(57)【要約】【課題】撹拌棒を介した反応液、洗浄液の次検体への持込みを抑制することにより検査測定値の正確性を向上させる方法であって、汎用の自動分析装置に適用可能な方法及びそのための添加剤を提供すること。【解決手段】検査測定値の正確性を向上させる方法は、撹拌棒を有する自動分析装置で検体を検査する際に、試薬と検体の混合物中にポリオキシエチレンポリオキシプロピレンブロック共重合体を共存させる。撹拌棒を有する自動分析装置で検体を検査する際の検査測定値の正確性向上添加剤は、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンブロック共重合体から成る。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
撹拌棒を有する自動分析装置で検体を検査する際に、試薬と検体の混合物中にポリオキシエチレンポリオキシプロピレンブロック共重合体を共存させる、検査測定値の正確性を向上させる方法。
【請求項２】
前記ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンブロック共重合体を、前記試薬に添加し、該試薬と前記検体を混合する、請求項１記載の方法。
【請求項３】
前記試薬が、第１試薬及び第２試薬から構成される、請求項１記又は２載の方法。
【請求項４】
前記ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンブロック共重合体が、前記第１試薬に含有される、請求項３記載の方法。
【請求項５】
前記ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンブロック共重合体が、重量平均分子量８，０００〜１７，０００であり、かつ分子中のエチレンオキシド含量が７５〜９５モル％である請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。 
【請求項６】
前記ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンブロック共重合体が、重量平均分子量１０，８００であり、かつ分子中のエチレンオキシド含量が８０モル％であるもの、重量平均分子量１３，３３３であり、かつ分子中のエチレンオキシド含量が８５モル％であるもの、及び重量平均分子量１５，５００であり、かつ分子中のエチレンオキシド含量が８０モル％であるものから選ばれる少なくとも１種である請求項５記載の方法。   
【請求項７】
ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンブロック共重合体が、ポリオキシエチレン（２００）ポリオキシプロピレングリコール（４０）、ポリオキシエチレン（２６０）ポリオキシプロピレングリコール（３５）、ポリオキシエチレン（２８０）ポリオキシプロピレングリコール（５５）から選ばれる少なくとも１種である請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンブロック共重合体から成る、撹拌棒を有する自動分析装置で検体を検査する際の検査測定値の正確性向上添加剤。
【請求項９】
前記ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンブロック共重合体が、重量平均分子量８，０００〜１７，０００であり、かつ分子中のエチレンオキシド含量が７５〜９５モル％である請求項８記載の添加剤。 
【請求項１０】
前記ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンブロック共重合体が、重量平均分子量１０，８００であり、かつ分子中のエチレンオキシド含量が８０モル％であるもの、重量平均分子量１３，３３３であり、かつ分子中のエチレンオキシド含量が８５モル％であるもの、重量平均分子量１５，５００であり、かつ分子中のエチレンオキシド含量が８０モル％であるものから選ばれる少なくとも１種である請求項９記載の添加剤。   
【請求項１１】
ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンブロック共重合体が、ポリオキシエチレン（２００）ポリオキシプロピレングリコール（４０）、ポリオキシエチレン（２６０）ポリオキシプロピレングリコール（３５）、ポリオキシエチレン（２８０）ポリオキシプロピレングリコール（５５）から選ばれる少なくとも１種である請求項８〜１０のいずれか１項に記載の添加剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、撹拌棒を有する自動分析装置で検体を検査する際における、検査測定値の正確性を向上させる方法及びそのための添加剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来、自動分析装置としては、例えば、血清等のサンプルに所望の試薬を混合して反応させた反応液を分析対象とし、その吸光度を測定することで分析を行う装置が知られている。この種の分析装置は、サンプルおよび試薬を反応容器に注入する機構と、反応容器内のサンプルおよび試薬を撹拌する機構と、反応中または反応が終了したサンプルの物性を分析する機構等を備えて構成されている。
