(57)【要約】      （修正有）【課題】糖尿病、肥満、メタボリックシンドローム、クッシング症候群および緑内障などを処置するクリプトクロム調節薬の提供。【解決手段】下式で例示するカルバゾール含有アミド、カルバメート、および尿素化合物。2019142959.tif 000164【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
明細書または図面に記載の発明。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、２０１４年４月７日に出願された米国仮特許出願第６１／９７６，３５０号に対する優先権を主張し、この全体は本明細書において参照として援用される。
【０００２】
技術分野
本明細書に開示する主題は、とりわけ、カルバゾール含有アミド、カルバメート、および尿素誘導体、これらの化合物を含む医薬組成物、そのクリプトクロム媒介性の疾患または障害の処置における使用方法、ならびにその作製方法に関する。また、本明細書に開示する化合物および組成物を受ける被験体のクリプトクロム依存性疾患を診断する方法、検出する方法、またはその進行をモニタリングする方法も提供する。
【背景技術】
【０００３】
背景
体内時計は、多くの生理学的プロセス、例えば、睡眠／目覚めの習性、体温、ホルモンの分泌および代謝の日周リズムを制御する内在性の時間管理機構である（Ｔａｋａｈａｓｈｉ，Ｊ．Ｓ．ら、Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｇｅｎｅｔ．２００８，９，７６４；Ｇｒｅｅｎ，Ｃ．Ｂ．ら、Ｃｅｌｌ，２００８，１３４，７２８；Ｚｈａｎｇ，Ｅ．Ｅ．ら、Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．２０１０，１１，７６４）。概日リズムは、細胞自律的様式で、時計遺伝子の転写調節ネットワークによって生じる。コアフィードバックループでは、転写因子ＣＬＯＣＫとＢＭＡＬ１がＰｅｒｉｏｄ（Ｐｅｒ１およびＰｅｒ２）ならびにクリプトクロム（Ｃｒｙ１およびＣｒｙ２）遺伝子の発現を活性化させる。翻訳および核局在後、ＰＥＲおよびＣＲＹタンパク質はＣＬＯＣＫ−ＢＭＡＬ１の機能を阻害し、持続性の律動的な遺伝子発現をもたらす。多くの生理学的経路は体内時計の制御下にある（Ｐａｎｄａ，Ｓ．ら、Ｃｅｌｌ，２００２，１０９，３０７）（例えば、数多くの肝内プロセスの直接調節（Ｒｅｙ，Ｇ．ら、ＰＬｏＳ  Ｂｉｏｌ．２０１１，９，ｅ１０００５９５；Ｂｕｇｇｅ，Ａ．ら、Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．２０１２，２６，６５７））。
【０００４】
概日脱同調は、インスリン感受性の障害（Ｓｐｉｅｇｅｌ，Ｋ．ら、Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２００５，９９，２００８；Ｓｐｉｅｇｅｌ，Ｋ．ら、Ｌａｎｃｅｔ，１９９９，３５４，１４３５）、レプチンレベルの低下と関連しており、前糖尿病状態と同等の高血糖症、高インスリン血症および食後グルコース応答をもたらす（Ｓｃｈｅｅｒ，Ｆ．Ａ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，２００９，１０６，４４５３）。いくつかのゲノムワイド関連解析により、Ｃｒｙ２は哺乳動物のグルコースレベルの調節に重要であり得るという知見が得られた（Ｄｕｐｕｉｓ，Ｊ．ら、Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．２０１０，４２，１０５；Ｌｉｕ，Ｃ．ら、ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ，２０１１，６，ｅ２１４６４；Ｂａｒｋｅｒ，Ａ．ら、Ｄｉａｂｅｔｅｓ，２０１１，６０，１８０５）。
【０００５】
血中のグルコース濃度は、膵臓内分泌部のインスリン感受性とインスリン分泌能の変化のため非常に律動的である（Ｐｏｌｏｎｓｋｙ，Ｋ．Ｓ．ら、Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．１９８８，３１８，１２３１）。ＣｌｏｃｋΔ１９変異型マウスは年齢依存性高血糖症を発症し、また、この動物は食事誘導性肥満を起こし易く、不適切に低いインスリン濃度を有し（Ｔｕｒｅｋ，Ｆ．Ｗ．ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００５，３０８，１０４３）、インスリンでの処置に応答して血糖の急降下を示し、これは、このような動物が向上したイ
ンスリン感受性を有し、それにより、そのβ細胞の欠陥が隠されることを示す（Ｍａｒｃｈｅｖａ，Ｂ．ら、Ｎａｔｕｒｅ，２０１０，４６６，６２７）。マウスにおけるＢｍａｌ１の肝臓特異的欠失により耐糖能の障害およびインスリン感受性の増大がもたらされる（Ｌａｍｉａ，Ｋ．Ａ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，２００８，１０５，１５１７２）。２型糖尿病を有する個体は、一等親血縁者がまだ該疾患に罹患していなくても、耐糖能の律動性の改変を示す（Ｂｏｄｅｎ，Ｇ．ら、Ｄｉａｂｅｔｅｓ，１９９９，４８，２１８２）。また、Ｐｅｒ２、Ｐｅｒ３、およびＣｒｙ２発現は、２型糖尿病を有するヒトでは該疾患のないヒトと対比して有意に低い（Ｓｔａｍｅｎｋｏｖｉｃｈ，Ｊ．Ａ．ら、Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，２０１２，６１，９７８）。糖新生遺伝子ホスホエノールピルビン酸カルボキシキナーゼ（Ｐｃｋ１）およびグルコース６−ホスファターゼ（Ｇ６ｐｃ）は、ＣＲＹおよびＢｍａｌ１遺伝子調節因子ＲＥＶ−ＥＲＢによって制御される（Ｚｈａｎｇ，Ｅ．Ｅ．ら、Ｎａｔ．Ｍｅｄ．２０１０，１６，１１５２；Ｌａｍｉａ，Ｋ．Ａ．ら、Ｎａｔｕｒｅ，２０１１，４８０，５５２；Ｙｉｎ，Ｌ．ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００７，３１８，１７８６）。糖新生は多重のシグナル伝達機構によって厳重に制御されており、さらに、マウスでの研究により、Ｃｒｙ１およびＣｒｙ２のモジュレーションにより、糖新生が乱され、血糖レベルが調節され得ることが明らかになっている（Ｚｈａｎｇ，Ｅ．Ｅ．ら、Ｎａｔ．Ｍｅｄ．２０１０，１６，１１５２）。
【０００６】
単独療法または併用療法の状況において、確立されている新しい経口抗糖尿病剤は有効性が一様でなく、限定的である。経口抗糖尿病治療薬は、血糖コントロールが不充分もしくは限定的、または許容され得ない副作用（浮腫、体重増加、または低血糖症などのさらにより重篤な合併症など）のため患者のコンプライアンスが不充分という欠点を有する。メトホルミン（置換型のビグアニド）は下痢および胃腸の不快感を引き起こし得る。最後に、浮腫、体重増加ならびに一部の場合では肝毒性および心臓毒性は、一部のチアゾリジン−２，４−ジオン抗糖尿病剤（例えば、ロシグリタゾンおよびピオグリタゾン）の投与と関連している。上記の薬剤の２種類または２種類より多くを用いた併用療法が一般的であるが、一般的に、血糖コントロールの漸進的改善がもたらされるにすぎない。
【０００７】
また、Ｃｒｙ１およびＣｒｙ２は、グルココルチコイド受容体（ＧＲ）とも相互作用し、グルココルチコイドに対する転写応答を包括的に改変させる（Ｌａｍｉａ，Ｋ．Ａ．ら、Ｎａｔｕｒｅ，２０１１，４８０，５５２）。Ｃｒｙ１および／またはＣｒｙ２の減損により耐糖能障害および構成的に高レベルの循環コルチコステロンがもたらされ、肝臓におけるグルココルチコイドトランス活性化の増大と呼応する視床下部−下垂体−副腎系の抑制の低減が示唆される。ゲノム的には、Ｃｒｙ１およびＣｒｙ２は、Ｐｃｋ１プロモーター内のグルココルチコイド応答エレメントとホルモン依存的様式で関連しており、Ｐｃｋ１遺伝子のデキサメタゾン誘導性転写は、クリプトクロム欠損肝臓において著しく増大した。これは、炎症を抑制するために使用されるグルココルチコイドの望ましくない代謝系の副作用（例えば、高血糖症、インスリン抵抗性および副腎機能の抑制）が、Ｃｒｙ１および／またはＣｒｙ２を安定化させ得る薬剤と併用することにより緩和され得ることを示唆する。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Ｔａｋａｈａｓｈｉ，Ｊ．Ｓ．ら、Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｇｅｎｅｔ．２００８，９，７６４
【非特許文献２】Ｇｒｅｅｎ，Ｃ．Ｂ．ら、Ｃｅｌｌ，２００８，１３４，７２８
【非特許文献３】Ｚｈａｎｇ，Ｅ．Ｅ．ら、Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．２０１０，１１，７６４
【非特許文献４】Ｐａｎｄａ，Ｓ．ら、Ｃｅｌｌ，２００２，１０９，３０７
【非特許文献５】Ｒｅｙ，Ｇ．ら、ＰＬｏＳ  Ｂｉｏｌ．２０１１，９，ｅ１０００５９５
【非特許文献６】Ｂｕｇｇｅ，Ａ．ら、Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．２０１２，２６，６５７
【非特許文献７】Ｓｐｉｅｇｅｌ，Ｋ．ら、Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２００５，９９，２００８
【非特許文献８】Ｓｐｉｅｇｅｌ，Ｋ．ら、Ｌａｎｃｅｔ，１９９９，３５４，１４３５
【非特許文献９】Ｓｃｈｅｅｒ，Ｆ．Ａ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，２００９，１０６，４４５３
【非特許文献１０】Ｄｕｐｕｉｓ，Ｊ．ら、Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．２０１０，４２，１０５
【非特許文献１１】Ｌｉｕ，Ｃ．ら、ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ，２０１１，６，ｅ２１４６４
【非特許文献１２】Ｂａｒｋｅｒ，Ａ．ら、Ｄｉａｂｅｔｅｓ，２０１１，６０，１８０５
【非特許文献１３】Ｐｏｌｏｎｓｋｙ，Ｋ．Ｓ．ら、Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．１９８８，３１８，１２３１
【非特許文献１４】Ｔｕｒｅｋ，Ｆ．Ｗ．ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００５，３０８，１０４３
【非特許文献１５】Ｍａｒｃｈｅｖａ，Ｂ．ら、Ｎａｔｕｒｅ，２０１０，４６６，６２７
【非特許文献１６】Ｌａｍｉａ，Ｋ．Ａ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，２００８，１０５，１５１７２
【非特許文献１７】Ｂｏｄｅｎ，Ｇ．ら、Ｄｉａｂｅｔｅｓ，１９９９，４８，２１８２
【非特許文献１８】Ｓｔａｍｅｎｋｏｖｉｃｈ，Ｊ．Ａ．ら、Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，２０１２，６１，９７８
【非特許文献１９】Ｚｈａｎｇ，Ｅ．Ｅ．ら、Ｎａｔ．Ｍｅｄ．２０１０，１６，１１５２
【非特許文献２０】Ｌａｍｉａ，Ｋ．Ａ．ら、Ｎａｔｕｒｅ，２０１１，４８０，５５２
【非特許文献２１】Ｙｉｎ，Ｌ．ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００７，３１８，１７８６
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００９】
概要
本明細書における主題は、クリプトクロム（Ｃｒｙ）モジュレート化合物、Ｃｒｙモジュレート化合物を含む医薬組成物、ならびにＣｒｙモジュレート化合物の投与によるＣｒｙ関連疾患または障害（例えば、糖尿病、肥満、メタボリックシンドローム、クッシング症候群および緑内障など）を処置する方法に関する。
一態様において、本明細書に開示する主題は、式Ｉ：
【化１】
2019142959.tif 000002
（式中：
Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｊ、Ｌ、ＭおよびＱの各々は独立して、ＮまたはＣであり；
Ｒ１およびＲ２の各々は、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｊ、Ｌ、ＭおよびＱがＣのとき、独立して、Ｈ、ハロ、シアノ、ニトロ、−ＣＦ３、−ＣＨＦ２、−ＣＨ２Ｆ、トリフルオロメトキシ、アジド、ヒドロキシル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルキニル、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｒ８、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ８、−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−Ｒ８、−ＮＲ８（Ｃ＝Ｏ）−Ｒ１０、−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＲ８Ｒ９、−ＮＲ８Ｒ９、−ＮＲ８ＯＲ９、−Ｓ（Ｏ）ｃＮＲ８Ｒ９、−Ｓ（Ｏ）ｄ（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル、−Ｏ−ＳＯ２−Ｒ８、ＮＲ８−Ｓ（Ｏ）ｃ、−（ＣＲ８Ｒ９）ｄ（３〜１０）員のシクロアルキル、−（ＣＲ８Ｒ９）ｅ（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール、−（ＣＲ８Ｒ９）ｅ（４〜１０）員のヘテロシクリル、−（ＣＲ８Ｒ９）ｆ（Ｃ＝Ｏ）（ＣＲ８Ｒ９）ｅ（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール、−（ＣＲ８Ｒ９）ｆ（Ｃ＝Ｏ）（ＣＲ８Ｒ９）ｅ（４〜１０）員のヘテロシクリル、−（ＣＲ８Ｒ９）ｅＯ（ＣＲ８Ｒ９）ｆ（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール、−（ＣＲ８Ｒ９）ｅＯ（ＣＲ８Ｒ９）ｆ（４〜１０）員のヘテロシクリル、−（ＣＲ８Ｒ９）ｆＳ（Ｏ）ｄ（ＣＲ８Ｒ９）ｅ（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール、および−（ＣＲ８Ｒ９）ｆＳ（Ｏ）ｄ（ＣＲ８Ｒ９）ｅ（４〜１０）員のヘテロシクリルから選択され；
Ｒ３およびＲ５の各々は独立して、Ｈ、シアノ、−ＣＦ３、−ＣＨＦ２、−ＣＨ２Ｆ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルキニル、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｒ８、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ８、−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＲ８Ｒ９、−Ｓ（Ｏ）ｃＮＲ８Ｒ９、−Ｓ（Ｏ）ｄ（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル、−（ＣＲ８Ｒ９）ｄ（３〜１０）員のシクロアルキル、−（ＣＲ８Ｒ９）ｅ（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール、−（ＣＲ８Ｒ９）ｅ（４〜１０）員のヘテロシクリル、−（ＣＲ８Ｒ９）ｆ（Ｃ＝Ｏ）（ＣＲ８Ｒ９）ｅ（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール、−（ＣＲ８Ｒ９）ｆ（Ｃ＝Ｏ）（ＣＲ８Ｒ９）ｅ（４〜１０）員のヘテロシクリル、−（ＣＲ８Ｒ９）ｅＯ（ＣＲ８Ｒ９）ｆ（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール、−（ＣＲ８Ｒ９）ｅＯ（ＣＲ８Ｒ９）ｆ（４〜１０）員のヘテロシクリル、−（ＣＲ８Ｒ９）ｆＳ（Ｏ）ｄ（ＣＲ８Ｒ９）ｅ（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール、および−（ＣＲ８Ｒ９）ｆＳ（Ｏ）ｄ（ＣＲ８Ｒ９）ｅ（４〜１０）員のヘテロシクリルから選択され；
このとき、各Ｒ３基は、任意選択で、４〜１２員の単環式または二環式の環として互いに連結されており；
このとき、各Ｒ５基は、任意選択で、４〜１２員の単環式または二環式の環として互いに連結されており；
Ｒ４は、Ｈ、−ＣＦ３、−ＣＨＦ２、−ＣＨ２Ｆ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルキニル、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｒ８、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ８、−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＲ８Ｒ９、−（ＣＲ８Ｒ９）ｄ（３〜１０）員のシクロアルキル、−（ＣＲ８Ｒ９）ｅ（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール、−（ＣＲ８Ｒ９）ｅ（４〜１０）員のヘテロシクリル、−（ＣＲ８Ｒ９）ｆ（Ｃ＝Ｏ）（ＣＲ８Ｒ９）ｅ（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール、−（ＣＲ８Ｒ９）ｆ（Ｃ＝Ｏ）（ＣＲ８Ｒ９）ｅ（４〜１０）員のヘテロシクリ
ル、−（ＣＲ８Ｒ９）ｅＯ（ＣＲ８Ｒ９）ｆ（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール、−（ＣＲ８Ｒ９）ｅＯ（ＣＲ８Ｒ９）ｆ（４〜１０）員のヘテロシクリル、−ＣＲ８Ｒ９）ｆＳ（Ｏ）ｄ（ＣＲ８Ｒ９）ｅ（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール、および−（ＣＲ８Ｒ９）ｆＳ（Ｏ）ｄ（ＣＲ８Ｒ９）ｅ（４〜１０）員のヘテロシクリルであり；
Ｒ６とＲ７は、４〜１２員の単環式または二環式の環として互いに連結されており；
Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０の各々は独立して、Ｈ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、−（ＣＲ１１Ｒ１２）ｅ（３〜１０）員のシクロアルキル、−（ＣＲ１１Ｒ１２）ｇ（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール、および−（ＣＲ１１Ｒ１２）ｇ（４〜１０）員のヘテロシクリルから選択され；
前述のＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５およびＲ１６の（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（３〜１０）員のシクロアルキル、（Ｃ６〜Ｃ１０）アリールおよび（４〜１０）員のヘテロシクリルの任意の炭素原子は独立して、各々がハロ、シアノ、ニトロ、−ＣＦ３、−ＣＨＦ２、−ＣＨ２Ｆ、トリフルオロメトキシ、アジド、ヒドロキシル、−Ｏ−Ｒ１５、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルキニル、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｒ１１、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｒ１５、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ１１、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ１５、−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−Ｒ１１、−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−Ｒ１５、−ＮＲ１１（Ｃ＝Ｏ）−Ｒ１３、−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＲ１１Ｒ１２、−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＲ１１Ｒ１５、−ＮＲ１１Ｒ１２、−ＮＲ１１Ｒ１５、−ＮＲ１１ＯＲ１２、−ＮＲ１１ＯＲ１５、−Ｓ（Ｏ）ｃＮＲ１１Ｒ１２、−Ｓ（Ｏ）ｃＮＲ１１Ｒ１５、−Ｓ（Ｏ）ｄ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、−Ｓ（Ｏ）ｄＲ１５、−Ｏ−ＳＯ２−Ｒ１１、−Ｏ−ＳＯ２−Ｒ１５、−ＮＲ１１−Ｓ（Ｏ）ｃ、−ＮＲ１５−Ｓ（Ｏ）ｃ、−（ＣＲ１１Ｒ１２）ｅ（３〜１０）員のシクロアルキル、−（ＣＲ１１Ｒ１２）ｅ（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール、−（ＣＲ１１Ｒ１２）ｅ（４〜１０）員のヘテロシクリル、−（ＣＲ１１Ｒ１２）ｆ（Ｃ＝Ｏ）（ＣＲ１１Ｒ１２）ｅ（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール、−（ＣＲ１１Ｒ１２）ｆ（Ｃ＝Ｏ）（ＣＲ１１Ｒ１２）ｅ（４〜１０）員のヘテロシクリル、−（ＣＲ１１Ｒ１２）ｅＯ（ＣＲ１１Ｒ１２）ｆ（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール、−（ＣＲ１１Ｒ１２）ｅＯ（ＣＲ１１Ｒ１２）ｆ（４〜１０）員のヘテロシクリル、−（ＣＲ１１Ｒ１２）ｆＳ（Ｏ）ｄ（ＣＲ１１Ｒ１２）ｅ（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール、および−（ＣＲ１１Ｒ１２）ｆＳ（Ｏ）ｄ（ＣＲ１１Ｒ１２）ｅ（４〜１０）員のヘテロシクリルから独立して選択される１〜３個のＲ１４置換基で任意選択的に置換されており；
前述のＲ１４の（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（３〜１０）員のシクロアルキル、（Ｃ６〜Ｃ１０）アリールおよび（４〜１０）員のヘテロシクリルの任意の炭素原子は独立して、各々がハロ、シアノ、ニトロ、−ＣＦ３、−ＣＨＦ２、−ＣＨ２Ｆ、トリフルオロメトキシ、アジド、（ＣＨ２）ｅＯＨ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルキニル、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｒ１１、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｒ１５、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ１１、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ１５、−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−Ｒ１１、−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−Ｒ１５、−ＮＲ１１（Ｃ＝Ｏ）−Ｒ１３、−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＲ１１Ｒ１２、−ＮＲ１１Ｒ１２、および−ＮＲ１１Ｒ１５から独立して選択される１〜３個のＲ１６置換基で任意選択的に置換されており；
前述のＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１４およびＲ１５の（４〜１０）員のヘテロシクリルの任意の窒素原子は独立して、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルキニル、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｒ１１、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ１１、−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＲ１１Ｒ１２、−（ＣＲ１１Ｒ１２）ｅ（３〜１０）員のシクロアルキル、−（ＣＲ１１Ｒ１２）ｅ（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール、−（ＣＲ１１Ｒ１２）ｅ（４〜１０）員のヘテロシクリル、−（ＣＲ１１Ｒ１２）ｆ（Ｃ＝Ｏ）（ＣＲ１１Ｒ１２）ｅ（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール、または−（ＣＲ１１Ｒ１２）ｆ（Ｃ＝Ｏ）（ＣＲ１１Ｒ１２）ｅ（４〜１０）員のヘテロシクリルで任意選択的に置換されており；
各Ｒ１１、Ｒ１２およびＲ１３は独立して、Ｈまたは（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルであり；
Ｒ１５は、−（ＣＲ１１Ｒ１２）ｅ（３〜１０）員のシクロアルキル、−（ＣＲ１１Ｒ１２）ｅ（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール、または−（ＣＲ１１Ｒ１２）ｅ（４〜１０）員のヘテロシクリルであり；
ａおよびｂは各々、独立して、１、２、３または４であり；
ｃは１または２であり；
ｄは０、１または２であり；
ｅ、ｆおよびｇは各々、独立して、０、１、２、３、４または５である）
の化合物またはその薬学的に許容され得る塩もしくは水和物に関する。
【００１０】
一部の実施形態では、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｊ、Ｌ、ＭおよびＱの各々がＣであり；Ｒ１およびＲ２の各々が独立して、Ｈまたはハロから選択され；Ｒ４がＨまたは（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルであり、Ｒ３とＲ５がＨであり；Ｒ６とＲ７は、４〜１２員の単環式または二環式のアミド環として互いに連結されており；Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６、ａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｅ、およびｆは本明細書に規定したとおりである。
【００１１】
他の実施形態では、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｊ、Ｌ、ＭおよびＱの各々がＣであり；Ｒ１およびＲ２の各々が独立して、Ｈまたはハロから選択され；Ｒ４がＨまたは（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルであり、Ｒ３とＲ５がＨであり；Ｒ６およびＲ７が４〜１２員の単環式または二環式の尿素環として互いに連結されており；Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６、ａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｅ、およびｆは本明細書に規定したとおりである。
【００１２】
いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物がＣ−３において（Ｒ）配置を有する単一のエナンチオマーであり、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｊ、Ｌ、ＭおよびＱの各々がＣであり；Ｒ１およびＲ２の各々が独立して、Ｈまたはハロから選択され；Ｒ４がＨまたは（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルであり、Ｒ３とＲ５がＨであり；Ｒ６とＲ７が４〜１２員の単環式または二環式のアミド環として互いに連結されており；Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６、ａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｅおよびｆは本明細書に規定したとおりである。
【００１３】
本明細書に開示する主題の他の実施形態では、式Ｉの化合物がＣ−３において（Ｒ）配置を有する単一のエナンチオマーであり、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｊ、Ｌ、ＭおよびＱの各々がＣであり；Ｒ１およびＲ２の各々が独立して、Ｈまたはハロから選択され；Ｒ４がＨまたは（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルであり、Ｒ３とＲ５がＨであり；Ｒ６およびＲ７が４〜１２員の単環式または二環式の尿素環として互いに連結されており；Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６、ａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｅ、およびｆは本明細書に規定したとおりである。
【００１４】
本明細書に記載の主題の他の実施形態は：
１−（３−（３，６−ジフルオロ−９Ｈ−カルバゾール−９−イル）−２−ヒドロキシプロピル）−３−フルオロピロリジン−２−オン；
２−（３−（３，６−ジフルオロ−９Ｈ−カルバゾール−９−イル）−２−ヒドロキシプロピル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−オン；
１−（３−（３，６−ジフルオロ−９Ｈ−カルバゾール−９−イル）−２−ヒドロキシプロピル）イミダゾリジン−２−オン；
（１Ｒ，４Ｓ）−２−（（Ｒ）−３−（３，６−ジフルオロ−９Ｈ−カルバゾール−９−イル）−２−ヒドロキシプロピル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−オン；
（Ｒ）−１−（３−（３，６−ジフルオロ−９Ｈ−カルバゾール−９−イル）−２−ヒド
ロキシプロピル）イミダゾリジン−２−オン；
（Ｒ）−１−（（Ｒ）−３−（３，６−ジフルオロ−９Ｈ−カルバゾール−９−イル）−２−ヒドロキシプロピル）−３−フルオロピロリジン−２−オン；
（Ｓ）−１−（（Ｓ）−３−（９Ｈ−カルバゾール−９−イル）−２−ヒドロキシ−２−メチルプロピル）−３−フルオロピロリジン−２−オン；
（Ｒ）−１−（（Ｒ）−３−（９Ｈ−カルバゾール−９−イル）−２−ヒドロキシプロピル）−４−メチルイミダゾリジン−２−オン
からなる群より選択される化合物；またはその薬学的に許容され得る塩もしくは水和物である。
【００１５】
別の態様において、本明細書に記載の化合物はＣｒｙ１またはＣｒｙ２をモジュレートするものである。Ｃｒｙ１またはＣｒｙ２のモジュレーションとしては、以下：Ｃｒｙ１またはＣｒｙ２への結合；Ｃｒｙ１またはＣｒｙ２の修飾の阻害；Ｃｒｙ１またはＣｒｙ２の局在の改変；Ｃｒｙ１またはＣｒｙ２の安定化の増大または低減；Ｃｒｙ１またはＣｒｙ２と標的との間の結合の増大または低減；Ｃｒｙ１またはＣｒｙ２の活性の増大または低減；およびＣｒｙ１またはＣｒｙ２の標的の活性の増大または低減のうちのいずれか１つが挙げられる。Ｃｒｙ１および／またはＣｒｙ２の標的としては、限定されないが、Ｐｅｒ１、Ｐｅｒ２、グルココルチコイド受容体（ＧＲ）、ＣＬＯＣＫ、ＢＭＡＬ１、またはＣＬＯＣＫ−ＢＭＡＬ１プロモーター配列が挙げられる。
【００１６】
別の態様において、本明細書に記載の主題により、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容され得る塩もしくは水和物、および薬学的に許容され得る担体、佐剤または希釈剤を含む医薬組成物を提供する。一部の実施形態では、医薬組成物に、さらに１種類または１種類より多くのさらなる治療用薬剤を含める。さらなる治療用薬剤の例としては、限定されないが、ＤＰＰ−ＩＶ阻害薬（シタグリプチン、アログリプチン、ビルダグリプチン、サキサグリプチンおよびリナグリプチンなど）；ＧＬＰ−１作動薬（エクセナチド、リラグルチドおよびアルビグルチドなど）；ＳＧＬＴ２阻害薬（カナグリフロジン、エルツグリフロジン、およびダパグリフロジンなど）；メトホルミン；およびスルホニル尿素（グリブリドなど）が挙げられる。さらなる治療用薬剤の他の例としては、Ｓｉｇｎｉｆｏｒ（登録商標）、ケトコナゾール、メチラポン、ミトタン、エトミデート、Ｋｏｒｌｙｍ（登録商標）、上皮成長因子阻害薬、アルドステロンシンターゼ／１１β−ヒドロキシラーゼ阻害薬ＬＣＩ６９９、およびケボケトコナゾール（ｋｅｖｏｋｅｔｏｃｏｎａｚｏｌｅ）（ＣＯＲ−００３）が挙げられる。
【００１７】
他の態様において、被験体に治療有効量の本明細書に記載の医薬組成物を投与することによる、被験体のＣｒｙ媒介性の疾患または障害を処置する方法を提供する。さらなる態様において、本発明は、被験体に治療有効量の本明細書に記載の医薬組成物を投与することによる、被験体のＣｒｙ媒介性の疾患または障害の症状を緩和する方法を提供する。疾患または障害は、糖尿病、糖尿病性合併症（糖尿病性ニューロパシー、糖尿病性網膜症、糖尿病性腎症、白内障形成、緑内障、糖尿病性血管症、アテローム性動脈硬化など）；非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）；非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）；喘息；慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）；メタボリックシンドローム；インスリン抵抗性症候群；肥満；緑内障；クッシング症候群；精神病性鬱；アルツハイマー病；神経障害性疼痛；薬物乱用；骨粗鬆症；がん；黄斑変性；およびミオパシーからなる群より選択され得る。
【００１８】
本明細書に記載の方法のいずれも、１種類または１種類より多くのさらなる治療用薬剤の被験体への投与も含むことができる。さらなる治療用薬剤の例としては、限定されないが、ＤＰＰ−ＩＶ阻害薬（シタグリプチン、アログリプチン、ビルダグリプチン、サキサグリプチンおよびリナグリプチンなど）；ＧＬＰ−１作動薬（エクセナチド、リラグルチドおよびアルビグルチドなど）；ＳＧＬＴ２阻害薬（カナグリフロジン、エルツグリフロ
ジン、およびダパグリフロジンなど）；メトホルミン；スルホニル尿素（グリブリドなど）；Ｓｉｇｎｉｆｏｒ（登録商標）；ケトコナゾール；メチラポン；ミトタン；エトミデート；Ｋｏｒｌｙｍ（登録商標）；上皮成長因子阻害薬；アルドステロンシンターゼ／１１β−ヒドロキシラーゼ阻害薬ＬＣＩ６９９；およびケボケトコナゾール（ＣＯＲ−００３）が挙げられる。
【００１９】
別の態様では、第１の期間に被験体由来の第１の試料における１種類または１種類より多くのクリプトクロムまたはクリプトクロム調節遺伝子の有効量を測定すること；第２の期間に該被験体由来の第２の試料における１種類または１種類より多くのクリプトクロムまたはクリプトクロム調節遺伝子の有効量を測定すること；および第１の試料において検出された１種類または１種類より多くのクリプトクロムまたはクリプトクロム調節遺伝子の量を、第２の試料において検出された１種類または１種類より多くのクリプトクロムまたはクリプトクロム調節遺伝子の量または参照値と比較することを含む、被験体のＣｒｙ媒介性の疾患または障害の進行または予後をモニタリングする方法を提供する。クリプトクロム調節遺伝子の例としては、そのプロモーター内にＥ−ｂｏｘ配列を含む遺伝子が挙げられる。かかる遺伝子としては、限定されないが、Ｄｂｐ、Ｒｅｖ−ｅｒｂα、Ｒｅｖ−ｅｒｂβ、Ｒｏｒα、Ｒｏｒβ、Ｒｏｒγ、Ｐｅｒ１、Ｐｅｒ２、Ｐｅｒ３、Ｃｒｙ１、Ｃｒｙ２、Ｐｃｋ１、Ｇ６Ｐｃ、Ａｖｐ、Ｖｉｐ、Ｃｃｋ、ＳＰ（サブスタンスＰ）、ＡＡ−Ｎａｔ、ＰＫ２（プロキネクチン２）、ｃ−Ｍｙｃ、ＭｙｏＤ、およびＮａｍｐｔが挙げられる。
【００２０】
一部の実施形態では、モニタリングが、被験体におけるＣｒｙ媒介性の疾患または障害の発症リスクの変化を評価することを含む。
【００２１】
ヒトにおける最適な投与時間は、ヒトＣｒｙ発現のピークに対応する夕方および活動期間（日中）の終了時であると予想される。
【００２２】
被験体には、以前にＣｒｙ媒介性の疾患もしくは障害の処置を受けたことがある被験体、以前にＣｒｙ媒介性の疾患もしくは障害の処置を受けたことがない被験体、または以前にＣｒｙ媒介性の疾患もしくは障害と診断されたことがない被験体が含まれ得る。試料は、全血、血清、血漿、血球、内皮細胞、組織生検材料、リンパ液、腹水液、間質液、骨髄、脳脊髄液（ＣＳＦ）、精液、唾液、粘膜、痰、汗、または尿であり得る。
【００２３】
一部の実施形態では、第１の試料を被験体から、Ｃｒｙ媒介性の疾患または障害の処置が行なわれる前に採取し、第２の試料を被験体から、Ｃｒｙ媒介性の疾患または障害の処置が行なわれた後に採取する。他の実施形態では、被験体を本明細書に開示する式Ｉの化合物を含む医薬組成物で処置する。一部の特定の実施形態では、モニタリングが、さらに、被験体に対する処置を選択すること、および／またはＣｒｙ媒介性の疾患もしくは障害の処置の有効性をモニタリングすることを含み、該Ｃｒｙ媒介性の疾患または障害の処置が、外科的介入、本明細書において規定した医薬組成物の単独もしくは１種類または１種類より多くのさらなる治療用薬剤との併用での投与、本明細書において提供する医薬組成物もしくは１種類または１種類より多くのさらなる治療用薬剤との併用での投与の後もしくは前での外科的介入、またはさらなる措置を講じないことを含む。
【００２４】
他の実施形態では、参照値が、指標値、Ｃｒｙ媒介性の疾患または障害の１種類または１種類より多くのリスク予測アルゴリズムに由来する値、Ｃｒｙ媒介性の疾患もしくは障害を有しない被験体に由来する値、またはＣｒｙ媒介性の疾患もしくは障害と診断された被験体に由来する値を含む。一部の実施形態では、該測定が、１種類または１種類より多くのクリプトクロムの有無を検出し、該１種類または１種類より多くのクリプトクロムの量を定量し、該１種類または１種類より多くのクリプトクロムの型を認定し、該１種類ま
たは１種類より多くのクリプトクロムの標的に対する結合能を評価することを含む。標的はＰｅｒ１、Ｐｅｒ２、またはＣＬＯＣＫ−ＢＭＡＬ１プロモーター配列であり得る。
【００２５】
本明細書に開示しているように、Ｃｒｙ媒介性の疾患または障害は、糖尿病、糖尿病性合併症（糖尿病性ニューロパシー、糖尿病性網膜症、糖尿病性腎症、白内障形成、緑内障、糖尿病性血管症、アテローム性動脈硬化など）；非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）；非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）；喘息；慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）；メタボリックシンドローム；インスリン抵抗性症候群；肥満；緑内障；クッシング症候群；精神病性鬱；アルツハイマー病；神経障害性疼痛；薬物乱用；骨粗鬆症；がん；黄斑変性；およびミオパシーからなる群より選択され得る。
【００２６】
１つの実施形態では、本明細書に開示する式Ｉの化合物において、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｊ、Ｌ、ＭおよびＱは炭素である。別の実施形態では、式Ｉの化合物において、Ｒ１およびＲ２は水素である。さらなる他の実施形態では、式Ｉの化合物において、Ｒ１およびＲ２はフッ素であり、ａおよびｂは１である。さらなる実施形態では、式Ｉの化合物において、Ｒ３およびＲ５は水素である。別の実施形態では、式Ｉの化合物において、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５は水素である。いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物において、Ｒ６とＲ７が連結されて任意選択的に置換された単環式の環を形成している。
【００２７】
他の実施形態では、式Ｉの化合物において、Ｒ６とＲ７が連結されて任意選択的に置換された二環式の縮合環、任意選択的に置換された二環式の架橋環、任意選択的に置換された二環式のスピロ環、任意選択的に置換されたピロリジノン環、任意選択的に置換されたイミダゾリジノン環、任意選択的に置換されたピペリジノン環、および／または任意選択的に置換されたピリミジノン環を形成している。同様に、これらの実施形態のいずれでは、Ｒ６とＲ７によって形成された環を、フッ素、メチル基、エチル基、イソプロピル基、Ｃ３〜６シクロアルカン、またはフェニル基で排他的に置換することができる。
【００２８】
特に定義していない限り、本明細書で用いる科学技術用語はすべて、本発明が関する技術分野の当業者に一般的に理解されているものと同じ意味を有する。本明細書に記載のものと同様または同等の方法および材料が本発明の実施に使用され得るが、好適な方法および材料を以下に記載する。本明細書で言及した刊行物、特許出願、特許および他の参考文献はすべて、引用によりその全体が明示的に組み込まれる。矛盾する場合は、本出願書類（例えば、定義）に支配される。また、本明細書に記載の材料、方法および実施例は例示にすぎず、限定を意図しない。
【００２９】
本発明の他の特長および利点は、以下の詳細説明および特許請求の範囲から明らかとなろう。
【図面の簡単な説明】
【００３０】
【図１】図１Ａ〜Ｈは、化合物７２の投与後のマウスにおけるコア時計遺伝子発現を示す一連のグラフである。コア時計遺伝子Ｐｅｒ２（ＡおよびＢ）、Ｂｍａｌ１（ＣおよびＤ）、Ｃｒｙ１（ＥおよびＦ）、およびＣｒｙ２（ＧおよびＨ）のｍＲＮＡ発現を、ビヒクル（Ｈ２Ｏ）または化合物７２で処置したＣ５７Ｂｌ／６Ｊ  ＤＩＯマウスの肝臓（Ａ、Ｃ、Ｅ、Ｇ）またはＢａｌｂ／ｃマウスの肝臓（Ｂ、Ｄ、Ｆ、Ｈ）において６時間間隔で２４時間にわたって測定した。転写物レベルをＲＴ−ｑＰＣＲによって決定し、暗期に影をつけたＺＴ８でビヒクルと比較した。各時点における化合物７２処置由来のｍＲＮＡレベルを、Ｔ検定によってビヒクルと比較した：＊＜０．０５、＊＊＜０．０１、＊＊＊＜０．００１、＊＊＊＊＜０．０００１。
【００３１】
【図２】図２Ａ〜Ｄは、化合物７２投与後のマウスにおける糖新生遺伝子発現を示す一連のグラフである。ビヒクル（Ｈ２Ｏ）または化合物７２で処置したＣ５７Ｂｌ／６Ｊ  ＤＩＯマウスの肝臓（ＡおよびＣ）またはＢａｌｂ／ｃマウスの肝臓（ＢおよびＤ）における６時間間隔で２４時間にわたる糖新生遺伝子Ｐｃｋ１（ＰＥＰＣＫ；ＡおよびＢ）、Ｇ６Ｐｃ（グルコース６−ホスファターゼ触媒サブユニット；ＣおよびＤ）のｍＲＮＡ発現。転写物レベルをＲＴ−ｑＰＣＲによって決定し、暗期に影をつけたＺＴ８でビヒクルと比較した。各時点における化合物７２処置由来のｍＲＮＡレベルを、Ｔ検定によってビヒクルと比較した：＊＜０．０５、＊＊＜０．０１、＊＊＊＜０．００１、＊＊＊＊＜０．０００１。
【００３２】
【図３】図３Ａ〜Ｃは、化合物７２、化合物４８、化合物９、または化合物５７投与後のＩＣＲマウスの肝臓におけるコア時計遺伝子発現を示す一連のグラフである。コア時計遺伝子Ｐｅｒ２（Ａ）、Ｂｍａｌ１（Ｂ）、およびＣｒｙ２（Ｃ）のｍＲＮＡ発現を、化合物７２、化合物４８、化合物９、化合物５７、またはビヒクルで１日２回、４日間処置したＩＣＲマウスの肝臓において測定した。ｍＲＮＡレベルを、最終ＺＴ０投薬後にＺＴ６で採取した試料に対するＲＴ−ｑＰＣＲによって決定した。各時点における化合物７２処置由来のｍＲＮＡレベルを、Ｔ検定によってビヒクルと比較した：＊＜０．０５、＊＊＜０．０１、＊＊＊＜０．００１、＊＊＊＊＜０．０００１。
【００３３】
【図４】図４は、Ｃｒｙ１発現のピークにおける化合物７２の連日の３回の投薬後のＤｂｐ遺伝子発現を示すグラフである。Ｄｂｐ  ｍＲＮＡ発現を、１００ｍｇ／ｋｇ化合物７２の連日の３回の投薬後のｄｂ／ｄｂマウス由来の全血においてＺＴ７．５で測定した。転写物レベルをＲＴ−ｑＰＣＲによって決定し、ＺＴ７．５でビヒクル（１０％コリフォア（ｋｏｌｌｉｐｈｏｒ））処置マウス由来の血液と比較した。各化合物処置由来のｍＲＮＡレベルを、Ｔ検定によってビヒクルと比較した（＊＊＊；ｐ≦０．００１）。
【００３４】
【図５】図５Ａ〜Ｄは、Ｃｒｙ１発現のピークまたは最低点での化合物７２の単回投薬後のコア時計遺伝子発現を示す一連のグラフである。コア時計遺伝子Ｐｅｒ２（Ａ）、Ｂｍａｌ１（Ｂ）、Ｃｒｙ１（Ｃ）、およびＣｒｙ２（Ｄ）のｍＲＮＡ発現を、１００ｍｇ／ｋｇ化合物７２の単回投薬後のＣ５７Ｂｌ／６Ｊ  ＤＩＯマウス由来の肝臓においてＺＴ７．５（Ｃｒｙ１発現のピーク）またはＺＴ１７．５（Ｃｒｙ１発現の最低点）で測定した。転写物レベルをＲＴ−ｑＰＣＲによって決定し、ビヒクル（１０％コリフォア）処置由来の肝臓と比較した。各時点における化合物７２処置由来のｍＲＮＡレベルを、Ｔ検定によってビヒクルと比較した：＊＜０．０５、＊＊＜０．０１、＊＊＊＜０．００１、＊＊＊＊＜０．０００１。
【００３５】
【図６】図６は、ｄｂ／ｄｂマウスにおける経口グルコース負荷試験（ＯＧＴＴ）に及ぼす化合物７２の影響を示す一連のグラフである。化合物７２（５０ｍｇ／ｋｇ、ＰＯ）または１０％コリフォア（対照）を、Ｃｒｙ１およびＢｍａｌ１の遺伝子発現のピーク（ＺＴ０）（Ａ）または最低点（ＺＴ１０）（Ｂ）のいずれかにおける単回用量として投与した。
【００３６】
【図７】図７は、ｄｂ／ｄｂマウスにおけるグルコース曲線下面積（ＡＵＣ）に及ぼす化合物７２の影響を示すグラフである。化合物７２（５０ｍｇ／ｋｇ、ＰＯ）または１０％コリフォア（対照）を、Ｃｒｙ１およびＢｍａｌ１の遺伝子発現のピーク（ＺＴ０）における単回用量として投与した。
【００３７】
【図８】図８Ａ〜Ｃは、ｄｂ／ｄｂマウスにおけるグルコース代謝に及ぼす７日間投与した化合物７２の影響を示す一連のグラフである。化合物７２（５０ｍｇ／ｋｇ、ＰＯ）または１０％コリフォア（対照）を、７日間投与した。Ａ）空腹時血中グルコースレベル；Ｂ）経口グルコース負荷試験（ＯＧＴＴ）；Ｃ）グルコースＡＵＣ。
【００３８】
【図９】図９Ａ〜Ｂは、ｄｂ／ｄｂマウスにおけるインスリンレベルに及ぼす７日間投与した化合物７２の影響を示す一連のグラフである。化合物７２（５０ｍｇ／ｋｇ、ＰＯ）または１０％コリフォア（対照）を投与した。Ａ）グルコース負荷の前（０時間）および後（２時間）のインスリンレベル；Ｂ）インスリン抵抗性のホメオスタシスモデル評価（Ｈｏｍｅｏｓｔａｔｉｃ  ｍｏｄｅｌ  ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ｅｓｔｉｍａｔｅｄ  ｉｎｓｕｌｉｎ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ）（ＨＯＭＡ−ＩＲ）。
【００３９】
【図１０】図１０は、最終用量の投与（５０ｍｇ／ｋｇ、ＰＯ）からおよそ８時間後の血漿および肝臓中で測定された化合物７２の化合物レベルを示すグラフである。Ｐｅｒ２アッセイにおける化合物７２のＥＣ５０濃度を、破線でグラフ上に示す。
【００４０】
【図１１】図１１Ａ〜Ｃは、ｄｂ／ｄｂマウスにおけるグルコース代謝に及ぼす漸増投薬量の化合物７２（１０ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇ、および１００ｍｇ／ｋｇ）の影響を示す一連のグラフである。１０％コリフォアを、ビヒクル対照として使用した。Ａ）空腹時血中グルコースレベル；Ｂ）ＯＧＴＴ；Ｃ）グルコースＡＵＣ。
【００４１】
【図１２】図１２Ａ〜Ｂは、ｄｂ／ｄｂマウスにおけるインスリンレベルに及ぼす漸増投薬量の化合物７２（１０ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇ、および１００ｍｇ／ｋｇ）の影響を示す一連のグラフである。１０％コリフォアを、ビヒクル対照として使用した。Ａ）グルコース負荷の前（０時間）および後（２時間）のインスリンレベル；Ｂ）インスリン抵抗性のホメオスタシスモデル評価（Ｈｏｍｅｏｓｔａｔｉｃ  ｍｏｄｅｌ  ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ｅｓｔｉｍａｔｅｄ  ｉｎｓｕｌｉｎ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ）（ＨＯＭＡ−ＩＲ）。
【００４２】
【図１３】図１３は、漸増投薬量（１０ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇ、および１００ｍｇ／ｋｇ）での最終用量の投与からおよそ８時間後の血漿および肝臓中で測定された化合物７２の化合物レベルを示すグラフである。Ｐｅｒ２アッセイにおける化合物７２のＥＣ５０濃度を、破線でグラフ上に示す。
【００４３】
【図１４】図１４Ａ〜Ｃは、ｄｂ／ｄｂマウスにおけるグルコース代謝に及ぼす漸増投薬量の化合物９（３０ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇ、および３００ｍｇ／ｋｇ）の影響を示す一連のグラフである。１０％コリフォアを、対照として使用した。Ａ）空腹時血中グルコースレベル；Ｂ）ＯＧＴＴ；Ｃ）グルコースＡＵＣ。
【００４４】
【図１５】図１５Ａ〜Ｂは、ｄｂ／ｄｂマウスにおけるインスリンレベルに及ぼす種々の投薬量の化合物９（３０ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇ、および３００ｍｇ／ｋｇ）の影響を示す一連のグラフである。１０％コリフォアを、対照として使用した。Ａ）グルコース負荷の前（０時間）および後（２時間）のインスリンレベル；Ｂ）インスリン抵抗性のホメオスタシスモデル評価（ＨＯＭＡ−ＩＲ）。
【００４５】
【図１６】図１６は、漸増投薬量（３０ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇ、および３００ｍｇ／ｋｇ）での最終用量の投与からおよそ８時間後の血漿および肝臓中の化合物９の化合物レベルを示すグラフである。Ｐｅｒ２アッセイにおける化合物９のＥＣ５０濃度を、破線でグラフ上に示す。
【００４６】
【図１７】図１７Ａ〜Ｃは、Ｃ５７／Ｂｌ６Ｊ  ＤＩＯマウスにおけるグルコース代謝に及ぼす化合物７２の影響を示すグラフである。化合物７２（１００ｍｇ／ｋｇ、ＰＯ）、１０％コリフォア（対照）、またはロシグリタゾン（３０ｍｇ／ｋｇ）を７日間投与した。Ａ）空腹時血中グルコースレベル；Ｂ）ＯＧＴＴ；Ｃ）グルコースＡＵＣ。
【００４７】
【図１８】図１８Ａ〜Ｂは、Ｃ５７／Ｂｌ６Ｊ  ＤＩＯマウスにおけるインスリンレベルに及ぼす化合物７２の影響を示す一連のグラフである。化合物７２（１００ｍｇ／ｋｇ、ＰＯ）、１０％コリフォア（対照）、またはロシグリタゾン（３０ｍｇ／ｋｇ）を７日間投与した。Ａ）グルコース負荷の前（０時間）および後（２時間）のインスリンレベル；Ｂ）インスリン抵抗性のホメオスタシスモデル評価（ＨＯＭＡ−ＩＲ）。
【００４８】
【図１９】図１９は、コルチゾン誘導性インスリン抵抗性のラットモデルに及ぼす化合物７２の影響を示す一連のグラフである。コルチゾン（３０ｍｇ／ｋｇ、ＳＣ）を、ビヒクル、化合物７２（５０ｍｇ／ｋｇ、ＰＯ）、またはミフェプリストン（３０ｍｇ／ｋｇ、ＰＯ）のいずれかと共に７日間投与した。（Ａ）空腹血漿グルコースレベルおよび（Ｂ）空腹血漿インスリンレベル。
【００４９】
【図２０】図２０は、コルチゾン誘導性インスリン抵抗性のラットモデルにおけるＨＯＭＡ−ＩＲに及ぼす７日間の化合物７２（５０ｍｇ／ｋｇ、ＰＯ）投与の影響を示すグラフである。コルチゾン（３０ｍｇ／ｋｇ、ＳＣ）を、ビヒクル、化合物７２（５０ｍｇ／ｋｇ、ＰＯ）、またはミフェプリストン（３０ｍｇ／ｋｇ、ＰＯ）のいずれかと共に７日間投与した。
【００５０】
【図２１】図２１は、ＣＲＹ１  ＦＡＤ結合ドメインのインビトロ熱安定性に及ぼす化合物７２の影響を示すグラフである。示差走査蛍光定量（「熱シフト」）アッセイによって決定したところ、精製ＣＲＹ１  ＦＡＤ結合ドメインの化合物７２での処置により、タンパク質融点が用量依存性に増大した。
【００５１】
【図２２】図２２Ａ〜Ｃは、ＤＩＯマウスにおけるグルコース代謝に及ぼす漸増投薬量の化合物７２（１０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、および１００ｍｇ／ｋｇ）の影響を示す一連のグラフである。化合物７２（１００ｍｇ／ｋｇ、ＰＯ）、１０％コリフォア（対照）、またはロシグリタゾン（３０ｍｇ／ｋｇ）を７日間投与した。Ａ）空腹時血中グルコースレベル；Ｂ）ＯＧＴＴ；Ｃ）グルコースＡＵＣ。
【発明を実施するための形態】
【００５２】
詳細説明
本文中に挙げた出願および特許の各々、ならびに該出願および特許の各々に挙げられた各文献または参考文献（各発行済み特許の出願経過中のものを含む；「出願書類に挙げられた文献」）、ならびにこれらの出願および特許のいずれかに対応する、および／または優先権を主張する米国および外国の出願または特許の各々、ならびに該出願書類に挙げられた文献の各々で挙げられた、もしくは参照された文献の各々は、参照により本明細書に明示的に組み込まれる。より一般的には、文献または参考文献は本文中に、特許請求の範囲の前の参考文献リスト、またはこの本文中のいずれかにおいて挙げており；これらの文献または参考文献（「本明細書に挙げた参考文献」）、ならびに本明細書に挙げた参考文献の各々に挙げられた各文献または参考文献（製造業者の仕様書、使用説明書など（あれば）を含む）の各々は、参照により本明細書に明示的に組み込まれる。参照により本文中に組み込まれる文献は本発明の実施に使用され得る。本明細書全体を通して記載する特長、構造または特徴は、任意の適当な様式で１つまたは１つより多くの実施形態に併合され得る。例えば、語句「例示的な実施形態」、「一例の実施形態」、「一部の実施形態」または他の類似の文言の使用は、本明細書全体を通して、一実施形態に関して記載した具体的な特長、構造または特徴が本明細書に記載の少なくとも１つの実施形態に含まれ得ることをいう。したがって、語句「例示的な実施形態」、「一例の実施形態」、「一部の実施形態では」、「他の実施形態では」または他の類似の文言の出現は、本明細書全体を通して、必ずしもすべてが同じ実施形態の群に言及しているのではなく、記載の特長、構造ま
たは特徴が任意の適当な様式で１つまたは１つより多くの実施形態に併合され得る。
【００５３】
本開示の理解を容易にするため、いくつかの用語を以下に定義する。本明細書において定義する用語は、本明細書に記載の主題に関連する分野の当業者に一般的に理解されているものと同じ意味を有する。「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」などの用語は、単数形の存在体のみを示しているのではなく、具体例が例示に使用したものであり得る一般類型を包含していることを意図している。本明細書における専門用語は、本明細書に記載の主題の具体的な実施形態を説明するために使用しており、特許請求の範囲に概略が示されている場合を除き、その使用によって本主題の範囲は制限されない。
【００５４】
本明細書で用いる場合、用語「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ（〜を含む）」、「ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ（〜を含む）」、または「ｈａｖｉｎｇ（〜を有する）」は、オープンで非限定的な意味で用いている。
【００５５】
用語「ハロ」は、本明細書で用いる場合、特に記載のない限り、フルオロ、クロロ、ブロモまたはヨードを意味する。
【００５６】
用語「アルキル」は、本明細書で用いる場合、特に記載のない限り、線状または分枝状の部分を有する一価の飽和炭化水素原子団を包含している。
【００５７】
用語「アルケニル」は、本明細書で用いる場合、特に指定のない限り、１つまたは１つより多くの炭素−炭素二重結合を含む２〜６個の炭素の直鎖または分枝鎖の一価の基を表し、エテニル、１−プロペニル、２−プロペニル、２−メチル−１−プロペニル、１−ブテニル、２−ブテニルなどが例示される。
【００５８】
用語「アルキニル」は、本明細書で用いる場合、炭素−炭素三重結合を含む２〜６個の炭素原子の直鎖または分枝鎖の一価の基を表し、エチニル、１−プロピニルなどが例示される。
【００５９】
用語「アルコキシ」は、本明細書で用いる場合、特に記載のない限り、Ｏ−アルキル基（該アルキルは上記に定義したとおりである）を包含している。
【００６０】
用語「Ｍｅ」はメチルを意味し、「Ｅｔ」はエチルを意味する。
【００６１】
用語「シクロアルキル」は、本明細書で用いる場合、特に記載のない限り、非芳香族で飽和または部分飽和の単環式または縮合、スピロもしくは非縮合型の二環式もしくは三環式の炭化水素をいい、本明細書では合計３〜１０個の炭素原子を含むものをいう。シクロアルキルの実例は、限定されないが、以下のもの：
【化２】
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から誘導されるものである。
【００６２】
用語「アリール」は、本明細書で用いる場合、特に記載のない限り、芳香族炭化水素から１個の水素を除去することによって誘導される有機原子団（フェニルまたはナフチルな
ど）を包含している。
【００６３】
用語「（４〜１２）員のヘテロシクリル」は、本明細書で用いる場合、特に記載のない限り、各々がＯ、ＳおよびＮから選択される１〜４個のヘテロ原子を含む芳香族および非芳香族の複素環基を包含しており、該複素環基の各々は４〜１２個の原子をその環系内に有するが、前記基の環は隣接している２個のＯまたはＳ原子を含むものでないものとする。非芳香族の複素環基には、その環系内に３個しか原子を有しない基が包含されるが、芳香族の複素環基は、その環系内に少なくとも５個の原子を有していなければならない。複素環基としてはベンゾ縮合環系が挙げられる。３員の複素環基の一例はアジリジンであり、４員環の複素環基の一例はアゼチジニル（アゼチジンから誘導）である。５員の複素環基の一例はチアゾリルであり、７員環の一例はアゼピニルであり、１０員の複素環基の一例はキノリニルである。非芳香族の複素環基の例は、ピロリジニル、テトラヒドロフラニル、ジヒドロフラニル、テトラヒドロチエニル、テトラヒドロピラニル、ジヒドロピラニル、テトラヒドロチオピラニル、ピペリジノ、モルホリノ、チオモルホリノ、チオキサニル、ピペラジニル、アゼチジニル、オキセタニル、チエタニル、ホモピペリジニル、オキセパニル、チエパニル、オキサゼピニル、ジアゼピニル、チアゼピニル、１，２，３，６−テトラヒドロピリジニル、２−ピロリニル、３−ピロリニル、インドリニル、２Ｈ−ピラニル、４Ｈ−ピラニル、ジオキサニル、１，３−ジオキソラニル、ピラゾリニル、ジチアニル、ジチオラニル、ジヒドロピラニル、ジヒドロチエニル、ジヒドロフラニル、ピラゾリジニル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサニル、３−アザビシクロ［４．１．０］ヘプタニル、３Ｈ−インドリルおよびキノリジニルである。芳香族の複素環基の例は、ピリジニル、イミダゾリル、ピリミジニル、ピラゾリル、トリアゾリル、ピラジニル、テトラゾリル、フリル、チエニル、イソオキサゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、イソチアゾリル、ピロリル、キノリニル、イソキノリニル、インドリル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾフラニル、シンノリニル、インダゾリル、インドリジニル、フタラジニル、ピリダジニル、トリアジニル（ｔｒａｉｚｉｎｙｌ）、イソインドリル、プテリジニル、プリニル、オキサジアゾリル、チアジアゾリル、フラザニル、ベンゾフラザニル、ベンゾチオフェニル、ベンゾチアゾリル、ベンゾオキサゾリル、キナゾリニル、キノキサリニル、ナフトリジニル、およびフロピリジニルである。前述の基（上記に挙げたものから誘導）は、可能な場合はＣ結合型であってもＮ結合型であってもよい。例えば、ピロールから誘導される基は、ピロール−１−イル（Ｎ結合型）またはピロール−３−イル（Ｃ結合型）であり得る。さらに、イミダゾールから誘導される基は、イミダゾール−１−イル（Ｎ結合型）またはイミダゾール−３−イル（Ｃ結合型）であり得る。４〜１２員の複素環式部は、環内の任意の炭素、イオウまたは窒素原子（１個または複数）が１つの環あたり１つまたは２つのオキソによって任意選択的に置換されていてもよい。２個の環内原子がオキソ部分で置換されている複素環基の一例は１，１−ジオキソ−チオモルホリニルである。４〜１２員の複素環式部の他の実例は、限定されないが、以下のもの：
【化３】
2019142959.tif 000004
から誘導されるものである。
【００６４】
