(57)【要約】【課題】血中尿酸値低減用組成物を提供する。【解決手段】キトサンとアンペロプシンを含有する血中尿酸値低減用組成物。【選択図】図２
2019108313.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
キトサンとアンペロプシンを含有する血中尿酸値低減用組成物。
【請求項２】
キトサンとアンペロプシンを含有する尿酸排泄促進用組成物。
【請求項３】
キトサンとアンペロプシンを含有するプリン体吸収抑制用組成物。
【請求項４】
キトサン１質量部当たりアンペロプシンを０．５〜３質量部の比率で含有する請求項１〜３のいずれかに記載の組成物。
【請求項５】
一日当たりの摂取量としてキトサンを５０〜１５０ｍｇ、アンペロプシンを１００〜３００ｍｇ含有する請求項１〜３のいずれかに記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、キトサンとアンペロプシンを含有する血中尿酸値低減用組成物及びプリン体吸収抑制用組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
尿酸は、ヒトにおいては、核酸・プリン体が代謝された結果、最終代謝産物として排泄される。この尿酸を排泄するための機能の低下や、プリン体の産生過剰によって、血中の尿酸値が７ｍｇ／ｄＬを超えると、高尿酸血症と定義される。高尿酸血症発症者は増加しており、日本国内には潜在的な患者を含めて５００万人程度以上いると言われている。
【０００３】
高尿酸血症状態が慢性化すると、関節炎、尿路結石、痛風腎等の病状を発症する危険性が高まる。特に体温が低い足部などにおいて、尿酸が溶解しきれずに尿酸塩として結晶化して関節包内などに付着すると、白血球群のうち、特に好中球が尿酸結晶を攻撃（捕食活動）を行うことが知られている。好中球による尿酸結晶捕食活動が激化すると、その活動による過大なエネルギーや、尿酸を抱え込んで死亡した好中球の遺骸そのものによる影響などから、血管壁がダメージを受けて大きな炎症を発生する。当然、当該部位周囲の神経組織をも相当に刺激し、患者は「内側からの激痛」を感じることとなる。これが痛風である。
また、近年の疫学研究により、高尿酸血症は、心・脳血管障害の独立した危険因子であることが示唆されてきており、メタボリックシンドロームのバイオマーカーとしての重要性が指摘されてきている。以上のことから、血中尿酸値を適正にコントロールすることは、前記の疾患を予防する観点から重要となり、高尿酸血症を改善する医薬品や食品が強く望まれている。
【０００４】
高尿酸血症の要因として、尿酸の産生過剰、尿酸排泄能の低下があげられる。痛風の症例における尿酸クリアランス試験の結果によると、８５％が尿酸排泄能の低下を示すことが明らかとなっており、高尿酸血症のうち排泄低下型の高尿酸血症の占める割合が高いと考えられている。
【０００５】
これまでに、尿酸値低下用薬剤として、尿酸産生抑制剤のアロプリノールや尿酸排泄促進剤のベンズブロマロン等が提供されている。しかし、これらの薬剤は、効果がある半面、肝障害等の副作用を伴うことが多い。
また、特許文献１には、血清尿酸値を低減させて高尿酸血症または痛風の予防改善にキトサンが有用であることが記載されている。特許文献１に記載のキトサンの血清尿酸値低減作用は、極めて緩やかな作用であって、その後行なわれた臨床試験によって、人に対して血清尿酸値低下効果を発揮するためには、１日当たり１．２２〜１．８３ｇという高用量投与する必要があることが明らかになっている（非特許文献１、非特許文献２、非特許文献３）。
特許文献２にはケルセチンを含む食品が、キサンチンオキシダーゼ阻害によって高尿酸血症を改善することが記載されている。
特許文献３には、ハマメリスがキサンチンオキシダーゼを阻害し、高尿酸血症を改善することが記載されている。
