(57)【要約】【課題】イシゲ（Ｉｓｈｉｇｅ  ｏｋａｍｕｒａｅ）から分離された新規化合物であるヘキサデカフロレトール（ｈｅｘａｄｅｃａｐｈｌｏｒｅｔｈｏｌ、ＨｄＰ）とこの化合物の抗糖尿及び運動遂行能力改善用途を開示する。【解決手段】前記新規化合物であるＨｄＰはアルファグルコシダーゼ（α−ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ）の活性を阻害し、分化した根源細胞であるＣ２Ｃ１２へのグルコース吸収を誘導し、ゼブラフィッシュを用いた動物実験でアロキサン（ａｌｌｏｘａｎ）処理によってインシュリン分泌が減少したゼブラフィッシュの血中グルコース濃度を減少させるだけでなく、ゼブラフィッシュにおいて筋収縮と運動性向上に必要なカルシウムイオンの細胞内濃度を上昇させ、筋収縮などに必要なエネルギー源であるグルコースの細胞内への流入を誘導する活性を有する。【選択図】図１
2019210270.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の式１の化合物、そのプロドラッグ、その水和物又はその溶媒和物。
【化１】
2019210270.tif 000005
【請求項２】
下記の式１の化合物、そのプロドラッグ、その水和物又はその溶媒和物を有効成分として含む、抗糖尿用組成物。
【化２】
2019210270.tif 000006
【請求項３】
前記組成物は食品組成物であることを特徴とする、請求項２に記載の抗糖尿用組成物。
【請求項４】
前記組成物は薬剤学的組成物であることを特徴とする、請求項２に記載の抗糖尿用組成物。
【請求項５】
下記の式１の化合物、そのプロドラッグ、その水和物又はその溶媒和物を有効成分として含む、運動遂行能力改善用組成物。
【化３】
2019210270.tif 000007
【請求項６】
前記組成物は食品組成物であることを特徴とする、請求項５に記載の運動遂行能力改善用組成物。
【請求項７】
前記組成物は薬剤学的組成物であることを特徴とする、請求項５に記載の運動遂行能力改善用組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、イシゲ（Ｉｓｈｉｇｅ  ｏｋａｍｕｒａｅ）から分離された新規化合物であるヘキサデカフロレトール（ｈｅｘａｄｅｃａｐｈｌｏｒｅｔｈｏｌ、ＨｄＰ）及びその用途に関し、より詳しくは、前記ヘキサデカフロレトールの抗糖尿の用途及び運動遂行能力改善の用途に関する。
【背景技術】
【０００２】
糖尿病は、通常インシュリン依存型糖尿病（Ｉ型糖尿病）とインシュリン非依存型糖尿病（ＩＩ型糖尿病）に区分される。インシュリン依存型糖尿病はウイルス感染などが原因となって膵臓のベータ細胞が破壊された結果、インシュリンが分泌されなくて発病し、主に１０〜２０代の若い年齢層で発病するから小児糖尿病とも言うもので、インシュリンが外部から供給されなければ生命の維持が難しいから名付けられた名前である。インシュリン非依存型糖尿病は肥満などの原因で膵臓のベータ細胞からインシュリンが分泌されることはするが、その量が足りなくてその作用力が減少することによって発病し、主に３０代以後に発病するので、成人型糖尿病とも言う。生命維持のために必ずしも外部からインシュリンを供給する必要はないと言ってインシュリン非依存型糖尿病と呼ばれているが、それでも高血糖治療のためにインシュリン治療が必要でないという意味ではない。
【０００３】
糖尿病は、インシュリン作用の不足による晩成高血糖症が持続することによって心筋梗塞、狭心症、視神経損傷、足部潰瘍などの余病を伴い、インシュリンは主に炭水化物代謝異常に関与し、炭水化物代謝の異常が基本的な問題であるが、これによって体内のタンパク質と脂質代謝及び電解質代謝の異常をもたらすので、総体的な代謝性疾病と言える（非特許文献１）。したがって、血糖調節は糖尿病による晩成余病の発生を予防するとか遅延させることができる方法であると思われる。
【０００４】
消化器官内の炭水化物は消化酵素であるアルファアミラーゼ（α−ａｍｙｌａｓｅ）とアルファグルコシダーゼ（α−ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ）によって分解され、小腸の絨毛で最終的にグルコース（ｇｌｕｃｏｓｅ）とフルクトース（ｆｒｕｃｔｏｓｅ）などに分解されて吸収される。しかし、血糖の効果的な調節ができない糖尿病患者の場合、消化吸収されるグルコースをまともに処理することができなくて高血糖状態が悪くなる。したがって、消化器官のアルファアミラーゼとアルファグルコシダーゼを阻害することによってグルコースが徐々に吸収されるようにして食後の血糖を調節することができる（非特許文献２〜５）。
【０００５】
特に、アルファグルコシダーゼは炭水化物の消化過程の最後段階を触媒としてブドウ糖に転換させる酵素であるので、アルファグルコシダーゼ阻害剤は多糖類から単糖類に分解される過程を阻害して糖の吸収を遅延させることで、血糖の調節に役立てることができる（非特許文献６〜７）。アルファグルコシダーゼ阻害剤の作用機序は、インシュリンを分泌しなくて小腸での糖の吸収を阻害することにより、既存薬物が持っている低血糖、肝毒性、ベータ細胞機能低下などの副作用を最小化することができる（非特許文献８〜１０）。
【０００６】
アルファグルコシダーゼ阻害剤としては、アカルボース（ａｃａｒｂｏｓｅ）、ボグリボース（ｖｏｇｌｉｂｏｓｅ）などが臨床に広く使われている。特に、アカルボースは小腸でのブドウ糖の吸収を抑制することによって抗糖尿に効果的であると知られているが（非特許文献１１）、腹部膨満、腹痛、嘔吐、下痢などの胃腸障害を引き起こすだけでなく、未分解した二糖類が大腸でバクテリアによって分解してガス、下痢、便秘などの副作用を引き起こすことがある（非特許文献１２）。また、アルファグルコシダーゼを全く阻害させる場合、糖の吸収率が著しく落ちて低血糖症状が発生するため、治療剤として使うのに問題点がある（非特許文献１３）。したがって、このような副作用を減らすとともに食後の血糖上昇抑制効果を出すことができる新しいアルファグルコシダーゼ阻害剤の開発は依然として必要であると言える。
