(57)【要約】【課題】肺状態および他の状態の処置を提供すること【解決手段】Ｘ１−Ｌ−Ｘ２（式中、Ｌは、エノンを含む連結部分であり、Ｘ１およびＸ２はそれぞれ独立して、必要に応じて置換されているＮ−複素環である）の構造を有する化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくはエステルが開示される。また、上記化合物を用いて、肺状態および他の臓器または系統状態を治療する方法も開示される。本明細書中に開示するさらなる実施形態は、親水性チオールと少なくとも２つのＮ−複素環を含むエノンとの付加体を含む化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくはエステルに関する。【選択図】  図１
2019108374.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
化合物またはその薬学的に許容される塩を含む組成物であって、該組成物は、対象においてＮＦ−κＢ活性を処置し阻害することにおける、対象において肺線維芽細胞増殖を阻害することにおける、対象において筋線維芽細胞分化を阻害することにおける、対象の肺組織において酸化剤を阻害することにおける、対象において移植臓器の急性または慢性拒絶反応を改善または防止することにおける、転写因子Ｎｒｆ２の活性のアップレギュレーションによって対象の内因性抗酸化活性を増加させることにおける、対象において肺コラーゲン沈着を阻害することにおける、対象においてアレルゲンに対する炎症応答を減少させることにおける、対象において炎症性、刺激性または細胞障害性作用物質に対する炎症応答を減少させることにおける、対象において気管支収縮薬に対するアレルゲン誘導性過剰応答を減少させることにおける、対象においてアレルゲン誘導性気道リモデリングを減少させることにおける、対象において肺血管系の低酸素誘導性リモデリングを減少させることにおける、または肺がん細胞において増殖を減少させ、そしてアポトーシスを誘導することにおける使用のための組成物であり、ここで、該化合物は、以下：
【化４０】
2019108374.tif 000160
（式中、
【化４１】
2019108374.tif 000161
は、単結合を表し、
Ａは、ＣＨ（Ｓ−Ｒ５）であり、Ｒ５は、アシルアミノ置換カルボキシルアルキル、スルホネート置換アルキルまたはアシルアミノ置換アミドであり、そして
Ｘ１およびＸ２はそれぞれ独立して、必要に応じて置換されているピラジニルであるかまたはＸ１およびＸ２はそれぞれ必要に応じて置換されているピリミジニルである）の構造を有する、
組成物。
【請求項２】
Ｘ１が、
【化５６】
2019108374.tif 000162
の構造を有し、Ｘ２が、
【化５７】
2019108374.tif 000163
の構造を有し、
式中、Ｚ１およびＺ３はそれぞれ、Ｎであるか、またはＺ１およびＺ２はそれぞれＮであり、そして
Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４およびＹ５はそれぞれ独立して、Ｈ、必要に応じて置換されているアルキル、アミノ、ヒドロキシル、必要に応じて置換されているアルコキシ、必要に応じて置換されているチオール、アシルまたはハロゲンである、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記化合物が、
【化５９】
2019108374.tif 000164
の構造を有し、
式中、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４およびＹ５はそれぞれ独立して、Ｈ、必要に応じて置換されているアルキル、アミノ、ヒドロキシル、必要に応じて置換されているアルコキシ、必要に応じて置換されているチオール、アシルまたはハロゲンである、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
Ｘ１およびＸ２が、それぞれ同じである、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
Ｘ１およびＸ２が、それぞれ異なる、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
前記化合物が、以下の構造：
【化１】
2019108374.tif 000165
の構造を有する、請求項１に記載の組成物。
【請求項７】
Ｘ１およびＸ２が、それぞれ必要に応じて置換されているピラジニルである、請求項１に記載の組成物。
【請求項８】
Ｒ５が、アシルアミノ置換カルボキシルアルキルである、請求項１に記載の組成物。
【請求項９】
Ｒ５が、スルホネート置換アルキルである、請求項１に記載の組成物。
【請求項１０】
Ｒ５が、アシルアミノ置換アミドである、請求項１に記載の組成物。
【請求項１１】
化合物またはその薬学的に許容される塩を含む組成物であって、該組成物は、対象においてＮＦ−κＢ活性を処置し阻害することにおける、対象において肺線維芽細胞増殖を阻害することにおける、対象において筋線維芽細胞分化を阻害することにおける、対象の肺組織において酸化剤を阻害することにおける、対象において移植臓器の急性または慢性拒絶反応を改善または防止することにおける、転写因子Ｎｒｆ２の活性のアップレギュレーションによって対象の内因性抗酸化活性を増加させることにおける、対象において肺コラーゲン沈着を阻害することにおける、対象においてアレルゲンに対する炎症応答を減少させることにおける、対象において炎症性、刺激性または細胞障害性作用物質に対する炎症応答を減少させることにおける、対象において気管支収縮薬に対するアレルゲン誘導性過剰応答を減少させることにおける、対象においてアレルゲン誘導性気道リモデリングを減少させることにおける、対象において肺血管系の低酸素誘導性リモデリングを減少させることにおける、または肺がん細胞において増殖を減少させ、そしてアポトーシスを誘導することにおける使用のための組成物であり、ここで、該化合物が、以下の構造：
【化５】
2019108374.tif 000166
【化６】
2019108374.tif 000167
【化７】
2019108374.tif 000168
【化８】
2019108374.tif 000169
【化９】
2019108374.tif 000170
【化１０】
2019108374.tif 000171
【化１１】
2019108374.tif 000172
【化１２】
2019108374.tif 000173
【化１３】
2019108374.tif 000174
【化１４】
2019108374.tif 000175
【化１５Ａ】
2019108374.tif 000176
または
【化１５Ｂ】
2019108374.tif 000177
を有する、
組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２０１３年５月１０日に出願された米国仮特許出願第６１／８２２２２４号の利益を主張し、当該出願はその全体が参考として本明細書に援用される。
【０００２】
政府支援の認定
本発明は、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈによって与えられた認定番号ＨＬ０９３１９６の下で政府支援によってなされた。政府は、本発明に対して一定の権利を有する。
【背景技術】
【０００３】
肺は、その極めて重要なガス交換機能に関して肺胞毛細血管界面などの繊細な構造に依存しているにもかかわらず、吸気中の毒素および刺激物に日常的に曝露されている、臓器である。肺はまた、身体の他の部分での感染および撹乱により生成される毒素および炎症産物により損傷を受けることがある。したがって、肺は多種多様の疾患に罹りやすく、それらの多くに関して、病因は完全には知られていない。これらの疾患および状態の幾つかは、利用可能な有効な治療を有しており、これらの治療は、ステロイド、他の抗炎症剤、小分子または治療用抗体の投与を含み得る。しかしながら、幾つかの疾患および状態、ならびに他の状態を有する患者の部分集合に関して、全ての利用可能な治療の有効性が限られている。多くの場合で最も一般的に用いられる治療は、副腎皮質ステロイドの投与であり、これは多くの場合、著しい副作用を伴う。
【０００４】
肺線維症は、放射線への曝露、感染、炎症プロセスまたは自己免疫障害に起因し得る肺疾患である。特発性肺線維症（ＩＰＦ）として知られる他の場合では、原因は未知である。誘発性発作にかかわらず、結果は、制御不可能な炎症、免疫活性、肺傷害／修復、および肺を損傷する線維性プロセスである。これらの疾患で見られる肺の瘢痕は、肺が酸素を血液へ移動させる能力を低減させ、低酸素血症を引き起こす。肺線維症に関する治療の主な目的は、炎症および傷害を低減させて、肺修復を高め、したがって不可逆的な線維症をもたらす異常プロセスを停止させることである。肺線維症に関する現在利用可能な治療法は非常に限られている。
【０００５】
慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）は、ますます大きな問題となっている。患者は、咳、粘液の過剰生成、および気管支炎または肺気腫と関連し得る呼吸困難の症状を示す。気管支炎は、気道の炎症を表す一方で、肺気腫は、炎症プロセスの一部として放出される酸化剤およびプロテアーゼにより肺実質の破壊を表すより進行した疾患である。ＣＯＰＤの発症は、長年にわたる喫煙または環境毒素への曝露に起因すると考えられる場合が最も多いが、疾患は、禁煙後でさえも進行し続ける。ＣＯＰＤの病態生理学はまた、ＨＤＡＣ（ヒストンデアセチラーゼ）酵素活性の低減により媒介される「ステロイド耐性」を特色とする。結果として、最も一般的に使用される抗炎症性薬は、ほとんど効果がなく、進行を停止させることは不可能である。ＣＯＰＤに利用可能な唯一の治療は、症状を緩和する薬物の投与である。
【０００６】
多くの場合ＣＯＰＤの症状と重複する症状を伴う肺疾患は、喘息である。喘息における気道炎症は、様々な免疫系細胞の活性化を特徴とする。喘息の病理学は、組織好酸球増多症およびＩｇＥ産生の増加とともに、主として適応免疫と関連付けられるＴｈ２クラスの多数のサイトカインの産生の増加を特色とする。喘息の診断上の特色は、メタコリンなどの気管支収縮薬に対する気道の過剰応答である。喘息に関する最も有効な治療法は、依然として、通常吸入により投与される副腎皮質ステロイドである。気管支拡張薬もまた、副
腎皮質ステロイドと頻繁に併用して用いられる。しかしながら、患者によっては、副腎皮質ステロイドに応答しない「ステロイド耐性」喘息を呈するものもいる。
【０００７】
嚢胞性線維症は、上皮細胞の膜における塩化物イオンチャネルに影響を及ぼす遺伝子疾患である。塩化物イオン輸送の欠如は、濃い粘性分泌物の生成をもたらす。多くの分泌物の中でも、肺における粘液生成に影響を及ぼす。嚢胞性線維症の顕著な特色は、同様に疾患の特色である頻発する感染にほんの部分的に起因する炎症である。この好中球に富んだ炎症は、最終的に死に至る、肺機能が徐々に失われることにおける要因の１つである。肺機能低下の軽減に関与する治療法は限られている。
【０００８】
ＡＬＩ（急性肺傷害）およびＡＲＤＳ（急性呼吸窮迫症候群）は、肺にとって内因性または外因性のいずれかの多種多様な傷害に起因し得る肺疾患である。急性期では、露出した基底膜上でのタンパク質に富んだヒアリン膜の形成とともに、気管支および肺胞上皮細胞の両方の脱落（ｓｌｏｕｇｈｉｎｇ）が見られる。このことは、損傷した毛細血管内皮へ付着して、間質から気腔へと遊走する好中球を伴う炎症を招く。気腔では、肺胞マクロファージが、炎症性サイトカインを分泌して、これらは、走化性を刺激して、酸化剤、プロテアーゼ、ロイコトリエン、および血小板活性化因子などの他の炎症性分子を放出する好中球を活性化するように局所的に作用する。酸化剤およびプロテアーゼは、より多くの傷害を生じ、そのサイクルが続く。ＡＬＩ／ＡＲＤＳに関する認可された薬理学的治療法はない。
【０００９】
虚血再灌流傷害は、血流が、酸素が欠乏している臓器に戻る際に起きる。虚血、続く再灌流は、臓器移植では不可避であるが、心筋梗塞および発作などの状態も付随する。関与するメカニズムは複雑であるが、炎症の関与および活性酸素種の関連生成が一般的である。活性酸素種は、多くの細胞の構成成分に損傷を与え得る強力な酸化剤である。臓器は、限られた期間の虚血に持ち堪えることができるに過ぎず、その後再灌流時に傷害を被る。移植前の処置によりこの期間を延長させる試みは、成功が限られており、移植後の処置は、さらに有用性が低くなるようである。虚血の許容可能な期間を延長させる最も有効な現行法は、採取と再移植との間の期間中に臓器の代謝率を低減させることによるものである。
【００１０】
肺高血圧は、特異的に肺の血管系における異常に高い血圧と定義される。肺高血圧は通常、肺血流または酸素供給を制限する状態に続発するが、同定可能な原因なしでも起こり得る。病因の重要な特色は、適切なアポトーシスの欠如を伴う血管細胞の異常増殖である。現在の管理は、血管拡張薬および症状低減戦略に焦点を当てているが、細胞増殖および他の経路を阻止する化合物が目下研究されている。
【００１１】
肺がんは、米国におけるがん死亡の有力な原因であり、５年程度生存しているのは、肺がんと診断された患者のほんの１６％に過ぎない。肺がん全ての８０％〜９０％が、たばこの煙の結果であると推定される。肺がんを誘導し得る他の環境的発がん物質と同様に、たばこの煙の中の発がん物質は、罹患細胞の制御されない増殖を招き、またそれらが正常な組織に浸潤するのを可能にする突然変異を引き起こす。治療は、手術、放射線および化学療法であり、関与するがんの特異的なタイプにある程度依存して選択されるが、いまだ伝播していない腫瘍の外科的除去のみが、長期生存に対する任意の期待を提供する。乏しい長期生存統計学が示すように、より良好な治療が必要である。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本明細書中に開示する一実施形態は、
Ｘ１−Ｌ−Ｘ２
（式中、Ｌは、エノンを含む連結部分であり、
Ｘ１およびＸ２はそれぞれ独立して、必要に応じて置換されているＮ−複素環である）
の構造を有する化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくはエステルに関する。
【００１３】
本明細書中に開示するさらなる実施形態は、親水性チオールと少なくとも２つのＮ−複素環を含むエノンとの付加体を含む化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくはエステルに関する。
本明細書中に開示するさらなる実施形態は、
【化１】
2019108374.tif 000003
（式中、
【化２】
2019108374.tif 000004
は、単結合または二重結合を表し、
Ａは、
【化３】
2019108374.tif 000005
が二重結合である場合にはＣＨであり、または
【化４】
2019108374.tif 000006
が単結合である場合にはＣＨ（Ｓ−Ｒ５）であり、Ｒ５は、ペプチド、アミノ酸、アミノ酸誘導体、必要に応じて置換されているアルキル、必要に応じて置換されているアルケニル、必要に応じて置換されているアルキニル、必要に応じて置換されているシクロアルキル、または必要に応じて置換されているシクロアルケニルであり、
Ｘ１およびＸ２はそれぞれ独立して、必要に応じて置換されているＮ−複素環である）、または
【化５】
2019108374.tif 000007
（式中、
【化６】
2019108374.tif 000008
は、単結合または二重結合を表し、
Ａは、
【化７】
2019108374.tif 000009
が二重結合である場合にはＣＨであり、または
【化８】
2019108374.tif 000010
が単結合である場合にはＣＨ（Ｓ−Ｒ５）であり、Ｒ５は、ペプチド、アミノ酸、アミノ酸誘導体、必要に応じて置換されているアルキル、必要に応じて置換されているアルケニル、必要に応じて置換されているアルキニル、必要に応じて置換されているシクロアルキル、または必要に応じて置換されているシクロアルケニルであり、
Ｘ１およびＸ２はそれぞれ独立して、必要に応じて置換されているＮ−複素環であり、
Ｒ１、Ｒ２およびＲ３はそれぞれ独立して、ＣまたはＮである）、または
【化９】
2019108374.tif 000011
（式中、
【化１０】
2019108374.tif 000012
は、単結合または二重結合を表し、
Ａは、
【化１１】
2019108374.tif 000013
が二重結合である場合にはＣＨであり、または
【化１２】
2019108374.tif 000014
が単結合である場合にはＣＨ（Ｓ−Ｒ５）であり、Ｒ５は、ペプチド、アミノ酸、アミノ酸誘導体、必要に応じて置換されているアルキル、必要に応じて置換されているアルケニル、必要に応じて置換されているアルキニル、必要に応じて置換されているシクロアルキル、または必要に応じて置換されているシクロアルケニルであり、
Ｘ１およびＸ２はそれぞれ独立して、必要に応じて置換されているＮ−複素環であり、
Ｒ１は、ＣまたはＮである）、または、
【化１３】
2019108374.tif 000015
（式中、
【化１４】
2019108374.tif 000016
は、単結合または二重結合を表し、
Ａは、
【化１５】
2019108374.tif 000017
が二重結合である場合にはＣＨであり、または
【化１６】
2019108374.tif 000018
が単結合である場合にはＣＨ（Ｓ−Ｒ５）であり、Ｒ５は、ペプチド、アミノ酸、アミノ酸誘導体、必要に応じて置換されているアルキル、必要に応じて置換されているアルケニル、必要に応じて置換されているアルキニル、必要に応じて置換されているシクロアルキル、または必要に応じて置換されているシクロアルケニルであり、
Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立して、ＣまたはＮであり、
Ｘ１およびＸ２はそれぞれ独立して、必要に応じて置換されているＮ−複素環である）
の構造を有する化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくはエステルに関する。
【００１４】
また、本明細書中に開示する化合物および少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物が本明細書中に開示される。
【００１５】
対象において肺疾患を治療する方法であって、治療有効量の本明細書中に開示する化合物または医薬組成物を、それを必要とする前記対象に投与することを含む方法がさらに開示される。
【００１６】
対象において虚血再灌流状態を治療する方法であって、治療有効量の本明細書中に開示する化合物または医薬組成物を、それを必要とする前記対象に投与することを含む方法がさらに開示される。
【００１７】
また、対象においてＮＦ−κＢ活性を阻害する方法であって、阻害量の本明細書中に開示する化合物または医薬組成物を、それを必要とする前記対象に投与することを含む方法が開示される。
【００１８】
対象において肺線維芽細胞増殖を阻害する方法であって、阻害量の本明細書中に開示する化合物または医薬組成物を、それを必要とする前記対象に投与することを含む方法がさらに開示される。
【００１９】
さらに、対象において筋線維芽細胞分化を阻害する方法であって、阻害量の本明細書中に開示する化合物または医薬組成物を、それを必要とする前記対象に投与することを含む方法が開示される。
【００２０】
また、対象の肺組織において酸化剤を阻害する方法であって、治療有効量の本明細書中に開示する化合物または医薬組成物を、それを必要とする前記対象に投与することを含む方法が開示される。
【００２１】
対象において移植臓器の急性または慢性拒絶反応を改善または防止する方法であって、治療有効量の本明細書中に開示する化合物または医薬組成物を、それを必要とする前記対象に投与することを含む方法がさらに開示される。
【００２２】
さらに、転写因子Ｎｒｆ２の活性のアップレギュレーションによって患者の内因性抗酸化活性を増加させる方法であって、治療有効量の本明細書中に開示する化合物または医薬組成物を、それを必要とする前記対象に投与することを含む方法が開示される。
【００２３】
また、対象において肺コラーゲン沈着を阻害する方法であって、治療有効量の本明細書中に開示する化合物または医薬組成物を、それを必要とする前記対象に投与することを含む方法が開示される。
【００２４】
