(57)【要約】      （修正有）【課題】新生児期を除く哺乳動物における蝸牛有毛細胞の喪失によって引き起こされた聴覚障害を治療する方法の提供。【解決手段】γセクレターゼ阻害薬等のノッチ阻害薬を治療効果のある分量含有した組成物を、前記哺乳動物の耳に局所的に投与するステップを備え、前記治療効果のある分量は、１つ以上の周波数において聴覚を回復させるのに十分な量である方法。前記組成物は、前記障害への暴露より４週間以内、２週間以内、１週間以内、又は１日以内に、前記耳へ投与されることが望ましい。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
新生児期を除く哺乳動物における蝸牛有毛細胞の喪失によって引き起こされた聴覚障害
を治療する方法であって、例えばγセクレターゼ阻害薬等のノッチ阻害薬を治療効果のあ
る分量含有した組成物を、前記哺乳動物の耳に局所的に投与するステップを備え、前記治
療効果のある分量は、１つ以上の周波数において聴覚を回復させるのに十分な量である方
法。
【請求項２】
前記聴覚喪失は、物理的又は化学的な耳毒性障害への暴露によって引き起こされたもの
である請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記物理的な耳毒性障害は、騒音である請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記組成物は、前記障害への暴露より４週間以内、２週間以内、１週間以内、又は１日
以内に、前記耳へ投与される請求項２に記載の方法。
【請求項５】
前記組成物は、正円窓に局所塗布される請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記組成物はさらに、徐放担体を含有する請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記担体は、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレントリブロック共重合体である
請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記組成物は、少なくとも１０ｍＭのノッチ阻害薬を含有する請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記組成物の投与前の、１つ以上の周波数における聴覚のベースラインレベルと、前記
組成物の投与後の、同一の１つ以上の周波数における聴覚の事後レベルとを判定するステ
ップと、前記１つ以上の周波数における所望の聴覚レベルが回復されるまで、追加で１回
分以上の前記組成物を投与するステップとをさらに備える請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記聴覚の事後レベルは、前記組成物の投与後、１週間、２週間、３週間、１ヶ月、２
ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、６ヶ月、及び／又は１２ヶ月で判定される請求項９に記載の方法
。
【請求項１１】
前記γセクレターゼ阻害薬は、ＲＯ４９２９０９７、ＤＡＰＴ（Ｎ−［（３，５−ジフ
ルオロフェニル）アセチル］−Ｌ−アラニル−２−フェニル］グリシン−１，１−ジメチ
ルエチルエステル）、Ｌ−６８５４５８（（５Ｓ）−（ｔ−ブトキシカルボニルアミノ）
−６−フェニル−（４Ｒ）ヒドロキシ−（２Ｒ）ベンジルヘキサノイル）−Ｌ−ｌｅｕ−
Ｌ−ｐｈｅ−アミド）、ＢＭＳ−７０８１６３（Ａｖａｇａｃｅｓｔａｔ）、ＢＭＳ−２
９９８９７（２−［（１Ｒ）−１−［［（４−クロロフェニル）スルホニル］（２，５−
ジフルオロフェニル）アミノ］エチル−５−フルオロベンゼンブタン酸）、ＭＫ−０７５
２、ＹＯ−０１０２７、ＭＤＬ２８１７０（Ｓｉｇｍａ）、ＬＹ４１１５７５（Ｎ−２（
（２Ｓ）−２−（３，５−ジフルオロフェニル）−２−ヒドロキシエタノイル）−Ｎ１−
（（７Ｓ）−５−メチル−６−オキソ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］ア
ゼピン−７−イル）−１−アラニンアミド）、ＥＬＮ−４６７１９（ＬＹ４１１５７５の
２−ヒドロキシ−バレリアン酸アミドアナログ、ＰＦ−０３０８４０１４（（Ｓ）−２−
（（Ｓ）−５，７−ジフルオロ−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン−３−イルア
ミノ）−Ｎ−（１−（２−メチル−１−（ネオペンチルアミノ）プロパン−２−イル）−
１Ｈ−イミダゾール−４−イル）ペンタンアミド）、化合物Ｅ（（２Ｓ）−２−｛［（３
，５−ジフルオロフェニル）アセチル］アミノ｝−Ｎ−［（３Ｓ）−１−メチル−２−オ
キソ−５−フェニル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−３−イル］
プロパンアミド、Ｓｅｍａｇａｃｅｓｔａｔ（ＬＹ４５０１３９、（２Ｓ）−２−ヒドロ
キシ−３−メチル−Ｎ−（（１Ｓ）−１−メチル−２−｛［（１Ｓ）−３−メチル−２−
オキソ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−３−ベンザゼピン−１−イル］アミノ｝
−２−オキソエチル）ブタンアミド）、又は薬学上許容可能なそれらの塩からなる群より
選択される請求項１〜１０のいずれかに記載の方法。
【請求項１２】
前記γセクレターゼ阻害薬は、ＬＹ４１１５７５（Ｎ−２（（２Ｓ）−２−（３，５−
ジフルオロフェニル）−２−ヒドロキシエタノイル）−Ｎ１−（（７Ｓ）−５−メチル−
６−オキソ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］アゼピン−７−イル）−１−
アラニンアミド）である請求項１〜１１のいずれかに記載の方法。
【請求項１３】
前記哺乳動物は、１歳、２歳、３歳、４歳、５歳、６歳、７歳、８歳、９歳、１０歳、
１１歳、１２歳、又は１３歳を越える幼児期、青年期、又は成熟期の哺乳動物である請求
項１〜１２のいずれかに記載の方法。
【請求項１４】
前記哺乳動物は、少なくとも４０歳、例えば、少なくとも４５歳、５０歳、５５歳、６
０歳、６５歳、７０歳の成熟期の哺乳動物である請求項１〜１３のいずれかに記載の方法
。
【請求項１５】
前記哺乳動物は、ヒトである請求項１〜１４のいずれかに記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
優先権主張
本出願は、２０１２年９月７日出願の米国仮出願シリアル番号６１／６９８，４７５の
利益を主張し、その開示内容全体を参照としてここに組み込む。
連邦政府による資金提供を受けた研究開発
本発明は、国立衛生研究所により認められた助成第ＲＯ１ＤＣ００７１７４号、Ｒ２１
ＤＣ０１０４４０‐０１号、及びＰ３０ＤＣ０５２０９号に基づき、政府支援の下でなさ
れた。政府は、本発明に係る特定の権利を有するものとする。
【０００２】
本発明は、例えばγセクレターゼ阻害薬等のノッチ阻害薬を使用して、例えば青年期又
は成熟期の動物等、新生児期を除く動物における、騒音暴露等によって引き起こされる蝸
牛有毛細胞の喪失に関連の聴覚喪失を治療する方法に係る。
【背景技術】
【０００３】
蝸牛感覚上皮は、頂端表面（１、２）の不動毛によって変換される音の検出に適した有
毛細胞を含む。成長中に生成される有毛細胞は、有糸分裂後の細胞であり、喪失後（３−
６）、又は、哺乳動物（７−９）の通常の細胞転換の一部として置換されるものでない。
結果として、有毛細胞の喪失による失聴は再起不能である。胎芽期における有毛細胞の成
長には、運命を決定付ける複雑な過程があり、ここで感覚上皮分化予定細胞は、ノッチシ
グナル伝達（５、１０、１１）によって調節される側方抑制のプロセスを通じて、有毛細
胞又は支持細胞の異なる運命を得る。支持細胞は、隣接の有毛細胞のリガンドによって刺
激される活性ノッチシグナル伝達により、有毛細胞への分化を妨げられる。出生後の早い
時期（１３）における有毛細胞の数に対するγセクレターゼ阻害薬の効果と、ノッチシグ
ナル伝達が誕生後（１４）に消失することを提示する他のデータとを考慮に入れると、こ
の活性ノッチシグナル伝達は、誕生後、直ちに終了する。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
聴覚有毛細胞の損傷による聴覚喪失は通常、哺乳動物の有毛細胞が新生児期以降に再生
しないため、再起不能である。本発明は、少なくとも部分的に、特定のγセクレターゼ阻
害薬によるノッチシグナル伝達の遮断により、騒音性の聴覚喪失後の聴覚回復に関連し、
成熟期動物における蝸牛有毛細胞を再生することができるという発見に基づくものである
。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
従って一様態において、本発明は、新生児期を除く哺乳動物における蝸牛有毛細胞の喪
失によって引き起こされた聴覚障害を治療する方法を特徴とする。本方法は、例えばγセ
クレターゼ阻害薬等のノッチ阻害薬を治療効果のある分量含有した組成物を、前記哺乳動
物の耳に全身又は局所的に投与するステップを備え、前記治療効果のある分量は、１つ以
上の周波数において聴覚を回復させるのに十分な量である。
【０００６】
いくつかの実施形態において、前記聴覚喪失は、例えば、反復的（常習的）な暴露又は
１度以上の深刻な暴露等、物理的又は化学的な耳毒性障害への暴露によって引き起こされ
たものである。
【０００７】
いくつかの実施形態において、前記物理的な耳毒性障害は、騒音である。
【０００８】
いくつかの実施形態において、前記組成物は、前記障害への暴露より４週間以内、２週
間以内、１週間以内、又は１日以内に、前記耳へ投与される。
【０００９】
いくつかの実施形態において、前記組成物は、正円窓に局所塗布される。
【００１０】
いくつかの実施形態において、前記組成物はさらに、例えば徐放担体等の担体を含有す
る。いくつかの実施形態において、前記担体は、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピ
レントリブロック共重合体である。
【００１１】
いくつかの実施形態において、前記組成物は、少なくとも１０ｍＭのノッチ阻害薬を含
有する。
【００１２】
いくつかの実施形態において、前記方法は、前記組成物の投与前の、１つ以上の周波数
における聴覚のベースラインレベルと、前記組成物の投与後の、同一の１つ以上の周波数
における聴覚の事後レベルとを判定するステップと、前記１つ以上の周波数における所望
の聴覚レベルが回復されるまで、追加で１回分以上の前記組成物を投与するステップとを
さらに備える。いくつかの実施形態において、前記聴覚の事後レベルは、前記組成物の投
与後、１週間、２週間、３週間、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、６ヶ月、及び／又は
１２ヶ月で判定される。
【００１３】
いくつかの実施形態において、前記γセクレターゼ阻害薬は、ＲＯ４９２９０９７、Ｄ
ＡＰＴ（Ｎ−［（３，５−ジフルオロフェニル）アセチル］−Ｌ−アラニル−２−フェニ
ル］グリシン−１，１−ジメチルエチルエステル）、Ｌ−６８５４５８（（５Ｓ）−（ｔ
−ブトキシカルボニルアミノ）−６−フェニル−（４Ｒ）ヒドロキシ−（２Ｒ）ベンジル
ヘキサノイル）−Ｌ−ｌｅｕ−Ｌ−ｐｈｅ−アミド）、ＢＭＳ−７０８１６３（Ａｖａｇ
ａｃｅｓｔａｔ）、ＢＭＳ−２９９８９７（２−［（１Ｒ）−１−［［（４−クロロフェ
ニル）スルホニル］（２，５−ジフルオロフェニル）アミノ］エチル−５−フルオロベン
ゼンブタン酸）、ＭＫ−０７５２、ＹＯ−０１０２７、ＭＤＬ２８１７０（Ｓｉｇｍａ）
、ＬＹ４１１５７５（Ｎ−２（（２Ｓ）−２−（３，５−ジフルオロフェニル）−２−ヒ
ドロキシエタノイル）−Ｎ１−（（７Ｓ）−５−メチル−６−オキソ−６，７−ジヒドロ
−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］アゼピン−７−イル）−１−アラニンアミド、ＵＳ６，５４
１，４６６号参照）、ＥＬＮ−４６７１９（ＬＹ４１１５７５の２−ヒドロキシ−バレリ
アン酸アミドアナログ（ＬＹ４１１５７５は、３，５−ジフルオロ−マンデル酸アミド）
（米国特許第６，５４１，４６６号））、ＰＦ−０３０８４０１４（（Ｓ）−２−（（Ｓ
）−５，７−ジフルオロ−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン−３−イルアミノ）
−Ｎ−（１−（２−メチル−１−（ネオペンチルアミノ）プロパン−２−イル）−１Ｈ−
イミダゾール−４−イル）ペンタンアミド、ＳａｍｏｎらによるＭｏｌ  Ｃａｎｃｅｒ  
Ｔｈｅｒ、２０１２、１１、１５６５〜１５７５）、化合物Ｅ（（２Ｓ）−２−｛［（３
，５−ジフルオロフェニル）アセチル］アミノ｝−Ｎ−［（３Ｓ）−１−メチル−２−オ
キソ−５−フェニル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−３−イル］
プロパンアミド、ＷＯ９８／２８２６８及び  ＳａｍｏｎらによるＭｏｌ  Ｃａｎｃｅｒ
Ｔｈｅｒ、２０１２、１１、１５６５〜１５７５参照）、Ｓｅｍａｇａｃｅｓｔａｔ（
ＬＹ４５０１３９、（２Ｓ）−２−ヒドロキシ−３−メチル−Ｎ−（（１Ｓ）−１−メチ
ル−２−｛［（１Ｓ）−３−メチル−２−オキソ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ
−３−ベンザゼピン−１−イル］アミノ｝−２−オキソエチル）ブタンアミド）、又は薬
学上許容可能なそれらの塩からなる群より選択される。
【００１４】
いくつかの実施形態において、前記γセクレターゼ阻害薬は、ＬＹ４１１５７５（Ｎ−
２（（２Ｓ）−２−（３，５−ジフルオロフェニル）−２−ヒドロキシエタノイル）−Ｎ
１−（（７Ｓ）−５−メチル−６−オキソ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ
］アゼピン−７−イル）−１−アラニンアミド）である。
【００１５】
いくつかの実施形態において、前記新生児期を除く哺乳動物は、例えば６ヶ月、１歳、
２歳、３歳、４歳、５歳、６歳、７歳、８歳、９歳、１０歳、１１歳、１２歳、又は１３
歳を越える幼児期、青年期、又は成熟期の哺乳動物である。
【００１６】
いくつかの実施形態において、前記哺乳動物は、少なくとも４０歳、例えば、少なくと
も４５歳、５０歳、５５歳、６０歳、６５歳、７０歳の成熟期の哺乳動物である。
【００１７】
いくつかの実施形態において、前記哺乳動物は、ヒトである。
【００１８】
規定のない限り、本明細書において使用される技術的且つ科学的擁護は、本発明の属す
る分野において通常の知識を有する当業者によって共通に理解されるのと同一の意味を有
する。本発明において使用される方法及び材料を、本明細書において記載する。当分野に
おいて既知のその他の好適な方法及び材料も使用することができる。材料、方法、及び例
は、例示のみを目的とするものであり、限定を意図するものでない。本明細書において言
及する出版物、特許出願、特許、シーケンス、データベース登録、及びその他の参照文献
はすべて、全体を参照としてここに組み込む。紛争が生じた場合、定義を含む本明細書に
より、統制を行う。
【００１９】
以下の詳細な説明、図面、及び請求項より、本発明の他の特徴及び効果が明らかとなる
であろう。
【００２０】
本特許すなわち出願申請には、カラー図面が少なくとも１つ含まれる。本発明すなわち
特許出願公開のカラー図面を含む複写は、要求に応じ、必要費用の支払によって特許庁よ
り提供されるものである。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
【図１】有毛細胞誘導におけるγセクレターゼ阻害薬のインビトロ活動を示す図。  （Ａ）指定濃度（μＭ）のγセクレターゼ阻害薬によるＭａｔｈ１−ｎＧＦＰマウスの内耳スフィアの治療後におけるｎＧＦＰ陽性細胞のＤＡＰＩ陽性細胞に対する相対比率により、ＬＹ４１１５７５が有毛細胞誘導について検査された４つの阻害薬中、最大の効能を有することが明らかとなった。ＤＭＳＯ添加により得られた値を制御するため、データを標準化した。アスタリスクはｐ＜０．０１であることを示す。  （Ｂ）ＬＹ４１１５７５によって誘発されたミオシンＶＩＩａのヘキスト陽性細胞に対する割合は、コルチ器官のＤＭＳＯ処置感覚細胞に対して算出された。  （Ｃ）ＤＭＳＯ又はＬＹ４１１５７５（１μＭ）存在下において７２時間に亘るＰ１マウスのコルチ器官の移植片培養により、外有毛細胞領域（白い括弧）内に異所性有毛細胞が生じた（ミオシンＶＩＩａ、緑）。異所性有毛細胞は、ファロイジン（毛束及び表皮板を標識化、赤で示す）に陽性であった。挿入画は、束構造を示すファロイジン着色有毛細胞の拡大図である（スケールバーは２μＭである）。  （Ｄ）Ｐ１マウスのコルチ器官の培養移植片１００μｍ当たりのミオシンＶＩＩａ陽性細胞の増加は、ＬＹ４１１５７５処置後、７２時間で観察された。  すべてのグラフにおいて、エラーバーは、平均値の標準誤差を示している。スケールバーは、５０μｍである。
【図２】有毛細胞切除を施されたマウスのコルチ器官移植片に対するＬＹ４１１５７５処置後の有毛細胞置換を示す図。  （Ａ）有毛細胞は、ミオシンＶＩＩａについて標識されたホールマウントの新生児コルチ器官全体に観察することができる。  （Ｂ）３行の外有毛細胞（白括弧、ＯＨＣ１−３）と１行の内有毛細胞（ＩＨＣ）が、ミオシンＶＩＩａに対する着色後のＰ３コルチ器官移植片に観察することができる。外有毛細胞領域内のダイテルス細胞（ＤＣ１−３）及びヘンゼン細胞（ＨＣ）はＳｏｘ２に陽性である。  （Ｃ）二量体誘導有毛細胞切除を施され、ＬＹ４１１５７５の存在下で３日間培養されたＰｏｕ４ｆ３−Ｃｒｅ及びＭｏｓ−ｉＣｓｐ３のダブルトランスジェニックマウスのコルチ器官移植片は、担体処置移植片に比して、外有毛細胞領域（白括弧）内においてミオシンＶＩＩａ陽性細胞の数が増加した。同一領域において、対照系に対するＳｏｘ２陽性細胞の数が減少した。ファロイジン着色組織の拡大図（スケールバーは２μＭ）は、有毛細胞の不動毛束（挿入画）を示している。  （Ｄ）中間頂部及び中間基部における外有毛細胞の数は、有毛細胞切除サンプル（Ｃｓｐ  Ｔｇ）の対照系の蝸牛に比して、ＬＹ４１１５７５処置されたものにおいて増加した。頂部、中間頂部、中間基部における野生型コルチ器官（Ｗｔ）のＬＹ４１１５７５処置後の有毛細胞の数も、増加が観察された。いずれの場合も、有毛細胞の数の増加は、支持細胞の数の減少によって達成された。  エラーバーは、平均値の標準誤差である（各グループにおいてｎ＝７）。アスタリスクは、ｐ＜０．０５であることを示す。スケールバーは、５０μｍである。
【図３】騒音暴露後にＬＹ４１１５７５処置を実施した蝸牛又は不実施の蝸牛におけるＨｅｓ５及びＡｔｏｈ１  ｍＲＮＡ発現の経時変化を示す図。  （Ａ）騒音暴露後のＨｅｓ５の上昇レベルは、ＬＹ４１１５７５処置に応じて減退し、騒音前レベルに達する。阻害薬を用いない場合、蝸牛におけるＨｅｓ５の発現レベルは、騒音暴露後、１日で増加し、２日までにはノイズ前レベルに比して上昇したまま維持された。ノイズへの暴露前（騒音前）、薬剤処置時（０日後）（騒音後）、薬剤処置の１日後（ｄ１）、薬剤処置の３日後（ｄ３）、薬剤処置の７日後（ｄ７）にｑＲＴ−ＰＣＲのサンプルを採った。ｍＲＮＡ発現レベルは、騒音前レベルに対して算出した。  （Ｂ）ＬＹ４１１５７５による処置では、騒音暴露後１日で、反対に未処置の耳と比して、Ａｔｏｈ１の発現が著しく増加した。薬剤処置の１日後（ｄ１）、レベル上昇が検出され、薬剤処置の３日後（ｄ３）、上昇したまま維持され、各グループにおいてｎ＝９であった。  エラーバーは、平均値の標準誤差である。またアスタリスクは、ｐ＜０．０５を示す。
