(57)【要約】【課題】  ８−ヒドロキシエイコサペンタエン酸の新規な薬理用途を提供すること。【解決手段】  本発明によれば、８−ヒドロキシエイコサペンタエン酸を有効成分とするＡＢＣＡ１遺伝子発現促進剤およびＩＬ−１β遺伝子発現抑制剤を提供することができる。８−ヒドロキシエイコサペンタエン酸は、これらの作用に基づいて、血管障害や糖尿病などに対する予防効果や治療効果を発揮する。【選択図】  図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
８−ヒドロキシエイコサペンタエン酸もしくはそのアルキルエステルまたはこれらの薬学的に許容される塩を有効成分とするＡＢＣＡ１遺伝子発現促進剤。
【請求項２】
８−ヒドロキシエイコサペンタエン酸もしくはそのアルキルエステルまたはこれらの薬学的に許容される塩を有効成分とするＩＬ−１β遺伝子発現抑制剤。
【請求項３】
８−ヒドロキシエイコサペンタエン酸もしくはそのアルキルエステルまたはこれらの薬学的に許容される塩を有効成分とする血管障害の予防・治療剤。
【請求項４】
８−ヒドロキシエイコサペンタエン酸もしくはそのアルキルエステルまたはこれらの薬学的に許容される塩を有効成分とする糖尿病の予防・治療剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、８−ヒドロキシエイコサペンタエン酸の薬理用途に関する。
【背景技術】
【０００２】
８−ヒドロキシエイコサペンタエン酸（８−ＨＥＰＥ）は、ω３脂肪酸の１つであるエイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）の代謝物であり、その存在は古くから知られていたが、これまで安定供給することができなかったこともあり、利用価値についてはほとんど知られていなかった。しかしながら、近年、本発明者らの研究グループは、８−ＨＥＰＥを海洋生物であるオキアミ（Ｅｕｐｈａｕｓｉａｃｅａ）から単離取得できることを見出すとともに、８−ＨＥＰＥが、脂肪酸代謝の活性化、体脂肪燃焼の促進、肥満の抑制、脂肪肝の抑制、糖尿病の予防や改善、インスリン抵抗性の予防や改善、持久力の向上といった効果をもたらすことが知られているＰＰＡＲ（Ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ  Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ−Ａｃｔｉｖａｔｅｄ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ：ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体）の活性化作用を有することを見出し（特許文献１）、その薬理作用について注目が集まっている。けれども、８−ＨＥＰＥが有する薬理作用の全容は未だ解明されるに至っていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】特開２０１５−１６３６０７号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
そこで本発明は、８−ＨＥＰＥの新規な薬理用途を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者らは、上記の点に鑑みて鋭意検討を行った結果、８−ＨＥＰＥが、泡沫化マクロファージにおけるＡＢＣＡ１（ＡＴＰ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｃａｓｓｅｔｔｅ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ  Ａ１）遺伝子発現促進作用およびＩＬ（Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ）−１β遺伝子発現抑制作用を有することを見出した。
