(57)【要約】【課題】白髪の予防及び改善効果に優れた新規な白髪の予防及び改善剤、又は頭皮用外用剤を提供する。【解決手段】サイトグロビンの産生抑制剤を含有することを特徴とする白髪の予防及び／又は改善剤である。サイトグロビンの産生抑制剤は、優れたメラノサイトの増殖促進効果及びメラニン生成促進効果を有していた。サイトグロビンの産生抑制剤は、白髪の予防及び改善に有効であり、化粧品、医薬部外品及び医薬品等への応用が期待される。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
サイトグロビンの産生抑制剤を含有することを特徴とする白髪の予防及び／又は改善剤。
【請求項２】
サイトグロビンの産生抑制剤がサイトグロビンのｓｉＲＮＡである請求項１記載の白髪の予防及び／又は改善剤。
【請求項３】
請求項１又は２記載の白髪の予防及び／又は改善剤を含有することを特徴とする頭皮用外用剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、優れた白髪の予防及び改善効果を有する白髪予防及び改善剤、並びにその白髪予防及び改善剤を含有する皮膚外用剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
人の毛髪の色調は、毛髪に存在するメラニン色素の量によって決定される。毛髪の毛母上部に存在するメラノサイトは、通常、メラニン色素を活発に産生し、毛髪皮質細胞に受け渡すことにより毛髪の黒化に寄与している。白髪は毛母上部に存在するメラノサイトの減少あるいは機能低下により、毛母上部でメラニン色素が作られなくなることが主原因であると考えられているが、その詳細は未だに明らかになっていない。白髪の改善方法としては染毛剤による対処療法が主であるが、これは根本的な白髪の防止・改善法ではなく、効果が一過性であり、定期的な使用に対する煩わしさや頭皮の炎症、毛髪の損傷が問題となる。従って、白髪そのものの発生を本質的に予防及び改善する方法や剤の開発が望まれていた。この様な要望に対し、メラノサイトの増殖やメラニン合成能を高める成分の使用が提案され、下記のような出願（特許文献１〜５）がなされている。
【０００３】
しかしながら、これらはその有効性、有効成分の安定性の面から使用者の満足を得られるものではなく、白髪の根本的な予防及び改善剤として広く応用されるに至っていない。
【０００４】
そのため、更に優れた白髪の予防及び改善効果を持つ成分が求められていた。
【０００５】
サイトグロビン（Ｃｙｔｏｇｌｏｂｉｎ）は別名ＳＴＡＰ（ｓｔｅｌｌａｔｅ  ｃｅｌｌ‐ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ）とも呼ばれる、鉄とＩＸ型プロトポルフィリンから成るヘムを含有するタンパク質であり、哺乳類で４つ存在するグロビン（ヘモグロビン、ミオグロビン、ニューログロビン、サイトグロビン）のうちの一つである。また、ミオグロビンと相同性の高いヘム蛋白であり、酸素や一酸化炭素と結合することが知られている（非特許文献１）。また、サイトグロビンは肝臓を含む内臓の線維芽細胞に発現し、臓器線維化とともに発現増強することや、サイトグロビンを過剰発現させると細胞が酸化ストレスから保護されることが明らかになってきている（特許文献６、７）。
【０００６】
サイトグロビンは、美白効果、抗しわ効果及びメラノーマ治療効果を有すること（特許文献８）が知られているが、これらは、表皮又は真皮に対するものであった。一方、毛髪は毛包にて形成されるが、表皮及び真皮とは独立した組織である毛包におけるサイトグロビンの機能は不明であり、サイトグロビンと白髪の発生との関連性については検討されていなかった。
【０００７】
リボ核酸媒介干渉現象（ＲＮＡｉ）は、二重螺旋構造を有する２１〜２５個の塩基から
なるリボ核酸が標的遺伝子の転写体（ｍＲＮＡ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔ）に相補的に結合
し該当転写体を分解して特定遺伝子の発現を抑制する現象である（非特許文献２）。ここで用いられるリボ核酸は、低分子干渉リボ核酸（ｓｍａｌｌ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ  ＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ）と呼ばれる。
【０００８】
