(57)【要約】【課題】パラベン類による感覚刺激を低減する、感覚刺激低減剤を提供する。【解決手段】スルフォラファン、又はスルフォラファン若しくはその配糖体を含有する植物若しくはその抽出物を有効成分とする感覚刺激低減剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
スルフォラファン、又はスルフォラファン若しくはその配糖体を含有する植物若しくはその抽出物を有効成分とする感覚刺激低減剤。
【請求項２】
感覚刺激が、ペラベン類により惹起される刺激感である請求項１記載の感覚刺激低減剤。
【請求項３】
スルフォラファン、又はスルフォラファン若しくはその配糖体を含有する植物若しくはその抽出物を有効成分とするＣＥＳ１発現促進剤。
【請求項４】
スルフォラファン若しくはその配糖体を含有する植物が発芽ブロッコリーである、請求項１〜３のいずれか１項記載の剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、パラベン類により惹起される刺激感を緩和する感覚刺激低減剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
皮膚化粧品等の皮膚外用剤は、細菌の混入、繁殖を防ぐために防腐剤を製剤に配合する場合が多い。中でも、パラベン類は抗菌力及び安全性が共に高い防腐剤として、最も多く皮膚外用剤に配合されている。しかし、紫外線、乾燥、化学物質等に過敏な人、いわゆる敏感肌の人においては、パラベン類によってピリピリ感やヒリヒリ感等の一過性の不快な刺激感を感じる場合がある。
【０００３】
これに対し、従来、皮膚に対する刺激感を抑制するものとして、例えば、界面活性剤に対する刺激を抑制する、疎水性基含有多糖類誘導体からなる刺激抑制剤（特許文献１）、染毛剤に対する刺激を抑制する染毛剤用刺激抑制剤（特許文献２）が報告されている。また、パラベン類の刺激抑制剤として、ＴＲＰＡ１の抑制物質が使用できることが報告されている（特許文献３）。
【０００４】
一方、アブラナ科アブラナ属に属するブロッコリー（Ｂｒａｓｓｉｃａ ｏｌｅｒａｃｅａ ｖａｒ． ｉｔａｌｉｃａ）の発芽体である発芽ブロッコリーは、スルフォラファンの含有量が高い植物として知られ、その抽出物には、美白、シワ、タルミ等の予防改善作用（特許文献４）や、皮脂産生促進作用（特許文献５）等があることが報告されている。
しかしながら、発芽ブロッコリーの抽出物やスルフォラファンに敏感肌を予防・改善するというような報告は存在しない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２００１−６４１８５号公報
【特許文献２】特開２００２−３６３０５３号公報
【特許文献３】特開２００８−７９５２８号公報
【特許文献４】特開２００３−１５５２２１号公報
【特許文献５】特願２００９−１１４１５２号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、パラベン類による感覚刺激を低減する、感覚刺激低減剤を提供することに関する。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、パラベン類により惹起される感覚刺激について検討したところ、メチルパラベンが生体内において代謝酵素カルボキシルエステラーゼ１（ＣＥＳ１）によって代謝されてｐ−ヒドロキシ安息香酸（ＰＨＢＡ）に変換され、当該ＰＨＢＡには感覚刺激が殆どないこと、更に、敏感肌の人では、健常者に比べてＣＥＳ１の発現が低下していることを見出し、ＣＥＳ１の発現促進物質がパラベン類による感覚刺激低減剤となり得ることを発見した。そして、スルフォラファンや発芽ブロッコリーのようなスルフォラファンを含有する植物の抽出物にＣＥＳ１の発現促進作用があり、パラベン類による感覚刺激低減効果があることを見出した。
【０００８】
すなわち、本発明は、以下の１）〜２）に係るものである。
１）スルフォラファン、又はスルフォラファン若しくはその配糖体を含有する植物若しくはその抽出物を有効成分とする感覚刺激低減剤。
２）スルフォラファン、又はスルフォラファン若しくはその配糖体を含有する植物若しくはその抽出物を有効成分とするＣＥＳ１発現促進剤。
【発明の効果】
【０００９】
本発明によれば、生体内においてパラベン類を速やかに分解し、パラベン類により惹起される感覚刺激を低減する、新しい機序の感覚刺激低減剤を提供できる。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】３次元培養表皮におけるＩＬ−１α産生量。ＭＰ：ｐ−ヒドロキシ安息香酸メチル添加、ＰＨＢＡ：ｐ−ヒドロキシ安息香酸添加。データは平均値±ＳＤ。