【０００３】
分析装置の分野では、サンプルおよび試薬の微量化が大きな技術課題となっている。すなわち、分析項目が増えていくのに伴い、単項目に割くことのできるサンプル量が少量になっていることや、サンプル自体が多量に準備できない乳幼児の血液検査といった少量サンプルの分析が行われている。また、分析内容が高度化するにつれて、高価な試薬が一般的に利用されるようになり、コストの面からも、試薬の微量化が要望されている。このようなサンプルおよび試薬の微量化は、反応容器の小形化を進め、また反応容器の小形化は新たな技術課題を生んでいる。例えば、検体・試薬分注機構や反応液撹拌機構では反応液や洗浄液の次検体への持ち込みの液量比が増大し、分析結果に影響を及ぼしやすくなってきたことは課題の一つである。
【０００４】
一般的な撹拌機構は、へら状の撹拌棒を反応容器中の被撹拌液に浸漬し、回転させることにより行っている。撹拌棒は洗浄液で洗浄された後、次の反応容器中の被撹拌液に浸漬するが、この際に撹拌棒に洗浄液や前の被攪拌液が水滴として付着して残った場合、次の反応容器中に洗浄液や前の被攪拌液が付着したり、被撹拌液と混ざり合うことにより、余分な液体が持ち込まれる。また、撹拌棒が回転する際に反応容器内壁に被撹拌液が飛び散り付着することで反応容器中の反応液量が少なくなったり、測定時に反応容器内壁に付着した被撹拌液が反応液に垂れ落ちて反応液に持ち込みされることで正確に測定できなくなる。
【０００５】
このような撹拌棒では反応液や洗浄液の次検体への持込みを完全に無くする事は難しい。そのため、特許文献１では被撹拌液に超音波を照射して撹拌する技術が開示されており、また特許文献２では被撹拌液に空気を噴射することで撹拌する技術が開示されている。このような被撹拌液と物理的に接触せずに撹拌する方法は、原理的に撹拌棒を介した反応液，洗浄液の次検体への持込みを無くすことができる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開２００１−２４２１７７号公報
【特許文献２】特開２００４−３４０７９１号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
撹拌棒を使用しない撹拌方法は上記のメリットはあるが、撹拌棒を用いる撹拌に比べコストが高くなる懸念がある。また、汎用の自動分析装置に使用できない場合は、検査現場は新しい自動分析装置を導入する必要があり、負担が増大する。
【０００８】
本発明の目的は、撹拌棒を介した反応液、洗浄液の次検体への持込みを抑制することにより検査測定値の正確性を向上させる方法であって、汎用の自動分析装置に適用可能な方法及びそのための添加剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、上記課題を解決するため、鋭意研究をおこなったところ、試薬にポリオキシエチレンポリオキシプロピレン共重合体を入れることで反応液、洗浄液の次検体へ持ち込みによる測定値の誤差を防ぐことができることを見出し、本発明を完成させるに至った。
【００１０】
すなわち、本発明は以下のものを提供する。
(1)  撹拌棒を有する自動分析装置で検体を検査する際に、試薬と検体の混合物中にポリオキシエチレンポリオキシプロピレンブロック共重合体を共存させる、検査測定値の正確性を向上させる方法。
(2)  前記ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンブロック共重合体を、前記試薬に添加し、該試薬と前記検体を混合する、(1)記載の方法。
(3)  前記試薬が、第１試薬及び第２試薬から構成される、(1)又は(2)記載の方法。
(4)  前記ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンブロック共重合体が、前記第１試薬に含有される、(3)記載の方法。
(5)  前記ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンブロック共重合体が、重量平均分子量８,０００〜１７，０００であり、かつ分子中のエチレンオキシド含量が７５〜９５モル％である(1)〜(4)のいずれか１項に記載の方法。 