毛包の外毛根鞘には未分化なメラノサイトが存在し、毛母上部のメラノサイトのリザーバーとして機能することが知られている（非特許文献３）。すなわち、ヘアサイクルの休止期及びその後の脱毛により毛母上部のメラノサイトは失われるが、新たなヘアサイクルの成長期初期に外毛根鞘のメラノサイトの毛母上部への遊走、増殖、メラニン合成の促進が引き起こされる。外毛根鞘におけるメラノサイトの減少、機能低下は、ヘアサイクルの成長期初期の毛母上部へのメラノサイトの供給低下につながり、白髪の原因となる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】特開平０４−２７５２１０号公報
【特許文献２】特開平０６−１７２１３４号公報
【特許文献３】特開平０７−１８７９６２号公報
【特許文献４】特開平０７−３１６０２６号公報
【特許文献５】特開２００５−１２００１１号公報
【特許文献６】特開２０１０−０５１２７７号公報
【特許文献７】特開２０１１−１８５７８９号公報
【特許文献８】特開２０１６−１４７８３７号公報
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Ｓａｗａｉ  Ｈ，  Ｋａｗａｄａ  Ｎ，  Ｙｏｓｈｉｚａｔｏ  Ｋ，  Ｎａｋａｊｉｍａ  Ｈ，  Ａｏｎｏ  Ｓ，  Ｓｈｉｒｏ  Ｙ．  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．  ２００３．４２．５１３３−５１４２．
【非特許文献２】Ｎｏｖｉｎａ  ＣＤ，  Ｓｈａｒｐ  ＰＡ，  Ｎａｔｕｒｅ，２００４．４３０．１６１−１６４．
【非特許文献３】Ｈｏｒｉｋａｗａ  Ｔ，  Ｎｏｒｒｉｓ  ＤＡ，  Ｊｏｈｎｓｏｎ  ＴＷ，  Ｚｅｋｍａｎ  Ｔ，  Ｄｕｎｓｃｏｍｂ  Ｎ，  Ｂｅｎｎｉｏｎ  ＳＤ，  Ｊａｃｋｓｏｎ  ＲＬ，  Ｍｏｒｅｌｌｉ  ＪＧ．  Ｊ  Ｉｎｖｅｓｔ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ，  １９９６．１０６．２８−３５．
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明は、優れた白髪の予防及び改善効果を有する白髪予防及び改善剤を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明者は、黒髪と白髪の外毛根鞘におけるサイトグロビンの発現レベルを比較し、白髪の外毛根鞘では、サイトグロビンの発現が亢進していることを見出した。サイトグロビンは、メラノサイトの増殖やメラニン生成を抑制する（特許文献８）ことから、外毛根鞘におけるサイトグロビンの発現亢進が毛母上部へのメラノサイトの供給を抑制し、白髪を引き起こす。一方、外毛根鞘におけるサイトグロビンの発現を抑制することは優れた白髪の予防及び改善効果につながると考えた。そこで、鋭意検討した結果、サイトグロビンの産生抑制剤が優れた白髪の予防及び改善効果を持つことを見出し、本発明を完成するに至った。
【００１３】
すなわち、本発明は、以下の（１）〜（３）からなる。
【００１４】
（１）サイトグロビンの産生抑制剤を含有することを特徴とする白髪の予防及び／又は改善剤。
（２）サイトグロビンの産生抑制剤がサイトグロビンのｓｉＲＮＡである（１）記載の白髪の予防及び／又は改善剤。
（３）（１）又は（２）記載の白髪の予防及び／又は改善剤を含有することを特徴とする頭皮用外用剤。
【発明の効果】
【００１５】
本発明のサイトグロビンの産生抑制剤は、優れた白髪の予防及び改善効果を有しており、医薬品、医薬部外品、化粧品の分野において貢献できるものである。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】黒髪及び白髪の毛根部の免疫組織化学染色像
【発明を実施するための形態】
【００１７】
以下に、本発明について詳細に述べる。
【００１８】
本発明におけるサイトグロビンの産生抑制剤は、サイトグロビン産生細胞におけるサイトグロビンの産生を抑制するものであり、その程度は、無処理群に比較してサイトグロビンの産生量を抑えることができれば、特に限定されるものではない。好ましくは、サイトグロビンの代謝経路抑制剤、合成酵素阻害剤、タンパク質合成阻害剤等が挙げられ、さらに好ましくは、サイトグロビンのｓｉＲＮＡが挙げられる。
【００１９】
本発明におけるサイトグロビンのｓｉＲＮＡは、サイトグロビンのｍＲＮＡに相補的に結合し、その部分のｍＲＮAを分解し、サイトグロビンの遺伝子発現を抑制する低分子ＲＮＡであり、合成することができる。また、市販品を入手できる。
【００２０】
本発明における頭皮用外用剤は、白髪を予防及び改善することを目的に用いる。
【００２１】
