(57)【要約】      （修正有）【課題】美容剤用配合物生成物を生成するための生物学的試料材料を収集、保管、及び分配するためのビジネスモデル、方法、及びシステムを提供する。【解決手段】幹細胞ベースの美容剤の処理及び製造のためのビジネスモデルを対象とする。この方法は、幹細胞ベースの生物学的材料を指定することから始まり、その後、幹細胞ベースの生物学的材料の収集、輸送、及び分配に関する所定のサービスに対する報酬の収集を確立する。このビジネスモデルは、次いで、幹細胞ベースの生物学的材料を供給源から得て、幹細胞ベースの生物学的材料を処理して、美容製品での使用のために少なくとも１つの生物学的生成物を生成する。少なくとも「処理」の完了時、及び任意の美容製品の製造の実施前に、品質制御のための少なくとも１つの生物学的生成物の試験を行う。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
幹細胞美容剤の処理及び製造のためのビジネスモデルにおいて、
ａ．幹細胞ベースの生物学的材料を指定するステップと、
ｂ．前記幹細胞ベースの生物学的材料の収集、処理、及び輸送に関する所定のサービスに対する報酬を収集するステップと、
ｃ．前記幹細胞ベースの生物学的材料を得るステップと、
ｄ．少なくとも１つの生物学的生成物を生成するために、前記幹細胞ベースの生物学的材料を酵素的に消化して分離するステップと、
ｅ．品質制御のために、前記少なくとも１つの生物学的生成物を試験するステップと、
ｆ．美容製品のためのビヒクル配合物を調製するステップと、
ｇ．美容製品を得るために、前記少なくとも１つの生物学的生成物を、前記ビヒクル配合物と配合させるステップと
を含み、
前記少なくとも１つの生物学的生成物が、前駆脂肪細胞、脂肪由来の間充織幹細胞、微小血管内皮細胞、内皮前駆細胞、単核細胞、及び血管平滑筋細胞の細胞混合物を含む間質血管細胞群であり、前記混合物中の有核細胞の少なくとも１％は、脂肪由来の間充織細胞でなければならず、前記間質血管細胞群は、アクリジンオレンジ／ヨウ化プロピジウムまたはトリパンブルー色素排除試験で、３５％以上の複合的な生存能力を示さなければならず、含有されている前記脂肪由来の間充織幹細胞は、細胞培養の分野の当業者に知られている適切な環境条件の下で適切な培地と接触させて配置したときに、増殖できなければならず、前記混合物が成熟脂肪細胞を含まない
ことを特徴とするビジネスモデル。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１１年３月２８日出願の米国仮特許出願第６１／４６８，１３２号明細書、２０１１年１２月３０日出願の米国仮特許出願第６１／５８２，０２６号明細書、及び２０１２年１月２０日出願の米国仮特許出願第６１／５８８，８４１号明細書に対する優先権を主張するものであり、各仮特許出願の全体を本明細書に援用する。
【０００２】
本発明は、得られた幹細胞ベースの生物学的試料材料からの美容剤用配合物の収集、低温保管、及び分配のためのビジネスモデルを対象とする。
【背景技術】
【０００３】
生物学的試料の収集、処理、及び長期保管のビジネスは、健康な人が、将来の療法での使用のために自分の組織を個人的に保存することができるようにする。個人化された収集及び保管は、保存されている患者自身の組織を将来の使用のために使うことができるようにすることによって、「個人化された医療」の問題または「バイオインシュランス」に対する解決策になる。
【０００４】
生理学的経路に活性的に作用すると同時に基本的な皮膚の問題に対応することが知られている成分を使用して調製された美容製品は、急速に、科学的な認知及びマーケットシェアを得ている。この概念を支援して進めるビジネスモデル、方法、及びシステムの構築は、科学と美容との将来的な融合を想定している。
【０００５】
このために確立されるビジネスモデルは、保存のための特定の組織に関する独特なプロセスを調整するために必要とされるだけでなく、この目的を達成するためにプロセスを補完するための機器も含む。更に、良い結果をもたらす方法は、後の使用のために、実質的に純粋であり生存能力の高い低温保管された試料を効果的かつ効率的に得るための他のサービスを評価して含む必要もある。
【０００６】
組織及び細胞の理解及び特性の近年の発達は、得られた生物学的試料を、様々な治療のために後で使用するために処理して低温保管することができるような科学の進歩を可能にしている。これは、同種及び自己幹細胞、並びに関連の増殖因子及び成長培地の使用において最も良く評価されている。しかし、科学的根拠があるにせよ、この着想を実現可能にするためには、費用対効果が高く信頼性のある長期的なビジネスモデルもなければならない。
【発明の概要】
【０００７】
第１の実施形態では、本発明は、幹細胞ベースの美容剤の処理及び製造のためのビジネスモデルを対象とする。この方法は、幹細胞ベースの生物学的材料を指定することから始まり、その後、幹細胞ベースの生物学的材料の収集、輸送、及び分配に関する所定のサービスに対する報酬の収集を確立する。このビジネスモデルは、次いで、幹細胞ベースの生物学的材料を供給源から得て、幹細胞ベースの生物学的材料を処理して、美容製品での使用のために少なくとも１つの生物学的生成物を生成する。少なくとも「処理」の完了時、及び任意の美容製品の製造の実施前に、品質制御のための少なくとも１つの生物学的生成物の試験を行う。
【０００８】
少なくとも１つの生物学的生成物を定義する品質制御試験後、望まれる特定の美容製品のためにビヒクル配合物を調製する。特定の美容製品を得るために、少なくとも１つの生物学的生成物を、特定の美容製品のための前記ビヒクル配合物と配合させる。
【０００９】
別の実施形態では、本発明は、幹細胞ベースの美容剤用配合物製品を製造するためのシステムを対象とする。このシステムは、幹細胞ベースの生物学的材料の収集システムと、幹細胞ベースの生物学的材料収集システムの構成要素を処理施設に輸送するための、幹細胞ベースの生物学的材料の輸送システムとを含む。処理施設は、少なくとも１つの生物学的生成物を生成するために幹細胞ベースの生物学的材料を処理するデータベースを有する。保管施設は、少なくとも１つの生物学的生成物を保管し、少なくとも１つの生物学的生成物を分配するための返還システムが含まれる。美容剤用配合物処理施設は、少なくとも１つの生物学的生成物に基づいて美容剤用配合物を調製する。
【００１０】
別の実施形態では、本発明は、自己美容剤用組成物を調製するための方法において、クライアントから生物学的試料を得るステップと、所定の分離生成物を得るために生物学的試料を分離するためのステップとを含む方法を対象とする。所定の分離生成物を成長培地と組み合わせて、コンフルエントに達するまで成長した幹細胞を得る。コンフルエントに達するまで成長した幹細胞を非成長培地と組み合わせて、隔離された活性物質を得る。隔離された活性物質を美容剤用配合物と配合させる。
【００１１】
別の実施形態では、本発明は、超音波キャビテーションによって幹細胞ベースの美容剤のための成分を調製する方法において、脂肪組織試料の超音波キャビテーションによって間質血管細胞群を生成するステップと、その後、間質血管細胞群を成長培地と組み合わせて、幹細胞をコンフルエントに達するまで成長させるステップとを含む方法を対象とする。幹細胞を隔離し、その後、非成長培地と組み合わせて、幹細胞からのシトキンの分泌を可能にして活性物質を生成し、この活性物質を美容剤用配合物と配合させて美容製品を生成する。
【００１２】
