(57)【要約】      （修正有）【課題】ヘム鉄を選択的かつ高感度で検出することができる化合物及び該化合物を含有する蛍光プローブの提供。【解決手段】下式の化合物又はその塩。2019147776.tif 000081（Ｒ１は、カルボキシル基、カルボン酸エステル基、又はカルボン酸アミド基；Ｒ２及びＲ３は、同一又は異なるアルキル基、或いは、Ｒ２及びＲ３は、互いに結合して隣接するＮ−オキシドの窒素原子（Ｎ）と共に環を形成；Ｒ４は、カルボキシル基、カルボン酸エステル基、及びカルボン酸アミド基；Ｙ１は、Ｏ又はＳ）【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化１】
2019147776.tif 000071
（式中、
Ｒ１は、カルボキシル基、カルボン酸エステル基、及びカルボン酸アミド基からなる群より選ばれる少なくとも１種を有する基である。
Ｒ２及びＲ３は、同一又は異なって、アルキル基であるか、或いは、Ｒ２及びＲ３は、互いに結合して隣接するＮ−オキシドの窒素原子（Ｎ）と共に環を形成していてもよく、当該環は置換基を有していてもよい。
Ｒ４は、置換基としてカルボキシル基、カルボン酸エステル基、及びカルボン酸アミド基からなる群より選ばれる少なくとも１種を有していてもよいアルキル基である。
Ｙ１は、−Ｏ−又は−Ｓ−である。）
で表される化合物又はその塩。
【請求項２】
式（Ｉ）において、
Ｒ１が、式：−ＣＯＯＲＡで表される基、又は式：−ＣＯＮＲＢ２で表される基であり、
Ｒ４が、置換基として式：−ＣＯＯＲＡで表される基、及び式：−ＣＯＮＲＢ２で表される基からなる群より選ばれる少なくとも１種を有していてもよいアルキル基であり、
当該ＲＡが、
(A1)水素原子、又は
(A2)アルキル基であり、当該アルキル基は、下記(A2-1)〜(A2-3)からなる群より選ばれる少なくとも１種の基を有していてもよく、
(A2-1)アルキルカルボニルオキシ基、
(A2-2)ホスホニウム残基、
(A2-3)アルキルオキシ基、
当該ＲＢが、同一又は異なって、
(B1)水素原子、又は
(B2)アルキル基であり、当該アルキル基は、下記(B2-1)〜(B2-5)からなる群より選ばれる少なくとも１種の基を有していてもよく、
(B2-1)カルボキシル基、
(B2-2)アルキルオキシカルボニル基、
(B2-3)（アルキルカルボニルオキシ）アルキルオキシカルボニル基、
(B2-4)ホスホニウム残基、
(B2-5)（アルキルオキシ）アルキルオキシカルボニル基、
Ｒ１及びＲ４が共に式：−ＣＯＯＲＡで表される基を有する場合、ＲＡは同一又は異なっていてもよく、
Ｒ１及びＲ４が共に式：−ＣＯＮＲＢ２で表される基を有する場合、ＲＢは同一又は異なっていてもよい、
請求項１に記載の化合物又はその塩。
【請求項３】
式（Ｉ）において、
【化２】
2019147776.tif 000072
（式中、Ｒ２及びＲ３は前記に同じ。）
で表される基が、式（Ａ）：
【化３】
2019147776.tif 000073
（式中、Ｚは、結合手、−Ｏ−、−ＣＨ２−、又は−ＮＲＺ−であり。ＲＺは、水素原子、アルキル基、アルキルカルボニル基、アリールカルボニル基、ヘテロアリールカルボニル基、又はアルキルオキシカルボニル基である。）
で表される基である、
請求項１又は２に記載の化合物又はその塩。
【請求項４】
式（Ｉ）において、Ｙ１が−Ｓ−である、請求項１〜３のいずれかに記載の化合物又はその塩。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれかに記載の化合物又はその塩を含む蛍光プローブ。
【請求項６】
請求項５に記載の蛍光プローブを用いてヘム鉄を検出する方法。
【請求項７】
（１）ヘム鉄を含む検体と、前記［５］に記載の蛍光プローブとを混合する工程、及び（２）得られた混合物の蛍光スペクトルを測定する工程を含む、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
式（Ｉ）：
【化４】
2019147776.tif 000074
（式中、
Ｒ１は、カルボキシル基、カルボン酸エステル基、及びカルボン酸アミド基からなる群より選ばれる少なくとも１種を有する基である。
Ｒ２及びＲ３は、同一又は異なって、アルキル基である、或いは、Ｒ２及びＲ３は、互いに結合して隣接するＮ−オキシドの窒素原子（Ｎ）と共に環を形成していてもよく、当該環は置換基を有していてもよい。
Ｒ４は、置換基としてカルボキシル基、カルボン酸エステル基、及びカルボン酸アミド基からなる群より選ばれる少なくとも１種を有していてもよいアルキル基である。
Ｙ１は、−Ｏ−又は−Ｓ−である。）
で表される化合物又はその塩の製造方法であって、式（９）：
【化５】
2019147776.tif 000075
（式中、記号は前記に同じ。）
で表される化合物を酸化反応に付し、必要に応じて塩を形成することを特徴とする、製造方法。
【請求項９】
式（Ｉ−Ｂ）：
【化６】
2019147776.tif 000076
（式中、
Ｒ２及びＲ３は、同一又は異なって、アルキル基であるか、或いは、Ｒ２及びＲ３は、互いに結合して隣接するＮ−オキシドの窒素原子（Ｎ）と共に環を形成していてもよく、当該環は置換基を有していてもよい。
ａｌｋはアルキレン基を示し、
Ｙ１は、−Ｏ−又は−Ｓ−である。）
で表される化合物又はその塩の製造方法であって、式（Ｉ−Ａ）：
【化７】
2019147776.tif 000077
（式中、Ｒ５及びＲ６は同一又は異なってアルキル基を示し、Ｒ２、Ｒ３、及びＹ１は前記に同じ。）
で表される化合物を加水分解し、必要に応じて塩を形成することを特徴とする、製造方法。
【請求項１０】
式（Ｉ−Ｆ）：
【化８】
2019147776.tif 000078
（式中、
Ｒ２及びＲ３は、同一又は異なって、アルキル基であるか、或いは、Ｒ２及びＲ３は、互いに結合して隣接するＮ−オキシドの窒素原子（Ｎ）と共に環を形成していてもよく、当該環は置換基を有していてもよい。
Ｒ４１はアルキル基を示し、
Ｙ１は、−Ｏ−又は−Ｓ−である。）
で表される化合物又はその塩の製造方法であって、式（Ｉ−Ｅ）：
【化９】
2019147776.tif 000079
（式中、Ｒ６は同一又は異なってアルキル基を示し、Ｒ２、Ｒ３、及びＹ１は前記に同じ。）
で表される化合物を加水分解し、必要に応じて塩を形成することを特徴とする、製造方法。
【請求項１１】
式（９）：
【化１０】
2019147776.tif 000080
（式中、
Ｒ１は、カルボキシル基、カルボン酸エステル基、及びカルボン酸アミド基からなる群より選ばれる少なくとも１種を有する基である。
Ｒ２及びＲ３は、同一又は異なって、アルキル基であるか、或いは、Ｒ２及びＲ３は、互いに結合して隣接するＮ−オキシドの窒素原子（Ｎ）と共に環を形成していてもよく、当該環は置換基を有していてもよい。
Ｒ４は、置換基としてカルボキシル基、カルボン酸エステル基、及びカルボン酸アミド基からなる群より選ばれる少なくとも１種を有していてもよいアルキル基である。
Ｙ１は、−Ｏ−又は−Ｓ−である。）
で表される化合物又はその塩。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、蛍光プローブ及びその製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
鉄は人体中において最も多く含まれている遷移金属種であり、酸素運搬や呼吸器系における電子伝達などをはじめ、様々な生命現象に関与している。一方、体内における鉄の濃度異常はがん、アルツハイマー病、パーキンソン病などの重篤疾患に関与することが指摘されており、特に、生体内遊離鉄イオンの大半を占める鉄(II)イオンはその高い活性酸素種生成能のために、最近アスベスト発がんやＣ型肝炎においてもその関与が示唆されている。
【０００３】
生細胞や生組織中において鉄(II)イオンを選択的に検知できかつ濃度変化を鋭敏に検知できる蛍光プローブとして、例えば、特許文献１及び２に報告例がある。
【０００４】
また、鉄(II)イオンとポルフィリンの錯体であるヘムは、ヘムタンパク質の補欠分子族として、酸化還元、電子伝達、そして酸素運搬として機能しており、近年、動物、植物、微生物等において多様な生理作用を調節する細胞内シグナルとしての機能することが明らかとなってきている。
【０００５】
しかしながら、細胞及び生体内においてヘム鉄がどのように輸送及び利用されるのか、またその生体内濃度はどのように調節されるのか等、生理的機能については不明な点が多く残されている。また、病原性細菌では宿主からのヘム鉄の獲得が感染及び病態発症の起点となる(非特許文献１及び２)ことから、感染過程におけるヘム鉄の機能及び挙動の解明は、こうした病原性細菌の感染予防の観点からも重要である。加えて、体内で起こる出血・溶血はヘモグロビンの分解とそれに伴うヘム鉄の放出を惹起し、これが酸化ストレスや炎症に関与する可能性も示唆されている（非特許文献３）。
【０００６】
以上のように、ヘム鉄の生理的及び病理的機能の重要性は強く示唆されており、ヘム鉄を生細胞や生組織中で選択的に測定できる方法が開発できれば、ヘムが関与する病態や生命現象の研究、医薬品開発等においてに非常に重要な手法となり得る。しかしながら、現状では生体内及び細胞内においてヘム鉄を選択的に検出できるような手法は限られており、融合タンパク質を使った方法(非特許文献４及び５)のみが報告されている。これら手法では選択的にヘム鉄を検出できるものの、分子量５万を超える融合タンパク質を遺伝子的手法にて細胞及び生体に導入し、発現させる必要があり、その使用条件は限られる。そのため、ヘム鉄を選択的かつ高感度で検出できる試薬（蛍光プローブ）及びそれを用いた検出方法が強く望まれている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特開2013-193990号公報
【特許文献２】国際公開第2015/108172号
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】J. Mol. Biol. 2016, 428, 3408-3428
【非特許文献２】Frontiers in Cell. Infect. Microbiol., 2013, 3, 1-11
【非特許文献３】Nat. Immunology, 2016, 17, 1361-1372
【非特許文献４】ACS Chem. Biol., 2015, 10, 1610-1615
【非特許文献５】Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 2016, 113, 7539-7544
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明は、ヘム鉄を選択的かつ高感度で検出することができる化合物及びその製造方法、その化合物を含むヘム鉄選択的な蛍光プローブ、並びにその蛍光プローブを用いたヘム鉄の検出方法を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは、上記課題を達成すべく鋭意研究を重ねた結果、式（Ｉ）で表される化合物又はその塩（以下、本発明化合物とも表記する）が、ヘム鉄を選択的かつ高感度で検出又は測定できることを見出した。かかる知見に基づきさらに研究を重ねた結果、本発明を完成するに至った。
【００１１】
本発明は、下記の化合物及び蛍光プローブ（特に、ヘム鉄選択的蛍光プローブ）を提供する。
【００１２】
［１］式（Ｉ）：
【００１３】
【化１】
2019147776.tif 000002
【００１４】
（式中、
Ｒ１は、カルボキシル基、カルボン酸エステル基、及びカルボン酸アミド基からなる群より選ばれる少なくとも１種を有する基である。
【００１５】
Ｒ２及びＲ３は、同一又は異なって、アルキル基であるか、或いは、Ｒ２及びＲ３は、互いに結合して隣接するＮ−オキシドの窒素原子（Ｎ）と共に環を形成していてもよく、当該環は置換基を有していてもよい。
【００１６】
Ｒ４は、置換基としてカルボキシル基、カルボン酸エステル基、及びカルボン酸アミド基からなる群より選ばれる少なくとも１種を有していてもよいアルキル基である。
【００１７】
Ｙ１は、−Ｏ−又は−Ｓ−である。）
で表される化合物又はその塩。
【００１８】
［２］式（Ｉ）において、
Ｒ１が、式：−ＣＯＯＲＡで表される基、又は式：−ＣＯＮＲＢ２で表される基であり、
Ｒ４が、置換基として式：−ＣＯＯＲＡで表される基、及び式：−ＣＯＮＲＢ２で表される基からなる群より選ばれる少なくとも１種を有していてもよいアルキル基であり、
当該ＲＡが、
(A1)水素原子、又は
(A2)アルキル基であり、当該アルキル基は、下記(A2-1)〜(A2-3)からなる群より選ばれる少なくとも１種の基を有していてもよく、
(A2-1)アルキルカルボニルオキシ基、
(A2-2)ホスホニウム残基、
(A2-3)アルキルオキシ基、
当該ＲＢが、同一又は異なって、
(B1)水素原子、又は
(B2)アルキル基であり、当該アルキル基は、下記(B2-1)〜(B2-5)からなる群より選ばれる少なくとも１種の基を有していてもよく、
(B2-1)カルボキシル基、
(B2-2)アルキルオキシカルボニル基、
(B2-3)（アルキルカルボニルオキシ）アルキルオキシカルボニル基、
(B2-4)ホスホニウム残基、
(B2-5)（アルキルオキシ）アルキルオキシカルボニル基、
Ｒ１及びＲ４が共に式：−ＣＯＯＲＡで表される基を有する場合、ＲＡは同一又は異なっていてもよく、
Ｒ１及びＲ４が共に式：−ＣＯＮＲＢ２で表される基を有する場合、ＲＢは同一又は異なっていてもよい、
前記［１］に記載の化合物又はその塩。
【００１９】
［３］式（Ｉ）において、
【００２０】
【化２】
2019147776.tif 000003
【００２１】
（式中、Ｒ２及びＲ３は前記に同じ。）
で表される基が、式（Ａ）：
【００２２】
【化３】
2019147776.tif 000004
【００２３】
（式中、Ｚは、結合手、−Ｏ−、−ＣＨ２−、又は−ＮＲＺ−であり。ＲＺは、水素原子、アルキル基、アルキルカルボニル基、アリールカルボニル基、ヘテロアリールカルボニル基、又はアルキルオキシカルボニル基である。）
で表される基である、
前記［１］又は［２］に記載の化合物又はその塩。
【００２４】
［４］式（Ｉ）において、Ｙ１が−Ｓ−である、前記［１］〜［３］のいずれかに記載の化合物又はその塩。
【００２５】
［５］前記［１］〜［４］のいずれかに記載の化合物又はその塩を含む蛍光プローブ。
【００２６】
［６］前記［５］に記載の蛍光プローブを用いてヘム鉄を検出する方法。
【００２７】
［７］（１）ヘム鉄を含む検体と、前記［５］に記載の蛍光プローブとを混合する工程、及び（２）得られた混合物の蛍光スペクトルを測定する工程を含む、前記［６］に記載の方法。
【００２８】
［８］式（Ｉ）：
【００２９】
【化４】
2019147776.tif 000005
【００３０】
（式中、
Ｒ１は、カルボキシル基、カルボン酸エステル基、及びカルボン酸アミド基からなる群より選ばれる少なくとも１種を有する基である。
【００３１】
Ｒ２及びＲ３は、同一又は異なって、アルキル基である、或いは、Ｒ２及びＲ３は、互いに結合して隣接するＮ−オキシドの窒素原子（Ｎ）と共に環を形成していてもよく、当該環は置換基を有していてもよい。
【００３２】
Ｒ４は、置換基としてカルボキシル基、カルボン酸エステル基、及びカルボン酸アミド基からなる群より選ばれる少なくとも１種を有していてもよいアルキル基である。
【００３３】
Ｙ１は、−Ｏ−又は−Ｓ−である。）
で表される化合物又はその塩の製造方法であって、式（９）：
【００３４】
【化５】
2019147776.tif 000006
【００３５】
（式中、記号は前記に同じ。）
で表される化合物を酸化反応に付し、必要に応じて塩を形成することを特徴とする、製造方法。
【００３６】
［９］式（Ｉ−Ｂ）：
【００３７】
【化６】
2019147776.tif 000007
【００３８】
（式中、
Ｒ２及びＲ３は、同一又は異なって、アルキル基であるか、或いは、Ｒ２及びＲ３は、互いに結合して隣接するＮ−オキシドの窒素原子（Ｎ）と共に環を形成していてもよく、当該環は置換基を有していてもよい。
【００３９】
ａｌｋはアルキレン基を示し、
Ｙ１は、−Ｏ−又は−Ｓ−である。）
で表される化合物又はその塩の製造方法であって、式（Ｉ−Ａ）：
【００４０】
【化７】
2019147776.tif 000008
【００４１】
（式中、Ｒ５及びＲ６は同一又は異なってアルキル基を示し、Ｒ２、Ｒ３、及びＹ１は前記に同じ。）
で表される化合物を加水分解し、必要に応じて塩を形成することを特徴とする、製造方法。
【００４２】
［１０］式（Ｉ−Ｆ）：
【００４３】
【化８】
2019147776.tif 000009
【００４４】
（式中、
Ｒ２及びＲ３は、同一又は異なって、アルキル基であるか、或いは、Ｒ２及びＲ３は、互いに結合して隣接するＮ−オキシドの窒素原子（Ｎ）と共に環を形成していてもよく、当該環は置換基を有していてもよい。
【００４５】
Ｒ４１はアルキル基を示し、
Ｙ１は、−Ｏ−又は−Ｓ−である。）
で表される化合物又はその塩の製造方法であって、式（Ｉ−Ｅ）：
【００４６】
【化９】
2019147776.tif 000010
【００４７】
（式中、Ｒ６は同一又は異なってアルキル基を示し、Ｒ２、Ｒ３、及びＹ１は前記に同じ。）
で表される化合物を加水分解し、必要に応じて塩を形成することを特徴とする、製造方法。
【００４８】
［１１］式（９）：
【００４９】
【化１０】
2019147776.tif 000011
【００５０】
（式中、
Ｒ１は、カルボキシル基、カルボン酸エステル基、及びカルボン酸アミド基からなる群より選ばれる少なくとも１種を有する基である。
【００５１】
Ｒ２及びＲ３は、同一又は異なって、アルキル基であるか、或いは、Ｒ２及びＲ３は、互いに結合して隣接するＮ−オキシドの窒素原子（Ｎ）と共に環を形成していてもよく、当該環は置換基を有していてもよい。
【００５２】