【図４】γセクレターゼ阻害薬によりインビトロ処置された騒音暴露蝸牛における支持細胞の系列追跡を示す図。  （Ａ）ＬＹ４１１５７５処置後１ヶ月の、Ｓｏｘ２−ＣｒｅＥＲ及びＣｒｅレポーター導入遺伝子ｍＴ／ｍＧを有する失聴マウスの蝸牛組織における外有毛細胞領域（白括弧）において、Ｓｏｘ２系列（ＧＦＰ）及びミオシンＶＩＩａ（青色）に対して陽性のダブル標識細胞（矢印先端部）が観察された。系統タグによる有毛細胞共通標識は、Ｓｏｘ２陽性細胞からの導出を示しており、従って、支持細胞の分化転換によって成熟マウスの蝸牛における失聴後に再生された有毛細胞の証拠となる。Ｓｏｘ２−ＣｒｅＥＲ及びｍＴ／ｍＧのダブルトランスジェニックマウスのＬＹ４１１５７５処置済の耳の共焦点ｘｙ投射画像は、蝸牛の縦断的周波数マップの８ｋＨｚ領域にある。  （Ｂ）Ａと同一領域の共焦点ｘｚ投射は、外有毛細胞領域（白括弧）の中間部分のミオシンＶＩＩａ陽性細胞がＧＦＰ陽性有毛束構造を有することを示し、Ｓｏｘ２系統（矢印先端部）を示している。図示の細胞は、支持細胞と同様に、基底膜（矢印）に付着した。  （Ｃ）ＬＹ４１１５７５処置後１ヶ月の、失聴した蝸牛のｘｙ投射の１１．３ｋＨｚ領域における外有毛細胞領域（白括弧）に、ミオシンＶＩＩａ（青色）及びＳｏｘ２系統（緑）でダブル標識された細胞が観察された（矢印先端部）。起源有毛細胞は、赤色の毛束を融資、新たなＳｏｘ２系統有毛細胞は緑色の（ＧＦＰ陽性）毛束を有する。より拡大の大きな画像（挿入画、スケールバーは２μＭ）では、Ｓｏｘ２陽性細胞（緑色毛束）より導出された細胞に隣接の起源（赤色）毛束を有する有毛細胞を示す。  （Ｄ）Ｃと同一領域の断面図では、外有毛細胞領域（白括弧）内のミオシンＶＩＩａ陽性細胞がＧＦＰ陽性有毛束構造を有することを示している。図示の細胞は、基底膜（矢印）に付着している。核の位置が基底膜に近接していることに留意されたい。  （Ｅ）８ｋＨｚ領域における対照系（Ａに対して対側）の耳のｘｙ投射画像には、ダブル標識細胞が観察されなかった。白括弧は、外有毛細胞領域を示す。  （Ｆ）ｘｚ投射画像では、対照系の対側の耳におけるダブル標識有毛細胞の欠如を裏付けている。  スケールバーはすべて、５０μｍである。  （Ｇ）周波数特定蝸牛領域（各グループにおいてｎ＝５）での失聴マウスにおける、ＬＹ４１１５７５処置後１ヶ月の外有毛細胞領域のＧＦＰ（Ｓｏｘ２系統）及びミオシンＶＩＩａのダブル標識細胞の定量化。エラーバーは、平均値の標準誤差である。
【図５】ＬＹ４１１５７５によるインビボ処置を施した損傷成体蝸牛の有毛細胞を示す図。  （Ａ）８ｋＨｚ領域、１１．３ｋＨｚ領域、及び１６ｋＨｚ領域における失聴した蝸牛の有毛細胞領域（白括弧）の有毛細胞（緑色、ミオシンＶＩＩａ）の数は、ＬＹ４１１５７５の処置（左耳）後３ヶ月で、対照系の耳（担体で処置された右耳）に比して増加し、この増加は、ホールマウントの共焦点ｘｙ投射画像における同一領域の支持細胞（青色、Ｓｏｘ２）の数の減少によって達成された。  （Ｂ）失聴マウスにおける対側担体処置済の耳の値に比して、ＬＹ４１１５７５による処置後３ヶ月の処置済の（左）耳における８ｋＨｚ領域及び１１．３ｋＨｚ領域の外有毛細胞において、有毛細胞及び支持細胞の数の著しい差が観察された（各グループにおいてｎ＝５）。  スケールバーはすべて、５０μｍである。エラーバーは、平均値の標準誤差であり、アスタリスクはｐ＜０．０５であることを示す。
【図６】ＬＹ４１１５７５処置後の失聴耳におけるＡＢＲ測定を示す図。  （Ａ、Ｂ）以下の時間経過に応じ、５．６６〜４５．２５ｋＨｚの７つの周波数での記録におけるＡＢＲ閾値において、右側の対照系の耳（Ａ）に比して左側のＬＹ４１１５７５処置済の耳（Ｂ）において低周波数（１６ｋＨｚまで）におけるＡＢＲ閾値の減少が現れた。騒音暴露前（騒音前、白丸）、騒音暴露後１日（騒音後、黒丸）、薬剤処置後１週間（１Ｗ、白四角）、処置後１ヶ月（１Ｍｏ、×印）、処置後３ヶ月（３Ｍｏ、黒三角）である（各グループにおいてｎ＝５）。８０ｄＢ（システムの最高音響出力）において応答が観察されなかった場合、閾値は８５ｄＢと指定された。  （Ｃ）同一マウスの薬剤処置後３ヶ月で記録された８ｋＨｚのＡＢＲ波の例。矢印先端部は、最大のピーク間振幅を有するピークを示す。ＬＹ４１１５７５処置済の耳において、まず６５ｄＢでピークを検出し、対照系側ではまず７５ｄＢでピークを検出することができた。  （Ｄ、Ｅ）８ｋＨｚ、１１．３３ｋＨｚ、及び１６ｋＨｚ（アスタリスク）における対照系の耳とＬＹ４１１５７５処置済の耳との間で、騒音暴露後１日と比して、薬剤処置後３ヶ月の閾値（Ｄ）及び波形１の振幅（Ｅ）の差が著しかった（各グループにおいてｎ＝５）。  エラーバーは、平均値の標準誤差である。
【図７】１１６ｄＢ  ＳＰＬの８〜１６ｋＨｚオクターブ帯域騒音に２時間暴露されたマウスにおける蝸牛アーキテクチャを示す図。  （Ａ）蝸牛全体に亘って有毛細胞（ミオシンＶＩＩａ）の喪失が現れ、２２ｋＨｚ領域において内有毛細胞の喪失とともに外有毛細胞の最大の喪失が観察された。  （Ｂ）今回の騒音暴露強度では、内有毛細胞の損傷も観察された２２ｋＨｚ領域を除き、蝸牛の大部分で支持細胞（Ｓｏｘ２）を維持したことにより、有毛細胞の喪失が達成された。  （Ｃ）統合画像は、基部（片１）、中間基部（片２）、中間頂部（片３）、頂部（片４）、及び対応の周波数を示している。  スケールバーは、５００μｍである。
【図８】騒音による損傷を負った若年成体マウスに対して全身投与されたＬＹ４１１５７５の脳幹反応及び有毛細胞形態に対するインビボ効果の解析を示す図。  （Ａ）５日間、腹腔内注射による毎日５０ｍｇ／ｋｇのＬＹ４１１５７５処置により、２〜４ヵ月後、低周波数に対する耳の反応性が高まった。４ｋＨｚ、８ｋＨＺ、及び１６ｋＨｚにおいて、１〜３ヶ月の間でＡＢＲの閾値に著しい改善が見られる。  （Ｂ）ファロジン着色（白色矢印）後、有毛細胞に不動毛束を検知することができた。ミオシンＶＩＩａについて着色された細胞は、外有毛細胞の喪失が中途の蝸牛の頂部において増加した。  アスタリスクは、ｐ＜０．０５であることを示す。スケールバーは、５０μｍである。
【図９】レポーター型を有する成熟マウスの蝸牛の標識を示す図。  Ｐ１にてタモキシフェンで処置されたレポーターラインｍＴ／ｍＧと交配されたＳｏｘ２−ＣｒｅＥｒマウスを、解剖後、ホールマウントとして検査した。Ｐ１にてＳｏｘ２を発現する細胞は、ＳＴＯＰシーケンスの除去後、ＧＦＰ陽性となることが予測されたが、Ｓｏｘ２を発現しなかった細胞はトマト標識を維持するであろう。５〜４５ｋＨｚ領域の支持細胞は、Ｓｏｘ２−Ｃｒｅレポーター（Ｓｏｘ２系統、緑色）のＧＦＰで標識している。一方、ミオシンＶＩＩａ標識有毛細胞（青色）は、ｔｄ−トマト標識（ｔｄ−トマト、赤色）を示しており、このパターンが５〜４５ｋＨｚ領域で保持されている（統合画像の毛束参照、統合）。恐らくＣｒｅのアクティビティが中途であったために、レポーター（例えば２２．６ｋＨｚ）のＧＦＰで標識されていない柱細胞があることに留意されたい。  スケールバーは、５０μｍである。
【図１０Ａ】γセクレターゼ阻害薬の構造を示す図。  ＤＡＰＴ（Ｎ−［（３，５−ジフルオロフェニル）アセチル］−Ｌ−アラニル−２−フェニル］グリシン−１、１−ジメチルエチルエステル）、Ｌ−６８５４５８（（５Ｓ）−（ｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−６−フェニル−（４Ｒ）ヒドロキシ−（２Ｒ）ベンジルヘキサノイル）−Ｌ−ｌｅｕ−Ｌ−ｐｈｅ−アミド）、ＢＭＳ−７０８１６３（Ａｖａｇａｃｅｓｔａｔ）、ＭＫ−０７５２、ＹＯ−０１０２７、ＭＤＬ２８１７０（Ｓｉｇｍａ）、ＬＹ４１１５７５（Ｎ−２（（２Ｓ）−２−（３，５−ジフルオロフェニル）−２−ヒドロキシエタノイル）−Ｎ１−（（７Ｓ）−５−メチル−６−オキソ−６、７−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］アゼピン−７−イル）−１−アラニンアミド）、及びＳｅｍａｇａｃｅｓｔａｔ（ＬＹ４５０１３９、（２Ｓ）−２−ヒドロキシ−３−メチル−Ｎ−（（１Ｓ）−１−メチル−２−｛［（１Ｓ）−３−メチル−２−オキソ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−３−ベンザゼピン−１−イル］アミノ｝−２−オキソエチル）ブタンアミド）の構造が示されている。
【図１０Ｂ】γセクレターゼ阻害薬の構造を示す図。  ＤＡＰＴ（Ｎ−［（３，５−ジフルオロフェニル）アセチル］−Ｌ−アラニル−２−フェニル］グリシン−１、１−ジメチルエチルエステル）、Ｌ−６８５４５８（（５Ｓ）−（ｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−６−フェニル−（４Ｒ）ヒドロキシ−（２Ｒ）ベンジルヘキサノイル）−Ｌ−ｌｅｕ−Ｌ−ｐｈｅ−アミド）、ＢＭＳ−７０８１６３（Ａｖａｇａｃｅｓｔａｔ）、ＭＫ−０７５２、ＹＯ−０１０２７、ＭＤＬ２８１７０（Ｓｉｇｍａ）、ＬＹ４１１５７５（Ｎ−２（（２Ｓ）−２−（３，５−ジフルオロフェニル）−２−ヒドロキシエタノイル）−Ｎ１−（（７Ｓ）−５−メチル−６−オキソ−６、７−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］アゼピン−７−イル）−１−アラニンアミド）、及びＳｅｍａｇａｃｅｓｔａｔ（ＬＹ４５０１３９、（２Ｓ）−２−ヒドロキシ−３−メチル−Ｎ−（（１Ｓ）−１−メチル−２−｛［（１Ｓ）−３−メチル−２−オキソ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−３−ベンザゼピン−１−イル］アミノ｝−２−オキソエチル）ブタンアミド）の構造が示されている。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
成熟期の哺乳動物における生理活性有毛細胞の生成の需要はあったものの、目標が排他
的であった。ｂＨＬＨ転写因子Ａｔｏｈｌのトランスフェクションは、成長中、有毛細胞
の分化を推し進めるが、萌芽期又は新生児期の組織において有毛細胞の数を増加させる１
つのアプローチであるが、萌芽期の有毛細胞となる要素であった細胞が、成熟動物（１３
、１７、２６）としての反応性を喪失した。損傷を負った成体蝸牛（１６）へのアデノウ
イルスにおけるＡＴｏｈｌの供給は、ある程度の有毛細胞の分化を示したが、新たな有毛
細胞の数は明らかでなく、新たな有毛細胞を前駆体から追跡することができず、「新たな
」有毛細胞と、毒素又は騒音による損傷のトラウマから回復した有毛細胞との区別をつけ
ることが困難となった。有毛細胞の再生（６）への代替ルートとして、細胞周期阻害薬を
発現停止させることにより細胞分裂を刺激することが提案されているが、有毛細胞は、高
度に分化されているため、分裂後に自滅プログラムを活性化する傾向にあり、増殖が失聴
（３、２７、２８）を引き起こし得る。有毛細胞の再生は、蝸牛の細胞構成により困難と
なり、上皮細胞間の相互作用における僅かな変化が失聴（２９）の要因となる。有毛細胞
の表面が浸る内リンパ液のイオン環境を維持するために密着結合が要求され、外有毛細胞
の柔軟性及び分散が蝸牛の増幅器としての機能に影響を及ぼすが、これは外有毛細胞の収
縮によって達成され、内有毛細胞の形質導入装置による音声検出とともに、哺乳類の聴覚
（１、３０、３１）の感度及び広範に亘るダイナミックレンジの主要因となる。
【００２３】
本発明者らは最近、ノッチの阻害により、幹細胞からの有毛細胞の分化を増加させるこ
とと、γセクレターゼ阻害薬による処置済の幹細胞における転写の発現停止により、有毛
細胞が運命付けられること（１５）を妨げるため、このメカニズムはＡｔｏｈ１に依存し
ていることとを示した。本明細書において記載のとおり、内耳幹細胞を使用して効能のあ
るγセクレターゼ阻害薬を選択した。ノッチを通じて活性信号伝達を行う細胞に唯一有効
なストラテジーとして、ノッチ経路をターゲットにした。損傷後の熟年期哺乳動物におけ
るノッチ信号伝達の増加が一部（１２）から指摘されていたものの、生後の早期期間（１
３）における有毛細胞数へのγセクレターゼ阻害薬の効果の喪失と、生誕（１４）後にノ
ッチ信号伝達が消失することを指摘するデータとは、双方ともに、γセクレターゼ阻害薬
が成熟期哺乳類の蝸牛における有毛細胞の数に何らの影響も有さないことを指摘している
。従って、特に細胞周期を操作するか、若しくは、胎芽期のノッチ遺伝子のノックアウト
によって新たな有毛細胞を生成しようとする過去の試みの失敗に着目すると、余剰の有毛
細胞が大量に得られるものの、この補足的な有毛細胞は機能せず、実際のところ内耳構造
を損傷する可能性があるため、依然として動物は失聴したままであり、新たな有毛細胞を
生成することによって聴覚喪失を治療することは困難である。これは規定数以上の有毛細
胞は機能しないばかりか、実際、内耳の構造に損傷を与え得るため、余剰な有毛細胞の数
を増やすだけで依然として動物は失聴したままとなる。
【００２４】
驚くことに、本明細書に記載のとおり、騒音による損傷後のノッチ阻害は、聴力の回復
に繋がる。特定の理論に縛られるつもりはないが、これは、新生児期を除く動物において
支持細胞が有毛細胞に分化転換するために発生するものであると考えられる。新たな有毛
細胞内の核の基底位置は、支持細胞からの導出と同一であるが、これは通常、有毛細胞の
面の下方面に位置づけられる。支持細胞の分化転換は、Ａｔｏｈｌによって誘発されるが
、これは分化因子に対して同様の能力で作用してもよく、一部は何らかの形でＡｔｏｈｌ
と関連し、細胞の再プログラム及びニューロン（３２、３３）への分化転換を許容する。
支持細胞は、Ｓｏｘ２、Ｍｕｓａｓｈｉ１、及びＧＬＡＳＴ（３４〜３６）等の幹細胞マ
ーカーを発現し、生後の早期期間（２６）における増殖及び分化転換の能力を有している
。同様の生後時間フレーム（３７）において、感覚上皮細胞による細胞塊の形成能力が見
出される。
【００２５】
有毛細胞を回復するための薬剤治療が新たなアプローチであり、蝸牛への実際の注射を
伴うことなく、内耳リンパ液に供給することが遺伝子治療に勝る利点となり、またより広
範な領域で有毛細胞への転換を行う遺伝子治療に比して、有毛細胞分化を感覚上皮領域の
細胞に効果的に制限してもよい。中耳のアプローチを使用して、損傷を負った内耳へのＬ
Ｙ４１１５７５の供給を行った。驚くことに、この経路で、治療効果を得るのに十分な服
薬量を供給することができた。正円窓膜が細胞層から成るため、薬剤の脂質可溶性は浸透
性（２３、２４）に有利に働く。
【００２６】
以前は新たな細胞が死滅するであろうと予測されてきたが、驚くことに、回復は少なく
とも３ヶ月間続き、最長時点を測定した。
【００２７】
内耳幹細胞及びトランスジェニックマウスを使用した新規のアプローチは、このマウス
内で有毛細胞を再生できたことを実証する上で重要であった。カスパーゼ３マウスにより
、新たな有毛細胞が正確に定量化されるように、他の細胞に損傷を与えることなく有毛細
胞を選択的に取り除くことができたモデルを提供した。ｍＴ／ｍＧとＳｏｘ２−ＣｒｅＥ
ｒのダブルｔランすジェニックマウスによる系列追跡では、薬剤治療が新たな有毛細胞の
生成に繋がるが、系列追跡を行わない場合に回復の主要因となり得た有毛細胞たばの回復
には繋がらないことを明確に実証することができた。ＡＢＲによる閾値の改善が見られ、
損傷が深刻な状況において、γセクレターゼ阻害薬の投与により聴覚の改善を示した。有
毛細胞の総数は、改善を示したＡＢＲと同一の周波数領域において増加を示した。従って
、改善された聴覚の周波数選択性を使用して、有毛細胞数の増分と、改善を示した聴覚閾
値との間の相関を判定した。深刻な騒音へ暴露されたモデルの損傷は、ヒトの有毛細胞の
喪失を反映しており、基部で最も深刻であり、主に外有毛細胞（２２）に制限された。蝸
牛の頂部における閾値の改善は、有毛細胞の数が外毛細胞のアクティビティによって検出
可能な変化を生むまでのレベルに増えたことに由来していると考えられた。蝸牛の基部に
より大きな損傷を負わせた結果、基部の有毛細胞数は、ＡＢＲの閾値を下げるのに十分と
はならず、頂部における有毛細胞の増加をＤＰＯＡＥ閾値の変化によって検出することが
できなかった。生理学的且つ細胞に関する証拠により、定量的で、周波数と相関を有し、
支持細胞からの系列追跡による有毛細胞生成の明確な証拠を提供する、有毛細胞生成の決
定的な立証を行った。
【００２８】
治療方法
本明細書に記載の化合物及び方法は、蝸牛有毛細胞喪失の結果として聴覚障害を患って
いるか、若しくは、聴覚障害の進行のリスクのある、新生児期を除く（例えば、１歳、２
歳、３歳、４歳、５歳、６歳、７歳、８歳、９歳、１０歳、１１歳、１２歳又は１３歳の
幼児期、青年期、又は成熟期の）哺乳動物（例えば、ヒト）に対する治療に適切である。
本明細書に記載の方法は、蝸牛有毛細胞の喪失や、聴覚障害又は失聴等、耳内の有毛細胞
喪失の結果として引き起こされるあらゆる障害の治療に使用することができる。これらの
対象は、本明細書に記載の薬剤による治療を受けることができる。このアプローチは、損
傷発生後、深刻な聴覚損失に対する治療を直ちに行う場合に最適であり、長時間経過後、
ノッチ信号伝達が成体のベースラインレベルに戻ると、効果が薄れることもある。
【００２９】
いくつかの実施形態において、方法は、蝸牛有毛細胞喪失のリスクがある患者及び／又
は蝸牛有毛細胞を喪失した患者を選択するステップを備える。代替又は追加として、この
方法は、有毛細胞喪失のリスクがある患者及び／又は蝸牛有毛細胞を喪失した患者を選択
するステップを備える。例えば、蝸牛有毛細胞を喪失したヒト又は蝸牛有毛細胞喪失の進
行のリスクのあるヒトは、本明細書に記載の治療方法を施す候補である。蝸牛有毛細胞を
喪失したヒト又は蝸牛有毛細胞の喪失を引き起こすリスクのあるヒトは、平均的なヒトに
比してよく聞こえないか、若しくは、有毛細胞喪失を起こす前に比してよく聞こえない。
例えば、聴覚が少なくとも５％、１０％、３０％、又は５０％以上減少し得る。
【００３０】
対象は、何らかの理由により、又は何らかの種別の事象の結果として、蝸牛有毛細胞の
喪失に関連の聴覚喪失を患い得る。例えば、対象は、耳の構造への身体外傷等のトラウマ
的事象などの物理的耳毒性障害の結果として失聴するか、又は聴覚障害を患い得る。好適
な実施形態において、対象は、急激な大音量騒音への暴露又は大音量騒音への持続的暴露
の結果として聴覚喪失を患い得る（又は聴覚障害を進行させるリスクを負い得る）。例え
ば、コンサート会場、空港滑走路、及び建設現場への持続的又は反復的暴露により、内耳
損傷を引き起こし、引いては聴覚喪失を引き起こし得る。例えば自宅や職場で高レベルの
環境騒音に晒された対象に対して、本明細書に記載の方法を使用して治療を行うことがで
きる。対象は、例えば、通常、正常な老化作用と関連している老人性難聴等、老化の結果
としての聴覚障害を患い得る。例えば、ＨｕａｎｇによるＭｉｎｎ  Ｍｅｄ．９０（１０
）、４８〜５０（２００７）及びＦｒｉｓｉｎａによるＡｎｎａｌｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎ
ｅｗ  Ｙｏｒｋ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、１１７０、７０８〜７１７
（２００９）参照のこと。これは１８歳程度の若年の対象にも生じ得るが、通常は、例え
ば４０歳、４５歳、５０歳、５５歳、６０歳、６５歳、７０歳、７５歳、８０歳、８５歳
、又は９０歳を越える対象等、より熟年の対象に特徴付けられる。対象は、有毛細胞の喪
