(57)【要約】      （修正有）【課題】仔魚に所要量のヨウ素を与えて魚類を養殖する養魚方法、前記仔魚の餌料として使用するワムシの生産に用いるクロレラを生産する方法、及び該クロレラを給餌してワムシを生産する方法を提供する。【解決手段】魚類の卵を孵化させて得られた仔魚に餌料としてワムシを与えて育成した後、適宜の餌料を与えて稚魚、更には成魚まで育成する場合、ヨウ素を含有させたクロレラを生産するクロレラ生産工程Ｓ１と、得られたクロレラを前記ワムシの餌料として与えて、ヨウ素を含有させたワムシを生産するワムシ生産工程Ｓ３と、得られたワムシを前記仔魚の餌料として与えて、仔魚を育成する孵化仔魚育成工程Ｓ５とを実施する。【選択図】図１
2019000037.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
魚類の卵を孵化させて得られた仔魚に餌料としてワムシを与えて育成した後、適宜の餌料を与えて成魚まで育成する場合、
ヨウ素を含有させたクロレラを生産するクロレラ生産工程と、
得られたクロレラを前記ワムシの餌料として与えて、ヨウ素を含有させたワムシを生産するワムシ生産工程と、
得られたワムシを前記仔魚の餌料として与えて、仔魚を育成する仔魚育成工程と
を実施することを特徴とする養魚方法。
【請求項２】
前記クロレラ生産工程は、
クロレラを適宜の培地で培養する培養工程と、
培養したクロレラを濃縮する濃縮工程と、
得られたクロレラの濃縮物にヨウ素を予め定めた濃度になるように添加して当該クロレラにヨウ素を吸収させるヨウ素吸収工程と
をこの順に実施する請求項１記載の養魚方法。
【請求項３】
前記濃縮工程では、培養したクロレラを乾燥質量として５０ｇ／Ｌ以上１８０ｇ／Ｌ以下になるように濃縮する請求項１記載の養魚方法。
【請求項４】
前記ヨウ素吸収工程では、０．０８ｍｍｏｌ／Ｌ以上４０ｍｍｏｌ／Ｌ以下の濃度になるようにヨウ素をクロレラの濃縮物に添加する請求項２又は３記載の養魚方法。
【請求項５】
前記ワムシ生産工程は、
ワムシを培養する培養液中に存在するワムシの密度を測定し、
得られた密度に基づいて、前記培養液中の全ワムシが単位期間当たりに摂取できるクロレラの量を求め、
求めたクロレラの量になるように、前記クロレラ生産工程で得られたクロレラを前記単位期間内で複数回に分けてワムシに与える
請求項１から４のいずれかに記載の養魚方法。
【請求項６】
前記クロレラ生産工程で得られたクロレラに含有されたヨウ素の量を測定しておき、
ワムシに与えたクロレラの量に基づいて、ワムシに含有されたヨウ素の量を求め、
求めたヨウ素の量が予め定めた値を超えるまで前記ワムシ生産工程を継続する請求項５記載の養魚方法。
【請求項７】
餌料として仔魚に与えるためのヨウ素を含有したワムシを生産すべく、当該ワムシに給餌するためのクロレラを生産する場合、
クロレラを適宜の培地で培養する培養工程と、
培養したクロレラを濃縮する濃縮工程と、
得られたクロレラの濃縮物にヨウ素を予め定めた濃度になるように添加して当該クロレラにヨウ素を吸収させるヨウ素吸収工程と
をこの順に実施する
ことを特徴とするクロレラの生産方法。
【請求項８】
前記濃縮工程では、培養したクロレラを乾燥質量として５０ｇ／Ｌ以上１８０ｇ／Ｌ以下になるように濃縮する請求項７記載のクロレラの生産方法。
【請求項９】
前記ヨウ素吸収工程では、０．０８ｍｍｏｌ／Ｌ以上４０ｍｍｏｌ／Ｌ以下の濃度になるようにヨウ素をクロレラの濃縮物に添加する請求項７又は８記載のクロレラの生産方法。
【請求項１０】
クロレラを給餌して、仔魚に餌料として与えるためのヨウ素を含有したワムシを生産する場合、
請求項７から９のいずれかに記載のクロレラの生産方法を実施して、ヨウ素を含有したクロレラを得、
ワムシを培養するための培養液中に存在するワムシの密度を測定する密度測定工程と、
得られた密度に基づいて、前記培養液中の全ワムシが単位期間当たりに摂取できるクロレラの量を求めるクロレラ摂取量算定工程と、
求めたクロレラの量になるように、前記ヨウ素を含有したクロレラを前記単位期間内で複数回に分けてワムシに与える給餌工程と
を実施することを特徴とするワムシの生産方法。
【請求項１１】
前記ヨウ素を含有したクロレラに含有されたヨウ素の量を測定しておき、
ワムシに与えたクロレラの量に基づいて、ワムシに含有されるヨウ素の量を求め、
求めたヨウ素の量が予め定めた値を超えるまで前記密度測定工程から前記給餌工程までの各工程を実施する請求項１０記載のワムシの生産方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、孵化させた仔魚を成魚へ育成する養魚方法、前記仔魚の餌料として使用するワムシの生産に用いるクロレラを生産する方法、及び該クロレラを給餌してワムシを生産する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
魚類を養殖する養魚方法として、捕獲した天然の稚魚に人工配合飼料を与えて成魚まで育成する方法と、親魚から採取した卵を孵化させて仔魚を得、得られた仔魚に給餌して稚魚まで育成し、この稚魚を更に成魚まで育成する方法とが実用化されているが、後者の養魚方法にあっては、仔魚の消化管が未分化であり、消化能が非常に低いため、仔魚に人工配合飼料を与えることができない。そのため、多くの場合、孵化仔魚の餌料として動物プランクトンであるワムシが使用されている。
【０００３】
ところで、ヨウ素は甲状腺ホルモンに含まれる成分であり、脊椎動物にあっては必須の微量ミネラルである。この甲状腺ホルモンは、全身の代謝を向上させるホルモンであるため、魚類の正常な成長を図るには必要量のヨウ素を与えることが重要である。そのため、孵化させた仔魚のステージからヨウ素を与えることが望ましいが、前述したように仔魚には人工配合飼料を与えることができないため、仔魚にヨウ素を与えることは困難であった。
【０００４】
一方、仔魚の餌料として使用されているワムシは海水中で培養することから、その体内には海水由来のヨウ素が存在し、かかるワムシが与えられた仔魚にあってはヨウ素の欠乏が生じる恐れがないと考えられてきた。しかしながら、本発明者らが検討したところ、海水中で培養したワムシに含有されるヨウ素の量は０．２〜１．１ｐｐｍと少なく、またその含有量には大きなバラツキが存在しているという結果が得られ、かかる結果より、仔魚にヨウ素の欠乏が生じている可能性があるという知見に達した。
【０００５】
前述したように、仔魚には人工配合飼料を与えることができないため、ヨウ素含有量を増大させたワムシを餌料として適用することができれば、仔魚のヨウ素欠乏を回避することができる。そのため、後記する非特許文献１には、培養を終了する３時間前に培養液にヨウ化ナトリウムを添加することによって、ヨウ素の含有量を増大させたワムシを得る方法が開示されている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Ａｎａ  Ｒｉｔａ  Ａ  Ｒｉｂｅｒｉｒｏ，Ｌａｕｒａ  Ｒｉｂｅｒｉｏ，Ｍａｒｉａ  Ｒ  Ｄｉｎｉｓ  ＆  Ｍａｒｉ  Ｍｏｒｅｎ，”Ｐｒｏｔｏｃｏｌ  ｔｏ  ｅｎｒｉｃｈ  ｒｏｔｉｆｅｒ  （Ｂｒａｃｈｉｏｎｕｓ  ｐｌｉｃａｔｉｌｌｉｓ）  ｗｉｔｈ  ｉｏｄｉｎｅ  ａｎｄ  ｓｅｌｅｎｉｕｍ”，Ａｑｕａｃｕｌｔｕｒｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２０１１，４２，ｐ１７３７−ｐ１７４０
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
しかしながら、非特許文献１に開示された方法にあっては、ワムシの培養液にヨウ化ナトリウムを添加するため、ワムシに利用されないヨウ化ナトリウムが培養液に多量に残存することとなり、ヨウ化ナトリウムの利用効率が低いという問題があった。これに対して、ワムシの培養初期の時点で、培養液にヨウ化ナトリウムを添加することが考えられるが、特に培養初期にあっては、ヨウ化ナトリウムはワムシの生育を阻害するため、その添加量は可及的に少なくしなければならず、所要量のヨウ素を含有するワムシを得ることができない。
【０００８】
更に、従来方法によって得られたワムシにあっては、仔魚に給餌すべく養魚中の海水に播いた場合、当該ワムシが海水と接触した直後からヨウ素含有量が急激に減少してしまい、仔魚に捕食される際のワムシに所要量のヨウ素が含有されていない恐れがあるという知見も得られている。
