(57)【要約】      （修正有）【課題】バナナの果肉部から、優れた生理活性を奏する組成物を得ることができる、バナナ由来組成物の製造方法の提供。【解決手段】バナナの果肉部を細分化し、果肉細分化物を得る工程（１）と、前記果肉細分化物に、蛋白質分解酵素を添加して酵素反応により前記果肉細分化物中の蛋白質を分解し、酵素反応物を得る工程（２）と、前記酵素反応物中の前記蛋白質分解酵素を失活させ、組成物Ａを得る工程（３）と、を備える、バナナ由来組成物の製造方法。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
バナナの果肉部を細分化し、果肉細分化物を得る工程（１）と、
前記果肉細分化物に、蛋白質分解酵素を添加して酵素反応により前記果肉細分化物中の蛋白質を分解し、酵素反応物を得る工程（２）と、
前記酵素反応物中の前記蛋白質分解酵素を失活させ、組成物Ａを得る工程（３）と、
を備える、バナナ由来組成物の製造方法。
【請求項２】
前記バナナの果肉部が未熟バナナの果肉部である、請求項１に記載のバナナ由来組成物の製造方法。
【請求項３】
前記工程（３）において、前記蛋白質分解酵素の失活を加熱により行う、請求項１又は２に記載のバナナ由来組成物の製造方法。
【請求項４】
前記工程（３）において、前記蛋白質分解酵素の失活を炭素数が１〜４のアルコールにより行う、請求項１又は２に記載のバナナ由来組成物の製造方法であって、前記工程（３）が、
前記酵素反応物に、前記炭素数が１〜４のアルコールを添加し、次いで得られたアルコール添加物を固液分離し、液相を取り出す工程［Ｉ］と、
前記液相中の前記炭素数が１〜４のアルコールを除去する工程［ＩＩ］と、
を含む、バナナ由来組成物の製造方法。
【請求項５】
前記炭素数が１〜４のアルコールが、メタノールおよびエタノールの少なくとも一方である、請求項４に記載のバナナ由来組成物の製造方法。
【請求項６】
前記工程［ＩＩ］が、凍結乾燥により前記液相中の前記炭素数が１〜４のアルコールを除去する工程である、請求項４又は５に記載のバナナ由来組成物の製造方法。
【請求項７】
更に、前記組成物Ａを脱糖及び脱塩し、組成物Ｂを得る工程（４）を備える、請求項１〜６のいずれか１項に記載のバナナ由来組成物の製造方法。
【請求項８】
前記バナナ由来組成物が、生理活性を奏する、請求項１〜７のいずれか１項に記載のバナナ由来組成物の製造方法。
【請求項９】
バナナの果肉部から得られるバナナ由来組成物を有効成分として含有する、生理活性物質。
【請求項１０】
前記バナナ由来組成物が、未熟バナナの果肉部から得られたものである、請求項９に記載の生理活性物質。
【請求項１１】
前記バナナ由来組成物が、前記バナナの果肉部に蛋白質分解酵素を添加して、酵素反応により前記バナナの果肉部中の蛋白質を分解し、次いで前記蛋白質分解酵素を加熱又はアルコールにより失活させて得られるものである、請求項９又は１０に記載の生理活性物質。
【請求項１２】
前記バナナ由来組成物中のアミノ酸含有量とトリプトファン誘導体含有量との合計が７質量％以上である、請求項９〜１１のいずれか１項に記載の生理活性物質。
【請求項１３】
前記アミノ酸がフェニルアラニン及びトリプトファンを含み、前記トリプトファン誘導体がセロトニンを含む、請求項１２に記載の生理活性物質。
【請求項１４】
血糖値上昇抑制作用を奏する、請求項９〜１３のいずれか１項に記載の生理活性物質。
【請求項１５】
コラーゲン産生促進作用を奏する、請求項９〜１４のいずれか１項に記載の生理活性物質。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、バナナ由来組成物の製造方法、及び、バナナ由来組成物を含有する生理活性物質に関する。
【背景技術】
【０００２】
バナナは世界中で幅広く栽培されているバショウ科に属する植物である。近年、バナナの各部位（花、根）が様々な生理活性を奏するという知見が得られており、そのような生理活性が注目を浴びている。そのような生理活性としては例えば、血糖値上昇抑制作用が挙げられる。成人の糖尿病患者数は近年、世界で数億人にものぼり、血糖値の上昇を抑制し糖尿病を改善する方法としては、例えば、インスリン投与、膵島の移植、運動が有効であるとされている。一方で、バナナの花や根から得られる抽出物が、高血糖状態の改善に寄与するとの報告がされている（例えば、非特許文献１〜２参照）。具体的には、非特許文献１では、バナナの根から得られる抽出物に、糖尿病改善効果があるとの報告がされている。また、非特許文献２では、バナナの花から得られる抽出物に、血糖値を低下させる効果があるとの報告がされている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００３】
【非特許文献１】Salau B.A et al.  Asian J. Exp. Biol. Sci.,vol 1 (1): 30-35, 2010.
【非特許文献２】L. Pari and J. Umamaheswari  Phytother. Res 14: 136-138, 2000.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
しかしながら、バナナの根、花は入手困難であり、より安価で安定的な供給に対する要求があった。また、バナナの根、花の抽出物が血糖値上昇抑制作用等の生理活性を与えるメカニズムについても不明であった。
【０００５】
本発明は、このような状況に鑑みてなされたものであり、バナナの果肉部から、優れた生理活性を奏する組成物を得ることができる、バナナ由来組成物の製造方法を提供することを目的とする。
また、本発明は、優れた生理活性を奏する、バナナの果肉部から得られるバナナ由来組成物を含有する生理活性物質を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者は、既に市場での流通ルートが確立されており、相当量を安価に確保することのできるバナナの果肉部に着目し、上記目的を達成するために鋭意検討を行った。そして、本発明者は、バナナの果肉部中の蛋白質を酵素分解して得られる組成物が、優れた生理活性を奏することを見出し、本発明を完成させた。
【０００７】
即ち、この発明は、上記課題を有利に解決することを目的とするものであり、本発明のバナナ由来組成物の製造方法は、バナナの果肉部を細分化し、果肉細分化物を得る工程（１）と、前記果肉細分化物に、蛋白質分解酵素を添加して酵素反応により前記果肉細分化物中の蛋白質を分解し、酵素反応物を得る工程（２）と、前記酵素反応物中の前記蛋白質分解酵素を失活させ、組成物Ａを得る工程（３）と、を備えることを特徴とする。このような工程を備える製造方法でバナナ由来組成物を製造すれば、得られるバナナ由来組成物の血糖値上昇抑制作用及びコラーゲン産生促進作用を優れたものとすることができる。
【０００８】
ここで、本発明のバナナ由来組成物の製造方法は、前記バナナの果肉部が未熟バナナの果肉部であることが好ましい。バナナの果肉部として未熟バナナの果肉部を用いれば、得られるバナナ由来組成物の血糖値上昇抑制作用及びコラーゲン産生促進作用などの生理活性を優れたものとすることができるからである。加えて、蛋白質分解酵素の失活に炭素数が１〜４のアルコールを用いた場合において特に、生産効率を大幅に向上させることができるからである。
【０００９】
そして、本発明のバナナ由来組成物の製造方法は、前記工程（３）において、前記蛋白質分解酵素の失活を加熱により行うことが好ましい。加熱による蛋白質分解酵素の失活は、その操作が容易かつ簡便な設備で可能であり、生産効率を向上させることができるからである。
【００１０】
