(57)【要約】      （修正有）【課題】両方の性別及び全ての発達段階のトコジラミを誘引及び／又は拘束することができる組成物の提供。【解決手段】組成物の活性成分が、ジメチルジスルフィド、ジメチルトリスルフィド、（Ｅ）‐２‐ヘキセナール、（Ｅ）‐２‐オクテナール、及び２‐ヘキサノンから本質的に成る、トコジラミを誘引又は拘束するための組成物であり、ブタナール、ペンタナール、ベンズアルデヒド、ベンジルアルコール、アセトフェノン、ベルべノン、オクタン酸エチル、オクタン酸メチル、ヘキサン酸ペンチル、ジメチルアミノエタノール、Ｎ‐アセチルグルコサミン、Ｌ‐３‐ヒドロキシキヌレニンＯ‐サルフェート、Ｌ‐バリン、Ｌ‐アラニン等の追加の化合物の有効量と組み合わせてもよい。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
組成物の活性成分が、ジメチルジスルフィド、ジメチルトリスルフィド、（Ｅ）‐２‐ヘキセナール、（Ｅ）‐２‐オクテナール、および２‐ヘキサノンから本質的に成る、トコジラミを誘引および／または拘束するための組成物。
【請求項２】
組成物の活性成分が、ブタナール、ペンタナール、ヘキサナール、ベンズアルデヒド、ベンジルアルコール、アセトフェノン、ベルべノン、オクタン酸エチル、オクタン酸メチル、ヘキサン酸ペンチル、ジメチルアミノエタノール、Ｎ‐アセチルグルコサミン、Ｌ‐３‐ヒドロキシキヌレニン Ｏ‐サルフェート、Ｌ‐バリン、Ｌ‐アラニン、オクタナール、ノナナール、デカナール、（Ｅ，Ｅ）‐２，４‐オクタジエナール、（Ｅ，Ｚ）‐２，４‐オクタジエナール、酢酸ベンジル、（＋）‐リモネン、（−）‐リモネン、６‐メチル‐５‐ヘプテン‐２‐オン（スルカトン）、ゲラニルアセトン、二酸化炭素、１‐オクテン‐３‐オール、Ｌ‐カルボン、Ｌ‐乳酸、プロピオン酸、酪酸、吉草酸、オレイン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、リノール酸、ラウリン酸、カプリン酸、ミリスチン酸、アンドロステノン、３‐メチルインドール、１‐ドコサノール、ペンタデカン酸、スクアレン、コレステロール、および２，２‐ジメチル‐１，３‐ジオキソラン‐４‐メタノールから成る群より選択される１つ以上の追加の化合物の有効量と組み合わされたジメチルジスルフィド、ジメチルトリスルフィド、（Ｅ）‐２‐ヘキセナール、（Ｅ）‐２‐オクテナール、および２‐ヘキサノンから本質的に成る、トコジラミを誘引および／または拘束するための組成物。
【請求項３】
顆粒、粉末、微粉、ペースト、ゲル、懸濁液、エマルジョン、または液体溶液として配合される、請求項１または請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
徐放性ルアーとして配合される、請求項１乃至３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５】
ジメチルジスルフィド、ジメチルトリスルフィド、（Ｅ）‐２‐ヘキセナール、（Ｅ）‐２‐オクテナール、および２‐ヘキサノンのブレンドが、徐放性ルアーとして配合される、請求項１乃至４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６】
請求項１乃至５のいずれか一項に記載の組成物を所望される場所に提供することを含む、吸血性昆虫を誘引および／または拘束する方法。
【請求項７】
ジメチルジスルフィド、ジメチルトリスルフィド、（Ｅ）‐２‐ヘキセナール、（Ｅ）‐２‐オクテナール、および２‐ヘキサノンが、前記ジメチルジスルフィド、ジメチルトリスルフィド、（Ｅ）‐２‐ヘキセナール、（Ｅ）‐２‐オクテナール、および２‐ヘキサノンが充填されたガス透過性密封容器を含む徐放性装置中に提供される、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
ジメチルジスルフィド、ジメチルトリスルフィド、（Ｅ）‐２‐ヘキセナール、（Ｅ）‐２‐オクテナール、および２‐ヘキサノン、ならびに１つ以上の追加の化合物が、前記ジメチルジスルフィド、ジメチルトリスルフィド、（Ｅ）‐２‐ヘキセナール、（Ｅ）‐２‐オクテナール、および２‐ヘキサノン、ならびに前記１つ以上の追加の化合物が充填されたガス透過性密封容器を含む徐放性装置中に提供され、前記１つ以上の追加の化合物が、ブタナール、ペンタナール、ヘキサナール、ベンズアルデヒド、ベンジルアルコール、アセトフェノン、ベルべノン、オクタン酸エチル、オクタン酸メチル、ヘキサン酸ペンチル、ジメチルアミノエタノール、Ｎ‐アセチルグルコサミン、Ｌ‐３‐ヒドロキシキヌレニン  Ｏ‐サルフェート、Ｌ‐バリン、Ｌ‐アラニン、オクタナール、ノナナール、デカナール、（Ｅ，Ｅ）‐２，４‐オクタジエナール、（Ｅ，Ｚ）‐２，４‐オクタジエナール、酢酸ベンジル、（＋）‐リモネン、（−）‐リモネン、６‐メチル‐５‐ヘプテン‐２‐オン（スルカトン）、ゲラニルアセトン、二酸化炭素、１‐オクテン‐３‐オール、Ｌ‐カルボン、Ｌ‐乳酸、プロピオン酸、酪酸、吉草酸、オレイン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、リノール酸、ラウリン酸、カプリン酸、ミリスチン酸、アンドロステノン、３‐メチルインドール、１‐ドコサノール、ペンタデカン酸、スクアレン、コレステロール、および２，２‐ジメチル‐１，３‐ジオキソラン‐４‐メタノールから成る群より選択される、請求項６に記載の方法。
【請求項９】
前記吸血性昆虫が、一般的なトコジラミ、キメクス・レクツラリウス（Cimex lectularius）、またはネッタイトコジラミ、Ｃ．ヘミプテルス（C. hemipterus）である、請求項６に記載の方法。
【請求項１０】
前記所望される場所が、トコジラミ駆除装置の中、上、または近くである、請求項６乃至９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記トコジラミ駆除装置が、検出器、モニター、またはトラップである、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
請求項７または請求項８に記載の前記徐放性装置が、前記検出器、モニター、またはトラップの中に配置される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記組成物を、熱源と組み合わせることをさらに含む、請求項６乃至１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記組成物を、二酸化炭素源と組み合わせることをさらに含む、請求項６乃至１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記組成物を、トコジラミを殺傷する殺虫剤と組み合わせることをさらに含む、請求項６乃至１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
吸血性昆虫を誘引および／または拘束するためのジメチルジスルフィド、ジメチルトリスルフィド、（Ｅ）‐２‐ヘキセナール、（Ｅ）‐２‐オクテナール、および２‐ヘキサノンの使用。
【請求項１７】
吸血性昆虫を誘引および／または拘束するための、ブタナール、ペンタナール、ヘキサナール、ベンズアルデヒド、ベンジルアルコール、アセトフェノン、ベルべノン、オクタン酸エチル、オクタン酸メチル、ヘキサン酸ペンチル、ジメチルアミノエタノール、Ｎ‐アセチルグルコサミン、Ｌ‐３‐ヒドロキシキヌレニン  Ｏ‐サルフェート、Ｌ‐バリン、Ｌ‐アラニン、オクタナール、ノナナール、デカナール、（Ｅ，Ｅ）‐２，４‐オクタジエナール、（Ｅ，Ｚ）‐２，４‐オクタジエナール、酢酸ベンジル、（＋）‐リモネン、（−）‐リモネン、６‐メチル‐５‐ヘプテン‐２‐オン（スルカトン）、ゲラニルアセトン、二酸化炭素、１‐オクテン‐３‐オール、Ｌ‐カルボン、Ｌ‐乳酸、プロピオン酸、酪酸、吉草酸、オレイン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、リノール酸、ラウリン酸、カプリン酸、ミリスチン酸、アンドロステノン、３‐メチルインドール、１‐ドコサノール、ペンタデカン酸、スクアレン、コレステロール、および２，２‐ジメチル‐１，３‐ジオキソラン‐４‐メタノールから成る群より選択される１つ以上の追加の化合物の有効量と組み合わされたジメチルジスルフィド、ジメチルトリスルフィド、（Ｅ）‐２‐ヘキセナール、（Ｅ）‐２‐オクテナール、および２‐ヘキサノンの使用。
【請求項１８】
前記吸血性昆虫が、一般的なトコジラミ、キメクス・レクツラリウス（Cimex lectularius）、またはネッタイトコジラミ、Ｃ．ヘミプテルス（C. hemipterus）である、請求項１６または請求項１７に記載の使用。
【請求項１９】
吸血性昆虫を誘引および／または拘束するための、請求項１乃至５のいずれか一項に記載の組成物の使用。
【請求項２０】
一般的なトコジラミ、キメクス・レクツラリウス（Cimex lectularius）、またはネッタイトコジラミ、Ｃ．ヘミプテルス（C. hemipterus）を誘引および／または拘束するための、請求項１９に記載の組成物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、トコジラミを誘引および／または拘束するための化合物、組成物、および方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
