(57)【要約】【課題】本発明は、経口でヘルペス感染症に対して高い効果を有する、食用キノコ由来の抗ヘルペス剤を提供することを課題とする。【解決手段】本発明は、マイタケ属、プレロータス属、シメジ属、シロタモギタケ属、キクラゲ属、ハナビラタケ属、及びキシメジ属からなる群より選択される属に属するキノコの、子実体若しくは菌糸体又はその乾燥物を有効成分として含む、ヘルペスウイルス感染症の治療及び／又は予防用の経口剤等に関する。【選択図】図１
2019172597.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
マイタケ（Grifola）属、プレロータス（Pleurotus）属、シメジ（Lyophyllum）属、シロタモギタケ（Hypsizygus）属、キクラゲ（Auricularia）属、ハナビラタケ（Sparassis）属、及びキシメジ（Tricholoma）属からなる群より選択される属に属するキノコの、子実体若しくは菌糸体又はその乾燥物を有効成分として含む、ヘルペスウイルス感染症の治療及び／又は予防用の経口剤。
【請求項２】
キノコが、マイタケ属、プレロータス属、及びシメジ属からなる群より選択される属に属する、請求項１に記載の経口剤。
【請求項３】
キノコが、マイタケ（Grifola frondosa）、シロマイタケ（Grifola albicans）、エリンギ（Pleurotus eryngii）、ヒラタケ（Pleurotus ostreatus）、タモギタケ（Pleurotus cornucopiae var. citrinopileatus）、トキイロヒラタケ（Pleurotus djamor）、ホンシメジ（Lyophyllum shimeji）、ハタケシメジ（Lyophyllum decastes）、ブナシメジ（Hypsizygus marmoreus）、キクラゲ（Auricularia auricula-judae）、ハナビラタケ（Sparassis crispa）、及びマツタケ（Tricholoma matsutake）からなる群から選択される種である、請求項１に記載の経口剤。
【請求項４】
キノコが、マイタケ、シロマイタケ、エリンギ、ヒラタケ、タモギタケ、及びホンシメジからなる群より選択される種である、請求項３に記載の経口剤。
【請求項５】
キノコの子実体若しくは菌糸体の乾燥物を有効成分として含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の経口剤。
【請求項６】
ヘルペスウイルスの回帰発症の治療及び／又は予防のための、請求項１〜５のいずれか一項に記載の経口剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、キノコの子実体若しくは菌糸体又はその乾燥物を有効成分として含む、ヘルペス感染症の治療及び／又は予防用の経口剤等に関する。
【背景技術】
【０００２】
ヘルペスウイルスは2本鎖DNAをゲノムとするDNAウイルスであり、ヒトに対して様々な病気を引き起こす。生体内に侵入したヘルペスウイルスは、発症の有無にかかわらず特定の細胞、組織、又は臓器に潜伏感染する。潜伏感染部位はヘルペスウイルス種によって異なり、多様性を示す。ヘルペスウイルスはDNAの状態で潜伏しているが、宿主がストレスや免疫抑制といった状態に陥った時等に、潜伏感染しているヘルペスウイルスは、再活性化・増殖し、宿主に再び病態を引き起こす（回帰発症）。ヘルペスウイルス感染症状は患者の免疫状態に大きく左右され、ほぼ無症状から致死的感染まで様々な病態を呈する。ヘルペスウイルスは回帰発症と潜伏感染を繰り返して、宿主に終生存在する。
【０００３】
細胞、組織、又は臓器においてDNAの状態で潜伏しているヘルペスウイルスを、体内から除去あるいは減少させることができる抗ウイルス薬は今のところ無い。この為、抗ウイルス薬は、再発時の不快感の緩和や再発回数の減少、病気の期間の短縮を目的に使用されている。しかしながら、アシクロビル（ACV）等の化学物質の抗ウイルス薬は、長期に渡って使用すると必然的に薬剤耐性ウイルスを生じるという問題がある。加えて、ACVには重大な副作用として、急性腎不全、肝機能障害、間質性肺炎、肺炎、血小板減少症、せん妄（意識障害）、てんかん発作、無顆粒球症、呼吸抑制、中毒性表皮壊死症等を生じることが知られている。
【０００４】
