(57)【要約】      （修正有）【課題】難溶性物質の溶解度を改善するのに用いる組成物の提供。【解決手段】難溶性物質の溶解度を改善するのに用いる組成物であって、重量で４０〜９９．５％のシクロデキストリン及び／又はその誘導体と、重量で０．０５〜１０％の少なくとも１つの水溶性高分子と、重量で０．０５〜６０％の少なくとも１つの水溶性安定剤と、を含む組成物。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
難溶性物質の溶解度を改善するのに用いる組成物であって、
重量で４０〜９９．５％のシクロデキストリンおよび／またはその誘導体と、
重量で０．０５〜１０％の少なくとも１つの水溶性高分子と、
重量で０．０５〜６０％の少なくとも１つの水溶性安定剤と、
を含む、難溶性物質の溶解度を改善するのに用いる組成物。
【請求項２】
前記シクロデキストリンには、α-シクロデキストリン、β-シクロデキストリン、γ-シクロデキストリン、δ-シクロデキストリンまたはこれらの組み合わせが含まれる、請求項１に記載の難溶性物質の溶解度を改善するのに用いる組成物。
【請求項３】
前記シクロデキストリンの誘導体には、ヒドロキシプロピル（hydroxypropyl）修飾シクロデキストリン、スクシニル（succinyl）修飾シクロデキストリン、メチル（methyl）修飾シクロデキストリンまたはこれらの組み合わせが含まれる、請求項１または２に記載の難溶性物質の溶解度を改善するのに用いる組成物。
【請求項４】
前記少なくとも１つの水溶性高分子には、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（hydroxypropyl methyl cellulose, ＨＰＭＣ）、ヒドロキシプロピルセルロース（hydroxypropyl cellulose）、カルボキシメチルセルロース（carboxymethyl cellulose, ＣＭＣ）、ポリビニルピロリドン（polyvinylpyrrolidone, ＰＶＰ）、ポリビニルアルコール（polyvinyl alcohol）、ポリエチレングリコール-ポリプロピレングリコール-ポリエチレングリコールトリブロック共重合体 （poly（ethylene glycol）-poly（propylene glycol）-poly（ethylene glycol）, ＰＥＧ−ＰＰＧ−ＰＥＧ（ＡＢＡ）  triblock copolymers）またはこれらの組み合わせが含まれる、請求項１〜３のいずれか１項に記載の難溶性物質の溶解度を改善するのに用いる組成物。
【請求項５】
前記少なくとも１つの水溶性安定剤には、極性側鎖を有するアミノ酸、少なくとも１つの極性側鎖を有するアミノ酸を含むオリゴペプチド（oligopeptide）、プリン（purine）、プリン誘導体またはこれらの組み合わせが含まれる、請求項１〜４のいずれか１項に記載の難溶性物質の溶解度を改善するのに用いる組成物。
【請求項６】
前記オリゴペプチドには、カルノシン（carnosine）、グルタチオン（glutathione, ＧＳＨ）またはロイシン−グリシン−グリシン（Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ）が含まれる、請求項５に記載の難溶性物質の溶解度を改善するのに用いる組成物。
【請求項７】
前記プリンにはアデニン（adenine）またはグアニン（guanine） が含まれる、請求項５に記載の難溶性物質の溶解度を改善するのに用いる組成物。
【請求項８】
前記プリン誘導体には、カフェイン（caffeine）、テオブロミン（theobromine）、イソグアニン（isoguanine）、キサンチン（xanthine）、ヒポキサンチン（hypoxanthine）または尿酸（uric acid）が含まれる、請求項５に記載の難溶性物質の溶解度を改善するのに用いる組成物。
【請求項９】
疎水性化合物である重量で０．０５〜１０％の少なくとも１つの活性成分と、
重量で４０〜９９．５％のシクロデキストリンおよび／またはその誘導体と、
重量で０．０５〜１０％の少なくとも１つの水溶性高分子と、
重量で０．０５〜６０％の少なくとも１つの水溶性安定剤と、
を含む、複合製剤。
【請求項１０】
前記疎水性化合物には、ステロイド系薬剤および／または分子量が１００〜１０００Ｄａの芳香族化合物が含まれる、請求項９に記載の複合製剤。
【請求項１１】
界面活性剤をさらに含んで前記複合製剤を微粒子に形成させる、請求項９または１０に記載の複合製剤。
【請求項１２】
前記界面活性剤にはＴｗｅｅｎ  ８０、Ｔｗｅｅｎ  ２０、Ｓｐａｎ  ８０、ＤＳＰＥ−ＰＥＧおよび／もしくはその誘導体またはこれらの組み合わせが含まれる、請求項１１に記載の複合製剤。
【請求項１３】
前記活性成分、前記シクロデキストリンおよび／またはその誘導体、前記少なくとも１つの水溶性高分子ならびに前記少なくとも１つの水溶性安定剤と液体剤形を形成する溶媒をさらに含む、請求項９〜１２のいずれか１項に記載の複合製剤。
【請求項１４】
前記複合製剤が医薬製剤である、請求項１３に記載の複合製剤。
【請求項１５】
前記液体剤形には、経口剤形、注射剤形または点眼剤が含まれ、前記注射剤形には皮下注射剤形、筋肉注射剤形または腹腔内注射剤形が含まれる、請求項１４に記載の複合製剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、難溶性物質の溶解度を改善するのに用いる組成物、その用途、およびそれを含む複合製剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
シクロデキストリン（Cyclodextrin, ＣＤ）は、難溶性薬剤の溶解度を改善するか、または薬剤劣化を回避する等の機能を有しており、現在、重要な医薬用賦形剤となっている。
【０００３】
シクロデキストリン分子間は互いに分子間水素結合を形成することで結合するが、この種の結合は、薬剤分子がシクロデキストリンのキャビティ（cavity）に取り入れられるのを阻止し易いため、シクロデキストリンの薬剤に対する装填量を低下させてしまうことになる。また、シクロデキストリンの使用濃度が過度に高いと、潜在的な毒性のリスクが生じ易くなり、このことはシクロデキストリンの多くの薬剤処方中における使用量を制限してしまう。
【０００４】
現在、シクロデキストリン上に異なる官能基を修飾するか、または適した水溶性高分子を添加する等の方式により、シクロデキストリンと薬剤の包接作用の効率を改善できることが知られている。しかし、依然として多数の薬剤は既存のシクロデキストリンと有効に包接複合体を形成することができない。薬剤の分子サイズとシクロデキストリンのリング内側のサイズが、薬剤とシクロデキストリンとの包接強度を決める主要な要因である。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
よって、現在、医薬分野ではシクロデキストリンと薬剤との包接作用を高めることのできる技術の開発が依然必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、重量で約４０〜９９．５％のシクロデキストリンおよび／またはその誘導体と、重量で約０．０５〜１０％の少なくとも１つの水溶性高分子と、重量で約０．０５〜６０％の少なくとも１つの水溶性安定剤と、を含む難溶性物質の溶解度を改善するのに用いる組成物を提供する。
【０００７】
本発明は、難溶性物質の溶解度を改善するものとしての組成物の用途であって、該組成物が、重量で約４０〜９９．５％のシクロデキストリンおよび／またはその誘導体と、重量で約０．０５〜１０％の少なくとも１つの水溶性高分子と、重量で約０．０５〜６０％の少なくとも１つの水溶性安定剤とを含む組成物の用途も提供する。
【０００８】
本発明はさらに、疎水性化合物である重量で約０．０５〜１０％の活性成分と、重量で約４０〜９９．５％のシクロデキストリンおよび／またはその誘導体と、重量で約０．０５〜１０％の少なくとも１つの水溶性高分子と、重量で約０．０５〜６０％少のなくとも１つの水溶性安定剤と、を含む複合製剤をも提供する。
【発明の効果】
【０００９】
本発明によれば、難溶性物質の溶解度を高めることができる。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
本発明の上記およびその他の目的、特徴および利点をより明瞭かつ分かりやすくするため、以下に好ましい実施例を挙げると共に、添付の図面と対応させて以下詳細に説明する。
【図１】ＨＰγＣＤの閉じた形式（closed-form）と開放形式（open-form）の最適化構造を示している。（ａ）は閉じた形式の最適化構造、（ｂ）は開放形式の最適化構造、（ｃ）は、水分子が閉じた形式のＨＰγＣＤを通過できないことを強調する図、（ｄ）は、水分子が開放形式のＨＰγＣＤを容易に通過できることを強調する図である。
【図２】［ＬＥ＠ＨＰγＣＤ］包接複合体の上位１のドッキング構造（docking structure）を示している。
【図３】ＧＳＨ−［ＬＥ＠ＨＰγＣＤ］包接複合体の上位１のドッキング構造を示している。（ａ）は側面図、（ｂ）は一次面の図である。
【図４】マンニトール−［ＬＥ＠ＨＰγＣＤ］包接複合体の上位１のドッキング構造を示している。
【図５】［アキシチニブ（axitinib）＠ＨＰγＣＤ］包接複合体の上位１のドッキング構造を示している。
