(57)【要約】      （修正有）【課題】希突起神経膠細胞（オリゴデンドロサイト）を標的とするキメラアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）カプシド、それを含むウイルスベクター、および該ベクターを使用して希突起神経膠細胞を標的とする方法の提供。【解決手段】アデノ随伴ウイルスのカプシドをコードする核酸であって、（ａ）特定の配列からなるヌクレオチド配列、または（ｂ）特定の配列からなるヌクレオチド配列うちの１つをコードするヌクレオチド配列と少なくとも９０％の同一性を有するアデノ随伴ウイルスカプシドコード配列を含む、核酸。【選択図】図１
2019000114.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
アデノ随伴ウイルスのカプシドをコードする核酸であって、
（ａ）配列番号１のヌクレオチド配列、または
（ｂ）配列番号２〜４のうちの１つをコードするヌクレオチド配列
と少なくとも９０％の同一性を有するアデノ随伴ウイルスカプシドコード配列を含む、核
酸。
【請求項２】
前記アデノ随伴ウイルスカプシドコード配列が、前記（ａ）または（ｂ）のヌクレオチ
ド配列と少なくとも９５％の同一性を有する、請求項１に記載の核酸。
【請求項３】
前記アデノ随伴ウイルスカプシドコード配列が、前記（ａ）または（ｂ）のヌクレオチ
ド配列を含む、請求項１に記載の核酸。
【請求項４】
プラスミド、ファージ、ウイルスベクター、細菌人工染色体または酵母人工染色体であ
る、請求項１から３のいずれか１項に記載の核酸。
【請求項５】
前記アデノ随伴ウイルスカプシドコード配列を含むアデノ随伴ウイルスベクターである
、請求項１から４のいずれか１項に記載の核酸。
【請求項６】
アデノ随伴ウイルスのｒｅｐをコードする配列をさらに含む、請求項１から５のいずれ
か１項に記載の核酸。
【請求項７】
ゲノムに安定的に組み込まれた請求項１から６のいずれか１項に記載の核酸を含む、イ
ンビトロの細胞。
【請求項８】
請求項１から６のいずれか１項に記載の核酸を含む、ウイルス粒子。
【請求項９】
アデノ随伴ウイルス粒子、アデノウイルス粒子、ヘルペスウイルス粒子またはバキュロ
ウイルス粒子である、請求項８に記載のウイルス粒子。
【請求項１０】
配列番号２〜４のうちの１つと少なくとも９６％の同一性を有するアミノ酸配列を含む
、アデノ随伴ウイルスカプシド。
【請求項１１】
配列番号２〜４のうちの１つと少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む
、請求項１０に記載のアデノ随伴ウイルスカプシド。
【請求項１２】
配列番号２〜４のうちの１つのアミノ酸配列を含む、請求項１０に記載のアデノ随伴ウ
イルスカプシド。
【請求項１３】
ＤＮＡ分子、ＲＮＡ分子、ポリペプチド、炭水化物、脂質および有機小分子からなる群
から選択される化合物に共有結合で連結しているか、結合しているか、または前記化合物
をカプシド形成している、請求項１０から１２のいずれか１項に記載のアデノ随伴ウイル
スカプシド。
【請求項１４】
アデノ随伴ウイルスベクターゲノムと、
請求項１０から１２のいずれか１項に記載のアデノ随伴ウイルスカプシドと
を含み、前記アデノ随伴ウイルスカプシドは前記アデノ随伴ウイルスベクターゲノムをカ
プシド形成している、アデノ随伴ウイルス粒子。
【請求項１５】
前記アデノ随伴ウイルスベクターゲノムが異種核酸を含む、請求項１４に記載のアデノ
随伴ウイルス粒子。
【請求項１６】
前記異種核酸がアンチセンスＲＮＡ、マイクロＲＮＡまたはＲＮＡｉをコードする、請
求項１４に記載のアデノ随伴ウイルス粒子。
【請求項１７】
前記異種核酸がポリペプチドをコードする、請求項１４に記載のアデノ随伴ウイルス粒
子。
【請求項１８】
前記異種核酸が治療用ポリペプチドをコードする、請求項１７に記載のアデノ随伴ウイ
ルス粒子。
【請求項１９】
前記異種核酸が増殖因子または分化因子をコードする、請求項１７に記載のアデノ随伴
ウイルス粒子。
【請求項２０】
前記異種核酸がインスリン増殖因子−１、グリア由来神経栄養因子、ニューロトロフィ
ン−３、アルテミン、形質転換増殖因子アルファ、血小板由来増殖因子、白血病抑制因子
、プロラクチン、モノカルボン酸トランスポーター１または核内因子１Ａをコードする、
請求項１７に記載のアデノ随伴ウイルス粒子。
【請求項２１】
前記異種核酸がレポータータンパク質をコードする、請求項１７に記載のアデノ随伴ウ
イルス粒子。
【請求項２２】
前記異種核酸が構成的プロモーターに作動可能に連結している、請求項１５から２１の
いずれか１項に記載のアデノ随伴ウイルス粒子。
【請求項２３】
前記異種核酸が、希突起神経膠細胞に特異的な、または希突起神経膠細胞に優先的なプ
ロモーターに作動可能に連結している、請求項１５から２１のいずれか１項に記載のアデ
ノ随伴ウイルス粒子。
【請求項２４】
前記希突起神経膠細胞に特異的な、または希突起神経膠細胞に優先的なプロモーターが
、ミエリン塩基性タンパク質、環状ヌクレオチドホスホジエステラーゼ、プロテオリピド
タンパク質、ＧｔｘまたはＳｏｘ１０から選択されるプロモーターである、請求項２３に
記載のアデノ随伴ウイルス粒子。
【請求項２５】
アデノ随伴ウイルスカプシドを含む組換えアデノ随伴ウイルス粒子を産生する方法であ
って、
細胞にインビトロで、請求項１から６のいずれか１項に記載の核酸、アデノ随伴ウイル
スのｒｅｐをコードする配列、異種核酸を含むアデノ随伴ウイルスベクターゲノム、およ
び増殖性のアデノ随伴ウイルス感染を生じさせるためのヘルパー機能を提供することと、
前記アデノ随伴ウイルスベクターゲノムをカプシド形成して、前記アデノ随伴ウイルス
カプシドを含む前記組換えアデノ随伴ウイルス粒子を構築することと
を含む、方法。
【請求項２６】
請求項２５に記載の方法により産生された、アデノ随伴ウイルス粒子。
【請求項２７】
薬学的に許容される担体中に、請求項１から６のいずれか１項に記載の核酸、請求項８
または９のいずれか１項に記載のウイルス粒子、請求項１０から１３のいずれか１項に記
載のアデノ随伴ウイルスカプシド、または請求項１４から２４もしくは２６のいずれか１
項に記載のアデノ随伴ウイルス粒子を含む、医薬製剤。
【請求項２８】
目的の核酸を希突起神経膠細胞に送達する方法であって、前記希突起神経膠細胞を請求
項１４から２４または２６のいずれか１項に記載のアデノ随伴ウイルス粒子と接触させる
ことを含む、方法。
【請求項２９】
対象となる哺乳動物において目的の核酸を希突起神経膠細胞に送達する方法であって、
有効量の、請求項１４から２４もしくは２６のいずれか１項に記載のアデノ随伴ウイル
ス粒子または請求項２７に記載の医薬製剤を対象となる哺乳動物に投与すること
を含む、方法。
【請求項３０】
前記対象となる哺乳動物がヒトである、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記アデノ随伴ウイルス粒子を中枢神経系に送達する、請求項２９または３０に記載の
方法。
【請求項３２】
前記アデノ随伴ウイルス粒子を、髄腔内送達、脳内送達、心室内送達、鼻腔内送達、耳
内送達、眼内送達もしくは眼周囲送達またはこれらの任意の組み合わせにより前記中枢神
経系に直接送達する、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記対象が損なわれた血液脳関門を有し、前記アデノ随伴ウイルス粒子を静脈内投与に
より前記中枢神経系に送達する、請求項３１に記載の方法。
【請求項３４】
対象となる哺乳動物において目的の核酸を損なわれた血液脳関門領域と隣接する中枢神
経系の領域に送達する方法であって、
有効量の、請求項１４から２４もしくは２６のいずれか１項に記載のアデノ随伴ウイル
ス粒子または請求項２７に記載の医薬製剤を対象となる哺乳動物に静脈内投与すること
を含む、方法。
【請求項３５】
希突起神経膠細胞の機能不全を伴う障害を処置することを必要とする対象となる哺乳動
物において該障害を処置する方法であって、治療有効量の、請求項１４から２４もしくは
２６のいずれか１項に記載のアデノ随伴ウイルス粒子または請求項２７に記載の医薬製剤
を対象となる哺乳動物に投与することを含む、方法。
【請求項３６】
前記希突起神経膠細胞の機能不全を伴う障害が脱髄疾患である、請求項３５に記載の方
法。
【請求項３７】
前記希突起神経膠細胞の機能不全を伴う障害が、多発性硬化症、ペリツェウス・メルツ
バッハー病、クラッベ病、異染性白質ジストロフィー、副腎白質ジストロフィー、カナバ
ン病、アレキサンダー病、正染性白質ジストロフィー、ツェルウェガー病、１８ｑ−症候
群、脳性麻痺、脊髄損傷、外傷性脳損傷、脳卒中、フェニルケトン尿症またはウイルス感
染症である、請求項３５に記載の方法。
【請求項３８】
目的の向性プロファイルを有するアデノ随伴ウイルスカプシドを調製する方法であって
、請求項１０から１２のいずれか１項に記載のアデノ随伴ウイルスカプシドを改変して、
目的の向性プロファイルをもたらすアミノ酸配列を挿入することを含む、方法。
【請求項３９】
前記目的の向性プロファイルが、骨格筋、肝臓、心筋、横隔膜、腎臓、肝臓、膵臓、脾
臓、消化管、肺、関節組織、舌、卵巣、精巣、生殖細胞、癌細胞またはこれらの組み合わ
せから選択される組織である、請求項３８に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
［優先権の陳述］
本出願は、その内容全体が参照により本明細書に援用される、２０１２年９月２８日に
出願された米国仮出願第６１／７０７，１０８号の利益を主張する。
【０００２】
［発明の分野］
本発明は、希突起神経膠細胞（オリゴデンドロサイト）を標的とするキメラアデノ随伴
ウイルス（ＡＡＶ）カプシド、それを含むウイルスベクター、および該ベクターを使用し
て希突起神経膠細胞を標的とする方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
１０年以上も前に、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）が筋肉を効率的に形質導入すること
が最初に報告されている（Ｘｉａｏ他、（１９９６）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７０：８０９８〜
８１０８）。外来性の発現カセットおよびＡＡＶ逆方向末端反復（ＩＴＲ）配列から構成
される組換えＡＡＶ（ｒＡＡＶ）ゲノムは、真核細胞において持続的な導入遺伝子の発現
に関与するエピソーム形態で存在する（Ｓｃｈｎｅｐｐ他、（２００３）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ
．７７：３４９５〜３５０４）。ＡＡＶベクターは良好な安全性プロファイルを有する。
ヒト疾患は野生型ＡＡＶの感染とは無関係であり、ｒＡＡＶによる形質導入後のヒト対象
では低毒性が観察される（Ｍａｎｎｏ他、（２００３）Ｂｌｏｏｄ  １０１：２９６３〜
２９７２）。
【０００４】
脳では、ＡＡＶベクターの大部分は神経細胞への優勢な選択性を示し、希突起神経膠細
胞等のその他の細胞型に対する有効性は非常に低い。ＡＡＶ改変および指向性進化におけ
る最近の進歩により、向性が変更されているベクターを含む新規のＡＡＶ血清型の開発能
力が増大されている（Ｇｒａｙ他、（２０１０）Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．１８：５７０〜５７
８）。しかしながら、中枢神経系では、ＡＡＶ４を除く全てのＡＡＶベクターおよびキメ
ラは優勢な神経細胞向性を示す。希突起神経膠細胞を効率的に標的とするＡＡＶベクター
は開発されていない。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、希突起神経膠細胞に対する優勢な向性を示すキメラＡＡＶカプシド配列の開
発に部分的に基づく。キメラカプシドを使用して、対象の中枢神経系（ＣＮＳ）中におけ
る希突起神経膠細胞を形質導入するＡＡＶベクターを創製することができる。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
そのため、本発明の一態様は、ＡＡＶカプシドをコードする核酸であって、（ａ）配列
番号１のヌクレオチド配列または（ｂ）配列番号２〜４のうちのいずれか１つをコードす
るヌクレオチド配列と少なくとも９０％の同一性を有するＡＡＶカプシドコード配列を含
む核酸と、該核酸を含む細胞およびウイルス粒子とに関する。
【０００７】
本発明の別の態様は、配列番号２〜４のうちのいずれか１つと少なくとも９６％の同一
性を有するアミノ酸配列を含むＡＡＶカプシドと、ＡＡＶベクターゲノムおよび本発明に
係るＡＡＶカプシドを含むＡＡＶ粒子とに関する。
【０００８】
本発明のさらなる態様は、ＡＡＶカプシドを含む組換えＡＡＶ粒子を産生する方法であ
って、細胞にインビトロで、本発明に係る核酸、ＡＡＶのｒｅｐをコードする配列、異種
核酸を含むＡＡＶベクターゲノム、および増殖性のＡＡＶ感染を生じさせるためのヘルパ
ー機能を提供することと、ＡＡＶベクターゲノムをカプシド形成して、ＡＡＶカプシドを
含む組換えＡＡＶ粒子を構築することとを含む方法に関する。
【０００９】
本発明の追加の態様は、薬学的に許容される担体中に、本発明に係る核酸、ウイルス粒
子、ＡＡＶカプシド、またはＡＡＶ粒子を含む医薬製剤に関する。
【００１０】
本発明の別の態様は、目的の核酸を希突起神経膠細胞に送達する方法であって、希突起
神経膠細胞を本発明に係るＡＡＶ粒子と接触させることを含む方法に関する。
【００１１】
本発明のさらなる態様は、対象となる哺乳動物において目的の核酸を希突起神経膠細胞
に送達する方法であって、有効量の、本発明に係るＡＡＶ粒子または医薬製剤を対象とな
る哺乳動物に投与することを含む方法に関する。
【００１２】
本発明の追加の態様は、対象となる哺乳動物において目的の核酸を損なわれた（ｃｏｍ
ｐｒｏｍｉｓｅｄ）血液脳関門領域と隣接するＣＮＳの領域に送達する方法であって、有
効量の、本発明に係るＡＡＶ粒子または医薬製剤を対象となる哺乳動物に静脈内投与する
ことを含む方法に関する。
【００１３】
本発明の別の態様は、それを必要とする哺乳動物対象において希突起神経膠細胞の機能
不全を伴う障害を処置する方法であって、治療有効量の、本発明に係るＡＡＶ粒子または
医薬製剤を対象となる哺乳動物に投与することを含む方法に関する。
【００１４】
本発明のさらなる態様は、目的の向性プロファイルを有するＡＡＶカプシドを調製する
方法であって、本発明に係るＡＡＶカプシドを改変して、目的の向性プロファイルをもた
らすアミノ酸配列を挿入することを含む方法に関する。
【００１５】
本発明のこれらの態様およびその他の態様を、以下の本発明の説明においてより詳細に
述べる。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】ＢＮＰ６１、ＢＮＰ６２およびＢＮＰ６３のＡＡＶカプシドクローンのキメラ構造を示す図である。
【図２】ラットの尾状核における希突起神経膠細胞に対するＢＮＰ６１の向性を示す写真である。（Ａ）は、ＢＮＰ６１−ＣＢｈ−ＧＦＰベクターの注入後１週目のラットの尾状核におけるＧＦＰ陽性の希突起神経膠細胞を示す写真である。ＧＦＰ陽性の神経細胞がないことに留意すべきである。（Ｂ）は、希突起神経膠細胞の形態を明瞭に示す、より高い倍率の写真であり、（Ｃ）は、星状膠細胞に対する細胞マーカーであるＧＦＡＰ（赤色）と共存するＧＦＰ陽性細胞がないことを示す写真である。
【図３】図３Ａおよび図３Ｂは、初代の希突起神経膠細胞培養における希突起神経膠細胞に対するＢＮＰ６１の向性を示す写真である。
【図４】定量ＰＣＲにより決定した、雌の野生型マウスにおける静脈内注射後のＢＮＰ６１（ＭＧ００１）および親（ｐａｒｅｎｔ）カプシドの体内分布を示すグラフである。Ｙ軸は、２倍体のマウスゲノム当たりのＧＦＰのコピー数を表す。
【図５】末梢性投与後にＢＮＰ６１が損なわれた血液脳関門を通過することを示す写真である。
【図６】ラットの梨状皮質における希突起神経膠細胞に対するＢＮＰ６３の向性を示す写真である。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
本発明は、希突起神経膠細胞に対する向性を示すキメラＡＡＶカプシド配列の開発に部
分的に基づく。このキメラカプシドを使用して、対象のＣＮＳ中における希突起神経膠細
胞を形質導入するＡＡＶベクターを創製することができる。
【００１８】
以下に本発明をより詳細に説明する。この説明は、本発明を実施することができる様々
な方法の全てまたは本発明に追加することのできる特徴の全ての詳細な列挙を意図するも
のではない。例えば、一実施形態に関して例示した特徴をその他の実施形態に組み込むこ
とができ、特定の実施形態に関して例示した特徴をその実施形態から削除することができ
る。さらに、本開示を踏まえて、本明細書に示した様々な実施形態に対する、本発明から
逸脱しない様々な変更および追加が当業者には明らかである。そのため、以下の詳述は、
本発明のいくつかの特定の実施形態を例示することを意図するものであり、それらの全て
の置き換え、組み合わせおよび変更を余すことなく詳述することを意図するものではない
。
【００１９】
文脈が別段のことを指示しない限り、本明細書に記載する本発明の様々な特徴を任意の
組み合わせで使用することができることが明確に意図される。さらに、本発明はまた、本
発明のいくつかの実施形態において、本明細書で述べる任意の特徴または特徴の組み合わ
せを除外することができるまたは省略することができることも意図するものである。例示
すると、ある複合体が構成要素Ａ、ＢおよびＣを含むことが本明細書で述べられている場
合、Ａ、ＢもしくはＣのうちのいずれかまたはそれらの組み合わせを単独でまたは任意の
組み合わせで省略して特許請求の範囲から除外することができることが明確に意図される
。
【００２０】
別段の定義がない限り、本明細書で使用する全ての技術用語および科学用語は、本発明
が属する分野の当業者により、一般に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書におい
て本発明の説明で使用する専門用語は、特定の実施形態を説明することのみを目的とし、
本発明を限定することを意図するものではない。
【００２１】
別段の具体的な指示がない限り、本明細書では、ヌクレオチド配列を左から右へ５’か
ら３’方向に一本鎖のみで示す。本明細書では、ヌクレオチドおよびアミノ酸の両方を、
米国特許規則１．８２２および確立された用法に従って、ＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ  Ｂｉｏｃ
ｈｅｍｉｃａｌ  Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ  Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎにより推奨された様
式でまたは（アミノ酸に関しては）１文字表記もしくは３文字表記のいずれかにより表す
。
【００２２】
別段に指示されている場合を除き、当業者に既知である標準的な方法を、組換えポリペ
プチドおよび合成ポリペプチド、抗体またはその抗原結合フラグメントの産生、核酸配列
の操作、形質転換細胞の産生、ｒＡＡＶ構築物、改変カプシドタンパク質、ＡＡＶのｒｅ
ｐ配列および／またはｃａｐ配列を発現するパッケージングベクターならびに一時的にお
よび安定して遺伝子導入されたパッケージング細胞の構築に使用することができる。その
ような技法は当業者に既知である。例えば、ＳＡＭＢＲＯＯＫ他、ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  
ＣＬＯＮＩＮＧ：Ａ  ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ  ＭＡＮＵＡＬ第２版（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉ
ｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、ＮＹ、１９８９）、Ｆ．Ｍ．ＡＵＳＵＢＥＬ他、ＣＵＲＲＥＮＴ  
ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ  ＩＮ  ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＢＩＯＬＯＧＹ（Ｇｒｅｅｎ  Ｐｕｂ
ｌｉｓｈｉｎｇ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｉｎｃ．およびＪｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎ
ｓ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）を参照。
【００２３】
本明細書で言及する全ての刊行物、特許出願、特許、ヌクレオチド配列、アミノ酸配列
およびその他の参考文献は、その全体が参照により援用される。
【００２４】
Ｉ．定義
本発明の説明および添付した特許請求の範囲におけるＡＡＶカプシドサブユニットにお
ける全てのアミノ酸位置の指定は、ＶＰ１カプシドサブユニットの番号付けに対するもの
である。
【００２５】
本発明の説明および添付した特許請求の範囲で使用する場合、単数形「ａ」、「ａｎ」
および「ｔｈｅ」は、文脈が別段のことを明確に指示しない限り複数形も含むことを意図
するものである。
【００２６】
本明細書で使用する場合、「および／または」は、列挙した関連事項のうちの１つまた
は複数の任意の組み合わせおよび全ての可能な組み合わせ、ならびに選択肢（「または」
）として解釈した場合には組み合わせの欠如を指し、これらを包含する。
【００２７】
さらに、本発明はまた、本発明のいくつかの実施形態において、本明細書で述べる任意
の特徴または特徴の組み合わせを除外することができるまたは省略することができること
も意図するものである。
【００２８】
さらに、用語「約」は本明細書で使用する場合、例えば本発明における化合物または薬
剤の量、用量、時間、温度等の測定可能な値を指す場合に、特定の量の±２０％、±１０
％、±５％、±１％、±０．５％または±０．１％のばらつきを包含することを意味する
。
【００２９】
用語「〜から本質的になる」は核酸、タンパク質またはカプシド構造に関して本明細書
で使用する場合、該核酸、タンパク質またはカプシド構造が該核酸、タンパク質またはカ
プシド構造の目的の機能、例えば該タンパク質もしくはカプシドのまたは核酸によりコー
ドされるタンパク質もしくはカプシドの向性プロファイルを著しく（例えば約１％、５％
または１０％を超えて）変更する、列挙した要素以外の任意の要素を含有しないことを意
味する。
【００３０】
本発明に関連する用語「アデノ随伴ウイルス」（ＡＡＶ）には、ＡＡＶ１型、ＡＡＶ２
型、ＡＡＶ３型（３Ａ型および３Ｂ型を含む）、ＡＡＶ４型、ＡＡＶ５型、ＡＡＶ６型、
ＡＡＶ７型、ＡＡＶ８型、ＡＡＶ９型、ＡＡＶ１０型、ＡＡＶ１１型、トリＡＡＶ、ウシ
ＡＡＶ、イヌＡＡＶ、ウマＡＡＶならびにヒツジＡＡＶ、ならびに未知のまたは後に発見
される任意の他のＡＡＶが含まれるがこれらに限定されない。例えば、ＢＥＲＮＡＲＤ  
Ｎ．ＦＩＥＬＤＳ他、ＶＩＲＯＬＯＧＹ、第２巻、第６９章（第４版、Ｌｉｐｐｉｎｃｏ
ｔｔ−Ｒａｖｅｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ）を参照。多くのさらなるＡＡＶの血清型およ
びクレードも同定されており（例えばＧａｏ他、（２００４）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７８：６
３８１〜６３８８および表１を参照）、これらも用語「ＡＡＶ」に包含される。
【００３１】
様々なＡＡＶおよび自律性パルボウイルスのゲノム配列ならびにＩＴＲ、Ｒｅｐタンパ
ク質およびカプシドサブユニットの配列は当分野で既知である。そのような配列を、文献
にまたはＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）データベース等の公共データベースに見出すことが
できる。例えば、ＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）受託番号ＮＣ００２０７７、ＮＣ００１４
０１、ＮＣ００１７２９、ＮＣ００１８６３、ＮＣ００１８２９、ＮＣ００１８６２、Ｎ
Ｃ０００８８３、ＮＣ００１７０１、ＮＣ００１５１０、ＡＦ０６３４９７、Ｕ８９７９
０、ＡＦ０４３３０３、ＡＦ０２８７０５、ＡＦ０２８７０４、Ｊ０２２７５、Ｊ０１９
０１、Ｊ０２２７５、Ｘ０１４５７、ＡＦ２８８０６１、ＡＨ００９９６２、ＡＹ０２８
