(57)【要約】【課題】本明細書は、レアアースイオンを分離回収するための実用的な技術を提供する。【手段】レアアース種結合ペプチドを規定する第１の領域と、フィブロイン鎖を規定する第２の領域と、を備える、融合タンパク質を提供する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
レアアース種結合ペプチドを規定する第１の領域と、フィブロインＬ鎖を規定する第２の領域と、を備える、融合タンパク質。
【請求項２】
前記レアアース種結合ペプチドは、金属レアアースと相互作用して捕捉するとともに、レアアースイオンと相互作用してミネラリゼーションするペプチドである、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項３】
前記レアアース種結合ペプチドは、中性条件下で、５℃〜８０℃において、金属レアアースを捕捉し、レアアースイオンをミネラリゼーションするペプチドである、請求項１又は２に記載の融合タンパク質。
【請求項４】
前記レアアース種結合ペプチドは、以下のアミノ酸配列（１）〜（３）から選択されるアミノ酸配列を有する、請求項１〜３のいずれかに記載の融合タンパク質。
（１）−Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ａ１−Ｘ４−Ｘ５−Ａ２−Ｘ６−Ａ３−Ｘ７−Ｘ８−（配列番号１）
（ただし、Ａ１は酸性アミノ酸、チロシン、アラニン、メチオニン又はグリシンであり、Ａ２は、酸性アミノ酸又はロイシンであり、Ａ３は、酸性アミノ酸、グリシン、プロリン、グルタミン又はアラニンであり、Ｘ１は、ロイシン、イソロイシン、バリン又はスレオニンであり、Ｘ２は、トリプトファン、システイン、アスパラギン酸、グリシン、又はバリンでありＸ３は、グリシン、イソロイシン、システイン、セリン、アルギニンであり、Ｘ４は、バリン、セリン、アルギニン、メチオニン、フェニルアラニン又はロイシンであり、Ｘ５はセリン、ロイシン、アルギニン、グリシン、システイン、アスパラギン又はリジンであり、Ｘ６は、ロイシン、リジン、バリン、セリン又はグリシンであり、Ｘ７は、フェニルアラニン、グリシン、ロイシン、トレオニン、イソロイシン、バリン、トリプトファン又はヒスチジンであり、Ｘ８は、ロイシン、バリン、スレオニン、セリン、アスパラギン、フェニルアラニン、グルタミン酸であり、少なくとも１つの酸性アミノ酸を有する。）
（２）−Ｘ１１−Ｘ１２−Ｘ１３−Ｘ１４−Ｘ１５−Ｘ１６−Ａ４−Ｘ１７−Ｘ１８−Ｘ１９−（配列番号２）
（ただし、Ａ４は、酸性アミノ酸であり、Ｘ１１は、ロイシン、トレオニン、グルタミン酸、イソロイシン、バリン、フェニルアラニン、システイン又はチロシンであり、Ｘ１２は、チロシン、アスパラギン酸、アスパラギン、グルタミン酸、アルギニン、フェニルアラニン又はバリンであり、Ｘ１３は、プロリン、セリン、グリシン、ロイシン、アラニン、トレオニン、バリン又はフェニルアラニンであり、Ｘ１４は、セリン、グルタミン酸、アルギニン又はイソロイシンであり、Ｘ１５は、トリプトファン、アラニン、グリシン、システイン、メチオニン又はチロシンであり、Ｘ１６は、セリン、グリシン、トレオニン、アラニン、アルギニン又はシステインであり、Ｘ１７はチロシン、システイン、セリン、イソロイシン、アスパラギン酸、セリン、グリシニン、リジン又はヒスチジンであり、Ｘ１８は、アラニン、グリシン、トレオニン、プロリン、システイン又はセリンであり、Ｘ１９は、フェニルアラニン、アルギニン、バリン、ロイシン、システイン、アラニン又はセリンである。）
（３）Ｘ２１−Ｘ２２−Ｘ２３−Ｘ２４−Ｘ２５−Ａ２６−Ａ５−Ｘ２７−Ａ６−Ｘ２８−Ｘ２９−Ｘ３０（配列番号３）
（ただし、Ａ５及びＡ６は、それぞれ独立して酸性アミノ酸であり、Ｘ１は、プロリンであり、Ｘ２は、バリンであり、Ｘ３は、トリプトファンであり、Ｘ４はセフェニルアラニンであり、Ｘ５は、セリンであり、Ｘ６は、バリンであり、Ｘ７は、グリシンであり、Ｘ８は、フェニルアラニンであり、Ｘ９は、メチオニンであり、Ｘ１０は、バリンである。)
【請求項５】
前記フィブロインＬ鎖は、配列番号３５で表されるアミノ酸配列と同一性が９０％以上であって、絹糸虫により生産され吐出される繊維状タンパク質である、請求項１〜４のいずれかに記載の融合タンパク質。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれかに記載の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド。
【請求項７】
請求項６に記載のポリヌクレオチドを保持する形質転換ベクター。
【請求項８】
請求項７に記載の形質転換ベクターによって形質転換された形質転換絹糸虫。
【請求項９】
請求項７に記載の形質転換ベクターにより形質転換絹糸虫を生産する方法。
【請求項１０】
請求項８に記載の形質転換絹糸虫を用いて、請求項１〜５のいずれかに記載の融合タンパク質を生産する工程を備える、レアアース結合融合タンパク質の生産方法。
【請求項１１】
請求項１〜５のいずれかに記載の融合タンパク質を用いる、レアアースイオン分離回収装置。
【請求項１２】
請求項１〜５のいずれかに記載の融合タンパク質を用いてレアアース種を分離・回収する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本明細書は、レアアース種分離回収用融合タンパク質及びその利用に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来より、レアアースを識別するペプチドがいくつか報告されている（特許文献１〜２）。また、リン酸基を含むビニル化合物を用いてシルクタンパク質を架橋したものが報告されている（特許文献３）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】特開２０１６−８８８４６号公報
【特許文献２】特開２０１６−１１７６６４号公報
【特許文献３】特開２０１４−１４１７５１号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
レアアースを効率的に分離回収するには、レアアースイオンと結合して他から分離できる一方、一旦分離されたレアアースイオンを容易に回収できることが必要である。さらに、こうした分離回収材料を容易に提供できることが必要である。
【０００５】
しかしながら、特許文献１、２に記載されるような特定のペプチドを合成してレアアースイオンの分離回収に用いるにはペプチドの製造コストが問題となる。また、効率的なレアアースイオンの回収には、ペプチドの樹脂などの固相表面への架橋、表面での配向制御など種々の加工が依然として必要であった。
【０００６】
また、シルクタンパク質をグラフトする方法は、遺伝子工学的にシルクタンパク質を生産して、後架橋することが必要であった。
【０００７】
以上のように、現在までのところ、分離回収材料の効率的な提供、新たなレアアースイオン分離回収のためのペプチド等が提供されているものの、実用的なレアアースイオンの分離回収システムの構築は依然として困難であった。
【０００８】
本明細書は、レアアースイオンを分離回収するのにより実用的な技術を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、既に本発明者らが開発したレアアース種結合ペプチド及びカイコなどが生産する絹糸に着目した。そして、絹糸にこのレアアース種結合ペプチドを複合化することで、絹糸の繊維タンパク質としての性能を損なわずにしかもレアアース種結合ペプチドが本来的に備えるレアアース種結合能も損なわない融合タンパク質として、カイコに生産させうることがわかった。本明細書は、これらの知見に基づき以下の手段を提供する。
【００１０】
［１］レアアース種結合ペプチドを規定する第１の領域と、フィブロイン鎖を規定する第２の領域と、を備える、融合タンパク質。
［２］前記レアアース種結合ペプチドは、金属レアアースと相互作用して捕捉するとともに、レアアースイオンと相互作用してミネラリゼーションするペプチドである、［１］に記載の融合タンパク質。
［３］前記レアアース種結合ペプチドは、中性条件下で、５℃〜８０℃において、金属レアアースを捕捉し、レアアースイオンをミネラリゼーションするペプチドである、［２］に記載の融合タンパク質。
［４］前記レアアース種結合ペプチドは、以下のアミノ酸配列（１）〜（３）から選択されるアミノ酸配列を有する、［１］〜［３］のいずれかに記載の融合タンパク質。
（１）−Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ａ１−Ｘ４−Ｘ５−Ａ２−Ｘ６−Ａ３−Ｘ７−Ｘ８−（配列番号１）