【図２】敏感肌者における皮膚感覚刺激スコア。ＭＰ：ｐ−ヒドロキシ安息香酸メチル塗布、ＰＨＢＡ：ｐ−ヒドロキシ安息香酸塗布。
【図３】健常者及び敏感肌者のＣＥＳ１発現量。データは平均値±ＳＤ。
【図４】健常者及び敏感肌者のｐ−ヒドロキシ安息香酸メチルの代謝活性。データは平均値±ＳＤ。
【図５】発芽ブロッコリー抽出物のｐ−ヒドロキシ安息香酸メチルによる感覚刺激低減作用。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
本発明において、スルフォラファン（Ｓｕｌｆｏｒａｐｈａｎｅ）は、４−（メチルスルフィニル）ブチルイソチオシアナートを指す。
スルフォラファンは、スルフォラファン若しくはその配糖体を含有する植物から公知の方法で単離精製すること等により取得することができる。また、単離精製されたスルフォラファンはシグマアルドリッチ社等から市販されており、本発明においては、当該市販品を使用することもできる。
【００１２】
本発明の有効成分としては、単離されたスルフォラファンのみならず、上記のスルフォラファン若しくはその配糖体を含有する植物又はその抽出物を使用することができる。
スルフォラファン若しくはその配糖体を含有する植物としては、例えばアブラナ科（Ｂｒａｓｓｉｃａｃｅａｅ）植物、好ましくはアブラナ科アブラナ属（Ｂｒａｓｓｉｃａ）の植物が挙げられる。具体的には、ブロッコリー、カリフラワー、キャベツ等が挙げられる。このうち、スルフォラファンの含有量の点で、ブロッコリー（Ｂｒａｓｓｉｃａ ｏｌｅｒａｃｅａ ｖａｒ． ｉｔａｌｉｃａ）が好ましく、発芽した後成長体となるまでの発芽ブロッコリー（「ブロッコリースプラウト」とも云われる）がより好ましい。
尚、スルフォラファンの配糖体としては、スルフォラファングルコシノレート等が挙げられる。
【００１３】
スルフォラファン若しくはその配糖体を含有する植物は、当該植物の全部又は一部の粉砕物、凍結乾燥物、搾汁等を用いることができる。例えば、発芽ブロッコリーでは、発芽体の芽、子葉、種子、根の一部又は全草の乾燥粉砕物が好適に使用できる。
上記植物の抽出物としては、公知の抽出方法により抽出して得られる各種溶剤抽出液、その希釈液、その濃縮液又はその乾燥末が挙げられる。公知の抽出方法としては、例えば、浸漬、煎出、浸出、固液抽出、還流抽出、超臨界抽出、超音波抽出及びマイクロ波抽出等が挙げられる。例えば、浸漬は、０℃〜溶媒沸点（好ましくは１５〜４０℃）で１時間〜４週間、浸漬・浸出することが挙げられ、固液抽出は、０℃〜溶媒沸点（好ましくは１５〜４０℃）下、３０〜１０００ｒｐｍで３０分〜２週間の攪拌もしくは振盪することが挙げられる。また、抽出物の酸化を防止するため、煮沸脱気や窒素ガス等の不活性ガスを通気して溶存酸素を除去しつつ、いわゆる非酸化的雰囲気下で抽出する手段を併用してもよい。また、還流抽出の場合には、ソックスレー抽出器等の抽出器具を用いて行うことができる。
【００１４】
抽出のための溶媒には、極性溶媒、非極性溶媒のいずれをも使用することができる。溶媒の具体例としては、例えば、水；１価、２価又は多価のアルコール類；アセトン、メチルエチルケトン等のケトン類；酢酸メチル、酢酸エチル等のエステル類；ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン等の鎖状又は環状のエーテル類；ポリエチレングリコール等のポリエーテル類；ヘキサン等の飽和又は不飽和の炭化水素類；ベンゼン、トルエン等の芳香族炭化水素類；ジクロロメタン、クロロホルム、ジクロロエタン、四塩化炭素等のハロゲン化炭化水素類；ピリジン類；ジメチルスルホキシド；アセトニトリル；二酸化炭素、超臨界二酸化炭素；油脂、ワックス、その他のオイル類；ならびにこれらの混合物が挙げられる。好適には、薬理活性および汎用性の点で、水、アルコール類およびそれらの混液が挙げられる。
【００１５】
上記アルコール類としては、特に限定されないが、例えば、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール、アミルアルコール、ヘキサノール、ヘプタノール、オクタノール等の１価アルコール類；１，３−ブチレングリコール、エチレングリコール、プロピレングリコール、１，４−ブタンジオール、１，５−ペンタンジオール、１，６−ヘキサンジオール等の２価アルコール類；グリセリン等の３価以上のアルコール類等が挙げられる。このうち、薬理活性および操作性の点で、１価アルコール類および２価アルコール類が好ましい。また好ましくは、上記アルコール類は、炭素数１〜１０のアルコール、より好ましくは炭素数１〜４のアルコールであり得る。
【００１６】