【０００６】
上記の知見に基づいてなされた本発明のＡＢＣＡ１遺伝子発現促進剤は、請求項１記載の通り、８−ＨＥＰＥもしくはそのアルキルエステルまたはこれらの薬学的に許容される塩を有効成分とする。
また、本発明のＩＬ−１β遺伝子発現抑制剤は、請求項２記載の通り、８−ＨＥＰＥもしくはそのアルキルエステルまたはこれらの薬学的に許容される塩を有効成分とする。
また、本発明の血管障害の予防・治療剤は、請求項３記載の通り、８−ＨＥＰＥもしくはそのアルキルエステルまたはこれらの薬学的に許容される塩を有効成分とする。
また、本発明の糖尿病の予防・治療剤は、請求項４記載の通り、８−ＨＥＰＥもしくはそのアルキルエステルまたはこれらの薬学的に許容される塩を有効成分とする。
【発明の効果】
【０００７】
本発明によれば、８−ＨＥＰＥの新規な薬理用途として、ＡＢＣＡ１遺伝子発現促進剤およびＩＬ−１β遺伝子発現抑制剤を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１】実験１における、８−ＨＥＰＥの（Ａ）ＡＢＣＡ１遺伝子発現促進作用および（Ｂ）ＩＬ−１β遺伝子発現抑制作用を示すグラフである。
【図２】実験２における、８−ＨＥＰＥの抗動脈硬化作用を示す（Ａ）写真および（Ｂ）グラフである。
【図３】実験３における、８−ＨＥＰＥの血糖降下作用を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
本発明によって提供されるＡＢＣＡ１遺伝子発現促進剤およびＩＬ−１β遺伝子発現抑制剤の有効成分である８−ＨＥＰＥとしては、例えば下記の化学構造を有する８−ヒドロキシ−５Ｚ，９Ｅ，１１Ｚ，１４Ｚ，１７Ｚ−エイコサペンタエン酸が挙げられる。８−ＨＥＰＥは、不斉炭素を有するので光学異性体が存在し、また、複数の二重結合を有するので種々のシス−トランス異性体が存在するが、本発明はそのいずれをも権利範囲に包含するものである。
【００１０】
【化１】
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【００１１】
本発明において有効成分とする８−ＨＥＰＥは、天然物から単離取得されたもの、有機合成化学的手法によって合成されたもの、ＥＰＡをリポキシゲナーゼなどによって酵素的に酸化させたものや非酵素的に酸化させたもの（このものは例えばＣｙｍａｎＣｈｅｍｉｃａｌ社より市販されている）などであってよい。８−ＨＥＰＥの天然物からの単離取得は、例えば特許文献１に記載の通り、オキアミからの抽出操作により行うことができる。原料として用いるオキアミは特に限定されるものではなく、三陸地方でイサダと呼ばれて食用に供されるツノナシオキアミ（Ｅｕｐｈａｕｓｉａ  ｐａｃｉｆｉｃａ）の他、ナンキョクオキアミ（Ｅｕｐｈａｕｓｉａ  ｓｕｐｅｒｂａ）などであってもよい。オキアミは生のものを用いてもよいし、凍結したものを用いてもよい。また、オキアミの乾物や塩蔵物を用いてもよい。抽出操作は例えばアルコール（メタノールやエタノールやイソプロパノールなど）やアセトンやアセトニトリルなどの水に可溶性の有機溶媒および／または水を用いて行うことができる。単離取得された８−ＨＥＰＥの精製度を高めるために、イオン交換樹脂、非イオン性吸着樹脂、ゲルろ過クロマトグラフィー、活性炭やアルミナやシリカゲルなどの吸着剤によるクロマトグラフィーおよび高速液体クロマトグラフィーを用いた分離操作の他、結晶化操作、減圧濃縮操作、凍結乾燥操作などの各種操作を単独または適宜組み合わせて行ってもよい。
【００１２】
８−ＨＥＰＥはアルキルエステルの形態であってもよい。アルキルエステルとしては、メチルエステル、エチルエステル、ブチルエステル、ヘキシルエステルなどの炭素数が１〜６の低級アルキルエステルが挙げられる。
