、それぞれの出現において独立に、水素、Ｃ１〜Ｃ６アルキルまたはＣ１〜Ｃ６ア
ルコキシアルキルであり、
Ｌは、アルキル、アルコキシまたはアルキルアミノ基、またはこれらの組合せを含む長さ
が１８原子までの任意選択のリンカーである。
【０２０５】
いくつかの例において、オリゴマーは、少なくとも１つのタイプ（Ａ）の連結を含む。
いくつかの他の実施形態において、オリゴマーは、少なくとも２つのタイプ（Ａ）の連続
的な連結を含む。さらなる実施形態において、オリゴマー中の連結の少なくとも５％は、
タイプ（Ａ）である、例えば、いくつかの実施形態において、連結の５％〜９５％、１０
％〜９０％、１０％〜５０％、または１０％〜３５％は、連結タイプ（Ａ）であり得る。
いくつかの特定の実施形態において、少なくとも１つのタイプ（Ａ）連結は、−Ｎ（ＣＨ
３）２である。他の実施形態において、タイプ（Ａ）の各連結は、−Ｎ（ＣＨ３）２であ
る。他の実施形態において、少なくとも１つのタイプ（Ａ）連結は、ピペリジン（ｐｉｐ
ｅｒｉｚｉｎ）−１−イル、例えば、非置換ピペラジン−１−イル（例えば、Ａ２または
Ａ３）である。他の実施形態において、タイプ（Ａ）の各連結は、ピペリジン−１−イル
、例えば、非置換ピペラジン−１−イルである。
【０２０６】
いくつかの実施形態において、Ｗは、それぞれの出現において独立に、ＳまたはＯであ
り、特定の実施形態において、Ｗは、Ｏである。
【０２０７】
いくつかの実施形態において、Ｘは、それぞれの出現において独立に、−Ｎ（ＣＨ３）
２、−ＮＲ１Ｒ２、−ＯＲ３である。いくつかの実施形態において、Ｘは、−Ｎ（ＣＨ３
）２である。他の態様において、Ｘは、−ＮＲ１Ｒ２であり。他の例において、Ｘは、−
ＯＲ３である。
【０２０８】
いくつかの実施形態において、Ｒ１は、それぞれの出現において独立に、水素またはメ
チルである。いくつかの実施形態において、Ｒ１は、水素である。他の実施形態において
、Ｘは、メチルである。
【０２０９】
いくつかの実施形態において、Ｒ２は、それぞれの出現において、水素である。他の実
施形態において、Ｒ２は、それぞれの出現において、−ＬＮＲ４Ｒ５Ｒ７である。いくつ
かの実施形態において、Ｒ３は、それぞれの出現において独立に、水素またはＣ１〜Ｃ６
アルキルである。他の実施形態において、Ｒ３は、メチルである。また他の実施形態にお
いて、Ｒ３は、エチルである。いくつかの他の実施形態において、Ｒ３は、ｎ−プロピル
またはイソプロピルである。いくつかの他の実施形態において、Ｒ３は、Ｃ４アルキルで
ある。他の実施形態において、Ｒ３は、Ｃ５アルキルである。いくつかの実施形態におい
て、Ｒ３は、Ｃ６アルキルである。
【０２１０】
特定の実施形態において、Ｒ４は、それぞれの出現において独立に、水素である。他の
実施形態において、Ｒ４は、メチルまたはエチルである。また他の実施形態において、Ｒ
４は、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２であり、他の実施形態において、Ｒ４は、−Ｚ−Ｌ−ＮＨＣ
（＝ＮＨ）ＮＨ２である。また他の実施形態において、Ｒ４は、−［Ｃ（＝Ｏ）ＣＨＲ’
ＮＨ］ｍＨである。一実施形態において、Ｚは、−Ｃ（＝Ｏ）−であり、別の実施形態に
おいて、Ｚは、直接結合である。Ｒ’は、天然アミノ酸の側鎖である。いくつかの実施形
態において、Ｒ’は、天然アミノ酸の側鎖の１または２炭素ホモログである。
【０２１１】
ｍは、１〜６の整数である。ｍは、１であり得る。ｍは、２であり得る。ｍは、３であ
り得る。ｍは、４であり得る。ｍは、５であり得る。ｍは、６であり得る。
【０２１２】
いくつかの実施形態において、Ｒ５は、それぞれの出現において独立に、水素、メチル
または電子対である。いくつかの実施形態において、Ｒ５は、水素である。他の実施形態
において、Ｒ５は、メチルである。また他の実施形態において、Ｒ５は、電子対である。
【０２１３】
いくつかの実施形態において、Ｒ６は、それぞれの出現において独立に、水素またはメ
チルである。いくつかの実施形態において、Ｒ６は、水素である。他の実施形態において
、Ｒ６は、メチルである。
【０２１４】
他の実施形態において、Ｒ７は、それぞれの出現において独立に、水素、Ｃ１〜Ｃ６ア
ルキルまたはＣ２〜Ｃ６アルコキシアルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ７
は、水素である。他の実施形態において、Ｒ７は、Ｃ１〜Ｃ６アルキルである。また他の
実施形態において、Ｒ７は、Ｃ２〜Ｃ６アルコキシアルキルである。いくつかの実施形態
において、Ｒ７は、メチルである。他の実施形態において、Ｒ７は、エチルである。また
他の実施形態において、Ｒ７は、ｎ−プロピルまたはイソプロピルである。いくつかの他
の実施形態において、Ｒ７は、Ｃ４アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ７
は、Ｃ５アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ７は、Ｃ６アルキルである。
また他の実施形態において、Ｒ７は、Ｃ２アルコキシアルキルである。いくつかの他の実
施形態において、Ｒ７は、Ｃ３アルコキシアルキルである。また他の実施形態において、
Ｒ７は、Ｃ４アルコキシアルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ７は、Ｃ５ア
ルコキシアルキルである。他の実施形態において、Ｒ７は、Ｃ６アルコキシアルキルであ
る。
【０２１５】
リンカー基Ｌは、上で述べたように、アルキル（例えば、−ＣＨ２−ＣＨ２−）、アル
コキシ（例えば、−Ｃ−Ｏ−Ｃ−）、およびアルキルアミノ（例えば、−ＣＨ２−ＮＨ−
）から選択されるその骨格において結合を含有するが、ただし、Ｌにおける末端原子（例
えば、カルボニルまたは窒素に隣接するもの）は、炭素原子である。分岐状連結（例えば
、−ＣＨ２−ＣＨＣＨ３−）が可能であるが、リンカーは一般に非分岐状である。一実施
形態において、リンカーは、炭化水素リンカーである。このようなリンカーは、構造（Ｃ
Ｈ２）ｎ−を有してもよく、ｎは、１〜１２であり、好ましくは２〜８であり、より好ま
しくは２〜６である。
【０２１６】
任意の数の連結タイプ（Ａ）を有するオリゴマーを提供する。いくつかの実施形態にお
いて、オリゴマーは、タイプ（Ａ）の連結を含有しない。特定の実施形態において、連結
の５パーセント、１０パーセント、２０パーセント、３０パーセント、４０パーセント、
５０パーセント、６０パーセント、７０パーセント、８０パーセントまたは９０パーセン
トは、連結（Ａ）である。選択した実施形態において、連結の１０〜８０パーセント、２
０〜８０パーセント、２０〜６０パーセント、２０〜５０パーセント、２０〜４０パーセ
ント、または２０〜３５パーセントは、連結（Ａ）である。
【０２１７】
連結（Ｂ）
いくつかの実施形態において、本発明の方法において使用するためのオリゴマーは、少
なくとも１つのタイプ（Ｂ）の連結を含む。例えば、オリゴマーは、１つ、２つ、３つ、
４つ、５つ、６つまたはそれより多いタイプ（Ｂ）の連結を含み得る。タイプ（Ｂ）連結
は、隣接してもよく、またはオリゴマーを通して散在し得る。連結タイプ（Ｂ）は、下記
の構造（Ｉ）：
【０２１８】
【化１９】
2019172691.tif 000026
【０２１９】
またはその塩もしくは異性体を有し、式中、
Ｗは、それぞれの出現において独立に、ＳまたはＯであり、
Ｘは、それぞれの出現において独立に、−ＮＲ８Ｒ９または−ＯＲ３であり、
Ｙは、それぞれの出現において独立に、Ｏまたは−ＮＲ１０であり、
Ｒ３は、それぞれの出現において独立に、水素またはＣ１〜Ｃ６アルキルであり、
Ｒ８は、それぞれの出現において独立に、水素またはＣ２〜Ｃ１２アルキルであり、
Ｒ９は、それぞれの出現において独立に、水素、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、Ｃ１〜Ｃ１２ア
ラルキルまたはアリールであり、
Ｒ１０は、それぞれの出現において独立に、水素、Ｃ１〜Ｃ１２アルキルまたは−ＬＮＲ
４Ｒ５Ｒ７であり、
Ｒ８およびＲ９は接合して、５〜１８員の単環式または二環式複素環を形成し得るか、あ
るいはＲ８、Ｒ９またはＲ３はＲ１０と接合して、５〜７員の複素環を形成し得、Ｘが４
−ピペラジノであるとき、Ｘは、下記の構造（ＩＩＩ）：
【０２２０】
【化２０】
2019172691.tif 000027
【０２２１】
を有し、式中、
Ｒ１１は、それぞれの出現において独立に、Ｃ２〜Ｃ１２アルキル、Ｃ１〜Ｃ１２アミノ
アルキル、Ｃ１〜Ｃ１２アルキルカルボニル、アリール、ヘテロアリールまたはヘテロシ
クリルであり、
Ｒは、それぞれの出現において独立に、電子対、水素またはＣ１〜Ｃ１２アルキルであり
、
Ｒ１２は、それぞれの出現において独立に、水素、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、Ｃ１〜Ｃ１２
アミノアルキル、−ＮＨ２、−ＮＲ１３Ｒ１４、−ＮＲ１３Ｒ１４Ｒ１５、Ｃ１〜Ｃ１２
アルキルカルボニル、オキソ、−ＣＮ、トリフルオロメチル、アミジル、アミジニル、ア
ミジニルアルキル、アミジニルアルキルカルボニルグアニジニル、グアニジニルアルキル
、グアニジニルアルキルカルボニル、コレート、デオキシコレート、アリール、ヘテロア
リール、複素環、−ＳＲ１３またはＣ１〜Ｃ１２アルコキシであり、Ｒ１３、Ｒ１４およ
びＲ１５は、それぞれの出現において独立に、Ｃ１〜Ｃ１２アルキルである。
【０２２２】
いくつかの例において、オリゴマーは、１つのタイプ（Ｂ）の連結を含む。いくつかの
他の実施形態において、オリゴマーは、２つのタイプ（Ｂ）の連結を含む。いくつかの他
の実施形態において、オリゴマーは、３つのタイプ（Ｂ）の連結を含む。いくつかの他の
実施形態において、オリゴマーは、４つのタイプ（Ｂ）の連結を含む。また他の実施形態
において、タイプ（Ｂ）の連結は、連続的である（すなわち、タイプ（Ｂ）連結は、互い
に隣接している）。さらなる実施形態において、オリゴマー中の連結の少なくとも５％は
、タイプ（Ｂ）である。例えば、いくつかの実施形態において、連結の５％〜９５％、１
０％〜９０％、１０％〜５０％、または１０％〜３５％は、連結タイプ（Ｂ）であり得る
。
【０２２３】
他の実施形態において、Ｒ３は、それぞれの出現において独立に、水素またはＣ１〜Ｃ
６アルキルである。また他の実施形態において、Ｒ３は、メチルであり得る。いくつかの
実施形態において、Ｒ３は、エチルであり得る。いくつかの他の実施形態において、Ｒ３
は、ｎ−プロピルまたはイソプロピルであり得る。また他の実施形態において、Ｒ３は、
Ｃ４アルキルであり得る。いくつかの実施形態において、Ｒ３は、Ｃ５アルキルであり得
る。いくつかの実施形態において、Ｒ３は、Ｃ６アルキルであり得る。
【０２２４】
いくつかの実施形態において、Ｒ８は、それぞれの出現において独立に、水素またはＣ
２〜Ｃ１２アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ８は水素である。また他の
実施形態において、Ｒ８はエチルである。いくつかの他の実施形態において、Ｒ８はｎ−
プロピルまたはイソプロピルである。いくつかの実施形態において、Ｒ８はＣ４アルキル
である。また他の実施形態において、Ｒ８はＣ５アルキルである。他の実施形態において
、Ｒ８はＣ６アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ８はＣ７アルキルである
。また他の実施形態において、Ｒ８はＣ８アルキルである。他の実施形態において、Ｒ８
はＣ９アルキルである。また他の実施形態において、Ｒ８はＣ１０アルキルである。いく
つかの他の実施形態において、Ｒ８はＣ１１アルキルである。また他の実施形態において
、Ｒ８はＣ１２アルキルである。いくつかの他の実施形態において、Ｒ８は、Ｃ２〜Ｃ１
２アルキルであり、Ｃ２〜Ｃ１２アルキルは、１つまたは複数の二重結合（例えば、アル
ケン）、三重結合（例えば、アルキン）または両方を含む。いくつかの実施形態において
、Ｒ８は、非置換Ｃ２〜Ｃ１２アルキルである。
【０２２５】
いくつかの実施形態において、Ｒ９は、それぞれの出現において独立に、水素、Ｃ１〜
Ｃ１２アルキル、Ｃ１〜Ｃ１２アラルキルまたはアリールである。いくつかの実施形態に
おいて、Ｒ９は水素である。また他の実施形態において、Ｒ９はＣ１〜Ｃ１２アルキルで
ある。他の実施形態において、Ｒ９はメチルである。また他の実施形態において、Ｒ９は
エチルである。いくつかの他の実施形態において、Ｒ９はｎ−プロピルまたはイソプロピ
ルである。いくつかの実施形態において、Ｒ９はＣ４アルキルである。いくつかの実施形
態において、Ｒ９はＣ５アルキルである。また他の実施形態において、Ｒ９はＣ６アルキ
ルである。いくつかの他の実施形態において、Ｒ９はＣ７アルキルである。いくつかの実
施形態において、Ｒ９はＣ８アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ９はＣ９
アルキルである。いくつかの他の実施形態において、Ｒ９はＣ１０アルキルである。いく
つかの他の実施形態において、Ｒ９はＣ１１アルキルである。また他の実施形態において
、Ｒ９はＣ１２アルキルである。
【０２２６】
いくつかの他の実施形態において、Ｒ９はＣ１〜Ｃ１２アラルキルである。例えば、い
くつかの実施形態において、Ｒ９は、ベンジルであり、ベンジルは、フェニル環またはベ
ンジルの炭素上で任意選択で置換されていてもよい。置換基は、これに関して、アルキル
およびアルコキシ基、例えば、メチルまたはメトキシを含む。いくつかの実施形態におい
て、ベンジル基は、ベンジルの炭素においてメチルで置換されている。例えば、いくつか
の実施形態において、Ｒ９は、下記の構造（ＸＩＶ）：  
【０２２７】
【化２１】
2019172691.tif 000028
【０２２８】
を有する。
【０２２９】
他の実施形態において、Ｒ９は、アリールである。例えば、いくつかの実施形態におい
て、Ｒ９は、フェニルであり、フェニルは、任意選択で置換されていてもよい。置換基は
、これに関して、アルキルおよびアルコキシ基、例えば、メチルまたはメトキシを含む。
他の実施形態において、Ｒ９は、フェニルであり、フェニルは、クラウンエーテル部分、
例えば、１２〜１８員のクラウンエーテルを含む。一実施形態において、クラウンエーテ
ルは１８員であり、さらなるフェニル部分をさらに含み得る。例えば、一実施形態におい
て、Ｒ９は、下記の構造（ＸＶ）またはＸＶＩ）：  
【０２３０】
【化２２】
2019172691.tif 000029
【０２３１】
の１つを有する。
【０２３２】
いくつかの実施形態において、Ｒ１０は、それぞれの出現において独立に、水素、Ｃ１
〜Ｃ１２アルキルまたは−ＬＮＲ４Ｒ５Ｒ７であり、Ｒ４、Ｒ５およびＲ７は、連結（Ａ
）に関して上記に定義されている通りである。他の実施形態において、Ｒ１０は水素であ
る。他の実施形態において、Ｒ１０はＣ１〜Ｃ１２アルキルであり、他の実施形態におい
て、Ｒ１０は−ＬＮＲ４Ｒ５Ｒ７である。いくつかの実施形態において、Ｒ１０はメチル
である。また他の実施形態において、Ｒ１０はエチルである。いくつかの実施形態におい
て、Ｒ１０はＣ３アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ１０はＣ４アルキル
である。また他の実施形態において、Ｒ１０はＣ５アルキルである。いくつかの他の実施
形態において、Ｒ１０はＣ６アルキルである。他の実施形態において、Ｒ１０はＣ７アル
キルである。また他の実施形態において、Ｒ１０はＣ８アルキルである。いくつかの実施
形態において、Ｒ１０はＣ９アルキルである。他の実施形態において、Ｒ１０はＣ１０ア
ルキルである。また他の実施形態において、Ｒ１０はＣ１１アルキルである。いくつかの
他の実施形態において、Ｒ１０はＣ１２アルキルである。
【０２３３】
いくつかの実施形態において、Ｒ８およびＲ９は接合して、５〜１８員の単環式または
二環式複素環を形成する。いくつかの実施形態において、複素環は、５員または６員の単
環式複素環である。例えば、いくつかの実施形態において、連結（Ｂ）は、下記の構造（
ＩＶ）：
【０２３４】
【化２３】
2019172691.tif 000030
【０２３５】
を有する。
【０２３６】
他の実施形態において、複素環は、二環式、例えば、１２員二環式複素環である。複素
環は、ピペリジニルであり得る。複素環は、モルホリノであり得る。複素環は、ピペリジ
ニル（ｐｉｐｅｒｉｚｉｎｙｌ）であり得る。複素環は、デカヒドロイソキノリンであり
得る。代表的な複素環には、以下：  
【０２３７】
【化２４】
2019172691.tif 000031
【０２３８】
が含まれる。
【０２３９】
いくつかの実施形態において、Ｒ１１は、それぞれの出現において独立に、Ｃ２〜Ｃ１
２アルキル、Ｃ１〜Ｃ１２アミノアルキル、アリール、ヘテロアリールまたはヘテロシク
リルである。
【０２４０】
いくつかの実施形態において、Ｒ１１はＣ２〜Ｃ１２アルキルである。いくつかの実施
形態において、Ｒ１１はエチルである。他の実施形態において、Ｒ１１はＣ３アルキルで
ある。また他の実施形態において、Ｒ１１はイソプロピルである。いくつかの他の実施形
態において、Ｒ１１はＣ４アルキルである。他の実施形態において、Ｒ１１はＣ５アルキ
ルである。いくつかの実施形態において、Ｒ１１はＣ６アルキルである。他の実施形態に
おいて、Ｒ１１はＣ７アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ１１はＣ８アル
キルである。他の実施形態において、Ｒ１１はＣ９アルキルである。また他の実施形態に
おいて、Ｒ１１はＣ１０アルキルである。いくつかの他の実施形態において、Ｒ１１はＣ
１１アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ１１はＣ１２アルキルである。
【０２４１】
他の実施形態において、Ｒ１１はＣ１〜Ｃ１２アミノアルキルである。いくつかの実施