２２６、ＡＹ０２８２２３、ＮＣ００１３５８、ＮＣ００１５４０、ＡＦ５１３８５１、
ＡＦ５１３８５２、ＡＹ５３０５７９、ＡＹ６３１９６５、ＡＹ６３１９６６を参照し、
これらの開示はその全体が本明細書に援用される。また、例えばＳｒｉｖｉｓｔａｖａ他
、（１９８３）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．４５：５５５；Ｃｈｉｏｒｉｎｉ他、（１９９８）Ｊ．
Ｖｉｒｏｌ．７１：６８２３；Ｃｈｉｏｒｉｎｉ他、（１９９９）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７３
：１３０９；Ｂａｎｔｅｌ−Ｓｃｈａａｌ他、（１９９９）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７３：９３
９；Ｘｉａｏ他、（１９９９）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７３：３９９４；Ｍｕｒａｍａｔｓｕ他
、（１９９６）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  ２２１：２０８；Ｓｈａｄｅ他、（１９８６）Ｊ．Ｖ
ｉｒｏｌ．５８：９２１；Ｇａｏ他、（２００２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ
．ＵＳＡ  ９９：１１８５４；国際公開第００／２８０６１号、国際公開第９９／６１６
０１号、国際公開第９８／１１２４４号；米国特許第６，１５６，３０３号も参照し、こ
れらの開示はその全体が本明細書に援用される。また、表１も参照。Ｘｉａｏ，Ｘ．（１
９９６）、「Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ａｄｅｎｏ−ａｓｓｏｃｉａｔ
ｅｄ  ｖｉｒｕｓ（ＡＡＶ）ＤＮＡ  ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｉｎｔｅｇｒａ
ｔｉｏｎ」、博士論文、ピッツバーグ大学、ピッツバーグ、ペンシルバニア州（その全体
が本明細書に援用される）には、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２およびＡＡＶ３の末端反復配列の初
期の説明が記載されている。
【００３２】
【表１】
2019000114.tif 000003
【００３３】
「キメラ」ＡＡＶ核酸カプシドコード配列または「キメラ」ＡＡＶカプシドタンパク質
とは、２種以上のカプシド配列の一部を組み合わせるものである。「キメラ」ＡＡＶのビ
リオンまたは粒子は、キメラＡＡＶカプシドタンパク質を含む。
【００３４】
用語「向性」は本明細書で使用する場合、ある種の細胞型もしくは組織型へのウイルス
の選択的侵入、ならびに／または、ある種の細胞型もしくは組織型への侵入を促進する、
細胞表面との選択的相互作用を指し、任意選択的におよび好ましくはその後にウイルスゲ
ノムにより運搬された配列の細胞内での発現（例えば転写および任意選択的に翻訳）、例
えば組換えウイルスに関しては異種ヌクレオチド配列の発現も指す。例えば誘導性プロモ
ーター用のトランス活性因子またはそれ以外の調節核酸配列が存在しない場合にウイルス
ゲノムからの異種核酸配列の転写を開始することができないことを当業者は理解する。ｒ
ＡＡＶゲノムの場合には、ウイルスゲノムからの遺伝子発現は、安定的に組み込まれたプ
ロウイルス由来であり得、および／または組み込まれていないエピソーム由来であり得、
ならびにウイルス核酸が細胞内で取り得る任意の他の形態であり得る。
【００３５】
用語「向性プロファイル」は、１種または複数の標的細胞、組織および／または器官の
形質導入のパターンを指す。キメラＡＡＶカプシドの代表的な例は、神経細胞、星状膠細
胞およびその他のＣＮＳ細胞の形質導入のみが低く、希突起神経膠細胞の形質導入が効率
的であることを特徴とする向性プロファイルを有する。
【００３６】
用語「希突起神経膠細胞に特異的な」は本明細書で使用する場合、ＣＮＳ中に直接投与
した場合に神経細胞、星状膠細胞およびその他のＣＮＳ細胞型よりも、希突起神経膠細胞
を選択的に形質導入するウイルスベクターを指す。いくつかの実施形態では、形質導入細
胞の少なくとも約８０％が希突起神経膠細胞であり、例えば少なくとも約８５％、９０％
、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはより多くが希突起神経膠細胞である。
【００３７】
用語「希突起神経膠細胞の機能不全を伴う障害」は本明細書で使用する場合、希突起神
経膠細胞が損傷している、欠失しているまたは不適切に機能する疾患、障害または傷害を
指す。この用語は、希突起神経膠細胞が直接影響を受ける疾患、障害および傷害、ならび
にその他の細胞の損傷（例えば脊髄傷害）によって希突起神経膠細胞が二次的に機能不全
になる疾患、障害および傷害を含む。
【００３８】
用語「損なわれた血液脳関門領域と隣接する」は本明細書で使用する場合、関門機能が
損なわれている血液脳関門の一部に隣接する中枢神経系（ＣＮＳ）の細胞を指す。
【００３９】
本明細書で使用する場合、ウイルスベクター（例えばＡＡＶベクター）による細胞の「
形質導入」は、ベクターの細胞内への侵入、ならびにウイルスベクター内への核酸の取り
込みおよびその後のウイルスベクターを介した細胞内への移入による遺伝物質の細胞内へ
の移入を意味する。
【００４０】
別段の指示がない限り、適切な陽性コントロールまたは陰性コントロールを参照して、
「効率的な形質導入」または「効率的な向性」または同様の用語を決定することができる
（例えば、形質導入もしくは向性それぞれが陽性コントロールの少なくとも約５０％、６
０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％であるかもしくはより高い、または、形
質導入もしくは向性それぞれが陰性コントロールの少なくとも約１１０％、１２０％、１
５０％、２００％、３００％、５００％、１０００％であるかもしくはより高い）。
【００４１】
同様に、適切なコントロールを参照して、ウイルスが標的組織を「効率的に形質導入し
ない」もしくは標的組織に対して「効率的な向性を有しない」かどうかをまたは同様の用
語を決定することができる。特定の実施形態では、ウイルスベクターは、肝臓、腎臓、生
殖腺および／または生殖細胞を効率的に形質導入しない（すなわち、これらに対して効率
的な向性を有しない）。特定の実施形態では、組織（例えば肝臓）の望ましくない形質導
入は、所望の標的組織（例えば骨格筋、横隔膜筋および／または心筋）の形質導入レベル
の２０％以下であり、１０％以下であり、５％以下であり、１％以下であり、０．１％以
下である。
【００４２】
本明細書で使用する場合、用語「ポリペプチド」は、別段の指示がない限りペプチドお
よびタンパク質の両方を包含する。
【００４３】
「核酸」または「ヌクレオチド配列」とはヌクレオチド塩基の配列のことであり、これ
らはＲＮＡ、ＤＮＡまたはＤＡＮ−ＲＮＡハイブリッド配列（天然に存在するヌクレオチ
ドおよび天然には存在しないヌクレオチドの両方が挙げられる）であり得るが、好ましく
は一本鎖ＤＮＡ配列または二本鎖ＤＮＡ配列のいずれかである。
【００４４】
本明細書で使用する場合、「単離された」核酸またはヌクレオチド配列（例えば「単離
されたＤＮＡ」または「単離されたＲＮＡ」）は、天然に存在する生物もしくはウイルス
のその他の成分、例えば細胞もしくはウイルスの構造成分または核酸もしくはヌクレオチ
ド配列と関連して一般に見出されるその他のポリペプチドもしくは核酸の少なくともいく
つかから分離されたまたはそれを実質的に含まない核酸またはヌクレオチド配列を意味す
る。
【００４５】
同様に、「単離された」ポリペプチドは、分離されたまたは天然に存在する生物もしく
はウイルスのその他の成分、例えば細胞もしくはウイルスの構造成分またはポリペプチド
と関連して一般に見出されるその他のポリペプチドもしくは核酸の少なくともいくつかを
実質的に含まないポリペプチドを意味する。
【００４６】
用語「処置する（ｔｒｅａｔ）」、「処置すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」もしくは「
〜の処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ）」（または文法的に等価の用語）は、対象の状態
の重症度が低減されるまたは少なくとも部分的に改善されるもしくは寛解されること、お
よび／または少なくとも１種の臨床症状のある程度の軽減、緩和もしくは低減が達成され
ること、および／または状態の進行の遅延、および／または疾患もしくは障害の発症の予
防もしくは遅延を意味する。用語「処置する（ｔｒｅａｔ）」、「処置する（ｔｒｅａｔ
ｓ）」、「処置すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」または「〜の処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ
ｏｆ）」等には、（例えば感染または癌または障害の発症を予防するための）対象の予
防的処置も含まれる。本明細書で使用する場合、用語「予防する（ｐｒｅｖｅｎｔ）」、
「予防する（ｐｒｅｖｅｎｔｓ）」または「予防（ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ）」（およびこ
れらと文法的に等価な用語）は、疾患の完全な消滅を暗示することを意味せず、状態の発
生率を低減させる、状態の発症および／もしくは進行を遅延させる、ならびに／または状
態に関連する症状を低減させる任意の種類の予防的処置を包含する。そのため、文脈が別
段のことを指示しない限り、用語「処置する（ｔｒｅａｔ）」、「処置すること（ｔｒｅ
ａｔｉｎｇ）」もしくは「〜の処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ）」（または文法的に等
価の用語）は、予防レジメンおよび治療レジメンの両方を指す。
【００４７】
「有効」量または「治療有効」量とは本明細書で使用する場合、対象にある程度の改善
または利益をもたらすのに十分な量のことである。換言すると、「有効」量または「治療
有効」量とは、対象における少なくとも１種の臨床症状のある程度の軽減、緩和または低
減をもたらすことができる量のことである。ある程度の利益が対象にもたらされる限り、
治療効果が完璧であるまたは治癒的である必要はないことを当業者は認識する。
【００４８】
「異種ヌクレオチド配列」または「異種核酸」とは、ウイルス中に天然には存在しない
配列のことである。一般に、異種核酸または異種ヌクレオチド配列は、ポリペプチドおよ
び／または非翻訳ＲＮＡをコードするオープンリーディングフレームを含む。
【００４９】
「治療用ポリペプチド」は、細胞中におけるまたは対象中におけるタンパク質の不存在
または欠損に起因する症状を軽減するまたは低減することができるポリペプチドであり得
る。さらに、「治療用ポリペプチド」は、別な方法で対象に利益を付与するポリペプチド
であり得、利益として例えば抗癌効果または移植片の残存性の改善が挙げられる。
【００５０】
本明細書で使用する場合、用語「ベクター」、「ウイルスベクター」、「送達ベクター
」（および同様の用語）は、核酸送達媒体として機能し、ビリオン内にパッケージングさ
れたウイルス核酸（すなわちベクターゲノム）を含むウイルス粒子を一般に指す。本発明
に係るウイルスベクターは本発明に係るキメラＡＡＶカプシドを含み、ＡＡＶゲノムもし
くはｒＡＡＶゲノムまたはウイルス核酸を含む任意の他の核酸をパッケージングすること
ができる。また、いくつかの文脈では、ビリオンが存在しないベクターゲノム（例えばｖ
ＤＮＡ）を指すために、および／またはカプシドに繋がれた分子もしくはカプシド内にパ
ッケージングされた分子を送達するために輸送体としての役割を果たすウイルスカプシド
を指すために、用語「ベクター」、「ウイルスベクター」「送達ベクター」（および同様
の用語）を使用することができる。
【００５１】
「組換えＡＡＶベクターゲノム」または「ｒＡＡＶゲノム」とは、少なくとも１つの逆
方向末端反復（例えば、１つの、２つのまたは３つの逆方向末端反復）と、１つまたは複
数の異種ヌクレオチド配列とを含むＡＡＶゲノム（すなわちｖＤＮＡ）のことである。ｒ
ＡＡＶベクターは、ウイルスを生成するために１４５塩基の末端反復（ＴＲ）をシスで一
般に保持するが、部分的にまたは完全に合成の配列を含む改変ＡＡＶ  ＴＲおよび非ＡＡ
Ｖ  ＴＲも、この目的に役立つことができる。全てのその他のウイルス配列が必ずしも必
要ではなく、トランスで供給されてもよい（Ｍｕｚｙｃｚｋａ、（１９９２）Ｃｕｒｒ．
Ｔｏｐｉｃｓ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５８：９７）。ｒＡＡＶベクタ
ーは２つのＴＲ（例えばＡＡＶ  ＴＲ）を任意選択的に含み、これらのＴＲは一般に異種
ヌクレオチド配列の５’末端および３’末端にあることができるが、それらに隣接してい
る必要はない。これらのＴＲは互いに同じであり得る、または互いに異なることができる
。ベクターゲノムはまた、その３’末端または５’末端に単一のＩＴＲを含有することも
できる。
【００５２】
用語「末端反復」または「ＴＲ」には、任意のウイルス末端反復、またはヘアピン構造
を形成し逆方向末端反復として機能する（すなわち、例えば複製、ウイルスパッケージン
グ、組み込みおよび／もしくはプロウイルスレスキュー（ｒｅｓｃｕｅ）等の所望の機能
を媒介する）合成配列が含まれる。ＴＲは、ＡＡＶ  ＴＲまたは非ＡＡＶ  ＴＲであり得
る。例えば、その他のパルボウイルス（例えば、イヌパルボウイルス（ＣＰＶ）、マウス
パルボウイルス（ＭＶＭ）、ヒトパルボウイルスＢ−１９）の非ＡＡＶ  ＴＲ配列等の非
ＡＡＶ  ＴＲ配列またはＳＶ４０複製の開始点としての役割を果たすＳＶ４０ヘアピンを
ＴＲとして使用することができ、非ＡＡＶ  ＴＲ配列またはＳＶ４０ヘアピンを短縮化、
置換、欠失、挿入および／または追加によりさらに改変することができる。さらに、ＴＲ
は、Ｓａｍｕｌｓｋｉ他に対する米国特許第５，４７８，７４５号に記載されている「二
重Ｄ配列」等の部分的なまたは完全な合成物であり得る。
【００５３】
「ＡＡＶ末端反復」または「ＡＡＶ  ＴＲ」は、血清型１、２、３、４、５、６、７、
８、９、１０もしくは１１または未知のもしくは後に発見される任意の他のＡＡＶ（例え
ば表１を参照）が挙げられるがそれらに限定されない任意のＡＡＶ由来であり得る。ＡＡ
Ｖ末端反復が所望の機能、例えば複製、ウイルスパッケージング、組み込みおよび／また
はプロウイルスレスキュー等を媒介する限り、ＡＡＶ末端反復は、天然の末端反復配列を
有する必要はない（例えば、天然のＡＡＶ  ＴＲ配列を挿入、欠失、短縮化および／また
はミスセンス変異により変更することができる）。
【００５４】
本明細書では用語「ｒＡＡＶ粒子」および「ｒＡＡＶビリオン」を互換的に使用する。
「ｒＡＡＶ粒子」または「ｒＡＡＶビリオン」は、ＡＡＶカプシド内にパッケージングさ
れているｒＡＡＶベクターゲノムを含む。
【００５５】
ＡＡＶカプシド構造は、ＢＥＲＮＡＲＤ  Ｎ．ＦＩＥＬＤＳ他、ＶＩＲＯＬＯＧＹ、第
２巻、第６９章および第７０章（第４版、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ−Ｒａｖｅｎ  Ｐｕｂｌ
ｉｓｈｅｒｓ）により詳細に説明されている。
【００５６】
特性を「実質的に保持する」とは、特性（例えば活性またはその他の測定可能な特徴）
の少なくとも約７５％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％または１００
％が保持されることを意味する。
【００５７】
ＩＩ．希突起神経膠細胞を標的とするキメラＡＡＶカプシド
本発明者らは、中枢神経系（ＣＮＳ）の神経細胞およびその他の細胞よりも、希突起神
経膠細胞を選択的に形質導入することが可能なキメラＡＡＶカプシド構造体を同定した。
そのため、本発明の一態様は、ＡＡＶカプシドをコードする核酸であって、（ａ）配列番
号１のヌクレオチド配列または（ｂ）配列番号２をコードするヌクレオチド配列と、少な
くとも９０％の同一性を有するＡＡＶカプシドコード配列を含む、該配列から本質的にな
るまたは該配列からなる核酸と、キメラＡＡＶカプシドを含むウイルスとに関する。いく
つかの実施形態では、ＡＡＶカプシドコード配列は、（ａ）または（ｂ）のヌクレオチド
配列と少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％ま
たは９９％の同一性を有する。別の実施形態では、ＡＡＶカプシドコード配列は、（ａ）
または（ｂ）のヌクレオチド配列を含むか、該配列から本質的になるか、または該配列か
らなる。
【００５８】
【化１】
2019000114.tif 000004
【００５９】
【化２】
2019000114.tif 000005
【００６０】
いくつかの実施形態では、ＡＡＶカプシドをコードする核酸は、配列番号３または４を
コードするヌクレオチド配列と少なくとも９０％の同一性を有するＡＡＶカプシドコード
配列を含み、該配列から本質的になり、または該配列からなり、ウイルスはキメラＡＡＶ
カプシドを含む。いくつかの実施形態では、ＡＡＶカプシドコード配列は、配列番号３ま
たは４をコードするヌクレオチド配列と少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９
５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有する。別の実施形態では、ＡＡ
Ｖカプシドコード配列は、配列番号３または４をコードするヌクレオチド配列を含むか、
該配列から本質的になるか、または該配列からなる。
【００６１】
【化３】
2019000114.tif 000006
【００６２】
【化４】
2019000114.tif 000007
【００６３】
配列番号２〜４は、本発明におけるＶＰ１カプシドタンパク質配列を例示する。本発明
の説明および添付した特許請求の範囲における全てのアミノ酸位置の指定は、ＶＰ１の番
号付けに対するものである。ＡＡＶカプシドは、より小さいＶＰ２カプシドタンパク質お
よびＶＰ３カプシドタンパク質も一般に含有することを当業者は理解する。ＡＡＶカプシ
ドタンパク質のコード配列の重複に起因して、ＶＰ２カプシドタンパク質およびＶＰ３カ
プシドタンパク質の核酸コード配列およびアミノ酸配列は、配列番号１〜４で示すＶＰ１
配列から明らかである。具体的には、ＶＰ２は、配列番号１のヌクレオチド４１２位（ａ
ｃｇ）および配列番号２のトレオニン１４８位から始まる。ＶＰ３は、配列番号１のヌク
レオチド６０７位（ａｔｇ）および配列番号２のメチオニン２０３位から始まる。ある実
施形態では、配列番号２〜４由来の配列を含む、単離されたＶＰ２カプシドタンパク質お
よびＶＰ３カプシドタンパク質、ならびにＶＰ２タンパク質もしくはＶＰ３タンパク質ま
たはその両方をコードする、単離された核酸が意図される。
【００６４】
本発明はまた、キメラＡＡＶカプシドタンパク質およびキメラカプシドも提供し、カプ
シドタンパク質は、配列番号２〜４のうちの１つに示すアミノ酸配列を含むか、該配列か
ら本質的になるか、または該配列からなり、配列番号２〜４のうちの１つのカプシドタン
パク質コード配列中のアミノ酸の１個、２個以下、３個以下、４個以下、５個以下、６個
以下、７個以下、８個以下、９個以下、１０個以下、１２個以下、１５個以下、２０個以
下、２５個以下、３０個以下、４０個以下もしくは５０個以下が（天然に存在する、改変
されたおよび／もしくは合成の）別のアミノ酸に置換され得、任意選択的に保存的アミノ
酸置換され得、かつ／または欠失し得、ならびに／または１個、２個以下、３個以下、４
個以下、５個以下、６個以下、７個以下、８個以下、９個以下、１０個以下、１２個以下
、１５個以下、２０個以下、２５個以下、３０個以下、４０個以下もしくは５０個以下の
アミノ酸が挿入され得（Ｎ末端伸長およびＣ末端伸長を含む）、または置換、欠失および
／もしくは挿入が任意の組み合わせで行なわれ得、置換、欠失および／または挿入は、バ
リアントカプシドタンパク質またはカプシドを含むビリオン（例えばＡＡＶビリオン）の
構造および／または機能を過度に損なわない。例えば、本発明の代表的な実施形態では、
キメラカプシドタンパク質を含むＡＡＶビリオンは、配列番号２〜４のうちの１つに示す
キメラカプシドタンパク質を含むキメラビリオンの少なくとも１つの特性を実質的に保持
する。例えば、キメラカプシドタンパク質を含むビリオンは、配列番号２〜４のうちの１
つに示すキメラＡＡＶカプシドタンパク質を含むビリオンの希突起神経膠細胞への向性プ
ロファイルを実質的に保持することができる。ウイルス形質導入等の生物学的特性を評価
する方法は当分野で公知である（例えば実施例を参照）。
【００６５】
保存的アミノ酸置換は当分野で既知である。特定の実施形態では、保存的アミノ酸置換
として、以下の群の１つまたは複数内での置換が挙げられる。グリシン、アラニン；バリ
ン、イソロイシン、ロイシン；アスパラギン酸、グルタミン酸；アスパラギン、グルタミ
ン；セリン、トレオニン；リシン、アルギニン；および／またはフェニルアラニン、チロ
シン。
【００６６】
所望の特性を付与するために当分野で既知であるその他の改変を組み込むべく、配列番
号２〜４のキメラＡＡＶカプシドタンパク質のアミノ酸配列をさらに改変することができ
ることが当業者には明らかである。非限定的な可能性として、カプシドタンパク質を改変
して標的化配列（例えばＲＧＤ）または精製および／もしくは検出を容易にする配列を組
み込むことができる。例えば、カプシドタンパク質を、グルタチオン−Ｓ−トランスフェ
ラーゼ、マルトース結合タンパク質、ヘパリン／ヘパラン硫酸結合ドメイン、ポリ−Ｈｉ
ｓ、リガンドおよび／またはレポータータンパク質（例えば、緑色蛍光タンパク質、β−
グルクロニダーゼ、β−ガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼ等）、免疫グロブリンＦｃフ
ラグメント、単鎖抗体、赤血球凝集素、ｃ−ｍｙｃ、ＦＬＡＧエピトープ等の全てまたは
一部と融合させて融合タンパク質を形成することができる。標的化ペプチドをＡＡＶカプ
シドに挿入する方法は当分野で既知である（例えば、国際公開第００／２８００４号、Ｎ
ｉｃｋｌｉｎ他、（２００１）Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．４７４〜１８１、Ｗｈｉｔｅ他、（２
００４）Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  １０９：５１３〜３１９、Ｍｕｌｌｅｒ他、（２００
３）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．２１：１０４０〜１０４６を参照。
【００６７】
本発明に係るウイルスは、国際公開第０１／９２５５１号および米国特許第７，４６５
，５８３号に記載されたように二本鎖ウイルスゲノムをさらに含むことができる。
【００６８】
本発明はまた、本発明に係るキメラＡＡＶカプシドタンパク質を含むＡＡＶカプシドお
よびそれを含むウイルス粒子（すなわちビリオン）も提供し、ウイルス粒子はベクターゲ
ノムをパッケージングし（すなわちカプシド形成し）、任意選択的にＡＡＶベクターゲノ
ムをパッケージングする。特定の実施形態では、本発明は、本発明に係るＡＡＶカプシド
タンパク質を含むＡＡＶカプシドを含むＡＡＶ粒子を提供し、ＡＡＶカプシドはＡＡＶベ
クターゲノムをパッケージングする。本発明はまた、本発明に係るキメラ核酸カプシドコ
ード配列によりコードされたＡＡＶカプシドまたはＡＡＶカプシドタンパク質を含むＡＡ
Ｖ粒子も提供する。
【００６９】
特定の実施形態では、ビリオンは、目的の異種核酸、例えば細胞に送達するための異種
核酸を含む組み替えベクターである。そのため、本発明は、インビトロでの、エクスビボ
での、およびインビボでの核酸の細胞への送達に有用である。代表的な実施形態では、本
発明に係る組換えベクターを有利に用いて、核酸を動物（例えば哺乳動物）細胞へ送達ま
たは移入させることができる。
【００７０】
本発明に係るウイルスベクターにより、任意の異種ヌクレオチド配列を送達することが
できる。目的の核酸として、ポリペプチドをコードし、任意選択的に治療用（例えば医学
的用途のまたは獣医学的用途の）ポリペプチドおよび／または免疫原性（例えばワクチン
用の）ポリペプチドをコードする核酸が挙げられる。
【００７１】
いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、希突起神経膠細胞の増殖および／または分