【０００７】
一方、骨格筋の主な役割は骨筋肉の収縮と弛緩を引き起こすことである。ここで、骨格筋細胞の細胞質内カルシウムイオンが骨格筋の収縮と弛緩過程を媒介する核心的な二次伝達物質として作用する。カルシウムイオンは人体で細胞の内外で重要な役割をし、多様な組職で適切な機能を維持するために細密に調節される。細胞外カルシウムは軟骨と骨格の主要構成分であるだけでなく心臓と筋肉では興奮収縮結合、神経系ではシナプス伝達などに関与する。細胞内カルシウムは細胞外カルシウムより１０，０００倍低い濃度を維持しながら細胞分裂、筋収縮、細胞移動、膜伝達と分泌などに信号伝達子として重要な役割をする（非特許文献１４〜１６）。
【０００８】
安定時の細胞内遊離カルシウムイオン濃度は細胞外液に比べて非常に低いが、神経刺激による筋細胞膜の脱分極によって細胞外液又は細胞内貯蔵場所からカルシウムイオンが流入又は遊離して一定水準に至れば筋収縮が引き起こされると知られている。特に、骨格筋収縮は筋細胞外のカルシウムを除去したときにも長期間持続するから、筋肉は細胞内重要なカルシウム供給源であると思われる（非特許文献１７〜１８）。
【０００９】
また、細胞内の増加したカルシウムはミトコンドリアによる呼吸とＡＴＰ生産を誘導すると知られている（非特許文献１９〜２０）。筋肉が刺激を受ければ、ＳＲ（ｓａｒｃｏｐｌａｓｍｉｃ  ｒｅｔｉｃｕｌｕｍ）Ｃａ２＋  ｐｕｍｐｓ（ＳＥＲＣＡ、小細胞体表面に存在するカルシウムポンプであり、細胞質に存在するカルシウムを小胞体内に移動させることによって細胞内カルシウム濃度恒常性を調節する）によってカルシウムがＳＲ内に進入し、これによってアクチンミオシン結合が形成されて筋肉の収縮が引き起こされる。筋収縮後にはＡＴＰによる能動輸送によってカルシウムは再び原位置（ＳＲを通じて細胞外）に移動することになり、ＡＴＰがミオシンと結合すればアクチンミオシン結合は切れ、筋肉は弛緩することになる。
【００１０】
ここで、必要なＡＴＰの生成は、ホスファゲンシステム（ｐｈｏｓｐｈａｇｅｎ  ｓｙｓｔｅｍ）、解糖過程（ｇｌｙｃｏｌｙｓｉｓ）、ＡＴＰ分解過程の３方法によってなされる。特に、運動時に必要なブドウ糖生産に最も重要な役割をするものはグルカゴン分泌の増加である（非特許文献２１）。運動が細胞膜で発現するブドウ糖受容体４（ＧＬＵＴ４）の数を増加させ、細胞組織のＧＬＵＴ４の濃度も増加させるという報告があり（非特許文献２２〜２４）、これは運動中に筋肉のブドウ糖摂取が増加するので、ＡＴＰの再生を増加させてブドウ糖輸送速度を増加させるという主張を裏付ける。
【００１１】
また、運動時に筋肉と肝のグリコーゲン枯渇は疲労の主要原因であり、骨格筋のＡＴＰは筋収縮時にミトコンドリアで生成する即刻のエネルギー源である。したがって、細胞実験又は実験動物の肝と筋肉組職を通じての骨格筋内グリコーゲン含量又は筋肉内ＡＴＰ含量の測定は運動遂行能力向上機能性評価のバイオマーカーとして使われる（非特許文献２５）。
【００１２】
本発明は、イシゲ（Ｉｓｈｉｇｅ  ｏｋａｍｕｒａｅ）から分離及び同定した新規物質であるＨｄＰとその抗糖尿活性及び運動遂行能力増進活性を開示する。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１３】
【非特許文献１】Ｊ  Ｋｏｒｅａｎ  Ｓｏｃ  Ｆｏｏｄ  Ｓｃｉ  Ｎｕｔｒ．  ２００２  ３１：１０７１−１０７７
【非特許文献２】Ｉｎｔ  Ｊ  Ｏｂｅｓ．  １９８４．  ８  Ｓｕｐｐｌ  １：１８１−９０
【非特許文献３】Ａｓｉａ  Ｐａｃ  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｎｕｔｒ．  ２００４．  １３（４）：４０１−８
【非特許文献４】Ｊ  Ｉｎｔ  Ｍｅｄ  Ｒｅｓ．  １９９８  Ｏｃｔ−Ｎｏｖ  ２６（５）：２１９−３２
【非特許文献５】Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｃａｒｅ．  １９９９  Ｊｕｎ  ２２（６）：９６０−４
【非特許文献６】Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ．  ２００８．  １８（７）：１００５−１０１０
【非特許文献７】Ｊ．  Ｅｔｈｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ．  ２０００．  ７２：１２９−１３３
【非特許文献８】Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ．  ２００９．  ６１５：２５２−２５６
【非特許文献９】Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ．  ２００８．  １８（７）：１００５−１０１０
【非特許文献１０】Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍ．  ２００８．  １０８：９６５−９７２
【非特許文献１１】Ｅｕｒ  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．  １９９４  Ａｕｇ、  ２４  Ｓｕｐｐｌ  ３：３−１０
【非特許文献１２】Ｗｏｒｌｄ  Ｊ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．  ２００８  Ｏｃｔ  ２１．  １４（３９）：６０８７−９２
【非特許文献１３】Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  １９９８  Ｍａｙ，  １８２（１−２）：１０１−８
【非特許文献１４】Ｃｌｉｎ  Ｊ  Ａｍ  Ｓｏｃ  Ｎｅｐｈｒｏｌ．  ２０１０．  ５  Ｓｕｐｐｌ  １：Ｓ２３−３０
【非特許文献１５】Ｎｅｐｈｒｏ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．  ２０１１．  １１８：２２−７
【非特許文献１６】Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．２００３．４：５１７−２９
