(57)【要約】【課題】検体に含まれる菌体から核酸得るまでの作業の手順を簡素化し、優れた作業性を有する核酸回収方法を提供する。【解決手段】菌体を含む液状の検体および試薬の通過を規制し、かつ菌体に含まれる核酸の通過を許容する核酸通過フィルター（３６）を少なくとも一部に有する壁（１３）により検体を収容する第１室（１１）を形成する容器を準備し、第１室（１１）内に検体を収容し、検体を加熱することにより菌体を破砕し、菌体から放出された核酸を、核酸通過フィルター（３６）を通過させる、核酸回収方法。【選択図】図２
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
菌体を含む液状の検体および試薬の通過を規制し、かつ前記菌体に含まれる核酸の通過を許容する核酸通過フィルターを少なくとも一部に有する壁により検体を収容するための第１室が形成されている容器を準備し、
前記第１室内に前記検体を収容し、
前記検体を加熱することにより前記菌体を破砕し、前記菌体から放出された前記核酸を、前記核酸通過フィルターを通過させる、核酸回収方法。
【請求項２】
前記検体が前記核酸通過フィルターに接した状態で前記検体を加熱する、請求項１に記載の核酸回収方法。
【請求項３】
前記核酸通過フィルターを介して前記第１室と連通する第２室が形成された前記容器を準備し、
前記第１室内に前記検体を収容し、
前記第２室内に試薬を収容し、
前記検体を加熱することにより前記菌体を破砕し、前記菌体から放出された前記核酸を、前記核酸通過フィルターを通して前記第２室に進入させる、請求項１または請求項２に記載の核酸回収方法。
【請求項４】
前記試薬が前記核酸通過フィルターに接した状態で前記検体を加熱する、請求項３に記載の核酸回収方法。
【請求項５】
菌体を含む液状の検体および試薬を収容するための容器であって、
前記検体を収容するための第１室と、
前記試薬を収容するための第２室と、
前記第１室と前記第２室とを区画する区画部と、を備え、
前記区画部が、少なくとも一部に、前記検体および前記試薬の通過を規制し、かつ前記菌体に含まれる核酸の通過を許容する核酸通過フィルターを有する、容器。
【請求項６】
請求項５に記載の容器は、
前記第１室を有するとともに、一方に開口部を有する第１容器と、
前記第２室を有するとともに、前記第１容器の開口部を閉じるための前記区画部を有する第２容器と、を備えている、容器。
【請求項７】
前記第２容器は、一方に開口部を有する本体容器と、前記区画部と対向するように前記本体容器に形成された開口部を閉じるための蓋体と、前記蓋体が前記本体容器に装着された状態で、前記蓋体から前記開口部を通じて区画部に向かって延びる棒状部材と、前記本体容器および前記棒状部材の少なくとも一方に設けられたシール部と、を有し、
前記シール部は、前記蓋体が前記本体容器に装着された状態で、前記棒状部材における前記蓋体と前記区画部との間の位置において、前記第２室を複数の空間に区画するように前記棒状部材の外面と前記本体容器の内面との間に全周にわたって介在する、請求項６に記載の容器。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、検体中における菌体に由来する核酸を回収する核酸回収方法およびこの核酸回収方法に用いられる容器に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、臨床診断の分野において遺伝子検査が急速に普及している。遺伝子検査とは、核酸や染色体等を分析して、遺伝性疾患に関連する変異や核型等の有無を臨床目的で検査することである。遺伝子検査の一例として、生体から採取した検体中に、結核等の感染症の原因菌としての感染症起炎菌に由来する核酸（以下、「標的核酸」という）が存在するかどうかを判定する検査がある。その検査工程は、主に前処理、核酸増幅、および検出の３工程からなる。
【０００３】
前処理工程には様々な方法がある。一例として、前処理工程は、均質化工程と集菌工程と菌破砕工程とを含む。均質化工程では、検体の粘度を低下させる処理液を検体に加えて検体を均質化する均質化処理が行われる。集菌工程では、均質化された検体に、検体中の感染症起炎菌を吸着（集菌）可能な吸着剤が分散された処理液を加えて集菌する集菌処理が行われる。菌破砕工程では、感染症起炎菌が集菌された吸着剤に、当該感染症起炎菌を脱離させて均質化処理が行われた検体に破砕処理液を加えて検体中の菌体を破砕（ホモジナイズ）する菌破砕処理が行われる。この菌破砕処理後の上清を検査用中間体とする。
【０００４】
核酸増幅工程では、前処理工程において調製された検査用中間体に、標的核酸に結合可能なプライマーと、標的核酸を増幅させる増幅試薬とを含む混合試薬を加え、核酸増幅反応によって標的核酸を増幅させて増幅産物を得る。増幅試薬には、標的核酸に結合する蛍光物質が含まれている。検出工程では、標的核酸に結合した蛍光物質の蛍光測定により、検体中における感染症起炎菌由来の標的核酸の存否を判定する。
【０００５】
ここで、集菌工程で使用される吸着剤として、特許文献１に開示されるように、磁性粒子の表面に菌体を吸着するポリマーがコーティングされた磁性吸着体（以下「磁気ビーズ」という。）が広く用いられている。
【０００６】
特許文献１に記載の方法では、集菌工程では、均質化された検体に磁気ビーズが分散された処理液を加えて磁気ビーズに菌体を吸着させる。そして検体と処理液の混合液に磁石を浸し、菌体を吸着した磁気ビーズを磁石によって回収し、菌破砕工程に供する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特開２００８−１６７７２２号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
特許文献１に記載の方法のように、磁気ビーズを使用して容器内の混合液から集菌を行う場合、菌体から核酸を得るまでに、磁気ビーズと均質化処理された検体とを容器内で混合、攪拌して磁気ビーズに菌体を吸着させ、容器内の検体から磁気ビーズを回収し、さらに回収した磁気ビーズを、他の容器に移して菌体を破砕するという多くの手順が必要である。
【０００９】
本発明は、このような問題に鑑みてなされたものであり、検体に含まれる菌体から核酸得るまでの作業の手順を簡素化し、優れた作業性を有する核酸回収方法およびこの核酸回収方法を適用可能な容器を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者は、種々検討した結果、菌体を含む液状の検体および試薬の通過を規制し、かつ菌体に含まれる核酸の通過を許容する核酸通過フィルターにより区画された室内で、菌体を破砕することにより、菌体から放出された核酸が核酸通過フィルターを通過することを見出した。本発明は、この知見に基づいて完成されたものである。
