(57)【要約】【課題】特にエシェリキア・アルバーティの検出に適した新規な選択分離培地を提供する。【解決手段】  本発明に係る選択分離培地は、エシェリキア・アルバーティが分解しない糖、例えばメリビオースやラムノース、キシロースなどと、ニュートラルレッドなどのｐＨ指示薬を含み、エシェリキア・アルバーティ，プロテウス属細菌，プロビデンシア属細菌，シゲラ属細菌，モルガネラ属細菌，シュードモナス属細菌，プレシオモナス属細菌の何れかの菌を選択分離するために用いられる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
エシェリキア・アルバーティが分解しない糖とｐＨ指示薬を含む細菌の選択分離用培地。
【請求項２】
エシェリキア・アルバーティが分解しない糖が、メリビオースである請求項１記載の選択分離培地。
【請求項３】
エシェリキア・アルバーティが分解しない糖が、１Ｌあたり０.５ｇから５０ｇである請求項１から請求項２記載のいずれか１項に記載の選択分離培地。
【請求項４】
エシェリキア・アルバーティ，プロテウス属細菌，プロビデンシア属細菌，シゲラ属細菌，モルガネラ属細菌，シュードモナス属細菌，プレシオモナス属細菌の何れかの菌を選択分離するための請求項１から請求項３のいずれか１項に記載の選択分離用培地。
【請求項５】
グラム陽性菌抑制剤を含む請求項１から４のいずれか１項に記載の選択分離用培地。
【請求項６】
前記グラム陽性菌抑制剤は、胆汁類及び／又はクリスタルレッドである請求項５に記載の選択分離用培地。
【請求項７】
前記ｐＨ指示薬は、ニュートラルレッドである請求項１〜６の何れか１項に記載の選択分離用培地。
【請求項８】
エシェリキア・アルバーティ以外のグラム陰性菌を抑制する生育抑制剤を含む請求項１〜７の何れか１項に記載の選択分離用培地。
【請求項９】
エシェリキア・アルバーティを選択分離するための請求項１〜８の何れか１項に記載の選択分離用培地。
【請求項１０】
さらにラムノース及びキシロースの群より選択される１以上の糖を含む請求項２に記載の選択分離用培地。
【請求項１１】
メリビオース、ラムノースおよびキシロースの群より選択される１以上の糖が、１Ｌあたり０.５ｇから５０ｇである請求項１０記載の選択分離培地。
【請求項１２】
エシェリキア・アルバーティ，プロビデンシア属細菌，シゲラ属細菌，モルガネラ属細菌，シュードモナス属細菌，プレシオモナス属細菌のいずれかの菌を選択分離するための請求項１０又は請求項１１に記載の選択分離用培地。
【請求項１３】
グラム陽性菌抑制剤を含む請求項１０から１２のいずれか１項に記載の選択分離用培地。
【請求項１４】
前記グラム陽性菌抑制剤は、胆汁類及び／又はクリスタルレッドである請求項１３に記載の選択分離用培地。
【請求項１５】
前記ｐＨ指示薬は、ニュートラルレッドである請求項１０〜１４の何れか１項に記載の選択分離用培地。
【請求項１６】
エシェリキア・アルバーティ以外のグラム陰性菌を抑制する生育抑制剤を含む請求項１０〜１５の何れか１項に記載の選択分離用培地。
【請求項１７】
試料を請求項１〜９の何れか１項の選択分離培地を用いて培養する工程と、
前記培養工程の後に生育したｐＨ指示薬の中性側の色又は白色のコロニーを分離する工程と、
を有するエシェリキア・アルバーティ，プロテウス属細菌，プロビデンシア属細菌，シゲラ属細菌，モルガネラ属細菌，シュードモナス属細菌，プレシオモナス属細菌の選択分離方法。
【請求項１８】
試料を請求項１０〜１６の何れか１項に記載の選択分離培地を用いて培養する工程と、
前記培養工程の後に生育した非着色のコロニーを分離する工程と、
を有するエシェリキア・アルバーティ，プロビデンシア属細菌，シゲラ属細菌，モルガネラ属細菌，シュードモナス属細菌，プレシオモナス属細菌の選択分離方法。
【請求項１９】
試料を請求項１〜１６の何れか１項に記載の選択分離培地を用いて培養する工程と、