Ｒ４は、置換基としてカルボキシル基、カルボン酸エステル基、及びカルボン酸アミド基からなる群より選ばれる少なくとも１種を有していてもよいアルキル基である。
【００５３】
Ｙ１は、−Ｏ−又は−Ｓ−である。）
で表される化合物又はその塩。
【発明の効果】
【００５４】
本発明の化合物は、ヘム鉄を選択的かつ高感度で検出することができるため、ヘム鉄選択的な蛍光プローブとして用いることができる。本発明の蛍光プローブは、条件を調整することにより、ヘム鉄を定量的に測定することもできる。
【図面の簡単な説明】
【００５５】
【図１】ヘム鉄蛍光プローブ Fura-Nox類縁体（a-f）および二価鉄イオン蛍光プローブ（g-i）のヘミン（2 μM、黒太実線）あるいは二価鉄イオン（10 μM、黒実線）に対する蛍光応答の評価結果を示す。黒点線：反応前。灰色実線：1 mMグルタチオンのみ。ヘミン、二価鉄イオンとの反応時は1 mMグルタチオン存在下で反応。励起波長：365 nm (a-f)、540 nm (g,h)、630 nm (i)。
【図２】(a) 各プローブのヘミン又は二価鉄イオンに対する蛍光応答性を比較した結果を示す。Fura-Nox-1からFura-Nox-6についてはそれぞれI(580)/I(430)、I(580)/I(430)、I(550)/I(425)、I(580)/I(430)、I(570)/I(430)、I(570)/I(430)の値を、プローブのみの場合を１として相対値をプロットした。ただし、I(x)はx nmにおける蛍光強度を示す。白色：プローブのみ、灰色：二価鉄イオン（10 μM）、黒色：ヘミン（2 μM）。実験条件は図１の実験と同様。(b) (a)におけるFura-Nox-1からFura-Nox-5の部分を拡大したもの。
【図３】各種金属イオン種に対するFura-Noxシリーズの蛍光応答性を比較した結果を示す。金属イオン濃度：Na, K, Mg, Ca = 1 mM, 他の金属種 = 20 μM。
【発明を実施するための形態】
【００５６】
以下本発明について詳細に説明する。
１．置換基の定義
本明細書における各置換基の定義は、特に断りのない限り、以下の通りである。
【００５７】
「カルボン酸エステル基」とは、「Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｃ」で示される化学構造を有する基を意味する。
【００５８】
「カルボン酸アミド基」とは、「Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ」で示される化学構造を有する基を意味する。
【００５９】
「アルキル基」としては、鎖状又は分岐状のＣ１〜６のアルキル基が挙げられ、好ましくは鎖状又は分岐状のＣ１〜４のアルキル基であり、より好ましくは鎖状又は分岐状のＣ１〜３のアルキル基である。具体例として、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、ｎ−ヘキシル基等が挙げられる。このうちメチル基及びエチル基がより好ましい。
【００６０】
「アルキルオキシ基」としては、鎖状又は分岐状のＣ１〜６のアルキルオキシ基が挙げられ、好ましくは鎖状又は分岐状のＣ１〜４のアルキルオキシ基であり、より好ましくは鎖状又は分岐状のＣ１〜３のアルキル基である。具体例として、メチルオキシ基、エチルオキシ基、ｎ−プロピルオキシ基、イソプロピルオキシ基、ｎ−ブチルオキシ基、ｎ−ペンチルオキシ基、ｎ−ヘキシルオキシ基等が挙げられる。このうちメチルオキシ基及びエチルオキシ基がより好ましい。
【００６１】
「アルキルカルボニル基」としては、上記「アルキル基」がカルボニル基に結合した基であり、（アルキル）−Ｃ（＝Ｏ）−と表すことができる。例えば、鎖状又は分岐状のＣ１〜６のアルキルカルボニル基が挙げられ、好ましくは鎖状又は分岐状のＣ１〜４のアルキルカルボニル基である。具体例として、アセチル基（Ａｃ）、プロピオニル基等が挙げられる。
【００６２】
「アルキルカルボニルオキシ基」としては、上記「アルキル基」がカルボニルオキシ基のカルボニル基に結合した基であり、（アルキル）−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−と表すことができる。例えば、鎖状又は分岐状のＣ１〜６のアルキルカルボニルオキシ基が挙げられ、好ましくは鎖状又は分岐状のＣ１〜４のアルキルカルボニルオキシ基である。具体例として、アセチルオキシ基（ＡｃＯ−）、プロピオニルオキシ基等が挙げられる。
【００６３】
「アルキルオキシカルボニル基」としては、上記「アルキル基」がオキシカルボニル基に結合した基であり、（アルキル）−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−と表すことができる。例えば、鎖状又は分岐状のＣ１〜６のアルキルオキシカルボニル基が挙げられ、好ましくは鎖状又は分岐状のＣ１〜４のアルキルオキシカルボニル基である。具体例として、メトキシカルボニル基、エトキシカルボニル基、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基（Ｂｏｃ）等が挙げられる。
【００６４】
「（アルキルカルボニルオキシ）アルキルオキシカルボニル基」としては、上記「アルキルカルボニルオキシ基」が上記「アルキルオキシカルボニル基」のアルキル基に結合した基であり、例えば、（アルキル）−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−（アルキレン）−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−と表すことができる。ここで、「アルキレン基」とは、上記「アルキル基」から１つの水素原子を除いて得られる２価の基を意味する。この「アルキレン基」としては、鎖状又は分岐状のＣ１〜６のアルキレン基が挙げられ、好ましくはＣ１〜４のアルキレン基であり、より好ましくはメチレン基（−ＣＨ２−）、ジメチレン基（−ＣＨ２ＣＨ２−）である。「（アルキルカルボニルオキシ）アルキルオキシカルボニル基」として好ましくは、（Ｃ１〜４アルキル）−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−（Ｃ１〜４アルキレン）−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−であり、より好ましくは（Ｃ１〜４アルキル）−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−ＣＨ２−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−である。
【００６５】
「（アルキルオキシ）アルキルオキシカルボニル基」としては、上記「アルキルオキシ基」が上記「アルキルオキシカルボニル基」のアルキル基に結合した基であり、例えば、（アルキル）−Ｏ−（アルキレン）−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−と表すことができる。ここで、「アルキレン基」は前記に同じである。「（アルキルオキシ）アルキルオキシカルボニル基」として好ましくは、（Ｃ１〜４アルキル）−Ｏ−（Ｃ１〜４アルキレン）−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−である。
【００６６】
「アリール基」としては、単環又は２以上の環が縮環したアリール基が挙げられ、例えば、フェニル基、トルイル基、キシリル基、ナフチル基等が挙げられる。
【００６７】
「アリールカルボニル基」としては、上記「アリール基」がカルボニル基に結合した基であり、例えば、（アリール）−Ｃ（＝Ｏ）−と表すことができる。好ましくは、ベンゾイル基等が挙げられる。
【００６８】
「ヘテロアリール」としては、環にＯ、Ｎ及びＳからなる群から選ばれる少なくとも１種のヘテロ原子を含むヘテロアリール基であり、単環（５又は６員環）又は２以上の環が縮環したヘテロアリール基が挙げられる。具体例として、ピリジル基、チエニル基、フリル基、ピロリル基、イミダゾリル基、ピラゾリル基、オキサゾリル基、チアゾリル基、ピラゾリル基、ピリミジニル基、イソキノリニル基、キノリニル基等が挙げられる。好ましくは、（２−，３−又は４−）ピリジル基等である。
【００６９】
「ヘテロアリールカルボニル基」としては、上記「ヘテロアリール基」がカルボニル基に結合した基であり、例えば、（ヘテロアリール）−Ｃ（＝Ｏ）−と表すことができる。好ましくは、（２−，３−又は４−ピリジル）−Ｃ（＝Ｏ）−が挙げられる。
【００７０】
「ホスホニウム残基」としては、例えば、式：−（ＰＲ７３）＋・（Ｘ５）―（式中、Ｒ７は同一又は異なって、アルキル基又はアリール基であり、Ｘ５はアニオンである。）で示される基が挙げられる。
【００７１】
Ｒ７で示される「アルキル基」としては、上記「アルキル基」から選択すること芽できる。例えば、鎖状又は分岐状のＣ１〜６のアルキル基が挙げられ、好ましくは鎖状又は分岐状のＣ１〜４のアルキル基である。具体的例として、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、ｎ−ブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、イソブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基等が挙げられる。
【００７２】
Ｒ７で示される「アリール基」としては、上記「アリール基」から選択すること芽できる。例えば、フェニル基、トルイル基、キシリル基等が挙げられ、好ましくはフェニル基である。
【００７３】
Ｘ５で示されるアニオンとは、電子を受け取って負の電荷を帯びた原子又は原子団を意味する。具体例として、ハロゲン化物イオン（フッ素、塩素、臭素、ヨウ素のイオン）、６フッ化リン（ＰＦ６―）、リン酸二水素イオン（Ｈ２ＰＯ４―）、酢酸イオン（ＡｃＯ―）、炭酸水素イオン（ＨＣＯ３―）等が挙げられる。
【００７４】
２．本発明化合物
本発明化合物は、式（Ｉ）で表される化合物及びその塩であり、分子内にＮ−オキシドを有することを特徴とする。
【００７５】
【化１１】
2019147776.tif 000012
【００７６】
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＹ１は前記に同じ。）
Ｒ１は、カルボキシル基、カルボン酸エステル基、及びカルボン酸アミド基からなる群より選ばれる少なくとも１種（好ましくは１種）を有する基である。特にＲ１としては、式：−ＣＯＯＲＡで表される基、又は式：−ＣＯＮＲＢ２で表される基が挙げられる。
【００７７】
Ｒ４は、置換基としてカルボキシル基、カルボン酸エステル基、及びカルボン酸アミド基からなる群より選ばれる少なくとも１種（好ましくは１種）を有していてもよいアルキル基である。特にＲ４としては、置換基として式：−ＣＯＯＲＡで表される基、及び式：−ＣＯＮＲＢ２で表される基からなる群より選ばれる少なくとも１種（好ましくは１種）を有していてもよいアルキル基が挙げられる。
【００７８】
Ｒ１及びＲ４における式：−ＣＯＯＲＡで表される基のＲＡは、同一又は異なって、
(A1)水素原子、又は
(A2)アルキル基であり、当該アルキル基は、下記(A2-1)〜(A2-3)からなる群より選ばれる少なくとも１種（好ましくは１種）の基を有していてもよい、
(A2-1)アルキルカルボニルオキシ基、
(A2-2)ホスホニウム残基、
(A2-3)アルキルオキシ基。
【００７９】
Ｒ１及びＲ４における式：−ＣＯＮＲＢ２で表される基のＲＢは、同一又は異なって、
(B1)水素原子、又は
(B2)アルキル基であり、当該アルキル基は、下記(B2-1)〜(B2-5)からなる群より選ばれる少なくとも１種（好ましくは１種）の基を有していてもよい、
(B2-1)カルボキシル基、
(B2-2)アルキルオキシカルボニル基、
(B2-3)（アルキルカルボニルオキシ）アルキルオキシカルボニル基、
(B2-4)ホスホニウム残基、
(B2-5)（アルキルオキシ）アルキルオキシカルボニル基。
【００８０】
Ｒ１及びＲ４において、式：−ＣＯＯＲＡで表される基の具体例としては、
−ＣＯＯＨ、
−ＣＯＯ（Ｃ１〜４アルキル）（特に、−ＣＯＯＣＨ３、−ＣＯＯＣ２Ｈ５、−ＣＯＯｔＢｕ等）、
−ＣＯＯＣＨ２−ＯＣ（＝Ｏ）−（Ｃ１〜４アルキル）（特に、−ＣＯＯＣＨ２−ＯＡｃ等）、
−ＣＨ２ＣＨ２−（ＰＰｈ３）＋・（Ｘ５）―（Ｘ５は前記に同じ。）、
等が挙げられる。
【００８１】
Ｒ１及びＲ４において、式：−ＣＯＮＲＢ２で表される基の具体例としては、
−ＣＯＮ（ＣＨ２−ＣＯＯＨ）２、
−ＣＯＮ（ＣＨ２−ＣＯＯ（Ｃ１〜４アルキル））２、
−ＣＯＮ（ＣＨ２−ＣＯＯ−ＣＨ２−ＯＣ（＝Ｏ）−（Ｃ１〜４アルキル））２、
−ＣＯＮＨ（ＣＨ２ＣＨ２−（ＰＰｈ３）＋・（Ｘ５）―）（Ｘ５は前記に同じ。）、
等が挙げられる。
【００８２】
Ｒ１として好ましくは、
−ＣＯＯＨ、
−ＣＯＯＣ（Ｃ１〜４アルキル）（特に、−ＣＯＯＣＨ３、−ＣＯＯＣ２Ｈ５、−ＣＯＯｔＢｕ等）、
−ＣＯＯＣＨ２−ＯＣ（＝Ｏ）−（Ｃ１〜４アルキル）、
−ＣＯＮＨ（ＣＨ２ＣＨ２−（ＰＰｈ３）＋・（Ｘ５）―）（Ｘ５は前記に同じ。）、
である。
【００８３】
Ｒ４として好ましくは、
Ｃ１〜３アルキル基（特に、メチル基）、
−ＣＨ２−ＣＯＮ（ＣＨ２−ＣＯＯＨ）２、
−ＣＨ２−ＣＯＮ（ＣＨ２−ＣＯＯ（Ｃ１〜４アルキル））２、
−ＣＨ２−ＣＯＮ（ＣＨ２−ＣＯＯ−ＣＨ２−ＯＣ（＝Ｏ）−（Ｃ１〜４アルキル））２、
である。
【００８４】
Ｒ１及びＲ４が共に式：−ＣＯＯＲＡで表される基を有する場合、ＲＡ（２つのＲＡ）は同一又は異なっていてもよい。
【００８５】
Ｒ１及びＲ４が共に式：−ＣＯＮＲＢ２で表される基を有する場合、ＲＢ（４つのＲＢ）は同一又は異なっていてもよい。
【００８６】
Ｒ２及びＲ３は同一又は異なって、アルキル基であるか、或いは、Ｒ２及びＲ３は、互いに結合して隣接するＮ−オキシドの窒素原子（Ｎ）と共に環を形成していてもよく、当該環は置換基を有していてもよい。当該置換基として、例えば、アルキル基、アルキルカルボニル基、アリールカルボニル基、ヘテロアリールカルボニル基、又はアルキルオキシカルボニル基等が挙げられる。好ましくは、後者のＲ２及びＲ３が互いに結合して隣接するＮ−オキシドの窒素原子（Ｎ）と共に環を形成している場合である。
【００８７】
Ｒ２及びＲ３の好ましい一態様として、
【００８８】
【化１２】
2019147776.tif 000013
【００８９】
（式中、Ｒ２及びＲ３は前記に同じ。）
で表される基が、式（Ａ）：
【００９０】
【化１３】
2019147776.tif 000014
【００９１】
（式中、Ｚは、結合手、−Ｏ−、−ＣＨ２−、又は−ＮＲＺ−であり。ＲＺは、水素原子、アルキル基、アルキルカルボニル基、アリールカルボニル基、ヘテロアリールカルボニル基、又はアルキルオキシカルボニル基である。）
で表される基であるものが挙げられる。
【００９２】
Ｚとして好ましくは、−Ｏ−、−ＣＨ２−、又は−ＮＲＺ−（ＲＺは前記に同じ。）である。
【００９３】
Ｙ１は、−Ｏ−又は−Ｓ−であり、好ましくは−Ｓ−である。
【００９４】
本発明化合物は、式（Ｉ）で表される化合物の塩の形態も包含する。当該塩としては、本発明の効果を発揮できる限り特に限定されない。水溶性の塩であることが好ましい。例えば、分子内にカルボキシル基等の酸性の基を有する場合には、例えば、アルカリ金属塩（ナトリウム、カリウム等の塩）、アルカリ土類金属塩（カルシウム、マグネシウム等の塩）、アンモニウム塩（テトラアルキルアンモニウム塩等）、有機アミン（トリアルキルアミン等）との塩、塩基性アミノ酸（アルギニン、リジン等）との塩等が挙げられる。また、分子内にアミノ基、ピリジル基等の塩基性の基を有する場合には、例えば、無機酸（塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸等）との塩、有機酸（酢酸、乳酸、酒石酸、シュウ酸等）との塩、酸性アミノ酸（アスパラギン酸等）との塩等が挙げられる。
【００９５】
本発明化合物の好ましい態様として、後述する反応式２及び３で示した、式（Ｉ−Ａ）〜式（Ｉ−Ｈ）で表される化合物又はその塩が挙げられる。
【００９６】
本発明化合物の他の好ましい一態様として、式（Ｉ−１）：
【００９７】
【化１４】
2019147776.tif 000015
【００９８】
（式中、Ｒ１、Ｒ４、Ｙ１及びＺは前記に同じ。）
で表される化合物又はその塩が挙げられる。
【００９９】
本発明化合物の他の好ましい一態様として、式（Ｉ−２）：
【０１００】
【化１５】
2019147776.tif 000016
【０１０１】
（式中、Ｒ１、Ｒ４及びＺは前記に同じ。）
で表される化合物又はその塩が挙げられる。
【０１０２】
本発明化合物の他の好ましい一態様として、式（Ｉ−３）：
【０１０３】
【化１６】
2019147776.tif 000017
【０１０４】
（式中、Ｒ４１はアルキル基を示し、Ｒ１及びＺは前記に同じ。）
で表される化合物又はその塩が挙げられる。
【０１０５】
本発明化合物の他の好ましい一態様として、式（Ｉ−４）：
【０１０６】
【化１７】
2019147776.tif 000018
【０１０７】
（式中、ａｌｋはアルキレン基を示し、Ｒ４２は式：−ＣＯＯＲＡで表される基、又は式：−ＣＯＮＲＢ２で表される基を示し、ＲＡ、ＲＢ、Ｒ１及びＺは前記に同じ。）
で表される化合物又はその塩が挙げられる。
【０１０８】
３．本発明化合物の製造方法
本発明化合物は、例えば次のようにして製造することができる。典型的な製造方法を反応式１に示す。
【０１０９】
【化１８】
2019147776.tif 000019
【０１１０】
（式中、Ｂｎはベンジル基を示し、Ｘ１、Ｘ２及びＸ３は同一又は異なって脱離基を示し、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＹ１は前記に同じ。）
Ｘ１、Ｘ２及びＸ３で示される脱離基としては、例えば、ハロゲン原子（塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子等）等が挙げられる。