【００１１】
本発明の一局面に係る核酸回収方法は、菌体を含む液状の検体および試薬の通過を規制し、かつ前記菌体に含まれる核酸の通過を許容する核酸通過フィルターを少なくとも一部に有する壁により検体を収容するための第１室が形成されている容器を準備し、前記第１室内に前記検体を収容し、前記検体を加熱することにより前記菌体を破砕し、前記菌体から放出された前記核酸を、前記核酸通過フィルターを通過させる。
【００１２】
上記の核酸回収方法では、第１室内に検体を収容し、この検体を加熱することにより、検体中の菌体を破砕して核酸を放出させるとともに、放出された核酸を核酸フィルターの第１室の反対側で容易に回収できる。したがって、従来の磁気ビーズを使用していた場合に行われていた、磁気ビーズに菌体を吸着させ、菌体を吸着した磁気ビーズを回収し、菌体を破砕するために他の容器に移すという手順が不要となり、菌体から核酸を得るまでの作業手順が簡素化される。
【００１３】
上記の核酸回収方法において、前記検体が前記核酸通過フィルターに接した状態で前記検体を加熱するようにしてもよい。
【００１４】
この態様では、検体が核酸通過フィルターに直に接触する。検体と核酸通過フィルターとが直に接触しない場合には、加熱により菌体から液状の検体中に放出された核酸が、さらに検体と核酸通過フィルターとの間の気層に放出され、気層中を浮遊した上で、核酸通過フィルターを通過する。しかし、この態様では、検体中の菌体から放出された核酸は、気層を経由することなく検体から直接核酸通過フィルターを通過するため、検体と核酸通過フィルターとが直に接触しない場合と比べて急速に核酸を回収することができる。
【００１５】
上記の核酸回収方法において、前記核酸通過フィルターを介して前記第１室と連通する第２室が形成された前記容器を準備し、前記第１室内に前記検体を収容し、前記第２室内に試薬を収容し、前記検体を加熱することにより前記菌体を破砕し、前記菌体から放出された前記核酸を、前記核酸通過フィルターを通して前記第２室に進入させてもよい。
【００１６】
この態様では、第１室内で菌体から放出された核酸を、第２室内の試薬に混合させることができる。そのため、容器内で核酸の増幅および検出を行うことができる。
【００１７】
上記の核酸回収方法において、前記試薬が前記核酸通過フィルターに接した状態で前記検体を加熱してもよい。
【００１８】
この態様では、試薬が核酸通過フィルターに直に接触する。試薬と核酸通過フィルターとが直に接触しない場合には、核酸通過フィルターを通して第２室に進入した核酸が、さらに核酸通過フィルターと試薬との間の気層に放出され、気層中を浮遊した上で、試薬に進入する。しかし、この態様では、核酸通過フィルターを通過した核酸は、気層を経由することなく直接試薬に浸入するため、試薬と核酸通過フィルターとが直に接触しない場合と比べて急速に核酸を試薬に回収することができる。
【００１９】
本発明の他の一局面に係る容器は、菌体を含む液状の検体および試薬を収容するための容器であって、前記検体を収容するための第１室と、前記試薬を収容するための第２室と、前記第１室と前記第２室とを区画する区画部と、を備え、前記区画部が、少なくとも一部に、前記検体および前記試薬の通過を規制し、かつ前記菌体に含まれる核酸の通過を許容する核酸通過フィルターを有する。
【００２０】
上記の容器では、第１室に検体を配置し、第２室に試薬を配置した状態で検体を加熱すれば、第１室内で菌体を破砕して核酸を放出させることができるとともに、当該核酸を核酸通過フィルターを通過させて第２室内において回収し、第２室内の試薬に混合させることができる。また、容器内で、そのまま核酸を増幅させ、標的核酸の検出まで行うことができる。したがって、上記の容器を用い、上記の核酸回収方法を適用することにより、従来の磁気ビーズを使用していた場合に行われていた、磁気ビーズに菌体を吸着させ、菌体を吸着した磁気ビーズを回収し、菌体を破砕するために他の容器に移すという手順が不要となる。
【００２１】
上記の容器を、前記第１室を有するとともに、一方に開口部を有する第１容器と、前記第２室を有するとともに、前記第１容器の開口部を閉じるための前記区画部を有する第２容器と、を備えているものとしてもよい。
【００２２】
この態様では、第１容器の開口部から第１室に検体を配置した後、試薬を収容する第２容器の区画部で第１容器の開口部を閉じることができる。そのため、第１室に検体を配置する作業と、第１室と第２室とを区画部で区画する作業とを容易に行うことができる。
【００２３】
上記の容器において、前記第２容器は、一方に開口部を有する本体容器と、前記区画部と対向するように前記本体容器に形成された開口部を閉じるための蓋体と、前記蓋体が前記本体容器に装着された状態で、前記蓋体から前記開口部を通じて区画部に向かって延びる棒状部材と、前記本体容器および前記棒状部材の少なくとも一方に設けられたシール部と、を有し、前記シール部は、前記蓋体が前記本体容器に装着された状態で、前記棒状部材における前記蓋体と前記区画部との間の位置において、前記第２室を複数の空間に区画するように前記棒状部材の外面と前記本体容器の内面との間に全周にわたって介在するものとしてもよい。
【００２４】
この態様では、第２容器に蓋体を装着した状態において第２容器の内部は棒状部材と第２容器の内面との間にシール部が介在することによって複数の空間に区画される（シール状態）。また、蓋体を取り外し、棒状部材を第２容器から抜いた状態では、シール部によるシール状態が解除され、第２容器内部の各空間が連通する状態となる。
【００２５】
核酸の増幅および検出に用いる試薬が、複数の原料試薬を混合して得られる混合試薬である場合、第２容器内部の各空間にあらかじめ各原料試薬を配置しておけば、作業者は第２容器の開口部を上方とし、棒状部材を抜くだけで各空間に配置された原料試薬を第２容器の下部で混合して混合試薬を得ることができる。また、棒状部材を再び第２容器に挿入し、蓋体を装着すると、第２室を封止することができる。
【００２６】