(6)  前記ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンブロック共重合体が、重量平均分子量１０，８００であり、かつ分子中のエチレンオキシド含量が８０モル％であるもの、重量平均分子量１３，３３３であり、かつ分子中のエチレンオキシド含量が８５モル％であるもの、及び重量平均分子量１５，５００であり、かつ分子中のエチレンオキシド含量が８０モル％であるものから選ばれる少なくとも１種である(5)記載の方法。   
(7)  ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンブロック共重合体が、ポリオキシエチレン（２００）ポリオキシプロピレングリコール（４０）、ポリオキシエチレン（２６０）ポリオキシプロピレングリコール（３５）、ポリオキシエチレン（２８０）ポリオキシプロピレングリコール（５５）から選ばれる少なくとも１種である(1)〜(6)のいずれか１項に記載の方法。
(8)  ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンブロック共重合体から成る、撹拌棒を有する自動分析装置で検体を検査する際の検査測定値の正確性向上添加剤。
(9)  前記ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンブロック共重合体が、重量平均分子量８，０００〜１７，０００であり、かつ分子中のエチレンオキシド含量が７５〜９５モル％である(8)記載の添加剤。 
(10)  前記ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンブロック共重合体が、重量平均分子量１０，８００であり、かつ分子中のエチレンオキシド含量が８０モル％であるもの、重量平均分子量１３，３３３であり、かつ分子中のエチレンオキシド含量が８５モル％であるもの、重量平均分子量１５，５００であり、かつ分子中のエチレンオキシド含量が８０モル％であるものから選ばれる少なくとも１種である(9)記載の添加剤。   
(11) ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンブロック共重合体が、ポリオキシエチレン（２００）ポリオキシプロピレングリコール（４０）、ポリオキシエチレン（２６０）ポリオキシプロピレングリコール（３５）、ポリオキシエチレン（２８０）ポリオキシプロピレングリコール（５５）から選ばれる少なくとも１種である(8)〜(10)のいずれか１項に記載の添加剤。
【発明の効果】
【００１１】
本発明により、生体試料中あるいは測定系外から撹拌棒を介して持ち込まれる液量を減少させ、ひいては、非目的成分の量を減少させてその影響を抑制し、生体試料中の目的成分の正確な測定が可能になる。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本発明のポリオキシエチレンポリオキシプロピレンブロック共重合体は、ポリオキシエチレン部分とポリオキシプロピレン部分を含むブロック共重合体であり、好ましくは、疎水性のポリオキシプロピレンブロックポリマーが、２つの親水性のポリオキシエチレンブロックポリマーにより挟まれた構造より成り、非イオン性界面活性剤として挙動する。
【００１３】
本発明において使用するポリオキシエチレンポリオキシプロピレンブロック共重合体を含有する市販品の具体的な例としては、一般に「プルロニック」の名称で販売されている非イオン性界面活性剤のうち「Ｆ」で括られる製品を挙げることができる。また「エパン」の名称で販売されている非イオン性界面活性剤、「プロノン」の名称で販売されている非イオン性界面活性剤も使用することができる。
【００１４】
なお、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンブロック共重合体の成分としての表記方法は数種類存在し、各表記間で相互に同一性、類似性を確認できるが、同一名称の市販品であっても各表記間での数値が完全に一致しなかったり、ポリオキシエチレン（「ＥＯ」と記載することがある）やポリオキシプロピレン（「ＰＯ」と記載することがある）の含量モル％から分子全体の分子量を計算しようとした場合などにも表示されている数値と完全に一致しないことがある。しかしながら、これらは重合性高分子に特有のものであり当業者は当然に理解しうる。
【００１５】
また、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンブロック共重合体は、ＥＯ含有量（モル％）を横軸、ＰＰＧ分子量を縦軸として区分けする「プルロニックグリッド」と呼ばれる区分け法があり、市販品のカタログ等にも記載されており、これらを参照して本発明のポリオキシエチレンポリオキシプロピレンブロック共重合体を選抜することができる。
