(57)【要約】【課題】植物体を効率よく生産でき、かつ生産された植物体は形態的に大きな変異形質を示さない植物体の生産方法及びこれに用いるための植物体の提供。【解決手段】ヒストン修飾酵素が過剰発現した植物体から別の植物体を形成する工程を含む、植物体の生産方法。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒストン修飾酵素が過剰発現した植物体から別の植物体を形成する工程を含む、植物体の生産方法。
【請求項２】
前記ヒストン修飾酵素はヒストンアセチル化酵素、ヒストン脱アセチル化酵素、ヒストンメチル化酵素及びヒストン脱メチル化酵素からなる群より選択される少なくとも１種である、請求項１に記載の植物体の生産方法。
【請求項３】
前記ヒストン修飾酵素はヒストン脱メチル化酵素である、請求項１又は請求項２に記載の植物体の生産方法。
【請求項４】
前記ヒストン修飾酵素はリジン特異的ヒストン脱メチル化酵素である、請求項１〜請求項３のいずれか１項に記載の植物体の生産方法。
【請求項５】
前記ヒストン修飾酵素はＬＤＬ３又はそのオーソログである、請求項１〜請求項４のいずれか１項に記載の植物体の生産方法。
【請求項６】
前記ヒストン修飾酵素が過剰発現した植物体から別の植物体を形成する工程が、ヒストン修飾酵素が過剰発現したカルスから植物器官を形成する工程を含む、請求項１〜請求項５のいずれか１項に記載の植物体の生産方法。
【請求項７】
請求項１〜請求項６のいずれか１項に記載の植物体の生産方法に用いられる、ヒストン修飾酵素が過剰発現した植物体。
【請求項８】
ヒストン修飾酵素として作用するタンパク質をコードする核酸を植物体に導入する工程を含む、前記植物体のカルスからの植物器官の形成効率を向上させる方法。
【請求項９】
前記タンパク質が、配列番号１、配列番号３及び配列番号５からなる群から選択される少なくとも１種のアミノ酸配列、又は前記アミノ酸配列との相同性が９０％以上のアミノ酸配列を有する請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
ヒストン修飾酵素として作用するタンパク質をコードする核酸を植物体に導入する工程を含む、前記植物体のバイオマスを増大させる方法。
【請求項１１】
前記タンパク質が、配列番号１、配列番号３及び配列番号５からなる群から選択される少なくとも１種のアミノ酸配列、又は前記アミノ酸配列との相同性が９０％以上のアミノ酸配列を有する請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
請求項１０又は請求項１１に記載の方法により得られた、バイオマスが増大した植物体。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、植物体の生産方法及び植物体に関する。
【背景技術】
【０００２】
クローン技術を用いてある植物体から別の植物体を生産する方法において、植物体の生産効率を向上させる技術の開発は、農園芸等の産業分野においても学術研究分野においても重要である。
【０００３】
例えば、非特許文献１には、植物の茎頂分裂組織形成に関わる因子として知られるＣＵＣ（Ｃｕｐ−Ｓｈａｐｅｄ  Ｃｏｔｙｌｅｄｏｎ）を過剰発現させるとカルス（細胞塊）からの葉や茎に類似の器官（シュート葉構造）の形成効率が向上することが報告されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】Ｐｌａｎｔ  Ｃｅｌｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．  ４４（２）：１１３−１２１（２００３）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
非特許文献１に記載された方法では、新たに作製された植物体の葉、花等の器官同士が融合したり極端に小さかったりといった、形態が通常の植物体とは大きく異なる形質が観察される場合がある。
本発明は、植物体を効率よく生産でき、かつ生産された植物体は植物体そのものや、実、葉等が矮小化する等の変異形質を示さない植物体の生産方法及びこれに用いるための植物体を提供することを課題とする。または、植物体のバイオマスを効果的に増大させることができる植物体の生産方法及びこれにより得られるバイオマスが増大した植物体を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
前記課題を達成するための具体的手段としては、好ましくは以下の態様が挙げられるが、本発明はこれに限定されるものではない。
＜１＞ヒストン修飾酵素が過剰発現した植物体から別の植物体を形成する工程を含む、植物体の生産方法。
＜２＞前記ヒストン修飾酵素はヒストンアセチル化酵素、ヒストン脱アセチル化酵素、ヒストンメチル化酵素及びヒストン脱メチル化酵素からなる群より選択される少なくとも１種である、＜１＞に記載の植物体の生産方法。
＜３＞前記ヒストン修飾酵素はＬＤＬ３である、＜１＞又は＜２＞に記載の植物体の生産方法。
＜４＞前記ヒストン修飾酵素が過剰発現した植物体から別の植物体を形成する工程が、ヒストン修飾酵素が過剰発現したカルスから植物器官を形成する工程を含む、＜１＞〜＜３＞のいずれか１項に記載の植物体の生産方法。
＜５＞＜１＞〜＜４＞のいずれか１項に記載の植物体の生産方法に用いられる、ヒストン修飾酵素が過剰発現した植物体。
＜６＞前記ヒストン修飾酵素はヒストンアセチル化酵素、ヒストン脱アセチル化酵素、ヒストンメチル化酵素及びヒストン脱メチル化酵素からなる群より選択される少なくとも１種である、＜５＞に記載の植物体。
＜７＞前記ヒストン修飾酵素はＬＤＬ３である、＜５＞又は＜６＞に記載の植物体。
＜８＞ヒストン修飾酵素として作用するタンパク質をコードする核酸を植物体に導入する工程を含む、前記植物体のカルスからの植物器官の形成効率を向上させる方法。
＜９＞前記タンパク質が、配列番号１、配列番号３又は配列番号５のいずれかで表されるアミノ酸配列から選ばれる１種以上のアミノ酸配列との相同性が９０％以上のアミノ酸配列を有する＜８＞に記載の方法。
＜１０＞ヒストン修飾酵素として作用するタンパク質をコードする核酸を植物体に導入する工程を含む、前記植物体のバイオマスを増大させる方法。
＜１１＞前記タンパク質が、配列番号１、配列番号３又は配列番号５のいずれかで表されるアミノ酸配列から選ばれる１種以上のアミノ酸配列との相同性が９０％以上のアミノ酸配列を有する＜１０＞に記載の方法。
＜１２＞＜１０＞又は＜１１＞に記載の方法により得られた、バイオマスが増大した植物体。
【発明の効果】
【０００７】
本発明によれば、植物体を効率よく生産でき、かつ生産された植物体は植物体そのものや、実、葉等が矮小化する等の変異形質を示さない植物体の生産方法及びこれに用いるための植物体が提供される。または、本発明によれば、植物体のバイオマスを効果的に増大させることができる植物体の生産方法及びこれにより得られる植物体が提供される。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１】ＡｔＬＤＬ３を過剰発現したカルスと野生型のカルスにおけるシュートの形成の状態を比較する写真である。
【図２】ＡｔＬＤＬ３を過剰発現したシロイヌナズナ、野生型のシロイヌナズナ、及びＡｔＬＤＬ３をノックアウトしたシロイヌナズナの根部におけるシュート形成の状態を比較する写真である。
【図３】ＡｔＬＤＬ３を過剰発現したシロイヌナズナ個体と、野生型のシロイヌナズナ個体とを比較する写真である。
【図４】ＡｔＬＤＬ３を過剰発現したシロイヌナズナ個体から採取した鞘と、野生型のシロイヌナズナ個体から採取した鞘とを比較する写真である。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
以下、本発明を実施するための態様について詳細に説明する。但し、本発明は以下の実施態様に限定されるものではない。以下の実施態様において、その構成要素（要素ステップ等も含む）は、特に明示した場合を除き、必須ではない。数値及びその範囲についても同様であり、本発明を制限するものではない。
本明細書において「工程」との語には、他の工程から独立した工程に加え、他の工程と明確に区別できない場合であってもその工程の目的が達成されれば、当該工程も含まれる。
【００１０】
＜植物体の生産方法＞
本発明の植物体の生産方法は、ヒストン修飾酵素が過剰発現した植物体から別の植物体を形成する工程を含む。又は、本発明の植物体の生産方法は、ヒストン修飾酵素が過剰発現した植物体のカルスを再分化し、植物体を再生させ、その結果として別の植物体を得る工程を含む。
【００１１】
本発明者らの検討により、ヒストン修飾酵素が過剰発現した植物体（以下、単に過剰発現体とも称する）から別の植物体を形成する場合は、ヒストン修飾酵素が過剰発現していない通常の植物体を用いて別の植物体を生産する場合に比べて植物体の生産効率が向上することがわかった。このような知見は、今までに報告されていないものである。
【００１２】
さらに、ヒストン修飾酵素の過剰発現体から形成された植物体は、これまで報告されているＣＵＣ等の転写因子を過剰発現した場合と異なり、形態的に大きな変異形質を示さないことがわかった。例えば、ヒストン修飾酵素を過剰発現した植物体は、野生型の植物体と比べて葉などの形状に大きな差が認められなかった。それは、特定の因子を制御するＣＵＣ等の転写因子が過剰発現した場合はある特定のパスウェイだけが強調されるのに対し、エピジェネティックに遺伝子の発現を制御する因子として知られるヒストン修飾酵素を過剰発現した場合にはより多くの遺伝子群の発現が総合的に制御されるためである。ただし、本発明はこの因果関係に何ら制限されるものではない。
【００１３】
ヒストン修飾酵素としては、ヒストンアセチル化酵素、ヒストン脱アセチル化酵素、ヒストンメチル化酵素、ヒストン脱メチル化酵素等が挙げられる。本発明におけるヒストン修飾酵素は、これを過剰発現した植物体を用いた場合に本発明の効果が得られるものであれば特に制限されず、いずれのヒストン修飾酵素も使用できる。
【００１４】
本発明のある実施態様では、ヒストン修飾酵素はヒストン脱メチル化酵素である。本発明のある実施態様では、ヒストン修飾酵素はリジン特異的ヒストン脱メチル化酵素である。本発明のある実施態様では、ヒストン修飾酵素はリジン特異的ヒストン脱メチル化酵素に属するＬＤＬ３（Ｌｙｓｉｎｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅｍｅｔｈｙｌａｔｅ  １  ｈｏｍｏｌｏｇ  ３）又はＬＤＬ３のオーソログである。
【００１５】
本発明におけるヒストン修飾酵素としては、各種植物由来のタンパク質を利用することができる。植物は被子植物及び裸子植物のいずれであってもよく、被子植物の場合、単子葉植物及び双子葉植物のいずれであってもよい。
例えば、シロイヌナズナ、アブラナ、オレンジ、カカオ、ワタ、ユーカリ、ダイズ、アズキ、ヒヨコマメ、モモ、ウメ、ナシ、マスクメロン、ジャガイモ、トマト、イネ、テンサイ、ソルガム、トウモロコシ、パームヤシ、コムギ、オオムギ等の植物由来のタンパク質（即ち、表１に記載のＮＣＢＩ  Ｌｏｃｕｓ  ＩＤ又はＮＣＢＩ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ＩＤのいずれかで表されるアミノ酸配列を含むタンパク質）であってもよい。好ましくは、シロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ  ｔｈａｌｉａｎａ）由来のＬＤＬ３、イネ（Ｏｒｙｚａ  ｓａｔｉｖａ）由来のＬＤＬ３、トウモロコシ（Ｚｅａ  ｍａｙｓ）由来のＬＤＬ３である。
【００１６】
シロイヌナズナ由来ＬＤＬ３（以下、ＡｔＬＤＬ３と称する）のアミノ酸配列を配列番号１に、ＡｔＬＤＬ３をコードするＡｔｌｄｌ３遺伝子の核酸配列を配列番号２に、イネ由来ＬＤＬ３（以下、ＯｓＬＤＬ３と称する）のアミノ酸配列を配列番号３に、ＯｓＬＤＬ３をコードするＯｓｌｄｌ３遺伝子の核酸配列を配列番号４に、トウモロコシ由来ＬＤＬ３（以下、ＺｍＬＤＬ３と称する）のアミノ酸配列を配列番号５に、ＺｍＬＤＬ３をコードするＺｍｌｄｌ３遺伝子の核酸配列を配列番号６に表す。
【００１７】
＜配列番号１  ＡｔＬＤＬ３のアミノ酸配列＞
