(57)【要約】【課題】本発明の課題は、水への溶解性に優れるフラボノイド包接化合物及びフラボノイド配糖体組成物の簡便で効率的な製造方法を新たに提供することである。また、水への溶解性に優れるフラボノイド包接化合物、フラボノイド包接化合物含有組成物、イソクエルシトリン配糖体組成物、ヘスペレチン−７−グルコシド配糖体組成物、ナリンゲニン−７−グルコシド配糖体組成物、これらの化合物又は組成物を含む飲食品、医療品、又は化粧品、及びラムノシド構造をもつ難溶性フラボノイドの溶解性を向上させる方法を提供することである。【解決手段】ラムノシド構造をもつ難溶性フラボノイドを、シクロデキストリンの存在下、ラムノシダーゼ活性を有する酵素で処理してラムノースを脱離する脱離工程を含む、フラボノイド包接化合物の製造方法。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ラムノシド構造をもつ難溶性フラボノイドを、シクロデキストリンの存在下、ラムノシダーゼ活性を有する酵素で処理してラムノースを脱離する脱離工程を含む、フラボノイド包接化合物の製造方法。
【請求項２】
前記ラムノシド構造をもつ難溶性フラボノイドが、ルチン、ヘスペリジン、ナリルチン、ナリンジン、ジオスミン、エリオシトリン、ミリシトリン、ネオヘスペリジン、ルテオリン−７−ルチノシド、デルフィニジン−３−ルチノシド、シアニジン−３−ルチノシド、イソラムネチン−３−ルチノシド、ケンペロール−３−ルチノシド、アピゲニン−７−ルチノシド、及びアカセチン−７−ルチノシドからなる群より選択される１種以上である、請求項１記載の製造方法。
【請求項３】
前記シクロデキストリンが、β−シクロデキストリン、分枝β−シクロデキストリン、及びγ−シクロデキストリンからなる群より選択される１種以上である、請求項１又は２記載の製造方法。
【請求項４】
前記ラムノシド構造をもつ難溶性フラボノイド１モルに対し、前記シクロデキストリンを０．０１モル以上の割合で存在させる、請求項１〜３いずれか記載の製造方法。
【請求項５】
前記脱離工程がｐＨ３〜７の水媒体において行われる、請求項１〜４いずれか記載の製造方法。
【請求項６】
前記フラボノイド包接化合物が、前記ラムノシド構造をもたない難溶性フラボノイドがシクロデキストリンに包接されたフラボノイド包接化合物であり、前記ラムノシド構造をもたない難溶性フラボノイドと前記シクロデキストリンとのモル比（シクロデキストリン／フラボノイド）が１．０〜３．０である、請求項１〜５いずれか記載の製造方法。
【請求項７】
前記フラボノイド包接化合物が、イソクエルシトリンがγ−シクロデキストリンに包接されたフラボノイド包接化合物であり、前記イソクエルシトリンと前記γ−シクロデキストリンとのモル比（γ−シクロデキストリン／イソクエルシトリン）が０．９〜４．０である、請求項１〜６いずれか記載の製造方法。
【請求項８】
前記フラボノイド包接化合物が、イソクエルシトリンがγ−シクロデキストリンに包接されたフラボノイド包接化合物であり、前記イソクエルシトリンと前記γ−シクロデキストリンとのモル比（γ−シクロデキストリン／イソクエルシトリン）が０．９〜１．８である、請求項１〜７いずれか記載の製造方法。
【請求項９】
前記フラボノイド包接化合物が、イソクエルシトリンがβ−シクロデキストリンに包接されたフラボノイド包接化合物であり、前記イソクエルシトリンと前記β−シクロデキストリンとのモル比（β−シクロデキストリン／イソクエルシトリン）が１．０〜３．０である、請求項１〜６いずれか記載の製造方法。
【請求項１０】
前記フラボノイド包接化合物が、ヘスペレチン−７−グルコシドがシクロデキストリンに包接されたフラボノイド包接化合物であり、前記ヘスペレチン−７−グルコシドと前記シクロデキストリンとのモル比（シクロデキストリン／ヘスペレチン−７−グルコシド）が１．０〜３．０である、請求項１〜６いずれか記載の製造方法。
【請求項１１】
前記フラボノイド包接化合物が、ナリンゲニン−７−グルコシドがβ−シクロデキストリンに包接されたフラボノイド包接化合物であり、前記ナリンゲニン−７−グルコシドと前記β−シクロデキストリンとのモル比（β−シクロデキストリン／ナリンゲニン−７−グルコシド）が１．０〜３．０である、請求項１〜６いずれか記載の製造方法。
【請求項１２】
得られるイソクエルシトリン包接化合物は体内吸収性が向上したものである、請求項７〜９いずれか記載の製造方法。
【請求項１３】
得られるヘスペレチン−７−グルコシド包接化合物は体内吸収性が向上したものである、請求項１０記載の製造方法。
【請求項１４】
請求項１〜１３いずれか記載の製造方法により得られたフラボノイド包接化合物を糖転移酵素で処理して配糖体化する配糖体化工程を含む、フラボノイド配糖体組成物の製造方法。
【請求項１５】
前記配糖体化工程がｐＨ３〜７の水媒体において行われる、請求項１４記載の製造方法。
【請求項１６】
ラムノシド構造をもつ難溶性フラボノイドを、シクロデキストリンの存在下、ラムノシダーゼ活性を有する酵素で処理してラムノースを脱離する脱離工程、及び前記脱離工程を経て得られたフラボノイド包接化合物を糖転移酵素で処理して配糖体化する配糖体化工程を含む、フラボノイド配糖体組成物の製造方法。
【請求項１７】
イソクエルシトリンがγ−シクロデキストリンに包接されたフラボノイド包接化合物であって、前記イソクエルシトリンと前記γ−シクロデキストリンとのモル比（γ−シクロデキストリン／イソクエルシトリン）が０．９〜１．８であり、前記イソクエルシトリンの水への溶解度が２％以上である、フラボノイド包接化合物。
【請求項１８】
イソクエルシトリンがγ−シクロデキストリンに包接されたフラボノイド包接化合物であって、前記イソクエルシトリンと前記γ−シクロデキストリンとのモル比（γ−シクロデキストリン／イソクエルシトリン）が０．９〜４．０であり、前記イソクエルシトリンの水への溶解度が２．５％以上である、フラボノイド包接化合物。
【請求項１９】
前記イソクエルシトリンと前記γ−シクロデキストリンとのモル比（γ−シクロデキストリン／イソクエルシトリン）が１．０〜１．８であり、甘味が低減されている、請求項１７又は１８記載のフラボノイド包接化合物。
【請求項２０】
イソクエルシトリンがβ−シクロデキストリンに包接されたフラボノイド包接化合物であって、前記イソクエルシトリンと前記β−シクロデキストリンとのモル比（β−シクロデキストリン／イソクエルシトリン）が１．０〜３．０であり、前記イソクエルシトリンの水への溶解度が０．１％以上である、フラボノイド包接化合物。
【請求項２１】
ヘスペレチン−７−グルコシドがシクロデキストリンに包接されたフラボノイド包接化合物であって、前記ヘスペレチン−７−グルコシドと前記シクロデキストリンとのモル比（シクロデキストリン／ヘスペレチン−７−グルコシド）が１．０〜３．０であり、前記ヘスペレチン−７−グルコシドの水への溶解度が０．０１％以上である、フラボノイド包接化合物。
【請求項２２】
前記ヘスペレチン−７−グルコシドと前記シクロデキストリンとのモル比（シクロデキストリン／ヘスペレチン−７−グルコシド）が１．０〜１．９であり、甘味が低減されている、請求項２１記載のフラボノイド包接化合物。
【請求項２３】
ナリンゲニン−７−グルコシドがβ−シクロデキストリンに包接されたフラボノイド包接化合物であって、前記ナリンゲニン−７−グルコシドと前記β−シクロデキストリンとのモル比（β−シクロデキストリン／ナリンゲニン−７−グルコシド）が１．０〜３．０であり、前記ナリンゲニン−７−グルコシドの水への溶解度が０．０１％以上である、フラボノイド包接化合物。
【請求項２４】
請求項１７〜２３いずれか記載のフラボノイド包接化合物とラムノースとを含み、前記フラボノイド包接化合物中のフラボノイドと前記ラムノースとのモル比（ラムノース／フラボノイド）が０．８〜１．２である、フラボノイド包接化合物含有組成物。
【請求項２５】
請求項１７〜２３いずれか記載のフラボノイド包接化合物と、ラムノシド構造をもつ難溶性フラボノイドとを含み、前記フラボノイド包接化合物中のフラボノイドと前記難溶性フラボノイドとのモル比（難溶性フラボノイド／包接化合物中のフラボノイド）が０．００１〜０．１である、フラボノイド包接化合物含有組成物。
【請求項２６】
下記一般式（１）で示される化合物を含むイソクエルシトリン配糖体組成物であって、前記配糖体組成物中、ｎ＝０の配糖体の含有量が１０モル％以上３０モル％以下であり、ｎ＝１〜３の配糖体の含有量が５０モル％以下であり、ｎ＝４以上の配糖体の含有量が３０モル％以上である、イソクエルシトリン配糖体組成物。
【化１】
2019024500.tif 000029
（一般式（１）中、Ｇｌｃはグルコース残基を、ｎは０または１以上の整数を意味する）
【請求項２７】
苦味が低減された、請求項２６記載のイソクエルシトリン配糖体組成物。
【請求項２８】
下記一般式（２）で示される化合物を含むヘスペレチン−７−グルコシド配糖体組成物であって、前記配糖体組成物中、ｎ＝０の配糖体の含有量が１０モル％以上３０モル％以下であり、ｎ＝１〜３の配糖体の含有量が５０モル％以下であり、ｎ＝４以上の配糖体の含有量が３０モル％以上である、ヘスペレチン−７−グルコシド配糖体組成物。
【化２】
2019024500.tif 000030
（一般式（２）中、Ｇｌｃはグルコース残基を、ｎは０または１以上の整数を意味する）
【請求項２９】
苦味が低減された、請求項２８記載のヘスペレチン−７−グルコシド配糖体組成物。
【請求項３０】
下記一般式（３）で示される化合物を含むナリンゲニン−７−グルコシド配糖体組成物であって、前記配糖体組成物中、ｎ＝０の配糖体の含有量が１０モル％以上３０モル％以下であり、ｎ＝１〜３の配糖体の含有量が５０モル％以下であり、ｎ＝４以上の配糖体の含有量が３０モル％以上である、ナリンゲニン−７−グルコシド配糖体組成物。
【化３】
2019024500.tif 000031
（一般式（３）中、Ｇｌｃはグルコース残基を、ｎは０または１以上の整数を意味する）
【請求項３１】
請求項１〜１３いずれか記載の製造方法により得られたフラボノイド包接化合物、請求項１４〜１６いずれか記載の製造方法により得られたフラボノイド配糖体組成物、請求項１７〜２３いずれか記載のフラボノイド包接化合物、請求項２４又は２５記載のフラボノイド包接化合物含有組成物、請求項２６又は２７記載のイソクエルシトリン配糖体組成物、請求項２８又は２９記載のヘスペレチン−７−グルコシド配糖体組成物、及び請求項３０記載のナリンゲニン−７−グルコシド配糖体組成物からなる群より選択される１種以上の化合物又は組成物を含む、飲食品。
【請求項３２】
請求項１〜１３いずれか記載の製造方法により得られたフラボノイド包接化合物、請求項１４〜１６いずれか記載の製造方法により得られたフラボノイド配糖体組成物、請求項１７〜２３いずれか記載のフラボノイド包接化合物、請求項２４又は２５記載のフラボノイド包接化合物含有組成物、請求項２６又は２７記載のイソクエルシトリン配糖体組成物、請求項２８又は２９記載のヘスペレチン−７−グルコシド配糖体組成物、及び請求項３０記載のナリンゲニン−７−グルコシド配糖体組成物からなる群より選択される１種以上の化合物又は組成物を含む、医薬品。
【請求項３３】
請求項１〜１３いずれか記載の製造方法により得られたフラボノイド包接化合物、請求項１４〜１６いずれか記載の製造方法により得られたフラボノイド配糖体組成物、請求項１７〜２３いずれか記載のフラボノイド包接化合物、請求項２４又は２５記載のフラボノイド包接化合物含有組成物、請求項２６又は２７記載のイソクエルシトリン配糖体組成物、請求項２８又は２９記載のヘスペレチン−７−グルコシド配糖体組成物、及び請求項３０記載のナリンゲニン−７−グルコシド配糖体組成物からなる群より選択される１種以上の化合物又は組成物を含む、化粧品。
【請求項３４】
ラムノシド構造をもつ難溶性フラボノイドと、請求項１〜１３いずれか記載の製造方法により得られたフラボノイド包接化合物あるいは請求項１７〜２３いずれか記載のフラボノイド包接化合物とを、前記フラボノイド包接化合物中のフラボノイドと前記難溶性フラボノイドとのモル比（包接化合物中のフラボノイド／難溶性フラボノイド）が０．１〜０．９となるように媒体中で混合する、ラムノシド構造をもつ難溶性フラボノイドの溶解性を向上させる方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、フラボノイド包接化合物の製造方法、フラボノイド配糖体組成物の製造方法、フラボノイド包接化合物、フラボノイド包接化合物含有組成物、イソクエルシトリン配糖体組成物、ヘスペレチン−７−グルコシド配糖体組成物、ナリンゲニン−７−グルコシド配糖体組成物、これらの化合物又は組成物を含む飲食品、医療品、又は化粧品、及びラムノシド構造をもつ難溶性フラボノイドの溶解性を向上させる方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
フラボノイドには、酸化防止効果があることから、食品の香味劣化防止、色素の退色防止等に使用されており、日本の食品添加物、既存添加物、酸化防止剤リストには、フラボノイドを有効成分としているカテキン、酵素処理ルチン、ルチン抽出物、茶抽出物、ヤマモモ抽出物等が数多く報告されている。また生理作用として、フラボノイドは、抗腫瘍、コレステロール低下、降圧、血糖下降、体脂肪減少等が報告されており、医薬品、飲食品、健康食品、特定保健用食品、及び化粧品などにも多く使用されている。
【０００３】
フラボノイドは、野菜、果実、お茶等に含まれ約３０００種類以上が知られているが、水難溶解性のものが多いため、清涼飲料水、水剤等、水易溶性が必要となる食品、飲料、医薬品及び化粧品に使用することが難しい。例えば、フラボノイドで代表的なヘスペリジンや、ルチンの水への溶解度は、０．０１％以下のため、清涼飲料水、化粧水等への使用は困難である。
【０００４】
難溶解性フラボノイドはラムノシド構造をもつものとラムノシド構造をもたないものに分けることができるが、ラムノシド構造をもつルチン、ヘスペリジン、ナリンジンよりも、ラムノースが脱離したイソクエルシトリン、ヘスペレチン−７−グルコシド、ナリンゲニン、ナリンゲニン−７−グルコシドのほうがラットでの体内吸収性が高くなることが報告されている（非特許文献１〜３）。
【０００５】
また、難溶性フラボノイドをシクロデキストリンで包接させることや、難溶性フラボノイドを配糖体化させることで体内吸収性が向上し、生理活性を効果的に示すことが知られている。包接化合物については、例えば、イソクエルシトリン(１Ｍ)・γ−シクロデキストリン（５Ｍ）包接化合物が、イソクエルシトリンよりもヒトでの体内吸収率が高くなることや（特許文献１）、マウスの実験で、ヘスペレチン・β-シクロデキストリン包接化合物等が、ヘスペレチンよりも体内吸収性(ＡＵＣ０−９時間)が高くなり、アレルギー反応抑制作用、血流改善作用、冷え性改善作用の効果が高くなることや（特許文献２）、ナリンゲニン・ヒドロキシプロピルβ−シクロデキストリン包接化合物が、ナリンゲニンに比較して体内吸収性（ラット）が上昇し、VLDL(very low lipoprotein)を減少させ、グルコースクリアランスの割合を増加させることなどが報告されている（非特許文献４）。配糖体化については、例えば、マウスの抗アレルギー効果が、「酵素処理ルチン＜イソクエルシトリン＜酵素処理イソクエルシトリン」の順になり、ラムノースを除去し、かつ水溶性の酵素処理イソクエルシトリンが最も効果を示すことが報告されている（非特許文献５）。
【０００６】
前記文献の他、ラムノシド構造を有する難溶性フラボノイドからラムノースを脱離する方法としては、例えば、特許文献３〜６に開示されている。難溶性フラボノイドをシクロデキストリンで包接する方法としては、例えば、特許文献２、７、８に開示されている。難溶性フラボノイドを配糖体化する方法としては、例えば、特許文献９、１０に開示されている。その他、特許文献１１には、難溶性フラボノイドを水易溶性にする方法として、水性媒体中に難溶性フラボノイドと大豆サポニン及び／又はマロニルイソフラボン配糖体組成物を共存させることにより可溶化する方法が開示されている。
【０００７】
また難溶性フラボノイドの溶解性を改善する方法として、難溶性フラボノイドと水易溶性フラボノイド配糖体を組み合わせることを特徴とする水溶性改善方法（特許文献３〜４、特許文献１２）、難溶性フラボノイド−β−シクロデキストリンと、グリコシルヘスペリジンを含有することを特徴とする水溶性フラボノイドが開示されている（特許文献８）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特許第５００２０７２号公報
【特許文献２】特許第５０００８８４号公報
【特許文献３】特許第４９０２１５１号公報