本発明の頭皮用外用剤には、サイトグロビンの産生抑制剤をそのまま使用しても良く、効果を損なわない範囲内で、化粧品、医薬部外品又は医薬品等に用いられる成分である油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、界面活性剤、金属石鹸、ｐＨ調整剤、防腐剤、香料、保湿剤、粉体、紫外線吸収剤、増粘剤、色素、酸化防止剤、美白剤、キレート剤、賦形剤、皮膜剤等の成分を含有することもできる。
【００２２】
本発明の剤型としては、例えば、クリーム、ローション、乳液、ゲル剤、エアゾール剤、ヘヤートニック、ヘヤーリキッド、リンス、シャンプー、ヘヤートリートメント、ヘヤーコンディショナー等が挙げられる。
【００２３】
本発明に用いるサイトグロビンの産生抑制剤の含有量は、特に限定されないが、０．００００１〜1０重量％の範囲が好ましく、さらに好ましくは０．０００１〜１重量％である。また、添加の方法については、予め加えておいても製造途中で添加しても良く、作業性を考えて適宜選択すればよい。
【００２４】
次に本発明を詳細に説明するため、実施例として本発明に用いるサイトグロビンの産生抑制剤の処方例及び実験例を挙げるが、本発明はこれに限定されるものではない。実施例に示す含有量の％とは重量％を示す。
【実施例１】
【００２５】
実験例１  黒髪と白髪の外毛根鞘におけるサイトグロビン発現レベルの比較
黒髪もしくは白髪を伴う健常人の頭皮のパラフィン包埋切片を用いて、サイトグロビンに対するマウスモノクローナル抗体を使用した免疫組織化学染色を行った。顕微鏡下にて赤く染色されたサイトグロビンの観察を行った。
【００２６】
黒髪及び白髪の毛根部の免疫組織化学染色像を図1に示した。白髪では、外毛根鞘に沿って陽性細胞を多数認めた。一方、これらの陽性細胞は黒髪の外毛根鞘には認められなかった。
【実施例２】
【００２７】
実験例２  メラノサイトの増殖に及ぼすサイトグロビン産生抑制剤の影響
ヒト正常メラノサイトＮＨＥＭ  １．２５×１０６個にＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ  ＲＮＡｉＭＡＸ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用い２０ｎＭのｓｉＲＮＡをトランスフェクションし、７２時間培養した。その後、増殖細胞のマーカーであるＫｉ６7を免疫染色し、細胞の核をＤＡＰＩ染色した。Ｋｉ６７陽性細胞を増殖期の細胞、ＤＡＰＩ陽性細胞を総細胞とし、それぞれの計測値から総細胞に占める増殖期細胞の割合を算出した。尚、サイトグロビンｓｉＲＮＡ及びコントロールｓｉＲＮＡは以下に示すものを用いた。
【００２８】
サイトグロビンｓｉＲＮＡ
ＡＵＣＵＣＣＡＵＣＵＣＧＣＣＵＧＧＣＡＣＵＵＵＣＵ（配列番号１）
コントロールｓｉＲＮＡ
ＡＧＡＵＧＣＧＡＣＧＧＧＣＧＡＵＡＧＧＡＡＡＧＡＵ（配列番号２）
【００２９】
実験結果を表１に示した。サイトグロビンｓｉＲＮＡをトランスフェクションした結果、増殖期細胞の割合が増加した。すなわち、本発明のサイトグロビンｓｉＲＮＡは、優れた細胞増殖促進効果を示した。
【００３０】
【表１】
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【実施例３】
【００３１】
実験例３  メラニン生成に及ぼすサイトグロビン産生抑制剤の影響
メラニン生成においては、チロシナーゼ（ＴＹＲ）、チロシナーゼ関連タンパク質１（ＴＲＰ１）及びチロシナーゼ関連タンパク質２（ＴＲＰ２）が主要な酵素として関与し、これら酵素の発現制御には小眼球症関連転写因子（ＭＩＴＦ）が重要な役割を担っている。実験例２と同様にヒト正常メラノサイトＮＨＥＭ  １．２５×１０６個にサイトグロビン及びコントロールｓｉＲＮＡをトランスフェクションし、２４時間培養後、総ＲＮＡの抽出を行った。細胞からの総ＲＮＡの抽出はＲＮＡｉｓｏ  ｐｌｕｓ（ＴＡＫＡＲＡ）を用いて行い、総ＲＮＡ量は分光光度計（ＮａｎｏＤｒｏｐ）を用いて２６０ｎｍにおける吸光度により求めた。ｍＲＮＡ発現量の測定は、細胞から抽出した総ＲＮＡを基にしてリアルタイムＲＴ−ＰＣＲ法により行った。リアルタイムＲＴ−ＰＣＲ法には、ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔ  ＲＴ  ＭａｓｔｅｒＭｉｘ（ＴＡＫＡＲＡ）及びＳＹＢＲ  Ｓｅｌｅｃｔ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いた。すなわち、５００ｎｇの総ＲＮＡを逆転写反応後、ＰＣＲ反応（９５℃：１５秒間、６０℃：６０秒間、４０ｃｙｃｌｅｓ）を行った。その他の操作は定められた方法に従い、サイトグロビン、ＴＹＲ、ＴＲＰ１、ＴＲＰ２及びＭＩＴＦの発現量を、内部標準であるβ―ａｃｔｉｎ  ｍＲＮＡの発現量に対する割合として求めた。サイトグロビン、ＴＹＲ、ＴＲＰ１、ＴＲＰ２及びＭＩＴＦの発現率は、コントロールのサイトグロビン、ＴＹＲ、ＴＲＰ１、ＴＲＰ２及びＭＩＴＦ  ｍＲＮＡの発現量に対するサイトグロビンｓｉＲＮＡトランスフェクション群のサイトグロビン、ＴＹＲ、ＴＲＰ１、ＴＲＰ２及びＭＩＴＦ  ｍＲＮＡの発現量の比率として算出した。尚、各遺伝子の発現量の測定に使用したプライマーは次の通りである。
