(57)【要約】【課題】増強された幹細胞組成物を提供すること。【解決手段】本発明は、細胞治療のための改善された方法を提供する。具体的には、本発明は、生着およびホーミングの性質が改善された、増強された造血幹細胞および造血前駆細胞の治療用組成物、ならびに治療用組成物を作製する方法を提供する。本発明は、さらに、造血系の再構築を必要とする被験体に治療用組成物を移植する工程を含む、造血幹細胞および造血前駆細胞移植の有効性を改善する方法を提供する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
本明細書に記載の発明。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
本願は、米国特許法第１１９条（ｅ）項の下、２０１１年１２月２日に出願された米国仮特許出願第６１／５６６，４９２号の利益を主張し、この米国仮特許出願の全体の内容は、本明細書中に参考として援用される。
【０００２】
背景
技術分野
本発明は、増強された造血幹細胞および造血前駆細胞ならびに増強された細胞を含む治療用組成物に関する。本発明は、増強された造血細胞および造血前駆細胞、および治療用組成物を作製する方法、ならびに、個体の造血系を再構築するため、および虚血に関連する状態および疾患を処置するための使用を含めた、その使用方法にも関する。
【背景技術】
【０００３】
先行技術の説明
再生医療の目的は、損傷を受けたまたは疾患にかかった細胞、組織、および臓器の機能を維持する、改善する、さらには回復させることである。医療の実施の改革を目的とした再生医療の１つのやり方は、細胞に基づく治療薬を使用して患者を処置することである。しかし、細胞に基づく治療薬の見込みが十分に理解されるためには、治療用細胞が患者に導入された際の耐容性が良好であるべきであり、該細胞は治療を必要とする部位に遊走または「ホーミング」するべきであり、該細胞により所望の治療をもたらすことができるべきである。当技術分野では、幹細胞に基づく治療薬および前駆細胞に基づく治療薬を使用するための試みがなされてきたが、ヒトの臨床実践場面における成功は、もしあってもわずかである。
【０００４】
改善された細胞に基づく治療薬が有効であろう再生医療の１つの領域は、種々の遺伝病、がん、および変性疾患を処置するための、幹細胞移植、例えば、骨髄移植および造血幹細胞移植である。Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｍａｒｒｏｗ  Ｄｏｎｏｒ  Ｐｒｏｇｒａｍ（登録商標）（ＮＭＤＰ）によると、生命にかかわる悪性疾患および非悪性疾患を有する患者を処置するために、世界的に年間で推定４５，０００〜５０，０００の造血細胞移植が実施されている。しかし、骨髄移植には多数の欠点がある。骨髄提供は有痛性であり、時には難しく、時間がかかり、また、多くの場合、ＨＬＡドナーマッチ組織を見つけるのが不可能である。また、同種移植には移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）の有意な発生率が伴う。さらに、より容易に得られる臍帯血を使用して同種造血幹細胞移植が実施されているが、臍帯血移植にもなおＧＶＨＤのリスクがある。既存の臍帯血移植の方法の他の欠点としては、移植可能な細胞の数が少ないこと、およびドナー細胞のホーミングおよび生着の欠乏が挙げられ、このどちらによっても患者の命にかかわる感染症のリスクが高くなる。さらに、臍帯血移植には、一般に、骨髄移植および末梢血移植と全く同じリスクがある。
【０００５】
ＧＶＨＤの発生率を低下させるため、または細胞のホーミングおよび生着する能力を増大させるために、単離された移植片内の臍帯血中のヒト造血幹細胞および造血前駆細胞の数をｅｘ  ｖｉｖｏの状況において増大させるために多数の手法が試みられてきたが、これらの試みでは限られた成功しか得られていない。
【０００６】
改善された細胞に基づく治療薬が有効であろう再生医療の別の領域は、虚血による損傷を受けた組織の処置である。組織および臓器への血流の途絶は虚血として公知である。ヒトの体内での細胞、組織、および臓器の生存能力は、適切な血流に依存している。適切な血流により、細胞に酸素、グルコース、および細胞の生理機能および代謝の調節に重要な必要性の高い栄養分がもたらされる。虚血は急性または慢性であり得る。急性型および慢性型の虚血のどちらによっても、細胞への適切な栄養分が失われ、持続する場合には、低酸素状態および／または無酸素状態になる。虚血を処置せずにいると、細胞が壊死またはアポトーシスを受け、それにより、組織または臓器の完全性および健康が危険にさらされる恐れがある。
【０００７】
虚血は、米国において毎年、数百万の患者に影響を及ぼしている。虚血は、実質的に無限の種類の遺伝学的状態、環境性の傷害、外傷性傷害、または外科的介入によって引き起こされる。患者が罹患する最も一般的な種類の虚血としては、これだけに限定されないが、脳虚血、脊髄傷害、心血管虚血、肢虚血、腸管虚血、皮膚虚血（例えば、熱傷および凍傷による創傷）、ならびに、これだけに限定されないが、臓器移植、および植皮を含めた医学的手技および外科手技によって生じる虚血が挙げられる。
【０００８】
現在、急性虚血および慢性虚血の消散には、多くの場合、外科的手段を用いて組織の灌流および血流を回復させることが必要であり、これにより、さらに患者に虚血性組織損傷のリスクが生じる。虚血期間後に血流が回復することにより、実際に、虚血よりも大きく損傷する可能性がある。酸素が再導入されることにより、損傷性フリーラジカルが多く生じるようになり、また、細胞外アシドーシス状態が除かれることにより、カルシウムが流入し、したがって、カルシウム過負荷になる。全体的に、潜在的に致死的な心不整脈をもたらす可能性がある再灌流傷害におけるこの結果により、壊死も著しく加速する恐れがある。虚血組織に対処する他の現存する処置としては、高圧酸素、静脈内血栓溶解薬、抗炎症剤、および新脈管形成プロモーターの局所的な適用が挙げられる。しかし、これらの処置では、一般に、もしあっても、限られた成功しか得られていない。
【０００９】
したがって、再生医療において使用される細胞に基づく組成物および材料の多くは、現在は法外な費用がかかり、非効率的かつ／または安全でない。再生医療において幹細胞に基づく治療薬および前駆細胞に基づく治療薬を使用することの他の著しい欠点は、幹細胞の増殖、移動性を制御するため、または幹細胞を、治療を必要とする特定のニッシェまたは組織に導く、例えば、ホーミングさせるために利用可能な技術が欠如していることである。最終的に、細胞に基づく治療薬は再生医療を必要とするものに対する現実的な処置の選択肢とは考えられないという結果になる。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
したがって、増大させることができる、治療が望まれる患者の部位にホーミングすることができる、および持続的な治療効果をもたらすことができる、改善された細胞に基づく治療薬が当技術分野において実質的に必要とされている。本発明は、これらの必要性に対処し、他の関連する利点をもたらす。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
発明の要旨
本発明は、一般に、治療的性質が改善された新規の細胞に基づく組成物を提供する。一実施形態では、本発明は、一部において、細胞におけるＣＸＣＲ４遺伝子発現を増加させる１種または複数種の作用剤（ａｇｅｎｔ）とｅｘ  ｖｉｖｏで接触させた造血幹細胞または造血前駆細胞と、接触させた造血幹細胞または造血前駆細胞におけるＣＸＣＲ４の遺伝子発現が、接触させていない造血幹細胞または造血前駆細胞と比較して少なくとも約３０倍増加することとを含むヒト造血幹細胞または造血前駆細胞を意図している。
【００１２】
特定の実施形態では、１種または複数種の作用剤は、（ｉ）１種または複数種のプロスタグランジン経路アゴニストと、（ｉｉ）１種または複数種のグルココルチコイドとを含む。
【００１３】
ある特定の実施形態では、プロスタグランジン経路アゴニストは、ＰＧＥ２  ＥＰ２受容体またはＰＧＥ２  ＥＰ４受容体に選択的に結合する化合物を含む。
【００１４】
さらなる特定の実施形態では、プロスタグランジン経路アゴニストは、ＰＧＥ２、ｄｍＰＧＥ２、１５（Ｓ）−１５−メチルＰＧＥ２、２０−エチルＰＧＥ２、および８−イソ−１６−シクロヘキシル−テトラノルＰＧＥ２からなる群から選択される。
【００１５】
別の特定の実施形態では、プロスタグランジン経路アゴニストは、ＰＧＥ２、またはＰＧＥ２類似体または誘導体を含む。
【００１６】
追加的な特定の実施形態では、プロスタグランジン経路アゴニストは、１６，１６−ジメチルＰＧＥ２を含む。
【００１７】
ある特定の実施形態では、グルココルチコイドは、メドリゾン、アルクロメタゾン、ジプロピオン酸アルクロメタゾン、アムシノニド、ベクロメタゾン、ジプロピオン酸ベクロメタゾン、ベタメタゾン、安息香酸ベタメタゾン、吉草酸ベタメタゾン、ブデソニド、シクレソニド、クロベタゾール、酪酸クロベタゾール（ｃｌｏｂｅｔａｓｏｌ  ｂｕｔｙｒａｔｅ）、プロピオン酸クロベタゾール、クロベタゾン、クロコルトロン、クロプレドノール、コルチゾール、コルチゾン、コルチバゾール、デフラザコート、デソニド、デスオキシメタゾン（ｄｅｓｏｘｉｍｅｔａｓｏｎｅ）、デスオキシコルトン、デスオキシメタゾン（ｄｅｓｏｘｙｍｅｔｈａｓｏｎｅ）、デキサメタゾン、ジフロラゾン、二酢酸ジフロラゾン、ジフルコルトロン、吉草酸ジフルコルトロン、ジフルオロコルトロン（ｄｉｆｌｕｏｒｏｃｏｒｔｏｌｏｎｅ）、ジフルプレドナート、フルクロロロン、フルクロロロンアセトニド、フルドロキシコルチド、フルメタゾン（ｆｌｕｍｅｔａｓｏｎｅ）、フルメタゾン（ｆｌｕｍｅｔｈａｓｏｎｅ）、ピバル酸フルメタゾン、フルニソリド、フルニソリド半水和物、フルオシノロン、フルオシノロンアセトニド、フルオシノニド、フルオコルチン、フルオコルチンブチル（ｆｌｕｏｃｏｒｉｔｉｎ  ｂｕｔｙｌ）、フルオコルトロン、フルオロコルチゾン、フルオロメトロン、フルペロロン、フルプレドニデン、酢酸フルプレドニデン、フルプレドニゾロン、フルチカゾン、プロピオン酸フルチカゾン、ホルモコータル、ハルシノニド、ハロメタゾン、ヒドロコルチゾン、酢酸ヒドロコルチゾン、アセポン酸ヒドロコルチゾン、ヒドロコルチゾンブテプレート、酪酸ヒドロコルチゾン、ロテプレドノール、メプレドニゾン、６ａ−メチルプレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、酢酸メチルプレドニゾロン、アセポン酸メチルプレドニゾロン、モメタゾン、フロ酸モメタゾン、フロ酸モメタゾン一水和物、パラメタゾン、プレドニカルベート、プレドニゾロン、プレドニゾン、プレドニリデン、リメキソロン、チキソコルトール、トリアムシノロン、トリアムシノロンアセトニドおよびウロベタゾールからなる群から選択される。
【００１８】
さらなるある特定の実施形態では、グルココルチコイドはメドリゾンである。
【００１９】
追加的なある特定の実施形態では、幹細胞または前駆細胞は、少なくとも１種の作用剤と少なくとも約１時間にわたって接触させたものである。
【００２０】
別のある特定の実施形態では、幹細胞または前駆細胞は、少なくとも１種の作用剤と約１時間〜約２４時間にわたって接触させたものである。
【００２１】
別のある特定の実施形態では、幹細胞または前駆細胞は、少なくとも１種の作用剤と約１時間〜約１２時間にわたって接触させたものである。
【００２２】
別のある特定の実施形態では、幹細胞または前駆細胞は、少なくとも１種の作用剤と約１時間〜約６時間にわたって接触させたものである。
【００２３】
ある特定の実施形態では、幹細胞または前駆細胞は、少なくとも１種の作用剤と約２時間〜約６時間にわたって接触させたものである。
【００２４】
さらなる実施形態では、幹細胞または前駆細胞は、少なくとも１種の作用剤と約２時間〜約４時間にわたって接触させたものである。
【００２５】
追加的なさらなる実施形態では、細胞は、骨髄、臍帯血、動員された末梢血、ホウォートンゼリー、胎盤、または胎児血から得られる。
【００２６】
一実施形態では、本発明は、一部において、ヒト造血幹細胞または造血前駆細胞を含む細胞の集団を含む組成物、例えば、治療用組成物であって、造血幹細胞または造血前駆細胞が、ヒト造血幹細胞または造血前駆細胞におけるＣＸＣＲ４の発現を増加させる１種または複数種の作用剤とｅｘ  ｖｉｖｏで接触させたものであり、接触させた造血幹細胞または造血前駆細胞におけるＣＸＣＲ４の遺伝子発現が、接触させていない造血幹細胞または造血前駆細胞と比較して少なくとも約３０倍増加する組成物を意図している。
【００２７】
追加的な実施形態では、１種または複数種の作用剤は、（ｉ）１種または複数種のプロスタグランジン経路アゴニストと、（ｉｉ）１種または複数種のグルココルチコイドとを含む。
【００２８】
特定の追加的な実施形態では、接触させた造血幹細胞または造血前駆細胞におけるＣＸＣＲ４の遺伝子発現が、接触させていない造血幹細胞または造血前駆細胞と比較して少なくとも約４０倍増加する。
【００２９】
特定の追加的な実施形態では、接触させた造血幹細胞または造血前駆細胞におけるＣＸＣＲ４の遺伝子発現が、接触させていない造血幹細胞または造血前駆細胞と比較して少なくとも約５０倍増加する。
【００３０】
特定の追加的な実施形態では、接触させた造血幹細胞または造血前駆細胞におけるＣＸＣＲ４の遺伝子発現が、接触させていない造血幹細胞または造血前駆細胞と比較して少なくとも約６０倍増加する。
【００３１】
特定の追加的な実施形態では、接触させた造血幹細胞または造血前駆細胞におけるＣＸＣＲ４の遺伝子発現が、接触させていない造血幹細胞または造血前駆細胞と比較して少なくとも約７０倍増加する。
【００３２】
特定の追加的な実施形態では、接触させた造血幹細胞または造血前駆細胞におけるＣＸＣＲ４の遺伝子発現が、接触させていない造血幹細胞または造血前駆細胞と比較して少なくとも約８０倍増加する。
【００３３】
特定の追加的な実施形態では、接触させた造血幹細胞または造血前駆細胞におけるＣＸＣＲ４の遺伝子発現が、接触させていない造血幹細胞または造血前駆細胞と比較して約４０〜約８０倍増加する。
【００３４】
特定の追加的な実施形態では、接触させた造血幹細胞または造血前駆細胞におけるＣＸＣＲ４の遺伝子発現が、接触させていない造血幹細胞または造血前駆細胞と比較して約５０〜約８０倍増加する。
【００３５】
特定の追加的な実施形態では、接触させた造血幹細胞または造血前駆細胞におけるＣＸＣＲ４の遺伝子発現が、接触させていない造血幹細胞または造血前駆細胞と比較して約６０〜約８０倍増加する。
【００３６】
ある特定の追加的な実施形態では、接触させた造血幹細胞または造血前駆細胞は遺伝子発現シグネチャーを含み、接触させた造血幹細胞または造血前駆細胞におけるＣＸＣＲ４の遺伝子発現が、接触させていない造血幹細胞または造血前駆細胞と比較して約３０倍、約４０倍、約５０倍、約６０倍、約７０倍、または約８０倍増加し、処理した幹細胞または前駆細胞におけるヒアルロナンシンターゼ１（ＨＡＳ１）、ＧＴＰ結合性タンパク質ＧＥＭ（ＧＥＭ）、二重特異性プロテインホスファターゼ４（ＤＵＳＰ４）、アンフィレギュリン（ＡＲＥＧ）、核受容体関連タンパク質１（ＮＲ４Ａ２）、レニン（ＲＥＮ）、ｃＡＭＰ応答エレメントモジュレーター（ＣＲＥＭ）、Ｉ型アルファ１コラーゲン（ＣＯＬ１Ａ１）、およびＦｏｓ関連抗原２（ＦＯＳＬ２）からなる群から選択される１種または複数種の遺伝子の遺伝子発現が、接触させていない幹細胞または前駆細胞と比較して少なくとも約２倍、約３倍、約４倍、約５倍、約１０倍、約２０倍、約３０倍、約４０倍、または約５０倍増加する。
【００３７】
他の追加的な実施形態では、接触させた造血幹細胞または造血前駆細胞は遺伝子発現シグネチャーを含み、接触させた造血幹細胞または造血前駆細胞におけるＣＸＣＲ４の遺伝子発現が、接触させていない細胞と比較して少なくとも３０倍増加し、処理した幹細胞または前駆細胞におけるＨＡＳ１、ＧＥＭ、ＤＵＳＰ４、ＡＲＥＧ、ＮＲ４Ａ２、ＲＥＮ、ＣＲＥＭ、ＣＯＬ１Ａ１、ＦＯＳＬ２からなる群から選択される１種または複数種の遺伝子の遺伝子発現が、接触させていない細胞と比較して少なくとも約２倍増加する。
【００３８】
他の追加的な実施形態では、接触させた造血幹細胞または造血前駆細胞は遺伝子発現シグネチャーを含み、接触させた造血幹細胞または造血前駆細胞におけるＣＸＣＲ４の遺伝子発現が、接触させていない細胞と比較して少なくとも３０倍増加し、処理した幹細胞または前駆細胞におけるＨＡＳ１、ＧＥＭ、ＤＵＳＰ４、ＡＲＥＧ、ＮＲ４Ａ２、ＲＥＮ、ＣＲＥＭ、ＣＯＬ１Ａ１、ＦＯＳＬ２からなる群から選択される１種または複数種の遺伝子の遺伝子発現が、接触させていない細胞と比較して少なくとも約３倍増加する。
【００３９】
他の追加的な実施形態では、接触させた造血幹細胞または造血前駆細胞は遺伝子発現シグネチャーを含み、接触させた造血幹細胞または造血前駆細胞におけるＣＸＣＲ４の遺伝子発現が、接触させていない細胞と比較して少なくとも３０倍増加し、処理した幹細胞または前駆細胞におけるＨＡＳ１、ＧＥＭ、ＤＵＳＰ４、ＡＲＥＧ、ＮＲ４Ａ２、ＲＥＮ、ＣＲＥＭ、ＣＯＬ１Ａ１、ＦＯＳＬ２からなる群から選択される１種または複数種の遺伝子の遺伝子発現が、接触させていない細胞と比較して少なくとも約５倍増加する。
【００４０】
他の追加的な実施形態では、接触させた造血幹細胞または造血前駆細胞は遺伝子発現シグネチャーを含み、接触させた造血幹細胞または造血前駆細胞におけるＣＸＣＲ４の遺伝子発現が、接触させていない細胞と比較して少なくとも３０倍増加し、処理した幹細胞または前駆細胞におけるＨＡＳ１、ＧＥＭ、ＤＵＳＰ４、ＡＲＥＧ、ＮＲ４Ａ２、ＲＥＮ、ＣＲＥＭ、ＣＯＬ１Ａ１、ＦＯＳＬ２からなる群から選択される１種または複数種の遺伝子の遺伝子発現が、接触させていない細胞と比較して少なくとも約１０倍増加する。
【００４１】
他の追加的な実施形態では、接触させた造血幹細胞または造血前駆細胞は遺伝子発現シグネチャーを含み、接触させた造血幹細胞または造血前駆細胞におけるＣＸＣＲ４の遺伝子発現が、接触させていない細胞と比較して少なくとも３０倍増加し、処理した幹細胞または前駆細胞におけるＨＡＳ１、ＧＥＭ、ＤＵＳＰ４、ＡＲＥＧ、ＮＲ４Ａ２、ＲＥＮ、ＣＲＥＭ、ＣＯＬ１Ａ１、ＦＯＳＬ２からなる群から選択される２種以上の遺伝子の遺伝子発現が、接触させていない細胞と比較して少なくとも約２倍増加する。
【００４２】
他の追加的な実施形態では、接触させた造血幹細胞または造血前駆細胞は遺伝子発現シグネチャーを含み、接触させた造血幹細胞または造血前駆細胞におけるＣＸＣＲ４の遺伝子発現が、接触させていない細胞と比較して少なくとも３０倍増加し、処理した幹細胞または前駆細胞におけるＨＡＳ１、ＧＥＭ、ＤＵＳＰ４、ＡＲＥＧ、ＮＲ４Ａ２、ＲＥＮ、ＣＲＥＭ、ＣＯＬ１Ａ１、ＦＯＳＬ２からなる群から選択される２種以上の遺伝子の遺伝子発現が、接触させていない細胞と比較して少なくとも約３倍増加する。
【００４３】
他の追加的な実施形態では、接触させた造血幹細胞または造血前駆細胞は遺伝子発現シグネチャーを含み、接触させた造血幹細胞または造血前駆細胞におけるＣＸＣＲ４の遺伝子発現が、接触させていない細胞と比較して少なくとも３０倍増加し、処理した幹細胞または前駆細胞におけるＨＡＳ１、ＧＥＭ、ＤＵＳＰ４、ＡＲＥＧ、ＮＲ４Ａ２、ＲＥＮ、ＣＲＥＭ、ＣＯＬ１Ａ１、ＦＯＳＬ２からなる群から選択される２種以上の遺伝子の遺伝子発現が、接触させていない細胞と比較して少なくとも約５倍増加する。
【００４４】
他の追加的な実施形態では、接触させた造血幹細胞または造血前駆細胞は遺伝子発現シグネチャーを含み、接触させた造血幹細胞または造血前駆細胞におけるＣＸＣＲ４の遺伝子発現が、接触させていない細胞と比較して少なくとも３０倍増加し、処理した幹細胞または前駆細胞におけるＨＡＳ１、ＧＥＭ、ＤＵＳＰ４、ＡＲＥＧ、ＮＲ４Ａ２、ＲＥＮ、ＣＲＥＭ、ＣＯＬ１Ａ１、ＦＯＳＬ２からなる群から選択される２種以上の遺伝子の遺伝子発現が、接触させていない細胞と比較して少なくとも約１０倍増加する。
【００４５】
他の追加的な実施形態では、接触させた造血幹細胞または造血前駆細胞は遺伝子発現シグネチャーを含み、接触させた造血幹細胞または造血前駆細胞におけるＣＸＣＲ４の遺伝子発現が、接触させていない細胞と比較して少なくとも３０倍増加し、処理した幹細胞または前駆細胞におけるＨＡＳ１、ＧＥＭ、ＤＵＳＰ４、ＡＲＥＧ、ＮＲ４Ａ２、ＲＥＮ、ＣＲＥＭ、ＣＯＬ１Ａ１、ＦＯＳＬ２からなる群から選択される３種以上の遺伝子の遺伝子発現が、接触させていない細胞と比較して少なくとも約２倍増加する。
【００４６】
他の追加的な実施形態では、接触させた造血幹細胞または造血前駆細胞は遺伝子発現シグネチャーを含み、接触させた造血幹細胞または造血前駆細胞におけるＣＸＣＲ４の遺伝子発現が、接触させていない細胞と比較して少なくとも３０倍増加し、処理した幹細胞または前駆細胞におけるＨＡＳ１、ＧＥＭ、ＤＵＳＰ４、ＡＲＥＧ、ＮＲ４Ａ２、ＲＥＮ、ＣＲＥＭ、ＣＯＬ１Ａ１、ＦＯＳＬ２からなる群から選択される３種以上の遺伝子の遺伝子発現が、接触させていない細胞と比較して少なくとも約３倍増加する。
【００４７】
他の追加的な実施形態では、接触させた造血幹細胞または造血前駆細胞は遺伝子発現シグネチャーを含み、接触させた造血幹細胞または造血前駆細胞におけるＣＸＣＲ４の遺伝子発現が、接触させていない細胞と比較して少なくとも３０倍増加し、処理した幹細胞または前駆細胞におけるＨＡＳ１、ＧＥＭ、ＤＵＳＰ４、ＡＲＥＧ、ＮＲ４Ａ２、ＲＥＮ、ＣＲＥＭ、ＣＯＬ１Ａ１、ＦＯＳＬ２からなる群から選択される３種以上の遺伝子の遺伝子発現が、接触させていない細胞と比較して少なくとも約５倍増加する。
【００４８】
他の追加的な実施形態では、接触させた造血幹細胞または造血前駆細胞は遺伝子発現シグネチャーを含み、接触させた造血幹細胞または造血前駆細胞におけるＣＸＣＲ４の遺伝子発現が、接触させていない細胞と比較して少なくとも３０倍増加し、処理した幹細胞または前駆細胞におけるＨＡＳ１、ＧＥＭ、ＤＵＳＰ４、ＡＲＥＧ、ＮＲ４Ａ２、ＲＥＮ、ＣＲＥＭ、ＣＯＬ１Ａ１、ＦＯＳＬ２からなる群から選択される３種以上の遺伝子の遺伝子発現が、接触させていない細胞と比較して少なくとも約１０倍増加する。
【００４９】
ある特定の追加的な実施形態では、プロスタグランジン経路アゴニストは、ＰＧＥ２  ＥＰ２受容体またはＰＧＥ２  ＥＰ４受容体に選択的に結合する化合物を含む。
【００５０】
さらなる追加的な実施形態では、プロスタグランジン経路アゴニストは、ＰＧＥ２、ｄｍＰＧＥ２、１５（Ｓ）−１５−メチルＰＧＥ２、２０−エチルＰＧＥ２、および８−イソ−１６−シクロヘキシル−テトラノルＰＧＥ２からなる群から選択される。
【００５１】
別の追加的な実施形態では、プロスタグランジン経路アゴニストは、ＰＧＥ２、またはＰＧＥ２類似体またはその誘導体を含む。
【００５２】
別の実施形態では、プロスタグランジン経路アゴニストは、１６，１６−ジメチルＰＧＥ２を含む。
【００５３】
別の特定の実施形態では、グルココルチコイドは、メドリゾン、アルクロメタゾン、ジプロピオン酸アルクロメタゾン、アムシノニド、ベクロメタゾン、ジプロピオン酸ベクロメタゾン、ベタメタゾン、安息香酸ベタメタゾン、吉草酸ベタメタゾン、ブデソニド、シクレソニド、クロベタゾール、酪酸クロベタゾール、プロピオン酸クロベタゾール、クロベタゾン、クロコルトロン、クロプレドノール、コルチゾール、コルチゾン、コルチバゾール、デフラザコート、デソニド、デスオキシメタゾン（ｄｅｓｏｘｉｍｅｔａｓｏｎｅ）、デスオキシコルトン、デスオキシメタゾン（ｄｅｓｏｘｙｍｅｔｈａｓｏｎｅ）、デキサメタゾン、ジフロラゾン、二酢酸ジフロラゾン、ジフルコルトロン、吉草酸ジフルコルトロン、ジフルオロコルトロン、ジフルプレドナート、フルクロロロン、フルクロロロンアセトニド、フルドロキシコルチド、フルメタゾン（ｆｌｕｍｅｔａｓｏｎｅ）、フルメタゾン（ｆｌｕｍｅｔｈａｓｏｎｅ）、ピバル酸フルメタゾン、フルニソリド、フルニソリド半水和物、フルオシノロン、フルオシノロンアセトニド、フルオシノニド、フルオコルチン、フルオコルチンブチル、フルオコルトロン、フルオロコルチゾン、フルオロメトロン、フルペロロン、フルプレドニデン、酢酸フルプレドニデン、フルプレドニゾロン、フルチカゾン、プロピオン酸フルチカゾン、ホルモコータル、ハルシノニド、ハロメタゾン、ヒドロコルチゾン、酢酸ヒドロコルチゾン、アセポン酸ヒドロコルチゾン、ヒドロコルチゾンブテプレート、酪酸ヒドロコルチゾン、ロテプレドノール、メプレドニゾン、６ａ−メチルプレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、酢酸メチルプレドニゾロン、アセポン酸メチルプレドニゾロン、モメタゾン、フロ酸モメタゾン、フロ酸モメタゾン一水和物、パラメタゾン、プレドニカルベート、プレドニゾロン、プレドニゾン、プレドニリデン、リメキソロン、チキソコルトール、トリアムシノロン、トリアムシノロンアセトニドおよびウロベタゾールからなる群から選択される。
【００５４】
別のある特定の実施形態では、造血幹細胞または造血前駆細胞が、（ｉ）１種もしくは複数種のプロスタグランジン経路アゴニストまたは（ｉｉ）１種もしくは複数種のグルココルチコイドのうちの少なくとも１つと少なくとも約１時間にわたって接触させたものである。
【００５５】
別のさらなる実施形態では、造血幹細胞または造血前駆細胞が、（ｉ）１種または複数種のプロスタグランジン経路アゴニストおよび（ｉｉ）１種または複数種のグルココルチコイドのうちの少なくとも１つと約２時間〜約２４時間にわたって接触させたものである。
【００５６】
別の追加的な実施形態では、造血幹細胞または造血前駆細胞が、（ｉ）１種または複数種のプロスタグランジン経路アゴニストおよび（ｉｉ）１種または複数種のグルココルチコイドのうちの少なくとも１つと約２時間〜約６時間にわたって接触させたものである。
【００５７】
特定の実施形態では、造血幹細胞または造血前駆細胞が、（ｉ）１種または複数種のプロスタグランジン経路アゴニストおよび（ｉｉ）１種または複数種のグルココルチコイドのうちの少なくとも１つと約４時間にわたって接触させたものである。
【００５８】
ある特定の実施形態では、細胞の集団が、約０．１０％未満、０．５０％未満、１．０％未満、３％未満、５％未満、１０％未満、１５％未満、２０％未満、または３０％未満のＣＤ３４＋細胞を含む。
【００５９】
さらなる実施形態では、細胞の集団が、少なくとも約０．０１％でかつ約５０％以下のＣＤ３４＋細胞を含む。
【００６０】
別の実施形態では、細胞の集団は、少なくとも約１％のＣＤ３４＋細胞を含む。
【００６１】
追加的な実施形態では、細胞の集団は、少なくとも約３％のＣＤ３４＋細胞を含む。
【００６２】
特定の実施形態では、細胞の集団は、少なくとも約５％のＣＤ３４＋細胞を含む。
【００６３】
別の特定の実施形態では、細胞の集団は、少なくとも約１０％のＣＤ３４＋細胞を含む。
【００６４】
さらに別の特定の実施形態では、細胞の集団は、少なくとも約２０％のＣＤ３４＋細胞を含む。
【００６５】
なおさらに別の特定の実施形態では、細胞の集団は、少なくとも約３０％のＣＤ３４＋細胞を含む。
【００６６】
ある特定の実施形態では、細胞の集団は、少なくとも約４０％のＣＤ３４＋細胞を含む。
【００６７】
別のある特定の実施形態では、細胞の集団は、少なくとも約５０％のＣＤ３４＋細胞を含む。
【００６８】
さらに別のある特定の実施形態では、細胞の集団は、少なくとも約６０％のＣＤ３４＋細胞を含む。
【００６９】
なおさらに別のある特定の実施形態では、細胞の集団は、少なくとも約７０％のＣＤ３４＋細胞を含む。
【００７０】
さらなる実施形態では、細胞の集団は、少なくとも約８０％のＣＤ３４＋細胞を含む。
【００７１】
別のさらなる実施形態では、細胞の集団は、少なくとも約９０％のＣＤ３４＋細胞を含む。
【００７２】
さらに別のさらなる実施形態では、細胞の集団は、少なくとも約９５％のＣＤ３４＋細胞を含む。
【００７３】
追加的な実施形態では、細胞の集団をｅｘ  ｖｉｖｏで増大させない。
【００７４】
ある特定の実施形態では、組成物は、ポイントオブケアで生成され、細胞の集団を培養せずに患者に投与される。
【００７５】
さらなる実施形態では、組成物は、洗浄され、１種または複数種の作用剤を実質的に含まない。
【００７６】
別の実施形態では、細胞の集団は、骨髄、胎児肝臓、胎児血、胎盤、胎盤血、臍帯血、または動員された末梢血から得られる。
【００７７】
一実施形態では、本発明は、一部において、ヒト造血幹細胞または造血前駆細胞を調製する方法であって、造血幹細胞または造血前駆細胞を細胞におけるＣＸＣＲ４遺伝子発現を増加させる１種または複数種の作用剤とｅｘ  ｖｉｖｏで接触させる工程であって、接触させた造血幹細胞または造血前駆細胞におけるＣＸＣＲ４遺伝子発現が、接触させていない造血幹細胞または造血前駆細胞と比較して少なくとも約３０倍増加する工程を含む方法を意図している。
【００７８】
特定の実施形態では、１種または複数種の作用剤は、（ｉ）１種または複数種のプロスタグランジン経路アゴニストと、（ｉｉ）１種または複数種のグルココルチコイドとを含む。
【００７９】
ある特定の実施形態では、プロスタグランジン経路アゴニストは、ＰＧＥ２  ＥＰ２受容体またはＰＧＥ２  ＥＰ４受容体に選択的に結合する化合物を含む。
【００８０】
さらなる特定の実施形態では、プロスタグランジン経路アゴニストは、ＰＧＥ２、ｄｍＰＧＥ２、１５（Ｓ）−１５−メチルＰＧＥ２、２０−エチルＰＧＥ２、および８−イソ−１６−シクロヘキシル−テトラノルＰＧＥ２からなる群から選択される。
【００８１】
別の特定の実施形態では、プロスタグランジン経路アゴニストは、ＰＧＥ２、またはＰＧＥ２類似体またはその誘導体を含む。
【００８２】
追加的な特定の実施形態では、プロスタグランジン経路アゴニストは、１６，１６−ジメチルＰＧＥ２を含む。
【００８３】
ある特定の実施形態では、グルココルチコイドは、メドリゾン、アルクロメタゾン、ジプロピオン酸アルクロメタゾン、アムシノニド、ベクロメタゾン、ジプロピオン酸ベクロメタゾン、ベタメタゾン、安息香酸ベタメタゾン、吉草酸ベタメタゾン、ブデソニド、シクレソニド、クロベタゾール、酪酸クロベタゾール、プロピオン酸クロベタゾール、クロベタゾン、クロコルトロン、クロプレドノール、コルチゾール、コルチゾン、コルチバゾール、デフラザコート、デソニド、デスオキシメタゾン（ｄｅｓｏｘｉｍｅｔａｓｏｎｅ）、デスオキシコルトン、デスオキシメタゾン（ｄｅｓｏｘｙｍｅｔｈａｓｏｎｅ）、デキサメタゾン、ジフロラゾン、二酢酸ジフロラゾン、ジフルコルトロン、吉草酸ジフルコルトロン、ジフルオロコルトロン、ジフルプレドナート、フルクロロロン、フルクロロロンアセトニド、フルドロキシコルチド、フルメタゾン（ｆｌｕｍｅｔａｓｏｎｅ）、フルメタゾン（ｆｌｕｍｅｔｈａｓｏｎｅ）、ピバル酸フルメタゾン、フルニソリド、フルニソリド半水和物、フルオシノロン、フルオシノロンアセトニド、フルオシノニド、フルオコルチン、フルオコルチンブチル、フルオコルトロン、フルオロコルチゾン、フルオロメトロン、フルペロロン、フルプレドニデン、酢酸フルプレドニデン、フルプレドニゾロン、フルチカゾン、プロピオン酸フルチカゾン、ホルモコータル、ハルシノニド、ハロメタゾン、ヒドロコルチゾン、酢酸ヒドロコルチゾン、アセポン酸ヒドロコルチゾン、ヒドロコルチゾンブテプレート、酪酸ヒドロコルチゾン、ロテプレドノール、メプレドニゾン、６ａ−メチルプレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、酢酸メチルプレドニゾロン、アセポン酸メチルプレドニゾロン、モメタゾン、フロ酸モメタゾン、フロ酸モメタゾン一水和物、パラメタゾン、プレドニカルベート、プレドニゾロン、プレドニゾン、プレドニリデン、リメキソロン、チキソコルトール、トリアムシノロン、トリアムシノロンアセトニドおよびウロベタゾールからなる群から選択される。
【００８４】
さらなるある特定の実施形態では、グルココルチコイドはメドリゾンである。
【００８５】
追加的なある特定の実施形態では、幹細胞または前駆細胞は、少なくとも１種の作用剤と少なくとも約１時間にわたって接触させたものである。
【００８６】
別のある特定の実施形態では、造血幹細胞または造血前駆細胞は、少なくとも１種の作用剤と約１時間〜約２４時間にわたって接触させたものである。
【００８７】
別のある特定の実施形態では、幹細胞または前駆細胞は、少なくとも１種の作用剤と約１時間〜約６時間にわたって接触させたものである。
【００８８】
ある特定の実施形態では、幹細胞または前駆細胞は、少なくとも１種の作用剤と約２時間〜約６時間にわたって接触させたものである。
【００８９】
さらなる実施形態では、幹細胞または前駆細胞は、少なくとも１種の作用剤と約２時間〜約４時間にわたって接触させたものである。
【００９０】
追加的なさらなる実施形態では、細胞は、骨髄、臍帯血、動員された末梢血、ホウォートンゼリー、胎盤、または胎児血から得られる。
【００９１】
一実施形態では、本発明は、一部において、治療用組成物を調製する方法であって、造血幹細胞または造血前駆細胞をｅｘ  ｖｉｖｏで（ｉ）１種または複数種のプロスタグランジン経路アゴニストおよび（ｉｉ）１種または複数種のグルココルチコイドと接触させる工程であって、ＣＸＣＲ４遺伝子発現が、接触させた造血幹細胞または造血前駆細胞において、接触させていない造血幹細胞または造血前駆細胞と比較して少なくとも約３０倍増加する工程を含む方法を意図している。
【００９２】
特定の実施形態では、接触させた造血幹細胞または造血前駆細胞におけるＣＸＣＲ４の遺伝子発現は、接触させていない造血幹細胞または造血前駆細胞と比較して少なくとも約４０倍増加する。
【００９３】
ある特定の実施形態では、プロスタグランジン経路アゴニストは、ＰＧＥ２  ＥＰ２受容体またはＰＧＥ２  ＥＰ４受容体に選択的に結合する化合物を含む。
【００９４】
別の特定の実施形態では、プロスタグランジン経路アゴニストは、ＰＧＥ２、ｄｍＰＧＥ２、１５（Ｓ）−１５−メチルＰＧＥ２、２０−エチルＰＧＥ２、および８−イソ−１６−シクロヘキシル−テトラノルＰＧＥ２からなる群から選択される。
【００９５】
別の特定の実施形態では、プロスタグランジン経路アゴニストは、ＰＧＥ２、またはＰＧＥ２類似体またはその誘導体を含む。
【００９６】
追加的な特定の実施形態では、プロスタグランジン経路アゴニストは、１６，１６−ジメチルＰＧＥ２を含む。
【００９７】
ある特定の実施形態では、グルココルチコイドは、メドリゾン、アルクロメタゾン、ジプロピオン酸アルクロメタゾン、アムシノニド、ベクロメタゾン、ジプロピオン酸ベクロメタゾン、ベタメタゾン、安息香酸ベタメタゾン、吉草酸ベタメタゾン、ブデソニド、シクレソニド、クロベタゾール、酪酸クロベタゾール、プロピオン酸クロベタゾール、クロベタゾン、クロコルトロン、クロプレドノール、コルチゾール、コルチゾン、コルチバゾール、デフラザコート、デソニド、デスオキシメタゾン（ｄｅｓｏｘｉｍｅｔａｓｏｎｅ）、デスオキシコルトン、デスオキシメタゾン（ｄｅｓｏｘｙｍｅｔｈａｓｏｎｅ）、デキサメタゾン、ジフロラゾン、二酢酸ジフロラゾン、ジフルコルトロン、吉草酸ジフルコルトロン、ジフルオロコルトロン、ジフルプレドナート、フルクロロロン、フルクロロロンアセトニド、フルドロキシコルチド、フルメタゾン（ｆｌｕｍｅｔａｓｏｎｅ）、フルメタゾン（ｆｌｕｍｅｔｈａｓｏｎｅ）、ピバル酸フルメタゾン、フルニソリド、フルニソリド半水和物、フルオシノロン、フルオシノロンアセトニド、フルオシノニド、フルオコルチン、フルオコルチンブチル、フルオコルトロン、フルオロコルチゾン、フルオロメトロン、フルペロロン、フルプレドニデン、酢酸フルプレドニデン、フルプレドニゾロン、フルチカゾン、プロピオン酸フルチカゾン、ホルモコータル、ハルシノニド、ハロメタゾン、ヒドロコルチゾン、酢酸ヒドロコルチゾン、アセポン酸ヒドロコルチゾン、ヒドロコルチゾンブテプレート、酪酸ヒドロコルチゾン、ロテプレドノール、メプレドニゾン、６ａ−メチルプレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、酢酸メチルプレドニゾロン、アセポン酸メチルプレドニゾロン、モメタゾン、フロ酸モメタゾン、フロ酸モメタゾン一水和物、パラメタゾン、プレドニカルベート、プレドニゾロン、プレドニゾン、プレドニリデン、リメキソロン、チキソコルトール、トリアムシノロン、トリアムシノロンアセトニドおよびウロベタゾールからなる群から選択される。
【００９８】
さらなるある特定の実施形態では、グルココルチコイドはメドリゾンである。
【００９９】
特定の実施形態では、造血幹細胞または造血前駆細胞は、（ｉ）１種または複数種のプロスタグランジン経路アゴニストおよび（ｉｉ）１種または複数種のグルココルチコイドと少なくとも約１時間にわたって接触させたものである。
【０１００】
さらなる特定の実施形態では、造血幹細胞または造血前駆細胞は、（ｉ）１種または複数種のプロスタグランジン経路アゴニストおよび（ｉｉ）１種または複数種のグルココルチコイドと約２時間〜約２４時間にわたって接触させたものである。
【０１０１】
さらなる特定の実施形態では、造血幹細胞または造血前駆細胞は、（ｉ）１種または複数種のプロスタグランジン経路アゴニストおよび（ｉｉ）１種または複数種のグルココルチコイドと約２時間〜約１２時間にわたって接触させたものである。
【０１０２】
さらなる特定の実施形態では、造血幹細胞または造血前駆細胞は、（ｉ）１種または複数種のプロスタグランジン経路アゴニストおよび（ｉｉ）１種または複数種のグルココルチコイドと約２時間〜約６時間にわたって接触させたものである。
【０１０３】
追加的な特定の実施形態では、造血幹細胞または造血前駆細胞は、（ｉ）１種または複数種のプロスタグランジン経路アゴニストおよび（ｉｉ）１種または複数種のグルココルチコイドと約２時間〜約４時間にわたって接触させたものである。
