(57)【要約】【課題】化学物質防護物質および／または抗酸化物質として有用である栄養補助剤が必要である。【解決手段】本発明は、有効成分として、スルホラファンと、シリマリン及び／又はシリビニンを含有してなるオオアザミ抽出物または粉末との組合せに関する。本発明はまた、これら有効成分相互間の相乗作用を発現させるようにした経口投与可能な組成物を提供する。【選択図】図１
2019014763.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
有効成分として、
スルホラファンと、
シリマリン及び／又はシリビニンを含有してなるオオアザミ抽出物または粉末と、
の組合せからなり、これら有効成分相互間の相乗作用を発現させるようにした経口投与可能な組成物。
【請求項２】
腸溶コーティング錠剤またはカプセル剤となっている請求項１記載の経口投与可能な組成物。
【請求項３】
ケルセチン、アミノ糖、グリコサミノグリカン、アボカド/ダイズ不けん化物、ビタミン、コーヒー果実、マグネシウム、シリマリン、プロアントシアニジン、ウルソール酸、クルクミン、フィトステロールおよびフィトスタノールからなる群から選択される１種以上のさらなる成分をさらに含む、請求項１記載の経口投与可能な組成物。
【請求項４】
ブロッコリー抽出物または粉末をさらに含む、請求項１記載の経口投与可能な組成物。
【請求項５】
直腸癌または結腸癌を治療、予防し、その発生を低減し、それと関連する症状を減少させ、その二次再発を低減させるための経口投与可能な薬剤組成物であって、有効成分として、
スルホラファンと、
シリマリン及び／又はシリビニンを含有してなるオオアザミ抽出物または粉末と、
の組合せからなり、これら有効成分相互間の相乗作用を発現させるようにした薬剤組成物。
【請求項６】
腸溶コーティング剤または錠剤とした請求項５記載の薬剤組成物。
【請求項７】
前記オオアザミ抽出物がシリマリンを含む請求項５記載の経口投与可能な薬剤組成物。
【請求項８】
前記オオアザミ抽出物がシリビニンを含む請求項５記載の経口投与可能な薬剤組成物。
【請求項９】
ケルセチン、アミノ糖、グリコサミノグリカン、アボカド/ダイズ不けん化物、ビタミン、コーヒー果実、マグネシウム、シリマリン、プロアントシアニジン、ウルソール酸、クルクミン、フィトステロール、フィトスタノールおよびＳ‐アデノシルメチオニン（ＳＡＭｅ）からなる群から選択される１種以上のさらなる成分をさらに含む、請求項５記載の経口投与可能な薬剤組成物。
【請求項１０】
肝臓、前立腺癌、脳、肺、腎臓、結腸、乳房、食道、膵臓または卵巣と関連している疾患又は症状を治療、予防し、その発症を低減し、それと関連する症状を減少させ、及び／又はその二次再発を低減するための経口投与可能な薬剤組成物であって、有効成分として、スルホラファンと、シリマリン及び／又はシリビニンを含有してなるオオアザミ抽出物または粉末との組合せからなり、これら有効成分相互間の相乗作用を発現させるようにした薬剤組成物。
【請求項１１】
グルタチオンレベルを増大させるための経口投与可能な薬剤組成物であって、有効成分として、スルホラファンと、シリマリン及び／又はシリビニンを含有してなるオオアザミ抽出物または粉末との組合せからなり、これら有効成分相互間の相乗作用を発現させるようにした薬剤組成物。
【請求項１２】
非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）を治療、予防し、その発生を低減し、それと関連する症状を減少させ、及び／又はその二次再発を低減させるための経口投与可能な薬剤組成物であって、有効成分として、スルホラファンと、シリマリン及び／又はシリビニンを含有してなるオオアザミ抽出物または粉末との組合せからなり、これら有効成分相互間の相乗作用を発現させるようにした薬剤組成物。
【請求項１３】
前記オオアザミ抽出物がシリマリンを含む請求項１２記載の経口投与可能な薬剤組成物。
【請求項１４】
前記オオアザミ抽出物がシリビニンを含む請求項１２記載の経口投与可能な薬剤組成物。
【請求項１５】
ケルセチン、アミノ糖、グリコサミノグリカン、アボカド/ダイズ不けん化物、ビタミン、コーヒー果実、マグネシウム、シリマリン、プロアントシアニジン、ウルソール酸、クルクミン、フィトステロールおよびフィトスタノールからなる群から選択される１種以上の成分を更に含む、請求項１２記載の経口投与可能な薬剤組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願は、各々、参照によりその全文が組み込まれる、以下の出願の優先権を主張する：２０１２年７月５日に出願された米国仮特許出願第６１／６６８，３２８号；２０１２年７月５日に出願された米国仮特許出願第６１／６６８，３４２号；２０１２年７月５日に出願された米国仮特許出願第６１／６６８，３８６号；２０１２年７月５日に出願された米国仮特許出願第６１／６６８，３９６号；２０１２年７月５日に出願された米国仮特許出願第６１／６６８，３６４号；２０１２年７月５日に出願された米国仮特許出願第６１，６６８，３７４号および２０１３年３月１５日に出願された米国仮特許出願第６１／７９４，４１７号。
【０００２】
本発明は、スルホラファン前駆体、スルホラファン前駆体をスルホラファンに変換できる酵素、酵素増強物質およびオオアザミ抽出物または粉末の組合せに関する。本発明はまた、スルホラファンまたはその誘導体およびオオアザミ抽出物または粉末の組合せに関する。本発明はまた、ブロッコリー抽出物または粉末およびオオアザミ抽出物または粉末の組合せに関する。本発明は、これらの組合せに関する組成物および方法を提供する。
【背景技術】
【０００３】
天然生成物の使用は、ヒトおよびコンパニオンアニマルの間でますます人気が高まってきている。これらの天然生成物のうち一部は、栄養補助食品およびメディカルフード中に組み込まれている。当技術分野では、化学物質防護物質および／または抗酸化物質として有用である栄養補助剤が必要である。さらに、当技術分野では、グルタチオンと関連する状態および障害にとって有用な医薬組成物および栄養補助食品が必要である。天然生成物の使用による化学物質防護は、ヒトおよび家畜を冒す多数の状態の発生を予防するまたは低減するための安全で、有効な、安価な、容易に利用可能な、実用的な手段として発展している。分子レベルで細胞に損傷を与え得る発癌物質は、非毒性前駆体として摂取および吸入されることが多いということがわかっている。これらの非毒性前駆体は、次いで、身体中で発癌性物質に変換し得る。解毒酵素を活性化し得る天然物質またはその補因子などの化学物質防護物質は、発癌物質に対抗し、その排出を可能にする。これらの同じ天然物質は、免疫系などのその他の天然に存在する防御を増強し得る。
【０００４】
一部の天然生成物は、抗酸化活性を有する。酸化ストレスは、加齢、神経変性性疾患の進行ならびに虚血などの生理的外傷において主要な役割を果たす。抗酸化物質は、重要な生体分子の酸化を低減または阻害でき、酸化ストレスによって影響を受ける状態の治療、予防またはその発生の低減において役割を果たし得る。
【０００５】
一部の天然生成物は、肝臓の健康の増強にとって有用である。非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）は、米国では最もよくある肝臓疾患であり、人口の約３０％を冒す。ＮＡＦＬＤはまた、肝リピドーシスとしても知られている。ＮＡＦＬＤを有する人の１０％では、この疾患は、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）に進行し、そのうち２５％は、硬変を発症する。硬変を有する患者の１０〜２５％が、肝細胞癌を発症する可能性がある。現在のペースで、有効な治療法がない場合、２０３０年までに肝細胞癌は、米国で第１位の診断される癌となると予測される。ＮＡＦＬＤは、脂肪が肝臓に蓄積される場合に（脂肪肝）生じるが、過剰のアルコール使用の結果としてではない。ＮＡＦＬＤは、慢性炎症、インスリン抵抗性、糖尿病および肥満症と関連している。ＮＡＦＬＤは、症状をほとんど呈さないか、まったく呈さず、最も一般的には、日常的な血液検査で異常な結果（すなわち、血清ＡＬＴおよびＡＳＴレベルの上昇）が得られた後に検出され、超音波または生検によって確認される。現在、ＮＡＦＬＤのための外科的治療または薬物治療はない。ＮＡＦＬＤを制御するための推奨として、健康な食事を摂ること、運動、体重減少、コレステロールを下げることおよび糖尿病を管理することなどのライフスタイルの改善が挙げられる。
【０００６】
