(57)【要約】【課題】本出願人らは、ＥＲＦＥが、ＢＭＰ２およびＢＭＰ６の両方に結合し、それらの活性に影響することを決定し、したがって、この相互作用のモジュレーションは、インスリン耐性の改善に影響を与え、糖尿病、代謝性および非アルコール性脂肪性肝疾患の発症等、体脂肪分布不良の様々な側面を寛解する手段を提供する。【解決手段】本発明は、さらに、ＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニストを使用して、鉄代謝の疾患および脂肪または炭水化物代謝の疾患を処置するための方法に関する。【選択図】図１
2019210290.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）ＢＭＰもしくはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチド、およびＥＲＦＥもしくはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドの間の相互作用を阻害する、および／またはＥＲＦＥもしくはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドによるＢＭＰ活性の阻害を阻害する、
（ｂ）ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドに結合し、それとアンタゴニストとの相互作用および／またはアンタゴニストによる阻害を防止する、
（ｃ）ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドのアンタゴニストに結合し、それとＢＭＰとの相互作用および／またはＢＭＰの阻害を防止する、
（ｄ）ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドに結合し、それとＥＲＦＥもしくはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドとの相互作用および／またはＥＲＦＥもしくはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドによる阻害を防止する、
（ｅ）ＥＲＦＥまたはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドに結合し、それとＢＭＰもしくはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドとの相互作用、および／またはＢＭＰ活性の阻害を防止または阻害する、
（ｆ）ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドに結合し、それとＢＭＰ受容体との相互作用を増強する、または
（ｇ）ＢＭＰ受容体に結合し、それとそのＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドとの相互作用を増強する、
鉄代謝の疾患の処置における使用のためのＢＭＰアゴニスト。
【請求項２】
ＢＭＰが、
（ｉ）ＢＭＰ２、２／６ヘテロ二量体、３、４、５、６、７、８ａ、８ｂ、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５のうちいずれか１種または複数、
（ｉｉ）ＢＭＰ２／６ヘテロ二量体、ＢＭＰ５、ＢＭＰ６、ＢＭＰ７のうちいずれか１種または複数、
（ｉｉｉ）ＢＭＰ５、ＢＭＰ６、ＢＭＰ７のうちいずれか１種または複数、
（ｉｖ）（ａ）ＢＭＰ２、ＢＭＰ４、（ｂ）ＢＭＰ２、（ｃ）ＢＭＰ４、（ｄ）ＢＭＰ５、（ｅ）ＢＭＰ６、（ｆ）ＢＭＰ７のうちいずれか１種または複数、
（ｖ）（ａ）ＢＭＰ２、（ｂ）ＢＭＰ２／６ヘテロ二量体、（ｃ）ＢＭＰ４、（ｖ）ＢＭＰ５、（ｂ）ＢＭＰ６または（ｆ）ＢＭＰ７のうちいずれか１種または複数、
（ｖｉ）（ａ）ＢＭＰ２、（ｂ）ＢＭＰ２／６または（ｃ）ＢＭＰ４のうちいずれか１種または複数
から選択される、請求項１に記載の使用のためのＢＭＰアゴニスト。
【請求項３】
場合により、約０．００１ｎＭまたはそれ未満の結合定数またはＫＤで、（ａ）ＢＭＰもしくはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチド、（ｂ）ＢＭＰのアンタゴニスト、（ｃ）ＢＭＰ受容体、または（ｄ）ＥＲＦＥもしくはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドに特異的に結合することができる、請求項１または２に記載の使用のためのＢＭＰアゴニスト。
【請求項４】
場合により、約０．００１ｎＭまたはそれ未満のＩＣ５０または阻害定数（Ｋｉ）で、（ａ）ＢＭＰのアンタゴニスト、（ｂ）ＢＭＰ受容体、および／または（ｃ）ＥＲＦＥもしくはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドのうちいずれか１種または複数への、ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドの結合を特異的に阻害することができる、請求項１〜３のいずれかに記載の使用のためのＢＭＰアゴニスト。
【請求項５】
（ａ）ＢＭＰもしくはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチド、（ｂ）ＢＭＰもしくはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドのアンタゴニスト、（ｃ）ＥＲＦＥもしくはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチド、または（ｄ）ＢＭＰ受容体に特異的にまたは選択的に結合することができる、請求項１〜４のいずれかに記載の使用のためのＢＭＰアゴニスト。
【請求項６】
（ａ）ＢＭＰのアンタゴニスト、（ｂ）ＢＭＰ受容体、（ｃ）ＥＲＦＥまたはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドのうちいずれか１種または複数への、ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドの結合を選択的に阻害することができる、請求項１〜５のいずれかに記載の使用のためのＢＭＰアゴニスト。
【請求項７】
疾患が、異常に低いヘプシジンレベル、低いヘプシジン活性、または異常に高い鉄レベルを含む、請求項１〜６のいずれかに記載の使用のためのＢＭＰアゴニスト。
【請求項８】
疾患が、サラセミアである、請求項７に記載の使用のためのＢＭＰアゴニスト。
【請求項９】
サラセミアが、アルファ−サラセミア、ベータ−サラセミア、デルタ−サラセミア、ヘモグロビンＥ／サラセミア、ヘモグロビンＳ／サラセミア、ヘモグロビンＣ／サラセミア、ヘモグロビンＤ／サラセミアから選択される、請求項８に記載の使用のためのＢＭＰアゴニスト。
【請求項１０】
疾患が、慢性Ｂ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、アルコール性肝疾患または鉄過剰疾患である、請求項７に記載の使用のためのＢＭＰアゴニスト。
【請求項１１】
脂質または炭水化物代謝の疾患の処置における使用のためのＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニスト。
【請求項１２】
（ｉ）ＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニストの活性を防止または阻害する、
（ｉｉ）ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチド、およびＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニストの間の相互作用を防止または阻害する、
（ｉｉｉ）ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチド、およびＥＲＦＥまたはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドの間の相互作用を防止または阻害する、
（ｉｖ）ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチド、およびＢＭＰ受容体の間の相互作用を防止または阻害する、
（ｖ）ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチド、およびＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニストの間の相互作用を増強する、
（ｖｉ）ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチド、およびＥＲＦＥまたはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドの間の相互作用を増強する、
（ｖｉｉ）ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチド、およびＢＭＰ受容体の間の相互作用を増強する、
（ｖｉｉｉ）ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドに結合し、それとアゴニストもしくはアンタゴニストとの相互作用および／またはアゴニストもしくはアンタゴニストによる阻害もしくは活性化を防止する、
（ｉｘ）ＢＭＰのアゴニストまたはアンタゴニストに結合し、それとＢＭＰもしくはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドとの相互作用および／またはＢＭＰもしくはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドの阻害もしくは活性化を防止する、
（ｘ）ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドに結合し、それとＥＲＦＥもしくはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドとの相互作用および／またはＥＲＦＥもしくはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドによる阻害を防止する、
（ｘｉ）ＥＲＦＥまたはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドに結合し、それとＢＭＰもしくはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドとの相互作用、および／またはＢＭＰ活性の阻害を防止または阻害する、
（ｘｉｉ）ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドに結合し、それとＥＲＦＥもしくはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドとの相互作用および／またはＥＲＦＥもしくはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドによる阻害を増強する、
（ｘｉｉｉ）ＥＲＦＥまたはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドに結合し、それとＢＭＰとの相互作用および／またはＢＭＰ活性の阻害を増強する、
（ｘｉｖ）ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドに結合し、それとＢＭＰ受容体との相互作用を防止または阻害する、
（ｘｖ）ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドに結合し、それとＢＭＰ受容体との相互作用を増強する、
（ｘｖｉ）ＢＭＰ受容体に結合し、それとＢＭＰもしくはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドとの相互作用を防止または阻害する、
（ｘｖｉｉ）ＢＭＰ受容体に結合し、それとＢＭＰもしくはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドとの相互作用を増強する、
請求項１１に記載の使用のためのＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニスト。
【請求項１３】
ＢＭＰが、
（ｉ）ＢＭＰ２、２／６ヘテロ二量体、３、４、５、６、７、８ａ、８ｂ、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５のうちいずれか１種または複数、
（ｉｉ）ＢＭＰ２／６ヘテロ二量体、ＢＭＰ５、ＢＭＰ６、ＢＭＰ７のうちいずれか１種または複数、
（ｉｉｉ）ＢＭＰ５、ＢＭＰ６、ＢＭＰ７のうちいずれか１種または複数、
（ｉｖ）（ａ）ＢＭＰ２、ＢＭＰ４、（ｂ）ＢＭＰ２、（ｃ）ＢＭＰ４、（ｄ）ＢＭＰ５、（ｅ）ＢＭＰ６、（ｆ）ＢＭＰ７のうちいずれか１種または複数、
（ｖ）（ａ）ＢＭＰ２、（ｂ）ＢＭＰ２／６ヘテロ二量体、（ｃ）ＢＭＰ４、（ｖ）ＢＭＰ５、（ｂ）ＢＭＰ６または（ｆ）ＢＭＰ７のうちいずれか１種または複数
から選択される、請求項１１または１２に記載の使用のためのＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニスト。
【請求項１４】
ＢＭＰが、ＢＭＰ２、ＢＭＰ２／６ヘテロ二量体またはＢＭＰ４から選択される、請求項１１または１２に記載の使用のためのＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニスト。
【請求項１５】
（ａ）ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチド、（ｂ）ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドのアゴニストまたはアンタゴニスト、（ｃ）ＥＲＦＥまたはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチド、（ｄ）ＢＭＰ受容体に特異的におよび／または選択的に結合することができる、請求項１１〜１４のいずれかに記載の使用のためのＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニスト。
【請求項１６】
（ａ）ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドのアゴニストまたはアンタゴニスト、（ｂ）ＢＭＰ受容体、（ｃ）ＥＲＦＥまたはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドのうちいずれか１種または複数への、ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドの結合を特異的におよび／または選択的に阻害または増強することができる、請求項１１〜１５のいずれかに記載の使用のためのＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニスト。
【請求項１７】
脂質または炭水化物代謝の疾患が、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、小児非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、小児非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、肥満、糖尿病１型、糖尿病２型、妊娠糖尿病から選択される、または高コレステロールまたは高トリグリセリドの処置における使用のための、請求項１１〜１６のいずれかに記載の使用のためのＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニスト。
【請求項１８】
（ｉ）低分子、（ｉｉ）抗体またはその抗原結合部分、（ｉｉｉ）ＥＲＦＥまたはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチド、（ｉｖ）ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチド、（ｖ）ＢＭＰ受容体、（ｖｉ）ＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニストをコードする核酸、（ｖｉｉ）ＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニストをコードする核酸を含むベクターである、請求項１〜１７のいずれかに記載の使用のためのＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニスト。
【請求項１９】
ＥＲＦＥまたはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドに結合する、それに特異的に結合する、またはそれに選択的に結合する、抗体またはその抗原結合部分である、請求項１８に記載の使用のためのＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニスト。
【請求項２０】
（ｉ）ＥＲＦＥのＮ末端領域、
（ｉｉ）配列番号３（ＴＮＦＤドメイン）、または配列番号１のアミノ酸位置１９０〜３５４、
（ｉｉｉ）配列番号４（ＮＴＤ２ドメイン）、または配列番号１のアミノ酸位置１１４〜１８９、
（ｉｖ）配列番号５（コラーゲン様ドメイン）、または配列番号１のアミノ酸位置９６〜１１３、
（ｖ）配列番号６（ＮＴＤ１ドメイン）、または配列番号１のアミノ酸位置２４〜９５、
（ｖｉ）配列番号７（ＳＰドメイン）、または配列番号１のアミノ酸位置１〜２３、
（ｖｉｉ）配列番号１のアミノ酸１９６〜２０６からなる配列、または配列番号８に示されている配列、
（ｖｉｉｉ）配列番号１のアミノ酸１３２〜１４８からなる配列、または配列番号９に示されている配列、
（ｉｘ）配列番号１のアミノ酸１０９〜１２５からなる配列、または配列番号１０に示されている配列、
（ｘ）配列番号１のアミノ酸７３〜９４からなる配列、または配列番号１１に示されている配列、
（ｘｉ）配列番号１のアミノ酸７３〜８５からなる配列、または配列番号１２に示されている配列、
（ｘｉｉ）アミノ酸配列ＲＤＡＷＦＶＲＱまたは配列番号１４の全体もしくは一部からなるまたは含む配列、
（ｘｉｉｉ）アミノ酸配列ＨＳＶＤＰＲＤＡＷＭまたは配列番号１５の全体もしくは一部からなるまたは含む配列、
（ｘｉｖ）アミノ酸配列ＨＳＶＤＰＲＤＡＷＭまたは配列番号１５の全体もしくは一部からなるまたは含む配列、
（ｘｖ）アミノ酸配列ＲＤＡＷＦＶＲＱまたは配列番号１４の全体もしくは一部からなるまたは含む配列、
（ｘｖｉ）アミノ酸配列ＤＰＲＤＡＷＦＶまたは配列番号１６の全体もしくは一部からなるまたは含む配列、
（ｘｖｉｉ）アミノ酸配列ＤＰＲＤＡＷＭＬＦＶまたは配列番号１７の全体もしくは一部からなるまたは含む配列、
（ｘｖｉｉｉ）アミノ酸配列ＨＳＶＤＰＲＤＡＷＭおよびＲＤＡＷＦＶＲＱまたは配列番号１４および配列番号１５の全体もしくは一部からなるまたは含む配列、
（ｘｉｘ）アミノ酸配列配列番号１または配列番号１に対して９５〜１００％同一性を有する配列の全体もしくは一部からなるまたは含む配列
に結合する抗体またはその抗原結合部分である、請求項１８または１９に記載の使用のためのＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニスト。
【請求項２１】
アゴニストまたはアンタゴニストが、抗体またはその抗原結合部分であり、抗体またはその抗原結合部分が、
（ｉ）ＣＤＲ配列：ＣＤＲＨ１、配列番号１８；ＣＤＲＨ２、配列番号１９；ＣＤＲＨ３、配列番号２０；ＣＤＲＬ１、配列番号２１；ＣＤＲＬ２、配列番号２２；ＣＤＲＬ３、配列番号２３，
（ｉｉ）ＶＨおよびＶＬ配列、配列番号２４および配列番号２５；または
（ｉｉｉ）重および軽鎖配列、配列番号２６および配列番号２７
を含む、請求項１８〜２０のいずれかに記載の使用のためのＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニスト。
【請求項２２】
抗体またはその抗原結合部分が、（ｉ）アミノ酸配列ＲＤＡＷＦＶＲＱまたは配列番号１４の全体もしくは一部からなるまたは含む配列に特異的に結合する、（ｉｉ）アミノ酸配列ＨＳＶＤＰＲＤＡＷＭまたは配列番号１５の全体もしくは一部からなるまたは含む配列に特異的に結合する、（ｉｉｉ）アミノ酸配列ＨＳＶＤＰＲＤＡＷＭおよびＲＤＡＷＦＶＲＱまたは配列番号１４および配列番号１５の全体もしくは一部からなるまたは含む配列に特異的に結合する、請求項２１に記載の使用のためのＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニスト。
【請求項２３】
抗体が、ＥＲＦＥまたはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドへの結合に関して、請求項２１または２２に記載の抗体またはその抗原結合部分と競合する、請求項１８または２０に記載の使用のためのＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニスト。
【請求項２４】
アゴニストまたはアンタゴニストが、ＥＲＦＥであるまたはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドであり、エリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドが、配列番号１のアミノ酸１９５〜３５４のＣ１Ｑ領域を欠くか、またはその領域内で切断されたＥＦＲＥのＮ末端領域であり、ＥＦＲＥのＮ末端領域が、（ｉ）配列番号１のアミノ酸１〜２１２、（ｉｉ）配列番号１のアミノ酸１〜１４２、（ｉｉｉ）配列番号１のアミノ酸１〜４２、（ｉｖ）配列番号１のアミノ酸１〜２４、（ｖ）配列番号１のアミノ酸２４〜９６、（ｖｉ）配列番号１のアミノ酸９６〜１１４、（ｖｉｉ）配列番号１のアミノ酸１１４〜１９５、（ｖｉｉｉ）配列番号１のアミノ酸１〜９６、（ｉｘ）配列番号１のアミノ酸１〜１１４、（ｘ）配列番号１のアミノ酸１〜１９０、（ｘｉ）配列番号１のアミノ酸１〜１９５、（ｘｉｉ）配列番号１のアミノ酸１９６〜２０６もしくは配列番号８に示されている配列［ＧＰＲＡＰＲＶＥＡＡＦ、配列番号８］、（ｘｉｉｉ）配列番号１のアミノ酸１３２〜１４８もしくは配列番号９に示されている配列、（ｘｉｖ）配列番号１のアミノ酸１０９〜１２５もしくは配列番号１０に示されている配列、（ｘｖ）配列番号１のアミノ酸７３〜９４もしくは配列番号１１に示されている配列、または（ｘｖｉ）配列番号１のアミノ酸７３〜８５もしくは配列番号１２に示されている配列を含むまたはそれからなる、請求項１８に記載の使用のためのＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニスト。
【請求項２５】
１種または複数のＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニスト、ならびに薬学的に許容できる担体および／または賦形剤を含む、請求項１〜２４のいずれかに記載の使用のためのＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニストを含む医薬組成物。
【請求項２６】
ＢＭＰアゴニストもしくはアンタゴニストまたは医薬組成物が、別々に、逐次にまたは同時に、第２の治療剤と組み合わせた使用のために提供され、場合により、組合せが、薬学的に許容できる担体および／または賦形剤を含む医薬組成物として提供される、請求項１〜２４のいずれかに記載の使用のためのＢＭＰアゴニストもしくはアンタゴニスト、または請求項２５に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項２７】
第２の治療剤が、（ｉ）低分子であるＢＭＰアゴニストもしくはアンタゴニスト、（ｉｉ）ＥＲＦＥもしくはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドに結合する抗体もしくはその抗原結合部分、（ｉｉｉ）ＢＭＰもしくはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドに結合する抗体もしくはその抗原結合部分、（ｉｖ）ＥＲＦＥもしくはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチド、（ｖ）ＢＭＰもしくはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチド、（ｖｉ）ＢＭＰ受容体、（ｖｉｉ）ＢＭＰアゴニストもしくはアンタゴニストをコードする核酸、（ｖｉｉｉ）ＢＭＰアゴニストもしくはアンタゴニストをコードする核酸を含むベクター、（ｉｘ）抗ＢＭＰもしくは抗ＥＲＦＥ抗体をコードする核酸または前記核酸を含有するベクター、（ｘ）インスリン増感剤、（ｘｉ）メトホルミン、（ｘｉｉ）チアゾリジンジオン、（ｘｉｉｉ）スタチン、（ｘｉｖ）ペントキシフィリン、（ｘｖ）利尿剤、（ｘｖｉ）ＡＣＥ阻害剤、（ｘｖｉｉ）シンバスタチン、（ｘｖｉｉｉ）シタグリプチン、（ｘｉｘ）ＧＬＰ−１アゴニスト、（ｘｘ）インスリン、または（ｘｘｉ）合成インスリンアナログから選択される、請求項２６に記載の使用のためのＢＭＰアゴニストもしくはアンタゴニスト、または使用のための医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、鉄、脂肪および炭水化物の代謝恒常性を調節するＢＭＰ（骨形成タンパク質）に関する。特に、本発明は、ＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニストを使用して、鉄代謝の疾患、または異常に高いもしくは低いヘプシジンレベルまたは異常に高いもしくは異常に低い鉄レベルを含む疾患を処置するための方法に関する。本発明は、さらに、ＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニストを使用して、脂肪または炭水化物代謝の疾患を処置するための方法に関する。本発明は、さらに、ＢＭＰおよびエリスロフェロン（ｅｒｙｔｈｒｏｆｅｒｒｏｎｅ）（ＥＲＦＥ）／ＦＡＭ１３２ｂの間の相互作用の阻害によって、鉄代謝の疾患を処置するため、または脂肪もしくは炭水化物代謝の疾患を処置するための方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
鉄は、赤血球生成に必須である。鉄利用能の増強は、出血からの回復に要求されるが、過剰な鉄は、例えば、β−サラセミアに見られるように病的である。鉄吸収は、ヘプシジン発現の制御により、赤血球生成需要によって緊密に調節される。ヘプシジンは、細胞の鉄排出輸送体フェロポーチンを阻害し、フェロポーチン発現細胞からの鉄排出を防止し、これにより、脾臓マクロファージによる鉄リサイクリングおよび腸細胞による食事性鉄の取り込みを低下させる。急性失血後にまたは低酸素のため、鉄の需要が高い場合、ヘプシジンが抑制されて、増加された赤血球生成のために鉄の動員を可能にする。ヘプシジン発現は、ＢＭＰ／ＳＭＡＤシグナリング経路によりモジュレートされる。肝類洞壁内皮細胞によって産生されるＢＭＰ６およびＢＭＰ２は、肝細胞の細胞膜におけるＢＭＰ受容体に結合することによりシグナリングカスケードを誘発し、このカスケードは、サイトゾルＳＭＡＤ（ＳＭＡＤ１／５／８）をリン酸化し、これがＳＭＡＤ４と複合体形成しつつ核へと転位置して、ヘプシジン（ＨＡＭＰ）を含む標的遺伝子の転写を活性化する。様々な鉄障害の病理発生におけるヘプシジン欠乏またはヘプシジン過剰の肝要な役割のため、ヘプシジン活性のアゴニストまたはアンタゴニストは、斯かる障害の処置を改善することが予想されるであろう。ヘプシジン活性のアゴニストは、遺伝性ヘモクロマトーシスおよびサラセミアにおける等、鉄過剰の処置に有用となる筈であり、貧血の場合のアンタゴニストもこれと同様である。ＢＭＰ経路阻害または活性化は、肝臓ヘプシジン調節経路制御を達成するための選択的手段を提供する筈である。エリスロポエチン（ＥＰＯ）は、少なくとも一部は、ホルモンであるエリスロフェロン（ＥＲＦＥ）の合成を増加させることにより、ヘプシジン抑制を引き起こす。エリスロポエチン（ＥＰＯ）は、赤芽球によるエリスロフェロン（ＥＲＦＥ）合成を増強し、ＥＲＦＥは、肝臓におけるヘプシジンの発現を抑制し、これにより、鉄レベルを増加させる。ＥＲＦＥは、出血またはＥＰＯ処置後に赤芽球によって産生され、肝細胞に作用して、ヘプシジン発現を抑制し、鉄利用能を増加させる。しかし、ＥＲＦＥがヘプシジンを抑制する機構は、依然として未知である。本出願人らは、ＥＰＯが、部分的にＥＲＦＥ依存性様式で、ｉｎ  ｖｉｖｏでヘプシジンおよび肝ＢＭＰ／ＳＭＡＤ経路遺伝子を抑制したことを見出した。組換えＥＲＦＥも、血清および肝臓鉄の変化とは無関係に、肝ＢＭＰ／ＳＭＡＤ経路を抑制し、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでは、ＥＲＦＥは、ＳＭＡＤ１／５／８リン酸化を減少させた。ＥＲＦＥは、ＢＭＰ５、ＢＭＰ６およびＢＭＰ７によるヘプシジン誘導の刺激を特異的に阻害し、ヘプシジン抑制をもたらした。この効果は、ＢＭＰおよびＥＲＦＥの間の直接的結合相互作用により媒介されると思われる。ＢＭＰは、脂肪代謝にも関係付けられ、近年の研究は、ＢＭＰ２／ＳＭＡＤ６が、体脂肪分布に関する脂肪およびインスリン生物学の両方に関与し得ることを示唆し（Ｓｈｕｎｇｉｎら、Ｎａｔｕｒｅ、２０１５）、ＢＭＰ２およびＢＭＰ６が、インスリン抵抗性を寛解することも見出した（Ｓｃｈｒｅｉｂｅｒら、Ｓｃｉ  Ｒｅｐ、２０１７）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】ＷＯ２００４０９２４０５
【特許文献２】米国特許第７，５３４，７６４号
【特許文献３】ＰＣＴ公開番号ＷＯ００／５３２１１
【特許文献４】米国特許第５，９８１，５６８号
【特許文献５】米国特許第４，４８５，０４５号
【特許文献６】米国特許第４，５４４，５４５号
【特許文献７】米国特許第５，０１３，５５６号
【特許文献８】ＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＧＢ９９／０１４４１
【特許文献９】英国特許出願第９８０９９５１．８号
【特許文献１０】米国特許第５，９９７，８６７号
【特許文献１１】米国特許第５，８６６，６９２号
【特許文献１２】ＰＣＴ公開番号ＷＯ９９／５８５７２
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】Ｓｈｕｎｇｉｎら、Ｎａｔｕｒｅ、２０１５
【非特許文献２】Ｓｃｈｒｅｉｂｅｒら、Ｓｃｉ  Ｒｅｐ、２０１７
【非特許文献３】Ｒａｔｚｉｕ  Ｖら、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ．２０００；１１８：１１１７〜１１２３
【非特許文献４】Ｓｕｍｉｄａ  Ｙら、ＢＭＣ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．２０１２；１２：２
【非特許文献５】Ｒａｔｚｉｕ  Ｖら、Ａｌｉｍｅｎｔ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｔｈｅｒ．２００７；２５：２０７〜２１８
【非特許文献６】Ｃａｌｅｓ  Ｐら、Ｌｉｖｅｒ  Ｉｎｔ．２０１０；３０：１３４６〜１３５４
【非特許文献７】Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ、Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、第２０版、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ、２０００
【非特許文献８】Ｅｐｓｔｅｉｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８２：３６８８（１９８５）
【非特許文献９】Ｈｗａｎｇら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７７：４０３０（１９８０）
【非特許文献１０】ＨｏｌｌｉｎｇｅｒおよびＨｕｄｓｏｎ、２００５、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２３（９）：１１２６〜１１３６
【非特許文献１１】Ｗａｒｄら、１９８９、Ｎａｔｕｒｅ  ３４１：５４４〜５４６
【非特許文献１２】ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ、Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  １９６（４）：９０１〜９１７、１９８７
【非特許文献１３】Ｋａｂａｔら、１９９２、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ、ＮＩＨ、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ  Ｄ．Ｃ．
【非特許文献１４】Ｃｈｏｔｈｉａら、１９８９、Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７７〜８８３
【非特許文献１５】ＭａｃＣａｌｌｕｍら、１９９６、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２６２：７３２〜７４５
【非特許文献１６】Ｍａｋａｂｅら、２００８、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２８３：１１５６〜１１６６
【非特許文献１７】Ｊａｙａｓｅｎａ、Ｓ．Ｄ．、Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．、４５：１６２８〜５０（１９９９）
【非特許文献１８】Ｆｅｌｌｏｕｓｅ、Ｆ．Ａ．ら、Ｊ．ＭｏＩ．Ｂｉｏｌ．、３７３（４）：９２４〜４０（２００７）
【非特許文献１９】Ｍｏｒｇａｎら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ８６：３１９〜３２４、１９９５
【非特許文献２０】Ｌｕｎｄら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １５７：４９６３〜９  １５７：４９６３〜４９６９、１９９６
【非特許文献２１】Ｉｄｕｓｏｇｉｅら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １６４：４１７８〜４１８４、２０００
【非特許文献２２】Ｔａｏら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １４３：２５９５〜２６０１、１９８９
【非特許文献２３】Ｊｅｆｆｅｓら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  １６３：５９〜７６、１９９８
【非特許文献２４】Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１９９９、２９：２６１３〜２６２４
【非特許文献２５】Ａｒｍｏｕｒら、２００３、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ４０、５８５〜５９３
【非特許文献２６】Ａａｌｂｅｒｓｅら、２００２、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １０５、９〜１９
【非特許文献２７】Ｊｅｆｆｅｒｉｓら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  １６３：５９〜７６、１９９８
【非特許文献２８】Ｋａｂａｔ、Ｅ．Ａ．ら、１９９１、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２
【非特許文献２９】Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎら、１９９２、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：７７６〜７９８
【非特許文献３０】Ｃｏｘら、１９９４、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：８２７〜８３６
【非特許文献３１】Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１８版、Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏ編、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ、１９９０
【非特許文献３２】Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、第２版（Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９８９）Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ
【非特許文献３３】Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ編、１９８４）；Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ
【非特許文献３４】Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｎｏｔｅｂｏｏｋ（Ｊ．Ｅ．Ｃｅｌｌｉｓ編、１９９８）Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ
【非特許文献３５】Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ編、１９８７）
【非特許文献３６】Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｃｅｌｌ  ａｎｄ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｊ．Ｐ．ＭａｔｈｅｒおよびＰ．Ｅ．Ｒｏｂｅｒｔｓ、１９９８）Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ
【非特許文献３７】Ｃｅｌｌ  ａｎｄ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ：Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ（Ａ．Ｄｏｙｌｅ、Ｊ．Ｂ．ＧｒｉｆｆｉｔｈｓおよびＤ．Ｇ．Ｎｅｗｅｌｌ編、１９９３〜１９９８）Ｊ．Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ
【非特許文献３８】Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｉｎｃ．）；Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｄ．Ｍ．ＷｅｉｒおよびＣ．Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ編）
【非特許文献３９】Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  Ｖｅｃｔｏｒｓ  ｆｏｒ  Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｃｅｌｌｓ（Ｊ．Ｍ．ＭｉｌｌｅｒおよびＭ．Ｐ．Ｃａｌｏｓ編、１９８７）
【非特許文献４０】Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌら編、１９８７）
【非特許文献４１】ＰＣＲ：Ｔｈｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ｃｈａｉｎ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ（Ｍｕｌｌｉｓら編、１９９４）
【非特許文献４２】Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎら編、１９９１）
【非特許文献４３】Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、１９９９）
【非特許文献４４】Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ（Ｃ．Ａ．ＪａｎｅｗａｙおよびＰ．Ｔｒａｖｅｒｓ、１９９７）
【非特許文献４５】Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｐ．Ｆｉｎｃｈ、１９９７）
【非特許文献４６】Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ  ｐｒａｃｔｉｃａｌ  ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｄ．Ｃａｔｔｙ．編、ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ、１９８８〜１９８９）
【非特許文献４７】Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ  ｐｒａｃｔｉｃａｌ  ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｐ．ＳｈｅｐｈｅｒｄおよびＣ．Ｄｅａｎ編、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ、２０００）
【非特許文献４８】Ｕｓｉｎｇ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ｍａｎｕａｌ（Ｅ．ＨａｒｌｏｗおよびＤ．Ｌａｎｅ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、１９９９）
【非特許文献４９】Ｔｈｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｍ．ＺａｎｅｔｔｉおよびＪ．Ｄ．Ｃａｐｒａ編、Ｈａｒｗｏｏｄ  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、１９９５）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本出願人らは、ＥＲＦＥが、ＢＭＰ２およびＢＭＰ６の両方に結合し、それらの活性に影響することを決定し、したがって、この相互作用のモジュレーションは、インスリン耐性の改善に影響を与え、糖尿病、代謝性および非アルコール性脂肪性肝疾患の発症等、体脂肪分布不良の様々な側面を寛解する手段を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
鉄代謝の疾患の処置
本発明の第１の態様において、ＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニストを使用して、鉄代謝の疾患を処置する、防止する、寛解する、制御する、その発生率を低下させる、またはその発症もしくは進行を遅延させる方法が提供される。鉄代謝の疾患は、異常に高いまたは低い鉄レベルを含む疾患、異常に高いまたは低いヘプシジンレベルを含む疾患、異常に高いまたは低いヘプシジン活性を含む疾患となることができる。鉄代謝の疾患は、異常に高いヘプシジンレベルおよび／または活性、および／または異常に低い鉄レベルを含む疾患となることができる。鉄代謝の疾患は、異常に低いヘプシジンレベルおよび／または活性、および／または異常に高い鉄レベルを含む疾患となることができる。鉄代謝の疾患は、貧血、例えば、鉄欠乏性貧血、鉄不応性鉄欠乏性貧血、慢性腎疾患の貧血、寄生性貧血、マラリア貧血；またはサラセミア、例えば、ベータ−サラセミアとなることができる。本発明において、濃度または活性を含むレベルは、生体試料において呈するおよび／または測定されるものとなることができる。したがって、本発明は、ＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニストを使用して、寄生虫血症、例えば、寄生性貧血、例えば、マラリア貧血に関連する寄生虫血症を処置する、防止する、寛解する、制御する、その発生率を低下させる、またはその発症もしくは進行を遅延させる方法を提供する。したがって、ＢＭＰアゴニストを使用して、異常に低いヘプシジンレベルおよび／または活性、および／または異常に高い鉄レベルを含む疾患を処置する方法も提供される。したがって、ＢＭＰアンタゴニストを使用して、異常に高いヘプシジンレベルおよび／または活性、および／または異常に低い鉄レベルを含む疾患を処置する方法も提供される。
【０００７】
鉄代謝の疾患もしくは障害、および／または異常に低いもしくは高いヘプシジンレベル、量もしくは発現を含む疾患もしくは障害は、ＷＯ２００４０９２４０５または米国特許第７，５３４，７６４号に発表されており、本明細書に開示されている通り、ヘプシジンレベルおよび発現または鉄レベルを決定およびモニターするためのアッセイ等、本技術分野で公知の方法を使用して、当業者によって決定することができる。
【０００８】
鉄代謝の疾患は、ＨＦＥ突然変異ヘモクロマトーシス、フェロポーチン突然変異ヘモクロマトーシス、トランスフェリン受容体２突然変異ヘモクロマトーシス、ヘモジュベリン（ｈｅｍｏｊｕｖｅｌｉｎ）突然変異ヘモクロマトーシス、ヘプシジン突然変異ヘモクロマトーシス、若年性ヘモクロマトーシス、新生児ヘモクロマトーシス等、ヘモクロマトーシスを含む。鉄代謝の疾患は、骨髄形成異常症候群、ヘプシジン欠乏、輸血性鉄過剰、サラセミア、例えば、中間型サラセミア、アルファサラセミア、ベータサラセミア、デルタサラセミア等のサラセミアも含む。鉄代謝の疾患は、鉄芽球性貧血、ポルフィリン症、晩発性皮膚ポルフィリン症、アフリカ型鉄過剰、高フェリチン血症、セルロプラスミン欠乏、無トランスフェリン血症も含む。鉄代謝の疾患は、貧血、例えば、先天性赤血球異形成貧血、慢性疾患の貧血、炎症の貧血、感染の貧血、低色素性小球性貧血、鉄欠乏性貧血、鉄不応性鉄欠乏性貧血、慢性腎疾患の貧血、寄生性貧血、マラリア貧血をその上含む。鉄代謝の疾患は、エリスロポエチン抵抗性、肥満の鉄欠乏、ヘプシジンを過剰産生するまたはその過剰産生を誘導する良性または悪性腫瘍、ヘプシジン過剰による状態、フリートライヒ運動失調症、ｇｒａｃｉｌｅ症候群、ハラーホルデン・スパッツ病、ウィルソン病、肺血鉄症、肝細胞癌、がん、肝炎、肝臓の硬変、異食症、慢性腎不全、インスリン抵抗性、糖尿病、糖尿病Ｉ型または糖尿病ＩＩ型、インスリン抵抗性、グルコース不耐性、粥状動脈硬化、神経変性障害、多発性硬化症、パーキンソン病、ハンチントン病およびアルツハイマー病をさらに含む。
【０００９】
脂質または炭水化物代謝の疾患の処置
本発明の第２の態様において、ＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニストを使用して、脂質または炭水化物代謝の疾患を処置する、防止する、寛解する、制御する、その発生率を低下させる、またはその発症もしくは進行を遅延させる方法が提供される。
【００１０】
脂質または炭水化物代謝の疾患は、体脂肪分布不良、インスリン不耐性もしくは抵抗性、低いインスリンレベル、高血糖、高血清トリグリセリド、低い高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）レベル、肝臓の脂肪症、線維症および／または硬変、高血圧、または心血管疾患を含む疾患となることができるまたはこれを含むことができる。脂質または炭水化物代謝の疾患は、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、小児非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、小児非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）となることができるまたはこれを含むことができ、場合により、この疾患は、肥満、糖尿病、高コレステロールまたは高トリグリセリド、メタボリックシンドロームをさらに含む。脂質または炭水化物代謝の疾患は、糖尿病、１型真性糖尿病、２型真性糖尿病、妊娠糖尿病、前糖尿病となることができ、場合により、この疾患は、肥満、高コレステロールまたは高トリグリセリド、ＮＡＳＨ、ＮＡＦＬＤをさらに含む。
【００１１】
したがって、ＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニストを使用して、脂質代謝の疾患を処置する方法が提供される。
【００１２】
したがって、ＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニストを使用して、炭水化物代謝の疾患を処置する方法が提供される。したがって、ＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニストを使用して、ＮＡＳＨを処置する方法が提供される。したがって、ＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニストを使用して、ＮＡＦＬＤを処置する方法が提供される。したがって、ＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニストを使用して、肥満を処置する方法が提供される。したがって、ＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニストを使用して、異常に高いコレステロールレベルを処置する方法が提供される。したがって、ＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニストを使用して、異常に高いトリグリセリドレベルを処置する方法が提供される。したがって、ＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニストを使用して、糖尿病を処置する方法が提供される。したがって、ＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニストを使用して、糖尿病１型を処置する方法が提供される。したがって、ＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニストを使用して、糖尿病２型を処置する方法が提供される。したがって、ＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニストを使用して、メタボリックシンドロームを処置する方法が提供される。
【００１３】
非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）は、アルコールに起因しない、肝臓細胞における過剰な脂肪の集積である。より重症型の非アルコール性脂肪性肝疾患は、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）と呼ばれ、肝臓を腫脹させ、損傷を受けるようにする。ＮＡＳＨは、過体重もしくは肥満である人物または糖尿病、高コレステロールもしくは高トリグリセリドを有する人物において発症する傾向がある。非アルコール性脂肪性肝炎は、成人における硬変の主因の１つである。メタボリックシンドロームは、次の５種の医学的状態のうち少なくとも３種、すなわち、３種以上を含む：腹部肥満、高血圧、高血糖、高血清トリグリセリドおよび低い高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）レベル。インスリン抵抗性、メタボリックシンドロームおよび前糖尿病は、メタボリックシンドロームおよび肥満と密接に関連する。メタボリックシンドロームは、心血管疾患および２型糖尿病の発症リスク増加と特に関連し、米国成人人口の約４分の１に蔓延している。
【００１４】
ＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニスト
本発明のどちらかの態様において、ＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニストは、ＢＭＰ２、２／６ヘテロ二量体、３、４、５、６、７、８ａ、８ｂ、９、１０、１１、１２、１３、１４または１５のうちいずれか１種または複数のアゴニストまたはアンタゴニストとなることができる。ＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニストは、ＢＭＰ２、ＢＭＰ２／６ヘテロ二量体、ＢＭＰ４、ＢＭＰ５、ＢＭＰ６またはＢＭＰ７のアゴニストまたはアンタゴニストとなることができる。ＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニストは、ＢＭＰ２／６ヘテロ二量体、ＢＭＰ５、ＢＭＰ６またはＢＭＰ７のアゴニストまたはアンタゴニストとなることができる。ＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニストは、ＢＭＰ５、ＢＭＰ６またはＢＭＰ７のアゴニストまたはアンタゴニストとなることができる。ＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニストは、ＢＭＰ２、ＢＭＰ２／６ヘテロ二量体またはＢＭＰ６のアゴニストまたはアンタゴニスト、ＢＭＰ２またはＢＭＰ６のアゴニストまたはアンタゴニスト、ＢＭＰ２のアゴニストまたはアンタゴニストとなることができる。ＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニストは、ＢＭＰ活性のアゴニストまたはアンタゴニストとなることができる。特に、本発明の第１の態様において、ＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニストは、ＢＭＰ２、ＢＭＰ２／６ヘテロ二量体、ＢＭＰ５、ＢＭＰ６またはＢＭＰ７、好ましくは、ＢＭＰ５、ＢＭＰ６またはＢＭＰ７のアゴニストまたはアンタゴニストとなることができ；第２の態様において、ＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニストは、ＢＭＰ２またはＢＭＰ６、その代わりにＢＭＰ２またはＢＭＰ２／６またはＢＭＰ４のアゴニストまたはアンタゴニストとなることができる。
【００１５】
本発明において、ＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニストは、ＢＭＰの生物活性、ＢＭＰ活性または活性をアゴナイズまたはアンタゴナイズすることができる。ＢＭＰは、ＢＭＰ２、２／６ヘテロ二量体、３、４、５、６、７、８ａ、８ｂ、９、１０、１１、１２、１３、１４または１５のうちいずれか１種となることができる。本発明において、ＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニストは、ＢＭＰのアゴニストもしくはアンタゴニストの活性を阻害することができる、またはＢＭＰとその受容体との結合もしくは相互作用を阻害もしくは増強することができる。
【００１６】
本発明において、ＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニストは、ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドに結合する、および／またはこれを活性化もしくは阻害することにより、ＢＭＰ活性をアゴナイズまたはアンタゴナイズすることができる。本発明において、ＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニストは、ＢＭＰもしくはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドおよびＢＭＰアゴニストもしくはアンタゴニストの間の相互作用を防止もしくは阻害することにより、またはＢＭＰもしくはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドとＢＭＰアゴニストもしくはアンタゴニストとのまたはＥＲＦＥもしくはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドとの間またはＢＭＰもしくはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドおよびＢＭＰ受容体の間の相互作用を防止もしくは阻害することにより、ＢＭＰ活性をアゴナイズまたはアンタゴナイズすることができる。本発明において、ＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニストは、ＢＭＰもしくはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドおよびアゴニストもしくはアンタゴニストの間の相互作用を増強することにより、またはＢＭＰもしくはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドおよびＥＲＦＥもしくはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドの間のまたはＢＭＰもしくはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドおよびＢＭＰ受容体の間の相互作用を増強することにより、ＢＭＰ活性をアゴナイズまたはアンタゴナイズすることができる。本発明において、ＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニストは、ＢＭＰもしくはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドおよびアゴニストもしくはアンタゴニストの間の相互作用を増強することにより、またはＢＭＰもしくはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドおよびＥＲＦＥもしくはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドの間またはＢＭＰもしくはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドおよびＢＭＰ受容体の間の相互作用を増強することにより、ＢＭＰ活性をアゴナイズまたはアンタゴナイズすることができる。
【００１７】
本発明において、ＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニストは、ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドのアゴニストまたはアンタゴニストの作用を阻害することにより、例えば、（ｉ）ＢＭＰもしくはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドに結合し、それとアゴニストもしくはアンタゴニストとの相互作用および／またはアゴニストもしくはアンタゴニストによる阻害もしくは活性化を防止する、または（ｉｉ）ＢＭＰもしくはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドのアゴニストもしくはアンタゴニストに結合し、それとＢＭＰもしくはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドとの相互作用および／またはＢＭＰもしくはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドの阻害もしくは活性化を防止する、（ｉｉｉ）ＢＭＰもしくはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドに結合し、それとＥＲＦＥもしくはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドとの相互作用および／またはＥＲＦＥもしくはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドによる阻害を防止する、（ｉｖ）ＥＲＦＥもしくはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドに結合し、それとＢＭＰもしくはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドとの相互作用および／またはＢＭＰ活性の阻害を防止または阻害することにより、ＢＭＰ活性をアゴナイズまたはアンタゴナイズすることができる。本発明において、ＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニストは、（ｉ）ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドに結合し、それとＢＭＰ受容体との相互作用を防止または阻害する、（ｉｉ）ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドに結合し、それとＢＭＰ受容体との相互作用を増強する、（ｉｉｉ）ＢＭＰ受容体に結合し、それとそのＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドとの相互作用を防止または阻害する、（ｉｖ）ＢＭＰ受容体に結合し、それとそのＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドとの相互作用を増強し；それによって、ＢＭＰ受容体へのＢＭＰ結合によって媒介される活性が、アゴナイズまたはアンタゴナイズされることにより、ＢＭＰ活性をアゴナイズまたはアンタゴナイズすることができる。
【００１８】
本発明において、ＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニストは、例えば、本明細書に記載されている、例えば、ＳＰＲ（表面プラズモン共鳴）またはＨＴＲＦ（均一時間分解蛍光）アッセイ等、適した活性アッセイにおいて測定された場合、約０．００１ｎＭまたはそれ未満、好ましくは、約０．００２、０．００３、０．００４、０．００５、０．００６、０．００７、０．００８、０．００９、０．０１、０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３８、２３９、２４０、２４１、２４２、２４３、２４４、２４５、２４６、２４７、２４８、２４９、２５０、２５１、２５２、２５３、２５４、２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、２６０、２６１、２６２、２６３、２６４、２６５、２６６、２６７、２６８、２６９、２７０、２７１、２７２、２７３、２７４、２７５、２７６、２７７、２７８、２７９、２８０、２８１、２８２、２８３、２８４、２８５、２８６、２８７、２８８、２８９、２９０、２９１、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９７、２９８、２９９、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、４７５、５００、５２５、５５０、５７５、６００、６２５、６５０、６７５、７００、７２５、７５０、７７５、８００、８２５、８５０、８７５、９００、９２５、９５０、９７５、１０００ｎＭまたはそれ未満、＋／−５％または１０％誤差の結合定数またはＫＤで、ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチド、好ましくは、（ｉ）ＢＭＰ２、（ｉｉ）ＢＭＰ２／６ヘテロ二量体、（ｉｉｉ）ＢＭＰ４、（ｉｖ）ＢＭＰ５、（ｖ）ＢＭＰ６または（ｖｉ）ＢＭＰ７に特異的に結合することができる。
【００１９】
本発明において、ＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニストは、例えば、本明細書に記載されている、例えば、ＳＰＲ（表面プラズモン共鳴）またはＨＴＲＦ（均一時間分解蛍光）アッセイ等、適した活性アッセイにおいて測定された場合、約０．００１ｎＭまたはそれ未満、好ましくは、約０．００２、０．００３、０．００４、０．００５、０．００６、０．００７、０．００８、０．００９、０．０１、０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３８、２３９、２４０、２４１、２４２、２４３、２４４、２４５、２４６、２４７、２４８、２４９、２５０、２５１、２５２、２５３、２５４、２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、２６０、２６１、２６２、２６３、２６４、２６５、２６６、２６７、２６８、２６９、２７０、２７１、２７２、２７３、２７４、２７５、２７６、２７７、２７８、２７９、２８０、２８１、２８２、２８３、２８４、２８５、２８６、２８７、２８８、２８９、２９０、２９１、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９７、２９８、２９９、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、４７５、５００、５２５、５５０、５７５、６００、６２５、６５０、６７５、７００、７２５、７５０、７７５、８００、８２５、８５０、８７５、９００、９２５、９５０、９７５、１０００ｎＭまたはそれ未満、＋／−５％または１０％誤差の結合定数またはＫＤで、（ａ）ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドのアゴニスト、（ｂ）ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドのアンタゴニスト、（ｃ）ＢＭＰ受容体、（ｄ）ＥＲＦＥまたはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドに特異的に結合することができる。好ましくは、ＢＭＰ受容体は、（ｉ）ＢＭＰ２、（ｉｉ）ＢＭＰ２／６ヘテロ二量体、（ｉｉｉ）ＢＭＰ４、（ｉｖ）ＢＭＰ５、（ｖ）ＢＭＰ６または（ｖｉ）ＢＭＰ７の受容体である。
【００２０】
本発明において、ＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニストは、例えば、本明細書に記載されている、例えば、ＳＰＲ（表面プラズモン共鳴）またはＨＴＲＦ（均一時間分解蛍光）アッセイ等、適した活性アッセイにおいて測定された場合、約０．００１ｎＭまたはそれ未満、好ましくは、約０．００２、０．００３、０．００４、０．００５、０．００６、０．００７、０．００８、０．００９、０．０１、０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３８、２３９、２４０、２４１、２４２、２４３、２４４、２４５、２４６、２４７、２４８、２４９、２５０、２５１、２５２、２５３、２５４、２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、２６０、２６１、２６２、２６３、２６４、２６５、２６６、２６７、２６８、２６９、２７０、２７１、２７２、２７３、２７４、２７５、２７６、２７７、２７８、２７９、２８０、２８１、２８２、２８３、２８４、２８５、２８６、２８７、２８８、２８９、２９０、２９１、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９７、２９８、２９９、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、４７５、５００、５２５、５５０、５７５、６００、６２５、６５０、６７５、７００、７２５、７５０、７７５、８００、８２５、８５０、８７５、９００、９２５、９５０、９７５、１０００ｎＭまたはそれ未満、＋／−５％または１０％誤差のＩＣ５０または阻害定数（Ｋｉ）で、（ａ）ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドのアゴニスト、（ｂ）ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドのアンタゴニスト、（ｃ）ＢＭＰ受容体、（ｄ）ＥＲＦＥまたはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドのうちいずれか１種または複数への、ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチド、好ましくは、（ｉ）ＢＭＰ２、（ｉｉ）ＢＭＰ２／６ヘテロ二量体、（ｉｉｉ）ＢＭＰ４、（ｉｖ）ＢＭＰ５、（ｖ）ＢＭＰ６または（ｖｉ）ＢＭＰ７の結合を特異的に阻害することができる。好ましくは、ＢＭＰ受容体は、（ｉ）ＢＭＰ２、（ｉｉ）ＢＭＰ２／６ヘテロ二量体、（ｉｉｉ）ＢＭＰ４、（ｉｖ）ＢＭＰ５、（ｖ）ＢＭＰ６または（ｖｉ）ＢＭＰ７の受容体である。
【００２１】
本発明において、ＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニストは、例えば、本明細書に記載されている、例えば、ＳＰＲ（表面プラズモン共鳴）等、例えば、適した活性アッセイにおいて測定された場合、（ａ）ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドのアゴニスト、（ｂ）ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドのアンタゴニスト、（ｃ）ＢＭＰ受容体、（ｄ）ＥＲＦＥまたはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドのうちいずれか１種または複数への、ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチド、好ましくは、（ｉ）ＢＭＰ２、（ｉｉ）ＢＭＰ２／６ヘテロ二量体、（ｉｉｉ）ＢＭＰ４、（ｉｖ）ＢＭＰ５、（ｖ）ＢＭＰ６または（ｖｉ）ＢＭＰ７の結合を特異的に増強し、約２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、４７５、５００、５２５、５５０、５７５、６００、６２５、６５０、６７５、７００、７２５、７５０、７７５、８００、８２５、８５０、８７５、９００、９２５、９５０、９７５、１０００、２０００、３０００、４０００、５０００、６０００、７０００、８０００、９０００、１０，０００倍のうちいずれかだけ、相互作用の結合親和性（ＫＤ）を、改善することができる。好ましくは、ＢＭＰ受容体は、（ｉ）ＢＭＰ２、（ｉｉ）ＢＭＰ２／６ヘテロ二量体、（ｉｉｉ）ＢＭＰ４、（ｉｖ）ＢＭＰ５、（ｖ）ＢＭＰ６または（ｖｉ）ＢＭＰ７の受容体である。
【００２２】
本発明において、ＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニストは、ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドに特異的にまたは選択的に結合することができ、ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドのアゴニストまたはアンタゴニストに特異的にまたは選択的に結合することができ、ＥＲＦＥまたはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドに特異的にまたは選択的に結合することができ、ＢＭＰ受容体に特異的にまたは選択的に結合することができ；それによって、ＢＭＰ活性のアゴニズムまたはアンタゴニズムが媒介される。
【００２３】
本発明において、ＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニストは、２、２／６ヘテロ二量体、３、４、５、６、７、８ａ、８ｂ、９、１０、１１、１２、１３、１４または１５の群から選択される別の異なるＢＭＰファミリーメンバーと比較して、ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチド、好ましくは、（ｉ）ＢＭＰ２、（ｉｉ）ＢＭＰ２／６ヘテロ二量体、（ｉｉｉ）ＢＭＰ４、（ｉｖ）ＢＭＰ５、（ｖ）ＢＭＰ６または（ｖｉ）ＢＭＰ７に選択的に結合することができ；好ましくは、ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドに対するアゴニストまたはアンタゴニストの結合親和性（ＫＤ）は、他の選択されるＢＭＰファミリーメンバー（複数可）に対するＫＤよりも約２〜１０，０００倍緊密である。好ましくは、結合親和性は、例えば、本明細書に記載されている、例えば、ＳＰＲ（表面プラズモン共鳴）等、例えば適した活性アッセイにおいて測定された場合、約２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、４７５、５００、５２５、５５０、５７５、６００、６２５、６５０、６７５、７００、７２５、７５０、７７５、８００、８２５、８５０、８７５、９００、９２５、９５０、９７５、１０００、２０００、３０００、４０００、５０００、６０００、７０００、８０００、９０００、１０，０００倍のいずれかを超えて、より緊密になることができる。好ましくは、ＢＭＰ受容体は、（ｉ）ＢＭＰ２、（ｉｉ）ＢＭＰ２／６ヘテロ二量体、（ｉｉｉ）ＢＭＰ４、（ｉｖ）ＢＭＰ５、（ｖ）ＢＭＰ６または（ｖｉ）ＢＭＰ７の受容体である。
【００２４】
本発明において、ＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニストは、２、２／６ヘテロ二量体、３、４、５、６、７、８ａ、８ｂ、９、１０、１１、１２、１３、１４または１５の群から選択される別の異なるＢＭＰファミリーメンバーと比較して、（ａ）ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドのアゴニスト、（ｂ）ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドのアンタゴニスト、（ｃ）ＢＭＰ受容体、（ｄ）ＥＲＦＥまたはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドのうちいずれか１種または複数への、ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチド、好ましくは、（ｉ）ＢＭＰ２、（ｉｉ）ＢＭＰ２／６ヘテロ二量体、（ｉｉｉ）ＢＭＰ４、（ｉｖ）ＢＭＰ５、（ｖ）ＢＭＰ６または（ｖｉ）ＢＭＰ７の結合を選択的に阻害することができ；好ましくは、結合親和性（ＫＤ）は、他の選択されるＢＭＰファミリーメンバーに対するＫＤと比較して、約２〜１０，０００倍弱い。好ましくは、結合親和性（ＫＤ）は、弱くなることができ、例えば、本明細書に記載されている、例えば、ＳＰＲ（表面プラズモン共鳴）等、例えば適した活性アッセイにおいて測定された場合、約２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、４７５、５００、５２５、５５０、５７５、６００、６２５、６５０、６７５、７００、７２５、７５０、７７５、８００、８２５、８５０、８７５、９００、９２５、９５０、９７５、１０００、２０００、３０００、４０００、５０００、６０００、７０００、８０００、９０００、１０，０００倍弱くなることができる。好ましくは、ＢＭＰ受容体は、（ｉ）ＢＭＰ２、（ｉｉ）ＢＭＰ２／６ヘテロ二量体、（ｉｉｉ）ＢＭＰ４、（ｉｖ）ＢＭＰ５、（ｖ）ＢＭＰ６または（ｖｉ）ＢＭＰ７の受容体である。
【００２５】
本発明において、ＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニストは、ＢＭＰの結合を選択的に増強することができ、好ましくは、２、２／６ヘテロ二量体、３、４、５、６、７、８ａ、８ｂ、９、１０、１１、１２、１３、１４または１５の群から選択される別の異なるＢＭＰファミリーメンバーと比較して、（ａ）ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドのアゴニスト、（ｂ）ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドのアンタゴニスト、（ｃ）ＢＭＰ受容体、（ｄ）ＥＲＦＥまたはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドのうちいずれか１種または複数への、ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチド、好ましくは、（ｉ）ＢＭＰ２、（ｉｉ）ＢＭＰ２／６ヘテロ二量体、（ｉｉｉ）ＢＭＰ４、（ｉｖ）ＢＭＰ５、（ｖ）ＢＭＰ６または（ｖｉ）ＢＭＰ７の結合を選択的に増強することができ；好ましくは、結合親和性（ＫＤ）は、他の選択されるＢＭＰファミリーメンバーに対するＫＤと比較して、約２〜１０，０００倍緊密である。好ましくは、結合親和性（ＫＤ）による選択性は、例えば、本明細書に記載されている、例えば、ＳＰＲ（表面プラズモン共鳴）等、例えば適した活性アッセイにおいて測定された場合、約２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、４７５、５００、５２５、５５０、５７５、６００、６２５、６５０、６７５、７００、７２５、７５０、７７５、８００、８２５、８５０、８７５、９００、９２５、９５０、９７５、１０００、２０００、３０００、４０００、５０００、６０００、７０００、８０００、９０００、１０，０００倍のいずれかを超えて、より緊密になることができる。好ましくは、ＢＭＰ受容体は、（ｉ）ＢＭＰ２、（ｉｉ）ＢＭＰ２／６ヘテロ二量体、（ｉｉｉ）ＢＭＰ４、（ｉｖ）ＢＭＰ５、（ｖ）ＢＭＰ６または（ｖｉ）ＢＭＰ７の受容体である。