第二次世界大戦後から２０世紀の最後の１０年間まで、長年の間、世界の大部分は、一般的なトコジラミであるキメクス・レクツラリウス（Cimex lectularius）（異翅類；トコジラミ科）による害虫発生から解放されていた。これは、現代の衛生対策、ならびにＤＤＴおよびその他の残留性殺虫剤の使用の広がりに帰する（Potter 2012）。しかし、最近の２０年は、世界中で再発生が見られ、トコジラミは一般的な都市害虫となっており（Boase 2001；Myles et al. 2003；Jones 2004）、消耗性（debilitating）の皮膚の刺激および病変を引き起こす場合がある（Ter Porten et al. 2005）。この再発生によって、トコジラミ発生の検出、モニタリング、および駆除、特に、トコジラミを誘引および／または拘束するために有効である化合物、組成物、ならびに方法の開発に関する関心が再度高まってきた。
【発明の概要】
【０００３】
本明細書で述べる発明は、多くの態様を有する。
１つの態様では、吸血性昆虫を誘引および／または拘束するための組成物が提供される。組成物は、ヒスタミンを含む。組成物は、さらに、ジメチルジスルフィド、ジメチルトリスルフィド、（Ｅ）‐２‐ヘキセナール、（Ｅ）‐２‐オクテナール、および２‐ヘキサノンを例とするスルフィド、アルデヒド、およびケトンなどの揮発性化合物を含んでよい。揮発性化合物は、重量基準で、０．５〜９９％のジメチルジスルフィド、０．５〜９９％のジメチルトリスルフィド、０．５〜９９％の（Ｅ）‐２‐ヘキセナール、０．５〜９９％の（Ｅ）‐２‐オクテナール、および０．５〜９９％の２‐ヘキサノンを含んでよい。組成物は、さらに、ブタナール、ペンタナール、ヘキサナール、ベンズアルデヒド、ベンジルアルコール、アセトフェノン、ベルべノン、オクタン酸エチル、オクタン酸メチル、ヘキサン酸ペンチル、ジメチルアミノエタノール、Ｎ‐アセチルグルコサミン、Ｌ‐３‐ヒドロキシキヌレニン Ｏ‐サルフェート、Ｌ‐バリン、Ｌ‐アラニン、オクタナール、ノナナール、デカナール、（Ｅ，Ｅ）‐２，４‐オクタジエナール、（Ｅ，Ｚ）‐２，４‐オクタジエナール、酢酸ベンジル、（＋）‐リモネン、（−）‐リモネン、６‐メチル‐５‐ヘプテン‐２‐オン（スルカトン）、ゲラニルアセトン、二酸化炭素、１‐オクテン‐３‐オール、Ｌ‐カルボン、Ｌ‐乳酸、プロピオン酸、酪酸、吉草酸、オレイン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、リノール酸、ラウリン酸、カプリン酸、ミリスチン酸、アンドロステノン、３‐メチルインドール、１‐ドコサノール、ペンタデカン酸、スクアレン、コレステロール、および２，２‐ジメチル‐１，３‐ジオキソラン‐４‐メタノールなどの１つ以上の追加の化合物の有効量を含んでよい。
【０００４】
ヒスタミンは、ヒスタミン塩基であってよい。組成物は、顆粒、粉末、微粉、ペースト、ゲル、懸濁液、エマルジョン、または液体溶液として配合されてよい。組成物は、徐放性ルアーとして配合されてよい。組成物のヒスタミン成分が、徐放性ルアーとして配合されてよい。ジメチルジスルフィド、ジメチルトリスルフィド、（Ｅ）‐２‐ヘキセナール、（Ｅ）‐２‐オクテナール、および２‐ヘキサノンのブレンドが、徐放性ルアーとして配合されてよい。１つ以上の追加の化合物の有効量と組み合わせたジメチルジスルフィド、ジメチルトリスルフィド、（Ｅ）‐２‐ヘキセナール、（Ｅ）‐２‐オクテナール、および２‐ヘキサノンのブレンドが、徐放性ルアーとして配合されてよい。１つ以上の追加の化合物は、ブタナール、ペンタナール、ヘキサナール、ベンズアルデヒド、ベンジルアルコール、アセトフェノン、ベルべノン、オクタン酸エチル、オクタン酸メチル、ヘキサン酸ペンチル、ジメチルアミノエタノール、Ｎ‐アセチルグルコサミン、Ｌ‐３‐ヒドロキシキヌレニン Ｏ‐サルフェート、Ｌ‐バリン、Ｌ‐アラニン、オクタナール、ノナナール、デカナール、（Ｅ，Ｅ）‐２，４‐オクタジエナール、（Ｅ，Ｚ）‐２，４‐オクタジエナール、酢酸ベンジル、（＋）‐リモネン、（−）‐リモネン、６‐メチル‐５‐ヘプテン‐２‐オン（スルカトン）、ゲラニルアセトン、二酸化炭素、１‐オクテン‐３‐オール、Ｌ‐カルボン、Ｌ‐乳酸、プロピオン酸、酪酸、吉草酸、オレイン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、リノール酸、ラウリン酸、カプリン酸、ミリスチン酸、アンドロステノン、３‐メチルインドール、１‐ドコサノール、ペンタデカン酸、スクアレン、コレステロール、および２，２‐ジメチル‐１，３‐ジオキソラン‐４‐メタノールから成る群より選択されてよい。
【０００５】
別の態様では、吸血性昆虫を誘引および／または拘束するための組成物が提供され、ここで、組成物の活性成分は、本質的に、ヒスタミンから成る。
別の態様では、吸血性昆虫を誘引および／または拘束するための組成物が提供され、ここで、組成物の活性成分は、本質的に、ジメチルジスルフィド、ジメチルトリスルフィド、（Ｅ）‐２‐ヘキセナール、（Ｅ）‐２‐オクテナール、および２‐ヘキサノンから成る。
【０００６】
別の態様では、吸血性昆虫を誘引および／または拘束するための組成物が提供され、ここで、組成物の活性成分は、本質的に、ヒスタミン、ジメチルジスルフィド、ジメチルトリスルフィド、（Ｅ）‐２‐ヘキセナール、（Ｅ）‐２‐オクテナール、および２‐ヘキサノンから成る。
【０００７】
別の態様では、吸血性昆虫を誘引および／または拘束するための組成物が提供され、組成物の活性成分は、ブタナール、ペンタナール、ヘキサナール、ベンズアルデヒド、ベンジルアルコール、アセトフェノン、ベルべノン、オクタン酸エチル、オクタン酸メチル、ヘキサン酸ペンチル、ジメチルアミノエタノール、Ｎ‐アセチルグルコサミン、Ｌ‐３‐ヒドロキシキヌレニン Ｏ‐サルフェート、Ｌ‐バリン、Ｌ‐アラニン、オクタナール、ノナナール、デカナール、（Ｅ，Ｅ）‐２，４‐オクタジエナール、（Ｅ，Ｚ）‐２，４‐オクタジエナール、酢酸ベンジル、（＋）‐リモネン、（−）‐リモネン、６‐メチル‐５‐ヘプテン‐２‐オン（スルカトン）、ゲラニルアセトン、二酸化炭素、１‐オクテン‐３‐オール、Ｌ‐カルボン、Ｌ‐乳酸、プロピオン酸、酪酸、吉草酸、オレイン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、リノール酸、ラウリン酸、カプリン酸、ミリスチン酸、アンドロステノン、３‐メチルインドール、１‐ドコサノール、ペンタデカン酸、スクアレン、コレステロール、および２，２‐ジメチル‐１，３‐ジオキソラン‐４‐メタノールから成る群より選択される１つ以上の追加の化合物の有効量と組み合わせたジメチルジスルフィド、ジメチルトリスルフィド、（Ｅ）‐２‐ヘキセナール、（Ｅ）‐２‐オクテナール、および２‐ヘキサノンから本質的に成る。
【０００８】
別の態様では、吸血性昆虫を誘引および／または拘束するための組成物が提供され、組成物の活性成分は、ブタナール、ペンタナール、ヘキサナール、ベンズアルデヒド、ベンジルアルコール、アセトフェノン、ベルべノン、オクタン酸エチル、オクタン酸メチル、ヘキサン酸ペンチル、ジメチルアミノエタノール、Ｎ‐アセチルグルコサミン、Ｌ‐３‐ヒドロキシキヌレニン Ｏ‐サルフェート、Ｌ‐バリン、Ｌ‐アラニン、オクタナール、ノナナール、デカナール、（Ｅ，Ｅ）‐２，４‐オクタジエナール、（Ｅ，Ｚ）‐２，４‐オクタジエナール、酢酸ベンジル、（＋）‐リモネン、（−）‐リモネン、６‐メチル‐５‐ヘプテン‐２‐オン（スルカトン）、ゲラニルアセトン、二酸化炭素、１‐オクテン‐３‐オール、Ｌ‐カルボン、Ｌ‐乳酸、プロピオン酸、酪酸、吉草酸、オレイン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、リノール酸、ラウリン酸、カプリン酸、ミリスチン酸、アンドロステノン、３‐メチルインドール、１‐ドコサノール、ペンタデカン酸、スクアレン、コレステロール、および２，２‐ジメチル‐１，３‐ジオキソラン‐４‐メタノールから成る群より選択される１つ以上の追加の化合物の有効量と組み合わせたヒスタミン、ジメチルジスルフィド、ジメチルトリスルフィド、（Ｅ）‐２‐ヘキセナール、（Ｅ）‐２‐オクテナール、および２‐ヘキサノンから本質的に成る。
【０００９】
別の態様では、吸血性昆虫を誘引および／または拘束するための方法が提供される。方法は、所望される場所に本明細書で述べる組成物を提供することを含む。ヒスタミンは、ヒスタミンを含浸させたセルロースマットなどの吸収材を含む徐放性装置中に提供されてよい。ジメチルジスルフィド、ジメチルトリスルフィド、（Ｅ）‐２‐ヘキセナール、（Ｅ）‐２‐オクテナール、および２‐ヘキサノンは、ジメチルジスルフィド、ジメチルトリスルフィド、（Ｅ）‐２‐ヘキセナール、（Ｅ）‐２‐オクテナール、および２‐ヘキサノンを充填したガス透過性密封容器を含む徐放性装置中に提供されてよい。ジメチルジスルフィド、ジメチルトリスルフィド、（Ｅ）‐２‐ヘキセナール、（Ｅ）‐２‐オクテナール、および２‐ヘキサノン、並びに１つ以上の追加の化合物は、ジメチルジスルフィド、ジメチルトリスルフィド、（Ｅ）‐２‐ヘキセナール、（Ｅ）‐２‐オクテナール、および２‐ヘキサノン、並びに１つ以上の追加の化合物を充填したガス透過性密封容器を含む徐放性装置中に提供されてよく、ここで、１つ以上の追加の化合物は、ブタナール、ペンタナール、ヘキサナール、ベンズアルデヒド、ベンジルアルコール、アセトフェノン、ベルべノン、オクタン酸エチル、オクタン酸メチル、ヘキサン酸ペンチル、ジメチルアミノエタノール、Ｎ‐アセチルグルコサミン、Ｌ‐３‐ヒドロキシキヌレニン Ｏ‐サルフェート、Ｌ‐バリン、Ｌ‐アラニン、オクタナール、ノナナール、デカナール、（Ｅ，Ｅ）‐２，４‐オクタジエナール、（Ｅ，Ｚ）‐２，４‐オクタジエナール、酢酸ベンジル、（＋）‐リモネン、（−）‐リモネン、６‐メチル‐５‐ヘプテン‐２‐オン（スルカトン）、ゲラニルアセトン、二酸化炭素、１‐オクテン‐３‐オール、Ｌ‐カルボン、Ｌ‐乳酸、プロピオン酸、酪酸、吉草酸、オレイン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、リノール酸、ラウリン酸、カプリン酸、ミリスチン酸、アンドロステノン、３‐メチルインドール、１‐ドコサノール、ペンタデカン酸、スクアレン、コレステロール、および２，２‐ジメチル‐１，３‐ジオキソラン‐４‐メタノールから成る群より選択される。吸血性昆虫は、一般的なトコジラミのキメクス・レクツラリウス、またはネッタイトコジラミのＣ．ヘミプテルス（C. hemipterus）であってよい。所望される場所は、トコジラミ駆除装置の中、上、または近くであってよい。トコジラミ駆除装置は、検出器、モニター、またはトラップであってよい。徐放性装置は、検出器、モニター、またはトラップの中に配置されてよい。方法はさらに、組成物を熱源と組み合わせることも含んでよい。方法はさらに、組成物を二酸化炭素源と組み合わせることも含んでよい。方法はさらに、組成物を、トコジラミを殺傷する殺虫剤と組み合わせることも含んでよい。