ＮＡＦＬＤは、グルタチオンレベルの低下と関連していることが多い。グルタチオンは、システインのアミン基とグルタミン酸側鎖のカルボキシル基の間のγペプチド結合を有するトリペプチドである。グルタチオンは、抗酸化薬、解毒剤および免疫エンハンサーとして役立ち得るので身体において重要な役割を果たす。グルタチオンは、身体からの排泄のために代謝物および前発癌物質などの毒素とコンジュゲートし得る。グルタチオンレベルは、質の悪い食事、汚染、毒素および／または特定の薬物に対する曝露、ストレス、外傷、加齢、感染ならびに放射線照射を含めたいくつかの理由のために患者において低下し得る。低レベルのグルタチオンは、患者を酸化ストレス、疾病および癌に対して感受性にし得る。例えば、グルタチオンの低下したレベルは、肝臓、前立腺、脳、肺、腎臓、結腸、乳房、食道、膵臓、卵巣などと関係する状態と関連している。グルタチオンの低下したレベルおよびグルタチオン欠乏と関連している障害の例として、それだけには限らないが、ＮＡＦＬＤ、癌（肺、前立腺、結腸、乳房、脳、肝臓、卵巣、食道、膵臓、鼻咽頭、骨肉腫）、白血病、嚢胞性線維症、ＨＩＶ、グルタチオンシンセターゼ欠損症、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン舞踏病、筋萎縮性側索硬化症、フリートライヒ運動失調症、多発性硬化症、線維筋痛症、慢性疲労、自閉症および糖尿病が挙げられる。
【０００７】
化学物質防護特性および抗酸化特性を有すると考えられる天然生成物の一例として、スルホラファンがある。スルホラファンは、１−イソチオシアナト−４−メチルスルフィニルブタンとしても知られる有機硫黄化合物である。スルホラファン前駆体であるグルコラファニンは、ブロッコリー、芽キャベツおよびキャベツなどのアブラナ科の野菜から得ることができる。しかし、化学予防に適切なレベルを得るには、大量の野菜が消費されなければならない。グルコラファニンは、アブラナ科野菜などの種々の外因性供給源中また腸細菌叢において内因性に生じるミロシナーゼと呼ばれるチオグルコシダーゼ酵素によって、スルホラファンに変換される。しかし、グルコラファニンの経口摂取の際には、すべての動物が、スルホラファンへのその変換を達成することができるわけではなく、これは、細菌叢集団および全体的な健康の多様性による可能性が最も高い。さらに、胃などの酸性環境では、グルコラファニンは、不活性代謝物に変換され得る。活性代謝物スルホラファンは、核内赤血球−２関連因子（Ｎｒｆ２）を誘導し、これは、次いで、グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ、ＮＡＤ（Ｐ）Ｈ：キノンオキシドレダクターゼ（ＮＱＯ１）およびヘムオキシゲナーゼ−１（ＨＯ−１）などの第ＩＩ相解毒酵素および細胞保護酵素の産生を上方制御する。スルホラファンは、Ｐ−４５０シトクロム酵素の合成を大幅に変更することなく、これらの酵素の産生を誘導すると考えられてきた。第ＩＩ相酵素の上方制御は、細胞毒性からの脳の保護、脂肪蓄積の毒性効果からの肝臓の保護および種々のその他の組織の解毒を含め、種々の生物活性において役割を果たすと考えられる。
【０００８】
スルホラファンおよびその前駆体グルコラファニンは、広く研究されている。Ｓｈａｐｉｒｏら（非特許文献１）は、ブロッコリースプラウトグルコシノレートおよびイソチオシアネートの安全性、忍容性および代謝を決定する第Ｉ相臨床研究を論じている。Ｓｈａｐｉｒｏらは、健常ヒト対象における、グルコラファニンなどのグルコシノレートまたはスルホラファンなどのイソチオシアネートのいずれかを含有するスプラウト抽出物のプラセボ対照の二重盲検無作為化臨床試験を論じている。この研究は、これらの物質の投与は、秩序だった、臨床上大きな副作用をもたらさないことを見出した。
【０００９】
オオアザミ（シリブム・マリアヌム（Ｓｉｌｙｂｕｍ  ｍａｒｉａｎｕｍ））は、キク科（Ａｓｔｅｒａｃｅａｅ）の植物である。オオアザミは、それだけには限らないが、シリビニン（シリビン（ｓｉｌｙｂｉｎ）またはシリビン（ｓｉｌｉｂｉｎ）としても知られる）、イソシリビニン、シリクリスチン（ｓｉｌｉｃｈｒｉｓｔｉｎ）、シリジアニン（ｓｉｌｙｄｉａｎｉｎ）、クベルセチン（ｋｖｅｒｃｅｔｉｎ）、デヒドロシリビン（ｄｅｈｙｄｒｏｓｉｌｙｂｉｎ）、デオキシシリシスチン（ｄｅｏｘｙｓｉｌｙｃｉｓｔｉｎ）、デオキシシリジアニン（ｄｅｏｘｙｓｉｌｙｄｉａｎｉｎ）、シランドリン（ｓｉｌａｎｄｒｉｎ）、シリビノム（ｓｉｌｙｂｉｎｏｍｅ）、シリヘルミン（ｓｉｌｙｈｅｒｍｉｎ）およびネオシリヘルミン（ｎｅｏｓｉｌｙｈｅｒｍｉｎ）などのフラボノリグナンを含めたいくつかの成分からなるシリマリンを含有する。シリマリンの成分は、フリーラジカル形成の阻害、フリーラジカル種の結合、膜脂質過酸化の防止、グルタチオンのレベルの増大および鉄のキレート化を含めたいくつかの生物学的効果を有し得る。シリビニンは、シリマリンの主要な活性成分であり、肝保護特性を有すると考えられている。シリマリンは、参照によりその全文が組み込まれる特許文献１に論じられている。
【００１０】
Ｚｈａｎｇら（非特許文献２）は、スルホラファンおよび構造的に関連する合成ノルボルニルイシオチオシアネートの抗発癌活性を決定するための、スプラーク−ドーリーラットにおける研究を論じている。この研究は、スルホラファンの投与が乳房腫瘍の形成の阻止において有効であると決定した。
【００１１】
Ｃｏｒｎｂｌａｔｔら（非特許文献３）は、乳房における化学予防におけるスルホラファンの効果を決定するための、スプラーク−ドーリーラットにおける研究を論じている。この研究は、スルホラファンまたはグルコラファニンのいずれかの経口投与が、ＮＡＤ（Ｐ）Ｈ：キノンオキシドレダクターゼ（ＮＱＯ１）酵素活性の３倍の増大および乳腺上皮におけるヘムオキシゲナーゼ−１（ＨＯ−１）酵素の免疫染色の４倍の上昇をもたらすと決定した。
【００１２】
Ｍｕｎｄａｙら（非特許文献４）は、ラットにおける膀胱癌発症に対するブロッコリースプラウトの凍結乾燥水性抽出物の効果に関する研究を論じている。この研究は、ブロッコリースプラウト抽出物の投与は、膀胱において、オキシダントおよび発癌物質に対する防護活性を発揮する酵素である、グルタチオンＳ−トランスフェラーゼおよびＮＡＤ（Ｐ）Ｈ：キノンオキシドレダクターゼ１の大幅な誘導をもたらすことを見出した。
【００１３】
Ｓ．Ａｇｈａｚａｄｅｈら（非特許文献５）は、実験的な脂肪性肝炎の治療におけるオオアザミ（Ｓｉｌｙｂｕｍ  ｍａｒｉａｎｕｍ）の抗アポトーシス効果および抗炎症効果を論じている。この研究は、非アルコール性脂肪性肝炎を誘導するようメチオニンおよびコリン欠乏（ＭＣＤ）食を給餌したラットへのオオアザミ（Ｓｉｌｙｂｕｍ  ｍａｒａｎｉｕｍ）の抽出物の投与が、ＭＣＤ食単独を給餌されている対照ラットと比較して、グルタチオン含量を増大およびＡＳＴおよびＡＬＴ活性を改善したことを見出した。
【００１４】
特許文献２は、カプセル化されているか、コーティングされている、グルコラファニンなどのグルコシノレートおよびミロシナーゼを含む製剤を開示している。
【００１５】
本明細書において引用されるすべての参考文献は、参照によりその全文が組み込まれる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１６】
【特許文献１】米国特許第７，５６３，７７９号明細書
【特許文献２】欧州特許出願公開第２２１３２８０号明細書
【非特許文献】
【００１７】
【非特許文献１】Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ、（２００６年）第５５巻（第１号）５３〜６２頁
【非特許文献２】Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．、（１９９４年）、第９１巻、３１４７〜３１５０頁
【非特許文献３】Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ、（２００７年）、第３８巻（第７号）：１４８５〜１４９０頁
【非特許文献４】Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ、（２００８年）、第６８巻（第５号）１５９３〜１６００頁
【非特許文献５】Ｅｘｐ  Ｔｏｘｉｃｏｌ  Ｐａｔｈｏｌ．（２０１１年）９月；第６３巻（第６号）：５６９〜７４頁
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１８】
本発明は、（ｉ）スルホラファン前駆体、好ましくは、グルコラファニン；（ｉｉ）スルホラファン前駆体をスルホラファンに変換できる酵素、好ましくは、グルコシダーゼ酵素、より好ましくは、チオグルコシダーゼ酵素、最も好ましくは、ミロシナーゼ；（ｉｉｉ）酵素増強物質、好ましくは、アスコルビン酸；（ｉｖ）オオアザミ抽出物または粉末を含む組成物を提供する。本発明はまた、対象に、（ｉ）スルホラファン前駆体、（ｉｉ）スルホラファン前駆体をスルホラファンに変換できる酵素、（ｉｉｉ）酵素増強物質および（ｉｖ）オオアザミ抽出物または粉末を投与することを含む、対象において肝臓、前立腺、脳、肺、腎臓、結腸、乳房、食道、膵臓または卵巣と関連している疾患または状態を治療、予防し、その発生を低減し、それと関連している症状を減少させ、および／またはその二次再発を低減する方法を提供する。本発明はまた、対象に、（ｉ）スルホラファン前駆体、（ｉｉ）スルホラファン前駆体をスルホラファンに変換できる酵素、（ｉｉｉ）酵素増強物質および（ｉｖ）オオアザミ抽出物または粉末を投与することを含む、対象においてそれを必要とする対象におけるグルタチオンレベルを増大する方法を提供する。本発明はまた、対象に、（ｉ）スルホラファン前駆体、（ｉｉ）スルホラファン前駆体をスルホラファンに変換できる酵素、（ｉｉｉ）酵素増強物質および（ｉｖ）オオアザミ抽出物または粉末を投与することを含む、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）および／または肝臓の任意のその他の障害を治療、予防し、その発生を低減し、それと関連する症状を減少させ、および／またはその二次再発を低減する方法を提供する。
