(57)【要約】      （修正有）【課題】髄膜炎菌コンジュゲートワクチンが他の小児用ワクチンと共に免疫化スケジュールに組み込まれる場合の、同時投与方法の提供。【解決手段】以下のステップａ）及びｂ）を含むスケジュールでヒト患者を免疫する、髄膜炎菌疾患の予防又は治療における使用のための髄膜炎菌コンジュゲートワクチンであって、ステップａ）が、破傷風トキソイドキャリアタンパク質にコンジュゲートさせて、少なくとも３種の細菌糖類を含有する細菌糖類コンジュゲートワクチンで０〜１１カ月の第１の月齢でヒト患者を免疫するステップであり、ステップｂ）が、破傷風トキソイドキャリアタンパク質に別個にコンジュゲートさせた髄膜炎菌血清型Ａ莢膜糖類（ＭｅｎＡ）などを含有する髄膜炎菌コンジュゲートワクチンで１２〜２４カ月の第２の月齢でヒト患者を免疫するステップである。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下のステップ：
ａ）キャリアタンパク質に別個にコンジュゲートさせて少なくとも1種、2種又は3種の細菌糖類コンジュゲートを形成した少なくとも1種、2種又は3種の細菌糖類を含有する細菌糖類コンジュゲートワクチンで0〜11カ月の第１の月齢でヒト患者を免疫するステップ；及び
ｂ）キャリアタンパク質に別個にコンジュゲートさせた髄膜炎菌（Neisseria meningitidis）血清型A莢膜糖類（MenA）、髄膜炎菌血清型C莢膜糖類（MenC）、髄膜炎菌血清型W135莢膜糖類（MenW135）、及び髄膜炎菌血清型Y莢膜糖類（MenY）からなる群より選択される少なくとも2種の莢膜糖類を含有する髄膜炎菌コンジュゲートワクチンで12〜24カ月の第２の月齢でヒト患者を免疫するステップ、
を含む、髄膜炎菌感染に対して免疫化する方法であって、該髄膜炎菌コンジュゲートワクチンをジフテリアトキソイド及び破傷風トキソイドを含有するワクチンと同時に投与する、上記方法。
【請求項２】
ステップａ）の少なくとも1種、2種又は3種の細菌糖類がインフルエンザ菌（Haemophilus influenza (Hib)）の糖類を含む、請求項１記載の方法。
【請求項３】
ステップａ）の少なくとも1種、2種又は3種の細菌糖類が髄膜炎菌血清型C（MenC）の莢膜糖類を含む、請求項１又は２記載の方法。
【請求項４】
ステップａ）の少なくとも1種、2種又は3種の細菌糖類が髄膜炎菌血清型Y（MenY）の莢膜糖類を含む、請求項１〜３のいずれか１項記載の方法。
【請求項５】
ステップａ）のキャリアタンパク質が破傷風トキソイド、ジフテリアトキソイド又はCRM197である、請求項１〜４のいずれか１項記載の方法。
【請求項６】
ステップａ）のキャリアタンパク質が破傷風トキソイドであり、場合によって一用量あたりの総TT含量が5-40、10-30、15-20μg又は約18μgである、請求項５記載の方法。
【請求項７】
ステップａ）の免疫が、2回又は3回量の細菌糖類コンジュゲートを、場合によって2、4及び6カ月で投与することを含む、請求項１〜６のいずれか１項記載の方法。
【請求項８】
ステップｂ）の髄膜炎菌コンジュゲートワクチンとジフテリア毒素及び破傷風毒素を含有するワクチンとの同時投与が、任意によりSBAアッセイで測定して、髄膜炎菌コンジュゲートワクチンを単独で投与する場合と比較して、MenA、MenC、MenW135又はMenYの少なくとも1種に対する免疫原性の少なくとも10％の上昇につながる、請求項１〜７のいずれか１項記載の方法。
【請求項９】
ステップａ）の間に、細菌糖類コンジュゲートワクチンをDTPを含有するワクチンと同時に投与する、請求項１〜８のいずれか１項記載の方法。
【請求項１０】
DTPを含有するワクチンがB型肝炎抗原を含有する、請求項９記載の方法。
【請求項１１】
DTPを含有するワクチンがIPVを含有する、請求項９又は１０記載の方法。
【請求項１２】
ステップｂ）の髄膜炎菌コンジュゲートワクチンがMenAを含有する、請求項１〜１１のいずれか１項記載の方法。
【請求項１３】
ステップｂ）の髄膜炎菌コンジュゲートワクチンがMenCを含有する、請求項１〜１２のいずれか１項記載の方法。
【請求項１４】
ステップｂ）の髄膜炎菌コンジュゲートワクチンがMenW135を含有する、請求項１〜１３のいずれか１項記載の方法。
【請求項１５】
ステップｂ）の髄膜炎菌コンジュゲートワクチンがMenYを含有する、請求項１〜１４のいずれか１項記載の方法。
【請求項１６】
ステップｂ）のキャリアタンパク質が、破傷風トキソイド、ジフテリアトキソイド又はCRM197からなる群より選択される、請求項１〜１５のいずれか１項記載の方法。
【請求項１７】
ステップｂ）のキャリアタンパク質が破傷風トキソイドである、請求項１６記載の方法。
【請求項１８】
ステップａ）のキャリアタンパク質及びステップｂ）のキャリアタンパク質が同じである、請求項１〜１７のいずれか１項記載の方法。
【請求項１９】
ジフテリアトキソイド及び破傷風トキソイドを含有するワクチンがDTPaワクチンである、請求項１〜１８のいずれか１項記載の方法。
【請求項２０】
ステップｂ）が12〜18カ月のヒト患者を免疫するものである、請求項１〜１９のいずれか１項記載の方法。
【請求項２１】
ステップｂ）が15〜18カ月のヒト患者を免疫するものである、請求項２０記載の方法。
【請求項２２】
更なるステップ：
ｃ）キャリアタンパク質に別個にコンジュゲートさせた髄膜炎菌血清型A莢膜糖類（MenA）、髄膜炎菌血清型C莢膜糖類（MenC）、髄膜炎菌血清型W135莢膜糖類（MenW135）、及び髄膜炎菌血清型Y莢膜糖類（MenY）からなる群より選択される少なくとも2種の莢膜糖類を含有する髄膜炎菌コンジュゲートワクチンで4〜20、5〜15又は5〜11歳の間の第３の年齢でヒト患者を免疫するステップ、
を含む、請求項１〜２１のいずれか１項記載の方法。
【請求項２３】
上記髄膜炎菌コンジュゲートワクチンが、請求項１〜１８のいずれか１項記載の髄膜炎菌コンジュゲートワクチンと同じである、請求項２２記載の方法。
【請求項２４】
髄膜炎菌コンジュゲートワクチンが、破傷風トキソイドキャリアタンパク質にそれぞれ別個にコンジュゲートしたMenA、MenC、MenW135及びMenYの莢膜糖類を含有する、請求項２２記載の方法。
【請求項２５】
以下のステップａ）及びｂ）を含むスケジュールでヒト患者を免疫する、髄膜炎菌疾患の予防又は治療における使用のための髄膜炎菌コンジュゲートワクチンであって、
ステップａ）が、キャリアタンパク質にコンジュゲートさせて少なくとも1種、2種又は3種の細菌糖類コンジュゲートを形成した少なくとも1種、2種又は3種の細菌糖類を含有する細菌糖類コンジュゲートワクチンで0〜11カ月の第１の月齢でヒト患者を免疫するステップであり、
ステップｂ）が、キャリアタンパク質に別個にコンジュゲートさせた髄膜炎菌血清型A莢膜糖類（MenA）、髄膜炎菌血清型C莢膜糖類（MenC）、髄膜炎菌血清型W135莢膜糖類（MenW135）、及び髄膜炎菌血清型Y莢膜糖類（MenY）からなる群より選択される少なくとも2種の莢膜糖類を含有する髄膜炎菌コンジュゲートワクチンで12〜24カ月の第２の月齢でヒト患者を免疫するステップであり、
該髄膜炎菌コンジュゲートワクチンをジフテリアトキソイド及び破傷風トキソイドを含有するワクチンと同時に投与する、上記髄膜炎菌コンジュゲートワクチン。
【請求項２６】
ステップａ）の少なくとも1種、2種又は3種の細菌糖類がインフルエンザ菌(Hib)の糖類を含む、請求項２５記載の使用のための髄膜炎菌コンジュゲートワクチン。
【請求項２７】
ステップａ）の少なくとも1種、2種又は3種の細菌糖類が髄膜炎菌血清型C（MenC）の莢膜糖類を含む、請求項２５又は２６記載の使用のための髄膜炎菌コンジュゲートワクチン。
【請求項２８】
ステップａ）の少なくとも1種、2種又は3種の細菌糖類が髄膜炎菌血清型Y（MenY）の莢膜糖類を含む、請求項２５〜２７のいずれか１項記載の使用のための髄膜炎菌コンジュゲートワクチン。
【請求項２９】
ステップａ）のキャリアタンパク質が破傷風トキソイド、ジフテリアトキソイド又はCRM197である、請求項２５〜２８のいずれか１項記載の使用のための髄膜炎菌コンジュゲートワクチン。
【請求項３０】
ステップａ）のキャリアタンパク質が破傷風トキソイドであり、場合によって一用量あたりの総TT含量が5-40、10-30、15-20μg又は約18μgである、請求項２９記載の使用のための髄膜炎菌コンジュゲートワクチン。
【請求項３１】
ステップａ）の免疫が、2回又は3回量の細菌糖類コンジュゲートを、場合によって2、4及び6カ月で投与することを含む、請求項２５〜３０のいずれか１項記載の使用のための髄膜炎菌コンジュゲートワクチン。
【請求項３２】
ステップｂ）の髄膜炎菌コンジュゲートワクチンとジフテリア毒素及び破傷風毒素を含有するワクチンとの同時投与が、任意によりSBAアッセイで測定して、髄膜炎菌コンジュゲートワクチンを単独で投与する場合と比較して、MenA、MenC、MenW135又はMenYの少なくとも1種に対する免疫原性の少なくとも10％の上昇につながる、請求項２５〜３１のいずれか１項記載の使用のための髄膜炎菌コンジュゲートワクチン。
【請求項３３】
ステップａ）の間に、細菌糖類コンジュゲートワクチンをDTPを含有するワクチンと同時に投与する、請求項２５〜３２のいずれか１項記載の使用のための髄膜炎菌コンジュゲートワクチン。
【請求項３４】
DTPを含有するワクチンがB型肝炎抗原を含有する、請求項３３記載の使用のための髄膜炎菌コンジュゲートワクチン。
【請求項３５】
DTPを含有するワクチンがIPVを含有する、請求項３３又は３４記載の使用のための髄膜炎菌コンジュゲートワクチン。
【請求項３６】
ステップｂ）の髄膜炎菌コンジュゲートワクチンがMenAを含有する、請求項２５〜３５のいずれか１項記載の使用のための髄膜炎菌コンジュゲートワクチン。
【請求項３７】
ステップｂ）の髄膜炎菌コンジュゲートワクチンがMenCを含有する、請求項２５〜３６のいずれか１項記載の使用のための髄膜炎菌コンジュゲートワクチン。
【請求項３８】
ステップｂ）の髄膜炎菌コンジュゲートワクチンがMenW135を含有する、請求項２５〜３７のいずれか１項記載の使用のための髄膜炎菌コンジュゲートワクチン。
【請求項３９】
ステップｂ）の髄膜炎菌コンジュゲートワクチンがMenYを含有する、請求項２５〜３８のいずれか１項記載の使用のための髄膜炎菌コンジュゲートワクチン。
【請求項４０】
ステップｂ）のキャリアタンパク質が、破傷風トキソイド、ジフテリアトキソイド又はCRM197からなる群より選択される、請求項２５〜３９のいずれか１項記載の使用のための髄膜炎菌コンジュゲートワクチン。
【請求項４１】
ステップｂ）のキャリアタンパク質が破傷風トキソイドである、請求項４０記載の使用のための髄膜炎菌コンジュゲートワクチン。
【請求項４２】
ステップａ）のキャリアタンパク質及びステップｂ）のキャリアタンパク質が同じである、請求項２５〜４１のいずれか１項記載の使用のための髄膜炎菌コンジュゲートワクチン。
【請求項４３】
ジフテリアトキソイド及び破傷風トキソイドを含有するワクチンがDTPワクチンである、請求項２５〜４２のいずれか１項記載の使用のための髄膜炎菌コンジュゲートワクチン。
【請求項４４】
ステップｂ）が12〜18カ月のヒト患者を免疫するものである、請求項２５〜４３のいずれか１項記載の使用のための髄膜炎菌コンジュゲートワクチン。
【請求項４５】
ステップｂ）が15〜18カ月のヒト患者を免疫するものである、請求項４４記載の使用のための髄膜炎菌コンジュゲートワクチン。
【請求項４６】
更なるステップ：