【０００９】
本発明は斯かる事情に鑑みてなされたものであって、仔魚に所要量のヨウ素を与えて魚類を養殖する養魚方法、前記仔魚の餌料として使用するワムシの生産に用いるクロレラを生産する方法、及び該クロレラを給餌してワムシを生産する方法を提供する。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
（１）本発明に係る養魚方法は、魚類の卵を孵化させて得られた仔魚に餌料としてワムシを与えて育成した後、適宜の餌料を与えて成魚まで育成する場合、ヨウ素を含有させたクロレラを生産するクロレラ生産工程と、得られたクロレラを前記ワムシの餌料として与えて、ヨウ素を含有させたワムシを生産するワムシ生産工程と、得られたワムシを前記仔魚の餌料として与えて、仔魚を育成する仔魚育成工程とを実施することを特徴とする。
【００１１】
前述したように、仔魚に給餌すべくワムシを海水中へ投入すると、ヨウ素の含有量が漸次減少するという知見が得られており、かかるワムシのヨウ素含有量が減少する現象は、前述した非特許文献１に開示された方法で培養されたワムシ、即ち培養を終了する３時間前に培養液にヨウ化ナトリウムを培養液中に添加する方法で培養されたワムシにおいて顕著であり、海水に投入後略３時間で当初のヨウ素含有量の１／１２以下に減少し、海水に投入後略６時間後では殆どヨウ素を含有していない程に減少するのである。
【００１２】
これに対して、本発明者らが鋭意検討した結果、ヨウ素を含有させたクロレラを給餌して育成したワムシにあっては、海水に投入した後にワムシのヨウ素含有量が減少するものの、投入後略３時間経過した後であっても投入前のヨウ素含有量の略半量が残存しているという知見を得て本発明を完成するに至った。ここで、ヨウ素としては、単体のヨウ素、ヨウ素化塩、ヨウ素酸塩等を用いることができるが、クロレラに対する悪影響が少ないヨウ化カリウムといったヨウ素化塩、又はヨウ素酸カリウムといったヨウ素酸塩が好適である。
【００１３】
すなわち、本発明の養魚方法にあっては、魚類の卵を孵化させて得られた仔魚に餌料としてワムシを与えて育成した後、適宜の餌料を与えて成魚まで育成する場合、ヨウ素を含有させたクロレラを生産するクロレラ生産工程と、得られたクロレラを前記ワムシの餌料として与えて、ヨウ素を含有させたワムシを生産するワムシ生産工程と、得られたワムシを前記仔魚の餌料として与えて、仔魚を育成する仔魚育成工程とを実施するのである。
【００１４】
仔魚であっても給餌されてから３時間も経過すれば、給餌されたワムシの大部分を摂食することができ、従って有効なヨウ素量が含有されたワムシが仔魚に摂食されるため、必要量のヨウ素を仔魚に確実に供給することができる。
【００１５】
一方、前述した非特許文献１に開示された方法で培養されたワムシにあっては、ヨウ素含有量の減少速度が大きいため、有効なヨウ素量が含有されたワムシが仔魚に摂食される確率が低く、必要量のヨウ素が仔魚に供給されない。
【００１６】
これに対して、非特許文献１に開示された方法によって、ワムシに含有させるヨウ素の量を増大させることが考えられるが、高濃度のヨウ素をワムシの培養液に添加すると、ワムシの活性が低下して仔魚に摂食されない恐れがあるのに加え、ワムシに吸収されずに培養液中に残存するヨウ素が大量に発生するため、ヨウ素の利用効率が著しく低下する。しかしながら、前述した本発明に係る方法では、ヨウ素を含有したクロレラをワムシに餌料として与えるため、ワムシの培養液にヨウ素を添加する必要がなく、従って比較的濃度が高いヨウ素を、活性を低下させることなく、高い利用効率でワムシに含有させることができる。
【００１７】
ところで、ワムシを大量培養するために、従来よりナンノクロロプシス又はパン酵母が使用されていたが、前者にあってはナンノクロロプシスを大量培養することが困難であり、また後者にあってはワムシの増殖に必要な栄養素の含有量が不足する場合があり、ワムシの大量へい死を招来することがあった。しかしながら、クロレラにあっては、大量培養の方法も確立されており、またワムシの増殖に必要な栄養素も略十分に含有しているため、ワムシの餌料として適している。
【００１８】
（２）本発明に係る養魚方法は、前記クロレラ生産工程は、クロレラを適宜の培地で培養する培養工程と、培養したクロレラを濃縮する濃縮工程と、得られたクロレラの濃縮物にヨウ素を予め定めた濃度になるように添加して当該クロレラにヨウ素を吸収させるヨウ素吸収工程とをこの順に実施することを特徴とする。
【００１９】
本発明の養魚方法にあっては、前述したクロレラ生産工程は、クロレラを適宜の培地で培養する培養工程と、培養したクロレラを濃縮する濃縮工程と、得られたクロレラの濃縮物にヨウ素を予め定めた濃度になるように添加して当該クロレラにヨウ素を吸収させるヨウ素吸収工程とをこの順に実施する。このように、クロレラの濃縮物にヨウ素を添加するため、クロレラの培地にヨウ素を添加する場合に比べて、ヨウ素の使用量を少なくすることができ、従ってヨウ素の利用効率が高い。一方、クロレラの濃縮物にあっては、各クロレラ細胞間の相互作用によって、添加されたヨウ素の濃度が比較的高い場合であっても、個々のクロレラ細胞の活性に影響が及び難く、従って、ヨウ素を含有されたクロレラがワムシに摂食されない等、餌料としての機能が低下する虞がない。
【００２０】
（３）本発明に係る養魚方法は、前記濃縮工程では、培養したクロレラを乾燥質量として５０ｇ／Ｌ以上１８０ｇ／Ｌ以下になるように濃縮することを特徴とする。
【００２１】
本発明の養魚方法にあっては、前述した濃縮工程では、培養したクロレラを乾燥質量として５０ｇ／Ｌ以上１８０ｇ／Ｌ以下になるように濃縮する。濃縮されたクロレラの濃度が乾燥質量として５０ｇ／Ｌ未満の場合、クロレラにヨウ素を包含させる際に、ヨウ素の利用効率が低く、濃縮されたクロレラの濃度が乾燥質量として１８０ｇ／Ｌを超えると、クロレラの濃縮物の流動性が低いため、クロレラの回収率が低下するとともに、取り扱いが困難になって作業に支障を来す。これに対して、濃縮したクロレラの濃度を乾燥質量として５０ｇ以上１８０ｇ以下／Ｌになした場合、クロレラの濃縮物が適当な流動性を備えるため、高い回収率で容易に取り扱うことができ、ヨウ素の利用率も高い。
【００２２】
（４）本発明に係る養魚方法は、前記ヨウ素吸収工程では、０．０８ｍｍｏｌ／Ｌ以上４０ｍｍｏｌ／Ｌ以下の濃度になるようにヨウ素をクロレラの濃縮物に添加することを特徴とする。
【００２３】
本発明の養魚方法にあっては、前述したヨウ素吸収工程では、０．０８ｍｍｏｌ／Ｌ以上４０ｍｍｏｌ／Ｌ以下の濃度になるようにヨウ素をクロレラの濃縮物に添加する。ヨウ素を添加する濃度が０．０８ｍｍｏｌ／Ｌ未満の場合、仔魚に必要な量のヨウ素を与えられない恐れがあり、ヨウ素を添加する濃度が４０ｍｍｏｌ／Ｌを超える場合、クロレラの細胞に悪影響を及ぼす虞がある。これに対して、ヨウ素を添加する濃度が０．０８ｍｍｏｌ／Ｌ以上４０ｍｍｏｌ／Ｌ以下である場合、クロレラに悪影響を及ぼすことなく、仔魚に必要な量のヨウ素を与えることができる。
【００２４】
（５）本発明に係る養魚方法は、前記ワムシ生産工程は、ワムシを培養する培養液中に存在するワムシの密度を測定し、得られた密度に基づいて、前記培養液中の全ワムシが単位期間当たりに摂取できるクロレラの量を求め、求めたクロレラの量になるように、前記クロレラ生産工程で得られたクロレラを前記単位期間内で複数回に分けてワムシに与えることを特徴とする。
【００２５】
本発明の養魚方法にあっては、ワムシ生産工程は、ワムシを培養する培養液中に存在するワムシの密度を測定する。単位量のワムシが単位期間当たりに摂取できるクロレラの量は定まっている。例えば、ワムシが無理なく安定して１日に摂取できるクロレラの量は、乾燥質量として略０．６μｇ／ワムシ個体である。そこで、得られた密度に基づいて、前記培養液中の全ワムシが単位期間当たりに摂取できるクロレラの量を求める。そして、求めたクロレラの量になるように、前述したクロレラ生産工程で得られたヨウ素を含有するクロレラを、単位期間内で複数回に分けてワムシに与える。
【００２６】
このように、培養液中の全ワムシが単位期間当たりに摂取できるクロレラの量を求め、求めたクロレラの量になるように、ヨウ素を含有するクロレラを単位期間内で複数回に分けてワムシに与えるため、ワムシにクロレラを給餌する都度、給餌されたクロレラの全量がワムシに迅速に残さず摂食される。従って、クロレラ、延いてはヨウ素の利用効率が高く、またワムシに含有されるヨウ素の量を比較的正確に求めることができる。一方、仮に給餌したクロレラが摂食されずにワムシの培養液中に残存した場合、当該培養液が経時的に汚染されて行くが、前述した如く、クロレラの全量が残さず摂食されるため、培養液が汚染されることもない。