【００１９】
本発明は、（ｉ）スルホラファンまたはその誘導体、および（ｉｉ）オオアザミ抽出物または粉末を含む組成物を提供する。本発明はまた、対象に、（ｉ）スルホラファンまたはその誘導体および（ｉｉ）オオアザミ抽出物または粉末を投与することを含む、対象において肝臓、前立腺、脳、肺、腎臓、結腸、乳房、食道、膵臓または卵巣と関連している疾患または状態を治療、予防し、その発生を低減し、それと関連する症状を減少させ、および／またはその二次再発を低減する方法を提供する。本発明はまた、対象に、（ｉ）スルホラファンまたはその誘導体および（ｉｉ）オオアザミ抽出物または粉末を投与することを含む、対象に投与することを含む、対象においてそれを必要とする対象におけるグルタチオンレベルを増大する方法を提供する。本発明はまた、対象に、（ｉ）スルホラファンまたはその誘導体および（ｉｉ）オオアザミ抽出物または粉末を投与することを含む、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）および／または肝臓の任意のその他の障害を治療、予防し、その発生を低減し、それと関連する症状を減少させ、および／またはその二次再発を低減する方法を提供する。
【００２０】
本発明は、（ｉ）ブロッコリー抽出物または粉末および（ｉｉ）オオアザミ抽出物または粉末を含む組成物を提供する。本発明はまた、対象に、（ｉ）ブロッコリー抽出物または粉末および（ｉｉ）オオアザミ抽出物または粉末を投与することを含む、対象において肝臓、前立腺、脳、肺、腎臓、結腸、乳房、食道、膵臓または卵巣と関連している疾患または状態を治療、予防し、その発生を低減し、それと関連している症状を減少させ、および／またはその二次再発を低減させる方法も提供する。本発明はまた、対象に、（ｉ）ブロッコリー抽出物または粉末および（ｉｉ）オオアザミ抽出物または粉末を投与することを含む、対象に投与することを含む、対象においてそれを必要とする対象におけるグルタチオンレベルを増大する方法を提供する。本発明はまた、対象に、（ｉ）ブロッコリー抽出物または粉末および（ｉｉ）オオアザミ抽出物または粉末を投与することを含む、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）および／または肝臓の任意のその他の障害を治療、予防し、その発生を低減し、それと関連する症状を減少させ、および／またはその二次再発を低減する方法を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
【図１】実施例４に記載されるような、アスコルビン酸を用いない３８℃でのグルコラファニンの変換を示すグラフである。
【図２】実施例４に記載されるような、アスコルビン酸濃度の関数としての、３８℃で約１０分以内の変換を示す示すグラフである。
【図３】実施例４に記載されるような、３８℃および１ｍＭアスコルビン酸で３０分以内のスルホラファンへの変換を示すグラフである。
【図４】実施例５に記載されるような、疑似腸液におけるグルコラファニンのスルホラファンへの変換を示すグラフである。
【図５】実施例６に記載される実験の結果を示すグラフである。
【図６】実施例６に記載される実験の結果を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
本発明は、スルホラファン前駆体、スルホラファン前駆体をスルホラファンに変換できる酵素、酵素増強物質およびオオアザミ抽出物または粉末の組合せに関する。本発明はまた、スルホラファンまたはその誘導体およびオオアザミ抽出物または粉末の組合せに関する。本発明はまた、ブロッコリー抽出物または粉末およびオオアザミ抽出物または粉末の組合せに関する。本発明はまた、スルホラファン前駆体、スルホラファンまたはその誘導体およびブロッコリー抽出物のうち１種以上の混合物とともの、オオアザミ抽出物または粉末の使用に関する。本発明は、これらの組合せに関連する組成物を提供する。
【００２３】
本発明は、これらの組合せを投与することを含む方法を提供する。いくつかの実施形態では、組合せは、対象に投与することを含む、対象において肝臓、前立腺、脳、肺、腎臓、結腸、乳房、食道、膵臓または卵巣と関連している疾患または状態を治療、予防し、その発生を低減し、それと関連している症状を減少させ、および／またはその二次再発を低減するために投与され得る。いくつかの実施形態では、組合せは、対象においてそれを必要とする対象におけるグルタチオンレベルを増大するために投与され得る。いくつかの実施形態では、組合せは、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）および／または肝臓の任意のその他の障害を治療、予防し、その発生を低減させ、それと関連する症状を減少させ、および／またはその二次再発を低減するために投与され得る。
【００２４】
スルホラファンはまた、１−イソチオシアナト−４−メチルスルフィニルブタンとしても知られる。スルホラファンの誘導体として、それだけには限らないが、スルホラファンのスルホキシチオカルバメート類似体、６−メチルスルフィニルヘキシルイソチオシアネート（６−ＨＩＴＣ）ならびに異なる側鎖および／またはイソチオシアナトとスルホキシド基の間に種々の長さのスペーサーを有するスルホラファンの構造を含む化合物が挙げられる。スルホラファンの誘導体の例として、各々、参照によりその全文が組み込まれる以下の参考文献に記載されるものが挙げられる：Ｈｕら、Ｅｕｒ  Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ、２０１３年、６４巻：５２９〜５３９頁；Ａｈｎら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ、２０１０年、１０７巻（２１号）：９５９０〜９５９５頁およびＭｏｒｉｍｉｓｔｕら、Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２００２年、２７７巻：３４５６〜３４６３頁およびＢａｉｒｄら、Ａｒｃｈ  Ｔｏｘｉｃｏｌ、２０１１年、８５巻（４号）：２４１〜２７２頁。
【００２５】
いくつかの実施形態では、組成物は、約１μｇ〜約１０ｇ、好ましくは、約３μｇ〜約５ｇ、好ましくは、約５μｇ〜約１０００ｍｇ、好ましくは、約７μｇ〜約７５０ｍｇ、より好ましくは、約１０μｇ〜約５００ｍｇ、最も好ましくは、約１００μｇ〜約１００ｍｇの量のスルホラファンまたはその誘導体、好ましくは、スルホラファンを含む。いくつかの実施形態では、ヒト使用に適した組成物は、約１ｍｇ〜約２０ｍｇを含む。
【００２６】
いくつかの実施形態では、本発明の方法は、対象へのスルホラファンまたはその誘導体、好ましくはスルホラファンの、約１μｇ〜約１０ｇ、好ましくは、約３μｇ〜約５ｇ、好ましくは、約５μｇ〜約１０００ｍｇ、好ましくは、約７μｇ〜約７５０ｍｇ、より好ましくは、約１０μｇ〜約５００ｍｇ、最も好ましくは、約１００μｇ〜約１００ｍｇの量の投与を含む。対象がヒトであるいくつかの実施形態では、方法は、約１ｍｇ〜約２０ｍｇの投与を含む。いくつかの実施形態では、本発明の方法は、スルホラファンまたはその誘導体、好ましくはスルホラファンの、対象への、約０．０１μｇ／ｋｇ〜約０．２ｇ／ｋｇ、好ましくは、約０．０５μｇ／ｋｇ〜約０．０７ｇ／ｋｇ、より好ましくは、約０．０７μｇ／ｋｇ〜約１５ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは、約０．１μｇ／ｋｇ〜約１１ｍｇ／ｋｇ、最も好ましくは、約０．２μｇ／ｋｇ〜約７ｍｇ／ｋｇの量の投与を含む。対象がヒトであるいくつかの実施形態では、方法は、約２μｇ／ｋｇ〜約２ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約０．３ｍｇ／ｋｇの投与を含む。上記の量は、個々の用量の投与または合計の一日用量を指し得る。合計の一日用量とは、２４時間の期間で対象に投与される化合物または成分の総量を指す。
【００２７】
いくつかの実施形態では、方法は、スルホラファンまたはその誘導体のうち２種以上の投与を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、スルホラファンまたはその誘導体のうち２種以上を含む。例えば、方法または組成物は、スルホラファンおよび１種以上のその誘導体の両方または２種以上の誘導体を含み得る。方法または組成物がスルホラファンまたはその誘導体のうち２種以上を含むいくつかの実施形態では、上記の量は、各スルホラファンもしくはその誘導体の量または２種以上のスルホラファンもしくはその誘導体の総量を指し得る。
【００２８】
用語「スルホラファン前駆体」とは、スルホラファンを産生するために使用され得る任意の化合物、物質または材料を指す。好ましい実施形態では、スルホラファン前駆体は、好ましくは、酵素によってスルホラファンに変換または代謝され得る化合物を含む。いくつかの好ましい実施形態では、スルホラファン前駆体は、グルコラファニンを含む。グルコラファニンは、４−メチルスルフィニルブチルグルコシノレートおよび１−Ｓ−［（１Ｅ）−５−（メチルスルフィニル）−Ｎ−（スルホナトオキシ）ペンタンイミドイル］−１−チオ−β−Ｄ−グルコピラノースとしても知られるグルコシノレートである。
