(57)【要約】      （修正有）【課題】臨床診断薬として使用される抗体などの活性を維持するために有用な、化学合成による高性能のタンパク安定化剤の提供。【解決手段】下記式で表される繰り返し単位などからなる親水性繰り返し単位と、疎水性繰り返し単位を有する共重合体を含有する、タンパク安定化剤。2019142787.tif 000036〔式（１）中、Ｒ1は、水素原子又はメチル基を示し、Ｒ２及びＲ３は、それぞれ独立して、水素原子、または炭素数１〜６のアルキル基またはヒドロキシアルキル基を示す。〕【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（１）、式（２）、式（３）、式（４）、および式（５）で表される繰り返し単位から選ばれる少なくとも１つの繰り返し単位からなる親水性繰り返し単位（Ａ）と、下記式（６）および下記式（７）で表される繰り返し単位から選ばれる少なくとも１つの繰り返し単位からなる疎水性繰り返し単位（Ｂ）を有する共重合体を含有する、タンパク安定化剤。
【化１】
2019142787.tif 000029
〔式（１）中、
Ｒ1は、水素原子又はメチル基を示し、
Ｒ２及びＲ３は、それぞれ独立して、水素原子、または炭素数１〜６のアルキル基またはヒドロキシアルキル基を示す。〕
【化２】
2019142787.tif 000030
〔式（２）中、
Ｒ４は、水素原子又はメチル基を示し、
Ｒ５及びＲ６は、それぞれ独立して、水素原子、または炭素数１〜６のアルキル基またはヒドロキシアルキル基を示す。〕
【化３】
2019142787.tif 000031
〔式（３）中、
Ｒ７は、水素原子又はメチル基を示し、
Ｒ８は、−Ｏ−、＊−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−、＊−ＮＲ１１−（Ｃ＝Ｏ）−（Ｒ１１は、水素原子又は炭素数１〜１０の有機基を示し、＊は、式（２）中のＲ８が結合している炭素原子と結合する位置を示す）又はフェニレン基を示す。
Ｒ９は、炭素数２〜４のアルカンジイル基を示し、ｎは、平均値で２〜１００を示す。
Ｒ１０は、水素原子又は炭素数１〜４のアルキル基を示す。〕
【化４】
2019142787.tif 000032
〔式（４）中、
Ｒ１２は、水素原子又はメチル基を示し、
Ｒ１３は、炭素数２〜４のアルカンジイル基を示し、
Ｒ１４は、炭素数１〜１０のアルカンジイル基を示し、
Ｒ１５、Ｒ１６及びＲ１７は、それぞれ独立して、水素原子又は炭素数１〜８の炭化水素基を示し、ｍは、平均値で１〜１０を示す。〕
【化５】
2019142787.tif 000033
〔式（５）中、
Ｘは、−（Ｃ＝Ｏ）Ｏ-、−（Ｏ＝Ｓ＝Ｏ）Ｏ-、−Ｏ（Ｏ＝Ｓ＝Ｏ）Ｏ-、−（Ｓ＝Ｏ）Ｏ-、−Ｏ（Ｓ＝Ｏ）Ｏ-、−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＲ２３）Ｏ-、−ＯＰ（＝Ｏ）（Ｒ２３）Ｏ-、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ２３）Ｏ-、又は−Ｐ（＝Ｏ）（Ｒ２３）Ｏ-を示し（Ｒ２３は炭素数１〜３のアルキル基を示す）、
Ｒ１８は、水素原子又はメチル基を示し、
Ｒ１９及びＲ２２は、それぞれ独立して、炭素数１〜１０の２価の有機基を示し、
Ｒ２０及びＲ２１は、それぞれ独立して、炭素数１〜１０の炭化水素基を示す。〕
【化６】
2019142787.tif 000034
〔式（６）中、
Ｒ２４は、水素原子又はメチル基を示し、
Ｒ２５は、−Ｏ−、＊−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−、＊−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＲ２７−、＊−ＮＲ２７−（Ｃ＝Ｏ）−（Ｒ２７は、水素原子又は炭素数１〜１０の有機基を示し、＊は、式（７）中のＲ２５が結合している炭素原子と結合する位置を示す）又はフェニレン基を示し、
Ｒ２６は、炭化水素基を示す。〕
【化７】
2019142787.tif 000035
〔式（７）中、
Ｒ２８は、水素原子又はメチル基を示し、
Ｙは、ホルミル基又はケト基を有する有機基を示す。〕
【請求項２】
前記共重合体の重量平均分子量が３，０００〜１０００，０００である、請求項１に記載のタンパク安定化剤。
【請求項３】
前記共重合体が水溶性である、請求項１〜２のいずれか１項に記載のタンパク安定化剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、例えば、臨床診断薬、臨床診断装置、バイオチップなどに用いられる各種タ
ンパクの安定化剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
臨床診断薬として使用される標識抗体、標識抗原、酵素、一次抗体、一次抗原などのタンパクは、溶液状態でその活性を維持するために、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を添加することが一般に行われる。しかしながら、ＢＳＡを添加しても、なお、タンパクの活性低下が生じ、さらに、生体由来の安定化剤を用いる場合、ＢＳＥに代表される生物汚染の問題があることなどから、化学合成による高性能のタンパク安定化剤の開発が望まれている。
【０００３】
化学合成によるタンパク安定化剤としては、特開平１０−４５７９４号公報にホスホリルコリンを有する重合体、特開平１０−２７９５９４号公報にトリアシルグリセリンに代表される脂肪酸エステル膜、特開平１１−６９９７３号公報にグリセロールに代表されるポリオール、特開平７−２５５４７７号公報にグリコシド誘導体をモノマー単位として含む重合体が提案されているが、これらの安定化剤のタンパク活性維持効果は十分でなかった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開平１０−４５７９４号公報
【特許文献２】特開平１０−２７９５９４号公報
【特許文献３】特開平１１−６９９７３号公報