【非特許文献１７】Ａｎｎｕｌ．  Ｒｅｖ．  Ｐｈｙｓｉｏｌ．  １９７６．  ３８：２９３−３１３
【非特許文献１８】Ｐｈｙｓｉｏ．  Ｒｅｖ．  １９７７．  ７１−１０８
【非特許文献１９】Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．  ２００４．  ２８７：８１７−８３３
【非特許文献２０】Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．  ２０１３．  ５２：２７９３−２８０９
【非特許文献２１】Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．  １９８４．  ７４（４）：１４０４−１３
【非特許文献２２】ＪＡＭＡ．  １９９１．  ２６６：１５３５−４２
【非特許文献２３】Ｊ  Ｃｌｉｎ  ｉｎｖｅｓｔ．  １９７９．  ６４：１０１１−１５
【非特許文献２４】Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．  １９８７．  ２５２：Ｅ１７０−１７５
【非特許文献２５】大韓民国食薬処、２０１６、健康機能食品機能性評価ガイド
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１４】
本発明の目的はイシゲから分離及び同定した新規物質であるＨｄＰを用いた運動遂行能力改善用組成物を提供することにある。
【００１５】
本発明の他の目的又は具体的な目的は以下で提示する。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
本発明者は、下記の実施例及び実験例から確認されるように、イシゲから分離及び同定した下記の式１の新規物質であるＨｄＰがアルファグルコシダーゼ（α−ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ）の活性を阻害し、分化した根源細胞であるＣ２Ｃ１２へのグルコースの吸収を誘導し、ゼブラフィッシュを用いた動物実験において、アロキサン（ａｌｌｏｘａｎ）処理によってインシュリン分泌が減少したゼブラフィッシュの血中グルコース濃度を減少させるだけでなく、ゼブラフィッシュにおいて筋収縮と運動性向上に必要なカルシウムイオンの細胞内濃度を上昇させ、筋収縮などに必要なエネルギー源であるグルコースの細胞内への流入を誘導することを確認した。
【化１】
2019210270.tif 000003
【００１７】
前述したような実験結果を考慮するとき、本発明は一側面において、前記式１の化合物、そのプロドラッグ、その水和物、又はその溶媒和物に関するものであり、他の側面において、前記式１の化合物、そのプロドラッグ、その水和物、又はその溶媒和物を有効成分として含む抗糖尿用組成物に関するものであり、さらに他の側面においては、前記式１の化合物、そのプロドラッグ、その水和物、又はその溶媒和物を有効成分として含む運動遂行能力改善用組成物に関するものである。
【発明の効果】
【００１８】
前述したように、本発明によると、イシゲから分離された新規化合物であるＨｄＰを用いた運動遂行能力改善用組成物を提供することができる。本発明の組成物は食品又は薬品に製品化することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】ＨｄＰ分離過程を模式化した図である。
【図２】ＨｄＰのＨＰＬＣクロマトグラムを示す図である。
【図３】ＨｄＰの１Ｈ、１３ＣＮＭＲスペクトルデータを示す図である。
【図４】ＨｄＰの二次元（２Ｄ）ＮＭＲスペクトルＨＭＱＣ（ａ）とＨＭＢＣ（ｂ）データを示す図である。
【図５】ＨｄＰのＬＣ−ＭＳ−ＭＳスペクトルデータを示す図である。
【図６】分化した根源細胞であるＣ２Ｃ１２細胞でＨｄＰがグルコースの吸収を誘導することを示す結果を示す図である。
【図７】ゼブラフィッシュ胚芽におけるＨｄＰの毒性テスト結果を示す図である。
【図８】成体ゼブラフィッシュでＨｄＰが血中グルコース濃度を低下させることを示す結果を示す図である。
【図９】ＨｄＰがゼブラフィッシュ細胞内カルシウムイオン（Ｃａ２＋）濃度を上昇させることを示す結果を示す図である。
【図１０】ＨｄＰがゼブラフィッシュ筋肉内へのグルコース流入を誘導することを示す結果を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
本明細書で、「プロドラッグ（ｐｒｏｄｒｕｇ）」とはある薬物を化学的に変化させて物理的、化学的性質を調節した薬物を意味し、そのものは生理活性を現さないが、投与後に体内で化学的又は酵素の作用によって元の薬物に変わって薬効を発揮することができる薬物を意味する。
【００２１】
また、本明細書で、「水和物（ｈｙｄｒａｔｅ）」とは水が結合している化合物を意味し、水と化合物の間に化学的な結合力がない内包化合物を含む意味である。
【００２２】
また、本明細書で、「溶媒和物（ｓｏｌｖａｔｅ）」とは溶質の分子又はイオンと溶媒の分子又はイオンの間に生じた化合物を意味する。
【００２３】
また、本明細書で、「抗糖尿」とは糖尿病の症状の軽減、予防、又は治療を意味する。
【００２４】
本明細書で、「糖尿病」とは前述したようなインシュリン依存型糖尿病（第１（型）糖尿病）とインシュリン非依存型糖尿病（第２（型）糖尿病）を含む意味であり、また他の疾病などによって膵臓が損傷することによって発生する糖尿病、例えば甲状腺機能亢進症、副腎皮質機能亢進症、成長ホルモン過多症又はカテコルラミン過多症による糖尿病、妊娠性糖尿病を含む意味である。
【００２５】
また、本明細書で、「有効成分」とは単独で目的とする活性を現すとか又はそのものは活性がない担体とともに活性を現すことができる成分を意味する。
【００２６】