そのため、当該混合試薬の効力が原料試薬の混合後急速に劣化するものである場合、第１容器の第１室に検体を配置した後、第２容器の区画部で第１容器の開口部を閉じ、続いて第２容器から蓋体を外すとともに棒状部材を抜いて原料試薬を混合し、時間を空けずに検体を加熱すれば、有効な混合試薬に検体から放出された核酸を混合し、核酸を増幅、検出することができる。また、原料試薬を混合した後、再び蓋体および棒状部材を第２容器に戻せば、第２室を封止した状態とすることができ、雰囲気中への核酸の飛散を抑制することができる。雰囲気中に核酸が飛散すると他の検体に混入するおそれがあり、当該他の検体について標的核酸の検出精度を低下させる原因となるため、核酸の飛散は抑制することが好ましい。
【００２７】
このように、作業者は、棒状部材を第２容器から抜いて、再び容器に戻すだけの非常に簡便な作業で、試薬の混合および混合した試薬を用いた核酸の増幅および検出を行うことができる。
【発明の効果】
【００２８】
本発明によれば、検体に含まれる菌体から核酸を得るまでの作業の手順を簡素化し、優れた作業性を有する核酸回収方法を提供することができる。また、本発明によれば、この核酸回収方法を適用可能な容器を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００２９】
【図１】図１は、第１の実施形態に係る核酸回収容器の斜視図である。
【図２】図２（ａ）は第１の実施形態に係る核酸回収容器の正面図であり、図２（ｂ）は図２（ａ）のＡ−Ａ断面図である。
【図３】図３は、第１の実施形態に係る核酸回収容器の分解斜視図である。
【図４】図４（ａ）は第１の実施形態に係る核酸回収容器の分解正面図であり、図４（ｂ）は図４（ａ）のＡ−Ａ断面図である。
【図５】図５は、第１の実施形態に係る核酸回収容器を使用した核酸回収方法の説明図である。
【図６】図６は、第１の実施形態に係る核酸回収容器を使用した核酸回収方法の説明図である。
【図７】図７は、第１の実施形態に係る核酸回収容器を使用した核酸回収方法の説明図である。
【図８】図８は、第１の実施形態に係る核酸回収容器を使用した核酸回収方法の説明図である。
【図９】図９は、第１の実施形態に係る核酸回収容器を使用した核酸回収方法の説明図である。
【図１０】図１０は、第２の実施形態に係る核酸回収容器の斜視図である。
【図１１】図１１（ａ）は第２の実施形態に係る核酸回収容器の正面図であり、図１１（ｂ）は図１１（ａ）のＢ−Ｂ断面図である。
【図１２】図１２は、第２の実施形態に係る核酸回収容器の分解斜視図である。
【図１３】図１３（ａ）は第２の実施形態に係る核酸回収容器の分解正面図であり、図１３（ｂ）は図１３（ａ）のＢ−Ｂ断面図である。
【図１４】図１４は、第２の実施形態に係る核酸回収容器を使用した核酸回収方法の説明図である。
【図１５】図１５は、第２の実施形態に係る核酸回収容器を使用した核酸回収方法の説明図である。
【図１６】図１６は、第２の実施形態に係る核酸回収容器を使用した核酸回収方法の説明図である。
【図１７】図１７は、第２の実施形態に係る核酸回収容器を使用した核酸回収方法の説明図である。
【図１８】図１８は、第２の実施形態に係る核酸回収容器を使用した核酸回収方法の説明図である。
【図１９】図１９は、一般的な対流の模式図である。
【発明を実施するための形態】
【００３０】
本発明の実施形態に係る核酸回収方法および核酸回収容器について図面に基づいて説明する。
【００３１】
本実施形態に係る核酸回収方法および核酸回収容器は、遺伝子を含む検体の検査に用いられる。例えば、生体から採取された検体中における、結核等の感染症の原因菌としての感染症起炎菌（菌体、特定成分）に由来する標的核酸の存否を判断する遺伝子検査において、感染症起炎菌の回収に用いられる。生体から採取される検体としては、喀痰、胃液および気管支肺胞洗浄液等の気道検体が挙げられる。
【００３２】
本実施形態では、生体から採取された検体を、そのまま検査用の検体とすることができる。また、検査用の検体として、生体から採取された検体をに均質化処理液を加えて調製された粘稠液を検査用の検体としてもよい。均質化処理液は、生体から採取された検体の粘度を低下させる機能を有する処理液であり、例えばＮＡＬＣ−ＮａＯＨ混合液やＮａＯＨ水溶液等が挙げられる。ＮＡＬＣ（Ｎ−ａｃｅｔｙｌ−Ｌ−ｃｙｓｔｅｉｎｅ）には還元作用があり、検体中のＳ−Ｓ結合を還元して解離することにより、検体の粘度を低下させる。また、ＮａＯＨ（水酸化ナトリウム）は、検体中に混在する感染症起炎菌（特定成分）以外を殺菌する。
【００３３】
以下では、第１の実施形態に係る核酸回収容器およびこれを用いた核酸回収方法について説明した後、第２の実施形態に係る核酸回収容器およびこれを用いた核酸回収方法について説明する。
【００３４】
（第１の実施形態）
（核酸回収容器の構成）
図１は本実施形態に係る核酸回収容器の斜視図であり、図２（ａ）はその正面図であり、図２（ｂ）は図２（ａ）のＡ−Ａ断面図である。図３は本実施形態に係る核酸回収容器の分解斜視図であり、図４（ａ）はその正面図であり、図４（ｂ）は図４（ａ）のＡ−Ａ断面図である。
【００３５】
核酸回収容器１（容器）は、検体を収容するための第１室１１と、試薬を収容するための第２室１２と、第１室１１と第２室１２とを区画する区画部１３とを備える。区画部１３は、一部に検体および試薬の通過を規制し、かつ菌体に含まれる核酸の通過を許容する核酸通過フィルター３６を有する。
【００３６】
具体的には、核酸回収容器１は、第１室１１を有するとともに開口部２３を有する外部容器２０（第１容器）と、第２室１２を有するとともに外部容器２０の開口部２３を閉じるための区画部１３を有する内部容器３０（第２容器）とを備える。また、内部容器３０は、内部容器３０を外部容器２０の内部に配置した状態で内部容器３０の開口部３５を塞ぐ蓋体４０を備える。
【００３７】
（外部容器）
外部容器２０は、軸方向Ｄ１に延びる円筒状の側壁２１と、側壁２１の一方の端部に設けられた底部２２とを有し、側壁２１の他方の端部に開口部２３が形成される。以下の説明では、軸方向Ｄ１において、外部容器２０の底部２２から開口部２３に向かう方向を第１方向Ｄ１１という。また、外部容器２０の開口部２３から底部２２に向かう方向を第２方向Ｄ１２という。
【００３８】
側壁２１は、開口部２３と、第１方向Ｄ１１側の端部から、第１方向Ｄ１１側の端部と第２方向Ｄ１２側の端部との間の位置まで延び、外ねじが形成された外ねじ部２１ａと、外ねじ部２１ａの第２方向Ｄ１２側の端部から、外ねじ部２１ａの第２方向Ｄ１２側の端部と底部２２との間の位置まで延びて略一定の内径を有する定径部２１ｂと、定径部２１ｂの第２方向Ｄ１２側の端部から側壁２１の第２方向Ｄ１２側の端部まで延びるとともに、内径が次第に小さくなるテーパー部２１ｃとを有する。図では、外ねじ部２１ａに形成された外ねじの具体的形状は省略している。以下、これ以外の外ねじおよび内ねじについても同様に図面において具体的形状を省略している。
