(57)【要約】      （修正有）【課題】ｐ９７のフラグメントおよびその使用の提供。【解決手段】例えば、血液脳関門（ＢＢＢ）を通過する治療薬または診断薬の送達を容易にするためのＢＢＢ輸送活性を有するヒトｐ９７（メラノトランスフェリン）ポリペプチドのフラグメント（その改変体および組み合わせが含まれる）と、前記ｐ９７フラグメントを含む結合体と、関連するその使用方法とを提供する。本発明の実施形態は、約３００、４００、５００、６００、または７００アミノ酸長までの単離ｐ９７（メラノトランスフェリン）ポリペプチドを含む。【選択図】図１１
2019147800.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
明細書に記載された発明。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
この出願は、米国特許法§１１９（ｅ）の下、２０１３年３月１３日に出願された米国
仮出願第６１／７８０，１７０号および２０１３年１０月１日に出願された米国仮出願第
６１／８８５，３８７号（これらはともに、その全体が参考として援用される）の利益を
主張する。
【０００２】
配列表に関する記述
本出願に関連する配列表を、ハードコピーの代わりにテキスト形式で提供し、この配列
表は、本明細書中で参考として援用される。配列表を含むテキストファイル名は、ＢＩＯ
Ａ＿００２＿０２ＷＯ＿＿ＳＴ２５．ｔｘｔである。このテキストファイルは約４０ＫＢ
であり、２０１４年３月１３日に作成され、ＥＦＳ−Ｗｅｂ経由で電子的に提出した。
【０００３】
背景
技術分野
本発明は、一般に、例えば、血液脳関門（ＢＢＢ）を通過して中枢神経系内に治療薬お
よび／または診断薬を容易に送達させるための輸送活性を有するヒトｐ９７（メラノトラ
ンスフェリン）ポリペプチドのフラグメント（その改変体および組み合わせが含まれる）
と、前記ｐ９７フラグメントを含む結合体と、関連するその使用方法とに関する。
【背景技術】
【０００４】
関連技術の説明
脳の特定の領域に治療薬または診断薬を送達させる困難を克服することは、脳障害が含
まれる多くの中枢神経系（ＣＮＳ）障害の処置または診断における大きな課題である。神
経保護における役割において、血液脳関門（ＢＢＢ）は、多数の潜在的に重要な診断薬お
よび治療薬の脳への送達を妨害するように機能する。
【０００５】
診断および治療に有効であり得る治療分子および治療遺伝子は、適量でＢＢＢを通過し
ない。全治療分子の９５％超が血液脳関門を通過しないと報告されている。
【０００６】
したがって、例えば、癌、特にＣＮＳに転移した癌などの中枢神経系（ＣＮＳ）の一定
の疾患を有効に処置するために血液脳関門を通過する治療薬および他の分子の送達を容易
にする組成物および方法が必要である。本発明は、これらのニーズに取り組み、他の関連
する利点を提供する。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
発明の概要
本発明の実施形態は、約３００、４００、５００、６００、または７００アミノ酸長ま
での単離ｐ９７（メラノトランスフェリン）ポリペプチドを含み、ここで、このポリペプ
チドは、任意の１つ以上の配列番号２〜１８、またはその活性なフラグメントもしくは改
変体と少なくとも７０％同一のアミノ酸配列を含む。一定の実施形態では、ｐ９７ポリペ
プチドは、配列番号２〜１８のうちの１つを含み、任意選択的に配列番号１によって定義
された隣接するＣ末端配列および／またはＮ末端配列を含む。一定の実施形態では、ポリ
ペプチドは、配列番号２〜１８のうちの２、３、４、または５つを含み、任意選択的に配
列番号１によって定義された任意の介在配列を含む。
【０００８】
一定の実施形態では、ｐ９７ポリペプチドは、配列番号１３および／または１４のうち
の一方または両方を含み、任意選択的に配列番号１によって定義された介在配列を含む。
一定の実施形態では、ｐ９７ポリペプチドは、およそまたはおよそ以下の数値まで：２５
０、２４０、２３０、２２０、２１０、２００、１９０、１８０、１７０、１６０、１５
０、１４０、１３０、１２０、１１０、１００、９０、８０、７０、６０、５０、４０、
３０、２５、２０、１５、または１０のアミノ酸長である。
【０００９】
一定の実施形態では、ｐ９７ポリペプチドは、異種タンパク質に融合されている。
【００１０】
本明細書中に記載のｐ９７ポリペプチドを含み、ここで、ｐ９７ポリペプチドが薬剤と
共有結合的または作動可能に連結されてｐ９７−薬剤結合体を形成する結合体も含まれる
。一定の実施形態では、薬剤は、小分子、ポリペプチド、ペプチド模倣物、ペプトイド、
アプタマー、または検出可能な実体である。
【００１１】
一定の実施形態では、小分子は、１つ以上のアルキル化剤、代謝拮抗物質、アントラサ
イクリン、抗腫瘍抗生物質、白金、タイプＩトポイソメラーゼインヒビター、タイプＩＩ
トポイソメラーゼインヒビター、ビンカアルカロイド、およびタキサンから選択される細
胞毒性薬、化学療法薬、または抗血管新生薬である。一定の実施形態では、小分子は、１
つ以上のクロラムブシル、シクロホスファミド、シレンジタイド（ｃｉｌｅｎｇｉｔｉｄ
ｅ）、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、メルファラン、プロカルバジン、チオテパ、カルムスチ
ン（ＢＣＮＵ）、エンザスタウリン、ブスルファン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、
ゲフィチニブ、エルロチニブイダルビシン、テモゾロミド、エピルビシン、ミトキサント
ロン、ブレオマイシン、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、カンプトセ
シン、イリノテカン、トポテカン、アムサクリン、エトポシド、エトポシドホスファート
、テニポシド、テムシロリムス、エベロリムス、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノ
レルビン、ビンデシン、ＣＴ５２９２３、パクリタキセル、イマチニブ、ダサチニブ、ソ
ラフェニブ、パゾパニブ、スニチニブ（ｓｕｎｉｔｎｉｂ）、バタラニブ、ゲフィチニブ
（ｇｅｆｔｉｎｉｂ）、エルロチニブ、ＡＥＥ−７８８、ジクロロアセタート（ｄｉｃｈ
ｏｒｏａｃｅｔａｔｅ）、タモキシフェン、ファスジル（ｆａｓｕｄｉｌ）、ＳＢ−６８
１３２３、セマキサニブ、ドネペジル（ｄｏｎｅｐｉｚｉｌ）、ガランタミン、メマンチ
ン、リバスチグミン、タクリン、ラサギリン（ｒａｓｉｇｉｌｉｎｅ）、ナルトレキソン
、ルビプロストン、サフィナミド、イストラデフィリン、ピマバンセリン、ピトリサント
、イスラジピン、プリドピジン（ＡＣＲ１６）、テトラベナジン、ベキサロテン、グラチ
ラマー酢酸塩、フィンゴリモド、およびミトキサントロン（その薬学的に許容され得る塩
および酸が含まれる）から選択される。
【００１２】
一定の実施形態では、ポリペプチドは、抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたは
免疫グロブリン様分子である。
【００１３】
一定の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、癌関連抗原に特異的に
結合する。一定の実施形態では、癌関連抗原は、１つ以上のヒトＨｅｒ２／ｎｅｕ、Ｈｅ
ｒ１／ＥＧＦ受容体（ＥＧＦＲ）、Ｈｅｒ３、Ａ３３抗原、Ｂ７Ｈ３、ＣＤ５、ＣＤ１９
、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３（ＩｇＥ受容体）、Ｃ２４２抗原、５Ｔ４、ＩＬ−６、
ＩＬ−１３、血管内皮成長因子ＶＥＧＦ（例えば、ＶＥＧＦ−Ａ）ＶＥＧＦＲ−１、ＶＥ
ＧＦＲ−２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４０、ＣＤ４４、ＣＤ５１、ＣＤ５２
、ＣＤ５６、ＣＤ７４、ＣＤ８０、ＣＤ１５２、ＣＤ２００、ＣＤ２２１、ＣＣＲ４、Ｈ
ＬＡ−ＤＲ、ＣＴＬＡ−４、ＮＰＣ−１Ｃ、テネイシン、ビメンチン、インスリン様成長
因子１受容体（ＩＧＦ−１Ｒ）、α−フェトプロテイン、インスリン様成長因子１（ＩＧ
Ｆ−１）、炭酸脱水酵素９（ＣＡ−ＩＸ）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、インテグリンαｖ
β３、インテグリンα５β１、葉酸受容体１、膜貫通糖タンパク質ＮＭＢ、線維芽細胞活
性化タンパク質α（ＦＡＰ）、糖タンパク質７５、ＴＡＧ−７２、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６
（またはＣＡ−１２５）、ホスファチジルセリン、前立腺特異的膜抗原（ＰＭＳＡ）、Ｎ
Ｒ−ＬＵ−１３抗原、ＴＲＡＩＬ−Ｒ１、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバ
ー１０ｂ（ＴＮＦＲＳＦ１０ＢまたはＴＲＡＩＬ−Ｒ２）、ＳＬＡＭファミリーメンバー
７（ＳＬＡＭＦ７）、ＥＧＰ４０汎癌腫抗原、Ｂ細胞活性化因子（ＢＡＦＦ）、血小板由
来成長因子受容体、糖タンパク質ＥｐＣＡＭ（１７−１Ａ）、プログラム死−１、タンパ
ク質ジスルフィドイソメラーゼ（ＰＤＩ）、再生肝ホスファターゼ３（ＰＲＬ−３）、前
立腺酸性ホスファターゼ、ルイス−Ｙ抗原、ＧＤ２（神経外胚葉起源の腫瘍上に発現する
ジシアロガングリオシド）、グリピカン（ＧＰＣ３）、またはメソテリンである。
【００１４】
一定の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、疼痛関連抗原に特異的
に結合する。一定の実施形態では、疼痛関連抗原は、１つ以上の神経成長因子（ＮＧＦ）
またはトロポミオシン関連キナーゼＡ（ＴｒｋＡ）である。
【００１５】
一定の実施形態では、抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたは免疫グロブリン様
分子は、炎症促進性分子、任意選択的には炎症促進性サイトカインまたはケモカインに特
異的に結合する。
【００１６】
一定の実施形態では、炎症促進性分子は、１つ以上のＴＮＦ−α、ＴＮＦ−β、Ｆａｓ
Ｌ、ＣＤ２７Ｌ、ＣＤ３０Ｌ、ＣＤ４０Ｌ、Ｏｘ４０Ｌ、４−１ＢＢＬ、ＴＲＡＩＬ、Ｔ
ＷＥＡＫ、およびＡｐｏ３Ｌ、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、インターフェロン−
γ（ＩＦＮ−γ）、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１２、ＩＬ−
１５、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−２１、ＬＩＦ、ＣＣＬ５、ＧＲＯα、ＭＣＰ−１
、ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−１β、マクロファージコロニー刺激因子（ＭＣＳＦ）、または
顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）である。一定の実施形態では、
炎症促進性分子はＴＮＦ−αであり、抗体または免疫グロブリン様分子は、アダリムマブ
、セルトリズマブペゴール、エタネルセプト、ゴリムマブ、インフリキシマブ、Ｄ２Ｅ７
、ＣＤＰ５７１、もしくはＣＤＰ８７０、またはその抗原結合フラグメントもしくは改変
体である。
【００１７】
一定の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、１つ以上のヒトＨｅｒ
２／ｎｅｕ、Ｈｅｒ１／ＥＧＦＲ、ＴＮＦ−α、Ｂ７Ｈ３抗原、ＣＤ２０、ＶＥＧＦ、Ｃ
Ｄ５２、ＣＤ３３、ＣＴＬＡ−４、テネイシン、α−４（α４）インテグリン、ＩＬ−２
３、アミロイド−β、ハンチンチン、ＣＤ２５、神経成長因子（ＮＧＦ）、ＴｒｋＡ、ま
たはα−シヌクレインに特異的に結合する。
【００１８】
一定の実施形態では、抗体は、１つ以上のトラスツズマブ、セツキシマブ、ダクリズマ
ブ、タネズマブ、３Ｆ８、８Ｈ９、アバゴボマブ、アデカツムマブ、アフツズマブ、アレ
ムツズマブ、アラシズマブ（ペゴール）、アマツキシマブ、アポリズマブ、バビツキシマ
ブ、ベクツモマブ、ベリムマブ、ベバシズマブ、ビバツズマブ（メルタンシン）、ブレン
ツキシマブベドチン、カンツズマブ（メルタンシン）、カンツズマブ（ラブタンシン）、
カプロマブ（ペンデチド）、カツマキソマブ、シタツズマブ（ボガトクス）、シクスツム
マブ、クリバツズマブ（テトラキセタン）、コナツムマブ、ダセツズマブ、ダロツズマブ
、デツモマブ、ドロジツマブ、エクロメキシマブ、エドレコロマブ、エロツズマブ、エナ
バツズマブ、エンシツキシマブ、エプラツズマブ、エルツマキソマブ、エタラシズマブ、
ファーレツズマブ、ＦＢＴＡ０５、フィギツムマブ、フランボツマブ、ガリキシマブ、ゲ
ムツズマブ、ガニツマブ、ゲムツズマブ（オゾガマイシン）、ギレンツキシマブ、グレム
バツムマブ（ベドチン）、イブリツモマブチウキセタン、イクルクマブ、イゴボマブ、イ
ンダツキシマブラブタンシン、インテツムマブ、イノツズマブオゾガマイシン、イプリム
マブ（ＭＤＸ−１０１）、イラツムマブ、ラベツズマブ、レキサツムマブ、リンツズマブ
、ロルボツズマブ（メルタンシン）、ルカツムマブ、ルミリキシマブ、マパツムマブ、マ
ツズマブ、ミラツズマブ、ミツモマブ、モガムリズマブ、モキセツモマブ（パスドトクス
）、ナコロマブ（タフェナトクス）、ナプツモマブ（エスタフェナトクス）、ナルナツマ
ブ、ネシツムマブ、ニモツズマブ、ニボルマブ、ノイラジアブ（登録商標）（放射性ヨウ
素を含むか含まない）、ＮＲ−ＬＵ−１０、オファツムマブ、オララツマブ、オナルツズ
マブ、オポルツズマブ（モナトクス）、オレゴボマブ、パニツムマブ、パトリツマブ、ペ
ムツモマブ、ペルツズマブ、プリツムマブ、ラコツモマブ、ラドレツマブ、ラムシルマブ
、リロツムマブ、リツキシマブ、ロバツムマブ、サマリズマブ、シブロツズマブ、シルツ
キシマブ、タバルマブ、タプリツモマブ（パプトクス）、テナツモマブ、テプロツムマブ
、ＴＧＮ１４１２、チシリムマブ、トレメリムマブ、チガツズマブ、ＴＮＸ−６５０、ト
シツモマブ、ＴＲＢＳ０７、ツコツズマブ（セルモロイキン）、ウブリツキシマブ、ウレ
ルマブ、ベルツズマブ、ボロシキシマブ、ボツムマブ、およびザルツムマブ（その抗原結
合フラグメントが含まれる）から選択される。
【００１９】
一定の実施形態では、ポリペプチドは、インターフェロン−βポリペプチド、またはそ
の活性なフラグメントもしくは改変体である。
【００２０】
一定の実施形態では、ポリペプチドはリソソーム蓄積症に関連する。一定の実施形態で
は、ポリペプチドは、１つ以上のアスパルチルグルコサミニダーゼ、酸性リパーゼ、シス
テイン輸送体、Ｌａｍｐ−２、α−ガラクトシダーゼＡ、酸性セラミダーゼ、α−Ｌ−フ
コシダーゼ、β−ヘキソサミニダーゼＡ、ＧＭ２−ガングリオシドアクチベーター（ＧＭ
２Ａ）、α−Ｄ−マンノシダーゼ、β−Ｄ−マンノシダーゼ、アリールスルファターゼＡ
、サポシンＢ、ノイラミニダーゼ、α−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼホスホトランス
フェラーゼ、ホスホトランスフェラーゼγ−サブユニット、Ｌ−イズロニダーゼ、イズロ
ナート−２−スルファターゼ、ヘパラン−Ｎ−スルファターゼ、α−Ｎ−アセチルグルコ
サミニダーゼ、アセチルＣｏＡ：Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ、Ｎ−アセチルグルコ
サミン６−スルファターゼ、ガラクトース６−スルファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、
Ｎ−アセチルガラクトサミン４−スルファターゼ、ヒアルロノグルコサミニダーゼ、スル
ファターゼ、パルミトイルプロテインチオエステラーゼ、トリペプチジルペプチダーゼＩ
、酸性スフィンゴミエリナーゼ、カテプシンＡ、カテプシンＫ、α−ガラクトシダーゼＢ
、ＮＰＣ１、ＮＰＣ２、シアリン、およびシアル酸輸送体（その活性なフラグメントおよ
び改変体が含まれる）から選択される。
【００２１】
一定の実施形態では、検出可能な実体は、１つ以上のジアトリゾ酸、放射性同位体、フ
ルオロフォア／蛍光色素、およびナノ粒子から選択される。
【００２２】
一定の実施形態では、薬剤は結合体化されていない形態の心毒性薬である。一定の実施
形態では、心毒性薬は、アントラサイクリン／アントラキノロン、シクロホスファミド、
代謝拮抗物質、抗微小管薬、チロシンキナーゼインヒビター、ベバシズマブ、またはトラ
スツズマブである。一定の実施形態では、心毒性薬は、シクロペンテニルシトシン、５−
フルオロウラシル、カペシタビン、パクリタキセル、ドセタキセル（ｄｏｃａｔａｘｅｌ
）、アドリアマイシン、ドキソルビシン（ｄｏｘｏｒｕｂｕｃｉｎ）、エピルビシン、エ
メチン、イソタミド、マイトマイシンＣ、エルロチニブ、ゲフィチニブ、イマチニブ、ソ
ラフェニブ、スニチニブ、シスプラチン、サリドマイド、ブスルファン、ビンブラスチン
、ブレオマイシン、ビンクリスチン、三酸化ヒ素、メトトレキサート、ロシグリタゾン、
またはミトキサントロンである。
【００２３】
いくつかの実施形態は、本明細書中に記載のｐ９７タンパク質またはｐ９７結合体、お
よび薬学的に許容され得るか医薬品グレードのキャリアを含む組成物（例えば、薬学的組
成物、治療組成物、診断組成物）を含む。
【００２４】
処置を必要とする被験体の処置方法であって、本明細書中に記載のｐ９７結合体または
組成物を被験体に投与する工程を含む方法も含まれる。
【００２５】
一定の実施形態は、中枢神経系（ＣＮＳ）、任意選択的には脳の癌の処置方法を含む。
一定の実施形態は、ＣＮＳ、任意選択的には脳の原発性癌の処置方法を含む。一定の実施
形態は、ＣＮＳ、任意選択的には脳の転移性癌の処置方法を含む。一定の実施形態は、神
経膠腫、髄膜腫、下垂体腺腫、前庭神経鞘腫、原発性ＣＮＳリンパ腫、神経芽細胞腫、ま
たは未分化神経外胚葉性腫瘍（髄芽腫）の処置方法を含む。いくつかの実施形態では、神
経膠腫は、星状細胞腫、乏突起膠腫、上衣腫、または脈絡叢乳頭腫である。一定の実施形
態は、多形性膠芽細胞腫の処置方法を含む。いくつかの実施形態では、多形性膠芽細胞腫
は、巨細胞膠芽腫（ｇｉａｎｔ  ｃｅｌｌ  ｇｌｉｏｂａｓｔｏｍａ）または神経膠肉腫
である。
【００２６】
一定の実施形態は、リソソーム蓄積症の処置方法を含む。いくつかの実施形態では、リ
ソソーム蓄積症は、１つ以上のアスパルチルグルコサミン尿症、コレステロールエステル
蓄積症、ウォルマン病、シスチン蓄積症、ダノン病、ファブリー病、ファーバー脂肪肉芽
腫症、ファーバー病、フコース蓄積症、ガラクトシアリドーシスタイプＩ／ＩＩ、ゴーシ
ェ病タイプＩ／ＩＩ／ＩＩＩ、ゴーシェ病、グロボイド細胞白質ジストロフィ（ｇｌｏｂ
ｏｉｄ  ｃｅｌｌ  ｌｅｕｃｏｄｙｓｔｒｏｐｈｙ）、クラッベ病、糖原貯蔵障害ＩＩ、
ポンぺ病、ＧＭ１−ガングリオシドーシスタイプＩ／ＩＩ／ＩＩＩ、ＧＭ２−ガングリオ
シドーシスタイプＩ、テイ・サックス病、ＧＭ２−ガングリオシドーシスタイプＩＩ、サ
ンドホフ病、ＧＭ２−ガングリオシドーシス、α−マンノシドーシスタイプＩ／ＩＩ、β
−マンノシドーシス、異染性白質ジストロフィ（ｍｅｔａｃｈｒｏｍａｔｉｃ  ｌｅｕｃ
ｏｄｙｓｔｒｏｐｈｙ）、ムコリピドーシスタイプＩ、シアリドーシスタイプＩ／ＩＩム
コリピドーシスタイプＩＩ／ＩＩＩ  Ｉ−細胞疾患、ムコリピドーシスタイプＩＩＩＣ偽
性ハーラーポリジストロフィ、ムコ多糖体沈着症タイプＩ、ムコ多糖体沈着症タイプＩＩ
（ハンター症候群）、ムコ多糖体沈着症タイプＩＩＩＡ、サンフィリッポ症候群、ムコ多
糖体沈着症タイプＩＩＩＢ、ムコ多糖体沈着症タイプＩＩＩＣ、ムコ多糖体沈着症タイプ
ＩＩＩＤ、ムコ多糖体沈着症タイプＩＶＡ、モルキオ症候群、ムコ多糖体沈着症タイプＩ
ＶＢ、ムコ多糖体沈着症タイプＶＩ、ムコ多糖体沈着症タイプＶＩＩ、スライ症候群、ム
コ多糖体沈着症タイプＩＸ、多発性スルファターゼ欠損症、神経セロイドリポフスチノー
シス、ＣＬＮ１バッテン病、ニーマン・ピック病タイプＮＢ、ニーマン・ピック病、ニー
マン・ピック病タイプＣ１、ニーマン・ピック病タイプＣ２、濃化異骨症、シンドラー病
タイプＩ／ＩＩ、シンドラー病、およびシアル酸蓄積症から選択される。
【００２７】
一定の実施形態は、中枢神経系（ＣＮＳ）の変性障害または自己免疫障害の処置方法を
含む。特定の実施形態では、ＣＮＳの変性障害または自己免疫障害は、アルツハイマー病
、ハンチントン病、パーキンソン病、または多発性硬化症（ＭＳ）である。
【００２８】
いくつかの実施形態では、被験体を、他の心毒性薬での治療に供する。一定の実施形態
では、心毒性薬は、アントラサイクリン／アントラキノロン、シクロホスファミド、代謝
拮抗物質、抗微小管薬、チロシンキナーゼインヒビター、ベバシズマブ、またはトラスツ
ズマブである。特定の実施形態では、心毒性薬は、シクロペンテニルシトシン、５−フル
オロウラシル、カペシタビン、パクリタキセル、ドセタキセル（ｄｏｃａｔａｘｅｌ）、
アドリアマイシン、ドキソルビシン（ｄｏｘｏｒｕｂｕｃｉｎ）、エピルビシン、エメチ
ン、イソタミド、マイトマイシンＣ、エルロチニブ、ゲフィチニブ、イマチニブ、ソラフ
ェニブ、スニチニブ、シスプラチン、サリドマイド、ブスルファン、ビンブラスチン、ブ
レオマイシン、ビンクリスチン、三酸化ヒ素、メトトレキサート、ロシグリタゾン、また
はミトキサントロンである。
【００２９】
一定の実施形態では、被験体は癌を有する。一定の実施形態では、癌は、１つ以上の乳
癌、前立腺癌、消化管癌、肺癌、卵巣癌、睾丸癌、頭頸部癌、胃癌、膀胱癌、膵臓癌、肝
臓癌、腎臓癌、扁平上皮癌、ＣＮＳまたは脳の癌、黒色腫、非黒色腫癌、甲状腺癌、子宮
内膜癌、上皮腫瘍、骨の癌、または造血性癌である。
【００３０】
一定の実施形態では、結合体の投与により、薬剤の結合体化されていない形態と比較し
て薬剤の心毒性が低下する。
【００３１】
一定の実施形態は、疼痛の処置方法を含む。いくつかの実施形態では、疼痛は、急性疼
痛、慢性疼痛、神経因性疼痛、および／または中心性疼痛である。
【００３２】
一定の実施形態は、炎症状態の処置方法を含む。いくつかの実施形態では、炎症状態は
中枢神経系構成要素を有する。一定の実施形態では、炎症状態は、１つ以上の髄膜炎、脊
髄炎、脳脊髄炎（ｅｎｃａｐｈａｌｏｙｍｙｅｌｉｔｉｓ）、くも膜炎、サルコイドーシ
ス、肉芽腫、薬物誘導性炎症、アルツハイマー病、卒中、ＨＩＶ−認知症、脳炎、寄生虫
感染、炎症性脱髄障害（ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｄｅｍｙｅｌｅｎｉａｔｉｎｇ  ｄ
ｉｓｏｒｄｅｒ）、ＣＮＳのＣＤ８＋Ｔ細胞媒介性自己免疫疾患、パーキンソン病、重症
筋無力症、運動ニューロパシー（ｍｏｔｏｒ  ｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ）、ギラン・バレー
症候群、自己免疫性ニューロパシー、ランバート・イートン筋無力症候群、腫瘍随伴性神
経学的疾患（ｐａｒａｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ  ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ  ｄｉｓｅａｓ
ｅ）、腫瘍随伴性小脳萎縮、非腫瘍随伴性スティッフマン症候群、進行性小脳萎縮、ラス
ムッセン脳炎、筋萎縮性側索硬化症、シデナム舞踏病、ジルドラトゥレット症候群、自己
免疫性多腺性内分泌症、異常免疫ニューロパシー（ｄｙｓｉｍｍｕｎｅ  ｎｅｕｒｏｐａ
ｔｈｙ）、後天性神経性筋強直症（ａｃｑｕｉｒｅｄ  ｎｅｕｒｏｍｙｏｔｏｎｉａ）、
多発性関節拘縮、視神経炎、卒中、外傷性脳損傷（ＴＢＩ）、脊柱狭窄症（ｓｐｉｎａｌ
ｓｔｅｎｏｓｉｓ）、急性脊髄損傷、および脊髄圧迫である。
【００３３】
一定の実施形態では、炎症状態は中枢神経系感染に関連する。一定の実施形態では、感
染は、１つ以上のＢ群連鎖球菌（例えば、サブタイプＩＩＩ）、肺炎レンサ球菌（例えば
、セロタイプ６、９、１４、１８、および２３）、大腸菌（例えば、Ｋ１抗原保有）、リ
ステリア・モノサイトゲネス（例えば、セロタイプＩＶｂ）、ナイセリア感染（Ｎｅｉｓ
ｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ（髄膜炎菌）など）、ブドウ球菌感染、ヘモフィ
ルス感染（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅタイプＢなど）、クレブシエ
ラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）、結核菌、梅毒トレポネーマ、またはボレリア・ブルグドル
フェリによって引き起こされる細菌感染である。一定の実施形態では、感染は、１つ以上
のエンテロウイルス、単純ヘルペスウイルスタイプ１または２、ヒトＴリンパ球向性ウイ
ルス、水痘帯状疱疹ウイルス、ムンプスウイルス、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、ま
たはリンパ球脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）によって引き起こされるウイルス感染であ
る。
【００３４】
一定の実施形態では、炎症状態は、ＣＮＳの癌、任意選択的には悪性髄膜炎に関連する
。
【００３５】
被験体の器官または組織の構成要素を画像化する方法であって、（ａ）本明細書中に記
載のヒトｐ９７ポリペプチドを被験体に投与する工程であって、ポリペプチドが検出可能
な実体に結合体化されている、工程と、（ｂ）被験体中の検出可能な実体を視覚化する工
程とを含む、方法も含まれる。一定の実施形態では、器官または組織の構成要素は、中枢
神経系を含む。一定の実施形態では、器官または組織の構成要素は脳を含む。一定の実施
形態では、検出可能な実体の視覚化は、１つ以上の透視検査、射影Ｘ線撮影（ｐｒｏｊｅ
ｃｔｉｏｎａｌ  ｒａｄｉｏｇｒａｐｈｙ）、Ｘ線ＣＴスキャン、陽電子放出断層撮影（
ＰＥＴ）、単一光子放射型コンピュータ断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）、または磁気共鳴画像
法（ＭＲＩ）を含む。
【００３６】
本発明のこれらおよび他の態様は、以下の詳細な説明および添付の図面を参照して明らかとなるであろう。本明細書中に開示の全ての文献は、各々が個別に援用されるかのようにその全体が本明細書中で参考として援用される。
例えば、本発明は以下の項目を提供する。
（項目１）
約３００アミノ酸長までの単離ｐ９７ポリペプチドであって、前記ポリペプチドが、ＤＳＳＨＡＦＴＬＤＥＬＲ（配列番号１３）または配列番号２〜１８のうちの任意の１つ以上に対して少なくとも７０％同一のアミノ酸配列を含む、単離ｐ９７ポリペプチド。
（項目２）
前記ポリペプチドがＤＳＳＨＡＦＴＬＤＥＬＲ（配列番号１３）または配列番号２〜１８のうちの１つ以上を含み、任意選択的に配列番号１によって定義した隣接するＣ末端配列および／またはＮ末端配列を含む、項目１に記載の単離ｐ９７ポリペプチド。
（項目３）
前記ポリペプチドがＤＳＳＨＡＦＴＬＤＥＬＲ（配列番号１３）または配列番号２〜１８のうちの２、３、４、または５つを含み、任意選択的に配列番号１によって定義された任意の介在配列を含む、項目１に記載の単離ｐ９７ポリペプチド。
（項目４）
前記ポリペプチドが、配列番号１３および／または１４のうちの一方または両方を含み、任意選択的に配列番号１によって定義された介在配列を含む、項目１に記載の単離ｐ９７ポリペプチド。
（項目５）
前記ポリペプチドは、約２５０、２００、１５０、１００、５０、２０、または１０アミノ酸長までである、前記項目のいずれか１項に記載の単離ｐ９７ポリペプチド。
（項目６）
前記ポリペプチドが異種タンパク質に融合されている、前記項目のいずれか１項に記載の単離ｐ９７ポリペプチド。
（項目７）
前記項目のいずれか１項に記載のｐ９７ポリペプチドを含む、結合体であって、前記ｐ９７ポリペプチドが薬剤と共有結合的または作動可能に連結されてｐ９７−薬剤結合体を形成する、結合体。
（項目８）
前記薬剤が、小分子、ポリペプチド、ペプチド模倣物、ペプトイド、アプタマー、または検出可能な実体である、項目７に記載の結合体。
（項目９）