本発明の組成物において、その有効成分は運動遂行能力改善効果などを現すことができる限り、用途、剤形などによって任意の量（有効量）で含まれることができ、通常的な有効量は、組成物の総重量を基準とするとき、０．００１重量％〜１５重量％の範囲内で決定されるであろう。ここで、「有効量」とは、その適用対象である哺乳動物、好ましくはヒトに、医療専門家などの提言による投与期間の間に本発明の組成物が投与されるとき、運動能力改善効果などの意図した医療的及び薬理学的効果を現すことができる、本発明の組成物に含まれる有効成分の量を言う。このような有効量は当業者の通常の能力範囲内で実験的に決定することができる。
【００２７】
本発明の組成物は、有効成分以外に、抗糖尿効果又は運動遂行能力改善効果などの上昇及び補強のために、又は体脂肪減少、疲労改善活性などの類似活性の付加による服用又は摂取の便利性を増進させるために、当業界で既に安全性が検証され、該当の活性を有するものとして公知となった任意の化合物又は天然抽出物をさらに含むことができる。
【００２８】
このような化合物又は抽出物には、各国の薬典（大韓民国では「大韓民国薬典」）、各国の健康機能食品公典（大韓民国食薬処告示である「健康機能食品基準及び規格」）などの工程書に開示されている化合物又は抽出物、医薬品の製造販売を規律する各国の法律（大韓民国では「薬事法」）によって品目許可を受けた化合物又は抽出物、健康機能食品の製造及び販売を規律する各国の法律（大韓民国では「健康食品に関する法律」）によって機能性が認められた化合物又は抽出物が含まれる。例えば、大韓民国「健康機能食品に関する法律」によって‘運動遂行能力向上’機能性が認められた原料であるマカゼラチン化粉末、クレアチン、ケンポナシ果柄抽出粉末、冬虫夏草醗酵抽出物などと、‘疲労改善’において機能性が認められた醗酵生成アミノ酸複合物、ケンポナシ果柄抽出物、紅景天（ｒｈｏｄｉｏｌａ  ｓａｃｒａ）抽出物など、又は大韓民国「健康機能食品に関する法律」によって‘血糖調節’機能性が認められた原料であるＬ−ａｒａｂｉｎｏｓｅ、ｎｏｐａｌ抽出物、桂皮抽出粉末、グアバ葉抽出物、難消化性マルトデキストリン、凍結乾燥カイコ粉末、長芋抽出物、バナバ葉抽出物、桑葉抽出物などがこのような化合物又は抽出物に相当するであろう。
【００２９】
このような化合物又は天然抽出物は本発明の組成物にその有効成分とともに一つ以上含まれることができる。
【００３０】
このような化合物又は抽出物は本発明の組成物にその有効成分とともに一つ以上含まれることができる。
【００３１】
本発明の組成物は具体的な様態において食品組成物として把握することができる。
【００３２】
本発明の食品組成物はどの形態にも製造されることができ、例えばお茶、ジュース、炭酸飲料、イオン飲料などの飲料類、牛乳、ヨーグルトなどの加工乳類、ガム類、餠、漢果、パン、お菓子、麺などの食品類、錠剤、カプセル、丸、顆粒、液状、粉末、片状、ペースト状、シロップ、ゲル、ゼリー、バーなどの健康機能食品製剤類などに製造されることができる。また、本発明の食品組成物は法律上及び機能上の区分において製造及び流通時点の施行法規に合う限り、任意の製品区分を有することができる。例えば、大韓民国の「健康機能食品に関する法律」による健康機能食品であるか、又は大韓民国の「食品衛生法」の食品公典（食薬処告示「食品の基準及び規格」）上、各食品類型によるお菓子類、豆類、茶類、飲料類、特殊用途食品などであってもよい。
【００３３】
本発明の食品組成物には、その有効成分以外に、食品添加物が含まれることができる。食品添加物は一般的に食品を製造、加工又は保存するにあたって食品に添加されて混合されるとか浸潤される物質であると理解することができるが、食品とともに毎日かつ長期間にわたって取られるので、その安全性が保障されなければならない。食品の製造及び流通を規律する各国の法律（大韓民国では「食品衛生法」）による食品添加物公典には安全性が保障された食品添加物が成分面で又は機能面で限定的に規定されている。大韓民国食品添加物公典（食薬処告示「食品添加物基準及び規格」）では、食品添加物が成分面で化学的合成品、天然添加物及び混合製剤類に区分されて規定されている。このような食品添加物は機能面においては甘味剤、風味剤、保存剤、乳化剤、酸味料、増粘剤などに区分される。
【００３４】
甘味剤は食品に適当な甘味を付与するために使うもので、天然のもの及び合成のもののいずれも本発明の食品組成物に使うことができる。好ましくは天然甘味剤を使う場合であり、天然甘味剤としては、トウモロコシロップ固形物、花蜜、スクロース、フルクトース、ラクトース、マルトースなどの糖甘味剤を挙げることができる。
【００３５】
風味剤は味又は香を良くするための用途に使うもので、天然のものと合成のもののいずれも使うことができる。好ましくは天然のものを使う場合である。天然のものを使う場合、風味以外に栄養強化の目的も並行することができる。天然風味剤としては、リンゴ、レモン、ミカン、ブドウ、イチゴ、モモなどから得られたものであるかあるいは緑茶葉、アマゴコロ、竹葉、桂皮、菊葉、ジャスミンなどから得られたものであってもよい。また、朝鮮人参（紅参）、竹の子、アロエベラ、銀杏の未などから得られたものを使うことができる。天然風味剤は液状の濃縮液又は固状の抽出物であってもよい。場合によって合成風味剤を使うことができる。合成風味剤としては、エステル、アルコール、アルデヒド、テルペンなどを用いることができる。
【００３６】
保存剤としては、ソルビン酸カルシウム、ソルビン酸ナトリウム、安息香酸カルシウム、安息香酸ナトリウム、安息香酸カリウム、ＥＤＴＡ（エチレンジアミン４酢酸）などを使うことができ、また乳化剤としては、アカシアガム、カルボキシメチルセルロース、キザンタンガム、ペクチンなどを使うことができ、酸味料としては、クエン酸、リンゴ酸、フマル酸、アジピン酸、リン酸、グルコン酸、酒石酸、アスコルビン酸、酢酸、リン酸などを使うことができる。酸味料は、味を増進させる目的以外に、微生物の増殖を抑制する目的で食品組成物を適正酸度にすることができるように添加することができる。増粘剤としては、懸濁化具現剤、沈降剤、ゲル形成剤、膨化剤などを使うことができる。
【００３７】
本発明の食品組成物は、前述した食品添加物以外に、機能性及び栄養性を補充及び補強する目的で当業界で公知となって食品添加物として安全性が保障された生理活性物質又はミネラル類を含むことができる。
【００３８】