用語「置換されている」は、本明細書で用いる場合、指定された原子上の任意の１個または１個より多くの水素原子が記載の基の選択肢で置き換えられていることを意味するが、指定された原子の通常の原子価は超えないものとし、該置換によって安定な化合物がもたらされるものとする。置換基がケト（すなわち、＝Ｏ）である場合、原子上の２個の水素原子が置き換えられる。ケト置換基が芳香族部分上に存在することはない。環内二重結合は、本明細書で用いる場合、隣接している２個の環内原子間で形成される二重結合（例えば、Ｃ＝Ｃ、Ｃ＝ＮまたはＮ＝Ｎ）である。かかる基の非限定的な例としては、限定されないが、Ｈ、ＣＨ３、ＮＯ２、ＳＯ２Ｎ（ＣＨ３）２、ＳＯ２Ｎ（（ＣＨ３）ＳＯ２）、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＣＨ３、ＣＯ（Ｎ（ＣＨ３））、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アラルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アルキルアリール、ヘテロアリール、ヘテロシクロアルキル、アルコキシ（すなわち、メトキシ、エトキシなど）、アルキルカルボニルオキシ、アリールカルボニルオキシ、アルコキシカルボニルオキシ、アリールオキシカルボニルオキシ、カルボキシレート、アルキルカルボニル、アルキルアミノカルボニル、アラルキルアミノカルボニル、アルケニルアミノカルボニル、アルキルカルボニル、アリールカルボニル、アラルキルカルボニル、アルケニルカルボニル、アルコキシカルボニル、アミノカルボニル、アルキルチオカルボニル、トリフルオロメチル、ペンタフルオロエチル、ハロゲン（すなわち、クロロ、フルオロ、ブロモ、ヨード）、シアノ、チオ、アミド、エーテル、エステル、ヒドロキシル、ヒドロキシアルキル、飽和または不飽和の脂肪酸、アジド、ホスホンアミド、スルホンアミド、ラクタム、ホスフェート、ホスホナト、ホスフィナト、アミノ（例えば、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アリールアミノ、ジアリールアミノおよびアルキルアリールアミノ）、アシルアミノ（例えば、アルキルカルボニルアミノ、アリールカルボニルアミノ、カルバモイルおよびウレイド）、アミジノ、イミノ、グアニジノ、スルフヒドリル、アルキルチオ、アリールチオ、チオカルボキシレート、スルフェート、アルキルスルフィニル、スルホナト、スルファモイル、スルホンアミド、ニトロ、シアノ、アジドなどが挙げられる。
【００６５】
本明細書に開示する主題により、１種類または１種類より多くのクリプトクロム分子をモジュレートするカルバゾール含有スルホンアミド化合物を提供する。このような化合物は、式Ｉ：
【化４】
2019142959.tif 000005
（式中
Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｊ、Ｌ、ＭおよびＱの各々は独立して、ＮまたはＣであり；
Ｒ１およびＲ２の各々は、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｊ、Ｌ、ＭおよびＱがＣのとき、独立して、Ｈ、ハロ、シアノ、ニトロ、−ＣＦ３、−ＣＨＦ２、−ＣＨ２Ｆ、トリフルオロメトキシ、アジド、ヒドロキシル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルキニル、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｒ８、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ８、−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−Ｒ８、−ＮＲ８（Ｃ＝Ｏ）−Ｒ１０、−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＲ８Ｒ９、−ＮＲ８Ｒ９、−ＮＲ８ＯＲ９、−Ｓ（Ｏ）ｃＮＲ８Ｒ９、−Ｓ（Ｏ）ｄ（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル、−Ｏ−ＳＯ２−Ｒ８、ＮＲ８−Ｓ（Ｏ）ｃ、−（ＣＲ８Ｒ９）ｄ（３〜１０）員のシクロアルキル、−（ＣＲ８Ｒ９）ｅ（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール、−（ＣＲ８Ｒ９）ｅ（４〜１０）員のヘテロシクリル、−（ＣＲ８Ｒ９）ｆ（Ｃ＝Ｏ）（ＣＲ８Ｒ９）ｅ（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール、−（ＣＲ８Ｒ９）ｆ（Ｃ＝Ｏ）（ＣＲ８Ｒ９）ｅ（４〜１０）員のヘテロシクリル、−（ＣＲ８Ｒ９）ｅＯ（ＣＲ８Ｒ９）ｆ（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール、−（ＣＲ８Ｒ９）ｅＯ（ＣＲ８Ｒ９）ｆ（４〜１０）員のヘテロシクリル、−（ＣＲ８Ｒ９）ｆＳ（Ｏ）ｄ（ＣＲ８Ｒ９）ｅ（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール、および−（ＣＲ８Ｒ９）ｆＳ（Ｏ）ｄ（ＣＲ８Ｒ９）ｅ（４〜１０）員のヘテロシクリルから選択され；
Ｒ３およびＲ５の各々は独立して、Ｈ、シアノ、−ＣＦ３、−ＣＨＦ２、−ＣＨ２Ｆ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルキニル、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｒ８、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ８、−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＲ８Ｒ９、−Ｓ（Ｏ）ｃＮＲ８Ｒ９、−Ｓ（Ｏ）ｄ（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル、−（ＣＲ８Ｒ９）ｄ（３〜１０）員のシクロアルキル、−（ＣＲ８Ｒ９）ｅ（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール、−（ＣＲ８Ｒ９）ｅ（４〜１０）員のヘテロシクリル、−（ＣＲ８Ｒ９）ｆ（Ｃ＝Ｏ）（ＣＲ８Ｒ９）ｅ（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール、−（ＣＲ８Ｒ９）ｆ（Ｃ＝Ｏ）（ＣＲ８Ｒ９）ｅ（４〜１０）員のヘテロシクリル、−（ＣＲ８Ｒ９）ｅＯ（ＣＲ８Ｒ９）ｆ（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール、−（ＣＲ８Ｒ９）ｅＯ（ＣＲ８Ｒ９）ｆ（４〜１０）員のヘテロシクリル、−（ＣＲ８Ｒ９）ｆＳ（Ｏ）ｄ（ＣＲ８Ｒ９）ｅ（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール、および−（ＣＲ８Ｒ９）ｆＳ（Ｏ）ｄ（ＣＲ８Ｒ９）ｅ（４〜１０）員のヘテロシクリルから選択され；
各Ｒ３基は、任意選択で、４〜１２員の単環式または二環式の環として互いに連結されており；
各Ｒ５基は、任意選択で、４〜１２員の単環式または二環式の環として互いに連結されており；
Ｒ４は、Ｈ、−ＣＦ３、−ＣＨＦ２、−ＣＨ２Ｆ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルキニル、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｒ８、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ８、−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＲ８Ｒ９、−（ＣＲ８Ｒ９）ｄ（３〜１０）員のシクロアルキル、−（ＣＲ８Ｒ９）ｅ（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール、−（ＣＲ８Ｒ９）ｅ（４〜１０）員のヘテロシクリル、−（ＣＲ８Ｒ９）ｆ（Ｃ＝Ｏ）（ＣＲ８Ｒ９）ｅ（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール、−（ＣＲ８Ｒ９）ｆ（Ｃ＝Ｏ）（ＣＲ８Ｒ９）ｅ（４〜１０）員のヘテロシクリ
ル、−（ＣＲ８Ｒ９）ｅＯ（ＣＲ８Ｒ９）ｆ（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール、−（ＣＲ８Ｒ９）ｅＯ（ＣＲ８Ｒ９）ｆ（４〜１０）員のヘテロシクリル、−ＣＲ８Ｒ９）ｆＳ（Ｏ）ｄ（ＣＲ８Ｒ９）ｅ（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール、および−（ＣＲ８Ｒ９）ｆＳ（Ｏ）ｄ（ＣＲ８Ｒ９）ｅ（４〜１０）員のヘテロシクリルであり；
Ｒ６とＲ７は、４〜１２員の単環式または二環式の環として互いに連結されており；
Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０の各々は独立して、Ｈ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、−（ＣＲ１１Ｒ１２）ｅ（３〜１０）員のシクロアルキル、−（ＣＲ１１Ｒ１２）ｇ（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール、および−（ＣＲ１１Ｒ１２）ｇ（４〜１０）員のヘテロシクリルから選択され；
前述のＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５およびＲ１６の（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（３〜１０）員のシクロアルキル、（Ｃ６〜Ｃ１０）アリールおよび（４〜１０）員のヘテロシクリルの任意の炭素原子は独立して、各々がハロ、シアノ、ニトロ、−ＣＦ３、−ＣＨＦ２、−ＣＨ２Ｆ、トリフルオロメトキシ、アジド、ヒドロキシル、−Ｏ−Ｒ１５、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルキニル、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｒ１１、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｒ１５、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ１１、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ１５、−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−Ｒ１１、−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−Ｒ１５、−ＮＲ１１（Ｃ＝Ｏ）−Ｒ１３、−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＲ１１Ｒ１２、−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＲ１１Ｒ１５、−ＮＲ１１Ｒ１２、−ＮＲ１１Ｒ１５、−ＮＲ１１ＯＲ１２、−ＮＲ１１ＯＲ１５、−Ｓ（Ｏ）ｃＮＲ１１Ｒ１２、−Ｓ（Ｏ）ｃＮＲ１１Ｒ１５、−Ｓ（Ｏ）ｄ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、−Ｓ（Ｏ）ｄＲ１５、−Ｏ−ＳＯ２−Ｒ１１、−Ｏ−ＳＯ２−Ｒ１５、−ＮＲ１１−Ｓ（Ｏ）ｃ、−ＮＲ１５−Ｓ（Ｏ）ｃ、−（ＣＲ１１Ｒ１２）ｅ（３〜１０）員のシクロアルキル、−（ＣＲ１１Ｒ１２）ｅ（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール、−（ＣＲ１１Ｒ１２）ｅ（４〜１０）員のヘテロシクリル、−（ＣＲ１１Ｒ１２）ｆ（Ｃ＝Ｏ）（ＣＲ１１Ｒ１２）ｅ（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール、−（ＣＲ１１Ｒ１２）ｆ（Ｃ＝Ｏ）（ＣＲ１１Ｒ１２）ｅ（４〜１０）員のヘテロシクリル、−（ＣＲ１１Ｒ１２）ｅＯ（ＣＲ１１Ｒ１２）ｆ（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール、−（ＣＲ１１Ｒ１２）ｅＯ（ＣＲ１１Ｒ１２）ｆ（４〜１０）員のヘテロシクリル、−（ＣＲ１１Ｒ１２）ｆＳ（Ｏ）ｄ（ＣＲ１１Ｒ１２）ｅ（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール、および−（ＣＲ１１Ｒ１２）ｆＳ（Ｏ）ｄ（ＣＲ１１Ｒ１２）ｅ（４〜１０）員のヘテロシクリルから独立して選択される１〜３個のＲ１４置換基で任意選択的に置換されており；
前述のＲ１４の（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（３〜１０）員のシクロアルキル、（Ｃ６〜Ｃ１０）アリールおよび（４〜１０）員のヘテロシクリルの任意の炭素原子は独立して、各々がハロ、シアノ、ニトロ、−ＣＦ３、−ＣＨＦ２、−ＣＨ２Ｆ、トリフルオロメトキシ、アジド、（ＣＨ２）ｅＯＨ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルキニル、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｒ１１、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｒ１５、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ１１、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ１５、−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−Ｒ１１、−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−Ｒ１５、−ＮＲ１１（Ｃ＝Ｏ）−Ｒ１３、−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＲ１１Ｒ１２、−ＮＲ１１Ｒ１２、および−ＮＲ１１Ｒ１５から独立して選択される１〜３個のＲ１６置換基で任意選択的に置換されており；
前述のＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１４およびＲ１５の（４〜１０）員のヘテロシクリルの任意の窒素原子は独立して、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルキニル、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｒ１１、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ１１、−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＲ１１Ｒ１２、−（ＣＲ１１Ｒ１２）ｅ（３〜１０）員のシクロアルキル、−（ＣＲ１１Ｒ１２）ｅ（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール、−（ＣＲ１１Ｒ１２）ｅ（４〜１０）員のヘテロシクリル、−（ＣＲ１１Ｒ１２）ｆ（Ｃ＝Ｏ）（ＣＲ１１Ｒ１２）ｅ（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール、または−（ＣＲ１１Ｒ１２）ｆ（Ｃ＝Ｏ）（ＣＲ１１Ｒ１２）ｅ（４〜１０）員のヘテロシクリルで任意選択的に置換されており；
各Ｒ１１、Ｒ１２およびＲ１３は独立して、Ｈまたは（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルであり；
Ｒ１５は、−（ＣＲ１１Ｒ１２）ｅ（３〜１０）員のシクロアルキル、−（ＣＲ１１Ｒ１２）ｅ（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール、または−（ＣＲ１１Ｒ１２）ｅ（４〜１０）員のヘテロシクリルであり；
ａおよびｂは各々、独立して、１、２、３または４であり；
ｃは１または２であり；
ｄは０、１または２であり；
ｅ、ｆおよびｇは各々、独立して、０、１、２、３、４または５である）
に示す一般構造を有するものまたはその薬学的に許容され得る塩もしくは水和物である。
【００６６】
一部の実施形態では、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｊ、Ｌ、ＭおよびＱの各々がＣであり；Ｒ１およびＲ２の各々が独立して、Ｈまたはハロから選択され；Ｒ４がＨまたは（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルであり、Ｒ３とＲ５がＨであり；Ｒ６およびＲ７が４〜１２員の単環式または二環式のアミド環として互いに連結されており；Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６、ａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｅ、およびｆは本明細書に規定したとおりである。
【００６７】
いくつかの実施形態では、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｊ、Ｌ、ＭおよびＱの各々がＣであり；Ｒ１およびＲ２の各々が独立して、Ｈまたはハロから選択され；Ｒ４がＨまたは（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルであり、Ｒ３とＲ５がＨであり；Ｒ６とＲ７が４〜１２員の単環式または二環式の尿素環として互いに連結されており；Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６、ａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｅおよびｆは本明細書に規定したとおりである。
【００６８】
本明細書に開示する主題のいくつかの実施形態では、式Ｉの化合物がＣ−３において（Ｒ）配置を有する単一のエナンチオマーであり、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｊ、Ｌ、ＭおよびＱの各々がＣであり；Ｒ１およびＲ２の各々が独立して、Ｈまたはハロから選択され；Ｒ４がＨまたは（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルであり、Ｒ３とＲ５がＨであり；Ｒ６とＲ７が４〜１２員の単環式または二環式のアミド環として互いに連結されており；Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６、ａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｅおよびｆは本明細書に規定したとおりである。
【００６９】
他の実施形態では、式Ｉの化合物がＣ−３において（Ｓ）配置を有する単一のエナンチオマーであり、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｊ、Ｌ、ＭおよびＱの各々がＣであり；Ｒ１およびＲ２の各々が独立して、Ｈまたはハロから選択され；Ｒ４がＨまたは（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルであり、Ｒ３とＲ５がＨであり；Ｒ６とＲ７が４〜１２員の単環式または二環式の尿素環として互いに連結されており；Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６、ａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｅおよびｆは本明細書に規定したとおりである。
【００７０】
一部の特定の実施形態では、該化合物が：
１−（３−（３，６−ジフルオロ−９Ｈ−カルバゾール−９−イル）−２−ヒドロキシプロピル）−３−フルオロピロリジン−２−オン；
２−（３−（３，６−ジフルオロ−９Ｈ−カルバゾール−９−イル）−２−ヒドロキシプロピル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−オン；
１−（３−（３，６−ジフルオロ−９Ｈ−カルバゾール−９−イル）−２−ヒドロキシプロピル）イミダゾリジン−２−オン；
（１Ｒ，４Ｓ）−２−（（Ｒ）−３−（３，６−ジフルオロ−９Ｈ−カルバゾール−９−イル）−２−ヒドロキシプロピル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−オン；
（Ｒ）−１−（３−（３，６−ジフルオロ−９Ｈ−カルバゾール−９−イル）−２−ヒドロキシプロピル）イミダゾリジン−２−オン；
（Ｒ）−１−（（Ｒ）−３−（３，６−ジフルオロ−９Ｈ−カルバゾール−９−イル）−２−ヒドロキシプロピル）−３−フルオロピロリジン−２−オン；
（Ｓ）−１−（（Ｓ）−３−（９Ｈ−カルバゾール−９−イル）−２−ヒドロキシ−２−メチルプロピル）−３−フルオロピロリジン−２−オン；
（Ｒ）−１−（（Ｒ）−３−（９Ｈ−カルバゾール−９−イル）−２−ヒドロキシプロピル）−４−メチルイミダゾリジン−２−オン
からなる群より選択されるもの；またはその薬学的に許容され得る塩もしくは水和物であり得る。
【００７１】
用語「薬学的に許容され得る」は、本明細書で用いる場合、担体または希釈剤などの物質が本明細書に記載の化合物の生物学的活性または特性を無効にせず、比較的無毒性であることをいう、すなわち、該物質が個体に、望ましくない生物学的効果を引き起こすことなく、または内包された組成物中の成分のいずれかと有害な様式で相互作用することなく投与され得る。
【００７２】
用語「薬学的に許容され得る塩」は、本明細書で用いる場合、明記した化合物の遊離の酸および塩基の生物学的有効性を保持しており、生物学的に、または他の様式で望ましくないものでない塩をいう。式Ｉの化合物の薬学的に許容され得る塩としては、その酸付加塩および塩基の塩が挙げられる。好適な酸付加塩は、無毒性の塩を形成する酸により形成されるものである。例としては、酢酸塩、アジピン酸塩、アラビノガラクタンスルホン酸塩（ａｒａｂｏｇａｌａｃｔａｎｅｓｕｌｆｏｎａｔｅ）、アスコルビン酸、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベシル酸塩、重炭酸塩／炭酸塩、重硫酸塩／硫酸塩、ホウ酸塩、カンシル酸塩、コール酸塩、クエン酸塩、エジシル酸塩、エストレート（ｅｓｔｏｌａｔｅ）、エシレート（ｅｓｙｌａｔｅ）、ギ酸塩、フマル酸塩、ガラクツロン酸塩、グルセプト酸塩、グルコン酸塩、グルクロン酸塩、グルタミン酸塩、ヘキサフルオロリン酸塩、ヒベンズ酸塩、馬尿酸塩、塩酸塩／塩化物、臭化水素酸塩／臭化物、ヨウ化水素酸塩／ヨウ化物、３−ヒドロキシ−２−ナフトエ酸塩、１−ヒドロキシ−２−ナフトエ酸塩、イセチオン酸塩、乳酸塩、ラクトビオン酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、マンデル酸塩、メシル酸塩、メチル硫酸塩、粘液酸塩、ナパジシル酸塩、ナフタル酸塩、２−ナプシル酸塩（ｎａｐｓｙｌａｔｅ）、ニコチン酸塩、硝酸塩、オレイン酸塩、オロチン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、リン酸塩／リン酸水素塩／リン酸二水素塩、糖酸塩、サリチル酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、スルホサリチル酸塩、酒石酸塩、トシル酸塩、トリフルオロ酢酸塩、およびトリプトファナート塩が挙げられる。
【００７３】
好適な塩基の塩は、無毒性の塩を形成する塩基により形成されるものである。例としては、アデニン、アルミニウム、２−アミノ−２−メチルプロパン−１−オール、アルギニン、ベネタミン、ベンザチン、カルシウム、コリン、シトシン、ジエチルアミン、ジオールアミン、エポラミン、エルブミン、エチレンジアミン、グルコサミン、グリシン、グアニジン、グアニン、ヒドラバミン、リシン、マグネシウム、メグルミン、モルホリン、ニコチンアミド、オラミン、オミチン（ｏｍｉｔｈｉｎｅ）、ピペラジン、カリウム、プロカイン、プロリン、ピリドキシン、セリン、銀、ナトリウム、トロラミン、トロメタミン、チロシン、バリンおよび亜鉛の塩が挙げられる。好適な塩に関する概説については、ＳｔａｈｌおよびＷｅｒｍｕｔｈによる“Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，ａｎｄ  Ｕｓｅ”（Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ，Ｗｅｉｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ，２００２）を参照されたい。
【００７４】
式Ｉの化合物お薬学的に許容され得る塩は、式Ｉの化合物と適宜、所望の酸または塩基の溶液を一体に混合することにより容易に調製され得る。該塩は、溶液から析出させて濾過により収集してもよく、溶媒のエバポレーションによって回収してもよい。塩のイオン
化の度合いは、完全にイオン化状態からほぼ非イオン化状態まで種々であり得る。
【００７５】
また、式Ｉの化合物は、多形体として知られる種々の結晶性形態として存在する場合があり得る。多形体には、元素の組成は同じで結晶充填配列が異なる化合物が包含される。多形体は、異なるＸ線回折パターン、赤外線スペクトル、融点、密度、硬度、結晶形状、光学的および電気的特性、安定性、溶媒和物ならびに溶解度を有するものであり得る。種々の要素、例えば、再結晶溶媒、結晶化速度および保存温度によって単一の結晶形が優位になり得る。
【００７６】
「溶媒和物」は、明記した化合物の薬学的に許容され得る溶媒和物形態であって、かかる化合物の生物学的有効性を保持しているものを意味することを意図する。溶媒和物の例としては、本発明の化合物と水、イソプロパノール、エタノール、メタノール、ジメチルスルホキシド、酢酸エチル、酢酸またはエタノールアミンとの組合せが挙げられる。用語「水和物」は、溶媒が水である溶媒和物をいう。用語「アルコーラート」は、溶媒がアルコールである溶媒和物をいう。水和物は、１分子または１分子より多くの水と１分子の物質との結合によって形成され、このとき、該水は、Ｈ２Ｏとしてのその分子状態を保持している。水和物の非限定的な例としては、一水和物、二水和物などが挙げられる。
【００７７】
本発明の化合物には、本明細書において規定した式Ｉの化合物、その多形体、プロドラッグおよび異性体（例えば、光学、幾何および互変異性体）ならびに同位体標識された式Ｉの化合物が包含される。
【００７８】
本発明の化合物をプロドラッグとして投与してもよい。したがって、それ自体は薬理学的活性をほとんど、または全くもたないものであり得る式Ｉの化合物の一部の特定の誘導体は、体内または身体上に投与されると、例えば加水分解による切断によって、所望の活性を有する式Ｉの化合物に変換され得る。かかる誘導体は「プロドラッグ」と称される。プロドラッグの使用に関するさらなる情報は、“Ｐｒｏ−ｄｒｕｇｓ  ａｓ  Ｎｏｖｅｌ
Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，第１４巻，ＡＣＳ  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  Ｓｅｒｉｅｓ（Ｔ．ＨｉｇｕｃｈｉおよびＷ．Ｓｔｅｌｌａ）ならびに“Ｂｉｏｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ”，Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，１９８７（Ｅ．Ｂ．Ｒｏｃｈｅ編，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）において知得され得る。プロドラッグは、例えば、式Ｉの化合物に存在する適切な官能部を、当業者に「プロ部分」として（ｉｓ）知られている、例えばＨ．Ｂｕｎｄｇａａｒｄによる“Ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｄｒｕｇｓ”（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，１９８５）に記載のような特定の部分で置き換えることにより作製され得る。
【００７９】
かかるプロドラッグの一例としては、式Ｉの化合物がカルボン酸官能部（−ＣＯ２Ｈ）、そのエステルを含むものである場合（例えば、水素の（Ｃ１〜Ｃ８）アルキルでの置き換え）；式Ｉの化合物がアルコール官能部（−ＯＨ）、そのエーテルを含むものである場合（例えば、水素の（Ｃ１〜Ｃ８）アルカノイルオキシメチルでの置き換え）；および式Ｉの化合物が第２級アミノ官能部（−ＮＨＲ（式中、ＲはＨでない））、そのアミドを含むものである場合（例えば、１個の水素の（Ｃ１〜Ｃ１０）アルカノイルでの置き換え）が挙げられる。前述の例による置き換え基のさらなる例および他のプロドラッグ型の例は当業者に知られている。
【００８０】
式Ｉの化合物は１個または１個より多くの不斉炭素原子を含むものである。式Ｉの化合物に対応するエナンチオマーおよび／またはジアステレオマーはすべて、類似の方法によって調製され得ることは理解される。式Ｉの化合物の光学異性体および立体異性体ならびにその混合物はすべて、本発明の範囲に含まれるとみなす。式Ｉの化合物に関して、本発
明は、ラセミ化合物、１種類または１種類より多くのエナンチオマー形態、１種類または１種類より多くのジアステレオマー形態、またはその混合物の使用を包含する。また、式Ｉの化合物は互変異性体として存在するものであってもよい。本発明は、かかる互変異性体すべておよびその混合物の使用に関する。
【００８１】
本発明の化合物中に含まれている特定の官能基を、生物学的等価性の基、すなわち、親の基と同様の空間的または電子的要件を有するが、異なるかまたは改善された物理化学的特性または他の特性を示す基で置換してもよい。好適な例は当業者によく知られており、限定されないが、Ｐａｔｉｎｉら、Ｃｈｅｍ  Ｒｅｖ．１９９６，９６，３１４７−３１７６およびそれに挙げられた参考文献に記載された部分が挙げられる。
【００８２】
特許請求の範囲に記載の式Ｉの化合物の範囲には、対イオンが光学活性である薬学的に許容され得る酸付加または塩基の塩、例えば、Ｄ−乳酸塩もしくはＬ−リシン、またはラセミ体、例えば、ＤＬ−酒石酸塩もしくはＤＬ−アルギニンも含まれる。シス／トランス異性体は、当業者によく知られた慣用的な手法、例えば、クロマトグラフィーおよび分別結晶によって分離され得る。個々のエナンチオマーの調製／単離のための慣用的な手法としては、適当な光学的に純粋な前駆体からのキラル合成、または例えばキラル高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を用いたラセミ化合物（もしくは塩あるいは誘導体のラセミ化合物）の分割が挙げられる。
【００８３】
あるいはまた、ラセミ化合物（またはラセミ体前駆物質）を、適当な光学活性化合物（例えば、アルコール）、または式Ｉの化合物が酸性部分もしくは塩基性部分を含むものである場合は、酒石酸もしくは１−フェニルエチルアミンなどの酸または塩基と反応させてもよい。得られたジアステレオマー混合物は、クロマトグラフィーおよび／または分別結晶によって分離され得、ジアステレオマーは、当業者によく知られた手段によって対応する純粋なエナンチオマーおよび／またはジアステレオマーに変換され得る。本発明のキラル化合物（およびそのキラル前駆体）を、不斉樹脂でのクロマトグラフィー（典型的にはＨＰＬＣ）を使用し、０〜５０％のイソプロパノール（典型的には２〜２０％）と０〜５％のアルキルアミン（典型的には０．１％のジエチルアミン）を含む炭化水素（典型的にはヘプタンまたはヘキサン）からなる移動相を用いて、エナンチオマー富化および／またはジアステレオマー富化形態で得てもよい。溶出液の濃縮により、富化混合物が得られる。エナンチオマーおよび／またはジアステレオマーの混合物は、当業者に知られた慣用的な手法によって分離され得る。例えば、Ｅ．Ｌ．Ｅｌｉｅｌによる“Ｓｔｅｒｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ”（Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９４）を参照のこと。
【００８４】
式Ｉの化合物を同位体標識してもよく、この場合、１個または１個より多くの原子が、同じ原子番号を有するが原子量または質量数は自然界に通常見られる原子量または質量数と異なる原子で置き換えられる。本発明の化合物に含めるのに好適な同位体の例としては、水素の同位体、例えば、２Ｈおよび３Ｈ、炭素、例えば、１１Ｃ、１３Ｃおよび１４Ｃ、塩素、例えば、３６Ｃｌ、フッ素、例えば、１８Ｆ、ヨウ素、例えば、１２３Ｉおよび１２５Ｉ、窒素、例えば、１３Ｎおよび１５Ｎ、酸素、例えば、１５Ｏ、１７Ｏおよび１８Ｏ、リン、例えば、３２Ｐ、ならびにイオウ、例えば、３５Ｓが挙げられる。一部の特定の式Ｉの同位体標識化合物、例えば、放射性同位体が組み込まれたものは、薬物および／または基質の組織分布試験に有用である。放射性同位体トリチウム、すなわち３Ｈ、および炭素−１４、すなわち１４Ｃは、組込みの容易さおよび容易な検出手段に鑑みると、この目的に特に有用である。重量同位体（例えば、重水素、すなわち２Ｈ）での置換により、代謝安定性が大きくなることによる特定の治療上の利点（例えば、インビボ半減期の増大または必要投薬量の低減）がもたらされ得、したがって、一部の状況において好ましいことであり得る。陽電子放出同位体、例えば、１１Ｃ、１８Ｆ、１５Ｏおよび１３Ｎで
の置換は、基質受容体占有を調べるための陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）試験に有用であり得る。式Ｉの同位体標識化合物は、一般的に、当業者に知られた慣用的な手法によって、または先に使用した非標識試薬の代わりに適切な同位体標識試薬を用いた本記載の実施例および調製に記載のものと類似の方法によって調製され得る。
【００８５】
本発明の化合物はＣｒｙ１および／またはＣｒｙ２をモジュレートするものである。本明細書で用いる場合、「モジュレートすること」は、Ｃｒｙ１およびＣｒｙ２の機能、活性または内在性の特徴を増大、低減または改変することをいう。Ｃｒｙ１またはＣｒｙ２のモジュレーションとしては、以下：Ｃｒｙ１もしくはＣｒｙ２への結合；Ｃｒｙ１もしくはＣｒｙ２の修飾の阻害；Ｃｒｙ１もしくはＣｒｙ２の局在の改変；Ｃｒｙ１もしくはＣｒｙ２の安定化の増大もしくは低減；Ｃｒｙ１もしくはＣｒｙ２と標的との間の結合の増大もしくは低減；Ｃｒｙ１もしくはＣｒｙ２の活性の増大もしくは低減；およびＣｒｙ１もしくはＣｒｙ２の標的の活性の増大もしくは低減のうちのいずれか１つが挙げられる。
【００８６】
Ｃｒｙ１およびＣｒｙ２のモジュレーションには、直接相互作用または間接的相互作用のいずれかによるＣｒｙ１および／またはＣｒｙ２に対する本発明の化合物の結合が包含される。一部の態様では、本発明の化合物は、Ｃｒｙ１および／またはＣｒｙ２を含む複合体に結合し得る。小分子とタンパク質間の相互作用を検出する方法は当該技術分野で知られており、例えば、免疫沈降手法、クロマトグラフィー、および種々のアレイ形式である。
【００８７】
Ｃｒｙ１およびＣｒｙ２の内在性の特徴、例えば、翻訳後修飾、安定性または局在が本発明の化合物によって改変され得る。Ｃｒｙ１およびＣｒｙ２の翻訳後修飾は、Ｃｒｙ１およびＣｒｙ２の活性、安定性または細胞内局在の決定に極めて重要な役割を果たし得る。一部の研究により、リン酸化によってＣｒｙ１およびＣｒｙ２の安定性が改変され得ることが示されている。本発明の化合物は、Ｃｒｙ１およびＣｒｙ２の翻訳後修飾、例えば、リン酸化、ユビキチン化、アセチル化、グリコシル化、リボシル化またはＳＵＭＯ化を妨げるか、または増大させるものであり得る。
【００８８】
Ｃｒｙ１またはＣｒｙ２の翻訳後修飾の検出方法は当業者によって容易に行なわれ得る。かかる検出方法としては、ウェスタンブロットおよびラジオイムノアッセイが挙げられる。Ｃｒｙ１およびＣｒｙ２は、特定の条件下で、例えば、Ｐｅｒ１およびＰｅｒ２とヘテロ二量体化すると核に局在する。核内に入ると、Ｃｒｙ１およびＣｒｙ２は、転写の開始による核内ＣＬＯＣＫ−ＢＭＡＬ１複合体の破壊において役割を果し、それにより、概日振動の維持に不可欠な負のフィードバックループの概日リズム遺伝子を下方調節する。タンパク質の局在は当業者により、例えば、免疫蛍光法、細胞成分分画およびウェスタンブロットアッセイによって容易に測定され得る。また、Ｃｒｙ１およびＣｒｙ２の下方調節も概日振動に極めて重要であり、転写レベルおよびタンパク質レベルで媒介される。Ｃｒｙ１およびＣｒｙ２の安定性は、当該技術分野で知られた方法、ならびに実施例５〜８に提示したものによって測定され得る。
【００８９】
Ｃｒｙ１およびＣｒｙ２の活性は、本明細書で用いる場合、Ｃｒｙ１またはＣｒｙ２と標的との間の結合および下流のＣｒｙ１またはＣｒｙ２の標的の活性を包含している。本発明の化合物は、Ｃｒｙ１またはＣｒｙ２と標的との間の結合を増大または低減させるものであり得る。Ｃｒｙ１および／またはＣｒｙ２に結合する標的は当該技術分野で知られており、Ｐｅｒ１、Ｐｅｒ２、グルココルチコイド受容体、ＣＬＯＣＫ−ＢＭＡＬ１プロモーター配列、およびＶＥＧＦプロモーター配列が挙げられる。他の標的としては、発現がＣｒｙ１またはＣｒｙ２によってモジュレートされる遺伝子（そのプロモーター中にＥ−ｂｏｘ配列を含む遺伝子が挙げられる）が挙げられる。かかる遺伝子としては、限定さ
れないが、Ｄｂｐ、Ｒｅｖ−ｅｒｂα、Ｒｅｖ−ｅｒｂβ、Ｒｏｒα、Ｒｏｒβ、Ｒｏｒγ、Ｐｅｒ１、Ｐｅｒ２、Ｐｅｒ３、Ｃｒｙ１、Ｃｒｙ２、Ｐｃｋ１、Ｇ６Ｐｃ、Ａｖｐ、Ｖｉｐ、Ｃｃｋ、ＳＰ（サブスタンスＰ）、ＡＡ−Ｎａｔ、ＰＫ２（プロキネクチン２）、ｃ−Ｍｙｃ、ＭｙｏＤ、およびＮａｍｐｔが挙げられる。また、本明細書でいうＣｒｙ１およびＣｒｙ２の標的には、まだ同定されていない標的も包含される。
【００９０】
Ｃｒｙ１またはＣｒｙ２と標的との間の結合は、例えば、免疫沈降、酵母ツーハイブリッド、アフィニティークロマトグラフィーによって調べることができる。Ｃｒｙ１またはＣｒｙ２の標的の下流活性には、ＣＬＯＣＫ−ＢＭＡＬ１媒介性の転写、Ｃｒｙ１またはＣｒｙ２のＣＬＯＣＫ−ＢＭＡＬ−１プロモーターに対する結合、Ｃｒｙ１またはＣｒｙ２のＶＥＧＦプロモーターに対する結合、Ｐｅｒ１またはＰｅｒ２の局在または安定性、ＣＬＯＣＫ−ＢＭＡＬ１二量体化、ＣＬＯＣＫ−ＢＭＡＬ１標的遺伝子（Ｃｒｙ１、Ｃｒｙ２、Ｐｅｒ１、Ｐｅｒ２、Ｒｅｖ−ｅｒｂαおよびβ、Ｒｏｒａ、ＴＩＭタンパク質ならびにＶＥＧＦなど）の発現が含まれる。プロモーター活性の検出方法は、クロマチン免疫沈降、電気泳動移動度シフトアッセイ、またはプロモーター−ルシフェラーゼアッセイ（実施例３および４に記載）によって測定され得るものである。標的遺伝子の発現を調べる方法としては遺伝子発現解析およびマイクロアレイが挙げられ、これらは当業者により容易に行なわれ得る。
【００９１】
いくつかの実施形態では、推定される有効性を決定するための方法またはアッセイは、Ｃｒｙ媒介性の疾患または障害の症状の処置または緩和に適切な、本明細書に記載の化合物の特定の化合物を同定するのに有用であり得る。１つの態様では、特定の曝露時間後のベースラインと最大値との間の応答の半分を誘導する化合物の濃度（本明細書ではＥＣ５０値またはＥＣ５０濃度と称する）を、コア時計遺伝子発現に及ぼす化合物の影響を測定するインビトロアッセイで決定することができる。コア時計遺伝子プロモーター配列（すなわち、Ｐｅｒ１、Ｐｅｒ２、Ｃｒｙ１、Ｃｒｙ２、またはＢｍａｌ１）に作動可能に連結されたルシフェラーゼレポーターを、本発明の化合物で処理された細胞に導入し（すなわち、トランスフェクション、形質導入、感染）、蛍光（または時計遺伝子駆動発現）を、経時的に測定する。具体的には、概日リズムと相関する予測発現と比較した蛍光の期間、振幅および位相を決定する。化合物のＥＣ５０値を、当業者が容易に利用可能な方法を使用して計算することができる。かかるアッセイの例を、本明細書の実施例３に記載する。ＥＣ５０値は、本発明の化合物の効力の評価に有用である。
【００９２】
他の態様において、有効性が増大した本発明の化合物を、インビボアッセイによって決定することができる。化合物を、被験体（すなわち、マウスモデル）に一定期間投与する。生物試料を被験体から単離し、生物試料中に存在する化合物の濃度レベルを測定する。生物試料は、例えば、全血もしくはその任意の画分（すなわち、血清または血漿）、または組織（Ｃｒｙ媒介性の疾患または障害に影響を受ける組織など）である。処置した被験体の試料中で検出された濃度を、関連するインビトロアッセイ（上記または実施例３に記載）で試験されるように、同一化合物のＥＣ５０濃度の値と比較する。インビボで測定された化合物濃度が所定のＥＣ５０値よりも高い化合物が、本発明の好ましい化合物である。これらの好ましい化合物は、Ｃｒｙ媒介性の疾患または障害の症状の処置または緩和の有効性が増大することを示し得る。
【００９３】
本明細書に開示する主題の他の態様において、式Ｉによる化合物および薬学的に許容され得る担体、佐剤または希釈剤を含む医薬組成物を提供する。具体的な量の活性化合物が用いられた種々の医薬組成物の調製方法は当業者に知られているか、または明らかである。また、当業者は製剤化および投与の手法を熟知している。かかるトピックスは、例えば、ＧｏｏｄｍａｎおよびＧｉｌｍａｎの“Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ”，現行版，Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ；
ならびに“Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ”，現行版，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡに論考されている。このような手法は、本明細書に記載の方法および組成物の適切な態様および実施形態に使用され得る。医薬組成物は、好ましくはＧＭＰ条件下で製造される。以下の実施例は例示の目的で示したものにすぎず、本発明の限定として供することを意図したものでない。
【００９４】
本明細書に記載の化合物は医薬組成物における使用が意図されるため、該化合物は各々、好ましくは実質的に純粋な形態で、例えば、少なくとも５０％純粋、少なくとも５５％純粋、少なくとも６０％純粋、少なくとも６５％純粋、少なくとも７０％純粋、少なくとも７５％純粋、少なくとも８０％純粋、少なくとも８５％、少なくとも９０％純粋、少なくとも９５％純粋、少なくとも９６％純粋、少なくとも９７％純粋、少なくとも９８％純粋、または少なくとも９９％純粋な形態で提供されることは容易に理解される。本明細書で示すパーセンテージは重量対重量基準である。該化合物の純粋でない調製物は、医薬組成物に使用されるより純粋な形態の調製に使用され得る；該化合物のこのような低純度の調製物は、少なくとも１％、より好適には少なくとも５％、例えば１０〜４９％の式Ｉの化合物を含むものであるのがよい。
【００９５】
式Ｉの化合物は、Ｃｒｙ媒介性疾患の処置における使用のための適当な局所、経口、経鼻、接眼、経粘膜、経直腸、経膣および非経口医薬製剤で提供され得る。本発明の化合物は、錠剤もしくはカプセル剤として、油性もしくは水性の懸濁剤、ロゼンジ剤、トローチ剤、散剤、顆粒剤、乳剤、シロップ剤またはエリキシル剤として経口投与され得る。経口使用のための該組成物には、医薬品として優美で口当たりのよい調製物を作製するために着香、甘味、着色および保存のための１種類または１種類より多くの薬剤が含まれ得る。錠剤には、かかる錠剤の製造における助剤としての薬学的に許容され得る賦形剤、担体、希釈剤および佐剤が含有され得る。当該技術分野において慣用的であるように、このような錠剤を薬学的に許容され得る腸溶性コーティング（グリセリルモノステアレートまたはグリセリルジステアレートなど）でコーティングし、胃腸管内での崩壊および吸収を遅延させて長期間にわたる持続作用をもたらしてもよい。水溶性が不充分な化合物の溶解速度は、噴霧乾燥分散剤（例えば、Ｔａｋｅｕｃｈｉ，Ｈ．ら、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１９８７，３９，７６９−７７３に記載のもの）の使用によって向上させ得る。
【００９６】
経口使用のための製剤をゼラチン硬カプセル剤の形態にしてもよく、この場合、活性成分は、不活性な固形希釈剤、例えば、炭酸カルシウム、リン酸カルシウムもしくはカオリンと混合される。また、該製剤をゼラチン軟カプセル剤の形態にしてもよく、この場合、活性成分は水または油性媒体、例えば、ピーナッツ油、液状パラフィンもしくはオリーブ油と混合される。
【００９７】
水性懸濁剤には、通常、活性成分が、水性懸濁剤の製造に適した賦形剤との混合状態で含有される。かかる賦形剤は懸濁化剤、例えば、Ｋｏｌｌｉｐｈｏｒ、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガカントゴムおよびアカシアゴム；天然に存在するホスファチドであり得る分散化剤または湿潤剤、例えば、レシチン、エチレンオキシドと長鎖脂肪酸との縮合生成物（例えば、ポリオキシエチレンステアレート）、エチレンオキシドと長鎖脂肪族アルコールとの縮合生成物（ヘプタデカエチレンオキシセタノールなど）、エチレンオキシドと脂肪酸およびヘキシトールから誘導される部分エステルとの縮合生成物（ポリオキシエチレンソルビトールモノオレエートなど）、または脂肪酸ヘキシトール無水物から誘導される部分エステルとの縮合生成物（ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートなど）であり得る。
【００９８】
医薬組成物は、滅菌注射用水性または油性懸濁剤の形態であってもよい。この懸濁剤を既知の方法に従って水性の等張性液剤または懸濁剤として製剤化してもよく、脂肪乳剤または懸濁剤から坐剤を調製してもよい。該組成物は、滅菌されたもの、および／または佐剤、例えば、保存剤、安定化剤、湿潤剤もしくは乳化剤、溶解促進剤、浸透圧を調節するための塩および／またはバッファーを含有するものであり得る。また、該組成物に他の治療上有益な物質を含有させてもよい。滅菌注射用調製物を、無毒性の非経口に許容され得る希釈剤または溶媒中の懸濁剤（例えば、１，３−ブタンジオール中の液剤）として製剤化してもよい。中でも、使用可能な許容され得るビヒクルおよび溶媒は水、リンゲル液および等張性塩化ナトリウム溶液である。この目的には、任意の無刺激性の固定油（例えば、合成のモノ−またはジグリセリド）が使用され得る。また、オレイン酸などの脂肪酸も注射用剤の調製に有用性が見い出されている。
【００９９】
また、式Ｉの化合物を薬物の経直腸投与のための坐剤の形態で投与してもよい。このような組成物は、薬物を適当な無刺激性の賦形剤と混合することにより調製され得、該賦形剤は約２５℃では固形であるが直腸温度では液状となり、したがって直腸内で融解して薬物を放出するものである。かかる物質としては、ココアバターおよび他のグリセリドが挙げられる。
【０１００】
局所または経皮使用では、本発明の化合物を含有する調製物、例えば、クリーム剤、軟膏、ゼリー剤  液剤または懸濁剤が使用される。経皮適用のための好適な製剤は、有効量の本発明の化合物を担体とともに含むものである。担体としては、宿主の皮膚の通り抜けを補助する吸収性の薬理学的に許容され得る溶媒が挙げられ得る。例えば、経皮デバイスは、裏当て部材、該化合物を任意選択で担体とともに内包するレザーバ、任意選択で、該化合物を宿主の皮膚に制御された所定の速度で長期間にわたって送達するための速度制御バリア、および該デバイスを皮膚に固定するための手段を備えた包帯の形態である。また、マトリックス型経皮製剤およびイオン導入デバイスを使用してもよい。例えば皮膚および目への局所適用のための好適な製剤は、好ましくは、当該技術分野でよく知られた水性液剤、軟膏、クリーム剤またはゲル剤である。かかるものには、可溶化剤、安定剤、張度向上剤、バッファーおよび保存料が含有され得る。
【０１０１】
活性化合物は、該化合物を体内からの急速な排除から保護する薬学的に許容され得る担体を用いて調製され得る（制御放出製剤など、例えば、埋入物およびマイクロカプセル封入送達系）。生分解性で生体適合性のポリマー、例えば、エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、およびポリ乳酸が使用され得る。かかる製剤の調製方法は当業者には明らかである。
【０１０２】
また、式Ｉの化合物をリポソーム送達系、例えば、小型の単層小胞、大型の単層小胞および多層小胞の形態に調製してもよい。リポソームはさまざまなリン脂質（コレステロール、ステアリルアミンまたはホスファチジルコリンなど）から形成され得る。
【０１０３】
いずれかの活性医薬成分または両方の好適な長期放出形態はマトリックス錠またはカプセル剤組成物であり得る。好適なマトリックス構成材料としては、例えば、ワックス（例えば、カルナウバ、蜜蝋、パラフィンワックス、セレシン、シェラックワックス、脂肪酸、および脂肪族アルコール）、油、硬化油または脂肪（例えば、硬化ナタネ油、ヒマシ油、牛脂、ヤシ油およびダイズ油）、ならびにポリマー（例えば、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、およびポリエチレングリコール）が挙げられる。他の好適なマトリックス錠形成材料は微晶質セルロース、粉末状セルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、エチルセルロース（他の担体および充填剤とともに）である。また、錠剤は粒状物、コート粉末またはペレットを含有して
いるものであってもよい。また、錠剤は多層状であってもよい。多層状錠剤は、活性成分が著しく異なる薬物動態学的プロフィールを有する場合に特に好ましい。任意選択で、完成錠剤はコーティングされていてもよく、コーティングされていなくてもよい。
【０１０４】
コーティング組成物は、典型的には不溶性マトリックスポリマー（コーティング組成物のおよそ１５〜８５重量％）と水溶性物質（例えば、コーティング組成物のおよそ１５〜８５重量％）を含有するものである。任意選択で、腸溶性ポリマー（コーティング組成物のおよそ１〜９９重量％）を使用するか、または含めてもよい。好適な水溶性物質としては、ポリマー、例えば、ポリエチレングリコール、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、ならびに単量体物質、例えば、糖類（例えば、ラクトース、スクロース、フルクトース、マンニトールなど）、塩（例えば、塩化ナトリウム、塩化カリウムなど）、有機酸（例えば、フマル酸、コハク酸、乳酸、および酒石酸）、ならびにその混合物が挙げられる。好適な腸溶性ポリマーとしては、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アセテートスクシネート、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、フタレート、ポリビニルアセテートフタレート、セルロースアセテートフタレート、セルロースアセテートトリメリテート、シェラック、ゼイン、およびカルボキシル基含有ポリメタクリレートが挙げられる。
【０１０５】
コーティング組成物は、該コーティングブレンドの特性、例えば、コーティング組成物の適用に使用される主成分または成分の混合物または溶媒のガラス転移温度に応じて可塑化され得る。適当な可塑剤がコーティング組成物の０〜５０重量％で添加され得、例えば、フタル酸ジエチル、クエン酸エステル、ポリエチレングリコール、グリセロール、アセチル化グリセリド、アセチル化クエン酸エステル、ジブチルセバケート、およびヒマシ油が挙げられる。所望により、コーティング組成物に充填剤を含めてもよい。充填剤の量は、コーティング組成物の総重量に対して１％〜およそ９９重量％であり得、二酸化ケイ素、二酸化チタン、タルク、カオリン、アルミナ、デンプン、粉末状セルロース、ＭＣＣ、またはポラクリン（ｐｏｌａｃｒｉｌｉｎ）カリウムなどの不溶性物質であり得る。コーティング組成物は、有機溶媒または水性溶媒またはその混合物の溶液またはラテックスとして適用され得る。溶液で適用する場合、溶媒は、溶解させる固形物の総重量に対しておよそ２５〜９９重量％の量で存在させ得る。好適な溶媒は水、低級アルコール、低級塩素化炭化水素、ケトン、またはその混合物である。ラテックスで適用する場合、溶媒は該ラテックス中の高分子物質の量に対しておよそ２５〜９７重量％の量で存在させる。溶媒は主に水であり得る。
【０１０６】
本発明の化合物の投薬量レベルは約０．５ｍｇ／ｋｇ体重〜約１００ｍｇ／ｋｇ体重程度、またはその間の任意の増加値である。好ましい投薬量の割合は約３０ｍｇ／ｋｇ体重〜約１００ｍｇ／ｋｇ体重である。総日用量を１回の用量で投与しても分割用量で投与してもよい。式Ｉの化合物の好適な治療用量は、１日あたりレシピエントの体重１キログラムあたり１マイクログラム（μｇ）〜１０００ミリグラム（ｍｇ）の範囲、およびその間の任意の増加値、例えば、１、２、３、５、１０、２５、５０、７５、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、または１０００μｇ（１ｍｇ）；２、３、５、１０、２５、５０、７５、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００または１０００ｍｇなどであり得る。しかしながら、任意の特定の患者に対する具体的な用量レベルは、いくつかの要素、例えば、投与される具体的な化合物の活性、年齢、体重、一般健康状態、性別、食事、投与期間、投与経路、排出速度、薬物併用および治療を受ける具体的な疾患の重症度に依存することは理解される。
【０１０７】
投薬量レジメンは、所望の最適な応答がもたらされるように調整され得る。例えば、単回ボーラスを投与し、数回での分割用量を経時的に投与してもよく、用量を治療状況の事
情によって示唆されるとおりに比例的に低減または増加してもよい。非経口組成物を単位投薬形態に製剤化することは、投与の容易性および投薬量の一様性のため特に好都合である。単位投薬形態は、本明細書で用いる場合、処置対象の哺乳動物被験体に対する投薬ユニットとして適した物理的に独立した単位をいい；各単位は、所望の治療効果がもたらされるように計算された所定の量の活性化合物を、必要とされる医薬用担体と合わされた状態で含有している。本発明の単位投薬形態の仕様は、（ａ）治療用薬剤の固有の特徴および得られる具体的な治療効果または予防効果、ならびに（ｂ）処置のためのかかる活性化合物の配合技術分野において内在する個体の感受性という制限によって決定づけられ、これらに直接依存する。したがって、当業者には、本明細書に示した開示に基づいて、用量および投与レジメンが治療技術分野でよく知られた方法に従って調整されることが認識され得る。すなわち、最大耐用量を容易に確立することができ、また、患者に検出可能な治療有益性がもたらされる有効量も決定することができ、患者に検出可能な治療有益性がもたらされるように各薬剤を投与するための一時的要件も決定することができる。したがって、一部の特定の用量および投与レジメンを本明細書において例示しているが、これらの例は、本発明の実施において患者に提供され得る用量および投与レジメンをなんら限定するものでない。
【０１０８】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の化合物および組成物を、夜間のおよそ就寝時刻または睡眠時間に被験体に投与する。好ましくは、本明細書に記載の化合物および組成物を、就寝時刻の６時間前後以内、５時間前後以内、４時間前後以内、３時間前後以内、１２０分前後以内、９０分前後以内、６０分前後以内、４５分前後以内、３０分前後以内、２５分前後以内、２０分前後以内、１５分前後以内、１０分前後以内、５分前後以内、または直前もしくは直後に被験体に投与する。好ましくは、本発明の化合物および組成物を、就寝時刻の２時間前以内から直前までに被験体に投与する。「就寝時刻」は、本明細書で用いる場合、被験体が休息または睡眠を意図して就寝する夜の時間をいう。
【０１０９】
他の実施形態では、本明細書に記載の化合物および組成物を、食物と共に投与するか食物を摂取せずに投与することができる。化合物または組成物を食物と共に投与する場合、食事（朝食、昼食、夕食、または軽食など）の４時間前後以内に化合物または組成物を投与することが好ましくあり得る。例えば、本発明の化合物または組成物を、食事の６時間前後以内、５時間前後以内、４時間前後以内、３時間前後以内、１２０分前後以内、９０分前後以内、６０分前後以内、４５分前後以内、３０分前後以内、２５分前後以内、２０分前後以内、１５分前後以内、１０分前後以内、５分前後以内、または直前もしくは直後に投与する。好ましくは、本発明の化合物および組成物を、夕食後の４時間以内、３時間以内、１２０分以内、９０分以内、または６０分以内に被験体に投与する。
【０１１０】
本明細書に開示する主題の別の態様では、本明細書における先の実施形態のいずれかに記載の式Ｉによる治療有効量の化合物を投与することを含む、Ｃｒｙ媒介性の疾患または障害を処置する方法を提供する。本発明の好ましい一実施形態は、Ｃｒｙ媒介性の疾患または障害を処置する方法であって、異常なＣｒｙレベルを特徴とする該疾患または障害が、糖尿病、糖尿病に関連する合併症、メタボリックシンドローム、インスリン抵抗性症候群、肥満、緑内障、クッシング症候群、炎症性障害、ミトコンドリア病、フリードライヒ運動失調症、精神病性鬱、アルツハイマー病、神経障害性疼痛、薬物乱用、骨粗鬆症、がん、黄斑変性、およびミオパシーからなる群より選択される、方法である。本明細書に開示の化合物によって処置される特に好ましいＣｒｙ媒介性の疾患または障害としては、糖尿病、糖尿病性合併症（糖尿病性ニューロパシー、糖尿病性網膜症、糖尿病性腎症、白内障形成、緑内障、糖尿病性血管症、アテローム性動脈硬化など）；非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）；非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）；喘息；および慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）が挙げられる。
【０１１１】
用語「投与する」、「投与すること」、「投与」などは、本明細書で用いる場合、化合物または組成物が所望の生物学的作用部位に送達されることを可能にするために使用され得る方法をいう。このような方法としては、限定されないが、経口、非経口、局所、経粘膜、接眼、経眼、経膣および経直腸投与が挙げられる。当業者は、本明細書に記載の化合物および方法で使用され得る投与手法を熟知している（例えば、ＧｏｏｄｍａｎおよびＧｉｌｍａｎ，Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，現行版；Ｐｅｒｇａｍｏｎ；ならびにＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（現行版），Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａに論考）。本明細書で用いる場合、医薬組成物の「非経口投与」には、被験体の組織の物理的破損および組織の該破損部からの医薬組成物の投与を特徴とする任意の投与経路が包含される。したがって、非経口投与としては、限定されないが、組成物の注射、外科的切開部からの組成物の適用、組織浸透性非外科的創傷からの組成物の適用などによる医薬組成物の投与が挙げられる。特に、非経口投与は、限定されないが、皮下、腹腔内、筋肉内および胸骨内注射、ならびに腎臓透析による輸注手法を包含していることが想定される。
【０１１２】
本発明との関連における「被験体」は好ましくは哺乳動物である。哺乳動物はヒト、非ヒト霊長類、マウス、ラット、イヌ、ネコ、ウマまたはウシであり得るが、これらの例に限定されない。ヒト以外の哺乳動物は、Ｃｒｙ媒介性の疾患または障害の動物モデルとなる被験体として好都合に使用され得る（ｏｂ／ｏｂマウスなど）。被験体は男性（雄）であっても女性（雌）であってもよい。被験体は、以前にＣｒｙ媒介性の疾患もしくは障害と診断された被験体または該疾患もしくは障害を有すると認定された被験体、および任意選択で、該疾患または障害の治療的介入または処置を既に受けたか、または受ける予定の被験体であり得る。あるいはまた、被験体は、Ｃｒｙ媒介性の疾患または障害を有すると以前に診断されたことがない被験体であってもよい。例えば、被験体は、Ｃｒｙ媒介性の疾患もしくは障害の１つまたは１つより多くのリスクファクターを示している被験体、またはＣｒｙ媒介性の疾患もしくは障害のリスクファクターを示していない被験体、またはＣｒｙ媒介性の疾患もしくは障害に対して無症候性の被験体であり得る。また、被験体は、Ｃｒｙ媒介性の疾患もしくは障害に苦しんでいるか、または該疾患もしくは障害を発症するリスクのある被験体、またはＣｒｙ媒介性の疾患もしくは障害の再発に苦しんでいるか、または該再発を起こすリスクのある被験体であり得る。また、被験体は、単独または他の治療用薬剤、手術もしくは前述のものの任意の組合せとの併用のいずれかでの本明細書に開示する化合物および組成物の投与によるものであれ、そうでなかれ、以前にＣｒｙ媒介性の疾患または障害の処置を受けたことがある被験体であり得る。用語「被験体」および「患者」は、本明細書で用いる場合、交換可能に使用され得る。
【０１１３】
「Ｃｒｙ媒介性の疾患または障害」としては、限定されないが、糖尿病（例えば限定されないが、インスリン依存性「Ｉ型」糖尿病、非インスリン依存性「ＩＩ型」糖尿病、妊娠糖尿病、および糖尿病関連合併症（糖尿病性ニューロパシー、糖尿病性網膜症、糖尿病性心筋症、糖尿病性腎症、歯周疾患、および糖尿病性ケトアシドーシスなど））、メタボリックシンドローム、インスリン抵抗性症候群、肥満、緑内障、クッシング症候群、精神病性鬱、アルツハイマー病、神経障害性疼痛、薬物乱用、骨粗鬆症、がん、黄斑変性、ならびにミオパシーが挙げられ得る。
【０１１４】
用語「処置すること」、「処置する」、または「処置」は、本明細書で用いる場合、防止的（例えば、予防的）、待機的、補助的および治癒的処置を包含している。例えば、２型糖尿病の処置は、本明細書で用いる場合、２型糖尿病を有するか、または２型糖尿病を有するリスクのある患者が本明細書に記載の方法に従って処置され得ることを意味する。防止的処置を受けている患者では、防止的に処置されている疾患状態の発生率の低減がもたらされることが、該防止的処置の測定可能な転帰である。
【０１１５】
