(57)【要約】      （修正有）【課題】鳥ムネ肉のエタノール抽出液濃縮物を脱ガム工程に供し、ガム質を回収してリン脂質濃縮物を得るにあたり、遠心分離を用いずとも効率よくリン脂質濃縮物を生産可能であり、スケールアップに適した手法を提供すること。【解決手段】鳥ムネ肉のエタノール抽出液濃縮物と４０〜６０質量％エタノール水溶液との質量比１：０．８〜１．２の混合液を、４０〜６０℃で静置する工程を含む、リン脂質濃縮物を生産する方法。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
（Ｂ）鳥ムネ肉のエタノール抽出液濃縮物と４０〜６０質量％エタノール水溶液との質量比１：０．８〜１．２の混合液を、４０〜６０℃で静置する工程
を含む、リン脂質濃縮物を生産する方法。
【請求項２】
静置時間が１時間以上である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
鳥ムネ肉のエタノール抽出液濃縮物の水分含有量が１質量％以下である、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
（Ａ）鳥ムネ肉のエタノール抽出液濃縮物と４０〜６０質量％エタノール水溶液とを、質量比１：０．８〜１．２で混合する工程
を工程（Ｂ）の前にさらに含む、
請求項１〜３のいずれかに記載の方法。
【請求項５】
（Ｃ）静置後に上層、中層、及び下層の３層に分離した混合液から、下層を回収する工程
を工程（Ｂ）後にさらに含む、請求項１〜４のいずれかに記載の方法。
【請求項６】
下層の回収が、上層及び中層の除去によって行われ、当該上層及び中層の除去は
（ｉ）３層に分離した混合液から上層を除去し、下層がゲル状になるまで１０℃以下の温度で静置した後に中層を除去することで行われるか、あるいは
（ｉｉ）３層に分離した混合液を下層がゲル状になるまで１０℃以下の温度で静置した後に上層及び中層を除去することで行われる、
請求項５に記載の方法。
【請求項７】
鳥ムネ肉が鶏ムネ肉である、請求項１〜６のいずれかに記載の方法。
【請求項８】
（ｂ）鳥ムネ肉のエタノール抽出物、エタノール、及び水を含む混合液であって、エタノール含有量が２０〜４３．５質量％の混合液を、４０〜６０℃で静置する工程
を含む、リン脂質濃縮物を生産する方法。
【請求項９】
前記混合液の水分含有量が１６〜３６．５質量％である、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
以下の（α１）〜（α５）の要件のうち、少なくとも１要件を満たす、請求項８又は９に記載の方法。
（α１）：静置時間が１時間以上である
（α２）：鳥ムネ肉のエタノール抽出液濃縮物の水分含有量が１質量％以下である
（α３）：（ｃ）静置後に上層、中層、及び下層の３層に分離した混合液から、下層を回収する工程
を工程（ｂ）後にさらに含む
（α４）：要件（α３）を満たし、且つ、下層の回収が、上層及び中層の除去によって行われ、当該上層及び中層の除去は
（ｉ）３層に分離した混合液から上層を除去し、下層がゲル状になるまで１０℃以下の温度で静置した後に中層を除去することで行われるか、あるいは
（ｉｉ）３層に分離した混合液を下層がゲル状になるまで１０℃以下の温度で静置した後に上層及び中層を除去することで行われる
（α５）：鳥ムネ肉が鶏ムネ肉である
【請求項１１】
（Ｂ）鳥ムネ肉のエタノール抽出液濃縮物と４０〜６０質量％エタノール水溶液との質量比１：０．８〜１．２の混合液を、４０〜６０℃で静置する工程
を含む、鳥ムネ肉に含まれるリン脂質を濃縮する方法。
【請求項１２】
以下の（α１）〜（α５）の要件のうち、少なくとも１要件を満たす、請求項１１に記載の方法。
（α１）：静置時間が１時間以上である
（α２）：鳥ムネ肉のエタノール抽出液濃縮物の水分含有量が１質量％以下である
（α３）：（ｃ）静置後に上層、中層、及び下層の３層に分離した混合液から、下層を回収する工程
を工程（ｂ）後にさらに含む
（α４）：要件（α３）を満たし、且つ、下層の回収が、上層及び中層の除去によって行われ、当該上層及び中層の除去は
