(57)【要約】      （修正有）【課題】家畜又は家禽組織のエタノール抽出液濃縮物を脱ガム工程に供し、ガム質を回収してリン脂質濃縮物を得るにあたり、当該操作毎に得られるリン脂質量のばらつきが抑制された手法を提供すること。【解決手段】家畜又は家禽肉からリン脂質濃縮物を生産する方法であって、（Ａ）家畜又は家禽の組織のエタノール抽出液濃縮物と水とを混合する工程であって、前記濃縮物１００質量部に対して水を７質量部未満混合する工程、及び（Ｂ）得られた混合液を２℃以下で遠心分離する工程を含む方法。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
家畜又は家禽の組織からリン脂質濃縮物を生産する方法であって、
（Ａ）家畜又は家禽の組織のエタノール抽出液濃縮物と水とを混合する工程であって、前記濃縮物１００質量部に対して水を７質量部未満混合する工程、及び
（Ｂ）得られた混合液を２℃以下で遠心分離する工程
を含む方法。
【請求項２】
家畜又は家禽の組織のエタノール抽出液濃縮物の水分含有量が１質量％以下である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
家畜又は家禽の組織からリン脂質濃縮物を生産する方法であって、
（ａ１）家畜又は家禽組織のエタノール抽出液を濃縮する工程、
（ａ２）得られた濃縮物と水とを混合する工程であって、前記濃縮物１００質量部に対して水を７質量部未満混合する工程、及び
（Ｂ）得られた混合液を２℃以下で遠心分離する工程
を含む方法。
【請求項４】
家畜又は家禽の組織のエタノール抽出液の濃縮が、得られる濃縮液の水分含有量が１質量％以下になるまで行われる、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
（ａ０）家畜又は家禽組織をエタノール抽出する工程
をさらに含み、
当該工程において析出が生じた場合には加温して析出を溶解させるか、あるいは
析出が生じない温度下で当該工程を行う、
請求項３又は４に記載の方法。
【請求項６】
（Ｃ）前記遠心分離により生じた沈殿を回収する工程
をさらに含む、請求項１〜５のいずれかに記載の方法。
【請求項７】
家畜又は家禽の組織に含まれるリン脂質を濃縮する方法であって、
（Ａ）家畜又は家禽組織のエタノール抽出液の濃縮物と水とを混合する工程であって、前記濃縮物１００質量部に対して水を７質量部未満混合する工程、及び
（Ｂ）得られた混合液を２℃以下で遠心分離する工程
を含む方法。
【請求項８】
家畜又は家禽の組織が、鳥類の組織である、請求項１〜７のいずれかに記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、リン脂質濃縮物の製造方法等に関する。
【背景技術】
【０００２】
リン脂質は、生体構成成分として重要であり、中でも例えばプラズマローゲン等は記憶能力を増強する等の様々な効果を有する機能性素材として注目されている。このため、リン脂質を効率よく調製する方法が望まれている。
【０００３】
これまで、例えばトリムネ肉からエタノール抽出により、リン脂質等の成分を抽出する方法が開発されてきている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２００６−２３２９６７号公報
【特許文献２】特開２０１０−６３４０６号公報
【特許文献３】特開２０１０−６５１６７号公報
【特許文献４】特開２０１６−２１０６９６号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
家畜又は家禽の組織からエタノールにより有用成分を抽出したのち、特に重要と考えられている成分の一種であるリン脂質を濃縮することを試みた。通常、油を精製する場合において、動植物からの抽出物を脱ガム工程に供し、リン脂質を主成分とするガム質を除去する。このようにリン脂質は主にガム質に含まれる成分であることから、効率的にリン脂質を濃縮するため、家畜又は家禽組織のエタノール抽出物を濃縮して脱ガム工程に供し、ガム質を回収することを検討した。
【０００６】
