(57)【要約】【課題】ＣＲＥに関与するＣＲＥＢ依存性長期記憶遺伝子転写活性、又はＣＲＥ依存性長期記憶遺伝子転写活性を促進する物質、及びこれらを含む医薬組成物や飲食物を開発するために、を提供する。【解決手段】アデノシン又はアデノシン誘導体は、中枢神経疾患の予防及び治療に用いられ、ＣＲＥに関与するＣＲＥＢ依存性長期記憶遺伝子転写活性、又はＣＲＥ依存性長期記憶遺伝子転写活性を促進する。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
中枢神経疾患の予防及び治療に用いられ、
ＣＲＥに関与するＣＲＥＢ依存性長期記憶遺伝子転写活性、又はＣＲＥ依存性長期記憶遺伝子転写活性を促進する、
ことを特徴とするアデノシン。
【請求項２】
中枢神経疾患の予防及び治療に用いられ、
ＣＲＥに関与するＣＲＥＢ依存性長期記憶遺伝子転写活性、又はＣＲＥ依存性長期記憶遺伝子転写活性を促進する、
ことを特徴とするアデノシン誘導体。
【請求項３】
請求項１に記載のアデノシン又は請求項２に記載のアデノシン誘導体を含む、
ことを特徴とする医薬組成物。
【請求項４】
請求項１に記載のアデノシン又は請求項２に記載のアデノシン誘導体を含む、
ことを特徴とする飲食物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、中枢神経疾患の予防及び治療に用いられるアデノシン、アデノシン誘導体、アデノシン又はアデノシン誘導体を含む医薬組成物及び飲食物に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
超高齢化社会に伴う認知症患者数の増加は、深刻な社会問題となっている。今後さらに高年齢者の数が増加することが予測されており、認知症を予防または治療する医薬品（医薬組成物）、食品（飲食物）に対する要求は増加すると考えられる。
記憶障害改善作用と作用機構を明らかにした植物由来成分として、例えば、柑橘類果皮由来のノビレチンが知られている（特許文献１）。
【０００３】
ノビレチンは、アルツハイマー病モデルを含む様々な記憶障害モデル動物において、その記憶障害を改善する。その作用機序として、ｐｒoｔｅｉｎ ｋｉｎａｓe Ａ（ＰＫＡ）／（ＥＲＫ）／ｃＡＭＰ（ＣＲＥ）-ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｔｅｉｎ（ＣＲＥＢ）細胞内シグナル経路を活性化し、ＣＲＥ依存性転写を亢進して記憶学習関連遺伝子の発現を亢進することが知られている（例えば、特許文献２）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２０１４−１１１６６４号公報
【特許文献２】特開２００７−６１０２８号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
上述のノビレチンは、ＣＲＥ依存性転写を亢進して記憶学習関連遺伝子の発現を亢進することが知られているが、現在までに、認知症、特にその半数を占めるアルツハイマー病に対する予防や進行抑制効果を持つ決定的な臨床薬は存在していない。
そのため、アルツハイマー病に対する予防（中枢神経疾患の予防）や進行抑制効果を持つ医薬組成物や飲食物を開発するにあたり、アルツハイマー病に対する予防や進行抑制効果を持つ物質を特定することが重要な課題となっている。
【０００６】