【０１０４】
別の特定の実施形態では、造血幹細胞または造血前駆細胞は、（ｉ）１種または複数種のプロスタグランジン経路アゴニストおよび（ｉｉ）１種または複数種のグルココルチコイドと約４時間にわたって接触させたものである。
【０１０５】
ある特定の実施形態では、細胞の集団が、約０．１０％未満、０．５０％未満、１．０％未満、３％未満、５％未満、１０％未満、１５％未満、２０％未満、または３０％未満のＣＤ３４＋細胞を含む。
【０１０６】
さらなる実施形態では、細胞の集団が、少なくとも約０．０１％でかつ約５０％以下のＣＤ３４＋細胞を含む。
【０１０７】
別の実施形態では、細胞の集団は、少なくとも約１％のＣＤ３４＋細胞を含む。
【０１０８】
追加的な実施形態では、細胞の集団は、少なくとも約３％のＣＤ３４＋細胞を含む。
【０１０９】
特定の実施形態では、細胞の集団は、少なくとも約５％のＣＤ３４＋細胞を含む。
【０１１０】
別の特定の実施形態では、細胞の集団は、少なくとも約１０％のＣＤ３４＋細胞を含む。
【０１１１】
さらに別の特定の実施形態では、細胞の集団は、少なくとも約２０％のＣＤ３４＋細胞を含む。
【０１１２】
またさらに別の特定の実施形態では、細胞の集団は、少なくとも約３０％のＣＤ３４＋細胞を含む。
【０１１３】
ある特定の実施形態では、細胞の集団は、少なくとも約４０％のＣＤ３４＋細胞を含む。
【０１１４】
別のある特定の実施形態では、細胞の集団は、少なくとも約５０％のＣＤ３４＋細胞を含む。
【０１１５】
さらに別のある特定の実施形態では、細胞の集団は、少なくとも約６０％のＣＤ３４＋細胞を含む。
【０１１６】
なおさらに別のある特定の実施形態では、細胞の集団は、少なくとも約７０％のＣＤ３４＋細胞を含む。
【０１１７】
さらなる実施形態では、細胞の集団は、少なくとも約８０％のＣＤ３４＋細胞を含む。
【０１１８】
別のさらなる実施形態では、細胞の集団は、少なくとも約９０％のＣＤ３４＋細胞を含む。
【０１１９】
さらに別のさらなる実施形態では、細胞の集団は、少なくとも約９５％のＣＤ３４＋細胞を含む。
【０１２０】
追加的な実施形態では、細胞の集団をｅｘ  ｖｉｖｏで増大させない。
【０１２１】
ある特定の実施形態では、組成物は、ポイントオブケアで生成され、細胞の集団を培養せずに患者に投与される。
【０１２２】
さらなる実施形態では、組成物は、洗浄され、１種または複数種の作用剤を実質的に含まない。
【０１２３】
別の実施形態では、細胞の集団は、骨髄、胎児肝臓、胎児血、胎盤、胎盤血、臍帯血、または動員された末梢血から得られる。
【０１２４】
種々の実施形態では、本発明は、一部において、細胞治療を必要とする被験体を処置する方法であって、被験体にヒト造血幹細胞または造血前駆細胞を投与する工程であって、造血幹細胞または造血前駆細胞が、ヒト造血幹細胞または造血前駆細胞におけるＣＸＣＲ４の発現を増加させる１種または複数種の作用剤とｅｘ  ｖｉｖｏで接触させたものであり、接触させた造血幹細胞または造血前駆細胞におけるＣＸＣＲ４の遺伝子発現が、接触させていない造血幹細胞または造血前駆細胞と比較して少なくとも約３０倍増加する工程を含む方法を意図している。
【０１２５】
特定の実施形態では、被験体は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、若年性骨髄単球性白血病、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、重症再生不良性貧血、ファンコニー貧血、発作性夜間血色素尿症（ＰＮＨ）、赤芽球ろう、先天性無巨核球性血小板減少症（ａｍｅｇａｋａｒｙｏｃｙｔｏｓｉｓ／ｃｏｎｇｅｎｉｔａｌ  ｔｈｒｏｍｂｏｃｙｔｏｐｅｎｉａ）、重症複合免疫不全症候群（ＳＣＩＤ）、ウィスコット・アルドリッチ症候群、重症型ベータサラセミア（ｂｅｔａ−ｔｈａｌａｓｓｅｍｉａ
ｍａｊｏｒ）、鎌状赤血球症、ハーラー症候群、副腎脳白質ジストロフィー、異染性白質ジストロフィー、脊髄異形成、不応性貧血、慢性骨髄単球性白血病、原因不明骨髄様化生、家族性血球貪食性リンパ組織球症、固形腫瘍、慢性肉芽腫性疾患、ムコ多糖症、またはダイヤモンド・ブラックファンを有する。
【０１２６】
ある特定の実施形態では、被験体は、乳がん、卵巣がん、脳がん、前立腺がん、肺がん、結腸がん、皮膚がん、肝がん、膵がん、または肉腫を有する。
【０１２７】
別の実施形態では、被験体は、骨髄破壊（ｂｏｎｅ  ｍａｒｒｏｗ  ａｂｌａｔｉｖｅ）または骨髄非破壊化学療法または放射線療法を受けている。
【０１２８】
さらなる実施形態では、被験体は骨髄ドナーである。
【０１２９】
一実施形態では、被験体は、虚血組織または虚血による損傷を受けた組織を有する。
【０１３０】
特定の実施形態では、被験体は、虚血組織または虚血による損傷を受けた組織と関連した少なくとも１つの症状を有する。
【０１３１】
種々の実施形態では、虚血は、急性冠状動脈症候群、急性肺傷害（ＡＬＩ）、急性心筋梗塞（ＡＭＩ）、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、動脈閉塞性疾患、動脈硬化症、関節軟骨欠損、無菌性全身性炎症（ａｓｅｐｔｉｃ  ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ）、アテローム硬化性心血管疾患、自己免疫疾患、骨折、骨折、脳浮腫、脳低灌流、バージャー病、熱傷、がん、心血管疾患、軟骨損傷、脳梗塞、脳虚血、脳卒中、脳血管疾患、化学療法誘発性ニューロパチー、慢性感染、慢性腸間膜虚血、跛行、うっ血性心不全、結合組織損傷、挫傷、冠動脈疾患（ＣＡＤ）、重症肢虚血（ＣＬＩ）、クローン病、深部静脈血栓症、深部創傷、潰瘍治癒の遅延、創傷治癒の遅延、糖尿病（Ｉ型およびＩＩ型）、糖尿病性ニューロパチー、糖尿病誘発性虚血、播種性血管内凝固（ＤＩＣ）、塞栓性脳虚血、移植片対宿主病、遺伝性出血性毛細血管拡張症、虚血性血管疾患、高酸素傷害、低酸素症、炎症、炎症性腸疾患、炎症性疾患、傷害を受けた腱、間欠性跛行、腸管虚血、虚血、虚血性脳疾患、虚血性心疾患、虚血性末梢血管疾患、虚血胎盤、虚血性腎疾患、虚血性血管疾患、虚血再灌流傷害、裂傷、左主冠状動脈疾患、肢虚血、下肢虚血、心筋梗塞、心筋虚血、臓器虚血、変形性関節症、骨粗鬆症、骨肉腫、パーキンソン病、末梢動脈性疾患（ＰＡＤ）、末梢動脈疾患、末梢性虚血、末梢性ニューロパチー、末梢血管疾患、前がん、肺水腫、肺塞栓症、リモデリング障害、腎臓虚血、網膜虚血、網膜症、敗血症、皮膚潰瘍、実質臓器移植、脊髄傷害、卒中、軟骨下骨嚢胞、血栓症、血栓性脳虚血、組織虚血、一過性脳虚血発作（ＴＩＡ）、外傷性脳傷害、潰瘍性大腸炎、腎臓の血管疾患、血管の炎症性の状態、フォンヒッペル・リンダウ症候群、および組織または臓器の創傷に関連する。
【０１３２】
一実施形態では、本発明は、一部において、被験体における造血幹細胞および造血前駆細胞のホーミングおよび／または生着を増加させる方法であって、被験体に、ヒト造血幹細胞または造血前駆細胞を含む細胞の集団を含む組成物を投与する工程であって、造血幹細胞または造血前駆細胞が、細胞におけるＣＸＣＲ４遺伝子発現を増加させる１種または複数種の作用剤とｅｘ  ｖｉｖｏで接触させたものであり、接触させた造血幹細胞または造血前駆細胞におけるＣＸＣＲ４の遺伝子発現が、接触させていない造血幹細胞または造血前駆細胞と比較して少なくとも約３０倍増加する工程を含む方法を意図している。
【０１３３】
特定の実施形態では、１種または複数種の作用剤は、（ｉ）１種または複数種のプロスタグランジン経路アゴニストと、（ｉｉ）１種または複数種のグルココルチコイドとを含む。
【０１３４】
ある特定の実施形態では、プロスタグランジン経路アゴニストは、ＰＧＥ２  ＥＰ２受容体またはＰＧＥ２  ＥＰ４受容体に選択的に結合する化合物を含む。
【０１３５】
さらなる特定の実施形態では、プロスタグランジン経路アゴニストは、ＰＧＥ２、ｄｍＰＧＥ２、１５（Ｓ）−１５−メチルＰＧＥ２、２０−エチルＰＧＥ２、および８−イソ−１６−シクロヘキシル−テトラノルＰＧＥ２からなる群から選択される。
【０１３６】
別の特定の実施形態では、プロスタグランジン経路アゴニストは、ＰＧＥ２、またはＰＧＥ２類似体または誘導体を含む。
【０１３７】
追加的な特定の実施形態では、プロスタグランジン経路アゴニストは、１６，１６−ジメチルＰＧＥ２を含む。
【０１３８】
ある特定の実施形態では、グルココルチコイドは、メドリゾン、アルクロメタゾン、ジプロピオン酸アルクロメタゾン、アムシノニド、ベクロメタゾン、ジプロピオン酸ベクロメタゾン、ベタメタゾン、安息香酸ベタメタゾン、吉草酸ベタメタゾン、ブデソニド、シクレソニド、クロベタゾール、酪酸クロベタゾール、プロピオン酸クロベタゾール、クロベタゾン、クロコルトロン、クロプレドノール、コルチゾール、コルチゾン、コルチバゾール、デフラザコート、デソニド、デスオキシメタゾン（ｄｅｓｏｘｉｍｅｔａｓｏｎｅ）、デスオキシコルトン、デスオキシメタゾン（ｄｅｓｏｘｙｍｅｔｈａｓｏｎｅ）、デキサメタゾン、ジフロラゾン、二酢酸ジフロラゾン、ジフルコルトロン、吉草酸ジフルコルトロン、ジフルオロコルトロン、ジフルプレドナート、フルクロロロン、フルクロロロンアセトニド、フルドロキシコルチド、フルメタゾン（ｆｌｕｍｅｔａｓｏｎｅ）、フルメタゾン（ｆｌｕｍｅｔｈａｓｏｎｅ）、ピバル酸フルメタゾン、フルニソリド、フルニソリド半水和物、フルオシノロン、フルオシノロンアセトニド、フルオシノニド、フルオコルチン、フルオコルチンブチル、フルオコルトロン、フルオロコルチゾン、フルオロメトロン、フルペロロン、フルプレドニデン、酢酸フルプレドニデン、フルプレドニゾロン、フルチカゾン、プロピオン酸フルチカゾン、ホルモコータル、ハルシノニド、ハロメタゾン、ヒドロコルチゾン、酢酸ヒドロコルチゾン、アセポン酸ヒドロコルチゾン、ヒドロコルチゾンブテプレート、酪酸ヒドロコルチゾン、ロテプレドノール、メプレドニゾン、６ａ−メチルプレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、酢酸メチルプレドニゾロン、アセポン酸メチルプレドニゾロン、モメタゾン、フロ酸モメタゾン、フロ酸モメタゾン一水和物、パラメタゾン、プレドニカルベート、プレドニゾロン、プレドニゾン、プレドニリデン、リメキソロン、チキソコルトール、トリアムシノロン、トリアムシノロンアセトニドおよびウロベタゾールからなる群から選択される。
【０１３９】
さらなるある特定の実施形態では、グルココルチコイドはメドリゾンである。
【０１４０】
追加的なある特定の実施形態では、幹細胞または前駆細胞は、少なくとも１種の作用剤と少なくとも約１時間にわたって接触させたものである。
【０１４１】
別のある特定の実施形態では、造血幹細胞または造血前駆細胞は、少なくとも１種の作用剤と約１時間〜約２４時間にわたって接触させたものである。
【０１４２】
別のある特定の実施形態では、幹細胞または前駆細胞は、少なくとも１種の作用剤と約１時間〜約６時間にわたって接触させたものである。
【０１４３】
ある特定の実施形態では、幹細胞または前駆細胞は、少なくとも１種の作用剤と約２時間〜約６時間にわたって接触させたものである。
【０１４４】
さらなる実施形態では、幹細胞または前駆細胞は、少なくとも１種の作用剤と約２時間〜約４時間にわたって接触させたものである。
【０１４５】
追加的なさらなる実施形態では、細胞は、骨髄、臍帯血、動員された末梢血、ホウォートンゼリー、胎盤、または胎児血から得られる。
【０１４６】
一実施形態では、本発明は、被験体における造血幹細胞および造血前駆細胞のホーミングおよび／または生着を増加させる方法であって、被験体に、ヒト造血幹細胞または造血前駆細胞を含む細胞の集団を含む組成物を投与する工程を含み、造血幹細胞または造血前駆細胞が（ｉ）１種または複数種のプロスタグランジン経路アゴニストおよび（ｉｉ）１種または複数種のグルココルチコイドとｅｘ  ｖｉｖｏで接触させたものであり、接触させた造血幹細胞または造血前駆細胞におけるＣＸＣＲ４の遺伝子発現が、接触させていない造血幹細胞または造血前駆細胞と比較して少なくとも約３０倍増加している方法を意図している。
【０１４７】
特定の実施形態では、接触させた造血幹細胞または造血前駆細胞におけるＣＸＣＲ４の遺伝子発現は、接触させていない造血幹細胞または造血前駆細胞と比較して少なくとも約４０倍増加する。
【０１４８】
ある特定の実施形態では、プロスタグランジン経路アゴニストは、ＰＧＥ２  ＥＰ２受容体またはＰＧＥ２  ＥＰ４受容体に選択的に結合する化合物を含む。
【０１４９】
さらなる特定の実施形態では、プロスタグランジン経路アゴニストは、ＰＧＥ２、ｄｍＰＧＥ２、１５（Ｓ）−１５−メチルＰＧＥ２、２０−エチルＰＧＥ２、および８−イソ−１６−シクロヘキシル−テトラノルＰＧＥ２からなる群から選択される。
【０１５０】
別の特定の実施形態では、プロスタグランジン経路アゴニストは、ＰＧＥ２、またはＰＧＥ２類似体または誘導体を含む。
【０１５１】
追加的な特定の実施形態では、プロスタグランジン経路アゴニストは、１６，１６−ジメチルＰＧＥ２を含む。
【０１５２】
ある特定の実施形態では、グルココルチコイドは、メドリゾン、アルクロメタゾン、ジプロピオン酸アルクロメタゾン、アムシノニド、ベクロメタゾン、ジプロピオン酸ベクロメタゾン、ベタメタゾン、安息香酸ベタメタゾン、吉草酸ベタメタゾン、ブデソニド、シクレソニド、クロベタゾール、酪酸クロベタゾール、プロピオン酸クロベタゾール、クロベタゾン、クロコルトロン、クロプレドノール、コルチゾール、コルチゾン、コルチバゾール、デフラザコート、デソニド、デスオキシメタゾン（ｄｅｓｏｘｉｍｅｔａｓｏｎｅ）、デスオキシコルトン、デスオキシメタゾン（ｄｅｓｏｘｙｍｅｔｈａｓｏｎｅ）、デキサメタゾン、ジフロラゾン、二酢酸ジフロラゾン、ジフルコルトロン、吉草酸ジフルコルトロン、ジフルオロコルトロン、ジフルプレドナート、フルクロロロン、フルクロロロンアセトニド、フルドロキシコルチド、フルメタゾン（ｆｌｕｍｅｔａｓｏｎｅ）、フルメタゾン（ｆｌｕｍｅｔｈａｓｏｎｅ）、ピバル酸フルメタゾン、フルニソリド、フルニソリド半水和物、フルオシノロン、フルオシノロンアセトニド、フルオシノニド、フルオコルチン、フルオコルチンブチル、フルオコルトロン、フルオロコルチゾン、フルオロメトロン、フルペロロン、フルプレドニデン、酢酸フルプレドニデン、フルプレドニゾロン、フルチカゾン、プロピオン酸フルチカゾン、ホルモコータル、ハルシノニド、ハロメタゾン、ヒドロコルチゾン、酢酸ヒドロコルチゾン、アセポン酸ヒドロコルチゾン、ヒドロコルチゾンブテプレート、酪酸ヒドロコルチゾン、ロテプレドノール、メプレドニゾン、６ａ−メチルプレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、酢酸メチルプレドニゾロン、アセポン酸メチルプレドニゾロン、モメタゾン、フロ酸モメタゾン、フロ酸モメタゾン一水和物、パラメタゾン、プレドニカルベート、プレドニゾロン、プレドニゾン、プレドニリデン、リメキソロン、チキソコルトール、トリアムシノロン、トリアムシノロンアセトニドおよびウロベタゾールからなる群から選択される。
【０１５３】
さらなるある特定の実施形態では、グルココルチコイドはメドリゾンである。
【０１５４】
特定の実施形態では、造血幹細胞または造血前駆細胞は、（ｉ）１種または複数種のプロスタグランジン経路アゴニストおよび（ｉｉ）１種または複数種のグルココルチコイドと少なくとも約１時間にわたって接触させたものである。
【０１５５】
さらなる特定の実施形態では、造血幹細胞または造血前駆細胞は、（ｉ）１種または複数種のプロスタグランジン経路アゴニストおよび（ｉｉ）１種または複数種のグルココルチコイドと約２時間〜約６時間にわたって接触させたものである。
【０１５６】
追加的な特定の実施形態では、造血幹細胞または造血前駆細胞は、（ｉ）１種または複数種のプロスタグランジン経路アゴニストおよび（ｉｉ）１種または複数種のグルココルチコイドと約２時間〜約４時間にわたって接触させたものである。
【０１５７】
別の特定の実施形態では、造血幹細胞または造血前駆細胞は、（ｉ）１種または複数種のプロスタグランジン経路アゴニストおよび（ｉｉ）１種または複数種のグルココルチコイドと約４時間にわたって接触させたものである。
【０１５８】
ある特定の実施形態では、細胞の集団が、約０．１０％未満、０．５０％未満、１．０％未満、３％未満、５％未満、１０％未満、１５％未満、２０％未満、または３０％未満のＣＤ３４＋細胞を含む。
【０１５９】
さらなる実施形態では、細胞の集団が、少なくとも約０．０１％でかつ約５０％以下のＣＤ３４＋細胞を含む。
【０１６０】
別の実施形態では、細胞の集団は、少なくとも約１％のＣＤ３４＋細胞を含む。
【０１６１】
追加的な実施形態では、細胞の集団は、少なくとも約３％のＣＤ３４＋細胞を含む。
【０１６２】
特定の実施形態では、細胞の集団は、少なくとも約５％のＣＤ３４＋細胞を含む。
【０１６３】
別の特定の実施形態では、細胞の集団は、少なくとも約１０％のＣＤ３４＋細胞を含む。
【０１６４】
さらに別の特定の実施形態では、細胞の集団は、少なくとも約２０％のＣＤ３４＋細胞を含む。
【０１６５】
なおさらに別の特定の実施形態では、細胞の集団は、少なくとも約３０％のＣＤ３４＋細胞を含む。
【０１６６】
ある特定の実施形態では、細胞の集団は、少なくとも約４０％のＣＤ３４＋細胞を含む。
【０１６７】
別のある特定の実施形態では、細胞の集団は、少なくとも約５０％のＣＤ３４＋細胞を含む。
【０１６８】
さらに別のある特定の実施形態では、細胞の集団は、少なくとも約６０％のＣＤ３４＋細胞を含む。
【０１６９】
なおさらに別のある特定の実施形態では、細胞の集団は、少なくとも約７０％のＣＤ３４＋細胞を含む。
【０１７０】
さらなる実施形態では、細胞の集団は、少なくとも約８０％のＣＤ３４＋細胞を含む。
【０１７１】
別のさらなる実施形態では、細胞の集団は、少なくとも約９０％のＣＤ３４＋細胞を含む。
【０１７２】
さらに別のさらなる実施形態では、細胞の集団は、少なくとも約９５％のＣＤ３４＋細胞を含む。
【０１７３】
追加的な実施形態では、細胞の集団をｅｘ  ｖｉｖｏで増大させない。
【０１７４】
ある特定の実施形態では、組成物は、ポイントオブケアで生成され、細胞の集団を培養せずに患者に投与される。
【０１７５】
さらなる実施形態では、組成物は、洗浄され、１種または複数種の作用剤を実質的に含まない。
【０１７６】
別の実施形態では、細胞の集団は、骨髄、胎児肝臓、胎児血、胎盤、胎盤血、臍帯血、または動員された末梢血から得られる。
【０１７７】
種々の上記の実施形態では、被験体は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、若年性骨髄単球性白血病、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、重症再生不良性貧血、ファンコニー貧血、発作性夜間血色素尿症（ＰＮＨ）、赤芽球ろう、先天性無巨核球性血小板減少症、重症複合免疫不全症候群（ＳＣＩＤ）、ウィスコット・アルドリッチ症候群、重症型ベータサラセミア、鎌状赤血球症、ハーラー症候群、副腎脳白質ジストロフィー、異染性白質ジストロフィー、脊髄異形成、不応性貧血、慢性骨髄単球性白血病、原因不明骨髄様化生、家族性血球貪食性リンパ組織球症、または固形腫瘍を有する。
【０１７８】
いくつかの上記の実施形態では、被験体は、乳がん、卵巣がん、脳がん、前立腺がん、肺がん、結腸がん、皮膚がん、肝がん、膵がん、または肉腫を有する。
【０１７９】
上記の実施形態のいずれかでは、被験体は、骨髄破壊または骨髄非破壊化学療法または放射線療法を受けている。
【０１８０】
特定の上記の実施形態では、被験体は骨髄ドナーである。
【０１８１】
ある特定の上記の実施形態では、細胞の集団は被験体に対して自原性（ａｕｔｏｇｅｎｅｉｃ）である。
【０１８２】
いくつかの上記の実施形態では、細胞の集団は、被験体の末梢血または骨髄から動員されたものである。
【０１８３】
種々の上記の実施形態では、細胞の集団は被験体に対して同種異系である。
【０１８４】
一実施形態では、本発明は、一部において、被験体における造血幹細胞および造血前駆細胞の再構築を増加させる方法であって、被験体に、ヒト造血幹細胞または造血前駆細胞を含む細胞の集団を含む組成物を投与する工程であって、造血幹細胞または造血前駆細胞が、細胞におけるＣＸＣＲ４遺伝子発現を増加させる１種または複数種の作用剤とｅｘ  ｖｉｖｏで接触させたものであり、接触させた造血幹細胞または造血前駆細胞におけるＣＸＣＲ４の遺伝子発現が、接触させていない造血幹細胞または造血前駆細胞と比較して少なくとも約３０倍増加する工程を含む方法を意図している。
【０１８５】
特定の実施形態では、１種または複数種の作用剤は、（ｉ）１種または複数種のプロスタグランジン経路アゴニストと、（ｉｉ）１種または複数種のグルココルチコイドとを含む。
【０１８６】
ある特定の実施形態では、プロスタグランジン経路アゴニストは、ＰＧＥ２  ＥＰ２受容体またはＰＧＥ２  ＥＰ４受容体に選択的に結合する化合物を含む。
【０１８７】
さらなる特定の実施形態では、プロスタグランジン経路アゴニストは、ＰＧＥ２、ｄｍＰＧＥ２、１５（Ｓ）−１５−メチルＰＧＥ２、２０−エチルＰＧＥ２、および８−イソ−１６−シクロヘキシル−テトラノルＰＧＥ２からなる群から選択される。
【０１８８】
別の特定の実施形態では、プロスタグランジン経路アゴニストは、ＰＧＥ２、またはＰＧＥ２類似体または誘導体を含む。
【０１８９】
追加的な特定の実施形態では、プロスタグランジン経路アゴニストは、１６，１６−ジメチルＰＧＥ２を含む。
【０１９０】
ある特定の実施形態では、グルココルチコイドは、メドリゾン、アルクロメタゾン、ジプロピオン酸アルクロメタゾン、アムシノニド、ベクロメタゾン、ジプロピオン酸ベクロメタゾン、ベタメタゾン、安息香酸ベタメタゾン、吉草酸ベタメタゾン、ブデソニド、シクレソニド、クロベタゾール、酪酸クロベタゾール、プロピオン酸クロベタゾール、クロベタゾン、クロコルトロン、クロプレドノール、コルチゾール、コルチゾン、コルチバゾール、デフラザコート、デソニド、デスオキシメタゾン（ｄｅｓｏｘｉｍｅｔａｓｏｎｅ）、デスオキシコルトン、デスオキシメタゾン（ｄｅｓｏｘｙｍｅｔｈａｓｏｎｅ）、デキサメタゾン、ジフロラゾン、二酢酸ジフロラゾン、ジフルコルトロン、吉草酸ジフルコルトロン、ジフルオロコルトロン、ジフルプレドナート、フルクロロロン、フルクロロロンアセトニド、フルドロキシコルチド、フルメタゾン（ｆｌｕｍｅｔａｓｏｎｅ）、フルメタゾン（ｆｌｕｍｅｔｈａｓｏｎｅ）、ピバル酸フルメタゾン、フルニソリド、フルニソリド半水和物、フルオシノロン、フルオシノロンアセトニド、フルオシノニド、フルオコルチン、フルオコルチンブチル、フルオコルトロン、フルオロコルチゾン、フルオロメトロン、フルペロロン、フルプレドニデン、酢酸フルプレドニデン、フルプレドニゾロン、フルチカゾン、プロピオン酸フルチカゾン、ホルモコータル、ハルシノニド、ハロメタゾン、ヒドロコルチゾン、酢酸ヒドロコルチゾン、アセポン酸ヒドロコルチゾン、ヒドロコルチゾンブテプレート、酪酸ヒドロコルチゾン、ロテプレドノール、メプレドニゾン、６ａ−メチルプレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、酢酸メチルプレドニゾロン、アセポン酸メチルプレドニゾロン、モメタゾン、フロ酸モメタゾン、フロ酸モメタゾン一水和物、パラメタゾン、プレドニカルベート、プレドニゾロン、プレドニゾン、プレドニリデン、リメキソロン、チキソコルトール、トリアムシノロン、トリアムシノロンアセトニドおよびウロベタゾールからなる群から選択される。
【０１９１】
さらなるある特定の実施形態では、グルココルチコイドはメドリゾンである。
【０１９２】
追加的なある特定の実施形態では、幹細胞または前駆細胞は、少なくとも１種の作用剤と少なくとも約１時間にわたって接触させたものである。
【０１９３】
別のある特定の実施形態では、造血幹細胞または造血前駆細胞は、少なくとも１種の作用剤と約１時間〜約２４時間にわたって接触させたものである。
【０１９４】
別のある特定の実施形態では、幹細胞または前駆細胞は、少なくとも１種の作用剤と約１時間〜約６時間にわたって接触させたものである。
【０１９５】
ある特定の実施形態では、幹細胞または前駆細胞は少なくとも１種の作用剤と約２時間〜約６時間にわたって接触させたものである。
【０１９６】
さらなる実施形態では、幹細胞または前駆細胞は少なくとも１種の作用剤と約２時間〜約４時間にわたって接触させたものである。
【０１９７】
追加的なさらなる実施形態では、細胞は、骨髄、臍帯血、動員された末梢血、ホウォートンゼリー、胎盤、または胎児血から得られる。
【０１９８】
一実施形態では、本発明は、一部において、被験体における造血幹細胞および造血前駆細胞の再構築を増加させる方法であって、被験体に、ヒト造血幹細胞または造血前駆細胞を含む細胞の集団を含む組成物を投与する工程であって、造血幹細胞または造血前駆細胞が、（ｉ）１種または複数種のプロスタグランジン経路アゴニストおよび（ｉｉ）１種または複数種のグルココルチコイドとｅｘ  ｖｉｖｏで接触させたものであり、ｂ）接触させた造血幹細胞または造血前駆細胞におけるＣＸＣＲ４の遺伝子発現が、接触させていない造血幹細胞または造血前駆細胞と比較して少なくとも約３０倍増加する工程を含む方法を意図している。
【０１９９】
特定の実施形態では、接触させた造血幹細胞または造血前駆細胞におけるＣＸＣＲ４の遺伝子発現は、接触させていない造血幹細胞または造血前駆細胞と比較して少なくとも約４０倍増加する。
【０２００】
ある特定の実施形態では、プロスタグランジン経路アゴニストは、ＰＧＥ２  ＥＰ２受容体またはＰＧＥ２  ＥＰ４受容体に選択的に結合する化合物を含む。
【０２０１】
さらなる特定の実施形態では、プロスタグランジン経路アゴニストは、ＰＧＥ２、ｄｍＰＧＥ２、１５（Ｓ）−１５−メチルＰＧＥ２、２０−エチルＰＧＥ２、および８−イソ−１６−シクロヘキシル−テトラノルＰＧＥ２からなる群から選択される。
【０２０２】
別の特定の実施形態では、プロスタグランジン経路アゴニストは、ＰＧＥ２、またはＰＧＥ２類似体または誘導体を含む。
【０２０３】
追加的な特定の実施形態では、プロスタグランジン経路アゴニストは、１６，１６−ジメチルＰＧＥ２を含む。
【０２０４】
ある特定の実施形態では、グルココルチコイドは、メドリゾン、アルクロメタゾン、ジプロピオン酸アルクロメタゾン、アムシノニド、ベクロメタゾン、ジプロピオン酸ベクロメタゾン、ベタメタゾン、安息香酸ベタメタゾン、吉草酸ベタメタゾン、ブデソニド、シクレソニド、クロベタゾール、酪酸クロベタゾール、プロピオン酸クロベタゾール、クロベタゾン、クロコルトロン、クロプレドノール、コルチゾール、コルチゾン、コルチバゾール、デフラザコート、デソニド、デスオキシメタゾン（ｄｅｓｏｘｉｍｅｔａｓｏｎｅ）、デスオキシコルトン、デスオキシメタゾン（ｄｅｓｏｘｙｍｅｔｈａｓｏｎｅ）、デキサメタゾン、ジフロラゾン、二酢酸ジフロラゾン、ジフルコルトロン、吉草酸ジフルコルトロン、ジフルオロコルトロン、ジフルプレドナート、フルクロロロン、フルクロロロンアセトニド、フルドロキシコルチド、フルメタゾン（ｆｌｕｍｅｔａｓｏｎｅ）、フルメタゾン（ｆｌｕｍｅｔｈａｓｏｎｅ）、ピバル酸フルメタゾン、フルニソリド、フルニソリド半水和物、フルオシノロン、フルオシノロンアセトニド、フルオシノニド、フルオコルチン、フルオコルチンブチル、フルオコルトロン、フルオロコルチゾン、フルオロメトロン、フルペロロン、フルプレドニデン、酢酸フルプレドニデン、フルプレドニゾロン、フルチカゾン、プロピオン酸フルチカゾン、ホルモコータル、ハルシノニド、ハロメタゾン、ヒドロコルチゾン、酢酸ヒドロコルチゾン、アセポン酸ヒドロコルチゾン、ヒドロコルチゾンブテプレート、酪酸ヒドロコルチゾン、ロテプレドノール、メプレドニゾン、６ａ−メチルプレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、酢酸メチルプレドニゾロン、アセポン酸メチルプレドニゾロン、モメタゾン、フロ酸モメタゾン、フロ酸モメタゾン一水和物、パラメタゾン、プレドニカルベート、プレドニゾロン、プレドニゾン、プレドニリデン、リメキソロン、チキソコルトール、トリアムシノロン、トリアムシノロンアセトニドおよびウロベタゾールからなる群から選択される。
【０２０５】
さらなるある特定の実施形態では、グルココルチコイドはメドリゾンである。
【０２０６】
特定の実施形態では、造血幹細胞または造血前駆細胞は、（ｉ）１種または複数種のプロスタグランジン経路アゴニストおよび（ｉｉ）１種または複数種のグルココルチコイドと少なくとも約１時間にわたって接触させたものである。
【０２０７】
さらなる特定の実施形態では、造血幹細胞または造血前駆細胞は、（ｉ）１種または複数種のプロスタグランジン経路アゴニストおよび（ｉｉ）１種または複数種のグルココルチコイドと約２時間〜約６時間にわたって接触させたものである。
【０２０８】
追加的な特定の実施形態では、造血幹細胞または造血前駆細胞は、（ｉ）１種または複数種のプロスタグランジン経路アゴニストおよび（ｉｉ）１種または複数種のグルココルチコイドと約２時間〜約４時間にわたって接触させたものである。
【０２０９】
別の特定の実施形態では、造血幹細胞または造血前駆細胞は、（ｉ）１種または複数種のプロスタグランジン経路アゴニストおよび（ｉｉ）１種または複数種のグルココルチコイドと約４時間にわたって接触させたものである。
【０２１０】
ある特定の実施形態では、細胞の集団が、約０．１０％未満、０．５０％未満、１．０％未満、３％未満、５％未満、１０％未満、１５％未満、２０％未満、または３０％未満のＣＤ３４＋細胞を含む。
【０２１１】
さらなる実施形態では、細胞の集団が、少なくとも約０．０１％でかつ約５０％以下のＣＤ３４＋細胞を含む。
【０２１２】
別の実施形態では、細胞の集団は、少なくとも約１％のＣＤ３４＋細胞を含む。
【０２１３】
追加的な実施形態では、細胞の集団は、少なくとも約３％のＣＤ３４＋細胞を含む。
【０２１４】
特定の実施形態では、細胞の集団は、少なくとも約５％のＣＤ３４＋細胞を含む。
【０２１５】
別の特定の実施形態では、細胞の集団は、少なくとも約１０％のＣＤ３４＋細胞を含む。
【０２１６】
さらに別の特定の実施形態では、細胞の集団は、少なくとも約２０％のＣＤ３４＋細胞を含む。
【０２１７】
なおさらに別の特定の実施形態では、細胞の集団は、少なくとも約３０％のＣＤ３４＋細胞を含む。
【０２１８】
ある特定の実施形態では、細胞の集団は、少なくとも約４０％のＣＤ３４＋細胞を含む。
【０２１９】
別のある特定の実施形態では、細胞の集団は、少なくとも約５０％のＣＤ３４＋細胞を含む。
【０２２０】
さらに別のある特定の実施形態では、細胞の集団は、少なくとも約６０％のＣＤ３４＋細胞を含む。
【０２２１】
なおさらに別のある特定の実施形態では、細胞の集団は、少なくとも約７０％のＣＤ３４＋細胞を含む。
【０２２２】
さらなる実施形態では、細胞の集団は、少なくとも約８０％のＣＤ３４＋細胞を含む。
【０２２３】
別のさらなる実施形態では、細胞の集団は、少なくとも約９０％のＣＤ３４＋細胞を含む。
【０２２４】
さらに別のさらなる実施形態では、細胞の集団は、少なくとも約９５％のＣＤ３４＋細胞を含む。
【０２２５】
追加的な実施形態では、細胞の集団をｅｘ  ｖｉｖｏで増大させない。
【０２２６】
ある特定の実施形態では、組成物は、ポイントオブケアで生成され、細胞の集団を培養せずに患者に投与される。
【０２２７】
さらなる実施形態では、組成物は、洗浄され、１種または複数種の作用剤を実質的に含まない。
【０２２８】
別の実施形態では、細胞の集団は、骨髄、胎児肝臓、胎児血、胎盤、胎盤血、臍帯血、または動員された末梢血から得られる。
【０２２９】
種々の実施形態では、細胞の集団は、１つまたは複数の臍帯血ユニット（ｃｏｒｄ  ｂｌｏｏｄ  ｕｎｉｔ）を含む。
【０２３０】
種々の上記の実施形態では、被験体は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、若年性骨髄単球性白血病、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、重症再生不良性貧血、ファンコニー貧血、発作性夜間血色素尿症（ＰＮＨ）、赤芽球ろう、先天性無巨核球性血小板減少症、重症複合免疫不全症候群（ＳＣＩＤ）、ウィスコット・アルドリッチ症候群、重症型ベータサラセミア、鎌状赤血球症、ハーラー症候群、副腎脳白質ジストロフィー、異染性白質ジストロフィー、脊髄異形成、不応性貧血、慢性骨髄単球性白血病、原因不明骨髄様化生、家族性血球貪食性リンパ組織球症、または固形腫瘍を有する。
【０２３１】
いくつかの上記の実施形態では、被験体は、乳がん、卵巣がん、脳がん、前立腺がん、肺がん、結腸がん、皮膚がん、肝がん、膵がん、または肉腫を有する。
【０２３２】
上記の実施形態のいずれかでは、被験体は、骨髄破壊または骨髄非破壊化学療法または放射線療法を受けている。
【０２３３】
特定の上記の実施形態では、被験体は骨髄ドナーである。
【０２３４】
ある特定の上記の実施形態では、細胞の集団は被験体に対して自原性である。
【０２３５】
いくつかの上記の実施形態では、細胞の集団は、被験体の末梢血または骨髄から動員されたものである。
【０２３６】
種々の上記の実施形態では、細胞の集団は被験体に対して同種異系である。
本発明の実施形態において、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
ヒト造血幹細胞または造血前駆細胞であって、
ａ）該細胞におけるＣＸＣＲ４遺伝子発現を増加させる１種または複数種の作用剤とｅｘ  ｖｉｖｏで接触させた造血幹細胞または造血前駆細胞と、
ｂ）該接触させた造血幹細胞または造血前駆細胞におけるＣＸＣＲ４の遺伝子発現が、接触させていない造血幹細胞または造血前駆細胞と比較して少なくとも約３０倍増加することと
を含むヒト造血幹細胞または造血前駆細胞。
（項目２）
前記１種または複数種の作用剤が、（ｉ）１種または複数種のプロスタグランジン経路アゴニストと、（ｉｉ）１種または複数種のグルココルチコイドとを含む、項目１に記載の造血幹細胞または造血前駆細胞。
（項目３）
前記プロスタグランジン経路アゴニストが、ＰＧＥ２  ＥＰ２受容体またはＰＧＥ２  ＥＰ４受容体に選択的に結合する化合物を含む、項目２に記載の造血幹細胞または造血前駆細胞。
（項目４）
前記プロスタグランジン経路アゴニストが、ＰＧＥ２、ｄｍＰＧＥ２、１５（Ｓ）−１５−メチルＰＧＥ２、２０−エチルＰＧＥ２、および８−イソ−１６−シクロヘキシル−テトラノルＰＧＥ２からなる群から選択される、項目２に記載の造血幹細胞または造血前駆細胞。
（項目５）
前記プロスタグランジン経路アゴニストが、ＰＧＥ２、またはＰＧＥ２類似体または誘導体を含む、項目２に記載の造血幹細胞または造血前駆細胞。
（項目６）
前記プロスタグランジン経路アゴニストが、１６，１６−ジメチルＰＧＥ２を含む、項目２に記載の造血幹細胞または造血前駆細胞。
（項目７）
前記グルココルチコイドが、メドリゾン、アルクロメタゾン、ジプロピオン酸アルクロメタゾン、アムシノニド、ベクロメタゾン、ジプロピオン酸ベクロメタゾン、ベタメタゾン、安息香酸ベタメタゾン、吉草酸ベタメタゾン、ブデソニド、シクレソニド、クロベタゾール、酪酸クロベタゾール、プロピオン酸クロベタゾール、クロベタゾン、クロコルトロン、クロプレドノール、コルチゾール、コルチゾン、コルチバゾール、デフラザコート、デソニド、デスオキシメタゾン（ｄｅｓｏｘｉｍｅｔａｓｏｎｅ）、デスオキシコルトン、デスオキシメタゾン（ｄｅｓｏｘｙｍｅｔｈａｓｏｎｅ）、デキサメタゾン、ジフロラゾン、二酢酸ジフロラゾン、ジフルコルトロン、吉草酸ジフルコルトロン、ジフルオロコルトロン、ジフルプレドナート、フルクロロロン、フルクロロロンアセトニド、フルドロキシコルチド、フルメタゾン（ｆｌｕｍｅｔａｓｏｎｅ）、フルメタゾン（ｆｌｕｍｅｔｈａｓｏｎｅ）、ピバル酸フルメタゾン、フルニソリド、フルニソリド半水和物、フルオシノロン、フルオシノロンアセトニド、フルオシノニド、フルオコルチン、フルオコルチンブチル、フルオコルトロン、フルオロコルチゾン、フルオロメトロン、フルペロロン、フルプレドニデン、酢酸フルプレドニデン、フルプレドニゾロン、フルチカゾン、プロピオン酸フルチカゾン、ホルモコータル、ハルシノニド、ハロメタゾン、ヒドロコルチゾン、酢酸ヒドロコルチゾン、アセポン酸ヒドロコルチゾン、ヒドロコルチゾンブテプレート、酪酸ヒドロコルチゾン、ロテプレドノール、メプレドニゾン、６ａ−メチルプレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、酢酸メチルプレドニゾロン、アセポン酸メチルプレドニゾロン、モメタゾン、フロ酸モメタゾン、フロ酸モメタゾン一水和物、パラメタゾン、プレドニカルベート、プレドニゾロン、プレドニゾン、プレドニリデン、リメキソロン、チキソコルトール、トリアムシノロン、トリアムシノロンアセトニドおよびウロベタゾールからなる群から選択される、項目２に記載の造血幹細胞または造血前駆細胞。
（項目８）
前記グルココルチコイドが、メドリゾンである、項目２に記載の造血幹細胞または造血前駆細胞。
（項目９）
少なくとも１種の作用剤と少なくとも約１時間にわたって接触させたものである、項目１に記載の造血幹細胞または造血前駆細胞。
（項目１０）
少なくとも１種の作用剤と約１時間〜約６時間にわたって接触させたものである、項目１に記載の造血幹細胞または造血前駆細胞。
（項目１１）
少なくとも１種の作用剤と約２時間〜約６時間にわたって接触させたものである、項目１に記載の造血幹細胞または造血前駆細胞。
（項目１２）
少なくとも１種の作用剤と約２時間〜約４時間にわたって接触させたものである、項目１に記載の造血幹細胞または造血前駆細胞。
（項目１３）