（ただし、Ａ１は酸性アミノ酸、チロシン、アラニン、メチオニン又はグリシンであり、Ａ２は、酸性アミノ酸又はロイシンであり、Ａ３は、酸性アミノ酸、グリシン、プロリン、グルタミン又はアラニンであり、Ｘ１は、ロイシン、イソロイシン、バリン又はスレオニンであり、Ｘ２は、トリプトファン、システイン、アスパラギン酸、グリシン、又はバリンでありＸ３は、グリシン、イソロイシン、システイン、セリン、アルギニンであり、Ｘ４は、バリン、セリン、アルギニン、メチオニン、フェニルアラニン又はロイシンであり、Ｘ５はセリン、ロイシン、アルギニン、グリシン、システイン、アスパラギン又はリジンであり、Ｘ６は、ロイシン、リジン、バリン、セリン又はグリシンであり、Ｘ７は、フェニルアラニン、グリシン、ロイシン、トレオニン、イソロイシン、バリン、トリプトファン又はヒスチジンであり、Ｘ８は、ロイシン、バリン、スレオニン、セリン、アスパラギン、フェニルアラニン、グルタミン酸であり、少なくとも１つの酸性アミノ酸を有する。）
（２）−Ｘ１１−Ｘ１２−Ｘ１３−Ｘ１４−Ｘ１５−Ｘ１６−Ａ４−Ｘ１７−Ｘ１８−Ｘ１９−（配列番号２）
（ただし、Ａ４は、酸性アミノ酸であり、Ｘ１１は、ロイシン、トレオニン、グルタミン酸、イソロイシン、バリン、フェニルアラニン、システイン又はチロシンであり、Ｘ１２は、チロシン、アスパラギン酸、アスパラギン、グルタミン酸、アルギニン、フェニルアラニン又はバリンであり、Ｘ１３は、プロリン、セリン、グリシン、ロイシン、アラニン、トレオニン、バリン又はフェニルアラニンであり、Ｘ１４は、セリン、グルタミン酸、アルギニン又はイソロイシンであり、Ｘ１５は、トリプトファン、アラニン、グリシン、システイン、メチオニン又はチロシンであり、Ｘ１６は、セリン、グリシン、トレオニン、アラニン、アルギニン又はシステインであり、Ｘ１７はチロシン、システイン、セリン、イソロイシン、アスパラギン酸、セリン、グリシニン、リジン又はヒスチジンであり、Ｘ１８は、アラニン、グリシン、トレオニン、プロリン、システイン又はセリンであり、Ｘ１９は、フェニルアラニン、アルギニン、バリン、ロイシン、システイン、アラニン又はセリンである。）
（３）Ｘ２１−Ｘ２２−Ｘ２３−Ｘ２４−Ｘ２５−Ａ２６−Ａ５−Ｘ２７−Ａ６−Ｘ２８−Ｘ２９−Ｘ３０（配列番号３）
（ただし、Ａ５及びＡ６は、それぞれ独立して酸性アミノ酸であり、Ｘ２１は、プロリンであり、Ｘ２２は、バリンであり、Ｘ２３は、トリプトファンであり、Ｘ２４はフェニルアラニンであり、Ｘ２５は、セリンであり、Ｘ２６は、バリンであり、Ｘ２７は、グリシンであり、Ｘ２８は、フェニルアラニンであり、Ｘ２９は、メチオニンであり、Ｘ３０は、バリンである。)
［５］前記フィブロイン鎖はフィブロインＬ鎖であり、配列番号３５で表されるアミノ酸配列と同一性が９０％以上であって、絹糸虫により生産され吐出される繊維状タンパク質である、［１］〜［４］のいずれかに記載の融合タンパク質。
［６］［１］〜［５］のいずれかに記載の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド。
［７］［６］に記載のポリヌクレオチドを保持する形質転換ベクター。
［８］［７］に記載の形質転換ベクターによって形質転換された形質転換絹糸虫。
［９］［７］に記載の形質転換ベクターにより形質転換絹糸虫を生産する方法。
［１０］［８］に記載の形質転換絹糸虫を用いて、［１］〜［５］のいずれかに記載の融合タンパク質を生産する工程を備える、レアアース結合融合タンパク質の生産方法。
［１１］［１］〜［５］のいずれかに記載の融合タンパク質を用いる、レアアースイオン分離回収装置。
［１２］［１］〜［５］のいずれかに記載の融合タンパク質を用いてレアアース種を分離・回収する方法。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】遺伝子組換えカイコの系統名とコンストラクトの概要を示す図である。
【図２】遺伝子組換えカイコ作製用の染色体ベクターの概要を示す図である。
【図３】遺伝子組換えカイコ各系統よりマーカー遺伝子の発現に基づいて選出した個体から抽出したゲノムＤＮＡを用いたSouthern hybridization解析の結果を示す図である。ａ）Ｌａｍｐ１−Ｃ（１−１, １−３）、ｂ）Ｌａｍｐ１−Ｌ（２−２, ２−３）、ｃ）Ｌａｍｐ１−Ｃｈｉｓ６（３−１, ３−２）、及びｄ）Ｌａｍｐ１−Ｌｈｉｓ６（４−１）。矢印は、以降のタンパク質発現を評価した個体を示す。
【図４】Ｌａｍｐ−１融合タンパク質の発現を確認した結果を示す図である。４系統のカイコから調製したシルクタンパク質について、ａ）ＦｉｂＬ抗体、ｂ）Ｌａｍｐ−１抗体、ｃ）、ｄ）Ｈｉｓ６抗体を用いたWestern blotting解析を行った。矢印は、タンパク質分子量から予想されるバンドの位置を示す。
【図５】Ｌａｍｐ−１融合タンパク質の精製結果を示す図である。ａ）ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、ｂ）Ｌａｍｐ−１抗体およびｃ）Ｈｉｓ６抗体を用いたWestern blotting解析。矢印は、タンパク質分子量（２８ｋＤａ）から予想されるバンドの位置を示す。
【図６】Ｌａｍｐ−１融合タンパク質におけるＤｙ3+鉱物化の評価結果を示す図である。ａ）Ｄｙ3+添加直後の目視画像、ｂ）Ｄｙ3+添加溶液の濁度評価、ｃ）生成鉱物のＳＥＭ画像。スケールバー：２ｍｍ
【図７】Ｌａｍｐ−１融合タンパク質におけるＤｙ3+沈降物の元素分析結果を示す図である。ａ）Ｌａｍｐ１−Ｌｈｉｓ６、ｂ）Ｌａｍｐ１−Ｃｈｉｓ６、ＳＥＭ画像の□枠について、それぞれ元素分析を行った。スペクトル中の矢印は、Ｄｙ：ジスプロシウムを示す。スケールバー：３０μｍ
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本明細書の開示は、レアアース種と相互作用し、レアアース種を分離し回収できる融合タンパク質を提供する。かかる融合タンパク質によれば、常温、常圧、中性条件下でのレアース種結合能を保持しつつ、フィブロインＨに由来する繊維状形態を保持し、しかも、遺伝子組換えカイコによって効率的に生産することができる。このため、ペプチドによる緩和な条件でのレアアース種の分離回収を実用化することができる。
【００１３】
本明細書において「レアアース」とは、スカンジウム（Ｓｃ）、イットリウム（Ｙ）の２元素と、ランタノイドのランタン（Ｌａ）、セリウム（Ｃｅ）、プラセオジウム（Ｐｒ）、ネオジム（Ｎｄ）、プロメチウム（Ｐｍ）、サマリウム（Ｓｍ）、ユウロビウム（Ｅｕ）、ガドリニウム（Ｇｄ）、テルビウム（Ｔｂ）、ジスプロシウム（Ｄｙ）、ホルミニウム（Ｈｏ）、エルビウム（Ｅｒ）、ツリウム（Ｔｍ）、イッテルビウム（Ｙｂ）及びルテチウム（Ｌｕ）が挙げられる。
【００１４】
本明細書において、レアアース種とは、金属レアアース、レアアースイオン及びレアアース含有化合物を含んでいる。
【００１５】
本明細書において、レアアースイオンとは、各レアアースに関し可能性ある酸化数の価数のイオンの状態も含まれる。また、本明細書において、レアアース含有化合物とは、各レアアースに関し可能性ある酸化数での酸化物、水酸化物、硫化物、窒化物、酸窒化物、ハロゲン化物、種々の無機塩又は有機塩である化合物を包含している。
【００１６】
本明細書において、アミノ酸とは、Ｌ−アミノ酸を意味し、天然に存在する公知の２０種のアミノ酸を意味する。なお、システイン（Ｃ）は、遊離のＳＨ基を有するほかＳＨ基がジスルフィド結合している状態を包含しうる。ペプチドは、アミノ酸がペプチド結合で連結された分子（ポリペプチド）を意味する。アミノ酸残基は、ペプチドに取り込まれて脱水された形態のアミノ酸を意味する。なお、便宜的に、アミノ酸配列中のアミノ酸残基をアミノ酸という場合もある。
【００１７】
本明細書において、結合とは、２つの物質又は化合物が両者にもたらされる相互作用による結びつきをいう。特に、相互作用の種類を限定するものではなく、本明細書における開示を拘束するものではないが、レアアース種とペプチドとの結合においては、例えば、イオン結合、水素結合、ファン・デル・ワールス結合などの結合による識別によるものと推測される。
【００１８】
（融合タンパク質）
本融合タンパク質は、レアアース種結合ペプチドを規定する第１の領域と、フィブロイン鎖を規定する第２の領域と、を備えることができる。フィブロイン鎖は、Ｈ鎖及びＬ鎖を包含している。
【００１９】
（第１の領域）
第１の領域は、レアアース種結合ペプチド（以下、単に、本ペプチドともいう。）を規定する。本ペプチドとしては、特に限定するものではないが、例えば、金属レアアース、レアアースイオン及びレアアース含有化合物のいずれかと相互作用して結合することができるペプチドが挙げられる。第１の領域に適用するペプチドが有するレアアース種との結合特性は特に限定するものではない。例えば、本ペプチドは、レアアースイオンと相互作用して結合することができ、かかるレアアースイオンと相互作用する本ペプチドは、そのレアアース含有化合物としてミネラリゼーションすることができる。また、かかるミネラリゼーションペプチドは、そのレアアースの金属レアアースと相互作用して結合することができる場合があり、また、そのレアアースのレアアース含有化合物と相互作用して結合することができる場合がある。
【００２０】