そこで、本発明は、ＣＲＥに関与するＣＲＥＢ依存性長期記憶遺伝子転写活性、又はＣＲＥ依存性長期記憶遺伝子転写活性を促進する物質、及び中枢神経疾患の予防及び治療に用いられる医薬組成物や飲食物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明に係るアデノシン又はアデノシン誘導体は、中枢神経疾患の予防及び治療に用いられ、ＣＲＥに関与するＣＲＥＢ依存性長期記憶遺伝子転写活性、又はＣＲＥ依存性長期記憶遺伝子転写活性を促進することを特徴とする。
【０００８】
本発明に係る医薬組成物、飲食物は、中枢神経疾患の予防及び治療に用いられ、上記のアデノシン、アデノシン誘導体を含むことを特徴とする。
【発明の効果】
【０００９】
本発明のアデノシン又はアデノシン誘導体は、ＣＲＥＢ依存性長期記憶遺伝子転写活性、又はＣＲＥ依存性長期記憶遺伝子転写活性を促進する。そのため、アデノシン又はアデノシン誘導体は、中枢神経疾患を予防または抑制する物質であるといえる。
したがって、アデノシンやアデノシン誘導体を含有させることにより、中枢神経疾患の予防または抑制する医薬組成物や飲食物を提供することが可能となる。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】カミツレの各抽出液（ヘキサン、酢酸エチル、ブタノール）を添加した場合のルシフェラーゼレポーターアッセイの結果を示すグラフである。
【図２】カミツレの分画抽出チャート（条件）を示す図である。
【図３】カミツレの分画抽出液（分画抽出液５Ｃから５Ｆ）を添加した場合のルシフェラーゼレポーターアッセイの結果を示すグラフである。
【図４】カミツレの各抽出液（ヘキサン、酢酸エチル、ブタノール）にアデノシンＡ２Ａ受容体の選択的拮抗剤（ＺＭ２４１３８５）を添加した場合のルシフェラーゼレポーターアッセイの結果を示すグラフである。
【図５】カミツレの分画抽出液（分画抽出液５Ｃから５Ｆ）にアデノシンＡ２Ａ受容体である選択的拮抗剤（ＺＭ２４１３８５）を添加した場合のルシフェラーゼレポーターアッセイの結果を示すグラフである。
【図６】雲南百薬の分画抽出チャート（条件）を示す図である。
【図７】雲南百薬の分画抽出液（分画抽出液８Ａから８Ｊ）を添加した場合のルシフェラーゼレポーターアッセイの結果を示すグラフである。
【図８】分画抽出液８Ｅの主成分及びコルジシニン（アデノシン誘導体）のＮＭＲの結果を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
［抽出溶液の種類］
本実施形態では、初めにキク科の植物であるカミツレの分画を行った。
カミツレ（キク科属名シカギク属カモミール（Ｍａｔｒｉｃａｒｉａ Ｃｈａｍｏｍｉｌａ Ｌ）は、消炎、鎮痛、鎮痙、発汗、強壮などの作用を有し、神経痛、リューマチ、腰痛、不眠症、小児喘息に対する効果があることが知られている。この他、腸管の蠕動運動促進作用、便秘、下痢、胃腸炎に対して有効である。
カミツレの花を乾燥させた後、細切し、ヘキサン（Ｈｅｘａｎｅ）、酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ）、ブタノール（ＢｕＯＨ）を用いて抽出し、各抽出液を得た。カミツレの濃度は、各抽出液に対して、１００μｇ／ｍＬから１５０μｇ／ｍＬとなるように調整した。
【００１２】
［ルシフェラーゼレポーターアッセイ］
各試料の遺伝子転写活性を評価するためにルシフェラーゼレポーターアッセイを行った。
ルシフェラーゼレポーターアッセイは、被検物質の有する転写活性を定量的に解析するために使用されるものである。転写が活性化するためには、遺伝子の上流プロモーターに存在する様々な制御配列が必要である。
本実施例では、ＰＫＡ／ＥＲＫ／ＣＲＥＢ細胞内シグナルによって活性化される制御配列であり、かつ記憶学習関連遺伝子の上流プロモーターに存在するＣＲＥ配列と、発光酵素であるルシフェラーゼの遺伝子を連結したプラスミドを使用した。