【００１０】
別の態様では、吸血性昆虫を誘引および／または拘束するためのヒスタミンの使用が提供される。吸血性昆虫は、一般的なトコジラミのキメクス・レクツラリウス、またはネッタイトコジラミのＣ．ヘミプテルスであってよい。
【００１１】
別の態様では、吸血性昆虫を誘引および／または拘束するためのジメチルジスルフィド、ジメチルトリスルフィド、（Ｅ）‐２‐ヘキセナール、（Ｅ）‐２‐オクテナール、および２‐ヘキサノンの使用が提供される。吸血性昆虫は、一般的なトコジラミのキメクス・レクツラリウス、またはネッタイトコジラミのＣ．ヘミプテルスであってよい。
【００１２】
別の態様では、吸血性昆虫を誘引および／または拘束するための、ブタナール、ペンタナール、ヘキサナール、ベンズアルデヒド、ベンジルアルコール、アセトフェノン、ベルべノン、オクタン酸エチル、オクタン酸メチル、ヘキサン酸ペンチル、ジメチルアミノエタノール、Ｎ‐アセチルグルコサミン、Ｌ‐３‐ヒドロキシキヌレニン Ｏ‐サルフェート、Ｌ‐バリン、Ｌ‐アラニン、オクタナール、ノナナール、デカナール、（Ｅ，Ｅ）‐２，４‐オクタジエナール、（Ｅ，Ｚ）‐２，４‐オクタジエナール、酢酸ベンジル、（＋）‐リモネン、（−）‐リモネン、６‐メチル‐５‐ヘプテン‐２‐オン（スルカトン）、ゲラニルアセトン、二酸化炭素、１‐オクテン‐３‐オール、Ｌ‐カルボン、Ｌ‐乳酸、プロピオン酸、酪酸、吉草酸、オレイン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、リノール酸、ラウリン酸、カプリン酸、ミリスチン酸、アンドロステノン、３‐メチルインドール、１‐ドコサノール、ペンタデカン酸、スクアレン、コレステロール、および２，２‐ジメチル‐１，３‐ジオキソラン‐４‐メタノールから成る群より選択される１つ以上の追加の化合物の有効量と組み合わせたジメチルジスルフィド、ジメチルトリスルフィド、（Ｅ）‐２‐ヘキセナール、（Ｅ）‐２‐オクテナール、および２‐ヘキサノンの使用が提供される。吸血性昆虫は、一般的なトコジラミのキメクス・レクツラリウス、またはネッタイトコジラミのＣ．ヘミプテルスであってよい。
【００１３】
別の態様では、吸血性昆虫を誘引および／または拘束するための、ブタナール、ペンタナール、ヘキサナール、ベンズアルデヒド、ベンジルアルコール、アセトフェノン、ベルべノン、オクタン酸エチル、オクタン酸メチル、ヘキサン酸ペンチル、ジメチルアミノエタノール、Ｎ‐アセチルグルコサミン、Ｌ‐３‐ヒドロキシキヌレニン Ｏ‐サルフェート、Ｌ‐バリン、Ｌ‐アラニン、オクタナール、ノナナール、デカナール、（Ｅ，Ｅ）‐２，４‐オクタジエナール、（Ｅ，Ｚ）‐２，４‐オクタジエナール、酢酸ベンジル、（＋）‐リモネン、（−）‐リモネン、６‐メチル‐５‐ヘプテン‐２‐オン（スルカトン）、ゲラニルアセトン、二酸化炭素、１‐オクテン‐３‐オール、Ｌ‐カルボン、Ｌ‐乳酸、プロピオン酸、酪酸、吉草酸、オレイン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、リノール酸、ラウリン酸、カプリン酸、ミリスチン酸、アンドロステノン、３‐メチルインドール、１‐ドコサノール、ペンタデカン酸、スクアレン、コレステロール、および２，２‐ジメチル‐１，３‐ジオキソラン‐４‐メタノールから成る群より選択される１つ以上の追加の化合物の有効量と組み合わせたヒスタミン、ジメチルジスルフィド、ジメチルトリスルフィド、（Ｅ）‐２‐ヘキセナール、（Ｅ）‐２‐オクテナール、および２‐ヘキサノンの使用が提供される。吸血性昆虫は、一般的なトコジラミのキメクス・レクツラリウス、またはネッタイトコジラミのＣ．ヘミプテルスであってよい。
【００１４】
別の態様では、吸血性昆虫を誘引および／または拘束するための本明細書で述べる組成物の使用が提供される。吸血性昆虫は、一般的なトコジラミのキメクス・レクツラリウス、またはネッタイトコジラミのＣ．ヘミプテルスであってよい。
【００１５】
上述の考察は、本発明の特定の態様を単にまとめたものであり、いかなる形であっても、本発明を限定することを意図するものではなく、本発明を限定するものと解釈されるべきでもない。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】図１は、（ａ）三皿型二者択一嗅覚計（three-dish, dual-choice olfactometer）および（ｂ）大型プレキシガラスアリーナ（large Plexiglass arena）の設計を示し；挿入図は、ヒスタミン含浸フィルター紙またはコントロールフィルター紙（ＦＰ）、段ボール（ＣＣ）、および鉱油中に配合した揮発性フェロモン成分または鉱油単独を含有する裏返しにしたバイアルキャップ（ＩＶＬ）を示す。図は正確な縮尺ではない。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
以下の記述全体を通して、本発明のより充分な理解を提供するために、具体的な詳細事項が示される。しかし、本発明は、これらの詳細事項なしで実施されてよい。他の例では、本発明を不必要に不明瞭とすることを避けるために、公知の要素は、詳細に示すことも、記載することもしていない。従って、詳細事項は、限定的な意味ではなく、実例的な意味であると見なされるべきである。
【００１８】
本発明のある態様は、一般的なトコジラミのキメクス・レクツラリウス、およびネッタイトコジラミのＣ．ヘミプテルスなどのトコジラミを誘引および／または拘束するための組成物に関する。ある実施形態では、組成物は、トコジラミ、キメクス・レクツラリウスの脱皮殻もしくは糞から単離したフェロモン成分、またはそのような化合物の合成均等物を含んでよい。ある実施形態では、組成物は、ヒスタミンを含む。ある実施形態では、組成物の活性成分は、ヒスタミンから本質的に成る。ある実施形態では、ヒスタミンは、塩基として提供される。ある実施形態では、組成物は、ヒスタミン、ならびにスルフィド、アルデヒド、およびケトンを含む揮発性化合物のブレンドを含む。ある実施形態では、揮発性化合物のブレンドは、ジメチルジスルフィド、ジメチルトリスルフィド、（Ｅ）‐２‐ヘキセナール、（Ｅ）‐２‐オクテナール、および２‐ヘキサノンのうちの１つ以上を含む。ある実施形態では、組成物の活性成分は、ヒスタミン、ならびにジメチルジスルフィド、ジメチルトリスルフィド、（Ｅ）‐２‐ヘキセナール、（Ｅ）‐２‐オクテナール、および２‐ヘキサノンのうちの１つ以上から本質的に成る。ある実施形態では、組成物は、ヒスタミン、ジメチルジスルフィド、ジメチルトリスルフィド、（Ｅ）‐２‐ヘキセナール、（Ｅ）‐２‐オクテナール、および２‐ヘキサノンを含むか、またはこれらから本質的に成っていてよい。
【００１９】
ある実施形態では、本明細書で述べる組成物は、ブタナール、ペンタナール、ヘキサナール、ベンズアルデヒド、ベンジルアルコール、アセトフェノン、ベルべノン、オクタン酸エチル、オクタン酸メチル、ヘキサン酸ペンチル、ジメチルアミノエタノール、Ｎ‐アセチルグルコサミン、Ｌ‐３‐ヒドロキシキヌレニン Ｏ‐サルフェート、Ｌ‐バリン、Ｌ‐アラニン、オクタナール、ノナナール、デカナール、（Ｅ，Ｅ）‐２，４‐オクタジエナール、（Ｅ，Ｚ）‐２，４‐オクタジエナール、酢酸ベンジル、（＋）‐リモネン、（−）‐リモネン、６‐メチル‐５‐ヘプテン‐２‐オン（スルカトン）、ゲラニルアセトン、二酸化炭素、１‐オクテン‐３‐オール、Ｌ‐カルボン、Ｌ‐乳酸、プロピオン酸、酪酸、吉草酸、オレイン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、リノール酸、ラウリン酸、カプリン酸、ミリスチン酸、アンドロステノン、３‐メチルインドール、１‐ドコサノール、ペンタデカン酸、スクアレン、コレステロール、および２，２‐ジメチル‐１，３‐ジオキソラン‐４‐メタノールなどの１つ以上の追加の活性成分を含んでよい。
【００２０】
ある実施形態では、本明細書で述べる組成物は、顆粒、粉末、微粉、ペースト、ゲル、懸濁液、エマルジョン、または液体溶液として配合されてよい。
本発明の特定の態様は、一般的なトコジラミのキメクス・レクツラリウス、およびネッタイトコジラミのＣ．ヘミプテルスなどのトコジラミを、所望される場所で誘引および／または拘束するための方法に関する。ある実施形態では、方法は、本明細書で述べる組成物を所望される場所に提供することを含む。ある実施形態では、所望される場所は、居住、業務、商業、工業、または農業の環境中の１つ以上の生活空間など、トコジラミが存在した、存在している、または存在していることが疑われるいずれの人または動物の住居であってもよい場所に配置されるトコジラミ駆除装置の中、上、または近くであってよい。ある実施形態では、適切なトコジラミ駆除装置は、検出器、モニター、およびトラップを含む。
【００２１】
ある実施形態では、組成物は、徐放性ルアーなどのルアーとして製剤されてよく、トコジラミ駆除装置の中、上、または近くに提供されてよい。ある実施形態では、組成物は、トコジラミ駆除装置の中、上、または近くに提供される徐放性装置中に提供されてよい。ある実施形態では、組成物の特定の成分は、別々の徐放性装置中に提供されてよい。例えば、ある実施形態では、ヒスタミンのための徐放性装置は、ヒスタミンが含浸された吸収材（例：セルロースマットなどの吸収材マット）であってよく、本明細書で述べる揮発性化合物、または揮発性化合物および本明細書で述べる１つ以上の追加の化合物のための徐放性装置は、ガス透過性密封容器（例：フェロモン透過性密封プラスチック容器）であってよい。ある実施形態では、組成物の成分は、同一の徐放性装置に提供されてよい。
