(57)【要約】【課題】細胞集合体の培養凹部からの飛び出しを防止できる細胞培養容器、細胞集合体を有する細胞培養容器、及び細胞集合体培養方法を提供する。【解決手段】細胞培養容器１は上方に開口する培養凹部１２を複数有し、培養凹部１２は、底面部１２ａと、該底面部１２ａの周縁から開口１２ｂに進むに従って該底面部１２ａからの高さが高くなる傾斜面を有する側面部１２ｃとを有する。底面部１２ａには、開口１２ｂに向かって延設する突起部１３が設けられている。突起部１３の底面部１２ａに対する高さｈ、及び突起部１３における横断面の最小幅ｄは、培養される細胞の最大幅以上である。【選択図】図１
2019050734.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
上方に開口する培養凹部を少なくとも一つ有する細胞培養容器であって、
前記培養凹部は、底面部と、該底面部の周縁から前記開口に進むに従って該底面部からの高さが高くなる傾斜面を有する側面部とを有し、
前記底面部には、前記開口に向かって延設する突起部が少なくとも一つ設けられ、
前記突起部の前記底面部に対する高さ、及び前記突起部における横断面の最小幅は、培養される細胞の最大幅以上であることを特徴とする細胞培養容器。
【請求項２】
前記底面部において、前記突起部は前記側面部から離れて設けられている請求項１に記載の細胞培養容器。
【請求項３】
前記底面部、前記側面部、及び前記突起部の外周面は、細胞非接着性の表面を有する請求項１又は２に記載の細胞培養容器。
【請求項４】
前記突起部の外周面には、該突起部の延設方向に延びるとともに、培養される細胞の最小幅よりも小さい幅を有する溝が複数設けられている請求項１〜３のいずれか一項に記載の細胞培養容器。
【請求項５】
前記突起部の外周面には、該突起部の延設方向に延びるリブが複数設けられている請求項１〜３のいずれか一項に記載の細胞培養容器。
【請求項６】
前記突起部は筒状を呈し、その筒壁には該突起部の内部と外部とを連通する連通孔が複数設けられている請求項１〜５のいずれか一項に記載の細胞培養容器。
【請求項７】
請求項１〜６のいずれか一項に記載の細胞培養容器と、
前記突起部を取り囲むように該突起部の周りに形成された細胞集合体と、
を備えることを特徴とする細胞集合体を有する細胞培養容器。
【請求項８】
請求項１〜６のいずれか一項に記載の細胞培養容器の前記培養凹部に、細胞を播種する第１工程と、
前記培養凹部の前記突起部の周りに細胞集合体を形成させる第２工程と、
を含むことを特徴とする細胞集合体培養方法。
【請求項９】
複数の細胞からなる細胞集合体であって、
内部に細胞の最大幅以上の空隙を有する空隙部が少なくとも一つ設けられていることを特徴とする細胞集合体。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示の実施形態は、細胞培養容器、細胞集合体を有する細胞培養容器、細胞集合体培養方法、及び細胞集合体に関する。
【背景技術】
【０００２】
再生医療及び創薬の研究において、生体内と同じ三次元組織を構築できる細胞集合体の三次元培養が注目されている。三次元培養方法として、例えば特許文献１に記載されているように、複数の培養凹部を有する培養容器に細胞の懸濁液を注入し、各培養凹部において均一サイズの細胞集合体を形成させることが知られている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】特開２０１０−８８３４７号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
しかし、上述した培養方法では、以下の問題が生じている。すなわち、懸濁液内を浮遊する細胞集合体が、通常では培養凹部の底面部に沈んだ状態になるが、運搬時の振動や懸濁液の対流等の原因で浮き上がって培養凹部から飛び出す可能性がある。培養凹部から飛び出した細胞集合体は、互いに接着して細胞集合体サイズが不均一になったり、懸濁液とともに吸引されたりする問題が生じている。
【０００５】