特許文献４には、エラグ酸を含む組成物が、高尿酸血症のラットにおいて尿酸排泄を促
進することが記載されている。
特許文献５には、わさびの水性溶媒抽出物が高尿酸血症のラットにおいて尿酸排泄を促進することが記載されている。
【０００６】
伝統的な食品である藤茶には様々な薬効が存在することが知られている。その作用は、急性肝炎などの肝臓疾患治療効果（特許文献６）、抗菌効果（特許文献７）、色素退色防止作用（特許文献８）など多岐に渡っている。一方、血中尿酸値低減作用、プリン体吸収抑制作用が存在することは、食経験の長い食品でありながらこれまでまったく知られていなかった。
本発明者らは天然物や天然抽出物を尿酸排泄剤として利用するために探索を行っていたところ、藤茶に血中尿酸値低減作用、プリン体吸収抑制作用、キサンチンオキシダーゼ阻害作用、尿酸排泄促進作用及びＡＢＣＧ２遺伝子活性化作用が存在することを発見している。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特開２００１−３１６２７２号公報
【特許文献２】特開２００２−１４５８７５号公報
【特許文献３】特開２００３−１７４８５７号公報
【特許文献４】特開２００５−３５０３７５号公報
【特許文献５】特開２００７−２１７３６６号公報
【特許文献６】特開２００３−０２６５８４号公報
【特許文献７】特開２００２−１５９５６６号公報
【特許文献８】特開２００２−０６５２０１号公報
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】健康・栄養食品研究．２００１．４（３）：１０３−１１３．
【非特許文献２】日本臨床栄養学会雑誌．２００７．２９（２）：１０４−１１３．
【非特許文献３】健康・栄養食品研究．２００４  ７（１）：３５−４７．
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明者らは、上記のような背景技術のもとに研究を行い、藤茶抽出物が血中尿酸値低減作用、プリン体吸収抑制作用、キサンチンオキシダーゼ阻害作用、尿酸排泄促進作用及びＡＢＣＧ２遺伝子活性化作用を有することを発見した。そして、さらに研究を進めたところ、これらの作用を示す物質が藤茶中に含まれるフラボノイドの一種であるアンペロプシンであることを見いだした。またこのアンペロプシンは、キトサンと併用することで優れた血清尿酸値低減作用及びプリン体吸収抑制作用を発揮することを発見し、本発明をなした。
【００１０】
すなわち、本発明の課題はキトサンとアンペロプシンを含有する血中尿酸値低減用組成物、尿酸排泄促進用組成物、プリン体吸収抑制用組成物を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明の主な構成は以下の通りである。
（１）キトサンとアンペロプシンを含有する血中尿酸値低減用組成物。
（２）キトサンとアンペロプシンを含有する尿酸排泄促進用組成物。
（３）キトサンとアンペロプシンを含有するプリン体吸収抑制用組成物。
（４）キトサン１質量部当たりアンペロプシンを０．５〜３質量部の比率で含有する（１）〜（３）のいずれかに記載の組成物。
（５）一日当たりの摂取量としてキトサンを５０〜１５０ｍｇ、アンペロプシンを１００〜３００ｍｇ含有する（１）〜（３）のいずれかに記載の組成物。
【発明の効果】
【００１２】
本発明により新たな血中尿酸値低減用組成物、尿酸排泄促進用組成物、プリン体吸収抑制用組成物が提供される。本発明により得られた組成物は、血清尿酸値低減用、尿酸排泄促進用、またはプリン体吸収抑制用、あるいは高尿酸血症や痛風などの予防治療剤及びこれらの疾患の改善用飲食品組成物とすることができる。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】プリン体負荷試験を実施する際の試験ダイアグラムを示す図である。