【００１３】
８−ＨＥＰＥが塩の形態をとる場合、その薬学的に許容される塩としては、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム、アルミニウムなどとの無機塩、低級アルキルアミン、低級アルコールアミンなどとの有機塩、リジン、アルギニン、オルニチンなどとの塩基性アミノ酸塩の他、アンモニウム塩などが挙げられる。
【００１４】
本発明において有効成分とする８−ＨＥＰＥを医薬品としてヒトや動物に対して投与する場合の投与方法は、経口的な投与方法であってもよいし、非経口的な投与方法であってもよい。非経口的な投与方法としては、例えば、静脈注射、筋肉内注射、皮下注射、腹腔内注射、経皮投与、経肺投与、経鼻投与、経腸投与、口腔内投与、経粘膜投与などが挙げられ、この場合、８−ＨＥＰＥは、これらの投与方法に適した形態に自体公知の方法で製剤化されて投与される。製剤形態としては、例えば、注射剤、坐剤、エアゾール剤、経皮吸収テープ、点眼剤、点鼻剤などが挙げられる。注射剤を調製する場合、適宜、ｐＨ調整剤、緩衝剤、安定化剤、可溶化剤などを添加して注射剤とする。経口投与製剤としては、例えば、錠剤（糖衣錠、コーティング錠、バッカル錠を含む）、散剤、カプセル剤（ソフトカプセルを含む）、顆粒剤（コーティングしたものを含む）、丸剤、トローチ剤、液剤、これらの製剤学的に許容され得る徐放化製剤などが挙げられる。液剤には、懸濁剤、乳剤、シロップ剤（ドライシロップを含む）、エリキシル剤などを含む。例えば、錠剤は、公知の製剤学的製造法に準じ、薬学的に許容され得る担体、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤などとともに調製することができる。この場合、担体や賦形剤としては、例えば、乳糖、ブドウ糖、白糖、マンニトール、馬鈴薯デンプン、トウモロコシデンプン、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、硫酸カルシウム、結晶セルロース、カンゾウ末、ゲンチアナ末などを用いることができる。結合剤としては、例えば、デンプン、トラガントゴム、ゼラチン、シロップ、ポリビニルアルコール、ポリビニルエーテル、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、エチルセルロース、カルボキシメチルセルロースなどを用いることができる。崩壊剤としては、例えば、デンプン、寒天、ゼラチン末、カルボキシメチルセルロースナトリウム、カルボキシメチルセルロースカルシウム、結晶セルロース、炭酸カルシウム、炭酸水素ナトリウム、アルギン酸ナトリウムなどを用いることができる。滑沢剤としては、例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルク、水素添加植物油、マクロゴールなどを用いることができる。着色剤としては、医薬品に添加することが許容されているものを用いることができる。錠剤や顆粒剤は、必要に応じ、白糖、ゼラチン、ヒドロキシプロピルセルロース、精製セラック、グリセリン、ソルビトール、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、フタル酸セルロースアセテート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、メチルメタクリレート、メタアクリル酸重合体などで被膜してもよいし、２層以上の層で被膜してもよい。さらにエチルセルロースやゼラチンなどを用いてカプセル化してもよい。
【００１５】