【００２７】
（６）本発明に係る養魚方法は、前記クロレラ生産工程で得られたクロレラに含有されたヨウ素の量を測定しておき、ワムシに与えたクロレラの量に基づいて、ワムシに含有されたヨウ素の量を求め、求めたヨウ素の量が予め定めた値を超えるまで前記ワムシ生産工程を継続することを特徴とする。
【００２８】
本発明の養魚方法にあっては、前記クロレラ生産工程で得られたクロレラに含有されたヨウ素の量を測定しておく。一方、ワムシに与えたヨウ素を含有するクロレラの量と、ワムシに含有されたヨウ素の量との間には直線的な比例関係が存在することが分かっている。そこで、ワムシに与えたクロレラの量に基づいて、ワムシに含有されたヨウ素の量を求めることができる。これによって、ワムシに含有されたヨウ素の量を、当該ワムシを分析することなく求めることができる。そして、求めたヨウ素の量が予め定めた値を超えるまで前述したワムシ生産工程を継続する。これによって、仔魚に十分量のヨウ素をワムシを介して確実に与えることができる。
【００２９】
（７）本発明に係るクロレラの生産方法は、餌料として仔魚に与えるためのヨウ素を含有したワムシを生産すべく、当該ワムシに給餌するためのクロレラを生産する場合、クロレラを適宜の培地で培養する培養工程と、培養したクロレラを濃縮する濃縮工程と、得られたクロレラの濃縮物にヨウ素を予め定めた濃度になるように添加して当該クロレラにヨウ素を吸収させるヨウ素吸収工程とをこの順に実施することを特徴とする。
【００３０】
本発明のクロレラの生産方法にあっては、餌料として仔魚に与えるためのヨウ素を含有したワムシを生産すべく、当該ワムシに給餌するためのクロレラを生産する場合、前述したようにクロレラを適宜の培地で培養する培養工程と、培養したクロレラを濃縮する濃縮工程と、得られたクロレラの濃縮物にヨウ素を予め定めた濃度になるように添加して当該クロレラにヨウ素を吸収させるヨウ素吸収工程とをこの順に実施する。従って、前同様、クロレラの培地にヨウ素を添加する場合に比べて、ヨウ素の使用量を少なくすることができ、従ってヨウ素の利用効率が高い。一方、クロレラの濃縮物にあっては、各クロレラ細胞間の相互作用によって、添加されたヨウ素の濃度が比較的高い場合であっても、個々のクロレラ細胞の活性に影響が及び難く、従って、ヨウ素を含有されたクロレラがワムシに摂食されない等、餌料としての機能が低下する虞がない。
【００３１】
（８）本発明に係るクロレラの生産方法は、前記濃縮工程では、培養したクロレラを乾燥質量として５０ｇ／Ｌ以上１８０ｇ／Ｌ以下になるように濃縮することを特徴とする。
【００３２】
本発明のクロレラの生産方法にあっては、前述した濃縮工程では、培養したクロレラを乾燥質量として５０ｇ／Ｌ以上１８０ｇ／Ｌ以下になるように濃縮するため、前同様、クロレラの濃縮物が適当な流動性を備え、高い回収率で容易に取り扱うことができ、ヨウ素の利用率も高い。
【００３３】
（９）本発明に係るクロレラの生産方法は、前記ヨウ素吸収工程では、０．０８ｍｍｏｌ／Ｌ以上４０ｍｍｏｌ／Ｌ以下の濃度になるようにヨウ素をクロレラの濃縮物に添加することを特徴とする。
【００３４】
本発明のクロレラの生産方法にあっては、前述したヨウ素吸収工程では、０．０８ｍｍｏｌ／Ｌ以上４０ｍｍｏｌ／Ｌ以下の濃度になるようにヨウ素をクロレラの濃縮物に添加するため、前同様、クロレラに悪影響を及ぼすことなく、仔魚に必要な量のヨウ素を与えることができる。
【００３５】
（１０）本発明に係るワムシの生産方法は、クロレラを給餌して、仔魚に餌料として与えるためのヨウ素を含有したワムシを生産する場合、前記（７）から（９）のいずれかに記載のクロレラの生産方法を実施して、ヨウ素を含有したクロレラを得、ワムシを培養するための培養液中に存在するワムシの密度を測定する密度測定工程と、得られた密度に基づいて、前記培養液中の全ワムシが単位期間当たりに摂取できるクロレラの量を求めるクロレラ摂取量算定工程と、求めたクロレラの量になるように、前記ヨウ素を含有したクロレラを前記単位期間内で複数回に分けてワムシに与える給餌工程とを実施することを特徴とする。
【００３６】
本発明のワムシの生産方法にあっては、クロレラを給餌して、仔魚に餌料として与えるためのヨウ素を含有したワムシを生産する場合、前記（７）から（９）のいずれかに記載のクロレラの生産方法を実施して、ヨウ素を含有したクロレラを得、ワムシを培養するための培養液中に存在するワムシの密度を測定する密度測定工程と、得られた密度に基づいて、前記培養液中の全ワムシが単位期間当たりに摂取できるクロレラの量を求めるクロレラ摂取量算定工程と、求めたクロレラの量になるように、前記ヨウ素を含有したクロレラを前記単位期間内で複数回に分けてワムシに与える給餌工程とを実施するため、前同様、ワムシにクロレラを給餌する都度、給餌されたクロレラの全量がワムシに迅速に残さず摂食され、従って、クロレラ、延いてはヨウ素の利用効率が高く、またワムシに含有されるヨウ素の量を比較的正確に求めることができる。一方、仮に給餌したクロレラが摂食されずにワムシの培養液中に残存した場合、当該培養液が経時的に汚染されて行くが、前述した如く、クロレラの全量が残さず摂食されるため、培養液が汚染されることもない。
【００３７】
（１１）本発明に係るワムシの生産方法は、前記ヨウ素を含有したクロレラに含有されたヨウ素の量を測定しておき、ワムシに与えたクロレラの量に基づいて、ワムシに含有されるヨウ素の量を求め、求めたヨウ素の量が予め定めた値を超えるまで前記密度測定工程から前記給餌工程までの各工程を実施することを特徴とする。
【００３８】
本発明のワムシの生産方法にあっては、前述したヨウ素を含有したクロレラに含有されたヨウ素の量を測定しておき、ワムシに与えたクロレラの量に基づいて、ワムシに含有されるヨウ素の量を求め、求めたヨウ素の量が予め定めた値を超えるまで前記密度測定工程から前記給餌工程までの各工程を実施するため、前同様、ワムシに含有されたヨウ素の量を、当該ワムシを分析することなく求めることができ、また、仔魚に十分量のヨウ素をワムシを介して確実に与えることができる。
【図面の簡単な説明】
【００３９】
【図１】本発明に係る養魚方法の手順を示すフローチャートである。
【図２】図１に示したクロレラ生産工程の詳細な実施手順を示すフローチャートである。
【図３】図１に示したワムシ生産工程の詳細な実施手順を示すフローチャートである。
【図４】図３に示したクロレラの給餌手順を説明するフローチャートである。
【図５】図１に示した仔魚育成工程の詳細な実施手順を示すフローチャートである。
【図６】クロレラの濃縮物にヨウ化カリウムを添加した後にヨウ素含有量を経時的に測定した結果を示すヒストグラムである。
【図７】ヨウ素含有クロレラをワムシに与えてヨウ素含有ワムシを生産した結果を示すグラフである。
【図８】ヨウ素含有クロレラをワムシに与えてヨウ素含有ワムシを生産した結果を示すグラフである。
【図９】本発明に係る方法で生産したヨウ素含有ワムシ（Ａ）と、非特許文献１に開示された方法で生産したヨウ素含有ワムシ（Ｎ）とを各別の水槽の海水中に投入してから３時間及び６時間経過後に、各ワムシのヨウ素含有量を測定した結果を示すヒストグラムである。
【発明を実施するための形態】
【００４０】
本発明に係る養魚方法等を図面に基づいて詳述する。
なお、本実施の形態で説明する養魚方法等は、本発明の趣旨を説明する一例であり、本発明はその趣旨を逸脱しない範囲での変形や改造を含むことはいうまでもない。
【００４１】
図１は本発明に係る養魚方法の手順を示すフローチャートである。
図１に示したように、本養魚方法は主な３つの工程、即ち、所要量のヨウ素を含有するクロレラを生産するクロレラ生産工程（ステップＳ１）、得られたクロレラを餌量として、所要量のヨウ素を含有するワムシを生産するワムシ生産工程（ステップＳ３）、及び得られたワムシを餌量として仔魚する仔魚育成工程（ステップＳ５）を含んでいる。以下、各工程について詳述する。
【００４２】
（クロレラ生産工程）
図２は図１に示したクロレラ生産工程の詳細な実施手順を示すフローチャートである。ここで、クロレラとしては種々の種を用いることができ、例えばブルガリカス種（ｖｕｌｇａｒｉｓ）、ソロキニアナ種（ｓｏｒｏｋｉｎｉａｎａ）、ケセリ種（ｋｅｓｓｌｅｒｉ）等、クロレラ属に分類されるものであれば、その種及び株に拘わらずいずれも使用することができる。