【００２６】
（ａ）ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドのアゴニスト、（ｂ）ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドのアンタゴニスト、（ｃ）ＢＭＰ受容体、（ｄ）ＥＲＦＥまたはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドのうちいずれか１種または複数へのｉｎ−ｖｉｔｒｏでの、ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチド結合の阻害または増強は、本明細書に記載されている、例えば、ＳＰＲ（表面プラズモン共鳴）またはＨＴＲＦ（均一時間分解蛍光）アッセイ等、ＢＭＰに対するｉｎ−ｖｉｔｒｏ結合アッセイによって測定することができる。均一（ｈｏｍｏｇｅｎｏｕｓ）時間分解蛍光アッセイ（ＨＴＲＦアッセイ）を使用して、ＢＭＰ  −  パートナー分子相互作用を増強または阻害することが可能な、抗ＢＭＰ、抗ＢＭＰ受容体もしくは抗ＥＲＦＥ抗体またはそれらの結合部分等、ＢＭＰのアゴニストまたはアンタゴニストを同定することができる。例えば、ユーロピウムクリプテートで標識された組換えＢＭＰ受容体が、ビオチン化ヒトＢＭＰを含有するアッセイ混合物に添加され、抗ＢＭＰ抗体の希釈系列が添加され、蛍光読み取り値が測定され、それからＩＣ５０を計算することができる。アッセイは、室温または２０℃で、例えば、適したアッセイ緩衝液において例えば室温または２０℃で行うことができる。反応は、データ読み取り値を得る前に、ある期間、例えば３時間、進むことができる。データは、３４０ｎｍにおける励起ならびに６１５ｎｍおよび６６５ｎｍにおける２種の発光読み取りにより得ることができ、読み取り値は、６６５／６１５における蛍光の比として表すことができ、この操作はＥｎＶｉｓｉｏｎ  ＭｕｌｔｉＬａｂｅｌ  Ｐｌａｔｅ  Ｒｅａｄｅｒを使用してもよい。その代わりに、ＥＲＦＥまたはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドへのＢＭＰの結合を阻害する抗ＢＭＰ抗体の能力は、室温または２０℃におけるＳＰＲアッセイ、例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ  Ｔ２００におけるランを使用して決定することができる。例えば、ＥＲＦＥまたはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドは、フローセルに固定化することができ、増加濃度の抗ＢＭＰ抗体が、ＢＭＰの存在下で添加され、シグナルが検出され、それから、ＢＭＰ−ＥＲＦＥまたはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドの相互作用の阻害のためのＩＣ５０を決定することができる。
【００２７】
本発明において、ＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニストは、低分子アゴニストまたはアンタゴニストとなることができる。本発明において、ＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニストは、特異的および／または選択的結合が可能な、アゴニストまたはアンタゴニスト免疫グロブリン分子、アゴニストまたはアンタゴニスト抗体となることができ、斯かる免疫グロブリンまたは抗体は、抗体またはその抗原結合断片もしくは部分となることができる。抗体またはその抗原結合部分は、ＥＲＦＥまたはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドに特異的におよび／または選択的に結合し得るおよび／またはそれに対して生成され得る。抗体またはその抗原結合部分は、ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチド、好ましくは、（ｉ）ＢＭＰ２、（ｉｉ）ＢＭＰ２／６ヘテロ二量体、（ｉｉｉ）ＢＭＰ４、（ｉｖ）ＢＭＰ５、（ｖ）ＢＭＰ６または（ｖｉ）ＢＭＰ７のそれに特異的におよび／または選択的に結合し得るおよび／またはそれに対して生成され得る。抗体またはその抗原結合部分は、ＢＭＰ受容体、好ましくは、（ｉ）ＢＭＰ２、（ｉｉ）ＢＭＰ２／６ヘテロ二量体、（ｉｉｉ）ＢＭＰ４、（ｉｖ）ＢＭＰ５、（ｖ）ＢＭＰ６または（ｖｉ）ＢＭＰ７の受容体に特異的におよび／または選択的に結合し得るおよび／またはそれに対して生成され得る。それぞれの場合において、特異的および／または選択的に結合は、ｉｎ−ｖｉｔｒｏおよび／またはｉｎ−ｖｉｖｏとなることができる。
【００２８】
本発明において、ＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニストは、ＢＭＰ受容体阻害剤、例えば、ドルソモルフィン（ｄｏｒｓｏｍｏｒｐｈｉｎ）、ＬＤＮ−１９３１８９、ＬＤＮ−２１２８５４、ＦＭＨ１、Ｋ０２２８８、ＬＤＮ−２１３８４４、ＬＤＮ−２１４１１７、ＢＭＰＲリガンドトラップとなることができる。本発明において、ＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニストは、ＢＭＰリガンド、例えば、ノギン、コーディン、コーディン様１、コーディン様２、エンドグリン、グレムリン（Ｇｒｅｍｌｉｎ）、ケルベロス、フォリスタチン、エクトジン（ｅｃｔｏｄｉｎ）／子宮感作（ｕｔｅｒｉｎｅ  ｓｅｎｓｉｔｉｚａｔｉｏｎ）関連遺伝子−１（ＵＳＡＧ−１）およびＤＡＮファミリーメンバーとなることができる。本発明において、ＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニストは、Ｓｍｕｒｆ１、Ｓｍｕｒｆ２等、Ｅ３ユビキチン（ｕｂｉｑｕｉｔｉｎｅ）リガーゼとなることができる、またはｃ−Ｓｋｉ、ＳｎｏＮおよびＴｏｂ等、転写コレプレッサーとなることができる、またはＢＡＭＢＩ、ＳＭＡＤ６、ＳＭＡＤ７等、フィードバック阻害剤となることができる。
【００２９】
本発明において、ＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニストは、ＥＲＦＥまたはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドに、好ましくは、（ｉ）ＥＲＦＥのＮ末端領域、または配列番号１のアミノ酸位置１〜１９０もしくは１〜２１２、（ｉｉ）配列番号３（ＴＮＦＤドメイン）、または配列番号１のアミノ酸位置１９０〜３５４、（ｉｉｉ）配列番号４（ＮＴＤ２ドメイン）、または配列番号１のアミノ酸位置１１４〜１８９、（ｉｖ）配列番号５（コラーゲン様ドメイン）、または配列番号１のアミノ酸位置９６〜１１３、（ｖ）配列番号６（ＮＴＤ１ドメイン）、または配列番号１のアミノ酸位置２４〜９５、（ｖ）配列番号７（ＳＰドメイン）、または配列番号１のアミノ酸位置１〜２３、（ｖｉ）配列番号１のアミノ酸１９６〜２０６からなる配列、または配列番号８に示されている配列［ＧＰＲＡＰＲＶＥＡＡＦ］、（ｖｉｉ）配列番号１のアミノ酸１３２〜１４８からなる配列、または配列番号９に示されている配列［ＬＬＫＥＦＱＬＬＬＫＧＡＶＲＱＲＥ］、（ｖｉｉｉ）配列番号１のアミノ酸１０９〜１２５からなる配列、または配列番号１０に示されている配列［ＧＬＰＧＰＰＧＰＰＧＰＱＧＰＰＧＰ］、（ｉｘ）配列番号１のアミノ酸７３〜９４からなる配列、または配列番号１１［ＡＨＳＶＤＰＲＤＡＷＭＬＦＶＸＱＳＤＫＧＸＮ］もしくは配列番号１３［ＡＨＳＶＤＰＲＤＡＷＭＬＦＶＲＱＳＤＫＧＶＮ］に示されている配列、（ｘ）配列番号１のアミノ酸７３〜８５からなる配列、または配列番号１２に示されている配列［ＡＨＳＶＤＰＲＤＡＷＭＬＦＶ］、（ｘｉ）アミノ酸配列［ＲＤＡＷＦＶＲＱ］、配列番号１４の全体もしくは一部からなるまたは含む配列、（ｘｉｉ）アミノ酸配列ＨＳＶＤＰＲＤＡＷＭ、配列番号１５の全体もしくは一部からなるまたは含む配列、（ｘｉｉｉ）アミノ酸配列ＤＰＲＤＡＷＦＶ、配列番号１６の全体もしくは一部からなるまたは含む配列、（ｘｉｖ）アミノ酸配列ＤＰＲＤＡＷＭＬＦＶ、配列番号１７の全体もしくは一部からなるまたは含む配列、（ｘｖ）アミノ酸配列ＨＳＶＤＰＲＤＡＷＭおよびＲＤＡＷＦＶＲＱ、配列番号１５および１４の全体もしくは一部からなるまたは含む配列、（ｘｖｉ）アミノ酸配列配列番号１または配列番号１に対して９５〜１００％同一性を有する配列の全体もしくは一部からなるまたは含む配列に結合する、それに特異的に結合する、またはそれに選択的に結合する、抗体またはその抗原結合部分となることができる。本発明において、ＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニストは、（ｉ）アミノ酸配列ＲＤＡＷＦＶＲＱ、配列番号１４の全体もしくは一部からなるまたは含む配列に特異的にまたは選択的に結合する、（ｉｉ）アミノ酸配列ＨＳＶＤＰＲＤＡＷＭ、配列番号１５の全体もしくは一部からなるまたは含む配列に特異的にまたは選択的に結合する、（ｉｉｉ）アミノ酸配列ＨＳＶＤＰＲＤＡＷＭおよびＲＤＡＷＦＶＲＱ、配列番号１５および１４の全体もしくは一部からなるまたは含む配列に特異的にまたは選択的に結合する、抗体またはその抗原結合部分となることができる。
【００３０】
本発明において、ＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニストは、（ｉ）ＣＤＲ配列：ＣＤＲＨ１、配列番号１８、ＣＤＲＨ２、配列番号１９、ＣＤＲＨ３、配列番号２０、ＣＤＲＬ１、配列番号２１、ＣＤＲＬ２、配列番号２２、ＣＤＲＬ３、配列番号２３、（ｉｉ）ＶｈおよびＶｌ配列、それぞれ配列番号２４および配列番号２５、または（ｉｉｉ）重および軽鎖配列、それぞれ配列番号２６および配列番号３７を含む、抗体またはその抗原結合部分となることができる。
【００３１】
本発明において、ＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニストは、抗体またはその抗原結合断片もしくは部分等、特異的および／または選択的結合が可能な免疫グロブリン分子アゴニストまたはアンタゴニストとなることができる。抗体またはその抗原結合部分は、上文に記載されている通り、ＥＲＦＥまたはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドに特異的におよび／または選択的に結合し得るおよび／またはそれに対して生成され得る、またはＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドに特異的におよび／または選択的に結合し得るおよび／またはそれに対して生成され得る、またはＢＭＰ受容体に特異的におよび／または選択的に結合し得るおよび／またはそれに対して生成され得る。本発明において、抗体またはその抗原結合部分は、ｉｎ−ｖｉｔｒｏおよび／またはｉｎ−ｖｉｖｏで、特異的におよび／または選択的に結合することができる。本発明において、抗体またはその抗原結合部分は、二重特異性となることができ、ＥＲＦＥまたはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドに特異的におよび／または選択的に結合することができる、および／またはＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチド、好ましくは、（ｉ）ＢＭＰ２、（ｉｉ）ＢＭＰ２／６ヘテロ二量体、（ｉｉｉ）ＢＭＰ４、（ｉｖ）ＢＭＰ５、（ｖ）ＢＭＰ６または（ｖｉ）ＢＭＰ７に特異的にかつ選択的に結合することができる。本発明において、抗体またはその抗原結合部分は、二重特異性となることができ、ＢＭＰ受容体、好ましくは、（ｉ）ＢＭＰ２、（ｉｉ）ＢＭＰ２／６ヘテロ二量体、（ｉｉｉ）ＢＭＰ４、（ｉｖ）ＢＭＰ５、（ｖ）ＢＭＰ６または（ｖｉ）ＢＭＰ７の受容体に特異的におよび／または選択的に結合することができる、ＢＭＰ、好ましくは、（ｉ）ＢＭＰ２、（ｉｉ）ＢＭＰ２／６ヘテロ二量体、（ｉｉｉ）ＢＭＰ４、（ｉｖ）ＢＭＰ５、（ｖ）ＢＭＰ６または（ｖｉ）ＢＭＰ７に特異的にかつ選択的に結合することができる；および／またはＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチド、好ましくは、（ｉ）ＢＭＰ２、（ｉｉ）ＢＭＰ２／６ヘテロ二量体、（ｉｉｉ）ＢＭＰ４、（ｉｖ）ＢＭＰ５、（ｖ）ＢＭＰ６または（ｖｉ）ＢＭＰ７に特異的にかつ選択的に結合することができる。
【００３２】
ＢＭＰアゴニストもしくはアンタゴニスト、または抗体もしくはその抗原結合部分は、用量または濃度依存性（ｄｅｐｅｎｄａｎｔ）様式で、ＥＲＦＥもしくはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドに結合することができる、および／またはＢＭＰもしくはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドに結合することができる、および／またはＢＭＰ受容体に結合することができる、および／またはそれらと安定した複合体を形成することができる。本発明において、ＢＭＰアゴニストもしくはアンタゴニスト、または抗体もしくはその抗原結合部分は、ＥＲＦＥもしくはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドおよび／またはＢＭＰもしくはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドおよび／またはＢＭＰ受容体と複合体を形成することができ、これは、約２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４、５６、５８、６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９６、９８、１００、１０２、１０４、１０６、１０８、１１０、１１２、１１４、１１６、１１８、１２０、１２２、１２４、１２６、１２８、１３０、１３２、１３４、１３６、１３８、１４０、１４２、１４４、１４６、１４８、１５０、１５２、１５４、１５６、１５８、１６０、１６２、１６４、１６６、１６８、１７０、１７２、１７４、１７６、１７８、１８０、１８２、１８４、１８６、１８８、１９０、１９２、１９４、１９６、１９８、２００、２０２、２０４、２０６、２０８もしくは２１０時間＋／−１時間またはそのうちのいずれか１種を超える、ｉｎ−ｖｉｔｒｏおよび／またはｉｎ−ｖｉｖｏおよび／または生体液における半減期を有することができる。ＢＭＰアゴニストもしくはアンタゴニスト、または抗体もしくはその抗原結合部分は、用量または濃度依存性（ｄｅｐｅｎｄａｎｔ）様式で、ＥＲＦＥもしくはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドおよび／またはＢＭＰもしくはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドおよび／またはＢＭＰ受容体に結合することができる、および／またはそれらと安定した複合体を形成することができる。本発明のある実施形態において、ＢＭＰアゴニストもしくはアンタゴニスト、または抗体もしくはその抗原結合部分は、ＥＲＦＥもしくはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドおよび／またはＢＭＰもしくはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドおよび／またはＢＭＰ受容体と複合体を形成することができ、これは、約２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４、５６、５８、６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９６、９８、１００、１０２、１０４、１０６、１０８、１１０、１１２、１１４、１１６、１１８、１２０、１２２、１２４、１２６、１２８、１３０、１３２、１３４、１３６、１３８、１４０、１４２、１４４、１４６、１４８、１５０、１５２、１５４、１５６、１５８、１６０、１６２、１６４、１６６、１６８、１７０、１７２、１７４、１７６、１７８、１８０、１８２、１８４、１８６、１８８、１９０、１９２、１９４、１９６、１９８、２００、２０２、２０４、２０６、２０８もしくは２１０日間＋／−１日間またはそのうちのいずれか１種を超える、ｉｎ−ｖｉｔｒｏおよび／またはｉｎ−ｖｉｖｏおよび／または生体液における半減期を有することができる。ある実施形態では、半減期は、約５日間、６日間、２０日間、２６日間、２７日間またはそのうちのいずれか１種を超える。
【００３３】
前述の発明において、ＢＭＰアゴニストもしくはアンタゴニスト、または抗体もしくはその抗原結合部分との複合体は、約６日間またはそれ超のｉｎ−ｖｉｖｏまたは生体液における半減期を有する。ｉｎ−ｖｉｔｒｏにおける安定性は、約生理的ｐＨで、緩衝水溶液において、例えば、２０℃または３７℃で、例えば、ＳＰＲ（表面プラズモン共鳴、ＢＩＡＣＯＲＥ）、ＥＬＩＳＡまたはラジオイムノアッセイによって測定して、標的結合により活性抗体のレベルを定量化することができる、またはその代わりに、分光光度法を使用して、溶液における可溶性抗体レベルの決定によって測定することができる。前述の実施形態において、ｉｎ−ｖｉｖｏ半減期は、ラット、マウスもしくはヒトの身体またはそれらの生体液、例えば、ヒトにおける半減期となることができる。半減期は、生体液試料への抗体の導入後の、またはｉｎ−ｖｉｖｏにおける例えば、静脈内もしくは皮下注射によるその投与後の、抗体−ＥＲＦＥ複合体レベルの血清または血漿測定から決定することもできる。
【００３４】
本発明において、ＢＭＰアゴニストもしくはアンタゴニスト、または抗体もしくはその抗原結合部分の複合体は、延長された半減期を有し、ｉｎ−ｖｉｖｏ、例えば、血清におけるより高い安定性は、より低頻度の投薬および／またはより低い投薬レベルの投薬量レジメンを可能にし、したがって、ｉｎ−ｖｉｖｏにおけるいずれかの潜在的毒性または副作用のリスクを低下させることから、望ましい。ＢＭＰアゴニストもしくはアンタゴニスト、または抗体の、もしくはその抗原結合部分の、複合体の高い安定性は、より高い効力の指標であり、特異性がより低いおよび／または選択性がより低いおよび／または強力さがより低いＢＭＰアゴニスト、アンタゴニストまたは抗体よりも低い投薬量で抗体を使用して同じ治療有効性を達成し、したがって、ｉｎ−ｖｉｖｏにおける潜在的毒性または副作用を低下させることができるという、言及されている利益を有する。
【００３５】
ＢＭＰアゴニストもしくはアンタゴニスト、または抗体もしくはその抗原結合部分、またはそれとの複合体は、約２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４、５６、５８、６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９６、９８、１００、１０２、１０４、１０６、１０８、１１０、１１２、１１４、１１６、１１８、１２０、１２２、１２４、１２６、１２８、１３０、１３２、１３４、１３６、１３８、１４０、１４２、１４４、１４６、１４８、１５０、１５２、１５４、１５６、１５８、１６０、１６２、１６４、１６６、１６８、１７０、１７２、１７４、１７６、１７８、１８０、１８２、１８４、１８６、１８８、１９０、１９２、１９４、１９６、１９８、２００、２０２、２０４、２０６、２０８、２１０、２１２、２１４、２１６、２１８、２２０、２２２、２２４、２２６、２２８、２３０、２３２、２３４、２３６、２３８、２４０、２４２、２４４、２４６、２４８、２５０、２５２、２５４、２５６、２５８、２６０、２６２、２６４、２６６、２６８、２７０、２７２、２７４、２７６、２７８、２８０、２８２、２８４、２８６、２８８、２９０、２９２、２９４、２９６、２９８、３００、３０２、３０４、３０６、３０８、３１０、３１２、３１４、３１６、３１８、３２０、３２２、３２４、３２６、３２８、３３０、３３２、３３４、３３６、３３８、３４０、３４２、３４４、３４６、３４８、３５０、３５２、３５４、３５６、３５８、３６０、３６２、３６４、３６６、３６８、３７０、３７２、３７４、３７６、３７８、３８０、３８２、３８４、３８６、３８８、３９０、３９２、３９４、３９６、３９８、４００、４０２、４０４、４０６、４０８、４１０、４１２、４１４、４１６、４１８、４２０、４２２、４２４、４２６、４２８、４３０、４３２、４３４、４３６、４３８、４４０、４４２、４４４、４４６、４４８、４５０、４５２、４５４、４５６、４５８、４６０、４６２、４６４、４６６、４６８、４７０、４７２、４７４、４７６、４７８、４８０、４８２、４８４、４８６、４８８、４９０、４９２、４９４、４９６、４９８、５００、５０２、５０４、５０６、５０８、５１０、５１２、５１４、５１６、５１８、５２０、５２２、５２４、５２６、５２８、５３０、５３２、５３４、５３６、５３８、５４０、５４２、５４４、５４６、５４８、５５０、５５２、５５４、５５６、５５８、５６０、５６２、５６４、５６６、５６８、５７０、５７２、５７４、５７６、５７８、５８０、５８２、５８４、５８６、５８８、５９０、５９２、５９４、５９６、５９８もしくは６００時間＋／−１時間またはそのうちのいずれか１種を超える、ｉｎ−ｖｉｖｏにおける半減期を有することができる。例えば、ＢＭＰアンタゴニスト（ａｎｔａｏｎｉｓｔ）もしくはアゴニスト、または抗体もしくはその抗原結合部分、またはそれとの複合体は、約１６３〜５４０時間の間、および／または約１６３時間もしくはそれ超の、ｉｎ−ｖｉｖｏにおける半減期を有することができる。ＢＭＰアゴニストもしくはアンタゴニスト、または抗体もしくはその抗原結合部分、またはそれとの複合体は、約２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４、５６、５８、６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９６、９８、１００、１０２、１０４、１０６、１０８、１１０、１１２、１１４、１１６、１１８、１２０、１２２、１２４、１２６、１２８、１３０、１３２、１３４、１３６、１３８、１４０、１４２、１４４、１４６、１４８、１５０、１５２、１５４、１５６、１５８、１６０、１６２、１６４、１６６、１６８、１７０、１７２、１７４、１７６、１７８、１８０、１８２、１８４、１８６、１８８、１９０、１９２、１９４、１９６、１９８、２００、２０２、２０４、２０６、２０８もしくは２１０日間＋／−１日間またはそのうちのいずれか１種を超える、ｉｎ−ｖｉｖｏにおける半減期を有することができ、例えば、ＢＭＰアゴニストもしくはアンタゴニスト、または抗体もしくはその抗原結合部分、またはそれとの複合体は、約６〜２２日間の間、例えば、約６日間またはそれ超の、ｉｎ−ｖｉｖｏにおける半減期を有する。
【００３６】
前述の実施形態において、ｉｎ−ｖｉｖｏ半減期は、ラット、マウスもしくはヒトの身体またはそれらの生体液における半減期となることができる。半減期は、ｉｎ−ｖｉｖｏにおける例えば、静脈内または皮下注射による投与後の、ＢＭＰアゴニストもしくはアンタゴニスト、または抗体もしくはその抗原結合部分、またはそれとの複合体のレベルの血漿または血清測定から決定することができる。
【００３７】
本発明のある実施形態において、抗体またはその抗原結合部分は、ヒト、ヒト化またはキメラとなることができる。
【００３８】
抗体またはその抗原結合部分は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ４、ＩｇＧ２Δａ、ＩｇＧ４Δｂ、ＩｇＧ４Δｃ、ＩｇＧ４  Ｓ２２８Ｐ、ＩｇＧ４Δｂ  Ｓ２２８ＰおよびＩｇＧ４Δｃ  Ｓ２２８Ｐからなる群から選択されるアイソタイプサブクラスを有することができる。抗体またはその抗原結合部分は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ４、ＩｇＧ２Δａ、ＩｇＧ４Δｂ、ＩｇＧ４Δｃ、ＩｇＧ４  Ｓ２２８Ｐ、ＩｇＧ４Δｂ  Ｓ２２８ＰまたはＩｇＧ４Δｃ  Ｓ２２８Ｐアイソタイプの全長抗体となることができる。抗体またはその抗原結合部分は、単鎖抗体、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ）２断片、Ｆｖ断片となることができる。抗体またはその抗原結合部分は、四量体抗体、四価抗体、二重特異性または多特異性抗体、ドメイン特異的抗体、単一ドメイン抗体となることができる。抗体またはその抗原結合部分は、融合タンパク質となることができる。本発明はまた、本発明の抗体またはその抗原結合部分を含む二重特異性分子を提供し、前記抗体またはその抗原結合部分は、前記抗体またはその抗原結合部分とは異なる結合特異性を有する第２の機能部分に連結されている。
【００３９】
本発明において、ＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニストは、ＥＲＦＥまたはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドとなることができる、および／またはＢＭＰ、好ましくは、（ｉ）ＢＭＰ２、（ｉｉ）ＢＭＰ２／６ヘテロ二量体、（ｉｉｉ）ＢＭＰ４、（ｉｖ）ＢＭＰ５、（ｖ）ＢＭＰ６または（ｖｉ）ＢＭＰ７；さらに好ましくは、ＢＭＰ２および／またはＢＭＰ４、またはＢＭＰ５および／またはＢＭＰ６および／またはＢＭＰ７に結合する。したがって、ＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニストは、（ｉ）配列番号１もしくは配列番号１に対して９５〜１００％同一性を有する配列のＥＲＦＥとなることができる、または（ｉｉ）アミノ酸配列配列番号１もしくは配列番号１に対して９５〜１００％同一性を有する配列のＣ末端切断を含むＥＦＲＥのＮ末端領域からなる単離されたＥＲＦＥポリペプチドとなることができる。
【００４０】
したがって、Ｃ末端切断は、ＴＮＦ様ドメイン内となることができ、ＴＮＦ様ドメインは、アミノ酸配列配列番号１または配列番号１に対して９５〜１００％同一性を有する配列のアミノ酸１９０〜３５４を含み、場合により、ＴＮＦ様ドメインは、アミノ酸１９０〜２１２の間、好ましくは、２１２で切断されている、またはＴＮＦ様ドメインは、欠失されている。
【００４１】
その代わりに、Ｃ末端切断は、ＮＴＤ２ドメイン内となることができ、ＮＴＤ２ドメインは、アミノ酸配列配列番号１または配列番号１に対して９５〜１００％同一性を有する配列のアミノ酸１１４〜１８９を含み、場合により、Ｃ末端切断は、アミノ酸位置１４２である、またはＮＴＤ２ドメインは、欠失されている。
【００４２】
その代わりに、Ｃ末端切断は、コラーゲン様ドメイン内となることができ、コラーゲン様ドメインは、アミノ酸配列配列番号１または配列番号１に対して９５〜１００％同一性を有する配列のアミノ酸９６〜１１３を含み、場合により、Ｃ末端切断は、アミノ酸位置９６もしくは１１２である、またはコラーゲンドメインは、欠失されている。
【００４３】
その代わりに、Ｃ末端切断は、ＮＴＤ１ドメイン内となることができ、ＮＴＤ１ドメインは、アミノ酸配列配列番号１または配列番号１に対して９５〜１００％同一性を有する配列のアミノ酸２４〜９５を含み、場合により、ＮＴＤ１ドメインは、アミノ酸位置４２で切断されている。
【００４４】
ＥＲＦＥまたはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドは、（ｉ）配列番号１のアミノ酸１９６〜２０６からなる配列、もしくは配列番号８に示されている配列［ＧＰＲＡＰＲＶＥＡＡＦ、配列番号８］；（ｉｉ）配列番号１のアミノ酸１３２〜１４８からなる配列、もしくは配列番号９に示されている配列［ＬＬＫＥＦＱＬＬＬＫＧＡＶＲＱＲＥ、配列番号９］；（ｉｉｉ）配列番号１のアミノ酸１０９〜１２５からなる配列、もしくは配列番号１０に示されている配列［ＧＬＰＧＰＰＧＰＰＧＰＱＧＰＰＧＰ、配列番号１０］；（ｉｖ）配列番号１のアミノ酸７３〜９４からなる配列、もしくは配列番号１１に示されている配列［ＡＨＳＶＤＰＲＤＡＷＭＬＦＶＸＱＳＤＫＧＸＮ、配列番号１１］；または（ｖ）配列番号１のアミノ酸７３〜８５からなる配列、もしくは配列番号１２に示されている配列［ＡＨＳＶＤＰＲＤＡＷＭＬＦＶ、配列番号１２］を含むまたはこれからなることができる。
【００４５】
ＥＲＦＥまたはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドは、ＳＰドメインを欠くことができ、ＳＰドメインは、アミノ酸配列配列番号１または配列番号１に対して９５〜１００％同一性を有する配列のアミノ酸１〜２４を含む。好ましくは、ＥＲＦＥまたはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドは、配列番号１のＥＦＲＥによって示されるエリスロフェロン活性と同様または同じであるエリスロフェロン活性を示す。好ましくは、ＥＲＦＥまたはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドは、ヘプシジン活性、ヘプシジン発現またはヘプシジンｍＲＮＡ産生を減少させるおよび／またはこれを阻害する、ＢＭＰ活性を阻害する、ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチド、好ましくは、（ｉ）ＢＭＰ２、（ｉｉ）ＢＭＰ２／６ヘテロ二量体、（ｉｉｉ）ＢＭＰ４、（ｉｖ）ＢＭＰ５、（ｖ）ＢＭＰ６または（ｖｉ）ＢＭＰ７；さらに好ましくは、ＢＭＰ２および／またはＢＭＰ４、またはＢＭＰ５および／またはＢＭＰ６および／またはＢＭＰ７に結合する。前述の説明において、「配列番号１に対する９５〜１００％同一性」を有する、という用語は、「配列番号１に対する９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一性、または配列番号１におけるポリペプチド配列の均等な長さにわたる斯かる同一性を有する」ことを含むものと読み取ることができる。
【００４６】
核酸、ベクター、細胞
本発明の第３の態様において、ＢＭＰアゴニストもしくはアンタゴニストをコードする核酸、または遺伝子送達ベクター、例えば、ＡＡＶベクター等、当該核酸を含むベクターを使用して、（ｉ）鉄代謝の疾患を処置する、防止する、寛解する、制御する、その発生率を低下させる、またはその発症もしくは進行を遅延させる方法、または（ｉｉ）脂質または炭水化物代謝の疾患を処置する、防止する、寛解する、制御する、その発生率を低下させる、またはその発症もしくは進行を遅延させる方法が提供される。ベクターは、哺乳類細胞をトランスフェクトするためのものであってよい、複製可能な発現ベクターとなることができ、例えば、ベクターは、ウイルスベクター、例えば、ＡＡＶベクターとなることができる。
【００４７】
本発明において、本明細書に記載されている通り、ＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニストは、（１．１）ＥＲＦＥまたはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチド、（１．２）ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチド；好ましくは、ＢＭＰ２、ＢＭＰ２／６ヘテロ二量体、ＢＭＰ４、ＢＭＰ５、ＢＭＰ６またはＢＭＰ７、（１．３）ＢＭＰ受容体またはその融合タンパク質、（１．４）（ｉ）ＥＲＦＥまたはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチド、（ｉｉ）ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチド；好ましくは、ＢＭＰ２、ＢＭＰ２／６ヘテロ二量体、ＢＭＰ４、ＢＭＰ５、ＢＭＰ６またはＢＭＰ７、（ｉｉｉ）ＢＭＰ受容体、好ましくは、ＢＭＰ２、ＢＭＰ２／６ヘテロ二量体、ＢＭＰ４、ＢＭＰ５、ＢＭＰ６またはＢＭＰ７の受容体に特異的におよび／または選択的に結合し得るおよび／またはそれに対して生成される、抗体またはその抗原結合部分となることができる。本発明において、本明細書に記載されている通り、ＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニストは、本明細書に列挙されているＢＭＰアゴニストもしくはアンタゴニストをコードする、例えば、上述の（１．１）〜（１．４）のいずれかをコードする核酸、または遺伝子送達ベクター、例えば、ＡＡＶベクター等、当該核酸を含むベクターとなることができる。
【００４８】
本発明は、したがって、本発明に係るＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニストをコードする核酸ならびに斯かる核酸を含むベクターおよび細胞、ならびに例えば、細胞からの発現および場合によるその後の精製により、細胞からＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニストを産生する方法を提供する。本発明は、さらに、ＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニストをコードする核酸分子、および／またはその相補的核酸を提供する。本発明において、核酸分子は、シグナル配列、例えば、ＤＮＡもしくはＲＮＡ配列または例えば、免疫グロブリンシグナル配列をコードする領域をさらに含むことができる。本発明は、さらに、細胞をトランスフェクトするための複製可能な発現ベクター、本発明の核酸分子を含むベクターを提供する。ある実施形態では、ベクターは、ウイルスベクターである。ベクターは、医薬としての使用のため、および／または鉄代謝の障害および／または異常に低いもしくは高い鉄レベルを含む疾患もしくは障害および／または異常に低いもしくは高いヘプシジンレベルを含む疾患もしくは障害および／または個体におけるそれらの症状および／または炭水化物もしくは脂質代謝の疾患の防止および／または処置における使用のためのものとなることができる。
【００４９】
本発明は、さらに、本発明の核酸分子またはベクターを発現させて、本発明に係るＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニストを産生または分泌する方法を提供する。本方法は、細胞への核酸分子またはベクターの導入、ならびにその中の核酸の発現を含み、本発明に係るＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニストを産生または分泌することができる。核酸分子またはベクターは、ｉｎ−ｖｉｔｒｏその代わりにｉｎ−ｖｉｖｏで細胞に導入され得る。発現されたＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニストは、ｉｎ−ｖｉｔｒｏで発現され得、さらに単離および精製されてもよい。発現されたＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニストは、ｉｎ−ｖｉｖｏで発現され得、ｉｎ−ｖｉｖｏ発現は、遺伝子療法を構成し得るようなものである。ベクターは、哺乳類細胞をトランスフェクトするためのものであってよい、複製可能な発現ベクターとなることができ、例えば、ベクターは、ウイルスベクター、例えば、ＡＡＶベクターとなることができる。
【００５０】
本発明は、さらに、第３または第４の態様のいずれかの核酸分子またはベクターを有する宿主細胞を提供し、例えば、細胞は、真核細胞または原核細胞、例えば、細菌細胞、酵母細胞または哺乳類細胞となることができる。ある実施形態では、宿主細胞は、哺乳類細胞である。
【００５１】
医薬組成物
本発明の第４の態様において、ＢＭＰアゴニストもしくはアンタゴニスト、またはＢＭＰアゴニストもしくはアンタゴニストをコードする核酸、または本発明の前述の態様のいずれかに係る核酸を含むベクターを含み、薬学的に許容できる担体および／または賦形剤をさらに含む、医薬組成物を使用して、鉄代謝の疾患または脂質もしくは炭水化物代謝の疾患を処置する、防止する、寛解する、制御する、その発生率を低下させる、またはその発症もしくは進行を遅延させる方法が提供される。一実施形態において、医薬組成物は、本発明に係る１種もしくは複数のＢＭＰアゴニストもしくはアンタゴニスト、および／またはＢＭＰアゴニストもしくはアンタゴニストをコードする１種もしくは複数の核酸、または当該核酸を含むベクターを含むことができる。
【００５２】
併用療法
本発明の第５の態様において、一実施形態では、第１、第３および第４の態様に係る、ＢＭＰアゴニストもしくはアンタゴニスト、またはＢＭＰアゴニストもしくはアンタゴニストをコードする核酸、または当該核酸を含むベクター、またはそれらの医薬組成物を使用して、鉄代謝の疾患を処置する方法であって、ＢＭＰアゴニストもしくはアンタゴニスト、またはＢＭＰアゴニストもしくはアンタゴニストをコードする核酸、または当該核酸を含むベクター、または医薬組成物が、別々に、逐次にまたは同時に、第２の治療剤と組み合わせた使用のために提供され、場合により、組合せが、薬学的に許容できる担体および／または賦形剤を含む医薬組成物として提供される、方法が提供される。第２の治療剤は、例えば、既に上文に記載されている、いずれか１種もしくは複数のＢＭＰアゴニストもしくはアンタゴニスト、またはＢＭＰアゴニストもしくはアンタゴニストをコードする核酸、または当該核酸を含むベクター、または医薬組成物等、ＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニスト、アゴニストから選択され得る。第２の治療剤は、例えば、輸血または赤血球アフェレーシス（ｅｒｙｔｈｏｃｙｔａｐｈｅｒｅｓｉｓ）によって提供される赤血球細胞、例えば、デフェロキサミンまたはデフェリプロン等の鉄キレート剤、葉酸塩から選択され得る。第２の治療剤は、ヒドロキシ尿素、低メチル化剤、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤、エリスロポエチン、例えば：ビタミンＥ、アセチルシステイン、デフェリプロン等の抗酸化剤；例えば、同種異系間移植によって提供される骨または骨髄幹細胞、サリドマイド、レナリドミド、シロリムス、ルキソリチニブ、パクリチニブ（ｐａｃｒｉｔｉｎｉｂ）、ＪＡＫ２阻害剤、ルスパテルセプト（ｌｕｓｐａｔｅｒｃｅｐｔ）、ソタテルセプト（ｓｏｔａｔｅｒｃｅｐｔ）、ミニ−ヘプシジン、アポ−トランスフェリン、例えば、遺伝子付加によって提供されるβ−またはγ−グロビン、グロビン合成の調節因子のうち１種または複数から選択され得る。