ｃ）キャリアタンパク質に別個にコンジュゲートさせた髄膜炎菌血清型A莢膜糖類（MenA）、髄膜炎菌血清型C莢膜糖類（MenC）、髄膜炎菌血清型W135莢膜糖類（MenW135）、及び髄膜炎菌血清型Y莢膜糖類（MenY）からなる群より選択される少なくとも2種の莢膜糖類を含有する髄膜炎菌コンジュゲートワクチンで4〜20、5〜15又は5〜11歳の間の第３の年齢でヒト患者を免疫するステップ、
を含む、請求項２５〜４５のいずれか１項記載の使用のための髄膜炎菌コンジュゲートワクチン。
【請求項４７】
上記髄膜炎菌コンジュゲートワクチンが、請求項２５〜４２のいずれか１項記載の髄膜炎菌コンジュゲートワクチンと同じである、請求項４６記載の使用のための髄膜炎菌コンジュゲートワクチン。
【請求項４８】
髄膜炎菌コンジュゲートワクチンが、破傷風トキソイドキャリアタンパク質にそれぞれ別個にコンジュゲートしたMenA、MenC、MenW135及びMenYの莢膜糖類を含有する、請求項４６記載の使用のための髄膜炎菌コンジュゲートワクチン。
【請求項４９】
ステップｂ）及び／又はステップｃ）の髄膜炎菌コンジュゲートワクチンが、50kDa、75kDa、100kDa、110kDa、120kDaもしくは130kDa以上の平均サイズを有する髄膜炎菌莢膜糖類を含有する、請求項１〜４８のいずれか１項記載の方法又は使用のための髄膜炎菌コンジュゲートワクチン。
【請求項５０】
ステップｂ）及び／又はステップｃ）の髄膜炎菌コンジュゲートワクチンが、それぞれが天然の多糖であるか、又は平均サイズが天然の多糖に対して10倍以下の倍率で低減した髄膜炎菌莢膜糖類を含有する、請求項１〜４９のいずれか１項記載の方法又は使用のための髄膜炎菌コンジュゲートワクチン。
【請求項５１】
ステップｂ）及び／又はステップｃ）の髄膜炎菌コンジュゲートワクチンが、天然の多糖である髄膜炎菌莢膜糖類を少なくとも1種含有する、請求項１〜５０のいずれか１項記載の方法又は使用のための髄膜炎菌コンジュゲートワクチン。
【請求項５２】
ステップｂ）及び／又はステップｃ）の髄膜炎菌コンジュゲートワクチンが、微小流動化（microfluidization）によってサイズが低下した髄膜炎菌莢膜糖類を少なくとも1種含有する、請求項１〜５１のいずれか１項記載の方法又は使用のための髄膜炎菌コンジュゲートワクチン。
【請求項５３】
ステップｂ）及び／又はステップｃ）の髄膜炎菌コンジュゲートワクチンが、微小流動化されたMenY及びMenW135からなる群より選択される少なくとも1種の髄膜炎菌莢膜糖類を含有し、微小流動化により該莢膜糖類の平均サイズが場合によって天然の莢膜多糖と比較して10倍以下の倍率で低下している、請求項１〜５２のいずれか１項記載の方法又は使用のための髄膜炎菌コンジュゲートワクチン。
【請求項５４】
ステップｂ）及び／又はステップｃ）の髄膜炎菌コンジュゲートワクチンが、天然の多糖であるMenA及びMenCからなる群より選択される少なくとも1種の髄膜炎菌莢膜糖類を含有する、請求項１〜５３のいずれか１項記載の方法又は使用のための髄膜炎菌コンジュゲートワクチン。
【請求項５５】
ステップｂ）及び／又はステップｃ）の髄膜炎菌コンジュゲートワクチンが、50kDa以上、75kDa以上、100kDa以上の平均サイズ、又は50-100kDa、55-90kDa、もしくは60-80kDaの平均サイズを有するMenA莢膜糖類を含有する、請求項１〜５４のいずれか１項記載の方法又は使用のための髄膜炎菌コンジュゲートワクチン。
【請求項５６】
ステップｂ）及び／又はステップｃ）の髄膜炎菌コンジュゲートワクチンが、50kDa以上、75kDa以上、100kDa以上、又は100-200kDa、100-150kDa、80-120kDa、90-110kDa、150-200kDa、120-240kDa、140-220kDa、160-200kDaもしくは190-200kDaの平均サイズを有するMenC莢膜糖類を含有する、請求項１〜５５のいずれか１項記載の方法又は使用のための髄膜炎菌コンジュゲートワクチン。
【請求項５７】
ステップｂ）及び／又はステップｃ）の髄膜炎菌コンジュゲートワクチンが、50kDa以上、75kDa以上、100kDa以上、又は60-190kDa、70-180kDa、80-170kDa、90-160kDa、100-150kDa、110-145kDaもしくは120-140kDaの平均サイズを有するMenY莢膜糖類を含有する、請求項１〜５６のいずれか１項記載の方法又は使用のための髄膜炎菌コンジュゲートワクチン。
【請求項５８】
ステップｂ）及び／又はステップｃ）の髄膜炎菌コンジュゲートワクチンが、50kDa以上、75kDa以上、100kDa以上、又は60-190kDa、70-180kDa、80-170kDa、90-160kDa、100-150kDa、140-180kDa、150-170kDaもしくは110-140kDaの平均サイズを有するMenW135莢膜糖類を含有する、請求項１〜５７のいずれか１項記載の方法又は使用のための髄膜炎菌コンジュゲートワクチン。
【請求項５９】
ステップｂ）及び／又はステップｃ）の髄膜炎菌コンジュゲートワクチンが、1:5-5:1又は1:1-1:4（w/w）の多糖：キャリア比をそれぞれ有する髄膜炎菌莢膜糖類コンジュゲートを含有する、請求項１〜５８のいずれか１項記載の方法又は使用のための髄膜炎菌コンジュゲートワクチン。
【請求項６０】
ステップｂ）及び／又はステップｃ）の髄膜炎菌コンジュゲートワクチンが、第2のキャリアタンパク質に直接コンジュゲートした少なくとも1種の髄膜炎菌莢膜多糖コンジュゲートを含有する、請求項１〜５９のいずれか１項記載の方法又は使用のための髄膜炎菌コンジュゲートワクチン。
【請求項６１】
ステップｂ）及び／又はステップｃ）の髄膜炎菌コンジュゲートワクチンが、第2のキャリアタンパク質に直接コンジュゲートしたMenW及び／もしくはMenY、MenW及び／もしくはMenC、MenY及び／もしくはMenC、又はMenW及びMenC及びMenYを含有する、請求項６０記載の方法又は使用のための髄膜炎菌コンジュゲートワクチン。
【請求項６２】
ステップｂ）及び／又はステップｃ）の髄膜炎菌コンジュゲートワクチンが、CDAP化学によって直接コンジュゲートした少なくとも1種の髄膜炎菌莢膜糖類コンジュゲートを含有する、請求項６０又は６１記載の方法又は使用のための髄膜炎菌コンジュゲートワクチン。
【請求項６３】
ステップｂ）及び／又はステップｃ）の髄膜炎菌コンジュゲートワクチンが、MenW及び／又はY莢膜糖類の第2のキャリアタンパク質に対する比が1:0.5〜1:2の間であるコンジュゲートを含有する、請求項６０〜６２のいずれか１項記載の方法又は使用のための髄膜炎菌コンジュゲートワクチン。
【請求項６４】
ステップｂ）及び／又はステップｃ）の髄膜炎菌コンジュゲートワクチンが、MenC多糖のキャリアタンパク質に対する比が1:0.5〜1:2の間であるMenCコンジュゲートを含有する、請求項６０〜６３のいずれか１項記載の方法又は使用のための髄膜炎菌コンジュゲートワクチン。
【請求項６５】
ステップｂ）及び／又はステップｃ）の髄膜炎菌コンジュゲートワクチンが、リンカーを介してキャリアタンパク質にコンジュゲートした1種以上の髄膜炎菌莢膜糖類を含有する、請求項１〜６４のいずれか１項記載の方法又は使用のための髄膜炎菌コンジュゲートワクチン。
【請求項６６】
リンカーが二官能性である、請求項６５記載の方法又は使用のための髄膜炎菌コンジュゲートワクチン。
【請求項６７】
リンカーが2個の反応性アミン基を有する、請求項６５又は６６記載の方法又は使用のための髄膜炎菌コンジュゲートワクチン。
【請求項６８】
リンカーが4〜12個の炭素原子を有する、請求項６５〜６７のいずれか１項記載の方法又は使用のための髄膜炎菌コンジュゲートワクチン。
【請求項６９】
リンカーがADHである、請求項６５〜６８のいずれか１項記載の方法又は使用のための髄膜炎菌コンジュゲートワクチン。
【請求項７０】
髄膜炎菌莢膜糖類がCDAP化学でリンカーにコンジュゲートしている、請求項６５〜６９のいずれか１項記載の方法又は使用のための髄膜炎菌コンジュゲートワクチン。
【請求項７１】
キャリアタンパク質がカルボジイミド化学、場合によってEDACを用いてリンカーにコンジュゲートしている、請求項６５〜７０のいずれか１項記載の方法又は使用のための髄膜炎菌コンジュゲートワクチン。
【請求項７２】
MenAがリンカーを介してキャリアタンパク質にコンジュゲートされている、請求項６５〜７１のいずれか１項記載の方法又は使用のための髄膜炎菌コンジュゲートワクチン。
【請求項７３】
MenA多糖とキャリアタンパク質との比率が1:2〜1:5の間である、請求項７２記載の方法又は使用のための髄膜炎菌コンジュゲートワクチン。
【請求項７４】
MenCがリンカーを介してキャリアタンパク質にコンジュゲートされている、請求項６５〜７３のいずれか１項記載の方法又は使用のための髄膜炎菌コンジュゲートワクチン。
【請求項７５】
MenC多糖とキャリアタンパク質との比率が1:2〜1:5の間である、請求項７４記載の方法又は使用のための髄膜炎菌コンジュゲートワクチン。
【請求項７６】
ステップｂ）及び／又はステップｃ）の髄膜炎菌コンジュゲートワクチンが、キャリアタンパク質にコンジュゲートしたインフルエンザ菌b莢膜糖類を更に含有する、請求項１〜７５のいずれか１項記載の方法又は使用のための髄膜炎菌コンジュゲートワクチン。
【請求項７７】
ステップｂ）及び／又はステップｃ）の髄膜炎菌コンジュゲートワクチンが、髄膜炎菌血清型B抗原、髄膜炎菌血清型B外膜ベシクル調製物及び／又は髄膜炎菌血清型Bタンパク質を含有する、請求項１〜７６のいずれか１項記載の方法又は使用のための髄膜炎菌コンジュゲートワクチン。
【請求項７８】
ステップｂ）及び／又はステップｃ）のキャリアタンパク質が髄膜炎菌コンジュゲートワクチン中に10-100、20-90、30-80、30-70、35-60又は40-50μgの合計用量で存在する、請求項１〜７７のいずれか１項記載の方法又は使用のための髄膜炎菌コンジュゲートワクチン。
【請求項７９】
髄膜炎菌感染に対して免疫化する方法であって、
キャリアタンパク質に別個にコンジュゲートした髄膜炎菌血清型A莢膜糖類（MenA）、髄膜炎菌血清型C莢膜糖類（MenC）、髄膜炎菌血清型W135莢膜糖類（MenW135）、及び髄膜炎菌血清型Y莢膜糖類（MenY）からなる群より選択される少なくとも2種の莢膜糖類を含有する多価髄膜炎菌コンジュゲートワクチンでヒト患者を12〜24カ月の月齢で免疫するステップ、及び
キャリアタンパク質にそれぞれ別個にコンジュゲートしたMenA、MenC、MenW135及びMenYの少なくとも2種を含有する追加免疫用（boosting）髄膜炎菌コンジュゲートワクチンでヒト患者を4〜20、5〜15、5〜11、5〜9、又は5〜6歳の年齢で再免疫するステップ
を含む、上記方法。
【請求項８０】
多価髄膜炎菌コンジュゲートワクチンがMenC及びMenYコンジュゲートを含有する、請求項７９記載の方法。
【請求項８１】
追加免疫用髄膜炎菌コンジュゲートワクチンがMenC及びMenYコンジュゲートを含有する、請求項７９又は８０記載の方法。
【請求項８２】
多価髄膜炎菌コンジュゲートワクチンがMenA、MenC、MenW135及びMenYコンジュゲートを含有する、請求項７９〜８１のいずれか１項記載の方法。
【請求項８３】
追加免疫用髄膜炎菌コンジュゲートワクチンがMenA、MenC、MenW135及びMenYコンジュゲートを含有する、請求項７９〜８２のいずれか１項記載の方法。
【請求項８４】
追加免疫用髄膜炎菌コンジュゲートワクチンの各莢膜糖類が、破傷風トキソイド、ジフテリアトキソイド又はCRM197からなる群より選択されるキャリアタンパク質にコンジュゲートしている、請求項７９〜８３のいずれか１項記載の方法。
【請求項８５】