上記アルコール類の好ましい例としては、メタノール、エタノール、１，３−ブチレングリコール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール、イソブタノール、ｓｅｃ−ブタノール、ｔ−ブタノール等が挙げられる。
【００１７】
上記アルコール類の水溶液におけるアルコールの濃度は、好ましくは２０質量％以上、より好ましくは３０質量％以上であり、より好ましくは４０質量％以上であり、且つ好ましくは８０質量％以下、より好ましくは７０質量％以下、さらに好ましくは６０質量％以下である。また、上記アルコール類の水溶液におけるアルコールの濃度は、好ましくは２０〜８０質量％、より好ましくは３０〜７０質量％、さらに好ましくは４０〜６０質量％である。
【００１８】
上記アルコール類のうち、汎用性の観点から、エタノールがより好ましい。したがって、上記植物の抽出物を調製するためのより好適な溶媒としては、水、エタノール、エタノール水溶液が挙げられる。
【００１９】
抽出における溶媒の使用量としては、植物（乾燥質量換算）１ｇに対して１〜１０００ｍＬが好ましい。ここで、本明細書において体積は２５℃での体積を意味する。また乾燥質量は試料を１０５℃の電気恒温乾燥機で３時間乾燥して揮発物質を除いた残分である乾燥固形分の質量を意味する。抽出条件は、十分な抽出が行える条件であれば特に限定されない。例えば、抽出時間は好ましくは１時間以上、より好ましくは３日以上、より好ましくは１週間以上であり、他方、好ましくは２ヶ月以下、より好ましくは５週間以下、より好ましくは２週間以下である。抽出温度は０℃以上が好ましく、５℃以上がより好ましく、他方、溶媒沸点以下が好ましく、９０℃以下がより好ましい。通常、低温なら長時間、高温なら短時間の抽出を行う。抽出条件の例としては、１５〜４０℃で３日〜５週間、好ましくは１〜２週間、６０〜９０℃で１〜５時間等が挙げられるが、これらに限定されず、当業者によって適宜選択され得る。
【００２０】
本発明において、植物抽出物はそのまま用いることもできるが、当該抽出物を希釈、濃縮若しくは乾燥した後、粉末又はペースト状に調製して用いることもできる。また、凍結乾燥し、用時に、通常抽出に用いられる溶剤、例えば水、エタノール、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、水・エタノール混液、水・プロピレングリコール混液、水・１，３−ブチレングリコール混液等の溶剤で希釈して用いることもできる。また、リポソーム等のベシクルやマイクロカプセル等に内包させて用いることもできる。
【００２１】
斯くして得られた植物抽出物は、必要に応じて、合成吸着剤による処理、ろ過処理、濃縮処理等の分離・精製工程に供することにより、スルフォラファンの含有割合を高めてもよい。スルフォラファンの含有割合を高めた発芽ブロッコリー抽出物として、「ブロッコリースプラウトエキス」（オリザ油化株式会社）が市販されており、本発明においては、当該市販品を使用することもできる。
【００２２】
後記実施例に示すとおり、スルフォラファン及びスルフォラファンを含有する植物である発芽ブロッコリー抽出物は、ＣＥＳ１の発現を促進させ、またパラベン類による感覚刺激を低減する作用を有する。
したがって、スルフォラファン又はスルフォラファン若しくはその配糖体を含有する植物若しくはその抽出物は、感覚刺激低減剤又はＣＥＳ１発現促進剤となり得、感覚刺激低減するため、ＣＥＳ１の発現を促進するために使用でき、また、感覚刺激低減剤又はＣＥＳ１発現促進剤を製造するために使用することができる。
ここで、「使用」は、ヒト若しくは非ヒト動物への投与又は摂取であり得、また治療的使用であっても非治療的使用であってもよい。尚、「非治療的」とは、医療行為を含まない概念、すなわち人間を手術、治療又は診断する方法を含まない概念、より具体的には医師又は医師の指示を受けた者が人間に対して手術、治療又は診断を実施する方法を含まない概念である。
【００２３】
本発明において、「感覚刺激低減」とは、パラベン類により惹起される、皮膚のピリピリ感やヒリヒリ感等の一過性の不快な刺激感を、抑制又は緩和することを意味する。ここで、「パラベン類」としては、例えばメチルパラベン（ｐ−ヒドロキシ安息香酸メチル）、エチルパラベン（ｐ−ヒドロキシ安息香酸エチル）、プロピルパラベン（ｐ−ヒドロキシ安息香酸プロピル）、イソプロピルパラベン（ｐ−ヒドロキシ安息香酸イソプロピル）、ブチルパラベン（ｐ−ヒドロキシ安息香酸ブチル）、イソブチルパラベン（ｐ−ヒドロキシ安息香酸イソブチル）、ベンジルパラベン（ｐ−ヒドロキシ安息香酸ベンジル）等のパラオキシ安息香酸エステル及びそのナトリウム塩が挙げられる。
斯かる感覚刺激低減効果は、後記実施例に示すような官能評価により測定することができる。