前記小分子が、アルキル化剤、代謝拮抗物質、アントラサイクリン、抗腫瘍抗生物質、白金、タイプＩトポイソメラーゼインヒビター、タイプＩＩトポイソメラーゼインヒビター、ビンカアルカロイド、およびタキサンのうちの１つ以上から選択される細胞毒性薬、化学療法薬、または抗血管新生薬である、項目８に記載の結合体。
（項目１０）
前記小分子が、以下の薬学的に許容され得る塩および酸を含む、クロラムブシル、シクロホスファミド、シレンジタイド、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、メルファラン、プロカルバジン、チオテパ、カルムスチン（ＢＣＮＵ）、エンザスタウリン、ブスルファン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、ゲフィチニブ、エルロチニブイダルビシン、テモゾロミド、エピルビシン、ミトキサントロン、ブレオマイシン、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、カンプトセシン、イリノテカン、トポテカン、アムサクリン、エトポシド、エトポシドホスファート、テニポシド、テムシロリムス、エベロリムス、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、ビンデシン、ＣＴ５２９２３、パクリタキセル、イマチニブ、ダサチニブ、ソラフェニブ、パゾパニブ、スニチニブ（ｓｕｎｉｔｎｉｂ）、バタラニブ、ゲフィチニブ（ｇｅｆｔｉｎｉｂ）、エルロチニブ、ＡＥＥ−７８８、ジクロロアセタート（ｄｉｃｈｏｒｏａｃｅｔａｔｅ）、タモキシフェン、ファスジル、ＳＢ−６８１３２３、セマキサニブ、ドネペジル（ｄｏｎｅｐｉｚｉｌ）、ガランタミン、メマンチン、リバスチグミン、タクリン、ラサギリン（ｒａｓｉｇｉｌｉｎｅ）、ナルトレキソン、ルビプロストン、サフィナミド、イストラデフィリン、ピマバンセリン、ピトリサント、イスラジピン、プリドピジン（ＡＣＲ１６）、テトラベナジン、ベキサロテン、グラチラマー酢酸塩、フィンゴリモド、およびミトキサントロンのうちの１つ以上から選択される、項目８に記載の結合体。
（項目１１）
前記ポリペプチドが抗体またはその抗原結合フラグメントである、項目８に記載の結合体。
（項目１２）
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが癌関連抗原に特異的に結合する、項目１１に記載の結合体。
（項目１３）
前記癌関連抗原が、ヒトＨｅｒ２／ｎｅｕ、Ｈｅｒ１／ＥＧＦ受容体（ＥＧＦＲ）、Ｈｅｒ３、Ａ３３抗原、Ｂ７Ｈ３、ＣＤ５、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３（ＩｇＥ受容体）、Ｃ２４２抗原、５Ｔ４、ＩＬ−６、ＩＬ−１３、血管内皮成長因子ＶＥＧＦ（例えば、ＶＥＧＦ−Ａ）ＶＥＧＦＲ−１、ＶＥＧＦＲ−２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４０、ＣＤ４４、ＣＤ５１、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ７４、ＣＤ８０、ＣＤ１５２、ＣＤ２００、ＣＤ２２１、ＣＣＲ４、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＴＬＡ−４、ＮＰＣ−１Ｃ、テネイシン、ビメンチン、インスリン様成長因子１受容体（ＩＧＦ−１Ｒ）、α−フェトプロテイン、インスリン様成長因子１（ＩＧＦ−１）、炭酸脱水酵素９（ＣＡ−ＩＸ）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、インテグリンαｖβ３、インテグリンα５β１、葉酸受容体１、膜貫通糖タンパク質ＮＭＢ、線維芽細胞活性化タンパク質α（ＦＡＰ）、糖タンパク質７５、ＴＡＧ−７２、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６（またはＣＡ−１２５）、ホスファチジルセリン、前立腺特異的膜抗原（ＰＭＳＡ）、ＮＲ−ＬＵ−１３抗原、ＴＲＡＩＬ−Ｒ１、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー１０ｂ（ＴＮＦＲＳＦ１０Ｂまたは
ＴＲＡＩＬ−Ｒ２）、ＳＬＡＭファミリーメンバー７（ＳＬＡＭＦ７）、ＥＧＰ４０汎癌腫抗原、Ｂ細胞活性化因子（ＢＡＦＦ）、血小板由来成長因子受容体、糖タンパク質ＥｐＣＡＭ（１７−１Ａ）、プログラム死−１、タンパク質ジスルフィドイソメラーゼ（ＰＤＩ）、再生肝ホスファターゼ３（ＰＲＬ−３）、前立腺酸性ホスファターゼ、ルイス−Ｙ抗原、ＧＤ２（神経外胚葉起源の腫瘍上に発現するジシアロガングリオシド）、グリピカン３（ＧＰＣ３）、またはメソテリンのうちの１つ以上である、項目１２に記載の方法。
（項目１４）
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが疼痛関連抗原に特異的に結合する、項目１１に記載の結合体。
（項目１５）
前記疼痛関連抗原が、神経成長因子（ＮＧＦ）またはトロポミオシン関連キナーゼＡ（ＴｒｋＡ）のうちの１つ以上である、項目１４に記載の方法。
（項目１６）
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、炎症促進性分子、任意選択的には、炎症促進性サイトカインまたはケモカインに特異的に結合する、項目１１に記載の結合体。
（項目１７）
前記炎症促進性分子が、ＴＮＦ−α、ＴＮＦ−β、ＦａｓＬ、ＣＤ２７Ｌ、ＣＤ３０Ｌ、ＣＤ４０Ｌ、Ｏｘ４０Ｌ、４−１ＢＢＬ、ＴＲＡＩＬ、ＴＷＥＡＫ、およびＡｐｏ３Ｌ、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、インターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−２１、ＬＩＦ、ＣＣＬ５、ＧＲＯα、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−１β、マクロファージコロニー刺激因子（ＭＣＳＦ）、または顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）のうちの１つ以上である、項目１６に記載の結合体。
（項目１８）
前記炎症促進性分子がＴＮＦ−αであり、前記抗体が、アダリムマブ、セルトリズマブペゴール、エタネルセプト、ゴリムマブ、インフリキシマブ、Ｄ２Ｅ７、ＣＤＰ５７１、もしくはＣＤＰ８７０、またはその抗原結合フラグメントもしくは改変体である、項目１７に記載の結合体。
（項目１９）
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、ヒトＨｅｒ２／ｎｅｕ、Ｈｅｒ１／ＥＧＦＲ、ＴＮＦ−α、Ｂ７Ｈ３抗原、ＣＤ２０、ＶＥＧＦ、ＣＤ５２、ＣＤ３３、ＣＴＬＡ−４、テネイシン、α−４（α４）インテグリン、ＩＬ−２３、アミロイド−β、ハンチンチン、ＣＤ２５、神経成長因子（ＮＧＦ）、ＴｒｋＡ、またはα−シヌクレインのうちの１つ以上に特異的に結合する、項目１１に記載の結合体。
（項目２０）
前記抗体が、以下の抗原結合フラグメントを含む、トラスツズマブ、セツキシマブ、ダクリズマブ、タネズマブ、３Ｆ８、８Ｈ９、アバゴボマブ、アデカツムマブ、アフツズマブ、アレムツズマブ、アラシズマブ（ペゴール）、アマツキシマブ、アポリズマブ、バビツキシマブ、ベクツモマブ、ベリムマブ、ベバシズマブ、ビバツズマブ（メルタンシン）、ブレンツキシマブベドチン、カンツズマブ（メルタンシン）、カンツズマブ（ラブタンシン）、カプロマブ（ペンデチド）、カツマキソマブ、シタツズマブ（ボガトクス）、シクスツムマブ、クリバツズマブ（テトラキセタン）、コナツムマブ、ダセツズマブ、ダロツズマブ、デツモマブ、ドロジツマブ、エクロメキシマブ、エドレコロマブ、エロツズマブ、エナバツズマブ、エンシツキシマブ、エプラツズマブ、エルツマキソマブ、エタラシズマブ、ファーレツズマブ、ＦＢＴＡ０５、フィギツムマブ、フランボツマブ、ガリキシマブ、ゲムツズマブ、ガニツマブ、ゲムツズマブ（オゾガマイシン）、ギレンツキシマブ、グレムバツムマブ（ベドチン）、イブリツモマブチウキセタン、イクルクマブ、イゴボマブ、インダツキシマブラブタンシン、インテツムマブ、イノツズマブオゾガマイシン、イプリムマブ（ＭＤＸ−１０１）、イラツムマブ、ラベツズマブ、レキサツムマブ、リンツズマブ、ロルボツズマブ（メルタンシン）、ルカツムマブ、ルミリキシマブ、マパツムマブ、マツズマブ、ミラツズマブ、ミツモマブ、モガムリズマブ、モキセツモマブ（パスドトクス）、ナコロマブ（タフェナトクス）、ナプツモマブ（エスタフェナトクス）、ナルナツマブ、ネシツムマブ、ニモツズマブ、ニボルマブ、ノイラジアブ（登録商標）（放射性ヨウ素を含むか含まない）、ＮＲ−ＬＵ−１０、オファツムマブ、オララツマブ、オナルツズマブ、オポルツズマブ（モナトクス）、オレゴボマブ、パニツムマブ、パトリツマブ、ペムツモマブ、ペルツズマブ、プリツムマブ、ラコツモマブ、ラドレツマブ、ラムシルマブ、リロツムマブ、リツキシマブ、ロバツムマブ、サマリズマブ、シブロツズマブ、シルツキシマブ、タバルマブ、タプリツモマブ（パプトクス）、テナツモマブ、テプロツムマブ、ＴＧＮ１４１２、チシリムマブ、トレメリムマブ、チガツズマブ、ＴＮＸ−６５０、トシツモマブ、ＴＲＢＳ０７、ツコツズマブ（セルモロイキン）、ウブリツキシマブ、ウレルマブ、ベルツズマブ、ボロシキシマブ、ボツムマブ、およびザルツムマブのうちの１つ以上から選択される、項目１１〜１９のいずれか１項に記載の結合体。
（項目２１）
前記ポリペプチドが、インターフェロン−βポリペプチド、またはその活性なフラグメントもしくは改変体である、項目８に記載の結合体。
（項目２２）
前記ポリペプチドがリソソーム蓄積症に関連する、項目８に記載の結合体。
（項目２３）
前記ポリペプチドが、以下の活性なフラグメントおよび改変体を含む、アスパルチルグルコサミニダーゼ、酸性リパーゼ、システイン輸送体、Ｌａｍｐ−２、α−ガラクトシダーゼＡ、酸性セラミダーゼ、α−Ｌ−フコシダーゼ、β−ヘキソサミニダーゼＡ、ＧＭ２−ガングリオシドアクチベーター（ＧＭ２Ａ）、α−Ｄ−マンノシダーゼ、β−Ｄ−マンノシダーゼ、アリールスルファターゼＡ、サポシンＢ、ノイラミニダーゼ、α−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼホスホトランスフェラーゼ、ホスホトランスフェラーゼγ−サブユニット、Ｌ−イズロニダーゼ、イズロナート−２−スルファターゼ、ヘパラン−Ｎ−スルファターゼ、α−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼ、アセチルＣｏＡ：Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ、Ｎ−アセチルグルコサミン６−スルファターゼ、ガラクトース６−スルファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、Ｎ−アセチルガラクトサミン４−スルファターゼ、ヒアルロノグルコサミニダーゼ、スルファターゼ、パルミトイルプロテインチオエステラーゼ、トリペプチジルペプチダーゼＩ、酸性スフィンゴミエリナーゼ、カテプシンＡ、カテプシンＫ、α−ガラクトシダーゼＢ、ＮＰＣ１、ＮＰＣ２、シアリン、およびシアル酸輸送体のうちの１つ以上から選択される、項目２２に記載の結合体。
（項目２４）
前記検出可能な実体が、ジアトリゾ酸、放射性同位体、フルオロフォア／蛍光色素、およびナノ粒子のうちの１つ以上から選択される、項目８に記載の結合体。
（項目２５）
前記薬剤が、結合体化されていない形態の心毒性薬である、項目８に記載の結合体。
（項目２６）
前記心毒性薬が、アントラサイクリン／アントラキノロン、シクロホスファミド、代謝拮抗物質、抗微小管薬、チロシンキナーゼインヒビター、ベバシズマブ、またはトラスツズマブである、項目２５に記載の結合体。
（項目２７）
前記心毒性薬が、シクロペンテニルシトシン、５−フルオロウラシル、カペシタビン、パクリタキセル、ドセタキセル（ｄｏｃａｔａｘｅｌ）、アドリアマイシン、ドキソルビシン（ｄｏｘｏｒｕｂｕｃｉｎ）、エピルビシン、エメチン、イソタミド、マイトマイシンＣ、エルロチニブ、ゲフィチニブ、イマチニブ、ソラフェニブ、スニチニブ、シスプラチン、サリドマイド、ブスルファン、ビンブラスチン、ブレオマイシン、ビンクリスチン、三酸化ヒ素、メトトレキサート、ロシグリタゾン、またはミトキサントロンである、項目２５または２６に記載の結合体。
（項目２８）
前記項目のいずれか１項に記載の結合体と、薬学的に許容され得るキャリアとを含む、組成物。
（項目２９）
処置を必要とする被験体の処置方法であって、項目２８に記載の組成物を前記被験体に投与する工程を含む、方法。
（項目３０）
中枢神経系（ＣＮＳ）、任意選択的には脳の癌を処置するための、項目２９に記載の方法。
（項目３１）
ＣＮＳ、任意選択的には脳の原発性癌を処置するための、項目２９に記載の方法。
（項目３２）
ＣＮＳ、任意選択的には脳の転移性癌を処置するための、項目２９に記載の方法。
（項目３３）
神経膠腫、髄膜腫、下垂体腺腫、前庭神経鞘腫、原発性ＣＮＳリンパ腫、神経芽細胞腫、または未分化神経外胚葉性腫瘍（髄芽腫）を処置するための、項目３０〜３２のいずれか１項に記載の方法。
（項目３４）
前記神経膠腫が、星状細胞腫、乏突起膠腫、上衣腫、または脈絡叢乳頭腫である、項目３３に記載の方法。
（項目３５）
多形性膠芽細胞腫を処置するための、項目２９に記載の方法。
（項目３６）
前記多形性膠芽細胞腫が巨細胞膠芽腫（ｇｉａｎｔ  ｃｅｌｌ  ｇｌｉｏｂａｓｔｏｍａ）または神経膠肉腫である、項目３５に記載の方法。
（項目３７）
リソソーム蓄積症を処置するための、項目２９に記載の方法。
（項目３８）
前記リソソーム蓄積症が、アスパルチルグルコサミン尿症、コレステロールエステル蓄積症、ウォルマン病、シスチン蓄積症、ダノン病、ファブリー病、ファーバー脂肪肉芽腫症、ファーバー病、フコース蓄積症、ガラクトシアリドーシスタイプＩ／ＩＩ、ゴーシェ病タイプＩ／ＩＩ／ＩＩＩ、ゴーシェ病、グロボイド細胞白質ジストロフィ（ｇｌｏｂｏｉｄ  ｃｅｌｌ  ｌｅｕｃｏｄｙｓｔｒｏｐｈｙ）、クラッベ病、糖原貯蔵障害ＩＩ、ポンぺ病、ＧＭ１−ガングリオシドーシスタイプＩ／ＩＩ／ＩＩＩ、ＧＭ２−ガングリオシドーシスタイプＩ、テイ・サックス病、ＧＭ２−ガングリオシドーシスタイプＩＩ、サンドホフ病、ＧＭ２−ガングリオシドーシス、α−マンノシドーシスタイプＩ／ＩＩ、β−マンノシドーシス、異染性白質ジストロフィ（ｍｅｔａｃｈｒｏｍａｔｉｃ  ｌｅｕｃｏｄｙｓｔｒｏｐｈｙ）、ムコリピドーシスタイプＩ、シアリドーシスタイプＩ／ＩＩムコリピドーシスタイプＩＩ／ＩＩＩ  Ｉ−細胞疾患、ムコリピドーシスタイプＩＩＩＣ偽性ハーラーポリジストロフィ、ムコ多糖体沈着症タイプＩ、ムコ多糖体沈着症タイプＩＩ（ハンター症候群）、ムコ多糖体沈着症タイプＩＩＩＡ、サンフィリッポ症候群、ムコ多糖体沈着症タイプＩＩＩＢ、ムコ多糖体沈着症タイプＩＩＩＣ、ムコ多糖体沈着症タイプＩＩＩＤ、ムコ多糖体沈着症タイプＩＶＡ、モルキオ症候群、ムコ多糖体沈着症タイプＩＶＢ、ムコ多糖体沈着症タイプＶＩ、ムコ多糖体沈着症タイプＶＩＩ、スライ症候群、ムコ多糖体沈着症タイプＩＸ、多発性スルファターゼ欠損症、神経セロイドリポフスチノーシス、ＣＬＮ１バッテン病、ニーマン・ピック病タイプＮＢ、ニーマン・ピック病、ニーマン・ピック病タイプＣ１、ニーマン・ピック病タイプＣ２、濃化異骨症、シンドラー病タイプＩ／ＩＩ、シンドラー病、およびシアル酸蓄積症のうちの１つ以上から選択される、項目３８に記載の方法。
（項目３９）
中枢神経系（ＣＮＳ）の変性障害または自己免疫障害を処置するための、項目２９に記載の方法。
（項目４０）
前記ＣＮＳの変性障害または自己免疫障害が、アルツハイマー病、ハンチントン病、パーキンソン病、または多発性硬化症（ＭＳ）である、項目３９に記載の方法。
（項目４１）
前記被験体が、他の心毒性薬での治療を受けている、前記項目のいずれか１項に記載の方法。
（項目４２）
前記心毒性薬が、アントラサイクリン／アントラキノロン、シクロホスファミド、代謝拮抗物質、抗微小管薬、チロシンキナーゼインヒビター、ベバシズマブ、またはトラスツズマブである、項目４１に記載の方法。
（項目４３）
前記心毒性薬が、シクロペンテニルシトシン、５−フルオロウラシル、カペシタビン、パクリタキセル、ドセタキセル（ｄｏｃａｔａｘｅｌ）、アドリアマイシン、ドキソルビシン（ｄｏｘｏｒｕｂｕｃｉｎ）、エピルビシン、エメチン、イソタミド、マイトマイシンＣ、エルロチニブ、ゲフィチニブ、イマチニブ、ソラフェニブ、スニチニブ、シスプラチン、サリドマイド、ブスルファン、ビンブラスチン、ブレオマイシン、ビンクリスチン、三酸化ヒ素、メトトレキサート、ロシグリタゾン、またはミトキサントロンである、項目４２に記載の方法。
（項目４４）
前記被験体が癌を有する、前記項目のいずれか１項に記載の方法。
（項目４５）
前記癌が、１つ以上の乳癌、前立腺癌、消化管癌、肺癌、卵巣癌、睾丸癌、頭頸部癌、胃癌、膀胱癌、膵臓癌、肝臓癌、腎臓癌、扁平上皮癌、ＣＮＳまたは脳の癌、黒色腫、非黒色腫癌、甲状腺癌、子宮内膜癌、上皮腫瘍、骨の癌、または造血性癌である、項目４４に記載の方法。
（項目４６）
前記結合体の投与により、前記薬剤の結合体化されていない形態と比較して前記薬剤の心毒性が低下する、前記項目のいずれか１項に記載の方法。
（項目４７）
疼痛を処置するための、項目２９に記載の方法。
（項目４８）
前記疼痛が、急性疼痛、慢性疼痛、神経因性疼痛、および／または中心性疼痛である、項目４７に記載の方法。
（項目４９）
炎症状態を処置するための、項目２９に記載の方法。
（項目５０）
前記炎症状態が中枢神経系の構成要素を有する、項目４９に記載の方法。
（項目５１）
前記炎症状態が、髄膜炎、脊髄炎、脳脊髄炎（ｅｎｃａｐｈａｌｏｙｍｙｅｌｉｔｉｓ）、くも膜炎、サルコイドーシス、肉芽腫、薬物誘導性炎症、アルツハイマー病、卒中、ＨＩＶ−認知症、脳炎、寄生虫感染、炎症性脱髄障害（ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｄｅｍｙｅｌｅｎｉａｔｉｎｇ  ｄｉｓｏｒｄｅｒ）、ＣＮＳのＣＤ８＋Ｔ細胞媒介性自己免疫疾患、パーキンソン病、重症筋無力症、運動ニューロパシー、ギラン・バレー症候群、自己免疫性ニューロパシー、ランバート・イートン筋無力症候群、腫瘍随伴性神経学的疾患、腫瘍随伴性小脳萎縮、非腫瘍随伴性スティッフマン症候群、進行性小脳萎縮、ラスムッセン脳炎、筋萎縮性側索硬化症、シデナム舞踏病、ジルドラトゥレット症候群、自己免疫性多腺性内分泌症、異常免疫ニューロパシー、後天性神経性筋強直症、多発性関節拘縮、視神経炎、卒中、外傷性脳損傷（ＴＢＩ）、脊柱狭窄症、急性脊髄損傷、および脊髄圧迫のうちの１つ以上である、項目５０に記載の方法。
（項目５２）
前記炎症状態が中枢神経系の感染に関連する、項目５０に記載の方法。
（項目５３）
前記感染が、Ｂ群連鎖球菌（例えば、サブタイプＩＩＩ）、肺炎レンサ球菌（例えば、セロタイプ６、９、１４、１８、および２３）、大腸菌（例えば、Ｋ１抗原保有）、リステリア・モノサイトゲネス（例えば、セロタイプＩＶｂ）、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ（髄膜炎菌）などのナイセリア感染、ブドウ球菌感染、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅタイプＢなどのヘモフィルス感染、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）、結核菌、梅毒トレポネーマ、またはボレリア・ブルグドルフェリのうちの１つ以上によって引き起こされる細菌感染である、項目５２に記載の方法。
（項目５４）
前記感染が、エンテロウイルス、単純ヘルペスウイルスタイプ１または２、ヒトＴリンパ球向性ウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、ムンプスウイルス、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、またはリンパ球脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）のうちの１つ以上によって引き起こされるウイルス感染である、項目５２に記載の方法。
（項目５５）
前記炎症状態が、ＣＮＳの癌、任意選択的には悪性髄膜炎に関連する、項目５０に記載の方法。
（項目５６）
被験体の器官または組織の構成要素を画像化する方法であって、（ａ）項目１〜６のいずれか１項に記載のヒトｐ９７ポリペプチドを前記被験体に投与する工程であって、前記ポリペプチドが検出可能な実体に結合体化されている、工程と、（ｂ）前記被験体中の前記検出可能な実体を視覚化する工程とを含む、方法。
（項目５７）
前記器官または組織の構成要素が中枢神経系を含む、項目５６に記載の方法。
（項目５８）
前記器官または組織の構成要素が脳を含む、項目５６に記載の方法。
（項目５９）
前記検出可能な実体を視覚化する工程は、透視検査、射影Ｘ線撮影、Ｘ線ＣＴスキャン、陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）、単一光子放射型コンピュータ断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）、または磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）のうちの１つ以上を含む、項目５６〜５８のいずれか１項に記載の方法。
【図面の簡単な説明】
【００３７】
【図１】図１は、ＣＮＢｒ消化ヒトメラノトランスフェリン（ｐ９７）のＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析を示す。
【図２−１】図２Ａ〜２Ｄは、ＭＳ／ＭＳ分析によって同定されたヒトｐ９７の溶解トリプシン消化物のｐ９７フラグメントのリストを示し、図２ＥはＭＳ／ＭＳ分析の配列範囲マップを示す。
【図２−２】図２Ａ〜２Ｄは、ＭＳ／ＭＳ分析によって同定されたヒトｐ９７の溶解トリプシン消化物のｐ９７フラグメントのリストを示し、図２ＥはＭＳ／ＭＳ分析の配列範囲マップを示す。
【図２−３】図２Ａ〜２Ｄは、ＭＳ／ＭＳ分析によって同定されたヒトｐ９７の溶解トリプシン消化物のｐ９７フラグメントのリストを示し、図２ＥはＭＳ／ＭＳ分析の配列範囲マップを示す。
【図２−４】図２Ａ〜２Ｄは、ＭＳ／ＭＳ分析によって同定されたヒトｐ９７の溶解トリプシン消化物のｐ９７フラグメントのリストを示し、図２ＥはＭＳ／ＭＳ分析の配列範囲マップを示す。
【図３Ａ】図３は、ＭＳ／ＭＳ分析によって同定したヒトｐ９７のＣＮＢｒ消化物のｐ９７フラグメントの配列範囲マップを示す。図１のＳＤＳ−ＰＡＧＥで同定した３バンドを、トリプシン消化およびＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析に供した。図３Ａは、バンド１についての結果を示す。図３Ｂは、バンド２についての結果を示す。図３Ｃは、バンド３についての結果を示す。
【図３Ｂ】図３は、ＭＳ／ＭＳ分析によって同定したヒトｐ９７のＣＮＢｒ消化物のｐ９７フラグメントの配列範囲マップを示す。図１のＳＤＳ−ＰＡＧＥで同定した３バンドを、トリプシン消化およびＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析に供した。図３Ａは、バンド１についての結果を示す。図３Ｂは、バンド２についての結果を示す。図３Ｃは、バンド３についての結果を示す。
【図３Ｃ】図３は、ＭＳ／ＭＳ分析によって同定したヒトｐ９７のＣＮＢｒ消化物のｐ９７フラグメントの配列範囲マップを示す。図１のＳＤＳ−ＰＡＧＥで同定した３バンドを、トリプシン消化およびＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析に供した。図３Ａは、バンド１についての結果を示す。図３Ｂは、バンド２についての結果を示す。図３Ｃは、バンド３についての結果を示す。
【図４Ａ】図４Ａは、バンド１中に検出されたペプチドのヒトｐ９７のアミノ酸配列とのマッチングを示す。適合したペプチドの配列範囲を太字で示す。図４Ｂは、一定の物理的特徴と共に各ペプチドを列挙している。
【図４Ｂ】図４Ａは、バンド１中に検出されたペプチドのヒトｐ９７のアミノ酸配列とのマッチングを示す。適合したペプチドの配列範囲を太字で示す。図４Ｂは、一定の物理的特徴と共に各ペプチドを列挙している。
【図５Ａ】図５Ａは、バンド２中に検出されたペプチドのヒトｐ９７のアミノ酸配列とのマッチングを示す。適合したペプチドの配列範囲を太字で示す。図５Ｂは、一定の物理的特徴と共に各ペプチドを列挙している。
【図５Ｂ】図５Ａは、バンド２中に検出されたペプチドのヒトｐ９７のアミノ酸配列とのマッチングを示す。適合したペプチドの配列範囲を太字で示す。図５Ｂは、一定の物理的特徴と共に各ペプチドを列挙している。
【図６Ａ】図６Ａは、バンド３中に検出されたペプチドのヒトｐ９７のアミノ酸配列とのマッチングを示す。適合したペプチドの配列範囲を太字で示す。図６Ｂは、一定の物理的特徴と共に各ペプチドを列挙している。
【図６Ｂ】図６Ａは、バンド３中に検出されたペプチドのヒトｐ９７のアミノ酸配列とのマッチングを示す。適合したペプチドの配列範囲を太字で示す。図６Ｂは、一定の物理的特徴と共に各ペプチドを列挙している。
【図７】図７は、中枢神経系への血液の流れのバリアをシミュレートするための管腔区画中のフィルター（３μｍまたは４μｍのフィルターのいずれか）上の内皮細胞および中枢神経系をシミュレートするための反管腔側区画中の膠細胞を有する血液脳関門（ＢＢＢ）のｉｎ  ｖｉｔｒｏモデルを示す。
【図８】図８は、ＢＢＢのｉｎ  ｖｉｔｒｏモデルを使用した試験プロトコールの略図を示す。
【図９Ａ】図９は、ヒト可溶性ｐ９７（配列番号９１；配列番号１の残基２０〜７０９）のＹＡＳＰＩＮ二次構造予測（Ｙｉｎら，Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ．  ２１：１５２−１５９，２００５を参照のこと）を、ＢＢＢのｉｎ  ｖｉｔｒｏモデルにおいて有意な輸送活性を有すると同定されたいくつかのｐ９７ペプチドフラグメントと共に示す。図９Ａは、ＢＢＢを通過する一定のトリプシン消化ペプチドフラグメントを示す（下線）。図９Ｂは、ＢＢＢを通過する３つのＣＮＢｒ消化物ペプチドフラグメントを示す（下線）。
【図９Ｂ】図９は、ヒト可溶性ｐ９７（配列番号９１；配列番号１の残基２０〜７０９）のＹＡＳＰＩＮ二次構造予測（Ｙｉｎら，Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ．  ２１：１５２−１５９，２００５を参照のこと）を、ＢＢＢのｉｎ  ｖｉｔｒｏモデルにおいて有意な輸送活性を有すると同定されたいくつかのｐ９７ペプチドフラグメントと共に示す。図９Ａは、ＢＢＢを通過する一定のトリプシン消化ペプチドフラグメントを示す（下線）。図９Ｂは、ＢＢＢを通過する３つのＣＮＢｒ消化物ペプチドフラグメントを示す（下線）。
【図１０】図１０は、ｐ９７（ＭＴｆ）−抗体結合体の合成経路を示す（実施例３を参照のこと）。
【図１１】図１１は、マウスへの投与後のＭＴｆ−抗体結合体およびコントロールタンパク質の脳分布を示す（実施例３を参照のこと）。
【図１２】図１２は、ｐ９７（ＭＴｆ）−ＨＲＰ（１２Ｂ）結合体の合成経路を示す（実施例４を参照のこと）。
【図１３−１】図１３Ａ〜１３Ｃは、試験タンパク質の脳生体内分布を評価するために実施した三次元（３Ｄ）共焦点顕微鏡法の結果を示す。図１３ＡはＰＢＳの結果を示す。図１３ＢはＡＦ６８０標識ＨＲＰの結果を示す。図１３Ｃは、ＡＦ６８０標識ＭＴｆＰＥＰ−ＨＲＰ結合体の結果を示す。図１３Ｃ中の矢印は、脳組織中のＡＦ６８０標識ＭＴｆＰＥＰ−ＨＲＰ結合体のＡＦ６８０蛍光を強調している。
【図１３−２】図１３Ａ〜１３Ｃは、試験タンパク質の脳生体内分布を評価するために実施した三次元（３Ｄ）共焦点顕微鏡法の結果を示す。図１３ＡはＰＢＳの結果を示す。図１３ＢはＡＦ６８０標識ＨＲＰの結果を示す。図１３Ｃは、ＡＦ６８０標識ＭＴｆＰＥＰ−ＨＲＰ結合体の結果を示す。図１３Ｃ中の矢印は、脳組織中のＡＦ６８０標識ＭＴｆＰＥＰ−ＨＲＰ結合体のＡＦ６８０蛍光を強調している。
【発明を実施するための形態】
【００３８】
発明の詳細な説明
本発明の実施形態は、血液脳関門（ＢＢＢ）を通過する輸送能力を有するヒトｐ９７（