【特許文献４】特開平７−２５５４７７号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明の目的は、臨床診断薬として使用される抗体などの活性を維持するために有用な、化学合成による高性能のタンパク安定化剤を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、この課題を解決するために、特定の組成の共重合体が高いタンパク安定化効果を有することを見いだし、本発明を完成した。
【０００７】
本発明の一態様に係るタンパク安定化剤は、下記式（１）、式（２）、式（３）、式（４）、および式（５）で表される繰り返し単位から選ばれる少なくとも１つの繰り返し単位からなる親水性繰り返し単位（Ａ）と、下記式（６）および下記式（７）で表される繰り返し単位から選ばれる少なくとも１つの繰り返し単位からなる疎水性繰り返し単位（Ｂ）を有する共重合体を含有する。
【０００８】
【化１】
2019142787.tif 000002
【０００９】
〔式（１）中、
Ｒ1は、水素原子又はメチル基を示し、
Ｒ２及びＲ３は、それぞれ独立して、水素原子、または炭素数１〜６のアルキル基またはヒドロキシアルキル基を示す。〕
【００１０】
【化２】
2019142787.tif 000003
【００１１】
〔式（２）中、
Ｒ４は、水素原子又はメチル基を示し、
Ｒ５及びＲ６は、それぞれ独立して、水素原子、または炭素数１〜６のアルキル基またはヒドロキシアルキル基を示す。〕
【００１２】
【化３】
2019142787.tif 000004
【００１３】
〔式（３）中、
Ｒ７は、水素原子又はメチル基を示し、
Ｒ８は、−Ｏ−、＊−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−、＊−ＮＲ１１−（Ｃ＝Ｏ）−（Ｒ１１は、水素原子又は炭素数１〜１０の有機基を示し、＊は、式（２）中のＲ８が結合している炭素原子と結合する位置を示す）又はフェニレン基を示す。
Ｒ９は、炭素数２〜４のアルカンジイル基を示し、ｎは、平均値で２〜１００を示す。
Ｒ１０は、水素原子又は炭素数１〜４のアルキル基を示す。〕
【００１４】
【化４】
2019142787.tif 000005
【００１５】
〔式（４）中、
Ｒ１２は、水素原子又はメチル基を示し、
Ｒ１３は、炭素数２〜４のアルカンジイル基を示し、
Ｒ１４は、炭素数１〜１０のアルカンジイル基を示し、
Ｒ１５、Ｒ１６及びＲ１７は、それぞれ独立して、水素原子又は炭素数１〜８の炭化水素基を示し、ｍは、平均値で１〜１０を示す。〕
【００１６】
【化５】
2019142787.tif 000006
【００１７】
〔式（５）中、
Ｘは、−（Ｃ＝Ｏ）Ｏ-、−（Ｏ＝Ｓ＝Ｏ）Ｏ-、−Ｏ（Ｏ＝Ｓ＝Ｏ）Ｏ-、−（Ｓ＝Ｏ）Ｏ-、−Ｏ（Ｓ＝Ｏ）Ｏ-、−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＲ２３）Ｏ-、−ＯＰ（＝Ｏ）（Ｒ２３）Ｏ-、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ２３）Ｏ-、又は−Ｐ（＝Ｏ）（Ｒ２３）Ｏ-を示し（Ｒ２３は炭素数１〜３のアルキル基を示す）、
Ｒ１８は、水素原子又はメチル基を示し、
Ｒ１９及びＲ２２は、それぞれ独立して、炭素数１〜１０の２価の有機基を示し、
Ｒ２０及びＲ２１は、それぞれ独立して、炭素数１〜１０の炭化水素基を示す。〕
【００１８】
【化６】
2019142787.tif 000007
【００１９】
〔式（６）中、
Ｒ２４は、水素原子又はメチル基を示し、
Ｒ２５は、−Ｏ−、＊−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−、＊−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＲ２７−、＊−ＮＲ２７−（Ｃ＝Ｏ）−（Ｒ２７は、水素原子又は炭素数１〜１０の有機基を示し、＊は、式（７）中のＲ２５が結合している炭素原子と結合する位置を示す）又はフェニレン基を示し、
Ｒ２６は、炭化水素基を示す。〕
【００２０】
【化７】
2019142787.tif 000008
【００２１】
〔式（７）中、
Ｒ２８は、水素原子又はメチル基を示し、
Ｙは、ホルミル基又はケト基を有する有機基を示す。〕
上記タンパク安定化剤において、前記共重合体の重量平均分子量は３，０００〜１０００，０００であることが好ましい。
【００２２】
上記タンパク安定化剤において、前記共重合体が水溶性であることが好ましい。
【発明の効果】
【００２３】
上記タンパク安定化剤は、下記式（１）、下記式（２）、下記式（３）、下記式（４）、および下記式（５）で表される繰り返し単位から選ばれる少なくとも１つの繰り返し単位からなる親水性繰り返し単位（Ａ）と、下記式（６）および下記式（７）で表される繰り返し単位から選ばれる少なくとも１つの繰り返し単位からなる疎水性繰り返し単位（Ｂ）を有する共重合体を含有することにより、高いタンパク安定化効果を有する。
【００２４】
【化８】
2019142787.tif 000009
【００２５】
〔式（１）中、
Ｒ1は、水素原子又はメチル基を示し、
Ｒ２及びＲ３は、それぞれ独立して、水素原子、または炭素数１〜６のアルキル基またはヒドロキシアルキル基を示す。〕
【００２６】
【化９】
2019142787.tif 000010
【００２７】
〔式（２）中、
Ｒ４は、水素原子又はメチル基を示し、
Ｒ５及びＲ６は、それぞれ独立して、水素原子、または炭素数１〜６のアルキル基またはヒドロキシアルキル基を示す。〕
【００２８】
【化１０】
2019142787.tif 000011
【００２９】
〔式（３）中、
Ｒ７は、水素原子又はメチル基を示し、
Ｒ８は、−Ｏ−、＊−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−、＊−ＮＲ１１−（Ｃ＝Ｏ）−（Ｒ１１は、水素原子又は炭素数１〜１０の有機基を示し、＊は、式（２）中のＲ８が結合している炭素原子と結合する位置を示す）又はフェニレン基を示す。
Ｒ９は、炭素数２〜４のアルカンジイル基を示し、ｎは、平均値で２〜１００を示す。
Ｒ１０は、水素原子又は炭素数１〜４のアルキル基を示す。〕
【００３０】
【化１１】
2019142787.tif 000012
【００３１】
〔式（４）中、
Ｒ１２は、水素原子又はメチル基を示し、
Ｒ１３は、炭素数２〜４のアルカンジイル基を示し、
Ｒ１４は、炭素数１〜１０のアルカンジイル基を示し、