本開示の実施形態は、上記の点に鑑みてなされたものであり、細胞集合体の培養凹部からの飛び出しを防止できる細胞培養容器、細胞集合体を有する細胞培養容器、及び細胞集合体培養方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本開示の実施形態に係る細胞培養容器は、上方に開口する培養凹部を少なくとも一つ有する細胞培養容器であって、前記培養凹部は、底面部と、該底面部の周縁から前記開口に進むに従って該底面部からの高さが高くなる傾斜面を有する側面部とを有し、前記底面部には、前記開口に向かって延設する突起部が少なくとも一つ設けられ、前記突起部の前記底面部に対する高さ、及び前記突起部における横断面の最小幅は、培養される細胞の最大幅以上であることを特徴としている。
【０００７】
本開示の実施形態に係る細胞培養容器では、培養凹部の底面部に突起部が設けられているので、突起部の周りに形成された細胞集合体が該突起部に引っ掛かることになる。その結果、仮に運搬時の振動や懸濁液の対流等の原因で細胞集合体が浮き上がろうとしても、突起部に引っ掛かるため、細胞集合体の培養凹部からの飛び出しを防止することができる。加えて、突起部の底面部に対する高さ、及び突起部における横断面の最小幅は培養される細胞の最大幅以上であるので、形成された細胞集合体が突起部に引っ掛かりやすく、培養凹部からの飛び出し防止効果を更に高めることができる。
【０００８】
本開示の一実施形態に係る細胞培養容器において、前記底面部において、前記突起部は前記側面部から離れて設けられていることが好ましい。
【０００９】
また、本開示の一実施形態に係る細胞培養容器において、前記底面部、前記側面部、及び前記突起部の外周面は、細胞非接着性の表面を有することが好ましい。
【００１０】
また、本開示の一実施形態に係る細胞培養容器において、前記突起部の外周面には、該突起部の延設方向に延びるとともに、培養される細胞の最小幅よりも小さい幅を有する溝が複数設けられていることが好ましい。
【００１１】
また、本開示の一実施形態に係る細胞培養容器において、前記突起部の外周面には、該突起部の延設方向に延びるリブが複数設けられていることが好ましい。
【００１２】
更に、本開示の一実施形態に係る細胞培養容器において、前記突起部は筒状を呈し、その筒壁には該突起部の内部と外部とを連通する連通孔が複数設けられていることが好ましい。
【００１３】
本開示の実施形態に係る細胞集合体を有する細胞培養容器は、上述の細胞培養容器と、前記突起部を取り囲むように該突起部の周りに形成された細胞集合体と、を備えることを特徴としている。
【００１４】
本開示の実施形態に係る細胞集合体培養方法は、上述した細胞培養容器の前記培養凹部に、細胞を播種する第１工程と、前記培養凹部の前記突起部の周りに細胞集合体を形成させる第２工程と、を含むことを特徴としている。
【００１５】
本開示の実施形態に係る細胞集合体は、複数の細胞からなる細胞集合体であって、内部に細胞の最大幅以上の空隙を有する空隙部が少なくとも一つ設けられていることを特徴としている。
【発明の効果】
【００１６】
本開示によれば、細胞集合体の培養凹部からの飛び出しを防止することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】（ａ）は第１実施形態の細胞培養容器を示す平面図であり、（ｂ）は（ａ）のＡ−Ａ線に沿う断面図である。
【図２】培養凹部に形成された細胞集合体を示す模式図である。
【図３】細胞集合体の形状を示す模式図である。
【図４】突起部の変形例を示す断面図である。
【図５】突起部の変形例を示す断面図である。
【図６】（ａ）突起部の変形例を示す斜視図であり、（ｂ）は突起部の変形例を示す平面図である。
【図７】（ａ）突起部の変形例を示す斜視図であり、（ｂ）は突起部の変形例を示す平面図である。
【図８】（ａ）突起部の変形例を示す斜視図であり、（ｂ）は突起部の変形例を示す平面図である。
【図９】（ａ）は第２実施形態の細胞培養容器の突起部を示す拡大断面図であり、（ｂ）は突起部を示す斜視図である。