【００３９】
定径部２１ｂの内径は、外ねじ部２１ａの内径よりも小さく、定径部２１ｂの第１方向Ｄ１１側の端面２１ｄは、軸方向Ｄ１に垂直な面を構成する。
【００４０】
外部容器２０を構成する素材は、特に限定されず、合成樹脂を使用することができる。合成樹脂としては、例えばポリプロピレン（ＰＰ）、ポリカーボネート（ＰＣ）、ポリメチルメタクリレート（ＰＭＭＡ）、シクロオレフィンポリマー（ＣＯＰ）等を使用することができる。また、外部容器２０は、複数の素材からなるものであってもよく、内部容器３０を収容した状態で、内部容器３０と対向する部分の少なくとも一部に光透過性を有する部分を備えることが好ましい。
【００４１】
（内部容器）
内部容器３０は、外部容器２０の内部に配置された状態で、軸方向Ｄ１に延びる円筒状の側壁３１と、側壁３１の第２方向Ｄ１２側の端部に設けられた底部３２と、側壁３１の第１方向Ｄ１１側の端部と第２方向Ｄ１２側の端部との間の位置において外面から軸方向Ｄ１に直交する方向に膨出する第１フランジ３３と、側壁３１の第１方向Ｄ１１側の端部において外面から軸方向Ｄ１に直交する方向に膨出する第２フランジ３４と、を有する。
【００４２】
側壁３１は、第１方向Ｄ１１側の端部に形成された開口部３５と、開口部３５から第１フランジ３３の第２方向Ｄ１２側の位置まで延びて略一定の外径および内径を有する定径部３１ａと、定径部３１ａの第２方向Ｄ１２側の端部から側壁３１の第２方向Ｄ１２側の端部まで延びるとともに、外径および内径が次第に小さくなるテーパー部３１ｂとを有する。
【００４３】
底部３２は、中央に開口部３２ａが形成され、底部３２の第２方向Ｄ１２側の面には、核酸通過フィルター３６が開口部３２ａを塞ぐように配置される。
【００４４】
核酸通過フィルター３６は、検体および試薬の通過を規制し、かつ菌体に含まれる核酸の通過を許容する。核酸通過フィルター３６は、例えば四フッ化エチレン樹脂からなる多孔質膜（以下「ＰＴＦＥ多孔質膜」ともいう。）であって、孔径０．５μｍ〜１．０μｍのものを使用することができる。
【００４５】
ＰＴＦＥ多孔質膜は、撥水性と通気性とを併せ持ち、気体の通過は許容し、液体の通過を規制するものとして知られていた。本発明者は、さまざまな検討の結果、ＰＴＦＥ多孔質膜が、微小な高分子である核酸の通過を許容し、かつ検体および試薬の通過を規制することを知見した。核酸は、気層中に浮遊した状態でも、液状の検体中を浮遊した状態でも、ＰＴＦＥ多孔質膜を通過することができる。
【００４６】
内部容器３０の、底部３２、核酸通過フィルター３６、および側壁３１の第１フランジ３３よりも第２方向Ｄ１２側の部分は、外部容器２０の内部を第１室１１と第２室１２とに区画する区画部１３を構成する。
【００４７】
すなわち、内部容器３０を外部容器２０の内部に配置した状態では、区画部１３によって、外部容器２０の定径部２１ｂの第１方向Ｄ１１側の端部で開口部２３が閉じられ、外部容器２０の内部の空間が、内部容器３０の外側の第１室１１と、内部容器３０の内側の第２室１２とに区画される。第１室１１は、外部容器２０の底部２２および側壁２１と内部容器３０の底部３２、核酸通過フィルター３６および側壁３１で構成される壁で囲まれた空間である。第２室１２は、内部容器３０の内部の空間である。第１室１１と第２室１２とは、核酸通過フィルター３６を介して連通する。
【００４８】
また、内部容器３０を外部容器２０の内部に配置した状態では、第１フランジ３３と外部容器２０の定径部２１ｂの第１方向Ｄ１１側の端面２１ｄとの間に第１Ｏリング１４が配置される。
【００４９】
内部容器３０を構成する素材は、特に限定されず、外部容器２０と同様の素材を使用することができる。側壁３１の少なくとも一部に光透過性を有する部分を備えることが好ましい。第１Ｏリング１４および後述の各Ｏリングには、例えばエラストマーを使用することができる。
【００５０】
（蓋体）
蓋体４０は、外部容器２０に結合された状態で、軸方向Ｄ１に延びる円筒状の側壁４１と、側壁４１の第１方向Ｄ１１側の開口を塞ぐ天板４２とを備える。
【００５１】
側壁４１の内面には、外部容器２０の外ねじ部２１ａの外ねじと螺合する内ねじ４１ａが設けられている。
【００５２】
天板４２の、第２方向Ｄ１２側の面には、内部容器３０の第２フランジ３４と接する環状の突起４３が設けられている。側壁４１と突起４３との間に形成される溝４４には、第２Ｏリング４５が嵌め込まれる。
【００５３】
内部容器３０を収容した状態の外部容器２０の開口部２３に蓋体４０を結合すると、内部容器３０の第２フランジ３４と接触する突起４３によって内部容器３０が第２方向Ｄ１２側に押し込まれる。これにより、第１フランジ３３と外部容器２０の定径部２１ｂの第１方向Ｄ１１側の端面２１ｄとの間に第１Ｏリング１４が押し潰された状態で全周にわたって介在し、第１室１１の気密が確保される。また、天板４２と外部容器２０の第１方向Ｄ１１側の端面との間に第２Ｏリング４５が押し潰された状態で全周にわたって介在し、第２室１２の気密が確保される。
【００５４】
蓋体４０を構成する素材は、特に限定されず、外部容器２０と同様の素材を使用することができる。天板４２は、少なくとも一部に光透過性を有する部分を備えることが好ましい。
【００５５】
（第１実施形態に係る核酸回収容器の変形例）
核酸通過フィルター３６は、上述のように内部容器３０の底部３２に配置してもよく、側壁３１の一部を構成するように配置してもよい。また、側壁３１および底部３２の一部を構成するように配置してもよい。
【００５６】
（核酸回収方法）
核酸回収容器１を用いた本実施形態に係る核酸回収方法について説明する。
【００５７】
図５〜９は、本実施形態に係る核酸回収容器を用いた核酸回収方法の説明図である。
【００５８】
まず、外部容器２０と、蓋体４０と、所定量の第１試薬５１を収容しキャップ３７で開口部３５が封止された内部容器３０と、所定量の第２試薬５２を収容しキャップ５４で開口部が封止された第２試薬容器５３と、検体（不図示）を準備する（図５）。第１試薬５１と第２試薬５２はそれぞれ核酸を増幅するための試薬であり、これらを混合し、混合試薬とすることにより核酸の増幅作用を発揮する。混合試薬は、標的核酸を増幅するのみならず、標的核酸と結合して標的核酸を蛍光標識する。
【００５９】