肺がん細胞において増殖を減少させ、アポトーシスを誘導する方法であって、前記細胞を、有効量の本明細書中に開示する化合物または医薬組成物と接触させることを含む方法がさらに開示される。
【００２５】
さらに、肺胞マクロファージの貪食作用能（ｐｈａｇｏｃｙｔｏｔｉｃ  ａｂｉｌｉｔｙ）を改善する方法であって、前記マクロファージを、有効量の本明細書中に開示する化合物または医薬組成物と接触させることを含む方法が開示される。
【００２６】
また、対象においてアレルゲンに対する炎症応答を減少させる方法であって、治療有効量の本明細書中に開示する化合物または医薬組成物を、それを必要とする前記対象に投与することを含む方法が開示される。
【００２７】
対象において炎症性、刺激性または細胞障害性作用物質に対する炎症応答を減少させる方法であって、治療有効量の本明細書中に開示する化合物または医薬組成物を、それを必要とする前記対象に投与することを含む方法がさらに開示される。
【００２８】
さらに、対象において気管支収縮薬（例えば、メタコリン）に対するアレルゲン誘導性過剰応答を減少させる方法であって、治療有効量の本明細書中に開示する化合物または医薬組成物を、それを必要とする前記対象に投与することを含む方法が開示される。
【００２９】
また、対象においてアレルゲン誘導性気道リモデリングを減少させる方法であって、治療有効量の本明細書中に開示する化合物または医薬組成物を、それを必要とする前記対象に投与することを含む方法が開示される。
【００３０】
対象において肺血管系の低酸素誘導性リモデリングを減少させる方法であって、治療有効量の本明細書中に開示する化合物または医薬組成物を、それを必要とする前記対象に投与することを含む方法がさらに開示される。
【００３１】
上記事項は、下記の詳細な説明からより明らかとなり、下記の詳細な説明は、添付の図面を参照して進めていく。
【図面の簡単な説明】
【００３２】
【図１】図１は、ＰＢ１４１の噴霧を実証する。ＰＢ１４１は、水または異なる濃度のＰＢＳ中に溶解して、溶液は、空気１０Ｌ／分で流動しているマイクロポンプネブライザー（Ｂｕｘｃｏ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、ウィルミントン、ＮＣ）を使用してエアロゾル化した。エアロゾル液滴サイズは、Ａｎｄｅｒｓｅｎカスケードインパクターを用いて測定した。（Ａ）ＰＢ１４１エアロゾル液滴サイズの分布。（Ｂ）３０分の噴霧期間中のＰＢ１４１の濃度は、２つの独立した実験において、噴霧中に試料を収集すること、および分光光度計により解析することにより測定した。
【００３３】
【図２】図２は、ＰＢ１４１が抗酸化活性を呈することを示す。ＰＢ１４１の抗酸化活性は、この化合物が、２，２’−アジノビス−（３−エチルベンゾチアゾリン）−６−スルホン酸の予め形成されたラジカルモノカチオン（ＡＢＴＳ＋）と反応する能力により決定した。データは、２つの独立した実験のうちの１つを代表とする；ｎ＝３、＊＊＊トロキソールに対してＰ＜０．００１。
【００３４】
【図３】図３は、ＰＢ１４１が抗酸化活性を呈することを示す。ＰＢ１４１の抗酸化活性は、三価鉄還元／抗酸化剤粉末（ＦＲＡＰ）アッセイにより決定され、ここでは化合物を、三価鉄トリピリジルトリアジン錯体と反応させる。データは、２つの独立した実験のうちの１つを代表とする；ｎ＝３、＊＊＊トロキソールに対してＰ＜０．００１。
【００３５】
【図４】図４は、ＰＢ１４１が体循環から迅速に排除されることを示す。７日間のＰＢ１４１の肺送達後、間隔を置いて後眼窩神経叢から血液を収集し、血漿を分離した。血漿ＰＢ１４１は、定組成（ｉｓｏｃｒａｔｉｃ）ＨＰＬＣにより決定した。
【００３６】
【図５Ａ】図５は、ＰＢ１４１の長期間の高用量肺送達後に腎臓、肝臓または肺毒性が存在しないことを実証する。ＰＢ１４１は、２５または２５０ｍｇ／ｋｇの用量で、最大３０日間、噴霧によりマウスへ送達した。（Ａ）肺を切除して、切片にして、炎症または傷害の痕跡に関して組織学的に検査した。（Ｂ）潜在的な腎臓および肝臓傷害は、クレアチニン、ＡＳＴおよびＡＬＴの血清レベルにより評価した。（Ｃ）噴霧されたＰＢ１４１が、濃度依存的様式でＮＦ−κＢのＬＰＳ誘導性アップレギュレーションを阻害することを示す。急性肺傷害は、ＬＰＳの気管内投与によりマウスにおいて誘導された。３０分後、ＰＢＳまたは様々な濃度のＰＢ１４１を、噴霧によりケージの空気へ送達した。屠殺後、核タンパク質を肺から単離して、炎症誘発性転写因子ＮＦ−κＢのｐ６５サブユニットのＤＮＡ結合活性を決定するのに使用した。
【図５Ｂ】図５は、ＰＢ１４１の長期間の高用量肺送達後に腎臓、肝臓または肺毒性が存在しないことを実証する。ＰＢ１４１は、２５または２５０ｍｇ／ｋｇの用量で、最大３０日間、噴霧によりマウスへ送達した。（Ａ）肺を切除して、切片にして、炎症または傷害の痕跡に関して組織学的に検査した。（Ｂ）潜在的な腎臓および肝臓傷害は、クレアチニン、ＡＳＴおよびＡＬＴの血清レベルにより評価した。（Ｃ）噴霧されたＰＢ１４１が、濃度依存的様式でＮＦ−κＢのＬＰＳ誘導性アップレギュレーションを阻害することを示す。急性肺傷害は、ＬＰＳの気管内投与によりマウスにおいて誘導された。３０分後、ＰＢＳまたは様々な濃度のＰＢ１４１を、噴霧によりケージの空気へ送達した。屠殺後、核タンパク質を肺から単離して、炎症誘発性転写因子ＮＦ−κＢのｐ６５サブユニットのＤＮＡ結合活性を決定するのに使用した。
【図５Ｃ】図５は、ＰＢ１４１の長期間の高用量肺送達後に腎臓、肝臓または肺毒性が存在しないことを実証する。ＰＢ１４１は、２５または２５０ｍｇ／ｋｇの用量で、最大３０日間、噴霧によりマウスへ送達した。（Ａ）肺を切除して、切片にして、炎症または傷害の痕跡に関して組織学的に検査した。（Ｂ）潜在的な腎臓および肝臓傷害は、クレアチニン、ＡＳＴおよびＡＬＴの血清レベルにより評価した。（Ｃ）噴霧されたＰＢ１４１が、濃度依存的様式でＮＦ−κＢのＬＰＳ誘導性アップレギュレーションを阻害することを示す。急性肺傷害は、ＬＰＳの気管内投与によりマウスにおいて誘導された。３０分後、ＰＢＳまたは様々な濃度のＰＢ１４１を、噴霧によりケージの空気へ送達した。屠殺後、核タンパク質を肺から単離して、炎症誘発性転写因子ＮＦ−κＢのｐ６５サブユニットのＤＮＡ結合活性を決定するのに使用した。
【００３７】
【図６】図６は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのＰＢ１４１処置がＮｒｆ２をアップレギュレートして、ＮＦ−κＢ活性を阻害することを示す。ＢＥＡＳ−２Ｂ細胞は、様々な濃度のＰＢ１４１で２４時間処置して、その後、（Ａ）Ｎｒｆ２活性を測定したか、または（Ｃ）核Ｎｒｆ２濃度をウェスタンブロットにより決定した。（Ｂ）他の実験では、細胞を、種々の濃度のＰＢ１４１で１時間、続いてＬＰＳ（５００ｎｇ／ｍｌ）で６時間、前処置した。次に、細胞を単離して、ＮＦ−κＢの活性を測定した。
【００３８】
【図７】図７は、ＰＢ１４１が肺線維芽細胞増殖を阻害することを示す。ＩＭＲ−９０細胞を、１０％熱不活性化ウシ胎児血清、ペニシリンおよびストレプトマイシン（１００ＩＵ／ｍｌ）を含有するダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）中で培養した。単層培養物は、２４時間血清を欠乏させて、図のように、異なる濃度のＰＢ１４１で異なる期間、処置した。次に、細胞数を、２４時間、４８時間および７２時間で計数した。データは、２つの独立した実験のうちの１つを代表とする；ｎ＝３。
【００３９】
【図８】図８は、ＰＢ１４１がＴＧＦ−β誘導性筋線維芽細胞分化を阻害することを示す。ＩＭＲ−９０細胞を、１０％熱不活性化ウシ胎児血清、ペニシリンおよびストレプトマイシン（１００ＩＵ／ｍｌ）を含有するダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）中で培養した。単層培養物は、２４時間血清を欠乏させて、０．５μＭ  ＰＢ１４１で、またはビヒクル（ｖｅｈｉｃｌｅ）（生理食塩水）で１時間、前処置した後、２ｎｇ／ｍｌのＴＧＦ−βへ２４時間曝露させた。（Ａ）α−平滑筋アクチンに関するウェスタンブロット解析。（Ｂ）各条件に関する定量値。＊＊＊Ｖｅｈに対してＰ＜０．００１。（Ｃ）処置後のα−ＳＭＡに関する免疫蛍光顕微鏡法。ブロットおよび画像は、２つの独立した実験を代表とする。
【００４０】
【図９】図９は、噴霧ＰＢ１４１がブレオマイシン誘導性肺線維症を低減させることを示す。硫酸ブレオマイシン（ＢＬＭ、０．０５単位）の気管内注射による肺線維症の誘導に続いて、ＰＢ１４１（２５ｍｇ／ｋｇ）またはビヒクル（生理食塩水）の噴霧、およびマイクロポンプネブライザーによるケージの空気への送達を行った。２１日後、肺試料を得た。（Ａ）肺ヒドロキシプロリン含有量。（Ｂ）肺線維素溶解。（Ｃ）肺コラーゲン含有量。（Ｄ）肺ＴＧＦ−β含有量。データは、１群につきｎ＝５〜７匹のマウスを用いた２つの独立した実験のうちの１つを代表とする；＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１。
【００４１】
【図１０−１】図１０は、噴霧されたＰＢ１４１が、ＬＰＳ誘導性肺炎症および酸化的損傷を低減させることを示す。ＬＰＳ（５０μｇ）の気管内注射によるＡＬＩの誘導に続いて、３０分後に、ＰＢ１４１（２５ｍｇ／ｋｇ）またはビヒクル（生理食塩水）の噴霧、およびマイクロポンプネブライザーによるケージの空気への送達を行った。さらに５．５時間後、ＢＡＬ液、血漿および肺試料を得た。ＢＡＬ液中の（Ａ）総細胞および（Ｂ）好中球数；（Ｃ）肺組織および（Ｄ）ＢＡＬ液中のミエロペルオキシダーゼ活性；（Ｅ）ＢＡＬ液の染色後の顕微鏡検査；（Ｆ）Ｈ２Ｏ２生成；（Ｇ）硝酸塩濃度、および（Ｈ）肺におけるマロニルジアルデヒド／タンパク質比；（Ｉ）ＭＩＰ−２、（Ｊ）ＩＬ−６、（Ｋ）ＴＮＦ−αおよび（Ｌ）ＫＣの血漿レベル。データは、１群につきｎ＝５〜８匹のマウスを用いた２つの独立した実験のうちの１つを代表とする；＊＊＊ｐ＜０．００１。
【図１０−２】図１０は、噴霧されたＰＢ１４１が、ＬＰＳ誘導性肺炎症および酸化的損傷を低減させることを示す。ＬＰＳ（５０μｇ）の気管内注射によるＡＬＩの誘導に続いて、３０分後に、ＰＢ１４１（２５ｍｇ／ｋｇ）またはビヒクル（生理食塩水）の噴霧、およびマイクロポンプネブライザーによるケージの空気への送達を行った。さらに５．５時間後、ＢＡＬ液、血漿および肺試料を得た。ＢＡＬ液中の（Ａ）総細胞および（Ｂ）好中球数；（Ｃ）肺組織および（Ｄ）ＢＡＬ液中のミエロペルオキシダーゼ活性；（Ｅ）ＢＡＬ液の染色後の顕微鏡検査；（Ｆ）Ｈ２Ｏ２生成；（Ｇ）硝酸塩濃度、および（Ｈ）肺におけるマロニルジアルデヒド／タンパク質比；（Ｉ）ＭＩＰ−２、（Ｊ）ＩＬ−６、（Ｋ）ＴＮＦ−αおよび（Ｌ）ＫＣの血漿レベル。データは、１群につきｎ＝５〜８匹のマウスを用いた２つの独立した実験のうちの１つを代表とする；＊＊＊ｐ＜０．００１。
【図１０−３】図１０は、噴霧されたＰＢ１４１が、ＬＰＳ誘導性肺炎症および酸化的損傷を低減させることを示す。ＬＰＳ（５０μｇ）の気管内注射によるＡＬＩの誘導に続いて、３０分後に、ＰＢ１４１（２５ｍｇ／ｋｇ）またはビヒクル（生理食塩水）の噴霧、およびマイクロポンプネブライザーによるケージの空気への送達を行った。さらに５．５時間後、ＢＡＬ液、血漿および肺試料を得た。ＢＡＬ液中の（Ａ）総細胞および（Ｂ）好中球数；（Ｃ）肺組織および（Ｄ）ＢＡＬ液中のミエロペルオキシダーゼ活性；（Ｅ）ＢＡＬ液の染色後の顕微鏡検査；（Ｆ）Ｈ２Ｏ２生成；（Ｇ）硝酸塩濃度、および（Ｈ）肺におけるマロニルジアルデヒド／タンパク質比；（Ｉ）ＭＩＰ−２、（Ｊ）ＩＬ−６、（Ｋ）ＴＮＦ−αおよび（Ｌ）ＫＣの血漿レベル。データは、１群につきｎ＝５〜８匹のマウスを用いた２つの独立した実験のうちの１つを代表とする；＊＊＊ｐ＜０．００１。
【００４２】
【図１１】図１１は、噴霧されたＰＢ１４１が、ＬＰＳ誘導性肺傷害を低減させることを示す。ＬＰＳ（５０μｇ）の気管内注射によるＡＬＩの誘導に続いて、３０分後に、ＰＢ１４１（２５ｍｇ／ｋｇ）またはビヒクル（生理食塩水）の噴霧、およびマイクロポンプネブライザーによるケージの空気への送達を行った。さらに５．５時間後、ＢＡＬ液および肺試料を得た。（Ａ）ＢＡＬ液中のタンパク質濃度。（Ｂ）肺の湿：乾重量の比。（Ｃ）Ｈ＆Ｅ染色後の肺の組織学的検査。データは、１群につきｎ＝５〜８匹のマウスを用いた２つの独立した実験のうちの１つを代表とする；＊＊＊ｐ＜０．００１。
【００４３】
【図１２】図１２は、ＰＢ１４１が、転写因子Ｎｒｆ２活性におけるＬＰＳ誘導性減少を反転させることを示す。ＬＰＳ（５０μｇ）の気管内注射によるＡＬＩの誘導に続いて、３０分後に、ＰＢ１４１（２５ｍｇ／ｋｇ）またはビヒクル（生理食塩水）の噴霧、およびマイクロポンプネブライザーによるケージの空気への送達を行った。さらに５．５時間後、肺を切除して、転写因子Ｎｒｆ２のＤＮＡ結合活性を決定した。データは、１群につきｎ＝４〜６匹のマウスを用いた２つの独立した実験のうちの１つを代表とする；＊＊＊ｐ＜０．００１。
【００４４】
【図１３】図１３は、ＰＢ１４１が、ＬＰＳで活性化された肺胞マクロファージにおいて炎症性遺伝子を低減させて、抗酸化剤遺伝子転写を増加させることを示す。ＬＰＳ（５０μｇ）の気管内注射によるＡＬＩの誘導に続いて、３０分後に、ＰＢ１４１（２５ｍｇ／ｋｇ）またはビヒクル（生理食塩水）の噴霧、およびマイクロポンプネブライザーによるケージの空気への送達を行った。さらに５．５時間後、ＢＡＬ液を得た。肺胞マクロファージをＢＡＬ液から単離して、ＤＭＥＭ＋１０％ＦＢＳ中で平板培養した。１時間後、ＲＮＡを単離して、示した遺伝子の発現を、実時間ＰＣＲを使用して決定しハウスキーピング遺伝子グリセルアルデヒド−３哺乳動物−リン酸脱水素酵素（ＧＡＰＤＨ）および９ｓ  ｒＲＮＡに関して値を標準化した。データは、１群につきｎ＝６〜８匹のマウスを用いた２つの独立した実験のうちの１つを代表とする；＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１。
【００４５】
【図１４】図１４は、噴霧されたＰＢ１４１が、Ａ／Ｊマウスにおいて４−メチルニトロソアミノ−１−（３−ピリジル）−１−ブタノン（ＮＮＫ）誘導性肺腫瘍形成を低減させることを示す。生理食塩水中に溶解させた５０ｍｇ／ｋｇのＮＮＫによる１日目、３日目および５日目の腹腔内（ｉ．ｐ．）注射による肺腫瘍形成の誘導に続いて、ＰＢ１４１（２５ｍｇ／ｋｇ）またはビヒクル（生理食塩水）の噴霧、およびマイクロポンプネブライザーによるケージの空気への送達を行った。８週間後、肺をＨ＆Ｅ染色後に組織学的に検査した。（Ａ）肺病変の数。（Ｂ）肺腫瘍発生および負荷を示す組織学。データは、１群につきｎ＝９〜１１匹のマウスを用いた２つの独立した実験のうちの１つを代表とする。
【００４６】
【図１５】図１５は、噴霧されたＰＢ１４１が、オボアルブミン（ＯＶＡ）誘導性気道過敏性（ａｉｒｗａｙ  ｈｙｐｅｒｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅｎｅｓｓ）を低減させることを示す。アレルゲン誘導性喘息は、０日目および７日目のＯＶＡの腹腔内（ｉ．ｐ．）注射による初期感作、および１４日目〜２２日目の偶数日のＯＶＡの気管内注射による誘発によりマウスにおいて生じた。各ＯＶＡ誘発の３０分後、ＰＢ１４１（２５ｍｇ／ｋｇ）またはビヒクル（生理食塩水）を噴霧させて、マイクロポンプネブライザーによってケージの空気へ送達させた。最終的な誘発および噴霧の２４時間後、増加濃度の吸入メタコリンに対する気道過敏性を、強制振動（ｆｌｅｘｉＶｅｎｔ）法により決定した。（Ａ）気道抵抗。（Ｂ）気道エラスタンス。データは、１群につきｎ＝６〜８匹のマウスを用いた２つの独立した実験のうちの１つを代表とする。
【００４７】
【図１６−１】図１６は、噴霧されたＰＢ１４１が、オボアルブミン（ＯＶＡ）誘導性肺炎症および酸化的損傷を低減させることを示す。アレルゲン誘導性喘息は、０日目および７日目のＯＶＡの腹腔内（ｉ．ｐ．）注射による初期感作、および１４日目〜２２日目の偶数日のＯＶＡの気管内注射による誘発によりマウスにおいて生じた。各ＯＶＡ誘発の３０分後、ＰＢ１４１（２５ｍｇ／ｋｇ）またはビヒクル（生理食塩水）を噴霧させて、マイクロポンプネブライザーによってケージの空気へ送達させた。最終的な誘発および噴霧の２４時間後、ＢＡＬ液、血漿および肺試料を得た。（Ａ）ＢＡＬ液中の総細胞および示差細胞計数。（Ｂ）ＢＡＬ液の染色後の顕微鏡検査。ＢＡＬ液中の（Ｃ）Ｈ２Ｏ２生成、（Ｄ）タンパク質濃度。データは、１群につきｎ＝７〜１０匹のマウスを用いた２つの独立した実験のうちの１つを代表とする；＊＊＊ｐ＜０．００１。
【図１６−２】図１６は、噴霧されたＰＢ１４１が、オボアルブミン（ＯＶＡ）誘導性肺炎症および酸化的損傷を低減させることを示す。アレルゲン誘導性喘息は、０日目および７日目のＯＶＡの腹腔内（ｉ．ｐ．）注射による初期感作、および１４日目〜２２日目の偶数日のＯＶＡの気管内注射による誘発によりマウスにおいて生じた。各ＯＶＡ誘発の３０分後、ＰＢ１４１（２５ｍｇ／ｋｇ）またはビヒクル（生理食塩水）を噴霧させて、マイクロポンプネブライザーによってケージの空気へ送達させた。最終的な誘発および噴霧の２４時間後、ＢＡＬ液、血漿および肺試料を得た。（Ａ）ＢＡＬ液中の総細胞および示差細胞計数。（Ｂ）ＢＡＬ液の染色後の顕微鏡検査。ＢＡＬ液中の（Ｃ）Ｈ２Ｏ２生成、（Ｄ）タンパク質濃度。データは、１群につきｎ＝７〜１０匹のマウスを用いた２つの独立した実験のうちの１つを代表とする；＊＊＊ｐ＜０．００１。
【００４８】
【図１７】図１７は、噴霧されたＰＢ１４１が、オボアルブミン（ＯＶＡ）誘導性炎症性細胞浸潤および粘液生成を低減させることを示す。アレルゲン誘導性喘息は、０日目および７日目のＯＶＡの腹腔内（ｉ．ｐ．）注射による初期感作、および１４日目〜２２日目の偶数日のＯＶＡの気管内注射による誘発によりマウスにおいて生じた。各ＯＶＡ誘発の３０分後、ＰＢ１４１（２５ｍｇ／ｋｇ）またはビヒクル（生理食塩水）を噴霧させて、マイクロポンプネブライザーによってケージの空気へ送達させた。最終的な誘発および噴霧の２４時間後、肺試料を得た。肺は、（Ａ）Ｈ＆Ｅ染色、（Ｂ）トリクローム染色および（Ｃ）過ヨウ素酸シッフ（ＰＡＳ）染色後に組織学的に検査した。データは、１群につきｎ＝７〜１０匹のマウスを用いた２つの独立した実験のうちの１つを代表とする。
【００４９】
【図１８】図１８は、噴霧されたＰＢ１４１が、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）のマウスモデルにおいて、肺腔への炎症関連細胞の浸潤および炎症性媒介物質の生成を低減させることを示す。ＣＯＰＤは、たばこの煙を５日間、マウスの身体全体に曝露することにより誘導され、その最後に、マウスを安楽死させて、細胞および媒介物質のレベルを、気管支肺胞洗浄により肺気腔から得た。数匹のマウスに、ＰＢ１４１（２５ｍｇ／ｋｇ）をたばこの煙と同時に付与した（Ａ〜Ｉ）。
【００５０】
【図１９】図１９は、噴霧されたＰＢ１４１が、慢性低酸素（ＣＨ）誘導性肺高血圧および右室肥大を低減させることを示す。ＣＨ誘導性肺高血圧は、マウスを慢性低酸素（ＣＨ；ＦＩＯ２  １０％）または室内の空気（Ｎ、対照）に３週間曝露させることにより、マウスにおいて生じた。曝露の最後の１０日中に、ＰＢ１４１（２５ｍｇ／ｋｇ）またはビヒクル（生理食塩水）を噴霧させて、マイクロポンプネブライザーによってケージの空気へ送達させた。最終的な噴霧の２４時間後、マウスに麻酔をして、各マウスの右内頸静脈を外科的に露出させて、右室圧力を記録するように進化させ、続いてさらに肺動脈圧を測定するように進化させた圧力トランスデューサーとともにカニューレを挿入した：（上部左）平均肺動脈圧；（上部右）右室収縮期圧（ＲＶＳＰ）；（下部左）末梢血抵抗；（下部右）右室肥大。データは、１群につきｎ＝４〜６匹のマウスを用いた２つの独立した実験のうちの１つを代表とする。
【００５１】
【図２０】図２０は、噴霧されたＰＢ１４１が、慢性低酸素（ＣＨ）誘導性肺高血圧および血管リモデリングを低減させることを示す。ＣＨ誘導性肺高血圧は、マウスをＣＨ（ＦＩＯ２  １０％）または室内の空気に３週間曝露させることにより、マウスにおいて生じた。曝露の最後の１０日中に、ＰＢ１４１（２５ｍｇ／ｋｇ）またはビヒクル（生理食塩水）を噴霧させて、マイクロポンプネブライザーによってケージの空気へ送達させた。最終的な噴霧の２４時間後、肺試料を得た。グラフは、ａ−ＳＭＡ陽性腺房性血管の内側壁厚および非筋性化（ｍｕｓｃｕｌａｒｉｚｅｄ）、部分的筋性化および完全筋性化した小血管のパーセントを示す。データは、１群につきｎ＝４〜６匹のマウスを用いた２つの独立した実験のうちの１つを代表とする。
