(57)【要約】      （修正有）【課題】ターゲットを簡便に分析する為のターゲット分析キット及びターゲット分析方法の提供。【解決手段】試料採取用具１０及び分析容器１１を含み、分析容器中の反応室１１２は上部開口に、前記試料採取用具の採取部１０２の先端によって破断可能な反応室用隔壁１１３、１１４を有し、前記試料採取用具又は前記分析容器は、溶媒１６が収容された溶媒室１１１を有し、前記溶媒室又は前記反応室は、ターゲットに結合する標識化された第１核酸分子１４を含み、前記溶媒室又は前記反応室は、第２試薬を有し、前記第２試薬は、担体と、前記第１核酸分子に配列依存的に結合する第２核酸分子１３又は前記ターゲットと同じ試薬物質とを含み、前記第２核酸分子は、前記担体に固定化された固定化第２核酸分子で、前記試薬物質は、前記担体に固定化された固定化試薬物質で、前記担体は、自発的又は強制的に、溶媒の上方に位置又は移動可能であるターゲット分析キット１。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
試料採取用具および分析容器を含み、
前記試料採取用具は、
軸部および採取部を有し、
前記軸部の一端側に前記採取部が連結され、
前記分析容器は、
反応室を含み、
前記反応室の上部開口に、前記試料採取用具の採取部の先端によって破断可能な反応室用隔壁を有し、
前記分析容器の内部に、前記試料採取用具の前記採取部を収容可能であり、
前記試料採取用具または前記分析容器は、
溶媒が収容された溶媒室を有し、
前記溶媒室または前記反応室は、
第１試薬を有し、
前記第１試薬は、ターゲットに結合する第１核酸分子が標識物質で標識化された標識化第１核酸分子を含み、
前記溶媒室または前記反応室は、
第２試薬を有し、
前記第２試薬は、担体と、前記第１核酸分子に配列依存的に結合する第２核酸分子または前記ターゲットと同じ試薬物質とを含み、
前記第２核酸分子は、前記担体に固定化された固定化第２核酸分子であり、
前記試薬物質は、前記担体に固定化された固定化試薬物質であり、
前記担体は、自発的または強制的に、溶媒の上方に位置または移動可能である
ことを特徴とするターゲット分析キット。
【請求項２】
前記反応室が、前記第１試薬を有し、
前記反応室または前記溶媒室が、前記第２試薬を有し、
前記担体は、前記溶媒に対して浮遊する担体である、請求項１記載のターゲット分析キット。
【請求項３】
前記担体は、空洞を有する、請求項２記載のターゲット分析キット。
【請求項４】
前記担体は、中空構造体または多孔質体である、請求項３記載のターゲット分析キット。
【請求項５】
前記多孔質体の材質が、シリカである、請求項４記載のターゲット分析キット。
【請求項６】
前記担体の材質が、前記溶媒と比較して比重が軽い材質である、請求項２から５のいずれか一項に記載のターゲット分析キット。
【請求項７】
前記担体の材質が、樹脂またはゴムである、請求項２から６のいずれか一項に記載のターゲット分析キット。
【請求項８】
前記樹脂が、メラミン樹脂、ポリエチレン（PE）、ポリプロピレン（PP）、およびエチレン酢酸ビニルコポリマー（EVA）からなる群から選択された少なくとも一つである、請求項７記載のターゲット分析キット。
【請求項９】
前記担体が、非中空構造体または非多孔質体である、請求項６から８のいずれか一項に記載のターゲット分析キット。
【請求項１０】
前記担体が、前記溶媒と分離する溶媒担体であり、
前記固定化第２核酸分子または前記固定化試薬物質は、付加分子と結合しており、
前記付加分子は、前記溶媒担体に対して溶解性を示す分子である、請求項２記載のターゲット分析キット。
【請求項１１】
前記溶媒が、水性溶媒であり、
前記溶媒担体は、前記水性溶媒よりも極性が低く、前記水性溶媒よりも比重が軽い溶媒である、請求項１０記載のターゲット分析キット。
【請求項１２】
前記溶媒担体が、オイルである、請求項１１記載のターゲット分析キット。
【請求項１３】
前記反応室が、前記第１試薬および磁石を有し、
前記反応室または前記溶媒室が、前記第２試薬を有し、
前記第２試薬の前記固定化第２核酸分子または前記固定化試薬物質は、前記担体が磁性ビーズである、請求項１記載のターゲット分析キット。
【請求項１４】
前記分析容器の外部に、移動可能な磁性体が配置されている、請求項１３記載のターゲット分析キット。
【請求項１５】
さらに、前記分析容器を挿入する挿入部を有し、
前記磁性体が前記挿入部に固定化されている、請求項１４記載のターゲット分析キット。
【請求項１６】
前記磁石が、磁石部と脚部とを有し、
前記磁石部は、
前記反応室において、上方に位置するように、前記脚部により支持されている、請求項１３記載のターゲット分析キット。
【請求項１７】
前記第１核酸分子が、アプタマーである、請求項１から１６のいずれか一項に記載のターゲット分析キット。
【請求項１８】
前記標識物質が、酵素、核酸、蛍光物質、色素物質、発光物質、放射性物質、および電子供与体からなる群から選択された少なくとも１つの物質である、請求項１から１７のいずれか一項に記載のターゲット分析キット。
【請求項１９】
前記第１試薬が、酵素と、前記酵素に対する基質とを含み、
前記標識化第１核酸分子における前記標識物質が前記酵素である、請求項１から１８のいずれか一項に記載のターゲット分析キット。
【請求項２０】
前記分析容器は、
前記溶媒室を有し、
前記溶媒室および前記反応室が、上方向からこの順序で連続して配置され、
前記溶媒室の上部開口に、前記試料採取用具の採取部の先端によって破断可能な溶媒室用隔壁を有し、
前記反応室の上部開口であって、前記溶媒室との間に、前記反応室用隔壁を有し、
前記試料採取部の先端で前記溶媒室用隔壁を破断することにより、前記溶媒室内の溶媒を、前記反応室に導入する、
請求項１から１９のいずれか一項に記載のターゲット分析キット。
【請求項２１】
前記試料採取用具は、
前記溶媒室を有し、
前記軸部は、
中空であり、
一端側が、前記採取部に連結され、開口しており、
他端側が、前記溶媒室に連結され、開口可能に閉口しており、
外部からの力で、前記溶媒室の内部において前記軸部の他端を開口することにより、前記溶媒室内の溶媒を、前記軸部の中空を介して、前記採取部に通液させる、請求項１から１９のいずれか一項に記載のターゲット分析キット。
【請求項２２】
前記軸部の他端側は、前記溶媒室の内部に位置し、
前記軸部は、折りによって、前記他端の閉口を開口可能であり、
外部からの力で、前記溶媒室の内部において、前記軸部の他端側を折ることにより、前記閉口を開口させる、請求項２１記載のターゲット分析キット。
【請求項２３】
前記溶媒室は、さらに、蓋部を有し、
前記溶媒室の内部において、前記軸部の他端の開口を塞ぐように、前記蓋部が配置されており、
外部からの力で、前記溶媒室の内部において、前記軸部の他端から前記蓋部を移動させることにより、前記閉口を開口させる、請求項２１記載のターゲット分析キット。
【請求項２４】
請求項１から２３のいずれか一項に記載のターゲット分析キットを使用し、
前記試料採取用具の試料が付着した前記採取部を、前記分析容器の前記反応室に挿入する挿入工程と、
前記反応室に、前記溶媒室の溶媒を導入する導入工程と、
前記反応室における反応を検出する検出工程とを有し、
前記検出工程において、
前記反応室に導入された溶媒中で、前記第１試薬と、前記第２試薬と、前記採取部に付着したターゲットとを接触させ、前記ターゲットに結合した前記第１試薬における前記標識物質を検出する
ことを特徴とするターゲット分析方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ターゲット分析キットおよびターゲット分析方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ターゲットの分析においては、一般的に、前記ターゲットに対する結合性を有する結合物質を使用し、前記ターゲットと前記結合物質との結合体を形成させ、これを直接的または間接的に検出することによって、ターゲットの有無または量を分析できる（特許文献１、特許文献２）。
【０００３】
そして、一つの分析用具で簡便に一連の処理を行い、ターゲットを検出することが求められている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特表２０１４−５０７６７０号公報
【特許文献２】特表２００７−５１８９９４号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