化学物質だけでなく、天然物に由来する抗ヘルペス剤についても研究がなされている。例えば、特許文献１にはリポポリサッカライド（LPS）を含む抗ヘルペス剤が開示されている。また、本願出願人は、長年の食経験から安全性が高いと考えられるマイタケ抽出物について研究を行い、これまでに、マイタケ抽出物がヘルペスウイルス感染症の治療及び／又は予防に有効であることを見出した（特許文献２）。しかしながら、特許文献２に記載のマイタケ抽出物を含む抗ヘルペス剤は、特に外用剤として局所投与した場合には有効であったが、経口投与による効果は示されていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開平０４−４９２４２号公報
【特許文献２】特開２０１４−８０３７３号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、経口でヘルペス感染症に対して高い効果を有する、食用キノコ由来の抗ヘルペス剤を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者は、マイタケ属、プレロータス属、シメジ属、シロタモギタケ属、キクラゲ属、ハナビラタケ属、及びキシメジ属からなる群より選択される属に属するキノコの子実体若しくは菌糸体等が、経口投与でヘルペス感染症に対して高い効果を有することを見出し、本発明を完成させた。
【０００８】
本発明は上記知見に基づくものであり、以下の態様を包含する。
（１）マイタケ（Grifola）属、プレロータス（Pleurotus）属、シメジ（Lyophyllum）属、シロタモギタケ（Hypsizygus）属、キクラゲ（Auricularia）属、ハナビラタケ（Sparassis）属、及びキシメジ（Tricholoma）属からなる群より選択される属に属するキノコの、子実体若しくは菌糸体又はその乾燥物を有効成分として含む、ヘルペスウイルス感染症の治療及び／又は予防用の経口剤。
（２）キノコが、マイタケ属、プレロータス属、及びシメジ属からなる群より選択される属に属する、（１）に記載の経口剤。
（３）キノコが、マイタケ（Grifola frondosa）、シロマイタケ（Grifola albicans）、エリンギ（Pleurotus eryngii）、ヒラタケ（Pleurotus ostreatus）、タモギタケ（Pleurotus cornucopiae var. citrinopileatus）、トキイロヒラタケ（Pleurotus djamor）、ホンシメジ（Lyophyllum shimeji）、ハタケシメジ（Lyophyllum decastes）、ブナシメジ（Hypsizygus marmoreus）、キクラゲ（Auricularia auricula-judae）、ハナビラタケ（Sparassis crispa）、及びマツタケ（Tricholoma matsutake）からなる群から選択される種である、（１）に記載の経口剤。
（４）キノコが、マイタケ、シロマイタケ、エリンギ、ヒラタケ、タモギタケ、及びホンシメジからなる群より選択される種である、（３）に記載の経口剤。
（５）キノコの子実体若しくは菌糸体の乾燥物を有効成分として含む、（１）〜（４）のいずれかに記載の経口剤。
（６）ヘルペスウイルスの回帰発症の治療及び／又は予防のための、（１）〜（５）のいずれかに記載の経口剤。
（７）被験体に、（１）〜（５）のいずれかに記載の経口剤を経口投与することを含む、ヘルペスウイルス感染症の治療及び／又は予防方法。
（８）被験体に、（１）〜（５）のいずれかに記載の経口剤を経口投与することを含む、ヘルペスウイルスの回帰発症の治療及び／又は予防方法。
【発明の効果】
【０００９】
本発明のキノコの子実体若しくは菌糸体等を含む経口剤は、ヘルペス感染症に対して高い効果を示す。また、本発明の経口剤は、長年の食経験を有する食用キノコ等から製造される為、安全性が高く、副作用が少ないと考えられる。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】図1は、各サンプルで処理したマウスにおける、HSV-2の接種14日後までのスコアの平均値を示す。
【図２】図2は、各サンプルで処理したマウスにおける、HSV-2の接種3日後のウイルス力価の測定結果を示す。*は、t検定における有意差（*p<0.05、**p<0.01、***p<0.001）を示す。
【図３】図3は、各サンプルで処理したマウスにおける、HSV-2の接種14日後までのスコアの平均値を示す。
【図４】図4は、各サンプルで処理したマウスにおける、HSV-2の接種14日後までのスコアの平均値を示す。
【図５】図5は、各サンプルで処理したマウスにおける、HSV-2の接種3日後のウイルス力価の測定結果を示す。*は、t検定における有意差（*p<0.05、**p<0.01、***p<0.001）を示す。
【図６】図6は、各サンプルで処理したマウスにおける、HSV-2の接種3日後のウイルス力価の測定結果を示す。*は、t検定における有意差（*p<0.05、**p<0.01、***p<0.001）を示す。