更に、本発明のバナナ由来組成物の製造方法は、前記工程（３）において、前記蛋白質分解酵素の失活を炭素数が１〜４のアルコールにより行い、そして前記工程（３）が、前記酵素反応物に、前記炭素数が１〜４のアルコールを添加し、次いで得られたアルコール添加物を固液分離し、液相を取り出す工程［Ｉ］と、前記液相中の前記炭素数が１〜４のアルコールを除去する工程［ＩＩ］と、を含むことが好ましい。炭素数が１〜４のアルコールにより蛋白質分解酵素を失活させれば、あわせて当該アルコールで有効成分を抽出することが可能となり、得られる有効成分の収率を向上させることができるからである。
【００１１】
加えて、本発明のバナナ由来組成物の製造方法は、前記炭素数が１〜４のアルコールが、メタノールおよびエタノールの少なくとも一方であることが好ましい。他のアルコールに比して沸点の低いメタノール及びエタノールは蒸発による除去が容易であり、そのような性質を有するメタノール及エタノールを用いれば、得られるバナナ由来組成物の熱履歴を減らし、生理活性を優れたものとすることができるからである。加えて、メタノール及びエタノールは、バナナの果肉部中のアミノ酸、トリプトファン誘導体の抽出効率に優れている。
【００１２】
ここで、本発明のバナナ由来組成物の製造方法は、前記工程［ＩＩ］が、凍結乾燥により前記液相中の前記炭素数が１〜４のアルコールを除去する工程であることが好ましい。アルコールを除去する方法として凍結乾燥を採用すれば、得られるバナナ由来組成物の熱履歴を減らし、生理活性を優れたものとすることができるからである。
【００１３】
そして、本発明のバナナ由来組成物の製造方法は、更に、前記組成物Ａを脱糖及び脱塩し、組成物Ｂを得る工程（４）を備えることが好ましい。この工程を備えれば、得られるバナナ由来組成物の血糖値上昇抑制作用及びコラーゲン産生促進作用を優れたものとすることに加え、得られるバナナ由来組成物の抗酸化作用を優れたものとすることができるからである。
【００１４】
なお、本発明のバナナ由来組成物の製造方法により得られるバナナ由来組成物は、生理活性を奏するものである。
【００１５】
また、この発明は、上記課題を有利に解決することを目的とするものであり、本発明の生理活性物質は、バナナの果肉部から得られるバナナ由来組成物を有効成分として含有することを特徴とする。このような生理活性物質は、生理活性に優れる。
【００１６】
ここで、本発明の生理活性物質は、前記バナナ由来組成物が、未熟バナナの果肉部から得られたものであることが好ましい。バナナ由来組成物が未熟バナナの果肉部から得られたものであれば、本発明の生理活性物質の生理活性を優れたものとすることができるからである。
【００１７】
更に、本発明の生理活性物質は、前記バナナ由来組成物が、前記バナナの果肉部に蛋白質分解酵素を添加して、酵素反応により前記バナナの果肉部中の蛋白質を分解し、次いで前記蛋白質分解酵素を加熱又はアルコールにより失活させて得られるものであることが好ましい。バナナ由来組成物が、酵素反応、そして加熱又はアルコールによる失活を経て製造されたものであれば、本発明の生理活性物質の生理活性を優れたものとすることができるからである。
【００１８】
加えて、本発明の生理活性物質は、前記バナナ由来組成物中のアミノ酸含有量とトリプトファン誘導体含有量との合計が７質量％以上であることが好ましい。バナナ由来組成物中のアミノ酸含有量とトリプトファン誘導体含有量との合計が７質量％以上であれば、本発明の生理活性物質の生理活性を優れたものとすることができるからである。
【００１９】
そして、本発明の生理活性物質は、前記アミノ酸がフェニルアラニン及びトリプトファンを含み、前記トリプトファン誘導体がセロトニンを含むことが好ましい。生理活性物質がフェニルアラニン、トリプトファン、セロトニンを含めば、本発明の生理活性物質の生理活性を優れたものとすることができるからである。
【００２０】
なお、本発明の生理活性物質は、血糖値上昇抑制作用およびコラーゲン産生促進作用の少なくとも一方を奏するものである。
【発明の効果】
【００２１】
本発明によれば、バナナの果肉部から、優れた生理活性を奏する組成物を得ることができる、バナナ由来組成物の製造方法を提供することができる。
また、本発明によれは、優れた生理活性を奏する、バナナの果肉部から得られるバナナ由来組成物を含有する生理活性物質を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】血糖値上昇抑制作用の測定結果（ラット）を示す図である。
【図２】血糖値上昇抑制作用の測定結果（ヒト）を示す図である。
【図３】血糖値上昇抑制作用の測定結果（ヒト）を示す他の図である。
【図４】コラーゲン産生促進作用の測定結果を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
以下、本発明の実施形態について詳細に説明する。
本発明のバナナ由来組成物の製造方法は、バナナの果肉部を原料として生理活性に優れた組成物を製造する方法である。また、本発明の生理活性物質は、バナナの果肉部から得られるバナナ由来組成物を有効成分として含有する。本発明の生理活性物質中のバナナ由来組成物は、例えば本発明のバナナ由来組成物の製造方法を用いて製造し得る。
【００２４】
＜バナナ由来組成物の製造方法＞
本発明のバナナ由来組成物の製造方法は、バナナの果肉部を細分化し、果肉細分化物を得る工程（１）と、前記果肉細分化物に、蛋白質分解酵素を添加して酵素反応により前記果肉細分化物中の蛋白質を分解し、酵素反応物を得る工程（２）と、前記酵素反応物中の前記蛋白質分解酵素を失活させ、組成物Ａを得る工程（３）と、を備えることを特徴とする。
また、本発明のバナナ由来組成物の製造方法は、上記工程（１）〜（３）に加え、更に、組成物Ａを脱糖及び脱塩し、組成物Ｂを得る工程（４）を備えてもよい。
そして、このような製造方法により得られるバナナ由来組成物は、優れた生理活性を奏する。本発明のバナナ由来組成物の製造方法により得られるバナナ由来組成物が、優れた生理活性を有するメカニズムは定かではないが、主として酵素反応により得られるアミノ酸（特にフェニルアラニン及びトリプトファン）そしてトリプトファン誘導体（特にセロトニン）が、生理活性（血糖値上昇抑制作用、コラーゲン産生促進作用、および抗酸化作用）に寄与しているものであると推察される。そして、本発明の製造方法によれば、そのようなアミノ酸、トリプトファン誘導体を効率よく採取でき、それらを高濃度で含有するバナナ由来組成物を製造することができる。
なお、得られるバナナ由来組成物に含まれうるアミノ酸としては、アルギニン、リジン、ヒスチジン、フェニルアラニン、チロシン、ロイシン、イソロイシン、メチオニン、バリン、アラニン、グリシン、プロリン、グルタミン酸、セリン、スレオニン、アスパラギン酸、トリプトファンが挙げられる。
また、トリプトファン誘導体は、トリプトファンから誘導されうるアミノ酸以外の化合物（または物質）、好ましくは人体の生体反応においてトリプトファンから誘導されうるアミノ酸以外の化合物（または物質）をいい、セロトニン、メラトニンが挙げられる。
【００２５】
なお、本明細書において、適宜、「バナナの果肉部を細分化し、果肉細分化物を得る工程（１）」を「果肉細分化工程（１）」と、「果肉細分化物に、蛋白質分解酵素を添加して酵素反応により果肉細分化物中の蛋白質を分解し、酵素反応物を得る工程（２）」を「酵素反応工程（２）」と、「酵素反応物中の蛋白質分解酵素を失活させ、組成物Ａを得る工程（３）」を「酵素失活工程（３）」と、「組成物Ａを脱糖及び脱塩し、組成物Ｂを得る工程（４）」を「脱糖脱塩工程（４）」と略記するものとする。
【００２６】
［果肉細分化工程（１）］
（細分化）
本発明のバナナ由来組成物の製造方法においては、まず、バナナの果肉部を細分化し、果肉細分化物を得る。このようにバナナの果肉部を細分化し果肉細分化物とすることで、後述する酵素反応工程（２）で、蛋白質分解酵素を効率よく蛋白質に反応させることができる。なお、本発明において「細分化」とは、果皮を取り除いた後、欠けた部位のない状態である果肉部を、粉砕、切断などにより、その状態よりも質量の小さい断片に分断すること、または、粉砕、切断などにより、ペースト状にすることをいう。細分化により得られる果肉細分化物の形状は特に制限はなく、粒状であってもペースト状であってもよいが、酵素反応の効率を十分に確保する観点からは、ペースト状であることが特に好ましい。