そこで、本発明の目的は、ターゲットを簡便に分析するためのターゲット分析キットを提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明のターゲット分析キット（以下、「分析キット」ともいう）は、
試料採取用具および分析容器を含み、
前記試料採取用具は、
軸部および採取部を有し、
前記軸部の一端側に前記採取部が連結され、
前記分析容器は、
反応室を含み、
前記反応室の上部開口に、前記試料採取用具の採取部の先端によって破断可能な反応室用隔壁を有し、
前記分析容器の内部に、前記試料採取用具の前記採取部を収容可能であり、
前記試料採取用具または前記分析容器は、
前記分析容器の前記反応室に溶媒を導入する溶媒室を有し、
前記溶媒室は、溶媒を含み、
前記分析容器の前記反応室は、
第１試薬を有し、
前記第１試薬は、ターゲットに結合する第１核酸分子が標識物質で標識化された標識化第１核酸分子を含み、
前記溶媒室または前記反応室は、
第２試薬を有し、
前記第２試薬は、担体と、前記第１核酸分子に相補的な第２核酸分子または前記ターゲットと同じ試薬物質とを含み、
前記第２核酸分子は、前記担体に固定化された固定化第２核酸分子であり、
前記試薬物質は、前記担体に固定化された固定化試薬物質であり、
前記担体は、自発的または強制的に、溶媒の上方に位置または移動可能である
ことを特徴とする。
【０００７】
本発明のターゲット分析方法（以下、「分析方法」ともいう）は、
本発明のターゲット分析キットを使用し、
前記試料採取用具の試料が付着した前記採取部を、前記分析容器の前記反応室に挿入する挿入工程と、
前記反応室に、前記溶媒室の溶媒を導入する導入工程と、
前記反応室における反応を検出する検出工程とを有し、
前記検出工程において、
前記反応室に導入された溶媒中で、前記第１試薬と、前記第２試薬と、前記採取部に付着したターゲットとを接触させ、前記ターゲットに結合した前記第１試薬における前記標識物質を検出することを特徴とする。
【発明の効果】
【０００８】
本発明のターゲット分析キットによれば、簡便に試料中のターゲットを分析することができる。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】図１は、実施形態１Ａにおけるターゲット分析キットの一例を示す概略図である。
【図２】図２は、実施形態１Ａにおけるターゲット分析キットを用いた分析方法の一例を示す概略図である。
【図３】図３は、実施形態１Ａにおける反応の一例を示す概略図である。
【図４】図４は、実施形態１Ｂにおけるターゲット分析キットの一例を示す概略図である。
【図５】図５は、実施形態１Ｂにおける反応の一例を示す概略図である。
【図６】図６は、実施形態１Ｃにおけるターゲット分析キットの一例を示す概略図である。
【図７】図７は、実施形態１Ｃにおけるターゲット分析キットを用いた分析方法の一例を示す概略図である。
【図８】図８は、実施形態１Ｄにおけるターゲット分析キットの一例を示す概略図である。
【図９】図９は、実施形態１Ｄにおけるターゲット分析キットを用いた分析方法の一例を示す概略図である。
【図１０】図１０は、実施形態２Ａにおけるターゲット分析キットの一例を示す概略図である。
【図１１】図１１は、実施形態２Ａにおけるターゲット分析キットを用いた分析方法の一例を示す概略図である。
【図１２】図１２は、実施形態２Ｂにおけるターゲット分析キットの一例を示す概略図である。
【図１３】図１３は、実施形態２Ｂにおけるターゲット分析キットを用いた分析方法の一例を示す概略図である。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
本発明の分析キットにおいて、例えば、前記反応室が、前記第１試薬を有し、前記反応室または前記溶媒室が、前記第２試薬を有し、前記担体は、前記溶媒に対して浮遊する担体である。
【００１１】
本発明の分析キットにおいて、例えば、前記担体は、空洞を有する。
【００１２】
本発明の分析キットにおいて、例えば、前記担体は、中空構造体または多孔質体である。
【００１３】
本発明の分析キットにおいて、例えば、前記多孔質体の材質が、シリカである。
【００１４】
本発明の分析キットにおいて、例えば、前記担体の材質が、前記溶媒と比較して比重が軽い材質である。
【００１５】
本発明の分析キットにおいて、例えば、前記担体の材質が、樹脂またはゴムである。
【００１６】
本発明の分析キットにおいて、例えば、前記樹脂が、ポリエチレン（PE）、ポリプロピレン（PP）、およびエチレン酢酸ビニルコポリマー（EVA）からなる群から選択された少なくとも一つである。
【００１７】
本発明の分析キットにおいて、例えば、前記担体が、非多孔質体である。
【００１８】
本発明の分析キットにおいて、例えば、前記担体が、前記溶媒と分離する溶媒担体であり、前記固定化第２核酸分子または前記固定化試薬物質は、付加分子と結合しており、前記付加分子は、前記溶媒担体に対して溶解性を示す分子である。
【００１９】
本発明の分析キットにおいて、例えば、前記溶媒が、水性溶媒であり、前記溶媒担体は、前記水性溶媒よりも極性が低く、前記水性溶媒よりも比重が軽い溶媒である。
【００２０】
本発明の分析キットにおいて、例えば、前記担体が、オイルである。
【００２１】
本発明の分析キットにおいて、例えば、前記反応室が、前記第１試薬および磁石を有し、前記反応室または溶媒室が、前記第２試薬を有し、前記第２試薬の前記固定化第２核酸分子または前記固定化試薬物質は、前記担体が磁性ビーズである。
【００２２】
本発明の分析キットにおいて、例えば、前記分析容器の外部に、移動可能な磁性体が配置されている。
【００２３】
本発明の分析キットにおいて、例えば、さらに、前記分析容器を挿入する挿入部を有し、前記磁性体が前記挿入部に固定化されている。
【００２４】
本発明の分析キットにおいて、例えば、前記磁石が、磁石部と脚部とを有し、前記磁石部は、前記反応室において、上方に位置するように、前記脚部により支持されている。
【００２５】
本発明の分析キットにおいて、例えば、前記第１核酸分子が、アプタマーである。
【００２６】
本発明の分析キットにおいて、例えば、前記標識物質が、酵素、核酸、蛍光物質、色素物質、発光物質、放射性物質、および電子供与体からなる群から選択された少なくとも１つの物質である。
【００２７】
本発明の分析キットにおいて、例えば、前記第１試薬が、酵素と、前記酵素に対する基質とを含み、前記標識化第１核酸分子における前記標識物質が前記酵素である。
【００２８】
本発明の分析キットにおいて、例えば、前記分析容器は、前記溶媒室を有し、前記溶媒室および前記反応室が、上方向からこの順序で連続して配置され、前記溶媒室の上部開口に、前記試料採取用具の採取部の先端によって破断可能な溶媒室用隔壁を有し、前記反応室の上部開口であって、前記溶媒室との間に、前記反応室用隔壁を有し、前記試料採取部の先端で前記溶媒室用隔壁を破断することにより、前記溶媒室内の溶媒を、前記反応室に導入する。
【００２９】
本発明の分析キットにおいて、例えば、前記試料採取用具は、前記溶媒室を有し、前記軸部は、中空であり、一端側が、前記採取部に連結され、開口しており、他端側が、前記溶媒室に連結され、開口可能に閉口しており、外部からの力で、前記溶媒室の内部において前記軸部の他端を開口することにより、前記溶媒室内の溶媒を、前記軸部の中空を介して、前記採取部に通液させる。
【００３０】
本発明の分析キットにおいて、例えば、前記軸部の他端側は、前記溶媒室の内部に位置し、前記軸部は、折りによって、前記他端の閉口を開口可能であり、外部からの力で、前記溶媒室の内部において、前記軸部の他端側を折ることにより、前記閉口を開口させる。
【００３１】
本発明の分析キットにおいて、例えば、前記溶媒室は、さらに、蓋部を有し、前記溶媒室の内部において、前記軸部の他端の開口を塞ぐように、前記蓋部が配置されており、外部からの力で、前記溶媒室の内部において、前記軸部の他端から前記蓋部を移動させることにより、前記閉口を開口させる。
【００３２】
本発明において、例えば、「上下方向」とは、前記分析容器に対して、前記試料採取用具の採取用具を収容する方向の平行方向を意味し、「上方向」とは、前記分析容器に前記試料採取用具がセットされた状態における、前記試料採取用具側の方向であり、「下方向」とは、前記分析容器に前記試料採取用具がセットされた状態における、前記分析容器側の方向で
【００３３】
＜ターゲット分析キットおよびターゲット分析方法＞
本発明のターゲット分析キットは、前述のように、
試料採取用具および分析容器を含み、
前記試料採取用具は、
軸部および採取部を有し、
前記軸部の一端側に前記採取部が連結され、