更に別の実施形態では、本発明は、民族的幹細胞ベースの美容製品を調製するための方法において、所定の民族性の提供者から生物学的試料を得るステップと、活性物質を得るために生物学的試料を処理するステップとを含む。活性物質を美容剤用配合物と配合させる。
【００１３】
更に別の実施形態では、本発明は、民族的幹細胞ベースの美容製品を連続的に供給するためのビジネスモデルを対象とする。この実施形態のビジネスモデルは、所定の民族性の提供者を選択し、所定の民族性の提供者から生物学的試料を得ることから始まる。生物学的試料の処理を手配し、生物学的試料を分解し、所定の分離生成物を得て、その後、所定の分離生成物の処理が活性物質を生成する。活性物質を、民族的グループの所定の所望の特性に関する活性成分を含有する美容剤用配合物と配合させ、民族的幹細胞ベースの美容製品を生成する。民族的幹細胞ベースの美容製品を、当業界で認識されている様々な方法で消費者に商業的に分配する。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】図１は、本発明のシステムの概略図である。
【図２】図２は、２つの分離方法に従って美容製品を調製し、所定の分離生成物を実現して、美容製品を生成するための活性物質を得るプロセスを示す流れ図である。
【図３】図３は、民族的幹細胞ベースの美容製品を連続的に供給するためのビジネスモデルを示す流れ図である。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
本明細書では、単に便宜上、特定の用語を使用するが、本発明に対する限定とみなすべきではない。用語は、具体的に挙げた語、それらの派生語、及び同様の意味の語を含む。「生物学的試料」と「生物学的材料」などいくつかの用語は同義で使用することができ、同様に、「生物学的生成物」と「隔離された材料」と「分離生成物」も同義で使用することができ、更に、「活性物質」と「馴化培地」も同義で使用することができる。
【００１６】
本明細書で論じる実施形態は、網羅的なものとは意図されず、開示する厳密な形態に本発明を限定することも意図されない。これらの実施形態は、本発明の原理並びにその適用例及び実用例を最良に説明するため、及び当業者が本発明を最も良く利用できるようにするために選択して記載するものである。
【００１７】
第１の実施形態では、本発明は、幹細胞ベースの美容剤の処理及び製造のためのビジネスモデルを対象とする。この方法は、幹細胞ベースの生物学的材料を指定することから始まる。幹細胞ベースの生物学的材料の供給源は、様々なものでよく、自己クライアント、同種源、または市販の組成物、例えば幹細胞を含む培地組成物を含む。市販の組成物は、異種源、最も一般的にはウシ属からのものであることがある。
【００１８】
幹細胞ベースの生物学的材料の指定後、幹細胞ベースの生物学的材料の収集、輸送、及び分配に関する所定のサービスに対する報酬の収集を確立する。サービス及び供給源に基づいて、特定の収集プロトコルを定義、手配、及び実施する。従って、本発明のビジネスモデルは、（本明細書における実施例で詳細に論じるように）幹細胞ベースの生物学的材料の供給源に基づく特定のサービスのために設計された所定の報酬収集方法及び情報記録を含む。
【００１９】
このビジネスモデルは、次いで、前に論じた材料源から幹細胞ベースの生物学的材料を得る。幹細胞ベースの生物学的材料を得るための方法は、美容製品の基礎を成す自己、同種、または異種幹細胞に基づく標準的な医療サービスを反映することを理解されよう。
【００２０】
美容製品で使用する目的で少なくとも１つの生物学的生成物を生成するための、幹細胞ベースの生物学的材料の処理は、「消化」プロトコルに加えて、それとは別に、幹細胞ベースの生物学的材料及びクライアント情報追跡の要件によって定義される。消化のために様々な手動方法、機械的方法、及び／または化学的方法を使用することができることを当業者は理解されよう。しかし、前に論じたように、得られる特定のプロセス及び情報は、幹細胞ベースの生物学的材料の供給源に依存する。本明細書における実施例によって理解されるように、得られる自己試料は、「消化」のステップがより大きくなる可能性に加えて、最大量の情報「追跡」を必要とする。対照的に、市販の（異種）材料は、最小量の情報追跡及び「消化」を必要とする。
【００２１】
少なくとも「処理」の完了時、及び任意の美容製品の製造の実施前に、品質制御のための生物学的生成物の試験を行う。全ての試験が、米国食品医薬品局によって要求される最低限のものである。
【００２２】
生物学的生成物を定義する品質制御試験後、望まれる特定の美容製品のためにビヒクル配合物を調製する。ビヒクル配合物は、１）「定義された」生物学的生成物と、２）望まれる特定の美容製品の要件とに基づく。当業者は、「フットクリーム」のためのビヒクル配合物が、「アイセラム」とは非常に異なることを理解されよう。配合物は、本発明のビジネスモデルの各ステップから得られる情報と共に、生物学的生成物の全ての成分の発出を効率的かつ効果的に可能にする配合を確立する。
【００２３】
望まれる特定の美容製品を得るために、生物学的生成物を、特定の美容製品のためのビヒクル配合物と配合させる。本発明によるビジネスモデルの中核は、活性成分の指数関数的な利益を実現可能にし、幹細胞ベースの生物学的材料の供給源に基づいて費用対効果の高い組合せ法を確立することである。
【００２４】
更に、このビジネスモデルは、特定の美容製品を使用してサービス提供者が美容処置をコーディネートすることを含むことができる。本発明の概念に重要なのは、クライアントとサービス提供者（最も一般的には医師または熟練した技師）との継続的な関係の評価である。継続的な関係は、追加のセッション及び「検診（ｃｈｅｃｋ−ｕｐ）」中にサービス提供者が美容剤用配合物を塗布できるようにする。サービス、最も一般的には皮膚のサービス、例えばピーリングやフェイシャルなどによる特定の美容製品の塗布をコーディネートすることにより、特定の美容製品が適正に、最も重要には最も効果的に使用されて塗布されているとクライアントが確信できるようにする。サービス提供者が他の治療と調整して特定の美容製品を塗布する機会を有することで、その特定の美容製品が最も効果的であり得るときには、クライアントとサービス提供者との関係が築かれ、クライアントが望む結果を得るための長期的な関係を可能にする。
【００２５】
このビジネスモデルは、少なくとも１つの生物学的生成物を低温保存することを含むことがあり、それにより、生物学的生成物が得られた後、生物学的生成物を将来の美容剤調製に使用することができ、同じ少なくとも１つの生物学的生成物を様々な「特定の」美容製品に使用できるようになる。従って、このビジネスモデルは、品質制御試験後に繰り返すことができ、少なくとも１つの生物学的生成物から特定の美容製品を得るためにクライアントが再注文できるようにする。
【００２６】
次に、本発明のビジネスモデルを説明するために様々な実施例を述べる。これは、実施例の非限定的な列挙であり、本発明によるビジネスモデルの範囲内の全ての可能な実施例を示すものと理解すべきではない。
【００２７】
実施例１  自己の低温保存された特定の美容製品
実施例１は、特定の美容製品を調製するために自己生物学的試料材料を収集、低温保管、及び分配するためのビジネスモデルを対象とする。この方法は、生物学的試料材料の収集、低温保管、及び分配に関する所定のサービスに対する報酬を収集し、その後、（ｉ）生物学的試料の収集のために行われる医師のサービスに対する援助として所定の料金を支払い、（ｉｉ）生物学的試料の収集及び輸送用の複数の構成要素を含む収集システムを供給することによって、顧客の生物学的試料の収集を手配することから始まる。このビジネスモデルのこの最初の部分は、試料を得るために重要なだけでなく、顧客と企業実体のビジネス関係を開始するためにも重要である。顧客、医師、及び企業実体は、このコラボレーションの「全体像」及び長期的な関係を把握して、（本明細書で説明するように）利益、権利、義務、及びコストを理解する。