【図６】ＧＳＨ−［アキシチニブ＠ＨＰγＣＤ］包接複合体の１上位のドッキング構造を示している。（ａ）は側面図、（ｂ）は一次面の図である。
【図７】マンニトール−［アキシチニブ＠ＨＰγＣＤ］包接複合体の上位１のドッキング構造を示している。（ａ）は側面図、（ｂ）は一次面の図である。
【図８】ヒドロキシプロピルメチルセルロース−ＧＳＨ−［ＬＥ＠ＨＰγＣＤ］およびヒドロキシプロピルメチルセルロース−ＧＳＨ−［アキシチニブ＠ＨＰγＣＤ］コンジュゲート（conjugates）の考えられる構造を示している。（a）はヒドロキシプロピルメチルセルロース−ＧＳＨ−［ＬＥ＠ＨＰγＣＤ］、（ｂ）はヒドロキシプロピルメチルセルロース−ＧＳＨ−［アキシチニブ＠ＨＰγＣＤ］である。
【図９Ａ】図９ＡはＧＳＨ−［ＬＥ＠ＨＰγＣＤ］包接複合体の３Ｄ構造を示している。
【図９Ｂ】図９ＢはＧＳＨ−［アキシチニブ＠ＨＰγＣＤ］包接複合体の３Ｄ構造を示している。
【図１０】は、本発明の１実施例におけるＨＣ８Ａ溶液のウサギの眼の房水（aqueous humor, ＡＨ）および網膜に対する薬物動態試験の結果を示している。
【図１１】本発明の１実施例によるアジュバンド誘発慢性ブドウ膜炎モデル（Adjuvant induced chronic uveitis model, AIU model）の試験実行の時間経過を示している。
【図１２】本発明の１実施例のアジュバンド誘発ブドウ膜炎モデル試験において  、１日に３回の頻度（ＴＩＤ）でキャリア、０．１％リン酸デキサメタゾンナトリウム（dexamethasone sodium phosphate）および本発明の組成物（０．１７％  ＨＰＣ８Ｈ８０ＬＨ／ＴＷ−ＰＤ）をそれぞれウサギの眼に投与し、４日後および１０日後に撮影したウサギの眼の写真を示している。
【図１３Ａ】図１３Ａは、本発明の１実施例のアジュバンド誘発ブドウ膜炎モデル試験において、キャリア処理群、０．１％リン酸デキサメタゾンナトリウム（dexamethasone sodium phosphate）処理群、本発明の組成物（０．１７％  ＨＰＣ８Ｈ８０ＬＨ／ＴＷ−ＰＤ）処理群および未処理群のウサギの眼の結膜充血（conjunctival congestion）の程度を評点した結果を示している。
【図１３Ｂ】図１３Ｂは、本発明の１実施例のアジュバンド誘発ブドウ膜炎モデル試験において、キャリア処理群、０．１％リン酸デキサメタゾンナトリウム処理群、本発明の組成物（０．１７％  ＨＰＣ８Ｈ８０ＬＨ／ＴＷ−ＰＤ）処理群および未処理群のウサギの眼の前房フレア（anterior chamber flare）の程度を評点した結果を示している。
【図１３Ｃ】図１３Ｃは、本発明の１実施例のアジュバンド誘発ブドウ膜炎モデル試験において、キャリア処理群、０．１％リン酸デキサメタゾンナトリウム処理群、本発明の組成物（０．１７％  ＨＰＣ８Ｈ８０ＬＨ／ＴＷ−ＰＤ）処理群および未処理群のウサギの眼のブドウ膜炎の状態の評点結果を示している。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
本発明は、難溶性物質の溶解度を改善するのに用いる組成物を提供する。ここに述べる「難溶性物質」とは、水に対する溶解度が約０．０１ｇ／ｍＬ未満である任意の物質のことを意味する。上記難溶性物質には、限定はされないが、疎水性化合物が含まれ、例えば疎水性薬剤であり得る。
【００１２】
上記本発明の難溶性物質の溶解度を改善するのに用いる組成物は、限定はされないが、シクロデキストリンおよび／またはその誘導体と、少なくとも１つの水溶性高分子と、少なくとも１つの水溶性安定剤を含み得る。上記本発明の難溶性物質の溶解度を改善するのに用いる組成物中において、各成分の含有量に特に制限はなく、その他の成分の含有量に応じて調整することができる、および／またはニーズに応じて調整することができる。
【００１３】
上記本発明の難溶性物質の溶解度を改善するのに用いる組成物中、シクロデキストリンおよび／またはその誘導体は重量で約４０〜９９．５重量％占めていてよく、例えば約４０〜４５％、４５〜５０％、５０〜５５％、５５〜６０％、６０〜６５％、６０〜６５％、６５〜７０％、７０〜７５％、７５〜８０％、８０〜８５％、８５〜９０％、９５〜９９．５％、５５〜９９．５％、５０〜７５％、６０〜８５％、８０〜９９．５％等であってよいが、これらに限定はされない。
【００１４】
上記シクロデキストリンの例には、α−シクロデキストリン、β−シクロデキストリン、γ−シクロデキストリン、δ−シクロデキストリンまたは上記の任意の組み合わせ等が含まれ得るが、これらに限定はされない。
【００１５】
また、上記シクロデキストリンの誘導体の例には、ヒドロキシプロピル（hydroxypropyl）修飾シクロデキストリン、スクシニル（succinyl）修飾シクロデキストリン、メチル（methyl）修飾シクロデキストリンまたは上記の任意の組み合わせが含まれ得るが、これらに限定はされない。また、上記ヒドロキシプロピル（hydroxypropyl）修飾シクロデキストリンとして、ヒドロキシプロピルγ−シクロデキストリン（hydroxypropyl-γ-CD）を挙げることができるが、これに限定されることはない。
【００１６】
上記本発明の難溶性物質の溶解度を改善するのに用いる組成物中、少なくとも１つの水溶性高分子は重量で約０．０５〜１０％占めてよく、例えば約０．０５〜０．１％、０．０５〜０．０８％、０．０６〜０．１％、０．１〜０．１２％、０．１５〜０．２５％、０．５〜１％、１〜２％、１〜３％、２〜５％、２〜３％、３〜５％、５〜７％、８〜１０％等であってよいが、これらに限定はされない。
【００１７】
上記少なくとも１つの水溶性高分子の分子量は約２０００Ｄａｌｔｏｎより大きくてよいが、これに限定はされず、例えば約１０００〜２０００００Ｄａｌｔｏｎである。また、上記少なくとも１つの水溶性高分子には、限定はされないが、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（hydroxypropyl methyl cellulose, ＨＰＭＣ）、ヒドロキシプロピルセルロース（hydroxypropyl cellulose）、カルボキシメチルセルロース（carboxymethyl cellulose, ＣＭＣ）、ポリビニルピロリドン（polyvinylpyrrolidone, ＰＶＰ）、ポリビニルアルコール（polyvinyl alcohol）、ポリエチレングリコール-ポリプロピレングリコール-ポリエチレングリコールトリブロック共重合体（poly（ethylene glycol）-poly（propylene glycol）-poly（ethylene glycol）, PEG-PPG-PEG （ＡＢＡ） triblock copolymers）または上記の任意の組み合わせ等が含まれ得る。１実施形態において、上記本発明の難溶性物質の溶解度を改善するのに用いる組成物中，上記少なくとも１つの水溶性高分子はヒドロキシプロピルメチルセルロースであり得る。
【００１８】
上記本発明の難溶性物質の溶解度を改善するのに用いる組成物中、少なくとも１つの水溶性安定剤は重量で約０．０５〜６０％占めていてよく、例えば約０．０５〜０．１％、０．０５〜０．０８％、０．０６〜０．１％、０．１〜０．１２％、０．１５〜０．２５％、０．５〜１％、１〜２％、１〜３％、２〜５％、２〜３％、３〜５％、５〜７％、８〜１０％、１０〜１５％、１５〜２０％、２０〜２５％、２５〜３０％、３０〜３５％、３５〜４０％、４０〜４５％、４０〜５５％、４５〜５０％、５０〜５５％、５５〜６０％等であってよいが、これらに限定はされない。
【００１９】
上記少なくとも１つの水溶性安定剤の例には、限定はされないが、極性側鎖を有するアミノ酸、少なくとも１つの極性側鎖を有するアミノ酸のオリゴペプチド（oligopeptide）、プリン（purine）、プリン誘導体または上記の任意の組み合わせ等が含まれ得る。
【００２０】
上記極性側鎖を有するアミノ酸は、極性側鎖を有するアミノ酸でさえあればよく、天然アミノ酸または非天然のアミノ酸であってよく、限定はない。例えば、上記極性側鎖を有するアミノ酸の例には、グリシン（glycine）、システイン（cysteine）、グルタミン（glutamine）、グルタミン酸（glutamic acid）、ヒスチジン（histidine）等が含まれ得るが、これらに限定はされない。
【００２１】
また、上記少なくとも１つの極性側鎖を有するアミノ酸を含むオリゴペプチドは、それを組成するアミノ酸中に少なくとも１つの極性側鎖を有するアミノ酸が含まれていればよく、特定の制限はない。例えば、上記の少なくとも１つの極性側鎖を有するアミノ酸を含むオリゴペプチドは、１つの極性側鎖を有するアミノ酸を備えるだけでも、もしくは複数の極性側鎖を有するアミノ酸を備えていてもよいし、または上記の少なくとも１つの極性側鎖を有するアミノ酸を含むオリゴペプチドが全て極性側鎖を有するアミノ酸から構成されていてもよい。さらに、上記の少なくとも１つの極性側鎖を有するアミノ酸を含むオリゴペプチドは、その備える各アミノ酸がそれぞれ独立に任意のアミノ酸であってよく、それを組成するアミノ酸中に少なくとも１つの極性側鎖を有するアミノ酸を含んでいればよい。また、上記の少なくとも１つの極性側鎖を有するアミノ酸を含むオリゴペプチド中、上記の少なくとも１つの極性側鎖を有するアミノ酸のオリゴペプチドにおける位置にも特定の位置に特定の制限はなく、独立してオリゴペプチドにおける任意の位置にあってよい。上記のオリゴペプチド中の少なくとも１つの極性側鎖を有するアミノ酸には、独立に、グリシン（glycine）、システイン（cysteine）、グルタミン（glutamine）、グルタミン酸（glutamic acid）、ヒスチジン（histidine）、上記の任意の組み合わせ等が含まれ得るが、これらに限定はされない。