前記分析容器は、
反応室を含み、
前記反応室の上部開口に、前記試料採取用具の採取部の先端によって破断可能な反応室用隔壁を有し、
前記分析容器の内部に、前記試料採取用具の前記採取部を収容可能であり、
前記試料採取用具または前記分析容器は、
溶媒が収容された溶媒室を有し、
前記溶媒室または前記反応室は、
第１試薬を有し、
前記第１試薬は、ターゲットに結合する第１核酸分子が標識物質で標識化された標識化第１核酸分子を含み、
前記溶媒室または前記反応室は、
第２試薬を有し、
前記第２試薬は、担体と、前記第１核酸分子に配列依存的に結合する第２核酸分子または前記ターゲットと同じ試薬物質とを含み、
前記第２核酸分子は、前記担体に固定化された固定化第２核酸分子であり、
前記試薬物質は、前記担体に固定化された固定化試薬物質であり、
前記担体は、自発的または強制的に、溶媒の上方に位置または移動可能である
ことを特徴とする。
【００３４】
また、本発明のターゲット分析方法は、前述のように、
本発明のターゲット分析キットを使用し、
前記試料採取用具の試料が付着した前記採取部を、前記分析容器の前記反応室に挿入する挿入工程と、
前記反応室に、前記溶媒室の溶媒を導入する導入工程と、
前記反応室における反応を検出する検出工程とを有し、
前記検出工程において、
前記反応室に導入された溶媒中で、前記反応室の第１試薬と、前記採取部の第２試薬と、前記採取部に付着したターゲットとを接触させ、前記ターゲットに結合した前記第１試薬における前記標識物質を検出することを特徴とする。
【００３５】
本発明において、前記第２核酸分子または前記試薬物質が固定化される前記担体は、前述のように、自発的または強制的に、溶媒の上方に位置する、または上方に移動可能であればよい。「自発的に、溶媒の上方に位置または移動可能」とは、前記担体が、前記担体自体の性質によって自発的に、位置すること、または移動することを意味し、例えば、前記溶媒に前記担体を投入した場合、前記溶媒に対して前記担体が沈降するのではなく、前記溶媒の液面側に浮遊することを意味する。また、「強制的に、溶媒の上方に位置または移動可能」とは、前記担体が、前記担体自体の性質によって自発的に位置する、または移動するのではなく、他の物質の力によって、強制的に位置すること、または移動することを意味し、例えば、前記他の物質の磁気によって、強制的に、前記溶媒の液面側に移動することを意味する。本発明においては、前者の形態を、第１のターゲット分析キット、およびそれを用いる第１のターゲット分析方法といい、後者の形態を、第２のターゲット分析キット、およびそれを用いる第２のターゲット分析方法という。
【００３６】
本発明において、前記ターゲットの種類は、何ら制限されない。そして、前記第１核酸分子は、前記ターゲットに結合できればよく、前記第２核酸分子および前記試薬物質は、前記第１核酸分子に結合できればよい。具体的に、前記第２核酸分子は、前記第１核酸分子に配列依存的に結合できればよい。このため、本発明において、前記第１核酸分子、および前記第２核酸分子または前記試薬物質は、例えば、目的とするターゲットに応じて適宜決定できる。具体的には、例えば、前記ターゲットの種類に応じて、前記ターゲットに結合する核酸分子を前記第１核酸分子として選択でき、選択された前記第１核酸分子の塩基配列に応じて、それに配列依存的に結合する核酸分子を前記第２核酸分子として選択できる。また、前記目的とするターゲットに応じて、同じ物質を前記試薬物質として選択できる。
【００３７】
前記第１核酸分子は、例えば、アプタマーである。前記アプタマーは、例えば、ＤＮＡアプタマーでもよいし、ＲＮＡアプタマーでもよいし、ＤＮＡとＲＮＡとを含むキメラアプタマーでもよい。また、前記アプタマーは、天然核酸からなるアプタマーでもよいし、非天然核酸からなるアプタマーでもよいし、前記天然核酸および前記非天然核酸を含むアプタマーでもよい。また、前記アプタマーは、例えば、修飾アプタマーでもよい。前記アプタマーは、例えば、一本鎖である。
【００３８】
前記第２核酸分子は、前述のように、前記第１核酸分子に、配列依存的に結合できればよい。前記第２核酸分子は、例えば、前記第１核酸分子の全体に相補的でもよいし、前記第１核酸分子の部分領域に相補的でもよく、例えば、相補性核酸分子ともいう。前記第１核酸分子に相補的とは、例えば、前記第１核酸分子またはその部分配列にハイブリダイズ可能な程度の相補性を有していればよく、相補性の程度は、制限されない。前記相補性は、前記第２核酸分子の全長を１００％とした場合、前記第１核酸分子に対する相補性は、例えば、１００％、５０％以上、２０％以上である。また、前記相補性は、前記第１核酸分子の全長を１００％とした場合、例えば、１００％、５０％以上、５％以上である。前記第２核酸分子は、例えば、前記ターゲットには非結合であることが好ましい。
【００３９】
前記第１核酸分子は、前述のように、前記標識物質で標識化されている。前記標識物質は、例えば、酵素、核酸、蛍光物質、色素物質、発光物質、放射性物質、および電子供与体等があげられる。前記核酸は、例えば、触媒機能を示す触媒核酸分子があげられ、前記触媒機能は、例えば、酸化還元機能であり、前記核酸の具体例として、例えば、ＤＮＡｚｙｍｅ、ＲＮＡｚｙｍｅ等があげられる。前記酵素は、例えば、ルシフェラーゼ、ホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）等のペルオキシダーゼ、アルカリフォスファターゼ等があげられる。前記第１核酸分子の標識化は、特に制限されず、例えば、前記第１核酸分子において、３’側末端、５’側末端または内部のいずれの部位が標識化されてもよく、好ましくは、いずれかの末端である。
【００４０】
本発明に供する試料は、特に制限されず、例えば、食品由来試料、環境試料等があげられる。前記食品由来試料は、例えば、食品、食品原料、食品添加物等があげられる。また、前記環境試料としては、例えば、食品加工場または調理場等における付着物、洗浄後の洗浄液等があげられる。前記試料の形態は、特に制限されず、例えば、液体試料でもよいし、固体試料でもよい。前記固体試料の場合、例えば、溶媒を用いて、混合液、抽出液、溶解液等を調製し、これを前記試料として使用してもよい。前記溶媒は、特に制限されず、例えば、水、生理食塩水、緩衝液等があげられる。前記試料は、例えば、前記ターゲットを含む試料でもよいし、前記ターゲットを含まない試料でもよいし、前記ターゲットを含むか不明の試料であってもよい。
【００４１】
以下、本発明の分析キットおよび分析方法について、図面を参照して、例をあげて詳細に説明する。ただし、本発明は、以下の例に限定および制限されない。また、図面においては、説明の便宜上、各部の構造は適宜簡略化して示す場合があり、各部の寸法比等は、実際とは異なり、模式的に示す場合がある。
【００４２】
本発明の分析キットは、前述のように、前記第２核酸分子または前記試薬物質が固定化される担体として、自発的に、溶媒の上方に位置または移動可能な担体を使用する第１の分析キットと、強制的に、溶媒の上方に位置または移動可能な担体を使用する第２の分析キットがある。そこで、前記第１の分析キットとして、前記担体が、前記溶媒に対して浮遊する担体（以下、「浮遊担体」ともいう）である例を、実施形態１Ａ〜１Ｄに示し、前記第２の分析キットとして、前記担体が、磁性ビーズである例を、実施形態２Ａ〜２Ｂに示す。
【００４３】
（実施形態１Ａ）
本実施形態の第１の分析キットとして、前記浮遊担体が多孔質体であり、前記分析容器が前記溶媒室を有する形態の一例を図１に示す。図１は、本実施形態の分析キット１を構成する試料採取用具１０および分析容器１１の概略を示す断面図である。
【００４４】
試料採取用具１０は、採取部１０２と軸部１０３とを有し、軸部１０３の一端に採取部１０２が連結されている。試料採取用具１０は、さらに、把持部１０１を有してもよく、把持部１０１は、軸部１０３の他端に連結されている。
【００４５】
採取部１０２は、前記試料を採取し保持する部分であり、例えば、「ワイプ部」ともいう。採取部１０２は、採取した前記試料を保持できればよく、その種類は、特に制限されない。採取部１０２の形状は、特に制限されず、球状、さじ状、リング状等の試料を採取しやすい構造があげられる。採取部１０２の形成材料は、特に制限されず、例えば、綿、合成繊維等の繊維質、発泡ウレタン等の合成樹脂、またはこれらの組合せの材質等があげられる。採取部１０２は、例えば、樹脂製の多孔質体等も使用できる。
【００４６】
軸部１０３は、例えば、棒状であり、樹脂製である。前記樹脂は、特に制限されず、例えば、ポリエチレン、ポリスチレン、ポリプロピレン、アクリロニトリル−ブタジエン−スチレン共重合合成樹脂等のプラスチック等があげられる。