（ｉ）３層に分離した混合液から上層を除去し、下層がゲル状になるまで１０℃以下の温度で静置した後に中層を除去することで行われるか、あるいは
（ｉｉ）３層に分離した混合液を下層がゲル状になるまで１０℃以下の温度で静置した後に上層及び中層を除去することで行われる
（α５）：鳥ムネ肉が鶏ムネ肉である
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、リン脂質濃縮物の生産方法等に関する。
【背景技術】
【０００２】
リン脂質は、生体構成成分として重要であり、中でも例えばプラズマローゲン等は記憶能力を増強する等の様々な効果を有する機能性素材として注目されている。このため、リン脂質を効率よく調製する方法が望まれている。
【０００３】
これまで、例えば鳥ムネ肉からエタノール抽出により、リン脂質等の成分を抽出する方法が開発されてきている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２００６−２３２９６７号公報
【特許文献２】特開２０１０−６３４０６号公報
【特許文献３】特開２０１０−６５１６７号公報
【特許文献４】特開２０１６−２１０６９６号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
鳥ムネ肉からエタノールにより有用成分を抽出したのち、特に重要と考えられている成分の一種であるリン脂質を濃縮することを試みた。通常、油を精製する場合において、動植物からの抽出物を脱ガム工程に供し、ガム質を除去する。しかし、リン脂質は主にガム質に含まれる成分であることから、効率的にリン脂質を濃縮するため鳥ムネ肉のエタノール抽出物を濃縮して脱ガム工程に供し、遠心分離により沈殿したガム質を回収することを検討した。
【０００６】
当該手法により、リン脂質の濃縮が可能となったが、当該手法では遠心分離を必須工程とするため、製造スケールを拡大することが困難であり、従って遠心分離を用いずに効率よくリン脂質濃縮物を生産する手法の開発が必要となった。
【０００７】
本発明は、鳥ムネ肉のエタノール抽出液濃縮物を脱ガム工程に供し、ガム質を回収してリン脂質濃縮物を得るにあたり、遠心分離を用いずとも効率よくリン脂質濃縮物を生産可能であり、スケールアップに適した手法を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、鳥ムネ肉のエタノール抽出液濃縮物と特定の含水エタノールとの混合液を、特定の条件で静置することにより、上記課題を解決できる可能性を見出し、さらに改良を重ねて本発明を完成させるに至った。
【０００９】
本発明は例えば以下の項に記載の主題を包含する。
項１．
（Ｂ）鳥ムネ肉のエタノール抽出液濃縮物と４０〜６０質量％エタノール水溶液との質量比１：０．８〜１．２の混合液を、４０〜６０℃で静置する工程
を含む、リン脂質濃縮物を生産する方法。
項２．
静置時間が１時間以上である、項１に記載の方法。
項３．
鳥ムネ肉のエタノール抽出液濃縮物の水分含有量が１質量％以下である、項１又は２に記載の方法。
項４．
（Ａ）鳥ムネ肉のエタノール抽出液濃縮物と４０〜６０質量％エタノール水溶液とを、質量比１：０．８〜１．２で混合する工程
を工程（Ｂ）の前にさらに含む、
項１〜３のいずれかに記載の方法。
項５．
（Ｃ）静置後に上層、中層、及び下層の３層に分離した混合液から、下層を回収する工程
を工程（Ｂ）後にさらに含む、項１〜４のいずれかに記載の方法。
項６．
下層の回収が、上層及び中層の除去によって行われ、当該上層及び中層の除去は
（ｉ）３層に分離した混合液から上層を除去し、下層がゲル状になるまで１０℃以下の温度で静置した後に中層を除去することで行われるか、あるいは
（ｉｉ）３層に分離した混合液を下層がゲル状になるまで１０℃以下の温度で静置した後に上層及び中層を除去することで行われる、
項５に記載の方法。
項７．
鳥ムネ肉が鶏ムネ肉である、項１〜６のいずれかに記載の方法。
項８．
（ｂ）鳥ムネ肉のエタノール抽出物、エタノール、及び水を含む混合液であって、エタノール含有量が２０〜４３．５質量％の混合液を、４０〜６０℃で静置する工程
を含む、リン脂質濃縮物を生産する方法。
項９．
前記混合液の水分含有量が１６〜３６．５質量％である、項８に記載の方法。