形態において、Ｒ１１はメチルアミノである。いくつかの実施形態において、Ｒ１１はエ
チルアミノである。他の実施形態において、Ｒ１１はＣ３アミノアルキルである。また他
の実施形態において、Ｒ１１はＣ４アミノアルキルである。いくつかの他の実施形態にお
いて、Ｒ１１はＣ５アミノアルキルである。他の実施形態において、Ｒ１１はＣ６アミノ
アルキルである。また他の実施形態において、Ｒ１１はＣ７アミノアルキルである。いく
つかの実施形態において、Ｒ１１はＣ８アミノアルキルである。他の実施形態において、
Ｒ１１はＣ９アミノアルキルである。また他の実施形態において、Ｒ１１はＣ１０アミノ
アルキルである。いくつかの他の実施形態において、Ｒ１１はＣ１１アミノアルキルであ
る。他の実施形態において、Ｒ１１はＣ１２アミノアルキルである。
【０２４２】
他の実施形態において、Ｒ１１はＣ１〜Ｃ１２アルキルカルボニルである。また他の実
施形態において、Ｒ１１はＣ１アルキルカルボニルである。他の実施形態において、Ｒ１
１はＣ２アルキルカルボニルである。いくつかの実施形態において、Ｒ１１はＣ３アルキ
ルカルボニルである。また他の実施形態において、Ｒ１１はＣ４アルキルカルボニルであ
る。いくつかの実施形態において、Ｒ１１はＣ５アルキルカルボニルである。いくつかの
他の実施形態において、Ｒ１１はＣ６アルキルカルボニルである。他の実施形態において
、Ｒ１１はＣ７アルキルカルボニルである。また他の実施形態において、Ｒ１１はＣ８ア
ルキルカルボニルである。いくつかの実施形態において、Ｒ１１はＣ９アルキルカルボニ
ルである。また他の実施形態において、Ｒ１１はＣ１０アルキルカルボニルである。いく
つかの他の実施形態において、Ｒ１１はＣ１１アルキルカルボニルである。いくつかの実
施形態において、Ｒ１１はＣ１２アルキルカルボニルである。また他の実施形態において
、Ｒ１１は、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣＯ２Ｈであり、ｎは１〜６である。例えば、い
くつかの実施形態において、ｎは、１である。他の実施形態において、ｎは、２である。
また他の実施形態において、ｎは、３である。いくつかの他の実施形態において、ｎは、
４である。また他の実施形態において、ｎは、５である。他の実施形態において、ｎは、
６である。
【０２４３】
他の実施形態において、Ｒ１１は、アリールである。例えば、いくつかの実施形態にお
いて、Ｒ１１は、フェニルである。いくつかの実施形態において、フェニルは、例えば、
ニトロ基で置換されている。
【０２４４】
他の実施形態において、Ｒ１１は、ヘテロアリールである。例えば、いくつかの実施形
態において、Ｒ１１は、ピリジニルである。他の実施形態において、Ｒ１１は、ピリミジ
ニルである。
【０２４５】
他の実施形態において、Ｒ１１は、ヘテロシクリルである。例えば、いくつかの実施形
態において、Ｒ１１は、ピペリジニル、例えば、ピペリジン−４−イルである。
【０２４６】
いくつかの実施形態において、Ｒ１１は、エチル、イソプロピル、ピペリジニル、ピリ
ミジニル、コレート、デオキシコレート、または−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣＯ２Ｈであ
り、ｎは、１〜６である。
【０２４７】
いくつかの実施形態において、Ｒは、電子対である。他の実施形態において、Ｒは、水
素であり、他の実施形態において、Ｒは、Ｃ１〜Ｃ１２アルキルである。いくつかの実施
形態において、Ｒはメチルである。いくつかの実施形態において、Ｒはエチルである。他
の実施形態において、ＲはＣ３アルキルである。また他の実施形態において、Ｒはイソプ
ロピルである。いくつかの他の実施形態において、ＲはＣ４アルキルである。また他の実
施形態において、ＲはＣ５アルキルである。いくつかの実施形態において、ＲはＣ６アル
キルである。他の実施形態において、ＲはＣ７アルキルである。また他の実施形態におい
て、ＲはＣ８アルキルである。他の実施形態において、ＲはＣ９アルキルである。いくつ
かの実施形態において、ＲはＣ１０アルキルである。また他の実施形態において、ＲはＣ
１１アルキルである。いくつかの実施形態において、ＲはＣ１２アルキルである。
【０２４８】
いくつかの実施形態において、Ｒ１２は、それぞれの出現において独立に、水素、Ｃ１
〜Ｃ１２アルキル、Ｃ１〜Ｃ１２アミノアルキル、−ＮＨ２、−ＮＲ１３Ｒ１４、−ＮＲ
１３Ｒ１４Ｒ１５、オキソ、−ＣＮ、トリフルオロメチル、アミジル、アミジニル、アミ
ジニルアルキル、アミジニルアルキルカルボニルグアニジニル、グアニジニルアルキル、
グアニジニルアルキルカルボニル、コレート、デオキシコレート、アリール、ヘテロアリ
ール、複素環、−ＳＲ１３またはＣ１〜Ｃ１２アルコキシであり、Ｒ１３、Ｒ１４および
Ｒ１５は、それぞれの出現において独立に、Ｃ１〜Ｃ１２アルキルである。
【０２４９】
いくつかの実施形態において、Ｒ１２は水素である。いくつかの実施形態において、Ｒ
１２はＣ１〜Ｃ１２アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ１２はＣ１〜Ｃ１
２アミノアルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ１２は−ＮＨ２である。いく
つかの実施形態において、Ｒ１２は−ＮＲ１３Ｒ１４である。いくつかの実施形態におい
て、Ｒ１２は−ＮＲ１３Ｒ１４Ｒ１５である。いくつかの実施形態において、Ｒ１２はＣ
１〜Ｃ１２アルキルカルボニルである。いくつかの実施形態において、Ｒ１２はオキソで
ある。いくつかの実施形態において、Ｒ１２は−ＣＮである。いくつかの実施形態におい
て、Ｒ１２はトリフルオロメチルである。いくつかの実施形態において、Ｒ１２はアミジ
ルである。いくつかの実施形態において、Ｒ１２はアミジニルである。いくつかの実施形
態において、Ｒ１２はアミジニルアルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ１２
はアミジニルアルキルカルボニルである。いくつかの実施形態において、Ｒ１２は、グア
ニジニル、例えば、モノメチルグアニジニル（ｍｅｔｈｙｌｇｕａｎｉｄｙｎｙｌ）また
はジメチルグアニジニルである。いくつかの実施形態において、Ｒ１２はグアニジニルア
ルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ１２はアミジニルアルキルカルボニルで
ある。いくつかの実施形態において、Ｒ１２はコレートである。いくつかの実施形態にお
いて、Ｒ１２はデオキシコレートである。いくつかの実施形態において、Ｒ１２はアリー
ルである。いくつかの実施形態において、Ｒ１２はヘテロアリールである。いくつかの実
施形態において、Ｒ１２は複素環である。いくつかの実施形態において、Ｒ１２は−ＳＲ
１３である。いくつかの実施形態において、Ｒ１２はＣ１〜Ｃ１２アルコキシである。い
くつかの実施形態において、Ｒ１２はジメチルアミンである。
【０２５０】
他の実施形態において、Ｒ１２はメチルである。また他の実施形態において、Ｒ１２は
エチルである。いくつかの実施形態において、Ｒ１２はＣ３アルキルである。いくつかの
実施形態において、Ｒ１２はイソプロピルである。いくつかの実施形態において、Ｒ１２
はＣ４アルキルである。他の実施形態において、Ｒ１２はＣ５アルキルである。また他の
実施形態において、Ｒ１２はＣ６アルキルである。いくつかの他の実施形態において、Ｒ
１２はＣ７アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ１２はＣ８アルキルである
。また他の実施形態において、Ｒ１２はＣ９アルキルである。いくつかの実施形態におい
て、Ｒ１２はＣ１０アルキルである。また他の実施形態において、Ｒ１２はＣ１１アルキ
ルである。他の実施形態において、Ｒ１２はＣ１２アルキルである。また他の実施形態に
おいて、アルキル部分は、１個または複数個の酸素原子で置換され、エーテル部分、例え
ば、メトキシメチル部分を形成する。
【０２５１】
いくつかの実施形態において、Ｒ１２はメチルアミノである。他の実施形態において、
Ｒ１２はエチルアミノである。また他の実施形態において、Ｒ１２はＣ３アミノアルキル
である。いくつかの実施形態において、Ｒ１２はＣ４アミノアルキルである。また他の実
施形態において、Ｒ１２はＣ５アミノアルキルである。いくつかの他の実施形態において
、Ｒ１２はＣ６アミノアルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ１２はＣ７アミ
ノアルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ１２はＣ８アミノアルキルである。
また他の実施形態において、Ｒ１２はＣ９アミノアルキルである。いくつかの他の実施形
態において、Ｒ１２はＣ１０アミノアルキルである。また他の実施形態において、Ｒ１２
はＣ１１アミノアルキルである。他の実施形態において、Ｒ１２はＣ１２アミノアルキル
である。いくつかの実施形態において、アミノアルキルは、ジメチルアミノアルキルであ
る。
【０２５２】
また他の実施形態において、Ｒ１２はアセチルである。いくつかの他の実施形態におい
て、Ｒ１２はＣ２アルキルカルボニルである。いくつかの実施形態において、Ｒ１２はＣ
３アルキルカルボニルである。また他の実施形態において、Ｒ１２はＣ４アルキルカルボ
ニルである。いくつかの実施形態において、Ｒ１２はＣ５アルキルカルボニルである。ま
た他の実施形態において、Ｒ１２はＣ６アルキルカルボニルである。いくつかの他の実施
形態において、Ｒ１２はＣ７アルキルカルボニルである。いくつかの実施形態において、
Ｒ１２はＣ８アルキルカルボニルである。また他の実施形態において、Ｒ１２はＣ９アル
キルカルボニルである。いくつかの他の実施形態において、Ｒ１２はＣ１０アルキルカル
ボニルである。いくつかの実施形態において、Ｒ１２はＣ１１アルキルカルボニルである
。他の実施形態において、Ｒ１２はＣ１２アルキルカルボニルである。アルキルカルボニ
ルは、カルボキシ部分で置換されており、例えば、アルキルカルボニルは、置換されて、
コハク酸部分（すなわち、３−カルボキシアルキルカルボニル）を形成する。他の実施形
態において、アルキルカルボニルは、末端−ＳＨ基で置換されている。
【０２５３】
いくつかの実施形態において、Ｒ１２は、アミジルである。いくつかの実施形態におい
て、アミジルは、例えば、−ＳＨ、カルバメート、またはこれらの組合せでさらに置換さ
れているアルキル部分を含む。他の実施形態において、アミジルは、アリール部分、例え
ば、フェニルで置換されている。特定の実施形態において、Ｒ１２は、下記の構造（ＩＸ
）：
【０２５４】
【化２５】
2019172691.tif 000032
【０２５５】
を有してもよく、式中、Ｒ１６は、それぞれの出現において独立に、水素、Ｃ１〜Ｃ１２
アルキル、Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ、−ＣＮ、アリールまたはヘテロアリールである。
【０２５６】
いくつかの実施形態において、Ｒ１２はメトキシである。他の実施形態において、Ｒ１
２はエトキシである。また他の実施形態において、Ｒ１２はＣ３アルコキシである。いく
つかの実施形態において、Ｒ１２はＣ４アルコキシである。いくつかの実施形態において
、Ｒ１２はＣ５アルコキシである。いくつかの他の実施形態において、Ｒ１２はＣ６アル
コキシである。他の実施形態において、Ｒ１２はＣ７アルコキシである。いくつかの他の
実施形態において、Ｒ１２はＣ８アルコキシである。いくつかの実施形態において、Ｒ１
２はＣ９アルコキシである。他の実施形態において、Ｒ１２はＣ１０アルコキシである。
いくつかの実施形態において、Ｒ１２はＣ１１アルコキシである。また他の実施形態にお
いて、Ｒ１２はＣ１２アルコキシである。
【０２５７】
特定の実施形態において、Ｒ１２は、ピロリジニル、例えば、ピロリジン−１−イルで
ある。他の実施形態において、Ｒ１２は、ピペリジニル、例えば、ピペリジン−１−イル
またはピペリジン−４−イルである。他の実施形態において、Ｒ１２は、モルホリノ、例
えば、モルホリン−４−イルである。他の実施形態において、Ｒ１２は、フェニルであり
、さらにさらなる実施形態において、フェニルは、例えば、ニトロ基で置換されている。
また他の実施形態において、Ｒ１２は、ピリミジニル、例えば、ピリミジン−２−イルで
ある。
【０２５８】
他の実施形態において、Ｒ１３、Ｒ１４およびＲ１５は、それぞれの出現において独立
に、Ｃ１〜Ｃ１２アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ１３、Ｒ１４または
Ｒ１５は、メチルである。また他の実施形態において、Ｒ１３、Ｒ１４またはＲ１５はエ
チルである。他の実施形態において、Ｒ１３、Ｒ１４またはＲ１５はＣ３アルキルである
。また他の実施形態において、Ｒ１３、Ｒ１４またはＲ１５はイソプロピルである。他の
実施形態において、Ｒ１３、Ｒ１４またはＲ１５はＣ４アルキルである。いくつかの実施
形態において、Ｒ１３、Ｒ１４またはＲ１５はＣ５アルキルである。いくつかの他の実施
形態において、Ｒ１３、Ｒ１４またはＲ１５はＣ６アルキルである。他の実施形態におい
て、Ｒ１３、Ｒ１４またはＲ１５はＣ７アルキルである。また他の実施形態において、Ｒ
１３、Ｒ１４またはＲ１５はＣ８アルキルである。他の実施形態において、Ｒ１３、Ｒ１
４またはＲ１５はＣ９アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ１３、Ｒ１４ま
たはＲ１５はＣ１０アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ１３、Ｒ１４また
はＲ１５はＣ１１アルキルである。また他の実施形態において、Ｒ１３、Ｒ１４またはＲ
１５はＣ１２アルキルである。
【０２５９】
上で述べたように、いくつかの実施形態において、Ｒ１２は、アリール部分で置換され
ているアミジルである。これに関しては、Ｒ１６のそれぞれの出現は、同一でも異なって
もよい。これらの実施形態のいくつかにおいて、Ｒ１６は、水素である。他の実施形態に
おいて、Ｒ１６は、−ＣＮである。他の実施形態において、Ｒ１６は、ヘテロアリール、
例えば、テトラゾリル（ｔｒｅｔｒａｚｏｌｙｌ）である。特定の他の実施形態において
、Ｒ１６は、メトキシである。他の実施形態において、Ｒ１６は、アリールであり、アリ
ールは、任意選択で置換されている。任意選択の置換基には、これに関して、Ｃ１〜Ｃ１
２アルキル、Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ、例えば、メトキシ；トリフルオロメトキシ；ハロ
、例えば、クロロ；およびトリフルオロメチルが含まれる。
【０２６０】
他の実施形態において、Ｒ１６はメチルである。また他の実施形態において、Ｒ１６は
エチルである。いくつかの実施形態において、Ｒ１６はＣ３アルキルである。いくつかの
他の実施形態において、Ｒ１６はイソプロピルである。また他の実施形態において、Ｒ１
６はＣ４アルキルである。他の実施形態において、Ｒ１６はＣ５アルキルである。また他
の実施形態において、Ｒ１６はＣ６アルキルである。いくつかの他の実施形態において、
Ｒ１６はＣ７アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ１６はＣ８アルキルであ
る。また他の実施形態において、Ｒ１６はＣ９アルキルである。いくつかの他の実施形態
において、Ｒ１６はＣ１０アルキルである。他の実施形態において、Ｒ１６はＣ１１アル
キルである。いくつかの他の実施形態において、Ｒ１６はＣ１２アルキルである。
【０２６１】
いくつかの実施形態において、Ｒ１６はメトキシである。いくつかの実施形態において
、Ｒ１６はエトキシである。また他の実施形態において、Ｒ１６はＣ３アルコキシである
。いくつかの他の実施形態において、Ｒ１６はＣ４アルコキシである。他の実施形態にお
いて、Ｒ１６はＣ５アルコキシである。いくつかの他の実施形態において、Ｒ１６はＣ６
アルコキシである。また他の実施形態において、Ｒ１６はＣ７アルコキシである。いくつ
かの他の実施形態において、Ｒ１６はＣ８アルコキシである。また他の実施形態において
、Ｒ１６はＣ９アルコキシである。いくつかの他の実施形態において、Ｒ１６はＣ１０ア
ルコキシである。いくつかの実施形態において、Ｒ１６はＣ１１アルコキシである。いく
つかの他の実施形態において、Ｒ１６はＣ１２アルコキシである。
【０２６２】
いくつかの他の実施形態において、Ｒ８およびＲ９は接合して、１２〜１８員のクラウ
ンエーテルを形成する。例えば、いくつかの実施形態において、クラウンエーテルは、１
８員であり、他の実施形態において、クラウンエーテルは、１５員である。特定の実施形
態において、Ｒ８およびＲ９は接合して、下記の構造（Ｘ）または（ＸＩ）：
【０２６３】
【化２６】
2019172691.tif 000033
【０２６４】
の１つを有する複素環を形成する。
【０２６５】
いくつかの実施形態において、Ｒ８、Ｒ９またはＲ３は、Ｒ１０と接合して、５〜７員
の複素環を形成する。例えば、いくつかの実施形態において、Ｒ３はＲ１０と接合して、
５〜７員の複素環を形成する。いくつかの実施形態において、複素環は、５員である。他
の実施形態において、複素環は、６員である。他の実施形態において、複素環は、７員で
ある。いくつかの実施形態において、複素環は、下記の構造（ＸＩＩ）：
【０２６６】
【化２７】
2019172691.tif 000034
【０２６７】
によって表され、式中、Ｚ’は、５〜７員の複素環を表す。構造（ＸＩ）の特定の実施形
態において、Ｒ１２は、それぞれの出現において水素である。例えば、連結（Ｂ）は、下
記の構造（Ｂ１）、（Ｂ２）または（Ｂ３）：
【０２６８】
【化２８】
2019172691.tif 000035
【０２６９】
の１つを有し得る。
【０２７０】