【０１１１】
式（１）で表される化合物は、公知の化合物であるか、又は公知の方法から容易に合成できる化合物であり、例えば、Tetrahedron Lett., 2012, 53, 2432.に記載の方法に従い又は準じて製造することができる。
（１）＋（２）→（３）：
式（１）で表される化合物及び式（２）で表される化合物を、溶媒（例えば、ＤＭＦ等）中、塩基（例えば、Ｋ２ＣＯ３等）の存在下に反応させることにより、式（３）で表される化合物を製造することができる。
（３）＋（４）→（５）：
式（３）で表される化合物及び式（４）で表される化合物を、溶媒（例えば、ＴＨＦ、ジオキサン等）中、パラジウム触媒（例えば、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４、Ｐｄ２ｄｂａ３、Ｐｄ（ＯＡｃ）２等）、配位子（例えば、2-ジシクロヘキシルホスフィノ-2',6'-ジイソプロポキシビフェニル（Ruphos）、2,2’-ビス（ジフェニルホスフィノ）-1-1’-ビナフチル（BINAP）、4,5-ビス（ジフェニルホスフィノ）-9,9-ジメチルキサンテン（Xantphos）等）及び塩基（例えば、炭酸セシウム等）の存在下に反応（カップリング反応）させることにより、式（５）で表される化合物を製造することができる。
（５）→（６）：
式（５）で表される化合物に、オキシ塩化リン（ＰＯＣｌ３）の存在下、ＤＭＦを反応させることにより、式（６）で表される化合物を製造することができる。
（６）→（７）：
式（６）で表される化合物を、水素雰囲気下、溶媒（例えば、酢酸エチル等）中、水素化触媒（例えば、Ｐｄ／Ｃ等）の存在下に還元反応（脱ベンジル化）することにより、式（７）で表される化合物を製造することができる。
（７）＋（８）→（９）：
式（７）で表される化合物及び式（８）で表される化合物を、溶媒（例えば、ＤＭＦ等）中、塩基（例えば、Ｋ２ＣＯ３等）の存在下に反応させることにより、式（９）で表される化合物を製造することができる。
（９）→（Ｉ）：
式（９）で表される化合物を、溶媒（例えば、酢酸エチル等）中、塩基（例えば、炭酸水素ナトリウム等）の存在下、酸化剤（例えば、ｍ−クロロ過安息香酸（ｍＣＰＢＡ）、過酸化水素等）で酸化（Ｎ−オキシド化）することにより、式（Ｉ）で表される化合物を製造することができる。
【０１１２】
上記反応式１で製造される式（Ｉ）で表される化合物のうち、Ｒ１が、カルボキシル基、カルボン酸エステル基、及びカルボン酸アミド基からなる群より選ばれる少なくとも１種を有する基であり、かつ、Ｒ４が、置換基としてカルボキシル基、カルボン酸エステル基、及びカルボン酸アミド基からなる群より選ばれる少なくとも１種を有するアルキル基である化合物、具体的には、式（Ｉ−Ａ）〜式（Ｉ−Ｄ）で表される化合物は、例えば、反応式２のようにして製造することができる。
【０１１３】
【化１９】
2019147776.tif 000020
【０１１４】
（式中、Ｒ５及びＲ６は同一又は異なってアルキル基を示し、ａｌｋはアルキレン基を示し、Ｘ４は脱離基を示し、Ｒ２、Ｒ３、ＲＡ、ＲＢ、Ｂｎ、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３及びＹ１は前記に同じ。）
Ｒ５及びＲ６で示される「アルキル基」としては、鎖状又は分岐状のＣ１〜４のアルキル基が挙げられ、具体例として、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基等が挙げられる。このうちメチル基及びエチル基が好ましい。
【０１１５】
ａｌｋで示される「アルキレン基」としては、鎖状又は分岐状のＣ１〜６のアルキレン基が挙げられ、好ましくはＣ１〜４のアルキレン基である。具体例として、メチレン基（−ＣＨ２−）、ジメチレン基（−ＣＨ２ＣＨ２−）、トリメチレン基（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）等が挙げられる。より好ましくはメチレン基、ジメチレン基である。
【０１１６】
Ｘ４で示される「脱離基」としては、例えば、ハロゲン原子（塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子等）等が挙げられる。
（１）＋（２ａ）→（３ａ）：
式（１）で表される化合物及び式（２ａ）で表される化合物から、式（３ａ）で表される化合物を製造する反応は、反応式１の式（１）で表される化合物及び式（２）で表される化合物から、式（３）で表される化合物を製造する反応に従い実施することができる。
（３ａ）＋（４）→（５ａ）：
式（３ａ）で表される化合物及び式（４）で表される化合物から、式（５ａ）で表される化合物を製造する反応は、反応式１の式（３）で表される化合物及び式（４）で表される化合物から、式（５）で表される化合物を製造する反応に従い実施することができる。
（５ａ）→（６ａ）：
式（５ａ）で表される化合物から、式（６ａ）で表される化合物を製造する反応は、反応式１の式（５）で表される化合物から、式（６）で表される化合物を製造する反応に従い実施することができる。
（６ａ）→（７ａ）：
式（６ａ）で表される化合物から、式（７ａ）で表される化合物を製造する反応は、反応式１の式（６）で表される化合物から、式（７）で表される化合物を製造する反応に従い実施することができる。
（７ａ）＋（８ａ）→（９ａ）：
式（７ａ）で表される化合物及び式（８ａ）で表される化合物から、式（９ａ）で表される化合物を製造する反応は、反応式１の式（７）で表される化合物及び式（８）で表される化合物から、式（９）で表される化合物を製造する反応に従い実施することができる。
（９ａ）→（Ｉ−Ａ）：
式（９ａ）で表される化合物から、式（Ｉ−Ａ）で表される化合物を製造する反応は、反応式１の式（９）で表される化合物から、式（Ｉ）で表される化合物を製造する反応に従い実施することができる。
（Ｉ−Ａ）→（Ｉ−Ｂ）：
式（Ｉ−Ａ）で表される化合物を、溶媒（例えば、メタノール／水等）中、塩基（例えば、水酸化カリウム、水酸化ナトリウム等）を用いて加水分解することにより、式（Ｉ−Ｂ）で表される化合物を製造することができる。
（９ａ）→（１０ａ）：
式（９ａ）で表される化合物から、式（１０ａ）で表される化合物を製造する反応は、反応式２の式（Ｉ−Ａ）で表される化合物から、式（Ｉ−Ｂ）で表される化合物を製造する反応に従い実施することができる。
（１０ａ）→（１１ａ）：
式（１０ａ）で表される化合物及び式（１３）で表される化合物を、溶媒（例えば、ＴＨＦ、ＤＭＦ等）中、縮合剤（例えば、ジシクロヘキシルカルボジイミド（DCC）等）の存在下で縮合（エステル化）させることにより、式（１１ａ）で表される化合物を製造することができる。或いは、式（１０ａ）で表される化合物及び式（１４）で表される化合物を、溶媒（例えば、ＴＨＦ、ＤＭＦ等）中、塩基（例えば、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン等）の存在下で反応（エステル化）させることにより、式（１１ａ）で表される化合物を製造することができる。
（１１ａ）→（Ｉ−Ｃ）：
式（１１ａ）で表される化合物から、式（Ｉ−Ｃ）で表される化合物を製造する反応は、反応式１の式（９）で表される化合物から、式（Ｉ）で表される化合物を製造する反応に従い実施することができる。
（１０ａ）＋（１５）→（１２ａ）：
式（１０ａ）で表される化合物及び式（１５）で表される化合物を、溶媒（例えば、ＴＨＦ、ＤＭＦ等）中、縮合剤（例えば、ジシクロヘキシルカルボジイミド（DCC）、4-(4,6-ジメトキシ-1,3,5-トリアジン-2-イル)-4-メチルモルホリニウム クロリド（DMT-MM）等）の存在下で縮合（アミド化）させることにより、式（１２ａ）で表される化合物を製造することができる。
（１２ａ）→（Ｉ−Ｄ）：
式（１２ａ）で表される化合物から、式（Ｉ−Ｄ）で表される化合物を製造する反応は、反応式１の式（９）で表される化合物から、式（Ｉ）で表される化合物を製造する反応に従い実施することができる。
【０１１７】
上記反応式１で製造される式（Ｉ）で表される化合物のうち、Ｒ１が、カルボキシル基、カルボン酸エステル基、及びカルボン酸アミド基からなる群より選ばれる少なくとも１種を有する基であり、かつ、Ｒ４がアルキル基である（以下、「Ｒ４１」と表記する。）化合物、具体的には、式（Ｉ−Ｅ）〜式（Ｉ−Ｈ）で表される化合物は、例えば反応式３のようにして製造することができる。
【０１１８】
【化２０】
2019147776.tif 000021
【０１１９】
（式中、Ｒ４１はアルキル基を示し、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ６、ＲＡ、ＲＢ、Ｂｎ、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４及びＹ１は前記に同じ。））
Ｒ４１で示される「アルキル基」としては、鎖状又は分岐状のＣ１〜４のアルキル基が挙げられ、具体例として、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基等が挙げられる。このうちメチル基及びエチル基が好ましい。
（１）＋（２ｂ）→（３ｂ）：
式（１）で表される化合物及び式（２ｂ）で表される化合物から、式（３ｂ）で表される化合物を製造する反応は、反応式１の式（１）で表される化合物及び式（２）で表される化合物から、式（３）で表される化合物を製造する反応に従い実施することができる。
（３ｂ）＋（４）→（５ｂ）：
式（３ｂ）で表される化合物及び式（４）で表される化合物から、式（５ｂ）で表される化合物を製造する反応は、反応式１の式（３）で表される化合物及び式（４）で表される化合物から、式（５）で表される化合物を製造する反応に従い実施することができる。
（５ｂ）→（６ｂ）：
式（５ｂ）で表される化合物から、式（６ｂ）で表される化合物を製造する反応は、反応式１の式（５）で表される化合物から、式（６）で表される化合物を製造する反応に従い実施することができる。
（６ｂ）→（７ｂ）：
式（６ｂ）で表される化合物から、式（７ｂ）で表される化合物を製造する反応は、反応式１の式（６）で表される化合物から、式（７）で表される化合物を製造する反応に従い実施することができる。
（７ｂ）＋（８ａ）→（９ｂ）：
式（７ｂ）で表される化合物及び式（８ａ）で表される化合物から、式（９ｂ）で表される化合物を製造する反応は、反応式１の式（７）で表される化合物及び式（８）で表される化合物から、式（９）で表される化合物を製造する反応に従い実施することができる。
（９ｂ）→（Ｉ−Ｅ）：
式（９ｂ）で表される化合物から、式（Ｉ−Ｅ）で表される化合物を製造する反応は、反応式１の式（９）で表される化合物から、式（Ｉ）で表される化合物を製造する反応に従い実施することができる。
（Ｉ−Ｅ）→（Ｉ−Ｆ）：
式（Ｉ−Ｅ）で表される化合物から、式（Ｉ−Ｆ）で表される化合物を製造する反応は、反応式２の式（Ｉ−Ａ）で表される化合物から、式（Ｉ−Ｂ）で表される化合物を製造する反応に従い実施することができる。
（９ｂ）→（１０ｂ）：
式（９ｂ）で表される化合物から、式（１０ｂ）で表される化合物を製造する反応は、反応式２の式（９ａ）で表される化合物から、式（１０ａ）で表される化合物を製造する反応に従い実施することができる。
（１０ｂ）→（１１ｂ）：
式（１０ｂ）で表される化合物から、式（１１ｂ）で表される化合物を製造する反応は、反応式２の式（１０ａ）で表される化合物から、式（１１ａ）で表される化合物を製造する反応に従い実施することができる。
（１１ｂ）→（Ｉ−Ｇ）：
式（１１ｂ）で表される化合物から、式（Ｉ−Ｇ）で表される化合物を製造する反応は、反応式１の式（９）で表される化合物から、式（Ｉ）で表される化合物を製造する反応に従い実施することができる。
（１０ｂ）＋（１５）→（１２ｂ）：
式（１０ｂ）で表される化合物から、式（１２ｂ）で表される化合物を製造する反応は、反応式２の式（１１ａ）で表される化合物から、式（１２ａ）で表される化合物を製造する反応に従い実施することができる。
（１２ｂ）→（Ｉ−Ｈ）：
式（１２ｂ）で表される化合物から、式（Ｉ−Ｈ）で表される化合物を製造する反応は、反応式１の式（９）で表される化合物から、式（Ｉ）で表される化合物を製造する反応に従い実施することができる。
【０１２０】
上記反応式１〜３における各製造工程の反応条件は、上記で説明した条件に限定されず、当業者が公知の方法に基づいて実施できるあらゆる条件を包含する。各反応において、必要であれば、反応に関与しない官能基を保護した後に反応を行い、反応後に当該保護基を除去（脱保護）することができる。この操作は、当業者は、公知の方法（例えば、Greene's Protective Groups in Organic Synthesis, 5th edition等）の記載に従い又は準じて適宜選択して実施できる。
【０１２１】
また、式（Ｉ）で表される化合物は、公知の方法に従い又は準じて所望の塩の形態に変換することができる。
【０１２２】
４．用途
本発明化合物（式（Ｉ）で表される化合物又はその塩）は、ヘム鉄を高選択的かつ高感度で検出できる蛍光特性を有している。ここで、ヘム鉄とは、二価鉄イオン（Ｆｅ（ＩＩ）２＋）とポルフィリンからなる錯体である。本発明化合物は、分子内にＮ−オキシド部位を有し、このＮ−オキシド部位がヘム鉄と選択的に反応してアミノ基に還元され、得られたアミノ基含有化合物が強い蛍光を発すると考えられる。本発明化合物は、ヘム鉄と選択的に反応し、鉄イオン以外の金属イオン及び遊離の鉄イオン（Ｆｅ（ＩＩ）イオン、Ｆｅ（ＩＩＩ）イオン等）とは反応しない又は極めて反応性が低いという特徴を有している。結果として、ヘム鉄を高選択的かつ高感度で検出できる。
【０１２３】
本発明化合物は、上記特性を利用して、ヘム鉄を選択的に検出又は測定することができる蛍光プローブ（蛍光試薬）として利用することができる。本発明はまた、上記蛍光プローブを含むヘム鉄蛍光検出薬、ヘム鉄蛍光検出キット等として利用することができる。
【０１２４】
本発明の蛍光プローブを用いてヘム鉄を測定又は検出することができる。その方法は、例えば、（１）ヘム鉄を含む検体と、本発明の蛍光プローブとを混合する工程、及び（２）得られた混合物の蛍光スペクトルを測定する工程を含む。具体的には、適当な緩衝液中で、ヘム鉄を含む検体及び本発明の蛍光プローブを混合しインキュベートした後、この混合物に励起光を当てて蛍光を測定することでヘム鉄を測定できる。
【０１２５】
緩衝液としては特に限定はなく、例えば、ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ ７．４）等の公知のものを用いることができる。
【０１２６】
緩衝液中の蛍光プローブ（式（Ｉ）で表される化合物又はその塩）の濃度は特に限定はなく、通常、０．１μＭ〜１ｍＭ程度、好ましくは１μＭ〜０．１ｍＭ程度、より好ましくは５μＭ〜２０μＭ程度である。
【０１２７】
インキュベーションの温度及び時間は、特に限定されず、例えば、０〜４０℃程度で１０分〜２時間程度である。検体が細胞又は組織である場合には、その培養に適した温度（例えば、ヒト由来の細胞又は組織であれば約３７℃）であることが好ましい。
【０１２８】
蛍光の測定は、市販の蛍光計を用いることができる。細胞内のヘム鉄の動態を調べる場合には、蛍光顕微鏡、共焦点レーザー走査蛍光顕微鏡等の公知の方法を用いて観察することができる。
【０１２９】
本発明の方法を採用することで、選択的かつ高感度にヘム鉄の蛍光検出が可能となる。具体的には、細胞および組織染色でのヘム鉄を蛍光検出したり、血液中、尿中等においてヘム鉄を定量して溶血を検出したりすることができる。
【実施例】
【０１３０】
以下、具体的な実施態様を示して本発明を説明するが、本発明はこれらに限定される訳ではない。
【０１３１】
実施例１（Fura-Nox-1の合成）
（１）化合物２の合成
【０１３２】
【化２１】
2019147776.tif 000022
【０１３３】
4-ベンジルオキシ-2-ブロモフェノール (54 mg, 0.19 mmol)（Tetrahedron Lett., 2012, 53, 2432.を参照）をジメチルホルムアミド(3 mL)に溶解し、そこに炭酸カリウム(40 mg, 0.29 mmol)およびブロモ酢酸エチル(36 mg, 0.21 mmol)を加えた。窒素置換し、室温にて2時間攪拌後、反応液に酢酸エチルを(20 mL)加えた。反応混合液を水(10 mL×3)、飽和食塩水(10 mL)で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥後、溶媒を減圧下留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(酢酸エチル : ヘキサン= 1 : 20 ; 1 : 10)で精製し、化合物2 を白色固体として得た(61 mg, 86%)。
【０１３４】
1H-NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 7.45-7.29 (m, 5H), 7.22 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 6.90-6.77 (m, 2H), 5.00 (s, 2H), 4.63 (s, 2H), 4.26 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 1.29 (t, J = 7.2 Hz, 3H); 13C-NMR (CDCl3, 100 MHz) δ 168.7, 154.2, 149.1, 136.5, 128.6, 128.1, 127.5, 120.1, 115.7, 114.6, 113.2, 70.7, 67.5, 61.4, 14.1; HRMS (ESI+): m/z calculated for C17H17BrNaO4+: 387.0202, found : 387.0176.