前記培養工程の後に生育した非着色のコロニーを分離する工程と、
を有するエシェリキア・アルバーティの選択分離方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は選択分離用培地、特にエシェリキア・アルバーティを簡便に選択分離するために用いられ得る培地に関する。
【背景技術】
【０００２】
食中毒は種々の原因により生じるが、その多くは細菌によるものである。原因菌の特定には、一般的にはＰＣＲを使った遺伝子検査後に選択分離培地を使った確定培養が行われる。また、遺伝子検査を行うことなく数種類の選択分離培地を用いて原因菌の特定が行われている。
【０００３】
しかしながら、遺伝子検査によれば各種の検出用プライマーを用いなければならず、検査コストが高くなるという問題があった。また、選択分離培地は特定の菌種のみを選択的に培養するので、選択分離培地のみで原因菌を特定する方法では、適切な選択分離培地が使用されなければならず、数多くの選択分離培地を用いる必要があった。また、場合によっては再度選択分離培地を選択し、培養をやり直す必要がある。このため、選択分離培地のみを用いる方法では、迅速な原因菌の特定を行うことができない、培地の数が増えることによってコストが高くなる場合があるという問題があった。
【０００４】
従って、数少ない選択分離培地で、推定される原因菌を数種類の菌種に絞り込み、好ましくは特定の菌種に絞り込める培地が望まれている。
【０００５】
ところで、近年、食中毒の原因菌の一つとしてエシェリキア・アルバーティ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ａｌｂｅｒｔｉｉ）が注視されている。この細菌は、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）Ｏ１５７などと同様に腸管性出血を引き起こす可能性が高く、エシェリキア・アルバーティを特異的に検出できる簡便な方法が必要とされている。
【０００６】
食中毒の原因菌を特定する選択分離培地としては数々の培地が知られている。例えば大腸菌Ｏ１５７の検出に用いられる培地として、例えば、乳糖をソルビトールに置換したソルビトールマッコンキー寒天培地がある。この培地は、大腸菌Ｏ１５７がソルビトールを分解できない性質を利用したものである。この培地では、大腸菌Ｏ１５７以外の大腸菌はソルビトールの発酵により生じた酸が培地中のｐＨ指示薬を発色又は変色させる結果、桃色から赤色のコロニーを生じる一方、大腸菌Ｏ１５７はソルビトールを発酵できないので無色から黄色のコロニーを生じる。同様に大腸菌Ｏ１１１やＯ２６の場合には、ソルボース、ラムノースをそれぞれ添加した培地がある。
【０００７】
しかしながら、エシェリキア・アルバーティは、大腸菌Ｏ１５７と同様にソルビトールを分解するので（非特許文献１）、ソルビトールマッコンキー寒天培地では大腸菌Ｏ１５７と区別できない。また、ソルボースを含む培地では大腸菌Ｏ１１１と同様にソルボースを分解できないので（非特許文献１）、大腸菌Ｏ１１１と区別できない。また、ラムノースを含む培地でも両者ともにラムノースを分解できないので（非特許文献１）、大腸菌Ｏ２６と区別できない。このように、これまでの腸管出血性大腸菌用の選択分離培地では、糖の分解性のみでエシェリキア・アルバーティと他の腸管出血性大腸菌群の細菌を区別できなかった。
【０００８】
一方、特許文献１（特表平１１−５０５４０５号公報）には、β−ガラクトシダーゼの誘導物質としてメリビオースを含む培地で培養し、誘導されたβ−ガラクトシダーゼの酵素活性を利用して大腸菌群の検出方法が開示されている。
【０００９】
しかしながら、特許文献１の記載の方法ではメリビオースを含む培地で培養した後にメンブランフィルターに転写させ、前記メンブレンフィルターをβ−ガラクトシダーゼと反応させているが、エシェリキア・アルバーティにおいてどのような物質がβ−ガラクトシダーゼを誘導し、他の大腸菌群と区別できるかは未知である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】特表平１１−５０５４０５号公報