【図１０】第３実施形態の細胞培養容器の突起部を示す拡大断面図である。
【図１１】（ａ）は第４実施形態の細胞培養容器を示す平面図であり、（ｂ）は（ａ）のＢ−Ｂ線に沿う断面図である。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
以下、図面を参照して本発明に係る細胞培養容器の実施形態を説明する。図面の説明において同一の要素には同一符号を付し、重複説明は省略する。また、以下の説明では、上下、左右及び前後の位置、方向は、細胞培養容器の通常の使用状態における位置及び方向である。更に、各図において、各構成部の間の距離などは、発明の理解を容易にするために、実際の製品の寸法に比べて大きく或いは小さく描かれる場合がある。
【００１９】
＜第１実施形態＞
図１（ａ）は第１実施形態の細胞培養容器を示す平面図であり、図１（ｂ）は図１（ａ）のＡ−Ａ線に沿う断面図である。本実施形態の細胞培養容器１は、三次元組織を有する細胞集合体の三次元培養に用いられるものであり、内部に複数の培養凹部１２が設けられた有底円筒状の容器である。
【００２０】
本実施形態の細胞集合体とは、細胞の分裂や増殖、又は／及び、複数の細胞の凝集や接着などによって形成された細胞の塊を意味する。ここでの細胞としては、集合体を形成可能であれば特に限定されず、例えば接着性を有する細胞等が挙げられる。そして、接着性を有する細胞として、肝臓癌細胞、肝芽腫細胞、ヘパトーマ細胞、肝臓の実質細胞である肝細胞、クッパー細胞、血管内皮細胞や角膜内皮細胞などの内皮細胞、繊維芽細胞、骨芽細胞、砕骨細胞、歯根膜由来細胞、表皮角化細胞などの表皮細胞、気管上皮細胞、消化管上皮細胞、子宮頸部上皮細胞、角膜上皮細胞などの上皮細胞、乳腺細胞、ペリサイト、平滑筋細胞や心筋細胞などの筋細胞、腎細胞、膵ランゲルハンス島細胞、末梢神経細胞や視神経細胞などの神経細胞、軟骨細胞、骨細胞、又は幹細胞、ＥＳ細胞（胚性幹細胞）及びｉＰＳ細胞（人工多能性幹細胞）等が挙げられる。幹細胞は、例えば骨髄未分化間葉幹細胞、造血幹細胞、血管幹細胞、神経幹細胞、小腸幹細胞、脂肪幹細胞、皮膚幹細胞、歯周組織幹細胞、毛様体幹細胞、角膜輪部幹細胞、内臓幹細胞等である。
【００２１】
細胞培養容器１は、互いに平行に配置された上面１０ａと底面１０ｂとを有する略円板状の底部１０と、底部１０の周縁から立設された円筒状の側壁部１１とを備えており、底部１０と側壁部１１とで形成された空間に懸濁液（すなわち、培養液）を収容可能となっている。なお、本実施形態の細胞培養容器１は、蓋部を備えていないが、通常のシャーレと同様に蓋部を備えても良い。
【００２２】
底部１０には、細胞や細胞集合体を収容して培養するための培養凹部１２が複数（本実施形態では、９個）形成されている。これらの培養凹部１２は、いわゆるマイクロウェルであり、図１（ａ）に示すように前後方向及び左右方向に等間隔に配列されている。培養凹部１２は、断面が上方に開口した円錐台状を呈し、底部１０の上面１０ａと平行する底面部１２ａと、該底面部１２ａの周縁から培養凹部１２の開口１２ｂに進むに従って該底面部１２ａからの高さが高くなる傾斜面を有する側面部１２ｃとを有する。
【００２３】
底面部１２ａには、開口１２ｂに向かって延設する円柱状の突起部１３が１つ設けられている。突起部１３は、底面部１２ａにおいて、周囲の側面部１２ｃから同じ距離で離れた中央位置に配置されている。そして、突起部１３の底面部１２ａに対する高さｈ、及び突起部１３の横断面の最小幅ｄ（すなわち、突起部１３の直径）は、培養される細胞の最大幅以上である。
【００２４】
なお、本実施形態での細胞の最大幅は、細胞が球状の場合にその直径、球状でない場合にその最も幅が広い箇所の寸法を指す。また、横断面は前後左右方向に展開する断面を指す。
【００２５】