【０１３５】
（２）化合物３の合成
【０１３６】
【化２２】
2019147776.tif 000023
【０１３７】
乾燥させた試験管にビス（ジベンジリデンアセトン）パラジウム(0) (2.5 mg, 0.0029 mmol)、Ruphos (6.4 mg, 0.014 mmol)、炭酸セシウム(89 mg, 0.27 mmol)、脱水1,4-ジオキサン(2 mL)、化合物2(50 mg, 0.14 mmol)、モルホリン(13 μL, 0.15 mmol)を加えた。アルゴンに置換し、100 ℃で24時間攪拌した。セライトを用いた濾過により不溶性の沈殿を除去した後、反応溶媒を減圧化留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(酢酸エチル: ヘキサン = 1 : 10 ; 1 : 3)で精製し、化合物3を淡黄色油状物質として得た(49 mg, 96%)。
【０１３８】
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 7.46-7.29 (m, 5H), 6.76 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 6.60 (d, J = 2.9 Hz, 1H), 6.53 (dd, J = 8.7, 2.9 Hz, 1H), 5.00 (s, 2H), 4.63 (s, 2H), 4.26 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 3.88 (t, J = 4.6 Hz, 4H), 3.12 (t, J = 4.3 Hz, 4H), 1.31 (t, J = 7.2 Hz, 3H); 13C-NMR (CDCl3, 100 MHz) δ 169.1, 154.5, 144.7, 143.0, 136.9, 128.5, 127.9, 127.5, 115.3, 107.0, 106.4, 70.4, 67.2, 66.4, 61.2, 50.8, 14.1; HRMS (ESI+): m/z calculated for C21H25NO5+: 372.1805, found : 372.1815.
【０１３９】
（３）化合物４の合成
【０１４０】
【化２３】
2019147776.tif 000024
【０１４１】
オキシ塩化リン(39 μL, 0.40 mmol)と脱水ジメチルホルムアミド(1 mL)を氷冷下で混和し、窒素雰囲気下、室温で30分間攪拌した。脱水ジメチルホルムアミド(1 mL)に溶解した化合物3 (49 mg, 0.13 mmol)を加え、窒素雰囲気下、45 ℃で4時間攪拌した。室温まで放冷した後、反応溶液を氷冷した飽和炭酸水素ナトリウム水溶液(30 mL)に加え、酢酸エチル(20 mL×2)で抽出した。混合した有機層を水(20 mL×3)と飽和食塩水(20 mL)で洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。溶媒を減圧留去し、化合物4を淡黄色固体として得た(46 mg, 88%)。
【０１４２】
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 10.3 (s, 1H), 7.51-7.31 (m, 5H), 7.22 (s, 1H), 6.48 (s, 1H), 5.16 (s, 2H), 4.65 (s, 2H), 4.27 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 3.88 (t, J = 4.6 Hz, 4H), 3.26 (t, J = 4.6 Hz, 4H), 1.32 (t, J = 7.2 Hz, 3H); 13C-NMR (CDCl3, 100 MHz) δ 187.8, 168.3, 157.9, 148.6, 144.2, 136.1, 128.7, 128.3, 127.3, 118.6, 110.7, 103.3, 71.2, 66.8, 65.6, 61.4, 50.3, 14.1; HRMS (ESI+): m/z calculated for C22H26NO6+: 400.1755, found : 400.1783.
【０１４３】
（４）化合物５の合成
【０１４４】
【化２４】
2019147776.tif 000025
【０１４５】
化合物4 (46 mg, 0.12 mmol)を酢酸エチル(3 mL)に溶解し、10%パラジウム炭素(3.0 mg)を加えた。水素雰囲気下、室温で21時間撹拌した後、セライトを用いた濾過を行ない、触媒を除去した。濾液を減圧下濃縮し、化合物5を茶色固体として得た(27 mg, 86%)。
【０１４６】
1H-NMR (CDCl3, 400 MHz) δ: 11.2 (s, 1H), 9.65 (s, 1H), 6.90 (s, 1H), 6.41 (s, 1H), 4.62 (s, 2H), 4.29 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 3.88 (t, J = 4.8 Hz, 4H), 3.31 (t, J = 4.6 Hz, 4H), 1.32 (t, J = 7.2 Hz, 3H); 13C-NMR (CDCl3, 125 MHz) δ 193.6, 168.5, 159.4, 150.6, 143.0, 117.3, 113.6, 105.8, 66.8, 66.4, 61.5, 50.2, 14.2; HRMS (ESI+): m/z calculated for C15H19NNaO6+: 332.1105, found : 332.1134.
【０１４７】
（５）化合物６の合成
【０１４８】
【化２５】
2019147776.tif 000026
【０１４９】
化合物5 (690 mg, 2.23 mmol)および2-ブロモメチルチアゾール5-カルボン酸エチル(893 mg, 3.57 mmol)を脱水ジメチルホルムアミド(15 mL)に溶解し、炭酸カリウムを加え、100 ℃で1.5時間撹拌した。放冷後、反応液を100 mLの水に注ぎ、得られた黄色懸濁液に1 M塩酸を滴下し、液性を酸性にした。そこに酢酸エチル：ジエチルエーテル = 1 : 1の混合溶媒を加え、抽出操作を行なった(100 mL×2)。混合した有機層を飽和食塩水(50 mL)で洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。溶媒を減圧留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(酢酸エチル: ヘキサン = 1 : 5 ; 1 : 2)で精製し、化合物6を黄色固体として得た(808 mg, 79%)。
【０１５０】
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 8.42 (s, 1H), 7.37 (s, 1H), 7.13 (s, 1H), 7.01 (s, 1H), 4.73 (s, 2H), 4.40 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 4.30 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 3.94 (t, J = 4.3 Hz, 4H), 3.21 (m, 4H), 1.41 (t, J = 7.0 Hz, 3H), 1.33 (t, J = 7.2 Hz, 3H); 13C-NMR (CDCl3, 100 MHz) δ 168.6, 162.6, 161.3, 151.8, 149.4, 149.2, 148.5, 142.7, 128.7, 122.1, 107.1, 105.3, 101.6, 67.1, 66.2, 61.7, 61.4, 51.4, 14.3, 14.2; HRMS (ESI+): m/z calculated for C22H25N2O7S+: 461.1377, found : 461.1398.
【０１５１】
（６）Fura-N-1の合成
【０１５２】
【化２６】
2019147776.tif 000027
【０１５３】
化合物6 (30 mg, 0.065 mmol)をメタノール(2 mL)に溶解し、そこに1.2 M水酸化カリウム水溶液(272 μL, 0.33 mmol)を滴下した。室温で2時間撹拌後、1.2 M水酸化カリウム水溶液(272 μL, 0.326 mmol)を追加し、室温でさらに2時間撹拌した。反応液を0 ℃に冷却した後、1 M塩酸を滴下し、液性を酸性とした。減圧下メタノールを留去し、得られた黄色懸濁液を桐山ロートで濾過し、黄色固体を回収した。これを減圧下乾燥し、Fura-N-1を黄色固体として得た(23 mg, 89%)。
【０１５４】
1H-NMR (500 MHz, D2O) δ: 7.58 (s, 1H), 6.69-6.58 (m, 2H), 6.42 (s, 1H), 4.15 (s, 2H), 3.72 (s, 4H), 2.81 (s, 4H); 13C-NMR (D2O, 125 MHz) δ 176.6, 167.2, 160.2, 149.8, 148.2, 147.9, 144.9, 140.3, 136.4, 122.7, 106.5, 103.2, 101.6, 66.9, 66.3, 51.1; HRMS (ESI-): m/z calculated for C18H15N2O7S-: 403.0605, found : 403.0603
【０１５５】
（７）Fura-N-1-AMの合成
【０１５６】
【化２７】
2019147776.tif 000028
【０１５７】
Fura-N-1 (19 mg, 0.047 mmol)を脱水ジメチルホルムアミド(2 mL)に溶解し、そこにジイソプロピルエチルアミン(8 μL, 0.47 mmol)を加えた後に窒素置換し、混合溶液を0 ℃に冷却した。そこに酢酸ブロモメチル(23 μL, 0.235 mmol)を滴下し、窒素雰囲気下、室温で2時間撹拌した。反応液に酢酸エチルを(30 mL)加え、反応混合液を水(20 mL×3)および飽和食塩水(20 mL)で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥後、溶媒を減圧下留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(酢酸エチル : ヘキサン= 1 : 3 ; 1 :1)で精製し、Fura-N-1-AM（AMはアセトキシメチル基を表す。以下同じ。）を黄色固体として得た(16 mg, 64%)。
【０１５８】
1H-NMR (CDCl3, 500 MHz) δ: 8.49 (s, 1H), 7.41 (s, 1H), 7.14 (s, 1H), 7.05 (s, 1H), 5.97 (s, 2H), 5.86 (s, 2H), 4.79 (s, 2H), 3.93 (t, J = 4.3 Hz, 4H), 3.20 (t, J = 4.0 Hz, 4H), 2.17 (s, 3H), 2.13 (s, 3H); 13C-NMR (CDCl3, 125 MHz) δ 169.5, 169.4, 167.5, 163.6, 159.9, 152.0, 150.8, 149.0, 148.3, 143.1, 127.0, 122.0, 107.7, 106.0, 101.8, 79.5, 79.3, 67.1, 65.9, 51.4, 20.7, 20.6; HRMS (ESI+): m/z calculated for C24H25N2O11S+: 549.1174, found : 549.1194.
【０１５９】
（８）Fura-Nox-1-AMの合成
【０１６０】
【化２８】
2019147776.tif 000029
【０１６１】
Fura-N-1-AM(14 mg, 0.026 mmol)を酢酸エチル(2 mL)に溶解し、0 ℃に冷却した後に炭酸水素ナトリウム(2.4 mg, 0.029 mmol)とメタクロロ過安息香酸(7.0 mg, 0.029 mmol)を加え、室温で30分間撹拌した。反応溶媒を減圧下留去した後、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(クロロホルム : メタノール= 1 : 0 ; 20 : 1)で精製し、Fura-Nox-1-AMを淡黄色固体として得た(15 mg, 100%)。
【０１６２】
1H-NMR (CDCl3, 500 MHz) δ 9.24 (s, 1H), 8.54 (s, 1H), 7.49 (s, 1H), 7.09 (s, 1H), 5.98 (s, 2H), 5.88 (s, 2H), 4.97 (s, 2H), 4.92 (td, J = 11.2, 3.8 Hz, 2H), 4.75 (t, J = 10.9 Hz, 2H), 3.97-3.85 (m, 2H), 2.99 (d, J = 10.9 Hz, 2H), 2.17 (s, 3H), 2.12 (s, 3H); 13C-NMR (CDCl3, 125 MHz) δ 169.5, 169.4, 166.4, 162.7, 159.7, 152.0, 150.7, 150.1, 145.9, 142.6, 129.1, 128.4, 110.1, 106.3, 103.7, 79.62, 79.61, 65.1, 64.8, 62.5, 20.7, 20.6; HRMS (ESI+): m/z calculated for C24H25N2O12S+: 565.1123, found : 565.1134.
【０１６３】
（９）化合物７の合成
【０１６４】
【化２９】
2019147776.tif 000030
【０１６５】
化合物6 (59 mg, 0.13 mmol)を酢酸エチル(4 mL)に溶解し、0 ℃に冷却した後に炭酸水素ナトリウム(12 mg, 0.14 mmol)とメタクロロ過安息香酸(35 mg, 0.14 mmol)を加え、室温で30分間撹拌した。反応溶媒を減圧下留去した後、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(クロロホルム : メタノール = 1 : 0 ; 30 : 1)で精製し、7を淡黄色固体として得た(51 mg, 83%)。
【０１６６】
1H-NMR (CDCl3, 500 MHz) δ 9.25 (s, 1H), 8.48 (s, 1H), 7.45 (s, 1H), 7.09 (s, 1H), 4.98 (td, J = 11.6, 3.8 Hz, 2H), 4.91 (s, 2H), 4.77 (t, J = 11.2 Hz, 2H), 4.41 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 4.33 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 3.90 (dd, J = 11.7, 3.2 Hz, 2H), 2.96 (d, J = 11.5 Hz, 2H), 1.42 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.34 (t, J = 7.2 Hz, 3H); 13C-NMR (CDCl3, 125 MHz) δ 167.4, 161.7, 161.0, 152.1, 149.9, 149.4, 146.2, 142.6, 129.9, 129.1, 109.9, 105.8, 103.6, 65.5, 64.8, 62.6, 62.0, 61.9, 14.2, 14.1; HRMS (ESI+): m/z calculated for C24H25N2O11S+: 477.1326, found : 477.1327.
【０１６７】
（１０）Fura-Nox-1の合成
【０１６８】
【化３０】
2019147776.tif 000031
【０１６９】
化合物7 (51 mg, 0.11 mmol)をメタノール(5 mL)に溶解し、そこに1.2 M水酸化カリウム水溶液(0.89 mL, 1.1 mmol)を滴下した。室温で1時間撹拌後、減圧下メタノールを留去し、1 M塩酸を滴下し、液性を酸性とした。生じた黄色懸濁液を桐山ロートで濾過し、淡黄色固体を回収した。これを減圧下乾燥し、Fura-Nox-1を淡黄色固体として得た(39 mg, 88%)。
【０１７０】
1H-NMR (5% NaOD in D2O, 500 MHz) δ 8.39 (s, 1H), 7.69 (s, 1H), 6.99 (s, 1H), 6.88 (s, 1H), 4.60-4.36 (m, 4H), 4.04 (d, J = 9.2 Hz, 2H), 3.08 (d, J = 12.0 Hz, 2H); 13C-NMR (5% NaOD in D2O, 125 MHz) δ 176.6, 167.2, 160.2, 149.8, 148.2, 147.9, 144.9, 140.3, 136.4, 122.7, 106.4, 103.2, 101.6, 66.9, 66.3, 51.2; HRMS (ESI-): m/z calculated for C24H25N2O11S-: 419.0555, found : 419.0579.
