(57)【要約】【課題】ヒト成長ホルモン類似体を用いた小児成長ホルモン分泌不全症の治療を提供すること。【解決手段】本発明は、小児対象用の小児成長ホルモン分泌不全症（ＰＧＨＤ）治療法に関する。本治療法は、ＰＧＨＤを有する小児患者に、ヒト成長ホルモン−ＸＴＥＮ（ｈＧＨ−ＸＴＥＮ）融合タンパク質を治療的に有効な用量にて、毎週、２週毎、半月毎、３週毎、またはひと月毎に投与することを含む。この治療法は、同一期間に及ぶＸＴＥＮに結合していないｈＧＨの連日投与を用いて達成される身長発育速度と比較して劣らない。他の一実施形態では、用量はボーラス用量である。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
図面に記載の発明。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）は、一般的に睡眠中に生じる、ヒト脳下垂体前葉から数分から数時間継続する間欠パルスとして自然に分泌される。ｈＧＨ分泌の速度および程度は加齢と共に減少し、正常で健康な栄養状態が良好な小児の思春期において最大である。ｈＧＨは、ＳＴＡＴ（シグナル伝達兼転写活性化因子）、ＭＡＰＫ（分裂促進因子活性化タンパク質キナーゼ）およびＰＩ３Ｋ（ホスホイノシチド３−キナーゼ）経路が関与するシグナル伝達過程を開始するｈＧＨ受容体に結合する。インスリン様成長因子−Ｉ（ＩＧＦ−Ｉ）遺伝子発現は、ｈＧＨ受容体シグナル伝達から活性化され、結果としてＩＧＦ−Ｉが循環中に分泌される。ＩＧＦ−Ｉは、インスリン様成長因子結合タンパク質−３（ＩＧＦＢＰ−３）とおよび酸不安定サブユニット（ＡＬＳ）と複合体を形成する。ＩＧＦＢＰ−３およびＡＬＳ両方の発現もｈＧＨ受容体の活性化によって制御される。
【背景技術】
【０００２】
ｈＧＨの発現または分泌の欠乏に起因し、ｈＧＨ受容体の欠損が原因ではない成長ホルモン分泌不全症（ＧＨＤ）を有する小児においては、正常に近い成長および発達を促進するために、ｒｈＧＨの毎日の注射による補充療法がしばしば処方される。新しい骨は、ｈＧＨおよびＩＧＦ−Ｉに応答して骨端で形成され、結果として思春期後に成長板が融合するまで線形成長をもたらす。連日のｒｈＧＨ投与は、ＧＨＤでない小児におけるｈＧＨの正常な内因性パルスを模倣するものではないが、成長において著しい増加をもたらし、治療後の一般的な初年度の成長速度は１１ｃｍ／年である。ポンプを用いてｒｈＧＨを連続注入する臨床研究は、連日のｒｈＧＨ注入で達成されるものと同等の成長速度およびＩＧＦ−Ｉレベルを実証した（ＪoｒｇｅｎｓｅｎらＪ．Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ．７０（６），１６１６−２３（１９９０）；Ｌａｕｒｓｅｎ，Ｔ．ら  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ．８０（８），２４１０−８（１９９５）；Ｔａｕｂｅｒ，Ｍ．ら  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ．７６（５），１１３５−９（１９９３））。それゆえ、連続的な、ならびに脈動的な、ｒｈＧＨの投与は有効である。
【０００３】
連日のｒｈＧＨ治療法の安全性は、ＧＨＤを有する小児と成人の両方において研究されてきた。過体重または肥満の患者の中には、空腹時および食後のインスリンレベルが増加に向かう傾向が観察されているものもある。概して十分に耐容性を示すが、連日のｒｈＧＨ治療法は、軽度から中程度の頭痛、関節痛、悪心、嘔吐および注射反応を引き起こし得る。
【０００４】
他は、種々の徐放性ＧＨ製剤について報告してきた（Ｃｏｏｋ  ＤＭら  ２００２．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ  ８７（１０）：４５０８−４５１４；Ｂｉｌｌｅｒ  ＢＭら  ２０１１．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ  ９６（６）：１７１８−１７２６；Ｐｅｔｅｒ  Ｆ．ら，２０１２．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ  ９７（２）：４００−４０７；Ｆａｒｅｓ  Ｆ．ら，２０１０．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ１５１（９）：４４１０−４４１７；Ｓｏｎｄｅｒｇａａｒｄ  Ｅら  ２０１１．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ  ９６（３）：６８１−６８８；ｄｅ  Ｓｃｈｅｐｐｅｒ  Ｊら  ２０１１．Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  １６５（３）：４０１−４０９；Ｂｉｄｌｉｎｇｍａｉｅｒ  Ｍら  ２００６．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ  ９１（８）：２９２６−２９３０）。しかしながら、代替的なＧＨ治療法、投与量、および治療計画についての必要性が残っている。
ＶＲＳ−３１７は、ＧＨＤを有する成人および小児ＧＨＤを有する小児の長期補充療法に関する、開発中の治験用長時間作用型ｒｈＧＨである。ＶＲＳ−３１７は、投与頻度の低減（年間わずか１２回対最高３６５回の注射）により治療の継続率を増加させ得、それにより全体的な治療結果を改善させ得ることを見越して、最高月一回までの投薬を達成するように設計された。ＶＲＳ−３１７は、伸長組み換えポリペプチド（ＸＴＥＮ）アミノ酸配列を、天然型ｈＧＨ配列のＮ末端およびＣ末端に遺伝的に融合させることによって、ｒｈＧＨへの突然変異なしに達成される受容体結合における低減を通して、受容体介在性クリアランスを最小にするように設計されたｒｈＧＨ融合タンパク質である（Ｃｌｅｌａｎｄら２０１２，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ．１０１（８）：２７４４−２７５４，Ｅｐｕｂ２０１２年６月７日）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】ＪoｒｇｅｎｓｅｎらＪ．Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ．７０（６），１６１６−２３（１９９０）
【非特許文献２】Ｌａｕｒｓｅｎ，Ｔ．ら  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ．８０（８），２４１０−８（１９９５）
【非特許文献３】Ｔａｕｂｅｒ，Ｍ．ら  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ．７６（５），１１３５−９（１９９３）
【非特許文献４】Ｃｏｏｋ  ＤＭら  ２００２．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ  ８７（１０）：４５０８−４５１４
【非特許文献５】Ｂｉｌｌｅｒ  ＢＭら  ２０１１．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ  ９６（６）：１７１８−１７２６
【非特許文献６】Ｐｅｔｅｒ  Ｆ．ら，２０１２．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ  ９７（２）：４００−４０７
【非特許文献７】Ｆａｒｅｓ  Ｆ．ら，２０１０．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ１５１（９）：４４１０−４４１７
【非特許文献８】Ｓｏｎｄｅｒｇａａｒｄ  Ｅら  ２０１１．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ  ９６（３）：６８１−６８８
【非特許文献９】ｄｅ  Ｓｃｈｅｐｐｅｒ  Ｊら  ２０１１．Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  １６５（３）：４０１−４０９
【非特許文献１０】Ｂｉｄｌｉｎｇｍａｉｅｒ  Ｍら  ２００６．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ  ９１（８）：２９２６−２９３０
【非特許文献１１】Ｃｌｅｌａｎｄら２０１２，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ．１０１（８）：２７４４−２７５４，Ｅｐｕｂ２０１２年６月７日
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、小児における小児成長ホルモン分泌不全症（「ＰＧＨＤ」）治療法のための、改善された治療計画に関する。具体的には、本発明は、一つ以上の伸長組み換えポリペプチド（ＸＴＥＮ）に融合したヒト成長ホルモンを備える融合タンパク質（以降、該融合タンパク質を「ｈＧＨ−ＸＴＥＮ」と呼ぶ）の組成物のボーラス用量投与のための方法に関する。従って、一態様では、本発明は、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質を用いてヒトＰＧＨＤを有する小児患者を治療する方法に関する。
【０００７】
一態様では、本発明は、ＰＧＨＤを有する患者に、ある用量のヒト成長ホルモン−ＸＴＥＮ（ｈＧＨ−ＸＴＥＮ）融合タンパク質を投与することにより小児患者におけるヒト小児成長ホルモン分泌不全症（ＰＧＨＤ）を治療する方法を提供する。別の実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質は、配列番号１に対し少なくとも約９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を備える。他の一実施形態では、用量はボーラス用量である。一実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮのボーラス用量は、治療的に有効な体重調整されたボーラス用量である。別の実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮのボーラス用量は、約０．８０ｍｇ／ｋｇから約６．３ｍｇ／ｋｇ間である。別の実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮのボーラス用量は約０．８０ｍｇ／ｋｇから約７．０ｍｇ／ｋｇである。
【０００８】
他の実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮのボーラス用量は、毎週、２週毎、半月毎（すなわち、月に２回生じる）、３週毎、またはひと月毎に投与される。別の実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮのボーラス用量の投与はひと月毎である。好ましい実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮのボーラス用量の投与は週毎である。好ましい実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮのボーラス用量の投与は半月毎である。別の好ましい実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮのボーラス用量の投与は３週毎である。さらなる実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮのボーラス用量は皮下に投与される。
【０００９】
さらなる実施形態では、ヒト小児患者は、ｈＧＨ−ＸＴＥＮのボーラス用量の投与後に約−２．０から約２．０間の血清ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコア（ＳＤＳ）を有する。別の実施形態では、ヒト小児患者は、ｈＧＨ−ＸＴＥＮのボーラス用量の一回目、または二回目、または三回目、または四回目のボーラス用量投与後に、約−２．０から約２．０間の血清ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコア（ＳＤＳ）を有する。他の実施形態では、小児患者はボーラス用量の投与後に当該血清ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコアを呈し、該ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコアは、約−２．０超、約−１．５超、約−１．０超、約−０．５超、約０超、約０．５超、約１．０超、および約１．５超からなる群より選択される。他の実施形態では、小児患者はボーラス用量の投与後に当該血清ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコアを呈し、該ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコアは、約−１．５より大きく約２．０まで、約−１．０より大きく約２．０まで、約−０．５より大きく約２．０まで、約０より大きく約２．０まで、約０．５より大きく約２．０まで、約１．０より大きく約２．０まで、および約１．５より大きく約２．０までからなる群より選択される。他の実施形態では、小児患者はボーラス用量の投与後に当該血清ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコアを呈し、該ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコアは、約−１．０より大きく約２．０まで、約０より大きく約２．０まで、および約１．０より大きく約２．０までからなる群より選択される。別の実施形態では、小児患者はボーラス用量の投与後に当該血清ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコアを呈し、該投与は週毎、２週毎、３週毎、またはひと月毎である。別の実施形態では、投与は週毎、２週毎、半月毎、３週毎、またはひと月毎である。さらなる実施形態では、投与は半月毎、またはひと月毎である。他の実施形態では、ボーラス用量は小児患者の血清ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコアを、約−２．０から約２．０間に、投与後少なくとも約７日間、少なくとも約８日間、少なくとも約９日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１１日間、少なくとも約１２日間、少なくとも約１３日間、少なくとも約１４日間、少なくとも約１５日間、少なくとも約１６日間、少なくとも約１７日間、少なくとも約１８日間、少なくとも約１９日間、少なくとも約２０日間、少なくとも約２１日間、少なくとも約２２日間、少なくとも約２３日間、少なくとも約２４日間、少なくとも約２５日間、少なくとも約２６日間、少なくとも約２７日間、少なくとも約２８日間、少なくとも約２９日間、少なくとも約３０日間、または少なくとも約一ヶ月にわたって維持するのに有効である。他の実施形態では、ボーラス用量は、小児患者の血清ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコアを、約−２．０から約２．０間に、投与後少なくとも約１４日間、少なくとも約２１日間、または少なくとも約３０日間にわたって維持するのに有効である。別の実施形態では、ボーラス用量は、小児患者の血清ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコアを、約−２．０から約２．０間に、投与後少なくとも約１４日間、または少なくとも約３０日間にわたって維持するのに有効である。別の実施形態では、ヒト小児患者は一回目、または二回目、または三回目、または四回目のｈＧＨ−ＸＴＥＮのボーラス用量投与の当該日数後に約−２．０から約２．０間の血清ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコア（ＳＤＳ）を有する。
【００１０】
他の実施形態では、ボーラス用量は、少なくとも１．０の小児患者の血清ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコアベースライン血清ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコア（ＳＤＳ）を、投与後少なくとも約７日間、少なくとも約８日間、少なくとも約９日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１１日間、少なくとも約１２日間、少なくとも約１３日間、少なくとも約１４日間、少なくとも約１５日間、少なくとも約１６日間、少なくとも約１７日間、少なくとも約１８日間、少なくとも約１９日間、少なくとも約２０日間、少なくとも約２１日間、少なくとも約２２日間、少なくとも約２３日間、少なくとも約２４日間、少なくとも約２５日間、少なくとも約２６日間、少なくとも約２７日間、少なくとも約２８日間、少なくとも約２９日間、少なくとも約３０日間、または少なくとも約一ヶ月にわたって維持するのに有効である。別の実施形態では、ボーラス用量は、少なくとも１．０の小児患者の血清ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコアベースライン血清ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコア（ＳＤＳ）を、投与後少なくとも約１４日間、少なくとも約２１日間、または少なくとも約３０日間にわたって維持するのに有効である。さらなる実施形態では、ボーラス用量は、少なくとも１．０の小児患者の血清ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコアベースライン血清ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコア（ＳＤＳ）を、投与後少なくとも約１４日間、または少なくとも約３０日間にわたって維持するのに有効である。他の実施形態では、ボーラス用量は、少なくとも１．０の小児患者の血清ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコアベースライン血清ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコア（ＳＤＳ）を、一回目、または二回目、または三回目、または四回目のｈＧＨ−ＸＴＥＮのボーラス用量投与の当該日数後に維持するのに有効である。
【００１１】
別の実施形態では、小児患者は、少なくとも二回目、または三回目または四回目のボーラス用量の投与後に当該血清ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコア（ＳＤＳ）を呈する。
【００１２】
他の実施形態では、本発明は、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質を患者に投与することにより、小児患者におけるヒト小児成長ホルモン分泌不全症（ＰＧＨＤ）を治療する方法を提供し、ここで該ｈＧＨ−ＸＴＥＮは、小児患者において、少なくとも約６ｃｍ／年、または少なくとも約７ｃｍ／年、または少なくとも約８ｃｍ／年、または少なくとも約９ｃｍ／年、または少なくとも約１０ｃｍ／年、または少なくとも約１１ｃｍ／年、または少なくとも１２ｃｍ／年に相当する身長発育速度を達成するのに有効である。別の実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮのボーラス用量は、約７ｃｍ／年から約１２ｃｍ／年相当の身長発育速度を達成するのに有効である。他の実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮのボーラス用量は、小児患者において約８ｃｍ／年から１１ｃｍ／年相当の身長発育速度を達成するのに有効である。本段落の前述の実施形態では、小児患者において、投与の少なくとも３ヶ月後、少なくとも６ヶ月後、少なくとも９ヶ月後、または少なくとも１２ヶ月後に身長発育速度は達成される。他の実施形態では、達成される身長発育速度は初年度身長発育速度である。
【００１３】
さらに他の実施形態では、本発明は、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質を患者に投与することにより小児患者におけるヒト小児成長ホルモン分泌不全症（ＰＧＨＤ）を治療する方法を提供し、該方法は同一期間におよぶＸＴＥＮに結合していないｈＧＨの連日投与を用いて達成される身長発育速度と比較して、小児患者の身長発育速度を達成するのに劣らない。一実施形態では、投与されるｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質は、モルベースで、ＸＴＥＮに結合しないｈＧＨの同等量に相当し、小児患者に投与される。一実施形態では、同等量は、少なくとも約２５、少なくとも約３０、少なくとも約３３、少なくとも約３５、少なくとも約３７、または少なくとも約または少なくとも約４０μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日のｈＧＨ用量から選択される。
【００１４】
さらに他の実施形態では、本発明は、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質を患者に投与することにより小児患者におけるヒト小児成長ホルモン分泌不全症（ＰＧＨＤ）を治療する方法を提供し、ここで該方法は、小児患者の身長発育速度を、同等の用量期間におよぶ、モルベースで、同等量のＸＴＥＮに結合していないｈＧＨを連日注射投与される小児患者において達成される身長発育速度と比較して、その少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、または少なくとも約３０％以内に維持するのに有効である。一実施形態では、同等量は、少なくとも約２５、少なくとも約３０、少なくとも約３３、少なくとも約３５、少なくとも約３７、または少なくとも約または少なくとも約４０μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日のｈＧＨ用量から選択される。
【００１５】
一実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮのボーラス用量は、約０．８ｍｇ／ｋｇ、約１．０ｍｇ／ｋｇ、約１．２ｍｇ／ｋｇ、約１．４ｍｇ／ｋｇ、約１．６ｍｇ／ｋｇ、約１．８ｍｇ／ｋｇ、約２．０ｍｇ／ｋｇ、約２．２ｍｇ／ｋｇ、約２．４ｍｇ／ｋｇ、約２．６ｍｇ／ｋｇ、約２．７ｍｇ／ｋｇ、約２．８ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約３．２ｍｇ／ｋｇ、約３．４ｍｇ／ｋｇ、約３．６ｍｇ／ｋｇ、約３．８ｍｇ／ｋｇ、約４．０ｍｇ／ｋｇ、約４．２ｍｇ／ｋｇ、約４．４ｍｇ／ｋｇ、約４．６ｍｇ／ｋｇ、約４．８ｍｇ／ｋｇ、約５．０ｍｇ／ｋｇ、約５．２ｍｇ／ｋｇ、約５．４ｍｇ／ｋｇ、約５．６ｍｇ／ｋｇ、約５．８ｍｇ／ｋｇ、約６．０ｍｇ／ｋｇ、および約６．３ｍｇ／ｋｇからなる群より選択される。別の実施形態では、ボーラス用量は約０．８ｍｇ／ｋｇから約２．０ｍｇ／ｋｇである。別の実施形態では、ボーラス用量は約２．０ｍｇ／ｋｇから約４．０ｍｇ／ｋｇである。別の実施形態では、ボーラス用量は約４．０ｍｇ／ｋｇから約６．０ｍｇ／ｋｇである。別の実施形態では、ボーラス用量は約６．０ｍｇ／ｋｇから約７．０ｍｇ／ｋｇである。別の実施形態では、ボーラス用量は約０．８ｍｇ／ｋｇから約１．５ｍｇ／ｋｇである。別の実施形態では、ボーラス用量は約１．８ｍｇ／ｋｇから約３．２ｍｇ／ｋｇである。別の実施形態では、ボーラス用量は約３．５ｍｇ／ｋｇから約６．３ｍｇ／ｋｇである。
【００１６】
別の実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質は、配列番号１のアミノ酸配列を備える。別の実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質は、配列番号１に対し、少なくとも約９１％、または少なくとも約９２％、または少なくとも約９３％、または少なくとも約９４％、または少なくとも約９５％、または少なくとも約９６％、または少なくとも約９７％、または少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有する。
【００１７】
別の態様では、本発明は、患者の血清ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコア（ＳＤＳ）をある特定のレベルに維持するのに有効な、ある用量のヒト成長ホルモン−ＸＴＥＮ（ｈＧＨ−ＸＴＥＮ）融合タンパク質を、ＰＧＨＤを有する患者に投与することにより、ヒト小児患者におけるヒト小児成長ホルモン分泌不全症（ＰＧＨＤ）を治療する方法を提供する。一実施形態では、本方法は、配列番号１に対し少なくとも約９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を伴うｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質を投与することを含む。別の実施形態では、該用量は、治療的に有効な体重調整されたボーラス用量である。他の一実施形態では、ボーラス用量は、患者の血清ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコア（ＳＤＳ）を約−２．０から約２．０間に維持するのに有効である。さらなる実施形態では、ボーラス用量は、ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコアを約−２．０から約２．０間に、ボーラス用量の投与後少なくとも７日間にわたって維持するのに有効である。他の実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮのボーラス用量は、約０．８ｍｇ／ｋｇから約６．３ｍｇ／ｋｇ間である。一実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮのボーラス用量は、患者の血清ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコアを約−２．０から約２．０間に、投与後少なくとも約７日間、少なくとも約８日間、少なくとも約９日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１１日間、少なくとも約１２日間、少なくとも約１３日間、少なくとも約１４日間、少なくとも約１５日間、少なくとも約１６日間、少なくとも約１７日間、少なくとも約１８日間、少なくとも約１９日間、少なくとも約２０日間、少なくとも約２１日間、少なくとも約２２日間、少なくとも約２３日間、少なくとも約２４日間、少なくとも約２５日間、少なくとも約２６日間、少なくとも約２７日間、少なくとも約２８日間、少なくとも約２９日間、少なくとも約３０日間、または少なくとも約一ヶ月にわたって維持するのに有効である。別の実施形態では、ボーラス用量は、小児患者の血清ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコアを約−２．０から約２．０間に、投与後少なくとも約１４日間、少なくとも約２１日間、または少なくとも約３０日間にわたって維持するのに有効である。別の実施形態では、ボーラス用量は、小児患者の血清ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコアを約−２．０から約２．０間に、投与後少なくとも約１４日間、または少なくとも約３０日間にわたって維持するのに有効である。
【００１８】
追加の一態様では、本発明は、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の小児ボーラス用量を提供する。一実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質は、配列番号１に対し少なくとも約９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を備える。別の実施形態では、ボーラス用量は治療的に有効な体重調整されたボーラス用量である。他の一実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮのボーラス用量は、約０．８ｍｇ／ｋｇから約６．３ｍｇ／ｋｇ間のｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質を備える。他の実施形態では、ボーラス用量は、必要とする小児患者におけるヒト小児成長ホルモン分泌不全症（ＰＧＨＤ）の治療で使用するためのものである。別の実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質は、配列番号１のアミノ酸配列を備える。一実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮのボーラス用量は、皮下投与用に製剤化される。
【００１９】
別の態様では、本発明は、（ｉ）ヒト小児患者におけるヒト小児成長ホルモン分泌不全症（ＰＧＨＤ）を治療する方法において使用するため；または（ｉｉ）小児患者におけるＰＧＨＤの治療のための医薬品の製造において使用するためのｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質を提供する。一実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質は配列番号１に対し少なくとも約９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を備える。さらなる実施形態では、本方法は、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質のボーラス用量を投与することを含む。別の実施形態では、医薬品は、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質のボーラス用量を備える。他の一実施形態では、ボーラス用量は、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の治療的に有効な体重調整されたボーラス用量である。一実施形態では、ボーラス用量は約０．８ｍｇ／ｋｇから約６．３ｍｇ／ｋｇ間である。別の実施形態では、ボーラス用量は毎週、２週毎、半月毎、３週毎、またはひと月毎に投与される。別の実施形態では、ボーラス用量は半月毎、またはひと月毎に投与される。追加の一実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質は配列番号１のアミノ酸配列を備える。別の実施形態では、ボーラス用量は皮下に投与される。別の実施形態では、医薬品は皮下投与用に製剤化される。他の実施形態では、ヒト小児患者は、ｈＧＨ−ＸＴＥＮのボーラス用量の投与後に約−２．０から約２．０間の血清ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコア（ＳＤＳ）を有する。追加の一実施形態では、小児患者は、ボーラス用量の投与後に当該血清ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコアを呈し、該ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコアは、約−２．０超、約−１．５超、約−１．０超、約−０．５超、約０超、約０．５超、約１．０超、および約１．５超からなる群より選択される。一実施形態では、ボーラス用量は週毎、２週毎、３週毎、半月毎またはひと月毎に投与される。別の実施形態では、ボーラス用量は半月毎、またはひと月毎に投与される。別の実施形態では、ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコアは、約−１．５超、約−１．０超、約−０．５超、約０超、約０．５超、約１．０超、および約１．５超からなる群より選択される。別の実施形態では、ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコアは、約−１．０超、約０超、および約１．０超からなる群より選択される。
【００２０】