【００２８】
生物学的試料を得るために医師に支払う所定の料金は様々であることがあるが、大抵は、収集システムと、処理施設への輸送とに関係するコストに限定されることが多い。しかし、コストは、試料を得るために処置を開始する前にクライアントによって同意される１回のセット料金である。
【００２９】
収集システムは、ビジネスモデルの手配のために設計された所定の１組の構成要素である。収集システムは、得られた生物学的試料のための識別材料を含む。これは、最も一般的には、所定のグループの標準フォームであり、（本明細書で論じるように）符号化されたプログラムと共に使用するためのコード化されたラベルを含むことがある。クライアント試料バッグは、符号化されたプログラムと共に使用するための同じコード化されたラベルを含む。これらのラベルは、州及び連邦の法令、例えば２１ＣＦＲ１１に準拠する。更に、収集システムは輸送ボックスを含み、輸送ボックスは、商業的に製造され、運送業者と連携されることがあり、例えばＦｅｄＥｘによるＢｉｏｌｏｇｉｅｓ  Ｂｏｘである。また、輸送ラベリングは、発送場所に関する情報に加えて、同じ符号化されたプログラムと共に使用するための同じコード化されたラベルを含む。手配後、この方法は、次いで、クライアントから生物学的試料を得て、収集システム内の生物学的試料を処理設備に輸送する。
【００３０】
処理施設で、収集システム構成要素は、ログインポートを介してデータベースの処理モジュールに導入される。このデータベースは、符号化されたプログラムを有する。データベースは、ＭｉｃｒｏｓｏｆｔのＡｃｃｅｓｓプログラムなど市販のプログラムを使用して、「ｅＰｒｏｔｅｃｔｅｄ」ヘルス情報を処理して記憶するようにカスタム設計される。データベースは、限定はしないが、「クライアント試料をクライアントと」調整するために収集システムから得られる情報、例えば、患者特定のバーコード付きのクライアント試料バッグに含まれる情報を含む。この情報も、標準化されたフォームで含まれる。データベースは、検索可能であり、このプロセスに関連付けられる全ての様々なフォームを生成するようにプログラムすることができる。
【００３１】
材料を分離及び隔離するために、自己生物学的試料を消化によって処理する。生物学的試料の隔離及び生物学的試料の品質の保証は、この方法の商業的成功のための必須事項である。（必要があれば）低温保存のために、隔離された材料の品質制御に関する試験を行い、その後、隔離された材料を少なくとも１つのアリコートで低温保存して保管する。
【００３２】
使用を求められ次第、隔離された材料を、少なくとも１つのアリコートで解凍する。次いで、隔離された材料を調製して、隔離された材料を少なくとも１つのアリコート内に含む少なくとも１つの美容剤自己配合物にする。
【００３３】
クライアントは、試料を使い果たすまで、望みに応じて、低温保存されている試料から「再注文」することができる。追加の生成物は、自己試料を得ることから始まるこのプロセスを繰り返すことによって得ることができることを理解されよう。
【００３４】
更に、このビジネスモデルは、少なくとも１つの美容剤自己配合物を使用してサービス提供者が美容処置をコーディネートすることを含む。論じたように、本発明の概念の中核は、生物学的試料提供者とサービス提供者（最も一般的には医師または熟練した技師）との継続的な関係の評価である。継続的な関係は、追加のセッション及び「検診（ｃｈｅｃｋ−ｕｐ）」中にサービス提供者が美容剤自己配合物を塗布できるようにする。
【００３５】
美容剤自己配合物は、身体の所定の部位のために配合され、限定はしないがフェースクリーム、フットクリーム、またはアイクリームを含む。
【００３６】
最も一般的には、得られる生物学的試料は、脂肪組織試料であり、幹細胞ペレットの形態での隔離された材料は、前駆脂肪細胞、脂肪由来の間充織幹細胞、微小血管内皮細胞、内皮前駆細胞、及び単核細胞の混合物から本質的になる。
【００３７】
実施例２  同種の低温保存された特定の美容製品
別の実施例は、自己低温保存された特定の美容製品に関する実施例１と同様のステップであるが、自己源ではなく同種源を使用する別のステップを含む。他のステップ及び概念は全て同じであり、製品を自己幹細胞源ではなく同種幹細胞源に基づかせることによって存在する異なる特性が認識される。そのような特性は、限定はしないが、生物学的試料と配合させるために調製される配合物を含む。
【００３８】
実施例３  異種の特定の美容製品
この実施例では、本発明は、幹細胞ベースの美容剤の処理及び製造のためのビジネスモデルを対象とする。この方法は、異種源からの幹細胞源を指定することから始まる。幹細胞源は、市販の組成物、例えば幹細胞を含む培地組成物である。市販の組成物は、異種源、最も一般的にはウシ属からのものであることがある。
【００３９】
市販の組成物の取得、処理、品質試験、及び配合物の調製、そして最後に特定の美容製品の調製のコストを賄うために料金が収集される。
【００４０】
基礎美容製品を生成する異種幹細胞組成物を得る。
【００４１】
美容製品で使用する目的で少なくとも１つの生物学的生成物を生成するための組成物の処理は、「消化」プロトコルに加えて、それとは別に、幹細胞試料及びクライアント情報追跡の要件を含む。更に、もしあれば製造業者の指示に基づいて、市販品の製造業者が要求する任意のプロセスまたは消化を行う。任意のプロセスにおいて、市販品を、ビヒクル配合物との配合のために受け入れることができるように消化する。これは、必要であれば低温保存処置を含む。低温保存は必要でない、または望まれないこともあることを理解されたい。
【００４２】
少なくとも「処理」の完了時、及び任意の美容製品の製造の実施前に、品質制御のための生物学的生成物の試験を行う。全ての試験が、米国食品医薬品局によって要求される最低限のものである。
【００４３】
前の実施例と同様に、生物学的生成物を定義する品質制御試験後、望まれる特定の美容製品のためにビヒクル配合物を調製する。ビヒクル配合物は、１）「定義された」生物学的生成物と、２）望まれる特定の美容製品の要件とに基づく。当業者は、「フットクリーム」のためのビヒクル配合物が、「アイセラム」とは非常に異なることを理解されよう。配合物は、本発明のビジネスモデルの各ステップから得られる情報と共に、生物学的生成物の全ての成分の発現を効率的かつ効果的に可能にする配合を確立する。
【００４４】
前の実施例と同様に、特定の美容製品を得るために、生物学的生成物を、特定の美容製品のためのビヒクル配合物と配合させる。ビヒクル配合物と生物学的生成物を配合させるために様々な手動方法、機械的方法、及び／または化学的方法を使用することができることを当業者は理解されよう。このビジネスモデルの中核は、活性成分の指数関数的な利益を実現可能にし、幹細胞の供給源に基づいて費用対効果の高い組合せ法を確立することである。
【００４５】
前の実施例と同様に、本明細書で論じたように、更に、このビジネスモデルは、特定の美容製品を使用してサービス提供者が美容処置をコーディネートすることを含むことができる。
【００４６】