被験物質がＣＲＥ依存性の転写を活性化した場合、その下流にあるルシフェラーゼ遺伝子が発現し、上昇してルシフェラーゼタンパク質が細胞内で増加する。そうすると、基質を添加することで蛍光を発するため、その吸光度を測定し、転写活性を定量できる。
ＰＣ１２細胞（ラット副腎髄質褐色細胞腫由来細胞株）を９６穴培養ディッシュに播種濃度４．０×１０４個／穴で播種した。その後、プラスミドをＰＣ１２細胞内に導入し、各試料を滴下した培地で培養した。培地には、１％血清を添加したα改変ダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）を使用した。
ＰＣ１２細胞を所定時間培養した後、培地１ｍＬに対し、所定の濃度となるように抽出液（試料）を加えた培地に交換し、各試料を添加した培養ディッシュを３７℃、５％ＣＯ２雰囲気下で、５時間インキュベートし、ルシフェラーゼレポーターアッセイを行った。
なお、比較として、ノビレチン溶液（３０μＭ、５０μＭ）を使用した。
【００１３】
各抽出液を添加した場合のルシフェラーゼレポーターアッセイの結果を図１に示す。
ヘキサン抽出液（１５０μｇ／ｍＬ）、酢酸エチル抽出液（１５０μｇ／ｍＬ）、ブタノール抽出液（１００μｇ／ｍＬ）は、ノビレチン溶液（３０μＭ）よりも高いルシフェラーゼ活性を示すことが分かった。
中でも、ブタノール抽出液（１００μｇ／ｍＬ）は、ヘキサン抽出液やエタノール抽出液よりも低濃度において、これらの抽出液よりも高いルシフェラーゼ活性を示すことが分かった。
このことから、カミツレのブタノール抽出液に高いルシフェラーゼ活性を示す物質が含まれていることが分かった。そこで、以下の実験では、カミツレのブタノール抽出液をさらに分画し、ルシフェラーゼ活性が高い物質の特定を行った。
【００１４】
［ブタノール分画抽出液］
ブタノール抽出液の分画は、図２に示す分画チャートに従って実施した。
具体的には、ブタノール抽出液をさらに分画し、分画抽出液１Ａから１Ｇを得た。これらの分画抽出液のルシフェラーゼ活性を調べたところ、分画抽出液１Ｃが高い活性を示した。
分画抽出液１Ｃをさらに分画し、分画抽出液２Ａから２Ｅを得た。高いルシフェラーゼ活性を示した分画抽出液２Ａをさらに分画し、分画抽出液３Ａから３Ｄを得た。この中で、分画抽出液３Ｂ及び３Ｃが高いルシフェラーゼ活性を示した。分画抽出液３Ｂをさらに分画し、分画抽出液４Ａから４Ｆを得た。この中で高いルシフェラーゼ活性を示した分画抽出液４Ｃと分画抽出液３Ｃを混合し、さらに分画を行い、分画抽出液５Ａから５Ｆを得た。
【００１５】
分画抽出液５Ｃから５Ｆを添加した場合のルシフェラーゼ活性の結果を図３に示す。
この結果から、分画抽出液５Ｃ及び５Ｄに高いルシフェラーゼ活性を示す物質が含まれていることが分かった。そして、これらの分画抽出液５Ｃ及び５Ｄの主成分を調べたところ、アデノシンであることが分かった。
そこで、アデノシンＡ２Ａ受容体の選択的拮抗剤であるＺＭ２４１３８５を添加して、ルシフェラーゼ活性を調べた。
【００１６】
ヘキサン抽出液、酢酸エチル抽出液、ブタノール抽出液にＺＭ２４１３８５（３ｎＭ及び１０ｎＭ）を添加した場合のルシフェラーゼ活性の結果を図４に示した。
この結果から、ＺＭ２４１３８５を添加すると、ルシフェラーゼ活性が著しく小さくなることが分かった。さらに、ＺＭ２４１３８５の添加濃度を高くした場合、それに伴いルシフェラーゼ活性が小さくなることが分かった。このことから、アデノシン（アデノシン誘導体）がルシフェラーゼ活性に寄与していると考えられる。
【００１７】