【００５２】
【図２１】図２１は、ＰＢ１４１の提唱される作用機序を示す。
【発明を実施するための形態】
【００５３】
専門用語
用語および方法の下記説明は、本化合物、組成物および方法についてより良好に記載するように、また本開示の実施において当業者を導くように提供される。同様に、本開示で使用される専門用語は、特定の実施形態および実施例のみについて記載する目的であり、限定するとは意図されないことが理解されよう。
【００５４】
「アシル」は、−Ｃ（Ｏ）Ｒ（式中、Ｒは、例えば、必要に応じて置換されているアルキル、必要に応じて置換されているアリール、または必要に応じて置換されているヘテロアリールであり得る）を有する基を指す。「低級アシル」基は、１〜６個の炭素原子を含有するものである。アセチルは、アシルの例である。
【００５５】
「アシルオキシ」は、構造−ＯＣ（Ｏ）Ｒ−（式中、Ｒは、例えば、必要に応じて置換されているアルキル、必要に応じて置換されているアリール、または必要に応じて置換されているヘテロアリールであり得る）を有する基を指す。「低級アシルオキシ」基は、１〜６個の炭素原子を含有する。
【００５６】
「投与」は本明細書中で使用する場合、別の人間による対象への投与、または対象による自己投与を含む。
【００５７】
「脂肪族」という用語は、アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロゲン化アルキルおよびシクロアルキル基を含むとして定義される。「低級脂肪族」基は、１〜１０個の炭素原子を有する分岐状または非分岐状脂肪族基である。
【００５８】
「アルカンジイル」、「シクロアルカンジイル」、「アリールジイル」、「アルカンアリールジイル」は、脂肪族、脂環式、アリールおよびアルカンアリール炭化水素に由来する二価基を指す。
【００５９】
「アルケニル」は、炭素および水素のみを含有する環状、分岐状または直鎖基を指し、共役され得るか、またはされ得ない１つまたは複数の二重結合を含有する。アルケニル基は、無置換であってもよく、または置換されてもよい。「低級アルケニル」基は、１〜６個の炭素原子を含有する。
【００６０】
「アルコキシ」という用語は、結合点に酸素原子を含む、１〜２０個の炭素原子、好ましくは１〜８個の炭素原子（「低級アルコキシ」として称される）、より好ましくは１〜４個の炭素原子を含む直鎖状、分岐状または環状炭化水素立体配置およびそれらの組合せ
を指す。「アルコキシ基」の例は、式−ＯＲ（式中、Ｒは、必要に応じてアルケニル、アルキニル、アリール、アラルキル、シクロアルキル、ハロゲン化アルキル、アルコキシまたはヘテロシクロアルキル基で置換されているアルキル基であり得る）により表される。適切なアルコキシ基としては、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、ｉ−プロポキシ、ｎ−ブトキシ、ｉ−ブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ、シクロプロポキシ、シクロヘキシルオキシ等が挙げられる。
【００６１】
「アルコキシカルボニル」は、アルコキシ置換されたカルボニル基−Ｃ（Ｏ）ＯＲ（式中、Ｒは、必要に応じて置換されているアルキル、アリール、アラルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキルまたは類似の部分を表す）を指す。
【００６２】
「アルキル」という用語は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、デシル、テトラデシル、ヘキサデシル、エイコシル、テトラコシルなどの１〜２４個の炭素原子の分岐状または非分岐状飽和炭化水素基を指す。「低級アルキル」基は、１〜６個の炭素原子を有する飽和分岐状または非分岐状炭化水素である。好ましいアルキル基は、１〜４個の炭素原子を有する。アルキル基は、「置換アルキル」であってもよく、ここで１つまたは複数の水素原子は、ハロゲン、シクロアルキル、アルコキシ、アミノ、ヒドロキシル、アリール、アルケニルまたはカルボニルなどの置換基で置き換えられている。例えば、低級アルキルまたは（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルは、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ペンチル、３−ペンチルまたはヘキシルであり得る；（Ｃ３〜Ｃ６）シクロアルキルは、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルまたはシクロヘキシルであり得る；（Ｃ３〜Ｃ６）シクロアルキル（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルは、シクロプロピルメチル、シクロブチルメチル、シクロペンチルメチル、シクロヘキシルメチル、２−シクロプロピルエチル、２−シクロブチルエチル、２−シクロペンチルエチルまたは２−シクロヘキシルエチルであり得る；（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシは、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、イソブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、ペントキシ、３−ペントキシまたはヘキシルオキシであり得る；（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニルは、ビニル、アリル、１−プロペニル、２−プロペニル、１−ブテニル、２−ブテニル、３−ブテニル、１−ペンテニル、２−ペンテニル、３−ペンテニル、４−ペンテニル、１−ヘキセニル、２−ヘキセニル、３−ヘキセニル、４−ヘキセニルまたは５−ヘキセニルであり得る；（Ｃ２〜Ｃ６）アルキニルは、エチニル、１−プロピニル、２−プロピニル、１−ブチニル、２−ブチニル、３−ブチニル、１−ペンチニル、２−ペンチニル、３−ペンチニル、４−ペンチニル、１−ヘキシニル、２−ヘキシニル、３−ヘキシニル、４−ヘキシニルまたは５−ヘキシニルであり得る；（Ｃ１〜Ｃ６）アルカノイルは、アセチル、プロパノイルまたはブタノイルであり得る；ハロ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルは、ヨードメチル、ブロモメチル、クロロメチル、フルオロメチル、トリフルオロメチル、２−クロロエチル、２−フルオロエチル、２，２，２−トリフルオロエチルまたはペンタフルオロエチルであり得る；ヒドロキシ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルは、ヒドロキシメチル、１−ヒドロキシエチル、２−ヒドロキシエチル、１−ヒドロキシプロピル、２−ヒドロキシプロピル、３−ヒドロキシプロピル、１−ヒドロキシブチル、４−ヒドロキシブチル、１−ヒドロキシペンチル、５−ヒドロキシペンチル、１−ヒドロキシヘキシルまたは６−ヒドロキシヘキシルであり得る；（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシカルボニルは、メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、プロポキシカルボニル、イソプロポキシカルボニル、ブトキシカルボニル、ペントキシカルボニルまたはヘキシルオキシカルボニルであり得る；（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルチオは、メチルチオ、エチルチオ、プロピルチオ、イソプロピルチオ、ブチルチオ、イソブチルチオ、ペンチルチオまたはヘキシルチオであり得る；（Ｃ２〜Ｃ６）アルカノイルオキシは、アセトキシ、プロパノイルオキシ、ブタノイルオキシ、イソブタノイルオキシ、ペンタノイルオキシまたはヘキサノイルオキシであり得る。
【００６３】
「アルキニル」は、炭素および水素のみを含有する環状、分岐状または直鎖基を指し、別記されない限りは通常、１〜１２個の炭素原子を含有し、１つまたは複数の三重結合を含有する。アルキニル基は、無置換であってもよく、または置換されてもよい。「低級アルキニル」基は、１〜６個の炭素原子を含有するものである。
【００６４】
「アミン」または「アミノ」という用語は、式−ＮＲＲ’（式中、ＲおよびＲ’は独立して、水素またはアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アラルキル、シクロアルキル、ハロゲン化アルキル、アシルまたはヘテロシクロアルキル基であり得る）の基を指す。例えば、「アルキルアミノ」または「アルキル化アミノ」は、−ＮＲＲ’（式中、ＲまたはＲ’の少なくとも１つがアルキルである）を指す。「アシルアミノ」は、−Ｎ（Ｒ）−Ｃ（Ｏ）−Ｒ（式中、Ｒは、アルキルまたはＨなどの置換基である）を指す。適切なアシルアミノ基は、アセトアミドである。
【００６５】
「アミノアルキル」という用語は、少なくとも１つの水素原子が、アミノ基で置き換えられた、上記で定義されるようなアルキル基（例えば、−ＣＨ２−ＮＨ２）を指す。
【００６６】
「アミノカルボニル」は単独で、または組合せで、アミノ置換カルボニル（カルバモイル）基を意味し、ここでアミノ基は、例えばアルキル、アリール、アラルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アルカノイル、アルコキシカルボニル、アラルコキシカルボニル等で、必要に応じて一または二置換されてもよい。例示的なアミノカルボニルは、−ＣＯＮＨ２である。「アミド（ａｍｉｄｅ）」または「アミド（ａｍｉｄｏ）」という用語は、式−Ｃ（Ｏ）ＮＲＲ’（式中、ＲおよびＲ’は独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アラルキル、シクロアルキル、ハロゲン化アルキルまたはヘテロシクロアルキル基であり得る）により表される。
【００６７】
「類似体」は、親化合物とは化学構造が異なる分子、例えば相同体（アルキル鎖の長さの違い、または１つまたは複数の同位体を含むことなどの、化学構造または質量の数における増分が異なっている）、分子断片、１つまたは複数の官能基が異なる構造、またはイオン化における変化である。類似体は、必ずしも親化合物から合成されるとは限らない。誘導体は、基礎構造に由来する分子である。
【００６８】
「動物」は、例えば哺乳動物および鳥類を含むカテゴリーである、生存している多細胞脊椎動物生物を指す。「哺乳動物」という用語は、ヒトおよび非ヒト哺乳動物の両方を含む。同様に、「対象」という用語は、ヒト対象、ならびに鳥類、および非ヒト霊長類、ペット動物（イヌおよびネコなど）、家畜（ブタ、ヒツジ、ウシなど）ならびに非家畜動物（大型ネコ科動物など）などの非ヒト哺乳動物を含む非ヒト対象の両方を含む。対象という用語は、生物の生活環における段階にかかわらず当てはまる。したがって、対象という用語は、生物（即ち、生物が、哺乳動物であろうと、家禽または野鶏などの鳥類であろうと）に応じて、子宮内での、または胚内での生物に当てはまる。
【００６９】
「アラルキル」という用語は、アリール基が、アルキル基の水素に代わって置換されたアルキル基を指す。アラルキル基の例は、ベンジル基である。
【００７０】
「アリール」は、必要に応じて、無置換であり得るか、または置換され得る単環（例えば、フェニル）または多重縮合環（例えば、ナフチルまたはアントリル）を有する一価不飽和芳香族炭素環式基を指す。「ヘテロアリール基」は、芳香族基の環内に組み込まれた少なくとも１つのヘテロ原子を有する芳香族基として定義される。ヘテロ原子の例としては、窒素、酸素、硫黄およびリンが挙げられるが、これらに限定されない。ヘテロアリールとしては、ピリジニル、ピラジニル、ピリミジニル、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアジアゾリル、オキサジアゾリ
ル、チオフェニル、フラニル、キノリニル、イソキノリニル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾオキサゾリル、キノキサリニル等が挙げられるが、これらに限定されない。アリールまたはヘテロアリール基は、アルキル、アルキニル、アルケニル、アリール、ハロゲン化物、ニトロ、アミノ、エステル、ケトン、アルデヒド、ヒドロキシ、カルボン酸またはアルコキシを含むが、これらに限定されない１つまたは複数の基で置換され得るか、あるいはアリールまたはヘテロアリール基は無置換であり得る。
【００７１】
「アリールオキシ」または「ヘテロアリールオキシ」は、式−ＯＡｒ（式中、Ａｒは、それぞれアリール基またはヘテロアリール基である）の基を指す。
【００７２】
「カルボン酸塩」または「カルボキシル」という用語は、−ＣＯＯ−または−ＣＯＯＨ基を指す。カルボキシル基は、カルボン酸を形成し得る。「置換カルボキシル」は、−ＣＯＯＲ（式中、Ｒは、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アラルキル、シクロアルキル、ハロゲン化アルキルまたはヘテロシクロアルキル基である）を指す。例えば、置換カルボキシル基は、カルボン酸エステルまたはその塩（例えば、カルボン酸塩）であり得る。
【００７３】
「カルボキシアルキル」は、アルキルの１つまたは複数の水素がカルボキシル基で置き換えられたアルキル（例えば、−ＲＣＯＯＨ）を指す。
【００７４】
「同時投与」または「同時投与すること」という用語は、同じ一般的な期間内に少なくとも１つの他の治療剤または診断剤とともに、本明細書中に開示する化合物を投与することを指し、時間が同じ正確な瞬間での投与を必要としない（が、同時投与は、時間が同じ正確な瞬間で投与することを含む）。したがって、同時投与は、同じ日、もしくは異なる日であってもよく、または同じ週で、もしくは異なる週であってもよい。
【００７５】
「シクロアルキル」という用語は、少なくとも３個の炭素原子で構成される非芳香族の炭素ベースの環を指す。シクロアルキル基の例として、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル等が挙げられるが、これらに限定されない。「ヘテロシクロアルキル基」という用語は、環の炭素原子の少なくとも１つが、これらに限定されないが、窒素、酸素、硫黄またはリンなどのヘテロ原子で置き換えられた、上記で定義するようなシクロアルキル基である。
【００７６】
「エステル」という用語は、水素が、例えばＣ１〜６アルキル基（「カルボキシルＣ１〜６アルキル」または「アルキルエステル」）、アリールまたはアラルキル基（「アリールエステル」または「アラルキルエステル」）等で置き換えられた、カルボニル基含有部分を指す。例えばメチルエステル（ＣＯ２Ｍｅ）、エチルエステル（ＣＯ２Ｅｔ）およびプロピルエステル（ＣＯ２Ｐｒ）などのＣＯ２Ｃ１〜３アルキル基が好ましく、それらの逆エステル（ｒｅｖｅｒｓｅ  ｅｓｔｅｒ）（例えば、−ＯＣＯＭｅ、−ＯＣＯＥｔおよび−ＯＣＯＰｒ）を含む。
【００７７】
「ハロゲン化アルキル」または「ハロアルキル基」という用語は、これらの基上に存在する１つまたは複数の水素原子がハロゲン（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）で置き換えられたアルキル基を指す。
【００７８】
「ヒドロキシル」という用語は、式−ＯＨにより表される。
【００７９】
「ヒドロキシアルキル」という用語は、少なくとも１つの水素原子がヒドロキシル基で置き換えられたアルキル基を指す。「アルコキシアルキル基」という用語は、少なくとも１つの水素原子が上述するアルコキシ基で置換されたアルキル基として定義される。
【００８０】
「阻害すること」は、疾患または状態の完全な発症を阻害することを指す。「阻害すること」はまた、対照に対して、生物学的活性または結合における任意の定量的または定性的低減を指す。
【００８１】
「Ｎ−複素環式」は、少なくとも１つの窒素ヘテロ原子を含む単環または二環または環系を指す。環または環系は概して、ヘテロ原子の他に、１〜９個の炭素原子を含み、飽和、不飽和または芳香族（擬似芳香族（ｐｓｅｕｄｏａｒｏｍａｔｉｃ）を含む）であり得る。「擬似芳香族」という用語は、厳密には芳香族ではないが、電子の非局在化によって安定化され、芳香環と類似した様式で挙動する環系を指す。芳香族はピロリル環などの擬似芳香族環系を含む。
【００８２】
５員環単環式Ｎ−複素環の例としては、ピロリル、Ｈ−ピロリル、ピロリニル、ピロリジニル、オキサゾリル、オキサジアゾリル（１，２，３および１，２，４オキサジアゾリルを含む）、イソオキサゾリル、フラザニル、チアゾリル、イソチアゾリル、ピラゾリル、ピラゾリニル、ピラゾリジニル、イミダゾリル、イミダゾリニル、トリアゾリル（１，２，３および１，３，４トリアゾリルを含む）、テトラゾリル、チアジアゾリル（１，２，３および１，３，４チアジアゾリルを含む）およびジチアゾリルが挙げられる。６員環単環式Ｎ−複素環の例としては、ピリジル、ピリミジニル、ピリダジニル、ピラジニル、ピペリジニル、モルホリニル、チオモルホニル、ピペラジニルおよびチアジニルが挙げられる。Ｎ−複素環は、広範囲の置換基で、好ましくはＣ１〜６アルキル、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル、ハロ、ヒドロキシ、メルカプト、トリフルオロメチル、アミノ、シアノまたはモノもしくはジ（Ｃ１〜６アルキル）アミノで必要に応じて置換され得る。Ｎ−複素環式基は、フェニル、ナフチル、インデニル、アズレニル、フルオレニルおよびアントラセニルなどの炭素環に融合され得る。
【００８３】
８、９および１０員環二重複素環の例としては、１Ｈチエノ［２，３−ｃ］ピラゾリル、インドリル、イソインドリル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾイソオキサゾリル、ベンゾイソチアゾリル、ベンゾイミダゾリル、インダゾリル、イソキノリニル、キノリニル、キノキサリニル、プリニル、シンノリニル、フタラジニル、キナゾリニル、キノキサリニル、ベンゾトリアジニル等が挙げられる。これらの複素環は、例えばＣ１〜６アルキル、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル、ハロ、ヒドロキシ、メルカプト、トリフルオロメチル、アミノ、シアノまたはモノもしくはジ（Ｃ１〜６アルキル）アミノで必要に応じて置換されていてもよい。別記しない限り、必要に応じて置換されているＮ−複素環は、ピリジニウム塩および適切な環窒素のＮ−酸化物形態を含む。
【００８４】
「対象」という用語は、ヒト対象、ならびに鳥類、および非ヒト霊長類、ペット動物（イヌおよびネコなど）、家畜（ブタ、ヒツジ、ウシなど）ならびに非家畜動物（大型ネコ科動物など）などの非ヒト哺乳動物を含む非ヒト対象の両方を含む。対象という用語は、生物の生活環における段階にかかわらず当てはまる。したがって、対象という用語は、生物（即ち、生物が、哺乳動物であろうと、家禽または野鶏などの鳥類であろうと）に応じて、子宮内での、または胚内での生物に当てはまる。
【００８５】
「置換（ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄ）」または「置換（ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎ）」は、１つまたは複数のさらなるＲ基による分子の水素原子またはＲ基の置き換えを指す。別記しない限り、「必要に応じて置換されている」または「必要に応じた置換基」という用語は本明細書中で使用する場合、１つ、２つ、３つ、４つまたはそれ超の基、好ましくは１つ、２つまたは３つ、より好ましくは１つまたは２つの基でさらに置換されていてもよく、または置換されていなくてもよい基を指す。置換基は、例えば、Ｃ１〜６アルキル、
Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ３〜８シクロアルキル、ヒドロキシル、オキソ、Ｃ１〜６アルコキシ、アリールオキシ、Ｃ１〜６アルコキシアリール、ハロ、Ｃ１〜６アルキルハロ（ＣＦ３およびＣＨＦ２など）、Ｃ１〜６アルコキシハロ（ＯＣＦ３およびＯＣＨＦ２など）、カルボキシル、エステル、シアノ、ニトロ、アミノ、置換アミノ、二置換アミノ、アシル、ケトン、アミド、アミノアシル、置換アミド、二置換アミド、チオール、アルキルチオ、チオキソ、スルフェート、スルホネート、スルフィニル、置換スルフィニル、スルホニル、置換スルホニル、スルホニルアミド、置換スルホンアミド、二置換スルホンアミド、アリール、アルＣ１〜６アルキル、ヘテロシクリルおよびヘテロアリールから選択されてもよく、ここで各アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリールおよびヘテロシクリルならびにそれらを含有する基は、必要に応じてさらに置換されてもよい。また、Ｎ−複素環の場合での必要に応じた置換基としては、Ｃ１〜６アルキル（即ち、Ｎ−Ｃ１〜３アルキル）が挙げられ得るが、これに限定されない。
