(57)【要約】【課題】腸内環境改善、又は肝性脳症、尿毒症等の疾患の予防若しくは治療に有用な新たな医薬の提供。【解決手段】下記式［Ｉ］で表される化合物又はその製薬学的に許容される塩を有効成分として含有する腸内環境改善剤、又は肝性脳症若しくは尿毒症の予防又は治療薬。2019142774.tif 000007【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式［Ｉ］で表される化合物又はその製薬学的に許容される塩を有効成分として含有する腸内環境改善剤。
【化１】
2019142774.tif 000006
【請求項２】
上記式［Ｉ］で表される化合物又はその製薬学的に許容される塩を有効成分として含有する肝性脳症の予防又は治療薬。
【請求項３】
上記式［Ｉ］で表される化合物又はその製薬学的に許容される塩を有効成分として含有する尿毒症の予防又は治療薬。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、腸内環境の改善に有用な医薬に関する。
【背景技術】
【０００２】
ヒトの腸内細菌叢を構成する細菌数は、１００兆個以上と見積もられ、種類にして約１０００種類、一人あたり２００〜３００種類で構成され、腸内細菌叢を形成しヒトと共生している。近年、腸内細菌と疾患との関わりが注目されており、消化器系疾患だけでなく、アレルギー、糖尿病、肥満、うつなど様々な疾患との関連が報告されている（非特許文献１、２）。
【０００３】
腸内細菌叢は善玉菌、悪玉菌、並びに悪玉菌及び善玉菌のどちらにも成りうる日和見菌の３種の腸内細菌より構成されている。Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属やＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属などの善玉菌は糖を発酵して酢酸や乳酸といった有機酸を生成する。善玉菌が生成する有機酸により腸内のｐＨは低下し、その結果、悪玉菌の生育を抑制する。悪玉菌が産生するインドールやアンモニアといった腐敗産物は生体に様々な障害を与えることが知られている。よって、腸内の善玉菌を増加させること、腸内の有機酸を増加させること、腸内の腐敗物質を減少させることは、腸内環境を良好に保ち、生体の健康維持に寄与すると考えられる。
【０００４】
腸内のＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属を増加させる物質としてイヌリンやフルクトオリゴ糖などのプレバイオティクスが知られているが、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属の増加には多量の摂取が必要となる。また、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属が入った生菌製剤や食品などのプロバイオティクスも知られているが、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属は大腸に到達する前に胃酸や胆汁酸で死滅するため、摂取した生菌の数を腸内で維持することは困難とされている。また、外から投与した生菌は一時的に腸内に定着するが、常在することは難しい。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Ｇｅｎｏｍｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，  ３（３），１４，２０１１
【非特許文献２】ＮＡＴＵＲＥ  ＲＥＶＩＥＷＳ  ＭＩＣＲＯＢＩＯＬＯＧＹ，  １１，２２７−２３８，２０１３
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、腸内環境の改善に有用な新たな医薬を提供することを目的とする。さらに本発明は、腸内環境を改善することにより、肝性脳症、尿毒症等の疾患の予防若しくは治療に有用な新たな医薬を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、上記課題を達成すべく鋭意検討を重ねた結果、下記式［Ｉ］で表される化合物（（１Ｓ）−１，５−アンヒドロ−１−［５−（４−｛（１Ｅ）−４−［（１−｛［２−（ジメチルアミノ）エチル］アミノ｝−２−メチル−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ］−３，３−ジメチル−４−オキソブタ−１−エン−１−イル｝ベンジル）−２−メトキシ−４−（プロパン−２−イル）フェニル］−Ｄ−グルシトール、以下、「化合物［Ｉ］」と記載することもある）が、優れた腸内環境改善作用を有することを見出した。