【図２】プリン体負荷試験における食後血清尿酸値の経時変化を示すグラフである。
【図３】プリン体負荷試験における食後血清尿酸ＡＵＣ値を示すグラフである。
【図４】プリン体負荷試験における尿酸排泄量の経時変化を示すグラフである。
【図５】長期臨床試験を実施する際の試験ダイアグラムを示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
本発明は、キトサンとアンペロプシンを含有する血中尿酸値低減用組成物に係る発明である。
本発明でいうキトサンとは、β−１，４−ポリグルコサミン構造を主とする物質である。キチンを脱アセチル化して得ることができる。なおキチンは、１，４−ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミン構造を主とする物質である。
【００１５】
キトサンは、一般的には、カニ、エビ、オキアミ等の甲殻類の甲皮、昆虫類の甲皮、イカの骨等を脱カルシウム処理し、除タンパク質処理し、そして得られたキチンを脱アセチル化処理して得ることができる。また、キノコ類、微生物からも得ることができる。
本発明におけるキトサンは、いずれの原料から得られたキトサンをも用いることができるが、食品として摂取した場合の安全性が明らかであり、経済的にも優れていると考えられる点で、カニ、エビ等の甲殻類の甲皮を原料としたキトサンが好ましい。更に、本発明の組成物に使用するキトサンは、ヒトが経口摂取した場合の安全性が明らかにされており、食品添加物等として実績があるものが好ましい。
【００１６】
本発明に用いられるキトサンの平均分子量は、１０万以上が好ましく、１００万以上がより好ましい。脱アセチル化度は、６５％以上が好ましく、８５％以上であれば、更に好ましい。
【００１７】
キトサンの分子量は、水系ＧＰＣカラムを用いたＧＰＣ法で測定することができる。また、脱アセチル化度というときは、特に示さない限り、ポリビニル硫酸カリウム溶液によるコロイド滴定法により測定することができる。
本発明に用いるキトサンは、市販の食品添加物用として市販されているものであれば使用可能である。このような製品としては、日本化薬フードテクノ株式会社製の食品用キトサン（製品名：キトサミン  登録商標）を例示する。
【００１８】
本発明でいうアンペロプシンは、藤茶から抽出したものを用いることができる。
藤茶は、ブドウ科ノブドウ属の植物であり、中国名を顕歯蛇葡萄という。学名は、Ａｍｐｅｌｏｐｓｉｓ  ｇｒｏｓｓｅｄｅｎｔａｔａである。主には中国の広西、広東、雲南、貴州、湖南、湖北、江西、福建などの省並びに自治区に分布している。中国の広西、湖南などの省や自治区の壮族や瑶族の人々がこの茎および葉から作った飲料を常用しており、風邪、のどの痛みの予防や治療などにも利用されている。アンペロプシンは、藤茶の示す肝臓疾患の治療作用や抗菌作用の活性本体として特定されている。
【００１９】
アンペロプシンは、下記の式で表される。
【００２０】
【化１】
2019108313.tif 000003
【００２１】
アンペロプシンは、例えば、藤茶（学名：Ａｍｐｅｌｏｐｓｉｓ  ｇｒｏｓｓｅｄｅｎｔａｔａ）、大叶蛇葡萄（学名：Ａｍｐｅｌｏｐｓｉｓ  ｍｅｇａｌｏｐｈｙｌｌａ）、広東蛇葡萄（学名：Ａｍｐｅｌｏｐｓｉｓ  ｃａｎｔｏｎｉｅｎｓｉｓ）、ケンポナシ（学名：Ｈｏｖｅｎｉａ  ｄｕｌｃｉｓ）、オノエヤナギ（学名：Ｓａｌｉｘ  ｓａｃｈａｌｉｎｅｎｓｉｓ）、ヨレハマツ（学名：Ｐｉｎｕｓ  ｃｏｎｔｏｒｔａ）及びカツラ（学名：Ｃｅｒｃｉｄｉｐｈｙｌｌｕｍ  ｊａｐｏｎｉｃｕｍ）から選ばれる植物の抽出物から単離精製することができる。これらの中でも藤茶が好ましい。
【００２２】