第１試薬５１としては、例えば核酸増幅反応を生じさせる試薬である増幅試薬を用いることができる。増幅試薬は、標的核酸を増幅する酵素および標的核酸に結合する蛍光物質を含有する。第２試薬５２としては、例えばプライマーを用いることができる。プライマーは、感染症起炎菌由来の標的核酸に対する核酸増幅反応の反応剤である。
【００６０】
次に、外部容器２０を第１方向Ｄ１１側の端部を鉛直方向上向きとして保持し、外部容器２０に検体５０を注入する。検体５０の注入後、外部容器２０に内部容器３０を挿入する（図６）。これにより、外部容器２０の内部が内部容器３０の区画部１３によって、第１室１１と第２室１２とに区画され、第１室１１に検体が配置され、第２室１２に第１試薬５１が配置された状態となる。外部容器２０への検体５０の注入量は、本実施形態では、内部容器３０を挿入した状態で検体５０の液面が核酸通過フィルター３６に接する高さとする。外部容器２０は、テーパー部２１ｃを有するため、検体５０が比較的少量でも液面を核酸通過フィルター３６に接する高さとすることができる。
【００６１】
外部容器２０に内部容器３０を挿入した後、内部容器３０のキャップ３７を外し（図７）、第２試薬容器５３のキャップ５４を外して内部容器３０に第２試薬５２を注入する（図８）。これにより、第２室１２において第１試薬５１と第２試薬５２とが混合され、混合試薬５５が得られる。第２試薬５２の注入後、外部容器２０に蓋体４０を装着して、核酸の増幅および検出準備が完了する。
【００６２】
蓋体４０を装着した外部容器２０を、ヒートブロック等の加熱装置１２２に配置し、検体５０を約６８℃に加熱し、所定時間保持する（図９）。加熱により、検体５０中の菌体は、細胞膜の分解等によって細胞成分がばらばらに破砕される（菌破砕工程）。破砕によって菌体から核酸が放出され、放出された核酸は検体５０とともに第１室１１内で対流する。
【００６３】
図１９は一般的な対流の模式図である。液体１２１を収容する容器１２０を加熱装置１２２によって外周面から加熱すると、液体１２１は容器１２０の水平方向中央部で上昇した後容器１２０の側壁周辺で下降し再び中央部で上昇する動きを繰り返し、対流を生じる。
【００６４】
同様に、検体５０は加熱により図９に矢印で示すように対流する。第１室１１内で検体５０とともに対流する核酸は、上昇時に核酸通過フィルター３６に接する。核酸通過フィルター３６に接した核酸は、核酸通過フィルター３６を通過するため、第２室１２において核酸を回収することができる。
【００６５】
核酸通過フィルター３６を通過した核酸は、混合試薬５５に混合される。混合試薬５５に混合された核酸は、混合試薬５５によって増幅される（増幅工程）。増幅された核酸のうち標的核酸には、混合試薬５５に含まれる蛍光物質が結合する。
【００６６】
核酸が混合された混合試薬５５に励起光を照射し、蛍光が確認されれば、標的核酸が存在していることが確認でき、蛍光が確認されなければ、標的核酸が存在していないと推定される。内部容器３０は、テーパー部３１ｂを有し、混合試薬５５内の核酸が底部３２の近傍に比較的高い密度で集まりやすいため、蛍光の発光強度が高まり、蛍光が確認しやすい。
【００６７】
蓋体４０の一部が光透過性を有する場合、または外部容器２０および内部容器３０の一部が光透過性を有する場合、蓋体４０を外部容器２０から外さなくても蛍光の有無を確認することができ、安全性が高まるとともに手順を簡略化できる。
【００６８】
本実施形態に係る核酸回収方法では、第１室１１内に検体５０を収容し、検体５０を加熱することにより、検体５０中の菌体を破砕して核酸を放出させるとともに、放出された核酸を核酸通過フィルター３６の第１室１１の反対側で容易に回収できる。したがって、従来の磁気ビーズを使用していた場合に行われていた、磁気ビーズに菌体を吸着させ、菌体を吸着した磁気ビーズを回収し、菌体を破砕するために他の容器に移すという手順が不要となる。また、第１室１１内で菌体から放出された核酸を、第２室１２内の混合試薬５５に混合させることができるため、核酸回収容器１を封止したまま核酸の増幅および検出まで行うことができる。
【００６９】
外部容器２０への検体５０の注入量は任意であり、内部容器３０を挿入した状態で検体５０の液面が核酸通過フィルター３６に接する高さまたは核酸通過フィルター３６よりも高い位置となる量とすることが好ましい。検体５０と核酸通過フィルター３６とが直に接触しない場合には、菌体から検体５０中に放出された核酸が、さらに検体５０と核酸通過フィルター３６との間の気層に放出され、気層中を浮遊した上で、核酸通過フィルター３６を通過する。一方、検体５０が核酸通過フィルター３６に直に接触する場合、検体５０中の菌体から放出された核酸は検体５０から直接核酸通過フィルター３６を通過するため、検体５０と核酸通過フィルター３６とが直に接触しない場合と比べて急速に核酸を回収することができる。
【００７０】
また、本実施形態では、混合試薬５５が核酸通過フィルター３６に直に接触する。混合試薬５５と核酸通過フィルター３６とが直に接触しない場合には、核酸通過フィルター３６を通過した核酸が、さらに核酸通過フィルター３６と混合試薬５５との間の気層に放出され、気層中を浮遊した上で、混合試薬５５に接触し、浸入する。しかし、混合試薬５５が核酸通過フィルター３６に直に接触する場合、核酸通過フィルター３６を通過した核酸は直接混合試薬５５に浸入するため、混合試薬５５と核酸通過フィルター３６とが直に接触しない場合と比べて急速に核酸を混合試薬５５に回収することができる。
【００７１】
なお、検体５０と混合試薬５５とは、両方を加熱装置によって加熱してもよいし、検体５０のみを加熱してもよい。検体５０のみを加熱し、混合試薬５５の加熱を抑制したい場合には、外部容器２０を軸方向Ｄ１に長いものとし、外部容器２０の底部２２から内部容器３０の底部３２までの距離を長く設定するとよい。
【００７２】
また、本実施形態の核酸回収方法では、第１室１１に検体５０、第２室１２に混合試薬５５を収容したが、第１室１１に混合試薬５５、第２室１２に検体５０を収容してもよい。
【００７３】
（第２の実施形態）
（核酸回収容器の構成）
図１０は本実施形態に係る核酸回収容器の斜視図であり、図１１（ａ）はその正面図であり、図１１（ｂ）は図１１（ａ）のＢ−Ｂ断面図である。図１２は本実施形態に係る核酸回収容器の分解斜視図であり、図１３（ａ）はその正面図であり、図１３（ｂ）は図１３（ａ）のＢ−Ｂ断面図である。
【００７４】