【００５３】
本発明の第５の態様において、一実施形態では、第２、第３および第４の態様に係る、ＢＭＰアゴニストもしくはアンタゴニスト、またはＢＭＰアゴニストもしくはアンタゴニストをコードする核酸、または当該核酸を含むベクター、またはそれらの医薬組成物を使用して、脂質または炭水化物代謝の疾患を処置する方法であって、ＢＭＰアゴニストもしくはアンタゴニスト、またはＢＭＰアゴニストもしくはアンタゴニストをコードする核酸、または当該核酸を含むベクター、または医薬組成物が、別々に、逐次にまたは同時に、本明細書に記載されている通り、前述の態様に係る第２の治療剤と組み合わせた使用のために提供され、場合により、組合せが、薬学的に許容できる担体および／または賦形剤を含む医薬組成物として提供される、方法が提供される。第２の治療剤は、既に上文に記載されている、ＢＭＰアゴニストもしくはアンタゴニスト、またはＢＭＰアゴニストもしくはアンタゴニストをコードする核酸、または当該核酸を含むベクター、または医薬組成物から選択され得る。第２の治療剤は、インスリン増感剤、メトホルミン、チアゾリジンジオン、スタチン、ペントキシフィリン、利尿剤、ＡＣＥ阻害剤、シンバスタチン、シタグリプチン、ＧＬＰ−１アゴニスト、インスリンまたは合成インスリンアナログのうち１種または複数から選択され得る。
【００５４】
処置方法
本発明の第１、第３、第４および第５の態様において、前述の態様に係る、ＢＭＰアゴニストもしくはアンタゴニスト、その核酸、核酸相補体、ベクターもしくは医薬組成物、または組合せを使用して、鉄代謝の疾患を処置する、防止する、寛解する、制御する、その発生率を低下させる、またはその発症もしくは進行を遅延させる方法であって、鉄代謝の疾患のバイオマーカーの濃度またはレベルが、正常濃度またはレベルから逸脱する程度が、ＢＭＰアゴニストもしくはアンタゴニスト、その核酸、核酸相補体、ベクターもしくは医薬組成物、または組合せの使用または投与によって低下される、方法がさらに提供される。本技術分野から知られている、本技術分野で発表されている、または受け入れられている通り、バイオマーカーの正常もしくは対照濃度または対照もしくはレベルは、例えば、鉄代謝の疾患がない個体に由来する対照試料から判断することができる、または鉄代謝の疾患がない個体におけるバイオマーカーの正常もしくは対照濃度もしくはレベルとなることができる。対照は、成人もしくは小児等、均等な性別、年齢の個体、またはそれらに由来する試料となることができる。ＢＭＰアゴニストもしくはアンタゴニスト、その核酸、核酸相補体、ベクターもしくは医薬組成物、または組合せの使用または投与は、バイオマーカーレベルまたは濃度の、正常または対照バイオマーカーレベルまたは濃度からの逸脱を、約５パーセント、１０パーセント、１５パーセント、２０パーセント、２５パーセント、３０パーセント、３５パーセント、４０パーセント、４５パーセント、５０パーセント、５５パーセント、６０パーセント、６５パーセント、７０パーセント、７５パーセント、８０パーセント、８５パーセント、９０パーセントもしくは９５パーセントまたはそれ超以上、例えば、９６パーセント、９７パーセント、９８パーセント、９９パーセントまたは１００パーセント低下させることができる。前述の態様に係る、ＢＭＰアゴニストもしくはアンタゴニスト、その核酸、核酸相補体、ベクターもしくは医薬組成物、または組合せの使用または投与は、バイオマーカーレベルまたは濃度の、正常または対照バイオマーカーレベルまたは濃度からの逸脱を、２時間、４時間、６時間、８時間、１０時間、１２時間、１４時間、１６時間、１８時間、２０時間、２２時間、１日間、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、８日間、９日間、１０日間、１１日間、１２日間、１３日間、１４日間、１５日間、１６日間、１７日間、１８日間、１９日間、２０日間、２１日間、２２日間、２３日間、２４日間、２５日間、２６日間、２７日間、２８日間、２９日間、３０日間の期間またはそれ未満以内、低下させることができる。
【００５５】
鉄代謝の疾患のバイオマーカーは、血液もしくは血清ヘプシジン、血清フェリチンもしくはトランスフェリンまたは肝臓における鉄蓄積、肝鉄指数（ＨＩＩ）、総鉄結合能、平均赤血球容積（ＭＣＶ）、平均赤血球ヘモグロビン（ＭＣＨ）、平均赤血球ヘモグロビン濃度（ＭＣＨＣ）、ヘマトクリットもしくは血中血球容積（ＰＣＶ）、総赤血球細胞（ＲＢＣ）数または血液ヘモグロビンとなることができ、例えば、低レベルのＲＢＣまたはヘモグロビンは、貧血の兆候である。
【００５６】
本発明の第２、第３、第４および第５の態様において、ＢＭＰアゴニストもしくはアンタゴニスト、その核酸、核酸相補体、ベクターもしくは医薬組成物、または組合せを使用して、脂質または炭水化物代謝の疾患を処置する、防止する、寛解する、制御する、その発生率を低下させる、またはその発症もしくは進行を遅延させる方法であって、脂質または炭水化物代謝の疾患のバイオマーカーの濃度またはレベルが、正常または対照濃度またはレベルから逸脱する程度が、ＢＭＰアゴニストもしくはアンタゴニスト、その核酸、核酸相補体、ベクターもしくは医薬組成物、または組合せの使用または投与によって低下される、方法がさらに提供される。本技術分野から知られている、本技術分野で発表されている、または受け入れられている通り、バイオマーカーの正常または対照濃度またはレベルは、例えば、脂質または炭水化物代謝の疾患がない個体に由来する対照試料から判断することができる、または脂質もしくは炭水化物代謝の疾患がない個体におけるバイオマーカーの正常もしくは対照濃度もしくはレベルとなることができる。対照は、成人もしくは小児等、均等な性別、年齢の個体、またはそれらに由来する試料となることができる。ＢＭＰアゴニストもしくはアンタゴニスト、その核酸、核酸相補体、ベクターもしくは医薬組成物、または組合せの使用または投与は、バイオマーカーレベルまたは濃度の、正常または対照バイオマーカーレベルまたは濃度からの逸脱を、約５パーセント、１０パーセント、１５パーセント、２０パーセント、２５パーセント、３０パーセント、３５パーセント、４０パーセント、４５パーセント、５０パーセント、５５パーセント、６０パーセント、６５パーセント、７０パーセント、７５パーセント、８０パーセント、８５パーセント、９０パーセントもしくは９５パーセントまたはそれ超以上、例えば、９６パーセント、９７パーセント、９８パーセント、９９パーセントまたは１００パーセント低下させることができる。前述の態様に係る、ＢＭＰアゴニストもしくはアンタゴニスト、その核酸、核酸相補体、ベクターもしくは医薬組成物、または組合せの使用または投与は、バイオマーカーレベルまたは濃度の、正常または対照バイオマーカーレベルまたは濃度からの逸脱を、２時間、４時間、６時間、８時間、１０時間、１２時間、１４時間、１６時間、１８時間、２０時間、２２時間、１日間、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、８日間、９日間、１０日間、１１日間、１２日間、１３日間、１４日間、１５日間、１６日間、１７日間、１８日間、１９日間、２０日間、２１日間、２２日間、２３日間、２４日間、２５日間、２６日間、２７日間、２８日間、２９日間、３０日間の期間またはそれ未満以内、低下させることができる。
【００５７】
脂質または炭水化物代謝の疾患のバイオマーカーは、血小板数、平均血小板容積（ＭＰＶ）、血液インスリン、血糖、血清トリグリセリド、血液高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）レベル、血圧、血液コレステロール、ヒアルロン酸、サイトケラチン−１８（ＣＫ−１８）およびコラーゲン７ｓの血清レベルとなることができる。バイオマーカーは、例えば、ｈｓ−ＣＲＰ検査によって検出される、ＣＲＰの血清濃度をさらに含むことができ、これは、ＮＡＦＬＤ、肥満、インスリン抵抗性およびメタボリックシンドロームにおいて上昇される。さらに別のバイオマーカーは、血液もしくは血清フェリチンもしくはトランスフェリンまたは肝臓における鉄蓄積または肝細胞における脂肪蓄積レベルを含むことができ、これらは、例えば、ＮＡＦＬＤ、脂肪性肝炎およびＮＡＳＨ患者において増加される。バイオマーカーは、その上、血清アルブミン、血清マロンジアルデヒド、血清血漿ペントラキシン３、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）および血液アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）の血液トランスアミナーゼ、血液アルカリホスファターゼ（ＡＬＫＰ）となることができ、その上さらに、血清レプチン、血清アディポカイン、血清アディポサイトカイン、血清アディポネクチンとなることができ、これらのレベルは、例えば、メタボリックシンドローム、インスリン抵抗性、ＮＡＳＨおよびＮＡＦＬＤにおいて変更される。さらに別のバイオマーカーは、ＩＬ−６またはＴＮＦ−αおよびその可溶性受容体の血液または血清レベルを含むことができ、インスリン抵抗性は、例えば、グルコースの代謝性クリアランス速度によって測定され、これらは、例えば、ＮＡＦＬＤ、インスリン抵抗性および肥満において有意により高い。バイオマーカーは、例えば、二重エネルギーｘ線吸収測定（ＤＥＸＡ）およびイメージング技法によって測定される、体型指数、体内総脂肪量または脂肪組織の分布、中心から末梢への脂肪分布、臀部から腹部への脂肪分布をさらに含むことができる。
【００５８】
本発明の第２、第３、第４および第５の態様において、前述の態様に係る、ＢＭＰアゴニストもしくはアンタゴニスト、その核酸、核酸相補体、ベクターもしくは医薬組成物、または組合せの使用または投与は、例えば、使用もしくは投与に先立つ検査もしくはスコアと比較して、または無処置個体もしくはそれに由来する試料と比較して、脂質または炭水化物代謝の疾患に関する診断検査または診断検査スコアにおける改善を達成することができる。診断検査または診断検査スコアは、例えば、ＢＡＡＴスコア［Ｒａｔｚｉｕ  Ｖら、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ．２０００；１１８：１１１７〜１１２３］、ＦＩＢ４指数［Ｓｕｍｉｄａ  Ｙら、ＢＭＣ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．２０１２；１２：２］、ＦｉｂｒｏＴｅｓｔ／ＮＡＳＨ検査［Ｒａｔｚｉｕ  Ｖら、Ａｌｉｍｅｎｔ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｔｈｅｒ．２００７；２５：２０７〜２１８］、ＦｉｂｒｏＭｅｔｅｒ／ＮＡＦＬＤ線維症スコアまたはＮＦＳ検査［Ｃａｌｅｓ  Ｐら、Ｌｉｖｅｒ  Ｉｎｔ．２０１０；３０：１３４６〜１３５４］、ＡＳＴ対ＡＬＴ比およびＡＳＴ対血小板比指数（ＡＰＲＩ）となることができる。
【００５９】
処置レジメンおよび投薬量
第１もしくは第２の態様に係るＢＭＰアゴニストもしくはアンタゴニスト、または第３の態様に係る核酸分子もしくはベクター、第４の態様に係る医薬組成物、または第５の態様に係る組合せは、治療法または斯かる使用のための、上述の状態の発病の前および／またはその間および／またはその後となることができる、経口、舌下、頬側、外用、直腸、吸入、経皮、皮下、静脈内、動脈内、筋肉内、心臓内、骨内、皮内、腹腔内、経粘膜、腟、硝子体内、関節内、関節周囲、局所的または皮膚上投与のために調製することができる、またはそれに適することができる。
【００６０】
好ましくは、第１もしくは第２の態様に係るＢＭＰアゴニストもしくはアンタゴニスト、または第３の態様に係る核酸分子もしくはベクター、第４の態様に係る医薬組成物、または第５の態様に係る組合せは、１週間に１回〜７回の間、例えば、１週間に１回、２回、３、４、５、６もしくは７回前後、さらに別の例によると、１カ月に１回〜４回の間、または６カ月間の期間に１回〜６回の間、または１年間に１回〜１２回の投与のためのものである、またはそのために調製される。その上好ましくは、これは、次から選択される期間において末梢に投与されるように調製される：１日１回、２、３、４、５もしくは６日毎に１回、毎週、２週間毎に１回、３週間毎に１回、毎月、２カ月毎に１回、３カ月毎に１回、４カ月毎に１回、５カ月毎に１回、６カ月毎に１回、７カ月毎に１回、８カ月毎に１回、９カ月毎に１回、１０カ月毎に１回、１１カ月毎に１回、または毎年。
【００６１】
好ましくは、第１もしくは第２の態様に係るＢＭＰアゴニストもしくはアンタゴニスト、または第３の態様に係る核酸分子もしくはベクター、第４の態様に係る医薬組成物、または第５の態様に係る組合せは、次のうち１種または複数から選択される経路により末梢に投与され得る、そのように投与される、またはそのように投与されるように調製される；経口、舌下、頬側、外用、直腸、吸入による、経皮、皮下、静脈内、動脈内または筋肉内、心臓内投与による、骨内、皮内、腹腔内、経粘膜、腟、硝子体内、皮膚上、関節内、膀胱内、くも膜下腔内、関節周囲または局所的。ある実施形態では、投与は、静脈内または皮下投与である。
【００６２】
好ましくは、第１もしくは第２の態様に係るＢＭＰアゴニストもしくはアンタゴニスト、または第３の態様に係る核酸分子もしくはベクター、第４の態様に係る医薬組成物、または第５の態様に係る組合せは、例えば、それぞれの活性成分に関して、約０．１〜約２００ｍｇ／ｍｌの間の濃度での；例えば、約０．５、１、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０または２００ｍｇ／ｍｌ＋／−約１０％誤差のうちいずれか１種での、例えば、約５０ｍｇ／ｍｌでの投与のためのものである、またはそのために調製される。
【００６３】
好ましくは、第１もしくは第２の態様またはその実施形態に係るＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニスト、または第３の態様に係る核酸分子もしくはベクター、第４の態様に係る医薬組成物、または第５の態様に係る組合せは、例えば、それぞれの活性成分に関して、約０．０１〜約２００ｍｇ／ｋｇ体重の間の濃度での；例えば、約０．１、０．５、１、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０または約２００ｍｇ／ｋｇ体重＋／−約１０％誤差のうちいずれか１種での、例えば、約１０ｍｇ／ｋｇでの投与のためのものである、またはそのために調製される。
【００６４】
第１もしくは第２の態様に係るＢＭＰアゴニストもしくはアンタゴニスト、または第３の態様に係る核酸分子もしくはベクター、第４の態様に係る医薬組成物、または第５の態様に係る組合せは、いずれか適した経路により個体に投与することができる。当業者には、本明細書に記載されている例が、利用できる技法について限定的であるとは意図されないが、説明的であることが明らかとなる筈である。したがって、投与は、例えば、ボーラスとしてのもしくはある期間にわたる持続注入による静脈内投与、筋肉内、腹腔内、脳脊髄内（ｉｎｔｒａｃｅｒｅｂｒｏｓｐｉｎａｌ）、経皮、皮下、関節内、舌下、滑膜内（ｉｎｔｒａｓｙｎｏｖｉａｌ）、ガス注入による、くも膜下腔内、経口、吸入または外用経路による等、公知の方法に従うことができる。投与は、全身性、例えば、静脈内投与となることができる、または局在化され得る。ジェットネブライザーおよび超音波ネブライザーを含む、液体製剤のための市販のネブライザーは、投与に有用である。液体製剤は、直接的に噴霧されてよく、凍結乾燥された粉末は、再構成後に噴霧されてよい。その代わりに、前述の態様に係るＢＭＰアゴニストもしくはアンタゴニスト、核酸分子、ベクター、医薬組成物または組合せは、フルオロカーボン製剤および定量噴霧式吸入器を使用してエアロゾル化されてよい、または凍結乾燥および粉砕された粉末として吸入されてよい。投与は、医薬の様々な植え込み型デポー源、または注入カテーテル、留置カテーテルもしくは針カテーテル等の局所的送達カテーテル、合成グラフト、外膜ラップ、シャントおよびステントまたは他の植え込み型デバイス、部位特異的担体、直接的注射または直接的塗布によるものを含む、部位特異的または標的化局所的送達となることができる。例えば、ＰＣＴ公開番号ＷＯ００／５３２１１および米国特許第５，９８１，５６８号を参照されたい。
【００６５】
前述の態様に係るＢＭＰアゴニストもしくはアンタゴニスト、核酸、ベクター、医薬組成物または組合せの様々な製剤は、投与に使用することができる。一部の実施形態では、これらは、混ぜ物無しで（ｎｅａｔ）、その代わりに、薬学的に許容できる賦形剤を含んで投与することができる。薬学的に許容できる賦形剤は、本技術分野で公知であり、薬理学的に有効な物質の投与を容易にする、相対的に不活性な物質である。例えば、賦形剤は、形もしくは一貫性を与えることができる、または希釈剤として作用することができる。適した賦形剤として、安定化剤、湿潤および乳化剤、容積オスモル濃度を変動させるための塩、被包剤、緩衝液ならびに皮膚浸透増強剤が挙げられるがそれらに限定されない。非経口的および経口的（ｎｏｎｐａｒｅｎｔｅｒａｌ）薬物送達のための賦形剤と製剤は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ、Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、第２０版、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ、２０００に示されている。一部の実施形態では、これらの薬剤は、注射（例えば、腹腔内、静脈内、皮下、筋肉内等）による投与のために製剤化される。したがって、これらの薬剤は、生理食塩水、リンゲル溶液、デキストロース溶液その他等、薬学的に許容できる媒体と組み合わせることができる。特定の投薬量レジメン、すなわち、用量、タイミングおよび反復は、特定の個体および当該個体の病歴に依存するであろう。
【００６６】
第１もしくは第２の態様またはその実施形態に係るＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニスト、または第３の態様に係る核酸分子もしくはベクター、第４の態様に係る医薬組成物、または第５の態様に係る組合せは、注射（例えば、腹腔内、静脈内、皮下、筋肉内等）による方法を含む、いずれか適した方法を使用して投与することができる。これらは、本明細書に記載されている通り、外用でまたは吸入により投与することもできる。一般に、投与のため、初回候補投薬量は、約２ｍｇ／ｋｇとなることができる。本発明の目的のため、典型的な１日の投薬量は、上で言及されている因子に応じて、３ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ〜３０ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ〜３００ｍｇ／ｋｇ以上のうちいずれかにおおよそ及び得る。例えば、約１ｍｇ／ｋｇ、約２．５ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇおよび約２５ｍｇ／ｋｇの投薬量を使用することができる。数日間以上にわたる反復投与のため、状態に応じて、例えば、症状もしくは状態の所望の抑制が発生するまで、十分な治療レベルが達成されるまで、または正常もしくは対照バイオマーカーレベルもしくは濃度からのバイオマーカーレベルもしくは濃度の上述の逸脱が低下されるまで、処置が持続されて、関連する疾患または状態を低下、防止または処置する。この治療法の進行は、従来の技法およびアッセイによって容易にモニターされ、投薬レジメンは、経時的に変動し得る。
【００６７】
本発明の目的のため、用いられるＢＭＰアゴニストもしくはアンタゴニスト、核酸分子、ベクター、医薬組成物または組合せの適切な投薬量は、処置されるべき鉄代謝または脂質もしくは炭水化物代謝の疾患の種類および重症度、薬剤が予防または治療目的で投与されるか、以前の治療法が存在するか、患者の臨床歴、ならびに使用される薬剤（単数または複数）に対する応答、投与される薬剤のクリアランス速度、ならびに担当医の裁量に依存するであろう。典型的には、疾患処置の所望の結果を達成する投薬量に達するまで、臨床医は、ＢＭＰアゴニストもしくはアンタゴニスト、核酸分子、ベクター、医薬組成物または組合せを投与するであろう。用量および／または頻度は、処置経過にわたって変動し得る。半減期等、経験的考慮は一般に、投薬量の決定に寄与するであろう。例えば、ヒト化抗体または完全ヒト抗体等、ヒト免疫系と適合性である抗体を使用して、抗体の半減期を延長させ、抗体が宿主の免疫系によって攻撃されるのを防止することができる。投与頻度は、治療法の経過にわたって決定および調整することができ、一般に、鉄代謝または脂質もしくは炭水化物代謝の疾患の防止および／または処置および／または抑制および／または寛解および／または遅延に基づくが、必ずしもそうとは限らない。その代わりに、ＢＭＰアゴニストもしくはアンタゴニスト、核酸分子、ベクター、医薬組成物または組合せの持続した連続的放出製剤が適切な場合もある。持続放出を達成するための様々な製剤およびデバイスは、本技術分野で公知である。
【００６８】
一実施形態では、前述の態様に係るＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニストのための投薬量は、ＢＭＰアゴニストもしくはアンタゴニスト、核酸分子、ベクター、医薬組成物または組合せの１回または複数の投与（複数可）を受けた個体において経験的に決定することができ、場合により、有効性の評価は、上述のバイオマーカーのいずれか等、疾患の指標をモニターすることによって為される。その代わりに、投与は、例えば、レシピエントの生理的状態、投与の目的が治療であるか予防であるか、および熟練の施術者にとって公知の他の因子に応じて連続的または間欠的となることができる。例えば、投与は、予め選択された期間にわたって本質的に連続的となることができる、または一連の間隔をあけた用量において為すことができる。
【００６９】
本発明において提供される処置は、個体の処置のためのものであり、例えば、個体は、ヒト、またはウマ、ネコもしくはイヌ等のコンパニオンアニマル、またはヒツジ、ウシもしくはブタ等の家畜；好ましくは、ヒトである。
【００７０】
治療製剤
本発明の先行する態様のいずれかに係るＢＭＰアゴニストもしくはアンタゴニスト、核酸分子、ベクター、医薬組成物または組合せの治療製剤は、凍結乾燥された製剤または水溶液の形態で、所望の程度の純度で、場合による薬学的に許容できる担体、賦形剤または安定剤（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ、Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、第２０版）、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ、２０００）と混合することにより、貯蔵のために調製することができる。
【００７１】
許容できる担体、賦形剤または安定剤は、用いられている投薬量および濃度では、レシピエントにとって無毒性であり、リン酸塩、クエン酸塩および他の有機酸等の緩衝液；塩化ナトリウム等の塩；アスコルビン酸およびメチオニンを含む抗酸化剤；保存料（オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド；ヘキサメトニウムクロリド；ベンザルコニウムクロリド、ベンゼトニウムクロリド；フェノール、ブチルまたはベンジルアルコール；メチルまたはプロピルパラベン等のアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；およびｍ−クレゾール等）；低分子量（約１０残基未満の）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチンもしくは免疫グロブリン等のタンパク質；ポリビニルピロリドン等の親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニンもしくはリジン等のアミノ酸；グルコース、マンノースもしくはデキストリンを含む、単糖、二糖および他の炭水化物；ＥＤＴＡ等のキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロースもしくはソルビトール等の糖；ナトリウム等の塩形成対イオン；金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質錯体）；および／またはＴＷＥＥＮ（商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）もしくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等の非イオン性界面活性物質を含むことができる。
【００７２】
ＢＭＰアゴニストもしくはアンタゴニスト、核酸分子、ベクター、医薬組成物または組合せを含有するリポソームは、Ｅｐｓｔｅｉｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８２：３６８８（１９８５）；Ｈｗａｎｇら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７７：４０３０（１９８０）；および米国特許第４，４８５，０４５号および同第４，５４４，５４５号に記載されている方法等、本技術分野で公知の方法によって調製することができる。循環時間が増強されたリポソームは、米国特許第５，０１３，５５６号に開示されている。特に有用なリポソームは、ホスファチジルコリン、コレステロールおよびＰＥＧ誘導体化ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥＧ−ＰＥ）を含む脂質組成物による逆相蒸発方法によって生成することができる。リポソームは、定義されたポアサイズのフィルターを通して押し出されて、所望の直径を有するリポソームを生じる。
【００７３】
活性成分は、コロイド薬物送達系（例えば、リポソーム、アルブミンマイクロスフェア、マイクロエマルション、ナノ粒子およびナノカプセル）またはマクロエマルションにおいて、例えば、コアセルベーション技法または界面重合によって調製されたマイクロカプセル、例えば、それぞれヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチン−マイクロカプセルおよびポリ−（メチルメタクリレート（ｍｅｔｈｙｌｎｎｅｔｈａｃｒｙｌａｔｅ））マイクロカプセル中に封入することもできる。斯かる技法は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ、Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、第２０版、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ（２０００）に開示されている。
【００７４】
持続放出調製物を調製することができる。持続放出調製物の適した例として、抗体を含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスが挙げられ、このマトリックスは、成形物、例えば、フィルムまたはマイクロカプセルの形態である。持続放出マトリックスの例として、ポリエステル、ハイドロゲル（例えば、ポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリレート）またはポリ（ビニルアルコール））、ポリラクチド（米国特許第３，７７３，９１９号）、Ｌ−グルタミン酸および７エチル−Ｌ−グルタメートのコポリマー、非分解性エチレン酢酸ビニル、ＬＵＰＲＯＮ  ＤＥＰＯＴ（商標）（乳酸−グリコール酸コポリマーおよびリュープロリド酢酸塩で構成される注射用マイクロスフェア）等の分解性乳酸−グリコール酸コポリマー、スクロース酢酸塩イソ酪酸塩、ならびにポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸が挙げられる。
【００７５】
ｉｎ−ｖｉｖｏ投与における使用のための製剤は、滅菌されていなければならない。滅菌は、例えば、滅菌濾過膜を通した濾過によって容易に達成される。上述の態様に係る治療組成物は一般に、滅菌アクセスポートを有する容器、例えば、皮下注射針で貫通可能なストッパーを有する静脈内溶液バッグまたはバイアル内に置かれる。
【００７６】
本発明に係る組成物は、経口、非経口的もしくは直腸投与のためまたは吸入もしくはガス注入による投与のための、固体組成物、錠剤、丸剤、カプセル、粉末、顆粒、溶液または懸濁液または坐薬等、単位剤形となることができる。
【００７７】
キット
本発明のさらなる態様において、
（ａ）先行する態様のいずれかに係るＢＭＰアゴニストもしくはアンタゴニスト、その核酸、核酸相補体、ベクターもしくは医薬組成物、または組合せと、
（ｂ）鉄代謝の疾患または脂質もしくは炭水化物代謝の疾患、またはそれらの症状を処置する、防止する、寛解する、制御する、その発生率を低下させる、またはその発症もしくは進行を遅延させるための、個体への有効量の前記ＢＭＰアゴニストもしくはアンタゴニスト、その核酸、核酸相補体、ベクターもしくは医薬組成物、または組合せの投与のための説明書と
を含むキットが提供される。
【００７８】
本キットは、本明細書に記載されているＢＭＰアゴニストもしくはアンタゴニスト、その核酸、核酸相補体、ベクターもしくは医薬組成物、または組合せを含有する１個または複数の容器と、本発明の方法及び使用のいずれかに従った使用のための説明書とを含むことができる。本キットは、当該個体が鉄代謝の疾患または炭水化物もしくは脂質代謝の疾患またはそれらの症状を有するか、または斯かる疾患を有するリスクがあるかについての同定に基づく、処置に適した個体の選択に関する記載をさらに含むことができる。医薬組成物の投与のための説明書は、意図される処置のための投薬量、投薬スケジュールおよび投与経路に関する情報を含むことができる。
【００７９】
一般に、キット説明書は、上に記載されている治療的処置のための、ＢＭＰアゴニストもしくはアンタゴニスト、その核酸、核酸相補体、ベクターもしくは医薬組成物、または組合せの投与に関する記載を含む。一部の実施形態では、キットは、単一用量の投与単位を産生するために提供される。ある特定の実施形態では、本キットは、乾燥したタンパク質を有する第１の容器および水性製剤を有する第２の容器の両方を含有することができる。ある特定の実施形態では、単一および複数チャンバーの予め充填されたシリンジ（例えば、液体シリンジおよびライオ（ｌｙｏ）シリンジ）を含有するキットが含まれる。
【００８０】
ＢＭＰアゴニストもしくはアンタゴニスト、その核酸、核酸相補体、ベクターもしくは医薬組成物、または組合せの使用に関する説明書は一般に、意図される処置のための投薬量、投薬スケジュールおよび投与経路に関する情報を含む。容器は、単位用量、バルクパッケージ（例えば、複数用量パッケージ）または副次的単位（ｓｕｂ−ｕｎｉｔ）用量となることができる。本発明のキット中に供給される説明書は典型的に、ラベルまたは添付文書（例えば、キット中に含まれる紙シート）に書かれた説明書であるが、機械可読説明書（例えば、磁気または光学保存ディスクに担われる説明書）も許容できる。
【００８１】
本発明のキットは、適したパッケージング中にある。適したパッケージングとして、バイアル、ボトル、広口瓶、可撓性パッケージング（例えば、封着されたＭｙｌａｒ（商標）またはビニール袋）その他が挙げられるがこれらに限定されない。吸入器、経鼻投与デバイス（例えば、アトマイザ）またはミニポンプ等の注入デバイス等、特異的デバイスと組み合わせた使用のためのパッケージも企図される。キットは、滅菌アクセスポートを有することができる（例えば、容器は、皮下注射針で貫通可能なストッパーを有する静脈内溶液バッグまたはバイアルとなることができる）。容器は、滅菌アクセスポートを有することもできる（例えば、容器は、皮下注射針で貫通可能なストッパーを有する静脈内溶液バッグまたはバイアルとなることができる）。組成物中の少なくとも１種の活性薬剤は、ＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニスト、核酸、核酸相補体、ベクターである。容器は、第２の薬学的活性薬剤をさらに含むことができる。
【００８２】
キットは、緩衝液および解釈上の情報等、追加的な構成成分を提供していてもよい。通常、本キットは、容器、および当該容器に貼られたまたは添えられたラベルまたは添付文書（複数可）を含む。
【００８３】
本発明はまた、試料中の本明細書に記載されているバイオマーカーに特異的に結合する抗体を含む診断キットを提供する。一部の実施形態では、診断キットを使用して、鉄代謝の疾患または脂質もしくは炭水化物代謝の疾患を発症するリスクがある個体を同定することができる。
【００８４】
本発明の診断キットは、本明細書に記載されているバイオマーカーに特異的に結合する抗バイオマーカー抗体を含む１個または複数の容器と、本明細書に記載されている本発明の方法のいずれかに従った使用のための説明書とを含む。一般に、このような説明書は、鉄代謝の疾患または脂質もしくは炭水化物代謝の疾患を発症するリスクがある個体におけるバイオマーカーの存在を検出するための抗バイオマーカー抗体の使用に関する記載を含む。一部の実施形態では、例示的な診断キットは、例えば、抗バイオマーカー抗体等の試薬、陰性対照試料、陽性対照試料、および本キットを使用するための指示書を含有するように構成され得る。
【図面の簡単な説明】
【００８５】
【図１】図１Ａ：ヘプシジン−ナノルシフェラーゼ（ｎａｎｏｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ）融合体発現におけるＢＭＰの効果：示されている例のＢＭＰ（ＢＭＰ２、６、９）をＮａｎｏＬｕｃ細胞に添加したところ、ヘプシジン発現における用量依存性増加が観察され、ＥＣ５０は、ｐＭ単位で示す。  図１Ｂ：「ｎａｎｏ−ｌｕｃ」ナノルシフェラーゼレポーターコンストラクトの略図。
【図２】図２：ＥＲＦＥは、ＳＰＲ／Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）によって測定される異なる親和性で、ＢＭＰ２、ＢＭＰ４およびＢＭＰ６に結合する。
【図３】図３Ａ〜図３Ｆ。ＢＭＰ／ＳＭＡＤシグナリングは、ＥＲＦＥによって抑制される：  図３Ａ。ヒトまたはマウスＥＲＦＥ（１０μｇ／ｍｌ）で２４時間処理されたＨｕｈ７細胞の遺伝子発現解析（Ｉｌｌｕｍｉｎａ）。値は、ヒトまたはマウスＥＲＦＥで処理された細胞において差次的に発現された遺伝子の対数（倍数変化）を表す。  図３Ｂ。媒体またはマウスＥＲＦＥ（１０μｇ／ｍｌ）で処理されたＨｕｈ７細胞における選択されたＢＭＰ／ＳＭＡＤ標的遺伝子およびＦＧＡのｑＲＴ−ＰＣＲによって測定された遺伝子発現。  図３Ｃ。マウスＥＲＦＥ（１０μｇ／ｍｌ）、ＢＭＰ６およびＬＤＮ（１００ｎＭ）で、単独でまたは組み合わせて３０分間処理されたＨｕｈ７細胞。ｐＳＭＡＤ／ＳＭＡＤ比値は、ウエスタンブロットからデンシトメトリーによって計算した。  図３Ｄ。マウスＥＲＦＥ（１０μｇ／ｍｌ）、ＢＭＰ６およびＬＤＮ（１００ｎＭ）で、単独でまたは組み合わせて３０分間処理されたＨｕｈ７細胞、ウエスタンブロット。  図３Ｅ。Ｃ２Ｃ１２  Ｂｒｅ−Ｌｕｃ細胞を、マウスＥＲＦＥ濃度の勾配（７．５ｐＭ〜０．５μＭ）と組み合わせた２ｎＭのＢＭＰで２４時間処理し、各ウェルにおけるルミネセンスを測定した。データを最大ルミネセンス（ＥＲＦＥなし）のパーセンテージに対して正規化した。  図３Ｆ。Ｈｕｈ７細胞を、無血清培地において、２ｎＭのＢＭＰで単独で、または１０μｇ／ｍｌのマウスＥＲＦＥと組み合わせて処理し、処理６時間後に解析した。ＨＡＭＰおよびＩＤ１の遺伝子発現をｑＲＴ−ＰＣＲによって測定した。結果を３回の独立した実験の平均値＋／−標準偏差として表す（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、スチューデントｔ検定）。  図３Ｇおよび図３Ｈ：ＥＲＦＥは、Ｈｕｈ７細胞においてＢＭＰ２／６、ＢＭＰ６およびＢＭＰ７を阻害することにより、ＢＭＰ／ＳＭＡＤシグナリングを抑制する：２ｎＭのＢＭＰ＋／−１０μｇ／ｍｌのマウスＥＲＦＥ、無血清培地における６時間インキュベーション、ＨＡＭＰおよびＩＤ１の遺伝子発現をｑＲＴ−ＰＣＲによって測定し、結果を３回の独立した実験の未処理細胞と比べた倍数変化として表現し、統計的有意性をＢＭＰ処理ペア毎に解析する（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、スチューデントｔ検定）。  図３Ｊおよび図３Ｋ：ＥＲＦＥは、ＨｅｐＧ２細胞においてＢＭＰ２／６、ＢＭＰ６およびＢＭＰ７を阻害することにより、ＢＭＰ／ＳＭＡＤシグナリングを抑制する：２ｎＭのＢＭＰ＋／−１０μｇ／ｍｌのマウスＥＲＦＥ、無血清培地における６時間インキュベーション、ＨＡＭＰおよびＩＤ１の遺伝子発現をｑＲＴ−ＰＣＲによって測定し、結果を３回の独立した実験の未処理細胞と比べた倍数変化として表現し、統計的有意性をＢＭＰ処理ペア毎に解析する（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、スチューデントｔ検定）。  図３Ｌ：ｍｏｎｏＦＣ−ｈｕＥｒｆｅは、用量依存性様式でヘプシジン産生を抑制する：安定に組み込まれたナノルシフェラーゼレポーターコンストラクトを含有するＨｅｐＧ２細胞を、示されている濃度のｍｏｎｏＦＣ−ｈｕＥｒｆｅ  Ａ４突然変異体で２４時間処理し、その後、上清を収集し、蛍光ｍｏｎｏＦＣを測定した。
【図４】図４：ＥＰＯは、ｉｎ−ｖｉｖｏにてＥＲＦＥ依存性様式でＢＭＰ標的遺伝子を抑制する：（Ａ、Ｂ）ＷＴおよびＥＲＦＥ  ＫＯ雄マウス（１０〜１３週齢）に、３用量の２００ｕのＥＰＯを、２４時間毎に１用量で注射し、最後の注射の２４時間後に解析して、ｑＲＴ−ＰＣＲによって測定された肝臓におけるＢＭＰ標的遺伝子の発現を測定し；血清および肝臓鉄解析を行った；（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、二元配置ＡＮＯＶＡを使用、１群当たりｎ＝６〜８匹のマウス）。
【図５】図５：ＥＲＦＥは、ｉｎ  ｖｉｖｏでＢＭＰ標的遺伝子を抑制する：９週齢ＷＴ雄マウスに、２００μｇのｍｏｎｏＦＣ−ｍｕＥｒｆｅまたはヒトＥＲＦＥのＮ末端１４アミノ酸を含有するｍｏｎｏ−Ｆｃ対照をｉ．ｖ．注射した。注射の３時間後にマウスを解析して、血清および肝臓鉄ならびに肝臓におけるＢＭＰ標的遺伝子の発現を測定した（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、スチューデントｔ検定を使用、１群当たりｎ＝６〜８匹のマウス）。