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】国立感染症研究所、ＩＡＳＲ、「集団感染事例から検出されたEscherichia albertii について―広島県」表１、平成２９年４月２４日検索、インターネット＜ＵＲＬ：http://www.niid.go.jp/niid/ja/iasr-sp/2344-related-articles/related-articles-435/6482-435r10.html＞
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
本発明は、試料中に含まれるエシェリキア・アルバーティやプロテウス（Ｐｒｏｔｅｕｓ）属細菌，プロビデンシア（Ｐｒｏｖｉｄｅｎｃｉａ）属細菌，シゲラ（Ｓｈｉｇｅｌｌａ）属細菌，モルガネラ（Ｍｏｒｇａｎｅｌｌａ）属細菌，シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属細菌，プレシオモナス（Ｐｌｅｓｉｏｍｏｎａｓ）属細菌、特にエシェリキア・アルバーティを簡便に選択分離できる方法を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明では、エシェリキア・アルバーティが分解しない糖とｐＨ指示薬を含む培地で試料を培養することで、形成された非着色のコロニーを分離、採取することにした。
【発明の効果】
【００１４】
本発明に係る選択分離培地により試料を培養することで、試料に含まれるエシェリキア・アルバーティやプロテウス属細菌，プロビデンシア属細菌，シゲラ属細菌，モルガネラ属細菌，シュードモナス属細菌，プレシオモナス属細菌を簡便に選択分離できる。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
本発明に係る選択分離培地は、メリビオースのようにエシェリキア・アルバーティが分解しない糖とｐＨ指示薬を含む培地である。エシェリキア・アルバーティが分解しない糖であるメリビオースなどを用いることで、下記に述べるようにエシェリキア属の細菌からエシェリキア・アルバーティのみを特異的に検出することができる。また、下記に述べるように、当該培地はエシェリキア・アルバーティが分解しない糖として、メリビオースに替えてラムノースやキシロースを含むことができるし、メリビオースに加えてさらにラムノースやキシロースを含むことができる。培地中の糖濃度は、コロニーの呈色性の観点から使用時の培地１Ｌ中に０.１ｇ〜１００ｇであり、好ましくは０.５ｇ〜５０ｇである。
【００１６】
本発明に係る選択分離培地は、ｐＨ指示薬を含む。ｐＨ指示薬は糖の分解により生じた酸によって生じたコロニーの色調で識別するために含ませられる。ｐＨ指示薬は中性から酸性側に掛けて色調を変化させられるものであれば特に限定されず、例えばニュートラルレッドや、フェノールレッド、ブロモチオールブルーなどが例示される。エシェリキア属の細菌の検出に汎用されているニュートラルレッドが好ましい。ｐＨ指示薬の濃度も適宜当業者により決定され得るが、その濃度は概ね使用時の培地１Ｌ中に０.００１ｇ〜０.１ｇである。
【００１７】
当該培地は、必要に応じてグラム陽性菌の生育を抑制するグラム陽性菌抑制剤を含み得る。グラム陽性菌抑制剤は公知であって、例えば胆汁酸やその塩、牛胆汁末や胆汁エキス等の胆汁などの胆汁類であり、クリスタルバイオレットであり得る。グラム陽性菌抑制剤は１種又は２種以上が用いられる。その濃度は適宜当業者により決定され得るが、その濃度は概ね使用時の培地１Ｌ中に０.００１ｇ〜０.１ｇである。
【００１８】