用語「緩和すること」または「緩和する」は、本明細書で用いる場合、障害の徴候または症状の重症度が低減、低下または抑止されるプロセスを示す。重要なことは、症状が解消されることなく緩和される場合があり得ることである。好ましい一実施形態では、本発明の医薬組成物の投与により症状の解消がもたらされるが、解消は必要とされない。治療有効量の本明細書に記載の化合物または医薬組成物により症状の重症度が低減されることが予測される。
【０１１６】
本明細書で用いる場合、用語「症状」は、疾患、病気、傷害、または体内での正常でない何かの兆候と定義する。症状は、その症状が起こっている個体は感じているか、または気付いているが、他者は容易に気付かない場合もあり得る。他者は、保健医療または臨床の専門家と定義する。
【０１１７】
用語「メタボリックシンドローム」は、本明細書で用いる場合、特に記載のない限り、乾癬、真性糖尿病、創傷治癒、炎症、神経変性疾患、ガラクトース血症、カエデシロップ尿病、フェニルケトン尿症、高サルコシン血症、チミンウラシル尿症、スルフィン尿症（ｓｕｌｆｉｎｕｒｉａ）、イソ吉草酸血症（ａｃａｄｅｍｉａ）、サッカロピン尿症（ｓａｃｃｈａｒｏｐｕｒｉｎｕｒｉａ）、４−ヒドロキシ酪酸尿症、グルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ欠損、およびピルビン酸デヒドロゲナーゼ欠損を意味する。
【０１１８】
用語「肥満」または「肥満の」は、本明細書で用いる場合、一般的に、個体がその年齢、性別および身長での平均体重より少なくとも約２０〜３０％オーバーしていることをいう。専門的には、「肥満の」とは、男性ではボディマス指数が２７．８ｋｇ／ｍ２より大きい個体、女性では、ボディマス指数が２７．３ｋｇ／ｍ２より大きい個体と定義されている。当業者には、本発明の方法が上記の基準の範囲内である個体に限定されないことが容易に認識される。実際、本発明の方法は、このような従来基準の範囲外である個体、例えば、肥満傾向であり得る個体でも好都合に実施され得る。
【０１１９】
用語「炎症性障害」は、本明細書で用いる場合、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、関節リウマチ、強直性脊椎炎、乾癬性関節炎、乾癬、軟骨石灰化症、痛風、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、クローン病、線維筋痛症、および悪液質などの障害をいう。
【０１２０】
用語「クッシング症候群」は、本明細書で用いる場合、高レベルのコルチゾールへの長期間の曝露に起因する様々な徴候および症状をいう。クッシング症候群は、内因性または外因性の原因に起因し得る。内因性クッシング症候群の原因としては、下垂体腫瘍（クッシング病とも呼ばれる）、副腎腫瘍、ならびに他の腫瘍（限定されないが、小細胞肺がんが挙げられる）からの副腎皮質刺激ホルモン（ＡＣＴＨ）および／またはコルチコトロピン放出ホルモン（ＣＲＨ）の異所性分泌が挙げられる。外因性（または医原性）クッシング症候群は、種々の障害（炎症性障害（限定されないが、喘息、乾癬、および関節リウマチが挙げられる）が挙げられる）の処置のためのコルチコステロイドの使用に起因する。
【０１２１】
用語「ミトコンドリア病」は、本明細書で用いる場合、ミトコンドリア脳筋症・乳酸アシドーシス・脳卒中様発作症候群（ＭＥＬＡＳ）、赤色ぼろ線維を伴うミオクローヌス癲癇（ＭＥＲＲＦ）、カーンズ・セイアー症候群、慢性進行性外眼筋麻痺、レーバー遺伝性視神経症、リー症候群、糖尿病、聴覚消失、神経原性筋力低下・運動失調症・網膜色素変性（ＮＡＲＰ）、および筋神経原性胃腸脳症（ｍｙｏｎｅｕｒｏｇｅｎｉｃ  ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｅｎｃｅｐｈａｌｏｐａｔｈｙ）などの疾患をいう。
【０１２２】
用語「がん」は、本明細書で用いる場合、無制御の細胞成長および／または増殖によって特徴付けられる障害および疾患をいい、良性および悪性のがん、過剰増殖性の障害およ
び疾患、ならびに転移が挙げられる。特に好ましいがんの例としては、充実性腫瘍のがんまたは上皮がんが挙げられ、限定されないが：肺がん；脳のがん；膵臓がん；頭頚部がん（例えば、扁平上皮癌腫）；乳がん；結腸直腸がん；肝臓がん；胃がん；腎臓がん；卵巣がん；前立腺がん；または腺癌腫が挙げられる。他のがんは、ＶＥＧＦ発現の増大、血管新生の増大または低酸素性腫瘍を伴うものである。
【０１２３】
語句「治療有効量」は、本明細書で用いる場合、研究者、獣医、医師などが得ようとしている組織、系、動物またはヒトの生物学的または医学的応答が誘起される薬物または医薬用薬剤の量をいう。
【０１２４】
語句「血中グルコースレベルを低下させるのに有効な・・・量」は、本明細書で用いる場合、所望の効果が得られるのに充分に高い循環濃度がもたらされるのに充分な化合物レベルをいう。かかる濃度は、典型的には約１０ｎＭ〜２μＭまでの範囲であり；約１００ｎＭ〜５００ｎＭまでの範囲の濃度が好ましい。先に記載のように、上記に示した式Ｉの規定に含まれる種々の化合物の活性はかなり異なり得るため、および個々の被験体は幅広い多様な症状の重症度を提示し得るため、処置に対する被験体の応答を調べ、それに応じて投薬量を変更するのは担当医師次第である。
【０１２５】
語句「インスリン抵抗性」は、本明細書で用いる場合、全身または個々の組織、例えば、骨格筋組織、心筋組織、脂肪組織もしくは肝臓組織におけるインスリンの作用に対する感受性の低下をいう。インスリン抵抗性は、真性糖尿病を有する、または有しない多くの個体で起こる。
【０１２６】
語句「インスリン抵抗性症候群」は、本明細書で用いる場合、インスリン抵抗性、高インスリン血症、非インスリン依存性真性糖尿病（ＮＩＤＤＭ）、動脈性高血圧、中心性（内臓）肥満および異常脂質血症を含む一群の臨床像をいう。
【０１２７】
また、本発明の化合物は、グルコース利用障害およびインスリン抵抗性と関連している他の代謝障害、例えば、ＮＩＤＤＭの主な後期合併症、例えば、糖尿病性血管症、アテローム性動脈硬化、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、糖尿病性腎症、糖尿病性ニューロパシー、ならびに糖尿病性の眼の合併症、例えば、網膜症、白内障形成および緑内障、ならびにＮＩＤＤＭと関連する多くの他の合併症、例えば、異常脂質血症、グルココルチコイド誘導性インスリン抵抗性、多嚢胞性卵巣症候群、肥満、高血糖症、高脂血症、高コレステロール血症、高トリグリセリド血症、高インスリン血症および高血圧の処置にも有用であり得る。このような病状の簡単な説明は任意の医学辞書、例えば、“Ｓｔｅｄｍａｎ’ｓ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ”（第Ｘ版）において得られる。
【０１２８】
本明細書に開示する化合物および組成物を治療有効量で、本明細書において規定した１種類または１種類より多くのさらなる治療用薬剤と併用して投与してもよい。例えば、Ｃｒｙ媒介性の疾患または障害の処置に使用される他の物質との相乗効果が生じ得る。本発明の化合物を他の治療薬と併せて投与する場合、共投与される化合物の投薬量は、もちろん、使用される共薬物の型、使用される具体的な薬物、処置対象の病状などに応じて異なる。
【０１２９】
本明細書で用いる場合、用語「併用処置」、「併用療法」、「処置の併用」または「コンビナトリアル処置」は、互換的に用いており、少なくとも２種類の異なる治療用薬剤での個体の処置を言う。用語「共投与」または「併用投与」などは、本明細書で用いる場合、一人の被験体に対する複数種の選択された治療用薬剤の投与を包含していることを意味し、薬剤が必ずしも同じ投与経路で、または同時に投与されない処置レジメンを包含して
いることを意図する。本明細書に記載の併用処置は、本明細書に開示の化合物および組成物と１種類または１種類より多くのさらなる治療用薬剤との相互作用から有利な効果を得ることを意図する。併用の有益な効果としては、限定されないが、本明細書に開示の化合物と治療用薬剤との組み合わせに起因する薬物動態学的または薬力学的な相互作用が挙げられる。組み合わせによるこれらの治療用薬剤を、典型的には、規定の期間（通常、選択した組み合わせに応じて、分、時間、日、または週）投与する。いくつかの実施形態では、本発明の化合物を、１種類または１種類より多くのさらなる治療用薬剤と組み合わせて同時または連続的様式で投与する。同時に投与する場合、例えば、さらなる治療用薬剤と同一のカプセル中で本発明の化合物（１つまたは複数）を投与することができる。あるいはまた、本発明の化合物およびさらなる治療用薬剤を、同時に投与されるように個別の組成物（すなわち、カプセル）中に含める。連続的に投与する場合、本発明の化合物（１つまたは複数）を、さらなる治療用薬剤の投与前または投与後に投与することができる。用語「複合医薬」は、１種類より多くの活性成分を混合することまたは合わせることにより得られる製剤品を意味し、活性成分の固定の組合せと非固定の組合せの両方を包含する。「固定の組合せ」は、活性成分（例えば、本明細書に開示する化合物）とさらなる治療用薬剤の両方が患者に、単一の存在体または投薬物の形態で同時に投与されることを意味する。「非固定の組合せ」は、活性成分（例えば、本明細書に開示する化合物）とさらなる治療用薬剤の両方が患者に別々の存在体として、同時、並行して、または逐次のいずれかで特に時間の制限なく投与されることを意味し、この場合、かかる投与により患者の体内に治療有効レベルの２種類の化合物がもたらされる。また、後者はカクテル療法（例えば、３種類または３種類より多くの活性成分の投与）にも適用される。
【０１３０】
糖尿病、メタボリックシンドローム、肥満、インスリン抵抗性症候群、糖尿病性合併症またはがんの処置のための治療用薬剤としては、限定されないが以下のもの：インスリン、血糖降下剤、抗糖尿病剤、抗炎症剤、脂質低減剤、降圧薬、例えば、カルシウムチャネル遮断薬、β−アドレナリン作動性受容体遮断薬、シクロオキシゲナーゼ−２阻害薬、アンギオテンシン系阻害薬、ＡＣＥ阻害薬、レニン阻害薬、化学療法剤、放射線療法薬、ホルモン調節剤、免疫調節剤、抗血管新生剤、ならびに他の一般的なリスクファクター改良剤が挙げられる。
【０１３１】
インスリンとしては、速効性形態、例えば、インスリンリスプロｒＤＮＡ起源：ＨＵＭＡＬＯＧ（１．５ｍＬ，１０ｍＬ，Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，Ｉｎｄ．）、インスリン注射（レギュラーインスリン）形態，牛および豚（レギュラーＩＬＥＴＩＮ  Ｉ，Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ］、ヒト：ｒＤＮＡ：ＨＵＭＵＬＩＮ  Ｒ（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ）、ＮＯＶＯＬＩＮ  Ｒ（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ）、半合成：ＶＥＬＯＳＵＬＩＮ  ヒト（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ）、ｒＤＮＡ  ヒト、緩衝型：ＶＥＬＯＳＵＬＩＮ  ＢＲ、豚：レギュラーインスリン（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ）、精製型，豚：ブタレギュラーＩＬＥＴＩＮ  ＩＩ（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ）、レギュラー精製ブタインスリン（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ）およびレギュラー（濃縮型）ＩＬＥＴＩＮ  ＩＩ  Ｕ−５００（５００単位／ｍＬ，Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ）；中間作用性形態、例えば、インスリン亜鉛懸濁剤，牛および豚：ＬＥＮＴＥ  ＩＬＥＴＩＮ  Ｇ
Ｉ（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ）、ヒト，ｒＤＮＡ：ＨＵＭＵＬＩＮ  Ｌ（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ）、ＮＯＶＯＬＩＮ  Ｌ（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ）、精製型，豚：ＬＥＮＴＥ  ＩＬＥＴＩＮ  ＩＩ（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ）、イソフェンインスリン懸濁剤（ＮＰＨ）：牛および豚：ＮＰＨ  ＩＬＥＴＩＮ  Ｉ（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ）、ヒト，ｒＤＮＡ：ＨＵＭＵＬＩＮ  Ｎ（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ）、Ｎｏｖｏｌｉｎ  Ｎ（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ）、精製型，豚：ブタＮＰＨ  Ｉｌｅｔｉｎ  ＩＩ（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ）、ＮＰＨ−Ｎ（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ）；ならびに長期作用性形態、例えば、インスリン亜鉛懸濁剤，長期（ＵＬＴＲＡＬＥＮＴＥ，Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ）、ヒト，ｒＤＮＡ：ＨＵＭＵＬＩＮ  Ｕ（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ）が挙げられる。
【０１３２】
血糖降下剤としては、限定されないが、スルホニル尿素：アセトヘキサミド（ジメロール（Ｄｙｍｅｌｏｒ））、クロルプロパミド（ジアビネーゼ（Ｄｉａｂｉｎｅｓｅ））、トルブタミド（オリナーゼ（Ｏｒｉｎａｓｅ））；第２世代スルホニル尿素：グリピジド（グルコトロール，グルコトロールＸＬ）、グリブリド（ダイアベータ（Ｄｉａｂｅｔａ）；ミクロナーゼ；グリナーゼ（Ｇｌｙｎａｓｅ））、グリメピリド（アマリール）；ビグアニド：メトホルミン（グルコファージ）；α−グルコシダーゼ阻害薬：アカルボース（プレコース（Ｐｒｅｃｏｓｅ））、ミグリトール（グリセット（Ｇｌｙｓｅｔ））、チアゾリジンジオン：ロシグリタゾン（アバンディア）、ピオグリタゾン（アクトス）、トログリタゾン（レズリン）；メグリチニド：レパグリニド（プランジン）；および他の血糖降下薬、例えば、アカルボース；ブホルミン；塩酸ブトキサミン；カミグリボース；シグリタゾン；エングリタゾンナトリウム；ダルグリタゾンナトリウム；塩酸エトホルミン（Ｅｔｏｆｏｒｍｉｎ）；グリアミリド（Ｇｌｉａｍｉｌｉｄｅ）；グリボムリド（Ｇｌｉｂｏｍｕｒｉｄｅ）；グリセタニル（Ｇｌｉｃｅｔａｎｉｌｅ）グリクラジドナトリウム；グリフルミド（Ｇｌｉｆｌｕｍｉｄｅ）；グルカゴン；グリヘキサミド；グリミジンナトリウム；グリオクタミド；グリパラミド；リノグリリド（Ｌｉｎｏｇｌｉｒｉｄｅ）；フマル酸リノグリリド；メチルパルモキシレート（Ｐａｌｍｏｘｉｒａｔｅ）；パルモキシレートナトリウム；酒石酸ピログリリド；プロインスリン，ヒト；；酢酸セグリチド（Ｓｅｇｌｉｔｉｄｅ）；トラザミド；トルピラミド（Ｔｏｌｐｙｒｒａｍｉｄｅ）；ゾポルレスタットが挙げられる。
【０１３３】
抗糖尿病薬としては、限定なしで、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ阻害薬（シタグリプチン、アログリプチン、ビルダグリプチン、サキサグリプチン、リナグリプチン、アナグリプチン、テネリグリプチン、ゲミグリプチン、ズトグリプチン、または現在開発中の任意の他のグリプチン、ベルベリン、およびルペオールなど）；ならびにＧＬＰ−１作動薬（エクセナチド、リラグルチド、アルビグルチド、タスポゲニチド（ｔａｓｐｏｇｅｎｉｔｄｅ）、およびＡＶＥ００１０など）が挙げられる。
【０１３４】
抗炎症剤としては、アルクロフェナク；ジプロピオン酸アルクロメタゾン；アルゲストンアセトニド；α−アミラーゼ；アムシナファル（Ａｍｃｉｎａｆａｌ）；アムシナフィド（Ａｍｃｉｎａｆｉｄｅ）；アムフェナクナトリウム；塩酸アミプリロース；アナキンラ；アニロラク（Ａｎｉｒｏｌａｃ）；アニトラザフェン（Ａｎｉｔｒａｚａｆｅｎ）；アパゾン；バルサラジド二ナトリウム；ベンダザック；ベノキサプロフェン；塩酸ベンジダミン；ブロメライン；ブロペラモール（Ｂｒｏｐｅｒａｍｏｌｅ）；ブデソニド；カルプロフェン；シクロプロフェン；シンタゾン；クリプロフェン；プロピオン酸クロベタゾール（Ｃｌｏｂｅｔａｓｏｌ）；酪酸クロベタゾン（Ｃｌｏｂｅｔａｓｏｎｅ）；クロピラク（Ｃｌｏｐｉｒａｃ）；プロピオン酸クロチカゾン（Ｃｌｏｔｉｃａｓｏｎｅ）；酢酸コルメタゾン（Ｃｏｒｍｅｔｈａｓｏｎｅ）；コルトドキソン；デフラザコート；デソニド；デソキシメタゾン；ジプロピオン酸デキサメタゾン；ジクロフェナクカリウム；ジクロフェナクナトリウム；二酢酸ジフロラゾン；ジフルミドン（Ｄｉｆｌｕｍｉｄｏｎｅ）ナトリウム；ジフルニサル；ジフルプレドナート；ジフタロン；ジメチルスルホキシド；ドロシノニド；エンドリソン；エンリモマブ（Ｅｎｌｉｍｏｍａｂ）；エノリカム（Ｅｎｏｌｉｃａｍ）ナトリウム；エピリゾール；エトドラク；エトフェナマート；フェルビナク；フェナモール；フェンブフェン；フェンクロフェナク；フェンクロラク；フェンドサール；フェンピパロン；フェンチアザク；フラザロン；フルアザコート；フルフェナム酸；フルミゾール；酢酸フルニソリド；フルニキシン；フルニキシンメグルミン；フルオコルチンブチル；酢酸フルオロメトロン；フルクアゾン；フルルビプロフェン；フルレトフェン；プロピオン酸フルチカゾン；フラプロフェン；フロブフェン；ハルシノニド；プロピオン酸ハロベタソール；酢酸ハロプレドン；イブフェナク；イブプロフェン；イブプロフェンアルミニウム；イブプロフェンピコノール；イロニダップ；インドメタシン；イ
ンドメタシンナトリウム；インドプロフェン；インドキソール；イントラゾール；酢酸イソフルプレドン；イソキセパック；イソキシカム；ケトプロフェン；塩酸ロフェミゾール；ロルノキシカム；ロテプレドノールエタボナート；メクロフェナム酸ナトリウム；メクロフェナム酸；メクロリソンジブチラート（Ｍｅｃｌｏｒｉｓｏｎｅ  Ｄｉｂｕｔｙｒａｔｅ）；メフェナム酸；メサラミン；メセクラゾン；スレプタン酸メチルプレドニゾロン；モルニフルマート；ナブメトン；ナプロキセン；ナプロキセンナトリウム；ナプロキソール；ニマゾン；オルサラジンナトリウム；オルゴテイン；オルパノキシン；オキサプロジン；オキシフェンブタゾン；塩酸パラニリン；ペントサンポリ硫酸ナトリウム；フェンブタゾンナトリウムグリセラート；ピルフェニドン；ピロキシカム；桂皮酸ピロキシカム；ピロキシカムオラミン；ピルプロフェン；プレドナザート（Ｐｒｅｄｎａｚａｔｅ）；プリフェロン（Ｐｒｉｆｅｌｏｎｅ）；プロドール酸；プロクアゾン；プロキサゾール；クエン酸プロキサゾール；リメキソロン；ロマザリット（Ｒｏｍａｚａｒｉｔ）；サルコレックス（Ｓａｌｃｏｌｅｘ）；サルナセジン；サルサラート；サリチラート；塩化サンギナリン；セクラゾン；セルメタシン；スドキシカム（Ｓｕｄｏｘｉｃａｍ）；スリンダク；スプロフェン；タルメタシン；タルニフルマート；タロサラート；テブフェロン；テニダップ；テニダップナトリウム；テノキシカム；テシカム；テシミド；テトリダミン；チオピナク（Ｔｉｏｐｉｎａｃ）；ピバリン酸チキソコルトール；トルメチン；トルメチンナトリム；トリクロニド；トリフルミダート；ジドメタシン；グルココルチコイド；ゾメピラクナトリウムが挙げられる。重要な抗炎症剤はアスピリンである。
【０１３５】
他の抗炎症剤は、サイトカイン阻害薬、例えば、サイトカイン拮抗薬（例えば、ＩＬ−６受容体拮抗薬）、アザ−アルキルリゾリン脂質（ＡＡＬＰ）、ならびに腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）阻害薬、例えば、抗ＴＮＦ−α抗体、可溶性ＴＮＦ受容体、ＴＮＦ−α、アンチセンス核酸分子、多価グアニルヒドラゾン（ＣＮＩ−１４９３）、Ｎ−アセチルシステイン、ペントキシフィリン、オクスペンチフィリン、炭素環式ヌクレオシドアナログ、小分子Ｓ９ａ、ＲＰ  ５５７７８（ＴＮＦ−α合成阻害薬）、デキサナビノール（ＨＵ−２１１）、ＭＤＬ  ２０１，４４９Ａ（９−［（１Ｒ，３Ｒ）−トランス−シクロペンタン−３−オール］アデニン、およびトリコジメロール（ｔｒｉｃｈｏｄｉｍｅｒｏｌ）（ＢＭＳ−１８２１２３）である。他のＴＮＦ−α阻害薬としては、エタネルセプト（ＥＮＢＲＥＬ，Ｉｍｍｕｎｅｘ，Ｓｅａｔｔｌｅ）およびインフリキシマブ（ＲＥＭＩＣＡＤＥ，Ｃｅｎｔｏｃｏｒ，Ｍａｌｖｅｒｎ，Ｐａ．）が挙げられる。
【０１３６】
脂質低減剤としては、ゲムフィブロジル、コレスチラミン（ｃｈｏｌｙｓｔｙｒａｍｉｎｅ）、コレスチポール、ニコチン酸、およびＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害薬が挙げられる。投与または本発明による他の薬剤との共投与に有用なＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害薬としては、限定されないが、シムバスタチン（米国特許第４，４４４，７８４号）、ロバスタチン（米国特許第４，２３１，９３８号）、プラバスタチンナトリウム（米国特許第４，３４６，２２７号）、フルバスタチン（米国特許第４，７３９，０７３号）、アトルバスタチン（米国特許第５，２７３，９９５号）、およびセリバスタチンが挙げられる。
【０１３７】
カルシウムチャネル遮断薬としては、ジヒドロピリジン（ニフェジピンなど）、フェニルアルキルアミン（ベラパミルなど）、およびベンゾチアゼピン（ジルチアゼムなど）が挙げられる。他のカルシウムチャネル遮断薬としては、限定されないが、アムリノン、アムロジピン、ベンシクラン、フェロジピン、フェンジリン、フルナリジン、イスラジピン、ニカルジピン、ニモジピン、ペルヘキシリン、ガロパミル、チアパミルおよびチアパミル類似体（１９９３ＲＯ−１１−２９３３など）、フェニトイン、バルビツレート、ならびにペプチドダイノルフィン、ω−コノトキシン、およびω−アガトキシンなど、および／またはその薬学的に許容され得る塩が挙げられる。
【０１３８】
β−アドレナリン作動性受容体遮断剤としては、限定されないが、アテノロール、アセブトロール、アルプレノロール、ベフノロール、ベタキソロール、ブニトロロール、カルテオロール、セリプロロール、ヘドロキサロール（ｈｅｄｒｏｘａｌｏｌ）、インデノロール、ラベタロール、レボブノロール、メピンドロール、メチプラノロール、メチンドール、メトプロロール、メトリゾラノロール（ｍｅｔｒｉｚｏｒａｎｏｌｏｌ）、オクスプレノロール、ピンドロール、プロプラノロール、プラクトロール、プラクトロール、ソタロルナドロール（ｓｏｔａｌｏｌｎａｄｏｌｏｌ）、チプレノロール、トマロロール（ｔｏｍａｌｏｌｏｌ）、チモロール、ブプラノロール、ペンブトロール、トリメプラノール、２−（３−（１，１−ジメチルエチル）−アミノ−２−ヒドロキシプロポキシ）−３−ピリデンカルボニトリルＨＣｌ、１−ブチルアミノ−３−（２，５−ジクロロフェノキシ−）−２−プロパノール、１−イソプロピルアミノ−３−（４−（２−シクロプロピルメトキシエチル）フェノキシ）−２−−プロパノール、３−イソプロピルアミノ−１−（７−メチルインダン−４−イルオキシ）−２−ブタノール、２−（３−ｔ−ブチルアミノ−２−ヒドロキシ−プロピルチオ）−４−（５−カルバモイル−２−チエニル）チアゾル、７−（２−ヒドロキシ−３−ｔ−ブチルアミンプロポキシ）フタリドが挙げられる。上記の化合物は、異性体混合物として、またはそのそれぞれの左旋性もしくは右旋性形態で使用され得る。
【０１３９】
いくつかの選択的ＣＯＸ−２阻害薬が当該技術分野で知られており、限定されないが、米国特許第５，４７４，９９５号；米国特許第５，５２１，２１３号；米国特許第５，５３６，７５２号；米国特許第５，５５０，１４２号；米国特許第５，５５２，４２２号；米国特許第５，６０４，２５３号；米国特許第５，６０４，２６０号；米国特許第５，６３９，７８０号；米国特許第５，６７７，３１８号；米国特許第５，６９１，３７４号；米国特許第５，６９８，５８４号；米国特許第５，７１０，１４０号；米国特許第５，７３３，９０９号；米国特許第５，７８９，４１３号；米国特許第５，８１７，７００号；米国特許第５，８４９，９４３号；米国特許第５，８６１，４１９号；米国特許第５，９２２，７４２号；米国特許第５，９２５，６３１号；および米国特許第５，６４３，９３３号に記載されたＣＯＸ−２阻害薬が挙げられる。上記のいくつかのＣＯＸ−２阻害薬は選択的ＣＯＸ−２阻害薬のプロドラッグであり、ＷＯ９５／００５０１、ＷＯ９５／１８７９９、および米国特許第５，４７４，９９５号（１９９５年１２月１２日発行）に記載のものが挙げられる。
【０１４０】
アンギオテンシンＩＩ拮抗薬の例としては：ペプチド系化合物（例えば、サララシン、［（Ｓａｎ１）（Ｖａｌ５）（Ａｌａ８）］アンギオテンシン−（１−８）オクタペプチドおよび関連類似体）；Ｎ−置換イミダゾール−２−オン（米国特許第５，０８７，６３４号）；酢酸イミダゾール誘導体、例えば、２−Ｎ−ブチル−４−クロロ−１−（２−クロロベンジル）イミダゾール−５−酢酸（Ｌｏｎｇら，Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．２４７（１），１−７（１９８８）参照）；４，５，６，７−テトラヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボン酸および類似体誘導体（米国特許第４，８１６，４６３号）；Ｎ２−テトラゾールβ−グルクロニド類似体（米国特許第５，０８５，９９２号）；置換ピロール、ピラゾール、およびトリアゾール（ｔｒｙａｚｏｌｅ）（米国特許第５，０８１，１２７号）；フェノールおよび複素環式の誘導体、例えば、１，３−イミダゾール（米国特許第５，０７３，５６６号）；イミダゾ縮合７員環複素環（米国特許第５，０６４，８２５号）；ペプチド（例えば、米国特許第４，７７２，６８４号）；アンギオテンシンＩＩに対する抗体（例えば、米国特許第４，３０２，３８６号）；ならびにアラルキルイミダゾール化合物、例えば、ビフェニル−メチル置換イミダゾール（例えば、ＥＰ２５３，３１０，１９８８年１月２０日）；ＥＳ８８９１（Ｎ−モルホリノアセチル−（−１−ナフチル）−Ｌ−アラニル−ｌ−（４，チアゾリル）−Ｌ−アラニル（３５，４５）−４−アミノ−３−ヒドロキシ−５−シクロ−ヘキサペンタノイル−−Ｎ−ヘキシルアミド，第一三共株式会社（Ｓａｎｋｙｏ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｌ
ｔｄ．），東京，日本）；ＳＫＦ１０８５６６（Ｅ−α−２−［２−ブチル−１−（カルボキシフェニル）メチル］１Ｈ−イミダゾール−５−イル［メチラン−ｅ］−２−チオフェンプロパン酸，Ｓｍｉｔｈ  Ｋｌｉｎｅ  Ｂｅｅｃｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｐａ．）；ロサルタン（ＤＵＰ７５３／ＭＫ９５４，ＤｕＰｏｎｔ  Ｍｅｒｃｋ
Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ）；レミキリン（Ｒｅｍｉｋｉｒｉｎ）（ＲＯ４２−５８９２，Ｆ．Ｈｏｆｆｍａｎ  ＬａＲｏｃｈｅ  ＡＧ）；Ａ２作動薬（Ｍａｒｉｏｎ  Ｍｅｒｒｉｌｌ  Ｄｏｗ）および特定の非ペプチド複素環（Ｇ．Ｄ．Ｓｅａｒｌｅ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ）が挙げられる。
【０１４１】
アンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害薬としては、アミノ酸およびその誘導体、ペプチド、例えば、ジ−およびトリ−ペプチド、ならびにＡＣＥの活性を阻害し、それにより前駆物質アンギオテンシンＩＩの形成を低減または排除することによりレニン−アンギオテンシン系内に介在するＡＣＥに対する抗体が挙げられる。他のＡＣＥ阻害薬としては、アシルメルカプトおよびメルカプトアルカノイルプロリン、例えば、カプトプリル（米国特許第４，１０５，７７６号）およびゾフェノプリル（米国特許第４，３１６，９０６号）、カルボキシアルキルジペプチド、例えば、エナラプリル（米国特許第４，３７４，８２９号）、リシノプリル（米国特許第４，３７４，８２９号）、キナプリル（米国特許第４，３４４，９４９号）、ラミプリル（米国特許第４，５８７，２５８号）、およびペリンドプリル（米国特許第４，５０８，７２９号）、カルボキシアルキルジペプチド模倣物、例えば、シラザプリル（米国特許第４，５１２，９２４号）およびベナゼプリル（米国特許第４，４１０，５２０号）、ホスフィニルアルカノイルプロリン、例えば、フォシノプリル（米国特許第４，３３７，２０１号）およびトランドロプリル（ｔｒａｎｄｏｌｏｐｒｉｌ）が挙げられる。
【０１４２】
レニン阻害薬としては、アミノ酸およびその誘導体、ペプチドおよびその誘導体、ならびにレニンに対する抗体が挙げられる。他のレニン阻害薬としては、ペプチドの尿素誘導体（米国特許第５，１１６，８３５号）；非ペプチド結合で連結されたアミノ酸（米国特許第５，１１４，９３７号）；ジ−およびトリ−ペプチド誘導体（米国特許第５，１０６，８３５号）；アミノ酸およびその誘導体（米国特許第５，１０４，８６９号および同第５，０９５，１１９号）；ジオールスルホンアミドおよびスルフィニル（米国特許第５，０９８，９２４号）；修飾ペプチド（米国特許第５，０９５，００６号）；ペプチジルβ−アミノアシルアミノジオールカルバメート（米国特許第５，０８９，４７１号）；ピロルイミダゾロン（米国特許第５，０７５，４５１号）；フッ素および塩素スタチンまたはスタトン（ｓｔａｔｏｎｅ）含有ペプチド（米国特許第５，０６６，６４３号）；ペプチジルアミノジオール（米国特許第５，０６３，２０８号および同第４，８４５，０７９号）；Ｎ−モルホリノ誘導体（米国特許第５，０５５，４６６号）；ペプスタチン誘導体（米国特許第４，９８０，２８３号）；Ｎ−複素環式アルコール（米国特許第４，８８５，２９２号）；レニンに対するモノクローナル抗体（米国特許第４，７８０，４０１号）；ならびにさまざまな他のペプチドおよびその類似体（米国特許第５，０７１，８３７号、同第５，０６４，９６５号、同第５，０６３，２０７号、同第５，０３６，０５４号、同第５，０３６，０５３号、同第５，０３４，５１２号、および同第４，８９４，４３７号）が挙げられる。
【０１４３】
糖尿病および関連障害の処置に有用な他の治療用薬剤としては、限定されないが、リパーゼ阻害薬、例えば、セチリスタット（ＡＴＬ−９６２）；合成アミリン類似体、例えば、組換えレプチンを有する、またはなしのシムリン  プラムリンチド；ナトリウム−グルコース共輸送体２（ＳＧＬＴ２）阻害薬（セルグリフロジン（８６９６８２；ＫＧＴ−１２５１）、ＹＭ５４３、カナグリフロジン、エルツグリフロジン、ダパグリフロジン、ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ社の分子１８９０７５、およびＳａｎｏｆｉ−Ａｖｅｎｔｉｓ社の分子ＡＶＥ２２６８など）；二重脂肪（ｄｕａｌ  ａｄｉｐｏｓｅ）トリグリセ
リドリパーゼおよびＰＩ３キナーゼ活性化薬（アジビア（Ａｄｙｖｉａ）（ＩＤ  １１０１）など）；神経ペプチドＹ２、Ｙ４およびＹ５受容体の拮抗薬（Ｎａｓｔｅｃｈ社の分子ＰＹＹ３−３６、ヒトホルモンＰＹＹ３−３６の合成類似体および膵臓ポリペプチド（７ＴＭ分子ＴＭ３０３３８）など）；シオノギ製薬の分子Ｓ−２３６７；カンナビノイドＣＢ１受容体拮抗薬、例えば、リモナバント（Ａｃｏｍｐｌｉａ）、タラナバント、ＣＰ−９４５，５９８、Ｓｏｌｖａｙ社の分子ＳＬＶ３１９、Ｖｅｒｎａｌｉｓ社の分子Ｖ２４３４３；ホルモン様オレイル−エストロン；セロトニン、ドーパミンおよびノルエピネフリンの阻害薬（当該技術分野では三重モノアミン再取込み阻害薬としても知られている）（テソフェンシン（Ｎｅｕｒｏｓｅａｒｃｈ社の分子ＮＳ２３３０）など）；ノルエピネフリンおよびドーパミン再取込みの阻害薬（コントレイブ（ブプロピオン＋オピオイド拮抗薬ナルトレキソン）およびエクスカリア（Ｅｘｃａｌｉａ）（ブプロピオン＋抗痙攣薬ゾニサミド（ｚｏｎｉｓａｍｉｎｄｅ））など；１１β−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ１型（１１ｂ−ＨＳＤ１）の阻害薬（Ｉｎｃｙｔｅ社の分子ＩＮＣＢ１３７３９など）；コルチゾール合成の阻害薬、例えば、ケトコナゾール（ＤｉＯｂｅｘ社の分子ＤＩＯ−９０２）；糖新生の阻害薬、例えば、メタバシス（Ｍｅｔａｂａｓｉｓ）／Ｄａｉｉｃｈｉ社の分子ＣＳ−９１７；グルコキナーゼ活性化薬（Ｒｏｃｈｅ社の分子Ｒ１４４０など）；タンパク質チロシンホスファターゼ−１Ｂのアンチセンス阻害薬、例えば、ＩＳＩＳ  １１３７１５；ならびにＮｉｃＯｘ社の分子ＮＣＸ  ４０１６などの他の薬剤；ガストリンおよび上皮細胞増殖因子（ＥＧＦ）類似体、例えば、Ｉｓｌｅｔ  Ｎｅｏｇｅｎｅｓｉｓ  Ｔｈｅｒａｐｙ（Ｅ１−Ｉ．Ｎ．Ｔ．）の注射；ベタヒスチン（Ｏｂｅｃｕｒｅ社の分子ＯＢＥ１０１）；胆汁酸隔離剤（例えば、コレスチラミンおよびコレスチポール）、ビタミンＢ３（ニコチン酸またはナイアシンとしても知られている）、ビタミンＢ６（ピリドキシン）、ビタミンＢ１２（シアノコバラミン）、フィブリン酸誘導体（例えば、ゲムフィブロジル、クロフィブレート、フェノフィブレートおよびベンザフィブレート）、プロブコール、ニトログリセリン、ならびにコレステロール吸収の阻害薬（例えば、β−シトステロールおよびアシルＣｏＡ−コレステロールアシルトランスフェラーゼ（ＡＣＡＴ）阻害薬、例えば、メリナミド）、ＨＭＧ−ＣｏＡシンターゼ阻害薬、スクアレンエポキシダーゼ阻害薬およびスクアレンシンテターゼ阻害薬が挙げられる。
【０１４４】
クッシング症候群を処置するために使用される薬剤の例としては、限定なしで、神経調節薬（Ｓｉｇｎｉｆｏｒ（登録商標）（パシレオチド）、カベルゴリン）；副腎ステロイド生成阻害薬（ケトコナゾール、メチラポン、ミトタン、エトミデート）；および核内受容体調節薬（Ｋｏｒｌｙｍ（登録商標）（ミフェプリストン）、レチノイン酸）が挙げられる。他の薬剤としては、限定なしで、上皮成長因子受容体阻害薬（例えば、ゲフィチニブ）、アルドステロンシンターゼ／１１β−ヒドロキシラーゼ阻害薬ＬＣＩ６９９、およびレボケトコナゾール（ｌｅｖｏｋｅｔｏｃｏｎａｚｏｌｅ）（ＣＯＲ−００３）が挙げられる。
【０１４５】
疼痛（例えば、神経障害性疼痛）を処置するために多くの場合で使用される鎮痛剤の例としては、限定されないが、オピオイドまたは非オピオイド鎮痛剤が挙げられる。好適なオピオイド鎮痛剤としては、限定されないが、モルヒネ、ヘロイン、ヒドロモルホン、ヒドロコドン、オキシモルホン、オキシコドン、メトポン、アポモルヒネ、ノルモルヒネ、エトルフィン、ブプレノルフィン、メペリジン、ロペラミド（ｌｏｐｅｒｍｉｄｅ）、アニレリジン、エトヘプタジン、ピミノジン（ｐｉｍｉｎｉｄｉｎｅ）、ベタプロジン（ｂｅｔａｐｒｏｄｉｎｅ）、ジフェノキシレート、フェンタニル（ｆｅｎｔａｎｉｌ）、スフェンタニル、アルフェンタニル、レミフェンタニル、レボルファノール、デキストロメトルファン、フェナゾシン、ペンタゾシン、シクラゾシン、メタドン、イソメタドンおよびプロポキシフェンが挙げられる。好適な非オピオイド鎮痛剤としては、限定されないが、アスピリン、セレコキシブ、ロフェコキシブ、ジクロフェナク（ｄｉｃｌｏｆｉｎａｃ）、ジフルシナル、エトドラク、フェノプロフェン、フルルビプロフェン、イブプロフェ
ン、ケトプロフェン、インドメタシン、ケトロラク、メクロフェナメート、メフェナム酸、ナブメトン、ナプロキセン、ピロキシカムおよびスリンダクが挙げられる。
【０１４６】
緑内障を処置するためによく使われる治療用薬剤の例としては、コリン作動薬（例えば、ピロカルピンおよびカルバコール）、コリンエステラーゼ阻害薬（例えば、フィゾスチグミン、ネオスチグミン、デマカリウム（ｄｅｍａｃａｒｉｕｍ）、ヨウ化エコチオフェートおよびイソフルロフェート（ｉｓｏｆｌｕｏｒｏｐｈａｔｅ）、炭酸脱水酵素阻害薬（例えば、アセタゾラミド、ジクロルフェナミド、メタゾラミド、エトキスゾラミドおよびドルゾラミド）、非選択的アドレナリン作動薬（例えば、エピネフリンおよびジピベフリン）、α２−選択的アドレナリン作動薬（例えば、アプラクロニジンおよびブリモニジン）、β−遮断薬（例えば、チモロール、ベタゾロール（ｂｅｔａｚｏｌｏｌ）、レボブノロール、カルテオロールおよびメチプラノロール）、プロスタグランジン類似体（例えば、ラタノプロスト）ならびに浸透圧性利尿薬（例えば、グリセリン、マンニトールおよびイソソルビド）；コルチコステロイド、例えば、ベクロメタゾン、メチルプレドニゾロン、ベタメタゾン、プレドニゾン、プレドニゾロン（ｐｒｅｎｉｓｏｌｏｎｅ）、デキサメタゾン、フルチカゾンおよびヒドロコルチゾン、ならびにコルチコステロイド類似体、例えば、ブデソニドが挙げられる。
【０１４７】
アルツハイマー病を処置するためによく使われる治療用薬剤の例としては、β−セクレターゼ阻害薬またはγ−セクレターゼ阻害薬；グリシン輸送阻害薬、ｔａｕリン酸化阻害薬；Ａβオリゴマー形成の遮断薬；ｐ２５／ＣＤＫ５阻害薬；ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害薬；ＰＰＡＲγ作動薬、例えば、ピオグリタゾンおよびロシグリタゾン；ＮＫ１／ＮＫ３受容体拮抗薬；ＮＳＡＩＤ、例えば、イブプロフェン；ビタミンＥ；抗アミロイド抗体、例えば、抗アミロイドヒト化モノクローナル抗体；ＣＯＸ−２阻害薬；抗炎症化合物、例えば、（Ｒ）−フルルビプロフェン；ＣＢ−１受容体拮抗薬またはＣＢ−１受容体逆作動薬；抗生物質、例えば、ドキシサイクリンおよびリファンピン；Ｎ−メチル−Ｄ−アスパラギン酸（ＮＭＤＡ）受容体拮抗薬、例えば、メマンチンおよびネラメキサン；ＮＲ２Ｂ拮抗薬；アンドロゲン受容体調節薬；アセチルコリンエステラーゼ阻害薬、例えば、ガランタミン（ｇａｌａｎｔａｍｉｎｅ）、リバスチグミン、ドネペジル、およびタクリン；ｍＧｌｕＲ５調節薬；成長ホルモン分泌促進薬、例えば、イブタモレン、メシル酸イブタモレン、およびカプロモレリン；ヒスタミンＨ３拮抗薬；ＡＭＰＡ作動薬；ＰＤＥ
ＩＶ阻害薬；ＧＡＢＡＡ逆作動薬；ＧＡＢＡＡα５受容体リガンド；ＧＡＢＡＢ受容体リガンド；カリウムチャネル遮断薬；神経ニコチン酸作動薬；Ｐ−４５０阻害薬、例えば、リトナビルが挙げられる。
【０１４８】
情動障害（例えば、鬱）を処置するためによく使われる治療用薬剤の例としては、限定されないが、アミトリプチリン、アミトリプチリンオキシド、デシプラミン、ジベンゼピン、ドスレピン、ドキセピン、クロロイミプラミン、イミプラミン、ノルトリプチリン、ミアンセリン、マプロチリン、トリミプラミン、ＣＰ−１２２７２１、エルザソナン、ＰＤ−１７１７２９、ＭＫ−８６９、ＤＯＶ−２１６３０３、ＤＯＶ−２１９４７、リカルバゼピン、アンフェブタモン、ラダファキシン、ビラゾドン、ＧＳＫ−６７９７６９、ＧＷ−５９７５９９、ＮＳ−２３５９、ＧＳＫ−８７６００８、プラミペキソール、デュロキセチン、アトモキセチン、ＬＹ−６２８５３５、デスベンラファキシン、エスシタロプラム、ＬＵ−ＡＡ２１００４、サレデュタント（ｓａｒｅｄｕｔａｎｔ）、ＳＲ−５８６１１、ＳＳＲ−１４９４１５、ＳＳＲ−１４６９７７、モクロベミド、Ｒ−６７３、Ｒ−１２０４、ＢＭＳ−４６９４５８、ＤＰＣ−３６８、Ｏｒｇ−３４５１７、Ｏｒｇ−３４８５０、ＣＲＨ受容体の阻害薬、ＯＮＯ−２３３３Ｍｓ、ＮＢＩ−８７６００８、ＡＡＧ−５６１、ＮＢＩ−３４０４１、ＤＰＣ−３６８、ＰＤ−１７１７２９、ＳＳＲ−１２５５４３、ビロキサジン（ｖｉｌｏｘａｚｉｎｅ）、トラゾドン、ネファゾドン、ミルタザピン、ベンラファキシン、レボキセチン、トラニルシプロミン、ブロファロミン、モクロ
ベミド、シタロプラム、エスシタロプラム、パロキセチン、フルオキセチン、フルボキサミン、セルトラリン、オトギリソウ属（セント・ジョーンズ・ワート）、アルプラゾラム、クロナゼパム、ジアゼパム、ロラゼパム、ハラゼパム、クロルジアゼポキシド、および他の薬物、例えば、ブスピロン、クロニジン、パゴクロン、リスペリドン、オランザピン、クエチアピン、ジプラシドン、セレコキシブ、ピロキシカム、パレコキシブ、バルデコキシブ、ＰＭＩ−００１、ＰＨ−６８６４６４、ＳＣ−５８２３６、エトリコキシブ、ロフェコキシブ、Ｌ−７７６９６７、ルミラコキシブ、ＧＷ−４０６３８１、ＧＷ−６４４７８４、メロキシカム、ＳＶＴ−２０１６、ＰＡＣ−１０６４９、ＣＳ−７０６、ＬＡＳ−３４４７５、シミコキシブ、Ａ−１８３８２７．０、またはニメスリドが挙げられる。
【０１４９】
依存症および薬物乱用を処置するためによく使われる治療用薬剤の例としては、限定されないが、フェネルジン、フェニルアルキルヒドラジン（米国特許第４，７８６，６５３号）、ジスルフィラム（「アンタビュース」）、２−イミノ−５−フェニル−４−オキサゾリジノン、α−メチル−パラ−チロシンまたはフザリン酸、ピペラジン誘導体（米国特許第４，３２５，９５２号）、クロニジンと三環系抗鬱薬との併用（米国特許第４，７８８，１８９号）、γ−ピロン、例えば、マルトールまたはエチルマルトール（米国特許第４，２７６，８９０号）、アカンプロセート、ガバペンチン、ビガバトリン、バクロフェン、Ｎ−アセチルシステイン、ノカイン（ｎｏｃａｉｎｅ）、モダナフィル（ｍｏｄａｎａｆｉｌ）、パロキセチン、ブプロピオン、ミルタザピン、トピラマート、オンダンセトロン、バレニクリン、オピオイド受容体の拮抗薬、例えば、ナルトレキソン、ナロキソン、ナルメフィン（ｎａｌｍｅｐｈｉｎｅ）、アンタキソン（ａｎｔａｘｏｎｅ）、Ｌ−α−アセチルメタドール、ペンタゾシン、ブトルファノール、ナルブフィン、ブプレノルフィン、およびメタドンが挙げられる。
【０１５０】
骨粗鬆症処置によく使われ、骨塩含量を調節し得る治療用薬剤の例としては、限定されないが、ビスホスホネート、例えば、アレンドロネート（Ｆｏｓａｍａｘ（登録商標））、リセドロネート（Ａｃｔｏｎｅｌ（登録商標））、エチドロネート（ｅｔｉｄｒｏｎａｔｅ）（Ｄｉｄｒｏｎｅｌ（登録商標））、パミドロネート、チルドロネート（Ｓｋｅｌｉｄ（登録商標））、クロドロネート（Ｂｏｎｅｆｏｓ（登録商標）；Ｌｏｒｏｎ（登録商標））、ネリドロネート、オルパドロネート、ゾレドロネート（Ｚｏｍｅｔａ（登録商標））、およびイバンドロネート（Ｂｏｎｉｖａ（登録商標））、選択的エストロゲン受容体調節薬（ＳＥＲＭ）、例えば、ラロキシフェン（Ｅｖｉｓｔａ（登録商標））、アルゾキシフェン、クロミフェン、バゼドキシフェン、ラソホキシフェン、オルメロキシフェン、タモキシフェン、およびトレミフィン（ｔｏｒｅｍｉｆｉｎｅ）、同化療法（ａｎａｂｏｌｉｃ  ｔｈｅｒａｐｙ）、例えば、テリパラチド（Ｆｏｒｔｅｏ（登録商標）；組換え副甲状腺ホルモン）、およびラネル酸ストロンチウム、ならびに副甲状腺ホルモンの組換えペプチド断片、エストロゲン／プロゲステロン補充療法、モノクローナル抗体、核因子ｋＢリガンド（ＲＡＮＫＬ）の受容体活性化薬の阻害薬、例えば、デノスマブ、オステオプロテゲリンおよびペプスタチンＡ、カテプシンＫの阻害薬、例えば、限定されないが、ＯＳＴ−４０７７（フラン−２−カルボン酸−（１−｛１−［４−フルオロ−２−（２−オキソ−ピロリジン−１−イル）−フェニル］−３−オキソ−ピペリジン−３−イルカルバモイル｝−シクロヘキシル）−アミド）、ロイペプチン、Ｃｂｚ−Ｐｈｅ−Ａｌａ−ＣＨＮ２、Ｃｂｚ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−アルデヒド、シスタチン、不可逆的システインプロテアーゼ阻害薬（ペプチドハロメチルケトン、ペプチドジアゾメチルケトン、およびエポキシドなど）、休止（ｑｕｉｅｓｃｅｎｔ）不可逆的システインプロテアーゼ阻害薬、例えば、アシルオキシメチルケトン、アザペプチド、マイケル受容体（ペプチドビニルエステル、スルホンおよびスルホネートなど）、可逆的システインプロテアーゼ阻害薬、例えば、ペプチドアルデヒド、ａ−ケトエステルおよびａ−ケトアミド、ペプチドメチルケトンおよびヒドロキシル、アルキルオキシ、アリールオキシ、アルキルチオ、ならびにそのアリールチオ誘導体、１，３−ビス−（アシルアミノ）−２−プロパノン、１
，３−ビス−（アシルヒドラジノ）−カルボニル、アシルアミノ−ピラゾロン、ピペリジノン、およびチアゾン−カルボニル−ヒドラジド、インテグリンＡｖｂ３の拮抗薬（当該技術分野ではビトロネクチンとしても知られている）、カルシリティック（ｃａｌｃｉｌｙｔｉｃ）化合物（ＰＴＨの分泌を増大させるＣａ２＋受容体拮抗薬）、カルシトニン（ＭｉａｃａｌｃｉｎＯ）、ナイトレート、例えば限定されないが、一硝酸イソソルビド（ＩＳＭＯ）またはニトログリセリン軟膏（ＮＴＧ）、ならびにダイエタリーサプリメント、例えば、カルシウムおよびビタミンＤ、ならびにその組合せが挙げられる。
【０１５１】
本発明の別の実施形態は、被験体から採取した試料における時計遺伝子（例えば、Ｃｒｙ１およびＣｒｙ２）の発現レベルの測定に基づいて処置を必要とする患者を認定する方法である（Ｂｊａｒｎａｓｏｎ，Ｇ．Ａ．ら、Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．２００１，１５８，１７９３；Ａｋａｓｈｉ，Ｍ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，２０１０，１０７，１５６４３）。被験体由来の試料で測定されるヒト時計遺伝子（例えば、Ｃｒｙ１およびＣｒｙ２）の律動的ｍＲＮＡ発現プロフィールは、末梢組織に体内時計が存在することを示す（Ｍｏｈａｗｋ，Ｊ．Ａ．ら、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２０１２，出版前に電子公開）。該試料における体内時計関連遺伝子の発現は、１日のうちで変動することが示されている。さらに、末梢血単核細胞における時計遺伝子（例えば、Ｃｒｙ１およびＣｒｙ２）の発現パターンはヒトにおいて、肥満などの疾患によって改変される。（Ｔａｈｉｒａ，Ｋ．ら、Ａｒｃｈ．Ｍｅｄ．Ｓｃｉ．２０１１，７，９３３）。末梢単核血球における時計遺伝子（例えば、Ｃｒｙ１およびＣｒｙ２）発現の変化は、血清レプチン、アジポネクチン、インスリンおよびｈｓＣＲＰレベル、血漿脂質、グルコース、メラトニンおよびコルチゾールレベルと相関し得る（動物では、肝臓、脂肪、膵臓および骨格筋などの組織における時計遺伝子（例えば、Ｃｒｙ１およびＣｒｙ２）の発現）。処置対象の被験体から採取した試料を式Ｉの化合物と接触させ、律動的なｍＲＮＡまたはタンパク質発現プロフィールを調べることにより、処置を必要とする患者が認定され得、薬理活性が評価され得る。他の実施形態では、１種類または１種類より多くのクリプトクロムの活性、例えば、クリプトクロムが標的、例えば、Ｐｅｒ１、Ｐｅｒ２、グルココルチコイド受容体（ＧＲ）、またはＣｒｙ認識部位を含むプロモーター配列（例えば、ＣＬＯＣＫ−ＢＭＡＬ１プロモーターなど）に結合する能力が評価され得る。
【０１５２】
したがって、本明細書に開示する主題の一態様は、第１の期間に被験体由来の第１の試料における１種類または１種類より多くのクリプトクロムの作用量を測定すること；第２の期間に該被験体由来の第２の試料における１種類または１種類より多くのクリプトクロムの作用量を測定すること；および第１の試料において検出された該１種類または１種類より多くのクリプトクロムの量を、第２の試料において検出された該１種類または１種類より多くのクリプトクロムの量または参照値と比較することを含む、被験体のＣｒｙ媒介性の疾患または障害の進行または予後をモニタリングする方法に関する。
【０１５３】
「診断」、「診断する」、「予後診断する」または「予後」は、個体が疾患を有するという確定判断またはほぼ確定判断に限定されず、個体が健常個体または一般母集団と比べて疾患を有するかまたは発症する尤度が高いという判断も包含する。
【０１５４】
本明細書で用いる場合、「発現」および「発現レベル」には、限定されないが、以下：前駆体ｍＲＮＡへの遺伝子の転写；前駆体ｍＲＮＡのスプライシングおよび他のプロセッシングによる成熟ｍＲＮＡの生成；ｍＲＮＡの安定性；成熟ｍＲＮＡのタンパク質への翻訳（コドン出現頻度およびｔＲＮＡ利用可能性を含む）；ならびに適正な発現および機能に必要とされる場合は翻訳産物のグリコシル化および／または他の修飾のうちの１種類または１種類より多くが包含される。
【０１５５】
「式」、「アルゴリズム」、または「モデル」は、任意の数学的方程式、アルゴリズム
処理、解析処理もしくはプログラムされた処理、または１つまたは１つより多くの連続入力もしくはカテゴリー入力を行ない（本明細書では「パラメータ」と称する）、出力値（場合によっては「指標」もしくは「指標値」と称される）を計算する統計学的手法である。「アルゴリズム」の非限定的な例としては、和、比および回帰演算子、例えば、係数または指数、値の変換および正規化（例えば限定されないが、性別、年齢、ボディマス指数または人種などの臨床パラメータに基づいた正規化スキーム）、規則およびガイドライン、統計分類モデル、ならびに歴史的母集団に照準を合わせたニューラルネットワークが挙げられる。本明細書において規定したＣｒｙの測定に特に有用であるのは、被験体の試料において検出されたＣｒｙレベルとＣｒｙ媒介性の疾患または障害を発症する被験体のリスクとの関係を「相関させる」線形および非線形方程式ならびに統計分類解析である。
【０１５６】
「測定すること」または「測定」は、臨床試料中または被験体由来試料中のいずれかの所与の物質の存在、非存在、量（“ｑｕａｎｔｉｔｙ”または“ａｍｏｕｎｔ”（これは有効量であってもよい）を評価すること、例えば、かかる物質の定性的または定量的濃度レベルの誘導、あるいは被験体の臨床パラメータの値またはカテゴリー化を評価することを意味する。また、測定または測定することは、型を認定すること、または物質を同定することを伴うものであってもよい。また、測定または測定することは、１種類または１種類より多くのＣｒｙが標的に結合する能力を伴うものであってもよく、この場合、標的はｐｅｒｉｏｄ遺伝子またはタンパク質Ｐｅｒ１およびＰｅｒ２、グルココルチコイド受容体（ＧＲ）、またはＣＬＯＣＫ−ＢＭＡＬ１遺伝子のプロモーター領域であり得る。Ｃｒｙの測定は、被験体のＣｒｙ媒介性の疾患もしくは障害を診断、検出もしくは認定するため、被験体のＣｒｙ媒介性の疾患もしくは障害の進行もしくは予後をモニタリングするため、被験体のＣｒｙ媒介性の疾患もしくは障害の再発を予測するため、または被験体を、Ｃｒｙ媒介性の疾患もしくは障害を発症するか、あるいはＣｒｙ媒介性の疾患もしくは障害が再発するリスクが低いか、もしくはリスクが高いかに分類するために使用され得る。
【０１５７】
本発明との関連における「リスク」は、Ｃｒｙ媒介性の疾患または障害の発症の場合のような具体的な期間に事象が起こる確率に関するものであり、被験体の「絶対」リスクまたは「相対」リスクを意味し得る。絶対リスクは、該当する期間コホートに関する測定後の実際の観測結果を参照して、または該当する期間で追跡された統計学的に有効な歴史的コホートから得られた指標値を参照してのいずれかで測定され得る。相対リスクは、低リスクコホートの絶対リスクまたは平均母集団リスクのいずれかと比較したときの被験体の絶対リスクの比率をいい、これは、どのようにして臨床的リスクファクターが評価されるかによって異なり得る。また、所与の試験結果について事象が起こらなかった場合に対する事象が起こった場合の割合であるオッズ比も、無変換で一般的に使用される（オッズは式ｐ／（１−ｐ）に従うものであり、式中、ｐは事象の確率であり、（１−ｐ）は非事象の確率である）。本発明との関連において評価され得る別の連続測定値としては、Ｃｒｙ媒介性の疾患もしくは障害の発症までの期間、またはＣｒｙ媒介性の疾患もしくは障害の異なる病期への進行、例えば、Ｃｒｙ媒介性の疾患もしくは障害の進行もしくは発症、および治療変更リスク低下比が挙げられる。
【０１５８】
本明細書に開示する主題との関連における「リスク評価」または「リスクの評価」には、事象または疾患状態が起こり得る確率、オッズまたは尤度の予測、事象またはある疾患状態から別の疾患状態への変換、すなわち、「正常」状態からＣｒｙ媒介性の疾患または障害の発症リスクのある状態への変換、あるいはリスクのある状態からＣｒｙ媒介性の疾患もしくは障害または再発性疾患もしくは障害の発症への変換の発生率の予測を行なうことが包含される。また、リスク評価には、絶対的観点または以前に測定された母集団を参照にした相対的観点のいずれかでのＣｒｙ媒介性の疾患または障害の他の指標の予測も包含され得る。本発明の方法は、Ｃｒｙ媒介性の疾患または障害への転換リスクの連続測定またはカテゴリー的測定を行ない、したがって、該疾患または障害を発症するリスクがあ
ると定義されるカテゴリーの被験体を診断し、そのリスク範囲を画定するために使用され得る。カテゴリー的シナリオでは、本発明は、正常被験体コホートとリスクのある被験体コホートを識別するために使用され得る。他の実施形態では、本発明は、リスクのある状態が疾患状態と、または疾患状態が正常と識別されるように使用され得る。
【０１５９】
「試料」は、本明細書で用いる場合、被験体から単離された生物学的試料であり、一例として限定されないが、全血、血清、血漿、血球、内皮細胞、組織生検材料、リンパ液、腹水液、間質液（「細胞外液」としても知られており、細胞間の空間内にみられる液、とりわけ、歯肉溝滲出液などが包含される）、骨髄、精液、脳脊髄液（ＣＳＦ）、唾液、粘膜、痰、汗、尿、もしくは任意の他の分泌液、排出液、または他の体液が挙げられ得る。
【０１６０】
「統計学的に有意な」により、改変が偶然だけで起こる（これは「偽陽性」であり得る）と予測され得るものより大きいことを意図する。統計学的有意性は、当該技術分野で知られた任意の方法によって判定され得る。一般的に使用される有意性の測定値としてはｐ値が挙げられ、これは、所与のデータ点を偶然だけの結果であると仮定し、該データ点と少なくとも同程度に極端な結果が得られる確率を表す。結果は、多くの場合、０．０５以下のｐ値で有意性が高いとみなされる。
【０１６１】
Ｃｒｙ媒介性の疾患または障害のリスクは、試料（例えば、被験体由来の試料）における１種類または１種類より多くのクリプトクロムの「作用量」を測定し、該作用量を参照値と比較することにより検出され得、多くの場合、大勢の個体の結果による情報を単一の測定値に統合するために数学的アルゴリズムまたは数式が用いられる。Ｃｒｙ媒介性の疾患または障害のリスクが高いと認定された被験体は、任意選択で、処置レジメンまたは治療的介入、例えば、本明細書において規定した式Ｉの化合物の単独療法として、もしくは１種類または１種類より多くのさらなる治療用薬剤との併用での投与、または外科的介入の実施（この後もしくは前に式Ｉの化合物を、単独もしくはさらなる治療用薬剤あるいは他の治療薬との併用で投与してもよい）を受けるために選択され得る。
【０１６２】
試料中のこのようなクリプトクロムを検出するための方法は多くの応用を有する。例えば、１種類または１種類より多くのクリプトクロムは、Ｃｒｙ媒介性の疾患または障害の診断または予後診断を補助するために測定され得る。別の例では、クリプトクロムの検出方法は、Ｃｒｙ媒介性の疾患または障害の処置に対する被験体の応答をモニタリングするために使用され得る。別の例では、該方法は、インビボまたはインビトロでクリプトクロムの発現をモジュレートする化合物をアッセイし、同定するために使用され得る。
【０１６３】
本発明は、Ｃｒｙ媒介性の疾患または障害への転換リスクの連続測定またはカテゴリー的測定を行ない、したがって、該疾患または障害を発症するリスクがあると定義されるカテゴリーの被験体を診断し、そのリスク範囲を画定するために使用され得る。カテゴリー的シナリオでは、本発明の方法は、正常被験体コホートとリスクのある被験体コホートを識別するために使用され得る。他の実施形態では、本発明は、リスク有が疾患と、または疾患が正常と識別されるように使用され得る。かかる種々の使用では、個々のパネルもしくはプロフィール、数学的アルゴリズムおよび／またはカットオフ点において異なる組合せが必要とされ得るが、意図される使用のための前述の同じ測定精度に供され得る。
【０１６４】
リスクのある被験体の認定により、該被験体のＣｒｙ媒介性の疾患または障害への転換を遅延、低減または予防するための種々の治療的介入または処置レジメンの選択および開始が可能となる。また、クリプトクロムタンパク質、核酸、多型、代謝産物または他の解析物の作用量レベルによっても処置過程をモニタリングすることが可能である。この方法では、Ｃｒｙ媒介性の疾患または障害の処置レジメン（例えば、治療的処置）を受けている被験体から生物学的試料が採取され得る。かかる処置レジメンとしては、限定されない
が、外科的介入およびＣｒｙ媒介性の疾患または障害と診断または認定された被験体に使用される治療用薬剤（例えば、本明細書に記載の式Ｉの化合物）での処置が挙げられ得る。所望により、生物学的試料を被験体から、処置前、処置中または処置後の種々の時点で採取する。例えば、被験体のクリプトクロムプロフィールと参照クリプトクロムプロフィールとの比較による疾患状態の判定は１回より多く反復され得、この場合、被験体のプロフィールは、該方法を反復した各時点で採取された別々の試料から得られるものであり得る。試料は被験体から、規則的な時間間隔（例えば、４時間、８時間、１２時間、２４時間、４８時間、７２時間など）で採取してもよく、当業者によって行なわれ得る任意の適当な時間間隔で採取してもよい。
【０１６５】
被験体の遺伝子構成の違いにより、Ｃｒｙ媒介性の疾患または障害の症状またはリスクファクターをモジュレートし得る種々の薬物を代謝する相対能力に差が生じ得る。Ｃｒｙ媒介性の疾患もしくは障害を有する被験体、またはＣｒｙ媒介性の疾患もしくは障害を発症するリスクがある被験体は、年齢、人種および他のパラメータが種々であり得る。したがって、薬物代謝に対する本明細書において規定した１種類または１種類より多くのクリプトクロムの作用量を、単独および既知の遺伝的要素との組合せと一緒の両方で測定することにより、選択された被験体で試験される推定治療薬または予防薬が、該被験体においてＣｒｙ媒介性の疾患または障害の処置または予防に適しているという所定のレベルの予測が可能となる。
【０１６６】
また、具体的な被験体に適切な治療用薬剤または薬物を同定するため、該被験体由来の試験試料を治療用薬剤または薬物に曝露し、クリプトクロムのタンパク質、核酸、多型、スプライスバリアント、代謝産物または他の解析物のうちの１種類または１種類より多くのレベルまたは活性を調べてもよい。また、１種類または１種類より多くのクリプトクロム（例えば、Ｐｅｒ１、Ｐｅｒ２、ＧＲ、ＣＬＯＣＫ−ＢＭＡＬ１プロモーターなど）に影響されるか、または直接もしくは間接的に結合する他の遺伝子またはタンパク質を測定してもよい。１種類または１種類より多くのクリプトクロムのレベルは、Ｃｒｙ媒介性の疾患もしくは障害に関する被験体のマネージメント、例えば、治療用薬剤もしくは薬物での処置もしくは曝露の前および後の被験体由来の試料と比較され得るか、またはかかる処置もしくは曝露の結果としてリスクファクターの改善が示された１例または１例より多くの被験体に由来する試料と比較され得る。
【０１６７】
核酸は試料から、当業者に知られた多くの様式で、例えば、抽出法（例えば、溶媒抽出など）、アフィニティー精製および遠心分離で採取され得る。また、選択的沈降によっても核酸が精製され得る。また、クロマトグラフィー法、例えば、ゲル濾過、イオン交換、選択的吸着または親和性結合も使用され得る。核酸は、例えば、ＲＮＡ、ＤＮＡであってもよく、ｃＤＮＡに合成してもよい。核酸は、当該技術分野でよく知られたマイクロアレイ手法（例えば、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘアレイ）、続いて多次元尺度構成手法を用いて検出され得る。Ｒ．Ｅｋｉｎｓ，Ｒ．およびＣｈｕ，Ｆ．Ｗ．（１９９９）Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１７：２１７−２１８；Ｄ．Ｄ．Ｓｈｏｅｍａｋｅｒら，（２００１）Ｎａｔｕｒｅ  ４０９（６８２２）：９２２−９２７ならびに米国特許第５，７５０，０１５号参照。
【０１６８】
所望により、試料は、１種類または１種類より多くのクリプトクロムの検出可能性が向上するように、例えば予備分別によって調製され得る。予備分別の方法としては、例えば、Ｃｉｂａｃｒｏｎ  ｂｌｕｅアガロースクロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、ヘパリンクロマトグラフィー、レクチンクロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、一本鎖ＤＮＡアフィニティークロマトグラフィー、逐次抽出、ゲル電気泳動および液体クロマトグラフィーが挙げられる。また、解析物を検出前に修飾してもよい。試料は、多量に存在するタンパク質または試料中
の目的分子の検出を妨げ得るタンパク質を除去することにより予備分別され得る。例えば、血清試料中には、血清アルブミンが多量に存在し、１種類または１種類より多くのクリプトクロムの解析を不明瞭にし得る。したがって、血清試料は、例えば、血清アルブミンに特異的に結合する吸着剤を備えた基材を用いて血清アルブミンを除去することにより予備分別され得、アフィニティーカラムまたは抗血清アルブミン抗体が使用され得る。
【０１６９】