メラノトランスフェリン）の最小フラグメントの発見に一部基づく。
【００３９】
それ故、本発明の実施形態は、ヒトｐ９７の特定のポリペプチドフラグメントおよびそ
の改変体、ポリペプチドフラグメントを含む組成物、付着したか作動可能に連結された目
的の薬剤を有するｐ９７フラグメントの結合体または混合物、ならびに関連する使用方法
（処置方法、診断方法、および試験方法（医学的画像化など）が含まれる）に関する。
【００４０】
本明細書中に記載のヒトｐ９７ポリペプチドフラグメントは、例えば、ＢＢＢを通過す
る薬剤の移行を改善するために治療分野および診断分野で種々の使用法を見出すことがで
きる。また、ＢＢＢ輸送活性に必要な最小フラグメントを同定することにより、本発明の
一定の態様は、より小さなｐ９７ポリペプチドを使用可能であり、それにより、巨大なポ
リペプチドの合成／産生、精製、および薬学的処方物に関連するいくつかの困難が軽減さ
れる。
【００４１】
他の利点および利益は、当業者に明らかであろう。
【００４２】
定義
他で定義しない限り、本明細書中で使用した全ての技術用語および科学用語は、本発明
の属する当業者によって一般に理解される意味を有する。本明細書中に記載の方法および
材料と類似するか等価な任意の方法および材料を本発明の実施または試験で使用すること
ができるが、好ましい方法および材料を記載する。本発明の目的のために、以下の用語を
以下のように定義する。
【００４３】
冠詞「ａ」および「ａｎ」を、本明細書中で、冠詞の文法上の目的語が１つまたは１つ
を超える（すなわち、少なくとも１つ）をいうために使用する。例として、「要素」は、
１つの要素または１つを超える要素を意味する。
【００４４】
「約」は、基準の量、レベル、値、数、頻度、百分率、寸法、サイズ、含量、重量、ま
たは長さの３０、２５、２０、１５、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、または１
％まで変化する量、レベル、値、数、頻度、百分率、寸法、サイズ、含量、重量、または
長さを意味する。
【００４５】
本明細書中で使用する場合、用語「アミノ酸」は、天然に存在するアミノ酸および天然
に存在しないアミノ酸の両方ならびにアミノ酸アナログおよびアミノ酸模倣物を意味する
ことを意図する。天然に存在するアミノ酸には、タンパク質生合成中に利用される２０（
Ｌ）−アミノ酸ならびに例えば４−ヒドロキシプロリン、ヒドロキシリジン、デスモシン
、イソデスモシン、ホモシステイン、シトルリン、およびオルニチンなどの他のアミノ酸
が含まれる。天然に存在しないアミノ酸には、例えば、当業者に公知の（Ｄ）−アミノ酸
、ノルロイシン、ノルバリン、ｐ−フルオロフェニルアラニン、およびエチオニンなどが
含まれる。アミノ酸アナログには、天然に存在するアミノ酸および天然に存在しないアミ
ノ酸の修飾形態が含まれる。かかる修飾物には、例えば、アミノ酸上の化学基および化学
部分の置換もしくは交換またはアミノ酸の誘導体化による修飾物が含まれ得る。アミノ酸
模倣物には、例えば、基準アミノ酸の電荷および電荷間隔の特徴などの機能的に類似の性
質を示す有機構造が含まれる。例えば、アルギニン（ＡｒｇまたはＲ）を模倣する有機構
造は、類似の分子空間内に存在する正電荷部分を有し、天然に存在するＡｒｇアミノ酸の
側鎖のｅ−アミノ基と同一の可動度を有するであろう。模倣物には、アミノ酸またはアミ
ノ酸官能基の最適な間隔および電荷相互作用を維持するための制限された構造物も含まれ
る。当業者は、どの構造が機能的に等価なアミノ酸アナログおよびアミノ酸模倣物を構成
するのかを承知しているか決定することができる。
【００４６】
本明細書を通して、文脈上他の意味に解すべき場合を除き、用語「ｃｏｍｐｒｉｓｅ」
、「ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ」、および「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ」は、言及した工程もしくは
要素または工程もしくは要素の群を含むが、任意の他の工程もしくは要素または工程もし
くは要素の群を排除しないことを意味すると理解されるであろう。「〜からなる」は、句
「〜からなる」に続くあらゆる用語を含み、且つそれに制限されることを意味する。した
がって、句「〜からなる」は、列挙した要素が必要または必須であり、他の要素が存在で
きないことを示す。「〜本質的になる」は、この句の後に列挙された任意の要素を含み、
且つ、列挙した要素の開示で特定された活性または作用に干渉も寄与もしない他の要素に
制限されることを意味する。したがって、句「〜本質的になる」は、列挙した要素が必要
とされるか必須であるが、他の要素が任意選択的であり、他の要素が列挙した要素の活性
または作用に実質的に影響を及ぼすかどうかに依存して存在しても存在しなくても良いこ
とを示す。
【００４７】
用語「結合体」は、薬剤または他の分子（例えば、生物学的に活性な分子）のｐ９７ポ
リペプチドへの共有結合的または非共有結合的な付着または連結の結果として形成された
物質をいうことを意図する。結合体ポリペプチドの一例は、「融合タンパク質」または「
融合ポリペプチド」（すなわち、元は個別のポリペプチドをコードする２つ以上のコード
配列の連結によって作製されたポリペプチド）であり、連結されたコード配列の翻訳によ
って典型的には各々の個別のポリペプチド由来の機能的性質を有する単一の融合ポリペプ
チドが得られる。
【００４８】
本明細書中で使用する場合、用語「機能」および「機能的な」などは、生物学的、酵素
的、または治療的な機能をいう。
【００４９】
「相同性」は、同一であるか、保存的置換を構成するアミノ酸数の百分率をいう。相同
性を、ＧＡＰ（Ｄｅｖｅｒａｕｘら，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ．
１２，３８７−３９５，１９８４）（本明細書中で参考として援用される）などの配列比
較プログラムを使用して決定することができる。この方法では、本明細書中に引用したも
のと類似するか実質的に異なる長さの配列を、例えば、ＧＡＰによって使用される比較ア
ルゴリズムによるアラインメントへのギャップ（かかるギャップは決定されている）の挿
入によって比較することができる。
【００５０】
「単離された」は、未変性の状態で通常は材料に付随する成分を実質的または本質的に
含まない材料を意味する。例えば、「単離ペプチド」または「単離ポリペプチド」などは
、本明細書中で使用する場合、その天然の細胞環境および他の細胞成分との会合（すなわ
ち、ｉｎ  ｖｉｖｏ基質と有意に会合していない）からのペプチド分子またはポリペプチ
ド分子のｉｎ  ｖｉｔｒｏ単離および／または精製を含む。
【００５１】
用語「連結」、「リンカー」、「リンカー部分」、または「Ｌ」を、目的の薬剤からｐ
９７ポリペプチドフラグメントを分離するためか、第１の薬剤を別の薬剤から分離するた
めに（例えば、２つ以上の薬剤が連結してｐ９７結合体を形成する場合）使用することが
できるリンカーをいうために本明細書中で使用する。リンカーは、生理学的に安定であり
得るか、酵素分解性リンカー（例えば、タンパク質分解性リンカー）などの放出可能なリ
ンカーを含むことができる。一定の態様では、リンカーは、例えば、ｐ９７融合タンパク
質の一部としてのペプチドリンカーであり得る。いくつかの態様では、リンカーは、非ペ
プチドリンカーまたは非タンパク質リンカーであり得る。いくつかの態様では、リンカー
は、ナノ粒子などの粒子であり得る。
【００５２】
用語「調整」および「変化」には、コントロールと比較して統計的に有意なまたは生理
学的に有意な量または程度の「増加」、「増強」、または「刺激」および「減少」または
「軽減」が含まれる。「増加」量、「刺激」量、または「増強」量は、典型的には、「統
計的に有意な」量であり、組成物の非存在下（例えば、本発明の結合体のポリペプチドの
非存在下）またはコントロールの組成物、サンプル、もしくは試験被験体による産生量の
１．１倍、１．２倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５
倍、２０倍、３０倍、またはそれを超える（例えば、５００倍、１０００倍）（その間の
全ての整数および小数点ならびに１超（例えば、１．５、１．６、１．７．１．８など）
が含まれる）増加が含まれ得る。「減少」量または「軽減」量は、典型的には、「統計的
に有意な」量であり、組成物の非存在下またはコントロール組成物による産生量の１％、
２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、
１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２５％、３０％、３５％、
４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、
９０％、９５％、または１００％減少（その間の全ての整数が含まれる）が含まれ得る。
１つの非限定的な例として、コントロールは、薬剤単独に対するｐ９７−薬剤結合体の活
性（血液脳関門を通過する輸送／送達の量もしくは速度、中枢神経系組織への分布の速度
および／もしくはレベル、ならびに／または血漿、中枢神経系組織、もしくは任意の他の
全身または末梢の非中枢神経系組織のＣｍａｘなど）を比較することができる。比較およ
び「統計的に有意な」量の他の例を、本明細書中に記載している。
【００５３】
一定の実施形態では、組成物中の任意の所与の薬剤（例えば、融合タンパク質などの、
ｐ９７結合体）の「純度」を、具体的に定義することができる。例えば、一定の組成物は
、例えば、高圧液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）（化合物を分離、同定、および定量す
るために生化学および分析化学で頻繁に使用されるカラムクロマトグラフィの周知の形態
）（決して制限されない）で測定した場合に純度が少なくとも８０％、８５％、９０％、
９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１
００％（その間の全ての小数が含まれる）である薬剤を含むことができる。
【００５４】
用語「ポリペプチド」および「タンパク質」を、アミノ酸残基のポリマーならびにその
改変体および合成アナログをいうために本明細書中で交換可能に使用する。したがって、
これらの用語は、１つ以上のアミノ酸残基が合成の天然に存在しないアミノ酸（対応する
天然に存在するアミノ酸の化学的アナログなど）であるアミノ酸ポリマーおよび天然に存
在するアミノ酸ポリマーに適用する。本明細書中に記載のポリペプチドは、産物の特定の
長さに制限されない。したがって、ペプチド、オリゴペプチド、およびタンパク質はポリ
ペプチドの定義内に含まれ、他で具体的に示さない限り、かかる用語を、本明細書中で交
換可能に使用することができる。本明細書中に記載のポリペプチドはまた、発現後修飾（
グリコシル化、アセチル化、およびリン酸化など）ならびに天然に存在するおよび天然に
存在しない当該分野で公知の他の修飾を含むことができる。ポリペプチドは、タンパク質
全体またはそのサブシーケンス、フラグメント、改変体、または誘導体であり得る。
【００５５】
「生理学的に切断可能な」または「加水分解可能な」または「分解可能な」結合は、生
理学的条件下で水と反応する（すなわち、加水分解される）結合である。結合が水中で加
水分解する傾向は、２つの中心原子を結びつける一般的な連結型だけでなく、これらの中
心原子に付着する置換基にも依存するであろう。適切な加水分解的に不安定か弱い連結に
は、以下が含まれるが、これらに限定されない：カルボン酸エステル、リン酸エステル、
無水物、アセタール、ケタール、アシルオキシアルキルエーテル、イミン、オルトエステ
ル、チオエステル、チオールエステル、カルボナート、ならびにヒドラゾン、ペプチドお
よびオリゴヌクレオチド。
【００５６】
「放出可能なリンカー」には、生理学的に切断可能なリンカーおよび酵素分解性リンカ
ーが含まれるが、これらに限定されない。したがって、「放出可能なリンカー」は、自発
性加水分解または生理学的条件下でのいくつかの他の機構（例えば、酵素触媒、酸触媒、
塩基触媒など）による切断のいずれかを経得るリンカーである。例えば、「放出可能なリ
ンカー」は、駆動力として塩基でプロトン（例えば、イオン化水素原子、Ｈα）が引き抜
かれる脱離反応に関与し得る。本明細書中の目的のために、「放出可能なリンカー」は、
「分解性リンカー」と同義である。「酵素分解性連結」は、連結（例えば、１つ以上の酵
素酵素（例えば、ペプチダーゼまたはプロテアーゼ）による分解に供されるアミノ酸配列
）を含む。特定の実施形態では、放出可能なリンカーのｐＨ７．４、２５℃（例えば、生
理学的ｐＨ、ヒトの体温（例えば、ｉｎ  ｖｉｖｏ）での半減期は、約３０分間、約１時
間、約２時間、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約１２時間、約１８時間、約
２４時間、約３６時間、約４８時間、約７２時間、または約９６時間またはそれ未満であ
る。
【００５７】
用語「基準配列」は、一般に、別の配列と比較される核酸コード配列（すなわち、アミ
ノ酸配列）をいう。本明細書中に記載の全てのポリペプチド配列およびポリヌクレオチド
配列（名称によって記載されている配列ならびに表および配列表中に記載の配列が含まれ
る）が基準配列として含まれる。
【００５８】
用語「配列同一性」（例えば、「〜と５０％同一の配列」を含む）は、本明細書中で使
用する場合、配列が比較ウィンドウにわたってヌクレオチド対ヌクレオチドを基本とする
かアミノ酸対アミノ酸を基本として同一である程度をいう。したがって、「配列同一率」
を、比較ウィンドウにわたる最適にアラインメントした２つの配列の比較、両方の配列中
に同一の核酸塩基（例えば、Ａ、Ｔ、Ｃ、Ｇ、Ｉ）または同一のアミノ酸残基（例えば、
Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、
Ｔｒｐ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｃｙｓ、およびＭ
ｅｔ）が生じる位置の数を決定して適合位置数を得ること、適合位置数を比較ウィンドウ
中の総位置数（すなわち、ウィンドウサイズ）で割ること、および結果に１００を掛けて
配列同一率を得ることによって計算することができる。典型的にはポリペプチド改変体が
基準ポリペプチドの少なくとも１つの生物学的活性を維持する、本明細書中に記載の任意
の基準配列（例えば、配列表を参照のこと）と少なくとも約５０％、５５％、６０％、６
５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、ま
たは１００％配列が同一のヌクレオチドおよびポリペプチドが含まれる。
【００５９】
２つ以上のポリヌクレオチド間またはポリペプチド間の配列の関係を説明するために使
用される用語には、「基準配列」、「比較ウィンドウ」、「配列同一性」、「配列同一率
」および「実質的な同一性」が含まれる。「基準配列」は、少なくとも１２個であるが、
頻繁には１５〜１８個、しばしば少なくとも２５個の長さのモノマー単位（ヌクレオチド
およびアミノ酸残基が含まれる）である。２つのポリヌクレオチドが、それぞれ、（１）
２つのポリヌクレオチド間で類似する配列（すなわち、完全なポリヌクレオチド配列の一
部のみ）、および（２）２つのポリヌクレオチド間で相違する配列を含むことができるの
で、２つ（またはそれを超える）ポリヌクレオチドの間の配列比較を、典型的には、２つ
のポリヌクレオチドの配列を「比較ウィンドウ」にわたって比較して配列が類似する局所
領域を同定および比較することによって行う。「比較ウィンドウ」は、２配列を最適にア
ラインメントした後にある配列を同数の連続する位置の基準配列と比較する少なくとも６
個（通常は約５０個〜約１００個、より通常には約１００個〜約１５０個）の連続する位
置の概念的セグメントをいう。比較ウィンドウは、基準配列（付加や欠失を含まない）と
比較した場合に２配列の最適なアラインメントのために約２０％以下の付加または欠失（
すなわち、ギャップ）を含むことができる。比較ウィンドウのアラインメントに最適な配
列アラインメントを、コンピュータ化されたアルゴリズムの実行（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  
Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｐａｃｋａｇｅ  Ｒｅｌｅａｓｅ  ７．０，Ｇｅ
ｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ，５７５  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｄｒｉｖｅ  
Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ，ＵＳＡ中のＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、およびＴＦＡ
ＳＴＡ）または観察および選択した任意の種々の方法によって作成された最良のアライン
メント（すなわち、結果として比較ウィンドウにわたって最高の相同率が得られる）によ
って行うことができる。例えば、Ａｌｔｓｃｈｕｌら，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．
２５：３３８９，１９９７に開示のプログラムのＢＬＡＳＴファミリーも参照することが
できる。配列分析の詳細な考察を、Ａｕｓｕｂｅｌら、  “Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏ
ｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，”  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆
Ｓｏｎｓ  Ｉｎｃ，１９９４−１９９８，Ｃｈａｐｔｅｒ  １５のＵｎｉｔ  １９．３
に見出すことができる。
【００６０】
「統計的に有意な」は、結果が偶然に起こった見込みが無いことを意味する。統計的有
意性を、当該分野で公知の任意の方法によって決定することができる。一般的に使用され
ている有意性の基準には、ｐ値が含まれ、これは、帰無仮説が真実である場合に認められ
た事象が起こる頻度または確率である。得られたｐ値が有意水準より小さい場合、帰無仮
説は棄却される。単純事例では、有意水準を０．０５以下のｐ値で定義する。
【００６１】
用語「溶解性」は、ｐ９７ポリペプチドフラグメントまたは結合体が液体溶媒に溶解し
て均一な溶液を形成する性質をいう。溶解性を、典型的には、溶媒の単位体積あたりの溶
質の質量（溶媒１ｋｇあたりの溶質のｇ数、ｇ／ｄＬ（１００ｍＬ）、ｍｇ／ｍｌなど）
、容積モル濃度、重量モル濃度、モル分率、または濃度の他の類似の記載のいずれかによ
る濃度として示す。１溶媒量あたりの溶解することができる溶質の最大平衡量は、特定の
条件下（温度、圧力、ｐＨ、および溶媒の性質が含まれる）でのその溶媒への溶質の溶解
性である。一定の実施形態では、溶解性を、生理学的ｐＨまたは他のｐＨ（例えば、ｐＨ
５．０、ｐＨ６．０、ｐＨ７．０、またはｐＨ７．４）で測定する。一定の実施形態では
、溶解性を、水またはＰＢＳもしくはＮａＣｌ（ＮａＰを含むか含まない）などの生理学
的緩衝液中で測定する。特定の実施形態では、溶解性を、相対的により低いｐＨ（例えば
、ｐＨ６．０）および相対的により高い塩（例えば、５００ｍＭ  ＮａＣｌおよび１０ｍ
Ｍ  ＮａＰ）で測定する。一定の実施形態では、溶解性を、血液または血清などの体液（
溶媒）中で測定する。一定の実施形態では、温度はおよそ室温（例えば、約２０、２１、
２２、２３、２４、２５℃）またはおよそ体温（約３７℃）であり得る。一定の実施形態
では、ｐ９７ポリペプチドまたは結合体の室温または約３７℃での溶解度は、少なくとも
約０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２
、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１
８、１９、２０、２５、または３０ｍｇ／ｍｌである。
【００６２】
「被験体」には、本明細書中で使用する場合、ｐ９７結合体で処置または診断すること
ができる症状を示すか、症状を示すリスクがある任意の動物が含まれる。適切な被験体（
患者）には、実験動物（マウス、ラット、ウサギ、またはモルモットなど）、家畜、およ
び飼育動物またはペット（ネコまたはイヌなど）が含まれる。非ヒト霊長類、好ましくは
ヒト患者が含まれる。
【００６３】
「実質的に」または「本質的に」は、ほぼ完全または十分であることを意味する（例え
ば、いくつかの所与の量の９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれを超え
る）。
【００６４】
「実質的に含まない」は、所与の量がほぼ完全にまたは完全に存在しないことをいう（
例えば、いくつかの所与の量の１０％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％未満）
。例えば、一定の組成物は、細胞タンパク質、膜、核酸、内毒素、または他の夾雑物を「
実質的に含まない」可能性がある。
【００６５】
「処置」または「処置すること」には、本明細書中で使用する場合、疾患または容態の
症状または病態に及ぼす任意の所望の影響が含まれ、処置される疾患または容態の１つ以
上の測定可能なマーカーの最小の変化または改善でさえ含まれ得る。「処置」または「処
置すること」は、疾患もしくは容態またはその関連する症状の完全な根絶または治癒を必
ずしも示さない。この処置を受ける被験体は、処置を必要とする任意の被験体である。臨
床的改善の例示的なマーカーは、当業者に明らかであろう。
【００６６】
用語「野生型」は、天然に存在する供給源から単離した場合に遺伝子または遺伝子産物
の特徴を有する遺伝子または遺伝子産物をいう。野生型の遺伝子または遺伝子産物（例え
ば、ポリペプチド）は、集団中で最も頻繁に認められるものであり、したがって、遺伝子
の「正常」形態または「野生型」形態が任意にデザインされる。
【００６７】
ｐ９７ポリペプチドの配列およびその結合体
本発明の実施形態は、一般に、ヒトｐ９７（メラノトランスフェリン；ＭＴｆ）のポリ
ペプチドフラグメント、かかるフラグメントを含む組成物、およびその結合体に関する。
一定の例では、本明細書中に記載のｐ９７ポリペプチドフラグメントは、輸送活性を有す
る、すなわち、血液脳関門（ＢＢＢ）を通過する輸送能力がある。特定の実施形態では、
ｐ９７フラグメントは、目的の薬剤（治療薬、診断薬、または検出薬など）と共有結合的
に、非共有結合的に、または作動可能にカップリングしてｐ９７−薬剤結合体を形成する
。薬剤の具体例には、本明細書中に記載され、且つ当該分野で公知の他の薬剤の中で特に
小分子およびポリペプチド（抗体など）が含まれる。例示的なｐ９７ポリペプチド配列お
よび薬剤を以下に記載する。ｐ９７ポリペプチドの目的の薬剤へのカップリングのための
例示的な方法および成分（リンカー基など）も記載する。
【００６８】
ｐ９７配列。いくつかの実施形態では、ｐ９７ポリペプチドは、表１〜７、図２〜６、
または図９で同定した少なくとも１つのヒトｐ９７フラグメントを含むか、本質的にこれ
らからなるか、これらからなる。特定の実施形態では、ｐ９７ポリペプチドは、少なくと
も１つの配列番号２〜１８に記載のヒトｐ９７配列を含むか、本質的にこれらからなるか
、これらからなる。
【００６９】
他の特定の実施形態では、以下でより具体的に記載するように、ｐ９７ポリペプチド配
列は、表１〜７、図２〜６、または図９で同定した少なくとも１つのヒトｐ９７フラグメ
ントと、その長さに沿って、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５
％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一または相同な配列を含む。いくつかの実
施形態では、ｐ９７ポリペプチド配列の改変体は、配列番号２〜１８に記載の少なくとも
１つのヒトｐ９７配列と、その長さに沿って、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５
％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一または相同な配列を含
む。
【００７０】
いくつかの実施形態では、ｐ９７ポリペプチドは、表１〜７、図２〜６、または図９で
同定した２、３、４、または５つのｐ９７フラグメントを含むか、本質的にこれらからな
るか、これらからなり、任意選択的に、任意の介在ｐ９７配列（すなわち、存在する場合
、フラグメントの間に存在する配列番号１由来のｐ９７配列）を含む。特定の実施形態で
は、ｐ９７ポリペプチドは、配列番号２〜１８中に記載の２、３、４、または５つのｐ９
７配列を含むか、本質的にこれらからなるか、これらからなり、任意選択的に、任意の介
在ｐ９７配列（すなわち、存在する場合、配列番号２〜１８の間に存在する配列番号１由
来のｐ９７配列）を含む（ヒトｐ９７の一次構造における配列番号２〜１８の間の関係に
ついては、図９Ａおよび９Ｂも参照のこと）。一例としてｐ９７ポリペプチドは、配列番
号１３および１４を含むことができ、任意選択的に配列番号１由来の任意の介在ｐ９７配
列またはその改変体を含む。
【００７１】
一定の実施形態では、ｐ９７ポリペプチドフラグメントは、およそ、少なくともおよそ
、またはおよそ以下の数値まで：５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、
１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２
８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１
、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、
５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６
８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１
、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、
９５、９６、９７、９８、１００、１０５、１１０、１１５、１２０、１２５、１３０、
１３５、１４０、１４５、１５０、１５５、１６０、１６５、１７０、１７５、１８０、
１８５、１９０、１９５、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、
２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、
３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、
４７０、４８０、４９０、５００、５１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、
５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、
６７０、６８０、６９０、７００．７００、７１０、７２０、７３０、またはそれを超え
るアミノ酸長（その間の全ての整数および範囲が含まれる）であり、基準ｐ９７配列の全
てまたは一部を含むことができ（例えば、配列表、表１〜７、表Ｂ、図２〜６および９を
参照のこと）、配列番号１によって定義された基準ｐ９７フラグメントの任意の隣接する
Ｎ末端および／またはＣ末端配列を含む。
【００７２】
一定の実施形態では、ｐ９７ポリペプチドフラグメントは、約５〜７００、５〜６００
、５〜５００、５〜４００、５〜３００、５〜２００、５〜１００、５〜５０、５〜４０
、５〜３０、５〜２５、５〜２０、５〜１５、５〜１０、１０〜７００、１０〜６００、
１０〜５００、１０〜４００、１０〜３００、１０〜２００、１０〜１００、１０〜５０
、１０〜４０、１０〜３０、１０〜２５、１０〜２０、１０〜１５、２０〜７００、２０
〜６００、２０〜５００、２０〜４００、２０〜３００、２０〜２００、２０〜１００、