図１を参照すると、別の実施形態では、本発明は、幹細胞ベースの美容剤用配合物製品を製造するためのシステム１０を対象とする。システム１０は、幹細胞ベースの生物学的材料の収集システム１２と、データベース１８を有する処理施設１６への幹細胞ベースの生物学的材料の輸送システム１４とを含む。データベース１８は、符号化されたプログラム２０を含み、幹細胞ベースの生物学的材料に関する情報及び記録情報を組織化して記憶する。これは、システム１０の様々な部分で使用することができる標準化されたフォーム２２での情報を含む。
【００４７】
収集システム１２は、前の実施形態で定義したものであり、通常は、容易に使用できるように「適合したボックス（ｆｉｔｔｅｄ  ｂｏｘ）」内にある。本明細書で論じるように、収集システムの輸送システム１４は、通常は、Ｆｅｄ  Ｅｘ（登録商標）など運送業者と連携し、これは、地域、州、及び連邦の法令に準拠した特定の機器を使用して医療試料を輸送できる。
【００４８】
処理施設１６で、少なくとも１つの生物学的生成物を生成するための幹細胞ベースの生物学的材料の処理が完了した時点で、少なくとも１つの生物学的生成物を保管施設２４内に置く。保管施設２４は、一般に、所定のサイズの「冷凍器」であり、Ｎｏｖａｒｅ（登録商標）Ｂｉｏ−Ｌｏｇｉｓｔｉｃｓなど第２の（永久）保管施設（図示せず）と連携できる能力及び構成を有する。場合によっては、本発明のビジネスモデルの範囲内で、戦略的なパートナーシップが成される。処理された少なくとも１つの生物学的生成物は、低温保存を必要とせず、特定の美容製品を生成するためにすぐに使用することもできることを理解されたい。従って、システム１０は、保管施設を必要としないことがあり、低温保存が必要とされない。低温保存が望まれない状況では、保管施設を、ある保存温度での許容できる生物学的容器に限定することができる。
【００４９】
システム１０は、保管契約更新の発生時、または低温で保管されている少なくとも１つの生物学的生成物が求められるときに、（図１に示されるように提供者を含む）複数の「エンドユーザ」機会に少なくとも１つの生物学的生成物を分配するための返還システム２６を含むことがある。
【００５０】
最も一般的には、得られる初期料金は、幹細胞ベースの生物学的材料及び少なくとも１つの生物学的生成物の収集、消化、及び初期保管に限定され、美容剤用配合物の調製に関する料金は含まない。
【００５１】
美容剤用配合物処理施設２８は、得られた少なくとも１つの生物学的生成物に基づいて美容剤用配合物を調製する。美容剤用配合物処理施設２８は、「解凍された」隔離された材料、または低温保存されていない材料を受け取る。本明細書で論じるように、美容剤用配合物は、限定はしないが、フェース、アイ、及び／またはフットクリームまたはセラムを含めた複数の製品でよい。
【００５２】
別の実施形態では、本発明は、自己美容剤用組成物を調製するための方法において、クライアントから生物学的試料を得るステップと、所定の分離生成物を得るために生物学的試料を分離するためのステップとを含む方法を対象とする。
【００５３】
所定の分離生成物を成長培地と組み合わせて、コンフルエントに達するまで成長した幹細胞を得る。コンフルエントに達するまで成長した幹細胞を非成長培地と組み合わせて、隔離された活性物質を得る。隔離された活性物質を美容剤用配合物と配合させる。隔離された活性物質と美容剤用配合物との配合が、所望の美容製品を生み出す。
【００５４】
方法のこの実施形態１１０を示す図２を参照すると、生物学的試料は、吸引１１２によって得られる脂肪組織である。この吸引は、最も一般的には医療専門家によって行われる。しかし、当業者は、本発明が脂肪組織に限定されず、他の生物学的組織、例えば多血小板血漿（ＰＲＰ）を対象とすることもあることを理解されよう。
【００５５】
この実施形態における所定の分離生成物は、間質血管細胞群（ＳＶＦ）である。これは、成長を支援する脂肪組織の部分である。より特定的には、ＳＶＦは、脂肪吸引により得られた脂肪吸引物から脂肪細胞（含脂肪細胞）を取り除いたものである。含脂肪細胞とは別に、ＳＶＦは、前駆脂肪細胞、内皮細胞、平滑筋細胞、周皮細胞、線維芽細胞、及び成体幹細胞（ＡＳＣ）など様々な他の細胞を含む。更に、ＳＶＦは、脂肪細胞に血液を供給する毛細管からの血液細胞も含む。そのような血液細胞は、いくつか挙げると、赤血球または赤血球細胞、Ｂ細胞及びＴ細胞、マクロファージ、単核細胞、マスト細胞、ナチュラルキラー（Ｎ）細胞、造血幹細胞、及び内皮前駆細胞を含む。更に、ＳＶＦは、含脂肪細胞内分泌物に加えて、増殖因子も含み、例えば、とりわけ、トランスフォーミング増殖因子β（ＴＦＧ）、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、及び線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）を含む。これは、細胞外マトリックスの存在時の細胞の分泌と一致する。また、ＳＶＦは、脂肪組織中に存在する様々なタンパク質も含む。
【００５６】
所定の分離生成物１１４、例えばＳＶＦを得るための分離は、本明細書で論じるように様々な方法で実現することができる。１つの方法１１４Ａでは、脂肪組織の分離は、主に細胞破壊（溶解）または分解に関連付けられる超音波キャビテーションによって実現することができる。一般的に超音波キャビテーションを説明すると、高い強度で液体を超音波処理するとき、液体培地中に伝播する音波は、周波数に依存する速度で、交互の高圧（圧縮）と低圧（希薄化）のサイクルを生じる。低圧サイクル中、高強度超音波は、液体中に小さな真空泡または空隙を生成する。泡は、エネルギーを吸収することができない体積に達すると、高圧サイクル中に激しく崩壊する。この現象は、キャビテーションと呼ばれる。破裂中、局所的に、非常に高い温度（約５０００Ｋ）及び圧力（約２０００ａｔｍ）に達する。また、キャビテーション泡の破裂は、最高で速度２８０ｍ／ｓの液体ジェットも生じる。生じるせん断力が、細胞エンベロープを機械的に破壊し、材料移送を改良する。超音波は、採用される超音波処理パラメータに応じて、細胞に対して弱め合うまたは強め合う作用を有することができる。
【００５７】
代替として、分離は、脂肪組織の酵素消化１１４Ｂによって実現することができ、所定の分離生成物を得るために化学物質が細胞を分離する。
【００５８】
間質血管細胞群を成長培地と組み合わせて、コンフルエントに達するまで幹細胞を成長させる。成長培地は、成長を可能にする組成を有する様々な市販の生成物でよい。しかし、米国特許第７，９８９，２０５号明細書に記載されている培地など、種に特有の培地を使用することもでき、これは、任意のタイプの免疫学的反応をなくす。当業者は、プロセスのこのステップを、所定または所要の数の細胞を得るために繰り返すことができることを理解されよう。
【００５９】
コンフルエントに達した成長の後、トリプソンなどの酵素を加えて、内部で「成長が生じた」容器の「表面」から連鎖を消化することができ、ここで、幹細胞は、液体培地中に「浮遊」する。成長培地を排出することによって幹細胞を隔離し、非成長培地１１８と組み合わせる。内部で成長が生じた容器に、非成長培地、例えば炭水化物に限定された培地を加える。これは、幹細胞から「非成長」培地中へのシトキンの分泌を可能にし、活性物質を生成する。
【００６０】
本明細書で述べるいずれかの方法（または間質血管細胞群を実現する他の分離方法）を使用して、活性物質を、（ｉ）６．０〜８．０の間のｐＨを有し、（ｉｉ）プロテアーゼを含まず、かつ（ｉｉｉ）無菌である美容剤用配合物と配合させる（１２０）。
【００６１】