なお、得られる果肉細分化物が粒状の断片である場合、断片の平均質量は好ましくは２０ｇ以下、より好ましくは１５ｇ以下、さらに好ましくは１０ｇ以下である。断片の平均質量が２０ｇ以下であることで、酵素反応の効率を十分に確保することができる。断片の平均質量は、特に限定されないが、通常０．１ｇ以上である。なお、「断片の平均質量」は、細分化後の断片の個数が１０を超える場合、任意に選択した１０個の断片の質量の平均値として求めることができ、細分化後の断片の個数が１０以下である場合は、全ての断片の質量の平均値として求めることができる。
バナナの果肉部を細分化する方法は特に限定されず、例えば、カッターミル粉砕機、ハンマーミル粉砕機を用いた方法が挙げられる。
【００２７】
（バナナの果肉部）
本発明において、バナナの果肉部とは、バナナの果実から果皮を取り除いた部位（バナナが食用バナナである場合は、所謂可食部に相当）をいう。用いるバナナの品種は特に限定されず、例えば、ジャイアント・キャベンディッシュ、ラカタンなどの品種が挙げられる。これらは一種単独で使用しても二種以上を併用してもよい。これらの中でも、ジャイアント・キャベンディッシュが好ましい。なおバナナの果肉部は、バナナの果実から、公知の方法を用いて果皮を取り除くことで得ることができる。
【００２８】
そして本発明において、バナナの果肉部は、未熟バナナの果肉部であることが好ましい。ここで、本発明において「未熟バナナ」とは、果肉部を粉砕、切断などによりペースト状にしたものを圧搾ろ過して得られる果汁を、糖用屈折計により測定した際のブリックス度が２４°Ｂｘ未満のものをいう。バナナの果肉部として、このように糖分の相対的に少ない未熟バナナの果肉部を用いることで、得られるバナナ由来組成物（１次精製物）の糖分量を低下させることができ、結果として該バナナ由来組成物中のアミノ酸及びトリプトファン誘導体（特にフェニルアラニン、トリプトファン、セロトニン）の含有量（含有割合）が上昇する。すなわち、未熟バナナの果肉部を用いた場合は、熟したバナナの果肉部を用いた場合に比して、バナナ由来組成物中のアミノ酸含有量とトリプトファン誘導体含有量の合計を上昇させることができ、生理活性（血糖値上昇抑制作用、コラーゲン産生促進作用）を向上させることができる。また、未熟バナナの果肉部は粘りが少なく、バナナの果肉部として未熟バナナの果肉部を用いることで、製造工程におけるろ過効率等を改善することが可能となり（例えば、後述する固液分離工程（Ｉ）における液相の取り出しが容易となり）、生産効率を大幅に向上させることができる。
そして上述のように生産効率を大幅に向上させ、脱糖を容易とし、加えて生理活性を向上させる観点から、バナナの果肉部のブリックス度は、好ましくは１０°Ｂｘ以下、より好ましくは８°Ｂｘ以下、さらにより好ましくは５°Ｂｘ以下、特に好ましくは２°Ｂｘ以下である。なお、バナナの果肉部のブリックス度の下限は特に限定されないが、該ブリックス度は通常０．１°Ｂｘ以上である。
【００２９】
［酵素反応工程（２）］
次に上記得られた果肉細分化物に、蛋白質分解酵素を添加して酵素反応により果肉細分化物中の蛋白質を分解し、酵素反応物を得る。この酵素反応により、得られるバナナ由来組成物中のアミノ酸及びトリプトファン誘導体（特にフェニルアラニン、トリプトファン、セロトニン）の量を大幅に増加させることができ、生理活性を確保することができる。
【００３０】
（蛋白質分解酵素）
酵素反応工程（２）に用いる蛋白質分解酵素は、バナナの果肉部中に含まれる蛋白質を分解し得るものであれば特に限定されず、エンド型、エキソ型のいずれを用いてもよい。エンド型蛋白質分解酵素を含む蛋白質分解酵素剤としては、プロチンＳＤ−ＡＹ１０、プロチンＳＤ−ＮＹ１０が挙げられる（いずれも天野エンザイム社製）。また、エキソ型蛋白質分解酵素を含む蛋白質分解酵素剤としては、プロテアックス（登録商標）、プロテアーゼＭ「アマノ」ＳＤ、プロテアーゼＰ「アマノ」ＳＤが挙げられる（いずれも天野エンザイム社製）。
そして用いる蛋白質分解酵素は、果肉細分化物中の蛋白質をより効率よく分解しアミノ酸を生成させることができる観点から、エキソ型蛋白質分解酵素が好ましく、プロテアーゼＭ「アマノ」ＳＤがより好ましい。
【００３１】
（酵素反応）
酵素反応工程（２）において、蛋白質分解酵素の添加量は、果肉細分化物１００質量部当たり、好ましくは０．５質量部以上、より好ましくは１質量部以上、特に好ましくは３質量部以上であり、好ましくは２０質量部以下、より好ましくは１５質量部以下、特に１０質量部以下である。蛋白質分解酵素の添加量が、果肉細分化物１００質量部当たり０．５質量部以上であることで、酵素反応を良好に進行させることができ、２０質量部以下であることで、取得できる有効成分量とコストの両面において優位である。
【００３２】
また、蛋白質分解酵素の添加に先立って、果肉細分化物に水を添加することが好ましい。果肉細分化物に添加する水の量は、果肉細分化物１００質量部当たり、好ましくは５０質量部以上、より好ましくは１００質量部以上、特に好ましくは１５０質量部以上であり、好ましくは５００質量部以下、より好ましくは３００質量部以下、特に好ましくは２５０質量部以下である。果肉細分化物に添加する水の量が、果肉細分化物１００質量部当たり５０質量部以上であることで、蛋白質分解酵素を果肉細分化物に対してむらなく拡散させ、酵素反応を良好に進行させることができる。一方、果肉細分化物に対する水の添加量が、果肉細分化物１００質量部当たり５００質量部以下であることで、蛋白質分解酵素の混合物中の濃度が好適となり、酵素反応を良好に進行させることができる。
【００３３】
蛋白質分解酵素の添加前の、果肉細分化物（又は果肉細分化物と水との混合物）のｐＨは、４．５〜６．０が好ましい。果肉細分化物（又は果肉細分化物と水との混合物）のｐＨが上記範囲であることで、酵素反応を良好に進行させることができる。
【００３４】
酵素反応の反応温度は、好ましくは４０℃以上、より好ましくは４５℃以上であり、好ましくは６５℃以下である。酵素反応の反応温度が上記範囲内であることで、酵素反応を良好に進行させることができる。
【００３５】
酵素反応の反応時間は、好ましくは１時間以上、より好ましくは３時間以上、特に好ましくは４時間以上であり、好ましくは２０時間以下である。酵素反応の反応時間を２０時間以下とすることで、得られるバナナ由来組成物中のセロトニンの分解を十分に抑制することができる。
【００３６】
そして、酵素反応工程（２）は、反応温度４５℃以上５５℃以下、反応時間３〜５時間の第一酵素反応工程と、第一酵素反応工程後、反応温度５５℃超６５℃以下、反応時間１〜１７時間の第二酵素反応工程を含むことが好ましい。このように酵素反応工程が第一酵素反応工程と、第二酵素反応工程を備えることで、酵素反応を良好に進行させることができる。
【００３７】
［酵素失活工程（３）］
次いで、上記酵素反応後に得られた酵素反応物中の蛋白質分解酵素を失活させる。酵素反応物中の蛋白質分解酵素を失活させる方法は特に限定されないが、例えば加熱により失活させる方法、炭素数が１〜４のアルコールにより失活させる方法を挙げることができる。これらの失活方法は、適宜組み合わせて使用してもよい。
【００３８】
（加熱による失活）
まず、加熱により蛋白質分解酵素を失活させて組成物Ａを得る方法について詳述する。加熱による失活は、その操作が容易かつ簡便な設備で可能であり、組成物Ａの生産効率に優れる。
具体的には、上記酵素反応後に得られた酵素反応物を、必要に応じてろ過した後、加熱する。加熱の際の温度（酵素反応物の品温）は、蛋白質分解酵素が失活し得る温度であれば特に限定されないが、８５℃以上９５℃以下が好ましい。加熱の際の温度が８５℃以上であることで、失活を十分に進行させることができ、９５℃以下であることで、有効成分の熱分解等による悪影響を抑制することができる。