Ｒ１５、Ｒ１６及びＲ１７は、それぞれ独立して、水素原子又は炭素数１〜８の炭化水素基を示し、ｍは、平均値で１〜１０を示す。〕
【００３２】
【化１２】
2019142787.tif 000013
【００３３】
〔式（５）中、
Ｘは、−（Ｃ＝Ｏ）Ｏ-、−（Ｏ＝Ｓ＝Ｏ）Ｏ-、−Ｏ（Ｏ＝Ｓ＝Ｏ）Ｏ-、−（Ｓ＝Ｏ）Ｏ-、−Ｏ（Ｓ＝Ｏ）Ｏ-、−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＲ２３）Ｏ-、−ＯＰ（＝Ｏ）（Ｒ２３）Ｏ-、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ２３）Ｏ-、又は−Ｐ（＝Ｏ）（Ｒ２３）Ｏ-を示し（Ｒ２３は炭素数１〜３のアルキル基を示す）、
Ｒ１８は、水素原子又はメチル基を示し、
Ｒ１９及びＲ２２は、それぞれ独立して、炭素数１〜１０の２価の有機基を示し、
Ｒ２０及びＲ２１は、それぞれ独立して、炭素数１〜１０の炭化水素基を示す。〕
【００３４】
【化１３】
2019142787.tif 000014
【００３５】
〔式（６）中、
Ｒ２４は、水素原子又はメチル基を示し、
Ｒ２５は、−Ｏ−、＊−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−、＊−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＲ２７−、＊−ＮＲ２７−（Ｃ＝Ｏ）−（Ｒ２７は、水素原子又は炭素数１〜１０の有機基を示し、＊は、式（７）中のＲ２５が結合している炭素原子と結合する位置を示す）又はフェニレン基を示し、
Ｒ２６は、炭化水素基を示す。〕
【００３６】
【化１４】
2019142787.tif 000015
【００３７】
〔式（７）中、
Ｒ２８は、水素原子又はメチル基を示し、
Ｙは、ホルミル基又はケト基を有する有機基を示す。〕
【発明を実施するための形態】
【００３８】
以下、本発明の一実施形態に係るタンパク安定化剤について、具体的に説明する。
１．タンパク安定化剤
１．１．タンパク安定化剤の構成
本発明の一態様に係るタンパク安定化剤は、
下記式（１）、下記式（２）、下記式（３）、下記式（４）、および下記式（５）から選ばれる少なくとも１つの繰り返し単位からなる親水性繰り返し単位（Ａ）と、下記式（６）および下記式（７）から選ばれる少なくとも１つの繰り返し単位からなる疎水性繰り返し単位（Ｂ）を有する共重合体を含有する。
【００３９】
【化１５】
2019142787.tif 000016
【００４０】
〔式（１）中、
Ｒ1は、水素原子又はメチル基を示し、
Ｒ２及びＲ３は、それぞれ独立して、水素原子、または炭素数１〜６のアルキル基またはヒドロキシアルキル基を示す。〕
【００４１】
【化１６】
2019142787.tif 000017
【００４２】
〔式（２）中、
Ｒ４は、水素原子又はメチル基を示し、
Ｒ５及びＲ６は、それぞれ独立して、水素原子、または炭素数１〜６のアルキル基またはヒドロキシアルキル基を示す。〕
【００４３】
【化１７】
2019142787.tif 000018
【００４４】
〔式（３）中、
Ｒ７は、水素原子又はメチル基を示し、
Ｒ８は、−Ｏ−、＊−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−、＊−ＮＲ１１−（Ｃ＝Ｏ）−（Ｒ１１は、水素原子又は炭素数１〜１０の有機基を示し、＊は、式（２）中のＲ８が結合している炭素原子と結合する位置を示す）又はフェニレン基を示す。
Ｒ９は、炭素数２〜４のアルカンジイル基を示し、ｎは、平均値で２〜１００を示す。
Ｒ１０は、水素原子又は炭素数１〜４のアルキル基を示す。〕
【００４５】
【化１８】
2019142787.tif 000019
【００４６】
〔式（４）中、
Ｒ１２は、水素原子又はメチル基を示し、
Ｒ１３は、炭素数２〜４のアルカンジイル基を示し、
Ｒ１４は、炭素数１〜１０のアルカンジイル基を示し、
Ｒ１５、Ｒ１６及びＲ１７は、それぞれ独立して、水素原子又は炭素数１〜８の炭化水素基を示し、ｍは、平均値で１〜１０を示す。〕
【００４７】
【化１９】
2019142787.tif 000020
【００４８】
〔式（５）中、
Ｘは、−（Ｃ＝Ｏ）Ｏ-、−（Ｏ＝Ｓ＝Ｏ）Ｏ-、−Ｏ（Ｏ＝Ｓ＝Ｏ）Ｏ-、−（Ｓ＝Ｏ）Ｏ-、−Ｏ（Ｓ＝Ｏ）Ｏ-、−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＲ２３）Ｏ-、−ＯＰ（＝Ｏ）（Ｒ２３）Ｏ-、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ２３）Ｏ-、又は−Ｐ（＝Ｏ）（Ｒ２３）Ｏ-を示し（Ｒ２３は炭素数１〜３のアルキル基を示す）、
Ｒ１８は、水素原子又はメチル基を示し、
Ｒ１９及びＲ２２は、それぞれ独立して、炭素数１〜１０の２価の有機基を示し、
Ｒ２０及びＲ２１は、それぞれ独立して、炭素数１〜１０の炭化水素基を示す。〕
【００４９】
【化２０】
2019142787.tif 000021
【００５０】
〔式（６）中、
Ｒ２４は、水素原子又はメチル基を示し、
Ｒ２５は、−Ｏ−、＊−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−、＊−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＲ２７−、＊−ＮＲ２７−（Ｃ＝Ｏ）−（Ｒ２７は、水素原子又は炭素数１〜１０の有機基を示し、＊は、式（７）中のＲ２５が結合している炭素原子と結合する位置を示す）又はフェニレン基を示し、
Ｒ２６は、炭化水素基を示す。〕
【００５１】
【化２１】
2019142787.tif 000022
【００５２】
〔式（７）中、
Ｒ２８は、水素原子又はメチル基を示し、
Ｙは、ホルミル基又はケト基を有する有機基を示す。〕
本実施形態に係るタンパク安定化剤は、その一部に前記共重合体を含んでいてもよく、あるいは、上記共重合体のみから構成されていてもよい。
１．１．１．繰り返し単位（Ａ）
上記共重合体において、親水性繰り返し単位（Ａ）は、高いタンパク安定化効果の発現に寄与する主体である。また、「親水性」とは、水との親和性が高い性質を持つことを意味する。具体的には１種の繰り返し単位のみからなるホモポリマー（実施例の測定法による数平均分子量が１万程度のもの）とした場合に、常温（２５℃）において純水１００ｇに対して１ｇ以上溶解する場合にはその繰り返し単位は親水性である。