好適には、培養凹部１２の底面部１２ａ及び側面部１２ｃ、突起部１３の外周面は細胞非接着性の表面を有する。細胞非接着性の表面とするためには、親水性の高い物質を用いても良く、又は界面活性剤、リン脂質、リン脂質・高分子複合体、アガロース、及びアルブミンなどのコーティング、プラズマ処理などの表面処理を行っても良い。そして、親水性の高い物質としては、ポリヒドロキシエチルメタクリレート、エチレンビニルアルコール共重合体、ポリ酢酸ビニルのケン化物、ポリビニルピロリドン、ポリエチレングリコール、ポリアクリルアミド、ポリメタアクリルアミド、ポリヒドロキシエチルメタアクリレート、ポリペンタエリスリトールトリアクリレート、ポリペンタエリスリトールテトラアクリレート、ポリジエチレングリコールジアクリレート等が挙げられる。
【００２６】
また、隣接する培養凹部１２同士の間には、平面部１４が介在されている。本実施形態では、平面部１４は、底部１０の上面１０ａと同一平面上に配置されているが、必要に応じて上面１０ａより高くしたり、低くしたりしても構わない。
【００２７】
該平面部１４において、隣接する培養凹部１２同士間の最小距離ｔは、培養される細胞の最小幅以下であることが好ましい。すなわち、図１（ａ）に示すように、前後方向及び左右方向に隣接する培養凹部１２同士間の距離ｔは、培養される細胞の最小幅以下である。このようにすれば、細胞が隣接する培養凹部１２同士の間に留まることを防止する効果を奏する。なお、ここでの細胞の最小幅は、細胞が球状の場合にその直径、球状でない場合にその最も幅が狭い箇所の寸法を指す。
【００２８】
以上のように構成された細胞培養容器１では、培養凹部１２の底面部１２ａに突起部１３が設けられているので、突起部１３の周りに形成された細胞集合体が該突起部１３に引っ掛かることになる。その結果、仮に運搬時の振動や懸濁液の対流等の原因で細胞集合体が浮き上がろうとしても、突起部１３に引っ掛かるため、細胞集合体の培養凹部１２からの飛び出しを防止することができる。加えて、突起部１３の高さｈ及び最小幅ｄが培養される細胞の最大幅以上であるので、形成された細胞集合体が突起部１３に引っ掛かりやすく、培養凹部１２からの飛び出し防止効果を更に高めることができる。
【００２９】
また、培養凹部１２の側面部１２ｃが開口１２ｂに進むに従って底面部１２ａからの高さが高くなる傾斜面を有するので、細胞集合体を形成する細胞を培養凹部１２の中心に集合させやすく、突起部１３を中心としてその周りに複数の細胞が繋がってなる浮輪状などの細胞集合体を形成させることができる。特に突起部１３が底面部１２ａの中央位置に配置されるので、底面部１２ａにおいて側面部１２ｃに近接する位置に突起部を設けた場合と比べて、複数の細胞が繋がってなる浮輪状の細胞集合体を形成させやすくなる。
【００３０】
また、従来では、細胞集合体が大きくなると、細胞集合体の中心部の細胞への酸素や栄養の供給が困難になり、中心部の細胞が酸素不足や栄養不足で死滅する可能性がある。本実施形態の細胞培養容器１では、突起部１３が設けられるので、懸濁液が突起部１３と細胞集合体との間の隙間に流れ込むことが可能になる。その結果、突起部１３の周りに位置する細胞に酸素や栄養を供給することができ、従来のように細胞集合体中心部の細胞が酸素不足や栄養不足に起因する死滅を抑制できるため、サイズの大きな細胞集合体を形成することが可能になる。
【００３１】
ここで、突起部１３は多孔質・ゲルなどの栄養透過性の物質によって形成されることが好ましい。このようにすれば、該突起部１３の周りに位置する細胞に酸素や栄養などの供給量を増やすことができるので、サイズの大きな細胞集合体を形成しやすくなる。そして、栄養透過性の物質としては、アルミナ、ジルコニア、チタニア、ハイドロキシアパタイト等の多孔質セラミック、アルギン酸ゲル、キトサンゲル、コラーゲンゲル、フィブリンゲル等が挙げられる。
【００３２】
なお、上述した培養凹部１２の寸法の一例を挙げると、例えば培養される細胞が球状であり、その直径が１０μｍの場合、培養凹部１２の底面部１２ａの直径が３００μｍ、開口１２ｂの直径が６００μｍ、培養凹部１２の深さが４００μｍである。突起部１３の高さｈ及び最小幅ｄが共に１０μｍ以上である。
【００３３】
そして、上述の細胞培養容器１を用いた細胞集合体培養方法は、細胞培養容器１の培養凹部１２に細胞を播種する第１工程と、培養凹部１２の突起部１３の周りに細胞集合体を形成させる第２工程とを含む。