また、加熱時間は特に限定されないが、１０分以上６０分以下が好ましい。加熱時間が上述の範囲内であることで、失活を十分に完了することができる。
【００３９】
加熱による失活後、必要に応じて水を除去して組成物Ａ（１次精製物）を得る。ここで組成物Ａが乾固物（例えば固形分濃度が９０質量％以上）となるまで水を除去した場合、該組成物Ａを、本発明の効果を奏するバナナ由来組成物とすることができる。この組成物Ａは、優れた血糖値上昇抑制作用及びコラーゲン産生促進作用を奏する。また組成物Ａが濃縮液（例えば、固形分濃度が１０質量％以上９０質量％未満）の状態となるまで水を除去した場合、該組成物Ａは、後述する脱糖脱塩処理工程（４）にそのまま用いることもできる。
水を除去する方法としては特に限定されず、例えば、濃縮、凍結乾燥、噴霧乾燥が挙げられる。これらの中でも、組成物Ａを乾固物とする場合、得られるバナナ由来組成物の熱履歴を低減し、生理活性を優れたものとする観点から、凍結乾燥が好ましい。また、これらの水を除去する方法は、一つの方法のみ使用でもよいが、複数の方法を組み合わせてもよい。例えば、加熱による失活後濃縮した後、凍結乾燥してもよいし、加熱による失活、噴霧乾燥してもよい。これらの乾燥条件は適宜調整することができる。そして、この乾燥に先んじて、賦形剤を添加してもよい。賦形剤の添加量は適宜調整することができる。
【００４０】
（アルコールによる失活）
次に、炭素数が１〜４のアルコールにより蛋白質分解酵素を失活させて組成物Ａを得る方法について詳述する。当該アルコールによる失活は、得られる組成物Ａ中における有効成分の収率に優れている。炭素数が１〜４のアルコールによる失活を行う場合、工程（３）は、上記酵素反応後に得られた酵素反応物に、炭素数が１〜４のアルコールを添加し、次いで得られたアルコール添加物を固液分離し、液相を取り出す工程［Ｉ］（以下、適宜「固液分離工程［Ｉ］」と略記する）と、液相中の炭素数が１〜４のアルコールを除去する工程［ＩＩ］（以下、適宜「溶媒除去工程［ＩＩ］」と略記する）とを含むことが好ましい。
【００４１】
−固液分離工程［Ｉ］−
まず、酵素反応物に炭素数が１〜４のアルコールを添加することで、蛋白質分解酵素を失活させる。さらに当該アルコールを含む液相中に有効成分を抽出することができる。加えて、酵素反応物に炭素数が１〜４のアルコールを添加することで、固液分離、特に後述するろ過を容易に行うことができる。
なお、酵素反応により得られた酵素反応物中の有効成分を十分抽出するため、炭素数が１〜４のアルコールの添加後、温度１０〜３０℃で２〜２０時間放置し、その後、固液分離することが好ましい。
【００４２】
固液分離工程［Ｉ］に用いる炭素数が１〜４のアルコールは、その分子構造中に炭素原子を１〜４個有するアルコールであり、メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール等が挙げられる。これらは一種単独で使用しても二種以上を併用してもよい。これらの中でも、メタノール及びエタノールの少なくとも一方が好ましい。他のアルコールに比して沸点の低いメタノール又はエタノールは蒸発による除去が容易である。従って、得られるバナナ由来組成物の熱履歴を減らし、血糖値上昇抑制作用などの生理活性を優れたものとすることができる。また、メタノール及びエタノールは、他のアルコールに比してバナナの果肉部中のアミノ酸、トリプトファン誘導体の抽出効率に優れている。加えて得られるバナナ由来組成物を食品に使用する観点からは、エタノールを用いることがより好ましい。
【００４３】
固液分離工程［Ｉ］において、炭素数が１〜４のアルコールの添加量は特に限定されないが、例えば、果肉細分化物１００質量部当たり、好ましくは１００質量部以上、より好ましくは２００質量部以上、特に好ましくは２５０質量部以上であり、好ましくは１５００質量部以下、より好ましくは１２００質量部以下、さらにより好ましくは４００質量部以下、特に好ましくは３５０質量部以下である。アルコールの添加量が、果肉細分化物１００質量部当たり１００質量部以上であることで、アルコール添加物の固液分離の効率が向上し、１５００質量部以下であることで、続く溶媒除去工程［ＩＩ］におけるアルコールの除去を容易とすることができる。
【００４４】
酵素反応物に炭素数が１〜４のアルコールを添加することで得られるアルコール添加物を、固液分離（固相と液相に分離）する方法としては、アルコール添加物を固相と液相に分離し液相を取り出すことができれば特に限定されず、例えば、ろ過、遠心分離などの方法が挙げられる。これらの中でも、固液分離を確実に行うことができる観点から、ろ過が好ましい。アルコール添加物をろ過する方法としては、例えば、自然ろ過、吸引ろ過、加圧ろ過等が挙げられる。
【００４５】
−溶媒除去工程［ＩＩ］−
上記固液分離工程［Ｉ］により取り出した液相中の、炭素数が１〜４のアルコールを一部又は全部除去し、組成物Ａ（１次精製物）を得る。なお、液相中に水が含まれる場合は、併せて、液相中の水を一部又は全部除去してもよい。ここで組成物Ａが乾固物（例えば固形分濃度が９０質量％以上）となるまで溶媒（炭素数が１〜４のアルコール及び任意の水）を除去した場合、該組成物Ａを、本発明の効果を奏するバナナ由来組成物とすることができる。この組成物Ａは、優れた血糖値上昇抑制作用及びコラーゲン産生促進作用を奏する。また組成物Ａが濃縮液（例えば、固形分濃度が１０質量％以上９０質量％未満）の状態となるまで溶媒を除去した場合、該組成物Ａは、後述する脱糖脱塩処理工程（４）にそのまま用いることもできる。
液相中の炭素数が１〜４のアルコール（及び任意の水）を除去する方法としては特に限定されず、例えば、濃縮、凍結乾燥、噴霧乾燥が挙げられる。これらの中でも、組成物Ａを乾固物とする場合、得られるバナナ由来組成物の熱履歴を低減し、生理活性を優れたものとする観点から、凍結乾燥が好ましい。また、これらの炭素数が１〜４のアルコール（及び任意の水）を除去する方法は、一つの方法のみ使用でもよいが、複数の方法を組み合わせてもよい。例えば、得られた液相を濃縮した後、凍結乾燥してもよいし、得られた液相を濃縮した後、噴霧乾燥してもよい。そして、この乾燥に先んじて、賦形剤を添加してもよい。賦形剤の添加量は適宜調整することができる。
【００４６】
なお、凍結乾燥の条件は特に限定されないが、例えば、得られた液相（又は濃縮後の液相等）を、まず、品温−３０℃〜−２５℃になるまで約１〜３時間予備凍結し、その後品温−３０〜−２５℃にて、真空度４０ｋＰａ以下まで減圧下にコントロールした後、徐々に棚温度を４０℃程度まで上昇させ、さらにその後得られた液相（又は濃縮後の液相等）の温度が棚温度と同程度になって３時間以上経過した後、乾燥終了とすることが好ましい。
【００４７】
［脱糖脱塩工程（４）］
次に、本発明のバナナ由来組成物の製造方法は、上記得られた組成物Ａを脱糖及び脱塩し、組成物Ｂを得る工程を含んでもよい。組成物Ａを脱糖及び脱塩することで、組成物Ａ中の糖分、そして塩（無機塩、有機塩）や遊離金属イオンの一部又は全部を取り除くことができ、得られる組成物Ｂ（２次精製物）は、優れた血糖値上昇抑制作用及びコラーゲン産生促進作用に加え、優れた抗酸化作用を奏する。
【００４８】
本発明において、脱糖及び脱塩は、脱糖、脱塩を独立した別々の操作により行ってもよいし、一つの操作で同時に行ってもよい。
そして、組成物Ａを脱糖脱塩する方法（脱糖及び脱塩を一つの操作で同時に行う方法）としては、例えば、組成物Ａに含まれる成分をカラムに充填した吸着樹脂に吸着させ、吸着樹脂を水洗し、その後吸着樹脂に吸着した成分を、溶離液により吸着樹脂から溶離させ取り出す方法（以下、適宜「吸着樹脂法」と略記する）等が挙げられる。
工程の簡易化の観点からは、脱糖及び脱塩を一つの操作で同時に行うことが好ましく、上記吸着樹脂法がより好ましい。
以下、脱糖脱塩工程（４）に上記吸着樹脂法を採用した場合を例に挙げ、詳細に説明する。
【００４９】