【図７】図7は、各サンプルで処理したマウスにおける、HSV-2の接種14日後までのスコアの平均値を示す。
【図８】図8は、各サンプルで処理したマウスにおける、HSV-2の接種14日後までのスコアの平均値を示す。
【図９】図9は、各サンプルで処理したマウスにおける、HSV-2の接種3日後のウイルス力価の測定結果を示す。*は、t検定における有意差（*p<0.05、**p<0.01、***p<0.001）を示す。
【図１０】図10は、各サンプルで処理したマウスにおける、HSV-2の接種3日後のウイルス力価の測定結果を示す。*は、t検定における有意差（*p<0.05、**p<0.01、***p<0.001）を示す。
【図１１】図11は、実施例9で得られた加熱乾燥マイタケ抽出物のHPLCによる分析結果を示す。
【図１２】図12は、実施例10で得られた真空乾燥マイタケ抽出物のHPLCによる分析結果を示す。
【図１３】図13は、実施例9で得られた加熱乾燥マイタケ抽出物、又は実施例10で得られた真空乾燥マイタケ抽出物で処理したマウスにおける、HSV-2の接種14日後までのスコアの平均値を示す。
【図１４】図14は、実施例9で得られた加熱乾燥マイタケ抽出物、又は実施例10で得られた真空乾燥マイタケ抽出物で処理したマウスにおける、HSV-2の接種3日後のウイルス力価の測定結果を示す。*は、t検定における有意差（*p<0.05、**p<0.01、***p<0.001）を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
一態様において、本発明は、ヘルペスウイルス感染症の治療及び／又は予防用の経口剤に関する。本発明の経口剤は、マイタケ（Grifola）属、プレロータス（Pleurotus）属、シメジ（Lyophyllum）属、シロタモギタケ（Hypsizygus）属、キクラゲ（Auricularia）属、ハナビラタケ（Sparassis）属、及びキシメジ（Tricholoma）属、好ましくはマイタケ属、プレロータス属、及びシメジ属からなる群より選択される属に属するキノコの、子実体若しくは菌糸体又はその乾燥物を有効成分として含む。
【００１２】
本明細書において、「マイタケ（Grifola）属」キノコには、狭義のマイタケ（Grifola frondosa）、シロマイタケ（Grifola albicans）、チョレイマイタケ（Grifola umbellata）、及びトンビマイタケ（Grifola gigantea）等が含まれるが、好ましくは、本明細書におけるマイタケは、狭義のマイタケはシロマイタケ、さらに好ましくは狭義のマイタケを指す。
【００１３】
本明細書において、「プレロータス（Pleurotus）属」キノコには、エリンギ（Pleurotus eryngii）、ヒラタケ（Pleurotus ostreatus）、タモギタケ（Pleurotus cornucopiae var. citrinopileatus）、トキイロヒラタケ（Pleurotus djamor）、及びウスヒラタケ（Pleurotus pulmonarius）が含まれる。
【００１４】
本明細書において、「シメジ（Lyophyllum）属」キノコには、ホンシメジ（Lyophyllum shimeji）、及びハタケシメジ（Lyophyllum decastes）が含まれる。
【００１５】
本明細書において、「シロタモギタケ（Hypsizygus）属」キノコには、ブナシメジ（Hypsizygus marmoreus）が含まれる。
【００１６】
本明細書において、「キクラゲ（Auricularia）属」キノコには、キクラゲ（Auricularia auricula-judae）が含まれる。
【００１７】
本明細書において、「ハナビラタケ（Sparassis）属」キノコには、ハナビラタケ（Sparassis crispa）が含まれる。
【００１８】
本明細書において、「キシメジ（Tricholoma）属」キノコには、マツタケ（Tricholoma matsutake）が含まれる。
【００１９】
キノコは、好ましくは、マイタケ、シロマイタケ、エリンギ、ヒラタケ、タモギタケ、トキイロヒラタケ、ホンシメジ、ハタケシメジ、ブナシメジ、キクラゲ、ハナビラタケ、及びマツタケからなる群から選択される種であり、さらに好ましくは、マイタケ、エリンギ、ヒラタケ、タモギタケ、及びホンシメジからなる群より選択される種である。
【００２０】