【００２２】
１実施形態において、上記の少なくとも１つの極性側鎖を有するアミノ酸を含むオリゴペプチドは、約２〜８個のアミノ酸、例えば２〜３、２〜６、２、３、４、５、６、７、８個のアミノ酸を有していてよいが、これらに限定はされない。また、上記の少なくとも１つの極性側鎖を有するアミノ酸を含むオリゴペプチドの例としては、カルノシン（carnosine）、グルタチオン（glutathione, ＧＳＨ）、ロイシン-グリシン-グリシン（Leu-Gly-Gly）等を挙げることができるが、これらに限定はされない。
【００２３】
また、上記プリンの例には、アデニン（adenine）、グアニン（guanine）、これらの組み合わせ等が含まれ得るが、これらに限定はされない。上記プリン誘導体には、限定はされないが、カフェイン（caffeine）、テオブロミン（theobromine）、イソグアニン（isoguanine）、キサンチン（xanthine）、ヒポキサンチン（hypoxanthine）、尿酸（uric acid）、これらの任意の組み合わせ等が含まれ得る。
【００２４】
１実施形態において、上記の本発明の難溶性物質の溶解度を改善するのに用いる組成物中、上記少なくとも１つの水溶性安定剤は、限定はされないが、極性側鎖を有するアミノ酸、例えばグリシン、グルタミン、グルタミン酸またはヒスチジンであってよい。別の実施形態において、上記の本発明の難溶性物質の溶解度を改善するのに用いる組成物中、上記少なくとも１つの水溶性安定剤は、限定はされないが、少なくとも１つの極性側鎖を有するアミノ酸を含むオリゴペプチド、例えばカルノシン、グルタチオン、ロイシン-グリシン-グリシンであってよい。また別の実施形態では、上記の本発明の難溶性物質の溶解度を改善するのに用いる組成物中、上記少なくとも１つの水溶性安定剤は、限定はされないが、プリン誘導体、例えばカフェインであってよい。
【００２５】
１実施形態では、上記の本発明の難溶性物質の溶解度を改善するのに用いる組成物中、上記少なくとも１つの水溶性安定剤は、極性側鎖を有するアミノ酸または少なくとも１つの極性側鎖を有するアミノ酸を含むオリゴペプチドであり、また、上記シクロデキストリンおよび／またはその誘導体は重量で約４０〜８５％占めていてよく、上記少なくとも１つの水溶性高分子は重量で約０．５〜５％占めていてよく、上記極性側鎖を有するアミノ酸または少なくとも１つの極性側鎖を有するアミノ酸を含むオリゴペプチドは重量で約１５〜５５％占めていてよい。また、上記シクロデキストリンおよび／またはその誘導体はヒドロキシプロピルγ-シクロデキストリンであってよく、かつ上記少なくとも１つの水溶性高分子はヒドロキシプロピルメチルセルロースであってよい。
【００２６】
また、上記の本発明の難溶性物質の溶解度を改善するのに用いる組成物中、特定の実施形態では、於上記少なくとも１つの水溶性安定剤が極性側鎖を有するアミノ酸または少なくとも１つの極性側鎖を有するアミノ酸を含むオリゴペプチドであり、かつシクロデキストリンおよび／またはその誘導体、少なくとも１つの水溶性高分子、ならびに極性側鎖を有するアミノ酸または少なくとも１つの極性側鎖を有するアミノ酸を含むオリゴペプチドが重量でそれぞれ約４０〜８５％、０．５〜５％、ならびに１５〜５５％占め得るという前提の下、シクロデキストリンおよび／またはその誘導体をヒドロキシプロピルγ−シクロデキストリンに、少なくとも１つの水溶性高分子をヒドロキシプロピルメチルセルロースに、少なくとも１つの水溶性安定剤を極性側鎖を有するアミノ酸にさらに限定でき、かつ極性側鎖を有するアミノ酸にグルタミン、グルタミン酸またはヒスチジンに含まれ得る場合、この特定の実施形態において上記ヒドロキシプロピルγ−シクロデキストリンは重量で約７０〜８５％占めてよく、上記ヒドロキシプロピルメチルセルロースは重量で約０．５〜３％占めてよく、上記極性側鎖を有するアミノ酸は重量で約１０〜２５％占めてよい。
【００２７】
あるいは、上記の本発明の難溶性物質の溶解度を改善するのに用いる組成物中、特定の実施形態では、上記少なくとも１つの水溶性安定剤が極性側鎖を有するアミノ酸または少なくとも１つの極性側鎖を有するアミノ酸を含むオリゴペプチドであり、かつシクロデキストリンおよび／またはその誘導体、少なくとも１つの水溶性高分子、ならびに極性側鎖を有するアミノ酸または少なくとも１つの極性側鎖を有するアミノ酸を含むオリゴペプチドが重量でそれぞれ約４０〜８５％、０．５〜５％、ならびに１５〜５５％占め得るという前提の下、シクロデキストリンおよび／またはその誘導体をヒドロキシプロピルγ-シクロデキストリンに、少なくとも１つの水溶性高分子をヒドロキシプロピルメチルセルロースに、少なくとも１つの水溶性安定剤を少なくとも１つの極性側鎖を有するアミノ酸を含むオリゴペプチドにさらに限定することができ、かつ少なくとも１つの極性側鎖を有するアミノ酸を含むオリゴペプチドにカルノシン、グルタチオンまたはロイシン-グリシン-グリシンが含まれ得る場合、この特定の実施形態において上記ヒドロキシプロピルγ−シクロデキストリンは重量で約４０〜８０％占めていてよく、上記ヒドロキシプロピルメチルセルロースは重量で約０．５〜３％占めていてよく、上記少なくとも１つの極性側鎖を有するアミノ酸を含むオリゴペプチドは重量で約１５〜５５％占めていてよい。
【００２８】
別の実施形態において、上記の本発明の難溶性物質の溶解度を改善するのに用いる組成物中、上記少なくとも１つの水溶性安定剤はプリン誘導体であってよく、かつプリン誘導体はカフェインであってよく、上記シクロデキストリンおよび／またはその誘導体はヒドロキシプロピルγ-シクロデキストリンであってよく、かつ上記少なくとも１つの水溶性高分子はヒドロキシプロピルメチルセルロースであってよい。そして、この実施形態のうち特定の実施形態では、上記ヒドロキシプロピルγ−シクロデキストリンは重量で約７０〜９９．５％占めてよく、上記ヒドロキシプロピルメチルセルロースは重量で約０．１〜５％占めてよく、上記カフェインは重量で約０．０５〜２０％占めてよい。
【００２９】
また、１実施形態において、上記の本発明の難溶性物質の溶解度を改善するのに用いる組成物は、上記シクロデキストリンおよび／またはその誘導体、少なくとも１つの水溶性高分子ならびに少なくとも１つの水溶性安定剤の他、さらに溶媒を含んで、上記シクロデキストリンおよび／またはその誘導体、少なくとも１つの水溶性高分子ならびに少なくとも１つの水溶性安定剤と溶液を形成するようにしてもよい。この溶液中における上記シクロデキストリンおよび／またはその誘導体、少なくとも１つの水溶性高分子ならびに少なくとも１つの水溶性安定剤の総濃度は約５〜５５％  （ｗ／ｖ）、例えば５〜１０％、１０〜２０％、２０〜２５％、３０〜３５％、３５〜４０％、４０〜４５％、４５〜５０％、５０〜５５％等とすることができるが、これらに限定はされない。
【００３０】
本発明は、難溶性物質の溶解度を改善するものとしての組成物の用途も提供する。本発明の難溶性物質の溶解度を改善するものとしての組成物の用途において、該組成物は、任意の上述した本発明の難溶性物質の溶解度を改善するのに用いる組成物であってよい。また、難溶性物質、シクロデキストリンおよび／またはその誘導体、少なくとも１つの水溶性高分子、ならびに少なくとも１つの水溶性安定剤等に関する説明は、本発明の難溶性物質の溶解度を改善するのに用いる組成物に関する上の段落中にすでに記載されているので、ここでは繰り返さない。
【００３１】
本発明の難溶性物質の溶解度を改善するものとしての組成物の用途において、難溶性物質を水性溶媒中に溶解するのに比して、難溶性物質と該組成物とを水性溶媒中に一緒に溶かすと、難溶性物質の溶解度を高めることができる。
【００３２】
本発明はさらに複合製剤も提供し得る。上記本発明の複合製剤は、限定はされないが、少なくとも１つの活性成分、シクロデキストリンおよび／またはその誘導体、少なくとも１つの水溶性高分子ならびに少なくとも１つの水溶性安定剤を含んでいてよく、上記少なくとも１つの活性成分は疎水性化合物である。上記本発明の複合製剤中の各成分の含有量に特に制限はなく、その他成分の含有量に応じて調整可能である、および／またはニーズに合わせて調整可能である。
【００３３】
上記本発明の複合製剤中、シクロデキストリンおよび／またはその誘導体、少なくとも１つの水溶性高分子ならびに少なくとも１つの水溶性安定剤は、上述した本発明の難溶性物質の溶解度を改善するのに用いる組成物の成分と同じと見なすことができ、それは本発明の複合製剤中の活性成分の溶解度を改善する効果を有する。
【００３４】
上記本発明の複合製剤中，上記少なくとも１つの活性成分は重量で約０．０５〜１０％占めてよく、例えば約０．０５〜０．１％、０．０５〜０．０８％、０．０６〜０．１％、０．１〜０．１２％、０．１５〜０．２５％、０．５〜１％、１〜２％、１〜３％、２〜５％、２〜３％、３〜５％、５〜７％、８〜１０％等であり得るが、これらに限定はされない。
【００３５】
１実施形態において、上記本発明の複合製剤は医薬製剤であってよい。上記本発明の複合製剤中、活性成分は疾病および／または症状に対して治療、軽減および／または予防効果を有する疎水性成分のことを指すが、これに限定されることはない。