項１０．
以下の（α１）〜（α５）の要件のうち、少なくとも１要件を満たす、項８又は９に記載の方法。
（α１）：静置時間が１時間以上である
（α２）：鳥ムネ肉のエタノール抽出液濃縮物の水分含有量が１質量％以下である
（α３）：（ｃ）静置後に上層、中層、及び下層の３層に分離した混合液から、下層を回収する工程
を工程（ｂ）後にさらに含む
（α４）：要件（α３）を満たし、且つ、下層の回収が、上層及び中層の除去によって行われ、当該上層及び中層の除去は
（ｉ）３層に分離した混合液から上層を除去し、下層がゲル状になるまで１０℃以下の温度で静置した後に中層を除去することで行われるか、あるいは
（ｉｉ）３層に分離した混合液を下層がゲル状になるまで１０℃以下の温度で静置した後に上層及び中層を除去することで行われる
（α５）：鳥ムネ肉が鶏ムネ肉である
項１１．
（Ｂ）鳥ムネ肉のエタノール抽出液濃縮物と４０〜６０質量％エタノール水溶液との質量比１：０．８〜１．２の混合液を、４０〜６０℃で静置する工程
を含む、鳥ムネ肉に含まれるリン脂質を濃縮する方法。
項１２．
以下の（α１）〜（α５）の要件のうち、少なくとも１要件を満たす、項１１に記載の方法。
（α１）：静置時間が１時間以上である
（α２）：鳥ムネ肉のエタノール抽出液濃縮物の水分含有量が１質量％以下である
（α３）：（ｃ）静置後に上層、中層、及び下層の３層に分離した混合液から、下層を回収する工程
を工程（ｂ）後にさらに含む
（α４）：要件（α３）を満たし、且つ、下層の回収が、上層及び中層の除去によって行われ、当該上層及び中層の除去は
（ｉ）３層に分離した混合液から上層を除去し、下層がゲル状になるまで１０℃以下の温度で静置した後に中層を除去することで行われるか、あるいは
（ｉｉ）３層に分離した混合液を下層がゲル状になるまで１０℃以下の温度で静置した後に上層及び中層を除去することで行われる
（α５）：鳥ムネ肉が鶏ムネ肉である
なお、上記の、（α１）〜（α５）の要件のうち、少なくとも１要件を満たす、とは、これら５つの要件の組み合わせ全ての中から選択される少なくとも１種類の組み合わせを意味する。すなわち、５！通りの組み合わせの何れかを意味する。
【発明の効果】
【００１０】
本発明に包含される、リン脂質濃縮物を生産する方法は、鳥ムネ肉のエタノール抽出液濃縮物を脱ガム工程に供し、ガム質を回収してリン脂質濃縮物を得るにあたり、遠心分離を用いずとも効率よくリン脂質濃縮物を生産可能であり、スケールアップに適した方法であるといえる。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】鶏ムネ肉のエタノール抽出液濃縮物とエタノール水溶液との混合及び静置を行い混合液の分離を行った結果を示す。
【図２】図１の各分離層をＴＬＣ分析した結果を示す。
【図３】鶏砂肝のエタノール抽出液濃縮物とエタノール水溶液との混合及び静置を行い混合液の分離を行った結果を示す。
【図４】図３の各分離層をＴＬＣ分析した結果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
以下、本発明の各実施形態について、さらに詳細に説明する。
【００１３】
本発明に包含される、鳥ムネ肉からリン脂質濃縮物を生産する方法（以下「本発明のリン脂質濃縮物生産方法」ということがある）は、（Ｂ）鳥ムネ肉のエタノール抽出液濃縮物と４０〜６０質量％エタノール水溶液との質量比１：０．８〜１．２の混合液を、４０〜６０℃で静置する工程を含む。
【００１４】
なお、本明細書において、特に断らない限り、質量％はｗ／ｗ％を示す。
【００１５】
鳥ムネ肉としては、食用鳥（例えば鶏、家鴨、鶉、鴨、雉、七面鳥等）のムネ肉が好ましく、特に鶏ムネ肉が好ましい。鳥ムネ肉は適当な大きさに裁断されていてもよい。また、乾燥（特に凍結乾燥）されたものであってもよい。
【００１６】