キャリアタンパク質が破傷風トキソイドである、請求項８４記載の方法。
【請求項８６】
多価髄膜炎菌コンジュゲートワクチンの各莢膜糖類が、破傷風トキソイド、ジフテリアトキソイド又はCRM197からなる群より選択されるキャリアタンパク質にコンジュゲートしている、請求項７９〜８５のいずれか１項記載の方法。
【請求項８７】
キャリアタンパク質が破傷風トキソイドである、請求項８６記載の方法。
【請求項８８】
髄膜炎菌感染に対する免疫化における使用のための髄膜炎菌コンジュゲートワクチンであって、
キャリアタンパク質に別個にコンジュゲートした髄膜炎菌血清型A莢膜糖類（MenA）、髄膜炎菌血清型C莢膜糖類（MenC）、髄膜炎菌血清型W135莢膜糖類（MenW135）、及び髄膜炎菌血清型Y莢膜糖類（MenY）からなる群より選択される少なくとも2種の莢膜糖類を含有する多価髄膜炎菌コンジュゲートワクチンでヒト患者を12〜24カ月の月齢で免疫し、
キャリアタンパク質にそれぞれ別個にコンジュゲートしたMenA、MenC、MenW135及びMenYの少なくとも2種を含有する追加免疫用髄膜炎菌コンジュゲートワクチンでヒト患者を4〜20、5〜15、5〜11、5〜9、又は5〜6歳の年齢で再免疫する、
上記髄膜炎菌コンジュゲートワクチン。
【請求項８９】
多価髄膜炎菌コンジュゲートワクチンがMenC及びMenYコンジュゲートを含有する、請求項８８記載の使用のための髄膜炎菌コンジュゲートワクチン。
【請求項９０】
追加免疫用髄膜炎菌コンジュゲートワクチンがMenC及びMenYコンジュゲートを含有する、請求項８８又は８９記載の使用のための髄膜炎菌コンジュゲートワクチン。
【請求項９１】
多価髄膜炎菌コンジュゲートワクチンがMenA、MenC、MenW135及びMenYコンジュゲートを含有する、請求項８８〜９０のいずれか１項記載の使用のための髄膜炎菌コンジュゲートワクチン。
【請求項９２】
追加免疫用髄膜炎菌コンジュゲートワクチンがMenA、MenC、MenW135及びMenYコンジュゲートを含有する、請求項８８〜９１のいずれか１項記載の使用のための髄膜炎菌コンジュゲートワクチン。
【請求項９３】
追加免疫用髄膜炎菌コンジュゲートワクチンの各莢膜糖類が、破傷風トキソイド、ジフテリアトキソイド又はCRM197からなる群より選択されるキャリアタンパク質にコンジュゲートしている、請求項８８〜９２のいずれか１項記載の使用のための髄膜炎菌コンジュゲートワクチン。
【請求項９４】
キャリアタンパク質が破傷風トキソイドである、請求項８４記載の方法。
【請求項９５】
多価髄膜炎菌コンジュゲートワクチンの各莢膜糖類が、破傷風トキソイド、ジフテリアトキソイド又はCRM197からなる群より選択されるキャリアタンパク質にコンジュゲートしている、請求項８８〜９４のいずれか１項記載の使用のための髄膜炎菌コンジュゲートワクチン。
【請求項９６】
キャリアタンパク質が破傷風トキソイドである、請求項９５記載の使用のための髄膜炎菌コンジュゲートワクチン。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、髄膜炎菌(Neisseria meningitidis)感染の予防又は治療のための、髄膜炎菌に対するコンジュゲートワクチンの使用の分野に関する。特に、本発明は、少なくとも1種のコンジュゲートワクチンで予め免疫された集団における、髄膜炎菌コンジュゲートワクチンとDTPを含有するワクチンとの同時投与に関する。本発明のさらなる態様は、さらなる免疫化の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
侵襲性髄膜炎菌感染は、適切な抗生物質及び支持療法が投与された場合でも死亡率が約10％の重篤な疾患を引き起こす[1]。米国では、侵襲性髄膜炎菌疾患(IMD)の大半が血清型B、C及びYによって引き起こされるが[2]、世界的に多くの地域で発生する疾患の重要な原因である血清型A、W-135及びX[3、4]はあまり検出されない。米国では、1歳より若い乳児のIMDの発生率が最も高い(約1人:18,500人の集団；1998年〜2007年)[2]。従って、米国の乳児及び子供の髄膜炎菌疾患に影響するためには、髄膜炎菌コンジュゲートワクチンは、低年齢から効果を有する必要性がある[5]。
【０００３】
近年、Hibと組み合わせた髄膜炎菌血清型C及びYワクチン(HibMenCY-TT、MenHibrix(商標)、GlaxoSmithKline Vaccines社)が、乳児及び幼児で実施された臨床試験における免疫原性及び安全性の実証後[7-14]、2カ月の月齢から開始する4回投与シリーズとして乳児に使用するために米国で認可された[6]。1種の4価血清型A、C、W-135及びY(MenACWY)髄膜炎菌コンジュゲートワクチンが、9〜12カ月の月齢の子供に使用するために米国で認可されており(Menactra(商標)、sanofi pasteur社)：米国予防接種諮問委員会(Advisory Committee on Immunization Practices：ACIP)により、補体欠損症又は流行地域への旅行/居住による曝露に起因してIMDのリスクが高まっている子供に対して、このワクチンの2回投与が推奨されている[15]。別のMenACWYコンジュゲートワクチンは、2歳から使用するために認可されている(Menveo(商標)、Novartis社)。
【０００４】
GlaxoSmithKline Vaccines社の、破傷風トキソイド(TT)にコンジュゲートさせた全血清型を有するMenACWYワクチン(MenACWY-TT：Nimenrix(商標))は、ヨーロッパで単回投与として認可されているが、米国ではまだ試験研究中である。臨床試験は、MenACWY-TTの1回投与が、4種の血清型全てに関して免疫原性であり、さらに12カ月の月齢からの幼児、子供、青年及び成人に十分に耐容されることを実証した[16-23]。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
小児の免疫化スケジュールは過密であり、髄膜炎菌コンジュゲートワクチンが他の小児用ワクチンと共に免疫化スケジュールに組み込まれる場合、その安全性及び免疫原性を評価する必要性が残っている。他のワクチンとの同時投与が、干渉問題又は免疫原性の増強をもたらすか否かを確証することは有用である。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本研究は、生後2年目にさらなる投与として投与される場合の、髄膜炎菌コンジュゲートワクチンの免疫原性及び安全性を評価する。特に、本研究は、生後2年目のジフテリア・破傷風・無細胞(DTPa)ワクチンの投与との同時投与の効果について報告する。
【０００７】
上記の研究は、生後2年目の多価髄膜炎菌コンジュゲートワクチンとDTPa含有ワクチンとの同時投与が、これらのワクチンが異なる時点で投与された場合と比較して、髄膜炎菌コンジュゲートに対する増強された免疫応答をもたらすことを予想外に示した。髄膜炎菌コンジュゲートとDTPaとが同時に投与されるよりシンプルな免疫化スケジュールは、より少数回の通院と改善された免疫原性の二重の利益をもたらす。
【０００８】
本発明の1つの態様によれば、以下のステップ：
ａ)第１のキャリアタンパク質にコンジュゲートさせて細菌糖類コンジュゲートを形成した少なくとも1種の細菌糖類で0〜11カ月の第１の月齢でヒト患者を免疫するステップ；及び
ｂ)第2のキャリアタンパク質に別個にコンジュゲートさせた髄膜炎菌血清型A莢膜糖類(MenA)、髄膜炎菌血清型A莢膜糖類、髄膜炎菌血清型C莢膜糖類(MenC)、髄膜炎菌血清型W135莢膜糖類(MenW135)、及び髄膜炎菌血清型Y莢膜糖類(MenY)からなる群より選択される少なくとも2種の莢膜糖類を含有する髄膜炎菌コンジュゲートワクチンで12〜24カ月の第2の月齢でヒト患者を免疫するステップ
を含む、髄膜炎菌感染に対して免疫化する方法であって、上記髄膜炎菌コンジュゲートワクチンをジフテリアトキソイド及び破傷風トキソイドを含有するワクチンと同時に投与する、上記方法が提供される。
【０００９】
本発明のさらなる態様によれば、以下のステップａ)及びｂ)を含むスケジュールでヒト患者を免疫する、髄膜炎菌疾患の予防又は治療における多価髄膜炎菌コンジュゲートワクチンの医学的使用であって、ステップａ)が、第１のキャリアタンパク質にコンジュゲートさせて細菌糖類コンジュゲートを形成した少なくとも1種の細菌糖類で0〜11カ月の第１の月齢でヒト患者を免疫するステップであり；及びステップｂ)が、第2のキャリアタンパク質に別個にコンジュゲートさせた髄膜炎菌血清型A莢膜糖類(MenA)、髄膜炎菌血清型A莢膜糖類、髄膜炎菌血清型C莢膜糖類(MenC)、髄膜炎菌血清型W135莢膜糖類(MenW135)、及び髄膜炎菌血清型Y莢膜糖類(MenY)からなる群より選択される少なくとも2種の莢膜糖類を含有する髄膜炎菌コンジュゲートワクチンで12〜24カ月の第２の月齢でヒト患者を免疫するステップであり、上記髄膜炎菌コンジュゲートワクチンをジフテリアトキソイド及び破傷風トキソイドを含有するワクチンと同時に投与する、上記医学的使用が提供される。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】試験を通した被験者の流れ  被験者が試験から離脱した理由又は第4投与フェーズ中にプロトコルに従う免疫原性コホートから除外された理由の詳細については補足表3を参照されたい。＊被験者は、第4投与フェーズに参加するのに気が進まなかったため(n=83)；被験者が追跡不能だったため(n=47)；又は被験者が参加適格性を有していなかったため(n=78)、第4投与フェーズに参加しなかった。
【図２】12〜15カ月の月齢でのMenACWY-TT若しくはHibMenCY-TTによる、15〜18カ月の月齢でのMenACWY-TT + DTaPによる、又は15〜18カ月の月齢でのDTaPによる(対照群)、ワクチン接種1カ月後のhSBA力価≧1:8を有する被験者のパーセンテージ(ATP免疫原性コホート、第4投与フェーズ)。ATP = プロトコルに従う；hSBA = ヒト補体源を用いた血清殺菌活性。
【図３】12〜15カ月の月齢でのMenACWY-TT若しくはHibMenCY-TTによる、又は15〜18カ月の月齢でのMenACWY-TT + DTaPによる、或いは15〜18カ月の月齢でのDTaPによる(対照群)、ワクチン接種1カ月後のhSBA GMT(ATP免疫原性コホート、第4投与フェーズ)。ATP = プロトコルに従う；hSBA = ヒト補体源を用いた血清殺菌活性；GMT = 幾何平均力価  ＊は、同時投与群と他の群との間に観察された差を表す。
【図４】12〜15カ月の月齢でのMenACWY-TT若しくはHibMenCY-TTによる、又は15〜18カ月の月齢でのDTaP及びMenACWY-TTの(同時投与群)、ワクチン接種後8日以内の局所応答型症状及び全身応答型症状(総ワクチン接種コホート、第4投与フェーズ)。全ての群について、局所症状は、MenACWY-TT又はHibMenCY-TTの注射部位に少なくとも1つの局所症状を有する被験者のパーセンテージを指す。任意の発熱(任意の経路)≧38.0℃；グレード3：赤み及び腫脹＞30mm；痛み - 四肢に触れられると泣いた/自発痛がある；発熱(任意の経路)>40℃；被刺激性/神経質(Fussiness)及び眠気- 通常の活動を妨げた；食欲不振 - 全く食べない。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
本発明は、以下のステップ：
a) 第１のキャリアタンパク質にコンジュゲートさせて細菌莢膜糖類コンジュゲートを形成した少なくとも1種の細菌莢膜糖類で0〜11カ月の第１の月齢でヒト患者を免疫するステップ；及び