【００３６】
ここにいう「疎水性化合物」とは、水に対する溶解度が0.01 g/mL未満である任意の物質のことを指すが、これに限定されることはない。上記疎水性化合物には、ステロイド系薬剤、分子量１００〜１０００Ｄａの芳香族化合物、または上記の任意の組み合わせ等が含まれ得るが、これらに限定されることはない。
【００３７】
ステロイド系薬剤の例には、限定はされないが、エタボン酸ロテプレドノール（loteprednol etabonate）、デキサメタゾン（dexamethasone）、デキサメタゾンリン酸塩（dexamethasone phosphate）、プレドニゾロン（prednisolone）、酢酸プレドニゾロン（prednisolone acetate）、フルオロメトロン（fluorometholone）、１７β-エストラジオール（17β-estradiol）、１７α−エチニルエストラジオール（17α-ethinylestradiol）、エチニルエストラジオール３−メチルエーテル（ethinylestradiol 3-methyl ether）、エストリオール（estriol）、ノルエチンドロン（norethindrone）、酢酸ノルエチンドロン（norethindrone acetate）、ノルゲストレル（norgestrel）、エチステロン（ethisterone）、メトキシプロゲステロン（methoxyprogesterone）、プロゲステロン（progesterone）、１７−メチルテストステロン（17-methyltestosterone）、トリアムシノロン（triamcinolone）、テストステロン（testosterone）、スピロノラクトン（spironolactone）、アルファキサロン（alfaxalone）、ラノスタノイド（lanostanoid）、これらの任意の組み合わせ等が含まれ得る。
【００３８】
また、分子量約100〜1000Daの芳香族化合物には、アキシチニブ（axitinib）、メトトレキサート（methotrexate）、葉酸（folic acid）、ジクロフェナクナトリウム（diclofenac sodium）、ルテイン（lutein）、これらの任意の組み合わせ等が含まれ得るが、これらに限定はされない。
【００３９】
上記本発明の複合製剤中、シクロデキストリンおよび／またはその誘導体は、重量で約４０〜９９．５％、例えば約４０〜４５％、４５〜５０％、５０〜５５％、５５〜６０％、６０〜６５％、６０〜６５％、６５〜７０％、７０〜７５％、７５〜８０％、８０〜８５％、８５〜９０％、９５〜９９．５％、５５〜９９．５％、５０〜７５％、６０〜８５％、８０〜９９．５％等を占めていてよいが、これらに限定はされない。
【００４０】
本発明の複合製剤中のシクロデキストリンおよび／またはその誘導体に関する説明は、本発明の難溶性物質の溶解度を改善するのに用いる組成物に関する上の段落中にすでに記載されているので、ここでは繰り返さない。
【００４１】
上記本発明の複合製剤中、少なくとも１つの水溶性高分子は、重量で約０．０５〜１０％、例えば約０．０５〜０．１％、０．０５〜０．０８％、０．０６〜０．１％、０．１〜０．１２％、０．１５〜０．２５％、０．５〜１％、１〜２％、１〜３％、２〜５％、２〜３％、３〜５％、５〜７％、８〜１０％等を占めていてよいが、これらに限定はされない。
【００４２】
また、本発明の複合製剤中の少なくとも１つの水溶性高分子に関する説明も、本発明の難溶性物質の溶解度を改善するのに用いる組成物に関する上の段落中にすでに記載されているので、ここでは繰り返さない。
【００４３】
さらに、上記本発明の複合製剤中、少なくとも１つの水溶性安定剤は重量で約０．０５〜６０％、例えば約０．０５〜０．１％、０．０５〜０．０８％、０．０６〜０．１％、０．１〜０．１２％、０．１５〜０．２５％、０．５〜１％、１〜２％、１〜３％、２〜５％、２〜３％、３〜５％、５〜７％、８〜１０％、１０〜１５％、１５〜２０％、２０〜２５％、２５〜３０％、３０〜３５％、３５〜４０％、４０〜４５％、４０〜５５％、４５〜５０％、５０〜５５％、５５〜６０％等を占めていてよいが、これらに限定はされない。
【００４４】
同じように、本発明の複合製剤中の少なくとも１つの水溶性安定剤に関する説明は、本発明の難溶性物質の溶解度を改善するのに用いる組成物に関する上の段落中にすでに記載されているので、同様にここでは繰り返さない。
【００４５】
１実施形態において、上記本発明の複合製剤中、上記少なくとも１つの水溶性安定剤は極性側鎖を有するアミノ酸または少なくとも１つの極性側鎖を有するアミノ酸を含むオリゴペプチドであり、また、上記活性成分は重量で約０．５〜５％を占めていてよく、上記シクロデキストリンおよび／またはその誘導体は重量で約４０〜８５％を占めていてよく、上記少なくとも１つの水溶性高分子は重量で約０．５〜５％を占めていてよく、上記極性側鎖を有するアミノ酸または少なくとも１つの極性側鎖を有するアミノ酸を含むオリゴペプチドは重量で約１５〜５５％を占めていてよい。さらに、上記活性成分はエタボン酸ロテプレドノールまたはアキシチニブであってよく、上記シクロデキストリンおよび／またはその誘導体はヒドロキシプロピルγ-シクロデキストリンであってよく、上記少なくとも１つの水溶性高分子はヒドロキシプロピルメチルセルロースであってよい。
【００４６】
また、上記本発明の複合製剤中、特定の実施形態では、上記少なくとも１つの水溶性安定剤が、極性側鎖を有するアミノ酸または少なくとも１つの極性側鎖を有するアミノ酸を含むオリゴペプチドであり、かつシクロデキストリンおよび／またはその誘導体、少なくとも１つの水溶性高分子、ならびに極性側鎖を有するアミノ酸または少なくとも１つの極性側鎖を有するアミノ酸を含むオリゴペプチドが重量でそれぞれ約４０〜８５％、０．５〜５％、ならびに１５〜５５％占め得るものであるという前提の下、さらに活性成分をエタボン酸ロテプレドノールまたはアキシチニブに、シクロデキストリンおよび／またはその誘導体をヒドロキシプロピルγ-シクロデキストリンに、少なくとも１つの水溶性高分子をヒドロキシプロピルメチルセルロースに、少なくとも１つの水溶性安定剤を極性側鎖を有するアミノ酸に限定することができ、かつ極性側鎖を有するアミノ酸にグルタミン、グルタミン酸またはヒスチジンが含まれ得る場合、この特定の実施形態において上記エタボン酸ロテプレドノールまたはアキシチニブは重量で約０．１〜３％占めてよく、上記ヒドロキシプロピルγ−シクロデキストリンは重量で約７０〜８５％占めていてよく、上記ヒドロキシプロピルメチルセルロースは重量で約０．５〜３％占めていてよく、上記極性側鎖を有するアミノ酸は重量で約１０〜２５％占めていてよい。
【００４７】
あるいは、上記本発明の複合製剤中、特定の実施形態では、上記少なくとも１つの水溶性安定剤が極性側鎖を有するアミノ酸または少なくとも１つの極性側鎖を有するアミノ酸を含むオリゴペプチドであり、かつシクロデキストリンおよび／またはその誘導体、少なくとも１つの水溶性高分子、ならびに極性側鎖を有するアミノ酸または少なくとも１つの極性側鎖を有するアミノ酸を含むオリゴペプチドが重量でそれぞれ約４０〜８５％、０．５〜５％、ならびに１５〜５５％占め得るという前提の下、さらに活性成分をエタボン酸ロテプレドノールまたはアキシチニブに、シクロデキストリンおよび／またはその誘導体をヒドロキシプロピルγ-シクロデキストリンに、少なくとも１つの水溶性高分子をヒドロキシプロピルメチルセルロースに、少なくとも１つの水溶性安定剤を少なくとも１つの極性側鎖を有するアミノ酸を含むオリゴペプチドに限定してよく、かつ少なくとも１つの極性側鎖を有するアミノ酸を含むオリゴペプチドにカルノシン、グルタチオンまたはロイシン-グリシン-グリシンが含まれ得る場合、この特定の実施形態において上記エタボン酸ロテプレドノールまたはアキシチニブは重量で約０．１〜３％占めていてよく、上記ヒドロキシプロピルγ−シクロデキストリンは重量で約４０〜８０％占めていてよく、上記ヒドロキシプロピルメチルセルロースは重量で約０．５〜３％占めていてよく、上記少なくとも１つの極性側鎖を有するアミノ酸を含むオリゴペプチドは重量で約１５〜５５％占めていてよい。
【００４８】
別の実施形態において、上記本発明の複合製剤中、上記少なくとも１つの水溶性安定剤はプリン誘導体であってよく、かつプリン誘導体はカフェインであってよく、また上記活性成分はエタボン酸ロテプレドノールまたはアキシチニブであってよく、上記シクロデキストリンおよび／またはその誘導体はヒドロキシプロピルγ-シクロデキストリンであってよく、かつ上記少なくとも１つの水溶性高分子はヒドロキシプロピルメチルセルロースであってよい。この実施形態のうち特定の実施形態では、上記エタボン酸ロテプレドノールまたはアキシチニブは重量で約１．５〜５％占めていてよく、上記ヒドロキシプロピルγ−シクロデキストリンは重量で約７０〜９９．５％占めていてよく、上記ヒドロキシプロピルメチルセルロースは重量で約０．１〜５％占めていてよく、上記カフェインは重量で約０．０５〜２０％占めていてよい。
【００４９】
また、本発明の複合製剤は、上記活性成分、シクロデキストリンおよび／またはその誘導体、少なくとも１つの水溶性高分子ならびに少なくとも１つの水溶性安定剤の他、複合製剤を微粒子に形成させるために界面活性剤をさらに含んでいてよい。上記本発明の複合製剤中、少なくとも１つの活性成分は重量で約０．０５〜１０％占めていてよく、シクロデキストリンおよび／またはその誘導体は重量で約４０〜９９．５％占めていてよく、少なくとも１つの水溶性高分子は重量で０．０５〜１０％占め、水溶性安定剤は重量で０．０５〜６０％占め、界面活性剤は重量で０．０５〜１０％占めるが、これらに限定はされない。