【０００８】
【化１】
2019142774.tif 000002
【０００９】
すなわち、本発明は以下の通りである。
（１）上記式［Ｉ］で表される化合物又はその製薬学的に許容される塩を有効成分として含有する腸内環境改善剤、
（２）上記式［Ｉ］で表される化合物又はその製薬学的に許容される塩を有効成分として含有する肝性脳症の予防又は治療薬、
（３）上記式［Ｉ］で表される化合物又はその製薬学的に許容される塩を有効成分として含有する尿毒症の予防又は治療薬、
を提供することである。
【発明の効果】
【００１０】
上記式［Ｉ］で表される化合物又はその製薬学的に許容される塩を有効成分として含有する本発明の医薬は、優れた腸内環境改善作用を有し、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属やＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属等の善玉菌を増加させ、腸内の有機酸を増加させ、腸内の腐敗産物を減少させる。したがって、本発明により、肝性脳症、尿毒症等の疾患の予防又は治療に有用な新たな医薬を提供することが可能となった。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
以下に、本願明細書において記載する記号、用語等の意義を説明するとともに、本発明を詳細に説明するが、本発明は例示されたものに特に限定されない。
【００１２】
本願明細書における「腸内環境改善剤」とは、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属やＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属等の善玉菌を増加させ、腸内の有機酸を増加させ、腸内の腐敗産物を減少させる医薬を示す。
腸内環境を改善することで、腸内環境変化に関連する疾患を改善することができる。
本願明細書における「腸内環境変化に関連する疾患」とは、慢性腎臓病、偽膜性腸炎・出血性腸炎、感染性腸炎、潰瘍性大腸炎、クローン病、過敏性腸症候群、肥満、動脈硬化、高血圧、ギラン・バレー症候群、アレルギー疾患、糖尿病、多発性硬化症、自己免疫疾患、アルコール性肝障害、非アルコール性脂肪性肝疾患、非アルコール性脂肪肝炎、非ステロイド性抗炎症薬起因性腸炎、ストレス、うつ、インフルエンザ、歯周病、がん、花粉症、機能性ディスペプシア、掻痒症などがあげられる。
【００１３】
腸内細菌は糖を発酵することでコハク酸、乳酸、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、イソ酪酸、ノルマル酪酸、イソ吉草酸、ノルマル吉草酸等を産生する。これら９物質を、本明細書では「有機酸」と記載することもある。
【００１４】
腸内細菌はアミノ酸を代謝することでフェノール、ｐ−クレゾール、インドール、スカトール、アンモニア等を産生する。これら５物質を、本明細書では「腐敗産物」と記載することもある。
フェノール、ｐ−クレゾール、インドール、スカトール、アンモニアは腸管に直接的に障害を与えるとともに、体内に吸収され、様々な疾患の発症にも関わっている。例えば、インドールは肝臓にて硫酸抱合を受けてインドキシル硫酸に代謝され、尿中より排泄されるが、腎機能が低下している患者では排泄されなくなり血中濃度が増加する。インドキシル硫酸は腎疾患患者における尿毒症の主要因子の一つとされており、血中濃度の増加に伴い、食欲不振、口臭、嘔気、掻痒感といった尿毒症症状が現れる。
また、アンモニアは肝臓で尿素サイクルにより尿素に解毒されるが、肝疾患などの肝機能が低下した状態では、血中のアンモニアを代謝することができず、血中アンモニア濃度が増加する。アンモニアが脳血液関門を通過し脳内に流入すると、アンモニアによる脳障害（肝性脳症）が引き起こされ、昏睡に至ることもある。
【００１５】
本願明細書における「肝性脳症の予防又は治療薬」とは、肝性脳症を予防又は改善する医薬を示す。また、本願明細書における「肝性脳症」とは、劇症肝炎や肝硬変など重篤な肝障害あるいは門脈大循環短絡に伴い血中アンモニア濃度が高くなる症状、またその結果発症する昏睡や神経障害などの症状を示す。
【００１６】
本願明細書における「尿毒症の予防又は治療薬」とは、尿毒症を予防又は改善する医薬を示す。また、本願明細書における「尿毒症」とは、腸管で産生された腐敗産物あるいはそれらの代謝物が腎臓の濾過機能低下に伴って体内に蓄積し、血中濃度が高くなる症状、またその結果発症する食欲不振、嘔気、口臭、掻痒感などの症状を示す。
【００１７】