本ペプチドは、また、特に限定するものではないが、例えば、本ペプチドが変性しない限り、レアアース種と相互作用して結合することができる。したがって、本ペプチドは、例えば、ｐＨ５〜８、また例えばｐＨ６〜８などの中性条件下で、レアアース種と相互作用し結合することができる。中性条件下でのレアアース種との結合は、緩和で、低コストな条件でのレアアース種の分離回収を可能とすることができる。
【００２１】
また、本ペプチドは、本ペプチドが変性しない限り、５℃以上８０℃以下程度の温度範囲でも、レアアース種と相互作用して結合することができる。したがって、本ペプチドは、例えば、５℃以上４５℃以下、また例えば１０℃以上４０℃以下、また例えば１５℃以上４０℃以下程度の温度範囲においても、レアアース種と相互作用することができる。こうした常温条件でのレアアース種との結合は、緩和で、低コストな条件でのレアアース種の分離回収を可能とすることができる。
【００２２】
本ペプチドを規定するアミノ酸配列としては、例えば、以下のアミノ酸配列（１）及び（２）が挙げられる。
【００２３】
（１）−Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ａ１−Ｘ４−Ｘ５−Ａ２−Ｘ６−Ａ３−Ｘ７−Ｘ８−（配列番号１）
（ただし、Ａ１は酸性アミノ酸、チロシン、アラニン、メチオニン又はグリシンであり、Ａ２は、酸性アミノ酸又はロイシンであり、Ａ３は、酸性アミノ酸、グリシン、プロリン、グルタミン又はアラニンであり、Ｘ１は、ロイシン、イソロイシン、バリン又はスレオニンであり、Ｘ２は、トリプトファン、システイン、アスパラギン酸、グリシン、又はバリンでありＸ３は、グリシン、イソロイシン、システイン、セリン、アルギニンであり、Ｘ４は、バリン、セリン、アルギニン、メチオニン、フェニルアラニン又はロイシンであり、Ｘ５はセリン、ロイシン、アルギニン、グリシン、システイン、アスパラギン又はリジンであり、Ｘ６は、ロイシン、リジン、バリンセリン又はグリシンであり、Ｘ７は、フェニルアラニン、グリシン、ロイシン、トレオニン、イソロイシン、バリン、トリプトファン又はヒスチジンであり、Ｘ８は、ロイシン、バリン、スレオニン、セリン、アスパラギン、フェニルアラニン、グルタミン酸であり、少なくとも１つの酸性アミノ酸を有する。）
【００２４】
（２）−Ｘ１１−Ｘ１２−Ｘ１３−Ｘ１４−Ｘ１５−Ｘ１６−Ａ４−Ｘ１７−Ｘ１８−Ｘ１９−（配列番号２）
（ただし、Ａ４は、酸性アミノ酸であり、Ｘ１１は、ロイシン、トレオニン、グルタミン酸、イソロイシン、バリン、フェニルアラニン、システイン又はチロシンであり、Ｘ１２は、チロシン、アスパラギン酸、アスパラギン、グルタミン酸、アルギニン、フェニルアラニン又はバリンであり、Ｘ１３は、プロリン、セリン、グリシン、ロイシン、アラニン、トレオニン、バリン又はフェニルアラニンであり、Ｘ１４は、セリン、グルタミン酸、アルギニン又はイソロイシンであり、Ｘ１５は、トリプトファン、アラニン、グリシン、システイン、メチオニン又はチロシンであり、Ｘ１６は、セリン、グリシン、トレオニン、アラニン、アルギニン又はシステインであり、Ｘ１７はチロシン、システイン、セリン、イソロイシン、アスパラギン酸、セリン、グリシニン、リジン又はヒスチジンであり、Ｘ１８は、アラニン、グリシン、トレオニン、プロリン、システイン又はセリンであり、Ｘ１９は、フェニルアラニン、アルギニン、バリン、ロイシン、システイン、アラニン又はセリンである。）
【００２５】
また、さらに、以下のアミノ酸配列（３）も挙げられる。
（３）Ｘ２１−Ｘ２２−Ｘ２３−Ｘ２４−Ｘ２５−Ａ５−Ｘ２６−Ｘ２７−Ａ６−Ｘ２８−Ｘ２９−Ｘ３０（配列番号３）
（ただし、Ａ５及びＡ６は、それぞれ独立して酸性アミノ酸であり、Ｘ２１は、プロリンであり、Ｘ２２は、バリンであり、Ｘ２３は、トリプトファンであり、Ｘ２４はフェニルアラニンであり、Ｘ２５は、セリンであり、Ｘ２６は、バリンであり、Ｘ２７は、グリシンであり、Ｘ２８は、フェニルアラニンであり、Ｘ２９は、メチオニンであり、Ｘ３０は、バリンである。）
【００２６】
配列（１）は、ランタン、セリウム、ネオジム、サマリウム、ガドリニウム、ジスプロシウム、ホルミニウム、エルビニウムのレアアース種に対して高いレアアース種捕捉能、なかでもレアアース捕捉能が高い。特に、セリウム、ネオジム、ガドリニウム、ジスプロシウム及びエルビニウムのレアアース種に対するレアアース捕捉能、特には、セリウム及びネオジムのレアアース種に対するレアアース捕捉能が一層高い。
【００２７】
一方、配列（１）は、軽希土類に対するミネラリゼーション能が概して低いか、有しておらず、これら軽希土類種（イオン）をその水酸化物等にミネラル化して捕捉することが困難である。すなわち、配列（１）は、テルビウム〜ルテチウムまで（例えば、テルビニウム、ジスプロシウム、エルビニウム及びイッテルビウムなど）の重希土類のミネラリゼーション能が高く、ランタン〜ガドリニウムまでのレアアース種については、ミネラリゼーション能は弱いか実質的に認められない。
【００２８】
配列（２）は、ランタン、セリウム、ネオジム、サマリウム、ガドリニウム、テルビニウム、ジスプロシウム、ホルミニウム、エルビニウムのレアアース種に対するレアアース種捕捉能が高い。特に、レアアースミネラル捕捉能が高い。なかでも、ランタン、セリウム、ホルミニウムのレアアース種に対してレアアースミネラル捕捉能が高く、ランタン及びセリウムのレアアース種に対して一層レアアースミネラル捕捉能が高い。
【００２９】
一方、配列（２）は、軽希土領域のミネラリゼーション能が概して低いか、有しておらず、これら軽希土類（イオン）をその水酸化物等にミネラル化して捕捉することが困難である。すなわち、配列（２）は、サマリウム〜ルテチウムまでの軽希土類（例えば、サマリウム、ユウロピウム）及び重希土類（例えば、ガドリニウム、テルビウム、ホルミニウム、エルビウム、イッテルビウム及びルテチウムなど）に対するミネラリゼーション能を有するが、ランタン〜プロメチウムまでの軽希土類に対するミネラリゼーション能は弱いか実質的に認められない。
【００３０】
また、配列（３）は、軽希土類であるランタノイドのランタン（Ｌａ）、セリウム（Ｃｅ）、プラセオジウム（Ｐｒ）、ネオジム（Ｎｄ）、プロメチウム（Ｐｍ）、サマリウム（Ｓｍ）及びユウロピウム（Ｅｕ）のレアアース種に対するレアアース種捕捉能を有し、なかでも、ランタン、ネオジム、サマリウムのレアアース種に対する捕捉能を有している。配列（３）は、軽希土類に対するレアアースミネラル捕捉能及びレアアースイオン捕捉能を有し、特に、軽希土類に対するミネラリゼーション能を有している。また、配列（３）は、重希土類に対するレアアース種捕捉能を有している。特に、重希土類に対するミネラリゼーション能を有している。すなわち、配列（３）は、軽希土類から重希土類にわたって広くレアアース種に対するミネラリゼーション能を有している。
【００３１】
これらの配列において、酸性アミノ酸は、好ましくはアスパラギン酸又はグルタミン酸である。
【００３２】
配列（１）のＸ１は好ましくはロイシン、イソロイシン又はバリンであり、Ｘ２は、好ましくはトリプトファン又はシステインであり、Ｘ３は好ましくはグリシンであり、Ａ１は好ましくはアスパラギン酸又はグルタミン酸であり、Ｘ４は好ましくはバリンであり、Ａ２は好ましくはグルタミン酸又はアスパラギン酸であり、Ｘ５は好ましくはセリン、アルギニン、アスパラギン又はリジンであり、Ｘ６は好ましくロイシン又はバリンであり、Ｘ７は好ましくはフェニルアラニン又はロイシンであり、Ｘ８は好ましくはロイシン、バリン又はトレオニンである。
【００３３】
配列（２）のＸ１１は好ましくはロイシン、イソロイシン、バリン又はトレオニンであり、Ｘ１２は好ましくはチロシン、アスパラギン、アスパラギン酸、アルギニン又はグルタミン酸であり、Ｘ１３は好ましくはプロリン、アラニン、セリン又はグリシンであり、Ｘ１４は好ましくはセリン、アルギニン又はイソロイシンであり、Ｘ１５は好ましくはトリプトファンであり、Ｘ１６は好ましくはセリン、グリシン又はトレオニンであり、Ｘ１７は好ましくはチロシン、アスパラギン酸又はセリンであり、Ｘ１８はアラニン、スレオニン又はグリシンであり、Ｘ１９は好ましくはフェニルアラニン又はロイシンである。
【００３４】
配列（１）は、好ましくは、
Leu/Val-Trp/Cys-Gly/Arg-Asp/Glu-Val-Ser/Asn/Lys/Arg-Asp/Glu-Leu/Val-Asp/Glu-Phe/Leu/Val-Leu/Val/Thrで表され、より好ましくは、
Cys-Leu/Val-Trp/Cys-Gly/Arg-Asp/Glu-Val-Ser/Asn/Lys/Arg-Asp/Glu-Leu/Val-Asp/Glu-Phe/Leu/Val-Leu/Val/Thr-Cysで表され、さらに好ましくは、
Ser-Cys-Leu/Val-Trp/Cys-Gly/Arg-Asp/Glu-Val-Ser/Asn/Lys/Arg-Asp/Glu-Leu/Val-Asp/Glu-Phe/Leu/Val-Leu/Val/Thr-Cys-Serで表される。
【００３５】