b) 第2のキャリアタンパク質に別個にコンジュゲートさせた髄膜炎菌血清型A莢膜糖類(MenA)、髄膜炎菌血清型A莢膜糖類、髄膜炎菌血清型C莢膜糖類(MenC)、髄膜炎菌血清型W135莢膜糖類(MenW135)、及び髄膜炎菌血清型Y莢膜糖類(MenY)からなる群より選択される少なくとも2種の莢膜糖類を含有する髄膜炎菌コンジュゲートワクチンで12〜24カ月の第2の月齢でヒト患者を免疫するステップ
を含む、髄膜炎菌感染に対して免疫化する方法であって、上記髄膜炎菌コンジュゲートワクチンをジフテリアトキソイド及び破傷風トキソイドを含有するワクチンと同時に投与する、上記方法を開示する。
【００１２】
ステップa)は、生後1年目の免疫化であり、典型的には0〜8、1〜7又は2〜6カ月の月齢のヒト乳児で行われる。一実施形態において、ステップa)の免疫化は、インフルエンザ菌(Haemophilus influenza (Hib))糖類コンジュゲート並びに/又は髄膜炎菌血清型C(MenC)莢膜糖類コンジュゲート及び/若しくは髄膜炎菌血清型Y(MenY)莢膜糖類コンジュゲートを含む。
【００１３】
一実施形態において、ステップa)において投与される、1つのコンジュゲート、又は複数のコンジュゲートのそれぞれは、破傷風トキソイド、ジフテリアトキソイド又はCRM197から選択されるキャリアタンパク質を含有する。ステップa)において複数のコンジュゲートが投与される好ましい実施形態では、同じ種類のキャリアタンパク質が各糖に独立してコンジュゲートされる。好ましい実施形態において、第1のキャリアタンパク質は破傷風トキソイドである。
【００１４】
一実施形態において、ステップa)の免疫化は、例えば2、4及び6カ月の月齢のヒト乳児を免疫することによる、2回量又は3回量の細菌糖類コンジュゲート(1種又は複数種)の投与を含む。
【００１５】
一実施形態において、ステップa)の間、細菌莢膜糖類コンジュゲート(1種又は複数種)、例えばHib、MenC及び/又はMenYは、ジフテリア、破傷風及び百日咳抗原(DTP)を含有するワクチンと同時に投与される。ジフテリア抗原は典型的にはジフテリアトキソイドであり、破傷風抗原は典型的には破傷風トキソイドであり、また百日咳抗原は全細胞百日咳であっても無細胞百日咳であってもよく、場合によって1種以上の百日咳トキソイド、FHA又はパータクチンを含有する。一実施形態において、DTPワクチンは、B型肝炎表面抗原及び/又はIPVをさらに含む。一実施形態において、ステップa)の免疫化は、破傷風トキソイドにコンジュゲートさせた2.5μgのHib PRPと、破傷風トキソイドにコンジュゲートさせたそれぞれ5μgのMenC及びY莢膜糖類とを含有するHibMenCY-TTワクチン(合計TT含有量5〜40、10〜30、15〜20μg又は約18μg)を投与する。
【００１６】
ステップb)は、生後2年目(すなわち12〜24カ月、好ましくは13〜20カ月、12〜18カ月、14〜18カ月又は15〜18カ月の月齢)の同じヒト患者を免疫するステップを含む。ステップb)の免疫化は、i) 多価髄膜炎菌莢膜糖コンジュゲートワクチンと、ii) ジフテリアトキソイド及び破傷風トキソイドを含有するワクチンとの同時投与を含む。多価髄膜炎菌莢膜糖コンジュゲートワクチンは、MenA、MenC、MenW135及びMenYの少なくとも2種；例えば：血清型C及びY莢膜多糖(MenCY)、血清型C及びA莢膜多糖(MenAC)、血清型C及びW135莢膜多糖(MenCW)、血清型A及びY莢膜多糖(MenAY)、血清型A及びW135莢膜多糖(MenAW)、血清型W135及びY莢膜多糖(MenWY)、血清型A、C及びW135莢膜多糖(MenACW)、血清型A、C及びY莢膜多糖(MenACY)；血清型A、W135及びY莢膜多糖(MenAWY)、血清型C、W135及びY莢膜多糖(MenCWY)；又は血清型A、C、W135及びY莢膜多糖(MenACWY)のコンジュゲートを含有する。
【００１７】
一実施形態において、多価髄膜炎菌莢膜糖コンジュゲートワクチンは、破傷風トキソイド、ジフテリアトキソイド又はCRM197からなる群より選択されるキャリアタンパク質(第2のキャリアタンパク質)を使用する。一実施形態において、第2のキャリアは破傷風トキソイドである。好ましい実施形態において、第1のキャリアタンパク質と第2のキャリアタンパク質は同じであり、好ましくは破傷風トキソイドである。
【００１８】
一実施形態において、同時に投与される、ジフテリアトキソイド及び破傷風トキソイドを含有するワクチンは、全細胞百日咳又は無細胞百日咳である百日咳成分をさらに含有する(例えば百日咳トキソイド、FHA及びパータクチンを含有する)、DTPワクチンである。一実施形態において、ジフテリアトキソイド及び破傷風トキソイドを含有するワクチンは、さらなる抗原(例えばHBV及び/又はIPV)を含む。
【００１９】
一実施形態において、多価髄膜炎菌コンジュゲートワクチンとジフテリアトキソイド及び破傷風トキソイドを含有するワクチンとの同時投与は、少なくとも1種の髄膜炎菌成分；例えば、MenC、MenY、MenW135、MenC及びMenY、MenC及びMenW135又はMenC、MenW135及びMenYの免疫原性の上昇をもたらす。一実施形態において、免疫原性の上昇は、任意により生後2年目の多価髄膜炎菌コンジュゲートワクチンによるワクチン接種時又は接種後に採取した血清上で実施される、SBAアッセイで(場合によってヒト補体源を用いて)測定される。一実施形態において、GMTは、ジフテリアトキソイド及び破傷風トキソイドを含有するワクチンとの同時投与後に、多価髄膜炎菌コンジュゲートワクチン単独の投与後のGMTと比較して、少なくとも10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％又は100％上昇する。
【００２０】
一実施形態において、ステップb)のキャリアタンパク質は、髄膜炎菌コンジュゲート投与において、10〜100、20〜90、20〜80、30〜70、35〜60又は40〜50μgの合計用量で存在する。例えば、キャリアタンパク質としてTT、DT又はCRM197を有する4価髄膜炎菌コンジュゲートワクチンについては、20〜80μgの合計キャリアタンパク質用量が想定される。二価髄膜炎菌コンジュゲートワクチンについては、20〜40μgの、TT、DT又はCRM197の合計キャリアタンパク質用量が想定される。
【００２１】
免疫化の方法に関して上記に示される詳細は、髄膜炎菌疾患の予防又は治療における多価髄膜炎菌コンジュゲートワクチンの使用に同様に適用される。
【００２２】
一実施形態において、少なくとも1種、2種、3種、4種又は各髄膜炎菌多糖の平均サイズ(又は分子量)は、MALLSにより決定すると、50kDa-1500kDa、50kDa-500kDa、50kDa-300kDa、101kDa-1500kDa、101kDa-500kDa又は101kDa-300kDaである。
【００２３】
一実施形態において、MenA多糖は、存在する場合、MALLSにより決定すると、50-500kDa、50-100kDa、100-500kDa、55-90kDa、60-70kDa若しくは70-80kDa又は60-80kDaの分子量を有する。
【００２４】
一実施形態において、MenC多糖は、存在する場合、MALLSにより決定すると、100-200kDa、50-100kDa、100-150kDa、101-130kDa、150-210kDa又は180-210kDaの分子量を有する。
【００２５】
一実施形態において、MenY多糖は、存在する場合、MALLSにより決定すると、60-190kDa、70-180kDa、80-170kDa、90-160kDa、100-150kDa又は110-140kDa、50-100kDa、100-140kDa、140-170kDa又は150-160kDaの分子量を有する。
【００２６】
一実施形態において、MenW多糖は、存在する場合、MALLSにより決定すると、60-190kDa、70-180kDa、80-170kDa、90-160kDa、100-150kDa、110-140kDa、50-100kDa又は120-140kDaの分子量を有する。
【００２７】
本明細書中の多糖の分子量又は平均分子量は、コンジュゲーション前に測定され、MALLSにより決定される多糖の重量平均分子量(Mw)を指す。
【００２８】
MALLS技術は当技術分野において周知であり、典型的には実施例2に記載されるとおりに実施される。髄膜炎菌糖類のMALLS分析については、2つのカラム(TSKG6000と5000PWxl、TOSOH Bioscience社)を組み合わせて使用することが可能であり、糖類は水中に溶出される。糖類は、光散乱検出器(例えば、488nmの10mWアルゴンレーザーを備えたWyatt Dawn DSP)及びインフェロメトリック(inferometric)屈折計(例えば、P100セルと498nmの赤色フィルターを備えたWyatt Otilab DSP)を使用して検出される。
【００２９】
一実施形態において、髄膜炎菌多糖は、天然の多糖であるか、又は通常の抽出過程の間にサイズが低下した天然の多糖である。
【００３０】
一実施形態において、髄膜炎菌多糖は、機械的切断により、例えば、微小流動化(microfluidization)又は超音波処理によってサイジングされる。微小流動化及び超音波処理は、比較的大きな天然の多糖のサイズを、濾過可能なコンジュゲートを提供するのに十分に低下させる利点を有する。サイジングは、20倍、10倍、8倍、6倍、5倍、4倍、3倍、2倍又は1.5倍以下である。
【００３１】
一実施形態において、免疫原性組成物は、天然の多糖と、20倍以下にサイジングされる多糖との混合物から作製される髄膜炎菌コンジュゲートを含む。例えば、MenC及び/又はMenAに由来する多糖は天然である。例えば、MenY及び/又はMenWに由来する多糖は、20倍、10倍、8倍、6倍、5倍、4倍、3倍、2倍又は1.5倍以下にサイジングされる。例えば、免疫原性組成物は、20倍、10倍、8倍、6倍、5倍、4倍、3倍、2倍若しくは1.5倍以下にサイジングされる及び/又は微小流動化される、MenY及び/又はMenW及び/又はMenC及び/又はMenAから作製されるコンジュゲートを含有する。例えば、免疫原性組成物は、天然のMenA及び/又はMenC及び/又はMenW及び/又はMenYから作製されるコンジュゲートを含有する。例えば、免疫原性組成物は、天然のMenCから作製されるコンジュゲートを含む。例えば、免疫原性組成物は、20倍、10倍、8倍、6倍、5倍、4倍、3倍、2倍若しくは1.5倍以下にサイジングされる及び/又は微小流動化される天然のMenC及びMenAから作製されるコンジュゲートを含む。例えば、免疫原性組成物は、20倍、10倍、8倍、6倍、5倍、4倍、3倍、2倍若しくは1.5倍以下にサイジングされる、及び/又は微小流動化される天然のMenC及びMenYから作製されるコンジュゲートを含む。
【００３２】
一実施形態において、多糖の多分散性は、1〜1.5、1〜1.3、1〜1.2、1〜1.1又は1〜1.05であり、またキャリアタンパク質へのコンジュゲーション後、コンジュゲートの多分散性は、1.0〜2.5、1.0〜2.0、1.0〜1.5、1.0〜1.2、1.5〜2.5、1.7〜2.2又は1.5〜2.0である。多分散性測定は全て、MALLSによって行われる。
【００３３】
多糖は、場合によって、細菌から単離される多糖のサイズから1.5、2、4、6、8、10、12、14、16、18又は20倍までサイジングされる。
【００３４】