また、本発明に係る培地は、その使用目的によりエシェリキア・アルバーティ以外のグラム陰性細菌の生育を抑制するための選択剤をさらに含み得る。選択剤は、亜テルル酸やその塩であり、各種の抗生物質やその塩であり、培地の使用目的に応じて１種又は２種以上が選ばれる。選択剤となり得る抗生物質は、例えばセフスロシン、セフィキシム、セフォタキシムなどのセフェム系抗生物質であり、アミカシンなどのアミノグリコシド系抗生物質、ノボシオシン、バンコマイシン類のテトラサイクリン系抗生物質であり、ピペラシリン、カルベニシリンなどのペニシリン系抗生物質であり得る。前記塩は、例えばナトリウム塩であり、カリウム塩であり、マグネシウム塩であり得る。この中でも水溶性の塩である、ナトリウム塩やカリウム塩が好ましい。
【００１９】
例えば、アミカシンはグラム陰性桿菌やシュードモナス属細菌の生育を抑制し得る。セフィキシムやセフォタキシムなどのセフェム系抗生物質はプロテウス属細菌やモルガネラ属細菌の生育を抑制し得る。亜テルル酸又はその塩は例えば大腸菌O157などの腸管出血性大腸菌群以外の大腸菌やアエロモナス（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ）属細菌の生育を抑制し得る。ノボシオシンはエンテロバクター（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ）属細菌やプロテウス属細菌の生育を抑制し得る。このように、上記の選択剤の１種又は２種以上を適宜組み合わせることで、選択培養できる細菌をより限定し、偽陽性を示す確率を減らし得る。その濃度はその使用目的や選択剤の種類によっても異なり、適宜当業者により決定され得る。その濃度は、例えば亜テルル酸やその塩であれば、概ね使用時の培地１Ｌ中に０.１〜５００ｍｇであり、抗生物質であるセフィキシムであれば、概ね使用時の培地１Ｌ中に０.０１〜１００ｍｇである。
【００２０】
また、本発明に係る培地は、寒天培地、簡易乾燥培地など形態は問わない。前記培地は、上記成分の他、栄養成分、無機塩、ｐＨ調整剤等を含み得る。栄養成分は細菌の生育に最低限必要な成分であり、必須成分である。栄養成分は、例えば、ペプトンであり、獣肉エキスであり、酵母エキスであり、魚肉エキスであり、またそれらの酵素処理物であり得る。培地はこれらの１種又は２種以上を含み、ペプトンやそのプロテアーゼ処理物を好ましく含む。栄養成分の量も当業者により適宜決定され得るが、概ね使用時において培地１Ｌ中１０〜４０ｇである。無機塩類は、塩化ナトリウム等の無機酸金属塩であり、クエン酸ナトリウムなどの有機酸金属塩であり得る。また、当該培地は必要に応じて平板培地にするための基剤成分を含み得る。基剤成分は例えば寒天であり得る。基剤成分は概ね使用時において培地１Ｌ中１〜３０ｇである。ｐＨ調整剤は必要に応じて使用時の培地ｐＨがほぼ中性になるように用いられる。
【００２１】
さらに本発明においては、チオ硫酸ナトリウム及び三価の鉄イオンを含み得る。三価の鉄イオンは例えば有機酸塩又は有機酸アンモニウム塩として培地中に含まれる。試料中にサルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）属細菌が存在した場合、コロニーが黒色に着色され、他の細菌によるコロニーとの識別が容易になる。
【００２２】
本発明に係る培地は上記成分のうちエシェリキア・アルバーティが分解しない糖、例えばメリビオース、ラムノースおよびキシロースの群から選択される１以上の糖とｐＨ指示薬と最低限必要な栄養成分を必須成分とする。また、本発明に係る培地は、酵素基質剤を含み得る。酵素基質剤は、例えば、細菌が産生する酵素と反応することで培地上に形成されたコロニーの色調を変化させたり蛍光を生じさせ、検出目的とする細菌によるコロニーとその他の細菌によるコロニーを識別しやすくために用いられる。酵素基質剤は、細菌が培地中に含まれる糖によって誘導された結果産生される酵素と反応する酵素基質剤であっても、培地中に含まれる糖とは関係なく細菌が本来的に産生する酵素と反応する酵素基質剤であってもよい。