【０１７１】
実施例２（Fura-Nox-2の合成）
（１）化合物８の合成
【０１７２】
【化３１】
2019147776.tif 000032
【０１７３】
Fura-N-1(147 mg, 0.36 mmol)とイミノ二酢酸ジ-tert-ブチル(197 mg, 0.80 mmol)を脱水ジメチルホルムアミド(4 mL)に溶解し、0 ℃でDMT-MM(222 mg, 0.80 mmol)を加えた。室温で3時間撹拌した後、反応液に酢酸エチルを(30 mL)加え、反応混合液を水(20 mL×3)および飽和食塩水(20 mL)で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥後、溶媒を減圧下留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(酢酸エチル : ヘキサン= 1 : 2 ; 1 : 1)で精製し、化合物8を黄色固体として得た(184 mg, 59%)。
【０１７４】
1H-NMR (CDCl3, 500 MHz) δ: 8.00 (s, 1H), 7.32 (s, 1H), 7.11 (d, J = 7.4 Hz, 2H), 4.82 (s, 2H), 4.28 (s, 2H), 4.19 (s, 2H), 4.16 (s, 2H), 4.13 (s, 2H), 3.92 (t, J = 4.3 Hz, 4H), 3.19 (m, 4H), 1.53 (s, 9H), 1.51 (s, 9H), 1.47 (s, 9H), 1.46 (s, 9H); 13C-NMR (CDCl3, 125 MHz) δ 168.2, 168.1, 167.9, 167.8, 167.7, 162.9, 161.0, 151.8, 148.9, 148.8, 144.7, 142.8, 131.2, 122.2, 106.8, 106.4, 101.6, 83.2, 83.0, 82.3, 82.2, 67.6, 67.1, 55.9, 52.7, 51.5, 50.2, 49.4, 49.0, 28.0, 28.0; HRMS (ESI+): m/z calculated for C42H59N4O13S+: 859.3794, found : 859.3784.
【０１７５】
（２）Fura-N-2の合成
【０１７６】
【化３２】
2019147776.tif 000033
【０１７７】
化合物8 (75 mg, 0.087 mmol)をジクロロメタン(1 mL)に溶解し、0 ℃でトリフルオロ酢酸(1 mL)を滴下した。室温で7時間撹拌後、反応液をジエチルエーテル(10 mL)に加えた。生じた黄色懸濁液を桐山ロートで濾過し、得られた黄色固体を減圧下乾燥し、Fura-N-2を黄色固体として得た(40 mg, 72%)。
【０１７８】
1H-NMR (CD3OD, 500 MHz) δ: 8.09 (s, 1H), 7.48 (s, 2H), 7.46 (s, 1H), 7.37 (s, 1H), 5.06 (s, 2H), 4.47 (s, 2H), 4.36 (s, 2H), 4.30 (s, 2H), 4.21 (s, 2H), 4.06-3.86 (m, 4H), 3.37-3.33 (m, 4H); 13C-NMR (CD3OD, 125 MHz) δ 172.36, 172.35, 172.2, 172.0, 171.9, 171.8, 164.8, 162.1, 152.9, 151.0, 150.9, 150.2, 146.0, 133.0, 109.4, 108.4, 103.6, 69.4, 67.5, 53.6, 53.2, 50.2; HRMS (ESI-): m/z calculated for C26H25N4O13S-: 633.1144, found : 633.1118.
【０１７９】
（３）Fura-N-2-AMの合成
【０１８０】
【化３３】
2019147776.tif 000034
【０１８１】
Fura-N-2(34 mg, 0.054 mmol)を脱水ジメチルホルムアミド(2 mL)に溶解し、そこにジイソプロピルエチルアミン(150 μL, 0.86 mmol)を加えた後に窒素置換し、混合溶液を0 ℃に冷却した。そこに酢酸ブロモメチル(42 μL, 0.43 mmol)を滴下し、窒素雰囲気下、室温で6時間撹拌した。反応液に酢酸エチルを(50 mL)加え、反応混合液を水(20 mL×3)および飽和食塩水(20 mL)で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥後、溶媒を減圧下留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(酢酸エチル : ヘキサン= 1 : 1 ; 3 :1)で精製し、Fura-N-2-AMを黄色固体として得た(28 mg, 56%)。
【０１８２】
1H-NMR (CDCl3, 500 MHz) δ: 8.00 (s, 1H), 7.38 (s, 1H),  7.13 (s, 1H), 7.10 (s, 1H), 5.84 (brs, 4H), 5.78 (s, 2H), 5.77 (s, 2H), 4.84 (s, 2H), 4.47 (brs, 2H), 4.41 (s, 2H), 4.35 (brs, 2H), 4.30 (s, 2H), 3.90 (t, J = 4.6 Hz, 4H), 3.16 (m, 4H), 2.16 (s, 6H), 2.13 (s, 3H), 2.06 (s, 3H); 13C-NMR (CDCl3, 125 MHz) δ 169.5, 169.4, 168.4, 167.6, 167.5, 163.2, 161.4, 151.9, 148.9, 148.5, 145.3, 142.9, 130.0, 122.2, 107.1, 106.8, 101.8, 79.8, 79.4, 67.9, 67.0, 51.4, 49.2, 48.1, 20.7, 20.5; HRMS (ESI+): m/z calculated for C38H43N4O21S+: 923.2135, found : 923.2150.
【０１８３】
（４）Nox-2-AMの合成
【０１８４】
【化３４】
2019147776.tif 000035
【０１８５】
Fura-N-2-AM (24 mg, 0.026 mmol)を酢酸エチル(2 mL)に溶解し、0 ℃に冷却した後に炭酸水素ナトリウム(2.4 mg, 0.029 mmol)とメタクロロ過安息香酸(7.1 mg, 0.029 mmol)を加え、室温で30分間撹拌した。反応溶媒を減圧下留去した後、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(クロロホルム : メタノール= 100 : 1 ; 15 : 1)で精製し、Fura-Nox-2-AMを淡黄色固体として得た(25 mg, 100%)。
【０１８６】
1H-NMR (CDCl3, 500 MHz) δ 9.13 (s, 1H), 8.07 (s, 1H), 7.45 (s, 1H), 7.17 (s, 1H), 5.88 (s, 2H), 5.84 (m, 4H), 5.76 (s, 2H), 5.10 (s, 2H), 4.96 (td, J = 11.5, 3.1 Hz, 2H), 4.73 (t, J = 11.2 Hz, 2H), 4.56-4.17 (m, 8H), 3.90 (dd, J = 11.7, 3.2 Hz, 2H), 3.06 (d, J = 9.2 Hz, 2H), 2.16 (m, 9H), 2.12 (s, 3H); 13C-NMR (CDCl3, 125 MHz) δ 169.5, 169.4, 167.5, 167.2, 167.1, 162.9, 160.4, 151.7, 149.9, 146.2, 145.6, 131.0, 129.3, 109.5, 106.1, 104.4, 80.2, 79.5, 65.3, 64.6, 62.6, 49.1, 48.4, 48.1, 20.7; HRMS (ESI+): m/z calculated for C38H42N4NaO22S+: 961.1904, found : 961.1892.
【０１８７】
（５）化合物９の合成
【０１８８】
【化３５】
2019147776.tif 000036
【０１８９】
化合物8 (55 mg, 0.064 mmol)を酢酸エチル(2 mL)に溶解し、0 ℃に冷却した後に炭酸水素ナトリウム(5.9 mg, 0.0704 mmol)とメタクロロ過安息香酸(17 mg, 0.0704 mmol)を加え、室温で1時間撹拌した。反応溶媒を減圧下留去した後、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(クロロホルム : メタノール= 100 :1 ; 20 :1)で精製し、化合物9を淡黄色固体として得た(49 mg, 87%)。
【０１９０】
1H-NMR (CDCl3, 500 MHz) δ 9.20 (s, 1H), 8.12 (s, 1H), 7.41 (s, 1H), 7.17 (s, 1H), 5.05 (s, 2H), 5.00 (td, J = 11.5, 2.9 Hz, 2H), 4.75 (t, J = 11.5 Hz, 2H), 4.26 (s, 2H), 4.20 (s, 2H), 4.13 (s, 2H), 4.08 (s, 2H), 3.89 (dd, J = 12.0 Hz, 2.9 Hz, 2H), 2.96 (d, J = 11.5 Hz, 2H), 1.55 (s, 9H), 1.53 (s, 9H), 1.51 (s, 9H), 1.46 (s, 9H); 13C-NMR (CDCl3, 125 MHz) δ 168.0, 167.7, 167.6, 166.9, 162.7, 160.1, 151.6, 149.8, 146.5, 145.6, 142.3, 131.7, 129.2, 109.5, 105.7, 104.1, 83.7, 83.3, 82.5, 82.4, 65.3, 64.8, 62.6, 52.6, 50.1, 49.4, 49.0, 28.0, 28.0; HRMS (ESI+): m/z calculated for C42H59N4O14S+: 875.3743, found : 875.3737.
【０１９１】
（６）Fura-Nox-2の合成
【０１９２】
【化３６】
2019147776.tif 000037
【０１９３】
化合物9 (48 mg, 0.055 mmol)をジクロロメタン(1.5 mL)に溶解し、0 ℃でトリフルオロ酢酸(1.5 mL)を滴下した。室温で4時間撹拌後、反応液をジエチルエーテル(50 mL)に加えた。生じた黄色懸濁液を桐山ロートで濾過し、得られた黄色固体を減圧下乾燥し、Fura-Nox-2を淡黄色固体として得た(24 mg, 67%)。
【０１９４】
1H-NMR (1% NaOD in CD3OD, 400 MHz) δ: 8.77 (s, 1H), 8.23 (s, 1H), 7.67 (s, 1H), 7.63 (s, 1H), 5.24-5.03 (m, 4H), 4.53 (t, J = 11.6 Hz, 2H), 4.16 (s, 4H), 4.10-3.85 (m, 6H), 3.01 (d, J = 12.1 Hz, 2H); 13C-NMR (1% NaOD in CD3OD, 100 MHz) δ 176.7, 176.2, 176.0, 175.7, 169.5, 164.4, 160.8, 153.2, 150.6, 148.4, 146.0, 142.1, 135.4, 131.2, 108.4, 107.6, 107.2, 65.7, 63.5, 56.0, 52.98, 52.96, 52.87, 52.84, 52.30, 52.28; HRMS (ESI-): m/z calculated for C26H25N4O14S-: 649.1093, found : 649.1072. 
【０１９５】
実施例３（Fura-Nox-3の合成）
（１）化合物１０の合成
【０１９６】
【化３７】
2019147776.tif 000038
【０１９７】
よく乾燥させたフラスコにビス（ジベンジリデンアセトン）パラジウム(0) (75 mg, 0.082 mmol)、Ruphos (192 mg, 0.42 mmol)、炭酸セシウム(2.68 g, 8.23 mmol)、脱水1,4-ジオキサン(40 mL)、化合物2 (1.50 g, 4.12 mmol)、N-Boc-ピペラジン(843 mg, 4.53 mmol)を加えた。アルゴンに置換し、100 ℃で26時間攪拌した。セライトを用いた濾過により不溶性の沈殿を除去した後、反応溶媒を減圧化留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(酢酸エチル: ヘキサン = 1 : 10 to 1 : 5)で精製し、化合物10を茶色油状物質として得た(1.39 g, 72%)。
【０１９８】
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ: 7.50-7.35 (m, 4H), 7.33 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 6.76 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 6.59 (d, J = 2.9 Hz, 1H), 6.53 (dd, J = 8.6, 2.9 Hz, 1H), 4.99 (s, 2H), 4.62 (s, 2H), 4.26 (q, J = 7.3 Hz, 2H), 3.59 (t, J = 4.6 Hz, 4H), 3.04 (t, J = 4.9 Hz, 4H), 1.48 (s, 9H), 1.31 (t, J = 7.2 Hz, 3H); 13C-NMR (CDCl3, 125 MHz) δ 169.1, 154.8, 154.5, 144.8, 143.1, 137.0, 128.6, 128.0, 127.6, 115.1, 107.4, 106.7, 79.7, 70.5, 66.4, 61.2, 50.5, 28.4, 14.2; HRMS (DART +): m/z calculated for C28H35N2O6+: 471.2490, found : 471.2462.
【０１９９】
（２）化合物１１の合成
【０２００】
【化３８】
2019147776.tif 000039
【０２０１】
化合物10 (579 mg, 1.23 mmol)を酢酸エチル(4 mL)に溶解し、0 ℃で4 M塩酸/酢酸エチル(4 mL)を滴下した。室温で4時間撹拌後、反応液にヘキサンを加え、生じた懸濁液を桐山ロートで濾過した。得られた茶色固体とピコリン酸(151 mg, 1.23 mmol)を脱水ジメチルホルムアミドに溶解し、0 ℃でトリエチルアミン(343 μL, 2.46 mmol)とDMT-MM (340 mg, 1.23 mmol)を加えた。窒素置換した後、混合液を室温で23時間撹拌した。反応液に酢酸エチルを(50 mL)加え、反応混合液を水(50 mL×3)および飽和食塩水(50 mL)で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥後、溶媒を減圧下留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(酢酸エチル : ヘキサン= 1 : 3 ; 2 : 1)で精製し、化合物11を茶色油状物質として得た(357 mg, 61%)。
【０２０２】
1H-NMR (CDCl3, 500 MHz) δ: 8.61 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.81 (td, J = 7.7, 1.7 Hz, 1H), 7.67 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.49-7.29 (m, 6H), 6.75 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 6.60 (d, J = 2.9 Hz, 1H), 6.55 (dd, J = 9.2, 2.9 Hz, 1H), 4.99 (s, 2H), 4.63 (s, 2H), 4.26 (q, J = 7.3 Hz, 2H), 3.99 (t, J = 5.0 Hz, 2H), 3.77 (t, J = 4.6 Hz, 2H), 3.21 (t, J = 4.9 Hz, 2H), 3.13 (t, J = 4.9 Hz, 2H), 1.30 (t, J = 7.2 Hz, 3H); 13C-NMR (CDCl3, 125 MHz) δ 169.0, 167.5, 154.4, 154.0, 148.3, 144.7, 142.6, 137.1, 136.9, 128.6, 127.9, 127.5, 124.4, 123.9, 114.9, 107.5, 107.0, 70.4, 66.4, 61.2, 50.9, 50.3, 47.5, 42.6, 14.2; HRMS (ESI+): m/z calculated for C27H29N3O5+: 498.1999, found : 498.2027.
【０２０３】
（３）化合物１２の合成
【０２０４】
【化３９】
2019147776.tif 000040
【０２０５】
オキシ塩化リン(368 μL, 3.76 mmol)と脱水ジメチルホルムアミド(2 mL)を氷冷下で混和し、窒素雰囲気下、室温で30分間攪拌した。脱水ジメチルホルムアミド(3 mL)に溶解した化合物12 (357 mg, 0.75 mmol)を加え、窒素雰囲気下、45 ℃で4時間攪拌した。室温まで放冷した後、反応溶液を氷冷した飽和炭酸水素ナトリウム水溶液(100 mL)に加え、酢酸エチル(50 mL×2)で抽出した。混合した有機層を水(50 mL×5)と飽和食塩水(50 mL)で洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。溶媒を減圧留去し、化合物12を淡黄色固体として得た(294 mg, 78%)。
【０２０６】
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 10.4 (s, 1H), 8.61 (d, J = 4.3 Hz, 1H), 7.83 (td, J = 7.7, 1.9 Hz, 1H), 7.69 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.52-7.32 (m, 6H), 6.50 (s, 1H), 5.15 (s, 2H), 4.66 (s, 2H), 4.26 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 4.00 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 3.86-3.70 (m, 2H), 3.39-3.21 (m, 4H), 1.31 (t, J = 7.2 Hz, 3H); 13C-NMR (CDCl3, 100 MHz) δ 187.7, 168.3, 167.5, 157.8, 153.8, 148.33, 148.28, 144.2, 137.1, 136.1, 128.7, 128.3, 127.3, 124.6, 124.1, 118.8, 110.6, 103.8, 71.2, 65.6, 61.4, 50.5, 49.7, 47.2, 42.3, 14.1; HRMS (ESI+): m/z calculated for C28H30N3O6+: 504.2129, found : 504.2100.
【０２０７】
（４）化合物１３の合成
【０２０８】
【化４０】
2019147776.tif 000041
【０２０９】
化合物12 (294 mg, 0.58 mmol)をエタノール(6 mL)とジクロロメタン(3 mL)の混合溶媒に溶解し、10%パラジウム炭素(30 mg)を加えた。水素雰囲気下、室温で46時間撹拌した後、セライトを用いた濾過を行ない、触媒を除去した。濾液を減圧下濃縮し、化合物13を淡茶色固体として得た(240 mg, 99%)。
【０２１０】
1H-NMR (CDCl3, 400 MHz) δ: 11.2 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 9.66 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.61 (d, J = 5.8 Hz, 1H), 7.83 (td, J = 7.7, 1.9 Hz, 1H), 7.77-7.62 (m, 1H), 7.40-7.36 (m, 1H), 6.90 (s, 1H), 6.42 (s, 1H), 4.71-4.55 (m, 2H), 4.28 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 4.00 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 3.86-3.79 (m, 2H), 3.42 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 3.34 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 1.32 (t, J = 7.2 Hz, 3H); 13C-NMR (CDCl3, 100 MHz) δ 193.6, 168.4, 167.5, 159.2, 153.7, 150.2, 148.3, 143.0, 137.2, 124.7, 124.1, 116.9, 113.8, 106.3, 66.4, 61.5, 50.2, 49.6, 47.1, 42.3, 14.2; HRMS (DART+): m/z calculated for C21H24N3O6+: 414.1660, found : 414.1689.