吸着樹脂法は、必要に応じて組成物Ａに水を添加する工程（水添加工程）、組成物Ａ（又は組成物Ａに水が添加された組成物（水添加物））を、吸着樹脂が充填されたカラムに通過させ、組成物Ａに含まれる成分（アミノ酸など）を吸着樹脂に吸着させる工程（吸着工程）と、前記吸着樹脂が充填されたカラムに水を通過させ、精製する工程（水洗工程）と、前記吸着樹脂が充填されたカラムに溶離液を通過させることで、吸着樹脂に吸着した成分を溶離させ前記溶離液による溶出画分を得る工程（溶離工程）と、前記溶出画分から溶離液を除去する工程（溶離液除去工程）により行うことが好ましい。以下、これらの工程を具体的に説明する。
【００５０】
（水添加工程）
上記組成物Ａに必要に応じて水を添加する。具体的には、組成物Ａが乾固物である場合、水を添加して水溶液とする必要があり、また、組成物Ａが溶媒を含む濃縮液である場合、濃縮液をそのまま使用してもよいが、固形分濃度調整のため水をさらに添加してもよい。吸着樹脂が充填されたカラムに通過させる前の、組成物Ａ（又はその水添加物）の固形分濃度は特に限定されないが、３〜３０質量％であることが好ましい。
【００５１】
（吸着工程）
組成物Ａ（又はその水添加物）を、吸着樹脂が充填されたカラムを通過させ、組成物Ａ中に含まれる成分（アミノ酸等）を吸着樹脂に吸着させる。
吸着樹脂としては、例えば、樹脂内の細孔表面と非吸着物質間の物理的相互作用により溶液中から有機物を吸着する合成吸着剤や、スルホン酸基などを有する陽イオン交換樹脂が挙げられる。これらの中でも、フェニルアラニン、トリプトファン等のアミノ酸や、セロトニン等のトリプトファン誘導体を効率よく吸着可能である点から、陽イオン交換樹脂が好ましく、強酸性陽イオン交換樹脂がより好ましい。強酸性陽イオン交換樹脂としては、例えば、ダイヤイオン（登録商標）ＳＫ１Ｂ（三菱化学社製）、アンバーライト（登録商標）ＩＲ１２０Ｂ（ダウケミカル社製）等が挙げられる。
【００５２】
吸着樹脂の充填したカラムを通過させる組成物Ａ（又はその水添加物）の流速については、通液の対象である組成物Ａ（又はその水添加物）の性状や使用する吸着樹脂に応じて適宜決定すればよく、特に限定されないが、例えば０．５〜５ＳＶの範囲の流速で通液させる。なお、ＳＶとは、単位時間当たりにカラムに通液した溶液の吸着樹脂に対する量（２５℃における体積基準）を表し、１時間に吸着樹脂と同体積の溶液を通液した場合の流速を１ＳＶとする。
また吸着樹脂の充填したカラムを通過させる組成物Ａの通液量についても、特に限定されないが、例えば、１〜３０ＲＶである。なお、ＲＶとは、カラムに通液した溶液の量の吸着樹脂に対する量（２５℃における体積基準）を表し、吸着樹脂と同体積の溶液を通液した場合の通液量を１ＲＶとする。
【００５３】
（水洗工程）
次に、前記吸着樹脂が充填されたカラムに水を通液させる。上記吸着工程後のカラムに水を通過させることで、非吸着成分及び吸着力の弱い成分(糖類、有機塩、無機塩、遊離金属イオンなど)を取り除く、即ち脱糖及び脱塩をすることが可能となる。
上記吸着工程後のカラムを通過させる水の流速については、使用する吸着樹脂に応じて適宜決定すればよく、特に限定されないが、例えば０．５〜５ＳＶの範囲の流速で通液させる。このような流速で水を通液させることで効果的に脱糖及び脱塩をすることができる。
そして、上記吸着工程後のカラムを通過させる水の通液量については、使用する吸着樹脂に応じて適宜決定すればよく、特に限定されないが、例えば、例えば、５〜１５ＲＶである。このような量の水を通液させることで、脱糖及び脱塩を十分とすることができる。
【００５４】
（溶離工程）
次に、吸着樹脂が充填されたカラムに溶離液を通過させることで、吸着樹脂に吸着した成分を溶離させ、該溶解離液による溶出画分を得る。溶離液（溶出液ともいう）は、吸着樹脂に吸着した成分を、吸着樹脂から溶離させるための液体である。用いる溶離液は、上記機能を有すれば特に限定されない。例えば吸着樹脂としてセパビーズ（登録商標）ＳＰ２０７などの合成吸着剤を用いた場合、溶離液としては、水とアルコール（メタノール及び／又はエタノール）との混合溶媒が挙げられる。該混合溶媒中のメタノール及び／又はエタノールの濃度は特に限定されないが、３〜１０質量％が好ましい。該混合溶媒中のメタノール及び／又はエタノールの濃度が上記範囲内であることで、吸着樹脂に吸着した成分を、効率よく溶離することができる。そして、例えば吸着樹脂としてダイヤイオン（登録商標）ＳＫ１Ｂなどの強酸性陽イオン交換樹脂を用いた場合、溶離液としては、アンモニア水が挙げられる。該アンモニ水中のアンモニア濃度は特に限定されないが、０．１〜５ｍｏｌ／Ｌが好ましい。該アンモニア水中のアンモニア濃度が上記範囲内であることで、吸着樹脂に吸着した成分を、効率よく溶離することができる。
【００５５】
溶離工程においてカラムを通過させる溶離液の流速については、使用する吸着樹脂に応じて適宜決定すればよく、特に限定されないが、例えば０．５〜５ＳＶの範囲の流速で通液させる。このような流速で水を通液させることで吸着樹脂に吸着した成分を、効率よく溶離することができる。
そして、溶離工程においてカラムを通過させる溶離液の通液量については、使用する吸着樹脂に応じて適宜決定すればよく、特に限定されないが、例えば、例えば、５〜６０ＲＶである。このような量の溶離液を通液させることで、吸着樹脂に吸着した成分を、より確実に溶離することができる。
【００５６】
（溶離液除去工程）
溶離工程により得られた溶出画分から溶離液を除去して組成物Ｂ（乾固物  ２次精製物）を得る。溶離液を除去し、乾固物である組成物Ｂを得る方法としては特に限定されず、「溶媒除去工程［ＩＩ］」の項で上述した方法が挙げられる。これらの中でも、得られるバナナ由来組成物の熱履歴を低減し、生理活性を優れたものとする観点から、凍結乾燥が好ましい。また、これらの溶離液を除去する方法は、「溶媒除去工程［ＩＩ］」同様、一つの方法のみの使用でもよいが、複数の方法を組み合わせてもよい。例えば、得られた溶出画分を濃縮した後、凍結乾燥してもよいし、得られた溶出画分を濃縮した後、噴霧乾燥してもよい。
なお、凍結乾燥の条件は特に限定されず、「溶媒除去工程［ＩＩ］」の項で上述した条件が好適に挙げられる。
得られる組成物Ｂは、バナナ由来組成物として用いることができ、この組成物Ｂは、優れた血糖値上昇抑制作用、コラーゲン産生促進作用、及び抗酸化作用を有する。
【００５７】
＜生理活性物質＞
本発明の生理活性物質は、バナナの果肉部から得られるバナナ由来組成物を有効成分として含有することを特徴とする。この生理活性物質は、血糖値上昇抑制作用、コラーゲン産生促進作用等の優れた生理活性を奏する。
【００５８】
［バナナ由来組成物］
本発明の生理活性物質が有効成分として含有するバナナ由来組成物は、バナナ果肉部から得られたものであれば特に限定されない。そして、このバナナ由来組成物は、「バナナ由来組成物の製造方法」で上述した理由と同様の理由で、未熟バナナの果肉部から得られた組成物であることが好ましい。
【００５９】
また、本発明の生理活性物質が有効成分として含有するバナナ由来組成物を得るための方法としては、特に限定されない。例えば、バナナ由来組成物を、抽出により得る場合は、抽出方法としては、熱水抽出、液化ニ酸化炭素抽出、アルコール抽出などを用いることも可能である。
そして、バナナ由来組成物は、バナナの果肉部に蛋白質分解酵素を添加して、酵素反応によりバナナの果肉部中の蛋白質を分解し、次いで蛋白質分解酵素を加熱又はアルコールにより失活させて得られるものであることが好ましい。なお、アルコールとしては炭素数が１〜４のアルコールが好ましく、炭素数が１〜４のアルコールとしては、「バナナ由来組成物の製造方法」で上述したものが用いることができ、好適な炭素数が１〜４のアルコールも「バナナ由来組成物の製造方法」で上述したものと同様である。
【００６０】