別の実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の投与は週毎、２週毎、半月毎、３週毎、またはひと月毎である。別の実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の投与は半月毎、またはひと月毎である。
【００２１】
他の一態様では、本発明は、小児成長ホルモン分泌不全症（ＰＧＨＤ）の治療のためのキットを提供する。一実施形態では、本キットは、ヒト成長ホルモン−ＸＴＥＮ（ｈＧＨ−ＸＴＥＮ）融合タンパク質を備える医薬組成物を収納する容器を備える。別の実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質は、配列番号１に対し少なくとも約９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を備える。他の一実施形態では、本キットは、当該容器に付随する添付文書をさらに備える。追加の一実施形態では、添付文書は、当該組成物が、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の初回用量の投与による小児患者における小児成長ホルモン分泌不全症（ＰＧＨＤ）の治療のためであること指示する。別の実施形態では、添付文書は、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の複数の後続用量の投与をさらに指示する。他の一実施形態では、初回用量は約０．８ｍｇ／ｋｇから約６．３ｍｇ／ｋｇ間である。さらなる実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の複数の後続用量は約０．８ｍｇ／ｋｇから約６．３ｍｇ／ｋｇ間である。一実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の用量は毎週、２週毎、半月毎、３週毎、またはひと月毎に投与される。別の実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の用量は半月毎、またはひと月毎に投与される。
【００２２】
別の態様では、本発明は、小児患者における小児成長ホルモン分泌不全症（ＰＧＨＤ）の治療の治療のための医薬品投与計画において使用するためのヒト成長ホルモン−ＸＴＥＮ（ｈＧＨ−ＸＴＥＮ）融合タンパク質を提供する。一実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質は、配列番号１に対し少なくとも約９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を備える。別の実施形態では、医薬品投与計画は、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質のボーラス用量を、小児患者を治療するために投与することを含む。他の一実施形態では、ボーラス用量はｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の治療的に有効な体重調整されたボーラス用量である。一実施形態では、ボーラス用量は約０．８ｍｇ／ｋｇから約６．３ｍｇ／ｋｇ間である。他の一実施形態では、医薬品投与計画は、小児患者において約−２．０から約２．０間のＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコア（ＳＤＳ）を達成するために必要なｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の量を決定するステップをさらに備える。一実施形態では、小児患者を治療するための医薬品投与計画は、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質を、約０．８ｍｇ／ｋｇから約６．３ｍｇ／ｋｇ間の初回ボーラス用量および約０．８ｍｇ／ｋｇから約６．３ｍｇ／ｋｇ間のｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の複数の後続ボーラス用量で投与することを含む。別の実施形態では、ボーラス用量は毎週、２週毎、半月毎、３週毎、またはひと月毎に投与される。別の実施形態では、ボーラス用量は半月毎、またはひと月毎に投与される。
本発明は、例えば以下を提供する。
（項目１）
小児患者におけるヒト小児成長ホルモン分泌不全症（ＰＧＨＤ）を治療する方法であって、ＰＧＨＤを有する前記小児患者に、配列番号１に対し少なくとも約９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を備えるヒト成長ホルモン−ＸＴＥＮ（ｈＧＨ−ＸＴＥＮ）融合タンパク質を、約０．８０ｍｇ／ｋｇから約６．３ｍｇ／ｋｇ間の治療的に有効な体重調整されたボーラス用量として投与することを含む方法。
（項目２）
前記ボーラス用量が毎週、２週毎、半月毎、３週毎、またはひと月毎に投与される、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記ボーラス用量がひと月毎に投与される、項目２に記載の方法。
（項目４）
前記ボーラス用量が２週毎または半月毎に投与される、項目２に記載の方法。
（項目５）
前記ボーラス用量が皮下に投与される、項目１から４のいずれか一つに記載の方法。
（項目６）
前記方法が、小児患者において７ｃｍ／年から１２ｃｍ／年相当の身長発育速度を達成するのに有効である、項目１から５のいずれか一つに記載の方法。
（項目７）
前記方法が、小児患者において８ｃｍ／年から１１ｃｍ／年相当の身長発育速度を達成するのに有効である、項目１から５のいずれか一つに記載の方法。
（項目８）
前記身長発育速度が、前記小児患者における投薬の少なくとも３ヶ月、少なくとも６ヶ月、または少なくとも１２ヶ月後に達成される、項目６または７に記載の方法。
（項目９）
達成された前記身長発育速度が初年度身長発育速度である、項目６または７に記載の方法。
（項目１０）
前記方法は、同一期間におよぶＸＴＥＮに結合していないｈＧＨの連日注射を用いて達成されるものと比較して、小児患者における身長発育速を達成するのに劣らない、項目１から５のいずれか一つに記載の方法。
（項目１１）
前記ボーラス用量が、約０．８ｍｇ／ｋｇから約１．５ｍｇ／ｋｇ、約１．８ｍｇ／ｋｇから約３．２ｍｇ／ｋｇ、または約３．５ｍｇ／ｋｇから約６．３ｍｇ／ｋｇから選択される、項目６から１０のいずれか一つに記載の方法。
（項目１２）
前記小児患者が、少なくとも１．０のベースライン血清ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコア（ＳＤＳ）からの増加を、投与後少なくとも約７日間、少なくとも約８日間、少なくとも約９日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１１日間、少なくとも約１２日間、少なくとも約１３日間、少なくとも約１４日間、少なくとも約１５日間、少なくとも約１６日間、少なくとも約１７日間、少なくとも約１８日間、少なくとも約１９日間、少なくとも約２０日間、少なくとも約２１日間、少なくとも約２２日間、少なくとも約２３日間、少なくとも約２４日間、少なくとも約２５日間、少なくとも約２６日間、少なくとも約２７日間、少なくとも約２８日間、少なくとも約２９日間、少なくとも約３０日間、または少なくとも約一ヶ月にわたって維持する、項目１から１１のいずれか一つに記載の方法。
（項目１３）
前記小児患者が、少なくとも１．０のベースライン血清ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコア（ＳＤＳ）からの増加を、投与後少なくとも約１４日間、少なくとも約２１日間、または少なくとも約３０日間にわたって維持する、項目１から１１のいずれか一つに記載の方法。
（項目１４）
前記小児患者が、少なくとも１．０のベースライン血清ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコア（ＳＤＳ）からの増加を、投与後少なくとも約１４日間、または少なくとも約３０日間にわたって維持する、項目１から１１のいずれか一つに記載の方法。
（項目１５）
前記小児患者が、投与後に約−２．０から約２．０間の血清ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコア（ＳＤＳ）を有する、項目１から１１のいずれか一つに記載の方法。
（項目１６）
前記ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコアが、約−１．５より大きく約２．０まで、約−１．０より大きく約２．０まで、約−０．５より大きく約２．０まで、約０より大きく約２．０まで、約０．５より大きく約２．０まで、約１．０より大きく約２．０まで、および約１．５より大きく約２．０までからなる群より選択される、項目１５に記載の方法。
（項目１７）
前記ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコアが、約−１．０より大きく約２．０まで、約０より大きく約２．０まで、および約１．０より大きく約２．０までからなる群より選択される、項目１５に記載の方法。
（項目１８）
前記小児患者が、前記ボーラス用量の投与後に前記血清ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコアを呈し、前記投与が毎週、２週毎、半月毎、３週毎、またはひと月毎である、項目１５に記載の方法。
（項目１９）
前記小児患者が、前記ボーラス用量の投与後に前記血清ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコアを呈し、前記投与が半月毎、またはひと月毎である、項目１５に記載の方法。
（項目２０）
前記小児患者が、少なくとも二回目、三回目、四回目のボーラス用量の投与後に、前記血清ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコアを呈する、項目１２から１９のいずれか一つに記載の方法。
（項目２１）
前記ボーラス用量が、前記小児患者の血清ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコアを約−２．０から約２．０間に、投与後少なくとも約７日間、少なくとも約８日間、少なくとも約９日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１１日間、少なくとも約１２日間、少なくとも約１３日間、少なくとも約１４日間、少なくとも約１５日間、少なくとも約１６日間、少なくとも約１７日間、少なくとも約１８日間、少なくとも約１９日間、少なくとも約２０日間、少なくとも約２１日間、少なくとも約２２日間、少なくとも約２３日間、少なくとも約２４日間、少なくとも約２５日間、少なくとも約２６日間、少なくとも約２７日間、少なくとも約２８日間、少なくとも約２９日間、少なくとも約３０日間、または少なくとも約一ヶ月にわたって維持するのに有効である、項目１５に記載の方法。
（項目２２）
前記ボーラス用量が、前記小児患者の血清ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコアを約−２．０から約２．０間に、投与後少なくとも約１４日間、少なくとも約２１日間、または少なくとも約３０日間にわたって維持するのに有効である、項目２１に記載の方法。
（項目２３）
前記ボーラス用量が、前記小児患者の血清ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコアを約−２．０から約２．０間に、投与後少なくとも約１４日間、または少なくとも約３０日間にわたって維持するのに有効である、項目２１に記載の方法。
（項目２４）
前記ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコアが、約−２．０から約２．０間に、一回目、または二回目、または三回目、または四回目のボーラス用量の投与後に維持される、項目２１から２３のいずれか一つに記載の方法。
（項目２５）
前記ボーラス用量が、約０．８ｍｇ／ｋｇ、約１．０ｍｇ／ｋｇ、約１．２ｍｇ／ｋｇ、約１．４ｍｇ／ｋｇ、約１．６ｍｇ／ｋｇ、約１．８ｍｇ／ｋｇ、約２．０ｍｇ／ｋｇ、約２．２ｍｇ／ｋｇ、約２．４ｍｇ／ｋｇ、約２．６ｍｇ／ｋｇ、約２．７ｍｇ／ｋｇ、約２．８ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約３．２ｍｇ／ｋｇ、約３．４ｍｇ／ｋｇ、約３．６ｍｇ／ｋｇ、約３．８ｍｇ／ｋｇ、約４．０ｍｇ／ｋｇ、約４．２ｍｇ／ｋｇ、約４．４ｍｇ／ｋｇ、約４．６ｍｇ／ｋｇ、約４．８ｍｇ／ｋｇ、約５．０ｍｇ／ｋｇ、約５．２ｍｇ／ｋｇ、約５．４ｍｇ／ｋｇ、約５．６ｍｇ／ｋｇ、約５．８ｍｇ／ｋｇ、約６．０ｍｇ／ｋｇ、および約６．３ｍｇ／ｋｇからなる群より選択される、項目１から２４のいずれか一つに記載の方法。
（項目２６）
前記ボーラス用量が約０．８ｍｇ／ｋｇから約１．５ｍｇ／ｋｇである、項目１から２４のいずれか一つに記載の方法。
（項目２７）
前記ボーラス用量が約１．８ｍｇ／ｋｇから約３．２ｍｇ／ｋｇである、項目１から２４のいずれか一つに記載の方法。
（項目２８）
前記ボーラス用量が約３．５ｍｇ／ｋｇから約６．３ｍｇ／ｋｇである、項目１から２４のいずれか一つに記載の方法。
（項目２９）
前記ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質が配列番号１のアミノ酸配列を備える、項目１から２８のいずれか一つに記載の方法。
（項目３０）
前記ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質が、配列番号１に対し、少なくとも約９１％、または少なくとも約９２％、または少なくとも約９３％、または少なくとも約９４％、または少なくとも約９５％、または少なくとも約９６％、または少なくとも約９７％、または少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有する、項目１から２８のいずれか一つに記載の方法。
（項目３１）
ヒト小児患者におけるヒト小児成長ホルモン分泌不全症（ＰＧＨＤ）を治療する方法であって、ＰＧＨＤを有する前記患者に、配列番号１に対し少なくとも約９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を備えるヒト成長ホルモン−ＸＴＥＮ（ｈＧＨ−ＸＴＥＮ）融合タンパク質を、前記患者の血清ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコア（ＳＤＳ）を約−２．０から約２．０間に前記ボーラス用量の投与後少なくとも７日間にわたって維持するのに有効な、治療的に有効な体重調整されたボーラス用量として投与することを含む方法。
（項目３２）
前記ボーラス用量が約０．８ｍｇ／ｋｇから約６．３ｍｇ／ｋｇ間である、項目３１に記載の方法。
（項目３３）
前記ボーラス用量が、前記患者の血清ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコアを、約−２．０から約２．０間に、投与後少なくとも約７日間、少なくとも約８日間、少なくとも約９日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１１日間、少なくとも約１２日間、少なくとも約１３日間、少なくとも約１４日間、少なくとも約１５日間、少なくとも約１６日間、少なくとも約１７日間、少なくとも約１８日間、少なくとも約１９日間、少なくとも約２０日間、少なくとも約２１日間、少なくとも約２２日間、少なくとも約２３日間、少なくとも約２４日間、少なくとも約２５日間、少なくとも約２６日間、少なくとも約２７日間、少なくとも約２８日間、少なくとも約２９日間、少なくとも約３０日間、または少なくとも約一ヶ月にわたって維持するのに有効である、項目３１または３２に記載の方法。
（項目３４）
前記ボーラス用量が、前記小児患者の血清ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコアを、約−２．０から約２．０間に、投与後少なくとも約１４日間、少なくとも約２１日間、または少なくとも約３０日間にわたって維持するのに有効である、項目３３に記載の方法。
（項目３５）
前記ボーラス用量が、前記小児患者の血清ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコアを、約−２．０から約２．０間に、投与後少なくとも約１４日間、または少なくとも約３０日間にわたって維持するのに有効である、項目３３に記載の方法。
（項目３６）
配列番号１に対し少なくとも約９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を備えるｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の小児ボーラス用量であって、前記ボーラス用量は、約０．８ｍｇ／ｋｇから約６．３ｍｇ／ｋｇ間のｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質を備える治療的に有効な体重調整されたボーラス用量である、小児ボーラス用量。
（項目３７）
必要とする小児患者におけるヒト小児成長ホルモン分泌不全症（ＰＧＨＤ）の治療において使用するための、項目３６に記載のボーラス用量。
（項目３８）
前記ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質が配列番号１のアミノ酸配列を備える、項目３６または３７に記載のボーラス用量。
（項目３９）
皮下投与用に製剤化された、項目３６から３８のいずれか一つに記載のボーラス用量。
（項目４０）
ヒト小児患者におけるヒト小児成長ホルモン分泌不全症（ＰＧＨＤ）を治療するための方法において使用するための、配列番号１に対し少なくとも約９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を備えるｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質であって、前記方法が約０．８ｍｇ／ｋｇから約６．３ｍｇ／ｋｇ間の用量で前記ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の治療的に有効な体重調整されたボーラス用量を投与することを含む、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質。
（項目４１）
小児患者におけるＰＧＨＤの治療のための医薬品の製造における、配列番号１に対し少なくとも約９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を備えるｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の使用であって、前記ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質が、前記小児患者に、約０．８ｍｇ／ｋｇから約６．３ｍｇ／ｋｇ間の用量で、前記ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の治療的に有効な体重調整されたボーラス用量として投与される、使用。
（項目４２）
前記ボーラス用量が、毎週、２週毎、半月毎、３週毎、またはひと月毎に投与される、項目４０に記載のｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質または項目４１に記載の使用。
（項目４３）
前記ボーラス用量が、半月毎、またはひと月毎に投与される、項目４０に記載のｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質または項目４１に記載の使用。
（項目４４）
前記ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質が配列番号１のアミノ酸配列を備える、項目４０に記載のｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質または項目４１から４３のいずれか一つに記載の使用。
（項目４５）
前記ボーラス用量が皮下に投与される、項目４０に記載のｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質または項目４１から４４のいずれか一つに記載の使用。
（項目４６）
前記ヒト小児患者が、前記ボーラス用量の投与後に、約−２．０から約２．０間の血清ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコア（ＳＤＳ）を有する、項目４０に記載のｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質または項目４１から４５のいずれか一つに記載の使用。
（項目４７）
前記ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコアが、約−１．５超、約−１．０超、約−０．５超、約０超、約０．５超、約１．０超、および約１．５超からなる群より選択される、項目４０に記載のｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質または項目４６に記載の使用。
（項目４８）
前記ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコアが、約−１．０超、約０超、および約１．０超からなる群より選択される、項目４０に記載のｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質または項目４６に記載の使用。
（項目４９）
前記投与が週毎、２週毎、半月毎、３週毎、またはひと月毎である、項目４０に記載のｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質または項目４１から４８のいずれか一項に記載の使用。（項目５０）
前記投与が半月毎、またはひと月毎である、項目４０に記載のｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質または項目４１から４８のいずれか一項に記載の使用。
（項目５１）
小児成長ホルモン分泌不全症（ＰＧＨＤ）の治療のためのキットであって、
（ｉ）配列番号１に対し少なくとも約９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を備えるヒト成長ホルモン−ＸＴＥＮ（ｈＧＨ−ＸＴＥＮ）融合タンパク質を備える医薬組成物を収納する容器と、および
（ｉｉ）前記容器に付随する添付文書であって、前記添付文書は、前記組成物は、約０．８ｍｇ／ｋｇから約６．３ｍｇ／ｋｇ間の前記ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の初回用量、および約０．８ｍｇ／ｋｇから約６．３ｍｇ／ｋｇ間の前記ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の複数の後続用量の投与による、小児患者における小児成長ホルモン分泌不全症（ＰＧＨＤ）の治療用であることを示し、前記用量が、毎週、２週毎、半月毎、３週毎、またはひと月毎に投与される、添付文書と
を備えるキット。
（項目５２）
前記容器が薬学的に許容され得る担体をさらに備える、項目５１に記載のキット。
（項目５３）
小児患者における小児成長ホルモン分泌不全症（ＰＧＨＤ）の治療の治療のための医薬品投与計画において使用するための、配列番号１に対し少なくとも約９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を備えるヒト成長ホルモン−ＸＴＥＮ（ｈＧＨ−ＸＴＥＮ）融合タンパク質であって、前記計画はｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質のボーラス用量を、前記小児患者を治療するために投与することを含む、成長ホルモン−ＸＴＥＮ（ｈＧＨ−ＸＴＥＮ）融合タンパク質。
（項目５４）
前記医薬品投与計画が、前記小児患者において約−２．０から約２．０間のＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコア（ＳＤＳ）を達成するのに必要なｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の量を決定するステップをさらに備える、項目５３に記載のｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質。
（項目５５）
前記小児患者を治療するための前記医薬品投与計画は、約０．８ｍｇ／ｋｇから約６．３ｍｇ／ｋｇ間の初回ボーラス用量および約０．８ｍｇ／ｋｇから約６．３ｍｇ／ｋｇ間の前記ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の複数の後続用量で、前記ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質を投与することを含む、項目５３に記載のｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質。
（項目５６）
前記ボーラス用量が毎週、２週毎、半月毎、３週毎、またはひと月毎に投与される、項目５５に記載のｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質。
（項目５７）
前記ボーラス用量が半月毎、またはひと月毎に投与される、項目５５に記載のｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質。
（項目５８）
投与される前記ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質が、モルベースで、ＸＴＥＮに結合していない同量のｈＧＨに相当し、小児患者に投与される、項目１０に記載の方法。
（項目５９）
前記方法は、前記小児患者の身長発育速度を、同等の用量期間にわたって、モルベースで、同等量のＸＴＥＮに結合していないｈＧＨの連日注射を投与された小児患者において達成された前記身長発育速度と比較して、その少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、または少なくとも約３０％以内に維持するのに有効である、項目１から５のいずれか一つに記載の方法。
【００２３】
参照による組み込み
各個々の刊行物、特許、または特許出願が具体的かつ個別に参照により組み込まれることが示されたかのように同程度に、本明細書で言及される全ての刊行物、特許、および特許出願は、本明細書に参照により組み込まれる。
【図面の簡単な説明】
【００２４】
【図１】ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質についてのアミノ酸配列（ｈＧＨ配列は下線および太字箇所である）（配列番号１）を提供する。
【図２】小児患者におけるヒト成長ホルモン−ＸＴＥＮ（ｈＧＨ−ＸＴＥＮ）融合タンパク質の第１ｂ／２ａ相試験の設計を要約する。
【図３】ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の血漿中濃度（ｎｇ／ｍＬ）平均値を示す。
【図４】ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質のＣｍａｘ（ｎｇ／ｍＬ）およびｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質のＡＵＣ（ｈｒ−ｎｇ／ｍＬ）を示す。
【図５】ＩＧＦ−Ｉにおける（ベースラインからの）持続変化（平均値）を実証する。
【図６】ＩＧＦ−Ｉ応答がｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の用量と線形関係にあることを示す。
【図７】小児患者におけるヒト成長ホルモン−ＸＴＥＮ（ｈＧＨ−ＸＴＥＮ）融合タンパク質の第１ｂ／２ａ相試験の設計を要約する。ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質は、３０日間にわたって摂取される５〜３７μｇ／ｋｄ／日の遺伝子組み換え成長ホルモン（ｒｈＧＨ）質量に同等で投薬される。
【図８】投薬完了群の臨床的特徴を示す表を提供する。数値は平均（ＳＤ）である。
【図９】用量段階群１〜６において治験薬に関連が有るかもしれない、おそらく関連が有る、明らかに関連が有ると考えられる関連有害事象を示す表を提供する。全ての関連する有害事象は軽度（ＣＴＣＡＥグレード１）および一過性である。重篤な有害事象無し、予期されない有害事象無し、患者中止例無し、脂肪萎縮症無し、小結節無し。
【図１０】ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の血漿中濃度（ｎｇ／ｍＬ）平均値（第１ｂ相からの予備的ＰＫ）を示す。
【図１１】ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質のＣｍａｘ（ｎｇ／ｍＬ）およびｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質のＡＵＣ（ｈｒ−ｎｇ／ｍＬ）（用量比例性）を示す。
【図１２Ａ】融合タンパク質の単回用量に対するＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコア応答を示す。
【図１２Ｂ】融合タンパク質の単回用量に対するＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコア応答を示す。
【図１３Ａ】ひと月毎の平均ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコア（単回用量）におけるベースラインからの増加を示す。平均ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコアにおける増加は、用量の増加とともに増加する（ｐ＜０．００００１）。所望のひと月毎のＩＧＦ−Ｉプロファイルを達成した。
【図１３Ｂ】ひと月毎の平均ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコア（単回用量）におけるベースラインからの増加を示す。平均ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコアにおける増加は、用量の増加とともに増加する（ｐ＜０．００００１）。所望のひと月毎のＩＧＦ−Ｉプロファイルを達成した。
【図１４】年齢適合歴史的対照およびＶＲＳ−３１７治療患者についての平均年率換算された身長発育速度を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２５】
本発明の実施形態を記載する前に、かかる実施形態は例としてのみ提供され、本明細書に記載の本発明の実施形態に対する種々の代替が本発明を実施する際に採用され得ることが理解されたい。多数の変形、変更、および置換が本発明から逸脱することなく当業者に想起されるだろう。
【００２６】
別段の定義がない限り、本明細書で使用される全ての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書に記載のものと類似または同等の方法および材料は、本発明の実施または試験において用いることができるが、好適な方法および材料を以下に記載する。矛盾する場合、定義を含む、本特許明細書が支配する。加えて、材料、方法および例は例示にすぎず、限定を意図しない。多数の変形、変更、および置換が本発明から逸脱することなく当業者に想起されるだろう。
【００２７】
定義
本明細書で用いるとき、以下の用語は別段の指示がない限り、それらに与えられた意味を有する。
【００２８】
本明細書および請求項内で使用されるとき、単数形、「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、および「その（ｔｈｅ）」は、文脈で明確にそうでないと指示されない限り、複数の言及を含む。例えば、用語「細胞」は、その混合物も含む、複数の細胞を含む。
【００２９】
用語「ポリペプチド」、「ペプチド」、および「タンパク質」は、本明細書で互換可能に使用され、任意の長さのアミノ酸の重合体を意味する。重合体は直鎖状または分岐鎖状であってもよく、修飾アミノ酸を備えてよく、非アミノ酸によって中断されてよい。これらの用語は、例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化、または標識構成要素とのコンジュゲーションなど任意の他の操作によって修飾されたアミノ酸重合体も包含する。