骨髄、臍帯血、動員された末梢血、ホウォートンゼリー、胎盤、または胎児血から得られる、項目１に記載の造血幹細胞または造血前駆細胞。
（項目１４）
ヒト造血幹細胞または造血前駆細胞を含む細胞の集団を含む治療用組成物であって、
ａ）該造血幹細胞または造血前駆細胞が、該ヒト造血幹細胞または造血前駆細胞におけるＣＸＣＲ４の発現を増加させる１種または複数種の作用剤とｅｘ  ｖｉｖｏで接触させたものであり、
ｂ）該接触させた造血幹細胞または造血前駆細胞におけるＣＸＣＲ４の遺伝子発現が、接触させていない造血幹細胞または造血前駆細胞と比較して少なくとも約３０倍増加する、治療用組成物。
（項目１５）
前記１種または複数種の作用剤が、（ｉ）１種または複数種のプロスタグランジン経路アゴニストと、（ｉｉ）１種または複数種のグルココルチコイドとを含む、項目１４に記載の治療用組成物。
（項目１６）
前記接触させた造血幹細胞または造血前駆細胞におけるＣＸＣＲ４の遺伝子発現が、接触させていない造血幹細胞または造血前駆細胞と比較して少なくとも約４０倍増加する、項目１４に記載の治療用組成物。
（項目１７）
前記プロスタグランジン経路アゴニストが、ＰＧＥ２  ＥＰ２受容体またはＰＧＥ２  ＥＰ４受容体に選択的に結合する化合物を含む、項目１５に記載の治療用組成物。
（項目１８）
前記プロスタグランジン経路アゴニストが、ＰＧＥ２、ｄｍＰＧＥ２、１５（Ｓ）−１５−メチルＰＧＥ２、２０−エチルＰＧＥ２、および８−イソ−１６−シクロヘキシル−テトラノルＰＧＥ２からなる群から選択される、項目１５に記載の治療用組成物。
（項目１９）
前記プロスタグランジン経路アゴニストが、ＰＧＥ２、またはＰＧＥ２類似体またはその誘導体を含む、項目１５に記載の治療用組成物。
（項目２０）
前記プロスタグランジン経路アゴニストが、１６，１６−ジメチルＰＧＥ２を含む、項目１５に記載の治療用組成物。
（項目２１）
前記グルココルチコイドが、メドリゾン、アルクロメタゾン、ジプロピオン酸アルクロメタゾン、アムシノニド、ベクロメタゾン、ジプロピオン酸ベクロメタゾン、ベタメタゾン、安息香酸ベタメタゾン、吉草酸ベタメタゾン、ブデソニド、シクレソニド、クロベタゾール、酪酸クロベタゾール、プロピオン酸クロベタゾール、クロベタゾン、クロコルトロン、クロプレドノール、コルチゾール、コルチゾン、コルチバゾール、デフラザコート、デソニド、デスオキシメタゾン（ｄｅｓｏｘｉｍｅｔａｓｏｎｅ）、デスオキシコルトン、デスオキシメタゾン（ｄｅｓｏｘｙｍｅｔｈａｓｏｎｅ）、デキサメタゾン、ジフロラゾン、二酢酸ジフロラゾン、ジフルコルトロン、吉草酸ジフルコルトロン、ジフルオロコルトロン、ジフルプレドナート、フルクロロロン、フルクロロロンアセトニド、フルドロキシコルチド、フルメタゾン（ｆｌｕｍｅｔａｓｏｎｅ）、フルメタゾン（ｆｌｕｍｅｔｈａｓｏｎｅ）、ピバル酸フルメタゾン、フルニソリド、フルニソリド半水和物、フルオシノロン、フルオシノロンアセトニド、フルオシノニド、フルオコルチン、フルオコルチンブチル、フルオコルトロン、フルオロコルチゾン、フルオロメトロン、フルペロロン、フルプレドニデン、酢酸フルプレドニデン、フルプレドニゾロン、フルチカゾン、プロピオン酸フルチカゾン、ホルモコータル、ハルシノニド、ハロメタゾン、ヒドロコルチゾン、酢酸ヒドロコルチゾン、アセポン酸ヒドロコルチゾン、ヒドロコルチゾンブテプレート、酪酸ヒドロコルチゾン、ロテプレドノール、メプレドニゾン、６ａ−メチルプレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、酢酸メチルプレドニゾロン、アセポン酸メチルプレドニゾロン、モメタゾン、フロ酸モメタゾン、フロ酸モメタゾン一水和物、パラメタゾン、プレドニカルベート、プレドニゾロン、プレドニゾン、プレドニリデン、リメキソロン、チキソコルトール、トリアムシノロン、トリアムシノロンアセトニドおよびウロベタゾールからなる群から選択される、項目１５に記載の治療用組成物。
（項目２２）
前記造血幹細胞または造血前駆細胞が、（ｉ）１種もしくは複数種のプロスタグランジン経路アゴニストまたは（ｉｉ）１種もしくは複数種のグルココルチコイドのうちの少なくとも１つと少なくとも約１時間にわたって接触させたものである、項目１４に記載の治療用組成物。
（項目２３）
前記造血幹細胞または造血前駆細胞が、（ｉ）１種または複数種のプロスタグランジン経路アゴニストおよび（ｉｉ）１種または複数種のグルココルチコイドのうちの少なくとも１つと約２時間〜約２４時間にわたって接触させたものである、項目１４に記載の治療用組成物。
（項目２４）
前記造血幹細胞または造血前駆細胞が、（ｉ）１種または複数種のプロスタグランジン経路アゴニストおよび（ｉｉ）１種または複数種のグルココルチコイドのうちの少なくとも１つと約２時間〜約６時間にわたって接触させたものである、項目１４に記載の治療用組成物。
（項目２５）
前記造血幹細胞または造血前駆細胞が、（ｉ）１種または複数種のプロスタグランジン経路アゴニストおよび（ｉｉ）１種または複数種のグルココルチコイドのうちの少なくとも１つと約４時間にわたって接触させたものである、項目１４に記載の治療用組成物。
（項目２６）
前記細胞の集団が、約０．１０％未満、０．５０％未満、１．０％未満、３％未満、５％未満、１０％未満、１５％未満、２０％未満、または３０％未満のＣＤ３４＋細胞を含む、項目１４に記載の治療用組成物。
（項目２７）
前記細胞の集団が、少なくとも約０．０１％でかつ約５０％以下のＣＤ３４＋細胞を含む、項目１４に記載の治療用組成物。
（項目２８）
前記細胞の集団が、少なくとも約１％のＣＤ３４＋細胞を含む、項目１４に記載の治療用組成物。
（項目２９）
前記細胞の集団が、少なくとも約３％のＣＤ３４＋細胞を含む、項目１４に記載の治療用組成物。
（項目３０）
前記細胞の集団が、少なくとも約５％のＣＤ３４＋細胞を含む、項目１４に記載の治療用組成物。
（項目３１）
前記細胞の集団が、少なくとも約９０％のＣＤ３４＋細胞を含む、項目１４に記載の治療用組成物。
（項目３２）
前記細胞の集団が、少なくとも約９５％のＣＤ３４＋細胞を含む、項目１４に記載の治療用組成物。
（項目３３）
前記細胞の集団をｅｘ  ｖｉｖｏで増大させない、項目１４に記載の治療用組成物。
（項目３４）
ポイントオブケアで生成され、前記細胞の集団を培養せずに患者に投与される、項目１４に記載の治療用組成物。
（項目３５）
洗浄され、前記１種または複数種の作用剤を実質的に含まない、項目１４に記載の治療用組成物。
（項目３６）
前記細胞の集団が、骨髄、胎児肝臓、胎児血、胎盤、胎盤血、臍帯血、または動員された末梢血から得られる、項目１４に記載の治療用組成物。
（項目３７）
ヒト造血幹細胞または造血前駆細胞を調製する方法であって、
ａ）該造血幹細胞または造血前駆細胞を、該細胞におけるＣＸＣＲ４遺伝子発現を増加させる１種または複数種の作用剤とｅｘ  ｖｉｖｏで接触させる工程であって、該接触させた造血幹細胞または造血前駆細胞における該ＣＸＣＲ４遺伝子発現が、接触させていない造血幹細胞または造血前駆細胞と比較して少なくとも約３０倍増加する工程を含む方法。
（項目３８）
前記１種または複数種の作用剤が、（ｉ）１種または複数種のプロスタグランジン経路アゴニストと、（ｉｉ）１種または複数種のグルココルチコイドとを含む、項目３７に記載の方法。
（項目３９）
プロスタグランジン経路アゴニストが、ＰＧＥ２  ＥＰ２受容体またはＰＧＥ２  ＥＰ４受容体に選択的に結合する化合物を含む、項目３７に記載の方法。
（項目４０）
プロスタグランジン経路アゴニストが、ＰＧＥ２、ｄｍＰＧＥ２、１５（Ｓ）−１５−メチルＰＧＥ２、２０−エチルＰＧＥ２、および８−イソ−１６−シクロヘキシル−テトラノルＰＧＥ２からなる群から選択される、項目３７に記載の方法。
（項目４１）
プロスタグランジン経路アゴニストが、ＰＧＥ２、またはＰＧＥ２類似体または誘導体を含む、項目３７に記載の方法。
（項目４２）
プロスタグランジン経路アゴニストが、１６，１６−ジメチルＰＧＥ２を含む、項目３７に記載の方法。
（項目４３）
グルココルチコイドが、メドリゾン、アルクロメタゾン、ジプロピオン酸アルクロメタゾン、アムシノニド、ベクロメタゾン、ジプロピオン酸ベクロメタゾン、ベタメタゾン、安息香酸ベタメタゾン、吉草酸ベタメタゾン、ブデソニド、シクレソニド、クロベタゾール、酪酸クロベタゾール、プロピオン酸クロベタゾール、クロベタゾン、クロコルトロン、クロプレドノール、コルチゾール、コルチゾン、コルチバゾール、デフラザコート、デソニド、デスオキシメタゾン（ｄｅｓｏｘｉｍｅｔａｓｏｎｅ）、デスオキシコルトン、デスオキシメタゾン（ｄｅｓｏｘｙｍｅｔｈａｓｏｎｅ）、デキサメタゾン、ジフロラゾン、二酢酸ジフロラゾン、ジフルコルトロン、吉草酸ジフルコルトロン、ジフルオロコルトロン、ジフルプレドナート、フルクロロロン、フルクロロロンアセトニド、フルドロキシコルチド、フルメタゾン（ｆｌｕｍｅｔａｓｏｎｅ）、フルメタゾン（ｆｌｕｍｅｔｈａｓｏｎｅ）、ピバル酸フルメタゾン、フルニソリド、フルニソリド半水和物、フルオシノロン、フルオシノロンアセトニド、フルオシノニド、フルオコルチン、フルオコルチンブチル、フルオコルトロン、フルオロコルチゾン、フルオロメトロン、フルペロロン、フルプレドニデン、酢酸フルプレドニデン、フルプレドニゾロン、フルチカゾン、プロピオン酸フルチカゾン、ホルモコータル、ハルシノニド、ハロメタゾン、ヒドロコルチゾン、酢酸ヒドロコルチゾン、アセポン酸ヒドロコルチゾン、ヒドロコルチゾンブテプレート、酪酸ヒドロコルチゾン、ロテプレドノール、メプレドニゾン、６ａ−メチルプレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、酢酸メチルプレドニゾロン、アセポン酸メチルプレドニゾロン、モメタゾン、フロ酸モメタゾン、フロ酸モメタゾン一水和物、パラメタゾン、プレドニカルベート、プレドニゾロン、プレドニゾン、プレドニリデン、リメキソロン、チキソコルトール、トリアムシノロン、トリアムシノロンアセトニドおよびウロベタゾールからなる群から選択される、項目３７に記載の方法。
（項目４４）
グルココルチコイドが、メドリゾンである、項目３７に記載の方法。
（項目４５）
前記造血幹細胞または造血前駆細胞が、少なくとも１種の作用剤と少なくとも約１時間にわたって接触させたものである、項目３７に記載の方法。
（項目４６）
前記造血幹細胞または造血前駆細胞が、少なくとも１種の作用剤と約１時間〜約２４時間にわたって接触させたものである、項目３７に記載の方法。
（項目４７）
前記造血幹細胞または造血前駆細胞が、少なくとも１種の作用剤と約２時間〜約６時間にわたって接触させたものである、項目３７に記載の方法。
（項目４８）
前記造血幹細胞または造血前駆細胞が、少なくとも１種の作用剤と約２時間〜約４時間にわたって接触させたものである、項目３７に記載の方法。
（項目４９）
前記造血幹細胞または造血前駆細胞が、骨髄、臍帯血、動員された末梢血、ホウォートンゼリー、胎盤、または胎児血から得られる、項目３７に記載の方法。
（項目５０）
治療用組成物を調製する方法であって、
造血幹細胞または造血前駆細胞を（ｉ）１種または複数種のプロスタグランジン経路アゴニストおよび（ｉｉ）１種または複数種のグルココルチコイドとｅｘ  ｖｉｖｏで接触させる工程であって、該接触させた造血幹細胞または造血前駆細胞におけるＣＸＣＲ４遺伝子発現が、接触させていない造血幹細胞または造血前駆細胞と比較して少なくとも約３０倍増加する工程を含む方法。
（項目５１）
前記接触させた造血幹細胞または造血前駆細胞におけるＣＸＣＲ４の遺伝子発現が、接触させていない造血幹細胞または造血前駆細胞と比較して少なくとも約４０倍増加する、項目５０に記載の方法。
（項目５２）
前記プロスタグランジン経路アゴニストが、ＰＧＥ２  ＥＰ２受容体またはＰＧＥ２  ＥＰ４受容体に選択的に結合する化合物を含む、項目５０に記載の方法。
（項目５３）
前記プロスタグランジン経路アゴニストが、ＰＧＥ２、ｄｍＰＧＥ２、１５（Ｓ）−１５−メチルＰＧＥ２、２０−エチルＰＧＥ２、および８−イソ−１６−シクロヘキシル−テトラノルＰＧＥ２からなる群から選択される、項目５０に記載の方法。
（項目５４）
前記プロスタグランジン経路アゴニストが、ＰＧＥ２、またはＰＧＥ２類似体またはその誘導体を含む、項目５０に記載の方法。
（項目５５）
前記プロスタグランジン経路アゴニストが、１６，１６−ジメチルＰＧＥ２を含む、項目５０に記載の方法。
（項目５６）
前記グルココルチコイドが、メドリゾン、アルクロメタゾン、ジプロピオン酸アルクロメタゾン、アムシノニド、ベクロメタゾン、ジプロピオン酸ベクロメタゾン、ベタメタゾン、安息香酸ベタメタゾン、吉草酸ベタメタゾン、ブデソニド、シクレソニド、クロベタゾール、酪酸クロベタゾール、プロピオン酸クロベタゾール、クロベタゾン、クロコルトロン、クロプレドノール、コルチゾール、コルチゾン、コルチバゾール、デフラザコート、デソニド、デスオキシメタゾン（ｄｅｓｏｘｉｍｅｔａｓｏｎｅ）、デスオキシコルトン、デスオキシメタゾン（ｄｅｓｏｘｙｍｅｔｈａｓｏｎｅ）、デキサメタゾン、ジフロラゾン、二酢酸ジフロラゾン、ジフルコルトロン、吉草酸ジフルコルトロン、ジフルオロコルトロン、ジフルプレドナート、フルクロロロン、フルクロロロンアセトニド、フルドロキシコルチド、フルメタゾン（ｆｌｕｍｅｔａｓｏｎｅ）、フルメタゾン（ｆｌｕｍｅｔｈａｓｏｎｅ）、ピバル酸フルメタゾン、フルニソリド、フルニソリド半水和物、フルオシノロン、フルオシノロンアセトニド、フルオシノニド、フルオコルチン、フルオコルチンブチル、フルオコルトロン、フルオロコルチゾン、フルオロメトロン、フルペロロン、フルプレドニデン、酢酸フルプレドニデン、フルプレドニゾロン、フルチカゾン、プロピオン酸フルチカゾン、ホルモコータル、ハルシノニド、ハロメタゾン、ヒドロコルチゾン、酢酸ヒドロコルチゾン、アセポン酸ヒドロコルチゾン、ヒドロコルチゾンブテプレート、酪酸ヒドロコルチゾン、ロテプレドノール、メプレドニゾン、６ａ−メチルプレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、酢酸メチルプレドニゾロン、アセポン酸メチルプレドニゾロン、モメタゾン、フロ酸モメタゾン、フロ酸モメタゾン一水和物、パラメタゾン、プレドニカルベート、プレドニゾロン、プレドニゾン、プレドニリデン、リメキソロン、チキソコルトール、トリアムシノロン、トリアムシノロンアセトニドおよびウロベタゾールからなる群から選択される、項目５０に記載の方法。
（項目５７）
前記造血幹細胞または造血前駆細胞が、（ｉ）１種または複数種のプロスタグランジン経路アゴニストおよび（ｉｉ）１種または複数種のグルココルチコイドと少なくとも約１時間にわたって接触させたものである、項目５０に記載の方法。
（項目５８）
前記造血幹細胞または造血前駆細胞が、（ｉ）１種または複数種のプロスタグランジン経路アゴニストおよび（ｉｉ）１種または複数種のグルココルチコイドと約２時間〜約６時間にわたって接触させたものである、項目５０に記載の方法。
（項目５９）
前記造血幹細胞または造血前駆細胞が、（ｉ）１種または複数種のプロスタグランジン経路アゴニストおよび（ｉｉ）１種または複数種のグルココルチコイドと約２時間〜約４時間にわたって接触させたものである、項目５０に記載の方法。
（項目６０）
前記造血幹細胞または造血前駆細胞が、（ｉ）１種または複数種のプロスタグランジン経路アゴニストおよび（ｉｉ）１種または複数種のグルココルチコイドと約４時間にわたって接触させたものである、項目５０に記載の方法。
（項目６１）
細胞の集団が、約０．１０％未満、０．５０％未満、１．０％未満、３％未満、５％未満、１０％未満、１５％未満、２０％未満、または３０％未満のＣＤ３４＋細胞を含む、項目５０に記載の方法。
（項目６２）
細胞の集団が、少なくとも約０．０１％でかつ約５０％以下のＣＤ３４＋細胞を含む、項目５０に記載の方法。
（項目６３）
細胞の集団が、少なくとも約１％のＣＤ３４＋細胞を含む、項目５０に記載の方法。
（項目６４）
細胞の集団が、少なくとも約３％のＣＤ３４＋細胞を含む、項目５０に記載の方法。
（項目６５）
細胞の集団が、少なくとも約５％のＣＤ３４＋細胞を含む、項目５０に記載の方法。
（項目６６）
細胞の集団をｅｘ  ｖｉｖｏで増大させない、項目５０に記載の方法。
（項目６７）
前記組成物が、ポイントオブケアで生成され、細胞の集団を培養せずに患者に投与される、項目５０に記載の方法。
（項目６８）
前記組成物を洗浄し、それが前記（ｉ）１種または複数種のプロスタグランジン経路アゴニストおよび（ｉｉ）１種または複数種のグルココルチコイドを実質的に含まない、項目５０に記載の方法。
（項目６９）
細胞の集団が、骨髄、胎児肝臓、胎児血、胎盤、胎盤血、臍帯血、または動員された末梢血から得られる、項目５０に記載の方法。
（項目７０）
細胞治療を必要とする被験体を処置する方法であって、項目１に記載のヒト造血幹細胞または造血前駆細胞を該被験体に投与する工程を含む方法。
（項目７１）
前記被験体が、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、若年性骨髄単球性白血病、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、重症再生不良性貧血、ファンコニー貧血、発作性夜間血色素尿症（ＰＮＨ）、赤芽球ろう、先天性無巨核球性血小板減少症、重症複合免疫不全症候群（ＳＣＩＤ）、ウィスコット・アルドリッチ症候群、重症型ベータサラセミア、鎌状赤血球症、ハーラー症候群、副腎脳白質ジストロフィー、異染性白質ジストロフィー、脊髄異形成、不応性貧血、慢性骨髄単球性白血病、原因不明骨髄様化生、家族性血球貪食性リンパ組織球症、固形腫瘍、慢性肉芽腫性疾患、ムコ多糖症、またはダイヤモンド・ブラックファンを有する、項目７０に記載の方法。
（項目７２）
前記被験体が、乳がん、卵巣がん、脳がん、前立腺がん、肺がん、結腸がん、皮膚がん、肝がん、膵がん、または肉腫を有する、項目７０に記載の方法。
（項目７３）
前記被験体が、骨髄破壊または骨髄非破壊化学療法または放射線療法を受けている、項目７０に記載の方法。
（項目７４）
前記被験体が、骨髄ドナーである、項目７０に記載の方法。
（項目７５）
前記被験体が虚血組織または虚血による損傷を受けた組織を有する、項目７０に記載の方法。
（項目７６）
前記被験体が虚血組織または虚血による損傷を受けた組織と関連した少なくとも１つの症状を有する、項目７０に記載の方法。
（項目７７）
前記虚血が、急性冠状動脈症候群、急性肺傷害（ＡＬＩ）、急性心筋梗塞（ＡＭＩ）、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、動脈閉塞性疾患、動脈硬化症、関節軟骨欠損、無菌性全身性炎症、アテローム硬化性心血管疾患、自己免疫疾患、骨折、骨折、脳浮腫、脳低灌流、バージャー病、熱傷、がん、心血管疾患、軟骨損傷、脳梗塞、脳虚血、脳卒中、脳血管疾患、化学療法誘発性ニューロパチー、慢性感染、慢性腸間膜虚血、跛行、うっ血性心不全、結合組織損傷、挫傷、冠動脈疾患（ＣＡＤ）、重症肢虚血（ＣＬＩ）、クローン病、深部静脈血栓症、深部創傷、潰瘍治癒の遅延、創傷治癒の遅延、糖尿病（Ｉ型およびＩＩ型）、糖尿病性ニューロパチー、糖尿病誘発性虚血、播種性血管内凝固（ＤＩＣ）、塞栓性脳虚血、移植片対宿主病、遺伝性出血性毛細血管拡張症、虚血性血管疾患、高酸素傷害、低酸素症、炎症、炎症性腸疾患、炎症性疾患、傷害を受けた腱、間欠性跛行、腸管虚血、虚血、虚血性脳疾患、虚血性心疾患、虚血性末梢血管疾患、虚血胎盤、虚血性腎疾患、虚血性血管疾患、虚血再灌流傷害、裂傷、左主冠状動脈疾患、肢虚血、下肢虚血、心筋梗塞、心筋虚血、臓器虚血、変形性関節症、骨粗鬆症、骨肉腫、パーキンソン病、末梢動脈性疾患（ＰＡＤ）、末梢動脈疾患、末梢性虚血、末梢性ニューロパチー、末梢血管疾患、前がん、肺水腫、肺塞栓症、リモデリング障害、腎臓虚血、網膜虚血、網膜症、敗血症、皮膚潰瘍、実質臓器移植、脊髄傷害、卒中、軟骨下骨嚢胞、血栓症、血栓性脳虚血、組織虚血、一過性脳虚血発作（ＴＩＡ）、外傷性脳傷害、潰瘍性大腸炎、腎臓の血管疾患、血管の炎症性の状態、フォンヒッペル・リンダウ症候群、および組織または臓器の創傷に関連する、項目７５または７６に記載の方法。
（項目７８）
被験体における造血幹細胞および造血前駆細胞のホーミングおよび／または生着を増加させる方法であって、該被験体に、ヒト造血幹細胞または造血前駆細胞を含む細胞の集団を含む組成物を投与する工程であって、
ａ）該造血幹細胞または造血前駆細胞が、該細胞におけるＣＸＣＲ４遺伝子発現を増加させる１種または複数種の作用剤とｅｘ  ｖｉｖｏで接触させたものであり、
ｂ）該接触させた造血幹細胞または造血前駆細胞におけるＣＸＣＲ４の遺伝子発現が、接触させていない造血幹細胞または造血前駆細胞と比較して少なくとも約３０倍増加する工程を含む方法。
（項目７９）
前記１種または複数種の作用剤が、（ｉ）１種または複数種のプロスタグランジン経路アゴニストと、（ｉｉ）１種または複数種のグルココルチコイドとを含む、項目７８に記載の方法。
（項目８０）
プロスタグランジン経路アゴニストが、ＰＧＥ２  ＥＰ２受容体またはＰＧＥ２  ＥＰ４受容体に選択的に結合する化合物を含む、項目７８に記載の方法。
（項目８１）
プロスタグランジン経路アゴニストが、ＰＧＥ２、ｄｍＰＧＥ２、１５（Ｓ）−１５−メチルＰＧＥ２、２０−エチルＰＧＥ２、および８−イソ−１６−シクロヘキシル−テトラノルＰＧＥ２からなる群から選択される、項目７８に記載の方法。
（項目８２）
プロスタグランジン経路アゴニストが、ＰＧＥ２、またはＰＧＥ２類似体または誘導体を含む、項目７８に記載の方法。
（項目８３）
プロスタグランジン経路アゴニストが、１６，１６−ジメチルＰＧＥ２を含む、項目７８に記載の方法。
（項目８４）
グルココルチコイドが、メドリゾン、アルクロメタゾン、ジプロピオン酸アルクロメタゾン、アムシノニド、ベクロメタゾン、ジプロピオン酸ベクロメタゾン、ベタメタゾン、安息香酸ベタメタゾン、吉草酸ベタメタゾン、ブデソニド、シクレソニド、クロベタゾール、酪酸クロベタゾール、プロピオン酸クロベタゾール、クロベタゾン、クロコルトロン、クロプレドノール、コルチゾール、コルチゾン、コルチバゾール、デフラザコート、デソニド、デスオキシメタゾン（ｄｅｓｏｘｉｍｅｔａｓｏｎｅ）、デスオキシコルトン、デスオキシメタゾン（ｄｅｓｏｘｙｍｅｔｈａｓｏｎｅ）、デキサメタゾン、ジフロラゾン、二酢酸ジフロラゾン、ジフルコルトロン、吉草酸ジフルコルトロン、ジフルオロコルトロン、ジフルプレドナート、フルクロロロン、フルクロロロンアセトニド、フルドロキシコルチド、フルメタゾン（ｆｌｕｍｅｔａｓｏｎｅ）、フルメタゾン（ｆｌｕｍｅｔｈａｓｏｎｅ）、ピバル酸フルメタゾン、フルニソリド、フルニソリド半水和物、フルオシノロン、フルオシノロンアセトニド、フルオシノニド、フルオコルチン、フルオコルチンブチル、フルオコルトロン、フルオロコルチゾン、フルオロメトロン、フルペロロン、フルプレドニデン、酢酸フルプレドニデン、フルプレドニゾロン、フルチカゾン、プロピオン酸フルチカゾン、ホルモコータル、ハルシノニド、ハロメタゾン、ヒドロコルチゾン、酢酸ヒドロコルチゾン、アセポン酸ヒドロコルチゾン、ヒドロコルチゾンブテプレート、酪酸ヒドロコルチゾン、ロテプレドノール、メプレドニゾン、６ａ−メチルプレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、酢酸メチルプレドニゾロン、アセポン酸メチルプレドニゾロン、モメタゾン、フロ酸モメタゾン、フロ酸モメタゾン一水和物、パラメタゾン、プレドニカルベート、プレドニゾロン、プレドニゾン、プレドニリデン、リメキソロン、チキソコルトール、トリアムシノロン、トリアムシノロンアセトニドおよびウロベタゾールからなる群から選択される、項目７８に記載の方法。
（項目８５）
グルココルチコイドが、メドリゾンである、項目７８に記載の方法。
（項目８６）
前記幹細胞または前駆細胞が、少なくとも１種の作用剤と少なくとも約１時間にわたって接触させたものである、項目７８に記載の方法。
（項目８７）
前記幹細胞または前駆細胞が、少なくとも１種の作用剤と約１時間〜約２４時間にわたって接触させたものである、項目７８に記載の方法。
（項目８８）
前記幹細胞または前駆細胞が、少なくとも１種の作用剤と約２時間〜約６時間にわたって接触させたものである、項目７８に記載の方法。
（項目８９）
前記幹細胞または前駆細胞が、少なくとも１種の作用剤と約２時間〜約４時間にわたって接触させたものである、項目７８に記載の方法。
（項目９０）
前記細胞が、骨髄、臍帯血、動員された末梢血、ホウォートンゼリー、胎盤、または胎児血から得られる、項目７８に記載の方法。
（項目９１）
被験体における造血幹細胞および造血前駆細胞のホーミングおよび／または生着を増加させる方法であって、該被験体に、ヒト造血幹細胞または造血前駆細胞を含む細胞の集団を含む組成物を投与する工程であって、
ａ）該造血幹細胞または造血前駆細胞が、（ｉ）１種または複数種のプロスタグランジン経路アゴニストおよび（ｉｉ）１種または複数種のグルココルチコイドとｅｘ  ｖｉｖｏで接触させたものであり、
ｂ）該接触させた造血幹細胞または造血前駆細胞におけるＣＸＣＲ４の遺伝子発現が、接触させていない造血幹細胞または造血前駆細胞と比較して少なくとも約３０倍増加する工程を含む方法。
（項目９２）
前記接触させた造血幹細胞または造血前駆細胞におけるＣＸＣＲ４の遺伝子発現が、接触させていない造血幹細胞または造血前駆細胞と比較して少なくとも約４０倍増加する、項目９１に記載の方法。
（項目９３）
前記プロスタグランジン経路アゴニストが、ＰＧＥ２  ＥＰ２受容体またはＰＧＥ２  ＥＰ４受容体に選択的に結合する化合物を含む、項目９１に記載の方法。
（項目９４）
前記プロスタグランジン経路アゴニストが、ＰＧＥ２、ｄｍＰＧＥ２、１５（Ｓ）−１５−メチルＰＧＥ２、２０−エチルＰＧＥ２、および８−イソ−１６−シクロヘキシル−テトラノルＰＧＥ２からなる群から選択される、項目９１に記載の方法。
（項目９５）
前記プロスタグランジン経路アゴニストが、ＰＧＥ２、またはＰＧＥ２類似体またはその誘導体を含む、項目９１に記載の方法。
（項目９６）
前記プロスタグランジン経路アゴニストが、１６，１６−ジメチルＰＧＥ２を含む、項目９１に記載の方法。
（項目９７）
前記グルココルチコイドが、メドリゾン、アルクロメタゾン、ジプロピオン酸アルクロメタゾン、アムシノニド、ベクロメタゾン、ジプロピオン酸ベクロメタゾン、ベタメタゾン、安息香酸ベタメタゾン、吉草酸ベタメタゾン、ブデソニド、シクレソニド、クロベタゾール、酪酸クロベタゾール、プロピオン酸クロベタゾール、クロベタゾン、クロコルトロン、クロプレドノール、コルチゾール、コルチゾン、コルチバゾール、デフラザコート、デソニド、デスオキシメタゾン（ｄｅｓｏｘｉｍｅｔａｓｏｎｅ）、デスオキシコルトン、デスオキシメタゾン（ｄｅｓｏｘｙｍｅｔｈａｓｏｎｅ）、デキサメタゾン、ジフロラゾン、二酢酸ジフロラゾン、ジフルコルトロン、吉草酸ジフルコルトロン、ジフルオロコルトロン、ジフルプレドナート、フルクロロロン、フルクロロロンアセトニド、フルドロキシコルチド、フルメタゾン（ｆｌｕｍｅｔａｓｏｎｅ）、フルメタゾン（ｆｌｕｍｅｔｈａｓｏｎｅ）、ピバル酸フルメタゾン、フルニソリド、フルニソリド半水和物、フルオシノロン、フルオシノロンアセトニド、フルオシノニド、フルオコルチン、フルオコルチンブチル、フルオコルトロン、フルオロコルチゾン、フルオロメトロン、フルペロロン、フルプレドニデン、酢酸フルプレドニデン、フルプレドニゾロン、フルチカゾン、プロピオン酸フルチカゾン、ホルモコータル、ハルシノニド、ハロメタゾン、ヒドロコルチゾン、酢酸ヒドロコルチゾン、アセポン酸ヒドロコルチゾン、ヒドロコルチゾンブテプレート、酪酸ヒドロコルチゾン、ロテプレドノール、メプレドニゾン、６ａ−メチルプレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、酢酸メチルプレドニゾロン、アセポン酸メチルプレドニゾロン、モメタゾン、フロ酸モメタゾン、フロ酸モメタゾン一水和物、パラメタゾン、プレドニカルベート、プレドニゾロン、プレドニゾン、プレドニリデン、リメキソロン、チキソコルトール、トリアムシノロン、トリアムシノロンアセトニドおよびウロベタゾールからなる群から選択される、項目９１に記載の方法。
（項目９８）
前記造血幹細胞または造血前駆細胞が、（ｉ）１種または複数種のプロスタグランジン経路アゴニストおよび（ｉｉ）１種または複数種のグルココルチコイドと少なくとも約１時間にわたって接触させたものである、項目９１に記載の方法。
（項目９９）
前記造血幹細胞または造血前駆細胞が、（ｉ）１種または複数種のプロスタグランジン経路アゴニストおよび（ｉｉ）１種または複数種のグルココルチコイドと約２時間〜約６時間にわたって接触させたものである、項目９１に記載の方法。
（項目１００）
前記造血幹細胞または造血前駆細胞が、（ｉ）１種または複数種のプロスタグランジン経路アゴニストおよび（ｉｉ）１種または複数種のグルココルチコイドと約２時間〜約４時間にわたって接触させたものである、項目９１に記載の方法。
（項目１０１）
前記造血幹細胞または造血前駆細胞が、（ｉ）１種または複数種のプロスタグランジン経路アゴニストおよび（ｉｉ）１種または複数種のグルココルチコイドと約４時間にわたって接触させたものである、項目９１に記載の方法。
（項目１０２）
前記細胞の集団が、約０．１０％未満、０．５０％未満、１．０％未満、３％未満、５％未満、１０％未満、１５％未満、２０％未満、または３０％未満のＣＤ３４＋細胞を含む、項目９１に記載の方法。
（項目１０３）
前記細胞の集団が、少なくとも約０．０１％でかつ約５０％以下のＣＤ３４＋細胞を含む、項目９１に記載の方法。
（項目１０４）
前記細胞の集団が、少なくとも約１％のＣＤ３４＋細胞を含む、項目９１に記載の方法。
（項目１０５）
前記細胞の集団が、少なくとも約３％のＣＤ３４＋細胞を含む、項目９１に記載の方法。
（項目１０６）
前記細胞の集団が、少なくとも約５％のＣＤ３４＋細胞を含む、項目９１に記載の方法。
（項目１０７）
前記細胞の集団が、少なくとも約９０％のＣＤ３４＋細胞を含む、項目９１に記載の組成物。
（項目１０８）
前記細胞の集団が、少なくとも約９５％のＣＤ３４＋細胞を含む、項目９１に記載の組成物。
（項目１０９）
前記細胞の集団をｅｘ  ｖｉｖｏで増大させない、項目９１に記載の方法。
（項目１１０）
前記組成物が、ポイントオブケアで生成され、前記細胞の集団を培養せずに患者に投与される、項目９１に記載の方法。
（項目１１１）
前記組成物が、洗浄され、前記１種または複数種の作用剤を実質的に含まない、項目９１に記載の方法。
（項目１１２）
前記細胞の集団が、骨髄、胎児肝臓、胎児血、胎盤、胎盤血、臍帯血、または動員された末梢血から得られる、項目９１に記載の方法。
（項目１１３）
前記被験体が、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、若年性骨髄単球性白血病、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、重症再生不良性貧血、ファンコニー貧血、発作性夜間血色素尿症（ＰＮＨ）、赤芽球ろう、先天性無巨核球性血小板減少症、重症複合免疫不全症候群（ＳＣＩＤ）、ウィスコット・アルドリッチ症候群、重症型ベータサラセミア、鎌状赤血球症、ハーラー症候群、副腎脳白質ジストロフィー、異染性白質ジストロフィー、脊髄異形成、不応性貧血、慢性骨髄単球性白血病、原因不明骨髄様化生、家族性血球貪食性リンパ組織球症、または固形腫瘍を有する、項目７８または項目９１に記載の方法。
（項目１１４）
前記被験体が、乳がん、卵巣がん、脳がん、前立腺がん、肺がん、結腸がん、皮膚がん、肝がん、膵がん、または肉腫を有する、項目７８または項目９１に記載の方法。
（項目１１５）
前記被験体が、骨髄破壊または骨髄非破壊化学療法または放射線療法を受けている、項目７８または項目９１に記載の方法。
（項目１１６）
前記被験体が、骨髄ドナーである、項目７８または項目９１に記載の方法。
（項目１１７）
前記細胞の集団が、前記被験体に対して自原性である、項目７８または項目９１に記載の方法。
（項目１１８）
前記細胞の集団が、前記被験体の末梢血または骨髄から動員される、項目７８または項目９１に記載の方法。
（項目１１９）
前記細胞の集団が、前記被験体に対して同種異系である、項目７８または項目９１に記載の方法。
（項目１２０）
被験体における造血幹細胞および造血前駆細胞の再構築を増加させる方法であって、該被験体に、ヒト造血幹細胞または造血前駆細胞を含む細胞の集団を含む組成物を投与する工程であって、
ａ）該造血幹細胞または造血前駆細胞が、該細胞におけるＣＸＣＲ４遺伝子発現を増加させる１種または複数種の作用剤とｅｘ  ｖｉｖｏで接触させたものであり、
ｂ）該接触させた造血幹細胞または造血前駆細胞におけるＣＸＣＲ４の遺伝子発現が、接触させていない造血幹細胞または造血前駆細胞と比較して少なくとも約３０倍増加する工程を含む方法。
（項目１２１）
前記１種または複数種の作用剤が、（ｉ）１種または複数種のプロスタグランジン経路アゴニストと、（ｉｉ）１種または複数種のグルココルチコイドとを含む、項目１２０に記載の方法。
（項目１２２）
前記プロスタグランジン経路アゴニストが、ＰＧＥ２  ＥＰ２受容体またはＰＧＥ２  ＥＰ４受容体に選択的に結合する化合物を含む、項目１２１に記載の方法。
（項目１２３）
前記プロスタグランジン経路アゴニストが、ＰＧＥ２、ｄｍＰＧＥ２、１５（Ｓ）−１５−メチルＰＧＥ２、２０−エチルＰＧＥ２、および８−イソ−１６−シクロヘキシル−テトラノルＰＧＥ２からなる群から選択される、項目１２１に記載の方法。
（項目１２４）
前記プロスタグランジン経路アゴニストが、ＰＧＥ２、またはＰＧＥ２類似体または誘導体を含む、項目１２１に記載の方法。
（項目１２５）
前記プロスタグランジン経路アゴニストが、１６，１６−ジメチルＰＧＥ２を含む、項目１２１に記載の方法。
（項目１２６）
前記グルココルチコイドが、メドリゾン、アルクロメタゾン、ジプロピオン酸アルクロメタゾン、アムシノニド、ベクロメタゾン、ジプロピオン酸ベクロメタゾン、ベタメタゾン、安息香酸ベタメタゾン、吉草酸ベタメタゾン、ブデソニド、シクレソニド、クロベタゾール、酪酸クロベタゾール、プロピオン酸クロベタゾール、クロベタゾン、クロコルトロン、クロプレドノール、コルチゾール、コルチゾン、コルチバゾール、デフラザコート、デソニド、デスオキシメタゾン（ｄｅｓｏｘｉｍｅｔａｓｏｎｅ）、デスオキシコルトン、デスオキシメタゾン（ｄｅｓｏｘｙｍｅｔｈａｓｏｎｅ）、デキサメタゾン、ジフロラゾン、二酢酸ジフロラゾン、ジフルコルトロン、吉草酸ジフルコルトロン、ジフルオロコルトロン、ジフルプレドナート、フルクロロロン、フルクロロロンアセトニド、フルドロキシコルチド、フルメタゾン（ｆｌｕｍｅｔａｓｏｎｅ）、フルメタゾン（ｆｌｕｍｅｔｈａｓｏｎｅ）、ピバル酸フルメタゾン、フルニソリド、フルニソリド半水和物、フルオシノロン、フルオシノロンアセトニド、フルオシノニド、フルオコルチン、フルオコルチンブチル、フルオコルトロン、フルオロコルチゾン、フルオロメトロン、フルペロロン、フルプレドニデン、酢酸フルプレドニデン、フルプレドニゾロン、フルチカゾン、プロピオン酸フルチカゾン、ホルモコータル、ハルシノニド、ハロメタゾン、ヒドロコルチゾン、酢酸ヒドロコルチゾン、アセポン酸ヒドロコルチゾン、ヒドロコルチゾンブテプレート、酪酸ヒドロコルチゾン、ロテプレドノール、メプレドニゾン、６ａ−メチルプレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、酢酸メチルプレドニゾロン、アセポン酸メチルプレドニゾロン、モメタゾン、フロ酸モメタゾン、フロ酸モメタゾン一水和物、パラメタゾン、プレドニカルベート、プレドニゾロン、プレドニゾン、プレドニリデン、リメキソロン、チキソコルトール、トリアムシノロン、トリアムシノロンアセトニドおよびウロベタゾールからなる群から選択される、項目１２１に記載の方法。
（項目１２７）
前記グルココルチコイドが、メドリゾンである、項目１２１に記載の方法。
（項目１２８）
前記幹細胞または前駆細胞が、少なくとも１種の作用剤と少なくとも約１時間にわたって接触させたものである、項目１２０に記載の方法。
（項目１２９）
前記幹細胞または前駆細胞が、少なくとも１種の作用剤と約１時間〜約２４時間にわたって接触させたものである、項目１２０に記載の方法。
（項目１３０）
前記幹細胞または前駆細胞が、少なくとも１種の作用剤と約２時間〜約６時間にわたって接触させたものである、項目１２０に記載の方法。
（項目１３１）
前記幹細胞または前駆細胞が、少なくとも１種の作用剤と約２時間〜約４時間にわたって接触させたものである、項目１２０に記載の方法。
（項目１３２）
前記細胞が、骨髄、臍帯血、動員された末梢血、ホウォートンゼリー、胎盤、または胎児血から得られる、項目１２０に記載の方法。
（項目１３３）
被験体における造血幹細胞および造血前駆細胞の再構築を増加させる方法であって、該被験体に、ヒト造血幹細胞または造血前駆細胞を含む細胞の集団を含む組成物を投与する工程であって、
ａ）該造血幹細胞または造血前駆細胞が、（ｉ）１種または複数種のプロスタグランジン経路アゴニストおよび（ｉｉ）１種または複数種のグルココルチコイドとｅｘ  ｖｉｖｏで接触させたものであり、
ｂ）該接触させた造血幹細胞または造血前駆細胞におけるＣＸＣＲ４の遺伝子発現が、接触させていない造血幹細胞または造血前駆細胞と比較して少なくとも約３０倍増加する工程を含む方法。
（項目１３４）
前記接触させた造血幹細胞または造血前駆細胞におけるＣＸＣＲ４の遺伝子発現が、接触させていない造血幹細胞または造血前駆細胞と比較して少なくとも約４０倍増加する、項目１３３に記載の方法。
（項目１３５）
前記プロスタグランジン経路アゴニストが、ＰＧＥ２  ＥＰ２受容体またはＰＧＥ２  ＥＰ４受容体に選択的に結合する化合物を含む、項目１３３に記載の方法。
（項目１３６）