更には、本発明の生理活性物質が有効成分として含有するバナナ由来組成物は、本発明のバナナ由来組成物の製造方法により製造されたものであることが好ましい。例えばバナナ由来組成物が、上述の本発明のバナナ由来組成物の製造方法により製造されたものである場合、上記組成物Ａ（１次精製物）を含む生理活性物質は、優れた血糖値上昇抑制作用、コラーゲン産生促進作用を奏し、さらに脱糖脱塩処理を施した組成物Ｂ（２次精製物）を含む生理活性物質は、優れた血糖値上昇抑制作用、コラーゲン産生促進作用、及び抗酸化作用を奏する。
【００６１】
そして本発明の生理活性物質において、バナナ由来組成物中のアミノ酸含有量とトリプトファン誘導体との合計は、好ましくは７質量％以上、より好ましくは８質量％以上、特に好ましくは１０質量％以上である。バナナ由来組成物中のアミノ酸含有量とトリプトファン誘導体との合計が７質量％以上であることで、本発明の生理活性物質の生理活性を優れたものとすることができる。アミノ酸含有量及びトリプトファン誘導体含有量は、例えばバナナ由来組成物として本発明のバナナ由来組成物の製造方法を用いた場合、酵素反応の条件を調節すること、脱糖脱塩工程（４）を経ること等で向上させることができる。なお、バナナ由来組成物中のアミノ酸含有量とトリプトファン誘導体との合計の上限は特に限定されないが、通常９５質量％以下である。
そして更に、バナナ由来組成物は、アミノ酸がフェニルアラニン及びトリプトファンを含み、トリプトファン誘導体がセロトニンを含むことが好ましい。バナナ由来組成物がフェニルアラニン、トリプトファン、及びセロトニンを含むことで、本発明の生理活性物質の生理活性を優れたものとすることができる。
なお、本発明において、バナナ由来組成物のアミノ酸、トリプトファン誘導体、そして、フェニルアラニン、トリプトファン、及びセロトニンの含有量は、本明細書の実施例に記載の測定方法を用いて測定することができる。
【００６２】
本発明の生理活性物質は、その目的等に応じて、例えば賦形剤などのバナナ由来組成物以外の成分を含んでもよく、またその用途は特に限定されず、各種飲食品に配合して用いることもできるし、単体で又は他の成分と混合してサプリメントして用いることもできる。
【実施例】
【００６３】
以下、本発明について実施例に基づき具体的に説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。なお、以下の説明において、量を表す「％」及び「部」は、特に断らない限り、質量基準である。
ブリックス度測定、バナナ由来組成物の成分分析は以下の手法を用いた。
＜ブリックス度測定＞
糖用屈折計（小清水社製、糖度計WZ-113）を用いて、測定温度２５℃で測定した。
＜バナナ由来組成物の成分分析＞
アミノ酸自動分析計（日本電子社製、日立ハイテクノロジーズ社製）を用いてアミノ酸の含有量と種類を測定した。高速液体クロマトグラフィ（島津製作所製）を用いて、該当する化合物の試薬を用い、絶対検量線法にてトリプトファン誘導体（セロトニン）の含有量と種類を測定した。そして、Shodex RI-71（昭和電工社製）を用いて、推測される糖類の試薬を用い、絶対検量線法にて糖の含有量と種類を測定した。
【００６４】
（実施例１）バナナ由来組成物１（組成物Ａ  １次精製物  アルコール失活）の製造
未熟バナナの果実（品種：ジャイアント・キャベンディッシュ  ブリックス度：１．４°Ｂｘ）１９６．５部の果皮を除去し、１０４．２部の果肉部を得た。得られた果肉部を、カッターミル粉砕機を用いて細分化し、１００部のペースト状の果肉細分化物を得た。
得られた果肉細分化物１００部にイオン交換水を１９０部加え攪拌し、さらに蛋白質分解酵素としてプロテアーゼＭ「アマノ」ＳＤを５部加え混合物を得た。この混合物を５０℃まで加熱し該温度を４時間維持し、その後、さらに５８〜６０℃まで加熱し、該温度を２時間維持し酵素反応を進行させた。得られた酵素反応物（２９５部）を放置して２５〜３０℃まで冷却し、これに２９１.１部のエタノールを添加し、２５〜３０℃で２時間攪拌し、アルコール（エタノール）添加物を得た。得られたアルコール添加物を室温にて単板ろ過機を用いてろ過した。この際さらにエタノール２９．５部を用いて固相に残存する抽出成分を洗浄した。このろ過により、アルコール添加物を固相（４２．８部  薄茶色）と液相（５７２．８部  黄色を呈した透明液体）に分離した。液相を、品温４０℃以下を維持しながら真空下で減圧濃縮を行い、５０部の濃縮液を得た。この濃縮液を品温が−３０℃〜−２５℃になるまで約２時間予備凍結した。その後品温−３０〜−２５℃にて、真空度４０ｋＰａ以下まで減圧下にコントロールした後、徐々に棚温度を４０℃まで加熱し、さらに品温が棚温度と同程度になって３時間以上経過した後、凍結乾燥を終了させ、１１部のバナナ由来組成物１を得た（果肉細分化物に対する収率１１％）。このバナナ由来組成物１中、フルクトースは５．４％、グルコースは４５．４％、スクロースは０％、アミノ酸は１１．０％（フェニルアラニン０．８９％、トリプトファン０．３４％）、セロトニン（トリプトファン誘導体）は０．００４％であった。
【００６５】
（実施例２）バナナ由来組成物２（組成物Ａ  １次精製物  アルコール失活）の製造
未熟バナナの果実（品種：ジャイアント・キャベンディッシュ  ブリックス度：１．４°Ｂｘ）１９６．５部の果皮を除去し、１０３．２部の果肉部を得た。得られた果肉部を、カッターミル粉砕機を用いて細分化し、ペースト状の１００部の果肉細分化物を得た。
得られた果肉細分化物１００部にイオン交換水を２００部加え攪拌し、さらに蛋白質分解酵素としてプロテアーゼＭ「アマノ」ＳＤを５部加え混合物を得た。この混合物を５０℃まで加熱し該温度を４時間維持し、その後、さらに６０℃まで加熱し該温度で２時間維持し酵素反応を進行させた。得られた酵素反応物（３０５部）を放置して２３℃まで冷却し、１０８７．７部のメタノールを添加し、１３〜２３℃で２時間攪拌し、アルコール（メタノール）添加物を得た。得られたアルコール添加物を室温にて単板ろ過機を用いてろ過した。この際さらにメタノール１４部を用いて固相を洗浄し、固相に残存する抽出成分を洗浄した。このろ過により、アルコール添加物を固相（４２．１部）と液相（ろ過後にさらにメタノールを７０．２部加え１４３４．４部  橙色を呈した透明液体）に分離した。この液相を、品温４０℃を維持しながら真空下で１１時間減圧濃縮を行い、更に棚段式減圧乾燥機内で、４０℃で２４時間乾燥し８．２部のバナナ由来組成物２を得た（果肉細分化物に対する収率８．２％）。このバナナ由来組成物２中、フルクトースは４．７０％、グルコース４３．４１％、スクロースは１．３４％、アミノ酸は１３．６４％（フェニルアラニン１．１３％、トリプトファン０．４２％）、セロトニン（トリプトファン誘導体）は０．０００９％であった。
【００６６】
（実施例３）バナナ由来組成物３（組成物Ｂ  ２次精製物  アルコール失活）の製造
「（実施例１）バナナ由来組成物１の製造」で上述した要領で、未熟バナナの果肉部を細分化し、酵素反応し、ろ過し、そして濃縮することで５０ｋｇの濃縮液（固形分１１．０ｋｇ含有）を得た。この濃縮液に１５０ｋｇのイオン交換水を加え、２００ｋｇの希釈液（固形分濃度５．５％）を得た。
この希釈液２００ｋｇ（２００Ｌ、２０ＲＶ）を、合成吸着剤（三菱化学社製  セパビーズ（登録商標）ＳＰ２０７）１０Ｌ（１ＲＶ）が充填されたカラムに１５Ｌ／ｈ（１．５ＳＶ）の流速で通液させ、次いで８０Ｌ（８ＲＶ）のイオン交換水を同様の流速で通液させ水洗した。イオン交換水全量通液終了直前の、カラム通過後のイオン交換水のブリックス度を測定し、該ブリックス度が０であることを確認した。
そして５質量％エタノール水溶液１８０Ｌ（１８ＲＶ）を同様の流速で通液させ、さらにその後７質量％エタノール水溶液１８０Ｌ（１８ＲＶ）を同様の流速で通液させ、通液後の液体（３６０Ｌ）を回収した。７質量％エタノール水溶液全量通液終了直前の、カラム通過後の液体に含まれるトリプトファンの濃度を島津製作所製高速液体クロマトグラフィにより測定し、該濃度が０であることを確認した。