失による耳鳴り（耳内での共鳴に特徴付けられる）を患い得る。対象は、科学的な耳毒性
障害を経験した可能性もあり、耳毒には、以下に記載の例を含む、抗がん剤、サリチル酸
塩、キニーネ、アミノグリコシド系抗生物質等の治療薬や、食物や医薬品中の混入物質、
及び環境又は産業的汚染物質が含まれる。
【００３１】
いくつかの実施形態において、この方法は、例えば物理的（騒音、トラウマ）又は化学
的（耳毒）な障害等、有毛細胞の喪失を引き起こすか、若しくは、引き起こす可能性があ
って対象のノッチ信号伝達の増加をもたらす耳毒性障害への暴露から１日、２日、３日、
４日、５日、６日、７日、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、又は６週間以内に
、本明細書に記載の化合物を対象に投与するステップを備える。
【００３２】
いくつかの実施形態において、本発明の特徴としての化合物及び方法を使用した治療に
適した対象には、両側性前庭機能障害及び片側性前庭機能障害を含む前庭機能障害を患う
対象が含まれ得る。またこの方法は、例えば、全身投与又は内リンパ嚢（ＥＳ）を介した
投与により、本明細書に記載の薬剤を治療効果のある分量、投与するステップを備える。
前庭機能障害は、浮動性目まい、平衡失調、回転性目まい、吐き気、かすみ目を含む症状
によって特徴付けられる内耳障害であり、聴覚の問題、疲労、及び認知機能の変化を伴う
こともある。本明細書に記載の方法によって治療可能な前庭機能障害は、前庭の有毛細胞
の喪失を引き起こす、遺伝子異常又は先天性異常、ウイルス感染又はバクテリア感染等の
感染、外傷性又は非外傷性の傷害の結果として引き起こされ得る。いくつかの実施形態に
おいて、本明細書に記載の方法により、平衡傷害すなわちメニエール病（特発性内リンパ
水腫）を治療してもよい。前庭機能障害は、疾患（例えば、回転性目まい、吐き気、及び
かすみ目）の個々の症状を測定することによって検査することが最も多い。
【００３３】
代替又は追加として、本発明において特徴付けられる化合物及び方法を予防的に使用す
ることにより、例えば、有毛細胞の喪失と関連の聴覚喪失、失聴、又はその他の聴覚障害
の進行を妨げたり、緩和したり、若しくは遅延することができる。例えば、１つ以上の化
合物を含有する組成物は、耳毒治療、すなわち有毛細胞に対して毒性を有するリスクがあ
るため、聴覚障害を引き起こすリスクのある治療（前、後、又は同時）で投与され得る。
耳毒性薬剤には、抗生物質のネオマイシン、カナマイシン、アミカシン、バイオマイシン
、ゲンタマイシン、トブラマイシン、エリスロマイシン、バンコマイシン、及びストレプ
トマイシンと、シスプラチン等の化学療法薬、トリサルチル酸コリンマグネシウム、ジク
ロフェナク、ジフルニサル、フェノプロフェン、フルルビプロフェン、イブプロフェン、
インドメタシン、ケトプロフェン、メクロフェナメート、ナブメトン、ナプロキセン、オ
キサプロジン、フェニルブタゾン、ピロキシカム、サルサラート、スリンダク、及びトル
メチン等の非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、利尿薬、アスピリン等のサリチル酸
塩、キニーネ及びクロロキン等のマラリア治療薬が含まれる。例えば、本明細書に記載の
化合物及び方法を使用して化学療法を施された対象を治療することができる。例えば化学
療法薬のシスプラチンは、聴覚喪失を引き起こすものと知られている。従って１つ以上の
化合物を含有する組成物は、シスプラチンの副作用を防ぐか、その重症度を緩和するため
に、シスプラチン治療時（例えば、前、後、又は同時）に投与することができる。このよ
うな組成物は、第２の治療薬の前、後、及び／又は同時に投与することができる。これら
２つの薬剤は、異なる投与経路で投与されてもよい。
【００３４】
通常、本明細書に記載の化合物及び方法を使用して、耳の有毛細胞の成長を促し、且つ
／又は、耳（例えば、内耳、中耳、及び／又は外耳）の有毛細胞の数を増やすことができ
る。例えば、耳の有毛細胞の数は、処置前の有毛細胞の数に比して約２倍、３倍、４倍、
６倍、８倍、又は１０倍以上に増やすことができる。この新たな有毛細胞の成長により、
対象の聴力を効果的に回復するか、若しくは、対象の跳梁を少なくとも部分的に改善する
ことができる。例えば、薬剤投与により、約５％、１０％、１５％、２０％、４０％、６
０％、８０％、又は１００％以上、聴覚喪失を改善することができる。
【００３５】
適切に以下の処置を行うことにより、対象は、聴覚、又は内耳障害に関連の他の症状を
改善すべく、検査することができる。聴覚を測定する方法は既知であり、純音聴力検査、
気導試験、骨伝導試験が含まれる。これらの試験では、対象が聴き取ることのできる音量
（強さ）及びピッチ（周波数）の限界値を測定する。ヒトの聴覚試験には、行動観察聴力
試験（乳幼児〜７ヶ月までの子ども対象）、ビジュアル強化配向聴力検査（７ヶ月〜３歳
の子ども対象）、４歳以上の子どもを対象とする遊戯聴力試験、例えば耳語、純音聴力試
験等の年長の子ども及び成人を対象とした標+準聴覚試験、音叉試験、脳幹聴覚誘発反応
（ＢＡＥＲ）試験、又は聴覚性脳幹誘発電位（ＡＢＥＰ）試験が含まれる。耳音響放射検
査を使用して、蝸牛有毛細胞の機能を検査することもでき、蝸電図により、蝸牛の機能と
脳への神経経路の第１部分とについての情報を提供する。いくつかの実施形態において、
治療は、変更の有無を問わず継続することができ、若しくは、停止することもできる。
【００３６】
投薬量
「効果的な分量」とは、有益な、又は、所望の治療効果を得るのに十分な分量である。
この分量は、疾患の発現又は疾患の諸症状を妨げるのに必要な分量である予防に効果的な
分量と同一とすることもでき、若しくは異ならせることもできる。効果的な量は、１回以
上の投与、塗布、又は投薬で投与され得る。治療化合物の治療効果のある分量（すなわち
効果的投薬量）は、選択された治療化合物によって決まる。この組成物は、１日に１回以
上から、２日置き等、１週間に１回以上の回数まで投与することができる。当業者は、疾
患又は障害の深刻度、過去の治療、対象の普段の健康状態及び／又は年齢、及び現在罹患
中の他の疾患等を含むがこれに限定されない特定の要因が、対象を効果的に治療するのに
必要な投薬量及びタイミングに影響を及ぼすことを理解するであろう。さらに本明細書に
記載の治療化合物を治療効果のある分量使用することによる対象の治療には、１回の治療
及び一連の治療を含み得る。いくつかの実施形態において、日常生活の活動（芝刈り機、
トラック、オートバイ、飛行機、音楽（例えば、個人用音楽再生装置から聴く場合）、ス
ポーツイベント等）と関連の通常の騒音、又は例えば、コンサート会場、空港、及び建設
現場等の内耳損傷と引いては聴覚喪失を引き起こし得る大音量騒音等の騒音に持続的又は
反復的に晒された対象や、例えば自宅や職場等で高レベルの環境騒音に晒された対象に対
して、例えば進行や聴覚喪失を妨げる（リスク低減）か、若しくは、遅延させるため、例
えば周期的サイクルなど反復的に、投薬量の医薬組成物で治療を施すことができる。
【００３７】
治療化合物の投薬量、毒性、及び治療効果は、例えば、ＬＤ５０（人口の５０％に対す
る致死量）及びＥＤ５０（人口の５０％に対して治療効果を破棄する投薬量）を判定する
ために、例えば細胞培養又は実験動物における標準的な製薬的手順で判定することができ
る。毒性効果及び治療効果の間の投薬量の割合は、治療指数であり、ＬＤ５０／ＥＤ５０
の割合で表現することができる。高い治療指数を示す化合物が好適である。毒性の副作用
を有する化合物を使用することもあるが、非感染細胞への潜在的損傷を最小化することに
より、副作用を低減するために、罹患組織の部位をこのような化合物の標的とする供給シ
ステムを設計するよう注意が払われなければならない。
【００３８】
ヒトへの使用のための投薬量範囲を定式化するに際して、細胞培養試験及び動物実験よ
り得られたデータを使用することができる。例えば、外リンパ又は内リンパのサンプルを
取得することにより、薬物動態を評価し、例えば正円窓への投与後の動物モデルにおいて
、効果的な投薬量を近似することができる。このような化合物の投薬量は、ＥＤ５０を含
む、毒性がほぼ無いか、若しくは、全く無い濃度範囲内に収まるのが好ましい。この投薬
量は、採用される投薬形態及び利用される投与経路に応じて、この範囲内で変化してもよ
い。本発明に係る方法で使用される化合物は、細胞培養試験より治療効果のある投薬量を
推定することもでき、且つ／又は、投薬量は動物モデルで定式化されてもよい。あるいは
、過去にヒトに対して使用されてことのある化合物については、開始時点では、臨床的に
望ましい濃度を使用することができる。このような情報を使用して、ヒトに対して有用な
投薬量をより正確に判断することができる。
【００３９】
医薬組成物及び投与方法
本明細書に記載の方法は、例えばγセクレターゼ阻害薬等のノッチ阻害薬など、本明細
書において指定の化合物を活性成分として含有する医薬組成物の製造及び使用を含む。ま
たこの医薬組成物自体も含まれる。
【００４０】
この組成物は、例えばγセクレターゼ阻害薬等、１つ以上のノッチ阻害薬を含有し、例
えば、ＲＯ４９２９０９７、ＤＡＰＴ（Ｎ−［（３，５−ジフルオロフェニル）アセチル
］−Ｌ−アラニル−２−フェニル］グリシン−１，１−ジメチルエチルエステル）、Ｌ−
６８５４５８（（５Ｓ）−（ｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−６−フェニル−（４Ｒ）
ヒドロキシ−（２Ｒ）ベンジルヘキサノイル）−Ｌ−ｌｅｕ−Ｌ−ｐｈｅ−アミド）、Ｂ
ＭＳ−７０８１６３（Ａｖａｇａｃｅｓｔａｔ）、ＢＭＳ−２９９８９７（２−［（１Ｒ
）−１−［［（４−クロロフェニル）スルホニル］（２，５−ジフルオロフェニル）アミ
ノ］エチル−５−フルオロベンゼンブタン酸］、ＭＫ−０７５２、ＹＯ−０１０２７、Ｍ
ＤＬ２８１７０（Ｓｉｇｍａ）、ＬＹ４１１５７５（Ｎ−２（（２Ｓ）−２−（３，５−
ジフルオロフェニル）−２−ヒドロキシエタノイル）−Ｎ１−（（７Ｓ）−５−メチル−
６−オキソ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］アゼピン−７−イル）−１−
アラニンアミド、ＵＳ６，５４１，４６６号参照）、ＥＬＮ−４６７１９（ＬＹ４１１５
７５の２−ヒドロキシ−バレリアン酸アミドアナログ（ＬＹ４１１５７５は、３，５−ジ
フルオロ−マンデル酸アミド）（米国特許第６，５４１，４６６号））、ＰＦ−０３０８
４０１４（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−５，７−ジフルオロ−１，２，３，４−テトラヒドロ
ナフタレン−３−イルアミノ）−Ｎ−（１−（２−メチル−１−（ネオペンチルアミノ）
プロパン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）ペンタンアミド、Ｓａｍｏｎら
によるＭｏｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ、２０１２、１１、１５６５〜１５７５）、及び
化合物Ｅ（（２Ｓ）−２−｛［３，５−ジフルオロフェニル］アセチル］アミノ｝−Ｎ−
［（３Ｓ）−１−メチル−２−オキソ−５−フェニル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−１，４
−ベンゾジアゼピン−３−イル］プロパンアミド、ＷＯ９８／２８２６８及び  Ｓａｍｏ
ｎらによるＭｏｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ、２０１２、１１、１５６５〜１５７５参照
、Ａｌｅｘｉｓ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓより入手可能）、又は薬学上許容可能なそれ
らの塩が挙げられる。
【００４１】
いくつかの実施形態において、好適なγセクレターゼ阻害薬には、ｓｅｍａｇａｃｅｓ
ｔａｔ（ＬＹ４５０１３９としても既知、（２Ｓ）−２−ヒドロキシ−３−メチル−Ｎ−
［（１Ｓ）−１−メチル−２−オキソ−２−［［（１Ｓ）−２，３，４，５−テトラヒド
ロ−３−メチル−２−オキソ−１Ｈ−３−ベンザゼピン−１−イル］アミノ］エチル］ブ
タンアミド、Ｅｌｉ  Ｌｉｌｙより入手可能、ＷＯ０２／４７６７１及び米国特許第７，
４６８，３６５号）、ＬＹ４１１５７５（Ｎ−２（（２Ｓ）−２−（３，５−ジフルオロ
フェニル）−２−ヒドロキシエタノイル）−Ｎ１−（（７Ｓ）−５−メチル−６−オキソ
−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］アゼピン−７−イル）−Ｌ−アラニンア
ミド、Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙより入手可能、ＦａｕｑらによるＢｉｏｏｒｇ  Ｍｅｄ  Ｃｈ
ｅｍ  Ｌｅｔｔ  １７、６３９２−５、２００７）、ｂｅｇａｃｅｓｔａｔ（ＧＳＩ−９
５３としても既知、米国特許第７，３００，９５１号）、アリルスルホンアミド類（ＡＳ
、ＦｕｗａらによるＢｉｏｏｒｇ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  Ｌｅｔｔ  １６（１６）、４１８
４〜４１８９、２００６）、Ｎ−［Ｎ−（３，５−ジフロオロフェンアセチル）−Ｌ−ア
ラニル］−（Ｓ）−フェニルグリシンｔ−ブチルエステル（ＤＡＰＴ、Ｓｈｉｈ及びＷａ
ｎｇによるＣａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ６７、１８７９〜１８８２、２００７）、Ｎ−［Ｎ−
３，５−ジフルオロフェンアセチル］−Ｌ−アラニル−Ｓ−フェニルグリシンメチルエス
テル（ＤＡＰＭとしても既知、γセクレターゼ阻害薬ＸＶ１、ＥＭＤ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒ
ｅより入手可能）、化合物Ｗ（３，５−ビス（４−ニトロフェノキシ）安息香酸、Ｔｏｃ
ｒｉｓ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅより入手可能）、Ｌ−６８５，４５８（（５Ｓ）−（ｔｅ
ｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−６−フェニル−（４Ｒ）−ヒドロキシ−（２Ｒ）−
ベンジルヘキサノイル）−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンアミド、Ｓｉｇｍａ−Ａ
ｌｄｒｉｃｈより入手可能、ＳｈｅａｒｍｅｎらによるＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ３９、
８６９８〜８７０４、２０００）、ＢＭＳ−２８９９４８（４−クロロ−Ｎ−（２，５−
ジフルオロフェニル）−Ｎ−（（１Ｒ）−｛４−フルオロ−２−［３−（１Ｈ−イミダゾ
ール−１−イル）プロピル］フェニル）エチル）ベンゼンスルホンアミドヒドロクロリド
、Ｂｒｉｓｔｏｌ  Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂより入手可能）、ＢＭＳ−２９９８９７（
４−［２−（（１Ｒ）−１−｛［（４−クロロフェニル）スルホニル］−２，５−ジフル
オロアニリノ｝エチル）−５−フルオロフェニル］ブタン酸、Ｂｒｉｓｔｏｌ  Ｍｙｅｒ
ｓ  Ｓｑｕｉｂｂより入手可能、ＺｈｅｎｇらによるＸｅｎｏｂｉｏｔｉｃａ３９（７）
、５４４−５５、２００９参照）、ａｖａｇａｃｅｓｔａｔ（ＢＭＳ−７０８１６３とし
ても既知、（Ｒ）−２−（４−クロロ−Ｎ−（２−フルオロ−４−（１，２，４−オキサ
ジアゾール−３−イル）ベンジル）フェニルスルホンアミド）−５，５，５−トリフルオ
ロペンタンアミド、Ｂｒｉｓｔｏｌ  Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂより入手可能、Ａｌｂｒ
ｉｇｈｔらによるＪ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．３４４（３）、６８６〜
６９５、２０１３）、ＭＫ−０７５２（３−（４−（（４−クロロフェニル）スルホニル
）−４−（２，５−ジフルオロフェニル）シクロヘキシル）プロパン酸、Ｍｅｒｃｈより
入手可能）、ＭＲＫ−００３（（３’Ｒ、６Ｒ、９Ｒ）−５’−（２，２，２−トリフル
オロエチル）−２−（（Ｅ）−３−（４−（トリフルオロメチル）ピペリジン−１−イル
）−プロパ−１−エン−１−イル）−５，６，７，８，９，１０−ヘキサヒドロスピロ［
６，９−メタノベンゾ［８］アニュレン−１１，３’−［１，２，５］チアジアゾリジン
］１’，１’−ジオキサイド、Ｍｅｒｃｋより入手可能、ＭｉｚｕｍａらによるＭｏｌ  
Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ．１１（９）、１９９９〜２００９、２０１２）、ＭＲＫ−５６
０（Ｎ−［シス−４−［（４−クロロフェニル）スルホニル］−４−（２，５−ジフルオ
ロフェニル）シクロヘキシル］−１，１，１−トリフルオロ−メタンスルホンアミド、Ｂ
ｅｓｔらによるＪ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｅｘｐ  Ｔｈｅｒ．３１７（２）、７８６〜９
０、２００６）、ＲＯ−４９２９０９７（Ｒ４７３３としても既知、（Ｓ）−２，２−ジ
メチルーＮ１−（６−オキソ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］アゼピン−
７−イル）−Ｎ３−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピル）マロンアミド、Ｈ
ｏｆｆｍａｎ−Ｌａ  Ｒｏｃｈｅ  Ｉｎｃ．より入手可能、ＴｏｌｃｈｅｒらによるＪ  
Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．３０（１９）、２３４８〜２３５３、２０１２）、ＪＬＫ６（７
−アミノ−４−クロロ−３−メトキシイソクマリンとしても既知、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ
Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．より入手可能、ＰｅｔｉｔらによるＮａｔ．Ｃ
ｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．３、５０７〜５１１、２００１）、Ｔａｒｅｎｔｌｕｒｂｉｌ（（Ｒ
）−Ｆｌｕｒｂｉｐｒｏｆｅｎとしても既知、（２Ｒ）−２−（３−フルオロ−４−フェ
ニルフェニル）プロパン酸）、ＡＬＸ−２６０−１２７（化合物ＩＩとしても既知、Ｗｏ
ｌｆｅらによるＪ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４１、６、１９９８に記載）、スリンダク硫化物
（ＳＳｉｄｅ、高橋らによるＪ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２７８（２０）、１８６６４〜７
０、２００３）、１，１，１−トリフルオロ−Ｎ−（４−［５−フルオロ−２−（トリフ
ルオロメチル）フェニル］−４−｛［４（トリフルオロメチル）フェニル］スルホニル｝
シクロヘキシル）メタンスルホンアミド（ＵＳ２０１１０２７５７１９に記載）、Ｎ−［
トランス−３−［（４−クロロフェニル）スルホニル］−３−（２，５−ジフルオロフェ
ニル）シクロブチル］−１，１，１−トリフルオロメタンスルホンアミド（ＵＳ２０１１