【図６】図６。Ｃ１ｑドメインは、エリスロフェロン活性に要求されない：（図６Ａ）Ｈｕｈ７細胞を、ヒトエリスロフェロンの全長またはＣ１ｑドメイン（１０μｇ／ｍｌ）で２４時間処理した。（図６Ｂ）Ｈｕｈ７細胞を、１０μｇ／ｍｌの、マウスエリスロフェロンに由来するアディポフェロン（ａｄｉｐｏｆｅｒｒｏｎｅ）（アディポネクチンのＮ末端ドメインおよびエリスロフェロンのＣ１ｑドメインを含有するコンストラクト）またはＣ１ｑ三量体（Ｔｒｉ−Ｃ１ｑ）で２４時間処理した。遺伝子発現はｑＲＴ−ＰＣＲによって測定する。データは、平均＋標準偏差（ｎ＝３）を表す。＊＊＊ｐ＜０．００１；＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。
【図７】図７。ＥｒｆｅのＮ末端におけるＲＡＲＲフューリン切断部位の突然変異は、フューリンによる切断を防止する。（図７Ａ）全長ヒトエリスロフェロン、およびフューリン切断後に生成される潜在的サブユニットの図表による構造。（図７Ｂ）フューリンプロテアーゼの存在または非存在下での、野生型およびＲＡＲＲ−ＡＡＡＡ（Ａ４）Ｅｒｆｅ突然変異体のクーマシーブルー染色。第２のｉｎ  ｓｉｌｉｃｏ予測されるフューリン切断部位は、これらの実験において使用された細胞型において活性であるとは思われない（矢印は、ＥＲＦＥを示す）。
【図８】図８。フューリン切断の予測されるパターンに基づき設計されたエリスロフェロンサブユニットは、ヘプシジンを抑制するその能力が異なる：（図８Ａ）ｍｏｎｏ−Ｆｃ−ｈｕＥＲＦＥ  Ａ４コンストラクトは、ヘプシジン発現を抑制する、（図８Ｂ）Ｈｕｈ７細胞を、両方のｉｎ  ｓｉｌｉｃｏ予測されるフューリン切断部位における活性を仮定して、形成され得る潜在的Ｅｒｆｅサブユニットの全てを表すように設計されたヒトエリスロフェロンサブユニットで２４時間処理した（図７Ａを参照）。遺伝子発現はｑＲＴ−ＰＣＲによって測定する。データは、平均＋標準偏差（ｎ＝３）を表す。＊＊＊ｐ＜０．００１；＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。
【図９】図９。エリスロフェロンのＮ末端ドメインは、ｉｎ  ｖｉｖｏでＢＭＰシグナリングおよびＨａｍｐを抑制する。８週齢Ｃ５７／ＢＬ６マウスに、１００μｇのヒトエリスロフェロンのＦ２サブユニットまたは生理食塩水をｉ．ｐ．注射した（１群当たり６匹のマウス）。注射３時間後に、マウスを選別し、肝臓遺伝子発現（図９Ａ）、血清ヘプシジンおよび血清鉄（図９Ｂ）の解析のために血液および組織を収集した。遺伝子発現はｑＲＴ−ＰＣＲによって測定する。＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１；＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。
【図１０】図１０Ａ／Ｂ：ＢＭＰ２／６、５、６および７は、Ｅｒｆｅへの結合に関して中和抗ｅｒｆｅ抗体と競合することができる。  図１０Ａ：ＢＭＰ２／６、５、６および７は、変動する程度の有効性で、ビオチン化ｍｏｎｏＦＣ−ｍｕＥｒｆｅへの結合に関してクリプテート標識中和抗ＥＲＦＥ抗体ａｂ  １５．１と競合する、ＦＲＥＴアッセイ。  図１０Ｂ：抗ｅｒｆｅ抗体１５．１は、用量依存性様式でＥｒｆｅ機能を阻害する：ヘプシジン−ＮａｎｏＬｕｃレポーター融合体を含有するＨｅｐＧ２細胞を、２０ｎＭ  ｍｏｎｏＦＣ−および６２５ｐＭ  ＢＭＰ６の存在下で、出発濃度５００ｎＭから３倍希釈で系列希釈された中和抗ＥＲＦＥ抗体ａｂ  １５．１で処理した。
【図１１】図１１：中和抗ＥＲＦＥ抗体は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでＢＭＰ５／６／７のＢＭＰシグナリングの、ＥＲＦＥに基づく抑制を防止する。
【図１２】図１２：Ｅｒｆｅは、腹部前脂肪細胞におけるＢＭＰ２によるＳＭＡＤリン酸化を抑制するが、臀部前脂肪細胞では抑制しない：腹部前脂肪細胞におけるリン酸および総ＳＭＡＤ１／５／８ならびにβ−アクチン対照のためのウエスタンブロッティング（図１２Ａ）、臀部前脂肪細胞におけるリン酸および総ＳＭＡＤ１／５／８ならびにβ−アクチン対照のためのウエスタンブロッティング（図１２Ｂ）。
【図１３】図１３：マウスにおけるＥｒｆｅ産生の誘導は、非エステル型脂肪酸レベルの増加をもたらすが、トリアシルグリセリドには影響を与えない：０時間、２４時間および４８時間の時点における連続したＥＰＯ注射後の野生型およびＥＲＦＥノックアウト雄マウスを使用して酵素により決定された、非エステル型脂肪酸（ＮＥＦＡ）濃度、図１３Ａおよびトリグリセリド（ＴＡＧ）濃度、図１３Ｂの測定値。
【発明を実施するための形態】
【００８６】
定義
本明細書において、「鉄代謝の疾患」は、ＨＦＥ突然変異ヘモクロマトーシス、フェロポーチン突然変異ヘモクロマトーシス、トランスフェリン受容体２突然変異ヘモクロマトーシス、ヘモジュベリン突然変異ヘモクロマトーシス、ヘプシジン突然変異ヘモクロマトーシス、若年性ヘモクロマトーシス、新生児ヘモクロマトーシス等、ヘモクロマトーシスを含むことができる。鉄代謝の疾患は、骨髄形成異常症候群、ヘプシジン欠乏、輸血性鉄過剰、サラセミア、中間型サラセミア、アルファサラセミア、ベータサラセミア、デルタサラセミア、鉄芽球性貧血、ポルフィリン症、晩発性皮膚ポルフィリン症、アフリカ型鉄過剰、高フェリチン血症、セルロプラスミン欠乏、無トランスフェリン血症も含む。鉄代謝の疾患は、貧血、例えば、先天性赤血球異形成貧血、慢性疾患の貧血、炎症の貧血、感染の貧血、低色素性小球性貧血、鉄欠乏性貧血、鉄不応性鉄欠乏性貧血、慢性腎疾患の貧血をその上含む。鉄代謝の疾患は、エリスロポエチン抵抗性、肥満の鉄欠乏、ヘプシジンを過剰産生するまたはその過剰産生を誘導する良性または悪性腫瘍、ヘプシジン過剰による状態、フリートライヒ運動失調症、ｇｒａｃｉｌｅ症候群、ハラーホルデン・スパッツ病、ウィルソン病、肺血鉄症、肝細胞癌、がん、肝炎、肝臓の硬変、異食症、慢性腎不全、インスリン抵抗性、糖尿病、糖尿病Ｉ型または糖尿病ＩＩ型、インスリン抵抗性、グルコース不耐性、粥状動脈硬化、神経変性障害、多発性硬化症、パーキンソン病、ハンチントン病、およびアルツハイマー病をさらに含む。
【００８７】
本明細書において、「異常に高いヘプシジンレベルおよび／または異常に低い鉄を含む疾患または障害」は、例えば、貧血、例えば、鉄不応性鉄欠乏性貧血（ＩＲＩＤＡ）、慢性腎疾患の貧血、ヘプシジンを分泌する腫瘍による貧血、炎症の貧血、急性または慢性となり得る疾患または感染に関連する貧血、また、糖尿病（Ｉ型またはＩＩ型）、インスリン抵抗性、グルコース不耐性となることができる。
【００８８】
本明細書において、「異常に低いヘプシジンレベルおよび／または異常に高い鉄レベルを含む疾患」は、例えば、アルファ−サラセミア、ベータ−サラセミア、デルタ−サラセミア、または他のヘモグロビン異常症と共存するサラセミア、例えば：ヘモグロビンＥ／サラセミア、ヘモグロビンＳ／サラセミア：ヘモグロビンＣ／サラセミア、ヘモグロビンＤ／サラセミア等、サラセミア、先天性赤血球異形成貧血、成人および若年性遺伝性ヘモクロマトーシス、および慢性Ｂ型肝炎等の慢性肝疾患、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、アルコール性肝疾患、または鉄過剰疾患、例えば、鉄過剰または鉄毒性、鉄負荷貧血、アルコール性肝疾患、慢性Ｃ型肝炎、ならびに遺伝性ヘモクロマトーシスの処置におけるものとなることができる。
【００８９】
本明細書において、「ＢＭＰ」、骨形成タンパク質は、ヒト、ラット、マウスおよびニワトリを含む、あらゆる哺乳類種のネイティブ配列ＢＭＰもしくはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドまたは組換えＢＭＰもしくはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドを含み、ファミリーメンバーＢＭＰ２、２／６ヘテロ二量体、３、４、５、６、７、８ａ、８ｂ、９、１０、１１、１２、１３、１４または１５のいずれかを含む。用語「ＢＭＰ」は、ヒトＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドのバリアント、アイソフォームおよび種ホモログを含むように使用される。本発明における使用のための抗体は、ある特定の事例では、ヒト以外の種に由来するＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドと交差反応する場合がある。ある特定の実施形態では、抗体は、ヒトＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドに完全に特異的となる場合があり、非ヒト交差反応性を示さない場合がある。
【００９０】
「ＢＭＰ活性」または「活性」または「生物活性」は、ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドの文脈において、例えば、用量依存性（ｄｅｐｅｎｄａｎｔ）もしくは濃度依存性（ｄｅｐｅｎｄａｎｔ）様式で、またはＢＭＰが非存在である状態と比較して、ｉｎ−ｖｉｖｏまたはｉｎ−ｖｉｔｒｏで、例えば、細胞、生体試料または体液、例えば、血漿（ｐｌａｍｓａ）もしくは血清の試料において；ヘプシジン活性、ヘプシジン発現、ヘプシジンレベルもしくは濃度、血清および／または血漿ヘプシジンレベル／濃度、ヘプシジンｍＲＮＡ産生もしくはレベルもしくは濃度、ヘプシジンｍＲＮＡ産生もしくはレベル／濃度、肝ヘプシジンｍＲＮＡ産生もしくはレベル／濃度、および／または鉄の血漿および／または血清濃度の低下を増加または増強する能力を一般に指す。「生物活性」、「ＢＭＰ活性」または「活性」は、ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドの文脈において、ｉｎ−ｖｉｖｏまたはｉｎ−ｖｉｔｒｏで、上文に記載されている通り、ＢＭＰ／ＳＭＡＤ経路等、ＢＭＰ活性によって媒介される下流経路（複数可）の活性化、またはＨＡＭＰ、ＩＤ１、ＩＤ２、ＩＤ３、ＳＭＡＤ６、ＳＭＡＤ７、ＡＴＯＨ８の発現、濃度、レベル、活性、ｍＲＮＡ産生、またはＳＭＡＤ１、ＳＭＡＤ５もしくはＳＭＡＤ８のリン酸化もしくはリン酸化の非リン酸化に対する比を増加させる能力をその上指す。活性の決定は、本明細書に記載されている通り、ヘプシジン、鉄、ＨＡＭＰ、ＩＤ１、ＩＤ２、ＩＤ３、ＳＭＡＤ６、ＳＭＡＤ７、ＡＴＯＨ８、ＳＭＡＤリン酸化のアッセイによって為すことができる。「ＢＭＰ活性」または「活性」または「生物活性」は、ＢＭＰの文脈において、本明細書に記載されている通り、ｉｎ−ｖｉｖｏまたはｉｎ−ｖｉｔｒｏで、例えば、細胞、生体試料または体液の試料において、ＢＭＰ受容体に結合する、および／またはＢＭＰ活性によって媒介される下流経路（複数可）を活性化する、ＢＭＰの能力も指す。
【００９１】
本明細書において、用語「エリスロフェロン」および「ＥＲＦＥ」は、エリスロフェロンの生物活性の少なくとも一部を保持する、エリスロフェロンおよびそのバリアントを指す。本明細書において、エリスロフェロンは、ヒト、ウサギ、カニクイザル、ラット、マウスおよびニワトリを含む、あらゆる哺乳類種のネイティブ配列エリスロフェロンを含む。用語「エリスロフェロン」および「ＥＲＦＥ」は、ヒトエリスロフェロンのバリアント、アイソフォームおよび種ホモログを含むように使用される。本発明における使用のための抗体は、ある特定の事例では、ヒト以外の種由来のエリスロフェロンと交差反応する場合がある。ある特定の実施形態では、抗体は、ヒトエリスロフェロンに完全に特異的となる場合があり、非ヒト交差反応性を示さない場合がある。例示的なヒトエリスロフェロンの完全アミノ酸配列は、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号：ＡＨＬ８４１６５．１を有する（また、本明細書において、配列番号１と命名されている）。
【００９２】
「ＥＲＦＥ活性」または「活性」または「生物活性」は、ＥＲＦＥまたはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドの文脈において、ＢＭＰ、好ましくは、（ｉ）ＢＭＰ２、（ｉｉ）ＢＭＰ２／６ヘテロ二量体、（ｉｉｉ）ＢＭＰ４、（ｉｖ）ＢＭＰ５、（ｖ）ＢＭＰ６または（ｖｉ）ＢＭＰ７に結合する、および／またはＢＭＰ活性を阻害する、またはｉｎ−ｖｉｔｒｏで、例えば、生体試料または体液、例えば、血漿（ｐｌａｍｓａ）もしくは血清の試料において、またはｉｎ−ｖｉｖｏで、ヘプシジン活性、ヘプシジン発現、ヘプシジンレベル／濃度、血清および／または血漿ヘプシジンレベル／濃度、ヘプシジンｍＲＮＡ産生もしくはレベル／濃度、ヘプシジンｍＲＮＡ産生もしくはレベル／濃度、肝ヘプシジンｍＲＮＡ産生もしくはレベル／濃度、および／または鉄の血漿および／または血清濃度の増加を減少させる、能力を一般に指す。
【００９３】
用語「ＢＭＰ活性を有するポリペプチド」は、ＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチド、またはＢＭＰ活性を有するＢＭＰに由来するポリペプチドのポリペプチド断片を包含し、好ましくは、ＢＭＰは、本明細書に定義されている通りのもの、ＢＭＰ２、２／６ヘテロ二量体、３、４、５、６、７、８ａ、８ｂ、９、１０、１１、１２、１３、１４または１５、好ましくは、（ｉ）ＢＭＰ２、（ｉｉ）ＢＭＰ２／６ヘテロ二量体、（ｉｉｉ）ＢＭＰ４、（ｉｖ）ＢＭＰ５、（ｖ）ＢＭＰ６または（ｖｉ）ＢＭＰ７である。
【００９４】
用語「エリスロフェロン活性を有するポリペプチド」は、エリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチド、またはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥに由来するポリペプチドのポリペプチド断片を包含する。
【００９５】
本明細書において、「アゴニスト」は、ＢＭＰの文脈において、ＢＭＰ活性を増加または増強するように作用する。ＢＭＰのアゴニストは、ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドに結合するまたはそれと相互作用し、ＢＭＰ活性を増加または増強することができ、例えば、低分子または抗ＢＭＰ抗体となることができる。ＢＭＰのアゴニストは、例えば、ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドにおける同じ結合部位における結合を阻害もしくは防止またはそれに関して競合することにより、ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドに結合するまたはそれと相互作用して、アンタゴニストの結合を阻害もしくは防止する、またはＢＭＰの結合に関してアンタゴニストと競合することができる。抗体またはその抗原結合部分の文脈において、アゴニストは、ＢＭＰ、好ましくは、（ｉ）ＢＭＰ２、（ｉｉ）ＢＭＰ２／６ヘテロ二量体、（ｉｉｉ）ＢＭＰ４、（ｉｖ）ＢＭＰ５、（ｖ）ＢＭＰ６または（ｖｉ）ＢＭＰ７におけるアンタゴニストと同じ結合領域またはエピトープに結合するまたはそれに関して競合する、抗ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有する抗ＢＭＰポリペプチド抗体となることができる。その代わりに、ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドのアゴニストは、例えば、アンタゴニストにおける同じ結合部位、または抗アンタゴニスト抗体等の抗体の文脈においては、アンタゴニストにおける同じ結合領域またはエピトープにおける結合を阻害もしくは防止するまたはそれに関して競合することにより、ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチド、好ましくは、（ｉ）ＢＭＰ２、（ｉｉ）ＢＭＰ２／６ヘテロ二量体、（ｉｉｉ）ＢＭＰ４、（ｉｖ）ＢＭＰ５、（ｖ）ＢＭＰ６または（ｖｉ）ＢＭＰ７のアンタゴニストに結合するまたはそれと相互作用して、ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドへの結合を阻害もしくは防止するまたはアンタゴニストの結合に関してＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドと競合することができ；例えば、アンタゴニストは、ＥＲＦＥまたはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドとなることができ、したがって、アゴニストは、抗ＥＲＦＥまたはエリスロフェロン活性を有する抗ＥＲＦＥポリペプチド抗体となることができる。本明細書において、「アゴニスト」は、ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドの文脈において、ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドおよびそのＢＭＰ受容体の間の結合を増強するように作用することもできる。その代わりに、アゴニストは、ＢＭＰ受容体結合阻害剤またはアンタゴニストに結合し、阻害剤／アンタゴニストが、ＢＭＰ受容体と相互作用するまたはそれに結合するのを防止することができる。この文脈において、アゴニストは、ＢＭＰ受容体結合の阻害剤アンタゴニストに相互作用または結合して、アンタゴニズムまたは阻害を防止することができる、またはその代わりに、アゴニストは、ＢＭＰもしくはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドおよび／または受容体のいずれかに相互作用または結合して、相互作用の増強、例えば、受容体およびＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチド、好ましくは、（ｉ）ＢＭＰ２、（ｉｉ）ＢＭＰ２／６ヘテロ二量体、（ｉｉｉ）ＢＭＰ４、（ｉｖ）ＢＭＰ５、（ｖ）ＢＭＰ６または（ｖｉ）ＢＭＰ７に対して二重特異性（ｂｉｐｅｃｉｆｉｃ）の抗体をもたらすことができる。
【００９６】
本明細書において、「アンタゴニスト」は、ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドの文脈において、ＢＭＰ活性を減少または阻害するように作用する。ＢＭＰのアンタゴニストは、ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチド、好ましくは、（ｉ）ＢＭＰ２、（ｉｉ）ＢＭＰ２／６ヘテロ二量体、（ｉｉｉ）ＢＭＰ４、（ｉｖ）ＢＭＰ５、（ｖ）ＢＭＰ６または（ｖｉ）ＢＭＰ７に結合するまたはそれと相互作用し、ＢＭＰ活性を減少または阻害することができ；例えば、アゴニストは、抗ＢＭＰ抗体またはその抗原結合断片、ＢＭＰ活性を有する抗ＢＭＰポリペプチド抗体またはその抗原結合断片、ＥＲＦＥまたはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドとなることができる。ＢＭＰのアンタゴニストは、例えば、ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドにおける同じ結合部位における結合、または抗ＢＭＰ抗体等の抗体もしくはその抗原結合部分の文脈においては、ＢＭＰもしくはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドにおける同じ結合領域またはエピトープを阻害もしくは防止するまたはそれに関して競合することにより、ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチド、好ましくは、（ｉ）ＢＭＰ２、（ｉｉ）ＢＭＰ２／６ヘテロ二量体、（ｉｉｉ）ＢＭＰ４、（ｉｖ）ＢＭＰ５、（ｖ）ＢＭＰ６または（ｖｉ）ＢＭＰ７に結合するまたはそれと相互作用して、（ａ）ＢＭＰ受容体、好ましくは、好ましくは（ｉ）ＢＭＰ２、（ｉｉ）ＢＭＰ２／６ヘテロ二量体、（ｉｉｉ）ＢＭＰ４、（ｉｖ）ＢＭＰ５、（ｖ）ＢＭＰ６または（ｖｉ）ＢＭＰ７の受容体への結合を阻害または防止する、その代わりに（ｂ）アゴニストの結合を阻害または防止するまたはＢＭＰの結合に関してアゴニストと競合することができる。その代わりに、ＢＭＰのアンタゴニストは、例えば、アゴニストにおける同じ結合部位における結合、または抗アゴニスト抗体等の抗体の文脈においては、アゴニストにおける同じ結合領域またはエピトープを阻害もしくは防止するまたはそれに関して競合することにより、ＢＭＰのアゴニストに結合するまたはそれと相互作用して、ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドへの結合を阻害もしくは防止する、またはアゴニストの結合に関してＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドと競合することができる。ＢＭＰのアンタゴニストは、ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチド、好ましくは、（ｉ）ＢＭＰ２、（ｉｉ）ＢＭＰ２／６ヘテロ二量体、（ｉｉｉ）ＢＭＰ４、（ｉｖ）ＢＭＰ５、（ｖ）ＢＭＰ６または（ｖｉ）ＢＭＰ７に結合するまたはそれと相互作用して、ＢＭＰ受容体の結合を阻害もしくは防止する、またはＢＭＰの結合に関してＢＭＰ受容体と競合することができる。その代わりに、ＢＭＰのアンタゴニストは、ＢＭＰ受容体、好ましくは、（ｉ）ＢＭＰ２、（ｉｉ）ＢＭＰ２／６ヘテロ二量体、（ｉｉｉ）ＢＭＰ４、（ｉｖ）ＢＭＰ５、（ｖ）ＢＭＰ６または（ｖｉ）ＢＭＰ７の受容体に結合するまたはそれと相互作用して、ＢＭＰの結合を阻害もしくは防止する、またはＢＭＰ受容体の結合に関してＢＭＰと競合することができる。
【００９７】
本明細書において、「アゴニスト」または「アンタゴニスト」は、エリスロフェロンまたはエリスロフェロン活性を有するポリペプチドの文脈において使用される場合、エリスロフェロン活性を有するエリスロフェロンポリペプチドに結合して、エリスロフェロン生物活性および／またはエリスロフェロン活性によって媒介される下流経路（複数可）を増強または阻害することができる分子、例えば、抗体またはその抗原結合部分の能力を指す。これは、ヘプシジン活性、ヘプシジン発現、ヘプシジンレベル、血清および／または血漿ヘプシジンレベル、ヘプシジンｍＲＮＡ産生またはレベル、ヘプシジンｍＲＮＡ産生またはレベル、肝ヘプシジンｍＲＮＡ産生またはレベル等、エリスロフェロン活性によって媒介される下流経路を含むエリスロフェロン生物活性を増強、増加（有意にを含む）、アゴナイズ、またはその代わりに、遮断、アンタゴナイズ、抑制または低下（有意にを含む）させることができる、抗体またはその抗原結合部分等の分子を包含する。本明細書において、「アンタゴニスト」は、そのＥＲＦＥもしくはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドまたは「抗ＥＲＦＥ抗体」もしくは抗「ＥＲＦＥアンタゴニスト抗体」に結合する、それに特異的に結合する、またはそれに選択的に結合する抗体または抗原結合部分の文脈において使用される場合、ＥＲＦＥに結合し、ＥＲＦＥ生物活性および／またはＥＲＦＥ活性によって媒介される下流経路（複数可）を阻害することができる抗体またはその抗原結合部分、および／またはＢＭＰもしくはＢＭＰ活性を有するポリペプチド、好ましくは、（ｉ）ＢＭＰ２、（ｉｉ）ＢＭＰ２／６ヘテロ二量体、（ｉｉｉ）ＢＭＰ４、（ｉｖ）ＢＭＰ５、（ｖ）ＢＭＰ６または（ｖｉ）ＢＭＰ７に結合するおよび／またはＢＭＰ活性を阻害する能力を指す。斯かるアンタゴニスト抗体は、ヘプシジン活性、ヘプシジン発現、ヘプシジンレベル、血清および／または血漿ヘプシジンレベル、ヘプシジンｍＲＮＡ産生もしくはレベル、ヘプシジンｍＲＮＡ産生もしくはレベル、肝ヘプシジンｍＲＮＡ産生もしくはレベル等、エリスロフェロンＥＲＦＥによって媒介される下流経路を含むＥＲＦＥ生物活性を遮断、アンタゴナイズ、抑制または低下（有意にを含む）させることができる抗体またはその抗原結合部分を包含する。本発明の目的のため、用語「抗ＥＲＦＥアンタゴニスト抗体」またはその抗原結合部分が、本明細書で同定されている用語、標題ならびに機能状態および特徴の全てを包含し、それによって、ＥＲＦＥそれ自体およびＥＲＦＥ生物活性（ヘプシジン活性、発現もしくはｍＲＮＡ産生、および／または鉄の血漿および／または血清濃度の増加のいずれかの態様を媒介するその能力が挙げられるがこれらに限定されない）、または活性もしくは生物活性の結果が、いずれか有意義な程度で実質的に無効にされる、減少されるまたは中和されることが明確に理解されるであろう。一部の実施形態では、抗ＥＲＦＥ抗体もしくは抗ＥＲＦＥアンタゴニスト抗体またはそれらの抗原結合部分は、ＥＲＦＥに結合し、ＥＲＦＥ  ＢＭＰ結合、好ましくは、（ｉ）ＢＭＰ２、（ｉｉ）ＢＭＰ２／６ヘテロ二量体、（ｉｉｉ）ＢＭＰ４、（ｉｖ）ＢＭＰ５、（ｖ）���ＭＰ６または（ｖｉ）ＢＭＰ７を防止し、ＢＭＰ活性の誘導される阻害を防止し、ＢＭＰ誘導されるヘプシジン活性、発現もしくはｍＲＮＡ産生、および／または鉄の血漿および／または血清濃度の増加を防止する。抗ＥＲＦＥ抗体または抗ＥＲＦＥアンタゴニスト抗体の例は、本明細書に提供されており、例えば、抗体ａｂ  １５．１である。
【００９８】
本発明において、用語「選択的に結合する」、「選択的に相互作用する」、「選択的に認識する」は、ＢＭＰもしくはＢＭＰ活性を有するポリペプチドまたはＥＲＦＥもしくはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドと結合または相互作用する抗体またはその結合部分の文脈において、抗体が、ＢＭＰファミリーメンバーまたは前記ＢＭＰファミリーメンバーにおける特異的配列もしくはエピトープに、他のＢＭＰファミリーメンバーまたは前記他のＢＭＰファミリーメンバーにおける特異的配列もしくはエピトープに結合するよりも優れた親和性、アビディティーで、および／またはより容易に、および／またはより優れた持続時間で結合することを意味する。ＥＲＦＥまたはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドと結合または相互作用する抗体またはその結合部分の文脈において、この用語は、抗体が、前記ＥＲＦＥまたはＥＲＦＥポリペプチドにおける特異的配列またはエピトープに、他のＥＲＦＥもしくはＥＲＦＥポリペプチドまたは前記他のＥＲＦＥもしくはＥＲＦＥポリペプチドにおける特異的配列もしくはエピトープに結合するよりも優れた親和性、アビディティーで、および／またはより容易に、および／またはより優れた持続時間で結合することを意味する。
【００９９】
本発明において、ＥＲＦＥまたはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドと結合または相互作用する抗体またはその結合部分に「特異的に結合する」、「特異的に相互作用する」、「特異的に認識する」という用語は、抗体が、ＥＲＦＥもしくはＥＲＦＥポリペプチドまたはそれらのエピトープに、その異なる配列またはエピトープの他の単離されたＥＲＦＥポリペプチドに結合するよりも優れた親和性、アビディティーで、より容易に、および／またはより優れた持続時間で優先的に結合する、および／または高い抗体濃度で、例えば、過剰なＫｄで、例えば、少なくとも２、４、６、８、１０倍またはそれを超える過剰なＫｄで、異なる配列の斯かる他のＥＲＦＥポリペプチドに有意に結合しないことを意味する。ＢＭＰに結合する抗体の文脈において、この用語は、抗体が、ＢＭＰもしくはＢＭＰ活性を有するポリペプチドまたはそれらのＢＭＰ領域もしくはエピトープに、それらの異なる配列またはエピトープの他のＢＭＰもしくはＢＭＰ活性を有するポリペプチドまたはそれらのＢＭＰ領域もしくはエピトープに結合するよりも優れた親和性、アビディティーで、より容易に、および／またはより優れた持続時間で優先的に結合する、および／または高い抗体濃度で、例えば、過剰なＫｄで、例えば、少なくとも２、４、６、８、１０倍またはそれを超える過剰なＫｄで、異なる配列の斯かる他のＢＭＰもしくはＢＭＰ活性を有するポリペプチドまたはそれらのＢＭＰ領域もしくはエピトープ領域に有意に結合しないことを意味する。この定義を読み取ることにより、例えば、第１の標的に特異的にまたは優先的に結合、相互作用または認識する抗体（または部分もしくはエピトープ）が、第２の標的に特異的にまたは優先的に結合、相互作用または認識してもしなくてもよいことも理解される。そのようなものとして、「特異的結合」または「優先的結合」は、排他的結合を必ずしも要求しない（これを含む場合があるが）。一般に、結合の参照は、優先的結合を意味するが、必ずしもそうとは限らない。
【０１００】
結合選択性は、抗体リガンド相互作用の文脈において、抗体が、異なる親和性で、異なるリガンドと結合して、複合体を形成することができることを示す、相対的または比較的な用語である。例えば、抗体が、ＢＭＰもしくはＢＭＰ活性を有するポリペプチドまたはＥＲＦＥもしくはエリスロフェロン活性を有するポリペプチドに選択的に結合するとして記載されている場合、これは、他のＢＭＰもしくはＢＭＰ活性を有するポリペプチドまたはＥＲＦＥもしくはエリスロフェロン活性を有するポリペプチドの結合と比較して、抗体の結合部位からのＢＭＰまたはＥＲＦＥポリペプチドの変位の反応の平衡定数が、他のＢＭＰまたはＥＲＦＥポリペプチドとの抗体複合体と比較した、選択的抗体複合体のＢＭＰもしくはＢＭＰ活性を有するポリペプチドまたはＥＲＦＥもしくはエリスロフェロン活性を有するポリペプチドの方向性にあることを示す。
【０１０１】
「抗体」は、免疫グロブリン分子の可変領域に位置する少なくとも１個の抗原認識部位を介して、炭水化物、ポリヌクレオチド、脂質、ポリペプチド等の標的への特異的結合が可能な免疫グロブリン分子である。本明細書において、用語「抗体」は、インタクトなポリクローナルまたはモノクローナル抗体のみならず、例えば、ｓｃＦｖ、単一ドメイン抗体（例えば、サメおよびラクダ科動物抗体）、マキシボディ（ｍａｘｉｂｏｄｙ）、ミニボディ（ｍｉｎｉｂｏｄｙ）、細胞内抗体（ｉｎｔｒａｂｏｄｙ）、ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）、トリアボディ（ｔｒｉａｂｏｄｙ）、テトラボディ（ｔｅｔｒａｂｏｄｙ）、ｖ−ＮＡＲおよびｂｉｓ−ｓｃＦｖを限定することなく含む、そのいずれかの抗原結合断片（すなわち、「抗原結合部分」）または単鎖、抗体を含む融合タンパク質、および抗原認識部位を含む他のいずれかの修飾された構成の免疫グロブリン分子も包含する（例えば、ＨｏｌｌｉｎｇｅｒおよびＨｕｄｓｏｎ、２００５、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２３（９）：１１２６〜１１３６を参照）。抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＡまたはＩｇＭ（またはそれらのサブクラス）等、いずれかのクラスの抗体を含み、抗体は、いずれか特定のクラスのものである必要はない。その重鎖の定常領域の抗体アミノ酸配列に応じて、免疫グロブリンは、異なるクラスに割り当てることができる。免疫グロブリンには５種の主要クラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭが存在し、これらのうちいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２へとさらに分けることができる。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常領域は、それぞれアルファ、デルタ、イプシロン、ガンマおよびミューと呼ばれる。免疫グロブリンの異なるクラスのサブユニット構造および三次元構成は周知である。
【０１０２】
抗体の「抗原結合部分」という用語は、本明細書において、抗原または抗原エピトープ、例えば、ＢＭＰもしくはＢＭＰ活性を有するポリペプチドまたはＥＲＦＥもしくはエリスロフェロン活性を有するポリペプチドに特異的に結合する能力を保持する、インタクト抗体の１種または複数の断片を指す。抗体の抗原結合機能は、インタクト抗体の断片によって果たすことができる。抗体の「抗原結合部分」という用語内に包含される結合断片の例として、Ｆａｂ；Ｆａｂ’；Ｆ（ａｂ’）２；ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片；抗体単腕のＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖ断片；単一ドメイン抗体（ｄＡｂ）断片（Ｗａｒｄら、１９８９、Ｎａｔｕｒｅ  ３４１：５４４〜５４６）、ならびに単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）が挙げられる。
【０１０３】
抗体の「可変領域」は、単独でのまたは組み合わせた、抗体軽鎖の可変領域または抗体重鎖の可変領域を指す。本技術分野で公知の通り、重および軽鎖の可変領域はそれぞれ、高頻度可変領域としても公知の３個の相補性決定領域（ＣＤＲ）によって接続された４個のフレームワーク領域（ＦＲ）からなり、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する。特に、ＣＤＲ領域外側のアミノ酸残基（すなわち、フレームワーク領域）における置換による、対象可変領域のバリアントが所望の場合、対象可変領域を、対象可変領域と同じ正準（ｃａｎｏｎｉｎｃａｌ）クラスにおけるＣＤＲ１およびＣＤＲ２配列を含有する他の抗体の可変領域と比較することにより、適切なアミノ酸置換、好ましくは、保存的アミノ酸置換を同定することができる（ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ、Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  １９６（４）：９０１〜９１７、１９８７）。対象ＣＤＲに隣接するようにＦＲを選択する場合、例えば、抗体をヒト化または最適化する場合、同じ正準クラスにおけるＣＤＲ１およびＣＤＲ２配列を含有する抗体由来のＦＲが好まれる。
【０１０４】
可変ドメインの「ＣＤＲ」は、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａの両方の蓄積（ａｃｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ）、ＡｂＭ、接触の定義および／または立体構造定義、または本技術分野で周知のＣＤＲ決定のいずれかの方法に従って同定される可変領域内のアミノ酸残基である。抗体ＣＤＲは、Ｋａｂａｔらによって本来定義された、高頻度可変領域として同定することができる。例えば、Ｋａｂａｔら、１９９２、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ、ＮＩＨ、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ  Ｄ．Ｃ．を参照されたい。ＣＤＲの位置は、Ｃｈｏｔｈｉａ達によって本来記載された、構造的ループ構造として同定することもできる。例えば、Ｃｈｏｔｈｉａら、１９８９、Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７７〜８８３を参照されたい。ＣＤＲ同定の他のアプローチは、ＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａの間の折衷であり、Ｏｘｆｏｒｄ  ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェア（現在はＡｃｃｅｌｒｙｓ（登録商標））を使用して導かれる「ＡｂＭ定義」、またはＭａｃＣａｌｌｕｍら、１９９６、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２６２：７３２〜７４５に示されている、観察される抗原接触に基づくＣＤＲの「接触定義」を含む。本明細書においてＣＤＲの「立体構造定義」と称される別のアプローチでは、ＣＤＲの位置は、抗原結合にエンタルピー寄与を生じる残基として同定することができる。例えば、Ｍａｋａｂｅら、２００８、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２８３：１１５６〜１１６６を参照されたい。さらに他のＣＤＲ境界定義は、上述のアプローチのうち１種に厳密に従わない場合もあるが、にもかかわらず、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲの少なくとも部分と重複するであろう、ただし、特定の残基もしくは残基群またはさらにはＣＤＲ全体が、抗原結合に有意に影響を与えないという予測または実験知見を踏まえて、これは短縮または延長され得る。本明細書において、ＣＤＲは、アプローチの組合せを含む、本技術分野で公知のいずれかのアプローチによって定義されるＣＤＲを指すことができる。本明細書で使用されている方法は、これらのアプローチのいずれかに従って定義されるＣＤＲを利用することができる。２種以上のＣＤＲを含有するいずれか所与の実施形態のため、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、拡張、ＡｂＭ、接触および／または立体構造定義のいずれかに従って定義することができる。
【０１０５】
用語「モノクローナル抗体」（Ｍａｂ）は、これが産生される方法ではなく、例えば、いずれかの真核生物、原核生物またはファージクローンを含む、単一コピーまたはクローンに由来する、抗体またはその抗原結合部分を指す。好ましくは、本発明のモノクローナル抗体は、均一または実質的に均一な集団に存在する。
【０１０６】
「ヒト化」抗体は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含有する、キメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖またはそれらの断片（Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２または抗体の他の抗原結合部分列等）である、非ヒト（例えば、マウスまたはニワトリ）抗体またはその抗原結合部分の形態を指す。好ましくは、ヒト化抗体は、レシピエントの相補性（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙ）決定領域（ＣＤＲ）由来の残基が、所望の特異性、親和性および能力を有するマウス、ラットまたはウサギ等の非ヒト種（ドナー抗体）のＣＤＲ由来の残基によって置き換えられた、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。
【０１０７】