前記プロスタグランジン経路アゴニストが、ＰＧＥ２、ｄｍＰＧＥ２、１５（Ｓ）−１５−メチルＰＧＥ２、２０−エチルＰＧＥ２、および８−イソ−１６−シクロヘキシル−テトラノルＰＧＥ２からなる群から選択される、項目１３３に記載の方法。
（項目１３７）
前記プロスタグランジン経路アゴニストが、ＰＧＥ２、またはＰＧＥ２類似体またはその誘導体を含む、項目１３３に記載の方法。
（項目１３８）
前記プロスタグランジン経路アゴニストが、１６，１６−ジメチルＰＧＥ２を含む、項目１３３に記載の方法。
（項目１３９）
前記グルココルチコイドが、メドリゾン、アルクロメタゾン、ジプロピオン酸アルクロメタゾン、アムシノニド、ベクロメタゾン、ジプロピオン酸ベクロメタゾン、ベタメタゾン、安息香酸ベタメタゾン、吉草酸ベタメタゾン、ブデソニド、シクレソニド、クロベタゾール、酪酸クロベタゾール、プロピオン酸クロベタゾール、クロベタゾン、クロコルトロン、クロプレドノール、コルチゾール、コルチゾン、コルチバゾール、デフラザコート、デソニド、デスオキシメタゾン（ｄｅｓｏｘｉｍｅｔａｓｏｎｅ）、デスオキシコルトン、デスオキシメタゾン（ｄｅｓｏｘｙｍｅｔｈａｓｏｎｅ）、デキサメタゾン、ジフロラゾン、二酢酸ジフロラゾン、ジフルコルトロン、吉草酸ジフルコルトロン、ジフルオロコルトロン、ジフルプレドナート、フルクロロロン、フルクロロロンアセトニド、フルドロキシコルチド、フルメタゾン（ｆｌｕｍｅｔａｓｏｎｅ）、フルメタゾン（ｆｌｕｍｅｔｈａｓｏｎｅ）、ピバル酸フルメタゾン、フルニソリド、フルニソリド半水和物、フルオシノロン、フルオシノロンアセトニド、フルオシノニド、フルオコルチン、フルオコルチンブチル、フルオコルトロン、フルオロコルチゾン、フルオロメトロン、フルペロロン、フルプレドニデン、酢酸フルプレドニデン、フルプレドニゾロン、フルチカゾン、プロピオン酸フルチカゾン、ホルモコータル、ハルシノニド、ハロメタゾン、ヒドロコルチゾン、酢酸ヒドロコルチゾン、アセポン酸ヒドロコルチゾン、ヒドロコルチゾンブテプレート、酪酸ヒドロコルチゾン、ロテプレドノール、メプレドニゾン、６ａ−メチルプレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、酢酸メチルプレドニゾロン、アセポン酸メチルプレドニゾロン、モメタゾン、フロ酸モメタゾン、フロ酸モメタゾン一水和物、パラメタゾン、プレドニカルベート、プレドニゾロン、プレドニゾン、プレドニリデン、リメキソロン、チキソコルトール、トリアムシノロン、トリアムシノロンアセトニドおよびウロベタゾールからなる群から選択される、項目１３３に記載の方法。
（項目１４０）
前記造血幹細胞または造血前駆細胞が、（ｉ）１種または複数種のプロスタグランジン経路アゴニストおよび（ｉｉ）１種または複数種のグルココルチコイドと少なくとも約１時間にわたって接触させたものである、項目１３３に記載の方法。
（項目１４１）
前記造血幹細胞または造血前駆細胞が、（ｉ）１種または複数種のプロスタグランジン経路アゴニストおよび（ｉｉ）１種または複数種のグルココルチコイドと約２時間〜約６時間にわたって接触させたものである、項目１３３に記載の方法。
（項目１４２）
前記造血幹細胞または造血前駆細胞が、（ｉ）１種または複数種のプロスタグランジン経路アゴニストおよび（ｉｉ）１種または複数種のグルココルチコイドと約２時間〜約４時間にわたって接触させたものである、項目１３３に記載の方法。
（項目１４３）
前記造血幹細胞または造血前駆細胞が、（ｉ）１種または複数種のプロスタグランジン経路アゴニストおよび（ｉｉ）１種または複数種のグルココルチコイドと約４時間にわたって接触させたものである、項目１３３に記載の方法。
（項目１４４）
前記細胞の集団が、約０．１０％未満、０．５０％未満、１．０％未満、３％未満、５％未満、１０％未満、１５％未満、２０％未満、または３０％未満のＣＤ３４＋細胞を含む、項目１３３に記載の方法。
（項目１４５）
前記細胞の集団が、少なくとも約０．０１％でかつ約５０％以下のＣＤ３４＋細胞を含む、項目１３３に記載の方法。
（項目１４６）
前記細胞の集団が、少なくとも約１％のＣＤ３４＋細胞を含む、項目１３３に記載の方法。
（項目１４７）
前記細胞の集団が、少なくとも約３％のＣＤ３４＋細胞を含む、項目１３３に記載の方法。
（項目１４８）
前記細胞の集団が、少なくとも約５％のＣＤ３４＋細胞を含む、項目１３３に記載の方法。
（項目１４９）
前記細胞の集団が、少なくとも約９０％のＣＤ３４＋細胞を含む、項目１３３に記載の方法。
（項目１５０）
前記細胞の集団が、少なくとも約９５％のＣＤ３４＋細胞を含む、項目１３３に記載の方法。
（項目１５１）
前記細胞の集団をｅｘ  ｖｉｖｏで増大させない、項目１３３に記載の方法。
（項目１５２）
前記組成物が、ポイントオブケアで生成され、前記細胞の集団を培養せずに患者に投与される、項目１３３に記載の方法。
（項目１５３）
前記組成物が、洗浄され、前記１種または複数種の作用剤を実質的に含まない、項目１３３に記載の方法。
（項目１５４）
前記細胞の集団が、骨髄、胎児肝臓、胎児血、胎盤、胎盤血、臍帯血、または動員された末梢血から得られる、項目１３３に記載の方法。
（項目１５５）
前記細胞の集団が、１つまたは複数の臍帯血ユニットを含む、項目１２０または項目１３３に記載の方法。
（項目１５６）
前記被験体が、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、若年性骨髄単球性白血病、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、重症再生不良性貧血、ファンコニー貧血、発作性夜間血色素尿症（ＰＮＨ）、赤芽球ろう、先天性無巨核球性血小板減少症、重症複合免疫不全症候群（ＳＣＩＤ）、ウィスコット・アルドリッチ症候群、重症型ベータサラセミア、鎌状赤血球症、ハーラー症候群、副腎脳白質ジストロフィー、異染性白質ジストロフィー、脊髄異形成、不応性貧血、慢性骨髄単球性白血病、原因不明骨髄様化生、家族性血球貪食性リンパ組織球症、または固形腫瘍を有する、項目１２０または項目１３３に記載の方法。
（項目１５７）
前記被験体が、乳がん、卵巣がん、脳がん、前立腺がん、肺がん、結腸がん、皮膚がん、肝がん、膵がん、または肉腫を有する、項目１２０または項目１３３に記載の方法。
（項目１５８）
前記被験体が、骨髄破壊または骨髄非破壊化学療法または放射線療法を受けている、項目１２０または項目１３３に記載の方法。
（項目１５９）
前記被験体が、骨髄ドナーである、項目１２０または項目１３３に記載の方法。
（項目１６０）
前記細胞の集団が、前記被験体に対して自原性である、項目１２０または項目１３３に記載の方法。
（項目１６１）
前記細胞の集団が、前記被験体の末梢血または骨髄から動員されたものである、項目１２０または項目１３３に記載の方法。
（項目１６２）
前記細胞の集団が、前記被験体に対して同種異系である、項目１２０または項目１３３に記載の方法。
【図面の簡単な説明】
【０２３７】
【図１】図１は、ヒト臍帯血ＣＤ３４＋細胞を単一の作用剤１０μＭ、またはｄｍＰＧＥ２１０μＭと５種の異なるグルココルチコイドのうちの１種１０μＭの組合せのいずれかを用いて処理した場合に当該細胞において検出されたＣＸＣＲ４  ｍＲＮＡのレベルの増加（ビヒクル処理と比較して）を示すグラフである。グルココルチコイドは、ｄｍＰＧＥ２と相乗的に作用して、ＣＸＣＲ４遺伝子発現を増加させる。
【０２３８】
【図２Ａ】図２Ａは、ヒト臍帯血ＣＤ３４＋細胞を、ＰＧＥ２を単独でまたはＰＧＥ２と種々のグルココルチコイドの組合せを用いて処理した場合に当該ＣＤ３４＋細胞において検出されたＣＸＣＲ４  ｍＲＮＡの増加を示すグラフである。データにより、グルココルチコイドがプロスタグランジン経路アゴニストと相乗的に作用して、ＣＤ３４＋細胞におけるＣＸＣＲ４遺伝子発現を増加させることが実証される。
【図２Ｂ】図２Ｂは、ヒト臍帯血ＣＤ３４＋細胞を、１５（Ｓ）−１５−メチルＰＧＥ２（ｍＰＧＥ２）を単独で、または種々のグルココルチコイドと組み合わせて処理した場合に当該ＣＤ３４＋細胞において検出されたＣＸＣＲ４  ｍＲＮＡの増加を示すグラフである。データにより、グルココルチコイドがプロスタグランジン経路アゴニストと相乗的に作用して、ＣＤ３４＋細胞におけるＣＸＣＲ４遺伝子発現を増加させることが実証される。
【図２Ｃ】図２Ｃは、ヒト臍帯血ＣＤ３４＋細胞を、２０−エチルＰＧＥ２（ｅＰＧＥ２）を単独で、または種々のグルココルチコイドと組み合わせて処理した場合に当該ＣＤ３４＋細胞において検出されたＣＸＣＲ４  ｍＲＮＡの増加を示すグラフである。データにより、グルココルチコイドがプロスタグランジン経路アゴニストと相乗的に作用して、ＣＤ３４＋細胞におけるＣＸＣＲ４遺伝子発現を増加させることが実証される。
【０２３９】
【図３】図３は、臍帯血または動員された末梢血（ｍＰＢ）に由来するヒトＣＤ３４＋細胞を、プロスタグランジン経路アゴニストを単独で、またはグルココルチコイドと組み合わせてのいずれかで用いて処理した場合に当該ＣＤ３４＋細胞において検出されたＣＸＣＲ４  ｍＲＮＡの増加を示すグラフである。ＣＤ３４＋細胞は、ＣＤ３４＋細胞の供給起源にかかわらず処理に対して同様に応答する。
【０２４０】
【図４Ａ】図４Ａは、ＣＤ３４＋細胞を、プロスタグランジン経路アゴニストを単独で、またはグルココルチコイドと組み合わせてのいずれかで用いて処理した後の、ＣＸＣＲ４表面タンパク質を発現しているＣＤ３４＋細胞の数の増加を％ＣＸＣＲ４＋で示したグラフである。
【図４Ｂ】図４Ｂは、ＣＤ３４＋細胞を、プロスタグランジン経路アゴニストを単独で、またはグルココルチコイドと組み合わせてのいずれかで用いて処理した後の、平均蛍光強度（ＭＦＩ）で測定されたＣＤ３４＋細胞のＣＸＣＲ４表面タンパク質の量の増加を示すグラフである。
【０２４１】
【図５】図５は、ヒトＣＤ３４＋細胞を、プロスタグランジン経路アゴニストを単独で、またはグルココルチコイドと組み合わせてのいずれかで用いて２時間処理する間に検出された、および該処理の後、処理を取り除いた後の追加的な４時間にわたって（培地単独で）検出されたＣＸＣＲ４  ｍＲＮＡの増加の動態測定値（倍数変化）および表面ＣＸＣＲ４タンパク質を発現しているヒトＣＤ３４＋細胞の数（ＣＸＣＲ４＋細胞の％）を示すグラフである。
【０２４２】
【図６】図６は、ヒトＣＤ３４＋細胞を、プロスタグランジン経路アゴニストを単独で、またはグルココルチコイドと組み合わせてのいずれかで用いて４時間処理する間に検出された、および該処理の後、処理を取り除いた後の追加的な４時間にわたって（培地単独で）検出されたＣＸＣＲ４  ｍＲＮＡの増加の動態測定値（倍数変化）および表面ＣＸＣＲ４タンパク質を発現しているヒトＣＤ３４＋細胞の数（ＣＸＣＲ４＋細胞の％）を示すグラフである。
【０２４３】
【図７】図７は、代表的なＳＤＦ−１トランスウェル遊走アッセイの結果を示す図である。結果は、ＣＤ３４＋細胞をＤＭＳＯ対照、ｄｍＰＧＥ２、またはｄｍＰＧＥ２およびメドリゾンを用いて処理することの、ＳＤＦ−１への細胞遊走の効率に対する効果を示す。データにより、プロスタグランジン経路アゴニストとグルココルチコイドの組合せを用いて処理したＣＤ３４＋細胞のＳＤＦ−１勾配に遊走する能力がビヒクルまたはプロスタグランジン経路アゴニスト単独で処理したＣＤ３４＋細胞と比較して増強されたことが実証される。結果は、プロスタグランジン経路アゴニストとグルココルチコイドの組合せを用いて処理した細胞におけるＣＸＣＲ４遺伝子発現の増加が機能的能力の増大に変換されることを示している。
【０２４４】
【図８】図８は、ｄｍＰＧＥ２を単独で、または種々のグルココルチコイドと組み合わせて用いて処理したＣＤ３４＋細胞のＳＤＦ−１への細胞遊走の効率を示す図である。プロスタグランジン経路アゴニストとグルココルチコイドの組合せを用いて処理したＣＤ３４＋細胞では、ビヒクルまたはプロスタグランジン経路アゴニスト単独で処理したＣＤ３４＋細胞と比較してＳＤＦ−１勾配に向かって遊走する能力の増大が示される。
【０２４５】
【図９】図９は、プロスタグランジン経路アゴニストとグルココルチコイドの組合せを用いて処理したＣＤ３４＋細胞の遊走能力の増強の持続時間を示す図である。結果により、遊走能力の増強の持続時間がＣＤ３４＋細胞を処理した後少なくとも４時間維持されることが実証される。
【０２４６】
【図１０】図１０は、代表的な中大脳動脈閉塞モデル（ＭＣＡＯ）虚血ラットモデルからの神経学的重症度スコア（Ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｅｖｅｒｉｔｙ  Ｓｃｏｒｅ）（ｍＮＳＳ）を示すグラフである。結果により、ｄｍＰＧＥ２およびメドリゾンを用いてＨＳＰＣ細胞を処理することの、ＭＣＡＯ卒中モデルにおける神経学的欠損を減少させる細胞の能力に対する効果が示されている。プロスタグランジン経路アゴニストとグルココルチコイドの組合せを用いて処理したＨＳＰＣを与えたラットでは、無処理の細胞またはビヒクル単独を与えたラットと比較して、神経学的欠損が減少し、神経機能が改善される。
【０２４７】
【図１１】図１１は、代表的な中大脳動脈閉塞モデル（ＭＣＡＯ）虚血ラットモデルのフットフォールトアッセイ結果を示すグラフである。結果により、ｄｍＰＧＥ２およびメドリゾンを用いてＨＳＰＣを処理することの、ＭＣＡＯ卒中モデルにおいて運動欠損を減少させる細胞の能力に対する効果が示されている。プロスタグランジン経路アゴニストとグルココルチコイドの組合せを用いて処理したＨＳＰＣを与えたラットでは、無処理の細胞またはビヒクル単独を与えたラットと比較して運動欠損が改善される。
【発明を実施するための形態】
【０２４８】
詳細な説明
Ａ．概要
本発明は、ｅｘ  ｖｉｖｏで処理して、細胞の治療的性質を増強したヒト造血幹細胞および造血前駆細胞を提供する。具体的には、本発明の造血幹細胞および造血前駆細胞は、細胞を、ホーミングに関与する遺伝子の遺伝子発現を増加させる１種または複数種の作用剤を用いて簡単に処理することによってｅｘ  ｖｉｖｏで改変したものである。一実施形態では、本発明の造血幹細胞および造血前駆細胞は、細胞を、ＣＸＣＲ４の発現を増加させる１種または複数種の作用剤を用いて簡単に処理することによってｅｘ  ｖｉｖｏで改変したものである。本発明の治療用細胞は、無処理のヒト造血幹細胞および造血前駆細胞と比較して予想外に高レベルのＣＸＣＲ４を発現する。特定の実施形態では、本発明の薬理学的に増強された細胞は、無処理の細胞と比較してＣＸＣＲ４の遺伝子発現が少なくとも約３０倍増加することを特徴とする。種々の実施形態では、治療用細胞はＣＤ３４＋細胞である。
【０２４９】
ＣＸＣＲ４は造血幹細胞および造血前駆細胞のホーミングおよび生着の増加に関連すると考えられており、したがって、本発明の処理した造血幹細胞および造血前駆細胞は、例えば、骨髄および虚血による損傷を受けた組織へのホーミングの増加、ならびに増殖性および再生性の増強を含め、治療的性質が増強されている。
【０２５０】
種々の実施形態では、本発明の細胞およびそのような増強された細胞を含有する組成物は、他の処置の中でも、造血幹細胞移植を含めた、造血幹細胞および造血前駆細胞の数を増加させることが必要または有益である状態および障害の処置において、および虚血による損傷を受けた組織の処置において有用である。理論に束縛されることを望むものではないが、本発明は、一部において、本発明の増強された造血幹細胞および造血前駆細胞の表面上のＣＸＣＲ４タンパク質のレベルを上昇させることにより、増強された細胞の骨髄および組織傷害部位へのホーミングを改善することを意図している。増強された造血幹細胞および造血前駆細胞により、例えば、処理した細胞の骨髄へのホーミングおよび／または生着を増加させること、および処理した細胞の、患者に投与された後にｉｎ  ｖｉｖｏで自己再生し、増殖する能力を増大させることによるものを含め、幹細胞移植に使用する造血幹細胞および造血前駆細胞の有効性を増大させることによって、幹細胞移植の間の患者の転帰を改善することができる。
【０２５１】
本発明の増強された造血幹細胞および造血前駆細胞を虚血組織または虚血による損傷を受けた組織を処置するために使用した場合、例えば、虚血組織における血管新生を改善すること、虚血部位における組織再生を改善すること、虚血組織の壊死またはアポトーシスを減少させること、および／または虚血部位における細胞生存を増加させることによって、患者の転帰を改善することができる。
Ｂ．定義
【０２５２】
冠詞「ａ（１つの）」、「ａｎ（１つの）」、および「ｔｈｅ（その）」は、本明細書では、その冠詞の文法上の目的語の１つ、または２つ以上（すなわち、少なくとも１つ）を指すために使用される。例として、「ａｎ（１つの）エレメント」とは、１つのエレメントまたは２つ以上のエレメントを意味する。
【０２５３】
選択肢（例えば、「ｏｒ（または）」）の使用は、その選択肢のいずれか一方、その両方、またはそれらの任意の組合せを意味すると理解されるべきである。本明細書で使用される場合、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」および「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」という用語は同義に使用される。
【０２５４】
本明細書で使用される場合、「約」または「およそ」という用語は、参照の数量、レベル、値、数、発生頻度、百分率、寸法、サイズ、量、重量または長さに対して１５％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％または１％まで変動する数量、レベル、値、数、発生頻度、百分率、寸法、サイズ、量、重量または長さを指す。一実施形態では、「約」または「およそ」という用語は、参照の数量、レベル、値、数、発生頻度、百分率、寸法、サイズ、量、重量または長さに関して±１５％、±１０％、±９％、±８％、±７％、±６％、±５％、±４％、±３％、±２％、または±１％の数量、レベル、値、数、発生頻度、百分率、寸法、サイズ、量、重量または長さの範囲を指す。
【０２５５】
「ｅｘ  ｖｉｖｏ」という用語は、一般に、好ましくは天然の条件の変更は最小にして、生体外の人工的な環境下の生組織の中またはその上で行われる実験または測定などの生体外で起こる活性を指す。特定の実施形態では、「ｅｘ  ｖｉｖｏ」における手順は、生物体から取得し、実験室の装置において、通常は滅菌条件下で、一般には数時間、または約２４時間まで、しかし状況に応じて４８時間または７２時間までを含めた時間にわたって培養した生細胞または生組織に関与する。ある特定の実施形態では、そのような組織または細胞を採取し、凍結させ、後でｅｘ  ｖｉｖｏにおける処理のために解凍することができる。生細胞または生組織を使用して数日よりも長く続く組織培養実験または手順は、一般には、「ｉｎ  ｖｉｔｒｏ」とみなされるが、ある特定の実施形態では、この用語は、ｅｘ  ｖｉｖｏと互換的に使用することができる。
【０２５６】
「ｅｘ  ｖｉｖｏにおける投与」、「ｅｘ  ｖｉｖｏにおける処理」、または「ｅｘ  ｖｉｖｏにおける治療的使用」という記述は、一般に、１つまたは複数の臓器、細胞、または組織を生きているまたは最近死亡した被験体から得、必要に応じて、精製／富化し、処理または手順にさらす医学的手技（例えば、細胞を本発明の組成物または作用剤と一緒にインキュベートして、造血幹細胞または造血前駆細胞などの特定の細胞の増大を増強する工程を含むｅｘ  ｖｉｖｏにおける投与工程）に関する。ｅｘ  ｖｉｖｏにおいて処理した細胞は、ドナーまたは別の生きている被験体に投与することができる。
【０２５７】
そのようなｅｘ  ｖｉｖｏにおける治療への適用は、本発明の接触させた細胞を生きている被験体に１回または複数回投与することによるものなどの、任意選択のｉｎ  ｖｉｖｏにおける処理または手技の工程も含んでよい。これらの実施形態については、当技術分野において周知の技法に従い、本明細書の他の箇所に記載されている局所投与および全身投与の両方が意図されている。被験体に投与する細胞の量は、被験体の特性、例えば、全体的な健康、年齢、性別、体重、および薬物に対する耐容性、ならびに薬物および／または細胞移植に対する反応の程度、重症度、および種類などに依存する。
【０２５８】
「ｉｎ  ｖｉｖｏ」という用語は、一般に、細胞の生着、細胞のホーミング、細胞の自己再生、および細胞の増大などの生体内で起こる活性を指す。一実施形態では、「ｉｎ  ｖｉｖｏにおける増大」という用語は、細胞集団がｉｎ  ｖｉｖｏにおいて数を増加させることができることを指す。特定の実施形態では、ｉｎ  ｖｉｖｏにおける増大とは、幹細胞の自己再生および／または増殖を含む。
【０２５９】
「増強する（ｅｎｈａｎｃｅ）」または「促進する（ｐｒｏｍｏｔｅ）」または「増加させる（ｉｎｃｒｅａｓｅ）」または「活性化する（ａｃｔｉｖａｔｅ）」とは、一般に、作用剤により、細胞において、ビヒクルまたは対照分子／組成物のいずれかによって引き起こされる応答と比較して大きな生理応答（すなわち、下流の効果）、例えば、造血幹細胞および造血前駆細胞の生着／生着の潜在性の増加およびｉｎ  ｖｉｖｏにおける幹細胞の増大の増加を生じさせる、または引き起こすことができることを指す。測定可能な生理応答は、当技術分野における理解および本明細書における記載から明らかなものの中でも、造血幹細胞および造血前駆細胞の生着、生存能力、ホーミング、自己再生、および／または増大の増加を含んでよい。一実施形態では、増加は、これだけに限定されないが、ＣＲＥＢリン酸化の増加、ＣＲＥＭ発現の増加、およびＣＸＣＲ４の発現の増加を含めた、ＰＧＥ２Ｒ２細胞シグナル伝達経路および／またはＰＧＥ２Ｒ４細胞シグナル伝達経路を通じたシグナル伝達の増加の結果としての遺伝子発現の増加であってよい。造血幹細胞および造血前駆細胞の生着、生存能力、ホーミング、自己再生および／またはｉｎ  ｖｉｖｏにおける増大の増加は、とりわけ、遺伝子発現、ＣＦＵ−Ｃアッセイ、ＣＦＵ−Ｓアッセイ、ＣＡＦＣアッセイ、および細胞表面タンパク質発現などの当技術分野で公知の方法を用いて確認することもできる。「増加した（ｉｎｃｒｅａｓｅｄ）」または「増強された（ｅｎｈａｎｃｅｄ）」量とは、一般には、「統計的に有意な」量であり、ビヒクル（作用剤が存在しない）または対照組成物によって生じる応答の１．１倍、１．２倍、１．５倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、３０倍またはそれ超（例えば、５００倍、１０００倍）（その間に入る１を超える全ての整数および小数点、例えば、１．５、１．６、１．７、１．８などを含む）に増加することを含んでよい。
【０２６０】
「減少する（ｄｅｃｒｅａｓｅ）」または「低減する（ｌｏｗｅｒ）」または「減る（ｌｅｓｓｅｎ）」または「低下する（ｒｅｄｕｃｅ）」または「軽減する（ａｂａｔｅ）」とは、一般に、作用剤により、細胞において、ビヒクルまたは対照分子／組成物のいずれかによって引き起こされる応答と比較して少ない生理応答（すなわち、下流の効果）、例えば、アポトーシスの減少を生じさせる、または引き起こすことができることを指す。一実施形態では、減少は、通常は細胞の生存能力の低下と関連する、遺伝子発現の減少または細胞シグナル伝達の減少であってよい。「減少した（ｄｅｃｒｅａｓｅ）」または「低下した（ｒｅｄｕｃｅｄ）」量とは、一般には、「統計的に有意な」量であり、ビヒクル（作用剤が存在しない）または対照組成物によって生じる応答の１．１分の１、１．２分の１、１．５分の１、２分の１、３分の１、４分の１、５分の１、６分の１、７分の１、８分の１、９分の１、１０分の１、１５分の１、２０分の１、３０分の１またはそれ未満（例えば、５００分の１、１０００分の１）（その間に入る１を超える全ての整数および小数点、例えば、１．５分の１、１．６分の１、１．７分の１、１．８分の１などを含む）に減少することを含んでよい。
【０２６１】
「維持する（ｍａｉｎｔａｉｎ）」または「保存する（ｐｒｅｓｅｒｖｅ）」または「維持（ｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅ）」または「変化なし（ｎｏ  ｃｈａｎｇｅ）」または「実質的な変化なし（ｎｏ  ｓｕｂｓｔａｎｔｉａｌ  ｃｈａｎｇｅ）」または「実質的な減少なし（ｎｏ  ｓｕｂｓｔａｎｔｉａｌ  ｄｅｃｒｅａｓｅ）」とは、一般に、作用剤により、細胞において、ビヒクルまたは対照分子／組成物のいずれかによって引き起こされる応答（参照応答）と比較して、匹敵する生理応答（すなわち、下流の効果）を生じさせる、または引き起こすことができることを指す。匹敵する応答とは、参照応答と有意に異ならないまたは測定可能には異ならない応答である。
【０２６２】
「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」および「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という単語は、本明細書全体を通して、文脈上異なる解釈を要する場合を除き、明記されている工程もしくはエレメントまたは工程もしくはエレメントの群を包含するが、任意の他の工程もしくはエレメントまたは工程もしくはエレメントの群を排除するものではないことを意味すると理解されたい。「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｏｆ）」とは、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｏｆ）」という句に続くいかなるものも含み、それに限定されることを意味する。したがって、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｏｆ）」という句は、列挙されているエレメントが必要または必須であること、および他のエレメントは存在してはならないことを示す。「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ）」とは、この句の後に列挙されている任意のエレメントを包含し、列挙されているエレメントに関する本開示に明記されている活性または作用に干渉も寄与もしない他のエレメントに限定されるものとする。したがって、「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ）」という句は、列挙されているエレメントが必要または必須であるが、他のエレメントは任意選択ではなく、それらが列挙されているエレメントの活性または作用に影響を及ぼすか否かに応じて存在してよいまたは存在してはならないことを示す。
【０２６３】
ある特定の実施形態では、本発明の治療用細胞は、独特のまたは実質的に独特の遺伝子シグネチャーを含む。本明細書で使用される場合、「遺伝子発現プロファイル」、「遺伝子発現シグネチャー」または「遺伝子シグネチャー」という用語は、同じ試料、すなわち、細胞の集団について測定された複数の異なる遺伝子の発現のレベルを指す。遺伝子発現シグネチャーは、治療用細胞を当技術分野において現存する細胞および／または対照、ビヒクル、または無処理細胞と区別するために役立つ遺伝子の一群である「シグネチャー遺伝子」が同定されるように定義することができる。
【０２６４】
「シグネチャー遺伝子」とは、本明細書で使用される場合、シグネチャー遺伝子セットの任意の遺伝子を意味する。例えば、シグネチャー遺伝子としては、ヒアルロナンシンターゼ１（ＨＡＳ１）、ＧＴＰ結合性タンパク質ＧＥＭ（ＧＥＭ）、二重特異性プロテインホスファターゼ４（ＤＵＳＰ４）、アンフィレギュリン（ＡＲＥＧ）、核受容体関連タンパク質１（ＮＲ４Ａ２）、レニン（ＲＥＮ）、ｃＡＭＰ応答エレメントモジュレーター（ＣＲＥＭ）、Ｉ型アルファ１コラーゲン（ＣＯＬ１Ａ１）、Ｆｏｓ関連抗原２（ＦＯＳＬ２）、およびＣＸＣケモカイン受容体４（ＣＸＣＲ４）が挙げられる。明確にするために、シグネチャー遺伝子はハウスキーピング遺伝子を包含しない。
【０２６５】
「遺伝子発現」とは、本明細書で使用される場合、幹細胞および前駆細胞、または幹細胞もしくは前駆細胞を含む細胞の集団などの生物学的試料中の遺伝子の相対的な発現レベルおよび／または発現パターンを指す。特定の実施形態では、幹細胞または前駆細胞は造血幹細胞および造血前駆細胞である。
【０２６６】
本発明の治療用組成物を含む、細胞を特徴付ける遺伝子の発現を検出するために当技術分野において利用可能な方法はいずれも本発明に包含される。本明細書で使用される場合、「発現を検出すること」という用語は、遺伝子のＲＮＡ転写物またはその発現産物の数量または存在を決定することを意味する。遺伝子の発現、すなわち遺伝子発現プロファイリングを検出するための方法としては、ポリヌクレオチドのハイブリダイゼーション分析に基づく方法、ポリヌクレオチドの配列決定に基づく方法、免疫組織化学的方法、およびプロテオミクスに基づく方法が挙げられる。当該方法では、一般に、対象の遺伝子の発現産物（例えば、ｍＲＮＡ）を検出する。いくつかの実施形態では、逆転写ＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲ）などのＰＣＲに基づく方法（Ｗｅｉｓら、ＴＩＧ  ８巻：２６３〜６４頁、１９９２年）、およびマイクロアレイなどのアレイに基づく方法（Ｓｃｈｅｎａら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７０巻：４６７〜７０頁、１９９５年）が用いられる。
【０２６７】
本明細書全体を通して「一実施形態」または「ある実施形態」との言及は、その実施形態に関連して記載されている特定の特徴、構造または特性が本発明の少なくとも１つの実施形態に包含されることを意味する。したがって、本明細書全体を通して種々の箇所において出現する「一実施形態では」または「ある実施形態では」という句は、必ずしも全てが同じ実施形態について言及しているのではない。さらに、特定の特徴、構造、または特性を任意の適切な様式で組み合わせて１つまたは複数の実施形態にすることができる。
Ｃ．造血幹細胞および造血前駆細胞
【０２６８】
本発明は、ヒト造血幹細胞および造血前駆細胞を提供し、幹細胞は細胞の治療的性質を増大させることができる１種または複数種の作用剤とｅｘ  ｖｉｖｏで接触させたものである。一実施形態では、ヒト造血幹細胞および造血前駆細胞は、細胞におけるＣＸＣＲ４遺伝子発現を増加させる１種または複数種の作用剤とｅｘ  ｖｉｖｏで接触させたものである。好ましい一実施形態では、処理したヒト造血幹細胞におけるＣＸＣＲ４の遺伝子発現は、接触させていない造血幹細胞および造血前駆細胞またはビヒクル対照を用いて処理した細胞と比較して少なくとも約３０倍増加する。
【０２６９】
造血幹細胞は、骨髄系列（例えば、単球およびマクロファージ、好中球、好塩基球、好酸球、赤血球、巨核球／血小板、樹状細胞）、およびリンパ系列（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞）、および当技術分野で公知のその他の系列を含めた、生物体の全ての種類の血液細胞を生じさせる多分化能幹細胞である（Ｆｅｉ，  Ｒ．ら、米国特許第５，６３５，３８７号；ＭｃＧｌａｖｅら、米国特許第５，４６０，９６４号；Ｓｉｍｍｏｎｓ，
Ｐ．ら、米国特許第５，６７７，１３６号；Ｔｓｕｋａｍｏｔｏら、米国特許第５，７５０，３９７号；Ｓｃｈｗａｒｔｚら、米国特許第５，７５９，７９３号；ＤｉＧｕｉｓｔｏら、米国特許第５，６８１，５９９号；Ｔｓｕｋａｍｏｔｏら、米国特許第５，７１６，８２７号を参照されたい）。造血前駆細胞（ＨＳＣ）は、生物体の生存期間にわたって成熟血液細胞のレパートリー全体を生成することができる関係づけられる造血前駆細胞（ＨＰＣ）を生じさせる。
【０２７０】
本明細書で使用される場合、「造血幹細胞および造血前駆細胞」または「ＨＳＰＣ」という用語は、抗原マーカーであるＣＤ３４が存在すること（ＣＤ３４＋）によって同定される、したがって、ＣＤ３４＋細胞と特徴付けられる細胞、およびそのような細胞の集団を指す。特定の実施形態では、「ＨＳＰＣ」という用語は、抗原マーカーであるＣＤ３４が存在すること（ＣＤ３４＋）および系列（ｌｉｎ）マーカーが存在しないことによって同定され、したがって、ＣＤ３４＋／Ｌｉｎ（−）細胞と特徴付けられる細胞、およびそのような細胞の集団を指す。ＣＤ３４＋および／またはＬｉｎ（−）細胞を含む細胞の集団は、造血前駆細胞も含み、したがって、本出願の目的に関して、「ＨＳＰＣ」という用語は造血前駆細胞を包含することが理解される。
【０２７１】
「増強された造血幹細胞および造血前駆細胞」または「増強されたＨＳＰＣ」とは、ｅｘ  ｖｉｖｏにおいて、細胞におけるＣＸＣＲ４遺伝子発現を対照、ビヒクルまたは無処理の細胞と比較して少なくとも約３０倍増加させる１種または複数種の作用剤を用いて処理したＨＳＰＣを指す。
【０２７２】
本明細書で使用される場合、「接触させていない」または「無処理の」細胞とは、対照作用剤以外の作用剤を用いて処理していない、例えば、それと一緒に培養していない、それと接触させていない、またはそれと一緒にインキュベートしていない細胞である。ＤＭＳＯ（対照作用剤）と接触させた、または別のビヒクルと接触させた細胞は、接触させていない細胞である。
【０２７３】
本発明のＨＳＰＣは、高レベルのＣＸＣＲ４の発現を示す遺伝子発現プロファイルによって同定され、それを特徴とする。ＨＳＰＣは、ＣＸＣＲ４遺伝子発現の増加およびＣＸＣＲ４ポリペプチドの細胞表面発現の増加に基づいて特徴付けることもできる。ある特定の実施形態では、本発明のＨＳＰＣにおけるＣＸＣＲ４遺伝子発現が、接触させていない細胞におけるＣＸＣＲ４の発現と比較して少なくとも３０倍、３５倍、４０倍、４５倍、５０倍、５５倍、６０倍、６５倍、７０倍、７５倍、８０倍、８５倍、９０倍、９５倍、または１００倍増加する。
【０２７４】
特定の実施形態では、ＨＳＰＣにおけるＣＸＣＲ４遺伝子発現が、無処理のＨＳＰＣと比較して約３０〜約８０倍増加する。さらなる実施形態では、ＨＳＰＣにおけるＣＸＣＲ４遺伝子発現が、無処理のＨＳＰＣと比較して約４０〜約８０倍、約５０〜約８０倍、約６０〜約８０倍、または約５０〜約７０倍増加する。
【０２７５】
本発明の処理したＨＳＰＣのＣＸＣＲ４遺伝子発現または遺伝子発現シグネチャーを、細胞を１種または複数種の作用剤を用いて処理した後に決定することができる。例えば、ＨＳＰＣを、ｅｘ  ｖｉｖｏにおいて１種または複数種の作用剤を用いて処理し、洗浄して作用剤（複数可）を除去し、細胞をさらにインキュベートせずに遺伝子発現を解析することができる。
【０２７６】
本発明の方法において接触させ、増強された治療的性質を有するヒトＨＳＰＣは、多数の種々の他の方法で、例えば、細胞内ｃＡＭＰシグナル伝達、例えばＣＲＥＢリン酸化のレベルの上昇によって、もしくは生化学的アッセイによって決定される通り；遺伝子発現アッセイ、例えばマイクロアレイによって決定されるＰＧＥ２Ｒ２／Ｒ４細胞シグナル伝達経路に関係づけられる遺伝子、例えばＣＲＥＭ、ならびに幹細胞および前駆細胞のホーミングおよび生着を増加させる遺伝子、例えばＣＸＣＲ４の上方制御を示す遺伝子発現シグネチャー；細胞の生存能力アッセイ、例えば７−アミノアクチノマイシンＤ（７−ＡＡＤ）染色によって決定される幹細胞および前駆細胞の生存能力における測定可能な低下がないこと；ならびに／またはｉｎ  ｖｉｔｒｏにおけるコロニー形成単位（ＣＦＵ−Ｃ）アッセイによって決定される幹細胞の自己再生する能力の増加によってなどで特徴付けることもできる。
１．遺伝子発現の決定
【０２７７】
「遺伝子発現」とは、本明細書で使用される場合、本発明の治療用組成物中の幹細胞および前駆細胞、または幹細胞もしくは前駆細胞を含む細胞の集団などの生物学的試料中のＣＸＣＲ４などの遺伝子の相対的な発現レベルおよび／または発現パターンを指す。試料は不均一または均一な細胞の集団を含んでよく、細胞集団を試料から精製してもしなくてもよい。ＣＸＣＲ４などの遺伝子の発現は、ｃＤＮＡ、ＲＮＡ、ｍＲＮＡ、またはそれらの組合せのレベルで測定することができる。
【０２７８】
ＣＸＣＲ４遺伝子の発現を検出するための当技術分野において利用可能な方法はいずれも本明細書に包含される。本明細書で使用される場合、「発現を検出すること」という用語は、遺伝子のＲＮＡ転写物またはその発現産物の数量または存在を決定することを意味する。遺伝子の発現を検出するための方法としては、ＰＣＲに基づく方法、ポリヌクレオチドのハイブリダイゼーション分析、ポリヌクレオチドの配列決定に基づく方法、免疫組織化学的方法、およびプロテオミクスに基づく方法が挙げられる。当該方法では、一般に、対象の遺伝子の発現産物（例えば、ｍＲＮＡ）を検出する。いくつかの実施形態では、逆転写ＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲ）などのＰＣＲに基づく方法（Ｗｅｉｓら、ＴＩＧ  ８巻：２６３〜６４頁、１９９２年）、およびマイクロアレイなどのアレイに基づく方法（Ｓｃｈｅｎａら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７０巻：４６７〜７０頁、１９９５年）が用いられる。
【０２７９】
ＲＮＡ抽出のための一般的な方法は当技術分野で周知であり、Ａｕｓｕｂｅｌら編、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  １９８７〜１９９９年を含めた分子生物学の標準の教本に開示されている。具体的には、ＲＮＡ単離は、Ｑｉａｇｅｎ（Ｖａｌｅｎｃｉａ、Ｃａｌｉｆ．）などの商業的な製造者からの精製キット、バッファーセットおよびプロテアーゼを製造者の指示に従って使用して実施することができる。例えば、Ｑｉａｇｅｎ  ＲＮｅａｓｙミニカラムを使用して培養物中の細胞由来の全ＲＮＡを単離することができる。単離されたＲＮＡは、これだけに限定されないが、ＰＣＲ分析およびプローブアレイを含めたハイブリダイゼーションまたは増幅アッセイにおいて使用することができる。ＲＮＡレベルを検出するための１つの方法は、単離されたＲＮＡを、検出しようとする遺伝子によりコードされるｍＲＮＡとハイブリダイズすることができる核酸分子（プローブ）と接触させる工程を伴う。核酸プローブは、例えば、全長のｃＤＮＡ、またはその部分、例えば、長さが少なくとも７、１５、３０、６０、１００、２５０、または５００ヌクレオチドであり、ストリンジェントな条件下で本発明の内因性遺伝子、または任意の誘導体ＤＮＡまたはＲＮＡと特異的にハイブリダイズするために十分なオリゴヌクレオチドなどであってよい。ｍＲＮＡとプローブがハイブリダイズすることにより、問題の内因性遺伝子が発現されていることが示される。