【０２１１】
（５）化合物１４の合成
【０２１２】
【化４１】
2019147776.tif 000042
【０２１３】
化合物13 (240 mg, 0.58 mmol)および2-ブロモメチルチアゾール5-カルボン酸エチル(218 mg, 0.87 mmol)を脱水ジメチルホルムアミド(15 mL)に溶解し、炭酸カリウム(361 mg, 2.62 mmol)を加え、100 ℃で1.5時間撹拌した。放冷後、反応液を.100 mLの水に注ぎ、得られた黄色懸濁液に1 M塩酸を滴下し、液性を酸性にした。そこに酢酸エチルを加え、抽出操作を行なった(50 mL×3)。混合した有機層を水(50 mL×3)と飽和食塩水(50 mL)で洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。溶媒を減圧留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(酢酸エチル: ヘキサン = 1 : 3 ; 3 : 1)で精製し、化合物14を黄色固体として得た(158 mg, 48%)。
【０２１４】
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ: 8.62 (m, 1H), 8.42 (s, 1H), 7.83 (td, J = 7.7, 1.7 Hz, 1H), 7.71 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.45-7.32 (m, 2H), 7.13 (s, 1H), 7.02 (s, 1H), 4.73 (s, 2H), 4.40 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 4.29 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 4.06 (t, J = 4.6 Hz, 2H), 3.85 (t, J = 4.6 Hz, 2H), 3.31 (t, J = 4.9 Hz, 2H), 3.22 (t, J = 4.9 Hz, 2H), 1.41 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.32 (t, J = 7.2 Hz, 3H); 13C-NMR (CDCl3, 125 MHz) δ 168.5, 167.6, 162.5, 161.3, 153.9, 151.6, 149.4, 149.3, 148.5, 148.3, 142.3, 137.1, 128.7, 124.5, 124.0, 122.4, 107.1, 104.9, 102.1, 66.1, 61.7, 61.5, 51.4, 50.8, 47.4, 42.5, 14.3, 14.2; HRMS (ESI+): m/z calculated for C28H29N4O7S+: 565.1751, found : 565.1721.
【０２１５】
（６）化合物１５の合成
【０２１６】
【化４２】
2019147776.tif 000043
【０２１７】
化合物14 (158 mg, 0.28 mmol)をメタノール(2 mL)とテトラヒドロフラン(3 mL)の混合溶媒に溶解し、そこに1.2 M水酸化カリウム水溶液(1.17 mL, 1.40 mmol)を滴下した。室温で2時間撹拌後、減圧下メタノールを留去し、1 M塩酸を滴下し、液性を酸性とした。生じた黄色懸濁液を桐山ロートで濾過した。得られた黄色固体とイミノ二酢酸ジ-tert-ブチル(172 mg, 0.70 mmol)を脱水ジメチルホルムアミド(4 mL)に溶解し、0 ℃でDMT-MM(193 mg, 0.70 mmol)を加えた。室温で7時間撹拌した後、反応液に酢酸エチルを(50 mL)加え、反応混合液を水(30 mL×3)および飽和食塩水(30 mL)で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥後、溶媒を減圧下留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(酢酸エチル : ヘキサン= 1 : 1 ; 3 :1)で精製し、化合物15を黄色固体として得た(217 mg, 81%)。
【０２１８】
1H-NMR (CDCl3, 400 MHz) δ: 8.00 (s, 1H), 7.32 (s, 1H), 7.11 (d, J = 7.4 Hz, 2H), 4.82 (s, 2H), 4.28 (s, 2H), 4.19 (s, 2H), 4.16 (s, 2H), 4.13 (s, 2H), 4.05 (m, 4H), 3.81 (t, J = 4.6 Hz, 2H), 3.19 (m, 4H), 3.28 (t, J = 4.6 Hz, 2H), 3.21 (t, J = 4.3 Hz, 2H), 1.53 (s, 9H), 1.51 (s, 9H), 1.47 (s, 9H), 1.45 (s, 9H); 13C-NMR (CDCl3, 100 MHz) δ 168.2, 167.9, 167.8, 167.6, 162.9, 160.9, 154.0, 151.6, 149.0, 148.8, 148.3, 144.8, 142.4, 137.0, 131.2, 124.4, 123.9, 122.5, 106.8, 106.2, 102.0, 83.2, 83.0, 82.3, 82.2, 67.6, 55.9, 52.7, 51.6, 50.7, 50.2, 49.4, 49.0, 47.5, 42.5, 28.0; HRMS (ESI+): m/z calculated for C48H62N6NaO13S+: 985.3988, found : 985.3991.
【０２１９】
（７）Fura-N-3の合成
【０２２０】
【化４３】
2019147776.tif 000044
【０２２１】
化合物15 (105 mg, 0.11 mmol) をジクロロメタン(1.5 mL)に溶解し、0 ℃でトリフルオロ酢酸(1.5 mL)を滴下した。室温で4時間撹拌後、反応液をジエチルエーテル(30 mL)に加えた。生じた黄色懸濁液を桐山ロートで濾過し、得られた黄色固体を減圧下乾燥し、Fura-N-3を黄色固体として得た(64 mg, 80%)。
【０２２２】
1H-NMR (CDCl3, 500 MHz) δ 8.62 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.99 (td, J = 7.7, 1.7 Hz, 1H), 7.68 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.53 (dd, J = 6.9, 5.2 Hz, 1H), 7.37 (s, 1H), 7.31 (s, 1H), 7.26 (s, 1H), 4.97 (s, 2H), 4.45 (s, 2H), 4.35 (s, 2H), 4.28 (s, 2H), 4.19 (s, 2H), 4.13-3.92 (m, 2H), 3.82-3.62 (m, 2H), 3.43-3.32 (m, 2H), 3.27-3.12 (m, 2H); 13C-NMR (CD3OD, 125 MHz) δ 172.3, 172.2, 172.1, 171.9, 171.5, 169.1, 164.8, 162.1, 154.4, 152.8, 150.6, 150.2, 149.6, 145.9, 141.9, 139.5, 132.8, 126.5, 125.2, 124.8, 108.7, 108.1, 103.7, 69.1, 53.1, 53.0, 52.5, 50.3, 50.2, 43.2; HRMS (ESI-); m/z calculated for C32H29N6O13S-: 737.1519, found : 737.1520.
【０２２３】
（８）Fura-N-3-AMの合成
【０２２４】
【化４４】
2019147776.tif 000045
【０２２５】
Fura-N-3 (45 mg, 0.061 mmol)を脱水ジメチルホルムアミド(2 mL)に溶解し、そこにジイソプロピルエチルアミン(171 μL, 0.98 mmol)を加えた後に窒素置換し、混合溶液を0 ℃に冷却した。そこに酢酸ブロモメチル(48 μL, 0.49 mmol)を滴下し、窒素雰囲気下、室温で3時間撹拌した。反応液に酢酸エチルを(50 mL)加え、反応混合液を水(30 mL×5)および飽和食塩水(30 mL)で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥後、溶媒を減圧下留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(クロロホルム : メタノール= 50 : 1)で精製し、Fura-N-3-AMを黄色固体として得た(45 mg, 72%)。
【０２２６】
1H-NMR (CDCl3, 500 MHz) δ 8.62 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.83 (td, J = 7.7, 1.7 Hz, 1H), 7.69 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.43-7.31 (m, 2H), 7.13 (s, 1H), 7.11 (s, 1H), 7.17-7.06 (m, 2H), 5.84 (brs, 4H), 5.78 (s, 2H), 5.72 (s, 2H), 4.85 (s, 2H), 4.56-4.16 (m, 8H), 4.03 (m, 2H), 3.81 (m, 2H), 3.26 (t, J = 4.6 Hz, 2H), 3.18 (t, J = 4.3 Hz, 2H), 2.16 (s, 6H), 2.12 (s, 3H), 2.05 (s, 3H); 13C-NMR (CDCl3, 125 MHz) δ 169.5, 169.4, 168.3, 167.6, 167.5, 167.5, 163.1, 161.3, 153.9, 151.8, 148.9, 148.5, 148.3, 145.3, 142.5, 137.1, 130.1, 124.5, 123.9, 122.5, 107.1, 106.5, 102.2, 79.8, 79.4, 67.8, 51.6, 50.8, 49.2, 48.1, 47.4, 42.4, 20.6, 20.5; HRMS (ESI+): m/z calculated for C44H47N6O21S+: 1027.2509, found : 1027.2479.
【０２２７】
（９）Fura-Nox-3-AMの合成
【０２２８】
【化４５】
2019147776.tif 000046
【０２２９】
Fura-N-3-AM (38 mg, 0.037 mmol)を酢酸エチル(2 mL)に溶解し、0 ℃に冷却した後に炭酸水素ナトリウム(3.4 mg, 0.041 mmol)とメタクロロ過安息香酸(10 mg, 0.041 mmol)を加え、室温で1時間撹拌した。反応溶媒を減圧下留去した後、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(クロロホルム : メタノール= 100 :1 ; 20 :1)で精製し、Fura-Nox-3-AMを淡黄色固体として得た(36.8 mg, 96%)。
【０２３０】
1H-NMR (CDCl3, 500 MHz) δ 9.13 (s, 1H), 8.60 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 8.07 (s, 1H), 7.85 (td, J = 7.7, 1.7 Hz, 1H), 7.80 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 7.45 (s, 1H), 7.42-7.35 (m, 1H), 7.19 (s, 1H), 5.96-5.79 (m, 6H), 5.79-5.70 (m, 2H), 5.19-4.94 (m, 3H), 4.94-4.82 (m, 1H), 4.82-4.71 (m, 1H), 4.57-4.21 (m, 9H), 4.20-4.05 (m, 2H), 3.33-3.15 (m, 1H), 3.15-3.04 (m, 1H), 2.17 (s, 6H), 2.15 (s, 3H), 2.09 (s, 3H); 13C-NMR (CDCl3, 125 MHz) δ 169.5, 169.4, 167.5, 167.4, 167.2, 167.1, 163.0, 160.4, 153.5, 151.7, 149.9, 148.3, 146.3, 145.6, 137.2, 131.1, 129.4, 124.8, 124.2, 109.3, 106.1, 104.7, 80.2, 79.5, 65.7, 65.1, 64.8, 49.2, 48.2, 42.8, 38.2, 20.67, 20.65; HRMS (ESI+): m/z calculated for C44H47N6O22S+: 1043.2464, found : 1043.2455.
【０２３１】
（１０）化合物１６の合成
【０２３２】
【化４６】
2019147776.tif 000047
【０２３３】
化合物15 (51 mg, 0.053 mmol)を酢酸エチル(3 mL)に溶解し、0 ℃に冷却した後に炭酸水素ナトリウム(4.9 mg, 0.058 mmol)とメタクロロ過安息香酸(14 mg, 0.058 mmol)を加え、室温で1時間撹拌した。反応溶媒を減圧下留去した後、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(クロロホルム：メタノール= 100 : 1 ; 20 : 1)で精製し、化合物16を淡黄色固体として得た(37 mg, 96%)。
【０２３４】
1H-NMR (CDCl3, 500 MHz) δ 9.17 (s, 1H), 8.60 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 8.11 (s, 1H), 7.88-7.76 (m, 2H), 7.41 (s, 1H), 7.39-7.33 (m, 1H), 7.18 (s, 1H), 5.15-4.96 (m, 3H), 4.96-4.85 (m, 1H), 4.78 (d, J = 13.7 Hz, 1H), 4.46 (t, J = 12.9 Hz, 1H), 4.35-3.99 (m, 10H), 3.19 (d, J = 11.5 Hz, 1H), 3.03 (d, J = 10.9 Hz, 1H), 1.56-1.49 (m, 27H), 1.46 (s, 9H); 13C-NMR (CDCl3, 125 MHz) δ 167.9, 167.7, 167.6, 167.5, 166.8, 162.7, 160.0, 153.4, 151.7, 149.7, 148.3, 146.4, 145.6, 142.0, 137.1, 131.8, 129.3, 124.7, 124.2, 109.2, 105.7, 104.4, 83.6, 83.3, 82.5, 82.4, 65.5, 65.1, 64.8, 52.6, 50.1, 49.4, 49.0, 42.7, 38.2, 28.0; HRMS (ESI+): m/z calculated for C48H62N6NaO14S+: 979.4117, found : 979.4126.
【０２３５】
（１１）Fura-Nox-3の合成
【０２３６】
【化４７】
2019147776.tif 000048
【０２３７】
化合物16  (50 mg, 0.051 mmol)をジクロロメタン(1 mL)に溶解し、0 ℃でトリフルオロ酢酸(1 mL)を滴下した。室温で3時間撹拌後、反応液をジエチルエーテル(50 mL)に加えた。生じた淡黄色懸濁液を桐山ロートで濾過し、得られた淡黄色固体を減圧下乾燥し、Fura-Nox-3を18 mg、37%の収率で淡黄色固体として得た(18 mg, 37%)。
【０２３８】
1H-NMR (5% NaOD/D2O, 500 MHz) δ 8.68-8.58 (m, 2H), 8.12 (s, 1H), 8.10-8.04 (m, 1H), 7.80 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.66-7.57 (m, 2H), 7.50 (s, 1H), 5.16 (s, 2H), 5.11-4.92 (m, 3H), 4.70 (d, J = 13.2 Hz, 1H), 4.28-4.16 (m, 3H), 4.16-3.91 (m, 8H), 3.84 (d, J = 14.3 Hz, 1H), 3.39-3.31 (m, 1H), 3.10 (d, J = 12.0 Hz, 1H); HRMS (ESI-): m/z calculated for C32H29N6O14S-: 753.1468, found : 753.1456.
【０２３９】
実施例４（Fura-Nox-4の合成）
（１）化合物１７の合成
【０２４０】
【化４８】
2019147776.tif 000049
【０２４１】
オキシ塩化リン(662 μL, 6.8 mmol)と脱水ジメチルホルムアミド(5 mL)を氷冷下で混和し、窒素雰囲気下、室温で30分間攪拌した。脱水ジメチルホルムアミド(5 mL)に溶解した化合物10 (635 mg, 1.4 mmol)を加え、窒素雰囲気下、45 ℃で4時間攪拌した。室温まで放冷した後、反応溶液を氷冷した飽和炭酸水素ナトリウム水溶液(100 mL)に加え、酢酸エチル(100 mL×2)で抽出した。混合した有機層を水(100 mL×3)と飽和食塩水(100 mL)で洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。溶媒を減圧留去し、化合物17を淡黄色固体として得た(568 mg, 84%)。
【０２４２】
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ: 10.3 (s, 1H), 7.49-7.31 (m, 6H), 7.22 (s, 1H), 6.48 (s, 1H), 5.15 (s, 2H), 4.65 (s, 3H), 4.27 (q, J = 7.3 Hz, 3H), 3.61 (t, J = 4.9 Hz, 5H), 3.27-3.12 (m, 4H), 1.66 (s, 1H), 1.49 (s, 9H), 1.32 (t, J = 7.2 Hz, 3H); 13C-NMR (CDCl3, 125 MHz) δ 187.8, 168.3, 157.8, 154.7, 148.7, 144.2, 136.1, 128.7, 128.3, 127.3, 118.6, 110.6, 103.7, 79.9, 71.2, 65.6, 61.4, 49.9, 49.8, 28.4, 14.2; HRMS (DART+): m/z calculated for C27H35N2O7+: 499.2439, found : 499.2441.
【０２４３】
（２）化合物１８の合成
【０２４４】
【化４９】
2019147776.tif 000050
【０２４５】
化合物17 (568 mg, 1.14 mmol)をエタノール(15 mL)とジクロロメタン(3 mL)の混合溶媒に溶解し、10%パラジウム炭素(30 mg)を加えた。水素雰囲気下、室温で46時間撹拌した後、セライトを用いた濾過を行ない、触媒を除去した。濾液を減圧下濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：ヘキサン＝1 : 20 ；1 : 10）で精製し、化合物18を白色固体として得た(173 mg, 37%)。
【０２４６】
1H-NMR (CDCl3, 500 MHz) δ 11.2 (s, 1H), 9.64 (s, 1H), 6.90 (s, 1H), 6.41 (s, 1H), 4.62 (s, 2H), 4.27 (q, J = 6.9 Hz, 2H), 3.61 (t, J = 5.2 Hz, 4H), 3.25 (t, J = 5.2 Hz, 4H), 1.48 (s, 9H), 1.31 (t, J = 6.9 Hz, 3H); 13C-NMR (CDCl3, 125 MHz) δ 193.6, 168.5, 159.3, 154.7, 150.6, 143.0, 117.1, 113.7, 106.2, 80.0, 66.4, 61.5, 49.7, 28.4, 14.2; HRMS (DART+): m/z calculated for C20H29N2O7+: 409.1969, found : 409.1955.