【００５３】
上記一般式（１）において、Ｒ2、Ｒ3で示されるアルキル基の炭素数は、好ましくは１〜３である。
【００５４】
また、上記Ｒ2、Ｒ3で示されるアルキル基は直鎖状でも分岐状でもよく、好適な具体例としては、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基が挙げられる。
【００５５】
また、Ｒ2、Ｒ3で示されるヒドロキシアルキル基の炭素数は、好ましくは１〜６であり、より好ましくは１〜３である。ヒドロキシアルキル基に含まれるアルキル基は直鎖状でも分岐状でもよく、ヒドロキシアルキル基の好適な具体例としては、ヒドロキシメチル基、ヒドロキシエチル基、ヒドロキシプロピル基、ヒドロキシイソプロピル基が挙げられる。なお、ヒドロキシアルキル基におけるヒドロキシ基の置換位置は任意である。
【００５６】
上記一般式（１）で表される繰り返し単位を構成するモノマーとしては、ジメチル（メタ）アクリルアミド、ジエチル（メタ）アクリルアミド、Ｎ−イソプロピル（メタ）アクリルアミド、Ｎ−（ヒドロキシメチル）（メタ）アクリルアミド、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）（メタ）アクリルアミド等が挙げられ、これらを単独で又は２種以上を組み合わせて用いてもよい。
【００５７】
上記一般式（２）において、Ｒ５及びＲ６は、それぞれ独立して、炭素数１〜３のアルカンジイル基を示す。かかるアルカンジイル基の炭素数は、好ましくは１〜２である。
【００５８】
また、上記アルカンジイル基は直鎖状でも分岐状でもよいが、直鎖状が好ましい。好適な具体例としては、メタン−１，１−ジイル基、エタン−１，２−ジイル基が挙げられる。
【００５９】
上記一般式（２）で表される繰り返し単位を構成するモノマーとしては、４−（メタ）アクリロイルモルホリン等が挙げられる。
【００６０】
上記一般式（３）において、Ｒ１０は、水素原子又は炭素数１〜４のアルキル基を示す。Ｒ１０で示されるアルキル基の炭素数は、本発明の所望の効果や入手容易性等の観点から、好ましくは１〜３であり、より好ましくは１又は２であり、更に好ましくは１である。また、Ｒ１０で示されるアルキル基は直鎖状でも分岐状でもよく、具体的には、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基が挙げられる。
【００６１】
かようなＲ１０の中でも、本発明の所望の効果や入手容易性等の観点から、水素原子、炭素数１〜３のアルキル基が好ましく、水素原子、炭素数１又は２のアルキル基がより好ましく、水素原子又はメチル基が更に好ましく、メチル基が特に好ましい。
【００６２】
また、Ｒ８は、−Ｏ−、＊−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−、＊−ＮＲ１１−（Ｃ＝Ｏ）−又はフェニレン基を示す。かかるフェニレン基としては、１，２−フェニレン基、１，３−フェニレン基、１，４−フェニレン基が挙げられる。
【００６３】
また、上記Ｒ１１で示される有機基の炭素数は１〜１０であるが、好ましくは１〜６である。上記有機基としては、炭化水素基が挙げられる。斯かる炭化水素基は、脂肪族炭化水素基、脂環式炭化水素基及び芳香族炭化水素基を包含する概念である。
【００６４】
上記Ｒ１１における脂肪族炭化水素基は直鎖状でも分岐状でもよく、具体的には、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、ヘプチル基、オクチル基、ノニル基、デシル基等のアルキル基が挙げられる。
【００６５】
また、上記脂環式炭化水素基は、単環の脂環式炭化水素基と橋かけ環炭化水素基に大別される。上記単環の脂環式炭化水素基としては、シクロプロピル基、シクロヘキシル基等のシクロアルキル基が挙げられる。また、橋かけ環炭化水素基としては、イソボルニル基等が挙げられる。
【００６６】
また、上記芳香族炭化水素基としては、フェニル基等のアリール基が挙げられる。
【００６７】
上述のようなＲ８の中でも、＊−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−が特に好ましい。
【００６８】
上記一般式（３）で表される繰り返し単位を構成するモノマーとしては、ポリエチレングリコール（メタ）アクリレート、ポリプロピレンレングリコール（メタ）アクリレート、ポリエチレングリコールポリプロピレングリコール（メタ）アクリレート、ポリエチレングリコールポリテトラメチレングリコール（メタ）アクリレート、ポリプロピレングリコールポリテトラメチレングリコール（メタ）アクリレート、メトキシポリエチレングリコール（メタ）アクリレート、エトキシポリエチレングリコール（メタ）アクリレート等が挙げられ、これらを単独で又は２種以上を組み合わせて用いたものでもよい。
【００６９】
上記一般式（４）において、Ｒ１３は、炭素数２〜４のアルカンジイル基を示す。なお、Ｒ１３が複数ある場合、Ｒ１３は同一でも異なっていてもよい。
【００７０】
また、Ｒ１３で示されるアルカンジイル基の炭素数は、好ましくは２又は３であり、より好ましくは２である。
【００７１】
また、Ｒ１３で示されるアルカンジイル基は直鎖状でも分岐状でもよく、具体的には、エタン−１，２−ジイル基、プロパン−１，２−ジイル基、プロパン−１，３−ジイル基、プロパン−２，２−ジイル基、ブタン−１，２−ジイル基、ブタン−１，３−ジイル基、ブタン−１，４−ジイル基等が挙げられる。これらの中でも、本発明の所望の効果や入手容易性等の観点から、エタン−１，２−ジイル基が好ましい。
【００７２】
また、Ｒ１４は、炭素数１〜１０のアルカンジイル基を示す。
【００７３】
Ｒ１４で示されるアルカンジイル基の炭素数は、好ましくは１〜６であり、より好ましくは１〜４であり、更に好ましくは２又は３であり、特に好ましくは２である。
【００７４】
また、Ｒ１４で示されるアルカンジイル基は直鎖状でも分岐状でもよく、好適な具体例としては、上記Ｒ１３で示されるアルカンジイル基と同様のものが挙げられる。
【００７５】