【０２８０】
試料中の遺伝子発現レベルを決定するための代替の方法は、例えば、ＲＴ−ＰＣＲ（米国特許第４，６８３，２０２号）、リガーゼ連鎖反応（Ｂａｒａｎｙ、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８８巻：１８９〜９３頁、１９９１年）、自家持続配列複製法（Ｇｕａｔｅｌｌｉら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．
ＵＳＡ  ８７巻：１８７４〜７８頁、１９９０年）、転写増幅系（Ｋｗｏｈら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８６巻：１１７３〜７７頁、１９８９年）、Ｑ−ベータレプリカーゼ（Ｌｉｚａｒｄｉら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ６巻：１１９７頁、１９８８年）、ローリングサークル複製（米国特許第５，８５４，０３３号）、または任意の他の核酸の増幅方法によって核酸を増幅するプロセス、その後、増幅された分子を当業者に周知の技法を用いて検出することを伴う。
【０２８１】
本発明の特定の態様では、ＣＸＣＲ４の遺伝子発現を定量的ＲＴ−ＰＣＲによって評価する。多数の異なるＰＣＲまたはＱＰＣＲのプロトコールが当技術分野で公知であり、本明細書の下に例示されており、ＣＸＣＲ４を検出および／または数量化するための当該記載の組成物を使用した使用に直接適用することまたは適合させることができる。いくつかの状況下では、定量的ＰＣＲ（ＱＰＣＲ）（リアルタイムＰＣＲとも称される）により、定量的測定だけでなく、時間およびコンタミネーションの減少ももたらされるので、定量的ＰＣＲが好ましい。いくつかの場合には、完全な遺伝子発現プロファイリング技法の利用可能性は、新鮮な凍結組織および特殊化された実験室設備が必要なことに起因して限られ、それにより、そのような技術を臨床実践場面において常套的に用いることは難しい。本明細書で使用される場合、「定量的ＰＣＲ（または「リアルタイムＱＰＣＲ」）」とは、反応産物を繰り返し試料採取することを必要とせずに行う、ＰＣＲ増幅の進行の直接モニタリングを指す。定量的ＰＣＲでは、反応産物が生成され、シグナルがバックグラウンドレベルを超えた後、反応がプラトーに到達する前に追跡されるとおり、シグナル伝達機構（例えば、蛍光）によって反応産物をモニターすることができる。蛍光の検出可能なまたは「閾値」レベルを実現するために必要なサイクル数は、ＰＣＲプロセスの開始時の増幅可能な標的の濃度に直接応じて変動し、これにより、シグナル強度を測定することによって試料中の標的核酸の量の測定をリアルタイムでもたらすことが可能になる。
【０２８２】
「正規化」を用いて、試料間の変動を除去することができる。マイクロアレイデータに関して、正規化のプロセスは、２つの標識色素の蛍光強度を釣り合わせることによって系統的な誤差を除去することを目的とする。色素の偏りは、色素の標識効率、熱および光感受性、ならびに２つのチャネルをスキャンするためのスキャナー設定の差異を含めた種々の原因に由来し得る。正規化因子を算出するために一般に用いられる方法のいくつかとして、（ｉ）対数尺度ロバストマルチアレイ解析（ＲＭＡ）によるものなどの、アレイ上の全ての遺伝子を使用する全体的な正規化；（ｉｉ）常に発現されるハウスキーピング／不変遺伝子を使用するハウスキーピング遺伝子正規化；および（ｉｉｉ）ハイブリダイゼーションの間に添加される既知量の外因性対照遺伝子を使用する内部対照品正規化（Ｑｕａｃｋｅｎｂｕｓｈ（２００２年）Ｎａｔ．  Ｇｅｎｅｔ．  ３２巻（補遺）、４９６〜５０１頁）が挙げられる。一実施形態では、本明細書に開示されている遺伝子の発現は、発現を対照ハウスキーピング遺伝子の発現に対して正規化することによって、または対数尺度ロバストマルチアレイ解析（ＲＭＡ）を実施することによって決定することができる。
２．幹細胞または前駆細胞の遺伝子発現プロファイル
【０２８３】
治療用組成物は、虚血組織の処置に関連する治療的性質が増大した、処理した幹細胞または前駆細胞の集団を含む。いかなる特定の理論にも縛られることを望むことなく、細胞をプロスタグランジン経路アゴニストおよび／またはグルココルチコイドを用いて処理することにより、細胞の、虚血組織または虚血組織と関連した１つまたは複数の（ｍｏｒｅ
ｏｒ  ｍｏｒｅ）症状を処置するために有用な治療的性質が増大する。治療的性質が増大した細胞は、ＣＸＣＲ４遺伝子発現の増加およびＣＸＣＲ４ポリペプチドの細胞表面発現の増加を特徴とする。特定の実施形態では、治療用組成物は、遺伝子および細胞表面ＣＸＣＲ４の発現のレベルの上昇を特徴とする造血幹細胞または造血前駆細胞を含む。
【０２８４】
プロスタグランジン経路アゴニストおよびグルココルチコイドを用いて処理した幹細胞または前駆細胞、例えば、造血幹細胞または造血前駆細胞は、ＣＸＣＲ４遺伝子発現が、無処理の細胞におけるＣＸＣＲ４の発現と比較して少なくとも４０倍、４５倍、５０倍、５５倍、６０倍、６５倍、７０倍、７５倍、または８０倍増加することを特徴とし得る。
【０２８５】
治療的性質が増大した細胞は、独特の遺伝子発現シグネチャーをさらに特徴とし得、ＣＸＣＲ４、ヒアルロナンシンターゼ１（ＨＡＳ１）、ＧＴＰ結合性タンパク質ＧＥＭ（ＧＥＭ）、二重特異性プロテインホスファターゼ４（ＤＵＳＰ４）、アンフィレギュリン（ＡＲＥＧ）、核受容体関連タンパク質１（ＮＲ４Ａ２）、レニン（ＲＥＮ）、ｃＡＭＰ応答エレメントモジュレーター（ＣＲＥＭ）、Ｉ型アルファ１コラーゲン（ＣＯＬ１Ａ１）、およびＦｏｓ関連抗原２（ＦＯＳＬ２）からなる群から選択されるシグネチャー遺伝子の１種、２種、３種、４種、５種、６種、７種、８種、９種、または１０種全ての発現が無処理の細胞と比較して増加する。
【０２８６】
他の特定の実施形態では、プロスタグランジン経路アゴニストおよびグルココルチコイドを用いて処理した造血幹細胞または造血前駆細胞は遺伝子発現シグネチャーを有し、１種、２種、３種、４種、５種、６種、７種、８種、９種、１０種またはそれより多くのシグネチャー遺伝子が、無処理の細胞と比較して少なくとも４０倍、４５倍、５０倍、５５倍、６０倍、６５倍、７０倍、７５倍、または８０倍増加する。いくつかの実施形態では、全てのシグネチャー遺伝子の平均倍数変化が少なくとも約１５倍、２０倍、２５倍、３０倍または３５倍である。いくつかの実施形態では、全てのシグネチャー遺伝子の平均倍数変化が少なくとも約２５、または３０倍である。
【０２８７】
処理した幹細胞または前駆細胞の遺伝子発現または遺伝子発現シグネチャーを、細胞を、作用剤を用いて処理した後に決定することもでき、処理後に細胞をいくらかの期間にわたってインキュベートした後、細胞の遺伝子発現シグネチャーを決定することもできる。例えば、細胞を、ｅｘ  ｖｉｖｏにおいて、１種または複数種の作用剤を用いて処理し、洗浄して作用剤を除去し、細胞をさらにインキュベートせずに遺伝子発現を分析することができる。あるいは、いくつかの実施形態では、細胞を１種または複数種の作用剤を用いて処理し、洗浄して作用剤を細胞集団から除去し、次いで、細胞をｅｘ  ｖｉｖｏにおいていくらかの期間にわたってインキュベートした後に、細胞の遺伝子発現シグネチャーを分析する。
３．ＨＳＰＣの供給源
【０２８８】
本発明の方法において調製されるＨＳＰＣは、造血幹細胞および造血前駆細胞の任意の適切な供給源から得ることができ、高度に精製されたＨＳＰＣの集団（均一な集団）として、または０．０１％〜約１００％のＨＳＰＣを含む組成物（不均一な集団）として提供し、処理することができる。例えば、これだけに限定することなく、ＨＳＰＣは、未分画骨髄（ＣＤ３４＋細胞が骨髄細胞集団の約１％未満を構成する）、臍帯血、胎盤血、胎盤、胎児血、胎児肝臓、胎児脾臓、ホウォートンゼリー、または動員された末梢血などの組成物でもたらすことができる。
【０２８９】
本発明の方法において使用するための適切なＨＳＰＣの供給源としては、これだけに限定されないが、造血起源の細胞を含有する体の臓器から単離されたまたは得られた細胞が挙げられる。「単離された」とは、その元の環境から取り出された材料を意味する。例えば、細胞は、そのネイティブな状態では通常それに付随する構成成分の一部または全部から分離されている場合、単離されている。例えば、「単離された細胞の集団」、「単離された細胞の供給源」または「単離されたＨＳＰＣ」などは、本明細書で使用される場合、１つまたは複数の細胞が、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏにおいてそれらの天然の細胞の環境から、および組織または臓器の他の構成成分との会合から分離されていること、すなわち、ｉｎ  ｖｉｖｏにおける物質が有意に会合していないことを指す。
【０２９０】
ＨＳＰＣは、大腿骨、寛骨、肋骨、胸骨、および他の骨を含む成体の骨髄から得ることまたは単離することができる。ＨＳＰＣを含有する骨髄吸引物は、針およびシリンジを使用して寛骨部から直接得ることまたは単離することができる。他のＨＳＰＣの供給源としては、臍帯血、胎盤血、動員された末梢血、ホウォートンゼリー、胎盤、胎児血、胎児肝臓、または胎児脾臓が挙げられる。特定の実施形態では、治療への適用において使用するために十分な数量のＨＳＰＣの回収には、ドナーにおいて幹細胞および前駆細胞を動員することが必要な場合がある。
【０２９１】
「造血幹細胞動員」とは、幹細胞移植の前に、白血球除去のために幹細胞を骨髄から末梢血循環中に放出させることを指す。ドナーから回収される幹細胞の数を増加させることにより、治療への適用のために利用可能な幹細胞の数を有意に改善することができる。多くの場合、造血性増殖因子、例えば、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）または化学療法剤を使用して動員を刺激する。商業的な幹細胞動員薬が存在し、Ｇ−ＣＳＦと組み合わせて使用して、被験体に移植するために十分な数量の造血幹細胞および造血前駆細胞を動員することができる。例えば、移植するために十分な数の造血細胞を回収するために、Ｇ−ＣＳＦおよびＭｏｚｏｂｉｌ（商標）（Ｇｅｎｚｙｍｅ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）をドナーに投与することができる。造血幹細胞および造血前駆細胞を動員する他の方法は、当業者には明らかであろう。
【０２９２】
特定の実施形態では、臍帯血からＨＳＰＣを得る。臍帯血は、当技術分野で公知の技法に従って回収することができる（例えば、そのような方法体系に関して参照により本明細書に組み込まれる米国特許第７，１４７，６２６号および同第７，１３１，９５８号を参照されたい）。
【０２９３】
一実施形態では、ＨＳＰＣは、多能性幹細胞供給源、例えば、人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）および胚性幹細胞（ＥＳＣ）から得ることができる。本明細書で使用される場合、「人工多能性幹細胞」または「ｉＰＳＣ」という用語は、多能性の状態に再プログラミングされた非多能性細胞を指す。被験体の細胞が多能性の状態に再プログラミングされたら、次いで、細胞を、造血幹細胞または造血前駆細胞などの所望の細胞型にプログラミングすることができる。本明細書で使用される場合、「再プログラミング」という用語は、細胞の潜在能を分化の程度が低い状態まで増大させる方法を指す。本明細書で使用される場合、「プログラミング」という用語は、細胞の潜在能を減少させるまたは細胞を分化の程度が高い状態に分化させる方法を指す。
４．治療用細胞組成物
【０２９４】
本発明は、本明細書に記載の増強されたＨＳＰＣを含む治療用組成物も提供する。具体的には、本発明の治療用組成物は、ＨＳＰＣにおけるＣＸＣＲ４遺伝子発現を増加させることができる１種または複数種の作用剤とｅｘ  ｖｉｖｏで接触させたＨＳＰＣを含む細胞の集団を含み、ＣＸＣＲ４の遺伝子発現が、該ＨＳＰＣにおいて、接触させていないＨＳＰＣと比較して少なくとも約３０倍増加する。一実施形態では、本発明の治療用組成物は、ｅｘ  ｖｉｖｏにおいてプロスタグランジン経路アゴニストおよびグルココルチコイドを用いて処理したＨＳＰＣを含む細胞の集団を含む。ある特定の実施形態では、増強されたＨＳＰＣを含む治療用組成物は全骨髄、臍帯血、または動員された末梢血である。
【０２９５】
特定の実施形態では、治療用組成物は、約９５％〜約１００％がＨＳＰＣである細胞の集団を含む。本発明は、一部において、高度に精製されたＨＳＰＣの治療用組成物、例えば、約９５％のＨＳＰＣを含む細胞の集団を含む組成物を使用することにより、幹細胞治療の効率を改善することができることを意図している。現在実施されている移植方法では、一般には、未分画の細胞の混合物を使用し、ＨＳＰＣは、細胞集団全体の１％未満を構成する。
【０２９６】
いくつかの実施形態では、治療用組成物は、約０．１％未満、０．５％未満、１％未満、２％未満、５％未満、１０％未満、１５％未満、２０％未満、２５％未満、または３０％未満のＨＳＰＣを含む細胞の集団を含む。いくつかの実施形態では、細胞の集団は、約０．１％未満、０．５％未満、１％未満、２％未満、５％未満、１０％未満、１５％未満、２０％未満、２５％未満、または３０％未満のＨＳＰＣを含む。他の実施形態では、細胞の集団は、約０．１％〜約１％、約１％〜約３％、約３％〜約５％、約１０％〜約１５％、約１５％〜２０％、約２０％〜２５％、約２５％〜３０％、約３０％〜３５％、約３５％〜４０％、約４０％〜４５％、約４５％〜５０％、約６０％〜７０％、約７０％〜８０％、約８０％〜９０％、約９０％〜９５％、または約９５％〜約１００％がＨＳＰＣである。
【０２９７】
特定の実施形態では、細胞の集団は、約０．１％〜約１％、約１％〜約３％、約３％〜約５％、約１０％〜約１５％、約１５％〜２０％、約２０％〜２５％、約２５％〜３０％、約３０％〜３５％、約３５％〜４０％、約４０％〜４５％、約４５％〜５０％、約６０％〜７０％、約７０％〜８０％、約８０％〜９０％、約９０％〜９５％、または約９５％〜約１００％がＨＳＰＣである。
【０２９８】
本発明の治療用組成物中のＨＳＰＣは、治療用組成物を投与する被験体に対して自己由来／自原性（「自己」）であっても非自己由来（「非自己」、例えば、同種異系、同系または異種）であってもよい。「自己由来」とは、本明細書で使用される場合、同じ被験体由来の細胞を指す。「同種異系」とは、本明細書で使用される場合、比較する細胞とは遺伝的に異なる同じ種の細胞を指す。「同系」とは、本明細書で使用される場合、比較する細胞と遺伝的に同一である、異なる被験体の細胞を指す。「異種」とは、本明細書で使用される場合、比較する細胞とは異なる種の細胞を指す。特定の実施形態では、本発明のＨＳＰＣは同種異系または自己由来のものである。
【０２９９】
本発明の方法において使用するためのＨＳＰＣは、成熟造血細胞、例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、樹状細胞、単球、顆粒球、赤血球系細胞、およびそれらの関係づけられる前駆体などを骨髄吸引物、臍帯血、または動員された末梢血（動員された白血球除去産物）から枯渇させたものであってよい。成熟した、系統で関係づけられる細胞を免疫枯渇によって、例えば、固体基材（ｓｏｌｉｄ  ｓｕｂｓｔｒａｔｅ）を、いわゆる「系統」抗原：ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１６、ＣＤ１９、ＣＤ５６、ＣＤ１２３、およびＣＤ２３５ａのパネルに結合する抗体で標識することによって枯渇させる。ＣＤ３４＋抗原に結合する抗体で標識した基材を使用して原始造血幹細胞および造血前駆細胞を分離するその後の工程を実施して、細胞の集団をさらに精製することができる。種々の細胞供給源から幹細胞および前駆細胞を精製するためのキットが市販されており、特定の実施形態では、これらのキットは、本発明の方法と共に使用するために適している。幹細胞および前駆細胞を精製するための例示的な市販のキットとしては、これだけに限定されないが、Ｌｉｎｅａｇｅ（Ｌｉｎ）Ｄｅｐｌｅｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ）；ＣＤ３４＋富化キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ）；ＲｏｓｅｔｔａＳｅｐ（Ｓｔｅｍ  ｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）が挙げられる。
【０３００】
一実施形態では、治療用組成物中のＨＳＰＣの量は、少なくとも細胞０．１×１０５個、少なくとも細胞０．５×１０５個、少なくとも細胞１×１０５個、少なくとも細胞５×１０５個、少なくとも細胞１０×１０５個、少なくとも細胞０．５×１０６個、少なくとも細胞０．７５×１０６個、少なくとも細胞１×１０６個、少なくとも細胞１．２５×１０６個、少なくとも細胞１．５×１０６個、少なくとも細胞１．７５×１０６個、少なくとも細胞２×１０６個、少なくとも細胞２．５×１０６個、少なくとも細胞３×１０６個、少なくとも細胞４×１０６個、少なくとも細胞５×１０６個、少なくとも細胞１０×１０６個、少なくとも細胞１５×１０６個、少なくとも細胞２０×１０６個、少なくとも細胞２５×１０６個、または少なくとも細胞３０×１０６個である。
【０３０１】
特定の実施形態では、治療用組成物中のＨＳＰＣの量は、細胞約０．１×１０５個〜細胞約１０×１０５個；細胞約０．５×１０６個〜細胞約５×１０６個；細胞約１×１０６個〜細胞約３×１０６個；細胞約１．５×１０６個〜細胞約２．５×１０６個；または細胞約２×１０６個〜細胞約２．５×１０６個である。
【０３０２】
特定の実施形態では、治療用組成物中のＨＳＰＣの量は、細胞約１×１０６個〜細胞約３×１０６個；細胞約１．０×１０６個〜細胞約５×１０６個；細胞約１．０×１０６個〜細胞約１０×１０６個；細胞約１０×１０６個〜細胞約２０×１０６個；細胞約１０×１０６個〜細胞約３０×１０６個；または細胞約２０×１０６個〜細胞約３０×１０６個である。
【０３０３】
別の実施形態では、治療用組成物中のＨＳＰＣの量は、細胞約１×１０６個〜細胞約３０×１０６個；細胞約１．０×１０６個〜細胞約２０×１０６個；細胞約１．０×１０６個〜細胞約１０×１０６個；細胞約２．０×１０６個〜細胞約３０×１０６個；細胞約２．０×１０６個〜細胞約２０×１０６個；または細胞約２．０×１０６個〜細胞約１０×１０６個である。
【０３０４】
特定の実施形態では、治療用組成物中のＨＳＰＣの量は、ＨＳＰＣ約１×１０６個；細胞約２×１０６個；細胞約５×１０６個；細胞約７×１０６個；細胞約１０×１０６個；細胞約１５×１０６個；細胞約１７×１０６個；細胞約２０×１０６個；細胞約２５×１０６個；または細胞約３０×１０６個である。
【０３０５】
一実施形態では、治療用組成物中のＨＳＰＣの量は、部分的なまたは単一の臍帯血（ｃｏｒｄ  ｏｆ  ｂｌｏｏｄ）中のＨＳＰＣの量、または少なくとも体重１ｋｇ当たり細胞０．１×１０５個、少なくとも体重１ｋｇ当たり細胞０．５×１０５個、少なくとも体重１ｋｇ当たり細胞１×１０５個、少なくとも体重１ｋｇ当たり細胞５×１０５個、少なくとも体重１ｋｇ当たり細胞１０×１０５個、少なくとも体重１ｋｇ当たり細胞０．５×１０６個、少なくとも体重１ｋｇ当たり細胞０．７５×１０６個、少なくとも体重１ｋｇ当たり細胞１×１０６個、少なくとも体重１ｋｇ当たり細胞１．２５×１０６個、少なくとも体重１ｋｇ当たり細胞１．５×１０６個、少なくとも体重１ｋｇ当たり細胞１．７５×１０６個、少なくとも体重１ｋｇ当たり細胞２×１０６個、少なくとも体重１ｋｇ当たり細胞２．５×１０６個、少なくとも体重１ｋｇ当たり細胞３×１０６個、少なくとも体重１ｋｇ当たり細胞４×１０６個、少なくとも体重１ｋｇ当たり細胞５×１０６個、少なくとも体重１ｋｇ当たり細胞１０×１０６個、少なくとも体重１ｋｇ当たり細胞１５×１０６個、少なくとも体重１ｋｇ当たり細胞２０×１０６個、少なくとも体重１ｋｇ当たり細胞２５×１０６個、もしくは少なくとも体重１ｋｇ当たり細胞３０×１０６個である。
Ｄ．本発明の増強された細胞を調製する方法
【０３０６】
本発明は、一部において、ＣＸＣＲ４遺伝子発現のレベルが上昇していることを特徴とするＨＳＰＣを調製する方法を意図している。特定の実施形態では、ＨＳＰＣを調製する方法は、ＨＳＰＣを、ｅｘ  ｖｉｖｏにおいて、接触させた細胞におけるＣＸＣＲ４遺伝子発現を増加させることができる１種または複数種の作用剤を用いて、接触させた細胞におけるＣＸＣＲ４遺伝子発現を、接触させていない細胞と比較して少なくとも３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、または８０倍増加させるために十分な条件下で処理する工程を含む。一実施形態では、本発明のＨＳＰＣを調製する方法は、ＨＳＰＣを、ｅｘ  ｖｉｖｏにおいてプロスタグランジン経路アゴニストおよびグルココルチコイドを用いて処理する工程を含む。
【０３０７】
本明細書で使用される場合、「十分な条件」または「十分な条件下で」という用語は、ＨＳＰＣを１種または複数種の作用剤を用いて処理して、細胞におけるＣＸＣＲ４遺伝子発現を対照、ビヒクル、または無処理細胞と比較して驚くべき予想外のレベルまで増加させるための条件を指す。
【０３０８】
条件としては、これだけに限定されないが、細胞の供給源、細胞を処理するために使用する作用剤および作用剤（複数可）の濃度、細胞を作用剤（複数可）に曝露する時間、ならびに処理温度が挙げられる。
１．増強された細胞の調製において有用な作用剤
【０３０９】
本明細書で使用される場合、「作用剤」とは、作用剤を用いて処理したＨＳＰＣにおけるＣＸＣＲ４遺伝子発現を増加させることができる化合物または分子を指し得、また、単独で、または別の化合物または分子と組み合わせてのいずれかで使用した場合にＣＸＣＲ４の発現を増加させる化合物を指す。本発明の特定の実施形態では、２つ以上の作用剤の組合せを用いて処理したＨＳＰＣにおけるＣＸＣＲ４遺伝子発現を増加させるように相乗的に作用する組合せを、増強されたＨＳＰＣの調製において使用する。特定の作用剤としては、例えば、プロスタグランジン経路を刺激することができる化合物、例えば、プロスタグランジン経路アゴニスト、ならびにグルココルチコイドが挙げられる。
２．プロスタグランジン経路アゴニスト
【０３１０】
本明細書で使用される場合、「プロスタグランジン経路アゴニスト」という用語は、ＰＧＥ２Ｒ２および／またはＰＧＥ２Ｒ４細胞シグナル伝達経路を刺激する作用剤を含めた、プロスタグランジン細胞シグナル伝達経路を刺激し、細胞におけるＣＸＣＲ４遺伝子発現を増加させる作用剤を指す。本発明の細胞の調製において使用するために適したプロスタグランジン経路アゴニストの実例としては、これだけに限定されないが、ＰＧＥ２、ｄｍＰＧＥ２、１５（Ｓ）−１５−メチルＰＧＥ２、２０−エチルＰＧＥ２、８−イソ−１６−シクロヘキシル−テトラノルＰＧＥ２、およびＰＧＥ２類似体が挙げられる。ある特定の実施形態では、ＰＧＥ２Ｒ２アゴニストおよびＰＧＥ２Ｒ４アゴニストならびにその類似体が特に興味深く、いくつかの実施形態では、作用剤は、ＰＧＥ２ＥＰ２受容体またはＰＧＥ２ＥＰ４受容体に優先的に結合し、それを活性化する。
【０３１１】
本明細書で使用される場合、「プロスタグランジンＥ２」または「ＰＧＥ２」という用語は、限定することなく、任意の天然に存在するまたは化学的に合成されたＰＧＥ２分子、ならびにその「類似体」を包含する。本明細書で使用される場合、「類似体」という用語は、別の化学的な物質、例えばＰＧＥ２と構造および機能が類似しており、多くの場合、単一のエレメントまたは基によって構造的に異なるが、親の化学的性質と同じ機能が保持されるのであれば２つ以上の基（例えば、２つ、３つ、または４つの基）の修飾によって異なってもよい化学的な分子に関する。そのような修飾は当業者には常套的なものであり、それらとしては、例えば、付加または置換された化学的部分、例えば、酸のエステルまたはアミドなど、保護基、例えば、アルコールまたはチオールに対するベンジル基およびアミンに対するｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（ｂｕｔｏｘｙｌｃａｒｂｏｎｙｌ）基が挙げられる。アルキル側鎖に対する修飾、例えば、アルキル置換（例えば、メチル、ジメチル、エチルなど）、側鎖の飽和または不飽和のレベルに対する修飾、および修飾された基、例えば、置換されたフェニルおよびフェノキシの付加も包含される。類似体は、コンジュゲート、例えば、ビオチン部分またはアビジン部分、酵素、例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼなども含んでよく、放射性標識された部分、生物発光部分、化学発光性部分、または蛍光部分も含み得る。また、本明細書に記載の作用剤に部分を付加して、他の望ましい特性の中でも、ｉｎ  ｖｉｖｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏにおける半減期を増加させること、またはそれらの細胞への浸透性を増大させることなど、それらの薬物動態的性質を変更することができる。医薬の多数の望ましい品質（例えば、溶解性、生物学的利用能、製造など）を増強することが公知であるプロドラッグも包含される（例えば、例示的なＥＰアゴニストプロドラッグについては、そのようなアゴニストについてのその開示に関して参照により組み込まれるＷＯ／２００６／０４７４７６を参照されたい）。
【０３１２】
ＰＧＥ２「類似体」の実例としては、限定することなく、１６，１６−ジメチルＰＧＥ２（「ｄｍＰＧＥ２」）、１６，１６−ジメチルＰＧＥ２ｐ−（ｐ−アセトアミドベンズアミド）フェニルエステル、１１−デオキシ−１６，１６−ジメチルＰＧＥ２、９−デオキシ−９−メチレン−１６，１６−ジメチルＰＧＥ２、９−デオキシ−９−メチレンＰＧＥ２、９−ケトフルプロステノール、５−トランスＰＧＥ２、１７−フェニル−オメガ−トリノルＰＧＥ２、ＰＧＥ２セリノールアミド、ＰＧＥ２メチルエステル、１６−フェニルテトラノルＰＧＥ２、１５（Ｓ）−１５−メチルＰＧＥ２、１５（Ｒ）−１５−メチルＰＧＥ２、８−イソ−１５−ケトＰＧＥ２、８−イソＰＧＥ２イソプロピルエステル、８−イソ−１６−シクロヘキシル−テトラノルＰＧＥ２、２０−ヒドロキシＰＧＥ２、２０−エチルＰＧＥ２、１１−デオキシＰＧＥ１、ノクロプロスト、スルプロストン、ブタプロスト、１５−ケトＰＧＥ２、および１９（Ｒ）ヒドロキシＰＧＥ２が挙げられる。９位においてハロゲンで置換された、ＰＧＥ２と類似の構造を有するＰＧ類似体または誘導体（例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２００１／１２５９６を参照されたい）、ならびに、その全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２００６／０２４７２１４号に記載のものなどの２−デカルボキシ−２−ホスフィニコプロスタグランジン誘導体も包含される。
【０３１３】
これだけに限定することなく、アルプロスタジルを含めたＰＧＥ１類似体も、ＰＧＥ２Ｒ２（ＥＰ２）細胞シグナル伝達経路およびＰＧＥ２Ｒ４（ＥＰ４）細胞シグナル伝達経路を活性化するために使用することができ、本発明の方法において有用な作用剤として意図される。
【０３１４】
ＰＧＥ２Ｒ２（ＥＰ２）細胞シグナル伝達経路およびＰＧＥ２Ｒ４（ＥＰ４）細胞シグナル伝達経路の刺激／活性化は、生着を増加させ、細胞の生存能力を維持し、細胞のホーミングおよび増殖を増加させる、ＨＳＰＣにおける生理応答の基礎をなすことを意図する。したがって、一実施形態では、ＰＧＥ２Ｒ２受容体およびＰＧＥ２Ｒ４受容体に結合し、それを刺激する「ＰＧＥ２ベースではないリガンド」（すなわち、ＰＧＥ２Ｒ２／ＰＧＥ２Ｒ４アゴニスト）が本発明の方法において使用するために意図されている。
【０３１５】
ＰＧＥ２ベースではないＥＰ２受容体アゴニストの実例としては、ＣＡＹ１０３９９、ＯＮＯ＿８８１５Ｌｙ、ＯＮＯ−ＡＥ１−２５９、ＣＰ−５３３，５３６、ならびにＷＯ２００７／０７１４５６に開示されているカルバゾールおよびフルオレンが挙げられる。
【０３１６】
ＰＧＥ２ベースではないＥＰ４アゴニストの実例としては、ＯＮＯ−４８１９、ＡＰＳ−９９９Ｎａ、ＡＨ２３８４８、ＯＮＯ−ＡＥ１−３２９、ならびにＷＯ／２０００／０３８６６３；米国特許第６，７４７，０３７号；および米国特許第６，６１０，７１９号）に開示されている他のＰＧＥ２ベースではないＥＰ４アゴニストが挙げられる。
【０３１７】
ＰＧＥ２ＥＰ４受容体に選択的な作用剤は、ＰＧＥ２ＥＰ４受容体に優先的に結合し、それを活性化する。そのような作用剤のＥＰ４受容体に対する親和性は、他の３つのＥＰ受容体、すなわちＥＰ１、ＥＰ２およびＥＰ３のいずれに対する親和性よりも高い。ＰＧＥ  ＥＰ４受容体に選択的に結合する作用剤としては、これだけに限定されないが、５−［（１Ｅ，３Ｒ）−４，４−ジフルオロ−３−ヒドロキシ−４−フェニル−１−ブテン−１−イル］−１−［６−（２Ｈ−テトラゾール−５Ｒ−イル）ヘキシル］−２−ピロリジノン；２−［３−［（１Ｒ，２Ｓ，３Ｒ）−３−ヒドロキシ−２−［（Ｅ，３Ｓ）−３−ヒドロキシ−５−［２−（メトキシメチル）フェニル］ペンタ−１−エニル］−５−オキソシクロペンチルジスルファニルプロピルスルファニル］酢酸；メチル４−［２−［（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ）−３−ヒドロキシ−２−［（Ｅ，３Ｓ）−３−ヒドロキシ−４−［３−（メトキシメチル）フェニル］ブタ−１−エニル］−５−オキソシクロペンチル］エチルスルファニル］ブタノエート；１６−（３−メトキシメチル）フェニル−ロ−テトラノル−５−チアＰＧＥ；５−｛３−［（２Ｓ）−２−｛（３Ｒ）−３−ヒドロキシ−４−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］ブチル｝−５−オキソピロリジン−１−イル］プロピル］チオフェン−２−カルボキシレート；［４’−［３−ブチル−５−オキソ−１−（２−トリフルオロメチル−フェニル）−１，５−ジヒドロ−［１，２，４］トリアゾール−４−イルメチル］−ビフェニル−２−スルホン酸（３−メチル−チオフェン−２−カルボニル）−アミド］；および（（Ｚ）−７−｛（１Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）−５−［（Ｅ）−５−（３−クロロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−３−ヒドロキシ−ペンタ−１−エニル］−４−ヒドロキシ−３，３−ジメチル−２−オキソ−シクロペンチル｝−ヘプタ−５−エン酸）、およびこれらの作用剤のいずれかの薬学的に許容される塩からなる群から選択される作用剤が挙げられる。
【０３１８】
特定の実施形態では、プロスタグランジン経路アゴニストは、ＰＧＥ２、ｄｍＰＧＥ２、１５（Ｓ）−１５−メチルＰＧＥ２、２０−エチルＰＧＥ２、または８−イソ−１６−シクロヘキシル−テトラノルＰＧＥ２である。
３．グルココルチコイド
【０３１９】
本発明の方法において使用するために適したグルココルチコイドおよびグルココルチコイド受容体アゴニストの実例としては、これだけに限定されないが、メドリゾン、アルクロメタゾン、ジプロピオン酸アルクロメタゾン、アムシノニド、ベクロメタゾン、ジプロピオン酸ベクロメタゾン、ベタメタゾン、安息香酸ベタメタゾン、吉草酸ベタメタゾン、ブデソニド、シクレソニド、クロベタゾール、酪酸クロベタゾール、プロピオン酸クロベタゾール、クロベタゾン、クロコルトロン、クロプレドノール、コルチゾール、コルチゾン、コルチバゾール、デフラザコート、デソニド、デスオキシメタゾン（ｄｅｓｏｘｉｍｅｔａｓｏｎｅ）、デスオキシコルトン、デスオキシメタゾン（ｄｅｓｏｘｙｍｅｔｈａｓｏｎｅ）、デキサメタゾン、ジフロラゾン、二酢酸ジフロラゾン、ジフルコルトロン、吉草酸ジフルコルトロン、ジフルオロコルトロン、ジフルプレドナート、フルクロロロン、フルクロロロンアセトニド、フルドロキシコルチド、フルメタゾン（ｆｌｕｍｅｔａｓｏｎｅ）、フルメタゾン（ｆｌｕｍｅｔｈａｓｏｎｅ）、ピバル酸フルメタゾン、フルニソリド、フルニソリド半水和物、フルオシノロン、フルオシノロンアセトニド、フルオシノニド、フルオコルチン、フルオコルチンブチル、フルオコルトロン、フルオロコルチゾン、フルオロメトロン、フルペロロン、フルプレドニデン、酢酸フルプレドニデン、フルプレドニゾロン、フルチカゾン、プロピオン酸フルチカゾン、ホルモコータル、ハルシノニド、ハロメタゾン、ヒドロコルチゾン、酢酸ヒドロコルチゾン、アセポン酸ヒドロコルチゾン、ヒドロコルチゾンブテプレート、酪酸ヒドロコルチゾン、ロテプレドノール、メプレドニゾン、６ａ−メチルプレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、酢酸メチルプレドニゾロン、アセポン酸メチルプレドニゾロン、モメタゾン、フロ酸モメタゾン、フロ酸モメタゾン一水和物、パラメタゾン、プレドニカルベート、プレドニゾロン、プレドニゾン、プレドニリデン、リメキソロン、チキソコルトール、トリアムシノロン、トリアムシノロンアセトニドおよびウロベタゾールならびにそれらの組合せが挙げられる。
【０３２０】
特定の実施形態では、グルココルチコイドは、メドリゾン、ヒドロコルチゾン、トリアムシノロン、アルクロメタゾン、またはデキサメタゾンを含む。より詳細な実施形態では、グルココルチコイドはメドリゾンである。
４．作用剤の組合せ
【０３２１】
作用剤の組合せも本発明の増強されたＨＳＰＣの調製において使用することができ、特定の実施形態では、作用剤の組合せを用いてＨＳＰＣを処理することにより、処理した細胞におけるＣＸＣＲ４遺伝子およびタンパク質の発現が予想外に相乗的に増加する。具体的には、プロスタグランジン経路アゴニストとグルココルチコイドの組合せを用いて処理したＨＳＰＣではＣＸＣＲ４遺伝子およびタンパク質の発現が予想外に大きく増加し、これは、処理した細胞の治療的性質が対照、ビヒクル、または無処理細胞と比較して改善されることと相関する。
【０３２２】
本発明の特定の実施形態では、ＨＳＰＣを、１種または複数種のプロスタグランジン経路アゴニストと１種または複数種のグルココルチコイドの組合せを用いて処理する。
【０３２３】
本発明の特定の実施形態では、組み合わせるプロスタグランジン経路アゴニストは、ＰＧＥ２ＥＰ２受容体またはＰＧＥ２ＥＰ４受容体に選択的に結合する化合物である。本発明の他の実施形態では、プロスタグランジン経路アゴニストは、ＰＧＥ２、またはＰＧＥ２類似体またはその誘導体を含む。特定の実施形態では、プロスタグランジン経路アゴニストは、ＰＧＥ２、ｄｍＰＧＥ２、１５（Ｓ）−１５−メチルＰＧＥ２、２０−エチルＰＧＥ２、または８−イソ−１６−シクロヘキシル−テトラノルＰＧＥ２である。本発明のより詳細な実施形態では、プロスタグランジン経路アゴニストは、ＰＧＥ２または１６，１６−ジメチルＰＧＥ２である。
【０３２４】
いくつかの実施形態では、組み合わせるグルココルチコイドは、メドリゾン、アルクロメタゾン、ジプロピオン酸アルクロメタゾン、アムシノニド、ベクロメタゾン、ジプロピオン酸ベクロメタゾン、ベタメタゾン、安息香酸ベタメタゾン、吉草酸ベタメタゾン、ブデソニド、シクレソニド、クロベタゾール、酪酸クロベタゾール、プロピオン酸クロベタゾール、クロベタゾン、クロコルトロン、クロプレドノール、コルチゾール、コルチゾン、コルチバゾール、デフラザコート、デソニド、デスオキシメタゾン（ｄｅｓｏｘｉｍｅｔａｓｏｎｅ）、デスオキシコルトン、デスオキシメタゾン（ｄｅｓｏｘｙｍｅｔｈａｓｏｎｅ）、デキサメタゾン、ジフロラゾン、二酢酸ジフロラゾン、ジフルコルトロン、吉草酸ジフルコルトロン、ジフルオロコルトロン、ジフルプレドナート、フルクロロロン、フルクロロロンアセトニド、フルドロキシコルチド、フルメタゾン（ｆｌｕｍｅｔａｓｏｎｅ）、フルメタゾン（ｆｌｕｍｅｔｈａｓｏｎｅ）、ピバル酸フルメタゾン、フルニソリド、フルニソリド半水和物、フルオシノロン、フルオシノロンアセトニド、フルオシノニド、フルオコルチン、フルオコルチンブチル、フルオコルトロン、フルオロコルチゾン、フルオロメトロン、フルペロロン、フルプレドニデン、酢酸フルプレドニデン、フルプレドニゾロン、フルチカゾン、プロピオン酸フルチカゾン、ホルモコータル、ハルシノニド、ハロメタゾン、ヒドロコルチゾン、酢酸ヒドロコルチゾン、アセポン酸ヒドロコルチゾン、ヒドロコルチゾンブテプレート、酪酸ヒドロコルチゾン、ロテプレドノール、メプレドニゾン、６ａ−メチルプレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、酢酸メチルプレドニゾロン、アセポン酸メチルプレドニゾロン、モメタゾン、フロ酸モメタゾン、フロ酸モメタゾン一水和物、パラメタゾン、プレドニカルベート、プレドニゾロン、プレドニゾン、プレドニリデン、リメキソロン、チキソコルトール、トリアムシノロン、トリアムシノロンアセトニドおよびウロベタゾールからなる群から選択される。
【０３２５】
より詳細な実施形態では、組み合わせるグルココルチコイドは、メドリゾン、ヒドロコルチゾン、アルクロメタゾン、デキサメタゾン、メチルプレドニゾロン、またはトリアムシノロンを含む。一実施形態では、グルココルチコイドはメドリゾンである。