具体的には、Ａｍｐｅｌｏｐｓｉｓ属植物である藤茶（学名：Ａｍｐｅｌｏｐｓｉｓ    ｇｒｏｓｓｅｄｅｎｔａｔａ）から、下記のようにして得ることができる。
すなわち、乾燥させた藤茶の枝葉部を含水エタノールで抽出した抽出物を濃縮し、例えば多孔性樹脂（ＤＩＡＩＯＮ  ＨＰ−２０）を用いたカラムクロマトグラフィーにかけ、８０容量％含水メタノールで溶出される分画にアンペロプシンが得られる。これを逆相シリカゲルカラムクロマトグラフィーや再結晶により、更に精製することができる。
精製されたアンペロプシンは、試薬としても販売されており、これを用いることもできる。
【００２３】
本発明に用いられる藤茶抽出物は、上記のアンペロプシンを１０質量％以上含有するものが好ましい。このような組成物を得るため、藤茶の抽出は、以下のような操作を行う。
乾燥した藤茶の葉または茎の粉砕物または粉末を抽出原料とし、水又は親水性有機溶媒若しくはこれらの混合溶媒に投入し、室温乃至溶媒の沸点以下の温度で任意の装置を用いて抽出することにより得ることができる。
【００２４】
抽出に用いる有機溶媒としては、例えばメタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１〜５の低級アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、イソプロピレングリコール、グリセリン等の炭素数２〜５の多価アルコールなどが挙げられる。
これらの中でもエタノールが好ましい。
なお、水と親水性有機溶媒との混合溶媒を使用する場合には、低級アルコールの場合は水１０質量部に対して３０〜９０質量部、低級脂肪族ケトンの場合は水１０質量部に対して１０〜４０質量部、多価アルコールの場合は水１０質量部に対して１０〜９０質量部添加することが好ましい。
【００２５】
上記のとおり、抽出溶媒を満たした処理槽に、藤茶の乾燥・粉砕物を投入し、必要に応じて時々撹拌しながら、３０分〜２時間静置して可溶性成分を溶出した後、ろ過して固形物を除去し、得られた抽出液から抽出溶媒を留去し、乾燥することにより抽出物が得られる。抽出溶媒量は、抽出原料の通常５〜１５倍量（質量比）であることが好ましく、抽出条件は、抽出溶媒として水を用いた場合には、通常５０〜９５℃で１〜４時間程度である。また、抽出溶媒として水とエタノールとの混合溶媒を用いる場合には、通常４０〜８０℃で３０分〜４時間程度である。
【００２６】
得られた抽出液から溶媒を留去するとペースト状の濃縮物が得られる。更に乾燥すれば、固形の抽出物が得られる。本発明にあっては、アンペロプシンの含有量が１０質量％、好ましくは２０質量％以上であれば、上記抽出液またはその濃縮液の状態であっても良い。
これらは、活性炭処理、吸着樹脂処理、イオン交換樹脂、液―液向流分配などの方法により精製してから用いても構わない。
したがって、上記の藤茶抽出物からさらに再抽出やクロマトグラフィーにより再分画し、アンペロプシンの濃度を高めた抽出物も本発明の組成物として使用可能である。
【００２７】
組成物中のアンペロプシンの含有量は、ＨＰＬＣなど公知の分析方法で分析することができる。定量方法の概略は次のとおりである。
・試料溶液の調製
試料（抽出物）約２０ｍｇを精秤し、蒸留水を加えて超音波にて溶解し、正確に５０ｍＬとする。この溶液２ｍＬを５０ｍＬに正確に希釈し、試料溶液とする。  
・標準溶液の調製と検量線作成  
標準品（Ｄｉｈｙｄｒｏｍｙｒｉｃｅｔｉｎ  ＳＩＧＭＡ−ＡＬＤＲＩＣＨ社製）２．００ｍｇを精秤し、１００％アセトニトリルを適量加えて超音波処理して溶解し、さらにアセトニトリルを加えて正確に２５ｍＬとした、アンペロプシン標準原液８０μｇ／ｍＬを調製する。この標準原液を蒸留水にて正確に５倍希釈して、１６μｇ／ｍＬアンペロプシン標準溶液を調製する。ＨＰＬＣへの注入量を１０、２０、４０μＬとし、アンペロプシンのピークに基づいて検量線を作成する。