また、Ｒ１５、Ｒ１６及びＲ1７は、それぞれ独立して、水素原子又は炭素数１〜８の炭化水素基を示すが、炭素数１〜８の炭化水素基が好ましい。かかる炭化水素基の炭素数は、好ましくは１〜４であり、より好ましくは１又は２であり、特に好ましくは１である。
【００７６】
また、上記炭化水素基としては、アルキル基；フェニル基等のアリール基；ベンジル基等のアラルキル基が挙げられるが、アルキル基が好ましい。
【００７７】
上記アルキル基は直鎖状でも分岐状でもよく、好適な具体例としては、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基が挙げられる。
【００７８】
また、ｍは、平均値で１〜１０を示すが、好ましくは平均値で１〜７であり、より好ましくは平均値で１〜４であり、更に好ましくは１である。
【００７９】
上記一般式（４）で表される繰り返し単位を構成するモノマーとしては、２−（メタ）アクリロイルオキシエチル−２'−（トリメチルアンモニオ）エチルホスフェート、（２−（メタ）アクリロイルオキシエチルホスホリルコリン）、３−（メタ）アクリロイルオキシプロピル−２'−（トリメチルアンモニオ）エチルホスフェート、４−（メタ）アクリロイルオキシブチル−２'−（トリメチルアンモニオ）エチルホスフェート、２−（メタ）アクリロイルオキシエトキシエチル−２'−（トリメチルアンモニオ）エチルホスフェート、２−（メタ）アクリロイルオキシジエトキシエチル−２'−（トリメチルアンモニオ）エチルホスフェート、２−（メタ）アクリロイルオキシエチル−２'−（トリエチルアンモニオ）エチルホスフェート、２−（メタ）アクリロイルオキシエチル−２'−（トリブチルアンモニオ）エチルホスフェート等が挙げられ、これらを単独で又は２種以上を組み合わせて用いたものでもよい。
【００８０】
上記一般式（５）において、Ｘとしては、−（Ｃ＝Ｏ）Ｏ-が好ましい。なお、Ｒ２３で示されるアルキル基としては、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基が挙げられる。
【００８１】
また、上記一般式（５）中、Ｒ１９及びＲ２２は、それぞれ独立して、炭素数１〜１０の２価の有機基を示す。斯かる２価の有機基の炭素数は、好ましくは１〜８、より好ましくは１〜６である。
【００８２】
また、上記２価の有機基としては、２価の炭化水素基が好ましく、２価の脂肪族炭化水素基がより好ましい。当該２価の脂肪族炭化水素基は、直鎖状でも分岐状でもよい。また、２価の脂肪族炭化水素基としては、アルカンジイル基が好ましい。例えば、メタン−１，１−ジイル基、エタン−１，２−ジイル基、プロパン−１，１−ジイル基、プロパン−１，２−ジイル基、プロパン−１，３−ジイル基、プロパン−２，２−ジイル基、ブタン−１，４−ジイル基、ペンタン−１，５−ジイル基、ヘキサン−１，６−ジイル基等が挙げられる。
【００８３】
また、上記一般式（５）中、Ｒ２０及びＲ２１は、それぞれ独立して、炭素数１〜１０の炭化水素基を示す。当該炭化水素基の炭素数は、好ましくは１〜６、より好ましくは１〜４である。
【００８４】
Ｒ２０及びＲ２１で示される炭化水素基としては、アルキル基；フェニル基等のアリール基；ベンジル基等のアラルキル基が挙げられるが、アルキル基が好ましい。当該アルキル基は、直鎖状でも分岐状でもよく、例えば、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基が挙げられる。
【００８５】
上記一般式（５）で表される繰り返し単位を構成するモノマーとしては、Ｎ−（メタ）アクリロイルオキシエチル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウム−α−Ｎ−メチルカルボキシベタイン、Ｎ−（メタ）アクリロイルオキシエチル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウム−α−Ｎ−プロピルスルホベタイン等が挙げられ、これらを単独で又は２種以上を組み合わせて用いたものでもよい。
１．１．２．繰り返し単位（Ｂ）
上記共重合体において、疎水性繰り返し単位（Ｂ）は、共重合体の親水／疎水バランスを疎水側にずらすことにより、より高いタンパク安定化効果の発現に寄与する。
【００８６】
また、「疎水性」とは、水との親和性が低い性質を持つことを意味する。具体的には１種の繰り返し単位のみからなるホモポリマー（実施例の測定法による数平均分子量が１万程度のもの）とした場合に、常温（２５℃）において純水１００ｇに対して１ｇ未満しか溶解しない場合にはその繰り返し単位は疎水性である。
【００８７】
上記一般式（６）において、
Ｒ２５は、−Ｏ−、＊−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−、＊−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＲ２７−、＊−ＮＲ２７−（Ｃ＝Ｏ）−又はフェニレン基を示す。かかるフェニレン基としては、１，２−フェニレン基、１，３−フェニレン基、１，４−フェニレン基が挙げられる。
【００８８】
Ｒ２５の中でも、本発明の所望の効果や入手容易性等の観点から、＊−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−、＊−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＲ２７−、フェニレン基が好ましく、＊−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−、＊−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＲ２７−がより好ましく、＊−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−、＊−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ−が特に好ましい。
【００８９】
また、Ｒ２６は、炭化水素基を示す。当該炭化水素基の炭素数は、好ましくは１〜３０であり、より好ましくは１〜２４であり、更に好ましくは１〜１８であり、特に好ましくは１〜１４である。
【００９０】
また、Ｒ２７で示される有機基の炭素数は１〜１０であるが、好ましくは１〜６である。上記有機基としては、炭化水素基が挙げられる。