特定の他の実施形態において、Ｒ１２は、アリールホスホリル部分、例えば、トリフェ
ニルホスホリル（ｐｈｏｓｐｏｒｙｌ）部分でさらに置換されている、Ｃ１〜Ｃ１２アル
キルカルボニルまたはアミジルである。この構造を有する連結の例には、Ｂ５６およびＢ
５５が含まれる。
【０２７１】
特定の実施形態において、連結（Ｂ）は、構造Ａ１〜Ａ５のいずれかを有さない。表３
は、タイプ（Ａ）および（Ｂ）の代表的な連結を示す。
【０２７２】
【表３−１】
2019172691.tif 000036
【０２７３】
【表３−２】
2019172691.tif 000037
【０２７４】
【表３−３】
2019172691.tif 000038
【０２７５】
【表３−４】
2019172691.tif 000039
【０２７６】
【表３−５】
2019172691.tif 000040
【０２７７】
【表３−６】
2019172691.tif 000041
【０２７８】
【表３−７】
2019172691.tif 000042
【０２７９】
【表３−８】
2019172691.tif 000043
【０２８０】
【表３−９】
2019172691.tif 000044
【０２８１】
【表３−１０】
2019172691.tif 000045
【０２８２】
【表３−１１】
2019172691.tif 000046
【０２８３】
【表３−１２】
2019172691.tif 000047
【０２８４】
下記の配列および考察において、連結についての上記の名称が使用されることが多い。
例えば、ＰＭＯａｐｎ連結を含む塩基は、ａｐｎＢとして例示され、Ｂは、塩基である。
他の連結は、同様に呼称する。さらに、省略された呼称を使用してもよく、例えば、上記
の括弧内の省略された呼称を使用し得る（例えば、ａＢは、ａｐｎＢを指す）。他の容易
に同定可能な略語をまた使用し得る。
【０２８５】
上で述べたように、本発明の本方法はまた、修飾された末端基を含むオリゴマーを提供
する。様々な化学部分によるオリゴマーの３’端および／または５’端の修飾は、オリゴ
マーに対して有益な治療特性（例えば、増強された細胞送達、効力、および／または組織
分布など）を提供することを出願人等は見出した。様々な実施形態において、修飾された
末端基は、疎水性部分を含み、一方、他の実施形態において、修飾された末端基は、親水
性部分を含む。修飾された末端基は、上記の連結を伴って、または伴わずに存在し得る。
例えば、いくつかの実施形態において、オリゴマーは、１つまたは複数の修飾された末端
基およびタイプ（Ａ）の連結、例えば、Ｘが−Ｎ（ＣＨ３）２である連結を含む。他の実
施形態において、オリゴマーは、１つまたは複数の修飾された末端基およびタイプ（Ｂ）
の連結、例えば、Ｘが４−アミノピペリジン−１−イル（すなわち、ＡＰＮ）である連結
を含む。また他の実施形態において、オリゴマーは、１つまたは複数の修飾された末端基
、ならびに連結（Ａ）および（Ｂ）の混合物を含む。例えば、オリゴマーは、１つまたは
複数の修飾された末端基（例えば、トリチルまたはトリフェニルアセチル）、ならびにＸ
が−Ｎ（ＣＨ３）２である連結およびＸが４−アミノピペリジン−１−イルである連結を
含み得る。修飾された末端基および修飾された連結の他の組合せはまた、オリゴマーに対
して都合よい治療特性を提供する。
【０２８６】
一実施形態において、末端修飾を含むオリゴマーは、下記の構造（ＸＶＩＩ）：
【０２８７】
【化２９】
2019172691.tif 000048
【０２８８】
またはその塩もしくは異性体を有し、式中、連結（Ａ）および（Ｂ）のいずれかについて
、Ｘ、ＷおよびＹは、上記に定義されている通りであり、
Ｒ１７は、それぞれの出現において独立に、非存在、水素またはＣ１〜Ｃ６アルキルであ
り、
Ｒ１８およびＲ１９は、それぞれの出現において独立に、非存在、水素、細胞透過性ペプ
チド、天然もしくは非天然のアミノ酸、Ｃ２〜Ｃ３０アルキルカルボニル、−Ｃ（＝Ｏ）
ＯＲ２１またはＲ２０であり、
Ｒ２０は、それぞれの出現において独立に、グアニジニル、ヘテロシクリル、Ｃ１〜Ｃ３
０アルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル；Ｃ６〜Ｃ３０アリール、Ｃ７〜Ｃ３０アラルキ
ル、Ｃ３〜Ｃ３０アルキルカルボニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキルカルボニル、Ｃ３〜Ｃ
８シクロアルキルアルキルカルボニル、Ｃ７〜Ｃ３０アリールカルボニル、Ｃ７〜Ｃ３０
アラルキルカルボニル、Ｃ２〜Ｃ３０アルキルオキシカルボニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアル
キルオキシカルボニル、Ｃ７〜Ｃ３０アリールオキシカルボニル、Ｃ８〜Ｃ３０アラルキ
ルオキシカルボニル、または−Ｐ（＝Ｏ）（Ｒ２２）２であり、
Ｂは、塩基対合部分であり、
Ｌ１は、アルキル、ヒドロキシル、アルコキシ、アルキルアミノ、アミド、エステル、カ
ルボニル、カルバメート、ホスホロジアミデート、ホスホロアミデート、ホスホロチオエ
ート、ピペラジンおよびホスホジエステルから選択される、結合を含む長さが１８原子ま
での任意選択のリンカーであり、
ｘは、０以上の整数であり、Ｒ１８またはＲ１９の少なくとも１つは、Ｒ２０であり、
Ｒ１８またはＲ１９の少なくとも１つは、Ｒ２０であり、ただし、Ｒ１７およびＲ１８の
両方が非存在ではない。
【０２８９】
修飾された末端基を有するオリゴマーは、任意の数のタイプ（Ａ）および（Ｂ）の連結
を含み得る。例えば、オリゴマーは、連結タイプ（Ａ）のみを含み得る。例えば、各連結
中のＸは、−Ｎ（ＣＨ３）２であり得る。代わりに、オリゴマーは、連結（Ｂ）のみを含
み得る。特定の実施形態において、オリゴマーは、連結（Ａ）および（Ｂ）の混合物を含
み、例えば、１〜４つのタイプ（Ｂ）の連結および連結の残りはタイプ（Ａ）である。こ
れに関しては、連結には、これらに限定されないが、Ｘがタイプ（Ｂ）についてアミノピ
ペリジニルであり、タイプ（Ａ）についてジメチルアミノである連結が含まれる。
【０２９０】
いくつかの実施形態において、Ｒ１７は、非存在である。いくつかの実施形態において
、Ｒ１７は、水素である。いくつかの実施形態において、Ｒ１７は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル
である。いくつかの実施形態において、Ｒ１７は、メチルである。また他の実施形態にお
いて、Ｒ１７は、エチルである。いくつかの実施形態において、Ｒ１７は、Ｃ３アルキル
である。いくつかの他の実施形態において、Ｒ１７は、イソプロピルである。他の実施形
態において、Ｒ１７は、Ｃ４アルキルである。また他の実施形態において、Ｒ１７は、Ｃ
５アルキルである。いくつかの他の実施形態において、Ｒ１７は、Ｃ６アルキルである。
【０２９１】
他の実施形態において、Ｒ１８は、非存在である。いくつかの実施形態において、Ｒ１
８は、水素である。いくつかの実施形態において、Ｒ１８は、下記でより詳細に記載する
ような細胞透過性ペプチドである。いくつかの実施形態において、Ｒ１８は、天然または
非天然のアミノ酸、例えば、トリメチルグリシンである。いくつかの実施形態において、
Ｒ１８は、Ｒ２０である。
【０２９２】
他の実施形態において、Ｒ１９は、非存在である。いくつかの実施形態において、Ｒ１
９は、水素である。いくつかの実施形態において、Ｒ１９は、下記でより詳細に記載する
ような細胞透過性ペプチドである。いくつかの実施形態において、Ｒ１９は、天然または
非天然のアミノ酸、例えば、トリメチルグリシンである。いくつかの実施形態において、
Ｒ１９は、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ１７であり、例えば、Ｒ１９は、下記の構造：
【０２９３】
【化３０】
2019172691.tif 000049
【０２９４】
を有し得る。
【０２９５】
他の実施形態において、Ｒ１８またはＲ１９は、Ｃ２〜Ｃ３０アルキルカルボニル、例
えば、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣＯ２Ｈであり、ｎは、１〜６、例えば、２である。他
の例において、Ｒ１８またはＲ１９は、アセチルである。
【０２９６】
いくつかの実施形態において、Ｒ２０は、それぞれの出現において独立に、グアニジニ
ル、ヘテロシクリル、Ｃ１〜Ｃ３０アルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル；Ｃ６〜Ｃ３０
アリール、Ｃ７〜Ｃ３０アラルキル、Ｃ３〜Ｃ３０アルキルカルボニル、Ｃ３〜Ｃ８シク
ロアルキルカルボニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキルアルキルカルボニル、Ｃ６〜Ｃ３０ア
リールカルボニル、Ｃ７〜Ｃ３０アラルキルカルボニル、Ｃ２〜Ｃ３０アルキルオキシカ
ルボニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキルオキシカルボニル、Ｃ７〜Ｃ３０アリールオキシカ
ルボニル、Ｃ８〜Ｃ３０アラルキルオキシカルボニル、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ２１、または−
Ｐ（＝Ｏ）（Ｒ２２）２であり、Ｒ２１は、１個もしくは複数の酸素またはヒドロキシル
部分またはこれらの組合せを含むＣ１〜Ｃ３０アルキルであり、各Ｒ２２は、Ｃ６〜Ｃ１
２アリールオキシである。
【０２９７】
特定の他の実施形態において、Ｒ１９は、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ２１であり、Ｒ１８は、水
素、グアニジニル、ヘテロシクリル、Ｃ１〜Ｃ３０アルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル
；Ｃ６〜Ｃ３０アリール、Ｃ３〜Ｃ３０アルキルカルボニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル
カルボニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキルアルキルカルボニル、Ｃ７〜Ｃ３０アリールカル
ボニル、Ｃ７〜Ｃ３０アラルキルカルボニル、Ｃ２〜Ｃ３０アルキルオキシカルボニル、
Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキルオキシカルボニル、Ｃ７〜Ｃ３０アリールオキシカルボニル、
Ｃ８〜Ｃ３０アラルキルオキシカルボニル、または−Ｐ（＝Ｏ）（Ｒ２２）２であり、各
Ｒ２２は、Ｃ６〜Ｃ１２アリールオキシである。
【０２９８】
他の実施形態において、Ｒ２０は、それぞれの出現において独立に、グアニジニル、ヘ
テロシクリル、Ｃ１〜Ｃ３０アルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル；Ｃ６〜Ｃ３０アリー
ル、Ｃ３〜Ｃ３０アルキルカルボニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキルカルボニル、Ｃ３〜Ｃ
８シクロアルキルアルキルカルボニル、Ｃ７〜Ｃ３０アリールカルボニル、Ｃ７〜Ｃ３０
アラルキルカルボニル、Ｃ２〜Ｃ３０アルキルオキシカルボニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアル
キルオキシカルボニル、Ｃ７〜Ｃ３０アリールオキシカルボニル、Ｃ８〜Ｃ３０アラルキ
ルオキシカルボニル、または−Ｐ（＝Ｏ）（Ｒ２２）２である。一方、他の例において、
Ｒ２０は、それぞれの出現において独立に、グアニジニル、ヘテロシクリル、Ｃ１〜Ｃ３
０アルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル；Ｃ６〜Ｃ３０アリール、Ｃ７〜Ｃ３０アラルキ
ル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキルカルボニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキルアルキルカルボニ
ル、Ｃ７〜Ｃ３０アリールカルボニル、Ｃ７〜Ｃ３０アラルキルカルボニル、Ｃ２〜Ｃ３
０アルキルオキシカルボニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキルオキシカルボニル、Ｃ７〜Ｃ３
０アリールオキシカルボニル、Ｃ８〜Ｃ３０アラルキルオキシカルボニル、または−Ｐ（
＝Ｏ）（Ｒ２２）２である。
【０２９９】
いくつかの実施形態において、Ｒ２０は、グアニジニル、例えば、モノメチルグアニジ
ニルまたはジメチルグアニジニルである。他の実施形態において、Ｒ２０は、ヘテロシク
リルである。例えば、いくつかの実施形態において、Ｒ２０は、ピペリジン−４−イルで
ある。いくつかの実施形態において、ピペリジン−４−イルは、トリチルまたはＢｏｃ基
で置換されている。他の実施形態において、Ｒ２０は、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキルである
。他の実施形態において、Ｒ２０は、Ｃ６〜Ｃ３０アリールである。
【０３００】
いくつかの実施形態において、Ｒ２０は、Ｃ７〜Ｃ３０アリールカルボニルである。例
えば、いくつかの実施形態において、Ｒ２０は、下記の構造（ＸＶＩＩＩ）：
【０３０１】
【化３１】
2019172691.tif 000050
【０３０２】
を有し、式中、Ｒ２３は、それぞれの出現において独立に、水素、ハロ、Ｃ１〜Ｃ３０ア
ルキル、Ｃ１〜Ｃ３０アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ３０アルキルオキシカルボニル、Ｃ７〜Ｃ３
０アラルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリルまたはヘテロシクロアルキル
（ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌａｌｋｙｌ）であり、１つのＲ２３は、別のＲ２３と接合して、
ヘテロシクリル環を形成し得る。いくつかの実施形態において、少なくとも１つのＲ２３
は、水素であり、例えば、いくつかの実施形態において、各Ｒ２３は、水素である。他の
実施形態において、少なくとも１つのＲ２３は、Ｃ１〜Ｃ３０アルコキシであり、例えば
、いくつかの実施形態において、各Ｒ２３は、メトキシである。他の実施形態において、
少なくとも１つのＲ２３は、ヘテロアリールであり、例えば、いくつかの実施形態におい
て、少なくとも１つのＲ２３は、下記の構造（ＸＶＩＩＩａ）または（ＸＶＩＩＩｂ）：
【０３０３】
【化３２】
2019172691.tif 000051
【０３０４】
の１つを有する。
【０３０５】
また他の実施形態において、１つのＲ２３は別のＲ２３と接合して、ヘテロシクリル環
を形成する。例えば、一実施形態において、Ｒ２０は、５−カルボキシフルオレセインで
ある。
【０３０６】
他の実施形態において、Ｒ２０は、Ｃ７〜Ｃ３０アラルキルカルボニルである。例えば
、様々な実施形態において、Ｒ２０は、下記の構造（ＸＩＸ）、（ＸＸ）または（ＸＸＩ
）：
【０３０７】
【化３３】
2019172691.tif 000052
【０３０８】
の１つを有し、式中、Ｒ２３は、それぞれの出現において独立に、水素、ハロ、Ｃ１〜Ｃ
３０アルキル、Ｃ１〜Ｃ３０アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ３０アルキルオキシカルボニル、Ｃ７
〜Ｃ３０アラルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリルまたはヘテロシクロア
ルキルであり、１つのＲ２３は、別のＲ２３と接合して、ヘテロシクリル環を形成し得、
Ｘは、−ＯＨまたはハロであり、ｍは、０〜６の整数である。いくつかの特定の実施形態
において、ｍは、０である。他の実施形態において、ｍは、１であり、一方、他の実施形
態において、ｍは、２である。他の実施形態において、少なくとも１つのＲ２３は、水素
であり、例えば、いくつかの実施形態において、各Ｒ２３は、水素である。いくつかの実
施形態において、Ｘは、水素である。他の実施形態において、Ｘは、−ＯＨである。他の
実施形態において、Ｘは、Ｃｌである。他の実施形態において、少なくとも１つのＲ２３
は、Ｃ１〜Ｃ３０アルコキシ、例えば、メトキシである。
【０３０９】
また他の実施形態において、Ｒ２０は、Ｃ７〜Ｃ３０アラルキル、例えば、トリチルで
ある。他の実施形態において、Ｒ２０は、メトキシトリチルである。いくつかの実施形態
において、Ｒ２０は、下記の構造（ＸＸＩＩ）：
【０３１０】
【化３４】
2019172691.tif 000053
【０３１１】
を有し、式中、Ｒ２３は、それぞれの出現において独立に、水素、ハロ、Ｃ１〜Ｃ３０ア
ルキル、Ｃ１〜Ｃ３０アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ３０アルキルオキシカルボニル、Ｃ７〜Ｃ３
０アラルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリルまたはヘテロシクロアルキル
であり、１つのＲ２３は、別のＲ２３と接合して、ヘテロシクリル環を形成し得る。例え
ば、いくつかの実施形態において、各Ｒ２３は、水素である。他の実施形態において、少
なくとも１つのＲ２３は、Ｃ１〜Ｃ３０アルコキシ、例えば、メトキシである。
【０３１２】
また他の実施形態において、Ｒ２０は、Ｃ７〜Ｃ３０アラルキルであり、Ｒ２０は、下
記の構造（ＸＸＩＩＩ）：
【０３１３】
【化３５】
2019172691.tif 000054
【０３１４】
を有する。
【０３１５】
いくつかの実施形態において、少なくとも１つのＲ２３は、ハロ、例えば、クロロであ
る。いくつかの他の実施形態において、１つのＲ２３は、パラ位におけるクロロである。
【０３１６】
他の実施形態において、Ｒ２０は、Ｃ１〜Ｃ３０アルキルである。例えば、いくつかの