更に、本発明は、活性物質を生成するために、所定の分離生成物と成長培地の組合せの際にトロポエラスチンを含めることを評価する。成長培地と間質血管細胞群の組合せ時のトロポエラスチンの添加は、活性物質に追加の特性を加える。
【００６２】
この方法によって、複数回使用のための所定の特性を有する自己美容製品が生成される。この実施形態の方法によって実現される自己美容製品は、再生、アンチエイジング、及び美容製品を含めた複数の目的を果たすことができるだけでなく、指定された結果を実現するために複数の効能で身体と作用する。そのような効能は、生体の真皮をこの実施形態の自己美容製品と接触させることによって、皮膚（真皮）細胞を刺激するための方法を含む。
【００６３】
別の実施形態では、本発明は、超音波キャビテーションによって、幹細胞ベースの美容剤のための成分を調製する方法を対象とする。美容剤の調製のための所定の方法における超音波キャビテーションの使用は、特定の目的を実現するために成分を調製するためのこの方法の特性及び利点に焦点を当てる。そのような成分は、美容剤の調製を可能にする特性を有する成分である。従って、この実施形態では、超音波キャビテーションを使用して、本明細書に提示する自己美容剤用組成物を調製するための方法または同じ目的の関連方法の他の「ステップ」に「ぴったり適合する（ｄｏｖｅｔａｉｌ）」成分を（分離活性によって）得る。
【００６４】
超音波処理は、細胞構造を破壊するための効果的な手段である。この効果は、細胞マトリックスから細胞内物質、例えばデンプンを抽出するために使用することができる。超音波処理は、超音波にさらされる液体中で、交互の高圧と低圧の波を生成する。超音波は、低圧サイクル中、液体中に小さな真空泡を生成し、高圧サイクル中に、これらの泡が激しく崩壊する。これは、「キャビテーション」と呼ばれる。キャビテーション泡の破裂は、強い流体力学的せん断力を引き起こす。このせん断力は、繊維質セルロース材料を、細胞構造の壁を破壊する細かい粒子に分解することができる。これは、より多くの細胞内材料、例えばデンプンや糖を液体中に解放する。更に、細胞壁物質が、小さなデブリに分解される。この効果は、有機物質の発酵、消化、及び他の転化プロセスに使用することができる。破砕及び粉砕の後、超音波処理は、より多くの細胞内物質、例えばデンプンと、デンプンを糖に転化する酵素に利用可能な細胞壁デブリとを生成する。この実施形態でより重要なことには、超音波キャビテーションが、液化または糖化中に酵素にさらされる表面積を増加することである。
【００６５】
この実施形態では、美容製品を得る目的での使用に関して、超音波キャビテーションによる細胞収率は、細胞の成長のために高濃度の血清を必要とする。この要件を認識しないと、細胞成長の収率は、美容製品で使用するための基礎とならず、商業的な方法を成功させることができない。
【００６６】
この実施形態の方法は、所定の様式での脂肪組織試料の超音波キャビテーションによって間質血管細胞群を生成するステップを含み、美容製品を製造するための所定の方法において使用することができる良好な所定の分離生成物を実現する。所定の様式の超音波キャビテーションの使用が完了した後、得られた間質血管細胞群を成長培地と組み合わせて、幹細胞をコンフルエントに達するまで成長させる。幹細胞を隔離し、その後、非成長培地と組み合わせて、幹細胞からのシトキン及び他の成長物質の分泌を可能にして活性物質を生成し、この活性物質を美容剤用配合物と配合させて美容製品を生成する。
【００６７】
前の実施形態と同様に、活性物質を、（ｉ）６．０〜８．０の間のｐＨを有し、（ｉｉ）プロテアーゼを含まず、かつ（ｉｉｉ）無菌である美容剤用配合物と配合させる。更に、成長培地は、市販の培地、または種に特有の培地である。更に、前の実施形態と同様に、活性物質を得る際に、トロポエラスチンを成長培地及び間質血管細胞群と組み合わせることができる。この方法によって生成される自己美容製品は、超音波キャビテーションによって得られる成分に相応する特性を有する。
【００６８】
更に別の実施形態では、本発明は、民族的幹細胞ベースの美容製品を調製するための方法において、所定の民族性の提供者から生物学的試料を得るステップと、活性物質を得るために生物学的試料を処理するステップとを含む方法を対象とする。提供者は、最も一般的には、顔の特徴、筋肉の外観、及び皮膚の質を含めた身体的外観の面で優れた質を持つ人である。幹細胞提供者は、美容製品の消費者が望む民族的な特徴を備えている。活性物質を美容剤用配合物と配合させる。
【００６９】
この実施形態での美容剤用配合物は、民族的グループの所定の所望の特性のための活性成分を含有する。配合物は、その活性成分と補完的であり、従って相乗的な関係が生じる可能性を実現し、更に、提供者の特定の民族的グループが備えるような望ましい結果を生じる成分、例えばスキンライトナも含有する。
【００７０】
生物学的試料の処理は、所定の分離生成物を得るために生物学的試料を分離することを含む。前の実施形態と同様に、所定の分離生成物は、最も一般的には、本明細書で述べるようにして得られるＳＶＦであり、成長培地と組み合わせて、コンフルエントに達するまで成長した幹細胞を得る。コンフルエントに達するまで成長した幹細胞を隔離し、その後、非成長培地と組み合わせて、隔離された活性物質を得る。本明細書で述べるように活性物質を美容剤用配合物と配合させて、民族的幹細胞ベースの美容剤を生成する。
【００７１】
図３を参照すると、更に別の実施形態において、本発明は、民族的幹細胞ベースの美容製品を連続的に供給するためのビジネスモデル２００を対象とする。この実施形態のビジネスモデルは、所定の民族性の提供者を選択し（２１０）、所定の民族性の提供者から生物学的試料を得る（２１２）ことから始まる。この実施形態で論じるように、選択される提供者は、ある民族的グループに関連付けられる所望の特徴を備える。
【００７２】
生物学的試料の処理を手配し、生物学的試料を分解し、所定の分離生成物を得て、その後、所定の分離生成物の処理が活性物質を生成する（２１４）。手配及び処理は、本明細書で論じるように最終的な消費者美容製品に寄与する所定の様式で実現することができる。
【００７３】
活性物質を、民族的グループの所定の所望の特性に関する活性成分を含有する美容剤用配合物と配合させ、民族的幹細胞ベースの美容製品を生成する（２１６）。活性成分及び配合物は、民族的幹細胞ベースの美容製品の所望の特性を満たすようにのみならず、商業的な成功のために費用対効果の高い様式で選択する。民族的幹細胞ベースの美容製品を、当業界で認識されている様々な方法で複数の消費者に商業的に分配する（２１８）。
【００７４】
実施例４  自己脂肪組織幹細胞ベースの美容製品のビジネスモデル及び調製方法
この実施例では、方法は、成人男性から脂肪組織の自己幹細胞ベースの生物学的材料を指定することから始まる。幹細胞ベースの生物学的材料の指定後、幹細胞ベースの生物学的材料の収集、輸送、処理、及び分配に関する所定のサービスに対する報酬を収集する。必要とされるサービスに基づいて、特定の収集プロトコルを定義、手配、及び実施する。
【００７５】
この実施例では、所定のクライアント試料容器を含む発送パッケージを、生物学的試料の抽出を行う場所に送る。「発送パッケージ」または「収集システム」は、医師がクライアント／脂肪組織試料の抽出を行うためのクライアント情報を伴う所定の容器に加えて、様々な構成要素を含む。医師が送る脂肪の全体的な含量を増やすための努力として、この実施例では、６０ｍＬ注射器をもう一本、収集システムに含めた。両方の注射器に脂肪吸入物を装填し、１０分置いてから、収集システムの１つの収集バッグに両方を注入するように、医師に対して指示が修正される。