鳥ムネ肉のエタノール抽出の方法としては、特に限定されず、公知の方法又は公知の方法から容易に相当できる方法を用いることができる。例えば、鳥ムネ肉に対して質量比１〜５倍程度のエタノールを加え、撹拌又は静置することで行うことができる。撹拌又は静置は、加温して行ってもよい。加温は、例えば３０〜５０℃、又は３５〜４５℃程度で行うことができる。また、撹拌又は静置の時間は特に制限されないが、例えば０．５〜２４時間、又は１〜１２時間程度を挙げることができる。得られた抽出液は、必要に応じて濾過などにより固液分離してもよい。また、抽出残渣に対して、同様の操作を行い、再度抽出液を得て、先に得られた抽出液に合算してもよい。
【００１７】
なお、気温が低い（特に冬期）場合、当該抽出工程中に析出が生じるおそれがある。このような温度は析出が生じる温度であれば制限はされないが、具体的には例えば１０℃以下、９℃以下、８℃以下、７℃以下、６℃以下、５℃以下、４℃以下、３℃以下、２℃以下、１℃以下、又は０℃以下が挙げられる。当該析出にはリン脂質が含まれるため、析出したままでエタノール抽出操作を続けると、析出に含まれるリン脂質がエタノール抽出液に含まれず、このため最終的に得られるリン脂質濃縮物に含まれるリン脂質量がばらつくおそれがある。よって、析出が生じた場合には、まず加温して析出を溶解させるか、あるいは析出が生じない温度下で当該工程を行うことが好ましい。加温して析出を溶解させる場合、加温の温度は析出が溶解し、且つ品質に影響を与えない範囲であれば特に制限されないが、例えば２０〜３０℃程度が例示される。また、析出が生じない温度下でエタノール抽出工程を行う場合、例えば２０〜３０℃程度の温度下で当該工程を行うことができる。
【００１８】
得られたエタノール抽出液を濃縮する方法としては、特に限定されず、公知の方法又は公知の方法から容易に相当できる方法を用いることができる。例えば、減圧濃縮、又は加熱濃縮等が挙げられる。
【００１９】
濃縮は、得られるエタノール抽出液濃縮物の水分含有量が１質量％以下になるまで行うことが好ましく、０．９質量％以下、０．８質量％以下、０．７質量％以下、０．６質量％以下、又は０．５質量％以下になるまで行うことがより好ましく、０．４質量％以下、０．３質量％以下、又は０．２質量％以下になるまで行うことがさらに好ましい。なお、当該水分含有量は、カールフィッシャー法により求めた値である。
【００２０】
また、得られるエタノール抽出液濃縮物のエタノール含有量は、１５質量％以下であることが好ましく、１４質量％以下、１３質量％以下、１２質量％以下、１１質量％以下、１０質量％以下、９質量％以下、又は８質量％以下であることがより好ましい。なお、当該エタノール含有量は、乾熱乾燥法（１０５℃、３時間）で求めた乾燥減量から上記水分含有量を減じた値である。例えば、当該乾熱乾燥減量が９０質量％であり、上記水分含有量が１質量％であった場合、エタノール含有量は１００−９０−１＝９（質量％）となる。
【００２１】
鳥ムネ肉のエタノール抽出液濃縮物と４０〜６０質量％エタノール水溶液とを、質量比１：０．８〜１．２で混合する。当該質量比の下限は、例えば１：０．８５、０．９、０．９５、又は１であってもよい。また、当該質量比の上限は、例えば１：１．１５、１．１、１．０５、又は１であってもよい。また、用いるエタノール水溶液の濃度の下限は、例えば４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、又は５０質量％であってもよい。また、用いるエタノール水溶液の濃度の上限は、例えば５９、５８、５７、５６、５５、５４、５３、５２、５１、又は５０質量％であってもよい。
【００２２】
このようにして得られた混合液を、４０〜６０℃で静置する。これにより、混合液は３層（上層、中層、下層）に分離され、下層にはリン脂質が濃縮される。
【００２３】
静置時の温度の下限は、例えば４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、又は５０℃であってもよい。また、静置時の温度の上限は、例えば５９、５８、５７、５６、５５、５４、５３、５２、５１、又は５０℃であってもよい。また、静置時の温度は、当該温度範囲であれば変化してもよいが、できるだけ一定であることが好ましく、変化する場合であっても変化幅は少ない（例えば変化幅１〜５℃、又は１〜３℃程度）方が好ましく、また変化する早さもできるだけゆっくりであることが好ましい。
【００２４】