【００４７】
把持部１０１は、例えば、試料採取用具１０を取り扱う際に、使用者が把持する部分である。把持部１０１は、例えば、後述する分析容器１１に試料採取用具１０の採取部１０２を収容した際、分析容器１１に対する蓋部を兼ねることが好ましい。把持部１０１は、特に制限されず、例えば、樹脂製であり、前述と同様の樹脂が例示できる。
【００４８】
分析容器１１は、例えば、中空の有底筒状の本体１１０を有し、本体１１０が、溶媒室１１１および反応室１１２を含み、溶媒室１１１および反応室１１２が、上方向からこの順序で連続して配置されている。本体１１０は、さらに、溶媒室１１１の上方向に、前室１１５を有してもよい。分析容器１１は、溶媒室１１１の上部開口、すなわち、前室１１５と溶媒室１１１との間に、溶媒室用隔壁１１３を有し、溶媒室１１１と反応室１１２との間に、反応室用隔壁１１４を有する。溶媒室用隔壁１１３と反応室用隔壁１１４は、それぞれ、試料採取用具１０の採取部１０２の先端によって破断可能な隔壁である。
【００４９】
溶媒室１１１には、溶媒１６が収容されることから、溶媒室１１１と反応室１１２との間の反応室用隔壁１１４は、例えば、溶媒室１１１の溶媒１６が、反応室１１２に向かって自然透過しない隔壁であることが好ましい。また、溶媒室１１１の上方向の溶媒室用隔壁１１３も、例えば、未使用時の分析容器１１を傾けたり、逆さまにした状態でも、溶媒室１１１の溶媒１６が、前室１１５に向かって自然透過しない隔壁であることが好ましい。
【００５０】
溶媒室１１１は、溶媒１６が収容される。溶媒１６の種類は、特に制限されず、分析キット１に供する試料の種類等によって、適宜選択できる。溶媒１６は、特に制限されず、例えば、水、生理食塩水、緩衝液等の水性溶媒があげられる。
【００５１】
反応室１１２は、第１試薬および第２試薬を有する。まず、前記第１試薬は、ターゲットに結合する第１核酸分子１４１が標識物質１４２で標識化された標識化第１核酸分子１４を含む。前記第１試薬は、例えば、標識化第１核酸分子１４における標識物質１４２の種類に応じて、さらに、試薬成分１５を含んでもよい。標識物質１４２が、例えば、酵素または触媒機能を示す触媒核酸分子である場合、試薬成分１５は、例えば、それらの触媒機能に対応する基質があげられる。前記基質としては、例えば、ＡＴＰとルシフェリンとの組み合わせ、ルミノール反応液等があげられる。前記第１試薬は、例えば、液体でもよいし、粉末等の乾燥体でもよい。
【００５２】
前記第２試薬は、前述のように、担体である多孔質体１８と、前記第１核酸分子に配列依存的に結合する第２核酸分子１３とを含む。第２核酸分子１３は、多孔質体１８に固定化されており、固定化第２核酸分子１３ともいう。多孔質体１８への第２核酸分子１３の固定化方法は、特に制限されず、例えば、架橋剤により固定化できる。後述するように、第２核酸分子１３を試料と接触させる際、例えば、接触しやすさの点から、多孔質体１８の露出表面に第２核酸分子１３を固定化することが好ましい。前記第２核酸分子は、例えば、３’側末端で固定化されてもよいし、５’側末端で固定化されてもよい。
【００５３】
多孔質体１８は、静置状態において、溶媒１６に浮遊する部材であればよい。多孔質体１８の材質は、特に制限されず、例えば、前記溶媒と比較して比重が軽い材質が好ましい。前記材質は、具体例として、シリカ、樹脂、ゴム等があげられ、前記樹脂としては、例えば、ポリエチレン（PE）、ポリプロピレン（PP）、およびエチレン酢酸ビニルコポリマー（EVA）等があげられる。前記ゴムは、例えば、天然ゴム、合成ゴム等があげられる。多孔質体１８は、溶媒１６に浮遊できればよく、例えば、大きさ、孔径、孔径分布等は、特に制限されない。
【００５４】
標識化第１核酸分子１４と固定化第２核酸分子１３の量は、特に制限されず、例えば、分析キット１で処理する試料の量、分析容器１１における反応室１１２の大きさ、溶媒室１１１に収容する溶媒１６の量等に応じて適宜決定できる。標識化第１核酸分子１４（Ｘ）と固定化第２核酸分子１３（Ｙ）の量の比（Ｘ：Ｙ）は、特に制限されない。固定化第２核酸分子１３の量は、特に制限されず、例えば、多孔質体１８の表面積１ｍｍ２あたり、例えば、０．１ｆｍｏｌ〜１００ｐｍｏｌ、１ｆｍｏｌ〜１０ｐｍｏｌ、１０ｆｍｏｌ〜１ｐｍｏｌである。
【００５５】
つぎに、図２および図３を用いて、分析キット１を使用した分析方法を説明する。図２は、分析キット１の使用順序に沿った状態の概略を示す断面図である。
【００５６】
試料採取用具１０を用いて、先端の採取部１０２により試料を採取する。試料は、例えば、採取部１０２を対象物に当て、その表面を撫でつけることで採取できる。前記対象物が、例えば、乾燥状態である場合は、前記対象物に溶媒で濡らしたり、採取部１０２を溶媒で濡らしてから、前記表面を撫でつけて、採取してもよい。前記溶媒は、特に制限されず、例えば、水、生理食塩水、緩衝液等があげられる。
【００５７】
そして、図２（Ａ）に示すように、分析容器１１の上方向から内部の前室１１５に向かって、試料採取用具１０の先端の採取部１０２を挿入していく。試料採取用具１０の採取部１０２の先端が、分析容器１１の溶媒室用隔壁１１３に接触したら、そのまま、前記先端を下方向に押し当てて、図２（Ｂ）に示すように、前記先端により溶媒室用隔壁１１３を破断し、採取部１０２を、分析容器１１の溶媒室１１１に挿入する。
【００５８】
つぎに、試料採取用具１０の採取部１０２の先端を、分析容器１１の反応室用隔壁１１４に接触させ、そのまま、前記先端を下方向に押し当てて、図２（Ｃ）に示すように、前記先端により反応室用隔壁１１４を破断し、採取部１０２を、分析容器１１の反応室１１２に挿入する。反応室用隔壁１１４の破断によって、溶媒室１１１に収容されていた溶媒１６は、溶媒室１１１から反応室１１２に導出される。
【００５９】
そして、反応室１１２において、前記試料中のターゲット１７と各試薬とを反応させる。前記反応について、図３を用いて説明する。図３は、分析キット１における反応を示す概略図であり、前記図２（Ｃ）における、分析容器１１の反応室１１２の状態を部分的に示す断面図である。
【００６０】
前述のように、試料採取用具１０の採取部１０２が、溶媒室１１１に挿入されることで、採取部１０２に保持された試料と、溶媒室１１１中の溶媒１６とが接触し、溶媒１６中に前記試料が拡散する。そして、試料採取用具１０の採取部１０２が、さらに反応室１１２に挿入されることで、前記試料が拡散された溶媒１６が、反応室１１１に導出される。この状態において、図３（Ａ）に示すように、試料採取用具１０がセットされた分析容器１１を、矢印方向に振り、反応室１１２において、前記試料が拡散された溶媒１６、標識化第１核酸分子１４、固定化第２核酸分子１３が固定化された多孔質体１８、および基質１５を接触させる。これによって、図３（Ｂ）に示すように、標識化第１核酸分子１４と前記試料中のターゲット１７との結合反応、標識化第１核酸分子１４と多孔質体１８に固定化された固定化第２核酸分子１３との結合反応が起こる。そして、図３（Ｃ）に示すように、反応室１１２の溶媒１６中における反応、例えば、標識物質である酵素１４２と基質１５との発色反応を測定する。前記試料中にターゲット１７が存在しなければ、標識化第１核酸分子１４は、固定化第２核酸分子１３に結合し、前記試料中にターゲット１７が存在すると、標識化第１核酸分子１４は、ターゲット１７および固定化第２核酸分子１３の量に依存して、ターゲット１７および固定化第２核酸分子１３に結合する。このため、反応室１１２の溶媒１６中の前記反応を測定すれば、ターゲット１７に結合した標識化第１核酸分子１４の標識物質１４２の前記反応を検出できるため、間接的に、ターゲット１７を検出することができる。
【００６１】
前記反応の条件は、特に制限されず、温度が、例えば、４〜３７℃、時間が、例えば、１０秒〜３０分である。
【００６２】
分析容器１１の反応室１１２において、固定化第２核酸分子１３が固定化された多孔質体１８は、溶媒１６の液面に浮遊した状態である。このため、分析容器１１の反応室１１２に溶媒１６が導入された静置状態において、例えば、溶媒１６について、その液面よりも下方向の領域、具体的には、多孔質体１８よりも離れた領域において、反応を測定することが好ましい。これによって、多孔質体１８の固定化第２核酸分子１３に結合した標識化第１核酸分子の標識物質の測定を抑制できる。また、例えば、測定前に、分析容器１１の反応室１１２から、多孔質体１８を抜き取ってから、反応室１１２の反応を測定してもよい。
【００６３】