【００３４】
具体的には、第１工程では、懸濁液を細胞培養容器１の内部に注入し、各培養凹部１２に懸濁液を充填させる。次に、培養対象である細胞を各培養凹部１２に入れる。ここで、細胞の分裂や増殖を利用して細胞集合体を形成させる場合には、例えばピペットで種細胞を培養凹部１２に入れる。一方、細胞の凝集や接着を利用して細胞集合体を形成させる場合には、複数の細胞を各培養凹部１２に入れる。
【００３５】
第２工程では、播種した細胞培養容器１をインキュベータ等に入れて所望の温度範囲及び湿度範囲で細胞の培養を行う。そして、細胞の分裂や増殖又は／及び複数の細胞の凝集や接着によって、突起部１３の周りに浮輪状の細胞集合体２０が形成される（図２（ａ）参照）。この浮輪状の細胞集合体２０を更に培養すると、細胞が突起部１３の高さを越えていき、突起部１３の周りだけでなく、上方からも該突起部１３を被せるような細胞集合体２０Ａが形成される（図２（ｂ）参照）。
【００３６】
培養終了後に細胞集合体２０，２０Ａを回収するとき、形成された細胞集合体２０，２０Ａをピンセット等で掴んで直接取り出しても良く、或いは形成された細胞集合体２０，２０Ａに液を直接当てて、該細胞集合体２０，２０Ａを浮上させてから吸い取っても良い。
【００３７】
このような細胞集合体培養方法では、培養凹部１２の底面部１２ａに突起部１３が設けられているので、突起部１３の周りに形成された細胞集合体２０，２０Ａが該突起部１３に引っ掛かることになる。その結果、仮に運搬時の振動や懸濁液の対流等の原因で細胞集合体２０，２０Ａが浮き上がろうとしても、突起部１３に引っ掛かるため、細胞集合体２０，２０Ａの培養凹部１２からの飛び出しを防止することができる。
【００３８】
そして、この培養方法により形成された細胞集合体の特徴として、細胞集合体の内部に細胞の最大幅以上の空隙を有する空隙部が形成されることである。ここで、内部に細胞の最大幅以上の空隙を有する空隙部は、図３（ａ）に示すように空隙部２１が細胞集合体２０を貫通するものと、図３（ｂ）に示すように空隙部２１Ａが細胞集合体２０Ａを貫通せずに所定の深さまでに留まるものとを含む。
【００３９】
具体的には、図３（ａ）に示す細胞集合体２０は、複数の細胞から構成された三次元組織を有しており、その内部において培養時に突起部１３に対応する位置には、略円柱状の空隙部２１が形成されている。空隙部２１は、細胞集合体２０を貫通しており、培養される細胞の最大幅以上の空隙を有する。
【００４０】
また、図３（ｂ）に示す細胞集合体２０Ａは、複数の細胞から構成された三次元組織を有しており、その内部において培養時に突起部１３に対応する位置には、陥没した空隙部２１Ａが形成されている。空隙部２１Ａは、略円柱状を呈し、細胞集合体２０Ａを貫通しておらず、所定の深さまで細胞集合体２０Ａの内部に入っている。そして、空隙部２１Ａの空隙は培養される細胞の最大幅以上である。
【００４１】
また、細胞集合体を有する細胞培養容器は、上述の構造を有する細胞培養容器１と、培養凹部１２の突起部１３を取り囲むように該突起部１３の周りに形成された細胞集合体２０，２０Ａとを備える。
【００４２】
なお、突起部については、上述した円柱状のほか、様々な変形例も考えられる。例えば図４（ａ）に示す変形例では、底面部１２ａに設けられた突起部１３Ａは、円錐台状を呈する。突起部１３Ａにおける横断面の最小幅ｄは、円錐台の上底の直径である。なお、ここで、円錐台状のほか、突起部１３Ａを角錐台状としても良い。
【００４３】
また、図４（ｂ）に示す変形例では、底面部１２ａに設けられた突起部１３Ｂは、開口１２ｂに向かって延設しながら湾曲している。このようにすれば、形成された細胞集合体が突起部１３Ｂに引っ掛かりやすくなるので、細胞集合体の飛び出し防止効果を更に高めることができる。
【００４４】
また、図５（ａ）に示す変形例では、底面部１２ａに設けられた突起部１３Ｃは、開口１２ｂに向かって延設しながら「く」字状に折れ曲がっている。このようにすれば、形成された細胞集合体が突起部１３Ｃに引っ掛かりやすくなるので、細胞集合体の飛び出し防止効果を更に高めることができる。