【００２９】
いくつかの実施形態では、組成物は、約１μｇ〜約１０ｇ、好ましくは、約２５０μｇ〜約５ｇ、より好ましくは、約５００μｇ〜約２０００ｍｇ、さらにより好ましくは、約１ｍｇ〜約７５０ｍｇ、さらにより好ましくは、約１．５ｍｇ〜約２５０ｍｇ、さらにより好ましくは、約２ｍｇ〜約１００ｍｇ、最も好ましくは、約３ｍｇ〜約７５ｍｇのスルホラファン前駆体、好ましくは、グルコラファニンを含む。いくつかの実施形態では、ヒト使用に適した組成物は、約３．５ｍｇ〜約５０ｍｇのスルホラファン前駆体、好ましくは、グルコラファニンを含む。
【００３０】
いくつかの実施形態では、方法は、対象に、約１μｇ〜約１０ｇ、好ましくは、約２５０μｇ〜約５ｇ、より好ましくは、約５００μｇ〜約２０００ｍｇ、さらにより好ましくは、約１ｍｇ〜約７５０ｍｇ、さらにより好ましくは、約１．５ｍｇ〜約２５０ｍｇ、さらにより好ましくは、約２ｍｇ〜約１００ｍｇ、最も好ましくは、約３ｍｇ〜約７５ｍｇの量のスルホラファン前駆体、好ましくは、グルコラファニンを投与することを含む。対象がヒトであるいくつかの実施形態では、方法は、約３．５ｍｇ〜約５０ｍｇの投与を含む。いくつかの実施形態では、方法は、対象に、一定量のスルホラファン前駆体を、約１μｇ／ｋｇ〜約１０００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは、約５μｇ／ｋｇ〜約５００ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは、約７．５μｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ、さらにより好ましくは、約１０μｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇ、最も好ましくは、約２５μｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇの量で投与することを含む。対象がヒトであるいくつかの実施形態では、方法は、約５０μｇ／ｋｇ〜約８００μｇ／ｋｇの投与を含む。上記の量は、個々の用量の投与または合計の一日用量を指し得る。
【００３１】
いくつかの実施形態では、方法は、２種以上のスルホラファン前駆体の投与を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、２種以上のスルホラファン前駆体を含む。方法または組成物が２種以上のスルホラファン前駆体を含むいくつかの実施形態では、上記の量は、各スルホラファン前駆体の量またはスルホラファン前駆体の総量を指し得る。
【００３２】
スルホラファン前駆体は、スルホラファンに変換または代謝され得る。いくつかの実施形態では、スルホラファン前駆体は、酵素によってスルホラファンに変換される。いくつかの実施形態では、スルホラファン前駆体をスルホラファンに変換できる酵素は、グルコシダーゼ酵素、好ましくは、チオグルコシダーゼ酵素、より好ましくは、ミロシナーゼを含む。ミロシナーゼはまた、チオグルコシドグルコヒドロラーゼとしても知られる。
【００３３】
いくつかの実施形態では、組成物は、酵素を、約１ｐｇ〜約１μｇ、好ましくは、約５０ｐｇ〜約５００ｎｇ、最も好ましくは、約１ｎｇ〜約１５０ｎｇの量で含む。いくつかの実施形態では、ヒト使用に適した組成物は、約５ｎｇ〜約７５ｎｇの酵素を含む。
【００３４】
いくつかの実施形態では、方法は、酵素、好ましくは、ミロシナーゼを、約１ｐｇ〜約１μｇ、好ましくは、約５０ｐｇ〜約５００ｎｇ、最も好ましくは、約１ｎｇ〜約１５０ｎｇの量で投与することを含む。対象がヒトであるいくつかの実施形態では、方法は、約５ｎｇ〜約７５ｎｇの酵素の投与を含む。いくつかの実施形態では、方法は、対象に酵素を、約０．０２ｐｇ／ｋｇ〜約０．０２μｇ／ｋｇ、好ましくは、約０．７ｐｇ／ｋｇ〜約７ｎｇ／ｋｇ、最も好ましくは、約０．０２ｎｇ／ｋｇ〜約２ｎｇ／ｋｇの量で投与することを含む。対象がヒトであるいくつかの好ましい実施形態では、方法は、約０．１ｎｇ／ｋｇ〜約１ｎｇ／ｋｇの投与を含む。上記の量は、個々の用量の投与または合計の一日用量を指し得る。
【００３５】
いくつかの実施形態では、方法は、２種以上のスルホラファン前駆体をスルホラファンに変換できる酵素の投与を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、２種以上のスルホラファン前駆体をスルホラファンに変換できる酵素を含む。方法または組成物が２種以上の酵素を含むいくつかの実施形態では、上記の量は、各酵素の量または酵素の総量を指し得る。
【００３６】
本発明はまた、それだけには限らないが、ブロッコリー種子およびスプラウト抽出物および粉末を含めたブロッコリー抽出物および／または粉末の使用を提供する。本発明は、ブロッコリー抽出物および／または粉末を投与する方法ならびにブロッコリー抽出物および／または粉末を含む組成物を提供する。いくつかの実施形態では、ブロッコリー抽出物または粉末は、約１重量％〜約７５重量％、より好ましくは、約２．５％〜約５０％、さらにより好ましくは、約５％〜約２５％、最も好ましくは、約１０％〜約２０％のスルホラファン前駆体、好ましくは、グルコラファニンを含有するよう標準化される。ブロッコリー抽出物および粉末の例として、それだけには限らないが、各々参照によりその全文が組み込まれる、米国特許第５，４１１，９８６号；同５，７２５，８９５号；同５，９６８，５０５号；同５，９６８，５６７号；同６，１７７，１２２号；同６，２４２，０１８号；同６，５２１，８１８号；同７，３０３，７７０号および同８，１２４，１３５号に記載されたものが挙げられる。ブロッコリーの粉末は、例えば、ブロッコリー、好ましくは、ブロッコリースプラウトを風乾、凍結乾燥、ドラム乾燥、噴霧乾燥、加熱乾燥および／または部分真空乾燥することによって得られ得る。いくつかの実施形態では、組成物および方法は、約１μｇ〜約１０ｇ、より好ましくは、約２５０μｇ〜約５ｇ、さらにより好ましくは、約５００μｇ〜約１ｇ、好ましくは、約６００μｇ〜約５００ｍｇ、より好ましくは、約７５０μｇ〜約４００ｍｇ、最も好ましくは、約１ｍｇ〜約３００ｍｇのブロッコリー抽出物の使用を含む。いくつかの実施形態では、ブロッコリー抽出物または粉末は、スルホラファン前駆体またはスルホラファンを上記の量で提供するのに十分な量で組成物中に存在するか、対象に投与される。いくつかの実施形態では、組成物は、酵素増強物質、好ましくは、アスコルビン酸をさらに含み得る。いくつかの実施形態では、方法は、酵素増強物質、好ましくは、アスコルビン酸の投与をさらに含み得る。
【００３７】
スルホラファンまたはその誘導体、スルホラファン前駆体および／またはスルホラファン前駆体をスルホラファンに変換できる酵素は、それだけには限らないが、アブラナ科（アブラナ科（Ｃｒｕｃｉｆｅｒａｅ）としても知られる）由来の１種以上の植物を含めた任意の供給源から得られ得る。アブラナ科由来の植物の例として、それだけには限らないが、ブロッコリー、芽キャベツ、カリフラワー、キャベツ、セイヨウワサビ、パースニップ、ダイコン、ワサビ、クレソンおよび白ガラシが挙げられる。いくつかの好ましい実施形態では、スルホラファン前駆体、好ましくは、グルコラファニンおよび酵素、好ましくは、ミロシナーゼは、ブロッコリー、ブロッコリースプラウトまたはブロッコリー種子から得られる。スルホラファン前駆体および酵素は、同一供給源から得ても、異なる供給源から得てもよい。いくつかの実施形態では、スルホラファン前駆体および酵素の両方が、これらの植物に由来する抽出物または粉末、好ましくは、ブロッコリー種子またはスプラウト抽出物または粉末から得られ得る。
【００３８】
本発明は、酵素増強物質の使用を提供する。酵素増強物質は、スルホラファン前駆体をスルホラファンに変換できる酵素の活性を増強するために使用され得る。いくつかの実施形態では、酵素増強物質は、酵素の補因子、好ましくは、アスコルビン酸を含む。アスコルビン酸はまた、アスコルビン酸塩またはビタミンＣとしても知られ、ミロシナーゼの活性を増強し得る。いくつかの実施形態では、アスコルビン酸などの酵素増強物質を用いない場合は、スルホラファンへの変換反応は遅すぎて、ピーク吸収に必要とされる部位で生じない場合がある。酵素増強物質は、天然供給源から得てもよく、または合成によって製造してもよい。
【００３９】
いくつかの実施形態では、組成物は、約１ｍｇ〜約５００ｍｇ、好ましくは、約１ｍｇ〜約２５０ｍｇ、最も好ましくは、約１ｍｇ〜約１２５ｍｇの酵素増強物質を含み得る。いくつかの好ましい実施形態では、ヒト使用に適した組成物は、約１ｍｇ〜約５０ｍｇの酵素増強物質を含む。
【００４０】