MetAspGlyLysGluLysLysSerGlySerLysArgGlySerLysValPheGlnPheAspAspAspAlaAspAspAspGluProIleGlySerLeuLeuGluIleMetLysHisLysSerSerLysLysAspLysValGluThrGluSerThrGlyLysGlnArgGlnLysGlnValValGluLysLysLeuSerAlaLeuGlyLysAspSerGluAspMetAspAspThrLeuAlaSerPheArgLysArgLeuLysGlyAsnLysLysGlyValGluSerGlyThrSerArgValArgAsnHisGluGlyValAspThrValThrAsnSerAsnLeuLysProIleGluGluAlaAsnLysAsnGluValGlnSerValLeuLeuArgGluAsnGlyAlaSerAsnSerIleGlnLysCysAlaSerGluThrGlyThrLeuLeuHisLysPheSerGlyLysAspLysAlaAlaSerProSerHisGluLysValGluThrValSerSerGluLysGluAlaAspValPheHisGlnIleThrLysGluGluSerGluIleProMetSerGluLysAlaValGluLeuSerArgValSerValProMetProAspValHisGlyGluValAsnCysThrIleAlaProAspLysHisIleHisLeuGlyGluProThrSerGluSerGlyTyrTyrArgGluLysAsnLeuValMetCysAspCysGlyThrGlnPheAsnPheGluAspArgSerPheGluSerAsnThrGlnValThrLeuCysGlnLysCysLysTyrSerSerHisHisAsnAlaSerAsnGlyGlyGlyIleGlnValAsnThrLeuGluAspGlyThrAlaGlnAlaSerProValSerIleIleProCysGluAspGluAsnPheArgGlyAspAlaIleSerLeuProAsnSerGlyLysProSerThrLeuGlnArgProGluArgIleAlaLysLysArgLysLeuGlyAsnMetValTyrGluGlyAspValLysTrpGluAsnGluGlnGlyPheLeuAspCysGlnSerAspLysSerPheLysGlySerAspLysCysGlyPheValProSerIleSerLysGluIleGluIleGlyArgAlaAlaAlaValThrAlaGlyLeuLysAlaGlnSerValSerProIleGluLysIleIleLeuLysGluValLeuLysArgLysGlySerAsnGlnGluTyrLeuValCysArgAsnSerIle
LeuGlyLeuTrpSerLysAsnValSerArgIleLeuProValThrGluCysGlyValThrGlyGlyProSerGluSerGluLeuProSerAlaSerLeuIleArgGluValTyrLysPheLeuAspGlnArgGlyTyrIleAsnAlaGlyIleSerSerValAsnGlyLysAlaAlaSerSerThrAsnGlnAspTyrAspLeuLeuGlnGlyArgGlnLeuGluGluSerSerMetAlaSerValAlaAspSerGluGluGlyValAlaPheIleLeuGlyGlnValLysAlaValGluSerThrSerGluGlyLysLysCysAlaLeuGlnAsnAspGluArgAspLeuValGlyCysAlaThrSerGluMetLeuGluSerIleSerLysLysCysGluAlaSerIleIleAspAspAsnLysArgSerValSerMetAsnAlaLeuGlnAspSerThrAlaSerAsnValGluLysHisProGluThrPheSerValAlaLysProAlaLeuSerSerThrLeuSerSerAlaHisSerAsnGlnMetArgGlyArgAspCysValProCysGluValIleAspGluLysLysValIleValIleGlyAlaGlyProAlaGlyLeuThrAlaAlaArgHisLeuGlnArgGlnGlyPheSerValThrValLeuGluAlaArgSerArgValGlyGlyArgValPheThrAspArgSerSerLeuSerValProValAspLeuGlyAlaSerIleIleThrGlyIleGluAlaAspValProSerGluArgMetProAspProSerValLeuValCysAsnGlnLeuGlyLeuGluLeuSerValLeuHisGlyPheCysProLeuTyrAspThrValThrGlyLysLysValProAlaGluLeuAspAspAlaLeuGlnAlaGluPheAsnSerLeuIleAspAspValAspLeuLeuValGluGluIleGlyLysGluArgAlaAsnLysMetSerLeuGluAspGlyLeuGluTyrGlyLeuGlnArgLeuArgMetProHisAspLysValAsnIleAspLysPheGlyLeuLeuAsnSerSerSerLysThrGlyIleArgGlyProPheMetGlnAspGluSerTrpLysAspAspPheLeuAsnProLeuGluArgArgValMetAsnTrpHisPheAlaHisThrGluTyrGlyCysAlaAlaValLeuLysGluValSerLeuProHisTrpAsnGlnAspGluPheTyrGlyGlyPheGlyGlyProHisAlaMetIleLysGlyGlyTyrSerArgValValGluSerLeuAlaGluGlyLeuAspIleHisLeuAsnLysIleValSerAspValSerTyrValSerAspValSerAlaMetAspAsnSerLysHisLysValArgValSerThrSerAsnGlyCysGluTyrLeuGlyAspAlaValLeuValThrValProLeuGlyCysLeuLysAlaGluThrIleLysPheSerProProLeuProAspTrpLysTyrAlaSerIleLysGlnLeuGlyPheGlyValLeuAsnLysValValLeuGluPheProThrValPheTrpAspAspSerValAspTyrPheGlyAlaThrAlaGluGluThrAspLeuArgGlyGluCysPheMetPheTrpAsnValLysLysThrValGlyAlaProValLeuIleAlaLeuValValGlyLysAlaAlaPheGluTyrThrAsnLysSerLysSerGluHisValAsnHisAlaMetMetValLeuArgLysLeuPheGlyGlyAspLeuValProAspProValAlaSerValValThrAspTrpGlyThrAspProTyrSerTyrGlyAlaTyrSerTyrValAlaIleGlyAlaSerGlyGluAspTyrAspValLeuGlyArgProValGlnAsnCysLeuPhePheAlaGlyGluAlaThrCysLysGluHisProAspThrValGlyGlyAlaMetMetThrGlyValArgGluAlaValArgIleIleAspIleLeuArgSerGlyAsnAspTyrThrAlaGluIleGluThrLeuGluLysAlaGlnArgLysSerValProValArgAspGluValArgAspLeuIleLysArgLeuGluValValGluLeuSerAsnValLeuAlaArgGlnSerLeuLeuArgAsnMetPhePheSerAlaLysThrThrValGlyArgLeuHisLeuAlaLysGluLeuLeuAsnLeuProGlyGluThrLeuLysSerPheAlaGlyThrLysGluGlyLeuAlaValLeuAsnSerTrpIleLeuAspSerMetGlyLysAsnGlyThrGlnLeuLeuArgHisCysValHisIleLeuValArgValThrSerAspLeuPheAlaLeuArgLeuSerGlyIleGlyLysThrValLysGluLysValCysAlaHisThrSerArgAspIleArgAlaIleAlaSerGlnLeuValAsnValTrpLeuAspLeuTyrArgLysGluLysAlaAsnSerGlyLysLysSerLeuArgGlnAlaAsnThrThrAsnThrSerArgIleArgArgLysLeuAsnSerProAspThrAspSerLysGlyLysLeuSerAsnGlyAsnAspValLysThrAspGluGluPheGluAspAsnGlnLeuProMetSerGluGluGluLysAlaValPheAlaGluAlaGluAlaAlaArgAlaAlaAlaGluAlaAlaAlaLysAlaPheSerGluAlaTyrHisAsnThrSerLeuGlnLeuProLysIleProSerPheHisLysPheAlaArgArgGluGlnTyrAlaLysMetAspGluSerAspPheArgLysLysPheProGlyAsnValLeuGlyArgGlnAspCysMetSerGluIleAspSerArgAsnCysLysValArgAspTrpTyrAspPheProAlaSerCysLeuAspLeuAspSerAlaArgIleProValAspAsnTyrSerGlnProSerHisSerAsnGluLeuValSerHisSerLysPheArgGluCysSerGlyGluSerValAlaAlaAspThrSerPheLeuThrGlyAlaTrpValAspThrGlyGlySerSerAspGlyPheLysAspSerGlnAlaIleAspArgTrpGlnSerGlnAlaAlaAlaAlaAspProGluPhePheAsnArgThrLeuHisIleLysAspGluGluAspSerIleAlaCysSerThrGlyProProSerTrpLysHisAspGlnArgAlaAsnGluCysSerValSerGlnValThrValAsnLysGluProHisLysAsnHisIleArgSerAlaAspArgLeuLysGlnGlyValValAspPheValAlaSerLeuLeuMetAlaProTyrArgAlaLysLysIleAspArgAspValTyrLysSerIleMetLysLysThrAlaThrLysValMetGlnHisThrThrAspValGluLysAlaMetAlaValThrGlnPheLeuAspSerLysArgLysAsnLysIleArgAspPheValAspLysGlnValAspLysTyrMetValIleProGlnValProLysPro
【００１８】
＜配列番号２  Ａｔｌｄｌ３の核酸配列＞
atggatggtaaggagaagaaatctggttccaagagaggatctaaggtttttcagtttgacgatgatgctgatgatgatgaacctattggatctctcttagagattatgaagcataaaagttccaagaaggataaggttgagacagaaagtactggtaaacagaggcagaaacaggttgtggaaaagaagctgagtgctttgggcaaggattctgaagatatggatgacacattagccagttttaggaagaggttgaagggtaacaagaaaggtgttgaatcaggaacctcaagagttaggaaccacgagggtgttgatactgtaacaaattctaatttgaaaccaattgaggaagccaacaaaaacgaggtgcagagtgtattacttagggaaaacggtgcttctaattctattcaaaaatgtgcttcagaaactggaaccctcttgcataagttttctggtaaagataaggcagcctctcccagtcatgaaaaagtagaaacagtatccagtgagaaggaagcagatgtctttcatcaaattacaaaggaggaatccgagataccaatgtcagagaaggctgtggagctatccagggtgtctgtccccatgccagatgtccatggcgaagttaattgtactattgctcctgataagcacatacacttgggagagccaacttcagagtccggttattaccgagagaagaatttagttatgtgtgattgtggtacccaatttaattttgaggatcgttcctttgagtctaatactcaggttactctctgtcaaaagtgcaagtattcttcacaccataatgcttctaatggaggtggtattcaagttaatactctagaagatggaactgctcaagcttcgccggtttctataattccctgcgaagatgaaaatttccgaggggatgcaatttcactacctaattctgggaagccatcgaccttgcaacgcccagagcgtattgctaaaaagcgtaagcttggaaacatggtgtatgaaggagacgtgaaatgggagaatgagcaaggctttcttgattgtcaaagtgacaagtcctttaagggaagcgacaagtgtggttttgttccatctatttccaaggaaattgaaattggtagagcagctgcggtaacagctggacttaaagcccagtcagtaagtccaattgagaagattatacttaaagaggtgttgaagcgcaaaggtagcaatcaggagtacctagtttgcaggaactctatcttaggcctgtggagtaaaaatgtcagccgaatcttacctgtcactgaatgtggtgttaccggaggcccttctgagagtgaattgccttcagcttcccttatcagagaagtctataagtttcttgatcagagaggttatataaatgctggaatttcatctgtgaatggaaaggcggcatcttcgactaatcaagactatgatctcctccaggggagacagcttgaagaaagttctatggcttctgttgcagattctgaagagggagttgcttttatccttggtcaggtcaaagccgttgaatcaactagtgagggtaagaaatgtgctctccaaaacgatgaaagggacttggtaggatgtgcgacctcggaaatgttggaatctatcagcaaaaaatgcgaagcaagcattattgatgataacaaacgttctgtgagcatgaatgctttacaggatagtactgcatctaatgttgaaaagcatcctgaaacattttcagtagcgaagcctgctttgtctagcacactctcctctgcacatagtaatcaaatgagaggaagggactgtgttccatgtgaggttatagatgagaagaaagttatagtaattggagctggtcctgctggattaacagcagcacgtcatttacagcgccagggtttttctgtaaccgttcttgaggcaaggagtagagtaggtggtcgtgtatttacagaccggtcgtctctttcagttcctgtggatcttggggctagcataattacaggcattgaggctgatgtgccatctgaaagaatgccagatccatcggtattggtctgtaaccaattaggtctggagttgagcgtgttacatggattctgtcctctttatgatactgtaacagggaaaaaggttcctgcagaattagatgatgctctacaagcagagttcaacagtctaattgacgatgtagatttgcttgttgaggaaataggcaaggaaagagcaaataaaatgtctcttgaggatggtctagaatatggccttcaacggctgagaatgccacatgacaaggtgaacattgacaaatttgggcttctcaattcaagctcaaaaacgggcatcagaggtccctttatgcaggatgaaagctggaaagatgattttttgaatcctttggagcgaagagttatgaattggcattttgctcacacagaatatggttgtgctgctgtcctcaaggaagtttcgcttcctcactggaatcaagatgagttttatggcgggtttggagggcctcatgctatgattaagggtggttatagccgagttgttgagtcgcttgcagaaggactggacattcacttaaacaaaatagtttcagatgtatcttatgtctctgatgtatctgccatggataacagcaagcataaagtcagagttagtacatcaaatggctgtgagtatcttggagatgctgttctggtaactgttccacttggatgcttgaaagcagaaactattaagttttcaccacccttgccggactggaaatatgcgtcaatcaaacaacttggttttggagttctaaataaagttgttttggagttcccaacggtattttgggatgatagtgttgattactttggggcaactgctgaggaaacagatctaagaggtgagtgctttatgttttggaatgtcaaaaaaactgttggtgctcctgtcctgatagctttggtggttgggaaggctgcttttgaatatacaaacaagagtaagtctgagcacgtgaaccatgcaatgatggttcttcggaagctttttggtggggatctggttcctgatcctgtcgcctcggtagttactgactggggcactgatccttacagttatggtgcctactcgtatgttgctattggtgcttctggtgaagattatgatgtattgggaaggcctgttcagaattgtttgttttttgctggtgaggcaacatgcaaagagcatcctgacactgttggtggtgcaatgatgactggagtccgggaagctgtgcgtataattgatatacttagaagtggaaatgattacacagccgaaatagaaacactagaaaaagcgcagaggaaatctgtacctgtaagggatgaagtcagagacctaataaagaggctggaagttgttgagctgtctaatgtgctagccaggcaatcattgctacgaaacatgttcttctctgccaaaacaactgtcgggcgtttgcatttagccaaggagttgcttaacctacctggtgaaaccttgaaatcctttgcaggtacaaaagaagggcttgcagtgctgaactcttggatcctggattcgatgggtaagaatggaacccagcttttacgtcactgtgtacatattcttgttcgagttacgagtgacctctttgccttgaggctatcaggtattgggaagactgtgaaagaaaaggtttgtgcacacacgagccgtgatattcgtgccattgcaagtcagcttgttaatgtgtggctggatctataccggaaagaaaaagctaatagtggaaagaaatcgttgagacaagcgaatactacaaacacctctagaataagaagaaaactgaatagtccggacacagacagtaagggaaagctgagcaatggcaacgatgtgaaaacagatgaagagtttgaggacaaccagctacctatgtcagaggaagagaaggctgtgtttgctgaagctgaggcggctcgtgcagcagcagaagcagctgcaaaggcattttctgaggcctatcataatacttcattgcagcttcctaagatcccctcatttcataagtttgccaggcgagagcagtatgcaaagatggacgaatctgatttcaggaaaaagtttcctggaaatgtcttaggaagacaagattgtatgtcagagattgactcgaggaactgcaaagttagggactggtatgattttcctgcctcgtgccttgaccttgacagtgcaaggattccagttgataactattcacagcctagccattcgaatgagcttgtatctcattcgaagttcagagaatgttctggagaaagtgtggctgcggataccagtttcttaactggggcatgggttgatactggtggtagtagcgatggtttcaaggattctcaggctatagatagatggcaatctcaagctgctgctgctgatcctgaatttttcaatcgtactttgcatataaaggatgaagaagattcgattgcttgttcgactggccctcctagttggaagcatgaccaacgagcgaatgaatgttccgtgtcacaggttacagtgaataaagagccacataaaaatcatatccggagtgcagatcgtttgaaacagggagttgtagattttgttgcatcgttgcttatggccccgtatagagcaaagaaaattgatagagatgtatacaagtcaattatgaagaagacagcaacaaaggttatgcaacatacaacagatgtggagaaagctatggctgttacacagttcctcgactcaaagcggaaaaataagattcgtgactttgtggacaaacaagttgacaagtacatggtgatacctcaagttccaaaaccttga
【００１９】
＜配列番号３  ＯｓＬＤＬ３のアミノ酸配列＞
MetProAspIleArgSerAlaProGlyArgGlyLysSerAspGluAspGluArgArgProIleGlySerLeuPheLysLeuLysArgLysArgArgAlaProGlySerAlaGluAlaLysGlyAspSerAsnProSerValGluSerGluAlaProAspGlyValValProGlyGluMetAspAspThrLeuAlaIleIleLysArgLysLeuArgLysProLysLysGlyLysGluGlyGlyAspAlaValValValGlySerGlyAlaGluGlyGluLeuLeuValGluGluGluAspValGlnGlyGlyValAsnValGlyAspGlyValAlaGluAspLysSerAsnLeuGluGlyValLysValGluValAspGluValIleGlyGlyGluLeuLysAspSerGlyGlyLeuGlyLeuGluAspSerLeuSerThrLeuPheLysArgSerGlyArgLysSerArgGlnValSerValLysGluGluGluGlyValGluValAlaGlySerHisGlyGluGluIleLeuGluLysGlySerGlyLeuValSerAspArgValAlaLysGlyThrLysArgArgArgArgArgThrLysGluGluMetLysAsnAlaAlaAlaLysSerGluSerAlaMetAlaHisGluGlySerProAsnArgLysValGlyThrSerLeuProArgLysAlaLysAlaGluAlaLysValLysIleSerAsnSerAsnArgArgSerLysLysSerAspGluLysProLysAlaSerAspAspValLeuCysHisArgSerLeuGlyGluThrIleGluGlnAspAlaGluThrArgThrValLeuAspAspGlySerArgAsnSerSerAspGlyAlaSerHisArgIleGluValSerAlaCysLeuSerAsnGlnProCysLeuLysProCysSerGlyGluLeuAlaGluGluValSerLeuSerAlaAlaAsnAlaAlaThrAspGlyValSerAsnGluHisThrTyrSerGluThrLeuLeuLysGluArgAsnAspAspAlaGlyCysSerHisGlyLysProProThrLeuAlaIleLysSerIleProGlyLysLysProIleGluMetProLysLysProValArgGlnLysAspGlnLeuLeuSerThrAspValAspAsnLysCysValValGlySerGlyAspThrLysAspValAsnIleGluAsnGlnProAlaPheGlyIleProGluSerHisValThrGlyLysGlyLeuHisProHisLysMetAlaThrSerValLysGluLeuAspValValAspValValAlaProThrAspPheGluAspMetGluAsnAlaSerLysSerLysArgValThrArgSerSerArgLysArgLysHisGlyAspMetAlaTyrGluGlyAspIleAspTrpGluThrLeuMetGlnGluGlnGlyLeuPheSerAsnLeuSerAlaAlaLeuValAspTyrProLeuLysSerLysAspLysIleLysIleSerGluValLeuAspAsnGlyAspGlySerGlyValAlaAlaValArgAlaGlyLeuLysAlaLysAlaValThrProIleGluLysIleLysPheLysAspIleLeuLysArgArgGlyGlyLeuGlnGluTyrLeuGluCysArgAsnMetIleLeuSerArgTrpCysLysAspValLysHisIleLeuAspLeuAlaGluCysGlyValSerAspValCysLeuAspAspGluSerProArgGlnThrLeuIleArgAspValTyrLeuPheLeuAspGlnAsnGlyTyrIleAsnAlaGlyIleAlaSerAspLysValLysThrAspHisGluSerProProGluAspValGluValSerLysLeuAsnGluSerHisGluArgLysSerValSerIleGlnAspCysIleValThrGluAlaValGlnAspLysLysAlaValValLysGlnThrAspCysValLeuThrGluAlaSerAsnGluGluSerSerSerAlaAlaIleHisCysAspAlaGlnAspLeuLeuProProLeuLysSerGluGluLeuIlePheLysGluLysAsnGlnGlyValLeuThrGluGlyArgAspGluSerAlaLeuProSerAsnSerAspIleHisSerLysSerAspLeuAspGlyPheIleLeuLysValGluGlyGlySerLeuHisGlnAlaGluAlaAlaAspIleGluHisSerGluAsnLysHisGluAlaSerAspArgValGluSerGlyGlyTyrGlyLysLysIleIleValValGlyAlaGlyProAlaGlyLeuThrAlaAlaArgHisLeuGlnArgGlnGlyPheSerValThrValLeuGluAlaArgAsnArgIleGlyGlyArgValTyrThrAspArgValSerLeuSerValProValAspLeuGlyAlaSerIleIleThrGlyValGluAlaAspIleAlaThrGluArgArgAlaAspProSerSerLeuIleCysSerGlnLeuGlyLeuGluLeuThrValLeuAsnSerAlaCysProLeuTyrAspValValThrGlyAspLysValProAspAspLeuAspThrAspLeuGluSerGluTyrAsnGlyLeuLeuAspGluMetAlaGlnLeuPheAlaGlnAsnGlyGluSerAlaValGlyLeuSerLeuGluAspGlyLeuGluTyrAlaLeuArgLysAsnArgValThrArgSerGluGlnAspAspGlnLeuArgAsnValSerSerAlaGlyAlaValAspIleSerGluSerAlaSerThrGluLysGluIleAlaHisCysGlyLysGluAspLysThrAspValLeuSerProLeuGluArgArgValMetAsnTrpHisPheAlaHisLeuGluTyrGlyCysAlaAlaMetLeuLysSerValSerLeuProTyrTrpAsnGlnAspAspValTyrGlyGlyPheGlyGlyAlaHisCysMetIleLysGlyGlyTyrAspThrValLeuGluSerLeuAlaLysGlyLeuAspValGlnLeuAsnHisValValThrGluValLeuTyrGlySerGluGluLeuGlyAlaSerGlyAsnSerArgLysPheValLysIleSerThrSerAsnGlyAsnGluPheValGlyAspAlaValLeuIleThrValProLeuGlyCysLeuLysAlaGlnThrIleLysPheSerProSerLeuProAspTrpLysLeuSerSerIleAspArgLeuGlyPheGlyLeuLeuAsnLysIleValLeuGluPheProGluValPheTrpAspAspAsnValAspTyrPheGlyAlaThrAlaGluGlnThrAspLeuArgGlyGlnCysPheMetPheTrpAsnLeuLysLysThrValGlyValProValLeuIleAlaLeuLeuValGlyLysAlaAlaIleAspGlyGlnSerIleSerSerAspAspHisValLysAsnAlaIleValValLeuArgLysLeuPheLysAspAlaSerValProAspProValAlaSerValValThrAsnTrpGlyLeuAspProPheSerArgGlyAlaTyrSerTyrValAlaValGlyAlaSerGlyArgAspTyrAspIleLeuGlyArgProValSerAspCysLeuPhePheAlaGlyGluAlaThrCysLysGluHisProAspThrValGlyGlyAlaIleLeuSerGlyLeuArgGluAlaValArgIleIleAspLeuValHisSerGlyLysAspTyrValAlaGluValGluAlaLeuGlnThrTyrGlnMetGlnSerAspSerGluArgAsnGluValLysAspMetSerAsnLysLeuAspAlaCysGluLeuSerThrAlaLeuCysLysThrSerSerAspAlaSerTyrProLeuPheSerLysGluThrLeuLeuGlnGluMetPhePheSerAlaLysThrThrSerGlyArgLeuHisLeuAlaLysGluLeuLeuLysLeuProProAspValLeuLysSerPheAlaGlySerLysAspGlyLeuSerThrLeuAsnSerTrpIleLeuAspSerLeuGlyLysAsnAlaThrGlnLeuLeuArgHisCysValArgLeuLeuLeuLeuValSerThrAspLeuLeuAlaValArgLeuSerGlyIleGlyArgThrValLysGluLysValCysValHisThrSerArgAspIleArgAlaIleAlaArgGlnLeuValSerValTrpValGluValPheArgLysGluLysAlaSerAsnGlyGlyLeuLysLeuLeuArgArgMetProSerThrGluSerSerLysProArgSerLysAspLeuLeuSerGlyLysProIleValArgAlaProAsnGlnValSerPheAsnProLysValAlaSerLysAsnAlaArgSerAlaGlyAsnHisSerProHisThrAlaIleLysLysProGluAsnLysAlaAlaLysLeuGluAlaMetThrAlaThrArgSerAspGlySerSerLeuArgSerGlnLysGlnGlnHisAlaLeuGluProLysValAspAsnGlyLeuAlaMetSerGluGluGluAlaAlaAlaPheAlaAlaAlaGluAlaAlaArgAlaAlaAlaIleAlaAlaAlaGlnAlaTyrAlaSerValGluAlaGluIleAsnAlaProArgGluLeuProLysIleProSerPheHisThrPheAlaMetArgAspHisTyrLeuAspGluSerAspThrArgLysLysValLeuSerAspAsnLeuValArgLeuGluCysIleSerGluIleAspSerArgAsnAspLysAlaLysAsnProSerValAspHisAlaAsnCysAlaAspValAspSerSerLysMetThrGlyAspAsnCysThrGlnArgSerTyrSerAsnGluAsnAlaCysLeuIleAsnIleArgAspHisSerThrAspSerGlyAlaValAspSerArgPheThrArgAlaTrpValAspThrAspThrIlePheIleAspGlyValLysAspProLeuAlaIleGluArgTrpGlnGlnGlnAlaMetGluAlaAspLysGluPheTyrSerArgIleArgIleProAspGluGluAspSerSerSerGlnLysGlnThrCysArgSerSerAlaSerGlnValAlaGluSerLysProAlaSerAspGlyGlnSerArgGlyValGluHisLeuArgGlnGlyLeuIleAsnPheIleSerThrValLeuMetProLeuTyrArgAsnLysLysValAspArgGluGlyTyrLysGlyIleMetArgLysAlaValThrLysIleIleGluThrCysThrGluGlyGluLysMetMetThrValHisGluPheLeuAspSerLysArgLysAsnLysIleGlnThrPheValAspLysLeuValGluArgHisCysHisMetAsnArgProProAsnSer
【００２０】
＜配列番号４  Ｏｓｌｄｌ３の核酸配列＞
atgcccgacattaggtcagcccctgggcggggcaagtccgacgaggacgagcggcggccgattgggtcgttgtttaaactcaagaggaagcgcagggcaccgggttcggcggaagccaagggggattcaaaccctagcgtggaatcggaggctcccgatggtgtggtgccaggggagatggatgataccttggctattataaagaggaaattgaggaagcctaagaagggcaaagaagggggtgatgctgtggtggttggatctggagccgaaggcgagctcctggtggaggaagaagatgtgcagggtggtgttaatgttggtgatggtgttgcagaggataagagcaatctggaaggtgtgaaagtagaggttgatgaagtcattgggggtgagttgaaggattcaggtggtctagggttggaggactccttgtcgacgctgtttaagagatctggtcgaaagtctcgacaggtctctgtgaaggaggaagaaggtgtggaagttgctggttcacatggtgaggaaattcttgagaagggatctggtttggtttcggatagggttgccaagggcactaaacggagaaggcgacgcacaaaggaagaaatgaaaaatgctgctgcaaaatctgaaagtgcaatggcccatgaaggatcgcccaatcggaaagttggcacctccttgcctagaaaggcaaaggcagaggcaaaggtgaagattagtaattccaataggcgctcaaagaagtctgatgagaaaccgaaggcttcagatgatgtgttatgtcaccgatcattgggagaaacaattgaacaagacgcggagaccaggacagtactggatgatggatctagaaactcatctgatggggccagtcatcgcattgaagtttcagcttgtttaagcaatcagccttgcttgaaaccttgctcaggagagcttgctgaagaagtgtctcttagtgcagcaaatgcagccactgatggtgtttctaatgaacacacatattccgaaacattattgaaggaaagaaatgatgatgcaggttgttcccatggcaagccaccgacattagccataaaaagcatacctggtaaaaaaccaatagagatgcccaagaaacctgtccgacaaaaggatcagttattatctactgatgttgacaataaatgcgtggtgggctcaggtgacactaaagatgtcaatatcgaaaatcagccagcttttgggatccctgagtcccatgtgactgggaagggcttgcatcctcataaaatggcaacatctgtgaaagagctggatgtagttgacgtggtagcacccacagatttcgaggacatggagaatgcatcaaaatcaaagcgtgtgacacgtagctccagaaaacgcaagcatggtgacatggcatatgagggtgatattgactgggaaactctaatgcaggagcaggggctgttctcaaacctctcagcagccttagtagattatcctctcaaatcaaaagacaaaatcaaaatctcggaagttctcgacaatggagatggtagcggtgttgctgcagtgcgtgctggcctaaaggcaaaggctgttactccaattgaaaagataaaattcaaggacatattgaagcgcaggggtggccttcaggaatacctggaatgcaggaacatgattctaagtcgatggtgcaaggatgttaaacatatattggatcttgcagagtgtggtgtatctgatgtttgtttggatgacgagtcaccacgtcaaacacttatacgtgacgtgtatttattcttagatcaaaatggttacataaatgccggaatcgcctcagataaggtgaaaacagaccatgaaagtcctcctgaagatgtagaagtatccaagctaaatgaatcacatgaaaggaaatctgtcagtattcaagattgcattgtcactgaagcagtccaggataagaaagctgttgttaaacagactgattgcgttttgacagaagcatcaaatgaagagagtagctctgctgccattcactgtgatgctcaagacttgctgcctcccttgaagtccgaagagctgatattcaaggaaaagaatcagggtgtattaactgaaggtagagatgaatcagcacttcccagcaattccgatatccactctaagtctgaccttgatggtttcattttaaaagttgaaggtggcagtcttcatcaagcagaagcagctgatatagaacattctgaaaacaaacatgaagcaagtgatagagttgaatctggtgggtatggaaaaaagataatagttgttggggctggtccagctggcttaactgctgcacgacatttgcagcgccaaggtttttctgtcactgttcttgaggcacgtaataggattggcggtcgtgtttatacagatcgtgtgtctctttcagttcctgtggatttgggtgctagcattattacaggtgtggaggctgatatagcaacagaaagaagggctgatccatcatctttgatatgttctcagcttggtcttgaactgactgtgttgaacagtgcttgccctctctatgatgtagtaactggcgacaaagttcctgatgatttggatacagatttggaatctgaatacaatggtcttcttgatgagatggcacagctttttgcacaaaatggtgaaagtgcagtgggtttatcccttgaggacggattagagtatgcacttaggaagaatcgtgtgactcgatctgaacaggatgatcagttaagaaatgtatctagtgctggagctgtagacatttctgaaagtgcttccacagaaaaggagatagcccactgtggaaaggaggataagacagatgttctcagcccccttgaaagaagagttatgaactggcactttgcacatttggaatatggttgtgctgcaatgctcaaatccgtttctcttccatattggaaccaggatgatgtgtatggagggtttggaggagctcattgcatgattaaaggtggctacgacacagttctagagagccttgcaaaaggacttgatgttcagttaaatcatgttgtaactgaagtactttatggatctgaggaactaggtgccagtggtaatagcaggaaatttgtcaaaatttccacttcaaatggaaatgaatttgtgggagatgctgtgctgatcactgttcctcttggttgcttgaaagcacagacaattaaattttctccttcgttgccagactggaaattgtcttctattgacaggcttggatttggtcttctcaataaaattgtcttggagtttcctgaggtcttttgggatgataatgtggattattttggtgcaactgctgaacaaactgatttaagaggacaatgctttatgttttggaatctcaaaaagacagttggggtaccagttctgatagcactacttgttgggaaggctgctatagatggacagagtatcagttctgatgatcatgttaagaatgctatagtggttctccgtaagctctttaaggatgcttctgtaccagatccagttgcatctgttgtgacaaactggggacttgatccttttagcagaggagcttactcttatgttgcagtaggagcatcgggaagggactacgacattctaggaaggcctgtttcagactgtttattttttgctggtgaagcaacatgtaaagaacacccagatactgttggtggtgcaattttaagtggtcttcgagaagctgttcggatcattgacttggtacacagtggtaaggattatgtggctgaggttgaagctctacaaacttaccaaatgcagtcagatagtgaaagaaatgaagttaaagacatgtcaaataaacttgatgcatgtgaactttcaactgctctgtgcaaaacctcatctgatgcatcctatccactatttagcaaggagactttactgcaagaaatgttctttagtgcaaaaacaacatcagggcgtctacatttggctaaagagttattgaagcttcctccagatgttctgaaatcatttgccgggtctaaagacggactatctacgctgaactcatggatacttgattctcttgggaaaaatgctactcaactgttgcgacattgtgtacgcttgcttctgcttgtttcaaccgacctgctagctgttcgcttgtctggaattgggagaactgtaaaggaaaaggtttgtgtccatacaagtcgagatatacgtgctatagctcgtcagttggttagtgtgtgggtagaagttttccgtaaagaaaaggctagcaatggtggactcaaattgctgcgtcgcatgccatcaactgaatccagtaagcccaggagtaaggatctactgtcaggaaagcctattgtacgtgcgccaaatcaagtttcatttaaccctaaagttgcttcaaagaatgcaagatctgctggaaaccattcaccacacacagcaatcaagaagcctgagaacaaggctgcaaaactggaggctatgacggctaccaggtctgatggtagttcgcttcgttcccaaaagcaacaacatgctctagaacctaaagttgataatggcctagctatgtctgaagaagaagctgctgcatttgctgctgccgaggctgctcgagctgctgccatagcagctgcacaggcgtatgcatctgtagaggcagagataaatgcacctcgtgaacttccaaagataccatcattccatacttttgcaatgcgtgaccattatttggatgagtctgatacaagaaagaaggtgttaagtgacaaccttgtgagacttgagtgcatatcagaaattgattccaggaatgacaaagctaagaacccatcagttgaccatgccaattgtgccgatgttgacagctcaaaaatgactggtgataactgtactcagaggagctactcaaatgagaatgcctgcctaataaatattagggatcattctacagatagtggagccgtagacagtcggttcacaagggcatgggttgatacagatacaatcttcattgatggtgtcaaggatcctctagccattgagaggtggcaacaacaggcaatggaagcagataaagaattctacagtcggatacgtatacctgatgaagaagactcaagtagccaaaagcagacatgtaggagttctgcctcacaggttgcagaaagcaaacctgcatcagatgggcaatcacgaggtgtagaacatttaaggcagggtcttataaatttcatatccacagtactgatgccactatacagaaacaaaaaggttgacagggaggggtacaagggaataatgcggaaagctgtcaccaagatcattgagacatgcacagaaggagagaagatgatgactgttcatgagtttcttgattcgaaaaggaaaaataagattcaaactttcgtggataagttggttgagaggcattgccatatgaatcggcctcccaattcataa
【００２１】
＜配列番号５  ＺｍＬＤＬ３のアミノ酸配列＞
MetAspAspThrLeuAlaThrIleArgMetLysLeuLysLysArgLysLysGlyLysAspSerAsnAspPheAspAlaValAlaGluCysGlyProGluValProAlaLeuValGlnGlnGluGlyGluArgAlaValValAspIleGlyAspGlyValAlaAspGluLysSerAsnLeuAsnValValLysLeuGluGlySerAspValSerGlyAsnCysAlaGlnGlyLeuAspAspLeuGlyLeuLysAspSerLeuAlaValLeuPheThrArgProGlyArgLysSerArgGlnValSerGluGluAlaGluGlyMetGluValSerCysProHisAspGluAspGlyLeuAsnLysGlySerGlyLeuAlaProAspThrAlaSerLysGlyIleLysArgArgArgArgArgThrLysGluGluMetLysAsnAlaSerValGlnAspGlnLysAlaSerLeuProArgLysAlaLysThrAsnGlySerLysSerThrLysLeuTyrLysValGlyAlaGlyProGlyGlnAlaLeuGlyGlyLeuSerSerValSerProGlnLeuGluLysSerGlyLysGluAsnAlaValAspAspGlySerPheTyrGlnSerLeuGlyGluValLeuLeuGlnAspValGluAlaSerLysValLeuLysAspGlySerIleThrSerPheAsnGlyValThrAspHisPheGluIleSerAlaTrpAlaSerAsnHisProGlyLeuGluSerArgSerGlyAsnLeuAspGluLysThrProArgThrAlaGluHisThrThrAsnLeuGlyValSerAspAlaHisThrArgSerGlnThrLeuGlyLysGluSerSerAspAspValAspCysSerGlnGlyLysSerProThrSerThrIleLysArgLysIleGlyLeuLysProLysGlnValProGlyLysSerValArgArgLysGluGluValLeuSerValAspAlaAspAsnLysProThrAspThrThrGluIleIleGluAlaSerThrThrProValIleGluGluAsnLeuAspGlnLeuProValMetAlaProLysAspSerCysSerSerHisAspIleValGlyAsnSerProMetCysLeuGlyAlaAspMetAlaAlaProValLysTyrValAspIleValAspValAlaThrProLeuAspTyrGluAspLysGluAsnThrSerLysValLysArgValThrArgGlySerLysLysArgLysHisGlyAspMetAlaTyrGluGlyAspValAspTrpGluThrLeuMetGlnGluGlnGlyLeuPheSerAsnProSerAlaGlyPheProAspGlnSerIleLysThrLysAsnLysIleLysThrSerGluValTyrGluGlyGlyGlyAspThrGlyValAlaAlaValArgAlaGlyLeuLysAlaLysThrIleThrProIleGluLysIleLysPheLysGluValLeuLysArgLysGlyGlyLeuGlnGluTyrLeuGluCysArgAsnMetIleLeuSerArgTrpSerLysAspValLysHisLeuLeuAspLeuAlaAspCysGlyValSerAspValProLeuLysAspGluLeuProHisGlnAlaLeuThrArgAlaValPheLeuPheLeuAspGlnTyrGlyTyrIleAsnAlaGlyIleAlaSerAspLysValAlaLysGlyHisAsnAspThrProTyrGluValIleGluValProLysLeuAsnGluSerHisGlnMetGluSerValAsnIleGlnAsnSerValValSerValSerGlnLysAsnGluAspPheGluHisGlyThrSerThrGluCysCysArgThrValSerValLysAsnThrGluCysAlaLeuValGluAlaSerAsnGluLysAsnArgSerThrValHisCysGlyValLeuGluLeuLeuProHisLeuMetSerGluGluHisProMetGluLysAsnIleLeuAspValSerThrGluValArgAsnAlaSerLeuProSerSerAsnLeuAspIleGlnPheThrSerTyrMetAsnSerSerValGlyLysValGluAlaProHisGlnGlnGluAlaLeuGluIleGluAsnSerGlyAsnAsnCysGlnSerAspArgAlaGluPheAlaValHisGlyLysArgIleIleIleValGlyAlaGlyProAlaGlyLeuThrAlaAlaArgHisLeuGlnArgGlnGlyPheLeuValThrValLeuGluAlaArgGluArgIleGlyGlyArgValTyrThrAspArgThrSerLeuSerValProValAspLeuGlyAlaSerIleIleThrGlyValGluAlaAspIleAlaThrGluArgArgAlaAspProSerSerLeuIleCysTyrGlnLeuGlyLeuGluLeuThrThrLeuAsnSerAlaCysProLeuTyrAspValValThrGlyAspLysValProAspSerLeuAspGluAspLeuGluAlaGluTyrAsnGlyLeuLeuAspGluMetAlaLeuLeuPheAlaHisAsnGlyAspSerAlaIleGlyLeuSerLeuGluAspGlyLeuGluTyrAlaLeuArgLysHisArgAlaThrGlnProMetAspSerValAspGlnAspGlyHisLeuArgPheMetThrAsnSerArgAlaValAspIleSerValSerAlaSerIleGlyLysGluIleAspHisCysGlyLysAsnAspLysIleAspValLeuSerProLeuGluArgArgValMetAsnTrpHisPheAlaHisLeuGluTyrGlyCysAlaAlaThrLeuLysSerValSerLeuProTyrTrpAsnGlnAspAspValTyrGlyGlyPheGlyGlyAlaHisCysMetIleLysGlyGlyTyrAspThrValLeuArgSerLeuAlaLysGlyLeuAspIleArgLeuAsnHisValValThrGluValLeuTyrGlySerGluGluLeuGlyAspSerCysLysAspGlyLysTyrValLysValSerThrSerThrGlySerGluPheThrGlyAspAlaValLeuIleThrIleProLeuGlyCysLeuLysAlaAspThrIleAsnPheSerProSerLeuProAspTrpLysValSerSerIleAsnArgLeuGlyPheGlyValLeuAsnLysIleValLeuGluPheProGluValPheTrpAspAspAsnValAspTyrPheGlyAlaThrAlaGluGluThrAspLeuArgGlyGlnCysPheMetPheTrpAsnLeuArgLysThrAlaGlyAlaProValLeuIleAlaLeuLeuValGlyLysAlaAlaIleAspGlyGlnSerIleSerSerGlyAspHisValAsnAsnAlaMetValValLeuArgLysLeuPheLysAsnAlaSerValProAspProValAlaSerValValThrAsnTrpGlyLeuAspProPheSerArgGlyAlaTyrSerTyrValAlaValGlyAlaSerGlyArgAspTyrAspIleLeuGlyArgProValAspAsnCysLeuPhePheAlaGlyGluAlaThrCysLysGluHisProAspThrValGlyGlyAlaIleLeuSerGlyLeuArgGluAlaValArgIleValAspLeuLeuAsnThrGlySerAspTyrIleAlaGluValGluThrLeuGlnThrTyrGlnMetGlnThrAspSerGluArgAsnGluValLysAspMetSerAsnArgLeuGluAlaCysGluLeuSerThrAlaLeuSerLysAsnSerSerAspAlaMetTyrProIleValSerLysGluSerLeuLeuGlnGluMetPhePheSerAlaLysThrThrSerGlyArgLeuHisLeuAlaLysGluLeuLeuLysLeuProThrAspValLeuLysSerPheAlaGlyCysLysGluGlyLeuSerThrLeuAsnPheTrpIleLeuAspSerLeuGlyLysAsnAlaThrGlnLeuLeuArgHisCysValArgLeuLeuValLeuValSerThrAspLeuValAlaValArgLeuSerGlyIleGlyLysThrValLysGluLysValCysValHisThrSerArgAspIleArgAlaIleAlaArgGlnLeuValSerValTrpIleGluValPheArgArgGluLysAspSerAsnGlyGlyLeuLysLeuLeuArgArgMetProSerIleGluSerSerLysThrLysSerLysAspLeuGlnSerGlyLysProThrLeuArgValProAsnGlyThrLeuAspAsnAsnLysValValSerGlnArgGlnArgThrArgPheAlaSerSerGlnSerProProLysIleAsnLysLysTyrAspAsnLysGluMetLysLeuGluThrValThrAlaAlaMetSerAspGlyLysLeuLeuSerGlnLysGlnGlnHisGlyIleGluSerLysValGluGluCysGlyIleProMetSerGluGluGluAlaAlaAlaPheAlaAlaAlaGluAlaAlaArgAlaAlaAlaIleAlaAlaAlaGlnAlaTyrAlaSerValGluAlaGluIleSerValProArgGluLeuProLysIleProSerPheGlnSerPheValMetArgAspHisHisLeuAspGluSerAspAlaArgLysArgThrLeuLysAspAspPheGlyArgLeuGluCysIleSerGluAsnAspSerLysAsnGlyGluValLysAspLeuProGluAsnThrLysTyrAlaAspGlyAspSerLeuLysMetSerHisAspAsnPheThrGlnGlnSerHisSerAsnGluThrAlaCysLeuAlaAsnAlaGlnAspHisSerThrAspThrValValValAspGlyArgPheThrArgAlaTrpValAspThrAspThrIleCysIleAspGlyValLysAspProLeuAlaIleGluArgTrpGlnAlaGlnAlaMetGluAlaAspLysGluPheTyrSerArgIleArgIleProAspGluAspAspSerSerSerGlnLysHisThrCysArgSerSerAlaSerGlnGlyAlaAspSerLysProAlaSerGluArgGlnSerArgGlyValGluHisIleLysGlnGlyLeuValAsnPheIleAlaSerLeuLeuMetProLeuTyrArgGlyLysLysIleAspArgGluGlyTyrLysThrIleMetArgLysSerValAsnLysIleIleAspThrCysSerGluGlyGluLysSerMetThrThrLeuGluPheLeuAspAspLysArgLysIleLysIleGluSerPheValGlyLysMetValAspLysHisLeuHisValValSerLysSerAlaLysPro
【００２２】
＜配列番号６  Ｚｍｌｄｌ３の核酸配列＞
atggatgataccttagctaccataaggatgaaattgaagaagcggaagaaaggcaaggatagtaatgattttgatgcagtggctgaatgtggacccgaggttccggcattggttcaacaggaaggtgaacgggctgttgttgatataggtgatggtgttgctgatgagaagagcaatttgaatgtcgtgaaactggagggtagtgatgtttctgggaattgtgcacagggtttggatgatttggggttgaaagactccttggcagtgctgtttacaagacctggtcggaagtcacggcaggtctcagaggaggcagaaggcatggaagtttcttgtccgcatgatgaggatggtcttaacaagggatctggtttggctccagacacagcttccaagggcattaaaaggagaaggcgacgcacaaaggaagagatgaagaatgcttctgtgcaggatcagaaagcctcattgcctcggaaagcaaagacaaatggtagcaagtctactaaactctataaggtcggtgctggtcctgggcaagctttgggaggattgtcttctgtttctcctcaactggaaaagtctgggaaagagaatgctgtagatgatggatcattttaccaatcattaggtgaagtgcttctacaagatgtggaagccagcaaagtactgaaggatggatcaattacctctttcaatggggtcactgatcactttgaaatctcagcttgggcaagcaatcaccctgggctggaatctcgttcaggaaatcttgatgaaaaaacacctcgcacagcagaacatacgaccaatcttggtgtttctgatgcacacacacgttcccaaacgctagggaaggaaagcagtgatgatgttgattgttctcaaggcaagtcaccaacatcaaccataaaaaggaaaattggtctaaaaccaaaacaggttcctgggaaatctgttcgacgaaaagaggaagtattatctgttgacgctgataataaaccaactgatacaacagaaattattgaagcaagtactactccggttattgaggaaaatttggatcagctgcctgttatggcccccaaggattcttgttcttcacatgacattgttggaaatagtcctatgtgtctaggtgcagacatggcagcacctgtgaaatatgtggatatagttgatgttgcaacaccattggattatgaagacaaggagaacacatcaaaggtgaaacgtgttacacgaggttccaaaaaacgcaaacatggtgacatggcatatgagggtgatgttgactgggaaactctaatgcaagagcaggggctgttctcaaacccctcagcaggttttccagatcagtcaataaaaacaaaaaataaaattaaaacttcagaagtttatgagggtggaggtgatactggtgttgctgcagtacgtgctggcctaaaggcaaagactattacaccgattgagaagataaagttcaaggaggttttgaagcgaaagggtggccttcaggagtacctagagtgcagaaatatgatactaagtcgctggagcaaggatgtcaagcatttattggatcttgcagactgtggtgtttcagacgttccgttgaaagatgagttgccacatcaagcacttactcgtgctgtgtttttattcttagaccaatatggctacataaatgctggaattgcatcagataaggtggcgaaggggcacaatgacactccatatgaggttattgaagtaccaaagctaaatgaatcacatcaaatggaatcagtcaacattcaaaatagcgttgtatctgtatcacaaaagaatgaggattttgagcatggaacgagcactgaatgctgcagaactgtaagtgttaaaaatactgaatgtgctttagtagaagcatcaaatgaaaaaaatcgttccacggttcactgtggtgtcctggagttgctgcctcacttgatgtctgaagaacatccaatggaaaaaaatattctagacgtgtcaactgaagttaggaatgcatcactgccatccagcaatttggatatccaatttacatcatatatgaatagttctgttggaaaagttgaggcccctcatcaacaagaagcacttgaaattgaaaatagtggaaacaactgtcaaagtgacagggctgagtttgctgtgcatggcaaaagaataatcattgtcggagcgggccctgctggtttaactgctgctcgccatttgcaacggcaaggttttttggtcactgttcttgaggcacgagaaaggattggtggccgtgtttatacggatcgcacatcactttcagttcctgtagatttgggtgctagcattattacaggggtggaggctgatatagctactgaaagacgggctgatccatcctctttgatctgttatcagcttggtcttgaacttactacgttgaatagtgcttgccctctgtatgatgtagtaactggtgacaaggttcctgattctctggatgaagatttagaagctgaatacaatggccttcttgatgagatggcactgctttttgcgcataatggtgacagtgcaatcggtttatccctggaggatggactggagtatgctcttaggaagcatcgcgcaactcaacctatggattctgtggaccaggatggccacttgagatttatgacaaattctagagctgtagacatttccgtaagtgcttcaataggaaaggagatagatcattgtggaaagaatgataagatagatgtcctcagccctctcgagagaagggttatgaactggcactttgcacatttagagtatggttgtgctgcaacgctgaaatctgtatcccttccatactggaaccaggacgatgtatacggaggattcggaggtgctcattgcatgatcaaaggtggctatgacactgttctacggagccttgctaaaggacttgatattaggttaaatcatgttgtcactgaagtactgtatggatctgaggagttaggtgatagctgtaaggatgggaaatatgtcaaggtttccacttcaactggaagtgaatttactggagatgctgtgttgataactatccctcttggttgcttgaaagcagataccatcaatttttcaccttcgttgccagactggaaagtatcttctataaaccggcttggatttggtgttctaaacaagatagtattggagttccctgaggtattttgggatgataatgtggattactttggtgcaactgcagaagaaacagatttaagaggacaatgctttatgttttggaatctcagaaagacagctggggctccagttctgatagctctacttgttgggaaggctgctatagatggacaaagcatcagttctggtgatcatgttaacaatgctatggtggttctccgaaagctttttaagaatgcttctgtaccagatccagttgcatctgttgtgacaaattggggacttgatccctttagtagaggtgcttactcttatgttgcagttggagcatcagggcgagattatgatattcttggaaggccagttgacaattgcttattctttgcgggtgaagcaacatgcaaagagcatccagatactgttggtggtgccattttgagtggtttgcgagaagctgttcgcatcgttgacttactgaacactggcagtgactatattgccgaggtagaaacgctacagacataccaaatgcagacagacagtgaaagaaatgaagtcaaggacatgtcaaatagacttgaagcatgtgaactttcgactgctctaagtaagaactcatctgatgcaatgtatccaattgttagcaaggaatctttgctgcaagaaatgttcttcagtgcaaagacaacatcagggcgcctacatttggctaaggagttattgaagcttcctacagatgttcttaaatcatttgctgggtgtaaagaaggactaagtacgctaaacttttggatacttgattcacttgggaaaaatgctactcaactactgcggcactgtgtgcgtttgcttgtgcttgtttccactgatctggtagctgtacgtttatcaggaattgggaagactgtaaaggaaaaggtttgtgtgcacacaagccgagatattcgtgctatagctcggcagttggtcagtgtgtggattgaagtttttcgtagagaaaaggatagcaacggcggactcaaattgctgcgtcgaatgccatcaattgaatcgagtaagaccaagagtaaggatctgcaatcaggaaagcctaccttacgtgtgccaaatggaactttggacaacaataaagtagtgtcccagcgccagcgtacaagattcgcaagtagtcaatcaccaccaaagataaacaagaagtatgataacaaggaaatgaaattggaaactgtgacagctgctatgtctgatggcaagttgctttcccaaaagcaacaacatggtattgaatctaaggtggaggaatgtggcattcctatgtctgaggaagaagctgctgcattcgctgctgctgaggctgctcgagctgctgctatagcagctgcacaggcatatgcatctgtagaggcagagataagtgtgcctcgtgagcttccaaagataccgtcgttccaatcttttgtgatgcgtgatcaccatttggacgaatctgatgcaagaaaaagaacattgaaggatgattttgggagacttgagtgcatatcagaaaatgattccaagaatggcgaagttaaggatttgcctgaaaacaccaagtacgctgatggtgatagcttgaaaatgtctcatgataattttactcagcagagccactcaaatgagacagcttgcctagcaaacgctcaggatcattcaacagatactgttgttgtagacggtcggtttacaagggcatgggtggatactgatacaatctgcattgatggtgtcaaggatcctctagccattgagaggtggca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【００２３】
さらに、各種植物由来のＬＤＬ３及びそのオーソログと推定されるタンパク質の具体例を表１に示すが、これらは例示であって本発明を制限するものではない。ＬＤＬ３及びそのオーソログの情報は、例えば、米国の国立生物工学情報センター（ＮＣＢＩ、https://www.ncbi.nlm.nih.gov/gene/）のデータベースを用いて検索可能である。
【００２４】
【表１】
2019024373.tif 000002
【００２５】
ＬＤＬ３のオーソログは、例えば、配列番号１、配列番号３及び配列番号５からなる群より選択される少なくとも１種のアミノ酸配列との相同性が９０％以上のアミノ酸配列を有するタンパク質であってもよい。即ち、本発明におけるタンパク質は、配列番号１、配列番号３及び配列番号５からなる群より選択される少なくとも１種のアミノ酸配列と９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、又は９９％以上の相同性を有するアミノ酸配列を含むことができる。
【００２６】
本明細書においてアミノ酸配列の相同性とは、対象とする２つのタンパク質間のアミノ酸配列の相同性をいい、当該技術分野において公知の数学的アルゴリズムを用いて作成されたアミノ酸配列の最適なアラインメントにおいて一致するアミノ酸残基及び相同性を示すアミノ酸残基の割合（％）によって表される。アミノ酸残基の相同性は、物理化学的な性質が相互に類似するアミノ酸残基の関係により示され、例えば、芳香族アミノ酸（Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ）、疎水性アミノ酸（Ａｓｐ、Ｇｌｕ）、脂肪族アミノ酸（Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ）、極性アミノ酸（Ａｓｎ、Ｇｌｎ）、塩基性アミノ酸（Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ）、酸性アミノ酸（Ａｓｐ、Ｇｌｕ）、ヒドロキシル基を含むアミノ酸（Ｓｅｒ、Ｔｈｒ）、側鎖の小さいアミノ酸（Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｍｅｔ）などのグループにおいて、同一のグループに属するアミノ酸同士は、相互に類似するアミノ酸残基であると理解される。このような相同性を示すアミノ酸残基は、タンパク質の表現型に影響を及ぼさないことが予測される。アミノ酸配列の相同性は、同一性と同様に視覚的検査及び数学的計算により決定することができ、当業者に周知の配列相同性検索プログラム（例えば、ＢＬＡＳＴ、ＰＳＩ−ＢＬＡＳＴ、ＨＭＭＥＲ）や、遺伝情報処理ソフトウェア（例えば、ＧＥＮＥＴＹＸ［登録商標］）などを用いて算出することができる。本明細書におけるアミノ酸配列の相同性は、具体的には、ＧＥＮＥＴＹＸ［登録商標］ネットワーク版ver. 11.1.3（株式会社ゼネティックス）を用い、Protein vs Protein Global Homologyを初期設定の条件（Unit size to compareを２に設定する）で求めることができる。
【００２７】
本発明におけるヒストン修飾酵素として作用するタンパク質は、配列番号１、配列番号３及び配列番号５からなる群より選択される１種以上のアミノ酸配列との所定の相同性を有するアミノ酸配列を含むこと、さらに植物体のカルスからの植物器官の形成効率を向上させる活性を有すること、及び／又は植物のバイオマスを増大させる活性を有することを特徴とする。
【００２８】
本発明においては、上述したタンパク質をコードする核酸が用いられる。本明細書において核酸とは、ヌクレオチドがリン酸エステル結合で連結した高分子を意味し、ポリヌクレオチド及びオリゴヌクレオチドの用語と互換可能に使用される。核酸の構造は、特に限定されず、１本鎖及び２本鎖のいずれであってもよい。核酸には、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、リボ核酸（ＲＮＡ）及びこれらの混成物（例えば、ＤＮＡ−ＲＮＡのハイブリッド２本鎖、ＤＮＡ及びＲＮＡが１本鎖に連結されたキメラ核酸）が含まれる。核酸の構成単位には、主としてアデニン（Ａ）、グアニン（Ｇ）等のプリン塩基及びチミン（Ｔ）、シトシン（Ｃ）、ウラシル（Ｕ）等のピリミジン塩基が含まれるが、対象のタンパク質への翻訳を行う限り、これらの修飾物も含まれる。本発明で用いられる核酸は、好ましくは対象のタンパク質をコードするｍＲＮＡ又はｃＤＮＡである。
【００２９】
本発明の植物体の生産方法は、上記本発明のタンパク質を植物体において過剰発現させた、過剰発現体を作成することを含むものであってもよい。過剰発現体は、外部から入手したものを用いても、自前で作製したものを用いてもよい。また、上記方法により過剰発現体から形成した別の植物体を過剰発現体として用いてもよい。過剰発現体を作製する方法は、特に制限されない。例えば、アグロバクテリウム法、パーティクルガン法、エレクトロポレーション法、ＰＥＧ法等の公知の手法により、ヒストン修飾酵素の遺伝子を植物体に導入することで作製することができる。
【００３０】
なお、過剰発現体を作成する方法としては、例えば、上記のタンパク質をコードする核酸及び所望のプロモーターを含むベクターを、植物体に導入する方法があげられる。ベクターは、勘弁には当業界において入手可能な組み換え用ベクターに所望の核酸を定法により連結することによって、調整することができる。また、過剰発現体には、野生型植物（外部から本発明の核酸以外の核酸が導入されている植物を含む）の有するｌｄｌ３遺伝子を制御するネイティブプロモーターについて、これを、３５Ｓプロモーターやユビキチンプロモーター等の公知の高い発現能力を有するプロモーターに置換した、いわゆる「部位特異的形質転換体」も含まれる。このような植物は、置換されたプロモーターによって当該植物がもともと有しているｌｄｌ３遺伝子の発現が亢進することにより、植物体のカルスからの植物器官の形成効率の向上や、植物のバイオマスを増大させる活性という特性を有する。本発明では、結果的に本発明の核酸が植物内で強発現した植物、即ち過剰発現体も一態様として含まれるため、このような部位特異的形質転換体も本発明の対象となり得る。このような植物を作製する方法として、ＣＲＩＳＰＲ法、ＺＦＮ法やＴＡＬエフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）法などの公知のゲノム編集技術を用いることができる。