【００２２】
ある実施形態では、組成物は、熱源、二酸化炭素源、および／またはトコジラミを殺傷する殺虫剤と組み合わされてよい。
本発明の特定の態様は、トコジラミを誘引および／または拘束するための化合物ならびに組成物の使用に関する。ある実施形態では、ヒスタミンは、トコジラミを誘引および／または拘束するために用いられる。ある実施形態では、本明細書で述べる組成物は、トコジラミを誘引および／または拘束するために用いられる。
【００２３】
本発明は、以下にその概要および詳細な記述を示す実施例を参照することによって、さらに理解することができる。これらの実施例は、実例として提供されるものであり、限定することを意図するものではない。
【００２４】
実施例の概要
トコジラミの飼育群を、脱皮殻および糞の採取源として、およびバイオアッセイ用の昆虫を供給するために維持した。三皿型二者択一嗅覚計および大型アリーナ嗅覚計をバイオアッセイに用いて、フェロモンの天然源、前記天然源の抽出物、および前記抽出物から識別された合成化学物質の生物活性を特定した。
【００２５】
５０、１０、２、または１個の脱皮殻は、二者択一静止空気嗅覚計（two-choice, still-air olfactometer）において、３から５齢のトコジラミ若虫の同等の誘引および拘束を誘発した。さらに、室温で２か月間保存した脱皮殻は、トコジラミの生き残った個体（refugia）から採取したばかりの脱皮殻と同等の効力を維持していた。
【００２６】
６つの脱皮殻に相当する用量でバイオアッセイを行ったメタノール抽出物は、生物活性を示し、誘引嗅覚計（baited olfactometers）での拘束を誘発したが、ヘキサン、エーテル、ジクロロメタン、およびアセトニトリルでの脱皮殻の抽出物は、３から５齢の若虫の拘束誘発に有効ではなかった。この結果は、このフェロモン成分が、極性の高い分子構造を有していることを示すものであった。
【００２７】
構造解明のためのフェロモン成分の単離は、脱皮殻を、極性が増加する順の有機溶媒（ヘキサン、エーテル、ジクロロメタン、アセトニトリル、およびメタノール）で抽出することによって達成され、それによって、最終メタノール抽出物は、極性化合物を主として含有していた。次に、このメタノール抽出物を、エーテルの割合を増加させていくペンタン／エーテルの５段階リンス液［１）１００：０；２）９０：１０；３）８０：２０；４）５０：５０；５）０：１００］（各２ｍｌ）で、続いてメタノールの割合を増加させていくジクロロメタン／メタノールの５段階リンス液［１）１００：０；２）９０：１０；３）８０：２０；４）５０：５０；５）０：１００］（各１ｍｌ）で溶出することにより、ガラスカラム中のシリカゲルを通して分画した。５つのジクロロメタン／メタノール画分のバイオアッセイから、溶出液としてジクロロメタン（ＣＨ２Ｃｌ２；５０％）およびメタノール（ＭｅＯＨ；５０％）を用いた画分のみが、３から５齢のトコジラミ若虫に拘束の応答を誘発したことを示した。
【００２８】
トコジラミ脱皮殻のメタノール抽出物を、ジアゾメタンまたはピリジン中の無水酢酸で微量分析処理にかけ、次にバイオアッセイを施した。生物活性は、ジアゾメタンによる処理後も維持されたが、無水酢酸による処理後は維持されなかった。これらの実験から、重要なフェロモン成分は、１つ以上のヒドロキシルおよび／またはアミン基を有することが示された。
【００２９】
数成分しか含有しない生物活性シリカ画分を、アセトニトリルを溶出液として用いた高速液体クロマトグラフィ‐質量分析（ＨＰＬＣ‐ＭＳ）による分析、ならびに１および２次元核磁気共鳴（ＮＭＲ）実験による分析に掛けることによって、潜在的集合フェロモン成分の分子構造を解明した。これらの分析の結果から、複数の成分が明らかとなり、Ｎ‐アセチルグルコサミン、Ｌ‐３‐ヒドロキシキヌレン Ｏ‐サルフェート、Ｌ‐バリン、Ｌ‐アラニン、ヒスタミン、およびジメチルアミノエタノールとして識別された。
【００３０】
ヒスタミンおよびジメチルアミノエタノールのブレンドは、三皿型二者択一嗅覚計にて、両方の性別およびすべての発達段階のトコジラミを拘束したが、ジメチルアミノエタノールの役割は不明確であった。Ｎ‐アセチルグルコサミン、Ｌ‐３‐ヒドロキシキヌレン Ｏ‐サルフェート、Ｌ‐バリン、およびＬ‐アラニンは、必須フェロモン成分ではないと特定された。
【００３１】
トコジラミの糞で汚したフィルターペーパーからのヘッドスペース揮発分を、ＤＢ‐５ ＭＳ ＧＣカラム（３０ｍ×０．２５μｍ ＩＤ）を取り付けたＶａｒｉａｎ ２０００ Ｉｏｎ Ｔｒａｐ ＧＣ‐ＭＳと接続したＡｇｉｌｅｎｔ Ｈｅａｄｓｐａｃｅ Ａｎａｌｙｚｅｒで分析した。この分析から、６つのアルデヒド（ブタナール、ペンタナール、ヘキサナール、（Ｅ）‐２‐ヘキセナール、（Ｅ）‐２‐オクテナール、ベンズアルデヒド）、１つのアルコール（ベンジルアルコール）、３つのケトン（２‐ヘキサノン、アセトフェノン、ベルべノン）、３つのエステル（オクタン酸メチル、オクタン酸エチル、ヘキサン酸ペンチル）、および２つのスルフィド（ジメチルジスルフィド、ジメチルトリスルフィド）から成る１５の酸素または硫黄含有揮発性成分のブレンドであることが明らかとなった。１５すべての揮発成分の合成ブレンドは、５０、５．０、および０．５μｇの用量で、三皿型二者択一嗅覚計にて、トコジラミを拘束した。
【００３２】
１５成分合成ブレンド単独で、または重要成分の群を含めずに三皿型二者択一嗅覚計で行った一連の減法実験（subtraction expriment）では、アルデヒド、スルフィド、およびケトン、またはアルコールのうちの１つ以上が、必須トコジラミフェロモン成分であることが示された。さらなる減法実験から、トコジラミの必須誘引揮発性フェロモン成分は、以下の６つの化合物：（Ｅ）‐２‐ヘキセナール、（Ｅ）‐２‐オクテナール、ジメチルジスルフィド、ジメチルトリスルフィド、アセトフェノン、および２‐ヘキサノンの中に含まれることが特定された。最後の一連の減法実験から、アセトフェノンは必須ではないこと、および両スルフィドおよび両アルデヒドは、このブレンドの生物活性に寄与していることが特定された。従って、必須誘引揮発性フェロモン成分は、（Ｅ）‐２‐ヘキセナール、（Ｅ）‐２‐オクテナール、ジメチルジスルフィド、ジメチルトリスルフィド、および２‐ヘキサノンであるという結論を得た。
【００３３】
一方の端部にシェルタートラップ（shelter trap）を備えた大型アリーナ嗅覚計でのバイオアッセイから、揮発性の低いヒスタミン、ならびに（Ｅ）‐２‐ヘキセナール、（Ｅ）‐２‐オクテナール、ジメチルジスルフィド、ジメチルトリスルフィド、および２‐ヘキサノンを含む５成分揮発性組成物でトラップに誘引した場合に、最も高い捕獲が見られたこと、ならびに低揮発分および揮発性フェロモン成分が、相乗効果的に作用したことが明らかとなった。
【００３４】
誘引またはコントロールシェルタートラップを、害虫発生した建物に配置したフィールド実験から、揮発性の低いヒスタミン、ならびに（Ｅ）‐２‐ヘキセナール、（Ｅ）‐２‐オクテナール、ジメチルジスルフィド、ジメチルトリスルフィド、および２‐ヘキサノンを含む５成分揮発性組成物の間の相乗効果的相互作用が確認され、このことは、上記６つの合成フェロモン成分すべてが、トコジラミの実用上のトラップにおいて必須であることを示している。フィールド実験はまた、上記６成分組成物で誘引したシェルタートラップが、非常に低レベルのトコジラミ発生である建物において、トコジラミ発生を明らかにするのに非常に有効であることも実証した。
【００３５】
実施例１
脱皮殻の生成およびバイオアッセイでの使用のための一般的なトコジラミのコロニーの維持
一般的なトコジラミのコロニーを、２２〜２４℃、周囲相対湿度、および１０時間暗期に対して１４時間明期の光周期で、昆虫飼育室で維持した。抽出、単離、および識別のためのフェロモンを集めるために、コロニーを２４００から６０００匹まで増大させ、それより高いレベルで１８ヶ月保持した。
【００３６】
およそ１５０匹のトコジラミを、４０個の５０ｍｌジャーの各々に入れた。各ジャーには、底部にボール紙片を（２×２ｃｍ）、ジャーを横切る対角線状に段ボール紙ストリップを（２×５ｃｍ）配置した。ジャーに、通気用の小孔を穿孔したプラスチックのキャップのカバーを付けた。
【００３７】
トコジラミの各々には、月に１回、ヒトの志願者によって餌を与えた。１週間あたり１５００匹のトコジラミに対して３０ヶ月間の合計で、個々の餌やり回数は１８００００回となる。餌を与えるべきトコジラミのジャーには、微細メッシュのカバーを付け、志願者の前腕に押し付けて、トコジラミにメッシュを通して餌を与えられるようにした。餌やりの後、若虫のトコジラミは脱皮し、そのプロセスで脱皮殻を脱ぎ落す。５齢若虫の各脱皮殻は、約０．０７ｍｇの重量である。１ヶ月あたり１２００匹分の５齢若虫（全コロニーの２０％）の脱皮殻を集めた結果、１ヶ月あたり８４ｍｇ（１２００×０．０７ｍｇ）の脱皮殻、合計で１５１２ｍｇの脱皮殻を得た。これを、集合フェロモンの抽出、単離、および識別のための出発物質とした。
【００３８】
実施例２
試験刺激物に対するトコジラミの応答を調べるための一般的実験設計
バイオアッセイを、二者択一嗅覚計および大型プレキシガラスアリーナ（図１）で行った。二者択一嗅覚計は、Ｐｙｒｅｘ（登録商標）ガラス管（長さ２．５ｃｍ×内径２ｃｍ）を介して中央皿と接続された左右２つのＰｙｒｅｘ（登録商標）ガラスペトリ皿（すべての皿は３×９ｃｍの内径）から構成した。この嗅覚計の皿は、トコジラミが１日を過ごす自然の静止空気シェルター（still-air shelters）を模したものである。バイオアッセイの開始前に、ペーパータオルのディスク（直径９ｃｍ）を各皿に置き、ペーパータオルのストリップ（２．４×０．６ｃｍ）を接続ガラス管内に挿入して、トコジラミが歩き回るための摩擦を提供した。加えて、左右の皿の各々にフィルター紙片（２×３ｍ；ワットマン（Whatman））を置き、ボール紙片（２×２ｃｍ）で覆って、バイオアッセイ昆虫の隠れ家とした。