【００２３】
本発明においては、下記に述べるように糖の分解によって生じた酸によるｐＨ指示薬の色調でコロニーを識別するので、培地中の糖を分解しない複数種類の細菌が存在する場合にはこれらの細菌がどの属の細菌であるかを識別できない。そこで、この識別を行うために、酵素基質剤を加えておくことで、一つ又は複数の属の細菌によるコロニーには色調変化や蛍光を生じさせる一方、残りの属の細菌によるコロニーには色調変化や蛍光を生じさせない、あるいは前記色調変化や前記蛍光色と異なるような色調変化や蛍光色を生じさせるようにする。
その一例として、非分解性の糖として培地中にメリビオースを含ませた場合、エシェリキア・アルバーティやシゲラ属細菌、プロビデンシア属細菌はいずれもメリビオースを分解しないので（実施例表２参照）、これらの細菌は同じような色調のコロニーを生じ得る。そこで、エシェリキア・アルバーティによるコロニーと、シゲラ属細菌及びプロビデンシア属細菌によるコロニーを区別するために、例えばエシェリキア・アルバーティは産生するが、シゲラ属細菌やプロビデンシア属細菌は産生しない酵素と反応する酵素基質剤を培地中に含ませておくと、酵素基質剤とエシェリキア・アルバーティが産生する酵素の反応によって、エシェリキア・アルバーティによるコロニーに色調変化や蛍光を生じさせることができる。この結果、エシェリキア・アルバーティによるコロニーと、シゲラ属細菌やプロビデンシア属細菌によるコロニーとの識別が容易になる。ここにおいて本発明では、当該酵素基質剤は、メリビオース分解能を有する細菌が産生する酵素と反応する酵素基質剤であっても、メリビオース分解能を有する細菌が産生する酵素と反応しない酵素基質剤のいずれであってもよい。酵素基質剤を加えない場合では、メリビオース非分解性の細菌によるコロニーにおける色調と、メリビオース分解性の細菌によるコロニーにおける色調が異なるので、酵素基質剤による色調変化後においてもメリビオース分解性の細菌によるコロニーとメリビオース非分解性の細菌によるコロニーは識別可能と考えられるからである。もっとも、酵素基質剤によって生じた後の色調が、メリビオース分解性の細菌によるコロニーとメリビオース非分解性の細菌によるコロニーで異なるように酵素基質剤を選択することが望まれる。なお、上記の例では３つの菌種の中からエシェリキア・アルバーティを検出する目的で、エシェリキア・アルバーティによるコロニーに色調変化や蛍光を生じさせることを前提にして説明したが、色調変化や蛍光を生じさせるコロニーは検出目的とする細菌によるコロニーであっても、検出目的ではない細菌によるコロニーのいずれでもよい。コロニーが有する色調、蛍光の有無や蛍光色によって識別を容易にできればよいからである。つまり、エシェリキア・アルバーティのみを特異的に検出する場合であれば、エシェリキア・アルバーティによるコロニーのみに色調変化等を生じさせず、他のメリビオース非分解性の細菌によるコロニーに色調変化等を生じさせる酵素基質剤を含ませることもできる。このような酵素基質剤として、例えば、サルモネラ属細菌の検出用に、５−ブロモ−６−クロロ−３−インドリルカプリレート、４−ニトロフェニルカプリレート、２−ナフチルカプリレート、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドキシル−α−Ｄ−ガラクトピラノシド、レゾルフィニル−α−Ｄ−ガラクトピラノシド、４−ニトロフェニル−α−Ｄ−ガラクトピラノシドなどが知られている。
【００２４】
本発明に係る培地は常法により各種の形態に製造され得る。また、本発明に係る培地は公知の培地の使用法と同様に使用することができ、例えば上記の成分を精製水に溶解した後、常法により滅菌処理などを施した後液体培地として、寒天などの基剤成分を含む場合には必要に応じて平板培地として使用される。また、糖以外の成分を含む培地は、例えばマッコンキー基礎培地若しくはマッコンキー平板基礎培地として知られており、本発明に係る培地は公知組成のマッコンキー基礎培地又はマッコンキー平板基礎培地に１以上のエシェリキア・アルバーティが分解しない糖を加えて使用することもできる。