【００８６】
「スルフィニル」は、−Ｓ（＝Ｏ）Ｈ基を指す。
【００８７】
「置換スルフィニル」または「スルホキシド」という用語は、水素が、例えばＣ１〜６アルキル基（「Ｃ１〜６アルキルスルフィニル」または「Ｃ１〜６アルキルスルホキシド」）、アリール（「アリールスルフィニル」）、アラルキル（「アラルキルスルフィニル」）等で置き換えられた、スルフィニル基を指す。例えば−ＳＯメチル、−ＳＯエチルおよび−ＳＯプロピルなどのＣ１〜３アルキルスルフィニル基が好ましい。
【００８８】
「スルホニル」という用語は、−ＳＯ２Ｈ基を指す。
【００８９】
「置換スルホニル」という用語は、水素が、例えばＣ１〜６アルキル基（「スルホニルＣ１〜６アルキル」）、アリール（「アリールスルホニル」）、アラルキル（「アラルキルスルホニル」）等で置き換えられた、スルホニル基を指す。例えば−ＳＯ２Ｍｅ、−ＳＯ２Ｅｔおよび−ＳＯ２ＰｒなどのスルホニルＣ１〜３アルキル基が好ましい。
【００９０】
「スルホニルアミド」または「スルホンアミド」という用語は、−ＳＯ２ＮＨ２基を指す。
【００９１】
「治療有効量」は、特定の作用物質で治療される対象において所望の効果を達成するのに十分な特定の作用物質の量を指す。理想的には、作用物質の治療有効量は、対象において実質的な毒性作用を引き起こさずに、疾患もしくは状態を阻害または治療するのに十分な量である。作用物質の治療有効量は、治療される対象、罹患（ａｆｆｌｉｃｔｉｏｎ）の重症度、および治療用組成物の投与様式に依存する。
【００９２】
「治療」は、発症し始めた後に、疾患または病理学的状態の徴候または症状を改善する治療的介入、または病理学もしくは状態を発症する危険性を減少させるか、または病理学もしくは状態の重症度を減少させる目的で、疾患の徴候を呈さないか、またはほんの初期の徴候のみを呈する対象に、化合物または組成物を投与することを指す。本明細書中で使用する場合、疾患または病理学的状態に関連して「改善すること」という用語は、治療の任意の観察可能な有益な効果を指す。有益な効果は、例えば影響されやすい対象における疾患の臨床症状の発病の遅延、疾患の幾らかまたは全ての臨床症状の重症度の低減、疾患のよりゆっくりとした進行、対象の健康全般または健全性（ｗｅｌｌ−ｂｅｉｎｇ）の改善から、または特定の疾患に特異的である当業者に周知の他のパラメーターから明らかであり得る。「疾患を治療すること」という語句は、例えば、糖尿病などの疾患の危険性がある対象において、疾患の完全な発症を阻害することを指す。疾患または状態を「防止すること」は、病理学または状態を発症する危険性を減少させるか、または病理学もしくは状態の重症度を減少させる目的で、疾患の徴候を呈さないか、またはほんの初期の徴候の
みを呈する対象に、組成物を予防的に投与することを指す。
【００９３】
「医薬組成物」は、担体、希釈剤および／または補助剤を含む１つまたは複数の無毒性の薬学的に許容される添加剤、および必要に応じて他の生物学的に活性な成分とともに、ある量（例えば、単位投与量）の開示する化合物の１つまたは複数を含む組成物である。かかる医薬組成物は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ（第１９版）に開示されるものなどの標準的な医薬製剤技法により調製することができる。
【００９４】
「薬学的に許容される塩またはエステル」という用語は、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、リンゴ酸、酢酸、シュウ酸、酒石酸、クエン酸、乳酸、フマル酸、コハク酸、マレイン酸、サリチル酸、安息香酸、フェニル酢酸、マンデル酸等を含むが、これらに限定されない無機酸および有機酸の塩を含む従来の手段により調製される塩またはエステルを指す。本開示化合物の「薬学的に許容される塩」はまた、ナトリウム、カリウム、アルミニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、亜鉛などの陽イオンから、およびアンモニア、エチレンジアミン、Ｎ−メチル−グルタミン、リシン、アルギニン、オルニチン、コリン、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、クロロプロカイン、ジエタノールアミン、プロカイン、Ｎ−ベンジルフェネチルアミン、ジエチルアミン、ピペラジン、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンおよび水酸化テトラメチルアンモニウムなどの塩基から形成されるものも含む。これらの塩は、標準的な手順により、例えば遊離酸を、適切な有機または無機塩基と反応させることにより調製することができる。あるいは、本明細書中に列挙される任意の化学化合物は、その薬学的に許容される塩として投与されてもよい。「薬学的に許容される塩」はまた、遊離酸、塩基および両性イオン形態を含む。適切な薬学的に許容される塩の記述は、Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ，  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，  Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｕｓｅ、Ｗｉｌｅｙ  ＶＣＨ（２００２年）に見出され得る。本明細書中に開示する化合物が、カルボキシ基などの酸性官能基を含む場合、カルボキシ基に適切な薬学的に許容される陽イオン対は、当業者に周知であり、アルカリ、アルカリ土類、アンモニウム、第四級アンモニウム陽イオン等を含む。かかる塩は、当業者に公知である。「薬理学的に許容可能な塩」のさらなる例に関しては、Ｂｅｒｇｅら、Ｊ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｓｃｉ．  ６６巻：１号（１９７７年）を参照されたい。
【００９５】
「薬学的に許容されるエステル」は、カルボキシル基を含むように修飾される本明細書中に記載する化合物に由来するものを含む。ｉｎ  ｖｉｖｏで加水分解可能なエステルは、ヒトまたは動物の身体中で加水分解されて、親酸またはアルコールを生じるエステルである。したがって、代表的なエステルとしては、エステル基のカルボン酸部分の非カルボキニル部分が、直鎖または分岐鎖アルキル（例えば、メチル、ｎ−プロピル、ｔ−ブチルまたはｎ−ブチル）、シクロアルキル、アルコキシアルキル（例えば、メトキシメチル）、アラルキル（例えば、ベンジル）、アリールオキシアルキル（例えば、フェノキシメチル）、アリール（例えば、例えばハロゲン、Ｃ１〜４アルキルもしくはＣ１〜４アルコキシ）またはアミノにより必要に応じて置換されているフェニル）から選択されるカルボン酸エステル；アルキルまたはアラルキルスルホニル（例えば、メタンスルホニル）などのスルホン酸エステル、またはアミノ酸エステル（例えば、Ｌ−バリルまたはＬ−イソロイシル）が挙げられる。「薬学的に許容されるエステル」はまた、モノ、ジまたはトリリン酸エステルなどの無機エステルを含む。かかるエステルにおいて、別記しない限り、存在する任意のアルキル部分は好適には、１〜１８個の炭素原子、詳細には１〜６個の炭素原子、より詳細には１〜４個の炭素原子を含有する。かかるエステル中に存在する任意のシクロアルキル部分は好適には、３〜６個の炭素原子を含有する。かかるエステル中に存在する任意のアリール部分は好適には、上記カルボシクリル（ｃａｒｂｏｃｙｃｙｌｙｌ）の定義で示されるように、必要に応じて置換されているフェニル基を含む。したがって、
薬学的に許容されるエステルとしては、アセチル、ｔ−ブチルなどのＣ１〜Ｃ２２脂肪酸エステル、あるいはパルモイル、ステロイルなどの長鎖直鎖もしくは分岐状の不飽和またはオメガ−６一不飽和脂肪酸が挙げられる。代替的なアリールまたはヘテロアリールエステルとしては、ベンゾイル、ピリジルメチロイル等が挙げられ、これらのいずれも同様に、上記カルボシクリルで定義されるように置換されてもよい。さらなる薬学的に許容されるエステルとして、ロイシル、イソロイシルおよび特にバリルなどの脂肪族Ｌ−アミノ酸エステルが挙げられる。
【００９６】
治療用途に関して、化合物の塩は、対イオンが薬学的に許容されるものである。しかしながら、薬学的に許容されない酸および塩基の塩もまた、例えば薬学的に許容される化合物の調製または精製において利用され得る。
【００９７】
上記で本明細書中に記述するような薬学的に許容される酸および塩基付加塩は、化合物が形成することが可能である治療上活性な無毒性の酸および塩基付加塩を含むと意図される。薬学的に許容される酸付加塩は、かかる適切な酸で塩基形態を処理することにより利便性よく得ることができる。適切な酸は、例えば、ハロゲン化水素酸、例えば塩酸または臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸等の酸などの無機酸、または例えば酢酸、プロパン酸、ヒドロキシ酢酸、乳酸、ピルビン酸、シュウ酸（即ち、エタン二酸）、マロン酸、コハク酸（即ち、ブタン二酸）、マレイン酸、フマル酸、リンゴ酸（即ち、ヒドロキシブタン二酸）、酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、シクラミン酸、サリチル酸、ｐ−アミノサリチル酸、パモ酸等の酸などの有機酸を含む。逆に、上記塩形態は、適切な塩基による処理により遊離塩基形態へ変換することができる。
【００９８】
酸性プロトンを含有する化合物はまた、適切な有機および無機塩基による処理により、それらの無毒性金属またはアミン付加塩形態へ変換され得る。適切な塩基塩形態は、例えば、アンモニウム塩、アルカリおよびアルカリ土類金属塩、例えばリチウム、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム塩等、有機塩基、例えばベンザチン、Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン等による塩、ヒドラバミン塩、例えばアルギニン、リシンなどのアミノ酸による塩を含む。
【００９９】
「付加塩」という用語は、本明細書中で使用する場合、本明細書中に記載する化合物が形成することが可能である溶媒和物を含む。かかる溶媒和物は、例えば水和物、アルコラート等である。
【０１００】
「第四級アミン」という用語は、本明細書中で使用する場合、化合物の塩基性窒素と、例えば必要に応じて置換されているハロゲン化アルキル、ハロゲン化アリールまたはハロゲン化アリールアルキル、例えばヨウ化メチルまたはヨウ化ベンジルなどの適切な四級化剤（ｑｕａｔｅｒｎｉｚｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）との間の反応により、化合物が形成することが可能である第四級アンモニウム塩を定義する。トリフルオロメタンスルホン酸アルキル、メタンスルホン酸アルキルおよびｐ−トルエンスルホン酸アルキルなどの良好な脱離基を有する他の反応物もまた使用され得る。第四級アミンは、正に荷電された窒素を有する。薬学的に許容される対イオンとしては、クロロ、ブロモ、ヨード、トリフルオロ酢酸塩および酢酸塩が挙げられる。選択した対イオンは、イオン交換樹脂を使用して導入することができる。
【０１０１】
開示する化合物のプロドラッグもまた、本明細書中で意図される。プロドラッグは、対象へのプロドラッグ投与後に、加水分解、代謝などのｉｎ  ｖｉｖｏでの生理学的作用を通じて、活性化合物へ化学的に修飾される活性または不活性化合物である。「プロドラッグ」という用語は、この本文全体にわたって使用する場合、誘導体の得られるｉｎ  ｖｉ
ｖｏ生体内変換生成物が、本明細書中に記載する化合物で定義されるような活性薬物であるように、エステル、アミドおよびリン酸塩などの薬理学的に許容可能な誘導体を意味する。プロドラッグは好ましくは、優れた水溶解度、バイオアベイラビリティーの増加を有し、ｉｎ  ｖｉｖｏで活性阻害剤へ容易に代謝される。本明細書中に記載する化合物のプロドラッグは、日常的な操作により、またはｉｎ  ｖｉｖｏで、親化合物へと修飾が切断されるような方法で、化合物中に存在する官能基を修飾することにより調製され得る。プロドラッグを作製および使用することに関与する適合性および技法は、当業者により周知である。エステルを含むプロドラッグの一般的な論述に関しては、ＳｖｅｎｓｓｏｎおよびＴｕｎｅｋ、Ｄｒｕｇ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  １６５巻（１９８８年）およびＢｕｎｄｇａａｒｄ、Ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｄｒｕｇｓ、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ（１９８５年）を参照されたい。
【０１０２】
「プロドラッグ」という用語はまた、プロドラッグが対象に投与されると、本発明の活性な親薬物をｉｎ  ｖｉｖｏで放出する任意の共有結合された担体を含むと意図される。プロドラッグは多くの場合、溶解度およびバイオアベイラビィティなどの、活性剤医薬品に対して増強された特性を有するため、本明細書中に開示する化合物は、プロドラッグ形態で送達され得る。したがって、本開示化合物のプロドラッグ、プロドラッグを送達する方法およびかかるプロドラッグを含有する組成物もまた意図される。開示する化合物のプロドラッグは通常、日常的な操作で、またはｉｎ  ｖｉｖｏで、修飾が切断されて、親化合物を生じるような方法で、化合物中に存在する１つまたは複数の官能基を修飾することにより調製される。プロドラッグは、ｉｎ  ｖｉｖｏで切断されて、それぞれ相当するアミノおよび／またはホスホネート基を生じる任意の基で官能基化されたホスホネートおよび／またはアミノ基を有する化合物を含む。プロドラッグの例としては、アシル化アミノ基および／またはホスホン酸エステルまたはホスホン酸アミド基を有する化合物が挙げられるが、これらに限定されない。特定の例では、プロドラッグは、ホスホン酸イソプロピルエステルなどのホスホン酸低級アルキルエステルである。
【０１０３】
開示する化合物の保護誘導体もまた意図される。開示する化合物を用いた使用に関する様々な適切な保護基は、ＧｒｅｅｎｅおよびＷｕｔｓ、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ；第３版；Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆
Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９９９年に開示されている。
【０１０４】
概して、保護基は、分子の残存部分に影響を及ぼさない条件下で除去される。これらの方法は、当技術分野で周知であり、酸加水分解、水素化分解等を含む。１つの好ましい方法は、例えば遊離ホスホネートを生じるようなＴＭＳ−Ｂｒ媒介性エステル切断においてルイス酸条件を使用したホスホン酸エステルの切断などのエステルの除去を含む。第２の好ましい方法は、アルコール、酢酸等またはそれらの混合物などの適切な溶媒系中で炭素上パラジウムを利用した水素化分解によるベンジル基の除去などの保護基の除去を含む。ｔ−ブトキシカルボニル保護基を含むｔ−ブトキシベースの基は、水、ジオキサンおよび／または塩化メチレンなどの適切な溶媒系中で、ＨＣｌまたはトリフルオロ酢酸などの無機または有機酸を利用して除去することができる。アミノおよびヒドロキシ官能基アミノを保護するのに適した別の例示的な別の保護基はトリチルである。他の従来の保護基は公知であり、適切な保護基は、ＧｒｅｅｎｅおよびＷｕｔｓ、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ；第３版；Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ
＆  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９９９年を参考にして、当業者により選択され得る。アミンが脱保護される場合、得られた塩は容易に中和されて、遊離アミンを生じ得る。同様に、ホスホン酸部分などの酸部分が保護されていない（ｕｎｖｅｉｌｅｄ）場合、化合物は、酸化合物として、またはその塩として単離され得る。
【０１０５】
ジアリールエノン化合物の有用性は、限られた水溶解度により妨げられる。噴霧された
製剤の吸入が肺への治療剤の送達に関して好ましい方法であるため、この欠点は、肺疾患の治療に特に関連する。吸入による薬物の送達は、喉、気管、気管支および肺胞を含む気道の異なる切片への薬物の堆積を可能にする。概して、吸入される粒子のサイズが小さいほど、それはより長く空気中に懸濁されたままであり、気道よりもはるか下部へ、吸入された薬物が送達され得る。噴霧用の液体の所望の特性は概して、１）低粘度、２）滅菌培地、３）低表面張力、４）噴霧メカニズムに対する安定性、５）中程度のｐＨ（約４〜１０）、６）液滴を形成する能力、７）刺激性防腐剤および安定化剤の非存在、および８）適切な張度を含む。操作様式が異なる多種多様なネブライザーが利用可能である。これらは、他のものと一緒に超音波、振動膜、振動メッシュ、振動プレート、振動コーン、マイクロポンプおよびジェットネブライザーを含む。振動メッシュ、振動コーンまたは振動プレートネブライザーは、それらが送達用に空気圧縮機の使用を必要とせず、単位用量の送達後に容器中に最小残留容量を有し、また低用量の吸入可能な溶液を送達するのに使用することができるため、特定に関心がもたれている。肺設置の他の方法を上回るネブライザーの主な利点は、患者の協力を必要としないことであり、また高用量の医薬を送達するのがより容易であることである。
【０１０６】
多くのチオール含有化合物が非常に親水性であるため、それらは、ジアリールエノン化合物との水溶性付加体を形成し得る。続いて、得られた水溶性化合物は、吸入による肺への送達用の噴霧可能な製剤へ組み込ませることができるだけでなく、自由に細胞に入ってもよく、ここで、ジアリールエノン構成成分は、元のチオール残基の転置に付随して、システイン残基との付加体を形成することにより、または他の手段により治療効果を発揮することができる。これらの考察に基づいて、特異的な新規ジアリールエノンの新規チオール誘導体が本明細書中で開示される。同様に、肺送達に適したこれらの化合物の製剤および肺疾患を治療するためのそれらの使用が開示される。
【０１０７】
ある特定の実施形態では、抗炎症、抗酸化および他の治療特性を保有する新規ジアリールエノン化合物が本明細書中で開示される。同様に、吸入による肺系統への送達に適しているこれらの化合物の噴霧されるエアロゾルまたは乾燥粉末製剤が記載される。さらに、各種肺疾患の治療のためのこれらの化合物および製剤の使用について記載される。治療上有用な化合物を、例えば適切なチオール誘導体の形成を通じて水溶性にさせてもよい。
【０１０８】
一態様では、新規化合物は、ジアリールエノン化合物を、最終化合物を水溶性にさせるチオールと化学的に組み合わせることにより生成することができる。かかる水溶性化合物は、容易に細胞に入ることができ、ここで合成的に添加されるチオールが、各種タンパク質内のシステイン残基などの細胞内チオールで置き換えられ得る。アリール基は、特有のジまたはトリ窒素含有部分で構成され、ここで窒素原子の誘起効果は、炭素原子上に部分的に陽性の電荷を誘導する。これらの窒素含有化合物およびそれらの誘導体における低位非占有π分子軌道のため、これらの化合物は、特有の物理化学特性、および架橋リガンドとして作用する能力を示す。
【０１０９】
化合物
親水性チオールと少なくとも２つのＮ−複素環を含むエノンとの付加体を含む化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくはエステルが本明細書に開示される。
【０１１０】
例えば、一実施形態は、
Ｘ１−Ｌ−Ｘ２
（式中、Ｌは、エノンを含む連結部分であり、
Ｘ１およびＸ２はそれぞれ独立して、必要に応じて置換されているＮ−複素環である）