化を刺激するポリペプチドである。例として、インスリン様増殖因子−１、グリア由来神
経栄養因子、ニューロトロフィン−３、アルテミン、形質転換増殖因子アルファ、血小板
由来増殖因子、白血病抑制因子、プロラクチン、モノカルボン酸トランスポーター１また
は核内因子１Ａが挙げられるがこれらに限定されない。
【００７２】
治療用ポリペプチドとして、嚢胞性線維症膜貫通調節タンパク質（ＣＦＴＲ）、ジスト
ロフィン（ジストロフィンのミニ遺伝子またはマイクロ遺伝子のタンパク質産物等、例え
ば、Ｖｉｎｃｅｎｔ他、（１９９３）Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ５：１３０、米
国特許公開第２００３０１７１３１号、Ｗａｎｇ他、（２０００）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．
Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９７：１３７１４〜９［ミニジストロフィン］、Ｈａｒｐｅ
ｒ他、（２００２）Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄ．８：２５３〜６１［マイクロジストロフィン
］を参照）；ミニアグリン、ラミニン−α２、サルコグリカン（α、β、γまたはδ）、
フクチン関連タンパク質、ミオスタチンプロペプチド、フォリスタチン、ドミナントネガ
ティブミオスタチン、血管新生因子（例えばＶＥＧＦ、アンジオポエチン−１またはアン
ジオポエチン−２）、抗アポトーシス因子（例えばヘムオキシゲナーゼ−１、ＴＧＦ−β
、プロアポトーシスシグナルの阻害因子、例えばカスパーゼ、プロテアーゼ、キナーゼ、
細胞死受容体［例えばＣＤ−０９５］、チトクロムＣ放出の調節因子、ミトコンドリアの
開孔および膨張の阻害因子）；アクチビンＩＩ型可溶性受容体、抗炎症性ポリペプチド、
例えばＩカッパＢ優性変異体、サルコスパン、ユートロフィン、ミニユートロフィン、ミ
オスタチンまたはミオスタチンプロペプチドに対する抗体または抗体フラグメント、細胞
周期調節因子、Ｒｈｏキナーゼ調節因子、例えば改変された細菌Ｃ３外酵素であるＣｅｔ
ｈｒｉｎ［ＢｉｏＡｘｏｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ．、サンローラン、ケ
ベック州、カナダから入手可能］、ＢＣＬ−ｘＬ、ＢＣＬ２、ＸＩＡＰ、ＦＬＩＣＥｃ−
ｓ、ドミナントネガティブカスパーゼ−８、ドミナントネガティブカスパーゼ−９、ＳＰ
Ｉ−６（例えば米国特許出願第２００７００２６０７６号を参照）、転写因子ＰＧＣ−α
１、Ｐｉｎｃｈ遺伝子、ＩＬＫ遺伝子およびチモシンβ４遺伝子）、凝固因子（例えば、
第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、第Ｘ因子等）、エリスロポエチン、アンジオスタチン、エ
ンドスタチン、カタラーゼ、チロシンヒドロキシラーゼ、細胞内のおよび／または細胞外
のスーパーオキシドジスムターゼ、レプチン、ＬＤＬ受容体、ネプリライシン、リポタン
パク質リパーゼ、オルニチントランスカルバミラーゼ、β−グロビン、α−グロビン、ス
ペクトリン、α１−抗トリプシン、アデノシンデアミナーゼ、ヒポキサンチングアニンホ
スホリボシルトランスフェラーゼ、β−グルコセレブロシダーゼ、スフィンゴミエリナー
ゼ、リソソームヘキソサミニダーゼＡ、分枝鎖ケト酸デヒドロゲナーゼ、ＲＰ６５タンパ
ク質、サイトカイン（例えばα−インターフェロン、β−インターフェロン、インターフ
ェロン−γ、インターロイキン１〜１４、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、リン
フォトキシン等）、ペプチド増殖因子、神経栄養因子およびホルモン（例えばソマトトロ
ピン、インスリン、ＩＧＦ−１およびＩＧＦ−２等のインスリン様増殖因子、ＧＬＰ−１
、血小板由来増殖因子、表皮増殖因子、繊維芽細胞増殖因子、神経増殖因子、神経栄養因
子−３および神経栄養因子−４、脳由来神経栄養因子、グリア由来増殖因子、形質転換増
殖因子−αおよび形質転換増殖因子−β等）、骨形態形成タンパク質（ＲＡＮＫＬおよび
ＶＥＧＦを含む）、リソソームタンパク質、グルタミン酸受容体、リンフォカイン、可溶
性ＣＤ４、Ｆｃ受容体、Ｔ細胞受容体、ＡｐｏＥ、ＡｐｏＣ、タンパク質ホスファターゼ
阻害因子１の阻害因子１（Ｉ−１）、ホスホランバン、ｓｅｒｃａ２ａ、リソソーム酸α
−グルコシダーゼ、α−ガラクトシダーゼＡ、Ｂａｒｋｃｔ、β２−アドレナリン受容体
、β２−アドレナリン受容体キナーゼ（ＢＡＲＫ）、ホスホイノシチド−３キナーゼ（Ｐ
Ｉ３キナーゼ）、カルサルシン、受容体（例えば腫瘍壊死増殖因子−α可溶性受容体）、
抗炎症性因子、例えばＩＲＡＰ、Ｐｉｍ−１、ＰＧＣ−１α、ＳＯＤ−１、ＳＯＤ−２、
ＥＣＦ−ＳＯＤ、カリクレイン、チモシン−β４、低酸素誘導転写因子［ＨＩＦ］、血管
新生因子、Ｓ１００Ａ１、パルブアルブミン、アデニリルシクラーゼ６型、Ｇタンパク質
共役受容体キナーゼ２型ノックダウンをもたらす分子、例えば短縮型の構成的に活性なｂ
ＡＲＫｃｔ；ホスホランバン阻害分子またはドミナントネガティブ分子、例えばホスホラ
ンバンＳ１６Ｅ、モノクローナル抗体（単鎖モノクローナル抗体を含む）または自殺遺伝
子産物（例えばチミジンキナーゼ、シトシンデアミナーゼ、ジフテリア毒素および腫瘍壊
死因子、例えばＴＮＦ−α）、ならびにそれを必要とする対象で治療効果を有する任意の
他のポリペプチドが挙げられるがこれらに限定されない。
【００７３】
ポリペプチドをコードする異種ヌクレオチド配列として、レポーターポリペプチド（例
えば酵素）をコードする異種ヌクレオチド配列が挙げられる。レポーターポリペプチドは
当分野で既知であり、該レポーターポリペプチドとして、緑色蛍光タンパク質、β−ガラ
クトシダーゼ、アルカリホスファターゼ、ルシフェラーゼおよびクロラムフェニコールア
セチルトランスフェラーゼが挙げられるがこれらに限定されない。
【００７４】
また、異種核酸は、アンチセンスオリゴヌクレオチド、リボザイム（例えば、米国特許
第５，８７７，０２２号に記載されている）、スプライソソーム媒介トランス−スプライ
シングをもたらすＲＮＡ（Ｐｕｔｔａｒａｊｕ他、（１９９９）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔ
ｅｃｈ．１７：２４６、米国特許第６，０１３，４８７号、米国特許第６，０８３，７０
２号を参照）、遺伝子サイレンシングを媒介する低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）を含む
干渉ＲＮＡ（ＲＮＡｉ）（Ｓｈａｒｐ他、（２０００）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８７：２４３
１を参照）、マイクロＲＮＡまたは「ガイド」ＲＮＡ（Ｇｏｒｍａｎ他、（１９９８）Ｐ
ｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９５：４９２９、Ｙｕａｎ他に対する米国
特許第５，８６９，２４８号）等のその他の非翻訳「機能性」ＲＮＡ等をコードすること
ができる。例示的な非翻訳ＲＮＡとして、（例えば、腫瘍を治療するためのおよび／もし
くは化学療法による損傷を予防するための心臓への投与のための）多剤耐性（ＭＤＲ）遺
伝子産物に対するＲＮＡｉまたはアンチセンスＲＮＡ、ミオスタチン（デュシェンヌ型の
もしくはベッカー型の筋ジストロフィー）に対するＲＮＡｉまたはアンチセンスＲＮＡ、
ＶＥＧＦまたは（腫瘍を処置するための）本明細書に具体的に記載した腫瘍免疫原が挙げ
られるがこれに限定されない腫瘍免疫原に対するＲＮＡｉまたはアンチセンスＲＮＡ、変
異ジストロフィン（デュシェンヌ型のもしくはベッカー型の筋ジストロフィー）を標的と
するＲＮＡｉまたはアンチセンスオリゴヌクレオチド、（Ｂ型肝炎感染を防止および／も
しくは処置するための）Ｂ型肝炎表面抗原遺伝子に対するＲＮＡｉまたはアンチセンスＲ
ＮＡ、（ＨＩＶを予防および／もしくは処置するための）ＨＩＶｔａｔ遺伝子および／ま
たはＨＩＶｒｅｖ遺伝子に対するＲＮＡｉまたはアンチセンスＲＮＡ、ならびに／または
（病原体から対象を保護するための）病原体由来の任意の他の免疫原または（疾患を予防
するまたは処置するための）欠陥遺伝子産物に対するＲＮＡｉまたはアンチセンスＲＮＡ
が挙げられる。上記した標的または任意の他の標的に対するＲＮＡｉまたはアンチセンス
ＲＮＡを研究試薬として用いることもできる。
【００７５】
当分野で知られているように、アンチセンス核酸（例えばＤＮＡまたはＲＮＡ）配列お
よび阻害性ＲＮＡ（例えばマイクロＲＡＮおよびＲＮＡｉ、例えばｓｉＲＮＡまたはｓｈ
ＲＮＡ）配列を使用して、ジストロフィン遺伝子の欠如から生じる筋ジストロフィーを有
する患者で「エクソンスキッピング」を誘発することができる。そのため、異種核酸は、
適切なエクソンスキッピングを誘発するアンチセンス核酸または阻害性ＲＮＡをコードす
ることができる。エクソンスキッピングのための特定のアプローチはジストロフィン遺伝
子の根本的な欠如の性質に依存し、多くのそのような戦略が当分野で既知であることを当
業者は認識する。例示的なアンチセンス核酸配列および阻害性ＲＮＡ配列は、１つまたは
複数のジストロフィンエクソン（例えばエクソン１９または２３）の上流の分岐点および
／または下流のドナースプライス部位および／または内部スプライシングエンハンサー配
列を標的とする。例えば、特定の実施形態では、異種核酸は、ジストロフィン遺伝子のエ
クソン１９または２３の上流の分岐点および下流のスプライスドナー部位に対するアンチ
センス核酸または阻害性ＲＮＡをコードする。そのような配列を、改変Ｕ７ｓｎＲＮＡと
アンチセンス核酸または阻害性ＲＮＡとを送達するＡＡＶベクターに組み込むことができ
る（例えばＧｏｙｅｎｖａｌｌｅ他、（２００４）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３０６：１７９６〜
１７９９を参照）。別の戦略として、改変Ｕ１ｓｎＲＮＡを、ジストロフィンエクソン（
例えばエクソン１９または２３）の上流のおよび下流のスプライス部位に相補的なｓｉＲ
ＮＡ、マイクロＲＮＡまたはアンチセンスＲＮＡと共にＡＡＶベクターに組み込むことが
できる（例えばＤｅｎｔｉ他、（２００６）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳ
Ａ  １０３：３７５８〜３７６３を参照）。さらに、アンチセンス核酸および阻害性ＲＮ
Ａは、エクソン１９、４３、４５または５３中のスプライシングエンハンサー配列を標的
とすることができる（例えば米国特許第６，６５３，４６７号、米国特許第６，７２７，
３５５号および米国特許第６，６５３，４６６号を参照）。
【００７６】
リボザイムとは、部位特異的な方法で核酸を切断するＲＮＡ−タンパク質複合体のこと
である。リボザイムは、エンドヌクレアーゼ活性を保持する特定の触媒ドメインを有する
（Ｋｉｍ他、（１９８７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８４：８７
８８、Ｇｅｒｌａｃｈ他、（１９８７）Ｎａｔｕｒｅ  ３２８：８０２、Ｆｏｒｓｔｅｒ
およびＳｙｍｏｎｓ、（１９８７）Ｃｅｌｌ  ４９：２１１）。例えば、多くのリボザイ
ムは、高度に特異的なリン酸エステル転移反応を促進し、オリゴヌクレオチド基質のいく
つかのリン酸エステルのうちの１つのみを切断することが多い（ＭｉｃｈｅｌおよびＷｅ
ｓｔｈｏｆ、（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１６：５８５、Ｒｅｉｎｈｏｌｄ−
ＨｕｒｅｋおよびＳｈｕｂ、（１９９２）Ｎａｔｕｒｅ  ３５７：１７３）。この特異性
は、化学反応前に基質が特異的な塩基対形成相互作用を介してリボザイムの内部ガイド配
列（「ＩＧＳ」）に結合するという要求に起因している。
【００７７】
リボザイム触媒反応は、核酸に関わる配列特異的切断／連結反応の一部として主に観察
されている（Ｊｏｙｃｅ、（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ  ３３８：２１７）。例えば、米国
特許第５，３５４，８５５号では、ある種のリボザイムが、配列特異性が既知のリボヌク
レアーゼの配列特異性よりも高くてＤＮＡ制限酵素の配列特異性に近いエンドヌクレアー
ゼとして作用することができることが報告されている。そのため、核酸発現の配列特異性
リボザイム媒介阻害は治療用途に特に適し得る（Ｓｃａｎｌｏｎ他、（１９９１）Ｐｒｏ
ｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８８：１０５９１、Ｓａｒｖｅｒ他（１９９
０）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４７：１２２２、Ｓｉｏｕｄ他、（１９９２）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉ
ｏｌ．２２３：８３１）。
【００７８】
マイクロＲＮＡ（ｍｉｒ）とは、ｍＲＮＡの安定性を制御することにより多重遺伝子の
発現を調節することができる天然の細胞ＲＮＡ分子のことである。特定のマイクロＲＮＡ
の過剰発現または減少を使用して機能不全を処置することができ、多くの病状および疾患
の動物モデルで有効であることが分かっている（例えばＣｏｕｚｉｎ、（２００８）Ｓｃ
ｉｅｎｃｅ  ３１９：１７８２〜４を参照）。遺伝的疾患および後天性疾患を処置するた
めに、またはある種の組織の機能性を高め増殖を促進するために、キメラＡＡＶを使用し
てマイクロＲＮＡを細胞、組織および対象中に送達することができる。例えば、ｍｉｒ−
１、ｍｉｒ−１３３、ｍｉｒ−２０６および／またはｍｉｒ−２０８を使用して心疾患お
よび骨格筋疾患を処置することができる（例えばＣｈｅｎ他、（２００６）Ｇｅｎｅｔ．
３８：２２８〜３３、ｖａｎ  Ｒｏｏｉｊ他、（２００８）Ｔｒｅｎｄｓ  Ｇｅｎｅｔ．
２４：１５９〜６６を参照）。マイクロＲＮＡを使用して、遺伝子送達後に免疫系を調節
することもできる（Ｂｒｏｗｎ他、（２００７）Ｂｌｏｏｄ  １１０：４１４４〜５２）
。
【００７９】
用語「アンチセンスオリゴヌクレオチド」（「アンチセンスＲＮＡ」を含む）は本明細
書で使用する場合、特定のＤＮＡ配列またはＲＮＡ配列に相補的であり特異的にハイブリ
ダイズする核酸を指す。アンチセンスオリゴヌクレオチドおよびそれをコードする核酸を
、従来の技法に従って産生することができる。例えば、Ｔｕｌｌｉｓに対する米国特許第
５，０２３，２４３号、Ｐｅｄｅｒｓｏｎに対する米国特許第５，１４９，７９７号を参
照。
【００８０】
配列相同性の程度が、アンチセンスヌクレオチド配列のその標的（上記で定義した）へ
の特異的ハイブリダイズおよびタンパク質産物の産生の（例えば少なくとも約３０％、４
０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％またはより多くの）低減に十分
である限り、アンチセンスオリゴヌクレオチドが標的配列に完全に相補的であることは必
要ではないことを当業者は認識する。
【００８１】
ハイブリダイゼーションの特異性を決定するために、低ストリンジェンシー条件下で、
中間ストリンジェンシー条件下で、さらにはストリンジェントな条件下で、そのようなオ
リゴヌクレオチドの標的配列へのハイブリダイゼーションを実行することができる。低ス
トリンジェンシーの、中間ストリンジェンシーのおよびストリンジェントなハイブリダイ
ゼーション条件を実現するための適切な条件は本明細書に記載した通りである。
【００８２】
換言すると、特定の実施形態では、本発明におけるアンチセンスオリゴヌクレオチドは
、標的配列の相補体と少なくとも約６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９７％、
９８％のまたはより高い配列同一性を有し、タンパク質産物（上記で定義した）の産生を
低減する。いくつかの実施形態では、アンチセンス配列は、標的配列と比較して１個、２
個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個または１０個のミスマッチを含有する。
【００８３】
核酸配列のパーセント同一性を決定する方法を、本明細書の他の箇所により詳細に記載
する。
【００８４】
アンチセンスオリゴヌクレオチドが目的の標的に特異的にハイブリダイズし、タンパク
質産物（上記で定義した）の産生を低減する限り、アンチセンスオリゴヌクレオチドの長
さは重要ではなく、常法に従って決定することができる。一般に、アンチセンスヌクレオ
チドは、少なくとも約８、１０もしくは１２もしくは１５のヌクレオチド長であり、かつ
／または約２０未満、３０未満、４０未満、５０未満、６０未満、７０未満、８０未満、
１００未満もしくは１５０未満のヌクレオチド長である。
【００８５】
ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）は、タンパク質産物（例えばｓｈＲＮＡまたはｓｉＲＮＡ）の
産生の低減に有用な別のアプローチである。ＲＮＡｉとは、目的の標的配列に対応する二
本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）が細胞または生物に取り込まれ、対応するｍＲＮＡが分解する
転写後遺伝子サイレンシング機構のことである。ＲＮＡｉにより遺伝子サイレンシングが
実現される機構は、Ｓｈａｒｐ他、（２００１）Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ  １５：４８５〜４
９０およびＨａｍｍｏｎｄ他、（２００１）Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖ．Ｇｅｎ．２：１１０
〜１１９）に概説されている。ＲＮＡｉの効果が複数回の細胞分裂にわたって持続した後
に遺伝子発現が回復する。したがって、ＲＮＡｉは、ＲＮＡレベルで、標的化したノック
アウトまたは「ノックダウン」を行なう強力な方法である。ＲＮＡｉは、ヒト胚腎細胞お
よびＨｅＬａ細胞を含むヒト細胞での成功が証明されている（例えばＥｌｂａｓｈｉｒ他
、Ｎａｔｕｒｅ（２００１）４１１：４９４〜８を参照）。
【００８６】
哺乳動物細胞でＲＮＡｉを使用する初期の試みにより、ｄｓＲＮＡ分子に応じたＰＫＲ
を含む抗ウイルス防御機構が得られた（例えばＧｉｌ他、（２０００）Ａｐｏｐｔｏｓｉ
ｓ  ５：１０７を参照）。その後、「短干渉ＲＮＡ」（ｓｉＲＮＡ）として既知である約
２１個のヌクレオチドの短い合成ｄｓＲＮＡが、抗ウイルス応答を誘発することなく哺乳
動物細胞でサイレンシングを媒介することができることが証明されている（例えばＥｌｂ
ａｓｈｉｒ他、Ｎａｔｕｒｅ（２００１）４１１：４９４〜８、Ｃａｐｌｅｎ他、（２０
０１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９８：９７４２を参照）。
【００８７】
ＲＮＡｉ分子（ｓｉＲＮＡ分子を含む）は短いヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ；Ｐａｄｄ
ｉｓｏｎ他、（２００２）、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９９：１４
４３〜１４４８を参照）であり得、ＲＮａｓｅＩＩＩ様酵素であるＤｉｃｅｒの作用によ
り細胞内で２０〜２５ｍｅｒのｓｉＲＮＡ分子にプロセシングされると考えられる。ｓｈ
ＲＮＡは一般に、ループアウトする短スペーサー配列により２つの逆方向反復配列が分離
されているステム−ループ構造を有する。３〜２３のヌクレオオチド長の範囲のループを
有するｓｈＲＮＡが報告されている。ループ配列は一般に重要ではない。例示的なループ
構造として以下のモチーフが挙げられる。ＡＵＧ、ＣＣＣ、ＵＵＣＧ、ＣＣＡＣＣ、ＣＴ
ＣＧＡＧ、ＡＡＧＣＵＵ、ＣＣＡＣＡＣＣおよびＵＵＣＡＡＧＡＧＡ。
【００８８】
ＲＮＡｉは、センス領域とアンチセンス領域との間でのｄｓＲＮＡ形成時に「ダンベル
」型の構造を形成するために、両側に２つのループ領域を有するセンス領域およびアンチ
センス領域を含む環状分子をさらに含むことができる。この分子をインビトロまたはイン
ビボでプロセシングして、ｄｓＲＮＡ部分、例えばｓｉＲＮＡを遊離させることができる
。
【００８９】
国際公開第０１／７７３５０号には、真核細胞中で異種配列のセンス転写産物およびア
ンチセンス転写産物の両方を生成するための双方向性転写用のベクターが記載されている
。この技法を用いて、本発明に係る使用のためのＲＮＡｉを産生することができる。
【００９０】
Ｓｈｉｎａｇａｗａ他、（２００３）Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．１７：１３４０には、ＣＭ
Ｖプロモーター（ｐｏｌ  ＩＩプロモーター）由来の長ｄｓＲＮＡを発現させる方法が報
告されており、この方法を組織特異的ｐｏｌ  ＩＩプロモーターに適用することもできる
。同様に、Ｘｉａ他、（２００２）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．２０：１００６のア
プローチはポリ（Ａ）尾部付加を回避し、組織特異的プロモーターに関連して使用され得
る。
【００９１】
ＲＮＡｉを生成する方法として、化学合成、インビトロ転写、（インビトロまたはイン
ビボでの）Ｄｉｃｅｒによる長ｄｓＲＮＡの消化、送達ベクターからのインビボでの発現
、およびＰＣＲ由来ＲＮＡｉ発現カセットからのインビボでの発現が挙げられる（例えば
Ａｍｂｉｏｎ，Ｉｎｃ．、オースティン  テキサス州からのＴｅｃｈＮｏｔｅｓ  １０（
３）“Ｆｉｖｅ  Ｗａｙｓ  ｔｏ  Ｐｒｏｄｕｃｅ  ｓｉＲＮＡｓ”を参照；ｗｗｗ．ａ
ｍｂｉｏｎ．ｃｏｍで入手可能）。
【００９２】
ｓｉＲＮＡ分子を設計するためのガイドラインが入手可能である（例えばＡｍｂｉｏｎ
，Ｉｎｃ．、オースティン  テキサス州からの文献を参照；ｗｗｗ．ａｍｂｉｏｎ．ｃｏ
ｍで入手可能）。特定の実施形態では、ｓｉＲＮＡ配列は約３０〜５０％のＧ／Ｃ含有量
を有する。さらに、ＲＮＡポリメラーゼＩＩＩをＲＮＡの転写に使用する場合、４個のＴ
残基またはＡ残基よりも大きい長ストレッチを一般に避ける。例えば、Ｗｈｉｔｅｈｅａ
ｄ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（ｗｗｗ．ｊ
ｕｒａ．ｗｉ．ｍｉｔ．ｅｄｕ）を介してＡｍｂｉｏｎ，Ｉｎｃ．（ｗｗｗ．ａｍｂｉｏ
ｎ．ｃｏｍ）から、またはＤｈａｒｍａｃｏｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｉｎｃ．（ｗｗｗ．
ｄｈａｒｍａｃｏｎ．ｃｏｍ）から、オンラインｓｉＲＮＡターゲットファインダー（Ｏ
ｎｌｉｎｅ  ｓｉＲＮＡ  ｔａｒｇｅｔ  ｆｉｎｄｅｒ）が入手可能である。
【００９３】
ＲＮＡｉ分子のアンチセンス領域は標的配列に完全に相補的であり得るが、該アンチセ
ンス領域が標的配列（上記に定義した）に特異的にハイブリダイズしてタンパク質産物の
産生を（例えば少なくとも約３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％
、９５％またはより多く）低減する限り、標的配列に完全に相補的である必要はない。い
くつかの実施形態では、上記で定義したように、そのようなオリゴヌクレオチドの標的配
列へのハイブリダイゼーションを低ストリンジェンシー条件下で、中間ストリンジェンシ
ー条件下で、さらにはストリンジェントな条件下で実行することができる。
【００９４】
その他の実施形態では、ＲＮＡｉのアンチセンス領域は、標的配列の相補体と少なくと
も約６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９７％、９８％のまたはより高い配列同
一性を有し、タンパク質産物の産生を（例えば少なくとも約３０％、４０％、５０％、６
０％、７０％、８０％、９０％、９５％またはより多く）低減する。いくつかの実施形態
では、アンチセンス領域は、標的配列と比較して１個、２個、３個、４個、５個、６個、
７個、８個、９個または１０個のミスマッチを含有する。ミスマッチは、ｄｓＲＮＡの中
心部分よりも端部で一般に許容される。
【００９５】
特定の実施形態では、ＲＮＡｉは、２つの別々のセンス分子とアンチセン分子との間の
分子間複合体化により形成される。ＲＮＡｉは、２つの別々の鎖の間の分子間塩基対合に
より形成される二本鎖領域を含む。その他の実施形態では、ＲＮＡｉは、典型的には逆方