いくつかの実施形態では、本発明の方法は、酵素増強物質、好ましくは、アスコルビン酸の、約１ｍｇ〜約５００ｍｇ、好ましくは、約１ｍｇ〜約２５０ｍｇ、最も好ましくは、約１ｍｇ〜約１２５ｍｇの量での投与を含む。対象がヒトであるいくつかの好ましい実施形態では、方法は、約１ｍｇ〜約５０ｍｇの投与を含む。いくつかの実施形態では、本発明の方法は、酵素増強物質、好ましくは、アスコルビン酸の、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約３ｍｇ／ｋｇ、最も約０．０２ｍｇ／ｋｇ〜約２ｍｇ／ｋｇの量での投与を含む。対象がヒトであるいくつかの好ましい実施形態では、方法は、約０．０２ｍｇ／ｋｇ〜約０．７ｍｇ／ｋｇの酵素増強物質の投与を含む。上記の量は、個々の用量の投与または合計の一日用量を指し得る。
【００４１】
いくつかの実施形態では、方法は、２種以上の酵素増強物質の投与を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、２種以上の酵素増強物質を含む。方法または組成物が２種以上の酵素増強物質を含むいくつかの実施形態では、上記の量は、各酵素増強物質の量または酵素増強物質の総量を指し得る。
【００４２】
本発明は、オオアザミ抽出物または粉末の使用をさらに含む。オオアザミは、シリブム・マリアヌム種（Ｓｉｌｙｂｕｍ  ｍａｒｉａｎｕｍ）に属する。オオアザミは、生物活性を有するいくつかの成分または画分を含む。オオアザミの活性画分は、シリマリンであり、これは、いくつかの成分を含む。シリマリンの成分の例として、それだけには限らないが、シリビニン（シリビン（ｓｉｌｙｂｉｎ）またはシリビン（ｓｉｌｉｂｉｎ）としても知られる）、イソシリビニン、シリクリスチン（ｓｉｌｉｃｈｒｉｓｔｉｎ）、シリジアニン（ｓｉｌｙｄｉａｎｉｎ）およびクベルセチン（ｋｖｅｒｃｅｔｉｎ）、デヒドロシリビン（ｄｅｈｙｄｒｏｓｉｌｙｂｉｎ）、デオキシシリシスチン（ｄｅｏｘｙｓｉｌｙｃｉｓｔｉｎ）、デオキシシリジアニン（ｄｅｏｘｙｓｉｌｙｄｉａｎｉｎ）、シランドリン（ｓｉｌａｎｄｒｉｎ）、シリビノム（ｓｉｌｙｂｉｎｏｍｅ）、シリヘルミン（ｓｉｌｙｈｅｒｍｉｎ）およびネオシリヘルミン（ｎｅｏｓｉｌｙｈｅｒｍｉｎ）が挙げられる。シリビニンの異性体として、シリビニン（Ｓｉｌｙｂｉｎｉｎ）Ａ（またはシリビニン（Ｓｉｌｂｉｎｉｎ）Ａ）およびシリビニン（Ｓｉｌｉｙｂｉｎｉｎ）Ｂ（またはシルビニン（Ｓｉｌｂｉｎｉｎ）Ｂ）が挙げられる。好ましい実施形態では、オオアザミ抽出物または粉末は、シリマリンを含む。
【００４３】
いくつかの実施形態では、本発明の組成物および方法は、オオアザミ抽出物または粉末の代わりに、またはそれに加えて、シリマリンの１種以上の誘導体の使用を含み得る。シリマリン成分の誘導体は、それだけには限らないが、７−Ｏ−および２３−Ｏ−アシル誘導体および類似体を含めた上記の化合物の任意の修飾された形態を含む。シリマリン成分の誘導体の例として、それだけには限らないが、２，３−デヒドロシリビン（ｄｅｈｙｄｒｏｓｉｌｙｂｉｎ）（ＤＨＳ）；７−Ｏ−メチルシリビン（ｍｅｔｈｙｌｓｉｌｙｂｉｎ）；７−Ｏ−ガロイルシリビン（ｇａｌｌｏｙｌｓｉｌｙｂｉｎ）；７，２３−ジスルフェートシリビン（ｄｉｓｕｌｐｈａｔｅｓｉｌｙｂｉｎ）（ＤＳＳ）；７−Ｏ−パルミトイルシリビン（ｐａｌｍｉｔｏｙｌｓｉｌｙｂｉｎ）；および２３−Ｏ−パルミトイルシリビン（ｐａｌｍｉｔｏｙｌｓｉｌｙｂｉｎ）が挙げられる。誘導体の例として、各々、その全文が参照により本明細書に組み込まれる以下の参考文献に記載されるものが挙げられる：Ａｇａｒｗａｌら  ＰＬＯＳ  ＯＮＥ、２０１３年、第８巻（第３号）：ｅ６００７４；ＧＢ２１６７４１４およびＣＡ１３３７１２４。いくつかの実施形態では、本発明の組成物および方法は、オオアザミ抽出物または粉末の代わりに、またはそれに加えて、精製形態のシリマリンもしくはシリビニンまたは合成によって製造されたシリマリンもしくはシリビニンの使用を含み得る。
【００４４】
いくつかの実施形態では、オオアザミ抽出物または粉末が使用され得る。好ましい実施形態では、オオアザミ抽出物は、シリマリンを含む。好ましい実施形態では、オオアザミ抽出物は、シリビニンを含む。いくつかの実施形態では、オオアザミ抽出物または粉末は、約２５％〜９５％、好ましくは、約５０％〜約９０％、より好ましくは、約５５％〜約８５％のシリマリンを含有するよう標準化される。いくつかの実施形態では、オオアザミ抽出物または粉末は、約５％〜約７５％、好ましくは、約１０％〜約６０％、より好ましくは、約１５％〜約５０％、最も好ましくは、約２０％〜約３５％のシリビニンを含有するよう標準化される。オオアザミ抽出物の例として、それだけには限らないが、各々、参照によりその全文が組み込まれる、米国特許第６，５５５，１４１号；米国特許第６，８６３，９０６号；米国特許第７，５６３，７７９号；ＷＯ２００９０８００６；ＥＰ２０２０２３８；ＷＯ２００９０４３６７１；ＥＰ１５８４２４０；およびＷＯ２０１１０７６１５４に記載されるものが挙げられる。オオアザミの粉末は、例えば、オオアザミを風乾、凍結乾燥、ドラム乾燥、噴霧乾燥、加熱乾燥および／または部分真空乾燥することによって得られ得る。
【００４５】
いくつかの実施形態では、組成物および方法は、約１．２５ｍｇ〜約１５グラム、好ましくは、約５ｍｇ〜約１０グラム、最も好ましくは、約１０ｍｇ〜約７．５グラムのオオアザミ抽出物の使用を含む。組成物が、ヒト使用に適しているいくつかの好ましい実施形態では、組成物は、約２５ｍｇ〜約５グラムのオオアザミ抽出物を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、約０．７５ｍｇ〜約１５グラム、好ましくは、約３ｍｇ〜約７グラム、より好ましくは、約７ｍｇ〜約５グラム、最も好ましくは、約１５ｍｇ〜約３．５グラムのシリマリンを含む。組成物が、ヒト使用に適しているいくつかの好ましい実施形態では、組成物は、約５０ｍｇ〜約２００ｍｇのシリマリンを含む。いくつかの実施形態では、組成物は、約０．３ｍｇ〜約５グラム、好ましくは、約１．５ｍｇ〜約３グラム、より好ましくは、約３ｍｇ〜約２グラム、最も好ましくは、約７ｍｇ〜約１．５グラムのシリビニンを含む。組成物が、ヒト使用に適しているいくつかの好ましい実施形態では、組成物は、約３０ｍｇ〜約９０ｍｇのシリビニンを含む。
【００４６】
いくつかの実施形態では、方法は、シリマリンの、約１μｇ／ｋｇ〜約７５ｍｇ／ｋｇ、好ましくは、約２．５μｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは、約５μｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは、約１０μｇ／ｋｇ〜約１５ｍｇ／ｋｇ、最も好ましくは、約１５μｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇの量での投与を含む。対象がヒトであるいくつかの好ましい実施形態では、方法は、約１ｍｇ／ｋｇ〜約３ｍｇ／ｋｇのシリマリンの投与を含む。いくつかの実施形態では、方法は、シリビニンの、約０．５μｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇ、好ましくは、約１μｇ／ｋｇ〜約３５ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは、約２．５μｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは、約５μｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、最も好ましくは、約７．５μｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇの量での投与を含む。対象がヒトであるいくつかの好ましい実施形態では、方法は、約３００μｇ／ｋｇ〜約２ｍｇ／ｋｇのシリビニンの投与をさらに含む。シリマリン成分の誘導体が使用される実施形態では、方法および組成物は、誘導体を、約０．７５ｍｇ〜約１５グラム、好ましくは、約３ｍｇ〜約７グラム、より好ましくは、約７ｍｇ〜約５グラム、最も好ましくは、約１５ｍｇ〜約３．５グラムの量で含み得る。組成物がヒト使用に適しているいくつかの好ましい実施形態では、組成物は、約５０ｍｇ〜約２００ｍｇのシリマリン成分の誘導体を含む。上記の量は、個々の用量の投与または合計の一日用量を指し得る。
【００４７】
いくつかの実施形態では、Ｓ−アデノシルメチオニンが、オオアザミ抽出物、シリマリンおよび／またはシリビニンの代わりに、またはそれに加えて使用され得る。
【００４８】
本発明の方法は、１種以上のさらなる成分の投与をさらに含み得る。本発明の組成物は、１種以上のさらなる成分をさらに含み得る。さらなる成分は、医薬品有効成分、栄養補助食品および栄養抽出物を含み得る。さらなる成分の例として、それだけに限らないが、ケルセチンまたはその誘導体、グルコサミンなどのアミノ糖、コンドロイチンなどのグリコサミノグリカン、アボカド／ダイズ不けん化物、ビタミンＫ２などのビタミン、コーヒー果実、マグネシウム、ウルソール酸、プロアントシアニジン、α−およびβ−グルカン、クルクミン、フィトステロール、フィトスタノールならびにＳ−アデノシルメチオニン（ＳＡＭｅ）が挙げられる。これらのさらなる成分は、クランベリー（ヴァシニアム・マクロカーポン（Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ  ｍａｃｒｏｃａｒｐｏｎ））抽出物（プロアントシアニジン、ケルセチンおよびウルソール酸）、ウコン（クルクマ・ロンガ（Ｃｕｒｃｕｍａ  ｌｏｎｇａ））、シイタケ（レンチヌラ・エドデス（Ｌｅｎｔｉｎｕｌａ  ｅｄｏｄｅｓ））、マイタケ（グリフォラ・フロンドサ（Ｇｒｉｆｏｌａ  ｆｒｏｎｄｏｓａ））キノコ抽出物およびレイシ（ガノデルマ・ルシダム（Ｇａｎｏｄｅｒｍａ  ｌｕｃｉｄｕｍ））キノコ抽出物などの薬用キノコ抽出物中に存在し得る。