【００３９】
処理およびコントロール刺激物を、各左右の皿にランダムに割り当てた。光が進入して昆虫の応答に影響を与えることを防止するために、嗅覚計を、不透明プラスチック箱に封入した。各反復実験において、１匹の３、４、または５齢Ｃ．レクツラリウス若虫を、嗅覚計の中央チャンバー中に放し、続いて逃げられないようにそれをガラスプレートで覆った。そして、各嗅覚計中の１匹のトコジラミに、すべてのチャンバーを探索させるようにした。各昆虫を、１４時間の明期の終了時に嗅覚計中に放し、１０時間の暗期の間にチャンバーを探索させ、明期の１０時間の間は、シェルターのうちの１つで休息させるようにした。この２０時間の期間後、嗅覚計中の昆虫の位置を記録した。左右の皿に見られない昆虫はいずれも、非応答として記録した。反復実験はすべて、２４±２℃および３０〜６０％ＲＨで行った。各バイオアッセイ間に、嗅覚計を、Ｓｐａｒｋｌｅｅｎ洗剤（フィッシャーサイエンティフィック社（Fisher Scientific Co），米国ペンシルベニア州ピッツバーグ）で洗浄し、オーブン（プレシジョン（Precision），米国バージニア州ウィンチェスター）で乾燥した。
【００４０】
２つの木片（長さ１６２ｃｍ×幅３．８ｃｍ×高さ０．８ｃｍ）を収容するために中央仕切り板（長さ１８０ｃｍ×高さ５．５ｃｍ）を有する大型２チャンバープレキシガラスアリーナ（large two-chanber Plexiglass arena）（長さ１８０ｃｍ×高さ１２ｃｍ×幅１３ｃｍ）を設計し、各木片は、木片のいずれかの端部にランダムに割り当てられたフェロモン誘引シェルターまたはコントロールシェルターに対する１匹のトコジラミの応答を試験するためのものである（図１、ｂの挿入図を参照）。何匹かのトコジラミは、仕切り板を超えて一方のチャンバーから他方へ移ることに成功したため、すべての反復実験は、各アリーナの１つのチャンバーのみを用いた。各反復実験において、１４時間の明期の終了直前に、１匹のトコジラミを木片の中央に置き、その位置を、翌朝、明期の開始後に記録した。
【００４１】
実施例３
トコジラミの脱皮殻（脱皮の過程で脱ぎ落された表皮）が採餌トコジラミの拘束を誘発することの証拠：試験した脱皮殻の数および老化の影響
実験１では、５齢若虫トコジラミの脱皮殻５０個（脱皮殻１個＝０．０８ｍｇ）が、採餌５齢若虫の拘束を誘発するかどうかについて試験した。５０個の脱皮殻に対する若虫の強い拘束応答があったため（表１参照）、フォローアップ実験２〜４では、より少ない数の脱皮殻が拘束応答の誘発に充分であるかどうかについて試験した。実験５では、室温で２か月間老化させた脱皮殻が、トコジラミの拘束誘発に依然として有効であるかどうかについて調べた。
【００４２】
実験１〜４では、予想外なことに、５０、１０、２、または１個の脱皮殻が、すべて、トコジラミの拘束誘発に同等に有効であった（表１）。驚くべきことに、実験５では、室温で２か月間保存後の脱皮殻は、依然としてトコジラミの拘束を誘発した。
【００４３】
【表１】
2019108384.tif 000002
【００４４】
実施例４
脱皮殻からフェロモンを抽出するための有機溶媒の効果
実験６〜１０では、脱皮殻からフェロモンを抽出するための異なる有機溶媒（ヘキサン、エーテル、ジクロロメタン、アセトニトリル、メタノール）の効果について試験した。各嗅覚計実験では、脱皮殻６個分に相当する抽出物、すなわち、合計で６個の脱皮殻から抽出可能である、恐らくはフェロモンを含む物質の量を試験した。
【００４５】
実験６〜９では、ヘキサン、エーテル、ジクロロメタン、およびアセトニトリルは、脱皮殻からのフェロモンの抽出、および３から５齢若虫の拘束応答誘発に効果を示さなかった（表２）。実験１０では、脱皮殻のメタノール抽出物は、強い拘束応答を誘発しており（表２）、このことは、トコジラミ拘束フェロモン成分が、メタノール抽出物中に存在することを示している。
【００４６】
【表２】
2019108384.tif 000003
【００４７】
実施例５
拘束フェロモン成分の単離
脱皮殻のメタノール抽出物中に拘束フェロモン成分が存在することは（表２、実験１０）、それが、極性の高い分子構造を有していることを示すものであった。構造解明のためのフェロモン成分を単離するために、脱皮殻を、極性が増加する順の有機溶媒（ヘキサン、エーテル、ジクロロメタン、アセトニトリル、およびメタノール）で抽出した。その結果、最終メタノール抽出物は、極性化合物を主として含有していた。次に、このメタノール抽出物を、ガラスカラム中（長さ１４ｃｍ×内径０．５ｃｍ）のシリカゲル（０．６ｇ）を通して分画した。シリカをペンタンで予備リンスした後、メタノール抽出物を適用し、シリカゲルに含浸させ、次に、エーテルの割合を増加させていくペンタン／エーテルの５段階リンス液（各２ｍｌ）［１）１００：０；２）９０：１０；３）８０：２０；４）５０：５０；５）０：１００］で、続いてメタノールの割合を増加させていくジクロロメタン／メタノールの５段階リンス液（各１ｍｌ）［１）１００：０；２）９０：１０；３）８０：２０；４）５０：５０；５）０：１００］で溶出した。次に、５つのジクロロメタン／メタノール画分を、実験１１〜１５のバイオアッセイに掛けた。
【００４８】
実験１１〜１５において（表３）、溶出液として５０％メタノールを用いたシリカ画分のみが（実験１４）、トコジラミ若虫の拘束を誘発した。
【００４９】
【表３】
2019108384.tif 000004
【００５０】
フェロモン単離のためのこのプロトコルを、同一、または僅かに改変した形で複数回繰り返した。各回において、バイオアッセイ昆虫のシリカ画分に対する応答は、５０％または１００％メタノールで溶出した画分中に拘束フェロモン成分が存在することを示した。これらの結果を合わせると、拘束フェロモン成分が高い極性を有することが明確に明らかとなった。
【００５１】
実施例６
フェロモン識別：生物活性抽出物の微量分析処理
極性拘束フェロモン成分が、酸、アミン、またはアルコール官能基を有するかどうかを特定するために、脱皮殻のメタノール抽出物を（表２参照）、ジアゾメタン（酸をエステルに変換）またはピリジン中の無水酢酸（アルコールをエステルに変換）での微量分析処理に掛け、次に実験１６および１７においてバイオアッセイを施した。
【００５２】
実験１６において（表４）、脱皮殻のジアゾメタン処理メタノール抽出物は、トコジラミ若虫の拘束応答を誘発しており、このことは、ジアゾメタン処理がフェロモン分子を変化させなかったこと、およびこのフェロモン成分が酸官能基を持たない可能性が高いことを示している。逆に、実験１７では、脱皮殻の無水酢酸処理メタノール抽出物は、トコジラミ若虫の拘束を誘発することができず、このことは、無水酢酸処理がフェロモン成分の分子構造を変化させたこと、ならびにそれが１つ以上のヒドロキシルおよび／またはアミン基を有していたことを示している。
【００５３】
【表４】
2019108384.tif 000005
【００５４】
実施例７
フェロモン識別：生物活性抽出物の核磁気共鳴分光分析（ＮＭＲ）
拘束フェロモン成分の分子構造を解明するために、脱皮殻および糞のいくつかのメタノール抽出物の１Ｈ ＮＭＲスペクトルを調べ、比較した。１Ｈ ＮＭＲスペクトルの分析から、Ｌ‐バリン、Ｌ‐アラニン、Ｎ‐アセチルグルコサミン、ヒスタミン、ジメチルアミノエタノール、および３‐ヒドロキシキヌレニン Ｏ‐サルフェートとして識別された複数の共通成分が明らかとなった。
【００５５】
バリン、アラニン、Ｎ‐アセチルグルコサミン、ヒスタミン、およびジメチルアミノエタノールは、得られた１Ｈおよび１３Ｃ ＮＭＲ、ならびに質量分析のスペクトルデータを、これらの化合物について過去に報告されたデータと比較することによって識別した。加えて、Ｌ‐バリン、Ｎ‐アセチルグルコサミン、ヒスタミン、およびジメチルアミノエタノールの標準サンプルを市販業者から購入し、別の実験において、粗メタノール抽出物に添加した。これらの追加実験の各々において、粗メタノール抽出物で記録し、特定の成分（すなわち、Ｌ‐バリン、Ｌ‐アラニン、Ｎ‐アセチルグルコサミン、ヒスタミン、およびジメチルアミノエタノール）に帰属された１Ｈ ＮＭＲスペクトルで得られた共鳴は、その成分の標準サンプルの添加によって強められており、このことから、粗メタノール抽出物中におけるこれらの化学物質の識別および存在が確認される。
【００５６】
３‐ヒドロキシキヌレニン Ｏ‐サルフェートの構造は、粗メタノール抽出物に対して記録した１Ｈ ＮＭＲスペクトルで得られた具体的な共鳴を、３‐ヒドロキシキヌレニン Ｏ‐サルフェートに対して過去に報告されたものと比較した後に提案した。加えて、３‐ヒドロキシキヌレニン Ｏ‐サルフェートの標準サンプルを、３‐ヒドロキシキヌレニンから、カルボン酸をメチルエステルとして、アミン官能基をカルボキシベンジルアミドとして保護した後に作製した。Ｍｅ３Ｎ‐ＳＯ３を用いた遊離アルコールの硫酸化、およびそれに続く水素化分解によるカルボキシベンジル保護基の除去およびメチルエステルの加水分解により、３‐ヒドロキシキヌレニン Ｏ‐サルフェートの標準サンプルを得た。３‐ヒドロキシキヌレニン Ｏ‐サルフェートの合成サンプルに対して記録した１Ｄおよび２Ｄ ＮＭＲスペクトル（１Ｈ、ＣＯＳＹ、ＨＭＱＣ、ＨＭＢＣ）は、粗メタノール抽出物中に存在する天然物質と完全に一致していた。
【００５７】
表５は、５つの個々のメタノール抽出物の各々におけるこれらの各成分の相対量をまとめたものであり、表６は、実験１８〜２２の各抽出物の生物活性を示す。最も高い応答レベル（実験１８〜２０）が、ヒスタミンおよびジメタミノエタノールの両方が相当量存在する３つの抽出物で達成されたことには留意されたい。