【００２４】
また、本発明において、「ＣＥＳ１」とは、カルボキシルエステラーゼ１を指し、セリンエステラーゼ１又はＳＥＳ１としても知られている。この酵素は、哺乳動物肝臓カルボキシエステラーゼ（ＥＣ  ３．１．１．１）のファミリーのメンバーであり、エステル、チオエステル又はアミド官能基を有する内因性基質を加水分解する。
後記参考例に示すとおり、ヒト三次元培養表皮モデルにｐ−ヒドロキシ安息香酸メチル（ＭＰ）又はｐ−ヒドロキシ安息香酸（ＰＨＢＡ）を添加して培養した後、培地中の炎症性サイトカイン（ＩＬ−１α）量を測定したところ、ＭＰを添加した場合にはＩＬ−１αの産生が増加したが、ＰＨＢＡの添加ではＩＬ−１αの産生は殆ど見られなかった（図１）。また、敏感肌を意識する人の皮膚にＭＰ又はＰＨＢＡを塗布し、その刺激感を試験したところ、ＭＰ塗布では何らかの刺激感が感じられたのに対して、ＰＨＢＡの塗布では刺激感は殆ど感じられなかった（図２）。更に、健常者および敏感肌者より皮膚を採取し、皮膚中のＭＰの代謝活性とＣＥＳ１の発現量を測定したところ、敏感肌者の皮膚では健常者の皮膚に比べて、ＭＰの代謝活性が低く、ＣＥＳ１発現量が遥かに低いことが認められた（図３、４）。
これらの結果は、ＣＥＳ１の発現を促進する物質が、パラベン類による感覚刺激低減剤として有用であることを示唆している。
【００２５】
本発明において、「ＣＥＳ１発現」には、ＣＥＳ１タンパク質の発現、ＣＥＳ１タンパク質の活性、当該タンパク質をコードするＣＥＳ１ｍＲＮＡの発現、及びＣＥＳ１遺伝子のプロモーターの活性が含まれ、好ましくはＣＥＳ１ｍＲＮＡ発現である。
尚、本発明において、ＣＥＳ１発現促進効果は、例えば、ＣＥＳ１を発現可能な細胞に、本発明の有効成分を接触させ、当該細胞におけるＣＥＳ１の発現（例えば、ＣＥＳ１ｍＲＮＡの発現等）を測定することによって評価することができる。
【００２６】
感覚刺激低減剤及びＣＥＳ１発現促進剤は、スルフォラファン又はスルフォラファン若しくはその配糖体を含有する植物若しくはその抽出物を単独で用いたものであってもよく、あるいは油分、色素、香料、防腐剤、キレート剤、顔料、酸化防止剤、ビタミン、ミネラル、甘味料、調味料、保存料、結合剤、増量剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤、分散剤、緩衝剤、被膜剤、担体、希釈剤等の、医薬品、化粧品、医薬部外品、生活用品等の各種製剤に用いられる添加剤や賦形剤等と組み合わせた組成物であってもよい。またそれらの形態も特に限定されず、例えば溶液、エマルジョン、サスペンジョン、ゲル、固形、粉体、粒体、エアゾールなど、任意の形態に調製できる。
当該組成物におけるスルフォラファン又はスルフォラファン若しくはその配糖体を含有する植物若しくはその抽出物の配合量は、スルフォラファンとして、製剤全質量の０．０００１質量％以上、好ましくは０．００１質量％以上、より好ましくは０．０１質量％以上、さらに好ましくは０．１質量％以上であり、そして、９９質量％以下、好ましくは９５質量％以下、より好ましくは９０質量％以下、さらに好ましくは８０質量％以下である。また、０．００１〜９９質量％、好ましくは０．０１〜９５質量％、より好ましくは０．１〜９０質量％、さらに好ましくは１〜８０質量％が挙げられる。また、当該組成物中にスルフォラファン若しくはその配糖体を含有する植物若しくはその抽出物を含有する場合、その含有量は、乾燥固形分として、製剤全質量の０．００１質量％以上、好ましくは０．０１質量％以上、より好ましくは０．１質量％以上、さらに好ましくは１質量％以上であり、そして、９９質量％以下、好ましくは９５質量％以下、より好ましくは９０質量％以下、さらに好ましくは８０質量％以下である。また、０．００１〜９９質量％、好ましくは０．０１〜９５質量％、より好ましくは０．１〜９０質量％、さらに好ましくは１〜８０質量％が挙げられる。
【００２７】
本発明の感覚刺激低減剤及びＣＥＳ１発現促進剤は、例えば、上述したパラベン類を含有する組成物（皮膚洗浄剤、頭髪洗浄剤、メイクアップ剤、入浴剤、パーマネントウェーブ用剤、染毛剤、石鹸類、台所用洗剤、洗濯用洗剤、歯磨類等の化粧品、医薬部外品、医薬品、生活用品等）に配合して使用すること、或いはパラベン類を含有する組成物とは別個の組成物として調製し、前記組成物と同時或いは前記組成物の使用前後に使用することにより、当該パラベン類により引き起こされる刺激感を低減できる。すなわち、本発明の感覚刺激低減剤又はＣＥＳ１発現促進剤の適用対象は、好ましくは、パラベン類を含有する組成物を使用するヒトであって、パラベン類により引き起こされる刺激感の低減を求めるヒトが挙げられる。
【００２８】