・ＨＰＬＣ条件
下記表１の条件に設定する。
【００２８】
【表１】
2019108313.tif 000004
【００２９】
本発明のキトサンとアンペロプシンを含有する組成物は、そのままあるいは各種賦形剤を添加して製剤化する。製剤としては顆粒剤、錠剤、カプセル剤を例示することができる。
また組成物をそのまま、あるいは製剤化したものを飲食品に添加して用いることもできる。
なお製剤化に当たっては、本発明の組成物の目的を阻害しない範囲で使用することができる。具体的には、シクロデキストリン、へミセルロース、リグニン、グアガム、コンニャクマンナン、イサゴール、アルギン酸、寒天、カラギーナン、キチン、カルボキシメチルセルロース、ポリデキストロースなどの食物繊維や増粘剤、食用油、カルシウム、鉄、ナトリウム、亜鉛、銅、カリウム、リン、マグネシウム、ヨウ素、マンガン、セレンなどのミネラル；ビタミンＡ、ビタミンＣ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、ビタミンＫ、ナイアシン、葉酸、パントテン酸などの脂溶性または水溶性のビタミン群、グリセリン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、プロピレングリコール脂肪酸エステル、リン脂質、アラビアガム、キサンタンガム、トラガカントガム、ローカストビーンガムなどの乳化剤や分散剤、増量剤、賦形剤、保存料・酸化防止剤、風味調整剤や香料、塩化ナトリウム、グルタミン酸ナトリウム、グリシン、コハク酸、乳酸ナトリウムなどの呈味料、クエン酸、クエン酸ナトリウム、酢酸、アジピン酸、フマル酸、リンゴ酸などの酸味料、マルチトール、アスパルテームなどの低カロリー甘味料、着色剤などである。
【００３０】
また、本発明の組成物は、キトサン１質量部当たりアンペロプシンを０．５〜３質量部の比率で含有するが、好ましくはキトサン１質量部当たりアンペロプシンを１〜２質量部、特に好ましくはキトサン１質量部当たりアンペロプシン１．５質量部を含有する。
本発明の組成物にあっては、ヒトにおける血中尿酸値低減効果、尿酸排泄促進効果、プリン体吸収抑制効果を発揮する有効量として、一日当たりの投与量は、キトサンを５０〜１５０ｍｇ、アンペロプシンを１００〜３００ｍｇ、好ましくはキトサンを１００〜１５０ｍｇ、アンペロプシンを１５０〜２００ｍｇ、特に好ましくはキトサン１００ｍｇ、アンペロプシン１５０ｍｇを含有する。
【実施例】
【００３１】
以下に本発明の組成物の製造例及びこの組成物を用いた試験例を示し、本発明を具体的に説明する。
＜藤茶抽出物の製造例１＞
乾燥藤茶１重量部（２００ｇ）に対して水を１５倍量加え９０℃に加熱し、１時間抽出しろ過を行い、１番抽出液を得た。次いでこの残渣に水を１２倍量加え、９０℃に加熱し、３０分間抽出し、ろ過を行い、２番抽出液を得た。両抽出液を合算し、減圧濃縮し、濃縮液約３００ｍｌを−４０℃で凍結させ、さらに凍結乾燥装置で乾燥させ、乾燥物を得た。これを粉砕し、６０メッシュの篩で篩い分けし、通過物８５ｇを本発明に用いる抽出物とした。この抽出物中のアンペロプシン含有量は、６８質量％であった。
【００３２】
＜藤茶抽出物の製造例２＞
乾燥藤茶１重量部（２００ｇ）に対して５０％エタノール水溶液を１５倍量加え、還流冷却機を付して加熱し、１時間抽出しろ過を行い、１番抽出液を得た。次いでこの残渣に同様に５０％エタノール水溶液を１２倍量加え、９０℃に加熱し、３０分間抽出し、ろ過を行い、２番抽出液を得た。両抽出液を合算し、減圧濃縮し、濃縮液約３００ｍｌを−４０℃で凍結させ、さらに凍結乾燥装置で乾燥させ、乾燥物を得た。これを粉砕し、６０メッシュの篩で篩い分けし、通過物７８．１ｇを本発明に用いる抽出物とした。この抽出物中のアンペロプシン含有量は、５２．９質量％であった。