通液後の液体３６０Ｌを、品温４０℃以下を維持しながら真空下で減圧濃縮を行い、０．８３ｋｇの濃縮液を得た。この濃縮液を品温が−３０℃〜−２５℃になるまで約２時間予備凍結した。その後品温−３０〜−２５℃にて、真空度４０ｋＰａ以下まで減圧下にコントロールした後、徐々に棚温度４０℃まで加熱し、さらに品温が棚温度と同程度になって３時間以上経過した後、凍結乾燥を終了させ、０．１７ｋｇのバナナ由来組成物３を得た（当初濃縮液の固形分１１．０ｋｇに対する収率は１．５％）。このバナナ由来組成物３中、フルクトースは０％、グルコースは０％、スクロースは０％、フェニルアラニンは３．７％、トリプトファンは１１．８％、セロトニン（トリプトファン誘導体）は０．１５％であった。
【００６７】
（実施例４）バナナ由来組成物４（組成物Ｂ  ２次精製物  アルコール失活）の製造
「（実施例２）バナナ由来組成物の製造」で上述した要領で、未熟バナナの果肉部を細分化し、酵素反応し、ろ過し、そして濃縮することで３．５ｋｇの濃縮液（固形分０．８ｋｇ含有  固形分濃度２３％）を得た。
この濃縮液３．５ｋｇ（３．５Ｌ、３．５ＲＶ）を、強酸性陽イオン交換樹脂（三菱化学社製  ダイヤイオン（登録商標）ＳＫ１Ｂ）１Ｌ（１ＲＶ）が充填されたカラムに１．５Ｌ／ｈ（１．５ＳＶ）の流速で通液させ、次いで１５．４Ｌ（１５．４ＲＶ）のイオン交換水を同様の流速で通液させた。イオン交換水全量通液終了直前の、カラム通過後のイオン交換水のブリックス度を測定し、該ブリックス度が０であることを確認した。
そして１ｍｏｌ／Ｌアンモニア水１０Ｌ(１０ＲＶ)を同様の流速で通液させ、通液後の液体（１０Ｌ）を回収した。１ｍｏｌ／Ｌアンモニア水全量通液終了直前の、カラム通過後の溶離液に含まれるトリプトファンの濃度を(株)島津製作所製高速液体クロマトグラフィにより測定し、該濃度が０であることを確認した。
通液後の液体１５．４Ｌを、品温４０℃以下を維持しながら真空下で減圧濃縮を行い、０．７０ｋｇの濃縮液を得た。この濃縮液を品温が−３０℃〜−２５℃になるまで約２時間予備凍結し、その後品温−３０〜−２５℃にて、真空度４０ｋＰａ以下まで減圧下にコントロールした後、徐々に棚温度４０℃まで加熱を実施し、その後品温が棚温度と同程度になって３時間以上経過した後、凍結乾燥を終了させ、０．１６ｋｇのバナナ由来組成物４を得た（当初濃縮液の固形分０．８ｋｇに対する収率は２０％）。このバナナ由来組成物４中、フルクトースは０％、グルコースは０％、スクロースは０％、アミノ酸は５５．２％（フェニルアラニン４．４７％、トリプトファン１．６９％）、セロトニン（トリプトファン誘導体）は０．０１５％であった。なお、このバナナ由来組成物４中のカリウム含有量を測定したところ、７ｍｇ／１００ｇと極めて少なく、脱塩が良好になされたことがわかる。
【００６８】
（比較例１）バナナ由来組成物５の製造
酵素分解をしない以外は、実施例１と同様の要領で、１．６３部のバナナ由来組成物５を得た。この収量は、実施例１のバナナ由来組成物１に比して極めて低く、酵素分解することにより、バナナ由来組成物の収率を飛躍的に向上させることができることがわかる。
なお、このバナナ由来組成物５中、フルクトースは１６．３％、グルコースは２５．６％、スクロースは０％、アミノ酸は６．６％（フェニルアラニン０．３％、トリプトファン０．１０２％）、セロトニン（トリプトファン誘導体）は０．００９％であった。このように有効成分の含有量が実施例１のバナナ由来組成物１に比して極めて低く、このバナナ由来組成物５を用いても十分な血糖上昇抑制、コラーゲン産生促進作用の生理活性は得られない。
【００６９】
（実施例５）バナナ由来組成物６（組成物Ａ  １次精製物  加熱失活）の製造
未熟バナナの果実（品種：ジャイアント・キャベンディッシュ  ブリックス度：１．４°Ｂｘ）１９６．５部の果皮を除去し、１０４．２部の果肉部を得た。得られた果肉部を、カッターミル粉砕機を用いて細分化し、１００部のペースト状の果肉細分化物を得た。
得られた果肉細分化物１００部にイオン交換水を１９０部加え攪拌し、さらに蛋白質分解酵素としてプロテアーゼＭ「アマノ」ＳＤを５部加え混合物を得た。この混合物を５０℃まで加熱し該温度を４時間維持し、その後、さらに６０℃まで加熱し、該温度を１５時間維持し酵素反応を進行させた。得られた酵素反応物（２９５部）をセライトろ過し、さらに孔径０．４５μｍのフィルターを用いてろ過した。得られたろ液を９０℃で３０分間加熱することにより蛋白質分解酵素を失活させ、その後放置して２５〜３０℃まで冷却して酵素反応物を得た。この酵素反応物を、品温４０℃以下を維持しながら、真空下で減圧濃縮を行い、固形分濃度を約１０質量％とした。減圧濃縮後の酵素反応物に、賦形剤として、当該酵素反応物の固形分質量と同量のパインデックス（登録商標）♯１００を添加し、９０℃で１時間攪拌殺菌を行った。攪拌殺菌後、放置して２５〜３０℃まで冷却した後、凍結乾燥して、１６．８部のバナナ由来組成物６を得た。
【００７０】
＜血糖値上昇抑制作用の確認（ラット）＞
７週齢雄性ウイスターラットを２４時間絶食させ、その後該ラット（Ｎ＝５）の胃に、ラットの体重１ｇあたり、生理活性物質としてのバナナ由来組成物２（１次精製物）１０ｍｇと水２ｍＬの混合物を、胃ゾンデを用いて直接投与した。バナナ由来組成物２の投与前、投与１５分後、３０分後、４５分後、６０分後にラットの尾静脈から採血し、テルモ社製メディセーフフィットを用いて血糖値を測定した。全ての操作は麻酔下で行った（なお、血糖値に対する麻酔の影響がないことは別途確認した）。
そして１週間後、使用した同じラット（Ｎ＝５）に、バナナ由来組成物２に替えて、バナナ由来組成物２に含まれる糖分（フルクトース及びグルコース）と同種同量の糖分を水に溶解させ、偽薬として同様にして投与した。偽薬の投与前、投与１５分後、３０分後、４５分後、６０分後にラットの尾静脈から採血し、血糖値を測定した。全ての操作は麻酔下で行った。
また、別の７週齢雄性ウイスターラット（Ｎ＝５）に、まず、上記と同様の偽薬を用いた試験を行い、上記と同様に血糖値を測定した。そして１週間後、上記と同様にしてバナナ由来組成物２を用いた試験を行い、血糖値を測定した。
バナナ由来組成物２を投与した場合、偽薬を投与した場合、それぞれの時間経過に伴う血糖値の推移を図１に示す（それぞれＮ＝１０の平均値）。図１から、生理活性物質としてのバナナ由来組成物２（１次精製物）が優れた血糖値上昇抑制作用を奏することがわかる。
【００７１】
＜血糖上昇抑制作用の確認（ヒト）＞
被験者（満２０歳以上７０歳未満の健康な日本人男性）は、試験前日の夕食を２１時までに済ませ、その後は絶食（水のみ摂取可）とし、試験品（偽薬、バナナ由来組成物６）を摂取する時刻（おおよそ午前９時）の１時間前より当日の採血が全て終了するまでは完全絶食とした。
まず、偽薬を用いて試験を行った。被験者は、１２．８ｇの偽薬（１５ｇのバナナ由来組成物６中に含まれる、グルコース、フルクトース、および賦形剤としてのマルチトールの量と同量の、グルコース、フルクトース、およびマルチトールを別途混合して調製した混合物）を、２００ｍＬの水ととともに経口摂取した後、負荷食（炊飯米３００ｇ、ククレカレー（登録商標）中辛、水１８０ｍＬ）を３分割した上で、それぞれ５分を目安に摂取し、１５分かけて全量を摂取した。偽薬摂取後負荷食摂取前、および負荷食摂取終了から３０、６０、９０分後に採血し、血糖値およびインスリンを測定した。
次に、上記偽薬を用いた試験の試験日から４日あけて、バナナ由来組成物６を用いて試験を行った。被験者は、１５ｇのバナナ由来組成物６を、２００ｍＬの水ととともに経口摂取した後、上述した負荷食を３分割した上で、それぞれ５分を目安に摂取し、１５分かけて全量を摂取した。バナナ由来組成物６摂取後負荷食摂取前、および負荷食摂取終了から３０、６０、９０分後に採血し、血糖値およびインスリンを測定した。その後２日あけて、バナナ由来組成物６の量を７．５ｇとした以外は上述と同様の操作を行い、さらに２日あけて、バナナ由来組成物６の量を３．７５ｇとした以外は上述と同様の操作を行った。