当該手法により、リン脂質の濃縮が可能となったが、検討を進めると、濃縮を行う毎に、得られるリン脂質量が変動することが明らかになった。市場にリン脂質濃縮物を供給するにあたり、品質の均一化は重要であるため、濃縮操作を行う毎に品質（特にリン脂質量）がばらつかない方法の開発が必要となった。
【０００７】
本発明は、家畜又は家禽組織のエタノール抽出液濃縮物を脱ガム工程に供し、ガム質を回収してリン脂質濃縮物を得るにあたり、当該操作毎に得られるリン脂質量のばらつきが抑制された手法を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、脱ガム工程における、処理条理やガム質回収工程条件を見出し、さらに改良を重ねて本発明を完成させるに至った。なお、上記の通り、本発明においてはリン脂質濃縮が目的であるため、脱ガム工程においてガム質を回収する。よって、脱ガム工程というよりもガム回収工程というべきとも考えられる。従って、以下本明細書においては、脱ガム工程を「ガム回収工程」表記する。
【０００９】
本発明は例えば以下の項に記載の主題を包含する。
項１．
家畜又は家禽の組織からリン脂質濃縮物を生産する方法、あるいは、家畜又は家禽の組織に含まれるリン脂質を濃縮する方法であって、
（Ａ）家畜又は家禽の組織のエタノール抽出液濃縮物と水とを混合する工程であって、前記濃縮物１００質量部に対して水を７質量部未満混合する工程、及び
（Ｂ）得られた混合液を２℃以下で遠心分離する工程
を含む方法。
項２．
家畜又は家禽の組織のエタノール抽出液濃縮物の水分含有量が１質量％以下である、項１に記載の方法。
項３．
家畜又は家禽の組織からリン脂質濃縮物を生産する方法、あるいは、家畜又は家禽の組織に含まれるリン脂質を濃縮する方法であって、
（ａ１）家畜又は家禽組織のエタノール抽出液を濃縮する工程、
（ａ２）得られた濃縮物と水とを混合する工程であって、前記濃縮物１００質量部に対して水を７質量部未満混合する工程、及び
（Ｂ）得られた混合液を２℃以下で遠心分離する工程
を含む方法。
項４．
家畜又は家禽の組織のエタノール抽出液の濃縮が、得られる濃縮液の水分含有量が１質量％以下になるまで行われる、項３に記載の方法。
項５．
（ａ０）家畜又は家禽組織をエタノール抽出する工程
をさらに含み、
当該工程において析出が生じた場合には、まず加温して析出を溶解させるか、あるいは
析出が生じない温度下で当該工程を行う、
項３又は４に記載の方法。
項６．
（Ｃ）前記遠心分離により生じた沈殿を回収する工程
をさらに含む、項１〜５のいずれかに記載の方法。
項７．
家畜又は家禽の組織に含まれるリン脂質を濃縮する方法であって、
（Ａ）家畜又は家禽組織のエタノール抽出液の濃縮物と水とを混合する工程であって、前記濃縮物１００質量部に対して水を７質量部未満混合する工程、及び
（Ｂ）得られた混合液を２℃以下で遠心分離する工程
を含む方法。
項８．
家畜又は家禽の組織が、鳥類の組織である、項１〜７のいずれかに記載の方法。
【発明の効果】
【００１０】
本発明の方法により、家畜又は家禽組織のエタノール抽出液濃縮物を脱ガム工程に供し、ガム質を回収してリン脂質濃縮物を得るにあたり、当該濃縮毎に得られるリン脂質量のばらつきが抑制される。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】ガム回収工程において、エタノール抽出液濃縮物に加える水の量の違いによって、得られる上層におけるリン脂質量の有無が変化するかをＴＬＣで検討した結果を示す。
【図２】ガム回収工程において、遠心分離条件を変化させたときに、得られる沈殿の様子が変化するかを検討した結果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
以下、本発明の各実施形態について、さらに詳細に説明する。
【００１３】
本発明に包含される、家畜又は家禽組織からリン脂質濃縮物を生産する方法（以下「本発明のリン脂質濃縮物生産方法」ということがある）は、（Ａ）家畜又は家禽組織のエタノール抽出液濃縮物と水とを混合する工程であって、前記濃縮物１００質量部に対して水を７質量部未満混合する工程、及び（Ｂ）得られた混合液を２℃以下で遠心分離する工程、を含む。