【００５０】
界面活性剤には、限定はされないが、Ｔｗｅｅｎ８０、Ｔｗｅｅｎ２０、Ｓｐａｎ８０、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ、ＤＳＰＥ−ＰＥＧの誘導体またはこれらの任意の組み合わせが含まれ得る。１実施形態において、界面活性剤はＴｗｅｅｎ８０であり得る。別の実施形態では、界面活性剤はＴｗｅｅｎ８０とＤＳＰＥ−ＰＥＧとの組み合わせであってよい。
【００５１】
上記微粒子の平均粒径は５００ｎｍ〜１００μｍ、例えば約５００ｎｍ〜８００ｎｍ、８００ｎｍ〜１０００ｎｍ、１０μｍ〜５０μｍ、５０μｍ〜１００μｍであり得るが、これらに限定はされない。
【００５２】
１実施形態において、少なくとも１つの活性成分はエタボン酸ロテプレドノールまたはアキシチニブであってよく、界面活性剤はＴｗｅｅｎ８０であってよい。この実施形態では、エタボン酸ロテプレドノールまたはアキシチニブは重量で約０．０１〜１０％占めていてよく、シクロデキストリンおよび／またはその誘導体は重量で約５０〜９０％占めていてよく、少なくとも１つの水溶性高分子は重量で０．０５〜２０％占め、水溶性安定剤は重量で０．０５〜２０％を占め、Ｔｗｅｅｎ８０は重量で０．１〜１０％を占めるが、これらに限定はされない。
【００５３】
また、本発明の複合製剤は、上記活性成分、シクロデキストリンおよび／またはその誘導体、少なくとも１つの水溶性高分子ならびに少なくとも１つの水溶性安定剤の他、溶媒をさらに含んで、上記活性成分、シクロデキストリンおよび／またはその誘導体、少なくとも１つの水溶性高分子ならびに少なくとも１つの水溶性安定剤と液体剤形を形成するようにしてもよい。この液体剤形中、上記シクロデキストリンおよび／またはその誘導体、少なくとも１つの水溶性高分子ならびに少なくとも１つの水溶性安定剤の総濃度は約５〜５５％（ｗ／ｖ）、例えば５〜１０％、１０〜２０％、２０〜２５％、３０〜３５％、３５〜４０％、４０〜４５％、４５〜５０％、５０〜５５％等であってよいが、これらに限定はされない。
【００５４】
上記溶媒には、限定はされないが、水、エタノールまたは水/エタノール混合物等が含まれ得る。
【００５５】
１実施形態において、本発明の複合製剤は液体剤形を形成することができ、かつ本発明の複合製剤は医薬製剤であり得る。上記液体剤形のタイプには、限定はされないが、経口剤形、注射剤形、点眼剤等が含まれ得る。また、上記注射剤形の例には、限定はされないが、皮下注射剤形、筋肉注射剤形、腹腔内注射剤形等が含まれ得る。１実施形態では、本発明の複合製剤の液体剤形は点眼剤である。
【００５６】
また、本発明の複合製剤は、この複合製剤の投与が必要な個体に投与され得るが、これに限定はされない。本発明の複合製剤の投薬経路は、非経口、経口、吸入噴霧（inhalation spray）または埋め込みリザーバー（implanted reservoir）による方式であってよいが、これらに限定はされない。非口径には、限定はされないが、患部への塗布、皮下（subcutaneous）、皮内（intracutaneous）、静脈内（intravenous）、筋肉内（intramuscular）、関節内（intraarticular）、動脈内（intraarterial）、滑液嚢内（intrasynovial）、胸骨内（intrasternal）、くも膜下腔内（intrathecal）、病巣内（intralesional）注射、眼内注射、点眼剤および注入技術等が含まれ得る。
【００５７】
さらに、上記個体には、限定はされないが、脊椎動物が含まれ得る。そして上記脊椎動物には、魚類、両生類、爬虫類、鳥類または哺乳類が含まれ得るが、これらに限定はされない。哺乳類の例には、限定はされないが、ヒト、オランウータン、サル、ウマ、ロバ、イヌ、ネコ、ウサギ、モルモット、ラットおよびマウスが含まれ得る。１実施形態では、個体はヒトである。
【００５８】
【実施例】
【００５９】
実施例１
【００６０】
エタボン酸ロテプレドノール（loteprednol etabonate, ＬＥ）の溶解度試験
【００６１】
実施例１−１
【００６２】
異なるアミノ酸、オリゴペプチドまたは単糖を製剤の安定剤としたときの、エタボン酸ロテプレドノール（ＬＥ）／ヒドロキシプロピルγ−シクロデキストリン（ＨＰγＣＤ）を含む製剤中の薬剤（エタボン酸ロテプレドノール）の溶解度に対する影響
【００６３】
１．方法
【００６４】
室温下、以下の表１に示された処方および下記する方法によりサンプルの調製と分析を行った。
【００６５】
ヒドロキシプロピルγ-シクロデキストリン、水溶性高分子（ヒドロキシプロピルメチルセルロース（hydroxypropyl methyl cellulose, ＨＰＭＣ（分子量：１６６７６））、および製剤の安定剤としてのアミノ酸（グルタミン（glutamine, Ｇｌｎ）、グルタミン酸（glutamic acid, Ｇｌｕ）またはヒスチジン（histidine, Ｈｉｓ）、オリゴペプチド（グルタチオン（glutathione, ＧＳＨ）、Ｌ−カルノシン（carnosine）またはロイシン（leucine）-グリシン-グリシン（Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ））を、脱イオン水３  ｍＬ中に溶解して溶液を作り、同時にオリゴペプチド（グリシン−グリシン（Ｇｌｙ−Ｇｌｙ））および単糖（マンニトール（mannitol））を製剤の安定剤とした群を陰性対照群（negative control）とした。
【００６６】
次いで、超音波水浴環境中で、上記溶液を、エタボン酸ロテプレドノール（ＬＥ）  ４ｍｇを含有するメタノール溶液（１０ｍｇ  ＬＥ／ｍＬ）にゆっくりと加え、混合物を作った。続いて、その混合物を負圧環境中で乾燥させてその中の溶媒を除去し、乾燥生成物を得た。
【００６７】
次いで、脱イオン水２ｍＬで上記乾燥生成物を再溶解して試験サンプルを形成し、さらに１Ｍ  ＮａＯＨで試験サンプル溶液をｐＨ５．５に調整した。続いて、試験サンプルを孔径サイズ０．２２μｍのフィルター（filter）でろ過し、未溶解の沈殿物を除去した。最後に、高速液体クロマトグラフィー（high performance liquid chromatography, ＨＰＬＣ）を用いて試験サンプル中のエタボン酸ロテプレドノール（LE）の含有量を分析した。
【００６８】
（表１）
2019142839.tif 000003
【００６９】
２．結果
【００７０】
各サンプルのエタボン酸ロテプレドノール（ＬＥ）の溶解度、およびエタボン酸ロテプレドノール（ＬＥ）／ＨＰγＣＤの溶解度と比較して改善した程度が下の表２に示されている。
【００７１】
（表２）
2019142839.tif 000004
Ｎ．Ａ．：検出されず
【００７２】
上の表２からわかるように、ＬＥの水溶性は極めて低く、わずか１．５μｇ／ｍＬであった。これに似て、ＬＥを水溶性高分子ＨＰＭＣまたは処方安定剤ＧＳＨのみと混合しただけでは、ＬＥの水溶液中への溶解度は依然として有効に高まらなかった。ＬＥをＨＰγＣＤと混合したときに、その水溶液中への溶解度が初めて改善され、４μｇ／ｍＬ未満から２９０μｇ／ｍＬまで高まった。
【００７３】
また、ＬＥ／ＨＰγＣＤの処方をそれぞれ水溶性高分子ＨＰＭＣまたは処方安定剤ＧＳＨとさらに混合すると、ＬＥの溶解度がＬＥ／ＨＰγＣＤの組み合わせの約１．２〜３．５倍となった。
【００７４】
さらに、ＬＥをＨＰγＣＤ、水溶性高分子ＨＰＭＣおよび処方安定剤（アミノ酸またはオリゴペプチド）と同時に混ぜると、ＬＥの溶解度がより一層高まり、例えばＬＥ／ＨＰγＣＤ／ＨＰＭＣ／ＧＳＨ処方のＬＥの溶解度はＬＥ／ＨＰγＣＤ処方の６．５倍となった。
【００７５】
さらに、多数の異なる処方の試験結果から、特定のアミノ酸およびオリゴペプチドはいずれも処方中のＬＥの溶解度を有効に高めることができており、このうちグルタミンおよびグルタミン酸（glutamic acid）（アミノ酸）ならびにカルノシンおよびグルタチオン（オリゴペプチド）を処方安定剤としたものがＬＥの溶解度を顕著に高め、ＬＥ／ＨＰγＣＤの約５．３〜６．６倍とし得ることが示された。これに対し、サンプルＬＥ／ＨＰγＣＤ／ＨＰＭＣ／マンニトールの安定性はそれほど高くなく、１時間以内に早くも沈殿した。
【００７６】
実施例１−２
【００７７】
ヒスチジン（Ｈｉｓ）を製剤の安定剤としたときの、エタボン酸ロテプレドノール（ＬＥ）／ヒドロキシプロピルγ−シクロデキストリン（ＨＰγＣＤ）を含有する製剤中の薬剤（エタボン酸ロテプレドノール）の溶解度に対する影響
【００７８】
１．方法
【００７９】
室温下、以下の表３に示された処方および下記する方法によりサンプルの調製と分析を行った。
【００８０】
ヒドロキシプロピルγ-シクロデキストリン、水溶性高分子（ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ（分子量：１６６７６））、および製剤の安定剤としてのヒスチジン（Ｈｉｓ）を二次純水（d.d water）中に共溶解して溶液を作った。
【００８１】