【０３２６】
いくつかの実施形態では、ＨＳＰＣを、ＰＧＥ２、ｄｍＰＧＥ２、１５（Ｓ）−１５−メチルＰＧＥ２、２０−エチルＰＧＥ２、および８−イソ−１６−シクロヘキシル−テトラノルＰＧＥ２からなる群から選択されるプロスタグランジン経路アゴニストと、１種または複数種のグルココルチコイドとを含む組合せを用いて処理する。特定の実施形態では、ＨＳＰＣを、ＰＧＥ２またはｄｍＰＧＥ２とグルココルチコイドとを含む組合せを用いて処理する。
【０３２７】
いくつかの実施形態では、ＨＳＰＣを、ＰＧＥ２、ｄｍＰＧＥ２、１５（Ｓ）−１５−メチルＰＧＥ２、２０−エチルＰＧＥ２、および８−イソ−１６−シクロヘキシル−テトラノルＰＧＥ２からなる群から選択されるプロスタグランジン経路アゴニストと、メドリゾン、ヒドロコルチゾン、アルクロメタゾン、デキサメタゾン、メチルプレドニゾロン、またはトリアムシノロンからなる群から選択されるグルココルチコイドとを含む組合せを用いて処理する。
【０３２８】
他の実施形態では、組合せは、ＰＧＥ２またはｄｍＰＧＥ２およびメドリゾン、ヒドロコルチゾン、アルクロメタゾン、デキサメタゾン、メチルプレドニゾロン、またはトリアムシノロンを含む。より詳細な実施形態では、ＨＳＰＣを、ＰＧＥ２またはｄｍＰＧＥ２とメドリゾンとを含む組合せを用いて処理する。
５．作用剤の製剤化
【０３２９】
ｃＧＭＰ実施を用いて、本発明の治療用組成物の調製において有用な作用剤を、本発明の細胞を接触させることにおいて使用するための酢酸メチルなどの有機溶媒中に製剤化することができ、それを、内毒素を含まない容器に入れて供給することができる。本発明によって意図されている作用剤は、本明細書に記載の通り、ｅｘ  ｖｉｖｏにおいて哺乳動物の細胞に投与するために適している。ある特定の実施形態では、溶媒は、一般には、本明細書に記載の適切な有機溶媒（例えば、ＤＭＳＯ、ＤＭＦ、ＤＭＥなど、それらの組合せまたは混合物を含める）である。１種または複数種の溶媒を特定の比率で組み合わせることができる。例えば、２種の溶媒の混合物を、全ての整数および小数点を含めた、９．５：０．５、９：１、８：２、７：３、６：４、５：５などの比率で組み合わせることができる。
【０３３０】
「有機溶媒」または「適切な有機溶媒」という記述は、一般に、固体、液体、または気体の溶質を溶解し、溶液をもたらす、炭素を含有する液体または気体に関する。「適切な」有機溶媒とは、ｅｘ  ｖｉｖｏにおける条件（例えば、細胞培養）下でまたはｉｎ  ｖｉｖｏにおいて、選択された濃度で、インキュベーションまたは投与の時間にわたって、毒性または他の阻害的影響が最小であることなどにより、哺乳動物の細胞にｅｘ  ｖｉｖｏで投与するためまたは哺乳動物の細胞と一緒にインキュベートするために適した有機溶媒であり、被験体にｉｎ  ｖｉｖｏで投与するためにも適している。適切な有機溶媒は、本明細書に記載の作用剤の貯蔵安定性および取扱いについても適しているべきである。適切な有機溶媒の例としては、これだけに限定されないが、その混合物または組合せを含め、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメトキシエタン（ＤＭＥ）、およびジメチルアセトアミドが挙げられる。ある特定の実施形態では、組成物または有機溶媒は、酢酸メチルを「実質的に含まない」、つまり、組成物または溶媒中の酢酸メチルは痕跡量以下、好ましくは検出不可能な量（例えば、高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、ガスクロマトグラフィー（ＧＣ）などによって測定したところ）であるべきである。
【０３３１】
本明細書で使用される場合、「内毒素を含まない」という用語は、多くても痕跡量（すなわち、被験体に対する有害な生理作用がない量）の内毒素、好ましくは検出不可能な量の内毒素を含有する容器および／または組成物を指す。「内毒素を実質的に含まない」とは、細胞の用量当たりの内毒素が、生物製剤についてＦＤＡによって許容されている、１日当たり体重１ｋｇ当たり５ＥＵの総内毒素、平均７０ｋｇの人に対して細胞の総用量当たり３５０ＥＵよりも少ないことを意味する。一実施形態では、「内毒素を含まない」という用語は、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％内毒素を含まない容器および／または組成物を指す。内毒素は、特定の細菌、一般にはグラム陰性細菌に付随する毒素であるが、内毒素は、Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓなどのグラム陽性細菌において見いだすことができる。最も蔓延している内毒素は、種々のグラム陰性細菌の外膜に見いだされるリポ多糖（ＬＰＳ）またはリポオリゴ糖（ＬＯＳ）であり、これらの細菌の疾患を引き起こす能力の中で中心的な病原的特徴を示す。ヒトでは少量の内毒素により、他の有害な生理作用の中でも発熱、血圧の低下、ならびに炎症および凝固の活性化が生じる恐れがある。したがって、少量でさえもヒトにおいて有害作用が引き起こされる可能性があるので、多くの場合、薬物製品容器から内毒素のほとんどまたは全ての痕跡を除去することが望ましい。内毒素は、当技術分野で公知の方法を用いて容器から除去することができ、例えば、容器を、ＨＥＰＡフィルター付き洗浄設備内で内毒素を含まない水を用いて浄化し、２５０℃で発熱物質除去（ｄｅｐｙｒｏｇｅｎａｔｅ）し、クラス１００／１０のクリーンルーム（例えば、クラス１００のクリーンルームでは、１立方フィートの空気中に含有される０．５ミクロンよりも大きな粒子が１００個以下である）の内側に位置するＨＥＰＡフィルター付きワークステーションにおいて清潔に包装する。
【０３３２】
特定の実施形態では、ＨＳＰＣを、１種または複数種の作用剤をそれぞれ約１μＭ〜約１００μＭの最終濃度で用いて処理する（例えば、それと接触させる）。ある特定の実施形態では、ＨＳＰＣを、１種または複数種の作用剤をそれぞれ約１×１０−１４Ｍ〜約１×１０−３Ｍ、約１×１０−１３Ｍ〜約１×１０−４Ｍ、約１×１０−１２Ｍ〜約１×１０−５Ｍ、約１×１０−１１Ｍ〜約１×１０−４Ｍ、約１×１０−１１Ｍ〜約１×１０−５Ｍ、約１×１０−１０Ｍ〜約１×１０−４Ｍ、約１×１０−１０Ｍ〜約１×１０−５Ｍ、約１×１０−９Ｍ〜約１×１０−４Ｍ、約１×１０−９Ｍ〜約１×１０−５Ｍ、約１×１０−８Ｍ〜約１×１０−４Ｍ、約１×１０−７Ｍ〜約１×１０−４Ｍ、約１×１０−６Ｍ〜約１×１０−４Ｍの最終濃度、またはその間の任意の範囲の最終濃度で用いて処理する。
【０３３３】
別の特定の実施形態では、ＨＳＰＣを、１種または複数種の作用剤をそれぞれ約１×１０−１４Ｍ、約１×１０−１３Ｍ、約１×１０−１２Ｍ、約１×１０−１０Ｍ、約１×１０−９Ｍ、約１×１０−８Ｍ、約１×１０−７Ｍ〜約１×１０−６Ｍ、約１×１０−５Ｍ、約１×１０−４Ｍ、約１×１０−３Ｍの最終濃度、またはその間の任意の最終濃度で用いて処理する。１種または複数種の作用剤を含む処理では、作用剤は、互いと異なる濃度であってもよく、同じ濃度であってもよい。
【０３３４】
特定の実施形態では、ＨＳＰＣを、１回、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回または１０回またはそれより多く処理する（例えば、１種または複数種の作用剤と接触させる）。ＨＳＰＣは、同じ容器内の１種または複数種の作用剤と断続的に、不規則に、または逐次的に接触させること（例えば、細胞の集団を、１種の薬物とある期間にわたって接触させ、培養培地を交換し、かつ／または細胞の集団を洗浄し、次いで、このサイクルを、同じまたは異なる医薬品の組合せを用いて同じ所定の期間または異なる所定の期間にわたって繰り返すこと）ができる。
６．ＨＳＰＣの処理
【０３３５】
一実施形態では、ＨＳＰＣを調製する方法は、ＨＳＰＣを、ｅｘ  ｖｉｖｏにおいて、ＣＸＣＲ４遺伝子発現を増加させることができる１種または複数種の作用剤を用いて、接触させた細胞におけるＣＸＣＲ４遺伝子発現を接触させていない細胞と比較して少なくとも３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、または８０倍増加させるために十分な条件下で処理する工程を含む。ＨＳＰＣは、被験体から単離した後に、本明細書に開示されている作用剤を用いて処理することができる。別の実施形態では、ＨＳＰＣを被験体から単離し、増大させた後に、本明細書に開示されている作用剤を用いて処理する。一実施形態では、ＨＳＰＣを被験体から単離し、凍結保存した後に、本明細書に開示されている作用剤を用いて処理する。
【０３３６】
特定の実施形態では、ＨＳＰＣを、１種または複数種の作用剤、例えば、プロスタグランジン経路アゴニストとグルココルチコイドの組合せを、接触させた細胞におけるＣＸＣＲ４遺伝子発現を接触させていない細胞と比較して少なくとも３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、または８０倍増加させるために有効な量で、十分な時間にわたって（すなわち、十分な条件下で）用いて処理する。
【０３３７】
種々の実施形態では、十分な温度条件は、ＨＳＰＣを１種または複数種の作用剤と一緒に、生理的に関連性のある温度、例えば、これだけに限定されないが、約２２℃、２３℃、２４℃、２５℃、２６℃、２７℃、２８℃、２９℃、３０℃、３１℃、３２℃、３３℃、３４℃、３５℃、３６℃、３７℃、３８℃、および３９℃の温度を含めた、約２２℃〜約３９℃（約室温〜約体温）の温度範囲などでインキュベートすることを含む。特定の実施形態では、十分な温度条件は、約３５℃から３９℃の間である。一実施形態では、十分な温度条件は約３７℃である。
【０３３８】
種々の実施形態では、作用剤の十分な濃度は、最終濃度が約１０ｎＭ〜約１００μＭ、約１００ｎＭ、約５００ｎＭ、約１μＭ、約１０μＭ、約２０μＭ、約３０μＭ、約４０μＭ、約５０μＭ、約６０μＭ、約７０μＭ、約８０μＭ、約９０μＭ、約１００μＭ、約１１０μＭ、または約１２０μＭ、またはその間の任意の他の作用剤の濃度（例えば、０．１μＭ、１μＭ、５μＭ、１０μＭ、２０μＭ、５０μＭ、１００μＭ）である。特定の実施形態では、各作用剤の十分な濃度は、最終濃度が約１０μＭ〜約２５μＭである。一実施形態では、作用剤の十分な濃度は、最終濃度が約１０μＭである。
【０３３９】
種々の実施形態では、ＨＳＰＣを１種または複数種の作用剤を用いて処理するために十分な期間は、約６０分〜約２４時間、約６０分〜約１２時間、約６０分〜約６時間、約２時間〜約６時間、約２時間〜約４時間のインキュベーション期間、および、これだけに限定されないが、約６０分、約７０分、約８０分、約９０分、約１００分、約１１０分、約２時間、約２．５時間、約３時間、約３．５時間または約４時間の持続時間またはその間の任意の他の持続時間にわたる処理を含む。特定の実施形態では、十分なインキュベーション期間は約２時間〜約４時間である。一実施形態では、ＨＳＰＣを処理するための十分なインキュベーション期間は約４時間である。
【０３４０】
特定の実施形態では、接触させた細胞におけるＣＸＣＲ４遺伝子発現を、接触させていない細胞と比較して少なくとも３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、または８０倍増加させるために十分な条件は、ＨＳＰＣを、ｅｘ  ｖｉｖｏにおいて、約２２℃〜約３９℃の温度範囲、プロスタグランジン経路アゴニストの最終濃度約１０μＭ〜約２５μＭ、およびグルココルチコイドの最終濃度約１０μＭ〜約２５μＭで、約１時間〜約４時間、約２時間〜約３時間、約２時間〜約４時間、または約３時間〜約４時間にわたって作用剤と一緒にインキュベートすることで処理することを含む。
【０３４１】
特定の実施形態では、接触させた細胞におけるＣＸＣＲ４遺伝子発現を、接触させていない細胞と比較して少なくとも３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、または８０倍増加させるために十分な条件は、ＨＳＰＣを、ｅｘ  ｖｉｖｏにおいて、約２２℃〜約３９℃の温度範囲、ＰＧＥ２またはｄｍＰＧＥ２の最終濃度約１０μＭ〜約２５μＭ、およびグルココルチコイドの最終濃度約１０μＭ〜約２５μＭで、約１時間〜約４時間、約２時間〜約３時間、約２時間〜約４時間、または約３時間〜約４時間にわたって作用剤と一緒にインキュベートすることで処理することを含む。
【０３４２】
特定の実施形態では、接触させた細胞におけるＣＸＣＲ４遺伝子発現を、接触させていない細胞と比較して少なくとも３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、または８０倍増加させるために十分な条件は、ＨＳＰＣを、ｅｘ  ｖｉｖｏにおいて、約２２℃〜約３９℃の温度範囲、ＰＧＥ２またはｄｍＰＧＥ２の最終濃度約１０μＭ〜約２５μＭ、およびメドリゾン、ヒドロコルチゾン、アルクロメタゾン、デキサメタゾン、メチルプレドニゾロン、またはトリアムシノロンからなる群から選択される化合物の最終濃度約１０μＭ〜約２５μＭで、約１時間〜約４時間、約２時間〜約３時間、約２時間〜約４時間、または約３時間〜約４時間にわたって作用剤（化合物）と一緒にインキュベートすることで処理することを含む。
【０３４３】
特定の実施形態では、接触させた細胞におけるＣＸＣＲ４遺伝子発現を、接触させていない細胞と比較して少なくとも３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、または８０倍増加させるために十分な条件は、ＨＳＰＣを、ｅｘ  ｖｉｖｏにおいて、約２２℃〜約３９℃の温度範囲、プロスタグランジン経路アゴニストの最終濃度約１０μＭ〜約２５μＭ、およびメドリゾンの最終濃度約１０μＭ〜約２５μＭで、約１時間〜約４時間、約２時間〜約３時間、約２時間〜約４時間、または約３時間〜約４時間にわたって作用剤と一緒にインキュベートすることで処理することを含む。
【０３４４】
別の実施形態では、接触させた細胞におけるＣＸＣＲ４遺伝子発現を、接触させていない細胞と比較して少なくとも３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、または８０倍増加させるために十分な条件は、ＨＳＰＣを、ｅｘ  ｖｉｖｏにおいて処理することを含み、約３７℃（約体温）の温度でインキュベートすること、最終濃度が約１０μＭのＰＧＥ２または１６，１６−ジメチルＰＧＥ２と、最終濃度が約１０μＭのメドリゾン、ヒドロコルチゾン、アルクロメタゾン、デキサメタゾン、メチルプレドニゾロン、またはトリアムシノロンからなる群から選択される化合物の組み合わせで、約４時間にわたってインキュベートすることを含む。
【０３４５】
別の実施形態では、接触させた細胞におけるＣＸＣＲ４遺伝子発現を接触させていない細胞と比較して少なくとも３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、または８０倍増加させるために十分な条件は、ＨＳＰＣを、ｅｘ  ｖｉｖｏにおいて処理することを含み、約３７℃（約体温）の温度でインキュベートすること、最終濃度が約１０μＭのＰＧＥ２または１６，１６−ジメチルＰＧＥ２と、最終濃度が約１０μＭのメドリゾンの組み合わせで、約４時間にわたってインキュベートすることを含む。
【０３４６】
特定の実施形態では、ＨＳＰＣを、１回、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回または１０回またはそれより多く処理する（例えば、１種または複数種の作用剤と接触させる）。細胞を、同じ容器内の１種または複数種の作用剤と断続的に、不規則に、または逐次的に接触させること（例えば、ＨＳＰＣを、１種の作用剤とある期間にわたって接触させ、培養培地を交換し、かつ／または細胞の集団を洗浄し、次いで、このサイクルを、同じまたは異なる作用剤の組合せを用いて、同じ所定の期間または異なる所定の期間にわたって繰り返すこと）ができる。
Ｅ．増強された幹細胞の治療的使用
【０３４７】
本明細書に記載のＨＳＰＣは、無処理の細胞と比較して、ＣＸＣＲ４遺伝子およびタンパク質の発現が増加しており、治療的性質の増強も示す。具体的には、本発明のＨＳＰＣは、骨髄、虚血組織部位、および虚血による損傷を受けた組織へのホーミングの増加を示し、生着の増加も示す。したがって、本発明のＨＳＰＣは、骨髄または虚血部位または虚血による損傷を受けた組織へのＨＳＰＣのホーミングおよび／または生着の増加を伴う処置を必要とする被験体を処置するために有用である。ある特定の実施形態では、ＨＳＰＣは、造血幹細胞移植を改善するため、ならびに虚血または虚血による損傷を受けた組織を処置すること、ならびに、細胞動員によって虚血組織へのさらなる損傷を減少させることおよび／または虚血組織への損傷を修復すること、虚血組織における血管新生を改善すること、虚血部位における組織再生を改善すること、虚血組織の壊死またはアポトーシスを減少させること、ならびに／または虚血部位における細胞生存を増加させることにおいても有用である。特定の実施形態では、ＨＰＳＣは、造血再構築を必要とする被験体、例えば、骨髄破壊療法を受けたまたは受ける予定である被験体などに対して有用である。
【０３４８】
本明細書で使用される場合、「生着」という用語は、細胞が組織などのある場所に組み込まれ、特定の場所で長い期間存続することができることを指す。細胞は、例えば骨髄に、または傷害を受けた部位もしくは虚血組織などの別の場所に生着することができる。「ホーミング」とは、ＨＳＰＣが特定の領域または組織に局在化する、すなわち、そこに移動することができることを指す。ホーミングは、投与したＨＳＰＣが骨髄、または傷害を受けた部位もしくは虚血組織などの別の場所に局在化することを含んでよい。一実施形態では、細胞は化学誘引機構を用いて特定の組織にホーミングし、ＣＸＣＲ４の発現が増加している細胞では、ＣＸＣＲ４の同族リガンドであるストロマ細胞由来因子１（ＳＤＦ１）を分泌している虚血組織へのホーミングが改善される。
【０３４９】
「被験体」とは、本明細書で使用される場合、本発明の細胞に基づく組成物を用いて処置することができる、または、ＣＸＣＲ４遺伝子発現が増加しているＨＳＰＣを用いて処置することができる症状を示す任意のヒトを包含する。
【０３５０】
種々の他の実施形態では、本発明は、それを必要とする被験体を処置する方法であって、必要とする被験体を同定すること、およびプロスタグランジン経路アゴニストとグルココルチコイドの組合せを含めた、細胞におけるＣＸＣＲ４遺伝子発現を増加させる１種または複数種の作用剤と、細胞におけるＣＸＣＲ４遺伝子発現を、接触させていない細胞におけるＣＸＣＲ４遺伝子発現のレベルと比較して少なくとも３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、または８０倍増加させるために十分な条件下で接触させたＨＳＰＣを被験体に投与し、それにより、必要とする被験体を処置する工程を含む方法を提供する。
【０３５１】
本明細書で使用される場合、「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」、「処置すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」などの用語は、これだけに限定することなく、疾患の症状の改善または排除を実現することを含めた、所望の薬理的効果および／または生理的効果を得ることを指す。効果は、疾患またはその症状を完全にまたは部分的に予防するという点で予防的であってよく、かつ／または、症状の改善または排除を実現する、もしくは疾患および／もしくは疾患に起因する有害な影響の部分的または完全な治癒をもたらすという点で治療的であってよい。「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」とは、本明細書で使用される場合、哺乳動物、特にヒトにおける疾患の任意の治療を包含し、（ａ）疾患の素因があり得るが、今のところはまだそれを有すると診断されていない被験体において疾患が生じることを予防すること；（ｂ）疾患を阻害すること、すなわち、その発生を阻止すること；（ｃ）疾患を軽減すること、例えば、疾患の退縮を引き起こすこと、例えば、疾患の症状を完全にまたは部分的に排除すること；および（ｄ）個体を疾患前の状態に回復させること、例えば、造血系を再構築することを含む。
【０３５２】
「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」または「処置すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」とは、本明細書で使用される場合、疾患または病的状態の症状または病態に対する任意の望ましい効果を包含し、また、最小のものであっても、処置されている疾患または状態の１つまたは複数の測定可能なマーカーの減少を包含し得る。「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」とは、必ずしも、疾患もしくは状態、または付随するその症状の完全な根絶または治癒を示さない、または必要としない。
１．幹細胞移植方法
【０３５３】
造血再構築、造血系の再構築、およびＨＳＰＣの数の増加を「必要とする被験体」とは、これだけに限定されないが、本明細書の他の箇所で考察されている種々の種類の白血病、貧血、リンパ腫、骨髄腫、免疫不全障害、および固形腫瘍を有する、またはその診断を受けた被験体を包含する。「被験体」とは、悪性疾患に対する処置または遺伝子治療の構成要素の過程中などの、幹細胞移植または骨髄移植の候補であるヒトも包含する。特定の実施形態では、被験体は、細胞に基づく遺伝子治療として、遺伝子改変されたＨＳＰＣを受ける。被験体とは、同種移植のための幹細胞または骨髄を供与する個体または動物も包含し得る。ある特定の実施形態では、被験体は、骨髄破壊放射線照射療法または化学療法を受けていてもよく、骨髄破壊をもたらす急性の放射線または化学物質による傷害を経験していてもよい。ある特定の実施形態では、被験体は、種々のがん処置中などの、放射線照射療法または化学療法を受けていてよい。典型的な被験体としては、作用剤または幹細胞または骨髄移植によって調節することができる、異常な量（「正常な」または「健康な」被験体よりも少ない量または多い量）の１つまたは複数の生理的活性を示す動物が挙げられる。
【０３５４】
造血再構築を必要とする被験体とは、がんに対する化学療法または放射線療法を受けた被験体、ならびに非悪性血液障害、特に免疫不全（例えば、とりわけ、ＳＣＩＤ、ファンコニー貧血、重症再生不良性貧血、もしくは先天性異常ヘモグロビン症、もしくはハーラー病、ハンター病、マンノシドーシスなどの代謝性蓄積症（ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  ｓｔｏｒａｇｅ  ｄｉｓｅａｓｅ））、またはがん、特に、血液系悪性腫瘍、例えば、急性白血病、慢性白血病（骨髄性またはリンパ性）、リンパ腫（ホジキンまたは非ホジキン）、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、もしくは非血液系がん、例えば、固形腫瘍（乳がん、卵巣がん、脳がん、前立腺がん、肺がん、結腸がん、皮膚がん、肝がん、または膵がんを含む）に罹患している（例えば、それを患っている）被験体を包含する。
【０３５５】
被験体とは、再生不良性貧血、免疫障害（重症複合免疫不全症候群またはループス）、脊髄異形成、サラセミア（ｔｈａｌａｓｓｅｍａｉａ）、鎌状赤血球症またはウィスコット・アルドリッチ症候群に罹患している被験体も包含し得る。いくつかの実施形態では、被験体は、別の一次処置、例えば、放射線療法、化学療法、またはジドブジン（ｚｉｄｏｖａｄｉｎｅ）、クラムフェニコール（ｃｈｌｏｒａｍｐｈｅｎｉｃａｌ）またはガンシクロビル（ｇａｎｇｃｉｃｌｏｖｉｒ）などの骨髄抑制性薬物を用いた処置の望ましくない副作用または合併症の結果生じる障害に罹患している。そのような障害としては、好中球減少症、貧血、血小板減少症、および免疫機能障害が挙げられる。
【０３５６】
他の被験体は、骨髄の幹細胞または前駆細胞に対する損傷を引き起こす感染（例えば、ウイルス感染、細菌感染または真菌感染）によって引き起こされる障害を有し得る。
【０３５７】
さらに、以下の状態に罹患している被験体にも、本発明のＨＳＰＣを使用した処置が有効であり得る：リンパ球減少症、リンパ漏、リンパうっ滞、赤血球減少症、赤血球変性障害（ｅｒｔｈｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ  ｄｉｓｏｒｄｅｒ）、赤芽球減少症、白赤芽球症；赤血球崩壊、サラセミア、骨髄線維症、血小板減少症、播種性血管内凝固（ＤＩＣ）、免疫（自己免疫性）血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、ＨＩＶ誘発性ＩＴＰ、脊髄異形成；血小板増加性疾患（ｔｈｒｏｍｂｏｃｙｔｏｔｉｃ  ｄｉｓｅａｓｅ）、血小板増加症、先天性好中球減少症（例えば、コストマン症候群およびシュバッハマン・ダイアモンド症候群）、新生物関連好中球減少症、小児および成人の周期性好中球減少症（ｃｙｃｌｉｃ  ｎｅｕｔｒｏｐａｅｎｉａ）；感染後好中球減少症（ｎｅｕｔｒｏｐａｅｎｉａ）；骨髄異形成症候群；化学療法および照射療法に伴う好中球減少症；慢性肉芽腫性疾患；ムコ多糖症；ダイヤモンド・ブラックファン；鎌状赤血球症；または重症型ベータサラセミア。
【０３５８】
特定の実施形態では、被験体は、骨髄を供与した骨髄ドナーである、骨髄をまだ供与していない骨髄ドナーである、骨髄ドナー移植片レシピエントである、環境ストレス下にある造血前駆細胞を有する、貧血を有する、正常な被験体と比較して免疫細胞機能のレベルが低下している、または免疫系欠損を有する。
【０３５９】
ある特定の実施形態では、被験体は、骨髄腫、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、慢性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性顆粒球性白血病、急性リンパ芽球性白血病、急性非リンパ芽球性白血病、または前白血病を有する。
【０３６０】
特定の実施形態では、被験体は、例えば、異常ヘモグロビン症など、遺伝子治療を必要としている。本明細書で使用される場合、「異常ヘモグロビン症」または「異常血色素症状態」という用語は、血液中に異常なヘモグロビン分子が存在することに関与する任意の障害を包含する。異常ヘモグロビン症の例としては、これだけに限定されないが、ヘモグロビンＣ症、ヘモグロビン鎌状赤血球症（ＳＣＤ）、鎌状赤血球貧血、およびサラセミアが挙げられる。血液中に異常なヘモグロビンの組合せが存在する異常ヘモグロビン症（例えば、鎌状赤血球／Ｈｂ−Ｃ症）も包含される。
【０３６１】
「鎌状赤血球貧血」または「鎌状赤血球症」という用語は、本明細書では、赤血球の鎌状化に起因する任意の症候性の貧血性の状態を包含すると定義される。鎌状赤血球症の徴候としては、貧血；疼痛；および／または臓器機能障害、例えば、腎不全、網膜症、急性胸部症候群、虚血、持続勃起症および卒中が挙げられる。本明細書で使用される場合、「鎌状赤血球症」という用語は、特に、ＨｂＳにおける鎌状赤血球置換に関してホモ接合体である被験体における鎌状赤血球貧血に伴う種々の臨床的問題を指す。鎌状赤血球症という用語を使用することによって本明細書で言及される体質的な徴候としては、成長および発達の遅延、特に肺炎球菌に起因する重篤な感染症が発生する傾向の増加、再発性梗塞および最終的に脾組織の破壊を伴う、循環している細菌の有効なクリアランスが妨げられる脾機能の顕著な欠陥がある。「鎌状赤血球症」という用語には、主に腰椎、腹部、および大腿骨骨幹部（ｆｅｍｏｒａｌ  ｓｈａｆｔ）に影響を及ぼし、機構および重症度が減圧痛と同様である筋骨格痛の急性エピソードも包含される。成人では、そのような発作（ａｔｔａｃｋ）は、一般に、数週間または数ヶ月ごとに持続時間の短い軽度のまたは中程度の発作（ｂｏｕｔ）として顕在化し、その間に平均で約１年に１回、５〜７日間続く苦痛な発作（ａｔｔａｃｋ）に襲われる。そのようなクリーゼのトリガーとなることが公知の事象はアシドーシス、低酸素症および脱水であり、これらは全て細胞内でのＨｂＳの重合を増強する（Ｊ．  Ｈ．  Ｊａｎｄｌ、Ｂｌｏｏｄ：Ｔｅｘｔｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ、第２版、Ｌｉｔｔｌｅ、Ｂｒｏｗｎ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｂｏｓｔｏｎ、１９９６年、５４４〜５４５頁）。本明細書で使用される場合、「サラセミア」という用語は、ヘモグロビンの合成に影響を及ぼす変異に起因して起こる遺伝性貧血を包含する。したがって、この用語は、重度のまたはβサラセミア、重症型サラセミア、中間型サラセミア、ヘモグロビンＨ症などのαサラセミアなどのサラセミアの状態によって生じる任意の症候性貧血を包含する。
【０３６２】
本明細書で使用される場合、「サラセミア」とは、ヘモグロビンの産生の欠陥を特徴とする遺伝性障害を指す。サラセミアの例としては、βサラセミアおよびサラセミアが挙げられ、βサラセミアは、ベータグロビン鎖の変異によって引き起こされ、重症型または軽症型で起こり得る。重症型のβサラセミアでは、出生時には小児は正常であるが、生後１年間で貧血を発症する。軽度の型のβサラセミアでは、小さな赤血球が産生され、グロビン鎖由来の１つまたは複数の遺伝子の欠失によってサラセミアが引き起こされる。本明細書で使用される場合、「抗鎌状赤血球化タンパク質」とは、鎌状赤血球の状態における赤血球の鎌状化を導く病理学的事象を予防するまたは逆転させるタンパク質を包含する。本発明の一実施形態では、本発明の形質導入された細胞を使用して、抗鎌状赤血球化タンパク質を異常血色素症状態の被験体に送達する。抗鎌状赤血球化タンパク質は、抗鎌状赤血球化アミノ酸残基を含む変異したβ−グロビン遺伝子も包含する。
【０３６３】
種々の実施形態では、本発明は、一部において、造血幹前駆細胞移植用のＨＳＰＣを得、調製するための方法であって、ＨＳＰＣを、プロスタグランジン経路アゴニストとグルココルチコイドの組合せを含めたＨＳＰＣにおけるＣＸＣＲ４遺伝子発現を増加させる１種または複数種の作用剤と、ＨＳＰＣにおけるＣＸＣＲ４遺伝子発現を、接触させていない細胞におけるＣＸＣＲ４遺伝子発現のレベルと比較して少なくとも３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、または８０倍増加させるために十分な条件下で接触させる工程を含む方法を提供する。
種々の他の実施形態では、本発明は、一部において、被験体における造血幹細胞および造血前駆細胞のホーミングを増加させる方法であって、ＨＳＰＣを、プロスタグランジン経路アゴニストとグルココルチコイドの組合せを含めた、ＨＳＰＣにおけるＣＸＣＲ４遺伝子発現を増加させる１種または複数種の作用剤と、ＨＳＰＣにおけるＣＸＣＲ４遺伝子発現を、接触させていない細胞におけるＣＸＣＲ４遺伝子発現のレベルと比較して少なくとも３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、または８０倍増加させるために十分な条件下で接触させる工程を含む方法を提供する。
特定の実施形態では、処理したＨＳＰＣを洗浄して、作用剤を実質的に除去し、その後、造血幹細胞のホーミングの増加を必要とする被験体に投与する。
【０３６４】
本発明は、一部において、それを必要とする被験体において幹細胞の生着を増加させるための方法であって、ＨＳＰＣを含む細胞の集団（例えば、骨髄細胞、末梢血液細胞、および／または臍帯血細胞）をプロスタグランジン経路アゴニストとグルココルチコイドの組合せを含めた、ＨＳＰＣにおけるＣＸＣＲ４遺伝子発現を増加させる１種または複数種の作用剤と、ＨＳＰＣにおけるＣＸＣＲ４遺伝子発現を、接触させていない細胞におけるＣＸＣＲ４遺伝子発現のレベルと比較して少なくとも３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、または８０倍増加させるために十分な条件下で接触させる工程、および増強されたＨＳＰＣを被験体に投与する工程を含む方法を意図している。
【０３６５】
特定の実施形態では、本発明は、造血再構築または造血系の再構築を必要とする被験体を処置する方法であって、造血再構築を必要とする被験体を同定する工程、および被験体に、プロスタグランジン経路アゴニストとグルココルチコイドの組合せを含めた、ＨＳＰＣにおけるＣＸＣＲ４遺伝子発現を増加させる１種または複数種の作用剤と、ＨＳＰＣにおけるＣＸＣＲ４遺伝子発現を、接触させていない細胞におけるＣＸＣＲ４遺伝子発現のレベルと比較して少なくとも３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、または８０倍増加させるために十分な条件下で接触させたある量のＨＳＰＣを投与し、それにより、造血再構築を必要とする被験体を処置する工程を含む方法を提供する。
【０３６６】
別の特定の実施形態では、本発明は、造血再構築、造血系の再構築、またはＨＳＰＣの数の増加を必要とする被験体を処置する方法であって、造血再構築を必要とする被験体を同定する工程、および被験体に、プロスタグランジン経路アゴニストとグルココルチコイドの組合せを含めた、ＨＳＰＣにおけるＣＸＣＲ４遺伝子発現を増加させる１種または複数種の作用剤と、ＨＳＰＣにおけるＣＸＣＲ４遺伝子発現を、接触させていない細胞におけるＣＸＣＲ４遺伝子発現のレベルと比較して少なくとも３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、または８０倍増加させるために十分な条件下で接触させたある量のＨＳＰＣを被験体に投与し、それにより、造血再構築を必要とする被験体を処置する工程を含む方法を提供する。
【０３６７】
別の特定の実施形態では、本発明は、造血幹細胞移植を必要とする被験体を処置する方法であって、造血幹細胞移植を必要とする被験体を選択する工程、および被験体に、プロスタグランジン経路アゴニストとグルココルチコイドの組合せを含めた、細胞におけるＣＸＣＲ４遺伝子発現を増加させる１種または複数種の作用剤と、ＨＳＰＣにおけるＣＸＣＲ４遺伝子発現を、接触させていない細胞におけるＣＸＣＲ４遺伝子発現のレベルと比較して少なくとも３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、または８０倍増加させるために十分な条件下で接触させたＨＳＰＣを投与する工程を含む方法を意図している。特定の実施形態では、被験体は、造血再構築を必要としている。
【０３６８】
ＨＳＰＣのホーミングまたは生着を増加させるため、または造血再構築、造血系の再構築を必要とする被験体を処置するため、または造血幹細胞移植を実施するための本明細書に記載の方法の特定の例示的な実施形態では、ＨＳＰＣを、（ｉ）ＰＧＥ２、ｄｍＰＧＥ２、１５（Ｓ）−１５−メチルＰＧＥ２、２０−エチルＰＧＥ２、または８−イソ−１６−シクロヘキシル−テトラノルＰＧＥ２および（ｉｉ）グルココルチコイドを含む１種または複数種の作用剤の組合せを用いて処理する。より詳細な実施形態では、組合せは、（ｉ）ＰＧＥ２または１６，１６−ジメチルＰＧＥ２および（ｉｉ）メドリゾン、ヒドロコルチゾン、デキサメタゾン、メチルプレドニゾロン、トリアムシノロン、またはアルクロメタゾンを含む。より詳細な実施形態では、組合せは、（ｉ）ＰＧＥ２または１６，１６−ジメチルＰＧＥ２および（ｉｉ）メドリゾンを含む。
【０３６９】
いかなる特定の理論にも縛られることを望むことなく、本発明は、一部において、幹細胞移植において本発明の増強されたＨＳＰＣを使用することの利点の１つが、増強されたＨＳＰＣでは、無処理のＨＳＰＣと比較して、例えば、生着の潜在性が増大し、ホーミングが改善され、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいて増大する能力が増大しているので、移植に使用するＨＳＰＣをより少なくすることができることを意図している。
２．虚血組織の処置方法
【０３７０】
本発明は、虚血組織を処置するため、または、これだけに限定されないが、臓器機能の低下または喪失（これだけに限定することなく、脳、腎臓、または心臓の機能の低下または喪失）、痙攣、跛行、しびれ、刺痛、衰弱、疼痛、創傷治癒の低下、炎症、皮膚変色、および壊疽を含めた、組織虚血に関連した１つまたは複数の症状を処置もしくは改善するための細胞に基づく治療に関する方法を提供する。
【０３７１】
虚血組織は、幹細胞の虚血性組織損傷の部位へのホーミングを増加させること、虚血組織部位における内在性幹細胞および内皮前駆細胞の動員を増加させること、虚血組織部位における血管新生を増加させること、虚血組織の壊死またはプログラム細胞死を減少させること、または虚血組織部位における細胞生存を増加させることによって処置することができる。したがって、本発明は、一部において、これらの治療的性質を有する細胞が、虚血組織もしくは虚血による損傷を受けた組織を処置すること、または虚血組織と関連した少なくとも１つの症状を処置もしくは改善することにおいて有用なはずであることを意図している。
【０３７２】
本明細書で使用される場合、「虚血」、「虚血状態」または「虚血事象」という用語は、脈管構造の任意の狭窄、損傷、または閉塞によって引き起こされる、任意の細胞、組織、臓器、または体の部分への血液供給の減少または停止のいずれも意味する。虚血は、時には、血管収縮または血栓症または塞栓症に起因する。虚血により、直接虚血傷害、酸素（低酸素症、無酸素症）、グルコース、および栄養分の供給の減少によって引き起こされる細胞死に起因する組織損傷が生じ得る。「低酸素症」または「低酸素状態」とは、細胞、臓器または組織が不十分な酸素の供給を受けている状態を意図している。「無酸素症」とは、臓器または組織に酸素が実質的に完全に存在しないことを指し、それが持続する場合には、細胞、臓器または組織が死に至る可能性がある。