【００９１】
ここで、Ｒ２６、Ｒ２７における炭化水素基は、脂肪族炭化水素基、脂環式炭化水素基及び芳香族炭化水素基を包含する概念である。また、直鎖状、分岐状のいずれでもよく、環構造を含んでいてもよい。
【００９２】
上記Ｒ２６、Ｒ２７における脂肪族炭化水素基は直鎖状でも分岐状でもよく、具体的には、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、ヘプチル基、オクチル基、ノニル基、デシル基等のアルキル基が挙げられる。
【００９３】
また、上記脂環式炭化水素基は、単環の脂環式炭化水素基と橋かけ環炭化水素基に大別される。上記単環の脂環式炭化水素基としては、シクロプロピル基、シクロヘキシル基等のシクロアルキル基が挙げられる。また、橋かけ環炭化水素基としては、イソボルニル基等が挙げられる。
【００９４】
また、上記芳香族炭化水素基としては、フェニル基等のアリール基が挙げられる。
【００９５】
これらの中でもＲ２６としては、アルキル基が好ましい。その炭素数は上記と同様に、好ましくは１〜３０であり、より好ましくは１〜２４であり、更に好ましくは１〜１８であり、特に好ましくは１〜１４である。
【００９６】
上記一般式（６）で表される繰り返し単位を構成するモノマーとしては、アルキル（メタ）アクリレートが好ましい。具体的には、メチル（メタ）アクリレート、２−エチルヘキシル（メタ）アクリレート、ラウリル（メタ）アクリレート、ステアリル（メタ）アクリレート等が挙げられ、これらを単独で又は２種以上を組み合わせて用いてもよい。
【００９７】
次に、上記一般式（７）において、Ｒ２８は、水素原子又はメチル基を示すが、好ましくは水素原子である。
【００９８】
また、Ｙは、ホルミル基又はケト基を有する有機基を示す。当該有機基の総炭素数としては、４以上が好ましく、４〜１３がより好ましく、５〜１１が更に好ましく、６〜９が特に好ましい。ホルミル基又はケト基の個数は特に限定されず１個以上であればよいが、１個が好ましい。
【００９９】
また、Ｙとしては、エステル結合又はアミド結合を有するものが好ましい。エステル結合又はアミド結合の個数は特に限定されないが、１個が好ましい。
【０１００】
Ｙとしては、ホルミル基又はケト基を１個有し、且つエステル結合又はアミド結合を１個有する有機基が好ましく、下記式（８）で表される基がより好ましい。
【０１０１】
【化２２】
2019142787.tif 000023
【０１０２】
〔式（８）中、
Ｘ1は、−Ｏ−又は−ＮＨ−を示し、
Ｘ2は、ホルミル基又はケト基を有する炭素数３〜１２（好ましくは炭素数４〜１０、より好ましくは炭素数５〜８）の有機基を示し、
＊は、結合手を示す。〕
Ｘ1としては、−ＮＨ−が好ましい。
【０１０３】
Ｘ2としては、下記式（９）で表される基が好ましい。
【０１０４】
【化２３】
2019142787.tif 000024
【０１０５】
〔式（９）中、
Ｒ２９は、炭素数２〜１０（好ましくは炭素数３〜８、より好ましくは炭素数４〜６）の直鎖状又は分岐状のアルカンジイル基を示し、
Ｘ3は、ホルミル基又は−（Ｃ＝Ｏ）−ＣＨ3を示し、
＊は、結合手を示す。〕
Ｘ2の好適な具体例としては、下記式（１０）又は（１１）で表される基が挙げられる。中でも、式（１０）で表される基がより好ましく、式（１２）で表される基が特に好ましい。
【０１０６】
【化２４】
2019142787.tif 000025
【０１０７】
〔式（１０）中、
Ｒ３０〜Ｒ３３は、それぞれ独立して、水素原子、メチル基又はエチル基を示し、
＊は、結合手を示す。〕
【０１０８】
【化２５】
2019142787.tif 000026
【０１０９】
〔式（１１）中、
Ｒ３４〜Ｒ３７は、それぞれ独立して、水素原子、メチル基又はエチル基を示し、
＊は、結合手を示す。〕
【０１１０】
【化２６】
2019142787.tif 000027
【０１１１】
〔式（１２）中、＊は、結合手を示す。〕
上記一般式（７）で表される繰り返し単位を構成するモノマーとしては、ジアセトン（メタ）アクリルアミドが挙げられる。
【０１１２】
また、上記共重合体において、繰り返し単位（Ａ）および繰り返し単位（Ｂ）をそれぞれ、少なくとも１種以上含有していてもよい。
１．２．タンパク安定化剤の製造
次に、上記共重合体の製造方法を製造するために使用するモノマーの組成について説明する。
１．２．１．モノマー（ａ）
繰り返し単位（Ａ）は、少なくとも１種のモノマー（ａ）に由来する構造を有する。
【０１１３】
モノマー（ａ）は、上記式（１）、（２）で表される（メタ）アクリルアミド系モノマー、上記式（３）で表されるポリアルキレングリコール鎖を含有するモノマー、上記式（４）、（５）で示される双性イオン構造を含有するモノマーから選ばれる少なくとも１種のモノマーであることが好ましい。より好ましくは、Ｎ，Ｎ−ジメチルアクリルアミド、４−（メタ）アクリロイルモルホリン、メトキシポリエチレングリコールメタクリレート、Ｎ−メタクリロイルオキシエチル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウム−α−Ｎ−メチルカルボキシベタインから選ばれる少なくとも一種である。
１．２．２．モノマー（ｂ）
繰り返し単位（Ｂ）は、少なくとも１種のモノマー（ｂ）に由来する構造を有する。
【０１１４】
モノマー（ｂ）は、好ましくは、上記式（５）で表されるアルキル（メタ）アクリレート系モノマーまたは上記式（６）〜（１３）で表される（メタ）アクリルアミド系モノマーから選ばれる少なくとも１種である。より好ましくは、メチルメタクリレート、ダイアセトンアクリルアミドから選ばれる少なくとも１種である。
【０１１５】
上記共重合体を製造するためのモノマー組成は、全モノマーを１００質量％として、好ましくは、モノマー（ａ）１〜９９質量％、モノマー（ｂ）１〜９９質量％、より好ましくは、モノマー（ａ）１０〜９０質量％、モノマー（ｂ）１０〜９０質量％である。
【０１１６】
モノマー（ａ）、（ｂ）が上記範囲を外れると、非特異吸着防止効果に劣る場合がある。
【０１１７】
また、モノマー（ａ）の使用量とモノマー（ｂ）の使用量の質量比は、１：９９〜９９：１であることがより好ましく、１０：９０〜９０：１０であることがさらに好ましい。
【０１１８】