【００４３】
本培養に先立って、クロレラの種培養を行う（ステップＳ１１）。種培養は例えば次のようにして実施する。すなわち、適宜容量の培地が入った坂口フラスコ内に、保存用スラントからクロレラを１白金耳取って接種し、２０００ｌｕｘ程度から３０００ｌｕｘ程度までの適宜の照度下、２５℃程度から３５℃程度までの適宜の温度で、３日間程度から１０日間程度振盪培養する。ここで、培地はクロレラを培養できるものであれば特に限定されず、例えばグルコース４０ｇ／Ｌ、リン酸第一カリウム１．０ｇ／Ｌ、硫酸マグネシウム１．０ｇ／Ｌ、Ｆｅ（ＩＩＩ）-ＥＤＴＡ１５ｍｇ／Ｌ、微量ミネラルＡ５（１０倍濃度）１ｍｌ／Ｌ、亜セレン酸ナトリウム２４μｇ／Ｌ、尿素３．０ｇ／Ｌ、ビタミンＢ１２  １００μｇ／Ｌの組成でｐＨ７．０に調整した培地を用いることができる。ここで、微量ミネラルＡ５は、純水１０００ｍｌ中、Ｈ３ＢＯ４２．８６ｇ、ＭｎＣｌ２・４Ｈ２Ｏ１．８１ｇ、ＺｎＳＯ４・７Ｈ２Ｏ０．２２ｇ、ＣｕＳＯ４・５Ｈ２Ｏ０．０８ｇ、Ｎａ２ＭｏＯ４０．０２１ｇの組成とすることができる。
【００４４】
クロレラの種が得られると、次に本培養を次のようにして実施して、培養量をスケールアップさせる（ステップＳ１２）。すなわち、適宜容量の培養タンクに前同様の培地を投入して滅菌し、培養温度まで冷却しておく。この培養タンクに前述したように得られた種を無菌的に接種し、通気を行いつつ、２５℃程度から３５℃程度までの適宜の温度で、４日程度撹拌培養する。なお、培養途中に、ドコサヘキサエン酸といった高度不飽和脂肪酸を添加するとよい。
【００４５】
なお、更にスケールアップが必要な場合は、より容量が大きい培養タンクを用いて前同様に培養を行い、順次クロレラの培養量を増大させてもよい。
【００４６】
このようにして所要量のクロレラが培養されると、固液分離して培養したクロレラを濃縮する（ステップＳ１３）。培養して得られたクロレラの濃縮は例えば連続遠心分離機によって行うことができるが、濾過によって実施してもよい。濃縮した後のクロレラの濃度は乾燥質量として５０ｇ／Ｌ以上１８０ｇ／Ｌ以下に調整するとよい。クロレラの濃度が乾燥質量として５０ｇ／Ｌ未満の場合、後述する如くクロレラにヨウ素を包含させる際に、ヨウ素の利用効率が低く、クロレラの濃度が乾燥質量として１８０ｇ／Ｌを超えると、クロレラの濃縮物の流動性が低いため、クロレラの回収率が低下するとともに、取り扱いが困難になって作業に支障を来す。これに対して、濃縮した後のクロレラの濃度を乾燥質量として５０ｇ以上１８０ｇ以下／Ｌに調整した場合、クロレラの濃縮物が適当な流動性を備えるため、高い回収率で容易に取り扱うことができ、ヨウ素の利用率も高い。
【００４７】
次に、クロレラの濃縮物にヨウ素を添加することにより、当該ヨウ素をクロレラ内に吸収させる（ステップＳ１４）。ここで、ヨウ素としては、単体のヨウ素、ヨウ素化塩、ヨウ素酸塩等を用いることができるが、クロレラに対する悪影響が少ないヨウ化カリウムといったヨウ素化塩、又はヨウ素酸カリウムといったヨウ素酸塩が好適である。
【００４８】
具体的には、ステップＳ１３で得られたクロレラの濃縮物に対して、ヨウ素の濃度が０．０８ｍｍｏｌ／Ｌ以上４０ｍｍｏｌ／Ｌ以下、より好ましくは０．８ｍｍｏｌ／Ｌ以上４０ｍｍｏｌ／Ｌ以下となるように添加する。ヨウ素を添加する濃度が０．０８ｍｍｏｌ／Ｌ未満の場合、仔魚に必要な量のヨウ素を与えられない恐れがあり、ヨウ素を添加する濃度が４０ｍｍｏｌ／Ｌを超える場合、クロレラの活性に悪影響を及ぼす虞がある。これに対して、ヨウ素を添加する濃度が０．０８ｍｍｏｌ／Ｌ以上４０ｍｍｏｌ／Ｌ以下である場合、クロレラに悪影響を及ぼすことなく、仔魚に必要な量のヨウ素を与えることができる。更に、ヨウ素を添加する濃度が０．８ｍｍｏｌ／Ｌ以上の場合、仔魚に必要な量のヨウ素をより確実に与えることができるという利点があるため好適である。
【００４９】
クロレラの濃縮物にヨウ素を添加してから６時間以上、好ましくは２４時間以上、更に好ましくは４８時間以上、クロレラの濃縮物を撹拌し、ヨウ素をクロレラに吸収させる。このとき、クロレラの濃縮物は５℃以上１５℃以下の温度に保持することによって、クロレラに与えるダメージを可及的に軽減することができる。なお、クロレラの濃縮物にヨウ素を添加してヨウ素をクロレラに吸収させる処理は１６８時間を上限とするとよい。かかる処理が１６８時間を超えるとクロレラの活性が低下する虞があるからである。
【００５０】
このような処理を施すことによって、クロレラ乾燥質量（ｇ）当たり１ｐｐｍ程度以上８００ｐｐｍ程度以下、より好ましくは１５ｐｐｍ程度以上５００ｐｐｍ程度以下のヨウ素を含有するクロレラの濃縮物を得ることができる。
【００５１】
そして、クロレラの濃縮物にその数倍量の水を投入して撹拌洗浄し、ステップＳ１３と同様に固液分離してクロレラを再濃縮する（ステップＳ１５）。
【００５２】
このようにしてヨウ素を吸収したクロレラの濃縮物が得られると、クロレラのヨウ素含有量を測定した（ステップＳ１６）後に、４℃以下の冷蔵保存によって、当該クロレラの濃縮物を保存する（ステップＳ１７）。なお、クロレラのヨウ素含有量は例えば、当該ロットから採取したクロレラの濃縮物を凍結乾燥させた後、酸又はアルカリにて可溶化して得たサンプルを誘導結合プラズマ質量分析計で分析すること（ＩＣＰ−ＭＳ法）によって測定することができる。
【００５３】
（ワムシ生産工程）
図３は図１に示したワムシ生産工程の詳細な実施手順を示すフローチャートである。ここで、ワムシとしてはシオミズツボワムシ（Ｂｒａｃｈｉｏｎｕｓ）を用いることができる。
【００５４】
適当な容量の培養槽に、培養液として海水又は人工海水を満たしておき、そこに、例えば継代培養により保存しているワムシを、１０個体／ｍｌから５００個体／ｍｌ程度の密度になるように接種する（ステップＳ３１）。なお、培養液の温度は１０℃以上３５℃以下に保持し、培養液中には適量の通気を行う。次に、ステップＳ１で生産したクロレラを給餌する（ステップＳ３２）。
【００５５】
図４は図３に示したクロレラの給餌手順を説明するフローチャートである。
給餌は次のように実施する。すなわち、培養槽から予め定めた単位容量の培養液を採取してそこに存在するワムシの個体数を計測し、ワムシの密度を測定する（ステップＳ３２１）。ワムシが無理なく安定して１日に摂取可能なクロレラの量は略０．６μｇ（１個体当たり）であるので、測定して得られたワムシの密度から１日に給餌するクロレラの全量を算定する（ステップＳ３２２）。
【００５６】
本発明に係る方法では、ワムシへのクロレラの給餌は、１日当たり複数回に分けて行うため、給餌時刻及び１回当たりの給餌量を決定する（ステップＳ３２３，Ｓ３２４）。そして、給餌時刻であるか否かを判断し（ステップ３２５）、給餌時刻である場合、１回分の量のクロレラを給餌する（ステップＳ３２６）。なお、給餌に際しては、クロレラと共に、パン酵母、ビタミン及び／又は脂肪酸といった他の栄養素を混合してもよい。
【００５７】
次に、図３に示したように、１日に与えたクロレラの全量、前述したクロレラのヨウ素含有量（乾燥質量当たり）、ワムシの密度及びワムシの育成日数から、ワムシのヨウ素含有量（乾燥質量当たり）を算定し（ステップＳ３３）、得られた値が予め定めたヨウ素含有量に達したか否かを判断する（ステップＳ３４）。ここで、例えば、ヨウ素を４４ｐｐｍ（乾燥質量当たり）含有するクロレラをワムシに、１日に０．６μｇ（１個体当たり）となるように給餌する条件でワムシを培養した場合、１日間（２４時間）程度から３日間程度の培養期間で所要のヨウ素含有量に達したワムシを得られることが分かっている。かかる関係からワムシのヨウ素含有量を算定することができる。
【００５８】
ステップＳ３４でワムシのヨウ素含有量が予め定めた値に達したと判断されるまでステップＳ３２及びステップＳ３３の操作を繰り返す。そして、ワムシのヨウ素含有量が予め定めた値に達したと判断されると、仔魚の餌料として使用することが可能となる。ここで、仔魚の餌料として使用することが可能となるのは、ヨウ素含有量が５ｐｐｍ（乾燥質量当たり）程度になったワムシである。
【００５９】
ワムシは培養液を交換することなく同じ培養液で５日間程度は培養することができるため、培養を開始してから所定日数経過したか否かを判断し（ステップＳ３５）、所定日数経過していない場合は、仔魚の餌料として使用を開始し（ステップＳ３６）、ステップＳ３２の操作に戻ってクロレラを給餌し、ワムシの培養を継続する。