分析キット１の大きさは、特に制限されない。以下に例示するが、一例であって、本発明は、これらの例示には制限されない。
【００６４】
分析容器１１において、本体１１０の上下方向の長さは、例えば、１５ｃｍであり、本体１１０の開口の大きさは、例えば、直径が１ｃｍである。分析容器１１において、溶媒室１１１の大きさは、例えば、容量が０．６ｍｌ、高さが２ｃｍであり、収容される溶媒１６の量は、例えば、０．４ｍｌである。反応室１１２の大きさは、例えば、容量が１．３ｍｌ、高さが３．５ｃｍであり、溶媒室１１１から溶媒１６が導入された状態において、溶媒１６の液面より上の空間の高さが、例えば、１．３ｃｍである。試料採取用具１０において、採取部１０２の大きさは、例えば、長さが１．５ｃｍ、軸部１０３の大きさは、例えば、長さが３．５ｃｍである。
【００６５】
本発明は、例えば、実施形態１Ａには制限されず、例えば、以下のような点を改変することもできる。なお、他の実施形態においても、同様である。
【００６６】
前記第２試薬は、反応室１１２に配置したが、これには制限されず、例えば、溶媒室１１１に配置してもよい。
【００６７】
また、前記第２試薬において、前記第１核酸分子に結合させる成分は、例えば、前記第２核酸分子には限られず、ターゲットと同じ物質（試薬物質）でもよい。つまり、固定化第２核酸分子１３には限られず、例えば、前記試薬物質が前記担体に固定化された固定化試薬物質でもよい。前記固定化試薬物質であれば、固定化第２核酸分子１３と同様に、前記第１核酸分子に結合することができる。前記ターゲットと同じである試薬物質の固定化方法は、特に制限されず、例えば、前記試薬物質の種類に応じて、適宜設定できる。
【００６８】
前記浮遊担体は、前述のように、前記溶媒に対して浮遊する担体であればよく、多孔質体１８には限定されない。前記浮遊担体は、例えば、空洞を有する担体であり、具体例として、前記多孔質体の他に、中空構造体が例示できる。前記空洞を有する担体の材質は、特に制限されず、例えば、前述の多孔質体と同様の材質が例示できる。
【００６９】
また、前記浮遊担体は、前記空洞を有する担体の他に、例えば、前記溶媒と比較して比重が軽い材質の担体があげられる。この場合、前記担体は、例えば、空洞を有さない担体、具体的には、例えば、非中空構造体または非多孔質体でもよい。前記材質は、例えば、樹脂またはゴム等があげられる。前記樹脂としては、例えば、ポリエチレン（PE）、ポリプロピレン（PP）、およびエチレン酢酸ビニルコポリマー（EVA）等があげられる。前記ゴムは、例えば、天然ゴム、合成ゴム等があげられる。
【００７０】
（実施形態１Ｂ）
本実施形態の第１の分析キットとして、前記浮遊担体が前記溶媒担体、具体的にはオイルであり、前記分析容器が前記溶媒室を有する形態の一例を図４および図５に示す。図４は、本実施形態の分析キット４を構成する試料採取用具１０および分析容器４１の概略を示す断面図であり、図５は、分析キット４の使用順序に沿った状態の概略を示す断面図である。なお、本実施形態は、前記浮遊担体がオイルである以外は、前記実施形態１Ａと同様である。
【００７１】
溶媒室１１１は、溶媒１６および前記第２試薬が収容される。前記第２試薬は、前述のように、前記担体であるオイルと、前記第１核酸分子に配列依存的に結合する第２核酸分子４３１とを含む。前記オイルは、溶媒１６上で、オイル層４８を形成している。前記オイルは、特に制限されず、例えば、ミネラルオイル、シリコーンオイル、植物油等があげられる。
【００７２】
第２核酸分子４３１には、前記付加分子として疎水性分子４３２が結合している。第２核酸分子４３１は、例えば、３’側末端に疎水性分子４３２が結合してもよいし、５’側末端に疎水性分子４３２が結合してもよい。疎水性分子４３２は、例えば、疎水性基（親油性基ともいう）を有する分子であればよい。前記疎水性基は、例えば、アルキル基、フェニル基等があげられ、疎水性分子４３２は、例えば、脂質分子等があげられる。
【００７３】
第２核酸分子４３１は、疎水性分子４３２を介して、オイル層４８に固定化されており、固定化第２核酸分子４３ともいう。なお、本実施形態において、オイル層４８のオイルに第２核酸分子４３１が固定化されているとは、例えば、疎水性分子４３２とオイルとの親和性により、疎水性分子４３２とオイルとが親和状態にあることを意味する。溶媒１６の上にオイル層４８が形成されている状態において、固定化第２核酸分子４３のうち、疎水性分子４３２がオイル層４８中に位置し、第２核酸分子４３１が溶媒１６中に位置することになる。
【００７４】
つぎに、分析キット４を使用した分析方法を説明する。なお、本実施形態の分析キット４において、試料採取用具１０は、前記実施形態１における図１の試料採取用具１０と同様である。
【００７５】
分析容器４１の上方向から内部の前室１１５に向かって、試料採取用具１０の先端の採取部１０２を挿入していく。試料採取用具１０の採取部１０２の先端が、分析容器４１の溶媒室用隔壁１１３に接触したら、そのまま、前記先端を下方向に押し当てて、前記先端により溶媒室用隔壁１１３を破断し、採取部１０２を、分析容器４１の溶媒室１１１に挿入する。
【００７６】
つぎに、試料採取用具１０の採取部１０２の先端を、分析容器４１の反応室用隔壁１１４に接触させ、そのまま、前記先端を下方向に押し当てて、前記先端により反応室用隔壁１１４を破断し、採取部１０２を、分析容器４１の反応室１１２に挿入する。反応室用隔壁１１４の破断によって、溶媒室１１１に収容されていた溶媒１６、オイル層４８、および固定化第２核酸分子４３は、溶媒室１１１から反応室１１２に導出される。
【００７７】
そして、反応室１１２において、前記試料中のターゲットと各試薬とを反応させる。前記反応について、図５を用いて説明する。図５は、本実施形態の分析キット４における反応を示す概略図であり、前記図３と同様に、分析容器４１の反応室１１２の状態を部分的に示す断面図である。
【００７８】
前述のように、試料採取用具１０の採取部１０２が、溶媒室１１１に挿入されることで、採取部１０２に保持された試料と、溶媒室１１１中の溶媒１６とが接触し、溶媒１６中に前記試料が拡散する。そして、試料採取用具１０の採取部１０２が、さらに反応室１１２に挿入されることで、前記試料が拡散された溶媒１６、固定化第２核酸分子４３およびオイル層４８が、反応室１１１に導出される。この状態において、図５（Ａ）に示すように、試料採取用具１０がセットされた分析容器４１を、矢印方向に振り、溶媒１６、オイル層４８、標識化第１核酸分子１４、固定化第２核酸分子４３、および基質１５を接触させる。これによって、図５（Ｂ）に示すように、標識化第１核酸分子１４と前記試料中のターゲット１７との結合反応、標識化第１核酸分子１４と固定化第２核酸分子４３との結合反応が起こる。そして、図５（Ｃ）に示すように、反応室１１２の溶媒１６中における反応、例えば、標識物質である酵素１４２と基質１５との発色反応を測定する。前記試料中にターゲット１７が存在しなければ、標識化第１核酸分子１４は、固定化第２核酸分子４３に結合し、前記試料中にターゲット１７が存在すると、標識化第１核酸分子１４は、ターゲット１７および固定化第２核酸分子４３の量に依存して、ターゲット１７および固定化第２核酸分子４３に結合する。そして、この固定化第２核酸分子４３は、疎水性分子４３２とオイルとの親和性によって、溶媒１６の上に浮遊するオイル層４８に固定化されている。このため、反応室１１２の溶媒１６中の前記反応を測定すれば、ターゲット１７に結合した標識化第１核酸分子１４の標識物質１４２の前記反応を検出できるため、間接的に、ターゲット１７を検出することができる。
【００７９】
分析容器４１の反応室１１２において、固定化第２核酸分子４３が固定化されたオイル層４８は、溶媒１６の液面に浮遊した状態である。このため、分析容器４１の反応室１１２に溶媒１６が導入された静置状態において、例えば、溶媒１６について、その液面よりも下方向の領域（溶媒１６とオイル層４８との界面よりも下方向の領域）、具体的には、オイル層４８よりも離れた領域において、反応を測定することが好ましい。これによって、オイル層４８の固定化第２核酸分子４３に結合した標識化第１核酸分子１４の標識物質１４２の測定を抑制できる。
【００８０】
本発明は、例えば、実施形態１Bには制限されず、例えば、以下のような点を改変することもできる。なお、他の実施形態においても、同様である。前記溶媒担体は、オイルには制限されず、例えば、前記溶媒と分離するものが使用できる。
【００８１】