【００３２】
サイトグロビン用のプライマーセット
ＣＴＣＡＡＣＡＣＴＧＴＣＧＴＧＧＡＧＡＡＣＣＴ（配列番号３）
ＣＡＣＡＡＧＧＧＣＧＡＧＣＡＣＡＧＡ（配列番号４）
ＴＹＲ用のプライマーセット
ＴＧＣＧＧＴＧＧＧＡＡＣＡＡＧＡＡＡＴＣ（配列番号５）
ＧＡＡＧＡＡＴＧＡＴＧＣＴＧＧＧＣＴＧＡＧＴ（配列番号６）
ＴＲＰ１用のプライマーセット
ＣＧＡＡＡＣＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＴＡＣＡＧＴ（配列番号７）
ＣＴＣＣＴＣＡＧＣＣＡＴＴＣＡＴＣＡＡＡＧＡＣＴ（配列番号８）
ＴＲＰ２用のプライマーセット
ＧＧＡＡＴＧＣＴＴＴＧＧＡＡＧＧＧＴＴＴＧ（配列番号９）
ＡＡＡＧＣＧＴＴＴＧＴＣＣＣＧＴＴＣＡＧ（配列番号１０）
ＭＩＴＦ用のプライマーセット
ＧＡＧＧＣＡＧＴＧＧＴＴＴＧＧＧＣＴＴ（配列番号１１）
ＡＡＴＴＣＴＧＣＡＣＣＣＧＧＧＡＡＴＣ（配列番号１２）
β―Ａｃｔｉｎ用のプライマーセット
ＣＡＣＴＣＴＴＣＣＡＧＣＣＴＴＣＣＴＴＣＣ（配列番号１３）
ＧＴＧＴＴＧＧＣＧＴＡＣＡＧＧＴＣＴＴＴＧ（配列番号１４）
【００３３】
実験結果を表２に示した。サイトグロビンｓｉＲＮＡをトランスフェクションした結果、サイトグロビンの発現が低下した。一方、ＴＹＲ、ＴＲＰ１、ＴＲＰ２及びＭＩＴＦの発現が増加した。すなわち、本発明のサイトグロビンｓｉＲＮＡは、優れたサイトグロビン産生抑制効果及びメラニン生成促進効果を示した。
【００３４】
【表２】
2019081721.tif 000004
【実施例４】
【００３５】
処方例１  ヘヤートニック
処方                                                            含有量（％）
１．サイトグロビンｓｉＲＮＡ                                    ０．０２
２．９５％エタノール                                          ６０．０
３．グリセリン                                                  ２．０
４．精製水                                                      残量
［製造方法］成分２〜４を十分撹拌混合し、成分１を加え、製品とする。
【００３６】
処方例２  ヘヤーローション
処方                                                            含有量（％）
１．サイトグロビンｓｉＲＮＡ                                    ０．０１
２．ステアリン酸                                                ５．０
３．セチルアルコール                                            ５．０
４．流動パラフィン                                              ２．０
５．グリセリンモノステアレート                                  １．３
６．ソルビタンモノオレエート                                    １．５
７．ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（１０Ｅ．О．）  ０．８
８．グリセリン                                                  ６．０
９．防腐剤                                                      適量
１０．精製水                                                      残量
［製造方法］成分２〜７を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分８〜１０を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化し、かき混ぜながら３０℃まで冷却後、成分１を加え、製品とする。