【００７６】
発送パッケージの検査は、（ａ）所定のクライアント容器が所定の期限を超えていないこと、（ｂ）クライアント試料が過去４８時間以内に収集されたこと、及び（ｃ）記録情報が正確であることを保証することを含む。ａ、ｂ、またはｃの条件が満たされない場合、試料は受け入れられず、バイオハザード廃棄物として廃棄しなければならない。試料の組織化及び「追跡」のために、この廃棄を記録する。
【００７７】
最も一般的には、発送パッケージは、（本明細書で論じるように）外側容器内の、培地を充填されたバーコード付きのクライアント試料容器と、無菌の６０ｍＬ注射器と、吸収剤シートを含む、バイオハザード物質用に承認された患者特定のバーコード付きの搬送容器と、内容物を安定させるのに十分な気泡緩衝材を巻かれたＴｙｖｅｋ（登録商標）外側容器と、外側段ボール箱（この要素は、Ｓａｆ−Ｔ−Ｐａｋ（登録商標）から市販されている）内の発泡断熱材とを含む。適切な針／カニューレ及び他の医療用サプライは、一般に入手可能な器具であり、これらは、医師によって用意されるが、発送品の一部として含めることもできる。
【００７８】
この方法は、次いで、完成した記録情報でのクライアント試料容器のバーコードをスキャンすることによって、ログインポートを介してデータベースの処理モジュールに発送パッケージ構成要素を導入する。データベースは、例えばＭｉｃｒｏｓｏｆｔのＡｃｃｅｓｓプログラムなど市販のプログラムを使用して、米国血液銀行協会（ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｂｌｏｏｄ  Ｂａｎｋｓ（ＡＡＢＢ））標準６．３及び２１  ＣＦＲ  §８２０．３０（ＦＤＡガイダンス、２００２年１月１１日、「Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ」）の要件に準拠することができるようにカスタム設計される。データベースは、（限定はしないが）クライアント試料をクライアントと調整するために搬送パッケージから得られる情報を含み、これは、例えば、患者指定のバーコード付きの搬送容器に含まれる情報である。この情報も、標準化されたフォームで含まれる。データベースは、標準化されたフォームでの組織と同様のモジュールで組織化され、検索可能であり、このプロセスに関連付けられる様々なフォーム全てを生成するようにプログラムされる。
【００７９】
許容できるクライアント試料を確立する際、それぞれコラゲナーゼ、中性プロテアーゼ、及びＤＮａｓｅ  Ｉの１つのバイアルを冷凍器から取り出し、消化溶液中で使用するためにバイオセーフティキャビネット内で解凍する。この実施例では、コラゲナーゼと中性プロテアーゼの事前に定めた混合物を使用した。即ち、コラゲナーゼＩとコラゲナーゼＩＩの両方、サーモリシン、及び中性プロテアーゼを含有するＲｏｃｈｅ  Ｌｉｂｅｒａｓｅ（登録商標）である。室温で補助なく解凍することが、これらの溶液の完全性及び生存能力の保護をサポートする。
【００８０】
クライアント試料を外側発送容器から取り出し、クライアント試料容器内で手作業で静かに撹拌して、培地中の脂肪及び任意の沈殿物を再懸濁し、更に、無菌性試験試料が内容物を表すことを保証した。試料容器が汚染されていないことを保証するために、濾過滅菌された７０％エタノールまたはイソプロパノールを含むスプレーボトルからのアルコールで試料容器を拭く。
【００８１】
クライアント試料容器を持ち上げ、または「吊るして」、約５分間、平静に保ち、目視できる血液の存在を確認し、クライアント試料中に存在する合計の脂肪組織の分画として、溶解された脂肪からの油の量を推定する。この観察結果を、事前に指定されたフォームで、所定の様式で記録する。存在する油の量などの観察を、標準化されたフォームに入力し、従って、その情報がデータベースの一部となる。容器にあるバーコードをスキャンし、バーコードの情報をデータベースにインポートする。
【００８２】
品質を保証するために、クライアント試料容器内部の脂肪組織試料の無菌性を試験する。クライアント試料容器の底面ポートからの除去が、重力による抽出を可能にし、それにより「ポンプ」などの必要をなくす。ＢａｃＴ／Ａｌｅｒｔまたは同様の試験など標準の市販のシステムによって、無菌性及び微生物試験を行う。特定の試験処置を行って、所要のＡＡＢＢまたは他の専門機関の認証に準拠して認証を受けられるようにし、適用可能なときには、特定の現在または将来のＦＤＡ規則に従う。無菌性試料は、汚染試験実験室に送るまでは、室温で保つ。
【００８３】
消毒綿を用いて７０％アルコールまたは無菌アルコールで拭くことによってクライアント試料容器の上部ポートの１つを消毒し、所定量の塩溶液を加えることによって、脂肪組織試料を洗浄する。この所定量は、脂肪組織試料を効果的に洗浄するように、脂肪組織試料の体積に少なくとも等しい。１８ゲージ針を有する６０ｃｃ注射器を使用して、塩溶液、例えばハンクス緩衝塩溶液（Ｈａｎｋ’ｓ  Ｂａｌａｎｃｅｄ  Ｓａｌｔ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（ＨＢＳＳ））を加える。
【００８４】
クライアント試料容器を、静かに撹拌し、所定の時間、例えば約５分間、平静に保つ。無菌性試料を得るために使用したのと同じポートを使用して、洗浄液を除去して廃棄する。容器は、容器の上部の単層中に脂肪が浮遊しているのが観察されるまで、高い位置に平静に「吊るして」おいた。脂肪組織試料から分散される油を除去する。
【００８５】
調製された消化溶液を、クライアント／脂肪組織試料を有するクライアント試料容器内に注入して、クライアント試料容器内部で消化混合物を生成する。無菌性を保証するために、（本明細書で使用するために前に論じたように解凍した）消化溶液のバイアルの外側をアルコール消毒綿で拭いた。
【００８６】
無菌の２ｍｌピペットを使用して、３７℃まで予熱した４８ｍＬのＨＢＳＳを含有する５０ｍＬ遠心管に上記の溶液を入れる。管にキャップをして、静かに撹拌することによって混合した。この希釈比の基礎は、酵素ストック溶液の濃度及び酵素活性であり、これらは、（ｉ）製品プロトコル、（ｉｉ）経験、及び（ｉｉｉ）当技術分野で知られている知識に基づく。本発明の適用の方法は、酵素希釈を質量ではなく特定の活性に基づかせることによってこの変数をなくし、プロセスをより再現可能なものにする。これは、商業プロセスに重要である。
【００８７】
洗浄した脂肪組織試料中に、クライアント試料容器の上部ポートの１つを使用して消化溶液を注入する。消化混合物は、４５分間３７℃で培養し、揺動プラットフォームで毎分２４回の揺動で撹拌する。消化の終了時、脂肪組織は、最大４ミリメートルのサイズだった組織フラグメントの懸濁物から、殆どの組織フラグメントが直径１ミリメートル未満のはるかに滑らかな懸濁物に転化されている。なぜなら、いくぶん白色のつながった組織がそのまま残っていることがあるものの、脂肪組織の殆どが解離されて、隔離された成熟脂肪細胞及び間質血管細胞群細胞になっているからである。その後、溶液を低速で遠心して、成熟脂肪細胞を消化混合物の残りの部分から分離する。
【００８８】
遠心した消化混合物の間質血管細胞群（「ＳＶＦ」）相を、無菌の４０マイクロメートルメッシュフィルターを通して引き出す。クライアント試料容器内の消化混合物の遠心は、含脂肪組織及び消化されていない脂肪組織からＳＶＦを分離する働きをする。クライアント試料容器から遠心管へのこのＳＶＦの取出し、及び再度の遠心は、（本明細書で論じるように）管の底部での「密な」ペレットの生成を可能にし、それにより、９５パーセント超、更には９９パーセントの酵素溶液を除去することができる。