本実施形態に係る核酸回収容器２は、検体を収容するための外部容器２０（第１容器）と、開口部６５および区画部１３を有しかつ試薬を収容するための内部容器６０（第２容器、本体容器）とを備える。また、内部容器６０は、内部容器６０の開口部６５を閉じるための蓋体１００と、蓋体１００が内部容器６０に装着された状態で、蓋体１００から内部容器６０の開口部６５を通じて区画部１３に向かって延びる棒状部材９０と、棒状部材に設けられた区画Ｏリング１１０（シール部）とを備える。内部容器６０の区画部１３は、外部容器２０の開口部２３を閉じて、外部容器２０の内部の空間および内部容器６０の内部の空間を第１室１１と第２室１２とに区画する。区画Ｏリング１１０は、蓋体１００が内部容器６０に装着された状態で、棒状部材９０における蓋体１００と区画部１３との間の位置において、棒状部材９０の外面と内部容器６０の内面との間に全周にわたって介在し、内部容器６０内の第２室１２を第１空間６８と第２空間６９に区画する。
【００７５】
（外部容器）
本実施形態に係る核酸回収容器２の外部容器２０は、第１の実施形態の外部容器２０における外ねじが設けられた外ねじ部２１ａに代えて内ねじが設けられた内ねじ部２１ｅを設けたこと以外は、第１の実施形態における外部容器２０と同じである。そのため、図面において外部容器２０について第１の実施形態と実質的に同じ部分には同じ符号を付す。
【００７６】
（内部容器）
内部容器６０は、外部容器２０の内部に一部が収容されるように配置された状態で、軸方向Ｄ１に延びる円筒状の側壁６１と、側壁６１の第２方向Ｄ１２側の端部に設けられた底部６２と、側壁６１の第１方向Ｄ１１側の端部と第２方向Ｄ１２側の端部との間の位置において外面から軸方向Ｄ１に直交する方向に膨出する第１フランジ６３と、側壁６１の第１方向Ｄ１１側の端部と第１フランジ６３との間の位置において外面から軸方向Ｄ１に直交する方向に膨出する第２フランジ６４とを有する。側壁６１の第１方向Ｄ１１側の端部には開口部６５が形成されている。
【００７７】
底部６２は、中央に開口部６２ａが形成され、底部６２の第２方向Ｄ１２側の面には、核酸通過フィルター６６が開口部６２ａを塞ぐように配置される。
【００７８】
内部容器６０の、底部６２、核酸通過フィルター６６および側壁６１の第２フランジ６４よりも第２方向Ｄ１２側の部分は、区画部１３を構成する。区画部１３と、内部容器６０の第１方向Ｄ１１側に形成されている開口部６５とは、軸方向Ｄ１に互いに対向する。
【００７９】
内部容器６０を外部容器２０の内部に配置した状態では、区画部１３によって、外部容器２０の内部の空間および内部容器６０の内部の空間が、内部容器３０の外側の第１室１１と、内部容器６０の内側の第２室１２とに区画される。第１室１１は、外部容器２０の底部２２および側壁２１と内部容器６０の底部６２、核酸通過フィルター６６および側壁６１とで囲まれた空間である。第２室１２は、内部容器６０の内部の空間である。第１室１１と第２室１２とは、核酸通過フィルター６６を介して連通する。
【００８０】
内部容器６０は、互いに軸が一致するように結合された第１部材７０と第２部材８０とを備える。第２部材８０は、第１部材７０の第１方向Ｄ１１側に配置される。
【００８１】
（第１部材）
第１部材７０は、内部容器６０の側壁６１の一部を構成する円筒状の第１側壁７１と、第１側壁７１の第２方向Ｄ１２側の開口を閉じる底部６２と、第１側壁７１の第１方向Ｄ１１側の端部と第２方向Ｄ１２側の端部との間の位置に配置された第１フランジ６３とを有する。
【００８２】
第１側壁７１は、第１方向Ｄ１１側の端部に開口部７５が形成され、第１方向Ｄ１１側の端部から第１フランジ６３まで外ねじ７４が設けられている。第１側壁７１の第２方向Ｄ１２側の端部は、底部６２に向けて延びるとともに外径および内径が次第に小さくなるテーパー状に形成されている。
【００８３】
（第２部材）
第２部材８０は、内部容器６０の側壁６１の一部を構成する円筒状の第２側壁８１と、第２側壁８１の第１方向Ｄ１１側の端部と第２方向Ｄ１２側の端部との間の位置に配置された第２フランジ６４と、第２側壁８１の第２方向Ｄ１２側の端部を囲繞するように設けられた円筒状の螺合部８２とを有する。
【００８４】
第２側壁８１は、第１方向Ｄ１１側の端部に形成された第１開口部８３と、第２方向Ｄ１２側の端部に形成された第２開口部８４と、第２側壁８１の第１方向Ｄ１１側の端部に設けられた外ねじ８７と、第２側壁８１の第２方向Ｄ１２側の端部に設けられ第１部材７０の内部に配置される挿入部８５とを有する。挿入部８５は、第２方向Ｄ１２に向かって外径および内径が次第に小さくなるまたは一定である形状に形成されている。また、挿入部８５の内面は、棒状部材９０を内部容器６０の底部６２に突き当たるまで挿入した状態において、区画Ｏリング１１０と接する。
【００８５】
第２側壁８１は、第２側壁８１の挿入部８５を囲繞する。螺合部８２の内面には、第１部材７０の第１方向Ｄ１１側の端部に設けられた外ねじ７４と螺合する内ねじ８８が設けられている。また、螺合部８２の外面には、外部容器２０の内ねじ部２１ｅの内ねじと螺合する外ねじ８９が設けられている。
【００８６】
第２部材８０は、第１部材７０と同様の素材からなるものとすることができる。第２部材８０は光透過性を有しなくてもよいが、光透過性を有することが好ましい。
【００８７】
第１部材７０の第１方向Ｄ１１側の端部に設けられた外ねじ７４と第２部材８０の螺合部８２の内ねじ８８とを螺合すると、第１部材７０と第２部材８０とが結合し、内部容器６０が形成される。このとき、第２部材８０の挿入部８５は、第１側壁７１の内側に配置される。また、第２部材８０の第１開口部８３は内部容器６０の開口部６５を構成する。
【００８８】
第２部材８０の、螺合部８２と挿入部８５との間に形成される溝には第３Ｏリング６７が配置される。第１部材７０の第１方向Ｄ１１側の端部に設けられた外ねじ７４と、第２部材８０の螺合部８２の内ねじ８８とを螺合した状態では、第３Ｏリング６７は、第１部材７０の第１方向Ｄ１１側の端部と、第２部材８０の螺合部８２と挿入部８５との間の溝の第１方向Ｄ１１側の端部との間に全周にわたって押し潰された状態で介在し、第１部材７０と第２部材８０との結合部の気密が確保される。
【００８９】
また、内部容器６０の螺合部８２の外ねじ８９と、外部容器２０の内ねじ部２１ｅの内ねじとを螺合すると、第１フランジ６３と外部容器２０の定径部２１ｂの第１方向Ｄ１１側の端面２１ｄとの間に第１Ｏリング１４が押し潰された状態で全周にわたって介在し、第１室１１の気密が確保される。
【００９０】
（蓋体）
蓋体１００は、円筒状の側壁１０１と、側壁１０１の一方の開口を塞ぐ天板１０２とを備える。蓋体１００は、内部容器６０に結合された状態では、側壁１０１の軸が内部容器６０の軸に一致する。以下の説明では、蓋体１００の側壁１０１の軸方向も軸方向Ｄ１とする。