２０〜５０、２０〜４０、２０〜３０、２０〜２５、３０〜７００、３０〜６００、３０
〜５００、３０〜４００、３０〜３００、３０〜２００、３０〜１００、３０〜５０、３
０〜４０、４０〜７００、４０〜６００、４０〜５００、４０〜４００、４０〜３００、
４０〜２００、４０〜１００、４０〜５０、５０〜７００、５０〜６００、５０〜５００
、５０〜４００、５０〜３００、５０〜２００、５０〜１００、６０〜７００、６０〜６
００、６０〜５００、６０〜４００、６０〜３００、６０〜２００、６０〜１００、６０
〜７０、７０〜７００、７０〜６００、７０〜５００、７０〜４００、７０〜３００、７
０〜２００、７０〜１００、７０〜８０、８０〜７００、８０〜６００、８０〜５００、
８０〜４００、８０〜３００、８０〜２００、８０〜１００、８０〜９０、９０〜７００
、９０〜６００、９０〜５００、９０〜４００、９０〜３００、９０〜２００、９０〜１
００、１００〜７００、１００〜６００、１００〜５００、１００〜４００、１００〜３
００、１００〜２５０、１００〜２００、１００〜１５０、２００〜７００、２００〜６
００、２００〜５００、２００〜４００、２００〜３００、または２００〜２５０アミノ
酸長であり、基準ｐ９７配列の全てまたは一部を含み（例えば、配列表、表１〜７、表Ｂ
、図２〜６および９を参照のこと）、配列番号１によって定義された基準ｐ９７フラグメ
ントの任意の隣接するＮ末端および／またはＣ末端配列を含む。
【００７３】
一定の実施形態は、式［Ｘ］ｎ（式中、Ｘは本明細書中に記載のｐ９７フラグメントで
あり、ｎは１〜５の整数である）によって示される１つ以上のｐ９７フラグメント（例え
ば、２、３、４、または５つのフラグメント）を含む。特定の実施形態では、ＸはＤＳＳ
ＨＡＦＴＬＤＥＬＲ（配列番号１３）である。
【００７４】
特定の実施形態では、ｐ９７フラグメントまたはその改変体は、ＢＢＢを通過する能力
、および任意選択的には、目的の薬剤を、ＢＢＢを通過して中枢神経系内に輸送する能力
を有する。一定の実施形態では、ｐ９７フラグメントまたはその改変体は、ｐ９７受容体
、ＬＲＰ１受容体、および／またはＬＲＰ１Ｂ受容体に特異的に結合することができる。
【００７５】
いくつかの実施形態では、ｐ９７フラグメントは、それぞれ結合体化およびヨウ素化の
ために付加することができる１つ以上の末端（例えば、Ｎ末端、Ｃ末端）システインおよ
び／またはチロシンを有する。
【００７６】
基準ｐ９７ポリペプチドの改変体およびフラグメントならびに他の基準ポリペプチドを
、以下でより詳細に記載する。
【００７７】
ｐ９７結合体。上述の通り、一定の実施形態は、目的の薬剤（例えば、小分子、ポリペ
プチド（例えば、ペプチド、抗体）、ペプチド模倣物、ペプトイド、アプタマー、検出可
能な実体、またはその任意の組み合わせ）を連結させたｐ９７ポリペプチドを含む。１つ
を超える目的の薬剤（例えば、抗体および小分子に結合体化したｐ９７フラグメント）を
含む結合体も含まれる。
【００７８】
共有結合性の連結が好ましいが、非共有結合性の連結（比較的強力な非共有結合性のタ
ンパク質−リガンド相互作用（ビオチンとアビジンとの間の相互作用など）を利用する連
結が含まれる）も使用することができる。ｐ９７フラグメントと目的の薬剤との間の直接
的な共有結合性または非共有結合性の相互作用を必ずしも必要としない作動可能な連結も
含まれ、かかる連結の例には、ｐ９７ポリペプチドおよび目的の薬剤を含むリポソーム混
合物が含まれる。例示的なタンパク質結合体の生成方法を本明細書中に記載しており、他
の方法が当該分野で周知である。
【００７９】
小分子。特定の実施形態では、ｐ９７フラグメントを、小分子に結合体化する。「小分
子」は、合成または生物学的起源（生体分子）であるが、典型的にはポリマーではない有
機化合物をいう。有機化合物は、その分子が炭素を含む化学物質の巨大なクラスをいい、
典型的には炭酸塩のみを含むもの、炭素の単純酸化物、またはシアニドが除外される。「
生体分子」は、一般に、生物によって産生される有機分子（高分子（バイオポリマー）（
ペプチド、ポリサッカリド、および核酸なども）および小分子（一次、二次代謝産物、脂
質、リン脂質、糖脂質、ステロール、グリセロ脂質、ビタミン、およびホルモンなど）が
含まれる）をいう。「ポリマー」は、一般に、典型的には共有結合性の化学結合によって
連結された反復構造単位から構成される大分子または高分子をいう。
【００８０】
一定の実施形態では、小分子の分子量は、約１０００〜２０００ダルトン未満、典型的
には約３００と７００ダルトンとの間であり、約５０、１００、１５０、２００、２５０
、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、５００、６５０、６００、７５０
、７００、８５０、８００、９５０、１０００、または２０００ダルトンが含まれる。
【００８１】
一定の小分子は、抗体について記載の「特異的結合」特性を有し得る（以下）。例えば
、小分子は、本明細書中に記載の標的に、少なくとも約０．０１、０．０５、０．１、０
．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５
、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２
０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、４０、または５０
ｎＭの結合親和性（Ｋｄ）で特異的に結合することができる。一定の実施形態では、小分
子（ａ  ｓｍａｌｌ）は、細胞表面受容体または他の細胞表面タンパク質に特異的に結合
する。いくつかの実施形態では、小分子は、少なくとも１つの本明細書中に記載の癌関連
抗原に特異的に結合する。特定の実施形態では、小分子は、少なくとも１つの本明細書中
に記載の神経系関連抗原、疼痛関連抗原、および／または自己免疫関連抗原に特異的に結
合する。
【００８２】
例示的な小分子には、細胞毒性薬、化学療法薬、および抗血管新生薬（例えば、種々の
癌（中枢神経系の癌および中枢神経系に転移した癌が含まれる）の処置で有用と見なされ
ている薬剤）が含まれる。特定の小分子クラスには、アルキル化剤、代謝拮抗物質、アン
トラサイクリン、抗腫瘍抗生物質、白金、タイプＩトポイソメラーゼインヒビター、タイ
プＩＩトポイソメラーゼインヒビター、ビンカアルカロイド、およびタキサンが含まれる
が、これらに限定されない。
【００８３】
小分子の具体例には、クロラムブシル、シクロホスファミド、シレンジタイド、ロムス
チン（ＣＣＮＵ）、メルファラン、プロカルバジン、チオテパ、カルムスチン（ＢＣＮＵ
）、エンザスタウリン、ブスルファン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、ゲフィチニブ
、エルロチニブイダルビシン、テモゾロミド、エピルビシン、ミトキサントロン、ブレオ
マイシン、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、カンプトセシン、イリノ
テカン、トポテカン、アムサクリン、エトポシド、エトポシドホスファート、テニポシド
、テムシロリムス、エベロリムス、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、ビ
ンデシン、ＣＴ５２９２３、およびパクリタキセル、ならびに任意の上記の薬学的に許容
され得る塩、酸、または誘導体が含まれる。
【００８４】
小分子のさらなる例には、神経系（例えば、ＣＮＳ）障害の処置のためにプロテインキ
ナーゼをターゲティングする小分子（イマチニブ、ダサチニブ、ソラフェニブ、パゾパニ
ブ、スニチニブ（ｓｕｎｉｔｎｉｂ）、バタラニブ、ゲフィチニブ（ｇｅｆｔｉｎｉｂ）
、エルロチニブ、ＡＥＥ−７８８、ジクロロアセタート（ｄｉｃｈｏｒｏａｃｅｔａｔｅ
）、タモキシフェン、ファスジル、ＳＢ−６８１３２３、およびセマキサニブ（ＳＵ５４
１６）が含まれる）が含まれる（Ｃｈｉｃｏら，Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏ
ｖ．８：８２９−９０９，２００９を参照のこと）。小分子の例には、ドネペジル（ｄｏ
ｎｅｐｉｚｉｌ）、ガランタミン、メマンチン、リバスチグミン、タクリン、ラサギリン
（ｒａｓｉｇｉｌｉｎｅ）、ナルトレキソン、ルビプロストン、サフィナミド、イストラ
デフィリン、ピマバンセリン、ピトリサント、イスラジピン、プリドピジン（ＡＣＲ１６
）、テトラベナジン、およびベキサロテン（例えば、アルツハイマー病、パーキンソン病
、ハンチントン病の処置用）；ならびにグラチラマー酢酸塩、フィンゴリモド、ミトキサ
ントロン（例えば、ＭＳの処置用）も含まれる。任意の上記の薬学的に許容され得る塩、
酸、または誘導体も含まれる。
【００８５】
小分子のさらなる例には、アルキル化剤（チオテパ、シクロホスファミド（サイトキサ
ン（商標））など）；スルホン酸アルキル（ブスルファン、インプロスルファン、および
ピポスルファンなど）；アジリジン（ベンゾドーパ、カルボコン、メツレドーパ、および
ウレドーパなど）；エチレンイミンおよびメチルアメラミン（アルトレタミン、トリエチ
レンメラミン、トリエチレン（ｔｒｉｅｔｙｌｅｎｅ）ホスホラミド、トリエチレンチオ
ホスホラミド（ｔｒｉｅｔｈｙｌｅｎｅｔｈｉｏｐｈｏｓｐｈａｏｒａｍｉｄｅ）、およ
びトリメチロールメラミン（ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｏｌｏｍｅｌａｍｉｎｅ）が含まれる）
；ナイトロジェンマスタード（クロラムブシル、クロルナファジン、クロロホスファミド
、エストラムスチン、イフォスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸
塩、メルファラン、ノブエンビキン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファ
ミド、ウラシルマスタードなど）；ニトロソ尿素（ｎｉｔｒｏｓｕｒｅａｓ）（カルムス
チン、クロロゾトシン、ホテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、ラニムスチンなど）；
抗生物質（アクラシノマイシン、アクチノマイシン、アントラマイシン（ａｕｔｈｒａｍ
ｙｃｉｎ）、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カリチアマイシン、カラ
ビシン、カルミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダ
ウノルビシン、デトルビシン、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、ドキソルビ
シン、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシン
、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ぺプロマイシン、ポトフィロマ
イシン、ピューロマイシン、ケラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレ
プトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシンなど）；代謝拮抗
物質（メトトレキサートおよび５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）など）；葉酸アナログ
（デノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキサートなど）；プリ
ンアナログ（フルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニンなど）
；ピリミジンアナログ（アンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール
、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジ
ン、５−ＦＵなど）；アンドロゲン（カルステロン、ドロモスタノロンプロピオナート、
エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトンなど）；抗アドレナル（アミノグ
ルテチミド、ミトタン、トリロスタンなど）；葉酸補充物（フォリン酸（ｆｒｏｌｉｎｉ
ｃ  ａｃｉｄ）など）；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン
酸；アムサクリン；ベストラブシル；ビサントレン；エダトレキサート（ｅｄａｔｒａｘ
ａｔｅ）；デフォファミン；デメコルシン；ジアジクオン；エフロルニチン（ｅｌｆｏｒ
ｍｉｔｈｉｎｅ）；エリプチニウムアセタート；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキ
シ尿素；レンチナン；ロニダミン；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダモール；ニ
トラクリン；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ポドフィリン酸；２−エチ
ルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ；ラゾキサン；シゾフィラン；スピロゲルマニウ
ム；テヌアゾン酸；トリアジコン；２，２’，２’’−トリクロロトリエチルアミン；ウ
レタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトー
ル；ピポブロマン；ガシトシン；アラビニノシド（「Ａｒａ−Ｃ」）；シクロホスファミ
ド；チオテパ；タキソイド（例えば、パクリタキセル（タキソール（登録商標）、Ｂｒｉ
ｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，Ｎ．Ｊ
．）およびドセタキセル（ｄｏｘｅｔａｘｅｌ）（タキソテール（登録商標）．，Ｒｈｎ
ｅ−Ｐｏｕｌｅｎｃ  Ｒｏｒｅｒ，Ａｎｔｏｎｙ，Ｆｒａｎｃｅ）；クロラムブシル；ゲ
ムシタビン；６−チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；白金アナログ（
シスプラチンおよびカルボプラチンなど）；ビンブラスチン；白金；エトポシド（ＶＰ−
１６）；イフォスファミド；マイトマイシンＣ；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ビ
ノレルビン；ナベルビン；ノバントロン；テニポシド；ダウノマイシン；アミノプテリン
；ゼローダ；イバンドロネート；ＣＰＴ−１１；トポイソメラーゼインヒビターＲＦＳ２
０００；ジフルオロメチルオルニチン（ｄｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｙｌｏｍｉｔｈｉｎｅ
）（ＤＭＦＯ）；レチノイン酸誘導体（タグレチン（商標）（ベキサロテン）、パンレチ
ン（商標）（アリトレチノイン）など）；ＯＮＴＡＫ（商標）（デニロイキンジフチトク
ス）；エスペラミシン；カペシタビン；および任意の上記の薬学的に許容され得る塩、酸
、または誘導体が含まれる。
【００８６】
腫瘍に対するホルモン作用を調節または阻害するように作用する抗ホルモン剤（抗エス
トロゲン（例えば、タモキシフェン、ラロキシフェン、アロマターゼ阻害４（５）−イミ
ダゾール、４−ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、ＬＹ１
１７０１８、オナプリストン、およびトレミフェン（フェアストン）が含まれる）；およ
び抗アンドロゲン（フルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、ロイプロリド、およびゴセ
レリンなど）など）；および任意の上記の薬学的に許容され得る塩、酸、または誘導体も
含まれる。
【００８７】
上述の通り、一定の態様では、小分子は他の心毒性薬である。心毒性小分子の特定の例
には、アントラサイクリン／アントラキノロン、シクロホスファミド、代謝拮抗物質、抗
微小管薬、およびチロシンキナーゼインヒビターが含まれるが、これらに限定されない。
心毒性薬の具体例には、本明細書中に記載され、且つ当該分野で公知の他の小分子の中で
特に、シクロペンテニルシトシン、５−フルオロウラシル、カペシタビン、パクリタキセ
ル、ドセタキセル（ｄｏｃａｔａｘｅｌ）、アドリアマイシン、ドキソルビシン（ｄｏｘ
ｏｒｕｂｕｃｉｎ）、エピルビシン、エメチン、イソタミド、マイトマイシンＣ、エルロ
チニブ、ゲフィチニブ、イマチニブ、ソラフェニブ、スニチニブ、シスプラチン、サリド
マイド、ブスルファン、ビンブラスチン、ブレオマイシン、ビンクリスチン、三酸化ヒ素
、メトトレキサート、ロシグリタゾン、およびミトキサントロンが含まれる。
【００８８】
ポリペプチド薬剤。特定の実施形態では、目的の薬剤は、ペプチドまたはポリペプチド
である。用語「ペプチド」および「ポリペプチド」を本明細書中で互換的に使用するが、
一定の例では、用語「ペプチド」は、より短いポリペプチド（例えば、約２、３、４、５
、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２
０、２５、３０、３５、４０、４５、または５０アミノ酸（その間の全ての整数および範
囲（例えば、５〜１０、８〜１２、１０〜１５）が含まれる）からなるポリペプチド）を
いうことができる。ポリペプチドおよびペプチドは、本明細書中に記載の天然に存在する
アミノ酸および／または天然に存在しないアミノ酸から構成され得る。ポリペプチドとし
ての抗体も含まれる。
【００８９】
例示的なポリペプチド薬剤には、リソソーム貯蔵障害に関連するポリペプチドが含まれ
る。かかるポリペプチドの例には、アスパルチルグルコサミニダーゼ、酸性リパーゼ、シ
ステイン輸送体、Ｌａｍｐ−２、α−ガラクトシダーゼＡ、酸性セラミダーゼ、α−Ｌ−
フコシダーゼ、β−ヘキソサミニダーゼＡ、ＧＭ２−ガングリオシドアクチベーター（Ｇ
Ｍ２Ａ）、α−Ｄ−マンノシダーゼ、β−Ｄ−マンノシダーゼ、アリールスルファターゼ
Ａ、サポシンＢ、ノイラミニダーゼ、α−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼホスホトラン
スフェラーゼ、ホスホトランスフェラーゼγ−サブユニット、Ｌ−イズロニダーゼ、イズ
ロナート−２−スルファターゼ、ヘパラン−Ｎ−スルファターゼ、α−Ｎ−アセチルグル
コサミニダーゼ、アセチルＣｏＡ：Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ、Ｎ−アセチルグル
コサミン６−スルファターゼ、ガラクトース６−スルファターゼ、β−ガラクトシダーゼ
、Ｎ−アセチルガラクトサミン４−スルファターゼ、ヒアルロノグルコサミニダーゼ、ス
ルファターゼ、パルミトイルプロテインチオエステラーゼ、トリペプチジルペプチダーゼ
Ｉ、酸性スフィンゴミエリナーゼ、カテプシンＡ、カテプシンＫ、α−ガラクトシダーゼ
Ｂ、ＮＰＣ１、ＮＰＣ２、シアリン、およびシアル酸輸送体（そのフラグメント、改変体
、および誘導体が含まれる）が含まれる。
【００９０】
一定の実施形態には、ポリペプチド（多発性硬化症（ＭＳ）の処置のためにしばしば使
用されるインターフェロン−β１ａ（例えば、ＡＶＯＮＥＸ、ＲＥＢＩＦ）およびインタ
ーフェロン−β１ｂ（例えば、Ｂｅｔａｓｅｒｏｎ）などのインターフェロン−βポリペ
プチドなど）が含まれる。
【００９１】
いくつかの実施形態では、前述の通り、ポリペプチド薬剤は、抗体またはその抗原結合
フラグメントである。本発明の結合体または組成物において使用される抗体または抗原結
合フラグメントは、本質的に任意のタイプであり得る。特定の例には、治療抗体および診
断抗体が含まれる。当該分野で周知のように、抗体は、免疫グロブリン分子の可変領域内
に存在する少なくとも１つのエピトープ認識部位を介して標的（炭水化物、ポリヌクレオ
チド、脂質、ポリペプチドなど）に特異的に結合することができる免疫グロブリン分子で
ある。
【００９２】
本明細書中で使用する場合、用語「抗体」は、インタクトなポリクローナル抗体または
モノクローナル抗体だけでなく、そのフラグメント（ｄＡｂ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａ
ｂ’）２、Ｆｖなど）、一本鎖（ＳｃＦｖ）、その合成改変体、天然に存在する改変体、
必要な特異性の抗原結合フラグメントを有する抗体部分を含む融合タンパク質、ヒト化抗
体、キメラ抗体、および抗原結合部位または必要な特異性のフラグメント（エピトープ認
識部位）を含む免疫グロブリン分子の任意の他の改変された立体配置も含む。
【００９３】
用語「抗原結合フラグメント」は、本明細書中で使用される場合、目的の抗原に結合す
る免疫グロブリン重鎖および／または軽鎖の少なくとも１つのＣＤＲを含むポリペプチド
フラグメントをいう。これに関して、本明細書中に記載の抗体の抗原結合フラグメントは
、治療標的または診断標的に結合する抗体由来のＶＨ配列およびＶＬ配列の１、２、３、
４、５、または６つ全てのＣＤＲを含むことができる。
【００９４】
用語「抗原」は、抗体などの選択的結合剤によって結合することができ、さらに、その
抗原のエピトープに結合することができる抗体を産生させるために動物内で使用すること
ができる分子または分子の一部をいう。抗原は、１つ以上のエピトープを有し得る。
【００９５】
用語「エピトープ」には、免疫グロブリンまたはＴ細胞受容体に特異的に結合すること
ができる任意の決定基、好ましくはポリペプチド決定基が含まれる。エピトープは、抗体
が結合する抗原の領域をいう。一定の実施形態では、エピトープ決定基は、分子の化学的
に活性な表面基（アミノ酸、糖側鎖、ホスホリル、またはスルホニルなど）を含み、一定
の実施形態では、特異的な三次元構造の特徴および／または特異的な電荷の特徴を有し得
る。エピトープは、抗原の一次構造に関して連続または不連続であり得る。
【００９６】
抗体などの分子は、この分子が別の細胞または物質と比較して特定の細胞または物質と
高頻度、迅速、長期間、および／または高親和性で反応または会合する場合、「特異的結
合」または「優先的結合」を示すという。抗体が他の物質への結合と比較して高親和性、
高アビディティ、迅速、および／または長期間結合する場合、抗体は、標的に「特異的に
結合する」または「優先的に結合する」。例えば、特異的エピトープに特異的にまたは優
先的に結合する抗体は、抗体が他のエピトープに結合する場合と比較して高親和性、高ア
ビディティ、迅速、および／または長期間特異的エピトープに結合する抗体である。この
定義に関して、例えば、第１の標的に特異的または優先的に結合する抗体（または一部も
しくはエピトープ）が、第２の標的に特異的または優先的に結合してもしなくてもよいと
も理解される。そのようなものとして、「特異的結合」または「優先的結合」には、排他
的結合は（含んでもよいが）必ずしも必要ではない。必須ではないが、一般に、結合とい
う言及は、優先的結合を意味する。
【００９７】
免疫学的結合は、一般に、例えば、例示を目的としており、制限されないが、静電気的
、イオン的、親水性、および／または疎水性の誘引または反発、立体力、水素結合、ファ
ンデルワールス力、および他の相互作用の結果として、免疫グロブリン分子と免疫グロブ
リンが特異性を示す抗原との間に生じるタイプの非共有結合性相互作用をいう。免疫学的
結合相互作用の強度または親和性を相互作用の解離定数（Ｋｄ）で示すことができ、ここ
で、Ｋｄが小さいほど親和性が高い。選択されたポリペプチドの免疫学的結合性を、当該
分野で周知の方法を使用して定量することができる。１つのかかる方法は、抗原結合部位
／抗原複合体の形成および解離の速度を測定する必要があり、ここで、これらの速度は、
複合体パートナーの濃度、相互作用の親和性、および速度が両方向の影響を等しく受ける
幾何学的パラメーターに依存する。したがって、「オン速度定数」（Ｋｏｎ）および「オ
フ速度定数」（Ｋｏｆｆ）の両方を、濃度ならびに実際の会合速度および解離速度の計算
によって決定することができる。Ｋｏｆｆ／Ｋｏｎ比は、親和性に関連しない全てのパラ
メーターを削除することができるので、解離定数Ｋｄに等しい。
【００９８】
選択された抗体およびポリペプチドの免疫学的結合特性を、当該分野で周知の方法を使
用して定量することができる（Ｄａｖｉｅｓら，Ａｎｎｕａｌ  Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ
．５９：４３９−４７３，１９９０を参照のこと）。いくつかの実施形態では、抗体また
は他のポリペプチドは、平衡解離定数が約１０−７Ｍ以下または１０−８Ｍ以下である場
合に抗原またはそのエピトープに特異的に結合するという。いくつかの実施形態では、抗
体の平衡解離定数は、約１０−９Ｍ以下または１０−１０Ｍ以下であり得る。一定の例示
的実施形態では、抗体または他のポリペプチドは、（抗体または他のポリペプチドが特異
的に結合する）本明細書中に記載の抗原または標的に対して少なくとも約０．０１、０．
０５、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１
、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７
、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、
４０、または５０ｎＭの親和性（Ｋｄ）を有する。
【００９９】
いくつかの実施形態では、抗体もしくは抗原結合フラグメントまたは他のポリペプチド
は、細胞表面受容体または他の細胞表面タンパク質に特異的に結合する。いくつかの実施
形態では、抗体もしくは抗原結合フラグメントまたは他のポリペプチドは、細胞表面受容
体または他の細胞表面タンパク質のリガンドに特異的に結合する。いくつかの実施形態で
は、抗体もしくは抗原結合フラグメントまたは他のポリペプチドは、細胞内タンパク質に
特異的に結合する。
【０１００】
一定の実施形態では、抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたは他のポリペプチド
は、癌関連抗原または癌抗原に特異的に結合する。例示的な癌抗原には、細胞表面受容体
などの細胞表面タンパク質が含まれる。かかる細胞表面タンパク質または受容体に結合す
るリガンドも癌関連抗原として含まれる。特定の実施形態では、抗体または抗原結合フラ
グメントは、細胞内癌抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、癌抗原に関連
する癌は、１つ以上の乳癌、転移性脳腫瘍、前立腺癌、消化管癌、肺癌、卵巣癌、睾丸癌
、頭頸部癌、胃癌、膀胱癌、膵臓癌、肝臓癌、腎臓癌、扁平上皮癌、ＣＮＳまたは脳の癌
、黒色腫、非黒色腫癌、甲状腺癌、子宮内膜癌、上皮腫瘍、骨の癌、または造血性癌であ
る。
【０１０１】
特定の実施形態では、抗体もしくは抗原結合フラグメントまたは他のポリペプチドは、
少なくとも１つの癌関連抗原または癌抗原（ヒトＨｅｒ２／ｎｅｕ、Ｈｅｒ１／ＥＧＦ受
容体（ＥＧＦＲ）、Ｈｅｒ３、Ａ３３抗原、Ｂ７Ｈ３、ＣＤ５、ＣＤ１９、ＣＤ２０、Ｃ
Ｄ２２、ＣＤ２３（ＩｇＥ受容体）、Ｃ２４２抗原、５Ｔ４、ＩＬ−６、ＩＬ−１３、血
管内皮成長因子ＶＥＧＦ（例えば、ＶＥＧＦ−Ａ）ＶＥＧＦＲ−１、ＶＥＧＦＲ−２、Ｃ
Ｄ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４０、ＣＤ４４、ＣＤ５１、ＣＤ５２、ＣＤ５６、Ｃ
Ｄ７４、ＣＤ８０、ＣＤ１５２、ＣＤ２００、ＣＤ２２１、ＣＣＲ４、ＨＬＡ−ＤＲ、Ｃ
ＴＬＡ−４、ＮＰＣ−１Ｃ、テネイシン、ビメンチン、インスリン様成長因子１受容体（
ＩＧＦ−１Ｒ）、α−フェトプロテイン、インスリン様成長因子１（ＩＧＦ−１）、炭酸
脱水酵素９（ＣＡ−ＩＸ）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、インテグリンαｖβ３、インテグ
リンα５β１、葉酸受容体１、膜貫通糖タンパク質ＮＭＢ、線維芽細胞活性化タンパク質
α（ＦＡＰ）、糖タンパク質７５、ＴＡＧ−７２、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６（またはＣＡ−