配列（２）は、好ましくは、
Leu-Tyr-Pro/Ala-Ser/Arg-Trp-Ser/Gly/Thr/Arg-Asp/Glu-Tyr/Asp-Ala/Gly/Ser/Thr-Phe/Leuで表され、より好ましくは、
Cys-Leu-Tyr-Pro/Ala-Ser/Arg-Trp-Ser/Gly/Thr/Arg-Asp/Glu-Tyr/Asp-Ala/Gly/Ser/Thr-Phe/Leu-Cysで表され、さらに好ましくは、
Ser-Cys-Leu-Tyr-Pro/Ala-Ser/Arg-Trp-Ser/Gly/Thr/Arg-Asp/Glu-Tyr/Asp-Ala/Gly/Ser/Thr-Phe/Leu-Cys-Serで表される。
【００３６】
配列（３）は、より具体的には、Pro-Val-Trp-Phe-Ser-Asp/Glu-Val-Gly-Asp/Glu-Phe-Met-Valからなることができる。
【００３７】
配列のＮ末端やＣ末端に１又は複数個のアミノ酸残基がさらに付加されていてもよい。例えば、１個又は２個のアミノ酸残基が付加されていてもよいし、１個以上３個以下のアミノ酸残基が付加されていてもよいし、１個以上５個以下のアミノ酸残基が付加されていてもよいし、１個以上７個以下のアミノ酸残基が付加されていてもよいし、１個以上１０個以下のアミノ酸残基が付加されていてもよいし、１個以上１９個以下のアミノ酸残基が付加されていてもよい。
【００３８】
配列の末端に付加するアミノ酸残基としては、例えば、セリン、システイン、アスパラギン等が挙げられる。また、両末端にシステインを導入することで、本ペプチドを容易に環状化することが可能となる。
【００３９】
配列（１）に関連付けられる捕捉領域としては、例えば、以下の配列を含むペプチドが挙げられる。以下に示すペプチド中、配列は、好ましくはＮ末端及びＣ末端の各１つのアミノ酸残基を除く配列であり、より好ましくは、両末端の各２つのアミノ酸残基、すなわち、ＳＣ−及び−ＣＳを除く配列である。
【００４０】
SerCys-LeuTrpGlyAspValSerGluLeuAspPheLeu-CysSer（配列番号４）
SerCys-LeuTrpIleGluSerLeuAspLeuAspGlyLeu-CysSer（配列番号５）
SerCys-LeuCysCysGluValSerAspLeuGlyLeuVal-CysSer（配列番号６）
SerCys-ValCysIleGluArgArgGluLeuAspLeuLeu-CysSer（配列番号７）
SerCys-IleAspSerTyrValGlyGluLeuGluThrLeu-CysSer（配列番号８）
SerCys-LeuTrpArgAlaValCysAspLeuGlyIleGlu-CysSer（配列番号９）
SerCys-LeuGlyGlyAspMetSerAspLysProValSer-CysSer（配列番号１０）
SerCys-ThrCysGlyMetValAsnAspValAspLeuThr-CysSer（配列番号１１）
SerCys-IleValGlyGluValArgLeuSerAspLeuVal-CysSer（配列番号１２）
SerCys-ThrCysGlyMetValAsnAspValAspLeuThr-CysSer（配列番号１３）
SerCys-ValTrpArgGlyPheLysAspGlyGlnTrpPhe-CysSer（配列番号１４）
SerCys-ValCysArgGlyLeuArgAspLeuAlaHisAsn-CysSer（配列番号１５）
【００４１】
配列（２）に関連付けられる捕捉領域としては、例えば、以下のレアアース結合配列を含むペプチドが挙げられる。以下に示すアミノ酸配列中、レアアース結合配列は、好ましくはＮ末端の３アミノ酸残基及びＣ末端の２アミノ酸残基を除く配列であり、より好ましくは両末端のＳＣ−及び−ＣＳを除く配列である。
【００４２】
SerCys-LeuTyrProSerTrpGlyAspTyrAlaPhe-CysSer（配列番号１６）
SerCys-ThrAspProSerTrpGlyGluTyrGlyPhe-CysSer（配列番号１７）
SerCys-GluTyrSerSerAlaSerGluTyrAlaArg-CysSer（配列番号１８）
SerCys-IleTyrGlyGluTrpArgAspTyrAlaPhe-CysSer（配列番号１９）
SerCys-ValTyrLeuSerGlySerGluCysThrPhe-CysSer（配列番号２０）
SerCys-LeuAsnAlaArgTrpSerAspSerProVal-CysSer（配列番号２１）
SerCys-LeuAsnThrIleTrpAlaAspTyrGlyLeu-CysSer（配列番号２２）
SerCys-LysAspValSerTrpGlyAspIleAlaCys-CysSer（配列番号２３）
SerCys-PheGluPheSerTrpSerGluAspCysAla-CysSer（配列番号２４）
SerCys-GluArgGlySerTrpCysGluAspAlaCys-CysSer（配列番号２５）
SerCys-ValTyrThrGlyTrpArgGluAspAlaSer-CysSer（配列番号２６）
SerCys-CysPheAlaSerCysThrAspSerAlaLeu-CysSer（配列番号２７）
SerCys-ThrArgSerArgCysGlyAspGlyAlaPhe-CysSer（配列番号２８）
SerCys-TyrValAlaIleMetSerGluLysSerPhe-CysSer（配列番号２９）
SerCys-IleGluAlaArgTyrThrAspHisAlaLeu-CysSer（配列番号３０）
【００４３】
配列（３）に関連付けられる捕捉領域としては、例えば、以下のレアアース結合配列を含むペプチドが挙げられる。以下に示すアミノ酸配列中、レアアース結合配列は、好ましくはＮ末端の３アミノ酸残基及びＣ末端の２アミノ酸残基を除く配列であり、より好ましくは両末端のＳＣ−及び−ＣＳを除く配列である。
【００４４】
SerCys-Pro-Val-Trp-Phe-Ser-Asp-Val-Gly-Asp-Phe-Met-Val-CysSer（配列番号３１）
SerCys-Pro-Val-Trp-Phe-Ser-Asp-Val-Gly-Glu-Phe-Met-Val-CysSer（配列番号３２）
SerCys-Pro-Val-Trp-Phe-Ser-Glu-Val-Gly-Asp-Phe-Met-Val-CysSer（配列番号３３）
SerCys-Pro-Val-Trp-Phe-Ser-Glu-Val-Gly-Glu-Phe-Met-Val-CysSer（配列番号３４）
【００４５】
（第２の領域）
第２の領域は、フィブロイン鎖を規定する。フィブロイン鎖としては、フィブロインＬ鎖とフィブロインＨ鎖とを包含する。これらのフィブロイン鎖は、いわゆる絹糸の構成タンパク質である。本開示においては、フィブロイン鎖を本ペプチドと融合することで、本ペプチドのレアアース種結合能を発揮するタンパク質を効率的に生産することができる。フィブロインＬ鎖は、いわゆる絹糸の構成タンパク質である。「絹糸」とは、主として絹糸虫の絹糸腺内で生合成される動物繊維をいう。
【００４６】
本明細書において「絹糸虫（silk-spinning worm）」とは、絹糸腺を有し、絹糸を吐糸することのできる昆虫の総称をいう。具体的には、チョウ目昆虫、ハチ目昆虫、アミメカゲロウ目昆虫、トビケラ目昆虫等において、主として幼虫期に営巣、営繭又は移動のために吐糸することのできる種類を指す。ここで、チョウ目昆虫は、分類学上のチョウ目（鱗翅目：Lepidoptera）に属する昆虫で、各種チョウ又はガが該当する。ハチ目昆虫は、分類学上のハチ目（膜翅目：Hymenoptera）に属する昆虫で、各種ハチ又はアリが該当する。アミメカゲロウ目昆虫は、アミメカゲロウ目（脈翅目：Neuroptera）に属する昆虫で、ヘビトンボ、ツノトンボ、ウスバカゲロウ等が該当する。トビケラ目昆虫は、トビケラ目（毛翅目：Trichoptera）に属する昆虫で、各種トビケラが該当する。本発明における絹糸虫には、大型の絹糸腺を有し、多量の絹糸を吐糸できるチョウ目昆虫が好ましく、中でもカイコガ科(Bombycidae)、ヤママユガ科（Saturniidae）、イボタガ科(Brahmaeidae)、オビガ科(Eupterotidae)、カレハガ科（Lasiocampidae）、ミノガ科（Psychidae）、ヒトリガ科（Archtiidae）、ヤガ科（Noctuidae）等に属する種が好適であり、Bombyx属、Samia属、Antheraea属、Saturnia属、Attacus属、Rhodinia属に属する種、具体的には、カイコの他、クワコ（Bombyx mandarina）、シンジュサン（Samia cynthia；エリサンSamia cynthia ricini及びシンジュサンとエリサンの交配種を含む）、ヤママユガ（Antheraea yamamai）、サクサン（Antheraea pernyi）、ヒメヤママユ（Saturnia jonasii）、クスサン（Saturnia japonica）、オオミズアオ（Actias aliena）、オナガミズアオ（Actias gnoma）等の野蚕と呼ばれるグループに属する種は特に好適である。最も好ましい絹糸虫は、カイコである。