【００１６】
本発明においては、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンブロック共重合体の重量平均分子量が８,０００〜１７，０００であり、かつ分子中のＥＯ含量が７５〜９５モル％であるものが好適であり、また、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンブロック共重合体の重量平均分子量が１０，８００であり、かつ分子中のＥＯ含量が８０モル％（市販品名：プルロニックＦ８８）であるか、重量平均分子量が１３，３３３であり、かつ分子中のＥＯ含量が８５モル％（市販品名：エパン７８５）であるか、重量平均分子量１５，５００であり、かつ分子中のＥＯ含量が８０モル％（市販品名：プルロニックＦ１０８）であるか、重量平均分子量８，０００であり、かつ分子中のＥＯ含量が８５モル％（市販品名：エパン４８５）であるものが好適であり、また、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンブロック共重合体が、ポリオキシエチレン（２００）ポリオキシプロピレングリコール（４０）（市販品名：プルロニックＦ８８）、ポリオキシエチレン（２６０）ポリオキシプロピレングリコール（３５）（市販品名：エパン７８５）、ポリオキシエチレン（２８０）ポリオキシプロピレングリコール（５５）（市販品名：プルロニックＦ１０８）であるものが好適である。
【００１７】
本発明で用いるポリオキシエチレンポリオキシプロピレン共重合体を用いた自動分析装置用試薬の調製方法について、臨床検査の分野で繁用されるラテックス粒子を用いる試薬を例として以下説明する。臨床検査の分野で繁用されるラテックス粒子を用いる試薬は、ラテックス粒子を含有しない試薬（第１試薬）及びラテックス粒子を含有する試薬（第２試薬）の二試薬系で構成されている場合が多い。そしてこの構成を採用する場合、第１試薬は、第２試薬が行う抗原抗体反応に好適な測定環境（例えば、目的成分の希釈や抗原エピトープの露出など）を準備する役割を担っている場合が多い。
【００１８】
本発明で用いるポリオキシエチレンポリオキシプロピレン共重合体は、第１試薬あるいは第２試薬のいずれに添加してもよいが、上述の二試薬の構成の場合には、撹拌棒が最初に試薬に接触し撹拌する際には、持ち込み現象を防ぐことが望ましいので、少なくとも第１試薬に添加するのが好ましい。
【００１９】
本発明で用いるポリオキシエチレンポリオキシプロピレン共重合体の濃度は、例えば、ラテックス免疫凝集反応時の終濃度で規定することができる。該濃度としては、０．０００１重量％〜１重量％が好適であり、好ましくは０．００１重量％〜０．５重量％、より好ましくは０．０１重量％〜０．３重量％である。
【００２０】
本発明で用いるポリオキシエチレンポリオキシプロピレン共重合体は、自動分析装置用試薬において、測定系としての所望の測定感度、測定範囲、再現性、あるいは試薬の安定性などが得られることを勘案したうえで、実用的に最適な種類、濃度、試薬の調製方法を選択し適宜利用することができる。
【００２１】
本発明の方法は、自動分析装置における撹拌棒に付着する液量を減少させることにより検査測定値の正確性を向上させる方法であるから、撹拌棒を用いる自動分析装置による全ての検査に適用可能である。これらのうちでも、免疫測定法、特に体液中の病原体や、病原体に対する抗体の検査に好適に利用可能である。
【００２２】
以下、実施例及び比較例により本発明を詳細に説明するが、本発明は以下の実施例により限定されるものではない。なお、濃度は、特に断りがない限り重量基準である。
【００２３】
参考例１
（１）試薬の調製
ＨＥＬＩＣＯＢＡＣＴＥＲ ＰＹＬＯＲＩ の ＮＡＴＩＶＥ 抗原を用いて、以下の通りに免疫凝集法による測定試薬を調製した。
ｉ）ＨＥＬＩＣＯＢＡＣＴＥＲ ＰＹＬＯＲＩ の ＮＡＴＩＶＥ 抗原を平均粒径３００ｎｍのポリスチレンラテックス浮遊液１ｍＬに対し５．２ｍｇ担持させてなる感作粒子を、緩衝液（ＭＯＰＳ、ｐＨ７）に０．１５％となるように懸濁し、ラテックス浮遊液を調製した。
ii）ＭＥＳ 緩衝液 （ｐＨ６．０）に ＢＳＡを２％になるように添加し、第１試薬とした。
【００２４】
（２）自動分析装置による測定
自動分析装置は日立ハイテクノロジーズ社７１８０形日立自動分析装置によりエンドポイント法で自動測定を行った。
【００２５】
前述の試薬を用いて、コントロールサンプルの測定をそれぞれ連続２回行った。検体溶液３．５μＬに第１試薬２００μＬを添加し、この混合液を３７℃で撹拌混合した。５分間放置後、上記で調製したラテックス浮遊液４０μＬを添加し、更に３７℃で撹拌混合した。約５分間の凝集反応を吸光度変化量として測定した。