本願明細書における「塩」としては、上記式［Ｉ］で表される化合物と製薬学的に許容される塩を形成するものであれば特に限定されないが、例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、リン酸塩、硫酸塩、硝酸塩のような鉱酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、トリフルオロメタンスルホン酸塩のようなスルホン酸塩、シュウ酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、マレイン酸塩、コハク酸塩、酢酸塩、安息香酸塩、マンデル酸塩、アスコルビン酸塩、乳酸塩、グルコン酸塩、リンゴ酸塩、フマル酸、モノセバシン酸のような有機酸塩等の酸付加塩、グリシン塩、リジン塩、アルギニン塩、オルニチン塩、グルタミン酸塩、アスパラギン酸塩のようなアミノ酸塩が挙げられる。なお、塩には、含水塩が含まれる。
【００１８】
上記式［Ｉ］で表される化合物は、不斉中心を持ち、光学活性体である。上記式［Ｉ］で表される化合物は、この目的のためによく知られた有機化学的手法によって得ることができる。
【００１９】
上記式［Ｉ］で表される化合物は、国際公開第ＷＯ２０１０／０９５７６８号のＥｘａｍｐｌｅ  １５−２で既に開示された化合物であり、当該文献に記載の方法により得ることができる。また、該化合物の結晶は、国際公開第ＷＯ２０１２／０２３５９８号に記載の方法により得ることができる。
【００２０】
本発明にかかる医薬は、常法によって製造することが可能である。
【００２１】
本発明にかかる医薬について、含有する上記式［Ｉ］で表される化合物又はその製薬学的に許容される塩は、単独に、又は薬学的あるいは薬剤学的に許容される添加剤と共に投与することができる。
【００２２】
添加剤としては、常用の賦形剤又は希釈剤、そして、必要に応じて一般に使用される結合剤、崩壊剤、潤滑剤、被覆剤、糖衣剤、pH調整剤、溶解剤又は水性若しくは非水性溶媒を使用することができる。具体的には、水、乳糖、デキストロース、フラクトース、ショ糖、ソルビトール、マンニトール、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、デンプン、コーンスターチ、ガム、ゼラチン、アルギネート、ケイ酸カルシウム、リン酸カルシウム、セルロース、水シロップ、メチルセルロース、ポリビニルピロリドン、アルキルパラヒドロキシベンゾエート、タルク、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、寒天、ペクチン、アラビアゴム、グリセリン、ゴマ油、オリーブ油、大豆油カカオバター、エチレングリコール、低粘度ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ−Ｌ）、微結晶セルロース、カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）、カルボキシメチルセルロースナトリウム（ＣＭＣ−Ｎａ）等やその他常用されるものを挙げることができる。
【００２３】
本発明にかかる医薬は、固体組成物、液体組成物及びその他の組成物のいずれの形態でもよく、必要に応じて最適のものが選択される。
【００２４】
本発明にかかる医薬について、含有する上記式［Ｉ］で表される化合物又はその製薬学的に許容される塩に、上記の添加剤を添加し、常用の製剤技術によって、錠剤、丸剤、カプセル剤、顆粒剤、粉剤、散剤、液剤、乳剤、懸濁剤等に調製する事ができる。
【００２５】
また、本発明にかかる医薬について、含有する上記式［Ｉ］で表される化合物又はその製薬学的に許容される塩は、α、β若しくはγ−シクロデキストリン又はメチル化シクロデキストリン等と包接化合物を形成させて製剤化することができる。
【００２６】
本発明にかかる医薬の投与量は、投与対象、投与ルート、対象疾患、症状等によっても異なるが、例えば、成人の患者に経口投与する場合、上記式［Ｉ］で表される化合物又はその製薬学的に許容される塩を、通常１回量として０．０１ｍｇ〜１０００ｍｇ、好ましくは０．０５ｍｇ〜２００ｍｇであり、この量を１日１回〜３回投与するのが望ましい。
【００２７】
本発明により、腸内環境の改善に有用な新たな医薬を提供することができる。本発明にかかる腸内環境改善剤は、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属やＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属等の善玉菌を増加させ、腸内の有機酸を増加させ、腸内の腐敗産物を減少させることができ、それにより肝性脳症若しくは尿毒症等の疾患を予防又は治療することができる。
【００２８】
以下に、試験例及び製剤例を挙げて、本発明をさらに具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００２９】
上記式［Ｉ］で表される化合物が腸内環境の改善に有用であることを、以下の試験例１により説明する。
【００３０】
試験例１
ＳＤ／ＩＧＳラット（６週齢；日本チャールスリバー）を食物繊維含量が５％の餌で１週間飼育し、体重値を指標にして群分けを実施した。化合物［Ｉ］投与群には、０．５％（ｗ／ｖ）メチルセルロース（０．５％ＭＣ）に懸濁又は溶解した化合物［Ｉ］を、対照群には０．５％ＭＣをそれぞれ５ｍＬ／ｋｇ体重の容量で１日２回、９日間又は、１５日間反復経口投与した。最終投与約４〜６時間後に盲腸内容物を回収し、凍結保存した。
【００３１】
（１）腸内のＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属の １６S ｒＤＮＡコピー数の測定
盲腸内容物からビーズ・フェノール法によりＤＮＡを抽出して、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属の１６Ｓ ｒＤＮＡコピー数をリアルタイムＰＣＲにて測定し、対数値を求めた。
【００３２】
（２）腸内の有機酸濃度の測定
一定量の盲腸内容物をビーズ入りチューブ中に精秤し、抽出溶液で懸濁した後、８０℃で１５分間滅菌した。ビーズにより盲腸内容物を破砕した後、遠心分離（１３，０００ ｒｐｍ、１０分）し、上清を０．４５μｍのメンブランフィルターで濾過した後、高速液体クロマトグラフィー（島津有機酸分析システム：島津製作所）法で有機酸濃度を測定した。
【００３３】
コハク酸、乳酸、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、イソ酪酸、ノルマル酪酸、イソ吉草酸、ノルマル吉草酸の９物質について濃度を測定し、その総和を「総有機酸濃度」とした。
【００３４】
（３）腸内のｐＨの測定、腸内のアンモニア濃度の測定
凍結した盲腸内容物を解凍し、重量の１０倍量の注射用水を加えて攪拌した。この懸濁液１ｍＬを分取し、除蛋白液４ｍＬと混合した後、遠心分離（３，０００ ｒｐｍ、５分、４℃）し、上清のアンモニア濃度を、アンモニアテストワコー（和光純薬工業株式会社）を用いて測定した。また、残りの懸濁液を遠心分離（３，０００ ｒｐｍ、１０分、４℃）し、上清のｐＨを、ｐＨメーター（ＨＯＲＩＢＡ  ＬＡＱＵＡｔｗｉｎ）を用いて測定した。
【００３５】
（４）腸内のインドール、フェノール、ｐ−クレゾール、及びスカトール濃度の測定
一定量の盲腸内容物を遠心管に精秤し、内部標準（４−Ｉｓｏｐｒｏｐｙｌｐｈｅｎｏｌ）を添加しリン酸緩衝液で懸濁した後、８５℃で１５分間滅菌した。冷却後、溶媒抽出を行い、固相カートリッジで精製し、ｇａｓ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ −  ｍａｓｓ  ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ−ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｉｏｎ  ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ（ＱＰ-２０１０、島津製作所）法で腐敗産物濃度を測定した。
【００３６】
インドール、フェノール、ｐ−クレゾール、及びスカトールの４物質について濃度を測定し、フェノール、ｐ−クレゾール、及びスカトールの３物質の総和を「その他の腐敗産物濃度」とした。
【００３７】
ラットにおける腸内のＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属１６Ｓ ｒＤＮＡコピー数に対する化合物［Ｉ］の作用を表１に、腸内の総有機酸濃度、ｐHに対する化合物［Ｉ］の作用を表２に、腸内のアンモニア、インドール、その他の腐敗産物濃度に対する化合物［Ｉ］の作用を表３に示す。
【００３８】
【表１】
2019142774.tif 000003
各群ｎ＝６（９日間投与）、ｎ＝５（１５日間投与）、平均値±標準誤差を表示。
＊＊＊：ｐ＜０．００１（溶媒対照群に対するＤｕｎｎｅｔの検定）
＃：ｐ＜０．０５（溶媒対照群に対するＳｔｅｅｌの検定）
【００３９】
【表２】
2019142774.tif 000004
総有機酸濃度：コハク酸、乳酸、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、イソ酪酸、ノルマル酪酸、イソ吉草酸及びノルマル吉草酸濃度の和
各群ｎ＝６（９日間投与）、ｎ＝５（１５日間投与）、平均値±標準誤差を表示。