の構造を有する化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくはエステルである。
【０１１１】
Ｌは例えば、ペンタ−１，４−ジエン−３−オンなどのアルキル−１，４−ジエン−３−オン、またはペンタ−１，５−チオール−３−オンなどのアルキル−１，５−チオール−３−オンであってもよく、ここで各チオールは、必要に応じて置換されている。ケトンに隣接している各二重結合を有する他の置換アルキルジエンは、ケトン由来の２つの炭素間に位置するチオール基を有するアリールケトンと同様に、適切である。
【０１１２】
ある特定の実施形態では、Ｘ１およびＸ２は同じであり、それぞれ、例えばピラジニルまたはピリミジニルである。
【０１１３】
さらなる実施形態では、
【化１７】
2019108374.tif 000019
（式中、
【化１８】
2019108374.tif 000020
は、単結合または二重結合を表し、
Ａは、
【化１９】
2019108374.tif 000021
が二重結合である場合にはＣＨであり、または
【化２０】
2019108374.tif 000022
が単結合である場合にはＣＨ（Ｓ−Ｒ５）であり、Ｒ５は、ペプチド、アミノ酸、アミノ酸誘導体、必要に応じて置換されているアルキル、必要に応じて置換されているアルケニル、必要に応じて置換されているアルキニル、必要に応じて置換されているシクロアルキル、または必要に応じて置換されているシクロアルケニルであり、
Ｘ１およびＸ２はそれぞれ独立して、必要に応じて置換されているＮ−複素環である）、または
【化２１】
2019108374.tif 000023
（式中、
【化２２】
2019108374.tif 000024
は、単結合または二重結合を表し、
Ａは、
【化２３】
2019108374.tif 000025
が二重結合である場合にはＣＨであり、または
【化２４】
2019108374.tif 000026
が単結合である場合にはＣＨ（Ｓ−Ｒ５）であり、Ｒ５は、ペプチド、アミノ酸、アミノ酸誘導体、必要に応じて置換されているアルキル、必要に応じて置換されているアルケニル、必要に応じて置換されているアルキニル、必要に応じて置換されているシクロアルキル、または必要に応じて置換されているシクロアルケニルであり、
Ｘ１およびＸ２はそれぞれ独立して、必要に応じて置換されているＮ−複素環であり、
Ｒ１、Ｒ２およびＲ３はそれぞれ独立して、ＣまたはＮである）、または
【化２５】
2019108374.tif 000027
（式中、
【化２６】
2019108374.tif 000028
は、単結合または二重結合を表し、
Ａは、
【化２７】
2019108374.tif 000029
が二重結合である場合にはＣＨであり、または
【化２８】
2019108374.tif 000030
が単結合である場合にはＣＨ（Ｓ−Ｒ５）であり、Ｒ５は、ペプチド、アミノ酸、アミノ酸誘導体、必要に応じて置換されているアルキル、必要に応じて置換されているアルケニル、必要に応じて置換されているアルキニル、必要に応じて置換されているシクロアルキル、または必要に応じて置換されているシクロアルケニルであり、
Ｘ１およびＸ２はそれぞれ独立して、必要に応じて置換されているＮ−複素環であり、
Ｒ１は、ＣまたはＮである）、または、
【化２９】
2019108374.tif 000031
（式中、
【化３０】
2019108374.tif 000032
は、単結合または二重結合を表し、
Ａは、
【化３１】
2019108374.tif 000033
が二重結合である場合にはＣＨであり、または
【化３２】
2019108374.tif 000034
が単結合である場合にはＣＨ（Ｓ−Ｒ５）であり、Ｒ５は、ペプチド、アミノ酸、アミノ酸誘導体、必要に応じて置換されているアルキル、必要に応じて置換されているアルケニル、必要に応じて置換されているアルキニル、必要に応じて置換されているシクロアルキル、または必要に応じて置換されているシクロアルケニルであり、
Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立して、ＣまたはＮであり、
Ｘ１およびＸ２はそれぞれ独立して、必要に応じて置換されているＮ−複素環である）
の構造を有する化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくはエステルが開示される。
【０１１４】
上記の化合物では、Ｘ１は、
【化３３】
2019108374.tif 000035
の構造を有してもよく、Ｘ２は、
【化３４】
2019108374.tif 000036
の構造を有し、
式中、Ｚ１、Ｚ２およびＺ３はそれぞれ独立して、ＣまたはＮであるが、但し、Ｚ１、Ｚ２またはＺ３の少なくとも１つはＮであり、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４およびＹ５はそれぞれ独立して、Ｈ、必要に応じて置換されているアルキル、必要に応じて置換されているアミノ、ヒドロキシル、必要に応じて置換されているアルコキシ、必要に応じて置換されているチオール、アシルまたはハロゲンである。
【０１１５】
ある特定の実施形態では、化合物は、
【化３５】
2019108374.tif 000037
の構造を有する。
【０１１６】
ある特定の実施形態では、化合物は、
【化３６】
2019108374.tif 000038
の構造を有する。
【０１１７】
ある特定の実施形態では、化合物は、
【化３７】
2019108374.tif 000039
の構造を有する。
【０１１８】
ある特定の実施形態では、化合物は、
【化３８】
2019108374.tif 000040
の構造を有する。
【０１１９】
ある特定の実施形態では、Ｘ１およびＸ２は、それぞれ必要に応じて置換されているピラリジニルまたは必要に応じて置換されているピリミジニルである。
【０１２０】
ある特定の実施形態では、Ｒ５は、アシルアミノ置換カルボキシルアルキル、スルホネート置換アルキルまたはアシルアミノ置換アミドである。ある特定の実施形態では、Ｒ５は、糖誘導体である。
【０１２１】
ある特定の実施形態では、−Ｓ−Ｒ５部分は、Ｎ−アセチルシステイン、２−メルカプトエタンスルホン酸またはグルタチオンの誘導体である。
【０１２２】
例示的な化合物を以下に示す：
【化３９−１】
2019108374.tif 000041
【化３９−２】
2019108374.tif 000042
【化３９−３】
2019108374.tif 000043
【化３９−４】
2019108374.tif 000044
【化３９−５】
2019108374.tif 000045
【化３９−６】
2019108374.tif 000046
【化３９−７】
2019108374.tif 000047
【化３９−８】
2019108374.tif 000048
【化３９−９】
2019108374.tif 000049
【化３９−１０】
2019108374.tif 000050
【化３９−１１】
2019108374.tif 000051
【化３９−１２】
2019108374.tif 000052
【化３９−１３】
2019108374.tif 000053
【化３９−１４】
2019108374.tif 000054
【化３９−１５】
2019108374.tif 000055
【化３９−１６】
2019108374.tif 000056
【化３９−１７】
2019108374.tif 000057
【化３９−１８】
2019108374.tif 000058
【化３９−１９】
2019108374.tif 000059
【化３９−２０】
2019108374.tif 000060
【化３９−２１】
2019108374.tif 000061
【化３９−２２】
2019108374.tif 000062
【化３９−２３】
2019108374.tif 000063
【化３９−２４】
2019108374.tif 000064
【化３９−２５】
2019108374.tif 000065
【化３９−２６】
2019108374.tif 000066
【化３９−２７】
2019108374.tif 000067
【化３９−２８】
2019108374.tif 000068
【化３９−２９】
2019108374.tif 000069
【化３９−３０】
2019108374.tif 000070
【化３９−３１】
2019108374.tif 000071
【化３９−３２】
2019108374.tif 000072
【化３９−３３】
2019108374.tif 000073
【化３９−３４】
2019108374.tif 000074
【化３９−３５】
2019108374.tif 000075
【化３９−３６】
2019108374.tif 000076
【化３９−３７】
2019108374.tif 000077
【化３９−３８】
2019108374.tif 000078
【化３９−３９】
2019108374.tif 000079
【化３９−４０】
2019108374.tif 000080
【化３９−４１】
2019108374.tif 000081
【化３９−４２】
2019108374.tif 000082
【化３９−４３】
2019108374.tif 000083
【化３９−４４】
2019108374.tif 000084
【化３９−４５】
2019108374.tif 000085
【化３９−４６】
2019108374.tif 000086
【化３９−４７】
2019108374.tif 000087
【化３９−４８】
2019108374.tif 000088
【化３９−４９】
2019108374.tif 000089
【化３９−５０】
2019108374.tif 000090
【化３９−５１】
2019108374.tif 000091
【化３９−５２】
2019108374.tif 000092
【化３９−５３】
2019108374.tif 000093
【化３９−５４】
2019108374.tif 000094
【化３９−５５】
2019108374.tif 000095
【化３９−５６】
2019108374.tif 000096
【化３９−５７】
2019108374.tif 000097
【化３９−５８】
2019108374.tif 000098
【化３９−５９】
2019108374.tif 000099
【化３９−６０】
2019108374.tif 000100
【化３９−６１】
2019108374.tif 000101
【化３９−６２】
2019108374.tif 000102
【化３９−６３】
2019108374.tif 000103
【化３９−６４】
2019108374.tif 000104
【化３９−６５】
2019108374.tif 000105
【化３９−６６】
2019108374.tif 000106
【化３９−６７】
2019108374.tif 000107
【化３９−６８】
2019108374.tif 000108
【化３９−６９】
2019108374.tif 000109
【化３９−７０】
2019108374.tif 000110
【化３９−７１】
2019108374.tif 000111
【化３９−７２】
2019108374.tif 000112
【化３９−７３】
2019108374.tif 000113
【化３９−７４】
2019108374.tif 000114
【化３９−７５】
2019108374.tif 000115
【化３９−７６】
2019108374.tif 000116
【化３９−７７】
2019108374.tif 000117
【化３９−７８】
2019108374.tif 000118
【化３９−７９】
2019108374.tif 000119
【化３９−８０】
2019108374.tif 000120
【化３９−８１】
2019108374.tif 000121
【化３９−８２】
2019108374.tif 000122
【化３９−８３】
2019108374.tif 000123
【化３９−８４】
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【化３９−８５】
2019108374.tif 000125
【化３９−８６】
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【化３９−８７】
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【化３９−８８】
2019108374.tif 000128
【化３９−８９】
2019108374.tif 000129
【化３９−９０】
2019108374.tif 000130
【化３９−９１】
2019108374.tif 000131
【化３９−９２】
2019108374.tif 000132
【化３９−９３】
2019108374.tif 000133
【化３９−９４】
2019108374.tif 000134
【化３９−９５】
2019108374.tif 000135
【化３９−９６】
2019108374.tif 000136
【０１２３】
医薬組成物および使用方法
ある特定の実施形態では、本明細書中に記載する化合物は、肺性疾患などの肺疾患を治療するのに有用であり得る。肺は、多種多様な疾患および病理学的状態の部位である。例示的な肺疾患としては、肺線維症、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、喘息、嚢胞性線維症、急性肺傷害（ＡＬＩ）、急性呼吸窮迫症候群、肺高血圧、肺がんおよび嚢胞性線維症の肺症状が挙げられる。
【０１２４】
ある特定の実施形態では、本明細書中に開示する化合物は、抗酸化剤である。例えば、この化合物は、肺組織に有害であるラジカル（例えば、酸化剤、陽イオン等）を酸化し得る。
【０１２５】
ある特定の実施形態では、本明細書中に開示する化合物は、虚血再灌流傷害を治療するのに有用であり得る。
【０１２６】
ある特定の実施形態では、本明細書中に開示する化合物は、ＮＦ−κＢ活性を阻害し得る。
【０１２７】
ある特定の実施形態では、本明細書中に開示する化合物は、肺線維芽細胞増殖を阻害し得る。
【０１２８】
ある特定の実施形態では、本明細書中に開示する化合物は、筋線維芽細胞分化を阻害し得る。
【０１２９】
ある特定の実施形態では、本明細書中に記載する化合物は、移植臓器、特に肺の急性および慢性拒絶反応を改善または防止するのに有用であり得る。
【０１３０】
また、吸入に適している噴霧されたエアロゾルまたは乾燥粉末のいずれかを生成することが可能な製剤によって化合物を直接肺へ効率的に送達する方法が開示される。
【０１３１】
開示の別の態様は、対象への投与用に調製される医薬組成物を含み、それは、治療有効量の本明細書中に開示する化合物の１つまたは複数を含む。開示する化合物の治療有効量は、投与経路、対象の種類および治療される対象の身体特性に依存する。考慮され得る特定要因としては、疾患の重症度および病期、重量、食事および併用投薬が挙げられる。開示する化合物の治療有効量を決定するためのこれらの因子の関連性は、当業者に理解される。
【０１３２】
対象への投与用の医薬組成物は、選択する分子の他に、担体、増粘剤、希釈剤、緩衝液、防腐剤、界面活性剤などの少なくとも１つのさらなる薬学的に許容される添加剤を含み得る。医薬組成物はまた、抗菌剤、抗炎症剤、麻酔薬などの１つまたは複数のさらなる有効成分を含み得る。これらの製剤に有用な薬学的に許容される担体は通例である。Ｅ．  Ｗ．  ＭａｒｔｉｎによるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ、第１９版（１９９５年）は、本明細書中に開示する化合物の医薬品送達に適した組成物および製剤について記載している。
【０１３３】
概して、担体の性質は、用いられる特定の投与様式に依存する。例えば、非経口製剤は通常、ビヒクルとして水、生理食塩水、平衡塩類溶液、水性デキストロース、グリセロールなどの薬学的および生理学的に許容される液体を含む注射液を含有する。固体組成物（例えば、粉末、丸剤、錠剤またはカプセル形態）に関して、従来の無毒性固体担体としては、例えば医薬品等級のマンニトール、ラクトース、デンプンまたはステアリン酸マグネシウムが挙げられ得る。生物学的に中性の担体の他に、投与されるべき医薬組成物は、微量の湿潤剤または乳化剤、防腐剤およびｐＨ緩衝剤などの無毒性補助物質、例えば酢酸ナトリウムまたはソルビタンラウリル酸モノエステルを含有し得る。
【０１３４】
本明細書中に開示する医薬組成物は、開示する化合物の薬学的に許容される塩および／または溶媒和物から形成されるものを含む。薬学的に許容される塩は、薬学的に許容される無機または有機塩基および酸に由来するものを含む。特定の開示化合物は、酸を用いて酸−塩基塩を形成することができる少なくとも１つの塩基性基を保有する。塩基性基の例として、アミノおよびイミノ基が挙げられるが、これらに限定されない。かかる塩基性基を用いて塩を形成することができる無機酸の例としては、塩酸、臭化水素酸、硫酸またはリン酸などの鉱酸が挙げられるが、これらに限定されない。塩基性基はまた、有機カルボン酸、スルホン酸、スルホ酸またはホスホ酸またはＮ置換スルファミン酸、例えば酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、コハク酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、メチルマレイン酸、フマル酸、リンゴ酸、酒石酸、グルコン酸、グルカル酸、グルクロン酸、クエン酸、安息香酸、ケイ皮酸、マンデル酸、サリチル酸、４−アミノサリチル酸、２−フェノキシ安息香酸、２−アセトキシ安息香酸、エンボン酸、ニコチン酸またはイソニコチン酸と、またさらにアミノ酸と、例えばα−アミノ酸と、同様にメタンスルホン酸、エタンスルホン酸、２−ヒドロキシメタンスルホン酸、エタン−１，２−ジスルホン酸、ベンゼンジスルホン酸、４−メチルベンゼンスルホン酸、ナフタレン−２−スルホン酸、２−または３−ホスホグリセリン酸、グルコース−６−リン酸またはＮ−シクロヘキシルスルファミン酸（シクラミン酸塩の形成を伴う）と、またはアスコルビン酸などの他の酸性有機化合物と塩を形成することができる。
【０１３５】
ある特定の化合物は、無機または有機塩基と酸−塩基塩を形成することができる少なくとも１つの酸性基を含む。無機塩基から形成される塩の例として、カリウムおよびナトリウムなどのアルカリ金属、カルシウムおよびマグネシウム等を含むアルカリ土類金属との
本開示化合物の塩が挙げられる。同様に、塩基性アミノ酸、脂肪族アミン、複素環式アミン、芳香族アミン、ピリジン、グアニジンおよびアミジンを用いて形成される塩を含む、アミン（本明細書中で使用する場合、アミンを指す用語は、文脈が明らかに、遊離アミンが意図されることを示さない限りは、それらの共役酸を含むと理解されるべきである）などの有機塩基との酸性化合物の塩が意図される。脂肪族アミンのうち、非環状脂肪族アミン、ならびに環状および非環状のジおよびトリアルキルアミンが、開示する化合物における使用に特に適している。さらに、第四級アンモニウム対イオンもまた使用することができる。
【０１３６】
本化合物における使用に適したアミン塩基（およびそれらの相当するアンモニウムイオン）の特定の例としては、ピリジン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン、ジアザビシクロノナン、ジアザビシクロウンデセン、Ｎ−メチル−Ｎ−エチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、ジイロプロピルエチルアミン、モノ−、ビス−またはトリス−（２−ヒドロキシエチル）アミン、２−ヒドロキシ−ｔｅｒｔ−ブチルアミン、トリス（ヒドロキシメチル）メチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）アミン、トリ−（２−ヒドロキシエチル）アミンおよびＮ−メチル−Ｄ−グルカミンが挙げられるが、これらに限定されない。「薬理学的に許容される塩」のさらなる例に関しては、Ｂｅｒｇｅら、Ｊ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｓｃｉ．  ６６巻：１号（１９７７年）を参照されたい。
【０１３７】