向反復として、センス領域およびアンチセンス領域の両方を含む単一の核酸分子内の分子
間塩基対合により形成されたｄｓ領域を含む（例えばｓｈＲＮＡもしくはその他のステム
ループ構造、または環状ＲＮＡｉ分子）。ＲＮＡｉは、センス領域とアンチセンス領域と
の間にスペーサー領域をさらに含むことができる。
【００９６】
一般に、ＲＮＡｉ分子は高選択的である。必要に応じて、当業者は、例えばＢＬＡＳＴ
（ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ＢＬＡＳＴで入手可能）を使用して、そ
の他の既知の配列との実質的な配列相同性を有しないＲＮＡｉ配列を同定すべく関連する
データベースを検索することにより、標的以外の核酸の発現を妨げる可能性がある候補Ｒ
ＮＡｉを容易に除くことができる。
【００９７】
ＲＮＡｉの産生用キットは市販されており、例えばＮｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌ
ａｂｓ，Ｉｎｃ．およびＡｍｂｉｏｎ，Ｉｎｃ．から市販されている。
【００９８】
組換えウイルスベクターはまた、宿主染色体の遺伝子座と相同性を共有し該遺伝子座と
組み換わる異種ヌクレオチド配列を含むこともできる。このアプローチを用いて、宿主細
胞での遺伝子欠損を修正することができる。
【００９９】
本発明はまた、例えばワクチン接種のための、免疫原性ポリペプチドを発現する組換え
ウイルスベクターも提供する。異種核酸は、当分野で既知の目的の任意の免疫原をコード
することができ、該免疫原として、ヒト免疫不全ウイルス、インフルエンザウイルス、ｇ
ａｇタンパク質、腫瘍抗原、癌抗原、細菌性抗原、ウイルス抗原等からの免疫原が挙げら
れるがこれらに限定されない。また、免疫原は、ウイルスカプシド中に存在する（例えば
ウイルスカプシド中に組み込まれる）ことができる、または（例えば共有結合改変により
）ウイルスカプシドに繋がれ得る。
【０１００】
パルボウイルスのワクチンとしての使用は当分野で既知である（例えばＭｉｙａｍｕｒ
ａ他、（１９９４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９１：８５０７、Ｙ
ｏｕｎｇ他に対する米国特許第５，９１６，５６３号、Ｍａｚｚａｒａ他に対する米国特
許第５，９０５，０４０号、米国特許第５，８８２，６５２号、Ｓａｍｕｌｓｋｉ他に対
する米国特許第５，８６３，５４１号、これらの開示はその全体が参照により本明細書に
援用される）。抗原がウイルスカプシド中に存在することができる。また、組換えベクタ
ーゲノムに導入した異種核酸から抗原を発現させることができる。
【０１０１】
免疫原性ポリペプチドまたは免疫原は、疾患に対して対象を防御するのに適した任意の
ポリペプチドであり得、該疾患として、微生物による疾患、細菌による疾患、原虫による
疾患、寄生虫による疾患、真菌による疾患およびウイルスによる疾患が挙げられるがこれ
らに限定されない。例えば、免疫原は、オルソミクソウイルス免疫原（例えばインフルエ
ンザウイルス免疫原、例えばインフルエンザウイルス赤血球凝集素（ＨＡ）表面タンパク
質もしくはインフルエンザウイルス核タンパク質遺伝子、またはウマインフルエンザウイ
ルス免疫原）、またはレンチウイルス免疫原（例えばウマ伝染性貧血ウイルス免疫原、サ
ル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）免疫原またはヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）免疫原、例
えばＨＩＶもしくはＳＩＶのエンベロープＧＰ１６０タンパク質、ＨＩＶもしくはＳＩＶ
のマトリックス／カプシドタンパク質、ならびにＨＩＶもしくはＳＩＶのｇａｇ遺伝子産
物、ｐｏｌ遺伝子産物およびｅｎｖ遺伝子産物）であり得る。免疫原はまた、アレナウイ
ルス免疫原（例えばラッサ熱ウイルス免疫原、例えばラッサ熱ウイルスのヌクレオカプシ
ドタンパク質遺伝子およびラッサ熱エンベロープ糖タンパク質遺伝子）、ポックスウイル
ス免疫原（例えばワクシニア、例えばワクシニアのＬ１遺伝子またはＬ８遺伝子）、フラ
ビウイルス免疫原（例えば黄熱病ウイルス免疫原または日本脳炎ウイルス免疫原）、フィ
ロウイルス免疫原（例えばエボラウイルス免疫原またはマールブルグウイルス免疫原、例
えばＮＰ遺伝子およびＧＰ遺伝子）、ブニヤウイルス免疫原（例えばＲＶＦＶウイルス、
ＣＣＨＦウイルスおよびＳＦＳウイルス）、またはコロナウイルス免疫原（例えば感染性
ヒトコロナウイルス免疫原、例えばヒトコロナウイルスのエンベロープ糖タンパク質遺伝
子またはブタ伝染性胃腸炎ウイルス免疫原またはトリ伝染性気管支炎ウイルス免疫原また
は重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）免疫原、例えばＳ［Ｓ１もしくはＳ２］タンパク質
、Ｍタンパク質、Ｅタンパク質またはＮタンパク質またはそれらの免疫原性フラグメント
）であることもできる。免疫原はさらに、ポリオ免疫原、ヘルペス免疫原（例えばＣＭＶ
免疫原、ＥＢＶ免疫原、ＨＳＶ免疫原）、流行性耳下腺炎免疫原、麻疹免疫原、風疹免疫
原、ジフテリア毒素もしくはその他のジフテリア免疫原、百日咳抗原、肝炎（例えばＡ型
肝炎、Ｂ型肝炎もしくはＣ型肝炎）免疫原または当分野で既知の任意の他のワクチン免疫
原であり得る。
【０１０２】
また、免疫原は、任意の腫瘍細胞抗原または癌細胞抗原であり得る。任意選択的に、腫
瘍抗原または癌抗抗原を癌細胞の表面上で発現させる。例示的な癌細胞抗原および腫瘍細
胞抗原がＳ．Ａ．Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ、（１９９９）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １０：２８１）
に記載されている。例示的な癌抗原および腫瘍抗原として、ＢＲＣＡ１遺伝子産物、ＢＲ
ＣＡ２遺伝子産物、ｇｐ１００、チロシナーゼ、ＧＡＧＥ−１／２、ＢＡＧＥ、ＲＡＧＥ
、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＣＤＫ−４、β−カテニン、ＭＵＭ−１、カスパーゼ−８、ＫＩＡ
Ａ０２０５、ＨＰＶＥ、ＳＡＲＴ−１、ＰＲＡＭＥ、ｐ１５、ＭＡＲＴ−１（Ｃｏｕｌｉ
ｅ他、（１９９１）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８０：３５）を含むメラノーマ腫瘍抗原（Ｋ
ａｗａｋａｍｉ他、（１９９４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９１
：３５１５、Ｋａｗａｋａｍｉ他、（１９９４）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．、１８０：３４７
、Ｋａｗａｋａｍｉ他、（１９９４）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５４：３１２４）、ｇｐ１
００（Ｗｉｃｋ他、（１９８８）Ｊ．Ｃｕｔａｎ．Ｐａｔｈｏｌ．４：２０１）ならびに
ＭＡＧＥ抗原（ＭＡＧＥ−１、ＭＡＧＥ−２およびＭＡＧＥ−３）（Ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｂ
ｒｕｇｇｅｎ他、（１９９１）Ｓｃｉｅｎｃｅ、２５４：１６４３）、ＣＥＡ、ＴＲＰ−
１；ＴＲＰ−２；Ｐ−１５およびチロシナーゼ（Ｂｒｉｃｈａｒｄ他、（１９９３）Ｊ．
Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７８：４８９）；ＨＥＲ−２／ｎｅｕ遺伝子産物（米国特許第４，９
６８，６０３号）；ＣＡ１２５；ＨＥ４；ＬＫ２６；ＦＢ５（エンドシアリン）；ＴＡＧ
７２；ＡＦＰ；ＣＡ１９−９；ＮＳＥ；ＤＵ−ＰＡＮ−２；ＣＡ５０；Ｓｐａｎ−１；Ｃ
Ａ７２−４；ＨＣＧ；ＳＴＮ（シアリルＴｎ抗原）；ｃ−ｅｒｂＢ−２タンパク質；ＰＳ
Ａ；Ｌ−ＣａｎＡｇ；エストロゲン受容体；乳脂肪グロブリン；ｐ５３腫瘍サプレッサー
タンパク質（Ｌｅｖｉｎｅ、（１９９３）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６２：６２
３）；ムチン抗原（国際公開第９０／０５１４２号）；テロメラーゼ；核マトリックスタ
ンパク質；前立腺酸性ホスファターゼ；パピローマウイルス抗原；ならびに以下の癌に関
連する抗原：メラノーマ、腺がん、胸腺腫、肉腫、肺癌、肝臓癌、結腸癌、非ホジキンリ
ンパ腫、ホジキンリンパ腫、白血病、子宮癌、乳癌、前立腺癌、卵巣癌、子宮頚部癌、膀
胱癌、腎臓癌、膵臓癌、脳癌、腎臓癌、胃癌、食道癌、頭頚部癌およびその他（例えばＲ
ｏｓｅｎｂｅｒｇ、（１９９６）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｍｅｄ．４７：４８１〜９１を参照）
が挙げられるがこれらに限定されない。
【０１０３】
また、異種ヌクレオチド配列は、望ましくはインビトロ、エクスビボでまたはインビボ
で細胞中において産生される任意のポリペプチドをコードすることができる。例えば、ウ
イルスベクターを培養細胞に導入し、発現したタンパク質産物を培養細胞から単離するこ
とができる。
【０１０４】
目的の異種核酸を適切な制御配列と作動可能に結合させることができることを当業者は
理解する。例えば、異種核酸を、発現制御エレメント、例えば転写／翻訳制御シグナル、
複製開始点、ポリアデニル化シグナル、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）、プロモー
ター、エンハンサー等と作動可能に結合させることができる。
【０１０５】
所望のレベルおよび組織特異的発現に応じて様々なプロモーター／エンハンサーエレメ
ントを使用することができることを当業者はさらに認識する。所望の発現パターンに応じ
て、プロモーター／エンハンサーは構成的であり得る、または誘導性であり得る。プロモ
ーター／エンハンサーは生来または外来性であり得、天然配列または合成配列であり得る
。外来性とは、転写開始領域が、該転写開始領域が導入されている野生型宿主において見
出されないことを意図するものである。
【０１０６】
プロモーター／エンハンサーエレメントは、標的細胞もしくは処置する対象に対して生
来のものであり得、および／または異種核酸配列に対して生来のものであり得る。プロモ
ーター／エンハンサーエレメントは一般に、目的の標的細胞中で機能することができるよ
うに選択される。代表的な実施形態では、プロモーター／エンハンサーエレメントは哺乳
動物のプロモーター／エンハンサーエレメントである。プロモーター／エンハンサー（ｅ
ｎｈａｎｃｅ）エレメントは構成的または誘導性であり得る。
【０１０７】
誘導性発現制御エレメントは一般に、異種核酸配列の発現に対する調節をもたらすこと
が望ましい用途で使用される。遺伝子送達用の誘導性プロモーター／エンハンサーエレメ
ントは、組織特異的なまたは組織優先的なプロモーター／エンハンサーエレメントであり
得、該エレメントには、（心臓、骨格および／または平滑筋を含む）筋肉に特異的なまた
は優先的な、（脳特異的を含む）神経組織に特異的なまたは優先的な、（網膜特異的およ
び角膜特異的を含む）眼、肝臓に特異的なまたは優先的な、骨髄に特異的なまたは優先的
な、膵臓に特異的なまたは優先的な、脾臓に特異的なまたは優先的な、および肺に特異的
なまたは優先的なプロモーター／エンハンサーエレメントが含まれる。一実施形態では、
希突起神経膠細胞に特異的なまたは希突起神経膠細胞に優先的なプロモーターを使用する
。例として、ミエリン塩基性タンパク質、環状ヌクレオチドホスホジエステラーゼ、プロ
テオリピドタンパク質、ＧｔｘおよびＳｏｘ１０が挙げられるがこれらに限定されない。
希突起神経膠細胞に特異的なまたは優先的なプロモーターを使用することにより、異種核
酸の発現を希突起神経膠細胞にさらに限定することによってキメラＡＡＶベクターによっ
て実現される特異性を増加させることができる。その他の誘導性プロモーター／エンハン
サーエレメントとして、ホルモン誘導性エレメントおよび金属誘導性エレメントが挙げら
れる。例示的な誘導性プロモーター／エンハンサーエレメントとして、Ｔｅｔオン／オフ
エレメント、ＲＵ４８６−誘導性プロモーター、エクジソン誘導性プロモーター、ラパマ
イシン誘導性プロモーターおよびメタロチオネインプロモーターが挙げられるがこれらに
限定されない。
【０１０８】
標的細胞において異種核酸配列が転写され、次いで翻訳される実施形態では、挿入され
たタンパク質コード配列の効率的な翻訳のために、特異的な開始シグナルを一般に用いる
。ＡＴＧ開始コドンおよび隣接配列を含むことができるこれらの外因性翻訳制御配列は様
々な起源であり得、すなわち天然および合成のどちらでもあることができる。
【０１０９】
本発明はまた、ＡＡＶカプシドおよびＡＡＶゲノムを含むキメラＡＡＶ粒子も提供し、
ＡＡＶゲノムは、ＡＡＶカプシドに「対応する」（すなわちＡＡＶカプシドをコードする
）。そのようなキメラＡＡＶ粒子のコレクションまたはライブラリも提供され、コレクシ
ョンまたはライブラリは、２個以上、１０個以上、５０個以上、１００個以上、１０００
個以上、１０４個以上、１０５個以上または１０６個以上の特徴的な配列を含む。
【０１１０】
本発明は、本発明に係るキメラＡＡＶカプシドタンパク質を含む、該タンパク質からな
る、または該タンパク質から本質的になる「空の」（すなわちベクターゲノムが存在しな
い）カプシド粒子をさらに包含する。米国特許第５，８６３，５４１号に記載されている
ように、本発明に係るキメラＡＡＶカプシドを「カプシド媒体」として使用することがで
きる。ウイルスカプセルに共有結合で連結させることができ、結合させることができ、ま
たはウイルスカプシドによりパッケージングすることができ、細胞に移入させることがで
きる分子として、ＤＮＡ、ＲＮＡ、脂質、炭水化物、ポリペプチド、有機小分子またはそ
れらの組み合わせが挙げられる。さらに、分子を宿主標的細胞中に移入させるために、分
子をウイルスカプシドの外側に結合させることができる（例えば「繋ぐことができる」）
。本発明の一実施形態では、分子はカプシドタンパク質に共有結合で連結している（すな
わち、接合している、または化学的に連結している）。分子を共有結合で連結させる方法
は当業者に既知である。
【０１１１】
本発明に係るウイルスカプシドにより、新規のカプシド構造に対する抗体を産生させる
際の使用も見出される。さらなる代替として、細胞への抗原提示のために、例えば外因性
アミノ酸配列への免疫応答をもたらすための対象への投与のために、外因性アミノ酸配列
をウイルスカプシドに挿入することができる。
【０１１２】
本発明はまた、キメラウイルスカプシドをコードする核酸（例えば単離された核酸）お
よび本発明に係るキメラカプシドタンパク質も提供する。核酸を含むベクターならびに本
発明に係る核酸および／またはベクターを含む（インビボでのまたは培養下での）細胞が
さらに提供される。そのような核酸、ベクターおよび細胞を、例えば本明細書に記載した
ウイルスベクターの産生用の試薬（例えばヘルパー構築物またはパッケージング細胞）と
して使用することができる。
【０１１３】
例示的な実施形態では、本発明は、配列番号２〜４のＡＡＶカプシドをコードする核酸
配列または配列番号１のヌクレオチド配列と少なくとも９０％同一の核酸配列を提供する
。本発明はまた、上記したＡＡＶカプシドバリアント、カプシドタンパク質バリアントお
よび融合タンパク質をコードする核酸も提供する。特定の実施形態では、核酸は、当業者
に既知の標準的な条件下で本明細書に具体的に開示した核酸配列の相補体にハイブリダイ
ズし、バリアントカプシドおよび／またはカプシドタンパク質をコードする。任意選択的
に、バリアントカプシドまたはカプシドタンパク質は、カプシドおよび／または配列番号
１の核酸配列でコードされたカプシドもしくはカプシドタンパク質の少なくとも１つの特
性を実質的に保持する。例えば、バリアントカプシドまたはバリアントカプシドタンパク
質を含むウイルス粒子は、配列番号１の核酸コード配列でコードされたカプシドまたはカ
プシドタンパク質を含むウイルス粒子の希突起神経膠細胞への向性プロファイルを実質的
に保持することができる。
【０１１４】
例えば、低ストリンジェンシー条件下で、中程度のストリンジェンシー条件下で、さら
にはストリンジェントな条件下で、そのような配列のハイブリダイゼーションを実行する
ことができる。低ストリンジェンシーの、中程度のストリンジェンシーの、およびストリ
ンジェントなハイブリダイゼーションの例示的条件は以下の通りである。（例えば、それ
ぞれ、３７℃での、５×デンハルト溶液、０．５％ＳＤＳおよび１×ＳＳＰＥを加えた３
５〜４０％ホルムアミドからなる洗浄ストリンジェンシーで表される条件、４２℃での、
５×デンハルト溶液、０．５％ＳＤＳおよび１×ＳＳＰＥを加えた４０〜４５％ホルムア
ミドからなる洗浄ストリンジェンシーで表される条件、ならびに４２℃での、５×デンハ
ルト溶液、０．５％ＳＤＳおよび１×ＳＳＰＥを加えた５０％ホルムアミドからなる洗浄
ストリンジェンシーで表される条件）。例えばＳａｍｂｒｏｏｋ他、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（第２版、１９８９）（Ｃ
ｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）を参照。
【０１１５】
その他の実施形態では、本発明におけるバリアントカプシドまたはカプシドタンパク質
をコードする核酸配列は、配列番号１の核酸配列との少なくとも約９０％、９１％、９２
％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のまたはより高い配列同
一性を有し、配列番号１の核酸でコードされたカプシドまたはカプシドタンパク質の少な
くとも１つの特性を実質的に保持するバリアントカプシドまたはカプシドタンパク質を任
意選択的にコードする。
【０１１６】
当分野で既知であるように、多くの異なるプログラムを使用して、核酸またはポリペプ
チドが既知の配列に対する配列同一性を有するかどうかを確認することができる。パーセ
ント同一性は本明細書で使用する場合、ＢＬＡＳＴＮを使用してその他の核酸（またはそ
の相補鎖）と（適切なヌクレオチドの挿入または欠失により）最適にアライメントした場
合に、核酸またはそのフラグメントが別の核酸に対する特定のパーセント同一性を共有す
ることを意味する。２つの異なる核酸の間のパーセント同一性を決定するために、ＢＬＡ
ＳＴＮプログラム「ＢＬＡＳＴ  ２  ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ」を使用してパーセント同一性
を決定することができる。このプログラムは、インターネット上でＮａｔｉｏｎａｌ  Ｃ
ｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ
）から公共で使用するために入手可能である（Ａｌｔｓｃｈｕｌ他、（１９９７）Ｎｕｃ
ｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５（１７）：３３８９〜３４０２）。使用するパラメ
ータは、デフォルトパラメータを丸括弧で示す、算出したパーセント同一性（以下で算出
する）が最も高い以下のあらゆる組み合わせである。プログラム−−ｂｌａｓｔｎ  Ｍａ
ｔｒｉｘ−−０  ＢＬＯＳＵＭ６２  Ｒｅｗａｒｄ  ｆｏｒ  ａ  ｍａｔｃｈ−−０また
は１（１）ミスマッチに対するペナルティ−−０、−１、−２または−３（−２）オープ
ンギャップペナルティ−−０、１、２、３、４または５（５）伸長ギャップペナルティ−
−０または１（１）ギャップｘ＿ドロップオフ−−０または５０（５０）期待値−−１０
。
【０１１７】
ポリペプチドに言及する場合のパーセント同一性またはパーセント類似性は、問題とな
るポリペプチドがＢＬＡＳＴＰを使用して決定した共通の長さにわたって別のタンパク質
またはその一部と比較した場合に特定のパーセント同一性またはパーセント類似性を表す
ことを示す。このプログラムも、インターネット上でＮａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  
ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）から公共で
使用するために入手可能である（Ａｌｔｓｃｈｕｌ他、（１９９７）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａ
ｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５（１７）：３３８９〜３４０２）。ポリペプチドに関するパーセ
ント同一性またはパーセント類似性を典型的には、配列解析ソフトウェアを使用して測定
する。例えばｔｈｅ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｐａｃ
ｋａｇｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ、Ｕｎｉｖ
ｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｃｅｎｔｅｒ
、９１０ユニバーシティアベニュー、マディソン、ウイスコンシン州、５３７０５を参照
。タンパク質解析ソフトウェアは、様々な置換、欠失およびその他の改変に割り当てられ
る相同性の基準を使用して類似の配列をマッチさせる。保存的置換として、以下の群内で
の置換が典型的には挙げられる。グリシン、アラニン；バリン、イソロイシン、ロイシン
；アスパラギン酸、グルタミン酸；アスパラギン、グルタミン；セリン、トレオニン；リ
シン、アルギニン；およびフェニルアラニン、チロシン。
【０１１８】
特定の実施形態では、核酸は、プラスミド、ファージ、ウイルスベクター（例えばＡＡ
Ｖベクター、アデノウイルスベクター、ヘルペスウイルスベクターまたはバキュロウイル
スベクター）、細菌人工染色体（ＢＡＣ）または酵母人工染色体（ＹＡＣ）が挙げられる
がこれらに限定されないベクターを含むことができるか、該ベクターから本質的になるこ
とができるか、または該ベクターからなることができる。例えば、核酸は、５’末端反復
および／または３’末端反復（例えば５’ＡＡＶ末端反復および／または３’ＡＡＶ末端
反復）を含むＡＡＶベクターを含むことができるか、該ＡＡＶベクターからなることがで
きるか、または該ＡＡＶベクターから本質的になることができる。
【０１１９】
いくつかの実施形態では、キメラＡＡＶカプシドタンパク質をコードする核酸は、ＡＡ
Ｖｒｅｐコード配列をさらに含む。例えば、核酸は、ウイルスのストックを産生するため
のヘルパー構築物であり得る。
【０１２０】
本発明はまた、本発明に係る核酸を安定的に含むパッケージング細胞も提供する。例え
ば、核酸を細胞のゲノムに安定的に組み込むことができる、またはエピソーム形態（例え
ば「ＥＢＶベースの核エピソーム」）で安定的に維持することができる。
【０１２１】
核酸を、ウイルス送達ベクター等の送達ベクターに組み込むことができる。例示すると
、本発明に係る核酸を、ＡＡＶ粒子、アデノウイルス粒子、ヘルペスウイルス粒子、バキ
ュロウイルス粒子または任意の他の適切なウイルス粒子中にパッケージングすることがで
きる。
【０１２２】
さらに、核酸をプロモーターエレメントと作動可能に結合させることができる。プロモ
ーターエレメントを本明細書でより詳細に説明する。
【０１２３】
本発明は、本発明に係るウイルスベクターを産生する方法をさらに提供する。代表的な
実施形態では、本発明は、組換えウイルスベクターを産生する方法であって、細胞にイン
ビトロで、（ａ）（ｉ）異種核酸および（ｉｉ）ＡＡＶテンプレートのウイルス粒子への
カプシド形成に十分なパッケージングシグナル配列（例えば、ＡＡＶ末端反復等の１つま
たは複数の（例えば２つの）末端反復）を含むテンプレートと、（ｂ）テンプレートの複
製およびウイルス粒子へのカプシド形成に十分なＡＡＶ配列（例えば、本発明に係るＡＡ
ＶカプシドをコードするＡＡＶｒｅｐ配列およびＡＡＶｃａｐ配列）とを提供することを
含む方法を提供する。カプシド内にパッケージングされたテンプレートを含む組換えウイ
ルス粒子が細胞中で産生されるような条件下で、テンプレート配列およびＡＡＶ複製配列
およびカプシド配列が提供される。本方法は、細胞からウイルス粒子を回収する工程をさ
らに含むことができる。培地からかつ／または細胞を溶解させることにより、ウイルス粒
子を回収することができる。
【０１２４】
一つの例示的な実施形態では、本発明は、ＡＡＶカプシドを含むｒＡＡＶ粒子を産生す
る方法であって、細胞にインビトロで、本発明に係るキメラＡＡＶカプシドをコードする