【００２５】
本発明に係る分離選択方法は、上記の成分から得られた平板培地を用いて試料を画線塗布し培養した後、形成されたｐＨ指示薬の中性側の色又は白色のコロニーを選択、分離する方法である。
【００２６】
使用され得る試料は、細菌検査に用いられるものであれば特に限定されることはなく、ヒトを始めとする各種動物の糞便であり、吐瀉物であり、生鮮食料品などの各種食品であり得る。試料はそのまま培地上に塗布してもよく、精製水や生理食塩水などに分散させた上で塗布してもよい。また、増菌用の培地を用いて前培養した培養液を塗布してもよい。
【００２７】
培養は３０〜４０℃好ましくは３７℃で２４〜７２時間程度培養する。培養後に形成されたコロニーの着色又は着色の有無で判別される。着色は、ｐＨ指示薬の種類や量によって異なる場合もあるが、糖非分解性の細菌は酸をほとんど生じないので、ｐＨ指示薬の中性側の色若しくは白色のコロニーを形成する一方、糖分解性の細菌は酸を生じてｐＨ指示薬の酸性側の色に着色したコロニーを形成する。例えばニュートラルレッドをｐＨ指示薬とした場合、糖分解性の細菌は紫系の色のコロニーを形成し、糖非分解性の細菌は着色のされていない白色のコロニーを形成する。
【００２８】
本発明に係る培地中、メリビオースとｐＨ指示薬を含む培地では、エシェリキア・アルバーティ、プロテウス属細菌、プロビデンシア属細菌、シゲラ属細菌、モルガネラ属細菌、シュードモナス属細菌，プレシオモナス属細菌をその他のグラム陰性菌から選択分離できる。エシェリキア・アルバーティなどの前記細菌は、メリビオースを分解せずに非着色のコロニーを形成するが、その他の大腸菌群細菌、サルモネラ属細菌、エンテロバクター属細菌、シトロバクター（Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ）属細菌などの腸内細菌はほぼ紫系の色のコロニーを形成する。さらに胆汁酸塩などのグラム陽性菌抑制剤及び／又は亜テルル酸やその塩を含む培地でも同様の結果が得られる。特にメリビオースとｐＨ指示薬、そして必要に応じてグラム陽性菌抑制剤及び／又は亜テルル酸やその塩が加えられた培地ではエシェリキア・アルバーティと他の大腸菌を区別することができる。従って、病原菌が大腸菌群である、あるいは出血性大腸菌群である可能性が高いと判断される場合には、当該培地のみを使用することでエシェリキア・アルバーティであるか、その他の出血性大腸菌群であるかが特定される。
【００２９】
また、メリビオースに加えてラムノースを含む培地では、エシェリキア・アルバーティ、プロテウス属細菌、プロビデンシア属細菌、モルガネラ属細菌、シュードモナス属細菌、プレシオモナス属細菌をその他のグラム陰性菌から選択分離できる。メリビオースに加えてさらにキシロースを含む培地、キシロースとラムノースを含む培地、さらにはメリビオース、ラムノース、キシロースの３種の糖を含む培地ではいずれもエシェリキア・アルバーティ、プロビデンシア属細菌、モルガネラ属細菌、シュードモナス属細菌、プレシオモナス属細菌をその他のグラム陰性菌から選択分離できる。さらに胆汁酸塩などのグラム陽性菌抑制剤及び／又は亜テルル酸やその塩を含む培地でも同様の結果が得られる。特に３糖を含む培地でも、メリビオースのみを糖として加えた培地と同様に、エシェリキア・アルバーティを他の腸管出血性大腸菌群と区別することができる。さらに当該培地ではプロテウス属細菌やプロビデンシア属細菌、シゲラ属細菌、シトロバクター属細菌、アシネトバクター（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ）属細菌は紫系の色のコロニーを形成する傾向にあり、メリビオースのみを加えた場合に比べて、原因菌の推定菌種がさらに限定される。