そのような生理活性物質としては、緑茶などに含まれたカテキン類、ビタミンＢ１、ビタミンＣ、ビタミンＥ、ビタミンＢ１２などのビタミン類、トコフェロール、ジベンゾイルチアミンなどを挙げることができ、ミネラル類としては、クエン酸カルシウムなどのカルシウム製剤、ステアリン酸マグネシウムなどのマグネシウム製剤、クエン酸鉄などの鉄製剤、塩化クロム、ヨードカリウム、セレニウム、ゲルマニウム、バナジウム、亜鉛などを挙げることができる。
【００３９】
本発明の食品組成物には、前述した食品添加物を製品類型によってその添加目的を達成することができる適量で含むことができる。
【００４０】
本発明の食品組成物に含まれることができるその他の食品添加物に関連しては、各国の法律による食品公典又は食品添加物公典を参照することができる。
【００４１】
本発明の組成物は他の具体的な様態においては薬剤学的組成物と把握することができる。
【００４２】
本発明の薬剤学的組成物は、有効成分以外に薬剤学的に許容される担体を含んで、当業界で公知となった通常の方法で、投与経路によって経口用剤形又は非経口用剤形に製造することができる。ここで「薬剤学的に許容される」の意味は有効成分の活性を抑制しないとともに適用（処方）対象が適応可能な程度以上の毒性を有しないという意味である。
【００４３】
本発明の薬剤学的組成物が経口用剤形に製造される場合、適した担体とともに当業界に公知となった方法で粉末、料粒、錠剤、丸剤、糖衣錠剤、カプセル剤、液剤、ゲル剤、シロップ剤、懸濁液、ウエハーなどの剤形に製造されることができる。ここで、薬剤学的に許容される適した担体の例としては、ラクトース、グルコース、スクロース、デキストロース、ソルビトール、マンニトール、キシリトールなどの糖類、トウモロコシ澱粉、ジャガイモ澱粉、小麦澱粉などの澱粉類、セルロース、メチルセルロース、エチルセルロース、カルボキシルメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルメチルセルロースなどのセルロース類、ポリビニルピロリドン、水、メチルヒドロキシベンゾエート、プロピルヒドロキシベンゾエート、ステアリン酸マグネシウム、鉱物油、麦芽、ゼラチン、タルク、ポリオール、植物性油などを挙げることができる。製剤化する場合、必要によって、充填剤、増量剤、結合剤、湿潤制、崩壊剤、界面活性剤などの希釈剤及び／又は賦形剤を含んで製剤化することができる。
【００４４】
本発明の薬剤学的組成物が非経口用剤形に製造される場合、適した担体とともに当業界に公知となった方法で、点眼剤、注射剤、経皮投与剤、鼻腔吸入剤、坐剤の形態に製剤化されることができる。点眼剤に製剤化する場合、適した担体としては、滅菌水、食塩水、５％デキストロースのような等張溶液などを使うことができ、必要によって、塩化ベンザルコニウム、メチルパラベン、エチルパラベンなどを防腐の目的で添加することができる。注射剤に製剤化する場合、適した担体としては、滅菌水、エタノール、グリセロール又はプロピレングリコールなどのポリオール又はこれらの混合物を使うことができ、好ましくはリンゲル溶液、トリエタノールアミンが含有されたＰＢＳ（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｂｕｆｆｅｒｅｄ  ｓａｌｉｎｅ）又は注射用滅菌水、５％デキストロースのような等張溶液などを使うことができる。経皮投与剤に製剤化する場合、軟膏剤、クリーム剤、ローション剤、ゲル剤、外用液剤、パスタ剤、塗布剤、エアロール剤などの形態に製剤化することができる。鼻腔吸入剤に製剤化する場合、ジクロロフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素などの適した推進剤を使ってエアロゾルスプレー形態に製剤化することができ、坐剤に製剤化する場合、その基剤としては、ウィテプソル（ｗｉｔｅｐｓｏｌ）、トゥイーン（ｔｗｅｅｎ）６１、ポリエチレングリコール類、カカオ脂、ラウリン脂、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類、ポリオキシエチレンステアレート類、ソルビタン脂肪酸エステル類などを使うことができる。
【００４５】
薬剤学的組成物の具体的な製剤化に関連しては当業界に公知となっており、例えば文献［Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１９ｔｈ  ｅｄ．，  １９９５）］などを参照することができる。前記文献は本明細書の一部と見なされる。
【００４６】
本発明の薬剤学的組成物の好ましい投与量は、患者の状態、体重、性別、年齢、患者の重症度、投与経路によって、１日０．００１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｇ／ｋｇの範囲、好ましくは０．００１ｍｇ／ｋｇ〜１ｇ／ｋｇの範囲であってもよい。投与は１日１回又は数回に分けて行うことができる。このような投与量はどの側面でも本発明の範囲を制限するものと解釈されてはいけない。
【００４７】
以下本発明を実施例及び実験例に基づいて説明する。しかし、本発明の範囲がこのような実施例及び実験例に限定されるものではない。
【実施例】
【００４８】
＜実施例＞イシゲ抽出物からＨｄＰの分離及び同定
＜実施例１＞ＨｄＰの分離
イシゲ抽出物からのＨｄＰの分離は下記のように行い、その分離過程の模式図を図１に示した。
【００４９】
イシゲは大韓民国、ゼジュド、ソンサン地域で採集し、淡水で２回洗って塩分を除去し、自然乾燥した。乾燥したイシゲをミキサーで粉末化し、この粉末１００ｇを２Ｌの５０％エタノールで２４時間の間に室温で抽出した後、濾過及び減圧濃縮して抽出溶媒を除去して粉末状の抽出物を得た。
【００５０】
この抽出物粉末１０ｇを５Ｌの蒸溜水に懸濁し、これに同量の５Ｌエチルアセテートを加えて分画し、減圧濃縮で溶媒を除去してエチルアセテート分画物を得た。
【００５１】