実施形態において、Ｒ２０は、Ｃ４〜Ｃ２０アルキルであり、１つまたは複数の二重結合
を任意選択で含む。例えば、いくつかの実施形態において、Ｒ２０は、三重結合、例えば
、末端三重結合を含むＣ４〜１０アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ２０
は、ヘキシン−６−イルである。いくつかの実施形態において、Ｒ２０は、下記の構造（
ＸＸＩＶ）、（ＸＸＶ）、（ＸＸＶＩ）または（ＸＸＶＩＩ）：
【０３１７】
【化３６】
2019172691.tif 000055
【０３１８】
の１つを有する。
【０３１９】
また他の実施形態において、Ｒ２０は、Ｃ３〜Ｃ３０アルキルカルボニル、例えば、Ｃ
３〜Ｃ１０アルキルカルボニルである。いくつかの実施形態において、Ｒ２０は、−Ｃ（
＝Ｏ）（ＣＨ２）ｐＳＨまたは−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｐＳＳＨｅｔであり、ｐは、１〜
６の整数であり、Ｈｅｔは、ヘテロアリールである。例えば、ｐは、１であり得、または
ｐは、２であり得る。他の例において、Ｈｅｔは、ピリジニル、例えば、ピリジン−２−
イルである。他の実施形態において、Ｃ３〜Ｃ３０アルキルカルボニルは、さらなるオリ
ゴマーで置換されており、例えば、いくつかの実施形態において、オリゴマーは、オリゴ
マーを別のオリゴマーの３’位に連結する、３’位におけるＣ３〜Ｃ３０アルキルカルボ
ニルを含む。このような末端修飾は、本開示の範囲内に含まれる。
【０３２０】
他の実施形態において、Ｒ２０は、アリールホスホリル部分、例えば、トリフェニルホ
スホリルでさらに置換されているＣ３〜Ｃ３０アルキルカルボニルである。このようなＲ
２０基の例には、表２における構造３３が含まれる。
【０３２１】
他の例において、Ｒ２０は、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキルカルボニル、例えば、Ｃ５〜Ｃ
７アルキルカルボニルである。これらの実施形態において、Ｒ２０は、下記の構造（ＸＸ
ＶＩＩＩ）：
【０３２２】
【化３７】
2019172691.tif 000056
【０３２３】
を有し、式中、Ｒ２３は、それぞれの出現において独立に、水素、ハロ、Ｃ１〜Ｃ３０ア
ルキル、Ｃ１〜Ｃ３０アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ３０アルキルオキシカルボニル、Ｃ７〜Ｃ３
０アラルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリルまたはヘテロシクロアルキル
であり、１つのＲ２３は別のＲ２３と接合して、ヘテロシクリル環を形成し得る。いくつ
かの実施形態において、Ｒ２３は、ヘテロシクリルアルキルであり、例えば、いくつかの
実施形態において、Ｒ２３は、下記の構造：
【０３２４】
【化３８】
2019172691.tif 000057
【０３２５】
を有する。
【０３２６】
いくつかの他の実施形態において、Ｒ２０は、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキルアルキルカル
ボニルである。他の実施形態において、Ｒ２０は、Ｃ２〜Ｃ３０アルキルオキシカルボニ
ルである。他の実施形態において、Ｒ２０は、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキルオキシカルボニ
ルである。他の実施形態において、Ｒ２０は、Ｃ７〜Ｃ３０アリールオキシカルボニルで
ある。他の実施形態において、Ｒ２０は、Ｃ８〜Ｃ３０アラルキルオキシカルボニルであ
る。他の実施形態において、Ｒ２０は、−Ｐ（＝Ｏ）（Ｒ２２）２であり、各Ｒ２２は、
Ｃ６〜Ｃ１２アリールオキシであり、例えば、いくつかの実施形態において、Ｒ２０は、
下記の構造（Ｃ２４）：
【０３２７】
【化３９】
2019172691.tif 000058
【０３２８】
を有する。
【０３２９】
他の実施形態において、Ｒ２０は、１個または複数個のハロ原子を含む。例えば、いく
つかの実施形態において、Ｒ２０は、上記のＲ２０部分のいずれかのペルフルオロ類似体
を含む。他の実施形態において、Ｒ２０は、ｐ−トリフルオロメチルフェニル、トリフル
オロメチルトリチル、ペルフルオロペンチルまたはペンタフルオロフェニルである。
【０３３０】
いくつかの実施形態において、３’末端は、修飾を含み、他の実施形態において、５’
末端は、修飾を含む。他の実施形態において、３’末端および５’末端の両方は、修飾を
含む。したがって、いくつかの実施形態において、Ｒ１８は、非存在であり、Ｒ１９は、
Ｒ２０である。他の実施形態において、Ｒ１９は、非存在であり、Ｒ１８は、Ｒ２０であ
る。また他の実施形態において、Ｒ１８およびＲ１９は、各Ｒ２０である。
【０３３１】
いくつかの実施形態において、オリゴマーは、３’修飾または５’修飾に加えて細胞透
過性ペプチドを含む。したがって、いくつかの実施形態において、Ｒ１９は、細胞透過性
ペプチドであり、Ｒ１８は、Ｒ２０である。他の実施形態において、Ｒ１８は、細胞透過
性ペプチドであり、Ｒ１９は、Ｒ２０である。上記のさらなる実施形態において、細胞透
過性ペプチドは、アルギニンに富んだペプチドである。
【０３３２】
いくつかの実施形態において、５’末端基（すなわち、Ｒ１９）をオリゴマーに連結す
るリンカーＬ１は、存在または非存在であり得る。リンカーは、任意の数の官能基および
長さを含み、ただし、リンカーは、５’末端基をオリゴマーに連結するその能力を保持し
、かつリンカーは、配列特異的様式で標的配列に結合するオリゴマーの能力を妨害しない
。一実施形態において、Ｌは、ホスホロジアミデートおよびピペラジン結合を含む。例え
ば、いくつかの実施形態において、Ｌは、下記の構造（ＸＸＩＸ）：
【０３３３】
【化４０】
2019172691.tif 000059
【０３３４】
を有し、式中、Ｒ２４は、非存在、水素またはＣ１〜Ｃ６アルキルである。いくつかの実
施形態において、Ｒ２４は、非存在である。いくつかの実施形態において、Ｒ２４は、水
素である。いくつかの実施形態において、Ｒ２４は、Ｃ１〜Ｃ６アルキルである。いくつ
かの実施形態において、Ｒ２４は、メチルである。他の実施形態において、Ｒ２４は、エ
チルである。また他の実施形態において、Ｒ２４は、Ｃ３アルキルである。いくつかの他
の実施形態において、Ｒ２４は、イソプロピルである。また他の実施形態において、Ｒ２
４は、Ｃ４アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ２４は、Ｃ５アルキルであ
る。また他の実施形態において、Ｒ２４は、Ｃ６アルキルである。
【０３３５】
また他の実施形態において、Ｒ２０は、Ｃ３〜Ｃ３０アルキルカルボニルであり、Ｒ２
０は、下記の構造（ＸＸＸ）：
【０３３６】
【化４１】
2019172691.tif 000060
【０３３７】
を有し、式中、Ｒ２５は、水素または−ＳＲ２６であり、Ｒ２６は、水素、Ｃ１〜Ｃ３０
アルキル、ヘテロシクリル、アリールまたはヘテロアリールであり、ｑは、０〜６の整数
である。
【０３３８】
上記のいずれかのさらなる実施形態において、Ｒ２３は、それぞれの出現において独立
に、水素、ハロ、Ｃ１〜Ｃ３０アルキル、Ｃ１〜Ｃ３０アルコキシ、アリール、ヘテロア
リール、ヘテロシクリルまたはヘテロシクロアルキルである。
【０３３９】
いくつかの他の実施形態において、オリゴマーの３’末端のみが、上で述べた基の１つ
に結合体化している。いくつかの他の実施形態において、オリゴマーの５’末端のみが、
上で述べた基の１つに結合体化している。他の実施形態において、３’末端および５’末
端の両方は、上で述べた基の１つを含む。末端基は、上で述べた基の任意の１つ、または
表４において例示した特定の基のいずれかから選択し得る。
【０３４０】
【表４−１】
2019172691.tif 000061
【０３４１】
【表４−２】
2019172691.tif 000062
【０３４２】
【表４−３】
2019172691.tif 000063
【０３４３】
【表４−４】
2019172691.tif 000064
【０３４４】
【表４−５】
2019172691.tif 000065
【０３４５】
ペプチド輸送体
本発明の方法のいくつかの実施形態において、対象オリゴマーは、ペプチド輸送体部分
、例えば、細胞中へのオリゴマーの輸送を増強するのに有効な細胞透過性ペプチド輸送部
分に結合体化している。例えば、いくつかの実施形態において、ペプチド輸送体部分は、
アルギニンに富んだペプチドである。さらなる実施形態において、輸送部分は、オリゴマ
ーの５’末端または３’末端に付着している。このようなペプチドがいずれかの末端に結
合体化しているとき、反対の末端は本明細書に記載の修飾された末端基へのさらなる結合
体化のために利用可能である。
【０３４６】
上記のいくつかの実施形態において、ペプチド輸送部分は、Ｘ’サブユニット、Ｙ’サ
ブユニット、およびＺ’サブユニットから選択される６〜１６のサブユニットを含み、
（ａ）各Ｘ’サブユニットは、独立に、リシン、アルギニンまたはアルギニン類似体を表
し、前記類似体は、構造Ｒ３３Ｎ＝Ｃ（ＮＨ２）Ｒ３４の側鎖を含むカチオン性α−アミ
ノ酸であり、Ｒ３３は、ＨまたはＲであり、Ｒ３４は、Ｒ３５、ＮＨ２、ＮＨＲ、または
ＮＲ３４であり、Ｒ３５は、低級アルキルまたは低級アルケニルであり、酸素または窒素
をさらに含み得、Ｒ３３およびＲ３４は、一緒に環を形成し得、側鎖は、Ｒ３３またはＲ
３４を介して前記アミノ酸に連結しており、
（ｂ）各Ｙ’サブユニットは、独立に、中性アミノ酸−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨＲ）ｎ−ＮＨ−
を表し、ｎは、２〜７であり、各Ｒは独立に、Ｈまたはメチルであり、
（ｃ）各Ｚ’サブユニットは、独立に、中性アラルキル側鎖を有するα−アミノ酸を表し
、
ペプチドは、（Ｘ’Ｙ’Ｘ’）ｐ、（Ｘ’Ｙ’）ｍ、および（Ｘ’Ｚ’Ｚ’）ｐの１つに
よって表される配列を含み、ｐは、２〜５であり、ｍは、２〜８である。
【０３４７】
選択した実施形態において、各Ｘ’について、側鎖部分は、アミノ酸サブユニットアル
ギニン（Ａｒｇ）におけるように、グアニジルである。さらなる実施形態において、各Ｙ
’は、−ＣＯ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＨＲ−ＮＨ−であり、ｎは、２〜７であり、Ｒは、Ｈで
ある。例えば、ｎが５であり、ＲがＨであるとき、Ｙ’は、本明細書においてＡｈｘとし
て略される６−アミノヘキサン酸サブユニットであり、ｎが２であり、ＲがＨであるとき
、Ｙ’は、β−アラニンサブユニットである。
【０３４８】
特定の実施形態において、このタイプのペプチドには、単一のＹ’サブユニットと交互
になっているアルギニン二量体を含むものが含まれ、Ｙ’は、Ａｈｘである。例には、式
（ＲＹ’Ｒ）ｐまたは式（ＲＲＹ’）ｐを有するペプチドが含まれ、Ｙ’は、Ａｈｘであ
る。一実施形態において、Ｙ’は、６−アミノヘキサン酸サブユニットであり、Ｒは、ア
ルギニンであり、ｐは、４である。
【０３４９】
さらなる実施形態において、各Ｚ’は、フェニルアラニンであり、ｍは、３または４で
ある。
【０３５０】
いくつかの実施形態において、結合体化されたペプチドは、リンカーＡｈｘ−Ｂを介し
てオリゴマーの末端に連結しており、Ａｈｘは、６−アミノヘキサン酸サブユニットであ
り、Ｂは、β−アラニンサブユニットである。
【０３５１】
選択した実施形態において、各Ｘ’について、側鎖部分は、グアニジル（ＨＮ＝Ｃ（Ｎ
Ｈ２）ＮＨ−）、アミジニル（ＨＮ＝Ｃ（ＮＨ２）Ｃ−）、２−アミノジヒドロピリミジ
ル、２−アミノテトラヒドロピリミジル、２−アミノピリジニル、および２−アミノピリ
ミドニル（ａｍｉｎｏｐｙｒｉｍｉｄｏｎｙｌ）からなる群から独立に選択され、グアニ
ジルおよびアミジニルから好ましくは選択される。一実施形態において、側鎖部分は、ア
ミノ酸サブユニットアルギニン（Ａｒｇ）におけるように、グアニジルである。
【０３５２】
いくつかの実施形態において、Ｘ’サブユニットが、Ｙ’サブユニットの間を介在せず
、またはＸ’サブユニットの間に単一で散在していないという点で、Ｙ’サブユニットは
、いずれにしても連続的である。しかし、いくつかの実施形態において、連結サブユニッ
トは、Ｙ’サブユニットの間に存在し得る。一実施形態において、Ｙ’サブユニットは、
ペプチド輸送体の末端において存在する。他の実施形態において、Ｙ’サブユニットは、
Ｘ’サブユニットに隣接している。さらなる実施形態において、各Ｙ’は、−ＣＯ−（Ｃ
Ｈ２）ｎ−ＣＨＲ−ＮＨ−であり、ｎは、２〜７であり、Ｒは、Ｈである。例えば、ｎが
５であり、ＲがＨであるとき、Ｙ’は、本明細書においてＡｈｘとして略される６−アミ
ノヘキサン酸サブユニットである。この基の選択された実施形態において、各Ｘ’は、ア
ルギニンサブユニットにおけるように、グアニジル側鎖部分を含む。このタイプの例示的
なペプチドは、単一のＹ’サブユニットと交互になっているアルギニン二量体を含むもの
を含み、Ｙ’は好ましくは、Ａｈｘである。例には、式（ＲＹ’Ｒ）４または式（ＲＲＹ
’）４を有するペプチドが含まれ、Ｙ’は好ましくは、Ａｈｘである。いくつかの実施形
態において、核酸類似体は、好ましくはＣ末端において、末端Ｙ’サブユニットに連結し
ている。他の実施形態において、リンカーは、構造ＡｈｘＢのものであり、Ａｈｘは、６
−アミノヘキサン酸サブユニットであり、Ｂは、β−アラニンサブユニットである。
【０３５３】
上記のようなペプチド輸送部分は、付着した輸送部分の非存在下でのオリゴマーの取込
みと比べて、および疎水性サブユニットＹ’を欠いている付着した輸送部分による取込み
と比べて、付着したオリゴマーの細胞侵入を大いに増強することが示されてきた。このよ
うな増強された取込みは、疎水性サブユニットＹ’を欠いている付着した輸送部分による
薬剤の取込みと比べて、哺乳動物細胞中への化合物の取込みにおける少なくとも２倍の増
大、または他の実施形態において、４倍の増大によって証明され得る。いくつかの実施形
態において、取込みは、結合体化されていない化合物と比べて、少なくとも２０倍または
少なくとも４０倍増強される。
【０３５４】
ペプチド輸送部分のさらなる利益は、アンチセンスオリゴマーとその標的核酸配列との
間の二重鎖を安定化させるその予想される能力である。理論に束縛されるものではないが
、二重鎖を安定化させるこの能力は、正に荷電している輸送部分と負に荷電している核酸
との間の静電相互作用に起因し得る。いくつかの実施形態において、多すぎる数の荷電し
ているサブユニットは配列特異性の低減をもたらし得るため、輸送体中の荷電しているサ
ブユニットの数は、上で述べたように１４未満であるか、または他の実施形態において、
８〜１１である。
【０３５５】
本開示はまた、ペプチド輸送部分および核酸類似体の結合体を組み込む。上で述べたよ
うに、ペプチド輸送部分は一般に、核酸類似体の細胞透過を増強するのに有効である。核
酸類似体とペプチド輸送部分の残りとの間にグリシン（Ｇ）またはプロリン（Ｐ）アミノ
酸サブユニットを含むこと（例えば、担体ペプチドのカルボキシまたはアミノ末端におい
て）は、結合体の毒性を低減させ、一方、有効性は、ペプチド輸送部分と核酸類似体との
間に異なる連結を有する結合体と比べて、同じままであるか、または改善されることを出
願人等はまた発見した。このように、現在開示されている結合体はより良好な治療ウィン
ドウを有し、他のペプチド−オリゴマー結合体より有望な薬物候補である。
【０３５６】
毒性を低減させることに加えて、核酸類似体と担体ペプチドとの間のグリシンまたはプ
ロリンアミノ酸サブユニットの存在は、さらなる利点を提供すると考えられる。例えば、
グリシンは安価であり、ラセミ化の可能性を伴わずに核酸類似体（または、任意選択のリ
ンカー）に容易にカップリングする。同様に、プロリンは、ラセミ化を伴わずに容易にカ
ップリングし、またヘリックス形成剤ではない担体ペプチドを提供する。プロリンの疎水
性はまた、細胞の脂質二重層との担体ペプチドの相互作用に関して特定の利点を与え得、
複数のプロリンを含む担体ペプチド（例えば、特定の実施形態において）は、Ｇ−四重体
形成に抵抗し得る。最終的に、特定の実施形態において、プロリン部分がアルギニンアミ
ノ酸サブユニットに隣接しているとき、アルギニン（ａｒｇｉｎｅ）−プロリンアミド結
合が一般のエンドペプチダーゼによって切断可能でないため、プロリン部分は、結合体に
対して代謝安定性を与える。
【０３５７】
いくつかの実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドへのペプチドの結合体
化は、参照によりその全体が組み込まれているＰＣＴ公開ＷＯ２０１２／１１５０９６０
に記載の通りである。特定の実施形態において、例えば、ペプチドが結合体化したオリゴ
ヌクレオチドは、ＣＰＰとアンチセンスオリゴヌクレオチドとの間のリンカーとしてグリ
シンを利用する。例えば、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、アルギニンに富
んだペプチド、例えば、（Ａｒｇ）６Ｇｌｙ（オリゴヌクレオチドに連結している６つの
アルギニンおよび１つのグリシン）にカップリングすることができる。一例として、この
ペプチドはＰＭＯに結合体化することができ、「Ｒ６−Ｇ−ＰＭＯ」として公知である。
【０３５８】
様々なリンカー（Ｃ、Ｇ、Ｐ、Ａｈｘ、Ｂ）を含むさらなる例示的なアルギニンに富ん
だ細胞透過性ペプチド輸送体を、下記の表５において示す。上記の表２において開示する
ように、好ましい細胞透過性ペプチド輸送体は、グリシンリンカー（Ｒ６Ｇ）を介して３
’末端においてＰＭＯに結合体化している配列番号４５である。５’末端へのＲ６Ｇの連
結はまた、好ましい一実施形態である。
【０３５９】
【表５】
2019172691.tif 000066
【０３６０】
使用の方法および医薬製剤