【００４７】
また、「絹糸腺」とは、絹糸虫が有する唾液腺の変化した管状器官であって、液状絹を産生、蓄積し、また分泌する機能を有する。絹糸腺は、主として絹糸虫の幼虫の消化管に沿って左右一対で存在し、各絹糸腺は、前部、中部及び後部絹糸腺の３領域で構成されている。カイコをはじめとする多くの絹糸虫において、中部絹糸腺（middle silk gland、以下、ＭＳＧともいう。）細胞内では、絹糸の被覆成分である水溶性のゼラチン様タンパク質、セリシンが合成され、中部絹糸腺内腔中に分泌される。また、後部絹糸腺（posterior silk gland、以下、ＰＳＧともいう。）細胞内では、絹糸の繊維成分を構成する３つの主要なタンパク質フィブロインＨ鎖、フィブロインＬ鎖、及びｐ２５／ＦＨＸが合成されている。これら３つのタンパク質は、複合体を形成し、後部絹糸腺内腔中に分泌される。その後、この複合体は中部絹糸腺内腔に移行し、セリシンで被覆され、絹糸として前部絹糸腺から吐糸される。本開示においては、フィブロインＨ鎖及び／又はフィブロインＬ鎖に本ペプチドを融合させていることで、本融合タンパク質が絹糸の一部として前部絹糸線を通り、吐糸口から吐糸される。
【００４８】
フィブロインＬ鎖は、例えば、カイコ（Bombyx mori）のフィブロインＬ鎖のアミノ酸配列は、例えば、GenBank AccessionNo.AAA27840.1（配列番号３５）などとして知られている。フィブロインＬ鎖は、例えば、以下に示すように、クワコ、ハチノスツズリガ、サクラスガ、トビケラなどについてフィブロインＬ鎖が同定されている。フィブロインＬ鎖としては、こうした各種のフィブロインＬ鎖や当該Ｌ鎖のアミノ酸配列と９０％以上のアミノ酸配列同一性を有するペプチドであって、絹糸として吐糸されるタンパク質を用いることができる。
【００４９】
クワコ [Bombyx mandarina]  GenBank: BAB39499.1
ハチノスツヅリガ  [Galleria mellonella]  GenBank: AAB34044.1
サクラスガ  [Yponomeuta evonymellus]  GenBank: BAE97693.1
トビケラ目
ヒゲナガカワトビケラ  [Stenopsyche marmorata]  GenBank: BAS02545.1
和名不明  [Rhyacophila obliterata]  GenBank: BAH80180.1
和名不明  [Limnephilus decipiens]  GenBank: BAF62096.1
ガイマイツヅリガ [Corcyra cephalonica]  GenBank: ACX50392.1
ワタノメイガ [Haritalodes derogata]  GenBank: AFS32690.1
【００５０】
フィブロインＨ鎖も、例えば、カイコ（Bombyx mori）のフィブロインＨ鎖のアミノ酸配列は、例えば、fibroin heavy chain Fib-H [Bombyx mori]GenBank: AAF76983.1などとして知られている。フィブロインＨ鎖は、テンサン、サクサン、タサールサン、ウスタビガ、クスサン、サクラスガ、スジコナマダラメイガ、ノシメマダラメイガクワコ、ハチミツガ、サクラスガ、トビケラなどについて全体又は一部が同定されている。フィブロインＨ鎖としては、こうした各種のフィブロインＨ鎖や当該Ｈ鎖のアミノ酸配列と９０％以上のアミノ酸配列同一性を有するペプチドであって、絹糸として吐糸されるタンパク質を用いることができる。
【００５１】
ここで、アミノ酸配列及び塩基配列の同一性又は類似性とは、当該技術分野で知られているとおり、配列を比較することにより決定される、２以上のタンパク質あるいは２以上のポリヌクレオチドの間の関係である。当該技術で“同一性”とは、タンパク質またはポリヌクレオチド配列の間のアラインメントによって、あるいは場合によっては、一続きのそのような配列間のアラインメントによって決定されるような、タンパク質またはポリヌクレオチド配列の間の配列不変性の程度を意味する。また、類似性とは、タンパク質またはポリヌクレオチド配列の間のアラインメントによって、あるいは場合によっては、一続きの部分的な配列間のアラインメントによって決定されるような、タンパク質またはポリヌクレオチド配列の間の相関性の程度を意味する。より具体的には、配列の同一性と保存性（配列中の特定アミノ酸又は配列における物理化学特性を維持する置換）によって決定される。なお、類似性は、後述するＢＬＡＳＴの配列相同性検索結果においてSimilarity と称される。同一性及び類似性を決定する方法は、対比する配列間で最も長くアラインメントするように設計される方法であることが好ましい。同一性及び類似性を決定するための方法は、公衆に利用可能なプログラムとして提供されている。例えば、AltschulらによるＢＬＡＳＴ (Basic Local Alignment Search Tool) プログラム（たとえば、Altschul SF, Gish W, Miller W, Myers EW, Lipman DJ., J. Mol. Biol., 215: p403-410 (1990), Altschyl SF, Madden TL, Schaffer AA, Zhang J, Miller W, Lipman DJ., Nucleic Acids Res. 25: p3389-3402 (1997)）を利用し決定することができる。ＢＬＡＳＴのようなソフトウェアを用いる場合の条件は、特に限定するものではないが、デフォルト値を用いるのが好ましい。
【００５２】
本融合タンパク質においては、第１の領域を、１個又は２個以上を備えることができる。２つの第１の領域間は、例えば、公知の知られた、例えば、ＧＳリンカーなどのペプチドリンカーによって適宜連結することができる。また、本タンパク質においては、第２の領域は、１個又は２個以上備えることができる。
【００５３】
本融合タンパク質においては、第１の領域の備える部位は特に限定するものではなく、第２の領域のＮ末端に備えていてもよいし、そのＣ末端側に備えていてもよいし、第２の領域のＮ末端側及びＣ末端側の双方に備えていてもよい。第１の領域と第２の領域との間も既述のＧＳリンカーなどの公知のペプチドリンカーを介在させることができる。
【００５４】
本融合タンパク質は、第１の領域と第２の領域とを備え、他に、ペプチドリンカーやシグナルペプチドなどを備えている。本融合タンパク質が、フィブロインＬ鎖を第２の領域として備えるとき、実質的にフィブロインＨ鎖やセリシンを備えていないタンパク質の形態を採ることができる。また、本融合タンパク質が、フィブロインＨ鎖を第２の領域として備えるとき、実質的にフィブロインＬ鎖やセリシンを備えていないタンパク質の形態を採ることができる。さらにまた、本融合タンパク質は、例えば、カイコなどにより産生され、吐糸される絹糸において、フィブロインＨ鎖又はフィブロインＬ鎖とセリシンと複合体を形成している。かかる複合体も本融合タンパク質の一形態である。
【００５５】
本融合タンパク質は、例えば、公知の化学的方法又は遺伝子工学的手法で製造することができる。好ましくは、後述する形質転換ベクターを用いて、絹糸虫を形質転換し、当該絹糸虫に吐糸させる絹糸として製造する。
【００５６】
本融合タンパク質は、それ自体、レアアース種結合能を有し、レアアース種の分離、回収、検出及び標識等に用いることができる。また、本融合タンパク質は、フィブロインＬ鎖を有しているため、繊維状タンパク質として撚糸、紡績、成形、集合、集積、圧縮等により、ファイバー、シート状体、粒状体、多孔質体、スポンジ状体の種々の所望の三次元形状を有する集合体とすることができる。
【００５７】
（本融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド及び形質転換ベクター）
本融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドとしては、特に限定するものではないが、本融合タンパク質をコードするＤＮＡ又はＲＮＡを備えている限り、どのような形態であってもよい。例えば、ＤＮＡ一本鎖及び二本鎖、ＲＮＡ一本鎖及び二本鎖、ＤＮＡ／ＲＮＡキメラ、ＤＮＡ／ＲＮＡハイブリッドなどが挙げられる。典型的には、ＤＮＡである。
【００５８】
本融合タンパク質をコードする核酸は、種々の態様で組み合わせた第１の領域を規定するアミノ酸配列及び第２の領域を規定するアミノ酸配列のほか、ペプチドリンカーやシグナルペプチドを規定するアミノ酸配列をコードしている。本融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドの塩基配列は、そのアミノ酸配列に基づいて適宜決定し、あるいは公知のＧｅｎＢａｎｋなどのデータベースから取得することができる。