１２５）、ホスファチジルセリン、前立腺特異的膜抗原（ＰＭＳＡ）、ＮＲ−ＬＵ−１３
抗原、ＴＲＡＩＬ−Ｒ１、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー１０ｂ（ＴＮ
ＦＲＳＦ１０ＢまたはＴＲＡＩＬ−Ｒ２）、ＳＬＡＭファミリーメンバー７（ＳＬＡＭＦ
７）、ＥＧＰ４０汎癌腫抗原、Ｂ細胞活性化因子（ＢＡＦＦ）、血小板由来成長因子受容
体、糖タンパク質ＥｐＣＡＭ（１７−１Ａ）、プログラム死−１、タンパク質ジスルフィ
ドイソメラーゼ（ＰＤＩ）、再生肝ホスファターゼ３（ＰＲＬ−３）、前立腺酸性ホスフ
ァターゼ、ルイス−Ｙ抗原、ＧＤ２（神経外胚葉起源の腫瘍上に発現するジシアロガング
リオシド）、グリピカン−３（ＧＰＣ３）、および／またはメソテリンなど）に特異的に
結合する。
【０１０２】
特定の実施形態では、抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたは他のポリペプチド
は、ヒトＨｅｒ２／ｎｅｕタンパク質に特異的に結合する。本質的に任意の抗Ｈｅｒ２／
ｎｅｕ抗体、抗原結合フラグメント、または他のＨｅｒ２／ｎｅｕ特異的結合剤を使用し
て本発明のｐ９７−抗体結合体を産生することができる。例示的な抗Ｈｅｒ２／ｎｅｕ抗
体は、例えば、米国特許第５，６７７，１７１号；同第５，７２０，９３７号；同第５，
７２０，９５４号；同第５，７２５，８５６号；同第５，７７０，１９５号；同第５，７
７２，９９７号；同第６，１６５，４６４号；同第６，３８７，３７１号；および同第６
，３９９，０６３号（その内容全体が本明細書中で参考として援用される）に記載されて
いる。
【０１０３】
いくつかの実施形態では、抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたは他のポリペプ
チドは、ヒトＨｅｒ１／ＥＧＦＲ（上皮成長因子受容体）に特異的に結合する。本質的に
任意の抗Ｈｅｒ１／ＥＧＦＲ抗体、抗原結合フラグメントまたは他のＨｅｒ１−ＥＧＦＲ
特異的結合剤を使用して本発明のｐ９７−抗体結合体を産生することができる。例示的な
抗Ｈｅｒ１／ＥＧＦＲ抗体は、例えば、米国特許第５，８４４，０９３号；同第７，１３
２，５１１号；同第７，２４７，３０１号；同第７，５９５，３７８号；同第７，７２３
，４８４号；同第７，９３９，０７２号；および同第７，９６０，５１６号（その内容全
体が本明細書中で参考として援用される）に記載されている。
【０１０４】
一定の実施形態では、抗体は、抗癌治療抗体などの治療抗体であり、３Ｆ８、８Ｈ９、
アバゴボマブ、アデカツムマブ、アフツズマブ、アレムツズマブ、アラシズマブ（ペゴー
ル）、アマツキシマブ、アポリズマブ、バビツキシマブ、ベクツモマブ、ベリムマブ、ベ
バシズマブ、ビバツズマブ（メルタンシン）、ブレンツキシマブベドチン、カンツズマブ
（メルタンシン）、カンツズマブ（ラブタンシン）、カプロマブ（ペンデチド）、カツマ
キソマブ、セツキシマブ、シタツズマブ（ボガトクス）、シクスツムマブ、クリバツズマ
ブ（テトラキセタン）、コナツムマブ、ダセツズマブ、ダロツズマブ、デツモマブ、ドロ
ジツマブ、エクロメキシマブ、エドレコロマブ、エロツズマブ、エナバツズマブ、エンシ
ツキシマブ、エプラツズマブ、エルツマキソマブ、エタラシズマブ、ファーレツズマブ、
ＦＢＴＡ０５、フィギツムマブ、フランボツマブ、ガリキシマブ、ゲムツズマブ、ガニツ
マブ、ゲムツズマブ（オゾガマイシン）、ギレンツキシマブ、グレムバツムマブ（ベドチ
ン）、イブリツモマブチウキセタン、イクルクマブ、イゴボマブ、インダツキシマブラブ
タンシン、インテツムマブ、イノツズマブオゾガマイシン、イプリムマブ（ＭＤＸ−１０
１）、イラツムマブ、ラベツズマブ、レキサツムマブ、リンツズマブ、ロルボツズマブ（
メルタンシン）、ルカツムマブ、ルミリキシマブ、マパツムマブ、マツズマブ、ミラツズ
マブ、ミツモマブ、モガムリズマブ、モキセツモマブ（パスドトクス）、ナコロマブ（タ
フェナトクス）、ナプツモマブ（エスタフェナトクス）、ナルナツマブ、ネシツムマブ、
ニモツズマブ、ニボルマブ、ノイラジアブ（登録商標）（放射性ヨウ素を含むか含まない
）、ＮＲ−ＬＵ−１０、オファツムマブ、オララツマブ、オナルツズマブ、オポルツズマ
ブ（モナトクス）、オレゴボマブ、パニツムマブ、パトリツマブ、ペムツモマブ、ペルツ
ズマブ、プリツムマブ、ラコツモマブ、ラドレツマブ、ラムシルマブ、リロツムマブ、リ
ツキシマブ、ロバツムマブ、サマリズマブ、シブロツズマブ、シルツキシマブ、タバルマ
ブ、タプリツモマブ（パプトクス）、テナツモマブ、テプロツムマブ、ＴＧＮ１４１２、
チシリムマブ、トレメリムマブ、チガツズマブ、ＴＮＸ−６５０、トシツモマブ、ＴＲＢ
Ｓ０７、トラスツズマブ、ツコツズマブ（セルモロイキン）、ウブリツキシマブ、ウレル
マブ、ベルツズマブ、ボロシキシマブ、ボツムマブ、およびザルツムマブなどの抗体が含
まれる。これらの抗体のフラグメント、改変体、および誘導体も含まれる。
【０１０５】
特定の実施形態では、抗体は心毒性抗体（すなわち、結合体化されていない形態で投与
した場合に心毒性を示す抗体）である。心毒性を示す抗体の具体例には、トラスツズマブ
およびベバシズマブが含まれる。
【０１０６】
特定の実施形態では、ｐ９７結合体で使用される抗Ｈｅｒ２／ｎｅｕ抗体は、トラスツ
ズマブ（ハーセプチン（登録商標））またはそのフラグメント、改変体、もしくは誘導体
である。ハーセプチン（登録商標）は、ヒト乳癌の処置について承認されたＨｅｒ２／ｎ
ｅｕ特異的モノクローナル抗体である。一定の実施形態では、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ結合抗原
結合フラグメントは、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ抗体の１つ以上のＣＤＲを含む。これに関して、
いくつかの場合、所望の特異的結合を保持しながら抗体のＶＨＣＤＲ３のみを移入するこ
とができることが示されている（Ｂａｒｂａｓら，ＰＮＡＳ．９２：２５２９−２５３３
，１９９５）。ＭｃＬａｎｅら，ＰＮＡＳ  ＵＳＡ．９２：５２１４−５２１８，１９９
５；およびＢａｒｂａｓら，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１６：２１６１−２１６２
，１９９４も参照のこと。
【０１０７】
他の特定の実施形態では、本発明の結合体で使用される抗Ｈｅｒ１／ＥＧＦＲ抗体は、
セツキシマブ（エルビタックス（登録商標））またはそのフラグメントもしくは誘導体で
ある。一定の実施形態では、抗Ｈｅｒ１／ＥＧＦＲ結合フラグメントは、セツキシマブな
どのＨｅｒ１／ＥＧＦＲ抗体の１つ以上のＣＤＲを含む。セツキシマブは、頭頸部癌およ
び結腸直腸癌の処置について承認されている。セツキシマブは、ヒトＥＧＦＲのＮ末端タ
ンパク質に特異的な２２５マウスＥＧＦＲモノクローナル抗体のＦｖ（可変；抗原結合）
領域、ヒトＩｇＧ１重鎖およびκ軽鎖の定常（フレームワーク）領域から構成される。
【０１０８】
いくつかの実施形態では、抗体もしくは抗原結合フラグメントまたは他のポリペプチド
は、少なくとも１つの神経系障害（末端神経系および／または中枢神経系（ＣＮＳ）の障
害が含まれる）（例えば、の処置）に関連する抗原に特異的に結合する。一定の実施形態
では、抗体もしくは抗原結合フラグメントまたは他のポリペプチドは、疼痛（急性疼痛、
慢性疼痛、および神経因性疼痛が含まれる）（例えば、の処置）に関連する抗原に特異的
に結合する。いくつかの実施形態では、抗体もしくは抗原結合フラグメントまたは他のポ
リペプチドは、自己免疫障害（神経系またはＣＮＳの自己免疫障害が含まれる）（例えば
、の処置）に関連する抗原に特異的に結合する。
【０１０９】
神経系、疼痛、および／または自己免疫に関連する抗原の例には、α−４（α４）イン
テグリン、ＣＤ２０、ＣＤ５２、ＩＬ−１２、ＩＬ−２３、ＩＬ−１２およびＩＬ−２３
のｐ４０サブユニット、軸索再生および再軸索形成のインヒビターＮｏｇｏ−ＡおよびＬ
ＩＮＧＯ、ＩＬ−２３、アミロイド−β（例えば、Ａβ（１−４２））、ハンチンチン、
ＣＤ２５（すなわち、ＩＬ−２受容体のα鎖）、神経成長因子（ＮＧＦ）、神経栄養性チ
ロシンキナーゼ受容体タイプ１（ＴｒｋＡ；ＮＧＦの高親和性触媒受容体）、ならびにα
−シヌクレインが含まれるが、これらに限定されない。これらおよび他の標的は、種々の
神経系、疼痛、および／または自己免疫の障害（多発性硬化症（α４インテグリン、ＩＬ
−２３、ＣＤ２５、ＣＤ２０、ＣＤ５２、ＩＬ−１２、ＩＬ−２３、ＩＬ−１２およびＩ
Ｌ−２３のｐ４０サブユニット、ならびに軸索再生および再軸索形成のインヒビターＮｏ
ｇｏ−ＡおよびＬＩＮＧＯ）、アルツハイマー病（Ａβ）、ハンチントン病（ハンチンチ
ン）、パーキンソン病（α−シヌクレイン）、および疼痛（ＮＧＦおよびＴｒｋＡ）など
）の処置で有用であると見なされている。
【０１１０】
特定の実施形態では、ｐ９７結合体で使用される抗ＣＤ２５抗体は、ダクリズマブ（す
なわち、ゼナパックス（商標））またはそのフラグメント、改変体、もしくは誘導体であ
る。ダクリズマブは、ＣＤ２５（ＩＬ−２受容体のαサブユニット）に特異的に結合する
ヒト化モノクローナル抗体である。他の実施形態では、抗体は、リツキシマブ、オクレリ
ズマブ、オファツムマブ、またはＣＤ２０に特異的に結合するその改変体もしくはフラグ
メントである。特定の実施形態では、抗体は、アレムツズマブまたはＣＤ５２に特異的に
結合するその改変体もしくはフラグメントである。一定の実施形態では、抗体は、ウステ
キヌマブ（ＣＮＴＯ１２７５）またはＩＬ−１２およびＩＬ−２３のｐ４０サブユニット
に特異的に結合するその改変体もしくはフラグメントである。
【０１１１】
特定の実施形態では、結合体で使用される抗ＮＧＦ抗体は、タネズマブまたはそのフラ
グメント、改変体、もしくは誘導体である。タネズマブは、ＮＧＦに特異的に結合し、交
感ニューロンおよび感覚ニューロン上に存在する高親和性膜結合触媒受容体であるトロポ
ミオシン関連キナーゼＡ（ＴｒｋＡ）へのＮＧＦの結合を防止しする。ＮＧＦによるＴｒ
ｋＡ刺激の低下によりかかるニューロンの痛覚伝導活性を阻害すると考えられている。
【０１１２】
いくつかの実施形態では、抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたは他のポリペプ
チド（例えば、免疫グロブリン様分子、可溶性受容体、リガンド）は、炎症促進性分子（
例えば、炎症促進性サイトカインまたはケモカイン）に特異的に結合する。これらおよび
関連する実施形態では、ｐ９７結合体を使用して、本明細書中に記載の種々の炎症状態を
処置することができる。炎症促進性分子の例には、とりわけ、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）（
ＴＮＦ−αおよびＴＮＦ−βなど）、ＴＮＦスーパーファミリー分子（ＦａｓＬ、ＣＤ２
７Ｌ、ＣＤ３０Ｌ、ＣＤ４０Ｌ、Ｏｘ４０Ｌ、４−１ＢＢＬ、ＴＲＡＩＬ、ＴＷＥＡＫ、
およびＡｐｏ３Ｌなど）、インターロイキン−１（ＩＬ−１）（ＩＬ−１αおよびＩＬ−
１βが含まれる）、ＩＬ−２、インターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）、ＩＦＮ−α／β、
ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−２１、
ＬＩＦ、ＣＣＬ５、ＧＲＯα、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−１β、マクロファー
ジコロニー刺激因子（ＭＣＳＦ）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳ
Ｆ）、ＣＸＣＬ２、ＣＣＬ２が含まれる。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原
結合フラグメントは、１つ以上の上記の炎症促進性分子の受容体（とりわけ、ＴＮＦ受容
体（ＴＮＦＲ）、ＩＬ−１受容体（ＩＬ−１Ｒ）、またはＩＬ−６受容体（ＩＬ−６Ｒ）
など）に特異的に結合する。
【０１１３】
特定の実施形態では、上述のように、抗体もしくは抗原結合フラグメントまたは他のポ
リペプチドは、ＴＮＦ−αまたはＴＮＦ−βに特異的に結合する。特定の実施形態では、
抗ＴＮＦ抗体または他のＴＮＦ結合ポリペプチドは、アダリムマブ（ヒューミラ（登録商
標））、セルトリズマブペゴール（シムジア（登録商標））、エタネルセプト（エンブレ
ル（登録商標））、ゴリムマブ（シムジア（登録商標））、またはインフリキシマブ（レ
ミケード（登録商標））、Ｄ２Ｅ７、ＣＤＰ５７１、もしくはＣＤＰ８７０、またはその
抗原結合フラグメントもしくは改変体である。いくつかの実施形態では、ＴＮＦ結合ポリ
ペプチドは、可溶性の受容体またはリガンド（ＴＮＲＦＳＦ１０Ｂ、ＴＲＡＩＬ（すなわ
ち、ＣＤ２５３）、ＴＮＦＳＦ１０、ＴＲＡＤＤ（腫瘍壊死因子受容体タイプ１関連デス
ドメインタンパク質）、ＴＲＡＦ（ＴＮＦ受容体関連因子（ＴＲＡＦＳ１〜７が含まれる
））、またはＲＩＰ（リボソーム不活性化タンパク質）など）である。抗ＴＮＦ抗体また
はＴＮＦ結合ポリペプチドを含む結合体を、例えば、本明細書中に記載の種々の炎症状態
の処置で使用することができる。かかるｐ９７結合体を、種々の神経学的な容態または障
害（アルツハイマー病、卒中、外傷性脳損傷（ＴＢＩ）、脊柱狭窄症、急性脊髄損傷、お
よび脊髄圧迫など）の処置で使用することもできる（米国特許第６，０１５，５５７号；
同第６，１７７，０７７号；同第６，４１９，９３４号；同第６，４１９，９４４号；同
第６，５３７，５４９号；同第６，９８２，０８９号；および同第７，２１４，６５８号
を参照のこと）。
【０１１４】
特定の実施形態では、前述のように、抗体または抗原結合フラグメントは、ＩＬ−１α
またはＩＬ−１βに特異的に結合する。特定の実施形態では、抗ＩＬ−１抗体は、カナキ
ヌマブもしくはゲボキズマブまたはＩＬ−１βに特異的に結合するその改変体もしくはフ
ラグメントである。本明細書中に記載のいくつかの炎症状態の中で特に、抗ＩＬ−１抗体
を含むｐ９７結合体を使用して、クリオピリン関連周期性症候群（ＣＡＰＳ）（家族性寒
冷自己炎症症候群、マックル・ウェルズ症候群、および新生児期発症多臓器系炎症性疾患
が含まれる）を処置することができる。
【０１１５】
抗体を、当業者に公知の任意の種々の技術によって調製することができる。例えば、Ｈ
ａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍ
ａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，１９８８
を参照のこと。目的のポリペプチドに特異的なモノクローナル抗体を、例えば、Ｋｏｈｌ
ｅｒ  ａｎｄ  Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６：５１１−５１９，
１９７６の技術およびその改良された技術を使用して調製することができる。ヒト抗体を
発現させるためのマウスなどのトランスジェニック動物を利用した方法も含まれる。例え
ば、Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒら，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １４：８２６
，１９９６；Ｌｏｎｂｅｒｇら，Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  
Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  １１３：４９−１０１，１９９４；およびＬｏｎｂｅｒｇら
，Ｉｎｔｅｒｎａｌ  Ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １３：６５−９３，
１９９５を参照のこと。特定の例には、ＲＥＧＥＮＥＲＥＸ（登録商標）のＶＥＬＯＣＩ
ＭＭＵＮＥ（登録商標）プラットフォームが含まれる（例えば、米国特許第６，５９６，
５４１号を参照のこと）。
【０１１６】
抗体を、ファージディスプレイライブラリーまたは酵母ディスプレイライブラリーの使
用によって生成および同定することもできる（例えば、米国特許第７，２４４，５９２号
；Ｃｈａｏら，Ｎａｔｕｒｅ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ．１：７５５−７６８，２００６を参
照のこと）。利用可能なライブラリーの非限定的な例には、クローン化ライブラリーまた
は合成ライブラリー（ヒト抗体レパートリーの構造多様性が７つの重鎖および７つの軽鎖
可変領域の遺伝子によって示されているヒトコンビナトリアル抗体ライブラリー（ＨｕＣ
ＡＬ）など）が含まれる。これらの遺伝子の組み合わせにより、マスターライブラリー中
に４９のフレームワークが得られる。これらのフレームワーク上への高可変遺伝子カセッ
ト（ＣＤＲ＝相補性決定領域）の重ねあわせにより、膨大なヒト抗体レパートリーを再現
することができる。軽鎖可変領域をコードするヒトドナー起源のフラグメント、重鎖ＣＤ
Ｒ−３、重鎖ＣＤＲ−１の多様性をコードする合成ＤＮＡ、および重鎖ＣＤＲ−２の多様
性をコードする合成ＤＮＡを使用してデザインしたヒトライブラリーも含まれる。使用に
適切な他のライブラリーは、当業者に明らかであろう。本明細書中に記載され、且つ当該
分野で公知のｐ９７ポリペプチドを、精製過程、例えば、アフィニティクロマトグラフィ
工程で使用することができる。
【０１１７】
一定の実施形態では、本明細書中に記載の抗体およびその抗原結合フラグメントには、
ＣＤＲを支持し、ＣＤＲの相互の空間的関係を確定する重鎖および軽鎖フレームワーク領
域（ＦＲ）のセットの間に配置された重鎖および軽鎖のＣＤＲセットが含まれる。本明細
書中で使用する場合、用語「ＣＤＲセット」は、重鎖または軽鎖のＶ領域の３つの超可変
領域をいう。重鎖または軽鎖のＮ末端側から、これらの領域を、それぞれ、「ＣＤＲ１」
、「ＣＤＲ２」、および「ＣＤＲ３」と命名する。したがって、抗原結合部位は、重鎖お
よび軽鎖のＶ領域の各々由来のＣＤＲセットを含む６つのＣＤＲを含む。単一のＣＤＲ（
例えば、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ３）を含むポリペプチドを、本明細書中で、
「分子認識単位」という。多数の抗原−抗体複合体の結晶解析により、ＣＤＲのアミノ酸
残基が結合した抗原に広範に接触し、抗原は重鎖ＣＤＲ３と最も広範に接触することが証
明されている。したがって、分子認識単位は、主に抗原結合部位の特異性を担う。
【０１１８】
本明細書中で使用する場合、用語「ＦＲセット」は、重鎖または軽鎖のＶ領域のＣＤＲ
セットのＣＤＲを取り囲む４つの隣接するアミノ酸配列をいう。いくつかのＦＲ残基は結
合した抗原と接触することができるが、ＦＲ、特にＣＤＲのすぐ隣のＦＲ残基は、主にＶ
領域の抗原結合部位への折り畳みを担う。ＦＲ内で、一定のアミノ残基および一定の構造
特性は非常に高度に保存されている。これに関して、全てのＶ領域配列は、およそ９０ア
ミノ酸残基の内部ジスルフィドループを含む。Ｖ領域が結合部位に折りたたまれると、Ｃ
ＤＲは突出したループモチーフを示し、抗原結合表面が形成される。正確なＣＤＲアミノ
酸配列と無関係にＣＤＲループの一定の「基準」構造に折りたたまれた形状に影響を及ぼ
すＦＲの保存された高増領域が存在すると一般に認識されている。さらに、一定のＦＲ残
基は、抗体の重鎖および軽鎖の相互作用を安定化する非共有結合性のドメイン間接触に関
与することが公知である。
【０１１９】
免疫グロブリン可変ドメインの構造および位置を、Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．ら，Ｓｅｑｕ
ｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒ
ｅｓｔ．４ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ．アメリカ合衆国保健福祉省．１９８７およびその最新
版を参照して決定することができる。
【０１２０】
「モノクローナル抗体」は、均一な抗体集団をいい、ここで、モノクローナル抗体は、
エピトープの選択的結合に関与するアミノ酸（天然に存在するアミノ酸および天然に存在
しないアミノ酸）から構成される。モノクローナル抗体は、高度に特異的で、単一のエピ
トープに指向する。用語「モノクローナル抗体」は、インタクトなモノクローナル抗体お
よび全長モノクローナル抗体だけでなく、そのフラグメント（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａ
ｂ’）２、Ｆｖなど）、一本鎖（ＳｃＦｖ）、その改変体、抗原結合部分を含む融合タン
パク質、ヒト化モノクローナル抗体、キメラモノクローナル抗体、およびエピトープを結
合するために必要な特異性および能力を有する抗原結合フラグメント（エピトープ認識部
位）を含む免疫グロブリン分子の任意の他の改変された立体配置を含む。抗体の供給源や
作製する様式（例えば、ハイブリドーマ、ファージ選択、組み換え発現、トランスジェニ
ック動物）に関して制限されることを意図しない。この用語には、「抗体」の定義におけ
る上記の免疫グロブリン全体およびフラグメントなどが含まれる。
【０１２１】
タンパク質分解酵素パパインは、ＩｇＧ分子を優先的に切断していくつかのフラグメン
トを精製し、そのうちの２つ（Ｆ（ａｂ）フラグメント）はそれぞれインタクトな抗原結
合部位を含む共有結合性ヘテロ二量体を含む。酵素ペプシンによってＩｇＧ分子を切断し
ていくつかのフラグメントを得ることができ、このフラグメントには両方の抗原結合部位
を含むＦ（ａｂ’）２フラグメントが含まれる。本発明の一定の実施形態で用いるＦｖフ
ラグメントを、ＩｇＭの優先的タンパク質分解的切断によって産生することができ、これ
はＩｇＧ免疫グロブリン分子またはＩｇＡ免疫グロブリン分子では稀である。しかし、Ｆ
ｖフラグメントは、より一般的には当該分野で公知の組換え技術を使用して誘導する。Ｆ
ｖフラグメントは、未変性の抗体分子の抗原結合性および結合能力の大半を保持する抗原
結合部位を含む非共有結合性ＶＨ：：ＶＬヘテロ二量体を含む。Ｉｎｂａｒら，ＰＮＡＳ
ＵＳＡ．６９：２６５９−２６６２，１９７２；Ｈｏｃｈｍａｎら，Ｂｉｏｃｈｅｍ．
１５：２７０６−２７１０，１９７６；およびＥｈｒｌｉｃｈら，Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９
：４０９１−４０９６，１９８０を参照のこと。
【０１２２】
一定の実施形態では、一本鎖ＦｖまたはｓｃＦＶ抗体を意図する。例えば、κボディ（
Ｉｌｌら，Ｐｒｏｔ．Ｅｎｇ．１０：９４９−５７，１９９７）；ミニボディ（Ｍａｒｔ
ｉｎら，ＥＭＢＯ  Ｊ  １３：５３０５−９，１９９４）；ダイアボディ（Ｈｏｌｌｉｇ
ｅｒら，ＰＮＡＳ  ９０：６４４４−８，１９９３）；またはヤヌシン（Ｔｒａｕｎｅｃ
ｋｅｒら，ＥＭＢＯ  Ｊ  １０：３６５５−５９，１９９１；およびＴｒａｕｎｅｃｋｅ
ｒら，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｕｐｐｌ．７：５１−５２，１９９２）を、所望の
特異性を有する抗体の選択に関して本出願の教示にしたがった標準的な分子生物学技術を
使用して調製することができる。
【０１２３】
一本鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）ポリペプチドは、ペプチドコードリンカーによって連結されたＶ
ＨおよびＶＬをコードする遺伝子を含む遺伝子融合物から発現された共有結合ＶＨ：：Ｖ
Ｌヘテロ二量体である（Ｈｕｓｔｏｎら（ＰＮＡＳ  ＵＳＡ．８５（１６）：５８７９−
５８８３，１９８８））。天然には凝集しているが化学的には分離している軽鎖および重
鎖のポリペプチドの抗体Ｖ領域からｓＦｖ分子（抗原結合部位の構造と実質的に類似の三
次元構造に折りたたまれるであろう）への変換のための化学構造を識別するための方法は
多数記載されている。例えば、Ｈｕｓｔｏｎらの米国特許第５，０９１，５１３号および
同第５，１３２，４０５号；およびＬａｄｎｅｒらの米国特許第４，９４６，７７８号を
参照のこと。
【０１２４】
一定の実施形態では、本明細書中に記載の抗体は、「ダイアボディ」の形態である。ダ
イアボディはポリペプチドの多量体であり、各ポリペプチドは、免疫グロブリン軽鎖の結
合領域を含む第１のドメインおよび免疫グロブリン重鎖の結合領域を含む第２のドメイン
を含み、この２つのドメインは（例えば、ペプチドリンカーによって）連結されているが
、相互に会合して抗原結合部位を形成することはできない。この抗原結合部位は、多量体
内の１つのポリペプチドの第１のドメインの多量体内の別のポリペプチドの第２のドメイ
ンとの会合によって形成される（ＷＯ９４／１３８０４号）。抗体のｄＡｂフラグメント
は、ＶＨドメインからなる（Ｗａｒｄら，Ｎａｔｕｒｅ  ３４１：５４４−５４６，１９
８９）。ダイアボディおよび他の多価または多特異的フラグメントを、例えば、遺伝子融
合によって構築することができる（ＷＯ９４／１３８０４号；およびＨｏｌｌｉｇｅｒら
，ＰＮＡＳ  ＵＳＡ．９０：６４４４−６４４８，１９９３）を参照のこと）。
【０１２５】
ＣＨ３ドメインに連結したｓｃＦｖを含むミニボディも含まれる（Ｈｕら，Ｃａｎｃｅ
ｒ  Ｒｅｓ．５６：３０５５−３０６１，１９９６を参照のこと）。Ｗａｒｄら，Ｎａｔ
ｕｒｅ．３４１：５４４−５４６，１９８９；Ｂｉｒｄら，Ｓｃｉｅｎｃｅ．２４２：４
２３−４２６，１９８８；Ｈｕｓｔｏｎら，ＰＮＡＳ  ＵＳＡ．８５：５８７９−５８８
３，１９８８）；ＰＣＴ／ＵＳ９２／０９９６５号；ＷＯ９４／１３８０４号；およびＲ
ｅｉｔｅｒら，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．１４：１２３９−１２４５，１９９６も
参照のこと。
【０１２６】
二重特異性抗体を使用すべきである場合、これらは、種々の方法（Ｈｏｌｌｉｇｅｒ  
ａｎｄ  Ｗｉｎｔｅｒ，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．４：
４４６−４４９，１９９３）で製造する（例えば、化学的に調製するかハイブリッドハイ
ブリドーマから調製する）ことができる従来の二重特異性抗体であり得るか、任意の前述
の二重特異性抗体フラグメントであり得る。ダイアボディおよびｓｃＦｖを、Ｆｃ領域を
使用せずに可変ドメインのみを使用して構築し、それにより、高イディオタイプ反応の影
響を潜在的に低下させることができる。
【０１２７】
二重特異性ダイアボディはまた、二重特異性の全抗体と対照的に、大腸菌内で容易に構
築および発現させることができるので、特に有用であり得る。結合特異性が適切なダイア
ボディ（および抗体フラグメントなどの多数の他のポリペプチド）を、ファージディスプ
レイ（ＷＯ９４／１３８０４）を使用してライブラリーから容易に選択することができる
。ダイアボディの一方のアームが、例えば、抗原Ｘに対する特異性を一定に保持する場合
、他方のアームが変動するライブラリーを作製することができ、特異性が適切な抗体が選
択される。二重特異性の全抗体を、ノブ・イントゥ・ホールエンジニアリングによって作
製することができる（Ｒｉｄｇｅｗａｙら，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．，９：６１６−６
２１，１９９６）。
【０１２８】
一定の実施形態では、本明細書中に記載の抗体を、ＵｎｉＢｏｄｙ（登録商標）の形態
で提供することができる。ＵｎｉＢｏｄｙ（登録商標）は、ヒンジ領域が除去されたＩｇ
Ｇ４抗体である（ＧｅｎＭａｂ  Ｕｔｒｅｃｈｔ，Ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓを参
照のこと；例えば、ＵＳ２００９０２２６４２１号も参照のこと）。この抗体テクノロジ
ーにより、現在の小抗体形式よりも治療可能時間域がより長いと予測される安定なより小
型の抗体形式が得られる。ＩｇＧ４抗体は不活性と見なされ、したがって、免疫系と相互
作用しない。完全ヒトＩｇＧ４抗体を、抗体のヒンジ領域の排除によって改変して対応す
るインタクトなＩｇＧ４と比較して明確な安定性を有する半分子フラグメントを得ること