【００４９】
いくつかの実施形態では、シリマリン対スルホラファンまたはその誘導体の比は、約１：１〜約７５：１、より好ましくは、約２：１〜約５０：１、より好ましくは、約２．５：１〜約２５：１、さらにより好ましくは、約５：１〜約１５：１、最も好ましくは、約６：１〜約９：１である。いくつかの実施形態では、シリビニン対スルホラファンまたはその誘導体の比は、約１：２〜約３５：１、より好ましくは、約１：１〜約２５：１、より好ましくは、約１：１〜約１５：１、さらにより好ましくは、約２：１〜約１０：１、最も好ましくは、約２：１〜約５：１である。いくつかの実施形態では、シリマリン対スルホラファン前駆体の比は、約１：５〜約５０：１、好ましくは、約１：２〜約２５：１、より好ましくは、約１：１〜約１０：１、より好ましくは、約１．５：１〜約５：１、最も好ましくは、約１：１〜約４：１である。いくつかの実施形態では、シリビニン対スルホラファン前駆体の比は、約１：５〜約５０：１、好ましくは、約１：２〜約２５：１、好ましくは、１：１〜約２０：１、最も好ましくは、約１：１〜約１３：１である。
【００５０】
いくつかの実施形態では、組成物は、それだけには限らないが、経口、直腸、静脈内、皮下、筋肉内、経皮、経粘膜および局所に適した医薬剤形を含めた単位剤形を含む。いくつかの好ましい実施形態では、組成物は、経口投与可能な剤形または直腸投与可能な剤形を含む。経口投与可能な剤形の例として、それだけには限らないが、錠剤、カプセル剤、飲料中に分散可能な粉末、溶液、懸濁液またはエマルジョンなどの液体、ソフトゲル／チュアブルカプセル剤、チュアブルバーまたは当技術分野で公知のその他の好都合な剤形が挙げられる。好ましい実施形態では、組成物は、錠剤、カプセル剤またはソフトチュアブルトリートを含む。経口投与可能な剤形は、即時放出、持続放出または遅延放出用に製剤化され得る。
【００５１】
いくつかの実施形態では、少なくともスルホラファン前駆体、酵素および酵素増強物質は、少なくとも４、好ましくは、少なくとも５のｐＨを有する胃腸管の領域、例えば、小腸、好ましくは、十二指腸における放出を可能にする剤形で提供される。いくつかの実施形態では、少なくともスルホラファンまたはその誘導体および／またはブロッコリー抽出物または粉末は、少なくとも４、好ましくは、少なくとも５のｐＨを有する胃腸管の領域、例えば、小腸、好ましくは、十二指腸における放出を可能にする剤形で提供される。いくつかの実施形態では、オオアザミ抽出物もしくは粉末および／または何らかの任意選択のさらなる成分も、少なくとも４、好ましくは、少なくとも５のｐＨを有する胃腸管の領域、例えば、小腸、好ましくは、十二指腸において放出される。小腸は、十二指腸、空調および回腸を含む。
【００５２】
いくつかの実施形態では、これらの成分（すなわち、スルホラファン前駆体、酵素、酵素増強物質、スルホラファンまたはその誘導体、ブロッコリー抽出物または粉末、オオアザミ抽出物または粉末および／あるいはさらなる成分）のそれぞれは、同時にまたは付随して（すなわち、互いに短い期間内に）放出される。これは、４未満のｐＨを有する胃腸管の領域、例えば、胃においてグルコラファニンを放出するよう製剤化されたグルコラファニン含有組成物を上回る利益を提供する。これなどの低ｐＨ環境では、酸性環境は、スルホラファン前駆体の変換をその他の生理学的に不活性の最終産物、例えば、スルホラファンニトリルおよびエピチオニトリル（ｅｐｉｔｈｉｏｎｉｔｒｉｌｅ）に変え得る。
【００５３】
いくつかの実施形態では、組成物は、腸溶コーティング剤形または４未満のｐＨを有する胃腸管の領域、例えば、胃における分解に対して耐性である任意の剤形を含む胃保護製剤を含む経口投与可能な組成物を含み得る。例えば、経口投与可能な組成物は、腸溶コーティングを含む錠剤またはカプセル剤を含み得る。腸溶コーティングは、それだけには限らないが、酢酸フタル酸セルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、酢酸フタル酸ポリビニル、メタクリル酸コポリマー、メタクリル酸：アクリル酸エステルコポリマー、ヒドロキシプロピルメチル酢酸コハク酸セルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルローストリメリテート、セラック、セルロースアセテートトリメリテート、カルボキシメチルエチルセルロースおよびそれらの混合物を含めた材料を含み得る。腸溶コーティングは、当技術分野で公知の任意の適した腸溶性ポリマーを含み得る。いくつかの実施形態では、組成物中の成分のうち１種以上が、腸溶性ポリマーのマトリックス中に包埋され得る。いくつかの実施形態では、経口投与可能な組成物は、胃酸中でゆっくりと溶解し、小腸へ移動するカプセル剤、例えば、ＣＡＰＳＵＧＥＬ（登録商標）によって市販されているＤＲＣＡＰＳ（商標）耐酸性カプセル剤または任意のその他の耐酸性カプセル剤を含む。
【００５４】
最も好ましい形態では、経口投与可能な組成物は、周囲の媒体が、少なくとも４、より好ましくは、少なくとも５のｐＨでない限り溶解しないコーティングによって囲まれている。あるいは、ｐＨではなく時間によって放出を制御するコーティングが使用され得、速度は、胃腸管のｐＨが、少なくとも４、より好ましくは、少なくとも５に上がった後まで成分が放出されないよう調整される。したがって、スルホラファン前駆体、スルホラファン前駆体をスルホラファンに変換できる酵素および酵素増強物質の、またはスルホラファンの胃での存在を防ぐよう、徐放製剤が使用され得る。標準コーティング技術を使用して、コーティング層（複数可）が、経口投与可能な組成物上に適用され得る。腸溶コーティング材料は、有機または水性溶媒中に溶解または分散され得る。腸溶コートが溶解するｐＨは、選択されたポリマーもしくはポリマーの組合せおよび／またはペンダント基の割合によって制御され得る。例えば、ポリマーフィルムの溶解特徴は、自由なカルボキシル基対エステル基の割合によって変更され得る。腸溶コーティング層はまた、クエン酸トリエチル、フタル酸ジブチル、トリアセチン、ポリエチレングリコール、ポリソルベートまたはその他の可塑剤などの医薬上許容される可塑剤も含有する。分散剤、着色剤、抗接着剤および消泡剤などの添加剤も含まれ得る。
【００５５】
組成物は、１種以上の医薬品非有効成分（一般に「賦形剤」としても知られる）を含有し得る。非有効成分は、例えば、有効成分を、使用するのに安全で、好都合なそうでなければ許容される、適用可能な、有効な調製物に、可溶化、懸濁、増粘、希釈、乳化、安定化、保存、保護、着色、風味づけおよび形作るのに役立つ。賦形剤は、医薬上許容される賦形剤であることが好ましい。医薬上許容される賦形剤のクラスの例として、滑沢剤、緩衝剤、安定化剤、発泡剤、色素、着色剤、香味剤、増量剤、嵩高剤、芳香、放出調整剤、アジュバント、可塑剤、流動促進剤、離型剤、ポリオール、造粒剤、希釈剤、結合剤、緩衝剤、吸収剤、流動促進剤、接着剤、抗付着剤、酸味料、軟化剤、樹脂、粘滑薬、溶媒、界面活性剤、乳化剤、エラストマーおよびそれらの混合物が挙げられる。
【００５６】
いくつかの実施形態では、（ｉ）スルホラファン前駆体、好ましくは、グルコラファニン、（ｉｉ）スルホラファン前駆体をスルホラファンに変換できる酵素、好ましくは、グルコシダーゼ酵素、より好ましくは、チオグルコシダーゼ酵素、最も好ましくは、ミロシナーゼ、（ｉｉｉ）酵素増強物質、好ましくは、酵素補因子、より好ましくは、アスコルビン酸および（ｉｖ）オオアザミ抽出物または粉末の組合せは、相乗効果を示す。いくつかの実施形態では、スルホラファン（またはその誘導体）およびオオアザミ抽出物または粉末の組合せは、相乗効果を示す。相乗効果とは、２種以上の成分の組合せが、単独で使用された場合に物質によってもたらされる効果の合計より大きい結果を提供する効果を指す。好ましい実施形態では、相乗効果は、相加効果より大きい。いくつかの実施形態では、スルホラファン前駆体、スルホラファン前駆体をスルホラファンに変換できる酵素、酵素増強物質およびオオアザミ抽出物もしくは粉末の組合せは、（ｉ）各成分単独、（ｉｉ）スルホラファン前駆体および酵素の組合せ単独ならびに／または（ｉｉｉ）スルホラファン前駆体、酵素および酵素増強物質の組合せ単独と比較して統計的に有意に大きい効果を有する。
【００５７】
好ましい実施形態では、スルホラファン前駆体、酵素、酵素増強物質およびオオアザミ抽出物または粉末の組合せは、スルホラファン前駆体単独およびオオアザミ抽出物または粉末単独と比較して、統計的に有意なおよび／または相加より大きい効果を有することによって相乗性を示す。いくつかの実施形態では、グルコラファニン、ミロシナーゼ、アスコルビン酸およびシリマリンの組合せは、グルコラファニン、ミロシナーゼ、アスコルビン酸のみの組合せと比較して、またシリマリン単独と比較して、相乗効果を有する。いくつかの実施形態では、グルコラファニン、ミロシナーゼ、アスコルビン酸およびシリビニンの組合せは、グルコラファニン、ミロシナーゼ、アスコルビン酸のみの組合せと比較して、またシリビニン単独と比較して相乗効果を有する。