本発明の経口剤は、好ましくは上記属又は種のいずれかに属するキノコの子実体若しくは菌糸体の乾燥物を含む。キノコの乾燥方法は特に限定されず、公知の乾燥法、例えば加熱乾燥、真空乾燥、及び風乾、好ましくは加熱乾燥及び真空乾燥によりキノコを乾燥することができる。例えば、加熱乾燥の例として熱風乾燥が挙げられる。加熱温度は、低すぎると乾燥効率が低下し、高すぎるとキノコの成分に化学変化が生じる恐れがあるため、適切な範囲に設定することが好ましい。乾燥は、30℃以上、40℃以上、50℃以上、60℃以上、好ましくは70℃以上、また150℃以下、120℃以下、100℃以下、好ましくは90℃以下、80℃以下、又は70℃以下の条件で、例えば30℃〜100℃、40℃〜80℃、又は50℃〜70℃の条件で、例えば熱風を目的の物質に送風することによって行うことができる。加熱時間はキノコ中の水分が除かれる限り特に限定されず、例えば1時間以上、2時間以上、4時間以上、6時間以上、終夜、又は一昼夜とすることができる。また、真空乾燥の例として、凍結乾燥が挙げられる。真空乾燥は、キノコを加熱する必要がなく、低温で乾燥を行うことから、キノコの成分に化学変化が生じる恐れが少ない。真空乾燥は、完全な真空下で行ってもよいし、実質的な真空下、例えば100Pa以下、50Pa以下、又は20Pa以下等で行ってもよい。真空乾燥は、当業者に公知の方法により、例えば市販の真空乾燥機を用いて行うことができ、真空乾燥の時間は、キノコから水分が除かれる限り特に限定されず、例えば1時間以上、2時間以上、4時間以上、6時間以上、終夜、又は一昼夜行うことができる。
【００２１】
キノコは、乾燥後、必要に応じて細断又は粉末化してもよい。
【００２２】
本発明の経口剤は、上記属又は種のいずれかに属するキノコの子実体若しくは菌糸体又はその乾燥物を、一種のみ含んでもよいし、数種類、例えば2種以上、3種以上、4種以上、又は5種以上組み合わせて含んでもよい。
【００２３】
本発明の経口剤によって治療及び／又は予防され得るヘルペスウイルスの種類は限定しないが、単純ヘルペスウイルス（HSV-1：単純ヘルペスウイルス1型、又はHSV-2：単純ヘルペスウイルス2型に分けられる）、水痘帯状疱疹ウイルス、エプステインバールウイルス、ヒトサイトメガロウイルス、ヒトヘルペスウイルス6、ヒトヘルペスウイルス7、及びヒトヘルペスウイルス8が挙げられる。本発明の経口剤によって治療及び／又は予防され得るヘルペスウイルスは、好ましくはHSV-1及びHSV-2である。本発明の経口剤により治療及び／又は予防され得るヘルペス感染症の例として、限定するものではないが、ヘルペス性皮膚炎、ヘルペス性角膜炎、ヘルペス性結膜炎、口唇ヘルペス、口腔ヘルペス、咽頭ヘルペス、性器ヘルペス、ヘルペス性脳炎、及び新生児ヘルペス等が挙げられる。本発明の経口剤は、これらのヘルペス感染症に罹患した患者に対して、ヘルペス感染症又はそれに伴う症状、例えば痒み及び痛み等の自覚症状、並びに／又は水疱及び紅斑等の皮膚症状を治療、緩和、又は低減するものであってもよい。また、本発明の経口剤は、ヘルペス感染症に罹患するリスクのある患者に対して、例えば、ヘルペス感染症に罹患し、回帰発症のおそれがある患者に対して、予防的に用いることができる。一実施形態において、本発明の経口剤は、ヘルペスウイルスの回帰発症の治療及び／又は予防のために使用することができる。
【００２４】
本明細書において、ヘルペスウイルスの「回帰発症」とは、臨床的に認められる症状を示さずに生体内に病原体が存在する状態（潜伏感染）から、ヘルペスウイルスが再活性化して、宿主に再び病態を引き起こすことを意味する。
【００２５】
本発明の経口剤の使用態様は特に限定されず、例えば健康補助食品等の食品又は食品組成物、サプリメント、及び医薬組成物等のいずれであってもよい。
【００２６】
本発明の経口剤は、常法により製剤化され得る。製剤化は、例えば、Remington’s Pharmaceutical Sciences（Merck Publishing Co．，Easton，Pa．）に記載の方法を参照することができる。
【００２７】
投与形態は特に制限されず、必要に応じ適宜選択されるが、例えば錠剤、カプセル剤、顆粒剤、細粒剤、散剤、液剤、シロップ剤、懸濁剤、乳剤、及びエリキシル剤等として投与することができる。
【００２８】
本発明の経口剤は、上記キノコの子実体若しくは菌糸体又はその乾燥物に加えて、他の成分、例えば担体又は溶媒等の他の成分を含んでもよい。担体又は溶媒の例として、滅菌水、生理食塩水、賦形剤、結合剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤、流動性促進剤、pH調整剤、安定化剤、矯味剤、着色剤、及び香料等が挙げられ、これらの他の成分は上記投与形態に応じて適宜選択される。本発明の経口剤が他の成分を含む場合、組成物中のキノコの子実体若しくは菌糸体又はその乾燥物の割合は特に限定されず、例えば、組成物全体の重量に対して、例えば1%〜99%、10%〜90％、又は20%〜80％であってよい。
【００２９】