本明細書中に開示する化合物は結晶化することができ、単一結晶形態で、または異なる結晶多型の組合せとして供給することができる。したがって、化合物は、異なる結晶形態、結晶性、液晶性または非結晶性（非晶質）形態などの１つまたは複数の物理形態で供給することができる。化合物のかかる異なる物理形態は、例えば再結晶用の異なる溶媒または溶媒の異なる混合物を使用して調製することができる。あるいは、またはさらに、異なる多型は、例えば、異なる温度で再結晶を実施することにより、および／または再結晶中に冷却速度を変更することにより調製することができる。多型の存在は、Ｘ線結晶学により、または場合によっては、固相ＮＭＲ分光法、ＩＲ分光法などの別の分光技法により、または示差走査熱量測定法により決定され得る。
【０１３８】
医薬組成物は、経口、直腸、鼻内、肺内または経皮送達によるもの、または他の表面への局所送達によるものを含む様々な粘膜投与様式により、対象へ投与され得る。必要に応じて、組成物は、筋内、皮下、静脈内、動脈内、関節内、腹腔内、くも膜下腔内、脳室内または非経口経路によるものを含む、非粘膜経路により投与され得る。他の代替的な実施形態では、化合物は、対象に由来する細胞、組織または臓器への直接曝露により、ｅｘ  ｖｉｖｏで投与され得る。
【０１３９】
医薬組成物を製剤化するために、化合物を、各種薬学的に許容される添加剤、ならびに化合物の分散用の基剤またはビヒクルと組み合わせることができる。所望の添加剤としては、アルギニン、水酸化ナトリウム、グリシン、塩酸、クエン酸などのｐＨ制御剤が挙げられるが、これらに限定されない。さらに、局所麻酔薬（例えば、ベンジルアルコール）、等張化剤（例えば、塩化ナトリウム、マンニトール、ソルビトール）、吸着阻害剤（例えば、Ｔｗｅｅｎ  ８０またはＭｉｇｌｙｏｌ  ８１２）、溶解増強剤（例えば、シクロデキストリンおよびその誘導体）、安定化剤（例えば、血清アルブミン）および還元剤（例えば、グルタチオン）が含まれ得る。当技術分野で周知の多くの他の適切な補助剤の中でも、水酸化アルミニウム（例えば、Ａｍｐｈｏｇｅｌ、Ｗｙｅｔｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、マディソン、ＮＪ）、フロイントアジュバント、ＭＰＬ（商標）（３−Ｏ−脱アシル化モノホスホリルリピドＡ；Ｃｏｒｉｘａ、ハミルトン、ＩＮ）およびＩＬ−１２（Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、ケンブリッジ、ＭＡ）などの補助剤が、組成物中に含まれ得る。組成物が液体である場合、１として解釈される０．９％（ｗ／ｖ）生
理食塩水溶液の張度を参照して測定する場合の製剤の張度は、実質的な不可逆的組織損傷が投与部位で誘導されない値に通常調節される。概して、溶液の張度は、約０．５〜約２．０、または約０．８〜約１．７などの約０．３〜約３．０の値に調節される。
【０１４０】
化合物は、基剤またはビヒクル中に分散させることができ、これは、化合物を分散する能力を有する親水性化合物、および任意の所望の添加剤を含み得る。基剤は、ポリカルボン酸またはそれらの塩の共重合体、他のモノマー（例えば、（メタ）アクリル酸メチル、アクリル酸等）とのカルボン酸無水物（例えば、マレイン酸無水物）、ポリ酢酸ビニル、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドンなどの親水性ビニルポリマー、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロースなどのセルロース誘導体、およびキトサン、コラーゲン、アルギン酸ナトリウム、ゼラチン、ヒアルロン酸などの天然ポリマー、およびそれらの無毒性金属塩を含むが、これらに限定されない多種多様の適切な化合物から選択され得る。多くの場合、生分解性ポリマー、例えばポリ乳酸、ポリ（乳酸−グリコール酸）共重合体、ポリヒドロキシ酪酸、ポリ（ヒドロキシ酪酸−グリコール酸）共重合体およびそれらの混合物が、基剤またはビヒクルとして選択される。あるいは、またはさらに、ポリグリセリン脂肪酸エステル、スクロース脂肪酸エステルなどの合成脂肪酸エステルがビヒクルとして用いられ得る。親水性ポリマーおよび他のビヒクルは、単独で、または組合せで使用することができ、部分結晶化、イオン結合、架橋等により高められた構造完全性をビヒクルへ付与することができる。ビヒクルは、液体または粘性溶液、ゲル、ペースト、粉末、ミクロスフェアおよび粘膜表面への直接塗布のためのフィルムを含む様々な形態で供給され得る。
【０１４１】
化合物は、様々な方法に従って基剤またはビヒクルと組み合わせることができ、化合物の放出は、拡散、ビヒクルの崩壊、または水チャネルの関連形成によるものであり得る。状況によっては、化合物は、適切なポリマー、例えば２−シアノアクリル酸イソブチルから調製されるマイクロカプセル（ミクロスフェア）またはナノカプセル（ナノスフェア）中に分散され（例えば、Ｍｉｃｈａｅｌら、Ｊ．  Ｐｈａｒｍａｃｙ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  ４３巻：１〜５号、１９９１年）、また持続性送達および長期にわたる生物学的活性をもたらす生体適合性分散媒質中に分散される。
【０１４２】
あるいは、開示の組成物は、ｐＨ調節剤および緩衝剤、張度調節剤、湿潤剤などの、ほぼ生理学的条件に必要とされるような薬学的に許容されるビヒクル物質、例えば酢酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、ソルビタンラウリル酸モノエステルおよびオレイン酸トリエタノールアミンを含有することができる。固体組成物に関して、例えば、医薬品等級のマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、タルカム、セルロース、グルコース、スクロース、炭酸マグネシウム等を含む従来の無毒性の薬学的に許容されるビヒクルが使用され得る。
【０１４３】
化合物を投与するための医薬組成物はまた、溶液、マイクロエマルジョンまたは高濃度の有効成分に適した他の秩序構造として製剤化され得る。ビヒクルは、例えば水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコール等）およびそれらの適切な混合物を含有する溶媒または分散媒質であり得る。溶液に関する適正な流動性は、例えばレシチンなどのコーティングの使用により、分散性製剤の場合には、所望の粒子サイズの維持により、および界面活性剤の使用により維持され得る。多くの場合、組成物中に、等張剤、例えば、糖、マンニトールおよびソルビトールなどのポリアルコール、または塩化ナトリウムを含むことが望ましい。化合物の長期的な吸収は、吸収を遅延させる作用物質、例えばモノステアリン酸塩およびゼラチンを組成物中に含むことにより引き起こされ得る。
【０１４４】
ある特定の実施形態では、化合物は、時間放出製剤中で、例えば徐放性ポリマーを含む組成物中で投与され得る。これらの組成物は、迅速な放出に対して保護するビヒクル、例えばポリマー、マイクロカプセル化された送達システムまたは生体接着ゲルなどの制御放出ビヒクルを用いて調製され得る。開示の各種組成物における長期的な送達は、吸収を遅延させる作用物質、例えばモノステアリン酸アルミニウムヒドロゲルおよびゼラチンを組成物中に含むことにより引き起こされ得る。制御放出製剤が望ましい場合、本開示に従う使用に適した制御放出結合剤は、活性剤にとって不活性であり、化合物および／または他の生物学的に活性な作用物質を組み込むことが可能である任意の生体適合性制御放出材料を含む。数多くのかかる材料が当技術分野で公知である。有用な制御放出結合剤は、それらの送達後に生理学的条件下で（例えば、粘膜表面で、または体液の存在下で）徐々に代謝される材料である。適切な結合剤として、持続性放出配合物における使用に関して当技術分野で周知の生体適合性ポリマーおよび共重合体が挙げられるが、これらに限定されない。かかる生体適合性化合物は、周囲の組織に対して無毒性かつ不活性であり、鼻の炎症、免疫応答、炎症などの著しい有害な副作用を誘発しない。それらは、同様に生体適合性でもある代謝生成物へ代謝されて、身体から容易に排除される。
【０１４５】
本開示における使用に関して例示的な高分子材料としては、加水分解性エステル結合を有する共重合および単独重合ポリエステルに由来する高分子マトリックスが挙げられるが、これらに限定されない。これらの多数が、生分解性であり、また毒性を有さないか、または低毒性を有する分解生成物をもたらすことが当技術分野で公知である。例示的なポリマーとしては、ポリグリコール酸およびポリ乳酸、ポリ（ＤＬ−乳酸−コ−グリコール酸）、ポリ（Ｄ−乳酸−コ−グリコール酸）およびポリ（Ｌ−乳酸−コ−グリコール酸）が挙げられる。他の有用な生分解性または生体内分解性（ｂｉｏｅｒｏｄａｂｌｅ）ポリマーとして、ポリ（イプシロン−カプロラクトン）、ポリ（イプシロン−アプロラクトン−ＣＯ−乳酸）、ポリ（イプシロン．−アプロラクトン−ＣＯ−グリコール酸）、ポリ（ベータ−ヒドロキシ酪酸）、ポリ（アルキル−２−シアノアクリレート）、ポリ（メタクリル酸ヒドロキシエチル）などのヒドロゲル、ポリアミド、ポリ（アミノ酸）（例えば、Ｌ−ロイシン、グルタミン酸、Ｌ−アスパラギン酸等）、ポリ（エステル尿素）、ポリ（２−ヒドロキシエチル  ＤＬ−アスパルトアミド（ａｓｐａｒｔａｍｉｄｅ））、ポリアセタールポリマー、ポリオルトエステル、ポリカーボネート、ポリマレアミド、多糖およびそれらの共重合体などのポリマーが挙げられるが、これらに限定されない。かかる製剤を調製する多くの方法は、当業者に周知である（例えば、Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ  ａｎｄ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｊ．  Ｒ．  Ｒｏｂｉｎｓｏｎ編、Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，  Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９７８年を参照）。他の有用な製剤は、制御放出マイクロカプセル（米国特許第４，６５２，４４１号および同第４，９１７，８９３号）、マイクロカプセルおよび他の製剤を作製するのに有用な乳酸−グリコール酸共重合体（米国特許第４，６７７，１９１号および同第４，７２８，７２１号）および水溶性ペプチド用の持続放出組成物（米国特許第４，６７５，１８９号）を含む。
【０１４６】
本開示の医薬組成物は通常、製造、貯蔵および使用の滅菌条件下で滅菌および安定である。滅菌溶液は、適切な溶媒中で所要量での化合物を、必要に応じて、本明細書中に列挙する成分の１つまたは組合せとともに組み込ませること、続く濾過滅菌により調製され得る。概して、分散液は、化合物および／または他の生物学的に活性な作用物質を、基礎分散媒質および本明細書中に列挙するもの由来の所要の他の成分を含有する滅菌ビヒクルへ組み込ませることにより調製される。滅菌粉末の場合、調製方法は、化合物とすでに滅菌濾過した溶液からの任意のさらなる所望の成分の粉末を生じる真空乾燥および凍結乾燥を含む。微生物の作用の防止は、各種抗菌剤および抗真菌剤、例えばパラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサール等により達成され得る。
【０１４７】
本開示の各種治療方法によれば、化合物は、治療または防止が求められる障害の管理に関連付けられる従来の方法論と一致した様式で、対象へ送達され得る。本明細書中の開示によれば、予防または治療有効な量の化合物および／または他の生物学的に活性な作用物質は、かかる治療を必要とする対象に、選択される疾患もしくは状態またはそれらの１つまたは複数の症状を防止、阻害および／または改善するのに十分な時間、および十分な条件下で投与される。
【０１４８】
本開示の化合物の投与は、予防または治療目的のいずれかのためであり得る。予防的に供給される場合、化合物は、任意の症状よりも先に供給される。化合物の予防的投与は、任意の続く疾患プロセスを防止または改善するのに役立つ。治療的に供給される場合、化合物は、疾患または感染の症状の発病時に（または直後に）供給される。
【０１４９】
予防および治療目的で、化合物は、経口経路により、または単一ボーラス送達で、長期間にわたる連続送達（例えば、連続的な経皮、粘膜または静脈内送達）により、または反復投与プロトコールで（例えば、１時間毎の、毎日のまたは毎週の反復投与プロトコールにより）対象に投与され得る。治療有効投与量の化合物が、本明細書中に記載するような標的とされる疾患または状態に関連付けられる１つまたは複数の症状または検出可能な状態を改善するための臨床上有意な結果をもたらす長期的な予防または治療レジメン内で反復用量として供給され得る。この状況で、有効な投与量の決定は通常、ヒト臨床試験により追随される動物モデル研究に基づき、対象における標的とされる疾患症状または状態の発生または重症度を有意に低減させる投与プロトコールにより導かれる。これに関して適切なモデルとしては、例えば、マウス、ラット、トリ、イヌ、ヒツジ、ブタ、ネコ、非ヒト霊長類および当技術分野で公知の他の許容される動物モデル対象が挙げられる。あるいは、有効な投与量は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏモデルを使用して決定され得る。かかるモデルを使用して、単なる通常の計算および調節のみが、化合物の治療有効量（例えば、標的とされる疾患の１つまたは複数の症状を軽減するのに有効な量）を投与するのに適切な濃度および用量を決定するのに必要とされる。代替的な実施形態では、有効量または有効用量の化合物は、治療または診断目的のいずれかで、本明細書中に記載するような疾患または状態と相関される１つまたは複数の選択される生物学的活性を単に阻害または増強し得る。
【０１５０】
化合物の実際の投与量は、対象の疾患の徴候および特定の状態（例えば、対象の年齢、大きさ、適応度、症状の程度、感受性因子等）、投与時間および経路、同時に投与される薬物および治療、ならびに対象において所望の活性または生物学的応答を誘発するための化合物の特定薬理学などの要因に応じて様々である。投薬レジメンは、最適な予防的または治療的応答を提供するように調節され得る。治療有効量はまた、化合物および／または他の生物学的に活性な作用物質の任意の有毒または有害な副作用を、臨床的観点で治療上有益な効果が上回るものである。本開示の方法および製剤内での化合物および／または他の生物学的に活性な作用物質の治療有効量に関する非限定的な範囲は、約１．０ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ（体重）または約５ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇ（体重）などの約０．２５ｍｇ／ｋｇ（体重）〜約２５０ｍｇ／ｋｇ（体重）である。
【０１５１】
投与量は、標的部位（例えば、肺または体循環）で所望の濃度を維持するように主治医により変更され得る。より高濃度またはより低濃度は、送達様式、静脈内または皮下または筋内送達に対して、例えば経皮、直腸、経口、肺、骨内または鼻内送達に基づいて選択され得る。投与量はまた、粉末に対する肺内スプレー、注射される粒子状物質または経皮送達配合物に対する持続放出経口の投与製剤等の放出速度に基づいて調節され得る。
【０１５２】
本明細書中に開示する化合物はまた、さらなる治療剤と同時投与されてもよい。かかる治療剤としては、抗炎症剤、抗菌剤、マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤、リポキシゲナーゼ阻害剤、サイトカインアンタゴニスト、免疫抑制薬、抗がん剤、抗ウイルス剤、
サイトカイン、増殖因子、免疫調節薬、プロスタグランジンまたは抗血管過剰増殖化合物が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１５３】
本開示はまた、本明細書中に記載する医薬組成物、有効成分および／または哺乳動物対象における疾患および他の状態の防止および治療における使用のための上記を投与する手段を含有するキット、パッケージおよび多容器ユニットを含む。診断用途のためのキットもまた提供される。一実施形態では、これらのキットは、本明細書中に記載する化合物の１つまたは複数を含有する容器または製剤を含む。１つの例では、この構成成分は、対象への送達のための医薬調製物中で製剤化される。化合物は、バルク分取用容器またはユニットもしくは多ユニット投薬形態中に必要に応じて含有される。必要に応じた分取手段、例えば肺または鼻内スプレーアプリケーターが提供され得る。包装材料は、どんな治療目的で、および／またはどのような様式で、一緒に包装される医薬作用物質が使用され得るかを示すラベルまたは指示書を必要に応じて含む。
【実施例】
【０１５４】
（実施例１）
ＰＢ化合物の一般的な合成
無水エタノール（１ｍｌ）中のピラジン−２−カルボアルデヒド（４．６２ｍｍｏｌ）の溶液を、ゆっくり撹拌しながら１０分間かけて室温で、無水エタノールおよびＨ２Ｏ２の混合物（１４ｍｌ、１：１比）中のＮａＯＨ（０．７５ｍｍｏｌ）およびケトン（アセトン）の溶液に滴下する。溶液の色が黄色になり、１０分以内に黄色い沈殿物が形成する。反応物を室温で６時間撹拌した後、黄色固体を濾過により除去して、水で洗浄して、続いて有機相を無水ＭｇＳＯ４で乾燥させて、真空中で濃縮して、ＰＢ１３７を表す淡黄色粉末を９７％純度で得る。
【０１５５】
（実施例２）
アセトンを用いたＰＢ化合物の合成
無水エタノール（１ｍｌ）中のピラジン−２−カルボアルデヒド［または３−アミノピラジン−２−カルボアルデヒド；６−アミノ−５−ヒドロキシピラジン−２−カルボアルデヒド；５−ヒドロキシ−６−メトキシピラジン−２−カルボアルデヒド；３−チオシアナトピラジン−２−カルボアルデヒド；５−（クロロメチルチオ）ピラジン−２−カルボアルデヒド；５−アセチルピラジン−２−カルボアルデヒド；６−（トリフルオロメトキシ）ピラジン−２−カルボアルデヒド；５−フルオロピラジン−２−カルボアルデヒド；５−（メチルチオ）ピラジン−２−カルボアルデヒド；５−（クロロメチルチオ）ピラジン−２−カルボアルデヒド；６−ｔｅｒｔ−ブトキシピラジン−２−カルボアルデヒド；５−アセチルピラジン−２−カルボアルデヒド；６−トリフルオロメトキシピラジン−２−カルボアルデヒド；６−アミノ−５−ヒドロキシピラジン−２−カルボアルデヒド；５−ヒドロキシ−６−メトキシピラジン−２−カルボアルデヒドまたは６−（トリフルオロメチル）ピラジン−２−カルボアルデヒド：（４．６２ｍｍｏｌ）］の溶液を、ゆっくり撹拌しながら１０分間かけて室温で、無水エタノールおよびＨ２Ｏ２の混合物（１４ｍｌ、１：１比）中のＮａＯＨ（０．７５ｍｍｏｌ）およびアセトンの溶液に滴下する。溶液の色が黄色になり、１０分以内に黄色い沈殿物が形成する。続いて、反応物を室温で６時間撹拌した後、黄色固体を濾過により除去して、水で洗浄して、有機相を無水ＭｇＳＯ４で乾燥させて、真空中で濃縮して、所望のＰＢ化合物を表す淡黄色粉末を９７％純度で得る。
【０１５６】
（実施例３）
シクロヘキサノンを用いたＰＢ化合物の合成
無水エタノール（１ｍｌ）中のピラジン−２−カルボアルデヒド［または３−アミノピラジン−２−カルボアルデヒド；６−アミノ−５−ヒドロキシピラジン−２−カルボアル
デヒド；５−ヒドロキシ−６−メトキシピラジン−２−カルボアルデヒド；３−チオシアナトピラジン−２−カルボアルデヒド；５−（クロロメチルチオ）ピラジン−２−カルボアルデヒド；５−アセチルピラジン−２−カルボアルデヒド；６−（トリフルオロメトキシ）ピラジン−２−カルボアルデヒド；５−フルオロピラジン−２−カルボアルデヒド；５−（メチルチオ）ピラジン−２−カルボアルデヒド；５−（クロロメチルチオ）ピラジン−２−カルボアルデヒド；６−ｔｅｒｔ−ブトキシピラジン−２−カルボアルデヒド；５−アセチルピラジン−２−カルボアルデヒド；６−トリフルオロメトキシピラジン−２−カルボアルデヒド；６−アミノ−５−ヒドロキシピラジン−２−カルボアルデヒド；５−ヒドロキシ−６−メトキシピラジン−２−カルボアルデヒドまたは６−（トリフルオロメチル）ピラジン−２−カルボアルデヒド：（４．６２ｍｍｏｌ）］の溶液を、ゆっくり撹拌しながら１０分間かけて室温で、無水エタノールおよびＨ２Ｏ２の混合物（１４ｍｌ、１：１比）中のＮａＯＨ（０．７５ｍｍｏｌ）およびシクロヘキサノンの溶液に滴下する。溶液の色が黄色になり、１０分以内に黄色い沈殿物が形成する。反応物を室温で６時間撹拌した後、黄色固体を濾過により除去して、水で洗浄して、有機相を無水ＭｇＳＯ４で乾燥させて、真空中で濃縮して、所望のＰＢ化合物を表す淡黄色粉末を９７％純度で得る。