【００１４】
家畜又は家禽としては、例えば、牛、豚、馬、羊、山羊、鳥類等が挙げられる。哺乳類の場合、リン脂質を含有する組織としては、主に、皮膚、脳、腸、心臓、生殖器、肉（特に筋肉）等が挙げられ、これらの組織からリン脂質を抽出することができる。また、鳥類としては、鶏、家鴨、鶉、鴨、雉、七面鳥等が挙げられる。入手のし易さ、コスト面、及び口にすることに対する抵抗感等も考慮すると、鶏が特に好ましい。また、鳥組織としては、特に制限されないが、例えば、鳥肉（特に、鳥ムネ肉）、鳥皮、鳥の内臓等が好ましい。なお、１又は複数種の生物の異なる組織を２種以上組み合わせてもよい。家畜又は家禽組織として、特に好ましい例として、鳥ムネ肉が挙げられ、鶏ムネ肉が中でも好ましい。
【００１５】
なお、家畜又は家禽組織は適当な大きさに裁断されていてもよい。また、乾燥（特に凍結乾燥）されたものであってもよい。
【００１６】
家畜又は家禽組織のエタノール抽出の方法としては、特に限定されず、公知の方法又は公知の方法から容易に相当できる方法を用いることができる。例えば、家畜又は家禽組織に対して質量比１〜５倍程度のエタノールを加え、撹拌又は静置することで行うことができる。撹拌又は静置は、加温して行ってもよい。加温は、例えば３０〜５０℃、又は３５〜４５℃程度で行うことができる。また、撹拌又は静置の時間は特に制限されないが、例えば０．５〜２４時間、又は１〜１２時間程度を挙げることができる。得られた抽出液は、必要に応じて濾過などにより固液分離してもよい。また、抽出残渣に対して、同様の操作を行い、再度抽出液を得て、先に得られた抽出液に合算してもよい。
【００１７】
なお、気温が低い（特に冬期）場合、当該抽出工程中に析出が生じるおそれがある。このような温度は析出が生じる温度であれば制限はされないが、具体的には例えば１０℃以下、９℃以下、８℃以下、７℃以下、６℃以下、５℃以下、４℃以下、３℃以下、２℃以下、１℃以下、又は０℃以下が挙げられる。当該析出にはリン脂質が含まれるため、析出したままでエタノール抽出操作を続けると、析出に含まれるリン脂質がエタノール抽出液に含まれず、このため最終的に得られるリン脂質濃縮物に含まれるリン脂質量がばらつくおそれがある。よって、析出が生じた場合には、まず加温して析出を溶解させるか、あるいは析出が生じない温度下で当該工程を行うことが好ましい。加温して析出を溶解させる場合、加温の温度は析出が溶解し、且つ品質に影響を与えない範囲であれば特に制限されないが、例えば２０〜３０℃程度が例示される。また、析出が生じない温度下でエタノール抽出工程を行う場合、例えば２０〜３０℃程度の温度下で当該工程を行うことができる。
【００１８】
得られたエタノール抽出液を濃縮する方法としては、特に限定されず、公知の方法又は公知の方法から容易に相当できる方法を用いることができる。例えば、減圧濃縮、又は加熱濃縮等が挙げられる。
【００１９】
濃縮は、得られるエタノール抽出液濃縮物の水分含有量が１質量％以下になるまで行うことが好ましく、０．９質量％以下、０．８質量％以下、０．７質量％以下、０．６質量％以下、又は０．５質量％以下になるまで行うことがより好ましく、０．４質量％以下、０．３質量％以下、又は０．２質量％以下になるまで行うことがさらに好ましい。なお、当該水分含有量は、カールフィッシャー法により求めた値である。
【００２０】
また、得られるエタノール抽出液濃縮物のエタノール含有量は、１５質量％以下であることが好ましく、１４質量％以下、１３質量％以下、１２質量％以下、１１質量％以下、１０質量％以下、９質量％以下、又は８質量％以下であることがより好ましい。なお、当該エタノール含有量は、乾熱乾燥法（１０５℃、３時間）で求めた乾燥減量から上記水分含有量を減じた値である。例えば、当該乾熱乾燥減量が９０質量％であり、上記水分含有量が１質量％であった場合、エタノール含有量は１００−９０−１＝９（質量％）となる。
【００２１】