第２核酸分子４３１は、例えば、使用前において、予め、溶媒室１１１の溶媒１６およびオイル層４８と共存させてもよいし、溶媒１６とは別に、反応室１１２に収容させてもよい。前者の場合、第２核酸分子４３１は、溶媒室１１１において、第２核酸分子４３１に結合した疎水性分子４３２とオイルとの親和性によって、溶媒１６と分離したオイル層４８に固定化されている。後者の場合、使用時において、反応室１１２に、溶媒１６とオイル層４８とが導入されると、溶媒１６とオイル層４８は分離された二層となり、反応室１１２の第２核酸分子４３１は、第２核酸分子４３１に結合した疎水性分子４３２とオイルとの親和性によって、オイル層４８に固定化される。このように、本発明において、第２核酸分子４３１は、使用前から、前記溶媒担体に固定化されてもよいし、使用時において、前記溶媒担体に固定化されてもよい。
【００８２】
（実施形態１Ｃ）              
本実施形態の第１の分析キットとして、前記実施形態１Ａと同様に、前記浮遊担体が多孔質体であるが、前記試料採取用具が前記溶媒室を有する形態の一例を示す。具体的には、前記試料採取用具が前記溶媒室を有し、且つ、前記試料採取用具の軸部が、折りによって、開口可能な形態の一例を図６および図７に示す。図６は、本実施形態の分析キット２を構成する試料採取用具２０および分析容器２１の概略を示す断面図であり、図７は、分析キット２の使用順序に沿った状態の概略を示す断面図である。なお、本実施形態は、前記試料採取用具が前記溶媒室を有する以外は、前記実施形態１Ａと同様である。
【００８３】
試料採取用具２０は、採取部１０２と軸部２０３と溶媒室２０１とを有し、軸部２０３の一端側に、採取部１０２が連結されており、軸部２０３の他端側に、溶媒室２０１が連結されている。
【００８４】
軸部２０３は、中空の筒状体である。軸部２０３の一端、すなわち、採取部１０２と連結する端部は、開口している。軸２０３の他端、すなわち、溶媒室２０１と連結する端部は、開口可能に閉口した状態で、溶媒室２０１と連結している。本実施形態において、軸部２０３の他端は、閉口しているが、他端領域２０３Ａ（以下、「取り外し領域」ともいう）を折って取り外すことにより、新たな端部は、前記一端の開口と連通する開口とすることができる。軸部２０３の形成材料は、特に制限されず、例えば、前述のプラスチック等があげられる。軸部２０３の他端の閉口は、特に制限されず、例えば、樹脂での封止等により行うことができる。
【００８５】
軸部２０３の他端は、溶媒室２０１の内部に位置している。具体的には、溶媒室２０１に溶媒１６が収容されている状態において、軸部２０３から取り外し領域２０３Ａを折って取り外した際に、前記新たな端部が、溶媒１６中に位置するように、軸部２０３が配置されていることが好ましい。溶媒室２０１内の溶媒１６は、前記新たな端部から、軸部２０３の中空を介して、採取部１０２に通液するため、溶媒１６を効率よく通液するために、例えば、軸部２０３は、取り外し領域２０３Ａを折ることができ、且つ、前記新たな端部が、溶媒室２０１の底面付近に位置するように、配置されることが好ましい。
【００８６】
溶媒室２０１は、溶媒１６を収容でき、また、外部からの力で、溶媒室２０１内部において、軸部２０３の取り外し領域２０３Ａを折ることができればよい。溶媒室２０１の材質は、特に制限されず、例えば、樹脂製である。前記樹脂は、特に制限されず、例えば、ポリエチレン、ポリスチレン、ポリプロピレン、アクリロニトリル−ブタジエン−スチレン共重合合成樹脂等のプラスチック等があげられる。溶媒室２０１は、例えば、前記把持部を兼ねてもよい。
【００８７】
採取部１０２は、軸部２０３の開口する一端と連結している。軸部２０３の中空を溶媒１６が通液して、採取部１０２に到達すると、溶媒１６は、採取部１０２から外部に導出される。このため、採取部１０２の形成材料は、例えば、溶媒１６が、採取部１０２の外部に移動可能な素材が好ましい。
【００８８】
分析容器２１は、前記溶媒室を有さない以外、例えば、前記実施形態１Ａにおける分析容器１１と同様である。
【００８９】
つぎに、図７を用いて、分析キット２を使用した分析方法を説明する。なお、本実施形態の分析キット２は、試料採取用具２０が溶媒室２０１を有する以外は、前記実施形態１Ａと同様である。このため、以下、溶媒室２０１から反応室１１２への溶媒１６の流れについて説明するが、その他は、前記実施形態１の記載を援用できる。
【００９０】
図７（Ａ）に示すように、分析容器２１の上方向から内部の前室１１５に向かって、試料採取用具２０の先端の採取部１０２を挿入していく。図７（Ｂ）に示すように、試料採取用具２０の採取部１０２の先端が、分析容器２１の反応室用隔壁１１４に接触したら、そのまま、前記先端を下方向に押し当てて、前記先端により反応室用隔壁１１４を破断し、採取部１０２を、分析容器２１の反応室１１２に挿入する。これにより、分析容器２１に試料採取用具２０がセットされる。
【００９１】
そして、図７（Ｃ）に示すように、試料採取用具２０について、溶媒室２０１の外部から力をかけて、溶媒室２０１の内部において、軸部２０３の取り外し領域２０３Ａを折って取り外す。軸部２０３の新たな端部２０３Ｂは、開口しており、新たな端部２０３Ｂは、溶媒室２０１の溶媒１６中に位置することから、新たな端部２０３Ｂに溶媒１６が導入され、溶媒１６は、軸部２０３の中空を介して、採取部１０２に通液される。
【００９２】
軸部２０３の中空から採取部１０２に通液された溶媒１６は、採取部１０２から、反応室１１２に導出される。溶媒１６が、採取部１０２から反応室１１２に導出されることによって、採取部１０２に保持された試料が、溶媒１６と接触し、反応室１１２中に溜まる溶媒１６中に、前記試料が拡散する。そして、試料採取用具２０をセットした分析容器２１を振り、反応室１１２において、前記試料が拡散された溶媒１６、標識化第１核酸分子１４、固定化第２核酸分子１３が固定化された多孔質体１８、および基質１５を接触させ、反応を行う。反応後、反応室１１２の溶媒１６中の前記反応を測定すれば、ターゲット１７に結合した標識化第１核酸分子１４の標識物質１４２の前記反応を検出できるため、間接的に、ターゲット１７を検出できる。
【００９３】
なお、本実施形態において、前記浮遊担体が前記多孔質体である例を示したが、前記実施形態１Ｂのオイルでもよく、本実施形態の記載は、前記実施形態１Ｂの分析キット４にも適用できる。この場合、試料採取用具２０の溶媒室２０１が、溶媒１６と、第２核酸分子４３１が疎水性分子４３２を介して固定化されたオイル層４８とを有することが好ましい。
【００９４】
本実施形態では、前記第１試薬を反応室１１２に配置した例を示したが、これには制限されず、例えば、溶媒室２０１に配置してもよい。
【００９５】
（実施形態１Ｄ）
本実施形態の第１の分析キットとして、前記実施形態１Ａと同様に、前記浮遊担体が多孔質体であるが、前記試料採取用具が前記溶媒室を有する形態の一例を示す。具体的には、前記試料採取用具が前記溶媒室を有し、且つ、前記溶媒室において、前記軸部の開口を塞ぐように、前記蓋部が配置されている形態の一例を図８および図９に示す。図８は、本実施形態の分析キット３を構成する試料採取用具３０および分析容器２１の概略を示す断面図であり、図９は、分析キット３の使用順序に沿った状態の概略を示す断面図である。なお、本実施形態は、前記試料採取用具が前記溶媒室を有する以外は、前記実施形態１Ａと同様である。
【００９６】
試料採取用具３０は、採取部１０２と軸部３０３と溶媒室２０１とを有し、軸部３０３の一端側に、採取部１０２が連結されており、軸部３０３の他端側に、溶媒室２０１が連結されている。溶媒室２０１は、さらに、蓋部３０４を有する。
【００９７】
軸部３０３は、採取部１０２と連結する一端と、溶媒室２０１と連結する他端は、それぞれ、開口している。溶媒室２０１の内部において、軸部３０３の他端の開口は、蓋部３０４により、閉塞されている。蓋部３０４の形状は、特に制限されず、溶媒室２０１において、軸部３０３の他端から支持部１０２への溶媒１６の通液を防止できる形状であればよい。蓋部３０４の形成材料は、特に制限されず、例えば、前述のプラスチック等があげられる。蓋部３０４の大きさは、特に制限されない。また、試料採取用具３０は、例えば、溶媒室２０１の外部からの力によって移動した蓋部３０４が、再度、溶媒室２０１の開口を覆わないように、蓋部３０４を固定する固定部材を含んでもよい。
【００９８】
つぎに、図９を用いて、分析キット３を使用した分析方法を説明する。なお、本実施形態の分析キット３は、軸部３０３の開口が蓋部３０４によって塞がれている以外は、前記実施形態１Ａおよび１Ｃと同様である。このため、以下、溶媒室２０１から反応室１１２への溶媒１６の流れについて説明するが、その他は、前記実施形態１Ａおよび１Ｃの記載を援用できる。