【００３７】
処方例３  クリーム
処方                                                            含有量（％）
１．サイトグロビンｓｉＲＮＡ                                    ０．０２
２．スクワラン                                                  ５．５
３．オリーブ油                                                  ３．０
４．ステアリン酸                                                ２．０
５．ミツロウ                                                    ２．０
６．ミリスチン酸オクチルドデシル                                ３．５
７．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．О．）            ３．０
８．ベヘニルアルコール                                          １．５
９．モノステアリン酸グリセリン                                  ２．５
１０．香料                                                        ０．１
１１．パラオキシ安息香酸メチル                                    ０．２５
１２．１，３−ブチレングリコール                                  ８．５
１３．精製水                                                      残量
［製造方法］成分２〜９を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１１〜１３を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら冷却し、４５℃で成分１０を加え、更に３０℃まで冷却後、成分１を加え、製品とする。
【００３８】
処方例４  ゲル剤
処方                                                            含有量（％）
１．サイトグロビンｓｉＲＮＡ                                    ０．００１
２．エタノール                                                  ５．０
３．パラオキシ安息香酸メチル                                    ０．１
４．ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（６０Ｅ．О．）              ０．１
５．香料                                                        適量
６．１，３−ブチレングリコール                                  ５．０
７．グリセリン                                                  ５．０
８．キサンタンガム                                              ０．１
９．カルボキシビニルポリマー                                    ０．２
１０．水酸化カリウム                                              ０．２
１１．精製水                                                      残量
［製造方法］成分２〜５と、成分１及び６〜１１をそれぞれ均一に溶解し、両者を混合して製品とする。
【産業上の利用可能性】
【００３９】
以上のことから、本発明のサイトグロビンの産生抑制剤は、優れたメラノサイトの増殖促進効果及びメラニン生成促進効果を示した。よって、本発明のサイトグロビンの産生抑制剤を含有することを特徴とする白髪の予防及び／又は改善剤は、白髪の予防及び改善に有効である。  
【図１】
2019081721.tif 000005
【配列表】
2019081721000001.app