【００９１】
天板１０２は、側壁１０１の第１方向Ｄ１１側の開口を塞いでいる。天板１０２の中央部には挿入孔１０３が設けられている。挿入孔１０３には、棒状部材９０が挿入される。
【００９２】
側壁１０１の内面には、内ねじ１０４が設けられている。内ねじ１０４は、内部容器６０の第１方向Ｄ１１側に設けられた外ねじ８７と螺合する。
【００９３】
蓋体１００は、第２部材８０と同様の素材からなるものとすることができる。蓋体１００も光透過性を有しなくてもよいが、光透過性を有することが好ましい。
【００９４】
挿入孔１０３の直径は、後述する棒状部材９０の本体９１の外径よりも大きく、棒状部材９０のストッパ９１ａの第２方向Ｄ１２側の端部が形成する包絡線の直径よりも小さい。
【００９５】
蓋体１００の内ねじ１０４は、内部容器６０の外ねじ８７と螺合することにより蓋体１００と内部容器６０とが結合する。内部容器６０の第１方向Ｄ１１側の端部には、第２Ｏリング１０５が配置される。蓋体１００と内部容器６０とが結合した状態において、内部容器６０の第１方向Ｄ１１側の端部と蓋体１００の天板１０２との間に第２Ｏリング１０５が全周にわたって押し潰された状態で介在し、内部容器６０と蓋体１００との結合部の気密が確保される。
【００９６】
（棒状部材）
棒状部材９０は、本体９１と、それぞれ本体９１に設けられた、ストッパ９１ａと、フランジ９１ｂと、第１凹部９１ｃと、第２凹部９１ｄとを備える。本体９１は、蓋体１００が内部容器６０に装着された状態で、蓋体１００から開口部６５を通じて区画部１３に向かって延び、軸が内部容器６０の軸に一致する。以下の説明では、棒状部材９０の軸方向も軸方向Ｄ１とする。
【００９７】
本体９１は、両端部が丸みを帯びた形状に若干縮径している以外は全長にわたって一定の外径を有する。
【００９８】
本体９１の第１方向Ｄ１１側の端部近傍には、複数のストッパ９１ａと、ストッパ９１ａの第２方向Ｄ１２側にフランジ９１ｂとが配置されている。ストッパ９１ａおよびフランジ９１ｂは、蓋体１００の天板１０２に設けられた挿入孔１０３に挿入された状態で、棒状部材９０が蓋体１００に対して棒状部材９０が延びる方向すなわち軸方向Ｄ１に移動するのを規制するように、天板１０２の挿入孔１０３の周囲部分と係止する。
【００９９】
各ストッパ９１ａは、本体９１の外面から軸方向Ｄ１に直交する方向に膨出し、第１方向Ｄ１１から第２方向Ｄ１２に向かって膨出量が大きくなる矢羽根状である。フランジ９１ｂは、本体９１の外面から軸方向Ｄ１に直交する方向に膨出し、第１方向Ｄ１１側の端部が軸方向Ｄ１に垂直な面を構成する。ストッパ９１ａの第２方向Ｄ１２側の端面から、フランジ９１ｂの第１方向Ｄ１１側の端面までの長さは、後述する蓋体１００の天板１０２の厚さと実質的に同一またはそれ以上の長さである。
【０１００】
本体９１は、第２方向Ｄ１２側の端部に、貫通孔９４を有する。貫通孔９４は、本体９１の第２方向Ｄ１２側の端面の中央部から、第２方向Ｄ１２側の端部とフランジ９１ｂとの間の位置まで第１方向Ｄ１１側に向けて設けられた円筒形の穴と、本体９１の側面から当該穴まで貫通する複数の窓とを有する。すなわち貫通孔９４は、本体９１の第２方向Ｄ１２側の端面と本体９１の側面との間で貫通している。
【０１０１】
本体９１のフランジ９１ｂと貫通孔９４との間には、周方向に第１凹部９１ｃが設けられ、第１凹部９１ｃには区画Ｏリング１１０が嵌め込まれる。本体９１のストッパ９１ａとフランジ９１ｂとの間には、周方向に第２凹部９１ｄが設けられ、第２凹部９１ｄには第４Ｏリング９３が嵌め込まれる。棒状部材９０は、内部容器６０と同様の素材からなるものとすることができる。
【０１０２】
本実施形態では、棒状部材９０を内部容器６０の底部６２に突き当たるまで挿入した状態では、フランジ９１ｂの第１方向Ｄ１１側の端面が内部容器６０の第１方向Ｄ１１側の端部よりも外側に位置する。そのため、棒状部材９０を内部容器６０の底部６２に突き当たるまで挿入した状態で、蓋体１００の挿入孔１０３に第２方向Ｄ１２側から棒状部材９０の第１方向Ｄ１１側の端部を挿入しつつ、蓋体１００を内部容器６０に装着すれば、天板１０２がストッパ９１ａを乗り越えて、ストッパ９１ａとフランジ９１ｂとの間に嵌まり込み、天板１０２の挿入孔１０３の周囲部分と棒状部材９０のストッパ９１ａおよびフランジ９１ｂとが第４Ｏリング９３を介して互いに係合する。このとき、第４Ｏリング９３がストッパ９１ａと天板１０２との間に挟まれることにより、第４Ｏリング９３により天板１０２と棒状部材９０との間の気密性が確保される。また、棒状部材９０は、蓋体１００に対して軸方向Ｄ１のいずれの方向にも移動が規制される。
【０１０３】
区画Ｏリング１１０を嵌め込んだ状態において、軸方向Ｄ１における棒状部材９０の本体９１の第２方向Ｄ１２側の端部からフランジ９１ｂまでの範囲では、区画Ｏリング１１０が最も外側に突出している。棒状部材９０を内部容器６０の底部６２（区画部１３）に突き当たるまで挿入し、蓋体１００を装着した状態では、区画Ｏリング１１０は、棒状部材９０の本体９１における蓋体１００と区画部１３との間の位置において、棒状部材９０外面と内部容器６０の側壁６１の内面（挿入部８５の内面）との間に全周にわたって介在し、内部容器６０の内部（第２室１２）が第１空間６８と第２空間６９とに区画される。また、蓋体１００を取り外し、棒状部材９０を内部容器６０から抜いた状態では、区画Ｏリング１１０によるシール状態が解除され、内部容器６０内部の第１空間６８と第２空間６９が連通する状態となる。
【０１０４】
（第２実施形態に係る核酸回収容器の変形例）
本実施形態では、棒状部材９０と区画Ｏリング１１０とは別部材としたが、一体に成形してもよい。また、区画Ｏリング１１０は棒状部材９０に設けるのではなく、内部容器６０に設けてもよい。この場合、棒状部材９０の第１凹部９１ｃを省略することができ、内部容器６０の内周面に、区画Ｏリング１１０を設けることができる。また、内部容器６０と区画Ｏリング１１０とは一体に成形してもよい。内部容器６０の内周面に区画Ｏリング１１０を設ける場合、内部容器６０の側壁６１の内面において、区画Ｏリング１１０が最も内側に突出するように第２部材８０および区画Ｏリング１１０を形成する必要がある。
【０１０５】
内部容器６０を構成する第１部材７０および第２部材８０は、一体に成形してもよい。
【０１０６】
第１室１３の気密の確保は、外部容器２０の内ねじ部２１ｅに内部容器６０の第１フランジ６３を圧入することによって行ってもよい。この場合、第１Ｏリング１４が不要となる。