エタノール抽出液濃縮物と混合する水の量は、当該濃縮物１００質量部に対して７質量部未満である。好ましくは、６．９質量部以下、６．８質量部以下、６．７質量部以下、６．６質量部以下、６．５質量部以下、６．４質量部以下、６．３質量部以下、６．２質量部以下、６．１質量部以下、又は６質量部以下である。また当該水の混合割合の下限は本発明の効果が損なわれない範囲であれば特に限定されないが、例えば、当該濃縮物１００質量部に対して好ましくは０．５質量部以上であり、より好ましくは１質量部以上であり、さらに好ましくは１．５質量部以上である。
【００２２】
エタノール抽出液濃縮物と水との混合液を遠心分離し、得られる沈殿（下層）を回収する。このとき、遠心分離は２℃以下の温度で行う。好ましくは１℃以下、より好ましくは０．５℃以下で行う。また、遠心分離を行う際の温度の加減は、前記濃縮物が凍結せず、遠心分離が行える範囲であれば特に制限されないが、例えば−２℃以上、−１．５℃以上、−１℃以上、又は−０．５℃以上を挙げることができる。
【００２３】
沈殿（下層）の回収は、例えば、液体部分（上層）を除去することで行うことができる。当該除去は公知の方法により行うことができ、例えばデカントで行ってもよいが、吸引除去することが好ましい。
【００２４】
回収した沈殿をそのままリン脂質濃縮物として用いることができる。また、回収した沈殿を加温（例えば３５〜４５℃程度）及び撹拌して、溶解してから用いることもできる。ここでの撹拌は、窒素気流下で行うことが好ましい。
【００２５】
また、本発明は、家畜又は家禽の組織に含まれるリン脂質を濃縮する方法であって、（Ａ）家畜又は家禽組織のエタノール抽出液の濃縮物と水とを混合する工程であって、前記濃縮物１００質量部に対して水を７質量部未満混合する工程、及び（Ｂ）得られた混合液を２℃以下で遠心分離する工程、を含む方法も、包含する。当該方法は、上記のリン脂質濃縮物を生産する方法と同じ工程を経ることができ、よって上記のリン脂質濃縮物を生産する方法についての説明が当該リン脂質を濃縮する方法にもそのまま当てはまる。
【００２６】
なお、本明細書において「含む」とは、「本質的にからなる」と、「からなる」をも包含する（The term "comprising" includes "consisting essentially of” and "consisting of."）。
【実施例】
【００２７】
以下、本発明をより具体的に説明するが、本発明は下記の例に限定されるものではない。
【００２８】
なお、鶏ムネ肉としては、凍結乾燥された鶏ムネ肉（ＦＤ鶏ムネ肉）を使用した。また、特に断らない限り、％は質量（ｗ／ｗ）％を示す。
【００２９】
エタノール抽出
ＦＤ鶏ムネ肉４２ｋｇを抽出釜に投入した。ＦＤ鶏ムネ肉の４倍量（ｗ／ｖ）の９９％エタノール（１６８Ｌ）を抽出釜に投入して窒素置換後、攪拌しながら加温し４０℃達温後、９０分間保持した。３０メッシュで濾過後、抽出液をドラム缶に回収した。１回目の抽出残渣を抽出釜に投入後、ＦＤ鶏ムネ肉の２．５倍量（ｗ／ｖ）の９９％エタノール（１０５Ｌ）を釜に投入して窒素置換後、攪拌しながら加温し４０℃達温後、９０分間保持した。３０メッシュで濾過後、抽出液をドラム缶に回収した。当該抽出液を１０Ｓろ紙で吸引ろ過した。得られた液をエタノール抽出液として用いた。
【００３０】
エタノール抽出液の減圧濃縮
エタノール抽出液を、内温４０℃以下で減圧し、５０Ｌバットに全量入る程度の量（約８ｋｇ）になるまで減圧濃縮した。当該一次濃縮液を５０Ｌバットに入れて外温５０〜６０℃で減圧した。得られた濃縮液を３０メッシュでろ過後、重量を測定したところ、５．１２ｋｇであった。当該濃縮液をエタノール抽出液濃縮物とし、使用するまで４℃で保管した。
【００３１】
なお、エタノール抽出液濃縮物の乾燥減量を乾熱乾燥法（１０５℃、３時間）で、水分量をカールフィッシャー法で、それぞれ測定した。また、差引法でエタノール濃度を算出した。結果は次のとおりであった。乾燥減量：８．０５％、水分：０．１５％、エタノール：７．９％。
【００３２】
ガム回収
＜混合水量の検討＞