【００３０】
本明細書で用いるとき、用語「アミノ酸」は、グリシンおよびＤまたはＬの両光学異性体、およびアミノ酸類似体およびペプチド模倣物質を含むがこれに限定されない、天然および／または非天然または合成のアミノ酸のいずれかを示す。標準的な１文字または３文字コードがアミノ酸を示すために使用される。
【００３１】
用語「天然Ｌ−アミノ酸」は、グリシン（Ｇ）、プロリン（Ｐ）、アラニン（Ａ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、システイン（Ｃ）、フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、トリプトファン（Ｗ）、ヒスチジン（Ｈ）、リジン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、グルタミン（Ｑ）、アスパラギン（Ｎ）、グルタミン酸（Ｅ）、アスパラギン酸（Ｄ）、セリン（Ｓ）、およびトレオニン（Ｔ）のＬ型の光学異性体を意味する。
【００３２】
用語「非天然型」は配列に適用されるときおよび本明細書で用いるとき、哺乳類に見られる野生型または天然型配列に対して対応物を有しないか、相補的でないか、または高度の相同性を有さないポリペプチドまたはポリヌクレオチド配列を意味する。例えば、非天然型ポリペプチドまたはフラグメントは、好適にアライメントした場合に、天然型配列と比較して、９９％、９８％、９５％、９０％、８０％、７０％、６０％、５０％以下、またはなお低いアミノ酸配列同一性を共有し得る。
【００３３】
用語「親水性」および「疎水性」は、物質が水に対して有する親和性の程度を意味する。親水性物質は、水への強い親和性を有し、水に溶解するか、水と混合するか、または水によって湿潤する傾向にある一方で、疎水性物質は、水への親和性を実質的に欠き、水をはじくおよび吸収しない傾向にあり、水に溶解しないか、水と混合しないか、または水によって湿潤しない傾向にある。アミノ酸は、それらの疎水性に基づいて特徴づけられることができる。いくつかのスケールが開発されている。一つの例は、Ｈｏｐｐ，ＴＰら，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ（１９８１）７８：３８２４に掲載されるＬｅｖｉｔｔ，Ｍら，Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ（１９７６）１０４：５９によって開発されたスケールである。「親水性アミノ酸」の例としては、アルギニン、リジン、トレオニン、アラニン、アスパラギン、およびグルタミンが挙げられる。特に注目されるのは、親水性アミノ酸アスパルテート、グルタメート、およびセリン、およびグリシンである。「疎水性アミノ酸」の例としては、トリプトファン、チロシン、フェニルアラニン、メチオニン、ロイシン、イソロイシン、およびバリンが挙げられる。
【００３４】
「フラグメント」は、治療活性および／または生物学的活性の少なくとも一部を保持する、天然の生物学的に活性なタンパク質（ｎａｔｉｖｅ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ  ａｃｔｉｖｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ）の切断型である。「変異体」は、生物学的に活性なタンパク質の治療活性および／または生物学的活性の少なくとも一部を保持する、天然の生物学的に活性なタンパク質と配列相同性を有するタンパク質である。例えば、変異体タンパク質は参照の生物学的に活性なタンパク質と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％のアミノ酸配列同一性を共有し得る。本明細書で用いるとき、用語「生物学的に活性なタンパク質部分」は、たとえば部位特異的突然変異誘発、挿入によって意図的に、または突然変異によって偶発的に修飾されたタンパク質を含む。
【００３５】
「宿主細胞」は、対象ベクターのレシピエントであることができる、またはレシピエントである個々の細胞または細胞培養物を含む。宿主細胞は、単一の宿主細胞の後代を含む。後代は、天然の、偶発的な、または意図的な突然変異のために、元の親細胞と必ずしも（ＤＮＡ相補体全体の形態またはゲノムにおいて）完全に同一でなくてもよい。宿主細胞は、本発明のベクターを用いてインビボで形質移入された細胞を含む。
【００３６】
「単離された」は、本明細書で開示する種々のポリペプチドを説明するために使用する場合に、その天然の環境の構成要素から同定および分離および／または回収されたポリペプチドを意味する。その天然の環境の夾雑物成分は、ポリペプチドの診断または治療用途を通例妨害する物質であり、酵素、ホルモン、および他のタンパク質性または非タンパク質性の溶質を含み得る。当業者に明らかなように、非天然型ポリヌクレオチド、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、抗体、またはそのフラグメントは、それをその天然型対応物から区別するための「単離」を必要としない。加えて、「濃縮された」、「分離された」または「希釈された」ポリヌクレオチド、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、抗体、またはそのフラグメントは、濃度または体積当たりの分子の数が、概してその天然型対応物のそれよりも大きいという点で、その天然型対応物から区別可能である。一般に、組換え手段によって作られ、宿主細胞にて発現されたポリペプチドは、「単離された」と見なされる。
【００３７】
「単離された」ポリヌクレオチドまたはポリペプチドをコードする核酸または他のポリペプチドをコードする核酸は、ポリペプチドをコードする核酸の天然源において通常伴う少なくとも１つの夾雑核酸分子から同定および分離された核酸分子である。単離されたポリペプチドをコードする核酸分子は、それが天然に見出される形態または状態以外のものである。それゆえ、単離されたポリペプチドをコードする核酸分子は、該核酸分子が天然の細胞中に存在するとき、特定のポリペプチドをコードする核酸分子から区別される。しかしながら、単離されたポリペプチドをコードする核酸分子は、たとえば核酸分子が天然に存在する細胞のものとは異なり、染色体内または染色体外の位置にある場合、ポリペプチドを通常発現する細胞に含有されたポリペプチドをコードする核酸分子を含む。
【００３８】
「キメラ」タンパク質は、配列内の天然に生じる場合とは異なる位置に領域を備える、少なくとも１つの融合ポリペプチドを含有する。その領域は、別個のタンパク質に通常存在し得、融合ポリペプチドにおいて一つにまとめられる。またはその領域は、同一のタンパク質に通常存在し得るが、融合ポリペプチドにおいて新たな位置に配置される。キメラタンパク質は、例えば、化学合成によって、またはペプチド領域が所望の関係でコードされるポリヌクレオチドを作出および翻訳することによって作出され得る。
【００３９】
「コンジュゲートされた」、「結合された」、「融合された」、および「融合」は、本明細書では互換可能に使用される。これらの用語は、化学的コンジュゲーションまたは組換え手段を含むなんらかの手段によって、２つ以上の化学元素または構成要素を結合させることを指す。たとえば、プロモーターまたはエンハンサーは、配列の転写に影響を及ぼす場合に、コード配列に作動可能に結合される。概して、「作動可能に結合される」は、結合されているＤＮＡ配列が隣接しており、読み取り相またはインフレームにあることを意味する。「インフレーム融合」は、２つ以上のオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）が結合して、元のＯＲＦの正しい読み取り枠を維持する様式で、連続したより長いＯＲＦを形成することを示す。それゆえ、結果得られる組換え融合タンパク質は、元のＯＲＦによってコードされたポリペプチドに対応する、２つ以上のセグメント（このセグメントは通常天然ではこのように結合されない）を含有する単一のタンパク質である。
【００４０】
ポリペプチドという面においては、「直鎖配列」または「配列」は、アミノ末端からカルボキシル末端の方向でのポリペプチドにおけるアミノ酸の順序であり、配列内で相互に隣り合う残基は、ポリペプチドの１次構造において隣接している。「部分配列」は、一方向または両方向で追加の残基を備えることが公知である、ポリペプチドの一部の直鎖配列である。
【００４１】
「異種」は、それが比較されている実体の残りとは遺伝子型的に異なる実体から由来することを意味する。例えば、天然コード配列から取り出され、天然配列以外のコード配列に作動可能に結合されたグリシンリッチ配列は、異種グリシンリッチ配列である。用語「異種」は、ポリヌクレオチド、ポリペプチドに適用される場合、ポリヌクレオチドまたはポリペプチドが、それが比較されている実体の残りとは遺伝子型的に異なる実体に由来することを意味する。
【００４２】
用語「ポリヌクレオチド」、「核酸」、「ヌクレオチド」および「オリゴヌクレオチド」は互換可能に使用される。これらの用語は、任意の長さのヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチドまたはリボヌクレオチドのいずれか、またはその類似体の重合形態を指す。ポリヌクレオチドは、任意の三次元構造を有し得、既知または未知の任意の機能を果たし得る。以下に、ポリヌクレオチドの非限定的な例を挙げる。遺伝子または遺伝子フラグメントのコード領域または非コード領域、連鎖解析から規定される座位、エクソン、イントロン、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、転移ＲＮＡ、リボソームＲＮＡ、リボザイム、ｃＤＮＡ、組換えポリヌクレオチド、分枝鎖ポリヌクレオチド、プラスミド、ベクター、任意の配列の単離されたＤＮＡ、任意の配列の単離されたＲＮＡ、核酸プローブ、およびプライマー。ポリヌクレオチドは、メチル化ヌクレオチドおよびヌクレオチド類似体などの改変されたヌクレオチドを備え得る。存在する場合、ヌクレオチド構造への改変は重合体の構築の前または後に与えられ得る。ヌクレオチドの配列は、非ヌクレオチド構成要素によって割り込まれてもよい。ポリヌクレオチドは、例えば標識構成要素とのコンジュゲーションによって、重合後にさらに改変されてもよい。
【００４３】
用語「ポリヌクレオチドの相補体」は、それが参照配列と完全な忠実度でハイブリダイズできるように、参照配列と比較して、相補的な塩基配列と逆配向とを有するポリヌクレオチド分子を示す。
【００４４】
ポリヌクレオチドに適用される「組換え体」は、そのポリヌクレオチドが、インビトロクローニング、制限および／またはライゲーションステップ、および宿主細胞で潜在的に発現可能である構築物をもたらす他の手順の種々の組み合わせの生成物であることを意味する。
【００４５】
用語「遺伝子」または「遺伝子フラグメント」は、本明細書で互換可能に使用される。これらは、転写および翻訳された後に、特定のタンパク質をコードすることができる少なくとも１つのオープンリーディングフレームを含有するポリヌクレオチドを指す。遺伝子または遺伝子フラグメントは、ポリヌクレオチドが、コード領域全体またはそのセグメントを対象とし得る、少なくとも１つのオープンリーディングフレームを含有する限り、ゲノムまたはｃＤＮＡであり得る。「融合遺伝子」は、互いに結合される少なくとも２つの異種ポリヌクレオチドから構成される遺伝子である。
【００４６】
「相同性」または「相同の」は、２つ以上のポリヌクレオチド配列または２つ以上のポリペプチド配列の間の配列類似性または互換性を示す。ＢｅｓｔＦｉｔなどのプログラムを使用して２つの異なるアミノ酸配列間の配列同一性、類似性または相同性を決定するとき、デフォルト設定が使用され得るか、またはｂｌｏｓｕｍ４５またはｂｌｏｓｕｍ８０などの適切なスコアリングマトリックスが選択されて同一性、類似性または相同性スコアを最適化し得る。好ましくは、相同であるポリヌクレオチドとは、本明細書において定義されるストリンジェントな条件下でハイブリダイズするものであり、それらの配列に対し、少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、さらに好ましくは少なくとも９０％、さらに好ましくは９５％、さらに好ましくは９７％、さらに好ましくは９８％、およびより一層好ましくは９９％の配列同一性を有する。
【００４７】
「ライゲーション」は、２つの核酸フラグメントまたは遺伝子間で、ホスホジエステル結合を形成してそれらを一つに結合してする過程を示す。ＤＮＡフラグメントまたは遺伝子を一つにライゲーションさせるには、ＤＮＡの末端は互いに適合していないといけない。場合によっては、エンドヌクレアーゼ消化後にその末端は直接適合するだろう。しかしながら、それらをライゲーションに適合させるために、エンドヌクレアーゼ消化の後に通常生成される付着端を平滑末端にまず変換することが必要であり得る。
【００４８】
用語「ストリンジェントな条件」または「ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件」は、ポリヌクレオチドが他の配列よりも検出可能により大きな程度（たとえばバックグラウンドの少なくとも２倍）までその標的配列にハイブリダイズする条件への言及を含む。概して、ハイブリダイゼーションのストリンジェンシーは、部分的には、洗浄ステップが行われる温度および塩濃度に関して表される。典型的には、ストリンジェントな条件は、塩濃度が約１．５Ｍ未満のＮａイオン、典型的には、ｐＨ７．０〜８．３にて約０．０１〜１．０ＭのＮａイオン濃度（または他の塩）であり、温度は、短いポリヌクレオチド（たとえば１０〜５０のヌクレオチド）では少なくとも約３０℃、長いポリヌクレオチド（たとえば５０超のヌクレオチド）では少なくとも約６０℃である条件である。例えば、「ストリンジェントな条件」は、５０％ホルムアミド、１Ｍ  ＮａＣｌ、１％ＳＤＳにおける３７℃でのハイブリダイゼーション、および０．１×ＳＳＣ／１％ＳＤＳにおける６０〜６５℃での各１５分間の洗浄３回を含むことができる。あるいは、約６５℃、６０℃、５５℃、または４２℃の温度が使用され得る。ＳＳＣ濃度は、約０．１〜２×ＳＳＣまで変動され得て、ＳＤＳは約０．１％で存在する。このような洗浄温度は、通例、定められたイオン強度およびｐＨでの特定の配列の熱融点よりも約５℃〜２０℃低くなるように選択される。Ｔｍは、標的配列の５０％が完全に一致するプローブとハイブリダイズする温度（定められたイオン強度およびｐＨ下）である。Ｔｍを計算するための式および核酸ハイブリダイゼーションの条件は周知であり、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｊ．ら（１９８９）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，第２編，１−３巻，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ，Ｐｌａｉｎｖｉｅｗ  Ｎ．Ｙ．；特に２巻９章を参照、に見出すことができる。典型的には、ブロッキング試薬は非特異的ハイブリダイゼーションをブロックするために使用される。このようなブロッキング試薬は、例えば、約１００〜２００μｇ／ｍｌの、せん断され、変性されたサケ精子ＤＮＡを含む。有機溶媒、たとえば約３５〜５０％ｖ／ｖの濃度のホルムアミドも、ＲＮＡ：ＤＮＡハイブリダイゼーションのためなどの特定の状況下で使用され得る。これらの洗浄条件に対する有用な変形は、当業者に容易に明らかだろう。
【００４９】
用語「同一性パーセント」および「同一性％」は、ポリヌクレオチド配列に適用される場合、規格化されたアルゴリズムを使用してアラインメントされた少なくとも２つのポリヌクレオチド配列間の残基が一致する百分率をいう。このようなアルゴリズムは、２つの配列の間のアライメントを最適化して、それにしたがって２つの配列のより有意義な比較を達成するために、規格化され、再現可能な方法で、比較されている配列にギャップを挿入し得る。同一性パーセントは、規定のポリヌクレオチド配列全体の長さにわたって測定され得るか、またはより短い長さ、たとえばより大型の規定されたポリヌクレオチド配列から得たフラグメント、例えば少なくとも４５連続残基、少なくとも６０連続残基、少なくとも９０連続残基、少なくとも１２０連続残基、少なくとも１５０連続残基、少なくとも２１０連続残基、または少なくとも４５０連続残基のフラグメントにわたって測定され得る。かかる長さは、単なる例示であり、本明細書、表、図または配列リストに示す配列によって支持される任意のフラグメント長さが、同一性百分率が測定され得る長さを説明するために使用されてよいことが理解されたい。
【００５０】
本明細書で同定されるポリペプチド配列に関する「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」は、最大配列同一性パーセントを達成するために配列を整列させ、必要に応じてギャップを導入した後の、いかなる保存的置換も配列同一性の一部と見なさない、第二の参照ポリペプチド配列またはその一部のアミノ酸残基と同一である、クエリー配列のアミノ酸残基の百分率として定義される。アミノ酸配列同一性パーセントの決定を目的とするアラインメントは、当分野の技術の範囲に含まれる各種の方法、例えばＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮまたはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの公的に利用可能なコンピューターソフトウェアを使用して達成されることができる。当業者は、比較される配列の全長にわたって最大のアラインメントを達成するのに必要な任意のアルゴリズムを含む、アラインメントを測定するための適切なパラメータを決定することができる。同一性パーセントは、規定のポリペプチド配列全体の長さにわたって測定され得るか、またはより短い長さ、たとえばより大きな、規定のポリペプチド配列から得られたフラグメント、例えば少なくとも１５連続残基、少なくとも２０連続残基、少なくとも３０連続残基、少なくとも４０連続残基、少なくとも５０連続残基、少なくとも７０連続残基、または少なくとも１５０連続残基のフラグメントにわたって測定され得る。かかる長さは単なる例示にすぎず、本明細書、表、図または配列リストに示される配列によって支持される任意のフラグメント長さが、同一性百分率が測定され得る長さを説明するために使用され得ることが理解されたい。
【００５１】
用語「非反復性」は、ポリペプチドに関して本明細書で使用する場合、ペプチドまたはポリペプチド配列の内部相同性の欠如または制限された程度を示す。用語「実質的に非反復性の」は、例えば、同一のアミノ酸タイプである、配列内の４つの連続したアミノ酸の例がほとんどまたは全くないこと、またはポリペプチドが１０以下の部分配列スコア（下に規定される）を有すること、またはポリペプチド配列を構成する配列モチーフの、Ｎ末端からＣ末端の順序でのパターンがないことを意味することができる。用語「反復性」は、ポリペプチドに関して本明細書で用いるとき、ペプチドまたはポリペプチド配列の内部相同性の程度を示す。これに対し、「反復性の」配列は、短いアミノ酸配列の複数の同一のコピーを含有し得る。例えば、対象のポリペプチド配列はｎ量体配列（ｎ−ｍｅｒ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ）に分割され得て、同一配列の数を計数することができる。高度に反復性の配列は、高い割合で同一配列を含有するが、非反復性の配列は同一配列をほとんど含有しない。ポリペプチドに関しては、配列は規定された長さまたは可変長のより短い配列の複数のコピーまたはモチーフを含有することができ、ここでモチーフ自体は非反復の配列を有し、完全長ポリペプチドを実質的に非反復性にする。非反復性を測定するポリペプチドの長さは、３アミノ酸から約２００アミノ酸、約６から約５０アミノ酸、または約９から約１４アミノ酸で変化することができる。ポリヌクレオチド配列に関して使用される「反復性」は、例えば、所与の長さの同一ヌクレオチド配列の頻度などの、配列における内部相同性の程度を示す。反復性は、たとえば同一配列の頻度を分析することによって測定できる。
【００５２】
「ベクター」は、挿入された核酸分子を宿主細胞の中および／または宿主細胞間に移動させる、適切な宿主において好ましくは自己複製する核酸分子である。該用語は、ＤＮＡまたはＲＮＡの細胞への挿入のために主に機能するベクター、ＤＮＡまたはＲＮＡの複製のために主に機能するベクターの複製、およびＤＮＡまたはＲＮＡの転写および／または翻訳のために機能する発現ベクターを含む。上記機能の２つ以上を提供するベクターも含まれる。「発現ベクター」は、適切な宿主細胞に導入されたときに、ポリペプチドに転写および翻訳されることができるポリヌクレオチドである。「発現系」は、所望の発現生成物を得るように機能できる発現ベクターで構成される、好適な宿主細胞を通常意味する。
【００５３】
「血清分解抵抗性」は、ポリペプチドに適用されるとき、血清または血漿中のプロテアーゼが一般的に関与する、血液またはその構成成分中での分解に耐えるポリペプチドの能力を示す。血清分解抵抗性は、通例一連の日数（たとえば０．２５、０．５、１、２、４、８、１６日間）にわたって、通例約３７℃にてタンパク質をヒト（または必要に応じてマウス、ラット、サル）の血清または血漿と組み合わせることによって測定することができる。これらの時点の試料はウェスタンブロットアッセイにかけることができ、抗体を用いてタンパク質が検出される。抗体は、そのタンパク質におけるタグとなることができる。タンパク質のサイズが注入されたタンパク質のサイズと同一である場合、そのタンパク質がウェスタンで単一のバンドを示すならば、分解はおこっていない。この例示的な方法では、ウェスタンブロットまたは同等の技法によって判断されるように、タンパク質の５０％が分解されている時点が、タンパク質の血清分解半減期または「血清半減期」である。
【００５４】
用語「ｔ１／２」は、本明細書で使用するとき、ｌｎ（２）／Ｋｅｌとして計算される終末相半減期を意味する。Ｋｅｌは、ｌｏｇ濃度対時間曲線の終末相線形部分の線形回帰によって計算された終末相排出速度定数である。半減期は通例、生体内に蓄積した投与された物質の半量が、正常な生物学的過程によって代謝または排出されるのに必要な時間を示す。用語「ｔ１／２」、「終末相半減期」、「排出半減期」および「循環半減期」は、本明細書で互換可能に使用される。
【００５５】
「見かけの分子量係数」または「見かけの分子量」は、特定のアミノ酸配列によって提示された見かけの分子量の相対的増加または減少の尺度を指す関連用語である。見かけの分子量は、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）および類似の方法を使用して球状タンパク質標準と比較して決定され、「見かけのｋＤ」単位で測定される。見かけの分子量係数は、見かけの分子量と実際の分子量間の比であり、実際の分子量は、アミノ酸組成に基づいて、組成物中の各種類のアミノ酸の計算された分子量を加算することによって予測される。
【００５６】
「流体力学半径」または「ストークス半径」は、溶液内を移動し、溶液の粘度によって抵抗を受けるのは物体であると仮定することによって測定される溶液中の分子の有効半径（Ｒｈ（ｎｍ単位））である。本発明の実施形態では、ＸＴＥＮ融合タンパク質の流体力学半径測定値は、より直観的な尺度である「見かけの分子量係数」と相関している。タンパク質の「流体力学半径」は、水溶液中のその拡散速度ならびに高分子のゲル中を移動するその能力に影響を及ぼす。タンパク質の流体力学半径は、その分子量、ならびに形状および緻密性を含むその構造によって決定される。流体力学半径を判断するための方法は当技術分野で周知であり、例えば、米国特許第６，４０６，６３２号および同第７，２９４，５１３号に記載されるサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）の使用がある。大半のタンパク質は球状構造を有し、それはタンパク質が最小の流体力学半径で有することのできる最も小型の三次元構造である。いくつかのタンパク質は、ランダムで開かれた、非構造性の、または「線形」高次構造を取り、結果として、類似した分子量の一般的な球状タンパク質と比較してはるかに大きい流体力学半径を有する。
【００５７】
「生理学的な条件」は、温度、塩濃度、ｐＨを含む、生物対象の条件に類似した生物宿主における一連の条件、並びに、インビトロでの条件を指す。インビトロアッセイで使用される多くの生理的に関連する条件が確立されている。概して、生理的緩衝液は、生理的濃度の塩を含有し、約６．５〜約７．８に、および好ましくは約７．０〜約７．５の範囲の中性ｐＨに調整される。種々の生理的緩衝液がＳａｍｂｒｏｏｋら（１９８９）に記載されている。生理的に関連する温度の範囲は、約２５℃〜約３８℃、好ましくは約３５℃〜約３７℃である。
【００５８】
「反応基」は、第二の反応基に結合することができる化学構造である。反応基の例としては、アミノ基、カルボキシル基、スルフヒドリル基、ヒドロキシル基、アルデヒド基、アジド基が挙げられる。いくつかの反応基を活性化させて、第二の反応基との結合を促進させることができる。活性化の非限定的な例としては、カルボキシル基とカルボジイミドとの反応、カルボキシル基の活性化エステルへの変換、またはカルボキシル基のアジド官能基への変換が挙げられる。
【００５９】
「制御放出性薬剤」、「徐放性薬剤」、「デポー製剤」または「持続放出性薬剤」は互換可能に使用されて、その薬剤なしにポリペプチドを投与した場合の放出期間と比較して、本発明のポリペプチドの放出期間を延長することができる薬剤を意味する。本発明の異なる実施形態は、異なる放出速度を有してよく、結果異なる治療量をもたらす。
【００６０】
用語「抗原」、「標的抗原」または「免疫原」は本明細書で互換可能に使用されて、抗体フラグメントまたは抗体フラグメントをベースとする治療薬が結合する、またはそれに対し特異性を有する構造または結合決定因子を意味する。
【００６１】
用語「ペイロード」は、本明細書で用いるとき、小分子ファーマコフォアの対応物である、生物学的活性または治療活性を有するタンパク質またはペプチド配列を示す。ペイロードの例としては、サイトカイン、酵素、ホルモン、および血液因子および成長因子を含むが、これらに限定されない。ペイロードは、化学治療薬、抗ウイルス化合物、毒素または造影剤などの遺伝子的に融合されたまたは化学的にコンジュゲートされた部分をさらに備えることができる。これらのコンジュゲートされた部分は、開裂可能または開裂不可能であり得るリンカーを介してポリペプチドの残りの部分に結合することができる。
【００６２】
用語「アンタゴニスト」は、本明細書で用いるとき、本明細書で開示する天然ポリペプチドの生物学的活性を部分的または完全に遮断、阻害、または中和する任意の分子を含む。ポリペプチドのアンタゴニストを同定する方法は、天然ポリペプチドをアンタゴニスト候補分子と接触させること、および天然ポリペプチドに通常関連付けられた１つ以上の生物学的活性の検出可能な変化を測定することを含み得る。本発明の文脈において、アンタゴニストは、タンパク質、核酸、炭水化物、抗体または生物学的に活性なタンパク質の効果を減少させる任意のその他の分子を含み得る。
【００６３】
用語「アゴニスト」は広義で使用され、本明細書に開示の天然ポリペプチドの生物学的活性を模倣する任意の分子を含む。好適なアゴニスト分子は、特に、アゴニスト抗体または抗体フラグメント、天然ポリペプチドのフラグメントまたはアミノ酸配列変異体、ペプチド、有機小分子等を含む。天然ポリペプチドのアゴニストを同定するための方法は、天然ポリペプチドをアゴニスト候補分子と接触させること、および天然ポリペプチドに正常に関連付けられた１つ以上の生物学的活性の検出可能な変化を測定することを含み得る。
【００６４】
本明細書の目的のための「活性」は、対応する天然の生物学的に活性なタンパク質の作用または効果と一致する、融合タンパク質の構成要素の作用または効果を示し、ここで「生物学的に活性」は、受容体結合、アンタゴニスト活性、アゴニスト活性、または細胞反応または生理的反応を含むがこれに限定されない、インビトロまたはインビボでの生体機能または効果を示す。
【００６５】
本明細書で使用する場合、「治療」または「治療すること」または「軽減すること」または「寛解すること」は、本明細書では互換可能に使用される。これらの用語は、治療的有益性および／または予防的有益性を含むがこれらに限定されない、有益なまたは所望の結果を得るための手法を示す。治療的有益性とは、治療される根底にある障害の根絶または寛解を意味する。また治療的有益性は、小児対象が根底にある障害にまだ罹患している可能性があるにもかかわらず、該対象において改善が観察されるように、根底にある障害に伴う生理学的症状の１つ以上の根絶または寛解によって達成される。予防的有益性については、特定の疾患を発症するリスクのある小児対象、または疾患の生理学的症状を一つ以上報告している小児対象に、この疾患の診断がまだ行われていなくても、組成物が投与され得る。
【００６６】
「治療効果」は、本明細書で使用するとき、生物学的に活性なタンパク質が所有する抗原性エピトープに対する抗体産生を誘導する能力を除いて、本発明の融合ポリペプチドによって引き起こされる、ヒトまたは他の動物における疾患の治癒、緩和、寛解、または予防、またはそうでなければヒトまたは動物の身体的または精神的健康の向上を含むがこれに限定されない、生理的効果を示す。治療有効量の決定は、とりわけ本明細書で提供された詳細な開示を考慮して、十分に当業者の能力の範囲内である。
【００６７】
用語「治療有効量」および「治療的に有効な用量」は、本明細書で使用するとき、小児対象に単回または反復用量で投与したときに、単独または融合タンパク質組成物の一部としてのいずれかにおいて、病状または病態の任意の症状、側面、測定パラメータまたは特徴に対し任意の検出可能な有益な効果を有することができる、生物学的に活性なタンパク質の量を示す。かかる効果は、有益であるために、絶対的であることが必要なわけではない。
【００６８】
「薬学的に許容され得る担体」は、有効成分以外の、小児対象に対して非毒性である医薬組成物内の成分を示す。薬学的に許容され得る担体には、緩衝剤、賦形剤、安定剤または保存剤が含まれるが、これらに限定されない。
【００６９】
本明細書で使用する場合、用語「治療的に有効な用量計画」は、単独でまたは融合タンパク質組成物の一部分としてのいずれかにおいて投与される、生物学的に活性なタンパク質の継続的に投与される用量のスケジュールを示し、ここで用量とは、病状または病態の任意の症状、側面、測定パラメータまたは特徴に対し持続的に有益な効果をもたらす治療有効量で与えられる。
【００７０】
用語「小児患者」、「小児対象」は、本明細書で用いるとき、成人でない個体を示す。小児患者は、乳幼児、小児、および青年を含む。一実施形態では、小児は青年期前または思春期前の個体である。別の実施形態では、小児患者はヒト患者である。
【００７１】
Ｉ）．一般技術
本発明の実施は、別途示さない限り、当該技術の範囲内である、免疫学、生化学、化学、分子生物学、微生物学、細胞生物学、ゲノミクスおよび組換えＤＮＡの従来の技術を用いる。その内容が全体として参照により本明細書に組み込まれる、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｊ．ら，“Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，”第３版，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，２００１；“Ｃｕｒｒｅｎｔ  ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｂｉｏｌｏｇｙ”，Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌら編，１９８７；シリーズ“Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，”Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，カリフォルニア州  サンディエゴ；“ＰＣＲ２：ａ  ｐｒａｃｔｉｃａｌ  ａｐｐｒｏａｃｈ”，Ｍ．Ｊ．ＭａｃＰｈｅｒｓｏｎ，Ｂ．Ｄ．Ｈａｍｅｓ  ａｎｄ  Ｇ．Ｒ．Ｔａｙｌｏｒ編，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，１９９５；“Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ａ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ｍａｎｕａｌ”Ｈａｒｌｏｗ，Ｅ．ａｎｄ  Ｌａｎｅ，Ｄ．編，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，１９８８；“Ｇｏｏｄｍａｎ＆Ｇｉｌｍａｎ’ｓ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ
Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，”第１１版，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，２００５；およびＦｒｅｓｈｎｅｙ，Ｒ．Ｉ．，“Ｃｕｌｔｕｒｅ  ｏｆ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌｓ：Ａ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｂａｓｉｃ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ，”第４版，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，ニュージャージー州サマーセット，２０００を参照されたい。
【００７２】
ＩＩ）．成長ホルモン
本発明は、小児成長ホルモン分泌不全症（ＰＧＨＤ）患者を治療するための改善された治療計画に関する。具体的には、本発明はＰＧＨＤを有する小児患者へのｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質のボーラス用量投与の方法に関する。従って、一態様では、本発明は、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質を用いた、小児患者におけるヒト小児成長ホルモン分泌不全症（ＰＧＨＤ）の治療方法に関する。
【００７３】
（ａ）成長ホルモンタンパク質
「成長ホルモン」または「ＧＨ」は、成長ホルモンタンパク質およびその種および配列変異体を意味し、ヒトＧＨの１９１単鎖アミノ酸配列を含むが、これに限定されない。ＧＨは天然の、完全長タンパク質であることができ、または天然のタンパク質の生物学的活性を少なくとも部分的に保持する切断型フラグメントまたは配列変異体であることができる。脳下垂体に由来する二つの公知のタイプのヒトＧＨ（以降「ｈＧＨ」）がある。一つは約２２，１２９ダルトンの分子量を有し（２２ｋＤのｈＧＨ）、他方は約２０，０００ダルトンの分子量を有する（２０ｋＤのｈＧＨ）。２０ｋＤのＨＧＨは、２２ｋＤのｈＧＨの３２番目から４６番目の１５個のアミノ酸残基が欠損している以外は、１９１個のアミノ酸からなる２２ｋＤのｈＧＨのアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を有する。２０ｋＤのｈＧＨが、２２ｋＤのｈＧＨよりも低いリスクおよび高い活性を呈すると見出されていることをいくつかの報告が示している。本発明は、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ組成物のための本明細書に開示のＸＴＥＮとの融合パートナーとしての使用に適切であるとして２２ｋＤのｈＧＨ、２０ｋＤのｈＧＨ、ならびにその種および配列変異体および切断フラグメントの使用を企図する。クローニングしたｈＧＨの遺伝子が分泌型で大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈａ  ｃｏｌｉ）内において発現され（米国特許第４，８９８，８３０号；Ｃｈａｎｇ，Ｃ．Ｎ．ら，Ｇｅｎｅ５５：１８９［１９８７］）、そのＤＮＡおよびアミノ酸配列が報告されている（Ｇｏｅｄｄｅｌら  Ｎａｔｕｒｅ，２８１：５４４［１９７９］）；Ｇｒａｙら，Ｇｅｎｅ３９：２４７［１９８５］）。
【００７４】
本発明は、ＧＨの生物活性もしくは生物学的機能の少なくとも一部を保持し、および／または小児患者においてＧＨ関連の疾患、分泌不全症、障害または病態を予防、治療、仲介、または寛解するのに有益である、ＧＨ配列と相同性を有する配列、天然である、例えばヒト由来の配列断片、および非天然の配列変異体を、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ組成物へ含めることを企図する。加えて、ヒトＧＨに相同性のある天然配列は、ＮＣＢＩ  ＢＬＡＳＴなどの標準相同性検索技法によって見出され得る。
【００７５】
身体の組織に及ぼすＧＨの効果は、一般的にタンパク質同化として説明される。大半の他のタンパク質ホルモンと同様に、天然ＧＨは、成長ホルモン受容体と呼ばれる、特定の原形質膜受容体と相互作用することによって作用する。ＧＨは、ＧＨの成長促進効果を担い、生産量も反映するＩＧＦ−Ｉの生産を刺激するように肝臓及びその他組織に作用する。ＩＧＦ−Ｉは次に、骨芽細胞および軟骨細胞活性を促進する効果があり、骨成長を増進する。一実施形態では、本発明は、本明細書に上述した天然のＧＨの特性の少なくとも１つを示すｈＧＨ−ＸＴＥＮを提供する。
【００７６】
一実施形態では、対象組成物に組み入れられたＧＨは、天然に見られるタンパク質に対応する配列を有する、組換えポリペプチドである。別の実施形態では、ＧＨは、配列変異体、フラグメント、ホモログ、または、対応する天然のＧＨの生物学的活性を少なくとも部分的に保持する天然の配列を模倣した配列である。他の一実施形態では、ＧＨは以下のアミノ酸配列：
ＦＰＴＩＰＬＳＲＬＦＤＮＡＭＬＲＡＨＲＬＨＱＬＡＦＤＴＹＱＥＦＥＥＡＹＩＰＫＥＱＫＹＳＦＬＱＮＰＱＴＳＬＣＦＳＥＳＩＰＴＰＳＮＲＥＥＴＱＱＫＳＮＬＥＬＬＲＩＳＬＬＬＩＱＳＷＬＥＰＶＱＦＬＲＳＶＦＡＮＳＬＶＹＧＡＳＤＳＮＶＹＤＬＬＫＤＬＥＥＧＩＱＴＬＭＧＲＬＥＤＧＳＰＲＴＧＱＩＦＫＱＴＹＳＫＦＤＴＮＳＨＮＤＤＡＬＬＫＮＹＧＬＬＹＣＦＲＫＤＭＤＫＶＥＴＦＬＲＩＶＱＣＲＳＶＥＧＳＣＧＦ（配列番号４１）を備えるヒトＧＨである。任意のヒトＧＨ配列、または天然ＧＨの生物学的活性を少なくとも部分的に保持するファミリー間で個々の変異を組み換えること（ｓｈｕｆｆｌｉｎｇ）によって構築された相同誘導体は、本発明の融合タンパク質に有用であり得る。ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質に組み込まれることができるＧＨは、配列番号４１に対し少なくとも約８０％の配列同一性、またはあるいは８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％配列同一性を呈するタンパク質を含むことができる。
【００７７】
ＩＩＩ）．ＰＧＨＤを治療するためのヒト成長ホルモン−ＸＴＥＮ融合タンパク質組成物
本発明は、小児患者の小児成長ホルモン分泌不全症（ＰＧＨＤ）治療のための改善された治療計画に関する。具体的には、本発明はＰＧＨＤを有する小児患者へのｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質のボーラス用量投与の方法に関する。一態様では、本発明での使用に好適なｈＧＨ融合タンパク質は、本明細書に記載の、およびＳｃｈｅｌｌｅｎｂｅｒｇｅｒら国際公開第１０／１４４５０２Ａ２号および国際公開第１０／０９１１２２号（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に開示されるヒト成長ホルモンポリペプチドおよび一つ以上のＸＴＥＮ配列を備える。
【００７８】
他の一態様では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質は、一つ以上の伸長組み換えポリペプチド（「ＸＴＥＮ」または「ＸＴＥＮｓ」）に共有結合されたＧＨの完全長配列または配列変異体を備えるＧＨの単離された単量体融合タンパク質である。一実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質は、図１に示すアミノ酸配列（配列番号１）、またはその薬理学的に活性な変異体を備える。別の実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質は表１から選択されたアミノ酸配列を備える。
【００７９】
例えば、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質ＶＲＳ−３１７は、組換えヒト成長ホルモン（ｒｈＧＨ）および二つの組み換えポリペプチドから構成され、Ｓｃｈｅｌｌｅｎｂｅｒｇｅｒら（２００９）．Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ２７，１１８６−９０、Ｓｃｈｅｌｌｅｎｂｅｒｇｅｒら国際公開第１０／１４４５０２Ａ２号、および国際公開第１０／０９１１２２号（そのそれぞれが、その全体において参照により本明細書に組み込まれる）に記載のようにＸＴＥＮと呼ばれる。ＸＴＥＮドメイン、アミノ酸の二つの構造不定の親水性鎖は、ｒｈＧＨに関して半減期の延長を提供する。ＶＲＳ−３１７の分子量は１１８．９ｋＤａであり、その内ｒｈＧＨは２２．１ｋＤａに寄与し、残りの質量はＸＴＥＮ構築物によって寄与される。それゆえｒｈＧＨ対ＶＲＳ−３１７の質量比は１：５．３７である。
【表１−１】
2019056013.tif 000002
【表１−２】
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【表１−３】
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【表１−４】
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【表１−５】
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【表１−６】
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【表１−７】
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【表１−８】
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【表１−９】
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【表１−１０】
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【表１−１１】
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【表１−１２】
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【表１−１３】
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【表１−１４】
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【表１−１５】
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【表１−１６】
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【表１−１７】
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【表１−１８】
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【表１−１９】
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【表１−２０】
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【表１−２１】
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表１に提供される例示的なｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質のさらなる特徴付けは、その全体が参照により本明細書に組み込まれるＳｃｈｅｌｌｅｎｂｅｒｇｅｒら国際公開第１０／１４４５０２Ａ２号の実施例（例えば実施例２７〜３５）に見出すことができる。
【００８０】
本発明は、図１、表１に示した、またはＳｃｈｅｌｌｅｎｂｅｒｇｅｒら国際公開第１０／１４４５０２Ａ２号（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載のアミノ酸配列の一つを備えるｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の使用を企図する。加えて、本明細書に記載および言及される任意のｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の薬理学的に活性な変異体も企図される。
【００８１】
下記により詳細に記載するように、融合タンパク質は、プロテアーゼが作用する場合に、融合タンパク質からＧＨを放出し、ＸＴＥＮ配列からＧＨを放出するための開裂配列をさらに備えるスペーサー配列を任意選択的に含む。
【００８２】
一態様では、本発明は、結果として成長ホルモン−ＸＴＥＮ融合タンパク質組成物（以降「ｈＧＨ−ＸＴＥＮ」）をもたらす、１つ以上の伸長組換えポリペプチド（「ＸＴＥＮ」）に共有結合した少なくとも第一の生物学的に活性な成長ホルモンタンパク質を備える、単離した融合タンパク質を提供する。一実施形態では、この成長ホルモンは、ヒト成長ホルモンまたはｈＧＨの配列変異体である。以下により詳細に記載するように、融合タンパク質は、プロテアーゼが作用する場合に融合タンパク質からＧＨを放出するための開裂配列をさらに含むスペーサー配列を任意選択的に含む。
【００８３】
本明細書で用いる時、用語「ｈＧＨ−ＸＴＥＮ」は、成長ホルモンと関連する１つ以上の生物学的または治療的な活性を媒介する生物学的に活性なＧＨを備えるペイロード領域、および、担体となる少なくとも第一のＸＴＥＮポリペプチドを備えるその他の領域の少なくとも１つを備える、融合ポリペプチドを包含するものである。一実施形態では、本発明は表１に記載の配列を備えるｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質を提供する。
【００８４】
対象組成物のＧＨは、それらの対応する核酸およびアミノ酸配列とともに、当該分野において周知であり、その説明および配列は、Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ａｂｓｔｒａｃｔｓ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ  Ｄａｔａｂａｓｅｓ（例えば、ＣＡＳレジストリ）、ＧｅｎＢａｎｋ、Ｔｈｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅ（ＵｎｉＰｒｏｔ）のような公開データベース、およびＧｅｎＳｅｑ（例えば、Ｄｅｒｗｅｎｔ）のような購読提供データベースから入手可能である。ポリヌクレオチド配列は、所与のＧＨ（例えば、完全長または成熟したもののいずれか）をコードする野生型ポリヌクレオチド配列であってもよく、または場合によって配列は、ポリヌクレオチドのＤＮＡ配列が、例えば特定の種での発現のために最適化されている野生型ポリヌクレオチド配列の変異体（例えば、生物学的に活性な野生型タンパク質をコードしているポリヌクレオチド）または部位特異的突然変異体または対立遺伝子変異体のような野生型タンパク質の変異体をコードするポリヌクレオチドなどの配列の変異体であってもよい。当技術分野で公知である方法を使用して、および／または本明細書に提供され、参照により本明細書にその全体が組み込まれるＳｃｈｅｌｌｅｎｂｅｒｇｅｒら国際公開第１０／１４４５０２Ａ２号の実施例でより詳細に記載される指針および方法と併用して、本発明によって企図される融合タンパク質構築物を作製するために、ＧＨの野生型もしくはコンセンサスｃＤＮＡ配列またはコドン最適化変異体を使用することは、十分に当業者の能力の範囲内にある。
【００８５】
本発明のｈＧＨ−ＸＴＥＮに組み入れられるＧＨは、生物学的、治療的、予防的、または診断的関心または機能の、または小児対象に投与した場合に、成長、成長ホルモン分泌不全症または欠乏に関連する疾患、障害または病態の仲介または予防または寛解に有用な、任意の成長ホルモンまたは配列変異体を含む。特に興味がもたれるのは、天然のＧＨと比較して、薬物動態学的パラメータの増加、溶解性の増加、安定性の増加、または一部の他の向上された医薬または薬力学的特性が求められるか、または終末相半減期を延長させることで有効性、安全性を改善させるか、結果的に投薬頻度の減少および／または小児患者の服薬遵守を改善する、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質組成物である。従ってｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質組成物は、例えば、インビボにおける曝露を増加させること、または、ＸＴＥＮに結合していないＧＨと比べて、小児対象に投与した場合に治療域中にｈＧＨ−ＸＴＥＮが残る期間を長くすることによって、生物学的に活性なＧＨの治療効果を改善させることを含む、種々の目的を念頭において調製される。
【００８６】
一実施形態において、対象組成物に組み込まれるＧＨは、ヒト成長ホルモンなどの天然に見られるタンパク質に対応する配列を有する組換えポリペプチドであり得る。一実施形態では、ＧＨは以下のアミノ酸配列：
ＦＰＴＩＰＬＳＲＬＦＤＮＡＭＬＲＡＨＲＬＨＱＬＡＦＤＴＹＱＥＦＥＥＡＹＩＰＫＥＱＫＹＳＦＬＱＮＰＱＴＳＬＣＦＳＥＳＩＰＴＰＳＮＲＥＥＴＱＱＫＳＮＬＥＬＬＲＩＳＬＬＬＩＱＳＷＬＥＰＶＱＦＬＲＳＶＦＡＮＳＬＶＹＧＡＳＤＳＮＶＹＤＬＬＫＤＬＥＥＧＩＱＴＬＭＧＲＬＥＤＧＳＰＲＴＧＱＩＦＫＱＴＹＳＫＦＤＴＮＳＨＮＤＤＡＬＬＫＮＹＧＬＬＹＣＦＲＫＤＭＤＫＶＥＴＦＬＲＩＶＱＣＲＳＶＥＧＳＣＧＦ（配列番号４１）を備えるヒトＧＨである。
【００８７】
別の実施形態では、ＧＨは、天然のＧＨの生物学的活性を少なくとも部分的に保持する、天然の配列の配列変異体、フラグメント、ホモログ、また模倣体である。非限定的な例では、ＧＨは配列番号４１のタンパク質配列に対し、少なくとも約８０％配列同一性、またはあるいは８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または少なくとも約９９％、または１００％配列同一性を呈する配列である。一実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質は、ＸＴＥＮに結合した単一のＧＨ分子を備える（以下により詳細に記載する）。別の実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質は、Ｎ末端側からＣ末端の配置がＸＴＥＮ−ＧＨ−ＸＴＥＮである第一および第二のＸＴＥＮに結合した単一のＧＨ分子を備え、ここでＧＨは、ヒト成長ホルモンタンパク質配列（配列番号４１）に対し、少なくとも約８０％配列同一性、またはあるいは８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または少なくとも約９９％、または１００％配列同一性を呈する配列であり、第一および／または第二のＸＴＥＮは表２から選択された配列に対し、少なくとも約８０％配列同一性、またはあるいは８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または少なくとも約９９％、または１００％配列同一性を呈する配列である。
【００８８】
概して、ｈＧＨ−ＸＴＥＮのＧＨ融合パートナー構成要素は、インビボにおいて使用した場合、またはインビトロアッセイで活用した場合に、所与の標的に対する結合特異性または別の所望される生物学的特徴を呈する。例えば、ｈＧＨ−ＸＴＥＮは、成長ホルモンの膜貫通型受容体に結合する能力を有するアゴニストである。一実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮの成長受容体への結合は受容体の二量体化をもたらし、天然の成長ホルモンと比較して、細胞内シグナル伝達経路の少なくとも部分的な活性化を引き起こす。一実施形態では、成長ホルモンの膜貫通型受容体に結合したｈＧＨ−ＸＴＥＮは、ＸＴＥＮに結合していない天然の成長ホルモンと比較して、細胞内シグナル伝達経路の少なくとも約１％、または約５％、または約１０％、または約１５％、または約２０％、または約２５％、または約３０％、または約４０％、または約５０％、または約６０％、または約７０％、または約８０％、または約９０％、または少なくとも約９５％の活性を呈するだろう。
【００８９】
本発明の対象ｈＧＨ−ＸＴＥＮは、１つ以上の薬物動態学的または薬力学的パラメータの向上を呈し、これらは任意選択的にスペーサー配列の開裂による融合タンパク質からのＧＨの放出により向上される。向上した薬物動態学的パラメータを有するｈＧＨ−ＸＴＥＮは、より低頻度での投薬を可能にし、または最小有効量または血中濃度（Ｃｍｉｎ）と最大耐量または血中濃度（Ｃｍａｘ）の間の治療域中での生物学的に活性なｈＧＨ−ＸＴＥＮの維持のなどの（しかしこれに限定されない）、高められた薬理学的効果を可能にする。加えて、向上した薬力学的パラメータを有するｈＧＨ−ＸＴＥＮは、より低いおよび／または少ない頻度での投薬を可能にし、持続性のまたは正常化されたＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコア（ＩＧＦ−ＩＳＤＳ）などの（しかしこれに限定されない）、高められた薬力学的効果を可能にする。このような場合においては、選択されたＸＴＥＮ配列を備える融合タンパク質へのＧＨの結合は、これらの特性の改善をもたらすことができ、ＸＴＥＮに結合していないＧＨと比較して、それらをより有用な治療用または予防用薬剤にする。
【００９０】
ＩＶ）．伸長組み換えポリペプチド
本発明は、ＰＧＨＤ治療のための改善された治療計画に関する。具体的には、本発明は、ＰＧＨＤを有する小児患者へのヒト成長ホルモン−ＸＴＥＮ（ｈＧＨ−ＸＴＥＮ）融合タンパク質のボーラス用量投与の方法に関する。従って、一態様では、本発明は、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ組み換えポリペプチドまたは融合タンパク質を用いてヒト小児成長ホルモン分泌不全症（ＰＧＨＤ）を治療する方法に関する。
【００９１】
別の態様では、本発明は、ＧＨが連結してｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質になる、融合タンパク質パートナーとして有用であるＸＴＥＮポリペプチド組成物を提供する。ＸＴＥＮは通常、小さな親水性アミノ酸で主に構成される、天然に存在しない、実質的に非反復性配列を有する伸長した長さのポリペプチドであり、その配列は、生理的条件下で低い程度の二次または三次構造を有するか全く有しない。
【００９２】
ＸＴＥＮは、融合タンパク質を作出するためにＧＨタンパク質に結合した場合に、ある特定の所望の薬物動態学的、物理化学的および医薬的特性を付与する、「担体」の役割を果たす点で融合タンパク質パートナーとしての有用性を有する。かかる所望の特性には、本明細書に記載される他の特性の中でも、組成物の向上した薬物動態学的パラメータおよび溶解特性が含まれるがこれらに限定されない。本明細書に記載のように、かかる融合タンパク質組成物は、ある特定の成長ホルモン関連疾患、障害または病態の治療に対する有用性を有する。本明細書で使用されるとき、「ＸＴＥＮ」は、単鎖抗体または軽鎖または重鎖のＦｃフラグメントなどの、抗体または抗体フラグメントを特異的に除外する。
【００９３】
いくつかの実施形態では、担体として使用されるとき、または累積的に１を超えるＸＴＥＮ単位が単一の融合タンパク質で使用されるとき、約１００より長く約３０００アミノ酸残基まで、好ましくは４００より長く約３０００残基までの長さを有する、長いポリペプチドである。他の実施形態では、融合タンパク質の構成要素間のリンカーとして用いる場合、または融合タンパク質の半減期の増加は必要とされないが、ＧＨ融合パートナー構成要素の溶解度の向上またはその他の物理／化学的特性が望まれる場合、例えば約９６、または約８４、または約７２、または約６０、または約４８、または約３６アミノ酸残基などの１００アミノ酸残基より短いＸＴＥＮ配列が、特性に効果を及ぼすように、ＧＨを伴う融合タンパク質組成物中に組み込まれる。
【００９４】
本発明の融合タンパク質組成物を作出するために用いられる、生物学的に活性なタンパク質に結合するＸＴＥＮの選択基準は、その後に融合タンパク質に向上した医薬および薬物動態学的特性を付与するために用いられる、ＸＴＥＮの物理的／化学的特性および立体構造の属性に通常関連する。本発明のＸＴＥＮは、それらを融合タンパク質のパートナーとして特に有用なものとする、以下の有利な特性の一つ以上を呈する：配座柔軟性、向上した水溶性、プロテアーゼへの高い抵抗性、低い免疫原性、哺乳類の受容体への低結合、およびより長い流体力学的（またはストローク）半径。ＸＴＥＮにより向上する、ＧＨを備える融合タンパク質の特性の非限定的な例としては、全体的な溶解度および／または代謝安定性の向上、タンパク質分解に対する感受性の低下、免疫原性の低下、皮下または筋肉内投与した場合の吸収速度の低下、および、Ｃｍａｘがより低く、次に、ＧＨの有害作用の減少をもたらし、総合して、対象に投与されるｈＧＨ−ＸＴＥＮ組成物の融合タンパク質が治療活性を保持する期間の増加をもたらすように、強化された薬物動態学的特性、例えば、より長い終末相半減期および増加した曲線下面積（ＡＵＣ）、皮下もしくは筋肉内注射の後のより遅い吸収（類似した経路によって投与される、ＸＴＥＮに結合していないＧＨと比較して）が含まれる。
【００９５】
１．非反復配列
いくつかの実施形態では、本組成物のＸＴＥＮ配列は実質的に非反復である。通常、反復性アミノ酸配列は、コラーゲンおよびロイシンジッパーのような天然の反復配列に代表されるように、凝集するまたはより高次な構造を形成する傾向を有するか、または結晶または疑似結晶構造を生じるように接触を形成する傾向にある。対照的に、非反復性配列が凝集しにくい傾向にあることは、相対的に低頻度で荷電アミノ酸（あるいは配列が反復性であるならば凝集する傾向にあるであろう）を有する、長い配列のＸＴＥＮを設計することを可能にする。通例、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質は、約１００よりも長く約３０００アミノ酸残基までの、好ましくは累積して４００より長く約３０００残基までの長さのＸＴＥＮ配列を備え、ここで配列は実質的に非反復である。一実施形態では、アミノ酸がセリンで、３つ以下の連続したアミノ酸がセリン残基でない限り、配列中の３つの連続したアミノ酸は同一のアミノ酸タイプでない、約１００より長く約３０００アミノ酸残基までの、好ましくは４００より長く約３０００アミノ酸残基までのアミノ酸残基を有する。前述した実施形態において、ＸＴＥＮ配列は、実質的に非反復だろう。
【００９６】
ポリペプチドまたは遺伝子の反復性の度合いは、部分列スコア（そのそれぞれが全体において参照により本明細書に組み込まれる、Ｓｃｈｅｌｌｅｎｂｅｒｇｅｒら国際公開第１０／１４４５０２Ａ２号の実施例４４；Ｃｌｅｌａｎｄら米国特許出願第１３／８２９，３６９号；およびＣｌｅｌａｎｄら国際公開第１３／１８４２１６号を参照されたい）を含む、当該分野において知られている、コンピュータープログラムまたはアルゴリズムまたはその他の方法によって測定される。いくつかの実施形態では、本発明は、１２未満、より好ましくは１０未満、より好ましくは９未満、より好ましくは８未満、より好ましくは７未満、より好ましくは６未満、および最も好ましくは５未満の部分列スコアを有する、１つ以上のＸＴＥＮをそれぞれ備えるｈＧＨ−ＸＴＥＮを提供する。この段落で上述した実施形態では、約１０未満（すなわち９、８、７など）の部分列スコアを有するＸＴＥＮは、「実質的に非反復性」である。
【００９７】
ＸＴＥＮの非反復性の特徴は、反復配列を有するポリペプチドと比較して、より高度の溶解性およびより少ない凝集傾向を、ＧＨを含む融合タンパク質に付与する。これらの特性は、１００ｍｇ／ｍｌを超える場合がある極めて高い薬物濃度を含有する、ＸＴＥＮを備える医薬調製物の製剤を容易にする。
【００９８】
２．例示的な配列モチーフ
本発明は、複数単位のより短い配列またはモチーフ備えるＸＴＥＮを包含し、そこにおいてモチーフのアミノ酸配列は非反復性である。ＸＴＥＮ配列の設計において、ＸＴＥＮ配列を作出するために多量体化した配列モチーフのライブラリーを用いた「構成単位」アプローチの使用にもかかわらず、非反復性の基準を満たし得ることが発見された。従って、ＸＴＥＮ配列がわずか４種類の異なる配列モチーフの複数単位からなり得る一方で、モチーフはそれ自体が通常非反復性アミノ酸配列からなることから、ＸＴＥＮ配列全体は実質的に非反復性となる（そのそれぞれが全体において参照により本明細書に組み込まれる、Ｓｃｈｅｌｌｅｎｂｅｒｇｅｒら国際公開第１０／１４４５０２Ａ２号；Ｃｌｅｌａｎｄら米国特許出願第１３／８２９，３６９号；およびＣｌｅｌａｎｄら国際公開第１３／１８４２１６号を参照されたい）。
【００９９】
３．配列の長さ
本発明の別の態様では、本発明は伸長した長さの配列を有するＸＴＥＮポリペプチドの担体を備えるｈＧＨ−ＸＴＥＮ組成物を包含する（そのそれぞれが全体において参照により本明細書に組み込まれる、Ｓｃｈｅｌｌｅｎｂｅｒｇｅｒら国際公開第１０／１４４５０２Ａ２号；Ｃｌｅｌａｎｄら米国特許出願第１３／８２９，３６９号；およびＣｌｅｌａｎｄら国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１３／０３１６７３号を参照されたい）。本発明のｈＧＨ−ＸＴＥＮ内に含めることが企図されるＸＴＥＮの非限定的な例を表２に提示する。一実施形態において本発明は、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ組成物を提供し、ここで融合タンパク質のＸＴＥＮ配列の長さが、約１００より長く約３０００アミノ酸残基までであり、場合によっては４００より長く約３０００アミノ酸残基までであり、ここでＸＴＥＮは、ＸＴＥＮに結合していないＧＨと比較して向上した薬物動態学的特性をｈＧＨ−ＸＴＥＮに付与する。いくつかの実施形態では、本発明のｈＧＨ−ＸＴＥＮ組成物のＸＴＥＮ配列は、約１００、または約１４４、または約２８８、または約４０１、または約５００、または約６００、または約７００、または約８００、または約９００、または約１０００、または約１５００、または約２０００、または約２５００または最高約３０００までの長さのアミノ酸残基であることができる。他の場合には、ＸＴＥＮ配列は、約１００から１５０、約１５０から２５０、約２５０から４００、４０１から約５００、約５００から９００、約９００から１５００、約１５００から２０００、または約２０００から約３０００までの長さのアミノ酸残基であることができる。一実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮは表２から選択された任意の配列に対して、約８０％配列同一性、またはあるいは８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を呈するＸＴＥＮ配列を備えることができる。いくつかの実施形態では、ＸＴＥＮ配列は、融合タンパク質をコードする遺伝子のＸＴＥＮ部分での最適化されたＮ末端リーダー配列（ＮＴＳ）のためのコードヌクレオチドの組入れによる、ｈＧＨ−ＸＴＥＮのＮ末端構成要素としての最適化された発現のために設計される。別の実施形態では、発現したｈＧＨ−ＸＴＥＮのＮ末端ＸＴＥＮ配列は、表２から選択された任意の配列に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する。一実施形態では、発現したｈＧＨ−ＸＴＥＮのＮ末端ＸＴＥＮ配列は、ＡＥ４８またはＡＭ４８、ＡＥ６２４、ＡＥ９１１、ＡＥ９１２またはＡＭ９２３の配列に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する。
【０１００】