【００８９】
クライアント試料容器から取り出した後、濾過した消化混合物の懸濁物を、２つの５０ｍＬ管内で遠心し、「第１の」間質血管ペレットを隔離する。遠心して濾過した懸濁物の上澄みを除去する。間質血管の「密な」第１のペレットを赤血球細胞溶解緩衝液中で粉砕して再懸濁し、赤血球細胞をなくし、残余酵素及びデブリを除去して細胞懸濁液を生成し、その細胞懸濁液を遠心して「第２の」ペレットを生成する。遠心した細胞懸濁物の上澄みを除去する。
【００９０】
ＨＢＳＳを滴定して加えることによって第２のペレットを再懸濁して、「第２の細胞懸濁物」を生成する。等しい体積のアクリジンオレンジとヨウ化プロピジウム染料の混合物と混合された第２の細胞懸濁物の小さなアリコート（２０マイクロリットル）を使用することによって、この第２の細胞懸濁物を生存能力に関して計数して分析し、Ｎｅｘｃｅｌｏｍ  Ｃｅｌｌｏｍｅｔｅｒ  Ｖｉｓｉｏｎ計器（Ｎｅｘｃｅｌｏｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して計数する。第２の細胞懸濁物を遠心して、「第３の」ペレットを生成し、このペレットを、更なる処理のためにバイオセーフティキャビネット内に保管する。
【００９１】
「第３のペレット」は、幹細胞ペレット生成物を定義し、例えば、洗浄されたＳＶＦペレットであり、これは、前駆脂肪細胞、脂肪由来の間充織細胞、微小血管内皮細胞、内皮前駆細胞、単核細胞、及び少数の血管平滑筋細胞を含む。混合物は、成熟脂肪細胞を含んでいてはならず、混合物中の有核細胞の少なくとも１％は、脂肪由来の間充織細胞でなければならない。混合物、または「幹細胞ペレット生成物」もしくは「洗浄されたＳＶＦペレット」は、３５％以下のアクリジンオレンジ／ヨウ化プロピジウムまたはトリパンブルー色素排除試験で、複合的な生存能力を示さなければならない。更に、含有されている脂肪由来の間充織幹細胞は、細胞培養の分野の当業者に知られている適切な環境条件の下で適切な培地と接触させて配置したときに、増殖できなければならない。
【００９２】
美容製品処理施設（「ＣＣＰＦ」）への発送用の最小量で１．０×１０６のＳＶＦ（「第３のペレット」）を含むＴ２５培養フラスコと、指定された保管施設に保管するためのバックアップ「Ｐ１」を生成するためのもう１つのフラスコとをプレーティングする。美容製品処理施設フラスコのためのプレーティングは、以下のように、全体のＳＶＦ収率に合わせて調整すべきである。
2019108370.tif 000002
【００９３】
フラスコを、１．５ｐ．ｇ／ｃｍ２で、ヒト血漿フィブロネクチンでコーティングする。１０μ／ｍｌのゲンタミシンを用いて培養物を成長させ、ＢａｃＴの結果が「陰性」を示して、汚染が存在しないことを保証する。
【００９４】
培養物の成長などに関する情報の組織化及び記憶のためのフォームを生成する。独自仕様の培養フォームを設計して、（本明細書で論じるように）コンピュータシステム／データベースへの情報の直接の流れを可能にする。具体的には、培養物のフォームは独自仕様のものであり、（バーコード化された）クライアント番号及び（バーコード化された）収集データを含むラベルを（限定はしないが）含む。これらのフォームに関する情報を、電子フォーマット、この実施例ではＭｉｃｒｏｓｏｆｔ  Ｅｘｃｅｌ（登録商標）に伝送し、その後、データベースに含めるためにデータ標準に伝送する。従って、情報は、第１次施設でも、美容製品処理施設でもアクセス可能である。
【００９５】
美容製品処理施設への発送用の最小量で１．０×１０６のＳＶＦを含むＴ２５培養物フラスコは、上述したように、１０μｇ／ｍＬのゲンタミシンを有する０．５％ＦＢＳ脂肪幹細胞培地を含む。初期プレーティングの１８〜２４時間後で、「１／２フィーディング」の時点で、培地の完全な交換を行う。このとき、ＡＳＣ（成体幹細胞）の相当な成長が目視によって確認されている。１／２フィーディングは、一般に、フラスコからの消費される培地の体積の約半分の除去と定義されることを当業者は理解されよう。次いで、等しいまたはわずかに多い新たな培地を加える。この実施例では、細胞生存能力及び成長のための栄養利用可能性を保証するために、完全な培地交換は休日の前に行う。
【００９６】
Ｔ２５培養物フラスコが約３０％〜５０％コンフルエントに達したことを確認した後、美容製品処理施設（ＣＰＰＦ）に発送する。細胞の生存能力を維持するために、細胞は一晩のうちに送る。金曜日、または休日の前日にはＳＶＦを送るべきないことを理解されたい。培養物記録のコピー、元の処理要求、及び６つのバーコードラベルが、美容製品処理施設への発送品と共に含まれる。培養物の生存能力を保証するために、プレーティングの日から１３〜１５日で発送するべきである。この期間内で発送できなかった場合には、監視者、管理施設、及び美容製品処理施設による再検査が必要である。理解されるように、本明細書で述べるシステムは、培養物の品質及び生存能力を保証するために、発送の遅延があればそれを実験室のスタッフに警告する。
【００９７】
美容製品処理施設で受け取った後（処理後１３〜１５日）、第１次施設にあるシステムに「接続」されたシステムによってＴ２５フラスコを「受領（ｃｈｅｃｋｅｄ  ｉｎ）」する。受け取ったＴ２５フラスコ内の培地を、受取り後に８０〜９０パーセントに減少させ、コンフルエントに達するまで１〜３日培養させる。
【００９８】
全ての回収した細胞を使用して、Ｔ２５フラスコの内容物を、ヒト血漿フィブロネクチンでコーティングされた４つのＴ７５フラスコにプレーティングする（Ｔ７５フラスコ当たり最小量で３０００００個の細胞）。この実施例では、この回収時の保管のために細胞を取り置きしない。Ｔ７５フラスコをインキュベータ内に置き、必要に応じて、２４〜４８時間ごとに、８０％超のコンフルエントが各フラスコ内に存在するまでフィーディングを行う。
【００９９】
１９〜２４日後の処理で、８０％超のコンフルエントで、成長培地を非成長培地ＨＡＭ  Ｆ−１２に換える。非成長培地を、糖と炭水化物の化合物に限定することができることを当業者は理解されよう。Ｔ７５フラスコを４〜７日間培養し、非成長培地へのサイトカイン、増殖因子、及びタンパク質などの物質の分泌を可能にして、「馴化培地」を生成する。
【０１００】
表１及び繰返しの実験からの表１Ａ及び表１Ｂは、この実施例の方法によって生成した馴化培地の成分を示す。様々なアッセイにより、様々な細胞成長培地を使用して馴化培地中で見られる物質のレベルが示される。
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【０１０１】
馴化培地を適宜採取し、１）特定の製品、例えば、フェースクリーム、アイクリーム、スキンクリーム、化粧水、ヘア製品、セラム、及び／または保湿剤のための使用を想定し、かつ２）馴化培地の（生物学的、物理学的、及び化学的）特性を評価して生成された配合物と配合させて、使用時の品質及び効果（調合技術の当業者に理解されるように「エレガンス（ｅｌｅｇａｎｃｅ）」）を確立する。この実施例では、表２は、セラム製品用の配合物であり、表３は、アイクリーム製品を生成するための配合物であり、表４は、保湿剤製品で使用される配合物である。各美容剤用配合物は、（ｉ）６．０〜８．０の間のｐＨを有し、（ｉｉ）プロテアーゼを含まず、かつ（ｉｉｉ）無菌であり、成長培地は、市販の培地、または種に特有の培地である。
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【０１０２】