本発明の感覚刺激低減剤及びＣＥＳ１発現促進剤を、パラベン類を含有する組成物と共に用いる場合、感覚刺激低減剤及びＣＥＳ１発現促進剤の使用量は、感覚刺激を低減する限り特に限定されないが、例えば、パラベン類１質量部に対し、本発明のスルフォラファン又はスルフォラファン若しくはその配糖体を含有する植物若しくはその抽出物を、スルフォラファンとして、好ましくは１０−７質量部以上、より好ましくは１０−６質量部以上、さらに好ましくは１０−５質量部以上であり、そして好ましくは１０質量部以下、より好ましくは１質量部以下、さらに好ましくは０．１質量部以下の割合とすることができる。また、好ましくは１０−７〜１０質量部、より好ましくは１０−６〜１質量部、さらに好ましくは１０−５〜０．１質量部の割合とすることができる。
【００２９】
上述した実施形態に関し、本発明においてはさらに以下の態様が開示される。
＜１＞スルフォラファン、又はスルフォラファン若しくはその配糖体を含有する植物若しくはその抽出物を有効成分とする感覚刺激低減剤。
＜２＞スルフォラファン、又はスルフォラファン若しくはその配糖体を含有する植物若しくはその抽出物を有効成分とするＣＥＳ１発現促進剤。
＜３＞感覚刺激低減剤を製造するための、スルフォラファン、又はスルフォラファン若しくはその配糖体を含有する植物若しくはその抽出物の使用。
＜４＞ＣＥＳ１発現促進剤を製造するための、スルフォラファン、又はスルフォラファン若しくはその配糖体を含有する植物若しくはその抽出物の使用。
＜５＞感覚刺激の低減に使用するための、スルフォラファン、又はスルフォラファン若しくはその配糖体を含有する植物若しくはその抽出物。
＜６＞ＣＥＳ１の発現促進に使用するための、スルフォラファン、又はスルフォラファン若しくはその配糖体を含有する植物若しくはその抽出物。
＜７＞感覚刺激を低減するための、スルフォラファン、又はスルフォラファン若しくはその配糖体を含有する植物若しくはその抽出物の（非治療的）使用。
＜８＞ＣＥＳ１発現を促進するための、スルフォラファン、又はスルフォラファン若しくはその配糖体を含有する植物若しくはその抽出物の（非治療的）使用。
＜９＞スルフォラファン、又はスルフォラファン若しくはその配糖体を含有する植物若しくはその抽出物を用いる、感覚刺激低減方法。
＜１０＞スルフォラファン、又はスルフォラファン若しくはその配糖体を含有する植物若しくはその抽出物を用いる、ＣＥＳ１発現促進方法。
＜１１＞上記＜１＞、＜３＞、＜５＞、＜７＞又は＜９＞において、感覚刺激は、ペラベン類により惹起される刺激感である。
＜１２＞上記＜１＞〜＜１１＞において、スルフォラファン若しくはその配糖体を含有する植物が発芽ブロッコリーである。
＜１３＞上記＜１＞〜＜１２＞において、スルフォラファン、又はスルフォラファン若しくはその配糖体を含有する植物若しくはその抽出物は、パラベン類を含有する組成物に配合して使用するか、或いは当該組成物とは別個の組成物として調製し、前記組成物と同時又は前記組成物の使用前後に使用するものである。
＜１４＞上記＜１３＞において、スルフォラファン、又はスルフォラファン若しくはその配糖体を含有する植物若しくはその抽出物は、パラベン類１質量部に対し、スルフォラファン又はスルフォラファン若しくはその配糖体を含有する植物若しくはその抽出物を、スルフォラファンとして、好ましくは１０−７質量部以上、より好ましくは１０−６質量部以上、さらに好ましくは１０−５質量部以上であり、そして好ましくは１０質量部以下、より好ましくは１質量部以下、さらに好ましくは０．１質量部以下の割合か、又は好ましくは１０−７〜１０質量部、より好ましくは１０−６〜１質量部、さらに好ましくは１０−５〜０．１質量部の割合で使用するものである。
＜１５＞上記＜１＞、＜３＞において、組成物中のスルフォラファン又はスルフォラファン若しくはその配糖体を含有する植物若しくはその抽出物の配合量は、スルフォラファンとして、製剤全質量の０．０００１質量％以上、好ましくは０．００１質量％以上、より好ましくは０．０１質量％以上、さらに好ましくは０．１質量％以上であり、そして、９９質量％以下、好ましくは９５質量％以下、より好ましくは９０質量％以下、さらに好ましくは８０質量％以下であるか、又は０．００１〜９９質量％、好ましくは０．０１〜９５質量％、より好ましくは０．１〜９０質量％、さらに好ましくは１〜８０質量％である。＜１６＞上記＜１＞、＜３＞において、組成物中のスルフォラファン若しくはその配糖体を含有する植物若しくはその抽出物の配合量は、乾燥固形分として、製剤全質量の０．００１質量％以上、好ましくは０．０１質量％以上、より好ましくは０．１質量％以上、さらに好ましくは１質量％以上であり、そして、９９質量％以下、好ましくは９５質量％以下、より好ましくは９０質量％以下、さらに好ましくは８０質量％以下であるか、又は０．００１〜９９質量％、好ましくは０．０１〜９５質量％、より好ましくは０．１〜９０質量％、さらに好ましくは１〜８０質量％である。