他の実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質は、第一および第二のＸＴＥＮ配列を備え、ここでＸＴＥＮ配列中の残基の累計は約４００より長く約３０００アミノ酸残基までである。前述の実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質は、第一のおよび第二のＸＴＥＮ配列を備え、ここで配列は、表２から選択された少なくとも第一のＸＴＥＮとまたは追加的に第二のＸＴＥＮに対し、少なくとも約８０％の配列同一性、またあるいは８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性をそれぞれ呈する。ｈＧＨ−ＸＴＥＮ組成物で１を超えるＸＴＥＮが用いられる例としては、少なくとも１つのＧＨのＮ末端およびＣ末端の両方にＸＴＥＮが結合した構築物が挙げられるがこれに限定されない。
【０１０１】
以下により詳細に記載するように、本発明は、小児対象に投与する融合タンパク質に目標の半減期を付与するようにＸＴＥＮの長さを選択することによってｈＧＨ−ＸＴＥＮを設計する方法を提供する。一般に、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ組成物に組み込まれる、累積で約４００残基より長いＸＴＥＮ長は、より短い、例えば約２８０残基より短い累積長と比較して、より長い半減期になる。しかしながら、別の実施形態では、小児対象への皮下または筋肉内投与の後のより遅い速度の全身吸収をさらに付与するように選択される、より長い配列長のＸＴＥＮを備えるように、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質を設計する。かかる実施形態では、ＸＴＥＮに結合していないＧＨの同等用量と比較してＣｍａｘは低減され、それにより、ｈＧＨ−ＸＴＥＮを組成物の治療域の中に維持する能力に寄与する。従って、ＸＴＥＮは、本明細書において記載されるその他の物理的／化学的特性に加えて、投与されるｈＧＨ−ＸＴＥＮに貯蔵所の特性を付与する。
【表２−１】
2019056013.tif 000023
【表２−２】
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【表２−３】
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【表２−４】
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【表２−５】
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【表２−６】
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【表２−７】
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【表２−８】
2019056013.tif 000030
【０１０２】
ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質のＸＴＥＮ構成要素のアミノ酸の１００％未満が、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、グルタミン酸（Ｅ）およびプロリン（Ｐ）から選択された４、５、６種のアミノ酸からなる、またはその配列の１００％未満が、表２のＸＴＥＮ配列からなるそれら実施形態において、ＸＴＥＮのその他のアミノ酸残基は、任意のその他１４種の天然Ｌ−アミノ酸から選択されるが、ＸＴＥＮ配列が少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または少なくとも約９９％の親水性アミノ酸を含有するように、親水性アミノ酸から優先的に選択される。グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、グルタミン酸（Ｅ）およびプロリン（Ｐ）ではないＸＴＥＮアミノ酸は、ＸＴＥＮ配列全体にわたって散在するか、配列モチーフ中または配列モチーフ間に局在するか、またはＸＴＥＮ配列中の１つ以上の短いひと続き（ｓｔｒｅｔｃｈｅｓ）中に濃縮され、例えばＸＴＥＮとｈＧＨ構成要素間にリンカーを形成する。ｈＧＨ−ＸＴＥＮのＸＴＥＮ構成要素が、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、グルタミン酸（Ｅ）およびプロリン（Ｐ）ではないアミノ酸を含む場合においては、結果得られる配列が通常二次構造を欠くように、約２％または約１％未満のアミノ酸が疎水性残基であることが好ましく、本明細書に開示される方法で決定されるように、例えば２％を超えるαへリックスまたはβシートを有さない。ＸＴＥＮの構築において好ましくない疎水性残基には、トリプトファン、フェニルアラニン、チロシン、ロイシン、イソロイシン、バリン、およびメチオニンが含まれる。加えて、ＸＴＥＮ配列が、システイン（ジスルフィド形成および酸化を避けるため）、メチオニン（酸化を避けるため）、アスパラギンおよびグルタミン（脱アミド化を避けるため）を５％未満または４％未満または３％未満または２％未満または１％未満含有するまたは全く含まないようにＸＴＥＮ配列を設計することができる。従って、いくつかの実施形態では、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、グルタミン酸（Ｅ）およびプロリン（Ｐ）に加えてその他のアミノ酸を備える、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質のＸＴＥＮ構成要素は、Ｃｈｏｕ−Ｆａｓｍａｎアルゴリズムで測定されるように残基の５％未満がαヘリックスおよびβシートに寄与する配列を有し、ＧＯＲアルゴリズムで測定されるように、少なくとも９０％、または少なくとも約９５％以上のランダムコイル形成を有する。
【０１０３】
４．ＸＴＥＮセグメント
一実施形態では、本発明は、単離されたｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質を提供し、そこで、ＸＴＥＮ構成要素の累積長は、表２（およびその全体が参照により本明細書に組み込まれるＳｃｈｅｌｌｅｎｂｅｒｇｅｒら国際公開第１０／１４４５０２Ａ２号の表８、９、１０、１１、および１２）から選択される少なくとも１つのポリペプチド配列セグメントを含有する、約１００より長く約３０００アミノ酸残基までであり、ＸＴＥＮ配列の残りの少なくとも約９０％、または少なくとも約９１％、または少なくとも約９２％、または少なくとも約９３％、または少なくとも約９４％、または少なくとも約９５％、または少なくとも約９６％、または少なくとも約９７％、または少なくとも約９８％以上は親水性アミノ酸を概して含有し、ＸＴＥＮの残りの約２％未満は、疎水性または芳香族のアミノ酸、またはシステインからなる。いくつかの実施形態では、ＸＴＥＮは、同一のまたは異なる複数のセグメントを含有する（そのそれぞれがその全体において参照により本明細書に組み込まれる、Ｓｃｈｅｌｌｅｎｂｅｒｇｅｒら国際公開第１０／１４４５０２Ａ２号；Ｃｌｅｌａｎｄら米国特許出願第１３／８２９，３６９号；およびＣｌｅｌａｎｄら国際公開第１３／１８４２１６号を参照されたい）。
【０１０４】
５．Ｎ末端ＸＴＥＮの発現強化配列
いくつかの実施形態では、本発明は、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質のＮ末端部分として組み込まれる短い長さのＸＴＥＮ配列を提供する。結合性融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドに組み込まれた最適化されたＮ末端リーダーポリヌクレオチド配列（Ｎ末端ＸＴＥＮをコードする）を備える好適な発現ベクターで形質転換した宿主細胞において、融合タンパク質の発現が強化される。Ｓｃｈｅｌｌｅｎｂｅｒｇｅｒら国際公開第１０／１４４５０２Ａ２号（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）の実施例１４〜１７に記載されるように、結合性融合タンパク質遺伝子内に最適化されたＮ末端リーダー配列（ＮＴＳ）を備える、かかる発現ベクターを用いて形質転換した宿主細胞が、ＮＴＳを含まないポリヌクレオチドの対応する融合タンパク質の発現と比較して、融合タンパク質の発現を大いに強化し、発現を強化するために使用される非ＸＴＥＮリーダー配列の組み込みの必要性を除去するということが発見されている（そのそれぞれがその全体において参照により本明細書に組み込まれる、Ｓｃｈｅｌｌｅｎｂｅｒｇｅｒら国際公開第１０／１４４５０２Ａ２号；Ｃｌｅｌａｎｄら米国特許出願第１３／８２９，３６９号；およびＣｌｅｌａｎｄら国際公開第１３／１８４２１６号を参照されたい）。
【０１０５】
一実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮのＮ末端ＸＴＥＮポリペプチドは、ＡＥ４８、ＡＥ４８．１、ＡＭ４８、またはＡＭ４８．１のアミノ酸配列（そのアミノ酸配列はそれぞれ以下の通りである：
ＡＥ４８：ＭＡＥＰＡＧＳＰＴＳＴＥＥＧＴＰＧＳＧＴＡＳＳＳＰＧＳＳＴＰＳＧＡＴＧＳＰＧＡＳＰＧＴＳＳＴＧＳ（配列番号１３）
ＡＥ４８．１：ＡＥＰＡＧＳＰＴＳＴＥＥＧＴＰＧＳＧＴＡＳＳＳＰＧＳＳＴＰＳＧＡＴＧＳＰＧＡＳＰＧＴＳＳＴＧＳ（配列番号３６）
ＡＭ４８：ＭＡＥＰＡＧＳＰＴＳＴＥＥＧＡＳＰＧＴＳＳＴＧＳＰＧＳＳＴＰＳＧＡＴＧＳＰＧＳＳＴＰＳＧＡＴＧＳ（配列番号１４）
ＡＭ４８．１：ＡＥＰＡＧＳＰＴＳＴＥＥＧＡＳＰＧＴＳＳＴＧＳＰＧＳＳＴＰＳＧＡＴＧＳＰＧＳＳＴＰＳＧＡＴＧＳ（配列番号３７））
に対し、少なくとも約８０％、より好ましくは少なくとも約９０％、より好ましくは少なくとも約９１％、より好ましくは少なくとも約９２％、より好ましくは少なくとも約９３％、より好ましくは少なくとも約９４％、より好ましくは少なくとも約９５％、より好ましくは少なくとも約９６％、より好ましくは少なくとも約９７％、より好ましくは少なくとも約９８％、より好ましくは少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を呈する配列を備える。
【０１０６】
別の実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮのＮ末端ＸＴＥＮポリペプチドは、本明細書に記載のように、ＡＥ４８、ＡＭ４８またはＡＥ９１２に対して少なくとも９０％の同一性を呈する配列を備え、ここでＮ末端Ｍ残基は存在しない（例えば、ＡＥ４８．１−配列番号３６；ＡＭ４８．１−配列番号３７；およびＡＥ９１２．１−配列番号３８）。さらなる実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮのＣ末端ＸＴＥＮポリペプチドは、本明細書に記載のように、ＡＥ１４６に対し９０％の同一性を呈する配列を備える（例えば、ＡＥ１４６−配列番号３５；またはＡＥ１４６．１−配列番号４０）。
【０１０７】
別の実施形態では、短い長さのＮ末端ＸＴＥＮは、より長い長さのＸＴＥＮに結合されてｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質のＮ末端領域を形成し、ここで短い長さのＮ末端ＸＴＥＮをコードするポリヌクレオチド配列は、宿主細胞における発現を強化する特性を付与し、長い長さの発現したＸＴＥＮは、上述のように、融合タンパク質中のＸＴＥＮ担体の特性の向上に寄与する。いくつかの実施形態では、長い長さを伴うＮ末端ＸＴＥＮポリペプチドは、配列ＡＥ６２４、ＡＥ９１１、ＡＥ９１２、およびＡＭ９２３からなる群より選択されるアミノ酸配列に対し、少なくとも約８０％、または少なくとも約９０％、または少なくとも約９１％、または少なくとも約９２％、または少なくとも約９３％、または少なくとも約９４％、または少なくとも約９５％、または少なくとも約９６％、または少なくとも約９７％、または少なくとも約９８％、または少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を呈する。
【０１０８】
６．実効電荷
他の実施形態では、ＸＴＥＮポリペプチドは、実効電荷を伴うアミノ酸残基の組み込み、および／またはＸＴＥＮ配列中の疎水性アミノ酸の割合の低減によって付与される非構造化特徴を有する。全実効電荷および実効電荷密度は、ＸＴＥＮ配列中の荷電したアミノ酸の含有量を変更することにより制御される。いくつかの実施形態では、組成物のＸＴＥＮの実効電荷密度は、１残基当たり、＋０．１超または−０．１未満の電荷であり得る。他の実施形態では、ＸＴＥＮの実効電荷は、約０％、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、または約２０％またはそれ以上であることができる（そのそれぞれが全体において参照により本明細書に組み込まれる、Ｓｃｈｅｌｌｅｎｂｅｒｇｅｒら国際公開第１０／１４４５０２Ａ２号；Ｃｌｅｌａｎｄら米国特許出願第１３／８２９，３６９号；およびＣｌｅｌａｎｄら国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１３／０３１６７３号を参照されたい）。
【０１０９】
７．低免疫原性
別の態様では、本発明は、ＸＴＥＮ配列が低度の免疫原性を有する、または実質的に非免疫原性である組成物を提供する。例えば、非反復性配列、非構造化立体構造、高い溶解度、低度な自己凝集性またはその欠如、配列中のタンパク質分解部位が低度であるかまたはその欠如、およびＸＴＥＮ配列中のエピトープが低度であるかまたはその欠如、などの複数の因子がＸＴＥＮの低免疫原性に寄与し得る（そのそれぞれがその全体において参照により本明細書に組み込まれる、Ｓｃｈｅｌｌｅｎｂｅｒｇｅｒら国際公開第１０／１４４５０２Ａ２号；Ｃｌｅｌａｎｄら米国特許出願第１３／８２９，３６９号；およびＣｌｅｌａｎｄら国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１３／０３１６７３号を参照されたい）。
【０１１０】
８．流体力学半径の増大
別の態様では、本発明は、ＸＴＥＮを組み込むｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質に、対応する増大した見かけの分子量を付与する高い流体力学半径をＸＴＥＮポリペプチドが有するＸＴＥＮを提供する。Ｓｃｈｅｌｌｅｎｂｅｒｇｅｒら国際公開第１０／１４４５０２Ａ２号の実施例３７に詳述するように、ＸＴＥＮのＧＨ配列への結合は、ＸＴＥＮに結合していないＧＨと比較して、増大した流体力学半径、増大した見かけの分子量、および増大した見かけの分子量因子を有することができる、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ組成物を生じる（そのそれぞれがその全体において参照により本明細書に組み込まれる、Ｓｃｈｅｌｌｅｎｂｅｒｇｅｒら国際公開第１０／１４４５０２Ａ２号；Ｃｌｅｌａｎｄら米国特許出願第１３／８２９，３６９号；およびＣｌｅｌａｎｄら国際公開第１３／１８４２１６号を参照されたい）。
【０１１１】
Ｖ）．ｈＧＨ−ＸＴＥＮの構造立体配置および特性
対象組成物のヒト成長ホルモン（ＧＨ）には、天然の、完全長ポリペプチドには限定されず、組み換えたもの、ならびに生物学的および／または薬理学的に活性な変異体またはそのフラグメントも含まれる。例えば、ＧＨの生物学的活性または薬理学的特性に関して本発明の精神から逸脱しない範囲で変異体を作製するために、様々なアミノ酸欠失、挿入および置換をＧＨに加えることができることが理解されるだろう。ポリペプチド配列におけるアミノ酸の保存的置換の例を表３に示す。しかしながら、ＧＨの配列同一性が、本明細書において開示した具体的な配列と比較して１００％未満であるｈＧＨ−ＸＴＥＮの実施形態では、本発明は、隣接したアミノ酸残基を含むＧＨ配列中の任意の位置にあってもよい、所与のＧＨの所与のアミノ酸残基のための、他の１９個の天然のＬ−アミノ酸のいずれかの置換を企図する。任意の１つの置換が生物学的活性における望ましくない変化を生じる場合には、代替アミノ酸の１つを採用することができ、本明細書に記載した方法または、例えば、その内容が全てにおいて参照により本明細書に組み入れられる、米国特許第５，３６４，９３４号に示す保存的および非保存的な突然変異の技術およびガイドラインのいずれかを使用して、または当該分野において一般的に知られている方法を用いて、構築物を評価することができる。加えて、変異体には、例えば、天然のペプチドの生物学的活性の全てではなくともいくらかを保持するＧＨの完全長天然アミノ酸配列のＮ末端またはＣ末端において、１つ以上のアミノ酸残基が付加されるか削除されるポリペプチドを含めることができる。
【表３−１】
2019056013.tif 000031
【表３−２】
2019056013.tif 000032
【０１１２】
（ａ）融合タンパク質の立体配置
本発明は、特異的なＮ末端からＣ末端への立体配置で結合されたＧＨおよびＸＴＥＮ構成要素を有する、融合タンパク質組成物を提供する。いくつかの実施形態においては、ブロック共重合体を形成するように、１つ以上のＧＨが１つ以上のＸＴＥＮに、そのＮ末端またはＣ末端のいずれかで、スペーサーと共にまたはスペーサーを伴わずに結合し、融合タンパク質中でのＧＨおよびＸＴＥＮの一連の配置はブロック共重合体化学において既知の配置と同一である。１を超えるＧＨ、ＸＴＥＮ、またはスペーサーがある場合、各ＧＨ、ＸＴＥＮ、またはスペーサーは同じまたは異なる配列を有し、ＧＨおよび／またはＸＴＥＮは連続してまたは交互に（規則的にまたは変則的に）結合する。従って、本明細書で提供する全ての式において、１を超えるＧＨ、ＸＴＥＮ、またはスペーサーがある場合、各ＧＨ、ＸＴＥＮ、およびスペーサーは同一かまたは異なる。いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、１つのＸＴＥＮポリペプチドに結合したＧＨを伴う単量体融合タンパク質である。他の実施形態では、融合タンパク質は２つ以上のＸＴＥＮポリペプチドに結合したＧＨを伴う単量体融合タンパク質である。さらに他の実施形態では、融合タンパク質は１つのＸＴＥＮポリペプチドに結合した２つ以上のＧＨを伴う単量体融合タンパク質である。さらに他の実施形態では、融合タンパク質は２つ以上のＸＴＥＮポリペプチドに結合した２つ以上のＧＨを伴う単量体融合タンパク質である。表４に、本発明によって包含される立体配置の非限定的な例を提供するが、本明細書において開示したまたは当該分野において既知のスペーサーおよび開裂配列の組み込みを含む、その他の数多くの変形が当業者には明らかであろう。
【表４−１】
2019056013.tif 000033
【表４−２】
2019056013.tif 000034
【０１１３】
本発明は、表４に示す立体配置にあり、ＸＴＥＮに結合していない対応するＧＨの生物学的活性の少なくとも一部を保持する融合タンパク質組成物を企図する。他の実施形態では、下により詳細に記載するように、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ内へとスペーサー配列内に組み込まれる任意選択的な開裂配列の開裂により、ＸＴＥＮからのその放出の際に、ＧＨ構成成分は生物学的に活性になるか、活性が増加する。
【０１１４】
ｈＧＨ−ＸＴＥＮ組成物の一実施形態では、本発明は式Ｉの融合タンパク質を提供し：（ＸＴＥＮ）ｘ−ＧＨ−（ＸＴＥＮ）ｙ Ｉ
式中、各存在について独立して、ＧＨはヒト成長ホルモンであり；ｘは０または１のいずれかであり、およびｙは０または１のいずれかであり、ここでｘ＋ｙ≧１であり；ＸＴＥＮは伸長組み換えポリペプチドである。
【０１１５】
ｈＧＨ−ＸＴＥＮ組成物の別の実施形態では、本発明は式ＩＩの融合タンパク質を提供し：
（ＸＴＥＮ）ｘ−（ＧＨ）−（Ｓ）ｙ−（ＸＴＥＮ）ｙ ＩＩ
式中、各存在について独立して、ＧＨはヒト成長ホルモンであり；Ｓは任意選択的に開裂配列を含むことができる、１から約５０個のアミノ酸残基を有するスペーサー配列であり；ｘは０または１のいずれかであり、およびｙは０または１のいずれかであり、ここでｘ＋ｙ≧１であり；ＸＴＥＮは伸長組み換えポリペプチドである。
【０１１６】
別の実施形態では、本発明は、単離された融合タンパク質を提供し、そこで融合タンパク質は式ＩＩＩのものであり：
（ＧＨ）−（Ｓ）ｘ−（ＸＴＥＮ）−（Ｓ）ｙ−（ＧＨ）−（Ｓ）ｚ−（ＸＴＥＮ）ｚ 
ＩＩＩ
式中、各存在について独立して、ＧＨはヒト成長ホルモンであり；Ｓは任意選択的に開裂配列を含むことができる、１から約５０個のアミノ酸残基を有するスペーサー配列であり；ｘは０または１のいずれかであり；ｙは０または１のいずれかであり；ｚは０または１のいずれかであり；ＸＴＥＮは伸長組み換えポリペプチドである。
【０１１７】
別の実施形態では、本発明は、単離された融合タンパク質を提供し、そこで融合タンパク質は式ＩＶのものであり：
（ＸＴＥＮ）ｘ−（Ｓ）ｙ−（ＧＨ）−（Ｓ）ｚ−（ＸＴＥＮ）−（ＧＨ） ＩＶ
式中、各存在について独立して、ＧＨはヒト成長ホルモンであり；Ｓは任意選択的に開裂配列を含むことができる、１から約５０個のアミノ酸残基を有するスペーサー配列であり；ｘは０または１のいずれかであり；ｙは０または１のいずれかであり；ｚは０または１のいずれかであり；ＸＴＥＮは伸長組み換えポリペプチドである。
【０１１８】
別の実施形態では、本発明は、単離された融合タンパク質を提供し、そこで融合タンパク質は式Ｖのものであり：
（ＧＨ）ｘ−（Ｓ）ｘ−（ＧＨ）−（Ｓ）ｙ−（ＸＴＥＮ） Ｖ
式中、各存在について独立して、ＧＨは成長ホルモンであり；Ｓは任意選択的に開裂配列を含むことができる、１から約５０個のアミノ酸残基を有するスペーサー配列であり；ｘは０または１のいずれかであり；ｙは０または１のいずれかであり；ＸＴＥＮは伸長組み換えポリペプチドである。
【０１１９】
別の実施形態では、本発明は、単離された融合タンパク質を提供し、そこで融合タンパク質は式ＶＩのものであり：
（ＸＴＥＮ）−（Ｓ）ｘ−（ＧＨ）−（Ｓ）ｙ−（ＧＨ） ＶＩ
式中、各存在について独立して、ＧＨは成長ホルモンであり；Ｓは任意選択的に開裂配列を含むことができる、１から約５０個のアミノ酸残基を有するスペーサー配列であり；ｘは０または１のいずれかであり；ｙは０または１のいずれかであり；ＸＴＥＮは伸長組み換えポリペプチドである。
【０１２０】
別の実施形態では、本発明は、単離された融合タンパク質を提供し、そこで融合タンパク質は式ＶＩＩのものであり：
（ＸＴＥＮ）−（Ｓ）ｘ−（ＧＨ）−（Ｓ）ｙ−（ＧＨ）−（ＸＴＥＮ）     ＶＩＩ
式中、各存在について独立して、ＧＨは成長ホルモンであり；Ｓは任意選択的に開裂配列を含むことができる、１から約５０個のアミノ酸残基を有するスペーサー配列であり；ｘは０または１のいずれかであり；ｙは０または１のいずれかであり；ＸＴＥＮは伸長組み換えポリペプチドである。
【０１２１】
別の実施形態では、本発明は、単離された融合タンパク質を提供し、そこで融合タンパク質は式ＶＩＩＩのものであり：
（（Ｓ）ｍ−（ＧＨ）ｘ−（Ｓ）ｎ−（ＸＴＥＮ）ｙ−（Ｓ）ｏ）ｔＶＩＩＩ
式中、ｔは０より大きい整数（１、２、３など）であり；ｍ、ｎ、ｏ、ｘ、およびｙはそれぞれ独立して整数（０、１、２、３など）であり、ＧＨは成長ホルモンであり；Ｓは任意選択的に開裂部位を備えるスペーサーであり；ＸＴＥＮは伸長組換えポリペプチドであり、ただし（１）ｘ＋ｙ＞１、（２）ｔ＝１の場合、ｘ＞０およびｙ＞０であり、（３）１を超えるＧＨ、Ｓ、またはＸＴＥＮがある場合、ＧＨ、ＸＴＥＮ、またはＳがそれぞれ同じまたはそれぞれ独立して異なり；（４）ｔ＞１の場合、各サブユニット中に含まれるｍ、ｎ、ｏ、ｘ、またはｙがそれぞれ同じまたはそれぞれ独立して異なる。
【０１２２】
別の実施形態では、本発明は、単離された融合タンパク質を提供し、そこで融合タンパク質は式ＩＸのものであり：
（ＸＴＥＮ）ｘ−（Ｓ）ｘ−（ＧＨ）−（Ｓ）ｙ−（ＸＴＥＮ）ｙ ＩＸ
式中、各存在について独立して、ＧＨはヒト成長ホルモンであり；Ｓは任意選択的に開裂配列を含むことができる、１から約５０個のアミノ酸残基を有するスペーサー配列であり；ｘは０または１のいずれかであり、およびｙは０または１のいずれかであり、ここでｘ＋ｙ＞１であり；ＸＴＥＮは伸長組み換えポリペプチドである。
【０１２３】
本発明によって包含される融合タンパク質では、スペーサー配列基はいずれも任意選択である。スペーサーは、宿主細胞からの融合タンパク質の発現を強化するために、または立体障害を低減させてＧＨ構成要素が所望の三次構造をとることができるようにおよび／またはその標的受容体と適切に相互作用できるように提供される。スペーサーおよび望ましいスペーサーの同定方法については、例えば、参照することにより具体的に本明細書に組み入れられる、Ｇｅｏｒｇｅら（２００３）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ１５：８７１−８７９を参照されたい。一実施形態では、スペーサーは、１〜５０間のアミノ酸残基の長さの、または約１〜２５残基、または約１〜１０残基の長さのペプチド配列を１つ以上備える。開裂部位を除いたスペーサー配列は、２０個の天然のＬアミノ酸のいずれをも備えることができ、好ましくは、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、グルタミン酸（Ｅ）およびプロリン（Ｐ）を含むことができるがこれらに限定されない立体障害のない親水性アミノ酸を備えるだろう。場合によっては、スペーサーは、ポリグリシンまたはポリアラニンであることができ、または主にグリシンおよびアラニン残基の混合物である。開裂配列を除外したスペーサーポリペプチドは、ほとんど実質的に二次構造を欠き、例えば、Ｃｈｏｕ−Ｆａｓｍａｎおよび／またはＧＯＲアルゴリズムで判断されるように、約１０％未満、または約５％未満である。一実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質組成物中の一方または両方のスペーサー配列は、それぞれ同一または異なる開裂配列をさらに含有し、この開裂配列は、融合タンパク質からＧＨを放出するためにプロテアーゼによって作用され得る。
【０１２４】
一実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質内へと組み込まれるＧＨは、配列番号４１として示される配列に対し少なくとも約８０％の配列同一性を、あるいは配列番号４１の配列と比較して少なくとも約８１％、または約８２％、または約８３％、または約８４％、または約８５％、または約８６％、または約８７％、または約８８％、または約８９％、または約９０％、または約９１％、または約９２％、または約９３％、または約９４％、または約９５％、または約９６％、または約９７％、または約９８％、または約９９％、または約１００％の配列同一性を呈する配列を有する。前述の実施形態のＧＨは、本明細書に記載のような、アッセイまたは測定されたまたは決定されたパラメータを使用して活性について評価されることができ、対応する天然ＧＨ配列に比較して、少なくとも約４０％、または約５０％、または約５５％、または約６０％、または約７０％、または約８０％、または約９０％、または約９５％またはそれ以上の活性を保持する配列が、対象ｈＧＨ−ＸＴＥＮへの組み入れには好適であると考えられるだろう。好適な活性レベルを保持すると見出されたＧＨは、本明細書上記に記載の一つ以上のＸＴＥＮポリペプチドに結合されることができる。一実施形態では、好適な活性レベルを保持すると見出されたＧＨは、表３からの配列に対し少なくとも約８０％の配列同一性を、あるいは表３の配列と比較したとき少なくとも約８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または約１００％の配列同一性を有する一つ以上のＸＴＥＮポリペプチドに結合されることができ、結果キメラ融合タンパク質を生じる。
【０１２５】
単一のＸＴＥＮに結合した単一のＧＨを含有する融合タンパク質の配列の非限定的な例は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｓｃｈｅｌｌｅｎｂｅｒｇｅｒら国際公開第１０／１４４５０２Ａ２号の表３５に提示される。一実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ組成物はＳｃｈｅｌｌｅｎｂｅｒｇｅｒら国際公開第１０／１４４５０２Ａ２号（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）の表３５からのｈＧＨ−ＸＴＥＮに対し、少なくとも約８０％の配列同一性を、あるいはその全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｓｃｈｅｌｌｅｎｂｅｒｇｅｒら国際公開第１０／１４４５０２Ａ２号の表３５からのｈＧＨ−ＸＴＥＮと比較したとき少なくとも約８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または約１００％の配列同一性を有する融合タンパク質を備えるだろう。１つ以上のＧＨに結合した２つのＸＴＥＮ分子を含有する融合タンパク質の配列の非限定的な例は、Ｓｃｈｅｌｌｅｎｂｅｒｇｅｒら国際公開第１０／１４４５０２Ａ２号（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）の表３６に示されるが、本発明はまた、表２から選択された配列に対し少なくとも約９０％の配列同一性を呈する、同一または異なり得る、１つか２つのＸＴＥＮに結合した配列番号４１の配列に対し少なくとも９０％の配列同一性を呈する配列を有する他のＧＨの置換も企図する。ＧＨ、ＸＴＥＮ、およびスペーサアミノ酸を備えるｈＧＨ−ＸＴＥＮの非限定的な例は、その全体が参照により本明細書に組み込まれるＳｃｈｅｌｌｅｎｂｅｒｇｅｒら国際公開第１０／１４４５０２Ａ２号の表３７に提示される。（そのそれぞれがその全体において参照により本明細書に組み込まれる、Ｓｃｈｅｌｌｅｎｂｅｒｇｅｒら国際公開第１０／１４４５０２Ａ２号；Ｃｌｅｌａｎｄら米国特許出願第１３／８２９，３６９号；およびＣｌｅｌａｎｄら国際公開第１３／１８４２１６号も参照されたい）。
【０１２６】
ＶＩ）．本発明の組成物の使用
体の成長に関わる多くの過程は、複数のペプチドおよびホルモンによって制御され、そしてかかるペプチドおよびホルモン、並びにその類似体が成長ホルモン関連疾患、障害および病態の治療において有用であることが見いだされた。しかしながら、小児患者を治療するための市販されている成長ホルモンの使用は、そのような疾患、障害および病態に罹患した小児患者の管理において最適な効果をもたらしていない。具体的には、用量の最適化および投薬頻度が、小児患者の成長ホルモン関連疾患および障害の治療に用いられるペプチドおよびホルモン生物製剤にとって重要である。成長ホルモンの半減期が短い（例えば、皮下に投与されたときは通常４時間未満）という事実により、臨床的有益性を達成するためには頻回（例えば、毎日）の投薬を必要とし、結果としてかかる小児患者の管理が困難になる。連日の成長ホルモン（ＧＨ）注射の不履行は治療効果を失わせ得る。
【０１２７】
遺伝子組み換え成長ホルモン（ｒｈＧＨ）についての現行の治療プロトコルと比較して、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の小児ＰＧＨＤ患者への利益には、注射の数および頻度における実質的な減少が含まれ得る。例えば、臨床試験の第２ａ相試験ステージにおいて（実施例２を参照）、小児ＰＧＨＤ患者は、連日のｒｈＧＨ治療法を受けている小児患者が同一期間をかけて受けるだろう総注射数（６か月にわたる連日のｒｈＧＨ治療法で患者が受けるだろうｒｈＧＨの計１８０回注射）と比較して、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の総注射数が有意に少ないだろう（例えば、計６回注射、月１回を６ヶ月間）。現在の臨床診療におけるｒｈＧＨを用いる注射の頻度は、しばしば服薬遵守の欠如をまねく。連日の治療に伴う服薬遵守は正常成長のための可能性を完全に実現するために重要である（Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄ，Ｒ．Ｇ．＆Ｂａｋｋｅｒ，Ｂ．（２００８）．Ｅｎｄｏｃｒ  Ｐｒａｃｔ  １４，１４３−５４；Ｄｅｓｒｏｓｉｅｒｓ，Ｐ．ら（２００５）．Ｐｅｄｉａｔｒ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｒｅｖ  ２  Ｓｕｐｐｌ３，３２７−３１）。ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質は、ＰＧＨＤを有する小児に、非連日（例えば、週２回、週毎、２週毎、３週毎、またはひと月毎）投与の利点を提供し、および現在の連日注射に対する安全な代案を提示すると期待される。連日のｒｈＧＨ治療法よりも少ない頻度で投与されるｈＧＨ生成物は、より優れた服薬遵守を提供し得、それゆえＰＧＨＤ小児に、より良好な長期治療結果を提供し得る。