【００２６】
１回目の測定時、検体に第１試薬を添加撹拌後、その撹拌混合に用いられた撹拌棒を乾燥した紙ウェスでふき取り、その後、続けて２回目の測定を行った。１回目測定値と２回目測定値の割合を算出した。また、検体、第１試薬とラテックス浮遊液の撹拌混合に用いられた、撹拌棒はふき取りを実施しなかった。結果を下記表１に示す。
【００２７】
参考例２
（１）試薬の調製
参考例１と同様に操作し、ラテックス浮遊液、第１試薬を調整した。
【００２８】
（２）自動分析装置による測定
参考例１と同様に操作し、測定を行った。１回目の測定時、検体と第１試薬にラテックス浮遊液を添加撹拌後、その撹拌混合に用いられた撹拌棒を乾燥した紙ウェスでふき取り、その後、続けて２回目の測定を行った。１回目測定値と２回目測定値の割合を算出した。また、検体と第１試薬の撹拌混合に用いられた、撹拌棒はふき取りを実施しなかった。結果を下記表１に示す。
【００２９】
参考例３
（１）試薬の調製
参考例１と同様に操作し、ラテックス浮遊液、第１試薬を調整した。
【００３０】
（２）自動分析装置による測定
参考例１と同様に操作し、測定を行った。１回目の測定時、検体に第１試薬を添加撹拌後、その撹拌混合に用いられた撹拌棒を乾燥した紙ウェスでふき取った。さらに、その後、検体と第１試薬にラテックス浮遊液を添加撹拌後、その撹拌混合に用いられた撹拌棒を乾燥した紙ウェスでふき取り、その後、続けて２回目の測定を行った。１回目測定値と２回目測定値の割合を算出した。結果を下記表１に示す。
【００３１】
参考例４
（１）試薬の調製
参考例１と同様に操作し、ラテックス浮遊液、第１試薬を調整した。
【００３２】
（２）自動分析装置による測定
参考例１と同様に操作し、測定を行った。
【００３３】
撹拌棒のふき取りを実施せず、連続２回測定を行った。１回目測定値と２回目測定値の割合を算出した。結果を下記表１に示す。
【００３４】
【表１】
2019148536.tif 000002
【００３５】
表１より、撹拌棒をふき取ることにより、２回目の測定値の低下が改善されることが示された。また、ラテックス試薬添加後、混合に用いた撹拌棒を、ふき取った場合の改善効果が大きいことが示された。
【００３６】
実施例１、比較例１〜４
（１）試薬の調製
ＨＥＬＩＣＯＢＡＣＴＥＲ ＰＹＬＯＲＩ の ＮＡＴＩＶＥ 抗原を用いて、以下の通りに免疫凝集法による測定試薬を調製した。
【００３７】
ｉ）ＨＥＬＩＣＯＢＡＣＴＥＲ ＰＹＬＯＲＩ の ＮＡＴＩＶＥ 抗原を平均粒径３００ｎｍのポリスチレンラテックス浮遊液１ｍＬに対し５．２ｍｇ担持させてなる感作粒子を、緩衝液（ＭＯＰＳ、ｐＨ７）に０．１５％となるように懸濁し、ラテックス浮遊液を調製した。
ii）緩衝液（ＭＥＳ、ＢＳＡ、ｐＨ６．０）に、各種界面活性剤を添加し、下記の試薬Ａ〜Ｄを調製した。比較例として、界面活性剤成分を添加しない、試薬Ｅを調製した。
【００３８】
【表２】
2019148536.tif 000003
Ａ〜Ｄ：非イオン性界面活性剤(Ａ：「プロノン２０８」（日油）、Ｂ：「エマルゲン７０７」（花王）、Ｃ：「Ｔｗｅｅｎ８０」（和光純薬）Ｄ：「エマルゲンＢ６６」（花王）をそれぞれ使用
Ｅ：緩衝剤のみ
【００３９】
（２）自動分析装置による測定
自動分析装置は日立ハイテクノロジーズ社７１８０形日立自動分析装置によりエンドポイント法で自動測定を行った。
【００４０】
前述の試薬Ａ〜Ｅの緩衝液を用いて、コントロールサンプル（４０Ｕ／ｍＬ）の測定をそれぞれ連続５回行った。検体溶液３．５μＬに試薬Ａ〜Ｈの緩衝液２００μＬを添加し、この混合液を３７℃で撹拌混合した。５分間放置後、上記で調製したラテックス浮遊液４０μＬを添加し、更に３７℃で撹拌混合した。約５分間の凝集反応を吸光度変化量として測定し、１回目測定値と５回目測定値の割合を算出した。また、併せて、比較例１と実施例の測定値の比較を行った。結果を下記表２に示す。
【００４１】
【表３】
2019148536.tif 000004
【００４２】
表３より、界面活性剤を添加することで、測定値の低下現象が改善されることが示された。また、界面活性剤を添加していない試薬の測定値（１回目測定値が正しい値）とポリオキシエチレン-ポリオキシプロピレン縮合物を添加した試薬の測定値に差が少ないことから、ポリオキシエチレン-ポリオキシプロピレン縮合物は、測定値低下を防ぎつつ且つ感度に影響を与えないことが示された。これに対し、比較例１〜３は、５回目測定値／１回目測定値（％）の比は、実施例１と同様に優れているものの、比較例４（現在行われている従来法）の１回目の測定値（正しい測定値）との乖離が大きく、界面活性剤により測定値の正確性が損なわれていることがわかる。