【実施例】
【００３０】
以下、本発明を実施例に基づきさらに詳細に説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。
【００３１】
参考例１  パラベン類により惹起される感覚刺激性の比較（三次元培養表皮での評価）
ヒト三次元培養表皮モデルとしてＬａｂＣｙｔｅ  ＥＰＩ−ＭＯＤＥＬ２４（株式会社ジャパン・ティッシュ・エンジニアリング）を用いた。専用アッセイ培地５００μＬで培養カップを一晩前培養（５％ＣＯ２、３７℃）した後、培養カップを新しいアッセイ培地の入った２４ウェルプレートに移した。培養カップ内の表皮組織にｐ−ヒドロキシ安息香酸メチル（ＭＰ）あるいはｐ−ヒドロキシ安息香酸（ＰＨＢＡ）の１６．４ｍＭ水溶液５０μＬ  を添加し、６時間培養した後、リン酸緩衝液で培養カップ内を１０回洗浄し、カップを新しいアッセイ培地の入った２４ウェルプレートに移して、さらに１８時間追培養した。追培養後、培地中のＩＬ−１α量をＨｕｍａｎ  ＩＬ−１  ａｌｐｈａ／ＩＬ−１Ｆ１  Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅ  ＥＬＩＳＡ  Ｋｉｔ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を用い添付プロトコールに従って定量した。結果を図１に示す。
図１より、感覚刺激物質により産生が亢進することが知られているＩＬ−１α量がＰＨＢＡではＭＰと比べて非常に少なく、ＰＨＢＡの感覚刺激性は極めて弱と考えられた。
【００３２】
参考例２  パラベン類により惹起される感覚刺激性の比較（ヒト評価）
次の基準のすべてに該当する者を敏感肌の被験者として選抜した。
１．  年齢：２０〜５５歳
２．  性別：女性
３．  敏感肌と自覚している者
４．  以下のａまたはｂの１つ以上に該当する者
ａ．  敏感肌対応化粧品と思われる製品を選んで使用している
ｂ．  過去１年以内に、洗顔料、スキンケア製品や化粧下地を使用してぴりぴり、チクチクと言った刺激を感じたことがある
【００３３】
選抜した被験者に対して次の方法でスティンギング試験Ａを実施した。
メイク落としと洗顔料によって洗顔後、温度２３℃湿度５０％環境下で５分以上馴化させ、ｐ−ヒドロキシ安息香酸メチルあるいはｐ−ヒドロキシ安息香酸の１６．４ｍＭ水溶液６００μＬを含浸した２ｃｍ×５ｃｍの不織布を頬部に接触させ、接触開始３０秒後、１分後、２分後、３分後、５分後の被験者が認知した感覚刺激（痛い、ぴりぴりする、ちくちくする、じんじんする、温かい、ほてる）について申告したスコア（０：なにも感じない、０．５：わずかに感じられる或いはほんの少しの違和感、１．０：少しの違和感、１．５：少し〜多少の違和感、２．０：多少の違和感、２．５：多少〜かなりの違和感、３．０：我慢できない或いはかなりの違和感）の３０秒後〜５分後までのすべてのスコアの中の最大値から蒸留水で同様の試験を実施した時のスコアの最大値を引いた値を感覚刺激スコアとしてＷｉｌｃｏｘｏｎの符号付順位和検定によって統計解析した。結果を図２に示す。
図２より、ＰＨＢＡの感覚刺激は極めて弱く、感覚刺激への寄与は殆どないと考えられた。
【００３４】
参考例３  健常肌と敏感肌のＣＥＳ１発現量および代謝活性の比較
（１）スティンギング試験Ｂ
メイク落としと洗顔料によって洗顔後、温度２３℃湿度５０％環境下で５分以上馴化させ、ｐ−ヒドロキシ安息香酸メチルの１６．４ｍＭ水溶液６００μＬを含浸した１０ｃｍ２の不織布を右頬部に接触させ、接触開始３０秒後、１分後、２分後、３分後の被験者が認知した感覚刺激について申告したスコア（０：なにも感じない、０．５：わずかに感じる、１．０：少し感じる、２．０：はっきり感じる、３．０：非常に強く感じる、強い刺激に不織布を外したい）の３０秒後〜３分後までのすべてのスコアの中の最大値を頬部の感覚刺激スコアとした。次いで、７０％イソプロピルアルコールで右頸部を清拭後、ｐ−ヒドロキシ安息香酸メチル（ＭＰ）の１６．４ｍＭ水溶液３００μＬを含浸した２ｃｍ×２．５ｃｍの不織布を清拭部位に接触させ、接触開始３０秒後、１分後、２分後、３分後の被験者が認知した感覚刺激について申告したスコア（０：なにも感じない、０．５：わずかに感じる、１．０：少し感じる、２．０：はっきり感じる、３．０：非常に強く感じる、強い刺激に不織布を外したい）の３０秒後〜３分後までのすべてのスコアの中の最大値を頸部の感覚刺激スコアとした。
【００３５】
（２）被験者の選抜
次の基準のすべてに該当する者の中から３名を健常肌者として選抜した。