他の実施形態では、試料中の目的分子が高分解能電気泳動、例えば、一次元または二次元ゲル電気泳動によって分離され得る。画分を単離し、気相イオン分光法によってさらに解析してもよい。好ましくは、二次元ゲル電気泳動を使用し、１種類または１種類より多くのクリプトクロムを含むスポットの二次元アレイを作製する。例えば、ＪｕｎｇｂｌｕｔおよびＴｈｉｅｄｅ，（１９９７）Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒ．Ｒｅｖ．１６：１４５−１６２を参照のこと。二次元ゲル電気泳動は、当該技術分野で知られた方法を用いて行なわれ得る。例えば、Ｄｅｕｔｓｃｈｅｒ編，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  第１８２巻を参照のこと。典型的には、試料は、例えば等電点電気泳動法によって分離され得、この間、試料中の１種類または１種類より多くのクリプトクロムがｐＨ勾配で、正味電荷がゼロになるスポット（すなわち、等電点）に達するまで分離される。この第１分離工程により一次元アレイが得られる。一次元アレイ内の分子を、一般的には第１分離工程に使用したものと相違する手法を用いてさらに分離する。例えば、二次元目では、等電点電気泳動法によって分離した目的分子をポリアクリルアミドゲルを用いて、例えば、ドデシル硫酸ナトリウムの存在下でのポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）を用いてさらに分離する。ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルにより、分子量に基づいたさらなる分離が可能となる。典型的には、二次元ゲル電気泳動により、複雑な混合物中の１０００〜２００，０００Ｄａの分子量範囲の化学的に異なる目的分子が分離され得る。
【０１７０】
二次元アレイ内の目的分子は、当該技術分野で知られた任意の適当な方法を用いて検出され得る。例えば、ゲル中の目的分子を標識または染色してもよい（例えば、クマシーブルーもしくは銀染色）。ゲル電気泳動によって本発明の１種類または１種類より多くのクリプトクロムの分子量に対応するスポットが得られたら、該スポットは切り出され、例えば、気相イオン分光法、質量分析または高速液体クロマトグラフィーによってさらに解析され得る。あるいはまた、目的分子を含むゲルを、電界を負荷することによって不活性膜に移してもよい。次いで、ほぼ目的分子の分子量に対応する膜上のスポットは、例えば、気相イオン分光法、質量分析またはＨＰＬＣによって解析され得る。
【０１７１】
任意選択で、目的分子を解析前に、その分解能を改善するため、またはその実体を調べるために修飾してもよい。例えば、試料は、解析前にタンパク質分解性消化に供され得る。任意のプロテアーゼが使用され得る。タンパク質を個々のいくつかの断片に切断し易いプロテアーゼ（トリプシンなど）が特に有用である。消化によって生じた断片は、目的分子のフィンガープリントとしての機能を果たし得、それにより、その間接的検出が可能になる。これは、対象の好ましい分子（すなわちクリプトクロム）と混同し得る同様の分子量を有する目的分子が存在する場合に特に有用である。また、小分子の方がより容易に質量分析によって分離されるため、タンパク質分解性断片化は高分子量分子に有用である。別の例では、該分子は、検出分解能を改善するために修飾され得る。例えば、ノイラミニダーゼを使用して糖タンパク質から末端シアル酸残基を除去すると、アニオン吸着剤（例えば、カチオン交換アレイ）に対する結合が改善され、検出分解能が改善され得る。別の例では、該分子は、別の分子存在体に特異的に結合する特定の分子量のタグを結合することによって修飾すると、該分子はさらに識別され得る。任意選択で、かかる修飾目的分子の検出後、さらに、タンパク質データベース（例えば、ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ）内の修飾型の物理的および化学的特徴とマッチングさせることにより、該分子の実体を調べてもよい。
【０１７２】
基材（例えば、バイオチップまたは抗体）上に捕捉されたら、任意の適当な方法（例えば、本明細書に記載のものならびに当該技術分野で知られた他の方法）を用いて、試料中の１種類または１種類より多くのクリプトクロムが測定され得る。かかる分子のレベルまたは量の実際の測定は、当該技術分野で知られた任意の方法を用いて行なわれ得る。このような方法としては、限定されないが、質量分析（例えば、レーザー脱離／イオン化質量分析）、蛍光（例えば、サンドイッチイムノアッセイ）、表面プラズモン共鳴、偏光解析法および原子間力顕微鏡使用が挙げられる。該方法に、さらに、マイクロアレイ、ＰＣＲ法、質量分析（例えば限定されないが、ＥＳＩ−ＭＳ、ＥＳＩ−ＭＳ／ＭＳ、ＥＳＩ−ＭＳ／（ＭＳ）ｎ、マトリックス支援レーザー脱離イオン化飛行時間型質量分析（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳ）、表面増強レーザー脱離／イオン化飛行時間型質量分析（ＳＥＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳ）、シリコン上での脱離／イオン化（ＤＩＯＳ）、二次イオン質量分析（ＳＩＭＳ）、四重極型飛行時間型（Ｑ−ＴＯＦ）、大気圧化学イオン化質量分析（ＡＰＣＩ−ＭＳ）、ＡＰＣＩ−ＭＳ／ＭＳ、ＡＰＣＩ−（ＭＳ）ｎ、大気圧光イオン化質量分析（ＡＰＰＩ−ＭＳ）、ＡＰＰＩ−ＭＳ／ＭＳ、およびＡＰＰＩ−（ＭＳ）ｎ、四重極型質量分析、フーリエ変換質量分析（ＦＴＭＳ）、ならびにイオントラップ質量分析など）、核酸チップ、ノザンブロットハイブリダイゼーション、ＴＭＡ、ＳＤＡ、ＮＡＳＢＡ、ＰＣＲ、リアルタイムＰＣＲ、逆転写酵素ＰＣＲ、リアルタイム逆転写酵素ＰＣＲ、インサイチュＰＣＲ、質量分析と対にしたクロマトグラフィーによる分離、固定化抗体を用いたタンパク質捕捉、あるいは従来のイムノアッセイのうちの１つまたは１つより多くによるものを含めてもよい。例えば、米国特許第５，７２３，５９１号；同第５，８０１，１５５号および同第６，０８４，１０２号ならびにＨｉｇｕｃｈｉ，１９９２および１９９３を参照のこと。ＰＣＲアッセイは、例えば、マルチウェルプレート形式またはチップ（ＢｉｏＴｒｏｖｅ  ＯＰＥＮ  ＡＲＲＡＹ  Ｃｈｉｐｓ（ＢｉｏＴｒｏｖｅ，Ｗｏｂｕｒｎ，ＭＡ）など）にて行なわれ得る。
【０１７３】
例えば、配列データベースエントリー内のクリプトクロムに相当する配列を使用し、例えば、ノザンブロットハイブリダイゼーション解析または特定の核酸配列を特異的に好ましくは定量的に増幅させる方法においてＲＮＡ配列を検出するためのプローブが構築され得る。別の例として、該配列は、クリプトクロム配列に特異的または選択的にハイブリダイズし、かつかかる配列を、例えば、増幅系検出法（逆転写系ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）など、例えば、定量的リアルタイムＲＴ−ＰＣＲ）にて増幅させるために使用されるプライマーを構築するために使用され得る。遺伝子発現の改変を遺伝子の増幅、欠失、多型および変異と関連させる場合、試験集団と参照集団の配列比較は、被験体の細胞集団と参照細胞集団中の試験対象ＤＮＡ配列の相対量を比較することにより行なわれ得る。本明細書で用いる場合、用語「特異的に（または選択的に）ハイブリダイズする」とは、核酸に言及している場合、核酸の不均一系集団中における当該核酸の存在を決定づける結合反応をいう。したがって、指定されたアッセイ条件下において、明記した核酸プローブ（阻害性核酸を含む）は目的の具体的な核酸に、バックグラウンドの少なくとも２倍結合またはハイブリダイズし得るが、試料中に存在する他の核酸には有意な量で実質的に結合またはハイブリダイズしない。
【０１７４】
クリプトクロムレベルはイムノアッセイによっても測定することができる。抗体は、モノクローナルであってもポリクローナルであってもキメラであっても前述のものの断片であってもよく（本明細書において詳細に論考している）、反応生成物の検出工程は、任意の適当なイムノアッセイを用いて行なわれ得る。抗体に「特異的に（または選択的に）結合する」または「〜と特異的に（または選択的に）免疫反応性である」という語句は、タンパク質またはペプチドに言及している場合、タンパク質および他の生体物質の不均一系集団中における当該タンパク質の存在を決定づける結合反応をいう。したがって、指定されたイムノアッセイ条件下において、明記した抗体は具体的なタンパク質に、バックグラウンドの少なくとも２倍結合するが、試料中に存在する他のタンパク質には有意な量で実
質的に結合しない。かかる条件下での抗体に対する特異的結合には、具体的なタンパク質に対するその特異性で選択される抗体が必要とされ得る。例えば、特定の種、例えば、ラット、マウスまたはヒトに由来するクリプトクロムに対して生成させるポリクローナル抗体は、該クリプトクロムと特異的に免疫反応性であるが、他のタンパク質（クリプトクロムの多型バリアントおよび対立遺伝子を除く）とはそうでないポリクローナル抗体のみが得られるように選択され得る。この選択は、他の種に由来するクリプトクロムと交差反応する抗体を除くことにより行なわれ得る。
【０１７５】
本発明に従って行なわれるイムノアッセイは均一系アッセイであっても不均一系アッセイであってもよい。均一系アッセイでは、免疫反応は、通常、特異的抗体（例えば、抗クリプトクロムタンパク質抗体）、標識解析物および対象試料を伴う。該標識から生じたシグナルは、該抗体が標識解析物に結合すると直接または間接的に修飾される。免疫反応およびその程度の検出はどちらも均一系溶液中で行なわれ得る。使用され得る免疫化学的標識としては、フリーラジカル、放射性同位体、蛍光色素、酵素、バクテリオファージまたは補酵素が挙げられる。
【０１７６】
不均一系アッセイアプローチでは、試薬は通常、試料、抗体、および検出可能なシグナルを生成する手段である。上記の試料が使用され得る。抗体は支持体上、例えば、ビーズ（プロテインＡおよびプロテインＧアガロースビーズなど）、プレートまたはスライド上に固定化され、抗原を含んでいると思われる被検物と液相中で接触させ得る。次いで、支持体を液相から分離し、支持体相または液相のいずれかを、かかるシグナルを生成する手段を用いて検出可能なシグナルについて調べる。シグナルは、試料中における解析物の存在と関連している。検出可能なシグナルを生成する手段としては、検出可能な標識の使用が挙げられる。例示的な検出可能な標識としては、磁気ビーズ（例えば、ＤＹＮＡＢＥＡＤＳ（商標））、蛍光色素、酵素（例えば、ホースラディッシュペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼおよびＥＬＩＳＡに一般的に使用される他のもの）、放射性標識（例えば、３５Ｓ、１２５Ｉ、１３１Ｉ）、ならびに蛍光標識（例えば、フルオレセイン、Ａｌｅｘａ、緑色蛍光タンパク質、ローダミン）ならびに比色標識、例えば、コロイド金または色ガラスまたはプラスチックビーズが挙げられる（既知の手法に従う）。
【０１７７】
あるいはまた、試料中の目的分子は間接アッセイを用いて（この場合、例えば、標識二次抗体を用いてクリプトクロム−特異的抗体結合体を検出する）、および／または競合もしくは阻害アッセイにて（この場合、例えば、クリプトクロムの相違するエピトープに結合するモノクローナル抗体を混合物とともに同時にインキュベートする）検出され得る。例えば、検出対象の抗原が第２の結合部位を含む場合、該部位に結合する抗体が検出可能な基にコンジュゲートされ、分離工程の前に該液相反応溶液に添加され得る。固相支持体上の検出可能な標識の存在は試験試料中における抗原の存在を示す。抗体−抗原複合体の量または存在の測定方法としては、例えば、蛍光、発光、化学発光、吸光度、反射率、透過率、複屈折または屈折率の検出（例えば、表面プラズモン共鳴、偏光解析法、共振ミラー法、格子カプラ導波路（ｇｒａｔｉｎｇ  ｃｏｕｐｌｅｒ  ｗａｖｅｇｕｉｄｅ）法または干渉分光法）が挙げられる。光学方法としては、顕微鏡使用（共焦点および非共焦点の両方）、イメージング法ならびに非イメージング法が挙げられる。電気化学的方法としては、ボルタンメトリーおよびアンペロメトリー法が挙げられる。ラジオ周波数法としては多重極共鳴分光法が挙げられる。適当なイムノアッセイの例としては、限定されないが、イムノブロッティング（例えば、ウエスタンブロッティング、スロットブロットアッセイ）、免疫沈降、免疫蛍光法、化学発光法、電気化学発光（ＥＣＬ）または酵素結合イムノアッセイ、例えば、酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）およびラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）が挙げられる。一般的に、Ｅ．Ｍａｇｇｉｏ，Ｅｎｚｙｍｅ−Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ，（１９８０）（ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，Ｆｌａ．）を参照のこと；また、米国特許第４，７２７，０２２号；同第４，６５９，６７８号；同
第４，３７６，１１０号；同第４，２７５，１４９号；同第４，２３３，４０２号；および同第４，２３０，７６７号も参照のこと。また、これらの方法は、例えば、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｉｎ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，第３７巻（Ａｓａｉ編  １９９３）；Ｂａｓｉｃ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｓｔｉｔｅｓ  ＆  Ｔｅｒｒ編，第７版  １９９１）；およびＨａｒｌｏｗ  ＆  Ｌａｎｅ（上掲）にも記載されている。これらはすべて、引用により本明細書に組み込まれる。
【０１７８】
イムノアッセイは、試料中の１種類または１種類より多くのクリプトクロムの有無ならびに試料中のその量を調べるために使用され得る。抗体−マーカー複合体の量は標準と比較することにより測定され得る。標準は、例えば、既知の化合物または試料中に存在することがわかっている別のタンパク質であり得る。上記のように、測定単位が対照と比較され得る限り、１種類または１種類より多くのクリプトクロムの試験量を絶対単位で測定する必要はない。
【０１７９】
タンパク質は、多くの場合、検出可能に異なる質量を特徴とする複数の異なる形態で試料中に存在している。このような形態は、翻訳前修飾および翻訳後修飾のいずれかまたは両方に起因し得る。翻訳前修飾形態としては、対立遺伝子バリアント、スプライス（ｓｌｉｃｅ）バリアントおよびＲＮＡエディティング形態が挙げられる。翻訳後修飾形態としては、タンパク質分解性切断（例えば、親タンパク質の断片）、グリコシル化、リン酸化、脂質化、酸化、メチル化、シスチニル化、スルホン化およびアセチル化により生じる形態が挙げられる。また、抗体もタンパク質の翻訳後修飾、ポリペプチド、変異および多型、例えば、チロシンのリン酸化、トレオニンのリン酸化、セリンのリン酸化、グリコシル化（例えば、Ｏ−ＧｌｃＮＡｃ）の検出に有用であり得る。かかる抗体は、目的のタンパク質（１種類または複数種）中のリン酸化アミノ酸を特異的に検出するものであり、本明細書に記載のイムノブロッティング、免疫蛍光法およびＥＬＩＳＡアッセイに使用され得る。このような抗体は当業者によく知られており、市販されている。また、翻訳後修飾は、リフレクターマトリックス支援レーザー脱離イオン化−飛行時間型質量分析（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ）でメタステーブルイオンを用いて調べることもできる（Ｗｉｒｔｈ，Ｕ．ら、（２００２）Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ  ２（１０）：１４４５−５１）。特定のタンパク質およびそのすべての修飾形態を含むタンパク質の集合体を、本明細書では「タンパク質クラスター」と称する。特定のタンパク質のすべての修飾形態の集合体（特定の該タンパク質そのものは除く）を、本明細書では「修飾タンパク質クラスター」と称する。また、いずれかのクリプトクロムの修飾形態も、それ自体が本明細書に開示する方法に使用され得る。一部の特定の場合では、修飾形態は、本明細書に示した具体的な形態よりも診断においてより良好な識別力を示すことがあり得る。修飾形態は、当該技術分野で知られた任意の方法論によって最初に検出され得る。
【０１８０】
あるいはまた、クリプトクロムタンパク質および核酸の代謝産物を測定してもよい。用語「代謝産物」には、代謝プロセスの任意の化学的または生化学的生成物、例えば、生体分子（例えば、タンパク質、核酸、糖質または脂質）のプロセッシング、切断または消費によって生じる任意の化合物が包含される。代謝産物は、当業者に知られたさまざまな様式で、例えば、屈折率分光法（ＲＩ）、紫外分光法（ＵＶ）、蛍光解析、放射化学的解析、近赤外線分光法（近−ＩＲ）、核磁気共鳴分光法（ＮＭＲ）、光散乱解析（ＬＳ）、質量分析、熱分解質量分析、比濁法、分散ラマン分光法、ガスクロマトグラフィーと質量分析の併用、液体クロマトグラフィー（例えば、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ））（これを質量分析と併用してもよい）、マトリックス支援レーザー脱離イオン化−飛行時間型（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ）と質量分析の併用、イオンスプレー分光法と質量分析の併用、キャピラリー電気泳動、イオン移動度分光法、表面増強レーザー脱離／イオン化（ＳＥＬＤＩ）、光学的方法、電気化学的方法、原子間力顕微鏡使用、高周波法、表面プラズ
モン共鳴、偏光解析法、ＮＭＲおよびＩＲ検出で検出され得る（国際特許出願公開公報番号ＷＯ０４／０５６４５６およびＷＯ０４／０８８３０９参照、これらは各々、引用によりその全体が本明細書に組み込まれる）。これとの関連において、他の解析物は、上記の検出方法または当業者に知られた他の方法を用いて測定され得る。例えば、循環カルシウムイオン（Ｃａ２＋）は試料中において、蛍光色素、とりわけＦｌｕｏシリーズのＦｕｒａ−２Ａ、Ｒｈｏｄ−２などを用いて検出され得る。他の代謝産物も、かかる代謝産物を検出するために特異的に設計または個別調整された試薬を用いて同様に検出され得る。
【０１８１】
Ｃｒｙ媒介性の疾患または障害は、１種類または１種類より多くのクリプトクロムの活性、または１種類または１種類より多くのクリプトクロムの標的に対する結合能の変化を伴うことがあり得る。理論に拘束されることを望まないが、クリプトクロムタンパク質は、Ｐｅｒｉｏｄタンパク質Ｐｅｒ１および／またはＰｅｒ２にヘテロ二量体として結合し、次いで、これがＣＬＯＣＫ−ＢＭＡＬ１遺伝子のプロモーター領域に結合し、数多くの代謝プロセスに影響を及ぼし得るフィードバックループにおいて転写抑制を助長すると考えられる。したがって、本発明の方法に従って１種類または１種類より多くのクリプトクロムの作用量を測定することは、Ｐｅｒ１および／またはＰｅｒ２、グルココルチコイド受容体（ＧＲ）、あるいは当業者に知られたＣｒｙの任意の他の結合標的に対するＣｒｙタンパク質の結合能の増大または低減を評価することを伴うものであってもよい。タンパク質−タンパク質相互作用の測定は、当該技術分野で知られた任意の方法、例えば、共免疫沈降、酵母ツーハイブリッドアッセイ、表面プラズモン共鳴、二分子蛍光相補性、タンデムアフィニティー精製、ファージディスプレイ、蛍光偏光／異方性、二重偏光干渉分光法、蛍光相関分光法、蛍光共鳴エネルギー移動などによって容易になり得る。
【０１８２】
また、１種類または１種類より多くのクリプトクロムの活性は、ＤＮＡ配列、すなわちＣＬＯＣＫ−ＢＭＡＬ１遺伝子または１種類または１種類より多くのクリプトクロムによって認識される結合部位を含む他の遺伝子のプロモーター領域に対する結合能の増大または低減によっても測定され得る。「プロモーター」、「プロモーター配列」、または「プロモーター領域」は、細胞内でＲＮＡポリメラーゼに結合し、下流（３’方向）のコード配列の転写を開始し、それによりその発現を制御し得るＤＮＡ配列をいう。本発明の規定の解釈上、プロモーター配列の３’末端には転写開始部位が結合しており、上流（５’方向）に延び、バックグラウンドより上の検出可能なレベルで転写の開始に必要な最小限の数の塩基またはエレメントを含んでいる。プロモーター配列内には、転写開始部位（簡便には、例えばヌクレアーゼＳ１でのマッピングによって規定される）、ならびにＲＮＡポリメラーゼの結合を担うタンパク質結合ドメイン（コンセンサス配列）がみられる。プロモーターは、その全体が天然遺伝子に由来するものであってもよく、天然にみられる種々のプロモーターに由来する種々のエレメントで構成されていてもよく、さらには合成ＤＮＡセグメントを含むものであってもよい。ほとんどの場合、調節配列の厳密な境界は完全には規定されておらず、種々の長さのＤＮＡ断片が同一のプロモーター活性を有し得る。
【０１８３】
ＣＬＯＣＫ−ＢＭＡＬ１プロモーター（またはＣｒｙの結合部位もしくは認識部位を含む任意の他のプロモーター領域）はレポーター遺伝子に「作動可能に連結され」得る。用語「作動可能に連結されている」とは、一方の機能が他方の影響を受けるような単一の核酸断片上における核酸配列同士の連関をいう。例えば、プロモーターは、コード配列の発現に影響を及ぼし得る（すなわち、コード配列が該プロモーターの転写制御下にある）場合、該コード配列と作動可能に連結されている。コード配列は調節配列にセンスまたはアンチセンス方向に作動可能に連結され得る。用語「レポーター遺伝子」は、レポーター遺伝子の効果に基づいて同定され得る同定因子をコードしている核酸を意味しており、この場合、該効果は、対象核酸の遺伝を追跡するため、対象核酸が遺伝した細胞もしくは生物体を認定するため、および／または遺伝子発現の誘導もしくは転写を調べるために使用される。当該技術分野で知られ、使用されているレポーター遺伝子の例としては：ルシフェ
ラーゼ（Ｌｕｃ）、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、アルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ（ＣＡＴ）、β−ガラクトシダーゼ（ＬａｃＺ）、β−グルクロニダーゼ（Ｇｕｓ）などが挙げられる。また、選択可能マーカー遺伝子もレポーター遺伝子とみなされ得る。プロモーター−レポーター遺伝子構築物を、細胞に移入またはトランスフェクトするプラスミドまたは発現ベクター内に含めてもよい。レポーター遺伝子の発現は、遺伝子産物の活性、例えば、上記に例示したレポーター遺伝子を使用する場合は酵素活性を調べることにより検出され得る。
【０１８４】
用語「プラスミド」は、多くの場合、細胞の中央代謝の一部でない遺伝子を担持しており、通常、環状の二本鎖ＤＮＡ分子の形態である染色体外要素をいう。かかる要素は、自己複製配列、ゲノム組み込み配列、ファージまたはヌクレオチド配列であり、線状、環状または超らせん状の一本鎖または二本鎖のＤＮＡまたはＲＮＡであり、任意の供給源に由来するものであり得、その内部ではいくつかのヌクレオチド配列が連接または再結合されて特殊な構成物となっており、該構成物によって、選択された遺伝子産物のためのプロモーター断片およびＤＮＡ配列が適切な３’非翻訳配列とともに細胞内に導入され得る。用語「発現ベクター」は、宿主内への形質転換後、挿入核酸配列の発現が可能となるように設計されたベクター、プラスミドまたは媒体を意味する。ベクターは所望の宿主細胞内に、当該技術分野で知られた方法、例えば、トランスフェクション、エレクトロポレーション、マイクロインジェクション、形質導入、細胞融合、ＤＥＡＥデキストラン、リン酸カルシウム沈降、リポフェクション（リソソーム融合）、遺伝子銃の使用、またはＤＮＡベクター輸送体によって導入され得る。任意の細胞、例えば、原核生物細胞または真核生物細胞がレポーターアッセイの実施に使用され得る。好ましくは、細胞は、細菌細胞、真菌細胞、酵母細胞、線虫細胞、昆虫細胞、魚類細胞、植物細胞、鳥類細胞、動物細胞、および哺乳動物細胞であり得る。細胞は、一次細胞であってもよく、細胞系として連続的に継代培養したものであってもよい。例示的な細胞および細胞系は当業者に知られている。
【０１８５】
１種類または１種類より多くのクリプトクロムがＤＮＡ配列に結合する活性または能力を測定する他の方法としては、クロマチン免疫沈降アッセイ、電気泳動移動度シフトアッセイ、ＤＮＡプルダウンアッセイ、マイクロプレートでの捕捉および検出などが挙げられる。
【０１８６】
次いで、クリプトクロムタンパク質、核酸、多型、代謝産物、もしくは他の解析物の作用量レベル、またはクリプトクロムタンパク質あるいはクリプトクロムタンパク質に直接もしくは間接的に結合する標的の活性が測定され、参照値、例えば、対照被験体もしくは疾患状態が既知の集団、または指標値もしくはベースライン値と比較され得る。参照試料または指標値もしくはベースライン値は、処置に曝露された１例または１例より多くの被験体から採取または誘導したものであってもよく、Ｃｒｙ媒介性の疾患または障害を発症するリスクが低い１例または１例より多くの被験体から採取または誘導したものであってもよく、処置への曝露の結果として疾患のリスクファクターの改善が示された被験体から採取または誘導したものであってもよい。あるいはまた、参照試料または指標値もしくはベースライン値は、処置に曝露されていない１例または１例より多くの被験体から採取または誘導したものであってもよい。例えば、試料は、Ｃｒｙ媒介性の疾患または障害に対する最初の処置、および該処置の進行をモニタリングするための該疾患または障害に対する後続処置を受けた被験体から収集され得る。一部の実施形態では、第１の試料が被験体から第１の期間に、例えば、本明細書において規定した式Ｉの化合物での単独または１種類または１種類より多くのさらなる治療用薬剤との併用のいずれかでの処置の前に採取され、続いて、本明細書に記載の１種類または１種類より多くのクリプトクロム（またはクリプトクロムの標的）が測定または検出され得る。その後、第２の試料が該被験体から第２の期間に、例えば、本明細書において規定した式Ｉの化合物での単独または１種類または１種類より多くのさらなる治療用薬剤との併用のいずれかでの処置の後に採取され、１
種類または１種類より多くのクリプトクロムまたはクリプトクロムの標的が測定され得る。任意の数の試料が処置過程の間に任意の時間間隔で採取され、その有効性が評価され得る。
【０１８７】
また、参照値には、本明細書に開示するものなどの集団試験によるリスク予測アルゴリズムまたはコンピュータ算出指標から誘導される値が含まれ得る。これとの関連における同様の用語は「対照」であり、これは、例えば、正常被験体または非疾患被験体（例えば、Ｃｒｙ媒介性の疾患もしくは障害が検出不可能である場合）における正常被験体の同等試料中に存在するクリプトクロムの平均量または中央量であり得る。対照量は、試験量の測定と同じまたは実質的に同様の実験条件下で測定される。相関には、試験試料中のクリプトクロムの有無および対照における同じ分子の検出頻度が考慮され得る。相関には、疾患状態の判定を容易にするため、かかる要素の両方が考慮され得る。
【０１８８】
また、Ｃｒｙ媒介性の疾患または障害を有していないが、Ｃｒｙ媒介性の疾患または障害を発症することが予測され得ない被験体の参照プロフィールを、本明細書に開示する方法に従って作成してもよい。また、１種類または１種類より多くのクリプトクロムの測定を用いて、Ｃｒｙ媒介性の疾患または障害を有する被験体から得られる「被験体プロフィール」を作成することもできる。被験体プロフィールと参照プロフィールとの比較により、Ｃｒｙ媒介性の疾患または障害を発症するリスクがある被験体が診断または認定され、疾患の進行とともに疾患の進行速度がモニタリングされ、処置モダリティまたは被験体のマネージメントの有効性がモニタリングされ得る。
【０１８９】
本発明の参照プロフィールおよび被験体プロフィールは、機械可読媒体、例えば限定されないが、とりわけ、アナログまたはデジタルテープ（ＶＣＲによって可読のものなど）、ＣＤ−ＲＯＭ、ＤＶＤ−ＲＯＭ、ＵＳＢフラッシュ媒体に内包され得る。また、かかる機械可読媒体にさらなる試験結果、例えば限定されないが、臨床パラメータの測定値および従来の実験によるリスクファクターを内包してもよい。あるいはまたさらに、機械可読媒体に被験体の情報、例えば、病歴および任意の関連家族暦を含めてもよい。また、機械可読媒体に他のリスクアルゴリズムおよびコンピュータ算出指標（本明細書に記載のものなど）に関する情報を内包してもよい。
【０１９０】
本明細書に開示する任意の方法において、試料のデータを、検出手段から診断アルゴリズムが内包されたコンピュータに直接送ってもよい。あるいはまた、得られたデータを、診断アルゴリズムが内包された別々のコンピュータに手作業で、または自動手段によって送ってもよい。したがって、本発明の実施形態には、クリプトクロムの検出をＣｒｙ媒介性の疾患または障害の予想診断と相関させることを伴う方法が包含される。相関には、対照量（クリプトクロムの上方調節または下方調節）（例えば、Ｃｒｙ媒介性の疾患または障害が検出不可能である正常被験体のもの）と比較した試料中の１種類または１種類より多くのクリプトクロムの量が考慮され得る。相関には、試験試料中のクリプトクロムの有無および対照における同じ分子の検出頻度が考慮され得る。相関には、被験体がＣｒｙ媒介性の疾患または障害を有するか否かの判定を容易にするため、かかる要素の両方が考慮され得る。
【０１９１】
データ解析には、検出されたマーカーのシグナル強度（例えば、ピーク高さ）を測定する工程および「外れ値」（所定の統計学的分布からそれるデータ）を除く工程が含まれ得る。観測されたピークは正規化され得る（なんらかの参照に相対的な各ピーク高さを計算するプロセス）。例えば、参照は、機器および化学物質（例えば、エネルギー吸収性分子）によって生じるバックグラウンドノイズであり得、これを、目盛りゼロとして設定する。各目的分子で検出されたシグナル強度は相対強度の形態で、所望の目盛り（例えば、１００）で表示され得る。あるいはまた、標準（例えば、血清タンパク質）を、検出された
各目的分子で観測されたシグナルの相対強度を計算するための参照として標準のピークが使用され得るように、試料とともに許容してもよい。
【０１９２】
得られたデータを、表示のために種々の形式に変換（“ｔｒａｎｓｆｏｒｍ”または“ｃｏｎｖｅｒｔ”）してもよい。「スペクトルビューまたは保持物質マップ（ｓｐｅｃｔｒｕｍ  ｖｉｅｗ  ｏｒ  ｒｅｔｅｎｔａｔｅ  ｍａｐ）」と称される形式の一例では、標準スペクトルビューが表示され得、この場合、該ビューには、検出器に到達した分子の量が具体的な各分子量において示される。「ピークマップ」と称される別の形式では、ピーク高さと質量情報のみがスペクトルビューで保持され、よりクリアな画像が得られ、ほぼ同一の分子量を有する目的分子をより容易に視認することが可能である。「ゲルビュー」と称されるまた別の形式では、ピークビューでの各質量が各ピークの高さに基づいてグレースケール画像に変換され得る。電気泳動のゲル上のバンドと同様の外観が得られる。「３Ｄオーバーレイ」と称されるまた別の形式では、いくつかのスペクトルをオーバーレイし、相対ピーク高さの微妙な変化が試験され得る。「ディファレンスマップビュー」と称されるまた別の形式では、２つまたは２つより多くのスペクトルが比較され、試料間で上方調節または下方調節された特殊な目的分子が簡便に強調表示され得る。任意の２つの試料のプロフィール（スペクトル）が視覚的に比較され得る。また別の形式では、Ｓｐｏｔｆｉｒｅ  Ｓｃａｔｔｅｒ  Ｐｌｏｔが使用され得、この場合、検出対象の目的分子がプロット内の点としてプロットされ、ここで、プロットの一方の軸は検出されたクリプトクロムの見かけ分子量を表し、他方の軸は、検出されたクリプトクロムのシグナル強度を表す。各試料について、検出された目的分子と試料中に存在する該分子の量がコンピュータ可読媒体に保存され得る。このデータは次いで、対照または参照プロフィールまたは参照値（例えば、対照、例えば、Ｃｒｙ媒介性の疾患または障害が検出不可能である被験体で検出された分子のプロフィールまたは量）と比較され得る。
【０１９３】
本明細書に開示する方法において得られたデータは、分類モデルを使用するパターン認識プロセスを用いて分類され得る。一部の実施形態では、「既知試料」などの試料を用いて得られたデータが、次いで、分類モデルを「トレーニング」するために使用され得る。「既知試料」は事前に分類された試料である（例えば、疾患または疾患なし）。既知試料を用いて得られたデータは、次いで、分類モデルを「トレーニング」するために使用され得る。「既知試料」は事前に分類された試料である。該データは分類モデルの形成に使用され得、「トレーニングデータセット」と称され得る。トレーニングしたら、分類モデルにより、未知試料を用いて得られたデータのパターンが認識され得る。次いで、分類モデルは、未知試料を緒類型に分類するために使用され得る。これは、例えば、具体的な生物学的試料が特定の生物学的状態と関連しているか否かの予測に有用であり得る（例えば、疾患状態対非疾患状態）。分類モデルを形成するために使用されるトレーニングデータセットは、未加工データを含むものであっても前処理データを含むものであってもよい。一部の実施形態では、未加工データが飛行時間型スペクトルまたは質量スペクトルから直接得られ得、次いで任意選択で、任意の適当な様式で「前処理」され得る。このようなものなどの前処理工程は、分類モデルのトレーニングに使用されるデータ量を減らすために使用され得る。
【０１９４】
分類モデルは、大量のデータを該データ内に存在する目的パラメータに基づいた緒類型に分離することを試みる任意の適当な統計分類（または「学習」）方法を用いて形成され得る。分類方法は、教師付きまたは教師なしのいずれかであり得る。教師付きおよび教師なし分類法の例は、Ｊａｉｎ，“Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ  Ｐａｔｔｅｒｎ  Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ：Ａ  Ｒｅｖｉｅｗ”，ＩＥＥＥ  Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ  ｏｎ  Ｐａｔｔｅｒｎ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ａｎｄ  Ｍａｃｈｉｎｅ  Ｉｎｔｅｌｌｉｇｅｎｃｅ，第２２巻，第１号，２０００年１月（これは、引用によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されている。教師付き分類では、既知カテゴリーの例を含むトレーニングデ
ータが学習機構に提示され、該機構で、各既知類型を規定するもう１つの組の関係が学習される。次いで新たなデータが学習機構に適用され得、次いで、この新たなデータが学習された該関係を用いて分類される。
【０１９５】
教師付き分類法の例としては、線形回帰法（例えば、多重線形回帰（ＭＬＲ）、部分的最小二乗法（ＰＬＳ）回帰および主成分回帰（ＰＣＲ））、二分決定木（例えば、再帰分割法、例えば、ＣＡＲＴ−分類および回帰木）、人工ニューラルネットワーク、例えば、誤差逆伝播ネットワーク、判別分析（例えば、ベイジアン分類器またはフィッシャー解析）、ロジスティック分類器、ならびにサポートベクター分類器（サポートベクターマシン）が挙げられる。好ましい教師付き分類方法は再帰分割法である（米国特許出願公開公報第２００２０１３８２０８号）。教師なし分類は、トレーニングデータセットを導き出したスペクトルを事前に分類せずにトレーニングデータセット内の類似性に基づいて分類を学習することを試みるものである。教師なし学習方法としてはクラスター分析が挙げられる。クラスター分析は、データを、理想的には互いに非常に類似しており、かつ他のクラスターの構成員とは非常に非類似である構成員を有するものであるのがよい「クラスター」または群に分けることを試みるものである。次いで、なんらかの距離計量（これによりデータ項目間の距離が測定される）を用いて類似性を調べ、互いに近いデータ項目をまとめてクラスター化する。クラスター化手法としては、ＭａｃＱｕｅｅｎのＫ平均法アルゴリズムおよびＫｏｈｏｎｅｎの自己組織化マップアルゴリズムが挙げられる。生物学的情報の分類における使用に主張される学習アルゴリズムは、例えば、国際特許出願公開公報番号ＷＯ０１／３１５８０ならびに米国特許出願公開公報第２００２０１９３９５０号、同第２００３０００４４０２号、および同第２００３００５５６１５号に記載されている。別の分類方法は、非線形型のＵｎｉｆｉｅｄ  Ｍａｘｉｍｕｍ  Ｓｅｐａｒａｂｉｌｉｔｙ  Ａｎａｌｙｓｉｓ（「ＵＳＭＡ」）分類器を使用する多変量予測モデルを伴うものである。ＵＳＭＡ分類器の詳細は米国特許出願公開公報第２００３００５５６１５号に記載されている。
【０１９６】
他の分類アルゴリズムおよび式としては、限定されないが、とりわけ、主成分分析（ＰＣＡ）、相互相関、因子軸の回転、ロジスティック回帰（ＬｏｇＲｅｇ）、線形判別分析（ＬＤＡ）、Ｅｉｇｅｎｇｅｎｅ線形判別分析（ＥＬＤＡ）、ランダムフォレスト（ＲＦ）、再帰的分割木（ＲＰＡＲＴ）、ならびに他の関連決定木分類手法、Ｓｈｒｕｎｋｅｎ
Ｃｅｎｔｒｏｉｄｓ（ＳＣ）、ＳｔｅｐＡＩＣ、Ｋ近傍法、ブースティング、決定木、ニューラルネットワーク、ベイジアンネットワーク、サポートベクターマシン、一個抜き（ＬＯＯ）、１０分割交差検証（１０分割ＣＶ）、および隠れマルコフモデルが挙げられる。
【０１９７】
また、１種類または１種類より多くのクリプトクロムの検出および相関を、ソフトウェアパッケージ、例えば、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍａｔｈｓ，ＧｅｎＥｘｐｌｏｒｅ（商標）、二元配置クラスター分析、主成分分析、判別分析、自己組織化マップ；ＢｉｏＤｉｓｃｏｖｅｒｙ，Ｉｎｃ．，Ｌｏｓ  Ａｎｇｅｌｅｓ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ（ＩｍａＧｅｎｅ（商標）、特殊画像処理およびデータ抽出ソフトウェア（ＭａｔＬａｂ（登録商標）に装備）；ＧｅｎｅＳｉｇｈｔ：階層的クラスター分析、人工ニューラルネットワーク（ＳＯＭ）、主成分分析、時系列；ＡｕｔｏＧｅｎｅ（商標）；ＣｌｏｎｅＴｒａｃｋｅｒ（商標））；ＧｅｎｅＤａｔａ  ＡＧ（Ｂａｓｅｌ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）；ＭＩＴのＷｈｉｔｅｈｅａｄ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｃｅｎｔｅｒの分子パターン認識ウェブサイト；Ｒｏｓｅｔｔａ  Ｉｎｐｈａｒｍａｔｉｃｓ，Ｋｉｒｋｌａｎｄ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ．Ｒｅｓｏｌｖｅｒ（商標）発現データ解析システム；Ｓｃａｎａｌｙｔｉｃｓ，Ｉｎｃ．，Ｆａｉｒｆａｘ，ＶＡなどの任意の適当な手段を用いて解析してもよい。そのＭｉｃｒｏＡｒｒａｙ  Ｓｕｉｔｅにより、研究者が遺伝子発現マイクロアレイデータを取得、可視化、処理および解析することが可能であり；ＴＩＧＲ（Ｔｈｅ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｆ
ｏｒ  Ｇｅｎｏｍｅ
Ｒｅｓｅａｒｃｈ）はアレイ解析のためのソフトウェアツールを提供している。例えば、ＥｉｓｅｎおよびＢｒｏｗｎ，（１９９９）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．３０３：１７９−２０５も参照のこと。
【０１９８】
疾患状態の認定方法の一部の特定の実施形態において、該方法は、さらに、疾患または障害の状態に基づいて被験体の臨床処置をマネージメントまたは修正することを含む。例えば、本発明の方法の結果が確定的でないか、または状態の確認が必要な理由が存在する場合、医師は、さらなる検査（例えば、ＣＴスキャン、ＰＥＴスキャン、ＭＲＩスキャン、ＰＥＴ−ＣＴスキャン、Ｘ線、生検、血液検査を命じてもよい。あるいはまた、状態によって処置が適切であることが示唆される場合、医師は被験体に処置を予定してもよい。他の場合では、被験体は手術の代わりに、または手術に加えてのいずれかで治療的処置（治療用薬剤（例えば、本明細書において規定した式Ｉの化合物などの単独もしくは１種類または１種類より多くのさらなる治療用薬剤との併用のいずれかでの投与など）を受けてもよい。さらなる対応を保証しなくてもよい。さらに、結果により処置が好成績であることが示された場合、維持療法を必要としてもよく、さらなるマネージメントを必要としなくてもよい。
【０１９９】
また、本明細書に開示する主題により、被験体の臨床処置後に再度クリプトクロムを測定するかかる方法を提供する。このような場合では、該方法は、Ｃｒｙ媒介性の疾患または障害の状態、例えば、処置に対する応答、該疾患の寛解または該疾患の進行をモニタリングするために使用される。該方法は、医師が処置過程の有効性を追跡することが可能となるように、被験体が受ける各処置後に反復され得る。結果により処置が有効でないことが示された場合、処置過程はそれに応じて変更され得る。
【０２００】
本発明は、疾患状態を認定するため、および／または疾患を検出もしくは診断するためのキットを提供し、該キットは、１種類または１種類より多くのクリプトクロムを検出するために使用され得る。例えば、該キットは、本明細書に記載のクリプトクロムのうちの任意の１種類または１種類より多くを検出するために使用され得、該１種類または１種類より多くのクリプトクロムは疾患被験体と正常被験体の試料中で差異的に存在している。本発明のキットは多くの用途を有する。例えば、該キットは、本明細書に記載の本発明の方法のうちのいずれか１つにおいて、例えば、とりわけ、被験体がＣｒｙ媒介性の疾患もしくは障害を有するかどうか、または陰性診断を有するかどうかを区別するため、したがって診断を補助するために使用され得る。別の例では、該キットは、１種類または１種類より多くのクリプトクロムの発現をモジュレートする化合物、１種類または１種類より多くのクリプトクロムの活性をモジュレートする（すなわち、１種類または１種類より多くのクリプトクロムの標的、例えば、Ｐｅｒ１、Ｐｅｒ２、グルココルチコイド受容体（ＧＲ）、またはクリプトクロムによって認識されるプロモーター配列（ＣＬＯＣＫ−ＢＭＡＬ１プロモーターなど）もしくは任意の他のプロモーター配列に対する結合能に影響を及ぼす）化合物を、Ｃｒｙ媒介性の疾患または障害のインビトロまたはインビボ動物モデルを使用することにより同定するために使用され得る。別の例では、該キットは、本明細書において規定した１種類または１種類より多くのクリプトクロムタンパク質の標的の結合を確認するために使用され得る。
【０２０１】
本発明のキットは、検出試薬、例えば、１種類または１種類より多くのクリプトクロム核酸の一部に相補的な相同核酸配列（オリゴヌクレオチド配列、プライマーもしくはアプタマー）を有することにより該核酸を特異的に同定する核酸、または１種類または１種類より多くのクリプトクロム核酸にコードされたタンパク質に対する抗体を、一緒にパッケージングされた状態で含むものであり得る。該オリゴヌクレオチドは遺伝子の断片であってもよい。該オリゴヌクレオチドは一本鎖であっても二本鎖であってもよい。例えば、該
オリゴヌクレオチドは、２００、１５０、１００、５０、２５、１０またはそれ以下のヌクレオチド長であり得る。あるいはまた、検出試薬は、１種類または１種類より多くのクリプトクロムタンパク質またはその標的に特異的または選択的に結合する１種類または１種類より多くの抗体であり得る。該キットは、別々の容器内に、核酸または抗体（既に固相マトリックスに結合されているか、またはこれらをマトリックスに結合させるための試薬と別々にパッケージングされているかのいずれか）、対照製剤（陽性および／または陰性）、および／または検出可能な標識（とりわけ、フルオレセイン、緑色蛍光タンパク質、ローダミン、シアニン染料、Ａｌｅｘａ染料、ルシフェラーゼ、放射性標識など）を内包するものであってもよい。アッセイを行なうため、および疾患状態と相関させるための使用説明書（例えば、書面、テープ、ＶＣＲ、ＣＤ−ＲＯＭなど）をキットに含めてもよい。
【０２０２】
例えば、検出試薬は、少なくとも１つの検出部位を形成するために多孔質ストリップなどの固相マトリックス上に固定化され得る。多孔質ストリップの測定領域または検出領域は、核酸を含む複数の部位を含むものであり得る。また、テストストリップに陰性および／または陽性対照の部位を含めてもよい。あるいはまた、対照部位をテストストリップとは別のストリップ上に存在させてもよい。任意選択で、種々の異なる検出部位に種々の量の固定化核酸を含めてもよい（例えば、第１の検出部位には多量、後続の部位には少量）。試験試料を添加したら、検出可能なシグナルを示す部位の数により、試料中に存在するクリプトクロムの量の定量的表示が得られる。検出部位は、好適に検出可能な任意の形状に構成され得、典型的にはテストストリップ幅全体に広がる帯または点の形状である。基材アレイは、例えば固相基材上、例えば、米国特許第５，７４４，３０５号に記載のような「チップ」上に存在させ得る。あるいはまた、基材アレイを、溶液アレイ、例えば、ｘＭＡＰ（Ｌｕｍｉｎｅｘ，Ａｕｓｔｉｎ，ＴＸ）、Ｃｙｖｅｒａ（Ｉｌｌｕｍｉｎａ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）、ＣｅｌｌＣａｒｄ（Ｖｉｔｒａ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ，ＣＡ）および量子ドットモザイク（Ｑｕａｎｔｕｍ  Ｄｏｔｓ’Ｍｏｓａｉｃ）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）にしてもよい。また、該キットに、試料ＤＮＡを増幅させるため、または単離するための試薬および／または酵素を含めてもよい。該キットは、リアルタイムＰＣＲのための試薬、例えば、ＴａｑＭａｎプローブおよび／またはプライマー、ならびに酵素を含むものであり得る。
【０２０３】
一部の実施形態では、キットは：（ａ）上面に吸着剤を備えた基材、該吸着剤は、クリプトクロムを保持するか、あるいはクリプトクロムの結合に適したものである、および（ｂ）試料を該吸着剤と接触させ、該吸着剤によって保持されたクリプトクロムを検出することによりクリプトクロムを検出するための使用説明書を備えたものである。一部の実施形態では、キットは、溶離剤（使用説明書の代替物として、もしくは使用説明書との組合せで）または溶離剤を作製するための使用説明書を備えたものであり得、この場合、吸着剤と溶離剤の組合せにより、気相イオン分光法を用いたクリプトクロムの検出が可能になる。
【０２０４】
他の実施形態では、キットは、上面に吸着剤（例えば、吸着剤で機能性付与された粒子）を備えた第１基材と、上面に第１基材が配置されてプローブが形成され得る第２基材とを備えたものであり得、該プローブは取り外して機械（例えば、気相イオン分光計など）内に挿入され得る。他の実施形態では、キットは単一の基材を備えたものであり得、該基材は、その上面に吸着剤を有するプローブの形態であり、これは、取り外して機械内に挿入され得る。また別の実施形態では、該キットは、さらに予備分別スピンカラム（例えば、Ｃｉｂａｃｒｏｎ  ｂｌｕｅアガロースカラム、抗ＨＳＡアガロースカラム、Ｋ−３０サイズ排除カラム、Ｑ−アニオン交換スピンカラム、一本鎖ＤＮＡカラム、レクチンカラムなど）を備えたものであり得る。別の実施形態では、キットは、（ａ）１種類または１種類より多くのクリプトクロムに特異的に結合する抗体；および（ｂ）検出試薬を備えた
ものである。抗体は、例えば、クリプトクロム遺伝子の遺伝子産物に対して指向される抗体であり得る。
【０２０５】
任意選択で、該キットは、さらに標準または対照の情報を備えていてもよく、それにより、試験試料を対照の情報の標準と比較し、試料中に検出された１種類または１種類より多くのクリプトクロムの試験量がＣｒｙ媒介性の疾患または障害の診断と整合する診断量であるかどうかを判定することができる。
【０２０６】
いくつかのバリエーションを上記において詳細に説明したが、他の修正または追加も可能である。特に、本明細書に示したものに加えてさらなる特長および／またはバリエーションが提供され得る。例えば、上記の実施は、開示した特長の種々の組合せおよび下位の組合せ、および／または上記に開示したいくつかのさらなる特長の組合せおよび下位の組合せに指向され得る。また、本明細書に記載の論理の流れは、望ましい結果を得るために、示した具体的な順序または逐次順序を必要とするものではない。他の実施形態は、特許請求の範囲の範囲に含まれ得るものである。
【実施例】
【０２０７】
実施例
実施例１：化合物の合成の反応スキーム
以下の反応スキーム、反応スキームＩ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ，Ｖ、およびＶＩは、式Ｉの化合物の合成方法を示す。式Ｉの化合物の調製の一般法において、可変部Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、ａおよびｂは、特に記載のない限り、式Ｉの化合物について先に規定したとおりである。本明細書に記載の反応スキームは、示した化合物の多くの調製に使用される方法論の一般説明を示すことを意図したものである。しかしながら、詳細な説明から、使用した調製様式が、本明細書に記載した一般手順からさらに拡張されることは明白であろう。特に、本発明の範囲に含まれる新たな実施例を得るために、本スキームに従って調製される化合物をさらに修飾してもよいことは認識される。以下の化合物に使用した試薬および中間体は、市販されているもの、または標準的な文献の手順に従って有機合成分野の当業者によって調製され得るもののいずれかである。
【０２０８】
以下の反応スキームＩは式Ｉの化合物の合成を示す。適切に置換された式ＩＶの臭化物誘導体を適切な式Ｖのカルバゾールで、適切な溶媒（例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドまたはＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミド）中、およそ０℃〜１５０℃の温度範囲内でおよそ５分間〜２４時間の期間処理すると、対応する式ＩＩＩのオキシラン化合物が得られる。式ＩＶの臭化物化合物を式Ｖのカルバゾールと反応させて式ＩＩＩの化合物を得るための好ましい条件としては、反応をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中、０℃〜室温にて水酸化カリウムの存在下で２０〜２４時間行なった後、抽出操作を行なうことが挙げられる。式ＩＩＩの化合物を適切な式ＩＩのアミドまたは尿素で、適切な溶媒（例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、またはＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミド）中、およそ室温〜１５０℃の温度範囲内でおよそ５分間〜３日間の期間処理すると、対応する式Ｉのアミド化合物または尿素化合物が得られる。式ＩＩＩのオキシラン化合物を反応させて式Ｉの化合物を得るための好ましい条件としては、水素化ナトリウムとの反応をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中で室温にて２０〜２４時間行なった後、抽出操作を行なうことが挙げられる。あるいはまた、式ＩＩＩのオキシラン化合物を式ＩＩのアミドまたは尿素と適切な溶媒（例えば、ジメチルスルホキシド）中、適切な塩基（例えば、カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド）と共に室温で３日間反応させて式Ｉの化合物を得ることができる。
反応スキームＩ
【化５】
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【０２０９】
以下の反応スキームＩＩは、式Ｉの化合物の代替の合成を示す。適切に置換された式ＩＩＩのオキシラン誘導体を適切な式ＶＩＩのジアミンで、適切な溶媒（例えば、エタノール）中、０℃〜１５０℃の温度範囲内でおよそ５分間〜２４時間の期間処理すると、対応する式ＶＩのジアミン化合物が得られる。式ＩＩＩのオキシラン化合物を式ＶＩＩのジアミンと反応させて式ＶＩの化合物を得るための好ましい条件としては、反応をエタノール中、４０℃にて２０〜２４時間行うことが挙げられる。式ＶＩの化合物を適切なカルボニル化剤（例えば、１，１’−カルボニルジイミダゾール）で、適切な溶媒（例えば、テトラヒドロフラン）中、室温にて５分間〜２４時間処理すると、対応する式Ｉの化合物が得られる。
反応スキームＩＩ
【化６】
2019142959.tif 000007
【０２１０】
以下の反応スキームＩＩＩは、式Ｉの化合物の代替の合成を示す。式ＩＩのアミド化合
物または尿素化合物を適切に置換された式ＩＸの臭化物誘導体で、適切な溶媒（例えば、テトラヒドロフラン）中、およそ０℃〜６５℃の温度範囲内でおよそ５分間〜２４時間の期間処理すると、対応する式ＶＩＩＩのオキシラン化合物が得られる。式ＩＸの臭化物化合物を式ＩＩのアミドまたは尿素と反応させて式ＶＩＩＩの化合物を得るための好ましい条件としては、反応をテトラヒドロフラン中、０℃〜室温にて水素化ナトリウムの存在下で２０〜２４時間行った後、抽出操作を行なうことが挙げられる。式ＶＩＩＩの化合物を適切な式Ｖのカルバゾールで、適切な溶媒（例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド）中、０℃〜７０℃の温度範囲内でおよそ５分間〜２４時間の期間処理すると、対応する式Ｉの化合物が得られる。式ＶＩＩＩのオキシラン化合物を式Ｖのカルバゾールと反応させて式Ｉの化合物を得るための好ましい条件としては、反応をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中、室温〜７０℃にて水素化ナトリウムの存在下で２０〜２４時間行って式Ｉの化合物を得ることが挙げられる。
反応スキームＩＩＩ
【化７】
2019142959.tif 000008
【０２１１】
以下の反応スキームＩＶは、式Ｉの化合物の代替の合成を示す。式ＸＩＩＩのＢｏｃ保護アミノ酸化合物をアンモニア、適切なカップリング試薬（例えば、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−Ｏ−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）ウロニウムヘキサフルオロホスフェート）、適切な塩基（例えば、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン）、および適切な溶媒（例えば、ジメチルホルムアミド）で、およそ０℃〜６５℃の温度範囲内でおよそ５分間〜２４時間の期間処理すると、対応する式ＸＩＩのアミド化合物が得られる。式ＸＩＩのＢｏｃ保護アミノアミド化合物を適切な還元剤（例えば、ボラン）で、適切な溶媒（例えば、テトラヒドロフラン）中、およそ０℃〜１００℃の温度範囲内でおよそ５分間〜２４時間の期間処理すると、対応する式ＸＩのＢｏｃ保護ジアミン化合物が得られる。式ＩＩＩのオキシラン化合物を式ＸＩのＢｏｃ保護ジアミンと反応させて式Ｘの化合物を得るための好ましい条件としては、反応をエタノール中、７０℃にて１６〜２４時間行うことが挙げられる。式Ｘの化合物を適切な塩基（例えば、カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド）で、適切な溶媒（例えば、テトラヒドロフラン（ｔｅｔｒａｙｈｄｒｏｆｕｒａｎ）中、およそ０℃〜１００℃の温度範囲内でおよそ５分間〜２４時間の期間処理すると、対応する式Ｉの化合物が得られる。
反応スキームＩＶ
【化８】
2019142959.tif 000009
【０２１２】
以下の反応スキームＶは、式Ｉの化合物の代替の合成を示す。式ＸＶＩのベンジル保護ジアミン化合物を適切なカルボニル化剤（例えば、１，１’−カルボニルジイミダゾール）で、適切な溶媒（例えば、テトラヒドロフラン）中、室温で５分間〜２４時間の期間処理すると、対応する式ＸＶの化合物が得られる。式ＩＩＩのオキシラン化合物を式ＸＶのベンジル保護尿素と反応させて式ＸＩＶの化合物を得るための好ましい条件としては、反応をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中、室温〜７０℃にて水素化ナトリウムの存在下で１６〜２４時間行うことが挙げられる。式ＸＩＶのベンジル保護尿素化合物を１〜５０ｐｓｉ水素で、適切な触媒（例えば、水酸化パラジウム担持炭素）の存在下にて、適切な酸（例えば、酢酸）と共に、適切な溶媒（例えば、テトラヒドロフラン）中、およそ室温〜１００℃の温度範囲内でおよそ５分間〜５日間の期間処理すると、対応する式Ｉの化合物が得られる。
反応スキームＶ
【化９】
2019142959.tif 000010
【０２１３】
以下の反応スキームＶＩは、式Ｉの化合物の代替の合成を示す。適切に置換された式ＸＶＩＩまたはＸＶＩＩＩのキラルオキシラン誘導体を適切な式ＩＩのアミド化合物または尿素化合物で、適切な塩基（例えば、水素化ナトリウム）と共に、適切な溶媒（例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドまたはテトラヒドロフラン）中、０℃〜１５０℃の温度範囲内でおよそ５分間〜２４時間の期間処理すると、対応する式Ｉのキラルアミド化合物または尿素化合物が得られる。
反応スキームＶＩ
【化１０】
2019142959.tif 000011
【０２１４】
以下の反応スキームＶＩＩは、式Ｉの化合物の代替の合成を示す。適切に置換された式ＸＶＩＩまたはＸＶＩＩＩのキラルオキシラン誘導体を適切な式ＶＩＩのジアミンで、適切な溶媒（例えば、エタノール）中、０℃〜１５０℃の温度範囲内でおよそ５分間〜２４時間の期間処理すると、対応する式ＶＩのキラルジアミン化合物が得られる。式ＸＶＩＩ
またはＸＶＩＩＩのオキシラン化合物を式ＶＩＩのジアミンと反応させて式ＶＩの化合物を得るための好ましい条件としては、反応をエタノール中、５５℃で５〜２４時間行うことが挙げられる。式ＶＩの化合物を適切なカルボニル化剤（例えば、１，１’−カルボニルジイミダゾール）で、適切な溶媒（例えば、テトラヒドロフラン）中、室温で５分間〜２４時間の期間処理すると、対応する式Ｉの化合物が得られる。
反応スキームＶＩＩ
【化１１】
2019142959.tif 000012
【０２１５】
本明細書に記載の反応スキームにおいて、式Ｉの化合物の調製に有用な中間体のヒドロキシル基は、必要に応じて、当業者に知られた慣用的な基によって保護され得ることを理解されたい。例えば、ヒドロキシル基を含む中間体は、対応するｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルエーテルとして保護され、続いて、テトラ−ｎ−ブチルアンモニウムフルオリドでの処理によって脱保護され、遊離のヒドロキシル誘導体が得られ得る。好適な保護基およびその除去方法は“Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”，第３版，Ｔ．Ｗ．ＧｒｅｅｎｅおよびＰ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ（Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，１９９９）に例示されている。
【０２１６】
１Ｈ核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトルは、すべての場合で、提示した構造と整合した。特性化学シフト（δ）は、主要ピークの表示のための慣用的な略号：例えば、ｓ，一重線；ｄ，二重線；ｔ，三重線；ｑ，四重線；ｍ，多重線；ｂｒ，ブロードを用いて、テトラメチルシランの低磁場側に１００万分の１分率で示している。質量スペクトル（ｍ／ｚ）は、エレクトロスプレーイオン化（ＥＳＩ）または大気圧化学イオン化（ＡＰＣＩ）のいずれかを用いて記録した。薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）が使用されている場合、これは、シリカゲル６０  Ｆ２５４プレートを用いたシリカゲルＴＬＣを示し、Ｒｆは、ＴＬＣプレート上において化合物が移動した距離を溶媒フロントが移動した距離で除算したものである。ＨＰＬＣは、高速液体クロマトグラフィーを示す。
【０２１７】
以下の具体的な実施例は、例示の目的で含めており、本開示に対する限定と解釈されるべきでない。
【０２１８】
中間体の調製
調製１：２−クロロ−４−フルオロ−Ｎ−（４−フルオロフェニル）アニリン
【化１２】
2019142959.tif 000013
【０２１９】
丸底フラスコに、１−ブロモ−４−フルオロベンゼン（１３．０ｇ，７４．３ｍｍｏｌ）、２−クロロ−４−フルオロアニリン（１１．３５４ｇ，７８．０ｍｍｏｌ）、無水トルエン（２００ｍＬ）、およびカリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（１０．００３ｇ，８９．１ｍｍｏｌ）を仕込んだ。混合物を脱気し、窒素を充填し、次いで、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（２．０４１ｇ，２．２ｍｍｏｌ）およびトリ−ｔｅｒｔ−ブチルホスフィン（０．９０２ｇ，４．５ｍｍｏｌ）を添加し、反応液を窒素下で１００℃にて１６時間撹拌した。冷却した後、混合物を６Ｍ水性塩酸で処理して酸性ｐＨにし、次いで、固体炭酸ナトリウムで調整して塩基性ｐＨに戻した。混合物を乾燥させ（無水硫酸マグネシウム）、セライトに通して濾過し、濾過ケークを酢酸エチルで洗浄した。濾液を濃縮し、残渣をシリカゲルクロマトグラフィーによって精製し（０から２０％までの酢酸エチル／ヘキサン）、黄色がかった油状物を得た（１４ｇ，７９％）。1H  NMR
(300  MHz,  CDCl3):δ  7.14  (dd,  1H,  J  =  8.4,  3.0  Hz),  7.12-6.98  (m,
5H),  6.88  (td,  1H,  J  =  8.7,  3.0  Hz),  5.80  (br  s,  1H).