【０１２８】
一態様では、本発明は、小児ヒト患者における成長ホルモン分泌不全症を含むがこれに限定されない、ＧＨによって媒介される疾患、障害、または病態において有益な効果を達成するための方法を提供する。別の態様では、本発明は、小児患者における成長ホルモン分泌不全症を含むがこれに限定されない、ＧＨによって媒介される疾患、障害または病態において有益な効果を達成するための方法を提供する。有益な効果は、制限なしに、ＧＨ関連疾患、分泌不全症、障害または病態を治療すること、仲介すること、または寛解することを含む。本発明は、比較的短い終末相半減期および／または狭い治療域を有するＧＨの欠点および／または制限に対処するものである。
【０１２９】
１．小児成長ホルモン分泌不全症（ＰＧＨＤ）
「小児成長ホルモン分泌不全症」または「ＰＧＨＤ」は本明細書で用いるとき、成長ホルモンを用いた治療が有効であるだろう、ヒト小児患者における疾患、分泌不全症、障害または病態を示す。ＰＧＨＤは、ＧＨ分泌不全症の原因に基づいて分類された障害を含む（例えば、脳下垂体性ＰＧＨＤ、視床下部性ＰＧＨＤ、機能性（ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ）ＰＧＨＤ、および特発性ＰＧＨＤ）。脳下垂体性または「古典的」ＰＧＨＤは、脳下垂体による成長ホルモンの生成が不能な状態である。「視床下部性ＰＧＨＤ」は、ＧＨを産生するように脳下垂体を適切に機能させる神経内分泌メッセージングホルモンである成長ホルモン放出ホルモン（ＧＨＲＨ）の産生および／または伝達における視床下部の不全である。「機能性ＰＧＨＤ」は、ＧＨの産生、取り込み、および／または活用における脳下垂体の不全に関連する他のホルモンおよび代謝機能の不全である。ＰＧＨＤは、制限なしに、特発性低身長、ターナー症候群、プラダー・ウィリー症候群、胎内発育遅延（ＳＧＡ）、低身長ホメオボックス含有遺伝子（ＳＨＯＸ欠損症）における欠損の結果としての発育不全；および慢性腎臓疾患（ＣＫＤ）も含む。ＰＧＨＤは本質的に、先天性または後天性であり得る。
【０１３０】
ＰＧＨＤはまた、子宮内発育遅延、先天性下垂体機能低下症または後天性下垂体機能低下症（例えば、頭蓋咽頭腫などの腫瘍によって引き起こされる下垂体機能低下症を含む）；脳下垂体内または付近における胎内発育遅延、発育障害；ＧＨの産生に関する遺伝的問題；プラダー・ウィリー症候群；ターナー症候群；特発性低身長；子宮内発育遅延；顔面正中欠損症；および腫瘍、感染、放射線治療、または重度頭部傷害による脳下垂体または周辺領域への損傷の結果としても生じ得る。
【０１３１】
ＰＧＨＤは、ＧＨ分泌不全症が顕現した人生の段階に基づいて分類され得る。例えば、青年は、乳児期または青年期前の小児期に始まった、小児期発症型ＰＧＨＤ（小児発症型ＰＧＨＤおよび小児発症型特発性ＰＧＨＤを含む）の継続であるＰＧＨＤを有し得る。小児期発症型ＰＧＨＤの原因は上に提供される。青年期前の小児のとき脳腫瘍を生き延びた青年は、外科手術、脳照射または化学療法の影響からＰＧＨＤを発症するリスクがあり得る。ＰＧＨＤは、青年期前の小児のときＧＨ分泌不全症であると診断されていなかった青年において発症、つまり小児期発症ＰＧＨＤを発症することがある。ＰＧＨＤは、脳下垂体への損傷または外傷によって引き起こされ得る。損傷は通例、腫瘍（例えば脳下垂体内または周囲での腫瘍、または視床下部内腫瘍）によって引き起こされる。脳下垂体腫瘍は腺を圧迫し得るか、または脳神経外科手術を介して腫瘍を除去したとき損傷が発生し得る。脳下垂体は感染、血管疾患、重度の頭部損傷、または頭頸部の腫瘍を治療するための脳照射または化学療法によっても損傷を受け得る。ＰＧＨＤは、小児または青年に彼らの誕生時または誕生直後に発生した外傷；中枢神経系感染；視床下部または脳下垂体の腫瘍；浸潤性または肉芽腫性疾患；全脳照射（ｃｒａｎｉａｌ  ｉｒｒａｄａｔｉｏｎ）；外科手術；または特発性原因によって引き起こされ得る。
【０１３２】
２．ｈＧＨ−ＸＴＥＮボーラス用量および投与計画
一態様では、本発明は、ヒト成長ホルモン−ＸＴＥＮ（ｈＧＨ−ＸＴＥＮ）融合タンパク質を患者に投与することによって、ヒト小児患者における小児成長ホルモン分泌不全症（ＰＧＨＤ）を治療する方法を提供する。一実施形態では、本方法は、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質を小児患者にボーラス用量として投与することを含む。別の実施形態では、ボーラス用量は治療的に有効な体重調整されたボーラス用量である。他の一実施形態では、ボーラス用量は約０．８ｍｇ／ｋｇから約６．３ｍｇ／ｋｇ間である。一実施形態では、融合タンパク質は配列番号１に対し少なくとも約９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を備える。別の実施形態では、融合タンパク質は配列番号１に対し、少なくとも約９１％、または少なくとも約９２％、または少なくとも約９３％、または少なくとも約９４％、または少なくとも約９５％、または少なくとも約９６％、または少なくとも約９７％、または少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を備える。別の実施形態では、融合タンパク質は配列番号１の配列を有するアミノ酸配列を備える。
【０１３３】
一態様では、ボーラス用量は、ある範囲の用量にわたって投与されてよい。概数の第一ｍｇ／ｋｇから概数の第二ｍｇ／ｋｇのボーラス用量の投与について言及する場合、「第一ｍｇ／ｋｇ」という用語は、第一ｍｇ／ｋｇ値を含んでよく、「第二ｍｇ／ｋｇ」という用語は第二ｍｇ／ｋｇ値を含んでよいことに留意されたい。
【０１３４】
一実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質は、（ｉ）配列番号１に対し少なくとも約９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列；（ｉｉ）配列番号１のアミノ酸配列；（ｉｉｉ）配列番号４（ＡＥ９１２−ｈＧＨ）に対し、少なくとも約９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列；（ｉｖ）配列番号４（ＡＥ９１２−ｈＧＨ）のアミノ酸配列；（ｖ）配列番号３８に対し、少なくとも約９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列；または（ｖｉ）配列番号３８のアミノ酸配列を備える。
【０１３５】
他の一態様では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質のボーラス用量は、ヒト小児患者に定期的に好適な期間（有限または無期限）にわたって投与される。一実施形態では、ボーラス用量は毎週、２週毎、３週毎、またはひと月毎に投与される。他の実施形態では、ボーラス用量は月１回、月２回、月３回または月４回投与される。別の実施形態では、ボーラス用量は約７日毎、約１０日毎、約１４日毎、約２１日毎、約２８日毎、または約３０日毎に投与される。一実施形態では、ボーラス用量は、非連日ベースで投与されるか、非連日ボーラス用量である。
【０１３６】
さらなる態様では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質のボーラス用量は、ヒト小児患者に（ｉ）約１．０ｍｇ／ｋｇから約６．３ｍｇ／ｋｇ；（ｉｉ）約１．０ｍｇ／ｋｇから約１．５ｍｇ／ｋｇ；（ｉｉｉ）約２．０ｍｇ／ｋｇから約３ｍｇ／ｋｇ、または（ｉｖ）約４．５ｍｇ／ｋｇから約５．５ｍｇ／ｋｇの用量で投与され、ここで該用量はひと月毎、半月毎、または週毎ベースで投与される。一実施形態では、融合タンパク質は約１．０ｍｇ／ｋｇ、約１．０５ｍｇ／ｋｇ、約１．１０ｍｇ／ｋｇ、約１．１５ｍｇ／ｋｇ、約１．２０ｍｇ／ｋｇ、約１．２５ｍｇ／ｋｇ、約１．３０ｍｇ／ｋｇ、約１．３５ｍｇ／ｋｇ、約１．４０ｍｇ／ｋｇ、約１．４５ｍｇ／ｋｇ、および約１．５０ｍｇ／ｋｇの用量で投与され、ここで該用量はひと月毎、半月毎、または週毎ベースで投与される。別の実施形態では、融合タンパク質は約２．０ｍｇ／ｋｇ、約２．１０ｍｇ／ｋｇ、約２．２０ｍｇ／ｋｇ、約２．３０ｍｇ／ｋｇ、約２．４０ｍｇ／ｋｇ、約２．５０ｍｇ／ｋｇ、約２．６０ｍｇ／ｋｇ、約２．７０ｍｇ／ｋｇ、約２．８０ｍｇ／ｋｇ、約２．９０ｍｇ／ｋｇ、および約３．０ｍｇ／ｋｇの用量で投与され、ここで該用量はひと月毎、半月毎、または週毎ベースで投与される。他の一実施形態では、融合タンパク質は約４．５０ｍｇ／ｋｇ、約４．６０ｍｇ／ｋｇ、約４．７０ｍｇ／ｋｇ、約４．８０ｍｇ／ｋｇ、約４．９０ｍｇ／ｋｇ、約５．０ｍｇ／ｋｇ、約５．１０ｍｇ／ｋｇ、約５．２０ｍｇ／ｋｇ、約５．３０ｍｇ／ｋｇ、約５．４０ｍｇ／ｋｇ、約５．５０ｍｇ／ｋｇ、約６．０ｍｇ／ｋｇ、および約６．３ｍｇ／ｋｇの用量で投与され、該用量はひと月毎、半月毎、または週毎ベースで投与される。好ましい実施形態では、融合タンパク質は（ｉ）約１．１５ｍｇ／ｋｇの用量で週毎ベース；（ｉｉ）約２．５ｍｇ／ｋｇの用量で半月毎ベース；および／または（ｉｉｉ）約５．０ｍｇ／ｋｇの用量でひと月毎ベースで投与される。
【０１３７】
別の実施形態では、融合タンパク質は約０．８ｍｇ／ｋｇ、約０．９ｍｇ／ｋｇ、１．６０ｍｇ／ｋｇ、約１．７０ｍｇ／ｋｇ、約１．８０ｍｇ／ｋｇ、約１．９０ｍｇ／ｋｇ、約３．１０ｍｇ／ｋｇ、約３．２０ｍｇ／ｋｇ、約３．３０ｍｇ／ｋｇ、約３．４０ｍｇ／ｋｇ、約３．５０ｍｇ／ｋｇ、約３．６０ｍｇ／ｋｇ、約３．７０ｍｇ／ｋｇ、約３．８０ｍｇ／ｋｇ、約３．９ｍｇ／ｋｇ、約４．０ｍｇ／ｋｇ、約４．１０ｍｇ／ｋｇ、約４．２０ｍｇ／ｋｇ、約４．３０ｍｇ／ｋｇ、約４．４０ｍｇ／ｋｇ、約５．６０ｍｇ／ｋｇ、約５．７０ｍｇ／ｋｇ、約５．８０ｍｇ／ｋｇ、および約５．９０ｍｇ／ｋｇの用量で投与され、ここで該用量はひと月毎、半月毎、または週毎ベースで投与される。
【０１３８】
別の態様では、ヒト小児患者にはｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の追加のボーラス用量および様々なボーラス用量が好適である。一実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮのボーラス用量は、
（ｉ）約０．８ｍｇ／ｋｇから約１．２ｍｇ／ｋｇ、約１．２ｍｇ／ｋｇから約１．８ｍｇ／ｋｇ、約１．８ｍｇ／ｋｇから約２．７ｍｇ／ｋｇ、約２．７ｍｇ／ｋｇから約４ｍｇ／ｋｇ、約４ｍｇ／ｋｇから約６ｍｇ／ｋｇ、約０．８ｍｇ／ｋｇから約１．８ｍｇ／ｋｇ、約０．８ｍｇ／ｋｇから約２．７ｍｇ／ｋｇ、または約０．８ｍｇ／ｋｇから約４ｍｇ／ｋｇ；
（ｉｉ）約１．２ｍｇ／ｋｇから約１．８ｍｇ／ｋｇ、約１．２ｍｇ／ｋｇから約２．７ｍｇ／ｋｇ、約１．２ｍｇ／ｋｇから約４ｍｇ／ｋｇ、または約１．２ｍｇ／ｋｇから約６．３ｍｇ／ｋｇ；
（ｉｉｉ）約１．８ｍｇ／ｋｇから約２．７ｍｇ／ｋｇ、約１．８ｍｇ／ｋｇから約４ｍｇ／ｋｇ、または約１．８ｍｇ／ｋｇから約６ｍｇ／ｋｇ；
（ｉｖ）約２．７ｍｇ／ｋｇから約４ｍｇ／ｋｇ、約２．７ｍｇ／ｋｇから約６ｍｇ／ｋｇ；または
（ｖ）約４ｍｇ／ｋｇから約６ｍｇ／ｋｇである。
【０１３９】
別の実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮのボーラス用量は、約０．８ｍｇ／ｋｇ、約１．０ｍｇ／ｋｇ、約１．２ｍｇ／ｋｇ、約１．４ｍｇ／ｋｇ、約１．６ｍｇ／ｋｇ、約１．８ｍｇ／ｋｇ、約２．０ｍｇ／ｋｇ、約２．２ｍｇ／ｋｇ、約２．４ｍｇ／ｋｇ、約２．６ｍｇ／ｋｇ、約２．７ｍｇ／ｋｇ、約２．８ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約３．２ｍｇ／ｋｇ、約３．４ｍｇ／ｋｇ、約３．６ｍｇ／ｋｇ、約３．８ｍｇ／ｋｇ、約４ｍｇ／ｋｇ、約４．２ｍｇ／ｋｇ、約４．４ｍｇ／ｋｇ、約４．６ｍｇ／ｋｇ、約４．８ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約５．２ｍｇ／ｋｇ、約５．４ｍｇ／ｋｇ、約５．６ｍｇ／ｋｇ、約５．８ｍｇ／ｋｇ、約６ｍｇ／ｋｇ、および約６．３ｍｇ／ｋｇからなる群より選択される。
【０１４０】
一実施形態では、本方法は少なくとも二つのボーラス用量のヒト成長ホルモンｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質を、ＰＧＨＤを有するヒト小児患者に投与することを含み、当該投与は、少なくとも約７日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１４日間、少なくとも約２１日間、少なくとも約２８日間、または少なくとも約３０日間で区切られる。他の一実施形態では、ボーラス用量は治療的に有効な体重調整されたボーラス用量（本明細書に記載）である。他の一実施形態では、投与ステップは、図１に記載のアミノ酸配列（配列番号１）を備える有効量のｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質を備える医薬組成物を投与することを含む。別の実施形態では、本明細書に記載の方法は、図１に記載の配列（配列番号１）に対し、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％、または少なくとも約９６％、または少なくとも約９７％、または少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有する融合タンパク質の使用を含む。
【０１４１】
別の実施形態では、ボーラス用量の投与は：少なくとも約一ヶ月、少なくとも約３１日間、少なくとも約３０日間、少なくとも約２９日間、少なくとも約２８日間、少なくとも約２７日間、少なくとも約２６日間、少なくとも約２５日間、少なくとも約２４日間、少なくとも約２３日間、少なくとも約２２日間、少なくとも約２１日間、少なくとも約２０日間、少なくとも約１９日間、少なくとも約１８日間、少なくとも約１７日間、少なくとも約１６日間、少なくとも約１５日間、少なくとも約１４日間、少なくとも約１３日間、少なくとも約１２日間、少なくとも約１１日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約９日間、少なくとも約８日間、少なくとも約７日間、少なくとも約６日間、少なくとも約５日間、少なくとも約４日間、少なくとも約３日間、または少なくとも約２日間で区切られる。
【０１４２】
別の実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の治療的に有効な体重調整されたボーラス用量はヒト小児患者に皮下投与される。
【０１４３】
一般に、「ボーラス用量」は短期間の内に投与される用量である。別の実施形態では、ボーラス用量は、約１から約３０分間、約１から約２０分間、約１から約１５分間、約１から約１０分間、または約１から約５分間以内に投与される。一実施形態では、ボーラス用量は約１から約５分間以内に投与される。他の一実施形態では、ボーラス用量は皮下ボーラス用量である。
【０１４４】
本発明は、ヒト小児患者のための本発明のｈＧＨ−ＸＴＥＮ医薬組成物についての用量計画を確立するための方法を提供する。本方法は、治療有効量のｈＧＨ−ＸＴＥＮ組成物の継続的用量を、用量間の様々な期間を使用して投与して、所望のパラメータ、血中濃度または臨床的作用を達成および／または維持するのに十分な投薬間隔を決定することを含み；有効な間隔での治療有効量のかかる継続的用量は、ＰＧＨＤ状態のための、ｈＧＨ−ＸＴＥＮの治療的に有効な用量計画を確立する。従って、一態様では、本発明はヒト成長ホルモン分泌不全症（ＰＧＨＤ）に治療的に有効である治療計画において使用するためのｈＧＨ−ＸＴＥＮ組成物を提供する。
【０１４５】
別の態様では、本発明は、ヒト小児成長ホルモン分泌不全症（ＰＧＨＤ）のための治療計画において使用するためのｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質を提供し、該計画はｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質をヒト小児患者に投与することを含む。一実施形態では、治療計画は、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質のボーラス用量（本明細書に記載）をヒト小児患者にある特定の間隔（本明細書に記載）で投与することを含む。追加の一実施形態では、治療計画はｈＧＨ−ＸＴＥＮのボーラス用量の皮下投与を含む。一実施形態では、該計画は、適切な間隔で区切られた（本明細書に記載）ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の少なくとも二つのボーラス用量（本明細書に記載）をヒト小児患者に投与することを含む。
【０１４６】
別の実施形態では、本発明はｈＧＨ−ＸＴＥＮの各ボーラス用量が毎週（または週毎）、２週毎、３週毎、４週毎、またはひと月毎に投与される、継続的用量計画を提供する。
【０１４７】
治療計画において使用するためのｈＧＨ−ＸＴＥＮ組成物の一実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質は図１に記載のように示されるアミノ酸配列（配列番号１）を備える。一実施形態では、治療的に有効な用量治療計画は、少なくとも二つの治療的に有効な体重調整されたボーラス用量の小児対象への投与を含み、該用量は皮下に投与される。
【０１４８】
３．ｒｈＧＨに対するｈＧＨ−ＸＴＥＮの同等性
別の態様では、本発明は、治療有効量のｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質を、連日投与される対応するｈＧＨ（ＸＴＥＮに結合していない）の有効量に対し同等であるまたはそれ未満に同等である、ボーラス用量として用いた小児患者におけるヒト成長ホルモン分泌不全症（ＰＧＨＤ）を治療する方法を提供する。一実施形態では、融合タンパク質のボーラス用量は、約４．８μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日から約３７μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日未満の量に同等である；または約４．８μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日、約７．４μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日、約１１．１μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日、約１６．７μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日、約２４．７μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日、または約３７μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日未満または同等である量に同等である。おおよその平均小児ｒｈＧＨ一日用量は４０μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日から４３μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日である。別の実施形態では、ボーラス用量はｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の治療的に有効な体重調整されたボーラス用量である。
【０１４９】
追加の一態様では、本発明はＰＧＨＤを有するヒト小児患者にｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質を、遺伝子組み換えｈＧＨの一日用量と同等（例えば、ｒｈＧＨの推奨される一日用量）以下または未満の投与量で投与することを含む、ヒト小児成長ホルモン分泌不全症（ＰＧＨＤ）を治療する方法を提供する。
【０１５０】
別の実施形態では、当該ボーラス用量の投与は少なくとも約７日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１４日間、少なくとも約２１日間、少なくとも約２８日間、少なくとも約３０日間、または少なくとも約一ヶ月で区切られる。
【０１５１】
一実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮのボーラス用量は、約４３μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日未満であるｈＧＨ／ｋｇ／日投与量に対して同等である。別の実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮのボーラス用量は、約４０μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日未満であるｈＧＨ／ｋｇ／日投与量に同等である。別の実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮの投与量は、約３９μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日、約３８μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日、約３６μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日、約３４μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日、約３２μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日、約３０μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日、約２８μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日、約２６μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日、約２５μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日、約２４μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日、約２２μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日、約２０μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日、約１８μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日、約１７μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日、約１６μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日、約１４μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日、約１２μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日、約１１μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日、約８μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日、約７μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日、約６μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日、約５μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日、約４μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日、または約２μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日未満に同等である。
【０１５２】
他の一実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮのボーラス用量は、約７日間、約１４日間、約２１日間、約２８日間、または約３０日間にわたって投与された累積した同等ｈＧＨ／ｋｇ／日投与量と同一または未満である。
【０１５３】
さらに別の実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質は、図１に記載のように示されるアミノ酸配列（配列番号１）を備える。他の実施形態では、投与は皮下投与である。
【０１５４】
一態様では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮのボーラス用量は、ｈＧＨ／ｋｇ／日投与量未満に同等である用量の範囲にわたって投与され得る。概数の第一μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日から概数の第二μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日であるｈＧＨ／ｋｇ／日投与量未満に同等であるボーラス用量について言及する場合、「第一μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日」という用語は第一μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日値を含んでも良く、「第二μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日」という用語は第二μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日値を含んでも良いことに留意されたい。
【０１５５】
４．ｈＧＨ−ＸＴＥＮおよびＩＧＦ−Ｉレベル
本発明の方法は、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質を用いた治療後にヒト小児患者において結果得られるＩＧＦ−Ｉレベルに関して有利である。高ＩＧＦ−Ｉが癌の危険因子であると考えられるために、血中ＩＧＦ−Ｉのレベルが高いことは望ましくない（Ｓｖｅｎｓｓｏｎら、Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎ  Ｍｅｔａｂ．２０１２年９月２６日にｄｏｉ：１０．１２１０／ｊｃ．２０１２−２３２９として電子出版）。ヒトにおけるＩＧＦ−Ｉの生成は、主としてＧＨシグナル伝達の結果であり、ＩＧＦ−ＩはＧＨ療法中に観察されるタンパク質同化作用のための重要なメディエータである（Ｌｅ  Ｒｏｉｔｈら（２００１）．Ｅｎｄｏｃｒ  Ｒｅｖ２２，５３−７４）。従って、ＩＧＦ−Ｉは、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の生物学的活性についての重要な薬力学的標識である。実際に、ＧＨに対するＩＧＦ−Ｉ応答（例えば、連日ｒｈＧＨ療法）は、年齢特異的および性別特異的規範的データの見地から解釈される（Ｖａｎｃｅら（１９９９）．Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ３４１，１２０６−１６；Ｍｏｌｉｔｃｈら（２０１１）．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ  ９６，１５８７−６０９）。ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコア（ＩＧＦ−Ｉ  ＳＤＳ）を使用することで、解釈は最も容易に行われる。さらに、ＧＨ分泌不全症を有する小児患者は、健常個体と同様に、ベースラインＩＧＦ−Ｉ値の範囲を有する。従って、０時点でのベースラインについて補正されたＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコアは、ＩＧＦ−Ｉ応答に起こり得るｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質用量効果を調査するために使用することができる。
【０１５６】
一態様では、本発明は、ヒト小児患者が、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の投与後に、ＩＧＦ−Ｉ応答（例えば、平均ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコアにより測定される）を正常範囲内に維持する、ＰＧＨＤの治療方法を提供する。ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコアについては、正常範囲は概して、約−１．５から約１．５間であるが、約−２．０から約２．０間でもあることができる。
【０１５７】
概数の第一の値（例えば、−２．０）から概数の第二の値（例えば、２．０）のＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコアに言及する場合、「第一の値」は第一の値を含んでよく、「第二の値」は第二の値を含んでよいことに留意されたい。
【０１５８】
一実施形態では、本発明は、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質を患者に投与することによりヒト小児患者における小児成長ホルモン分泌不全症（ＰＧＨＤ）を治療する方法を提供し、ここで該ヒト患者は、投与後に約−２．０から約２．０間の血清ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコア（ＳＤＳ）を有する。一実施形態では、本方法は、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質を小児患者にボーラス用量（本明細書に記載）として投与することを含む。別の実施形態では、ボーラス用量は治療的に有効な体重調整されたボーラス用量である。他の実施形態では、小児患者は、ｈＧＨ−ＸＴＥＮの投与後、約−２．０超、約−１．５超、約−１．０超、約−０．５超、または約０超、約０．５超、約１．０超、約１．５超、約１．６超、約１．７超、約１．８超、または約１．９超の血清ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコアを有する。
【０１５９】
別の実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮのボーラス用量は、小児患者の血清ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコア（ＳＤＳ）を、（ａ）約−２．０から約２．０間、または（ｂ）約０から約２．０間に、ボーラス用量の投与後、少なくとも約７日間、少なくとも約８日間、少なくとも約９日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１１日間、少なくとも約１２日間、少なくとも約１３日間、少なくとも約１４日間、少なくとも約１５日間、少なくとも約１６日間、少なくとも約１７日間、少なくとも約１８日間、少なくとも約１９日間、少なくとも約２０日間、少なくとも約２１日間、少なくとも約２２日間、少なくとも約２３日間、少なくとも約２４日間、少なくとも約２５日間、少なくとも約２６日間、少なくとも約２７日間、少なくとも約２８日間、少なくとも約２９日間、または少なくとも約３０日間にわたって維持するのに有効である。
【０１６０】