【００６０】
一方、ステップＳ３５で、培養を開始してから所定日数経過したと判断された場合、当該ワムシは餌料として適さない可能性が高いため、当該ロットにおけるワムシの培養を終了し、ワムシが残存した場合は廃棄する。従って、仔魚の育成量及び育成スケジュールに応じて、培養槽を使用する個数、及び各培養槽でのワムシの培養スケジュールを策定しておくとよい。これによって、高い活性のワムシを用いて仔魚に給餌することができる。
【００６１】
なお、本実施の形態では、ワムシの生産をバッチ式に実施する場合について説明したが、本発明はこれに限らず、半連続式に実施してもよい。この場合、例えば、前記ステップＳ３６で仔魚の餌料として使用を開始した後、培養槽中のワムシを一時的に捕獲して、培養槽内の培養液の略半量を廃棄する。そして、廃棄量に相当する量の新しい培養液を培養槽内へ充填し、この培養槽内へ捕獲したワムシを戻した後、前同様、クロレラを給餌する。かかる操作を連日実施するのである。これによって、ワムシをより効率的に生産することができる。
【００６２】
（仔魚育成工程）
図５は図１に示した仔魚育成工程の詳細な実施手順を示すフローチャートである。
このようにして所要のヨウ素含有量のワムシの生産を行う一方、目的とする親魚から採取した卵を受精させ、得られた受精卵を適当な容量の育成槽内に満たされた海水又は人工海水中に浮遊又は沈降させて、当該受精卵を孵化させる（ステップＳ５１）。
【００６３】
孵化した仔魚は、１日〜２日程度経過した後からワムシを摂食することができるため、そのタイミング以降、１日当たり複数の回数で、１受精卵当たり数百〜数千個体のワムシを仔魚に与える（ステップＳ５２）。ここで、１受精卵当たりに給餌するワムシの個体数は、孵化してからの経過時間が短いほど相対的に少なくし、孵化してからの経過時間が長くになるに従って相対的に多くするとよい。また、ワムシを給餌する１日当たりの回数は、孵化してからの経過時間が短いほど相対的に多くし、孵化してからの経過時間が長くになるに従って相対的に少なくするとよい。なお、ワムシを給餌するに先立って、海水中に、仔魚に摂食されていないワムシが残存する場合、当該ワムシを濾別しておくとよい。後述するように、ワムシを海水中へ投入すると、ヨウ素の含有量が漸次減少するからである。
【００６４】
本発明者らが鋭意検討した結果、仔魚に給餌すべくワムシを海水中へ投入すると、ヨウ素の含有量が漸次減少するという知見が得られた。ワムシのヨウ素含有量が減少する現象は、前述した非特許文献１に開示された方法で培養されたワムシ、即ち培養を終了する３時間前に培養液にヨウ化ナトリウムを添加する方法で培養されたワムシにあって顕著であり、海水に投入後略３時間で当初のヨウ素含有量の１／１２以下に減少し、海水に投入後略６時間後では殆どヨウ素を含有していない。
【００６５】
これに対して、前述した如き本発明方法によって得られたワムシにあっては、ワムシのヨウ素含有量が減少するものの、海水に投入後略３時間経過した後であっても当初のヨウ素含有量の略半量が残存している。仔魚であっても給餌されてから３時間も経過すれば、給餌されたワムシの大部分を摂食することができ、従って有効なヨウ素量が含有されたワムシが仔魚に摂食されるため、必要量のヨウ素を仔魚に確実に供給することができる。
【００６６】
一方、前述した非特許文献１に開示された方法で培養されたワムシにあっては、ヨウ素含有量の減少速度が大きいため、有効なヨウ素量が含有されたワムシが仔魚に摂食される確率が低く、必要量のヨウ素が仔魚に供給されない。そのため、ワムシに含有させるヨウ素の量を増大させることが考えられるが、高濃度のヨウ素をワムシの培養液に添加すると、ワムシの活性が低下して仔魚に摂食されない恐れがあるのに加え、ワムシに吸収されずに培養液中に残存するヨウ素が大量に発生するため、ヨウ素の利用効率が著しく低下してしまうのである。
【００６７】
孵化してから配合飼料を消化できるように成育するまで魚種に応じた所定の日数を要する。そのため、ワムシの給餌が終了する都度、当該所定の日数に達したか否かを判断し（ステップＳ５３）、所定の日数に達したと判断するまでステップＳ５２及びステップＳ５３の操作を繰り返すことによって仔魚を育成する。
【００６８】
このようにして、仔魚が配合飼料を消化できるまで成育すると、図１に示したように、成育した魚体をより広い生簀に移し、魚種に対応した微粒子の配合飼料及びワムシより大型の動物プランクトンであるアルテミアといった生餌を与えて稚魚へ育成し、更には成魚まで育成する（ステップＳ７）。
【実施例】
【００６９】
次に、比較試験等を行った結果について説明する。
【００７０】
（実施例１）
ヨウ素を含有させたクロレラを生産した結果について説明する。
図６はクロレラの濃縮物にヨウ化カリウムを添加した後にヨウ素含有量を経時的に測定した結果を示すヒストグラムであり、縦軸はクロレラのヨウ素含有量を、横軸はヨウ化カリウムを添加してからの経過時間をそれぞれ示している。
【００７１】
ここで、クロレラの濃縮物は次のようにして調製した。
すなわち、クロレラ（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ  Ｖｕｌｇａｒｉｓ）の保存スラントから１白金耳取って、坂口フラスコ内の培地に無菌的に接種し、２８℃、３０００ｌｕｘの光照射下で７日間、種培養を行った。なお、培地としては、クロレラを培養できる組成であれば特に限定されないが、例えば、グルコースが４０ｇ／Ｌ、リン酸一カリウムが１．０ｇ／Ｌ，硫酸マグネシウムが１．０ｇ／Ｌ、Ｆｅ・ＥＤＴＡが１５ｍｇ／Ｌ、前述した組成の微量ミネラルＡ５（×１０）が１ml／Ｌ、亜セレン酸ナトリウムが２４μg／Ｌ、尿素が３．０ｇ／Ｌ、ビタミンＢ１２が１００μｇ／Ｌ、ｐＨ７．０のものを用いた。
【００７２】
１０Ｌの容量のジャーファーメンター内に前同様の組成の培地６Ｌを調整しておき、種培養して得られた培養液を無菌的に接種し、３５℃、通気量６Ｌ／分、撹拌速度３００ｒｐｍの条件下で４日間、本培養を行った。なお、培養中に高度不飽和脂肪酸（ドコサヘキサエン酸６０％濃度）を１．５ｇ／Ｌとなるように添加した。本培養が終了した後、培養液を遠心分離機に供給して固液分離してクロレラの濃縮物を得、これに水を加えて洗浄し、再び遠心分離機にて固液分離する操作を数回繰り返し、１００ｇ／Ｌとなるように濃縮したクロレラの濃縮物を得た。
【００７３】
このようにして得られたクロレラの濃縮物を撹拌しつつ５℃に保ち、ヨウ化カリウムを４ｍｍｏｌ／Ｌの濃度となるように添加混合し、直ちに一部を採取して遠心分離によりヨウ化カリウム溶液を除去し、得られたクロレラの沈降物に純水を加えて分散・洗浄して再び遠心分離する操作を４回繰り返し、得られたクロレラの沈降物を零時の試料とした。一方、残りのクロレラの濃縮物については、ヨウ化カリウムを添加してから６時間、２４時間、４８時間、７２時間経過した後に、前同様の操作を行って、それぞれの経過時間における試料とした。そして、各試料を凍結乾燥し、ＩＣＰ−ＭＳ法によって各試料のヨウ素含有量を測定した。なお、誘導結合プラズマ質量分析計（ＩＣＰ−ＭＳ）にはアレンジ・テクノロジー社製の７７００Ｘ型を用いた。
【００７４】
図６から明らかなように、濃縮されたクロレラに５℃でヨウ素を吸収させると、ヨウ素の含有量は零時から２４時間までは緩やかに上昇し、２４時間から４８時間までは急激に上昇し、４８時間から７２時間までは含有量の上昇が徐々に頭打ちになっていた。すなわち、各バーの頂点を結ぶとシグモイド状のカーブのグラフが得られた。この結果より、５℃の環境下では、４８時間から７２時間程度の間、クロレラにヨウ素を吸収させると、ヨウ素の含有量が多いクロレラを得ることができることが分かる。
【００７５】
なお、前同様に濃縮したクロレラに６時間、ヨウ素を吸収させる操作を、２５℃、１５℃でそれぞれ行ったところ、前者におけるクロレラのヨウ素含有量（乾燥質量当たり）は１８．４ｐｐｍであり、後者におけるクロレラのヨウ素含有量（乾燥質量当たり）は１５．１ｐｐｍと、処理温度が低くなるに連れてヨウ素含有量が低下したものの、図６に示した６時間におけるクロレラのヨウ素含有量（乾燥質量当たり）である１３．４ｐｐｍより、いずれも高い値であった。つまり、処理温度が高いほど、クロレラに含有されるヨウ素の量も多くなっていた。
【００７６】