核酸、ＡＡＶのｒｅｐをコードする配列、異種核酸を含むＡＡＶベクターゲノム、および
増殖性のＡＡＶ感染を生じさせるためのヘルパー機能を提供することと、ＡＡＶベクター
ゲノムをカプシド形成して（カプシドで包んで）、ＡＡＶカプシドを含むＡＡＶ粒子を構
築することとを含む方法を提供する。
【０１２５】
細胞は典型的には、ＡＡＶウイルス複製を許容する細胞である。哺乳動物細胞等の当分
野で既知の任意の適切な細胞を用いることができる。複製欠陥性ヘルパーウイルス、例え
ば２９３細胞またはその他のＥ１ａトランス相補性細胞から欠失した機能を提供するトラ
ンス相補性パッケージング細胞株も適している。
【０１２６】
当分野で既知の任意の方法により、ＡＡＶ複製配列およびカプシド配列を供給すること
ができる。最新のプロトコルにより、単一のプラスミド上でＡＡＶｒｅｐ／ｃａｐ遺伝子
が典型的には発現される。ＡＡＶ複製配列およびパッケージング配列を共に供給する必要
はないが、そのようにすることが便利な場合がある。ＡＡＶｒｅｐ配列および／またはＡ
ＡＶｃａｐ配列を、任意のウイルスベクターまたは非ウイルスベクターにより供給するこ
とができる。例えば、ｒｅｐ／ｃａｐ配列を、ハイブリッドアデノウイルスベクターまた
はハイブリッドヘルペスウイルスベクターにより供給することができる（例えば、欠失ア
デノウイルスベクターのＥａ１領域またはＥ３領域に挿入することができる）。ＥＢＶベ
クターを用いてＡＡＶｃａｐ遺伝子およびＡＡＶｒｅｐ遺伝子を発現させることもできる
。この方法の１つの利点は、ＥＢＶベクターがエピソームであるが、連続的な細胞分裂を
通して高コピー数を維持することができる（すなわち、ＥＢＶベースの核エピソームと命
名した染色体外エレメントとして細胞に安定的に組み込まれる）ことである。
【０１２７】
さらなる代替として、ｒｅｐ／ｃａｐ配列は細胞内で安定的に保有され得る（エピソー
ムであり得る、または組み込まれ得る）。
【０１２８】
典型的には、ＡＡＶｒｅｐ／ｃａｐ配列がＡＡＶパッケージング配列（例えばＡＡＶ  
ＩＴＲ）に隣接せず、これらの配列のレスキューおよび／またはパッケージングを防止す
ることができる。
【０１２９】
当分野で既知の任意の方法を使用して、テンプレート（例えばｒＡＡＶベクターゲノム
）を細胞に供給することができる。例えば、非ウイルス（例えばプラスミド）ベクターま
たはウイルスベクターにより、テンプレートを供給することができる。特定の実施形態で
は、テンプレートは、ヘルペスウイルスベクターまたはアデノウイルスベクターにより供
給される（例えば、欠失アデノウイルスのＥ１ａ領域またはＥ３領域に挿入される）。別
の例示として、ＡＡＶ  ＩＴＲに隣接するレポーター遺伝子を保有するバキュロウイルス
ベクターがＰａｌｏｍｂｏ他、（１９９８）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７２：５０２５に記載され
ている。ＥＢＶベクターを用いて、ｒｅｐ／ｃａｐ遺伝子に関して上記に記載したように
テンプレートを送達することもできる。
【０１３０】
別の代表的な実施形態では、ｒＡＡＶウイルスを複製することによりテンプレートが供
給される。さらに他の実施形態では、ＡＡＶプロウイルスが細胞の染色体に安定的に組み
込まれる。
【０１３１】
最大のウイルス力価を得るために、増殖性ＡＡＶ感染に必須のヘルパーウイルス機能（
例えばアデノウイルスまたはヘルペスウイルス）が細胞に概して供給される。ＡＡＶ複製
に必要なヘルパーウイルス配列は当分野で既知である。典型的には、これらの配列は、ヘ
ルパーアデノウイルスベクターまたはヘルパーヘルペスウイルスベクターにより供給され
る。また、別の非ウイルスベクターまたはウイルスベクターにより、例えばＦｅｒｒａｒ
ｉ他、（１９９７）Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄ．３：１２９５ならびに米国特許第６，０４０
，１８３号および米国特許第６，０９３，５７０号に記載されているように効率的なＡＡ
Ｖ産生に必要である全てのヘルパー遺伝子を保有する非感染性のアデノウイルスミニプラ
スミドとして、アデノウイルス配列またはヘルペスウイルス配列を供給することができる
。
【０１３２】
さらに、染色体に組み込まれた、または安定的な染色体外エレメントとして維持された
ヘルパー遺伝子を有するパッケージング細胞により、ヘルパーウイルス機能を提供するこ
とができる。代表的な実施形態では、ヘルパーウイルス配列をＡＡＶビリオン中にパッケ
ージングすることはできず、例えばＡＡＶ  ＩＴＲに隣接していない。
【０１３３】
ＡＡＶ複製配列およびカプシド配列ならびにヘルパーウイルス配列（例えばアデノウイ
ルス配列）を単一のヘルパー構築物上に供給することが有利であり得ることを当業者は認
識する。このヘルパー構築物は非ウイルス構築物またはウイルス構築物であり得るが、任
意選択的に、ＡＡＶｒｅｐ／ｃａｐ遺伝子を含むハイブリッドアデノウイルスまたはハイ
ブリッドヘルペスウイルスであり得る。
【０１３４】
一つの特定の実施形態では、単一のアデノウイルスヘルパーベクターによりＡＡＶｒｅ
ｐ／ｃａｐ配列およびアデノウイルスヘルパー配列が供給される。このベクターはｒＡＡ
Ｖテンプレートをさらに含有する。ＡＡＶｒｅｐ／ｃａｐ配列および／またはｒＡＡＶテ
ンプレートを、アデノウイルスの欠失領域（例えばＥ１ａ領域またはＥ３領域）に挿入す
ることができる。
【０１３５】
さらなる実施形態では、単一のアデノウイルスヘルパーベクターによりＡＡＶｒｅｐ／
ｃａｐ配列およびアデノウイルスヘルパー配列が供給される。ｒＡＡＶテンプレートはプ
ラスミドテンプレートとして供給される。
【０１３６】
別の例示的な実施形態では、単一のアデノウイルスヘルパーベクターによりＡＡＶｒｅ
ｐ／ｃａｐ配列およびアデノウイルスヘルパー配列が供給され、ｒＡＡＶテンプレートは
プロウイルスとして細胞に組み込まれる。また、染色体外エレメントとして（例えば「Ｅ
ＢＶベースの核エピソーム」として、Ｍａｒｇｏｌｓｋｉ、（１９９２）Ｃｕｒｒ．Ｔｏ
ｐ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｍｍｕｎ．１５８：６７を参照）細胞内に維持されるＥＢＶ
ベクターによりｒＡＡＶテンプレートが供給される。
【０１３７】
さらに例示的な実施形態では、単一のアデノウイルスヘルパーによりＡＡＶｒｅｐ／ｃ
ａｐ配列およびアデノウイルスヘルパー配列が供給される。ｒＡＡＶテンプレートは別々
の複製ウイルスベクターとして供給される。例えば、ｒＡＡＶ粒子によりまたは別の組換
えアデノウイルス粒子によりｒＡＡＶテンプレートを供給することができる。
【０１３８】
上述の方法によれば、ハイブリッドアデノウイルスベクターは、アデノウイルスの複製
およびパッケージングに十分なアデノウイルスの５’シス配列および３’シス配列（すな
わち、アデノウイルスの末端反復およびＰＡＣ配列）を典型的には含む。ＡＡＶｒｅｐ／
ｃａｐ配列および存在する場合にはｒＡＡＶテンプレートはアデノウイルスバックボーン
に埋め込まれており、５’シス配列および３’シス配列に隣接しており、そのため、これ
らの配列をアデノウイルスカプシド中にパッケージングすることができる。上記に記載し
たように、代表的な実施形態では、アデノウイルスヘルパー配列およびＡＡＶｒｅｐ／ｃ
ａｐ配列はＡＡＶパッケージング配列（例えばＡＡＶ  ＩＴＲ）に隣接しておらず、その
ため、これらの配列はＡＡＶビリオン中にパッケージングされない。
【０１３９】
ＡＡＶパッケージング法において、ヘルペスウイルスをヘルパーウイルスとして使用す
ることもできる。ＡＡＶｒｅｐタンパク質をコードするハイブリッドヘルペスウイルスは
、よりスケーラブルなＡＡＶベクター産生スキームを有利に促進することができる。ＡＡ
Ｖ−２ｒｅｐ遺伝子およびＡＡＶ−２ｃａｐ遺伝子を発現するハイブリッド単純ヘルペス
ウイルスＩ型（ＨＳＶ−１）が記載されている（Ｃｏｎｗａｙ他、（１９９９）Ｇｅｎｅ
Ｔｈｅｒａｐｙ  ６：９８６および国際公開第００／１７３７７号、これらの開示はそ
の全体が本明細書に援用される）。
【０１４０】
さらなる代替として、Ｕｒａｂｅ他、（２００２）Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａ
ｐｙ  １３：１９３５〜４３に記載されているようにｒｅｐ／ｃａｐ遺伝子およびｒＡＡ
Ｖテンプレートの送達にバキュロウイルスベクターを使用して、本発明に係るウイルスベ
クターを昆虫細胞中で産生することができる。
【０１４１】
ＡＡＶを産生するその他の方法は、安定的に形質転換されたパッケージング細胞を使用
する（例えば米国特許第５，６５８，７８５号を参照）。
【０１４２】
当分野で既知の任意の方法により、ヘルパーウイルスの夾雑がないＡＡＶベクタースト
ックを得ることができる。例えば、ＡＡＶおよびヘルパーウイルスをサイズに基づいて容
易に区別することができる。ＡＡＶをヘパリン基質に対する親和性に基づいてヘルパーウ
イルスから分離することもできる（Ｚｏｌｏｔｕｋｈｉｎ他、（１９９９）Ｇｅｎｅ  Ｔ
ｈｅｒａｐｙ  ６：９７３）。代表的な実施形態では、いかなる夾雑ヘルパーウイルスも
複製能を有しないように、欠失した複製欠損ヘルパーウイルスを使用する。さらなる代替
として、アデノウイルスの初期遺伝子発現のみがＡＡＶウイルスのパッケージングの媒介
に必要であることから、後期遺伝子発現を欠いているアデノウイルスヘルパーを用いるこ
とができる。後期遺伝子発現が不完全なアデノウイルス変異体は当分野で既知である（例
えばｔｓ１００Ｋアデノウイルス変異体およびｔｓ１４９アデノウイルス変異体）。
【０１４３】
本発明におけるパッケージング法を用いて、ウイルス粒子の高力価ストックを産生する
ことができる。特定の実施形態では、ウイルスストックは、少なくとも約１０５形質導入
単位（ｔｕ）／ｍｌ、少なくとも約１０６ｔｕ／ｍｌ、少なくとも約１０７ｔｕ／ｍｌ、
少なくとも約１０８ｔｕ／ｍｌ、少なくとも約１０９ｔｕ／ｍｌまたは少なくとも約１０
１０ｔｕ／ｍｌの力価を有する。
【０１４４】
新規のカプシドタンパク質およびカプシド構造により、抗体の産生での用途、例えば診
断用途もしくは治療用途、または研究試薬としての用途が見出される。そのため、本発明
はまた、本発明に係る新規のカプシドタンパク質およびカプシドに対する抗体も提供する
。
【０１４５】
用語「抗体（ａｎｔｉｂｏｄｙ）」または「抗体（ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）」は本明細
書で使用する場合、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤおよびＩｇＥを含む全種類の免疫グ
ロブリンを指す。抗体は、モノクローナルまたはポリクローナルであり得、および（例え
ば）マウス、ラット、ウサギ、ウマ、ヤギ、ヒツジまたはヒト等の任意の種に由来するこ
とができる、またはキメラ抗体であり得る。例えばＷａｌｋｅｒ他、Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎ
ｏｌ．２６、４０３〜１１（１９８９）を参照。抗体は、例えば米国特許第４，４７４，
８９３号または米国特許第４，８１６，５６７号に開示された方法に従って産生される組
換えモノクローナル抗体であり得る。例えば米国特許第４，６７６，９８０号に開示され
た方法に従って、抗体を化学的に構築することもできる。
【０１４６】
本発明の範囲に含まれる抗体フラグメントとして、例えばＦａｂフラグメント、Ｆ（ａ
ｂ’）２フラグメントおよびＦｃフラグメント、ならびにＩｇＧ以外の抗体から得られる
対応するフラグメントが挙げられる。そのようなフラグメントを既知の技法により産生す
ることができる。例えば、抗体分子のペプシン消化によりＦ（ａｂ’）２フラグメントを
産生することができ、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントのジスルフィド架橋を還元することに
よりＦａｂフラグメントを生成することができる。また、Ｆａｂ発現ライブラリを構築し
て、所望の特異性を有するモノクローナルＦａｂフラグメントの迅速で容易な同定を可能
にすることができる（Ｈｕｓｅ他、（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５４、１２７５〜１
２８１）。
【０１４７】
標的に対するモノクローナル抗体が結合する抗原で適切な動物（例えばウサギ、ヤギ等
）を免疫化すること、動物から免疫血清を採取すること、および既知の手順に従って免疫
血清からポリクローナル抗体を分離することにより、ポリクローナル抗体を産生すること
ができる。
【０１４８】
ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ、（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ  ２６５、４９５〜
９７の技法に従って、モノクローナル抗体をハイブリドーマ細胞株中で産生することがで
きる。例えば、適切な抗原を含有する溶液をマウスに注入し、十分な時間後にマウスを屠
殺して脾臓細胞を得ることができる。次いで、典型的にはポリエチレングリコールの存在
下で、脾臓細胞を骨髄腫細胞とまたはリンパ腫細胞と融合させてハイブリドーマ細胞を産
生することにより、脾臓細胞を不死化する。次いで、ハイブリドーマ細胞を適切な培地中
で増殖させ、所望の特異性を有するモノクローナル抗体に関して上清をスクリーニングす
る。当業者に既知の組換え技法により、モノクローナルＦａｂフラグメントを大腸菌（Ｅ
．ｃｏｌｉ）中で産生することができる。例えばＷ．Ｈｕｓｅ、（１９８９）Ｓｃｉｅｎ
ｃｅ  ２４６、１２７５〜８１を参照。
【０１４９】
標的ポリペプチドに特異的な抗体を、当分野で既知のファージディスプレイ技法により
得ることもできる。
【０１５０】
様々なイムノアッセイを、所望の特異性を有する抗体を同定するためのスクリーニング
に使用することができる。確立された特異性を有するポリクローナル抗体またはモノクロ
ーナル抗体のいずれかを使用する競合結合アッセイまたは免疫放射定量アッセイのための
多くのプロトコルが当分野で公知である。そのようなイムノアッセイは、抗原とその特異
的抗体との間での複合体形成（例えば抗原／抗体複合体形成）の測定を典型的には含む。
２つの非干渉エピトープに対して反応性であるモノクローナル抗体を利用する二部位のモ
ノクローナルベースのイムノアッセイを、競合結合アッセイと同様に使用することができ
る。
【０１５１】
既知の技法に従って、抗体を固体支持体（例えば、ラテックスまたはポリスチレン等の
材料で形成されたビーズ、プレート、スライドまたはウェル）にコンジュゲートさせるこ
とができる。同様に、既知の技法に従って、検出可能な基、例えば放射性標識（例えば３
５Ｓ、１２５Ｉ、１３１Ｉ）、酵素標識（例えばホースラディッシュペルオキシダーゼ、
アルカリホスファターゼ）および蛍光標識（例えばフルオロセイン）に抗体を直接的にま
たは間接的にコンジュゲートさせることができる。当分野で周知であるように、例えば沈
殿、凝集、フロキュレーション、放射活性、発色または変色、蛍光、発光等の検出により
、本発明に係る方法における抗体／抗原複合体の形成を定量することができる。
【０１５２】
ＩＩＩ．キメラＡＡＶカプシドを使用する方法
本発明はまた、異種ヌクレオチド配列を希突起神経膠細胞中に送達する方法にも関する
。本発明に係るウイルスベクターを用いて例えば目的のヌクレオチド配列をインビトロで
希突起神経膠細胞に送達し、例えばインビトロのまたはエクスビボの遺伝子治療でポリペ
プチドまたは核酸を産生することができる。ベクターは、例えば治療用のまたは免疫原性
のポリペプチドまたは核酸を発現するために、それを必要とする対象にヌクレオチド配列
を送達する方法でさらに有用である。したがって、このようにしてポリペプチドまたは核
酸を対象中においてインビボで産生することができる。このポリペプチドまたは核酸を対
象が必要としている場合がある。なぜならば、対象がこのポリペプチドを欠乏しているか
らであるか、または処置の方法もしくはその他の方法としておよび以下でさらに説明する
ように、対象中でのポリペプチドもしくは核酸の産生により、ある程度の治療効果を付与
することができるからである。
【０１５３】
特定の実施形態では、ベクターは、希突起神経膠細胞に有益な効果をもたらすポリペプ
チドまたは核酸を発現するのに有用であり、例えば希突起神経膠細胞の増殖および／また
は分化を促進するのに有用である。ベクターを希突起神経膠細胞に標的化する能力は、希
突起神経膠細胞の機能不全および／または神経細胞の脱髄を伴う疾患または障害を処置す
るのに特に有用であり得る。その他の実施形態では、ベクターは、希突起神経膠細胞付近
の細胞（例えば神経細胞）に有益な効果をもたらすポリペプチドまたは核酸を発現するの
に有用である。
【０１５４】
そのため、本発明の一態様は、目的の核酸を希突起神経膠細胞に送達する方法であって
、希突起神経膠細胞を本発明に係るＡＡＶ粒子と接触させることを含む方法に関する。
【０１５５】
別の態様では、本発明は、対象となる哺乳動物において目的の核酸を希突起神経膠細胞
に送達する方法であって、有効量の、本発明に係るＡＡＶ粒子または医薬製剤を対象とな
る哺乳動物に投与することを含む方法に関する。
【０１５６】
本発明のさらなる態様は、それを必要とする対象において希突起神経膠細胞の機能不全
を伴う障害の処置を処置する方法であって、治療有効量の、本発明に係るＡＡＶ粒子を対
象に投与することを含む方法に関する。一実施形態では、希突起神経膠細胞の機能不全を
伴う障害は脱髄疾患である。一実施形態では、希突起神経膠細胞の機能不全を伴う障害は
、多発性硬化症、ペリツェウス・メルツバッハー病、クラッベ病、異染性白質ジストロフ
ィー、副腎白質ジストロフィー、カナバン病、アレキサンダー病、正染性白質ジストロフ
ィー、ツェルウェガー病、１８ｑ−症候群、脳性麻痺、脊髄損傷、外傷性脳損傷、脳卒中
、フェニルケトン尿症もしくはウイルス感染症、または希突起神経膠細胞の機能不全を伴
うことが知られているまたは後に分かる任意の他の障害である。別の実施形態では、本発
明に係る方法を使用して、希突起神経膠細胞の機能不全を直接伴わないが、神経細胞、星
状膠細胞またはその他のＣＮＳ細胞型中における発現に加えてまたは該発現の代わりに、
希突起神経膠細胞中における異種ポリペプチドまたは核酸の発現により利益を得る障害を
処置する。例として、神経変性障害、例えばアルツハイマー病、パーキンソン病およびハ
ンチントン病、ＣＮＳ腫瘍ならびにその他のＣＮＳ障害が挙げられるがこれらに限定され
ない。
【０１５７】
ＣＮＳ障害として、思考および認知の障害、例えば統合失調症およびせん妄；健忘障害
；気分の障害、例えば感情障害および不安障害（心的外傷後ストレス障害、分離不安障害
、選択性無言症、反応性愛着障害、常同性運動障害、恐怖障害、広場恐怖症、特定恐怖症
、社会恐怖症、強迫性障害、急性ストレス障害、全般性不安障害、物質誘発性うつ病性障
害および／または不特定の不安障害等）；社会的行動障害；学習および記憶の障害、例え
ば学習障害（例えば失読症）；運動能力障害；コミュニケーション障害（例えば吃音症）
；広汎性発達障害（例えば自閉症性障害、レット障害、小児期崩壊性障害、アスペルガー
障害および／または不特定の広汎性発達障害）ならびに認知症が挙げられるがこれらに限
定されない。したがって、用語「中枢神経系障害」は、上記に列挙した障害と、抑うつ障
害（大うつ病性障害、気分変調性障害（ｄｙｓｔｈｍｙｉｃ  ｄｉｓｏｒｄｅｒ）、不特
定の抑うつ障害、産後うつ病等）；季節性感情障害；躁病；双極性障害（双極性Ｉ型障害
、双極性ＩＩ型障害、気分循環性障害、不特定の双極性障害等）；注意欠陥および破壊的
行動障害（多動性障害を伴う注意欠陥障害、行動障害、反抗挑戦性障害および／または不
特定の破壊的行動障害等）；薬物依存症／物質乱用（アヘン剤、アンフェタミン、アルコ
ール、幻覚剤、大麻、吸入薬、フェンシクリジン、鎮静剤、睡眠薬、抗不安薬（ａｎｘｙ
ｏｌｙｔｉｃ）および／またはコカインの乱用等）；アルコールにより誘発される障害；
アンフェタミンにより誘発される障害；カフェインにより誘発される障害；大麻により誘
発される障害；コカインにより誘発される障害；幻覚剤により誘発される障害；吸入薬に
より誘発される障害；ニコチンにより誘発される障害；オピオイドにより誘発される障害
；フェンシクリジンにより誘発される障害；鎮痛剤、睡眠薬または抗不安薬（ａｎｘｙｏ
ｌｙｔｉｃ）により誘発される障害；激越；感情鈍麻；精神病；過敏性；脱抑制；統合失
調症様障害；統合失調感情障害；妄想性障害；短期精神病性障害、共有精神病性障害；物
質誘発精神病性障害；不特定の精神障害；単極性障害、気分障害（例えば精神病の特徴を
伴う気分障害）；身体表現性障害；虚偽性障害；解離性障害（ｄｉｓａｓｓｏｃｉａｔｉ
ｖｅ  ｄｉｓｏｒｄｅｒ）；精神遅滞；乳児期または幼児期の栄養補給障害および摂食障
害；摂食障害、例えば神経性食欲不振症、神経性過食症および／または不特定の摂食障害
；睡眠障害（例えば睡眠異常、例えば原発性不眠症、原発性過眠症、ナルコプシー、呼吸
関連睡眠障害および概日リズム睡眠障害ならびに／または睡眠時随伴症）；衝動制御障害
（例えば窃盗癖、放火癖、抜毛癖、ギャンブル依存症および／または間欠性爆発性障害）
；適応障害；人格障害（例えば妄想性人格障害、統合失調質人格障害、統合失調症型人格
障害、反社会性人格障害、境界型人格障害、演技性人格障害、自己愛パーソナリティー障
害、回避性人格障害、依存性人格障害および／または強迫性障害）；チック障害（例えば
トゥレット障害、慢性運動または音声チック障害、一過性チック障害および／または不特
定のチック障害）；排泄障害；ならびに上述の任意の組み合わせ、ならびにＤｉａｇｎｏ
ｓｔｉｃ  ａｎｄ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｍｅｎｔａｌ  Ｄｉ
ｓｏｒｄｅｒｓ−第４版（ＤＳＭ−ＩＶ；ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｓｙｃｈｉａｔ
ｒｉｃ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ、ワシントンＤ．Ｃ．１９９４）に記載された任意の他
の障害またはそれらの障害の群とを包含する。「中枢神経系障害」として、神経変性障害
、例えばアルツハイマー病、不随意運動障害、例えばパーキンソン病、ハンチントン病、
筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）等が挙げられるがそれらに限定されない、ＣＮＳに関与す
るその他の状態も挙げられる。その他のＣＮＳ障害として、てんかん、多発性硬化症、神
経原性疼痛、心因性疼痛および偏頭痛が挙げられるがこれらに限定されない。その他の実
施形態では、ＣＮＳ障害は、上述の疾患の任意のサブセットを包含する、または上述の状
態のいずれか１つまたは複数を除外する。特定の実施形態では、用語「中枢神経系障害」
は、ＣＮＳの良性の腫瘍および／または悪性の腫瘍を包含しない。
【０１５８】
本発明の別の態様では、本発明に係るキメラＡＡＶカプシドおよびベクターは、以下で
論じるように１つまたは複数の末梢の器官または組織を標的とするために所望の向性プロ
ファイルにさらに改変することができる、完全に脱標的化された（ｄｅｔａｒｇｅｔｅｄ
）またはほぼ完全に脱標的化されたベクターである。この態様では、本発明はまた、異種
ヌクレオチド配列を、分裂細胞および非分裂細胞を含む広範囲の細胞中に送達する方法に
も関する。本発明に係るウイルスベクターを用いて目的のヌクレオチド配列を細胞にイン
ビトロで送達し、例えばインビトロまたはエクスビボの遺伝子治療でポリペプチドを産生
することができる。ベクターは、例えば治療用のまたは免疫原性のポリペプチドまたは核
酸を発現するために、それを必要とする対象にヌクレオチド配列を送達する方法でさらに
有用である。したがって、このようにしてポリペプチドまたは核酸を対象中においてイン
ビボで産生することができる。このポリペプチドまたは核酸を対象が必要としている場合
がある。なぜならば、対象がこのポリペプチドを欠乏しているからである、または処置の
方法もしくはその他の方法としておよび以下でさらに説明するように、対象中でのポリペ
プチドもしくは核酸の産生により、ある程度の治療効果を付与することができるからであ
る。
【０１５９】
一般に、本発明に係るウイルスベクターを用いて、遺伝子発現に関連する任意の障害を
伴う症状を処置するまたは改善する生物学的効果を有する任意の外来核酸を送達すること
ができる。さらに、本発明を使用して、治療用ポリペプチドを送達することが効果的であ
る任意の病状を処置することができる。例示的な病状として、嚢胞性線維症（嚢胞性線維