本発明の経口剤が投与され得る被験体としては、限定されるものではないが、哺乳動物（例えばヒト及びチンパンジー等の霊長類、ラット及びマウス等の実験動物、ブタ、ウシ、ウマ、ヒツジ、及びヤギ等の家畜動物、並びにイヌ及びネコ等の愛玩動物が挙げられ、好ましくはヒト又はマウス、最も好ましくはヒト）、鳥類（ニワトリ、ウズラ、シチメンチョウ、アヒル、ガチョウ等の家禽類、インコ、オウム、ジュウシマツ等の愛玩鳥）、及び魚類（マグロ、タイ、ハマチ、ブリ等の養殖魚、ニシキゴイ、キンギョ等の観賞用魚）、好ましくは哺乳動物である。
【００３０】
本発明の経口剤の投与量、投与間隔、及び投与期間は、当業者であれば、被験体の性別、体重、年齢（月齢、週齢）、並びに疾患等の経過及び症状等の種々の要因を考慮して適宜定めることができる。例えば、経口剤の投与量又は治療有効量は、1日当たり約0.1mg〜10g/kg体重、好ましくは1mg〜1000mg/kg体重、又は250〜500mg/kg体重であってよい。また、投与回数は、限定するものではないが、1日3回、1日2回、1日1回、2日に1回、3日に1回、1週間に1回、2週間に1回、1カ月に1回等であってよい。また、投与期間は、限定するものではないが、1日、2日、3日、1週間、2週間、1カ月、半年、一年、又はそれ以上であってよい。
【００３１】
一態様において、本発明は、被験体に上記経口剤を経口投与することを含む、ヘルペスウイルス感染症の治療及び／又は予防方法に関する。本方法における被験体、ヘルペスウイルス感染症、組成物の投与量、投与間隔、及び投与期間等は、経口剤について記載した通りであるからここでは記載を省略する。
【実施例】
【００３２】
［実施例1：キノコ子実体熱風乾燥粉末の調製］
人工栽培により得られたキノコ子実体（茎部及び傘部）を厚さ1cm以下になるように切って、50〜70℃で乾燥機にて4〜8時間かけて熱風乾燥した。次いで乾燥子実体を手で細かく砕いたのち、ブレンダーで30秒間粉砕し、微粉末のキノコ子実体熱風乾燥粉末を得た。
【００３３】
［実施例2：キノコ子実体凍結乾燥粉末の調製］
人工栽培により得られたキノコ子実体（茎部及び傘部）を厚さ1cm以下になるように切って、−30℃で凍結させ、真空凍結乾燥機を用いて乾燥した。乾燥機内は20Paまで減圧され、およそ4日かけて乾燥した。次いで乾燥子実体を手で細かく砕いたのち、ブレンダーで30秒間粉砕し、微粉末のキノコ子実体凍結乾燥粉末を得た。
【００３４】
［実施例3：ヘルペスウイルス感染症に対する予防及び治療効果１］
本実施例では、BALB/cマウスを用いて、実施例1及び実施例2で調製したキノコ子実体乾燥粉末によるヘルペスウイルス感染症に対する効果を検証した。陽性対照としてはACVを用いた。
【００３５】
BALB/cマウス（6週齢、♀、n=5）にウイルスに感染させやすくする目的でmedroxyprogesterone 17-acetate (3 mg/mouse)を、ウイルス接種6日前及び1日前に皮下注射した。マウスには各群のサンプル（5mg/0.4mL/日）を、ウイルス接種3日前から7日後までの間、1日2回（午前9時及び午後6時）ゾンデを使用して強制的に経口投与した。なお、PBS、ACV（0.2mg/40μL/日）は性器に局所投与した。
【００３６】
ウイルス（単純ヘルペスウイルス2型：HSV-2、UW 268株、富山県衛生試験所からの分与株、1x103 PFU/20 μL/mouse)を性器に局所接種した3日後に、局所をPBSで洗浄し、その中のウイルス力価をプラークアッセイ法によって測定した。
【００３７】
症状の程度（スコア）及び死亡例をウイルスの接種後2週間にわたって毎日記録した（2週間以降には死亡例はない）。症状の程度は表1のスコアで示す通りである。
【００３８】
【表１】
2019172597.tif 000003
【００３９】
＜結果＞
各群における死亡率及び死亡日数を表2に、スコアの平均値を図1に示した。
【００４０】
【表２】
2019172597.tif 000004
【００４１】
表2及び図1から明らかな様に、エリンギ子実体熱風乾燥粉末、マイタケ子実体熱風乾燥粉末、及びマイタケ子実体凍結乾燥粉末いずれもACV（局所投与）に匹敵するヘルペス治療効果（「症状の程度（スコア）」と「死亡率」の両方を勘案した効果）を示した。また、ウイルス接種の3日後にウイルス量を測定したところ、キノコ子実体乾燥粉末処置群では、コントロールに比べて有意に低値であった（図2）。
【００４２】
［実施例4：ヘルペスウイルス感染症に対する予防及び治療効果２］
本実施例では、BALB/cマウスを用いて、ブナシメジ、ハタケシメジ、ホンシメジ、ヒラタケ、タモギタケ、キクラゲ、ハナビラタケ、マツタケ、エノキタケ、シイタケ、及びマッシュルームの子実体を実施例1に示した方法により調製して得たキノコ子実体熱風乾燥粉末によるヘルペスウイルス感染症に対する効果を検証した。陽性対照としてはACVを用いた。