本発明において有効成分とする８−ＨＥＰＥは、ＡＢＣＡ１遺伝子発現促進作用およびＩＬ−１β遺伝子発現抑制作用を有する。ＡＢＣＡ１は、ＡＢＣタンパク質の１つであって、善玉コレステロールと呼ばれる高密度リポタンパク質（Ｈｉｇｈ  Ｄｅｎｓｉｔｙ  Ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ：ＨＤＬ）の産生に必須の膜タンパク質である。ＩＬ−１βは、主として単球／マクロファージから産生される炎症性サイトカインである。従って、ＡＢＣＡ１遺伝子発現促進作用およびＩＬ−１β遺伝子発現抑制作用を有する８−ＨＥＰＥは、これらの作用によって脂質異常を是正するとともに炎症を抑制することで、例えば動脈硬化などの血管障害の予防・治療剤の有効成分として用いることができる。また、８−ＨＥＰＥは、ＩＬ−１β遺伝子発現抑制作用に基づいて、血糖のコントロールやβ細胞機能の改善といった効果をもたらすので、糖尿病の予防・治療剤の有効成分として用いることができる他、抗炎症剤の有効成分としての用途も期待することができる。その投与量は、投与対象者の年齢や体重、症状の程度、健康状態などの条件によって適宜設定すればよいが、標準的には、成人１日当たり約１０ｍｇ〜約１０ｇを、経口的または非経口的に１日１回〜数回にて投与すればよい。
【００１６】
また、８−ＨＥＰＥは、種々の形態の食品（サプリメントを含む）に、ＡＢＣＡ１遺伝子発現促進作用やＩＬ−１β遺伝子発現抑制作用を発揮するに足る有効量を添加して食してもよい（体重１ｋｇ当たり０．１ｍｇ〜１００ｍｇの摂取が標準的である）。
【００１７】
なお、８−ＨＥＰＥは、脂質異常を是正する作用などを有することが知られているＥＰＡやドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）などと組み合わせて用いてもよい。
【００１８】
また、８−ＨＥＰＥは、ＡＢＣＡ１遺伝子発現促進作用を有する研究試薬やＩＬ−１β遺伝子発現抑制作用を有する研究試薬などとして利用することもできる。
【実施例】
【００１９】
以下、本発明を実施例によって詳細に説明するが、本発明は以下の記載に限定して解釈されるものではない。
【００２０】
実験１：８−ＨＥＰＥのＡＢＣＡ１遺伝子およびＩＬ−１β遺伝子の発現に対する作用
（実験方法）
ＪＣＲＢ細胞バンクから入手したマウス由来のＪ７７４．１細胞（ＩＬ−１を産生する単球・マクロファージ様細胞株）を、６ウェルプレートに１×１０６ｃｅｌｌ／ｗｅｌｌで播種し、１０％ＦＢＳ含有ＲＰＭＩ１６４０培地を用いて、５％ＣＯ２インキュベーター内において３７℃で２４時間培養した後、８−ヒドロキシ−５Ｚ，９Ｅ，１１Ｚ，１４Ｚ，１７Ｚ−エイコサペンタエン酸（特許文献１に記載の方法に従って三陸地方で漁獲されたイサダから単離取得したもの、以下同じ）を終濃度が５０μＭになるように添加した。引き続き、５％ＣＯ２インキュベーター内において３７℃で２４時間培養した後、アセチルＬＤＬコレステロール（ＡｃＬＤＬ）を終濃度が５０μｇ／ｍＬになるように添加することで細胞の泡沫化を行い、さらに１８時間培養した。その後、細胞をＰＢＳ（−）でリンスしてから、セパゾールＲＮＡ  ｓｕｐｅｒ  Ｇ（ナカライテスク社）を用いて全ＲＮＡを抽出し、ＲＴ−ＰＣＲを行って、泡沫化マクロファージにおける各種の遺伝子の発現に対する８−ＨＥＰＥの作用を調べた。
【００２１】
（実験結果）
ＡＢＣＡ１遺伝子発現およびＩＬ−１β遺伝子発現に対する８−ＨＥＰＥの作用をそれぞれ図１のＡ、Ｂに示す（図中のＨ）。また、図１には、対照サンプルとしてＥＰＡを終濃度が５０μＭになるように添加した場合の結果と、コントロールとして同容量のＰＢＳ（−）を添加した場合の結果を、あわせて示す（前者が図中のＥで後者が図中のＶｅｈｉ）。図１から明らかなように、８−ＨＥＰＥは、アセチルＬＤＬコレステロールの負荷による泡沫化マクロファージにおける優れたＡＢＣＡ１遺伝子発現促進作用およびＩＬ−１β遺伝子発現抑制作用を示した。一方、ＥＰＡは、こうした作用を示さなかった。
【００２２】