一実施形態において、多価髄膜炎菌コンジュゲートワクチンは、髄膜炎菌血清型Bに由来する抗原をさらに含む。この抗原は、場合によって髄膜炎菌血清型B(MenB)に由来する莢膜多糖若しくはサイジングされた多糖又はそれらに由来するオリゴ糖である。抗原は、場合によって、EP301992、WO 01/09350、WO 04/14417、WO 04/14418及びWO 04/14419に記載される、髄膜炎菌血清型Bから調製される外膜ベシクル調製物である。
【００３５】
一実施形態において、多価髄膜炎菌コンジュゲートワクチンは、キャリアタンパク質にコンジュゲートさせたインフルエンザ菌b(Hib)莢膜糖類をさらに含む。
【００３６】
本発明の医薬組成物に含まれる髄膜炎菌多糖(1種又は複数種)(及び場合によってHib莢膜糖類)は、破傷風トキソイド、破傷風トキソイドフラグメントC、破傷風毒素の非毒性変異体、ジフテリアトキソイド、CRM197、ジフテリア毒素の他の非毒性変異体[例えばCRM176、CRM 197、CRM228、CRM 45(Uchidaら、J. Biol. Chem. 218；3838-3844, 1973年)；Nicholls及びYouleにより、Genetically Engineered Toxins, Frankel, Maecel Dekker Inc(編), 1992年に記載されているCRM9、CRM45、CRM102、CRM103及びCRM107並びに他の変異；Glu-148からAsp、Gln若しくはSer及び/又はAla 158からGlyへの欠失或いは変異、並びにUS 4709017又はUS 4950740に開示される他の変異；少なくとも1つ以上の残基Lys516、Lys526、Phe530及び/又はLys534の変異、並びにUS 5917017又はUS 6455673に開示される他の変異；或いはUS 5843711に開示されるフラグメント]などのキャリアタンパク質にコンジュゲートしている。
【００３７】
一実施形態において、本発明の多価髄膜炎菌コンジュゲートワクチンは、少なくとも2種、3種、4種又は各髄膜炎菌多糖において同じキャリアタンパク質を(独立して)使用する。一実施形態において、Hibが存在する場合、Hibは、少なくとも1種、2種、3種、4種又は各髄膜炎菌多糖と同じキャリアタンパク質にコンジュゲートされていてよい。例えば、1種、2種、3種又は4種の髄膜炎菌多糖が独立して破傷風トキソイドにコンジュゲートされ、1種、2種、3種又は4種のコンジュゲートを作製する。
【００３８】
一実施形態において、単一のキャリアタンパク質が2つ以上の糖抗原を有していてよい(WO 04/083251)。例えば、単一のキャリアタンパク質が、MenA及びMenC；MenA及びMenW；MenA及びMenY；MenC及びMenW；MenC及びMenY；MenW及びMenY；MenA、MenC及びMenW；MenA、MenC及びMenY；MenA、MenW及びMenY；MenC、MenW及びMenY；MenA、MenC、MenW及びMenY；Hib及びMenA；Hib及びMenC；Hib及びMenW；又はHib及びMenYとコンジュゲートしていてもよい。
【００３９】
多価髄膜炎菌コンジュゲートワクチンは、場合によって、1:5〜5:1、1:2〜5:1、1:0.5〜1:2.5又は1:1.25〜1:2.5(w/w)のMen糖とキャリアタンパク質(特に破傷風トキソイド)の比を有する少なくとも1種の髄膜炎菌糖(例えばMenA；MenC；MenW；MenY；MenA及びMenC；MenA及びMenW；MenA及びMenY；MenC及びMenW；Men C及びMenY；MenW及びMenY；MenA、MenC及びMenW；MenA、MenC及びMenY；MenA、MenW及びMenY；MenC、MenW及びMenY又はMenA、MenC、MenW及びMenY)コンジュゲートを含む。
【００４０】
コンジュゲート中の糖とキャリアタンパク質の比(w/w)は、滅菌コンジュゲートを使用して決定することができる。タンパク質の量は、Lowryアッセイ(例えば、Lowryら(1951年) J. Biol. Chem. 193, 265-275又はPetersonら、Analytical Biochemistry 100、201-220(1979年))を使用して決定され、糖の量は、MenAについてはICP-OES(誘導結合プラズマ発光分光分析装置(inductively coupled plasma-optical emission spectroscopy))を使用して、MenCについてはDMAPアッセイを使用して、またMenW及びMenYについてはレゾルシノール(Resorcinol)アッセイ(Monsignyら、(1988年) Anal. Biochem. 175, 525〜530)を使用して決定される。
【００４１】
一実施形態において、髄膜炎菌莢膜糖(1種又は複数種)及び/又はHib糖は、リンカー(例えば二官能性リンカー)を介してキャリアタンパク質にコンジュゲートされる。リンカーは、場合によってヘテロ二官能性又はホモ二官能性であり、例えば反応性アミノ基及び反応性カルボン酸基、2個の反応性アミノ基又は2個の反応性カルボン酸基を有する。リンカーは、例えば、4〜20個、4〜12個、5〜10個の炭素原子を有する。可能性のあるリンカーはADHである。他のリンカーとしては、B-プロピオンアミド(WO 00/10599)、ニトロフェニル-エチルアミン(Geverら、(1979年) Med. Microbiol. Immunol. 165；171-288)、ハロゲン化ハロアルキル(US 4057685)、グリコシド結合(US 4673574、US 4808700)、ヘキサンジアミン及び6-アミノカプロン酸(US 4459286)が挙げられる。
【００４２】
本発明において使用される多糖コンジュゲートは、任意の公知の結合技術によって調製することができる。コンジュゲーション方法は、1-シアノ-4-ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロボレート(CDAP)を用いた糖の活性化によって、シアン酸エステルを形成することができる。このようにして、活性化された糖は、直接、又はスペーサー(リンカー)基を介してキャリアタンパク質上のアミノ基に結合させることができる。例えば、スペーサーは、チオール多糖を与えるシスタミン又はシステアミンであって良く、このチオール化多糖は(例えばGMBSを使用した)マレイミド活性化キャリアタンパク質又は(例えばヨードアセチミド(iodoacetimide)若しくはN-スクシンイミジルブロモアセテートを使用した)ホロアセチル化キャリアタンパク質との反応後に、チオエーテル結合を介してキャリアに結合し得る。場合によって、シアン酸エステル(場合によってCDAP化学により作製される)は、ヘキサンジアミン若しくはADHにより結合し、アミノ誘導体化糖は、カルボジイミド(例えば、EDAC又はEDC)化学を用いてキャリアタンパク質にコンジュゲートする。このようなコンジュゲートは、PCT国際公開 WO 93/15760(Uniformed Services University)並びにWO 95/08348及びWO 96/29094に記載されている。
【００４３】
他の好適な技術は、カルビイニド(carbiinide)、ヒドラジド、活性エステル、ノルボラン(norborane)、p-ニトロ安息香酸、N-ヒドロキシスクシンイミド、S-NHS、EDC、TSTUを使用する。多くは、WO 98/42721に記載されている。コンジュゲーションは、糖の遊離ヒドロキシル基をCDIと反応させ(Bethellら、J. Biol. Chem. 1979年, 254；2572-4、Hearnら、J. Chromatogr. 1981年 218；509-18)、その後のタンパク質と反応させてカルバメート結合を形成することによって形成され得るカルボニルリンカーを含み得る。これは、アノマー末端の第1級ヒドロキシル基への還元、第1級ヒドロキシル基の任意の保護/脱保護、第1級ヒドロキシル基とCDIとの反応によるCDIカルバメート中間体の形成、及びCDIカルバメート中間体とタンパク質上のアミノ基との結合を含み得る。
【００４４】
コンジュゲートはまた、US 4365170(Jennings)及びUS 4673574(Anderson)に記載される直接還元的アミノ化方法によって調製することもできる。他の方法は、EP-0-161-188、EP-208375及びEP-0-477508に記載されている。
【００４５】
さらなる方法は、例えばEDACを使用した、カルボジイミド縮合(Chu C.ら、Infect. Immunity, 1983年 245 256)による、アジピン酸ヒドラジド(ADH)で誘導体化された臭化シアン(又はCDAP)活性化糖の、タンパク質キャリアへの結合を含む。
【００４６】
一実施形態において、糖上のヒドロキシル基(場合によって活性化ヒドロキシル基、例えばシアネートエステルにより活性化されたヒドロキシル基)は、直接的又は(リンカーを通して)間接的にタンパク質上のアミノ基又はカルボキシル基に結合している。リンカーが存在する場合、糖上のヒドロキシル基は、例えばCDAPコンジュゲーションを用いて、場合によってリンカー上のアミノ基に結合している。リンカー中のさらなるアミノ基(例えばADH)は、例えばカルボジイミド化学を使用することにより(例えばEDACを用いることにより)、タンパク質上のカルボン酸基にコンジュゲートしていてよい。一実施形態において、Hib又は髄膜炎菌莢膜多糖(1種若しくは複数種)は、リンカーがキャリアタンパク質にコンジュゲートされる前に、最初にリンカーにコンジュゲートしている。
【００４７】
一実施形態において、Hib糖は、存在する場合、CNBr、若しくはCDAP、又はCDAPとカルボジイミド化学(例えばEDAC)との組み合わせ、若しくはCNBrとカルボジイミド化学(例えばEDAC)との組み合わせを用いてキャリアタンパク質にコンジュゲートされる。場合によって、Hibは、CNBr及びカルボジイミド化学、場合によってEDACを使用してコンジュゲートされる。例えば、CNBrを使用して糖とリンカーとを連結し、その後、カルボジイミド化学を使用してリンカーをタンパク質キャリアに連結する。
【００４８】
一実施形態において、少なくとも1種の髄膜炎菌莢膜多糖は、キャリアタンパク質に直接コンジュゲートされ；場合によってMenW及び/又はMenY及び/又はMenC糖(1種又は複数種)は、キャリアタンパク質に直接コンジュゲートされる。例えば、MenW；MenY；MenC；MenW及びMenY；MenW及びMenC；MenY及びMenC；又はMenW、MenY及びMenCは、キャリアタンパク質に直接結合される。場合によって少なくとも1種の髄膜炎菌莢膜多糖は、CDAPにより直接コンジュゲートされる。例えば、MenW；MenY；MenC；MenW及びMenY；MenW及びMenC；MenY及びMenC；又はMenW、MenY及びMenCは、CDAPによりキャリアタンパク質に直接に結合される(WO 95/08348及びWO 96/29094を参照)。一実施形態において、全ての髄膜炎菌莢膜多糖は、破傷風トキソイドにコンジュゲートされる。
【００４９】
場合によって、MenW及び/若しくはY糖とキャリアタンパク質との比は、1:0.5〜1:2(w/w)であり、並びに/又はMenC糖とキャリアタンパク質との比は、1:0.5〜1:4又は1:1.25〜1:1.5又は1:0.5〜1:1.5(w/w)である（特にこれらの糖類が、任意によりCDAPを使用してタンパク質に直接結合している場合）。
【００５０】