バナナ由来組成物６を投与した場合、偽薬を投与した場合のそれぞれの時間経過に伴う血糖値およびインスリンの推移を、負荷食摂取前の値を１００とした指数値を用いて、それぞれ図２および図３に示す。図２および図３から、生理活性物質としてのバナナ由来組成物６（１次精製物）が優れた血糖値上昇抑制作用を奏することがわかる。
【００７２】
＜コラーゲン産生促進作用の確認＞
正常ヒト真皮線維芽細胞を２×１０4cells/mlの濃度で24well培養プレートに播種し、３７℃のＣＯ2インキュベータにて７２時間培養した。培養培地には、５％ウシ胎児血清（Thermo Trace社製）を含むDMEM培地（SIGMA社製）を使用した。
前培養培地を取り除いた後、24well培養プレートに、1well当たり1mLの本格培養培地を作製した。本培養培地として、０．２５％ウシ胎児血清（Thermo Trace社製）を含むDMEM培地（SIGMA社製）を使用した。本培養培地への交換から２４時間経過後、再度同様の本培養培地に交換し試料を添加した。試料としては、対照（蒸留水）、バナナ由来組成物２（添加濃度１００μg/ml）、バナナ由来組成物２（添加濃度２００μg/ml）を用いた（試験試料は蒸留水を用いて調製し、０．２２μｍのフィルターでろ過滅菌した）。
それぞれの試料を添加後、３７℃のＣＯ2インキュベータにて７２時間培養し、培養後のプロコラーゲン産出量を測定した。具体的には、Procollagen Type I C-Peptide(PIP)を定量可能な、Procollagen Type I C-Peptide (RIP)EIA Kit（タカラバイオ社製）を用いて、培養上澄みのＩ型プロコラーゲン産生量を測定した。なお、細胞数の判定はCell counting Kit-8（同仁化学研究所製）を用いて行った。
試料として、対照を添加した場合、バナナ由来組成物２を添加した場合、それぞれのプロコラーゲン（Ｐｒｏｃｏｌｌａｇｅｎ）産出量を図４に示す（それぞれＮ＝４の平均値、エラーバーは実際の測定結果の範囲を示している、また対照を１００％として表示している）。図４から、生理活性物質としてのバナナ由来組成物２（１次精製物）が優れたコラーゲン産生促進作用を奏することがわかる。
【００７３】
＜抗酸化作用の確認＞
生理活性物質としてのバナナ由来組成物４（２次精製物）、ビタミンＣを超純水に溶解させ、濃度１０ｍｇ／ｍｌの溶液を作製し、これらの溶液の抗酸化能をそれぞれ２回ずつ測定した。具体的には、フリーラジカル解析装置ＦＲＥＥ（ウィスマー社製）を用いて、ＯＸＹ吸着テストにより次亜鉛素酸（ＨＣｌＯ）の酸化に対する抗酸化能を測定した。測定結果として、消去されたＨＣｌＯ濃度がμmolHClO／mLの単位で得られる。この数値が高いほど、より多くのＨＣｌＯを消去したこととなり、即ち高い抗酸化作用を有することを示す。結果を表１に示す。
【００７４】
【表１】
2019142948.tif 000003
【００７５】
表１から、生理活性物質としてのバナナ由来組成物４（２次精製物）は、ビタミンＣよりもμmolHClO／mLの値が高く、即ち、高い抗酸化作用を奏することがわかる。
【００７６】
＜ろ過（固液分離）性の確認＞
未熟バナナの果肉部（品種：ジャイアント・キャベンディッシュ  ブリックス度：４．５°Ｂｘ）、熟したバナナの果肉部（品種：ジャイアント・キャベンディッシュ  ブリックス度：２４．８°Ｂｘ）、それぞれを原料に用いた場合のろ過性を確認すべく、以下の要領で比較試験を行った。
「（実施例１）バナナ由来組成物１の製造」で上述した方法と同じ要領で、上記未熟バナナの果肉部を細分化し、得られた果肉細分化物（１５０ｇ）を酵素反応し、酵素分解物を得た。
この酵素分解物をろ過試験用サンプル１とし、このろ過試験用サンプル１にエタノール濃度がそれぞれ１０％、３０％、５０％となるようにエタノールを添加したものを、それぞれろ過試験用サンプル２〜４とした。
一方、上記未熟バナナと同じ要領で、上記熟したバナナの果肉部を細分化し、得られた果肉細分化物（１５０ｇ）を酵素反応し、酵素分解物を得た。
この酵素分解物をろ過試験用サンプル５とし、このろ過試験用サンプル５にエタノール濃度がそれぞれ１０％、５０％となるようにエタノールを添加したものを、ろ過性試験用サンプル６、７とした。
これらろ過試験用サンプル１〜７を、定性ろ紙No.2（ADVANTEC社製)を用いて吸引ろ過し、全量ろ過が終了するまでの時間を目視で確認し、全量ろ過に要した時間（ろ過時間）を測定した。結果を表２に示す。
【００７７】
【表２】
2019142948.tif 000004
【００７８】
表２から、未熟バナナの果肉部を用いた場合の方が、熟したバナナの果肉部を用いた場合に比して、極めて優れたろ過性を有することがわかる。加えて、未熟バナナの果肉部を用いた場合は、エタノール濃度を上昇させる程、ろ過性を向上させうることがわかる。
【００７９】
＜失活に用いるアルコールの相違による抽出効率の確認＞
蛋白質分解酵素の失活に用いる炭素数が１〜４のアルコールの相違によるアミノ酸、トリプトファン誘導体の抽出効率の優劣を確認すべく、以下の要領で比較試験を行った。
エタノールを用いた実施例１のバナナ由来組成物１と、該実施例１と、エタノールに替えてメタノール、２−プロパノール、１−ブタノールをそれぞれ使用した以外は同様にして得られた３種類のバナナ由来組成物に含まれるフェニルアラニン、トリプトファン、およびセロトニンの量を測定した。結果を表３に示す。
【００８０】
【表３】
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【００８１】
表３から、エタノールとメタノールが、２−プロパノールと１−ブタノールに比して、バナナ果肉部中の上記成分を全体として効率よく抽出可能であることがわかる。
【産業上の利用可能性】
【００８２】
本発明によれば、バナナの果肉部から、優れた生理活性を奏する組成物を得ることができる、バナナ由来組成物の製造方法を提供することができる。
また、本発明によれは、優れた生理活性を奏する、バナナの果肉部由来のバナナ由来組成物を含有する生理活性物質を提供することができる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【手続補正書】
【提出日】令和1年5月23日(2019.5.23)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
バナナの果肉部から得られるバナナ由来組成物を有効成分として含有する、生理活性物質であって、
前記バナナ由来組成物中のアミノ酸含有量とトリプトファン誘導体含有量との合計が１０質量％以上９５質量％以下であり、
前記アミノ酸がフェニルアラニン及びトリプトファンを含み、前記トリプトファン誘導体がセロトニンを含む、生理活性物質。
【請求項２】
前記バナナ由来組成物中のアミノ酸含有量が１１．０質量％以上５５．２質量％以下である、請求項１に記載の生理活性物質。
【請求項３】
前記バナナ由来組成物中の前記フェニルアラニンの含有量が０．８９質量％以上４．４７質量％以下である、請求項１または２に記載の生理活性物質。
【請求項４】
前記バナナ由来組成物中の前記トリプトファンの含有量が０．３４質量％以上１１．８質量％以下である、請求項１〜３の何れかに記載の生理活性物質。
【請求項５】
前記バナナ由来組成物中の前記セロトニンの含有量が０．０００９質量％以上０．１５質量％以下である、請求項１〜４の何れかに記載の生理活性物質。
【請求項６】
前記バナナ由来組成物中の前記フェニルアラニンの含有量が０．８９質量％以上４．４７質量％以下であり、前記トリプトファンの含有量が０．３４質量％以上１１．８質量％以下であり、前記セロトニンの含有量が０．０００９質量％以上０．１５質量％以下である、請求項１または２に記載の生理活性物質。
【請求項７】
血糖値上昇抑制作用を奏する、請求項１〜６のいずれか１項に記載の生理活性物質。
【請求項８】
コラーゲン産生促進作用を奏する、請求項１〜７のいずれか１項に記載の生理活性物質。