「ヒト抗体または完全ヒト抗体」は、ヒト抗体遺伝子を保有するトランスジェニックマウスまたはヒト細胞に由来する抗体またはその抗原結合部分を指す。用語「キメラ抗体」は、可変領域配列がマウス抗体に由来し、定常領域配列がヒト抗体に由来する抗体等、可変領域配列がある種に由来し、定常領域配列が別の種に由来する抗体またはその抗原結合部分を指すことが意図される。抗体は、本技術分野で周知の技法、例えば、組換え技術、ファージディスプレイ技術、合成技術、または斯かる技術の組合せ、または本技術分野で容易に公知の他の技術を使用して産生することができる（例えば、Ｊａｙａｓｅｎａ、Ｓ．Ｄ．、Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．、４５：１６２８〜５０（１９９９）およびＦｅｌｌｏｕｓｅ、Ｆ．Ａ．ら、Ｊ．ＭｏＩ．Ｂｉｏｌ．、３７３（４）：９２４〜４０（２００７）を参照）。
【０１０８】
一部の実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合部分は、ヒトＦｃガンマ受容体に対して増加または減少された結合親和性を有する修飾された定常領域を含むことができる、免疫学的に不活性または部分的に不活性である、例えば、補体媒介性溶解を誘発しない、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を刺激しない、またはマイクログリアを活性化しない；または次のうちいずれか１種または複数において低下された活性を有する（無修飾抗体と比較して）：補体媒介性溶解の誘発、ＡＤＣＣの刺激、またはマイクログリアの活性化。定常領域の異なる修飾を使用して、エフェクター機能の最適レベルおよび／または組合せを達成することができる。例えば、Ｍｏｒｇａｎら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ８６：３１９〜３２４、１９９５；Ｌｕｎｄら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １５７：４９６３〜９  １５７：４９６３〜４９６９、１９９６；Ｉｄｕｓｏｇｉｅら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １６４：４１７８〜４１８４、２０００；Ｔａｏら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １４３：２５９５〜２６０１、１９８９；およびＪｅｆｆｅｓら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  １６３：５９〜７６、１９９８を参照されたい。一部の実施形態では、定常領域は、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１９９９、２９：２６１３〜２６２４；ＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＧＢ９９／０１４４１；および／または英国特許出願第９８０９９５１．８号に記載されている通りに修飾される。
【０１０９】
一部の実施形態では、抗体定常領域は、Ｆｃガンマ受容体および補体および免疫系との相互作用を回避するように修飾することができる。斯かる抗体の調製のための技法は、ＷＯ９９／５８５７２に記載されている。例えば、臨床治験およびヒトにおける処置において抗体が使用される場合、定常領域は、ヒト定常領域により似るように操作して、免疫応答を回避することができる。例えば、米国特許第５，９９７，８６７号および同第５，８６６，６９２号を参照されたい。
【０１１０】
一部の実施形態では、定常領域は、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１９９９、２９：２６１３〜２６２４；ＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＧＢ９９／０１４４１；および／または英国特許出願第９８０９９５１．８号に記載されている通りに修飾することができる。斯かる実施形態では、Ｆｃは、ヒトＩｇＧ２またはヒトＩｇＧ４となることができる。Ｆｃは、突然変異Ａ３３０Ｐ３３１からＳ３３０Ｓ３３１を含有するヒトＩｇＧ２となることができ（ＩｇＧ２Δａと命名）、この場合、アミノ酸残基は、野生型ＩｇＧ２配列を参照してナンバリングされている。Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１９９９、２９：２６１３〜２６２４。一部の実施形態では、抗体は、次の突然変異を含むＩｇＧの定常領域を含む（Ａｒｍｏｕｒら、２００３、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ４０、５８５〜５９３）：Ｅ２３３Ｆ２３４Ｌ２３５からＰ２３３Ｖ２３４Ａ２３５（ＩｇＧ４Δｃ）、この場合、ナンバリングは、野生型ＩｇＧ４を参照する。さらに別の実施形態では、Ｆｃは、ヒトＩｇＧ４  Ｅ２３３Ｆ２３４Ｌ２３５からＰ２３３Ｖ２３４Ａ２３５と欠失Ｇ２３６であり（ＩｇＧ４Δｂ）、別の実施形態では、Ｆｃは、ヒンジ安定化突然変異Ｓ２２８からＰ２２８を含有するいずれかのヒトＩｇＧ４  Ｆｃである（ＩｇＧ４、ＩｇＧΔΔｂまたはＩｇＧ  Δｃ）（Ａａｌｂｅｒｓｅら、２００２、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １０５、９〜１９）。
【０１１１】
一部の実施形態では、抗体は、次の突然変異を含むヒト重鎖ＩｇＧ２定常領域を含む：Ａ３３０Ｐ３３１からＳ３３０Ｓ３３１（野生型ＩｇＧ２配列を参照したアミノ酸ナンバリング）。Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１９９９、２９：２６１３〜２６２４。また他の実施形態では、定常領域は、Ｎ結合型グリコシル化に関して無グリコシル化（ａｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｅ）されている。一部の実施形態では、定常領域は、定常領域におけるＮ−グリコシル化認識配列の一部であるオリゴ糖取り付け残基および／または隣接残基を突然変異させることにより、Ｎ結合型グリコシル化に関して無グリコシル化されている。例えば、Ｎ−グリコシル化部位Ｎ２９７は、例えば、Ａ、Ｑ、ＫまたはＨに突然変異させることができる。Ｔａｏら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １４３：２５９５〜２６０１、１９８９；およびＪｅｆｆｅｒｉｓら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  １６３：５９〜７６、１９９８を参照されたい。一部の実施形態では、定常領域は、Ｎ結合型グリコシル化に関して無グリコシル化されている。定常領域は、酵素により（酵素ＰＮＧａｓｅによる炭水化物の除去等）またはグリコシル化欠損宿主細胞における発現によって、Ｎ結合型グリコシル化に関して無グリコシル化され得る。
【０１１２】
本発明の抗体またはその抗原結合部分に含まれる他の抗体修飾は、ＰＣＴ公開番号ＷＯ９９／５８５７２に記載されている通りに修飾された抗体を含む。このような抗体は、標的分子に方向付けられた結合ドメインに加えて、ヒト免疫グロブリン重鎖の定常領域の全体または一部に実質的に相同なアミノ酸配列を有するエフェクタードメインを含む。このような抗体は、標的の有意な補体依存性溶解または細胞媒介性破壊を誘発することなく標的分子に結合することが可能である。一部の実施形態では、エフェクタードメインは、ＦｃＲｎおよび／またはＦｃｙＲｌｌｂに特異的に結合することが可能である。これらは、典型的に、２種以上のヒト免疫グロブリン重鎖ＣＨ２ドメインに由来するキメラドメインに基づく。この様式で修飾された抗体は、慢性抗体療法における使用に特に適しており、従来の抗体療法に対する炎症および他の有害反応を回避する。
【０１１３】
一部の実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合部分は、無修飾抗体と比較して、ＦｃＲｎに対する増加された結合親和性および／または増加された血清半減期を有する修飾された定常領域を含む。
【０１１４】
「生殖系列化（ｇｅｒｍｌｉｎｉｎｇ）」として公知のプロセスにおいて、ＶＨおよびＶＬ配列におけるある特定のアミノ酸は、生殖系列ＶＨおよびＶＬ配列において天然に見出されるアミノ酸にマッチするように突然変異させることができる。特に、ＶＨおよびＶＬ配列におけるフレームワーク領域のアミノ酸配列は、生殖系列配列にマッチするように突然変異させて、抗体が投与される際の免疫原性のリスクを低下させることができる。ヒトＶＨおよびＶＬ  遺伝子の生殖系列ＤＮＡ配列は、本技術分野で公知である（例えば、「Ｖｂａｓｅ」ヒト生殖系列配列データベースを参照；また、Ｋａｂａｔ、Ｅ．Ａ．ら、１９９１、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２；Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎら、１９９２、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：７７６〜７９８；およびＣｏｘら、１９９４、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：８２７〜８３６も参照されたい）。
【０１１５】
為され得る別の種類のアミノ酸置換は、抗体における潜在的タンパク質分解部位を除去するものである。斯かる部位は、抗体の可変ドメインのＣＤＲもしくはフレームワーク領域または定常領域において発生し得る。システイン残基の置換およびタンパク質分解部位の除去は、抗体産物における不均一性のリスクを減少させ、これにより、その均一性を増加させることができる。別の種類のアミノ酸置換は、潜在的脱アミド部位を形成するアスパラギン−グリシンペアを排除するものであり、これらの残基の一方または両方を変更することにより為される。別の例では、本発明の抗体の重鎖のＣ末端リジンを切断することができる。本発明の様々な実施形態では、抗体の重および軽鎖は、シグナル配列を含んでいてもよい。
【０１１６】
本技術分野で公知の通り、用語「Ｆｃ領域」は、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するために使用される。「Ｆｃ領域」は、ネイティブ配列Ｆｃ領域またはバリアントＦｃ領域となることができる。免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界は、変動し得るが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は通常、位置Ｃｙｓ２２６におけるアミノ酸残基またはＰｒｏ２３０からそのカルボキシル末端へと伸びると定義される。Ｆｃ領域における残基のナンバリングは、Ｋａｂａｔと同様のＥＵ指数のナンバリングである。Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ．、１９９１。免疫グロブリンのＦｃ領域は一般に、２個の定常ドメインＣＨ２およびＣＨ３を含む。本技術分野で公知のように、Ｆｃ領域は、二量体または単量体形態で存在することができる。
【０１１７】
用語「エピトープ」は、抗体の抗原結合領域のうち１個または複数において、抗体またはその抗原結合部分によって認識および結合され得る分子の部分を指す。エピトープは、一次、二次または三次タンパク質構造の定義される領域からなることができ、抗体またはその抗原結合部分の抗原結合領域によって認識される標的の二次構造単位または構造ドメインの組合せを含む。エピトープは同様に、アミノ酸または糖側鎖等、分子の定義される化学的に活性な表面グループ分けからなることができ、特異的な三次元構造特徴と共に特異的な電荷特徴を有する。用語「抗原性エピトープ」は、本明細書において、本技術分野で周知のいずれかの方法によって、例えば、従来のイムノアッセイ、抗体競合的結合アッセイまたはｘ線結晶学もしくは関連する構造決定方法（例えば、ＮＭＲ）によって決定される、抗体が特異的に結合し得るポリペプチドの部分として定義される。「非線形エピトープ」または「立体構造エピトープ」は、エピトープに特異的な抗体が結合する、抗原性タンパク質内の非近接ポリペプチド（またはアミノ酸）を含む。抗原における所望のエピトープが決定されれば、例えば、本明細書に記載されている技法を使用して、当該エピトープに対する抗体を生成することが可能になる。発見プロセスにおいて、抗体の生成および特徴付けは、望ましいエピトープに関する情報を解明することができる。この情報から、次いで、同じエピトープへの結合に関して抗体を競合的にスクリーニングすることが可能になる。これを達成するためのアプローチは、互いに競合または交差競合する抗体を見出すための競合および交差競合研究を行うことであり、例えば、抗体は、抗原または抗原性エピトープへの結合に関して競合する。
【０１１８】
「宿主細胞」は、ポリヌクレオチドインサートの取り込みのためのベクター（複数可）のレシピエントとなり得るまたはそうであった、個々の細胞または細胞培養物を含む。宿主細胞は、単一宿主細胞の後代を含み、後代は、天然、偶発的または計画的突然変異のために、本来の親細胞と必ずしも完全に同一（形態またはゲノムＤＮＡ相補体が）ではない場合がある。宿主細胞は、本発明のポリヌクレオチド（複数可）をｉｎ  ｖｉｖｏでトランスフェクトされた細胞を含む。
【０１１９】
本明細書において、「ベクター」は、宿主細胞において目的の１種または複数の遺伝子（複数可）または配列（複数可）を送達し、好ましくは、発現することが可能なコンストラクトを意味する。ベクターの例として、ウイルスベクター、ネイキッドＤＮＡまたはＲＮＡ発現ベクター、プラスミド、コスミドまたはファージベクター、カチオン性縮合剤に会合したＤＮＡまたはＲＮＡ発現ベクター、リポソームに被包されたＤＮＡまたはＲＮＡ発現ベクター、および産生株細胞等のある特定の真核細胞が挙げられるがそれらに限定されない。
【０１２０】
本明細書において、「発現制御配列」は、核酸の転写を方向付ける核酸配列を意味する。発現制御配列は、構成的もしくは誘導性プロモーター等のプロモーター、またはエンハンサーとなることができる。発現制御配列は、転写されるべき核酸配列に作動可能に連結される。
【０１２１】
用語「結合親和性」または「ＫＤ」は、本明細書において、特定の抗原−抗体相互作用の解離速度を指すことが意図される。ＫＤは、「オフレート（ｏｆｆ−ｒａｔｅ）（ｋｏｆｆ）」とも呼ばれる解離速度の、会合速度または「オンレート（ｏｎ−ｒａｔｅ）（ｋｏｎ）」に対する比である。よって、ＫＤイコールｋｏｆｆ／ｋｏｎであり、モル濃度（Ｍ）として表現される。その結果、ＫＤが小さいほど、結合の親和性は強くなる。したがって、１μＭのＫＤは、１ｎＭのＫＤと比較して弱い結合親和性を示す。抗体のＫＤ値は、本技術分野で十分に確立された方法を使用して決定することができる。抗体のＫＤを決定するための一方法は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）、典型的には、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）システム等のバイオセンサーシステムを使用することによる。
【０１２２】
用語「効力」は、生物活性の測定値であり、抗原、例えば、ＢＭＰもしくはＢＭＰ活性を有するポリペプチドまたはＥＲＦＥもしくはエリスロフェロン活性を有するポリペプチドに対する抗体のＩＣ５０または有効濃度と命名することができ、これは、本明細書に記載されているもの等、ＥＲＦＥまたはＢＭＰ活性アッセイにおいて測定される活性の５０％の阻害に要求される。
【０１２３】
用語「阻害する」または「中和する」は、本明細書において、本発明の抗体の生物活性に関して、例えば、ＢＭＰもしくはＢＭＰ活性を有するポリペプチドまたはＥＲＦＥもしくはエリスロフェロン活性を有するポリペプチドの生物活性または発現が挙げられるがこれらに限定されない、阻害されているものの進行または重症度を実質的にアンタゴナイズする、禁止する、防止する、制限する、遅くする、破壊する、排除する、停止する、低下させるまたは反転する抗体の能力を意味する。
【０１２４】
用語「競合する」は、本明細書において、抗体またはその抗原結合部分に関して、第１の抗体とその同族エピトープとの結合の結果が、第２の抗体の非存在下での第１の抗体の結合と比較して、第２の抗体の存在下で検出可能に減少されるように、第１の抗体またはその抗原結合部分が、第２の抗体またはその抗原結合部分の結合と十分に同様の様式で、エピトープに結合することを意味する。第２の抗体のそのエピトープへの結合も、第１の抗体の存在下で検出可能に減少されるその代替の状況も生じ得るが、実際にそうである必要はない。すなわち、第２の抗体が、第１の抗体のそのそれぞれのエピトープへの結合を阻害することなく、第１の抗体は、第２の抗体のそのエピトープへの結合を阻害することができる。しかし、各抗体が、他の抗体とその同族エピトープとの結合を検出可能に阻害する場合、同じ、より多いまたはより少ない程度であるかにかかわらず、抗体は、それらのそれぞれのエピトープ（複数可）または結合領域（複数可）の結合に関して互いに「交差競合する」と言われる。競合および交差競合抗体の両方が、本発明によって包含される。斯かる競合または交差競合が発生する機構に関係なく（例えば、立体障害、立体構造変化または共通エピトープもしくはその部分への結合）、当業者であれば、本明細書に提供されている教示に基づき、斯かる競合および／または交差競合抗体が包含されており、本明細書に開示されている方法に有用となり得ることを認めるであろう。用語「競合する」は、本明細書において、ＢＭＰもしくはＢＭＰ活性を有するポリペプチドまたはＥＲＦＥもしくはエリスロフェロン活性を有するポリペプチド、またはそれらのエピトープに結合する抗体またはその抗原結合部分を包含する。
【０１２５】
本発明において、ＢＭＰまたはエリスロフェロン活性およびそれらのアゴニズムまたはアンタゴニズムは、対照、例えば、ＢＭＰもしくはエリスロフェロンまたはそれらのアゴニストもしくはアンタゴニストの非存在下と比較していてもよい、ヘプシジン活性、ヘプシジン発現、ヘプシジンレベル、血清および／または血漿ヘプシジンレベル、ヘプシジンｍＲＮＡ産生またはレベル、肝ヘプシジンｍＲＮＡ産生またはレベルのアッセイによって決定することができる。アッセイは、ｉｎ−ｖｉｖｏおよび／またはｉｎ−ｖｉｔｒｏで、例えば、生体試料または体液の試料、例えば、血漿または血清、尿、唾液、脳脊髄液、脊髄液、血液、臍帯血、羊水または腹膜透析液において為すことができる。その代わりに、アッセイは、本明細書に記載されているｎａｎｏ−ｌｕｃアッセイ等、ｉｎ−ｖｉｔｒｏ系において為すことができる。ヘプシジン発現、レベルおよび／または濃度は、標識されたヘプシジンの存在下で行われる酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）または競合的酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）を使用して決定することができる。アッセイは、試料からヘプシジンを捕捉するための、抗体またはそのリガンド結合ドメイン等、表面結合ヘプシジンリガンドを含むことができ、さらに斯かるリガンドは、基質反応における酵素読み出し情報にコンジュゲートされていてもよく、または発色性または化学蛍光（ｃｈｅｍｉｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ）または化学発光となり得るシグナル生成の代替手段にコンジュゲートされていてもよい。競合的ＥＬＩＳＡを使用することができ、これは、測定のためのヘプシジン抗原を含有する試料と共にインキュベートされる、非標識ヘプシジン一次リガンド、例えば、抗ヘプシジン抗体を含むことができる。次に、一次リガンド−抗原複合体が、ヘプシジン抗原で予めコーティングされた容器に添加される。非結合一次リガンドは、洗浄によって除去される。試料にヘプシジン抗原が多いほど、容器内の抗原に結合することができるリガンドは少なくなるであろう。二次リガンド、例えば、一次リガンド／抗体に特異的であり、酵素または均等な読み出し手段とコンジュゲートされた抗体が添加され、その後、基質が添加されて発色性または蛍光シグナルを誘発してもよい。鉄レベルの決定は、上文に記載されている通り、ｉｎ−ｖｉｔｒｏで、例えば、生体試料または体液の試料において、例えば、フェリチンアッセイによって為すことができる。フェリチンは、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）または免疫放射線アッセイ、ＩＲＭＡによってアッセイすることができる。ラジオイムノアッセイにおいて、公知含量のフェリチンが、放射性同位体で標識され、次いで公知量の抗フェリチン抗体と混合され、未知含量のフェリチンを含有する試料がその後に添加されて、結合に関して競合し、抗体結合した放射標識フェリチンの、遊離した放射標識フェリチンに対する比が決定され、これは、変動濃度の標識フェリチンで行われる場合、試料における非標識フェリチンの計算を可能にする。ＩＲＭＡにおいて、抗体は、放射性同位体で標識され、これは、試料に存在するフェリチンの結合に使用され、残っている標識抗体は、固相フェリチンとの第２の反応によって除去される。溶液に残っている放射活性の量は、フェリチン濃度の一次関数である。
【０１２６】
語句「有効量」または「治療有効量」は、本明細書において、所望の治療結果の達成に必要な量（投薬量、期間、投与手段で）を指す。有効量は、対象への治療利益の付与に必要な活性薬剤の少なくとも最小量であるが、有毒量未満である。
【０１２７】
本明細書において、「薬学的に許容できる担体」または「薬学的な許容できる賦形剤」は、活性成分と組み合わされた場合、成分が生物活性を保持することを可能にし、対象の免疫系と非反応性である、いずれかの材料を含む。斯かる担体を含む組成物は、周知の従来方法によって製剤化される（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１８版、Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏ編、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ、１９９０；およびＲｅｍｉｎｇｔｏｎ、Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、第２０版、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ、２０００を参照）。
【０１２８】
用語「処置すること」は、本明細書において、他に断りがなければ、斯かる用語が適用される障害もしくは状態、または斯かる障害もしくは状態の１種もしくは複数の症状の反転、軽減、その進行阻害、その進行遅延、その発病遅延、または防止もしくは阻害を意味する。用語「処置」は、本明細書において、他に断りがなければ、処置行為を指し、この「処置すること」は直ぐ上に定義されている通りである。用語「処置すること」は、対象のアジュバントおよびネオアジュバント処置も含む。誤解を避けるために、本明細書における「処置」への言及は、根治的、対症的および予防的処置への言及を含む。
【０１２９】
「生体試料」は、個体から得られる種々の試料型を包含し、診断またはモニタリングアッセイにおいて使用することができる。定義は、血液、血漿、血清、尿および生物学的起源の他の液体試料、生検検体もしくは組織培養物等の固形組織試料、またはそれらに由来する細胞、ならびにそれらの後代を包含する。定義は、試薬による処理、可溶化、またはタンパク質もしくはポリヌクレオチド等のある特定の構成成分の濃縮、または切片作製目的での半固体もしくは固体マトリックスにおける包埋による等、その調達後にいずれかの仕方で操作された試料も含む。用語「生体試料」は、臨床試料を包含し、培養物中の細胞、細胞上清、細胞ライセート（Ｉｙｓａｔｅ）、血清、血漿、生体液および組織試料も含む。
【０１３０】
本明細書において、「実質的に純粋」は、少なくとも５０％純粋（すなわち、夾雑物を含まない）、より好ましくは、少なくとも９０％純粋、より好ましくは、少なくとも９５％純粋、より好ましくは、少なくとも９８％純粋、より好ましくは、少なくとも９９％純粋である材料を指す。
【０１３１】
本明細書における「約」ある値またはパラメータの参照は、当該値またはパラメータそれ自体を対象にする実施形態を含む（また、記載する）。例えば、「約Ｘ」を参照する記載は、「Ｘ」の記載を含む。数的範囲は、当該範囲を定義する数を包括する。
【０１３２】
実施形態が、言語「を含む」を用いて本明細書に記載されている場合は常に、「からなる」および／または「から本質的になる」の観点から記載されている他の面では類似の実施形態も提供されることが理解される。
【０１３３】
本発明の態様または実施形態が、マーカッシュ群または代替の他のグループ分けの観点から記載されている場合、本発明は、全体として収載されている群全体のみならず、個々に群の各メンバーおよび主要群のあらゆる可能な部分群、また、群メンバーのうち１種または複数が存在しない主要群も包含する。本発明は、請求されている発明における群メンバーのうちいずれかの１種または複数の明確な排除も想定する。
【０１３４】
他に規定がなければ、本明細書で使用されているあらゆる技術および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されているものと同じ意義を有する。矛盾が生じる場合、定義を含む本明細書が優先されるであろう。本明細書および特許請求の範囲を通して、単語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」または「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」もしくは「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」等の変化形は、記述されている整数または整数群の包含を暗示するが、他のいかなる整数または整数群の排除も暗示しないと理解されるであろう。文脈によってそれ以外が要求されない限り、単数形の用語は、複数を含むものとし、複数形の用語は、単数形を含むものとする。用語「例えば（ｅ．ｇ．またはｆｏｒ  ｅｘａｍｐｌｅ）」に続くいずれかの例（複数可）は、徹底的または限定的であることを意味するものではない。
【０１３５】
例示的な方法および材料が、本明細書に記載されているが、本明細書に記載されているものと同様のまたは均等な方法および材料を、本発明の実施または検査において使用することもできる。材料、方法および実施例は、単に説明的であり、限定を意図するものではない。
【０１３６】
一般技法
本発明の実施は、他に断りがなければ、当業者の技能範囲内で、分子生物学（組換え技法を含む）、微生物学、細胞生物学、生化学および免疫学の従来の技法を用いるであろう。斯かる技法は、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、第２版（Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９８９）Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ；Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ編、１９８４）；Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ；Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｎｏｔｅｂｏｏｋ（Ｊ．Ｅ．Ｃｅｌｌｉｓ編、１９９８）Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ；Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ編、１９８７）；Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｃｅｌｌ  ａｎｄ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｊ．Ｐ．ＭａｔｈｅｒおよびＰ．Ｅ．Ｒｏｂｅｒｔｓ、１９９８）Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ；Ｃｅｌｌ  ａｎｄ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ：Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ（Ａ．Ｄｏｙｌｅ、Ｊ．Ｂ．ＧｒｉｆｆｉｔｈｓおよびＤ．Ｇ．Ｎｅｗｅｌｌ編、１９９３〜１９９８）Ｊ．Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ；Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｉｎｃ．）；Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｄ．Ｍ．ＷｅｉｒおよびＣ．Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ編）；Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  Ｖｅｃｔｏｒｓ  ｆｏｒ  Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｃｅｌｌｓ（Ｊ．Ｍ．ＭｉｌｌｅｒおよびＭ．Ｐ．Ｃａｌｏｓ編、１９８７）；Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌら編、１９８７）；ＰＣＲ：Ｔｈｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ｃｈａｉｎ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ（Ｍｕｌｌｉｓら編、１９９４）；Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎら編、１９９１）；Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、１９９９）；Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ（Ｃ．Ａ．ＪａｎｅｗａｙおよびＰ．Ｔｒａｖｅｒｓ、１９９７）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｐ．Ｆｉｎｃｈ、１９９７）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ  ｐｒａｃｔｉｃａｌ  ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｄ．Ｃａｔｔｙ．編、ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ、１９８８〜１９８９）；Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ  ｐｒａｃｔｉｃａｌ  ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｐ．ＳｈｅｐｈｅｒｄおよびＣ．Ｄｅａｎ編、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ、２０００）；Ｕｓｉｎｇ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ｍａｎｕａｌ（Ｅ．ＨａｒｌｏｗおよびＤ．Ｌａｎｅ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、１９９９）；Ｔｈｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｍ．ＺａｎｅｔｔｉおよびＪ．Ｄ．Ｃａｐｒａ編、Ｈａｒｗｏｏｄ  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、１９９５）等の文献で十分に説明されている。
【０１３７】
次の実施例は、単なる説明目的で提供されており、決して本発明の範囲を限定することを意図するものではない。実際に、本明細書に示され記載されているものに加えて、本発明の様々な修正は、当業者には前述の説明から明らかになり、添付の特許請求の範囲内に収まるであろう。本願を通して引用されているあらゆる図面ならびにあらゆる参考文献、特許および公開された特許出願の内容は、明確に参照により本明細書に組み込む。
【実施例】
【０１３８】
（実施例１）
ヘプシジン発現におけるＢＭＰ効果
次の通りに使用してｉｎ−ｖｉｔｒｏで測定した：ヘプシジン転写融合レポーターアッセイ（ｎａｎｏ−ｌｕｃまたはナノルシフェラーゼアッセイ）を開発して、ｉｎ−ｖｉｔｒｏでのヘプシジン産生におけるＢＭＰの効果を評価した。ＨｅｐＧ２ヘパトーマ細胞における内在性ＨＡＭＰ遺伝子のコード配列の末端にナノルシフェラーゼレポーターを挿入し、ＨＡＭＰ−ナノルシフェラーゼ融合体を作製した。ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ９を使用して、このノックインレポーターコンストラクトにより細胞を編集した。ｎａｎｏＬｕｃの後にウシ成長ホルモンポリＡが含まれて、適切なｍＲＮＡプロセシングを確実にした。ｎａｎｏｌｕｃレポーターの３’にピューロマイシン−ＴＫ発現カセットも含まれて、適切に標的化されたクローンを濃縮した。ＨＡＭＰ−ＮａｎｏＬｕｃ融合体がホモ接合型のクローンを選択し、ＢＭＰおよびＬＤＮ（４−［６−［４−（１−ピペラジニル）フェニル］ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−イル］キノリンジヒドロクロリド）、強力なＡＬＫ２／３  ＢＭＰ阻害剤に対するその応答に関して検査し、ｎａｎｏ−ｌｕｃコンストラクトの模式図を図１Ｂに示す。Ｈａｍｐ−ｎａｎｏＬｕｃシグナルにおける代表的ＢＭＰ（ＢＭＰ２、６、９）の効果を評価した。およそ２０，０００個の細胞（トリプシン／ＥＤＴＡで分割された細胞）を２００ｕＬの完全培地（ＤＭＥＭ＋１０％血清＋ピルビン酸Ｎａ）に懸濁し、９６ウェルプレートの各ウェルに分布させ、２４時間３７Ｃでインキュベートした。次に、培地を吸引し、１００ｕＬ完全培地において２４時間３７Ｃにて、系列希釈した選択されたＢＭＰの存在下で細胞を処理し（２回複製して）、新鮮培地単独の対照をベースラインシグナルのために使用した（２回複製して）。インキュベーション後に、９０ｕＬの上清をホワイトウェル９６ウェルプレートに移し、ＲＴで平衡化し、９０ｕＬのＲＴ  ＮａｎｏＬｕｃ試薬を添加し／ウェル（１プレートにつき、１０ｍＬ希釈試薬＋２００ｕＬ  ＮａｎｏＬｕｃ基質  −  Ｎａｎｏ−Ｇｌｏルシフェラーゼアッセイ系から、Ｐｒｏｍｅｇａ、ｒｅｆ  ｃａｔ＃Ｎ１１５０）、２〜３分間室温で混合した。製造業者の説明書に従って、Ｌｕｍ７００プログラムを用いたＥｎｖｉｓｉｏｎにおいてプレートを読み取った。図１Ａに示すデータは、アッセイ系において、ヘプシジン発現における各アッセイされたＢＭＰの用量依存性効果があることを実証する。結論として、ヘプシジン発現は、ＢＭＰによりモジュレートされる。
【０１３９】
（実施例２）
Ｂｉａｃｏｒｅによって測定されるＥＲＦＥとのＢＭＰ相互作用
鉄吸収は、ヘプシジン発現の制御により、赤血球生成需要によって緊密に調節される。エリスロポエチン（ＥＰＯ）は、少なくとも一部には、ホルモンのエリスロフェロン（ＥＲＦＥ）の合成を増加させることにより、ヘプシジン抑制を引き起こす。ＥＲＦＥは、出血またはＥＰＯ処置後に赤芽球によって産生され、ヘプシジン発現を抑制し、鉄利用能を増加させるように肝細胞に作用する。ＥＲＦＥノックアウトマウスは、静脈切開術後にヘプシジンを抑制することができず、失血からの回復遅延を示す。さらに、血清ＥＲＦＥ濃度は、失血およびＥＰＯ投与後のヒトならびにβ−サラセミア患者において増加される。ヘプシジン発現は、ＢＭＰ／ＳＭＡＤシグナリング経路によりモジュレートされる。特に、肝類洞壁内皮細胞によって産生されるＢＭＰ６およびＢＭＰ２は、肝細胞の細胞膜におけるＢＭＰ受容体に結合することによりシグナリングカスケードを誘発することができ、このカスケードは、サイトゾルＳＭＡＤ（ＳＭＡＤ１／５／８）をリン酸化し、これがＳＭＡＤ４と複合体形成しつつ核へと転位置して、ヘプシジン（ＨＡＭＰ）を含む標的遺伝子の転写を活性化する。本出願人らは、ＥＲＦＥがヘプシジンを抑制する機構が、ＢＭＰとの相互作用によるものであるか決定しようと試みた。Ｂｉａｃｏｒｅ  ＳＰＲを使用して結合定数を測定した。５０ｎＭのＢＭＰ２、４、６を、ＭＥＳ−Ｔｒｉｓ緩衝液ｐＨ６．０、２５℃において、ＣＭ４センサーチップにカップルしたＥＲＦＥ  Ａ４−ビオチンアミンに対してランした。
【０１４０】
結論として、図２におけるデータは、ＥＲＦＥが、ＳＰＲ（Ｂｉａｃｏｒｅ（商標））によって決定される通り、ナノモル濃度Ｋｄで、選択されたＢＭＰ２、４および６に、最も緊密にはＢＭＰ６に結合することを示す。
【０１４１】
（実施例３）
ＢＭＰ／ＳＭＡＤシグナリング経路は、ｉｎ−ｖｉｔｒｏでエリスロフェロンによって抑制される
（ａ）ヘプシジン発現は、ＢＭＰ／ＳＭＡＤシグナリング経路によりモジュレートされる：ＢＭＰ、例えば、肝類洞壁内皮細胞によって産生されるＢＭＰ６およびＢＭＰ２は、肝細胞の細胞膜におけるＢＭＰ受容体に結合することによりシグナリングカスケードを誘発し、このカスケードは、サイトゾルＳＭＡＤ（ＳＭＡＤ１／５／８）をリン酸化し、これがＳＭＡＤ４と複合体形成しつつ核へと転位置して、ヘプシジン（ＨＡＭＰ）を含む標的遺伝子の転写を活性化する。
【０１４２】
（ｂ）遺伝子発現マイクロアレイ：マウスまたはヒトエリスロフェロンで処理したＨｕｈ７細胞のマイクロアレイ解析を実行して、ＢＭＰ／ＳＭＡＤシグナリング経路におけるエリスロフェロンの活性を検査した。一般に、細胞処理は、次のプロトコールに従って実行した：他に断りがなければ、１０％ウシ胎仔血清（Ｓｉｇｍａ）、１％ペニシリン−ストレプトマイシン（Ｓｉｇｍａ）および１％Ｌ−グルタミン（Ｓｉｇｍａ）を補充したダルベッコ変法イーグル培地  −  高グルコース（Ｓｉｇｍａ）において、Ｈｕｈ７およびＨｅｐＧ２を培養した。２４ウェル（遺伝子発現解析）または１２ウェル（タンパク質解析）細胞培養プレートにおいて、処理２４時間前に細胞を蒔いた。処理の時点で、細胞をＰＢＳで洗浄し、新鮮培地を添加した。細胞を、組換えヒトもしくはマウスＥＲＦＥ（１０μｇ／ｍｌ）、ＢＭＰ２、４、５、６、７もしくは９（Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ）、アクチビンＢ（Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ）、ＬＤＮ−１９３１８９（ＭｅｄＣｈｅｍ  Ｅｘｐｒｅｓｓ）またはＩＬ−６（Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ）で、３０分間（ウエスタンブロット）、６または２４時間（遺伝子発現）処理した。