図５は、ノビレチン溶液（５０μＭ）、アデノシン溶液（１μＭ）、分画抽出液５Ｄから５ＦにＺＭ２４１３８５を添加した場合のルシフェラーゼ活性の結果である。
ＺＭ２４１３８５を添加したノビレチン溶液を添加した場合と未添加のノビレチン溶液を添加した場合を比較すると、ほぼ同じルシフェラーゼ活性を示すことが分かった。
一方、アデノシン溶液（１μＭ）、分画抽出液５Ｄから５ＦにＺＭ２４１３８５を添加した場合では、ルシフェラーゼ活性が小さくなることが分かった。
これらの結果からも、アデノシン（あるいはアデノシン誘導体）がルシフェラーゼ活性に大きく寄与する有効成分であるといえる。
【００１８】
次に、雲南百薬をブタノール分画し、分画抽出液に含まれているルシフェラーゼ活性に寄与する有効成分について調べた。
雲南百薬は、静岡県富士市産のアカサカズラ（ツルムラサキ科植物）を使用し、メタノールで抽出した。抽出した雲南百薬粉末は、ジメチルスルホキシド（Ｄｉｍｅｔｈｙｌ ｓｕｌｆｏｘｉｄｅ）（ＤＭＳＯ）に溶解させた。なお、雲南百薬は、中国語学名：藜蔓（落葵薯）、ラテン名：Ａｎｒｅｄｅｒａ ｃоｒｄｉｆоｌｉａ (Ｔｅｎоｒｅ) Ｓｔｅｅｎｉｓ、別名：藤三七（ｔｅｎｇ ｓａｎ ｑｉ）、ラテン名：Ｂоｕｓｓｉｎｇａｕｌｔｉａ ｇｒａｃｉｌｉｓ Ｍｉｅｒｓｖａｒ．ｐｓｅｕｄоｂａｓｅｌｌоｉｄｅｓ Ｂａｉｌｅｙ）である。
【００１９】
分画抽出は、図２と同様の分画フローで実施した。この中でルシフェラーゼ活性を示した分画抽出液１Ｄをさらに分画し、分画抽出液８Ａから８Ｊを得た（図６）。これらの分画抽出液を添加し、ルシフェラーゼ活性を調べた結果を図７に示す。
この結果から、分画抽出液８Ａ、８Ｂ、８Ｈを添加した場合、ルシフェラーゼ活性は、ノビレチン溶液（３０μＭ）を添加した場合よりも小さくなることが分かった。
一方、分画抽出液８Ｃから８Ｇを添加した場合、ルシフェラーゼ活性は、ノビレチン溶液（３０μＭ）を添加した場合よりも大きくなることが分かった。
【００２０】
ルシフェラーゼ活性は、分画抽出液８Ｃから８Ｅにかけて大きくなり、分画抽出液８Ｅから８Ｇにかけて小さくなる。そこで、分画抽出液８Ｅの主成分の構造を核磁気共鳴装置（ＮＭＲ）で調べた。
分画抽出液８Ｅの有効成分とアデノシン誘導体であるコルジシニン（２-Ｍｅｔｏｘｙａｄｅｎｏｃｉｎｅ）の１Ｈ−ＮＭＲ及び１３Ｃ−ＮＭＲの結果を図８に示した。
この結果から、分画抽出液８Ｅの主成分は、アデノシン誘導体であるコルジシニンであることが分かった。
【００２１】
以上から、分画抽出液５Ｃから５Ｆ、分画抽出液８Ｃから８Ｇは、ノビレチン溶液（３０μＭ）よりもルシフェラーゼ活性が高いことが分かった。そして、これらの溶液には、アデノシンやアデノシン誘導体が含まれていることがわかった。また、アデノシンＡ２Ａ受容体の選択的拮抗剤であるＺＭ２４１３８５を添加した結果、ルシフェラーゼ活性が顕著に低くなることから、アデノシン、アデノシン誘導体は、ＣＲＥ依存性転写が促進し、記憶学習関連遺伝子の発現を亢進するという効果を有することが明らかとなった。
したがって、中枢神経疾患の予防または抑制する医薬組成物や飲食物（食品）を開発にアデノシンやアデノシン誘導体を使用することが有益であるといえる。
【００２２】
以上、本実施形態について説明したが、これ以外にも、本発明の主旨を逸脱しない限り、上記実施の形態で挙げた構成を取捨選択したり、他の構成に適宜変更することが可能である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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