【特許文献４】特許第３８３３７７５号公報
【特許文献５】特許第４４９８２７７号公報
【特許文献６】特許第５９８５２２９号公報
【特許文献７】特許第３１３５９１２号公報
【特許文献８】特許第５０００３７３号公報
【特許文献９】特許第４２０２４３９号公報
【特許文献１０】特許第３９８９５６１号公報
【特許文献１１】特開２０１１−２２５５８６号公報
【特許文献１２】特開平７−１０８９８号公報
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】British Journal of Nutrition,102,976-984, 2009
【非特許文献２】Biological & Pharmaceutical Bulletin,32(12),2034-2040, 2009
【非特許文献３】American Journal of Physiology: Gastrointestinal and Liver Physiology,279,1148-1154, 2000
【非特許文献４】PL0S ONE（4）,e18033, 2011
【非特許文献５】Journal of natural Medicines, Oct,67(4), 881-6,2013
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
しかしながら、前記先行技術文献に開示される製造方法は生産効率が良いものとは言えず、また、得られるフラボノイドの水への溶解性を十分に満足するものではなく、さらなる改良が望まれるところである。
【００１１】
本発明の課題は、水への溶解性に優れるフラボノイド包接化合物及びフラボノイド配糖体組成物の簡便で効率的な製造方法を新たに提供することである。また、水への溶解性に優れるフラボノイド包接化合物、フラボノイド包接化合物含有組成物、イソクエルシトリン配糖体組成物、ヘスペレチン−７−グルコシド配糖体組成物、ナリンゲニン−７−グルコシド配糖体組成物、これらの化合物又は組成物を含む飲食品、医療品、又は化粧品、及びラムノシド構造をもつ難溶性フラボノイドの溶解性を向上させる方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明は、
[１]ラムノシド構造をもつ難溶性フラボノイドを、シクロデキストリンの存在下、ラムノシダーゼ活性を有する酵素で処理してラムノースを脱離する脱離工程を含む、フラボノイド包接化合物の製造方法、
[２][１]記載の製造方法により得られたフラボノイド包接化合物を糖転移酵素で処理して配糖体化する配糖体化工程を含む、フラボノイド配糖体組成物の製造方法、
[３]ラムノシド構造をもつ難溶性フラボノイドを、シクロデキストリンの存在下、ラムノシダーゼ活性を有する酵素で処理してラムノースを脱離する脱離工程、及び前記脱離工程を経て得られたフラボノイド包接化合物を糖転移酵素で処理して配糖体化する配糖体化工程を含む、フラボノイド配糖体組成物の製造方法、
[４]イソクエルシトリンがγ−シクロデキストリンに包接されたフラボノイド包接化合物であって、前記イソクエルシトリンと前記γ−シクロデキストリンとのモル比（γ−シクロデキストリン／イソクエルシトリン）が０．９〜１．８であり、前記イソクエルシトリンの水への溶解度が２％以上である、フラボノイド包接化合物、
[５]イソクエルシトリンがγ−シクロデキストリンに包接されたフラボノイド包接化合物であって、前記イソクエルシトリンと前記γ−シクロデキストリンとのモル比（γ−シクロデキストリン／イソクエルシトリン）が０．９〜４．０であり、前記イソクエルシトリンの水への溶解度が２．５％以上である、フラボノイド包接化合物、
[６]イソクエルシトリンがβ−シクロデキストリンに包接されたフラボノイド包接化合物であって、前記イソクエルシトリンと前記β−シクロデキストリンとのモル比（β−シクロデキストリン／イソクエルシトリン）が１．０〜３．０であり、前記イソクエルシトリンの水への溶解度が０．１％以上である、フラボノイド包接化合物、
[７]ヘスペレチン−７−グルコシドがシクロデキストリンに包接されたフラボノイド包接化合物であって、前記ヘスペレチン−７−グルコシドと前記シクロデキストリンとのモル比（シクロデキストリン／ヘスペレチン−７−グルコシド）が１．０〜３．０であり、前記ヘスペレチン−７−グルコシドの水への溶解度が０．０１％以上である、フラボノイド包接化合物、
[８]ナリンゲニン−７−グルコシドがβ−シクロデキストリンに包接されたフラボノイド包接化合物であって、前記ナリンゲニン−７−グルコシドと前記β−シクロデキストリンとのモル比（β−シクロデキストリン／ナリンゲニン−７−グルコシド）が１．０〜３．０であり、前記ナリンゲニン−７−グルコシドの水への溶解度が０．０１％以上である、フラボノイド包接化合物、
[９][４]〜[８]いずれか記載のフラボノイド包接化合物とラムノースとを含み、前記フラボノイド包接化合物と前記ラムノースとのモル比（ラムノース／フラボノイド包接化合物）が０．８〜１．２である、フラボノイド包接化合物含有組成物、
[１０][４]〜[８]いずれか記載のフラボノイド包接化合物と、ラムノシド構造をもつ難溶性フラボノイドとを含み、前記フラボノイド包接化合物中のフラボノイドと前記難溶性フラボノイドとのモル比（難溶性フラボノイド／包接化合物中のフラボノイド）が０．００１〜０．１である、フラボノイド包接化合物含有組成物、
[１１]下記一般式（１）で示される化合物を含むイソクエルシトリン配糖体組成物であって、前記配糖体組成物中、ｎ＝０の配糖体の含有量が１０モル％以上３０モル％以下であり、ｎ＝１〜３の配糖体の含有量が５０モル％以下であり、ｎ＝４以上の配糖体の含有量が３０モル％以上である、イソクエルシトリン配糖体組成物、
【化１】
2019024500.tif 000002
（一般式（１）中、Ｇｌｃはグルコース残基を、ｎは０または１以上の整数を意味する）
[１２]下記一般式（２）で示される化合物を含むヘスペレチン−７−グルコシド配糖体組成物であって、前記配糖体組成物中、ｎ＝０の配糖体の含有量が１０モル％以上３０モル％以下であり、ｎ＝１〜３の配糖体の含有量が５０モル％以下であり、ｎ＝４以上の配糖体の含有量が３０モル％以上である、ヘスペレチン−７−グルコシド配糖体組成物、
【化２】
2019024500.tif 000003
（一般式（２）中、Ｇｌｃはグルコース残基を、ｎは０または１以上の整数を意味する）
[１３]
下記一般式（３）で示される化合物を含むナリンゲニン−７−グルコシド配糖体組成物であって、前記配糖体組成物中、ｎ＝０の配糖体の含有量が１０モル％以上３０モル％以下であり、ｎ＝１〜３の配糖体の含有量が５０モル％以下であり、ｎ＝４以上の配糖体の含有量が３０モル％以上である、ナリンゲニン−７−グルコシド配糖体組成物、
【化３】
2019024500.tif 000004
（一般式（３）中、Ｇｌｃはグルコース残基を、ｎは０または１以上の整数を意味する）
[１４][１]記載の製造方法により得られたフラボノイド包接化合物、[２]又は[３]記載の製造方法により得られたフラボノイド配糖体組成物、[４]〜[８]いずれか記載のフラボノイド包接化合物、[９]又は[１０]記載のフラボノイド包接化合物含有組成物、[１１]記載のイソクエルシトリン配糖体組成物、[１２]記載のヘスペレチン−７−グルコシド配糖体組成物、及び[１３]記載のナリンゲニン−７−グルコシド配糖体組成物からなる群より選択される１種以上の化合物又は組成物を含む、飲食品、
[１５][１]記載の製造方法により得られたフラボノイド包接化合物、[２]又は[３]記載の製造方法により得られたフラボノイド配糖体組成物、[４]〜[８]いずれか記載のフラボノイド包接化合物、[９]又は[１０]記載のフラボノイド包接化合物含有組成物、[１１]記載のイソクエルシトリン配糖体組成物、[１２]記載のヘスペレチン−７−グルコシド配糖体組成物、及び[１３]記載のナリンゲニン−７−グルコシド配糖体組成物からなる群より選択される１種以上の化合物又は組成物を含む、医薬品、
[１６][１]記載の製造方法により得られたフラボノイド包接化合物、[２]又は[３]記載の製造方法により得られたフラボノイド配糖体組成物、[４]〜[８]いずれか記載のフラボノイド包接化合物、[９]又は[１０]記載のフラボノイド包接化合物含有組成物、[１１]記載のイソクエルシトリン配糖体組成物、[１２]記載のヘスペレチン−７−グルコシド配糖体組成物、及び[１３]記載のナリンゲニン−７−グルコシド配糖体組成物からなる群より選択される１種以上の化合物又は組成物を含む、化粧品、並びに
[１７]ラムノシド構造をもつ難溶性フラボノイドと、[１]記載の製造方法により得られたフラボノイド包接化合物あるいは[４]〜[８]いずれか記載のフラボノイド包接化合物とを、前記フラボノイド包接化合物中のフラボノイドと前記難溶性フラボノイドとのモル比（包接化合物中のフラボノイド／難溶性フラボノイド）が０．１〜０．９となるように媒体中で混合する、ラムノシド構造をもつ難溶性フラボノイドの溶解性を向上させる方法に関する。
【発明の効果】
【００１３】
本発明によれば、水への溶解性に優れるフラボノイド包接化合物及びフラボノイド配糖体組成物の、簡便で効率的な製造方法が新たに提供される。また、水への溶解性に優れるフラボノイド包接化合物、フラボノイド包接化合物含有組成物、イソクエルシトリン配糖体組成物、ヘスペレチン−７−グルコシド配糖体組成物、ナリンゲニン−７−グルコシド配糖体組成物、これらの化合物又は組成物を含む飲食品、医療品、又は化粧品、及びラムノシド構造をもつ難溶性フラボノイドの溶解性を向上させる方法を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】実施例３９のＨＰＬＣクロマトグラムを示す。
【図２】実施例４０のＨＰＬＣクロマトグラムを示す。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
本発明者らが前記課題を検討したところ、ラムノシド構造をもつ難溶性フラボノイドをシクロデキストリンの存在下でラムノースを脱離することで、ラムノース脱離と同時にフラボノイド包接化合物を製造することができ、脱離工程と包接工程を別々に行っていた従来法よりも効率的に製造できることを見出した。さらに意外なことに、かかる製造方法で得られたフラボノイド包接化合物が、従来法で製造したフラボノイド包接化合物よりも水への溶解性に優れていることを見出した。本発明においては、シクロデキストリンの他に各種の環状オリゴ糖を同様に使用できる。ここで、環状オリゴ糖とは、単糖が環状につながった化合物を示し、より具体的には、シクロデキストリン、サイクロデキストラン、サイクロフルクタン、サイクロアルタナン、クラスターデキストリンなどが例示される。以下の説明では、シクロデキストリンを用いた態様を例にして説明するが、本発明はこれに限定されるものではなく、その他の環状オリゴ糖も同様に用いることができる。
【００１６】
本発明のフラボノイド包接化合物の製造方法は、ラムノシド構造をもつ難溶性フラボノイドを、シクロデキストリンの存在下、ラムノシダーゼ活性を有する酵素で処理してラムノースを脱離する脱離工程を含む。
【００１７】
脱離工程は、ラムノシド構造をもつ難溶性フラボノイドからラムノースを脱離して、ラムノシド構造をもたないフラボノイドとシクロデキストリンとの包接化合物（「フラボノイド包接化合物」とも称す）を得る工程である。脱離工程は、水などの溶媒中で静置、又は攪拌しながら行うことができ、反応中の酸化、又は褐変を防止するために、反応系のヘッドスペースの空気を窒素等の不活性ガスで置換してもよく、またアスコルビン酸等の酸化防止剤を反応系に添加することも可能である。脱離工程は、反応液を加熱により酵素失活させる方法など公知の方法により終了することができる。
【００１８】
ラムノシド構造をもつ難溶性フラボノイドとしては、フラボノール類、フラバノン類、フラボン類、イソフラボン類から選ばれるものが挙げられ、フラボノイド骨格のベンゼン環にヒドロキシ基が１個以上、好ましくは、２個以上結合し、かつラムノースを保有する構造を有するものを使用することができる。ここで「難溶性」とは、２５℃での水への溶解度が１．０質量％以下、好ましくは０．１％以下、より好ましくは０．０１質量％以下であることをいう。具体的には、ルチン、ヘスペリジン、ナリルチン、ナリンジン、ジオスミン、エリオシトリン、ミリシトリン、ネオヘスペリジン、ルテオリン−７−ルチノシド、デルフィニジン−３−ルチノシド、シアニジン−３−ルチノシド、イソラムネチン−３−ルチノシド、ケンペロール−３−ルチノシド、アピゲニン−７−ルチノシド、アカセチン−７−ルチノシド及びこれらの誘導体などが挙げられる。誘導体としては、アセチル化物、マロニル化物、メチル化物などが挙げられる。
【００１９】
ラムノシド構造をもつ難溶性フラボノイドの使用量は、特に限定されるものではないが、反応系中、好ましくは０．１〜２０質量％、より好ましくは１〜１５質量％、さらに好ましくは２〜１４質量％とすることができる。ラムノシド構造をもつ難溶性フラボノイドを２種以上使用する場合の使用量は、その合計量を指す。
【００２０】
本発明の製造方法に使用されるラムノシド構造をもつ難溶性フラボノイドを含有する原料は、特に精製される必要はないが、精製されることが好ましい。前記原料中のラムノシド構造をもつ難溶性フラボノイドの含量に関しては、特に制限がなく、好ましくは５％以上であり、より好ましくは２０％以上であり、さらに好ましくは５０％以上であり、さらに好ましくは８０％以上であり、さらに好ましくは９０％以上のものを使用することができる。
【００２１】
脱離工程において存在させるシクロデキストリン（ＣＤ）としては、特に制限はされないが、より好ましくは、β−シクロデキストリン（β−ＣＤ）、分枝β−シクロデキストリン（分岐β−ＣＤ）、及びγ−シクロデキストリン（γ−ＣＤ）からなる群より選択される１種以上を使用することができる。シクロデキストリンは、Ｄ−グルコースが、α−１,４グリコシド結合によって結合し環状構造をとった環状オリゴ糖の一種で、７個結合しているものがβ−シクロデキストリン、８個結合しているものがγ−シクロデキストリンとなる。分枝β−ＣＤは、β−ＣＤに１個以上のグルコ-ス残基、ガラクトシル基、又はヒドロキシプロピル基が側鎖として連結したもので、マルトシルβ−ＣＤ（Ｇ２−β−ＣＤ）、ヒドロキシプロピル−β−ＣＤ（ＨＰ−β−ＣＤ）等がある。なお、「シクロデキストリンの存在下」とは、脱離反応系中にシクロデキストリンが含まれた状態であることを指す。
【００２２】
存在させるシクロデキストリンの量は、特に限定されるものではないが、反応系中、好ましくは０．０１〜６０質量％、より好ましくは１〜５０質量％、さらに好ましくは３〜４０質量％とすることができる。シクロデキストリンを２種以上使用する場合の量は、その合計量を指す。
【００２３】
ラムノシド構造をもつ難溶性フラボノイドに対する、シクロデキストリンのモル比（シクロデキストリン／フラボノイド）は、効率性の観点から、好ましくは０．０１以上であり、より好ましくは０．１以上であり、さらに好ましくは０．９以上であり、さらに好ましくは１．０以上であり、経済性の観点から、好ましくは１０．０以下であり、より好ましくは６．０以下であり、さらに好ましくは４．０以下であり、さらに好ましくは３．０以下である。
【００２４】
ラムノシダーゼ活性を有する酵素としては、その起源に限定はなく、動物由来、植物由来、微生物由来等のすべての由来のもので使用できる。さらに、遺伝子組み換え酵素であってもよい。また当該酵素の形態は特に限定されない。
【００２５】
ラムノシダーゼ活性を有する酵素の具体例としては、ヘスペリジナーゼ、ナリンギナーゼ、及びβ−グルコシダーゼ、ペクチナーゼなどが挙げられる。
【００２６】
ラムノシダーゼ活性を有する酵素の使用量は、用いる酵素の種類、反応条件、原料のラムノシド構造をもつ難溶解性フラボノイド類の種類などによって異なるが、例えば、ヘスペリジナーゼ、ナリンギナーゼ、及びβ−グルコシダーゼの場合、ラムノシド構造をもつ難溶解性フラボノイド類１ｇに対し０．０１〜１０００Ｕであることが好ましい。反応条件は、使用する酵素の特性に合わせ反応温度や反応液のｐＨを選択できるが、ｐＨ３〜７とすることが好ましく、ｐＨ３．５〜６．５とすることがさらに好ましい。また、ラムノシド構造をもつ難溶解性フラボノイド類をアルカリ域で溶解後にｐＨ７以下で酵素反応することもできる。反応系に使用される溶媒としては水媒体が挙げられる。本明細書において水媒体とは、水、又は有機溶媒の水溶液を云う。水としては、水道水、蒸留水、イオン交換水、精製水が例示される。有機溶媒としては、水と均一に混合するものであれば特に限定されない。有機溶媒としては食品に適用可能であるという観点よりエタノールが好ましい。また反応温度は好ましくは１０〜８０℃であり、より好ましくは４０〜７５℃である。また、反応時間は、酵素の種類等によって異なるが、例えば、１〜１００時間とすることができ、２〜２４時間が好ましい。