【０２４７】
（３）化合物１９の合成
【０２４８】
【化５０】
2019147776.tif 000051
【０２４９】
化合物18 (135 mg, 0.33 mmol)および2-ブロモメチルチアゾール5-カルボン酸エチル(122 mg, 0.49 mmol)を脱水ジメチルホルムアミド(5 mL)に溶解し、炭酸カリウム(206 mg, 1.49 mmol)を加え、100 ℃で1.5時間撹拌した。放冷後、反応液を.50 mLの飽和炭酸水素ナトリウム水溶液に注ぎ、そこに酢酸エチルを加え、抽出操作を行なった(50 mL)。有機層を水(50 mL×3)と飽和食塩水(50 mL)で洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。溶媒を減圧留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(酢酸エチル: ヘキサン = 1 :5 ; 1 : 3)で精製し、化合物19を黄色固体として得た(127 mg, 48%)。
【０２５０】
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ: 8.42 (s, 1H), 7.38 (s, 1H), 7.12 (s, 1H), 7.02 (s, 1H), 4.72 (s, 2H), 4.41 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 4.29 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 3.66 (t, J = 4.6 Hz, 4H), 3.14 (t, J = 4.6 Hz, 4H), 1.50 (s, 9H), 1.41 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.33 (t, J = 7.2 Hz, 3H); 13C-NMR (CDCl3, 125 MHz) δ 168.6, 162.6, 161.3, 154.8, 151.6, 149.4, 149.2, 148.5, 142.7, 128.7, 122.2, 107.2, 105.1, 102.0, 79.8, 66.2, 61.7, 61.4, 50.9, 28.4, 14.3, 14.2; HRMS (ESI+): m/z calculated for C27H34N3O8S+: 560.2061, found : 560.2085.
【０２５１】
（４）化合物２０の合成
【０２５２】
【化５１】
2019147776.tif 000052
【０２５３】
化合物19 (147 mg, 0.26 mmol)をメタノール(1 mL)とテトラヒドロフラン(3 mL)の混合溶媒に溶解し、そこに1.2 M水酸化カリウム水溶液(1.32 mL, 1.32 mmol)を滴下した。室温で1時間撹拌後、減圧下メタノールを留去し、飽和塩化アンモニウム水溶液を滴下し、反応液を中和した。生じた黄色懸濁液を桐山ロートで濾過した。得られた黄色固体とイミノ二酢酸ジ-tert-ブチル(142 mg, 0.58 mmol)を脱水ジメチルホルムアミド(4 mL)に溶解し、0 ℃でEt3N (183 μL, 1.32 mmol)とDMT-MM (100 mg, 0.58 mmol)を加えた。室温で8時間撹拌した後、反応液に酢酸エチルを(50 mL)加え、反応混合液を水(30 mL×3)および飽和食塩水(50 mL)で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥後、溶媒を減圧下留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(酢酸エチル : ヘキサン= 1 : 5 ; 1 : 1)で精製し、化合物20を黄色固体として得た(154 mg, 61%)。
【０２５４】
1H-NMR (CDCl3, 500 MHz) δ: 8.00 (s, 1H), 7.32 (s, 1H), 7.10 (s, 1H), 7.09 (s, 1H), 4.92 (s, 2H), 4.27 (s, 2H), 4.19 (s, 2H), 4.16 (s, 2H), 4.13 (s, 2H), 4.05 (m, 6H), 3.76-3.47 (m, 4H), 3.11 (t, J = 4.6 Hz, 4H), 1.56-1.48 (m, 27H), 1.47 (s, 9H), 1.46 (s, 9H); 13C-NMR (CDCl3, 125 MHz) δ 174.0, 171.1, 168.2, 168.1, 167.9, 167.8, 167.7, 162.9, 161.0, 154.8, 151.7, 148.8, 148.9, 144.7, 142.8, 131.2, 122.4, 106.8, 106.4, 101.9, 83.2, 83.1, 82.4, 82.2, 79.7, 67.6, 55.9, 52.7, 51.0, 50.2, 49.4, 49.0, 28.4, 28.03, 28.00; HRMS (ESI+): m/z calculated for C47H67N5NaO14S+: 980.4297, found : 980.4284.
【０２５５】
（５）Fura-N-4-AMの合成
【０２５６】
【化５２】
2019147776.tif 000053
【０２５７】
化合物20 (154 mg, 0.16 mmol)をジクロロメタン(2 mL)に溶解し、0 ℃でトリフルオロ酢酸(2 mL)を滴下した。室温で2時間撹拌後、反応液をジエチルエーテル(10 mL)に加えた。生じた黄色懸濁液を桐山ロートで濾過した。得られた黄色固体を脱水ジメチルホルムアミド(2 mL)に溶解し、そこにジイソプロピルエチルアミン(65 μL, 0.37 mmol)と脱水ジメチルホルムアミド(1 mL)に溶解した二炭酸ジ-tert-ブチル(81 mg, 0.37 mmol)を加え、室温で12時間撹拌した。減圧下、反応溶媒の残量が0.5 mLとなるまで濃縮した後、濃縮した反応液を30 mLのジエチルエーテルへと加えた。生じた橙色懸濁液を桐山ロートを用いて濾過し、沈殿を集めた。得られた黄色固体を脱水ジメチルホルムアミド(3 mL)に溶解し、そこにジイソプロピルエチルアミン(347 μL, 1.98 mmol)を加えた後に窒素置換し、混合溶液を0 ℃に冷却した。そこに酢酸ブロモメチル(97 μL, 0.99 mmol)を滴下し、窒素雰囲気下、室温で18時間撹拌した。反応液に酢酸エチルを(50 mL)加え、反応混合液を水(50 mL×5)および飽和食塩水(50 mL)で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥後、溶媒を減圧下留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(酢酸エチル : ヘキサン= 1 : 2 ; 4 : 1)で精製し、Fura-N-4-AMを黄色固体として得た(43 mg, 34%)。
【０２５８】
1H-NMR (CDCl3, 500 MHz) δ: 8.00 (s, 1H), 7.38 (s, 1H), 7.11 (s, 1H), 5.84 (brs, 4H), 5.78 (s, 2H), 5.77 (s, 2H), 4.85 (s, 2H), 4.48 (brs, 2H), 4.40 (s, 4.40), 4.36 (s, 2H), 4.30 (s, 2H), 3.71-3.53 (m, 4H), 3.19-2.97 (m, 4H), 2.17 (s, 6H), 2.13 (s, 3H), 2.06 (s, 3H), 1.50 (s, 9H); 13C-NMR (CDCl3, 125 MHz) δ 169.4, 169.3, 168.4, 167.6, 167.5, 163.1, 161.3, 154.7, 151.8, 148.8, 148.4, 145.3, 142.9, 130.0, 122.3, 107.0, 106.7, 102.0, 79.7, 79.4, 67.9, 50.9, 49.2, 48.0, 28.3, 20.6, 20.4; HRMS (ESI+): m/z calculated for C43H52N5O22S+: 1022.2819, found : 1022.2797.
【０２５９】
（６）Fura-Nox-4-AMの合成
【０２６０】
【化５３】
2019147776.tif 000054
【０２６１】
Fura-N-4-AM(20.6 mg, 0.020 mmol)を酢酸エチル(2 mL)に溶解し、0 ℃に冷却した後に炭酸水素ナトリウム(1.9 mg, 0.022 mmol)とメタクロロ過安息香酸(6.4 mg, 0.022 mmol)を加え、室温で1時間撹拌した。反応溶媒を減圧下留去した後、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(クロロホルム : メタノール= 100 : 1 ; 30 : 1)で精製し、Fura-Nox-4-AMを淡黄色固体として得た(16 mg, 78%)。
【０２６２】
1H-NMR (CDCl3, 500 MHz) δ: 9.15 (s, 1H), 8.07 (s, 1H), 7.47 (s, 1H), 7.16 (s, 1H), 6.07-5.81 (m, 6H), 5.77 (s, 2H), 5.03 (s, 2H), 4.77 (s, 2H), 4.46 (s, 2H), 4.36 (s, 2H), 4.29 (s, 2H), 4.23 (s, 2H), 4.20-3.90 (m, 4H), 3.06 (d, J = 10.3 Hz, 2H), 2.16 (s, 9H), 2.12 (s, 3H), 1.52 (s, 9H); 13C-NMR (CDCl3, 125 MHz) δ 169.5, 169.48, 169.45, 167.5, 167.2, 167.0, 163.0, 160.5, 154.6, 151.8, 150.0, 146.3, 145.7, 131.1, 129.4, 109.5, 106.2, 104.5, 80.4, 80.2, 79.8, 79.5, 65.4, 64.4, 51.6, 49.0, 48.4, 48.1, 28.4, 20.7; HRMS (ESI+): m/z calculated for C43H52N5O23S+: 1038.2768, found : 1038.2772.
【０２６３】
（７）Fura-Nox-4の合成
【０２６４】
【化５４】
2019147776.tif 000055
【０２６５】
Fura-Nox-4-AM (15 mg, 0.015 mmol)をメタノール(1 mL)に溶解し、そこに水(1 mL)に溶解した炭酸カリウム(44 mg, 0.32 mmol)を加えた。室温で1時間撹拌した後、反応溶媒を減圧下留去し、残渣を逆相Sep-Packカートリッジ(C18, 10 g, H2O : MeCN = 1 : 0 ; 3 : 1)を用いて精製し、Fura-Nox-4を無色固体として得た(10 mg, 93%)。
【０２６６】
1H-NMR (CD3OD, 500 MHz) δ: 8.75 (s, 1H), 8.21 (s, 1H), 7.67 (s, 1H), 7.61 (s, 1H), 5.18 (s, 2H), 5.03-4.94 (m, 2H), 4.19-4.08 (m, 6H), 4.03 (s, 2H), 3.96 (s, 2H), 3.91-3.70 (m, 2H), 3.13-3.02 (m, 2H), 1.52 (s, 9H); 13C-NMR (CD3OD, 100 MHz) δ 176.5, 175.9, 175.6, 169.3, 164.3, 161.4, 160.7, 156.1, 153.4, 150.6, 148.4, 145.9, 141.9, 135.6, 131.4, 108.2, 107.6, 107.5, 82.0, 67.5, 65.3, 55.9, 52.8, 52.7, 52.1, 30.8, 28.7, 24.3; HRMS (ESI-): m/z calculated for C31H34N5O15S-: 748.1778, found : 748.1791.
【０２６７】
（８）Fura-N-4の合成
【０２６８】
【化５５】
2019147776.tif 000056
【０２６９】
Fura-N-4-AM(19 mg, 0.019 mmol)をメタノール(1.5 mL)に溶解し、そこに水(1 mL)に溶解した炭酸カリウム(53 mg, 0.38 mmol)を加えた。室温で1時間撹拌した後、反応溶媒を減圧下留去し、残渣を逆相Sep-Packカートリッジ(C18, 10 g, H2O : MeCN = 1 : 0 ; 3 : 1)を用いて精製し、Fura-N-4を黄色固体として得た(12 mg, 89%)。
【０２７０】
1H-NMR (CD3OD, 500 MHz) δ: 7.46 (s, 1H), 7.36 (s, 1H), 7.20 (s, 1H), 4.97 (s, 2H), 4.16 (s, 4H), 4.06 (s, 2H), 3.96 (s, 2H), 3.70-3.53 (m, 4H), 3.19-3.06 (m, 4H), 1.48 (s, 9H); 13C-NMR (CD3OD, 125 MHz) δ 175.4, 174.7, 174.3, 169.3, 163.2, 160.5, 160.1, 155.2, 151.4, 149.4, 148.8, 144.2, 142.6, 132.9, 122.7, 106.6, 106.1, 101.3, 79.8, 66.6, 54.6, 51.5, 51.4, 51.34, 51.32, 50.9, 50.8, 50.7, 27.3; HRMS (ESI-): m/z calculated for C31H34N5O14S-: 732.1828, found : 732.1825.
【０２７１】
実施例５（Fura-Nox-5の合成）
（１）化合物２２の合成
【０２７２】
【化５６】
2019147776.tif 000057
【０２７３】
化合物21 (277 mg, 1.17 mmol)（J. Chem. Soc., Perkin Trans. 1 1981, No. 0, 2120.を参照）及び2-ブロモメチルチアゾール5-カルボン酸エチル(380 mg, 1.52 mmol)を脱水ジメチルホルムアミド(7 mL)に溶解し、炭酸カリウムを加え、100 ℃で1.5時間撹拌した。放冷後、反応液を100 mLの水に注ぎ、得られた黄色懸濁液に1 M塩酸を滴下し、液性を酸性にした。そこに酢酸エチル(100 mL)を加え、抽出操作を行なった。混合した有機層を飽和食塩水(50 mL)で洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。溶媒を減圧留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(酢酸エチル: ヘキサン = 1 : 5 ; 1 : 2)で精製し、化合物22を黄色固体として得た(353 mg, 78%)。
【０２７４】
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.42 (s, 1H), 7.40 (s, 1H), 7.12 (s, 1H), 7.05 (s, 1H), 4.40 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 4.04-3.85 (7H), 3.21-2.97 (4H), 1.50-1.29 (3H); 13C-NMR (100 MHz, CDCl3) δ: 162.8, 161.3, 151.0, 150.5, 149.4, 148.9, 142.3, 128.6, 122.3, 107.2, 102.6, 101.4, 67.1, 61.7, 55.9, 51.4, 14.3; HRMS (ESI+): m/z calculated for C19H21N2O5S+: 389.1166, found : 389.1138.
【０２７５】
（２）化合物２３の合成
【０２７６】
【化５７】
2019147776.tif 000058
【０２７７】
化合物22 (13 mg, 0.034 mmol)を酢酸エチル(2 mL)に溶解し、0 ℃に冷却した後に炭酸水素ナトリウム(3.1 mg, 0.037 mmol)とメタクロロ過安息香酸(9.8 mg, 0.037 mmol)を加え、室温で30分間撹拌した。反応溶媒を減圧下留去した後、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(クロロホルム : メタノール= 1 : 0 ; 20 :1)で精製し、化合物23を淡黄色沈殿として得た(13 mg, 96%)。
【０２７８】
1H-NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 9.19 (s, 1H), 8.48 (s, 1H), 7.47 (s, 1H), 7.22 (s, 1H), 4.97-4.62 (m, 4H), 4.41 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 3.88 (d, J = 9.7 Hz, 2H), 2.93 (d, J = 9.7 Hz, 2H), 1.43 (t, J = 7.2 Hz, 3H); 13C-NMR (100 MHz, CDCl3) δ: 161.9, 161.1, 152.0, 149.6, 149.5, 148.1, 142.5, 129.9, 129.2, 109.4, 105.9, 103.6, 64.7, 62.6, 61.9, 56.3, 14.3; HRMS (ESI+): m/z calculated for C19H20N2NaO6S+: 427.0934, found : 427.0959.
【０２７９】
（３）Fura-Nox-5の合成
【０２８０】
【化５８】
2019147776.tif 000059
【０２８１】
化合物23 (12 mg, 0.030 mmol)をメタノール(2 mL)に溶解し、そこに1 M水酸化カリウム水溶液(297 μL, 0.30 mmol)を滴下した。室温で1時間撹拌後、反応液を0 ℃に冷却し、6 M塩酸を滴下して液性を酸性とした。減圧下メタノールを留去し、得られた黄色懸濁液を桐山ロートで濾過し、黄色固体を回収した。これをシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝1:0;2:1）により精製し、Fura-Nox-5を淡黄色固体として得た(7.5 mg, 67%)。
【０２８２】
1H-NMR (D2O, 500 MHz) δ 8.11 (s, 1H), 7.34 (s, 1H), 6.52 (s, 1H), 6.49 (s, 1H), 4.64 (t, J = 10.0 Hz, 2H), 4.42 (t, J = 11.7 Hz, 2H), 3.97 (d, J = 10.9 Hz, 2H), 3.64 (s, 3H), 2.90 (d, J = 12.0 Hz, 2H); 13C-NMR (NaOD/D2O, 100 MHz) δ 171.6, 169.1, 161.9, 153.1, 150.9, 150.4, 142.4, 140.9, 131.9, 109.2, 108.4, 107.5, 66.9, 65.1, 62.3, 58.8.
【０２８３】
（４）Fura-N-5の合成
【０２８４】
【化５９】
2019147776.tif 000060
【０２８５】
化合物22 (353 mg, 0.91 mmol)をメタノール(10 mL)とテトラヒドロフラン(5 mL)の混合溶媒に溶解し、そこに1 M水酸化ナトリウム水溶液(4.55 mL, 4.55 mmol)を滴下した。室温で6時間撹拌後、反応液を0 ℃に冷却し、1 M塩酸を滴下して液性を酸性とした。減圧下メタノールを留去し、得られた黄色懸濁液を桐山ロートで濾過し、黄色固体を回収した。これを減圧下乾燥し、Fura-N-5を黄色固体として得た(258 mg, 79%)。
【０２８６】
1H-NMR (C5D5N, 400 MHz) δ 8.89 (s, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.18 (s, 2H), 3.93 (t, J = 4.3 Hz, 4H), 3.83 (s, 3H), 3.16 (t, J = 4.3 Hz, 4H); 13C-NMR (C5D5N, 100 MHz) δ 164.2, 162.3, 151.5, 151.2, 149.8, 149.5, 143.0, 132.3, 122.6, 107.5, 103.8, 101.7, 67.2, 56.1, 51.7.