０２６３５８０に記載）、Ｎ−［シス−３−［（４−クロロフェニル）スルホニル］−３
−（２，５−ジフルオロフェニル）シクロブチル］−１，１，１−トリフルオロメタンス
ルホンアミド（ＵＳ２０１１０２６３５８０に記載）、Ｎ−［シス−３−［（４−クロロ
フェニル）スルホニル］−３−（２−シアノ−５−フルオロフェニル）シクロブチル］−
１，１，１−トリフルオロメタンスルホンアミド（ＵＳ２０１１０２６３５８０に記載）
、Ｎ−［シス−３−［（４−クロロフェニル）スルホニル］−３−（２，５−ジクロロフ
ェニル）シクロブチル］−１，１，１−トリフルオロメタンスルホンアミド（ＵＳ２０１
１０２６３５８０に記載）、Ｎ−（シス−３−（２，５−ジフルオロフェニル）−３−｛
［４−（トリフルオロメチル）フェニル］スルホニル｝シクロブチル）−１，１，１−ト
リフルオロメタンスルホンアミド（ＵＳ２０１１０２６３５８０に記載）、Ｎ−｛シス−
３−（５−クロロ−２−フルオロフェニル）−３−［（４−クロロフェニル）スルホニル
］シクロブチル｝−１，１，１−トリフルオロメタンスルホンアミド（ＵＳ２０１１０２
６３５８０に記載）、Ｎ−｛シス−３−（２，５−ジフルオロフェニル）−３−［（４−
フルオロフェニル）スルホニル］シクロブチル｝−１，１，１−トリフルオロメタンスル
ホンアミド（ＵＳ２０１１０２６３５８０に記載）、Ｎ−｛シス−３−（２，５−ジフル
オロフェニル）−３−［（３，４−ジフルオロフェニル）スルホニル］シクロブチル｝−
１，１，１−トリフルオロメタンスルホンアミド（ＵＳ２０１１０２６３５８０に記載）
、Ｎ−［シス−３−［（４−シアノフェニル）スルホニル］−３−（２，５ジフルオロフ
ェニル）シクロブチル］−１，１，１−トリフルオロメタンスルホンアミド（ＵＳ２０１
１０２６３５８０に記載）、４−｛［シス−３−［（４−クロロフェニル）スルホニル］
−３−（２，５−ジフルオロフェニル）シクロブチル］［トリフルオロメチル）スルホニ
ル］アミノ｝ブタン酸（ＵＳ２０１１０２６３５８０に記載）、Ｎ−［シス−３−［（４
−クロロフェニル）スルホニル］−３−（２，５−ジフルオロフェニル）シクロブチル］
−１，１，１−トリフルオロ−Ｎ−［２−（テトラヒドロ−２−ピラン−２−イルオキシ
）エチル］メタンスルホンアミド（ＵＳ２０１１０２６３５８０に記載）；メチル｛［シ
ス−３−［（４−クロロフェニル）スルホニル］−３−（２，５−ジフルオロフェニル）
シクロブチル］［（トリフルオロメチル）スルホニル］アミノ｝アセテート（ＵＳ２０１
１０２６３５８０に記載）、Ｎ−［３−［（４−クロロフェニル）スルホニル］−３−（
２，５−ジフルオロフェニル）シクロブチル］−１，１，１−トリフルオロ−Ｎ−メチル
メタンスルホンアミド（ＵＳ２０１１０２６３５８０に記載）、Ｎ−［３−［（４−クロ
ロフェニル）スルホニル］−３−（２，５−ジフルオロフェニル）シクロブチル］−１，
１，１−トリフルオロ−Ｎ−メチルメタンスルホンアミド（ＵＳ２０１１０２６３５８０
に記載）、メチル４−｛［シス−３−［（４−クロロフェニル）スルホニル］−３−（２
，５−ジフルオロフェニル）シクロブチル］［（トリフルオロ−メチル）スルホニル］ア
ミノ｝ブタノアート（ＵＳ２０１１０２６３５８０に記載）、Ｎ−［シス−３−［（４−
クロロフェニル）スルホニル］−３−（２，５−ジフルオロフェニル）シクロブチル］−
Ｎ−［（トリフルオロメチル）スルホニル］グリシン（ＵＳ２０１１０２６３５８０に記
載）、Ｎ−［シス−３−［（４−クロロフェニル）スルホニル］−３−（２，５−ジフル
オロフェニル）−１−メチルシクロブチル］−１，１，１−トリフルオロメタンスルホン
アミド（ＵＳ２０１１０２６３５８０に記載）、Ｎ−（シス−３−（２，５−ジフルオロ
フェニル）−１−メチル−３−｛［４−（トリフルオロメチル）フェニル］スルホニル｝
シクロブチル）−１，１，１−トリフルオロメタンスルホンアミド（ＵＳ２０１１０２６
３５８０に記載）、Ｎ−［シス−３−［（４−クロロフェニル）スルホニル］−３−（２
，５−ジフルオロフェニル）シクロブチル］−１，１，１−トリフルオロ−Ｎ−［（トリ
フルオロメチル）スルホニル］メタンスルホンアミド（ＵＳ２０１１０２６３５８０に記
載）、ナトリウム［シス−３−［（４−クロロフェニル）スルホニル］−３−（２，５−
ジフルオロフェニル）シクロブチル］［（トリフルオロメチル）スルホニル］アザニド（
ＵＳ２０１１０２６３５８０に記載）、カリウム［シス−３−［（４−クロロフェニル）
スルホニル］−３−（２，５−ジフルオロフェニル）シクロブチル］［（トリフルオロメ
チル）スルホニル］アザニド（ＵＳ２０１１０２６３５８０に記載）、Ｎ−［シス−３−
［（４−トリフルオロメトキシフェニル）スルホニル］−３−（２，５−ジフルオロフェ
ニル）シクロブチル］−１，１，１−トリフルオロメタンスルホンアミド（ＵＳ２０１１
０２６３５８０に記載）、１，１，１−トリフルオロ−Ｎ−（４−［５−フルオロ−２−
（トリフルオロメチル）フェニル］−４−｛［４（トリフルオロメチル）フェニル］スル
ホニル｝シクロヘキシル）メタンスルホンアミド（ＵＳ２０１１０２６３５８０に記載）
、γセクレターゼ阻害薬Ｉ（Ｚ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｎｌｅ−ＣＨＯとしても既知、ベンジ
ルオキシカルボニル−ロイシル−ロイシル−ノルロイシナール、Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍよ
り入手可能）、γセクレターゼ阻害薬ＩＩ、
【００４２】
【化１】
2019172679.tif 000002
（ＭＯＬ）（ＣＤＸ）（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍより入手可能）、γセクレターゼ阻害薬Ｉ
ＩＩ、（Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−Ｌｅｕ−ロイシナール、Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ
より入手可能）、γセクレターゼ阻害薬ＩＶ、（Ｎ−（２−ナフトイル）−Ｖａｌ−フェ
ニルアラニナール、Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍより入手可能）、γセクレターゼ阻害薬Ｖ（Ｚ
−ＬＦ−ＣＨＯとしても既知、Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−Ｌｅｕ−フェニルアラニ
ナール、ＥＭＤ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅより入手可能）、γセクレターゼ阻害薬ＶＩ（１−
（Ｓ）−ｅｎｄｏ−Ｎ−（１，３，３）トリメチルビシクロ［２，２，１］ヘプト−２−
イル）−４−フルオロフェニルスルホンアミド、ＥＭＤ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅより入手可
能）、γセクレターゼ阻害薬ＶｌＩ、（化合物Ａとしても既知、ＭＯＣ−ＬＬＣＨＯ、メ
チルオキシカルボニル−ＬＬ−ＣＨＯ、Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍより入手可能）、γセクレ
ターゼ阻害薬Ｘ、（｛１Ｓ−ベンジル−４Ｒ−［１−（１Ｓ−カルバモイル−２−フェン
エチルカルバモイル）−１Ｓ−３−メチルブチルカルバモイル］−２Ｒ−ヒドロキシ−５
−フェニルペンチル｝カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル、Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍよ
り入手可能）、γセクレターゼ阻害薬ＸＩ、（７−アミノ−４−クロロ−３−メトキシイ
ソクマリン、Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍより入手可能）、γセクレターゼ阻害薬ＸＩＩ、（Ｚ
−Ｉｌｅ−Ｌｅｕ−ＣＨＯとしても既知、Ｓｈｉｈ及びＷａｎｇによるＣａｎｃｅｒ  Ｒ
ｅｓ．６７、１８７９〜１８８２、２００７）、γセクレターゼ阻害薬ＸＩＩＩ、（Ｚ−
Ｔｙｒ−Ｉｌｅ−Ｌｅｕ−ＣＨＯ、Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍより入手可能）、γセクレター
ゼ阻害薬ＸＩＶ、（Ｚ−Ｃｙｓ（ｔ−Ｂｕ）−Ｉｌｅ−Ｌｅｕ−ＣＨＯ、Ｃａｌｂｉｏｃ
ｈｅｍより入手可能）、γセクレターゼ阻害薬ＸＶＩＩ、（ＷＰＥ−ＩＩＩ−３１Ｃとし
ても既知）、
【００４３】
【化２】
2019172679.tif 000003
（ＭＯＬ）（ＣＤＸ）（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍより入手可能）、γセクレターゼ阻害薬Ｘ
ＩＸ、（ベンゾジアゼピンとしても既知、（２Ｓ，３Ｒ）−３−（３，４−ジフルオロフ
ェニル）−２−（４−フルオロフェニル）−４−ヒドロキシ−Ｎ−（（３Ｓ）−２−オキ
ソ−５−フェニル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］［１，４］ジアゼピン−３−
イル）−ブチルアミド、ＣｈｕｒｃｈｅｒらによるＪ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ．４６（１２）
、２２７５−８、２００３）、γセクレターゼ阻害薬ＸＸ、（ジベンザゼピン、（Ｓ，Ｓ
）−２−［２−（３，５−ジフルオロフェニル）アセチルアミノ］−Ｎ−（５−メチル−
６−オキソ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］アゼピン−７−イル）プロピ
オンアミド、
【００４４】
【化３】
2019172679.tif 000004
（ＭＯＬ）（ＣＤＸ）（ＷｅｉｈｏｆｅｎらによるＳｃｉｅｎｃｅ２９６、２２１５〜２
２１８、２００２、Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍより入手可能）、γセクレターゼ阻害薬ＸＸＩ
、（（Ｓ，Ｓ）−２−［２−（３，５−ジフルオロフェニル）−アセチルアミノ］−Ｎ−
（１−メチル−２−オキソ−５−フェニル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］［１
，４］ジアゼピン−３−イル）−プロピオンアミド、Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍより入手可能
）、５−メチル−２−プロパン−２−イルシクロヘキシル）Ｎ−［４−メチル−１−［（
４−メチル−１−オキソペンタン−２−イル）アミノ］−１−オキソペンタン−２−イル
］カルバメート（ＨＤＨ  Ｐｈａｒｍａ  Ｉｎｃ．より入手可能）、Ｎ−トランス−３，
５−ジメトキシシンナモイル−Ｉｌｅ−ロイシナール（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍより入手可
能）、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−バリナール、イソバレ
リル−ＶＶ−Ｓｔａ−Ａ−Ｓｔａ−ＯＣＨ３（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍより入手可能）、ジ
エチル−（５−フェニル−３Ｈ−アゼピン−２−イル）−アミン（ＵＳ８１８８０６９に
記載）、ジエチル−（５−イソプロピル−３Ｈ−アゼピン−２−イル）−アミン（ＵＳ８
１８８０６９に記載）、ジエチル−（４−フェニル−３Ｈ−アゼピン−２−イル）−アミ
ン（ＵＳ８１８８０６９に記載）、ジエチル−（６−フェニル−３Ｈ−アゼピン−２−イ
ル）−アミン（ＵＳ８１８８０６９に記載）、５−フェニル−１，３−ジヒドロ−アゼピ
ン−２−オン（ＵＳ８１８８０６９に記載）；５−イソプロピル−１，３−ジヒドロ−ア
ゼピン−２−オン（ＵＳ８１８８０６９に記載）、４−フェニル−１，３−ジヒドロ−ア
ゼピン−２−オン（ＵＳ８１８８０６９に記載）；６−フェニル−１，３−ジヒドロ−ア
ゼピン−２−オン（ＵＳ８１８８０６９に記載）、２−ブトキシ−５−フェニル−３Ｈ−
アゼピン（ＵＳ８１８８０６９に記載）、１−メチル−５−フェニル−１，３−ジヒドロ
−アゼピン−２−オン（ＵＳ８１８８０６９に記載）、５−イソプロピル−１−メチル−
１，３−ジヒドロ−アゼピン−２−オン（ＵＳ８１８８０６９に記載）、１−メチル−４
−フェニル−１，３−ジヒドロ−アゼピン−２−オン（ＵＳ８１８８０６９に記載）、１
−メチル−６−フェニル−１，３−ジヒドロ−アゼピン−２−オン（ＵＳ８１８８０６９
に記載）、１−メチル−５−フェニル−１Ｈ−アゼピン−２，３−ジオン−３−オキシム
（ＵＳ８１８８０６９に記載）、５−イソプロピル−ｌ−メチル−１Ｈ−アゼピン−２，
３−ジオン−３−オキシム（ＵＳ８１８８０６９に記載）、１−メチル−６−フェニル−
１Ｈ−アゼピン−２，３−ジオン−３−オキシム（ＵＳ８１８８０６９に記載）、１−メ
チル−４−フェニル−１Ｈ−アゼピン−２，３−ジオン−３−オキシム（ＵＳ８１８８０
６９に記載）、３−アミノ−１−メチル−５−フェニル−１，３−ジヒドロ−アゼピン−
２−オン（ＵＳ８１８８０６９に記載）、３−アミノ−５−イソプロピル−１−メチル−
１，３−ジヒドロ−アゼピン−２−オン（ＵＳ８１８８０６９に記載）、３−アミノ−１
−メチル−４−フェニル−１，３−ジヒドロ−アゼピン−２−オン（ＵＳ８１８８０６９
に記載）、３−アミノ−１−メチル−６−フェニル−１，３−ジヒドロ−アゼピン−２−
オン（ＵＳ８１８８０６９に記載）、（Ｓ）−［１−（１−メチル−２−オキソ−５−フ
ェニル−２，３−ジヒドロ−ＩＨ−アゼピン−３−イルカルバモイル）エチル］−カルバ
ミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（ＵＳ８１８８０６９に記載）、［（Ｓ）−１−（５−
イソプロピル−１−メチル−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−アゼピン−３−イル
カルバモイル）−エチル］カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（ＵＳ８１８８０６９
に記載）、［（Ｓ）−１−（１−メチル−２−オキソ−４−フェニル−２，３−ジヒドロ
−１Ｈ−アゼピン−３−イルカルバモイル）−エチル］カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエ
ステル（ＵＳ８１８８０６９に記載）、［（Ｓ）−１−（１−メチル−２−オキソ−６−
フェニル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−アゼピン−３−イルカルバモイル）エチル］−カル
バミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（ＵＳ８１８８０６９に記載）、（Ｓ）−２−アミノ
−Ｎ−（１−メチル−２−オキソ−５−フェニル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−アゼピン−
３−イル）−プロピオンアミド（ＵＳ８１８８０６９に記載）、（Ｓ）−２−アミノ−Ｎ
−（５−イソプロピル−１−メチル−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−アゼピン−
３−イル）−プロピオンアミド（ＵＳ８１８８０６９に記載）、（Ｓ）−２−アミノ−Ｎ
−（１−メチル−２−オキソ−６−フェニル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−アゼピン−３−
イル）プロピオンアミドヒドロクロリド（ＵＳ８１８８０６９に記載）、（Ｓ）−２−ア
ミノ−Ｎ−（１−メチル−２−オキソ−４−フェニル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−アゼピ
ン−３−イル）プロピオンアミドヒドロクロリド（ＵＳ８１８８０６９に記載）、（Ｓ）
−２−フルオロ−３−メチル酪酸（ＵＳ８１８８０６９に記載）、（Ｓ）−２−ヒドロキ
シ−３−メチル−Ｎ−［（Ｓ）−１−（（Ｓ）−１−メチル−２−オキソ−５−フェニル
−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−アゼピン−３−イルカルバモイル）−エチル］−ブチルアミ
ド（ＵＳ８１８８０６９に記載）、（Ｓ）−２−フルオロ−３−メチル−Ｎ−［（Ｓ）−
１−（１−メチル−２−オキソ−５−フェニル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−アゼピン−３
−イルカルバモイル）−エチル］−ブチルアミド（ＵＳ８１８８０６９に記載）、（Ｓ）
−２−ヒドロキシ−Ｎ−［（Ｓ）−１−（５−イソプロピル−１−メチル−２−オキソ−
２，３−ジヒドロ−１Ｈ−アゼピン−３−イルカルバモイル）エチル］−３−メチル−ブ
チルアミド（ＵＳ８１８８０６９に記載）、（Ｓ）−２−ヒドロキシ−３−メチル−Ｎ−
［（Ｓ）−１−（１−メチル−２−オキソ−４−フェニル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ア
ゼピン−３−イルカルバモイル）−エチル］−ブチルアミド（ＵＳ８１８８０６９に記載
）、（Ｓ）−２−ヒドロキシ−３−メチルＮ−［（Ｓ）−１−（１−メチル−２−オキソ
−６−フェニル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−アゼピン−３−イルカルバモイル）−エチル
］−ブチルアミド（ＵＳ８１８８０６９に記載）、及び（Ｓ）−２−フルオロ−３−メチ
ル−Ｎ−［（Ｓ）−１−（１メチル−２−オキソ−６−フェニル−２，３−ジヒドロ−１
Ｈ−アゼピン−３−イルカルバモイル）−エチル］−ブチルアミド（ＵＳ８１８８０６９
に記載）、又は薬学上許容可能なそれらの塩が含まれる。
【００４５】
γセクレターゼ阻害薬のさらなる例については、米国特許出願公開第２００４／００２
９８６２号、第２００４／００４９０３８号、第２００４／０１８６１４７号、第２００
５／０２１５６０２号、第２００５／０１８２１１１号、第２００５／０１８２１０９号
、第２００５／０１４３３６９号、第２００５／０１１９２９３号、第２００８／００８
３１６号、及び第２０１１／００２０２３２号、米国特許第６，７５６，５１１号、第６
，８９０，９５６号、第６，９８４，６２６号、第７，０４９，２９６号、第７，１０１
，８９５号、第７，１３８，４００号、第７，１４４，９１０号、第７，１８３，３０３
号、第８，１８８，０６９号、及び国際出願ＷＯ１９９８／２８２６８号、ＷＯ２００１
／７０６７７号、ＷＯ２００２／０４９０３８号、ＷＯ２００４／１８６１４７号、ＷＯ
２００３／０９３２５３号、ＷＯ２００３／０９３２５１号、ＷＯ２００３／０９３２５
２号、ＷＯ２００３／０９３２６４号、ＷＯ２００５／０３０７３１号、ＷＯ２００５／
０１４５５３号、ＷＯ２００４／０３９８００号、ＷＯ２００４／０３９３７０号、ＥＰ
２２４４７１３号に開示されている。
【００４６】
上述の開示はすべて、参照としてここに組み込む。
【００４７】
医薬組成物は通常、薬学上許容可能な担体が含有されている。本明細書で使用される用
語「薬学上許容可能な担体」には、薬剤投与と適合する生理食塩水、溶剤、分散媒体、コ
ーティング、抗菌剤及び抗真菌薬、等張剤及び吸収遅延剤等が含まれる。デキサメタゾン