【００４３】
＜方法＞
BALB/cマウス（6週齢、♀、n=5）に、ウイルスに感染させやすくする目的でmedroxyprogesterone 17-acetate (3 mg/mouse)を、ウイルス接種6日前及び1日前に皮下注射した。マウスには、蒸留水、ACV（1mg/0.4mL/日）、又は調製したサンプル（5mg/0.4mL/日）を、ウイルス接種3日前から7日後までの間、1日2回（午前9時及び午後6時）、ゾンデを使用して強制的に経口投与した。
【００４４】
ウイルス（単純ヘルペスウイルス2型：HSV-2、UW 268株、富山県衛生試験所からの分与株、1x104 PFU/20μL/mouse）を性器に局所接種した3日後に、局所をPBSで洗浄し、その中のウイルス力価をプラークアッセイ法によって測定した。
【００４５】
症状の程度（スコア）及び死亡例をウイルスの接種後2週間にわたって毎日記録した（2週間以降には死亡例はない）。症状の程度は表1のスコアで示す通りである。
【００４６】
＜結果＞
実施した試験の各群における死亡率及び死亡日数を表3に、スコアの平均値を図3に示した。
【００４７】
【表３】
2019172597.tif 000005
【００４８】
［実施例5：ヘルペスウイルス感染症に対する予防及び治療効果３］
本実施例では、BALB/cマウスを用いて、トキイロヒラタケ、アガリクス、チャーガ、冬虫夏草、及び霊芝の子実体を、実施例1に示した方法により調製して得られるキノコ子実体熱風乾燥粉末によるヘルペスウイルス感染症に対する効果を検証した。陽性対照としてはACVを用いた。
【００４９】
実験方法は、実施例4に記載の方法に従った。
【００５０】
＜結果＞
実施した試験の各群における死亡率及び死亡日数を表4に、スコアの平均値を図4に示した。
【００５１】
【表４】
2019172597.tif 000006
【００５２】
表3と表4及び図3と図4から明らかな様に、ブナシメジ、ハタケシメジ、ホンシメジ、ヒラタケ、タモギタケ、キクラゲ、エノキタケ、マッシュルーム、ハナビラタケ、マツタケ、トキイロヒラタケ、アガリクス、チャーガにヘルペス治療効果が認められ、この内、ホンシメジ、ヒラタケ、タモギタケ、及びキクラゲにおいて、ACVと同等の特に高いヘルペス治療効果がみられた。
【００５３】
また、ウイルス接種の3日後にウイルス量を測定したところ、ブナシメジ、ハタケシメジ、ホンシメジ、ヒラタケ、タモギタケ、ハナビラタケ、マツタケ、トキイロヒラタケ、及び霊芝において、対照群に比べて有意に低値であった（図5、図6）。
【００５４】
以上の結果から、ブナシメジ、ハタケシメジ、ホンシメジ、ヒラタケ、タモギタケ、キクラゲ、ハナビラタケ、マツタケ、及びトキイロヒラタケがウイルス感染に対して優れた効果を有することが示された。
【００５５】
［実施例6：キノコ菌糸体の調製］
キノコの菌株はポテトデキストロース（PDA）寒天培地で平面培養したものを保存菌株とした。
【００５６】
液体培地（PGY培地：グルコース2%、ペプトン0.2%、酵母エキス0.2%、硫酸マグネシウム・七水和物0.05%、リン酸二水素カリウム0.05%）200mLを500mL三角フラスコに入れ、121℃、20分間加圧滅菌し、その後室温まで放冷した。平面培地のマイタケまたはエリンギから直径5mmディスクを抜き取り、液体培地へと接種した。これを暗室の室温25℃、湿度60%、7日間、振とう100rpmで培養し、これを前培養とした。前培養で増やした菌糸をさらに増やすために、本培養を実施した。培地組成は前培養と同様の組成3Lを5L容器のガラス瓶に入れ、121℃、30分間加圧滅菌後、室温で放冷した。前培養液を添加して、暗室の室温25℃、湿度60%、14日間、通気（2.0L/min）で培養を行った。
【００５７】
培養期間が終了した時点で、菌糸体と培養液を遠心分離によって分け、菌糸体を充分に水で洗浄し、ろ別した。
【００５８】
回収した菌糸体を−30℃で凍結させ、真空凍結乾燥機を用いて乾燥した。乾燥機内は20Paまで減圧され、およそ4日かけて乾燥した。次いで凍結乾燥した菌糸体を手で細かく砕いたのち、ブレンダーで30秒間粉砕し、微粉末の菌糸体凍結乾燥粉末を得た。
【００５９】
［実施例7：ヘルペスウイルス感染症に対する予防及び治療効果４］
本実施例では、キノコ子実体だけでなくキノコ菌糸体の経口投与のよる効果を検討するため、BALB/cマウスを用いて、実施例6で調製したマイタケ及びエリンギの菌糸体乾燥粉末によるヘルペスウイルス感染症に対する効果を検証した。陽性対照としてはACVを用いた。
【００６０】