一実施形態において、少なくとも1種の髄膜炎菌莢膜多糖(1種又は複数種)は、リンカー(例えば二官能性リンカー)を介してキャリアタンパク質にコンジュゲートしている。リンカーは、場合によってヘテロ二官能性又はホモ二官能性であり、例えば反応性アミン基及び反応性カルボン酸基、2個の反応性アミン基又は2個の反応性カルボン酸基を有する。リンカーは、例えば、4〜20、4〜12、5〜10個の炭素原子を有する。可能性のあるリンカーはADHである。
【００５１】
一実施形態において、MenA；MenC；又はMenA及びMenCは、リンカーを介してキャリアタンパク質(例えば破傷風トキソイド)にコンジュゲートしている。
【００５２】
一実施形態において、少なくとも1種の髄膜炎菌多糖は、CDAP及びEDACを使用して、リンカーを介してキャリアタンパク質にコンジュゲートしている。例えば、MenA；MenC；又はMenA及びMenCは、上記のCDAP及びEDACを使用して、リンカー(例えば、ADHなどの末端に2個のヒドラジノ基を有するリンカー)を介してタンパク質にコンジュゲートしている。例えば、CDAPを使用して糖をリンカーにコンジュゲートさせ、またEDACを使用してリンカーをタンパク質にコンジュゲートさせる。場合によって、リンカーを介したコンジュゲーションは、MenA；MenC；又はMenA及びMenCについて、1:0.5〜1:6；1:1〜1:5又は1:2〜1:4の多糖とキャリアタンパク質との比をもたらす。
【００５３】
一実施形態において、MenA莢膜多糖は、存在する場合、少なくとも部分的にO-アセチル化されており、例えば少なくとも50％、60％、70％、80％、90％、95％又は98％の反復単位が少なくとも1つの位置においてO-アセチル化されている。O-アセチル化は、例えば、少なくとも50％、60％、70％、80％、90％、95％又は98％の反復単位の少なくともO-3位に存在する。
【００５４】
一実施形態において、MenC莢膜多糖は、存在する場合、少なくとも部分的にO-アセチル化されており、例えば少なくとも30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％又は98％の(α2→9)結合NeuNAc反復単位が少なくとも1つ又は2つの位置においてO-アセチル化されている。O-アセチル化は、例えば、少なくとも30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％又は98％の反復単位のO-7位及び/又はO-8位に存在する。
【００５５】
一実施形態において、MenW莢膜多糖は、存在する場合、少なくとも部分的にO-アセチル化されており、例えば少なくとも30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％又は98％の反復単位が少なくとも1つ又は2つの位置においてO-アセチル化されている。O-アセチル化は、例えば、少なくとも30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％又は98％の反復単位のO-7位及び/又はO-9位に存在する。
【００５６】
一実施形態において、MenY莢膜多糖は、存在する場合、少なくとも部分的にO-アセチル化されており、例えば少なくとも20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％又は98％の反復単位が、少なくとも1つ又は2つの位置においてO-アセチル化されている。O-アセチル化は、少なくとも20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％又は98％の反復単位の7位及び/又は9位に存在する。
【００５７】
O-アセチル化パーセントは、O-アセチル化を含有する反復単位のパーセントを指す。これは、多糖において、コンジュゲーション前及び/又はコンジュゲーション後に測定され得る。
【００５８】
「糖」という用語は、多糖又はオリゴ糖を包含する。多糖は、細菌から単離されるか、又は細菌から単離されて公知の方法によって(例えばEP497524及びEP497525を参照)、また場合によって微小流動化により、ある程度サイジングされる。多糖は、多糖サンプルの粘度を低下させるため、及び/又はコンジュゲート生成物の濾過可能性を高めるためにサイジングすることができる。オリゴ糖は、典型的には、少数の反復単位(典型的には5〜30個の反復単位)を有する加水分解多糖であることを特徴とする。
【００５９】
平均用量は、全てのさらなる多糖の用量を加算し、さらなる多糖の数で割ることによって決定される。さらなる多糖は、Hibを除く免疫原性組成物中の全ての多糖であり、髄膜炎菌莢膜多糖を包含し得る。「用量」は、ヒトに投与される免疫原性組成物又はワクチンの量である。
【００６０】
Hib糖は、インフルエンザ菌b型のポリリボシルホスフェート(PRP)莢膜多糖又はそれに由来するオリゴ糖である。
【００６１】
一実施形態において、多価髄膜炎菌コンジュゲートワクチンは、各髄膜炎菌莢膜糖を、0.1〜20μg；1〜10μg；2〜10μg、2.5〜5μg、約若しくは正確に5μg；又は約若しくは正確に2.5μgの用量で含有する。
【００６２】
「約(Around)」又は「約(approximately)」、若しくは「ほぼ(approximately)」は、本発明の目的のための所与の数字から10％多いか又は少ない値までの範囲内と定義される。
【００６３】
本発明の一実施形態において、少なくとも2種、3種、4種又は各髄膜炎菌糖コンジュゲートのそれぞれの糖用量は、場合によって同じであるか、又はほぼ同じである。
【００６４】
多価髄膜炎菌コンジュゲートワクチンは、場合によって、MenA、MenC、MenW135及びMenYを、1:1:1:1又は2:1:1:1又は1:2:1:1又は2:2:1:1又は1:3:1:1又は1:4:1:1(w/w)の糖用量比で含有する。
【００６５】
本発明の方法又は使用において用いられるワクチンは、場合によって製薬上許容される賦形剤を含有する。
【００６６】
一実施形態において、多価髄膜炎菌コンジュゲートワクチンは、pH7.0〜8.0、pH7.2〜7.6又は約若しくは正確にpH7.4で緩衝されるか、又はpH7.0〜8.0、pH7.2〜7.6又は約若しくは正確にpH7.4に調整される。
【００６７】
多価髄膜炎菌コンジュゲートワクチンは、場合によって、安定剤(例えば、スクロース又はトレハロースなどのポリオール)の存在下で凍結乾燥される。
【００６８】
場合によって、多価髄膜炎菌コンジュゲートワクチンは、免疫原に対する免疫応答を増強するのに十分な量のアジュバントを含有する。好適なアジュバントとしては、例えば、限定するものではないが、アルミニウム塩(リン酸アルミニウム又は水酸化アルミニウム)、スクアレン混合物(SAF-1)、ムラミルペプチド、サポニン誘導体、マイコバクテリウム細胞壁調製物、モノホスホリルリピドA、ミコール酸誘導体、非イオン性ブロックコポリマー界面活性剤、Quil A、コレラ毒素Bサブユニット、ポリホスファゼン及び誘導体、並びにTakahashiら、(1990年) Nature 344:873-875により記載されているものなどの免疫刺激複合体(ISCOM)が挙げられる。
【００６９】
上記で考察される髄膜炎菌又はHibMenの組み合わせにおいて、アルミニウム塩アジュバント又はアジュバントを全く使用しないことが有利であり得る。
【００７０】
全ての免疫原性組成物又はワクチンと同様に、免疫原の免疫学的有効量は、経験的に決定されなければならない。考慮すべき因子としては、免疫原性(免疫原がアジュバント又はキャリアタンパク質若しくは他のキャリアと複合体を形成するか、又はこれらに共有結合するか否かに関わらず)、投与経路及び投与される免疫化用量の数が挙げられる。このような因子はワクチンの技術分野において公知であり、過度の実験を行うことなくこのような決定を行うことは、免疫学者の技術の範疇である。
【００７１】
活性剤は、本発明の医薬組成物又はワクチンにおいて様々な濃度で存在し得る。典型的には、当該物質の最小濃度はその使用目的を達成するために必要な量であるが、最大濃度は、溶液中に残るか、又は初期の混合物中に均一に懸濁される最大量である。例えば、治療剤の最小量は、場合によって単一の治療上有効用量を提供する量である。生物活性物質については、最小濃度は、再構成の際の生物活性に必要な量であり、最大濃度は、均一な懸濁を維持することができない濃度点である。単一投与単位の場合、その量は、単一の治療的投与の量である。一般的に、各用量は、1〜100μgのタンパク質抗原、場合によって5〜50μg又は5〜25μgのタンパク質抗原を含むことが予想される。細菌糖類の用量の例は、10〜20μg、5〜10μg、2.5〜5μg又は1〜2.5μgである。上記の物質の好ましい量は物質間で異なるが、当業者により容易に決定可能である。
【００７２】
本発明のワクチン調製物は、上記のワクチンを全身経路又は粘膜経路を介して投与することによって、感染症を起こしやすいヒト患者を保護又は治療するために使用することができる。ヒト患者は、場合によって乳児(12カ月未満)、又は幼児(12〜24、12〜16又は12〜14カ月)である。これらの投与は、筋肉内、腹腔内、皮内若しくは皮下経路を介した注入；又は口道/消化管、気道、尿生殖路への粘膜投与を介した注入を含み得る。単一の投与経路に加えて、2つの異なる投与経路を使用することができる。例えば、ウイルス抗原はID(皮内)投与することができ、細菌タンパク質はIM(筋肉内)又はIN(鼻腔内)投与することができる。糖類が存在する場合、これらはIM(又はID)投与することが可能であり、また細菌タンパク質は、IN(又はID)投与することができる。さらに、本発明のワクチンは、初回刺激投与についてはIM投与し、追加免疫用量についてはIN投与することができる。
【００７３】
本発明者らは、髄膜炎菌血清型A莢膜糖類(MenA)、髄膜炎菌血清型C莢膜糖類(MenC)、髄膜炎菌血清型W135莢膜糖類(MenW135)及び髄膜炎菌血清型Y莢膜糖類(MenY)からなる群より選択される少なくとも2種の莢膜糖類を含む髄膜炎菌コンジュゲートワクチンの後の追加免疫投与が、莢膜糖類抗原に対してさらに強力な免疫応答を生じさせ得るとさらに決定した。実施例3に提供されるデータは、最初の免疫化の数年後に与えられる追加免疫化が、SBAアッセイにより評価してはるかに高いGMTを与えることを示す。髄膜炎菌コンジュゲートワクチンのさらなる追加免疫投与は、ワクチン誘導性保護の持続期間を延ばし得る。さらなる追加免疫投与は、本発明の独立した態様であると考えることもできるし、本発明の同時投与態様のさらなるステップであると考えることもできる。
【００７４】
従って、髄膜炎菌感染に対して免疫化する方法であって、キャリアタンパク質に別個にコンジュゲートさせた髄膜炎菌血清型A莢膜糖類(MenA)、髄膜炎菌血清型C莢膜糖類(MenC)、髄膜炎菌血清型W135莢膜糖類(MenW135)、及び髄膜炎菌血清型Y莢膜糖類(MenY)からなる群より選択される少なくとも2種の莢膜糖類を含有する多価髄膜炎菌コンジュゲートワクチンでヒト患者を12〜24カ月の月齢で免疫し、それぞれキャリアタンパク質に別個にコンジュゲートさせたMenA、MenC、MenW135及びMenYの少なくとも2種を含有する追加免疫用(boosting)髄膜炎菌コンジュゲートワクチンでヒト患者を4〜20、5〜15、5〜11、5〜9、又は5〜6歳の年齢で再免疫するステップを含む、上記方法が提供される。
【００７５】
一実施形態において、多価髄膜炎菌コンジュゲートワクチンは、MenC及びMenYコンジュゲートを含み、及び/又は追加免疫用髄膜炎菌コンジュゲートワクチンは、MenC及びMenYコンジュゲートを含む。
【００７６】