調製２：３，６−ジフルオロ−９Ｈ−カルバゾール
【化１３】
2019142959.tif 000014
【０２２０】
炭酸カリウム（２６．５２８ｇ，１９１．９ｍｍｏｌ）、２−クロロ−４−フルオロ−Ｎ−（４−フルオロフェニル）アニリン（２３．０ｇ，９６．０ｍｍｏｌ）、トリシクロヘキシルホスホニウムテトラフルオロボレート（３．５３４ｇ，９．６ｍｍｏｌ）、二酢酸パラジウム（１．０７７ｇ，４．８ｍｍｏｌ）、および無水Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（２００ｍＬ）の混合物を、窒素下にて１３０℃で１６時間撹拌した。冷却した後、混合物を濃縮し、残渣を酢酸エチルで処理し、セライトに通して濾過し、濾過ケークを酢酸エチルで洗浄した。濾液を濃縮し、残渣を短いシリカゲルカラムによって精製し（２０から５０％までの塩化メチレン／ヘキサン）、粗製生成物を得た。これをヘキサン−塩化メチレンから再結晶し、純粋な生成物を白色粉末として得た（１７．２ｇ，８８％）。1H
NMR  (300  MHz,  CDCl3):δ  8.00  (br  s,  1H),  7.67  (dd,  2H,  J  =  8.7,  2.7  Hz),  7.36  (dd,  2H,  J  =  8.7,  4.2  Hz),  7.19  (td,  2H,  J  =  9.0,  2.7  Hz).
調製３：９−（オキシラン−２−イルメチル）−９Ｈ−カルバゾール
【化１４】
2019142959.tif 000015
【０２２１】
粉末状水酸化カリウム（３．３６ｇ，６０ｍｍｏｌ）を、カルバゾール（８．３６ｇ，５０ｍｍｏｌ）を含む無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５０ｍＬ）の溶液に添加し、周囲温度で１時間撹拌した。反応混合物を氷浴中で冷却し、エピブロモヒドリン（１０．３ｍＬ，１２５ｍｍｏｌ）を添加した。氷浴を除き、反応液を室温で２０時間撹拌した。混合物を酢酸エチルと水に分配した。有機層を水と飽和水性塩化ナトリウムの溶液で連続的に洗浄し、乾燥させ（無水硫酸ナトリウム）、濾過し、濃縮した。粗製物質をヘキサンを用いて磨砕し、酢酸エチル／ヘキサンで再結晶させ、所望の生成物を白色針状物として得た（６．４１ｇ，５８％収率）。２回目の結晶収集物を母液から晶出させ、さらなる生成物を得た（１．２ｇ，１１％）。1H  NMR  (300  MHz,  CDCl3)  δ  8.11-8.08  (m,
2H),  7.46-7.44  (m,  4H),  7.28-7.25  (m,  2H),  4.68-4.62  (dd,  1H,  J  =  3.1,  15.8  Hz)  4.45-4.38  (dd,  1H,  J  =  4.8,  15.9  Hz),  3.37  (m,  1H),  2.84-2.81  (dd,  1H,  J  =  4.2,  4.3  Hz),  2.60-2.57  (dd,  1H,  J  =  2.5,  5.0  Hz);  HPLC  analysis:  (C18,  5-95%  acetonitrile  in  water  +  0.1%  trifluoroacetic  acid  over  20  min:  retention  time,  %  area  at  254  nm):  7.83
min,  98.7%.
以下の化合物を同様に調製した：
【表１Ａ】
2019142959.tif 000016
【０２２２】
調製４：１−ベンゾイルピロリジン−２−オン
【化１５】
2019142959.tif 000017
【０２２３】
２−ピロリジノン（４．４ｇ，５１．７ｍｍｏｌ，１．０当量）およびトリエチルアミン（１５．４ｍＬ，１１１．２ｍｍｏｌ，２．１当量）を含む無水テトラヒドロフラン（１２０ｍＬ）の０℃の冷溶液に、４−ジメチルアミノピリジン（０．０７５ｇ）および塩化ベンゾイル（６．９ｍＬ，５９．５ｍｍｏｌ，１．１当量）を添加した。得られた混合物を室温で１６時間撹拌した。混合物を水に注入し、酢酸エチルで抽出した。有機画分を０．１Ｍの水性塩酸、飽和水性重炭酸ナトリウム、および飽和水性塩化ナトリウムの各溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空濃縮し、赤色油状物を得た。粗製生成物を、２０から６５％までの酢酸エチルを含むヘキサンのグラジエントで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、オフホワイト色の固形物を得た（５．６３ｇ，５８％）。1H  NMR  (300  MHz,  CDCl3):δ  7.61-7.57  (m,  2H),  7.53-7.47  (tt,  1H,  J  =  1.5,  7.5  Hz),  7.42-7.37  (m,  2H),  3.98-3.94  (t,
2H,  J  =  7.1  Hz),  2.61-2.58  (t,  2H,  J  =  8.0  Hz),  2.20-2.10  (quint,
2H,  J  =  7.5  Hz).ESI  (m/z):190.1  (M+H).
調製５：１−ベンゾイル−３−フルオロピロリジン−２−オン
【化１６】
2019142959.tif 000018
【０２２４】
１−ベンゾイルピロリジン−２−オン（１ｇ，５．３ｍｍｏｌ，１．０当量）を含む無水テトラヒドロフラン（２６ｍＬ）の−７８℃の溶液に、リチウムジイソプロピルアミド（３．３８２ｍＬの２Ｍテトラヒドロフラン溶液、６．８ｍｍｏｌ，１．３当量）を添加し、混合物を−７８℃で３０分間撹拌した。Ｎ−フルオロベンゼンスルホンイミド（２．５ｇ，７．９ｍｍｏｌ，１．５当量）を含む無水テトラヒドロフラン（５ｍＬ）の溶液を−７８℃でゆっくり添加し、反応液を−４０℃で１時間撹拌した。飽和水性炭酸水素ナトリウムを添加し、溶液を室温まで昇温させ、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和水性塩化ナトリウムで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空濃縮し、黄色固形物を得た。粗製生成物を、１５から６０％までの酢酸エチルを含むヘキサンのグラジエントを用いるシリカゲルから溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、白色固形物を得た（０．５９５ｇ，５４％）。1H  NMR  (300  MHz,  CDCl3):δ  7.64-7.61  (m,  2H),  7.57-7.52  (tt,  1H,  J  =  1.5,  7.5  Hz),  7.45-7.39  (m,  2H),  5.28-5.06  (dt,  1H,  J  =  7.8,  51  Hz),  4.15-4.07  (m,  1H),  3.87-3.78
(m,  1H),  2.68-2.56  (m,  1H),  2.45-2.27  (m,  1H).19F  NMR  (282  MHz,  CDCl3):δ  -188.9  to  -189.2  (ddd,  J  =  12.1,  24.2,  51.8  Hz).
調製６：３−フルオロピロリジン−２−オン
【化１７】
2019142959.tif 000019
【０２２５】
１−ベンゾイル−３−フルオロピロリジン−２−オン（０．２８２ｇ，１．４ｍｍｏｌ，１．０当量）を含む無水テトラヒドロフラン（５ｍＬ）の溶液に、オクチルアミン（０．２５９ｍＬ，１．６ｍｍｏｌ，１．１当量）を添加し、反応液を室温で１６時間撹拌した。反応混合物を減圧濃縮し、黄色油状物を得た。粗製生成物を、７０から１００％までの酢酸エチルを含むヘキサンのグラジエントで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、白色固形物を得た（０．１０４ｇ，７４％収率）。1H  NMR  (300
MHz,  CDCl3):δ  7.81  (br  s,  1H),  5.11-4.89  (ddd,  1H,  J  =  6.3,  7.8,
52.8  Hz),  3.49-3.42  (m,  1H),  3.36-3.27  (m,  1H),  2.57-2.41  (m,  1H),  2.34-2.13  (m,  1H).13C    NMR  (75  MHz,  CDCl3):δ  173.5-173.3  (d,  J  =  20
Hz),  89.9-87.4  (d,  J  =  182  Hz),  39.1  (d,  J  =  4  Hz),  28.6-28.4  (d,  J  =  20  Hz).19F  NMR  (282  MHz,  CDCl3):δ  -190.1  to  -190.4  (ddd,  J  =  15,  27,  52  Hz).
調製７：ｔｅｒｔ−ブチル２−オキソピペリジン−１−カルボキシレート
【化１８】
2019142959.tif 000020
【０２２６】
ピペリジン−２−オン（５ｇ，５０．４ｍｍｏｌ，１．０当量）、トリエチルアミン（１４．０２２ｍＬ，１００．９ｍｍｏｌ，２．０当量）、およびＮ，Ｎ−４−ジメチルアミノピリジン（０．１２３ｇ，１．０ｍｍｏｌ）を含む塩化メチレン（１００ｍＬ）の撹拌溶液に０℃で、二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１６．５１２ｇ，７５．７ｍｍｏｌ，１．５当量）を添加した。混合物を室温までゆっくり昇温させ、４８時間撹拌した。反応液を水でクエンチし、有機層を、逐次、１Ｎの水性塩酸、飽和水性重炭酸ナトリウム、および飽和水性塩化ナトリウムで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濾過し、真空濃縮した。残渣を、シリカゲルカラムによって精製し（０から１００％までの酢酸エチル／ヘキサン）、所望の生成物を黄色油状物として得た（８．５ｇ，８５％）。1H  NMR  (300  MHz,  CDCl3):δ  3.72-3.62  (m,  2H),  2.58-2.48  (m,  2H),  1.90-1.78
(m,  4H),  1.55  (s,  9H).
調製８：ｔｅｒｔ−ブチル３−フルオロ−２−オキソピペリジン−１−カルボキシレート
【化１９】
2019142959.tif 000021
【０２２７】
ｔｅｒｔ−ブチル２−オキソピペリジン−１−カルボキシレート（３ｇ，１５．１ｍｍｏｌ，１．０当量）を含む無水テトラヒドロフラン（７０ｍＬ）の撹拌溶液に窒素下にて−７８℃で、ナトリウムビス（トリメチルシリル）アミド（２２．５８６ｍＬの１Ｍテト
ラヒドロフラン溶液、２２．６ｍｍｏｌ，１．５当量）を３０分間にわたって滴下した。得られた溶液を−７８℃で４５分間撹拌し、次いで、Ｎ−フルオロベンゼンスルホンイミド（７．１２２ｇ，２２．６ｍｍｏｌ，１．５当量）を含む無水テトラヒドロフラン（３０ｍＬ）の溶液を、３０分間にわたって滴下した。反応液を−７８℃で１時間撹拌し、次いで、２時間にわたって室温までゆっくり昇温させ、室温で１時間撹拌した。反応液を、飽和水性塩化アンモニウムでクエンチし、酢酸エチルで抽出した。有機相を飽和水性塩化ナトリウムで洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、真空濃縮した。残渣をジエチルエーテルで処理し、固形物を捨てた。溶液を濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し（０から１００％までの酢酸エチル／ヘキサン）、粗製生成物画分およびジフルオロ副生成物を白色固形物として得た（１．５ｇ）。粗製生成物画分を、シリカゲルクロマトグラフィーの２回目の実行によってさらに精製し、所望の生成物を粘稠性油状物として得た（０．４６ｇ，１４％）。1H  NMR  (300  MHz,  CDCl3):δ  4.92  (ddd,  1H,  J  =  47.4,  8.7,  6.3  Hz),  3.78-3.60  (m,  2H),  2.35  (m,  1H),  2.15-1.80  (m,  3H),  1.55  (s,  9H).19F  NMR  (282  MHz,  CDCl3):δ
-185.2  (dt,  J  =  45.7,  15.5  Hz).
調製９：３−フルオロピペリジン−２−オン
【化２０】
2019142959.tif 000022
【０２２８】
ｔｅｒｔ−ブチル３−フルオロ−２−オキソピペリジン−１−カルボキシレート（０．４５０ｇ，２．１ｍｍｏｌ，１．０当量）を含む塩化メチレン（５ｍＬ）の０℃の溶液に、トリフルオロ酢酸（１ｍＬ，１３．５ｍｍｏｌ，６．５当量）を添加し、得られた溶液を３時間撹拌した。反応液を減圧濃縮し、残渣をシリカゲルカラムによって精製し（０から１００％までの酢酸エチル／ヘキサン、次いで０から２０％までのメタノール／酢酸エチル）、所望の生成物を白色粉末として得た（０．２３ｇ，９５％）。1H  NMR  (300  MHz,  CDCl3):δ  6.36  (br  s,  1H),  4.85  (ddd,  1H,  J  =  46.8,  8.1,  5.4  Hz),  3.50-3.20  (m,  2H),  2.40-1.70  (m,  4H).19F  NMR  (282  MHz,  CDCl3):δ  -186.5  (dt,  J  =  46.5,  15.5  Hz).
調製１０：３，３−ジフルオロピペリジン−２−オン
【化２１】
2019142959.tif 000023
【０２２９】
３，３−ジフルオロピペリジン−２−オンを、報告された手順に従って調製した（Ｋｉｍ，Ｂ．Ｃ．ら、Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ２０１２，４４，３１６５−３１７０）。
調製１１：１−ベンゾイル−３，３−ジフルオロピロリジン−２−オン
【化２２】
2019142959.tif 000024
【０２３０】
調製２１Ｂ由来の１−ベンゾイル−３−フルオロピロリジン−２−オン（０．３ｇ，１．４ｍｍｏｌ，１．０当量）およびＮ−フルオロベンゼンスルホンイミド（０．６３９ｇ，２．０ｍｍｏｌ，１．４当量）を含む無水テトラヒドロフラン（１０ｍＬ）の−７８℃の溶液に、リチウムジイソプロピルアミド（０．９０５ｍＬの２Ｍテトラヒドロフラン溶液、１．８ｍｍｏｌ，１．３当量）を添加し、混合物を−７８℃で３０分間撹拌した。追加分のリチウムジイソプロピルアミド溶液（０．５当量）およびＮ−フルオロベンゼンスルホンイミド（０．５当量を含む０．５ｍＬの無水テトラヒドロフラン）を添加し、混合物を−７８℃で１時間撹拌した。飽和水性炭酸水素ナトリウムを添加し、混合物を室温まで昇温させ、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和水性塩化ナトリウムで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空濃縮した。粗製生成物を、１５から５０％までの酢酸エチルを含むヘキサンのグラジエントで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、白色固形物を得た（０．０９ｇ，２３％）。1H  NMR  (300  MHz,  CDCl3):δ  7.66-7.61  (m,  2H),  7.59-7.55  (m,  1H),  7.47-7.44  (m,  2H),  4.02-3.97  (m,  2H),  2.70-2.56  (tt,  2H,  J  =  6.6,  14.7  Hz).19F  NMR  (282  MHz,  CDCl3):δ  -106.0  to-106.1  (t,  J  =  15  Hz).
調製１２：３，３−ジフルオロピロリジン−２−オン
【化２３】
2019142959.tif 000025
【０２３１】
１−ベンゾイル−３，３−ジフルオロピロリジン−２−オン（０．０８５ｇ，０．４ｍｍｏｌ，１．０当量）を含む無水テトラヒドロフラン（１ｍＬ）の溶液に、オクチルアミン（０．０７５ｍＬ，０．５ｍｍｏｌ，１．１当量）を添加し、反応液を室温で１６時間撹拌した。混合物を減圧濃縮し、黄色油状物を得た。粗製残渣を、５０から１００％までの酢酸エチルを含むヘキサンのグラジエントで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、白色固形物を得た（０．０２４ｇ，５２％収率）。1H  NMR  (300
MHz,  CDCl3):δ  7.93  (br  s,  1H),  3.50-3.46  (br  t,  2H,  J  =  6.0  Hz),
2.63-2.48  (tt,  2H,  J  =  6.6,  15.2  Hz).19F  NMR  (282  MHz,  CDCl3):δ  -107.33  to  -107.44  (t,  J  =  15.2  Hz).13C  NMR  (75  MHz,  CDCl3):δ  167.5-166.7  (t,  J  =  31  Hz),  121.1-114.4  (t,  J  =  248  Hz),  37.1  (t,  J  =  3.3  Hz),  31.2-30.6  (t,  J  =  23.1  Hz).
調製１３：１−ベンジル−３−メチルピロリジン−２−オン；一般手順
【化２４】
2019142959.tif 000026
【０２３２】
１−ベンジル−２−ピロリジノン（０．４２２ｇ，２．４ｍｍｏｌ，１．０当量）を含む無水テトラヒドロフラン（１５ｍＬ）の−７８℃の冷溶液に、リチウムジイソプロピルアミド（２．４ｍＬの２Ｍ溶液，４．８ｍｍｏｌ，２．０当量）を添加し、得られた赤色溶液を−７８℃で３０分間撹拌し、ヨードメタン（０．６ｍＬ，９．６ｍｍｏｌ，４．０当量）を添加した。溶液を−７８℃で１時間撹拌し、１６時間にわたり室温までゆっくり昇温させた。飽和水性塩化アンモニウムを添加し、混合物を酢酸エチルで抽出した。有機画分を飽和水性塩化ナトリウムで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空濃縮した。粗製生成物を、３５から８０％までの酢酸エチルを含むヘキサンのグラジエン
トで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、生成物を黄褐色の液状物として得た（０．３７４ｇ，８２％）。1H  NMR  (300  MHz,  CDCl3):δ  7.37-7.34  (m,  5H),  4.52-4.41  and  4.46-4.41  (ABq,  2H,  J  =  14.6  Hz),  3.27-3.15
(m,  2H),  2.60-2.46  (m,  1H),  2.28-2.15  (m,  1H),  1.68-1.58  (m,  1H),  1.28-1.25  (d,  3H,  J  =  7.2  Hz).
以下の化合物を同様に調製した：
【表１Ｂ】
2019142959.tif 000027
【０２３３】
調製１４：１−ベンジル−３−シクロヘキシルピペリジン−２−オン
【化２５】
2019142959.tif 000028
【０２３４】
窒素雰囲気下で、１０％パラジウム担持炭素（０．０９ｇ）を、１−ベンジル−３−（シクロヘキサ−２−エン−１−イル）ピペリジン−２−オン（０．６ｇ，２．３ｍｍｏｌ）を含むエタノール（１０ｍＬ）の溶液に添加した。混合物を水素雰囲気下に置き、２日間撹拌した。懸濁液をセライトに通して濾過し、減圧濃縮し、所望の生成物を透明な液状物として得た（０．５７８ｇ，９８％）。1H  NMR  (300  MHz,  CDCl3):δ  7.33-7.22
(m,  5H),  4.66-4.61  and  4.59-4.54  (ABq,  2H,  J  =  14.7  Hz),  3.19-3.14
(m,  2H),  2.34-2.21  (m,  2H),  1.86-1.52  (m,  9H),  1.39-1.04  (m,  5H);ESI
(m/z):272.2  (M+H).
調製１５：１−ベンジル−３−フェニルピペリジン−２−オン
【化２６】
2019142959.tif 000029
【０２３５】
ｄｅ  Ｆｉｌｉｐｐｉｓ，Ａ．ら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，２００４，６０，９７５７の手順に従って合成した。Ｎ−ベンジル−２−ピペリジノン（１．３２６ｇ，７．０ｍｍｏｌ，２．２当量）を含む無水テトラヒドロフラン（１４ｍＬ，０．５Ｍ）の冷（−２０℃）撹拌溶液に、リチウムビス（トリメチルシリル）アミド（６．４ｍＬの１Ｍ無水テトラヒドロフラン溶液，６．４ｍｍｏｌ，２．０当量）を添加し、混合物を−２０℃で２０分間撹拌した。塩化亜鉛（０．９５５ｇ，７．０ｍｍｏｌ，２．２当量）を含む無水テトラヒドロフラン（８ｍＬ）の溶液を添加し、溶液を−２０℃で２０分間撹拌した。得られた溶液を、２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）ビフェニル（０．０９４ｇ）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（０．０９２ｇ）、およびブロモベンゼン（０．３３５ｍＬ，３．２ｍｍｏｌ，１．０当量）を含む無水テトラヒドロフラン（６ｍＬ）の溶液にカニューラで移送し、得られた混合物を７０℃で６時間加熱した。反応液を水性塩化アンモニウムでクエンチし、酢酸エチルで抽出した。有機画分を飽和水性塩化ナトリウムで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空濃縮した。粗製生成物を、１５から６０％までの酢酸エチルを含むヘキサンのグラジエントで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、黄色液状物を得た（０．６２９ｇ，７４％）。1H  NMR  (300  MHz,  CDCl3):δ  7.38-7.21  (m,  10H),  4.74-4.69  and  4.66-4.61  (AB,  2H,  J  =  14.4  Hz),  3.77-3.72  (dd,  1H,  J  =  6.0,  8.1  Hz),  3.41-3.28  (m,  2H),  2.23-2.13  (m,  1H),  2.05-1.69  (m,  3H).
調製１６：３−メチルピロリジン−２−オン
【化２７】
2019142959.tif 000030
【０２３６】
トリフルオロメタンスルホン酸（０．６０４ｍＬ，６．８ｍｍｏｌ，４．０当量）を、１−ベンジル−３−メチルピロリジン−２−オン（０．３２３ｇ，１．７ｍｍｏｌ，１．０当量）を含むトルエン（２ｍＬ，１Ｍ）の溶液に添加した。混合物を、マイクロ波反応器内にて１９５℃で２５分間加熱した。混合物を、少量の飽和水性重炭酸ナトリウムに注入し、酢酸エチルで抽出し、飽和水性塩化ナトリウムで洗浄し、合わせた水層を酢酸エチルで再度抽出した。合わせた有機画分を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空濃縮した。粗製残渣を、０から１０％までのメタノールを含む塩化メチレンで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、所望の生成物を得た（０．０８７ｇ）。1H  NMR  (300  MHz,  CDCl3):δ  6.49  (br  s),  3.37-3.26  (m,  2H),  2.53-2.28  (m,  2H),  1.80-1.65  (m,  1H),  1.21-1.19  (d,  3H,  J  =  6.6  Hz).
以下の化合物を同様に調製した：
【表１Ｃ】
2019142959.tif 000031
【０２３７】
調製１７：１−ベンジル−３−（１−ヒドロキシシクロブチル）ピロリジン−２−オン
【化２８】
2019142959.tif 000032
【０２３８】
１−ベンジル−２−ピロリジノン（１．０ｇ，５．７ｍｍｏｌ，１．０当量）を含む無水テトラヒドロフラン（１９ｍＬ）の冷（−７８℃）溶液に、リチウムジイソプロピルアミド（３．１５ｍＬの２Ｍテトラヒドロフラン溶液，１．１当量）を添加し、混合物を−７８℃で１時間撹拌した。シクロブタノン（０．４２６ｍＬ，５．７ｍｍｏｌ，１．０当量）および三フッ化ホウ素ジエチルエーテラート（０．７０４ｍＬ，５．７ｍｍｏｌ，１．０当量）を添加し、反応混合物を−７８℃で４時間撹拌した。反応物を、飽和水性塩化アンモニウムでクエンチし、酢酸エチルで抽出した。有機画分を飽和水性塩化ナトリウムで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮した。粗製生成物を、５０から１００％までの酢酸エチルを含むヘキサンのグラジエントを用いるシリカゲルから溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、白色固形物を得た（０．７１４ｇ，５１％）。1H  NMR  (300  MHz,  CDCl3):δ  7.36-7.20  (m,  5H),  4.56-4.51  and  4.42-4.37  (AB,  2H,  J  =  14.7  Hz),  4.24  (s,  1H),  3.28-3.21  (m,
2H),  2.78-2.72  (t,  1H,  J  =  2.7  Hz),  2.34-1.89  (m,  7H),  1.66-1.52  (m,  1H);ESI  (m/z):246.0  (M+H).
以下の化合物を同様に調製した：
【表１Ｄ】
2019142959.tif 000033
【０２３９】
調製１８：１−ベンジル−３−シクロブチリデンピロリジン−２−オン：
【化２９】
2019142959.tif 000034
【０２４０】
１−ベンジル−３−（１−ヒドロキシシクロブチル）ピロリジン−２−オン（０．７ｇ，２．９ｍｍｏｌ，１．０当量）を含む無水塩化メチレン（１２ｍＬ）の冷（０℃）溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２．４８５ｍＬ，１４．３ｍｍｏｌ，５．０当量）、Ｎ，Ｎ−４−ジメチルアミノピリジン（０．０７ｇ，０．６ｍｍｏｌ，０．２当量）、およびメタンスルホニルクロリド（０．３３１ｍＬ，４．３ｍｍｏｌ，１．５当量）を添加した。混合物を、０℃で２時間、室温で１６時間撹拌し、３時間還流した。混合物を室温まで冷却し、酢酸エチルと飽和水性塩化アンモニウムに分配した。有機層を飽和水性塩化ナトリウムで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空濃縮し、橙色油状物を得た。粗製生成物を、２０から６０％までの酢酸エチルを含むヘキサンのグラジエントで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、黄色油状物を得た（０．２５ｇ，３８％）。1H  NMR  (300  MHz,  CDCl3):δ  7.33-7.23  (m,  5H),
4.47  (s,  2H),  3.27-3.19  (m,  4H),  2.75-2.69  (m,  2H),  2.52-2.46  (m,  2H),  2.18-2.08  (quint,  2H,  J  =  7.8  Hz);ESI  (m/z):228.2  (M+H).
以下の化合物を同様に調製した：
【表１Ｅ】
2019142959.tif 000035
【０２４１】
調製１９：１−ベンジル−３−シクロブチルピロリジン−２−オン
【化３０】
2019142959.tif 000036
【０２４２】
１−ベンジル−３−シクロブチリデンピロリジン−２−オン（０．２５ｇ，１．０ｍｍｏｌ）を含むエタノール（１１ｍＬ）の溶液に、１０％パラジウム担持炭素（０．０５ｇ）を添加し、反応混合物を水素雰囲気下で７２時間撹拌した。混合物をセライトに通して濾過し、減圧濃縮し、透明な油状物を得た（０．２４２ｇ，１００％）。1H  NMR  (300
MHz,  CDCl3):δ  7.34-7.20  (m,  5H),  4.49-4.47  and  4.40-4.35  (ABq,  2H,  J  =  14.4  Hz),  3.18-3.13  (m,  2H),  2.69-2.47  (m,  2H),  2.20-1.64  (m,  8H);ESI  (m/z):230.2  (M+H).
以下の化合物を同様に調製した：
【表１Ｆ】
2019142959.tif 000037
【０２４３】
調製２０：３−シクロブチルピロリジン−２−オン：
【化３１】
2019142959.tif 000038
【０２４４】
調製１８と同様に１−ベンジル−３−シクロブチルピロリジン−２−オンから調製した。1H  NMR  (300  MHz,  CDCl3):δ  5.45  (br  s,  1H),  3.34-3.27  (m,  2H),  2.65-2.54  (m,  1H),  2.43-2.35  (m,  1H),  2.28-1.79  (m,  8H).
以下の化合物を同様に調製した：
【表１Ｇ】
2019142959.tif 000039
【０２４５】
調製２１：Ｎ１−シクロヘキシルエタン−１，２−ジアミン
【化３２】
2019142959.tif 000040
【０２４６】
シクロヘキサノン（６．２６ｇ，６３．８ｍｍｏｌ）、エチレンジアミン（４２．６４ｍＬ，６３７．８ｍｍｏｌ，１０．０当量）、酢酸（３６．５１５ｍＬ，６３７．８ｍｍｏｌ，１０．０当量）、および４Åのモレキュラーシーブス（２５ｇ）を含む無水メタノール（２５０ｍＬ）の混合物に、ナトリウムシアノボロヒドリド（８．０１７ｇ，１２７．６ｍｍｏｌ，２．０当量）を添加した。混合物を４８時間撹拌し、濾過して固形物を除去し、半固形物になるまで濃縮した。粗製物質を３Ｎ水性水酸化ナトリウム（１５０ｍＬ）に溶解させ、塩化メチレンで３回抽出した。合わせた有機画分を、わずかに塩基性の飽和水性塩化ナトリウム溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空濃縮し、薄黄色の液状物を得た。これを真空蒸留によって精製し、透明な液状物を得た（４．１ｇ，４５％）。1H  NMR  (300  MHz,  CDCl3):δ  2.80-2.76  (td,  2H,  J  =  0.9,
6.0  Hz),  2.68-2.64  (td,  2H,  J  =  0.9,  6.0  Hz),  2.43-2.34  (m,  1H),  1.89-1.83  (m,  2H),  1.74-1.70  (m,  2H),  1.62-1.57  (m,  1H),  1.32-0.98  (m,
8H).
調製２２：３−（シクロブチルアミノ）プロパンニトリル
【化３３】
2019142959.tif 000041
【０２４７】
室温で、シクロブチルアミン（５．９０ｍＬ，５９．８ｍｍｏｌ、１．０当量）を１５分間にわたって、アクリロニトリル（４．７６ｇ，８９．７ｍｍｏｌ、１．５当量）を含むメタノール（７ｍＬ）の溶液に滴下した。混合物を室温で３０分間および還流下で１時間撹拌し、室温まで冷却し、減圧濃縮した。所望の生成物を真空蒸留によって透明な液状物として得た（７．７ｇ，９８％）。1H  NMR  (300  MHz,  CDCl3):  δ  3.29-3.21  (m,  1H),  2.88-2.83  (t,  2H,  J  =  6.6  Hz),  2.50-2.46  (t,  2H,  J  =  6.6  Hz),  2.26-2.20  (m,  2H),  1.76-1.63  (m,  4H),  1.30  (br  s,  1H).
調製２３：Ｎ１−シクロブチルプロパン−１，３−ジアミン
【化３４】
2019142959.tif 000042
【０２４８】
水素化アルミニウムリチウム（３．０５６ｇ，８０．５ｍｍｏｌ、２．０当量）を含む無水エーテル（１２０ｍＬ）の冷（０℃）懸濁液に、３−（シクロブチルアミノ）プロパンニトリル（５．０ｇ，４０．３ｍｍｏｌ、１．０当量）を含む無水ジエチルエーテル（４０ｍＬ）の溶液を４５分間にわたって滴下した。反応混合物を室温で１５分間および還流下で４時間撹拌し、室温まで冷却し、１時間撹拌した。混合物を０℃まで冷却し、激しく撹拌し、この間、水（３．１ｍＬ）を滴下した後、１５％水性水酸化ナトリウム（３．１ｍＬ）、最後に水（９．３ｍＬ）を滴下した。得られたスラリーを室温まで昇温させ、１５分間撹拌し、硫酸マグネシウムを添加し、さらに１５分間撹拌した。固形物質をガラスフリットフィルターを介した濾過によって除去し、温塩化メチレンで多数回洗浄し、有機溶液を減圧濃縮し、所望の生成物を薄黄色液状物として得た（３．４４ｇ，６６％）。1H  NMR  (300  MHz,  CDCl3):  δ  3.14  (m,  1H),  2.69-2.62  (m,  2H),  2.53-2.45  (m,  2H),  2.13-2.10  (m,  2H),  1.56-1.48  (m,  6H),  1.33  (br  s,  3H).
調製２４：３−（シクロペンチルアミノ）プロパンニトリル
【化３５】
2019142959.tif 000043
【０２４９】
室温で、シクロペンチルアミン（５．７９４ｍＬ，５８．７ｍｍｏｌ、１．０当量）を、アクリロニトリル（５．７９ｍＬ，８８．１ｍｍｏｌ、１．５当量）を含むメタノール（７ｍＬ）の溶液に滴下した。この溶液を室温で３０分間および還流下で１時間撹拌し、室温まで冷却し、減圧濃縮し、所望の生成物を真空蒸留によって透明な液状物として得た（７．４ｇ，９１％）。1H  NMR  (300  MHz,  CDCl3):  δ  3.14-3.04  (quin,  1H,  J  =  6.3  Hz),  2.91-2.87  (t,  2H,  J  =  6.9  Hz),  2.53-2.48  (td,  2H,  J  =  0.9,  6.9  Hz),  1.88-1.78  (m,  2H),  1.73-1.49  (m,  4H),  1.36-1.24  (m,  2H),  1.19  (br  s,  1H).
調製２５：Ｎ１−シクロペンチルプロパン−１，３−ジアミン
【化３６】
2019142959.tif 000044
【０２５０】
水素化アルミニウムリチウム（３．２９５ｇ，８６．８ｍｍｏｌ、２．０当量）を含む無水ジエチルエーテル（１５０ｍＬ）の冷（０℃）懸濁液に、３−（シクロペンチルアミノ）プロパンニトリル（６．０ｇ，４３．４ｍｍｏｌ、１．０当量）を含む無水ジエチルエーテル（４０ｍＬ）の溶液を４５分間にわたって滴下した。反応混合物を室温で１５分間および還流下で４時間撹拌し、室温まで冷却し、１時間撹拌した。混合物を０℃まで冷却し、激しく撹拌し、この間、水（３．４ｍＬ）を滴下した後、１５％水性水酸化ナトリウム（３．４ｍＬ）、最後に水（１０．２ｍＬ）を滴下した。得られたスラリーを室温まで昇温させ、１５分間撹拌し、硫酸マグネシウムを添加し、さらに１５分間撹拌した。固形物質をガラスフリットフィルターを介した濾過によって除去し、温塩化メチレンで多数
回洗浄し、有機溶液を減圧濃縮し、所望の生成物を透明な油状物として得た（４．５ｇ，７３％）。1H  NMR  (300  MHz,  CDCl3):  δ  3.05-2.96  (quint,  1H,  J  =  6.6  Hz),  2.74-2.71  (t,  2H,  J  =  6.6  Hz),  2.68-2.58  (t,  2H,  J  =  6.9  Hz),
1.85-1.68  (m,  2H),  1.62-1.42  (m,  6H),  1.34  (br  s,  3H),  1.30-1.21  (m,  2H).
調製２６：１−（（３−（シクロヘキシルアミノ）プロピル）アミノ）−３−（３，６−ジフルオロ−９Ｈ−カルバゾール−９−イル）−２−メチルプロパン−２−オール；一般手順
【化３７】
2019142959.tif 000045
【０２５１】
Ｎ−シクロヘキシル−１，３−プロパンジアミン（または他のＮ官能化１，３−プロパンジアミン、８．０当量）を含むエタノール（１Ｍ）の溶液に、３，６−ジフルオロ−９−（（２−メチルオキシラン−２−イル）メチル）−９Ｈ−カルバゾール（１．０当量、あるいはまた、３，６−ジフルオロ−９−（オキシラン−２−イルメチル）−９Ｈ−カルバゾール）を添加し、反応混合物を７０℃で１６時間またはＬＣＭＳによって反応の完了が決定されるまで撹拌し、室温まで冷却し、真空濃縮し、粗製残渣を得た。これを、メタノールを含む塩化メチレンおよび０．１％トリエチルアミンの適切なグラジエントを用いるＨＰシリカゲルから溶出するカラムクロマトグラフィーによって精製し、所望の生成物を得た。
【表１Ｈ−１】
2019142959.tif 000046
【表１Ｈ−２】
2019142959.tif 000047
【表１Ｈ−３】
2019142959.tif 000048
【０２５２】
調製２７：ｔｅｒｔ−ブチル（１−アミノ−１−オキソプロパン−２−イル）カルバメート
【化３８】
2019142959.tif 000049
【０２５３】
Ｂｏｃ−ＤＬ−アラニン（５．０ｇ，２６．４ｍｍｏｌ，１．０当量）、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−Ｏ−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）ウロニウムヘキサフルオロホスフェート（１５．０３３ｇ，３９．６ｍｍｏｌ，１．５当量）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（８．７３５ｍＬ，５２．９ｍｍｏｌ，２．０当量）、および無水ジメチルホルムアミド（５０ｍＬ）の混合物を、室温で２０分間撹拌し、次いで、氷水で冷却し、アンモニア（２．２５０ｇ，１３２．１ｍｍｏｌ，５．０当量）を混合物中にゆっくりバブリングした。反応液を密封容器内で室温にて３時間撹拌した。反応液を水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和水性塩化ナトリウムで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空濃縮した。得られた固形物を冷酢酸エチルおよびエーテルで洗浄し、乾燥させ、生成物を白色粉末として得た（２．９ｇ，５８％）。1H  NMR  (300  MHz,  CDCl3):δ  6.20  (br  s,  1H),  5.50  (br  s,  1H),  5.00  (br  s,  1H),  4.20  (m,  1H),  1.47  (s,  9H),  1.40  (d,  3H,  J  =  7.2  Hz).
調製２８：ｔｅｒｔ−ブチル（１−アミノプロパン−２−イル）カルバメート
【化３９】
2019142959.tif 000050
【０２５４】
ｔｅｒｔ−ブチル（１−アミノ−１−オキソプロパン−２−イル）カルバメート（２．２ｇ）を、無水テトラヒドロフラン（１００ｍＬ）に溶解させ、ボラン（４０ｍＬの１Ｍテトラヒドロフラン溶液）を添加した。混合物を室温で２時間撹拌し、次いで、９０℃で２時間加熱した。室温まで冷却した後、反応液を、泡が生成されなくなるまでメタノールでクエンチした。混合物を、９０℃で１時間加熱し、次いで、乾燥するまで濃縮し、粗製
生成物をシロップとして得た（２．２ｇ）。これを次の工程反応のために直接使用した。1H  NMR  (300  MHz,  CDCl3):δ  4.60  (br  s,  1H),  3.65  (m,  1H),  2.76  (dd,
1H,  J  =  12.9,  5.1  Hz),  2.64  (dd,  1H,  J  =  12.9,  6.3  Hz),  1.47  (s,  9H),  1.14  (d,  3H,  J  =  6.9  Hz).
調製２９：ｔｅｒｔ−ブチル（１−（（３−（３，６−ジフルオロ−９Ｈ−カルバゾール−９−イル）−２−ヒドロキシプロピル）アミノ）プロパン−２−イル）カルバメート
【化４０】
2019142959.tif 000051
【０２５５】
窒素雰囲気下で、３，６−ジフルオロ−９−（オキシラン−２−イルメチル）−９Ｈ−カルバゾール（０．７ｇ）およびｔｅｒｔ−ブチル（１−アミノプロパン−２−イル）カルバメート（１．５ｇ）を含むエタノール（５０ｍＬ）の溶液を、７０℃で１６時間撹拌した。混合物を減圧濃縮し、０から２０％までのメタノールを含む塩化メチレンのグラジエントで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、オフホワイト色の泡状物を得た（１．２８ｇ）。生成物を、さらに精製せずに次の工程で直接使用した：1H  NMR  (300  MHz,  CDCl3):δ  7.67  (dd,  2H,  J  =  8.7,  2.7  Hz),  7.42-7.37  (m,  2H),  7.22  (td,  2H,  J  =  9.0,  2.7  Hz),  4.55-4.30  (m,  3H),  4.13
(m,  1H),  3.78  (br  s,  1H),  2.88  and  2.82  (dd,  1H,  J  =  12.0,  3.6  Hz),  2.70-2.50  (m,  3H),  1.45  (s,  9H),  1.13  and  1.11  (d,  3H,  J  =  6.6  Hz);ESI  (m/z):434.0  (M+H).
調製３０：３−（シクロプロピルアミノ）プロパンニトリル
【化４１】
2019142959.tif 000052
【０２５６】
シクロプロピルアミン（４．２１４ｍＬ，６０．８ｍｍｏｌ，１．０当量）を、アクリロニトリル（４．８４０ｇ，９１．２ｍｍｏｌ，１．５当量）を含むメタノール（７ｍＬ）の溶液に室温でゆっくりと添加し、３０分間撹拌した。反応液を還流加熱し、１時間撹拌し、冷却し、濃縮し、真空蒸留し、５．５ｇの透明な液状物を得た（５．５ｇ，８２％）。1H  NMR  (300MHz;CDCl3):δ  2.99  (t,  2H,  J  =  6.3  Hz),  2.51  (t,  2H,
J  =  6.3  Hz),  2.12  (m,  1H),  1.78  (br  s,  1H),  0.49-0.32  (m,  4H);ESI
(m/z):111.5  (M+H).
調製３１：Ｎ１−シクロプロピルプロパン−１，３−ジアミン
【化４２】
2019142959.tif 000053
【０２５７】
水素化アルミニウムリチウム（３．４４５ｇ，９０．８ｍｍｏｌ，２．０当量）を含む無水テトラヒドロフラン（１２０ｍＬ）の冷（０℃）懸濁液に、３−（シクロプロピルアミノ）プロパンニトリル（５．０００ｇ，４５．４ｍｍｏｌ，１．０当量）を含む無水テトラヒドロフラン（２０ｍＬ）の溶液を１０分間にわたってゆっくり添加した。反応液を室温で１５分間撹拌し、次いで（ｔｈａｎ）、還流加熱し、３時間撹拌した。混合物を室温まで冷却し、発泡が停止するまで硫酸ナトリウム十水和物を添加した。懸濁液を１０分間撹拌し、固体を濾別した（テトラヒドロフランで洗浄した）。溶液を減圧濃縮し、粗製生成物を得た。これを次の工程で直接使用した。1H  NMR  (300MHz,  CDCl3):δ  2.74-2.69  (m,  4H),  2.10-2.04  (m,  1H),  1.65-1.56  (m,  2H),  0.43-0.27  (m,  4H);ESI  (m/z):115.4  (M+H).
調製３２：  １−エチルテトラヒドロピリミジン−２（１Ｈ）−オン；ジアミン由来の尿素の一般的な合成方法
【化４３】
2019142959.tif 000054
【０２５８】
激しく撹拌しながら、適切なＮ官能化した１，３−プロパンジアミンまたは１，２−エチレンジアミン（１０．０ｍｍｏｌ，１．０当量）を、１，１’−カルボニルジイミダゾール（１．６２２ｇ，１０．０ｍｍｏｌ，１．０当量）を含む無水テトラヒドロフラン（０．０５  Ｍ）の溶液（これは、外部氷浴で０℃に維持した）に添加した。溶液を室温までゆっくり昇温させ、１６時間撹拌した。混合物を、以下のいずれかによって後処理した：ｉ）混合物を減圧濃縮し、メタノールを含む塩化メチレンのグラジエントでシリカゲルから溶出するカラムクロマトグラフィーによって精製し、所望の生成物を得た；またはｉｉ）混合物を酢酸エチルで希釈し、１Ｎ水性塩酸で２回および飽和水性塩化ナトリウムで１回連続的に洗浄し、有機層を酢酸エチルで１回逆抽出し、合わせた有機画分を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空濃縮し、所望の生成物を得た。これをさらに精製せずに使用した。
【表１Ｉ−１】
2019142959.tif 000055
【表１Ｉ−２】
2019142959.tif 000056
【０２５９】
調製３１：１−エチル−３−（オキシラン−２−イルメチル）テトラヒドロピリミジン−２（１Ｈ）−オン；（オキシラン−２−イルメチル）官能化尿素の一般的調製方法。
【化４４】
2019142959.tif 000057
【０２６０】
１−エチルテトラヒドロピリミジン−２（１Ｈ）−オン、あるいはまた、調製６で生成された環状尿素（１．０当量）を含む無水テトラヒドロフラン（ｔｅｔｒａｈｄｒｏｆｕｒａｎ）（０．２  Ｍ）の溶液に、鉱油中６０％の水素化ナトリウム（１．１当量）を添加し、得られた懸濁液を室温で１時間撹拌した。エピブロモヒドリン（３．０当量）を添加し、混合物を室温または３５℃のいずれかで２４時間撹拌した。シリカゲルを添加し、懸濁液を減圧濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによって直接精製し、メタノールを含む塩化メチレンの適切なグラジエントで所望の生成物を溶出させた。
【表１Ｊ−１】
2019142959.tif 000058
【表１Ｊ−２】
2019142959.tif 000059
【０２６１】
調製３２：１−エチル−３−（（２−メチルオキシラン−２−イル）メチル）テトラヒドロピリミジン−２（１Ｈ）−オン；Ｎ−（（２−メチルオキシラン−２−イル）メチル）官能化尿素の一般的な調製方法
【０２６２】
調製７で生成された環状尿素（１．０当量）を含む無水テトラヒドロフラン（０．２Ｍ）の溶液に、鉱油中６０％の水素化ナトリウム（１．１当量）を添加し、得られた懸濁液を室温で１時間撹拌した。２−（クロロメチル）−２−メチルオキシラン（４．０当量）を室温で添加し、混合物を密封チューブ内で７０〜９０℃にて一晩撹拌した。シリカゲルを添加し、懸濁液を減圧濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによって直接精製し、メタノールを含む塩化メチレンのグラジエントで所望の生成物を溶出させた。
【表１Ｋ】
2019142959.tif 000060
【０２６３】
調製３３：３−（メチルアミノ）ブタンニトリル
【化４５】
2019142959.tif 000061
【０２６４】
メチルアミン（１５８．５８４ｍＬの４０％ｗ／ｗ水性液、１８４２．３ｍｍｏｌ，１０．０当量）およびクロトノニトリル（１５ｍＬ，１８４．２ｍｍｏｌ，１．０当量）の混合物を室温で１６時間撹拌した。反応液を塩化メチレン（３×１００ｍＬ）で抽出し、合わせた有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空濃縮し、所望の生成物を無色油状物として得た（１８ｇ，１００％）。1H  NMR  (300  MHz,  CDCl3):δ  2.96  (m,  1H),  2.47  (d,  2H,  J  =  6.0  Hz),  2.46  (s,  3H),  1.36  (d,  3H,  J  =  6.6  Hz).
調製３４：Ｎ３−メチルブタン−１，３−ジアミン
【化４６】
2019142959.tif 000062
【０２６５】
Ｐａｒｒ振盪フラスコに、メタノール（１００ｍＬ）を仕込み、０℃まで冷却し、アンモニアをバブリングした。３−（メチルアミノ）ブタンニトリル（４．８ｇ，４８．９ｍｍｏｌ，１．０当量）および１さじのラネーＮｉを添加した。反応液を水素下にて５０ｐｓｉで１０時間振盪した。反応液をセライトに通して濾過し、濾液を真空濃縮し、透明な油状物を得た（５．０ｇ，１００％）。1H  NMR  (300  MHz,  CDCl3):δ  2.90-2.60  (m,  3H),  2.43  (s,  3H),  1.70-1.40  (m,  2H),  1.08  (d,  3H,  J  =  6.0  Hz).
調製３５：１，６−ジメチルテトラヒドロピリミジン−２（１Ｈ）−オン
【化４７】
2019142959.tif 000063
【０２６６】
Ｎ３−メチルブタン−１，３−ジアミン（５．０ｇ，４８．９ｍｍｏｌ，１．０当量）を含む無水テトラヒドロフラン（１００ｍＬ）の撹拌溶液に０℃で、１，１’−カルボニルジイミダゾール（７．９３５ｇ，４８．９ｍｍｏｌ，１．０当量）を添加した。混合物を室温までゆっくり昇温させ、１６時間撹拌した。反応液を減圧濃縮し、残渣を飽和水性塩化アンモニウムで処理し、塩化メチレンで２回抽出した。合わせた有機層を飽和水性塩化ナトリウムで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空濃縮した。残渣を、シリカゲルカラムによって精製し（０から２０％までのエタノール／塩化メチレン）、所望の生成物を白色固形物として得た（１．８ｇ，２９％）。1H  NMR  (300  MHz,  CDCl3):δ  4.66  (br  s,  1H),  3.53-3.35  (m,  2H),  3.25  (m,  1H),  2.95  (s,  3H),  2.05  (m,  1H),  1.70  (m,  1H),  1.24  (d,  3H,  J  =  6.3  Hz).
調製３６：２−（アミノメチル）−Ｎ−ベンジルアニリン
【化４８】
2019142959.tif 000064
【０２６７】
窒素雰囲気下で、２−（ベンジルアミノ）ベンゾニトリル（４．０ｇ，１９．２ｍｍｏｌ，１．０当量）を含む無水テトラヒドロフラン（２５ｍＬ）の溶液を、水素化アルミニウムリチウム（２．１８７ｇ，５７．６ｍｍｏｌ，３．０当量）を含む無水テトラヒドロフラン（６０ｍＬ）の冷（０℃）懸濁液にゆっくり添加した。混合物を冷却し、硫酸ナトリウム十水和物を、（外部水／氷浴で冷却しながら）発泡が停止するまで添加した。混合物を濾過して固形物を除去し、溶液を真空濃縮し、透明な液状物を得た（３．２ｇ，７９％）。1H  NMR  (300  MHz,  CDCl3):δ  7.42-7.23  (m,  5H),  7.17-7.11  (td,  1H,
J  =  1.8,  7.5  Hz),  7.07-7.04  (m,  1H),  6.68-6.61  (m,  2H),  6.29  (br  s,  1H),  4.40  (s,  2H),  3.99  (s,  2H),  1.31  (br  s,  2H).