ができる（ＧｅｎＭａｂ，Ｕｔｒｅｃｈｔ）。ＩｇＧ４分子はＵｎｉＢｏｄｙ（登録商標
）上に同種抗原（例えば、疾患標的）に結合することができる領域が１つだけ残存してお
り、したがって、ＵｎｉＢｏｄｙ（登録商標）は標的細胞上のたった１つの部位に一価に
結合する。一定の癌細胞表面抗原について、この１価の結合は、同一の抗原特異性を有す
る２価の抗体を使用して認められるような癌細胞が成長するように刺激する可能性がなく
、それ故、ＵｎｉＢｏｄｙ（登録商標）テクノロジーは、従来の抗体を用いた処置に抵抗
性を示し得るいくつかの癌タイプのための処置選択肢を提供することができる。小型のＵ
ｎｉＢｏｄｙ（登録商標）は、いくつかの癌形態を処置する場合に大きな利点を得ること
ができ、より大きな固形腫瘍により良好に分子が分布し、有効性を増大させる可能性があ
る。
【０１２９】
一定の実施形態では、本明細書中に提供した抗体は、ナノボディの形態を取ることがで
きる。ミニボディは、単一の遺伝子によってコードされ、ほとんど全ての原核生物宿主お
よび真核生物宿主（例えば、大腸菌（米国特許第６，７６５，０８７号を参照のこと）、
カビ（例えば、ＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓまたはＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）、および酵母（
例えば、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ、Ｋｌｕｙｖｅｒｍｙｃｅｓ、Ｈａｎｓｅｎｕｌａ
、またはＰｉｃｈｉａ（米国特許第６，８３８，２５４号を参照のこと））で効率的に産
生される。産生過程は拡大可能であり、何キログラムものナノボディが産生されてきた。
ナノボディを、貯蔵期間の長い既製の溶液として処方することができる。ナノクローン法
（ＷＯ０６／０７９３７２号を参照のこと）は、Ｂ細胞の自動化された高処理選択に基づ
いた所望の標的に対するナノボディの独自の生成方法である。
【０１３０】
一定の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントをヒト化する。これらの実
施形態は、一般に組換え技術を使用して調製され、非ヒト種由来の免疫グロブリン由来の
抗原結合部位を有し、且つヒト免疫グロブリンの構造および／または配列に基づいた分子
の免疫グロブリン構造が残存したキメラ分子をいう。抗原結合部位は、定常ドメイン上に
融合された完全な可変ドメインまたは可変ドメイン中の適切なフレームワーク領域上にグ
ラフティングされたＣＤＲのみのいずれかを含み得る。エピトープ結合部位は、野生型で
あり得るか、１つ以上のアミノ酸置換によって改変することができる。これにより、ヒト
個体中の免疫原としての定常領域が排除されるが、外来可変領域に対する免疫応答の可能
性が残る（ＬｏＢｕｇｌｉｏら，ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  ８６：４２２０−４２２４，１９８
９；Ｑｕｅｅｎら，ＰＮＡＳ  ＵＳＡ．８６：１００２９−１００３３，１９８８；Ｒｉ
ｅｃｈｍａｎｎら，Ｎａｔｕｒｅ．３３２：３２３−３２７，１９８８）。例示的な抗体
のヒト化方法には、米国特許第７，４６２，６９７号に記載の方法が含まれる。
【０１３１】
別のアプローチは、ヒト由来定常領域を提供することだけでなく、再形成してヒト形態
に出来るだけ近づけるけるための可変領域の改変することにも焦点を合わせている。重鎖
および軽鎖の両方の可変領域が、問題のエピトープに対する応答が異なり、且つ結合能力
を決定づける３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、所与の種で比較的保存されており
、且つＣＤＲの足場を提供すると推定されている４つのフレームワーク領域（ＦＲ）が隣
接していることが公知である。特定のエピトープに関して非ヒト抗体を調製する場合、可
変領域を、改変すべきヒト抗体中に存在するＦＲ上に非ヒト抗体由来のＣＤＲをグラフテ
ィングすることによって「再形成」または「ヒト化」することができる。このアプローチ
の種々の抗体への適用については、Ｓａｔｏら，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５３：８５１−
８５６，１９９３；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら，Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２７，１
９８８；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：１５３４−１５３６，１９８
８；Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈら，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ．４：７
７３−３７８３，１９９１；Ｍａｅｄａら，Ｈｕｍａｎ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｈｙｂ
ｒｉｄｏｍａ  ２：１２４−１３４，１９９１；Ｇｏｒｍａｎら，ＰＮＡＳ  ＵＳＡ．８
８：４１８１−４１８５，１９９１；Ｔｅｍｐｅｓｔら，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ
９：２６６−２７１，１９９１；Ｃｏら，ＰＮＡＳ  ＵＳＡ．８８：２８６９−２８７
３，１９９１；Ｃａｒｔｅｒら，ＰＮＡＳ  ＵＳＡ．８９：４２８５−４２８９，１９９
２；およびＣｏら，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：１１４９−１１５４，１９９２によっ
て報告されている。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は、全ＣＤＲ配列が保存されて
いる（例えば、マウス抗体由来の６つ全てのＣＤＲを含むヒト化マウス抗体）。他の実施
形態では、ヒト化抗体は、元の抗体と比較して変化した１つ以上のＣＤＲ（１、２、３、
４、５、６つ）を有し、これらのＣＤＲを、元の抗体由来の１つ以上のＣＤＲ「から誘導
された」１つ以上のＣＤＲとも呼ぶ。
【０１３２】
一定の実施形態では、本発明の抗体はキメラ抗体であり得る。これに関して、キメラ抗
体は、異なる抗体の異種Ｆｃ部分に作動可能連結されたか、そうでなければ融合された抗
体の抗原結合フラグメントから構成される。一定の実施形態では、異種Ｆｃドメインはヒ
ト起源である。他の実施形態では、異種Ｆｃドメインは、親抗体由来の異なるＩｇクラス
（ＩｇＡ（サブクラスＩｇＡ１およびＩｇＡ２が含まれる）、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ（
サブクラスＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４が含まれる）、およびＩｇＭ
が含まれる）に由来し得る。さらなる実施形態では、異種Ｆｃドメインは、１つ以上の異
なるＩｇクラス由来のＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメインから構成され得る。ヒト化抗
体に関して上述のように、キメラ抗体の抗原結合フラグメントは、本明細書中に記載の抗
体の１つ以上のＣＤＲのみ（例えば、本明細書中に記載の抗体の１、２、３、４、５、ま
たは６つのＣＤＲ）を含み得るか、全可変ドメイン（ＶＬ、ＶＨ、または両方）を含み得
る。
【０１３３】
ペプチド模倣物。一定の実施形態は、「ペプチド模倣物」を使用する。ペプチドアナロ
グは、テンプレートペプチドに類似の性質を有する非ペプチド薬として医薬品産業で一般
的に使用されている。これらの非ペプチド化合物タイプを、「ペプチド模倣物」または「
ペプチドの模倣物」と呼ぶ（Ｌｕｔｈｍａｎら，Ａ  Ｔｅｘｔｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｄｒｕｇ
Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，１４：３８６−４０６，２ｎｄ  Ｅ
ｄ．，Ｈａｒｗｏｏｄ  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，１９９６；Ｊｏａｃ
ｈｉｍ  Ｇｒａｎｔｅ，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．，３３：１６
９９−１７２０，１９９４；Ｆａｕｃｈｅｒｅ，Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｒｅｓ．，１５：２
９，１９８６；Ｖｅｂｅｒ  ａｎｄ  Ｆｒｅｉｄｉｎｇｅｒ  ＴＩＮＳ，ｐ．３９２（１
９８５）；およびＥｖａｎｓら，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３０：２２９，１９８７）。ペ
プチドの模倣物は、ペプチドの生物学的活性を模倣するが、もはや化学的性質がペプチド
ではない分子である。ペプチド模倣化合物は、当該分野で公知であり、例えば、米国特許
第６，２４５，８８６号に記載されている。
【０１３４】
ペプチド模倣物は、抗体について記載の「特異的結合」特性を有し得る（前述）。例え
ば、ペプチド模倣物は、本明細書中に記載の標的に、少なくとも約０．０１、０．０５、
０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、
３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８
、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、４０、
または５０ｎＭの結合親和性（Ｋｄ）で特異的に結合することができる。いくつかの実施
形態では、ペプチド模倣物は、細胞表面受容体または他の細胞表面タンパク質に特異的に
結合する。いくつかの実施形態では、ペプチド模倣物は、少なくとも１つの本明細書中に
記載の癌関連抗原に特異的に結合する。特定の実施形態では、ペプチド模倣物は、少なく
とも１つの本明細書中に記載の神経系関連抗原、疼痛関連抗原、および／または自己免疫
関連抗原に特異的に結合する。
【０１３５】
ペプトイド。本発明の結合体はまた、「ペプトイド」を含む。ペプチドのペプトイド誘
導体は、生物学的活性に重要な構造決定基を保持するがペプチド結合が排除され、それに
よりタンパク質分解耐性が付与された改変ペプチドの別の形態を示す（Ｓｉｍｏｎら，Ｐ
ＮＡＳ  ＵＳＡ．８９：９３６７−９３７１，１９９２）。ペプトイドは、Ｎ置換グリシ
ンのオリゴマーである。それぞれ天然アミノ酸の側鎖に対応する多数のＮ−アルキル基が
記載されている。本発明のペプチドの模倣物には、少なくとも１つのアミノ酸、少数のア
ミノ酸、または全アミノ酸残基が対応するＮ置換グリシンに置換された化合物が含まれる
。ペプトイドライブラリーは、例えば、米国特許第５，８１１，３８７号に記載されてい
る。
【０１３６】
ペプトイドは、抗体について記載の「特異的結合」特性を有し得る（前述）。例えば、
ペプトイドは、本明細書中に記載の標的に、少なくとも約０．０１、０．０５、０．１、
０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、
５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、
２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、４０、または５
０ｎＭの結合親和性（Ｋｄ）で特異的に結合することができる。一定の実施形態では、ペ
プトイドは、細胞表面受容体または他の細胞表面タンパク質に特異的に結合する。いくつ
かの実施形態では、ペプトイドは、少なくとも１つの本明細書中に記載の癌関連抗原に特
異的に結合する。特定の実施形態では、ペプトイドは、少なくとも１つの本明細書中に記
載の神経系関連抗原、疼痛関連抗原、および／または自己免疫関連抗原に特異的に結合す
る。
【０１３７】
アプタマー。本発明のｐ９７結合体はまた、アプタマーを含む（例えば、Ｅｌｌｉｎｇ
ｔｏｎら，Ｎａｔｕｒｅ．３４６，８１８−２２，１９９０；およびＴｕｅｒｋら，Ｓｃ
ｉｅｎｃｅ．２４９，５０５−１０，１９９０を参照のこと）。アプタマーの例には、核
酸アプタマー（例えば、ＤＮＡアプタマー、ＲＮＡアプタマー）およびペプチドアプタマ
ーが含まれる。核酸アプタマーは、一般に、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ選択ラウンドの繰り返しま
たは等価な方法（ＳＥＬＥＸ（試験管内進化法）など）によって操作して、小分子、タン
パク質、核酸などの種々の分子標的、さらには細胞、組織、および器官に結合する核酸種
をいう。例えば、米国特許第６，３７６，１９０号；および同第６，３８７，６２０号を
参照のこと。
【０１３８】
ペプチドアプタマーは、典型的には、両末端がタンパク質足場に付着した可変ペプチド
ループ（典型的にはペプチドアプタマーの結合親和性が抗体の結合親和性に匹敵するレベ
ル（例えば、ナノモル範囲）に増加する二重の構造的拘束）を含む。一定の実施形態では
、可変ループ長は約１０〜２０アミノ酸（その間の全ての整数が含まれる）から構成され
得、足場は良好な溶解性および緻密性を有する任意のタンパク質を含むことができる。一
定の例示的実施形態は、足場タンパク質として細菌タンパク質チオレドキシン−Ａを利用
することができ、このタンパク質は、可変ループが還元活性部位内に挿入され（野生タン
パク質中の−Ｃｙｓ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓ−ループ）、２つの外側のシステイン鎖が
ジスルフィド架橋を形成することができる。ペプチドアプタマーの同定方法は、例えば、
米国特許出願公開第２００３／０１０８５３２号に記載されている。
【０１３９】
アプタマーは、抗体について記載の「特異的結合」特性を有し得る（前出）。例えば、
アプタマーは、本明細書中に記載の標的と少なくとも約０．０１、０．０５、０．１、０
．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５
、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２
０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、４０、または５０
ｎＭの結合親和性（Ｋｄ）で特異的に結合することができる。特定の実施形態では、アプ
タマーは、細胞表面受容体または他の細胞表面タンパク質に特異的に結合する。いくつか
の実施形態では、アプタマーは、少なくとも１つの本明細書中に記載の癌関連抗原に特異
的に結合する。特定の実施形態では、アプタマーは、少なくとも１つの本明細書中に記載
の神経系関連抗原、疼痛関連抗原、および／または自己免疫関連抗原に特異的に結合する
。
【０１４０】
検出可能な実体。いくつかの実施形態では、ｐ９７フラグメントを、「検出可能な実体
」に結合体化させる。例示的な検出可能な実体には、ヨウ素ベースの標識、放射性同位体
、フルオロフォア／蛍光色素、およびナノ粒子が含まれるが、これらに限定されない。
【０１４１】
例示的なヨウ素ベースの標識には、ジアトリゾ酸（Ｈｙｐａｑｕｅ（登録商標）、ＧＥ
Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）およびそのアニオン型ジアトリゾアートが含まれる。ジアトリ
ゾ酸は、ＣＴスキャンなどの先進Ｘ線技術で使用される放射線造影剤である。下記のヨウ
素放射性同位体も含まれる。
【０１４２】
検出可能な実体として使用することができる例示的な放射性同位体には、３２Ｐ、３３
Ｐ、３５Ｓ、３Ｈ、１８Ｆ、１１Ｃ、１３Ｎ、１５Ｏ、１１１Ｉｎ、１６９Ｙｂ、９９ｍ
ＴＣ、５５Ｆｅ、およびヨウ素同位体（１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、および１３１Ｉ
など）が含まれる。これらの放射性同位体は、特定のプロトコールのニーズに適合するよ
うに調整することができる異なる半減期、減衰型、およびエネルギーレベルを有する。こ
れらの一定の放射性同位体を、例えば、かかる組織の医学的画像化を改善するためにｐ９
７ポリペプチドに結合体化することによってＣＮＳ組織を選択的に標的するかより良好に
標的にすることができる。
【０１４３】
直接検出可能な実体として使用することができるフルオロフォアまたは蛍光色素の例に
は、フルオレセイン、テトラメチルローダミン、テキサスレッド、およびオレゴングリー
ン（登録商標）などが含まれる（例えば、Ｈａｕｇｌａｎｄ，Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  
Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ  Ｐｒｏｂｅｓ−９ｔｈ  Ｅｄ．，２００２，Ｍｏｌｅｃ．Ｐｒ
ｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｅｕｇｅｎｅ  ＯＲ；Ｈａｕｇｌａｎｄ，Ｔｈｅ  Ｈａｎｄｂｏｏ
ｋ：Ａ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ  Ｐｒｏｂｅｓ  ａｎｄ  Ｌａｂｅ
ｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ−１０ｔｈ  Ｅｄ．，２００５，Ｉｎｖｉｔｒｏｇ
ｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）。発光色素または他の検出可能な色素も含まれる。色素
による発光は、可視光または不可視光（紫外線または赤外線など）であり得る。例示的な
実施形態では、色素は、蛍光共鳴エネルギー転移（ＦＲＥＴ）色素；キサンテン色素（フ
ルオレセインおよびローダミンなど）；α位またはβ位にアミノ基を有する色素（ナフチ
ルアミン色素、１−ジメチルアミノナフチル−５−スルホナート、１−アニリノ−８−ナ
フタレンスルホナート（ｎａｐｈｔｈａｌｅｎｄｅ  ｓｕｌｆｏｎａｔｅ）、および２−
ｐ−トルイジニル（ｔｏｕｉｄｉｎｙｌ）−６−ナフタレンスルホナートなど）；３−フ
ェニル−７−イソシアナトクマリンを有する色素；アクリジン（９−イソチオシアナトア
クリジンおよびアクリジンオレンジなど）；ピレン、ベンゾオキサジアゾール（ｂｅｎｓ
ｏｘａｄｉａｚｏｌｅ）、およびスチルベン；３−（ε−カルボキシペンチル）−３’−
エチル−５，５’−ジメチルオキサカルボシアニン（ＣＹＡ）を有する色素；６−カルボ
キシフルオレセイン（ＦＡＭ）；５および６−カルボキシローダミン−１１０（Ｒ１１０
）；６−カルボキシローダミン−６Ｇ（Ｒ６Ｇ）；Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−
６−カルボキシローダミン（ＴＡＭＲＡ）；６−カルボキシ−Ｘ−ローダミン（ＲＯＸ）
；６−カルボキシ−４’，５’−ジクロロ−２’，７’−ジメトキシフルオレセイン（Ｊ
ＯＥ）；ＡＬＥＸＡ  ＦＬＵＯＲ（商標）；Ｃｙ２；テキサスレッドおよびローダミンレ
ッド；６−カルボキシ−２’，４，７，７’−テトラクロロフルオレセイン（ＴＥＴ）；
６−カルボキシ−２’，４，４’，５’，７，７’−ヘキサクロロフルオレセイン（ＨＥ
Ｘ）；５−カルボキシ−２’，４’，５’，７’−テトラクロロフルオレセイン（ＺＯＥ
）；ＮＡＮ；ＮＥＤ；Ｃｙ３；Ｃｙ３．５；Ｃｙ５；Ｃｙ５．５；Ｃｙ７；およびＣｙ７
．５；ＩＲ８００ＣＷ、ＩＣＧ、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ３５０；Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏ
ｒ４８８；Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ５３２；Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ５４６；Ａｌｅｘａ
Ｆｌｕｏｒ５６８；Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ５９４；Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ６４７；
Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ６８０、またはＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ７５０であり得る。一定
の実施形態は、検出可能な実体（フルオロフォア（例えば、オレゴングリーン（登録商標
）、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ４８８）など）で標識した化学療法薬（例えば、パクリタキ
セル、アドリアマイシン）への結合体化を含む。
【０１４４】
ナノ粒子は、通常、約１〜１０００ｎｍの範囲のサイズであり、金粒子、銀粒子、およ
び量子ドットなどの多様な化学構造が含まれる。白色光をある入射角で照射した場合、約
４０〜１２０ｎｍの範囲の銀または金のナノ粒子は高強度で単色光を散乱するであろう。
散乱光の波長は、粒子サイズに依存する。ごく近接した４〜５種の異なる粒子は各々単色
光を散乱し、これらが重ね合わされた場合に特異的な固有の色が得られるであろう。銀粒
子または金粒子などの誘導体化ナノ粒子を、広範囲の分子（タンパク質、抗体、小分子、
受容体リガンド、および核酸が含まれる）に付着させることができる。ナノ粒子の具体例
には、金属ナノ粒子および金属ナノシェル（金粒子、銀粒子、銅粒子、白金粒子、カルシ
ウム粒子、複合粒子、金中空球、金コーティングしたシリカナノシェル、およびシリカコ
ーティングした金シェルなど）が含まれる。シリカ、ラテックス、ポリスチレン、ポリカ
ルボナート、ポリアクリラート、ＰＶＤＦナノ粒子、およびこれらの任意の材料の着色粒
子も含まれる。
【０１４５】
量子ドットは、広範な波長にわたる光によって励起可能な直径約１〜５ｎｍの蛍光結晶
である。適切な波長の光による励起の際、これらの結晶は単色光などを発光し、波長はそ
の化学組成およびサイズに依存する。ＣｄＳｅ、ＺｎＳｅ、ＩｎＰ、またはＩｎＡｓなど
の量子ドットは固有の光学的性質を有し、これらおよび類似の量子ドットは多数の商業的
供給元（例えば、ＮＮ−Ｌａｂｓ，Ｆａｙｅｔｔｅｖｉｌｌｅ，ＡＲ；Ｏｃｅａｎ  Ｎａ
ｎｏｔｅｃｈ，Ｆａｙｅｔｔｅｖｉｌｌｅ，ＡＲ；Ｎａｎｏｃｏ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉ
ｅｓ，Ｍａｎｃｈｅｓｔｅｒ，ＵＫ；Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，
ＭＯ）から利用可能である。
【０１４６】
ポリペプチド改変体およびフラグメント。一定の実施形態は、名称によるか配列識別子
を参照して記載される本明細書中に記載の基準ポリペプチド（ｐ９７ポリペプチドおよび
ポリペプチドベースの薬剤（例えば、抗体）が含まれる）の改変体および／またはフラグ
メントを含む。これらのポリペプチドの野生型配列または最も一般的な配列は当該分野で
周知であり、本明細書中に記載の改変体およびフラグメントとの比較のために使用するこ
とができる。
【０１４７】
ポリペプチド「改変体」は、この用語を本明細書中で使用する場合、１つ以上の置換、
欠失、付加、および／または挿入によって本明細書中に具体的に開示のポリペプチドと典
型的に異なるポリペプチドである。改変体ポリペプチドは生物学的に活性である。すなわ
ち、これらは基準ポリペプチドの酵素活性または結合活性を保有し続ける。かかる改変体
は、例えば、遺伝子多型および／または人為的操作に起因し得る。
【０１４８】
多くの場合、生物学的に活性な改変体は、１つ以上の保存的置換を含むであろう。「保
存的置換」は、あるアミノ酸を、ペプチド化学分野の当業者がポリペプチドの二次構造お
よびハイドロパシー特性が実質的に不変であると予想されるような類似の性質を有する別
のアミノ酸と置換することである。上記のように、本発明のポリヌクレオチドおよびポリ
ペプチドの構造を修飾し、所望の特徴を有する改変体ポリペプチドまたは誘導ポリペプチ
ドをコードする機能的分子を依然として得ることができる。本発明のポリペプチドの等価
であるかさらに改良された改変体または一部を作製するためにポリペプチドのアミノ酸配
列を変更することが望ましい場合、当業者は、典型的には、以下の表Ａにしたがって、コ
ードＤＮＡ配列の１つ以上のコドンを変化させるであろう。
【０１４９】
【表１−１】
2019147800.tif 000003
【０１５０】
例えば、一定のアミノ酸を、例えば、抗体の抗原結合領域または基質分子上の結合部位
などの構造との相互作用的結合能力を相当に喪失することなく、タンパク質構造中の他の
アミノ酸と置換することができる。タンパク質の生物学的機能活性を定義するのはタンパ
ク質の相互作用能力および相互作用性であるので、タンパク質配列、そして勿論その根底
にあるＤＮＡコード配列中で一定のアミノ酸配列置換を行うことができ、それにもかかわ
らず、類似の性質を有するタンパク質が得られる。したがって、開示の組成物のペプチド
配列または前記ペプチドをコードする対応するＤＮＡ配列においてその有用性を大きく喪
失することなく種々の変更を行うことができることが期待される。
【０１５１】
かかる変化の作製において、アミノ酸のハイドロパシー指標を考慮することができる。
タンパク質に相互作用性の生物学的機能を付与する際のアミノ酸ハイドロパシー指標の重
要性は、当該分野で一般に理解されている（Ｋｙｔｅ  ＆  Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅ，１９８
２（本明細書中で参考として援用される））。アミノ酸の相対的なハイドロパシーは、得
られたタンパク質の二次構造に依存し、一方でタンパク質の他の分子（例えば、酵素、基
質、受容体、ＤＮＡ、抗体、および抗原など）との相互作用を定義することを認めている
。各アミノ酸は、疎水性および電荷特性に基づいてハイドロパシー指標が割り当てられて
いる（Ｋｙｔｅ  ＆  Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅ、１９８２）。これらの値は以下である：イソ
ロイシン（＋４．５）；バリン（＋４．２）；ロイシン（＋３．８）；フェニルアラニン
（＋２．８）；システイン（＋２．５）；メチオニン（＋１．９）；アラニン（＋１．８
）；グリシン（−０．４）；トレオニン（−０．７）；セリン（−０．８）；トリプトフ
ァン（−０．９）；チロシン（−１．３）；プロリン（−１．６）；ヒスチジン（−３．
２）；グルタミン酸塩（−３．５）；グルタミン（−３．５）；アスパラギン酸塩（−３
．５）；アスパラギン（−３．５）；リジン（−３．９）；およびアルギニン（−４．５
）。一定のアミノ酸を類似のハイドロパシーの指標またはスコアを有する他のアミノ酸と
置換することができ、それにより、依然として類似の生物学的活性を有するタンパク質が
得られる（すなわち、依然として生物学的機能が等価のタンパク質が得られる）ことが当
該分野で公知である。かかる変化の作製において、そのハイドロパシー指標が±２以内で
あるアミノ酸との置換が好ましく、±１以内が特に好ましく、±０．５以内がさらに特に
好ましい。
【０１５２】
類似のアミノ酸の置換を親水性に基いて有効に行うことができることも当該分野で理解
される。米国特許第４，５５４，１０１号（その全体が本明細書中で参考として特に援用
される）は、タンパク質の最も高い局所平均親水性は、その隣接アミノ酸の親水性に支配
されるので、そのタンパク質の生物学的性質と相関すると述べている。米国特許第４，５
５４，１０１号に詳述のように、以下の親水性値がアミノ酸残基に割り当てられている：
アルギニン（＋３．０）；リジン（＋３．０）；アスパラギン酸塩（＋３．０±１）；グ
ルタミン酸塩（＋３．０±１）；セリン（＋０．３）；アスパラギン（＋０．２）；グル