症膜貫通制御タンパク質）および肺のその他の疾患、血友病Ａ（第ＶＩＩＩ因子）、血友
病Ｂ（第ＩＸ因子）、サラセミア（β−グロビン）、貧血症（エリスロポエチン）および
その他の血液疾患、アルツハイマー病（ＧＤＦ；ネプリライシン）、多発性硬化症（β−
インターフェロン）、パーキンソン病（グリア細胞株由来の神経栄養因子［ＧＤＮＦ］）
、ハンチントン病（反復を除去するための、ｓｉＲＮＡもしくはｓｈＲＮＡ等のＲＮＡｉ
、アンチセンスＲＮＡまたはマイクロＲＮＡを含むがこれらに限定されない阻害性ＲＮＡ
）、筋萎縮性側索硬化症、てんかん（ガラニン、神経栄養因子）およびその他の神経障害
、癌（エンドスタチン、アンジオスタチン、ＴＲＡＩＬ、ＦＡＳリガンド、インターフェ
ロンを含むサイトカイン；ＶＥＧＦ、多剤耐性遺伝子産物または癌の免疫原に対する阻害
性ＲＮＡを含む、ＲＮＡｉ（例えばｓｉＲＮＡもしくはｓｈＲＮＡ）、アンチセンスＲＮ
ＡおよびマイクロＲＮＡを含むがこれらに限定されない阻害性ＲＮＡ）、糖尿病（インス
リン、ＰＧＣ−α１、ＧＬＰ−１、ミオスタチンプロペプチド、グルコーストランスポー
ター４）、デュシェンヌ型およびベッカー型を含む筋ジストロフィー（例えばジストロフ
ィン、ミニジストロフィン、マイクロジストロフィン、インスリン様増殖因子Ｉ、サルコ
グリカン［例えばα、β、γ］、ミオスタチンまたはミオスタチンプロペプチドに対する
阻害性ＲＮＡ［例えばＲＮＡｉ、アンチセンスＲＮＡもしくはマイクロＲＮＡ］、ラミニ
ン−アルファ２、フクチン関連タンパク質、ドミナントネガティブミオスタチン、フォリ
スタチン、アクチビンＩＩ型可溶性受容体、抗炎症性ポリペプチド、例えばＩカッパＢ優
性変異体、サルコスパン、ユートロフィン、ミニユートロフィン、エクソンスキッピング
を誘発するための、ジストロフィン遺伝子のスプライス部位に対する阻害性ＲＮＡ［例え
ばＲＮＡｉ、アンチセンスＲＮＡもしくはマイクロＲＮＡ］［例えばＷＯ／２００３／０
９５６４７を参照］、エクソンスキッピングを誘発するための、Ｕ７  ｓｎＲＮＡに対す
る阻害性ＲＮＡ（例えばＲＮＡｉ、アンチセンスＲＮＡまたはマイクロＲＮＡ］［例えば
ＷＯ／２００６／０２１７２４を参照］、およびミオスタチンまたはミオスタチンプロペ
プチドに対する抗体または抗体フラグメント）、ゴーシェ病（グルコセレブロシダーゼ）
、ハーラー病（α−Ｌ−イズロニダーゼ）、アデノシンデアミナーゼ欠乏症（アデノシン
デアミナーゼ）、グリコーゲン蓄積症（例えばファブリー病［α−ガラクトシダーゼ］お
よびポンペ病［リソソーム酸性α−グルコシダーゼ］）およびその他のリソソーム蓄積障
害およびグリコーゲン蓄積障害を含むその他の代謝欠損、先天性肺気腫（α１−抗トリプ
シン）、レッシュ・ナイハン症候群（ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフ
ェラーゼ）、ニーマン・ピック病（スフィンゴミエリナーゼ）、メープルシロップ尿症（
分枝鎖ケト酸脱水素酵素）、網膜変性疾患（ならびに眼および網膜のその他の疾患；例え
ば、黄斑変性症に関するＰＤＧＦ、エンドスタチンおよび／またはアンギオスタチン）、
固形臓器の疾患、例えば脳（パーキンソン病［ＧＤＮＦ］、星状細胞腫［エンドスタチン
、アンギオスタチンおよび／またはＶＥＧＦに対するＲＮＡｉ］、神経膠芽腫［エンドス
タチン、アンギオスタチンおよび／またはＶＥＧＦに対するＲＮＡｉ］）、肝臓（Ｂ型肝
炎遺伝子および／またはＣ型肝炎遺伝子に関する、ｓｉＲＮＡもしくはｓｈＲＮＡ等のＲ
ＮＡｉ、マイクロＲＮＡまたはアンチセンスＲＮＡ）、腎臓、うっ血性心不全または末梢
動脈疾患（ＰＡＤ）を含む心臓（例えば、プロテインホスファターゼ阻害剤Ｉ［Ｉ−１］
、ホスホランバン、筋小胞体Ｃａ２＋−ＡＴＰアーゼ［ｓｅｒｃａ２ａ］、ホスホランバ
ン遺伝子を調節する亜鉛フィンガータンパク質、Ｐｉｍ−１、ＰＧＣ−１α、ＳＯＤ−１
、ＳＯＤ−２、ＥＣＦ−ＳＯＤ、カリクレイン、チモシンβ４、低酸素誘導転写因子［Ｈ
ＩＦ］、βａｒｋｃｔ、β２アドレナリン受容体、β２アドレナリン受容体キナーゼ［β
ＡＲＫ］、ホスホイノシチド−３キナーゼ［ＰＩ３キナーゼ］、カルサルシン、血管新生
因子、Ｓ１００Ａ１、パルブアルブミン、アデニリルシクラーゼ６型、例えば短縮型の構
成的に活性なｂＡＲＫｃｔ等のＧタンパク質共役受容体キナーゼ２型ノックダウンを引き
起こす分子、ホスホランバンに対する阻害性ＲＮＡ［例えばＲＮＡｉ、アンチセンスＲＮ
ＡもしくはマイクロＲＮＡ］；例えばホスホランバンＡ１６Ｅ等のホスホランバン阻害ま
たはドミナントネガティブ分子等の送達による）、関節炎（インスリン様増殖因子）、関
節障害（インスリン様増殖因子）、内膜過形成（例えば、内皮型一酸化窒素合成酵素、誘
導型一酸化窒素合成酵素の送達による）、心臓移植の生存期間の改善（スーパーオキシド
ジスムターゼ）、ＡＩＤＳ（可溶性ＣＤ４）、筋消耗（インスリン様増殖因子Ｉ、ミオス
タチンプロペプチド、抗アポトーシス因子、フォリスタチン）、肢虚血（ＶＥＧＦ、ＦＧ
Ｆ、ＰＧＣ−１α、ＥＣ−ＳＯＤ、ＨＩＦ）、腎臓欠乏症（エリスロポエチン）、貧血症
（エリスロポエチン）、関節炎（抗炎症性因子、例えばＩＲＡＰおよびＴＮＦα可溶性受
容体）、肝炎（α−インターフェロン）、ＬＤＬ受容体欠乏症（ＬＤＬ受容体）、高アン
モニア血症（オルニチントランスカルバミラーゼ）、ＳＣＡ１、ＳＣＡ２およびＳＣＡ３
を含む脊髄小脳失調症、フェニルケトン尿症（フェニルアラニンヒドロキシラーゼ）、自
己免疫疾患等が挙げられるがこれらに限定されない。臓器移植後に本発明をさらに使用し
て、（例えば、免疫抑制剤または阻害性核酸を投与してサイトカイン産生を遮断すること
により）移植の成功を高めかつ／または臓器移植もしくは補助療法のマイナスの副作用を
低減することができる。別の例として、例えば癌患者において切断または外科切除後に、
骨移植により骨形態形成タンパク質（ＲＡＮＫＬおよび／またはＶＥＧＦ等）を投与する
ことができる。
【０１６０】
本発明に従って処置することできる例示的なリソソーム蓄積症として、ハーラー症候群
（ＭＰＳ  ＩＨ）、シャイエ症候群（ＭＰＳ  ＩＨ）およびハーラー・シャイエ症候群（
ＭＰＳ  ＩＨ／Ｓ）（α−Ｌ−イズロニダーゼ）；ハンター症候群（ＭＰＳ  ＩＩ）（イ
ズロン酸硫酸スルファターゼ）；サンフィリポＡ症候群（ＭＰＳ  ＩＩＩＡ）（ヘパラン
−Ｓ−硫酸スルファミニダーゼ）、サンフィリポＢ症候群（ＭＰＳ  ＩＩＩＢ）（Ｎ−ア
セチル−Ｄ−グルコサミニダーゼ）、サンフィリポＣ症候群（ＭＰＳ  ＩＩＩＣ）（アセ
チル−ＣｏＡ−グルコサミニドＮ−アセチルトランスフェラーゼ）、サンフィリポＤ症候
群（ＭＰＳ  ＩＩＩＤ）（Ｎ−アセチル−グルコサミニン−６−硫酸スルファターゼ）；
モルキオＡ病（ＭＰＳ  ＩＶ  Ａ）（ガラクトサミン−６−硫酸スルファターゼ）、モル
キオＢ病（ＭＰＳ  ＩＶ  Ｂ）（β−ガラクトシダーゼ）；マロトー・ラミー病（ＭＰＳ
ＶＩ）（アリールスルファターゼＢ）；スライ症候群（ＭＰＳ  ＶＩＩ）（β−グルク
ロニダーゼ）；ヒアルロニダーゼ欠乏症（ＭＰＳ  ＩＸ）（ヒアルロニダーゼ）；シアリ
ドーシス（ムコリピドーシスＩ）、ムコリピドーシスＩＩ（Ｉ細胞病）（Ｎ−アセチルグ
ルコサミニル（ａｃｔｙｌｇｌｕｃｏｓ−ａｍｉｎｙｌ）−１−ホスホトランスフェラー
ゼ触媒サブユニット）、ムコリピドーシスＩＩＩ（偽性ハーラーポリジストロフィー）（
Ｎ−アセチルグルコサミニル−１−ホスホトランスフェラーゼ；ＩＩＩＡ型［触媒サブユ
ニット］およびＩＩＩＣ型［基質認識サブユニット］）；ＧＭ１ガングリオシドーシス（
ガングリオシドβ−ガラクトシダーゼ）、ＧＭ２ガングリオシドーシスＩ型（テイ・サッ
クス病）（β−ヘキサミニダーゼＡ）、ＧＭ２ガングリオシドーシスＩＩ型（サンドホフ
病）（β−ヘキソサミニダーゼＢ）；ニーマン・ピック病（Ａ型およびＢ型）（スフィン
ゴミエリナーゼ）；ゴーシェ病（グルコセレブロシダーゼ）；ファーバー病（セラミニダ
ーゼ）；ファブリー病（α−ガラクトシダーゼＡ）；クラッベ病（ガラクトシルセラミド
β−ガラクトシダーゼ）；異染性白質ジストロフィー（アリールスルファターゼＡ）；ウ
ォルマン病等のリソソーム酸リパーゼ欠乏症（リソソーム酸リパーゼ）；バッテン病（若
年型神経セロイドリポフスチン症）（リソソーム膜貫通ＣＬＮ３タンパク質）シアリドー
シス（ノイラミニダーゼ１）；ガラクトシアリドーシス（ゴールドバーグ症候群）（防御
タンパク質／カテプシンＡ）；αマンノース症（α−Ｄ−マンノシダーゼ）；βマンノー
ス症（β−Ｄ−マンノシドーシス）；フコシドーシス（α−Ｄ−フコシダーゼ）；アスパ
ルチルグルコサミン尿症（Ｎ−アスパルチルグルコサミニダーゼ）；ならびにシアル酸尿
症（リン酸Ｎａ共輸送体）が挙げられるがこれらに限定されない。
【０１６１】
本発明に従って処置することができる例示的なグリコーゲン蓄積症として、Ｉａ型ＧＳ
Ｄ（フォンギールケ病）（グルコース−６−ホスファターゼ）、Ｉｂ型ＧＳＤ（グルコー
ス−６−リン酸トランスロカーゼ）、Ｉｃ型ＧＳＤ（ミクロソームのリン酸輸送体または
ピロリン酸輸送体）、Ｉｄ型ＧＳＤ（ミクロソームのグルコース輸送体）、ポンペ病また
は乳児のＩＩａ型ＧＳＤ（リソソーム酸α−グルコシダーゼ）およびＩＩｂ型（ダノン）
（リソソーム膜タンパク質２）等のＩＩ型ＧＳＤ、ＩＩＩａ型ＧＳＤおよびＩＩＩｂ型Ｇ
ＳＤ（脱分枝酵素；アミログルコシダーゼおよびオリゴグルカノトランスフェラーゼ）、
ＩＶ型ＧＳＤ（アンダーソン病）（分枝酵素）、Ｖ型ＧＳＤ（マックアードル病）（筋ホ
スホリラーゼ）、ＶＩ型ＧＳＤ（ハース病）（肝臓ホスホリラーゼ）、ＶＩＩ型ＧＳＤ（
垂井病）（ホスホフルクトキナーゼ）、ＧＳＤ  ＶＩＩＩ／ＩＸａ型（Ｘ連鎖性のホスホ
リラーゼキナーゼ）、ＧＳＤ  ＩＸｂ型（肝臓ホスホリラーゼキナーゼおよび筋ホスホリ
ラーゼキナーゼ）、ＧＳＤ  ＩＸｃ型（肝臓ホスホリラーゼキナーゼ）、ＧＳＤ  ＩＸｄ
型（筋ホスホリラーゼキナーゼ）、ＧＳＤ  Ｏ（グリコーゲンシンターゼ）、ファンコニ
ー・ビッケル症候群（グルコース輸送体２）、ホスホグルコイソメラーゼ欠乏症、筋ホス
ホグリセリン酸キナーゼ欠乏症、ホスホグリセリン酸ムターゼ欠乏症、フルクトース１，
６−ジホスファターゼ欠乏症、ホスホエノールピルビン酸カルボキシキナーゼ欠乏症なら
びに乳酸デヒドロゲナーゼ欠乏症が挙げられるがこれらに限定されない。
【０１６２】
心筋に送達することができる核酸およびポリペプチドとして、損傷した、変性したまた
は萎縮した心筋および／または先天性の心臓欠陥の処置に有効である核酸およびポリペプ
チドが挙げられる。例えば、心疾患の処置での血管新生の促進に有用な血管新生因子とし
て、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、ＶＥＧＦ  ＩＩ、ＶＥＧＦ−Ｂ、ＶＥＧＦ−Ｃ、Ｖ
ＥＧＦ−Ｄ、ＶＥＧＦ−Ｅ、ＶＥＧＦ１２１、ＶＥＧＦ１３８、ＶＥＧＦ１４５、ＶＥＧ
Ｆ１６５、ＶＥＧＦ１８９、ＶＥＧＦ２０６、低酸素誘導因子１α（ＨＩＦ  １α）、内
皮ＮＯ合成酵素（ｅＮＯＳ）、ｉＮＯＳ、ＶＥＦＧＲ−１（Ｆｌｔ１）、ＶＥＧＦＲ−２
（ＫＤＲ／Ｆｌｋ１）、ＶＥＧＦＲ−３（Ｆｌｔ４）、アンジオゲニン、内皮増殖因子（
ＥＧＦ）、アンジオポエチン、血小板由来増殖因子、血管新生因子、形質転換増殖因子−
α（ＴＧＦ−α）、形質転換増殖因子−β（ＴＧＦ−β）、血管透過性因子（ＶＰＦ）、
腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ−α）、インターロイキン−３（ＩＬ−３）、インターロ
イキン−８（ＩＬ−８）、血小板由来内皮増殖因子（ＰＤ−ＥＧＦ）、顆粒球コロニー刺
激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）、散乱因子（ＳＦ）、プレイオトロフ
ィン（ｐｌｅｉｔｒｏｐｈｉｎ）、プロリフェリン、フォリスタチン、胎盤増殖因子（Ｐ
ＩＧＦ）、ミッドカイン、血小板由来増殖因子−ＢＢ（ＰＤＧＦ）、フラクタルカイン、
ＩＣＡＭ−１、アンジオポエチン−１およびアンジオポエチン−２（ＡＮｇ１およびＡｎ
ｇ２）、Ｔｉｅ−２、ニューロピリン−１、ＩＣＡＭ−１、平滑筋細胞の、単球のまたは
白血球の遊走を刺激するケモカインおよびサイトカイン、抗アポトーシスのペプチドおよ
びタンパク質、繊維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）、ＦＧＦ−１、ＦＧＦ−１ｂ、ＦＧＦ−１
ｃ、ＦＧＦ−２、ＦＧＦ−２ｂ、ＦＧＦ−２ｃ、ＦＧＦ−３、ＦＧＦ−３ｂ、ＦＧＦ−３
ｃ、ＦＧＦ−４、ＦＧＦ−５、ＦＧＦ−７、ＦＧＦ−９、酸性ＦＧＦ、塩基性ＦＧＦ、単
球走化性タンパク質−１、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、インスリン様増殖因
子−１（ＩＧＦ−１）、ＩＧＦ−２、初期増殖応答因子−１（ＥＧＦ−１）、ＥＴＳ−１
、ヒト組織カリクレイン（ＨＫ）、マトリックスメタロプロテアーゼ、キマーゼ、ウロキ
ナーゼ型プラスミノーゲン活性化因子およびヘパリナーゼが挙げられるがこれらに限定さ
れない。（例えば米国特許出願第２００６０２８７２５９号および米国特許出願第２００
７００５９２８８号を参照）。
【０１６３】
成人で最も頻繁に発見される先天性心疾患は二尖大動脈弁であるが、成人で見られる先
天性心疾患の３０〜４０％を心房中隔欠損症が占める。小児集団で最も頻繁に観察される
先天性心臓欠陥は心室中隔欠損症である。その他の先天性心疾患として、アイゼンメンガ
ー症候群、動脈管開存症、肺動脈弁狭窄症、大動脈縮窄症、大血管転位症、三尖弁閉鎖症
、単心室症、エブスタイン奇形および両大血管右室起始症が挙げられる。多くの研究によ
り、これらの先天性心疾患の１つまたは複数と関連する推定遺伝子座が同定されている。
例えば、ダウン症候群と関連する先天性心疾患に関する推定遺伝子は、ＥＴＳ２とＭＸ１
との間の２１ｑ２２．２〜ｑ２２．３である。同様に、ディジョージ症候群のほとんどの
ケースは、染色体２２ｑ１１．２（ディジョージ症候群染色体領域、すなわちＤＧＣＲ）
の欠失に起因する。推定転写因子ＴＵＰＬＥ１を含むこの欠失では、いくつかの遺伝子が
脱落している。この欠失は、様々な表現型、例えばシュプリンツェン症候群；円錐動脈幹
異常顔貌（またはタカオ症候群）；およびファロー四徴症、総動脈幹症および大動脈弓離
断症等の心臓の流出路分離欠陥（ｉｓｏｌａｔｅｄ  ｏｕｔｆｌｏｗ  ｔｒａｃｔ  ｄｅ
ｆｅｃｔ）と関連する。上述の疾患全てを本発明に従って処置することができる。
【０１６４】
心臓および血管系のその他の重大な疾患も遺伝子の、典型的には多遺伝子の、病理学的
要素を有すると考えられる。この疾患として、例えば左心低形成症候群、心臓弁形成異常
、ファイファー心頭蓋症候群、眼顔面心歯症候群、ケーパー・トリエロ症候群、ソノダ症
候群、オード眼瞼裂狭小症候群、心手症候群、ピエール・ロバン症候群、ヒルシュスプル
ング病、クーセフ症候群、グレーンジ閉塞性動脈症候群、カーンズ・セイヤ症候群、カル
タゲナー症候群、アラジール症候群、リッチャー・スキンゼル症候群、アイブマーク症候
群、ヤング・シンプソン症候群、ヘモクロマトーシス、ホルツグリーブ症候群、バース症
候群、スミス・レムリ・オピッツ症候群、グリコーゲン蓄積症、ゴーシェ様蓄積症、ファ
ブリー病、ローリー・マクリーン症候群、レット症候群、オピッツ症候群、マルファン症
候群、ミラー・ディーカー脳回欠損症候群、ムコ多糖症、ブルガダ症候群（Ｂｒｕａｄａ
ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、上腕骨脊椎異骨症、ファバー症候群、マクドナー症候群、マルフ
ァン様過可動症候群、無トランスフェリン血症、コルネリア・デ・ランジェ症候群、レオ
パード症候群、ダイアモンド・ブラックファン貧血、スタインフェルド症候群、早老症お
よびウイリアムズ・ボイレン症候群が挙げられる。これらの疾患全てを本発明に従って処
置することができる。
【０１６５】
抗アポトーシス因子を骨格筋、横隔膜筋および／または心筋に送達して、筋消耗性疾患
、肢虚血、心筋梗塞、心不全、冠動脈疾患および／またはＩ型糖尿病もしくはＩＩ型糖尿
病を処置することができる。
【０１６６】
骨格筋に送達することができる核酸として、損傷した、変性したおよび／または萎縮し
た骨格筋の処置に有効である核酸が挙げられる。筋ジストロフィーを引き起こす遺伝子欠
陥が多くの型の疾患で既知である。この欠陥遺伝子により、タンパク質産物を産生するこ
とができない、適切に機能することができないタンパク質産物が産生される、または細胞
の適切な機能を妨げる機能不全のタンパク質産物が産生される。異種核酸は、機能不全の
タンパク質の産生または活性を阻害する治療上機能的なタンパク質またはポリヌクレオチ
ドをコードすることができる。（例えばＲＮＡｉ、マイクロＲＮＡまたはアンチセンスＲ
ＮＡの送達により）送達された核酸から発現され得るまたは送達された核酸により阻害さ
れ得るポリペプチドとして、ジストロフィン、ミニジストロフィンまたはマイクロジスト
ロフィン（デュシェンヌ型ＭＤおよびベッカー型ＭＤ）；ジストロフィン関連糖タンパク
質β−サルコグリカン（肢帯型ＭＤ  ２Ｅ）、δ−サルコグリカン（肢帯型ＭＤ  ２  ２
Ｆ）、α−サルコグリカン（肢帯型ＭＤ  ２Ｄ）およびγ−サルコグリカン（肢帯型ＭＤ
２Ｃ）、ユートロフィン、カルパイン（常染色体劣性の肢帯型ＭＤタイプ２Ａ）、カベ
オリン−３（常染色体優性の肢帯型ＭＤ）、ラミニン−アルファ２（メロシン欠損型の先
天性ＭＤ）、ミニアグリン（ラミニン−アルファ２欠損型の先天性ＭＤ）、フクチン（福
山型の先天性ＭＤ）、エメリン（（エメリ・ドレフュス型ＭＤ）、ミオティリン、ラミン
Ａ／Ｃ、カルパイン−３、ジスフェリンならびに／またはテレソニンが挙げられるがこれ
らに限定されない。さらに、異種核酸は、ｍｉｒ−１、ｍｉｒ−１３３、ｍｉｒ−２０６
、ｍｉｒ−２０８またはアンチセンスＲＮＡ、ＲＮＡｉ（例えばｓｉＲＮＡもしくはｓｈ
ＲＮＡ）またはマイクロＲＮＡをコードして、欠損したジストロフィン遺伝子でのエクソ
ンスキッピングを誘発することができる。
【０１６７】
特定の実施形態では、（例えばジストロフィー性の舌を処置するために）核酸を舌筋に
送達する。舌に送達する方法は、直接注入、経口投与、舌への局所投与、静脈内投与、関
節内投与等を含む当分野で既知の任意の方法によることができる。
【０１６８】
上述のタンパク質を横隔膜筋に投与して筋ジストロフィーを処置することもできる。
【０１６９】
また、任意の他の治療用ポリペプチドをコードする遺伝子導入用ベクターを投与するこ
とができる。
【０１７０】
特定の実施形態では、本発明に係るウイルスベクターを使用して、本明細書に記載した
目的の核酸を骨格筋、横隔膜筋および／または心筋に送達して、例えば、これらの組織の
１つまたは複数と関連する疾患、例えば筋ジストロフィー、心疾患（ＰＡＤおよびうっ血
性心不全等）等を処置する。
【０１７１】
遺伝子移入は、病状の理解および治療の提供における実質的に潜在的な用途を有する。
欠損遺伝子が既知でありクローニングされている遺伝病が数多く存在する。一般に、上記
の病状は以下の２つのクラスに分けられる。一般に劣性遺伝する（通常は酵素の）欠乏状
態、および調節タンパク質または構造タンパク質に関わる可能性があり、典型的には優性
遺伝する不均衡状態。欠乏状態の疾患の場合、遺伝子導入を使用することにより、補充療
法を目的として正常な遺伝子を患部組織に導くことができ、および阻害性ＲＮＡ、例えば
ＲＮＡｉ（例えばｓｉＲＮＡもしくはｓｈＲＮＡ）、マイクロＲＮＡまたはアンチセンス
ＲＮＡを使用して疾患の動物モデルを創製することができる。不均衡の病状の場合、遺伝
子導入を使用することにより、モデルシステムで病状を創製し、次いで病状に拮抗するた
めに使用することができる。そのため、本発明に係るウイルスベクターは遺伝性疾患の処
置を可能にする。本明細書で使用する場合、病状は、疾患を引き起こすまたは疾患をより
重症にする欠乏症または不均衡を部分的にまたは完全に治療することにより処置される。
核酸配列の部位特異的な組換えを使用して変異を引き起こすまたは欠損を訂正することも
可能である。
【０１７２】
本発明に係るウイルスベクターを用いて、アンチセンス核酸または阻害性ＲＮＡ（例え
ばマイクロＲＮＡまたはＲＮＡｉ、例えばｓｉＲＮＡもしくはｓｈＲＮＡ）をインビトロ
でまたはインビボで細胞に供給することもできる。標的細胞中での阻害性ＲＮＡの発現に
より、細胞による特定のタンパク質の発現が弱まる。したがって、阻害性ＲＮＡを投与し
て、それを必要とする対象において特定のタンパク質の発現を減少させることができる。
阻害性ＲＮＡをインビトロで細胞に投与して細胞生理学を調節することもでき、例えば細
胞培養システムまたは組織培養システムを最適化することもできる。
【０１７３】
さらなる態様として、本発明に係るウイルスベクターを使用して対象中で免疫応答を生
じさせることができる。この実施形態によれば、免疫原をコードする核酸を含むウイルス
ベクターを対象に投与することができ、対象により免疫原に対する能動的な免疫応答（任
意選択として防御免疫応答）が開始される。免疫原は上述した通りである。
【０１７４】
また、ウイルスベクターをエクスビボで細胞に投与することができ、変異細胞を対象に
投与する。異種核酸を細胞に導入して該細胞を対象に投与し、免疫原をコードする異種核
酸が任意選択的に発現させ、対象において該免疫原に対する免疫応答を誘発する。特定の
実施形態では、細胞は抗原提示細胞（例えば樹状細胞）である。
【０１７５】
「能動的な免疫応答」または「能動免疫」は、「免疫原との遭遇後における宿主の組織
および細胞の関与を特徴とする。それには、リンパ細網組織における免疫担当細胞の分化
および増殖が関与し、これらにより、抗体の合成もしくは細胞媒介反応性の発生またはそ
の両方に至る」。Ｈｅｒｂｅｒｔ  Ｂ．Ｈｅｒｓｃｏｗｉｔｚ、Ｉｍｍｕｎｏｐｈｙｓｉ
ｏｌｏｇｙ：Ｃｅｌｌ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｉｎｔｅｒａｃ
ｔｉｏｎｓ  ｉｎ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｆｏｒｍａｔｉｏｎ，ｉｎ  ＩＭＭＵＮＯＬＯＧ
Ｙ：ＢＡＳＩＣ  ＰＲＯＣＥＳＳＥＳ  １１７（Ｊｏｓｅｐｈ  Ａ．Ｂｅｌｌａｎｔｉ編
、１９８５）。換言すると、能動的な免疫応答は、感染またはワクチン接種による免疫原
への曝露後に宿主によって開始される。能動免疫を受動免疫と対比することができ、受動
免疫は「能動免疫された宿主から非免疫宿主への、予め形成された物質（抗体、移入因子
、胸腺移植片、インターロイキン−２）の移入」を介して起こる。同文献。
【０１７６】
「防御」免疫応答または「防御」免疫は本明細書で使用する場合、疾患の発生を予防す
るまたは低減するという点で、免疫応答が対象にある程度の利益を付与することを示す。
また、防御免疫応答または防御免疫は、疾患の処置に有用であり得、（例えば、癌もしく
は腫瘍の退縮を引き起こすことにより、および／または転移を予防することにより、およ
び／または転移性小結節の増殖を予防することにより）特に癌または腫瘍の処置で有用で
あり得る。処置の利益が該処置の任意の不利益を上回る限り、防御効果は完全であっても
よいし部分的であってもよい。
【０１７７】
癌細胞抗原を発現するウイルスベクター（もしくは免疫学的に類似の分子）または癌細
胞に対する免疫応答を引き起こす任意の他の免疫原の投与により、癌免疫療法を目的とし
て本発明に係るウイルスベクターを投与することもできる。例示として、癌細胞抗原をコ
ードする異種ヌクレオチド配列を含むウイルスベクターを投与することにより、対象中に
おいて癌細胞抗原に対して免疫応答を引き起こし、例えば、癌を有する患者を処置するこ
とができる。本明細書に記載したように、インビボまたはエクスビボ法を使用することに
より、ウイルスベクターを対象に投与することができる。
【０１７８】
本明細書で使用する場合、用語「癌」は腫瘍形成癌を包含する。同様に、用語「癌組織
」は腫瘍を包含する。「癌細胞抗原」は腫瘍抗原を包含する。
【０１７９】
用語「癌」は、当分野で理解されるその意味、例えば身体の遠位部位に広がる（すなわ
ち転移する）可能性がある組織の制御不能な増殖を有する。例示的な癌として、白血病、
リンパ腫（例えばホジキンリンパ腫および非ホジキンリンパ腫）、結腸直腸癌、腎癌、肝
癌、乳癌、肺癌、前立腺癌、精巣腫瘍、卵巣癌、子宮癌、子宮頚部癌、脳癌（例えば神経
膠腫および神経膠芽細胞腫）、骨癌、肉腫、黒色腫、頭頚部癌、食道癌、甲状腺癌等が挙
げられるがこれらに限定されない。本発明の実施形態では、本発明を実行して腫瘍形成癌
を処置および／または予防する。
【０１８０】
用語「腫瘍」はまた、例えば多細胞生物内での未分化細胞の異常な腫瘤として当分野で
理解される。腫瘍は悪性でもよいし良性でもよい。代表的な実施形態では、本明細書に開