ただし、高い活性のクロレラを得るためには、処理温度を５℃程度に保持することが好ましく、従って、処理温度を５℃程度に保持し、処理時間を４８時間から７２時間程度とするのが好ましい。
【００７７】
（実施例２）
次に、実施例１で得られた濃縮クロレラに与えるヨウ素の濃度の影響を検討した結果について説明する。
【００７８】
実施例１で説明した操作と同じ操作を行ってクロレラの濃縮物を得た。この濃縮クロレラから同量ずつ６つの容器に分注してそれぞれ５℃に保持した。次に、対照を除く各容器にヨウ化カリウムを、０．８ｍｍｏｌ／Ｌ、４ｍｍｏｌ／Ｌ、８ｍｍｏｌ／Ｌ、４０ｍｍｏｌ／Ｌ、８０ｍｍｏｌ／Ｌになるように添加し、撹拌しつつ４８時間処理した。なお、対照としてヨウ化カリウムを添加せずに同様の操作を行った。その後、各容器内のクロレラを平板希釈法によってプレート内の平板培地に塗布し、各プレートを培養器内に保管して平板培養を行った。そして、各プレートの平板培地に生育したコロニー数を計測した。その結果を次の表に示す。
【００７９】
【表１】
2019000037.tif 000003
【００８０】
上表から明らかなように、ヨウ素の濃度が０〜４０ｍｍｏｌ／Ｌまでの場合、１ｍｌ当たりのコロニー数に差が見られず、従ってこの濃度範囲のヨウ素は濃縮クロレラに影響を及ぼしていない。これに対して、ヨウ素の濃度が８０ｍｍｏｌ／Ｌの場合、１ｍｌ当たりのコロニー数に有意な減少が認められており、この濃度のヨウ素は濃縮クロレラに悪影響を及ぼしていた。
【００８１】
（実施例３）
次に、実施例１で説明したようにして生産したヨウ素含有クロレラをワムシに与えて、ヨウ素含有ワムシを生産した結果について説明する。
【００８２】
図７及び図８は、ヨウ素含有クロレラをワムシに与えてヨウ素含有ワムシを生産した結果を示すグラフであり、いずれも縦軸はワムシの乾燥質量当たりのヨウ素含有量を、横軸はクロレラの乾燥質量当たりのヨウ素含有量をそれぞれ示している。また、図７はヨウ素源としてヨウ化カリウムを用いた結果を、図８はヨウ素源としてヨウ素酸カリウムを用いた結果をそれぞれ示している。なお、クロレラとして、図７ではクロレラ・ブルガリス（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ  ｖｕｌｇａｒｉｓ）を、図８ではクロレラ・ソロキニアナ（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ  ｓｏｒｏｋｉｎｉａｎａ）を用いており、一方、いずれもシオミズツボワムシ（Ｂｒａｃｈｉｏｎｕｓ）を用いた。
【００８３】
試験は次のようにして行った。
すなわち、実施例１で説明した操作と同じ操作を行ってクロレラの濃縮物を得た。この濃縮クロレラから同量ずつ５つの容器に分注してそれぞれ５℃に保持した。次に、対照を除く各容器にヨウ素源を、０．８ｍｍｏｌ／Ｌ、４ｍｍｏｌ／Ｌ、８ｍｍｏｌ／Ｌ、４０ｍｍｏｌ／Ｌになるように添加し、４８時間撹拌してクロレラにヨウ素を吸収させた。なお、対照としてヨウ化カリウムを添加せずに同様の操作を行った。その後、各容器内の濃縮クロレラを純水で４回洗浄した後、各容器内の濃縮クロレラを一部採取してそれぞれ凍結乾燥し、実施例１と同様、ＩＣＰ−ＭＳ法によって各試料のヨウ素含有量を測定した。
【００８４】
次に、２５Ｌの容量のパンライト水槽を５つ用意しておき、各水槽に海水を２０Ｌずつ貯留させ、２８℃の水温で通気量５Ｌ／分に保った。各水槽にワムシを５００個体／ｍｌの密度になるように投入して育成を開始し、育成開始時及び育成開始から１６時間経過後に、前記各容器内から濃縮クロレラを、ワムシ１個体当たり乾燥物換算で０．６μｇのクロレラとなるように採取し、対応する水槽内のワムシに給餌し、２４時間まで育成した。そして、目開きが１００μｍのプランクトンネットにて各水槽内のワムシを各別に収穫し、純水で洗浄した後に凍結乾燥し、実施例１と同様、ＩＣＰ−ＭＳ法によって各試料のヨウ素含有量を測定した。なお、２４時間育成して得られたワムシの個体数は、いずれのクロレラを給餌した場合にあっても１４００〜１５００個体／ｍｌと略同じであった。
【００８５】
図７及び図８から明らかなように、いずれのヨウ素源であっても、クロレラのヨウ素含有量と、当該クロレラが給餌されたワムシのヨウ素含有量との間には、直線的な比例関係が見られた。
【００８６】
（実施例４）
本発明者らが鋭意検討したところ、ヨウ素を含有したワムシが海水に投入されると、ヨウ素含有量が経時的に低下するという知見を得たため、ワムシにヨウ素を含有させる方法の違いにより、海水に投入されたワムシのヨウ素含有量がどのように低下するのかを検討した結果について説明する。
【００８７】
ヨウ素を含有するワムシを生産する方法としては、本発明に係る方法と、前述した非特許文献１に開示された方法とを用いた。
【００８８】
すなわち、本発明に係る方法では、実施例１と同様の操作を行って得られた濃縮クロレラを５℃になし、ヨウ化カリウムを３０ｍｍｏｌ／Ｌになるように添加して４８時間撹拌し、濃縮クロレラにヨウ素を吸収させた。その後、濃縮クロレラを純水で４回洗浄してヨウ素含有濃縮クロレラを得た。なお、得られた濃縮クロレラに含有されたヨウ素の量を前同様にして測定したところ、乾燥質量当たり５０５ｐｐｍ（＝０．０５０ｎｇ／μｇ）であった。一方、２５Ｌの容量のパンライト水槽に海水を２０Ｌ貯留させ、２６℃の水温で通気量５Ｌ／分に保った。この水槽にワムシを５００個体／ｍｌの密度になるように投入して育成を開始し、育成開始時及び育成開始から１６時間経過後に、ヨウ素含有濃縮クロレラを、ワムシ１個体当たり乾燥物換算で０．６μｇのクロレラとなるように水槽内のワムシに給餌し、２４時間まで育成してヨウ素含有ワムシを得た（本発明例１）。
【００８９】
これに対し、非特許文献１に開示された方法では、５０Ｌの容量のパンライト水槽に海水を４０Ｌ貯留させ、２６℃の水温で通気量５Ｌ／分に保った。この水槽にワムシを２５０個体／ｍｌの密度になるように投入するとともに、ＤＨＡセルコ（インベ・アクアカルチャ社製）をワムシ１個体当たり１．０μｇとなるように添加し、更に、ヨウ化ナトリウムをワムシ１個体当たり０．２６μｇとなるように添加して育成を開始し、育成開始から３時間経過後に、プランクトンネットによってワムシを回収して育成を終了し、ヨウ素含有ワムシを得た（比較例１）。
【００９０】
このようにして得られたワムシに投与したヨウ素量、及び、ワムシのヨウ素含有量は次の表の通りである。なお、各試料のヨウ素含有量は、実施例１と同様、ＩＣＰ−ＭＳ法によって測定した。
【００９１】
【表２】
2019000037.tif 000004
【００９２】
前表から明らかなように、本発明例１のヨウ素の投与量は比較例１のヨウ素の投与量の略１／７００であったが、得られたワムシのヨウ素含有量は本発明例１及び比較例１のいずれも略同じ値であった。このように本発明に係る方法では、少ないヨウ素投与量で所要のヨウ素含有量のワムシを生産することができ、非常に高い効率でワムシにヨウ素を含有させることができたことが分かる。
【００９３】
このようにしてヨウ素含有ワムシが得られると、複数の２５Ｌの容量のパンライト水槽に海水をそれぞれ２０Ｌ貯留させ、２５℃の水温で通気量１Ｌ／分に保っておき、各水槽に前述した本発明例１に係るワムシ及び比較例１に係るワムシを各別に、５００個体／ｍｌの密度になるように投入し、投入してから３時間及び６時間経過後に、各水槽から一部のワムシを採取し、実施例１と同様、ＩＣＰ−ＭＳ法によって各試料のヨウ素含有量を測定した。
【００９４】
その結果を図９に示した。なお、図９中、Ａは本発明例１に係るワムシのヨウ素含有量を、またＮは比較例１に係るワムシのヨウ素含有量をそれぞれ示している。また、各ワムシを海水に投入する前のヨウ素含有量も示した。
【００９５】
図９から明らかなように、海水に投入する前にあっては、本発明例１に係るワムシのヨウ素含有量も比較例１に係るワムシのヨウ素含有量も同程度であったが、比較例１に係るワムシのヨウ素含有量は、海水にワムシを投入してから３時間経過すると海水に投入する前の略１０％以下にまで低下しており、６時間経過後では海水に投入する前の略３％以下にまで低下していた。
【００９６】
これに対し、本発明例１に係るワムシのヨウ素含有量は、海水にワムシを投入してから３時間経過後であっても海水に投入する前の略５５％が残存しており、６時間経過後でも、比較例１に係るワムシの海水に投入してから３時間経過のヨウ素含有量より高い値であった。
【００９７】