モノマー（ａ）の使用量に対してモノマー（ｂ）の使用量が９９：１未満であると、タンパク安定化効果に劣る場合があり、一方、１：９９を超えると、水に不溶となって、タンパク質を含有する水溶液中に添加することができなくなる場合がある。
【０１１９】
使用するモノマーは、工業用原料として入手することができるものを精製して、あるいは、未精製のまま、共重合に使用することができる。
【０１２０】
モノマーの重合は、例えば、ラジカル重合、アニオン重合、カチオン重合など公知の重合法で行うことができ、製造が容易であることから、好ましくはラジカル重合である。
【０１２１】
また、モノマーの重合は、公知の溶媒、開始剤、連鎖移動剤などと共に攪拌・加熱することにより実施される。重合時間は、通常３０分〜２４時間、重合温度は、０〜１２０℃程度である。
【０１２２】
重合後の共重合体水溶液は、透析膜、ダイアライザー、アシライザー、限外濾過等により精製することが好ましい。
１．３．タンパク安定化剤の物性および用途
本実施形態に係るタンパク安定化において、上記共重合体の質量平均分子量は、通常１，０００〜１，０００，０００であり、好ましくは５，０００〜５００，０００であり、より好ましくは８，０００〜２００，０００である。また、上記共重合体の分子量分布は、典型的には、質量平均分子量／数平均分子量が１．５〜８である。上記共重合体の質量平均分子量が上記範囲未満であると、タンパク安定化効果が不十分である場合があり、一方、上記共重合体の質量数平均分子量が上記範囲より大きいと、溶液の粘度が増加してハンドリングが困難になる場合がある。
【０１２３】
本実施形態に係るタンパク安定化剤が含有する共重合体は水溶性である。本発明において、「水溶性である」とは、２５℃で１％のポリマー固形分となるように水に共重合体を添加・混合したときに、目視で透明に溶解することをいう。
【０１２４】
本実施形態に係るタンパク安定化剤においては、上記共重合体の繰り返し単位（Ｂ）がタンパク質と相互作用し、かつ、繰り返し単位（Ａ）が水に対する分散作用を有するため、タンパク質がコンフォメーションを変化させて疎水化することを防ぎ、タンパク質の凝集を抑制することができる。
【０１２５】
本実施形態に係るタンパク安定化剤においては、糖、糖アルコール、アミノ酸、ベタイン等のオスモライトを含有していてもよい。
【０１２６】
本実施形態に係るタンパク安定化剤は、例えば、臨床診断薬として使用される標識抗体、標識抗原、酵素、一次抗体、一次抗原の安定化剤；血漿製剤に含まれるタンパクの安定化剤；コンタクトレンズの洗浄に使用される酵素などの安定化剤などとして、タンパク溶液中に添加することにより、タンパクの活性を長期間にわたり維持させることができる。
さらに、本実施形態に係るタンパク安定化剤は、容器・器具などにコーティングしてタンパク、核酸の非特異吸着を抑制する効果、免疫診断薬の希釈液として用いて非特異検体のシグナル抑制する効果を有する。
【実施例】
【０１２７】
以下、実施例を挙げて本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれらによって制限されるものではない。
【０１２８】
なお、本実施例では、質量平均分子量（Ｍｗ）および数平均分子量（Ｍｎ）は，東ソー社製ＴＳＫ ｇｅｌ α−Ｍカラムを用い、流量０．５ ミリリットル／分、溶出溶媒は０．０３Ｍ  臭化リチウム，０．０２Ｍ  リン酸／ Ｎ−メチルピロリドン溶媒、カラム温度４０℃ の分析条件で、単分散ポリエチレンスチレンを標準とするゲルパーミエーションクロマトグラフィー（ＧＰＣ）により測定された。吸光度は、パーキンエルマー社製ＡＲＶＯ−Ｘ５マイクロプレートリーダーにより測定された。
２．１．実施例１
モノマー（ａ）としてジメチルアクリルアミド（以下、ＤＭＡＡと称する）５０ｇ、モノマー（ｂ）としてダイアセトンアクリルアミド（以下、ＤＡＡＭと称する）５０ｇを水９００ｇに混合して攪拌機付きセパラブルフラスコに入れた。これに窒素を吹き込みながら、開始剤として過硫酸カリウム（以下、ＫＰＳと称する）０．５ｇ、ピロ亜硫酸ナトリウム（以下、ＳＭＳと称する）０．５８ｇを添加した後、室温で８時間重合を行った。得られた共重合体溶液を限外濾過により精製後、ＴＳＣ  １％になるよう純水で希釈し、本実施例のタンパク安定化剤（Ｓ−１）を得た。
【０１２９】
タンパク安定化剤（Ｓ−１）のＧＰＣによる数平均分子量は４２，０００であり、重量平均分子量は９１，０００であった。
【０１３０】
タンパク安定化剤（Ｓ−１）をＰＢＳバッファーで１０倍希釈し、この溶液に西洋わさびペルオキシダーゼ（以下、ＨＲＰと称する。オリエンタル酵母社）を２５０ ｎｇ／ｍＬになるよう添加した。このＨＲＰ溶液１０μｌと１−ＳｔｅｐＴＭ  ＡＢＴＳ Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（以下、ＡＢＳＴと呼称する。Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  ＳＣＩＥＮＴＩＦＩＣ社製）１００μｌを混合し発色させた。１０分後、１％  ドデシル硫酸ナトリウム水溶液１００μｌを添加し反応を停止させ、４０５ｎｍ の吸光度を測定した（保存前の吸光度の測定）。残りのＨＲＰ溶液を４０℃ で７日間保存した後、同様の方法にて吸光度を測定した（保存後の吸光度の測定）。その結果、保存前のＨＲＰによるＡＢＴＳの発色の吸光度を１００％ としたとき、タンパクの活性維持率の指標となる保存後の吸光度は８３％ であった。
２．２．実施例２
モノマー（ａ）としてＤＭＡＡ  ６０ｇ、モノマー（ｂ） としてＤＡＡＭ  ４０ｇを水９００ｇ に混合して攪拌機付きセパラブルフラスコに入れた。これに窒素を吹き込みながら、開始剤としてＫＰＳ  ０．５ｇ、ＳＭＳ  ０．５８ｇを添加した後、室温で８時間重合を行った。得られた共重合体溶液を限外濾過により精製後、ＴＳＣ  １％になるよう純水で希釈し、本実施例のタンパク安定化剤（Ｓ−２）を得た。
【０１３１】
タンパク安定化剤（Ｓ−２）のＧＰＣによる数平均分子量は３３，０００であり、重量平均分子量は８３，０００であった。
【０１３２】
また、タンパク安定化剤（Ｓ−２）を使用した以外は実施例１と同様の方法にて、保存前の吸光度および保存後の吸光度をそれぞれ測定した結果、保存前の吸光度（１００％）に対する保存後の吸光度は７５％であった。