【０１４３】
遺伝子発現マイクロアレイ解析の目的のため、ＲＮｅａｓｙ  Ｐｌｕｓキット（Ｑｉａｇｅｎ）を使用してＨｕｈ７細胞からＲＮＡを単離し、これに続いて、２１００  Ｂｉｏａｎａｌｙｚｅｒ（Ａｇｉｌｅｎｔ）を使用したＲＮＡ定量化および品質評価を行った。ヒトＨＴ１２ｖ４．０発現Ｂｅａｄｃｈｉｐ（Ｉｌｌｕｍｉｎａ）およびＩｌｌｕｍｉｎａｓのｉＳｃａｎ  Ｓｃａｎｎｅｒを使用して解析されるハイブリダイゼーションおよび遺伝子発現のため、ＲＮＡをビオチン標識ｃＲＮＡへと変換した。ｌｕｍｉパッケージ（Ｂｉｏｃｏｎｄｕｃｔｏｒ）を使用して生データを正規化し、ＬＩＭＭＡ（Ｂｉｏｃｏｎｄｕｃｔｏｒ）を使用して比較した。統計的有意性をｐ＜０．０５に設定した。マウスまたはヒトＥＲＦＥで処理した細胞の解析は、１２種の抑制された遺伝子を明らかにし（図３Ａ）、そのうち５種は、ＢＭＰ／ＳＭＡＤシグナリングの標的である  −  ＩＤ１、ＩＤ２、ＩＤ３、ＳＭＡＤ６およびＨＡＭＰ。ヘプシジン発現に影響する正準経路であるＪＡＫ／ＳＴＡＴ３経路の標的遺伝子に変化は観察されず、炎症性シグナリングの低下が、ＨＡＭＰ発現のＥｒｆｅ媒介性低下の一次ドライバーではないことを示す。
【０１４４】
（ｃ）ＲＮＡ単離、ｃＤＮＡ合成およびｑＲＴ−ＰＣＲ：いくつかのＢＭＰ標的遺伝子：ＨＡＭＰ、ＩＤ１、ＩＤ３、ＳＭＡＤ６およびＳＭＡＤ７の抑制をｑＲＴ−ＰＣＲによってさらに確認した。ＲＮｅａｓｙ  Ｐｌｕｓキット（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して細胞を溶解し、ＲＮＡを単離し、続いて、Ｎａｎｏｄｒｏｐ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）を使用してＲＮＡ定量化および品質評価を行った。Ｈｉｇｈ  Ｃａｐａｃｉｔｙ  ＲＮＡ−ｔｏ−ｃＤＮＡキット（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用してｃＤＮＡを合成した。製造業者の説明書に従って、目的の遺伝子に特異的な、Ｔａｑｍａｎ遺伝子発現マスターミックスおよび在庫品（ｉｎｖｅｎｔｏｒｉｅｄ）Ｔａｑｍａｎ遺伝子発現アッセイ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）による定量的リアルタイムＰＣＲを使用して遺伝子発現を評価した。図３Ｂに示すデータは、媒体またはマウスＥＲＦＥ（１０μｇ／ｍｌ）で処理されたＨｕｈ７細胞における５種の選択されたＢＭＰ／ＳＭＡＤ標的遺伝子およびＦＧＡ（ＪＡＫ／ＳＴＡＴ３標的遺伝子）に関する、ＱｕａｎｔＳｔｕｄｉｏ  ７  ＦｌｅｘリアルタイムＰＣＲ系を使用して行われたｑＲＴ−ＰＣＲによって測定された遺伝子発現を実証する。結論として、ＨＡＭＰの変化は、減少した炎症性シグナリングによって媒介されず、ＪＡＫ／ＳＴＡＴ３経路の標的遺伝子であるＦＧＡに変化は観察されなかった。
【０１４５】
（ｄ）ＳＭＡＤ１／５／８リン酸化によって測定されるＢＭＰ／ＳＭＡＤシグナリングにおけるＥＲＦＥ効果：ＢＭＰ／ＳＭＡＤシグナリングの抑制を確認するために、本出願人らは、ＨＡＭＰ上方調節をもたらすシグナルの伝達に要求されるＳＭＡＤ１／５／８のリン酸化を解析した。次の方法論に従ったウエスタンブロットによって解析を実行した：プロテアーゼ／ホスファターゼ阻害剤（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ）を含有するＲＩＰＡ緩衝液（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して、細胞を４℃で溶解した。ライセートを９５℃で変性させ、製造業者の説明書に従って１０％ＳＤＳポリアクリルアミドゲル（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）において分離した。Ｎｏｖｅｘ  Ｓｈａｒｐ  Ｐｒｅ−Ｓｔａｉｎｅｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｌａｄｄｅｒ（ｌｉｆｅ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用することによりタンパク質サイズを推定した。タンパク質をニトロセルロース膜に転写し、次いでミルク／ＴＢＳで１時間ブロッキングした。使用した抗体は、抗Ｐ−ＳＭＡＤ１／５（Ｓ４６３ｓ／４６５）／９（Ｓ４６５／４６７）（Ｃｅｌｌ  ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ  １３８２０Ｓ  １：５００）、抗Ｓｍａｄ１（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ  ６９４４Ｓ  １：５００）、抗β−アクチン−ペルオキシダーゼ（Ｓｉｇｍａ  Ａ３８５４  １：１００００）および抗ウサギＩｇＧ  ＨＲＰコンジュゲート（ＲｎＤ  ｓｙｓｔｅｍｓ  ＨＡＰ００８  １：５０００）であった。ＥＲＦＥは、ベースラインおよびＢＭＰ６刺激後の両方で、未処理細胞と比べてＳＭＡＤ１／５／８リン酸化の減少を引き起こすことが示された（図３Ｃ）。この場合、Ｈｕｈ７細胞は、マウスＥＲＦＥ（１０μｇ／ｍｌ）またはＢＭＰ６およびＬＤＮ（ＢＭＰの低分子阻害剤）（１００ｎＭ）で、単独でまたは組み合わせて３０分間処理し、ｐＳＭＡＤ／ＳＭＡＤ比値をデンシトメトリーによって計算した。エリスロフェロンは、未処理細胞と比べてＳＭＡＤリン酸化の減少を引き起こした（図３Ｄ）。さらに、エリスロフェロンも、ＢＭＰ６刺激に起因するリン酸化の増加を鈍らせた。
【０１４６】
まとめると、これらのデータは、エリスロフェロンが、ＢＭＰ／ＳＭＡＤシグナリングの抑制により肝ＨＡＭＰを抑制することを示唆する。
【０１４７】
ＨＡＭＰは、種々のリガンドによって刺激され得るため、本出願人らは、Ｃ２Ｃ１２  Ｂｒｅ−Ｌｕｃ細胞におけるＢＭＰ／ＳＭＡＤシグナリングアウトプットを測定することにより、様々なＢＭＰで処理した細胞におけるＥＲＦＥの効果をさらに検査した。Ｃ２Ｃ１２  Ｂｒｅ−Ｌｕｃ細胞を、マウスＥＲＦＥ濃度の勾配（７．５ｐＭ〜０．５μＭ）と組み合わせた２ｎＭのＢＭＰで２４時間処理し、各ウェルにおけるルミネセンスを測定した。データを、最大ルミネセンス（ＥＲＦＥなし）のパーセンテージに対して正規化し、これを図３Ｅに示す。本出願人らは、ＥＲＦＥの濃度増加に応答して、ＢＭＰ５、ＢＭＰ６およびＢＭＰ７によるＢＭＰシグナリングの活性化の用量依存性減少を観察し、ＢＭＰ２、ＢＭＰ４およびＢＭＰ９活性には効果がなく、この効果は、下で考察される通り、検査した異なる細胞型において見られた。類似のデータは、ＥＲＦＥおよびＢＭＰ２／６、ＢＭＰ５、ＢＭＰ６およびＢＭＰ７で処理した細胞におけるＨＡＭＰおよびＩＤ１の抑制を確認した、図３Ｆ。
【０１４８】
結論として、これらのデータは、ＥＲＦＥが、ＢＭＰ／ＳＭＡＤシグナリングを阻害し、ＢＭＰ５、ＢＭＰ６およびＢＭＰ７（およびある程度までＢＭＰ２／６）による活性化に特異的に影響を与え、ヘプシジン抑制をもたらすことを実証する。
【０１４９】
（ｅ）ＥＲＦＥは、主に、ＢＭＰ５、ＢＭＰ６およびＢＭＰ７を阻害することにより、種々の細胞型においてｉｎ−ｖｉｔｒｏでＢＭＰ／ＳＭＡＤシグナリングを抑制する。
選択されたＢＭＰにおけるＥＦＥの阻害効果を、３種の異なる細胞型、Ｃ２Ｃ１２、Ｈｕｈ７およびＨｅｐＧ２においてｉｎ−ｖｉｔｒｏで検査した。Ｈｕｈ７（図３Ｇ、図３Ｈ）およびＨｅｐＧ２（図３Ｊ、図３Ｋ）細胞を、無血清培地において２ｎＭのＢＭＰで単独でまたは１０μｇ／ｍｌのマウスＥＲＦＥと組み合わせて処理し、処理６時間後に解析した。ＨＡＭＰおよびＩＤ１の遺伝子発現をｑＲＴ−ＰＣＲによって測定した。結果を３回の独立した実験からの未処理細胞と比べた倍数変化として表現した。統計的有意性をＢＭＰ処理ペア毎に解析した（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、スチューデントｔ検定）。その上、本出願人らは、Ｃ２Ｃ１２  Ｂｒｅ−Ｌｕｃ細胞におけるＢＭＰ／ＳＭＡＤシグナリングアウトプットを測定することにより、様々なＢＭＰで処理した細胞におけるＥＲＦＥの効果を検査した（図３Ｅ）。Ｃ２Ｃ１２  Ｂｒｅ−Ｌｕｃ細胞を、マウスＥＲＦＥ濃度の勾配（７．５ｐＭ〜０．５μＭ）と組み合わせた２ｎＭのＢＭＰで２４時間処理し、各ウェルにおけるルミネセンスを測定した。
【０１５０】
ヒトＥＲＦＥは、ＮａｎｏＬｕｃ系におけるヘプシジン産生に用量依存性効果を有することがさらに示された。ＮａｎｏＬｕｃ細胞を実施例１に記載されている通りに調製し、２００００細胞／ウェルの密度でマルチウェルディッシュに播種した。ｍｏｎｏＦＣ−ｈｕＥｒｆｅを、出発濃度６００ｎＭから２倍希釈で系列希釈し、データを図３Ｌに示し、これから、ヘプシジンのＥＲＦＥ抑制が用量依存性（ｄｅｐｅｎｄａｎｔ）であることが結論付けられる。
【０１５１】
結論として、まとめると、これらのデータは、ＥＲＦＥが、ＢＭＰ５、ＢＭＰ６およびＢＭＰ７を阻害することによりＢＭＰ／ＳＭＡＤシグナリングを抑制すること、また、ヘプシジンの抑制が、用量依存性（ｄｅｐｅｎｄａｎｔ）であることを実証する。阻害作用は、種々の異なる細胞型において、ＢＭＰ２および４ならびにＢＭＰ２／６ヘテロ二量体に対しても見られた。
【０１５２】
（実施例４）
ＢＭＰ／ＳＭＡＤシグナリング経路は、ｉｎ−ｖｉｖｏでエリスロフェロンによって抑制される
（ａ）動物研究：Ｈａｒｌａｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、ＵＫから野生型雄Ｃ５７ＢＬ／６マウスを購入した。ＵＣ  ＤａｖｉｓにおけるＭｕｔａｎｔ  Ｍｏｕｓｅ  Ｒｅｇｉｏｎａｌ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅ  Ｃｅｎｔｅｒ（ＭＭＲＲＣ）から、混合型Ｓｖ１２９／Ｃ５７ＢＬ／６バックグラウンドにおけるＦａｍ１３２ｂ＋／−マウス由来の胚を得て（系統Ｂ６；１２９Ｓ５−Ｆａｍ１３２ｂｔｍ１Ｌｅｘ／Ｍｍｕｃｄ、ＩＤ  ＭＭＲＲＣ：０３２２８９−ＵＣＤ）、マーカー支援加速された戻し交配を使用してＣ５７ＢＬ／６バックグラウンドにおいて戻し交配した。ヘテロ接合体ペアを交配させて、ホモ接合型動物を生成し、これから、ノックアウトおよび野生型コロニーを維持した。動物は、Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｏｘｆｏｒｄにおける個々に換気されたケージに収容し、通常の固形飼料（１６３ｐｐｍの鉄、Ｓｐｅｃｉａｌ  Ｄｉｅｔｓ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ  ８０１７００）および水に自由にアクセスさせた。９〜１３週齢雄マウスにおいて全実験を行った。ＥＰＯ処理のため、マウスに、３日連続して毎日、水または媒体（水）における２００ＩＵ組換えヒトＥＰＯ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）を腹腔内注射し、最後のＥＰＯ注射の２４時間後に選別した。ＥＲＦＥ処理のため、マウスに、２００μｇの組換えマウスＥＲＦＥまたは媒体（生理食塩水）を静脈内注射し、処理３時間後に選別した。増加するＣＯ２濃度においてマウスを安楽死させた。
【０１５３】
（ｂ）血清鉄解析：マウス安楽死の直後に心臓穿刺によって血液を採集し、ＢＤ  ＥＤＴＡまたはＳＳＴ（血清）Ｍｉｃｒｏｔａｉｎｅｒチューブに採取した。ＢＤ  Ｍｉｃｒｏｔａｉｎｅｒ  ＳＳＴチューブ（Ｂｅｃｋｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）において、８０００×ｇにおける３分間の血餅の遠心分離によって血清を調製し、Ａｂｂｏｔｔ  Ａｒｃｈｉｔｅｃｔ  ｃ１６０００自動分析計（Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を使用した血清鉄定量化に使用した。
【０１５４】
（ｃ）組織非ヘム鉄測定：肝臓組織を４時間１００℃で乾燥させ、秤量し、１０％トリクロロ酢酸（ｔｒｉｃｈｏｌｏｒｏａｃｅｔｉｃ  ａｃｉｄ）（Ｓｉｇｍａ）／３０％塩酸（Ｓｉｇｍａ）において２０時間６５℃で消化した。１０％（ｗ／ｖ）トリクロロ酢酸／３０％塩酸混合物におけるクエン酸鉄アンモニウム（Ｓｉｇｍａ）の希釈系列を使用して検量線を作成した。０．１％（ｗ／ｖ）バソフェノールジスルホン酸（ｂａｔｈｏｐｈｅｎｏｌｄｉｓｕｌｐｈｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）（Ｓｉｇｍａ）／０．８％チオグリコール酸（Ｓｉｇｍａ）を含有する色素原試薬との反応後に５３５ｎｍにおける吸光度を測定することにより、比色測定により非ヘム鉄含有量を決定した。
【０１５５】
（ｄ）エリスロポエチンまたはＥＲＦＥを負荷したマウスは、ＢＭＰ標的遺伝子を下方調節する：ＷＴおよびＥＲＦＥ  ＫＯ雄マウス（１０〜１３週齢）に、３用量の２００ｕのＥＰＯを、２４時間毎に１用量で注射し、最後の注射の２４時間後に解析した。肝臓におけるＢＭＰ標的遺伝子の発現をｑＲＴ−ＰＣＲによって測定した。ＥＰＯは、Ｈａｍｐおよび他のＢＭＰ標的遺伝子（Ｉｄ１、Ｉｄ２、Ａｔｏｈ８およびＳｍａｄ７）を強く抑制し、ＢＭＰシグナリング活性の減少を示す（図４）。ＥＲＦＥ  ＫＯマウスにおいて、ＨａｍｐおよびＢＭＰ標的遺伝子の抑制が鈍らされまたは防止され、ＢＭＰシグナリングにおけるＥＰＯの効果が、ＥＲＦＥを要求することを確認する。
【０１５６】
ＢＭＰシグナリングにおけるＥＲＦＥ非依存性減少の観察される部分的な寄与は、赤芽球による鉄消費増加のための、ＥＰＯ処理マウスにおける血清鉄減少（図４）によって説明することができ、解析は、最後のＥＰＯ注射の２４時間後であり、血清鉄は、化学分析計において測定され、肝臓鉄は、比色分析アッセイを使用して測定された。
【０１５７】
肝ＢＭＰシグナリングにおけるＥＲＦＥおよび鉄の効果の間を区別するために、本出願人らは、ＷＴマウスにおける短期ＥＲＦＥ処理を行い（解析は、最後のＥＰＯ注射の３時間後であった）、９週齢ＷＴ雄マウスに、２００μｇのマウスＥＲＦＥ（ｍｕＥＲＦＥ  ＷＴ）またはヒトＥＲＦＥの１４アミノ酸Ｎ末端領域とのｍｏｎｏＦｃ融合体である不活性対照（Ｃｌｉｐ  ｈｕＥＲＦＥ）をｉ．ｖ．注射した。注射３時間後に、マウスを選別し、血清および肝臓鉄を測定した。血清および肝臓鉄は、ＥＲＦＥ注射によって影響されず（図５）、鉄レベルが、ＢＭＰシグナリング減少の観察される効果を駆動していないことを示す。その上、注射３時間後に、マウスを選別し、ＢＭＰ標的遺伝子の肝臓遺伝子発現の解析のために肝臓を収集した。この３時間の時点において、ＥＲＦＥは、ＨａｍｐおよびＢＭＰ標的遺伝子の発現を有意に低下させた（図５）。血清ヘプシジンレベルも、対照と比較してＥＲＦＥ投与動物において低下されたことが認められた。
【０１５８】
結論として、ＥＲＦＥは、特に、ＢＭＰ５、ＢＭＰ６およびＢＭＰ７を阻害することにより、鉄とは無関係に、ＢＭＰ／ＳＭＡＤシグナリングを抑制する。
【０１５９】
（実施例５）
エリスロフェロン活性は、ＥＲＦＥ球状Ｃ１ｑドメインによって媒介されない
エリスロフェロンは、Ｃ１ｑ／ＴＮＦ関連タンパク質（ＣＴＲＰ）ファミリーのメンバーであり、シグナルペプチド、Ｎ末端、コラーゲン様ドメイン、および補体タンパク質１ｑ（Ｃ１ｑ）に相同な球状Ｃ末端ドメインで構成される構造を含む。エリスロフェロンの作用機序を解析するために、本出願人らは、タンパク質の異なるサブユニットの活性を調査した。本出願人らは、Ｃ１ｑドメイン単独で構成されたタンパク質を生成し、その活性を全長タンパク質と比較した。本出願人らは、球状ドメインそれ自体は、Ｈｕｈ７細胞におけるＨＡＭＰおよびＩＤ１の抑制に十分ではないことを観察した（図６Ａ）。効果の欠如が、Ｎ末端ドメインの欠如による構造的制約によるものであるか検査するために、本出願人らは、Ｃ１ｑ三量体（ＣＴＲＰファミリーの他のメンバーにおける最も一般的な配置）、ならびにアディポネクチンのＮ末端（ＣＴＲＰファミリーの構造的に関連したメンバー）およびエリスロフェロンのＣ１ｑドメインのハイブリッド  −  アディポフェロンを生成した（図６Ｂ）。
【０１６０】
結論として、上で検査したタンパク質のうち、ＨＡＭＰを抑制できたものはなく、球状ドメインが、エリスロフェロン活性に要求されないことを確認する。
【０１６１】
（実施例６）
ＥＲＦＥ活性は、活性Ｎ末端ドメインによって媒介される
ＰｒｏＰソフトウェアを使用したヒトエリスロフェロンの配列解析は、２個のフューリン切断部位を予測した：位置４２におけるＲＡＲＲおよび位置２１２におけるＲＬＲＲ（図７Ａ）。ＲＬＲＲ部位は、マウスオルソログ（位置１９８）において保存されている。ＲＡＲＲ部位のＡＡＡＡへの突然変異は、フューリンによる処理後にヒトエリスロフェロンのクリッピングを低下させ（図７Ｂ）、矢印は、ＥＲＦＥを示し、活性フューリン切断部位の存在を確認する。このｍｏｎｏＦＣ−ｈｕＥｒｆｅ  Ａ４コンストラクトは、ヘプシジン発現を有効に抑制することが示された（図８ａ）。ＥＲＦＥの機能に対するフューリン切断の潜在的寄与を評価するために、本出願人らは、フューリン切断によって作製され得る異なるエリスロフェロンサブユニット（図８Ａ、図８Ｂ）ならびにフューリン−切断部位突然変異体（ＡＡＡＡ）および野生型タンパク質の活性を比較した。エリスロフェロンサブユニットの検査により、エリスロフェロンの触媒部位としてＮ末端ドメインを同定することが可能になった：タンパク質の当該部分を含有するサブユニットのみ（Ｆ２、Ｆ３およびＦ４）が、ＨＡＭＰおよびＩＤ１を抑制することができた。先に示した通り（図６Ａ）、Ｃ１ｑドメインのみを含有するサブユニット（Ｆ５）は不活性であった。
【０１６２】
結論として、ＥＲＦＥの潜在的フューリン切断ペプチドのｉｎ−ｓｉｌｉｃｏ設計を用いて、推定上のフューリン切断されるペプチドの合成をガイドし、これらのペプチドは、ＥＲＦＥ活性の原因となる活性部位が、Ｎ末端ドメインに位置することを示した。
【０１６３】
Ｎ末端ドメインが、エリスロフェロンの活性に要求されることをさらに示すために、本出願人らは、Ｃ５７ＢＬ／６マウスにＦ２サブユニット（Ｎ末端ドメインのみを含有）を注射し、肝臓におけるＨａｍｐおよび他のＢＭＰ／ＳＭＡＤ標的遺伝子の発現を解析した。処理３時間後に、本出願人らは、Ｈａｍｐ、ならびにＩｄ１、Ｉｄ２、Ｓｍａｄ７およびＡｔｏｈ８の減少を観察した（図９Ａ）。Ｆｇａの変化がないことは、エリスロフェロン注射が、炎症性反応を引き起こさないことを示す。本出願人らは、血清ヘプシジンタンパク質の減少傾向およびこの時点では血清鉄に変化がないことも観察した（図９Ｂ）。
【０１６４】
結論として、上で観察された遺伝子発現パターンは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで観察された本出願人らのデータを再現し、エリスロフェロン、特に、Ｎ末端ドメインが、ＢＭＰ／ＳＭＤシグナリングを抑制し、ヘプシジンの抑制をもたらすことを確認する。
【０１６５】
（実施例７）
中和抗ＥＲＦＥ抗体は、ＥＲＦＥ  ＢＭＰ相互作用に干渉する
（ａ）ビオチン化マウスＥＲＦＥへのクリプテート標識抗ＥＲＦＥ抗体の結合を破壊するＢＭＰの能力の調査：ＦＲＥＴアッセイを用いて、ＥＲＦＥおよび中和抗ＥＲＦＥ抗体（Ａｂ  １５．１）の間の結合を破壊するＢＭＰの能力を決定した。アッセイセットアップは、ウェル当たり５０ｎｇとなるような１：１０００の一定濃度のストレプトアビジンＸＬ６６５（ｃｉｓｂｉｏ  ａｓｓａｙｓ）、ビオチン化ｍｏｎｏＦＣ−ｍｕＥｒｆｅ（９μＭ）、すなわち、単量体ＦＣマウスＥＲＦＥ融合体、１５ｎＭのクリプテート標識抗ＥＲＦＥ抗体（Ａｂ  １５．１）を含んだ。各反応ウェルは、次のものを含む総容量２０μｌを含有した：５μｌストレプトアビジンＸＬ６６５、５μｌビオチン化ｍｏｎｏＦＣ−ｍｕＥｒｆｅ、５μｌクリプテート標識抗ＥＲＦＥ抗体  １５．１、２５０ｎＭから０．３９ｎＭへの用量設定としての５μｌ競合抗原、各濃度における全抗原を２回複製してアッセイした。反応液を３時間室温で放置し、次いで６６５ｎＭおよび６１５ｎＭにおける吸光度をＥｎｖｉｓｉｏｎで読み取った。ＢＭＰ２／６ヘテロ二量体、ＢＭＰ５、ＢＭＰ６およびＢＭＰ７は、ビオチン化ｍｏｎｏＦＣ−ｍｕＥｒｆｅへの結合に関する、クリプテート標識抗ＥＲＦＥ抗体との測定可能な競合を実証する（図１０Ａ）。ＢＭＰ４は、結合に関して中和抗ＥＲＦＥ抗体と有効に競合しなかった。対照として非中和抗ＥＲＦＥ抗体を使用したアッセイも行った。
【０１６６】
結論として、ＢＭＰ、本明細書では例としてＢＭＰ２／６ヘテロ二量体、ＢＭＰ５、ＢＭＰ６およびＢＭＰ７は、ＥＲＦＥに結合し、ＥＲＦＥへの結合に関して中和抗ＥＲＦＥ抗体と競合することができるが、ＢＭＰ４はできず、効果は、非中和対照抗ＥＲＦＥ抗体では見られなかった。
【０１６７】
（ｂ）中和抗ＥＲＦＥ抗体は、用量依存性様式でヘプシジン産生のＥＲＦＥ抑制を阻害することが実証された：ＮａｎｏＬｕｃ細胞を実施例１に記載されている通りに調製し、２００００細胞／ウェルの密度でマルチウェルディッシュに播種した。中和抗ＥＲＦＥ抗体（Ａｂ  １５．１）を、出発濃度５００ｎＭから３倍希釈で系列希釈し、６２５ｐＭに一定濃度でＢＭＰ６を維持し、２０ｎＭの一定濃度でｍｏｎｏＦＣ−ｈｕＥｒｆｅを維持し、データを図１０Ｂに示す。
【０１６８】
結論として、ＢＭＰ２／６、５、６および７について本明細書で示す通り、中和抗ＥＲＦＥ抗体は、ＥＲＦＥおよびＢＭＰの間の相互作用を遮断し、ＢＭＰ阻害を防止することができ、これは、用量依存性（ｄｅｐｅｎｄａｎｔ）様式で為される。
【０１６９】
（実施例９）
中和抗ＥＲＦＥ抗体は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでＢＭＰ５／６／７におけるＥＲＦＥ活性を遮断する
ＢＭＰ５、６または７（２ｎＭ）、マウスＥＲＦＥ（１μｇ／ｍｌ）および抗ＥＲＦＥ抗体１５．１（１０μｇ／ｍｌ）で、単独でまたは組み合わせて６時間処理したＨＵＨ７細胞。ＨＡＭＰおよびＩＤ１遺伝子発現をｑＲＴ−ＰＣＲによって測定し、無処理細胞と比べた倍数変化として表現した、図１１Ａおよび図１１Ｂ。
【０１７０】
結論として、ＢＭＰ５、６および７ならびに抗体１５．１について本明細書で示す通り、中和抗ＥＲＦＥ抗体は、ＥＲＦＥおよびＢＭＰの間の相互作用を遮断し、ＢＭＰ阻害を防止することができる。
【０１７１】
（実施例１０）
臀部ｖｓ腹部前脂肪細胞におけるＥＲＦＥの効果の調査：
（ａ）初代前脂肪細胞単離。臍のレベルで（ＡＳＡＴ）および臀部領域の上部、外部四分円（ＧＳＡＴ）から針吸引により局所的麻酔薬（１％リグノカイン）下で採集された白色脂肪組織（ＷＡＴ）生検からの単離によって、ヒト初代前脂肪細胞を調製した。ハサミを使用して機械的に刻み、ハンクス緩衝塩溶液で２回洗浄して、混入血液を除去し、次いでハンクス緩衝塩溶液における１ｍｇ／ｍｌコラゲナーゼ（Ｒｏｃｈｅ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅ）において、振盪ウォーターバス（９０ｒｐｍ）にて３７℃で４５分間酵素消化することにより、ＡＳＡＴおよびＧＳＡＴ生検から初代前脂肪細胞を単離した。消化された組織を１０００ｒｐｍで５分間４℃にて遠心分離した。間質血管細胞を含有するペレットを、１７．５ｍＭグルコースを含有し、１０％ウシ胎仔血清、０．２５ｎｇ／ｍｌ線維芽細胞増殖因子、２ｍＭグルタミン、１００ユニット／ｍｌペニシリンおよび１００μｇ／ｍｌストレプトマイシンを補充したダルベッコ変法イーグル培地／Ｆ１２  Ｈａｍの栄養素混合物（ｖ／ｖ、１：１）に再懸濁した。ＡＰＡＤおよびＧＰＡＤ細胞の細胞ストックを調製し、将来の研究のために液体窒素中に貯蔵した。
【０１７２】
（ｂ）前脂肪細胞の細胞株の生成：ヒトテロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）およびヒトパピローマウイルス１６型Ｅ７オンコプロテイン（ＨＰＶ１６−Ｅ７）を、それぞれｐＢＡＢＥ−ｎｅｏ−ｈＴＥＲＴおよびｐＧＥＸ２Ｔ  Ｅ７プラスミド（Ａｄｄｇｅｎｅ）からｐＬｅｎｔｉ６．３／Ｖ５−ＤＥＳＴレンチウイルス発現ベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）へとサブクローニングした。ｈＴＥＲＴおよびＨＰＶ１６−Ｅ７の構成的発現のため、ＶｉｒａＰｏｗｅｒ  ＨｉＰｅｒｆｏｒｍレンチウイルス発現系（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して、２９３ＦＴ産生株細胞においてレンチウイルス粒子を生成した。１°  ＡＰＡＤおよび１°  ＧＰＡＤ細胞をヘキサジメトリンブロマイド（８μｇ／ｍｌ）で前処理し、次いでｈＴＥＲＴレンチウイルス粒子により形質導入した。ｈＴＥＲＴを構成的に発現する前脂肪細胞を選択するために、ブラストサイジン（２μｇ／ｍｌ）の存在下で細胞を培養した。非形質導入細胞のブラストサイジン処理を使用して、ブラストサイジンの最適致死濃度を決定した。次に、ブラストサイジン抵抗性細胞に、ＨＰＶ１６−Ｅ７レンチウイルス粒子を形質導入した。ｈＴＥＲＴおよびＨＰＶ１６−Ｅ７の発現は、ｐＬｅｎｔｉ６．３／Ｖ５ベクター内のヒトサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）最初期プロモーターによって駆動された。培養培地にブラストサイジン（２μｇ／ｍｌ）を添加しつつ、ヒト初代前脂肪細胞について記載されている通りにｉｍＡＰＡＤおよびｉｍＧＰＡＤ細胞を培養した。
【０１７３】
（ｃ）ウエスタンブロット：細胞を１．５×１０＾５細胞／ウェル（６ウェルフォーマット）で播種し、２４時間培養し、次いで０．２５ｎｇ／ｍｌ線維芽細胞増殖因子（Ｓｉｇｍａ）；２ｍＭ  Ｌ−グルタミン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）；ならびに１００ユニット／ｍｌペニシリンおよび１００μｇ／ｍｌストレプトマイシン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を補充した無血清成長培地（ダルベッコ変法イーグル培地／栄養素混合物Ｆ−１２  Ｈａｍ（ｖ／ｖ、１：１；Ｓｉｇｍａ））において一晩インキュベートした。次に、細胞を、無血清培地に溶解したＢＭＰ２および／またはマウス組換えＥＲＦＥ（または媒体）と共に３０分間インキュベートし、プロテアーゼおよびホスファターゼ阻害剤を補充した１％ＮＰ−４０溶解緩衝液においてタンパク質のために収集し、その後、リン酸および総ＳＭＡＤ１／５／８ならびにｂ−アクチンのウエスタンブロッティングのために加工した。ウエスタンブロットの結果を図１２Ａおよび図１２Ｂに示す。
【０１７４】
結論として、臀部および腹部細胞型の両方におけるＳＭＡＤ１／５／８リン酸化の増加によって観察される通り、ＢＭＰ２による処理は、ＢＭＰシグナリングを増強したが、この効果は、腹部脂肪細胞において排他的に、ＥＲＦＥの添加によって縮小された。したがってデータは、脂肪分布におけるＥＲＦＥ  ＢＭＰ相互作用の潜在的効果を示唆する。
【０１７５】
（実施例１１）
ｉｎ  ｖｉｖｏにおけるＮＥＦＡおよびＴＡＧの放出におけるＥＲＦＥの効果の調査
Ｃ５７ＢＬ／６バックグラウンドの、１０〜１３週齢の野生型およびＦａｍ１３２ｂ（ＥＲＦＥ）ノックアウト雄マウスに、２００ユニットの組換えヒトエリスロポエチン（ＥＰＯ）または媒体としての水をｉ．ｐ．注射した。ＥＰＯ注射は、野生型におけるＥＲＦＥ産生を高度に増加させることが示された。連続した日に３回の注射（０時間、２４時間および４８時間）を与えたマウスを、最後の注射の２４時間後に選別した（７２時間）。血液を心臓穿刺によって採取し、血漿分離器チューブ（ＢＤ  Ｍｉｃｒｏｔａｉｎｅｒ）に入れ、８０００ｇで３分間、４Ｃにて遠心分離した。トリグリセリド（ＴＡＧ）および非エステル型脂肪酸（ＮＥＦＡ）の測定のため、各血漿を２個の予冷したＥｐｐｅｎｄｏｒｆチューブに分離した。最終濃度３０ｕｇ／ｍｌのテトラヒドロリパスタチン（Ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｌｉｐａｓｔａｔｉｎ）をＮＥＦＡチューブに添加して、脂肪分解を防止した。ＩＬａｂ  ６００  Ｍｕｌｔｉａｎａｌｙｓｅｒ（Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔａｔｉｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｗａｒｒｉｎｇｔｏｎ、Ｕ．Ｋ．）を使用して、血漿トリグリセリドおよびＮＥＦＡ濃度を酵素により決定した。図１３Ａおよび図１３Ｂに示すデータは、ＷＴマウスにおけるＥＰＯによる処理が、血清ＮＥＦＡを有意に増加させた一方、この効果が、ＥＲＦＥ  ＫＯマウスでは観察されなかったことを実証し、血液へのＮＥＦＡの放出がＥＲＦＥ媒介性であることを示唆する。血清ＮＥＦＡの増加は、ヒトにおける肥満、糖尿病およびＮＡＦＬＤの発症に関連付けられてきた。血漿ＴＡＧの変化は観察されなかった。
【０１７６】
結論として、本データは、ＢＭＰ  ＥＲＦＥ相互作用が、血清ＮＥＦＡをモジュレートし、ヒトにおける肥満、糖尿病およびＮＡＦＬＤの発症に関係付けられることを示す。
【０１７７】
配列
ＭＡＰＡＲＲＰＡＧＡＲＬＬＬＶＹＡＧＬＬＡＡＡＡＡＧＬＧＳＰＥＰＧＡＰＳＲＳＲＡＲＲＥＰＰＰＧＮＥＬＰＲＧＰＧＥＳＲＡＧＰＡＡＲＰＰＥＰＴＡＥＲＡＨＳＶＤＰＲＤＡＷＭＬＦＶＲＱＳＤＫＧＶＮＧＫＫＲＳＲＧＫＡＫＫＬＫＦＧＬＰＧＰＰＧＰＰＧＰＱＧＰＰＧＰＩＩＰＰＥＡＬＬＫＥＦＱＬＬＬＫＧＡＶＲＱＲＥＲＡＥＰＥＰＣＴＣＧＰＡＧＰＶＡＡＳＬＡＰＶＳＡＴＡＧＥＤＤＤＤＶＶＧＤＶＬＡＬＬＡＡＰＬＡＰＧＰＲＡＰＲＶＥＡＡＦＬＣＲＬＲＲＤＡＬＶＥＲＲＡＬＨＥＬＧＶＹＹＬＰＤＡＥＧＡＦＲＲＧＰＧＬＮＬＴＳＧＱＹＲＡＰＶＡＧＦＹＡＬＡＡＴＬＨＶＡＬＧＥＰＰＲＲＧＰＰＲＰＲＤＨＬＲＬＬＩＣＩＱＳＲＣＱＲＮＡＳＬＥＡＩＭＧＬＥＳＳＳＥＬＦＴＩＳＶＮＧＶＬＹＬＱＭＧＱＷＴＳＶＦＬＤＮＡＳＧＣＳＬＴＶＲＳＧＳＨＦＳＡＶＬＬＧＶ、配列番号１  −  ［ＧｅｎＢａｎｋ：  ＡＨＬ８４１６５．１  −  エリスロフェロンヒト（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）］
【０１７８】
ＭＡＳＲＲＰＶＧＡＲＴＬＬＡＣＡＳＬＬＡＡＭＧＬＧＶＰＥＳＡＥＰＶＧＴＨＡＲＰＱＰＰＧＡＥＬＰＡＰＰＡＮＳＰＰＥＰＩＡＨＡＨＳＶＤＰＲＤＡＷＭＬＦＶＫＱＳＤＫＧＩＮＳＫＲＲＳＫＡＲＲＬＫＬＧＬＰＧＰＰＧＰＰＧＰＱＧＰＰＧＰＦＩＰＳＥＶＬＬＫＥＦＱＬＬＬＫＧＡＶＲＱＲＥＳＨＬＥＨＣＴＲＤＬＰＡＳＧＳＰＳＲＶＰＡＡＱＥＬＤＳＱＤＰＧＡＬＬＡＬＬＡＡＴＬＡＱＧＰＲＡＰＲＶＥＡＡＦＨＣＲＬＲＲＤＶＱＶＤＲＲＡＬＨＥＬＧＩＹＹＬＰＥＶＥＧＡＦＨＲＧＰＧＬＮＬＴＳＧＱＹＴＡＰＶＡＧＦＹＡＬＡＡＴＬＨＶＡＬＴＥＱＰＲＫＧＰＴＲＰＲＤＲＬＲＬＬＩＣＩＱＳＬＣＱＨＮＡＳＬＥＴＶＭＧＬＥＮＳＳＥＬＦＩＳＶＮＧＶＬＹＬＱＡＧＨＹＳＶＦＬＤＮＡＳＧＳＳＬＴＶＲＳＧＳＨＦＳＡＩＬＬＧＬ、配列番号２  −  ［エリスロフェロンマウス］
【０１７９】
ＡＡＰＬＡＰＧＰＲＡＰＲＶＥＡＡＦＬＣＲＬＲＲＤＡＬＶＥＲＲＡＬＨＥＬＧＶＹＹＬＰＤＡＥＧＡＦＲＲＧＰＧＬＮＬＴＳＧＱＹＲＡＰＶＡＧＦＹＡＬＡＡＴＬＨＶＡＬＧＥＰＰＲＲＧＰＰＲＰＲＤＨＬＲＬＬＩＣＩＱＳＲＣＱＲＮＡＳＬＥＡＩＭＧＬＥＳＳＳＥＬＦＴＩＳＶＮＧＶＬＹＬＱＭＧＱＷＴＳＶＦＬＤＮＡＳＧＣＳＬＴＶＲＳＧＳＨＦＳＡＶＬＬＧＶ、配列番号３、ＴＮＦ様ドメイン、ＴＮＦＤ（組織壊死因子様ドメイン）、配列番号１のアミノ酸位置１９０〜３５４
【０１８０】
ＰＧＰＰＧＰＱＧＰＰＧＰＩＩＰＰＥＡＬＬＫＥＦＱＬＬＬＫＧＡＶＲＱＲＥＲＡＥＰＥＰＣＴＣＧＰＡＧＰＶＡＡＳＬＡＰＶＳＡＴＡＧＥＤＤＤＤＶＶＧＤＶＬＡＬＬ、配列番号４、ＮＴＤ２（Ｎ末端ドメイン２）、配列番号１のアミノ酸位置１１４〜１８９
【０１８１】
ＫＫＲＳＲＧＫＡＫＫＬＫＦＧＬＰＧＰ、配列番号５  −  ＣＤ（コラーゲンドメイン）、［アミノ酸位置９６〜１１３］
【０１８２】
ＡＧＬＧＳＰＥＰＧＡＰＳＲＳＲＡＲＲＥＰＰＰＧＮＥＬＰＲＧＰＧＥＳＲＡＧＰＡＡＲＰＰＥＰＴＡＥＲＡＨＳＶＤＰＲＤＡＷＭＬＦＶＲＱＳＤＫＧＶＮＧ、配列番号６  −  ＮＴＤ１（Ｎ末端ドメイン１）［配列番号１のアミノ酸位置２４〜９５］
【０１８３】
ＭＡＰＡＲＲＰＡＧＡＲＬＬＬＶＹＡＧＬＬＡＡＡＡ、配列番号７  −  ＳＰ（シグナルペプチドドメイン）、配列番号１のアミノ酸位置１〜２３
【０１８４】
ＧＰＲＡＰＲＶＥＡＡＦ、配列番号８；
ＬＬＫＥＦＱＬＬＬＫＧＡＶＲＱＲＥ、配列番号９；
ＧＬＰＧＰＰＧＰＰＧＰＱＧＰＰＧＰ、配列番号１０；
ＡＨＳＶＤＰＲＤＡＷＭＬＦＶＸＱＳＤＫＧＸＮ、配列番号１１
ＡＨＳＶＤＰＲＤＡＷＭＬＦＶ、配列番号１２
ＡＨＳＶＤＰＲＤＡＷＭＬＦＶＲＱＳＤＫＧＶＮ、配列番号１３
ＲＤＡＷＦＶＲＱ  ［配列番号１４］
ＨＳＶＤＰＲＤＡＷＭ  ［配列番号１５］
ＤＰＲＤＡＷＦＶ  ［配列番号１６］
ＤＰＲＤＡＷＭＬＦＶ  ［配列番号１７］
【０１８５】
抗ＥＲＦＥ抗体１５．１重鎖ＣＤＲ
ＣＤＲＨ１．  ＴＤＹＳＭＨ  ［配列番号１８］
ＣＤＲＨ２．  ＹＩＮＰＮＳＧＧＴＳＹＮＱＫＦＫＧ  ［配列番号１９］
ＣＤＲＨ３．  ＹＧＹＤＤＹ  ［配列番号２０］
【０１８６】
抗ＥＲＦＥ抗体１５．１軽鎖ＣＤＲ
ＣＤＲＬ１．  ＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥ  ［配列番号２１］
ＣＤＲＬ２．  ＫＶＳＮＲＦＳ  ［配列番号２２］
ＣＤＲＬ３．  ＦＱＧＳＨＶＰＬＴ  ［配列番号２３］
【０１８７】
抗ＥＲＦＥ抗体１５．１可変重鎖  −  ＣＤＲに下線
ＥＶＱＬＱＱＳＧＰＥ  ＬＶＫＰＧＡＳＶＫＭ  ＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴ  ＤＹＳＭＨＷＶＫＱＳ  ＨＧＫＳＬＥＷＩＧＹ  ＩＮＰＮＳＧＧＴＳＹ  ＮＱＫＦＫＧＫＡＴＬ  ＴＶＮＫＳＳＳＴＡＹ  ＭＥＬＲＳＬＴＳＥＤ  ＳＡＶＹＹＣＶＰＹＧ  ＹＤＤＹＷＧＱＧＴＴ  ＬＴＶＳＳ
［配列番号２４］
【０１８８】
抗ＥＲＦＥ抗体１５．１可変軽鎖  −  ＣＤＲに下線
ＤＶＬＭＴＱＴＰＬＳ  ＬＰＶＳＬＧＤＱＶＳ  ＩＳＣＲＳＳＱＳＩＶ  ＨＳＮＧＮＴＹＬＥＷ  ＹＬＱＫＰＧＱＳＰＫ  ＬＬＩＹＫＶＳＮＲＦ  ＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳ  ＧＳＧＴＤＦＴＬＲＩ  ＴＲＶＡＡＥＤＬＧＶ  ＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰ  ＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥ  ＬＫＲ  ［配列番号２５］
【０１８９】
抗ＥＲＦＥ抗体１５．１重鎖  −  ＣＤＲに下線
ＥＶＱＬＱＱＳＧＰＥ  ＬＶＫＰＧＡＳＶＫＭ  ＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴ  ＤＹＳＭＨＷＶＫＱＳ  ＨＧＫＳＬＥＷＩＧＹ  ＩＮＰＮＳＧＧＴＳＹ  ＮＱＫＦＫＧＫＡＴＬ  ＴＶＮＫＳＳＳＴＡＹ  ＭＥＬＲＳＬＴＳＥＤ  ＳＡＶＹＹＣＶＰＹＧ  ＹＤＤＹＷＧＱＧＴＴ  ＬＴＶＳＳＡＫＴＴＡ  ＰＳＶＹＰＬＡＰＶＣ  ＧＤＴＴＧＳＳＶＴＬ  ＧＣＬＶＫＧＹＦＰＥ  ＰＶＴＬＴＷＮＳＧＳ  ＬＳＳＧＶＨＴＦＰＡ  ＶＬＱＳＤＬＹＴＬＳ  ＳＳＶＴＶＴＳＳＴＷ  ＰＳＱＳＩＴＣＮＶＡ  ＨＰＡＳＳＴＫＶＤＫ  ＫＩＥＰＲＧＰＴＩＫ  ＰＣＰＰＣＫＣＰＡＰ  ＮＬＥＧＧＰＳＶＦＩ  ＦＰＰＫＩＫＤＶＬＭ  ＩＳＬＳＰＩＶＴＣＶ  ＶＶＤＶＳＥＤＤＰＤ  ＶＱＩＳＷＦＶＮＮＶ  ＥＶＨＴＡＱＴＱＴＨ  ＲＥＤＹＮＳＴＬＲＶ  ＶＳＡＬＰＩＱＨＱＤ  ＷＭＳＧＫＡＦＡＣＡ  ＶＮＮＫＤＬＰＡＰＩ  ＥＲＴＩＳＫＰＫＧＳ  ＶＲＡＰＱＶＹＶＬＰ  ＰＰＥＥＥＭＴＫＫＱ  ＶＴＬＴＣＭＶＴＤＦ  ＭＰＥＤＩＹＶＥＷＴ  ＮＮＧＫＴＥＬＮＹＫ  ＮＴＥＰＶＬＤＳＤＧ  ＳＹＦＭＹＳＫＬＲＶ  ＥＫＫＮＷＶＥＲＮＳ  ＹＳＣＳＶＶＨＥＧＬ  ＨＮＨＨＴＴＫＳＦＳ  ＲＴＰＧ  ［配列番号２６］
【０１９０】
抗ＥＲＦＥ抗体１５．１軽鎖  −  ＣＤＲに下線
ＤＶＬＭＴＱＴＰＬＳ  ＬＰＶＳＬＧＤＱＶＳ  ＩＳＣＲＳＳＱＳＩＶ  ＨＳＮＧＮＴＹＬＥＷ  ＹＬＱＫＰＧＱＳＰＫ  ＬＬＩＹＫＶＳＮＲＦ  ＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳ  ＧＳＧＴＤＦＴＬＲＩ  ＴＲＶＡＡＥＤＬＧＶ  ＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰ  ＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥ  ＬＫＲＴＤＡＡＰＴＶ  ＳＩＦＰＰＳＳＥＱＬ  ＴＳＧＧＡＳＶＶＣＦ  ＬＮＮＦＹＰＫＤＩＮ  ＶＫＷＫＩＤＧＳＥＲ  ＱＮＧＶＬＮＳＷＴＤ  ＱＤＳＫＤＳＴＹＳＭ  ＳＳＴＬＴＬＴＫＤＥ  ＹＥＲＨＮＳＹＴＣＥ  ＡＴＨＫＴＳＴＳＰＩ  ＶＫＳＦＮＲＮＥＣ  ［配列番号２７］
【０１９１】
発明の記述
１．ＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニストが、
（ｉ）ＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニストの活性を防止または阻害する、
（ｉｉ）ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチド、およびＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニストの間の相互作用を防止または阻害する、
（ｉｉｉ）ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチド、およびＥＲＦＥまたはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドの間の相互作用を防止または阻害する、
（ｉｖ）ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチド、およびＢＭＰ受容体の間の相互作用を防止または阻害する、
（ｖ）ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチド、およびＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニストの間の相互作用を増強する、
（ｖｉ）ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチド、およびＥＲＦＥまたはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドの間の相互作用を増強する、