遠心分配クロマトグラフィー（ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌ  ｐａｒｔｉｔｉｏｎ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ、ＣＰＣ）を行うために、予備実験によって、溶媒系（ｓｏｌｖｅｎｔ  ｓｙｓｔｅｍ）としてｎ−ヘキサン−エチルアセテート−メタノール−水で構成されている溶媒系をまず選定し、この溶媒系の溶媒の比率を変化させながら最適の分配係数であるＫ値を測定及び探索することで、ｎ−ヘキサン−エチルアセテート−メタノール−水の溶媒系が１：９：４．５：６．５の体積比を有する条件で０．５のＫ値が適切であることを確認した。
【００５２】
前記溶媒系を分別漏斗に入れ、強く振って振盪した後、常温で完全な均衡を成すようにして上下層に分離し、上層の有機相は固定相として、下層の液状は移動相として使った。
【００５３】
ＣＰＣを行うために、１０００ｒｐｍで回転するＣＰＣカラムに前記上層有機固定相をいっぱい満たし、回転速力を１０００ｒｐｍにし、ポンプ圧力が一定に維持されるまで上層有機固定相を２ｍｌ／ｍｉｎの速力で注入させた。圧力が一定になると、試料（前記エチルアセテート分画物５００ｍｇを６ｍＬの水とメタノールの１：１体積比混合物に溶解させたもの）６０ｍｌを注入させた後、２３０ｎｍの波長でモニターしながら各分画物を分取し、相対的に非極性の分画物を７０分から１２０分までの分画から分離した。
【００５４】
ついで、前記得られたＣＰＣ分画物に対し、ｓｅｍｉｐｒｅｐａｒａｔｉｖｅ  ＨＰＬＣカラム（ＹＭＣ−Ｐａｃｋ  ＯＤＳ−Ａ、１０×２５０ｍｍ、５μｍ  ｐａｒｔｉｃｌｅ  ｓｉｚｅ、ＹＭＣ  Ｃｏ  Ｌｔｄ、Ｔｏｋｙｏ、Ｊａｐａｎ）を用いてＨＰＬＣを行った。具体的に、移動相は０．１％ギ酸を含有した３１％アセトニトリル（３２％  ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ  ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ０．１％  ｆｏｒｍｉｃ  ａｃｉｄ）及び０．１％のギ酸を含有する６９％水（６８％  ｗａｔｅｒ  ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ０．１％  ｆｏｒｍｉｃ  ａｃｉｄ）にし、流速２ｍＬ／ｍｉｎで流し、ＵＶ吸光度を２３０ｎｍで測定し、強度が二番目で高い１７．３０２分帯の化合物を分離した。この化合物が表示されたＨＰＬＣクロマトグラムを図２に示した。
【００５５】
＜実施例２＞前記化合物の同定
分離された前記化合物の構造を同定するために、１ＨＮＭＲ、１３ＣＮＭＲスペクトルを測定し、水素原子間及び水素と炭素原子間の相関関係を調べるための二次元（２Ｄ）ＮＭＲスペクトルでＨＭＱＣ及びＨＭＢＣスペクトルを測定し、分子量を分析するためにＬＣ−ＭＳ−ＭＳを測定した。各結果を図３〜図５に示し、関連文献との比較検討によって、既存に報告されなかった新規化合物である式１のＨｄＰと確認した。
【００５６】
＜実験例＞ＨｄＰの抗糖尿活性及び運動遂行能力向上活性実験
＜実験例１＞ＨｄＰの抗糖尿活性
１．１  アルファグルコシダーゼ（α−ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ）阻害活性測定
アルファグルコシダーゼ阻害活性の評価はワタナベなど（Ｗａｔａｎａｂｅ、Ｋａｗａｂａｔａ、Ｋｕｒｉｈａｒａ及びＮｉｋｉ、１９９７）に記述されている方法に従い、酵母酵素を使って行った。ｐＨ７．０、３７℃の反応条件で基質である５ｍＭのｐ−ニトロフェニルα−Ｄ−グルコピラノシド（ｐ−ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｌα−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ、ＰＮＰ−Ｇ）と、１００ｍＭのリン酸緩衝液（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｂｕｆｆｅｒ）で希釈された３２ｍＵ／ｍｌ酵素液（ｙｅａｓｔ  α−ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ、Ｓｉｇｍａ）を反応させ、分光偏光計（ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒ）を用いて阻害活性を測定した。試料をＰＮＰ−Ｇと５分間反応させることで、ＰＮＰ−Ｇの加水分解によって放出される４−ニトロフェノール（４−ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｏｌ）の吸光度を４０５ｎｍで測定した。その後、同量の基質溶液を添加した後、室温で５分間さらに反応させた後、０．５ＭのＮａ２ＣＯ３を加えて反応を中止させ、吸光度を測定して吸光度の変化量を確認した。
【００５７】
アルファグルコシダーゼの阻害活性（％）を「（１−試料添加区吸光度／溶媒添加区吸光度）×１００」の数式で算出した。
【００５８】
陽性対照群としてアルファグルルコシダーゼ抑制剤系の経口用血糖降下剤であるアカルボース（Ａｃａｒｂｏｓｅ）を使った。
【００５９】
１．２  Ｃ２Ｃ１２細胞糖吸収測定
１．２．１  Ｃ２Ｃ１２細胞培養及び分化
マウス由来の根源細胞であるＣ２Ｃ１２細胞（ＡＴＣＣ，  Ｍａｎａｓｓａｓ，  ＶＡ，  ＵＳＡ）は１０％ＦＢＳと抗生剤が含まれたＤＭＥＭ（Ｄｕｌｂｅｃｃｏｓ  Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｅａｇｌｅ’ｓ  Ｍｅｄｉａ）培地に懸濁し、３７℃、５％ＣＯ２の条件で培養器で培養した。細胞密度が８０％となれば、Ｃ２Ｃ１２細胞を２％ウマ血清（ｈｏｒｓｅ  ｓｅｒｕｍ）と低濃度グルコースが含まれたＤＭＥＭ培地で５日間分化させ、培地は３日ごとに取り替えた。分化した細胞は低濃度のグルコースが含まれた無血清ＤＭＥＭ培地で１２時間の間に血清飢餓状態（ｓｔａｒｖａｔｉｏｎ）で維持させ、ＰＢＳ溶液で洗浄した後、低濃度のグルコースが含まれた新しい無血清ＤＭＥＭ培地で２４時間の間に試料（ＨｄＰ）と反応させた。
【００６０】
１．２．２  フローサイトメトリ（ＦＡＣＳ）を用いたＣ２Ｃ１２細胞の糖吸収測定