、プレドニゾン、ゲンタマイシン、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、組換ヒトインスリ
ン様成長因子１（ｒｈＩＧＦ−１）、ＦＧＲ、Ｒ−スポンジン、及び／又は、ＧＳＫ−３
β拮抗薬又は阻害薬等の補足の活性化合物を組成物に加えることもでき、ＧＳＫ−３β阻
害薬は、以下のＧＳＫ−３β阻害薬のうちの１つ以上である。つまり、プルバラノールＡ
、オロムシン、塩化リチウム（ＬｉＣｌ）、アルステルパウロン、及びケンパウロンであ
る。本明細書に記載の治療において有用なその他のＧＳＫ３β阻害薬には、ベンジル−２
−メチル−１，２，４−チアジアゾリジン−３，５−ジオン（ＴＤＺＤ−８）、２−チオ
（３−ヨードベンジル）−５−（１−ピリジル）−［１，３，４］−オキサジアゾール（
ＧＳＫ３阻害薬ＩＩ）、２，４−ジベンジル−５−オキソチアジアゾリジン−３−チオン
（ＯＴＤＺＴ）、（２’Ｚ，３’Ｅ）−６−ブロモインジルビン−３’−オキシム（ＢＩ
Ｏ）、α−４−ジブロモアセトフェノン（すなわち、タウプロテインキナーゼＩ（ＴＰＫ
Ｉ）阻害薬）、２−クロロ−１−（４，５−ジブロモ−チオフェン−２−イル）−エタ
ノン、Ｎ−（４−メトキシベンジル）−Ｎ’−（５−ニトロ−１，３−チアゾール−２−
イル）尿素（ＡＲ−Ａ０１４４１８）、Ｈ−ＫＥＡＰＰＡＰＰＱＳｐＰ−ＮＨ２（Ｌ８０
３、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：Ｉ）、Ｍｙｒ−Ｎ−ＧＫＥＡＰＰＡＰＰＱＳｐＰ−ＮＨ２（Ｌ
８０３−ｍｔｓ、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２）、及びインジルビン類が含まれる。インジル
ビンの例としては、インジルビン−５−スルホナミド、インジルビン−５−スルホン酸（
２−ヒドロキシエチル）−アミドインジルビン−３’−モノキシム、５−ヨード−インジ
ルビン−３’モノキシム、５−フルオロインジルビン、５，５’−ジブロモインジルビン
、５−ニトロインジルビン、５−クロロインジルビン、５−メチルインジルビン、及び５
−ブロモインジルビンが挙げられる。他の使用可能なＧＳＫ３β阻害薬として、例えば特
許第６，４１７，１８５号、第６，４８９，３４４号、第６，６０８，０６３号、及び２
００３年１０月２０日申請の公開米国出願第６９０４９７号、２００３年８月１９日申請
の第４６８６０５号、２００３年８月２１日申請の第６４６６２５、２００３年２月６日
申請の第３６０５３５号、２００３年５月２８日申請の第４４７０３１号、及び２００２
年１２月３日申請の第３０９５３５号に開示の阻害薬等、従来既知の阻害薬が挙げられる
。
【００４８】
本発明の医薬組成物は、計画された投与経路と適合するよう定式化される。
【００４９】
いくつかの実施形態において、組成物は、例えば静脈内投与、皮内投与、又は皮下投与
等の非経口投与によって全身へ供給される。
【００５０】
いくつかの実施形態において、組成物は、液体処方又はゲル処方を正円窓膜に塗布する
ことによって投与される。正円窓膜への塗布は、例えば、液体処方又はゲル処方の鼓室内
注射、若しくは、例えばマイクロ流体素子を使用して、内耳リンパ液中に直接供給するな
ど、従来基地の方法を使用して達成することができる。
【００５１】
いくつかの実施形態において、組成物は、例えばミニ浸透圧ポンプ（例えば、Ｔａｋｅ
ｍｕｒａらによるＨｅａｒ  Ｒｅｓ．２００４年１０月、１９６（１−２）、５８〜６８
参照）等のポンプ、又は、カテーテル（ＣｈａｒａｂｉらによるＡｃｔａ  Ｏｔｏｌａｒ
ｙｎｇｏｌ  Ｓｕｐｐｌ．２０００、５４３、１０８−１０参照）を介して供給される。
【００５２】
好適な医薬組成物を処方する方法は、従来技術（例えば、ＲｅｍｉｎｇｔｏｎによるＴ
ｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、第２１版
、２００５参照）及びシリーズ書籍Ｄｒｕｇｓ  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔ
ｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｓｅｒｉｅｓ  ｏｆ  Ｔｅｘｔｂｏｏｋｓ  ａｎｄ  Ｍｏ
ｎｏｇｒａｐｈｓ（Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ）により既知である。例えば、非経口投与、皮内
投与、又は皮下投与には、以下の要素を含み得る。つまり、注射用蒸留水、生理食塩水、
固定油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール、又は、その他の
合成溶剤等の滅菌希釈剤、ベンジルアルコール又はメチルパラベン類等の抗菌剤、アスコ
ルビン酸又は亜硫酸水素ナトリウム等の抗酸化剤、エチレンジアミン四酢酸等のキレート
剤、酢酸塩、クエン酸塩、又はリン酸塩等の緩衝剤、及び塩化ナトリウム又はブドウ糖等
の張性調整剤を含み得る。ｐＨは、塩酸又は水酸化ナトリウム等の酸又は塩基で調整する
ことができる。非経口製剤は、アンプル、使い捨て注射器、若しくはガラス又はプラスチ
ック製の頻回投与バイアルに入れることができる。
【００５３】
注射使用に好適な医薬組成物には、滅菌水溶液（水溶性）又は滅菌分散系、及び滅菌注
射液又は滅菌注射分散系の即時調製を行うことのできる滅菌粉末を含み得る。静脈内投与
に好適な担体には、生理食塩水、静菌水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ（登録商標）（ＢＡ
ＳＦ、Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ、ＮＪ）、又はリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）が含まれる
。いずれの場合も、組成物は滅菌されていなければならず、容易に注射針を通過できる程
度の流体でなければならない。また製造及び保管の条件下で安定でなければならず、バク
テリアや菌類等の微生物の汚染から保護されなければならない。単体は、例えば、水、エ
タノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、及び液体ポリエ
チレングリコール等）、及びその好適な混合物を含有する溶媒又は分散媒体であり得る。
例えば、レシチン等のコーティングを使用して、分散系の場合は要求される粒径を維持す
ることにより、また界面活性剤を使用することにより、適切な流動性を維持することがで
きる。例えば、パラベン類、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサ
ール等、種々の抗菌剤及び抗真菌薬により、微生の活動を妨げることができる。多くの場
合、組成物中に、例えば、糖類や、マンニトール、ソルビトール、塩化ナトリウム等の多
価アルコールなど、等張剤を含むのが好ましい。組成物中に、例えばモノステアリン酸ア
ルミニウム及びゼラチン等、吸収を送らせる薬剤を含有することにより、注射組成物の持
続的吸収を実現することができる。
【００５４】
滅菌注射液は、要求に応じて以上に列挙した成分を１つ以上含有した適切な溶媒に、要
求される分量の活性化合物を投入し、続いてろ過滅菌を行うことによって調製することが
できる。通常、分散系は、基本的な分散系と列挙の成分から選択されるその他の必要成分
とを含有した滅菌媒材に活性化合物を投入することによって調製される。滅菌注射液を調
製するための滅菌粉末の場合、好適な調製方法は、真空乾燥及び凍結乾燥であり、この方
法では過去に滅菌ろ過した溶液から、活性化合物及びその他の所望の成分の粉末を作り出
す。
【００５５】
いくつかの実施形態において、治療化合物は、移植及びマイクロカプセル化供給システ
ム等を含む、放出制御製剤等、体内から即座に排出されてしまうことを防ぐための担体を
含有するよう調整される。リポソーム懸濁液（細胞性抗原に対するモノクローナル抗体を
有する選択細胞をターゲットとしたリポソームを含む）もまた、薬学上許容可能な担体と
して使用することができる。これらは、当業者にとって既知の方法によって調製すること
ができ、例えば、米国特許第４，５２２，８１１に記載されている。例えば、ポリ乳酸／
グリコール酸（ＰＬＧＡ）ナノパーティクル（ＴａｍｕｒａらによるＬａｒｙｎｇｏｓｃ
ｏｐｅ．２００５、１１月、１１５（１１）、２０００−５、ＧｅらによるＯｔｏｌａｒ
ｙｎｇｏｌ  Ｈｅａｄ  Ｎｅｃｋ  Ｓｕｒｇ．２００７、１０月、１３７（４）、６１９
−２３、ＨｏｒｉｅらによるＬａｒｙｎｇｏｓｃｏｐｅ．２０１０年２月、１２０（２）
、３７７−８３、ＳａｋａｍｏｔｏらによるＡｃｔａ  Ｏｔｏｌａｒｙｎｇｏｌ  Ｓｕｐ
ｐｌ．２０１０年１１月、（５６３）、１０１−４参照）も使用することができる。
【００５６】
いくつかの実施形態において、担体は、正円窓における化合物の維持を向上し、活性成
分の局所的且つ持続的放出を可能にする、例えばヒドロゲル等のポリマーを含有する。こ
のようなポリマー及びヒドロゲルは、従来既知である。例えば、Ｐａｕｌｓｏｎらによる
Ｌａｒｙｎｇｏｓｃｏｐｅ．２００８年４月、１１８（４）、７０６−１１（キトサン−
グリセロリン酸エステル（ＣＧＰ）−ヒドロゲルベースの薬剤供給システムについて記載
）を参照のこと。他の担体としては、熱可逆性トリブロック共重合体プロキサマー４０７
（例えばＷａｎｇらによるＡｕｄｉｏｌ  Ｎｅｕｒｏｏｔｏｌ．２００９、１４（６）、
３９３−４０１、Ｅｐｕｂ、２００９年１１月１６日及びＷａｎｇらによるＬａｒｙｎｇ
ｏｓｃｏｐｅ．２０１１年２月、１２１（２）、３８５−９１）、例えばＯＴＯ−１０４
で使用されるプロキサマーベースのヒドロゲル類（例えばＧＢ２４５９９１０、Ｗａｎｇ
らによるＡｕｄｉｏｌ  Ｎｅｕｒｏｔｏｌ、２００９年、１４、３９３−４０１及びＰｉ
ｕらによるＯｔｏｌ  Ｎｅｕｒｏｔｏｌ．２０１１年１月、３２（１）、１７１−９参照
）、プルロニックＦ−１２７（例えばＥｓｃｏｂａｒ−ＣｈａｖｅｚらによるＪ  Ｐｈａ
ｒｍ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ．２００６年、９（３）、３３９−５参照）、プルロニックＦ
６８、Ｆ８８、又はＦ１０８、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレントリブロック
共重合体（例えば一般式Ｅ１０６、Ｐ７０、ＥＩ０６のポリオキシプロピレン及びポリオ
キシエチレンからなるポリマー、ＧＢ２４５９９１０、ＵＳ２０１１０３１９３７７、及
びＵＳ２０１００２７３８６４参照）、ＭＰＥＧＰＣＬジブロック共重合体（Ｈｙｕｎら
によるＢｉｏｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ．２００７年４月、８（４）、１０９３−１
００、Ｅｐｕｂ、２００７年２月２８日）、ヒアルロン酸ヒドロゲル類（Ｂｏｒｄｅｎら
によるＡｕｄｉｏｌ  Ｎｅｕｒｏｏｔｏｌ．２０１１年、１６（１）、１−１１）、ゲル
フォームキューブ（例えばＨａｖｅｎｉｔｈらによるＨｅａｒｉｎｇ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ
、２０１１年２月、２７２（１−２）、１６８−１７７参照）、及びゼラチンヒドロゲル
（例えばＩｎａｏｋａらによるＡｃｔａ  Ｏｔｏｌａｒｙｎｇｏｌ．２００９年４月、１
２９（４）、４５３−７参照）を挙げることができる。またその他の生分解可能で生体適
合性のあるポリマーとして、エチレンビニルアセテート、ポリ無水物類、ポリグリコール
酸、コラーゲン、ポリオルトエステル類、ポリ乳酸を使用することもできる。天然アミノ
酸Ｌ及びＤより生成される調節可能な自己集合性ヒドロゲルは、標準的な技術を使用して
調製することができ、もしくは、Ａｌｚａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ及びＮｏｖａ  Ｐｈ
ａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．等から市販されている。
【００５７】
医薬組成物は、投与に関する指示とともに、容器、パック、又はディスペンサに入れる
ことができる。
【実施例】
【００５８】
本発明はさらに、以下の実施例において説明するが、請求項に記載の本発明の範囲を限
定するものでない。
【００５９】
材料及び方法
本明細書に記す実施例においては、以下の材料及び方法を使用した。
【００６０】
動物
内耳スフィアを使用した実験では、両性別のＣ５７ＢＬ／６（Ｊａｃｋｓｏｎ研究所）
又はＭａｔｈｌ−ｎＧＦＰレポーターマウス（１９）（テキサス大学、Ｊａｎｅ  Ｊｈｏ
ｎｓｏｎより支援）を使用した。有毛細胞を除去したコルチ器官の組織片を生成するため
、Ｍｏｓ−ｉＣｓｐ３マウス（１７行）（２０）を、Ｐｏｕ４ｆ３−Ｃｒｅマウス（６）
（タフツ大学、Ｄｏｕｇｌａｓ  Ｖｅｔｔｅｒより支援）と交配した。インビボ試験すべ
てにおいて、Ｓｏｘ２−ＣｒｅＥＲマウス（４７）（Ｍａｓｓ  Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｈｏｓ
ｐｉｔａｌのＫｏｎｒａｄ  Ｈｏｃｈｅｄｌｉｎｇｅｒより支援）と交配した生後４週間
のＣｒｅレポーターラインｍＴ／ｍＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ研究所）を使用した。遺伝子型決
定後、ダブルトランスジェニック動物を系列追跡に使用した。バックグラウンド（２２、
４８）に応じて変化することが知られている、騒音に応じたひずみ効果を防ぐため、ｍＴ
／ｍＧ、Ｓｏｘ２−ＣｒｅＥＲの熟年野生型同腹子を使用した。マウスは、ＰＣＲによっ
て遺伝子型決定がなされた。プロトコルはすべて、動物の人道的管理と使用に関する規範
に準拠し、マサチューセッツ眼科耳科病院動物実験委員会又は慶応義塾大学医学部実験動
物センターにより承認を受けた。
【００６１】
内耳スフェアの分離
両性別の生後１〜３日のマウスの小嚢及び蝸牛を解剖し、神経幹及び間葉組織を注意深
く取り除いた後、トリプシン処理を施して分離した。分離した細胞を遠心分離機にかけ、
Ｎ２／Ｂ２７サプリメント、ＥＧＦ（２０ｎｇ／ｍｌ）、ＩＧＦ１（５０ｎｇ／ｍｌ）、
ｂＦＧＦ（１０ｎｇ／ｍｌ）及びヘパラン硫酸（５０ｎｇ／ｍｌ）（Ｓｉｇｍａ）を含有
したＤＭＥＭ／Ｆ１２媒体中で、沈殿物を再懸濁し、７０μｍ細胞ろ過器（ＢＤ  Ｂｉｏ
ｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｌａｂｗａｒｅ）によりろ過した。スフィア（
４９）のクローン製増殖を開始するため、非接着性ペトリ皿（Ｇｒｅｉｎｅｒ  Ｂｉｏ−
Ｏｎｅ）内で単細胞を培養した。培地で２〜３日後に形成されたスフィアは、４〜６日置
きに継代した。またスフィアを遠心分離し、沈殿物をピペット先端で分離し、媒体内で再
懸濁した。継代３〜４のスフィアを本明細書に記載の実験に使用したこれらの細胞は、分
化開始前、有毛細胞マーカーに対して陰性であった（３７）。分化のため、前述のとおり
、浮遊スフィアをフィブロネクチン被覆の４ウェルプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ  Ｂｉｏ−
Ｏｎｅ）に移した（３７、４９）。接着したスフィアは、Ｎ２／Ｂ２７を含有し、成長因
子を含有しないＤＭＥＭ／Ｆ１２媒体中で、５〜７日間分化された。
【００６２】
細胞接着の翌日、γセクレターゼ阻害薬のＤＡＰＴ、Ｌ−６８５４５８、ＭＤＬ２８１
７０（Ｓｉｇｍａ）、及びＬＹ４１１５７５（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ）（図１０参照）を
いくつかの濃度で添加した。
【００６３】
新生児蝸牛移植片
両性別の生後３日のＣ５７ＢＬ／６又はＭｏｓ−ｉＣｓｐ３、Ｐｏｕ４ｆ３−Ｃｒｅダ
ブルトランスジェニックマウスの蝸牛を、ハンクス溶液（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）内で解
剖した。平坦な蝸牛表面処理を行うため、らせん神経節、ライスナー膜、及び最も基底の
蝸牛セグメントを取り除いた。移植片を、ポリ−Ｌ−オルニチン（０．０１％、Ｓｉｇｍ
ａ）及びラミニン（５０μｇ／ｍｌ、Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を塗布した４
ウェルプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ  Ｂｉｏ−Ｏｎｅ）上に固定した。蝸牛移植片を、１０
％のウシ胎仔血清を含有するＤＭＥＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中で培養した。培地はす
べて、５％のＣＯ２と２０％のＯ２を有する加湿培養器（Ｆｏｒｍａ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆ
ｉｃ）内に維持した。
【００６４】
音響への過剰暴露
生後４週間のマウスを、小さな残響室（２２）内で、無響環境に晒し、覚醒させ、無拘
束にした。１１６ｄＢ  ＳＰＬで表される８〜１６ｋＨｚのオクターブ帯域の騒音に２時
間暴露することにより、音響トラウマを発生させた。この暴露刺激は、専用白色雑音弦で
生成され、フィルタが掛けられ（６０ｄＢ／オクターブスロープのＢｒｉｃｋｗａｌｌ  
Ｆｉｌｔｅｒ）、増幅され（Ｃｒｏｗｎパワーアンプ）、残響ボックスの最上部にある孔
部に固定された指数ホーンを通じて供給された（ＪＢＬ圧縮ドライバ）。騒音暴露レベル
は、０．２５インチのＢｒuｅｌ  ａｎｄ  Ｋｊaｒコンデンサーマイクロホンを使用して
、各ケージ内の４箇所で測定した。これらの測定箇所に亘って、＜０．５ｄＢで音圧が変
化していることがわかった。
【００６５】
ＬＹ４１１５７５の全身投与
１２〜１６ｇの重量の生後４週間のマウスを使用した。手術に先立ち、これらの動物を
ケタミン（２０ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）及びキシラジン（１００ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）で麻
酔し、リドカイン（１％）の局所投与後、外耳道付近の耳介後方を切開した。正円窓窩に
接近するよう耳嚢を開いた。ＰＥ１０管（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）に端部を
炎の先端にかざし、正円窓窩内に慎重に挿入した。ＬＹ４１１５７５は、ＤＭＳＯに溶解
され、最終濃度が４ｍＭとなるようにポリエチレングリコール４００（Ｓｉｇｍａ）内で
１０倍に希釈した。この溶液（総質量１μｌ）を左耳の正円窓窩に注射した。１０％のＤ
ＭＳＯを含有したポリエチレングリコール４００は、対照系としての右耳に注射した。こ
の溶液は２分間で投与した。このアプローチは現在、臨床で使用されており（例えば、急
性聴覚喪失に対するステロイドや重度の平衡障害に対するゲンタマイシンの鼓室内注射）
、内耳を使わない利点があるものの、薬剤を内耳（５０）の供給するために正円窓膜によ
って得られる局所経路を利用する。溶液を維持するためにゼラチンを小窩に塗布し、傷口
を閉鎖した。
【００６６】
全身投与のため、０．５％（ｗｔ／ｖｏｌ）のメチルセルロース（ＷＡＫＯ）に溶解し
たＬＹ４１１５７５（５０ｍｇ／ｋｇ）を、１日１回、連続５日間、経口投与した。聴覚
は、騒音暴露１日前、２日後、１週間後、２週間後、１ヶ月後、２ヶ月後、及び３ヵ月後