【００２７】
ラムノシダーゼ活性を有する酵素は、グルコシダーゼ活性を有することもあり、グルコシダーゼ活性により、ラムノシド構造をもつ難溶性フラボノイド（ヘスペリジン、ルチン、ナリンジン、ミリシトリン等）から、アグリコン包接化合物（ケルセチン包接化合物、ヘスペレチン包接化合物、ナリンゲニン包接化合物、ミリセチン包接化合物等）を得ることも制限はなく、これらも本発明に係るフラボノイド包接化合物に含まれる。
【００２８】
生成したフラボノイド包接化合物は、前記のとおりラムノシド構造をもたないフラボノイドとシクロデキストリンとの包接化合物である。ここで、包接化合物とは、一方の化学種が、分子規模の空間をつくり、その空間に形状と寸法が適合することで、他方の化学種を包接することによって生じる化合物のことを示す。
【００２９】
ラムノシド構造をもたないフラボノイドとしては、イソクエルシトリン、ケルセチン、ヘスペレチン−７−グルコシド、ヘスペレチン、ナリンゲニン−７−グルコシド（プルニン）、ナリンゲニン、ルテオリン−７−グルコシド、ジオスメチン−７−グルコシド、ミリセチン、エリオジクチオ−ル−７−グルコシド、デルフィニジン−３−グルコシド、シアニジン−３−グルコシド、イソラムネチン−３−グルコシド、ケンペロ−ル−３−グルコシド、アピゲニン−７−ルチノシド、及びアカセチン−７−グルコシドなどが挙げられる。
【００３０】
ラムノシド構造をもつ難溶性フラボノイドと、ラムノシド構造をもたないフラボノイドの構造式の具体例を以下に示す。ラムノシド構造をもつルチン（ＲＴＮ）、ヘスペリジン（ＨＳＰ）、ナリンジン（ＮＲＧ）、及びラムノシド構造をもたないイソクエルシトリン（ＩＱＣ）、ケルセチン（ＱＣＴ）、ヘスペレチン−７−グルコシド（ＨＰＴ−７Ｇ）、ヘスペレチン（ＨＰＴ）、ナリンゲニン−７−グルコシド（プルニン）（ＮＧＮ−７Ｇ，ｐｒｕｎｉｎ）、ナリンゲニン（ＮＧＮ）の構造式は下記式となる。
【００３１】
【化４】
2019024500.tif 000005
【００３２】
ラムノシド構造をもたないフラボノイドに対する、シクロデキストリンの包接体でのモル比（シクロデキストリン／フラボノイド）は、効率性の観点から、好ましくは０．０１以上であり、より好ましくは０．１以上であり、さらに好ましくは０．９以上であり、さらに好ましくは１．０以上であり、経済性の観点から、好ましくは１０．０以下であり、より好ましくは６．０以下であり、さらに好ましくは４．０以下であり、さらに好ましくは３．０以下である。
【００３３】
生成したフラボノイド包接化合物の収率は、好ましくは１０〜１００％、より好ましくは４０〜１００％であり、より好ましくは７０〜１００％であり、さらに好ましくは９０〜１００％である。収率は、ラムノシド構造をもつ難溶性フラボノイドからラムノシド構造をもたないフラボノイドへの転化率であり、後述の実施例に記載する方法により算出することができる。なお、生成したフラボノイド包接化合物は、使用原料のフラボノイド含量や転化率により、原料であるラムノシド構造をもつフラボノイド（例えばルチン、ヘスペリジン、ナリンジン等）や、原料に含有することがあるフラボノイド（例えば、ケルセチン、ケンペロール−３−ルチノシド、ケンペロール−３−グルコシド、ヘスペレチン、ナリンゲニン等）との混合物になる場合であっても、その割合に制限はない。
【００３４】
生成したフラボノイド包接化合物又は後述するフラボノイド包接化合物含有組成物（両者を「フラボノイド包接化合物等」と称す場合がある）において、フラボノイド部分の水への溶解度は、使用するラムノシド構造をもつ難溶性フラボノイド及びシクロデキストリンの種類や量にもよるが、好ましくは０．０１％以上であり、より好ましくは０．０１５％以上であり、さらに好ましくは０．０２％以上であり、さらに好ましくは１．０％以上であり、さらに好ましくは２．０％以上であり、さらに好ましくは２．５％以上であり、さらに好ましくは３％以上である。上限は特に限定されるものではないが、例えば２０％以下とすることができる。本明細書においてフラボノイド部分の水への溶解度は、２５℃における質量パーセント濃度であり、後述の実施例に記載する方法で測定することができる。
【００３５】
具体的な態様を以下に示す。
【００３６】
態様１−１
イソクエルシトリンがγ−シクロデキストリンに包接されたフラボノイド包接化合物であって、前記イソクエルシトリンと前記γ−シクロデキストリンとの包接体でのモル比（γ−シクロデキストリン／イソクエルシトリン）が、生産コストを抑える観点から、好ましくは０．９〜４．０である場合、より好ましくは０．９〜１．８である場合には、前記イソクエルシトリンの水への溶解度が好ましくは０．０１％以上であり、より好ましくは２％以上であり、さらに好ましくは２．５％以上であり、さらに好ましくは３％以上である。
【００３７】
態様１−２
イソクエルシトリンがβ−シクロデキストリンに包接されたフラボノイド包接化合物であって、前記イソクエルシトリンと前記β−シクロデキストリンとの包接体でのモル比（β−シクロデキストリン／イソクエルシトリン）が１．０〜３．０である場合には、前記イソクエルシトリンの水への溶解度が好ましくは０．０１％以上であり、より好ましくは０．０２％以上であり、さらに好ましくは０．０３％以上であり、さらに好ましくは０．０５％以上である。
【００３８】
態様１−３
ヘスペレチン−７−グルコシドがシクロデキストリンに包接されたフラボノイド包接化合物であって、前記ヘスペレチン−７−グルコシドと前記シクロデキストリンとの包接体でのモル比（シクロデキストリン／ヘスペレチン−７−グルコシド）が１．０〜３．０である場合には、前記ヘスペレチン−７−グルコシドの水への溶解度が好ましくは０．０１％以上であり、より好ましくは０．０２％以上であり、さらに好ましくは０．０３％以上である。
【００３９】
態様１−４
ナリンゲニン−７−グルコシドがβ−シクロデキストリンに包接されたフラボノイド包接化合物であって、前記ナリンゲニン−７−グルコシドと前記β−シクロデキストリンとの包接体でのモル比（シクロデキストリン／ナリンゲニン−７−グルコシド）が１．０〜３．０である場合には、前記ナリンゲニン−７−グルコシドの水への溶解度が好ましくは０．０１％以上であり、より好ましくは０．０２％以上であり、さらに好ましくは０．０３％以上である。
【００４０】
本発明のフラボノイド包接化合物の製造方法によれば、未精製の場合、フラボノイド包接化合物とラムノースとを含むフラボノイド包接化合物含有組成物が得られる。この場合において前記フラボノイド包接化合物中のフラボノイドと脱離したラムノースとのモル比（ラムノース／フラボノイド）は０．８〜１．２となる。
【００４１】
本発明のフラボノイド包接化合物の製造方法によれば、前記の収率が１００％でない場合には、未反応物としてラムノシド構造をもつ難溶性フラボノイドを含有することとなる。このような未反応物を含む、フラボノイド包接化合物含有組成物における前記フラボノイド包接化合物中のフラボノイドと前記難溶性フラボノイドとのモル比（難溶性フラボノイド／包接化合物中のフラボノイド）は、長期安定性の観点から、好ましくは０．１以下であり、より好ましくは０．０８以下であり、さらに好ましくは０．０５以下である。下限値は特に限定されるものではないが、０．００１以上、０．００３以上、０．００４以上、０．０１以上であってもよい。
【００４２】
また、驚くべきことに、本発明の製造方法で得られるフラボノイド包接化合物により、ラムノシド構造をもつ難溶性フラボノイドの溶解性を改善することができることも分かった。より具体的には、ラムノシド構造をもつ難溶性フラボノイドと、本発明の製造方法により得られたフラボノイド包接化合物とを、前記フラボノイド包接化合物中のフラボノイドと前記難溶性フラボノイドとのモル比（包接化合物中のフラボノイド／難溶性フラボノイド）が好ましくは０．１〜０．９、より好ましくは０．１〜０．７、さらに好ましくは０．１〜０．３となるように媒体中で混合することで、ラムノシド構造をもつ難溶性フラボノイドの溶解性を向上させることができる。ここで、媒体中とは、水媒体中、あるいは糖類、塩類、酸味料、甘味料、香料、グリセリン、プロピレングリコール等、食品添加物や、レモンエキス、漢方エキス等、食品や漢方を含有する水溶液中のことをいう。この溶解性向上方法は、未反応物を含むフラボノイド包接化合物含有組成物をそのまま使用することにより実施してもよいし、ラムノシド構造をもつ難溶性フラボノイドにフラボノイド包接化合物等を添加することにより実施してもよい。ここで、ラムノシド構造をもつ難溶性フラボノイドや、本発明の製造方法で得られるフラボノイド包接化合物については前記したとおりであり、例えば、ルチンとイソクエルシトリン−γ−シクロデキストリン包接化合物、ヘスペリジンとヘスペレチン−７−グルコシド−β−シクロデキストリン包接化合物、ナリンギンとナリゲニン−７−グルコシド−β−シクロデキストリン包接化合物、ルチンとナリゲニン−７−グルコシド−β−シクロデキストリン包接化合物とを組み合わせることが挙げられる。
【００４３】
本発明のフラボノイド包接化合物の製造方法は、脱離工程以外に、必要に応じて精製をすることには特に制限がなく、樹脂処理工程（吸着法、イオン交換法等）、膜処理工程（限外濾過膜処理法、逆浸透膜処理法、ゼータ電位膜処理法等）、及び電気透析法、塩析、酸析、再結晶、溶媒分画法等で精製することができる。例えば、脱離工程で得られたフラボノイド包接化合物含有組成物を、多孔性合成吸着剤により、吸着させ、水洗により、ラムノース等を除去後、アルコール溶出し、噴霧乾燥することで精製された粉末を得ることができ、またアルコール溶出後、当該組成物以外の成分として、希釈素材、またはその他の添加剤を含有しても良い。なお、ラムノース等を分画し、食品分野、医薬品、医薬部外品分野、及び香粧品分野などで利用することもできる。また製造されたフラボノイド包接化合物より、フラボノイドのみを精製することもできる。
【００４４】
希釈素材としては、本発明の効果を妨げないものであれば特に制限されず、例えば、砂糖、グルコース、デキストリン、澱粉類、トレハロース、乳糖、マルトース、水飴、液糖などの糖類；エタノール、プロピレングリコール、グリセリン等のアルコール類；ソルビトール、マンニトール、キシリトール、エリスリトール、マルチトール、還元水あめ、マンニット等の糖アルコール；または水を挙げることができる。また添加剤としては、リン酸塩類、有機酸類、キレ-ト剤等の助剤、アスコルビン酸等の酸化防止剤などを挙げることができる。
【００４５】
次に、本発明のフラボノイド配糖体組成物の製造方法について説明する。
【００４６】
本発明のフラボノイド配糖体組成物の製造方法は、本発明のフラボノイド包接化合物の製造方法により得られたフラボノイド包接化合物を糖転移酵素で処理して配糖体化する配糖体化工程を含む。即ち、ラムノシド構造をもつ難溶性フラボノイドを、シクロデキストリンの存在下、ラムノシダーゼ活性を有する酵素で処理してラムノースを脱離する脱離工程、及び前記脱離工程を経て得られたフラボノイド包接化合物を糖転移酵素で処理して配糖体化する配糖体化工程を含むものである。
【００４７】
脱離工程及び脱離工程を経て得られたフラボノイド包接化合物については前記のとおりである。なお、脱離工程を経て得られたとは、脱離工程以外の工程を含むものを排除する趣旨ではなく、任意に精製工程等を経て得られたものについても含むものである。
【００４８】
配糖体化工程は、脱離工程を経て得られたフラボノイド包接化合物に糖転移酵素を作用させて配糖体化し、フラボノイド配糖体組成物を得る工程である。また、配糖体化工程は、脱離工程と同様、水などの溶媒中で静置、又は攪拌しながら行うことができ、反応中の酸化、又は褐変を防止するために、反応系のヘッドスペースの空気を窒素等の不活性ガスで置換してもよく、またアスコルビン酸等の酸化防止剤を反応系に添加することも可能である。配糖化工程は、反応液を加熱により酵素失活させる方法など公知の方法により終了することができる。
【００４９】
配糖体化工程では、フラボノイド包接化合物のシクロデキストリンが糖供与体となり、フラボノイド配糖体組成物を製造できるが、糖供与体を追加供与することに制限はない。追加供与される糖供与体の具体例としては、澱粉、デキストリン、マルトオリゴ糖等の澱粉部分加水分解物、キシロオリゴ糖、及びこれらの含有物等が挙げられる。
【００５０】
糖転移酵素としては、脱離工程を経て得られたフラボノイド包接化合物に対して糖の転移活性を有する酵素であれば特に制限はない。糖転移酵素は、その起源に限定はなく、動物由来、植物由来、微生物由来等のすべての由来のものを使用することができる。さらに、遺伝子組み換え技術、部分加水分解等による人工酵素であってもよい。また、糖転移酵素の形態は特に限定されず、酵素蛋白質の乾燥物、不溶性担体で固定化された酵素、及び酵素蛋白質を含む液体等を用いることができる。
【００５１】
糖転移酵素の具体例としては、シクロデキストリングルカノトランスフェラーゼ、グルコシルトランスフェラーゼ、α−グルコシダーゼ、β−グルコシダーゼ、α−ガラクトシダーゼ、β−ガラクトシダーゼ、α−アミラーゼ、キシラナーゼ、プルラナーゼ、アラビノフラノシダーゼ等が挙げられる。
【００５２】
糖転移酵素の使用量は、用いる酵素の種類、糖転移反応の条件、糖の種類等によって異なるが、例えば、シクロデキストリングルカノトランスフェラーゼの場合、フラボノイド包接化合物１ｇに対し１〜１００００Ｕが好ましい。難溶性フラボノイドを配糖化する場合、難溶性フラボノイドを可溶化させるため、アルカリ側にして酵素反応をさせるのが一般的ではあるが、ｐＨ７を超えるアルカリ域では、フラボノイドの安定性が悪くなり、分解・褐色化されやすい上に、褐色物の除去工程が必要となり、かつアルカリ中和による脱塩工程も必要となる。しかし、本発明の製造方法で得られるフラボノイド包接化合物は、難溶性フラボノイドがｐＨ７以下でも高濃度で可溶化しているため、酵素反応はｐＨ７以下でも効率良く配糖体化する。従って、生産効率や品質の観点から、ｐＨ３〜７とすることが好ましく、ｐＨ６〜６．８とすることがさらに好ましい。但し、アルカリ域で糖転移することや、アルカリ域に調整した後にｐＨ７以下に調整して糖転移することもできる。反応系に使用される溶媒としては水媒体が挙げられる。また反応温度は好ましくは４０〜７０℃であり、より好ましくは５０〜６５℃である。また、反応時間は、酵素の種類等によって異なるが、例えば、０．５〜１２０時間とすることができ、１〜３０時間が好ましい。また、生産効率の観点から、脱離工程後、連続して、温度、ｐＨを至適に変更し、糖転移酵素を添加して配糖体化工程を行うことが好ましい。
【００５３】
フラボノイドに結合する糖の結合様式はα−結合又はβ−結合のいずれであってもよい。結合する糖の種類は、特に制限されないが、グルコース、ガラクトース、フルクトース等の５〜６単糖から選ばれる少なくとも１種以上が好ましい。また、糖の結合数は、好ましくは１〜３０個であり、より好ましくは１〜２５個であり、さらに好ましくは１〜２０個であり、さらに好ましくは１〜１５個であり、さらに好ましくは１〜１０個である。フラボノイド配糖体組成物は、フラボノイドに上記糖類が結合した配糖体の混合物を含むものをいい、各配糖体の結合数割合に制限はないが、飲食品等の香味を損なわない観点から、以下の態様が好ましい。
【００５４】
態様２−１
下記一般式（１）で示される化合物を含むイソクエルシトリン配糖体組成物であって、前記配糖体組成物中、ｎ＝０の配糖体の含有量が１０モル％以上３０モル％以下であり、ｎ＝１〜３の配糖体の含有量が５０モル％以下であり、ｎ＝４以上の配糖体の含有量が３０モル％以上である、イソクエルシトリン配糖体組成物。好ましくは、ｎ＝０の配糖体の含有量が１０モル％以上３０モル％以下であり、ｎ＝１〜３の配糖体の含有量が３５モル％以上４５モル％以下であり、ｎ＝４以上の配糖体の含有量が３０モル％以上５０モル％以下である。
【化５】
2019024500.tif 000006
（一般式（１）中、Ｇｌｃはグルコース残基を、ｎは０または１以上の整数を意味する）
【００５５】
態様２−２
下記一般式（２）で示される化合物を含むヘスペレチン−７−グルコシド配糖体組成物であって、前記配糖体組成物中、ｎ＝０の配糖体の含有量が１０モル％以上３０モル％以下であり、ｎ＝１〜３の配糖体の含有量が５０モル％以下であり、ｎ＝４以上の配糖体の含有量が３０モル％以上である、ヘスペレチン−７−グルコシド配糖体組成物。好ましくは、ｎ＝０の配糖体の含有量が１０モル％以上２５モル％以下であり、ｎ＝１〜３の配糖体の含有量が３５モル％以上５０モル％以下であり、ｎ＝４以上の配糖体の含有量が３０モル％以上５０モル％以下である。