実験２：８−ＨＥＰＥの動脈硬化に対する作用
（実験方法）
動脈硬化誘発モデルマウスであるａｐｏＥ遺伝子欠損マウスに、普通食、ウエスタン飼料、８−ヒドロキシ−５Ｚ，９Ｅ，１１Ｚ，１４Ｚ，１７Ｚ−エイコサペンタエン酸含有素材添加ウエスタン飼料（飼料１ｋｇあたり８−ＨＥＰＥ：５０ｍｇ、ＥＰＡ：１１０ｍｇ、ＤＨＡ：８０ｍｇを含有）を３ヶ月間摂取させた後、大動脈（大動脈弓から総腸骨動脈分岐部まで）を摘出し、内腔を展開してからＳｕｄａｎＩＶ染色により病変部位（粥状硬化部位）を赤色に染色した。染色された大動脈を実体顕微鏡に装着したデジタルカメラ（Ｌｅｉｃａ  ＭＣ１２０ＨＤ）にて撮影し、画像解析ソフト（Ａｄｏｂｅ  ｐｈｏｔｏｓｈｏｐ  Ｃ３またはｐｈｏｔｏｓｈｏｐ  ＣＣ  ２０１７）にて大動脈全体に対する病変部の割合を計測した。
【００２３】
（実験結果）
大動脈のＳｕｄａｎＩＶによる染色結果と病変部の割合の定量結果をそれぞれ図２のＡ、Ｂに示す（図中のＷＤ＋８−ＨＥＰＥ）。また、図２には、普通食を摂食させた場合の結果と、ウエスタン飼料を摂食させた場合の結果を、あわせて示す（前者が図中のＳＤで後者が図中のＷＤ）。図２から明らかなように、８−ＨＥＰＥ含有素材添加ウエスタン飼料を摂食させた場合、ウエスタン飼料を摂取させることで生じる動脈硬化が抑制された。８−ＨＥＰＥ含有素材添加ウエスタン飼料には、抗動脈硬化作用を有することが知られているＥＰＡとＤＨＡが含まれているが、それぞれの含有量はこれまでの報告によれば抗動脈硬化作用を示すに足るものではないので、８−ＨＥＰＥ含有素材添加ウエスタン飼料を摂食させることによる抗動脈硬化作用の発現は、実験１の結果とあわせ考えると、８−ＨＥＰＥが、ＡＢＣＡ１遺伝子の発現促進を介して血管壁など末梢組織でのコレステロールの沈着を抑制するとともに、ＩＬ−１β遺伝子の発現抑制を介して抗炎症作用を発揮したことによると考えられた。
【００２４】
実験３：８−ＨＥＰＥの血糖に対する作用
（実験方法）
実験２において、普通食、ウエスタン飼料、８−ＨＥＰＥ含有素材添加ウエスタン飼料を３ヶ月間摂取させたａｐｏＥ遺伝子欠損マウスの心臓から血液採取を行い、実験動物用グルコース濃度測定器（ラボグルコ：フィルジェン社）を用いて血糖値を測定した。
【００２５】
（実験結果）
図３に示す。また、図３には、普通食を摂食させた場合の結果と、ウエスタン飼料を摂食させた場合の結果を、あわせて示す（前者が図中のＳＤで後者が図中のＷＤ）。図３から明らかなように、８−ＨＥＰＥ含有素材添加ウエスタン飼料を摂食させた場合、ウエスタン飼料を摂取させることで生じる血糖上昇が抑制された。８−ＨＥＰＥ含有素材添加ウエスタン飼料には、血糖降下作用を有することが知られているＥＰＡとＤＨＡが含まれているが、それぞれの含有量はこれまでの報告によれば血糖降下作用を示すに足るものではないので、８−ＨＥＰＥ含有素材添加ウエスタン飼料を摂食させることによる血糖降下作用の発現は、実験１の結果とあわせ考えると、８−ＨＥＰＥが、ＩＬ−１β遺伝子の発現抑制を介して血糖コントロール作用やβ細胞機能改善作用を発揮したことによると考えられた。
【００２６】
製剤例１：カプセル剤
８−ＨＥＰＥ２００ｍｇ、精製大豆油８０ｍｇ、ミツロウ１５ｍｇ、ビタミンＥ５ｍｇを４０℃に加温しながら十分に混合して均質な液状物とした。これをカプセル充填機に供給して１粒の内容量が３００ｍｇのゼラチン被覆カプセル剤を製造した。
【産業上の利用可能性】
【００２７】
本発明は、８−ＨＥＰＥの新規な薬理用途として、ＡＢＣＡ１遺伝子発現促進剤およびＩＬ−１β遺伝子発現抑制剤を提供することができる点において産業上の利用可能性を有する。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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