（ｖｉｉ）ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチド、およびＢＭＰ受容体の間の相互作用を増強する、
（ｖｉｉｉ）ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドに結合し、それとアゴニストもしくはアンタゴニストとの相互作用および／またはアゴニストもしくはアンタゴニストによる阻害もしくは活性化を防止する、
（ｉｘ）ＢＭＰのアゴニストまたはアンタゴニストに結合し、それとＢＭＰもしくはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドとの相互作用および／またはＢＭＰもしくはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドの阻害もしくは活性化を防止する、
（ｘ）ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドに結合し、それとＥＲＦＥもしくはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドとの相互作用および／またはＥＲＦＥもしくはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドによる阻害を防止する、
（ｘｉ）ＥＲＦＥまたはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドに結合し、それとＢＭＰもしくはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドとの相互作用、および／またはＢＭＰ活性の阻害を防止または阻害する、
（ｘｉｉ）ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドに結合し、それとＥＲＦＥもしくはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドとの相互作用および／またはＥＲＦＥもしくはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドによる阻害を増強する、
（ｘｉｉｉ）ＥＲＦＥまたはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドに結合し、それとＢＭＰとの相互作用および／またはＢＭＰ活性の阻害を増強する、
（ｘｉｖ）ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドに結合し、それとＢＭＰ受容体との相互作用を防止または阻害する、
（ｘｖ）ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドに結合し、それとＢＭＰ受容体との相互作用を増強する、
（ｘｖｉ）ＢＭＰ受容体に結合し、それとＢＭＰもしくはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドとの相互作用を防止または阻害する、
（ｘｖｉｉ）ＢＭＰ受容体に結合し、それとＢＭＰもしくはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドとの相互作用を増強する、
鉄代謝の疾患の処置における使用のためのＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニスト。
【０１９２】
２．ＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニストが、アゴニストであり、アゴニストが、
（ａ）ＢＭＰもしくＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチド、およびＥＲＦＥもしくはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドの間の相互作用を阻害する、および／またはＥＲＦＥもしくはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドによるＢＭＰ活性の阻害を阻害する、
（ｂ）ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドに結合し、それとアンタゴニストとの相互作用および／またはアンタゴニストによる阻害を防止する、
（ｃ）ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドのアンタゴニストに結合し、それとＢＭＰとの相互作用および／またはＢＭＰの阻害を防止する、
（ｄ）ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドに結合し、それとＥＲＦＥもしくはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドとの相互作用および／またはＥＲＦＥもしくはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドによる阻害を防止する、
（ｅ）ＥＲＦＥまたはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドに結合し、それとＢＭＰもしくはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドとの相互作用、および／またはＢＭＰ活性の阻害を防止または阻害する、
（ｆ）ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドに結合し、それとＢＭＰ受容体との相互作用を増強する、または
（ｇ）ＢＭＰ受容体に結合し、それとそのＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドとの相互作用を増強する、
記述１に記載の使用のためのＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニスト。
【０１９３】
３．ＢＭＰが、
（ｉ）ＢＭＰ２、２／６ヘテロ二量体、３、４、５、６、７、８ａ、８ｂ、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５のうちいずれか１種または複数、
（ｉｉ）ＢＭＰ２／６ヘテロ二量体、ＢＭＰ５、ＢＭＰ６、ＢＭＰ７のうちいずれか１種または複数、
（ｉｉｉ）ＢＭＰ５、ＢＭＰ６、ＢＭＰ７のうちいずれか１種または複数、
（ｉｖ）（ａ）ＢＭＰ２、ＢＭＰ４、（ｂ）ＢＭＰ２、（ｃ）ＢＭＰ４、（ｄ）ＢＭＰ５、（ｅ）ＢＭＰ６、（ｆ）ＢＭＰ７のうちいずれか１種または複数、
（ｖ）（ａ）ＢＭＰ２、（ｂ）ＢＭＰ２／６ヘテロ二量体、（ｃ）ＢＭＰ４、（ｖ）ＢＭＰ５、（ｂ）ＢＭＰ６または（ｆ）ＢＭＰ７のうちいずれか１種または複数、
（ｖｉ）（ａ）ＢＭＰ２、（ｂ）ＢＭＰ２／６または（ｃ）ＢＭＰ４のうちいずれか１種または複数
から選択される、記述１または２に記載の使用のためのＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニスト。
【０１９４】
４．場合により、約１０、１、０．１、０．０１もしくは０．００１ｎＭまたはそれ未満の結合定数またはＫＤで、（ａ）ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチド、（ｂ）ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドのアゴニストまたはアンタゴニスト、（ｃ）ＥＲＦＥまたはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチド、（ｄ）ＢＭＰ受容体に特異的におよび／または選択的に結合することができる、記述１〜３のいずれかに記載の使用のためのＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニスト。
【０１９５】
５．場合により、約１０、１、０．１、０．０１もしくは０．００１ｎＭまたはそれ未満のＩＣ５０または阻害定数（Ｋｉ）で、（ａ）ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドのアゴニストまたはアンタゴニスト、（ｂ）ＢＭＰ受容体、（ｃ）ＥＲＦＥまたはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドのうちいずれか１種または複数への、ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドの結合、または約２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、２００倍のいずれかによる活性の増強を特異的におよび／または選択的に阻害または増強することができる、記述１〜４のいずれかに記載の使用のためのＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニスト。
【０１９６】
６．場合により、約１０、１、０．１、０．０１または０．００１ｎＭまたはそれ未満の結合定数またはＫＤで、（ａ）ＢＭＰもしくはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチド、（ｂ）ＢＭＰのアンタゴニスト、（ｃ）ＢＭＰ受容体または（ｄ）ＥＲＦＥもしくはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドに特異的に結合することができる、記述１〜５のいずれかに記載の使用のためのＢＭＰアゴニスト。
【０１９７】
７．ＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニストが、場合により、約１０、１、０．１、０．０１もしくは０．００１ｎＭまたはそれ未満のＩＣ５０または阻害定数（Ｋｉ）で、（ａ）ＢＭＰのアンタゴニスト、（ｂ）ＢＭＰ受容体、および／または（ｃ）ＥＲＦＥもしくはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドのうちいずれか１種または複数への、ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドの結合を特異的に阻害することができる、記述１〜６のいずれかに記載の使用のためのＢＭＰアゴニスト。
【０１９８】
８．（ａ）ＢＭＰもしくはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチド、（ｂ）ＢＭＰもしくはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドのアンタゴニスト、（ｃ）ＥＲＦＥもしくはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチド、または（ｄ）ＢＭＰ受容体に特異的にまたは選択的に結合することができる、記述１〜７のいずれかに記載の使用のためのＢＭＰアゴニスト。
【０１９９】
９．（ａ）ＢＭＰのアンタゴニスト、（ｂ）ＢＭＰ受容体、（ｃ）ＥＲＦＥまたはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドのうちいずれか１種または複数への、ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドの結合を選択的に阻害することができる、記述１〜８のいずれかに記載の使用のためのＢＭＰアゴニスト。
【０２００】
１０．疾患が、異常に高いヘプシジンレベル、高いヘプシジン活性、または異常に低い鉄レベルを含む、記述１〜９のいずれかに記載の使用のためのＢＭＰアンタゴニスト。
【０２０１】
１１．疾患が、異常に低いヘプシジンレベル、低いヘプシジン活性、または異常に高い鉄レベルを含む、記述１〜９のいずれかに記載の使用のためのＢＭＰアゴニスト。
【０２０２】
１２．疾患が、サラセミアである、記述１１に記載の使用のためのＢＭＰアゴニスト。
【０２０３】
１３．サラセミアが、アルファ−サラセミア、ベータ−サラセミア、デルタ−サラセミア、ヘモグロビンＥ／サラセミア、ヘモグロビンＳ／サラセミア、ヘモグロビンＣ／サラセミア、ヘモグロビンＤ／サラセミアから選択される、記述１２に記載の使用のためのＢＭＰアゴニスト。
【０２０４】
１４．疾患が、慢性Ｂ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、アルコール性肝疾患または鉄過剰疾患である、記述１１に記載の使用のためのＢＭＰアゴニスト。
【０２０５】
１５．脂質または炭水化物代謝の疾患の処置における使用のためのＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニスト。
【０２０６】
１６．（ｉ）ＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニストの活性を防止または阻害する、
（ｉｉ）ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチド、およびＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニストの間の相互作用を防止または阻害する、
（ｉｉｉ）ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチド、およびＥＲＦＥまたはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドの間の相互作用を防止または阻害する、
（ｉｖ）ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチド、およびＢＭＰ受容体の間の相互作用を防止または阻害する、
（ｖ）ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチド、およびＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニストの間の相互作用を増強する、
（ｖｉ）ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチド、およびＥＲＦＥまたはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドの間の相互作用を増強する、
（ｖｉｉ）ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチド、およびＢＭＰ受容体の間の相互作用を増強する、
（ｖｉｉ）ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドに結合し、それとアゴニストもしくはアンタゴニストとの相互作用および／またはアゴニストもしくはアンタゴニストによる阻害もしくは活性化を防止する、
（ｉｘ）ＢＭＰのアゴニストまたはアンタゴニストに結合し、それとＢＭＰ、ＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドとの相互作用および／またはＢＭＰ、ＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドの阻害もしくは活性化を防止する、
（ｘ）ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドに結合し、それとＥＲＦＥもしくはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドとの相互作用および／またはＥＲＦＥもしくはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドによる阻害を防止する、
（ｘｉ）ＥＲＦＥまたはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドに結合し、それとＢＭＰもしくはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドとの相互作用、および／またはＢＭＰ活性の阻害を防止または阻害する、
（ｘｉｉ）ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドに結合し、それとＥＲＦＥもしくはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドとの相互作用および／またはＥＲＦＥもしくはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドによる阻害を増強する、
（ｘｉｉｉ）ＥＲＦＥまたはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドに結合し、それとＢＭＰとの相互作用および／またはＢＭＰ活性の阻害を増強する、
（ｘｉｖ）ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドに結合し、それとＢＭＰ受容体との相互作用を防止または阻害する、
（ｘｖ）ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドに結合し、それとＢＭＰ受容体との相互作用を増強する、
（ｘｖｉ）ＢＭＰ受容体に結合し、それとＢＭＰもしくはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドとの相互作用を防止または阻害する、
（ｘｖｉｉ）ＢＭＰ受容体に結合し、それとＢＭＰもしくはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドとの相互作用を増強する、
記述１５に記載の使用のためのＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニスト。
【０２０７】
１７．ＢＭＰが、
（ｉ）ＢＭＰ２、２／６ヘテロ二量体、３、４、５、６、７、８ａ、８ｂ、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５のうちいずれか１種または複数、
（ｉｉ）ＢＭＰ２／６ヘテロ二量体、ＢＭＰ５、ＢＭＰ６、ＢＭＰ７のうちいずれか１種または複数、
（ｉｉｉ）ＢＭＰ５、ＢＭＰ６、ＢＭＰ７のうちいずれか１種または複数、
（ｉｖ）（ａ）ＢＭＰ２、ＢＭＰ４、（ｂ）ＢＭＰ２、（ｃ）ＢＭＰ４、（ｄ）ＢＭＰ５、（ｅ）ＢＭＰ６、（ｆ）ＢＭＰ７のうちいずれか１種または複数、
（ｖ）（ａ）ＢＭＰ２、（ｂ）ＢＭＰ２／６ヘテロ二量体、（ｃ）ＢＭＰ４、（ｖ）ＢＭＰ５、（ｂ）ＢＭＰ６または（ｆ）ＢＭＰ７のうちいずれか１種または複数
から選択される、記述１５または１６に記載の使用のためのＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニスト。
【０２０８】
１８．ＢＭＰが、ＢＭＰ２、ＢＭＰ２／６ヘテロ二量体またはＢＭＰ４から選択される、記述１５または１６に記載の使用のためのＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニスト。
【０２０９】
１９．（ａ）ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチド、（ｂ）ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドのアゴニストまたはアンタゴニスト、（ｃ）ＥＲＦＥまたはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチド、（ｄ）ＢＭＰ受容体に特異的におよび／または選択的に結合することができる、記述１５〜１８のいずれかに記載の使用のためのＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニスト。
【０２１０】
２０．ＢＭＰアゴニストが、（ａ）ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドのアゴニストまたはアンタゴニスト、（ｂ）ＢＭＰ受容体、（ｃ）ＥＲＦＥまたはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドのうちいずれか１種または複数への、ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドの結合を特異的におよび／または選択的に阻害または増強することができる、記述１５〜１９のいずれかに記載の使用のためのＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニスト。
【０２１１】
２１．ＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニストが、アゴニストであり、アゴニストが、
（ａ）ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチド、およびＥＲＦＥまたはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドの間の相互作用を阻害する、および／またはＥＲＦＥまたはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドによるＢＭＰ活性の阻害を阻害する、
（ｂ）ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドに結合し、それとアンタゴニストとの相互作用および／またはアンタゴニストによる阻害を防止する、
（ｃ）ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドのアンタゴニストに結合し、それとＢＭＰとの相互作用および／またはＢＭＰの阻害を防止する、
（ｄ）ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドに結合し、それとＥＲＦＥもしくはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドとの相互作用および／またはＥＲＦＥもしくはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドによる阻害を防止する、
（ｅ）ＥＲＦＥまたはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドに結合し、それとＢＭＰもしくはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドとの相互作用、および／またはＢＭＰ活性の阻害を防止または阻害する、
（ｆ）ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドに結合し、それとＢＭＰ受容体との相互作用を増強する、または
（ｇ）ＢＭＰ受容体に結合し、それとそのＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドとの相互作用を増強する、
記述１５に記載の使用のためのＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニスト。
【０２１２】
２２．ＢＭＰが、
（ｉ）ＢＭＰ２、２／６ヘテロ二量体、３、４、５、６、７、８ａ、８ｂ、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５のうちいずれか１種または複数、
（ｉｉ）ＢＭＰ２／６ヘテロ二量体、ＢＭＰ５、ＢＭＰ６、ＢＭＰ７のうちいずれか１種または複数、
（ｉｉｉ）ＢＭＰ５、ＢＭＰ６、ＢＭＰ７のうちいずれか１種または複数、
（ｉｖ）（ａ）ＢＭＰ２、ＢＭＰ４、（ｂ）ＢＭＰ２、（ｃ）ＢＭＰ４、（ｄ）ＢＭＰ５、（ｅ）ＢＭＰ６、（ｆ）ＢＭＰ７のうちいずれか１種または複数、
（ｖ）（ａ）ＢＭＰ２、（ｂ）ＢＭＰ２／６ヘテロ二量体、（ｃ）ＢＭＰ４、（ｖ）ＢＭＰ５、（ｂ）ＢＭＰ６または（ｆ）ＢＭＰ７のうちいずれか１種または複数
から選択される、記述２１に記載の使用のためのＢＭＰアゴニスト。
【０２１３】
２３．ＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニストが、場合により、約１０、１、０．１、０．０１もしくは０．００１ｎＭまたはそれ未満の結合定数またはＫＤで、（ａ）ＢＭＰもしくはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチド、（ｂ）ＢＭＰのアンタゴニスト、（ｃ）ＢＭＰ受容体、または（ｄ）ＥＲＦＥもしくはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドに特異的に結合することができる、記述２１〜２２のいずれかに記載の使用のためのＢＭＰアゴニスト。
【０２１４】
２４．ＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニストが、場合により、約１０、１、０．１、０．０１もしくは０．００１ｎＭまたはそれ未満のＩＣ５０または阻害定数（Ｋｉ）で、（ａ）ＢＭＰのアンタゴニスト、（ｂ）ＢＭＰ受容体、および／または（ｃ）ＥＲＦＥもしくはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドのうちいずれか１種または複数への、ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドの結合を特異的に阻害することができる、記述２１〜２３のいずれかに記載の使用のためのＢＭＰアゴニスト。
【０２１５】
２５．（ａ）ＢＭＰもしくはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチド、（ｂ）ＢＭＰもしくはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドのアンタゴニスト、（ｃ）ＥＲＦＥもしくはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチド、または（ｄ）ＢＭＰ受容体に特異的にまたは選択的に結合することができる、記述２１〜２４のいずれかに記載の使用のためのＢＭＰアゴニスト。
【０２１６】
２６．（ａ）ＢＭＰのアンタゴニスト、（ｂ）ＢＭＰ受容体、（ｃ）ＥＲＦＥまたはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドのうちいずれか１種または複数への、ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドの結合を選択的に阻害することができる、記述２１〜２５のいずれかに記載の使用のためのＢＭＰアゴニスト。
【０２１７】
２７．脂質または炭水化物代謝の疾患が、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、小児非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、小児非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、肥満、糖尿病１型、糖尿病２型、妊娠糖尿病から選択される、または高コレステロールまたは高トリグリセリドの処置における使用のための、記述１５〜２６のいずれかに記載の使用のためのＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニスト。
【０２１８】
２８．（ｉ）低分子、（ｉｉ）抗体またはその抗原結合部分、（ｉｉｉ）ＥＲＦＥまたはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチド、（ｉｖ）ＢＭＰまたはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチド、（ｖ）ＢＭＰ受容体、（ｖｉ）ＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニストをコードする核酸、（ｖｉｉ）ＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニストをコードする核酸を含むベクターである、記述１〜２７のいずれかに記載の使用のためのＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニスト。
【０２１９】
２９．ＥＲＦＥまたはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドに結合する、それに特異的に結合する、またはそれに選択的に結合する、抗体またはその抗原結合部分である、記述２８に記載の使用のためのＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニスト。
【０２２０】
３０．（ｉ）ＥＲＦＥのＮ末端領域、
（ｉｉ）配列番号３（ＴＮＦＤドメイン）、または配列番号１のアミノ酸位置１９０〜３５４、
（ｉｉｉ）配列番号４（ＮＴＤ２ドメイン）、または配列番号１のアミノ酸位置１１４〜１８９、
（ｉｖ）配列番号５（コラーゲン様ドメイン）、または配列番号１のアミノ酸位置９６〜１１３、
（ｖ）配列番号６（ＮＴＤ１ドメイン）、または配列番号１のアミノ酸位置２４〜９５、
（ｖｉ）配列番号７（ＳＰドメイン）、または配列番号１のアミノ酸位置１〜２３、
（ｖｉｉ）配列番号１のアミノ酸１９６〜２０６からなる配列、または配列番号８に示されている配列、
（ｖｉｉｉ）配列番号１のアミノ酸１３２〜１４８からなる配列、または配列番号９に示されている配列、
（ｉｘ）配列番号１のアミノ酸１０９〜１２５からなる配列、または配列番号１０に示されている配列、
（ｘ）配列番号１のアミノ酸７３〜９４からなる配列、または配列番号１１に示されている配列、
（ｘｉ）配列番号１のアミノ酸７３〜８５からなる配列、または配列番号１２に示されている配列、
（ｘｉｉ）アミノ酸配列ＲＤＡＷＦＶＲＱまたは配列番号１４の全体もしくは一部からなるまたは含む配列、
（ｘｉｉｉ）アミノ酸配列ＨＳＶＤＰＲＤＡＷＭまたは配列番号１５の全体もしくは一部からなるまたは含む配列、
（ｘｉｖ）アミノ酸配列ＨＳＶＤＰＲＤＡＷＭまたは配列番号１５の全体もしくは一部からなるまたは含む配列、
（ｘｖ）アミノ酸配列ＲＤＡＷＦＶＲＱまたは配列番号１４の全体もしくは一部からなるまたは含む配列、
（ｘｖｉ）アミノ酸配列ＤＰＲＤＡＷＦＶまたは配列番号１６の全体もしくは一部からなるまたは含む配列、
（ｘｖｉｉ）アミノ酸配列ＤＰＲＤＡＷＭＬＦＶまたは配列番号１４の全体もしくは一部からなるまたは含む配列、
（ｘｖｉｉｉ）アミノ酸配列ＨＳＶＤＰＲＤＡＷＭおよびＲＤＡＷＦＶＲＱまたは配列番号１４および配列番号１５の全体もしくは一部からなるまたは含む配列、
（ｘｉｘ）アミノ酸配列配列番号１または配列番号１に対して９５〜１００％同一性を有する配列の全体もしくは一部からなるまたは含む配列
に結合する抗体またはその抗原結合部分である、記述２８または２９に記載の使用のためのＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニスト。
【０２２１】
３１．アゴニストまたはアンタゴニストが、抗体またはその抗原結合部分であり、抗体またはその抗原結合部分が、
（ｉ）ＣＤＲ配列：ＣＤＲＨ１、配列番号１８；ＣＤＲＨ２、配列番号１９；ＣＤＲＨ３、配列番号２０；ＣＤＲＬ１、配列番号２１；ＣＤＲＬ２、配列番号２２；ＣＤＲＬ３、配列番号２３、
（ｉｉ）ＶＨおよびＶＬ配列、配列番号２４および配列番号２５；または
（ｉｉｉ）重および軽鎖配列、配列番号２６および配列番号２７
を含む、記述２８〜３０のいずれかに記載の使用のためのＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニスト。
【０２２２】
３２．抗体またはその抗原結合部分が、（ｉ）アミノ酸配列ＲＤＡＷＦＶＲＱまたは配列番号１４の全体もしくは一部からなるまたは含む配列に特異的に結合する、（ｉｉ）アミノ酸配列ＨＳＶＤＰＲＤＡＷＭまたは配列番号１５の全体もしくは一部からなるまたは含む配列に特異的に結合する、（ｉｉｉ）アミノ酸配列ＨＳＶＤＰＲＤＡＷＭおよびＲＤＡＷＦＶＲＱまたは配列番号１４および配列番号１５の全体もしくは一部からなるまたは含む配列に特異的に結合する、記述３１に記載の使用のためのＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニスト。
【０２２３】
３３．抗体が、ＥＲＦＥまたはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドへの結合に関して、記述３１または３２に記載の抗体またはその抗原結合部分と競合する、記述２８または３０に記載の使用のためのＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニスト。
【０２２４】
３４．アゴニストまたはアンタゴニストが、ＥＲＦＥであるまたはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドであり、エリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドが、配列番号１のアミノ酸１９５〜３５４のＣ１Ｑ領域を欠くか、またはその領域内で切断されたＥＦＲＥのＮ末端領域であり、ＥＦＲＥのＮ末端領域が、（ｉ）配列番号１のアミノ酸１〜２１２、（ｉｉ）配列番号１のアミノ酸１〜１４２、（ｉｉｉ）配列番号１のアミノ酸１〜４２、（ｉｖ）配列番号１のアミノ酸１〜２４、（ｖ）配列番号１のアミノ酸２４〜９６、（ｖｉ）配列番号１のアミノ酸９６〜１１４、（ｖｉｉ）配列番号１のアミノ酸１１４〜１９５、（ｖｉｉｉ）配列番号１のアミノ酸１〜９６、（ｉｘ）配列番号１のアミノ酸１〜１１４、（ｘ）配列番号１のアミノ酸１〜１９０、（ｘｉ）配列番号１のアミノ酸１〜１９５、（ｘｉｉ）配列番号１のアミノ酸１９６〜２０６もしくは配列番号８に示されている配列［ＧＰＲＡＰＲＶＥＡＡＦ、配列番号８］、（ｘｉｉｉ）配列番号１のアミノ酸１３２〜１４８もしくは配列番号９に示されている配列、（ｘｉｖ）配列番号１のアミノ酸１０９〜１２５もしくは配列番号１０に示されている配列、（ｘｖ）配列番号１のアミノ酸７３〜９４もしくは配列番号１１に示されている配列、または（ｘｖｉ）配列番号１のアミノ酸７３〜８５もしくは配列番号１２に示されている配列を含むまたはこれからなる、記述２８〜３０に記載の使用のためのＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニスト。
【０２２５】
３５．１種または複数のＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニスト、ならびに薬学的に許容できる担体および／または賦形剤を含む、いずれか先行する記述に記載の使用のためのＢＭＰアゴニストまたはアンタゴニストを含む医薬組成物。
【０２２６】
３６．ＢＭＰアゴニストもしくはアンタゴニストまたは医薬組成物が、別々に、逐次にまたは同時に、第２の治療剤と組み合わせた使用のために提供され、場合により、組合せが、薬学的に許容できる担体および／または賦形剤を含む医薬組成物として提供される、記述１〜３４のいずれかに記載の使用のためのＢＭＰアゴニストもしくはアンタゴニスト、または記述３５に記載の使用のための医薬組成物。
【０２２７】
３７．第２の治療剤が、（ｉ）低分子であるＢＭＰアゴニストもしくはアンタゴニスト、（ｉｉ）ＥＲＦＥもしくはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチドに結合する抗体もしくはその抗原結合部分、（ｉｉｉ）ＢＭＰもしくはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチドに結合する抗体もしくはその抗原結合部分、（ｉｖ）ＥＲＦＥもしくはエリスロフェロン活性を有するＥＲＦＥポリペプチド、（ｖ）ＢＭＰもしくはＢＭＰ活性を有するＢＭＰポリペプチド、（ｖｉ）ＢＭＰ受容体、（ｖｉｉ）ＢＭＰアゴニストもしくはアンタゴニストをコードする核酸、（ｖｉｉｉ）ＢＭＰアゴニストもしくはアンタゴニストをコードする核酸を含むベクター、（ｉｘ）抗ＢＭＰもしくは抗ＥＲＦＥ抗体をコードする核酸または前記核酸を含有するベクター、（ｘ）インスリン増感剤、（ｘｉ）メトホルミン、（ｘｉｉ）チアゾリジンジオン、（ｘｉｉｉ）スタチン、（ｘｉｖ）ペントキシフィリン、（ｘｖ）利尿剤、（ｘｖｉ）ＡＣＥ阻害剤、（ｘｖｉｉ）シンバスタチン、（ｘｖｉｉｉ）シタグリプチン、（ｘｉｘ）ＧＬＰ−１アゴニスト、（ｘｘ）インスリン、または（ｘｘｉ）合成インスリンアナログから選択される、記述３６に記載の使用のためのＢＭＰアゴニストもしくはアンタゴニストまたは使用のための医薬組成物。
【図１】
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【図２】
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【図３−１】
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【図３−２】
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【図３−３】
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【図３−４】
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【図３−５】
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【図３−６】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
2019210290.tif 000014
【図８】
2019210290.tif 000015
【図９−１】
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【図９−２】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２−１】
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【図１２−２】
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【図１３−１】
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【図１３−２】
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【配列表】
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【外国語明細書】
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