調製３７：１−ベンジル−３，４−ジヒドロキナゾリン−２（１Ｈ）−オン
【化４９】
2019142959.tif 000065
【０２６８】
２−（アミノメチル）−Ｎ−ベンジルアニリン（１．５ｇ，７．１ｍｍｏｌ，１．０当量）を含む無水テトラヒドロフラン（１４２ｍＬ）の溶液に、１，１’−カルボニルジイミダゾール（１．３１８ｇ，８．１ｍｍｏｌ，１．１当量）を添加し、溶液を室温で２４時間撹拌した。１Ｎ水性塩酸（２０ｍＬ）を添加し、混合物を酢酸エチルで３回抽出した。有機画分を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空濃縮し、白色固形物を得た（１．６８ｇ，９９％）。1H  NMR  (300  MHz,  CDCl3):δ  7.33-7.20  (m,  5H),  7.11-7.03  (m,  2H),  6.95-6.91  (m,  1H),  6.74-6.71  (d,  1H,  J  =  8.1  Hz),  5.13  (s,  2H),  4.54  (s,  2H),  1.60  (br  s,  2H).ESI  (m/z):  239.2  (M+H).
調製３８：１−ベンジル−３−（３−（３，６−ジフルオロ−９Ｈ−カルバゾール−９−イル）−２−ヒドロキシプロピル）−３，４−ジヒドロキナゾリン−２（１Ｈ）−オン
【化５０】
2019142959.tif 000066
【０２６９】
１−ベンジル−３，４−ジヒドロキナゾリン−２（１Ｈ）−オン（０．１０５ｇ，０．４ｍｍｏｌ，１．８当量）を含む無水ジメチルホルムアミド（１ｍＬ）の撹拌溶液に、鉱油中６０％の水素化ナトリウム（０．０１ｇ，０．３ｍｍｏｌ，１．０当量）を添加し、混合物を３０分間撹拌した。３，６−ジフルオロ−９−（オキシラン−２−イルメチル）−９Ｈ−カルバゾール（０．０６５ｇ，０．３ｍｍｏｌ，１．０当量）を添加し、混合物を５５℃で１６時間撹拌した。混合物を飽和水性塩化アンモニウムに注入し、酢酸エチルで３回抽出した。有機画分を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮し、黄褐色油状物を得た。粗製残渣を、２０から６０％までの酢酸エチル／ヘキサンのグラジエントで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、生成物を得た。これをさらに精製せずに次の工程で直接使用した（３５％）。ESI  (m/z):498.2  (M+H);HPLC  analysis:  (C18,  5-95%  acetonitrile  in  water  +  0.1%  trifluoroacetic  acid  over  20  min:retention  time,  %  area  at  254  nm):15.2  mins,  51%.
調製３９：１−ベンジル−３−（３−（３，６−ジフルオロ−９Ｈ−カルバゾール−９−イル）−２−ヒドロキシ−２−メチルプロピル）−３，４−ジヒドロキナゾリン−２（１Ｈ）−オン
【化５１】
2019142959.tif 000067
【０２７０】
１−ベンジル−３，４−ジヒドロキナゾリン−２（１Ｈ）−オン（０．０９９ｇ，０．４ｍｍｏｌ，１．８当量）を含む無水ジメチルホルムアミド（１ｍＬ）の撹拌溶液に、鉱油中６０％の水素化ナトリウム（０．０１ｇ，０．３ｍｍｏｌ，１．０当量）を添加し、混合物を３０分間撹拌した。３，６−ジフルオロ−９−（（２−メチルオキシラン−２−イル）メチル）−９Ｈ−カルバゾール（０．０６５ｇ，０．２ｍｍｏｌ，１．０当量）を添加し、混合物を５５℃で１６時間撹拌した。混合物を飽和水性塩化アンモニウムに注入し、酢酸エチルで３回抽出した。有機画分を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮し、黄褐色油状物を得た。粗製残渣を、２０から６０％までの酢酸エチル／ヘキサンのグラジエントで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、オフホワイト色の固形物を得た（０．０８６ｇ，６５％）。1H  NMR  (300  MHz,  CDCl3):δ  7.66-7.62  (dd,  2H,  J  =  2.4,  8.7  Hz),  7.45-7.40  (dd,  2H,  J  =  4.1,  8.9  Hz),  7.30-7.09  (m,  8H),  7.04-6.93  (m,  2H),  6.75-6.72  (d,  1H,  J  =  8.1  Hz),  5.20-5.15  and  5.08-5.03  (ABq,  2H,  J  =  16.6  Hz),  4.74-4.69  and  4.59-4.54  (ABq,  2H,  J  =  14.3  Hz),  4.39-4.34  and  4.32-4.26  (ABq,  2H,  J
=  15.3  Hz),  4.09  (s,  1H),  3.97-3.93  and  3.51-3.47  (ABq,  2H,  J  =  14.4  Hz),  1.36  (s,  3H);ESI  (m/z):512.3  (M+H).
調製４０：（Ｒ）−（２−メチルオキシラン−２−イル）メタノール
【化５２】
2019142959.tif 000068
【０２７１】
破砕した４Åの活性化モレキュラーシーブス（１５．０ｇ）および塩化メチレン（３００ｍＬ）の混合物を、−１０℃まで冷却し、チタン（ＩＶ）イソプロポキシド（２．０７２ｍＬ，７．０ｍｍｏｌ，０．０５当量）および（−）−ジエチル−Ｄ−タートレート（２．１２６ｇ，１０．３ｍｍｏｌ，０．０７当量）をシリンジで添加後、８０％クメンヒドロペルオキシド（５０．０００ｇ，２６２．８ｍｍｏｌ，１．８当量）を添加した。混合物を−１０℃で３０分間撹拌した。混合物を−３５℃まで冷却し、２−メチル−２−プロペン−１−オール（１０．６２０ｇ，１４７．３ｍｍｏｌ，１．０当量）を含むジクロロメタン（ｄｉｃｈｌｏｒｏｍｅｔｈａｎｓ）（１０ｍＬ）の溶液をシリンジで、１〜２ｍＬずつ３０分間にわたって添加した。反応混合物を、−３５℃で１時間撹拌し、次いで、−２０℃のフリーザー内に３日間置いた。混合物を０℃まで昇温させ、水を添加し、室温で３０分間撹拌した。混合物を０℃まで冷却し、３０％水酸化ナトリウムを含む飽和水性塩化ナトリウム（１０ｍＬ）の溶液を添加し、この温度で１時間撹拌した。混合物をセライトパッドに通して濾過し、塩化メチレン（５０ｍＬ）で洗浄した。水性部分を分離し、塩化メチレン（３×３０ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせ、乾燥させ（無水硫酸マグネシウム）、濾過し、無色の液状物になるまで真空濃縮した。粗製残渣を、２０から１００％までのジエチルエーテル／ヘキサンのグラジエントで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、無色油状物を得た（６．２３４９ｇ  ４８％）。1H  NM
R  (300  MHz,  CDCl3):δ  3.76  (dd,  1H,  J  =  4.5,  12.3  Hz),  3.6  (dd,  1H,  J  =  8.1,  12.3  Hz),  2.92  (d,  1H,  J  =  4.5  Hz),  2.66  (d,  1H,  J  =
4.8  Hz),  1.79  (br  m,  1H),  1.36  (s,  3H).
【０２７２】
（Ｓ）エナンチオマーを、同様の様式で（＋）−ジエチルタートレートから合成した。
調製４１：（Ｓ）−（２−メチルオキシラン−２−イル）メチル３−ニトロベンゼンスルホネート
【化５３】
2019142959.tif 000069
【０２７３】
（Ｒ）−（２−メチルオキシラン−２−イル）メタノール（５．０００ｇ，５６．８ｍｍｏｌ，１．０当量）、Ｎ，Ｎ−４−ジメチルアミノピリジン（０．１００ｇ，０．８ｍｍｏｌ，１．４ｍｏｌ％）、およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１５．７７６ｍＬ，８８．９ｍｍｏｌ，２．０当量）を含む無水塩化メチレン（１００ｍＬ）の撹拌溶液に−２０℃で、３−ニトロベンゼンスルホニルクロリド（１５．０９２ｇ，６８．１ｍｍｏｌ，１．２当量）を少量に分けて１５分間にわたってゆっくり添加した。混合物を０℃に到達させ、３時間撹拌した。反応液を水でクエンチし、塩化メチレンで抽出した。合わせた有機層を、逐次、水、１Ｎ水性塩酸、飽和水性重炭酸ナトリウム、および飽和水性塩化ナトリウムで洗浄した。有機層を乾燥させ（無水硫酸ナトリウム）、濾過し、真空濃縮した。粗製残渣を、シリカゲルカラムによって精製し（０から８０％までの酢酸エチル／ヘキサン（ｈｅｘａｎｅａ））、所望の生成物を黄色油状物として得た（６．７３ｇ，４３．４％）。1H  NMR  (300  MHz,  CDCl3):δ  8.77  (t,  1H,  J  =  1.8  Hz),  8.54  (m,  1H),  8.27  (m,  1H),  7.84  (t,  1H,  J  =  7.95  Hz),  4.29  (d,  1H,  J  =  11.1  Hz),  4.05  (d,  1H,  J  =  11.1  Hz),  2.73  (dd,  2H,  J  =  17.7,  4.8  Hz),  1.37  (s,  3H).
【０２７４】
（Ｒ）エナンチオマーを同様の様式で合成した。
調製４２：（Ｓ）−９−（オキシラン−２−イルメチル）−９Ｈ−カルバゾール
【化５４】
2019142959.tif 000070
【０２７５】
カルバゾール（５．１５ｇ，３０．８ｍｍｏｌ，１．０当量）を含む無水ジメチルホルムアミド（１００ｍＬ）の撹拌溶液に０℃で、鉱油中６０％の水素化ナトリウム（１．３５５ｇ，３３．９ｍｍｏｌ，１．１当量）を添加し、混合物を０℃で１時間撹拌した。（Ｒ）−（−）−グリシジルノシレート（９．９８１ｇ，３８．５ｍｍｏｌ，１．３当量）を添加し、反応混合物を１時間撹拌し、次いで、室温までゆっくり昇温させ、１６時間撹拌した。混合物を水と酢酸エチルに分配した。有機層を飽和水性塩化ナトリウムで洗浄し、乾燥させ（無水硫酸ナトリウム）、濾過し、減圧濃縮し、赤色油状物を得た。粗製残渣を、シリカゲルカラム（１５から８０％までの塩化メチレン／ヘキサン）によって精製し、所望の生成物を白色固形物として得た（４．９５ｇ，７２％）。1H  NMR  (300  MHz,
CDCl3):δ  8.11-8.08  (dt,  2H,  J  =  0.9,  7.5  Hz),  7.48-7.46  (m,  4H),  7.28-7.23  (m,  2H),  4.67-4.61  (dd,  1H,  J  =  2.4,  15.9  Hz),  4.45-4.38  (dd,  1H,  J  =  5.0,  15.9  Hz),  3.39-3.34  (m,  1H),  2.83-2.80  (t,  1H,  J  
=  4.2  Hz),  2.60-2.57  (dd,  1H,  J  =  2.4,  4.8  Hz).HPLC  analysis:  (C18,
5-95%  acetonitrile  in  water  +  0.1%  trifluoroacetic  acid  over  20  min:retention  time,  %  area  at  254  nm):13.2  mins,  99.5%.Chiral  HPLC  analysis:  (Chiralcel  AD-H,  5-15%  isopropanol  in  hexanes  over  20  mins:retention
time,  %  area  at  254  nm):8.12  mins,  3.8  %;8.54  mins,  96.1%  (92.2%  ee).
以下の化合物を同様に調製した：
【表１Ｌ−１】
2019142959.tif 000071
【表１Ｌ−２】
2019142959.tif 000072
【０２７６】
調製４３：（１Ｓ，４Ｒ）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−オン
【化５５】
2019142959.tif 000073
【０２７７】
（１Ｒ）−（−）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタ−５−エン−３−オン（１．０ｇ，９．２ｍｍｏｌ）および１０％パラジウム担持炭素（０．４ｇ）を含むメタノール（５０ｍＬ）の混合物を、水素雰囲気下で３時間撹拌した。混合物をセライトに通して濾過し、濾過ケークをメタノールで洗浄した。合わせた有機部分を真空濃縮し、必要とされる生成物（ｒｅｑｕｉｒｅ  ｐｒｏｄｕｃｔ）を得た（１ｇ，９８％）。1H  NMR  (300  MHz,  CDCl3):δ  5.91  (br  s,  1H),  3.89  (s,  1H),  2.74  (s,  1H),  1.96-1.59  (m,  5H),  1.42-1.37  (m,  1H).
調製４４：（１Ｒ，４Ｓ）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−オン
【化５６】
2019142959.tif 000074
【０２７８】
（１Ｓ）−（＋）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタ−５−エン−オン（１．０ｇ，９．２ｍｍｏｌ，１．０当量）および１０％パラジウム担持炭素（０．４ｇ）を含むメタノール（４０ｍＬ）の混合物を、水素雰囲気下で周囲温度にて２時間撹拌した。混合物をセライトに通して濾過し、濾過ケークをメタノールで洗浄した。合わせた有機部分を真空濃縮し、必要とされる生成物を得た（１ｇ，９８％）。1H  NMR  (300  MHz,  CDCl3):δ  5.83  (br  s,  1H),  3.89  (s,  1H),  2.74  (s,  1H),  1.96-1.59  (m,  5H),  1.42-1.38  (m,  1H).
調製４５：（Ｒ）−５−（ヒドロキシメチル）−２−ピロリジノンｐ−トルエンスルホネート
【化５７】
2019142959.tif 000075
【０２７９】
（Ｒ）−（−）−５−（ヒドロキシメチル）−２−ピロリジノン（１．０ｇ，８．７ｍｍｏｌ，１．０当量）を、塩化メチレン（４０ｍＬ）に溶解させた。トリエチルアミン（１．５６９ｍＬ，１１．３ｍｍｏｌ，１．３当量）、ｐ−トルエンスルホニルクロリド（１．９０４ｇ，１０．０ｍｍｏｌ，１．１当量）、および４−（ジメチルアミノ）ピリジン（０．１２ｇ）を氷冷下で添加し、混合物を室温で１８時間撹拌した。反応混合物を減圧濃縮し、０．５Ｎ水性塩酸を添加し、混合物を酢酸エチルで抽出した。有機層を、０．５Ｎ水性塩酸、水、飽和水性炭酸水素ナトリウム、および飽和水性塩化ナトリウムで洗浄した。有機画分を乾燥させ（無水硫酸ナトリウム）、濾過し、減圧濃縮し、白色固形物を得た（１．９１ｇ，８１％）。1H  NMR  (300  MHz,  CDCl3):δ  7.79-7.76  (m,  2H),
7.38-7.35  (m,  2H),  5.73  (br  s,  1H),  4.08-4.04  (dd,  1H,  J  =  3.5,  9.5  Hz),  3.98-3.93  (m,  1H),  3.85-3.82  (dd,  1H,  J  =  7.5,  9.5  Hz),  2.47  (s,  3H),  2.36-2.22  (m,  3H),  1.81-1.73  (m,  1H).
調製４６：（Ｓ）−５−（ヨードメチル）ピロリジン−２−オン
【化５８】
2019142959.tif 000076
【０２８０】
（Ｓ）−（５−オキソピロリジン−２−イル）メチル４−メチルベンゼンスルホネート（４．５ｇ，１６．７ｍｍｏｌ，１．０当量）を、無水アセトニトリル（１４０ｍＬ）に溶解させ、ヨウ化ナトリウム（５．００９ｇ，３３．４ｍｍｏｌ，２．０当量）を添加し、混合物を８時間還流加熱した。反応混合物を室温まで冷却し、減圧濃縮し、水を添加し、混合物を酢酸エチルで抽出した。有機層を、飽和水性チオ硫酸ナトリウム、水、および飽和水性塩化ナトリウムで洗浄した。有機画分を乾燥させ（無水硫酸ナトリウム）、濾過し、真空濃縮し、標題化合物を白色固形物として得た（２．０ｇ，５３％）。1H  NMR  (300  MHz,  CDCl3):δ  6.42  (br  s,  1H),  3.90-3.82  (s,  1H),  3.27-3.16  (m,
2H),  2.53-2.29  (m,  3H),  1.88-1.17  (m,  1H).
調製４７：（Ｒ）−５−（ヨードメチル）ピロリジン−２−オン
【化５９】
2019142959.tif 000077
【０２８１】
（Ｒ）−５−（ヒドロキシメチル）−２−ピロリジノンｐ−トルエンスルホネート（１．９ｇ，７．１ｍｍｏｌ，１．０当量）を、無水アセトニトリル（６０ｍＬ）に溶解させ、ヨウ化ナトリウム（２．０９ｇ）を添加し、混合物を８時間還流加熱した。反応混合物を室温まで冷却し、減圧濃縮し、水を添加し、混合物を酢酸エチルで抽出した。有機層を、飽和水性チオ硫酸ナトリウム、水、および飽和水性塩化ナトリウムで洗浄した。有機画分を乾燥させ（無水硫酸ナトリウム）、濾過し、真空濃縮し、標題化合物をオフホワイト色の固形物として得た（０．９７ｇ，６１％）。1H  NMR  (300  MHz,  CDCl3):δ  5.92
(br  s,  1H),  3.89-3.85  (m,  1H),  3.28-3.15  (m,  2H),  2.53-2.30  (m,  3H),  1.88-1.78  (m,  1H).
調製４８：（Ｒ）−５−メチルピロリジン−２−オン
【化６０】
2019142959.tif 000078
【０２８２】
（Ｓ）−５−（ヨードメチル）ピロリジン−２−オン（２．０ｇ，８．９ｍｍｏｌ，１．０当量）を、エタノール（６０ｍＬ）に溶解させ、炭酸ナトリウム（１．０３６ｇ，９．８ｍｍｏｌ，１．１当量）および１０％パラジウム担持炭素（０．４ｇ）を添加し、混合物を水素雰囲気下で１６時間撹拌した。混合物をセライトに通して濾過し、濾液を減圧濃縮し、橙色の半固形物を得た。得られた残渣に５％水性チオ硫酸ナトリウムを添加し、混合物を酢酸エチルで抽出した。有機層を乾燥させ（無水硫酸ナトリウム）、濾過し、真空濃縮し、標題化合物を薄黄色油状物として得た（０．５６４ｇ，６４％）。1H  NMR  (300  MHz,  CDCl3):δ  6.61  (br  s,  1H),  3.82-3.72  (sext,  1H,  J  =  6.6  Hz
),  2.45-2.22  (m,  3H),  1.71-1.59  (m,  1H),  1.23-1.21  (d,  3H,  J  =  6.6  Hz).
調製４９：（Ｓ）−５−メチルピロリジン−２−オン
【化６１】
2019142959.tif 000079
【０２８３】
（Ｓ）−５−ヨードメチルピロリジン−２−オン（１．１２ｇ）をエタノール（３０ｍＬ）に溶解させ、炭酸ナトリウム（０．５３ｇ）および１０％パラジウム担持炭素（０．２２ｇ）を添加し、混合物を水素雰囲気下で８時間撹拌した。混合物をセライトに通して濾過し、濾液を減圧濃縮した。得られた残渣に５％水性チオ硫酸ナトリウムを添加し、混合物を酢酸エチルで抽出した。有機層を乾燥させ（無水硫酸ナトリウム）、濾過し、真空濃縮し、標題化合物を得た（０．２６３ｇ，６１％）。1H  NMR  (300  MHz,  CDCl3):δ
6.34  (br  s,  1H),  3.83-3.72  (sext,  1H,  J  =  6.3  Hz),  2.46-2.21  (m,  3H),  1.72-1.60  (m,  1H),  1.23-1.21  (d,  3H,  J  =  6.0  Hz).
調製５０：（Ｓ）−１−（（２−アミノエチル）アミノ）−３−（３，６−ジフルオロ−９Ｈ−カルバゾール−９−イル）プロパン−２−オール
【化６２】
2019142959.tif 000080
【０２８４】
（Ｒ）−３，６−ジフルオロ−９−（オキシラン−２−イルメチル）−９Ｈ−カルバゾール（０．１ｇ，０．４ｍｍｏｌ，１．０当量）およびエチレンジアミン（０．２３２ｇ，３．９ｍｍｏｌ，１０．０当量）を含むエタノール（２ｍＬ）の混合物を、５５℃で５時間撹拌した。反応混合物を室温まで冷却し、真空濃縮し、淡黄色のシロップを得た。これをゆっくり固化し、オフホワイト色の固形物を形成させた（０．１２２ｇ，９６％）。1H  NMR  (300  MHz,  CDCl3):δ  7.68  (dd,  2H,  J  =  8.7,  2.7  Hz),  7.42  (dd,  2H,  J  =  8.7,  4.2  Hz),  7.22  (td,  2H,  J  =  9.0,  2.7  Hz),  4.33-4.31  (d,  2H,  J  =  5.4  Hz),  4.15  (m,  1H),  2.85-2.55  (m,  6H)1.84  (br  s,
4H).ESI  (m/z):320.2  (M+H).
調製５１：（Ｒ）−４−ベンジル−３−（４−ブロモブタノイル）オキサゾリジン−２−オン
【化６３】
2019142959.tif 000081
【０２８５】
丸底フラスコに、４−ブロモ酪酸（１９．２２６ｇ，１１５．１ｍｍｏｌ，１．０当量）および乾燥ジエチルエーテル（５００ｍＬ）を仕込んだ。得られた溶液を、−７８℃ま
で冷却し、トリエチルアミン（１６．４７３ｍＬ，１１８．５ｍｍｏｌ，１．１当量）を添加した後、トリメチルアセチルクロリド（１４．５９６ｍＬ，１１８．５ｍｍｏｌ，１．１当量）を添加した。白色析出物が形成され、その際に冷浴を除き、反応混合物を０℃まで昇温させ、２時間撹拌し、スラリーを−７８℃まで再冷却した。個別の反応槽内で、２．５Ｍのｎ−ブチルリチウムのヘキサン溶液（４５．１４６ｍＬ，１１２．９ｍｍｏｌ，１．０当量）を、−７８℃にて無水テトラヒドロフラン（１７０ｍＬ）中で撹拌した（Ｒ）−４−ベンジル−２−オキサゾリジノン（２０．０００ｇ，１１２．９ｍｍｏｌ，１．０当量）の溶液に滴下した。１０分後、得られたスラリーを、広口径のカニューラによって、混合無水物（およそ１００ｍＬの無水テトラヒドロフランで洗浄した）に添加した。−７８℃で１５分後、混合物を３０分間にわたって０℃まで昇温させ、次いで、この温度を１時間維持した。次いで、スラリーを水（１８０ｍＬ）で注意深くクエンチし、さらに５分間撹拌し、次いで、室温まで昇温させた。得られた溶液を、酢酸エチル（２×５００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物を、水、飽和水性重炭酸ナトリウム（５００ｍＬ）、飽和水性塩化ナトリウム（４００ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（無水硫酸ナトリウム）、濾過し、真空濃縮した。粗製残渣を、フラッシュクロマトグラフィーによって精製し（シリカゲル、１０から５０％までの酢酸エチル／ヘキサン）、透明な油状物を得た（２６．０ｇ，７１％）。1H  NMR  (300  MHz,  CDCl3):δ  7.19-7.37  (m,  5H),  4.63-4.71  (m,  1H),  4.16-4.25  (m,  2H),  3.52  (t,  2H,  J  =  6.5  Hz),  3.29  (dd,  1H,  J  =  3.3,  13.5  Hz),  3.08-3.18  (m,  2H),  2.78  (dd,  1H,  J  =  9.6,  13.5  Hz),  2.21-2.30  (m,  2H).
【０２８６】
（Ｓ）エナンチオマーを同様の様式で合成した。
調製５２：（Ｒ）−３−（４−アジドブタノイル）−４−ベンジルオキサゾリジン−２−オン
【化６４】
2019142959.tif 000082
【０２８７】
アジ化ナトリウム（７．６２３ｇ，１１７．３ｍｍｏｌ，１．５当量）を、（Ｒ）−４−ベンジル−３−（４−ブロモブタノイル）オキサゾリジン−２−オン（２５．５００ｇ，７８．２ｍｍｏｌ，１．０当量）を含む無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２２５ｍＬ）の撹拌溶液に添加した。得られた溶液を、５５℃で１５分間および７０℃で２時間加熱した。室温まで冷却した後、溶液を飽和水性塩化ナトリウム／酢酸エチル（１．４Ｌ）に注入し、水および飽和水性塩化ナトリウムで洗浄し、乾燥させ（無水硫酸ナトリウム）、濾過し、真空濃縮し、油状物を得た（２２．０ｇ，９８％）。これをさらに精製せずに使用した。1H  NMR  (300  MHz,  CDCl3):δ  7.36-  7.19  (m,  5H),  4.62-4.72  (m,
1H),  4.10-4.25  (m,  2H),  3.41  (t,  2H,  J  =  6.6  Hz),  3.30  (dd,  1H,  J  =  3.3,  13.2  Hz),  2.99-3.10  (m,  2H),  2.79  (dd,  2H,  J  =  9.9,  13.5
Hz),  1.93-2.02  (m,  2H);HPLC  analysis:  (C18,  10-90%  acetonitrile  in  water  +  0.1%  trifluoroacetic  acid  over  20  min:retention  time,  %  area  at
254  nm):12.3  min,  95%.
【０２８８】
（Ｓ）エナンチオマーを同様の様式で合成した。
調製５３：（Ｒ）−３−（（Ｒ）−４−アジド−２−メチルブタノイル）−４−ベンジルオキサゾリジン−２−オン
【化６５】
2019142959.tif 000083
【０２８９】
−７８℃の無水テトラヒドロフラン（１２５ｍＬ）中で撹拌した（Ｒ）−３−（４−アジドブタノイル）−４−ベンジルオキサゾリジン−２−オン（２０．６００ｇ，７１．５ｍｍｏｌ，１．０当量）の溶液に、１．０Ｍのナトリウムビス（トリメチルシリル）アミドを含むテトラヒドロフラン溶液（１１９．０８８ｍＬ，７１．５ｍｍｏｌ，１．０当量）をゆっくり添加した。１５分後、得られた溶液を、ヨードメタン（４．６７１ｍＬ，７５．０ｍｍｏｌ，１．０当量）で処理した。冷浴を除き、５分後、反応槽を氷水浴に入れ、さらに１５分間撹拌した。反応液を飽和水性重炭酸ナトリウム（３００ｍＬ）でクエンチし、酢酸エチル（２×３００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物を、飽和水性塩化ナトリウム（２×２００ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（無水硫酸マグネシウム）、濾過し、真空濃縮した。フラッシュクロマトグラフィーによる精製により（４００ｇシリカゲル、１０から５０％までの酢酸エチル／ヘキサン）、所望の生成物を透明な油状物として得た（９．７ｇ，４５％）。1H  NMR  (300  MHz,  CDCl3):δ  7.20-7.38  (m,  5H),  4.65-4.72  (m,  1H),  4.15-4.26  (m,  2H),  3.85-3.79  (m,  1H),  3.35  (app.t,  2H,
J  =  6.0  Hz),  3.25  (dd,  1H,  J  =  13.5,  3.6Hz),  2.78  (dd,  1H,  J  =
13.0  Hz,  9.0  Hz),  2.04-2.18  (m,  1H),  1.67-1.78  (m,  1H),  1.27  (d,  3H,  J  =  6.9  Hz);HPLC  analysis:  (C18,  10-90%  acetonitrile  in  water  +  0.1%  trifluoroacetic  acid  over  20  min:retention  time,  %  area  at  254  nm):13.0min,  99.4%.
【０２９０】
（Ｓ）エナンチオマーを同様の様式で合成した。
調製５４：（Ｒ）−３−メチルピロリジン−２−オン
【化６６】
2019142959.tif 000084
【０２９１】
室温にて無水テトラヒドロフラン（１２５ｍＬ）中で撹拌した（Ｒ）−３−（（Ｒ）−４−アジド−２−メチルブタノイル）−４−ベンジルオキサゾリジン−２−オン（９．６５０ｇ，３１．９ｍｍｏｌ，１．０当量）の溶液に、トリフェニルホスフィン（１６．７４４ｇ，６３．８ｍｍｏｌ，２．０当量）を添加した。５分後（溶液が黄色になり、発泡する）、水（０．５７５ｍＬ，３１．９ｍｍｏｌ，１．０当量）を添加し、反応混合物を２５℃で１８時間撹拌した。混合物を濃縮し、得られた残渣を、フラッシュクロマトグラフィーによって精製し（シリカゲル、７５から１００％までの酢酸エチル／ヘキサン、次いで、１００％から９０％までの酢酸エチル／メタノールのグラジエント）、所望の生成物を得た（２．９８ｇ，９５％）。1H  NMR  (300  MHz,  CDCl3):δ  6.10  (br.s,  1H),  3.25-3.35  (m,  2H),  2.27-2.50  (m,  2H),  1.68-1.80  (m,  1H),  1.20  (d,
3H,  J  =  7.5  Hz).
【０２９２】
（Ｓ）エナンチオマーを同様の様式で合成した。
調製５５：（Ｓ）−３−（（トリメチルシリル）オキシ）ピロリジン−２−オン
【化６７】
2019142959.tif 000085
【０２９３】
Ｈａｒｒｉｓ，Ｂ．Ｄ．ら、Ｓｙｎｔｈ．Ｃｏｍｍｕｎ．１９８６，１６，１８１５の手順に従った。トリメチルシリルクロリド（０．８０５ｍＬ，６．３ｍｍｏｌ，０．１当量）を、（Ｓ）−（−）−４−アミノ−２−ヒドロキシ酪酸（１５．０００ｇ，１２５．９ｍｍｏｌ，１．０当量）を含むキシレン（１Ｌ）とヘキサメチルジシラザン（１８４．７５７ｍＬ，８８１．５ｍｍｏｌ，７．０当量）との撹拌混合物に室温で添加した。反応混合物を、４時間還流加熱し、室温まで冷却させ、無水エタノール／メタノール（１Ｌ）で希釈した。溶媒を減圧下で除去し、粗製生成物を得た。これを、溶出液として酢酸エチル／塩化メチレン（３０から８０％までのグラジエント）を使用してカラムクロマトグラフィーによって精製し、白色固形物を得た（１７．９ｇ，８２％）。1H  NMR  (300  MHz,  CDC13):δ  6.49  (br  s,  1H),  4.28-4.23  (t,  1H,  J=  7.7  Hz),  3.40-3.21
(m,  2H),  2.42-2.32  (m,  2H),  2.08-1.95  (m,  2H),  0.18  (s,  9H).
調製５６：（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル２−オキソ−３−（（トリメチルシリル）オキシ）ピロリジン−１−カルボキシレート
【化６８】
2019142959.tif 000086
【０２９４】
ＤｉＲｏｃｃｏ，Ｄ．Ａ．ら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．２００９，１３１，１０８７２およびＤｉＲｏｃｃｏ，Ｄ．Ａ．ら、ＷＯ  ２０１２／００９３７２の手順に従った。（Ｓ）−３−（トリメチルシリルオキシ）ピロリジン−２−オン（６．００ｇ，３４．６２ｍｍｏｌ，１．０当量）を含む無水塩化メチレン（１５０ｍＬ）の溶液に、二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１５．１１ｇ，６９．２４ｍｍｏｌ，２．０当量）、トリエチルアミン（４．８２ｍＬ，３４．６２ｍｍｏｌ，１．０当量）、および４−ジメチルアミノピリジン（４．２３ｇ，３４．６２ｍｍｏｌ，１．０当量）を添加した。混合物を室温で一晩撹拌し、次いで、１Ｎ水性塩酸（１００ｍＬ）を添加し、層を分離した。有機層を、１Ｎ水性塩酸（２×５０ｍＬ）および飽和水性塩化ナトリウム（１×５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（無水硫酸ナトリウム）、濾過した。溶液を真空濃縮して粗製油状物を得た。これをシリカゲルクロマトグラフィーによって精製し（０から１５％までの酢酸エチル／ヘキサンで溶出）、透明な粘性油状物を得た。これをフリーザー内で固化させた（３．９３ｇ，４２％）。1H  NMR  (300  MHz,  CDCl3):δ  4.32-4.26  (dd,  1H,  J  =  8.4,
9.3  Hz),  3.82-3.74  (ddd,  1H,  J  =  2.1,  9.0,  11.1  Hz),  3.50-3.41  (m,
1H),  2.28-2.25  (m,  1H),  1.94-1.87  (m,  1H),  1.51  (s,  9H),  0.18  (s,  9H).
調製５７：（Ｒ）−３−フルオロピロリジン−２−オン
【化６９】
2019142959.tif 000087
【０２９５】
（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル２−オキソ−３−（（トリメチルシリル）オキシ）ピロリジン−１−カルボキシレート（３ｇ，１１ｍｍｏｌ）を含む無水塩化メチレン（５５ｍＬ）の溶液を−７８℃まで冷却し、その時点でジエチルアミノスルファートリフルオリド（２．９ｍＬ，２２ｍｍｏｌ，２．０当量）を滴下した。次いで、溶液を、室温までゆっくり昇温させ、次いで、飽和水性重炭酸ナトリウム（５０ｍＬ）を添加して反応物をクエンチした。層を分離し、次いで、有機層を、飽和水性塩化アンモニウム（２×２５ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（無水硫酸ナトリウム）、濾過し、真空蒸留し、粗製固形物を得た。次いで、この粗製物質を塩化メチレン（４０ｍＬ）に溶解させ、トリフルオロ酢酸（２．５ｍＬ，３３ｍｍｏｌ，３．０当量）を添加した。溶液を３時間撹拌し、その時点でガスの発生が静まっていた。真空濃縮によって黄褐色の液状物が得られた。これを、シリカゲルクロマトグラフィーによって精製し（０から１０％までのメタノール／塩化メチレンで溶出）、所望の生成物を白色固形物として得た（０．７７ｇ，６８％）。1H  NMR  (300  MHz,  CDC13):δ  7.35  (br  s,  1H),  5.15-4.93  (dt,  1H,  J  =  7.6,  53.4  Hz),
3.50-3.34  (m,  2H),  2.53  (m,  1H),  2.39-2.21  (m,  1H).
調製５８：（Ｒ）−３−ヒドロキシピロリジン−２−オン
【化７０】
2019142959.tif 000088
【０２９６】
４−ニトロ安息香酸（９．２７３ｇ，５５．５ｍｍｏｌ，１．１当量）および（Ｓ）−（−）−３−ヒドロキシ（３ｙｄｒｏｘｙ）−２−ピロリドン（５．１００ｇ，５０．４ｍｍｏｌ，１．０当量）を含む無水テトラヒドロフラン（１７５ｍＬ）の撹拌混合物に窒素雰囲気下で、トリフェニルホスフィン（２６．４６１ｇ，１００．９ｍｍｏｌ，２．０当量）を添加した。この反応混合物に、ジイソプロピル（ｄｉｓｏｐｒｏｐｙｌ）アゾジカルボキシレート（１４．８９８ｍＬ，７５．７ｍｍｏｌ，１．５当量）を滴下した（冷水浴で外部冷却する）。反応液を室温で一晩撹拌した。反応混合物を真空濃縮し、粗製残渣を得た。室温でメタノール（１３０ｍＬ）を残渣に添加した後、炭酸カリウム（０．３８ｇ）を添加した。反応混合物を室温で８時間撹拌した。反応混合物を塩化メチレンで希釈し、セライトを通して濾過した。セライトベッドを、１％メタノールを含む塩化メチレンで洗浄した。濾液を合わせ、乾燥するまで濃縮した。残渣を、酢酸エチル：水性希塩酸（２０ｍＬ，９：１）の間で分配し、１５分間撹拌した。層を分離し、水層を酢酸エチルで３回洗浄した。水層を乾燥するまで濃縮し、固形残渣を得た。粗製残渣を、１から２％までのメタノールを含む塩化メチレン（３×５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（無水硫酸ナトリウム）、濾過し、濃縮し、黄褐色油状物を得た（３．３ｇ、６０％）。1H  NMR  (300  MHz,  CDCl3):δ  4.32-4.27  (t,  1H,  J  =  8.5  Hz),  3.36-3.19  (m,  2H),  2.48-2.40  (m,  1H),  2.07-1.93  (m,  1H),  1.16-1.14  (d,  1H,  J  =  6.3  Hz).
調製５９：（Ｒ）−３−（（トリメチルシリル）オキシ）ピロリジン−２−オン
【化７１】
2019142959.tif 000089
【０２９７】
トリメチルシリルクロリド（０．４０５ｍＬ，３．２ｍｍｏｌ，０．１当量）を、（Ｒ）−３−ヒドロキシ−２−ピロリドン（３．２００ｇ，３１．７ｍｍｏｌ，１．０当量）、キシレン（４５ｍＬ）、およびヘキサメチルジシラザン（３９．８ｍＬ，１８９ｍｍｏ
ｌ，６．０当量）の撹拌懸濁液に室温で添加した。反応混合物を、還流温度で５時間加熱し、無水エタノール（５０ｍＬ）で希釈した。減圧下で溶媒を除去した。粗製生成物を、溶出液として酢酸エチルを含む塩化メチレン（３０から８０％までのグラジエント）を使用したカラムクロマトグラフによって精製し、透明な油状物を得た。これを静置してオフホワイト色の固形物に固化させた（２．５７ｇ，４７％）。1H  NMR  (300  MHz,  CDC13):δ  6.89  (br  s,  1H),  4.28-4.23  (t,  1H,  J  =  8.1  Hz),  3.40-3.21  (m,
2H),  2.42-2.32  (m,  1H),  2.08-1.95  (m,  1H),  0.18  (s,  9H).
調製６０：（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル２−オキソ−３−（（トリメチルシリル）オキシ）ピロリジン−１−カルボキシレート
【化７２】
2019142959.tif 000090
【０２９８】
（Ｒ）−３−（（トリメチルシリル）オキシ）ピロリジン−２−オン（２．７７０ｇ，１６．０ｍｍｏｌ，１．０当量）を含む無水塩化メチレン（７５ｍＬ）の溶液に、二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（６．９７１ｇ，３１．９ｍｍｏｌ，２．０当量）、トリエチルアミン（２．２２２ｍＬ，１６．０ｍｍｏｌ，１．０当量）、およびＮ，Ｎ−４−ジメチルアミノピリジン（１．９５３ｇ，１６．０ｍｍｏｌ，１．０当量）を添加した。混合物を、室温で一晩撹拌し、次いで、塩化メチレンで希釈し、０．１Ｎ水性塩酸（１００ｍＬ）で洗浄した。有機層を０．１Ｎ水性塩酸（２×１００ｍＬ）および飽和水性塩化ナトリウム（１×１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（無水硫酸ナトリウム）、濾過した。溶液を真空濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィーによって精製し（０から１５％までの酢酸エチル／ヘキサンで溶出）、透明な粘性油状物を得た（２．１ｇ，４８％）。1H  NMR  (300
MHz,  CDCl3):δ  4.32-4.26  (dd,  1H,  J  =  8.1,  9.3  Hz),  3.82-3.74  (ddd,
1H,  J  =  2.1,  9.0,  11.1Hz),  3.50-3.41  (m,  1H),  2.32-2.23  (m,  1H),  1.97-1.87  (m,  1H),  1.54  (s,  9H),  0.18  (s,  9H).
調製６１：（Ｓ）−３−フルオロピロリジン−２−オン
【化７３】
2019142959.tif 000091
【０２９９】
（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル２−オキソ−３−（（トリメチルシリル）オキシ）ピロリジン−１−カルボキシレート（２．１００ｇ，７．７ｍｍｏｌ，１．０当量）を含む無水塩化メチレン（３７ｍＬ）の溶液を、−７８℃まで冷却し、その時点で、ジエチルアミノスルファートリフルオリド（２．０３０ｍＬ，１５．４ｍｍｏｌ，２．０当量）を滴下した。次いで、溶液を室温までゆっくり昇温し、次いで、飽和水性重炭酸ナトリウム（３３ｍＬ）を添加して反応物をクエンチした。層を分離し、有機層を、飽和水性塩化アンモニウム（２×１６ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（無水硫酸ナトリウム）、濾過し、真空濃縮し、粗製固形物を得た。次いで、この粗製物質をジクロロメタン（３０ｍＬ）に溶解させ、トリフルオロ酢酸（１．７ｍＬ，３３ｍｍｏｌ，３．０当量）を添加した。溶液を３時間撹拌し、その時点で、発泡が静まっていた。真空濃縮およびシリカゲルクロマトグラフィーによる精製により（０から１０％までのメタノール／塩化メチレンでのグラジエント）、所望の生成物をオフホワイト色の固形物として得た（０．７１ｇ，９０％）。1H  NMR  (300  MHz,  CDC13):δ  7.35  (br  s,  1H),  5.15-4.93  (dt,  1H,  J  =  7.6,  53.4  Hz),  3.50-3.34  (m,  2H),  2.53  (m,  1H),  2.39-2.21  (m,  1H).
調製６２：メチル４−メチル−５−オキソペンタノエート
【化７４】
2019142959.tif 000092
【０３００】
Ｏｉｋａｗａ，Ｍ．ら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，１９９５，５１，６２３７７の手順に従った。ピペリジン（５４．４２５ｍＬ，５５１．０ｍｍｏｌ，２．０当量）および炭酸カリウム（１３．７７４ｇ，９９．７ｍｍｏｌ，０．４当量）を含むフラスコを、水浴に浸し、プロピオンアルデヒド（１６．０００ｇ，２７５．５ｍｍｏｌ，１．０当量）を、強く撹拌しながら２０分間にわたって添加した。１８時間の攪拌後、不溶性物質を、セライトパッドを通した濾過によって除去した（パッドをジエチルエーテルで洗浄する）。濾液を乾燥させ（無水硫酸ナトリウム）、濾過し、真空濃縮した。このようにして得られた粗製エナミンを、アセトニトリル（１５０ｍＬ）に溶解させ、これにメチルアシレート（４７．４３３ｇ，５５１．０ｍｍｏｌ，２．０当量）を滴下した。反応混合物を、撹拌しながら２４時間還流した後、酢酸（３１．５４１ｍＬ，５５１．０ｍｍｏｌ，２．０当量）および水（１５０ｍＬ）を添加した。撹拌しながら２４時間還流した後、これを塩化ナトリウムで飽和し、ジエチルエーテル（３×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物を乾燥させ（無水硫酸マグネシウム）、濾過し、真空濃縮した。シリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによる精製により（０から２０％までの酢酸エチル／ヘキサン）、付加物を無色の油状物として得た（２２ｇ，５５％）。1H  NMR  (300  MHz,  CDC13):δ
9.64  (d,  1H,  J  =  1.8  Hz),  3.69  (s,  3H),  2.50-2.35  (m,  3H),  2.07  (sext,  1H,  J  =  7.2  Hz),  1.71  (sext,  1H,  J  =  7.2  Hz),  1.14  (d,  3H,
J  =  7.2  Hz).
調製６３：（３Ｒ，８Ｓ，８ａＲ）−８−メチル−３−フェニルテトラヒドロ−２Ｈ−オキサゾロ［３，２−ａ］ピリジン−５（３Ｈ）−オンおよび（３Ｒ，８Ｒ，８ａＳ）−８−メチル−３−フェニルテトラヒドロ−２Ｈ−オキサゾロ［３，２−ａ］ピリジン−５（３Ｈ）−オン
【化７５】
2019142959.tif 000093
【０３０１】
Ａｍａｔ，Ｍ．ら、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．２０１４，７９，２７９２の手順に従った。メチル４−メチル−５−オキソペンタノエート（５．７８０ｇ，４０．１ｍｍｏｌ，１．０当量）を含むトルエン（１００ｍＬ）の撹拌溶液に、（Ｒ）−（−）−フェニルグリシノール（５．５００ｇ，４０．１ｍｍｏｌ，１．０当量）を添加した。反応混合物を、ディーン・スターク装置で生成された水を共沸除去しながら、２５時間還流加熱した。冷却した後、混合物を真空濃縮し、残渣を、シリカゲルカラム（カラムをＴＥＡで前処理し、次いで、０から７０％までの酢酸エチル／ヘキサンで溶出する）によって精製し、以下の所望の生成物を得た：淡黄色固形物としての（３Ｒ，８Ｓ，８ａＳ）−８−メチル−３−フェニルテトラヒドロ−２Ｈ−オキサゾロ［３，２−ａ］ピリジン−５（３Ｈ）−オン（１．３ｇ，１４％）および無色シロップとしての（３Ｒ，８Ｓ，８ａＲ）−８−メチル−３−フェニルテトラヒドロ−２Ｈ−オキサゾロ［３，２−ａ］ピリジン−５（３Ｈ）−オン（６．５ｇ，７０％）。（３Ｒ，８Ｓ，８ａＳ）−８−メチル−３−フェニルテトラヒドロ−２Ｈ−オキサゾロ［３，２−ａ］ピリジン−５（３Ｈ）−オン：1H  NMR  (300
MHz,  CDCl3):δ  7.40-7.20  (m,  5H),  5.25  (t,  1H,  J  =  7.5  Hz),  4.61  (d,  1H,  J  =  8.4  Hz),  4.48  (t,  1H,  J  =  8.7  Hz),  3.75  (dd,  1H,  J  =  9.0,  7.8  Hz),  2.55  (dd,  1H,  J  =  18.0,  6.0  Hz),  2.46-2.33  (m,  1H),  1.88-1.51  (m,  3H),  1.19  (d,  3H,  J  =  5.7  Hz);ESI  (m/z):232.7  (M+H).
（３Ｒ，８Ｓ，８ａＲ）−８−メチル−３−フェニルテトラヒドロ−２Ｈ−オキサゾロ［３，２−ａ］ピリジン−５（３Ｈ）−オン:1H  NMR  (300  MHz,  CDCl3):δ  7.40-7.20  (m,  5H),  4.93  (d,  1H,  J  =  6.3  Hz),  4.44  (d,  1H,  J  =  9.3  Hz),
4.14  (dd,  1H,  J  =  8.7,  6.3  Hz),  4.01  (dd,  1H,  J  =  8.7,  1.2  Hz),
2.47-2.25  (m,  2H),  2.05-1.87  (m,  2H),  1.60-1.43  (m,  1H),  1.20  (d,  3H,  J  =  6.6  Hz);ESI  (m/z):232.7  (M+H).
調製６４：（Ｓ）−１−（（Ｒ）−２−ヒドロキシ−１−フェニルエチル）−５−メチルピペリジン−２−オン
【化７６】
2019142959.tif 000094
【０３０２】
Ａｍａｔ，Ｍ．ら、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．２０１４，７９，２７９２の手順に従った。（３Ｒ，８Ｓ，８ａＲ）−８−メチル−３−フェニルテトラヒドロ−２Ｈ−オキサゾロ［３，２−ａ］ピリジン−５（３Ｈ）−オン（３．６００ｇ，１５．６ｍｍｏｌ，１．０当量）を含む無水塩化メチレン（１００ｍＬ）の撹拌溶液に、トリエチルシラン（７．４５８ｍＬ，４６．７ｍｍｏｌ，３．０当量）および塩化チタン（ＩＶ）（７．６９７ｍＬ，７０．０ｍｍｏｌ，４．５当量）を添加し、混合物を５０℃で２４時間撹拌した。次いで、さらなる塩化チタン（ＩＶ）（７．７ｍＬ）およびトリエチルシラン（７．５ｍＬ）を添加し、５０℃で２４時間撹拌し続けた。混合物を飽和水性重炭酸ナトリウム（１００ｍＬ）に注入した。水相をセライトで濾過し、塩化メチレンで抽出した。合わせた有機抽出物を乾燥させ（無水硫酸ナトリウム）、濾過し、真空濃縮し、残渣を得た。これを、シリカゲルでクロマトグラフィーを行って（０から１００％までの酢酸エチル／ヘキサン、次いで、純粋な酢酸エチル）、所望の生成物を無色の油状物として得て（１．６ｇ，４４％）、出発物質（０．６ｇ）を回収した。1H  NMR  (300  MHz,  CDCl3):δ  7.40-7.20
(m,  5H),  5.80  (dd,  1H,  J  =  9.6,  4.8  Hz),  4.20-4.00  (m,  2H),  2.97
(ddd,  1H,  J  =  11.7,  4.8,  2.4  Hz),  2.84  (dd,  1H,  J  =  11.7,  9.9  Hz),  2.70  (br  s,  1H),  2.59  (ddd,  1H,  J  =  17.7,  6.3,  3.0  Hz),  2.47  (ddd,  1H,  J  =  17.7,  11.1,  6.6Hz),  1.90-1.75  (m,  2H),  1.50  (m,  1H),  0.93  (d,  3H,  J  =  6.3  Hz).
調製６５：（Ｓ）−５−メチルピペリジン−２−オン
【化７７】
2019142959.tif 000095
【０３０３】
ドライアイス冷却器を取り付けた二口フラスコ中に、（Ｓ）−１−（（Ｒ）−２−ヒドロキシ−１−フェニルエチル）−５−メチルピペリジン−２−オン（１．６００ｇ，６．９ｍｍｏｌ，１．０当量）および無水テトラヒドロフラン（２０ｍＬ）を仕込んだ。混合
物を、窒素雰囲気下で−７８℃まで冷却し、次いで、アンモニア（５０ｍＬ）を凝縮した。反応温度を−３３℃まで昇温させた。金属ナトリウム小片を青色が持続するまで添加し、混合物を−３３℃で５分間撹拌した。反応液を、青色が消失するまで固体塩化アンモニウムを添加することによってクエンチした。混合物を室温で５時間撹拌し、塩化メチレンを添加した。混合物をセライトに通して濾過し、濾液を真空濃縮した。残渣を、シリカゲルカラムによって精製し（０から１００％までの酢酸エチル／ヘキサン、次いで、２０％メタノール／酢酸エチル）、所望の生成物を無色の油状物として得た（０．４８０ｇ，６２％）。1H  NMR  (300  MHz,  CDCl3):δ  5.84  (br  s,  1H),  3.10  (m,  1H),  2.94  (t,  1H,  J  =  10.8  Hz),  2.50-2.28  (m,  2H),  2.05-1.80  (m,  2H),  1.50
(m,  1H),  1.03  (d,  3H,  J  =  6.9  Hz).
調製６６：（Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−ヒドロキシ−１−フェニルエチル）−５−メチルピペリジン−２−オン
【化７８】
2019142959.tif 000096
【０３０４】
Ａｍａｔ，Ｍ．ら、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．２０１４，７９，２７９２の手順に従った。（３Ｒ，８Ｒ，８ａＳ）−８−メチル−３−フェニルテトラヒドロ−２Ｈ−オキサゾロ［３，２−ａ］ピリジン−５（３Ｈ）−オン（１．０００ｇ，４．３ｍｍｏｌ，１．０当量）を含む無水塩化メチレン（５０ｍＬ）の撹拌溶液に、トリエチルシラン（２．０７２ｍＬ，１３．０ｍｍｏｌ，３．０当量）および塩化チタン（ＩＶ）（２．１３８ｍＬ，１９．５ｍｍｏｌ，４．５当量）を添加し、混合物を５０℃で６時間撹拌した。混合物を飽和水性重炭酸ナトリウム（５０ｍＬ）に注入した。水相をセライトで濾過し、塩化メチレンで抽出した。合わせた有機抽出物を乾燥させ（無水硫酸ナトリウム）、濾過し、真空濃縮し、残渣を得た。これにクロマトグラフィーを行い（０から１００％までの酢酸エチル／ヘキサン、次いで、酢酸エチル）、所望の生成物を無色のシロップとして得た（０．２００ｇ，２０％）。1H  NMR  (300  MHz,  CDCl3):δ  7.40-7.20  (m,  5H),  5.67  (dd,  1H,  J  =  7.8,  6.3  Hz),  4.20-4.05  (m,  2H),  3.15-3.00  (m,  2H),  2.65-2.40  (m,  3H),  2.00-1.75  (m,  2H),  1.40  (m,  1H),  0.89  (d,  3H,  J  =  6.9  Hz).
調製６７：（Ｒ）−５−メチルピペリジン−２−オン
【化７９】
2019142959.tif 000097
【０３０５】
ドライアイス冷却器を取り付けた二口フラスコ中に、（Ｒ）−１−（（Ｓ）−２−ヒドロキシ−１−フェニルエチル）−５−メチルピペリジン−２−オン（０．２００ｇ，０．９ｍｍｏｌ，１．０当量）および無水テトラヒドロフラン（５ｍＬ）を仕込んだ。混合物を、窒素雰囲気下で−７８℃まで冷却し、次いで、アンモニア（１５ｍＬ）を凝縮した。反応温度を−３３℃まで昇温させた。金属ナトリウム小片を青色が持続するまで添加し、混合物を−３３℃で５分間撹拌した。反応液を、青色が消失するまで固体塩化アンモニウムを添加することによってクエンチした。混合物を室温で５時間撹拌し、塩化メチレンを
添加した。混合物をセライトに通して濾過し、濾液を真空濃縮した。残渣を、シリカゲルカラムによって精製し（０から１００％までの酢酸エチル／ヘキサン、次いで、２０％メタノール／酢酸エチル）、所望の生成物を黄色油状物として得た（０．０８０ｇ，８２％）。1H  NMR  (300  MHz,  CDCl3):δ  5.85  (br  s,  1H),  3.10  (m,  1H),  2.93  (t,  1H,  J  =  10.8  Hz),  2.50-2.28  (m,  2H),  2.05-1.80  (m,  2H),  1.50  (m,  1H),  1.03  (d,  3H,  J  =  6.6  Hz).
調製６８：（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル（１−アミノ−１−オキソプロパン−２−イル）カルバメート
【化８０】
2019142959.tif 000098
【０３０６】
Ｂｏｃ−Ａｌａ−ＯＭｅ（５．０００ｇ，２４．６ｍｍｏｌ，１．０当量）および２８％水性水酸化アンモニウム（１００．００ｍＬ，１４７９．７ｍｍｏｌ，６０．１当量）を含むメタノール（１００ｍＬ）の混合物を、室温で１６時間撹拌した。反応混合物を真空濃縮し、所望の生成物を白色固形物として得た（４．６５ｇ，１００％）。1H  NMR  (300  MHz,  CDCl3):δ  6.15  (br,  1H),  5.55  (br,  1H),  4.95  (br,  1H),  4.20
(br,  1H),  1.46  (s,  9H),  1.39  (d,  3H,  J  =  7.2  Hz).
調製６９：（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル（１−アミノプロパン−２−イル）カルバメート
【化８１】
2019142959.tif 000099
【０３０７】
Ｂｏｃ−Ａｌａ−ＮＨ２（４．６００ｇ，２４．４ｍｍｏｌ，１．０当量）を含む無水テトラヒドロフラン（１００ｍＬ）の撹拌溶液に窒素下で、１．０Ｍボラン−テトラヒドロフラン錯体を含むテトラヒドロフラン（８５．５３６ｍＬ，８５．５ｍｍｏｌ，３．５当量）を添加した。混合物を室温で１６時間撹拌し、次いで、７０℃で２時間加熱した。冷却した後、反応液を、発泡しなくなるまでメタノールでクエンチした。混合物を７０℃で２時間加熱し、次いで、真空濃縮した。残渣を、シリカゲルカラムによって精製し（０から１００％までの酢酸エチル／ヘキサン、次いで、０から３０％までのメタノール／塩化メチレン）、所望の生成物を半固形物として得た（１．４ｇ，３３％）。1H  NMR  (300  MHz,  CDCl3):δ  4.60  (br  s,  1H),  3.65  (m,  1H),  2.76  (dd,  1H,  J  =
12.9,  4.8  Hz),  2.64  (dd,  1H,  J  =  12.9,  6.6  Hz),  1.45  (s,  9H),  1.13  (d,  3H,  J  =  6.9  Hz).
調製７０：ｔｅｒｔ−ブチル（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−３−（３，６−ジフルオロ−９Ｈ−カルバゾール−９−イル）−２−ヒドロキシプロピル）アミノ）プロパン−２−イル）カルバメート
【化８２】
2019142959.tif 000100
【０３０８】
（Ｒ）−３，６−ジフルオロ−９−（オキシラン−２−イルメチル）−９Ｈ−カルバゾール（０．６００ｇ，２．３ｍｍｏｌ，１．０当量）および（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル−（１−アミノプロパン−２−イル）カルバメート（１．２１０ｇ，６．９ｍｍｏｌ，３．０当量）を含むエタノール（１０ｍＬ）の混合物を、７０℃で撹拌した。１５時間後、反応混合物を真空濃縮し、シリカゲルカラムによって精製し（０から１００％までの酢酸エチル／ヘキサン、次いで、０から３０％までのメタノール／塩化メチレン）、所望の生成物を白色泡状物として得（０．７５０ｇ，７５％）、アミン出発物質を回収した（０．２ｇ）。1H  NMR  (300  MHz,  CDCl3):δ  7.67  (dd,  2H,  J  =  8.7,  2.4  Hz),  7.42  (dd,  2H,  J  =  8.7,  3.9  Hz),  7.22  (td,  2H,  J  =  9.0,  2.7  Hz),  4.50-4.25  (m,  3H),  4.13  (m,  1H),  3.78  (br  s,  1H),  2.86  (dd,  1H,  J  =
12.0,  3.6  Hz),  2.70-2.50  (m,  3H),  1.43  (s,  9H),  1.10  (d,  3H,  J  =
6.3  Hz);ESI  (m/z):434.0  (M+H).
調製７１：ｔｅｒｔ−ブチル（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−３−（９Ｈ−カルバゾール−９−イル）−２−ヒドロキシプロピル）アミノ）プロパン−２−イル）カルバメート
【化８３】
2019142959.tif 000101
【０３０９】
（Ｒ）−９−（オキシラン−２−イルメチル）−９Ｈ−カルバゾール（０．１５０ｇ，０．７ｍｍｏｌ，１．０当量）および（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル（１−アミノプロパン−２−イル）カルバメート（０．２００ｇ，１．１ｍｍｏｌ，１．７当量）を含むエタノール（５ｍＬ）の混合物を、７０℃で撹拌した。１５時間後、反応混合物を真空濃縮し、シリカゲルカラムによって精製し（０から１００％までの酢酸エチル／ヘキサン）、所望の生成物を白色泡状物として得た（０．１２０ｇ，４５％）。1H  NMR  (300  MHz,  CDCl3):δ  8.09  (d,  2H,  J  =  7.8  Hz),  7.52-7.41  (m,  4H),  7.25-7.20  (m,  2H),  4.50-4.35  (m,  3H),  4.17  (m,  1H),  3.73  (m,  1H),  2.83  (dd,  1H,  J  =
11.7,  3.6  Hz),  2.66-2.47  (m,  3H),  1.43  (s,  9H),  1.08  (d,  3H,  J  =
6.6  Hz);ESI  (m/z):398.1  (M+H).
調製７２：（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル（１−アミノ−１−オキソプロパン−２−イル）カルバメート
【化８４】
2019142959.tif 000102
【０３１０】
Ｂｏｃ−Ｄ−Ａｌａ−ＯＭｅ（５．０００ｇ，２４．６ｍｍｏｌ，１．０当量）および２８％水性水酸化アンモニウム（１００ｍＬ，１４７９．７ｍｍｏｌ，６０．１当量）を含むメタノール（１００ｍＬ）の混合物を、室温で１６時間撹拌した。反応混合物を真空濃縮し、所望の生成物を白色固形物として得た（４．６５ｇ，１００％）。1H  NMR  (300  MHz,  CDCl3):δ  6.15  (br,  1H),  5.60  (br,  1H),  5.00  (br,  1H),  4.20  (br,  1H),  1.46  (s,  9H),  1.39  (d,  3H,  J  =  6.9  Hz).