【００５８】
いくつかの実施形態では、スルホラファン（またはその誘導体）およびオオアザミ抽出物または粉末の組合せは、（ｉ）スルホラファン（もしくはその誘導体）単独、および／または（ｉｉ）オオアザミ抽出物もしくは粉末単独よりも、統計的に有意な、および／または相加よりも大きな効果を有する。いくつかの実施形態では、スルホラファンおよびシリマリンの組合せは、スルホラファン単独およびシリマリン単独と比較して相乗効果を有する。いくつかの実施形態では、スルホラファンおよびシリビニンの組合せは、スルホラファン単独およびシリビニン単独と比較して相乗効果を有する。
【００５９】
いくつかの実施形態では、ブロッコリー抽出物または粉末およびオオアザミ抽出物または粉末の組合せは、（ｉ）ブロッコリー抽出物もしくは粉末単独および／または（ｉｉ）オオアザミ単独よりも、統計的に有意なおよび／または相加より大きな効果を有する。いくつかの実施形態では、ブロッコリー抽出物または粉末およびシリマリンの組合せは、ブロッコリー抽出物または粉末単独およびシリマリン単独と比較して相乗効果を有する。いくつかの実施形態では、ブロッコリー抽出物または粉末およびシリビニンの組合せは、ブロッコリー抽出物または粉末単独およびシリビニン単独と比較して相乗効果を有する。
【００６０】
本発明は、それを必要とする対象へ投与する方法を含めた使用する方法を提供する。いくつかの実施形態では、方法は、スルホラファン前駆体、スルホラファン前駆体をスルホラファンに変換できる酵素、酵素増強物質およびオオアザミ抽出物または粉末の組合せの投与を含む。いくつかの実施形態では、方法は、スルホラファンまたはその誘導体およびオオアザミ抽出物または粉末の組合せの投与を含む。いくつかの実施形態では、方法は、ブロッコリー抽出物または粉末およびオオアザミ抽出物または粉末の組合せの投与を含む。
【００６１】
いくつかの実施形態では、方法は、対象に投与することを含む、対象において肝臓、泌尿生殖器系（前立腺、乳房および卵巣を含む）、脳、肺、腎臓、結腸、食道、膵臓または造血系と関連している疾患または状態を治療、予防し、その発生を低減し、それと関連している症状を減少させ、および／またはその二次再発を低減することに関する。方法は、肝臓、泌尿生殖器系（前立腺、乳房および卵巣を含む）、脳、肺、腎臓、結腸、食道および膵臓などの組織および臓器への損傷を低減することまたは損傷を減速することにおいて有用であり得る。いくつかの実施形態では、方法は、対象においてそれを必要とする対象におけるグルタチオンレベルを増大することに関する。方法はまた、低レベルのグルタチオンと関連している疾患または状態の治療、予防、それと関連している症状の減少および／またはその二次再発の低減において有用であり得る。このような疾患および状態の例として、それだけには限らないが、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、癌（肝臓、肺、前立腺、結腸、乳房、脳、卵巣、食道、膵臓、鼻咽頭の癌、骨肉腫など）、白血病、嚢胞性線維症、ＨＩＶ、グルタチオンシンセターゼ欠損症、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン舞踏病、筋萎縮性側索硬化症、フリートライヒ運動失調症、多発性硬化症、線維筋痛症、慢性疲労、自閉症、糖尿病、肝毒性および環境因子による毒性が挙げられる。
【００６２】
いくつかの実施形態では、方法は、対象において非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）および／または肝臓の任意のその他の障害を治療、予防し、その発生を低減し、それと関連する症状を減少させ、および／またはその二次再発を低減することに関する。いくつかの実施形態では、方法は、ＮＡＦＬＤを寛解させることまたはその有害な効果を低減することに関する。
【００６３】
いくつかの実施形態では、方法は、バイオマーカーに対する有益な効果を提供することおよびこれらのバイオマーカーの異常なレベルを治療、予防し、その発生を低減させ、それと関連する症状を減少させることに関する。このようなバイオマーカーの例として、それだけには限らないが、ＮＡＤＰＨ依存性酵素、チオレドキシン（ＴＸＮ）、チオレドキシンレダクターゼ−１（Ｔｘｎｒｄ−１）、グルタミン酸−システインリガーゼサブユニット（ＧＣＬＣ）、スルホトランスフェラーゼ１Ａ１（ＳＵＬＴ１Ａ１）、ヘムオキシゲナーゼ−１（ＨＭＯＸ１）、グルタチオンペルオキシダーゼ−３（ＧＰｘ−３）、グルタチオンＳ−トランスフェラーゼθ２（ＧＳＴＴ２）、ミクロソームグルタチオンＳ−トランスフェラーゼ１（ＭＧＳＴ１）、アルデヒドオキシダーゼ（ＡＯＸ１）、アルド−ケト還元酵素１Ｂ８（Ａｋｒ１ｂ８）、フラビン含有モノオキシゲナーゼ２（ＦＭＯ２）、Ｆｅ受容体領域受容体Ｉｌｌ（Ｆｃｇｒ３）、トリプターゼβ１（ＴＰＳＢ１）、肥満細胞プロテアーゼ−６（Ｍｃｐｔ６）、ニューレキシン−１−α（ＮＲＸＮ−１）、小眼球症関連転写因子（ＭＩＴＦ）、ＩＩ型ヨードチロニンデヨージナーゼ（ＤＩＯ２）、アンジオポエチン−１４（Ａｎｇｐｔ１４）、分化抗原（ＣＤ３６）およびＮｔｅｌが挙げられる。これらのバイオマーカーの高いまたは異常なレベルと関連している疾患または状態として、それだけには限らないが、癌、肺および中枢神経系結核、多発性硬化症、クローン病、アテローム性動脈硬化症、変形性関節症、喘息、卒中、肺気腫、糖尿病性腎症、慢性組織球性胎盤絨毛組織炎、高血圧症、腹部大動脈瘤、炎症性腸疾患、慢性副鼻腔炎、冠動脈疾患および腎臓疾患が挙げられる。
【００６４】
いくつかの実施形態では、方法は、スルホラファンおよびオオアザミ抽出物または粉末の組合せを、それを必要とする対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、ブロッコリー抽出物または粉末およびオオアザミ抽出物または粉末の組合せを、それを必要とする対象に投与することを含む。いくつかの好ましい実施形態では、方法は、対象に、グルコラファニン、ミロシナーゼ、アスコルビン酸およびオオアザミ抽出物または粉末の組合せを投与することを含む。好ましい実施形態では、組合せは、本発明の方法において相乗効果を実証する。
【００６５】
好ましい実施形態では、組合せの１種以上の成分（例えば、スルホラファン前駆体、スルホラファン前駆体をスルホラファンに変換できる酵素、酵素増強物質、オオアザミ抽出物もしくは粉末；またはスルホラファンもしくはその誘導体およびオオアザミ抽出物もしくは粉末；またはブロッコリー抽出物もしくは粉末およびオオアザミ抽出物もしくは粉末）は、１種の組成物または剤形で一緒に、または別個に、好ましくは、治療特性が重複する期間内に投与される。いくつかの実施形態では、組合せの成分は、２種以上の経口投与可能な組成物または剤形で投与され得る。例えば、いくつかの実施形態では、スルホラファン前駆体、スルホラファン前駆体をスルホラファンに変換できる酵素および酵素増強物質は、１種の経口投与可能な剤形で投与され、オオアザミ抽出物または粉末は、１種以上の別個のまたはさらなる経口投与可能な剤形で投与される。好ましい実施形態では、組合せの成分は、１種の剤形で投与される。
【００６６】
いくつかの実施形態では、組合せは、１日１〜１０回、好ましくは、１日１〜５回、より好ましくは、１日１〜３回、最も好ましくは、１日１回の頻度で投与され得る。
【００６７】
本願において開示される用量は、一般に、ヒトに適した用量を指す。用量算出は、体重、表面積、代謝速度および種差を評価することによって当業者によって決定され得る。
【００６８】
用語「対象」とは、哺乳動物およびトリを含めた任意の動物を指す。哺乳動物として、それだけには限らないが、ヒト、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ラクダ、ゾウ、ライオン、トラ、クマ、アシカおよびウサギが挙げられる。好ましい実施形態では、対象は、ヒト、ネコおよびイヌなどの食物として消費されない哺乳動物を含む。
【実施例１】
【００６９】
以下は、例示的製剤である：
グルコラファニン含有ブロッコリー抽出物（約１２重量％）、５０ｍｇ〜５ｇ、
ミロシナーゼ含有凍結乾燥ブロッコリースプラウト粉末、２５ｍｇ〜５００ｍｇ
アスコルビン酸、５ｍｇ〜５００ｍｇ
オオアザミ抽出物（約２０重量％〜３５重量％シリビニン）、２５ｍｇ〜５ｇ
【実施例２】
【００７０】
以下の条件を含む疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＬＩＣ）法を開発した：
カラム：Ｗａｔｅｒｓ社ＢＥＨアミド、１．７μｍ粒径；２．１ｍｍ×１００ｍｍ
移動相：２０％の１０ｍＭ酢酸アンモニウム、ｐＨ５．０；８０％アセトニトリル；
分離モード：イソクラティック
カラム温度：７０℃
流速：０．７ｍｌ／分
上記の条件によって、スルホラファン前駆体、グルコラファニンを含めた５種の典型的なアブラナ科グルコシノレート分離が可能となる。