次いで、上記溶液を、エタボン酸ロテプレドノール（LE） を含有するメタノール溶液にゆっくりと加え、混合物を作った。続いて、その混合物をロータリーエバポレーターにかけてメタノールを完全に除去し、０．１Ｍ  ＨＣｌ水溶液でｐＨを５．５に調整して、最終的な溶液の体積を１ｍＬに固定し（足りない分は二次純水で補充）、試験サンプルを形成した。続いて、試験サンプルを孔径サイズ０．２２μｍのフィルターでろ過し、未溶解の沈殿物を除去した。最後に、高速液体クロマトグラフィーを用いて試験サンプル中のエタボン酸ロテプレドノール（ＬＥ）の含有量を分析した。
【００８２】
（表３）
2019142839.tif 000005
-：添加していない
【００８３】
２．結果
【００８４】
各サンプルのエタボン酸ロテプレドノール（ＬＥ）の溶解度、およびエタボン酸ロテプレドノール（ＬＥ）／ＨＰγＣＤの溶解度と比較して改善した程度が下の表４に示されている。
【００８５】
（表４）
2019142839.tif 000006
Ｎ．Ａ．：検出されず
【００８６】
表４からわかるように、ＬＥ／２ＨＰγＣＤ（サンプル２）の処方中、ＨＰγＣＤの単位ごとの装填できるＬＥの量の範囲は約２．０（μｇ／ｍｇ）であった。しかし、水溶性高分子ＨＰＭＣおよび処方安定剤ヒスチジン（ＬＥ／２ＨＰγＣＤ／Ｈｉｓ／ＨＰＭＣ、サンプル３）を加えると、ＨＰγＣＤの単位ごとの装填できる薬剤の量の範囲は、顕著に高められ１２．７（μｇ／ｍｇ）となった、すなわち、水溶性高分子ＨＰＭＣおよび処方安定剤ヒスチジンを加えた処方のＬＥ溶解度はサンプル２（ＬＥ／２ＨＰγＣＤ処方）の６．４倍であった。
【００８７】
実施例１−３
【００８８】
グルタチオン（ＧＳＨ）を製剤の安定剤としたときの、エタボン酸ロテプレドノール（ＬＥ）／ヒドロキシプロピルγ−シクロデキストリン（ＨＰγＣＤ）を含む製剤中の薬剤（エタボン酸ロテプレドノール）の溶解度に対する影響
【００８９】
１．方法
【００９０】
室温下、以下の表５に示された処方および下記する方法によりサンプルの調製と分析を行った。
【００９１】
ヒドロキシプロピルγ-シクロデキストリン、水溶性高分子（ヒドロキシプロピルメチルセルロース（hydroxypropyl methyl cellulose）（ＨＰＭＣ）（分子量：１６６７６））、および製剤の安定剤としてのグルタチオン（ＧＳＨ）を二次純水中に共溶解し、溶液を作った。
【００９２】
次いで、上記溶液を、エタボン酸ロテプレドノール（ＬＥ）を含有するメタノール溶液にゆっくりと加え、混合物を作った。続いて、その混合物をロータリーエバポレーターにかけてメタノールを完全に除去し、１Ｍ  ＮａＯＨ水溶液でｐＨを５．５に調整して、最終的な溶液の体積を１ｍＬに固定し（足りない分は二次純水で補充）、試験サンプルを形成した。続いて、試験サンプルを孔径サイズ０．２２μｍのフィルターでろ過し、未溶解の沈殿物を除去した。最後に、高速液体クロマトグラフィーを用いて試験サンプル中のエタボン酸ロテプレドノール（ＬＥ）の含有量を分析した。
【００９３】
（表５）
2019142839.tif 000007
-：添加していない
【００９４】
２．結果
【００９５】
各サンプルのエタボン酸ロテプレドノール（ＬＥ）の溶解度、およびエタボン酸ロテプレドノール（ＬＥ）／ＨＰγＣＤの溶解度と比較して改善した程度が下の表６に示されている。
【００９６】
（表６）
2019142839.tif 000008
Ｎ．Ａ．：検出されず
【００９７】
表６からわかるように、ＬＥ／ＨＰγＣＤ（サンプル４）の処方中、ＨＰγＣＤの単位ごとの装填できるＬＥの濃度の範囲は１．４（μｇ／ｍｇ）であった。しかし、水溶性高分子ＨＰＭＣおよび処方安定剤グルタチオン（ＧＳＨ）（サンプル５およびサンプル６）を加えると、ＨＰγＣＤの単位ごとの装填できる薬剤の濃度の範囲は顕著に高められ、５．３〜７．４（μｇ／ｍｇ）となった、すなわち、水溶性高分子ＨＰＭＣおよび処方安定剤グルタチオン（ＧＳＨ）を加えたＬＥ溶解度はサンプル４（ＬＥ／ＨＰγＣＤの処方）の約３．７〜５．２倍であった。
【００９８】
実施例１−４
【００９９】
カフェインを製剤の安定剤としたときの、エタボン酸ロテプレドノール（ＬＥ）／ヒドロキシプロピルγ−シクロデキストリン（ＨＰγＣＤ）を含む製剤中の薬剤（エタボン酸ロテプレドノール）の溶解度に対する影響
【０１００】
１．方法
【０１０１】
室温下、以下の表７に示された処方および下記する方法によりサンプルの調製と分析を行った。
【０１０２】
ヒドロキシプロピルγ−シクロデキストリン、水溶性高分子（ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ））、および製剤の安定剤としてのカフェインを二次純水中に共溶解し、溶液を作った。
【０１０３】
次いで、上記溶液を、エタボン酸ロテプレドノール（ＬＥ）を含有するメタノール溶液にゆっくりと加え、混合物を作った。続いて、その混合物をロータリーエバポレーターにかけてメタノールを完全に除去し、０．１Ｍクエン酸酸水溶液でｐＨを５．５に調整して、最終的な溶液の体積を１ｍＬに固定し（足りない分は二次純水で補充）、試験サンプルを形成した。続いて、試験サンプルを孔径サイズ０．２２μｍのフィルターでろ過し、未溶解の沈殿物を除去した。最後に、高速液体クロマトグラフィーを用いて試験サンプル中のエタボン酸ロテプレドノール（ＬＥ）の含有量を分析した。
【０１０４】
（表７）
2019142839.tif 000009
-：添加していない
【０１０５】
２．結果
【０１０６】
各サンプルのエタボン酸ロテプレドノール（ＬＥ）の溶解度、およびエタボン酸ロテプレドノール（ＬＥ）／ＨＰγＣＤの溶解度と比較して改善した程度が下の表８に示されている。
【０１０７】
（表８）
2019142839.tif 000010
Ｎ．Ａ．：検出されず
【０１０８】
表８からわかるように、異なる配合比のＬＥ／ＨＰγＣＤ処方（サンプル２、３および４）におけるＨＰγＣＤの単位ごとの装填できるＬＥの濃度の範囲は１．４〜２．０（μｇ／ｍｇ）であった。しかし、水溶性高分子ＨＰＭＣおよび処方安定剤カフェイン（サンプル５、６、７および９）を加えると、ＨＰγＣＤの単位ごとの装填できる薬剤の濃度の範囲は顕著に高められ１２．７〜１６．４（μｇ／ｍｇ）となった、すなわち、水溶性高分子ＨＰＭＣおよび処方安定剤カフェインの処方を加えたＬＥの溶解度はサンプル４（ＬＥ／ＨＰγＣＤの処方）の約６．４〜８．２倍となった。
【０１０９】
実施例２
【０１１０】
アキシチニブ（axitinib）の溶解度試験
【０１１１】
カフェインを製剤の安定剤としたときの、アキシチニブ／ヒドロキシプロピルγ−シクロデキストリン（ＨＰγＣＤ）を含む製剤中のアキシチニブの溶解度に対する影響
【０１１２】
１．方法
【０１１３】
室温下、以下の表９に示された処方および下記する方法によりサンプルの調製と分析を行った。
【０１１４】
ヒドロキシプロピルγ-シクロデキストリン、水溶性高分子（ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ））、および製剤の安定剤としてのカフェインを脱イオン水３ｍＬ中に溶解し、溶液を作った。
【０１１５】
次いで、超音波水浴環境中で、上記溶液を、アキシチニブ４．０５ｍｇを含む酢酸溶液（９ｍｇアキシチニブ／ｍＬ）にゆっくりと加え、混合物を作った。続いて、その混合物を凍結乾燥してその中の溶媒を除去し、乾燥生成物を得た。
【０１１６】
次いで、脱イオン水１ｍＬで上記乾燥生成物を再溶解し、試験サンプルを形成し、さらに１Ｍ  ＮａＯＨで試験サンプル溶液をｐＨ４．３に調整した。続いて、試験サンプルを孔径サイズ０．２２μｍのフィルターでろ過し、未溶解の沈殿物を除去した。最後に、高速液体クロマトグラフィーを用いて試験サンプル中のアキシチニブの含有量を分析した。
【０１１７】
（表９）
2019142839.tif 000011
-：添加していない
【０１１８】
２．結果
【０１１９】
各サンプルのアキシチニブの溶解度、およびアキシチニブ／ＨＰγＣＤの溶解度と比較して改善した程度が下の表１０に示されている。
【０１２０】
（表１０）
2019142839.tif 000012
Ｎ．Ａ．：検出されず
ＬＯＱ：定量下限（limit of quantification）
【０１２１】
上の表１０からわかるように、アキシチニブ（サンプル１）の水溶性は極めて低く、分析可能な最小薬剤含有量の下限（４μｇ／ｍＬ）を下回っている。サンプル２の試験結果から、アキシチニブとＨＰγＣＤとを混合すると、溶液中のアキシチニブ含有量を有効に高めることができ、１０５．５５μｇ／ｍＬまでになることがわかった。また、サンプル５および６の試験結果に示されるように、ＨＰγＣＤを水溶性高分子ＨＰＭＣまたは処方安定剤カフェインとそれぞれ組み合わせると、アキシチニブの溶解度を、アキシチニブ／ＨＰγＣＤ処方（サンプル２）の２から３．６倍まで高めることができた。また、アキシチニブ／ＨＰγＣＤ処方を水溶性高分子ＨＰＭＣおよび処方安定剤カフェインと同時に組み合わせる（サンプル８）と、アキシチニブのの溶解量を大幅に高め１８３３．５３μｇ／ｍＬまでにすることができ、アキシチニブ／ＨＰγＣＤ処方の（サンプル２）の約１７．４倍となった。
【０１２２】
実施例３
【０１２３】
エタボン酸ロテプレドノール／シクロデキストリン／グルタチオン錯体化（complexation）の分子動態シミュレーション
【０１２４】