示した方法を使用して、悪性腫瘍を予防および処置する。
【０１８１】
癌細胞抗原は上述されている。用語「癌を処置する」または「癌の処置」とは、癌の重
症度を低減するまたは癌を予防するもしくは少なくとも部分的に除去することを意図する
ものである。例えば、具体的な文脈において、これらの用語は、癌の転移を予防するまた
は低減するまたは少なくとも部分的に除去することを示す。さらに代表的な実施形態では
、これらの用語は、（例えば原発腫瘍の外科的切除後に）転移性小結節の増殖を予防する
または低減するまたは少なくとも部分的に除去することを示す。用語「癌の予防」または
「癌を予防する」とは、癌の発生率または発症を少なくとも部分的に除去するまたは低減
する方法を意図するものである。換言すると、対象における癌の発症または悪化を緩慢に
する、調節する、それらの確率もしくは可能性を低減する、または遅延させることができ
る。
【０１８２】
特定の実施形態では、癌を有する対象から細胞を取り出し、本発明に係るウイルスベク
ターと接触させることができる。次いで、改変細胞を対象に投与し、それにより癌細胞抗
原に対する免疫応答を誘発する。この方法は、インビボで十分な免疫応答を開始すること
ができない（すなわち、十分な量の促進抗体を産生することができない）免疫不全対象に
特に有利に用いられる。
【０１８３】
免疫調節サイトカイン（例えばα−インターフェロン、β−インターフェロン、γ−イ
ンターフェロン、ω−インターフェロン、τ−インターフェロン、インターロイキン−１
α、インターロイキン−１β、インターロイキン−２、インターロイキン−３、インター
ロイキン−４、インターロイキン５、インターロイキン−６、インターロイキン−７、イ
ンターロイキン−８、インターロイキン−９、インターロイキン−１０、インターロイキ
ン−１１、インターロイキン１２、インターロイキン−１３、インターロイキン−１４、
インターロイキン−１８、Ｂ細胞増殖因子、ＣＤ４０リガンド、腫瘍壊死因子−α、腫瘍
壊死因子−β、単球走化性タンパク質−１、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子およ
びリンフォトキシン）により免疫応答を増強することができることは当分野で既知である
。したがって、免疫調節サイトカイン（例えばＣＴＬ誘導性サイトカイン）をウイルスベ
クターと共に対象に投与することができる。
【０１８４】
当分野で既知の任意の方法によりサイトカインを投与することができる。外因性サイト
カインを対象に投与することができる、または適切なベクターを使用して、サイトカイン
をコードするヌクレオチド配列を対象に送達し、サイトカインをインビボで産生すること
ができる。
【０１８５】
ウイルスベクターは、研究目的で希突起神経膠細胞を標的とするのにさらに有用であり
、例えば、インビトロでのもしくは動物でのＣＮＳ機能の研究のために、または疾患の動
物モデルの創製および／もしくは研究での使用にさらに有用である。例えば、脱髄疾患の
動物モデルにおいて、ベクターを使用して異種核酸を希突起神経膠細胞に送達することが
できる。ウイルス（例えばセムリキウイルス、マウス肝炎ウイルスまたはタイラーマウス
脳脊髄炎ウイルス）の投与および化学物質（例えばクプリゾン、臭化エチジウムまたはリ
ゾレシチン）の投与が挙げられるがこれらに限定されない様々な方法により、動物モデル
で脱髄を誘発することができる。いくつかの実施形態では、実験的自己免疫性脳脊髄炎の
動物モデルでベクターを使用することもできる。例えば、カイナイト、ＳＩＮ−１、抗ガ
ラクトセレブロシドの投与または照射により、この状態を誘発することができる。その他
の実施形態では、ウイルスベクターを使用して毒剤または毒剤を産生する酵素（例えばチ
ミジンキナーゼ）を希突起神経膠細胞に特異的に送達して、細胞の一部または全てを死滅
させることができる。
【０１８６】
さらに、診断方法およびスクリーニング方法での本発明に係るウイルスベクターのさら
なる用途が見出され、これにより、目的の遺伝子が細胞培養システム中でまたは遺伝子導
入動物モデル中で過渡的にまたは安定的に発現される。例えば研究目的、産業目的または
商業目的のタンパク質産生を目的として核酸を送達するために本発明を実行することもで
きる。
【０１８７】
獣医学での応用および医学での応用の両方での本発明に係る組換えウイルスベクターの
用途が見出される。適切な対象（被験体）としてトリおよび哺乳動物の両方が含まれる。
本明細書で使用する場合、用語「トリ」には、ニワトリ、アヒル、ガチョウ、ウズラ、シ
チメンチョウ、キジ、オウム、インコが含まれるがこれらに限定されない。本明細書で使
用する場合、用語「哺乳動物」には、ヒト、霊長類非ヒト霊長類（例えばサルおよびヒヒ
）、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ブタ、ウマ、ネコ、イヌ、ウサギ、齧歯類（例えばラット、マ
ウス、ハムスター等）等が含まれるがこれらに限定されない。ヒト対象として、新生児、
乳幼児、児童および成人が挙げられる。任意選択的に、対象は本発明に係る方法を「必要
とする」。なぜならば、例えば、対象が本明細書に記載したものを含む障害を有するもし
くは対象に該疾患のリスクがあると考えられるからである、または本明細書に記載したも
のを含む核酸の送達により対象が利益を得るからである。例えば、特定の実施形態では、
対象は脱髄疾患もしくは脊髄損傷もしくは脳損傷を有する（もしくは有していた）、また
は対象にこれらのリスクがある。さらなる選択肢として、対象は実験動物および／または
疾患の動物モデルであり得る。
【０１８８】
特定の実施形態では、本発明は、薬学的に許容される担体中の本発明に係るウイルスベ
クターと、任意選択的にその他の薬剤、医薬品、安定化剤、緩衝剤、担体、アジュバント
、希釈剤等とを含む医薬組成物を提供する。注射では、担体は典型的には液体となる。そ
の他の投与の方法では、担体は固体でもよいし液体でもよい。吸入投与では、担体は呼吸
に適し、好ましくは固体または液体粒子形態となる。
【０１８９】
「薬学的に許容される」とは、毒性ではないまたはそれ以外の望ましくはないものでは
ない材料を意味し、すなわち、任意の望ましくない生物学的影響を引き起こすことなく材
料を対象に投与することができる。
【０１９０】
本発明の一態様は、ヌクレオチド配列をインビトロで細胞へ移入する方法である。特定
の標的細胞に適した標準的な形質導入法により、感染の適切な多重度でウイルスベクター
を細胞に導入することができる。投与するウイルスベクターまたはカプシドの力価は、標
的細胞の型および数、ならびに具体的なウイルスベクターまたはカプシドに応じて異なる
ことができ、過度の実験を行なうことなく当業者により決定され得る。特定の実施形態で
は、少なくとも約１０３感染単位を、より好ましくは少なくとも約１０５感染単位を細胞
に導入する。
【０１９１】
ウイルスベクターを導入することができる細胞は、神経細胞（末梢神経系、中枢神経系
、特に脳細胞、例えば神経細胞、希突起神経膠細胞、グリア細胞、星状膠細胞を含む）、
肺細胞、眼の細胞（網膜細胞、網膜色素上皮および角膜細胞を含む）、上皮細胞（例えば
腸上皮細胞および呼吸上皮細胞）、骨格筋細胞（筋芽細胞、筋管および筋繊維を含む）、
横隔膜筋細胞、樹状細胞、膵臓細胞（島細胞を含む）、肝細胞、消化管の細胞（平滑筋細
胞、上皮細胞を含む）、心臓細胞（心筋細胞を含む）、骨細胞（例えば骨髄幹細胞）、造
血幹細胞、脾臓細胞、角化細胞、線維芽細胞、内皮細胞、前立腺細胞、関節細胞（例えば
軟骨、半月板、滑膜および骨髄を含む）、生殖細胞等が挙げられるがこれらに限定されな
い任意の種類であり得る。また、細胞は任意の前駆細胞であり得る。さらにまた、細胞は
幹細胞（例えば神経幹細胞、肝幹細胞）であり得る。さらにまた、細胞は癌細胞または腫
瘍細胞（上記に記載している癌および腫瘍）であり得る。さらに、上記に示したように、
細胞は任意の種類の起源由来であり得る。
【０１９２】
改変細胞を対象に投与する目的で、ウイルスベクターをインビトロで細胞に導入するこ
とができる。特定の実施形態では、対象から細胞を取り出し、細胞にウイルスベクターを
導入し、次いで細胞を対象内に戻す。エクスビボでの処置のために対象から細胞を取り出
し、続いて対象内に戻す方法は当分野で既知である（例えば米国特許第５，３９９，３４
６号を参照）。または、組換えウイルスベクターを、別の対象由来の細胞に、培養細胞に
、または任意のその他の適切な供給源由来の細胞に導入し、それを必要とする対象に該細
胞を投与する。
【０１９３】
エクスビボでの遺伝子治療に適した細胞は上記に記載した通りである。対象に投与する
細胞の投与量は、対象の年齢、状態および種、細胞型、細胞により発現される核酸、投与
の様式等に応じて異なることができる。典型的には、薬学的に許容される担体中、投与１
回当たり少なくとも約１０２〜約１０８個のまたは約１０３〜１０６個の細胞を投与する
ことができる。特定の実施形態では、ウイルスベクターにより形質導入された細胞を有効
量で、薬学的に許容される担体と共に対象に投与する。
【０１９４】
いくつかの実施形態では、ウイルスベクターにより形質導入されている細胞を投与して
、送達されたポリペプチド（例えば導入遺伝子として発現される、またはカプシド中で発
現される）に対する免疫応答を誘発することができる。典型的には、有効量のポリペプチ
ドを発現する量の細胞を、薬学的に許容される担体と共に投与する。任意選択的に、投与
量は防御免疫応答（上記で定義した）を引き起こすのに十分である。免疫原性ポリペプチ
ドを投与する利点が該投与の任意の不利益を上回る限り、付与される防御の程度が完全で
ある必要はない、または持続性である必要はない。
【０１９５】
本発明のさらなる態様は、本発明に係るウイルスベクターまたはカプシドを対象に投与
する方法である。特定の実施形態では、本方法は、目的の核酸を対象となる動物に送達す
る方法を含み、該方法は、有効量の、本発明に係るウイルスベクターを対象となる動物に
投与することを含む。当分野で既知の任意の手段により、それを必要とする対象となるヒ
トまたは動物に本発明に係るウイルスベクターを投与することができる。任意選択的に、
薬学的に許容される担体中のウイルスベクターを有効な用量で送達する。
【０１９６】
さらに、本発明に係るウイルスベクターを（例えばワクチンとして）対象に投与して、
免疫原性応答を誘発することができる。典型的には、本発明におけるワクチンは、有効量
のウイルスを薬学的に許容される担体と共に含む。任意選択的に、投与量は防御免疫応答
（上記で定義した）を引き起こすのに十分である。免疫原性ポリペプチドを投与する利点
が該投与の任意の不利益を上回る限り、付与される防御の程度が完全である必要はない、
または持続性である必要はない。対象および免疫原は上記に記載した通りである。
【０１９７】
対象に投与するウイルスベクターの投与量を、投与の様式、処置する疾患または状態、
個々の対象の状態、具体的なウイルスベクターおよび送達する核酸によって決めることが
でき、定常的な方法で決定することができる。治療効果を達成する例示的な用量は、少な
くとも約１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１０１０、１０１１、１０１２、１
０３、１０１４、１０１５形質導入単位またはより多くであり、好ましくは約１０７また
は１０８、１０９、１０１０、１０１１、１０１２、１０１３または１０１４形質導入単
位であり、さらにより好ましくは約１０１２形質導入単位である。
【０１９８】
特定の実施形態では、複数回の投与（例えば２回、３回、４回またはより多くの投与）
を用いて、様々な間隔の期間にわたり、例えば日毎に、週毎に、月毎に、年毎に等で所望
のレベルの遺伝子発現を達成することができる。
【０１９９】
投与の例示的な様式として、経口、直腸、経粘膜、局所、鼻腔内、（例えばエアロゾル
を介する）吸入、口腔（例えば舌下）、膣、髄腔内、眼内、経皮、子宮内（または卵内）
、非経口（例えば静脈内、皮下、皮内、筋肉内［骨格筋、横隔膜筋および／または心筋へ
の投与等］、皮内、胸腔内、脳内および関節内）、局所（例えば皮膚表面と気道表面を含
む粘膜表面との両方、および経皮投与）、リンパ管内等、ならびに組織または器官への（
例えば肝臓、骨格筋、心筋、横隔膜筋または脳への）直接注入が挙げられる。腫瘍（例え
ば腫瘍またはリンパ節の内部または近傍）に投与することもできる。いずれの場合であっ
ても、最も適切な経路を、処置する状態の性質および重症度、ならびに使用する具体的な
ベクターの性質によって決めることができる。
【０２００】
いくつかの実施形態では、ウイルスベクターをＣＮＳに、例えば脳または脊髄に直接投
与する。直接投与により、例えば形質導入細胞の少なくとも８０％が、８５％が、９０％
が、９５％がまたはより多くが希突起神経膠細胞である希突起神経膠細胞の形質導入の高
い特異性を得ることができる。当分野で既知の任意の方法を使用して、ベクターをＣＮＳ
に直接投与することができる。ベクターを、脊髄、脳幹（延髄、脳橋）、中脳（視床下部
、視床、視床上部、脳下垂体、松果体）、小脳、終脳（線条体、後頭部、側頭部、頭頂部
および前頭葉、皮質、基底核、海馬および扁桃体を含む大脳）、辺縁系、新皮質、線条体
、大脳ならびに下丘に導入することができる。ベクターを、眼の様々な領域、例えば網膜
、角膜または視神経に投与することもできる。ベクターをより分散して投与するために、
（例えば腰椎穿刺により）ベクターを脳脊髄液に送達することができる。
【０２０１】
送達ベクターを、髄腔内、脳内、脳室内、鼻腔内、耳内、眼内（例えば硝子体内、網膜
下、前房）送達および眼周囲（例えばサブテノン領域）送達またはこれらの任意の組み合
わせが挙げられるがこれらに限定されない当分野で既知の任意の経路でＣＮＳの所望の領
域に投与することができる。
【０２０２】
典型的には、ウイルスベクターを、直接注入（例えば定位的注入）により液剤でＣＮＡ
中における所望の領域または区画に投与することができる。いくつかの実施形態では、リ
ザーバおよび／またはポンプによってベクターを送達することができる。その他の実施形
態では、所望の領域への局所適用によりまたはエアロゾル剤の鼻腔内投与により、ベクタ
ーを供給することができる。液滴の局所適用により、眼にまたは耳中に投与することがで
きる。さらなる代替として、ベクターを固形の徐放剤として投与することができる。パル
ボウイルスおよびＡＡＶベクターの放出制御が国際公開第０１／９１８０３号に記載され
ている。
【０２０３】
対象が損なわれた血液脳関門（ＢＢＢ）を有するいくつかの実施形態では、ウイルスベ
クターを対象に全身的に（例えば静脈内に）送達することができ、ベクターは、ＢＢＢが
損なわれた（例えばＢＢＢと隣接する）領域における希突起神経膠細胞を形質導入する。
ある実施形態では、ベクターは損なわれた領域中の細胞を形質導入するが、損なわれてい
ない領域中の細胞を形質導入しない。そのため、本発明の一態様は、対象となる哺乳動物
において目的の核酸を、損なわれた血液脳関門領域と隣接するＣＮＳの領域に送達する方
法であって、有効量の、本発明に係るＡＡＶ粒子を静脈内投与することを含む方法に関す
る。
【０２０４】
いくつかの実施形態では、ＢＢＢにおける損傷（ｃｏｍｐｒｏｍｉｓｅ）は疾患または
障害に起因する。例として、神経変性疾患、例えばアルツハイマー、パーキンソン病、疾
患、筋萎縮性側索硬化症および多発性硬化症、てんかん、ＣＮＳ腫瘍または脳梗塞が挙げ
られるがこれらに限定されない。その他の実施形態では、ＢＢＢ損傷とは、例えば薬剤の
ＣＮＳへの送達を促進するための、誘発された崩壊であり得る。一時的なＢＢＢ損傷を、
例えば毒性化学物質（例えばメトラゾール、ＶＰ−１６、シスプラチン、ヒドロキシ尿素
、フルオロウラシルおよびエトポシド）、浸透圧剤（例えばマンニトールおよびアラビノ
ース）、生物学的薬剤（例えばレチノイン酸、酢酸ミリスチン酸ホルボール、ロイコトリ
エンＣ４、ブラジキニン、ヒスタミン，ＲＭＰ−７およびアルキルグリセロール）または
照射（例えば超音波照射もしくは電磁照射）により誘発することができる。
【０２０５】
本発明に係る骨格筋への投与として、四肢（例えば上腕、前腕、上腿および／もしくは
下腿）、背部、頚部、頭部（例えば舌）、胸部、腹部、骨盤／会陰部ならびに／または指
の骨格筋への投与が挙げられるがこれらに限定されない。適切な骨格筋組織として、（手
の）小指外転筋、（足の）小指外転筋、母指外転筋、第五中足骨外転筋（ａｂｄｕｃｔｏ
ｒ  ｏｓｓｉｓ  ｍｅｔａｔａｒｓｉ  ｑｕｉｎｔｉ）、短母指外転筋、長母指外転筋、
短内転筋、母趾内転筋、長内転筋、大内転筋、母指内転筋、肘筋、前斜角筋、膝関節筋、
上腕二頭筋、大腿二頭筋、上腕筋、腕橈骨筋、頬筋、烏口腕筋、皺眉筋、三角筋、口角下
制筋、下唇下制筋、顎二腹筋、（手の）背側骨間筋、（足の）背側骨間筋、短橈側手根伸
筋、長橈側手根伸筋、尺側手根伸筋、小指伸筋、指伸筋、短趾伸筋、長趾伸筋、短母趾伸
筋、長母趾伸筋、示指伸筋、短母指伸筋、長母指伸筋、橈側手根屈筋、尺側手根屈筋、（
手の）短小指屈筋、（足の）短小指屈筋、短趾屈筋、長趾屈筋、深指屈筋、浅指屈筋、短
母趾屈筋、長母趾屈筋、短母指屈筋、長母指屈筋、前頭筋、腓腹筋、オトガイ舌骨筋、大
臀筋、中臀筋、小臀筋、薄筋、頸腸肋筋、腰腸肋筋、腸骨筋（ｉｌｌｉａｃｕｓ）、下双
子筋、下斜筋、下直筋、棘下筋、棘間筋、横突間筋（ｉｎｔｅｒｔｒａｎｓｖｅｒｓｉ）
、外側翼突筋、外直筋、広背筋、口角挙筋、上唇挙筋、上唇鼻翼挙筋、上眼瞼挙筋、肩甲
挙筋、長回旋筋、頭最長筋、頸最長筋、胸最長筋、頭長筋、頸長筋、（手の）虫様筋、（
足の）虫様筋、咬筋、内側翼突筋、内直筋、中斜角筋、多裂筋、顎舌骨筋、下頭斜筋、上
頭斜筋、外閉鎖筋、内閉鎖筋、後頭筋、肩甲舌骨筋、小指対立筋、母指対立筋、眼輪筋、
口輪筋、掌側骨間筋、短掌筋、長掌筋、恥骨筋、大胸筋、小胸筋、短腓骨筋、長腓骨筋、
第三腓骨筋、梨状筋、底側骨間筋、足底筋、広頸筋、膝窩筋、後斜角筋、方形回内筋、円
回内筋、大腰筋、大腿方形筋、足底方形筋、前頭直筋、外側頭直筋、大後頭直筋、小後頭
直筋、大腿直筋、大菱形筋、小菱形筋、笑筋、縫工筋、最小斜角筋、半膜様筋、頭半棘筋
、頸半棘筋、胸半棘筋、半腱様筋、前鋸筋、短回旋筋、ヒラメ筋、頭棘筋、頸棘筋、胸棘
筋、頭板状筋、頸板状筋、胸鎖乳突筋、胸骨舌骨筋、胸骨甲状筋、茎突舌骨筋、鎖骨下筋
、肩甲下筋、上双子筋、上斜筋、上直筋、回外筋、棘上筋、側頭筋、大腿筋膜張筋、大円
筋、小円筋、胸部筋（ｔｈｏｒａｃｉｓ）、甲状舌骨筋、前脛骨筋、後脛骨筋、僧帽筋、
上腕三頭筋、中間広筋、外側広筋、内側広筋、大頬骨筋および小頬骨筋、ならびに当分野
で既知の任意の他の適切な骨格筋が挙げられるがこれらに限定されない。
【０２０６】
静脈内投与、動脈内投与、腹腔内投与、（脚および／もしくは腕の）分離式肢灌流（例
えばＡｒｒｕｄａ他、（２００５）Ｂｌｏｏｄ  １０５：３４５８〜３４６４を参照）な
らびに／または直接的な筋肉注射が挙げられるがこれらに限定されない任意の適切な方法
により、ウイルベクターを骨格筋に送達することができる。
【０２０７】
心筋への投与として、左心房、右心房、左心室、右心室および／または隔膜への投与が
挙げられるがこれらに限定されない。例えば、静脈内投与、動脈内投与、例えば大動脈内
投与、（例えば左心房中への、右心房中への、左心室中への、右心室中への）直接的な心
臓注射および／または冠動脈潅流等の当分野で既知の任意の方法により、ウイルスベクタ
ーを心筋に送達することができる。
【０２０８】
静脈内投与、動脈内投与および／または腹腔内投与等の任意の適切な方法により、横隔
膜筋に投与することができる。
【０２０９】
ウイルスベクターを含むデポー剤を送達することにより、これらの組織のいずれかへの
送達を達成することもでき、デポー剤は、骨格筋組織、心筋組織および／もしくは横隔膜
筋組織に埋め込むことができ、または該組織を、ウイルスベクターを含むフィルムまたは
その他のマトリックスと接触させることができる。そのような埋め込み可能なマトリック
スまたは基質の例が米国特許第７，２０１，８９８号に記載されている。
【０２１０】
特定の実施形態では、（例えば筋ジストロフィーまたは心疾患［例えばＰＡＤもしくは
うっ血性心不全］を処置するために）本発明に係るウイルスベクターを骨格筋、横隔膜筋
および／または心筋に投与する。
【０２１１】
本発明を使用して、骨格筋、心筋および／または横隔膜筋の障害を処置することができ
る。また、本発明を実行して、核酸を骨格筋、心筋および／または横隔膜筋に送達するこ
とができ、本発明は、通常は血液中を循環するタンパク質産物（例えば酵素）もしくは非
翻訳ＲＮＡ（例えばＲＮＡｉ、マイクロＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ）の産生用の、また
は疾患（例えば代謝障害、例えば糖尿病（例えばインスリン）、血友病（例えば第ＩＸ因
子もしくは第ＶＩＩＩ因子）またはリソソーム蓄積障害（例えばゴーシェ病［グルコセレ
ブロシダーゼ］、ポンペ病［リソソーム酸性α−グルコシダーゼ］またはファブリー病［
α−ガラクトシダーゼＡ］またはグリコーゲン蓄積障害（例えばポンペ病［リソソーム酸
性αグルコシダーゼ］）を処置するためのその他の組織への全身的送達用のプラットフォ
ームとして使用される。代謝障害の処置に適したその他のタンパク質は上記に記載されて
いる。
【０２１２】
代表的な実施形態では、本発明は、それを必要とする対象において筋ジストロフィーを
処置する方法であって、有効量の、本発明に係るウイルスベクターを対象となる哺乳動物
に投与することを含む方法を提供し、ウイルスベクターは、筋ジストロフィーを処置する
のに有効な異種核酸を含む。例示的な実施形態では、本方法は、有効量の、本発明に係る
ウイルスベクターを対象となる哺乳動物に投与することを含み、ウイルスベクターは、ジ
ストロフィン、ミニジストロフィン、マイクロジストロフィン、ユートロフィン、ミニユ
ートロフィン、ラミニン−α２、ミニアグリン、フクチン関連タンパク質、フォリスタチ
ン、ドミナントネガティブミオスタチン、α−サルコグリカン、β−サルコグリカン、γ
−サルコグリカン、δ−サルコグリカン、ＩＧＦ−１、ミオスタチンプロペプチド、アク
チビンＩＩ型可溶性受容体、抗炎症性ポリペプチド、例えばＩカッパＢ優性変異体、サル
コスパン、ミオスタチンまたはミオスタチンプロペプチドに対する抗体または抗体フラグ
メント、またはミオスタチンに対する阻害性ＲＮＡ（例えばアンチセンスＲＮＡ、マイク
ロＲＮＡもしくはＲＮＡｉ）、ｍｉｒ−１、ｍｉｒ−１３３、ｍｉｒ−２０６、ｍｉｒ−
２０８、または欠陥ジストロフィン遺伝子でのエクソンスキッピングを誘発するための阻
害性ＲＮＡ（例えばマイクロＲＮＡ、ＲＮＡｉもしくはアンチセンスＲＮＡ）をコードす
る異種核酸を含む。特定の実施形態では、本明細書の他の箇所で記載したようにウイルス
ベクターを骨格筋、横隔膜筋および／または心筋に投与することができる。
【０２１３】
本発明は、それを必要とする対象において代謝障害を処置する方法をさらに包含する。
代表的な実施形態では、本方法は、有効量の、本発明に係るウイルスベクターを対象の骨
格筋に投与することを含み、ウイルスベクターはポリペプチドをコードする異種核酸を含
み、代謝障害は、ポリペプチドの欠乏および／またな欠損の結果である。例示的な代謝障
害とポリペプチドをコードする異種核酸とは本明細書に記載されている。さらなる選択肢
として、異種核酸は分泌タンパク質をコードすることができる。本発明を実行して、全身
的送達用の阻害性ＲＮＡ（例えばアンチセンスＲＮＡ、マイクロＲＮＡまたはＲＮＡｉ）
を産生することもできる。
【０２１４】
本発明はまた、それを必要とする対象において先天性心不全を処置する方法であって、
有効量の、本発明に係るウイルスベクターを対象となる哺乳動物に投与することを含む方
法も提供し、ウイルスベクターは、先天性心不全を処置するのに有効な異種核酸を含む。
代表的な実施形態では、本方法は、有効量の、本発明に係るウイルスベクターを対象とな
る哺乳動物に投与することを含み、ウイルスベクターは、筋小胞体Ｃａ２＋−ＡＴＰアー
ゼ（ＳＥＲＣＡ２ａ）、血管新生因子、ホスホランバン、ＰＩ３キナーゼ、カルサルシン
（ｃａｌｓａｒｃａｎ）、β−アドレナリン受容体キナーゼ（βＡＲＫ）、βＡＲＫｃｔ
、タンパク質ホスファターゼ１の阻害因子１、Ｐｉｍ−１、ＰＧＣ−１α、ＳＯＤ−１、
ＳＯＤ−２、ＥＣ−ＳＯＤ、カリクレイン、ＨＩＦ、チモシン−β４、Ｓ１００Ａ１、パ
ルブアルブミン、アデニリルシクラーゼ６型、Ｇタンパク質共役受容体キナーゼ２型ノッ
クダウンをもたらす分子、例えば短縮型の構成的に活性なｂＡＲＫｃｔ；ホスホランバン
阻害分子またはドミナントネガティブ分子、例えばホスホランバンＳ１６Ｅ、ｍｉｒ−１
、ｍｉｒ−１３３、ｍｉｒ−２０６、ｍｉｒ−２０８をコードする異種核酸を含む。
【０２１５】
注射剤を、溶液または懸濁液、注射前に溶液または懸濁液に適した固形状として、また