【００５８】
【表５】
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【００５９】
【表６】
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【００６０】
実施例８
ヒスタミン：トコジラミの必須フェロモン成分
ヒスタミンおよびジメチルアミノエタノールの両方が存在する抽出物でトコジラミの最大応答レベルが得られたことから（表５、６）、標準サンプルに対するトコジラミの応答を試験するためのフォローアップ実験を設計した。実験２３〜２５では、比率１：１でのジメチルアミノエタノールおよびヒスタミンの用量を増加させると、トコジラミの拘束応答が高まった（表７）。次に、実験２６〜２８では、ヒスタミンを塩基、塩、または塩基および塩で提供して、ジメチルアミノエタノール（２０μｇ）およびヒスタミン（２０μｇ）を試験した。この結果から、塩基としてのヒスタミンのみで、トコジラミの拘束応答が引き起こされることが明らかとなった（表７）。従って、さらなる実験はすべて、塩基としてのヒスタミンを用いた。
【００６１】
実験２９〜３１では、ジメチルアミノエタノールまたはヒスタミンの１０倍の増加（２０μｇから２００μｇ）が、誘引効果を向上させるかどうかについて試験した。この結果から、ヒスタミンの１０倍増加は、トコジラミの拘束応答を向上させることが示された（表７）。実験２９〜３１の結果を利用して、実験３２〜３４では、２μｇ：２０μｇ、２０μｇ：２００μｇ、および２００μｇ：２０００μｇの用量の比率１：１０でのジメチルアミノエタノールおよびヒスタミンについて試験した。この結果は、最も高い２つの用量が、トコジラミによる拘束応答を引き起こすのに非常に有効であることを示している（表７）。２成分ブレンドにおけるジメチルアミノエタノールおよびヒスタミンの効果を特定するために、実験３５〜３７では、各々２００μｇのジメチルアミノエタノールおよびヒスタミン単独で、ならびに比率２０μｇ：２００μｇでの２成分混合で試験した。このデータから、ジメチルアミノエタノールはそうではないが、ヒスタミンは、それ単独で生物活性であり、試験した用量で、トコジラミ拘束において２成分ブレンドと同程度に有効であることが明らかとなった。
【００６２】
実験２３〜３７では、ジメチルアミノエタノールの明確な役割は明らかになっていない。一方では、実験３２において、ジメチルアミノエタノールおよびヒスタミンが２μｇ：２０μｇの比率で提供された場合、誘引チャンバーの優先的な選択は見られなかった。しかし、実験２４および２９において、ジメチルアミノエタノールの用量を、ヒスタミンと等しい２０μｇに引き上げた場合、誘引チャンバーの優先性が現れた。他方、実験３７でのヒスタミンとは異なり、実験３６におけるジメタミノエタノール単独は、不活性であった。さらに、実験３２において、ヒスタミンの用量は一定に保持し、ジメチルアミノエタノールの用量を１０倍に増加させても、応答の増加という結果は得られなかった。
【００６３】
【表７】
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【００６４】
実施例９
ヒスタミンおよびジメチルアミノエタノールのブレンドに対する追加成分（Ｌ‐バリン、Ｌ‐アラニン、Ｎ‐アセチルグルコサミン、３‐ヒドロキシ‐キヌレニン Ｏ‐サルフェート）の効果
トコジラミの脱皮殻または糞のメタノール抽出物中にその他の成分が存在することから（表５）、実験３８および３９、ならびに４０および４１では、ジメチルアミノエタノールおよびヒスタミンの２成分ブレンド（２０μｇ：２００μｇ）が、Ｌ‐バリン、Ｌ‐アラニン、およびＮ‐アセチルグルコサミンの添加によって（実験３９）、または３‐ヒドロキシ‐キヌレニン Ｏ‐サルフェートの添加によって（実験４１）、より効果的となるかどうかについて試験した。データから、ジメチルアミノエタノールおよびヒスタミンの２成分ブレンドによるトコジラミ拘束の効果を（実験３８および４０）、その他の成分の添加によって高めることができなかったことが明らかとなった（表８）。
【００６５】
【表８】
2019108384.tif 000009
【００６６】
実施例１０
ジメチルアミノエタノールおよびヒスタミンに対するトコジラミの若虫、成虫雄、および成虫雌の比較応答
ジメチルアミノエタノールおよびヒスタミンの２成分ブレンドが幼体および成体段階のトコジラミの拘束応答を引き起こすかどうかを特定するために、実験４２〜４４では、トコジラミの若虫、成虫雄、および成虫雌の応答について、ジメチルアミノエタノールおよびヒスタミン（２０μｇ：２００μｇ）を試験した。データから、この２成分ブレンドは、若虫、成虫雄、および成虫雌の拘束応答の誘発において、等しく効果的であることが明らかとなった（表９）。
【００６７】
【表９】
2019108384.tif 000010
【００６８】
実施例１１
トコジラミ糞中の候補揮発性フェロモン成分の識別
ジメチルアミノエタノールが限定的なフェロモンの役割しか持たないという証拠（表７）、およびヒスタミンの揮発性が低く、従って誘引フェロモン（attractant）ではなく拘束フェロモン（arrestant）として作用する可能性が高いことから、誘引揮発性フェロモン成分に対する研究を続けた。研究の焦点も、天然のトコジラミシェルターに脱皮殻と共に存在するトコジラミの糞に移した。
【００６９】
およそ３００匹のトコジラミの糞に４週間にわたって暴露したフィルター紙片（５×１０ｃｍ）を、各々０．７５ｃｍ×０．５ｃｍの小片に切断し、それを、ＤＢ‐５ ＭＳ ＧＣカラム（３０ｍ×０．２５μｍ ＩＤ）を取り付けたＶａｒｉａｎ ２０００ Ｉｏｎ Ｔｒａｐ ＧＣ‐ＭＳと接続したＡｇｉｌｅｎｔ Ｈｅａｄｓｐａｃｅ Ａｎａｌｙｚｅｒで分析した。糞汚染紙を２０ｍｌバイアルに入れた後、それを、２０ｍｍ ＯＤの白色シリコン隔膜を持つクリンプキャップで密封し、５分間９０℃に加熱した。浮遊するヘッドスペース揮発分を自動シリンジで抜き取り、以下の温度プログラム：５０℃で５分間、続いて１分間あたり１０℃で２８０℃まで昇温、を用いて結合ガスＧＣ‐ＭＳ分析（coupled gas GC-MS analysis）に掛けた。この分析から、６つのアルデヒド（ブタナール、ペンタナール、ヘキサナール、（Ｅ）‐２‐ヘキセナール、（Ｅ）‐２‐オクテナール、ベンズアルデヒド）、１つのアルコール（ベンジルアルコール）、３つのケトン（２‐ヘキサノン、アセトフェノン、ベルべノン）、３つのエステル（オクタン酸メチル、オクタン酸エチル、ヘキサン酸ペンチル）、および２つのスルフィド（ジメチルジスルフィド、ジメチルトリスルフィド）から成る１５の酸素または硫黄含有揮発性成分の複雑なブレンドであることが明らかとなった。これら１５の化合物はすべて、二者択一嗅覚計バイオアッセイ（実施例２；図１参照）でのトコジラミの誘引について試験されるべき候補フェロモン成分と見なした。
【００７０】
実施例１２
トコジラミ糞揮発分の３つの用量での合成ブレンドに対する成虫雄トコジラミの応答
トコジラミの糞中で識別された１５のトコジラミ糞揮発分のブレンド（実施例１１参照）が、トコジラミを誘引し、従って１つ以上のトコジラミフェロモン成分を含有するかどうかを特定するために、合成ブレンド（ＳＢ）を、中用量（５０μｇ；実験４５）、低用量（５μｇ；実験４６）、および非常に低用量（０．５μｇ；実験４７）にて、三皿型二者択一嗅覚計でのトコジラミの応答について試験した（実施例２；図１参照）。試験した各用量において、成分はすべて鉱油中に等量で配合し、これを、裏返しにした４ｍｌバイアルのキャップにピペットで入れた。次に、バイアルを、嗅覚計のランダムに割り当てた処理皿中の段ボールシェルターの上に置いた（図１参照）（実施例２参照）。コントロール刺激物は、合成試験化学物質を含まない鉱油を含有する同じ型のキャップから成り、嗅覚計のコントロール皿の段ボール上に置いた。
【００７１】
実験４５〜４７では、中用量、低用量、および非常に低用量のトコジラミ糞揮発分の合成ブレンドのすべてが、コントロール刺激物よりも雄トコジラミを強く誘引しており、このことは、このブレンドが、１つ以上のトコジラミフェロモン成分を含有することを示していた。さらなる実験に用いるために、中用量を選択した。
【００７２】
【表１０】
2019108384.tif 000011
【００７３】
実施例１３
トコジラミ糞揮発分の合成ブレンド中のフェロモン成分の特定
トコジラミを誘引したトコジラミ糞揮発分の１５成分合成ブレンド（ＳＢ）（実施例１２；表１０）中の（１もしくは複数の）必須成分を特定するために、実験４８〜５２では、１５成分すべての完全ＳＢに対するその応答（実験４８）を、関連する有機化学物質の群が除かれた、すなわちエステル（オクタン酸メチル、オクタン酸エチル、ヘキサン酸ペンチル；実験４９）、アルデヒド（ブタナール、ペンタナール、ヘキサナール、Ｅ２‐ヘキセナール、Ｅ２‐オクテナール、ベンジルアルデヒド；実験５０）、スルフィド（ジメチルジスルフィド、ジメチルトリスルフィド；実験５１）、およびケトン／アルコール（２‐ヘキサノン、アセトフェノン、ベルべノン、ベンジルアルコール；実験５２）が除かれたＳＢに対する応答と比較した。すべてのＳＢは、実施例１１に記載の通りに配合し、バイオアッセイに掛けた。
【００７４】
実験４８では（表１１）、１５成分ＳＢは、成虫雄トコジラミを強く誘引しており、このＳＢが、１つ以上のトコジラミフェロモン成分を含有することが確認された。同様に、実験４９では（表１１）、エステルが除かれたＳＢは、成虫雄トコジラミを強く誘引しており、このことは、エステルが、トコジラミフェロモンブレンドの必須部分ではないことを示している。逆に、アルデヒド（実験５０）、スルフィド（実験５１）、またはケトンおよびアルコール（実験５２）が除かれたＳＢで誘引したシェルターはすべて、コントロールシェルターと比較して有意に多い数の成虫雄トコジラミを捕獲することができておらず、このことは、アルデヒド、スルフィド、およびケトンまたはアルコールのうちの１つ以上が、必須トコジラミフェロモン成分であることを示している。