【０３７３】
「虚血に関連する症状」、「虚血に起因する症状」または「虚血によって引き起こされる症状」とは、これだけに限定されないが、臓器機能の低下または喪失（これだけに限定することなく、脳、腎臓、または心臓の機能の低下または喪失）、痙攣、跛行、しびれ、刺痛、衰弱、疼痛、創傷治癒の低下、炎症、皮膚変色、および壊疽を含めた症状を指す。
【０３７４】
「虚血組織傷害」、「虚血性組織損傷」、「虚血に起因する組織損傷」、「虚血に関連する組織損傷」、「虚血の結果としての組織損傷」、「虚血によって引き起こされる組織損傷」および「虚血により損傷を受けた組織」とは、虚血期間の結果としての臓器または組織または細胞への形態学的損傷、生理的損傷、および／または分子的損傷を指す。
【０３７５】
一実施形態では、被験体は、虚血組織または虚血による損傷を受けた組織の少なくとも１つの症状を示す。特定の実施形態では、被験体は、虚血組織または虚血による損傷を受けた組織を有する、またはそれを有するリスクがあるヒト、例えば、糖尿病、末梢血管疾患、閉塞性血栓性血管炎、脈管炎、心血管疾患、冠動脈疾患もしくは心不全、または脳血管疾患、心血管疾患、または脳血管疾患を有する被験体である。
【０３７６】
本発明は、特定の実施形態において、虚血組織または虚血による損傷を受けた組織を処置する方法であって、そのような処置を必要とする患者に、プロスタグランジン経路アゴニストとグルココルチコイドの組合せを含めた、細胞におけるＣＸＣＲ４遺伝子発現を増加させる１種または複数種の作用剤と、細胞におけるＣＸＣＲ４遺伝子発現を、接触させていない細胞におけるＣＸＣＲ４遺伝子発現のレベルと比較して少なくとも３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、または８０倍増加させるために十分な条件下で接触させたＨＳＰＣを投与する工程を含む方法も提供する。
【０３７７】
一実施形態では、細胞により、幹細胞の虚血性組織損傷の部位へのホーミングが増加すること、虚血組織部位における内在性幹細胞および内皮前駆細胞の動員が増加すること、虚血組織部位における血管新生の刺激が増加すること、虚血組織の壊死またはプログラム細胞死が減少すること、または虚血組織部位における細胞生存が増加することにより、被験体に治療がもたらされる。
【０３７８】
種々の他の実施形態では、本発明は、虚血組織傷害を処置または改善する方法であって、被験体に、プロスタグランジン経路アゴニストとグルココルチコイドの組合せを含めた、細胞におけるＣＸＣＲ４遺伝子発現を増加させる１種または複数種の作用剤と、細胞におけるＣＸＣＲ４遺伝子発現を、接触させていない細胞におけるＣＸＣＲ４遺伝子発現のレベルと比較して少なくとも３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、または８０倍増加させるために十分な条件下で接触させたＨＳＰＣを含む治療有効量の組成物を投与する工程を含む方法を提供する。
【０３７９】
種々の他の実施形態では、本発明は、虚血組織傷害に関連する症状を処置または改善する方法であって、被験体に、プロスタグランジン経路アゴニストとグルココルチコイドの組合せを含めた、細胞におけるＣＸＣＲ４遺伝子発現を増加させる１種または複数種の作用剤と、細胞におけるＣＸＣＲ４遺伝子発現を、接触させていない細胞におけるＣＸＣＲ４遺伝子発現のレベルと比較して少なくとも３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、または８０倍増加させるために十分な条件下で接触させたＨＳＰＣを投与する工程を含む方法を提供する。
【０３８０】
本発明の組成物を用いた処置に適した組織の実例としては、中胚葉系組織、内胚葉系組織、または外胚葉系組織が挙げられる。本発明の組成物を用いた処置に適した他の組織としては、これだけに限定されないが、皮膚組織、骨格筋組織、心筋組織、平滑筋組織、軟骨組織、腱組織、骨組織、脳組織、脊髄組織、網膜組織、角膜組織、肺組織、肝組織、腎組織、膵組織、卵巣組織、精巣組織、腸組織、胃組織、および膀胱組織が挙げられる。
【０３８１】
特定の実施形態では、血液供給が損なわれ、虚血である、または虚血になるリスクがある任意の組織を、本発明の方法を用いて処置することができる。
【０３８２】
被験体において虚血を引き起こすもしくは虚血に関連する、または虚血のリスクを増加させる、または被験体に１つまたは複数の（ｍｏｒｅ  ｏｒ  ｍｏｒｅ）虚血の症状を引き起こす、したがって、本発明の方法を用いて処置または改善するために適した遺伝的障害、症候性の状態、外傷性傷害、慢性の状態、医療介入、または他の状態の実例としては、これだけに限定されないが、急性冠状動脈症候群、急性肺傷害（ＡＬＩ）、急性心筋梗塞（ＡＭＩ）、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、動脈閉塞性疾患、動脈硬化症、関節軟骨欠損、無菌性全身性炎症、アテローム硬化性心血管疾患、自己免疫疾患、骨折、骨折、脳浮腫、脳低灌流、バージャー病、熱傷、がん、心血管疾患、軟骨損傷、脳梗塞、脳虚血、脳卒中、脳血管疾患、化学療法誘発性ニューロパチー、慢性感染、慢性腸間膜虚血、跛行、うっ血性心不全、結合組織損傷、挫傷、冠動脈疾患（ＣＡＤ）、重症肢虚血（ＣＬＩ）、クローン病、深部静脈血栓症、深部創傷、潰瘍治癒の遅延、創傷治癒の遅延、糖尿病（Ｉ型およびＩＩ型）、糖尿病性ニューロパチー、糖尿病誘発性虚血、播種性血管内凝固（ＤＩＣ）、塞栓性脳虚血、移植片対宿主病、凍傷、遺伝性出血性毛細血管拡張症、虚血性血管疾患、高酸素傷害、低酸素症、炎症、炎症性腸疾患、炎症性疾患、傷害を受けた腱、間欠性跛行、腸管虚血、虚血、虚血性脳疾患、虚血性心疾患、虚血性末梢血管疾患、虚血胎盤、虚血性腎疾患、虚血性血管疾患、虚血再灌流傷害、裂傷、左主冠状動脈疾患、肢虚血、下肢虚血、心筋梗塞、心筋虚血、臓器虚血、変形性関節症、骨粗鬆症、骨肉腫、パーキンソン病、末梢動脈性疾患（ＰＡＤ）、末梢動脈疾患、末梢性虚血、末梢性ニューロパチー、末梢血管疾患、前がん、肺水腫、肺塞栓症、リモデリング障害、腎臓虚血、網膜虚血、網膜症、敗血症、皮膚潰瘍、実質臓器移植、脊髄傷害、卒中、軟骨下骨嚢胞、血栓症、血栓性脳虚血、組織虚血、一過性脳虚血発作（ＴＩＡ）、外傷性脳傷害、潰瘍性大腸炎、腎臓の血管疾患、血管の炎症性の状態、フォンヒッペル・リンダウ症候群、および組織または臓器の創傷が挙げられる。
【０３８３】
本発明の方法を用いて処置または改善するために適した、被験体において虚血を引き起こすもしくは虚血に関連する、または虚血のリスクを増加させる、または被験体において１つまたは複数の（ｍｏｒｅ  ｏｒ  ｍｏｒｅ）虚血の症状を引き起こす遺伝的障害、症候性の状態、外傷性傷害、慢性の状態、医療介入、または他の状態の他の実例としては、外科手術、化学療法、放射線療法、または細胞、組織、または臓器の移植（ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ）もしくは移植（ｇｒａｆｔ）に起因する虚血が挙げられる。
【０３８４】
種々の実施形態では、本発明の方法は、脳血管虚血、心筋虚血、肢虚血（ＣＬＩ）、心筋虚血（特に、慢性心筋虚血）、虚血性心筋症、脳血管虚血、腎臓虚血、肺虚血、腸管虚血などを処置するために適している。
【０３８５】
種々の実施形態では、本発明は、本明細書に開示されている治療用細胞組成物を使用して、血流、酸素供給、グルコース供給、または組織への栄養分の供給を増加させることが望ましい虚血組織を処置することができることを意図している。
３．増大したＨＳＰＣ
【０３８６】
本発明は、さらに、本発明によって提供される増強されたＨＳＰＣを、被験体に投与する前にｅｘ  ｖｉｖｏでもｉｎ  ｖｉｔｒｏでも増大させないことを意図している。特定の実施形態では、増大させていないＨＳＰＣの集団を得、ＨＳＰＣの集団を、本明細書において提供されるプロトコールに従ってｅｘ  ｖｉｖｏにおいて処理して、増強されたＨＳＰＣＳを得、増強されたＨＳＰＣを洗浄して処理用作用剤（複数可）を除去することができ、ＨＳＰＣ集団をｅｘ  ｖｉｖｏで増大させることなく、増強されたＨＳＰＣを患者に投与する。いくつかの実施形態では、ＨＳＰＣは、臍帯血を含めた、ドナーから得たものであり、ＨＳＰＣの処理の前もしくは処理の後、または治療用組成物を患者に投与する前のいかなる時点においても増大させない。
【０３８７】
一実施形態では、増大させていないＨＳＰＣの集団を処理し、集団内のＨＳＰＣの任意の実質的なｅｘ  ｖｉｖｏにおける細胞分裂の前、または任意のｅｘ  ｖｉｖｏにおける実質的な細胞分裂に必要な時間の前に患者に投与する。他の実施形態では、増大させていないＨＳＰＣの集団を処理し、集団内のＨＳＰＣの任意の実質的なｅｘ  ｖｉｖｏにおける有糸分裂の前、または任意の実質的なｅｘ  ｖｉｖｏにおける有糸分裂に必要な時間の前に患者に投与する。いくつかの実施形態では、増大させていないＨＳＰＣの集団を処理し、集団内のＨＳＰＣの倍加時間の前に患者に投与する。いくつかの実施形態では、増大させていないＨＳＰＣの集団を処理し、ＨＳＰＣの処理の６時間以内、１２時間以内、または２４時間以内に患者に投与する。他の実施形態では、増大させていないＨＳＰＣの集団を処理し、ＨＳＰＣの処理の２時間以内に患者に投与する。
【０３８８】
種々の実施形態では、本発明のＨＳＰＣは、ｅｘ  ｖｉｖｏにおいて１種または複数種の作用剤、または作用剤の組合せを用いて処理する前、または患者に投与する前のいかなる時点でも培養しない。いくつかの実施形態では、ＨＳＰＣを約２４時間未満培養する。他の実施形態では、ＨＳＰＣを約１２時間未満、１０時間未満、８時間未満、６時間未満、４時間未満、または２時間未満培養する。
【０３８９】
他の実施形態では、本発明は、ＨＳＰＣを作用剤で処理して増強されたＨＳＰＣを得る前に増大させたＨＳＰＣを提供する。臍帯血、骨髄、末梢血、ホウォートンゼリー、胎盤血または他の供給源のいずれから得たかにかかわらず、ＨＳＰＣは、所望の通り、任意の適切な、市販のまたは特別に定義された、血清を伴う、または伴わない培地で成長または増大させることができる（例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｈａｒｔｓｈｏｒｎら、Ｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ｆｏｒ  Ｃｅｌｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、２２１〜２２４頁、Ｒ．  Ｓｍｉｔｈ編；Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ、２００７年を参照されたい）。例えば、ある特定の実施形態では、無血清培地においてＣＤ３４＋細胞を成長および増大させるために有用であることが示されているアルブミンおよび／またはトランスフェリンを無血清培地に利用することができる。また、とりわけ、Ｆｌｔ−３リガンド、幹細胞因子（ＳＣＦ）、およびトロンボポエチン（ＴＰＯ）などのサイトカインを含めることもできる。ＨＳＰＣは、バイオリアクターなどの容器中で成長させることもできる（例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｌｉｕら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １２４巻：５９２〜６０１頁、２００６年を参照されたい）。ＨＳＰＣをｅｘ  ｖｉｖｏにおいて増大させるために適した培地は、例えばリンパ系組織の解離から生じる可能性があり、造血幹細胞および造血前駆細胞、ならびにそれらの後代のｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｅｘ  ｖｉｖｏ、およびｉｎ
ｖｉｖｏにおける維持、成長、および分化を支持することが示されている間質細胞（例えば、リンパ細網間質細胞）などの支持細胞も含んでよい。
【０３９０】
種々の実施形態では、被験体に投与する増強されたＨＳＰＣは、顆粒球（例えば、前骨髄球、骨髄球、後骨髄球、好中球、好酸球、好塩基球）、赤血球（例えば、網状赤血球、赤血球）、血小板（例えば、巨核芽球、血小板産生巨核球、血小板）、および単球（例えば、単球、マクロファージ）を含めた全骨髄、臍帯血、動員された末梢血、造血幹細胞、造血前駆細胞、ならびに造血幹細胞および造血前駆細胞の後代を含めた細胞の不均一な集団である。
４．ＨＳＰＣおよびその組成物の投与
【０３９１】
種々の実施形態では、本発明は、一部において、処理したＨＰＳＣを、それを必要とする被験体に投与する工程を含む方法を提供する。本明細書に記載の方法において使用される細胞の集団を投与するために適した方法としては、これだけに限定されないが、静脈内投与および動脈内投与などの血管内投与の方法を含めた非経口投与が挙げられる。本発明の細胞を投与するための追加的な例示的な方法としては、筋肉内、髄腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、くも膜下、脊髄内および胸骨内の注射および注入が挙げられる。
【０３９２】
一実施形態では、ＨＳＰＣのホーミングまたは生着を増加させるための方法は、プロスタグランジン経路アゴニストとグルココルチコイドの組合せを含めた、細胞におけるＣＸＣＲ４遺伝子発現を増加させる１種または複数種の作用剤と、細胞におけるＣＸＣＲ４遺伝子発現を、接触させていない細胞におけるＣＸＣＲ４遺伝子発現のレベルと比較して少なくとも３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、または８０倍増加させるために十分な条件下で接触させたＨＳＰＣを非経口投与する工程を含む。
【０３９３】
一実施形態では、造血再構築、造血系の再構築、または造血幹細胞移植を実施するための方法は、プロスタグランジン経路アゴニストとグルココルチコイドの組合せを含めた、細胞におけるＣＸＣＲ４遺伝子発現を増加させる１種または複数種の作用剤と、細胞におけるＣＸＣＲ４遺伝子発現を、接触させていない細胞におけるＣＸＣＲ４遺伝子発現のレベルと比較して少なくとも３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、または８０倍増加させるために十分な条件下で接触させたＨＳＰＣを非経口投与する工程を含む。
【０３９４】
好ましい実施形態では、ＨＳＰＣを被験体の静脈内に投与または注入する。
【０３９５】
ＨＳＰＣのホーミングまたは生着を増加させるため、または造血再構築、造血系の再構築を必要とする被験体を処置するため、または造血幹細胞移植を実施するための本明細書に記載の方法の特定の例示的な実施形態では、（ｉ）ＰＧＥ２、ｄｍＰＧＥ２、１５（Ｓ）−１５−メチルＰＧＥ２、２０−エチルＰＧＥ２、または８−イソ−１６−シクロヘキシル−テトラノルＰＧＥ２および（ｉｉ）グルココルチコイドを含む１種または複数種の作用剤の組合せを用いて処理したＨＳＰＣを静脈内に投与または注入する工程を含む。より詳細な実施形態では、該方法は、（ｉ）ＰＧＥ２または１６，１６−ジメチルＰＧＥ２および（ｉｉ）メドリゾン、ヒドロコルチゾン、デキサメタゾン、メチルプレドニゾロン、トリアムシノロン、またはアルクロメタゾンを用いて処理したＨＳＰＣを静脈内に投与または注入する工程を含む。より詳細な実施形態では、該方法は、（ｉ）ＰＧＥ２または１６，１６−ジメチルＰＧＥ２および（ｉｉ）メドリゾンを用いて処理したＨＳＰＣを静脈内に投与または注入する工程を含む。
【０３９６】
特定の実施形態では、虚血、虚血組織、または少なくとも１つの虚血の症状を有する個体に組成物を投与することができる。最も好ましくは、投与の部位は、意図された活性の部位の近くまたは最も近く、すなわち、組織虚血の近くの部位である。被験体が全体的な虚血にさらされている場合には、静脈内投与などの全身投与が好ましい。機構に縛られることを意図することなく、治療用組成物を投与すると、ＨＳＰＣが傷害に起因して産生された走化性因子に応答して虚血組織に遊走またはホーミングして、虚血組織の治療または虚血組織と関連した少なくとも１つの症状の処置および改善をもたらす。
【０３９７】
ＨＳＰＣを虚血領域に直接注射することもでき、幹細胞を、組織虚血の領域に供給する動脈に注入することもできる。被験体において、通常は虚血組織の領域に供給する血管が完全に閉塞している場合には、注入のために選択する動脈は、完全に閉塞した血管の分布内の虚血組織に側副流をもたらす血管であることが好ましい。
【０３９８】
本発明のＨＳＰＣおよび治療用組成物は、被験体への注射または埋め込みによる導入を容易にする送達デバイスに挿入することができる。そのような送達デバイスは、チューブ、例えば、細胞および流体をレシピエント被験体の体内に注射するためのカテーテルを含んでよい。一実施形態では、チューブは、さらに本発明の細胞を被験体の所望の場所に導入することができる針、例えば、シリンジを有する。特定の実施形態では、細胞は、カテーテル（「カテーテル」という用語は、物質を血管に送達するための種々のチューブ様システムをいずれも含むものとする）を介して血管に投与するために製剤化する。
【０３９９】
一実施形態では、虚血組織、または虚血による損傷を受けた組織を処置するための方法は、プロスタグランジン経路アゴニストとグルココルチコイドの組合せを含めた、細胞におけるＣＸＣＲ４遺伝子発現を増加させる１種または複数種の作用剤と、細胞におけるＣＸＣＲ４遺伝子発現を、接触させていない細胞におけるＣＸＣＲ４遺伝子発現のレベルと比較して少なくとも３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、または８０倍増加させるために十分な条件下で接触させたＨＳＰＣを非経口投与する工程を含む。
【０４００】
一実施形態では、虚血組織または虚血による損傷を受けた組織と関連した少なくとも１つの症状を処置または改善するための方法は、プロスタグランジン経路アゴニストとグルココルチコイドの組合せを含めた、細胞におけるＣＸＣＲ４遺伝子発現を増加させる１種または複数種の作用剤と、細胞におけるＣＸＣＲ４遺伝子発現を、接触させていない細胞におけるＣＸＣＲ４遺伝子発現のレベルと比較して少なくとも３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、または８０倍増加させるために十分な条件下で接触させたＨＳＰＣを非経口投与する工程を含む。
【０４０１】
好ましい実施形態では、ＨＳＰＣを静脈内に、または虚血部位に直接注射することによって投与する。
【０４０２】
虚血または少なくとも１つの虚血の症状を処置または改善するための、本明細書に記載の方法の特定の例示的な実施形態では、（ｉ）ＰＧＥ２、ｄｍＰＧＥ２、１５（Ｓ）−１５−メチルＰＧＥ２、２０−エチルＰＧＥ２、または８−イソ−１６−シクロヘキシル−テトラノルＰＧＥ２および（ｉｉ）グルココルチコイドを含む１種または複数種の作用剤の組合せを用いて処理したＨＳＰＣを静脈内に投与する工程または直接注射する工程を含む。より詳細な実施形態では、該方法は、（ｉ）ＰＧＥ２または１６，１６−ジメチルＰＧＥ２および（ｉｉ）メドリゾン、ヒドロコルチゾン、デキサメタゾン、メチルプレドニゾロン、トリアムシノロン、またはアルクロメタゾンを用いて処理したＨＳＰＣを静脈内に投与または注入する工程を含む。より詳細な実施形態では、該方法は、（ｉ）ＰＧＥ２または１６，１６−ジメチルＰＧＥ２および（ｉｉ）メドリゾンを用いて処理したＨＳＰＣを静脈内に投与または注入する工程を含む。
【０４０３】
特定の実施形態では、組成物を、例えば、創傷、例えば、非治癒性創傷、潰瘍、熱傷、または凍傷の表面などの虚血性組織損傷の部位に局所的に投与することができる。
【０４０４】
本発明の組成物は、（１）例えば、細胞移植片、生体適合性足場などの一部として滅菌した溶液もしくは懸濁液、または持続放出製剤として、例えば、皮下注射、筋肉内注射、静脈内注射または硬膜外注射による非経口投与に適合させたものを含めた、固体または液体の形態で投与するために特別に製剤化することができる。種々の実施形態では、損傷を受けた、傷害を受けた、または疾患にかかった組織または臓器、例えば、虚血組織の修復、置き換え、および／または再生を促進するための生体適合性足場または移植片が提供される。
【０４０５】
ある特定の例示的な実施形態では、本発明のＨＰＳＣを必要とする被験体を処置するための方法は、本発明のＨＰＳＣを含む生体適合性足場または細胞移植片を提供する工程を含む。本明細書で使用される場合、「生体適合性足場」または「細胞移植片」という用語は、細胞に基づく組成物を誘導または誘引してｉｎ  ｖｉｖｏにおいて細胞、組織または臓器を修復、再生、または置き換えることのために適した患者または被験体の表面に注射する、適用する、またはその内部に生着させる１つまたは複数の細胞に基づく組成物、細胞、組織、ポリマー、ポリヌクレオチド、格子、および／またはマトリックスを含む生体適合性の天然構造および／または合成構造を指す。
【０４０６】
特定の例示的な実施形態では、埋め込み物は、任意の適切な形態に成形することができ、皮膚の創傷に適用するための特定の深さもしくは高さを有する３次元の形状または平らなシート様形状の組織を調製するために特に重要な役割を有する生体適合性マトリックスを含む。バイオマテリアル科学は、確立され、発展している分野である（Ｔａｋａｙａｍａら、Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ、第２版、Ｌａｎｚａ  ＲＰ、Ｌａｎｇｅｒ  Ｒ、Ｖａｃａｎｔｉ  Ｊ．編、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、２０００年、２０９〜２１８頁；Ｓａｌｔｍａｎｎら、Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ、第２版、Ｌａｎｚａ  ＲＰ、Ｌａｎｇｅｒ  Ｒ、Ｖａｃａｎｔｉ  Ｊ．編、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、２０００年、２２１〜２３６頁；Ｈｕｂｂｅｌｌら、Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ、第２版、Ｌａｎｚａ  ＲＰ、Ｌａｎｇｅｒ  Ｒ、Ｖａｃａｎｔｉ  Ｊ．編、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、２０００年、２３７〜２５０頁；Ｔｈｏｍｓｏｎら、Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ、第２版、Ｌａｎｚａ  ＲＰ、Ｌａｎｇｅｒ  Ｒ、Ｖａｃａｎｔｉ  Ｊ．編、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、２０００年、２５１〜２６２頁；Ｐａｃｈｅｎｃｅら、Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ、第２版、Ｌａｎｚａ  ＲＰ、Ｌａｎｇｅｒ  Ｒ、Ｖａｃａｎｔｉ  Ｊ．編、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、２０００年、２６３〜２７８頁）。
【０４０７】
化学者らにより、細胞の成長をｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｅｘ  ｖｉｖｏ、およびｉｎ  ｖｉｖｏにおいて誘導し、調節するためのポリマーを含む生体適合性足場を合成するための方法が開発されてきた。ポリマーの物理特性を調節して、特定の強度および粘度の固体マトリックスおよび液体マトリックスを創製することができる。いくつかのポリマーはｉｎ  ｖｉｖｏで安定であり、１年、２年、３年、４年、５年、１０年、１５年またはそれより長きにわたって患者の体内に留まる。他のポリマーは同様に生分解性であり、時間を経て固定速度で再吸収されて、新しく合成される細胞外マトリックスタンパク質によって置き換えられる。再吸収は、埋め込み後、数日〜数週間または数ヶ月以内に起こり得る（Ｐａｃｈｅｎｃｅら、Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ、第２版、Ｌａｎｚａ  ＲＰ、Ｌａｎｇｅｒ  Ｒ、Ｖａｃａｎｔｉ  Ｊ．編、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、２０００年、２６３〜２７８頁）。
【０４０８】
他の例示的な実施形態では、生体適合性足場は、生体吸収性材料を含む。多孔質キャリアは、コラーゲン、コラーゲン誘導体、ヒアルロン酸、ヒアルロン酸塩、キトサン、キトサン誘導体、ポリロタキサン、ポリロタキサン誘導体、キチン、キチン誘導体、ゼラチン、フィブロネクチン、ヘパリン、ラミニン、およびアルギン酸カルシウムからなる群から選択される１つの構成成分または複数の構成成分の組合せで作製されていることが好ましく、支持体のメンバーは、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリカプロラクトン、ポリ乳酸−ポリグリコール酸共重合体、ポリ乳酸−ポリカプロラクトン共重合体、およびポリグリコール酸−ポリカプロラクトン共重合体からなる群から選択される１つの構成成分または複数の構成成分の組合せで作製される（例えば、米国特許第５，０７７，０４９号および同第５，４２，０３３号、および米国特許出願公開第２００６／０１２１０８５号を参照されたい、各特許および特許出願のポリマー製剤およびそれを作製する方法の全体が本明細書に組み込まれる）。
【０４０９】
本発明の特定の例示的な実施形態では、生体適合性足場または細胞移植片は、粘性の生体適合性液体材料を含む。生体適合性液体は、体温でゲル化することができ、アルギン酸塩、コラーゲン、フィブリン、ヒアリン、または血漿からなる群から選択される。粘性の生体適合性液体材料は、不規則な組織欠損を埋めることができる可鍛性の３次元のマトリックスと組み合わせることもできる。マトリックスは、これだけに限定されないが、ポリグリコール酸−ポリ乳酸、ポリ−グリコール酸、ポリ−乳酸、または縫合糸様材料を含めた材料である。
【０４１０】
さらなる例示的な実施形態では、マトリックスを含む生体適合性足場または細胞移植片を細胞、組織、および／または臓器の発達を促すまたは容易にする所望の形状（例えば、２次元構造または３次元構造）に成形することができる。埋め込み物は、メッシュまたはスポンジなどの繊維を有するポリマー材料から形成されていてよい。そのような構造により、細胞を成長させ、増殖させることができる十分な面積がもたらされる。足場または細胞移植片のマトリックスは、時間を経て生分解され得、したがって、動物質（ａｎｉｍａｌ  ｍａｔｔｅｒ）が発達するにしたがってそれに吸収されることが望ましい。適切なポリマーは、ホモポリマーまたはヘテロポリマーであってよく、また、これだけに限定されないが、グリコール酸、乳酸、プロピルフマレート、カプロラクトンなどを含めた単量体から形成され得る。他の適切なポリマー材料としては、タンパク質、多糖、ポリヒドロキシ酸、ポリオルトエステル、ポリ酸無水物、ポリホスファゼン（ｐｏｌｙｐｈｏｓｐｈｏｚｅｎｅ）、または合成ポリマー、特に、生分解性ポリマー、またはそれらの任意の組合せを挙げることができる。
【０４１１】
シート様の足場および移植片により、皮膚組織、歯根被覆手順用の膜、膜性組織（例えば、硬膜）、扁平骨（例えば、頭蓋骨、胸骨）などに対する修復治療、置換え治療、および／または再生治療がもたらされる。管状の埋め込み物および移植片により、動脈、静脈、尿管、尿道、神経、長骨（例えば、大腿骨、腓骨、脛骨、上腕骨、橈骨、尺骨、中手骨、中足骨など）などに対する修復治療、置換え治療、および／または再生治療がもたらされる。他の３次元の埋め込み物および移植片により、臓器移植物（例えば、肝臓、肺、皮膚、心臓、膵臓など）、骨リモデリングまたは全種類の骨の補修、歯科インプラントに対する、または筋肉移植片、腱移植片、靭帯移植片、および軟骨移植片に対する修復治療、置換え治療、および／または再生治療がもたらされる。
【０４１２】
一実施形態では、虚血組織または虚血による損傷を受けた組織と関連した少なくとも１つの症状を処置または改善するための方法は、虚血組織に、プロスタグランジン経路アゴニストとグルココルチコイドの組合せを含めた、細胞におけるＣＸＣＲ４遺伝子発現を増加させる１種または複数種の作用剤と、細胞におけるＣＸＣＲ４遺伝子発現を、接触させていない細胞におけるＣＸＣＲ４遺伝子発現のレベルと比較して少なくとも３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、または８０倍増加させるために十分な条件下で接触させたＨＳＰＣを含む生体適合性足場または細胞移植片を直接投与する工程を含む。
【０４１３】
虚血組織または虚血による損傷を受けた組織と関連した少なくとも１つの症状を処置または改善するための、本明細書に記載の方法の特定の例示的な実施形態では、虚血組織に、（ｉ）ＰＧＥ２、ｄｍＰＧＥ２、１５（Ｓ）−１５−メチルＰＧＥ２、２０−エチルＰＧＥ２、または８−イソ−１６−シクロヘキシル−テトラノルＰＧＥ２および（ｉｉ）グルココルチコイドを含む１種または複数種の作用剤の組合せを用いて処理したＨＳＰＣを含む生体適合性足場または細胞移植片を直接投与する工程を含む。より詳細な実施形態では、該方法は、虚血組織に、（ｉ）ＰＧＥ２または１６，１６−ジメチルＰＧＥ２および（ｉｉ）メドリゾン、ヒドロコルチゾン、デキサメタゾン、メチルプレドニゾロン、トリアムシノロン、またはアルクロメタゾンを用いて処理したＨＰＳＣを含む生体適合性足場または細胞移植片を直接投与する工程を含む。より詳細な実施形態では、該方法は、虚血組織に、（ｉ）ＰＧＥ２または１６，１６−ジメチルＰＧＥ２および（ｉｉ）メドリゾンを用いて処理したＨＰＳＣを含む生体適合性足場または細胞移植片を直接投与する工程を含む。
Ｆ．本発明の投与準備済みの組成物
【０４１４】
本発明の処理した細胞の組成物は滅菌されており、ヒト患者に適しており、投与できる状態にある（すなわち、いかなるさらなる加工も伴わずに投与することができる）。いくつかの実施形態では、治療用組成物は患者に注入できる状態にある。本明細書で使用される場合、「投与準備済みの（ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ−ｒｅａｄｙ）」、「投与できる状態にある」または「注入できる状態にある」という用語は、被験体に移植または投与する前にいかなるさらなる処理または操作も必要としない本発明の細胞に基づく組成物を指す。
【０４１５】
患者に投与するために適した、滅菌された治療的に許容される組成物は、１種または複数種の薬学的に許容されるキャリア（添加物）および／または希釈剤（例えば、薬学的に許容される培地、例えば、細胞培養培地）、または他の薬学的に許容される構成成分を含んでよい。薬学的に許容されるキャリアおよび／または希釈剤は、一部において、投与する特定の組成物によって、ならびに治療用組成物を投与するために用いる特定の方法によって決定される。したがって、本発明の治療用組成物の多種多様の適切な製剤が存在する（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１７版  １９８５年を参照されたい）。
【０４１６】
特定の実施形態では、幹細胞および／または前駆細胞を含む治療用細胞組成物は、薬学的に許容される細胞培養培地を含む。本発明の細胞に基づく組成物を含む治療用組成物を、経腸投与方法または非経口投与方法によって別々に、または他の適切な化合物と組み合わせて投与して、所望の処置目的を果たすことができる。
【０４１７】
薬学的に許容されるキャリアおよび／または希釈剤は、処置されているヒト被験体に投与するために適するように、純度が十分に高く、毒性が十分に低くなければならない。薬学的に許容されるキャリアおよび／または希釈剤は、さらに、治療用組成物の安定性を維持または増加すべきである。薬学的に許容されるキャリアは、液体であっても固体であってもよく、本発明の治療用組成物の他の構成成分と組み合わせたときに所望の容積、粘稠度などがもたらされるように計画的な投与様式を考慮して選択される。例えば、薬学的に許容されるキャリアは、これだけに限定することなく、結合剤（例えば、アルファ化トウモロコシデンプン、ポリビニルピロリドンまたはヒドロキシプロピルメチルセルロースなど）、増量剤（例えば、ラクトースおよび他の糖、微結晶セルロース、ペクチン、ゼラチン、硫酸カルシウム、エチルセルロース、ポリアクリレート、リン酸水素カルシウムなど）、滑沢剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルク、シリカ、コロイド状二酸化ケイ素、ステアリン酸、ステアリン酸金属塩、硬化植物油、トウモロコシデンプン、ポリエチレングリコール、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウムなど）、崩壊剤（例えば、デンプン、デンプングリコール酸ナトリウムなど）、または湿潤剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウムなど）であってよい。本発明の組成物のための他の適切な薬学的に許容されるキャリアとしては、これだけに限定されないが、水、塩類溶液、アルコール、ポリエチレングリコール、ゼラチン、アミロース、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ケイ酸、粘性パラフィン、ヒドロキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドンなどが挙げられる。
【０４１８】
そのようなキャリア溶液は、緩衝液、希釈剤および他の適切な添加物も含有してよい。「緩衝液」という用語は、本明細書で使用される場合、その化学的構成により、ｐＨを有意に変化させずに酸または塩基を中和する溶液または液体を指す。本発明により構想される緩衝液の例としては、これだけに限定されないが、ダルベッコリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）、リンゲル液、水中５％ブドウ糖（Ｄ５Ｗ）、ノーマルセーライン／生理食塩水（０．９％ＮａＣｌ）が挙げられる。
【０４１９】
これらの薬学的に許容されるキャリアおよび／または希釈剤は、治療用組成物のｐＨを約３から約１０の間に維持するために十分な量で存在してよい。そのように、緩衝剤は、重量対重量ベースで組成物全体の約５％までであってよい。例えば、これだけに限定されないが、塩化ナトリウムおよび塩化カリウムなどの電解質も治療用組成物に含めることができる。
【０４２０】
一態様では、治療用組成物のｐＨは、約４〜約１０の範囲である。あるいは、治療用組成物のｐＨは、約５〜約９、約６〜約９、または約６．５〜約８の範囲である。別の実施形態では、治療用組成物は、ｐＨが前記ｐＨ範囲のうちの１つである緩衝液を含む。別の実施形態では、治療用組成物のｐＨは約７である。あるいは、治療用組成物のｐＨは約６．８〜約７．４の範囲である。さらに別の実施形態では、治療用組成物のｐＨは約７．４である。
【０４２１】
本発明の滅菌組成物は、非毒性の薬学的に許容される媒体中の滅菌した溶液または懸濁液であってよい。「懸濁液」という用語は、本明細書で使用される場合、細胞が固体支持体に付着していない非接着性の状態を指し得る。例えば、懸濁液中に維持される細胞は、撹拌することができ、培養皿などの支持体に接着していない。
【０４２２】
懸濁液は、細かく分割された種が別の種と組み合わさった分散物（混合物）であり、前者は、細かく分割され混合されているので急速に沈降しない。懸濁液は、溶液を含めた液体媒体などのビヒクルを使用して調製することができる。特定の実施形態では、本発明の治療用組成物は、幹細胞および／または前駆細胞が、許容される液体媒体または溶液、例えば、食塩水または無血清培地中に分散し、固体支持体に付着していない懸濁液である。日常生活において最も一般的な懸濁液は、液体水中の固体の懸濁液である。使用することができる許容される希釈剤、例えば、ビヒクルおよび溶媒としては、水、リンゲル液、等張性塩化ナトリウム（食塩水）溶液、および無血清の細胞培養培地がある。いくつかの実施形態では、懸濁液の作製に高張性溶液が使用される。さらに、滅菌不揮発性油が溶媒または懸濁媒として慣習的に使用されている。非経口的な適用のために特に適したビヒクルは、溶液、好ましくは油性溶液または水溶液、ならびに懸濁液、乳液、または埋め込み物からなる。水性懸濁液は、懸濁液の粘度を増加させる物質を含有してよく、それらとしては、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトールおよび／またはデキストランが挙げられる。いくつかの実施形態では、輸液は、対象組織に対して等張性である。いくつかの実施形態では、輸液は対象組織に対して高張性である。
【０４２３】
本発明の投与準備済みの治療用組成物を含む薬学的に許容されるキャリア、希釈剤、および他の構成成分は、臨床レジメンにおいて使用される治療用組成物を可能にする米国医薬品グレード試薬から得られる。一般には、任意の媒体、溶液、または他の薬学的に許容されるキャリアおよび／または希釈剤を含めたこれらの完成した試薬は、使用する前に、濾過滅菌などの当技術分野における従来の様式で滅菌され、種々の望ましくない混入物、例えば、マイコプラズマ、内毒素、またはウイルスの混入について試験される。薬学的に許容されるキャリアは、一実施形態では、ヒトまたは動物起源の天然のタンパク質を実質的に含まず、造血幹細胞および造血前駆細胞を含めた治療用組成物の細胞の集団を貯蔵するために適している。治療用組成物は、ヒト患者に投与されることが意図されており、したがって、ウシ血清アルブミン、ウマ血清、およびウシ胎仔血清などの細胞培養物構成成分を実質的に含まない。