【０１０７】
（内部容器への試薬の配置方法）
本実施形態に係る内部容器６０の第１空間６８および第２空間６９への第１試薬および第２試薬の配置方法について説明する。第１試薬および第２試薬は、第１の実施形態と同じものを用いることができる。
【０１０８】
まず、第２部材８０と組み合わせられる前の第１部材７０に、所定量の第１試薬５１を注入する。
【０１０９】
次に、第１部材７０の開口部７５から、第２部材８０の挿入部８５を挿入し、第１部材７０の外ねじ７４と第２部材８０の内ねじ８８とを螺合させる。これにより、第１部材７０と第２部材８０とが結合して内部容器６０を構成する。
【０１１０】
第２部材８０の挿入部８５と螺合部８２との間に形成される溝には、第１部材７０と結合する前に第３Ｏリング６７を配置しておく。第２部材８０は、螺合部８２を備えるため、第１部材７０と第２部材８０とを確実に結合させることができる。
【０１１１】
続いて、棒状部材９０を貫通孔９４側から、内部容器６０の開口部６５すなわち第２部材８０の第１開口部８３に挿入する。棒状部材９０は、区画Ｏリング１１０が第２部材８０の挿入部８５の内面と接するよう、先端が底部６２に突き当たるまで挿入する。
【０１１２】
以上の工程により、第１空間６８に第１試薬５１が配置され、第１空間６８が封止されるとともに、第２空間６９に第２試薬５２を配置できる状態となる。
【０１１３】
次に、棒状部材９０を内部容器６０に挿入した状態で、内部容器６０の開口部６５から所定量の第２試薬５２を注入する。第２試薬５２を注入した後、内部容器６０の第１方向Ｄ１１側の端部に第２Ｏリング１０５を配置し、蓋体１００を内部容器６０に装着する。このとき、棒状部材９０のストッパ９１ａおよびフランジ９１ｂと、蓋体１００の天板１０２の挿入孔１０３の周囲部分とが互いに係止し、棒状部材９０と蓋体１００とが結合されるとともに、内部容器６０の内部が蓋体１００により封止される。
【０１１４】
このようにして、所定量の第１試薬５１が第１空間６８に、所定量の第２試薬５２が第２空間６９に、それぞれ分離して第２室１２内に配置され、内部容器６０が封止される。
【０１１５】
（核酸回収方法）
核酸回収容器２を用いた本実施形態に係る核酸回収方法について説明する。
【０１１６】
図１４〜１８は、本実施形態に係る核酸回収容器を用いた核酸回収方法の説明図である。
【０１１７】
まず、外部容器２０と、第１試薬５１および第２試薬５２を分離した状態で収容した内部容器６０とを準備する（図１４）。このとき、外部容器２０と内部容器６０とは結合した状態でも分離した状態でもよい。しかし、外部容器２０の内部を清浄に保つため、核酸回収容器２を使用するまでは、図１４に示すように外部容器２０と内部容器６０とは結合した状態とすることが好ましい。
【０１１８】
外部容器２０と内部容器６０とを分離し、外部容器２０を第１方向Ｄ１１側の端部を鉛直方向上向きとして保持し、外部容器２０に検体５０を注入する（図１５）。
【０１１９】
検体５０の注入後、外部容器２０に内部容器６０を挿入し、外部容器２０の内ねじ部２１ｅの内ねじと、内部容器６０の螺合部８２の外ねじ８９とを螺合する。これにより、外部容器２０と内部容器６０とが結合される（図１６）。このとき、外部容器２０の内部と内部容器６０の内部とが内部容器６０の区画部１３によって、第１室１１と第２室１２とに区画され、第１室１１に検体が配置された状態となる。また、第２室１２は、第１試薬５１が収容された第１空間６８と第２試薬５２が収容された第２空間６９とに区画されている。
【０１２０】
外部容器２０に挿入された内部容器６０の蓋体１００を外し、棒状部材９０を抜くと、第２空間６９に配置された第２試薬５２が第２側壁８１の挿入部８５の内面に沿って、第１空間６８側に導かれる（図１７）。これにより、第２室１２の第１空間６８において第１試薬５１と第２試薬５２とが混合され、混合試薬５５が得られる。内部容器６０に棒状部材９０を挿入し蓋体１００を装着すると、第２室１２が封止され、検出準備が完了する（図１８）。
【０１２１】
蓋体１００を装着した外部容器２０を、ヒートブロック等の加熱装置に配置し、検体５０を７０℃に加熱し、所定時間保持する。
【０１２２】
第１室１１内で検体５０とともに対流する核酸は、上昇時に核酸通過フィルター６６に接し、核酸通過フィルター６６を通過し、核酸通過フィルター６６を通過した核酸は、棒状部材９０の貫通孔９４を通じて混合試薬５５に混合されるため、第２室１２の第１空間６８において核酸を回収することができる。
【０１２３】
本実施形態では、第２試薬５２を別の容器から第１試薬５１を収容する内部容器６０に移し替えなくても、棒状部材９０を抜くだけで、内部容器６０内で第１試薬５１と第２試薬５２とを混合することができ、作業手順が簡略化される。
【０１２４】
このように、本実施形態に係る核酸回収容器２を用いる場合、外部容器２０の第１室１１に検体５０を配置した後、内部容器６０の区画部１３で外部容器２０の開口部２３を閉じ、続いて内部容器６０から蓋体１００を外すとともに棒状部材９０を抜いて第１試薬５１と第２試薬５２とを混合し、時間を空けずに検体を加熱すれば、混合試薬５５の効力が試薬の混合後急速に失われる場合であっても、有効な混合試薬５５に検体から放出された核酸を混合することができる。
【０１２５】
また、第１試薬５１と第２試薬５２とを混合した後、再び蓋体１００および棒状部材９０を内部容器６０に戻すことにより、第２室１２を封止した状態とすることができ、雰囲気中への核酸の飛散を抑制することができる。雰囲気中に核酸が飛散すると他の検体に混入し、他の検体について標的核酸の検出精度を低下させるおそれがある。しかし、核酸回収容器２を用いる場合、核酸の飛散を抑制し、他の検体について標的核酸の検出精度の低下を抑制することができる。
【符号の説明】
【０１２６】
１、２  核酸回収容器
１１  第１室
１２  第２室
１３  区画部（壁）
２０  外部容器（第１容器）
２１  側壁（壁）
２２  底部（壁）
２３  開口部
３０  内部容器（第２容器）
３１、６１  側壁（壁）
３２、６２  底部（壁）
３５、６５  開口部
３６、６６  核酸通過フィルター（壁）
５０  検体
５５  混合試薬（試薬）
６０  内部容器（第２容器、本体容器）
９０  棒状部材
１００  蓋体
１１０  区画Ｏリング
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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