静置する時間としては、混合液が層分離される範囲であれば特に制限されないが、例えば１時間以上が好ましい。２時間以上、３時間以上、４時間以上、５時間以上、又は６時間以上であってもよい。静置時間の上限は特に制限されないが、例えば２４時間以下、１８時間以下、１２時間以下、又は１０時間以下が例示される。
【００２５】
上述の通り、３層に分離された混合液の下層にリン脂質が濃縮されている。よって、本発明のリン脂質濃縮物生産方法は、静置後に３層に分離した混合液から、下層を回収する工程をさらに含むことができる。
【００２６】
下層の回収は、例えば、（ｉ）３層に分離した混合液から上層を除去し、下層がゲル状になるまで１０℃以下の温度で静置した後に中層を除去する、あるいは、（ｉｉ）３層に分離した混合液を下層がゲル状になるまで１０℃以下の温度で静置した後に上層及び中層を除去することで行うことができる。
【００２７】
（ｉ）（ｉｉ）のいずれにおいても、これらの工程における静置温度は１０℃以下であり、例えば９℃以下、８℃以下、７℃以下、６℃以下、５℃以下、４℃以下であってもよい。また、当該静置時間としては、下層がゲル状になる範囲であれば特に制限されないが、例えば１２時間以上が例示される。
【００２８】
また、鳥ムネ肉のエタノール抽出液濃縮物と４０〜６０質量％エタノール水溶液との質量比１：０．８〜１．２の混合液は、上記のエタノール抽出液濃縮物のエタノール含有量の好ましい範囲も考慮すると、例えば、鳥ムネ肉のエタノール抽出物、エタノール、及び水を含む混合液であって、エタノール含有量が２０〜４３．５質量％の混合液、ということができる。当該混合液のエタノール含有量の下限は、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、又は３０質量％であってもよい。また、当該混合液のエタノール含有量の上限は、４３、４２、４１、４０、３９、３８、３７、３６、３５、３４、又は３３質量％であってもよい。また、当該混合液の水含有量は、上記のエタノール抽出液濃縮物の水分含有量の好ましい範囲も考慮すると、例えば１６〜３６．５質量％ということができる。当該混合液の水含有量の下限は、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、又は２４質量％であってもよい。また、当該混合液の水含有量の上限は、３６、３５、３４、３３、３２、３１、３０、２９、２８、２７、又は２６質量％であってもよい。
【００２９】
また、本発明は、（Ｂ）鳥ムネ肉のエタノール抽出液濃縮物と４０〜６０質量％エタノール水溶液との質量比１：０．８〜１．２の混合液を、４０〜６０℃で静置する工程を含む、鳥ムネ肉に含まれるリン脂質を濃縮する方法も、包含する。当該方法は、上記のリン脂質濃縮物を生産する方法と同じ工程を経ることができ、よって上記のリン脂質濃縮物を生産する方法についての説明が当該リン脂質を濃縮する方法にもそのまま当てはまる。
【００３０】
なお、本明細書において「含む」とは、「本質的にからなる」と、「からなる」をも包含する（The term "comprising" includes "consisting essentially of” and "consisting of."）。
【実施例】
【００３１】
以下、本発明をより具体的に説明するが、本発明は下記の例に限定されるものではない。
【００３２】
なお、鶏ムネ肉としては、凍結乾燥された鶏ムネ肉（ＦＤ鶏ムネ肉）を使用した。また、特に断らない限り、％は質量（ｗ／ｗ）％を示す。
【００３３】
エタノール抽出
ＦＤ鶏ムネ肉４２ｋｇを抽出釜に投入した。ＦＤ鶏ムネ肉の４倍量（ｗ／ｖ）の９９％エタノール（１６８Ｌ）を抽出釜に投入して窒素置換後、攪拌しながら加温し４０℃達温後、９０分間保持した。３０メッシュで濾過後、抽出液をドラム缶に回収した。１回目の抽出残渣を抽出釜に投入後、ＦＤ鶏ムネ肉の２．５倍量（ｗ／ｖ）の９９％エタノール（１０５Ｌ）を釜に投入して窒素置換後、攪拌しながら加温し４０℃達温後、９０分間保持した。３０メッシュで濾過後、抽出液をドラム缶に回収した。当該抽出液を１０Ｓろ紙で吸引ろ過した。得られた液をエタノール抽出液として用いた。
【００３４】
エタノール抽出液の減圧濃縮