【００４５】
また、図５（ｂ）に示す変形例では、突起部１３の外周面には、複数の枝部１５が更に設けられている。このようにすれば、突起部１３に加えて、形成された細胞集合体が更に枝部１５に引っ掛かるので、細胞集合体の飛び出し防止効果を一層高めることができる。
【００４６】
また、図示しないが、突起部１３は、更に横断面が楕円状、三角形や四角形等の多角形状であっても良い。
【００４７】
更に、図６に示す変形例では、突起部１３Ｄの外周面に複数のリブ１８が設けられている。これらのリブ１８は、突起部１３Ｄの周方向に等間隔に配置されるとともに、該突起部１３Ｄの延設方向に沿って一端から他端まで延びている。このようにリブ１８を設けることで、隣接するリブ１８同士間に溝が複数形成される。これらの溝は懸濁液の流路になる。そして、懸濁液が該流路に沿って突起部１３Ｄの一端から他端まで流れることができ、突起部１３Ｄの周りに位置する細胞集合体の細胞に酸素や栄養を供給することができる。その結果、サイズの大きな細胞集合体を形成することが可能になる。
【００４８】
この場合において、細胞が隣接するリブ１８同士間に形成された溝に入り込むと、懸濁液の流路を塞ぐ可能性がある。これを防止するために、突起部１３Ｄの周方向に隣接するリブ１８同士間の最大距離ｒ（図６（ｂ）参照）を培養される細胞の最小幅よりも小さくすることが好ましい。
【００４９】
例えば図７に示すように、突起部１３Ｅの外周面に複数の溝１７が設けられている。これらの溝１７は、突起部１３Ｅの周方向に沿って等間隔に配置されるとともに、該突起部１３Ｅの延設方向に沿って一端から他端まで延びている。このように溝１７を設けることで、懸濁液が溝１７に沿って突起部１３Ｅの一端から他端まで流れることができる。すなわち、これらの溝１７は懸濁液の流路になる。そして、酸素や栄養がこの流路を介して突起部１３Ｅの周りに位置する細胞集合体の細胞に供給されるので、サイズの大きな細胞集合体を形成することができる。
【００５０】
溝１７の溝幅は培養される細胞の最小幅よりも小さい。このようにすることで、細胞が溝１７に入り込むことを抑制し、細胞による流路の塞ぎを防止することができる。
【００５１】
更に、図８に示す変形例では、突起部１３Ｆの外周面に複数のリブ２２ａ，２２ｂが設けられているが、これらのリブ２２ａ，２２ｂは突起部１３Ｆの周方向に等間隔に配置されておらず、相対的に近接する２つのリブ２２ａ，２２ｂがリブ組２２を構成する。このように構成された４つのリブ組２２が周方向に略９０度の間隔で配置されている。そして、周方向に相対的に近接するリブ２２ａ，２２ｂ同士間の最大距離ｒ１（図８（ｂ）参照）は培養される細胞の最小幅よりも小さいが、隣接するリブ組２２同士間の最大距離ｒ２は培養される細胞の最小幅よりも大きい。このような構造を有する突起部１３Ｆは、上述した図６に示す変形例と同じ作用効果を得られる。
【００５２】
＜第２実施形態＞
図９（ａ）は第２実施形態の細胞培養容器の突起部を示す拡大断面図であり、図９（ｂ）は突起部を示す斜視図である。本実施形態の細胞培養容器２は、突起部１６の構造において上述の第１実施形態と異なっている。その他の構成は、第１実施形態と同様であるため、重複説明を省略する。
【００５３】
具体的には、底面部１２ａに形成された突起部１６は円筒状を呈し、その筒壁には該突起部１６の内部と外部とを連通する連通孔１６ａが複数形成されている。これらの連通孔１６ａは、突起部１６の延設方向に等間隔に配置されている。このようにすれば、懸濁液が突起部１６の開口端から突起部１６の内部に流れ込み、各連通孔１６ａを通って突起部１６の外部に流れて、突起部１６の周りに位置する細胞集合体の細胞に酸素や栄養を供給することができる。その結果、サイズの大きな細胞集合体を形成することが可能になる。
【００５４】
なお、連通孔１６ａは突起部１６の筒壁の全範囲にわたって形成する必要がなく、少なくとも突起部１６の根元部分（すなわち、底面部１２ａに近接する部分）に設ければ良い。
【００５５】
＜第３実施形態＞