実験方法は、実施例6で調製したキノコ菌糸体粉末を用いる以外は、実施例4に記載の方法に従った。
【００６１】
＜結果＞
実施した試験の各群における死亡率及び死亡日数を表5に、スコアの平均値を図7に示した。
【００６２】
【表５】
2019172597.tif 000007
【００６３】
［実施例8：ヘルペスウイルス感染症に対する予防及び治療効果５］
本実施例では、実施例6で調製したマイタケ、タモギタケ、及びヒラタケの菌糸体乾燥粉末によるヘルペスウイルス感染症に対する効果を検証した。陽性対照としてはACVを用いた。
【００６４】
実験方法は、実施例7に記載の方法に従った。
【００６５】
＜結果＞
実施した試験の各群における死亡率及び死亡日数を表6に、スコアの平均値を図8に示した。
【００６６】
【表６】
2019172597.tif 000008
【００６７】
表5と表6及び図7と図8から明らかな様に、マイタケ菌糸体及びエリンギ菌糸体において、ACVと同等の高いヘルペス治療効果が認められた。
【００６８】
また、ウイルス接種の3日後にウイルス量を測定したところ、マイタケ菌糸体において、特に優れたウイルス増殖抑制効果が認められた（図9、図10）。
【００６９】
［実施例9：マイタケ子実体加熱乾燥粉末抽出物の調製］
人工栽培により得られたマイタケの子実体（茎部及び傘部）を棚型乾燥室の棚にならべ、最初は70℃から段階的に温度を上げ最終的には80℃でほぼ1日かけて乾燥した。ついでマイタケ子実体加熱乾燥物を製粉機で粉砕し、微粉末のマイタケ子実体加熱乾燥粉末を得た。
【００７０】
マイタケ子実体加熱乾燥粉末13.5kgを、イオン交換水310Lに投入し、2気圧加圧下、121℃で30分間の熱水抽出を行った。抽出液は、フィルタープレスを用いて濾過し、黒褐色の抽出液約260Ｌを得た。該溶液を減圧下で60L程度まで濃縮して、室温でエタノール66Lを加え10℃以下で約数時間放置すると、液面、液中に浮遊又は壁面に付着する茶褐色の物質が生成した。これらの物質を金網で掬って除去し、褐色の溶液を得た。該溶液を減圧下でアルコールを除き、さらに減圧下で濃縮後、スプレードライ装置を用いて噴霧乾燥し、微細な褐色粉末5.2kgを得た。得られた物質をMD Frとした。
【００７１】
得られたMD Frにつき、以下の条件でHPLCを行ったところ、図11に示すピークが得られた。
溶離液    ：0.1M NaNO3(0.02% NaN3)水溶液
検出器    ：示差屈折計
分析カラム：SB-806M HQ
温度      ：40℃
流速      ：1.0mL/min
【００７２】
［実施例10：マイタケ子実体真空乾燥粉末抽出物の調製］
人工栽培により得られたマイタケの子実体（茎部及び傘部）を−30℃〜−40℃で凍結させ、真空凍結乾燥機を用いて乾燥した。乾燥機内は20Paまで減圧され、およそ1日で乾燥した。次いで、マイタケ子実体真空乾燥物を製粉機で粉砕し、微粉末化した。
【００７３】
マイタケ子実体真空乾燥粉末10kgを、あらかじめ80℃まで加熱しておいたイオン交換水210Lに投入し、2気圧加圧下、121℃で30分間の熱水抽出を行った。抽出液は、フィルタープレスを用いて濾過し、黒褐色の抽出液159Lを得た。該溶液を減圧下で濃縮後、スプレードライ装置を用いて噴霧乾燥し、微細な褐色粉末3.6kgを得た。得られた物質をYM-6Aとした。
【００７４】
得られたYM-6Aにつき、以下の条件でHPLCを行ったところ、図12に示すピークが得られた。
溶離液    ：0.1M NaNO3(0.02% NaN3)水溶液
検出器    ：示差屈折計
分析カラム：SB-806M HQ
温度      ：40℃
流速      ：1.0mL/min
【００７５】
［実施例11：ヘルペスウイルス感染症に対する予防及び治療効果６］
本実施例では、BALB/cマウスを用いて、実施例9と実施例10で調製した各種マイタケ抽出物によるヘルペスウイルス感染症に対する効果を検証した。陽性対照としてはACVを用いた。
【００７６】
＜方法＞
BALB/cマウス（6週齢、♀、n=5）に、ウイルスに感染させやすくする目的でmedroxyprogesterone 17-acetate (3 mg/mouse)を、ウイルス接種6日前及び1日前に皮下注射した。マウスには、蒸留水、ACV（2mg/0.4mL/日）、又は実施例9と実施例10で調製したサンプル（10mg/0.4mL/日）を、ウイルス接種7日前から7日後までの間、1日2回（午前9時及び午後6時）、ゾンデを使用して強制的に経口投与した。
【００７７】
ウイルス（単純ヘルペスウイルス2型：HSV-2、UW 268株、富山県衛生試験所からの分与株、1x104 PFU/20μL/mouse）を性器に局所接種した3日後に、局所をPBSで洗浄し、その中のウイルス力価をプラークアッセイ法によって測定した。