複合体の結合エネルギーと構造を正確にシミュレートするため、先ずキャリア、薬剤、不安定化剤および安定剤を含む各成分の構造を最適化した。水中における成分の分子の構造最適化（PCMによりモデル構築）は、いずれも台湾高性能計算国立センターのＰＣクラスタ（PC cluster）のＧａｕｓｓｉａｎ １６プログラム（Gaussian 16 suite of programs）中の勾配補正混成密度汎関数法（gradient-corrected hybrid density functional theory, DFT） （Frisch, M. J., et al.）を用いて行った。Ｂ３ＬＹＰ密度汎関数、Ｂｅｃｋｅの３パラメータの交換汎関数（D. J. Gaussian 16, Wallingford, CT, 2016）、およびＬｅｅ−Ｙａｎｇ−Ｐａｒｒ勾配補正相関関数（Becke, A. D., Density-Functional Thermochemistry. III. The Role of Exact Exchange. J. Chem. Phys. 1993, 98, 5648.）を用いた。中サイズの６−３１Ｇ（ｄ，ｐ）基底系（Lee, C.; Yang, W.; Parr, R. G., Development of the Colle-Salvetti Correlation-Energy Formula Into a Functional of the Electron Density. Physical Review B 1988, 37, 785.）を用い、振動周波数の計算により、算出した安定構造を調べた。最適化した構造を以下のドッキング（docking）研究に用いた。
【０１２５】
１．ヒドロキシプロピルγ-シクロデキストリン（ＨＰγＣＤ）の構造
【０１２６】
キャリアとしてのヒドロキシプロピルγ−シクロデキストリン（ＨＰγＣＤ）は２つの異なる構造を有している。ＨＰγＣＤのヒドロキシプロピルが凝集して、ＨＰγＣＤの一次面（primary face）を閉じる。ＨＰγＣＤのもう一つの構造は、そのヒドロキシプロピルが水中に分散して、ＨＰγＣＤの一次面を開放する。図１は、最適化されたＨＰγＣＤの構造を示している。閉じた形式のＨＰγＣＤは、そのヒドロキシプロピルにより形成される水素結合ネットワークを有し（図１の（ａ））、対応する開放形式に比して相対的に安定し、３４．７ｋｃａｌ／ｍｏｌを有する。よって、閉じた形式のＨＰγＣＤは水分子を自由に通過させない（図１の（ｃ）参照）。これに対し、水分子は開放形式のＨＰγＣＤを容易に通過することができる（図１の（ｄ）参照）。このため、以下の研究ではすべて閉じた形式のＨＰγＣＤを採用している。
【０１２７】
２．包接複合体のドッキングシミュレーション（Docking Simulations of Inclusion Complexes）
【０１２８】
ＡｕｔｏＤｏｃｋ  Ｖｉｎａ  １．１２５を用いて包接複合体の安定構造をスクリーニングした。表１１に、［ＬＥ＠ＨＰγＣＤ］包接複合体の上位５個のドッキング結果が示されている。ドッキングシミュレーションに用いたＬＥおよびＨＰγＣＤの初期構造は上述のＤＦＴ計算から得られたものである。このうち、［ＬＥ＠ＨＰγＣＤ］包接複合体の上位５個のドッキング結果は、類似する−８．９ｋｃａｌ／ｍｏｌの結合親和力があることが観察でき、このことは、ＬＥが、対称なＨＰγＣＤとは特定の相互作用を生じないことを示している。［ＬＥ＠ＨＰγＣＤ］包接複合体の上位１のドッキング構造は図２に示されるとおりである。［ＬＥ＠ＨＰγＣＤ］包接複合体構造において、ＬＥの極性部分はＨＰγＣＤの二次面外に位置し、疎水性部分はＨＰγＣＤのキャビティ内に位置している。
【０１２９】
（表１１）［ＬＥ＠ＨＰγＣＤ］包接複合体の上位５個のドッキング結果
2019142839.tif 000013
【０１３０】
表１２には、ＧＳＨ−［ＬＥ＠ＨＰγＣＤ］包接複合体の上位５個のドッキング結果が示されている。グルタチオン（ＧＳＨ）はＨＰγＣＤの二次面に位置している。ＧＳＨ−［ＬＥ＠ＨＰγＣＤ］包接複合体の上位１のドッキング結果は図３に示されるとおりである。この構造において、ＧＳＨはＬＥが直接水分子と相互作用するのを防止できている。
【０１３１】
（表１２）ＧＳＨ−［ＬＥ＠ＨＰγＣＤ］包接複合体の上位５個のドッキング結果
2019142839.tif 000014
【０１３２】
表１３にはマンニトール−［ＬＥ＠ＨＰγＣＤ］包接複合体の上位５個のドッキング結果が示されている。陰性対照群（negative control）としての高度水溶性マンニトールはＨＰγＣＤの一次面に位置している。マンニトール−［ＬＥ＠ＨＰγＣＤ］包接複合体の上位１のドッキング構造は表４に示されるとおりである。この構造において、極性マンニトールはＨＰγＣＤのヒドロキシプロピルと水素結合を形成することができ、それはヒドロキシプロピルの水素結合ネットワークを部分的に破壊し得る。
【０１３３】
（表１３）マンニトール−［ＬＥ＠ＨＰγＣＤ］包接複合体の上位５個のドッキング結果
2019142839.tif 000015
【０１３４】
表１４には［アキシチニブ＠ＨＰγＣＤ］包接複合体の上位５個のドッキング結果が示されている。ドッキングシミュレーションに用いたアキシチニブおよびＨＰγＣＤの初期構造は、上述したＤＦＴ計算から得られたものである。このうち、［アキシチニブ＠ＨＰγＣＤ］包接複合体の上位５個のドッキング結果は、類似する−８．６ｋｃａｌ／ｍｏｌの結合親和力があることが観察でき、このことは、アキシチニブが、対称なＨＰγＣＤとは特定の相互作用を生じないことを示している。［アキシチニブ＠ＨＰγＣＤ］包接複合体の上位１のドッキング構造は図５に示されるとおりである。［アキシチニブ＠ＨＰγＣＤ］包接複合体構造において、アキシチニブの極性部分はＨＰγＣＤの一次面外に位置し、疎水性部分はＨＰγＣＤのキャビティ内に位置している。
【０１３５】
（表１４）［アキシチニブ＠ＨＰγＣＤ］包接複合体の上位５個のドッキング結果
2019142839.tif 000016
【０１３６】
表１５にはＧＳＨ−［アキシチニブ＠ＨＰγＣＤ］包接複合体の上位５個のドッキング結果が示されている。グルタチオン（ＧＳＨ）はＨＰγＣＤの二次面上に位置している。ＧＳＨ−［アキシチニブ＠ＨＰγＣＤ］包接複合体の上位１のドッキング構造は図６に示すとおりである。この構造において、安定剤（ＧＳＨ）はアキシチニブが直接水分子と相互作用するのを防ぐことができる。
【０１３７】
（表１５）ＧＳＨ−［アキシチニブ＠ＨＰγＣＤ］包接複合体の上位５個のドッキング結果
2019142839.tif 000017
【０１３８】
表１６にはマンニトール−［アキシチニブ＠ＨＰγＣＤ］包接複合体の上位５個のドッキング結果が示されている。マンニトールはＨＰγＣＤの二次面に位置している。マンニトール−［アキシチニブ＠ＨＰγＣＤ］包接複合体の上位１のドッキング構造は図７に示すとおりである。
【０１３９】
（表１６）マンニトール-［アキシチニブ＠ＨＰγＣＤ］包接複合体の上位５個のドッキング結果
2019142839.tif 000018
【０１４０】
図８は、ヒドロキシプロピルメチルセルロース−ＧＳＨ−［ＬＥ＠ＨＰγＣＤ］およびヒドロキシプロピルメチルセルロース−ＧＳＨ−［アキシチニブ＠ＨＰγＣＤ］コンジュゲート（conjugates）の考えられる構造を説明している。ＨＰＭＣと包接複合体との間の絡み合いは［薬剤＠ＨＰγＣＤ］包接複合体を安定させることができる。
【０１４１】
３．包接複合体の結合エネルギー（Binding Energy）
【０１４２】
基底関数重なり誤差（basis set superposition error ,  ＢＳＳＥ）補正により複合体の結合エネルギーを計算した。ドッキング計算からの複合体の１個目の構造が、Ｂ３ＬＹＰ／６−３１Ｇ（ｄ）の方法によりさらに構造最適化された初期構造として用いられる。最適化複合体の振動周波数をさらに計算して、それが停留点（stationary point）であるかを検証した。最適化された複合体の全ての正の振動周波数を得た後、複合体の結合能エネルギー（ΔＥ）を下記の式により計算した。
［数１］
ΔＥ＝Ｅ複合体−（Ｅリガンド＋ＥＨＰγＣＤ）
【０１４３】
表１７には複合体の結合エネルギーが示されている。複合体が目標に達したとき、［薬剤＠ＨＰγＣＤ］複合体の比較的小さい結合エネルギー（−５．７８ｋｃａｌ／ｍｏｌ）は、薬剤を容易に放出させその活性を機能させるようにする。興味深いのは、マンニトールに比して、ＧＳＨはより高い結合エネルギーを備えるという点である。豊富なＨ−結合ドナー（donor）とマンニトールアクセプター（acceptor）は、マンニトールに高度水溶性を持たせる（２５℃のとき１．１９ｍｏｌ／Ｌ）。ＧＳＨが２５℃のときの水溶性はわずか０．９５ｍｏｌ／Ｌである。
【０１４４】
表１８には、一次面および二次面にそれぞれ位置するＧＨＳを有するＧＳＨ−［アキシチニブ＠ＨＰγＣＤ］構造の相対エネルギー（Ｂ３ＬＹＰ／６−３１Ｇ（ｄ）レベルで計算した）が示されている。表１８からわかるように、二次面に位置するＧＨＳを有するＧＳＨ−［アキシチニブ＠ＨＰγＣＤ］構造は、一次面に位置するＧＨＳを有するＧＳＨ−［アキシチニブ＠ＨＰγＣＤ］構造に比べ、９ｋｃａｌ／ｍｏｌ安定している。図９Ａおよび図９ＢはそれぞれＧＳＨ−［ＬＥ  ＠ＨＰγＣＤ］およびＧＳＨ−［アキシチニブ＠ＨＰγＣＤ］包接複合体の３Ｄ構造を示しており、ＧＳＨおよびＨＰγＣＤの二次面の間のＨ−結合の相互作用が強調されている。
【０１４５】
（表１７）Ｂ３ＬＹＰ／６−３１Ｇ（ｄ）レベルで計算した包接複合体の結合エネルギー（ｋｃａｌ／ｍｏｌ）
2019142839.tif 000019
【０１４６】
（表１８）Ｂ３ＬＹＰ／６−３１Ｇ（ｄ）レベルで計算したＧＨＳを有する一次面および二次面におけるＧＳＨ−［アキシチニブ＠ＨＰγＣＤ］構造の相対エネルギー（ｋｃａｌ／ｍｏｌ）