表１、表１Ａ、及び表１Ｂを参照すると、この実施例での各配合物は、本明細書で論じる原理に基づいて設計される。具体的には、この実施例のプロセスによって実現されるＩＬ−８、具体的には「ＡＣＣ」培地の量を補足するために、表１、表１Ａ、及び表１Ｂによって示されるように、配合物中の「成分」のパーセンテージは、「馴化培地」で見られる成分、即ちサイトカイン、タンパク質、及び増殖因子の量に基づく。米国特許出願第７，９８９，２０５号明細書（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｒｙｏｓｔｅｍ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）の主題であるＡＣＣ培地は、「ＭＣ」培地製品、即ちＭｅｓｅｎＣｕｌｔ（登録商標）の使用によって得られる馴化培地に比べて増加したＩＬ−８の生成に相関する。
【０１０３】
美容製品の所望のエレガンスは、製品が「流れる」または「滴り落ちる」のを妨げる粘稠性などの性質を含む。例えば、カルボマー、ヒアルロン酸、グリセロール、及びジメチコンなどの増粘剤を使用することができる。求められる別の性質は、商業目的で製品の寿命を保つことができる能力である。当業者は、特定の製品に関する生成物配合に基づいて、冷凍が必要とされることがあり、また冷凍を許容することができることを理解されよう。所定の配合に基づいて、（かなりのサイトカインを含む）成分の相乗効果をもたらすことができることが、特定の製品の生物学的性質と商業ブランドとの両方に関して非常に有利であることを当業者は理解されよう。
【０１０４】
第１次施設での継代培養のためのＴ２５フラスコ；１９〜２４日後の処理は、将来の製品のための美容製品処理施設でそれぞれ取り出すために、最低１００万個の細胞を含む５〜１０個のＰ１バイアルを最終的に冷凍するという目的を有する。優先事項は、以下のように２つのＴ７５フラスコをプレーティングすることである。
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【０１０５】
細胞を、第１のフィーディングで除去される１０１．１ｇ／ｍＬのゲンタミシンを含む０．５％のＦＢＳ  ＡＳＣ培地中でプレーティングする。これ以前にＢａｃＴの結果が陰性である場合には、細胞は即座に除去される。細胞が活性成長している間、予定される採取の約２日前に、２％のＨＳＡ培地を供給する。
【０１０６】
第１次施設で、脂肪幹細胞のＰ１バイアルを低温保存する。ＴｒｙｐＬＥ（商標）を使用して、血清がある状態と血清のない状態のどちらでも、付着依存性の哺乳類細胞株を解離し、トリプシンに置換する。計数に従って、低温保存＝計数値／１００００００（最低５バイアル）であり、例えば、（利用可能であれば）約５×１０５のＡＳＣを有する２ＱＣバイアルである。ＢａｃＴを使用して、上澄みを収集して試験する。Ｐ１でのプレーティングからＰ１凍結までの集団倍化の変化（ΔＰＤ）を計算する。
Ｌｏｇ１０［収率／種］×３．３
細胞を採取する。
【０１０７】
当業者は、品質制御回収が好ましいことを理解されよう。具体的には、この実施例では、１つの品質制御バイアルを回収する。細胞計数を終えた後、最終的な細胞懸濁物の１／２にＢａｃＴ試験を行い、０．５％ＦＢＳ  ＡＳＣ培地を使用してフィブロネクチンでコーティングされた１つのＴ２５またはＴ１２．５フラスコ（計数による）をプレーティングする。回収後、継代培養を２回行い、各新たなフラスコに１×１０４のＡＳＣを播種して、第２の継代培養後に計数のために採取する。プレーティングの１４日後に培養物が継代培養（または採取）の準備ができていない場合、継代培養が依然として行われる。培養物が完全な集団倍化を行わなかった場合、死んだものとみなされて、成長ＱＣ標準に不合格となる。培養物が倍増した場合、ＱＣプロセスを続ける。集団倍化（ＡＰＤ）の変化、及び累積集団倍化数（ｃＰＤＬ）を計算する。Ｐ１凍結からのｃＰＤＬを含めることを忘れないこと。
ΔＰＤ＝Ｌｏｇｉｃ，［収率／種］×３．３２
ｃＰＤＬ  ＝ΣＡＰＤ
【０１０８】
上述した実施形態に、それらの広範な発明概念から逸脱することなく変更を施すことができることを当業者は理解されよう。従って、本発明は、開示される特定の実施形態に限定されず、添付の特許請求の範囲によって定義される本発明の精神及び範囲内の修正形態を網羅することが意図されることを理解されたい。
【図１】
2019108370.tif 000013
【図２】
2019108370.tif 000014
【図３】
2019108370.tif 000015
【手続補正書】
【提出日】平成31年4月3日(2019.4.3)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
自己美容剤用組成物を調製するための方法において、
ａ．クライアントから得られた脂肪組織生物学的試料を提供するステップと、
ｂ．間質血管細胞群からなる所定の分離生成物を得るために、前記脂肪組織生物学的試料を分離するステップであって、前記所定の分離生成物は、アクリジンオレンジ／ヨウ化プロピジウムまたはトリパンブルー色素排除試験で３５％以上の複合的な生存能力を示し、前駆脂肪細胞、増殖することができる脂肪由来の間充織幹細胞、微小血管内皮細胞、内皮前駆細胞、単核細胞、及び血管平滑筋細胞の細胞混合物を含み、成熟脂肪細胞を含まず、前記混合物中の有核細胞の少なくとも１％は、脂肪由来の間充織細胞でなければならないステップと、
ｃ．コンフルエントに達するまで成長した幹細胞を得るために、前記所定の分離生成物を成長培地と組み合わせるステップと、
ｄ．コンフルエントに達するまで成長した前記幹細胞を単離するステップと、
ｅ．活性物質を産生するために、前記単離された幹細胞を非成長培地と組み合わせるステップと、
ｆ．前記活性物質を単離するステップと、
ｇ．前記活性物質を美容剤用配合物と配合させるステップと
を含むことを特徴とする方法。
【請求項２】
請求項１に記載の方法において、前記成長培地中の増殖因子が液体増殖因子であることを特徴とする方法。
【請求項３】
請求項２に記載の方法において、前記脂肪組織が吸引によって抽出されたものであることを特徴とする方法。
【請求項４】
請求項３に記載の方法において、前記活性物質が濃度約２３０ｐｇ／ｍｌ乃至約３６０ｐｇ／ｍｌのＩＬ−８の量を含むことを特徴とする方法。
【請求項５】
請求項４に記載の方法において、前記脂肪組織の分離が、酵素消化によって実現されることを特徴とする方法。
【請求項６】
請求項５に記載の方法において、前記美容剤用配合物が、（ｉ）６．０〜８．０の間のｐＨを有し、（ｉｉ）プロテアーゼを含まず、（ｉｉｉ）無菌であり、（ｉｖ）前記活性物質中のサイトカイン、タンパク質および増殖因子の量に基づく成分を含むことを特徴とする方法。
【請求項７】
請求項６に記載の方法において、前記成長培地が、種に特有の培地であることを特徴とする方法。
【請求項８】
請求項７に記載の方法において、ステップｃでの前記所定の分離生成物と成長培地とを組合せることが、更に、前記活性物質を産生するためにトロポエラスチンを前記所定の分離生成物および成長培地と組み合わせるステップを含むことを特徴とする方法。
【請求項９】
請求項８に記載の方法によって生成されることを特徴とする自己美容製品。
【請求項１０】
生体の真皮の皮膚細胞を刺激するための医薬の製造における、請求項９に記載の自己美容製品の使用。
【請求項１１】
請求項６に記載の方法において、前記美容剤用配合物が、前記方法によって達成されたＩＬ−８の量を補足するように設計されたものであることを特徴とする方法。