【００３３】
＜藤茶抽出物の製造例３＞  
製造例１と同様に、乾燥藤茶１重量部（２００ｇ）に対して水を１５倍量加え９０℃に加熱し、１時間抽出しろ過を行い、１番抽出液を得た。次いでこの残渣に水を１２倍量加え、９０℃に加熱し、３０分間抽出し、ろ過を行い、２番抽出液を得た。両抽出液を合算し、減圧濃縮し、濃縮液約３００ｍｌを得た。さらにグアガム分解物を、濃縮液あたり７８ｇ添加し、−４０℃で凍結させ、さらに凍結乾燥装置で乾燥させ、乾燥物を得た。これを粉砕し、６０メッシュの篩で篩い分けし、通過物１６３．１ｇを本発明に用いる抽出物とした。この抽出物中のアンペロプシン含有量は、２４．７質量％であった。
【００３４】
＜藤茶抽出物の製造例４＞  
製造例１と同様に、乾燥藤茶１重量部（２００ｇ）に対して水を１５倍量加え９０℃に加熱し、１時間抽出しろ過を行い、１番抽出液を得た。次いでこの残渣に水を１２倍量加え、９０℃に加熱し、３０分間抽出し、ろ過を行い、２番抽出液を得た。両抽出液を合算し、減圧濃縮し、濃縮液約３００ｍｌを得た。さらにγシクロデキストリンを、濃縮液中に７８ｇ添加し、−４０℃で凍結させ、さらに凍結乾燥装置で乾燥させ、乾燥物を得た。これを粉砕し、６０メッシュの篩で篩い分けし、通過物１５１．４ｇを本発明に用いる抽出物とした。この抽出物中のアンペロプシン含有量は、２６．４質量％であった。
【００３５】
ヒト試験
＜１．プリン体負荷試験＞
プリン体を経口投与しながら本発明品を摂取した場合の血中尿酸値及び尿中尿酸値に及ぼす効果を試験した。
（１）試験試料
７０％含水エタノールで抽出した藤茶抽出物を試験試料とした。この抽出物中にはＨＰＬＣ法で測定したとき、固形物重量あたりアンペロプシンが３１．９質量％含有されていた。
【００３６】
（２）試験方法
１）ヒト試験用試料
表２の組成で、７０％含水エタノール藤茶抽出物（アンペロプシン）を充填したカプセル剤、甲殻類由来のキトサン（日本化薬フードテクノ社製）及びアンペロプシン含有カプセル剤、プラセボ（デンプン）を充填したカプセル剤をヒト試験用試料として調製した（アンペロプシン１５０ｍｇ及びキトサン１００ｍｇは、一日摂取量としての数値を示す）。なおキトサン１００ｍｇは、血清尿酸の低下効果が認められる有効量の約１０分の１の一日摂取量である。
【００３７】
【表２】
2019108313.tif 000005
【００３８】
２）被験者
日本人男性（２０歳〜６５歳）を対象にスクリーニング検査を行い、男性６名を被験者として選抜した。
なおスクリーニング、本試験を含め、試験スケジュールは表３、検査項目は表４のとおりである。また試験は、すべて専門の臨床検査施設においてヘルシンキ宣言に則って実施した。なお試験全体のフローを図１に示す。なお被験者の１名は制限事項の不遵守のため解析から除外され、最終解析は５名のデータで行った。
【００３９】
【表３】
2019108313.tif 000006
【００４０】
【表４】
2019108313.tif 000007
【００４１】
３）試験方法
被験者６名をＡ、Ｂ、Ｃの３群に割付け、試験を行った。
上記の試験用カプセル剤を用いて無作為化二重盲検プラセボ対照クロスオーバー法で試験した。なお被験者には、酵母エキスの摂取によってプリン体負荷を行い、さらにアンペロプシン（3粒）およびプラセボ２（4粒）、アンペロプシン＋キトサン（4粒）およびプラセボ１（3粒）、プラセボ１（3粒）およびプラセボ２（4粒）を各摂取期で合計７粒摂取させた。
プリン体の負荷開始から、６０分、１２０分、１８０分、２４０分経過後に血液を採取して、血清尿酸値を測定した。
【００４２】
試験操作手順は次のとおりである。
１）プリン体負荷６０分前（午前９時〜９時半の間）に来院させ、被験者に水３００ｍ
Ｌを摂取させた。
２）プリン体負荷前の採血を行った。