【０１５７】
（実施例４）
ＰＢ１３７の精製
９４〜９７％純度で合成されたＰＢ１３７は、温度７０℃でエタノール中に、透明な溶液が形成するまで、ゆっくり撹拌しながら、添加漏斗を使用してそれをゆっくり添加することにより溶解させる。透明な溶液が形成されたら、炭（ｃｈａｒｃｏａｌ）を添加して、熱い反応混合物を迅速にセライト床に通して濾過する。濾液を一晩４℃に冷却して、ＰＢ１３７を表す淡黄色結晶を９９％純度で形成させる。純度および同定は、ＬＣ−ＭＳ解析により確認した。
【０１５８】
（実施例５）
チオール結合体の合成
Ｎ−アセチル−システイン（ＮＡＣ）（１２３ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を、５０％エタノール水７ｍｌ中に溶解して、１Ｎ  ＮａＯＨを使用して、得られた溶液のｐＨをおよそ７．８に調節する。ＰＢ１３７（３６ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）をエタノール３ｍｌ中に溶解した後、上述の溶液に添加する。混合物を周囲温度でＮ２下において、３時間撹拌する。次に、溶媒を蒸発させて、ＣＨ３ＣＮ中０．０５％ＴＦＡの勾配を使用した逆相ＨＰＬＣにより、粗製生成物を精製する。ＰＢ１４１の収率全体は９７％である。
【０１５９】
（実施例６）
ＰＢ１４１の噴霧
ＰＢ１４１を、水または異なる濃度のＰＢＳ中に溶解して、空気１０Ｌ／分で流動しているマイクロポンプネブライザー（Ｂｕｘｃｏ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、ウィルミントン、ＮＣ）を使用して、エアロゾルを生成した。エアロゾル液滴サイズは、Ａｎｄｅｒｓｅｎカスケードインパクターを用いて測定した。３０分の噴霧期間中のＰＢ１４１の濃度は、３つの独立した実験において、噴霧中に試料を収集すること、および分光光度計によりそれらを解析することにより測定した。結果は、最適な１〜２μｍ範囲の液滴サイズを示した（図１）。噴霧は、２％生理食塩水中のＰＢ１４１の溶液に関して最適であったが、純水中での形成もまた有効であった。
【０１６０】
（実施例７）
ＴＲＡＰアッセイ
ＰＢ１４１またはＰＢ１５７の抗酸化活性は、これらの化合物の、２，２’−アジノビス−（３−エチルベンゾチアゾリン）−６−スルホン酸の予め形成されたラジカルモノカ
チオン（ＡＢＴＳ＋）と反応する能力により決定した。ＡＢＴＳ（１．８ｍｍｏｌ）を、暗所において室温で、再蒸留水（ｄｏｕｂｌｅ  ｄｉｓｔｉｌｌｅｄ  ｗａｔｅｒ）中で過硫酸カリウム（０．６３ｍｍｏｌ）と一晩反応させて、濃青色ＡＢＴＳ＋ラジカルカチオンを生成した。このラジカルカチオンは、７３４ｎｍでの最大吸収を有する。実験の直前に、ＡＢＴＳ＋を、７３４ｎｍでおよそ０．７の吸光度になるように無水エタノール中で希釈した。ＰＢ１４１またはＰＢ１５７（１０μｍｏｌ）をＡＢＴＳ＋（１ｍｌ）に添加して、ボルテックスすることにより混合した。反応物を５分間安定させて、吸光度を測定した。これらの化合物の抗酸化活性は、ラジカルカチオンの色を消すそれらの能力により決定した。トロキソール（１０μｍｏｌ）を参照標準物質として使用した。２つの化合物の抗酸化活性は明らかに実証された。ＰＢ１４１に関する結果を図２に示す。
【０１６１】
（実施例８）
ＦＲＡＰアッセイ
ＰＢ１４１またはＰＢ１５７の抗酸化活性は、第二鉄還元／抗酸化力（ＦＲＡＰ）アッセイにより決定し、ここで、化合物を、第二鉄トリピリジルトリアジン錯体と反応させる。第二鉄錯体は、ｐＨ３．６の酢酸緩衝液（０．２５Ｍ）中での塩化第二鉄（１６．７ｍｍｏｌ）および２，４，６−トリスピリジル−ｓ−トリアジン（８．３３ｍｍｏｌ）の反応により室温で調製された。ＦＲＡＰ試薬は、調製の直後に使用した。ＰＢ１４１またはＰＢ１５７（１０μｍｏｌ）をＦＲＡＰ試薬（１ｍｌ）に添加して、ボルテックスすることにより混合した。反応物を５分間安定させて、吸光度を測定した。これらの化合物の抗酸化活性は、５９３ｎｍでモニタリングされる、第二鉄錯体を紫色の第一鉄錯体へと還元する能力により決定した。トロキソール（１０μｍｏｌ）を参照標準物質として使用した。２つの化合物の抗酸化活性は、極めて著しく、ほぼ同じであった。ＰＢ１４１に関する結果を図２に示す。
【０１６２】
（実施例９）
ＰＢ１４１は、体循環において短い半減期を示す
ＰＢ１４１を、上述するように水中に溶解して、エアロゾル化によりマウスに送達した。ＰＢ１４１送達の１０分、２０分、４０分、６０分、８０分、１００分、１２０分、１４０分、１６０分、１８０分、２００分、２２０分および２４０分後に、浅麻酔下でマウスの後眼窩神経叢から血液試料を収集した。血漿を２０００×ｇで５分間、血液を遠心分離することにより調製して、解析するまで−８０±１０℃で凍結保管した。血漿２００マイクロリットルを、各種濃度のＰＢ１４１（標準曲線を創出するため）またはβ−エストラジオール（内部標準）で、続いて２倍容量の酢酸エチルでスパイクした。試料をロッカー上で５分間混合して、５，０００ｒｐｍで１０分間、室温で遠心分離した。上清をきれいなガラスチューブに移して、窒素下において４０℃で乾燥させた。試料を移動相１００μｌ中に再構成させて、５０μｌを、Ｗａｔｅｒｓ  ７１７  ＵＶ検出器およびＷａｔｅｒｓ  ５１５ポンプのＨＰＬＣシステム（ミルフォード、ＭＡ）へ注入した。４３０ｎｍの可視波長を使用して、ＰＢ１４１を検出して、２８０ｎｍを使用して、β−エストラジオールを検出した。ＰＢ１４１分離は、定組成ＨＰＬＣ法を使用することにより達成された。試料を、Ａｐｏｌｌｏ逆相Ｃ１８カラム、１５０ｍｍ×３．９ｍｍ×５μｍ粒子サイズ（Ａｌｌｔｅｃｈ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ、ディアフィールド、ＩＬ）へ注入した。カラムを室温で１ｍｌ／分の流速で作動させた。移動相は、ＨＰＬＣ等級の水中で、４５％水酸化カリウム溶液を使用してｐＨ３．０に調節した１％（ｗｔ／ｖｏｌ）クエン酸溶液からなり、これを５０：５０（ｖｏｌ／ｖｏｌ）比でテトラヒドロフランと混合した。溶液を０．２μｍフィルターに通して濾過した。血液からのＰＢ１４１の迅速な消失が観察された（図４）。
【０１６３】
（実施例１０）
ＰＢ１４１の噴霧送達は、肺および他の組織に無毒性である
ＰＢ１４１（２５ｍｇ／ｋｇまたは２５０ｍｇ／ｋｇ）を、最大３０日連続で毎日マウスにエアロゾル化した。有効性研究で使用する標準的な用量は、２５ｍｇ／ｋｇで１〜１０日間である。各実験の終わりに、血液を収集して、肺を切除して、傷害および毒性の痕跡に関して病理組織学的に検査した。クレアチニンおよびアスパラギン酸（ＡＳＴ）およびアラニン（ＡＬＴ）アミノ基転移酵素の血清レベルを、製造業者の指示書に従って酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）キット（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、ミネアポリス、ＭＮ）を使用して測定した。３０日目の曝露の最後に、他の臓器も切除して、同様に検査した（データは示していない）。傷害または毒性の痕跡はいかなる研究でも見出されなかった（図５Ａ、図５Ｂ）。
【０１６４】
（実施例１１）
ＰＢ１４１は、抗酸化剤転写因子Ｎｒｆ２の活性をアップレギュレートして、気道上皮細胞において炎症誘発性転写因子ＮＦ−κＢを阻害する
ＢＥＡＳ−２Ｂ細胞を、１０％熱不活性化ウシ胎児血清、ペニシリンおよびストレプトマイシン（１００ＩＵ／ｍｌ）を含有するダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）中で培養した。単層培養物を異なる濃度のＰＢ１４１で２４時間処置した。次に、細胞を単離して、抗酸化剤転写因子Ｎｒｆ２のＤＮＡ結合活性を決定した。同様に、Ｎｒｆ２の核濃度は、ウェスタンブロット法により決定した。ＰＢ１４１は、濃度依存的な様式で、Ｎｆ２の核局在化およびＤＮＡ結合活性の両方を増加させた（図６Ａ、図６Ｃ）。幾つかの実験では、単層培養物を２４時間血清が除かれ、異なる濃度のＰＢ１４１で１時間前処置した後、ＬＰＳに６時間曝露させた。核タンパク質を調製して、ＮＦ−κＢのｐ６５サブユニットのＤＮＡ結合活性を定量するのに使用した。ＰＢ１４１は、濃度依存的様式でＮＦ−κＢ活性を阻害して、ほぼ完全な阻害が、１μＭの濃度で観察された（図６Ｂ）。他の実験では、細胞障害性は、１０μＭ程度と高い濃度で観察された（データは示していない）。
【０１６５】
他の実験では、急性肺傷害は、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）Ｏ１１１：Ｂ６（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ；セントルイス、ＭＯ）から調製されるエンドトキシン［リポ多糖（ＬＰＳ）］の気管内（ｉ．ｔ．）注射により誘導した。３０分後、等張性生理食塩水中の異なる濃度のＰＢ１４１を噴霧して、チャンバー入口に装着されて空気１０Ｌ／分で流動しているマイクロポンプネブライザー（Ｂｕｘｃｏ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ
Ｓｙｓｔｅｍｓ、ウィルミントン、ＮＣ）を使用して、３０分間ケージの空気へ送達させた。ＰＢＳは対照として同様に送達させた。核タンパク質は、肺試料から調製し、それらの濃度を決定して、炎症誘発性転写因子ＮＦ−κＢのｐ６５サブユニットのＤＮＡ結合活性を定量するのに使用した。ＰＢ１４１は、濃度依存的様式でＮＦ−κＢのＬＰＳ誘導性のアップレギュレーションを阻害した（図５Ｃ）。
【０１６６】
（実施例１２）
ＰＢ１４１およびＰＢ１５７は、アポトーシスを誘導するが、細胞障害性ではない
細胞生存度、アポトーシスおよび細胞障害性を評価するために、Ａｐｏ  Ｔｏｘ−Ｇｌｏ三重アッセイを、製造業者の指示書に従って使用した（Ｐｒｏｍｅｇａ、マディソン、ＷＩ）。簡潔に述べると、ＢＥＡＳ−２Ｂ細胞を、不透明壁付きの透明底部を有する９６ウェルプレートにおいて培地１００μｌ中で２×１０４個の細胞／ウェルで平板培養した。２４時間の培養後、それらを、さらなる指示時間、異なる濃度のＰＢ１４１またはＰＢ１５７で処置した。培養期間の最後に、生存度／細胞障害性試薬２０μｌを各ウェルに添加して、オービタル振とう（３００ｒ．ｐ．ｍ．、３０秒間）により混合して、３７℃で３０分間インキュベートした。次に、蛍光は、４００ｎｍでの励起および５０５ｎｍでの発光で測定して、細胞生存度を評価し、４８５ｎｍ励起および５２０ｎｍ発光で細胞障害性を評価した。ともに、相対蛍光単位（ＲＦＵ）として定量した。続いて、カスパーゼ−Ｇｌｏ  ３／７試薬１００μｌを各ウェルに添加して、オービタル振とう（３００ｒ．ｐ
．ｍ．、３０秒間）により混合して、室温で３０分間インキュベートした。発光を測定して、アポトーシスのマーカーとしてカスパーゼ活性化を評価して、相対発光単位として定量した。ＰＢ１４１およびＰＢ１５７に関する結果は類似していた。両方の化合物が、細胞障害性を示さずにアポトーシスを誘導した（データは示していない）。
【０１６７】
（実施例１３）
ＰＢ１４１溶液の噴霧は、肺への効率的な送達を提供して、肺線維症を防止する
肺線維症は、関連技術分野の文献ですでに報告されている方法により誘導した。簡潔に述べると、生理食塩水中の硫酸ブレオマイシン５０μｌまたはＮＩＥＨＳクロシドライト石綿（長さがＮ１０μｍ）０．１ｍｇを、麻酔したマウスへ気管内投与した。幾つかの実験では、線維症は、下記の標準的なＸ線曝露手順により誘導した：１０〜１２週齢の麻酔したマウスを固定化して、鉛遮蔽体は、胸腔を除く全てを除外した。次に、動物にセリウム供給源（Ｊ．Ｌ．Ｓｈｅｐｈｅｒｄ  ａｎｄ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ、サンフェルナンド、ＣＡ）から単一線量１４．５Ｇｙで、１．６５Ｇｙ／分の線量率で照射した。Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスに関するＬＤ５０は１４．５Ｇｙである。この線量では、長期間の解析に適性数の動物を可能にするのに、生存が十分である。
【０１６８】
上述するような方法を使用した肺線維症の誘導後、通常生理食塩水中に溶解したＰＢ１４１（２５ｍｇ／ｋｇ）を、チャンバー入口に装着されたマイクロポンプネブライザー（Ｂｕｘｃｏ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、ウィルミントン、ＮＣ）によって３０分間送達した。２１日後、気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬＦ）試料を得て、血球計数器および細胞の分染法により細胞浸潤に関して解析した。肺線維症は、製造業者の指示書に従って、Ｓｉｒｃｏｌコラーゲンアッセイキット（Ｂｉｏｃｏｌｏｒ）を使用して総肺コラーゲン含有量を、またヒドロキシプロリンアッセイキット（ＢｉｏＶｉｓｉｏｎ、マウンテンビュー、ＣＡ）を使用してヒドロキシプロリン含有量を推定することにより肺ホモジネートから評価した。肺組織学切片は、形態計測、ヘマトキシリンおよびエオシン（Ｈ＆Ｅ）染色、およびマッソントリクローム染色により評価した。噴霧されたＰＢ１４１組成物の送達は、炎症細胞浸潤、コラーゲン生産および筋線維芽細胞分化を効果的に防止し、これにより、有効用量のＰＢ１４１が肺に送達されることが示された。溶液（２５ｍｇ／ｋｇ）の反復肺投薬は、肺線維症を有意に低減した（図９は、ブレオマイシン誘導のみに関する結果を示す）。溶液は、気管内投与でさえ十分許容された。
【０１６９】
さらなるｉｎ  ｖｉｔｒｏ実験は、正常なヒト胎児肺線維芽細胞（ＩＭＲ−９０、Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｆｏｒ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、カムデン、ＮＪ）または組織学的に正常な患者もしくは通常の間質性肺炎（ＵＩＰ）患者の機械的に解離した外科的肺バイオプシーから成長させた線維芽細胞を使用して実施した。細胞を２４時間血清飢餓状態にして、２ｍｇ／ｍｌの組換えＴＧＦ−β（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、ミネアポリス、ＭＮ）で２４時間処置した。幾つかの実験では、ＴＧＦ−β処置前に、細胞を０．１〜１μＭのＰＢ１４１で前処置した。総細胞タンパク質抽出物を調製して、ウェスタンブロットにより、細胞増殖および筋線維芽細胞マーカーに関してアッセイした。免疫組織化学染色は、処置後にα−ＳＭＡに関して実施した。ＰＢ１４１による前処置は、増殖を阻害し（図７）、およびＵＩＰ患者由来のものを含むヒト肺線維芽細胞による筋線維芽細胞への分化を阻害した（図８）。
【０１７０】
（実施例１４）
ＰＢ１４１溶液の噴霧は、肺への効率的な送達を提供し、肺傷害を防止する
急性肺傷害は、麻酔したマウスへの大腸菌Ｏ１１１：Ｂ６（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ；セントルイス、ＭＯ）から調製されるエンドトキシン（リポ多糖；ＬＰＳ）の気管内注射により誘導した。他の実験では、全身性敗血症は、エンドトキシンの腹腔内注射により誘導した。３０分後に、ＰＢ１４１（２５ｍｇ／ｋｇ）またはビヒクル（生理食塩水）
を、チャンバー入口に装着されたマイクロポンプネブライザー（Ｂｕｘｃｏ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、ウィルミントン、ＮＣ）によって３０分間マウスへ送達した。５．５時間後の肺傷害および１２時間後の敗血症の程度は、肺組織ミエロペルオキシダーゼ活性、気管支肺胞洗浄液中の多形核好中球（ＰＭＮ）計数、肺血管透過性、肺水腫およびサイトカイン生成を測定することにより評価した。肺組織学切片は、ヘマトキシリンおよびエオシン（Ｈ＆Ｅ）染色後に、炎症および傷害の痕跡に関して顕微鏡的に評価された。
【０１７１】
図１０に示すように、噴霧によるＰＢ１４１溶液の送達は、ＢＡＬ液中のＰＭＮ計数の減少および肺ミエロペルオキシダーゼ活性の減少の両方により示されるように、肺胞腔へのＰＭＮ浸潤を効率的に防止した。ＰＢ１４１はまた、血管透過性（図１１Ａ）、浮腫（図１１Ｂ）、酸化剤ストレス（図１０Ｆ〜図１０Ｈ）およびサイトカイン生成（図１０Ｉ〜図１０Ｌ）を低減した。肺傷害の減少は、噴霧されたＰＢ１４１溶液を受けたマウスの肺において組織学的に見られた（図１１Ｃ）。
【０１７２】
さらなるｉｎ  ｖｉｔｒｏ研究に関して、上述の処置後に、肺胞マクロファージをＢＡＬ液から単離して、ＤＭＥＭ＋１０％ＦＢＳ中で平板培養した。１時間後、ＲＮＡを単離して、異なる遺伝子の発現を、実時間ＰＣＲを使用して決定し、結果は、ハウスキーピング遺伝子グリセルアルデヒド−３−リン酸脱水素酵素（ＧＡＰＤＨ）および９ｓ  ｒＲＮＡに関して値を標準化した。ＰＢ１４１で処置したマウス由来のマクロファージは、炎症性遺伝子の転写の減少および抗酸化剤遺伝子の転写の増加を示した（図１３）。他の実験では、ＰＭＮは、ヘタスターチ交換輸血によりエンドトキシン処置したマウスの末梢血から単離した。ＰＭＮ接着は、Ｃｙｔｏｓｅｌｅｃｔ白血球−内皮接着アッセイキット（ＣＢＡ−２１０；Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌａｂｓ）を用いて評価し、経内皮ＰＭＮ遊走は、Ｃｙｔｏｓｅｌｅｃｔ白血球遊出アッセイキット（ＣＢＡ−２１２；Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌａｂｓ）を用いて決定した。ＰＢ１４１で処置したマウス由来の細胞は、ＰＭＮ接着および経内皮遊走の減少を示した。
【０１７３】
（実施例１５）
ＰＢ１４１溶液の噴霧は、肺への効率的な送達を提供し、肺がんを防止する
Ａ／Ｊマウスに、生理食塩水中に溶解した５０ｍｇ／ｋｇの４−メチルニトロソアミノ−１−（３−ピリジル）−１−ブタノン（ＮＮＫ；Ｃｈｅｍｓｙｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、レネックサ、ＫＳ）を、１日目、３日目および５日目に腹腔内注射した。次に、マウスを８週間保持して、前浸潤性病変：胚胞過形成および腺腫の発症を可能にした。幾つかの実験では、がんは、下記の通りにＸ線照射により誘導した：マウスをポリカーボネートケージに配置させて、厚紙で分離した。全身性損傷のための全身照射は、６ＭＶ光子を生じる線形加速器（ＭＥＶＡＴＲＯＮ  ＰＲＩＭＵＳ（登録商標）；ＳＩＥＭＥＮＳ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ、ＣＡ、ＵＳＡ）を使用して実施した。線形加速器は、供給源から皮膚までの距離１００ｃｍに置いて、照射は、３．０Ｇｙ／分の線量で送達した。ＰＢ１４１（２５ｍｇ／ｋｇ）またはビヒクル（生理食塩水）は、マイクロポンプネブライザー（Ｂｕｘｃｏ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、ウィルミントン、ＮＣ）によって３０分間／日で８週間、マウスに送達した。
【０１７４】
マウスは、８週の処置期間後に安楽死させた。肺組織学切片は、ヘマトキシリンおよびエオシン（Ｈ＆Ｅ）により染色した。肺病変は、肺胸膜表面腫瘍の発生率および有病率を決定すること、各マウスの右肺および左肺の両方を計数することにより定量した。腺腫評価を実施する研究者は、用いる処置に関して知らされていなかった。肺の過形成および腫瘍性病変は、肺１つにつき６または７個の切片においてげっ歯類腫瘍の国際分類に従ってスコア付けした。切片は、形態計測およびＫｉ６７免疫組織化学に関してさらに評価した。ＰＢ１４１の送達は、Ａ／Ｊマウスモデルにおいて腫瘍進行、前癌性肺がんおよび細胞
増殖を有意に（およそ４０％）阻害した（図１４）。
【０１７５】
さらなるｉｎ  ｖｉｔｒｏの研究に関して、ヒト肺腺癌細胞株（ＮＣＩ−Ｈ６６１、ＮＣＩ−Ｈ４４１およびＮＣＩＨ１２９９）を、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎから入手した。細胞を１μＭのＮＮＫで１時間処置した。幾つかの実験では、ＮＮＫによる処置前に、細胞を１〜５μＭのＰＢ１４１で前処置した。細胞増殖は、ＢｒｄＵ増殖キット（Ｒｏｃｈｅ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅ）により評価した。アポトーシスは、ＴＵＮＥＬアッセイにより評価した。ＰＢ１４１による処置は、細胞増殖を有意に減少させ、ＮＮＫ誘導性肺腺癌細胞においてアポトーシスを誘導した（データは示していない）。