はエマルションとしてのいずれかの従来の形態で調製することができる。また、ウイルス
ベクターを例えばデポー剤または徐放性製剤で全身的な様式ではなくて局所に投与するこ
とができる。さらに、（例えば米国特許第７，２０１，８９８号に記載されているように
）ウイルスベクターを、例えば骨移植代替物、縫合糸、ステント等の外科的に埋め込み可
能なマトリックスに乾燥して送達することができる。
【０２１６】
経口投与に適した医薬組成物を、それぞれ所定の量の本発明に係る組成物を含有するカ
プセル、カシェ剤、ロゼンジ剤もしくはタブレット等の個別の単位で；粉末または顆粒と
して；水性のもしくは非水性の液体の溶液もしくは懸濁液として；または水中油型のもし
くは油中水型のエマルションとして提供することができる。本発明に係るウイルスベクタ
ーと動物の腸内において消化酵素による分解に耐えることが可能な担体との複合体化によ
り、経口送達を行なうことができる。そのような担体の例として、当分野で既知であるよ
うにプラスチックカプセルまたはタブレットが挙げられる。そのような製剤を薬学の任意
の適切な方法により調製し、該方法は、組成物と、（上記で述べた１種または複数の副成
分を含有することができる）好適な担体とを結合させる工程を含む。一般に、組成物と液
体の担体もしくは微粉化した固体の担体またはその両方とを均一にかつ密接に混合し、次
いで、必要な場合には得られた混合物を成形することにより、本発明の実施形態に係る医
薬組成物を調製する。例えば、組成物と任意選択的に１種または複数の副成分とを含有す
る粉末または顆粒を圧縮するまたは成型することにより、タブレットを調製することがで
きる。結合剤、潤滑剤、不活性希釈剤および／または界面活性剤／分散剤と任意選択的に
混合した、粉末または顆粒等の易流動形態の組成物を適切な機械中で圧縮することにより
、圧縮タブレットを調製する。不活性な液体結合剤で湿らせた粉末状化合物を適切な機械
中で成型することにより、成型タブレットを作製する。
【０２１７】
頬側（舌下）投与に適した医薬組成物として、通常はスクロースおよびアラビアゴムま
たはトラガントである風味付け基剤中に本発明に係る組成物を含むロゼンジ剤；ならびに
ゼラチンおよびグリセリンまたはスクロースおよびアカシアゴム等の不活性基剤中に組成
物を含むパステル剤が挙げられる。
【０２１８】
非経口投与に適した医薬組成物は、本発明に係る組成物の無菌の水性注射液および非水
性注射液を構成することができ、これらの調製液は、対象の受容者の血液と任意選択的に
等張である。これらの調製液は、組成物と対象の受容者の血液とを等張にする抗酸化剤、
緩衝剤、静菌薬および溶液を含有することができる。水性のおよび非水性の無菌の懸濁液
、溶液およびエマルションは、懸濁剤および増粘剤を含むことができる。非水性溶媒の例
は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油等の植物油、オレイン
酸エチル等の注射可能な有機エステルである。水性担体として、水、アルコール性／水性
の溶液、食塩水および緩衝媒体を含むエマルションまたは懸濁液が挙げられる。非経口媒
体として、塩化ナトリウム溶液、リンゲルデキストロース（Ｒｉｎｇｅｒ’ｓ  ｄｅｘｔ
ｒｏｓｅ）、デキストロースおよび塩化ナトリウム、乳酸化リンゲル（ｌａｃｔａｔｅｄ
Ｒｉｎｇｅｒ’ｓ）または不揮発性油が挙げられる。静脈内媒体として、流体および栄
養補充液、電解質補充液（例えばリンゲルデキストロースをベースとするもの）等が挙げ
られる。例えば抗菌剤、抗酸化剤、キレート剤および不活性ガス等の、防腐剤およびその
他の添加剤が存在することもできる。
【０２１９】
組成物は、単位／用量のまたは複数回用量の容器中の状態で、例えば密封したアンプル
およびバイアル中の状態で存在することができ、使用直前に無菌の液体担体、例えば食塩
水または注射用水の添加のみを必要とするフリーズドライした（凍結乾燥した）状態で貯
蔵され得る。
【０２２０】
即時注射用の溶液および懸濁液を、上記した種類の無菌の粉末、顆粒およびタブレット
から調製することができる。例えば、密封した容器中における単位剤形の形態で、本発明
に係る注射可能な安定した無菌の組成物を提供することができる。組成物を凍結乾燥した
形態で提供することができ、該組成物を適切な薬学的に許容される担体と再構成して対象
への注射に適した液体組成物を形成することができる。単位剤形は、約１μｇ〜約１０グ
ラムの本発明に係る組成物であり得る。組成物が実質的に水不溶性である場合、十分な量
の生理的に許容される乳化剤が、水性担体中で組成物を乳化させるのに十分な量で含有さ
れ得る。そのような有用な乳化剤の一つはホスファチジルコリンである。
【０２２１】
直腸投与に適した医薬組成物が単位用量の座薬として存在することができる。組成物と
例えばカカオ脂等の１種または複数の従来の固体担体とを混合し、次いで得られた混合物
を成形することにより、この座薬を調製することができる。
【０２２２】
皮膚への局所投与に適した本発明に係る医薬組成物は、軟膏、クリーム、ローション、
ペースト、ゲル、スプレー、エアロゾルおよび／またはオイルの形態を取ることができる
。使用することができる担体として、ワセリン、ラノリン、ポリエチレングリコール、ア
ルコール、経皮エンハンサーおよびこれらの２種以上の組み合わせが挙げられるがこれら
に限定されない。いくつかの実施形態では、例えば本発明に係る医薬組成物と皮膚を通過
可能な親油性試薬（例えばＤＭＳＯ）とを混合することにより、局所送達を行なうことが
できる。
【０２２３】
経皮投与に適した医薬組成物は、長時間にわたり対象の表皮に密接させた状態で保つの
に適した個別パッチの形態であり得る。経皮投与に適した組成物をイオン導入（例えばＰ
ｈａｒｍ．Ｒｅｓ．３：３１８（１９８６）を参照）により送達することもでき、該組成
物は任意選択的に緩衝した本発明に係る組成物の水溶液の形態を典型的にはとる。適切な
製剤は、クエン酸塩緩衝液もしくはビス／トリス緩衝剤（ｐＨ６）またはエタノール／水
を含むことができ、０．１〜０．２Ｍの活性成分を含有することができる。
【０２２４】
任意の適切な手段により、例えば、対象が吸入する、ウイルスベクターから構成される
呼吸用粒子のエアロゾル懸濁液を投与することにより、本明細書中に開示したウイルスベ
クターを対象の肺に投与することができる。吸入用粒子は液体または固体であり得る。当
業者に既知であるように、任意の適切な手段により、例えば圧力駆動式のエアロゾル噴霧
器または超音波噴霧器により、ウイルスベクターを含む液体粒子のエアロゾルを産生する
ことができる。例えば米国特許第４，５０１，７２９号を参照。ウイルスベクターを含む
固体粒子のエアロゾルも同様に、製薬分野で既知の技法により、任意の固体粒子の薬剤エ
アロゾル発生器により産生することができる。
【０２２５】
ＩＶ．末梢組織を標的とするためのＡＡＶカプシドの使用
本発明に係るＡＡＶカプシドおよびベクターは、末梢器官および末梢組織について完全
に脱標的化しているまたはほぼ完全に脱標的化していることが実証されている（図４を参
照）。この脱標的化により、所望の向性プロファイルを生じさせるために、例えば特定の
器官および組織を標的とし、かつ／またはその他の器官および組織を脱標的化するために
変更され得る「ブランク」ベクターとして理想的なベクターが作製される。そのため、本
発明の一態様は、目的の向性プロファイルを有するＡＡＶカプシドを調製する方法であっ
て、本発明に係るＡＡＶカプシドを改変して、目的の向性プロファイルをもたらすアミノ
酸配列を挿入することを含む方法に関する。いくつかの実施形態では、目的の向性プロフ
ァイルは、骨格筋、心筋、横隔膜、腎臓、肝臓、膵臓、脾臓、消化管、肺、関節組織、舌
、卵巣、精巣、生殖細胞、癌細胞もしくはそれらの組み合わせから選択される組織に対し
て選択的に増強され、かつ／または肝臓、卵巣、精巣、生殖細胞もしくはそれらの組み合
わせに対して選択的に低減される。
【０２２６】
特異的な標的化配列および脱標的化配列の例は当分野で既知である。一例は、ヘパリン
を有するいずれかの血清型の相互作用に関与すると思われる連続した基本的なフットプリ
ントに対する優先的な肝臓向性の分子基盤であり、該分子基盤はＡＡＶ２およびＡＡＶ６
の場合にマッピングされている。特に、ＡＡＶ６上の単一のリシン残基（Ｋ５３１）がヘ
パリン結合能を左右し、その結果として肝臓向性を左右することが既に実証されている。
推論では、リシン残基を有するその他の血清型上の対応するグルタミン酸／アスパラギン
酸残基の置換変異性生成により、場合によってはカプシド表面上の最小の連続的した基本
的なフットプリントを形成することによってヘパリン結合が付与される。別の例は、その
全体が参照により本明細書に援用される国際公開第２０１２／０９３７８４号で開示され
ている３回転軸ループ（ｔｈｒｅｅ−ｆｏｌｄ  ａｘｉｓ  ｌｏｏｐ）４の変化を含むカ
プシド変異体である。この変異体は、（ｉ）肝臓の形質導入の低減、（ｉｉ）内皮細胞を
横切る移動の増強、（ｉｉｉ）全身的な形質導入、（ｉｖ）筋肉組織（例えば骨格筋、心
筋および／もしくは横隔膜筋）の形質導入の増強、ならびに／または（ｖ）脳組織（例え
ば神経）の形質導入の低減を含む１つまたは複数の特性を示す。その他の向性配列がＬｉ
他、（２０１２）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．８６：７７５２〜７７５９、Ｐｕｌｉｃｈｅｒｌａ他
、（２０１１）Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．１９：１０７０〜１０７８、Ｂｏｗｌｅｓ他、（２０
１２）Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．２０：４４３〜４５５、Ａｓｏｋａｎ他、（２０１２）Ｍｏｌ
．Ｔｈｅｒ．２０：６９９〜７０８およびＡｓｏｋａｎ他、（２０１０）Ｎａｔｕｒｅ  
Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２８：７９〜８２に記載されており、それぞれはその全体が参照
により援用される。
【０２２７】
いくつかの実施形態では、所望の向性プロファイルを有する改変カプシドを同定するた
めのＤＮＡスクランブリングおよび／または指向性進化により、本発明に係るＡＡＶカプ
シドを改変することができる。ＡＡＶカプシドのＤＮＡスクランブリングおよび指向性進
化に関する技法は国際公開第２００９／１３７００６号に記載されており、その全体が参
照により本明細書に援用される。
【０２２８】
本発明を説明してきたが、本発明を以下の実施例でより詳細に説明することができ、実
施例は例示目的のみで本明細書に記載されており、本発明を限定すること意図するもので
はない。
【実施例】
【０２２９】
［実施例１：ＢＮＰ６１  ＡＡＶクローンの発見および特徴付け］
変異体ＤＮＡシャフリングしたＡＡＶカプシドライブラリを、パーキンソン病のラット
モデルに静脈注射し、３日後の細胞を尾状核から分離した。ＰＣＲレスキューを使用する
と、単一クローンが出現した（ＢＮＰ６１）。追加のシャフリングおよび選別でも同じク
ローンを得た。図１に示すように、このクローンは、いくつかのＡＡＶ血清型のキメラで
ある。
【０２３０】
このＢＮＰ６１クローンのラットの脳への直接注入により、驚くべき細胞の形質導入パ
ターンが生じた。これまでの知見では、遺伝子発現が構成的プロモーターにより駆動され
る場合には、ほとんど全ての多様なＡＡＶ血清型およびキメラは神経細胞に対して９５％
超の向性を示す。これとは大いに異なり、ＢＮＰ６１は、星状膠細胞（アストロサイト）
またはミクログリアの形質導入の所見を呈することなく、神経細胞の最小の形質導入を示
し、希突起神経膠細胞（オリゴデンドロサイト）に対して９５％超の向性を示した（図２
Ａ〜２Ｃ）。図２Ａは、ＢＮＰ６１−ＣＢｈ−ＧＦＰベクターの注入後１週目のラットの
尾状核におけるＧＦＰ陽性希突起神経膠細胞を示す。ここで、ＧＦＰ陽性の神経細胞がな
いことに留意すべきである。図２Ｂは、希突起神経膠細胞の形態を明瞭に示す、より高い
倍率を示し、図２Ｃは、星状膠細胞に対する細胞マーカーであるＧＦＡＰ（赤色）と共存
するＧＦＰ陽性細胞がないことを示す。
【０２３１】
また、初代の希突起神経膠細胞培養では、ＢＮＰ６１は希突起神経膠細胞を形質導入す
るが、下層の星状膠細胞を形質導入しない（図３Ａ〜３Ｂ）。１０日目の混合グリア培養
物を１００ウイルス粒子のＭＯＩ（感染多重度）でＢＮＰ６１−ＧＦＰにより形質導入し
、７２時間後に画像を取得した。図３Ａは、グリア培養物の明画像である。図３Ｂは、図
３Ａと同じフレームから取得したＡＡＶ  ＧＦＰ陽性細胞の蛍光画像である。下層の星状
膠細胞は形質導入されず、ほとんど全てのＧＦＰ発現細胞は形態学的に希突起神経膠細胞
として現れている。矢印は、希突起神経膠細胞の前駆培養形態と一致するプロセスを示す
短焦点の希突起神経膠細胞を示す。そのため、ＢＮＰ６１  ＡＡＶベクターは、これまで
に特徴付けられているその他のＡＡＶベクターと明らかに異なる特性を示す。
【０２３２】
末梢性の体内分布を評価するために、ＢＮＰ６１−ＣＢｈ−ＧＦＰベクターをマウスに
静脈内投与し、その後に末梢器官を採取した。特に示している場合を除き、全てのマウス
に成体として５×１０１０ｖｇを注入した。新生児マウスには２．５×１０１０ｖｇを注
入した。注入後１０日目に成体マウスを屠殺し、注入後４週目に新生児マウスを屠殺した
。＊は、試験しなかったサンプルを示す。凡例では、各ベクターに関する動物の数を丸括
弧内に示す。エラーバーは標準誤差である。図４に示すように、いずれの末梢器官におい
てもＢＮＰ６１が蓄積しなかった。
【０２３３】
［実施例２：ＢＮＰ６１は損なわれた（ｃｏｍｐｒｏｍｉｓｅｄ）血液脳関門を通過する
］
最初の選択ラウンドの後に、ＢＮＰ６１クローンをＧＦＰでパッケージングし、組換え
ウイルスを産生した。次いで、６−ＯＨＤＡ処置後２週目に、組換えウイルスを８×１０
１１個のベクターゲノム／ｋｇの用量で静脈投与した。１ヶ月後に、ラットを屠殺して脳
を切開した。この処置後２週のラットでは、６−ＯＨＤＡ処置線条体内の突起神経膠細胞
およびいくつかの神経細胞で実質的な遺伝子発現が見られたが（図５）、一方で、対側線
条体、皮質における注入管（ｉｎｊｅｃｔｏｒ  ｔｒａｃｔ）または遠位の脳構造では遺
伝子発現が見られなかった。孤立したＮｅｕＮ陽性神経細胞を取り囲む多くの希突起神経
膠細胞とのＮｅｕＮ共存の欠如に留意すべきである（図５）。そのため、静脈内投与後に
、この新規のＡＡＶクローンは６−ＯＨＤＡで損なわれた血液脳関門を通過する能力を示
すが、損傷を受けていない（ｉｎｔａｃｔ）血液脳関門を通過する能力を示さないと考え
られる。
【０２３４】
［実施例３：希突起神経膠細胞を標的としたさらなるクローンの生成］
実施例１に記載した同じＡＡＶ  ＤＮＡカプシドシャフリングおよびインビボの指向性
進化プロセスを使用して、希突起神経膠細胞を標的とした２種のさらなるクローンＢＮＰ
６２およびＢＮＰ６３を同定した。図１に示すように、またＢＮＰ６１と同様に、これら
のクローンはいくつかのＡＡＶ血清型のキメラである。これらのクローン間のアミノ酸配
列の同一性を表２に示す。３種のクローン全ては、アミノ酸レベルで互いに９５％を超え
る同一性を有する。
【０２３５】
【表２】
2019000114.tif 000008
【０２３６】
図６は、ラットの梨状皮質においてＢＮＰ６３クローンが希突起神経膠細胞を形質導入
することを示す。ＢＮＰ６３形質導入細胞（緑色）は、星状膠細胞の細胞マーカー（ＧＦ
ＡＰ、赤色）と共存しない。また、形質導入細胞は、明瞭な希突起神経膠細胞の形態を示
す。
【０２３７】
前述は本発明を例示するものであり、本発明を限定すると解釈すべきではない。本発明
は、以下の特許請求の範囲によって定義され、特許請求の均等物は特許請求の範囲に含ま
れるべきである。
【図１】
2019000114.tif 000009
【図２】
2019000114.tif 000010
【図３】
2019000114.tif 000011
【図４】
2019000114.tif 000012
【図５】
2019000114.tif 000013
【図６】
2019000114.tif 000014
【手続補正書】
【提出日】平成30年9月10日(2018.9.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
２５個以下のアミノ酸置換、欠失および／または挿入を有する配列番号２〜４のうちの１つに示すアミノ酸配列を含む、アデノ随伴ウイルスカプシド。
【請求項２】
配列番号２〜４のうちの１つと少なくとも９６％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１に記載のアデノ随伴ウイルスカプシド。
【請求項３】
配列番号２〜４のうちの１つと少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１または２に記載のアデノ随伴ウイルスカプシド。
【請求項４】
アミノ酸置換、欠失および／または挿入を伴わない配列番号２〜４のうちの１つのアミノ酸配列を含む、請求項１に記載のアデノ随伴ウイルスカプシド。
【請求項５】
ＤＮＡ分子、ＲＮＡ分子、ポリペプチド、炭水化物、脂質および有機小分子からなる群から選択される化合物に共有結合で連結しているか、結合しているか、または前記化合物をカプシド形成している、請求項１〜４のいずれか１項に記載のアデノ随伴ウイルスカプシド。
【請求項６】
アデノ随伴ウイルスベクターゲノムと、
請求項１〜５のいずれか１項に記載のアデノ随伴ウイルスカプシドと
を含み、前記アデノ随伴ウイルスカプシドは前記アデノ随伴ウイルスベクターゲノムをカプシド形成している、アデノ随伴ウイルス粒子。
【請求項７】
前記アデノ随伴ウイルスベクターゲノムが異種核酸を含む、請求項６に記載のアデノ随伴ウイルス粒子。
【請求項８】
前記異種核酸がアンチセンスＲＮＡ、マイクロＲＮＡまたはＲＮＡｉをコードする、請求項７に記載のアデノ随伴ウイルス粒子。
【請求項９】
前記異種核酸がポリペプチドをコードする、請求項７に記載のアデノ随伴ウイルス粒子。
【請求項１０】
前記異種核酸が治療用ポリペプチドをコードする、請求項９に記載のアデノ随伴ウイルス粒子。
【請求項１１】
前記異種核酸が増殖因子または分化因子をコードする、請求項９に記載のアデノ随伴ウイルス粒子。
【請求項１２】
前記異種核酸がインスリン増殖因子−１、グリア由来神経栄養因子、ニューロトロフィン−３、アルテミン、形質転換増殖因子アルファ、血小板由来増殖因子、白血病抑制因子、プロラクチン、モノカルボン酸トランスポーター１または核内因子１Ａをコードする、請求項９に記載のアデノ随伴ウイルス粒子。
【請求項１３】
前記異種核酸がレポータータンパク質をコードする、請求項９に記載のアデノ随伴ウイルス粒子。
【請求項１４】
前記異種核酸が構成的プロモーターに作動可能に連結している、請求項７〜１３のいずれか１項に記載のアデノ随伴ウイルス粒子。
【請求項１５】
前記異種核酸が、希突起神経膠細胞に特異的な、または希突起神経膠細胞に優先的なプロモーターに作動可能に連結している、請求項７〜１３のいずれか１項に記載のアデノ随伴ウイルス粒子。
【請求項１６】
前記希突起神経膠細胞に特異的な、または希突起神経膠細胞に優先的なプロモーターが、ミエリン塩基性タンパク質、環状ヌクレオチドホスホジエステラーゼ、プロテオリピドタンパク質、ＧｔｘまたはＳｏｘ１０から選択されるプロモーターである、請求項１５に記載のアデノ随伴ウイルス粒子。
【請求項１７】
請求項１〜５のいずれか１項に記載のアデノ随伴ウイルスカプシドをコードする核酸。
【請求項１８】
配列番号１のヌクレオチド配列と少なくとも９０％の同一性を有する、請求項１７に記載の核酸。
【請求項１９】
配列番号１のヌクレオチド配列と少なくとも９５％の同一性を有する、請求項１７に記載の核酸。
【請求項２０】
プラスミド、ファージ、ウイルスベクター、細菌人工染色体または酵母人工染色体である、請求項１７〜１９のいずれか１項に記載の核酸。
【請求項２１】
前記アデノ随伴ウイルスカプシドコード配列を含むアデノ随伴ウイルスベクターである、請求項１７〜２０のいずれか１項に記載の核酸。
【請求項２２】
アデノ随伴ウイルスのｒｅｐをコードする配列をさらに含む、請求項１７〜２１のいずれか１項に記載の核酸。
【請求項２３】
ゲノムに安定的に組み込まれた請求項１７〜２２のいずれか１項に記載の核酸を含む、インビトロの細胞。
【請求項２４】
請求項１７〜２２のいずれか１項に記載の核酸を含む、ウイルス粒子。
【請求項２５】
アデノ随伴ウイルス粒子、アデノウイルス粒子、ヘルペスウイルス粒子またはバキュロウイルス粒子である、請求項２４に記載のウイルス粒子。
【請求項２６】
アデノ随伴ウイルスカプシドを含む組換えアデノ随伴ウイルス粒子を産生する方法であって、
細胞にインビトロで、請求項１〜５のいずれか１項に記載のアデノ随伴ウイルスカプシドをコードする核酸、アデノ随伴ウイルスのｒｅｐをコードする配列、異種核酸を含むアデノ随伴ウイルスベクターゲノム、および増殖性のアデノ随伴ウイルス感染を生じさせるためのヘルパー機能を提供することと、
前記アデノ随伴ウイルスベクターゲノムをカプシド形成して、前記アデノ随伴ウイルスカプシドを含む前記組換えアデノ随伴ウイルス粒子を構築することと
を含む、方法。
【請求項２７】
請求項２６に記載の方法により産生された、アデノ随伴ウイルス粒子。
【請求項２８】
薬学的に許容される担体中に、１７〜２２のいずれか１項に記載の核酸、請求項２４または２５のいずれか１項に記載のウイルス粒子、請求項１〜５のいずれか１項に記載のアデノ随伴ウイルスカプシド、または請求項６〜１６もしくは２７のいずれか１項に記載のアデノ随伴ウイルス粒子を含む、医薬製剤。
【請求項２９】
目的の核酸を希突起神経膠細胞に送達する方法であって、前記希突起神経膠細胞を請求項６〜１６または２７のいずれか１項に記載のアデノ随伴ウイルス粒子と接触させることを含む、方法。
【請求項３０】
対象となる哺乳動物において目的の核酸を希突起神経膠細胞に送達する方法であって、
有効量の、請求項６〜１６もしくは２７のいずれか１項に記載のアデノ随伴ウイルス粒子または請求項２８に記載の医薬製剤を対象となる哺乳動物に投与すること
を含む、方法。
【請求項３１】
前記対象となる哺乳動物がヒトである、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記アデノ随伴ウイルス粒子を中枢神経系に送達する、請求項３０または３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記アデノ随伴ウイルス粒子を、髄腔内送達、脳内送達、心室内送達、鼻腔内送達、耳内送達、眼内送達もしくは眼周囲送達またはこれらの任意の組み合わせにより前記中枢神経系に直接送達する、請求項３０に記載の方法。
【請求項３４】
前記対象が損なわれた血液脳関門を有し、前記アデノ随伴ウイルス粒子を静脈内投与により前記中枢神経系に送達する、請求項３０に記載の方法。
【請求項３５】
対象となる哺乳動物において目的の核酸を損なわれた血液脳関門領域と隣接する中枢神経系の領域に送達する方法であって、
有効量の、請求項６〜１６もしくは２７のいずれか１項に記載のアデノ随伴ウイルス粒子または請求項２８に記載の医薬製剤を対象となる哺乳動物に静脈内投与すること
を含む、方法。
【請求項３６】
希突起神経膠細胞の機能不全を伴う障害を処置することを必要とする対象となる哺乳動物において該障害を処置する方法であって、治療有効量の、請求項６〜１６もしくは２７のいずれか１項に記載のアデノ随伴ウイルス粒子または請求項２８に記載の医薬製剤を対象となる哺乳動物に投与することを含む、方法。
【請求項３７】
前記希突起神経膠細胞の機能不全を伴う障害が脱髄疾患である、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
前記希突起神経膠細胞の機能不全を伴う障害が、多発性硬化症、ペリツェウス・メルツバッハー病、クラッベ病、異染性白質ジストロフィー、副腎白質ジストロフィー、カナバン病、アレキサンダー病、正染性白質ジストロフィー、ツェルウェガー病、１８ｑ−症候群、脳性麻痺、脊髄損傷、外傷性脳損傷、脳卒中、フェニルケトン尿症またはウイルス感染症である、請求項３６に記載の方法。
【請求項３９】
目的の向性プロファイルを有するアデノ随伴ウイルスカプシドを調製する方法であって、請求項１〜５のいずれか１項に記載のアデノ随伴ウイルスカプシドを改変して、目的の向性プロファイルをもたらすアミノ酸配列を挿入することを含む、方法。
【請求項４０】
前記目的の向性プロファイルが、骨格筋、肝臓、心筋、横隔膜、腎臓、肝臓、膵臓、脾臓、消化管、肺、関節組織、舌、卵巣、精巣、生殖細胞、癌細胞またはこれらの組み合わせから選択される組織である、請求項３９に記載の方法。