【化６】
2019024500.tif 000007
（一般式（２）中、Ｇｌｃはグルコース残基を、ｎは０または１以上の整数を意味する）
【００５６】
態様２−３
下記一般式（３）で示される化合物を含むナリンゲニン−７−グルコシド配糖体組成物であって、前記配糖体組成物中、ｎ＝０の配糖体の含有量が１０モル％以上３０モル％以下であり、ｎ＝１〜３の配糖体の含有量が５０モル％以下であり、ｎ＝４以上の配糖体の含有量が３０モル％以上である、ナリンゲニン−７−グルコシド配糖体組成物。
【化７】
2019024500.tif 000008
（一般式（３）中、Ｇｌｃはグルコース残基を、ｎは０または１以上の整数を意味する）
【００５７】
なお、グルコース基の結合数（ｎ数）は、任意に調整することができる。例えば、フラボノイド配糖体組成物生成後に、各種のアミラ-ゼ（α−アミラーゼ、β−アミラーゼ、グルコアミラーゼ、α−グルコシダーゼ等）を単独もしくは複数組み合わせて処理することにより、フラボノイド配糖体組成物分子中のグルコース糖鎖数を減少させて、任意のグルコース糖鎖長を持つフラボノイド配糖体組成物を得ることもできる。
【００５８】
本発明のフラボノイド配糖体組成物の製造方法は、脱離工程、配糖体化工程以外に、必要に応じて精製をすることには特に制限がなく、樹脂処理工程（吸着法、イオン交換法等）、膜処理工程（限外濾過膜処理法、逆浸透膜処理法、ゼータ電位膜処理法等）、及び電気透析法、塩析、酸析、再結晶、溶媒分画法等で精製することができる。例えば、配糖体化工程で得られたフラボノイド配糖体組成物を、多孔性合成吸着剤により、配糖体組成物を吸着、水洗、アルコール溶出後、噴霧乾燥することで精製された粉末を得ることができる。またアルコール溶出後、当該組成物以外の成分として、希釈素材、またはその他の添加剤を含有しても良い。
【００５９】
希釈素材の具体例としては、フラボノイド包接化合物の製造方法で記載したものと同様である。
【００６０】
本発明の製造方法で得られるフラボノイド配糖体組成物における水への溶解度は、フラボノイド換算値で、好ましくは０．０１％以上であり、より好ましくは０．０１５％以上であり、さらに好ましくは０．０２％以上であり、さらに好ましくは０．１％以上であり、さらに好ましくは０．５％以上である。上限は特に限定されるものではないが、例えば２０％以下とすることができる。
【００６１】
本発明の製造方法で得られるフラボノイド包接化合物、フラボノイド配糖体組成物は、体内吸収性が遅いと言われているラムノシド構造をもつ難溶性フラボノイド、あるいはラムノシド構造をもつフラボノイド配糖体組成物と組み合わせることで、体内吸収率が持続的に向上した食品の形態とすることができる。例えば、イソクエルシトリン包接化合物とルチンとの組み合せ、イソクエルシトリン配糖体組成物とルチン配糖体組成物（例えばαＧルチン、東洋製糖（株））との組み合せ、ヘスペレチン−７−グルコシド包接化合物とヘスペリジン配糖体組成物（例えばαＧヘスペリジン、東洋製糖（株））との組み合せ、ヘスペレチン−７−グルコシド配糖体組成物とヘスペリジン配糖体組成物（例えばモノグルコシルヘスペリジン、（株）林原）との組み合せなどが挙げられる。
【００６２】
また、本発明の製造方法で得られるフラボノイド配糖体組成物は、他の難溶性フラボノイドと組み合わせることで、他の難溶性フラボノイドの溶解性を改善することができる。例えば、イソクエルシトリン配糖体組成物とルチン、ヘスペレチン−７−グルコシド配糖体組成物とヘスペリジン、ヘスペレチン−７−グルコシド配糖体組成物とミリシトリンを組み合わせることが挙げられる。またそのモル比率（配糖体組成物／他の難溶性フラボノイド）は、好ましくは０．１〜０．５であり、より好ましくは０．１〜０．３であり、さらに好ましくは０．１〜０．１５である。
【００６３】
本発明の製造方法で得られたフラボノイド包接化合物、及び／又はフラボノイド配糖体組成物は、前記のとおり体内吸収率に優れる他、退色防止、香味劣化防止、保存安定性にも優れるため、食品用組成物、医薬用組成物、化粧用組成物、及び食品添加物用組成物として好適に用いることができる。より詳細には、抗アレルギー、抗酸化、抗癌、抗炎症、腸内フローラ改善、消臭、血漿コレステロール上昇抑制、血圧上昇抑制、血糖上昇抑制、血小板凝集抑制、痴呆予防、体脂肪燃焼、体脂肪蓄積抑制、持久力向上、抗疲労、冷え症改善、肌状態改善、育毛、筋委縮抑制、睡眠のための素材として、また、食品添加物の酸化防止剤、退色防止剤、香味劣化防止剤として使用できる。食品添加物組成物は、甘味料、着色料、保存料、増粘安定剤、発色剤、漂白剤、防カビ剤、ガムベース、苦味料、光沢剤、酸味料、調味料、乳化剤、強化剤、製造用剤、香料の劣化防止などのために添加し、混合製剤とすることができる。即ち、本発明においては、本発明の製造方法で得られたフラボノイド包接化合物、及び／又はフラボノイド配糖体組成物を含む、飲食品、医薬品、化粧品などを提供することができる。
【００６４】
飲食品は、食品と飲料を含むものであり、例えば、栄養補助食品、健康食品、特定保健用食品、機能性表示食品、食事療法用食品、総合健康食品、サプリメント、茶飲料、コーヒー飲料、ジュース、清涼飲料、ドリンク剤などが挙げられる。
【００６５】
医薬品は、医薬品又は医薬部外品を含むものであり、経口製剤、又は皮膚用外用剤であることが好ましく、液剤、錠剤、顆粒剤、丸剤、シロップ剤、又はローション剤、スプレー剤、軟膏剤の形態とすることができる。
【００６６】
化粧品としては、クリーム、液状ローション、乳液状ローション、スプレーの形態とすることができる。
【００６７】
本発明の飲食品、医薬品、又は化粧品中におけるフラボノイド包接化合物及び／又はフラボノイド配糖体組成物の配合量は、特に限定されないが、フラボノイド類の好ましい一日摂取量を参考に、溶解性、呈昧等を考慮して、適宜設計することができる。例えば、食品用組成物中における本発明の製造方法で得られたフラボノイド包接化合物及び／又はフラボノイド配糖体組成物のフラボノイド部分としての配合量を好ましくは０．００１〜３０質量％、より好ましくは０．０１〜２０質量％、さらに好ましくは０．０２〜１０質量％とすることができ、フラボノイド包接化合物及び／又はフラボノイド配糖体組成物を一日当たり好ましくは１０ｍｇ〜２０ｇ、より好ましくは３０ｍｇ〜１０ｇ、さらに好ましくは１００ｍｇ〜５ｇを１〜数回（例えば３回）に分けて摂取することができるように、食品用組成物中の配合量を決定することもできる。また、食品添加物製剤へのフラボノイド包接化合物及び／又はフラボノイド配糖体組成物の配合量は、フラボノイド類が効果を示す容量として好ましくは０．００１〜５０質量％、より好ましくは０．０１〜４０質量％、さらに好ましくは０．１〜３０質量％で使用することができる。
【実施例】
【００６８】
以下に、実施例により本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例によってなんら限定されるものではない。なお、特に記載のない限り、「％」は「質量％」を意味するものとする。
【００６９】
フラボノイド包接化合物含有組成物の調製
実施例１〜３１
１０００ｍ１容量のビーカーに、ラムノシド構造をもつ難溶性フラボノイド（ルチン又はヘスペリジン）とシクロデキストリンを表１、２に示すように添加し、水を加えて１０００ｇにし、７０℃、ｐＨ４．５に調整した。その後撹拌しながら、ナリンギナーゼ（天野エンザイム（株）１５５ｕ／ｇ）を３〜３０ｇ添加し、２４時間反応させた後、室温に戻して、ろ紙濾過後、ラムノシド構造をもたないフラボノイド（イソクエルシトリン又はヘスペレチン−７−グルコシド）とシクロデキストリンとの包接化合物、及び脱離したラムノースを含むフラボノイド包接化合物含有組成物を得た。
【００７０】
比較例１〜３
シクロデキストリンを添加しない以外は実施例１６、１７と同様にしてそれぞれ比較例１、３の組成物を調製した。また、シクロデキストリンに代えて、デキストリンを添加した以外は実施例１６と同様にして比較例２の組成物を調製した。
【００７１】
比較例１０１
１００ｍ１容量のビ−カ−に、下記で調製したイソクエルシトリンとγ−シクロデキストリンを表１−２に示すように添加し、水を加えて１００ｇとし、７０℃、ｐＨ４．５で２４時間攪拌後、室温に戻して、ろ紙濾過し、イソクエルシトリンとγ−シクロデキストリンとの包接化合物を含有する組成物を調製した。
【００７２】
イソクエルシトリンの調製
表１で使用したルチン１０ｇを１００Ｌ水溶液に添加し、７０℃、ｐＨ４．５に調整した。その後撹拌しながら、ナリンギナーゼ（天野エンザイム(株）１５５ｕ／ｇ）を１ｇ添加し、回収・乾燥することで、含量９６％以上のイソクエルシトリンを７．２ｇ得た。試薬イソクエルシトリン（Ｗａｋｏ）を用いてＨＰＬＣにて同一であることを確認した。
【００７３】
実施例１０１〜１０９
表２−２に示す原料を使用した以外は実施例１〜３１と同様にしてナリンゲニン−７−グルコシドとβ−シクロデキストリンとの包接化合物を含有する組成物を調製した。
【００７４】
比較例１０２
シクロデキストリンを添加しない以外は実施例１０４と同様にして比較例１０２の組成物を調製した。
【００７５】
表１、１−２、２、２−２で使用した詳細を以下に示す。
ＲＴＮ：下記で調製したルチン
マメ科植物であるエンジュのつぼみ５０ｋｇを５００Ｌの熱水に３時間浸漬した後、濾別した濾液を取得した。その後、室温まで冷却して沈殿した成分を濾別し、沈殿部を水洗、再結晶、及び乾燥することにより、含量９６％以上のルチン３１９０ｇを得た。試薬ルチン（Ｗａｋｏ）を用いてＨＰＬＣにて同一ピークであることを確認した。
ＨＳＰ：ヘスペリジン（含量９７％以上、浜理薬品工業株式会社製）
ＮＲＧ：ナリンジン（含量９５％以上  ＳＩＧＭＡ社製）
β−ＣＤ：β−シクロデキストリン（パールエース社製）
γ−ＣＤ：γ−シクロデキストリン（パールエース社製）
デキストリン：サンデック＃７０（三和澱粉工業株式会社製）
【００７６】
ルチンからイソクエルシトリンへの転化率
実施例１〜１６、及び比較例１〜２の未濾過の反応終了混合液を測定サンプルとし、ＨＰＬＣ（ＳＨＩＭＡＤＺＵ）の面積比（イソクエルシトリンのピーク面積／ルチンのピーク面積）＜ＨＰＬＣ条件；カラム:ＣＡＰＣＥＬＬ  ＰＡＫ  Ｃ１８    ＳＩＺＥ  ４．６ｍｍ×２５０ｍｍ（ＳＨＩＳＥＩＤＯ）、溶離液：２０％（ｖ／ｖ）アセトニトリル／０．１％リン酸水溶液、検出：３５１ｎｍ、流速：０．４ｍｌ／ｍｉｎ、カラム温度：７０℃＞より、転化率（％）＝イソクエルシトリンのピ−ク面積×１００／（ルチンのピ−ク面積＋イソクエルシトリンのピ−ク面積）として算出した。イソクエルシトリンは、試薬イソクエルシトリン（Ｗａｋｏ）を用いてＨＰＬＣにて同一のピークであることで確認した。実施例１〜１６における転化率はいずれも９６％以上であった。一方、実施例１６と同酵素量で比較した比較例１における転化率は５６％、比較例２における転化率は５７％と低いものであった。
【００７７】
ヘスペリジンからヘスペレチン−７−グルコシドへの転化率
実施例１７〜３１、及び比較例３の未濾過の反応終了混合液を測定サンプルとし、ＨＰＬＣ（ＳＨＩＭＡＤＺＵ）の面積比（ヘスペレチン−７−グルコシドのピーク面積／ヘスペリジンのピーク面積）＜ＨＰＬＣ条件；カラム:ＣＡＰＣＥＬＬ  ＰＡＫ  Ｃ１８    ＳＩＺＥ  ４．６ｍｍ×２５０ｍｍ（ＳＨＩＳＥＩＤＯ）、溶離液：４０％（ｖ／ｖ）アセトニトリル／０．１％リン酸水溶液、検出：２８０ｎｍ、流速：０．４ｍｌ／ｍｉｎ、カラム温度：７０℃＞より、転化率（％）＝ヘスペレチン−７−グルコシドのピ−ク面積×１００／（ルチンのピ−ク面積＋ヘスペレチン−７−グルコシドのピ−ク面積）として算出した。ヘスペレチン−７−グルコシドは、ＮＭＲによりヘスペレチン−７−グルコシドであることを確認した乾燥品を用いて、ＨＰＬＣにて同一のピークであることで確認した。実施例１７〜３１における転化率はいずれも９６％以上であった。一方、比較例３における転化率は５７％と低いものであった。
【００７８】
ナリンジンからナリンゲニン−７−グルコシドへの転化率
実施例１０１〜１０９、及び比較例１０２の未濾過の反応終了混合液を測定サンプルとし、ＨＰＬＣ（ＳＨＩＭＡＤＺＵ）の面積比（ナリンゲニン−７−グルコシドのピ−ク面積／ナリンジンのピ−ク面積）＜ＨＰＬＣ条件；カラム:ＣＡＰＣＥＬＬ  ＰＡＫ  Ｃ１８    ＳＩＺＥ  ４．６ｍｍ×２５０ｍｍ（ＳＨＩＳＥＩＤＯ）、溶離液：２５％（ｖ／ｖ）アセトニトリル／０．１％リン酸水溶液、検出：２８０ｎｍ、流速：０．４ｍｌ／ｍｉｎ、カラム温度：７０℃＞より算出した。すなわち転化率（％）＝ナリンゲニン−７−グルコシドのピ−ク面積×１００／（ナリンジンのピ−ク面積＋ナリンゲニン−７−グルコシドのピ−ク面積）として算出した。ナリンゲニン−７−グルコシドは、試薬ナリンゲニン−７−グルコシド（Ｗａｋｏ）を用いてＨＰＬＣにて同一のピ−クであることで確認した。実施例１０１〜１０９、及び比較例１０２の転化率は９５％以上であった。
【００７９】
イソクエルシトリン（ＩＱＣ）濃度（吸光度分析法）
実施例１〜１６、比較例１、２、１０１の反応終了液を、室温静置後に、上清液１ｍｌをフィルター濾過し、測定サンプルとした。試薬ルチン（Ｗａｋｏ）を使用し吸光度３５１ｎｍ（０．１％リン酸溶液）で検量線を作成後、測定サンプルの吸光度よりルチン濃度を算出し、転化率で補正後０．７６１（イソクエルシトリン／ルチンの分子量比（４６４．３８／６１０．５２＝０．７６１））を乗じたものをイソクエルシトリン濃度として算出した。結果を表１、１−２に示す。なお、濃度算出時の転化率は、濃度分析と同サンプルをＨＰＬＣ測定後算出した。
【００８０】
ヘスペレチン−７−グルコシド（ＨＰＴ−７Ｇ）濃度（吸光度分析法）
実施例１７〜３１、比較例３の反応終了液を、室温静置後に、上清液１ｍｌをフィルター濾過し、測定サンプルとした。試薬ヘスペリジン（Ｗａｋｏ）を使用した吸光度２８０ｎｍ（０．１％リン酸溶液）で検量線を作成後、測定サンプルの吸光度よりヘスペリジン濃度を算出し、ＨＰＬＣ分析の転化率で補正後、０．７６１（ヘスペレチン−７−グルコシド／ヘスペリジンの分子量比（４６４．４２／６１０．５６＝０．７６１））を乗じたものをヘスペレチン−７−グルコシド濃度として算出した。結果を表２に示す。なお、濃度算出時の転化率は、濃度分析と同サンプルをＨＰＬＣ測定後算出した。
【００８１】
ナリンゲニン−７−ゲルコシド(ＮＧＮ−７Ｇ)濃度（吸光度分析法）
実施例１０１〜１０９、及び比較例１０２の反応終了液を、室温静置後に、上清液１ｍｌをフィルター濾過し、測定サンプルとした。試薬ナリンジン（ＳＩＧＭＡ社製、以下ＮＲＧ）を使用した吸光度２８０ｎｍ（０．１％リン酸溶液）で検量線を作成後、測定サンプルの吸光度よりナリンジン濃度を算出し、ＨＰＬＣ分析の転化率で補正後、０．７４８（ナリンジン／ナリンゲニン−７−グルコシドの分子量比（４３４．３９/５８０．５４＝０．７４８））を乗じたものをナリンゲニン−７−グルコシド濃度として算出した。結果を表２−２に示す。なお、濃度算出時の転化率は、濃度分析と同サンプルでＨＰＬＣ測定後算出した。
【００８２】
モル比（ＣＤ/ＩＱＣ（モル比）、ＣＤ/ＨＰＴ−７Ｇ（モル比）、ＣＤ/ＮＧＮ−７Ｇ（モル比））(ＨＰＬＣ糖分析法)
実施例１〜３１、１０１〜１０９及び比較例１０１の反応終了液を、室温静置後、上清液１ｍｌをフィルターろ過し、測定サンプルとした。ＨＰＬＣ(ＳＨＩＭＡＤＺＵ)分析＜ＨＰＬＣ条件：カラム：Ｉｎｅｒｔｓｉｌ  ＮＨ２(４．６×１５０ｍｍ（ジーエルサイエンス）、溶離液：６５％アセトニトリル/水（ｖ／ｖ）、検出：示唆屈折計 ＲＩＤ−１０Ａ（ＳＨＩＭＡＤＺＵ）、流速：１ｍｌ/ｍｉｎ、カラム温度：４０℃＞より、β−シクロデキストリン（Ｗａｋｏ）、γ−シクロデキストリン（Ｗａｋｏ）の検量線を作成後、サンプルのシクロデキストリンのモル濃度を算出し、又イソクエルシトリン、ヘスペレチン−７−グルコシド、及びナリンゲニン−７−グルコシドのモル濃度とで、シクロデキストリン／イソクエルシトリン、シクロデキストリン／ヘスペレチン−７−グルコシド、シクロデキストリン／ナリンゲニン−７−グルコシドのモル比を算出した。結果を表１、１−２、２、２−２に示す。なお、反応終了後濾過液のモル比は、凍結乾燥物でも同じであった。
【００８３】
溶解度（ＩＱＣ溶解度、ＨＰＴ−７Ｇ溶解度、ＮＧＮ−７Ｇ溶解度）