【００７８】
症状の程度（スコア）及び死亡例をウイルスの接種後2週間にわたって毎日記録した（2週間以降には死亡例はない）。スコアは表1で示す通りである。
【００７９】
＜結果＞
各群における死亡率及び死亡日数を表7に、スコアの平均値を図13に示した。
【００８０】
【表７】
2019172597.tif 000009
【００８１】
表7及び図13から明らかな様に、MD Fr及びYM-6AいずれもACV（経口投与）と比較し、ヘルペス治療効果は著しく低かった。また、ウイルス接種の3日後にウイルス量を測定したところ、コントロールと同程度であった（図14）。
【００８２】
以上より、経口投与において、キノコ乾燥粉末は、マイタケ抽出物であるMD Fr及びYM-6Aと比較し、優れたヘルペス感染症阻止効果が認められた。
【００８３】
［実施例12：単純ヘルペスウイルス潜伏感染からの回帰発症に対する阻止効果］
本実施例では、BALB/cマウスを用いて、実施例6で調製したマイタケ菌糸体、及びACVによる回帰発症に対する阻止効果を検証した。
【００８４】
＜方法＞
BALB/cマウスに麻酔下で、左右の角膜を23ゲージ針束で5回ずつ交差して擦過後、HSV-1 McKrae株、北陸大学薬学部からの分与株（1 x 105 PFU/ 5 μL/ mouse）を接種した。14日間にわたって、角膜の症状を記録した。感染3日後、5日後に、PBS 0.1 mLずつで左右の角膜を洗浄し、回収した洗浄液をプラークアッセイに供した。生存したマウスについて、発症の程度及び左右角膜のウイルス量のデータに基づいて、均等に1群6匹ずつ、4群に分けた。マウスには、滅菌水(0.4mL/日)、ACV（1mg/0.4mL/日）、又は実施例6で調製したマイタケ菌糸体サンプル（5mg/0.4mL/日）を、感染28日後から38日後まで、1日2回（9時、18時）ゾンデを使用して強制的に経口投与した。感染35日後に、酪酸ナトリウム (NaBu)  (1200 mg/kg ＝ 27 mg/0.2 mL/mouse) を腹腔内注射した。感染36日後にさらに、NaBu (600 mg/kg ＝ 13.5 mg/0.2 mL/mouse) を腹腔内注射し、左右の眼球をPBS (0.1 mL) で洗浄し、洗浄液をプラークアッセイに供した。感染37日後に、左右の眼球をPBS (0.1 mL)で洗浄し、プラークアッセイに供した。感染39日後（初回のNaBu処置後4日後）に、全血、左右の眼球、左右の三叉神経節（TG）、脳を採取した。血清からは、中和抗体価を測定し、眼球、TG、脳：超音波処理し、遠心後、上清からウイルスを検出した。
【００８５】
＜結果＞
各群における回帰発症数及び回帰発症率を表8に示す。
【００８６】
【表８】
2019172597.tif 000010
また、各群における中和抗体価を表9に示す。
【００８７】
【表９】
2019172597.tif 000011
【００８８】
以上の通り、ACV及びマイタケ菌糸体の投与によって回帰発症率が減少した。さらに、中和抗体価に関しては、ACVは、ウイルスへ直接作用するため中和抗体価が上がっていないが、マイタケ菌糸体は、コントロールと比べ中和抗体価を有意に上昇させ、その結果、ウイルスの増殖を抑えることにより、回帰発症率が下がったと推察される。
【産業上の利用可能性】
【００８９】
本発明の食用キノコ又はその乾燥物は、ヘルペス感染症に対して高い効果を示す。また、本発明のヘルペス感染症の治療及び／又は予防剤は、長年の食経験を有する食用キノコから製造される為、安全性が高く、副作用が少ないと考えられる。したがって、本発明によって、ヘルペス感染症に対して有効であり、かつ副作用が少ないヘルペス感染症（回帰発症を含む）の治療及び／又は予防剤が提供され得る。
【図１】
2019172597.tif 000012
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
2019172597.tif 000016
【図６】
2019172597.tif 000017
【図７】
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【図８】
2019172597.tif 000019
【図９】
2019172597.tif 000020
【図１０】
2019172597.tif 000021
【図１１】
2019172597.tif 000022
【図１２】
2019172597.tif 000023
【図１３】
2019172597.tif 000024
【図１４】
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