２．３．実施例３
モノマー（ａ）としてＤＭＡＡ  ７０ｇ 、モノマー（ｂ） としてＤＡＡＭ  ３０ｇを水９００ｇ に混合して攪拌機付きセパラブルフラスコに入れた。これに窒素を吹き込みながら、開始剤としてＫＰＳ  ０．５ｇ、ＳＭＳ  ０．５８ｇを添加した後、室温で８時間重合を行った。得られた共重合体溶液を限外濾過により精製後、ＴＳＣ  １％になるよう純水で希釈し、本実施例のタンパク安定化剤（Ｓ−３）を得た。
【０１３３】
タンパク安定化剤（Ｓ−３）のＧＰＣによる数平均分子量は２８，０００であり、重量平均分子量は９０，０００であった。
【０１３４】
また、タンパク安定化剤（Ｓ−３）を使用した以外は実施例１と同様の方法にて、保存前の吸光度および保存後の吸光度をそれぞれ測定した結果、保存前の吸光度（１００％）に対する保存後の吸光度は６２％であった。
２．４．実施例４
モノマー（ａ）としてＤＭＡＡ  ２５ｇ 、エチレンオキシドの平均付加モル数９のメトキシポリエチレングリコールメタクリレート（以下、Ｍ９０Ｇと称する（新中村化学工業社製））２５ｇ、モノマー（ｂ） としてＤＡＡＭ  ５０ｇを水９００ｇ に混合して攪拌機付きセパラブルフラスコに入れた。これに窒素を吹き込みながら、開始剤としてＫＰＳ  ０．５ｇ、ＳＭＳ  ０．５８ｇを添加した後、室温で８時間重合を行った。得られた共重合体溶液を限外濾過により精製後、ＴＳＣ  １％になるよう純水で希釈し、本実施例のタンパク安定化剤（Ｓ−４）を得た。
【０１３５】
タンパク安定化剤（Ｓ−４）のＧＰＣによる数平均分子量は３４，０００であり、重量平均分子量は８６，０００であった。
【０１３６】
また、タンパク安定化剤（Ｓ−４） を使用した以外は実施例１と同様の方法にて、保存前の吸光度および保存後の吸光度をそれぞれ測定した結果、保存前の吸光度（１００％）に対する保存後の吸光度は８３％ であった。
２．５．実施例５
モノマー（ａ）としてＤＭＡＡ  ２５ｇ 、Ｎ−メタクリロイルオキシエチル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウム−α−Ｎ−メチルカルボキシベタイン（以下、ＧＬＢＴと称する（大阪有機化学工業社製））２５ｇ、モノマー（ｂ） としてＤＡＡＭ  ５０ｇを水９００ｇ に混合して攪拌機付きセパラブルフラスコに入れた。これに窒素を吹き込みながら、開始剤としてＫＰＳ  ０．５ｇ、ＳＭＳ  ０．５８ｇを添加した後、室温で８時間重合を行った。得られた共重合体溶液を限外濾過により精製後、ＴＳＣ  １％になるよう純水で希釈し、本実施例のタンパク安定化剤（Ｓ−５）を得た。
【０１３７】
タンパク安定化剤（Ｓ−５）のＧＰＣによる数平均分子量は２５，０００であり、重量平均分子量は６７，０００であった。
【０１３８】
また、タンパク安定化剤（Ｓ−５）を使用した以外は実施例１と同様の方法にて、保存前の吸光度および保存後の吸光度をそれぞれ測定した結果、保存前の吸光度（１００％）に対する保存後の吸光度は９２％であった。
２．６．実施例６
モノマー（ａ）として４−アクリロイルモルホリン（以下、ＡＣＭＯと称する（興人フィルム＆ケミカルズ社製））６０ｇ、Ｍ９０Ｇ  ７５ｇ、モノマー（ｂ） としてメチルメタクリレート（以下、ＭＭＡと称する）１５ｇ 、連鎖移動剤としてα−チオグリセロール４．５ｇを水８５０ｇに混合して攪拌機付きセパラブルフラスコに入れた。これに窒素を吹き込みながら、６０℃ まで昇温し、開始剤として２,  ２’−アゾビス（２−メチルプロピオンアミジン）ジハイドロクロライド（以下、Ｖ−５０と称する）  ３ｇを添加した後、３時間重合後、室温まで冷却した。得られた共重合体溶液を限外濾過により精製後、ＴＳＣ  １％になるよう純水で希釈し、本実施例のタンパク安定化剤（Ｓ−６）を得た。
【０１３９】
タンパク安定化剤（Ｓ−６）のＧＰＣによる数平均分子量は３，０００であり重量平均分子量は１１，０００であった。
【０１４０】
また、タンパク安定化剤（Ｓ−６）を使用した以外は実施例１と同様の方法にて、保存前の吸光度および保存後の吸光度をそれぞれ測定した結果、保存前の吸光度（１００ ％）に対する保存後の吸光度は２３％ であった。
２．７．比較例１
実施例１において、モノマー（ａ） としてＤＭＡＡ  ５０ｇ、モノマー（ｂ） としてＤＡＡＭ  ５０ｇを用いた代わりに、モノマーとしてＤＭＡＡ  １００ｇのみを用いた以外は、実施例１と同様の方法にて、タンパク安定化剤（Ｘ−１）を得た。
【０１４１】
タンパク安定化剤（Ｘ−１）のＧＰＣによる数平均分子量は１４，０００であり、質量平均分子量は８４，０００であった。
【０１４２】
タンパク安定化剤（Ｓ−１）の替わりにタンパク安定化剤（Ｘ−１）を使用した以外は実施例１と同様の方法にて、保存前の吸光度および保存後の吸光度をそれぞれ測定した結果、保存前の吸光度（１００％）に対する保存後の吸光度は５％ であった。
２．８．比較例２
実施例１において、モノマー（ａ）としてＤＭＡＡ  ５０ｇ、モノマー（ｂ） としてＤＡＡＭ  ５０ｇを用いた代わりに、モノマーとしてＤＡＡＭ  １００ｇのみを用いた以外は、実施例１と同様の方法にて、重合を実施したが、水に不溶の白色物が発生し攪拌が困難になったため、重合を中止した。
２．９．比較例３
タンパク安定化剤（Ｓ−１）の替わりにＢＳＡを用いた以外は、実施例１と同様の方法にて、保存前の吸光度および保存後の吸光度をそれぞれ測定した結果、保存前の吸光度（１００％に対する保存後の吸光度は１１％であった。
２．１０．比較例４
タンパク安定化剤（Ｓ−１）の替わりに市販の界面活性剤（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社製、Ｔｗｅｅｎ２０）を用いた以外は、実施例１と同様の方法にて、保存前の吸光度および保存後の吸光度をそれぞれ測定した結果、保存前の吸光度（１００％）に対する保存後の吸光度は３％であった。
２．１１．比較例５
タンパク安定化剤（Ｓ−１）の替わりにスクロースを用いた以外は、実施例１と同様の方法にて、保存前の吸光度および保存後の吸光度をそれぞれ測定した結果、保存前の吸光度（１００％）に対する保存後の吸光度は３％であった。
３．測定結果
以上の実施例および比較例におけるタンパク安定化効果の測定結果を表１に示す。
【０１４３】
【表１】
2019142787.tif 000028