にＡＢＲによって測定した。
【００６７】
ｑＲＴ−ＰＣＲ
コルチ器官をＨＢＳＳ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で解剖し、次の使用まで−８０度にて
ＲＮＡｌａｔｅｒ（Ａｍｂｉｏｎ）内に保管した。ＲＮＡはすべて、メーカーの指示に従
い、ＲＮｅａｓｙ  Ｍｉｎｉ  Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して抽出した。逆転写には
、ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ１１（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）をランダムな６量体とともに使
用した。逆転写条件として、２５度で１０分間行った後、３７度で６０分間行った。反応
は、９５度にて５分間で終了させた。ｃＤＮＡは、メーカーの指示に従い、Ｔａｑｍａｎ
Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｍａｓｔｅｒｍｉｘ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙ
ｓｔｅｍｓ）及びＨｅｓ５、Ａｔｏｈｌ、又は１８Ｓプライマー（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉ
ｏｓｙｓｔｅｍｓ）と混合した。サンプルは、ｑＰＣＲ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓ
ｔｅｍｓ、７９００ＨＴ）により９６ウェルにおいて３連で解析し、ＰＣＲの熱サイクル
条件を以下のようにした。初期変性を９５度にて２分間行い、編成を９５度で１５秒間行
い、アニーリング／伸張を６０度にて１分間、４５サイクル行った。各プライマーにつき
、条件は同一とした。各ＰＣＲ反応は、３連で実施した。相対遺伝子発現は、△△ＣＴ方
法を使用して解析した。遺伝子発現は１８Ｓ  ＲＮＡに対して算出し、ｃＤＮＡの適用量
は１８Ｓ  ＲＮＡに対するＣｔ値が８〜１１となるように調製した。
【００６８】
免疫組織化学
スフィアについて、細胞は、ＰＢＳ内の４％のパラホルムアルデヒドにより１０分間で
固定した。免疫染色は、１％のＢＳＡ及び５％のヤギ血清（ＰＢＴ１）を補ったＰＢＳ中
の０．１％のＴｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００によって１時間ブロッキングすることにより、開
始した。固定及び透過処理した細胞を、ミオシンＶＩＩａ（Ｐｒｏｔｅｕｓ  Ｂｉｏｓｃ
ｉｅｎｃｅｓ）に対するポリクロナール抗体を含むＰＢＴ１内にて一晩培養した。サンプ
ルをＰＢＳで３回、２０分間洗浄した。一次抗体が検出され、二次抗体はＡｌｅｘａ４８
８（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ）に抱合され、二次抗体のみを陰性対照系として
使用した。サンプルは、１０分間、ＤＡＰＩ（Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ
）又はＨｏｅｃｈｓｔ３３２５８（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で対比染色し、落射蛍光顕微
鏡（Ａｘｉｏｓｋｏｐ  ２  Ｍｏｔ  Ａｘｉｏｃａｍ、Ｚｅｉｓｓ）で観察した。
【００６９】
移植片について、コルチ器官ば、ＰＢＳ内の４％のパラホルムアルデヒドにより１５分
間で固定した。免疫染色は、５％のロバ血清（ＰＢＴ１）を補ったＰＢＳ中の０．１％の
Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００によって１時間、組織をブロッキングすることにより、開始し
た。固定及び透過処理した細胞を、ミオシンＶＩＩａ（Ｐｒｏｔｅｕｓ  Ｂｉｏｓｃｉｅ
ｎｃｅｓ）、Ｓｏｘ２（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ）、ＧＦＰ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、プ
レスチン（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ）、及びＣｔＢＰ２（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）
に対するポリクロナール抗体を含むＰＢＴ１内にて一晩培養した。サンプルをＰＢＳで３
回、２０分間洗浄した。一次抗体が検出され、二次抗体はＡｌｅｘａ４８８及び６４７（
Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ）に抱合された。サンプルは、ローダミンファロイジ
ン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で１５分間着色し、共焦点光顕微鏡（ＴＣＳ  ＳＰ５、Ｌｅ
ｉｃａ）で観察した。
【００７０】
成体マウスの蝸牛の収集については、ケタミン及びキシラジンで深く麻酔をかけた後、
マウスに８．６％のスクロースを含有した０．０１Ｍのリン酸液緩衝剤を心臓潅流した後
、０．１Ｍのリン酸液緩衝材（ｐＨ７，４）中の新たに脱重合された４％パラホルムアル
デヒドからなる定着薬液を心臓潅流した。断頭後、側頭骨を取り除き、直ちに４度の同一
定着薬液中に入れた。正円窓、前庭窓、及び蝸牛の頂部に小さな開口を開けた。一晩、４
度の定着薬液中に浸した後、４度で２日間攪拌することにより、５％スクロースを含有し
た０．１ＭのＥＤＴＡ（ｐＨ７，４）中で側頭骨を脱灰した。脱灰後、ホールマウント調
製のため、蝸牛を４片に顕微解剖した。免疫染色は、５％のロバ血清（ＰＢＴ１）を補っ
たＰＢＳ中の０．１％のＴｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００によって１時間、組織をブロッキング
することにより、開始した。固定及び透過処理した蝸牛片を、ミオシンＶＩＩａ（Ｐｒｏ
ｔｅｕｓ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、Ｓｏｘ２（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ）、及びＧＦＰ
（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）に対するポリクロナール抗体を含むＰＢＴ１内にて一晩培養し
た。サンプルをＰＢＳで３回、２０分間洗浄した。一次抗体が検出され、二次抗体はＡｌ
ｅｘａ４８８、５６８、及び６４７（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ）に抱合され、
共焦点光顕微鏡（ＴＣＳ  ＳＰ５、Ｌｅｉｃａ）で観察した。各ケース毎に蝸牛の長さを
取得し、５．６ｋＨｚ、８．０ｋＨｚ、１１．３ｋＨｚ、１６．０ｋＨｚ、２２．６ｋＨ
ｚ、３２ｋＨｚ、及び４５．２ｋＨｚ領域から内有毛細胞を正確に配置するため、蝸牛周
波数マップを演算した。断面測定を行うため、固定した側頭骨を４度のＰＢＳにおいて３
０％スクロースに浸し、室温で１時間、ＯＣＴ内で培養し、液体窒素で凍結した。染色プ
ロトコルは、ＤＡＰＩ（Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）で対比染色すること
を除き、上述と同一であった。標本は、落射蛍光顕微鏡（Ａｘｉｏｓｋｏｐ  ２  Ｍｏｔ
Ａｘｉｏｃａｍ、Ｚｅｉｓｓ）で観察した。
【００７１】
細胞計数
スフィアの細胞計数は、ＭｅｔａＭｏｒｐｈソフトウェアで実施した。細胞の数は、Ｄ
ＡＰＩ陽性又はＨｏｅｃｈｓｔ陽性の核から判定した。反復的な細胞計数により、＜１％
の検査誤差となった。蝸牛ホールマウントにおいて、移植片、内有毛細胞、外有毛細胞、
及び外有毛細胞領域内の支持細胞の計数を行った。有毛細胞は、Ｍａｔｈ１−ｎＧＦＰマ
ウスチュのミオシンＶＩＩａ抗体又は内在ＧＦＰにより特定した。全長の蝸牛又は蝸牛移
植片培地の拡大画像を組み込み、ＰｈｏｔｏＳｈｏｐ  ＣＳ４（Ａｄｏｂｅ）で解析した
。ＩｍａｇｅＪソフトウェア（ＮＩＨ）を使用して、蝸牛ホールマウントの全長と、個々
に計数されたセグメントの長さを測定した。内有毛細胞、外有毛細胞、及び外有毛細胞領
域内の支持細胞の総数は、１２００〜１４００μｍの４つの蝸牛セグメント（頂部、中間
頂部、中間基部、及び基部）の各々において計数した。その後、密度（１００μｍ当たり
の細胞）を各セグメント毎に産出した。成体蝸牛について、演算した周波数マップに応じ
た周波数特定領域（５．６ｋＨｚ、８．０ｋＨｚ、１１．３ｋＨｚ、１６．０ｋＨｚ）の
拡大画像を組み込み、解析した。内有毛細胞、外有毛細胞、及び１００μｍの外有毛細胞
領域における支持細胞の数は、蝸牛の４つの周波数特定領域の各々において計数した。Ｇ
ＦＰによって特定したＳｏｘ２系列陽性細胞の数も、同一の方法で計数した。
【００７２】
ＡＢＲ測定
聴性脳幹反応（５１、５２）は、騒音暴露前、騒音暴露後１日、手術後１週間、１ヶ月
、及び３ヶ月で、７ログ間隔周波数（５．６ｋＨｚ〜４５．２ｋＨｚまでの半オクターブ
ステップ）にて各動物で測定された。マウスは、ケタミン（１００ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）
及びキシラジン（２０ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）で麻酔した。針電極を頭頂及び耳介に挿入し
、設置側を尾の付近に挿入した。ＡＢＲは、５ｍｓのトーンピップ（０．５ｍｓの上昇下
降で、ｃｏｓ２開始エンベロープが３５／ｓで供給された）。反応は増幅され、フィルタ
に掛けられ、ＬａｂＶＩＥＷ駆動データ取得システムで平均化された。音声レベルは、≧
１０ｄＢから＜８０ｄＢ  ＳＰＬの閾値まで５ｄＢステップで上げた。各音声レベルにお
いて、「アーチファクト除去」を使用して１０２４の反応を（刺激極性を変化させること
により）平均化し、ピーク間の反応振幅が１５μＶを越えた場合、応答波形を破棄した。
蓄積した波形を外観検査することにより、あらゆる波形が検知できる最低ＳＰＬレベルと
して「ＡＢＲ閾値」を基底したが、これは大抵、ピーク間の反応振幅がノイズフロア（約
０．２５μＶ）を上回って大幅に増加するレベルステップの直下のレベルステップに対応
する。利用可能な最高の音声レベルで反応が観察されない場合、閾値は、統計試験が果た
せるようにそのレベルより５ｄＢ高いものとして設計した。振幅対レベル機能については
、各音声レベルにおいて外観検査で波形１のピークを特定し、ピーク間振幅を演算した。
【００７３】
定量化及び統計分析
Ｍａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙの両側Ｕ検査を使用して、治療グループの差を比較した。同
一の動物の治療前後の変化は、Ｗｉｌｃｏｘｏｎの両側ｔ検定で解析した。反復測定ＡＮ
ＯＶＡを使用して、グループ内の時間依存変化を比較した。データは、敵視と及び図面に
おいて、±ＳＥＭで示した。０．０５未満のＰの値が重要であると考えられる。
【００７４】
遺伝子型決定
Ｍｏｓ−ｉＣｓｐ３
ＬａｃＺ  Ｆ：5’-ttcactggccgtcgttttacaacgtcgtga-3’（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１）
ＬａｃＺ  Ｒ：5’-atgtgagcgagtaacaacccgtcggattct-3’（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２）
Ｐｏｕ４ｆ３Ｃｒｅ、Ｓｏｘ２ＣｒｅＥＲ
Ｃｒｅ  Ｆ：5’-tgggcggcatggtgcaagtt-3’（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３）
Ｃｒｅ  Ｒ：5’-cggtgctaaccagcgttttc-3’（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４）
ｍＴ／ｍＧ
ｏＩＭＲ７３１８  ｗｉｌｄ−ｔｙｐｅ  Ｆ：5’-ctctgctgcctcctggcttct-3’（ＳＥＱ
ＩＤ  ＮＯ：５）
ｏＩＭＲ７３１９  ｗｉｌｄ−ｔｙｐｅ  Ｒ：5’-cgaggcggatcacaagcaata-3’（ＳＥＱ
ＩＤ  ＮＯ：６）
ｏＩＭＲ７３２０  ｍｕｔａｎｔ  Ｒ：5’-tcaatgggcgggggtcgtt-3’（ＳＥＱ  ＩＤ  
ＮＯ：７）
【００７５】
実施例１、内耳幹細胞からの有毛細胞分化を誘発するγセクレターゼ阻害薬のスクリーニ
ング
リガンドによって引き起こされたγセクレターゼの活動により、ノッチ細胞内領域のプ
ロテアーゼ放出に触媒作用を及ぼすことで、ノッチ信号変換の第１ステップを成立させる
。γセクレターゼ阻害薬が、ノッチ（１５）の効果により、内耳幹細胞からの有毛細胞分
化を促進することを前述した。最も効果の高い阻害薬を見つけるため、いくつかの既知の
薬剤、ＤＡＰＴ、Ｌ−６８５４５８、ＭＤＬ２８１７０、及びＬＹ４１１５７５（図１０
参照）について、新生児期のＭａｔｈ１−ｎＧＦＰレポーターマウス（１９）から導出し
た小嚢スフィアからの有毛細胞分化に及ぼす効果を検査した。このシステムにおいて、４
つのγセクレターゼ阻害薬中、ＬＹ４１１５７５が最も高い効果を示した（図１ａ）。蝸
牛細胞に対するＬＹ４１１５７５の効果を確認するため、コルチ器官から導出したスフィ
アを使用した。ＬＹ４１１５７５による処置に際し、ミオシンＶＩＩａ陽性細胞（ミオシ
ンＶＩＩａは有毛細胞の専用マーカー）の数が、対照系の１．５倍〜２．５倍に増えた（
図１Ｂ）。これらの細胞はさらに、有毛細胞に対する他のマーカーであるカルレチニンに
対しても陽性であり、有毛束がエスピンに対して陽性であった。
【００７６】
実施例２、ＬＹ４１１５７５によるコルチ器官移植片中の有毛細胞数の増加
ＬＹ４１１５７５の効果はさらに、新生児期のコルチ器官移植片にも特徴付けられた。
ＬＹ４１１５７５を添加することにより、外有毛細胞領域（図１Ｃ）のミオシンＶＩＩａ
陽性細胞の数は、対照系（図１Ｄ、ｐ＜０．０５）に比して、３０セル／１００μｍ増加
した。この増加した有毛細胞は、毛束構造を示した。このような結果は、内耳幹細胞を使
用したスクリーニングによって選択したγセクレターゼ阻害薬が、新生児期のコルチ器官
において有毛細胞のさらなる分化を効果的に誘発したことを示している。
【００７７】
次に、Ｐｏｕ４ｆ３−Ｃｒｅ、Ｍｏｓ−ｉＣｓｐ３のダブルトランスジェニックマウス
からのコルチ器官移植片を使用して、損傷後（図２Ａ）に有毛細胞を誘発することができ
るか否かを検査した。成長中の内耳に一時的に出現するＰｏｕ４ｆ３が有毛細胞（２１）
に限定されているため、このＭｏｓ−ｉＣｓｐ３マウスは、有毛細胞の薬剤規制された二
量化可能なカスパーゼ３（２０）を生成するＣｒｅ／ｌｏｘカセットを有する。従って、
カスパーゼ３を二量化する薬剤による治療後、この二量体は有毛細胞の死滅を招く。Ｍｏ
ｓ−ｉＣｓｐ３蝸牛は、外有毛細胞（図２Ｂ対図２Ｃ、対照系）の押す室を示した。Ｍｏ
ｓ−ｉＣｓｐ３コルチ器官のＬＹ４１１５７５処置により、外毛細胞領域（図２Ｄ、ｐ＜
０．０５）のミオシンＶＩＩａ陽性（有毛）細胞の数が増加し、これに伴って蝸牛（図２
Ｄ、Ｐ＜０．０５）の中間頂部及び中間基部におけるＳｏｘ２陽性（支持）細胞の数が減
少した。いずれのグループも、内有毛細胞の数に著しい差は見られなかった。ＬＹ４１１
５７５処置後の外有毛細胞の増加と支持細胞の減少との相関は、ノッチ信号伝達が妨げら
れると、支持細胞が有毛細胞に分化形質転換することを示している。
【００７８】
実施例３、ＬＹ４１１５７５全身投与による有毛細胞数の増加及び騒音による損傷を受け
た蝸牛の聴覚回復促進
熟年期の耳において有毛細胞分化を誘発することができるか否かを調べるため、まずマ
ウスを、広範に亘って外有毛細胞の死滅を引き起こし、且つ支持細胞（実施例５及び図７
Ａ〜図７Ｃ参照）を維持したまま永久的な聴覚喪失を引き起こすような音響損傷（２２）
に暴露した。体重に対して５０ｍｇ／ｋｇのＬＹ４１１５７５を５日間、経口投与するこ
とにより、騒音誘発閾値推移は４ｋＨｚ、８ｋＨｚ、及び１６ｋＨｚ（図８Ａ）で減少し
た。その外有毛細胞数は増加し、新たな有毛細胞は不動毛束（図８Ｂ）を有した。このよ
うに処置されたマウスは、深刻な副作用（実施例６参照）を起こした。投薬蝋を減らすと
（体重に対して１０ｍｇ／ｋｇ）治療効果が上がらなかった。
【００７９】
実施例４、ＬＹ４１１５７５の局所投与による、成体蝸牛における騒音誘発聴覚喪失後の
支持細胞の有毛細胞への分化形質転換による聴覚回復促進
薬剤の全身投与後の投薬量制限の毒性により、正円窓膜、中耳と内耳（２３、２４）と
の間の透過性細胞障壁を介した内耳への直接供給を試験した。定量的ＲＴ−ＰＣＲを使用
して、ＬＹ４１１５７５の使用及び不使用時における成体聴覚喪失蝸牛Ｈｅｓ５及びＡｔ
ｏｈｌ  ｍＲＮＡの発現レベルの時間経過を調べた。ＨｅＳ５は、Ａｔｏｈｌ（２５）を
抑制するノッチ信号伝達の直接的な下流ターゲットである。ＬＹ４１１５７５は、騒音暴
露の１日後、正円窓窩を介して投与された。騒音暴露後、Ｈｅｓ５  ｍＲＮＡ発現は、そ
の騒音前レベルに比して２．１５±０．２６増加し、騒音暴露（図３Ａ）の３日後、その
レベルは騒音前のレベルに達するまで徐々に検証した。この誘発は、１日でＬＹ４１１５
７５処置グループにおいて完全にブロックされ、騒音前レベル（対照系の蝸牛と著しく異
なり、ｐ＜０．０１）に留まった。ＬＹ４１１５７５処置の３日後、Ｈｅｓ５の発現レベ
ルは対照系の蝸牛と相違なくなった。Ｈｅｓ５とは対照的に、Ａｔｏｈｌの発現は、ソン
音暴露（図３Ｂ）以降、継続して安定的であった。この発現は、ＬＹ４１１５７５処置の
１日後、騒音暴露後のレベルを超えて２．２８倍まで著しく増加し、７日後に騒音前レベ
ルに戻るまで、処置後３日間、上昇し続けた（Ｐ＜０．０５）。これらの結果は、ノッチ
信号が深刻な騒音外傷によって活性化され得ること、γセクレターゼ阻害薬の局所治療に
よる熟年期早期のマウスのＨｅｓ５の減少は、Ａｔｏｈｌの発現上昇を持続することを示
した。
【００８０】
インビボ系列追跡を使用して、分化形質転換が新たな有毛細胞を作り出す主要因と成り
得るか否かを試験した。Ｓｏｘ２は支持細胞中に発現するため、Ｃｒｅレポーター型を使
用してＳｏｘ２陽性細胞の系列追跡を実施した。Ｓｏｘ２−ＣｒｅＥＲ、ｍＴ／ｍＧマウ
スにおいて、タモキシフェン投与時にＳｏｘ２を発現する細胞はＧＦＰに対して陽性とな
り、Ｓｏｘ２の発現がなくなっても（図９）発現を保持する。レポーターマウスは、タモ
キシフェン処置後１週間で騒音に暴露され、騒音暴露１日後に、左耳にＬＹ４１１５７５
を投与し、右耳に担体を投与した。ＬＹ４１１５７５処置の１ヵ月後、ＧＦＰ中に失聴蝸
牛において多数のミオシンＶＩＩａ陽性細胞が発現し、ＳｏＸ２陽性細胞からの分化形質
転換を示した。ミオシンＶＩＩａ／ＧＦＰダブル標識細胞（図４Ａ及び図４Ｃ）において
、緑色の毛束が観察され、毛束の一部は、本来の有毛細胞（図４Ｃ及び図４Ｄ）のように
Ｖ字型の配置で現れた。さらに、ＧＦＰ標識細胞は、外有毛細胞のモータ蛋白であるプレ
スチン（Ｄａｌｌｏｓら、２００６年）に対して陽性の発色を示し、新たな有毛細胞が活
性内有毛細胞であった場合に発現が予測されるシナプスリボンマーカーであるＣｔＢＰ２
（Ｋｈｉｍｉｃｈら、２００５年及びＬｉｂｅｒｍａｎら、２０１１年）と同様、内有毛
細胞のマーカーであるＶＧＬＵＴ３（Ｓｅａｌら、２００８年）に対して陰性であった。