３）水摂取６０分後、全排尿させた。
４）排尿後、プリン体（ビール酵母抽出ＲＮＡ、株式会社エル・エス・ファクトリー
ＢＦ）４．６５ｇ（ＲＮＡとして４ｇ）を２００ｍＬの水で摂取させた。
５）プリン体摂取直後に試験食品またはプラセボを１００ｍＬの水とともに摂取させ      た。
６）プリン体負荷後、蓄尿を開始させ、６０分ごとに２４０分まで尿を回収した。
７）プリン体負荷６０分後、１２０分後、１８０分後、２４０分後に採血を行った。
８）プリン体負荷６０分後、１２０分後、１８０分後に２００ｍＬの水を摂取させた。
【００４３】
統計解析は、対応のあるｔ検定にて行った。統計解析ソフトはＪＭＰ（登録商標）１２．０（ＳＡＳ社製）及びＭｉｃｒｏｓｏｆｔ  Ｅｘｃｅｌ  ２０１０（Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ社製）を使用した。 
【００４４】
（３）試験結果
・血清尿酸値経時変化
血清尿酸値の経時測定結果は、試験開始時の尿酸値からの変化量として図２に示した。
プリン体の投与によって血清尿酸値の増加量は、投与開始から経時的に上昇するが、アンペロプシン１５０ｍｇを摂取した場合は、上昇が抑制されていた。アンペロプシン１５０ｍｇとキトサン１００ｍｇ摂取した場合、投与開始１２０分経過後緩やかな減少に転じた。プラセボ投与の場合は、血中尿酸の上昇が最も高かった。
【００４５】
・血清尿酸ＡＵＣ
プリン体の吸収性を評価するため、AUC（Area Under the blood concentration-time Curve）として図３に示した。アンペロプシン１５０ｍｇ摂取した場合、アンペロプシン１５０ｍｇとキトサン１００ｍｇ摂取した場合は、いずれもプラセボ摂取に対して低かった。これは、アンペロプシン及びキトサンがプリン体の吸収を抑制しているためと考えられた。
【００４６】
・尿酸クリアランス
２４０分までの尿酸クリアランスを図４に示す。尿酸クリアランスは、アンペロプシン１５０ｍｇとキトサン１００ｍｇ摂取時に増加を認め、尿酸排泄量の増加が考えられた。
【００４７】
以上の試験結果から、アンペロプシン１５０ｍｇ摂取によって血清尿酸低下効果を有することが確認された。またこの血清尿酸値低下効果はキトサン１００ｍｇを併用することで相乗的に作用するものと考えられた。またその作用は、キトサンとアンペロプシンの相乗作用に基づくプリン体の吸収抑制と考えられた。また、アンペロプシンはＡＢＣＧ２といった尿酸排泄トランスポーターへ影響し、尿酸排泄を促進する可能性も考えられるため、キトサンとアンペロプシンの組み合わせによって、プリン体吸収阻害、尿酸合成阻害、尿酸排泄促進という３つの機能で尿酸値を低下させていると考えられた。
【００４８】
＜２．長期臨床試験＞
前記の試験で有効性が確認されたアンペロプシン１５０ｍｇとキトサン１００ｍｇを含有するカプセル剤を用いて１２週間の長期間投与による臨床試験を行い、血中尿酸値及び尿中尿酸値に及ぼす効果を試験した。
（１）試験方法
１）試験試料
一日摂取量として、アンペロプシン１５０ｍｇとキトサン１００ｍｇを含有するカプセル剤及びプラセボを試験試料とした。
【００４９】
２）被験者
血清尿酸値が６．０ｍｇ／ｄＬ以上８．０ｍｇ／ｄＬ未満の日本人男性８０名（２０歳〜６５歳）を被験者とした。
なお試験はすべて専門の臨床検査施設においてヘルシンキ宣言に則って実施した。
【００５０】
被験者の選抜から試験終了までのフローを図５に示す。
同意を取得した被験者候補４１４例に対して、事前検査を実施し、８０例の被験者を選択し、この８０例をそれぞれプラセボ群、被験食品群に割付けた。
なお、この被験者８０例の内、被験食品群の１例はヘルニアのために摂取４週目検査後に同意を撤回し脱落した。また，プラセボ群の１例はクラミジア感染症を発症したため、試験責任医師は当該被験者の試験を中止した。