実施例１〜３１、１０１〜１０９及び比較例１〜３、１０１、１０２の反応終了液を、室温静置後、ろ紙濾過し、凍結乾燥により乾燥物を得た。水を５０ｍｌ入れた１００ｍｌ容量のビーカーの中に、上記で調製した乾燥物を、５０℃で、撹拌しながら、溶解しきれず析出するまで添加した。室温（２５℃）静置後、上清液１ｍｌをフィルター濾過し、吸光度分析法にてイソクエルシトリン濃度、ヘスペレチン−７−グルコシド濃度、ナリンゲニン−７−グルコシド濃度を算出し、溶解度とした。但し、溶解度測定の際、乾燥物量が不充分である場合、同実施例実験を繰り返すことで必要量を取得し、溶解度を測定した。また、実施例１〜３１、１０１〜１０９及び比較例１０１でフラボノイドがシクロデキストリンと包接されていることを、示差走査熱量計（ＤＳＣ）、核磁気共鳴（ＮＭＲ）、及びフーリエ変換赤外分光光度計（ＦＴ−ＩＲ）より確認した。溶解度の結果を表１、１−２、２、２−２に示す。なお、実施例１〜３１、１０１〜１０９の反応終了後、室温ろ過液を、透析によりラムノースを除去したフラボノイド包接化合物の凍結乾燥物もほぼ同様の溶解度を示した。
【００８４】
【表１】
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【００８５】
表１の注釈
（１）反応開始時のルチン濃度（質量％）
（２）反応開始時のβ−シクロデキストリン濃度（質量％）
（３）反応開始時のγ−シクロデキストリン濃度（質量％）
（４）反応開始時のデキストリン濃度（質量％）
（５）反応開始時のシクロデキストリン／ルチン（モル比）
（６）反応終了後濾過液のイソクエルシトリン濃度（質量％）
（７）反応終了後濾過液のシクロデキストリン／イソクエルシトリン（モル比）
（８）反応終了後濾過液凍結乾燥物のイソクエルシトリン溶解度（質量％）
【００８６】
【表１−２】
2019024500.tif 000010
【００８７】
表１−２の注釈
（１１）加熱撹拌開始時のイソクエルシトリン濃度（質量％）
（１２）加熱撹拌開始時のγ−シクロデキストリン濃度（質量％）
（１３）加熱撹拌開始時のシクロデキストリン／イソクエルシトリン（モル比）
（１４）加熱撹拌後濾過液のイソクエルシトリン濃度（質量％）
（１５）加熱撹拌後濾過液のシクロデキストリン／イソクエルシトリン（モル比）
（１６）加熱撹拌後濾過液凍結乾燥物のイソクエルシトリン溶解度（質量％）
【００８８】
表１から明らかなように、本発明の製造方法によれば、ルチンからラムノース脱離反応とともに、イソクエルシトリンとシクロデキストリンとの包接体が効率よく得られることがわかった。他方、比較例１及び２では、転化率が低く、また溶解度も低かった。なお、実施例７、８、及び比較例１〜３の反応液及び反応終了液は懸濁状態であった。しかし実施例１〜６、及び実施例９〜１６は、反応初期、反応中期には、反応液は懸濁状態であったが、反応終了時、及びその後の室温静置時は溶解しており、イソクエルシトリン−シクロデキストリン包接化合物の包接化率（包接化合物中のイソクエルシトリン濃度（反応終了後、室温静置濾過液の濃度）×１００／反応終了液（未濾過の混合液）中のイソクエルシトリン濃度）は、ほぼ１００％であった。しかし、表１−２の比較例１０１のように、実施例１０と同組成のイソクエルシトリンとγ−シクロデキストリンを混合加熱するだけでは、終始懸濁状態で、包接化率（包接化合物中のイソクエルシトリン濃度（反応終了後、室温静置後濾過液の濃度）×１００／反応終了液（未濾過の混合液）中のイソクエルシトリン濃度）も１２％と低く、また濾液の凍結乾燥物の溶解度も低かった。
【００８９】
【表２】
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【００９０】
表２の注釈
（２１）反応開始時のヘスペリジン濃度（質量％）
（２２）反応開始時のβ−シクロデキストリン濃度（質量％）
（２３）反応開始時のγ−シクロデキストリン濃度（質量％）
（２４）反応開始時のシクロデキストリン／ヘスペリジン（モル比）
（２５）反応終了後濾過液のヘスペレチン−７−グルコシド濃度（質量％）
（２６）反応終了後濾過液のシクロデキストリン／ヘスペレチン−７−グルコシド（モル比）
（２７）反応終了後濾過液凍結乾燥物のヘスペレチン−７−グルコシド溶解度（質量％）
【００９１】
表２から明らかなように、本発明の製造方法によれば、ヘスペリジンからラムノース脱離反応とともに、ヘスペレチン−７−グルコシドとシクロデキストリンとの包接体が効率よく得られることがわかった。他方、比較例３では、転化率が低く、また溶解度も低かった。なお、実施例１７、２６、及び比較例３は、反応液及び反応終了液は懸濁状態であった。しかし実施例１８〜２５、及び実施例２７〜３１は、反応初期及び反応中期には、反応液は懸濁状態であったが、反応終了時、及び室温静置時は溶解しており、ヘスペレチン−７−グルコシド−シクロデキストリン包接化合物となる包接化率（包接化合物中のヘスペレチン−７−グルコシド濃度（反応終了後、室温静置濾過液の濃度）×１００/反応終了液（未濾過の混合液）のヘスペレチン−７−グルコシド濃度）はほぼ１００％であった。
【００９２】
【表２−２】
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【００９３】
表２−２の注釈
（３１）反応開始時のナリンジン濃度（質量％）
（３２）反応開始時のβ−シクロデキストリン濃度（質量％）
（３３）反応開始時のシクロデキストリン／ナリンジン（モル比）
（３４）反応終了後濾過液のナリンゲニン−７−グルコシド濃度（質量％）
（３５）反応終了後濾過液のシクロデキストリン／ナリンゲニン−７−グルコシド（モル比）
（３６）反応終了後濾過液凍結乾燥物のナリンゲニン−７−グルコシド溶解度（質量％）
【００９４】
表２−２から明らかなように、本発明の製造方法によれば、ナリンジンからラムノ−ス脱離反応とともに、ナリンゲニン−７−グルコシドとβシクロデキストリンとの包接体が効率よく得られ、溶解性も改善された。比較例１０２は、転化率は９５％以上であったが、反応終了後、室温静置ですぐに沈殿が生じた為、低い溶解度となった。しかし実施例１０１〜１０９の反応終了後、室温静置濾過液は溶解しており、ナリンゲニン−７−グルコシド−シクロデキストリン包接化合物となる包接化率（包接化合物中のナリンゲニン−７−グルコシド濃度（反応終了後、室温静置濾過液の濃度）×１００/反応終了液（未濾過の混合液）のナリンゲニン−７−グルコシド濃度）はほぼ１００％であった。
【００９５】
フラボノイド包接化合物含有組成物中のモル比（ラムノース/フラボノイド）
また実施例１８〜２５、２７〜３１、１０１〜１０９の反応終了後濾過液のラムノース含量を測定（ＨＰＬＣ糖分析法と同条件、ラムノース（Ｗａｋｏ）で検量線作成）後、ラムノースのモル濃度を算出したところ、包接化合物のフラボノイドとのモル比（ラムノース/フラボノイド）は、０．８〜１．２であった。
【００９６】
フラボノイド包接化合物の風味評価
実施例１０〜１５の反応終了液の各１００ｍｌを、透析膜（スペクトラ／ポア  CE  透析用チューブ，ＭＷＣＯ ５００−１０００,  funakoshi社製）に入れ、水１０Ｌ中で透析（５回水交換、１０℃）を行うことでラムノースを除去し、その後各液を凍結乾燥して１０ｇ〜３０ｇの乾燥物を得た。得られた乾燥物を、市販の炭酸飲料（無糖）（「南アルプスの天然水スパークリング」、サントリー社製）、コーヒー飲料（無糖）（「ワンダゴールド  ブラック」、アサヒ飲料社製）、及びお茶（「おーいお茶」、伊藤園社製）にイソクエルシトリン換算濃度として０．１質量％添加し、５名のパネラーにより、無添加品を対照に、官能評価(異味、甘味)を実施した。下記の評価基準に従い、それぞれの平均点を算出した。結果を表３に示す。
【００９７】
異味の評価基準
１：異味を強く感じる
２：異味をやや強く感じる
３：異味を感じる
４：異味をかすかに感じる
５：異味を感じない
【００９８】
甘味の評価基準
１：甘味を強く感じる
２：甘味をやや強く感じる
３：甘味を感じる     
４：甘味をかすかに感じる
５：甘味を感じない
【００９９】
【表３】
2019024500.tif 000013
【０１００】
表３から明らかなように、モル比（γＣＤ／ＩＱＣ）が１．０〜１．８であると、モル比が２．０〜４．０のものと比較して異味や甘味が少なく、飲料等の食品の風味に対する影響を小さくする観点から好ましいことが分かる。また、表には示さないが、ヘスペレチン−７−グルコシド包接化合物については、モル比（ＣＤ／ＨＰＴ−７Ｇ）が１．０〜１．９であると、モル比が２．０〜３．０のものと比較して異味（無添加と異なる風味）や甘味が少なく、飲食品に好適に使用できる。
【０１０１】
フラボノイド配糖体組成物の調製
実施例３２〜３９
実施例４で調製した反応液（７０℃、ｐＨ４．５、イソクエルシトリン濃度２．３質量％）に、少量のアルカリを加えて６０℃、ｐＨ６．５に調整後、シクロデキストリングルカノトランスフェラーゼ（CGTase :天野エンザイム(株)、商品名「コンチザイム」、６００Ｕ／ｍｌ）２０ｇを添加して反応を開始し、２４時間保持した。得られた反応液を、加熱殺菌、濾過後、凍結乾燥して、一般式（１）で示される化合物を含むイソクエルシトリン配糖体組成物１５８ｇ（試料１）を得た。得られたイソクエルシトリン配糖体組成物（試料１）における水への溶解度は、イソクエルシトリン換算値で２．７％であった。得られたイソクエルシトリン配糖体組成物（試料１）を水に溶解後、ダイヤイオンＨＰ−２０（多孔性合成吸着樹脂、三菱ケミカル社製）を充填したカラムに通液しイソクエルシトリン配糖体組成物を吸着させ、樹脂容量の２倍の水で洗浄することでラムノース等の糖類を除去した。その後、樹脂容量の２倍の６５％（ｖ／ｖ）エタノールにより吸着成分を溶離させた溶出液を濃縮後、凍結乾燥して、実施例３９の配糖体組成物を調製した。実施例３９のＨＰＬＣクロマトグラムを図１に示す。この結果は、試料１のＨＰＬＣクロマトグラムと同等であった。また、実施例３９と同様の方法で、イソクエルシトリン配糖体組成物 (試料１)を吸着、水洗浄後、溶出させるエタノール濃度を１０〜６０％（ｖ／ｖ）で溶出させた。それら溶出液（１０、２０、３０、４０、５０、６０％（ｖ／ｖ）溶出液）を組み合わせてモル比調整した溶液を、濃縮後凍結乾燥して、実施例３２〜３８の配糖体組成物を調製した。実施例３２〜３９の配糖体組成物の水への溶解度は、イソクエルシトリン換算値で１０％以上であった。なお、糖転移反応時、同酵素量で、ｐＨ７．５、ｐＨ８．５での反応液を調製したところ、ほぼ同量のイソクエルシトリン配糖体組成物が産生したが、フラボノイドの一部分解により、溶液の色目が褐黒色化したため、ｐＨ６．５で反応させたものを使用した。なお、実施例１〜３、１０〜１６で調製した反応液も、同条件で試料１と同じＨＰＬＣクロマトグラム（図１）のイソクエルシトリン配糖体組成物が作製された。
【０１０２】
【化８】
2019024500.tif 000014
（一般式（１）中、Ｇｌｃはグルコース残基を、ｎは０または１以上の整数を意味する）
【０１０３】
実施例４０〜４６
実施例２２で調製した反応液（７０℃、ｐＨ４．５、ヘスペレチン−７−グルコシド濃度２．９質量％）に、少量のアルカリを加えて６０℃、ｐＨ６．５に調整後、シクロデキストリングルカノトランスフェラーゼ（CGTase :天野エンザイム(株)、商品名「コンチザイム」、６００Ｕ／ｍｌ）５ｇを添加して反応を開始し、２４時間保持した。得られた反応液を、加熱殺菌、濾過後、噴霧乾燥して、一般式（２）で示される化合物を含むヘスペレチン−７−グルコシド配糖体組成物１３６ｇ（試料２）を得た。得られたヘスペレチン−７−グルコシド配糖体組成物（試料２）における水への溶解度は、ヘスペレチン−７−グルコシド換算値で５．１％であった。得られたヘスペレチン−７−グルコシド配糖体組成物（試料２）を水に溶解後、ダイヤイオンＨＰ−２０（多孔性合成吸着樹脂、三菱ケミカル社製）を充填したカラムに通液しヘスペレチン−７−グルコシド配糖体組成物を吸着させ、樹脂容量の２倍の水で洗浄することでラムノース等の糖類を除去した。その後、樹脂容量の２倍の６５％（ｖ／ｖ）エタノールにより吸着成分を溶離させた溶出液を濃縮後、凍結乾燥して、実施例４０の配糖体組成物を調製した。実施例４０のＨＰＬＣクロマトグラムを図２に示す。この結果は、試料２のＨＰＬＣクロマトグラムと同等であった。また、実施例４０と同様の方法で、ヘスペレチン−７−グルコシド配糖体組成物 (試料２)を吸着、水洗浄後、溶出させるエタノール濃度を１０〜６０％（ｖ／ｖ）で溶出させた。それら溶出液（１０、２０、３０、４０、５０、６０％（ｖ／ｖ）溶出液）を組み合わせてモル比調整した溶液を、濃縮後凍結乾燥して、実施例４１〜４６の配糖体組成物を調製した。実施例４０〜４６の配糖体組成物の水への溶解度は、ヘスペレチン−７−グルコシド換算値で１０％以上であった。なお、糖転移反応時、同酵素量で、ｐＨ７．５、ｐＨ８．５での反応液を調製したところ、ほぼ同量のヘスペレチン−７−グルコシド配糖体組成物が産生したが、フラボノイドの一部分解により、溶液の色目が褐黒色化したため、ｐＨ６．５で反応させたものを使用した。なお、実施例２１、２３、２７〜３１で調製した反応液も、同条件で試料２と同じＨＰＬＣクロマトグラム（図２）のイソクエルシトリン配糖体組成物が作製された。
【０１０４】
【化９】
2019024500.tif 000015
（一般式（２）中、Ｇｌｃはグルコース残基を、ｎは０または１以上の整数を意味する）
【０１０５】
溶解度（ＩＱＣ換算値、ＨＰＴ−７Ｇ換算値）
試料１、２、及び実施例３２〜４６のフラボノイド配糖体組成物の溶解度は、前記ＩＱＣ溶解度、ＨＰＴ−７Ｇ溶解度と同法で、イソクエルシトリン濃度、ヘスペレチン−７−グルコシド濃度を算出し、イソクエルシトリン換算値、ヘスペレチン−７−グルコシド換算値とした。なお、各換算値が１０％以上で析出が観察されないものは、溶解度を１０％以上として記述した。
【０１０６】
実施例３２〜４６のフラボノイド配糖体組成物におけるモル比（％）は以下のＨＰＬＣ（ＳＩＭＡＤＺＵ）条件での分析結果から次式より算出した。結果を表４に示す。なお、図１、図２のｎ＝０〜ｎ＝７の各ピークは、ＬＣ/ＭＳ（液体クロマトグラフィー質量分析、ＳＨＩＭＡＤＺＵ）により分析し、配糖体数を確認した。
モル比（％）＝フラボノイド配糖体組成物の各ピーク面積×１００／フラボノイド配糖体組成物の総ピーク面積
【０１０７】
＜ＨＰＬＣ条件：実施例３２〜３９＞
カラム：ＣＡＰＣＥＬＬ  ＰＡＫ  Ｃ１８    ＳＩＺＥ  ４．６ｍｍ×２５０ｍｍ（ＳＨＩＳＥＩＤＯ）
溶離液：水／アセトニトリル／リン酸＝７９９／２００／１（体積比）
検出：波長３５１ｎｍにおける吸光度測定
流速：０．４ｍｌ／ｍｉｎ
カラム温度：７０℃
【０１０８】
<ＨＰＬＣ条件：実施例４０〜４６>
カラム：ＣＡＰＣＥＬＬ  ＰＡＫ  Ｃ１８    ＳＩＺＥ  ４．６ｍｍ×２５０ｍｍ（ＳＨＩＳＥＩＤＯ）
溶離液：水／アセトニトリル／リン酸＝８４９／１５０／１（体積比）
検出：波長２８０ｎｍにおける吸光度測定
流速：０．４ｍｌ／ｍｉｎ
カラム温度：７０℃
【０１０９】
フラボノイド配糖体組成物の風味評価
実施例３２〜４６のフラボノイド配糖体組成物の凍結乾燥物を、酸糖液（ｐＨ３．１、Ｂｒｉｘ１０°）に、イソクエルシトリン換算濃度が０．０５％(実施例３２〜３９)、あるいはヘスペレチン−７−グルコシド換算濃度が０．０５％(実施例４０〜４６)になるように添加し、７名のパネラーにより官能評価(苦味、エグ味、収斂味)を実施した。下記の評価基準に従い、それぞれの平均点を算出した。なお、比較例１０１で調製したイソクエルシトリン０．０５％含有酸糖液（調製直後溶解液）における苦味、エグ味、及び収斂味の評価点を最も強い１として比較した。またイソクエルシトリン０．０５％含有酸糖液は、調製後室温にて３０分は沈殿が観察されなかったため、その間に官能評価を実施した。結果を表４に示す。
【０１１０】
苦味の評価基準
１：苦味を強く感じる
２：苦味をやや強く感じる
３：苦味を感じる
４：苦味をかすかに感じる
５：苦味を感じない
【０１１１】
エグ味の評価基準
１：エグ味を強く感じる
２：エグ味をやや強く感じる
３：エグ味を感じる
４：エグ味をかすかに感じる
５：エグ味を感じない
【０１１２】
収斂味の評価基準
１：収斂味を強く感じる
２：収斂味をやや強く感じる
３：収斂味を感じる
４：収斂味をかすかに感じる
５：収斂味を感じない
【０１１３】
【表４】
2019024500.tif 000016
【０１１４】
表４から明らかなように、一般式（１）（２）におけるｎ＝０の配糖体の含有量が１０モル％以上３０モル％以下であり、ｎ＝１〜３の配糖体の含有量が５０モル％以下であり、ｎ＝４以上の配糖体の含有量が３０モル％以上である実施例３６、３８、３９、４０、４１の配糖体組成物では、酸糖液による官能評価で、有意に苦味、エグ味、及び収斂味が減少しており、飲食品用途において好適に使用することができる。なお、実施例３２〜４６の配糖体組成物は、いずれも溶解性に優れることから、味覚と関係のない用途、例えば、化粧品などの用途に好適に使用することができる。また、表には示していないが、実施例１０４〜１０６で調製した反応液を用いて得られたナリンゲニン−７−グルコシド配糖体組成物についても、ｎ＝０の配糖体の含有量が１０モル％以上３０モル％以下であり、ｎ＝１〜３の配糖体の含有量が５０モル％以下であり、ｎ＝４以上の配糖体の含有量が３０モル％以上であると、酸糖液下、ナリンゲニン−７−グルコシド換算濃度０．０５％による官能評価で、有意に苦味、エグ味、及び収斂味が減少していた。