マウス由来のＣ２Ｃ１２根源細胞の糖吸収測定は２−ＮＢＤＧ（（２−（Ｎ−（７−Ｎｉｔｒｏｂｅｎｚ−２ｏｘａ−１，３−ｄｉａｚｏｌ−４−ｙｌ）Ａｍｉｎｏ）−２−Ｄｅｏｘｙｇｌｕｃｏｓｅ）分析法（Ｃｅｌｌ  Ｄｅａｔｈ  Ｄｉｓ．  ２０１７  Ｏｃｔ  ５．８（１０）：ｅ３０７８）を用いてフローサイトメトリ（ＦＡＣＳ）で測定した。前記培養された細胞を１０μＭ濃度の２−ＮＢＤＧとともに３７℃で２４時間反応させた後、ＢＤ  ＦＡＣＳ  ＣａｎｔｏＩＩ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，ＮＪ，ＵＳＡ）で分析し、２−ＮＢＤＧの蛍光はＦＩＴＣチャネルで検出した。
【００６１】
１．３  動物実験
成体ゼブラフィッシュ（Ｚｅｂｒａｆｉｓｈ）は市中（ゼジュアクアリウム、ゼジュド、大韓民国）で購入して実験に使い、２８．５±１℃の温度及び１４／１０時間の明暗周期条件の３．５Ｌアクリルタンクで管理し、１日２回食餌（Ｔｅｔｒａ  ＧｍｇＨ  Ｄ−４９３０４  Ｍｅｌｌｅ，  ドイツ産）を給与した。ゼブラフィッシュ実験はチェジュ大学校の動物実験倫理委員会の承認の下で行った。
【００６２】
１．３．１  ゼブラフィッシュ胚芽（Ｚｅｂｒａｆｉｓｈ  Ｅｍｂｒｙｏ）におけるＨｄＰ毒性テスト
受精後４時間が経過した胚芽（ｎ＝１５）に胚芽培地（６０ｐｐｍの塩を含む蒸溜水）９５０μｌとＨｄＰ（０．０１、０．１、１、及び１０μｇ／ｍｌ）５０μｌが含有された１２ウェルプレートの各ウェルに移し、受精後１６８時間の間にＨｄＰに露出されたゼブラフィッシュ胚芽の生存率を測定した。
【００６３】
１．３．２  ゼブラフィッシュの血中グルコース濃度測定
野生型成体ゼブラフィッシュを２ｍｇ／ｍｌのアロキサン（ａｌｌｏｘａｎ）に１時間反応させた後、インシュリンがない状態で１％グルコースに１時間反応させた。その後、反応溶液を水に取り替え、１時間反応させた後、ＨｄＰ、メットホルミン（Ｍｅｔｆｏｒｍｉｎ）、ＢＡＰＴＡ−ＡＭを９０分間処理した。実験群は、無処理群、アロキサン処理群（ｃｏｎｔｒｏｌ）、アロキサンとＨｄＰ（０．３μｇ／ｇ体重）処理群、アロキサンとメットホルミン（５μｇ／ｇ体重）処理群、アロキサンとＢＡＰＴＡ−ＡＭ（３μｇ／ｇ体重）処理群、及びアロキサンとＢＡＰＴＡ−ＡＭ（３μｇ／ｇ体重）そしてＨｄＰ（０．３μｇ／ｇ体重）処理群で構成した。
【００６４】
２．  実験結果
２．１  アルファグルコシダーゼ（α−ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ）阻害活性測定結果
結果として、アルファグルコシダーゼ活性を５０％抑制するのに必要な試料の濃度（ＩＣ５０）を下記の表１に示した。
【００６５】
【表１】
2019210270.tif 000004
【００６６】
前記表から確認されるように、本発明のＨｄＰはアカルボースに比べて高いアルファグルコシダーゼ抑制活性を示した。
【００６７】
２．２  Ｃ２Ｃ１２細胞の糖吸収測定結果
分化したＣ２Ｃ１２細胞において、ＨｄＰによるグルコース吸収能を測定し、その結果を図７に示した。ＦＡＣＳは細胞の不均質混合物から多数の蛍光が付着された細胞を単離する装置である。蛍光が標識されたグルコース類似体（ａｎａｌｏｇｕｅｓ）である２−ＮＢＤＧと反応させたＣ２Ｃ１２細胞においてＦＩＴＣフィルターによって２−ＮＢＤＧの検出が多くなるほど蛍光強度は強くなり、グラフは右側に動くことになる。よって、図６を参照すると、ＨｄＰを２４時間処理した、分化したＣ２Ｃ１２細胞内へのグルコース吸収がＨｄＰの処理濃度に依存的に有意に増加することが分かる。これは、ＨｄＰが血中グルコース濃度を低めることができることを示す結果であると言える。分化したＣ２Ｃ１２細胞内へのグルコース吸収はグルコースの血中濃度減少の指標と知られている（Ｄｉａｂｅｔｅｓ  ３０  （１９８１）  １０００−１００７；  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ  ４２０  （２０１２）  ５７６−５８１；  Ｎａｔ．  Ｒｅｖ．  Ｍｏｌ．  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．  ７  （２００６）  ８５−９６；  Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．  ８７  （２００８）  ３３７−３５１）。
【００６８】
２．３  ゼブラフィッシュ胚芽におけるＨｄＰ毒性テスト結果
毒性がないＨｄＰの濃度を確認するために、ゼブラフィッシュ胚芽を介して生存率を評価した結果、図７に示すように、１μｇ／ｍｌ以下で約９０％以上の生存率を示した。
【００６９】
２．４  ゼブラフィッシュのＨｄＰによる血中グルコースレベル測定結果
ＨｄＰが動物モデルの血糖を調節するかを確認するために、アロキサン（ａｌｌｏｘａｎ）処理によってインシュリン分泌が減少した成体ゼブラフィッシュにグルコースを注入してＨｄＰによる血液内グルコースの変化を観察した。
【００７０】
結果を図８に示した。図８を参照して見ると、アロキサンを処理した成体ゼブラフィッシュの血中グルコースは、ＨｄＰが処理される場合、濃度依存的に有意に減少することを確認した。このような効果は、血糖調節のために市中に使われるメットホルミン（ｍｅｔｆｏｒｍｉｎ）と比較したとき、類似した水準と現れた。特に、これは、ＨｄＰの処理濃度が０．３μｇ／ｇであることを考慮するとき、メットホルミンの処理濃度である５μｇ／ｇより１６．７倍低い濃度で類似した水準のグルコース流入誘導効果を期待することができることを意味する。
【００７１】
＜実験例２＞ＨｄＰの運動遂行能力向上活性
１．  実験方法
１．１  ゼブラフィッシュの準備
成体ゼブラフィッシュ（Ｚｅｂｒａｆｉｓｈ）は市中（ゼジュアクアリウム、チェジュド、大韓民国）で購入して実験に使い、２８．５±１℃の温度及び１４／１０時間の明暗周期条件の３．５Ｌアクリルタンクで管理し、１日２回食餌（Ｔｅｔｒａ  ＧｍｇＨ  Ｄ−４９３０４  Ｍｅｌｌｅ，ドイツ産）を給与した。実験はチェジュ大学校の動物実験倫理委員会の承認の下で行った。