調製７３：（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル（１−アミノプロパン−２−イル）カルバメート
【化８５】
2019142959.tif 000103
【０３１１】
Ｂｏｃ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ２（４．６００ｇ，２４．４ｍｍｏｌ，１．０当量）を含む無水テトラヒドロフラン（１００ｍＬ）の撹拌溶液に窒素下で、１．０Ｍボラン−テトラヒドロフラン錯体を含むテトラヒドロフラン（９７．７５６ｍＬ，９７．８ｍｍｏｌ，４．０当量）を添加した。混合物を室温で１６時間撹拌し、次いで、７０℃で２時間加熱した。冷却した後、反応液を、発泡しなくなるまでメタノールでクエンチした。混合物を７０℃で２時間加熱し、次いで、真空濃縮した。残渣を、シリカゲルカラムによって精製し（０から３０％までのメタノール／塩化メチレン）、所望の生成物を無色の油状物として得た（１．５ｇ，３５％）。1H  NMR  (300  MHz,  CDCl3):δ  4.60  (br  s,  1H),  3.65  (m,  1H),  2.75  (dd,  1H,  J  =  12.9,  5.1  Hz),  2.63  (dd,  1H,  J  =  12.9,  6.6  Hz),  1.45  (s,  9H),  1.41  (s,  2H),  1.12  (d,  3H,  J  =  6.3  Hz).
調製７４：ｔｅｒｔ−ブチル（（Ｒ）−１−（（（Ｓ）−３−（３，６−ジフルオロ−９Ｈ−カルバゾール−９−イル）−２−ヒドロキシプロピル）アミノ）プロパン−２−イル）カルバメート
【化８６】
2019142959.tif 000104
【０３１２】
（Ｒ）−３，６−ジフルオロ−９−（オキシラン−２−イルメチル）−９Ｈ−カルバゾ
ール（０．２００ｇ，０．８ｍｍｏｌ，１．０当量）および（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル（１−アミノプロパン−２−イル）カルバメート（０．４０３ｇ，２．３ｍｍｏｌ，３．０当量）を含むエタノール（１０ｍＬ）の混合物を、７０℃で撹拌した。１５時間後、反応混合物を真空濃縮し、シリカゲルカラムによって精製し（０から３０％までのメタノール／塩化メチレン）、所望の生成物を白色粉末として単離した（０．２５０ｇ，７５％）。1H  NMR  (300  MHz,  CDCl3):δ  7.68  (dd,  2H,  J  =  8.7,  2.7  Hz),  7.41  (dd,  2H,  J  =  9.3,  4.2  Hz),  7.22  (td,  2H,  J  =  9.3,  2.4  Hz),  4.43  (br  s,  1H),  4.35  (d,  2H,  J  =  5.7  Hz),  4.12  (m,  1H),  3.78  (br  s,  1H),  2.80  (dd,  1H,  J  =  12.3,  3.6  Hz),  2.63  (dd,  1H,  J  =  12.3,  5.7  Hz),  2.57  (d,  2H,  J  =  7.2  Hz),  1.44  (s,  9H),  1.11  (d,  3H,  J  =  6.6  Hz);ESI  (m/z):434.0  (M+H).
調製７５：ｔｅｒｔ−ブチル（（Ｒ）−１−（（（Ｓ）−３−（９Ｈ−カルバゾール−９−イル）−２−ヒドロキシプロピル）アミノ）プロパン−２−イル）カルバメート
【化８７】
2019142959.tif 000105
【０３１３】
（Ｒ）−９−（オキシラン−２−イルメチル）−９Ｈ−カルバゾール（０．１５０ｇ，０．７ｍｍｏｌ，１．０当量）および（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル（１−アミノプロパン−２−イル）カルバメート（０．３５１ｇ，２．０ｍｍｏｌ，３．０当量）を含むエタノール（１０ｍＬ）の混合物を、７０℃で撹拌した。１５時間後、反応混合物を真空濃縮し、シリカゲルカラムによって精製し（０から３０％までのメタノール／塩化メチレン）、所望の生成物を白色泡状物として単離した（０．２１０ｇ，７８％）。1H  NMR  (300  MHz,  CDCl3):δ  8.10  (d,  2H,  J  =  7.5  Hz),  7.55-7.40  (m,  4H),  7.27-7.20  (m,  2H),  4.60-4.30  (m,  3H),  4.16  (m,  1H),  3.78  (m,  1H),  2.80  (dd,  1H,  J  =  12.3,  3.6  Hz),  2.67  (dd,  1H,  J  =  12.0,  8.4  Hz),  2.60-2.50  (m,  2H),  1.44  (s,  9H),  1.10  (d,  3H,  J  =  6.6  Hz);ESI  (m/z):398.1  (M+H).
実施例２：式Ｉの化合物の調製
化合物１：１−（３−（９Ｈ−カルバゾール−９−イル）−２−ヒドロキシプロピル）ピペリジン−２−オン
【化８８】
2019142959.tif 000106
【０３１４】
ピペリジン−２−オン（０．１３３ｇ，１．３ｍｍｏｌ）を含むジメチルスルホキシド（５ｍＬ）の撹拌溶液に、カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（０．１５１ｇ，１．３ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で１時間撹拌した。９−（オキシラン−２−イルメチル）−
９Ｈ−カルバゾール（０．１５０ｇ，０．７ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で１６時間撹拌した。混合物を水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和水性塩化ナトリウムで洗浄し、乾燥させ（無水硫酸ナトリウム）、濾過し、真空濃縮した。残渣を、シリカゲルカラム（５０から１００％までの酢酸エチル／ヘキサン）、次いで、分取用ＨＰＬＣ（Ｃ１８、３０から８０％までのアセトニトリル／水＋０．１％ギ酸、０〜８分にわたる）によって精製し、生成物を白色泡状物として得た（０．０９８ｇ，４５％）。1H  NMR  (300  MHz,  CDCl3):δ  8.08  (d,  2H,  J  =  7.8  Hz),  7.50-7.40  (m,  4H),
7.28-7.18  (m,  2H),  4.60-4.25  (m,  4H),  3.87  (dd,  1H,  J  =  14.1,  7.8
Hz),  3.15-2.95  (m,  3H),  2.36  (t,  2H,  J  =  5.7  Hz),  1.85-1.55  (m,  4H);ESI  (m/z):323.2  (M+H).
化合物２〜７２の化合物：
【０３１５】
化合物２〜７２を、化合物１のために使用した手順に類似する手順またはカリウムｔｅｒｔ−ブトキシドの代わりに水素化ナトリウム（０．４当量）を使用することにより調製した。あるいは、ホスファゼン塩基Ｐ４−ｔ−Ｂｕを、カリウムｔｅｒｔ−ブトキシドの代わりに使用することもできる。以下の標的のための出発物質が市販されていない場合、合成は前述の実施例に記載されている。
【表１Ｍ−１】
2019142959.tif 000107
【表１Ｍ−２】
2019142959.tif 000108
【表１Ｍ−３】
2019142959.tif 000109
【表１Ｍ−４】
2019142959.tif 000110
【表１Ｍ−５】
2019142959.tif 000111
【表１Ｍ−６】
2019142959.tif 000112
【表１Ｍ−７】
2019142959.tif 000113
【表１Ｍ−８】
2019142959.tif 000114
【表１Ｍ−９】
2019142959.tif 000115
【表１Ｍ−１０】
2019142959.tif 000116
【表１Ｍ−１１】
2019142959.tif 000117
【表１Ｍ−１２】
2019142959.tif 000118
【表１Ｍ−１３】
2019142959.tif 000119
【表１Ｍ−１４】
2019142959.tif 000120
【表１Ｍ−１５】
2019142959.tif 000121
【表１Ｍ−１６】
2019142959.tif 000122
【表１Ｍ−１７】
2019142959.tif 000123
【表１Ｍ−１８】
2019142959.tif 000124
【表１Ｍ−１９】
2019142959.tif 000125
【０３１６】
化合物７１：１−（３−（３，６−ジフルオロ−９Ｈ−カルバゾール−９−イル）−２−ヒドロキシプロピル）テトラヒドロピリミジン−２（１Ｈ）−オン
【化８９】
2019142959.tif 000126
【０３１７】
３，６−ジフルオロ−９−（オキシラン−２−イルメチル）−９Ｈ−カルバゾール（０．０６ｇ，０．２ｍｍｏｌ）および１，３−ジアミノプロパン（０．１９５ｍＬ，２．３ｍｍｏｌ）を含むエタノール（２ｍＬ）の混合物を、４０℃で５時間撹拌した。反応混合物を真空濃縮し、淡黄色の油状物を得た。ESI  (m/z):334.2  (M+H).残渣を塩化メチレン（１０ｍＬ）に０℃で溶解させ、４−ジメチルアミノピリジン（０．００５ｇ）および１，１’−カルボニルジイミダゾール（０．０５６ｇ，０．３ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温まで昇温させ、１６時間撹拌した。反応液を真空濃縮し、残渣をシリカゲルクロマトグラフィーによって精製し（０から１０％までのメタノール／塩化メチレン）、所望
の生成物を白色粉末として得た（０．０６０ｇ，７２％）。1H  NMR  (300  MHz,  d6-DMSO):δ  7.99  (dd,  2H,  J  =  9.6,  2.7  Hz),  7.56  (dd,  2H,  J  =  9.0,  4.2
Hz),  7.30  (td,  2H,  J  =  9.0,  2.7  Hz),  6.29  (s,  1H),  5.24  (d,  1H,
J  =  5.4  Hz),  4.35  (dd,  1H,  J  =  15.0,  3.6  Hz),  4.24  (dd,  1H,  J  =  15.0,  8.1  Hz),  4.07  (m,  1H),  3.55-3.05  (m,  6H),  1.90-1.70  (m,  2H);ESI  (m/z):360.1  (M+H).
化合物７２〜８４：
【０３１８】
化合物７２〜８４を、１，３−ジアミノプロパンの代わりに適切なジアミン、例えば、Ｎ−メチル−１，３−ジアミノプロパン、エチレンジアミン、Ｎ−エチルエチレンジアミン（Ｎ−ｅｔｈｙｌｅｔｈｌｅｎｅｄｉａｍｉｎｅ）、Ｎ１−シクロヘキシルプロパン−１，３−ジアミン、Ｎ１−シクロブチルプロパン−１，３−ジアミン、Ｎ１−シクロペンチルプロパン−１，３−ジアミン、またはプロパン−１，２−ジアミンを使用した、化合物７１のために使用した手順に類似する手順によって調製した。使用した市販されていないジアミンの調製は、中間体の調製に記載されている。
【表１Ｎ−１】
2019142959.tif 000127
【表１Ｎ−２】
2019142959.tif 000128
【表１Ｎ−３】
2019142959.tif 000129
【表１Ｎ−４】
2019142959.tif 000130
【０３１９】
化合物８５：１−（３−（３，６−ジフルオロ−９Ｈ−カルバゾール−９−イル）−２−ヒドロキシプロピル）−４−メチルイミダゾリジン−２−オン
【化９０】
2019142959.tif 000131
【０３２０】
ｔｅｒｔ−ブチル（１−（（３−（３，６−ジフルオロ−９Ｈ−カルバゾール−９−イル）−２−ヒドロキシプロピル）アミノ）プロパン−２−イル）カルバメート（１．４００ｇ，純度８０％，２．６ｍｍｏｌ，１．０当量）およびカリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（０．２９０ｇ，２．６ｍｍｏｌ，１．０当量）を含む無水テトラヒドロフラン（２７０ｍＬ）の混合物を、撹拌しながら２時間還流した。反応混合物を室温まで冷却し、酢酸（０．１ｍＬ）およびシリカゲルを添加し、混合物をスラリーになるまで減圧濃縮した。粗製残渣を、０から１０％までのメタノール／塩化メチレンのグラジエントでの溶出によるシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、固形物を得た。固形物を、酢酸エチルから晶出させ、白色固形物を得た（０．６７３ｇ，７２％）。1H  NMR  (300  MHz,
CDCl3;mixture  of  diastereomers):δ  7.69-7.65  (dd,  2H,  J  =  2.7,  8.7  Hz),  7.40-7.35  (dd,  2H,  J  =  4.1,  9.0  Hz),  7.24-7.18  (td,  2H,  J  =  2.7,  9.0  Hz),  4.47-4.19  (m,  5H),  3.82  (br  m,  1H),  3.58-2.93  (m,  4H),  1.26-1.24  (d,  3H,  J  =  6.3  Hz);ESI  (m/z):360.9  (M+H).
化合物８６：１−（３−（３，６−ジフルオロ−９Ｈ−カルバゾール−９−イル）−２−ヒドロキシプロピル）−３−エチルテトラヒドロピリミジン−２（１Ｈ）−オン
【化９１】
2019142959.tif 000132
【０３２１】
３，６−ジフルオロ−９Ｈ−カルバゾール（０．０６５ｇ，０．３ｍｍｏｌ）を含む無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．３ｍＬ）の溶液に、鉱油中６０％の水素化ナトリウム（０．００９ｇ，０．２ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で３０分間撹拌した。１−エチル−３−（オキシラン−２−イルメチル）テトラヒドロピリミジン−２（１Ｈ）−オン（０．０５５ｇ，０．３ｍｍｏｌ）を含む無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．３ｍＬ）の溶液を添加し、混合物を７０℃で８時間加熱した。反応混合物をメタノールで希釈し、濾過し、分取用ＨＰＬＣによって精製し（Ｃ１８、３０から９５％までのアセトニトリルを含む水）、白色固形物を得た（０．０７２ｇ，６２％）。1H  NMR  (300MHz,
CDCl3):δ  7.67-7.63  (dd,  2H,  J  =  2.6,  9.0  Hz),  7.39-7.35  (dd,  2H,  J  =  4.2,  8.7  Hz),  7.23-7.16  (td,  2H,  J  =  2.4,  9.0  Hz),  5.52  (d,  1H,  J  =  2.7  Hz),  4.37-4.21  (m,  3H),  3.86-3.79  (m,  1H),  3.43-2.98  (m,
6H),  2.88-2.83  (dd,  1H,  J  =  1.8,  14.7  Hz),  1.91-1.83  (quin,  2H,  J
=  5.9  Hz),  1.12-1.07  (t,  3H,  J  =  7.4  Hz);ESI  (m/z):388.1  (M+H);HPLC
analysis:  (C18,  10-90%  acetonitrile  in  water  over  20  min:retention  time,  %  area  at  254  nm):12.8  min,  100%.
化合物８７〜１００：
【０３２２】
化合物８７〜１００を、化合物８８のために使用した手順に類似する手順によって調製した。
【表１Ｏ−１】
2019142959.tif 000133
【表１Ｏ−２】
2019142959.tif 000134
【表１Ｏ−３】
2019142959.tif 000135
【表１Ｏ−４】
2019142959.tif 000136
【０３２３】
化合物１０１：１−（３−（３，６−ジフルオロ−９Ｈ−カルバゾール−９−イル）−２−ヒドロキシプロピル）−３，４−ジメチルテトラヒドロピリミジン−２（１Ｈ）−オン
【化９２】
2019142959.tif 000137
【０３２４】
３，６−ジフルオロ−９Ｈ−カルバゾール（０．３８ｇ，１．９ｍｍｏｌ，１．２当量）を含む無水Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（２ｍＬ）の撹拌溶液に、鉱油中６０％の水素化ナトリウム（０．０７５ｇ，１．９ｍｍｏｌ，１．２当量）を添加した。室温で２時間撹拌した後、得られたカルバゾールナトリウム溶液は、使用可能な状態であった。
【０３２５】
１，６−ジメチルテトラヒドロピリミジン−２（１Ｈ）−オン（０．２ｇ，１．６ｍｍｏｌ，１．０当量）を含む乾燥Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（３ｍＬ）の撹拌溶液に０℃で、鉱油中６０％の水素化ナトリウム（０．０７５ｇ，１．９ｍｍｏｌ，１．２当量）
を添加し、混合物を室温で１時間撹拌した。エピブロモヒドリン（０．１５５ｍＬ，１．９ｍｍｏｌ，１．２当量）を０℃で添加し、混合物を室温までゆっくり昇温させ、１６時間撹拌した。カルバゾールナトリウム溶液を添加し、混合物を７０℃で５時間加熱した。反応液を水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和水性塩化ナトリウムで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空濃縮した。残渣を、シリカゲルカラムによって精製し（０から１００％までの酢酸エチル／ヘキサン）、純粋な生成物を白色泡状物として得た（０．１１６ｇ，１９％）。1H  NMR  (300  MHz,  CDCl3):  (a  mixture  of
two  diastereomers)δ  7.68  (dd,  2H,  J  =  8.7,  2.7  Hz),  7.40  (dd,  2H,
J  =  9.0,  4.2  Hz),  7.27-7.18  (m,  2H),  5.51  and  5.06  (d,  1H,  J  =  2.7  Hz),  4.50-4.20  (m,  3H),  3.90-3.74  (m,  1H),  3.50-2.75  (m,  7H),  2.05  (m,  1H),  1.60  (m,  1H),  1.21  and  1.17  (d,  3H,  J  =  6.6  Hz);ESI  (m/z):388.2  (M+H).
化合物１０２：３−（３−（３，６−ジフルオロ−９Ｈ−カルバゾール−９−イル）−２−ヒドロキシ−２−メチルプロピル）−３，４−ジヒドロキナゾリン−２（１Ｈ）−オン
【化９３】
2019142959.tif 000138
【０３２６】
１−ベンジル−３−（３−（３，６−ジフルオロ−９Ｈ−カルバゾール−９−イル）−２−ヒドロキシ−２−メチルプロピル）−３，４−ジヒドロキナゾリン−２（１Ｈ）−オン（０．１０２ｇ，０．２ｍｍｏｌ，１．０当量）と２０％水酸化パラジウム担持炭素（０．０３５ｇ）とを含む酢酸（４ｍＬ）およびテトラヒドロフラン（２ｍＬ）の混合物を、５０ｐｓｉの水素下で４８時間撹拌した。２０％水酸化パラジウム担持炭素（０．０２ｇ）および１０％パラジウム担持炭素（０．０１ｇ）を添加し、反応混合物を５０ｐｓｉの水素下で７２時間撹拌した。混合物を濾過し、濃縮し、分取用ＨＰＬＣによって精製し（Ｃ１８、４０から８０％までのアセトニトリルを含む水）、白色固形物を得た（０．０１３ｇ，１５％）。1H  NMR  (300  MHz,  CD3OD):δ  7.73-7.70  (dd,  2H,  J  =  2.6,  8.6  Hz),  7.55-7.51  (dd,  2H,  J  =  4.1,  9.2  Hz),  7.27-7.05  (m,  3H),
7.07-7.05  (d,  1H,  J  =  7.2  Hz),  6.96-6.91  (td,  1H,  J  =  1.1,  7.5  Hz),  6.81-6.78  (d,  1H,  J  =  8.1  Hz),  4.71  (s,  2H),  4.33  (s,  2H)3.75-3.70,  3.59-3.54  (ABq,  2H,  J  =  14.4  Hz),  1.22  (s,  3H);ESI  (m/z):  422.1
(M+H);HPLC  analysis:  (C18,  5-95%  acetonitrile  in  water  +  0.1%  trifluoroacetic  acid  over  20  min:retention  time,  %  area  at  254  nm):13.5  min,
91.5%.
【０３２７】
以下の化合物を、化合物１０２のために使用した手順に類似する手順によって調製した。
【表１Ｐ】
2019142959.tif 000139
【０３２８】
化合物１０４：（１Ｓ，４Ｒ）−２−（（Ｒ）−３−（３，６−ジフルオロ−９Ｈ−カルバゾール−９−イル）−２−ヒドロキシプロピル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−オン
【化９４】
2019142959.tif 000140
【０３２９】
（１Ｓ，４Ｒ）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−オン（０．０５１ｇ，０．５ｍｍｏｌ，２．０当量）を含む無水テトラヒドロフラン（１．５ｍＬ）の撹拌溶液に、鉱油中６０％の水素化ナトリウム（０．００９ｇ，０．２ｍｍｏｌ，１．０当量）を添加し、混合物を室温で６０分間撹拌した。（Ｒ）−３，６−ジフルオロ−９−（オキシラン−２−イルメチル）−９Ｈ−カルバゾール（０．０６０ｇ，０．２ｍｍｏｌ，１．０当量）を添加し、混合物を密封チューブ内で８０℃にて１６時間撹拌した。混合物を室温まで冷却し、１Ｎ酢酸（０．０２ｍＬ）を含むメタノールを添加し、次いで、減圧濃縮した。粗製残渣を分取用ＨＰＬＣによって精製し（Ｃ１８、３０から９５％までのアセトニトリルを含む水）、白色固形物を得た（０．０５３ｇ，６１％）。1H  NMR  (300  MHz,  CDCl3):δ  7.68-7.65  (dd,  2H,  J  =  2.6,  8.6  Hz),  7.38-7.33  (dd,  2H,
J  =  4.1,  8.9  Hz),  7.24-7.17  (td,  2H,  J  =  2.5,  9.0  Hz),  4.38-4.28
(m,  4H),  3.64  (br  s,  1H),  3.43-3.38  (dd,  1H,  J  =  2.7,  14.1  Hz),  3.02-2.96  (dd,  1H,  J  =  2.7,  14.4  Hz),  2.90-2.89  (m,  1H),  1.96-1.40  (m,  6  H);ESI  (m/z):371.1  (M+H);HPLC  analysis:  (C18,  5-95%  acetonitrile  in  water  +  0.1%  trifluoroacetic  acid  over  20  min:retention  time,  %  area  at  254  nm):12.2  min,  100%;    Chiral  HPLC  analysis  (Chiralcel  AD-H,  
15%  ethanol  in  hexanes  over  42  mins:retention  time,  %  area  at  254  nm):7.7  min,  98.5%;12.6min,  0.7%  (98.5%  de).
化合物１０５〜１３８：
【０３３０】
化合物１０５〜１３８を、化合物１０４のために使用した手順に類似する手順によって調製した。
【表１Ｑ−１】
2019142959.tif 000141
【表１Ｑ−２】
2019142959.tif 000142
【表１Ｑ−３】
2019142959.tif 000143
【表１Ｑ−４】
2019142959.tif 000144
【表１Ｑ−５】
2019142959.tif 000145
【表１Ｑ−６】
2019142959.tif 000146
【表１Ｑ−７】
2019142959.tif 000147
【表１Ｑ−８】
2019142959.tif 000148
【表１Ｑ−９】
2019142959.tif 000149
【表１Ｑ−１０】
2019142959.tif 000150
【表１Ｑ−１１】
2019142959.tif 000151
【表１Ｑ−１２】
2019142959.tif 000152
【表１Ｑ−１３】
2019142959.tif 000153
【表１Ｑ−１４】
2019142959.tif 000154
【表１Ｑ−１５】
2019142959.tif 000155
【表１Ｑ−１６】
2019142959.tif 000156
【表１Ｑ−１７】
2019142959.tif 000157
【０３３１】
式Ｉの化合物の評価に有用な具体的なアッセイとしては、後述するような、試験化合物の効力を評価するためのＰｅｒ２アッセイおよび試験化合物の標的を評価するためのＣｒｙ１アッセイが挙げられる。
【０３３２】
実施例３：試験化合物の効力を評価するためのＰｅｒ２アッセイ
化合物を、Ｚｈａｎｇ，Ｅ．Ｅ．ら、Ｃｅｌｌ，２００９，１３９，１９９−２１０に既報のハイスループット概日アッセイ系を使用することによりスクリーニングした。簡単には、Ｐｅｒ２−ｄＬｕｃを有する安定なＵ２ＯＳレポーター細胞を３０，０００細胞／ウェルの密度で、Ｃｏｒｎｉｎｇ  ９６ウェルのソリッドで白色平底のＴＣ処理済みマイクロプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ（登録商標））内にプレーティングし、５％ＣＯ２の存在下、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）およびペニシリン（１００単位／ｍＬ）−ストレプトマイシン（１００μｇ／ｍＬ）を補給したダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）の培地中、３７℃で４８時間インキュベートした。式Ｉの化合物を、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中にて、典型的には、２ｍｇ／ｍＬの濃度で可溶化する。次いで、ＤＭＳＯストックを、ＤＭＳＯ中で、典型的には、各希釈工程において３倍希釈されるように連続希釈する。４８時間後、細胞培養培地を、プレートした細胞から除去し、細胞を、５μＭフォルスコリン（Ｔｏｃｒｉｓ（登録商標））および１ｍＭビートルルシフェリン（Ｐｒｏｍｅｇａ（登録商標））を補給した２００μＬ／ウェルの完全細胞培養培地（上記）で同調させた。同調直後に、１μＬの化合物の希釈物を各ウェルに添加する。プレートをシールし、軽く振盪し、３５℃で最低３日間連続して発光を測定すること（Ｔｅｃａｎ（登録商標）Ｉｎｆｉｎｉｔｅ  Ｍ２００またはＴｅｃａｎ（登録商標）Ｉｎｆｉｎｉｔｅ  Ｍ２００  Ｐｒｏ）により遺伝子発現をモニタリングした。発光生データ（カウント）を、Ｍｕｌｔｉｃｙｃｌｅ（商標）ソフトウェア（Ａｃｔｉｍｅｔｒｉｃｓ，Ｉｎｃ．）を使用して最初に分析して、各化合物濃度における振幅（ａｍｐ）、期間、および位相（ｐｈｚ）を決定した。対照ウェル（すなわち、化合物なし、ＤＭＳＯのみ）の期間は、２６〜３０時間であってよい。次いで、ａｍｐデータを化合物濃度（Ｍ）の対数に対してプロットし、非線形回帰分析によって解析してＥＣ５０を決定した。
【０３３３】
以下の表に、明記した化合物のＰｅｒ２  ＥＣ５０データを示す。ＥＣ５０はマイクロモル濃度で報告している。
【表１−１】
2019142959.tif 000158
【表１−２】
2019142959.tif 000159
【０３３４】
当業者であれば、本明細書に記載の任意の化合物のＰｅｒ２  ＥＣ５０データを測定するためのこのアッセイを容易に最適化することができる。
【０３３５】
実施例４：熱シフト結合アッセイ
ヒトＣＲＹ１タンパク質（ｈＣＲＹ１）の単離ＦＡＤ結合ドメインへの化合物の結合を、示差走査蛍光定量（「熱シフト」）アッセイ（Ｐａｎｔｏｌｉａｎｏら、（２００１）Ｊ  Ｂｉｏｍｏｌ  Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ  ６，４２９；Ｎｉｅｓｅｎら（２００７）Ｎａｔｕｒｅ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ２，２２１２）を使用して決定した。Ｃ末端Ｍｙｃ−ＤＤＫタグを有するｈＣＲＹ１（アミノ酸残基１〜４９４）のＦＡＤ結合ドメイン（ＦＡＤＢＤ）を、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞（カタログ番号ＣＲＬ−３２１６，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）の一過性トランスフェクションによっ
て産生し、抗ＦＬＡＧアフィニティークロマトグラフィー（カタログ番号Ａ２２２０，Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）によって精製した。ＦＡＤＢＤ（０．５μｇ／ウェル）を、ＤＭＳＯ（反応物中のＤＭＳＯ最終濃度５％）を含む１７．５μｌのトリスバッファー生理食塩水（ＴＢＳ）中で化合物の希釈物と共に氷上で１０分間インキュベートし、次いで、２．５μｌの８×Ｓｙｐｒｏ−Ｏｒａｎｇｅ  Ｄｙｅ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を各ウェルに添加した。各化合物濃度について３連のウェルをアッセイした。融解温度を、ＡＢＩ７５００定量ＰＣＲ装置において、融解曲線モードを使用し、２５℃で２分間、その後、ランプ速度１℃／分で９９℃までの熱プロフィールにて測定した。各ウェルの融解温度を、融解曲線の一次微分から決定した。融解温度の変化（ΔＴｍ）を、５％ＤＭＳＯのみにおけるＦＡＤＢＤの融解温度の減算によって得た。図２１に示すように、化合物７２でΔＴｍの用量依存性の増加が認められ、これは、この化合物がｈＣＲＹ１
ＦＡＤＢＤタンパク質と物理的に関連していることを示していた。
実施例５：時計遺伝子および糖新生遺伝子の発現に及ぼすインビボでの影響
【０３３６】
本実施例では、種々のマウスモデルにおける時計遺伝子および糖新生遺伝子の発現に及ぼすカルバゾール含有アミド、カルバメート、および尿素の影響を試験した。具体的には、以下の４種の異なるマウスモデルを使用した：ＩＣＲマウス、Ｂａｌｂ／ｃマウス、Ｃ５７Ｂｌ／６Ｊ  ＤＩＯ（食餌性肥満）マウス、およびｄｂ／ｄｂマウス。Ｃ５７Ｂｌ／６Ｊ  ＤＩＯマウスおよびｄｂ／ｄｂマウスの両方は、当該分野で認識されている糖尿病、肥満、および異常脂質血症のモデルである。高脂肪食摂取に応答してＩＩ型糖尿病表現型を示す食餌性肥満症（ＤＩＯ）マウスは、肥満、高インスリン血症、インスリン抵抗性、および耐糖能障害を発症する（Ｓｒｉｎｉｖａｓａｎ  ａｎｄ  Ｒａｍａｒａｏ，２００７）。ｄｂ／ｄｂマウス（ｌｅｐｒｄｂマウス）は、レプチン受容体をコードするｄｂ遺伝子が変異している。ｄｂ／ｄｂマウスは、一過性の食欲過剰性を示し、肥満症、高血糖、高インスリン症、およびインスリン抵抗性を発症するようになる。
【０３３７】
遺伝子発現に及ぼすＣｒｙモジュレーター化合物の影響を試験するインビボ研究を、下記の種々の実験方法を使用して行った。
【０３３８】
４日間研究。Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｈｏｌｌｉｓｔｅｒ，ＣＡ）から入手した雄ＩＣＲマウス（体重３０〜３５ｇ）を、少なくとも３日間の馴化後に実験のために使用した。マウスに、ビヒクル（ＷＦＩまたは１０％コリフォア）または化合物（５０ｍｇ／ｋｇ、用量体積５ｍＬ／ｋｇ、ＰＯ）を、第１日目の午後から開始して、ＢＩＤ（１日２回）で４日間投薬した。化合物またはビヒクルの最後の用量を、採取日の朝に投与した。採取日に（最終用量の６時間後）、マウスをＣＯ２窒息によって安楽死させ、５０ｍｇの肝臓組織を切り出し、５００μｌのＲＮＡｌａｔｅｒを含むチューブに入れた。
【０３３９】
２４時間遺伝子発現研究。１７週齢の雄Ｃ５７Ｂｌ／６Ｊ  ＤＩＯマウスを購入し（Ｔｈｅ  Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｓａｃｒａｍｅｎｔｏ，ＣＡ）、２週間順化させて実験で使用した。全群サイズは処置あたり１５であり、これを５つの時点に分割し、最終的な群サイズはマウス３匹であった。マウスに、ビヒクル（注射用水（ＷＦＩ）またはＣｒｙモジュレーター化合物である化合物７２（５０ｍｇ／ｋｇを含むＷＦＩ）を、用量体積５ｍｌ／ｋｇ、ＢＩＤ、強制経口投与（ｏｒａｌ  ｇａｖａｇｅ）にて２日間で投薬し、最後の５回目の用量を採取１２時間前に投与した。
【０３４０】
合計で、各マウスは、一連の実験にわたって５回の投薬を受けた。マウスの体重を測定し、研究開始前の夕方に体重に基づいて各処置に無作為に割り当てた。３日目の午後３：００に開始し、ビヒクル処置群および化合物７２処置群由来の動物群を、ＣＯ２窒息を使用して安楽死させ、５０ｍｇの肝臓、精巣上体脂肪、および骨格筋をそれぞれ切り出し、
５００μｌのＲＮＡＬａｔｅｒを含むチューブに入れた。残りの時点の群についてその採取時にこの手順を取った。各動物について血漿試料も採取し、凍結してその後の化合物レベルの測定に使用した。
【０３４１】
マウス肝臓総ＲＮＡの調製。Ｅ．Ｚ．Ｎ．Ａ．（登録商標）ＨＰ総ＲＮＡ単離キット（Ｒ６８１２−０１および２０１０年改訂のマニュアルに記載のプロトコール）を利用して、肝臓試料からＲＮＡを調製および単離した。ＲＮＡ試料を調製するために、１０〜３０ｍｇの試料をＲＮＡ−Ｌａｔｅｒから取り出し、１．５ｍｌの微量遠心管（ｍｉｃｒｏｆｕｇｅ  ｔｕｂｅ）に入れた。ＧＴＣ溶解バッファー（７００μｌ）を組織に添加し、ローター−ステーター方式ホモジナイザー（例えば、Ｔｉｓｓｕｅ−Ｔｅａｒｏｒ，モデル番号９８５３７０  ＢｉｏＳｐｅｃ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，４．５ｍｍプローブ付き，カタログ番号９８５３７０−０４）でホモジナイズし、次いで、最高速度（１３，０００×ｇ以上）で５分間遠心分離した。透明化となった上清を、２ｍＬ回収チューブに予め挿入したＤＮＡクリアランスカラムにピペッティングすることによって移した。組み立てたカラムを、１３，０００×ｇで１分間遠心分離し、フロースルーを確保した。等体積（７００μｌ）の７０％エタノールをライセートに添加し、混合した。次いで、試料を２ｍｌ回収チューブに入れたＨｉＢｉｎｄ  ＲＮＡスピンカラムに適用し、１０，０００×ｇにて室温で６０秒間遠心分離した。ＲＮＡ洗浄バッファーＩ（２５０μｌ）を、新規の２ｍｌ回収チューブに挿入したＨｉＢｉｎｄ  ＲＮＡカラム上に直接ピペッティングすることによって添加した。組み立てたカラムを１０，０００×ｇで６０秒間遠心分離した。ＲＮＡカラムを、新規の２ｍｌ回収チューブに入れた。ＤＮａｓｅＩ保存液を、各カラム中のＨｉＢｉｎｄ  ＲＮＡ樹脂表面上に直接ピペッティングした（７５μｌ）（ＲＮａｓｅフリーＤＮａｓｅセット（Ｅ１０９１）を使用したＤＮＡｓｅ消化を使用：各ＨｉＢｉｎｄ  ＲＮＡカラムのために、ＤＮａｓｅＩ保存液を以下のように調製した：Ｅ．Ｚ．Ｎ．Ａ．（登録商標）ＤＮａｓｅＩ消化バッファー７３．５μｌ、ＲＮａｓｅフリーＤＮａｓｅＩ（２０  Ｋｕｎｉｔｚ／μｌ）１．５μｌ＝総体積７５μｌ）。結合ＲＮＡを有するカラムを、室温（２５〜３０℃）で１５分間インキュベートした。ＲＮＡ洗浄バッファーＩ（５００μｌ）をカラムに添加し、ベンチトップ上に２分間置いた。１０，０００×ｇで６０秒間の遠心分離後、フロースルーを破棄し、５００μｌのＲＮＡ洗浄バッファーＩＩを添加し、１０，０００×ｇで６０秒間遠心分離した。別の５００μｌのＲＮＡ洗浄バッファーＩＩを添加し、カラムアセンブリを１０，０００×ｇで６０秒間遠心分離した。カラムを最高速度で２分間遠心分離して、ＨｉＢｉｎｄマトリックスを完全に乾燥させた。カラムを、清潔な１．５ｍｌの微量遠心管に入れ、４０〜７０μｌの分子生物学グレードの水を添加した。１分間の撹拌後、カラムを最高速度で２分間遠心分離して、ＲＮＡを溶出させた。単離ＲＮＡを、回収チューブに回収した。
【０３４２】
マウス血中総ＲＮＡの調製。全血ＲＮＡ研究のために、雄ｄｂ／ｄｂマウス（９週齢、Ｔｈｅ  Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｍａｉｎｅ）を、各実験群についてｎ＝８マウスを使用した実験のために使用した。マウスに、化合物７２（１００ｍｇ／ｋｇ，Ｐ．Ｏ；用量体積５ｍｌ／ｋｇ，１０％コリフォア中）または１０％コリフォアを、１日１回ＺＴ０（午前７：００）に３日間投薬した（ＺＴはツァイトゲーバータイムをいい、マウス施設内で日を刺激するために点灯された時間を示す）。最終日のＺＴ７．５（午後２：３０）に、ＣＯ２窒息を使用して動物を安楽死させ、心穿刺によって心臓から血液を回収した。血液をＲＮＡＬａｔｅｒ液に総体積が１．５ｍｌとなるまで入れた。総ＲＮＡを、以下のようにＡｍｂｉｏｎマウスＲｉｂｏＰｕｒｅ血中ＲＮＡ単離キットＡＭ１９５１を使用して調製した。試料を、３分間遠心分離し、上清を破棄した。２ｍｌの溶解液を添加し、ボルテックスし、１５ｍｌチューブに移した後、数マイクロリットルの３Ｍ酢酸ナトリウムを添加した。溶解バッファーを、総体積が３．８ｍｌになるまで添加し、ボルテックスした。試料混合物を、１．５ｍｌ酸性フェノール：クロロホルムで抽出し、水相を回収した。０．５体積の１００％エタノールの添加およボル
テックス後、試料をキット付属のフィルターカラムに通し、７５０マイクロリットルの洗浄バッファー１で洗浄した。フィルターを、７５０マイクロリットルの洗浄バッファー２／３を２回通過させて洗浄し、乾燥させた。ＲＮＡを、２００マイクロリットルの分子生物学グレードの水（ＲＮａｓｅフリー）にて溶出させた。
【０３４３】
総ＲＮＡの定量。ＲｅｄｉＰｌａｔｅ  ９６  ＲｉｂｏＧｒｅｅｎ  ＲＮＡ定量キット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）のＲｅｄｉＰｌａｔｅ検量線を、２０μｌの再構築ＲＮＡ標準を１８０μｌのＲｅｄｉＰｌａｔｅ  ＴＥバッファー中に再構成したＲｅｄｉＰｌａｔｅウェルに移すことによって作成した。Ｏｍｅｇａ  Ｂｉｏ−Ｔｅｋ  ＨＰ総ＲＮＡキットに類似するキットを使用し、５０μｌ（マイクロリットル）の体積のＲＮＡｓｅフリー水で溶出した３０〜１００ｍｇの組織から調製した肝臓ＲＮＡについて、５μｌの総ＲＮＡを１９５μｌのＲｅｄｉＰｌａｔｅ  ＴＥバッファーで希釈し（ＲＮＡを４０倍希釈する）、混合した。５μｌを１９５μｌのＴＥバッファー中で再構成したＲｅｄｉＰｌａｔｅウェルに移し、室温で１０分間インキュベートした後、標準および試料を有するウェルの蛍光強度を、励起設定４８０ｎｍおよび発光設定５２０ｎｍを使用し、ゲインを約７０％に設定したＴｅｃａｎ  Ｍ２００で読み取った。あるいは、励起４８８ｎｍおよび発光５２５ｎｍならびにカットオフ５１５ｎｍにてＦｌｅｘＳｔａｔｉｏｎ３を使用することができる。検量線をＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍで作成し、試料の読み取り（未知）を、線形回帰分析を介して内挿し、ＲＮＡ試料濃度を計算した。
【０３４４】
ｃＤＮＡの調製。大容量ｃＤＮＡ逆転写キット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）の１０×ＲＴバッファー（４０〜７０μｌ）、ｄＮＴＰ、およびランダムプライマーを氷上で解凍した。各試料（通常、０．５〜４．０μｇ）について同量のインプットＲＮＡを使用して、反応を、総体積４０μｌで構成した。適量の総ＲＮＡおよびＮｕｃｌｅａｓｅフリーＨ２Ｏを混合して、総体積を２０μｌとした。各反応について４．２μｌのＲＮＡｓｅフリーＨ２Ｏ、２μｌの１０×ＲＴバッファー、０．８μｌの２５×ｄＮＴＰ、および２μｌランダムプライマーを使用してマスターミックスを作製した（任意選択的に、１０％超を十分な体積を確保するために実施すべき総反応数に添加することができる）。逆転写酵素（１μｌ）を各反応物に添加し、ボルテックスせずに慎重に混合した。いくつかの二連の試料（総数の約１０％）をＲＴ（−）組に割り当て、これらの対照を含めるのに十分な逆転写酵素を欠くマスターミックスを調製した。マスターミックス（２０μｌ）（またはＲＴ（−）マスターミックス）を、２０μｌの固定インプットＲＮＡ試料に添加した。反応物を３７℃で２時間インキュベートし、８５℃まで５分間加熱し、氷上に置いた。ｃＤＮＡ試料を、翌日までに使用する場合は４℃で保存し、またはより長い期間については−２０℃で保存した。
【０３４５】
ＲＴ−ＰＣＲ。ＰＣＲ分析について、利用したキットはＴａｑＭａｎ（登録商標）Ｆａｓｔ  Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ（２ｘ），Ｎｏ  ＡｍｐＥｒａｓｅ（登録商標）ＵＮＧであった。ＡＢＩ７５００で実施すべき反応について、２μｌのｃＤＮＡテンプレートまたはＲＴ（−）対照テンプレートを、各ウェルに入れた。実施されるべき各試料に対して１．０μｌのＴａｑＭａｎ発現アッセイ（プライマー／プローブ）および７μｌのヌクレアーゼフリーＨ２Ｏを含むマスターミックスを作製し、１８μｌのマスターミックス＋発現アッセイ＋ヌクレアーゼフリーＨ２Ｏを、各２μｌ試料に添加し、ピペッティングによって混合した。プレートを密封し、スピンダウンし、ＡＢＩ７５００に負荷した。少なくとも１つのハウスキーピングｍＲＮＡ発現アッセイ（例えば、ＧＡＰＤＨ；Ｍｍ０３３０２２４９＿ｇ１またはＨｓ０２７５８９９１＿ｇ１）を、評価すべき各ＲＮＡ試料組中に含んだ。
【０３４６】
コア時計機能に及ぼすＣｒｙモジュレーター化合物７２の影響を、糖尿病マウスおよび非糖尿病マウスで試験した。１７週齢の雄Ｃ５７Ｂｌ／６Ｊ  ＤＩＯマウス（Ｔｈｅ  Ｊ
ａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｓａｃｒａｍｅｎｔｏ，ＣＡ）を、高脂肪食（ＨＦＤ）で維持し、２週間の馴化後、糖尿病および肥満を繰り返すように処置した。３匹のマウスを、それぞれ５つの時点で化合物またはビヒクルで処置した。マウスに、ビヒクル（注射用水（ＷＦＩ）または化合物７２（５０ｍｇ／ｋｇを含むＷＦＩ）を、用量体積５ｍｌ／ｋｇ、ＢＩＤ（１日２回）、強制経口投与にて投薬した。合計で、各マウスは、一連の実験にわたって５回の投薬を受けた。マウスの体重を測定し、研究開始前の夕方に体重に基づいて各処置に無作為に割り当てた。３日目の午後３：００に開始し、ビヒクル処置群および化合物７２処置群由来の動物群を、ＣＯ２窒息を使用して安楽死させ、ＲＮＡ調製のために５０ｍｇの肝臓、精巣上体脂肪、および骨格筋を切り出した。
【０３４７】
２４時間にわたる概日性ｍＲＮＡに及ぼす化合物７２の影響も、正常なＢａｌｂ／ｃマウスにおいて試験した。マウスは８週齢であり、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒから入手し、２週間順化させた。マウスへの投薬は、ＢＩＤで３日間、各動物について全部で７用量であり、最後の投薬は組織を得る１２時間前であった。マウスに、ビヒクル（ＷＦＩ）または化合物７２（５０ｍｇ／ｋｇを含むＷＦＩ）を、用量体積５ｍｌ／ｋｇ、ＢＩＤ、強制経口投与にて投薬した。３日目の午後３：００に開始し、ビヒクル処置群および化合物７２処置群由来の動物群を屠殺し、およそ５０ｍｇの肝臓、肺、腎臓、副腎、脾臓、精巣上体脂肪、および褐色脂肪組織を切り出し、ＲＮＡＬａｔｅｒに入れた。
【０３４８】
ビヒクル処置５７Ｂｌ／６Ｊ  ＤＩＯマウス由来のコア時計ｍＲＮＡは、特徴的な概日性発現パターンを示した（図１）。しかし、化合物７２で処置すると、Ｃ５７Ｂｌ／６Ｊ
ＤＩＯマウスおよびＢａｌｂ／ｃマウスの両方において２４時間にわたってＰｅｒ２  ｍＲＮＡが抑制され、これらは、ＺＴ８で最も減少し、２４時間後のＺＴ８で再度最も減少した（図１ＡおよびＢ）。Ｂｍａｌ１  ｍＲＮＡは、両マウス系統においてＺＴ８および元のＺＴ０の３２時間後の化合物７２処置によって実質的に増加した。Ｂｍａｌ１転写物はまた、Ｃ５７Ｂｌ／６Ｊ  ＤＩＯマウスにおいて顕著な時期の遅延を示し、Ｂａｌｂ／ｃマウスにおいてより小さな程度の遅延を示した（図１ＣおよびＤ）。Ｃｒｙ１のｍＲＮＡは、暗期のその発現のピーク中に抑制された（図１ＥおよびＦ、影付きの領域）。ビヒクル処置したＢａｌｂ／ｃマウスに対し、ＤＩＯマウスにおいて認められたビヒクル処置したＣｒｙ１転写物の時期の前進は、その一部が、多数の日周パターンに及ぼす高脂肪食の既知の影響に起因し得る（Ｅｃｋｅｌ−Ｍａｈａｎら（２０１３）Ｃｅｌｌ）。Ｃｒｙ１  ｍＲＮＡと対照的に、Ｃｒｙ２のｍＲＮＡはビヒクル処置マウスにおいては日中にピークに達するが、Ｃ５７Ｂｌ／６Ｊ  ＤＩＯマウスおよびＢａｌｂ／ｃマウスの両方においては化合物７２での処置によってこのｍＲＮＡが強く弱められた（図１ＧおよびＨ）。
【０３４９】
上記の同一の２４時間研究では、糖新生遺伝子Ｐｃｋ１（ＰＥＰＣＫ）およびＧ６Ｐｃ（グルコース６−ホスファターゼ触媒サブユニット）のｍＲＮＡの概日パターンは、Ｃ５７Ｂｌ／６Ｊ  ＤＩＯマウスにおいてビヒクルに対し、化合物７２によって実質的に変化した（図２ＡおよびＣ）。ビヒクル処置マウスは、他の研究において固形飼料摂取Ｃ５７Ｂｌ／６Ｊマウスについて認められたパターン（Ｈｕｇｈｅｓら（２００９））よりも平らで時期が前進したパターンを示した。化合物７２処置Ｃ５７Ｂｌ／６Ｊ  ＤＩＯマウスは、これらの糖新生遺伝子の両方について早い夕方（ＺＴ１４）に発現ピークを示し、このピークは、固形飼料摂取マウスで認められたピーク発現時間（Ｈｕｇｈｅｓら（２００９））に近い。Ｐｃｋ１およびＧ６Ｐｃの発現の日周パターンは、Ｂａｌｂ／ｃマウスよりもＣ５７Ｂｌ／６Ｊ  ＤＩＯマウスにおいて、ビヒクルに対し化合物７２によってより変化した（図２ＢおよびＤ）。
【０３５０】
複数のＣｒｙモジュレーター化合物である化合物７２、化合物４８、化合物９、および化合物５７の影響を、ＩＣＲマウスで試験した。マウスを、５０ｍｇ／ｋｇの各化合物（
化合物７２、化合物４８、化合物９、および化合物５７）、ＰＯ（経口投与）、５ｍｌ／ｋｇの用量体積で４日間、ＢＩＤまたはビヒクル対照で処置した。各化合物により、肝臓Ｐｅｒ２発現が抑制された（図３Ａ）。化合物４８での処置によりＺＴ６でＢｍａｌ１  ｍＲＮＡが８倍増加になり、化合物７２および化合物９で処置したマウスは４倍増加を示し、化合物５７処置マウスでは少なくとも２倍増加を示した（図３Ｂ）。化合物７２、化合物４８、および化合物９はまた、Ｃｒｙ２転写物を減少させた（図３Ｃ）。
【０３５１】
全血中のコア時計遺伝子ｍＲＮＡレベルは、処置した被験体における化合物の影響を決定するための非侵襲性の方法を提供し得る。雄ｄｂ／ｄｂマウス（９週齢、Ｔｈｅ  Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｍａｉｎｅ）を、各実験群についてｎ＝８で使用した。マウスに、化合物７２（１００ｍｇ／ｋｇ，Ｐ．Ｏ；用量体積５ｍｌ／ｋｇ，１０％コリフォア中）または１０％コリフォアを、１日１回ＺＴ０（午前７：００）に３日間投薬した（ＺＴはツァイトゲーバータイムをいい、マウス施設内で日を刺激するために点灯された時間を示す）。最終日のＺＴ７．５（午後２：３０）に、ＣＯ２窒息を使用して動物を安楽死させ、心穿刺によって心臓から血液を回収した。ＲＴ−ｑＰＣＲによるアッセイのために、ＲＮＡＬａｔｅｒを含むチューブに全血を移した。
【０３５２】
Ｄ−ｂｏｘ結合タンパク質Ｄｂｐは、概日様式で強く制御される。化合物７２は、本研究においてＤｂｐ遺伝子発現を統計的に有意に抑制し（図４）、かかる化合物で処置したマウスにおける白血球が全生物におけるコア時計機構に及ぼす化合物の影響についての情報を提供することができることを証明した。かかる情報を、コア概日機構に影響を与えるＣｒｙモジュレーターおよび他の治療用薬剤の影響を評価するための診断マーカーまたはバイオマーカーとして使用してよい。
【０３５３】
コア時計機構と直接相互作用する化合物について、投薬時間は、その効果を最大にするのに極めて重要であり得る。ｄｂ／ｄｂマウスを、単回用量の化合物７２（５０ｍｇ／ｋｇ）をＺＴ０またはＺＴ１０のいずれかで投与することによって処置した。前者（ＺＴ０）はマウス肝臓におけるＣｒｙ１タンパク質およびＢｍａｌ１タンパク質のピークと一致し、後者（ＺＴ１０）はＣｒｙ１およびＢｍａｌ１の最低点付近に対応する。肝臓組織をそれぞれについて７．５時間後に採取し、試料をＲＴ−ｑＰＣＲによってコア時計遺伝子ｍＲＮＡについて試験した。化合物７２が最低点と比較してピークでの時計ｍＲＮＡに及ぼす相対的影響が高かったので（図５）、前者付近の時間での投薬が時計機構により大きな影響を及ぼし、これにより、さらに、時計の代謝アウトプットにより大きな影響を及ぼし得る。
実施例６：糖尿病マウスモデルにおける時計遺伝子発現のピークまたは最低点で投与した単回用量の化合物７２の影響
【０３５４】
ＩＩ型糖尿病のｄｂ／ｄｂマウスモデルにおいてコア時計遺伝子Ｃｒｙ１／Ｂｍａｌ１発現のピークまたは最低点のいずれかで単回用量として投与した場合のグルコース代謝に及ぼす化合物７２の影響を評価した。
【０３５５】
Ｌｅｐｒｄｂがホモ接合である雄ｄｂ／ｄｂマウス（６週齢）を、Ｔｈｅ  Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｍａｉｎｅ）から入手した。マウスは、正常な明／暗期サイクル（点灯：０７：００〜１９：００時）に収容した群であり、標準的なペレット状マウス用飼料および水を自由に利用させた。動物を、実験前に２週間これらの条件に慣れさせた。マウスを、Ｃｒｙ１およびＢｍａｌ１の遺伝子発現のピークまたは最低点のいずれかで投薬する２つの研究アームに分けた。マウスに、ビヒクル（１０％コリフォア、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）または化合物７２（５０ｍｇ／ｋｇを含む１０％コリフォア水溶液）を、用量体積５ｍｌ／ｋｇ、ＱＤ、強制経口投与にて、ＺＴ０（ピーク、午前７：００）またはＺＴ１０（最低点、午後５：００）で１回投薬した
。０日目に動物の体重を測定し、各群が類似の平均出発体重となるように処置群に無作為に割り当てた。ＺＴ０に投薬したマウスを、午後１０：３０から一晩絶食させ、この時、マウスを清潔なケージに移し、１２時間にわたって水を自由に利用させたが、飼料は与えなかった。ＺＴ１０に投薬したマウスを、同一の様式で午前８：３０から絶食させた。研究当日に、投薬後、マウスの尾部の切開を、この手順によって起こり得る任意のストレスから回復させるために、空腹時血中グルコース測定の２時間前に行った。動物由来の空腹時血中グルコース（ＦＢＧ）を、午前１０：３０または午後８：３０にＡｌｐｈａＴＲＡＫ血糖計（Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，ＵＳＡ）を使用して評価した。午前１１：３０（ピーク投薬マウス）または午後９：３０（最低点投薬マウス）に、各動物に０．５ｇ／ｋｇのグルコースを投薬し、次いで、血中グルコースを、グルコース負荷後、ｔ＝１５、３０、６０、９０、および１２０分で測定した。最後の血液回収後に動物を死亡させ、他のエンドポイントの決定のために組織および血液を採取した。
【０３５６】
ＯＧＴＴ中に得た空腹時血中グルコース値およびグルコース測定値を平均し、グラフ化した（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ，ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｌａ  Ｊｏｌｌａ，ＣＡ）。各々の動物について曲線下面積（ＡＵＣ）を計算した。一元配置ＡＮＯＶＡを使用して統計分析を行った後、適切なポストテストを行った。ｐ＜０．０５の場合に有意性を認めた。データを、平均およびＳ．Ｅ．Ｍ．で示す。
【０３５７】
単回用量でのＣｒｙ１およびＢｍａｌ１の遺伝子発現のピークでのｄｂ／ｄｂマウスへの化合物７２（５０ｍｇ／ｋｇ，ＰＯ）の投与は、ビヒクル対照と比較してＯＧＴＴ測定値に明らかな効果があるが（図６Ａ）、しかし、最低点で投薬した場合は効果がなかった（図６Ｂ）。遺伝子発現のピークに投薬した動物のＯＧＴＴから計算したＡＵＣは、化合物７２での処置がグルコースエクスカーション（ｇｌｕｃｏｓｅ  ｅｘｃｕｒｓｉｏｎ）を１４％減少させることを示した（７４０９８＋／−４１９４から６３８４２＋／−４３１８；図７）。
実施例７：糖尿病マウスモデルにおける７日間にわたる単回用量の化合物７２の投与の影響
【０３５８】
ＩＩ型糖尿病のｄｂ／ｄｂマウスモデルにおいて７日間にわたって単回用量を投与した場合のグルコース代謝およびインスリンレベルに及ぼす化合物７２の影響を評価した。
【０３５９】
Ｌｅｐｒｄｂがホモ接合である雄ｄｂ／ｄｂマウス（６週齢）を、Ｔｈｅ  Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｍａｉｎｅ）から入手した。マウスは、正常な明／暗期サイクル（点灯：０７：００〜１９：００時）に収容した群であり、標準的なペレット状マウス用飼料および水を自由に利用させた。動物を、実験前に２週間これらの条件に慣れさせた。マウスに、ビヒクル（１０％コリフォア、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）または化合物７２（５０ｍｇ／ｋｇを含む１０％コリフォア水溶液）を、用量体積５ｍｌ／ｋｇ、ＱＤ、強制経口投与にて、ＺＴ０（午前７：００）に７日間投薬した。０日目にマウスの体重を測定し、各群が類似の平均出発体重となるようにいずれかの処置群に無作為に割り当てた。エンドポイント測定前の夕方午後１０：３０に、マウスを清潔なケージに移し、空腹時血中グルコース測定前の１２時間にわたって水を自由に利用させたが、飼料は与えなかった。研究最終日に、動物に通常通り投薬し、次いで、尾部の切開を、この手順によって起こり得る任意のストレスから回復させるために、空腹時血中グルコース測定の２時間前に行った。動物由来の空腹時血中グルコース（ＦＢＧ）を、午前１０：３０にＡｌｐｈａＴＲＡＫ血糖計（Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，ＵＳＡ）を使用して評価した。ＦＢＧ測定後、尾部ミルキング技術（ｍｉｌｋｉｎｇ  ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ）を使用して、各マウスから毛細管に血液を回収した。毛細管をヘマトクリット（ＢＤ  Ｔｒｉａｃ  ０２００）で遠心分離し、得られた血漿をエッペンドルフに移した。ｔ＝０時間とラベルしたこの試料を、その後にインスリンを測定できるよう
に−８０℃で凍結した。午前１１：３０に、各動物に０．５ｇ／ｋｇのグルコースを投薬し、次いで、血中グルコースを、グルコース負荷後ｔ＝１５、３０、６０、９０、および１２０分で測定した。ＯＧＴＴの終了後、上記のようにｔ＝２時間でのインスリン決定のために血液を回収した。最後の血液回収後に動物を死亡させ、他のエンドポイントの決定のために組織および血液を採取した（他所に詳述）。化合物７２で処置した動物由来の血漿および肝臓組織を、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳを使用して化合物レベルを測定し、既知の化合物量の検量線と比較するために、ＣＲＯに委託した。
【０３６０】
ＯＧＴＴ中に得た空腹時血中グルコース値およびグルコース測定値を平均し、グラフ化した（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ，ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｌａ  Ｊｏｌｌａ，ＣＡ）。各々の動物について曲線下面積（ＡＵＣ）を計算した。血漿インスリンレベルを、超高感度インスリンＥＬＩＳＡ（ＡＬＰＣＯ，Ｓａｌｅｍ，ＮＨ）を使用して決定した。ＨＯＭＡ−ＩＲ（インスリン抵抗性のホメオスタシスモデル評価）を、以下の式を使用して計算した：（ＦＰＩ（μＵ／Ｌ）×ＦＰＧ（ｍｍｏｌ／Ｌ））／２２．５（式中、ＦＰＩおよびＦＰＧは、それぞれ空腹時血漿インスリンおよび空腹時血漿グルコースを示す）。インスリンデータを、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ形式でも示した。一元配置ＡＮＯＶＡを使用して統計分析を行った後、適切なポストテストを行った。ｐ＜０．０５の場合に有意性を認めた。データを、平均およびＳ．Ｅ．Ｍ．で示す。
【０３６１】
ｄｂ／ｄｂマウスへの化合物７２（５０ｍｇ／ｋｇ，ＰＯ）の７日間の投与により、ビヒクル対照と比較してＦＢＧが有意に減少した（４８４．９＋／−３４．３７ｍｇ／ｄＬから３８５．０＋／−２９．６９ｍｇ／ｄＬ；図８Ａ）。一連のＯＧＴＴ測定中、化合物７２処置動物は、ビヒクル対照群より低かった（図８Ｂ）。ＯＧＴＴから計算したＡＵＣは、化合物７２投与によってグルコースエクスカーションが有意に減少したことを示した（５４８４５＋／−４１１２から３５９４２＋／−３１９２；図８Ｃ）。
【０３６２】
ｔ＝０およびｔ＝２時間で採取した試料から血漿インスリンを測定し、図９Ａに示す。インスリンは、化合物７２での処置によってｔ＝０およびｔ＝２時間の両時点でそれぞれ２０％および２１％減少した（それぞれ、４．７０＋／−０．７６から３．７８＋／−０．６９ｎｇ／ｍＬおよび３．１７＋／−０．６７から２．５３＋／−０．５０ｎｇ／ｍＬ）。ＨＯＭＡ−ＩＲ（インスリンに対する再感作の指標）は、１３９．９１＋／−２６．５７から９３．６９＋／−２３．６０単位に３３％減少した（図９Ｂ）。
【０３６３】