このように、直接的にヨウ素を含有させた比較例１のワムシにあっては、海水に投入した後、急激にヨウ素含有量が低下するため、かかるワムシを給餌された仔魚にあっては必要量のヨウ素を摂取できない虞がある。これに対して、より高濃度のヨウ素を含有させたワムシを生産しておくことが考えられるが、高濃度のヨウ素はワムシに悪影響を与えるため、より高濃度のヨウ素を含有するワムシの生産には限度がある。
【００９８】
一方、本発明例１に係るワムシにあっては、海水にワムシを投入してから３時間経過後であっても海水に投入する前の半分を超える濃度のヨウ素が含有されているため、かかるワムシを給餌された仔魚にあっては十分量のヨウ素を摂取することができるものと考えられる。
【００９９】
（実施例５）
次に、本発明に係る方法と、前述した非特許文献１に開示された方法とでそれぞれ生産したヨウ素含有ワムシを用いて仔魚を育成した結果について説明する。
【０１００】
本発明に係る方法にあっては、実施例１で説明した操作と同様の操作を行って所要量のクロレラの濃縮物を得、これを２分割して、一方にはヨウ化カリウムを２ｍｍｏｌ／Ｌになるように添加し、他方にはヨウ化カリウムを８ｍｍｏｌ／Ｌになるように添加して、５℃で４８時間撹拌した後、水洗・濃縮してヨウ素含有クロレラを得た。ここで、２ｍｍｏｌ／Ｌで処理して得られた低濃度ヨウ素含有クロレラのヨウ素含有量は４４ｐｐｍ（乾燥質量当たり）であり、８ｍｍｏｌ／Ｌで処理して得られた高濃度ヨウ素含有クロレラのヨウ素含有量は１５９ｐｐｍ（乾燥質量当たり）であった。そして、低濃度ヨウ素含有クロレラ及び高濃度ヨウ素含有クロレラを各別に用い、実施例３で説明した操作と同様の操作を行って、ヨウ素含有ワムシをそれぞれ得た。得られたワムシのヨウ素含有量は、低濃度ヨウ素含有クロレラを用いた場合は４．７ｐｐｍ（乾燥質量当たり）であり、高濃度ヨウ素含有クロレラを用いた場合は１８．３ｐｐｍ（乾燥質量当たり）であった。前者のヨウ素含有ワムシを本発明例２、後者のヨウ素含有ワムシを本発明例３とした。
【０１０１】
一方、実施例１で説明した操作と同様の操作を行ってクロレラの濃縮物を得、得られた濃縮クロレラをヨウ素を吸収させることなく用いて、実施例３で説明した操作と同様の操作を行って、ヨウ素を含有させていないワムシを得、これを対照例とした。得られたワムシのヨウ素含有量は０．６ｐｐｍ（乾燥質量当たり）であった。
【０１０２】
また、実施例４の比較例１で説明した操作と同様の操作を行って、ワムシに直接ヨウ化ナトリウムを吸収させてヨウ素含有ワムシを生産し、これを比較例２とした。なお、ヨウ化ナトリウムはワムシを育成させる海水に０．０２μｇ／ワムシ個体となるように添加した。得られたワムシのヨウ素含有量は４．９ｐｐｍ（乾燥質量当たり）であった。
【０１０３】
このようにして得られたワムシを用いて、次のように仔魚を育成した。
すなわち、真鯛（Ｐａｇｕｒｕｓ  ｍａｉｊｏｒ）から採取した卵を受精させた後、塩分濃度３２ｐｐｔの海水１００Ｌをそれぞれ貯留させた複数の水槽に、前記受精卵を１０個／Ｌとなるように投入し、１９℃の水温で、５０ｍｌ／分の通気及び１日当たり１２時間・１０００ｌｕｘの光照射を行った。受精卵が孵化してから２日目からワムシを５〜１０個体／ｍｌになるように、一日当たり２回給餌し、真鯛の仔魚を２２日間育成した。なお、孵化後５日目から５０ｍｌ／分の潅水を行った。
【０１０４】
そして、各水槽から無作為に採取した１０尾について全長、頭長、尾鰭鰭条数、生存率を求めた。また、各水槽から無作為に５０尾を採取し、５秒間外気中に露出させた後に各水槽の海水中へ戻し、２４時間後の生存率を測定して活力とした。得られた各結果を次の表に示す。
【０１０５】
【表３】
2019000037.tif 000005
【０１０６】
表の本発明例２及び本発明例３から明らかなように、本発明に係る方法で生産されたヨウ素含有ワムシを給餌して仔魚を育成した場合、ワムシに含有されたヨウ素量の大小に拘わらず、得られた仔魚の全長、頭長、尾鰭鰭条数、生存率、活力のいずれにおいても有意差は認められなかった。前述した如く、本発明例２で用いたワムシのヨウ素含有量は４．７ｐｐｍ（乾燥質量当たり）であり、本発明例３で用いたワムシのヨウ素含有量は１８．３ｐｐｍ（乾燥質量当たり）であるが、本発明に係る方法で生産されたヨウ素含有ワムシにあっては、ヨウ素含有量が少なくとも４．７ｐｐｍ（乾燥質量当たり）程度であれば、仔魚の成長にとって十分量のヨウ素を仔魚に与え得ることが分かる。
【０１０７】
これに対して、比較例２から明らかなように、ワムシに直接ヨウ化カリウムを吸収させて生産したヨウ素含有ワムシを給餌した場合、得られた仔魚の全長、頭長、尾鰭鰭条数、生存率、活力は、ヨウ素を含有させていないワムシを給餌した対照例の仔魚より大きい値であったものの、いずれも、本発明例２及び本発明例３の仔魚に比べて有意に低い値であった。比較例２で用いたワムシのヨウ素含有量は４．９ｐｐｍ（乾燥質量当たり）であり、本発明例２で用いたワムシのヨウ素含有量の４．７ｐｐｍ（乾燥質量当たり）より高い値であったが、実施例４で示したように、ワムシに直接ヨウ化カリウムを吸収させて生産したヨウ素含有ワムシにあっては、それを給餌すべく海水に投入した直後から急激にヨウ素の含有量が低下するため、海水に投入されてから仔魚に捕食されるまでの間にヨウ素の含有量が必要以上低下し、仔魚に十分量のヨウ素が与えられないためであるものと考えられる。
【符号の説明】
【０１０８】
Ｓ１    ステップ１
Ｓ３    ステップ３
Ｓ５    ステップ５
Ｓ３３    ステップ３３
【図１】
2019000037.tif 000006
【図２】
2019000037.tif 000007
【図３】
2019000037.tif 000008
【図４】
2019000037.tif 000009
【図５】
2019000037.tif 000010
【図６】
2019000037.tif 000011
【図７】
2019000037.tif 000012
【図８】
2019000037.tif 000013
【図９】
2019000037.tif 000014
【手続補正書】
【提出日】平成30年8月17日(2018.8.17)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
魚類の卵を孵化させて得られた仔魚に餌料としてワムシを与えて育成した後、適宜の餌料を与えて成魚まで育成する場合、
ヨウ素を含有させたクロレラを生産するクロレラ生産工程と、
得られたクロレラを前記ワムシの餌料として与えて、ヨウ素を含有させたワムシを生産するワムシ生産工程と、
得られたワムシを前記仔魚の餌料として与えて、仔魚を育成する仔魚育成工程と
を実施するに際し、
前記クロレラ生産工程は、
クロレラを適宜の培地で培養する培養工程と、
培養したクロレラを濃縮する濃縮工程と、
得られたクロレラの濃縮物にヨウ素を予め定めた濃度になるように添加して当該クロレラにヨウ素を吸収させるヨウ素吸収工程と
をこの順に実施してヨウ素を含有した生きたクロレラを得る
ことを特徴とする養魚方法。
【請求項２】
前記濃縮工程では、培養したクロレラを乾燥質量として５０ｇ／Ｌ以上１８０ｇ／Ｌ以下になるように濃縮する請求項１記載の養魚方法。
【請求項３】
前記ヨウ素吸収工程では、０．０８ｍｍｏｌ／Ｌ以上４０ｍｍｏｌ／Ｌ以下の濃度になるようにヨウ素をクロレラの濃縮物に添加する請求項２記載の養魚方法。
【請求項４】
前記ヨウ素吸収工程は、クロレラにヨウ素を吸収させる処理の温度が５℃以上１５℃以下であり、当該処理の時間が６時間以上１６８時間以下である請求項１から３のいずれかに記載の養魚方法。
【請求項５】
前記ワムシ生産工程は、
ワムシを培養する培養液中に存在するワムシの密度を測定し、
得られた密度に基づいて、前記培養液中の全ワムシが単位期間当たりに摂取できるクロレラの量を求め、
求めたクロレラの量になるように、前記クロレラ生産工程で得られたクロレラを前記単位期間内で複数回に分けてワムシに与える
請求項１から４のいずれかに記載の養魚方法。
【請求項６】
前記クロレラ生産工程で得られたクロレラに含有されたヨウ素の量を測定しておき、
ワムシに与えたクロレラの量に基づいて、ワムシに含有されたヨウ素の量を求め、
求めたヨウ素の量が予め定めた値を超えるまで前記ワムシ生産工程を継続する請求項５記載の養魚方法。
【請求項７】
餌料として仔魚に与えるためのヨウ素を含有したワムシを生産すべく、当該ワムシに給餌するためのクロレラを生産する場合、
クロレラを適宜の培地で培養する培養工程と、