【０１１５】
フラボノイド配糖体組成物中のモル比（ラムノース/フラボノイド）
試料１、及び試料２のラムノース含量測定（ＨＰＬＣ糖分析法と同条件、ラムノース（Ｗａｋｏ）で検量線を作成）後に算出されたモル濃度とイソクエルシトリン換算値、ヘスペレチン−７−グルコシド換算値から算出したモル濃度とのモル比（ラムノース/フラボノイド）は、０．８〜１．２であった。
【０１１６】
退色防止効果の評価
実施例１６のフラボノイド包接化合物含有組成物および実施例３９のフラボノイド配糖体組成物を、赤キャベツ色素製剤０．０５％含有酸糖液（ｐＨ３．０）に、イソクエルシトリン換算濃度が０．００５％になるよう添加し、紫外線フェードメーター処理４時間後の色素残存率を比較したところ、無添加品と比べて退色防止効果が観察された。結果を表５に示す。
【０１１７】
【表５】
2019024500.tif 000017
【０１１８】
表５から明らかなように、イソクエルシトリン・γ−シクロデキストリン包接化合物含有組成物、及びイソクエルシトリン配糖体組成物で、赤キャベツ色素に対する退色防止効果が観察された。
【０１１９】
香味劣化防止効果の評価（牛乳）
実施例１６の反応終了液１００ｍｌを、透析膜（スペクトラ／ポア  CE  透析用チューブ，ＭＷＣＯ ５００−１０００,  funakoshi社製）に入れ、水１０Ｌ中で透析（５回水交換、１０℃）を行うことでラムノースを除去し、その溶液を凍結乾燥して２２ｇの乾燥物を得た。得られた乾燥物および実施例３９のフラボノイド配糖体組成物を、市販の牛乳（乳脂肪３．５％、「明治乳業」、明治社製）に、イソクエルシトリン換算濃度が０．００５％になるよう１００ｍｌ透明ガラス瓶に添加し、蛍光灯照射（２００００ルクス、５時間、１０℃）後の香味について、下記評価基準によりパネラー１０名の平均点で比較したところ、香味劣化防止効果が観察された。結果を表６に示す。
【０１２０】
＜評価基準＞
１：未照射品より著しく変化している
２：未照射品よりかなり変化している
３：未照射品より少し変化している
４：未照射品と僅かに変化している
５：未照射品と変化なし
【０１２１】
【表６】
2019024500.tif 000018
【０１２２】
表６から明らかなように、イソクエルシトリン・γ−シクロデキストリン包接化合物、及びイソクエルシトリン配糖体組成物で、牛乳における香味劣化防止効果が観察された。
【０１２３】
香味劣化防止効果の評価（ゼリー）
グレープフルーツ果汁（１／６）０．５％、ゼラチン３％、グレープフルーツさのう１％、マルチトール６％、ベニバナ黄色製剤０．０２５％を原料とする無添加品のグレープフルーツゼリーを調製した。実施例２２、２８の反応終了液１００ｍｌを、透析膜（スペクトラ／ポア  CE  透析用チューブ，ＭＷＣＯ ５００−１０００,  funakoshi社製）に入れ、水１０Ｌ中で透析（５回水交換、１０℃）を行うことでラムノースを除去し、その溶液を凍結乾燥して実施例２２より１２ｇ、実施例２８より１６ｇの乾燥物を得た。得られた各乾燥物および実施例４０のフラボノイド配糖体組成物を、ヘスペレチン−７−グルコシド換算濃度が０．００５％になるように無添加品のグレープフルーツゼリーに添加し、添加品のグレープフルーツゼリーをそれぞれ調製した。その後９３℃に加熱し、これらを透明ガラス瓶に密封後、冷却し、室温下、通常の蛍光灯の当たる部屋で、１か月保存した後の香味について、下記評価基準によりパネラー１０名の平均点で比較したところ、各添加品に香味劣化防止効果が観察された。結果を表７に示す。
【０１２４】
＜評価基準＞
１：未照射品より著しく変化している
２：未照射品よりかなり変化している
３：未照射品より少し変化している
４：未照射品と僅かに変化している
５：未照射品と変化なし
【０１２５】
【表７】
2019024500.tif 000019
【０１２６】
表７から明らかなように、ヘスペレチン−７−グルコシド・β−シクロデキストリン包接化合物、ヘスペレチン−７−グルコシド・γ−シクロデキストリン包接化合物、及びヘスペレチン−７−グルコシド配糖体組成物で、グレープフルーツゼリーにおける香味劣化防止効果が観察された。
【０１２７】
保存安定性の評価（酸糖液）
比較例１０１で調製したイソクエルシトリン、実施例１６のフラボノイド包接化合物含有組成物、および実施例３９のフラボノイド配糖体組成物を、イソクエルシトリン換算濃度が０．０３％となるように、下記組成からなるｐＨ３の酸糖液に溶解し、１００ｍ１容のガラス瓶にホットパック充填（９３℃）した。調製した溶液は放冷後、それぞれ４℃、２５℃、４０℃の条件下で４ヶ月間静置し、析出の有無を目視で観察した。透明で沈殿が観察されなかったものを○、沈殿が観察されたものを×とした。結果を表８に示す。
【０１２８】
酸糖液処方
（質量％）
１．砂糖                        １０
２．クエン酸（結晶）            ０．０８
３．クエン酸３ナトリウム        ｐＨを調整（ｐＨ３）
４．水                          残部
【０１２９】
【表８】
2019024500.tif 000020
【０１３０】
表８に示すように、酸糖液にイソクエルシトリンを添加した場合、冷蔵（４℃）、室温（２５℃）、４０℃のいずれにおいても保存直後に沈殿が観察されたが、イソクエルシトリン・γ−シクロデキストリン包接化合物、及びイソクエルシトリン配糖体組成物を添加した場合には、４ヶ月間静置しても沈殿がなく、さらに５ヶ月の長期保存をしても沈殿が観察されなかった。
【０１３１】
保存安定性の評価（お茶）
ヘスペリジン（浜理薬品工業株式会社製）、ヘスペレチン−７−グルコシド（下記で調製したもの）、実施例２２のフラボノイド包接化合物、及び実施例４０のフラボノイド配糖体組成物のヘスペレチン−７−グルコシド換算濃度が０．０３％となるように、市販のお茶（「お〜いお茶」、伊藤園社製）に添加し、４℃、２５℃に７日間静置後、沈殿の有無を目視で観察した。透明で沈殿が観察されなかったものを○、沈殿が観察されたものを×とした。結果を表９に示す。
【０１３２】
ヘスペリジン（浜理薬品工業株式会社製）７ｇを１００Ｌ水溶液に添加し、７０℃、ｐＨ４．５に調整した。その後撹拌しながら、ナリンギナーゼ（天野エンザイム(株）１５５ｕ／ｇ）を０．５ｇ添加し、回収・乾燥することで、含量９６％以上のヘスペレチン−７−グルコシドを４．２ｇ得た。ヘスペレチン−７−グルコシドであること及び含量は、前記と同様にＮＭＲ、及びＨＰＬＣより分析した。
【０１３３】
【表９】
2019024500.tif 000021
【０１３４】
表９に示すように、お茶にヘスペリジン、ヘスペレチン−７−グルコシドを添加した場合、冷蔵（４℃）、室温（２５℃）のいずれにおいても保存直後に沈殿が観察されたが、ヘスペレチン−７−グルコシド包接化合物含有組成物、及びヘスペレチン−７−グルコシド配糖体組成物を添加した場合には、７日静置しても沈殿が観察されなかった。
【０１３５】
保存安定性の評価（レモン飲料）
ナリンジン（ＳＩＧＭＡ社製）、ナリンゲニン−７−グルコシド（下記で調製したもの）、実施例１０９のフラボノイド包接化合物含有組成物のナリンゲニン−７−グルコシド換算濃度が０．３％となるように、市販のレモン飲料（Ｃ１０００レモンウォーター、ハウスウェルネスフーズ社製）に添加し、４℃、２５℃に１ヶ月間静置後、沈殿の有無を目視で観察した。透明で沈殿が観察されなかったものを○、沈殿が観察されたものを×とした。結果を表９−２に示す。
【０１３６】
比較例１０２による反応終了後、室温静置後の沈殿物を回収後、水洗、再結晶、乾燥することで、含量９５％以上のナリンゲニン−７−グルコシドを１３ｇ得た。試薬ナリンゲニン−７−グルコシド（Ｗａｋｏ）を用いてＨＰＬＣにて同一であること及び含量を分析した。
【０１３７】
【表９−２】
2019024500.tif 000022
【０１３８】
表９−２に示すように、レモン飲料にナリンジン、ナリンゲニン−７−グルコシドを添加した場合、冷蔵（４℃）、室温（２５℃）のいずれにおいても沈殿が観察されたが、ナリンゲニン−７−グルコシド包接化合物含有組成物を添加した場合には、１ケ月静置しても沈殿が観察されなかった。
【０１３９】
体内吸収性の評価
９週齢のWisterラット（雄）に飼料として、ＭＦ(オリエンタル酵母(株))を与えて７日間飼育した後、試験物質投与前日より絶食下においた。その後、香味劣化防止効果の評価において調製した実施例１６の乾燥物１００μｍｏｌ／ｋｇ（ＩＱＣ換算値）、ルチン懸濁液（アルプス薬品工業、１００μｍｏｌ／ｋｇ（ＩＱＣ換算値））、香味劣化防止効果の評価において調製した実施例２２の乾燥物１０００μｍｏｌ／ｋｇ（ＨＰＴ−７Ｇ換算値）、ヘスペリジン懸濁液（浜理薬品工業株式会社、１０００μｍｏｌ／ｋｇ（ＨＰＴ−７Ｇ換算値））を単回経口投与（ゾンデ強制経口投与、ｎ＝２）し、３０分後、１時間後、３時間後において、ラット尾静脈よりヘパリン採血し、遠心分離し血漿を得た。採取した血清試料中のケルセチン誘導体量は牧野らの方法（Biol.pharm.Bull.32(12) 2034,2009）、ヘスペレチン誘導体量は、山田らの方法（Biosci. Biotechnol. Biochem, 70(6),1386,2006）に準じ、高速液体クロマトグラフィー（ＳＨＩＭＡＤＺＵ）にかけ、フォトダイオードアレイ検出器（ＳＰＤ−Ｍ３０Ａ，ＳＨＩＭＡＤＺＵ）を使用して分析した。結果を表１０、１１に示す。表１０には、０〜３時間のケルセチン及びケルセチン誘導体（イソラムネチン、タマリキセチン）の濃度（μＭ）、及びそれらの総和の血中濃度時間曲線下面積（ＡＵＣ）（μＭ・ｈ）を示した。また、表１１には、ヘスペレチン誘導体は検出されなかったため、０〜３時間のヘスペレチン濃度（μＭ）、及びその血中濃度時間曲線下面積（ＡＵＣ）（μＭ・ｈ）を示した。
【０１４０】
【表１０】
2019024500.tif 000023
【０１４１】
【表１１】
2019024500.tif 000024
【０１４２】
表１０、１１に示すように、ＡＵＣ１〜３時間比較では、ルチンやヘスペリジンに比較して、イソクエルシトリン・γ−シクロデキストリン包接化合物やヘスペレチン−７−グルコシド・β−シクロデキストリン包接化合物がラットに効率よく吸収されることがわかった。また表には記載していないが、実施例３９のイソクエルシトリン配糖体組成物１００μｍｏｌ／ｋｇ（ＩＱＣ換算値）は実施例１６の体内吸収率とほぼ同様であり、実施例４０のヘスペレチン−７−グルコシド配糖体組成物１０００μｍｏｌ／ｋｇ（ＨＰＴ−７Ｇ換算値）は実施例２２の体内吸収率とほぼ同様であった。
【０１４３】
難溶性フラボノイドの溶解性改善効果
実施例１１０〜１１３
表１２に示す成分用量でルチン（ＲＴＮ）及びイソクエルシトリンとγ−シクロデキストリンとの包接化合物（ＩＱＣ−ｒＣＤ）を酸糖液（ｐＨ３．１、Ｂｒｉｘ１０°）に溶解し、１００ｍｌのガラス瓶にホットパック充填した。調製した溶液を放冷し、冷蔵保存（４℃、６ヶ月）後、沈殿の有無を目視観察した。結果を表１２に示す。
【０１４４】
比較例１０３〜１０６、参考例
表１３に示す成分用量でルチン（ＲＴＮ）及びイソクエルシトリン（ＩＱＣ）を酸糖液に溶解した以外は実施例１１０〜１１３と同様にして調製、放冷、冷蔵保存し、沈殿の有無を目視観察した。結果を表１３に示す。
【０１４５】
表１２、１３において、ＩＱＣ／ＲＴＮ（モル比）は、調製成分溶解直後の酸糖液1ｍｌを測定サンプルとし、ＨＰＬＣ（ＳＨＩＭＡＤＺＵ、転化率と同条件）分析後、面積比（イソクエルシトリンのピーク面積／ルチンのピーク面積）をモル比として示した。
【０１４６】
【表１２】
2019024500.tif 000025
【０１４７】
【表１３】
2019024500.tif 000026
【０１４８】
表１２、１３の注釈
（４１）酸糖液中のルチン濃度       （質量％）
（４２）酸糖液中のイソクエルシトリン−γ−シクロデキストリン包接化合物濃度（質量％）
（４３）酸糖液中のイソクエルシトリン濃度（質量％）
（４４）酸糖液中のγ−シクロデキストリン濃度（質量％）
（４５）溶解性：
沈殿が観察されない  ：−
沈殿の量が少ない    ：＋
沈殿の量がやや多い  ：＋＋
沈殿の量が多い      ：＋＋＋
（４６）酸糖液中のイソクエルシトリン／ルチン（モル比）
【０１４９】
表１２、１３に示すように、イソクエルシトリン−γ−シクロデキストリン包接化合物を添加した実施例１１０〜１１３ではルチンの溶解性が向上しており、特にイソクエルシトリンとルチンとのモル比（イソクエルシトリン/ルチン）が０．１〜０．７の範囲では、沈殿が観察されなかった。これら結果は、実施例１０、１３、１４のフラボノイド包接化合物凍結乾燥物（ラムノースを透析により除去したもの）、及びラムノースを含有するフラボノイド包接化合物含有組成物凍結乾燥物でも同様の結果を示した。一方、表１３に示すように、イソクエルシトリンのみを添加したものでは、すべて沈殿が観察された。
【０１５０】
また、表１２、１３において、イソクエルシトリンとイソクエルシトリン−β−シクロデキストリン(実施例１〜７の凍結乾燥物)、又ルチンに代えてヘスペリジンとヘスペレチン−７−グルコシド−β−シクロデキストリン（実施例１８〜２３の凍結乾燥物）、あるいはヘスペレチン−７−グルコシド−γ−シクロデキストリン（実施例２７〜３１の凍結乾燥物）においても同様の結果が得られた。
【０１５１】
イソクエルシトリン−γ−シクロデキストリン包接化合物の長期安定性及び収斂味の評価
実施例１１４〜１１７
表１４に示す成分用量とした以外は実施例１１０〜１１３と同様に溶液を調製し、放冷直後に収斂味について官能評価を行った。また同成分用量のものを別調製し、冷蔵保存（４℃、１２ヶ月）後、沈殿の有無を目視観察した。結果を表１４に示す。
【０１５２】
比較例１０７〜１１０
表１５に示す成分用量とした以外は比較例１０３〜１０６と同様に溶液を調製し、放冷直後に収斂味について官能評価を行った。また同成分用量のものを別調製し、冷蔵保存（４℃、１２ヶ月）後、沈殿の有無を目視観察した。結果を表１５に示す。
【０１５３】
表１４、１５において、ＲＴＮ／ＩＱＣ（モル比）は、調製成分溶解直後の酸糖液1ｍｌを測定サンプルとし、ＨＰＬＣ（ＳＨＩＭＡＤＺＵ、転化率と同条件）分析後、面積比（ルチンのピーク面積／イソクエルシトリンのピーク面積）をモル比として示した。
【０１５４】
【表１４】
2019024500.tif 000027
【０１５５】
【表１５】
2019024500.tif 000028
【０１５６】
表１４、１５の注釈
（５１）酸糖液中のイソクエルシトリン−γ−シクロデキストリン包接化合物濃度（質量％）
（５２）酸糖液中のイソクエルシトリン濃度（質量％）
（５３）酸糖液中のγ−シクロデキストリン濃度（質量％）
（５４）酸糖液中のルチン濃度       （質量％）
（５５）溶解性：
沈殿が観察されない  ：−
沈殿の量が少ない    ：＋
沈殿の量がやや多い  ：＋＋
沈殿の量が多い      ：＋＋＋
（５６）酸糖液中のルチン／イソクエルシトリン（モル比）
（５７）酸糖液調製放冷直後、１０名のパネラーにより、無添加の酸糖液と比較し、最も強く収斂味を感じたサンプルを３点とし、以下、２点、１点とし、その平均を示した。
尚、比較例１０７〜１１０は調製放冷後、室温にて３０分間は沈殿が観察されなかった為、その間に官能評価を実施した。
【０１５７】
表１４に示すように、本発明の製造方法で得られたイソクエルシトリンとγ−シクロデキストリンとの包接化合物を含む組成物中に、ルチンを特定量含有しても包接化合物の長期安定性に問題がないことを確認した。また、収斂味についても弱く、飲食品に添加した際における風味に及ぼす影響が少なくなることを確認した。ＲＴＮ／ＩＱＣ（モル比）が０．０８以下の範囲（実施例１１４〜１１７）では、特に収斂味が弱かった。これら結果は、実施例１０、１３、１４のフラボノイド包接化合物凍結乾燥物（ラムノースを透析により除去したもの）、及びラムノースを含有するフラボノイド包接化合物含有組成物凍結乾燥物でも同様の結果を示した。一方、表１５に示すように、イソクエルシトリンを含む組成物においては、ルチンを含有するとすべて沈殿が観察され、収斂味についても強いものであった。
【０１５８】