【００７５】
【表１１−１】
2019108384.tif 000012
【００７６】
【表１１−２】
2019108384.tif 000013
【００７７】
トコジラミフェロモン成分を構成する特定の（１もしくは複数の）アルデヒド、（１もしくは複数の）ケトン、または（１もしくは複数の）スルフィドを絞り込むために、フォローアップ同時進行実験を行って、再度、完全ＳＢ（実験５３）、ならびにベンジルアルデヒドおよびベンジルアルコールの両方を除いたＳＢ（実験５４）、ベルべノンを除いたＳＢ（実験５５）、または（Ｅ）‐２‐ヘキセナールおよび（Ｅ）‐２‐オクテナールの両方を除いたＳＢ（実験５６）について試験した。
【００７８】
実験５３では（表１１）、１５成分ＳＢで誘引したシェルターが、コントロールシェルターよりも２倍多い数の成虫雄トコジラミを捕獲した。ベンジルアルデヒドおよびベンジルアルコールの両方を除いたＳＢ（実験５４）またはベルべノンを除いたＳＢ（実験５５）でも同様のデータが得られており、このことは、これら３つの化合物がいずれも、必須トコジラミフェロモン成分ではないことを示している。逆に、（Ｅ）‐２‐ヘキセナールおよび（Ｅ）‐２‐オクテナールの両方を除いたＳＢ（実験５６）で誘引したシェルターは、コントロールシェルターよりも多い数の成虫雄トコジラミを捕獲することができておらず、このことは、これら２つのアルデヒドのうちの一方または両方が、トコジラミフェロモン成分であることを示している。
【００７９】
実験４８〜５６のデータを組み合わせると、トコジラミの必須誘引フェロモン成分は、以下の６つの化合物：（Ｅ）‐２‐ヘキセナール、（Ｅ）‐２‐オクテナール、ジメチルジスルフィド、ジメチルトリスルフィド、アセトフェノン、および２‐ヘキサノン、の中に含まれることが示された。この６成分合成ブレンド（６‐Ｃｏｍｐ．ＳＢ）が、トコジラミの誘引において１５‐ｃｏｍｐ．ＳＢと同程度に有効であるかどうかを確認するために、実験５７および５８では、コントロール刺激物に対してＳＢおよび６‐Ｃｏｍｐ．ＳＢを試験した。
【００８０】
実験５７では（表１１）、予想通り、１５‐Ｃｏｍｐ．ＳＢが、コントロール刺激物よりも著しく多い数の成虫雄トコジラミを誘引した。実験５８では、６‐Ｃｏｍｐ．ＳＢは、コントロール刺激物よりも著しく多い数の成虫雄トコジラミを誘引した。ＳＢおよび６‐Ｃｏｍｐ．ＳＢが、同等にトコジラミを誘引することができると思われたことから、すべての必須フェロモン成分が６‐Ｃｏｍｐ．ＳＢ中に存在するものと結論付けた。
【００８１】
６‐Ｃｏｍｐ．ＳＢ中の（１もしくは複数の）必須ケトンを特定するために、フォローアップ同時進行実験では、６‐Ｃｏｍｐ．ＳＢ（実験５９）、アセトフェノンを除いた６‐Ｃｏｍｐ．ＳＢ（実験６０）、および２‐ヘキサノンを除いた６‐Ｃｏｍｐ．ＳＢ（実験６１）に対する応答を比較した。
【００８２】
実験５９では（表１１）、６‐Ｃｏｍｐ．ＳＢは、コントロール刺激物よりも著しく多い数の成虫雄トコジラミを誘引した。同様に、実験６０でも、アセトフェノンを除いた６‐Ｃｏｍｐ．ＳＢは、コントロール刺激物よりも著しく多い数の成虫雄トコジラミを誘引しており、このことは、アセトフェノンが必須トコジラミフェロモン成分ではないことを示している。逆に、実験６１では、２‐ヘキサノンを除いた６‐Ｃｏｍｐ．ＳＢは、著しく多い数の成虫雄トコジラミを誘引することができておらず、このことは、２‐ヘキサノンが、重要なトコジラミフェロモン成分であることを示している。
【００８３】
６‐Ｃｏｍｐ．ＳＢ中の（１もしくは複数の）重要なスルフィドを特定するために、次の３つのフォローアップ同時進行実験では、６‐Ｃｏｍｐ．ＳＢ（実験６２）、ジメチルジスルフィドを除いた６‐Ｃｏｍｐ．ＳＢ（実験６３）、およびジメチルトリスルフィドを除いた６‐Ｃｏｍｐ．ＳＢ（実験６４）に対する応答を比較した。
【００８４】
実験６２では、６‐Ｃｏｍｐ．ＳＢは、コントロール刺激物よりも著しく多い数の成虫雄トコジラミを誘引した。同様に、ジメチルトリスルフィド（実験６３）またはジメチルトリスルフィド（実験６４）のいずれかを除いた２つの６‐Ｃｏｍｐ．ＳＢも、成虫雄トコジラミの誘引において、コントロール刺激物よりもなおより有効であった。しかし、これら両方のスルフィドを含む６‐Ｃｏｍｐ．ＳＢは（実験６２）、一方のスルフィドだけを含有するＳＢ（実験６３および６４）よりも相対的に誘引性が高いと思われ、このことから、これらのスルフィドの両方が、重要なフェロモン成分であり、実用上のルアーに含まれるべきであることが示唆される。
【００８５】
６‐Ｃｏｍｐ．ＳＢ中の（１もしくは複数の）重要なアルデヒドを特定するために、次の３つのフォローアップ同時進行実験では、６‐Ｃｏｍｐ．ＳＢ（実験６５）、（Ｅ）‐２‐ヘキセナールを除いた６‐Ｃｏｍｐ．ＳＢ（実験６６）、および（Ｅ）‐２‐オクテナールを除いた６‐Ｃｏｍｐ．ＳＢ（実験６７）に対する応答を比較した。
【００８６】
実験６５では（表１１）、６‐Ｃｏｍｐ．ＳＢは、コントロール刺激物よりも著しく多い数の成虫雄トコジラミを誘引した。同様に、実験６６では、（Ｅ）‐２‐ヘキセナールを除いた６‐Ｃｏｍｐ．ＳＢは、コントロール刺激物よりも著しく多い数の成虫雄トコジラミを誘引した。逆に、実験６７では、（Ｅ）‐２‐オクテナールを除いた６‐Ｃｏｍｐ．ＳＢは、コントロール刺激物よりもかろうじて２倍多い数の成虫雄トコジラミを誘引しただけであった。データをまとめると、（Ｅ）‐２‐オクテナールの方が、（Ｅ）‐２‐ヘキセナールよりも比較的より重要なフェロモン成分であることが明らかとなった。しかしながら、最適な誘引のために、商業用トコジラミフェロモンルアーには、両方のアルデヒドが共に含まれるべきである。
【００８７】
実施例１４
大型バイオアッセイアリーナにおける合成フェロモンルアーに対するトコジラミの応答
実験６８〜７５は、小型の嗅覚計（実施例２；図１；表７〜１１）だけでなく、大型のバイオアッセイアリーナにおいても、トコジラミが合成フェロモンに応答することを確認するために行った。実験６８〜７５は、トコジラミの誘引および拘束に対する揮発性フェロモン成分（ＶＰＣ）、（Ｅ）‐２‐ヘキセナール、（Ｅ）‐２‐オクテナール、ジメチルジスルフィド、ジメチルトリスルフィド、および２‐ヘキサノンの効果、ならびに低揮発性フェロモン成分、ヒスタミン（Ｈ）の効果についても調べた。処理刺激物は、Ｈ（２０００μｇ）で含浸し、段ボールシェルター（３×２．２ｃｍ）で覆ったフィルター紙（４×２．２ｃｍ）、ならびに鉱油（０．５ｍｌ）中に高用量（５００μｇ；実験６８〜７４）または中用量（５０μｇ；実験７５）で配合したＶＰＣを、シェルター上に置いた裏返しにした２０ｍｌシンチレーションバイアルのキャップにピペットで入れたものから構成した（図１）。コントロール刺激物は、同一の設計であるが、フィルター紙はＨを含有しておらず、鉱油はＶＰＣを含有していなかった。
【００８８】
具体的には、実験６８では、ＶＰＣおよびＨから成る完全合成フェロモンブレンドをコントロール刺激物に対して試験し、一方、同時進行の実験６９では、ＶＰＣのみから成る部分フェロモンブレンドをコントロール刺激物に対して試験した。
【００８９】
実験６８（表１２）では、試験した１６匹の雄トコジラミのうちの１５匹が、完全フェロモンブレンドに個別に応答しており、このことは、完全ブレンドが、すべての必須トコジラミフェロモン成分を含有していたことを示している。対照的に、実験６９では、ヒスタミンを含まないＶＰＣから成る部分フェロモンブレンドに応答したのは、試験した１６匹の雄トコジラミのうちの僅かに６匹であり、このことは、ヒスタミンが必須トコジラミフェロモン成分であること（表７〜９も参照）、およびＨが、ＶＰＣによってシェルターに誘引されたトコジラミをシェルターに拘束する役割を持つことが確認される。
【００９０】
【表１２】
2019108384.tif 000014
【００９１】
フェロモンブレンド中のＶＰＣの効果を特定するために、発明者らは、続いて、ヒスタミン単独対ブランクコントロール（実験７０）、ならびにＶＰＣおよびヒスタミンの完全フェロモンブレンド対ブランクコントロール（実験７１）を同時に試験した。
【００９２】
実験７０では（表１２）、１２匹のトコジラミが、ヒスタミン含浸フィルター紙を備えたシェルターに応答し、一方、ブランクフィルター紙を備えたシェルターには、１匹のトコジラミしか応答しておらず、このことは、ここでも、ヒスタミンの存在下でトコジラミが拘束されることを示している。実験７１では、１７匹のトコジラミが、ＶＰＣおよびヒスタミンの完全フェロモンブレンドを伴うシェルターに応答し、コントロールシェルターには、１匹のトコジラミしか応答しておらず、このことは、完全フェロモンブレンドが、トコジラミの誘引または拘束において、部分ブレンド（実験７０で試験）よりも恐らくは有効であることを示唆している。
【００９３】
ヒスタミンおよびＶＰＣのトコジラミフェロモン成分としての相対的重要性をさらに比較するために、発明者らは、ヒスタミンまたはＶＰＣで誘引したシェルター（実験７２）、およびブランクコントロールに対してＶＰＣおよびヒスタミンの完全フェロモンブレンドで誘引したシェルター（実験７３）に対するトコジラミの応答を同時に試験した。
【００９４】
実験７２では（表１２）、１４匹のトコジラミが、ヒスタミンで誘引したシェルターに応答し、２匹のトコジラミが、ＶＰＣで誘引したシェルターに応答しており、このことは、トコジラミによるシェルター選択決定に対して、ヒスタミンの方が強い影響を持つことを示している。実験７３では、１５匹のトコジラミが、完全フェロモンブレンド（ＶＰＣ＋ヒスタミン）で誘引したシェルターに応答し、非誘引コントロールシェルターに応答したのは、僅かに１匹のトコジラミであり、このことから、完全トコジラミフェロモンブレンドのより優れた効果が確認される。
【００９５】