＊＊：ｐ＜０．０１＊＊＊：ｐ＜０．００１（溶媒対照群に対するＤｕｎｎｅｔの検定）
＃：ｐ＜０．０５、＃＃：ｐ＜０．０１（溶媒対照群に対するＳｔｅｅｌの検定）
【００４０】
【表３】
2019142774.tif 000005
その他の腐敗産物濃度：フェノール、ｐ−クレゾール及びスカトール濃度の和
各群ｎ＝６（９日間投与）、ｎ＝５（１５日間投与）、平均値±標準誤差を表示。
＊＊：ｐ＜０．０１、＊＊＊：ｐ＜０．００１（溶媒対照群に対するＤｕｎｎｅｔの検定）
＃：ｐ＜０．０５、＃＃：ｐ＜０．０１（溶媒対照群に対するＳｔｅｅｌの検定）
【００４１】
化合物［Ｉ］の投与により、腸内のＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属が増加した。また、腸内の有機酸が増加してｐＨが低下し、腸内のアンモニア、インドール、及びその他の腐敗産物が減少した。したがって、化合物［Ｉ］が腸内環境の改善に有用であることが示された。
【００４２】
以下に、本発明にかかる医薬の製剤例を示す。
【００４３】
製剤例１
以下の成分を含有する顆粒剤を製造する。
（処方）
成分  化合物［Ｉ］                       10mg
乳糖                              700mg
コーンスターチ                    274mg
ＨＰＣ−Ｌ                         16mg
1000mg
【００４４】
（製法）
化合物［Ｉ］及び乳糖を６０メッシュのふるいに通す。コーンスターチを１２０メッシュのふるいに通す。これらをＶ型混合機にて混合する。混合末に低粘度ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ−Ｌ）水溶液を添加し、練合、造粒（押し出し造粒  孔径０．５〜１ｍｍ）した後、乾燥する。得られた乾燥顆粒を振動ふるい（１２／６０メッシュ）で篩過し顆粒剤を得る。
【００４５】
製剤例２
以下の成分を含有するカプセル充填用散剤を製造する。
成分  化合物［Ｉ］                      10mg
乳糖                              79mg
コーンスターチ                    10mg
ステアリン酸マグネシウム           1mg
100mg
【００４６】
（製法）
化合物［Ｉ］及び乳糖を６０メッシュのふるいに通す。コーンスターチを１２０メッシュのふるいに通す。これらとステアリン酸マグネシウムをＶ型混合機にて混合する。１０倍散１００ｍｇを５号硬ゼラチンカプセルに充填する。
【００４７】
製剤例３
以下の成分を含有するカプセル充填用顆粒剤を製造する。
成分  化合物［Ｉ］                      15mg
乳糖                              90mg
コーンスターチ                    42mg
ＨＰＣ−Ｌ                         3mg
150mg
【００４８】
（製法）
化合物［Ｉ］及び乳糖を６０メッシュのふるいに通す。コーンスターチを１２０メッシュのふるいに通す。これらをＶ型混合機にて混合する。混合末に低粘度ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ−Ｌ）水溶液を添加し、練合、造粒した後、乾燥する。得られた乾燥顆粒を振動ふるい（１２／６０メッシュ）で篩過し整粒し、その１５０ｍｇを４号硬ゼラチンカプセルに充填する。
【００４９】
製剤例４
以下の成分を含有する錠剤を製造する。
成分  化合物［Ｉ］                      10mg
乳糖                              90mg
微結晶セルロース                  30mg
ステアリン酸マグネシウム           5mg
ＣＭＣ−Ｎａ                      15mg
150mg
【００５０】
（製法）
化合物［Ｉ］及び乳糖と微結晶セルロース、ＣＭＣ−Ｎａ（カルボキシメチルセルロース  ナトリウム塩）を６０メッシュのふるいに通し、混合する。混合末にステアリン酸マグネシウムを添加し、製剤用混合末を得る。本混合末を直打し１５０ｍｇの錠剤を得る。
【産業上の利用可能性】
【００５１】
上記式［Ｉ］で表される化合物又はその製薬学的に許容される塩を有効成分として含有する本発明の医薬は、優れた腸内環境改善作用を有する。したがって、本発明により、肝性脳症、尿毒症等の疾患の予防又は治療に有用な医薬を提供することが可能となり、更なる医薬品産業の発達が期待される。