【０４２４】
本発明は、一部において、薬学的に許容される細胞培養培地、具体的には、本発明の組成物および／または培養物の使用も意図している。そのような組成物は、ヒト被験体に投与するために適している。一般的に言うと、本発明の所望の再プログラムされた細胞および／またはプログラムされた細胞の維持、成長、および／または健康を支持する任意の媒体が、薬学的細胞培養培地として使用するために適している。特定の実施形態では、薬学的に許容される細胞培養培地は、無血清培地である。
【０４２５】
治療用組成物は、組成物を含む細胞の集団を貯蔵するために適した無血清培地を含んでよい。種々の実施形態では、無血清培地は動物質を含まず、必要に応じて、タンパク質を含まなくてよい。必要に応じて、培地は、生物薬剤的に許容される組換えタンパク質を含有してよい。「動物質を含まない（ａｎｉｍａｌ−ｆｒｅｅ）」培地とは、構成成分が、非動物供給源に由来する培地を指す。動物質を含まない培地ではネイティブな動物タンパク質を組換えタンパク質に置き換え、栄養分は、合成の植物供給源または微生物供給源から得る。対照的に、タンパク質を含まない培地は、タンパク質を実質的に含まないと定義される。
【０４２６】
本発明において使用される無血清培地は、ヒト治療プロトコールおよび製品に使用するために適した製剤である。１つの無血清培地は、米国特許第５，９４５，３３７号に記載のＱＢＳＦ−６０（Ｑｕａｌｉｔｙ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ，Ｉｎｃ．）である。ＱＢＳＦ−６０は、米国医薬品グレードの構成成分を用いて最適化されており、基本培地ＩＭＤＭとそれに加えて２ｍＭのＬ−グルタミン、１００Ｕ／ｍｌのペニシリン、１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシン、ヒト注射用グレードの血清アルブミン（４ｍｇ／ｍｌ）（Ａｌｐｈａ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、部分的鉄飽和型ヒトトランスフェリン（３００μｇ／ｍｌ）（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  ＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎまたはＢａｙｅｒ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）およびヒト組換えナトリウムインスリン（０．４８Ｕ／ｍｌ）（Ｓｉｇｍａ）で構成される。当技術分野で公知の他の無血清培地としては、これだけに限定されないが、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  ＣａｔａｌｏｇｕｅのＳｔｅｍＰｒｏ−３４無血清培養培地；Ｃａｐｍａｎｙら、Ｓｈｏｒｔ−ｔｅｒｍ，  ｓｅｒｕｍ−ｆｒｅｅ，  ｓｔａｔｉｃ  ｃｕｌｔｕｒｅ  ｏｆ  ｃｏｒｄ  ｂｌｏｏｄ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ＣＤ３４＋  ｃｅｌｌｓ：  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ＦＬＴ３−Ｌ  ａｎｄ  ＭＩＰ−１α  ｏｎ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ｅｘｐａｎｓｉｏｎ  ｏｆ  ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ  ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ  ｃｅｌｌｓ、Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａ  ８４巻：６７５〜６８２頁（１９９９年）；Ｄａｌｅｙ、Ｊ  Ｐら、Ｅｘ  ｖｉｖｏ  ｅｘｐａｎｓｉｏｎ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ  ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ｓｅｒｕｍ−ｆｒｅｅ  ＳｔｅｍＰｒｏＴＭ−３４  Ｍｅｄｉｕｍ、Ｆｏｃｕｓ  １８巻（３号）：６２〜６７頁；Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｃａｔａｌｏｇｕｅ  ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｏｎ  ＡＩＭ  Ｖ  ｓｅｒｕｍ  ｆｒｅｅ  ｃｕｌｔｕｒｅ  ｍｅｄｉａ；ＢｉｏＷｈｉｔｔａｋｅｒ  Ｃａｔａｌｏｇｕｅ  ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｏｎ  Ｘ−ＶＩＶＯ  １０  ｓｅｒｕｍ  ｆｒｅｅ  ｃｕｌｔｕｒｅ  ｍｅｄｉａ；発明の名称がＳｅｒｕｍ−ｆｒｅｅ  ｂａｓａｌ  ａｎｄ  ｃｕｌｔｕｒｅ  ｍｅｄｉｕｍ  ｆｏｒ  ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ  ａｎｄ  ｌｅｕｋｅｍｉａ  ｃｅｌｌｓである５，３９７，７０６号；ｎｏ  ｃｅｌｌ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ；Ｋｕｒｔｚｂｅｒｇら、１８巻：１５３〜４頁（２０００年）；Ｋｕｒｔｚｂｅｒｇら、Ｅｘｐ  Ｈｅｍａｔｏｌ  ２６巻（４号）：２８８〜９８頁（１９９８年４月）が挙げられる。
【０４２７】
上記の培地の例は例示的なものであり、決して本発明において使用するために適した培地の配合を限定するものではないこと、ならびに当業者に公知であり、利用可能な多くのそのような培地が存在することは当業者には理解されよう。
【０４２８】
種々の実施形態では、本発明の治療用組成物は、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、例えば、５％ＨＳＡ、および低分子量（ＬＭＷ）デキストランの滅菌溶液を含む。
【０４２９】
治療用組成物は、マイコプラズマ、内毒素、および微生物の混入物を実質的に含まない。特定の実施形態では、治療用組成物は、約１０μｇ／ｍｌ未満、５μｇ／ｍｌ未満、４μｇ／ｍｌ未満、３μｇ／ｍｌ未満、２μｇ／ｍｌ未満、１μｇ／ｍｌ未満、０．１μｇ／ｍｌ未満、０．０５μｇ／ｍｌ未満のウシ血清アルブミンを含有する。
【０４３０】
内毒素に関して、「実質的に含まない」とは、細胞の用量当たりの内毒素が、生物製剤についてＦＤＡによって認められている、１日当たり体重１ｋｇ当たり５ＥＵの総内毒素、平均７０ｋｇの人に対して細胞の総用量当たり３５０ＥＵよりも少ないことを意味する。
【０４３１】
マイコプラズマおよび微生物の混入に関して、「実質的に含まない」とは、本明細書で使用される場合、当業者に公知の一般に認められている試験について読み取りが陰性であることを意味する。例えば、マイコプラズマ混入は、肉汁培地中で治療用組成物の試料を継代培養し、１日目、３日目、７日目、および１４日目に３７℃で寒天プレートに適切な陽性対照および陰性対照と一緒に分布させることによって決定される。試料の外観を、顕微鏡で、１００×で陽性対照および陰性対照の外観と比較する。さらに、接種した指標細胞培養物を３日間および５日間インキュベートし、ＤＮＡ結合性蛍光色素を使用し、落射蛍光顕微鏡法によって６００×でマイコプラズマの存在について検査する。試料は、寒天培地および／または肉汁培地の手順および指標細胞培養の手順によりマイコプラズマ混入の証拠が示されなければ、申し分ないとみなされる。
【実施例】
【０４３２】
（実施例１）
処理したＨＳＰＣにおけるＣＸＣＲ４  ｍＲＮＡの発現レベル
Ｆｌｕｉｄｉｇｍプラットフォームを使用したＣＸＣＲ４  ｑＰＣＲ
【０４３３】
ｅｘ  ｖｉｖｏにおいて処理したヒト臍帯血由来ＣＤ３４＋細胞（Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ
Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ、ＢＣ、Ｃａｎａｄａ）からの遺伝子発現のリアルタイムＰＣＲ転写物定量を、ＢｉｏＭａｒｋ  Ｄｙｎａｍｉｃ  Ａｒｒａｙ
ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓシステム（Ｆｌｕｉｄｉｇｍ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｓｏｕｔｈ  Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ、ＣＡ、ＵＳＡ）を使用して実施した。
【０４３４】
臍帯血または動員された末梢血に由来するＣＤ３４＋細胞を、１０μＭのプロスタグランジン経路アゴニスト単独、または１０μＭのグルココルチコイドとの組合せと一緒に、無血清増殖培地（Ｓｅｒｕｍ−Ｆｒｅｅ  Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ  Ｍｅｄｉｕｍ）（ＳＦＥＭ；例えば、ＳｔｅｍＣｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｉｎｃ．からのＳｔｅｍＳｐａｎ（登録商標））中、３７℃、５％ＣＯ２で４時間処理した。プロスタグランジン経路アゴニストは、１６，１６−ジメチルＰＧＥ２（ｄｍＰＧＥ２）、２０−エチルＰＧＥ２（ｅＰＧＥ２）、１５（Ｓ）−１５−メチルＰＧＥ２（ｍＰＧＥ２）、およびＰＧＥ２を含んだ。グルココルチコイドは、ヒドロコルチゾン、デキサメタゾン、メドリゾン、アルクロメタゾン、またはトリアムシノロン（ｔｒｉａｍｃｉｎａｌｏｎｅ）を含んだ。処理後、細胞をＳＦＥＭで洗浄し、３００ｇで１０分遠心分離した。
【０４３５】
次いで、Ｐｉｃｏ  Ｐｕｒｅ  ＲＮＡ  Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ、Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ、ＣＡ、ＵＳＡ）を使用して、処理した細胞から全ＲＮＡを単離した。Ｈｉｇｈ−Ｃａｐａｃｉｔｙ  ｃＤＮＡ  Ｒｅｖｅｒｓｅ  Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ、ＵＳＡ）を使用して、５０ｎｇの単離された全ＲＮＡから相補ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）を逆転写した。
【０４３６】
参照の対照遺伝子３種（ＧＡＰＤＨ、ＨＰＲＴ１、およびＱＡＲＳ）を含め、特定の標的遺伝子（９６種）について、９６種の遺伝子に特異的なＡｐｐｌｉｅｄ  ＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓＴａｑＭａｎ  Ａｓｓａｙ（表１を参照されたい）の混合物２００ｎＭを使用し、ＴａｑＭａｎ  ＰｒｅＡｍｐ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ  Ｋｉｔ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）プロトコールを使用して、ｃＤＮＡを予め増幅した。ｃＤＮＡからの特異的標的増幅（ＳＴＡ）を、製造者のプロトコールを使用して、標準のサイクル条件での１４サイクルの増幅を用いて実施した。試料について、反応混合物は、３．０μＬのＧｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈ．）、０．３μＬのＳａｍｐｌｅ  Ｌｏａｄｉｎｇ  Ｂｕｆｆｅｒ（Ｆｌｕｉｄｉｇｍ）、１．５μＬの希釈した（１：５滅菌ｎＨ２Ｏ）ＳＴＡ  ｃＤＮＡ、および９６．９６Ｄｙｎａｍｉｃ
Ａｒｒａｙ（Ｆｌｕｉｄｉｇｍ）の試料注入口にローディングするための１．２μＬの滅菌ｄｉＨ２Ｏを含有した。
【０４３７】
試料を５〜９ウェルで反復試験した。反応混合物は、２．５μＬの遺伝子特異的ＴａｑＭａｎアッセイ（Ｇｅｎｅ  Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｔａｑｍａｎ  Ａｓｓａｙ）（２０×）および９６．９６Ｄｙｎａｍｉｃ  Ａｒｒａｙ（Ｆｌｕｉｄｉｇｍ）上のアッセイ注入口にローディングするためのアッセイローディング緩衝液（Ａｓｓａｙ  Ｌｏａｄｉｎｇ  Ｂｕｆｆｅｒ）（Ｆｌｕｉｄｉｇｍ）２．５μＬを含有した。ＮａｎｏＦｌｅｘ  ＩＦＣ
Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｒ  ＨＸ（Ｆｌｕｉｄｉｇｍ）を使用して９６．９６Ｄｙｎａｍｉｃアレイをローディングし、ＢｉｏＭａｒｋ  Ｒｅａｌ−Ｔｉｍｅ  ＰＣＲ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｆｌｕｉｄｉｇｍ）を使用してリアルタイム反応を実施した。
【０４３８】
結果を、ＢｉｏＭａｒｋ  Ｒｅａｌ−Ｔｉｍｅ  ＰＣＲ  Ａｎａｌｙｓｉｓソフトウェアを使用して解析した。試料反復物から平均Ｃｔを算出し、３種の参照遺伝子（ＧＡＰＤＨ、ＨＰＲＴ１、ＱＡＲＳ）の平均値を使用してビヒクルのみの試料に対してデルタ−デルタＣｔ（ΔΔＣｔ）を算出した。２８を超えるＣｔを算出から排除した。結果をＥｘｃｅｌ棒グラフ（Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ  Ｃｏｒｐ．、Ｒｅｄｍｏｎｄ、ＷＡ、ＵＳＡ）で示したが、そこではＣＸＣＲ４についての平均倍数変化（２＾ΔΔＣｔ）が示されている。エラーバーは反復測定の＋／−標準偏差（ＳＤ）を示す。
結果
【０４３９】
ＳＦＥＭ中で１０μＭの１６，１６−ジメチルＰＧＥ２（２２倍）、または１０μＭのｄｍＰＧＥ２と１０μＭのグルココルチコイドの組合せ（５０〜６１倍）を用いて処理した臍帯血ＣＤ３４＋細胞において、ＤＭＳＯ処理した細胞と比較してＣＸＣＲ４  ｍＲＮＡ発現の増加が観察された。１０μＭのｄｍＰＧＥ２と、５種の異なるグルココルチコイドのうちのいずれか１種１０μＭの組合せで処理した後にＣＸＣＲ４＋  ｍＲＮＡのレベルの相乗的な増加が検出された（図１）。グルココルチコイドは、ｄｍＰＧＥ２と相乗的に作用して、ＣＸＣＲ４遺伝子発現を増加させる。
【０４４０】
ＳＦＥＭ中で、他のプロスタグランジン経路アゴニスト、１０μＭ  ＰＧＥ２（８〜６１倍の増加）（図２Ａ）、１０μＭの１５，１５−メチルＰＧＥ２（１６〜５０倍の増加）（図２Ｂ）、および１０μＭの２０−エチルＰＧＥ２（１６〜５５倍の増加）（図２Ｃ）をグルココルチコイドと組み合わせて用いて４時間にわたって処理した臍帯血ＣＤ３４＋細胞においても、ＤＭＳＯ処理した細胞と比較した場合に同様の相乗的なＣＸＣＲ４  ｍＲＮＡ発現の増加が観察された。グルココルチコイドは、他のプロスタグランジン経路アゴニストとも相乗的に作用して、ＣＸＣＲ４遺伝子発現を増加させる。
表１：Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  ＴａｑＭａｎアッセイ
【表１】
2019047820.tif 000002
Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  ＳｔｅｐＯｎｅＰｌｕｓを使用したＣＸＣＲ４  ｑＰＣＲ
【０４４１】
ｅｘ  ｖｉｖｏにおいて処理した臍帯血ＣＤ３４＋細胞（Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ、ＢＣ、Ｃａｎａｄａ）および動員された末梢血  ＣＤ３４＋細胞（Ａｌｌ  Ｃｅｌｌｓ、ＬＬＣ、Ｅｍｏｒｙｖｉｌｌｅ、ＣＡ、ＵＳＡ）からのリアルタイムＰＣＲ転写物定量を、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  ＳｔｅｐＯｎｅ  Ｐｌｕｓシステム（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ、ＵＳＡ）を使用して実施した（図３参照）。ＣＤ３４＋細胞をＳＦＥＭ中、３７℃、５％ＣＯ２で、１０μＭの１６，１６−ジメチルＰＧＥ２（ｄｍＰＧＥ２）を単独で、または１０μＭのメドリゾンと組み合わせて用いて４時間にわたって処理した。処理後、細胞をＳＦＥＭで洗浄し、３００ｇで１０分遠心分離した。
【０４４２】
次いで、Ｐｉｃｏ  Ｐｕｒｅ  ＲＮＡ  Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ、Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ、ＣＡ、ＵＳＡ）を使用して処理した細胞から全ＲＮＡを単離した。Ｈｉｇｈ−Ｃａｐａｃｉｔｙ  ｃＤＮＡ  Ｒｅｖｅｒｓｅ  Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して５０ｎｇの単離された全ＲＮＡから相補ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）を逆転写した。
【０４４３】
ｃＤＮＡ試料に対して２連でリアルタイムＰＣＲ解析を実行した。反応混合物は、１μＬのＧｅｎｅ  Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｔａｑｍａｎ  Ａｓｓａｙ（２０×）および１０μＬのＧｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を含有し、残りの体積の９μＬは、１０ｎｇのｃＤＮＡおよび滅菌ｄｉＨ２Ｏを含有した。
【０４４４】
ＣＸＣＲ４の結果（表１からのアッセイ）を、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ
ＳｔｅｐＯｎｅ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  ｖ２．１  Ａｎａｌｙｓｉｓソフトウェアを使用して解析した。試料反復物から平均Ｃｔを算出し、ＧＡＰＤＨの結果（表１からのアッセイ）を参照遺伝子として使用してビヒクルのみの試料に対してデルタ−デルタＣｔ（ΔΔＣｔ）を算出した。結果をＥｘｃｅｌ棒グラフ（Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ  Ｃｏｒｐ．、Ｒｅｄｍｏｎｄ、ＷＡ、ＵＳＡ）で示したが、そこではＣＸＣＲ４についての平均倍数変化（２＾ΔΔＣｔ）が示されている。エラーバーは、反復測定の＋／−標準偏差（ＳＤ）を示す（図１〜３、図５、および図６を参照されたい）。
結果
【０４４５】
臍帯血由来ＣＤ３４＋細胞および動員された末梢血から単離したＣＤ３４＋細胞のどちらにおいても、ＳＦＥＭ中で１０μＭの１６，１６−ジメチルＰＧＥ２を用いて４時間処理した後、同様のＣＸＣＲ４  ｍＲＮＡ発現の増加が観察された（それぞれ２２倍および２７倍の増加）。臍帯血由来ＣＤ３４＋細胞および動員された末梢血から単離したＣＤ３４＋細胞のどちらにおいても、ＳＦＥＭ中でプロスタグランジン経路アゴニスト（ｄｍＰＧＥ２）とグルココルチコイド（メドリゾン）の組合せで４時間処理した後、同様の相乗的なＣＸＣＲ４  ｍＲＮＡの増加が検出された（それぞれ６０倍および５９倍）（図３）。ＣＤ３４＋細胞は、供給起源にかかわらず、いずれの処理に対しても同様に応答する。
【０４４６】
（実施例２）
ＣＤ３４＋細胞をｄｍＰＧＥ２とメドリゾンの組合せで処理することにより、ＣＸＣＲ４表面タンパク質発現が増加する
凍結させたＣＤ３４＋  ＣＢおよびＰＢにおけるＣＸＣＲ４表面発現解析
ＣＤ３４＋臍帯血（ＣＢ）細胞（Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）およびＣＤ３４＋動員された末梢血（ｍＰＢ）細胞（Ａｌｌ  Ｃｅｌｌｓ）を、ＳＦＥＭ中、３７℃、５％ＣＯ２で２時間および４時間にわたって、１０μＭのｄｍＰＧＥ２、ｄｍＰＧＥ２およびメドリゾン、または対照としてＤＭＳＯを用いて処理した。処理後、細胞をＳＦＥＭで洗浄し、３００ｇで１０分遠心分離した。次いで、細胞をＳＦＥＭに再懸濁させ、３７℃、５％ＣＯ２で多様な時間にわたってインキュベートした。
【０４４７】
ｍＰＢ  ＣＤ３４＋細胞およびＣＢ  ＣＤ３４＋細胞を、ＳＦＥＭ中、２時間または４時間にわたってｄｍＰＧＥ２、ｄｍＰＧＥ２およびメドリゾン、またはＤＭＳＯを用いて処理し、次いで、処理中および処理後の異なる時点において細胞をＣＸＣＲ４表面タンパク質発現について評価した（表２）。ＣＸＣＲ４レベルを測定するために、処理した細胞を３００ｇで１０分遠心分離し、Ｌｉｎｅａｇｅカクテル  １−ＦＩＴＣ、ＣＤ３４−ＡＰＣ、ＣＸＣＲ４（ＣＤ１８４）−ＰＥを含有する染色培地に再懸濁させ、氷上で２０分インキュベートした。次いで、新鮮な染色培地を細胞に加えて、残留する結合していない抗体のいずれも細胞から洗い流し、細胞を３００ｇで１０分遠心分離し、この洗浄手順を２回繰り返した。染色された細胞をＧｕａｖａ  ＥａｓｙＣｙｔｅ  ８ＨＴフローサイトメーター上に得、ＦｌｏＪｏ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｐａｃｋａｇｅ（Ｔｒｅｅｓｔａｒ）を使用して解析を実施した。
表２．ＣＸＣＲ４タンパク質表面解析のために用いた処理および時点
【表２】
2019047820.tif 000003
【０４４８】
結果
ＳＦＥＭ中、３７℃で、２時間および４時間にわたって１０μＭの１６，１６−ジメチルＰＧＥ２ならびにｄｍＰＧＥ２およびメドリゾンを用いて処理した臍帯血またはｍＰＢ細胞由来のＣＤ３４＋細胞において、ＤＭＳＯ処理した細胞と比較した場合、ＣＸＣＲ４
ＲＮＡ発現の増加が観察された。細胞供給源にかかわらず、どちらの細胞型についても、ｄｍＰＧＥ２およびメドリゾンを用いた４時間の処理の２時間後（図５および図６）にＣＸＣＲ４＋細胞の最も高い百分率が得られた。動員された末梢血ＣＤ３４＋細胞については、対照の８％と比較して、細胞の７５％がＣＸＣＲ４＋を発現した（図５）。臍帯血ＣＤ３４＋細胞については、対照試料の３〜６％と比較して、ｄｍＰＧＥ２およびメドリゾン処理後に細胞の２５％がＣＸＣＲ４を発現した（図６）。
【０４４９】
ヒト骨髄由来のＣＤ３４＋細胞を、１６，１６−ジメチルＰＧＥ２およびｄｍＰＧＥ２とメドリゾンの組合せに応答するそれらの能力についても試験した。この場合、予め凍結させた骨髄ＣＤ３４＋を、ＳＦＥＭ中、３７℃で４時間にわたって１０μＭの１６，１６−ジメチルＰＧＥ２＋１０μＭのメドリゾンを用いて処理した。次いで、細胞を洗浄し、ＳＦＥＭに２時間再懸濁させた。次いで、ＣＸＣＲ４表面タンパク質を以前に記載されている通りフローサイトメトリーによって評価した。ＢＭ  ＣＤ３４＋細胞をＳＦＥＭ中で１０μＭの１６，１６−ジメチルＰＧＥ２を単独でまたは１０μＭの１６，１６−ジメチルＰＧＥ２＋１０μＭのメドリゾンを用いて処理することにより、ＣＸＣＲ４タンパク質の発現のレベルが、それぞれ１２倍および２０倍に増加する。さらに、ＳＦＥＭ中で１０μＭの１６，１６−ジメチルＰＧＥ２＋１０μＭのメドリゾンを用いて処理することにより、ＣＸＣＲ４＋細胞の百分率が１２倍増加する（図４Ａおよび図４Ｂ）。
【０４５０】
（実施例３）
ＳＤＦ−１  トランスウェル遊走アッセイ
方法
９６ウェル走化性チャンバー、５μＭ孔径のポリカーボネート膜（Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｉｎｃ．、Ｃｏｒｎｉｎｇ、ＮＹ）を製造者の指示に従って使用してトランスウェル遊走アッセイを実施した。簡単に述べると、次いで、ＣＤ３４＋細胞を、３７℃で４時間にわたって１６，１６−ジメチルＰＧＥ２（ｄｍＰＧＥ２）、ｄｍＰＧＥ２およびグルココルチコイド、またはＤＭＳＯ対照をＳｔｅｍＳｐａｎ（登録商標）培地（Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ
Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ、Ｃａｎａｄａ）中１０μＭの濃度で用いて処理した。次いで、細胞を遠心分離によって洗浄し（３００×ｇ、１０分）、トランスウェルアッセイ緩衝液（Ｐｈｅｎｏｌ  Ｒｅｄ  Ｆｒｅｅ  ＲＰＭＩ培地（Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ）、０．５％無脂質ＢＳＡ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）に７５μｌ当たり細胞４０，０００〜６０，０００個の濃度で再懸濁させた。
【０４５１】
処理効果の持続時間を試験するために、処理した細胞の一部分を遠心分離によって洗浄し（３００×ｇ、１０分）、ｄｍＰＧＥ２も、グルココルチコイドも、ＤＭＳＯも無しのＳｔｅｍＳｐａｎ（登録商標）培地に３７℃で４時間再懸濁させ、次いで、再度遠心分離によって洗浄し（３００×ｇ、１０分）、トランスウェルアッセイ緩衝液（Ｐｈｅｎｏｌ  Ｒｅｄ  Ｆｒｅｅ  ＲＰＭＩ培地（Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ）、０．５％無脂質ＢＳＡ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）に７５μｌ当たり細胞４０，０００〜６０，０００個の濃度で再懸濁させた。
【０４５２】
プレートの上部のチャンバーには細胞懸濁液７５μｌを加え、下のウェルには０ｎｇ／ｍｌまたは５０ｎｇ／ｍｌのＳＤＦ１α（Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍ、Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ＭＮ）を含有するトランスウェルアッセイ培地２３５μｌを加えた。３７℃、５％ＣＯ２で２．５時間インキュベートした後に下のウェルの総細胞数をフローサイトメトリーによって得た。
結果
【０４５３】
ＣＤ３４＋細胞を、ＤＭＳＯ対照、ｄｍＰＧＥ２、またはｄｍＰＧＥ２およびメドリゾンを用いて上記の通り処理した。下部のチャンバーに０ｎｇ／ｍＬのＳＤＦ１または５０ｎｇ／ｍＬのＳＤＦ１が入ったトランスウェル培養プレートの上部のチャンバーに処理した細胞を入れた。遊走を、加えた細胞に対する％、すなわち、上部のチャンバーに最初に加えた細胞の数に対して正規化した下部のチャンバー内の細胞の数として表した。ｄｍＰＧＥ２で処理することにより、ＤＭＳＯ対照と比較してＳＤＦ１に駆動される遊走が増加した（図７参照）。ｄｍＰＧＥ２とメドリゾンを組み合わせて処理することにより、ＳＤＦ１に駆動される細胞遊走がｄｍＰＧＥ２単独またはＤＭＳＯ対照を超えて増加した（図７参照）。したがって、ＳＦＥＭ中でｄｍＰＧＥ２、またはｄｍＰＧＥ２およびメドリゾンを用いて処理したＣＤ３４＋細胞は、ＤＭＳＯ対照で処理した細胞と比較して、ＳＤＦ１に向かってより効率的に遊走した。
【０４５４】
ＣＤ３４＋細胞を、ＤＭＳＯ対照、ｄｍＰＧＥ２、またはｄｍＰＧＥ２およびグルコステロイド（ｇｌｕｃｏｓｔｅｒｏｉｄ）（メドリゾン、ヒドロコルチゾン、トリアムシノロン、アルクロメタゾン、ジプロピオン酸アルクロメタゾン、またはデキサメタゾン）を用いて上記の通り処理した。下部のチャンバーに０ｎｇ／ｍＬのＳＤＦ１または５０ｎｇ／ｍＬのＳＤＦ１が入ったトランスウェル培養プレートの上部のチャンバーに処理した細胞を入れた。遊走を、加えた細胞に対する％、すなわち、上部のチャンバーに最初に加えた細胞の数に対して正規化した下部のチャンバー内の細胞の数として表した。ｄｍＰＧＥ２で処理することにより、ＳＤＦ１に駆動される細胞遊走がＤＭＳＯ対照と比較して増加した（図８参照）。さらに、ｄｍＰＧＥ２をメドリゾン、ヒドロコルチゾン、トリアムシノロン、アルクロメタゾン、ジプロピオン酸アルクロメタゾン、またはデキサメタゾンのいずれかと組み合わせて処理することにより、ＳＤＦ１に駆動される細胞遊走がｄｍＰＧＥ２単独またはＤＭＳＯ対照よりも有効に増加した（図８参照）。したがって、ＳＦＥＭ中でｄｍＰＧＥ２、またはｄｍＰＧＥ２および種々のグルココルチコイドを用いて処理したＣＤ３４＋細胞は、ＤＭＳＯ対照で処理した細胞と比較して、ＳＤＦ１に向かってより効率的に遊走し、プロスタグランジン経路アゴニスト／グルココルチコイドで処理した細胞の遊走性の増強は特定のグルココルチコイドに限定されないことが示された。
【０４５５】
ｄｍＰＧＥ２／グルココルチコイドで処理した細胞のＳＤＦ−１への遊走効果の増強の持続時間を試験した。ＣＤ３４＋細胞を、ＤＭＳＯまたはｄｍＰＧＥ２およびメドリゾンを用いて処理した。新鮮に処理した細胞または処理し、さらなる処理を伴わずに追加的な４時間にわたってインキュベートした細胞（上記の通り）を、下部のチャンバーに０ｎｇ／ｍＬのＳＤＦ１または５０ｎｇ／ｍＬのＳＤＦ−１が入ったトランスウェル培養プレートの上部のチャンバーに入れた。遊走を、加えた細胞に対する％、すなわち、上部のチャンバーに最初に加えた細胞の数に対して正規化した下部のチャンバー内の細胞の数として表した。ｄｍＰＧＥ２およびメドリゾンで処理することにより、ＳＤＦ１に駆動される細胞遊走がＤＭＳＯ対照と比較して増加した（図９参照）。さらに、ｄｍＰＧＥ２およびメドリゾンで処理し、さらなる処理無しで追加的な４時間にわたってインキュベートした細胞は、新鮮に処理した細胞と同様に遊走した。したがって、プロスタグランジン経路アゴニスト／グルココルチコイドで処理した細胞のＳＤＦ−１への遊走効果の増強は少なくとも４時間にわたって安定であり、この効果は処理した細胞を被験体に投与する場合にも存在することが示される。
【０４５６】
（実施例４）
ＰＧＥ２およびＰＧＥ２／グルココルチコイドで処理したＣＤ３４＋細胞により、ラット虚血モデルにおける神経機能および運動機能が改善される
方法
成体の雄のＷｉｓｔａｒラットを、右中大脳動脈を遮断することによる一過性の限局性虚血ＭＣＡＯモデル（中大脳動脈閉塞）に供した。先端を丸くした外科用ナイロン縫合糸を、中大脳動脈の起点を塞ぐまで外頸動脈から内頸動脈の内腔に進めた。２時間後に、縫合糸を除いて再灌流させた。再灌流の１日後に、ラットに、尾静脈を介してハンクス平衡塩類溶液（Ｈａｎｋｓ  Ｂａｌａｎｃｅｄ  Ｓａｌｔ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ）（ＨＢＳＳ）、ＤＭＳＯで処理したＣＤ３４＋細胞、またはｄｍＰＧＥ２およびメドリゾンを用いて処理したＣＤ３４＋細胞のいずれかを注射した。増強された細胞の効果の持続力を増大させるために、ホスホジエステラーゼ（ｐｈｏｓｐｏｄｉｅｓｔｅｒａｓｅ）４阻害剤（ＹＭ９７６）も含めた。本発明者らの研究により、ＰＤＥ４型の阻害剤では増強された細胞の性質は有意に変化しないことが実証されている。細胞を、培養培地で化合物またはＤＭＳＯと一緒に３７℃で４時間インキュベートした。注射する前に、前処理した細胞を遠心分離し、得られた上清を吸引し、細胞ペレットをＨＢＳＳに再懸濁させた。
【０４５７】
注射の１日後および１週間後、２週間後、３週間後、４週間後および５週間後に、ラットを、実験群についてマスクされている研究者によって実施した行動試験を用いて神経学的欠損について評価した。運動試験、感覚試験、平衡試験および反射試験の公開されたパネルに基づいて改変神経学的重症度スコア（Ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｅｖｅｒｉｔｙ  Ｓｃｏｒｅ）（ｍＮＳＳ）を算出した（Ｃｈｅｎら、Ｓｔｒｏｋｅ  ３２巻：２６８２〜２６８８頁（２００１年））。
【０４５８】
さらに、注射の１日後および１週間後、２週間後、３週間後、４週間後および５週間後に、処置したラットにおいて、動物に穴の開いた通路を横断させるフットフォールト試験を用いて運動機能を評価した。前肢のステップの総数および左前肢が穴に落ちた踏み誤りの数を測定した。
結果
【０４５９】
ラットに、処理したＨＳＰＣを投与し、処理効果によりＭＣＡＯ卒中モデルにおける神経学的欠損を減少させる能力について試験した。片側性虚血性脳傷害の２４時間後に、処理したＨＳＰＣを静脈内に注射した。一連の行動試験を用いて神経機能を評価し、ｍＮＳＳとして報告した。ｄｍＰＧＥ２およびメドリゾンを用いて処理した細胞により、７日目、１４日目および３５日目におけるｍＮＳＳがビヒクル対照と比較して有意に改善されたが、ＤＭＳＯで処理した細胞では、ｍＮＳＳに有意な影響はなかった（図１０参照）、＊ｐ＜０．０５（１群当たりｎ＝６）。
【０４６０】
ラットに、ｄｍＰＧＥ２およびメドリゾンを用いて処理したＨＳＰＣを投与し、処理効果により、ＭＣＡＯ卒中モデルにおける運動欠損を減少させる能力について試験した。片側性虚血性脳傷害の２４時間後に、処理したＨＳＰＣを静脈内に注射した。運動機能を穴の開いた通路を横断したときの％フットフォールトとして評価した。ｄｍＰＧＥ２およびメドリゾンを用いて処理した細胞により、７日目および３５日目における％フットフォールトがビヒクル対照と比較して有意に減少したが、ＤＭＳＯで処理した細胞では、％フットフォールトに有意な影響はなかった（図１１参照）。＊ｐ＜０．０５（１群当たりｎ＝６）。
【０４６１】
したがって、プロスタグランジン経路アンタゴニストおよびグルココルチコイドを用いて処理したＨＳＰＣにより、ラットＭＣＡＯモデルにおける虚血およびそれに関連する症状が有効に処置された。
【０４６２】
（実施例５）
方法
処理した全臍帯血からのＬｉｎ（−）ＣＤ３４＋細胞の単離
ヒト全臍帯血単核細胞をＳｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ、Ｃａｎａｄａ）から入手した。解凍したら、細胞を、ＬＭＤ／５％ＨＳＡ培地中で１６，１６−ジメチルＰＧＥ２または適切な対照、例えば、ＤＭＳＯを用いて処理した。
【０４６３】
処理後、細胞をＬＭＤ／５％ＨＳＡ培地で洗浄し、室温で６５０×ｇで１０分間遠心分離し、冷選択緩衝液（Ｃａ＋もＭｇ＋も含まないリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）；２ｍＭのＥＤＴＡ；および０．５％ＨＳＡ）に再懸濁させた。Ｌｉｎｅａｇｅ（Ｌｉｎ）Ｄｅｐｌｅｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ、ＣＡ）、その後にＣＤ３４＋富化キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ）を使用して磁気選択を実施した。系統枯渇およびＣＤ３４＋細胞の富化はＱｕａｄｒｏＭＡＣＳ（商標）分離器を使用し、製造者の指示に従って実施した。このプロセスの間、細胞を４℃で保持した。処理した全臍帯血からＬｉｎ−ＣＤ３４＋細胞を単離したら、一定分量をフローサイトメトリーによって分析して、純度を評価した。細胞の純度は９０％を超えた。Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ解析のために、Ｐｉｃｏ  Ｐｕｒｅ  ＲＮＡ  Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ、Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ、ＣＡ）を使用したＲＮＡ抽出のために大多数の細胞を使用した。
【０４６４】
上記の実施例に記載のＣＤ３４＋細胞は、臍帯血、動員された末梢血および骨髄細胞から記載の通り単離し、Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  ＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓおよびＡｌｌ  Ｃｅｌｌｓ  ＬＬＣから入手した。これらの細胞を受け取ったら、分化細胞混入のレベルを、フローサイトメトリーにより、ＣＤ３４＋細胞の表面上に存在する系統マーカーの量に基づいて決定した。系統マーカーを発現しているＣＤ３４＋細胞は、系統陰性ＣＤ３４＋細胞と同じ自己再生能力を有さない分化した前駆細胞である。これらの会社から入手し、本明細書の実験において参照されているＣＤ３４＋細胞は全て、少なくとも８５％がＣＤ３４＋／Ｌｉｎ（−）細胞であった。
【０４６５】
上記の種々の実施形態を組み合わせてさらなる実施形態をもたらすことができる。本明細書において参照され、かつ／または本出願データシートに列挙されている米国特許、米国特許出願公開、米国特許出願、外国特許、外国特許出願および非特許刊行物は全て、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。必要であれば、実施形態の態様を種々の特許、出願および公開の概念を使用するように改変して、なおさらなる実施形態をもたらすことができる。
【０４６６】
上記の詳細な説明を踏まえて、これらおよび他の変化を実施形態に行うことができる。一般に、以下の特許請求の範囲において使用される用語は、特許請求の範囲を本明細書および特許請求の範囲に開示されている特定の実施形態に限定するものと解釈されるべきではなく、可能性のある実施形態を、そのような特許請求の範囲に権利が与えられる等価物の全範囲と共に全て含むものと解釈されるべきである。したがって、特許請求の範囲は本開示により限定されない。
【図１】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【図３】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【外国語明細書】
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