化合物７２の化合物レベルを研究終了時に採取した試料から評価し、比較目的のために実施例３に記載のＰｅｒ２アッセイから決定したＥＣ５０値と共に図１０に示す。化合物７２は、最後の投薬からおよそ８時間後に血漿中および肝臓中の両方で見出された（血漿：０．５３＋／−０．０３μＭ；肝臓：０．６７＋／−０．０５μＭ，平均およびＳ．Ｅ．Ｍとして示す）。両方の場合、化合物レベルは、化合物７２について決定したＰｅｒ２
ＥＣ５０値よりもわずかに高かった（０．４μＭ；それぞれ、血漿および肝臓におけるＥＣ５０値の１．３倍および１．７倍）。
実施例８：糖尿病マウスモデルにおける漸増投薬量の化合物７２の影響
【０３６４】
ＩＩ型糖尿病のｄｂ／ｄｂマウスモデルにおけるグルコース代謝およびインスリンレベルに及ぼす７日間にわたって投与した漸増用量の化合物７２の影響を評価した。
【０３６５】
Ｌｅｐｒｄｂがホモ接合である雄ｄｂ／ｄｂマウス（５週齢）を、Ｔｈｅ  Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｍａｉｎｅ）から入手した。マウスは、正常な明／暗期サイクル（点灯：０７：００〜１９：００時）に収容した群であり、標準的なペレット状マウス用飼料および水を自由に利用させた。動物を、実験前に２週間これらの条件に慣れさせた。マウスに、ビヒクル（１０％コリフォア、Ｓｉｇｍａ−Ａ
ｌｄｒｉｃｈ）または１０、５０、もしくは１００ｍｇ／ｋｇの化合物７２（１０％コリフォア水溶液中）を、用量体積５ｍｌ／ｋｇ、ＱＤ、強制経口投与にて、ＺＴ０（午前７：００）で７日間投薬した。実施した実験方法は、実施例１１に詳述の実験方法と同一であった。化合物７２で処置した動物由来の血漿および肝臓組織中の化合物レベルを、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳを使用して測定し、既知の化合物量の検量線と比較した。
【０３６６】
ｄｂ／ｄｂマウスへの漸増用量での７日間の化合物７２の投与により、ビヒクル対照群と比較して、５０および１００ｍｇ／ｋｇで空腹時血中グルコースレベルが減少したが、これは統計的有意性に到達しなかった（ビヒクル対照：４９１．０＋／−５１．３０ｍｇ／ｄＬ、５０ｍｇ／ｋｇ：４０２．８＋／−２５．２５ｍｇ／ｄＬ、１００ｍｇ／ｋｇ：４２０．７＋／−２６．４４ｍｇ／ｄＬ；図１１Ａ）。１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与した化合物７２は、空腹時血中グルコースレベルの減少を示さなかった（５０３．５＋／−４９．６８ｍｇ／ｄＬ）。一連のＯＧＴＴ測定中で、化合物７２で処置した動物は、グルコース負荷後の動物由来のグルコースエクスカーションに対して用量依存性の影響を示した（図１１Ｂ）。ＯＧＴＴから計算した曲線下面積は、化合物７２の投与により用量依存様式でグルコースＡＵＣが減少し、１００ｍｇ／ｋｇで最も有意であることを示していた（ビヒクル：４６０８８＋／−３３０３，１０ｍｇ／ｋｇ：３９７７１＋／−４２４４，５０ｍｇ／ｋｇ：３５５２７＋／−３２１５，１００ｍｇ／ｋｇ：２８４９９＋／−３０７９；図１１Ｃ）。
【０３６７】
ｔ＝０およびｔ＝２時間で採取した試料の血漿インスリンを測定し、図１２Ａに示す。インスリンは、１００ｍｇ／ｋｇで投薬した場合に化合物７２での処置によってｔ＝０で減少した（５．６８＋／−０．４３から４．６３＋／−０．１７ｎｇ／ｍＬ（それぞれ、ビヒクルおよび１００ｍｇ／ｋｇ群））。ＨＯＭＡ−ＩＲは、化合物７２の投与後に用量依存様式で減少した（ビヒクル：１６９．３＋／−１８．４１，１０ｍｇ／ｋｇ：１７２．７＋／−１６．６１，５０ｍｇ／ｋｇ：１４９．２＋／−１６．４９，１００ｍｇ／ｋｇ：１１１．９＋／−９．０２単位；図１２Ｂ）。１００ｍｇ／ｋｇで、化合物７２の影響は有意であった（ビヒクル対照群と比較して３４％減少）。
【０３６８】
化合物７２の化合物レベルを研究終了時に採取した試料から評価し、比較目的のためにＰｅｒ２  ＥＣ５０値（実施例３に記載）と共に図１３に示す。化合物７２は、最後の投薬からおよそ８時間後に血漿中および肝臓中の両方で見出され、曝露レベルは投与した用量の増加に対して増加した（血漿、１０ｍｇ／ｋｇ：０．０９＋／−０．０１μＭ；５０ｍｇ／ｋｇ：０．５７＋／−０．０３μＭ；１００ｍｇ／ｋｇ：１．２２＋／−０．１７μＭ；肝臓、１０ｍｇ／ｋｇ：０．１２＋／−０．０１μＭ；５０ｍｇ／ｋｇ：０．７８＋／−０．０６μＭ；１００ｍｇ／ｋｇ：１．８１＋／−０．２２μＭ）。血漿および肝臓の両方において、曝露レベルは、それぞれ、血漿および肝臓におけるＰｅｒ２  ＥＣ５０値の、５０ｍｇ／ｋｇで１．４倍および１．９５倍、ならびに１００ｍｇ／ｋｇで３倍および４．５倍であった。
実施例９：糖尿病マウスモデルにおける漸増投薬量の化合物９の影響
【０３６９】
ＩＩ型糖尿病のｄｂ／ｄｂマウスモデルにおけるグルコース代謝およびインスリンレベルに対する７日間にわたって投与した漸増用量の化合物９の影響を評価した。
【０３７０】
Ｌｅｐｒｄｂがホモ接合である雄ｄｂ／ｄｂマウス（５週齢）を、Ｔｈｅ  Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｍａｉｎｅ）から入手した。マウスは、正常な明／暗期サイクル（点灯：０７：００〜１９：００時）に収容した群であり、標準的なペレット状マウス用飼料および水を自由に利用させた。動物を、実験前に２週間これらの条件に慣れさせた。マウスに、ビヒクル（１０％コリフォア、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）または３０、１００、もしくは３００ｍｇ／ｋｇの化合物９（ｃｏｍｐｏ
ｕｎｄ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄ  ９）、または３０ｍｇ／ｋｇのロシグリタゾン（１０％コリフォア水溶液中）を、用量体積５ｍｌ／ｋｇ、ＱＤ、強制経口投与にて、ＺＴ０（午前７：００）で７日間投薬した。ロシグリタゾンは、陽性対象として使用した抗糖尿病治療用薬剤である。実施した実験方法は、実施例１１に詳述の実験方法と同一であった。化合物９で処置した動物由来の血漿および肝臓組織中の化合物レベルを、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳを使用して測定し、既知の化合物量の検量線と比較した。
【０３７１】
ｄｂ／ｄｂマウスへの漸増用量での７日間の化合物９の投与により、ビヒクル対照群と比較して１００ｍｇ／ｋｇで空腹時血中グルコースレベルが減少したが（４９２．８＋／−４８．０７から４０３．１＋／−３９．７３ｍｇ／ｄＬ；図１４Ａ）、全体的に見て、統計的に有意な効果は認められなかった。３０および１００ｍｇ／ｋｇの用量で投与した化合物９は、ＯＧＴＴ中のグルコースレベル測定値の用量依存性の減少が認められたが、試験した最高用量３００ｍｇ／ｋｇでは効果は増加しなかった（図１４Ｂ）。ＯＧＴＴから計算した曲線下面積は、化合物９の投与により用量依存様式でグルコースＡＵＣが減少し、１００および３００ｍｇ／ｋｇの両方で有意であることを示していた（ビヒクル：５６０４６＋／−３２０４、３０ｍｇ／ｋｇ：４４４４２＋／−３８９５、１００ｍｇ／ｋｇ：３３６４３＋／−４８２２、３００ｍｇ／ｋｇ：３３６５０＋／−４６８８；図８Ｃ）。グルコースＡＵＣは、ビヒクル対照群より、それぞれ、３０、１００、および３００ｍｇ／ｋｇで２１％、４０％、および４０％減少した。動物モデルの陽性対象として使用したロシグリタゾンは、空腹時血中グルコース（４９２．８＋／−４８．０７から２８０．４＋／−１３．６６ｍｇ／ｄＬ；図１４Ａ）およびグルコースＡＵＣ（５６０４６＋／−３２０４から１１５０２＋／−２１１８単位；図１４Ｃ）を有意に阻害した。
【０３７２】
ｔ＝０およびｔ＝２時間で採取した試料から血漿インスリンを測定し、図１５Ａに示す。インスリンは、化合物９での処置後、ｔ＝０（ビヒクル：１４．８９＋／−２．９３、３０ｍｇ／ｋｇ：１０．９４＋／−１．６２、１００ｍｇ／ｋｇ：７．７１＋／−１．２６、３００ｍｇ／ｋｇ：１０．５４＋／−１．６ｎｇ／ｍＬ）およびｔ＝２時間（ビヒクル：７．４４＋／−０．９２、３０ｍｇ／ｋｇ：５．７６＋／−０．１１、１００ｍｇ／ｋｇ：３．７０＋／−０．２９、３００ｍｇ／ｋｇ：４．０１＋／−０．４４ｎｇ／ｍＬ）の両方で減少した。ＨＯＭＡ−ＩＲは、化合物９の投与後に用量依存様式で減少したが、このエンドポイントにおいて３００ｍｇ／ｋｇの化合物の影響はより低かった（ビヒクル：４３８．８＋／−８７．８８、３０ｍｇ／ｋｇ：２８９．９＋／−２４．４０、１００ｍｇ／ｋｇ：１７５．３＋／−２７．５２、３００ｍｇ／ｋｇ：３０１．４＋／−５２．６６単位；図１５Ｂ）。１００ｍｇ／ｋｇでは、化合物９の効果は有意であった（ビヒクル対照群と比較して６０％減少）。ロシグリタゾンは、ｔ＝０およびｔ＝２時間でインスリンレベルを減少させ（それぞれ、３．０５＋／−０．１４および２．２８＋／−０．０８ｎｇ／ｍＬへ；図１５Ａ）、ＨＯＭＡ−ＩＲも有意に減少させた（５０．５８＋／−３．５２単位へ、図１５Ｂ）。
【０３７３】
化合物９の組織レベルを、研究終了時に採取した肝臓試料から評価し、比較目的のためにＰｅｒ２  ＥＣ５０値と共に図１６に示す。化合物９は、最後の投薬からおよそ８時間後に血漿中および肝臓中（ｐｌａｓｍａ  ｌｉｖｅｒ）で見出され、曝露レベルは３０ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇの間で投与した用量の増加に対して増加した。３００ｍｇ／ｋｇでの曝露レベルは、薬物の蓄積を示していた（予想される３倍よりもむしろ７．１倍の増加）。３０、１００、または３００ｍｇ／ｋｇの化合物９を投与した動物の肝臓試料中の化合物レベルは、それぞれ、０．１９＋／−０．０２μＭ、０．６７＋／−０．０５μＭ、および４．７７＋／−１．０６μＭであった。３０ｍｇ／ｋｇの化合物９の投与後の肝臓曝露レベルはＰｅｒ２  ＥＣ５０値のおよそ１／１．６（０．３μＭ）であり、１００ｍｇ／ｋｇおおび３００ｍｇ／ｋｇでのレベルはそれぞれ２．２倍および１５．９倍であった。
実施例１０：食餌誘導性肥満マウスモデルにおける化合物７２の影響
【０３７４】
ＩＩ型糖尿病の食餌誘導性肥満（ＤＩＯ）マウスモデルにおける化合物７２の影響を試験した。
【０３７５】
雄Ｃ５７／Ｂｌ６Ｊ  ＤＩＯマウスを、Ｔｈｅ  Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（Ｓａｃｒａｍｅｎｔｏ，ＣＡ）から入手した。マウスは、正常な明／暗期サイクル（点灯：０７：００〜１９：００時）に収容した群であり、高脂肪食（Ｄ１２４９２（６０ｋｃａｌ％脂肪）、Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｄｉｅｔｓ、Ｉｎｃ．）および水を自由に利用させた。動物を、実験前に少なくとも２週間これらの条件に慣れさせ、およそ２４週齢で使用した。マウスに、ビヒクル（１０％コリフォア、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）、化合物７２（１００ｍｇ／ｋｇを含む１０％コリフォア水溶液）、またはロシグリタゾン（３０ｍｇ／ｋｇを含む１０％コリフォア水溶液）を、用量体積５ｍｌ／ｋｇ、ＱＤ、強制経口投与にて、ＺＴ０（午前７：００）で７日間投薬した。ロシグリタゾンは、陽性対象として使用した抗糖尿病治療用薬剤である。０日目にマウスの体重を測定し、各群が類似の平均出発体重となるようにいずれかの処置群に無作為に割り当てた。エンドポイント測定前の夕方午後１０：３０に、マウスを清潔なケージに移し、空腹時血中グルコース測定前の１２時間にわたって水を自由に利用させたが、飼料は与えなかった。研究最終日に、動物に通常通り投薬し、次いで、尾部の切開を、この手順によって起こり得る任意のストレスから回復させるために、空腹時血中グルコース測定の２時間前に行った。動物由来の空腹時血中グルコース（ＦＢＧ）を、午前１０：３０にＡｌｐｈａＴＲＡＫ血糖計（Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，ＵＳＡ）を使用して評価した。ＦＢＧ測定後、尾部ミルキング技術を使用して、各マウスから毛細管に血液を回収した。毛細管をヘマトクリット（ＢＤ  Ｔｒｉａｃ  ０２００）で遠心分離し、得られた血漿をエッペンドルフに移した。ｔ＝０時間とラベルしたこの試料を、その後にインスリンを測定できるように−８０で凍結した。午前１１：３０に、各動物に１．５ｇ／ｋｇのグルコースを投薬し、次いで、血中グルコースを、グルコース負荷後ｔ＝１５、３０、６０、９０、および１２０分に測定した。ＯＧＴＴの終了後、上記のようにｔ＝２時間でのインスリン決定のために血液を回収した。最後の血液回収後に動物を死亡させ、他のエンドポイントの決定のために組織および血液を採取した。
【０３７６】
ＯＧＴＴ中に得た空腹時血中グルコース値およびグルコース測定値を平均し、グラフ化した（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ，ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ，ＬＡ  Ｊｏｌｌａ，ＣＡ）。各々の動物について曲線下面積（ＡＵＣ）を計算した。血漿インスリンレベルを、超高感度インスリンＥＬＩＳＡ（ＡＬＰＣＯ，Ｓａｌｅｍ，ＮＨ）を使用して決定した。ＨＯＭＡ−ＩＲ（インスリン抵抗性のホメオスタシスモデル評価）を、以下の式を使用して計算した：（ＦＰＩ（μＵ／Ｌ）×ＦＰＧ（ｍｍｏｌ／Ｌ））／２２．５（式中、ＦＰＩおよびＦＰＧは、それぞれ空腹時血漿インスリンおよび空腹時血漿グルコースを示す）。インスリンデータを、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ形式でも示した。一元配置ＡＮＯＶＡを使用して統計分析を行った後、適切なポストテストを行った。ｐ＜０．０５の場合に有意性を認めた。データを、平均およびＳ．Ｅ．Ｍ．で示す。
【０３７７】
Ｃ５７／Ｂｌ６Ｊ  ＤＩＯマウスへの化合物７２（１００ｍｇ／ｋｇ，ＰＯ）の７日間の投与により、ビヒクル対照と比較して空腹時血中グルコースレベルが有意に減少した（２３７．２＋／−１５．２９ｍｇ／ｄＬから１７７．１＋／−８．２８ｍｇ／ｄＬ；図１７Ａ）。一連のＯＧＴＴ測定中、化合物７２で処置した動物はビヒクル対照群よりはるかに低かった（図１７Ｂ）。ＯＧＴＴから計算したＡＵＣは、化合物７２の投与によってグルコースエクスカーションが有意に減少したことを示した（３１５１１＋／−１６７０から１７０５５＋／−７６９．１；図１７Ｃ）。動物モデルの陽性対象として使用したロシグリタゾンは、空腹時血中グルコースを１５３．９＋／−５．０５ｍｇ／ｄＬに、グルコ
ースＡＵＣを１１５００＋／−１１０４単位に減少させた。
【０３７８】
ｔ＝０およびｔ＝２時間で採取した試料から血漿インスリンを測定し、図１８Ａに示す。インスリンは、ｔ＝０（ビヒクル：５．００＋／−０．９２、１００ｍｇ／ｋｇ：３．１２＋／−０．２４、ｎｇ／ｍＬ）およびｔ＝２時間（ビヒクル：４．８２＋／−０．６０、１００ｍｇ／ｋｇ：２．８８＋／−０．２１ｎｇ／ｍＬ）の両方において化合物７２での処置後に減少した。ＨＯＭＡ−ＩＲは、化合物７２投与後に有意に減少した（ビヒクル：７０．７６＋／−１１．３０、１００ｍｇ／ｋｇ：３２．５４＋／−３．３７単位；図１８Ｂ）。ロシグリタゾン（３０ｍｇ／ｋｇ）は、ｔ＝０およびｔ＝２時間でインスリンを減少させ（それぞれ、２．７０＋／−０．１２および２．３０＋／−０．０６ｎｇ／ｍＬへ）、ＨＯＭＡ−ＩＲを有意に減少させた（２４．６０＋／−１．４２単位へ）。
実施例１１：ラットにおけるコルチゾン誘導性インスリン抵抗性の発症に及ぼす化合物７２の影響
【０３７９】
コルチゾンのラットへの６日間の反復投与により、血漿インスリンおよびグルコースの有意な上昇に関連する有意な体重増加を誘導する。これらの影響は、１１−βＨＳＤ１活性によって生成されたコルチゾールによって媒介される。グルココルチコイド受容体拮抗薬、例えばミフェプリストンは、インスリン抵抗性に及ぼすコルチゾールの影響を改善する。これらの実験の目的は、ラットにおけるコルチゾン誘導性インスリン抵抗性の発症に及ぼす化合物７２の影響を決定することであった。
【０３８０】
動物に、試験化合物と組み合わせたコルチゾン（３０ｍｇ／ｋｇ、皮下、１日１回）を６日間投薬し、次いで、最後のコルチゾン投薬から２７時間後に死亡させた。参照基準（ミフェプリストン）も含めた。コルチゾン２１−アセテート（Ｓｉｇｍａ  Ｃ−３１３０）をＲｅｎａＳｃｉから入手し、１％メチルセルロースの最終懸濁物として用量体積５ｍｌ／ｋｇで皮下経路にて投与した。化合物７２（５０ｍｇ／ｋｇを含む１０％コリフォア水溶液）を、ＱＤで用量体積５ｍｌ／ｋｇを使用して強制経口投与によって投薬した。ミフェプリストン（Ｓｉｇｍａ  Ｍ８０４６）を、ＲｅｎａＳｃｉから入手した。
【０３８１】
グルコースおよびインスリンの決定を、１２時間の絶食後（最後のコルチゾン投薬のおよそ２７時間後）に尾静脈出血から得た血漿試料に対して行った。次いで、動物を死亡させ、終末期（心臓）血液試料を採取し、この血液から血漿を調製した。
【０３８２】
３４匹の雄Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラット（体重範囲２００〜２５０ｇ）を、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ，Ｍａｒｇａｔｅ，Ｋｅｎｔ，ＵＫから取り寄せた。ラットは、正常な明／暗期サイクル（点灯：０７：００〜１９：００時）に収容した群であり、標準的なペレット状ラット用飼料および水道水を常に自由に利用させた。動物を、実験前に２週間これらの条件に慣れさせた。その後、動物に、ｔ＝０時間（０７：００）に１日１回ビヒクルを投薬する３日間のベースライン期間を施した。この手順は、研究におけるストレスに関連する影響の発生率を減少させることが見出されている。以下の表２に示すように、全薬物を６日間投与した。体重を、０７：００（ｔ＝０時間）の投薬開始直前に記録した。コルチゾンを、皮下経路（ｓｃ）によって投与し、ｔ＝０時間でのコルチゾン投与の直後に化合物７２およびミフェプリストンを強制的に（ｖｉａ  ｇａｖａｇｅ）経口投与した。
【表２】
2019142959.tif 000160
【０３８３】
投薬６日目に、ラットを、２２：３０（７日目終了と一致するように調節）から１２時間絶食させた。７日目に、ラットに、ビヒクルを投与したがコルチゾン（ｓｃ）を投与せず、その後、ビヒクル／化合物７２／ミフェプリストンを通常通り０７：００に経口投与した。７日目の１０：３０（コルチゾンの最終投薬から２７時間後）に、血液試料（３００μｌ）を、外側尾静脈からＥＤＴＡを含むチューブ（Ｓａｒｓｔｅｄｔ  １６．４４４）に採取した。血液を遠心分離し、得られた血漿アリコートを−７５℃で保存した。動物をＣＯ２窒息およびその後の頸椎脱臼によって安楽死させた。終末期血液（およそ１０ｍｌ）を、心穿刺によってＥＤＴＡを含むチューブ（Ｓａｒｓｔｅｄｔ  ５ｍｌ  ３２．３３２）に回収し、次いで、遠心分離し、血漿を−７５℃で保存した。尾静脈血漿を、グルコース（ｎ＝２）については市販の臨床試薬（Ｔｈｅｒｍｏｅｌｅｃｔｒｏｎ  Ｉｎｆｉｎｉｔｙグルコース試薬（ＴＲ１５４２１）を使用し、インスリン（ｎ＝１）についてはＭｅｒｃｏｄｉａ超高感度ラットインスリンラットＥＬＩＳＡ（１０−１２５１−１０）を使用して分析した。
【０３８４】
血漿グルコースおよび血漿インスリンを、因子としての処置ならびに共変量としての採血の順序（ｂｌｅｅｄｉｎｇ  ｏｒｄｅｒ）およびベースライン体重を使用したロバスト回帰または一般線形モデルによって分析した。適切な場合、対数変換を使用した。適切な多重比較検定（両側）を使用して、ビヒクル群およびコルチゾン群由来の有意差を決定した。Ｐ＜０．０５を統計的に有意と見なした。
【０３８５】
ラットへの化合物７２の投与により、コルチゾン投与による処置に原因する血漿グルコースおよび血漿インスリンの増加量が有意に減少した。血漿グルコースレベルは、コルチゾンでの処置後に６．２８＋／−０．３０ｍＭから１０．１７＋／−０．５１ｍＭへ増加し、化合物７２（５０ｍｇ／ｋｇ）によって８．５５＋／−０．３ｍＭへ有意に減少した（ｐ＜０．０１；平均およびＳ．Ｅ．Ｍ）。血漿インスリンレベルは、コルチゾン処置の際に０．７０＋／−０．１１ｎｇ／ｍＬから８．１９＋／−０．９１ｎｇ／ｍＬへ増加し、化合物７２（５０ｍｇ／ｋｇ）によって５．２４＋／−１．１１ｎｇ／ｍＬへ減少した（ｐ＜０．０５；データを平均およびＳ．Ｅ．Ｍとして示す；図１９）。動物モデルの陽性対象として使用したミフェプリストンは、血漿グルコースおよび血漿インスリンを、それぞれ、７．４３＋／−０．２７ｎｇ／ｍＬおよび３．６２＋／−０．２９ｎｇ／ｍＬへ有意に減少させた。
【０３８６】
ＨＯＭＡ−ＩＲ値を化合物９に記載のように計算し、データを図２０に示す。コルチゾン処置により、ビヒクルと比較してＨＯＭＡ−ＩＲが９５．５７＋／−１１．４単位へ増加した：ビヒクル対照群（５．２７＋／−１．０４単位）。化合物７２（５０ｍｇ／ｋｇ）およびミフェプリストンの投与により、それぞれ、インスリン抵抗性ラットにおけるＨＯＭＡ−ＩＲ値が５６．９４＋／−１１．１８単位および２９．９９＋／−２．５４単位へ有意に減少した。
実施例１２：化合物９および化合物７２の薬物動態学的（ＰＫ）分析
【０３８７】
雄ＩＣＲマウス（体重３０〜４０ｇ、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を、各実験群についてｎ＝３マウスを用いた実験のために使用した（研究用に合計２７匹）。マウスに、Ｃｒｙモジュレーターである化合物９または化合物７２（５０ｍｇ／ｋｇ，Ｐ．Ｏ；用量体積５ｍｌ／ｋｇ，１０％コリフォア中）を投薬した。血液および肝臓組織を、投与後以下の時点で回収した：１５、３０、６０、９０分間、３、６、１２、および２４時間。動物の対照群（Ｔ０）も試料採取した。動物を、ＣＯ２を使用して安楽死させ、心穿刺を使用して心臓から血液を回収し、ＥＤＴＡチューブに移し、次いで、５４００ｒｐｍにて４℃で５分間遠心分離した。得られた血漿を、ドライアイスを使用して凍結し、次いで、アッセイの準備ができるまで−８０℃で保存した。肝臓組織を各動物から取り出し、０．５ｇをエッペンドルフに回収し、凍結し、薬物動態学的測定のために委託した。各動物由来の血漿および肝臓組織を、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳを使用して化合物レベルを測定し、ならびに血漿中および肝臓中の両方における既知の化合物量の検量線と比較するために、ＣＲＯに委託した。生データを、ＷｉｎＮｏｎＬｉｎを使用してＰＫパラメータ（Ｃｍａｘ、Ｔｍａｘ、半減期ｔ１／２、ＭＲＴ（平均滞留時間）、ＡＵＣ（曲線下面積）−（０−最終および外挿率）について分析した。
【０３８８】
雄ＳＤラット（体重２５０〜３００ｇ、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を、各実験群についてｎ＝４ラットを用いた実験のために使用した。ラットに、化合物７２（５０ｍｇ／ｋｇ，Ｐ．Ｏ；用量体積５ｍｌ／ｋｇ、１０％コリフォア中）を投薬した。投与後以下の時点で血液を回収した：１５、３０、６０、９０分間、３、６、１２、および２４時間。投薬前の試料も回収した。Ｒｅｓｅｔでの送達前にＣｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒの技術スタッフによって動物にカニューラ処理を行った。全血（０．３ｍｌ）を、各時点で右総頸静脈中のカニューラから回収した。全血をＥＤＴＡチューブに移し、次いで、５４００ｒｐｍにて４℃で５分間遠心分離した。得られた血漿を、ドライアイスを使用して凍結し、次いで、アッセイの準備ができるまで−８０℃で保存した。０．９％塩化ナトリウム（０．３ｍｌ）を、各採血後の流動液の補充のために投与した。０．１ｍｌのヘパリンナトリウム（５００ＩＵ／ｍｌ）を、１２時間の時点でロック溶液として使用した。試料を上記のようにアッセイした。表３および４は、分析結果をまとめている。
【表３】
2019142959.tif 000161
【０３８９】
＊は、４回の実験由来のデータを示し、平均およびＳ．Ｅ．Ｍとして示す。
【表４】
2019142959.tif 000162
【０３９０】
＊は、４回の実験由来のデータを示し、平均およびＳ．Ｅ．Ｍとして示す。
実施例１３：食餌誘導性肥満マウスモデルにおける漸増投薬量の化合物７２の影響
【０３９１】
ＩＩ型糖尿病の食餌性肥満（ＤＩＯ）マウスモデルにおける漸増用量の化合物７２の影響を評価した。
【０３９２】
雄Ｃ５７／Ｂｌ６Ｊ  ＤＩＯマウスを、Ｔｈｅ  Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（Ｓａｃｒａｍｅｎｔｏ，ＣＡ）から入手した。マウスは、正常な明／暗期サイクル（点灯：０７：００〜１９：００時）に収容した群であり、高脂肪食（Ｄ１２４９２（６０ｋｃａｌ％脂肪）、Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｄｉｅｔｓ、Ｉｎｃ．）および水を自由に利用させた。動物を、実験前に少なくとも２週間これらの条件に慣れさせ、およそ２６週齢で使用した。マウスに、ビヒクル（１０％コリフォア、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）、化合物７２（１０、３０、または１００ｍｇ／ｋｇを含む１０％コリフォア水溶液）、またはロシグリタゾン（３０ｍｇ／ｋｇを含む１０％コリフォア水溶液）を、用量体積５ｍｌ／ｋｇ、ＱＤ、強制経口投与にて、ＺＴ０（午前７：００）で７日間投薬した。実施した実験方法は、実施例１０に詳述の実験方法と同一であった。
【０３９３】
Ｃ５７／Ｂｌ６Ｊ  ＤＩＯマウスへの漸増用量での７日間の化合物７２の投与により、ビヒクル対照と比較して空腹時血中グルコースレベルを減少させ、１００ｍｇ／ｋｇで有意に到達した（ビヒクル対照：２２６．９＋／−１３．１１ｍｇ／ｄＬ、１０ｍｇ／ｋｇ：２０６．８＋／−８．３６ｍｇ／ｄＬ、３０ｍｇ／ｋｇ：１９７．５＋／−１２．０６ｍｇ／ｄＬ、１００ｍｇ／ｋｇ：１７６．３＋／−７．８３ｍｇ／ｄＬ、図２２Ａ）。一連のＯＧＴＴ測定中、化合物７２で処置した動物は、グルコース負荷後のグルコースエクスカーションの減少を示した（図２２Ｂ。ＯＧＴＴから計算した曲線下面積は、化合物７２の投与によってグルコースＡＵＣが減少し、３０および１００ｍｇ／ｋｇで有意性が証明されたことを示した（ビヒクル：２６０９０＋／−１９１７、１０ｍｇ／ｋｇ：２２５６３＋／−１２２４、３０ｍｇ／ｋｇ：１９０３３＋／−１９３４、１００ｍｇ／ｋｇ：１９５０２＋／−２４０４単位；図２２Ｃ）。動物モデルの陽性対象として使用したロシグリタゾンは、空腹時血中グルコース（２２６．９＋／−１３．１１から１６１．１＋／−８．０６ｍｇ／ｄＬ；図２２Ａ）およびグルコースＡＵＣ（２６０９０＋／−１９１７から９８５８＋／−１２８１単位；図２２Ｃ）を有意に阻害した。
【０３９４】
本発明の好ましい実施形態においては、例えば、以下が提供される。
（項１）
式Ｉ
【化９５】
2019142959.tif 000163
（式中
Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｊ、Ｌ、ＭおよびＱの各々は独立して、ＮまたはＣであり；
Ｒ１およびＲ２の各々は、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｊ、Ｌ、ＭまたはＱがＣのとき、独立して、Ｈ、ハロ、シアノ、ニトロ、−ＣＦ３、−ＣＨＦ２、−ＣＨ２Ｆ、トリフルオロメトキシ、アジド、ヒドロキシル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルキニル、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｒ８、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ８、−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−Ｒ８、−ＮＲ８（Ｃ＝Ｏ）−Ｒ１０、−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＲ８Ｒ９、−ＮＲ８Ｒ９、−ＮＲ８ＯＲ９、−Ｓ（Ｏ）ｃＮＲ８Ｒ９、−Ｓ（Ｏ）ｄ（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル、−Ｏ−ＳＯ２−Ｒ８、ＮＲ８−Ｓ（Ｏ）ｃ、−（ＣＲ８Ｒ９）ｄ（３〜１０）員のシクロアルキル、−（ＣＲ８Ｒ９）ｅ（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール、−（ＣＲ８Ｒ９）ｅ（４〜１０）員のヘテロシクリル、−（ＣＲ８Ｒ９）ｆ（Ｃ＝Ｏ）（ＣＲ８Ｒ９）ｅ（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール、−（ＣＲ８Ｒ９）ｆ（Ｃ＝Ｏ）（ＣＲ８Ｒ９）ｅ（４〜１０）員のヘテロシクリル、−（ＣＲ８Ｒ９）ｅＯ（ＣＲ８Ｒ９）ｆ（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール、−（ＣＲ８Ｒ９）ｅＯ（ＣＲ８Ｒ９）ｆ（４〜１０）員のヘテロシクリル、−（ＣＲ８Ｒ９）ｆＳ（Ｏ）ｄ（ＣＲ８Ｒ９）ｅ（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール、および−（ＣＲ８Ｒ９）ｆＳ（Ｏ）ｄ（ＣＲ８Ｒ９）ｅ（４〜１０）員のヘテロシクリルから選択され；
Ｒ３およびＲ５の各々は独立して、Ｈ、シアノ、−ＣＦ３、−ＣＨＦ２、−ＣＨ２Ｆ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルキニル、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｒ８、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ８、−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＲ８Ｒ９、−Ｓ（Ｏ）ｃＮＲ８Ｒ９、−Ｓ（Ｏ）ｄ（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル、−（ＣＲ８Ｒ９）ｄ（３〜１０）員のシクロアルキル、−（ＣＲ８Ｒ９）ｅ（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール、−（ＣＲ８Ｒ９）ｅ（４〜１０）員のヘテロシクリル、−（ＣＲ８Ｒ９）ｆ（Ｃ＝Ｏ）（ＣＲ８Ｒ９）ｅ（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール、−（ＣＲ８Ｒ９）ｆ（Ｃ＝Ｏ）（ＣＲ８Ｒ９）ｅ（４〜１０）員のヘテロシクリル、−（ＣＲ８Ｒ９）ｅＯ（ＣＲ８Ｒ９）ｆ（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール、−（ＣＲ８Ｒ９）ｅＯ（ＣＲ８Ｒ９）ｆ（４〜１０）員のヘテロシクリル、−（ＣＲ８Ｒ９）ｆＳ（Ｏ）ｄ（ＣＲ８Ｒ９）ｅ（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール、および−（ＣＲ８Ｒ９）ｆＳ（Ｏ）ｄ（ＣＲ８Ｒ９）ｅ（４〜１０）員のヘテロシクリルから選択され；
このとき、各Ｒ３基は、任意に、４〜１２員の単環式または二環式の環として互いに連結されており；
このとき、各Ｒ５基は、任意に、４〜１２員の単環式または二環式の環として互いに連結されており；
Ｒ４は、Ｈ、−ＣＦ３、−ＣＨＦ２、−ＣＨ２Ｆ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルキニル、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｒ８、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ８、−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＲ８Ｒ９、−（ＣＲ８Ｒ９）ｄ（３〜１０）員のシクロアルキル、−（ＣＲ８Ｒ９）ｅ（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール、−（ＣＲ８Ｒ９）ｅ（４〜１０）員のヘテロシクリル、−（ＣＲ８Ｒ９）ｆ（Ｃ＝Ｏ）（ＣＲ８Ｒ９）ｅ（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール、−（ＣＲ８Ｒ９）ｆ（Ｃ＝Ｏ）（ＣＲ８Ｒ９）ｅ（４〜１０）員のヘテロシクリル、−（ＣＲ８Ｒ９）ｅＯ（ＣＲ８Ｒ９）ｆ（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール、−（ＣＲ８Ｒ９）ｅＯ（ＣＲ８Ｒ９）ｆ（４〜１０）員のヘテロシクリル、−ＣＲ８Ｒ９）ｆＳ（Ｏ）ｄ（ＣＲ８Ｒ９）ｅ（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール、および−（ＣＲ８Ｒ９）ｆＳ（Ｏ）ｄ（ＣＲ８Ｒ９）ｅ（４〜１０）員のヘテロシクリルであり；
このとき、Ｒ６とＲ７が４〜１２員の単環式または二環式の環として互いに連結されており；
Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０の各々は独立して、Ｈ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、−（ＣＲ１１Ｒ１２）ｅ（３〜１０）員のシクロアルキル、−（ＣＲ１１Ｒ１２）ｇ（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール、および−（ＣＲ１１Ｒ１２）ｇ（４〜１０）員のヘテロシクリルから選択され；
前述のＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５およびＲ１６の（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（３〜１０）員のシクロアルキル、（Ｃ６〜Ｃ１０）アリールおよび（４〜１０）員のヘテロシクリルの任意の炭素原子は独立して、各々がハロ、シアノ、ニトロ、−ＣＦ３、−ＣＨＦ２、−ＣＨ２Ｆ、トリフルオロメトキシ、アジド、ヒドロキシル、−Ｏ−Ｒ１５、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルキニル、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｒ１１、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｒ１５、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ１１、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ１５、−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−Ｒ１１、−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−Ｒ１５、−ＮＲ１１（Ｃ＝Ｏ）−Ｒ１３、−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＲ１１Ｒ１２、−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＲ１１Ｒ１５、−ＮＲ１１Ｒ１２、−ＮＲ１１Ｒ１５、−ＮＲ１１ＯＲ１２、−ＮＲ１１ＯＲ１５、−Ｓ（Ｏ）ｃＮＲ１１Ｒ１２、−Ｓ（Ｏ）ｃＮＲ１１Ｒ１５、−Ｓ（Ｏ）ｄ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、−Ｓ（Ｏ）ｄＲ１５、−Ｏ−ＳＯ２−Ｒ１１、−Ｏ−ＳＯ２−Ｒ１５、−ＮＲ１１−Ｓ（Ｏ）ｃ、−ＮＲ１５−Ｓ（Ｏ）ｃ、−（ＣＲ１１Ｒ１２）ｅ（３〜１０）員のシクロアルキル、−（ＣＲ１１Ｒ１２）ｅ（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール、−（ＣＲ１１Ｒ１２）ｅ（４〜１０）員のヘテロシクリル、−（ＣＲ１１Ｒ１２）ｆ（Ｃ＝Ｏ）（ＣＲ１１Ｒ１２）ｅ（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール、−（ＣＲ１１Ｒ１２）ｆ（Ｃ＝Ｏ）（ＣＲ１１Ｒ１２）ｅ（４〜１０）員のヘテロシクリル、−（ＣＲ１１Ｒ１２）ｅＯ（ＣＲ１１Ｒ１２）ｆ（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール、−（ＣＲ１１Ｒ１２）ｅＯ（ＣＲ１１Ｒ１２）ｆ（４〜１０）員のヘテロシクリル、−（ＣＲ１１Ｒ１２）ｆＳ（Ｏ）ｄ（ＣＲ１１Ｒ１２）ｅ（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール、および−（ＣＲ１１Ｒ１２）ｆＳ（Ｏ）ｄ（ＣＲ１１Ｒ１２）ｅ（４〜１０）員のヘテロシクリルから独立して選択される１〜３個のＲ１４置換基で任意に置換されており；
前述のＲ１４の（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（３〜１０）員のシクロアルキル、（Ｃ６〜Ｃ１０）アリールおよび（４〜１０）員のヘテロシクリルの任意の炭素原子は独立して、各々がハロ、シアノ、ニトロ、−ＣＦ３、−ＣＨＦ２、−ＣＨ２Ｆ、トリフルオロメトキシ、アジド、（ＣＨ２）ｅＯＨ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルキニル、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｒ１１、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｒ１５、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ１１、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ１５、−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−Ｒ１１、−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−Ｒ１５、−ＮＲ１１（Ｃ＝Ｏ）−Ｒ１３、−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＲ１１Ｒ１２、−ＮＲ１１Ｒ１２、および−ＮＲ１１Ｒ１５から独立して選択される１〜３個のＲ１６置換基で任意に置換されており；
前述のＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１４およびＲ１５の（４〜１０）員のヘテロシクリルの任意の窒素原子は独立して、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルキニル、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｒ１１、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ１１、−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＲ１１Ｒ１２、−（ＣＲ１１Ｒ１２）ｅ（３〜１０）員のシクロアルキル、−（ＣＲ１１Ｒ１２）ｅ（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール、−（ＣＲ１１Ｒ１２）ｅ（４〜１０）員のヘテロシクリル、−（ＣＲ１１Ｒ１２）ｆ（Ｃ＝Ｏ）（ＣＲ１１Ｒ１２）ｅ（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール、または−（ＣＲ１１Ｒ１２）ｆ（Ｃ＝Ｏ）（ＣＲ１１Ｒ１２）ｅ（４〜１０）員のヘテロシクリルで任意に置換されており；
各Ｒ１１、Ｒ１２およびＲ１３は独立して、Ｈまたは（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルであり；
Ｒ１５は、−（ＣＲ１１Ｒ１２）ｅ（３〜１０）員のシクロアルキル、−（ＣＲ１１Ｒ１２）ｅ（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール、または−（ＣＲ１１Ｒ１２）ｅ（４〜１０）員のヘテロシクリルであり；
ａおよびｂは各々、独立して、１、２、３または４であり；
ｃは１または２であり；
ｄは０、１または２であり；
ｅ、ｆおよびｇは各々、独立して、０、１、２、３、４または５である）
の化合物またはその薬学的に許容され得る塩もしくは水和物。
（項２）
Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｊ、Ｌ、ＭおよびＱの各々がＣであり；Ｒ１およびＲ２の各々が独立して、Ｈまたはハロから選択され；Ｒ４がＨまたは（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルであり、Ｒ３とＲ５がＨであり；Ｒ６とＲ７が４〜１２員の単環式または二環式のアミド環として互いに連結されており；Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６、ａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｅおよびｆは本明細書に規定したとおりである、請求項１に記載の化合物。
（項３）
Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｊ、Ｌ、ＭおよびＱの各々がＣであり；Ｒ１およびＲ２の各々が独立して、Ｈまたはハロから選択され；Ｒ４がＨまたは（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルであり、Ｒ３とＲ５がＨであり；Ｒ６とＲ７が４〜１２員の単環式または二環式の尿素環として互いに連結されており；Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６、ａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｅおよびｆは本明細書に規定したとおりである、請求項１に記載の化合物。
（項４）
前記化合物が、Ｃ−３において（Ｒ）配置を有する単一のエナンチオマーであり、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｊ、Ｌ、ＭおよびＱの各々がＣであり；Ｒ１およびＲ２の各々が独立して、Ｈまたはハロから選択され；Ｒ４がＨまたは（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルであり、Ｒ３とＲ５がＨであり；Ｒ６とＲ７が４〜１２員の単環式または二環式のアミド環として互いに連結されており；Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６、ａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｅおよびｆは本明細書に規定したとおりである、請求項１に記載の化合物。
（項５）
前記化合物が、Ｃ−３において（Ｒ）配置を有する単一のエナンチオマーであり、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｊ、Ｌ、ＭおよびＱの各々がＣであり；Ｒ１およびＲ２の各々が独立して、Ｈまたはハロから選択され；Ｒ４がＨまたは（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルであり、Ｒ３とＲ５がＨであり；Ｒ６とＲ７が４〜１２員の単環式または二環式の尿素環として互いに連結されており；Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６、ａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｅおよびｆは本明細書に規定したとおりである、請求項１に記載の化合物。
（項６）
１−（３−（３，６−ジフルオロ−９Ｈ−カルバゾール−９−イル）−２−ヒドロキシプロピル）−３−フルオロピロリジン−２−オン
２−（３−（３，６−ジフルオロ−９Ｈ−カルバゾール−９−イル）−２−ヒドロキシプロピル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−オン
１−（３−（３，６−ジフルオロ−９Ｈ−カルバゾール−９−イル）−２−ヒドロキシプロピル）イミダゾリジン−２−オン
（１Ｒ，４Ｓ）−２−（（Ｒ）−３−（３，６−ジフルオロ−９Ｈ−カルバゾール−９−イル）−２−ヒドロキシプロピル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−オン
（Ｒ）−１−（３−（３，６−ジフルオロ−９Ｈ−カルバゾール−９−イル）−２−ヒドロキシプロピル）イミダゾリジン−２−オン
（Ｒ）−１−（（Ｒ）−３−（３，６−ジフルオロ−９Ｈ−カルバゾール−９−イル）−２−ヒドロキシプロピル）−３−フルオロピロリジン−２−オン
（Ｓ）−１−（（Ｓ）−３−（９Ｈ−カルバゾール−９−イル）−２−ヒドロキシ−２−メチルプロピル）−３−フルオロピロリジン−２−オン
（Ｒ）−１−（（Ｒ）−３−（９Ｈ−カルバゾール−９−イル）−２−ヒドロキシプロピル）−４−メチルイミダゾリジン−２−オン；
からなる群より選択される化合物；またはその薬学的に許容され得る塩もしくは水和物。
（項７）
１−（３−（３，６−ジフルオロ−９Ｈ−カルバゾール−９−イル）−２−ヒドロキシプロピル）−３−フルオロピロリジン−２−オンである、請求項６に記載の化合物；またはその薬学的に許容され得る塩。
（項８）
２−（３−（３，６−ジフルオロ−９Ｈ−カルバゾール−９−イル）−２−ヒドロキシプロピル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−オンである、請求項６に記載の化合物；またはその薬学的に許容され得る塩もしくは水和物。
（項９）
１−（３−（３，６−ジフルオロ−９Ｈ−カルバゾール−９−イル）−２−ヒドロキシプロピル）イミダゾリジン−２−オンである、請求項６に記載の化合物；またはその薬学的に許容され得る塩もしくは水和物。
（項１０）
（１Ｒ，４Ｓ）−２−（（Ｒ）−３−（３，６−ジフルオロ−９Ｈ−カルバゾール−９−イル）−２−ヒドロキシプロピル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−オンである、請求項６に記載の化合物；またはその薬学的に許容され得る塩もしくは水和物。
（項１１）
（Ｒ）−１−（３−（３，６−ジフルオロ−９Ｈ−カルバゾール−９−イル）−２−ヒドロキシプロピル）イミダゾリジン−２−オンである、請求項６に記載の化合物；またはその薬学的に許容され得る塩もしくは水和物。
（項１２）
（Ｒ）−１−（（Ｒ）−３−（３，６−ジフルオロ−９Ｈ−カルバゾール−９−イル）−２−ヒドロキシプロピル）−３−フルオロピロリジン−２−オンである、請求項６に記載の化合物；またはその薬学的に許容され得る塩もしくは水和物。
（項１３）
（Ｓ）−１−（（Ｓ）−３−（９Ｈ−カルバゾール−９−イル）−２−ヒドロキシ−２−メチルプロピル）−３−フルオロピロリジン−２−オンである、請求項６に記載の化合物；またはその薬学的に許容され得る塩もしくは水和物。
（項１４）
（Ｒ）−１−（（Ｒ）−３−（９Ｈ−カルバゾール−９−イル）−２−ヒドロキシプロピル）−４−メチルイミダゾリジン−２−オンである、請求項６に記載の化合物；またはその薬学的に許容され得る塩もしくは水和物。
（項１５）
前記化合物が、Ｃｒｙ１またはＣｒｙ２をモジュレートする、請求項１に記載の化合物。
（項１６）
前記モジュレーションが、以下：
（ｉ）Ｃｒｙ１またはＣｒｙ２への結合；
（ｉｉ）Ｃｒｙ１またはＣｒｙ２の修飾の阻害；
（ｉｉｉ）Ｃｒｙ１またはＣｒｙ２の局在の改変；
（ｉｖ）Ｃｒｙ１またはＣｒｙ２の安定化の増大または低減；
（ｖ）Ｃｒｙ１またはＣｒｙ２と標的との間の結合の増大または低減；
（ｖｉ）Ｃｒｙ１またはＣｒｙ２の活性の増大または低減；および
（ｖｉｉ）Ｃｒｙ１またはＣｒｙ２の標的の活性の増大または低減
のうちのいずれか１つを含む、請求項１５に記載の化合物。
（項１７）
前記標的がＰｅｒ１、Ｐｅｒ２、グルココルチコイド受容体（ＧＲ）、ＣＬＯＣＫ、ＢＭＡＬ１、またはＣＬＯＣＫ−ＢＭＡＬ１プロモーター配列である、請求項１６に記載の化合物。
（項１８）
請求項１に記載の化合物またはその薬学的に許容され得る塩もしくは水和物、および薬学的に許容され得る担体、佐剤または希釈剤を含む医薬組成物。
（項１９）
さらに１種類または１種類より多くのさらなる治療用薬剤を含む、請求項１８に記載の医薬組成物。
（項２０）
前記１種類または１種類より多くのさらなる治療用薬剤が、ＤＰＰ−ＩＶ阻害薬、ＳＧＬＴ２阻害薬、メトホルミン、およびスルホニル尿素からなる群より選択される、請求項１９に記載の医薬組成物。
（項２１）
前記１種類または１種類より多くのさらなる治療用薬剤が、Ｓｉｇｎｉｆｏｒ（登録商標）、ケトコナゾール、メチラポン、ミトタン、エトミデート、Ｋｏｒｌｙｍ（登録商標）、上皮成長因子受容体阻害薬、アルドステロンシンターゼ／１１β−ヒドロキシラーゼ阻害薬ＬＣＩ６９９、およびレボケトコナゾール（ＣＯＲ−００３）からなる群より選択される、請求項１９に記載の医薬組成物。
（項２２）
被験体に治療有効量の請求項１８に記載の医薬組成物を投与することを含む、該被験体のＣｒｙ媒介性の疾患または障害を処置する方法。
（項２３）
被験体に治療有効量の請求項１８に記載の医薬組成物を投与することを含む、該被験体のＣｒｙ媒介性の疾患または障害の症状を緩和する方法。
（項２４）
前記Ｃｒｙ媒介性の疾患または障害が、糖尿病、糖尿病、糖尿病性合併症（糖尿病性ニューロパシー、糖尿病性網膜症、糖尿病性腎症、白内障形成、緑内障、糖尿病性血管症、アテローム性動脈硬化など）；非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）；非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）；喘息；慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）；メタボリックシンドローム；インスリン抵抗性症候群；肥満；緑内障；クッシング症候群；精神病性鬱；アルツハイマー病；神経障害性疼痛；薬物乱用；骨粗鬆症；がん；黄斑変性；およびミオパシーからなる群より選択される、請求項２２または２３に記載の方法。
（項２５）
さらに、前記被験体に１種類または１種類より多くのさらなる治療用薬剤を投与することを含む、請求項２２または２３に記載の方法。
（項２６）
前記１種類または１種類より多くのさらなる治療用薬剤が、ＤＰＰ−ＩＶ阻害薬、ＳＧＬＴ２阻害薬、メトホルミン、およびスルホニル尿素からなる群より選択される、請求項２５に記載の方法。
（項２７）
前記１種類または１種類より多くのさらなる治療用薬剤が、Ｓｉｇｎｉｆｏｒ（登録商標）、ケトコナゾール、メチラポン、ミトタン、エトミデート、Ｋｏｒｌｙｍ（登録商標）、上皮成長因子受容体阻害薬、アルドステロンシンターゼ／１１β−ヒドロキシラーゼ阻害薬ＬＣＩ６９９、およびレボケトコナゾール（ＣＯＲ−００３）からなる群より選択される、請求項２５に記載の方法。
（項２８）
第１の期間に被験体由来の第１の試料における１種類または１種類より多くのクリプトクロムまたはクリプトクロム調節遺伝子の有効量を測定すること；
第２の期間に該被験体由来の第２の試料における１種類または１種類より多くのクリプトクロムまたはクリプトクロム調節遺伝子の有効量を測定すること；および
該第１の試料において検出された該１種類または１種類より多くのクリプトクロムまたはクリプトクロム調節遺伝子の量を、該第２の試料において検出された該１種類または１種類より多くのクリプトクロムまたはクリプトクロム調節遺伝子の量または参照値と比較すること
を含む、被験体のＣｒｙ媒介性の疾患または障害の進行または予後をモニタリングする方法。
（項２９）
前記１種類または１種類より多くのクリプトクロム調節遺伝子が、そのプロモーター中にＥ−ｂｏｘ配列を含み、Ｄｂｐ、Ｒｅｖ−ｅｒｂα、Ｒｅｖ−ｅｒｂβ、Ｒｏｒα、Ｒｏｒβ、Ｒｏｒγ、Ｐｅｒ１、Ｐｅｒ２、Ｐｅｒ３、Ｃｒｙ１、Ｃｒｙ２、Ｐｃｋ１、Ｇ６Ｐｃ、Ａｖｐ、Ｖｉｐ、Ｃｃｋ、ＳＰ（サブスタンスＰ）、ＡＡ−Ｎａｔ、ＰＫ２（プロキネクチン２）、ｃ−Ｍｙｃ、ＭｙｏＤ、およびＮａｍｐｔからなる群より選択される遺伝子である、請求項２８に記載の方法。
（項３０）
前記モニタリングが、前記被験体における前記Ｃｒｙ媒介性の疾患または障害の発症リスクの変化を評価することを含む、請求項２８に記載の方法。
（項３１）
前記被験体は、以前に前記Ｃｒｙ媒介性の疾患もしくは障害の処置を受けたことがある被験体、以前に該Ｃｒｙ媒介性の疾患もしくは障害の処置を受けたことがない被験体、または以前に該Ｃｒｙ媒介性の疾患もしくは障害と診断されたことがない被験体を含む、請求項２８に記載の方法。
（項３２）
前記試料が全血、血清、血漿、血球、内皮細胞、組織生検材料、リンパ液、腹水液、間質液、骨髄、脳脊髄液（ＣＳＦ）、精液、唾液、粘膜、痰、汗または尿である、請求項２８に記載の方法。
（項３３）
前記第１の試料が前記被験体から、前記Ｃｒｙ媒介性の疾患または障害の処置が行なわれる前に採取される、請求項２８に記載の方法。
（項３４）
前記第２の試料が前記被験体から、前記Ｃｒｙ媒介性の疾患または障害の処置が行なわれた後に採取される、請求項２８に記載の方法。
（項３５）
前記被験体が請求項１８に記載の医薬組成物で処置される、請求項２８に記載の方法。
（項３６）
前記モニタリングが、さらに、前記被験体に対する処置を選択すること、および／または前記Ｃｒｙ媒介性の疾患もしくは障害の処置の有効性をモニタリングすることを含む、請求項２８に記載の方法。
（項３７）
前記Ｃｒｙ媒介性の疾患または障害の前記処置が、外科的介入、請求項１８に記載の医薬組成物の単独または１種類もしくは１種類より多くのさらなる治療用薬剤との併用での投与、請求項１８に記載の医薬組成物の単独または１種類もしくは１種類より多くのさらなる治療用薬剤との併用での投与の後もしくは前での外科的介入、またはさらなる措置を講じないことを含む、請求項３６に記載の方法。
（項３８）
前記参照値が、指標値、Ｃｒｙ媒介性の疾患または障害の１種類または１種類より多くのリスク予測アルゴリズムに由来する値、Ｃｒｙ媒介性の疾患もしくは障害を有しない被験体に由来する値、またはＣｒｙ媒介性の疾患もしくは障害と診断された被験体に由来する値を含む、請求項２８に記載の方法。
（項３９）
前記測定が、前記１種類または１種類より多くのクリプトクロムの有無を検出すること、該１種類または１種類より多くのクリプトクロムの量を定量すること、該１種類または１種類より多くのクリプトクロムの型を認定すること、および１種類または１種類より多くのクリプトクロムの標的に対する結合能を評価することを含む、請求項２８に記載の方法。
（項４０）
前記標的がＰｅｒ１、Ｐｅｒ２、グルココルチコイド受容体（ＧＲ）またはＣＬＯＣＫ−ＢＭＡＬ１プロモーター配列である、請求項３９に記載の方法。
（項４１）
前記Ｃｒｙ媒介性の疾患または障害が、糖尿病、糖尿病性合併症（糖尿病性ニューロパシー、糖尿病性網膜症、糖尿病性腎症、白内障形成、緑内障、糖尿病性血管症、アテローム性動脈硬化など）；非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）；非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）；喘息；慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）；メタボリックシンドローム；インスリン抵抗性症候群；肥満；緑内障；クッシング症候群；精神病性鬱；アルツハイマー病；神経障害性疼痛；薬物乱用；骨粗鬆症；がん；黄斑変性；およびミオパシーからなる群より選択される、請求項２８に記載の方法。
（項４２）
Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｊ、Ｌ、ＭおよびＱが炭素である、請求項１に記載の化合物。
（項４３）
Ｒ１およびＲ２が水素である、請求項１に記載の化合物。
（項４４）
Ｒ１およびＲ２がフッ素であり、ａおよびｂが１である、請求項１に記載の化合物。
（項４５）
Ｒ３およびＲ５が水素である、請求項１に記載の化合物。
（項４６）
Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５が水素である、請求項１に記載の化合物。
（項４７）
Ｒ６とＲ７が連結されて任意に置換された単環式の環を形成している、請求項１に記載の化合物。
（項４８）
Ｒ６とＲ７が連結されて任意に置換された二環式の縮合環を形成している、請求項１に記載の化合物。
（項４９）
Ｒ６とＲ７が連結されて任意に置換された二環式の架橋環を形成している、請求項１に記載の化合物。
（項５０）
Ｒ６とＲ７が連結されて任意に置換された二環式のスピロ環を形成している、請求項１に記載の化合物。
（項５１）
Ｒ６とＲ７が連結されて任意に置換されたピロリジノン環を形成している、請求項１に記載の化合物。
（項５２）
Ｒ６とＲ７が連結されて任意に置換されたイミダゾリジノン環を形成している、請求項１に記載の化合物。
（項５３）
Ｒ６とＲ７が連結されて任意に置換されたピペリジノン環を形成している、請求項１に記載の化合物。
（項５４）
Ｒ６とＲ７が連結されて任意に置換されたピリミジノン環を形成している、請求項１に記載の化合物。
（項５５）
Ｒ６とＲ７によって形成された環が、フッ素、メチル基、エチル基、イソプロピル基、Ｃ３〜６シクロアルカン、またはフェニル基で排他的に置換されている、請求項４８〜５４のいずれか１項に記載の化合物。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【外国語明細書】
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