本発明は、その必要がある被験体に本明細書に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド
、またはこれを含有する医薬組成物を投与することによって、被験体において早老性疾患
、例えば、ラミノパシーおよび関連する疾患または状態を処置するための方法に関し、オ
リゴヌクレオチドは、ＬＭＮＡプレｍＲＮＡのスプライシングをモジュレートすることに
よって、変異体ＬＭＮＡタンパク質ｍＲＮＡの発現を阻害する。特定の態様において、例
えば、これらおよび関連する方法は、プロジェリン発現が疾患、例えば、ＨＧＰＳと関連
する臨床状況における早老性ラミノパシーの処置に適用することができる。これらおよび
関連する実施形態はまた、本発明の方法を他の処置と共に併行的または逐次的に行うこと
によって、早老性ラミノパシーを処置または低減させる方法と合わせることができる。
【０３６１】
本明細書に記載されている結果は、早老性ラミノパシーを超えて、老化プロセスならび
に関連する状態および疾患に一般化することができる。これは、ＨＧＰＳが、多くの観点
において、通常の加齢プロセスと密接に結び付いているからである。ＨＧＰＳは、加齢の
有用なモデルとして認識され続けている（Ｆｏｓｓｅｌ，  Ｊ．、Ｐｅｄｉａｔｒ  Ｅｎ
ｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ、１３巻、補遺６：１４７７〜１４８１頁、２０００年）
。例えば、特に、冠動脈の、アテローム性動脈硬化症との関係は、非常に強力である。さ
らに、ＨＧＰＳにおける脱毛症は、高齢の被験体において見られるものと同様である。さ
らに、ＨＧＰＳの主な細胞の特色は、何年も前にＨａｙｆｌｉｃｋおよびその他によって
記載されたように（Ｈａｙｆｌｉｃｋ、Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ、２９５巻：１３０２
〜１３０８頁、１９７６年）、早期の細胞の老化である。ＨＧＰＳ線維芽細胞における限
定された数の細胞分裂は、高齢の個体に由来する線維芽細胞において見られるものと同様
である。これは、ＨＧＰＳ線維芽細胞および高齢の人に由来する線維芽細胞の遺伝子発現
パターンにおける類似性を示し、これらをより若い人に由来する線維芽細胞から区別する
研究によってさらに探究された（Ｌｙら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２８７巻：２４８６〜２４９
２頁、２０００年）。
【０３６２】
したがって、本明細書に記載の早老性疾患または関連する状態を処置するための方法は
、早老性ラミノパシー、例えば、ＨＧＰＳ、または別の早老性疾患もしくは状態、年齢に
関連する状態、心血管疾患もしくは状態（例えば、アテローム性動脈硬化症）などの処置
を含むことができることが理解される。
【０３６３】
本発明の方法を使用した有効なインビボの処置レジメンは、オリゴヌクレオチドの投与
の持続期間、用量、頻度および経路、ならびに処置を受けている被験体の状態によって変
化し得ることが理解される（すなわち、予防的投与に対して現存する状態に応じた投与）
。したがって、このようなインビボの治療は、処置を受けている特定のタイプの疾患に適
当な試験によるモニタリング、および最適な治療成績を達成するための用量または処置レ
ジメンにおける対応する調節を必要とすることが多い。
【０３６４】
特定の実施形態において、本発明の方法は、本明細書に記載のアンチセンスオリゴマー
の治療的送達に適した製剤または組成物を用いる。したがって、特定の実施形態において
、本発明の方法は、１種または複数種の薬学的に許容される担体（添加物）および／また
は希釈剤と一緒に製剤した、治療有効量の１つまたは複数の本明細書に記載されているオ
リゴマーまたは薬剤を含む薬学的に許容される組成物を用いる。本発明のオリゴマーを単
独で投与することは可能である一方、化合物を医薬製剤（組成物）として投与することが
好ましい。
【０３６５】
核酸分子の送達のための方法は、例えば、Ａｋｈｔａｒら、１９９２年、Ｔｒｅｎｄｓ
Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏ．、２巻：１３９頁；およびＤｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｔｒａｔｅｇｉｅ
ｓ  ｆｏｒ  Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕ
ｔｉｃｓ、ｅｄ．  Ａｋｈｔａｒ、Ｓｕｌｌｉｖａｎら、ＰＣＴ  ＷＯ９４／０２５９５
に記載されている。これらおよび他のプロトコルは、本発明の単離したオリゴマーを含め
た実際上任意の核酸分子の送達のために利用することができる。
【０３６６】
下記で詳述するように、本発明の方法において使用される医薬組成物は、下記のために
適合されたものを含めた、固体または液体形態での投与のために特別に製剤され得る：（
１）経口投与、例えば、水薬（水性または非水性の液剤または懸濁剤）、錠剤、例えば、
口腔、舌下、および全身的吸収を標的としたもの、ボーラス、散剤、顆粒剤、舌への適用
のためのペースト剤；（２）非経口投与、例えば、皮下、筋内、静脈内もしくは硬膜外注
射による、例えば、無菌液剤もしくは懸濁剤、または持続放出製剤として；（３）局所適
用、例えば、皮膚に適用するクリーム剤、軟膏剤、または制御放出パッチまたはスプレー
剤として；（４）膣内または直腸内、例えば、ペッサリー、クリーム剤またはフォーム剤
として；（５）舌下；（６）目；（７）経皮的；あるいは（８）経鼻。
【０３６７】
「薬学的に許容される」という語句は、本明細書において、合理的な利益／リスク比と
釣り合った、過剰な毒性も刺激もアレルギー反応も他の問題も合併症も伴わない、妥当な
医学的判断の範囲内で、人間および動物の組織と接触させる使用に適した化合物、材料、
組成物、および／または剤形を指すために用いられる。
【０３６８】
「薬学的に許容される担体」という語句は、本明細書において使用する場合、体の１つ
の器官または一部から、体の別の器官または一部に対象化合物を運搬または輸送すること
に関与する、薬学的に許容される材料、組成物またはビヒクル、例えば、液体または固体
充填剤、希釈剤、賦形剤、製造助剤（例えば、滑沢剤、タルクマグネシウム、ステアリン
酸カルシウムもしくはステアリン酸亜鉛、もしくはステアリン酸（ｓｔｅｒｉｃ  ａｃｉ
ｄ））、または溶媒封入材料を意味する。各担体は、製剤の他の成分と適合性であり、患
者に対して傷害性でないという意味で「許容され」なくてはならない。
【０３６９】
薬学的に許容される担体としての役割を果たすことができる材料のいくつかの例には、
これらに限定されないが、（１）糖、例えば、ラクトース、グルコースおよびスクロース
；（２）デンプン、例えば、トウモロコシデンプンおよびバレイショデンプン；（３）セ
ルロース、およびその誘導体、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチル
セルロースおよび酢酸セルロース；（４）トラガカント粉末；（５）麦芽；（６）ゼラチ
ン；（７）タルク；（８）賦形剤、例えば、カカオバターおよび坐剤ろう；（９）油、例
えば、ピーナッツ油、綿実油、サフラワー油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油およ
びダイズ油；（１０）グリコール、例えば、プロピレングリコール；（１１）ポリオール
、例えば、グリセリン、ソルビトール、マンニトールおよびポリエチレングリコール；（
１２）エステル、例えば、オレイン酸エチルおよびラウリン酸エチル；（１３）寒天；（
１４）緩衝剤、例えば、水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウム；（１５）アルギ
ン酸；（１６）発熱物質を含まない水；（１７）等張食塩水；（１８）リンゲル液；（１
９）エチルアルコール；（２０）ｐＨ緩衝化溶液；（２１）ポリエステル、ポリカーボネ
ートおよび／またはポリ無水物；ならびに（２２）医薬製剤中で用いられる他の無毒性の
適合性物質が含まれる。
【０３７０】
本発明のアンチセンスオリゴマーを有する製剤に適した薬剤のさらなる非限定的例には
、ＰＥＧが結合体化された核酸、リン脂質が結合体化された核酸、親油性部分を含有する
核酸、ホスホロチオエート、様々な組織中への薬物の侵入を増強することができるＰ糖タ
ンパク質阻害剤（例えば、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｐ８５）；生分解性ポリマー、例えば、埋
込み後の持続放出送達のためのポリ（ＤＬ−ラクチド−ｃｏグリコリド）ミクロスフィア
（Ｅｍｅｒｉｃｈ，  ＤＦら、１９９９年、Ｃｅｌｌ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ、８巻、４
７〜５８頁）Ａｌｋｅｒｍｅｓ、Ｉｎｃ．Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、Ｍａｓｓ．；および負荷
されたナノ粒子、例えば、血液脳関門を越えて薬物を送達することができ、かつニューロ
ン取込み機構を変化させることができる、ポリブチルシアノアクリレートでできたもの（
Ｐｒｏｇ  Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｂｉｏｌ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒ
ｙ、２３巻、９４１〜９４９頁、１９９９年）が含まれる。
【０３７１】
本発明の方法はまた、ポリ（エチレングリコール）脂質を含有する表面修飾されたリポ
ソーム（ＰＥＧ−修飾された分岐状および非分岐状のもの、もしくはこれらの組合せ、ま
たは長期循環リポソームもしくはステルスリポソーム）を含む組成物の使用を特徴とする
。本発明のオリゴマーはまた、様々な分子量の共有結合的に付着したＰＥＧ分子を含むこ
とができる。これらの製剤は、標的組織における薬物の蓄積を増大させるための方法を提
供する。このクラスの薬物担体は、単核食細胞系（ＭＰＳまたはＲＥＳ）によるオプソニ
ン化および排除に抵抗し、それによってカプセル化された薬物についてより長い血液循環
時間および組織曝露の増強を可能とする（Ｌａｓｉｃら、Ｃｈｅｍ．  Ｒｅｖ．、１９９
５年、９５巻、２６０１〜２６２７頁；Ｉｓｈｉｗａｔａら、Ｃｈｅｍ．  Ｐｈａｒｍ．
Ｂｕｌｌ．、１９９５年、４３巻、１００５〜１０１１頁）。このようなリポソームは
、おそらく血管新生された標的組織における血管外漏出および捕獲によって、腫瘍におい
て選択的に蓄積することが示されてきた（Ｌａｓｉｃら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、１９９５年、
２６７巻、１２７５〜１２７６頁；Ｏｋｕら、１９９５年、Ｂｉｏｃｈｉｍ．  Ｂｉｏｐ
ｈｙｓ．  Ａｃｔａ、１２３８巻、８６〜９０頁）。長期循環リポソームは、特に、ＭＰ
Ｓの組織において蓄積することが公知である従来のカチオン性リポソームと比較して、Ｄ
ＮＡおよびＲＮＡの薬物動態および薬力学を増強する（Ｌｉｕら、Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃ
ｈｅｍ．、１９９５年、４２巻、２４８６４〜２４８７０頁；Ｃｈｏｉら、国際ＰＣＴ出
願第ＷＯ９６／１０３９１号；Ａｎｓｅｌｌら、国際ＰＣＴ出願第ＷＯ９６／１０３９０
号；Ｈｏｌｌａｎｄら、国際ＰＣＴ出願第ＷＯ９６／１０３９２号）。長期循環リポソー
ムはまた、代謝的に活発なＭＰＳ組織、例えば、肝臓および脾臓における蓄積を回避する
これらの能力に基づいて、カチオン性リポソームと比較してより大きな程度まで薬物をヌ
クレアーゼ分解から保護する可能性が高い。
【０３７２】
さらなる実施形態において、本発明の方法は、米国特許第６，６９２，９１１号、同第
７，１６３，６９５号および同第７，０７０，８０７号において記載されるような、送達
のために調製されるオリゴマー組成物を含む。これに関しては、一実施形態において、本
発明は、米国特許第７，１６３，６９５号、同第７，０７０，８０７号、および同第６，
６９２，９１１号において記載されているような、単独での、あるいはＰＥＧ（例えば、
分岐状もしくは非分岐状ＰＥＧ、または両方の混合物）と組み合わせた、ＰＥＧおよび標
的化部分と組み合わせた、あるいは架橋剤と組み合わせた上記のいずれかと組み合わせた
、リシンおよびヒスチジン（ＨＫ）のコポリマーを含む組成物中の本発明のオリゴマーを
提供する。特定の実施形態において、本発明は、グルコン酸で修飾されたポリヒスチジン
またはグルコニル化（ｇｌｕｃｏｎｙｌａｔｅｄ）−ポリヒスチジン／トランスフェリン
−ポリリシンを含む組成物中のアンチセンスオリゴマーを提供する。当業者はまた、Ｈｉ
ｓおよびＬｙｓと同様の特性を有するアミノ酸が、組成物内で置換され得ることを認識す
る。
【０３７３】
特定の方法において、本明細書に記載されているオリゴマーは、塩基性官能基、例えば
、アミノまたはアルキルアミノを含有してもよく、このように、薬学的に許容される酸と
共に薬学的に許容される塩を形成することができる。「薬学的に許容される塩」という用
語は、この点において、本発明の化合物の比較的毒性のない無機および有機の酸付加塩を
指す。これらの塩は、投与ビヒクルまたは剤形製造工程においてインサイチュで調製する
ことができ、あるいはその遊離塩基の形態の精製した本発明の化合物と適切な有機酸また
は無機酸とを別々に反応させ、それに続く精製の間にこのように形成された塩を単離する
ことによって調製することができる。代表的な塩には、臭化水素酸塩、塩酸塩、硫酸塩、
硫酸水素塩、リン酸塩、硝酸塩、酢酸塩、吉草酸塩、オレイン酸塩、パルミチン酸塩、ス
テアリン酸塩、ラウリン酸塩、安息香酸塩、乳酸塩、リン酸塩、トシル酸塩、クエン酸塩
、マレイン酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、ナプシル酸（ｎａｐｔｈｙｌａｔ
ｅ）、メシル酸塩、グルコヘプトン酸塩、ラクトビオン酸塩、およびラウリルスルホン酸
塩などが含まれる（例えば、Ｂｅｒｇｅら（１９７７年）「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａ
ｌ  Ｓａｌｔｓ」、Ｊ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｓｃｉ．、６６巻：１〜１９頁を参照されたい
）。
【０３７４】
対象オリゴマーの薬学的に許容される塩には、例えば、無毒性の有機酸または無機酸か
らの、化合物の従来の無毒性塩または第四級アンモニウム塩が含まれる。例えば、このよ
うな従来の無毒性塩には、無機酸、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、スルファミン酸、
リン酸、硝酸などに由来するもの；および有機酸、例えば、酢酸、プロピオン酸、コハク
酸、グリコール酸、ステアリン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸
、パルミチン酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、フェニル酢酸、グルタミン酸、安
息香酸、サリチル酸（ｓａｌｉｃｙｃｌｉｃ）、スルファニル酸、２−アセトキシ安息香
酸、フマル酸、トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、エタンジスルホン酸、シュウ酸
、イセチオン酸（ｉｓｏｔｈｉｏｎｉｃ）などから調製された塩が含まれる。
【０３７５】
特定の方法において、本発明のオリゴマーは、１つまたは複数の酸性官能基を含有して
もよく、したがって薬学的に許容される塩基と薬学的に許容される塩を形成することがで
きる。「薬学的に許容される塩」という用語は、これらの場合、本発明の化合物の比較的
毒性のない無機および有機の塩基付加塩を指す。これらの塩は同様に、投与ビヒクルまた
は剤形製造工程においてインサイチュで調製することができ、あるいはその遊離酸の形態
の精製した化合物と、適切な塩基、例えば、薬学的に許容される金属カチオンの水酸化物
、炭酸塩または炭酸水素塩とを、アンモニアとを、または薬学的に許容される有機第一級
、第二級もしくは第三級アミンとを別々に反応させることによって調製することができる
。代表的なアルカリ塩またはアルカリ土類塩には、リチウム塩、ナトリウム塩、カリウム
塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、およびアルミニウム塩などが含まれる。塩基付加塩
の形成のために有用な代表的な有機アミンには、エチルアミン、ジエチルアミン、エチレ
ンジアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、ピペラジンなどが含まれる（例え
ば、Ｂｅｒｇｅら、上述を参照されたい）。
【０３７６】
湿潤剤、乳化剤および滑沢剤、例えば、ラウリル硫酸ナトリウムおよびステアリン酸マ
グネシウム、ならびに着色剤、離型剤、コーティング剤、甘味剤、矯味矯臭剤および香料
、保存剤および抗酸化剤はまた、組成物中に存在することができる。
【０３７７】
薬学的に許容される抗酸化剤の例には、（１）水溶性抗酸化剤、例えば、アスコルビン
酸、塩酸システイン、硫酸水素ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウム
など；（２）油溶性抗酸化剤、例えば、パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシ
アニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、レシチン、没食子酸プ
ロピル、α−トコフェロールなど；および（３）金属キレート剤、例えば、クエン酸、エ
チレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ソルビトール、酒石酸、リン酸などが含まれる。
【０３７８】
本発明の本方法において使用される製剤には、経口、経鼻、局所（口腔および舌下を含
めた）、直腸、膣および／または非経口投与に適したものが含まれる。製剤は、単位剤形
で好都合に提示し得、製剤分野で周知の任意の方法によって調製し得る。単一の剤形を生
成するために担体材料と合わせることができる活性成分の量は、処置されている宿主、特
定の投与モードによって変化する。単一の剤形を生成するために担体材料と合わせること
ができる活性成分の量は一般に、治療効果を生じさせる化合物の量である。一般に、１０
０パーセントの内、この量は、約０．１パーセント〜約９９パーセントの活性成分、好ま
しくは、約５パーセント〜約７０パーセント、最も好ましくは、約１０パーセント〜約３
０パーセントの範囲である。
【０３７９】
特定の実施形態において、本発明の方法において使用される製剤は、シクロデキストリ
ン、セルロース、リポソーム、ミセル形成剤、例えば、胆汁酸、およびポリマー担体、例
えば、ポリエステルおよびポリ無水物から選択される賦形剤；ならびに本発明のオリゴマ
ーを含む。特定の実施形態において、上記の製剤は、本発明の経口的に生物が利用可能な
オリゴマーを与える。
【０３８０】
これらの製剤または組成物を調製する方法は、本発明のオリゴマーを、担体、および任
意選択で、１種または複数種の補助成分と合わせるステップを含む。一般に、製剤は、本
発明の化合物と、液体担体、または微粉化した固体担体、または両方とを、均質および密
接に合わせ、次いで必要に応じて、生成物を成形することによって調製される。
【０３８１】
経口投与に適した本発明において使用される製剤は、それぞれが、活性成分として所定
の量の本発明の化合物を含有する、カプセル剤、カシェ剤、丸剤、錠剤、ロゼンジ剤（香
味を付けた基剤、通常、スクロースおよびアカシアまたはトラガカントを使用した）、散
剤、顆粒剤の形態、あるいは水性もしくは非水性液体中の液剤または懸濁剤として、ある
いは水中油型もしくは油中水型液体乳剤として、あるいはエリキシル剤またはシロップ剤
として、あるいは香錠（不活性な基剤、例えば、ゼラチンおよびグリセリン、またはスク
ロースおよびアカシアを使用した）として、ならびに／あるいは口内洗浄剤などとしてで
よい。本発明のオリゴマーはまた、ボーラス、舐剤またはペースト剤として投与し得る。
【０３８２】
経口投与のために本発明において使用される固体剤形（カプセル剤、錠剤、丸剤、糖衣
錠、散剤、顆粒剤、トローチ剤（ｔｒｏｕｃｈｅｓ）など）において、活性成分は、１種
または複数種の薬学的に許容される担体、例えば、クエン酸ナトリウムまたはリン酸二カ
ルシウム、ならびに／あるいは下記のいずれか：（１）充填剤または増量剤（ｅｘｔｅｎ
ｄｅｒ）、例えば、デンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール、お
よび／またはケイ酸；（２）結合剤、例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギネー
ト、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロースおよび／またはアカシア；（３）保湿
剤（ｈｕｍｅｃｔａｎｔ）、例えば、グリセロール；（４）崩壊剤、例えば、寒天、炭酸
カルシウム、ジャガイモまたはタピオカデンプン、アルギン酸、特定のシリケート、およ
び炭酸ナトリウム；（５）溶解遅延剤、例えば、パラフィン；（６）吸収促進剤、例えば
、第四級アンモニウム化合物および界面活性剤、例えば、ポロキサマーおよびラウリル硫
酸ナトリウム；（７）湿潤剤、例えば、セチルアルコール、モノステアリン酸グリセロー
ル、および非イオン性界面活性剤；（８）吸収剤、例えば、カオリンおよびベントナイト
クレイ；（９）滑沢剤、例えば、タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネ
シウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸亜鉛、ス
テアリン酸ナトリウム、ステアリン酸、およびこれらの混合物；（１０）着色剤；ならび
に（１１）制御放出剤、例えば、クロスポビドンまたはエチルセルロースと混合され得る
。カプセル剤、錠剤および丸剤の場合、医薬組成物はまた、緩衝剤を含み得る。同様のタ
イプの固体組成物はまた、ラクトースまたは乳糖などの賦形剤、および高分子量ポリエチ
レングリコールなどを使用して、ソフトおよびハードシェルのゼラチンカプセル中の充填
剤として用い得る。
【０３８３】
錠剤は、任意選択で１種または複数種の補助成分と共に、圧縮または成形によって作製
し得る。圧縮錠剤は、結合剤（例えば、ゼラチンまたはヒドロキシプロピルメチルセルロ
ース）、滑沢剤、不活性な希釈剤、保存剤、崩壊剤（例えば、デンプングリコール酸ナト
リウムまたは架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム）、表面活性剤または分散化剤
を使用して調製し得る。成形錠剤は、適切な機械において不活性な液体希釈剤で湿らせた
粉末化した化合物の混合物を成形することによって作製し得る。
【０３８４】
本発明によって使用される医薬組成物の錠剤、および他の固体剤形、例えば、糖衣錠、
カプセル剤、丸剤および顆粒剤は、コーティングおよびシェル、例えば、腸溶性コーティ
ング、および医薬製剤の技術分野において周知の他のコーティングと共に任意選択で刻み
目を付け、または調製し得る。これらはまた、例えば、所望の放出プロファイルを提供す
るために変化する割合のヒドロキシプロピルメチルセルロース、他のポリマーマトリック
ス、リポソームおよび／またはミクロスフィアを使用して、その中の活性成分の緩徐な放
出または制御放出を提供するために製剤し得る。これらは、急速放出のために製剤し得る
（例えば、凍結乾燥）。これらは、例えば、細菌保持フィルターを通した濾過によって、
または滅菌水もしくはいくつかの他の無菌の注射用媒体に使用の直前に溶解させることが
できる無菌の固体組成物の形態の滅菌剤を組み込むことによって無菌化し得る。これらの
組成物はまた、乳白剤を任意選択で含有してもよく、これらが、任意選択で遅延された様
式で、胃腸管の特定の部分において活性成分（複数可）のみまたはそれを優先的に放出す
る組成であり得る。使用することができる包埋組成物の例には、ポリマー物質およびろう
が含まれる。活性成分はまた、適切な場合、上記の賦形剤の１つまたは複数を有するマイ
クロカプセル化された形態でよい。
【０３８５】
本発明の化合物の経口投与のための液体剤形には、薬学的に許容される乳剤、マイクロ
乳剤、液剤、懸濁剤、シロップ剤およびエリキシル剤が含まれる。活性成分に加えて、液
体剤形は、当技術分野で通常使用される不活性な希釈剤、例えば、水または他の溶媒、可
溶化剤および乳化剤、例えば、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル
、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３
−ブチレングリコール、油（特に、綿実油、ラッカセイ油、トウモロコシ油、胚芽油、オ
リーブ油、ヒマシ油およびゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフリルアルコール、ポ
リエチレングリコール、およびソルビタンの脂肪酸エステル、ならびにこれらの混合物を
含有し得る。
【０３８６】
不活性な希釈剤に加えて、経口組成物はまた、佐剤、例えば、湿潤剤、乳化剤および懸
濁化剤、甘味剤、矯味矯臭剤、着色剤、香料および保存剤を含むことができる。
【０３８７】
懸濁剤は、活性化合物に加えて、例えば、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリ
オキシエチレンソルビトールおよびソルビタンエステル、微結晶性セルロース、メタ水酸
化アルミニウム、ベントナイト、寒天およびトラガカント、ならびにこれらの混合物とし
て、懸濁化剤を含有し得る。
【０３８８】
直腸または膣投与のための製剤は、１種または複数種の本発明の化合物と、例えば、カ
カオバター、ポリエチレングリコール、坐剤ろうまたはサリチレートを含む１種または複
数種の適切な非刺激性の賦形剤または担体とを混合することによって調製してもよく、か
つ室温で固体であるが体温で液体であり、したがって、直腸または膣腔内で融解して活性
化合物を放出する、坐剤として提示し得る。
【０３８９】
本明細書において提供するようなオリゴマーの局所または経皮的投与のための製剤また
は剤形には、散剤、スプレー剤、軟膏剤、ペースト剤、クリーム剤、ローション剤、ゲル
剤、液剤、パッチおよび吸入剤が含まれる。活性オリゴマーは、無菌条件下にて、薬学的
に許容される担体と、および必要とし得る任意の保存剤、緩衝液、または噴霧体と混合し
得る。軟膏剤、ペースト剤、クリーム剤およびゲル剤は、本発明の活性化合物に加えて、
賦形剤、例えば、動物性および植物性脂肪、油、ろう、パラフィン、デンプン、トラガカ
ント、セルロース誘導体、ポリエチレングリコール、シリコーン、ベントナイト、ケイ酸
、タルクならびに酸化亜鉛、またはこれらの混合物を含有し得る。
【０３９０】
散剤およびスプレー剤は、本発明のオリゴマーに加えて、賦形剤、例えば、ラクトース
、タルク、ケイ酸、水酸化アルミニウム、ケイ酸カルシウムおよびポリアミド粉末、また
はこれらの物質の混合物を含有することができる。スプレー剤は、通例の噴霧体、例えば
、クロロフルオロ炭化水素および揮発性非置換炭化水素、例えば、ブタンおよびプロパン
をさらに含有することができる。
【０３９１】
経皮パッチは、体への本発明のオリゴマーの制御された送達を提供するさらなる利点を
有する。このような剤形は、オリゴマーを適当な媒体に溶解または分散させることによっ
て作製することができる。吸収増強剤をまた使用して、皮膚を横切る薬剤のフラックスを
増大させることができる。このようなフラックスの速度は、当技術分野において公知の他
の方法の中で、速度制御膜を提供することによって、または薬剤をポリマーマトリックス
もしくはゲルに分散させることによって制御することができる。
【０３９２】
非経口投与に適した医薬組成物は、糖、アルコール、抗酸化剤、緩衝液、静菌剤、製剤
を意図するレシピエントの血液と等張とする溶質、または懸濁化剤もしくは増粘剤（ｔｈ
ｉｃｋｅｎｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）を含有し得る、１種または複数種の薬学的に許容される
無菌等張性の水性液剤もしくは非水性液剤、分散剤、懸濁剤または乳剤、あるいは使用の
直前に無菌の注射用溶液または分散剤に再構成し得る無菌の粉末と組み合わせて、１種ま
たは複数種の本発明のオリゴマーを含有し得る。本発明の医薬組成物において用い得る適
切な水性および非水性担体の例には、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロー
ル、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど）、および適切なこれらの混合
物、植物性油、例えば、オリーブ油、および注射用有機エステル、例えば、オレイン酸エ
チルが含まれる。例えば、コーティング材料、例えば、レシチンの使用によって、分散剤
の場合は必要とされる粒径を維持することによって、および界面活性剤の使用によって、
適当な流動性を維持することができる。
【０３９３】
これらの組成物はまた、佐剤、例えば、保存剤、湿潤剤、乳化剤および分散化剤を含有
し得る。対象オリゴマーに対する微生物の作用の防止は、様々な抗菌剤および抗真菌剤、
例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノールソルビン酸などを含むことによって確
実にし得る。組成物中に等張剤、例えば、糖、塩化ナトリウムなどを含むことがまた望ま
しくあり得る。さらに、注射用医薬形態の延長された吸収は、吸収を遅延させる薬剤、例
えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンを含むことによってもたらし得る。
【０３９４】
場合によっては、薬物の効果を延長させるために、皮下注射または筋肉内注射からの薬
物の吸収を遅らせることが望ましい。これは、当技術分野において公知の他の方法の中で
も、水溶性が乏しい結晶性またはアモルファス材料の液体懸濁液を使用することによって
達成し得る。そして薬物の吸収の速度は溶解のその速度によって決まり、これはまた、結
晶サイズおよび結晶形態によって決まり得る。代わりに、非経口的に投与された薬物形態
の吸収の遅延は、油性ビヒクルに薬物を溶解または懸濁させることによって達成される。
【０３９５】
注射用デポー形態は、生分解性ポリマー、例えば、ポリラクチド−ポリグリコリド中で
対象オリゴマーのマイクロカプセル化マトリックスを形成させることによって作製し得る
。オリゴマーとポリマーの比、および用いる特定のポリマーの性質によって、オリゴマー
放出の速度を制御することができる。他の生分解性ポリマーの例には、ポリ（オルトエス
テル）およびポリ（無水物）が含まれる。デポー注射用製剤はまた、身体組織と適合性で
あるリポソームまたはマイクロ乳剤中に薬物を捕捉することによって調製し得る。
【０３９６】
本発明のオリゴマーが医薬としてヒトおよび動物に投与されるとき、これらはそれ自体
で、または薬学的に許容される担体と組み合わせて、例えば、０．１〜９９％（より好ま
しくは、１０〜３０％）の活性成分を含有する医薬組成物として与えることができる。
【０３９７】
上で述べたように、本発明において使用される製剤または調製物は、経口的、非経口的
、局所的、または直腸に与え得る。これらは典型的には、それぞれの投与経路に適した形
態で与えられる。例えば、これらは、錠剤またはカプセル剤形態で、注射、吸入、眼用ロ
ーション剤（ｅｙｅ  ｌｏｔｉｏｎ）、軟膏剤、坐剤などによる、注射、注入または吸入
による投与；ローション剤または軟膏剤による局所；および坐剤による直腸で投与される
。
【０３９８】
「非経口投与」および「非経口的に投与された」という語句は、本明細書において使用
する場合、通常、注射による、経腸および局所投与以外の投与モードを意味し、これらに
限定されないが、静脈内、筋内、動脈内、くも膜下腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、
腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、くも膜下、脊髄内および胸骨内注射お
よび注入が含まれる。
【０３９９】
「全身投与」、「全身的に投与された」、「末梢投与」および「末梢的に投与された」
という語句は、本明細書において使用する場合、中枢神経系中への直接の投与以外の、化
合物、薬物または他の材料が患者の系に入り、したがって代謝および他の同様のプロセス
に供されるような、化合物、薬物または他の材料の投与、例えば、皮下投与を意味する。
【０４００】
選択した投与経路に関わらず、適切な水和形態で使用し得る本発明において使用される
オリゴマー、および／または本発明の医薬組成物は、当業者に公知の従来の方法によって
薬学的に許容される剤形に製剤し得る。本発明の医薬組成物中の活性成分の実際の投与量
レベルは、患者に対して受容できないほど毒性であることを伴わずに、特定の患者、組成
物、および投与モードについて所望の治療反応を達成するのに有効な活性成分の量を得る
ために変化し得る。
【０４０１】
選択した投与量レベルは、用いられる本発明の特定のオリゴマー、またはそのエステル
、塩もしくはアミドの活性、投与経路、投与の時間、用いられる特定のオリゴマーの排泄
または代謝の速度、吸収の速度および程度、処置の持続期間、用いられる特定のオリゴマ
ーと組み合わせて使用される他の薬物、化合物および／または材料、処置される患者の年
齢、性別、体重、状態、身体全体の健康および従前の病歴、ならびに医学の技術分野にお
いて周知の同様の要因を含めた種々の要因によって決まる。
【０４０２】
当技術分野で通常の技量を有する医師または獣医師は、必要とされる医薬組成物の有効
量を容易に決定および処方することができる。例えば、医師または獣医師は、所望の治療
効果を達成するために必要とされるよりも低いレベルで医薬組成物中に用いられる本発明
の化合物の用量を開始し、所望の効果が達成されるまで投与量を徐々に増大させることが
できる。一般に、本発明の化合物の適切な１日用量は、治療効果を生じさせるのに有効な
最も低い用量である化合物の量である。このような有効用量は一般に、上記の要因によっ
て決まる。一般に、患者のための本発明の化合物の経口、静脈内、脳室内（ｉｎｔｒａｃ
ｅｒｅｂｒｏｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ）および皮下用量は、示される効果のために使用さ
れるとき、１日当たり体重１キログラム毎に約０．０００１〜約１００ｍｇの範囲である
。
【０４０３】
所望される場合、活性化合物の有効な１日用量は、任意選択で単位剤形にて、１日を通
して適当な間隔で別々に投与される、２つ、３つ、４つ、５つ、６つまたはそれを超える
部分用量として投与し得る。特定の状況において、投薬は、１日毎に１回の投与である。
特定の実施形態において、投薬は、必要に応じ、所望の状態を処置するための、２日毎、
３日毎、４日毎、５日毎、６日毎、７日毎、８日毎、９日毎、１０日毎、１１日毎、１２
日毎、１３日毎、１４日毎、または１週間毎、２週間毎、３週間毎、４週間毎、５週間毎
、６週間毎、７週間毎、８週間毎、９週間毎、１０週間毎、１１週間毎、１２週間毎、ま
たは１カ月毎、２カ月毎、３カ月毎、４カ月毎、５カ月毎、６カ月毎、７カ月毎、８カ月
毎、９カ月毎、１０カ月毎、１１カ月毎、１２カ月毎に１回または複数回の投与である。
【０４０４】