【００９９】
図９（Ａ）に示すように、分析容器２１の上方向から内部の前室１１５に向かって、試料採取用具３０の先端の採取部１０２を挿入していく。図９（Ｂ）に示すように、試料採取用具３０の採取部１０２の先端が、分析容器２１の反応室用隔壁１１４に接触したら、そのまま、前記先端を下方向に押し当てて、前記先端により反応室用隔壁１１４を破断し、採取部１０２を、分析容器２１の反応室１１２に挿入する。これにより、分析容器２１に試料採取用具３０がセットされる。
【０１００】
そして、図９（Ｃ）に示すように、試料採取用具３０について、溶媒室２０１の外部から力をかけて、溶媒室２０１の内部において、蓋部３０４を動かして、軸部３０３を開口させる。軸部３０３の開口した端部に、溶媒１６が導入され、溶媒１６は、軸部３０３の中空を介して、採取部１０２に通液される。
【０１０１】
軸部３０３の中空から採取部１０２に通液された溶媒１６は、採取部１０２から、反応室１１２に導出される。溶媒１６が、採取部１０２から反応室１１２に導出されることによって、採取部１０２に保持された試料が、溶媒１６と接触し、反応室１１２中に溜まる溶媒１６中に、前記試料が拡散する。そして、試料採取用具３０をセットした分析容器２１を振り、反応室１１２において、前記試料が拡散された溶媒１６、標識化第１核酸分子１４、固定化第２核酸分子１３が固定化された多孔質体１８、および基質１５を接触させ、反応を行う。反応後、反応室１１２の溶媒１６中の前記反応を測定すれば、ターゲット１７に結合した標識化第１核酸分子１４の標識物質１４２の前記反応を検出できるため、間接的に、ターゲット１７を検出できる。
【０１０２】
なお、本実施形態において、前記浮遊担体が前記多孔質体である例を示したが、前記実施形態１Ｂのオイルでもよく、本実施形態の記載は、前記実施形態１Ｂの分析キット４にも適用できる。この場合、試料採取用具２０の溶媒室２０１が、溶媒１６と、第２核酸分子４３１が疎水性分子４３２を介して固定化されたオイル層４８とを有することが好ましい。
【０１０３】
本実施形態では、前記第１試薬を反応室１１２に配置した例を示したが、これには制限されず、例えば、溶媒室２０１に配置してもよい。
【０１０４】
（実施形態２Ａ）
本実施形態の第２の分析キットとして、前記担体が磁性ビーズであり、さらに、磁石を有し、前記分析容器が前記溶媒室を有する形態の一例を図１０に示す。図１０は、本実施形態の分析キット７を構成する試料採取用具１０および分析容器７１の概略を示す断面図である。なお、本実施形態は、特に示さない限り、前記実施形態１Ａと同様である。
【０１０５】
溶媒室１１１には、溶媒１６および前記第２試薬が収容される。前記第２試薬は、前述のように、前記担体である磁性ビーズ５８に第２核酸分子１３が固定化されている。前記磁性ビーズ５８は、特に制限されず、磁石にくっつけばよく、材質は、例えば、ポリマーを被覆した酸化鉄粒子等があげられる。
【０１０６】
磁性ビーズ５８の大きさは、特に制限されず、直径は、例えば、１〜５μｍである。溶媒１６あたりの磁性ビーズ５８の数は、特に制限されず、例えば、２×１０６〜２×１０９個である。磁性ビーズ５８に対して固定化する第２核酸分子１３の量は、特に制限されず、磁性ビーズ５８の表面積１ｍｍ２あたり、例えば、０．１ｆｍｏｌ〜１００ｐｍｏｌ、１ｆｍｏｌ〜１０ｐｍｏｌ、１０ｆｍｏｌ〜１ｐｍｏｌである。
【０１０７】
反応室１１２は、前記第１試薬および磁石を有する。前記磁石は、特に制限されず、磁性ビーズ５８と後述する磁性体５１にくっつけばよい。
【０１０８】
第２分析キット７は、分析容器７１の外部に、移動可能な磁性体５１を有する。磁性体５１は、磁性ビーズ５８と同様に、磁石にくっつけばよく、その材質は、例えば、磁性ビーズ５８と同様のものが例示でき、具体例としては、例えば、鉄、ニッケル、コバルト等があげられる。
【０１０９】
つぎに、図１１を用いて、分析キット７を使用した分析方法を説明する。図１１は、分析キット７の使用順序に沿った状態の概略を示す断面図である。
【０１１０】
分析容器７１の上方向から内部の前室１１５に向かって、試料採取用具１０の先端の採取部１０２を挿入していく。試料採取用具１０の採取部１０２の先端が、分析容器７１の溶媒室用隔壁１１３に接触したら、そのまま、前記先端を下方向に押し当てて、前記先端により溶媒室用隔壁１１３を破断し、採取部１０２を、分析容器７１の溶媒室１１１に挿入する（図１１（Ａ））。
【０１１１】
つぎに、試料採取用具１０の採取部１０２の先端を、分析容器７１の反応室用隔壁１１４に接触させ、そのまま、前記先端を下方向に押し当てて、前記先端により反応室用隔壁１１４を破断し、採取部１０２を、分析容器７１の反応室１１２に挿入する。反応室用隔壁１１４の破断によって、溶媒室１１１に収容されていた溶媒１６、および磁性ビーズ５８に固定化された第２核酸分子１３は、溶媒室１１１から反応室１１２に導出される。
【０１１２】
そして、反応室１１２において、前記試料中のターゲットと各試薬とを反応させる（図１１（Ｂ））。前記反応について、具体的に説明する。
【０１１３】
前述のように、試料採取用具１０の採取部１０２が、溶媒室１１１に挿入されることで、採取部１０２に保持された試料と、溶媒室１１１中の溶媒１６とが接触し、溶媒１６中に前記試料が拡散する。そして、試料採取用具１０の採取部１０２が、さらに反応室１１２に挿入されることで、前記試料が拡散された溶媒１６、および磁性ビーズ５８に固定化された第２核酸分子１３が、反応室１１１に導出される。この状態において、試料採取用具１０がセットされた分析容器７１を振り、溶媒１６、標識化第１核酸分子１４、磁性ビーズ５８に固定化された第２核酸分子１３、基質１５、および磁石５０を接触させる。これによって、図１１（Ｃ）に示すように、標識化第１核酸分子１４と前記試料中のターゲット１７との結合反応、標識化第１核酸分子１４と磁性ビーズ５８に固定化された第２核酸分子１３との結合反応が起こる。また、磁性ビーズ５８は、磁石５０に結合する。
【０１１４】
つぎに、分析容器７１の外部に設置した磁性体５１を、分析容器７１の反応室１１２に近づけて、反応室１１２内の磁石５０を、反応室１１２の内壁に引き寄せる。さらに、磁性体５１を、上方向に動かすことによって、反応室１１２内の磁石５０を上方に移動させる（図１１（Ｃ））。磁石５０は、前述のように、第２核酸分子１３が固定化された磁性ビーズ５８が結合しており、その磁性ビーズ５８には、第２核酸分子１３を介して、ターゲットと結合しなかったフリーの標識化第１核酸分子１４が結合している。このため、磁性体５１によって、強制的に、磁石５０と磁性ビーズ５８とを溶媒の外に移動させることができる。
【０１１５】
そして、反応室１１２の溶媒１６中における反応、例えば、標識物質である酵素１４２と基質１５との発色反応を測定する。反応室１１２の溶媒１６中の前記反応を測定すれば、ターゲット１７に結合した標識化第１核酸分子１４の標識物質１４２の前記反応を検出できるため、間接的に、ターゲット１７を検出することができる。
【０１１６】
前述のように、外部の磁性体５１によって、磁石５０と磁性ビーズ５８とを上方に移動させている。このため分析容器７１の反応室１１２において、第２核酸分子１３が固定化された磁性ビーズ５８は、溶媒１６の外に移動した状態である。このため、分析容器７１の反応室１１２に溶媒１６が導入された静置状態において、例えば、溶媒１６について、その液面よりも下方向の領域、具体的には、磁性ビーズ５８が結合した磁石５０よりも離れた領域において、反応を測定することが好ましい。これによって、磁性ビーズ５８に固定化された第２核酸分子１３に結合した標識化第１核酸分子１４の標識物質１４２の測定を抑制できる。なお、本発明において、第２核酸分子１３に結合した標識化第１核酸分子１４が、基質１５と接触して反応した場合でも、基質１５の反応は減衰するため、分析キット７を振った後、分析キット７を静置し、磁性体５１により磁性ビーズ５８が結合した磁石５０を上方に移動させ、溶媒１６から取り除くことによって、反応室１１２の溶媒１６中における測定への影響は、十分に回避できる。または、磁性体５１が溶媒１６中にあっても、測定部から十分に離れた位置へ磁性体５１を移動させることで、反応室１１２の溶媒１６中における測定への影響は、十分に回避できる。
【０１１７】
本実施形態において、溶媒室１１１が溶媒１６とともに、第２核酸分子１３が固定化された磁性ビーズ５８を有する形態を例示したが、これには制限されず、例えば、第２核酸分子１３が固定化された磁性ビーズ５８は、磁石５０とともに、反応室１１２に収容されてもよい。
【０１１８】