・年齢：２０〜５５歳
・性別：女性
・敏感肌ではないと自覚している者
・スティンギング試験Ｂで頬部・頸部の感覚刺激スコアがいずれも０（なにも感じない）の者
【００３６】
次の基準のすべてに該当する者の中から３名を敏感肌者として選抜した。
・年齢：２０〜５５歳
・性別：女性
・敏感肌と自覚している者
・スティンギング試験Ｂで頬部の感覚刺激スコアが２（はっきり感じる）以上かつ頸部の感覚刺激スコアが０．５（わずかに感じる）以上の者
【００３７】
（３）皮膚生検
健常肌者および敏感肌者より各３名ずつを選抜し、右頸部（スティンギング試験を実施した部位）より４ｍｍφの生検トレパンによって皮膚を採取し、採取皮膚を液体窒素によってただちに凍結させ、解析まで−８０℃で保存した。
【００３８】
（４）生検皮膚中カルボキシルエステラーゼ１の発現量および活性
４ｍｍφの生検皮膚をメスで半分にし、一片をカルボキシルエステラーゼ１の発現量解析用、残りの一片をカルボキシルエステラーゼ１の活性解析用に用いた。
発現量解析用生検皮膚組織をハサミで細切し、プロテアーゼ阻害剤ミックス（和光純薬工業）を添加したＲＩＰＡ  ｂｕｆｆｅｒ（和光純薬工業）を生検皮膚組織の入ったマイクロチューブ内に（組織重量（ｍｇ）×２０）μＬ添加して、ホモジナイザー（ヒスコトロン、株式会社マイクロテック・ニチオン）でホモジナイズした後、３０分間氷上で静置した。３０分後、４℃で２分間超音波処理し、１０，０００ｒｐｍ、４℃で２０分間遠心して、その上清を皮膚抽出液として得た。Ｐｉｅｒｃｅ  ＢＣＡ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用い、ｂｏｖｉｎｅ  ｓｅｒｕｍ  ａｌｂｕｍｉｎを標準タンパク質として皮膚抽出液のタンパク質量を定量した。
【００３９】
皮膚抽出液を試料として以下の通りポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）及びウェスタンブロッティングを行った。
皮膚抽出液をＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分離後、ＰＶＤＦ膜（ＢＩＯ  ＲＡＤ）に転写した。転写したＰＶＤＦ膜は５％スキムミルク液に浸漬してブロッキングした後、１：２００に希釈した抗カルボキシルエステラーゼ１抗体（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｃａｔ＃ＭＡＢ４９２０）を用いて一次抗体反応を行い、１：２０００に希釈したｈｏｒｓｅｒａｄｉｓｈ  ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ（ＨＲＰ）標識抗マウスＩｇＧ抗体（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｃａｔ＃ＨＡＦ００７）を用いて二次抗体反応を行った。Ｃｌａｒｉｔｙ  Ｗｅｓｔｅｒｎ  ＥＣＬ  Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ（ＢＩＯ  ＲＡＤ）にて発光させ、ＬＡＳ−４０００（富士フィルム株式会社）を用いて抗体反応を検出した。撮影したウェスタンブロットの画像からＣＥＳ１とアクチンのバンドを画像解析ソフトＣＳ Ａｎａｌｙｚｅｒ（アトー株式会社）により別々に選択しバンド強度を測定して、アクチン当たりのＣＥＳ１の強度を算出した。なお、ポリアクリルアミドゲルへの試料のロード量が均一であるかどうかは、一次抗体に抗β―アクチン抗体を用いた同様の実験により検証した。
【００４０】
活性解析用生検皮膚組織をハサミで細切後、５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ／  １５０ｍＭ  ＫＣｌ（ｐＨ  ７．４）溶液を（組織重量（ｍｇ）×２０）μＬ添加し、ホモジナイザー（ヒスコトロン、株式会社マイクロテック・ニチオン）でホモジナイズした後、１０，０００ｒｐｍ、４℃で２０分間遠心して、その上清を皮膚抽出液として得た。皮膚抽出液のタンパク質量をＰｉｅｒｃｅ  ＢＣＡ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いて定量した。各皮膚抽出液の最終タンパク濃度が５０μｇ／ｍＬとなるように調製し、カルボキシルエステラーゼ１の基質であるｐ−ヒドロキシ安息香酸メチルを２００μＭとなるよう添加し、３７℃で５時間反応させた。その後、反応溶液と同量の冷アセトニトリルを添加し、反応を停止させ、代謝物であるｐ−ヒドロキシ安息香酸をＨＰＬＣで定量し、単位タンパク質、単位時間当たりのｐ−ヒドロキシ安息香酸生成量をＣＥＳ１代謝活性とした。以下にＨＰＬＣに用いた機器、カラム、測定条件を示す。