タミン（＋０．２）；グリシン（０）；トレオニン（−０．４）；プロリン（−０．５±
１）；アラニン（−０．５）；ヒスチジン（−０．５）；システイン（−１．０）；メチ
オニン（−１．３）；バリン（−１．５）；ロイシン（−１．８）；イソロイシン（−１
．８）；チロシン（−２．３）；フェニルアラニン（−２．５）；トリプトファン（−３
．４）。あるアミノ酸を類似の親水性値を有する別のアミノ酸と置換することができ、そ
れにより、依然として生物学的に等価な、特に免疫学的に等価なタンパク質が得られると
理解される。かかる変化において、その親水性値が±２以内のアミノ酸置換が好ましく、
±１以内が特に好ましく、±０．５以内がさらに特に好ましい。
【０１５３】
したがって、上記で概説のように、アミノ酸置換は、一般に、アミノ酸側鎖置換基の相
対的類似性（例えば、その疎水性、親水性、電荷、およびサイズなど）に基づく。種々の
上記特徴を考慮した例示的な置換は当業者に周知であり、以下が含まれる：アルギニンお
よびリジン；グルタミン酸塩およびアスパラギン酸塩；セリンおよびトレオニン；グルタ
ミンおよびアスパラギン；ならびにバリン、ロイシン、およびイソロイシン。
【０１５４】
アミノ酸置換を、残基の極性、電荷、溶解性、疎水性、親水性、および／または両親媒
性の類似性に基づいてさらに行うことができる。例えば、負電荷アミノ酸には、アスパラ
ギン酸およびグルタミン酸が含まれ；正電荷アミノ酸にはリジンおよびアルギニンが含ま
れ；類似の親水性値を有する無電荷極性頭部基を有するアミノ酸には、ロイシン、イソロ
イシン、およびバリン；グリシンおよびアラニン；アスパラギンおよびグルタミン；なら
びにセリン、トレオニン、フェニルアラニン、およびチロシンが含まれる。保存的変化を
示し得る他のアミノ酸群には、以下が含まれる：（１）ａｌａ、ｐｒｏ、ｇｌｙ、ｇｌｕ
、ａｓｐ、ｇｌｎ、ａｓｎ、ｓｅｒ、ｔｈｒ；（２）ｃｙｓ、ｓｅｒ、ｔｙｒ、ｔｈｒ；
（３）ｖａｌ、ｉｌｅ、ｌｅｕ、ｍｅｔ、ａｌａ、ｐｈｅ；（４）ｌｙｓ、ａｒｇ、ｈｉ
ｓ；ａｎｄ（５）ｐｈｅ、ｔｙｒ、ｔｒｐ、ｈｉｓ。
【０１５５】
改変体は、非保存的変化も含み得るか、その代わりに含み得る。１つの好ましい実施形
態では、改変体ポリペプチドは、約１０、９、８、７、６、５、４、３、２アミノ酸未満
、またはさらに１アミノ酸の置換、欠失、または付加が未変性の配列と異なる。改変体を
、例えば、ポリペプチドの免疫原性、二次構造、酵素活性、および／またはハイドロパシ
ーへの影響が最小のアミノ酸の欠失または付加によって改変することも（その代わりに行
うことも）できる。
【０１５６】
一定の実施形態では、ＤＳＳＨＡＦＴＬＤＥＬＲ（配列番号１３）の改変体は、以下の
表Ｂに示す他の生物由来のｐ９７配列に基づき得る。ヒト配列と比較した改変体アミノ酸
に下線を引いている。
【０１５７】
【表１−２】
2019147800.tif 000004
【０１５８】
【表１−３】
2019147800.tif 000005
【０１５９】
【表１−４】
2019147800.tif 000006
【０１６０】
それ故、一定の実施形態では、ｐ９７ペプチドは、表Ｂ中の配列を含むか、この配列か
らなるか、本質的にこの配列からなる。特定の態様では、ｐ９７ペプチドは、ＤＳＳＨＡ
ＦＴＬＤＥＬＲ（配列番号１３）ペプチドのＣ末端に短いα−ヘリックス（ＬＤＥＬ）を
保持している。
【０１６１】
一定の実施形態では、ポリペプチド配列は、およそ、少なくともおよそ、またはおよそ
以下の数値まで：５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１
７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０
、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、
４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８
５、９０、９５、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、
１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、
２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、
３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、
４８０、４９０、５００、５１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、
５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、
６８０、６９０、７００、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、
７７０、７８０、７９０、８００、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、
８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、
９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、１０００、またはそれを超える連続アミノ酸
長（その間の全ての整数が含まれる）であり、基準配列の全てまたは一部を含むことがで
きる（例えば、配列表、表１〜７、表Ｂ、図２〜６および９を参照のこと）。
【０１６２】
他の特定の実施形態では、ポリペプチド配列は、約またはわずか約５、６、７、８、９
、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、
２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３
６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９
、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１
２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２
２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３
２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４
２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、５１０、５
２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６
２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７
２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８００、８
１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９
００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、１
０００、またはそれを超える連続アミノ酸（その間の全ての範囲が含まれる）からなり、
基準配列の全てまたは一部を含むことができる（例えば、配列表、表１〜７、表Ｂ、図２
〜６および９を参照のこと）。
【０１６３】
さらに他の特定の実施形態では、ポリペプチド配列は、約１０〜１０００、１０〜９０
０、１０〜８００、１０〜７００、１０〜６００、１０〜５００、１０〜４００、１０〜
３００、１０〜２００、１０〜１００、１０〜５０、１０〜４０、１０〜３０、１０〜２
０、２０〜１０００、２０〜９００、２０〜８００、２０〜７００、２０〜６００、２０
〜５００、２０〜４００、２０〜３００、２０〜２００、２０〜１００、２０〜５０、２
０〜４０、２０〜３０、５０〜１０００、５０〜９００、５０〜８００、５０〜７００、
５０〜６００、５０〜５００、５０〜４００、５０〜３００、５０〜２００、５０〜１０
０、１００〜１０００、１００〜９００、１００〜８００、１００〜７００、１００〜６
００、１００〜５００、１００〜４００、１００〜３００、１００〜２００、２００〜１
０００、２００〜９００、２００〜８００、２００〜７００、２００〜６００、２００〜
５００、２００〜４００、または２００〜３００の連続アミノ酸（その間の全ての範囲が
含まれる）であり、基準配列の全てまたは一部を含む。一定の実施形態では、短縮ポリペ
プチドが基準ポリペプチドの結合特性および／または活性を保持する限り、任意の基準ポ
リペプチドのＣ末端領域またはＮ末端領域を、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、
１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、１
００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２
００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７
００、７５０、または８００、またはそれを超えるアミノ酸、または約１０〜５０、２０
〜５０、５０〜１００、１００〜１５０、１５０〜２００、２００〜２５０、２５０〜３
００、３００〜３５０、３５０〜４００、４００〜４５０、４５０〜５００、５００〜５
５０、５５０〜６００、６００〜６５０、６５０〜７００、７００〜７５０、７５０〜８
００、またはそれを超えるアミノ酸（その間の全ての整数および範囲（例えば、１０１、
１０２、１０３、１０４、１０５）が含まれる）を短縮することができる。典型的には、
生物学的に活性なフラグメントは、由来する生物学的に活性な基準ポリペプチドの活性の
約１％、約５％、約１０％、約２５％、または約５０％も有する。
【０１６４】
一般に、改変体は、基準ポリペプチド配列に対して少なくとも約３０％、４０％、５０
％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２
％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の類似性または配列同一
性または配列相同性を示すであろう。さらに、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、
１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、３０、４０、５
０、６０、７０、８０、９０、１００、またはそれを超えるアミノ酸の付加（例えば、Ｃ
末端付加、Ｎ末端付加、両方）、欠失、短縮、挿入、または置換によって未変性配列また
は親配列と異なるが、親または基準のポリペプチド配列の性質または活性を保持する配列
が意図される。
【０１６５】
いくつかの実施形態では、改変体ポリペプチドは、基準配列と少なくとも１つであるが
、５０、４０、３０、２０、１５、１０、８、６、５、４、３、または２アミノ酸残基未
満が異なる。他の実施形態では、改変体ポリペプチドは、基準配列と少なくとも１％であ
るが、２０％、１５％、１０％、または５％未満の残基が異なる。（この比較にアライン
メントが必要である場合、配列を類似性が最大になるようにアラインメントしなければな
らない。欠失または挿入によって「除外された」配列（すなわち、ミスマッチ）を相違と
見なす）
配列間の配列類似性および配列同一性（これらの用語を本明細書中で交換可能に使用す
る）の計算を以下のように行う。２つのアミノ酸配列または２つの核酸配列の同一率を決
定するために、配列を最適に比較されるようにアラインメントする（例えば、第１および
第２のアミノ酸配列または核酸配列内の一方または両方にアラインメントを最適にするた
めのギャップを挿入することができ、比較のために非相同配列を無視することができる）
。一定の実施形態では、比較のためにアラインメントした基準配列の長さは、基準配列の
長さの少なくとも３０％、好ましくは少なくとも４０％、より好ましくは少なくとも５０
％、６０％、さらにより好ましくは少なくとも７０％、８０％、９０％、１００％である
。次いで、対応するアミノ酸の位置またはヌクレオチドの位置でアミノ酸残基またはヌク
レオチドを比較する。第１の配列中の位置が第２の配列中の対応する位置と同一のアミノ
酸残基またはヌクレオチドで占められる場合、分子はその位置で同一である。
【０１６６】
２配列間の同一率は、２配列の最適なアライメントのために挿入する必要があるギャッ
プの数および各ギャップの長さを考慮して、これらの配列によって共有される同一の位置
の数の関数である。
【０１６７】
配列の比較および２配列間の同一率の決定を、数学アルゴリズムを使用して行うことが
できる。１つの好ましい実施形態では、２アミノ酸配列間の同一率を、ＧＣＧソフトウェ
アパッケージ内のＧＡＰプログラム内に組み込まれたＮｅｅｄｌｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｗｕ
ｎｓｃｈ（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４４−４５３，１９７０）アルゴリズムを使
用し、Ｂｌｏｓｓｕｍ６２行列またはＰＡＭ２５０行列のいずれか、ならびにギャップの
重み１６、１４、１２、１０、８、６、または４および長さの重み１、２、３、４、５、
または６を使用して決定する。さらに別の好ましい実施形態では、２ヌクレオチド配列間
の同一率を、ＧＣＧソフトウェアパッケージ内のＧＡＰプログラムを使用し、ＮＷＳｇａ
ｐｄｎａ．ＣＭＰ行列ならびにギャップの重み４０、５０、６０、７０、または８０およ
び長さの重み１、２、３、４、５、または６を使用して決定する。特に好ましいパラメー
タセット（および他で特定しない限り使用すべきセット）は、ギャップペナルティ１２、
ギャップ伸長ペナルティ４、およびフレームシフトギャップペナルティ５を使用したＢｌ
ｏｓｓｕｍ  ６２スコアリング行列である。
【０１６８】
２つのアミノ酸配列またはヌクレオチド配列間の同一率を、ＡＬＩＧＮプログラム（バ
ージョン２．０）に組み込まれているＥ．Ｍｅｙｅｒｓ  ａｎｄ  Ｗ．Ｍｉｌｌｅｒのア
ルゴリズム（Ｃａｂｉｏｓ．４：１１−１７，１９８９）を使用し、ＰＡＭ１２０重み残
基表、ギャップ長さペナルティ１２、およびギャップペナルティ４を使用して決定するこ
とができる。
【０１６９】
本明細書中に記載の核酸配列およびタンパク質配列を、公的データベースを検索するた
めの「問い合わせ配列」として使用して、例えば、他のファミリーメンバーまたは関連配
列を同定することができる。Ａｌｔｓｃｈｕｌら（１９９０，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ，２
１５：４０３−１０）のＮＢＬＡＳＴプログラムおよびＸＢＬＡＳＴプログラム（バージ
ョン２．０）を使用してかかる検索を行うことができる。ＢＬＡＳＴヌクレオチド検索を
、ＮＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝１００、ワードレングス＝１２を使用して行い、本
発明の核酸分子と相同なヌクレオチド配列を得ることができる。ＢＬＡＳＴタンパク質検
索を、ＸＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝５０、ワードレングス＝３を使用して行い、本
発明のタンパク質分子と相同なアミノ酸配列を得ることができる。比較のためのギャップ
挿入アラインメントを得るために、Ａｌｔｓｃｈｕｌら（Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  
Ｒｅｓ．２５：３３８９−３４０２，１９９７）に記載のようにＧａｐｐｅｄ  ＢＬＡＳ
Ｔを利用することができる。ＢＬＡＳＴプログラムおよびＧａｐｐｅｄ  ＢＬＡＳＴプロ
グラムを利用する場合、各プログラム（例えば、ＸＢＬＡＳＴおよびＮＢＬＡＳＴ）のデ
フォルトパラメータを使用することができる。
【０１７０】
１つの実施形態では、上述の通り、ポリヌクレオチドおよび／またはポリペプチドを、
ＢＬＡＳＴアラインメントツールを使用して評価することができる。局所アラインメント
は単純に配列セグメント対からなり、各配列由来の１つを比較する。Ｓｍｉｔｈ−Ｗａｔ
ｅｒｍａｎアルゴリズムまたはＳｅｌｌｅｒｓアルゴリズムの修正により、伸長またはト
リミングによってそのスコアを改善することができない全てのセグメント対（高スコアリ
ングセグメント対（ＨＳＰ）と呼ばれる）が見出されるであろう。ＢＬＡＳＴアラインメ
ントの結果は、偶然のみからＢＬＡＳＴスコアを予想することができる見込みを示すため
の統計的尺度を含む。
【０１７１】
生スコアＳを各アラインメントした配列に関連するギャップ数および置換数から計算し
、類似性スコアが高いほどアラインメントの有意性が高くなる。置換スコアは参照表から
得られる（ＰＡＭ、ＢＬＯＳＵＭを参照のこと）。
【０１７２】
ギャップスコアを、典型的には、Ｇ（ギャップ開始ペナルティ）およびＬ（ギャップ伸
長ペナルティ）の和として計算する。ギャップの長さｎについて、ギャップコストはＧ＋
Ｌｎであろう。ギャップコスト（ＧおよびＬ）の選択は経験によるが、通例ではＧについ
ては高値（１０〜１５）（例えば、１１）およびＬについては低値（１〜２）（例えば、
１）を選択する。
【０１７３】
ビットスコアＳ’は生アラインメントスコアＳに由来し、これは使用したスコアリング
システムの統計的特性が考慮されている。ビットスコアをスコアリングシステムに関して
正規化し、したがって、このスコアを使用して異なる検索由来のアラインメントスコアを
比較することができる。用語「ビットスコア」および「類似度スコア」を、交換可能に使
用する。ビットスコアから、アラインメントの優良度が示され、このスコアが高いほどア
ラインメントが優良である。
【０１７４】
Ｅ値（すなわち期待値）は、類似スコアを有する配列がデータベース中に偶然に生じる
見込みを示す。これは、データベース中に偶然起こると期待されるＳと等しいかより良好
なスコアを有する異なるアラインメント数の予想である。Ｅ値が小さいほどアラインメン
トは有意である。例えば、Ｅ値がｅ−１１７のアラインメントは、類似のスコアを有する
配列が単純に偶然に起こる可能性が極めて低いことを意味する。さらに、アミノ酸のラン
ダム対をアラインメントするための期待スコアは負である必要があり、そうでなければ長
いアラインメントはアラインメントしたセグメントが関連するかどうかとは無関係に高ス
コアを有する傾向があるであろう。さらに、ＢＬＡＳＴアルゴリズムは、適切な置換行列
、ヌクレオチド、またはアミノ酸を使用し、ギャップ挿入アラインメントについてはギャ
ップ作製ペナルティおよびギャップ伸長ペナルティを使用する。例えば、ＢＬＡＳＴアラ
インメントおよびポリペプチド配列の比較を、典型的には、ＢＬＯＳＵＭ６２行列、ギャ
ップ伸長ペナルティ１１、およびギャップ伸長ペナルティ１を使用して行う。
【０１７５】
１つの実施形態では、配列類似度スコアを、ＢＬＯＳＵＭ６２行列、ギャップ伸長ペナ
ルティ１１、およびギャップ伸長ペナルティ１を使用して行ったＢＬＡＳＴ分析から報告
する。
【０１７６】
特定の実施形態では、本明細書中に提供した配列同一性／類似度スコアは、以下のパラ
メータを使用したＧＡＰ  Ｖｅｒｓｉｏｎ  １０（ＧＣＧ，Ａｃｃｅｌｒｙｓ，Ｓａｎ  
Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．）を使用して得た値をいう：ＧＡＰ重み５０および長さ重み３
、およびｎｗｓｇａｐｄｎａ．ｃｍｐスコアリング行列を使用したヌクレオチド配列につ
いての同一率および類似率；ＧＡＰ重み８および長さ重み２、およびＢＬＯＳＵＭ６２ス
コアリング行列を使用したアミノ酸配列についての同一率および類似率（Ｈｅｎｉｋｏｆ
ｆ  ａｎｄ  Ｈｅｎｉｋｏｆｆ，ＰＮＡＳ  ＵＳＡ．８９：１０９１５−１０９１９，１
９９２）。ＧＡＰは、マッチ数を最大にし、且つギャップ数を最小にする２つの完全配列
のアラインメントを見出すためにＮｅｅｄｌｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｗｕｎｓｃｈのアルゴリ
ズム（Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．４８：４４３−４５３、１９７０）を使用する。
【０１７７】
１つの特定の実施形態では、改変体ポリペプチドは、基準ポリペプチド配列（例えば、
配列表を参照のこと）と任意選択的にアラインメントして少なくとも約５０、６０、７０
、８０、９０、１００、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１
７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２
７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３
７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４
７０、４８０、４９０、５００、５１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５
７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６
７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７
７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８
７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９
７０、９８０、９９０、１０００、またはそれを超える（その間の全ての整数および範囲
が含まれる）ＢＬＡＳＴビットスコアまたは配列類似度スコアを生成することができるア
ミノ酸配列を含み、ここで、ＢＬＡＳＴアラインメントにはＢＬＯＳＵＭ６２行列、ギャ
ップ伸長ペナルティ１１、およびギャップ伸長ペナルティ１を使用した。
【０１７８】
上述の通り、基準ポリペプチドを、種々の方法（アミノ酸の置換、欠失、短縮、付加、
および挿入が含まれる）で変化させることができる。かかる操作方法は、一般に、当該分
野で公知である。例えば、基準ポリペプチドのアミノ酸配列改変体を、ＤＮＡの操作によ
って調製することができる。変異誘発およびヌクレオチド配列の変更の方法は、当該分野
で周知である。例えば、Ｋｕｎｋｅｌ（ＰＮＡＳ  ＵＳＡ．８２：４８８−４９２，１９
８５）；Ｋｕｎｋｅｌら，（Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．１５４：３６７−
３８２，１９８７）、米国特許第４，８７３，１９２号、Ｗａｔｓｏｎ，Ｊ．Ｄ．ら，（
“Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｇｅｎｅ，”  Ｆｏｕｒｔｈ  
Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｂｅｎｊａｍｉｎ／Ｃｕｍｍｉｎｇｓ，Ｍｅｎｌｏ  Ｐａｒｋ，Ｃａｌ
ｉｆ．，１９８７）、およびこれらの引用文献を参照のこと。目的のタンパク質の生物学
的活性に影響を及ぼさない適切なアミノ酸置換に関するガイダンスを、Ｄａｙｈｏｆｆら
，（１９７８）Ａｔｌａｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒ
ｕｃｔｕｒｅ（Ｎａｔｌ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｒｅｓ．Ｆｏｕｎｄ．，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ
，Ｄ．Ｃ．）のモデルで見出すことができる。
【０１７９】
かかる改変によって作製されたコンビナトリアルライブラリーの遺伝子産物をスクリー
ニングする方法および選択された性質を有する遺伝子産物についてｃＤＮＡライブラリー
をスクリーニングする方法は、当該分野で公知である。かかる方法を、基準ポリペプチド
の組み合わせ変異誘発によって生成された遺伝子ライブラリーの迅速なスクリーニングに
適合させることが可能である。一例として、反復アンサンブル変異誘発（ＲＥＭ）（ライ
ブラリー中の機能的変異体の頻度を増大させる技術）をスクリーニングアッセイと組み合
わせて使用してポリペプチド改変体を同定することができる（Ａｒｋｉｎ  ａｎｄ  Ｙｏ
ｕｒｖａｎ，ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  ８９：７８１１−７８１５，１９９２；Ｄｅｌｇｒａｖ
ｅら，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ．６：３２７−３３１，１９９３）。
【０１８０】
例示的な結合体化方法。ｐ９７ポリペプチド配列の目的の他の薬剤への結合体化または
カップリングを、標準的な化学的技術、生化学的技術、および／または分子技術を使用し
て行うことができる。実際に、利用可能な当該分野で認識されている方法論を使用して本
開示を考慮したｐ９７結合体の作製方法は明らかであろう。勿論、本発明のｐ９７結合体
の一次成分をカップリングした場合に使用した技術および得られた連結の化学的性質が結
合体の各成分の所望の機能性または活性を実質的に妨害しないことが一般に好ましいであ
ろう。
【０１８１】
使用した特定のカップリングの化学的性質は、生物学的に活性な薬剤（例えば、小分子
、ポリペプチド）の構造、生物学的に活性な薬剤内に複数の官能基が存在する可能性、保
護／脱保護工程の必要性、および薬剤の化学的安定性などに依存し、当業者はこの化学的
性質を容易に決定するであろう。本発明のｐ９７結合体の調製に有用な例示的なカップリ
ングの化学的性質を、例えば、Ｗｏｎｇ（１９９１），“Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｐ
ｒｏｔｅｉｎ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｃｒｏｓｓｌｉｎｋｉｎｇ”，ＣＲＣ
Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，Ｆｌａ．；およびＢｒｉｎｋｌｅｙ  “Ａ  Ｂｒ
ｉｅｆ  Ｓｕｒｖｅｙ  ｏｆ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  Ｐｒｅｐａｒｉｎｇ  Ｐｒｏｔ
ｅｉｎ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ  ｗｉｔｈ  Ｄｙｅｓ，Ｈａｐｔｅｎｓ，ａｎｄ  Ｃｒｏ
ｓｓｌｉｎｋｉｎｇ  Ｒｅａｇｅｎｔｓ，”  ｉｎ  Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ．Ｃｈｅｍ．，
３：２０１３，１９９２に見出すことができる。好ましくは、結合体の結合能力および／
または結合活性は、使用した結合体化技術の結果として、例えば、結合体化されていない
薬剤または結合体化されていないｐ９７ポリペプチドと比較して実質的に減少しない。
【０１８２】
一定の実施形態では、ｐ９７ポリペプチド配列を、目的の薬剤に直接または間接的にカ
ップリングすることができる。ｐ９７ポリペプチド配列と目的の薬剤との間の直接反応は
、それぞれが相互反応可能な置換基を保有する場合に可能である。例えば、一方に存在す
る求核性基（アミノ基またはスルフヒドリル基など）は、他方に存在するカルボニル含有
基（無水物または酸ハライドなど）または良好な脱離基（例えば、ハライド）を含むアル
キル基と反応することができる。
【０１８３】
あるいは、リンカー基（非ペプチドリンカーおよびペプチドリンカーが含まれる）を介
してｐ９７ポリペプチド配列および目的の薬剤を間接的にカップリングすることが望まし
いかもしれない。リンカー基はまた、結合能力、ターゲティング能力、または他の機能性
の妨害を回避するために目的の薬剤をｐ９７ポリペプチド配列から遠ざけるためのスペー