図１０は第３実施形態の細胞培養容器の突起部を示す拡大断面図である。本実施形態の細胞培養容器３は、突起部１３の数において上述の第１実施形態と異なっている。その他の構成は、第１実施形態と同様であるため、重複説明を省略する。
【００５６】
すなわち、底面部１２ａには、突起部１３が所定の間隔で前後方向及び左右方向に沿って複数設けられている。このようにすれば、細胞集合体の飛び出し防止効果を更に高めることができるとともに、懸濁液が突起部１３と細胞集合体との間の隙間に流れ込むルートが多くなるので、内部細胞への栄養や酸素の供給が良くなり、よりサイズの大きな細胞集合体を形成することができる。なお、ここでは、複数の突起部１３を所定の間隔で千鳥状に配置しても良く、あるいは規則性のないランダムな配列にしても良い。また、この場合において、形成された細胞集合体の内部には、空隙部が複数形成されることになる。
【００５７】
＜第４実施形態＞
図１１（ａ）は第４実施形態の細胞培養容器を示す平面図であり、図１１（ｂ）は図１１（ａ）のＢ−Ｂ線に沿う断面図である。本実施形態の細胞培養容器４は、容器全体の形状及び培養凹部の形状において上述の第１実施形態と異なっている。その他の構成は、第１実施形態と同様であるため、重複説明を省略する。
【００５８】
図１１（ａ）及び図１１（ｂ）に示すように、細胞培養容器４は、略平板状の底部４０と、該底部４０の四周から立設された枠状の側壁部４１とを備える。底部４０には、複数の培養凹部４２が一方向（図１１（ａ）においては左右方向）に沿って並設されている。培養凹部４２は、断面が上方に開口した角錐台状を呈し、一方向と直交する方向（図１１（ａ）においては前後方向）に延設されている。この培養凹部４２は、その延設方向に延びる底面部４２ａと、該底面部４２ａの四周から培養凹部４２の開口４２ｂに進むに従って底面部４２ａからの高さが高くなる傾斜面を有する側面部４２ｃとを有する。培養凹部４２の底面部４２ａには、開口４２ｂに向かって延びる突起部１３が複数設けられている。本実施形態においては、これらの突起部１３は、培養凹部４２の延設方向に等間隔に配置されているが、必要に応じて所定の間隔で千鳥状に配置されても良く、規則性のないランダムに配置されても良い。
【００５９】
このように構成された細胞培養容器４は、上述の第１実施形態と同じ作用効果を得られる。そして、該細胞培養容器４を用いて形成された細胞集合体は、三次元組織を有する長尺状のものになり、その内部において各突起部１３に対応する位置には、断面略円形状の空隙部がそれぞれ形成される。
【００６０】
以上、本発明の実施形態について詳述したが、本発明は、上記の実施形態に限定されるものではなく、特許請求の範囲に記載された本発明の精神を逸脱しない範囲で、種々の設計変更を行うことができるものである。例えば、本発明は培養凹部を１つしか設けない細胞培養容器にも適用される。
【符号の説明】
【００６１】
１，２，３，４    細胞培養容器
１０，４０    底部
１０ａ    上面
１０ｂ    底面
１１，４１    側壁部
１２，４２    培養凹部
１２ａ，４２ａ    底面部
１２ｂ，４２ｂ    開口
１２ｃ，４２ｃ    側面部
１３，１３Ａ，１３Ｂ，１３Ｃ，１３Ｄ，１３Ｅ，１３Ｆ，１６    突起部
１４    平面部
１５    枝部
１７    溝
１８，２２ａ，２２ｂ    リブ
２０，２０Ａ    細胞集合体
２１，２１Ａ    空隙部
２２    リブ組
【図１】
2019050734.tif 000003
【図２】
2019050734.tif 000004
【図３】
2019050734.tif 000005
【図４】
2019050734.tif 000006
【図５】
2019050734.tif 000007
【図６】
2019050734.tif 000008
【図７】
2019050734.tif 000009
【図８】
2019050734.tif 000010
【図９】
2019050734.tif 000011
【図１０】
2019050734.tif 000012
【図１１】
2019050734.tif 000013