また、表１４、１５において、イソクエルシトリンとイソクエルシトリン−β−シクロデキストリン(実施例１〜７の凍結乾燥物)、又ルチンに代えてヘスペリジンとヘスペレチン−７−グルコシド−β−シクロデキストリン（実施例１８〜２３の凍結乾燥物）、あるいはヘスペレチン−７−グルコシド−γ−シクロデキストリン（実施例２７〜３１の凍結乾燥物）においても同様の結果が得られた。
【０１５９】
実施例１１０〜１１７、比較例１０３〜１１０、参考例で使用した成分の詳細を下記に示す。
ＲＴＮ：９９．５％容量エタノール９０ｇとルチン（調製品：イソクエルシトリン／ルチンのモル比が０．３／９９．７）１０ｇとの加熱溶解品
ＩＱＣ−ｒＣＤ：実施例１６の凍結乾燥品（透析によるラムノース除去品、（ルチン／イソクエルシトリンのモル比が０．３／９９．７））
ＩＱＣ：９９．５％容量エタノール１８ｇとイソクエルシトリン（調製品：ルチン／イソクエルシトリンのモル比が０．３／９９．７）２ｇとの加熱溶解品
【０１６０】
フラボノイド包接化合物含有組成物、及びフラボノイド配糖体組成物の処方例
処方例１：グレープフルーツ飲料
香味劣化防止の為、実施例１６のイソクエルシトリン・γ−シクロデキストリン包接化合物含有組成物の乾燥物を含有する飲料を調製した。本品は、飲料として、好適に利用できる。
【０１６１】
成分                            質量％
グレープフルーツ濃縮果汁        ５．０
ブドウ糖果糖混合液糖            ０．９
マルチトール                    ２．０
酸味料                          ０．３
ビタミンＣ                      ０．０２
香料                            ０．１
実施例１６の乾燥物              ０．０２
水                              残部
合計                            １００
【０１６２】
処方例２：ゼリー
香味劣化防止の為、実施例２２のヘスペレチン−７−グルコシド・β−シクロデキストリン包接化合物含有組成物の乾燥物を含有するゼリーを調製した。本品は、食品（ゼリー）として、好適に利用できる。
【０１６３】
成分                            質量％
砂糖                          １０．０
レモン濃縮果汁                  ８．５
クチナシ黄色製剤                ０．００４
酸味料                          １．０
ゲル化剤                        １．５
ビタミンＣ                      ０．０２
香料                            ０．２
実施例２２の乾燥物              ０．０４
水                              残部
合計                            １００
【０１６４】
処方例３：化粧品
くすみやむくみの肌改善の為、実施例４０のヘスペレチン−７−グルコシド配糖体組成物の乾燥物を含有する化粧品を調製した。本品は、スキンケア化粧品として、好適に利用できる。
【０１６５】
成分                            質量％
グリセリン                      ５．０
プロピレングリコール            ４．０
オレイルアルコール              ０．１
界面活性剤                      ２．０
エチルアルコール              １０．０
香料                            ０．１
実施例４０の乾燥物              ０．２６
精製水                          残部
合計                            １００
【０１６６】
処方例４：錠剤
体温緩和の為、実施例２２のヘスペレチン−７−グルコシド・β−シクロデキストリン包接化合物含有組成物の乾燥物を含有する錠剤を調製した。本品は、健康食品として、好適に使用できる。
【０１６７】
成分                            質量％
マルチトール                  ６９．０
トレハロース                  １２．９
酸味料                          ２．５
ステアリン酸Ｃａ                ０．５
ビタミンＣ                      ０．０２
香料                            ０．０８
実施例２２の乾燥物            １５．０
合計                            １００
【０１６８】
処方例５：コーヒー飲料
体脂肪減小の為、実施例３９のイソクエルシトリン配糖体組成物の乾燥物を含有するコーヒー飲料を調製した。本品は、特定保健用食品として好適に利用できる。
【０１６９】
成分                            質量％
コーヒー抽出物                ３２．６
砂糖                            ６．０
香料                            ０．０６
実施例３９の乾燥物              ０．０６
水                              残部
合計                            １００
【０１７０】
処方例６：紅茶飲料
中性脂肪減小の為、実施例４０のヘスペレチン−７−グルコシド配糖体組成物の乾燥物を含有する紅茶飲料を調製した。本品は、機能性表示食品として好適に利用できる。
【０１７１】
成分                            質量％
紅茶抽出液                    １８．６
炭酸水素ナトリウム              ０．００２
スクラロース                    ０．００３
ビタミンＣ                      ０．０３
香料                            ０．１
実施例４０の乾燥物              ０．０６
水                              残部
合計                            １００
【０１７２】
処方例７：育毛剤
頭皮改善のため、実施例２２のヘスペレチン−７−グルコシド・β-シクロデキストリン包接化合物含有組成物の乾燥物を含有する育毛剤を調製した。
【０１７３】
成分                            質量％
エチルアルコール              ６０．０
センブリエキス                  ５．０
酢酸トコフェロール              ０．２
パントテニルエチルエーテル      ０．２
プロピレングリコール            ５．０
防腐剤                          ０．１
香料                            ０．２
実施例２２の乾燥物              ０．０３
精製水                          残部
合計                            １００
【０１７４】
処方例８：ヘアシャンプー
炎症予防のため、実施例２７のヘスペレチン−７−グルコシド・γ-シクロデキストリン包接化合物含有組成物の乾燥物を含有するヘアシャンプーを調製した。
【０１７５】
成分                                                質量％
ポリオキシエチレン（２）ラウリルエーテル
硫酸ナトリウム                                      ９．０
ラウリル硫酸ナトリウム                              ４．０
ヤシ油脂肪酸アミドプロピルベタイン                  ３．０
高重合メチルポリシロキサン                          ２．０
メチルポリシロキサン                                １．０
ヤシ油脂肪酸モノエタノールアミド                    １．０
プロピレングリコール                                ２．０
ジステアリン酸エチレングリコール                    ２．０
防腐剤                                              ０．１
香料                                                ０．１
実施例２７の乾燥物                                  ０．０３
水                                                  残部
合計                                                １００
【０１７６】
処方例９：ダイエット用錠剤
ダイエットの為、実施例１０９のナリンゲニン−７−グルコシド−β−シクロデキストリン包接化合物含有組成物の乾燥物を含有する錠剤を調製した。本品は、健康食品として、好的に利用できる。
【０１７７】
成分                            質量％
マルチトール                  ６４．０
トレハロース                  １２．９
酸味料                          ２．５
ステアリン酸Ｃａ                ０．５
ビタミンＣ                      ０．０２
香料                            ０．０８
実施例１０９の乾燥物          ２０．０
合計                            １００
【産業上の利用可能性】
【０１７８】
本発明の製造方法によれば、水への溶解性に優れるフラボノイド包接化合物やフラボノイド配糖体組成物を効率よく生産することができ、医薬品、飲食品、健康食品、特定保健用食品、及び化粧品などの分野において好適に利用することができる。
【図１】
2019024500.tif 000032
【図２】
2019024500.tif 000033
【手続補正書】
【提出日】平成30年11月5日(2018.11.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ラムノシド構造をもつ難溶性フラボノイドを、シクロデキストリンの存在下、ラムノシダーゼ活性を有する酵素で処理してラムノースを脱離する脱離工程を含む、フラボノイド包接化合物の製造方法。
【請求項２】
前記ラムノシド構造をもつ難溶性フラボノイドが、ルチン、ヘスペリジン、ナリルチン、ナリンジン、ジオスミン、エリオシトリン、ミリシトリン、ネオヘスペリジン、ルテオリン−７−ルチノシド、デルフィニジン−３−ルチノシド、シアニジン−３−ルチノシド、イソラムネチン−３−ルチノシド、ケンペロール−３−ルチノシド、アピゲニン−７−ルチノシド、及びアカセチン−７−ルチノシドからなる群より選択される１種以上である、請求項１記載の製造方法。
【請求項３】
前記シクロデキストリンが、β−シクロデキストリン、分枝β−シクロデキストリン、及びγ−シクロデキストリンからなる群より選択される１種以上である、請求項１又は２記載の製造方法。
【請求項４】
前記ラムノシド構造をもつ難溶性フラボノイド１モルに対し、前記シクロデキストリンを０．０１モル以上の割合で存在させる、請求項１〜３いずれか記載の製造方法。
【請求項５】
前記脱離工程がｐＨ３〜７の水媒体において行われる、請求項１〜４いずれか記載の製造方法。
【請求項６】
前記フラボノイド包接化合物が、前記ラムノシド構造をもたない難溶性フラボノイドがシクロデキストリンに包接されたフラボノイド包接化合物であり、前記ラムノシド構造をもたない難溶性フラボノイドと前記シクロデキストリンとのモル比（シクロデキストリン／フラボノイド）が１．０〜３．０である、請求項１〜５いずれか記載の製造方法。
【請求項７】
前記フラボノイド包接化合物が、イソクエルシトリンがγ−シクロデキストリンに包接されたフラボノイド包接化合物であり、前記イソクエルシトリンと前記γ−シクロデキストリンとのモル比（γ−シクロデキストリン／イソクエルシトリン）が０．９〜４．０である、請求項１〜６いずれか記載の製造方法。
【請求項８】
前記フラボノイド包接化合物が、イソクエルシトリンがγ−シクロデキストリンに包接されたフラボノイド包接化合物であり、前記イソクエルシトリンと前記γ−シクロデキストリンとのモル比（γ−シクロデキストリン／イソクエルシトリン）が０．９〜１．８である、請求項１〜７いずれか記載の製造方法。
【請求項９】
前記フラボノイド包接化合物が、イソクエルシトリンがβ−シクロデキストリンに包接されたフラボノイド包接化合物であり、前記イソクエルシトリンと前記β−シクロデキストリンとのモル比（β−シクロデキストリン／イソクエルシトリン）が１．０〜３．０である、請求項１〜６いずれか記載の製造方法。
【請求項１０】
前記フラボノイド包接化合物が、ヘスペレチン−７−グルコシドがシクロデキストリンに包接されたフラボノイド包接化合物であり、前記ヘスペレチン−７−グルコシドと前記シクロデキストリンとのモル比（シクロデキストリン／ヘスペレチン−７−グルコシド）が１．０〜３．０である、請求項１〜６いずれか記載の製造方法。
【請求項１１】
前記フラボノイド包接化合物が、ナリンゲニン−７−グルコシドがβ−シクロデキストリンに包接されたフラボノイド包接化合物であり、前記ナリンゲニン−７−グルコシドと前記β−シクロデキストリンとのモル比（β−シクロデキストリン／ナリンゲニン−７−グルコシド）が１．０〜３．０である、請求項１〜６いずれか記載の製造方法。
【請求項１２】
得られるイソクエルシトリン包接化合物は体内吸収性が向上したものである、請求項７〜９いずれか記載の製造方法。
【請求項１３】
得られるヘスペレチン−７−グルコシド包接化合物は体内吸収性が向上したものである、請求項１０記載の製造方法。
【請求項１４】
フラボノイド包接化合物及びラムノースを含有するフラボノイド包接化合物含有組成物の製造方法であって、ラムノシド構造をもつ難溶性フラボノイドを、シクロデキストリンの存在下、ラムノシダーゼ活性を有する酵素で処理してラムノースを脱離する脱離工程を含む、フラボノイド包接化合物含有組成物の製造方法。
【請求項１５】
請求項１〜１３いずれか記載の製造方法により得られたフラボノイド包接化合物を糖転移酵素で処理して配糖体化する配糖体化工程を含む、フラボノイド配糖体組成物の製造方法。
【請求項１６】
前記配糖体化工程がｐＨ３〜７の水媒体において行われる、請求項１５記載の製造方法。
【請求項１７】
ラムノシド構造をもつ難溶性フラボノイドを、シクロデキストリンの存在下、ラムノシダーゼ活性を有する酵素で処理してラムノースを脱離する脱離工程、及び前記脱離工程を経て得られたフラボノイド包接化合物を糖転移酵素で処理して配糖体化する配糖体化工程を含む、フラボノイド配糖体組成物の製造方法。
【請求項１８】
イソクエルシトリンがγ−シクロデキストリンに包接されたフラボノイド包接化合物であって、前記イソクエルシトリンと前記γ−シクロデキストリンとのモル比（γ−シクロデキストリン／イソクエルシトリン）が０．９〜１．８であり、前記イソクエルシトリンの水への溶解度が２％以上である、フラボノイド包接化合物。
【請求項１９】
イソクエルシトリンがγ−シクロデキストリンに包接されたフラボノイド包接化合物であって、前記イソクエルシトリンと前記γ−シクロデキストリンとのモル比（γ−シクロデキストリン／イソクエルシトリン）が０．９〜４．０であり、前記イソクエルシトリンの水への溶解度が２．５％以上である、フラボノイド包接化合物。
【請求項２０】
前記イソクエルシトリンと前記γ−シクロデキストリンとのモル比（γ−シクロデキストリン／イソクエルシトリン）が１．０〜１．８であり、甘味が低減されている、請求項１８又は１９記載のフラボノイド包接化合物。
【請求項２１】
イソクエルシトリンがβ−シクロデキストリンに包接されたフラボノイド包接化合物であって、前記イソクエルシトリンと前記β−シクロデキストリンとのモル比（β−シクロデキストリン／イソクエルシトリン）が１．０〜３．０であり、前記イソクエルシトリンの水への溶解度が０．１％以上である、フラボノイド包接化合物。
【請求項２２】