エタノール抽出液濃縮物を２０℃まで加温しながら混合し、５ｇずつ量り取った。当該濃縮物に対し、質量比率４、５、６、又は７％の水を添加し（すなわち０．２ｇ、０．２５ｇ、０．３ｇ、又は０．３５ｇ）、５分間十分に撹拌した後、２０００×ｇ、４℃、１５分遠心し、２層に分離した。沈殿の固さと上層に含まれるリン脂質（ＰＬ）を薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）で確認した。当該ＴＬＣ結果を図１及び表１に示す。
【００３３】
【表１】
2019143054.tif 000002
【００３４】
混合する水量の少しの違いにより、沈殿の硬さ及び上層におけるＰＬの有無が大きく異なることが分かった。混合水量として、沈殿（下層）と液体（上層）の分離が容易で、且つ最もＰＬ回収効率が高くなる、６％を選択して更に検討を進めた。
【００３５】
＜遠心条件の検討＞
エタノール抽出液濃縮物を２０℃まで加温しながら以下のようにして水を混合し遠心した。
（Ｉ）：前記濃縮物３００ｇに対し質量比率６％の水（１８ｇ）を添加して５分間、プロペラ式攪拌機で攪拌して水和した。
（ＩＩ）：前記濃縮物３００ｇに対し質量比率６％の水（１８ｇ）を添加して５分間、１２０回／分で振とうして水和した。
条件（Ｉ）及び（ＩＩ）共に、２０００×ｇ、４℃、１５分遠心したところ２層に分離した。しかし、遠心直後はどちらも沈殿はゆるく固液分離が難しかった。なお、ＴＬＣ分析において上層にリン脂質は検出されなかった。そこで、少なくとも固液分離が容易に行える程度に硬い沈殿ができる条件をさらに検討した。
（ＩＩＩ）：前記濃縮液３００ｇに対し質量比率６％の水（１８ｇ）を添加して５分間、１２０回／分で振とうして水和した後、４℃で一晩静置した。２０００×ｇ、４℃、１５分遠心したところ３層に分離した（図２左側）。中層と下層は固体であり固液分離は可能であった。しかし、中性脂質が含まれている中層とリン脂質を含む下層を分離するのが困難であった。
（ＩＶ）：前記濃縮液３００ｇに対し質量比率６％の水（１８ｇ）を添加して５分間、１２０回／分で振とうして水和し、２０００×ｇ、０℃、１５分遠心したところ２層に分離した（図２右側）。遠心直後には沈殿は硬く固液分離が可能であった。
【００３６】
以上のことから、４℃より低い温度で遠心分離を行うことが重要であることがわかった。
【００３７】
条件（ＩＶ）において、回収した沈殿（下層）は、窒素気流下で４０℃・５分間撹拌することで容易に溶解した。なお、当該溶解液量は１１３．５ｇであり、よって歩留は３７．８％であった。また、溶解した沈殿を薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）で分析したところ、リン脂質が多く含まれていることが確認できた。
【００３８】
以上のことから、条件（ＩＶ）を採用してエタノール抽出液からリン脂質濃縮物を調製することにより、操作中にリン脂質が失われるおそれが低減し、よって操作毎に得られるリン脂質量のばらつきが抑制されることがわかった。
【００３９】
季節間による差
上記の通り、条件（ＩＶ）を採用することにより、操作毎に得られるリン脂質量のばらつきが抑制されるようになった。ところが、冬期を迎えると、それまで得られていたリン脂質量よりも少ない量しか得られないようになった。このため、さらに検討を行ったところ、上記エタノール抽出液調製時の濾過操作に長く時間がかかったり、あるいは濾過操作までに長時間静置しておくなどすると、気温が低い場合には析出が見られることが明らかになった。当該析出をＴＬＣで分析したところ、リン脂質が含まれていることがわかった。このため、析出が生じた場合、濾過により当該析出が除去されてしまい、その結果リン脂質量が減少すると考えられた。
【００４０】
そこで、特に冬場においては、エタノール抽出操作を行う場合、析出物が生じた場合には、加温融解してから操作を継続させることとした。あるいは、エタノール抽出操作自体を析出が起こらない温度下（例えば２５℃程度）で行うこととした。
【図１】
2019143054.tif 000003
【図２】
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