【００５９】
形質転換ベクターは、レアアース種をミネラリゼーション等する本融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドのほか、絹糸虫で絹糸を産生するためのプロモーターのほか、ターミネーターを備えることができる。形質転換ベクターは、さらに、形質転換体をスクリーニングするためのマーカー、絹糸虫の染色体への導入のための要素他を備えることができる。
【００６０】
（プロモーター）
本形質転換ベクターは、絹糸の一部として本融合タンパク質を合成することが可能なプロモーターを備えることができる。かかるプロモーターとしては、絹糸虫由来の後部絹糸腺プロモーターが挙げられる。第２の領域としてフィブロインＬ鎖を備えるときには、絹糸虫由来の後部絹糸腺プロモーターとすることができる。後部絹糸線プロモーターは、絹糸虫の後部絹糸腺で特異的に発現する遺伝子の発現を制御する部位特異的プロモーターをいう。
【００６１】
絹糸虫の後部絹糸腺（ＰＳＧ）で特異的に発現する遺伝子には、例えば、Ｆｉｂ Ｈ遺伝子、Ｆｉｂ Ｌ遺伝子、又はｐ２５遺伝子が挙げられる。したがってこれらの遺伝子の発現を制御するプロモーター（本明細書では、それぞれＦｉｂ Ｈプロモーター、Ｆｉｂ Ｌプロモーター、及びｐ２５プロモーターと称する）は、本形質転換ベクターのプロモーターとしての絹糸虫由来のＰＳＧプロモーターとして好適である。これらのプロモーターの具体例として、カイコ由来の、配列番号３６で示す塩基配列からなるＦｉｂ Ｈプロモーター、配列番号３７で示す塩基配列からなるＦｉｂ Ｌプロモーター、及び配列番号３８で示す塩基配列からなるｐ２５プロモーターが、またサクサン由来の配列番号３９で示す塩基配列からなるＦｉｂ Ｈプロモーター等が挙げられる。
【００６２】
なお、ＰＳＧプロモーターの塩基配列は、絹糸虫間で進化的に非常によく保存されている。したがって、例えば、ＰＳＧプロモーターは異なる絹糸虫種のＰＳＧにおいても作動し得る蓋然性が高い（Sezutsu H., et al., 2009, Journal of Insect Biotechnology and Sericology, 78 :1-10）。よって、ＰＳＧプロモーターの由来生物種と形質転換ベクターを導入する絹糸虫の生物種は必ずしも同一種でなくてもよい。好ましくは同じ目に属する種、より好ましくは同じ科に属する種、さらに好ましくは同じ属に属する種、最も好ましいのは同種由来のプロモーターである。
【００６３】
本形質転換ベクターは、どのＰＳＧプロモーターを含んでいてもよいが、好ましくは、Ｆｉｂ  Ｌ遺伝子のプロモーターである。
【００６４】
本形質転換ベクターにおいて、ＰＳＧプロモーターは、その下流域（３’末端側）の制御領域範囲内に本融合タンパク質をコードする遺伝子や転写調節因子などを配置されているかあるいは遺伝子を配置可能に構成されている。
【００６５】
（ターミネーター）
本形質転換ベクターは、ターミネーターとして、本融合ペプチドをコードする遺伝子の転写を終結できる塩基配列をターミネーターとして備えることができる。かかるターミネーターとしては、特に限定するものではないが、例えば、ＰＳＧプロモーターと本来的に組み合わされているターミネーターを用いることができる。ターミネーターは、通常、本融合タンパク質をコードする遺伝子の終結コドンから一定範囲内に配置されている。
【００６６】
（マーカー）
本形質転換ベクターは、マーカーを適宜備えることができる。マーカーは、いわゆる選抜マーカーとも呼ばれる標識タンパク質をコードする遺伝子である。標識タンパク質は、その活性に基づいて標識遺伝子の発現の有無を判別することのできるポリペプチドをいう。マーカーの検出は、標識タンパク質の活性そのものを直接的に検出してもよいし、標識タンパク質の活性によって生成される色素のような代謝物を介して間接的に検出してもよい。検出方法は、標識タンパク質の種類や検出操作性を考慮して適宜決定される。
【００６７】
標識タンパク質の種類は、特に限定するものではないが、例えば、蛍光タンパク質、色素合成タンパク質、発光タンパク質、外部分泌タンパク質、外部形態を制御するタンパク質等が挙げられる。蛍光タンパク質は、特定波長の励起光を当該タンパク質に照射したときに特定波長の蛍光を発するタンパク質をいう。天然型及び非天然型のいずれであってもよい。また、励起波長、蛍光波長も特に限定はしない。具体的には、例えば、ＣＦＰ、ＡｍＣｙａｎ、ＲＦＰ、ＤｓＲｅｄ（ＤｓＲｅｄ  ｍｏｎｏｍｅｒ、ＤｓＲｅｄ２のような派生物を含む）、ＹＦＰ、ＧＦＰ（ＥＧＦＰ、ＥＹＦＰ等の派生物を含む）等が挙げられる。色素合成タンパク質は、色素の生合成に関与するタンパク質であり、通常は酵素である。例えば、色素は、メラニン系色素（ドーパミンメラニンを含む）、オモクローム系色素、又はプテリジン系色素が挙げられる。発光タンパク質は、励起光を必要とすることなく発光することのできる基質タンパク質又はその基質タンパク質の発光を触媒する酵素をいう。例えば、イクオリン、酵素としてのルシフェラーゼが挙げられる。
【００６８】
マーカーは、本融合ペプチドを発現するためのカセットとは別個に、任意のプロモーターの下流に発現可能な状態で配置される。使用するプロモーターは、本融合ペプチドに用いるものと同一であっても異なっていてもよいが、形質転換体をスクリーニングする観点からは、個体において外部から観察できる部分にマーカーを発現できるプロモーターを用いることができる。
【００６９】
（染色体導入要素）
本形質転換ベクターは、本融合ペプチドをコードする遺伝子を絹糸虫の染色体に組み込むための導入要素を備えることができる。かかる導入要素としては、例えば、絹糸虫においてはトランスポゾンによる染色体導入要素が挙げられる。より具体的には、トランスポゾンの逆位末端反復配列(ＩＴＲＳ：Inverted terminal repeat sequence)」であり、トランスポゾンとしては、ｐｉｇｇｙＢａｃ、ｍａｒｉｎｅｒ、ｍｉｎｏｓ等を用いることができる（Shimizu,K. et al., 2000, Insect Mol. Biol., 9, 277-281；Wang W. et al.,2000, Insect Mol Biol 9（2）:145-55）。
【００７０】
（その他）
他の構成要素とは、例えば、適宜、エンハンサー、インスレーターが用いられる。エンハンサーは、プロモーターと協調して標的遺伝子の転写量を増大させることのできる遺伝子発現活性化領域である。インスレーターとしては、周囲の染色体のクロマチンによる影響を受けることなく、その配列に挟まれた遺伝子の転写を、安定的に制御できる塩基配列である。例えば、ニワトリのｃＨＳ４配列やショウジョウバエのｇｙｐｓｙ配列などが挙げられる。
【００７１】
本形質転換ベクターは、種々の形態を採ることができる。例えば、ＰＳＧプロモーターの３’末端側に当該プロモーターによって発現制御可能に本融合タンパク質をコードする遺伝子を配置して、当該プロモーターによって直接的に本融合タンパク質をコードする遺伝子の発現を制御するようにしてもよい。また、ＰＳＧプロモーターの３’末端側に当該プロモーターによって、ＧＡＬ４遺伝子などの転写調節因子タンパク質の発現を制御し、当該転写調節因子によって活性化されるプロモーターの制御下に本融合タンパク質をコードする遺伝子を配置するようにしてしてもよい。すなわち、ＰＳＧプロモーターによって間接的に本融合タンパク質をコードする遺伝子を発現制御するような形態であってもよい。後者の場合、１つの形質転換ベクターで構成されていてもよいし、２つ以上の形質転換ベクターで構成されていてもよい。
【００７２】
本形質転換ベクターは、本融合タンパク質を絹糸虫に発現させることができるため、本融合タンパク質の生産材としての絹糸虫を作製するための剤として用いることができる。すなわち、レアアース種結合剤又はレアアース種結合剤製造デバイス（絹糸虫）の作製剤として用いることができる。
【００７３】
（本形質転換ベクターによる形質転換絹糸虫の作製）
本形質転換ベクターを、絹糸虫に導入して形質転換絹糸虫を作製することができる。本形質転換ベクターの導入対象は、絹糸虫個体、絹糸虫由来の細胞（株化細胞を含む）、又は、絹糸虫由来の組織のいずれであってもよい。個体の場合にはその個体の発生ステージは問わない。胚、幼虫、蛹、又は成虫のいずれのステージであってもよい。好ましくは、高い効果が期待できる胚時期である。また、宿主の雌雄も問わない。同様に、細胞若しくは組織の場合にはそれが採取された又はそれが由来する個体の発生ステージは問わない。
【００７４】