ヒスタミンが、トコジラミをシェルターに強く拘束することを受け（表１２の実験７０および７２参照）、発明者らは次に、ヒスタミンにＶＰＣを添加することによってヒスタミンの効果を高めることができるかどうかについて調べた。従って、発明者らは、ヒスタミン、またはヒスタミンにＶＰＣを添加したものに対するトコジラミの応答を、ＶＰＣの高用量（５００μｇ；実験７５）およびＶＰＣの中用量（５０μｇ；実験７４）の両方で試験した。
【００９６】
実験７４および７５では、ヒスタミンにＶＰＣを添加した完全フェロモンブレンドは、高用量および中用量において、ヒスタミン単独よりも著しく多い数のトコジラミを誘引、拘束しており、このことから、ＶＰＣ（トコジラミを誘引）とヒスタミン（トコジラミを拘束）との間の相乗効果が明確に明らかとなった。
【００９７】
実施例１４
重度に害虫発生した居住用アパートにおける合成フェロモンルアーに対するトコジラミの応答
大型アリーナによる実験室でのバイオアッセイだけでなく、害虫発生した建物（居住用アパート）においても、合成フェロモンルアーに対してトコジラミが応答するかどうかを特定するために、発明者らは、トコジラミの発生が既知である、または疑われるアパートに、フェロモン誘引シェルタートラップ（図１参照）を置いた。シェルターは、実施例１３に記載のものと同一であったが、但し、シェルターの配置が容易となるように、ヒスタミン含浸フィルター紙またはコントロールフィルター紙は、段ボールシェルターに糊付けした。複数のアパートにおける２４時間のトラップ設置の結果に基づいて、発明者らは、単一の激しく害虫発生したアパート（以降１０６号室と称する）を、合成トコジラミフェロモンルアーのさらなる試験のために選択した。
【００９８】
合成フェロモンルアーにおけるＶＰＣとヒスタミンとの間の相乗的相互作用（表１２の実験室実験７４および７５参照）についてのフィールドでの証拠を得るために、１０６号室で２つの実験の２つの連続するセットを行った（セット１：実験７６および７７；セット２：実験７８および７９）。各実験の反復サンプルは（ｎ＝１５〜２０）、壁または家具に沿って置かれたペアのシェルターから構成し、ペアのシェルター間の間隔はおよそ３０ｃｍとし、シェルターペア間の間隔は≧１ｍとした。各実験での各シェルターペアにおいて、フェロモンおよびコントロール処理をランダムに割り当て、反復サンプルの配置は、セット１およびセット２の２つの実験間で交互とした。いずれの時点でも、１０６号室には１０個を超えるシェルターペアを収容させることができなかったことから、実験データは、連続する複数の２４時間の期間にわたって収集した。毎朝９時に、１０６号室からシェルターを回収し、すぐに別々のラベリングしたジッパーロックバッグ（zipper lock bags）に入れ、次にそれをドライアイス上に置いて、シェルターに入り込んだトコジラミを殺傷した。各シェルター中のトコジラミを、その後実験室にて顕微鏡を用いてカウントし、その発達段階（１齢、２齢、３齢、４齢、成虫）、性別（雄、雌）、およびシェルターに入り込む前に吸血した証拠（またはそれがないこと）を記録した。毎朝、１０６号室からトコジラミシェルターを回収した直後に、新しい予め用意しておいたシェルターにフェロモン誘引処理を行うか（処理）またはそれを行わず（コントロール）、それらのシェルターペア内での位置はランダムに割り当て（上記参照）、シェルターペアの配置もやはり、実験７６と７７との間（セット１）、および実験７８と７９との間（セット２）で交互とした。
【００９９】
揮発性フェロモン成分（ＶＰＣ）、（Ｅ）‐２‐ヘキセナール、（Ｅ）‐２‐オクテナール、ジメチルジスルフィド、ジメチルトリスルフィド、２‐ヘキサノン（発明者らは、トコジラミをシェルターへ誘引するであろうと予測）、ならびに低揮発性成分、ヒスタミン（発明者らは、トコジラミをシェルターに拘束するであろうと予測）の存在下または非存在下での合成フェロモンルアーの効果を特定するために、発明者らは、実験７６および７７、ならびに実験７８および７９において、各セットの実験を同時に行い、完全ならびに部分合成フェロモンルアーに対するトコジラミの応答を比較した。
【０１００】
実験７６では、発明者らは、完全合成フェロモンルアー（ＶＰＣ＋ヒスタミン）で誘引したシェルターを、誘引なしのシェルターに対して試験し、実験７７では、発明者らは、ＶＰＣのみで誘引したシェルターを、誘引なしのシェルターに対して試験した。同様に、実験７８では、発明者らは、完全合成フェロモンルアー（ＶＰＣ＋ヒスタミン）で誘引したシェルターを、誘引なしのシェルターに対して試験し、実験７９では、発明者らは、ヒスタミンのみで誘引したシェルターを、誘引なしのシェルターに対して試験した。
【０１０１】
実験７６では（表１３）、完全合成フェロモンブレンドで誘引したシェルターは、コントロールシェルターでの平均４．８匹のトコジラミと比較して、平均２１．４匹のトコジラミを誘引、拘束した。これらのデータは、完全合成フェロモンルアーが、トコジラミの誘引および拘束に対して著しい効果を有していたことを示している。逆に、実験７７では、ＶＰＣのみで誘引したシェルターは、コントロールシェルターでの平均４．７匹のトコジラミと比較して、平均で僅かに１０．３匹のトコジラミしか誘引、拘束しなかった。
【０１０２】
【表１３】
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【０１０３】
実験７６および７７からのデータを合わせると、完全合成フェロモンルアーが、トコジラミの誘引および拘束において、部分フェロモンルアー（ヒスタミンが除かれた）よりも優れていることが明らかとなった。
【０１０４】
実験７８では（表１３）、完全合成フェロモンブレンドで誘引したシェルターは、コントロールシェルターでの平均３．７３匹のトコジラミと比較して、平均２４．８６匹のトコジラミを誘引、拘束した。これらのデータは、ここでも、完全合成フェロモンルアーが、トコジラミの誘引および拘束に対して著しい効果を有していたことを示している。逆に、実験７９では、ヒスタミンのみを含有する部分フェロモンブレンドで誘引したシェルターは、コントロールシェルターでの平均４．５３匹のトコジラミと比較して、平均で僅かに６．０６匹のトコジラミしか誘引、拘束しなかった。
【０１０５】
実験７６〜７９からのデータを合わせると、完全合成フェロモンブレンドが、トコジラミの誘引および拘束において、最も効果的であることが明らかとなった。完全合成フェロモンブレンドの驚くべき優れた性能は、トコジラミをシェルターに誘引する揮発性成分（ＶＰＣ）、およびシェルターに誘引された後に、トコジラミをシェルターに拘束する低揮発性フェロモン成分であるヒスタミンの２種類のフェロモン成分の組み合わされた効果に起因する。
【０１０６】
フェロモン誘引シェルターには、すべての齢の若虫（吸血ありおよびなし）、ならびに成虫の雄および雌（吸血ありおよびなし）が存在しており、このことは、完全合成フェロモンが、トコジラミの発達段階、性別、または生理学的状態に関わらず、トコジラミを誘引、拘束することを明らかに示している。
【０１０７】
実施例１５
軽度にトコジラミが発生した居住用アパートにおける合成フェロモンルアーに対するトコジラミの応答
トコジラミが重度に発生した居住用アパート（実施例１４；表１３参照）だけでなく、非常に軽度にトコジラミが発生した居住用アパートにおいても、完全合成フェロモンに対してトコジラミが応答するかどうかを確認するために、有害生物管理の専門家による報告に従って、テナントがトコジラミの発生を疑っている３つの別々の建物の８つの居住用アパートにトラップを設置した。これらのアパートの各々において、寝具、マットレス、およびその他の家具を、生トコジラミの存在、およびベッドシーツの糞汚れなどのトコジラミの活動の証拠について、念入りに調べた。実験８０では、トコジラミシェルタートラップ（図１参照）の１〜５ペアを各アパートに置き、合計で２０ペアとした。各ペアにおける１つのシェルターは、フェロモンで誘引し［ＶＰＣ：（Ｅ）‐２‐ヘキセナール、（Ｅ）‐２‐オクテナール、ジメチルジスルフィド、ジメチルトリスルフィド、２‐ヘキサノン（５００μｇ）、およびヒスタミン（２０００μｇ）］；他方は、誘引なしとした。シェルターの配置、ならびにシェルターペア内、およびペア間の間隔は、実施例１４に記載の通りに行った。シェルターは、配置後２４時間で回収し、すぐに別々のラベリングしたジッパーロックバッグに入れ、ドライアイス上に置いて、すべての捕獲したトコジラミを殺傷した。
【０１０８】
実験８０では、捕獲した２７匹のトコジラミのうち２６匹が、フェロモン誘引シェルター中に存在し；非誘引コントロールシェルターに存在したトコジラミは１匹だけであった。実験の開始時に少なくとも１匹の生きたトコジラミが見られたすべての部屋におけるシェルタートラップは、少なくとも１匹のトコジラミを捕獲した。
【０１０９】
これらのデータは、（Ｅ）‐２‐ヘキセナール、（Ｅ）‐２‐オクテナール、ジメチルジスルフィド、ジメチルトリスルフィド、２‐ヘキサノン、およびヒスタミンを含む６成分合成フェロモンルアーが、軽度に害虫発生した居住用アパートにおいて、トコジラミを誘引、拘束することができること、ならびにこの新規なフェロモンルアーが、居住用および商業用建物におけるトコジラミ発生を検出するための効果的なツールとなる可能性を有することを示している。
【０１１０】
本出願は、本発明の全般的原理を用いた本発明のいずれの変型例、使用、または適合も含むことを意図している。さらに、本出願は、本発明が属する技術分野における公知のまたは慣習的な実践の範囲内であり、添付の請求項の範囲に含まれる本開示からの逸脱も含むことを意図している。従って特許請求の範囲は、明細書中に示される好ましい実施形態によって限定されるべきではなく、全体としての明細書と一致する最も広い解釈が与えられるべきである。
【０１１１】
参考文献
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【図１】
2019108384.tif 000016