培養したクロレラを濃縮する濃縮工程と、
得られたクロレラの濃縮物にヨウ素を予め定めた濃度になるように添加して当該クロレラにヨウ素を吸収させるヨウ素吸収工程と
をこの順に実施してヨウ素を含有した生きたクロレラを得る
ことを特徴とするクロレラの生産方法。
【請求項８】
前記濃縮工程では、培養したクロレラを乾燥質量として５０ｇ／Ｌ以上１８０ｇ／Ｌ以下になるように濃縮する請求項７記載のクロレラの生産方法。
【請求項９】
前記ヨウ素吸収工程では、０．０８ｍｍｏｌ／Ｌ以上４０ｍｍｏｌ／Ｌ以下の濃度になるようにヨウ素をクロレラの濃縮物に添加する請求項７又は８記載のクロレラの生産方法。
【請求項１０】
クロレラを給餌して、仔魚に餌料として与えるためのヨウ素を含有したワムシを生産するに当たって、
請求項７から９のいずれかに記載のクロレラの生産方法を実施して、ヨウ素を含有した生きたクロレラを得、
ワムシを培養するための培養液中に存在するワムシの密度を測定する密度測定工程と、
得られた密度に基づいて、前記培養液中の全ワムシが単位期間当たりに摂取できるクロレラの量を求めるクロレラ摂取量算定工程と、
求めたクロレラの量になるように、前記ヨウ素を含有した生きたクロレラを前記単位期間内で複数回に分けてワムシに与える給餌工程と
を実施することを特徴とするワムシの生産方法。
【請求項１１】
前記ヨウ素を含有したクロレラに含有されたヨウ素の量を測定しておき、
ワムシに与えたクロレラの量に基づいて、ワムシに含有されるヨウ素の量を求め、
求めたヨウ素の量が予め定めた値を超えるまで前記密度測定工程から前記給餌工程までの各工程を実施する請求項１０記載のワムシの生産方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１８】
更に、本発明に係る養魚方法は、前記クロレラ生産工程は、クロレラを適宜の培地で培養する培養工程と、培養したクロレラを濃縮する濃縮工程と、得られたクロレラの濃縮物にヨウ素を予め定めた濃度になるように添加して当該クロレラにヨウ素を吸収させるヨウ素吸収工程とをこの順に実施してヨウ素を含有した生きたクロレラを得ることを特徴とする。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１９】
本発明の養魚方法にあっては、前述したクロレラ生産工程は、クロレラを適宜の培地で培養する培養工程と、培養したクロレラを濃縮する濃縮工程と、得られたクロレラの濃縮物にヨウ素を予め定めた濃度になるように添加して当該クロレラにヨウ素を吸収させるヨウ素吸収工程とをこの順に実施してヨウ素を含有した生きたクロレラを得る。このように、クロレラの濃縮物にヨウ素を添加するため、クロレラの培地にヨウ素を添加する場合に比べて、ヨウ素の使用量を少なくすることができ、従ってヨウ素の利用効率が高い。一方、クロレラの濃縮物にあっては、各クロレラ細胞間の相互作用によって、添加されたヨウ素の濃度が比較的高い場合であっても、個々のクロレラ細胞の活性に影響が及び難く、従って、ヨウ素を含有されたクロレラがワムシに摂食されない等、餌料としての機能が低下する虞がない。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２０】
（２）本発明に係る養魚方法は、前記濃縮工程では、培養したクロレラを乾燥質量として５０ｇ／Ｌ以上１８０ｇ／Ｌ以下になるように濃縮することを特徴とする。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２２】
（３）本発明に係る養魚方法は、前記ヨウ素吸収工程では、０．０８ｍｍｏｌ／Ｌ以上４０ｍｍｏｌ／Ｌ以下の濃度になるようにヨウ素をクロレラの濃縮物に添加することを特徴とする。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２３】
本発明の養魚方法にあっては、前述したヨウ素吸収工程では、０．０８ｍｍｏｌ／Ｌ以上４０ｍｍｏｌ／Ｌ以下の濃度になるようにヨウ素をクロレラの濃縮物に添加する。ヨウ素を添加する濃度が０．０８ｍｍｏｌ／Ｌ未満の場合、仔魚に必要な量のヨウ素を与えられない恐れがあり、ヨウ素を添加する濃度が４０ｍｍｏｌ／Ｌを超える場合、クロレラの細胞に悪影響を及ぼす虞がある。これに対して、ヨウ素を添加する濃度が０．０８ｍｍｏｌ／Ｌ以上４０ｍｍｏｌ／Ｌ以下である場合、クロレラに悪影響を及ぼすことなく、仔魚に必要な量のヨウ素を与えることができる。一方、（４）本発明に係る養魚方法は、前記ヨウ素吸収工程は、クロレラにヨウ素を吸収させる処理の温度が５℃以上１５℃以下であり、当該処理の時間が６時間以上１６８時間以下であることを特徴としており、これによってクロレラに与えるダメージを可及的に低減し、クロレラの活性低下を回避することができる。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２９】
（７）本発明に係るクロレラの生産方法は、餌料として仔魚に与えるためのヨウ素を含有したワムシを生産すべく、当該ワムシに給餌するためのクロレラを生産する場合、クロレラを適宜の培地で培養する培養工程と、培養したクロレラを濃縮する濃縮工程と、得られたクロレラの濃縮物にヨウ素を予め定めた濃度になるように添加して当該クロレラにヨウ素を吸収させるヨウ素吸収工程とをこの順に実施してヨウ素を含有した生きたクロレラを得ることを特徴とする。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３０】
本発明のクロレラの生産方法にあっては、餌料として仔魚に与えるためのヨウ素を含有したワムシを生産すべく、当該ワムシに給餌するためのクロレラを生産する場合、前述したようにクロレラを適宜の培地で培養する培養工程と、培養したクロレラを濃縮する濃縮工程と、得られたクロレラの濃縮物にヨウ素を予め定めた濃度になるように添加して当該クロレラにヨウ素を吸収させるヨウ素吸収工程とをこの順に実施してヨウ素を含有した生きたクロレラを得る。従って、前同様、クロレラの培地にヨウ素を添加する場合に比べて、ヨウ素の使用量を少なくすることができ、従ってヨウ素の利用効率が高い。一方、クロレラの濃縮物にあっては、各クロレラ細胞間の相互作用によって、添加されたヨウ素の濃度が比較的高い場合であっても、個々のクロレラ細胞の活性に影響が及び難く、従って、ヨウ素を含有されたクロレラがワムシに摂食されない等、餌料としての機能が低下する虞がない。
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３５】
（１０）本発明に係るワムシの生産方法は、クロレラを給餌して、仔魚に餌料として与えるためのヨウ素を含有したワムシを生産するに当たって、前記（７）から（９）のいずれかに記載のクロレラの生産方法を実施して、ヨウ素を含有した生きたクロレラを得、ワムシを培養するための培養液中に存在するワムシの密度を測定する密度測定工程と、得られた密度に基づいて、前記培養液中の全ワムシが単位期間当たりに摂取できるクロレラの量を求めるクロレラ摂取量算定工程と、求めたクロレラの量になるように、前記ヨウ素を含有した生きたクロレラを前記単位期間内で複数回に分けてワムシに与える給餌工程とを実施することを特徴とする。
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３６】
本発明のワムシの生産方法にあっては、クロレラを給餌して、仔魚に餌料として与えるためのヨウ素を含有したワムシを生産するに当たって、前記（７）から（９）のいずれかに記載のクロレラの生産方法を実施して、ヨウ素を含有した生きたクロレラを得、ワムシを培養するための培養液中に存在するワムシの密度を測定する密度測定工程と、得られた密度に基づいて、前記培養液中の全ワムシが単位期間当たりに摂取できるクロレラの量を求めるクロレラ摂取量算定工程と、求めたクロレラの量になるように、前記ヨウ素を含有した生きたクロレラを前記単位期間内で複数回に分けてワムシに与える給餌工程とを実施するため、前同様、ワムシにクロレラを給餌する都度、給餌されたクロレラの全量がワムシに迅速に残さず摂食され、従って、クロレラ、延いてはヨウ素の利用効率が高く、またワムシに含有されるヨウ素の量を比較的正確に求めることができる。一方、仮に給餌したクロレラが摂食されずにワムシの培養液中に残存した場合、当該培養液が経時的に汚染されて行くが、前述した如く、クロレラの全量が残さず摂食されるため、培養液が汚染されることもない。