エタノール抽出液を、内温４０℃以下で減圧し、５０Ｌバットに全量入る程度の量（約８ｋｇ）になるまで減圧濃縮した。当該一次濃縮液を５０Ｌバットに入れて外温５０〜６０℃で減圧した。得られた濃縮液を３０メッシュでろ過後、重量を測定したところ、５．１２ｋｇであった。当該濃縮液をエタノール抽出液濃縮物とし、使用するまで４℃で保管した。
【００３５】
なお、エタノール抽出液濃縮物の乾燥減量を乾熱乾燥法（１０５℃、３時間）で、水分量をカールフィッシャー法で、それぞれ測定した。また、差引法でエタノール濃度を算出した。結果は次のとおりであった。乾燥減量：８．０５％、水分：０．１５％、エタノール：７．９％。
【００３６】
エタノール抽出液濃縮物とエタノール水溶液との混合検討
＜検討１＞
エタノール抽出液濃縮物１５ｇに対し、５０、６０、７０、又は８０％エタノール水溶液を等量添加（ｗ／ｗ）し、室温で撹拌した。室温で３時間静置後、分離状況を確認した。
＜検討２＞
エタノール抽出液濃縮物１０ｇに対し、２５、５０、又は７５％エタノール水溶液を等量添加して（ｗ／ｗ）し、５０℃になるまで加温撹拌した。５０℃で３時間静置後、分離状況を確認した。
＜ＴＬＣ分析＞
各検討で分離された層に含まれる成分を、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）で確認した。より詳細には、薄層板（シリカゲル）で作られた薄層を使い、検討１及び検討２で分離させた各層を移動相（クロロホルム／メタノール／水＝６５／２５／４）で展開させて中性脂質とリン脂質を分離した。検出溶液には１０％硫酸を用いた。
【００３７】
検討１においては、５０％エタノール水溶液を等量混合した場合、乳化状態になり分離は確認できなかった。６０、７０、又は８０％エタノール水溶液を等量混合した場合には２層の分離はみられたが、それぞれの層の脂質分布をＴＬＣで確認したところ、いずれの層にも中性脂質とリン脂質が存在し分離が不十分であった。このことから、室温条件下では分離が不十分であることが明らかとなった。
【００３８】
検討２においては、２５％エタノール水溶液を等量混合した場合、乳化状態になり分離は確認できなかったが、５０又は７５％エタノール水溶液を等量混合した場合には３層に分離した（図１）。ＴＬＣ分析によれば、７５％エタノールを等量混合した場合には、リン脂質が最も多かった下層画分で中性脂質やコレステロールも多く存在していた。一方、５０％エタノール水溶液を等量混合した場合、上層には主として中性脂質、下層に主としてリン脂質が存在していることがわかった（図２）。なお、図２では、（Ａ）は上層、（Ｂ）は中層、（Ｃ）は下層を示す。
【００３９】
このことから、５０％エタノール水溶液を当量混合して５０℃で静置することにより、鳥ムネ肉のエタノール抽出液濃縮物について、遠心分離を用いずとも、効率よくリン脂質濃縮物を得られることが分かった。
【００４０】
また、３層分離した状態で４℃で保存したところ、上層と下層のみが固まった。当該特徴を利用することで、より効率的に下層のみを回収することができた。具体的には、まず３相分離した状態において上層のみを吸引除去し、４℃で一晩静置した後、中層（液状）と下層（ゲル状）とを固液分離して下層のみを容易に採取することができた。
【００４１】
なお、同様の検討（エタノール抽出、エタノール抽出液濃縮、及びエタノール抽出液濃縮物とエタノール水溶液との混合及び静置）を、鶏ムネ肉ではなく、鶏砂肝又は鶏皮を用いて行ったところ、中性脂質とリン脂質との分離が不十分であった。図３に鶏砂肝のエタノール抽出液濃縮物とエタノール水溶液との混合及び静置を行い混合液の分離を行った結果を、図４に図３の各分離層をＴＬＣ分析した結果を、それぞれ示す。なお、図４では、エタノール濃度（含有量）５０％における（Ａ）は上層、（Ｂ）は中層、（Ｃ）は下層を示し、エタノール濃度（含有量）７５％における（Ａ）は上層、（Ｂ）は下層を示す（エタノール濃度７５％では、２層にしか分離しなかった）。
【００４２】
これらの結果から、当該手法は、特に鳥ムネ肉に対して用いるのに適していることがわかった。
【図１】
2019142818.tif 000002
【図２】