導入方法は、導入状況に応じて当該分野で公知の方法によって行えばよい。例えば、導入する宿主がカイコで、本形質転換ベクターがトランスポゾンの逆位末端反復配列（Handler AM. et al., 1998, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 95:7520-5）を有するプラスミドの場合であれば、Tamuraらの方法（Tamura T. et al., 2000, Nature Biotechnology, 18, 81-84）を利用して導入できる。簡単に説明すると、本形質転換ベクターと共にトランスポゾン転移酵素をコードするＤＮＡを有するヘルパーベクターをカイコの初期胚にインジェクションすればよい。ヘルパーベクターとしては、例えば、ｐＨＡ３ＰＩＧが挙げられる。本形質転換ベクターがマーカーを含む場合には、マーカーの発現に基づいて形質転換体を容易に選抜することができる。なお、この方法で得られた遺伝子組換え絹糸虫は、本形質転換ベクターがトランスポゾンの逆位末端反復配列を介して染色体中に組み込まれている。得られた遺伝子組換えカイコを必要に応じて兄妹交配又は同系交配を行い、染色体に挿入された発現ベクターのホモ接合体を得ることもできる。
【００７５】
（本融合タンパク質遺伝子組換え絹糸虫）
本明細書に開示される遺伝子組換え絹糸虫（以下、単に、本遺伝子組換絹糸虫ともいう。）は、本形質転換ベクターを備えており、絹糸中に本融合ペプチドを含んで製造することができる。絹糸虫は、既述のいずれの絹糸虫であってもよいが、多頭飼育が可能なカイコ、エリサン及びサクサンは特に好ましい。本遺伝子組換え絹糸虫は、本形質転換ベクターを染色体内に保持していてもよいし、染色体外において一過的に保持していてもよい。
【００７６】
本遺伝子組換え絹糸虫は、既述のとおり種々の形態の本形質転換ベクターを備えることができる。ＰＳＧプロモーターの制御下に本融合ペプチドをコードする遺伝子を備える形態であってもよいし、ＰＳＧプロモーターの制御下にＧＡＬ４などの転写因子タンパク質を有する形質転換ベクターと、当該転写因子タンパク質によって活性化されるプロモーターの制御下に本融合ペプチドをコードする遺伝子を備える形質転換ベクターを備えていてもよい。
【００７７】
本遺伝子組換え絹糸虫は、本融合ペプチドを吐出することができるものであり、本融合ペプチドの生産デバイスでもある。
【００７８】
（本融合タンパク質の生産方法）
本明細書に開示される本融合タンパク質の生産方法は、本遺伝子組換え絹糸虫を用いて、本融合タンパク質を生産する工程を備えることができる。生産工程では、典型的には、本遺伝子組換え絹糸虫の繭から絹糸を分離し、必要に応じて絹糸を溶解処理することで、フィブロインを取得し、さらに、必要に応じて、フィブロインＬ鎖を分離することができる。
【００７９】
繭から絹糸を分離し、絹糸を可溶化し、絹糸からフィブロインＬ鎖を取得する方法は公知である。例えば、絹糸を可溶化するには、絹糸を塩化カルシウム溶液／エタノール混液、臭化リチウム水溶液、１，１，１，３，３，３−ヘキサフルオイソプロパノール、ヘキサフルオロアセトン、イオン液体で可溶化することができる。本融合ペプチドとしては、好ましくは、可溶化し、さらに好ましくはフィブロインＬ鎖として利用する。
【００８０】
（本融合タンパク質を備えるレアアース種分離回収装置）
本明細書に開示されるレアアース種分離回収装置（以下、単に、本装置ともいう。）は、本融合タンパク質を備えており、レアアース種と相互作用してレアアース種を捕捉するように構成されている。捕捉されたレアアース種は、必要に応じて、レアアース種を分離回収することができるように構成されている。本融合タンパク質の形態は、既述のとおり、特に限定するものではないが、例えば、生糸から分離されてフィブロインＬ鎖又はＨ鎖を備える形態である。
【００８１】
本装置は、如何なる形態で本融合タンパク質を備えていてもよい。例えば、本融合タンパク質が備えるフィブロイン鎖が周知の固相担体に固定化された形態であってもよい。フィブロイン鎖は、周知の方法で周知の固相担体に固定化することができる。また、フィブロイン鎖は、自己集合性を有しているため、それ自体あるいは他の材料とともに既述のように種々の形態に成形されていてもよい。
【００８２】
（レアアース種の分離回収方法）
本明細書に開示されるレアアース種の分離回収方法は、本融合タンパク質を用いてレアアース種を捕捉する工程を備えることができ、その結果、レアアース種を分離回収することができる。
【００８３】
本融合タンパク質を用いてレアアース種を捕捉するには、本融合タンパク質とレアアース種とを結合させる。本融合タンパク質と結合させるには、本融合タンパク質の存在下でレアアース種を接触させればよい。本融合タンパク質とレアアース種との結合のための条件は、本融合ペプチドのレアアース種結合能が発揮される限り特に限定されない。結合条件は、レアアース種と本融合タンパク質とを、ｐＨ、温度、塩濃度において条件を異ならせて、結合状態を確認することで取得できる。例えば、ｐＨ５以上８以下、温度４℃以上８０℃以下の範囲で、本融合タンパク質とレアアース種との結合を確認できている。
【００８４】
本融合タンパク質とレアアース種との結合は、液性媒体中において本融合タンパク質とレアアース種とを混合等するなどして接触させればよい。液体媒体としては、本ペプチドのレアアース種結合能を発揮できる限り、いかなる液性媒体であってもよい。液性媒体は、水性媒体であっても有機溶媒であってもよく、これらの混合媒体であってもよい。典型的には、中性付近のバッファ等やそれらを含む混液等用いることができる。例えば、ｐＨは、特に限定されないが、５以上８以下程度とすることができ、塩濃度も特に限定されないが、１０ｍＭ以上１Ｍ以下とすることができる。温度も、特に限定されないで、温度制御なくて容易に結合を実現できるが、典型的には、４℃以上８０℃以下、より好ましくは１０℃以上４０℃以下とすることができ、さらに好ましくは１５℃以上３０℃以下とすることができる。本融合タンパク質とレアアース種とが結合するためには、適宜撹拌して接触効率を高めることができる。また、接触のための時間は、特に限定しないが、１０分程度から数時間程度とすることができ、好ましくは３０分以上８時間以下とすることができ、上限時間はより好ましくは６時間以下、さらに好ましくは４時間以下程度とすることができる。また、より好ましくは１時間以上３時間以下程度とすることができる。
【００８５】
本融合タンパク質のレアアース種結合能を発揮させるための液体媒体中の本融合タンパク質濃度及びレアアース種濃度も特に限定されないが、例えば、本融合タンパク質が２０ｎＭ以上の濃度であることが好ましく、レアアース種濃度が１００μＭ以上であることが好ましい。
【００８６】
（本融合タンパク質によるミネラリゼーション）
本融合タンパク質によれば、本融合タンパク質とレアアースイオンなどのレアアース含有無機化合物の原料（ミネラリゼーション原料）からレアアース含有無機化合物を生成することができる。レアアース含有無機化合物は、生成時点においては結晶であってもよいし、非晶であってもよい。非晶の場合には、必要に応じて焼成工程を実施することで結晶化することができる。
【００８７】
ミネラリゼーションを実現するには、本融合タンパク質とレアアースの無機化合物の原料（ミネラリゼーション原料）とを液性媒体中でインキュベートすればよい。ミネラリゼーション原料としては、１つはレアアースイオンである。レアアースイオンは、例えば、硝酸塩や塩酸塩などミネラリゼーションに使用する媒体に溶解する状態で用いることができる。その他のミネラリゼーション原料としては、レアアースの無機化合物である酸化物、水酸化物及び無機酸の構成原料である。酸化物や水酸化物においては、水性媒体の液性により水性媒体等において存在し得るし、無機酸にあっては、水性媒体等中に陰イオンとして存在させればよい。
【００８８】
インキュベート条件は、本融合タンパク質のミネラリゼーション活性を発揮させることができる限り特に限定されない。典型的には、既に説明した本ペプチドのレアアース材料結合能を発揮させる状態を採用することができる。なお、ｐＨ、温度及び／又はインキュベート時間により無機化合物の生成状況や析出状況が異なるため、ｐＨ調節、温度調節及び／又はインキュベート時間を適宜延長したり短縮したりするなど設定することが好ましい。例えば、本発明者らによれば、ｐＨ５以上８以下、温度４℃以上８０℃以下の範囲で、本融合タンパク質によるミネラリゼーション活性を確認できている。
【００８９】
本融合タンパク質によるミネラリゼーションにおいては、本融合タンパク質とミネラリゼーション原料を、静置してもよいしミネラリゼーションを阻害しない程度に撹拌してもよい。ミネラリゼーションによるレアアース含有無機化合物は、インキュベーション中の液性媒体において不溶物（沈殿物）として取得することができる。遠心分離等により固相を回収し、界面活性剤等を利用して本ペプチド等を分離することで、本融合タンパク質と分離したレアアース含有無機化合物を得ることができる。さらに、必要に応じ、乾燥及び／又は焼成によりレアアース無機化合物を得ることができる。
【００９０】
本融合タンパク質のミネラリゼーション活性を発揮させるための液体媒体中の本融合タンパク質濃度及びミネラリゼーション原料濃度も特に限定されないが、例えば、本融合タンパク質が５μＭ以上の濃度であることが好ましく、ミネラリゼーション原料のレアアースイオン濃度が１００μＭ以上であることが好ましい。また、無機化合物のレアアース以外である他のミネラリゼーション原料についても、レアアースイオン濃度と同様である。