【実施例３】
【００７１】
アスコルビン酸濃度の関数としてのグルコラファニンの消費
【００７２】
約１２重量％のグルコラファニンを含有する約２５０ｍｇのブロッコリー種子抽出物を、０〜６００μモル／リットルの範囲の可変濃度のアスコルビン酸の存在下での、固定濃度のブロッコリースプラウト由来ミロシナーゼによる加水分解に付した。反応混合物を３８℃で温度制御し、６０分間の間、１５分毎にアリコートを取り出し、クロマトグラフィーによってグルコラファニンの濃度を決定した。グルコラファニン消費速度は、スルホラファンへのその変換速度として解釈した。増大するアスコルビン酸濃度の関数としてのグルコラファニン含量低減のグラフ表示は、一連の直線プロットをもたらし、線形回帰直線の傾斜は、μモル／分でのグルコラファニン消費の速度を反映する。６００μモル／リットル濃度のアスコルビン酸の存在下で、反応速度が、アスコルビン酸の調節効果の不在下で進行するものと比較して１３倍に増大したことは明らかである。
【００７３】
【表１】
2019014763.tif 000003
【実施例４】
【００７４】
グルコラファニンのスルホラファンへの等モル変換
【００７５】
ミロシナーゼ活性の調節におけるアスコルビン酸の役割をさらに解明するために、２パートの実験を実施した。すべての溶液は、ミロシナーゼ活性にとって最適とこれまでに同定されたｐＨ７．５の２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ緩衝生理食塩水中で調製し；各サンプルチューブは、ミロシナーゼの供給源として、正確に秤量された１００ｍｇの凍結乾燥ブロッコリー粉末を有していた。実験は、３８℃で２時間実施し、３０分刻みでサンプルアリコートを採取し、ＨＰＬＣによってグルコラファニンおよびスルホラファン両含量を評価した。強酸性「停止」溶液を利用して、採取したアリコートにおいてさらなるミロシナーゼ活性を即時的に阻害した。対照サンプルは、アスコルビン酸を含有しておらず、酵素的変換は、補因子によって補助されずに進行した。
【００７６】
パート１。固定濃度のアスコルビン酸１ｍｍｏｌ／リットルの存在下で、２５０ｍｇ〜５００ｍｇの範囲の増大する量のブロッコリー種子抽出物（約１２重量％グルコラファニン）を添加した。
【００７７】
パート２。２５０ｍｇで固定されたブロッコリー種子抽出物の量を維持しながら、アスコルビン酸の濃度を０．４ｍｍｏｌ／リットル〜３．８ｍｍｏｌ／リットルで変えた。
【００７８】
以下の表は、μモルで表されるグルコラファニンおよびスルホラファンを示す。ほとんどの反応混合物において最初の３０分内に、グルコラファニンのスルホラファンへの変換が完了したことは明らかである。しかし、アスコルビン酸の刺激効果を用いない、対照サンプルにおいて生じる酵素変換の注意深い検討によって、グルコラファニンのスルホラファンへの等モル変換が示され、すなわち、消費されるグルコラファニンの量は、等量の製造されるスルホラファンをもたらす。
【００７９】
【表２】
2019014763.tif 000004
【００８０】
実験のパート２では、ミロシナーゼの活性に対する増大する濃度のアスコルビン酸の調節効果を評価した。グルコラファニンのスルホラファンへのミロシナーゼによって促進される変換の、最初の、見かけ上線形の増大が、約２ｍｍｏｌ／Ｌのアスコルビン酸濃度まで観察され、続いてその後、かなり横ばい状態となる。
【００８１】
最後に、実験のパート１の３０分以内のスルホラファン収量の検討は、１ｍｍｏｌ／リットルのアスコルビン酸の存在下で、１００ｍｇの凍結乾燥ブロッコリースプラウト粉末中に含有される固定量のミロシナーゼは、予想可能に線形で、少なくとも２００μモルのスルホラファンを産生できることを示す。図１、２、３および４は、この研究の結果を示す。
【実施例５】
【００８２】
疑似腸液の存在下でのグルコラファニンのスルホラファンへの変換
【００８３】
疑似腸液（ＳＩＦ）粉末、組成、ｐＨおよびイオン強度の点でヒト腸内容物と密接に近似する商業的に供給される濃縮物を使用した。実験は、ＵＳＰ溶解装置２（パドル式）を使用し、これでは、６つの溶解容器中に、５００ｍｌの疑似腸液を、ミロシナーゼの供給源として１５０ｍｇの凍結乾燥ブロッコリースプラウト粉末とともに分注した。容器１〜４では、アスコルビン酸の濃度を０．２５〜１．００ｍｍｏｌ／リットルで変え、容器５では、１ｍｍｏｌ／リットルのアスコルビン酸に加えて、３．１２５ｇのパンクレアチン（８ｘ  ＵＳＰ）を懸濁し；容器６では、１ｍｍｏｌ／リットルのアスコルビン酸および３．１２５ｇのパンクレアチン（８ｘ  ＵＳＰ）に加えて、２倍量の凍結乾燥ブロッコリースプラウト粉末（３００ｍｇ）を加えた。容器を３８℃にしたのち、各々に、２５０ｍｇのグルコラファニンの豊富な（１２重量％）ブロッコリー種子抽出物を加え、得られた懸濁液を７５ＲＰＭで２時間撹拌した。１５分毎にアリコートを取り出し、スルホラファンについてアッセイした。図４は、特に、実験の最初の段階でのスルホラファンの高い収率とアスコルビン酸の高い濃度の間の直接相関を示す。
【実施例６】
【００８４】
以下の研究を実施して、グルタチオンレベルに対するスルホラファンおよびシリビニンの組合せの効果を調べた。グルタチオンは、抗酸化薬、解毒剤および免疫エンハンサーとして役立ち得るので身体において重要な役割を果たす。グルタチオンの減少したレベルは、患者を酸化ストレス、疾病および癌に対して感受性にし得る。したがって、グルタチオンレベルの増大は、有益な効果である。
【００８５】
この研究では、ヒト肝臓癌細胞系統、ＨｅｐＧ２細胞を、ＤＭＳＯ（媒体対照）、スルホラファン（ＳＦＮ）、シリビニン（Ｓｉｌｉｂ）またはスルホラファンおよびシリビニンの組合せを用いて２４時間処理した。細胞溶解物を収集し、蛍光試薬としてｏ−フタルアルデヒド（ＯＰＴ）を使用してグルタチオンレベルを測定した。図５および図６は、研究の結果を示す。
【００８６】
研究のパート１では、０．５μＭ  ＳＦＮの効果を、種々の濃度のシリビニンと、また０．５μＭ  ＳＦＮおよび種々の濃度のシリビニンの組合せと比較した。具体的には、細胞を（ｉ）ＤＭＳＯ（媒体対照）、（ｉｉ）０．５μＭ  ＳＦＮ、（ｉｉｉ）１００μＭ  Ｓｉｌｉｂ、（ｉｖ）２００μＭ  Ｓｉｌｉｂ、（ｖ）３００μＭ  Ｓｉｌｉｂ、（ｖｉ）０．５μＭ  ＳＦＮおよび１００μＭ  Ｓｉｌｉｂ、（ｖｉｉ）０．５μＭ  ＳＦＮおよび２００μＭ  Ｓｉｌｉｂならびに（ｖｉｉｉ）０．５μＭ  ＳＦＮおよび３００μＭ  Ｓｉｌｉｂのうち１種を用いて処理した。結果は、試験された投与量の各々でのスルホラファンおよびシリビニンの組合せが、各成分単独と比較して相乗効果を有していたことを実証する。例えば、細胞が個々の成分を用いて処理された場合は、グルタチオンレベルは、ＤＭＳＯ（媒体）対照と比較して、スルホラファン単独の処理を用いた場合には同様のままであるか、またはシリビニン処理を用いた場合には、わずかに減少した。しかし、細胞を、スルホラファンおよびシリビニンの組合せを用いて処理した場合には、試験された投与量の各々で、グルタチオンレベルは、対照と比較して相乗的に増大した。グルタチオンレベルの増大は、有益な効果である。結果は、図５に表されている。
【００８７】
研究のパート２では、２μＭのＳＦＮの効果を、種々の濃度のシリビニンと、また２μＭのＳＦＮおよび種々の濃度のシリビニンの組合せと比較した。具体的には、細胞を、（ｉ）ＤＭＳＯ（媒体対照）、（ｉｉ）２μＭ  ＳＦＮ、（ｉｉｉ）１００μＭ  Ｓｉｌｉｂ、（ｉｖ）３００μＭ  Ｓｉｌｉｂ、（ｖ）２μＭ  ＳＦＮおよび１００μＭ  Ｓｉｌｉｂならびに（ｖｉ）０．５μＭ  ＳＦＮおよび３００μＭ  Ｓｉｌｉｂのうち１種を用いて処理した。結果は、スルホラファンおよびシリビニンの組合せが、試験された投与量の各々で、各成分単独と比較して相乗効果を有していたことを実証する。例えば、細胞が個々の成分を用いて処理された場合は、グルタチオンレベルは、対照と比較して、スルホラファン単独の処理を用いた場合には同様のままであるか、またはシリビニン処理を用いた場合には、わずかに減少した。しかし、細胞を、スルホラファンおよびシリビニンの組合せを用いて処理した場合には、試験された投与量の各々で、グルタチオンレベルは、対照に比べて相乗的に増大した。グルタチオンレベルの増大は、細胞を解毒するための有益な効果である。結果は、図６に表されている。
【実施例７】
【００８８】
対象は、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）を呈し、倦怠、疲労および腹部不快感を含めた症状に苦しんでいる。この女性に、グルコラファニン、ミロシナーゼ、アスコルビン酸およびオオアザミ抽出物を含有する錠剤が投与される。錠剤は、小腸において内容物を放出する腸溶コーティング製剤である。１ヶ月の錠剤の毎日投与後、対象は、症状の改善と相関する、グルタチオンを含めた代替バイオマーカーの調節を経験する。
【図１】
2019014763.tif 000005
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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