2019142818.tif 000003
【図３】
2019142818.tif 000004
【図４】
2019142818.tif 000005
【手続補正書】
【提出日】平成31年2月26日(2019.2.26)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（Ｂ）水分含有量が０．５質量％以下であり且つエタノール含有量が１０質量％以下である鳥ムネ肉のエタノール抽出液濃縮物と４０〜６０質量％エタノール水溶液との質量比１：０．８〜１．２の混合液を、４０〜６０℃で静置し３層に分離する工程
を含む、リン脂質濃縮物を生産する方法。
【請求項２】
静置時間が１時間以上である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
（Ａ）水分含有量が０．５質量％以下であり且つエタノール含有量が１０質量％以下である鳥ムネ肉のエタノール抽出液濃縮物と４０〜６０質量％エタノール水溶液とを、質量比１：０．８〜１．２で混合する工程
を工程（Ｂ）の前にさらに含む、
請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
（Ｃ）静置後に上層、中層、及び下層の３層に分離した混合液から、下層を回収する工程を工程（Ｂ）後にさらに含む、請求項１〜３のいずれかに記載の方法。
【請求項５】
下層の回収が、上層及び中層の除去によって行われ、当該上層及び中層の除去は
（ｉ）３層に分離した混合液から上層を除去し、下層がゲル状になるまで１０℃以下の温度で静置した後に中層を除去することで行われるか、あるいは
（ｉｉ）３層に分離した混合液を下層がゲル状になるまで１０℃以下の温度で静置した後に上層及び中層を除去することで行われる、
請求項４に記載の方法。
【請求項６】
鳥ムネ肉が鶏ムネ肉である、請求項１〜５のいずれかに記載の方法。
【請求項７】
（ｂ）鳥ムネ肉のエタノール抽出物、エタノール、及び水を含む混合液であって、エタノール含有量が２０〜４３．５質量％の混合液を、４０〜６０℃で静置し３層に分離する工程
を含む、リン脂質濃縮物を生産する方法。
【請求項８】
前記混合液の水分含有量が１６〜３６．５質量％である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
以下の（α１）〜（α４）の要件のうち、少なくとも１要件を満たす、請求項７又は８に記載の方法。
（α１）：静置時間が１時間以上である
（α２）：鳥ムネ肉が鶏ムネ肉である
（α３）：（ｃ）静置後に上層、中層、及び下層の３層に分離した混合液から、下層を回収する工程
を工程（ｂ）後にさらに含む
（α４）：要件（α３）を満たし、且つ、下層の回収が、上層及び中層の除去によって行われ、当該上層及び中層の除去は
（ｉ）３層に分離した混合液から上層を除去し、下層がゲル状になるまで１０℃以下の温度で静置した後に中層を除去することで行われるか、あるいは
（ｉｉ）３層に分離した混合液を下層がゲル状になるまで１０℃以下の温度で静置した後に上層及び中層を除去することで行われる
【請求項１０】
（Ｂ）水分含有量が０．５質量％以下であり且つエタノール含有量が１０質量％以下である鳥ムネ肉のエタノール抽出液濃縮物と４０〜６０質量％エタノール水溶液との質量比１：０．８〜１．２の混合液を、４０〜６０℃で静置し３層に分離する工程
を含む、鳥ムネ肉に含まれるリン脂質を濃縮する方法。
【請求項１１】
以下の（α１）〜（α４）の要件のうち、少なくとも１要件を満たす、請求項１０に記載の方法。
（α１）：静置時間が１時間以上である
（α２）：鳥ムネ肉が鶏ムネ肉である
（α３）：（ｃ）静置後に上層、中層、及び下層の３層に分離した混合液から、下層を回収する工程
を工程（ｂ）後にさらに含む
（α４）：要件（α３）を満たし、且つ、下層の回収が、上層及び中層の除去によって行われ、当該上層及び中層の除去は
（ｉ）３層に分離した混合液から上層を除去し、下層がゲル状になるまで１０℃以下の温度で静置した後に中層を除去することで行われるか、あるいは
（ｉｉ）３層に分離した混合液を下層がゲル状になるまで１０℃以下の温度で静置した後に上層及び中層を除去することで行われる