ヘスペレチン−７−グルコシドがシクロデキストリンに包接されたフラボノイド包接化合物であって、前記ヘスペレチン−７−グルコシドと前記シクロデキストリンとのモル比（シクロデキストリン／ヘスペレチン−７−グルコシド）が１．０〜３．０であり、前記ヘスペレチン−７−グルコシドの水への溶解度が０．０１％以上である、フラボノイド包接化合物。
【請求項２３】
前記ヘスペレチン−７−グルコシドと前記シクロデキストリンとのモル比（シクロデキストリン／ヘスペレチン−７−グルコシド）が１．０〜１．９であり、甘味が低減されている、請求項２２記載のフラボノイド包接化合物。
【請求項２４】
ナリンゲニン−７−グルコシドがβ−シクロデキストリンに包接されたフラボノイド包接化合物であって、前記ナリンゲニン−７−グルコシドと前記β−シクロデキストリンとのモル比（β−シクロデキストリン／ナリンゲニン−７−グルコシド）が１．０〜３．０であり、前記ナリンゲニン−７−グルコシドの水への溶解度が０．０１％以上である、フラボノイド包接化合物。
【請求項２５】
請求項１〜１３いずれか記載の製造方法で得られたフラボノイド包接化合物と、ラムノースとを含み、前記フラボノイド包接化合物中のフラボノイドと前記ラムノースとのモル比（ラムノース／フラボノイド）が０．８〜１．２である、フラボノイド包接化合物含有組成物。
【請求項２６】
請求項１８〜２４いずれか記載のフラボノイド包接化合物と、ラムノシド構造をもつ難溶性フラボノイドとを含み、前記フラボノイド包接化合物中のフラボノイドと前記難溶性フラボノイドとのモル比（難溶性フラボノイド／包接化合物中のフラボノイド）が０．００１〜０．１である、フラボノイド包接化合物含有組成物。
【請求項２７】
さらにラムノースを含み、前記フラボノイド包接化合物中のフラボノイドと前記ラムノースとのモル比（ラムノース／フラボノイド）が０．８〜１．２である、請求項２６記載のフラボノイド包接化合物含有組成物。
【請求項２８】
下記一般式（１）で示される化合物を含むイソクエルシトリン配糖体組成物であって、前記配糖体組成物中、ｎ＝０の配糖体の含有量が１０モル％以上３０モル％以下であり、ｎ＝１〜３の配糖体の含有量が５０モル％以下であり、ｎ＝４以上の配糖体の含有量が３０モル％以上である、イソクエルシトリン配糖体組成物。
【化１】
2019024500.tif 000034
（一般式（１）中、Ｇｌｃはグルコース残基を、ｎは０または１以上の整数を意味する）
【請求項２９】
苦味が低減された、請求項２８記載のイソクエルシトリン配糖体組成物。
【請求項３０】
さらにラムノースを含有し、前記イソクエルシトリン配糖体組成物のイソクエルシトリン換算モルと前記ラムノースとのモル比（ラムノース／イソクエルシトリン）が０．８〜１．２である、請求項２８又は２９記載のイソクエルシトリン配糖体組成物。
【請求項３１】
下記一般式（２）で示される化合物を含むヘスペレチン−７−グルコシド配糖体組成物であって、前記配糖体組成物中、ｎ＝０の配糖体の含有量が１０モル％以上３０モル％以下であり、ｎ＝１〜３の配糖体の含有量が５０モル％以下であり、ｎ＝４以上の配糖体の含有量が３０モル％以上である、ヘスペレチン−７−グルコシド配糖体組成物。
【化２】
2019024500.tif 000035
（一般式（２）中、Ｇｌｃはグルコース残基を、ｎは０または１以上の整数を意味する）
【請求項３２】
苦味が低減された、請求項３１記載のヘスペレチン−７−グルコシド配糖体組成物。
【請求項３３】
さらにラムノースを含有し、前記ヘスペレチン−７−グルコシド配糖体組成物のヘスペレチン−７−グルコシド換算モルと前記ラムノースとのモル比（ラムノース／ヘスペレチン−７−グルコシド）が０．８〜１．２である、請求項３１又は３２記載のヘスペレチン−７−グルコシド配糖体組成物。
【請求項３４】
下記一般式（３）で示される化合物を含むナリンゲニン−７−グルコシド配糖体組成物であって、前記配糖体組成物中、ｎ＝０の配糖体の含有量が１０モル％以上３０モル％以下であり、ｎ＝１〜３の配糖体の含有量が５０モル％以下であり、ｎ＝４以上の配糖体の含有量が３０モル％以上である、ナリンゲニン−７−グルコシド配糖体組成物。
【化３】
2019024500.tif 000036
（一般式（３）中、Ｇｌｃはグルコース残基を、ｎは０または１以上の整数を意味する）
【請求項３５】
さらにラムノースを含有し、ナリンゲニン−７−グルコシド配糖体組成物のナリンゲニン−７−グルコシド換算モルと前記ラムノースとのモル比（ラムノース／ナリンゲニン−７−グルコシド）が０．８〜１．２である、請求項３４記載のナリンゲニン−７−グルコシド配糖体組成物。
【請求項３６】
請求項１〜１３いずれか記載の製造方法により得られたフラボノイド包接化合物、請求項１４記載の製造方法により得られたフラボノイド包接化合物含有組成物、請求項１５〜１７いずれか記載の製造方法により得られたフラボノイド配糖体組成物、請求項１８〜２４いずれか記載のフラボノイド包接化合物、請求項２５〜２７いずれか記載のフラボノイド包接化合物含有組成物、請求項２８〜３０いずれか記載のイソクエルシトリン配糖体組成物、請求項３１〜３３いずれか記載のヘスペレチン−７−グルコシド配糖体組成物、及び請求項３４又は３５記載のナリンゲニン−７−グルコシド配糖体組成物からなる群より選択される１種以上の化合物又は組成物を含む、飲食品。
【請求項３７】
請求項１〜１３いずれか記載の製造方法により得られたフラボノイド包接化合物、請求項１４記載の製造方法により得られたフラボノイド包接化合物含有組成物、請求項１５〜１７いずれか記載の製造方法により得られたフラボノイド配糖体組成物、請求項１８〜２４いずれか記載のフラボノイド包接化合物、請求項２５〜２７いずれか記載のフラボノイド包接化合物含有組成物、請求項２８〜３０いずれか記載のイソクエルシトリン配糖体組成物、請求項３１〜３３いずれか記載のヘスペレチン−７−グルコシド配糖体組成物、及び請求項３４又は３５記載のナリンゲニン−７−グルコシド配糖体組成物からなる群より選択される１種以上の化合物又は組成物を含む、医薬品。
【請求項３８】
請求項１〜１３いずれか記載の製造方法により得られたフラボノイド包接化合物、請求項１４記載の製造方法により得られたフラボノイド包接化合物含有組成物、請求項１５〜１７いずれか記載の製造方法により得られたフラボノイド配糖体組成物、請求項１８〜２４いずれか記載のフラボノイド包接化合物、請求項２５〜２７いずれか記載のフラボノイド包接化合物含有組成物、請求項２８〜３０いずれか記載のイソクエルシトリン配糖体組成物、請求項３１〜３３いずれか記載のヘスペレチン−７−グルコシド配糖体組成物、及び請求項３４又は３５記載のナリンゲニン−７−グルコシド配糖体組成物からなる群より選択される１種以上の化合物又は組成物を含む、化粧品。
【請求項３９】
ラムノシド構造をもつ難溶性フラボノイドと、請求項１〜１３いずれか記載の製造方法により得られたフラボノイド包接化合物あるいは請求項１８〜２４いずれか記載のフラボノイド包接化合物とを、前記フラボノイド包接化合物中のフラボノイドと前記難溶性フラボノイドとのモル比（包接化合物中のフラボノイド／難溶性フラボノイド）が０．１〜０．９となるように媒体中で混合する、ラムノシド構造をもつ難溶性フラボノイドの溶解性を向上させる方法。
【請求項４０】
ラムノシド構造をもつ難溶性フラボノイドと、請求項１４記載の製造方法により得られたフラボノイド包接化合物含有組成物あるいは請求項２５〜２７いずれか記載のフラボノイド包接化合物組成物とを、前記フラボノイド包接化合物含有組成物中のフラボノイドと前記難溶性フラボノイドとのモル比（包接化合物中のフラボノイド／難溶性フラボノイド）が０．１〜０．９となるように媒体中で混合する、ラムノシド構造をもつ難溶性フラボノイドの溶解性を向上させる方法。
【手続補正書】
【提出日】平成31年1月7日(2019.1.7)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ラムノシド構造をもつ難溶性フラボノイドを、シクロデキストリンの存在下、ラムノシダーゼ活性を有する酵素で処理してラムノースを脱離する脱離工程を含む、フラボノイド包接化合物の製造方法で得られたフラボノイド包接化合物と、ラムノースとを含み、前記フラボノイド包接化合物中のフラボノイドと前記ラムノースとのモル比（ラムノース／フラボノイド）が０．８〜１．２である、フラボノイド包接化合物含有組成物。
【請求項２】
前記ラムノシド構造をもつ難溶性フラボノイドが、ルチン、ヘスペリジン、ナリルチン、ナリンジン、ジオスミン、エリオシトリン、ミリシトリン、ネオヘスペリジン、ルテオリン−７−ルチノシド、デルフィニジン−３−ルチノシド、シアニジン−３−ルチノシド、イソラムネチン−３−ルチノシド、ケンペロール−３−ルチノシド、アピゲニン−７−ルチノシド、及びアカセチン−７−ルチノシドからなる群より選択される１種以上である、請求項１記載のフラボノイド包接化合物含有組成物。
【請求項３】
前記シクロデキストリンが、β−シクロデキストリン、分枝β−シクロデキストリン、及びγ−シクロデキストリンからなる群より選択される１種以上である、請求項１又は２記載のフラボノイド包接化合物含有組成物。
【請求項４】
前記ラムノシド構造をもつ難溶性フラボノイド１モルに対し、前記シクロデキストリンを０．０１モル以上の割合で存在させる、請求項１〜３いずれか記載のフラボノイド包接化合物含有組成物。
【請求項５】
前記脱離工程がｐＨ３〜７の水媒体において行われる、請求項１〜４いずれか記載のフラボノイド包接化合物含有組成物。
【請求項６】
前記フラボノイド包接化合物が、前記ラムノシド構造をもたない難溶性フラボノイドがシクロデキストリンに包接されたフラボノイド包接化合物であり、前記ラムノシド構造をもたない難溶性フラボノイドと前記シクロデキストリンとのモル比（シクロデキストリン／フラボノイド）が１．０〜３．０である、請求項１〜５いずれか記載のフラボノイド包接化合物含有組成物。
【請求項７】
前記フラボノイド包接化合物が、イソクエルシトリンがγ−シクロデキストリンに包接されたフラボノイド包接化合物であり、前記イソクエルシトリンと前記γ−シクロデキストリンとのモル比（γ−シクロデキストリン／イソクエルシトリン）が０．９〜４．０である、請求項１〜６いずれか記載のフラボノイド包接化合物含有組成物。
【請求項８】
前記フラボノイド包接化合物が、イソクエルシトリンがγ−シクロデキストリンに包接されたフラボノイド包接化合物であり、前記イソクエルシトリンと前記γ−シクロデキストリンとのモル比（γ−シクロデキストリン／イソクエルシトリン）が０．９〜１．８である、請求項１〜７いずれか記載のフラボノイド包接化合物含有組成物。
【請求項９】
前記フラボノイド包接化合物が、イソクエルシトリンがβ−シクロデキストリンに包接されたフラボノイド包接化合物であり、前記イソクエルシトリンと前記β−シクロデキストリンとのモル比（β−シクロデキストリン／イソクエルシトリン）が１．０〜３．０である、請求項１〜６いずれか記載のフラボノイド包接化合物含有組成物。
【請求項１０】
前記フラボノイド包接化合物が、ヘスペレチン−７−グルコシドがシクロデキストリンに包接されたフラボノイド包接化合物であり、前記ヘスペレチン−７−グルコシドと前記シクロデキストリンとのモル比（シクロデキストリン／ヘスペレチン−７−グルコシド）が１．０〜３．０である、請求項１〜６いずれか記載のフラボノイド包接化合物含有組成物。
【請求項１１】
前記フラボノイド包接化合物が、ナリンゲニン−７−グルコシドがβ−シクロデキストリンに包接されたフラボノイド包接化合物であり、前記ナリンゲニン−７−グルコシドと前記β−シクロデキストリンとのモル比（β−シクロデキストリン／ナリンゲニン−７−グルコシド）が１．０〜３．０である、請求項１〜６いずれか記載のフラボノイド包接化合物含有組成物。
【請求項１２】
得られるイソクエルシトリン包接化合物は体内吸収性が向上したものである、請求項７〜９いずれか記載のフラボノイド包接化合物含有組成物。
【請求項１３】
得られるヘスペレチン−７−グルコシド包接化合物は体内吸収性が向上したものである、請求項１０記載のフラボノイド包接化合物含有組成物。
【請求項１４】
イソクエルシトリンがγ−シクロデキストリンに包接されたフラボノイド包接化合物と、ラムノシド構造をもつ難溶性フラボノイドと、ラムノースを含み、前記イソクエルシトリンと前記γ−シクロデキストリンとのモル比（γ−シクロデキストリン／イソクエルシトリン）が０．９〜１．８であり、前記イソクエルシトリンの水への溶解度が２％以上であり、前記フラボノイド包接化合物中のフラボノイドと前記難溶性フラボノイドとのモル比（難溶性フラボノイド／包接化合物中のフラボノイド）が０．００１〜０．１であり、前記フラボノイド包接化合物中のフラボノイドと前記ラムノースとのモル比（ラムノース／フラボノイド）が０．８〜１．２である、フラボノイド包接化合物含有組成物。
【請求項１５】
イソクエルシトリンがγ−シクロデキストリンに包接されたフラボノイド包接化合物と、ラムノシド構造をもつ難溶性フラボノイドと、ラムノースを含み、前記イソクエルシトリンと前記γ−シクロデキストリンとのモル比（γ−シクロデキストリン／イソクエルシトリン）が０．９〜４．０であり、前記イソクエルシトリンの水への溶解度が２．５％以上であり、前記フラボノイド包接化合物中のフラボノイドと前記難溶性フラボノイドとのモル比（難溶性フラボノイド／包接化合物中のフラボノイド）が０．００１〜０．１であり、前記フラボノイド包接化合物中のフラボノイドと前記ラムノースとのモル比（ラムノース／フラボノイド）が０．８〜１．２である、フラボノイド包接化合物含有組成物。
【請求項１６】
前記イソクエルシトリンと前記γ−シクロデキストリンとのモル比（γ−シクロデキストリン／イソクエルシトリン）が１．０〜１．８であり、甘味が低減されている、請求項１４又は１５記載のフラボノイド包接化合物含有組成物。
【請求項１７】
イソクエルシトリンがβ−シクロデキストリンに包接されたフラボノイド包接化合物と、ラムノシド構造をもつ難溶性フラボノイドと、ラムノースを含み、前記イソクエルシトリンと前記β−シクロデキストリンとのモル比（β−シクロデキストリン／イソクエルシトリン）が１．０〜３．０であり、前記イソクエルシトリンの水への溶解度が０．１％以上であり、前記フラボノイド包接化合物中のフラボノイドと前記難溶性フラボノイドとのモル比（難溶性フラボノイド／包接化合物中のフラボノイド）が０．００１〜０．１であり、前記フラボノイド包接化合物中のフラボノイドと前記ラムノースとのモル比（ラムノース／フラボノイド）が０．８〜１．２である、フラボノイド包接化合物含有組成物。
【請求項１８】
ヘスペレチン−７−グルコシドがシクロデキストリンに包接されたフラボノイド包接化合物と、ラムノシド構造をもつ難溶性フラボノイドと、ラムノースを含み、前記ヘスペレチン−７−グルコシドと前記シクロデキストリンとのモル比（シクロデキストリン／ヘスペレチン−７−グルコシド）が１．０〜３．０であり、前記ヘスペレチン−７−グルコシドの水への溶解度が０．０１％以上であり、前記フラボノイド包接化合物中のフラボノイドと前記難溶性フラボノイドとのモル比（難溶性フラボノイド／包接化合物中のフラボノイド）が０．００１〜０．１であり、前記フラボノイド包接化合物中のフラボノイドと前記ラムノースとのモル比（ラムノース／フラボノイド）が０．８〜１．２である、フラボノイド包接化合物含有組成物。
【請求項１９】
前記ヘスペレチン−７−グルコシドと前記シクロデキストリンとのモル比（シクロデキストリン／ヘスペレチン−７−グルコシド）が１．０〜１．９であり、甘味が低減されている、請求項１８記載のフラボノイド包接化合物含有組成物。
【請求項２０】
ナリンゲニン−７−グルコシドがβ−シクロデキストリンに包接されたフラボノイド包接化合物と、ラムノシド構造をもつ難溶性フラボノイドと、ラムノースを含み、前記ナリンゲニン−７−グルコシドと前記β−シクロデキストリンとのモル比（β−シクロデキストリン／ナリンゲニン−７−グルコシド）が１．０〜３．０であり、前記ナリンゲニン−７−グルコシドの水への溶解度が０．０１％以上であり、前記フラボノイド包接化合物中のフラボノイドと前記難溶性フラボノイドとのモル比（難溶性フラボノイド／包接化合物中のフラボノイド）が０．００１〜０．１であり、前記フラボノイド包接化合物中のフラボノイドと前記ラムノースとのモル比（ラムノース／フラボノイド）が０．８〜１．２である、フラボノイド包接化合物含有組成物。
【請求項２１】
請求項１〜２０いずれか記載のフラボノイド包接化合物含有組成物を含む、飲食品。
【請求項２２】
請求項１〜２０いずれか記載のフラボノイド包接化合物含有組成物を含む、医薬品。
【請求項２３】
請求項１〜２０いずれか記載のフラボノイド包接化合物含有組成物を含む、化粧品。