【００９１】
本融合タンパク質のミネラリゼーションのためのインキュベーションは、簡易な低コスト条件で実現できる点において有利である。
【００９２】
ミネラリゼーションによって得られるレアアース含有無機化合物の乾燥及び非晶質のレ
アアース含有無機化合物の結晶化のために焼成することができる。焼成工程は、レアアース含有無機化合物が非晶質である場合などにおいて、結晶化を促進するために行うことができる。あるいは焼成工程は、水酸化物などから脱水して酸化物に変換させるために行うことができる。
【００９３】
結晶化のための焼成工程は、公知の非晶質化合物を結晶化するための条件に基づいて行
うことができる。例えば、３００℃以上１５００℃以下とすることができる。ミネラリゼ
ーションによるレアアース含有無機化合物が炭酸塩などの無機塩類の場合、当該無機塩の
状態を維持して結晶化するための加熱温度を設定することができる。また、脱炭酸等など
無機酸を脱離させて酸化物を得る場合には、当該脱離が生じる温度を適宜選択することが
できる。
【実施例】
【００９４】
以下、本明細書の開示をより具体的に説明するために具体例としての実施例を記載する。以下の実施例は、本明細書の開示を説明するためのものであって、その範囲を限定するものではない。
【実施例１】
【００９５】
（遺伝子発現用ベクターの構築とカイコへの遺伝子導入）
カイコ絹糸のフィブロインＬ鎖（配列番号３５）をコードする遺伝子（Fibroin L）下流に、Ｌｉｎｋｅｒ配列（Gly-Gly-Gly-Ser）を介してＬａｍｐ−１をコードするＤＮＡ（Ｌａｍｐ−１遺伝子ともいう。）を連結した４種類の遺伝子を発現する発現ベクターを設計した。フィブロインＬ鎖のＣ末端にリンカー（GSKGGGSGGGS）を介してＬａｍｐ−１を付与してシステイン（Ｃ）残基で環状化したＬａｍｐ１−Ｃ及び環状化せずに直鎖状としたＬａｍｐ１−Ｌのほか、それぞれについて、発現タンパク質の精製を考慮しＬａｍｐ−１のさらにＣ末端側にリンカー（GGGS）を介して、ヒスチジン（Ｈｉｓ）が６つ連結したＨｉｓ−Ｔａｇ配列を付与したコンストラクト（Ｌａｍｐ１−Ｃｈｉｓ６、Ｌａｍｐ１−Ｌｈｉｓ６）も同時に作製した。設計したコンストラクトの構成を図１に示す。これら４種類の遺伝子の塩基配列は、それぞれ配列番号４０、４３、４６及び４９である。
【００９６】
ＰＣＲを利用して本遺伝子を増幅後、定法に従って、図２に示すカイコ染色体導入用ベクター（マーカー遺伝子は、ｍＫＯ遺伝子）の挿入部位（制限酵素サイトＡｓｃＩとＦｓｅＩでカットした部位）に挿入した。作製した各遺伝子発現ベクターについてＤＮＡ塩基配列を解読した結果、いずれも目的とするベクターであった。
【００９７】
続いて、本ベクターを用いて、国立研究開発法人農業・食品産業技術総合研究機構で維持されている白眼・白卵・非休眠系統であるカイコｗ１−ｐｎｄ系統に対して遺伝子導入を行った。なお、カイコの飼育条件は、２５〜２７℃の飼育室で、幼虫の全齢を人工飼料（シルクメイト原種１−３齢Ｓ、日本農産工）で飼育した。人工飼料は２〜３日毎に交換した（Uchino K. et al., 2006, J Insect Biotechnol Sericol, 75:89-97）。
【００９８】
遺伝子組換えカイコは、Ｔａｍｕｒａらの方法（Tamura T. et al., 2000, Nature Biotechnology, 18, 81-84）に従って作出した。すなわち、各遺伝子発現ベクターをｐｉｇｇｙＢａｃヘルパープラスミドとともに、それぞれ産卵後２〜８時間の合計２００個のカイコ卵にインジェクションした。インジェクション後の卵は、加湿状態、２５℃で孵化するまでインキュベートした。孵化した幼虫を上記の方法で飼育し、成虫まで育て上げて次世代の卵を得た。これらの卵について、ベクター中にコードされているｍＫＯ遺伝子の発現（眼や神経系でｍＫＯタンパク質の蛍光が認められる）を指標に選抜を行い、１〜２１頭の遺伝子組換えカイコを得た。各カイコを飼育し、それらの卵から生まれた後代を飼育して解析に用いた。
【実施例２】
【００９９】
（遺伝子組換えカイコにおける遺伝子導入・融合タンパク質発現の確認）
ProteinaseK法によって、各成虫からゲノムＤＮＡを調製した。本ＤＮＡを制限酵素ＨｉｎｄＩＩＩ（タカラバイオ）にて処理し、定法に従って電気泳動後、Ｈｙｂｏｎｄ−Ｎ＋ナイロンメンブレンにトランスファーした。本メンブレンをAlkphos Direct Labeling kit（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いてSouthern hybridizationを行った。検出用のプローブＤＮＡは、トランスポゾン（ｐｉｇｇｙ Ｂａｃ）の３’側領域をＰＣＲ増幅して使用した。解析の結果、各個体で複数種のバンドが検出された。結果を図３に示す。
【０１００】
図３に示すように、バンド数は挿入コピー数、バンドパターンは導入状況を示すことから、選出した遺伝子組換えカイコにおいて目的遺伝子が１〜４コピー導入されていることがわかった。
【０１０１】
続いて、遺伝子組換えカイコにおけるＬａｍｐ−１融合タンパク質の発現確認を行った。組換えカイコが生産する絹糸を可溶化し、Ｌａｍｐ−１抗体を用いたWestern blotting解析を行った。なお、可溶化は、絹糸を尿素精錬（８Ｍ尿素０．５％ ２−メルカプトエタノール中で８０℃３０分処理）してセリシンを除いた後、約２０ｍｇの精錬絹糸を９ＭＬｉＢｒ水溶液に浸漬することで行った。溶解した後、８Ｍ尿素で４ｍｇ／ｍｌに調整して用いた。結果を図４に示す。
【０１０２】
図４に示すように、４系統の遺伝子組換えカイコ（Ｌａｍｐ１−Ｃ，Ｌａｍｐ１−Ｌ，Ｌａｍｐ１−Ｃｈｉｓ６，Ｌａｍｐ１−Ｌｈｉｓ６）いずれもＬａｍｐ−１抗体で認識され、予想される分子量付近にバンドが確認された。一方、Ｌａｍｐ−１遺伝子を持たないコントロールカイコ（Ｗｉｌｄ ｔｙｐｅ）では、ＦｉｂＬ抗体では検出されるもののＬａｍｐ−１抗体では検出バンドが認められなかった。以上の結果より、遺伝子組換えカイコにおいて、Ｌａｍｐ−１がフィブロインＬ鎖に融合する形でタンパク質発現されていることを確認できた。
【実施例３】
【０１０３】
（レアアース種結合融合タンパク質の精製）
組換えカイコが生産する絹糸を臭化リチウム水溶液で溶解し、ヒスチジンタグの機能を活用してＬａｍｐ−１融合タンパク質のみをカラム精製した。調製した各タンパク質について、定法に従ってＳＤＳ−ポリアクリルアミド電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）後に、Ｌａｍｐ−１抗体を用いたWestern blotting解析を行った。結果を図５に示す。
【０１０４】
図５に示すように、目的の分子量に相当するバンドが検出され（２８ｋＤａ）、フィブロインＬ鎖にＬａｍｐ−１タンパク質が融合したタンパク質が精製できていることがわかった。
【実施例４】
【０１０５】
（Ｌａｍｐ−１融合タンパク質におけるレアアースイオン鉱物化）
実施例３で調製したＬａｍｐ−１融合タンパク質のレアアース回収能力を評価した。２種類の精製タンパク質（ＦｉｂＬ−Ｌａｍｐ１−Ｌｈｉｓ６，ＦｉｂＬ−Ｌａｍｐ１−Ｃｈｉｓ６）に、ジスプロシウムイオン（Ｄｙ3+）溶液をそれぞれ添加した。添加後の液体の外観、吸光度及び走査型顕微鏡（Scanning Electron Microscope, ＳＥＭ、日立ハイテク）による観察結果を図６に示す。また、沈殿物をエネルギー分散型Ｘ線分析（Energy Dispersive X-ray spectrometry,ＥＤＸ）にて元素分析した結果を図７に示す。
【０１０６】
図６に示すように、Ｄｙ3+添加直後にいずれの融合タンパク質も白濁し、沈降物の生成が認められた。分光光度計および走査型電子顕微鏡（Scanning Electron Microscope, ＳＥＭ、日立ハイテク）観察の結果、環状型ペプチドが付与された融合タンパク質（ＦｉｂＬ−Ｌａｍｐ１−Ｃｈｉｓ６）のほうが、非環状型ペプチド（Ｌａｍｐ１−Ｌｈｉｓ６）の場合より多くの沈降物が認められた。
【０１０７】
また、図７に示すように、ＥＤＸにて元素分析した結果、いずれもＤｙを示すスペクトルが確認、Ｌａｍｐ−１を融合したフィブロインＬ鎖は、レアアースイオンを鉱物形状で回収できることがわかった。
【０１０８】
以上のことから、Ｌａｍｐ−１などのレアアース種結合ペプチドは、フィブロインＬ鎖と融合することにより、カイコなどの絹糸虫が吐出する絹糸の一部に融合タンパク質として発現し、かつ、レアアース種結合能を保持していることがわかった。
【配列表フリーテキスト】
【０１０９】
配列番号４０〜５１：フィブロインＬ融合タンパク質をコードするＤＮＡ
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【配列表】
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