【００３０】
この結果、メリビオース、ラムノース、キシロースの３種の糖及びｐＨ指示薬を含む培地では、検出されるグラム陰性菌はエシェリキア・アルバーティであるか、モルガネラ属細菌であるか、シュードモナス属細菌であるか、プレシオモナス属細菌であるかに絞り込まれるために、ＰＣＲを使わず、また数少ない種類の培地で食中毒の原因菌の特定に貢献できる。
【００３１】
次に本発明について下記の実施例に基づいて説明するが、本発明は下記の実施例に限定されないのは言うまでもない。
【実施例１】
【００３２】
メリビオース、ラムノース、キシロースの３種の糖を用いた培地を用いて、下痢症状を示した患者から分離された細菌（供試菌株）の生育状況を調べた。培地は、表１に示す組成の培地を用いた。表１の組成となるように全ての成分を１Ｌの精製水に溶かし、その後常法により滅菌して、寒天平板培地を作製した。糖については、表１に示す組成において、各種の糖がそれぞれ１％、つまり、２種の場合には糖濃度が２％、３種の場合には糖濃度が３％となるようにした。
【００３３】
供試菌株は２４時間液体培地にて前培養しこれを試料として、寒天平板培地に画線塗抹により接種し、３７℃で２４時間培養を行った。その結果を表２に示した。これらの培地では、糖が分解された場合には赤色から紫色のコロニーを形成し、糖が分解されなかった場合には白色のコロニーを形成した。
【００３４】
この結果から、エシェリキア・アルバーティはエシェリキア・コリとは異なりメリビオース非分解性であり、シゲラ属細菌、プロテウス属細菌、プレシオモナス属細菌、プロビデンシア属細菌（一部の菌株を除く）、モルガネラ属細菌、シュードモナス属細菌もメリビオース非分解性であった。また、３糖を混合した場合にも、エシェリキア・アルバーティ、プレシオモナス属細菌、プロビデンシア属細菌（一部の菌株を除く）、モルガネラ属細菌、シュードモナス属細菌は白色のコロニーを形成した。
【００３５】
【表１】
2019024418.tif 000002
【００３６】
【表２】
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【実施例２】
【００３７】
次に、さらに選択培養の可能性を調べるため、菌株を増やし、表３及び表４に示す菌株について試験を行った。メリビオース、ラムノース、キシロースの３種の糖を用いて実施例１と同様の実験を行った。糖濃度は各糖それぞれ１％とした。その結果を表３と表４に示した。
【００３８】
この結果、大腸菌Ｏ１５７、Ｏ２６、Ｏ１１１、Ｏ１２１などの腸管出血性大腸菌群を始めとする各種の病原性大腸菌は紫色又はそれに近い色のコロニーを形成し、エシェリキア・アルバーティと容易に識別することができた。また、グラム陰性菌であるエンテロバクター属細菌、 サルモネラ属細菌、 クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）属細菌、 シトロバクター属細菌、 アシネトバクター属細菌、 プロテウス属細菌の菌株も紫色またはそれに近い色のコロニーを形成したが、その他の属（シゲラ属やプロビデンシア属の一部菌株を除く）に属する菌株については、白色のコロニーを形成した。従って、培養後に白色のコロニーを採取することで、少なくともエシェリキア・アルバーティをその他の病原性大腸菌から特異的に選別できる。また、得られた白色のコロニーは、エシェリキア・アルバーティであるか、シュードモナス属の菌株であるか、モルガネラ属の菌株である可能性が高いと言える。特に、腸管出血性の食中毒が疑われる下痢患者の便を使用した場合には、その原因菌はほぼエシェリキア・アルバーティであると判断できる。
【００３９】
【表３】
2019024418.tif 000004
【００４０】
【表４】
2019024418.tif 000005