2019142839.tif 000020
【０１４７】
実施例４
【０１４８】
動物試験
【０１４９】
実施例４−１
【０１５０】
エタボン酸ロテプレドノール（LE）の曝露量測定
【０１５１】
１．サンプル調製
【０１５２】
室温下、以下の表１９に示された処方によりサンプルを調製した。サンプル調製の方法は前述の実施例１−４を参照にできる。本実施例のサンプル２にＴｗｅｅｎ  ８０をさらに添加して、サンプルを凝集させ微粒子に形成した。形成された微粒子の平均粒径は約５００ｎｍ〜１００μｍであった。
【０１５３】
（表１９）
2019142839.tif 000021
−：添加していない
【０１５４】
２．曝露量測定方法
【０１５５】
実験の前に、体重約２〜３ｋｇの雄のニュージーランドシロウサギ（male New Zealand rabbit）の重量をはかり記録した。シロウサギを保定器に入れ、状態が安定した後、下眼瞼を引いて結膜嚢を露出させてから、ピペットマン（pipetman）で点眼処方３５μＬを吸い上げて、シロウサギの左右の眼の結膜嚢にそれぞれ点眼した。次いで、眼瞼を閉じて軽く押さえ、眼球表面全体が点眼液で潤されるようにした。
【０１５６】
投薬の０．５、１、３時間後に、ＣＯ２でシロウサギを犠牲死させた。次いで、先ずＰＢＳ溶液で左右の眼球を洗浄してから、左右の眼球を取り出した。左右の眼球を取り出した後、その取り出したシロウサギの眼球を再度ＰＢＳ溶液で洗浄し、無塵紙で余分なＰＢＳ溶液をふき取った。
【０１５７】
２５Ｇの注射器で角膜の後方を刺入して房水（aqueous humor, ＡＨ）を吸い取り、次いでそれを１．５  ｍＬの遠心管に入れた。続いて、眼球組織と房水を含む遠心管を液体窒素中に約２分入れて急速に冷凍した後、−８０℃の冷凍機に入れて後続のサンプルの薬剤含有分析に供した。房水サンプルまたは濃度の異なる薬剤標準品を２０μＬ取り、１．５ｍＬ遠心管中にそれぞれ入れた。各遠心管に１８０μＬの０．１％  ＴＦＡ（Trifluoroacetic acid）含有ＡＣＮ（acetonitrile）を加え、均一に混合した。遠心管を遠心分離機に入れて回転速度１５０００ｒｐｍで１０分遠心分離を行った。遠心分離後のサンプルに対し、液体クロマトグラフィー・タンデム質量分析（ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）を用いて房水サンプル中の薬剤濃度定量分析（ＬＬＯＱ：  ０．１  ｎｇ／ｍＬ）を行うと共に、薬物動態パラメータ（最高血中薬剤濃度に達するのにかかった時間Ｔｍａｘ、最高血中薬剤濃度Ｃｍａｘ、血中薬剤濃度−時間曲線下面積ＡＵＣ （Area under curve）等）を計算し、処方薬剤の角膜透過を増加させる能力を評価した。
【０１５８】
３．結果
【０１５９】
２−１  エタボン酸ロテプレドノール（ＬＥ）の曝露量測定
【０１６０】
前述した測定方法を用い、シロウサギに本発明の処方ＨＰＣ８Ｃ１５ＬＨ、ＨＰＣ８Ｃ１５ＬＨ−ＴＷ８０およびＬｏｔｅｍａｘ（エタボン酸ロテプレドノール（ＬＥ）の市販品）（Bausch & Lomb, Inc.，）をそれぞれ投与した。結果は表２０に示すとおりである。
【０１６１】
（表２０）
2019142839.tif 000022
【０１６２】
表２０からわかるように、本発明の処方は薬剤の前眼房に対する浸透能力を高めることができ、かつ房水中における薬剤のＡＵＣを１０倍以上高めることができる。
【０１６３】
実施例４−２
【０１６４】
アキシチニブ曝露量測定
【０１６５】
１．サンプル調製
【０１６６】
室温下、以下の表２１に示された処方でサンプルを調製した。サンプルの調製方法は前述の実施例２を参照にすることができる。
【０１６７】
（表２１）
2019142839.tif 000023
【０１６８】
２．曝露量測定方法
【０１６９】
前述の実施例４−１において記載した曝露測定方法を用い、シロウサギに本発明の処方ＨＣ８Ａ溶液およびアキシチニブ−ＭＰＰ（粘液浸透性粒子（mucus penetrating particle, ＭＭＰ））（kala pharmaceuticals）をそれぞれ投与した。結果が表２２および図１０に示されている。
【０１７０】
（表２２）
2019142839.tif 000024
【０１７１】
表２２および図１０からわかるように、本発明の処方は薬剤を有効に後眼房に届けることができ、よって眼内後方の疾病または病変、例えば黄斑修飾の治療に効果的に用いることができる。
【０１７２】
実施例４−３
【０１７３】
アジュバンド誘発慢性ブドウ膜炎モデル（Adjuvant induced chronic uveitis model,  ＡＩＵ model）
【０１７４】
１．サンプル調製
【０１７５】
室温下、以下の表２０に示された処方によりサンプルを調製した。サンプル調製の方法は前述の実施例１−２を参照にできる。本実施例のサンプルにＴｗｅｅｎ  ８０をさらに添加し、サンプルを凝集させて微粒子に形成した。形成された微粒子の平均粒径は約５００ｎｍ〜１００μｍであった。
【０１７６】
（表２３）
2019142839.tif 000025
【０１７７】
２．実験方法
【０１７８】
実験動物：ニュージーランドシロウサギ（New Zealand White （ＮＺＷ） rabbits）、オス、２〜２．５ｋｇ。
【０１７９】
実験を始める前に、体重で実験動物をランダムにグループ分けし、各グループの平均体重および体重分布傾向が近くなるようにした。
【０１８０】
図１１に示される時間経過に従って、アジュバンド誘発慢性ブドウ膜炎モデル試験を行った。
【０１８１】
０日目（Ｄ０）に、筋肉注射（Intramuscular injection, IM）により麻酔剤（Zoletil 50:40mg/kg+ xylazine: 10 mg/kg）で実験動物を麻酔し、３０Ｇマイクロシリンジで完全フロイントアジュバンド（Freund’s Complete Adjuvant, ＣＦＡ）１０μｌを前房注射（Anterior chamber injection）の方式で両眼の眼球内にそれぞれ投与した。
【０１８２】
次いで、０日目から試験薬剤の投与を始めた。試験物質を点眼剤の方式で両眼にそれぞれ１日３回、１回ごとの投与体積を３５μＬ／眼とし、１０日連続で投与した。
【０１８３】
２日目（Ｄ２）、４日目（Ｄ４）および１０日目（Ｄ１０）に細隙灯で実験動物の両眼を観察し、以下の表２４、２５および２６に示される採点基準に基づいて結膜充血（conjunctival congestion）の程度、前房フレア（anterior chamber flare）の程度およびブドウ膜炎の状態に対して採点およびグレード分けを行い、眼内の炎症状態を評価した。
【０１８４】
次いで、１０日目（Ｄ１０）に過剰量のＣＯ２ガスで実験動物を犠牲死させ、眼房水を取り、炎症細胞浸潤カウント、タンパク産生およびＰＧＥ２産生分析を行った。
【０１８５】
（表２４）結膜充血程度の採点
2019142839.tif 000026
Bellot JL et al., 1996
【０１８６】
（表２５）前房フレアの程度の採点
2019142839.tif 000027
THE STANDARDIZATION OF UVEITIS NOMENCLATURE （SUN） WORKING GROUP, 2005
【０１８７】
（表２６）ブドウ膜炎の状況の評点
2019142839.tif 000028
Hoekzema R et al., 1991
【０１８８】
３．結果
【０１８９】
前述の方法を用い、キャリア、０．１％リン酸デキサメタゾンナトリウム（dexamethasone sodium phosphate）、本発明の処方０．１７％  ＨＰＣ８Ｈ８０ＬＨ／ＴＷ−ＰＤ（エタボン酸ロテプレドノール濃度：１．７ｍｇ／ｍＬ）をシロウサギにそれぞれ投与した。結果は図１２および図１３Ａから１３Ｃに示すとおりである。
【０１９０】
図１２および図１３Ａから１３Ｃからわかるように、本発明の処方は結膜充血、前房フレアおよびブドウ膜炎を有効に改善させることができる。
【０１９１】
本発明を好ましい実施形態により以上のように開示したが、これらは本発明を限定するものではなく、当業者であれば、本発明の精神および範囲を逸脱することなく、いくつかの変更および修飾を加えることができ、よって本発明の保護範囲は、後述の特許請求の範囲で定義されたものが基準となる。
【図１】
2019142839.tif 000029
【図２】
2019142839.tif 000030
【図３】
2019142839.tif 000031
【図４】
2019142839.tif 000032
【図５】
2019142839.tif 000033
【図６】
2019142839.tif 000034
【図７】
2019142839.tif 000035
【図８】
2019142839.tif 000036
【図９Ａ】
2019142839.tif 000037
【図９Ｂ】
2019142839.tif 000038
【図１０】
2019142839.tif 000039
【図１１】
2019142839.tif 000040
【図１２】
2019142839.tif 000041
【図１３Ａ】
2019142839.tif 000042
【図１３Ｂ】
2019142839.tif 000043
【図１３Ｃ】
2019142839.tif 000044
【外国語明細書】
2019142839000001.pdf