これらのマーカーの解析により、それらの位置とＶ字型の毛束にも基づき、これらが外有
毛細胞であることを識別した。これらのダブル標識された細胞は、基底膜から内リンパ表
面（図４Ｄ）に上皮を拡大したが、これは通常の耳では観察することができないものの、
支持細胞にＡｔｏｈｌ（１６）を導入する際にレポートされた。これらの細胞の核は、細
胞の基部にあった。ダブル標識された細胞は、蝸牛の上方に見られ、その数は中間頂部に
最も多かった（図４Ｇ、ｎ＝５）。対照系の耳では、いずれの蝸牛領域においてもダブル
標識細胞が観察されなかった（図４Ｅ及び図４Ｆ）。この結果は、ＬＹ４１１５７５によ
るノッチブロッキングにより、騒音誘発の有毛細胞喪失後における熟年期蝸牛の頂部から
中間頂部にかけて、支持細胞の有毛細胞への分化形質転換を促進することを示した。
【００８１】
３ヶ月後、外有毛細胞の数は、ＬＹ４１１５７５処置済の耳の蝸牛の中間（８〜１６ｋ
Ｈｚ）全体に亘って、担体処置済の対側の耳（図５Ａ及び図５Ｂ、ｐ＜０．００５）に比
して増加した。外有毛細胞領域の支持細胞の数は、同一の蝸牛において、担体処置済の耳
（図５Ａ及び図５Ｂ、ｐ＜０．０５）に比して、８ｋＨｚ領域及び１１．３ｋＨｚ領域で
の外有毛細胞数の増加に合わせて著しく減少した。また支持細胞の減少は、移植片培地と
同様に著しいものであった（図５Ｂ、ｐ＜０．０５）。最も基底の領域（２２ｋＨｚ超）
では、ＬＹ４１１５７５の処置の有無に関わらず、外有毛細胞は皆無であり、処置グルー
プの有毛細胞の数に著しい変化は認められなかった（データは図示せず）。ＬＹ４１１５
７５処置済の耳と担体処置済の耳との間における外有毛細胞数の差は、対応する支持細胞
数の差より大きい。さらに、外有毛細胞数の差は、蝸牛の位置に関して、Ｓｏｘ２−Ｃｒ
ｅＥｒ、ｍＴ／ｍＧマウス（図４Ｇ）において観察されたＳｏｘ２系列からのミオシンＶ
ＩＩａ陽性細胞と同様の傾向を見せた。
【００８２】
反応閾値に対する有毛細胞置換の効果を判定するため、ＬＹ４１１５７５処理済及び担
体処理済の対照系の耳において、聴性脳幹反応（ＡＢＲ）を記録した。担体のみを注射し
た後、閾値の変化は認められなかった。騒音暴露から１日後のＡＢＲ閾値は、すべての周
波数について＞８０ｄＢ  ＳＰＬであった（図６Ａ及び図６ｂ）。対照系の耳における暴
露後の回復（図６Ａ）は、（２２）で予測されるように、このような条件の下で最低とな
った。驚くことに、ＬＹ４１１５７５治療後の閾値の回復は、８ｋＨｚ、１１．３３ｋＨ
ｚ、及び１６ｋＨｚにおいて対照系に比して著しく（図６Ｄ）、波形１の振幅が同一周波
数において増加した（図６Ｅ）。ＡＢＲによると、２２．６５ｋＨｚを越える周波数では
、いずれの耳でも閾値の回復が見られず、歪成分耳音響放射（ＤＰＯＡＥ）のノイズフロ
アを越える回復を観察することはできなかった。閾値回復の差は、外有毛細胞の数と同様
の蝸牛位置／周波数への依存を示している（図５参照）。
【００８３】
実施例５、成体蝸牛における騒音誘発性聴覚喪失
若年成体マウスにおける騒音誘発性聴覚喪失モデルも使用した。永久的な聴覚喪失を引
き起こし、特に外有毛細胞領域（２２）での大部分の有毛細胞の死滅を引き起こす１１６
ｄＢ  ＳＰＬ（８〜１６ｋＨｚ）の暴露強度にて、ほぼすべての内有毛細胞が維持された
一方（頂部先端から２２ｋＨｚ領域まで）、外有毛細胞は、深刻な喪失を示した。さらに
、ほぼすべての支持細胞が維持された（図７Ａ〜図７Ｃ）。従って、有毛細胞の再生を調
べるため、有毛細胞喪失モデルとして、１１６ｄＢの騒音に暴露されたモデルを選択した
。
【００８４】
実施例６、騒音損傷を受けた成体蝸牛の聴覚喪失のＬＹ４１１５７５の全身治療による改
善
薬剤治療実験の予備範囲を全身投与によって実施し、毒性によって制限を加えた。胸腺
重量に対する最少投薬計画を選択した（４３、４４）。５０ｍｇ／ｋｇを５日間投与され
た１２匹のマウス中、ＬＹ４１１５７５治療の最終時点である３ヶ月で６匹はＡＢＲにつ
いて試験をすることができた。残りは、重度の下痢及び体重減少のため、１週以内で死亡
した。生き残ったマウスにも、腹部の上皮細胞の減少及び食道から結腸にかけての消化管
全体に亘る分泌細胞の増加に伴い、体重減少（３日間で約１５％の減少）が起こった。ま
た胸腺の萎縮による免疫抑制（細胞の総数が１／４０に激減し、ＣＤ４及びＣＤ８の二重
陽性率が７８．６％から１．２３％に減少した）により、翌週には肌の色が変化した。こ
れらの変化は、過去の論文（４４、４５）で報告されたノッチ阻害に起因するものであっ
た。１ヵ月後の対照系等物及び処置動物の比較によって統計的有意性を得ることができ、
且つ、３ヶ月まで持続する小幅の閾値推移（図８Ａ）が、４ｋＨｚ、８ｋＨｚ、及び１６
ｋＨｚで観察された。有毛細胞計数によって外有毛細胞の増加を示したが、これは損傷が
最も深刻であった領域（低周波数、図８Ａ）で最も顕著であり、有毛細胞は、不動毛束を
備えて現れ、シナプスがＣｔＢＰ２及びニューロフィラメント抗体によるダブル着色で可
視化された（図８Ｂ）。
【００８５】
実施例７、支持細胞の系列追跡のためのモデル
支持細胞から有毛細胞への分化形質転換を可視化するために、レポータラインを使用し
た。ｍＴ／ｍＧマウス（４６）を、Ｓｏｘ２−ＣｒｅＥｒマウスと交配した。ｍＴ／ｍＧ
マウスにおいて、Ｃｒｅ組換後の細胞は、膜結合性ＧＦＰ（ＧＦＰ、緑色蛍光）の発現で
標識され、非組換型細胞は、タモキシフェン治療後、ｔｄ−トマト（赤色蛍光）を発現し
た。この結果が、Ｓｏｘ２陽性細胞の系列追跡に使用することのできるＣｒｅレポーター
ラインである。ダブルトランスジェニックマウスの蝸牛は、Ｓｏｘ２−陽性細胞における
タモキシフェンによるエストロゲン受容体の活性後、支持細胞がＧＦＰから緑色蛍光を発
現し、有毛細胞がｔｄ−トマトからの赤色蛍光を維持する（図９）。
【００８６】
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ｏｌｅｃｕｌａｒ  ｂａｓｉｓ  ｏｆ  ｎｅｕｒｏｓｅｎｓｏｒｙ  ｃｅｌｌ  ｆｏｒｍ
ａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｅａｒ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ：  ａ  ｂｌｕｅｐｒｉｎｔ  ｆｏ
ｒ  ｈａｉｒ  ｃｅｌｌ  ａｎｄ  ｓｅｎｓｏｒｙｎｅｕｒｏｎ  ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉ
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毛細胞再生（Ｈａｉｒ  ｃｅｌｌ  ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ａｆｔｅｒ  ａｃｏｕｓ
ｔｉｃ  ｔｒａｕｍａ  ｉｎ  ａｄｕｌｔ  Ｃｏｔｕｍｉｘ  ｑｕａｉｌ）、Ｓｃｉｅｎ
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１０．Ｊ．Ａｄａｍら、ニワトリの内耳における細胞運命選択及びノッチ、デルタ、鋸状
相同器官の発現（Ｃｅｌｌ  ｆａｔｅ  ｃｈｏｉｃｅｓ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｅｘｐｒｅｓ
ｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｎｏｔｃｈ、Ｄｅｌｔａ  ａｎｄ  Ｓｅｒｒａｔｅ  ｈｏｍｏｌｏｇｕ
ｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｃｈｉｃｋ  ｉｎｎｅｒ  ｅａｒ：  ｐａｒａｌｌｅｌｓ  ｗｉｔ
ｈ  Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ  ｓｅｎｓｅ−ｏｒｇａｎ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ）、Ｄｅ
ｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  １２５、４６４５（１９９８年１２月）
１１．Ｎ．Ｄａｕｄｅｔ、Ｊ．Ｌｅｗｉｓ、ニワトリの内耳成長におけるノッチ活動の２
つの対照的役割、プロセンサリパッチ及び有毛細胞分化の側方抑制（Ｔｗｏ  ｃｏｎｔｒ
ａｓｔｉｎｇ  ｒｏｌｅｓ  ｆｏｒ  Ｎｏｔｃｈ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｉｎ  ｃｈｉｃｋ
ｉｎｎｅｒ  ｅａｒ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ：  ｓｐｅｃｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ
ｐｒｏｓｅｎｓｏｒｙ  ｐａｔｃｈｅｓ  ａｎｄ  ｌａｔｅｒａｌ  ｉｎｈｉｂｉｔｉ
ｏｎ  ｏｆ  ｈａｉｒ−ｃｅｌｌ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ）、Ｄｅｖｅｌｏｐ
ｍｅｎｔ  １３２、５４１（２００５年２月）
１２．Ｓ．Ａ．Ｂａｔｔｓ、Ｃ．Ｒ．Ｓｈｏｅｍａｋｅｒ、Ｙ．Ｒａｐｈａｅｌ、正常コ
ルチ器官及び薬害性損傷を受けたコルチ器官おけるノッチ信号送信及びＨｅｓ標識（Ｎｏ
ｔｃｈ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ａｎｄ  Ｈｅｓ  ｌａｂｅｌｉｎｇ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｎｏ
ｒｍａｌ  ａｎｄ  ｄｒｕｇ−ｄａｍａｇｅｄ  ｏｒｇａｎ  ｏｆ  Ｃｏｒｔｉ）、Ｈｅ
ａｒ  Ｒｅｓ  ２４９、ＩＳ（２００９年３月）
１３．Ａ．Ｄｏｅｔｚｌｈｏｆｅｒら、ＦＧＦによるＨｅｙ２規制でコルチ器官の柱細胞
運命を維持するためのノッチ非依存型機構を提供する（Ｈｅｙ２  ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ
ｂｙ  ＦＧＦ  ｐｒｏｖｉｄｅｓ  ａ  Ｎｏｔｃｈｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｍｅｃｈ
ａｎｉｓｍ  ｆｏｒ  ｍａｉｎｔａｉｎｉｎｇ  ｐｉｌｌａｒ  ｃｅｌｌ  ｆａｔｅ  ｉ
ｎ  ｔｈｅ  ｏｒｇａｎ  ｏｆ  Ｃｏｒｔｉ）、Ｄｅｖ  Ｃｅｌｌ  １６、５８（２００
９年１月）
１４．Ｂ．Ｈ．Ｈａｒｔｍａｎら、出生後マウス及び成熟期マウスの内耳及び薬剤性損傷
を受けた蝸牛におけるＨｅｓ５の発現（Ｈｅｓ５  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ
ｐｏｓｔｎａｔａｌ  ａｎｄ  ａｄｕｌｔ  ｍｏｕｓｅ  ｉｎｎｅｒ  ｅａｒ  ａｎｄ
ｔｈｅ  ｄｒｕｇ−ｄａｍａｇｅｄ  ｃｏｃｈｌｅａ）、Ｊ  Ａｓｓｏｃ  Ｒｅｓ  Ｏ
ｔｏｌａｒｙｎｇｏｌ  １０、３２１（２００９年９月）
１５．Ｓ．Ｊ．Ｊｅｏｎ、Ｍ．Ｆｕｊｉｏｋａ、Ｓ．Ｃ．Ｋｉｍ、Ａ．Ｓ．Ｂ．Ｅｄｇｅ
、ノッチ信号伝達は、内耳幹細胞の感覚細胞運命特定又は神経細胞運命特定（Ｎｏｔｃｈ
ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ａｌｔｅｒｓ  ｓｅｎｓｏｒｙ  ｏｒ  ｎｅｕｒｏｎａｌ  ｃｅ
ｌｌ  ｆａｔｅ  ｓｐｅｃｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｉｎｎｅｒ  ｅａｒ  ｓｔｅｍ  
ｃｅｌｌｓ）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．３１、８３５１（２０１１年６月８日）
１６．Ｍ．Ｉｚｕｍｉｋａｗａら、失聴哺乳動物におけるＡｔｏｈｌ遺伝子治療による聴
性有毛細胞置換及び聴覚改善（Ａｕｄｉｔｏｒｙ  ｈａｉｒ  ｃｅｌｌ  ｒｅｐｌａｃｅ
ｍｅｎｔ  ａｎｄ  ｈｅａｒｉｎｇ  ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ  ｂｙ  Ａｔｏｈ  Ｉ  ｇ
ｅｎｅ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｉｎ  ｄｅａｆ  ｍａｍｍａｌｓ）、Ｎａｔ  Ｍｅｄ  １１、
２７１（２００５年３月）
１７．Ｓ．Ｐ．Ｇｕｂｂｅｌｓ、Ｄ．Ｗ．Ｗｏｅｓｓｎｅｒ、Ｊ．Ｃ．Ｍｉｔｃｈｅｌｌ
、Ａ．Ｊ．Ｒｉｃｃｉ、Ｊ．Ｖ．Ｂｒｉｇａｎｄｅ、子宮内遺伝子導入による哺乳動物蝸
牛への機能聴性有毛細胞の生成（Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ａｕｄｉｔｏｒｙ  ｈａｉｒ  
ｃｅｌｌｓ  ｐｒｏｄｕｃｅｄ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｍａｍｍａｌｉａｎ  ｃｏｃｈｌｅａ  
ｂｙ  ｉｎｕｔｅｒｏ  ｇｅｎｅ  ｔｒａｎｓｆｅｒ）、Ｎａｔｕｒｅ  ４５５、５３７
（２００８年９月２５日）
１８．Ｊ．Ｌ．Ｚｈｅｎｇ、Ｗ．Ｑ．Ｇａｏ、Ｍａｔｈ１の過剰発現により生後ラットの
内耳に余剰の有毛細胞のロバストな生成を誘発する（Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏ
ｆ  Ｍａｔｈ  Ｉ  ｉｎｄｕｃｅｓ  ｒｏｂｕｓｔ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｅｘ
ｔｒａ  ｈａｉｒ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ｐｏｓｔｎａｔａｌ  ｒａｔ  ｉｎｎｅｒ  ｅａ
ｒｓ）、Ｎａｔ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  ３、５８０（２０００年６月）
１９．Ｅ．Ａ．Ｌｕｍｐｋｉｎら、トランスジェニックマウスの成長中の神経システムに
おけるＭａｔｈ１−駆動ＧＦＰ発現（Ｍａｔｈｌ−ｄｒｉｖｅｎ  ＧＦＰ  ｅｘｐｒｅｓ
ｓｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇ  ｎｅｒｖｏｕｓ  ｓｙｓｔｅｍ  ｏｆ
ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ  ｍｉｃｅ）Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒ  Ｐａｔｔｅｒｎｓ  ３、３８９
（２００３年８月）
２０．Ｍ．Ｆｕｊｉｏｋａ、Ｈ．Ｔｏｋａｎｏ、Ｋ．Ｓ．Ｆｕｊｉｏｋａ、Ｈ．Ｏｋａｎ
ｏ、Ａ．Ｓ．Ｅｄｇｅ、Ｃｒｅ／ｌｏｘ仲介のインビボモザイク細胞切除を使用した変性
疾患の具現マウスモデル（Ｇｅｎｅｒａｔｉｎｇ  ｍｏｕｓｅ  ｍｏｄｅｌｓ  ｏｆ  ｄ
ｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ  ｄｉｓｅａｓｅｓ  ｕｓｉｎｇ  Ｃｒｅ／ｌｏｘ−ｍｅｄｉａ
ｔｅｄ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｍｏｓａｉｃ  ｃｅｌｌ  ａｂｌａｔｉｏｎ）Ｊ  Ｃｌ  ｉｎ
Ｉｎｖｅｓｔ  １２１、２４６２（２０１１年６月１日）
２１．Ｃ．Ｓａｇｅら、哺乳動物の有毛細胞成長及び聴覚における網膜芽細胞腫タンパク
の必須的役割（Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｒｅｔｉｎｏｂｌａｓｔｏｍａ  
ｐｒｏｔｅｉｎ  ｉｎ  ｍａｍｍａｌｉａｎ  ｈａｉｒ  ｃｅｌｌ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅ
ｎｔ  ａｎｄ  ｈｅａｒｉｎｇ）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  １０
３、７３４５（２００６年５月９日）
２２．Ｙ．Ｗａｎｇ、Ｋ．Ｈｉｒｏｓｅ、Ｍ．Ｃ．Ｌｉｂｅｒｍａｎ、マウスの蝸牛にお
ける騒音誘発性の細胞傷害及び回復のダイナミクス（Ｄｙｎａｍｉｃｓ  ｏｆ  ｎｏｉｓ
ｅ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｉｎｊｕｒｙ  ａｎｄ  ｒｅｐａｉｒ  ｉｎ  
ｔｈｅ  ｍｏｕｓｅ  ｃｏｃｈｌｅａ）Ｊ  Ａｓｓｏｃ  Ｒｅｓ  Ｏｔｏｌａｒｙｎｇｏ
ｌ  ３、２４８（２００２年９月）
２３．Ｍ．Ｖ．Ｇｏｙｃｏｏｌｅａ、Ｌ．Ｌｕｎｄｍａｎ、正円窓膜、構造機能及び透過
性、レビュー（Ｒｏｕｎｄ  ｗｉｎｄｏｗ  ｍｅｍｂｒａｎｅ．Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｆ
ｕｎｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ：  ａ  ｒｅｖｉｅｗ）、Ｍｉｃｒ
ｏｓｃ  Ｒｅｓ  Ｔｅｃｈ  ３６、２０１（１９９７年２月１日）
２４．Ａ．Ｎ．Ｓａｌｔ、Ｓ．Ｋ．Ｐｌｏｎｔｋｅ、内耳への局所的薬剤供給の原則（Ｐ
ｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆｌｏｃａｌ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｉ
ｎｎｅｒ  ｅａｒ）、Ａｕｄｉｏｌ  Ｎｅｕｒｏｏｔｏｌ  １４、３５０（２００９年）
２５．Ａ．Ｚｉｎｅら、Ｈｅｓ１及びＨｅｓ５は哺乳動物の内耳における有毛細胞の正常
成長に必要である（Ｈｅｓ  Ｉ  ａｎｄ  Ｈｅｓ５  ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ  ａｒｅ  ｒ
ｅｑｕｉｒｅｄ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｎｏｒｍａｌ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ｔｈ
ｅ  ｈａｉｒ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｍａｍｍａｌｉａｎ  ｉｎｎｅｒ  ｅａｒ）
、Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  ２１、４７１２（２００１年７月１日）
２６．Ｐ．Ｍ．Ｗｈｉｔｅ、Ａ．Ｄｏｅｔｚｌｈｏｆｅｒ、Ｙ．Ｓ．Ｌｅｅ、Ａ．Ｋ．Ｇ
ｒｏｖｅｓ、Ｎ．Ｓｅｇｉｌ、哺乳動物の蝸牛の支持細胞は分離し有毛細胞の分化形質変
換し得る（Ｍａｍｍａｌｉａｎ  ｃｏｃｈｌｅａｒ  ｓｕｐｐｏｒｔｉｎｇ  ｃｅｌｌｓ
ｃａｎ  ｄｉｖｉｄｅ  ａｎｄ  ｔｒａｎｓ−ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅ  ｉｎｔｏ
ｈａｉｒ  ｃｅｌｌｓ）、Ｎａｔｕｒｅ  ４４１、９８４（２００６年６月２２日）
２７．Ｈ．Ｌｏｗｅｎｈｅｉｍら、ｐ２７（Ｋｉｐｌ）の遺伝子破壊により生後及び成熟
期のコルチ器官の細胞増殖を可能にする（Ｇｅｎｅ  ｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎ  ｏｆｐ２７
（Ｋｉｐ１）  ａｌｌｏｗｓ  ｃｅｌｌ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  
ｐｏｓｔｎａｔａｌ  ａｎｄ  ａｄｕｌｔ  ｏｒｇａｎ  ｏｆ  ｃｏｒｔｉ）、Ｐｒｏｃ
Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９６、４０８４（１９９９年３月３０日）
２８．Ｊ．Ｍａｎｔｅｌａら、網膜芽腫遺伝子経路によりマウスの内耳における有毛細胞
の有糸分裂後状態を規制する（Ｔｈｅ  ｒｅｔｉｎｏｂｌａｓｔｏｍａ  ｇｅｎｅ  ｐａ
ｔｈｗａｙ  ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  ｔｈｅ  ｐｏｓｔｍｉｔｏｔｉｃ  ｓｔａｔｅ  ｏｆ
ｈａｉｒ  ｃｅｌｌｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｍｏｕｓｅ  ｉｎｎｅｒ  ｅａｒ）、Ｄｅｖｅ
ｌｏｐｍｅｎｔ  １３２、２３７７（２００５年５月）
２９．Ｍ．Ｃｏｈｅｎ−Ｓａｌｍｏｎら、内耳の上皮ギャップ結合ネットワークにおける
コネキシン２６のターゲット切除により聴覚障害及び細胞死滅を引き起こす（Ｔａｒｇｅ
ｔｅｄ  ａｂｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｏｎｎｅｘｉｎ２６  ｉｎ  ｔｈｅ  ｉｎｎｅｒ  
ｅａｒ  ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  ｇａｐ  ｊｕｎｃｔｉｏｎ  ｎｅｔｗｏｒｋ  ｃａｕｓ
ｅｓ  ｈｅａｒｉｎｇ  ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ  ａｎｄ  ｃｅｌｌ  ｄｅａｔｈ）、Ｃｕ
ｒｒ  Ｂｉｏｌ  １２、１１０６（２００２年７月９日）
３０．Ａ．Ｂ．Ｅｌｇｏｙｈｅｎ、Ｌ．Ｆ．Ｆｒａｎｃｈｉｎｉ、有毛細胞のプレスチン
及びコリン作用性受容体、哺乳動物において積極的に選択されるたんぱく質（Ｐｒｅｓｔ
ｉｎ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｃｈｏｌｉｎｅｒｇｉｃ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｏｆ  ｈａｉｒ  
ｃｅｌｌｓ：  ｐｏｓｉｔｉｖｅｌｙ−ｓｅｌｅｃｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｉｎ  ｍ
ａｍｍａｌｓ）、Ｈｅａｒ  Ｒｅｓ  ２７３、１００（２０１１年３月）
３１．Ｇ．Ｐ．Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎ、Ｊ．Ｂ．ｄｅ  Ｍｏｎｖｅｌ、Ｃ．Ｐｅｔｉｔ、
失聴遺伝学が聴覚生理学をいかに明らかにするか（Ｈｏｗ  ｔｈｅ  ｇｅｎｅｔｉｃｓ  
ｏｆ  ｄｅａｆｎｅｓｓ  ｉｌｌｕｍｉｎａｔｅｓ  ａｕｄｉｔｏｒｙ  ｐｈｙｓｉｏｌ
ｏｇｙ）、Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｐｈｙｓｉｏｌ７３、３１１（２０１１年３月１７日）
３２．Ｍ．Ｃａｉａｚｚｏら、マウス及びヒトの線維芽細胞からの機能ドーパミン作動性
ニューロンの直接生成（Ｄｉｒｅｃｔ  ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ
ａｌ  ｄｏｐａｍｉｎｅｒｇｉｃ  ｎｅｕｒｏｎｓ  ｆｒｏｍ  ｍｏｕｓｅ  ａｎｄ  ｈ
ｕｍａｎ  ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ）、Ｎａｔｕｒｅ  ４７６、２２４（２０１１年８月
１１日）
３３．Ｔ．Ｖｉｅｒｂｕｃｈｅｎら、規定因子による線維芽細胞の機能神経への直接転換
（Ｄｉｒｅｃｔ  ｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ  ｏｆｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ  ｔｏ  ｆｕｎｃ
ｔｉｏｎａｌ  ｎｅｕｒｏｎｓ  ｂｙ  ｄｅｆｉｎｅｄ  ｆａｃｔｏｒｓ）Ｎａｔｕｒｅ
４６３、１０３５（２０１０年２月２５日）
３４．Ｙ．Ｋａｎｅｋｏら、Ｍｕｓａｓｈｉ  １、神経幹細胞を含むＣＮＳ前駆細胞に用
いるマーカーの進化的保存（ａｎ  ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｌｌｙ  ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ  
ｍａｒｋｅｒ  ｆｏｒ  ＣＮＳ  ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎｃｌｕｄｉｎ
ｇ  ｎｅｕｒａｌ  ｓｔｅｍ  ｃｅｌｌｓ）、Ｄｅｖ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  ２２、１３９
（２０００年）
３５．Ｅ．Ｃ．Ｏｅｓｔｅｒｌｅ、Ｓ．Ｃａｍｐｂｅｌｌ、Ｒ．Ｒ．Ｔａｙｌｏｒ、Ａ．
Ｆｏｒｇｅ、Ｃ．Ｒ．Ｈｕｍｅ、正常な成熟期マウス及び薬剤性損傷を負った成熟期マウ
スの内耳におけるＳｏｘ２及びＪＡＧＧＥＤ１の発現（Ｓｏｘ２  ａｎｄ  ＪＡＧＧＥＤ
１  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｎｏｒｍａｌ  ａｎｄ  ｄｒｕｇ−ｄａｍａｇｅｄ
ａｄｕｌｔ  ｍｏｕｓｅ  ｉｎｎｅｒ  ｅａｒ）、Ｊ．Ａｓｓｏｃ  Ｒｅｓ  Ｏｔｏｌ
ａｒｙｎｇｏｌ  ９、６５（２００８年３月）
３６．Ｈ．Ｓａｋａｇｕｃｈｉら、内耳の成長中におけるＭｕｓａｓｈｉ  １発現の時空
パターン（Ｓｐａｔｉｏｔｅｍｐｏｒａｌ  ｐａｔｔｅｒｎｓ  ｏｆ  Ｍｕｓａｓｈｉ  
１  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｄｕｒｉｎｇ  ｉｎｎｅｒ  ｅａｒ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎ
ｔ．Ｎｅｕｒｏｒｅｐｏｒｔ  １５、９９７（２００４年４月２９日）
３７．Ｋ．Ｏｓｈｉｍａら、内耳の聴覚器官及び前庭器官における幹細胞の特異的分布（
Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｔｅｍ  ｃｅｌｌｓ  
ｉｎ  ｔｈｅ  ａｕｄｉｔｏｒｙ  ａｎｄ  ｖｅｓｔｉｂｕｌａｒ  ｏｒｇａｎｓ  ｏｆ
ｔｈｅ  ｉｎｎｅｒ  ｅａｒ）、Ｊ  Ａｓｓｏｃ  Ｒｅｓ  Ｏｔｏｌａｒｙｎｇｏｌ  ８
、１８（２００７年３月）
３８．Ｊ．Ｓ．Ｓｔｏｎｅ、Ｄ．Ａ．Ｃｏｔａｎｃｈｅ、鳥類の聴覚上皮における有毛細
胞再生（Ｈａｉｒ  ｃｅｌｌ  ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  ａｖｉａｎ  
ａｕｄｉｔｏｒｙ  ｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ）、Ｉｎｔ  Ｊ  Ｄｅｖ  Ｂｉｏｌ  ５１、６
３３（２００７年）
３９．Ｍ．Ｅ．Ｗａｒｃｈｏｌ、脊椎動物の内耳における感覚再生（Ｓｅｎｓｏｒｙ  ｒ
ｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｖｅｒｔｅｂｒａｔｅ  ｉｎｎｅｒ  ｅａｒ：
Ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ  ａｔ  ｔｈｅ  ｌｅｖｅｌｓ  ｏｆ  ｃｅｌｌｓ  ａｎｄ  ｓ
ｐｅｃｉｅｓ）、Ｈｅａｒ  Ｒｅｓ、（２０１０年５月１９日）
４０．Ｊ．Ｃａｆａｒｏ、Ｇ．Ｓ．Ｌｅｅ、Ｊ．Ｓ．Ｓｔｏｎｅ、Ａｔｏｈ１発現は鳥類
の有毛細胞再生の間に活性化前駆細胞及び分化有毛細胞を規定する（Ａｔｏｈ  １  ｅｘ
ｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｄｅｆｉｎｅｓ  ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒｓ  ａ
ｎｄ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｎｇ  ｈａｉｒ  ｃｅｌｌｓ  ｄｕｒｉｎｇ  ａｖｉ
ａｎ  ｈａｉｒ  ｃｅｌｌ  ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ）、Ｄｅｖ  Ｄｙｎ  ２３６、１
５６（２００７年１月）
４１．Ｎ．Ｄａｕｄｅｔら、成熟期鳥類の静止再生中の聴覚上皮における前駆細胞挙動の
ノッチ規制（Ｎｏｔｃｈ  ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ  ｃｅｌ
ｌ  ｂｅｈａｖｉｏｒ  ｉｎ  ｑｕｉｅｓｃｅｎｔ  ａｎｄ  ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｎｇ
ａｕｄｉｔｏｒｙ  ｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ  ｏｆ  ｍａｔｕｒｅ  ｂｉｒｄｓ）、Ｄｅ
ｖ  Ｂｉｏｌ、（２００８年１１月５日）
４２．Ｖ．Ｌｉｎら、成熟期マウスの小嚢においてノッチ活動阻害により有毛細胞の非有
糸分裂再生を促進する（Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｎｏｔｃｈ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  
ｐｒｏｍｏｔｅｓ  ｎｏｎｍｉｔｏｔｉｃ  ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈａｉｒ
ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ａｄｕｌｔ  ｍｏｕｓｅ  ｕｔｒｉｃｌｅｓ）、Ｊ  Ｎｅ
ｕｒｏｓｃｉ  ３１、１５３２９（２０１１年１０月２６日）
４３．Ｌ．Ａ．Ｈｙｄｅら、ＣＲＮＤ８マウスにおいてγセクレターゼ阻害薬Ｎ２−［（
２Ｓ）−２−（３，５−ジフルオロフェニル）−２−ヒドロキシエタノイル］−Ｎ１−［
（７Ｓ）−５−メチル−６−オキソ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］アゼ
ピン−７−イル］−Ｌ−アラニンアミド（ＬＹ４１１，５７５）のインビボ治療濃度域の
調査研究（Ｓｔｕｄｉｅｓ  ｔｏ  ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ  ｔｈｅ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  
ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｗｉｎｄｏｗ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｇａｍｍａ−ｓｅｃｒｅｔａｓ
ｅ  ｉｎｈｉ  ｂｉｔｏｒ  Ｎ２−［（２Ｓ）−２−（３，５−ｄｉｆｌｕｏｒｏｐｈｅ
ｎｙｌ）−２−ｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈａｎｏｙｌ］−Ｎ１−［（７Ｓ）−５−ｍｅｔｈｙ
ｌ−６−ｏｘｏ−６，７−ｄｉｈｙｄｒｏ−５Ｈ−ｄｉｂｅｎｚｏ［ｂ，ｄ］ａｚｅｐｉ
ｎ−７−ｙｌ］−Ｌ−ａｌａｎｉｎａｍｉｄｅ（ＬＹ４１１，５７５）  ｉｎ  ｔｈｅ  
ＣＲＮＤ８  ｍｏｕｓｅ）、Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｅｘｐ  Ｔｈｅｒ  ３１９、１１
３３（２００６年１２月）
４４．Ｇ．Ｔ．Ｗｏｎｇら、γセクレターゼ阻害薬ＬＹ４１１，５７５による長期間処置
によりβアミロイドペプチドの生成を阻害してリンパ球産出及び腸細胞分化を変化させる
（Ｃｈｒｏｎｉｃ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｗｉｔｈ  ｔｈｅ  ｇａｍｍａ−ｓｅｃｒｅｔ
ａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ＬＹ−４１１，５７５  ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ｂｅｔａ−ａ
ｍｙｌｏｉｄ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ａｌｔｅｒｓ  ｌｙｍ
ｐｈｏｐｏｉｅｓｉｓ  ａｎｄ  ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｃｅｌｌ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ
ｉａｔｉｏｎ）、Ｊ  Ｂｉｏｉ  Ｃｈｅｍ  ２７９、１２８７６（２００４年３月２６日
）
４５．Ｂ．Ｋ．Ｈａｄｌａｎｄら、γセクレターゼ阻害薬は胸腺細胞成長を抑制する（Ｇ
ａｍｍａ  −ｓｅｃｒｅｔａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｒｅｐｒｅｓｓ  ｔｈｙｍｏ
ｃｙｔｅ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ）、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ
９８、７４８７（２００１年６月１９日）
４６．Ｍ．Ｄ．Ｍｕｚｕｍｄａｒ、Ｂ．Ｔａｓｉｃ、Ｋ．Ｍｉｙａｍｉｃｈｉ、Ｌ．Ｌｉ
、Ｌ．Ｌｕｏ、世界のダブル蛍光Ｃｒｅレポーターマウス（Ａ  ｇｌｏｂａｌ  ｄｏｕｂ
ｌｅ−ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ  Ｃｒｅ  ｒｅｐｏｒｔｅｒ  ｍｏｕｓｅ）、Ｇｅｎｅｓ
ｉｓ  ４５、５９３（Ｓｅｐ、２００７）
４７．Ｋ．Ａｍｏｌｄら、Ｓｏｘ２（＋）成体幹細胞及び前駆細胞が組織再生及びマウス
の生存にとって重要である（Ｓｏｘ２（＋）  ａｄｕｌｔ  ｓｔｅｍ  ａｎｄ  ｐｒｏｇ
ｅｎｉｔｏｒ  ｃｅｌｌｓ  ａｒｅ  ｉｍｐｏｒｔａｎｔ  ｆｏｒ  ｔｉｓｓｕｅ  ｒｅ
ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ｏｆ  ｍｉｃｅ）、Ｃｅｌｌ  Ｓｔ
ｅｍ  Ｃｅｌｌ  ９、３１７（２０１１年１０月４日）
４８．Ｇ．Ｗ．Ｈａｒｄｉｎｇ、Ｂ．Ａ．Ｂｏｈｎｅ、Ｊ．Ｄ．Ｖｏｓ、騒音誘発性聴覚
喪失及び低周波騒音による蝸牛損傷に対する老化関連聴覚喪失遺伝子（Ａｈ１）の効果（
Ｔｈｅ  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ａｎ  ａｇｅ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｈｅａｒｉｎｇ  ｌｏｓ
ｓ  ｇｅｎｅ（Ａｈ１）  ｏｎ  ｎｏｉｓｅ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｈｅａｒｉｎｇ  ｌｏｓ
ｓ  ａｎｄ  ｃｏｃｈｌｅａｒ  ｄａｍａｇｅ  ｆｒｏｍ  ｌｏｗｆｒｅｑｕｅｎｃｙ  
ｎｏｉｓｅ）、Ｈｅａｒ  Ｒｅｓ  ２０４、９０（２００５年６月）
４９．Ｒ．Ｍａｒｔｉｎｅｚ−Ｍｏｎｅｄｅｒｏ、Ｅ．Ｖｉ、Ｋ．Ｏｓｈｉｍａ、Ｅ．Ｇ
ｌｏｗａｔｚｋｉ、Ａ．Ｓ．Ｅｄｇｅ、内耳幹細胞の機能感覚神経への分化（Ｄｉｆｆｅ
ｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｉｎｎｅｒ  ｅａｒ  ｓｔｅｍ  ｃｅｌｌｓ  ｔｏ  ｆｕ
ｎｃｔｉｏｎａｌ  ｓｅｎｓｏｒｙ  ｎｅｕｒｏｎｓ）、Ｄｅｖ  Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ  
６８，６６９（２００８年４月）
５０．Ａ．Ａ．Ｍｉｋｕｌｅｃ、Ｊ．Ｊ．Ｈａｒｔｓｏｃｋ、Ａ．Ｎ．Ｓａｌｔ、正円窓
膜の透過性は投与される薬液の組成及び通常の外科的処置の影響を受ける（Ｐｅｒｍｅａ
ｂｉｌｉｔｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｒｏｕｎｄ  ｗｉｎｄｏｗ  ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｉｓ  ｉ
ｎｆｌｕｅｎｃｅｄ  ｂｙ  ｔｈｅ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｐｐｌｉｅｄ  
ｄｒｕｇ  ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  ｂｙ  ｃｏｍｍｏｎ  ｓｕｒｇｉｃａｌ  ｐｒ
ｏｃｅｄｕｒｅｓ）、Ｏｔｏｌ  Ｎｅｕｒｏｔｏｌ  ２９、１０２０（２００８年１０月
）
５１．Ｓ．Ｇ．Ｋｕｊａｗａ、Ｍ．Ｃ．Ｌｉｂｅｒｍａｎ、聴覚損傷からの調整関連保護
、慢性遠心路遮断及び擬似手術の効果（Ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｉｎｇ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｐ
ｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  ｆｒｏｍ  ａｃｏｕｓｔｉｃ  ｉｎｊｕｒｙ：  ｅｆｆｅｃｔｓ  
ｏｆ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｄｅｅｆｆｅｒｅｎｔａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｓｈａｍ  ｓｕｒｇ
ｅｒｙ）、Ｊ  Ｎｅｕｒｏｐｈｙｓｉｏｌ  ７８、３０９５（１９９７年１２月）
５２．Ｓ．Ｆ．Ｍａｉｓｏｎ、Ｒ．Ｂ．Ｅｍｅｓｏｎ、Ｊ．Ｃ．Ａｄａｍｓ、Ａ．Ｅ．Ｌ
ｕｅｂｋｅ、Ｍ．Ｃ．Ｌｉｂｅｒｍａｎ、αＣＧＲＰ喪失により蝸牛神経中の音響誘発活
動を減少する（Ｌｏｓｓ  ｏｆ  ａｌｐｈａ  ＣＧＲＰ  ｒｅｄｕｃｅｓ  ｓｏｕｎｄ−
ｅｖｏｋｅｄ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｃｏｃｈｌｅａｒ  ｎｅｒｖｅ）、Ｊ
Ｎｅｕｒｏｐｈｙｓｉｏｌ  ９０、２９４１（２００３年１１月）
その他の実施形態
【００８７】
本発明は詳細な説明との関連で説明したが、以上の説明は例示を目的としており、本発
明の範囲を限定するものでなく、本発明の範囲は添付の請求範囲によって規定されること
を理解されなければならない。その他の様態、効果、及び修正についても、以下の請求の
範囲内である。
【図１】
2019172679.tif 000005
【図２】
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【図３】
2019172679.tif 000007
【図４】
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【図５】
2019172679.tif 000009
【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
2019172679.tif 000013
【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
2019172679.tif 000015
【配列表】
2019172679000001.app
【外国語明細書】
2019172679000001.pdf