一実施形態において、多価髄膜炎菌コンジュゲートワクチンは、MenA、MenC、MenW-135及びMenYコンジュゲートを含み、及び/又は追加免疫用髄膜炎菌コンジュゲートワクチンは、MenA、MenC、MenW135及びMenYコンジュゲートを含む。
【００７７】
一実施形態において、追加免疫用髄膜炎菌コンジュゲートワクチンの各莢膜糖類は、破傷風トキソイド、ジフテリアトキソイド又はCRM197からなる群より選択されるキャリアタンパク質にコンジュゲートされ、好ましくは、キャリアタンパク質は破傷風トキソイド又はCRM197であり、より好ましくは、キャリアタンパク質は破傷風トキソイドである。
【００７８】
一実施形態において、多価髄膜炎菌コンジュゲートワクチンの各莢膜糖類は、破傷風トキソイド、ジフテリアトキソイド又はCRM197からなる群より選択されるキャリアタンパク質にコンジュゲートされ、好ましくは、キャリアタンパク質は破傷風トキソイド又はCRM197であり、より好ましくは、キャリアタンパク質は破傷風トキソイドである。
【００７９】
本発明の最初の態様のための上記の髄膜炎菌糖類及びコンジュゲートの特性は、本発明の第2の態様にも適用し得ることが理解されるだろう。従って、上記の髄膜炎菌糖類及びコンジュゲートの説明は、場合によって、多価髄膜炎菌コンジュゲートワクチン及び追加免疫用髄膜炎菌コンジュゲートワクチンに含まれる。
【００８０】
ワクチン調製は、VaccineDesign(“The subunit and adjuvant approach” (Powell M.F. & Newman M.J.編)(1995年) Plenum Press New York)に一般的に記載されている。リポソームへのカプセル化は、Fullertonにより、米国特許第4,235,877号に記載されている。
【００８１】
本明細書中の用語「含む」(「comprising」、「comprise」及び「comprises」)は、本発明者らにより、場合によって、それぞれ用語「からなる」(「consisting of」、「consist of」及び「consists of」)といかなる場合も置換可能であると意図される。
【００８２】
この特許明細書中で引用される全ての参考文献又は特許出願は、参照により本明細書中に組み込まれる。
【００８３】
本発明をさらに良く理解することができるように、以下の実施例を示す。これらの実施例は、例示の目的のみのためであり、いかなる方法でも本発明の範囲を限定すると解釈されてはならない。
【実施例】
【００８４】
実施例1
試験設計
このフェーズIII、無作為化対照試験は、米国内の59カ所の施設において、医薬品の臨床試験実施基準(Good Clinical Practice)及びヘルシンキ宣言(Declaration of Helsinki)(1996年 サマーセットウェスト)に従って実施された。登録前に、各被験者の親/保護者から、書面によるインフォームドコンセントを得た。
【００８５】
健康な乳児を、HibMenCY-TT及びDTaP-HBV-IPV、又はHib-TT+DTaP-HBV-IPVによる2、4及び6カ月の月齢でのワクチン接種に登録して5:1に無作為化した(表1、図1)。12〜15カ月の月齢(第4投与フェーズ)において、HibMenCY-TT+DTaP-HBV-IPVのワクチン接種を受けた子供は再無作為化され(2:2:1)、12〜15カ月の月齢でMenACWY-TT、その後15〜18カ月の月齢でDTaP(MenACWY-TT群)；15〜18カ月の月齢でMenACWY-TTとDTaPとの同時投与(同時投与群(Coad group))；又は12〜15カ月の月齢でHibMenCY-TT、その後15〜18カ月の月齢でDTaPの接種を受けた(HibMenCY-TT群)。Hib-TT+DTaP-HBV-IPVで初回刺激された子供は再無作為化されず、15〜18カ月の月齢でDTaPの接種を受けた(対照群)。同時投与群、MenACWT-TT群及び対照群の被験者は、試験実施時に起こっていた米国内におけるHibコンジュゲートワクチンの不足のため、Hibの追加免疫ワクチン接種を受けなかった。Hibの追加免疫ワクチン接種は、Hibコンジュゲートワクチンが再び利用できるようになったときまで延期された[25]。試験は、＜2歳の子供への使用が米国内で認可された髄膜炎菌コンジュゲートワクチンが利用可能となる前に実施された；このため対照群は、試験中、髄膜炎菌ワクチンの接種を受けなかった。全被験者は、ACIPにより推奨される所定のワクチン接種を受けることが許容された。
【００８６】
試験は、ワクチンの外観が異なっていたため、一次フェーズでは単一盲検であった。第4投与の前に、親/保護者は、一次フェーズで彼らの子供がどのワクチンの接種を受けたかについて知らされ、様々な治療群についてワクチン数及び血清サンプリング時点が異なることから、第4投与フェーズにおける子供の治療群について認識していた。
【００８７】
無作為化リストを使用して、ワクチンに番号を付けた。各試験フェーズへの無作為割り当ては中央webベースシステムを用いて実施され、このシステムは、個々の施設において確実にバランスのとれた群間の割り当てを行なうための最小化手順を含んでいた。
【００８８】
試験被験者及びワクチン
参加者は、妊娠の少なくとも36週間後に生まれた6〜12週齢の健康な乳児であった。除外基準は、出生以降の任意の血液製剤の先の接種、又は第1投与から30日以内の肺炎球菌コンジュゲートワクチン若しくはヒトロタウイルスワクチン以外のワクチンの接種を含んでいた。B型肝炎ワクチンの出生時投与は許容された。髄膜炎菌、Hib、ジフテリア、破傷風、百日咳、B型肝炎、若しくはポリオに起因する病歴、又は試験外で実施されたこれらの疾患のいずれかに対するワクチン接種は、一次フェーズ及び第4投与フェーズからの除外につながった。第4投与フェーズに含まれるには、被験者は、全3回の一次ワクチン接種投与を受けていなければならなかった。
【００８９】
1回0.5ml用量のHibMenCY-TTは、TTにコンジュゲートした2.5μgのHibのリン酸ポリリボシルリビトール(PRP)、及びTTにコンジュゲートしたそれぞれ5μgのMenC多糖及びMenY多糖を含有していた(合計TT含有量約18μg)。1回0.5ml用量のMenACWY-TTは、TTにコンジュゲートした5μgの各髄膜炎菌血清型A、C、W135及びY多糖を含有していた(合計TT含有量約44μg)。凍結乾燥された髄膜炎菌ワクチンは、注射用の無菌食塩水で再構成され、左大腿又は腕に筋肉内投与された。
【００９０】
認可されたDTaP-HBV-IPVワクチン(Pediarix(商標)、GlaxoSmithKline Vaccines社)及びHib-TTワクチン(ActHIB(商標)、Sanofi Pasteur社)の組成は他所に記載されている[10]。DTaP(Infanrix(商標)、GlaxoSmithKline Vaccines社)の組成は、DTaP-HBV-IPVのDTaP成分と同じである。
【００９１】
試験目的
主目的は、
1) 血清殺菌活性(ヒト補体源を用いる：hSBA)力価≧1:8並びに血清型C及びYの幾何平均力価(GMT)を有する被験者のパーセンテージに関して、HibMenCY-TTの第4投与に対する、DTaPの同時投与を伴う及び伴わないMenACWY-TTの非劣性を実証すること；
2) 血清型A及びW-135のhSBA力価≧1:8を有する被験者のパーセンテージに関して、DTaPの同時投与を伴う又は伴わないMenACWY-TTの単回投与の免疫原性を実証すること；及び
3) 抗ジフテリア及び抗破傷風抗体濃度≧1.0 IU/ml及び抗百日咳幾何平均濃度を有する被験者のパーセンテージに関して、DTaPの単独投与に対する、MenACWY-TTと同時投与されるDTaPの非劣性を実証すること
であった。この論文は、予め規定された統計的基準に従った髄膜炎菌のエンドポイントについて記載する。エンドポイント及び免疫応答は表2にまとめられている。DTaP追加免疫ワクチンに関するエンドポイントは、他所に報告されている[24]。
【００９２】
免疫原性評価
15〜18カ月の月齢の同時投与群において、ワクチン接種の1カ月後(表1)及びワクチン接種前に、被験者から血液サンプルを採取した(HibMenCY-TTによる3回投与の乳児ワクチン接種後の、15〜18カ月の月齢におけるhSBA持続を評価するため)。
【００９３】
安全性及び反応原性（reactogenicity）評価
特異的局所症状及び全身症状は、親により、第4投与ワクチン接種後8日間(0〜7日目)、ダイアリーカードに記録された。他の有害事象(AE)は全て、ワクチン接種後31日間記録された。重篤な有害事象(SAE)及び特異的AEの発生は新たな慢性疾患の発症を示し、また救急治療室(ER)への訪問を促す状態は、標準電話スクリプトにより、用量1から最後のワクチン接種の6カ月後まで報告された。発疹の発生は、第4投与フェーズの間に記録された。SAEは、死亡につながった事象又は生命を脅かした事象；入院又は既存の入院の長期化を必要とした事象；被験者の身体障害若しくは無能力につながった事象；又は試験責任医師によって重篤であると考えられた任意の他の事象として定義された。
【００９４】
統計的分析
免疫原性の分析は、プロトコルに規定される手順を遵守する全ワクチン接種被験者を含む、プロトコルに従う(ATP)免疫原性コホート上で実施された。主目的は階層的様式で評価された；すなわち、ある目的は、前の目的が全て達成された後にのみ、正式に達成されたと考えられた。
【００９５】
同時投与群におけるワクチン接種前血液サンプルの採取(表1)は、この群におけるワクチン接種前後のワクチン応答率及びGMT比の計算を可能とした。ワクチン応答は、最初に血清反応陰性であった被験者におけるワクチン接種後の抗体力価≧1:8、及び最初に血清反応陽性であった被験者におけるワクチン接種前抗体力価の≧4倍増加として定義された。
【００９６】
特異的カットオフ値に達する被験者のパーセントにおいて2群間の差の漸近標準化95％信頼区間(CI)が0を含まなかった場合、又は群間のGMT比の95％CIが1を含まなかった場合に、探索的分析において群間の潜在的な差が強調された。これらの探索的分析は、多重度の調整が行われなかったことを考慮すると、慎重に解釈されなければならない。
【００９７】
安全性の分析は、全ワクチン接種被験者を含む総ワクチン接種コホート上で実施された。症状の発生率及び強度は、各群の正確な95％CIによって計算された。
【００９８】
分析は、SAS(登録商標)ソフトウェアバージョン9.1(SAS Institute Inc., Cary, NC, 米国)及びProcStatXact 7.0を使用して実施された。
【００９９】
結果
試験被験者
一次ワクチン接種フェーズにおいて、合計1554人の被験者が登録され、ワクチン接種を受けて、このうち1447人がこの試験フェーズを完了した。第4投与フェーズについては、1303人の幼児が登録され、ワクチン接種を受けて(図1)、このうち1238人の被験者がこの試験の第4投与ワクチン接種フェーズを完了し、1209人が延長された安全性追跡フェーズを完了した。被験者が試験から離脱した理由、又は被験者がATPコホートから除外された理由の概要は、表3(補足)に記載される。2人の被験者(1人はMenACWY-TT群に由来し、また1人はHibMenCY-TT群に由来する)が、AEのため、第4投与ワクチン接種フェーズ中に離脱した。両被験者とも、予定されたDTaPの第5投与の前に熱性痙攣を経験していた：1人は第4投与の38日後に発症し、1人は第4投与の43日後に発症した。いずれの事象も、試験責任医師によって、ワクチン接種に関連しているとは考えられなかった。ATP免疫原性コホートには955人の被験者がいた。同時投与群では男性の方が女性より多く(それぞれ165人対138人)、また対照群では女性の方が男性より多かった(それぞれ97人対78人)。試験群は、その他の点では個体群統計学的特徴に関して同等であった(表4：補足)。