別の実施形態では、複数の継続的なｈＧＨ−ＸＴＥＮボーラス用量の投与は、小児患者の血清ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコア（ＳＤＳ）を、（ａ）約−２．０から約２．０間、または（ｂ）約０から約２．０間に、ボーラス用量の投与と投与の間に、少なくとも約７日間、少なくとも約８日間、少なくとも約９日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１１日間、少なくとも約１２日間、少なくとも約１３日間、少なくとも約１４日間、少なくとも約１５日間、少なくとも約１６日間、少なくとも約１７日間、少なくとも約１８日間、少なくとも約１９日間、少なくとも約２０日間、少なくとも約２１日間、少なくとも約２２日間、少なくとも約２３日間、少なくとも約２４日間、少なくとも約２５日間、少なくとも約２６日間、少なくとも約２７日間、少なくとも約２８日間、少なくとも約２９日間、または少なくとも約３０日間にわたって維持するのに有効である。前述の実施形態では、ボーラス用量は週毎、２週毎、３週毎、またはひと月毎に投与される。
【０１６１】
別の実施形態では、複数の継続的なｈＧＨ−ＸＴＥＮボーラス用量の投与は、小児患者の平均血清ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコア（ＳＤＳ）を、（ａ）約−２．０から約２．０間、または（ｂ）約−１．０から約２．０間に、ボーラス用量の投与と投与の間に、少なくとも約７日間、少なくとも約８日間、少なくとも約９日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１１日間、少なくとも約１２日間、少なくとも約１３日間、少なくとも約１４日間、少なくとも約１５日間、少なくとも約１６日間、少なくとも約１７日間、少なくとも約１８日間、少なくとも約１９日間、少なくとも約２０日間、少なくとも約２１日間、少なくとも約２２日間、少なくとも約２３日間、少なくとも約２４日間、少なくとも約２５日間、少なくとも約２６日間、少なくとも約２７日間、少なくとも約２８日間、少なくとも約２９日間、または少なくとも約３０日間にわたって維持するのに有効である。前述の実施形態では、ボーラス用量は週毎、２週毎、３週毎、またはひと月毎に投与される。
【０１６２】
別の実施形態では、複数の継続的なｈＧＨ−ＸＴＥＮボーラス用量の投与は、小児患者の血清ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコア（ＳＤＳ）を、（ａ）約−２．０より上、または（ｂ）約０より上、または（ｃ）約１．０より上、または（ｄ）約１．５より上に、ボーラス用量の投与と投与の間に、少なくとも約７日間、少なくとも約８日間、少なくとも約９日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１１日間、少なくとも約１２日間、少なくとも約１３日間、少なくとも約１４日間、少なくとも約１５日間、少なくとも約１６日間、少なくとも約１７日間、少なくとも約１８日間、少なくとも約１９日間、少なくとも約２０日間、少なくとも約２１日間、少なくとも約２２日間、少なくとも約２３日間、少なくとも約２４日間、少なくとも約２５日間、少なくとも約２６日間、少なくとも約２７日間、少なくとも約２８日間、少なくとも約２９日間、または少なくとも約３０日間にわたって維持するのに有効である。前述の実施形態では、ボーラス用量は週毎、２週毎、３週毎、またはひと月毎に投与される。
【０１６３】
別の実施形態では、複数の継続的なｈＧＨ−ＸＴＥＮボーラス用量の投与は、小児患者の血清ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコア（ＳＤＳ）を、（ａ）約１．５未満、または（ｂ）約２．０未満に、ボーラス用量の投与と投与の間、少なくとも約７日間、少なくとも約８日間、少なくとも約９日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１１日間、少なくとも約１２日間、少なくとも約１３日間、少なくとも約１４日間、少なくとも約１５日間、少なくとも約１６日間、少なくとも約１７日間、少なくとも約１８日間、少なくとも約１９日間、少なくとも約２０日間、少なくとも約２１日間、少なくとも約２２日間、少なくとも約２３日間、少なくとも約２４日間、少なくとも約２５日間、少なくとも約２６日間、少なくとも約２７日間、少なくとも約２８日間、少なくとも約２９日間、または少なくとも約３０日間にわたって維持するのに有効である。前述の実施形態では、ボーラス用量は週毎、２週毎、３週毎、またはひと月毎に投与される。
【０１６４】
別の実施形態では、複数の継続的なｈＧＨ−ＸＴＥＮボーラス用量の投与は、ベースラインＳＤＳと比較して平均最大血清ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコア（ＳＤＳ）における小児患者の変化を、（ａ）約０．５から３．０間、または（ｂ）約１．０から２．５間に、ボーラス用量の投与と投与の間、少なくとも約７日間、少なくとも約８日間、少なくとも約９日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１１日間、少なくとも約１２日間、少なくとも約１３日間、少なくとも約１４日間、少なくとも約１５日間、少なくとも約１６日間、少なくとも約１７日間、少なくとも約１８日間、少なくとも約１９日間、少なくとも約２０日間、少なくとも約２１日間、少なくとも約２２日間、少なくとも約２３日間、少なくとも約２４日間、少なくとも約２５日間、少なくとも約２６日間、少なくとも約２７日間、少なくとも約２８日間、少なくとも約２９日間、または少なくとも約３０日間にわたって維持するのに有効である。前述の実施形態では、ボーラス用量は週毎、２週毎、３週毎、またはひと月毎に投与される。
【０１６５】
別の実施形態では、投与ステップは、図１に記載のアミノ酸配列（配列番号１）を備える有効量のｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質を備える医薬組成物を投与することを含む。
【０１６６】
他の一態様では、本発明は、小児患者に正常な血清ＩＧＦ−Ｉレベルを提供するためにｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質を投与することによって小児患者を治療する方法を提供する。一実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質は、ボーラス用量（本明細書に記載）として投与される。別の実施形態では、少なくとも二つのボーラス用量が時間間隔（本明細書に記載）によって区別されて投与される。他の一実施形態では、ボーラス用量は、融合タンパク質の治療的に有効な体重調整されたボーラス用量である。さらに他の実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮの当該ボーラス用量の投与は、小児対象において血清ＩＧＦ−Ｉレベルの正常化を、ボーラス用量の投与後、少なくとも約７日間、少なくとも約８日間、少なくとも約９日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１１日間、少なくとも約１２日間、少なくとも約１３日間、少なくとも約１４日間、少なくとも約１５日間、少なくとも約１６日間、少なくとも約１７日間、少なくとも約１８日間、少なくとも約１９日間、少なくとも約２０日間、少なくとも約２１日間、少なくとも約２２日間、少なくとも約２３日間、少なくとも約２４日間、少なくとも約２５日間、少なくとも約２６日間、少なくとも約２７日間、少なくとも約２８日間、少なくとも約２９日間、少なくとも約３０日間、または少なくとも約一ヶ月にわたってもたらす。他の一実施形態では、正常な血清ＩＧＦ−Ｉレベルは、約−２．０より上；約−１．５より上；約−１．０より上；約０より上；約０．５より上；約１．０より上；または約１．５より上の血清ＩＧＦ−Ｉ標準偏差（ＳＤ）によって特徴づけられる。別の実施形態では、正常な血清ＩＧＦ−Ｉレベルは、約−１．５から約１．５の間；約−１．５から約１．０の間；約−１．５から約０．５の間；約−１．５から約０の間；約−１．５から約−０．５の間；および約−１．５から約−１．０の間の血清ＩＧＦ−Ｉ標準偏差（ＳＤ）によって特徴づけられる。
【０１６７】
さらなる実施形態では、ＩＧＦ−Ｉ血清レベルの正常化の程度は、ｈＧＨ融合タンパク質の治療的に有効な体重調整されたボーラス用量の用量に依存する。他の一実施形態では、ＩＧＦ−Ｉ正常化の期間は、ｈＧＨ融合タンパク質の治療的に有効な体重調整されたボーラス用量とともに増加する。
【０１６８】
本発明の方法は、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の投与が、望ましくない高いＩＧＦ−Ｉレベルへの過剰曝露を伴わない、またはそれを代償とするものではなく、観察可能で遷延したＩＧＦ−Ｉ応答をヒト小児患者においてもたらす（例えば、ＩＧＦ−Ｉ  ＳＤＳによって測定）という具体的な利点を提供する。換言すれば、ＩＧＦ−Ｉ応答は、例えば１．５以下のＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコア、または２．０以下のＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコアによって示されるような、現行の基準によってまだ許容できると考えられる高いレベルで維持される。
【０１６９】
５．ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の血漿中濃度
別の態様では、本発明は、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質を患者に投与することによる、ヒト小児患者におけるヒト小児成長ホルモン分泌不全症（ＰＧＨＤ）治療する方法を提供し、ここで該患者は、投与後に少なくとも約１０ｎｇ／ｍＬの当該融合タンパク質の血漿中濃度を有する。一実施形態では、本方法は、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質を小児患者にボーラス用量（本明細書に記載）として投与することを含む。別の実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮのボーラス用量は治療的に有効な体重調整されたボーラス用量（本明細書に記載）である。一実施形態では、ボーラス用量は、約０．８ｍｇ／ｋｇ、約１．０ｍｇ／ｋｇ、約１．２ｍｇ／ｋｇ、約１．４ｍｇ／ｋｇ、約１．６ｍｇ／ｋｇ、約１．８ｍｇ／ｋｇ、約２．０ｍｇ／ｋｇ、約２．２ｍｇ／ｋｇ、約２．４ｍｇ／ｋｇ、約２．６ｍｇ／ｋｇ、約２．７ｍｇ／ｋｇ、約２．８ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約３．２ｍｇ／ｋｇ、約３．４ｍｇ／ｋｇ、約３．６ｍｇ／ｋｇ、約３．８ｍｇ／ｋｇ、約４．０ｍｇ／ｋｇ、約４．２ｍｇ／ｋｇ、約４．４ｍｇ／ｋｇ、約４．６ｍｇ／ｋｇ、約４．８ｍｇ／ｋｇ、約５．０ｍｇ／ｋｇ、約５．２ｍｇ／ｋｇ、約５．４ｍｇ／ｋｇ、約５．６ｍｇ／ｋｇ、約５．８ｍｇ／ｋｇ、約６．０ｍｇ／ｋｇ、および約６．３ｍｇ／ｋｇからなる群より選択される。別の実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮのボーラス用量は、少なくとも約１０ｎｇ／ｍＬの融合タンパク質の血漿中濃度を、少なくとも約５日間、少なくとも約７日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１４日間、少なくとも約２０日間、少なくとも約２５日間、少なくとも約３０日間、または少なくとも約一ヶ月にわたって維持するのに有効である。別の実施形態では、ボーラス用量は、少なくとも約１００ｎｇ／ｍＬの融合タンパク質の血漿中濃度を、少なくとも約５日間、少なくとも約７日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１４日間、または少なくとも約２０日間にわたって維持するのに有効である。他の一実施形態では、投与ステップは、図１に記載のアミノ酸配列（配列番号１）を備える有効量のｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質を備える医薬組成物を投与することを含む。
【０１７０】
６．副作用の非存在
一実施形態では、本発明は、患者にｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質を一つ以上の副作用が存在しない状態で投与することを含む、ヒト小児患者におけるヒト小児成長ホルモン分泌不全症（ＰＧＨＤ）治療する方法を提供する。他の一実施形態では、一つ以上の副作用が存在しないということは、臨床的に有意なレベルの一つ以上の副作用が存在ないということである。別の実施形態では、融合タンパク質の投与後、存在しない一つ以上の副作用は、頭痛、関節痛（ａｒｔｈａｌｇｉａ）、筋肉痛、浮腫、悪心、および筋疲労からなる群より選択される。本明細書で用いるとき、「臨床的に有意なレベルの副作用」は、副作用が予期しないものではないまたは重篤有害事象でないことを意味する。軽度で一過性の副作用は、頭痛、関節痛、筋肉痛、浮腫、吐き気および筋肉疲労または成長ホルモンの投与に関連することが別段に公知のもののいずれであっても、臨床的に有意なレベルとは判断されないであろう。一実施形態では、本方法は、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質を小児患者にボーラス用量（本明細書に記載）として投与することを含む。別の実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質のボーラス用量は、治療的に有効な体重調整されたボーラス用量（本明細書に記載）である。他の一実施形態では、ボーラス用量は皮下に投与される。他の一実施形態では、投与ステップは、図１に記載のアミノ酸配列（配列番号１）を備える有効量のｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質を備える医薬組成物を投与することを含む。
【０１７１】
７．投与後のパラメータ
一実施形態では、本発明は、治療有効量のｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質を小児患者に投与するステップを備える、成長ホルモン分泌不全症を有するヒト小児患者において有益な効果を達成するための方法を提供し、当該投与は、ＰＧＨＤ（本明細書に記載）を含む成長ホルモン関連疾患、障害、または病態に関連する、一つ以上の生化学的または生理学的パラメータまたは臨床エンドポイントにおける改善をもたらす。有効量は、成長ホルモン関連疾患、障害または病態の有害作用の治療（例えば、治癒または重篤度の低減）の補助において有益な効果を生じる。場合によっては、有益な効果を達成するための方法は、ＰＧＨＤ（本明細書に記載）を含む成長ホルモン関連疾患、障害または病態を有する小児患者を治療するために治療有効量のｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質組成物を投与することを含む。
【０１７２】
本発明の方法は、所望のパラメータまたは臨床効果を達成および／または維持するのに十分な期間にわたる治療有効量のｈＧＨ−ＸＴＥＮの連続または継続的用量のヒト小児患者への投与を含み、治療有効量のかかる継続的用量は、ｈＧＨ−ＸＴＥＮについての治療的に有効な用量計画、つまり融合タンパク質組成物の継続投与用量についてのスケジュールを確立させ、ここで該用量は、これに限定されないが、本明細書に記載のものを含めた代謝性病状または病態の任意の臨床兆候または症状、側面、測定パラメータまたは特徴について持続的な有益効果を結果としてもたらすために治療有効量で与えられる。本方法の一実施形態では、パラメータは、平均（ＳＤ）身長標準偏差スコア（ＨＴ−ＳＤＳ）、身長発育速度における変化、ＩＧＦ−Ｉ濃度、ＩＧＦ−Ｉ／ＩＧＦＢＰ−３の比率、ＩＧＦＢＰ３濃度、体重における変化、除脂肪体重、肥満指数の変化、体脂肪量（脂肪（ａｄｉｐｏｓｅ  ｆａｔ）／組織）、体幹脂肪、インスリンチャレンジに対する応答、軟骨細胞の分裂速度、軟骨細胞数、骨密度、骨年齢、骨成長、骨代謝、骨端軟骨板幅の増大、コレステロールの低減、トリグリセリドの低減、およびＬＤＬの低減を含むがこれに限定されない。本方法の別の実施形態では、治療有効量のｈＧＨ−ＸＴＥＮの連続または継続的用量のヒト小児患者への投与は、平均（ＳＤ）身長標準偏差スコア（ＨＴ−ＳＤＳ）、身長発育速度における変化、ＩＧＦ−Ｉ濃度、ＩＧＦ−Ｉ／ＩＧＦＢＰ−３の比率、ＩＧＦＢＰ３濃度、体重における変化、除脂肪体重、肥満指数の変化、体脂肪量（脂肪／組織）、体幹脂肪、インスリンチャレンジに対する応答、軟骨細胞の分裂速度、軟骨細胞数、骨密度、骨年齢、骨成長、骨代謝、骨端軟骨板幅の増大、コレステロールの低減、トリグリセリドの低減、およびＬＤＬの低減を含むがこれに限定されない、２つ以上のパラメータにおいて有益な効果をもたらす。
【０１７３】
組換えヒト成長ホルモン（ｒｈＧＨ）を用いて治療される小児患者における身長発育速度のデータは、様々なデータベースに蓄積されてきた。Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｓｔｕｄｙ（ＮＣＧＳ）データベースは、２２０，０００患者・年のｒｈＧＨ治療法を受けている小児に関する成長データを含有する。ＮＣＧＳデータベースは、安全性と有効性の評価を目的としてｒｈＧＨを用いて治療される小児におけるデータを収集するために１９８５年１２月に開始された。誕生日、性別、身長、体重、低身長の病因、刺激試験に対するピーク血清ＧＨ応答、Ｔａｎｎｅｒ思春期段階（Ｔａｎｎｅｒ  ｐｕｂｅｒｔａｌ  ｓｔａｇｅ）、親の身長、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ社製のｒｈＧＨ製品を用いて治療された患者についてのＧＨ用量（Ｓｈｕｌｍａｎ，ＤＩらＩｎｔ  Ｊ  Ｐｅｄｉａｔｒ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．２０１３；２０１３（１）：２）を含む、匿名のデータが米国で臨床研究者によって入力された。ＧＨを用いた治療の初年度中で観察される身長発育速度は、胎内発育遅延（ＳＧＡ）小児においてＧＨに対する第二思春期前年成長応答の主要な決定要素であることが示されている（Ｒａｎｋｅ  ＭＢらＪ  Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ．２００３；８８：１２５−１３１）。初年度身長発育速度は、３ヶ月、４ヶ月、６ヶ月、または最高１２ヶ月までの他の期間にわたって小児患者において測定されることができ、「ｃｍ／年」として表される、年率換算された初年度身長発育速度が確認される。
【０１７４】
成長ホルモン分泌不全症を有するヒト小児患者において有益な効果を達成するための方法の他の実施形態では、本方法は、治療有効量のｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質を小児患者に投与するステップを含み、ここで当該投与は、小児患者における身長発育速度の割合における改善をもたらす。本方法の一実施形態では、本方法は小児患者において７ｃｍ／年から１２ｃｍ／年相当の身長発育速度を達成するのに有効である。本方法の別の実施形態では、本方法は小児患者において８ｃｍ／年から１１ｃｍ／年相当の身長発育速度を達成するのに有効である。一実施形態では、身長発育速度は、小児患者における投薬の少なくとも３ヶ月、または少なくとも６ヶ月、または少なくとも１２ヶ月後に達成（または測定）される。別の実施形態では、達成される身長発育速度は初年度身長発育速度である。別の実施形態では、本方法は、モルベースで匹敵する同等量で投与され、同一期間におよぶＸＴＥＮに結合していないｈＧＨの連日注射で達成された身長発育速度に劣らない。別の実施形態では、本方法は、投薬の少なくとも３か月後の小児患者の年率換算された身長発育速度を、同一期間におよぶ、モルベースで同等量のＸＴＥＮに結合していないｈＧＨの連日投与を用いて達成される身長発育速度と比較して、その１０％、２０％、３０％以内に維持するのに有効である。前述の一実施形態では、ＸＴＥＮに結合していないｈＧＨの連日注射を投与された小児患者は、少なくとも約２５、少なくとも約３０、少なくとも約３３、少なくとも約３５μｇ  ｒｈＧＨ／ｋｇ／日、少なくとも少なくとも約３７μｇ  ｒｈＧＨ／ｋｇ／日、または少なくとも約４３μｇ  ｒｈＧＨ／ｋｇ／日の用量を受ける。本段落の前述の実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質のボーラス用量は、約０．８ｍｇ／ｋｇから約６．３ｍｇ／ｋｇ間のｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質を備える、治療的に有効な体重調整されたボーラス用量である。別の実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質のボーラス用量は、約０．８ｍｇ／ｋｇから約７．０ｍｇ／ｋｇのｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質を備える、治療的に有効な体重調整されたボーラス用量である。別の実施形態では、ボーラス用量は、毎週、２週毎、３週毎、半月毎またはひと月毎に投与される。別の実施形態では、小児患者は、約１．１５ｍｇ／ｋｇのｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質のボーラス用量を、週毎、または約２．５ｍｇ／ｋｇのｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質のボーラス用量を２週毎、または約５．０ｍｇ／ｋｇのｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質のボーラス用量をひと月毎に投与される。別の実施形態では、小児患者は約０．８ｍｇ／ｋｇから約１．５ｍｇ／ｋｇ、約１．８ｍｇ／ｋｇから約３．２ｍｇ／ｋｇ、または約３．５ｍｇ／ｋｇから約６．３ｍｇ／ｋｇから選択されたボーラス用量を投与される。好ましい実施形態では、小児患者は少なくとも約５．０ｍｇ／ｋｇのｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質のボーラス用量をひと月毎に投与される。
【０１７５】
本計画の別の実施形態では、ヒト小児患者は二つ以上のボーラス用量後、骨密度、骨成長、および骨端軟骨板幅の増大から選択される少なくとも一つのパラメータにおいて改善を達成する。他の一実施形態では、前述の改善は、ヒト成長ホルモンを受けていないヒト小児患者と比べて少なくとも約１０％、または少なくとも約２０％、または少なくとも約３０％、または少なくとも約４０％、または少なくとも約５０％、または少なくとも約６０％、または少なくとも約７０％、または少なくとも約８０％、または少なくとも約９０％である。別の実施形態では、前述の改善％は、ＸＴＥＮに連結してなく、かつｈＧＨの連日投薬同等量を使用して連日投与されるｈＧＨによって達成される改善と同様であるか、またはそれに劣るものではない。
【０１７６】
８．ｈＧＨ−ＸＴＥＮ医薬品
別の実施形態では、本発明は、医薬品として使用するための、または小児患者のＰＧＨＤを治療するためのｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質を提供する。別の実施形態では、本発明は、ＰＧＨＤを有するヒト小児患者においてＰＧＨＤを治療するための医薬品を製造するためのｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の使用を提供する。他の一実施形態では、本発明は、小児患者のＰＧＨＤの治療のための医薬品の製造における、図１に記載の配列（配列番号１）を有する融合タンパク質の使用を提供する。他の実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質はボーラス用量（本明細書に記載）として提供される。別の実施形態では、ボーラス用量は治療的に有効な体重調整された用量である。別の実施形態では、医薬品は皮下投与用に製剤化される。他の一実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質は図１に記載のように示すアミノ酸配列（配列番号１）を備える。
【０１７７】
９． 小児ＧＨ関連症状の兆候の治療
別の態様では、本発明は、小児患者における小児成長ホルモン欠乏症（ＰＧＨＤ）に関連する疾患または病態を治療するためのｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質ベースの治療剤を提供する。所与の疾患または病態の予防、治療またはその重症度の低減のために、本発明の治療剤の適切な投与量は、上記で定義したように、治療する疾患または病態のタイプ、その疾患または病態の重症度および経過、薬剤を治療目的で投与するかどうか、以前の治療法、小児患者の病歴および薬剤に対する反応、および主治医の裁量に依存するであろう。
【０１７８】
別の態様では、本発明は、小児患者のＰＧＨＤに関連する疾患または病態の進行を遅延または減速させるための方法を提供する。一実施形態では、本方法は、疾患、病態または障害を有すると診断された小児対象に、有効量のｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質を投与することを含む。別の態様では、本発明は、ＰＧＨＤに関連する疾患または病態の兆候を治療するまたは寛解させるための方法を提供する。一実施形態では、本方法は有効量のｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質を、疾患または病態のリスクにある小児対象に投与することを含み、ここでｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質は疾患または病態の兆候の発症に対して有効である。
【０１７９】
追加の一態様では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質は、ヒト小児患者におけるＰＧＨＤに関連する疾患または病態の臨床的および／または組織学的および／または生化学的および／または病理学的兆候（症状および兆候の両方を含む）の発症または進行に対する寛解効果を提供する。一実施形態では、疾患または病態はＰＧＨＤである。一実施形態では、小児患者における兆候は、低身長、体脂肪のレベルの増加（特に中心部または体幹、つまりウエストの脂肪蓄積）、低速な全ての体の部位の成長、確立された身長成長曲線の横這いまたはそこからの脱落、遅延骨年齢、ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコアの低下、および平均身長標準偏差スコアを下回ることを含む。別の実施形態では、小児対象は、ＰＧＨＤに関連する状態の疾患のリスクにある。一般に、リスクにある小児対象は、以前に脳下垂体および／または視床下部になんらかの損傷を負っているだろう。一実施形態では、リスクにある小児対象は、脳下垂体と関連する腫瘍を有すると以前に診断され、および／またはその腫瘍を治療するために、外科手術、化学療法、または放射線治療を施された。別の実施形態では、リスクにある小児対象は、脳下垂体への血液供給が以前に低減したか、または現在低減している。他の一実施形態では、リスクにある小児対象は、以前に頭蓋切除を受けているかまたは頭部外傷の経験がある。いくつかの実施形態では、リスクにある小児対象は、以前に視床下部−脳下垂体疾患または障害を以前に経験したか、または現在経験している。
【０１８０】
本明細書に記載の疾患および病態（ＰＧＨＤを含む）の治療の有効性は、小児患者のＰＧＨＤの評価において通常使用される様々なアセスメントによって測定されることができる。例えば、ホルモン分泌腺の健康状態は、これに限定されないが、例えば、ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコア（ＳＤＳ）、平均（ＳＤ）身長標準偏差スコア（ＨＴ−ＳＤＳ）、成長ホルモン刺激試験（ＧＨＳＴ）、成長ホルモン放出ホルモン（ＧＨＲＨ）、刺激試験、内因性ｈＨＧパルス、ＩＧＦ−Ｉレベル、ＩＧＦ−Ｉ結合タンパク質レベルのモニターまたは測定、他の血液または生化学試験（例えば、総コレステロール、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）コレステロール、高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）コレステロール、トリグリセリド、および脂質）によって評価されることができる。
【０１８１】
追加の一態様では、本発明は、ヒト小児患者においてヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）治療法の有効性を増加させる方法を提供する。別の態様では、本発明は、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質を用いてＰＧＨＤを有するヒト小児患者を治療する場合に、後続投薬期間中に投与されるｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の後続用量を決定する方法を提供する。「投薬期間」は、ボーラス用量（例えば、初回用量）の投与から次の連続的なボーラス用量の投与（例えば、後続用量）間の時間を意味する。投薬期間は一つ以上のさらなる連続的用量と共に変更してもよく、一定のままであってもよい。
【０１８２】
一実施形態では、有効性を増加させる前述の方法は、ヒト成長ホルモン−ＸＴＥＮ（ｈＧＨ−ＸＴＥＮ）融合タンパク質の初回用量の投与の初回投薬期間中に、小児患者から得られた血漿または血清試料におけるＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコア（ＳＤＳ）をモニターするステップを含む。一実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質は、配列番号１に対し少なくとも約９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を備える。別の実施形態では、本方法は、初回投薬期間中に観察されたＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコアに基づいて、後続投薬期間中に投与されるｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の後続用量を決定するステップをさらに含む。追加の一実施形態では、本方法は、後続投薬期間中に後続用量を投与することをさらに含む。他の一実施形態では、後続用量は、後続投薬期間中の治療の有効性を改善する。別の実施形態では、後続用量は、初回用量よりも多いか、少ないか、または同等である。初回用量または後続用量は、本明細書に記載の任意のボーラス用量であってよい。追加の一実施形態では、後続投薬期間は、初回投薬期間よりも長いか、短いか、または同等である。初回投薬期間または後続投薬期間は、本明細書に記載の任意の期間（例えば、週毎、２週毎、半月毎、３週毎、ひと月毎、等、または７日毎、１０日毎、１４日毎、２１日毎、３０日毎、等）であってよい。
【０１８３】
ＶＩＩ）．剤形および医薬組成物
別の態様では、本発明は、本明細書に記載のｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質を備えるボーラス用量または剤形を提供する。
【０１８４】
一実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質のボーラス用量または投与量は、ヒト小児患者のための治療的に有効な体重調整されたボーラス用量を含む。他の一実施形態では、ボーラス用量または投与量は、約０．８ｍｇ／ｋｇから約６．３ｍｇ／ｋｇ間のｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質を含む。他のボーラス用量は本明細書に記載される。
【０１８５】
他の実施形態では、ボーラス用量または投与量は、（ｉ）必要とする小児対象におけるヒトＰＧＨＤの治療で使用するためのものであり；および／または（ｉｉ）皮下投与用に製剤化される。他の一実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質は、図１に記載のように示されるアミノ酸配列（配列番号１）を備える。一実施形態では、ボーラス用量または剤形は、図１に記載のような配列（配列番号１）を有する融合タンパク質および薬学的に許容され得る担体を備える医薬組成物である。
【０１８６】
別の実施形態では、本発明は、包装材、および前述の実施形態の医薬組成物を含む少なくとも第一の容器、および医薬組成物および保管および取扱い条件を特定するラベル、および医薬組成物の調製および／または小児対象への投与を指示するシートを備えるキットを提供する。