【００３１】
過剰発現体は、未分化の状態（カルス）であっても、分化した状態であってもよい。分化した状態の過剰発現体は、植物体の全体（植物個体）であっても、植物体の一部（葉、花弁、茎、根、果実、種子、表皮等）であってもよい。
【００３２】
過剰発現体から形成される別の植物体は、未分化の状態（カルス）であっても、分化した状態であってもよい。分化した状態の植物体は、植物体の全体（植物個体）であっても、植物体の一部（葉、花弁、茎、根、果実、種子、表皮等）であってもよい。好ましくは、未分化の状態（カルス）である過剰発現体から再分化工程を経て再生された、植物体の全体又はその一部である。
【００３３】
上記方法において別の植物体の「形成」は特定の態様に限られず、細胞培養、組織培養、栽培等が含まれる。過剰発現体から別の植物体を形成する方法は特に制限されず、公知の手法を用いることができる。例えば、ヒストン修飾酵素が過剰発現した植物体としてカルスを用いる場合は、所望の植物器官の分化を促す条件下でカルスを培養する方法が挙げられる。カルスを培養して形成された植物器官（シュート等）は、必要に応じて所定の条件下でさらに培養して、他の植物器官を備えた植物体の形成に用いてもよい。過剰発現体として植物器官を用いる場合は、挿し芽、挿し木等の方法が挙げられる。
【００３４】
本発明の植物体の生産方法における植物体の「生産効率の向上」は、種々の態様で観察されうる。例えば、過剰発現体から形成される植物体の数、形成される植物体の全体又は一部の大きさ又は数などにおいて観察されうる。植物体の生産効率の向上は、個体間の比較において観察されても、複数の個体群間の比較において観察（平均の大きさ等）されてもよい。
【００３５】
上記方法で生産される植物の種類は、特に制限されない。なお、上記方法で生産される植物とは、ヒストン修飾酵素として作用するタンパク質をコードする核酸を導入する植物をも意味する。また、上記方法で生産される植物の種類は、当該植物に導入するヒストン修飾酵素として作用するタンパク質の由来植物と同一であってもよく、また別種の植物であってもよい。
植物体は被子植物及び裸子植物のいずれであってもよく、被子植物の場合、単子葉植物及び双子葉植物のいずれであってもよい。
裸子植物としては、具体的には、ソテツ科のソテツ等、イチョウ科のイチョウ、マツ科のアカマツ、クロマツ、モミ、トウヒ等、スギ科のスギ等、イチイ科のイチイ等が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
単子葉植物としては、具体的には、イネ科のイネ、コムギ、オオムギ、カラスムギ、ライムギ、キビ、アワ、ヒエ、トウモロコシ、シコクビエ、モロコシ、タケ、ヨシ、ススキ、アマランサス、ミスカンサス、スイッチグラス、ソルガム等、サトイモ科のサトイモ等、ヤシ科のヤシ、ナツメヤシ等、バショウ科のバナナ等が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
双子葉植物としては、具体的には、アブラナ科のシロイヌナズナ、ナタネ、キャベツ、ブロッコリー、カリフラワー等、ナス科のナス、トマト、ジャガイモ、タバコ等、ウリ科のメロン、カボチャ等、マメ科のダイズ等、アオイ科のワタ等、キク科のキク等、ヤナギ科のポプラ等、ブドウ科のブドウ等、バラ科のバラ、リンゴ等、ラン科のラン等、ユリ科のユリ、チューリップ等が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
好ましくは、単子葉植物としてはイネ科植物であり、さらに好ましくはイネ、コムギ、トウモロコシ、オオムギ又はソルガムであり、より好ましくはイネ、コムギ又はトウモロコシである。双子葉植物としては、シロイヌナズナ、タバコ、ダイズ、ワタ、ナタネ、トマトであり、より好ましくはシロイヌナズナ、ダイズ、ワタ、ナタネである。
【００３６】
上記方法により生産される植物体には、本発明における核酸又はこれを含むベクターが導入された植物細胞を生育させた植物体、及び当該植物体の後代、子孫またはクローンである植物、並びにこれらの繁殖材料（例えば、種子、果実、切穂、塊茎、塊根、株、カルス、プロトプラスト等）が含まれる。形質転換植物細胞からの植物体の再生は、植物細胞の種類に応じて当業者に公知の方法で行うことが可能である。上記技術については既に確立し、本発明の技術分野において広く用いられており、本発明において上記方法を好適に用いることができる。
【００３７】
上記方法により生産される植物体の用途は、特に制限されない。例えば、上記方法における過剰発現体として用いるものであってもよく、他の目的に用いるものであってもよい。上記方法における過剰発現体として用いる以外の目的は、特に制限されない。例えば、食品用、飼料用、鑑賞用、バイオ燃料用、試験研究用等が挙げられる。
【００３８】
上記方法により生産される植物体は、加工された状態であってもよい。加工の方法は特に制限されず、滅菌、加熱、乾燥、粉砕、圧搾、塩漬等が挙げられる。加工された状態の植物体は、生存していても生存していなくてもよい。
【００３９】
本発明は、ヒストン修飾酵素として作用するタンパク質をコードする核酸を植物体に導入する工程を含む、前記植物体のカルスからの植物器官の形成効率を向上させる方法を提供する。
【００４０】
本明細書において「植物器官の形成」とは、植物体から得られたカルスを植物器官の形成を誘導する培地で培養することで生じた幼芽、不定芽、茎、葉等の植物器官を形成させることを含む。植物器官形成効率の向上とは、野生型植物（外部からヒストン修飾酵素として作用するタンパク質をコードする核酸以外の核酸が導入されている植物を含む）と比べ、植物器官形成過程の一時点において、植物器官の形成割合が向上していることを意味する。なお、植物器官とは、一般的にシュートと呼ばれる、茎頂分裂組織に由来する茎とそれに付属する葉、不定芽等を含めた構造を含むが、これに限定されない。
【００４１】
本発明は、ヒストン修飾酵素として作用するタンパク質をコードする核酸を植物体に導入する工程を含む、前記植物体のバイオマスを増大させる方法を提供する。
【００４２】
本明細書において「植物体のバイオマス」とは、植物個体の全体、一部、個別器官、あるいはその組み合わせに係る量を意図する。植物個体の全体、一部、あるいは個別器官としては、例えば、全体、地上部、根、茎、葉、果実、種子、胚、胚珠、子房、茎頂、鞘、葯、花粉、又は穂等が挙げられる。また、量としては、例えば、数、大きさ、長さ、幅、重量、面積、又は体積等が挙げられる。従って、バイオマスの例としては、全体重、地上部重、収量、茎径、茎数、稈長、葉面積、葉数、籾数、種子数、分げつ数、鞘数、鞘長、鞘重、穂数、一鞘に含まれる種数、一穂粒数、穂長、最大穂長、又は全穂重等を挙げることができる。また、「増大」とは、上記に例示されるような植物のバイオマスのいずれかが単独で、又は複数が組み合わさって増大していればよい。
【００４３】
＜植物体＞
本発明の植物体は、上述した植物体の生産方法に用いられる、ヒストン修飾酵素が過剰発現した植物体（過剰発現体）である。
【００４４】
本発明の植物体、及びこれを用いる植物体の生産方法の具体的な態様は、上述した植物の生産方法に用いる過剰発現体、及び上述した植物の生産方法の具体的な態様と同様である。
【実施例】
【００４５】
以下、本発明を実施例により更に具体的に説明する。ただし、本発明はこの実施例に限定されるものではない。
【００４６】
実施例では、植物体としてシロイヌナズナ（品種：コロンビア）を用いた。シロイヌナズナのＬＤＬ３（配列番号１）を過剰発現したシロイヌナズナは、どの組織にも普遍的（ユビキタス）な発現を促す３５Ｓというプロモーター配列に、ＡｔＬＤＬ３タンパク質をコードする遺伝子の核酸配列（配列番号２）をつなげた配列（３５Ｓ：：ＡｔＬＤＬ３）を導入してトランスジェニック植物として作製した。トランスジェニック植物の作製は、既報（Ｐｌａｎｔ  Ｊ  １６（６）：７３５−７４３）に従い、花芽へのアグロバクテリウム遺伝子導入法を用いて行った。アグロバクテリウムには、ＧＶ３１０１菌株、バイナリーベクターには、ｐＭＤＣ２０２（Ｇａｔｅｗａｙ）を用いた。また、ＡｔＬＤＬ３をノックアウトしたシロイヌナズナとしては、ＡｔＬＤＬ３のタンパク質をコードするゲノム上の塩基配列にナンセンスなＤＮＡ断片（Ｔ−ＤＮＡ）を挿入することで、ＬＤＬ３遺伝子の発現を抑制した植物系統を用いた。
【００４７】
ＡｔＬＤＬ３を過剰発現したＴ４世代のシロイヌナズナ、ＡｔＬＤＬ３を過剰発現していない（野生型）のシロイヌナズナ、及びＡｔＬＤＬ３をノックアウトしたシロイヌナズナの発芽後６日目の苗から、葉又は根端部を切り出し、カルス誘導培地（ＣＩＭ）で２週間、２５℃、恒明条件下で培養した。尚、ＣＩＭはｐＨを５．７に調節し、成分は以下のものを含む。ガンボーグＢ５培地用混合塩類、２０ｇ／Ｌ  グルコース、ガンボーグＢ５培地用ビタミン、０．５ｇ／Ｌ  ２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸、８ｇ／Ｌ  ゲランガム、５００μｇ／Ｌ  オーキシン（２，４−Ｄ）、５０μｇ／Ｌ  サイトカイニン（キネチン）。
【００４８】
作製したカルスをＣＩＭからシュート誘導培地（ＳＩＭ）に移し、３週間、２５℃、恒明条件下で培養して、シュートを形成した。尚、ＳＩＭはｐＨを５．７に調節し、成分は以下のものを含む。ガンボーグＢ５培地用混合塩類、１０ｇ／Ｌ  グルコース、ガンボーグＢ５培地用ビタミン、０．５ｇ／Ｌ  ２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸、８ｇ／Ｌ  ゲランガム、４００μｇ／Ｌ  オーキシン（ＩＢＡ）、２ｍｇ／Ｌ  サイトカイニン（ゼアチン）、１ｍｇ／Ｌ  Ｄ−ビオチン。
【００４９】
カルスから形成したシュートをＳＩＭから根誘導培地（ＲＩＭ）に移し、２〜３週間、２５℃、恒明条件下で培養した。その後、シュートと根を含む構造を土に移し、育成して、シロイヌナズナの個体を得た。尚、ＲＩＭはｐＨを５．７に調節し、成分は以下のものを含む。ガンボーグＢ５培地用混合塩類、１０ｇ／Ｌ  グルコース、ガンボーグＢ５培地用ビタミン、０．５ｇ／Ｌ  ２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸、８ｇ／Ｌ  ゲランガム、５００μｇ／Ｌ  オーキシン（ＩＢＡ）。
【００５０】
図１は、ＡｔＬＤＬ３を過剰発現したシロイヌナズナと野生型のシロイヌナズナの葉を用いて上述の方法で培養したカルスにおけるシュート形成の状態を比較する写真である。図１に示すように、ＡｔＬＤＬ３を過剰発現したシロイヌナズナは、野生型のシロイヌナズナに比べ、シュートを形成している組織（矢印で示す部分）が観察されたものの数が多かった。
【００５１】
図２は、ＡｔＬＤＬ３を過剰発現したシロイヌナズナ、野生型のシロイヌナズナ、及びＡｔＬＤＬ３をノックアウトしたシロイヌナズナの根端部（図中に矢印で示す）を用いて上述の方法で培養したカルスにおけるシュート形成の状態を比較する写真である。図２に示すように、ＡｔＬＤＬ３を過剰発現したシロイヌナズナは、野生型のシロイヌナズナに比べ、シュートの形成が多く観察された。一方、ＡｔＬＤＬ３をノックアウトしたシロイヌナズナは、野生型のシロイヌナズナに比べ、シュートの形成が少なかった。このことから、ＡｔＬＤＬ３が植物体の分化促進に影響していると考えられる。
【００５２】
図３は、上述の方法で得られたＡｔＬＤＬ３を過剰発現したシロイヌナズナＴ４個体と、野生型のシロイヌナズナ個体とを比較する写真である。図３に示すように、ＡｔＬＤＬ３を過剰発現したシロイヌナズナＴ４個体は、野生型のシロイヌナズナ個体に比べて葉の大きさが大きく、葉の数も多かった。なお、シロイヌナズナ個体の外観には、両者の間で顕著な差は見られなかった。
【００５３】
図４は、上述の方法で得られたＡｔＬＤＬ３を過剰発現したシロイヌナズナＴ４個体から採取した鞘と、野生型のシロイヌナズナ個体から採取した鞘とを比較する写真である。図４に示すように、ＡｔＬＤＬ３を過剰発現したシロイヌナズナＴ４個体から採取した鞘は、野生型のシロイヌナズナ個体から採取した鞘に比べ、鞘が長く、鞘の内部の種子の数も多かった。なお、鞘の外観には、両者の間で顕著な差は見られなかった。
【００５４】
以上の結果より、ヒストン修飾酵素を過剰発現した植物体を用いることで植物体を効率よく生産できること、及び生産された植物体は形態的に大きな変異形質を示さないことがわかった。
【図１】
2019024373.tif 000003
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【配列表】
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