【０１００】
免疫原性
HibMenCY-TT又はMenACWY-TTで、12〜15カ月の月齢でワクチン接種された後、又はMenACWY-TT+DTaPで、15〜18カ月の月齢でワクチン接種された後、100％の被験者が血清型C及びYについてhSBA力価≧1:8を有しており(図2)、被験者はこれらに対して前に初回刺激されていた。MenACWY-TTによるワクチン接種を受けた少なくとも96.1％の被験者はまた、血清型A及びW-135についてhSBA力価≧1:8を有していた(図2)。対照群中には、いずれのワクチン血清型についても、hSBA力価≧1:8を有する被験者はほとんどいなかった(≦7.8％)。
【０１０１】
探索的分析では、血清型C及びYについてワクチン接種の1カ月後にhSBA力価≧1:8を有する被験者のパーセンテージに関して、HibMenCY-TT群と比較すると、MenACWY-TT群と同時投与群間の差を全く検出しなかった。しかし、結果は、1) HibMenCY-TT群と比較した、MenACWY-TT群及び同時投与群における血清型C及びYについて、また2) MenACWY-TT群と比較した、同時投与群における血清型C、W-135及びYについて、より高いワクチン接種後GMTを示唆していた(図3)。
【０１０２】
同時投与群における、ワクチン応答を有する被験者のパーセンテージは、血清型Aについては95.9％(95％信頼区間(CI) 92.3％;98.1％)、血清型Cについては99.2％(97.3％;99.9％)、血清型W-135については97.7％(94.8％;99.3％)、また血清型Yについては98.9％(96.8％;99.8％)であった。最初に血清反応陰性であった被験者の少なくとも96.1％が1種以上の血清型に対するワクチン応答を有していた。
【０１０３】
ワクチン接種前、同時投与群において、90.7％及び96.3％の被験者は、HibMenCY-TTによる3回投与の初回刺激の後、血清型C及びYに対する血清防御的(seroprotective)hSBA力価(≧1:4)を維持していた。同時投与群において、GMTは、ワクチン接種前からワクチン接種後まで、血清型Cについては107倍、また血清型Yについては53倍上昇し、HibMenCY-TTによる初回刺激後の追加免疫応答を示し；さらに血清型Aについては44倍、また血清型W-135については244倍上昇し、これらのワクチン抗原に対する最初の曝露に対する優れた免疫原性を示していた。
【０１０４】
用量4の後、血清型W-135に対する血清防御率及びGMTは、MenACWY-TT群及び同時投与群において高く、また用量4でW-135ワクチン抗原の接種を受けなかったHibMenCY-TT受容者においても同様に高かった。対照群では、血清型W-135に対する応答は観察されなかった。
【０１０５】
反応原性
局所症状及び全身症状を報告する被験者のパーセンテージは、3つの試験群において同じ範囲内であった(図4)。一次ワクチン接種の開始から第4投与の6カ月後まで、SAE、新たな慢性疾患の発症及びERへの訪問につながるAEを報告する被験者のパーセンテージは、3群にわたって同様であった(表5)。2人の被験者において報告された3つのSAEが、ワクチン関連であると考えられた：用量4の47日間後に発生した筋緊張低下児の1つの症例があったが(同時投与群)、これは2日後に消失した。さらに、最初の一次ワクチン接種投与の65日後に発生した痙攣の1つの報告された症例があり(HibMenCY-TT群)、これは乳児において消失したが、この乳児は後に、用量1の89日後に二次的なSAE(乳児突然死症候群)が原因で死亡した。試験中、他に3つの死亡例があったが(全て一次フェーズ中)、そのいずれもワクチン関連であるとは考えられなかった：1人の被験者は用量1の33日後に乳児突然死症候群が原因で死亡し；1人の被験者は、用量1の43日後に脱水症、溶血性尿毒症症候群及び敗血症性ショックが原因で死亡し、また1人の被験者は、白血病(用量3の57日後に発症)及び最終的には呼吸不全が原因で死亡した。
【０１０６】
実施例2-MALLSを用いた分子量の決定
サンプルが溶出するHPLCサイズ排除カラムに検出器を連結した。一方で、レーザー光散乱検出器が高分子溶液により16°の角度で散乱された光強度を測定し、他方、オンラインで配置された干渉屈折計により、溶出したサンプルの量の決定が可能になった。これらの強度から、溶液中の高分子のサイズ及び形状を決定することができる。
【０１０７】
重量平均分子量(Mw)は、個々の分子量を乗じた全ての種の重量の合計を全ての種の重量の合計で除したものとして定義される。
【０１０８】
a) 重量平均分子量：Mw
【数１】
2019142898.tif 000002
【０１０９】
b) 数平均分子量：Mn
【数２】
2019142898.tif 000003
【０１１０】
c) 二乗平均平方根半径：Rw及びR2wは：
【数３】
2019142898.tif 000004
(miは散乱中心iの質量であり、riは、散乱中心iと高分子の重心との間の距離である)
によって定義される二乗半径である。
【０１１１】
d) 多分散性は、Mw/Mn比として定義される。
【０１１２】
髄膜炎菌多糖を、組み合わせて使用される2つのHPLCカラム(TSKG6000と5000PWxl)にローディングすることによって、MALLSにより分析した。25μlの多糖をカラムにロードし、0.75mlの濾水で溶出した。多糖は、光散乱検出器(488nmの10mWアルゴンレーザーを備えたWyatt Dawn DSP)及び干渉屈折計(P100セルと498nmの赤色フィルターを備えたWyatt Otilab DSP)を用いて検出される。
【０１１３】
全てのサンプルの分子量の多分散性及び回復は、Astra 4.72ソフトウェアにおいて、多項式フィット次数1を用いたDebye法により計算された。
【０１１４】
実施例3-追加免疫化の効果
さらなる試験によって、健康な子供における、髄膜炎菌血清型Cコンジュゲートワクチン(MenC-CRM197、Wyeth LLC)と比較した、髄膜炎菌血清型A、C、W-135、Yコンジュゲートワクチン(MenACWY-TT、GlaxoSmithKline Vaccines社)による追加免疫ワクチン接種の12カ月後の抗体持続について評価した。
【０１１５】
方法：フィンランドにおけるこのフェーズIII、非盲検、対照、多施設試験(NCT00955682)では、子供達は予め無作為化され(3:1)、さらに12〜23カ月の月齢でMenACWY‐TT又はMenC-CRM197の単回投与により初回刺激され(NCT00474266)、初回刺激の48カ月後に同じワクチンの追加免疫投与を受けた。免疫原性は、ウサギ(rSBA；カットオフ1:8)及びヒト(hSBA；カットオフ1:4)の補体を用いる血清殺細菌抗体アッセイにより60カ月目(M60)(追加免疫の12カ月後)に評価された。ワクチン関連の重篤な有害事象(SAE)は、M60まで記録された。
【０１１６】
結果：293人の追加免疫された子供のうち、M60に286人が復帰し、このうち277人は、M60における持続について、プロトコルに従うコホートに含まれた(MenACWY‐TT：N=231；MenC-CRM197：N=46)。M60において、MenACWY-TTの受容者は全て、rSBA力価≧1:8(MenCを除いて、97.4％)及びhSBA力価≧1:4(MenAを除いて、95.5％)(表)を保持していた。M60におけるhSBA幾何平均抗体力価(GMT)は、M49(追加免疫の1ヶ月後)と比較して低下していたが、一次ワクチン接種後よりは高かった。MenC血清陽性率及びGMT(rSBA、hSBA)は、群間で同等であった。ワクチン関連SAEは報告されなかった。
【０１１７】
結論：rSBA及びhSBAアッセイにより評価された抗体は、各血清型について、MenACWY-TTの追加ワクチン接種の12カ月後に＞97％の子供で持続していた。これらのデータは、MenACWY-TTのさらなる追加免疫投与が、ワクチン誘導性保護の持続期間を延長し得ることを示唆している。
【０１１８】
【表１】
2019142898.tif 000005
【０１１９】
【表２】
2019142898.tif 000006
【０１２０】
【表３】
2019142898.tif 000007
【０１２１】
【表４】
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【０１２２】
【表５】
2019142898.tif 000009
【０１２３】
【表６】
2019142898.tif 000010
【０１２４】
【表７】
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【０１２５】
参考文献
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【手続補正書】
【提出日】平成31年4月26日(2019.4.26)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下のステップａ）及びｂ）を含むスケジュールでヒト患者を免疫する、髄膜炎菌疾患の予防又は治療における使用のための髄膜炎菌コンジュゲートワクチンであって、
ステップａ）が、破傷風トキソイドキャリアタンパク質にコンジュゲートさせて、髄膜炎菌血清型C（MenC）莢膜糖類コンジュゲート、髄膜炎菌血清型Y（MenY）莢膜糖類コンジュゲート、及びインフルエンザ菌(Hib)糖類コンジュゲートを含む少なくとも3種の細菌糖類コンジュゲートを形成した少なくとも3種の細菌糖類を含有する細菌糖類コンジュゲートワクチンで0〜11カ月の第１の月齢でヒト患者を免疫するステップであり、
ステップｂ）が、破傷風トキソイドキャリアタンパク質に別個にコンジュゲートさせた髄膜炎菌血清型A莢膜糖類（MenA）、髄膜炎菌血清型C莢膜糖類（MenC）、髄膜炎菌血清型W135莢膜糖類（MenW135）、及び髄膜炎菌血清型Y莢膜糖類（MenY）を含有する髄膜炎菌コンジュゲートワクチンで12〜24カ月の第２の月齢でヒト患者を免疫するステップであり、該髄膜炎菌コンジュゲートワクチンを、ジフテリアトキソイド、破傷風トキソイド及び無細胞百日咳抗原（DTPa）を含有するワクチンと同時に投与する、上記髄膜炎菌コンジュゲートワクチン。
【請求項２】
ワクチンが一用量あたり5-40、10-30、15-20μg又は約18μgの総TT含量を有する、請求項１記載の使用のための髄膜炎菌コンジュゲートワクチン。
【請求項３】
ステップａ）の免疫が、2回又は3回量の細菌糖類コンジュゲートを投与することを含む、請求項１又は２記載の使用のための髄膜炎菌コンジュゲートワクチン。
【請求項４】
ステップａ）の免疫が、2、4及び6カ月の月齢でワクチンを投与することを含む、請求項３記載の使用のための髄膜炎菌コンジュゲートワクチン。
【請求項５】
ステップｂ）の髄膜炎菌コンジュゲートワクチンとジフテリア毒素及び破傷風毒素を含有するワクチンとの同時投与が、任意によりSBAアッセイで測定して、髄膜炎菌コンジュゲートワクチンを単独で投与する場合と比較して、MenA、MenC、MenW135又はMenYの少なくとも1種に対する免疫原性の少なくとも10％の上昇につながる、請求項１〜４のいずれか１項記載の使用のための髄膜炎菌コンジュゲートワクチン。
【請求項６】
ステップａ）の間に、細菌糖類コンジュゲートワクチンをDTPを含有するワクチンと同時に投与する、請求項１〜５のいずれか１項記載の使用のための髄膜炎菌コンジュゲートワクチン。
【外国語明細書】
2019142898000001.pdf