【００４１】
機器：Ａｌｌｉａｎｃｅ  ２６９５  Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ  Ｍｏｄｕｌｅ、２９９６  Ｐｈｏｔｏｄｉｏｄｅ  Ａｒｒａｙ  Ｄｅｔｅｃｔｏｒ（Ｗａｔｅｒｓ）
カラム：Ｌ−ｃｏｌｕｍｎ  ＯＤＳ（４．６×１５０ｍｍ、５μｍ、化学物質評価研究機構）
カラム温度：４０℃
移動相：４５％メタノール／  ０．１％ギ酸
流速：１．０ｍＬ／  ｍｉｎ
試料注入量：５０μＬ
検出波長：２５４ｎｍ  
【００４２】
結果を図３及び図４に示す。
図３及び図４より、敏感肌者の皮膚は健常者の皮膚に比べてＣＥＳ１発現量、ＣＥＳ１代謝活性が低いことが認められた。
【００４３】
実施例１  ＣＥＳ１発現促進作用
正常ヒト表皮角化細胞（ライフテクノロジーズジャパン）を各ウェル１×１０５となるよう６−ｗｅｌｌプレートに播種し、ＨｕＭｅｄｉａ−ＫＧ２（クラボウ）で一晩培養後、スルフォラファン（シグマアルドリッチ社）を最終濃度０．１、１、１０μＭとなるように、発芽ブロッコリー抽出物（「ブロッコリースプラウトエキス」（オリザ油化株式会社、化粧品用））は固形分濃度０．０００１ｗ／ｖ％あるいは０．００１ｗ／ｖ％となるように細胞へ暴露し、４８時間培養した。培養後の細胞をリン酸緩衝液（Ｄ−ＰＢＳ（−））で洗浄し、ＲＮｅａｓｙ  Ｍｉｎｉ  Ｋｉｔｓ（キアゲン社）を用い、添付のマニュアルに従ってＲＮＡを抽出した。ＲＮＡ濃度は、ＮａｎｏＤｒｏｐ１０００（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いて算出した。Ｈｉｇｈ−Ｃａｐａｃｉｔｙ  ＲＮＡ−ｔｏ−ｃＤＮＡ  Ｋｉｔ（ライフテクノロジーズジャパン社）を用いて抽出したＴｏｔａｌ  ＲＮＡの逆転写反応を行った後、７５００  Ｆａｓｔ  Ｒｅａｌ−Ｔｉｍｅ  ＰＣＲ  Ｓｙｓｔｅｍ（ライフテクノロジーズジャパン社）を用いてリアルタイムＰＣＲを実施した。リアルタイムＰＣＲは、前記で逆転写したｃＤＮＡとカルボキシルエステラーゼ１もしくは内在性コントロールとしてＲＰＬＰ０のＴａｑｍａｎプライマー（ライフテクノロジーズジャパン社、ＣＥＳ１：Ｈｓ００２７５６２７−ｍ１、ＲＰＬＰ０：ＨＳ００４２０８９５＿ｇＨ）、Ｔａｑｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ（ライフテクノロジーズジャパン社）を用いて、ΔΔＣＴ法により遺伝子発現量を比較した。結果を表１及び２に示す。
【００４４】
【表１】
2019202987.tif 000002
【００４５】
【表２】
2019202987.tif 000003
【００４６】
表１及び２より、スルフォラファン又は発芽ブロッコリー抽出物によってＣＥＳ１ｍＲＮＡ発現量の増加が認められた。
【００４７】
実施例２  感覚刺激低減作用
敏感肌を自覚しており、かつｐ−ヒドロキシ安息香酸メチル（ＭＰ）に感覚刺激を感じる男性を被験者として選抜して、固形分濃度０．０１％の発芽ブロッコリー抽出物（「ブロッコリースプラウトエキス」（オリザ油化株式会社、化粧品用））含有する１０％エタノール溶液を１日２回、１回５００円玉大の量を１週間にわたって被験者の全顔に塗布し、塗布前後のスティンギング試験Ｃによる感覚刺激スコアを比較した。スティンギング試験Ｃは次の方法で実施した。
メイク落としと洗顔料によって洗顔後、温度２３℃湿度５０％環境下で５分以上馴化させ、ｐ−ヒドロキシ安息香酸メチルの１６．４ｍＭ水溶液６００μＬを含浸した１０ｃｍ２の不織布を頬部に適用し、適用３０秒〜３分後の被験者が認知した感覚刺激について申告したスコア（０：なにも感じない、０．５：わずかに感じる、１．０：少し感じる、２．０：はっきり感じる、３．０：非常に強く感じる、強い刺激に不織布を外したい）の最大値から蒸留水で同様の試験を実施した時のスコアの最大値を引いた値を感覚刺激スコアとしてＷｉｌｃｏｘｏｎの符号付順位和検定によって統計解析した。結果を図５に示す。
【００４８】
図５より、発芽ブロッコリー抽出物によってｐ−ヒドロキシ安息香酸メチルの感覚刺激が低減されることが確認された。
【図１】
2019202987.tif 000004
【図２】
2019202987.tif 000005
【図３】
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【図４】
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【図５】
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