【００７２】
１．２  ゼブラフィッシュ胚芽においてｆｌｕｏ４を用いた細胞内カルシウム濃度測定
ゼブラフィッシュ胚芽の細胞内カルシウム濃度測定は、カルシウム敏感性Ｆｌｕｏ４プローブを用いて行った。ゼブラフィッシュ胚芽をＦｌｕｏ４と２８．５±１℃の温度で３０分間反応させた後、ＨｄＰ（０．６、３、及び６μｇ／ｍｌ）を処理した。カルシウムの細胞内進入を抑制するために、カルシウムキレート剤であるＢＡＰＴＡ−ＡＭ  ０．１ｍＭを処理するときは、ｆｌｕｏ４を処理する前、１時間の間に予め反応させた。実験群は、無処理群（Ｎ）、Ｆｌｕｏ４単独処理群（Ｆ）、ＨｄＰ単独処理群（０．６、３、及び６μｇ／ｍｌ）、Ｆｌｕｏ４とＨｄＰ処理群（０．６、３、及び６μｇ／ｍｌ）、Ｆｌｕｏ４とＢＡＰＴＡ−ＡＭ及びＨｄｐ処理群（６μｇ／ｍｌ）で構成した。
【００７３】
１．３  ゼブラフィッシュの血中グルコース濃度測定
野生型成体ゼブラフィッシュを２ｍｇ／ｍｌのアロキサン（ａｌｌｏｘａｎ）に１時間反応させた後、インシュリンがない状態で１％グルコースに１時間反応させた。その後、反応溶液を水に取り替え、１時間反応させた後、ＨｄＰ、メットホルミン（Ｍｅｔｆｏｒｍｉｎ）、ＢＡＰＴＡ−ＡＭを９０分間処理した。実験群は、無処理群、アロキサン処理群（ｃｏｎｔｒｏｌ）、アロキサンとＨｄＰ（０．３μｇ／ｇ体重）処理群、アロキサンとメットホルミン（５μｇ／ｇ体重）処理群、アロキサンとＢＡＰＴＡ−ＡＭ（３μｇ／ｇ体重）処理群、及びアロキサンとＢＡＰＴＡ−ＡＭ（３μｇ／ｇ体重）、及びＨｄＰ（０．３μｇ／ｇ体重）処理群で構成した。
【００７４】
２．  実験結果
２．１  ゼブラフィッシュのＨｄＰによる細胞内カルシウム濃度変化測定結果
ＨｄＰによるゼブラフィッシュ胚芽細胞内カルシウムの変化をｆｌｕｏ４で観察した結果を図９に示した。図９を参照して見ると、無処理群（Ｎ）と比較したとき、Ｆｌｕｏ４処理群（Ｆ）は腹部周囲で有意的な違いがあることを確認したが、ＨｄＰのみを処理した実験群は無処理群（Ｎ）又はＦｌｕｏ４処理群（Ｆ）と比較して特別な変化が現されなかった（図９、左側）。これはＨｄＰによる蛍光変化がないことを意味する。そして、ＨｄＰとｆｌｕｏ４を一緒に処理した実験群はＦｌｕｏ４処理群（Ｆ）と比較して蛍光の有意的な増加が観察されることによって、細胞内Ｃａ２＋濃度がＨｄＰ処理によって増加したことが分かり、またカルシウムキレート剤であるＢＡＰＴＡ−ＡＭをＨｄＰとともに処理した場合は、細胞内へのＣａ２＋流入が抑制されることによって蛍光が減少したことを確認することができる（図９、右側）。
【００７５】
２．２  ゼブラフィッシュのＨｄＰによる血中グルコース変化測定結果
ＨｄＰが、細胞内Ｃａ２＋濃度上昇によって、筋収縮などに必要なグルコース吸収を誘導するかを確認するために、アロキサン処理によってインシュリン分泌が減少したゼブラフィッシュ成体にグルコースを注入して、ＨｄＰによる筋肉内へのグルコース流入誘導結果を血中濃度で確認した結果を図１０に示した。エネルギー源であるグルコースの血中濃度の減少は筋肉などの組職へのブドウ糖流入が指標として知られている（Ｄｉａｂｅｔｅｓ  ３０  （１９８１）  １０００−１００７；  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ  ４２０  （２０１２）  ５７６−５８１；  Ｎａｔ．  Ｒｅｖ．  Ｍｏｌ．  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．  ７  （２００６）  ８５−９６；  Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．  ８７  （２００８）  ３３７−３５１）。
【００７６】
アロキサンで処理したゼブラフィッシュ成体の血中グルコースはＨｄＰによって有意的に減少した。このような効果は血糖調節のために市中に使われるメットホルミン（ｍｅｔｆｏｒｍｉｎ）と比較したとき、類似した水準と現れた。特に、これは、ＨｄＰの処理濃度が０．３μｇ／ｇであることを考慮するとき、メットホルミンの処理濃度である５μｇ／ｇより１６．７倍低い濃度で類似した水準のグルコース流入誘導効果を期待することができることを意味する。
【００７７】
また、ＨｄＰのグルコース流入誘導効果が細胞内カルシウム濃度の上昇と関連があるかを確認するために、カルシウムキレート剤であるＢＡＰＴＡ−ＡＭを一緒に処理した結果、アロキサン処理群、ＢＡＰＴＡ−ＡＭ処理群及びＨｄＰ及びＢＡＰＴＡ−ＡＭ処理群の間にグルコースの濃度の大きな差がないことが観察されることから、ＨｄＰによって細胞内カルシウム濃度が上昇することによってゼブラフィッシュ成体のグルコース吸収が促進されたことを確認することができる。
【図１】
2019210270.tif 000008
【図２】
2019210270.tif 000009
【図３】
2019210270.tif 000010
【図４】
2019210270.tif 000011
【図５】
2019210270.tif 000012
【図６】
2019210270.tif 000013
【図７】
2019210270.tif 000014
【図８】
2019210270.tif 000015
【図９】
2019210270.tif 000016
【図１０】
2019210270.tif 000017
【手続補正書】
【提出日】令和1年8月30日(2019.8.30)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の式１の化合物、その水和物又はその溶媒和物。
【化１】
2019210270.tif 000018
【請求項２】
下記の式１の化合物、その水和物又はその溶媒和物を有効成分として含む、抗糖尿用組成物。
【化２】
2019210270.tif 000019
【請求項３】
前記組成物は食品組成物であることを特徴とする、請求項２に記載の抗糖尿用組成物。
【請求項４】
前記組成物は薬剤学的組成物であることを特徴とする、請求項２に記載の抗糖尿用組成物。