【０２８７】
実施例６（Fura-Nox-6の合成）
（１）化合物２４の合成
【０２８８】
【化６０】
2019147776.tif 000061
【０２８９】
4-ベンジルオキシ-2-ブロモフェノール (1.41 g, 5.00 mmol)（Tetrahedron Lett., 2012, 53, 2432を参照）をジメチルホルムアミド (15 mL)に溶解し、そこに炭酸カリウム(1.04 g, 7.5 mmol)およびブロモ酢酸-tert-ブチル(807 μL, 5.5 mmol)を加えた。窒素置換し、室温にて2時間攪拌後、反応液に酢酸エチルを(100 mL)加えた。反応混合液を水(50 mL×3)、飽和食塩水(50 mL)で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥後、溶媒を減圧下留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(酢酸エチル : ヘキサン= 1 : 20 ; 1 : 10)で精製し、化合物24を無色油状物質として得た(1.60 g, 81%)。
【０２９０】
1H-NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 7.48-7.29 (m, 5H), 7.22 (d, J = 2.9 Hz, 1H), 6.85 (dd, J = 9.2, 2.9 Hz, 1H), 6.78 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 4.99 (s, 2H), 4.52 (s, 2H), 1.47 (s, 9H); 13C-NMR (CDCl3, 100 MHz) δ 167.7, 153.9, 149.1, 136.5, 128.6, 128.1, 127.5, 120.1, 114.9, 114.5, 112.9, 82.4, 70.7, 67.5, 28.0; HRMS (DART+): m/z calculated for C19H22BrO4+: 393.0702, found : 397.0717.
【０２９１】
（２）化合物２５の合成
【０２９２】
【化６１】
2019147776.tif 000062
【０２９３】
よく乾燥させたフラスコにビス（ジベンジリデンアセトン）パラジウム(0) (75 mg, 0.0814 mmol)、Ruphos (190 mg, 0.407 mmol)、炭酸セシウム(2.65 mg, 8.14 mmol)、脱水1,4-ジオキサン(2 mL)、化合物24 (1.60 g, 4.07 mmol)、モルホリン(423 μL, 4.88 mmol)を加えた。アルゴンに置換し、100 ℃で20時間攪拌した。セライトを用いた濾過により不溶性の沈殿を除去した後、反応溶媒を減圧化留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(酢酸エチル: ヘキサン = 1 : 10 ; 1 : 3)で精製し、化合物25を淡黄色油状物質として得た(794 mg, 49%)。
【０２９４】
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 7.46-7.29 (m, 5H), 6.76 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 6.60 (d, J = 2.9 Hz, 1H), 6.53 (dd, J = 8.7, 2.9 Hz, 1H), 5.00 (s, 2H), 4.63 (s, 2H), 4.26 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 3.88 (t, J = 4.6 Hz, 4H), 3.12 (t, J = 4.3 Hz, 4H), 1.31 (t, J = 7.2 Hz, 3H); 13C-NMR (CDCl3, 100 MHz) δ 169.1, 154.5, 144.7, 143.0, 136.9, 128.5, 127.9, 127.5, 115.3, 107.0, 106.4, 70.4, 67.2, 66.4, 61.2, 50.8, 14.1; HRMS (DART+): m/z calculated for C23H30NO5+: 400.2118, found : 400.2133.
【０２９５】
（３）化合物２６の合成
【０２９６】
【化６２】
2019147776.tif 000063
【０２９７】
オキシ塩化リン(70 μL, 0.751 mmol)と脱水ジメチルホルムアミド(1 mL)を氷冷下で混和し、窒素雰囲気下、室温で30分間攪拌した。脱水ジメチルホルムアミド (1 mL)に溶解した化合物25 (100 mg, 0.250 mmol)を加え、窒素雰囲気下、45 ℃で4時間攪拌した。室温まで放冷した後、反応溶液を氷冷した飽和炭酸水素ナトリウム水溶液(40 mL)に加え、酢酸エチル(30 mL×2)で抽出した。混合した有機層を水(20 mL×3)と飽和食塩水(20 mL)で洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。溶媒を減圧留去し、化合物26を淡黄色固体として得た(53 mg, 50%)。
【０２９８】
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ: 10.35 (s, 1H), 7.48-7.32 (m, 5H), 7.20 (s, 1H), 6.48 (s, 1H), 5.16 (s, 2H), 4.54 (s, 2H), 3.88 (t, J = 4.6 Hz, 5H), 3.25 (t, J = 4.6 Hz, 5H), 1.50 (s, 9H);13C-NMR (100 MHz, CDCl3) δ: 187.7, 167.4, 157.7, 148.5, 144.2, 136.2, 128.7, 128.3, 127.4, 118.6, 110.3, 103.3, 82.5, 71.2, 66.9, 65.9, 50.3, 28.0; HRMS (DART+): m/z calculated for C24H30NO6+: 428.2068, found : 428.2044.
【０２９９】
（４）化合物２７の合成
【０３００】
【化６３】
2019147776.tif 000064
【０３０１】
化合物26 (847 mg, 1.98 mmol)を酢酸エチル(40 mL)に溶解し、10%パラジウム炭素(20 mg)を加えた。水素雰囲気下、室温で24時間撹拌した後、セライトを用いた濾過を行ない、触媒を除去した。濾液を減圧下濃縮し、化合物27を黄色油状物質として得た(74 mg, quant.)。
【０３０２】
1H-NMR (CDCl3, 500 MHz) δ: 11.20 (s, 1H), 9.63 (s, 1H), 6.86 (s, 1H), 6.41 (s, 1H), 4.51 (s, 2H), 3.99-3.74 (m, 4H), 3.32 (t, J = 4.9 Hz, 4H), 1.50 (s, 9H); 13C-NMR (125 MHz, CDCl3) δ: 193.5, 167.5, 159.2, 150.4, 143.1, 116.7, 113.6, 105.8, 82.6, 66.8, 66.7, 50.1, 28.1; HRMS (DART+): m/z calculated for C17H24NO6+: 338.1598, found : 338.1591.
【０３０３】
（５）化合物２８の合成
【０３０４】
【化６４】
2019147776.tif 000065
【０３０５】
化合物27 (570 mg, 1.69 mmol)および2-ブロモメチルチアゾール5-カルボン酸エチル(634 mg, 2.54 mmol)を脱水ジメチルホルムアミド(8 mL)に溶解し、炭酸カリウム(1.05 g, 7.61 mmol)を加え、100 ℃で1.5時間撹拌した。放冷後、反応液を.100 mLの水に注ぎ、得られた黄色懸濁液に1 M塩酸を滴下し、液性を酸性にした。そこに酢酸エチル(100 mL)を加え、抽出操作を行なった。有機層を水(50 mL×3)および飽和食塩水(50 mL)で洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。溶媒を減圧留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(酢酸エチル: ヘキサン = 1 : 10 ; 1 : 3)で精製し、化合物28を黄色固体として得た(692 mg, 84%)。
【０３０６】
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ: 8.42 (s, 1H), 7.37 (s, 1H), 7.13 (s, 1H), 6.98 (s, 1H), 4.62 (s, 2H), 4.40 (q, J = 7.3 Hz, 2H), 3.94 (t, J = 4.6 Hz, 5H), 3.21 (t, J = 4.0 Hz, 4H), 1.51 (s, 9H), 1.41 (t, J = 7.2 Hz, 3H); 13C-NMR (125 MHz, CDCl3) δ: 167.6, 162.7, 161.3, 151.6, 149.1, 148.5, 142.6, 128.6, 122.1, 107.2, 104.7, 101.6, 82.5, 67.1, 66.5, 61.7, 51.3, 28.1, 14.3; HRMS (ESI+): m/z calculated for C24H29N2O7S+: 489.1690, found : 489.1676.
【０３０７】
（６）Fura-N-6の合成
【０３０８】
【化６５】
2019147776.tif 000066
【０３０９】
化合物28 (30 mg, 0.0615 mmol)をエタノール(1.5 mL)と水(1.5 mL)の混合溶媒に溶解し、そこに1.2 M水酸化カリウム水溶液(61.5 μL, 0.0615 mmol)を滴下した。室温で6時間撹拌した後、Amberlite CG Type-Iを加え、反応溶液を中和した。反応液を濾過し、濾液を減圧化濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(クロロホルム：メタノール = 1 : 0 ; 50 : 1)で精製し、黄色固体の化合物29を得た(9.0 mg, 24%)。
【０３１０】
得られた化合物29 (9.0 mg)と2-アミノエチルトリフェニルホスホニウムブロミド(9.4 mg, 0.0215 mmol)を脱水ジメチルホルムアミド(2 mL)に溶解し、0 ℃でDMT-MM(5.9 mg, 0.0215 mmol)を加えた。室温で15時間撹拌した後、反応液にヘキサフルオロリン酸カリウム(36 mg, 0.195 mmol)を加えた。室温で1時間撹拌した後、酢酸エチルを(20 mL)加え、反応混合液を水(20 mL×3)および飽和食塩水(20 mL)で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥後、溶媒を減圧下留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(クロロホルム：メタノール= 1 : 0 ;30 :1)で精製し、Fura-N-6を黄色固体として得た(6.8 mg, 39%)。
【０３１１】
1H-NMR (CDCl3, 400 MHz) δ: 8.27 (s, 1H), 7.88-7.79 (m, 3H), 7.79-7.65 (m, 12H), 7.62-7.52 (m, 1H), 7.33 (s, 1H), 7.27 (s, 2H), 7.13 (s, 1H), 6.97 (s, 1H), 4.61 (s, 2H), 3.94 (t, J = 4.3 Hz, 4H), 3.90-3.79 (m, 2H), 3.68-3.51 (m, 2H), 3.29-3.11 (m, 4H), 1.50 (s, 9H); HRMS (ESI+): m/z calculated for C42H43N3O6PS+: 748.2605, found : 748.2624. 
【０３１２】
（７）Fura-Nox-6の合成
【０３１３】
【化６６】
2019147776.tif 000067
【０３１４】
Fura-N-6 (6.1 mg, 0.0068 mmol)をジクロロメタン(2 mL)に溶解し、0 ℃に冷却した後に炭酸水素ナトリウム(0.63 mg, 0.0075 mmol)とメタクロロ過安息香酸(1.9 mg, 0.0075 mmol)を加え、室温で30分間撹拌した。反応溶媒を減圧下留去した後、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(クロロホルム : メタノール= 1 : 0 ; 20 :1)で精製し、Fura-Nox-6を淡黄色沈殿として得た(3.3 mg, 53%)。
【０３１５】
1H-NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 8.79 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 7.94-7.85 (m, 9H), 7.84-7.71 (m, 6H), 7.61 (d, J = 1.0 Hz, 1H), 7.50 (s, 1H), 5.23-5.00 (m, 2H), 4.54 (t, J = 10.9 Hz, 2H), 4.05-3.88 (m, 2H), 3.88-3.68 (m, 4H), 3.10-2.98 (m, 2H), 1.53 (s, 9H); HRMS (ESI+): m/z calculated for C42H43N3O7PS+: 764.2554, found : 764.2544.427.0959.
【０３１６】
試験例１（各種分光学的測定）
各種Fura-Noxのヘム鉄応答性を蛍光分光光度計（日本分光、FP-6600）にて調査した。測定は全て50 mM HEPES緩衝液中pH 7.4にて実施した。また、Fura-Noxの濃度は2 μM（1 mM DMSO溶液をストック溶液とした）とし、ヘミン 2 μM（1 mM DMSO溶液をストック溶液とした）とグルタチオン（1 mM、100 mM水溶液をストック溶液とした）を添加し、一時間後における蛍光スペクトル変化を測定し、スペクトル変化前後における極大蛍光波長における蛍光強度比を算出した（表１参照）。
【０３１７】
【表１】
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【０３１８】
（１）ヘム鉄選択性の評価
ヘム鉄選択性について確認するため、10 μM二価鉄イオン（FeSO4）とグルタチオン（1 mM）を2 μMのFura-Nox誘導体と混合し、同様に一時間後の蛍光スペクトル変化および蛍光強度比を算出した。また、励起波長は365 nmとした（図１）。
【０３１９】
比較対象化合物として、二価鉄イオン応答性プローブであるRhoNox-1 （Chem. Sci. 2013, 4, 1250）、HMRhoNox-M （Org. Biomol. Chem. 2014, 12, 6590）、SiRhoNox-1 （Chem. Sci. 2017, 8, 4598）についても同条件にてヘミン又は二価鉄イオンと混合し、それぞれのプローブに対応する波長での蛍光スペクトル測定を実施した。
【０３２０】
【化６７】
2019147776.tif 000069
【０３２１】
図１（a-i）に、ヘム鉄蛍光プローブ Fura-Nox類縁体（a-f）及び二価鉄イオン蛍光プローブ（g-i）における、ヘミン（2 μM、黒太線）又は二価鉄イオン（10 μM、黒実線）に対する蛍光応答の結果を示す。各グラフにおいて、黒点線は反応前の蛍光応答を、灰色実線は1 mMグルタチオンのみの場合の蛍光応答を示す。ヘミン、二価鉄イオンとの反応時は1 mMグルタチオン存在下で反応した。励起波長は、(a-f)では365 nm、(g,h)では540 nm、(i)では630 nmとした。
【０３２２】
図２(a)に、各プローブのヘミン又は二価鉄イオンに対する蛍光応答性を比較した結果を示す。Fura-Nox-1からFura-Nox-6についてはそれぞれI(580)/I(430)、I(580)/I(430)、I(550)/I(425)、I(580)/I(430)、I(570)/I(430)、I(570)/I(430)の値を、プローブのみの場合を1として相対値をプロットした。但し、I(x)はx nmにおける蛍光強度を示す。棒グラフの白色はプローブのみ、灰色は二価鉄イオン（10 μM）、黒色はヘミン（2 μM）の結果を示す。実験条件は図１の実験と同様である。
【０３２３】
図２(b)は、図２(a)におけるFura-Nox-1からFura-Nox-5の部分を拡大したものである。
【０３２４】
図１及び図２に示す結果から、全てのFura-Noxシリーズについて、二価鉄イオンの応答に比較してヘム鉄であるヘミンに対してのみ顕著な蛍光強度変化を示した。
【０３２５】
また、同条件における二価鉄イオンに対するヘム鉄に対する選択性は表２のとおりである。特に、Fura-Nox-2からFura-Nox-6のFura-Noxシリーズについては、10倍以上の高い選択性を示し、良好なヘム鉄選択性が確認できた。
【０３２６】
比較対象化合物である公知のキサンテン系色素を母核としたＮ−オキシド型二価鉄イオン蛍光プローブであるRhoNox-1、HMRhoNox-M、及びSiRhoNox-1は、二価鉄イオン及びヘム鉄の両方に対し反応し、ヘム鉄に対する選択性がほとんどないことがわかる。
【０３２７】
従って、本発明のFura-Noxシリーズは、公知のキサンテン系色素を母核としたＮ−オキシド型二価鉄イオン蛍光プローブとは化学構造が大きく異なると共に、ヘム鉄に対する高い選択性（応答性）を示すことから全く異なる挙動を示すことが分かった。
【０３２８】
【表２】
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【０３２９】
（２）金属イオン選択性の評価
金属イオン選択性試験については、金属種としてMnSO4、CoSO4、NiSO4、FeSO4、FeCl3、CuSO4、ZnSO4、NaCl、KCl、MgCl2、CaCl2を用い、遷移金属イオンについては10 mMのストック溶液を、アルカリ金属、アルカリ土類金属イオンは1 Mのストック溶液を作成し、これらを使用した。銅(I)については10 mM の[Cu(CH3CN)4]PF4のアセトニトリル溶液を作成し、これを用いた。上記のストック溶液を用いて20 μMの遷移金属イオンおよび1 mMのアルカリ、アルカリ土類金属イオンを2 μMのFura-Nox誘導体に添加し、一時間後の575 nmにおける蛍光強度を比較した。その結果を、図３に示す。
【０３３０】
図３は、各種金属イオン種に対するFura-Noxシリーズの蛍光応答性を比較した結果である。金属イオン濃度は、Na, K, Mg, Caイオンは、いずれも1 mMとし、他の金属イオンは、20 μMとした。
【０３３１】
図３の結果より、Fura-Noxシリーズは、ヘム鉄に対する高い選択性を示すが、遊離の二価鉄イオン、及びその他の遷移金属イオンに対しては全く応答しないことが明らかになった。
【産業上の利用可能性】
【０３３２】
本発明化合物は、ヘム鉄に対する高い選択性を有するため、ヘム鉄選択的蛍光プローブとして有用である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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