また、本実施形態において、前記分析容器が前記溶媒室を有する形態を例示したが、前記溶媒室の形態は、例えば、前記実施形態１Ｃおよび１Ｄの形態でもよく、これらの形態は、本実施形態に適用できる。
【０１１９】
本実施形態では、前記第１試薬を反応室１１２に配置した例を示したが、これには制限されず、例えば、溶媒室１１１に配置してもよい。また、本実施形態の分析キットは、例えば、さらに、前記分析容器を挿入する挿入部を有し、前記外部の磁性体（金属５１）が前記挿入部に固定化されてもよく、具体的には、前記挿入部の内部に固定化されてもよい。この形態によれば、例えば、前記挿入部に前記分析容器を挿入することによって、前記挿入部の内部に固定化した磁性体によって、その位置で、磁石５０と磁性ビーズ５８とを捕捉することができる。
【０１２０】
（実施形態２Ｂ）
本実施形態の第２の分析キットとして、外部に配置する磁性体が不要であり、且つ、磁石が、磁石部と脚部とを有する形態の一例を図１２に示す。図１２は、本実施形態の分析キット６を構成する試料採取用具１０および分析容器６１の概略を示す断面図である。なお、本実施形態は、前記磁石の形態が異なり且つ外部の磁性体が不要である以外は、特に示さない限り、前記実施形態２Ａと同様である。
【０１２１】
本実施形態における磁石６０は、磁石部６０１と脚部６０２とを有し、磁石部６０１は、脚部６０２に支持されている。磁石部６０１は、例えば、脚部６０２に連結されることで、支持されてもよい。脚部６０２は、例えば、磁性ビーズ５８とはくっつかないものが好ましく、例えば、非磁石または非磁性体である。磁石６０における磁石部６０１は、反応室１１２において、上方に位置するように、脚部６０２により支持されている。反応室１１２における上方とは、例えば、静置した状態において、溶媒室１１１から導入された溶媒１６の上方、すなわち、溶媒１６の液面付近や液面よりも上側である。脚部の材質としては、例えば、プラスチック等があげられる。
【０１２２】
脚部６０２の形状は、特に制限されず、磁石部６０１が、反応室１１２において上方に維持されるような形態であればよい。
【０１２３】
つぎに、図１３を用いて、分析キット６を使用した分析方法を説明する。図１３は、分析キット６の使用順序に沿った状態の概略を示す断面図である。
【０１２４】
分析容器６１の上方向から内部の前室１１５に向かって、試料採取用具１０の先端の採取部１０２を挿入していく（図１３（Ａ））。試料採取用具１０の採取部１０２の先端が、分析容器６１の溶媒室用隔壁１１３に接触したら、そのまま、前記先端を下方向に押し当てて、前記先端により溶媒室用隔壁１１３を破断し、採取部１０２を、分析容器６１の溶媒室１１１に挿入する（図１３（Ｂ））。
【０１２５】
つぎに、試料採取用具１０の採取部１０２の先端を、分析容器６１の反応室用隔壁１１４に接触させ、そのまま、前記先端を下方向に押し当てて、前記先端により反応室用隔壁１１４を破断し、採取部１０２を、分析容器６１の反応室１１２に挿入する。反応室用隔壁１１４の破断によって、溶媒室１１１に収容されていた溶媒１６、および磁性ビーズ５８に固定化された第２核酸分子１３は、溶媒室１１１から反応室１１２に導出される。
【０１２６】
そして、反応室１１２において、前記試料中のターゲットと各試薬とを反応させる（図１３（Ｃ））。前記反応について、具体的に説明する。
【０１２７】
前述のように、試料採取用具１０の採取部１０２が、溶媒室１１１に挿入されることで、採取部１０２に保持された試料と、溶媒室１１１中の溶媒１６とが接触し、溶媒１６中に前記試料が拡散する。そして、試料採取用具１０の採取部１０２が、さらに反応室１１２に挿入されることで、前記試料が拡散された溶媒１６、および磁性ビーズ５８に固定化された第２核酸分子１３が、反応室１１２に導出される。この状態において、試料採取用具１０がセットされた分析容器６１を振り、溶媒１６、標識化第１核酸分子１４、磁性ビーズ５８に固定化された第２核酸分子１３、基質１５、および磁石６０を接触させる。これによって、図１３（Ｃ）に示すように、標識化第１核酸分子１４と前記試料中のターゲット１７との結合反応、標識化第１核酸分子１４と磁性ビーズ５８に固定化された第２核酸分子１３との結合反応が起こる。また、磁性ビーズ５８は、磁石６０の磁石部６０１に結合する。
【０１２８】
そして、反応室１１２の溶媒１６中における反応、例えば、標識物質である酵素１４２と基質１５との発色反応を測定する。反応室１１２の溶媒１６中の前記反応を測定すれば、ターゲット１７に結合した標識化第１核酸分子１４の標識物質１４２の前記反応を検出できるため、間接的に、ターゲット１７を検出することができる。
【０１２９】
前述のように、磁石６０において、磁石部６０１は脚部６０２によって、溶媒１６の上方に支持されている。このため分析容器６１の反応室１１２において、第２核酸分子１３が固定化された磁性ビーズ５８は、溶媒１６の外もしくは溶媒１６の液面側に移動した状態である。このため、分析容器６１の反応室１１２に溶媒１６が導入された静置状態において、例えば、溶媒１６について、その液面よりも下方向の領域、具体的には、磁石６０の磁石部６１よりも離れた領域において、反応を測定することが好ましい。これによって、磁性ビーズ５８に固定化された第２核酸分子１３に結合した標識化第１核酸分子１４の標識物質１４２の測定を抑制できる。なお、本発明において、磁石６０の磁石部６０１が溶媒１６の外に位置する場合は、第２核酸分子１３に結合した標識化第１核酸分子１４が、基質１５と接触して反応した場合でも、基質１５の反応は減衰するため、分析キット６を振った後、分析キット６を静置すれば、反応室１１２の溶媒１６中における反応への影響は、十分に回避できる。
【０１３０】
本実施形態において、溶媒室１１１が溶媒１６とともに、第２核酸分子１３が固定化された磁性ビーズ５８を有する形態を例示したが、これには制限されず、例えば、第２核酸分子１３が固定化された磁性ビーズ５８は、磁石６０とともに、反応室１１２に収容されてもよい。
【０１３１】
また、本実施形態において、前記分析容器が前記溶媒室を有する形態を例示したが、前記溶媒室の形態は、例えば、前記実施形態１Ｃおよび１Ｄの形態でもよく、これらの形態は、本実施形態に適用できる。この場合、第２核酸分子１３が固定化された磁性ビーズ５８は、例えば、分析容器７１の反応室１１２に配置してもよいし、前記溶媒室に配置してもよい。
【０１３２】
本実施形態では、前記第１試薬を反応室１１２に配置した例を示したが、これには制限されず、例えば、溶媒室１１１に配置してもよい。
【０１３３】
以上、実施形態を参照して本発明を説明したが、本発明は、上記実施形態に限定されるものではない。本発明の構成や詳細には、本発明のスコープ内で当業者が理解しうる様々な変更をできる。
【産業上の利用可能性】
【０１３４】
本発明によれば、簡便に試料中のターゲットを分析することができる。
【符号の説明】
【０１３５】
１、２、３、４、６、７            分析キット
１０、２０、３０          試料採取用具
１０１        把持部
１０２        採取部
１０３、２０３、３０３        軸部
２０３Ａ                    軸部の他端領域
２０３Ｂ                    軸部の新たな端部
１１、２１、４１、６１、７１          分析容器
１１０                      本体
１１１        溶媒室
１１２        反応室
１１３        第１隔壁
１１４        第２隔壁
１１５        前室
１３、４３        固定化第２核酸分子
４３１        第２核酸分子
４３２        疎水性分子
１４          標識化第１核酸分子
１４１        第１核酸分子
１４２        標識物質
１５          基質
１６          溶媒
１７          ターゲット
１８          多孔質体
５８          磁性ビーズ
５０、６０    磁石
５１          磁性体
４８          オイル層
３０４        蓋部
【図１】
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【図２】
2019062829.tif 000004
【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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