【０１７６】
（実施例１６）
ＰＢ１４１溶液の噴霧は、肺への効率的な送達を提供し、ＣＯＰＤを防止する
マウスに、曝露間に３０分の禁煙間隔で１日につき４回投与される５本のたばこ（フィルターなしの参照たばこ２Ｒ４Ｆ；ケンタッキー大学）の煙に１週につき５日を４週間曝露した（亜急性曝露）。最適な煙：空気の比１：６を得た。予防的研究では、たばこの煙の曝露は、マイクロポンプネブライザー（Ｂｕｘｃｏ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、ウィルミントン、ＮＣ）によってＰＢ１４１（２５ｍｇ／ｋｇ）またはビヒクル（生理食塩水）を含有する噴霧された溶液の送達により平行させた。煙の曝露の終わりに、肺炎症の程度を、気管支肺胞洗浄液中の多形核好中球（ＰＭＮ）を計数すること、および肺血管透過性、浮腫、肺リンパ球凝集ならびに炎症性ケモカインおよびサイトカインの生成を測定することにより評価した。肺気腫は、破壊指数（ＤＩ）として定量される肺胞壁の破壊により、および平均線形切片（ｉｎｔｅｒｃｅｐｔ）により定量される肺胞腔の拡張により評価した。気道リモデリングは、気道壁においてコラーゲンを染色することにより、およびフィブロネクチンの量を測定することにより評価した。肺組織学切片は、ヘマトキシリンおよびエオシン（Ｈ＆Ｅ）染色後に、炎症および傷害に関して評価した。リンパ球凝集体は、形態計測解析により定量した。
【０１７７】
図１８に示すように、噴霧されたＰＢ１４１溶液の送達は、肺における炎症性細胞のたばこの煙誘導性の増加、肺リンパ球凝集体、炎症性ケモカインおよびサイトカインの生成、気道壁リモデリング、肺高血圧および肺気腫の発症を有意に減少させた。さらに、噴霧によりＰＢ１４１の投与は、肺胞マクロファージの貪食作用能を改善した。
【０１７８】
さらなるｉｎ  ｖｉｔｒｏでの研究に関して、気管支上皮細胞、ＴＨＰ細胞（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎから入手）および肺胞マクロファージ（ヒトおよびマウスの気管支洗浄液から単離）を培養して、連邦取引委員会（ＦＴＣ）プロトコールに従って、ＲＰＭＩ培地へ２つのたばこを燻すことにより調製される１０％たばこの煙抽出物（ＣＳＥ）へ曝露した。幾つかの実験では、たばこの煙抽出物処置前に、細胞を１〜５μＭのＰＢ１４１で前処置した。ＰＢ１４１による前処置は、上皮細胞透過性、炎症性ケモカインおよびサイトカイン産生、ならびにＲＯＳ生成を減少させた。また、ＰＢ１４１による前処置は、マウスおよびヒトの肺胞マクロファージの貪食作用能を改善させた。
【０１７９】
（実施例１７）
ＰＢ１４１溶液の噴霧は、肺への効率的な送達を提供し、喘息を防止する
アレルゲン誘導性喘息は、０日目および７日目にＯＶＡの腹腔内注射による初期感作、および１４日〜２２日の偶数日のＯＶＡの気管内注射による誘発により、マウスにおいて引き起こした。各ＯＶＡ誘発の３０分後に、ＰＢ１４１（２５ｍｇ／ｋｇ）またはビヒクル（生理食塩水）をケージの空気へ３０分間噴霧した。最終的な誘発および噴霧の２４時間後に、メタコリン誘発に対する気道過敏性は、全身プレチスモグラフィー（ＷＢＰ；Ｂ
ｕｘｃｏ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、ウィルミントン、ＮＣ）により非侵襲的に、およびコンピューター制御人工呼吸器（ｆｌｅｘｉＶｅｎｔ；ＳＣＩＲＥＱ  Ｉｎｃ．、モントリオール、カナダ）により侵襲的に測定した。気腔への細胞浸潤は、肺におけるミエロペルオキシダーゼ活性、ならびに気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬＦ）中の多形核好中球および好酸球の数を測定することにより評価した。肺炎症は、血管透過性、浮腫およびサイトカイン生成により評価した。血清中の抗ＯＶＡ  ＩｇＥ濃度は、ＥＬＩＳＡキット（ＭＤ  Ｂｉｏｐｒｏｄｕｃｔｓ、セントポール、ＭＮ）を使用して測定した。肺組織学切片は、ムコ多糖蓄積の検出に使用されるメイグリュンワルドギムザまたは過ヨウ素酸シッフ（ＰＡＳ）染色、コラーゲン沈着の検出用のシリウスレッドまたはマッソントリクローム染色、ならびに炎症の評価用のヘマトキシリンおよびエオシン（Ｈ＆Ｅ）染色を用いた形態計測により評価した。肺コラーゲン含有量は、Ｓｉｒｃｏｌコラーゲンアッセイキット（Ｂｉｏｃｏｌｏｒ）を用いて可溶性コラーゲンを定量することにより決定した。
【０１８０】
図１５〜図１７に示すように、ＰＢ１４１溶液の噴霧された送達は、気道過敏性を有意に抑制すると同時に、気道リモデリングおよび粘液蓄積を減じた。それは、気腔および肺への炎症性細胞の浸潤を抑制して、ＢＡＬＦおよび血清中のサイトカイン、ケモカインおよびＩｇＥの発現を減衰させた。ＰＢ１４１投与はまた、１０ｎｇ／ｍｌのＩＦＮ−γまたはＩＬ−４／ＩＬ−１３で６時間刺激した肺上皮細胞（ＢＥＡＳ２Ｂ）においてサイトカイン生成、ｉＮＯＳ発現およびＮＯ生成を阻害した。
【０１８１】
（実施例１８）
ＰＢ１４１溶液の噴霧は、肺への効率的な送達を提供し、肺高血圧を防止する
肺高血圧は、マウスを慢性低酸素（ＦｉＯ２  １０％）に３週間曝露させることにより、マウスにおいて誘導した。対照マウスは、曝露の最後の１０日中に部屋の空気を入れ換えて、ＰＢ１４１（２５ｍｇ／ｋｇ）またはビヒクル（生理食塩水）をネブライザーによって３０分間、ケージの空気へ噴霧した。
【０１８２】
ＰＢ１４１の肺送達は、慢性低酸素誘導性の肺高血圧において右室収縮期圧を低減させる。最後のＰＢ１４１投与の２４時間後に、マウスに麻酔をかけて、各マウスの右内頸静脈を外科的に露出させて、肺高血圧で上昇される右室収縮期圧（ＲＶＳＰ）を記録するように進化させた圧力トランスデューサーをカニューレ挿入した。肺動脈圧および肺血管抵抗と同様に、圧力の増加は、ＰＢ１４１処置マウスにおいて有意により小さかった。次に、心臓を切除して、右室を左室（中隔を含む）と分離させた。各室を別個に秤量した。肺高血圧は、右室肥大を誘導するが、ＰＢ１４１処置は、左室＋中隔の重量に対する、右室重量の比の増加を有意に低減させた（図１９）。
【０１８３】
ＰＢ１４１の肺送達は、慢性低酸素誘導性の肺高血圧において血管リモデリングを低減させる。最後のＰＢ１４１投与の２４時間後に、肺試料を得た。肺高血圧における重要なマーカーであるα−ＳＭＡの免疫染色は、肺のパラフィン切片中で実施されて、切片は、顕微鏡的に検査した。α−ＳＭＡ陽性腺房血管の数を定量して、α−ＳＭＡに関して陽性である血管の中央壁厚さであるとして、筋性化なし、部分的な筋性化または完全な筋性化を示す数を決定した。肺高血圧の根底にある病態生理学である小肺血管における血管壁リモデリングのこれらの尺度は全て、ＰＢ１４１処置により低減した（図２０）。
【０１８４】
開示する本発明の原理が適用され得る多くの考え得る実施形態を考慮して、示した実施形態は、本発明の単なる好ましい例に過ぎず、本発明の範囲を限定するものと解釈されるべきではないことが理解されるべきである。
【０１８５】
本発明の好ましい実施形態によれば、例えば、以下が提供される。
（項１）
Ｘ１−Ｌ−Ｘ２
（式中、Ｌは、エノンを含む連結部分であり、
Ｘ１およびＸ２はそれぞれ独立して、必要に応じて置換されているＮ−複素環である）
の構造を有する化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくはエステル。
（項２）
Ｌが、ジエノンを含む、上記項１に記載の化合物。
（項３）
Ｌが、ペンタ−１，４−ジエン−３−オンである、上記項１に記載の化合物。
（項４）
Ｌが、ペンタ−１，５−チオール−３−オンであり、各チオールが必要に応じて置換されている、上記項１に記載の化合物。
（項５）
Ｘ１およびＸ２が同じである、上記項１から４のいずれか一項に記載の化合物。
（項６）
Ｘ１およびＸ２が、それぞれ異なる、上記項１から４のいずれか一項に記載の化合物。
（項７）
Ｘ１およびＸ２が、それぞれ必要に応じて置換されているピラジニルである、上記項１から６のいずれか一項に記載の化合物。
（項８）
Ｘ１およびＸ２が、それぞれ必要に応じて置換されているピリミジニルである、上記項１から６のいずれか一項に記載の化合物。
（項９）
親水性チオールと少なくとも２つのＮ−複素環を含むエノンとの付加体を含む化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくはエステル。
（項１０）
【化４０】
2019108374.tif 000137
（式中、
【化４１】
2019108374.tif 000138
は、単結合または二重結合を表し、
Ａは、
【化４２】
2019108374.tif 000139
が二重結合である場合にはＣＨであり、または
【化４３】
2019108374.tif 000140
が単結合である場合にはＣＨ（Ｓ−Ｒ５）であり、Ｒ５は、ペプチド、アミノ酸、アミノ酸誘導体、必要に応じて置換されているアルキル、必要に応じて置換されているアルケニル、必要に応じて置換されているアルキニル、必要に応じて置換されているシクロアルキル、または必要に応じて置換されているシクロアルケニルであり、
Ｘ１およびＸ２はそれぞれ独立して、必要に応じて置換されているＮ−複素環である）、または
【化４４】
2019108374.tif 000141
（式中、
【化４５】
2019108374.tif 000142
は、単結合または二重結合を表し、
Ａは、
【化４６】
2019108374.tif 000143
が二重結合である場合にはＣＨであり、または
【化４７】
2019108374.tif 000144
が単結合である場合にはＣＨ（Ｓ−Ｒ５）であり、Ｒ５は、ペプチド、アミノ酸、アミノ酸誘導体、必要に応じて置換されているアルキル、必要に応じて置換されているアルケニル、必要に応じて置換されているアルキニル、必要に応じて置換されているシクロアルキル、または必要に応じて置換されているシクロアルケニルであり、
Ｘ１およびＸ２はそれぞれ独立して、必要に応じて置換されているＮ−複素環であり、
Ｒ１、Ｒ２およびＲ３はそれぞれ独立して、ＣまたはＮである）、または
【化４８】
2019108374.tif 000145
（式中、
【化４９】
2019108374.tif 000146
は、単結合または二重結合を表し、
Ａは、
【化５０】
2019108374.tif 000147
が二重結合である場合にはＣＨであり、または
【化５１】
2019108374.tif 000148
が単結合である場合にはＣＨ（Ｓ−Ｒ５）であり、Ｒ５は、ペプチド、アミノ酸、アミノ酸誘導体、必要に応じて置換されているアルキル、必要に応じて置換されているアルケニル、必要に応じて置換されているアルキニル、必要に応じて置換されているシクロアルキル、または必要に応じて置換されているシクロアルケニルであり、
Ｘ１およびＸ２はそれぞれ独立して、必要に応じて置換されているＮ−複素環であり、
Ｒ１は、ＣまたはＮである）、または、
【化５２】
2019108374.tif 000149
（式中、
【化５３】
2019108374.tif 000150
は、単結合または二重結合を表し、
Ａは、
【化５４】
2019108374.tif 000151
が二重結合である場合にはＣＨであり、または
【化５５】
2019108374.tif 000152
が単結合である場合にはＣＨ（Ｓ−Ｒ５）であり、Ｒ５は、ペプチド、アミノ酸、アミノ酸誘導体、必要に応じて置換されているアルキル、必要に応じて置換されているアルケニル、必要に応じて置換されているアルキニル、必要に応じて置換されているシクロアルキル、または必要に応じて置換されているシクロアルケニルであり、
Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立して、ＣまたはＮであり、
Ｘ１およびＸ２はそれぞれ独立して、必要に応じて置換されているＮ−複素環である）
の構造を有する化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくはエステル。
（項１１）
Ｘ１が、
【化５６】
2019108374.tif 000153
の構造を有し、Ｘ２が、
【化５７】
2019108374.tif 000154
の構造を有し、
式中、Ｚ１、Ｚ２およびＺ３はそれぞれ独立して、ＣまたはＮであるが、但し、Ｚ１、Ｚ２またはＺ３の少なくとも１つはＮであり、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４およびＹ５はそれぞれ独立して、Ｈ、必要に応じて置換されているアルキル、アミノ、ヒドロキシル、必要に応じて置換されているアルコキシ、必要に応じて置換されているチオール、アシルまたはハロゲンである、上記項１から８または１０のいずれか一項に記載の化合物。
（項１２）
【化５８】
2019108374.tif 000155
の構造を有する、上記項１０または１１に記載の化合物。
（項１３）
【化５９】
2019108374.tif 000156
の構造を有する、上記項１２に記載の化合物。
（項１４）
【化６０】
2019108374.tif 000157
の構造を有する、上記項１０または１１に記載の化合物。
（項１５）
【化６１−１】
2019108374.tif 000158
【化６１−２】
2019108374.tif 000159
の構造を有する、上記項１４に記載の化合物。
（項１６）
Ｘ１およびＸ２がそれぞれ、必要に応じて置換されているピラジニルまたは必要に応じて置換されているピリミジニルである、上記項１０から１２または１４のいずれか一項に記載の化合物。
（項１７）
Ｘ１およびＸ２が、それぞれ同じである、上記項１６に記載の化合物。
（項１８）
Ｘ１およびＸ２が、それぞれ異なる、上記項１６に記載の化合物。
（項１９）
Ｒ５が、アシルアミノ置換カルボキシルアルキル、スルホネート置換アルキルまたはアシルアミノ置換アミドである、上記項１０から１８のいずれか一項に記載の化合物。
（項２０）
−Ｓ−Ｒ５が、Ｎ−アセチルシステイン、２−メルカプトエタンスルホン酸またはグルタチオンの誘導体である、上記項１０から１８のいずれか一項に記載の化合物。
（項２１）
上記項１から２０のいずれか一項に記載の化合物および少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物。
（項２２）
エアロゾルの形態である、上記項２１に記載の医薬組成物。
（項２３）
乾燥粉末の形態である、上記項２１に記載の医薬組成物。
（項２４）
対象において肺疾患を治療する方法であって、治療有効量の上記項１から２０のいずれか一項に記載の化合物を、それを必要とする前記対象に投与することを含む方法。
（項２５）
前記化合物が、吸入により前記対象に投与される、上記項２４に記載の方法。
（項２６）
前記化合物が、直接的な肺送達により投与される、上記項２４に記載の方法。
（項２７）
対象において肺疾患を治療する方法であって、治療有効量の上記項２１から２３のいずれか一項に記載の医薬組成物を、それを必要とする前記対象に投与することを含む方法。
（項２８）
前記肺疾患が、肺線維症、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、喘息、嚢胞性線維症、急性肺傷害（ＡＬＩ）、急性呼吸窮迫症候群、肺高血圧、肺がんまたは嚢胞性線維症の肺症状である、上記項２４から２７のいずれか一項に記載の方法。
（項２９）
対象において虚血再灌流状態を治療する方法であって、治療有効量の上記項１から２０のいずれか一項に記載の化合物を、それを必要とする前記対象に投与することを含む方法。
（項３０）
対象において虚血再灌流状態を治療する方法であって、治療有効量の上記項２１から２３のいずれか一項に記載の医薬組成物を、それを必要とする前記対象に投与することを含む方法。
（項３１）
前記虚血および再灌流が、前記対象における臓器の移植の結果として生じる、上記項２９または３０に記載の方法。
（項３２）
前記化合物が、前記臓器の取り出し前にドナーに投与される、上記項３１に記載の方法。
（項３３）
前記化合物が、ドナーからの取り出し時からレシピエントにおける配置の間に、前記移植臓器に供給される、上記項３１または３２に記載の方法。
（項３４）
前記臓器が肺である、上記項３１から３３のいずれか一項に記載の方法。
（項３５）
対象においてＮＦ−κＢ活性を阻害する方法であって、阻害量の上記項１から２０のいずれか一項に記載の化合物を、それを必要とする前記対象に投与することを含む方法。
（項３６）
対象において肺線維芽細胞増殖を阻害する方法であって、阻害量の上記項１から２０のいずれか一項に記載の化合物を、それを必要とする前記対象に投与することを含む方法。
（項３７）
対象において筋線維芽細胞分化を阻害する方法であって、阻害量の上記項１から２０のいずれか一項に記載の化合物を、それを必要とする前記対象に投与することを含む方法。
（項３８）
対象の肺組織において酸化剤を阻害する方法であって、治療有効量の上記項１から２０のいずれか一項に記載の化合物を、それを必要とする前記対象に投与することを含む方法。
（項３９）
対象において移植臓器の急性または慢性拒絶反応を改善または防止する方法であって、治療有効量の上記項１から２０のいずれか一項に記載の化合物を、それを必要とする前記対象に投与することを含む方法。
（項４０）
前記臓器が肺である、上記項３９に記載の方法。
（項４１）
転写因子Ｎｒｆ２の活性のアップレギュレーションによって対象の内因性抗酸化活性を増加させる方法であって、治療有効量の上記項１から２０のいずれか一項に記載の化合物を、それを必要とする前記対象に投与することを含む方法。
（項４２）
対象において肺コラーゲン沈着を阻害する方法であって、治療有効量の上記項１から２０のいずれか一項に記載の化合物を、それを必要とする前記対象に投与することを含む方法。
（項４３）
肺がん細胞において増殖を減少させ、アポトーシスを誘導する方法であって、前記細胞を、有効量の上記項１から２０のいずれか一項に記載の化合物と接触させることを含む方法。
（項４４）
肺胞マクロファージの貪食作用能を改善する方法であって、前記マクロファージを、有効量の上記項１から２０のいずれか一項に記載の化合物と接触させることを含む方法。
（項４５）
対象においてアレルゲンに対する炎症応答を減少させる方法であって、治療有効量の上記項１から２０のいずれか一項に記載の化合物を、それを必要とする前記対象に投与することを含む方法。
（項４６）
対象において炎症性、刺激性または細胞障害性作用物質に対する炎症応答を減少させる方法であって、治療有効量の上記項１から２０のいずれか一項に記載の化合物を、それを必要とする前記対象に投与することを含む方法。
（項４７）
対象において気管支収縮薬（例えば、メタコリン）に対するアレルゲン誘導性過剰応答を減少させる方法であって、治療有効量の上記項１から２０のいずれか一項に記載の化合物を、それを必要とする前記対象に投与することを含む方法。
（項４８）
対象においてアレルゲン誘導性気道リモデリングを減少させる方法であって、治療有効量の上記項１から２０のいずれか一項に記載の化合物を、それを必要とする前記対象に投与することを含む方法。
（項４９）
対象において肺血管系の低酸素誘導性リモデリングを減少させる方法であって、治療有効量の上記項１から２０のいずれか一項に記載の化合物を、それを必要とする前記対象に投与することを含む方法。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図５Ｃ】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０−１】
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【図１０−２】
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【図１０−３】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６−１】
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【図１６−２】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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