【０１８７】
追加の一態様では、本発明は、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の組成物、医薬組成物、および投薬量を提供する。他の一実施形態では、医薬組成物または投薬量は、図１に記載のような配列（配列番号１）を有する、または配列番号１に対し少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、または少なくとも約９２％、または少なくとも約９３％、または少なくとも約９４％、または少なくとも約９５％、または少なくとも約９６％、または少なくとも約９７％、または少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有する融合タンパク質を備える。別の実施形態では、投薬量は、患者の体重に基づいたヒト小児患者用である。小児ヒト患者の体重は、約１０ｋｇから約５０ｋｇまでの範囲であることができる。追加の一実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質は、医薬組成物、組成物、またはある特定の量としての投薬量内で提供される。他の一実施形態では、医薬組成物または投薬量は、さらに薬学的に許容され得る担体を備える。
【０１８８】
一実施形態では、医薬組成物は治療的に有効な用量で投与される。別の実施形態では、医薬組成物を、複数の継続的用量を使用して、治療的に有効な用量計画（本明細書に定める）を使用して投与期間の間、投与する。
【０１８９】
ｈＧＨ−ＸＴＥＮの治療有効量は、病状、個体の年齢、性別、および体重、および個体において所望の反応を引き出す融合タンパク質の能力などの因子によって変動する。治療有効量は、ｈＧＨ−ＸＴＥＮの任意の毒性または有害作用が、治療的に有益な効果に劣るものでもある。
【０１９０】
概数の第一ｍｇから概数の第二ｍｇの量のｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質を備える組成物、医薬組成物または投薬量について言及する場合、「第一ｍｇ」という用語は第一ｍｇ値を含んでよく、「第二ｍｇ」という用語は第二ｍｇ値を含んでよいことに留意されたい。
【０１９１】
別の態様では、本発明は、ＰＧＨＤを治療するための医薬品投与計画または治療的に有効な用量計画において使用するためのｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質を提供する。一実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質は、小児患者を治療するために融合タンパク質のボーラス用量を含む計画において使用するためのものである。さらなる実施形態では、本計画は、小児患者において約−２．０から約２．０間のＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコア（ＳＤＳ）の達成に必要なｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の量を決定するステップを含む。
【０１９２】
他の一実施形態では、本計画は治療的に有効な体重調整されたボーラス用量を備える。別の実施形態では、本計画は、約０．８ｍｇ／ｋｇから約６．３ｍｇ／ｋｇ間である、融合タンパク質のボーラス用量を備える。他の一実施形態では、本計画は融合タンパク質の継続的なボーラス用量の投与を備える。一実施形態では、継続的なボーラス用量の投与は、約毎週、約２週毎、約３週毎、または約毎月である。追加の一実施形態では、融合タンパク質は配列番号１に対し少なくとも約９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を備える。一実施形態では、本計画は融合タンパク質のボーラス用量の皮下投与を備える。別の実施形態では、本計画は小児患者のＰＧＨＤを治療するのに有効である。
【０１９３】
ＶＩＩＩ）．製品
一態様では、本発明は、小児患者における疾患（例えばＰＧＨＤ）の治療、予防および／または診断に有用な材料を含有するキットおよび製品も提供する。別の実施形態では、本発明は、包装材、および前述の実施形態の剤形または医薬組成物を含む少なくとも第一の容器、およびその剤形または医薬組成物ならびに保管および取扱い条件を特定するラベル、および再構成および／または剤形または医薬組成物の小児対象への投与について指示するシートを備える、キットを提供する。他の一実施形態では、本キットは、容器と、容器の上に位置するか容器に付随することができるラベルを含む。容器は、ボトル、バイアル、シリンジ、カートリッジ（オートインジェクターカートリッジを含む）、または任意の他の好適な容器であってよく、ガラスまたはプラスチックなどの様々な材料から形成されてよい。容器は、本明細書に記載のようなｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質を有する組成物を収容し、滅菌アクセスポートを有し得る。容器の例としては、皮下注射針で刺すことのできるストッパーを伴うバイアルが含まれる。本キットは、様々な試薬、例えば希釈剤、保存剤、および緩衝剤を収納する追加の容器を有してよい。ラベルは組成物の説明ならびに小児患者における意図される使用についての指示説明を提供し得る。
【０１９４】
他の一態様では、容器はプレフィルドシリンジである。一実施形態では、シリンジは、本明細書に記載のｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質を有する組成物をあらかじめ充填されている。追加の一態様では、本発明は、本明細書に記載のｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質を有する組成物の容器を提供し、該容器は組成物の自動注射に好適である。一実施形態では、容器はカートリッジである。別の実施形態では、容器は自動注射ペン内のカートリッジである。当業者は、他の好適な自動注射デバイスが本発明のために使用されてよいことを理解するだろう。いくつかの実施形態では、自動注射デバイスは、注射前に針の先端を保護する円筒状のハウジング内にバネ付きシリンジを備える。一実施形態では、小児患者がデバイス上のボタンを押すと、シリンジ針が自動的に挿入されて内容物を送達する。
【０１９５】
別の実施形態では、デバイスは、ガスジェット自動注射デバイスである。他の実施形態では、ガスジェットデバイスは、加圧ガスのシリンダーを備えるが、針は存在しない。起動すると、デバイスは、針を使用せずに、微細な液体流を皮膚を通して推進させる。他の一実施形態では、デバイスは、イオントフォレーシスデバイスまたは起電薬投与（ＥＭＤＡ）デバイス（例えば、小さな電荷を使用して、針を使用せずに薬剤を皮膚を通して送達する）である。
【０１９６】
本キットは、本明細書に記載のｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質を備える組成物を活性薬剤として含む、少なくとも一つの容器を有する。本容器は、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の剤形または医薬組成物を含んでよい。剤形または組成物は、小児患者における疾患を治療するために使用されてよいと指示するラベルが提供され得る。ラベルは、治療を必要とする小児対象への投与についての指示も提供し得る。キットは、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝生理食塩水、リンガー溶液、ブドウ糖溶液などの薬学的に許容され得る緩衝液を有する追加の容器をさらに含有し得る。最後に、キットは、他の緩衝剤、希釈剤、フィルター、針、およびシリンジを含む任意の他の好適な材料も含有し得る。
【０１９７】
一態様では、本発明はヒト成長ホルモン−ＸＴＥＮ（ｈＧＨ−ＸＴＥＮ）融合タンパク質を備える、ヒト小児患者に投与するための医薬組成物を収納する容器を備えるキットを提供する。一実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質は、図１に記載の配列（配列番号１）に対し少なくとも約９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を備える。別の実施形態では、キットは、当該容器に付随する添付文書をさらに備える。他の一実施形態では、添付文書は、当該組成物が、組成物の複数用量の投与による成長ホルモン分泌不全症の治療用であると指示する。一実施形態では、投与は、約０．８ｍｇ／ｋｇから約６．３ｍｇ／ｋｇ間のｈＧＨ−ＸＴＥＮの初回用量および約０．８ｍｇ／ｋｇから約６．３ｍｇ／ｋｇ間の量でのｈＧＨ−ＸＴＥＮの複数の後続用量の投与である。別の実施形態では、用量は、お互いに時間的に、少なくとも約７日間で区切られる。添付文書は、本明細書に記載のような様々な用量、用量範囲および用量間の時間をさらに指示してよい。
【０１９８】
以下に本発明の方法、治療計画、および組成物の実施例を記す。上記の一般的な説明を考慮して、様々な他の実施形態が実施され得ることが理解される。
【実施例】
【０１９９】
実施例１Ａ−単回用量の結果
成長ホルモン分泌不全症を有する小児患者における、皮下（ＳＣ）投与用ヒト成長ホルモン類似体（図１、配列番号１として示されるヒト成長ホルモン−ＸＴＥＮ（ｈＧＨ−ＸＴＥＮ）融合タンパク質）の単回用量の安全性、薬物動態（ＰＫ）および薬物力学（ＰＤ）の第１ｂ／２ａ相試験が実施された。ＧＨＤ成人における安全プロフィール（Ｙｕｅｎ，Ｋ．Ｃ．らＴｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ＥｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙおよびＭｅｔａｂｏｌｉｓｍ９８，２５９５−２６０３（２０１３）および月一回の投薬を達成する可能性に基づいて、ＧＨＤ小児における第１ｂ／２ａ相試験は、（ｉ）ＧＨＤ小児におけるｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の単回用量に対する安全性、耐容性、ＰＫおよびＩＧＦ−Ｉ応答（第１ｂ相）；および（ｉｉ）ＩＧＦ−Ｉを正常化する融合タンパク質投与計画を用いた６ヶ月身長発育速度（第２ａ相）を判断した。
【０２００】
本試験は、最高７２人までの未治療、思春期前の小児が参加するように設計された。極めて重要な選択基準は、思春期前状態、低身長（ＨＴ−ＳＤＳ≦−２．００）、対応（ｐａｉｒｅｄ）ＧＨ刺激試験によって診断されたＧＨＤ（ＧＨ  ｍａｘ≦１０ｎｇ／ｍＬ）、ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコア（ＩＧＦ−ＩＳＤＳ）≦−１およびデータ解釈を損なわせ得る他の病気または薬物治療の使用がないことである。第１ｂ相において、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の最高６つまでの漸増用量段階の単回の皮下用量（単回用量漸増（ＳＡＤ）設計）後、３０日間にわたるＰＫおよびＰＤ（ＩＧＦ−ＩおよびＩＧＦＢＰ−３）応答を判断した。プロトコルが指定する中止基準（ｐｒｏｔｏｃｏｌ−ｓｐｅｃｉｆｉｅｄ  ｓｔｏｐｐｉｎｇ  ｃｒｉｔｅｒｉａ）に対して収集したデータを含め、各用量増大の前に安全性を見直した。第２ａ相についてのｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の用量選択は、安全性およびＩＧＦ−Ｉ応答に基づいた。用量選択の後、反復投薬後の６ヶ月身長発育速度を判断するために、被験者は異なる用量および／または用量計画の最大３つのコホートに無作為化された。ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の投薬を、ＧＨＤ成人において安全で十分に耐容性を示す用量の０．８０ｍｇ／ｋｇで開始し、１．２０ｍｇ／ｋｇ、１．８０ｍｇ／ｋｇ、２．７０ｍｇ／ｋｇ、４．００ｍｇ／ｋｇおよび最高６．００ｍｇ／ｋｇまで増加させた。
【０２０１】
図２は、第１ｂ／２ａ相試験の設計の概要を示す。表１．１は、第１ｂ相用量段階を提供する。ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の用量段階は、３０日間にわたって投与された４０μｇ／ｋｇ／日の平均小児ＧＨＤ一日組換えヒト成長ホルモン（ｒｈＧＨ）用量未満である。３０日間のＩＧＦ−１曝露を正常化する可能性に基づいて第２ａ相の用量が選択された。
【表５−１】
2019056013.tif 000035
【表５−２】
2019056013.tif 000036
表１．２は投薬完了群の臨床的特徴を示す；数値は平均（ＳＤ）である。
【表６】
2019056013.tif 000037
【０２０２】
第１ｂ相投薬およびデータ収集は、０．８０、１．２０、１．８０および２．７０ｍｇ／ｋｇ  ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質群について完全である。０．８０から２．７ｍｇ／ｋｇの範囲（４．８から１６．７μｇ  ｒｈＧＨ／ｋｇを毎日３０日間摂取に同等）の用量についてデータは完全である。
【０２０３】
データは、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質は安全で十分に耐容性を示すことを支持する。表１．３は、用量段階群１〜４における治験薬に関連が有るかもしれない、おそらく関連が有るまたは明らかに関連が有ると考えられる有害事象（ＡＥ）を示す。全ての関連する有害事象は、ＣＴＣＡＥグレード１（軽度）である。重篤な有害事象、予期されない有害事象、患者中止例、および脂肪萎縮症は参加した小児のいずれにおいてもなかった。事象は、ＧＨＤを有する、未治療の小児において、ｒｈＧＨ治療が開始したときに観察されるものの典型であると判断された。
【表７】
2019056013.tif 000038
【０２０４】
ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の血漿中濃度は、単回用量の後、最高３０日間まで持続された。図３は、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の血漿中濃度（ｎｇ／ｍＬ）平均値を示す。
【０２０５】
図４は、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質のＣｍａｘ（ｎｇ／ｍＬ）およびｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質のＡＵＣ（ｈｒ−ｎｇ／ｍＬ）データについての線形回帰を示す。これらの結果は、融合タンパク質への曝露が用量に線形的に比例することを支持する。
【０２０６】
２．７０ｍｇ／ｋｇのｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の単回皮下用量後、ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコアは、８人の内６人の被験者で３０日目を通して、残り２人の被験者で２２日目を通して、ベースラインを超えて維持された。ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコアの応答の遷延は、ＩＧＦ−Ｉへの過剰曝露を代償とするものではない。ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコア＞２．０（２．１２）は、一時点で一被験者でのみ観察された。
【０２０７】
図５は、全用量（０．８ｍｇ／ｋｇ（●）；１．２ｍｇ／ｋｇ（■）；１．８ｍｇ／ｋｇ（▲）；および２．７ｍｇ／ｋｇ（◆）についてのＩＧＦ−Ｉ（平均値）における持続変化（ベースラインから）を実証する。ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質に対するＩＧＦ−Ｉ応答は単一皮下用量後最高３０日間まで持続する。
【０２０８】
図６は、４つの用量群についての最大ＩＧＦ−ＳＤＳデータの線形回帰を示し、ＩＧＦ−Ｉ応答がｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の用量に線形に関連することを実証する。
【０２０９】
完了した用量段階からのデータは、第２ａ相での、週毎または半月毎のｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質投与計画の使用を支持する。第２ａ相での、月一回のｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質投与計画を支持するために用量漸増を継続する。
【０２１０】
実施例１ｂ−単回用量の結果
現在承認されている成長ホルモン薬は連日注射を必要とし、必然的にＧＨＤを有する患者にかなりの困難をもたらす。対照的に、ヒト成長ホルモン類似体（配列番号１（図１）として示されるヒト成長ホルモン−ＸＴＥＮ（ｈＧＨ−ＸＴＥＮ）融合タンパク質）は、最高月一回までの投薬を提供し、患者の彼らの治療計画に従う能力における改善を促進し、およびその治療結果全体を改善するように開発されている。
【０２１１】
成長ホルモン分泌不全症（ＧＨＤ）を有する思春期前の小児における新規長時間作用型ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質）の第１ｂ／２ａ相試験からデータを集めた。第１ｂ相試験の目的は、小児ＧＨＤ患者におけるｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の単回用量の安全性、耐容性を評価することであり、３０日間に及ぶ、ＰＫ（ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質濃度）およびＰＤ（ＩＧＦ−Ｉ、ＩＧＦＢＰ−３）プロファイルを決定することであった。
【０２１２】
臨床試験にはＧＨＤを有する最高７２人までの未治療、思春期前の小児が参加し、成長学基準（ａｕｘｏｌｏｇｉｃ  ｃｒｉｔｅｒｉａ）および２回のＧＨ刺激試験で文書化された。ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の臨床試験は、二つのステージを有する：融合タンパク質用量の安全性、ＰＫおよびＰＤを測定するため、および６ヶ月身長発育速度結果を得るための反復用量ステージ（第２ａ相）において使用する投与計画の選択を可能にするための単回漸増用量ステージ（第１ｂ相）。最近完了した本試験の第１ｂ相用量漸増ステージからの結果は入手可能である。
【０２１３】
第１ｂ相からのデータは、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の単回用量はＧＨＤを有する小児において十分に耐容性を示すことを実証し、投与頻度を減少させる一方でＩＧＦ−Ｉを良好な追いつき成長に伴うレベルまで安全に上昇させることが可能であることを実証した。データは、試験の次のステージにおいて最高月一回までの投薬の継続試験について強く支持し、それはＧＨＤ患者における３ヶ月および６ヶ月身長発育速度をさらに測定するだろう。
【０２１４】
第１ｂ相では、６漸増用量段階でのｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の単回皮下用量の後、３０日間におよぶＰＫおよびＰＤ（ＩＧＦ−Ｉ）応答を測定した。融合タンパク質の投薬は、以前に完了した試験でＧＨＤ成人において安全で十分に耐容性を示すと示された用量である、０．８０ｍｇ／ｋｇで開始し、１．２０ｍｇ／ｋｇ、１．８０ｍｇ／ｋｇ、２．７０ｍｇ／ｋｇ、４．００ｍｇ／ｋｇおよび６．００ｍｇ／ｋｇと用量を増加させた（４．８、７．４、１１．１、１６．７、２４．７および３７．０μｇ（ｍｃｇ）  ｒｈＧＨ／ｋｇ／日の３０日間摂取と同等）。従って、この試験において試されたｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の用量は、全てこれらの患者に一般的に処方される連日のｒｈＧＨの用量を下回る。第２ａ相の融合タンパク質用量は、第１ｂ相の安全性およびＩＧＦ−Ｉ応答に基づいて選択された。第２ａ相の用量選択の後、被験者は３ヶ月および６ヶ月身長発育速度を測定するために３つの用量コホートのそれぞれにおいて投薬された。
【０２１５】
本試験の第１ｂ相部分では、平均（ＳＤ）年齢７．２（２．２）歳の４８人の被験者（男２７、女２１）が、６つの用量コホートにおいて試験された（１コホートにつき８人）。スクリーニングでは、平均（ＳＤ）ＨＴ−ＳＤＳは−２．７（０．６）、体重は１８．０（４．６）ｋｇおよびＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコアは−１．８（０．７）であった。ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の血漿中濃度は、試験された全被験者において、投薬後３日間の平均時間で最大値に達し、用量に比例し、単回用量から最高３０日間までにわたって検出可能のままであった。ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコアにおける最大変化は、初日の単回用量後、２から１４日後に発生した。ＩＧＦ−Ｉ応答の振幅および期間は、融合タンパク質用量の増加に伴って増加した。３０日間におよぶ平均ＩＧＦ−１ＳＤＳにおける増加も用量に比例し、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の最高月一回までの投薬を支持するのに十分であった。重要なことには、ＩＧＦ−Ｉ応答の遷延は、高いＩＧＦ−Ｉレベルへの過剰曝露を代償とするものではなく、二人の患者のそれぞれにおいて標準偏差スコアの単一の値のみが＋２を超えた。報告されている全ての関連有害事象は、軽度および一過性であり、重篤または予期しない有害事象は報告されていない。
【０２１６】
要約すると、０．８から６．０ｍｇ／ｋｇのｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の単回用量は、ＧＨＤを有する４８人の思春期前小児に投与された場合、安全で十分に耐容性を示した。加えて、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質レベルおよびＩＧＦ−Ｉ応答における用量比例増加が観察され、用量選択および最高月１回までの投薬の用量計画についての柔軟性を示した。それ故、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質は、ＧＨＤを有する小児において最高ひと月毎までの投薬間隔の可能性を有する長時間作用型ｒｈＧＨである。
【０２１７】
図７は、小児患者におけるヒト成長ホルモン−ＸＴＥＮ（ｈＧＨ−ＸＴＥＮ）融合タンパク質の第１ｂ／２ａ相試験の設計の概要を示す。ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質は、３０日間にわたって摂取される５〜３７μｇ／ｋｄ／日の遺伝子組み換え成長ホルモン（ｒｈＧＨ）質量に同等で投薬される。
【０２１８】
図８は、投与完了群の臨床的特徴を示す表（数値は平均（ＳＤ）である）を提供する。数値は平均（ＳＤ）である。
【０２１９】
図９は、用量段階群１〜６の治験薬に関連が有るかもしれない、おそらく関連が有るまたは明らかに関連が有ると考えられる関連有害事象を示す表を提供する。全ての関連する有害事象は軽度（ＣＴＣＡＥグレード１）および一過性である。重篤な有害事象無し、予期されない有害事象無し、患者中止例無し、脂肪萎縮症無し、小結節無し。
【０２２０】
図１０は、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の血漿中濃度（ｎｇ／ｍＬ）平均値（第１ｂ相からの予備的ＰＫ）を示す。
【０２２１】
図１１は、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質のＣｍａｘ（ｎｇ／ｍＬ）およびｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質のＡＵＣ（ｈｒ−ｎｇ／ｍＬ）（用量比例性）を示す。
【０２２２】
図１２Ａ〜Ｂは、融合タンパク質の単回用量に対するＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコア応答を示す。
【０２２３】
図１３Ａ〜Ｂは、月平均ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコアにおけるベースラインからの増加を示す（単回用量）。平均ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコアにおける増加は、用量に伴って増加する（ｐ＜０．００００１）。所望のひと月毎のＩＧＦ−Ｉプロファイルを達成した。
【０２２４】
０．８０から６．０ｍｇ／ｋｇのｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の単回用量は、ＧＨＤを有する思春期前小児において安全および十分に耐容性を示した。注射部位反応は軽度および一過性であり、小結節および脂肪萎縮症は無かった。ｈＧＨ−ＸＴＥＮの用量は、３０日間にわたって摂取される４．８〜３７μｇ  ｒｈＧＨ／ｋｇ／日に同等である。薬物曝露パラメータ（Ｃｍａｘ、ＡＵＣ）は、用量に比例した。３０日間におよぶ平均ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコアにおける増加は用量に比例した。月平均ＩＧＦ−Ｉにおける増大は、ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコア（２つの一過性値＞２）の上昇と関連しなかった。ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質は、最高ひと月毎までの投薬のＰＫ／ＰＤ特性を伴う長時間作用型ｒｈＧＨである。
【０２２５】
実施例２−反復投薬の結果
ＶＲＳ−３１７は、Ｎ末端およびＣ末端で結合されたアミノ酸配列（ＸＴＥＮ）（配列番号１、図１）を伴うｒｈＧＨからなる新規融合タンパク質（Ｍ．Ｗ．１１９ｋＤａ）である。ＧＨＤ成人および小児における第１相試験において、ＶＲＳ−３１７濃度、ＩＧＦ−ＩおよびＩＧＦＢＰ−３応答は用量に比例し、ＩＧＦ−ＩおよびＩＧＦＢＰ−３における薬物濃度および増加は単回の皮下注射の３０日後にまだ存在した。単回用量のＶＲＳ−３１７投与は、安全で十分に耐容であり、伴う注射部位不快感は最小であり、連日ｒｈＧＨ製品と比べて新しい安全性シグナルは出現しなかった。
【０２２６】
反復投薬試験は、ＶＲＳ−３１７治療の６ヶ月後の安全性、耐容性、身長発育速度、ＩＧＦ−ＩおよびＩＧＦＢＰ−３応答を測定するために実施された。主要評価項目は、平均６ヶ月身長発育速度である。被験者は、全員思春期前およびｒｈＧＨ未治療であった。ＧＨＤは、低身長（ＨＴ−ＳＤＳ＜−２）、遅延骨年齢、対応ＧＨ刺激試験（ＧＨｍａｘ≦１０ｎｇ／ｍＬ）、低ＩＧＦ−Ｉ（ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコア＜−１）および低成長を引き起こす他の条件がないことによって診断された。最初に、４８人の被験者（８人／用量コホート）は、６つのＶＲＳ−３１７用量段階（０．８から６．０ｍｇ／ｋｇ；３０日間摂取される４．９から３７μｇ  ｒｈＧＨ／ｋｇ／日と同等）の内１つで単回用量を受けた。観察されたＰＫ／ＰＤ結果に基づいて、５．０ｍｇ／ｋｇ／月、２．５ｍｇ／ｋｇ／半月、または１．１５ｍｇ／ｋｇ／週（全て３０ｍｇ／ｋｇ／６ヶ月の累積用量）を評価するため、６４人の被験者を３つの投薬群に無作為化した。反復投薬の開始時、被験者（男３７／女２７）は、７．８（２．４）歳の平均（ＳＤ）年齢、−２．５（０．５）のＨＴ−ＳＤＳ、および−１．７（０．８）のＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコアを有した。
【０２２７】
現在まで４６５回を超える注射が投与されたが、注射部位での不快感は軽度（グレード１）、一過性（概して３０分未満）であり、被験者の２２％でのみ報告されている。注射部位での小結節の形成または脂肪萎縮症は確認されなかった。関連重篤有害事象（ＳＡＥ）または予期されない有害事象は起きていない。他の関連有害事象は、軽度および一過性であり、ｒｈＧＨ未治療の小児においてｒｈＧＨが開始されたときに予期されるタイプのもの（例えば、５人の被験者で筋骨格痛、１人の被験者で頭痛）である。ピークＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコアレベルはひと月毎の投薬で最大であったが３は超えず、２症例においてのみ一過性的に２を超えた（２．０１および２．１２）。平均トラフＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコアレベルは、全投薬群において３０日目でベースラインより上のままであった。投薬の２ヶ月後、ピークＩＧＦ−Ｉレベルは概して最初の用量後より高く、反復ＶＲＳ−３１７投薬がＩＧＦ−Ｉ応答を増大させ得ることを示す。
【０２２８】
結論として、おおよそ３０μｇ  ｒｈＧＨ／ｋｇ／日のｒｈＧＨ質量に同等である用量では、ＶＲＳ−３１７を用いた反復投薬は、週毎、半月毎またはひと月毎間隔で与えられた場合、思春期前ＧＨＤ小児において安全で十分に耐容性を示し、ＩＧＦ−Ｉ過剰曝露なしに、平均ＩＧＦ−Ｉ増加をベースラインを超えて維持すると見出された。反復ＶＲＳ−３１７投薬は、初回投薬で見られるＩＧＦ−Ｉ応答を増大させ得る。
【０２２９】
実施例３−３ヶ月結果
おおよそ３０μｇ  ｒｈＧＨ／ｋｇ／日の連日ｒｈＧＨに同等であるＶＲＳ−３１７用量では、現在までの第２ａ相におけるＶＲＳ−３１７の反復投薬は、週毎、半月毎またはひと月毎間隔で与えられた場合、思春期前ＧＨＤ小児において安全で十分に耐容性を示し、ＩＧＦ−Ｉ過剰曝露なしに、治療的範囲内で、平均ＩＧＦ−Ｉ増加をベースラインを超えて維持すると見出された。関連重篤有害事象または予期しない有害事象は起こっていない。他の関連有害事象は、主に軽度および一過性であり、ｒｈＧＨ未治療の小児においてｒｈＧＨが開始されたときに予期されるタイプのものである。現在まで１０００回を超える注射が投与されたが、注射部位での不快感は患者の小数で発生しており、軽度および一過性である。注射部位での小結節の形成または脂肪萎縮症は認められていない。ピークＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコアレベルは、ひと月毎の投薬で最大であるが３は超えず、３症例においてのみ一過性的に２を超えた。平均トラフＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコアレベルは、全投薬群において３０日目でベースラインより上のままであった。投薬の２ヶ月後、ピークＩＧＦ−Ｉレベルは概して最初の用量後より高く、反復ＶＲＳ−３１７投薬がＩＧＦ−Ｉ応答を増大させ得ることを示す。第２ａ相におけるＧＨＤ小児からの平均年率換算された３ヶ月身長発育速度（成長速度としても知られる）は、連日ｒｈＧＨの同等用量（３３μｇ
ｒｈＧＨ／ｋｇ／日）を投与された歴史的年齢適合対照に匹敵する。全体的に、ＧＨＤ小児の第２ａ相臨床試験における現在までの結果は、ＶＲＳ−３１７が、同等の用量で投与される連日ｒｈＧＨの歴史的研究と同等の安全性および有効性プロファイルを有することを示す。
【０２３０】
図１４は、年齢適合歴史的対照およびＶＲＳ−３１７治療患者についての平均年率換算された身長発育速度を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ】
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【図１３Ａ】
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【図１３Ｂ】
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【図１４】
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【配列表】
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【外国語明細書】
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