アンチセンス分子は、これらに制限されないが、本明細書に記載され、当技術分野にお
いて公知のような、リポソーム中へのカプセル化、イオン導入による、または他のビヒク
ル、例えば、ヒドロゲル、シクロデキストリン、生分解性ナノカプセル、および生体付着
性ミクロスフィア中への組込みによるものを含めて、当業者には公知の種々の方法によっ
て細胞に投与することができる。特定の実施形態において、マイクロ乳化技術を利用して
、親油性（水不溶性）医薬品のバイオアベイラビリティーを改善し得る。例には、トリメ
トリン（Ｔｒｉｍｅｔｒｉｎｅ）（Ｄｏｒｄｕｎｏｏ，  Ｓ．  Ｋ．ら、Ｄｒｕｇ  Ｄｅ
ｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ａｎｄ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、１７頁（１２
号）、１６８５〜１７１３頁、１９９１年およびＲＥＶ５９０１（Ｓｈｅｅｎ，  Ｐ．  
Ｃ．ら、Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ、８０巻（７号）、７１２〜７１４頁、１９９１年）が
含まれる。様々な利益のなかでもとりわけ、マイクロ乳化は、吸収を循環器系の代わりに
リンパ系に優先的に向けることによって増強されたバイオアベイラビリティーを実現し、
これによって肝臓を迂回し、肝胆道循環における化合物の破壊を防止する。
【０４０５】
本発明の一態様において、製剤は、本明細書において提供するようなオリゴマーおよび
少なくとも１種の両親媒性担体から形成されるミセルを含有し、ミセルは、約１００ｎｍ
未満の平均直径を有する。より好ましい実施形態は、約５０ｎｍ未満の平均直径を有する
ミセルを提供し、さらにより好ましい実施形態は、約３０ｎｍ未満、またはさらに約２０
ｎｍ未満の平均直径を有するミセルを提供する。
【０４０６】
全ての適切な両親媒性担体が意図される一方、現在好ましい担体は一般に、一般に安全
と認められる（ＧＲＡＳ）ステータスを有し、かつ本発明の化合物を可溶化することがで
き、溶液が複雑な水相（例えば、ヒト消化管において見出されるもの）と接触するとき、
より後の段階でマイクロ乳化することができることの両方であるものである。通常、これ
らの要件を満足させる両親媒性成分は、２〜２０のＨＬＢ（親水親油バランス）値を有し
、これらの構造は、Ｃ−６〜Ｃ−２０の範囲の直鎖脂肪族ラジカルを含有する。例は、ポ
リエチレングリコール化（ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ−ｇｌｙｃｏｌｉｚｅｄ）脂肪酸グ
リセリドおよびポリエチレングリコールである。
【０４０７】
両親媒性担体の例には、飽和および一不飽和ポリエチレングリコール化（ｐｏｌｙｅｔ
ｈｙｌｅｎｅｇｌｙｃｏｌｙｚｅｄ）脂肪酸グリセリド、例えば、完全または部分的に水
素付加した様々な植物性油から得られるものが含まれる。このような油は有利には、トリ
−、ジ−、およびモノ−脂肪酸グリセリド、ならびに対応する脂肪酸のジ−およびモノ−
ポリエチレングリコールエステルからなり、特に好ましい脂肪酸組成物は、カプリン酸４
〜１０％、カプリン酸３〜９％、ラウリン酸４０〜５０％、ミリスチン酸１４〜２４％、
パルミチン酸４〜１４％およびステアリン酸５〜１５％を含む。別の有用なクラスの両親
媒性担体には、飽和もしくは一不飽和脂肪酸（ＳＰＡＮ−シリーズ）または対応するエト
キシ化類似体（ＴＷＥＥＮ−シリーズ）を伴う部分的にエステル化されたソルビタンおよ
び／またはソルビトールが含まれる。
【０４０８】
Ｇｅｌｕｃｉｒｅ−シリーズ、Ｌａｂｒａｆｉｌ、Ｌａｂｒａｓｏｌ、またはＬａｕｒ
ｏｇｌｙｃｏｌ（全てＧａｔｔｅｆｏｓｓｅ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｓａｉｎｔ  Ｐ
ｒｉｅｓｔ、Ｆｒａｎｃｅによって製造および配布されている）、ＰＥＧ−モノ−オレエ
ート、ＰＥＧ−ジ−オレエート、ＰＥＧ−モノ−ラウレートおよびジ−ラウレート、レシ
チン、ポリソルベート８０など（米国および世界中のいくつかの会社によって生産および
配布されている）を含めて、市販の両親媒性担体は特に有用であり得る。
【０４０９】
特定の実施形態において、送達は、適切な宿主細胞中への本発明の組成物の導入のため
の、リポソーム、ナノカプセル、微粒子、ミクロスフィア、脂質粒子、小胞などの使用に
よって起こり得る。特に、本発明の組成物は、脂質粒子、リポソーム、小胞、ナノスフィ
ア、ナノ粒子などのいずれか中にカプセル化されて、送達のために製剤し得る。このよう
な送達ビヒクルの製剤および使用は、公知および従来の技術を使用して行うことができる
。
【０４１０】
本発明における使用に適した親水性ポリマーは、容易に水溶性であり、小胞形成脂質に
共有結合的に付着させることができ、毒性効果を伴わずにインビボで耐容性を示す（すな
わち、生体適合性である）ものである。適切なポリマーには、ポリエチレングリコール（
ＰＥＧ）、ポリ乳酸（ポリラクチドとまた称される）、ポリグリコール酸（ポリグリコリ
ドとまた称される）、ポリ乳酸−ポリグリコール酸コポリマー、およびポリビニルアルコ
ールが含まれる。特定の実施形態において、ポリマーは、約１００ダルトンもしくは１２
０ダルトンから、約５，０００ダルトンもしくは１０，０００ダルトンまで、または約３
００ダルトン〜約５，０００ダルトンの分子量を有する。他の実施形態において、ポリマ
ーは、約１００〜約５，０００ダルトンの分子量を有し、または約３００〜約５，０００
ダルトンの分子量を有するポリエチレングリコールである。特定の実施形態において、ポ
リマーは、７５０ダルトンのポリエチレングリコール（ＰＥＧ（７５０））である。ポリ
マーはまた、その中のモノマーの数によって定義し得る。本発明の好ましい実施形態は、
少なくとも約３種のモノマーのポリマーを利用し、このようなＰＥＧポリマーは、３種の
モノマーからなる（ほぼ１５０ダルトン）。
【０４１１】
本発明における使用に適し得る他の親水性ポリマーには、ポリビニルピロリドン、ポリ
メトキサゾリン（ｐｏｌｙｍｅｔｈｏｘａｚｏｌｉｎｅ）、ポリエチルオキサゾリン、ポ
リヒドロキシプロピルメタクリルアミド、ポリメタクリルアミド、ポリジメチルアクリル
アミド、および誘導体化セルロース、例えば、ヒドロキシメチルセルロースまたはヒドロ
キシエチルセルロースが含まれる。
【０４１２】
特定の実施形態において、本発明において使用される製剤は、ポリアミド、ポリカーボ
ネート、ポリアルキレン、アクリル酸エステルおよびメタクリル酸エステルのポリマー、
ポリビニルポリマー、ポリグリコリド、ポリシロキサン、ポリウレタンおよびそのコポリ
マー、セルロース、ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリスチレン、乳酸およびグリコー
ル酸のポリマー、ポリ無水物、ポリ（オルト）エステル、ポリ（酪酸）（ｐｏｌｙ（ｂｕ
ｔｉｃ  ａｃｉｄ））、ポリ（吉草酸）、ポリ（ラクチド−ｃｏ−カプロラクトン）、多
糖類、タンパク質、ポリヒアルロン酸、ポリシアノアクリレート、ならびにそのブレンド
、混合物、またはコポリマーからなる群から選択される生体適合性ポリマーを含む。
【０４１３】
シクロデキストリンは、それぞれ、ギリシャ文字α、βまたはγと呼称される、６つ、
７つまたは８つのグルコース単位からなる環状オリゴ糖である。グルコース単位は、α−
１，４−グルコシド結合によって連結している。糖単位のいす形配座の結果として、全て
の第二級ヒドロキシル基（Ｃ−２、Ｃ−３における）は、環の１つの側面上に位置してお
り、一方、Ｃ−６における全ての第一級ヒドロキシル基は、他の側面上に配置されている
。その結果、外側の面は親水性であり、シクロデキストリンを水溶性とする。対照的に、
シクロデキストリンの空洞は、原子Ｃ−３およびＣ−５の水素によって、ならびにエーテ
ル様酸素で裏打ちされているため疎水性である。これらのマトリックスは、例えば、ステ
ロイド化合物、例えば、１７α−エストラジオールを含めた種々の比較的疎水性の化合物
と共に複合体を形成することが可能となる（例えば、ｖａｎ  Ｕｄｅｎら、Ｐｌａｎｔ  
Ｃｅｌｌ  Ｔｉｓｓ．  Ｏｒｇ．  Ｃｕｌｔ．、３８巻：１−３−１１３（１９９４年）
を参照されたい）。複合体形成は、ファンデルワールス相互作用によって、および水素結
合形成によって起こる。シクロデキストリンの化学的性質の一般的概説について、Ｗｅｎ
ｚ、Ａｇｎｅｗ．  Ｃｈｅｍ．  Ｉｎｔ．  Ｅｄ．  Ｅｎｇｌ．、３３巻：８０３〜８２
２頁（１９９４年）を参照されたい。
【０４１４】
シクロデキストリン誘導体の物理化学的特性は、種類および置換度によって強力に決ま
る。例えば、水中のこれらの溶解度は、不溶性（例えば、トリアセチル−β−シクロデキ
ストリン）から１４７％可溶性（ｗ／ｖ）（Ｇ−２−β−シクロデキストリン）までの範
囲である。さらに、これらは、多くの有機溶媒中で可溶性である。シクロデキストリンの
特性により、様々な製剤構成要素の溶解度を増大または減少させることによって、これら
の溶解度の制御をすることができる。
【０４１５】
多数のシクロデキストリンおよびこれらの調製のための方法が記載されてきた。例えば
、Ｐａｒｍｅｔｅｒ（Ｉ）ら（米国特許第３，４５３，２５９号）およびＧｒａｍｅｒａ
ら（米国特許第３，４５９，７３１号）は、電気的中性のシクロデキストリンを記載した
。他の誘導体には、カチオン性特性を有するシクロデキストリン［Ｐａｒｍｅｔｅｒ（Ｉ
Ｉ）、米国特許第３，４５３，２５７号］、不溶性架橋シクロデキストリン（Ｓｏｌｍｓ
、米国特許第３，４２０，７８８号）、およびアニオン性特性を有するシクロデキストリ
ン［Ｐａｒｍｅｔｅｒ（ＩＩＩ）、米国特許第３，４２６，０１１号］が含まれる。アニ
オン性特性を有するシクロデキストリン誘導体の中で、カルボン酸、亜リン酸、亜ホスフ
ィン酸（ｐｈｏｓｐｈｉｎｏｕｓ  ａｃｉｄ）、ホスホン酸、リン酸、チオホスホン酸（
ｔｈｉｏｐｈｏｓｐｈｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）、チオスルフィン酸（ｔｈｉｏｓｕｌｐｈｉ
ｎｉｃ  ａｃｉｄ）、およびスルホン酸が、親シクロデキストリンに付加されてきた［Ｐ
ａｒｍｅｔｅｒ（ＩＩＩ）、上述を参照されたい］。さらに、スルホアルキルエーテルシ
クロデキストリン誘導体は、Ｓｔｅｌｌａらによって記載されてきた（米国特許第５，１
３４，１２７号）。
【０４１６】
リポソームは、水性の内部コンパートメントを封入する少なくとも１つの脂質二重層膜
からなる。リポソームは、膜タイプにより、およびサイズにより特性決定し得る。小型単
層小胞（ｓｍａｌｌ  ｕｎｉｌａｍｅｌｌａｒ  ｖｅｓｉｃｌｅ）（ＳＵＶ）は単一の膜
を有し、典型的には直径が０．０２〜０．０５μｍの範囲であり、大型単層小胞（ｌａｒ
ｇｅ  ｕｎｉｌａｍｅｌｌａｒ  ｖｅｓｉｃｌｅ）（ＬＵＶＳ）は典型的には、０．０５
μｍより大きい。少層大型小胞（ｏｌｉｇｏｌａｍｅｌｌａｒ  ｌａｒｇｅ  ｖｅｓｉｃ
ｌｅ）および多層小胞（ｍｕｌｔｉｌａｍｅｌｌａｒ  ｖｅｓｉｃｌｅ）は、複数の通常
同心円状膜の層を有し、典型的には０．１μｍより大きい。いくつかの非同心円状膜を有
するリポソーム、すなわち、より大型小胞内に含有されるいくつかのより小型小胞は、多
胞体小胞（ｍｕｌｔｉｖｅｓｉｃｕｌａｒ  ｖｅｓｉｃｌｅ）と称される。
【０４１７】
本方法の一態様は、本発明のオリゴマーを含有するリポソームを含む製剤を使用し、リ
ポソーム膜は、増大した運搬能力を有するリポソームを提供するように製剤される。代わ
りにまたはさらに、本発明の化合物は、リポソームのリポソーム二重層中に含有し得、ま
たはリポソームのリポソーム二重層上に吸着し得る。本発明のオリゴマーは、脂質界面活
性剤（ｌｉｐｉｄ  ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ）と共に凝集させ、リポソームの内側空間内に
運んでもよい。これらの場合、リポソーム膜は、活性剤−界面活性剤凝集物の破壊効果に
抵抗するように製剤される。
【０４１８】
本方法の一実施形態によると、ＰＥＧ鎖が、脂質二重層の内面からリポソームによって
カプセル化された内部空間中に伸長し、脂質二重層の外部から周囲の環境中に伸長するよ
うに、リポソームの脂質二重層は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）で誘導体化された
脂質を含有する。
【０４１９】
本方法のリポソーム内に含有される活性剤は、可溶化形態である。界面活性剤および活
性剤の凝集物（例えば、目的とする活性剤を含有する乳剤またはミセル）は、本発明によ
るリポソームの内部空間内に捕捉し得る。界面活性剤は、活性剤を分散および可溶化する
ように作用し、これらに限定されないが、変化する鎖長（例えば、約Ｃ１４〜約Ｃ２０）
の生体適合性リゾホスファチジルコリン（ＬＰＣ）を含めた任意の適切な脂肪族、脂環式
または芳香族の界面活性剤から選択し得る。ポリマー誘導体化脂質は、ミセル／膜融合を
阻害するように作用し、界面活性剤分子へポリマーを加えることによって界面活性剤のＣ
ＭＣを減少させ、ミセル形成を助長するため、ポリマー誘導体化脂質、例えば、ＰＥＧ−
脂質をまた、ミセル形成のために利用し得る。好ましいのは、マイクロモル濃度範囲のＣ
ＭＣを有する界面活性剤である。より高いＣＭＣの界面活性剤を利用して、本発明のリポ
ソーム内に捕捉されたミセルを調製し得る。
【０４２０】
本方法によって使用されるリポソームは、当技術分野において公知の種々の技術のいず
れかによって調製し得る。例えば、米国特許第４，２３５，８７１号；公開されたＰＣＴ
出願ＷＯ９６／１４０５７；Ｎｅｗ  ＲＲＣ，  Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ：Ａ  ｐｒａｃｔｉ
ｃａｌ  ａｐｐｒｏａｃｈ、ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ、Ｏｘｆｏｒｄ（１９９０年）、３３〜
１０４頁；Ｌａｓｉｃ  ＤＤ，  Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ  ｆｒｏｍ  ｐｈｙｓｉｃｓ  ｔｏ
ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒ
ｓ  ＢＶ、Ａｍｓｔｅｒｄａｍ、１９９３年を参照されたい。例えば、リポソーム中で望
ましい誘導体化された脂質の最終モルパーセントに相当する脂質濃度で、予め形成された
リポソームを脂質グラフトポリマーから構成されるミセルに曝露させることになどによっ
て、親水性ポリマーで誘導体化した脂質を予め形成されたリポソーム中に拡散させること
によって、本発明のリポソームは調製し得る。親水性ポリマーを含有するリポソームはま
た、当技術分野において公知のように、均質化、脂質領域水和（ｌｉｐｉｄ−ｆｉｅｌｄ
ｈｙｄｒａｔｉｏｎ）、または押出技術によって形成することができる。
【０４２１】
別の例示的な製剤手順において、活性剤は、リゾホスファチジルコリン、または疎水性
分子を容易に可溶化する他の低ＣＭＣの界面活性剤（ポリマーグラフト脂質を含めた）中
で超音波処理によって最初に分散させる。次いで、このように得られた活性剤のミセル懸
濁液を使用して、適切なモルパーセントのポリマーグラフト脂質、またはコレステロール
を含有する乾燥した脂質試料を再水和させる。次いで、脂質および活性剤懸濁液を、当技
術分野において公知のような押出技術を使用してリポソームに形成し、このように得られ
たリポソームを、標準的なカラム分離によってカプセル化されていない溶液から分離する
。
【０４２２】
本方法の一態様において、リポソームは、選択したサイズ範囲の実質的に均一なサイズ
を有するように調製される。１つの有効なサイジング方法は、選択した均質な孔径を有す
る一連のポリカーボネート膜を通してリポソームの水性懸濁液を押し出すことを伴い、膜
の孔径は、その膜を通す押出によって生成したリポソームの最も大きなサイズにおおよそ
相当する。例えば、米国特許第４，７３７，３２３号（１９８８年４月１２日）を参照さ
れたい。特定の実施形態において、試薬、例えば、ＤｈａｒｍａＦＥＣＴ（登録商標）お
よびＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（登録商標）を利用して、細胞中にポリヌクレオチドま
たはタンパク質を導入し得る。
【０４２３】
本方法において使用される製剤の放出の特徴は、封入材料、カプセル化された薬物の濃
度、および放出調節剤の存在によって決まる。例えば、胃におけるように低ｐＨにおいて
のみ、または腸におけるようにより高いｐＨで放出するｐＨ感受性コーティングを使用し
て、例えば、放出をｐＨ依存性であるように操作することができる。腸溶性コーティング
を使用して、胃を通過する後まで放出が起こることを防止することができる。複数のコー
ティング、または異なる材料中にカプセル化されたシアナミドの混合物を使用して、胃に
おける最初の放出、それに続く腸におけるその後の放出を得ることができる。放出はまた
、水の取込みまたはカプセルからの拡散による薬物の放出を増大させることができる、塩
またはポア形成剤を含むことによって操作することができる。薬物の溶解度を改変させる
賦形剤をまた使用して、放出速度を制御することができる。マトリックスの分解またはマ
トリックスからの放出を増強する薬剤をまた組み込むことができる。これらは、化合物に
よって、薬物に加え、別々の相として加えることができ（すなわち、微粒子として）、ま
たはポリマー相に同時溶解することができる。殆どの場合、量は、０．１〜３０パーセン
ト（ｗ／ｗポリマー）であるべきである。分解増強剤のタイプには、無機塩、例えば、硫
酸アンモニウムおよび塩化アンモニウム、有機酸、例えば、クエン酸、安息香酸、および
アスコルビン酸、無機塩基、例えば、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸カルシウム、
炭酸亜鉛、および水酸化亜鉛、ならびに有機塩基、例えば、硫酸プロタミン、スペルミン
、コリン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、およびトリエタノールアミン、なら
びに界面活性剤、例えば、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）およびＰｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）
が含まれる。マトリックスに微小構造を加えるポア形成剤（すなわち、水溶性化合物、例
えば、無機塩および糖）を、微粒子として加える。範囲は典型的には、１〜３０パーセン
ト（ｗ／ｗポリマー）である。
【０４２４】
腸における粒子の滞留時間を変化させることによって、取込みをまた操作することがで
きる。例えば、粒子を粘膜の接着性ポリマーでコーティングすることによって、または封
入材料として粘膜の接着性ポリマーを選択することによって、これは達成することができ
る。例には、遊離カルボキシル基を有する大部分のポリマー、例えば、キトサン、セルロ
ース、特に、ポリアクリレートが含まれる（本明細書において使用する場合、ポリアクリ
レートは、アクリレート基および修飾されたアクリレート基、例えば、シアノアクリレー
トおよびメタアクリレートを含むポリマーを指す）。
【０４２５】
オリゴマーは、手術デバイスもしくは医療デバイスまたはインプラント内に含有される
ように製剤され得るか、あるいはこれらによって放出されるように適合され得る。特定の
態様において、インプラントは、オリゴマーでコーティングまたは別の方法で処理し得る
。例えば、ヒドロゲル、または他のポリマー、例えば、生体適合性および／または生分解
性ポリマーを使用して、インプラントを本発明の組成物でコーティングし得る（すなわち
、組成物は、ヒドロゲルまたは他のポリマーを使用することによって医療デバイスと共の
使用のために適合し得る）。医療デバイスを薬剤でコーティングするためのポリマーおよ
びコポリマーは、当技術分野において周知である。インプラントの例には、これらに限定
されないが、ステント、薬物溶出ステント、縫合糸、プロテーゼ、血管カテーテル、透析
カテーテル、血管移植片、人工心臓弁、心臓ペースメーカー、埋め込み式電気除細動器、
ＩＶ針、接骨（ｂｏｎｅ  ｓｅｔｔｉｎｇ）および骨形成のためのデバイス、例えば、ピ
ン、ネジ、プレート、および他のデバイス、ならびに創傷治癒のための人工組織マトリッ
クスが含まれる。
【０４２６】
本明細書において提供する方法に加えて、本発明によって使用するためのオリゴマーは
、ヒトまたは動物用の薬における使用のために、他の医薬から類推して任意の好都合な方
法における投与のために製剤し得る。アンチセンスオリゴマーおよびこれらの対応する製
剤は、単独で、または炎症の処置における他の治療戦略と組み合わせて投与し得る。
【０４２７】
本発明の方法によると、アンチセンスオリゴマー送達の経路には、これらに限定されな
いが、経口および非経口の経路を含めた様々な全身的経路、例えば、静脈内、皮下、腹腔
内、および筋内、ならびに吸入、経皮的、肺および局所送達が含まれる。適当な経路は、
処置を受けている被験体の状態に応じて適当に当業者が決定し得る。例えば、皮膚の状態
の処置におけるアンチセンスオリゴマーの送達のための適当な経路は、局所送達を含み得
、一方、呼吸状態（例えば、ＣＯＰＤ）の処置のためのアンチセンスオリゴマーの送達は
、吸入、鼻腔内または肺の送達を含み得る。オリゴマーはまた、炎症、感染の部位に、ま
たは血流に直接送達し得る。
【０４２８】
アンチセンスオリゴマーは、生理学的に許容される任意の好都合なビヒクル中で投与し
得る。このような組成物は、当業者が用いる種々の標準的な薬学的に許容される担体のい
ずれかを含み得る。例には、これらに限定されないが、食塩水、リン酸緩衝食塩水（ＰＢ
Ｓ）、水、水性エタノール、乳剤、例えば、油／水乳剤またはトリグリセリド乳剤、錠剤
およびカプセルが含まれる。適切な生理学的に許容される担体の選択は、選択した投与モ
ードによって変化する。
【０４２９】
いくつかの場合において、上で述べたように、リポソームを用いて、細胞中へのアンチ
センスオリゴヌクレオチドの取込みを促進し得る（例えば、Ｗｉｌｌｉａｍｓ，  Ｓ．Ａ
．、Ｌｅｕｋｅｍｉａ、１０巻（１２号）：１９８０〜１９８９頁、１９９６年；Ｌａｐ
ｐａｌａｉｎｅｎら、Ａｎｔｉｖｉｒａｌ  Ｒｅｓ．、２３巻：１１９号、１９９４年；
Ｕｈｌｍａｎｎら、ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ：ａ  ｎｅ
ｗ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ，  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗ
ｓ、第９０巻、４号、５４４〜５８４頁、１９９０年；Ｇｒｅｇｏｒｉａｄｉｓ，  Ｇ．
、第１４章、Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ，  Ｄｒｕｇ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｌｏｇ
ｙ  ａｎｄ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、２８７〜３４１頁、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、１
９７９年を参照されたい）。ヒドロゲルはまた、例えば、ＷＯ９３／０１２８６またはＰ
ＣＴ出願第ＵＳ１９９２／００５３０５号に記載されているように、アンチセンスオリゴ
マー投与のためのビヒクルとして使用し得る。代わりに、オリゴヌクレオチドは、ミクロ
スフィアまたは微粒子中で投与し得る（例えば、Ｗｕ，  Ｇ．Ｙ．およびＷｕ，  Ｃ．Ｈ
．、Ｊ．、Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．、２６２巻：４４２９〜４４３２頁、１９８７年を参
照されたい）。代わりに、アンチセンスオリゴマーと複合体形成したガスが充填された微
小気泡の使用は、米国特許第６，２４５，７４７号に記載されているように、標的組織へ
の送達を増強することができる。
【０４３０】
持続放出組成物をまた使用し得る。これらは、成形された物品の形態、例えば、フィル
ムまたはマイクロカプセル中の半透性のポリマーマトリックスを含み得る。
【０４３１】
特定の実施形態において、アンチセンス化合物は、少なくとも２００〜４００ｎＭのア
ンチセンスオリゴマーのピーク血中濃度をもたらすのに有効な量および様式で投与し得る
。典型的には、一般に規則的間隔で約１〜２週間の期間、アンチセンスオリゴマーの１つ
または複数の用量が投与される。経口投与のための好ましい用量は、７０ｋｇ当たり約１
〜１００ｍｇのオリゴマーである。場合によっては、１００ｍｇ超の用量のオリゴマー／
患者が必要であり得る。ｉ．ｖ．投与のために、好ましい用量は、７０ｋｇ当たり約１ｍ
ｇ〜５００ｍｇのオリゴマーである。アンチセンスオリゴマーは、短期間、例えば、２週
間またはそれ未満の間毎日、規則的間隔で投与し得る。しかし、場合によっては、オリゴ
マーは、より長期間に亘って断続的に投与される。投与の後に抗生物質の投与もしくは他
の治療的処置が続いてもよく、または投与は抗生物質の投与もしくは他の治療的処置と併
行的でよい。処置レジメンは、処置されている被験体の免疫アッセイ、他の生化学的試験
および生理学的検査の結果に基づいて、示されるように調節し得る（用量、頻度、経路な
ど）。
【０４３２】
本明細書において引用される全ての刊行物および特許出願は、それぞれの個々の刊行物
または特許出願が特におよび個々に参照により組み込まれていることが示されるかのよう
に参照により本明細書に組み込まれている。
【０４３３】
理解を明確にするために上記の発明を例示および例として少し詳しく記載してきたが、
添付の特許請求の範囲の精神または範囲を逸脱することなく、特定の変更および修正をそ
れに行い得ることは、本発明の教示に鑑みて当業者には容易に明らかであろう。下記の実
施例は、限定のためではなく例示としてのみ提供する。当業者は、本質的に同様の結果を
得るために変更または修正することができる種々の重大でないパラメーターを容易に認識
する。
【０４３４】
【表６−１】
2019172691.tif 000067
【０４３５】
【表６−２】
2019172691.tif 000068
【実施例】
【０４３６】
（実施例１）
ＬＭＮＡを標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドを使用したＨＧＰＳ細胞の処理
２種の初代線維芽細胞系統であるＨＧＰＳ線維芽細胞（ＨＧＡＤＦＮ１６７）および対
照線維芽細胞（ＨＧＦＤＦＮ１６８）を使用した。ＨＧＰＳおよび対照細胞を、約１０，
０００個の細胞／ウェルの密度で２４ウェルディッシュ中に播種した。ラミン−Ａプレｍ
ＲＮＡのエキソン１１および／または１０を標的としたモルホリノオリゴヌクレオチドを
、遊離取込みによって、またはｎｕｃｌｅｏｆｅｃｔｉｏｎ（例えば、Ａｍａｘａ）によ
って、培養したＨＧＰＳ細胞中に個々に導入した。遊離取込みのために、細胞を、２５μ
Ｍまたは５０μＭまたは８０ｕＭのＰＭＯオリゴヌクレオチドを含有する培地中で１〜２
週間培養した。次いで、これらの細胞を、抗プロジェリン抗体または抗ラミンＡ／Ｃ抗体
を伴う免疫蛍光によってスクリーニングした。プロジェリン染色の蛍光強度を、Ｚｅｉｓ
ｓ蛍光顕微鏡およびＳＰＯＴプログラムを使用して定量化した。実験は三連で行い、プロ
ジェリンの下方調節において効果を示したＰＭＯを、さらなる分析のために選択した。分
析は、プロジェリン特異的プライマーによる定量的ＲＴ−ＰＣＲ、および抗プロジェリン
抗体によるウエスタンブロッティング分析を含んだ。
【０４３７】
（実施例２）
ＬＭＮＡを標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドによる処理の後のＨＧＰＳ細胞
の蛍光免疫染色
蛍光免疫染色：免疫蛍光のために、細胞を４ウェルチャンバースライド上に播種した。
４％パラホルムアルデヒド／ＰＢＳ中で室温にて１５分間固定化した後、細胞を０．５％
Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００／ＰＢＳで室温にて５分間透過処理し、それに続いてブロック
溶液中で４℃にて一晩インキュベートした（ブロック溶液：４％ＢＳＡ／ＴＢＳ）。細胞
を、マウスモノクローナル抗ラミンＡ／Ｃ（ＭＡＢ３２１１、Ｃｈｅｍｉｃｏｎ）および
ウサギポリクローナル抗プロジェリン（カスタムペプチド抗体、Ｙｅｎｚｍ）で、翌日３
時間室温にて染色した。一次抗体を、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ−標識二次抗体（Ｉｎｖｉ
ｔｒｏｇｅｎ）で検出した。ＤＡＰＩを含有するＶｅｃｔａｓｈｉｅｌｄ封入剤を乗せた
スライドを、Ｚｅｉｓｓ蛍光顕微鏡で観察した。曝露時間および取得の設定を、実験の各
セットの初めに確立し、全ての処理について一定に維持した。実験の結果を、図２におい
て記載する。オリゴヌクレオチドのいくつかは、プロジェリンを有意に下方調節した。
【０４３８】
（実施例３）
ＬＭＮＡを標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドによる処理の後のＨＧＰＳ細胞
のＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびウエスタンブロッティング分析
ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびウエスタンブロッティング分析：処理された細胞を集め、ＰＢ
Ｓ中で２回すすぎ、次いでＬａｅｍｍｌｉ  ＳＤＳ−ＰＡＧＥローディングバッファー中
で溶解した。試料を９５℃にて１５分間加熱し、次いで１０％ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル上に
ロードした。ウエスタンブロット分析に関して、タンパク質を、ニトロセルロース膜上に
移した。膜を５％ミルク／ＴＢＳＴで４℃にて一晩ブロックし、４％ＢＳＡ／ＴＢＳＴに
希釈した一次抗体と共に室温にて１〜３時間インキュベートした。ＴＢＳＴで洗浄した後
、膜を１％ミルク／ＴＢＳＴに１：５０００で希釈した二次抗体中で室温にて１時間イン
キュベートした。化学発光は、ＥＣＬウエスタンブロッティング検出キット（Ｐｉｅｒｃ
ｅ）で検出した。使用した一次抗体は、マウスモノクローナル抗ラミンＡ／Ｃ（ＭＡＢ３
２１１、Ｃｈｅｍｉｃｏｎ）、ウサギポリクローナル抗プロジェリン（カスタムペプチド
抗体、Ｙｅｎｚｍ）およびウサギポリクローナル抗アクチン（汎アクチン、Ｃｅｌｌ  Ｓ
ｉｇｎａｌｉｎｇ）を含む。実験の結果を、図３において記載する。６９９（配列番号４
）に相当するオリゴヌクレオチドは、ＬＭＮＡのエキソン１１潜在的スプライス部位から
取り出されており、ＬＭＮＡのエキソン１１潜在的スプライス部位と重複しないにも関わ
らず、実験においてプロジェリンの有意な下方調節を示した。
【０４３９】
（実施例４）
ＬＭＮＡを標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドによる処理の後のＨＧＰＳ細胞
の定量的ＲＴ−ＰＣＲ分析
定量的ＲＴ−ＰＣＲ：定量的ＲＴ−ＰＣＲ（ｑＲＴ−ＰＣＲ）実験を行い、オリゴヌク
レオチド６９９（配列番号４）および７０６（配列番号１１）による処理に続いて、１６
４線維芽細胞（ｐ１３、古典的ＨＧＰＳ）におけるプロジェリン、ラミンＡおよびβ−ア
クチンの発現レベルを測定した。全ての反応は、製造業者の指示によって、ＳＹＢＲ  Ｇ
ｒｅｅｎミックス（Ｑｉａｇｅｎ）を使用してＡｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ７
９００ＨＴ  ＦａｓｔリアルタイムＰＣＲシステムにて三連で行った。反応条件は、以下
の通りであった。５０℃にて２分を１サイクル；９５℃にて１５分を１サイクル；ならび
に９５℃にて１５秒、５７℃にて１分、および７２℃にて４５秒を４０サイクル。β−ア
クチンフォワードプライマーについての配列は、ＴＣＴＴＴＧＣＡＧＣＣＡＣＡＴＴＣＣ
ＣＧであり、リバースプライマーは、ＧＧＣＴＴＧＣＧＧＧＴＧＴＴＡＡＡＡＧＣである
。プロジェリン／ラミンＡを増幅するためのフォワードプライマーの配列は、ＧＣＡＡＣ
ＡＡＧＴＣＣＡＡＴＧＡＧＧＡＣＣＡである。プロジェリン特異的リバースプライマーお
よびラミンＡ特異的リバースプライマーについて、末位から２番目の塩基において変異を
導入して、特異性を増大させることによって、増幅困難な変異系戦略により設計した。プ
ロジェリン特異的プライマー配列は、ＣＡＴＧＡＴＧＣＴＧＣＡＧＴＴＣＴＧＧＧＧＧＣ
ＴＣＴＧＧＡＣであり、ラミンＡについての特異的プライマー配列は、ＣＡＴＧＡＴＧＣ
ＴＧＣＡＧＴＴＣＴＧＧＧＧＧＣＴＣＴＧＧＡＴである。実験の結果を、図４において記
載する。
【０４４０】
（実施例５）
ＬＭＮＡを標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドによる処理の後のＨＧＰＳ細胞
のＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびウエスタンブロッティング分析
ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびウエスタンブロッティング分析：処理された細胞を集め、ＰＢ
Ｓ中で２回すすぎ、次いでＬａｅｍｍｌｉ  ＳＤＳ−ＰＡＧＥローディングバッファー中
で溶解した。試料を９５℃にて１５分間加熱し、次いで１０％ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル上に
ロードした。ウエスタンブロット分析に関して、タンパク質を、ニトロセルロース膜上に
移した。膜を５％ミルク／ＴＢＳＴで４℃にて一晩ブロックし、４％ＢＳＡ／ＴＢＳＴに
希釈した一次抗体と共に室温にて１〜３時間インキュベートした。ＴＢＳＴで洗浄した後
、膜を１％ミルク／ＴＢＳＴに１：５０００で希釈した二次抗体中で室温にて１時間イン
キュベートした。化学発光は、ＥＣＬウエスタンブロッティング検出キット（Ｐｉｅｒｃ
ｅ）で検出した。使用した一次抗体は、マウスモノクローナル抗ラミンＡ／Ｃ（ＭＡＢ３
２１１、Ｃｈｅｍｉｃｏｎ）、ウサギポリクローナル抗プロジェリン（カスタムペプチド
抗体、Ｙｅｎｚｍ）および西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）結合体化抗アクチン（
Ｓｉｇｍａ）を含む。実験の結果を、図５において記載する。オリゴヌクレオチド６９９
（配列番号４）は、これがＬＭＮＡのエキソン１１潜在的スプライス部位から取り出され
、ＬＭＮＡのエキソン１１潜在的スプライス部位と重複しないにも関わらず、プロジェリ
ンの下方調節およびラミンＡの上方調節を起こした。
【０４４１】
【化４２】
2019172691.tif 000069
【図１Ａ】
2019172691.tif 000070
【図１Ｂ】
2019172691.tif 000071
【図１Ｃ】
2019172691.tif 000072
【図１Ｄ】
2019172691.tif 000073
【図１Ｅ】
2019172691.tif 000074
【図１Ｆ】
2019172691.tif 000075
【図１Ｇ】
2019172691.tif 000076
【図２】
2019172691.tif 000077
【図３】
2019172691.tif 000078
【図４】
2019172691.tif 000079
【図５】
2019172691.tif 000080
【配列表】
2019172691000001.app
【外国語明細書】
2019172691000001.pdf