結果として、７８例が所定の試験スケジュールを完了した。
試験を完了した被験者のうち、所定の日誌への虚偽記載および制限事項の不遵守が見られた被験食品群の１例、試験期間中に高眼圧の治療を開始した被験食品群の１例の合計２例が事前に設定していた解析対象除外基準に該当したため除外した。なお、割付表の開鍵は解析対象者を決定した後に行った。
その結果、プラセボ群３９例、被験食品群３７例の合計７６例となった。
【００５１】
解析対象者の背景情報を下記の表５に示す。
【００５２】
【表５】
2019108313.tif 000008
【００５３】
いずれの項目についても、群間で背景情報の有意な差は認められなかった。
【００５４】
３）試験方法
試験は無作為化二重盲検プラセボ対照並行群間比較試験とした。
すなわち、試験に関与しない担当者が、乱数表を用いて無作為に被験者を被験食品群とプラセボ群の２群に割付け、摂取前検査を実施し、摂取前検査当日から、研究食品の摂取を開始させた。
摂取開始後、４週後、８週後および１２週後に被験者を来院させ検査を実施した。なお、各検査日前日から、蓄尿容器としてユリンメート（登録商標）Ｐ（住友ベークライト株式会社）を使用して２４時間蓄尿を実施し、尿酸排泄に関する各パラメータ評価に用いた。
試験期間中は、日誌に自覚症状、試験食品摂取有無および暴飲・暴食や医薬品・健康食品摂取などの指導内容逸脱の有無について記録させた。なお、検査来院日前３日間については、食事内容を記録させた。
【００５５】
４）検査項目
血清尿酸値の変化量、尿中尿酸排泄量、尿酸クリアランス、クレアチニンクリアランス、尿酸クリアランス−クレアチニンクリアランス比（R）を測定した。各パラメータは高尿酸血症・痛風の治療ガイドライン  第２版に記載の式で算出した。なお、計算に使用した体表面積はＤｕ  ｂｏｉｓらの方法で算出した。
【００５６】
統計解析は、対応のあるｔ検定にて行った。統計解析ソフトはＪＭＰ（登録商標）１２．０（ＳＡＳ社製）及びＭｉｃｒｏｓｏｆｔ  Ｅｘｃｅｌ  ２０１０（Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ社製）を使用した。 
【００５７】
（２）結果
摂取１２週目までの血清尿酸値の摂取前検査からの変化量の推移を下記の表６に示す。
【００５８】
【表６】
2019108313.tif 000009
【００５９】
被験食品群は摂取４週目以降、摂取前と比較し、血清尿酸値が殆ど上昇せず、８週目以降投与前より低下した。一方でプラセボ群では摂取開始後、血清尿酸値は徐々に上昇した。プラセボに対して被験食品群は、１２週目時点で統計的に有意に低値であった。
なお、本試験条件下における安全性に問題はなかった。
本試験によりアンペロプシン１５０ｍｇとキトサン１００ｍｇを含有するカプセル剤の摂取によって有意に血清尿酸値が低下することが確認された。
なお、試験に用いた組成物中のキトサン量の１００ｍｇ／日の摂取量は、これまでに血清尿酸値低減効果が報告されている用量である１．２２ｇ／日および１．８３ｇ／日と比較して低用量であることから、キトサンとアンペロプシンを組み合わせたことによる効率的な血清尿酸値低減効果の発現が考えられた。アンペロプシンはＡＢＣＧ２といった尿酸排泄トランスポーターへ影響し、尿酸排泄を促進する可能性も考えられるため、キトサンとアンペロプシンの組み合わせによって、プリン体吸収阻害、尿酸合成阻害、尿酸排泄促進という３つの機能で尿酸値を低下させると考えられた。
【図１】
2019108313.tif 000010
【図２】
2019108313.tif 000011
【図３】
2019108313.tif 000012
【図４】
2019108313.tif 000013
【図５】
2019108313.tif 000014