サーとして機能することができる。リンカー基はまた、薬剤上の置換基の化学反応性を増
大させ、したがって、カップリング効率を増大させる働きをし得る。化学反応性の増大は
また、他の場合には増大しなければ不可能と考えられる薬剤または薬剤上の官能基の使用
を容易にすることができる。放出可能または安定なリンカーを選択して、ｐ９７結合体お
よび付着した目的の薬剤の薬物動態学的を変化せることもできる。例示的な連結基には、
例えば、ジスルフィド基、チオエーテル基、酸不安定性基、光解離性基、ペプチダーゼ不
安定基、およびエステラーゼ不安定基が含まれる。他の例示的な実施形態では、結合体は
、米国特許第５，２０８，０２０号または欧州特許第０  ４２５  ２３５  Ｂ１号、およ
びＣｈａｒｉら，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ．５２：１２７−１３１，１９９２に
開示の連結基などの連結基を含む。さらなる例示的なリンカーを以下に記載する。
【０１８４】
いくつかの実施形態では、１つを超えるｐ９７ポリペプチド配列を薬剤にカップリング
する（またはその逆）ことが望ましいかも知れない。例えば、一定の実施形態では、複数
のｐ９７ポリペプチド配列を１つの薬剤にカップリングするか、あるいは、１つ以上のｐ
９７ポリペプチドを複数の薬剤に結合体化する。ｐ９７ポリペプチド配列は、同一でも異
なっていてもよい。特定の実施形態と無関係に、複数のｐ９７ポリペプチド配列を含む結
合体を、種々の方法で調製することができる。例えば、１つを超えるポリペプチドを薬剤
に直接カップリングすることができるか、複数の付着部位を提供するリンカーを使用する
ことができる。種々の公知のヘテロ二官能性架橋ストラテジーのうちのいずれかを、本発
明の結合体の作製のために使用することができる。結合体化／架橋手順中に使用した材料
の化学量論の調節によって多数のこれらの実施形態を行うことができると理解されるであ
ろう。
【０１８５】
一定の例示的な実施形態では、スクシンイミジルエステル官能基を含む薬剤とアミノ基
を含むｐ９７ポリペプチドとの間の反応によりアミド連結が形成され、オキシカルボニル
イミダゾール（ｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌｉｍｉｄｉｚａｏｌｅ）官能基を含む薬剤とアミ
ノ基を含むＰ９７ポリペプチドとの間の反応によりカルバマート連結が形成され、ｐ−ニ
トロフェニルカルボナート官能基を含む薬剤とアミノ基を含むＰ９７ポリペプチドとの間
の反応によりカルバマート連結が形成され、トリクロロフェニルカルボナート官能基を含
む薬剤とアミノ基を含むＰ９７ポリペプチドとの間の反応によりカルバマート連結が形成
され、チオエステル官能基を含む薬剤とＮ末端アミノ基を含むＰ９７ポリペプチドとの間
の反応によりアミド連結が形成され、プロピオンアルデヒド（ｐｒｏｐｒｉｏｎａｌｄｅ
ｈｙｄｅ）官能基を含む薬剤とアミノ基を含むＰ９７ポリペプチドとの間の反応により第
二級アミン連結が形成される。
【０１８６】
いくつかの例示的な実施形態では、ブチルアルデヒド官能基を含む薬剤とアミノ基を含
むＰ９７ポリペプチドとの間の反応により第二級アミン連結が形成され、アセタール官能
基を含む薬剤とアミノ基を含むＰ９７ポリペプチドとの間の反応により第二級アミン連結
が形成され、ピペリドン官能基を含む薬剤とアミノ基を含むＰ９７ポリペプチドとの間の
反応により第二級アミン連結が形成され、メチルケトン官能基を含む薬剤とアミノ基を含
むＰ９７ポリペプチドとの間の反応により第二級アミン連結が形成され、トレシラート官
能基を含む薬剤とアミノ基を含むＰ９７ポリペプチドとの間の反応により第二級アミン連
結が形成され、マレイミド官能基を含む薬剤とアミノ基を含むＰ９７ポリペプチドとの間
の反応により第二級アミン連結が形成され、アルデヒド官能基を含む薬剤とアミノ基を含
むＰ９７ポリペプチドとの間の反応により第二級アミン連結が形成され、ヒドラジン官能
基を含む薬剤とカルボン酸基を含むＰ９７ポリペプチドとの間の反応により第二級アミン
連結が形成される。
【０１８７】
特定の例示的な実施形態では、マレイミド官能基を含む薬剤とチオール基を含むＰ９７
ポリペプチドとの間の反応によりチオエーテル連結を形成し、ビニルスルホン官能基を含
む薬剤とチオール基を含むＰ９７ポリペプチドとの間の反応によりチオエーテル連結を形
成し、チオール官能基を含む薬剤とチオール基を含むＰ９７ポリペプチドとの間の反応に
よりジスルフィド連結を形成し、オルソピリジルジスルフィド官能基を含む薬剤とチオー
ル基を含むＰ９７ポリペプチドとの間の反応によりジスルフィド連結を形成し、ヨードア
セトアミド官能基を含む薬剤とチオール基を含むＰ９７ポリペプチドとの間の反応により
チオエーテル連結を形成する。
【０１８８】
特定の実施形態では、アミン−スルフヒドリル架橋剤を、結合体の調製のために使用す
る。１つの好ましい実施形態では、例えば、架橋剤はスクシンイミジル−４−（Ｎ−マレ
イミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシラート（ＳＭＣＣ）（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓ
ｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）であり、この架橋剤は、中程度の長さのシクロヘキサン安定化スペ
ーサーアーム（８．３オングストローム）の反対側の末端にＮＨＳ−エステルおよびマレ
イミド反応基を含むスルフヒドリル架橋剤である。ＳＭＣＣは、その後のｐ９７ポリペプ
チド配列との反応のためのスルフヒドリル反応性のマレイミド活性化された薬剤（例えば
、ポリペプチド、抗体）を作製するために使用することができる非切断性の膜透過性架橋
剤である。ＮＨＳエステルは、ｐＨ７〜９で第一級アミンと反応して安定なアミド結合を
形成する。マレイミドは、ｐＨ６．５〜７．５でスルフヒドリル基と反応して安定なチオ
エーテル結合を形成する。したがって、ＳＭＣＣのアミン反応性ＮＨＳエステルが薬剤の
第一級アミンと迅速に架橋し、次いで、得られたスルフヒドリル反応性マレイミド基がｐ
９７のシステイン残基との反応に利用されて目的の特定の結合体を得ることができる。
【０１８９】
一定の特定の実施形態では、ｐ９７ポリペプチド配列を、架橋を容易にするために（例
えば、マレイミド活性化された薬剤への架橋を容易にするために）露呈したスルフヒドリ
ル基を含むように改変する。より特定の実施形態では、ｐ９７ポリペプチド配列を、保護
されたチオールスルフヒドリル基を付加するために第一級アミンを修飾する試薬で修飾す
る。さらにより特定の実施形態では、試薬Ｎ−スクシンイミジル−Ｓ−アセチルチオアセ
タート（ＳＡＴＡ）（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して、チオール化ｐ
９７ポリペプチドを生成する。
【０１９０】
他の特定の実施形態では、マレイミド活性化された薬剤を、適切な条件下でチオール化
ｐ９７ポリペプチドと反応させて本発明の結合体を生成する。これらの反応物中でのＳＭ
ＣＣ、ＳＡＴＡ、薬剤、およびｐ９７ポリペプチドの比を操作することによって異なる化
学量論、分子量、および性質を有する結合体を生成することが可能であると理解されるで
あろう。
【０１９１】
さらに他の例示的な実施形態では、結合体を、二官能性タンパク質カップリング剤（Ｎ
−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオナート（ＳＰＤＰ）、スクシ
ンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシラート、イ
ミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの二官能性誘導体（アジピミド酸ジメチルＨＣＬ
など）、活性エステル（スベリン酸ジスクシンイミジルなど）、アルデヒド（グルタルア
ルデヒドなど）、ビス−アジド化合物（ビス（ｐ−アジドベンゾイル）ヘキサンジアミン
など）、ビス−ジアゾニウム誘導体（ビス−（ｐ−ジアゾニウムベンゾイル）−エチレン
ジアミンなど）、ジイソシアナート（トルエン２，６−ジイソシアナートなど）、および
ビス−活性フッ素化合物（１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼンなど）など）
を使用して作製する。特定のカップリング剤には、ジスルフィド連結を得るためのＮ−ス
クシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオナート（ＳＰＤＰ）（Ｃａｒｌｓ
ｓｏｎら，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．１７３：７２３−７３７［１９７８］）およびＮ−スク
シンイミジル−４−（２−ピリジルチオ）ペンタノアート（ＳＰＰ）が含まれる。
【０１９２】
本明細書中で考察した特定の架橋ストラテジーは、本発明の結合体の生成で使用するこ
とができる適切な結合体化ストラテジーの多数の例のほんの一部である。種々の他の二官
能性または多官能性の試薬（ホモ官能性およびヘテロ官能性の両方）（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃ
ｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬのカタログ中に記載の試薬など）をリ
ンカー基として使用することができることが当業者に明らかであろう。例えば、アミノ基
、カルボキシル基、スルフヒドリル基、または酸化炭水化物残基によってカップリングす
ることができる。かかる方法論を記載した文献が多数存在する（例えば、Ｒｏｄｗｅｌｌ
らの米国特許第４，６７１，９５８号）。
【０１９３】
特定の実施形態は、ｐ９７ポリペプチドと薬剤との間の結合体化を容易にするための１
つ以上のアルデヒドタグを使用することができる（米国特許第８，０９７，７０１号およ
び同第７，９８５，７８３号（参考として援用される）を参照のこと）。ここで、ホルミ
ルグリシン生成酵素（ＦＧＥ）の作用によるアルデヒドタグのスルファターゼモチーフで
の酵素修飾により、ホルミルグリシン（ＦＧｌｙ）残基が生成される。次いで、ＦＧｌｙ
残基のアルデヒド部分を、目的の部分のポリペプチドへの部位特異的付着のための化学的
ハンドルとして利用することができる。いくつかの態様では、目的の部分は、小分子、ペ
プトイド、アプタマー、またはペプチド模倣物である。いくつかの態様では、目的の部分
は、別のポリペプチド（抗体など）である。
【０１９４】
したがって、特定の実施形態は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、または
それを超える異種スルファターゼモチーフを含むｐ９７ポリペプチドまたはポリペプチド
薬剤を含み、ここで、モチーフは、以下の構造：
Ｘ１Ｚ１Ｘ２Ｚ２Ｘ３（配列番号１９）
（式中、Ｚ１はシステインまたはセリンであり；Ｚ２はプロリン残基またはアラニン残基
であり；Ｘ１は存在しても不在でもよく、存在する場合、任意のアミノ酸であり、Ｘ１は
、異種スルファターゼモチーフがアルデヒドタグ化ポリペプチドのＮ末端に存在する場合
に存在することが好ましく；Ｘ２およびＸ３は、それぞれ独立して、任意のアミノ酸であ
る）を含む。
【０１９５】
上記モチーフを有するポリペプチドを、ＦＧＥ酵素によって修飾してＦＧｌｙ残基を有
するモチーフを生成することができ、上述の通り、次いで、このモチーフを例えば、リン
カー部分を介した薬剤（第２のポリペプチドなど）の部位特異的付着のために使用するこ
とができる。かかる修飾を、例えば、ＦＧＥ酵素を発現する哺乳動物細胞、酵母細胞、ま
たは細菌細胞中のスルファターゼモチーフ含有ポリペプチド（例えば、ｐ９７、抗体）の
発現または単離ＦＧＥ酵素での単離ポリペプチドのｉｎ  ｖｉｔｒｏ修飾によって行うこ
とができる（Ｗｕら，ＰＮＡＳ．１０６：３０００−３００５，２００９；Ｒｕｓｈ  ａ
ｎｄ  Ｂｅｒｔｏｚｚｉ，Ｊ．Ａｍ  Ｃｈｅｍ  Ｓｏｃ．１３０：１２２４０−１，２０
０８；およびＣａｒｌｓｏｎら，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２８３：２０１１７−２５，
２００８を参照のこと）。
【０１９６】
それ故、いくつかの実施形態は、ホルミルグリシン残基を有する１、２、３、４、５、
６、７、８、９、１０、またはそれを超える異種スルファターゼモチーフを含むｐ９７ポ
リペプチドまたはポリペプチド薬剤（例えば、抗体）を含み、ここで、モチーフは、以下
の構造：
Ｘ１（ＦＧｌｙ）Ｘ２Ｚ２Ｘ３（配列番号２０）
（式中、ＦＧｌｙはホルミルグリシン残基であり；Ｚ２はプロリン残基またはアラニン残
基であり；Ｘ１は存在しても不在でもよく、存在する場合、任意のアミノ酸であり、Ｘ１
は、異種スルファターゼモチーフがアルデヒドタグ化ポリペプチドのＮ末端に存在する場
合に存在することが好ましく；Ｘ２およびＸ３は、それぞれ独立して、任意のアミノ酸で
ある）を含む。
【０１９７】
特定の実施形態では、Ｘ１、Ｘ２、およびＸ３は、それぞれ独立して、脂肪族アミノ酸
、硫黄含有アミノ酸、または極性の無電荷アミノ酸である。例えば、Ｘ１は、Ｌ、Ｍ、Ｖ
、Ｓ、またはＴであり得；Ｘ２および／またはＸ３は、独立して、Ｓ、Ｔ、Ａ、Ｖ、Ｇ、
またはＣであり得る。
【０１９８】
いくつかの実施形態では、異種スルファターゼモチーフは、（ａ）１６アミノ酸残基長
未満（約４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、または１５残基長が
含まれる）であり得るか、（ｂ）ポリペプチドのＮ末端に位置し得るか、（ｃ）ポリペプ
チドのＣ末端に位置し得るか、（ｄ）ポリペプチド起源のアミノ酸配列の内部部位に位置
し得るか、（ｅ）ポリペプチドの末端ループ中に位置し得るか、（ｆ）ポリペプチドの翻
訳後修飾部位（例えば、グリコシル化部位）に位置し得るか、その任意の組み合わせであ
り得る。
【０１９９】
いくつかの実施形態は、（ｉ）スルファターゼモチーフ（またはアルデヒドタグ）含有
ｐ９７ポリペプチド、および（ｉｉ）薬剤（Ａ）（アルデヒド反応基で官能化された小分
子など）の結合体に関し、ここで、（ｉ）および（ｉｉ）は、スルファターゼモチーフの
ＦＧｌｙ残基およびアルデヒド反応基を介して共有結合性に連結している。かかる結合体
は、以下の一般的構造：
ｐ９７（ＦＧｌｙ）−Ｒ１−Ａ
（式中、Ｒ１は少なくとも１つのアルデヒド反応性連結であり；ＦＧｌｙは異種スルファ
ターゼモチーフ内のホルミルグリシン残基である）のうちの１つを有することができる。
【０２００】
いくつかの実施形態は、（ｉ）スルファターゼモチーフ（またはアルデヒドタグ）含有
ｐ９７ポリペプチド、および（ｉｉ）アルデヒド反応基で官能化されたポリペプチド薬剤
（ｐＡ）（逆も同じ）の結合体に関し、ここで、（ｉ）および（ｉｉ）は、スルファター
ゼモチーフのＦＧｌｙ残基およびアルデヒド反応基を介して共有結合性に連結している。
かかる結合体は、以下の一般的構造：
ｐ９７（ＦＧｌｙ）−Ｒ１−ｐＡまたはｐ９７−Ｒ１−（ＦＧｌｙ）ｐＡ
（式中、Ｒ１は少なくとも１つのアルデヒド反応性連結であり；ＦＧｌｙは異種スルファ
ターゼモチーフ内のホルミルグリシン残基である）のうちの１つを有することができる。
【０２０１】
薬剤または非アルデヒドタグ含有ポリペプチド（例えば、抗体、ｐ９７ポリペプチド）
を、１つ以上のアルデヒド反応基（アミノオキシ、ヒドラジド、およびチオセミカルバジ
ドなど）で官能化し、次いで、少なくとも１つのＦＧｌｙ残基を介してアルデヒドタグ含
有ポリペプチドに共有結合性に連結してアルデヒド反応性連結を形成することができる。
アミノオキシ官能化薬剤（または非アルデヒドタグ含有ポリペプチド）の付着によりＦＧ
ｌｙ残基と官能化薬剤（または非アルデヒドタグ含有ポリペプチド）との間にオキシム連
結が作製され；ヒドラジド官能化薬剤（または非アルデヒドタグ含有ポリペプチド）の付
着によりＦＧｌｙ残基と官能化薬剤（または非アルデヒドタグ含有ポリペプチド）との間
にヒドラジン連結が作製され；チオセミカルバジド官能化薬剤（または非アルデヒドタグ
含有ポリペプチド）の付着によりＦＧｌｙ残基と官能化薬剤（または非アルデヒドタグ含
有ポリペプチド）との間にヒドラジンカルボチアミド連結が作製される。それ故、これら
および関連する実施形態では、Ｒ１は、シッフ塩基を含む連結（オキシム連結、ヒドラジ
ン連結、またはヒドラジンカルボチアミド連結など）であり得る。
【０２０２】
一定の実施形態は、（ｉ）スルファターゼモチーフ（またはアルデヒドタグ）含有ｐ９
７ポリペプチドおよび（ｉｉ）スルファターゼモチーフ（またはアルデヒドタグ）含有ポ
リペプチド薬剤（Ａ）の結合体を含み、ここで、（ｉ）および（ｉｉ）は、各ＦＧｌｙ残
基を介して、任意選択的に二官能性のリンカー部分またはリンカー基を介して共有結合性
に連結している。例えば、一定のｐ９７結合体は、以下の構造：
ｐ９７（ＦＧｌｙ）−Ｒ１−Ｌ−Ｒ２−（ＦＧｌｙ）Ａ
（式中、Ｒ１およびＲ２は同一または異なるアルデヒド反応性連結であり；Ｌはリンカー
部分であり、ｐ９７（ＦＧｌｙ）はアルデヒドタグ含有ｐ９７ポリペプチドであり、（Ｆ
Ｇｌｙ）Ａはアルデヒドタグ含有薬剤（抗体または他のポリペプチドベースの薬剤など）
である）を含むことができる。
【０２０３】
単なる例として、いくつかの実施形態では、少なくとも１つの異種スルファターゼモチ
ーフは、ｐ９７ポリペプチドのＣ末端およびポリペプチドベースの薬剤のＮ末端に存在し
得る。他の実施形態では、少なくとも１つの異種スルファターゼモチーフは、ｐ９７ポリ
ペプチドのＮ末端およびポリペプチドベースの薬剤のＣ末端に存在し得る。さらなる他の
実施形態では、少なくとも１つの異種スルファターゼモチーフは、ｐ９７ポリペプチドの
Ｎ末端およびポリペプチドベースの薬剤のＮ末端に存在し得る。さらなる実施形態では、
少なくとも１つの異種スルファターゼモチーフは、ｐ９７ポリペプチドのＣ末端およびポ
リペプチドベースの薬剤のＣ末端に存在し得る。上述の通り、少なくとも１つの異種モチ
ーフは、ｐ９７ポリペプチドおよび／またはポリペプチドベースの薬剤中の内部位置に存
在し得る。当業者は、他の組み合わせが可能であると認識するであろう。
【０２０４】
Ｒ１およびＲ２のアルデヒド反応性連結を、（ｉ）アルデヒドタグのホルミルグリシン
（ＦＧｌｙ）残基と（ｉｉ）前記アルデヒド反応基で官能化されたリンカー部分（例えば
、２つのアルデヒド反応基（同一でも異なっていてもよい）を有する二官能化リンカー）
との間の共有結合を形成する任意のアルデヒド反応基によって独立して形成することがで
きる。アルデヒド反応基の例には、アミノオキシ基、ヒドラジド基、およびチオセミカル
バジド基が含まれ、これらは、ＦＧｌｙ残基を有するシッフ塩基含有連結（それぞれ、オ
キシム連結、ヒドラジン連結、およびヒドラジンカルボチアミド連結が含まれる）を形成
するであろう。それ故、Ｒ１およびＲ２は、独立して、シッフ塩基を含む連結（オキシム
連結、ヒドラジン連結、またはヒドラジンカルボチアミド連結など）であり得る。
【０２０５】
いくつかの実施形態では、アルデヒドタグ含有ｐ９７ポリペプチドおよびアルデヒドタ
グ含有薬剤を、多官能化リンカー（例えば、二官能化リンカー）を介して連結し（例えば
、共有結合的に連結し）、後者を同一または異なるアルデヒド反応基で官能化する。これ
らおよび関連する実施形態では、アルデヒド反応基は、リンカーによりｐ９７ポリペプチ
ドと薬剤との間にその各ＦＧｌｙ残基を介して共有結合性の架橋を形成可能である。リン
カー部分には、１つ以上のアルデヒド反応基で官能化することができ、好ましくは二官能
化または多官能化することができる任意の部分または化学的部分が含まれる。特定の例に
は、ペプチド、水溶性ポリマー、検出可能な実体、他の治療化合物（例えば、細胞傷害性
化合物）、ビオチン／ストレプトアビジン部分、およびグリカンが含まれる（Ｈｕｄａｋ
ら，Ｊ  Ａｍ  Ｃｈｅｍ  Ｓｏｃ．１３３：１６１２７−３５，２０１１を参照のこと）
。グリカン（またはグリコシド）の具体例には、アミノオキシグリカン（グリコシルＮ−
ペンテノイルヒドロキサマート中間体から構成される高次グリカンなど）が含まれる（前
出）。例示的なリンカーを本明細書中に記載し、これらのリンカーを当該分野の日常的技
術にしたがってアルデヒド反応基で官能化することができる（例えば、Ｃａｒｒｉｃｏら
，Ｎａｔ  Ｃｈｅｍ  Ｂｉｏｌ．３：３２１−３２２，２００７；および米国特許第８，
０９７，７０１号および同第７，９８５，７８３号を参照のこと）。
【０２０６】
ｐ９７結合体を、種々の「クリック化学」技術（モジュール式であり、広範で収率が非
常に高く、非クロマトグラフ法によって除去することができ、且つ立体特異的であり得る
が必ずしもエナンチオ選択性ではない主に無害の副生成物を生成する反応が含まれる）に
よって調製することもできる（Ｋｏｌｂら，Ａｎｇｅｗ  Ｃｈｅｍ  Ｉｎｔ  Ｅｄ  Ｅｎ
ｇｌ．４０：２００４−２０２１，２００１を参照のこと）。特定の例には、アジドとア
ルキンのヒュスゲン１，３−双極子付加環化を使用する結合体化技術（「アジド−アルキ
ン付加環化」反応とも呼ばれる）が含まれる（Ｈｅｉｎら，Ｐｈａｒｍ  Ｒｅｓ．２５：
２２１６−２２３０，２００８を参照のこと）。アジド−アルキン付加環化反応の非限定
的な例には、銅触媒アジド−アルキン付加環化（ＣｕＡＡＣ）反応およびルテニウム触媒
アジド−アルキン付加環化（ＲｕＡＡＣ）反応が含まれる。
【０２０７】
ＣｕＡＡＣは、広範な温度で作用し、水性条件およびｐＨ４〜１２の範囲で影響を受け
ず、広範な官能基を許容する（Ｈｉｍｏら，Ｊ  Ａｍ  Ｃｈｅｍ  Ｓｏｃ．１２７：２１
０−２１６，２００５を参照のこと）。活性Ｃｕ（Ｉ）触媒を、例えば、還元剤としてア
スコルビン酸ナトリウムを使用してＣｕ（Ｉ）塩またはＣｕ（ＩＩ）塩から生成すること
ができる。この反応によって１，４置換生成物が形成され、領域特異性となる（Ｈｅｉｎ
ら，前出を参照のこと）。
【０２０８】
ＲｕＡＡＣは、アジドの末端アルキンへの付加環化を触媒することができるペンタメチ
ルシクロペンタジエニルルテニウムクロリド［Ｃｐ＊ＲｕＣｌ］複合体を利用し、それに
より、位置選択的に１，５二置換１，２，３−トリアゾールが得られる（Ｒａｓｍｕｓｓ
ｅｎら，Ｏｒｇ．Ｌｅｔｔ．９：５３３７−５３３９，２００７を参照のこと）。さらに
、ＣｕＡＡＣと対照的に、ＲｕＡＡＣを内部アルキンと共に使用して、全置換１，２，３
−トリアゾールを得ることもできる。
【０２０９】
したがって、一定の実施形態は、アジド側鎖またはアルキン側鎖を有する少なくとも１
つの非天然アミノ酸（内部および末端（例えば、Ｎ末端、Ｃ末端）の非天然アミノ酸が含
まれる）を含むｐ９７ポリペプチドを含む。一定のこれらのｐ９７ポリペプチドを、アジ
ド側鎖またはアルキン側鎖を含む非天然アミノ酸のｉｎ  ｖｉｖｏまたはｉｎ  ｖｉｔｒ
ｏ（例えば、無細胞系）組込みによって形成することができる。例示的なｉｎ  ｖｉｖｏ
技術には、例えば改変大腸菌を使用した細胞培養技術（Ｔｒａｖｉｓ  ａｎｄ  Ｓｃｈｕ
ｌｔｚ，Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．
２８５：１１０３９−４４，２０１０；およびＤｅｉｔｅｒｓ  ａｎｄ  Ｓｃｈｕｌｔｚ
，Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｌｅｔｔｅｒ
ｓ．１５：１５２１−１５２４，２００５を参照のこと）が含まれ、例示的なｉｎ  ｖｉ
ｔｒｏ技術には無細胞系（Ｂｕｎｄｙ，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ  Ｃｈｅｍ．２１：２５５−
６３，２０１０を参照のこと）が含まれる。
【０２１０】
いくつかの実施形態では、アジド側鎖を有する少なくとも１つの非天然アミノ酸を含む
ｐ９７ポリペプチドを、少なくとも１つのアルキン基を含む薬剤（またはリンカー）（ア
ルキン側鎖を有する少なくとも１つの非天然アミノ酸を含むポリペプチド薬剤など）への
アジド−アルキン付加環化によって結合体化する。他の実施形態では、アルキン側鎖を有
する少なくとも１つの非天然アミノ酸を含むｐ９７ポリペプチドを、少なくとも１つのア
ジド基を含む薬剤（またはリンカー）（アジド側鎖を有する少なくとも１つの非天然アミ
ノ酸を含むポリペプチド薬剤など）へのアジド−アルキン付加環化によって結合体化する
。それ故、一定の実施形態は、１，２，３−トリアゾール連結を介して薬剤に共有結合性
に連結したｐ９７ポリペプチドを含む結合体を含む。
【０２１１】
特異的ｐ９７結合体を、以下のそれぞれの構造（Ｉ）または（ＩＩ）：
【０２１２】
【化１】
2019147800.tif 000007
【０２１３】
（式中、Ｒはｐ９７ポリペプチドであり、Ｒｌは目的の薬剤（またはリンカー）であるか
、Ｒは目的の薬剤（またはリンカー）であり、Ｒｌはｐ９７ポリペプチドである）を含め
るための以下のＣｕＡＡＣベースの反応またはＲｕＡＡＣベースの反応によって形成する
ことができる。
【０２１４】
一定の実施形態では、アジド側鎖を有する非天然アミノ酸および／またはアルキン側鎖
を有する非天然アミノ酸は、末端アミノ酸（Ｎ末端、Ｃ末端）である。一定の実施形態で
は、１つ以上の非天然アミノ酸は内部非天然アミノ酸である。
【０２１５】
例えば、一定の実施形態は、アルキン基を含む薬剤に結合体化したアジド側鎖を有する
Ｎ末端非天然アミノ酸を含むｐ９７ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態は、アルキ
ン基を含む薬剤に結合体化したアジド側鎖を有するＣ末端非天然アミノ酸を含むｐ９７ポ
リペプチドを含む。特定の実施形態は、アジド側鎖を含む薬剤に結合体化したアルキン側
鎖を有するＮ末端非天然アミノ酸を含むｐ９７ポリペプチドを含む。さらなる実施形態は
、アジド側鎖を含む薬剤に結合体化したアルキン側鎖を有するＣ末端非天然アミノ酸を含
むｐ９７ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態は、アルキン基を含む薬剤に結合体化
したアジド側鎖を有する少なくとも１つの内部非天然アミノ酸を含むｐ９７ポリペプチド
を含む。さらなる実施形態は、アジド側鎖を含む薬剤に結合体化したアルキン側鎖を有す
る少なくとも１つの内部非天然アミノ酸を含むｐ９７ポリペプチドを含む。
【０２１６】
特定の実施形態は、アルキン側鎖を有するＮ末端非天然アミノ酸を含むポリペプチド薬
剤に結合体化したアジド側鎖を有するＮ末端非天然アミノ酸を含むｐ９７ポリペプチドを
含む。他の実施形態は、アルキン側鎖を有するＣ末端非天然アミノ酸を含むポリペプチド
薬剤に結合体化したアジド側鎖を有するＣ末端非天然アミノ酸を含むｐ９７ポリペプチド
を含む。さらに他の実施形態は、アルキン側鎖を有するＣ末端非天然アミノ酸を含むポリ
ペプチド薬剤に結合体化したアジド側鎖を有するＮ末端非天然アミノ酸を含むｐ９７ポリ
ペプチドを含む。さらなる実施形態は、アルキン側鎖を有するＮ末端非天然アミノ酸を含
むポリペプチド薬剤に結合体化したアジド側鎖を有するＣ末端非天然アミノ酸を含むｐ９
７ポリペプチドを含む。
【０２１７】
他の実施形態は、アジド側鎖を有するＮ末端非天然アミノ酸を含むポリペプチド薬剤に
結合体化したアルキン側鎖を有するＮ末端非天然アミノ酸を含むｐ９７ポリペプチドを含
む。なおさらなる実施形態は、アジド側鎖を有するＣ末端非天然アミノ酸を含むポリペプ
チド薬剤に結合体化したアルキン側鎖を有するＣ末端非天然アミノ酸を含むｐ９７ポリペ
プチドを含む。さらなる実施形態は、アジド側鎖を有するＣ末端非天然アミノ酸を含むポ
リペプチド薬剤に結合体化したアルキン側鎖を有するＮ末端非天然アミノ酸を含むｐ９７
ポリペプチドを含む。なおさらなる実施形態は、アジド側鎖を有するＮ末端非天然アミノ
酸を含むポリペプチド薬剤に結合体化したアルキン側鎖を有するＣ末端非天然アミノ酸を
含むｐ９７ポリペプチドを含む。
【０２１８】
（ａ）（ｉ）アジド側鎖を有する少なくとも１つの非天然アミノ酸を含むｐ９７ポリペ
プチドと少なくとも１つのアルキン基を含む薬剤（例えば、アルキン側鎖を有する非天然
アミノ酸）との間；または（ｉｉ）アルキン側鎖を有する少なくとも１つの非天然アミノ
酸を含むｐ９７ポリペプチドと少なくとも１つのアジド基を含む薬剤（例えば、アジド側
鎖を有する非天然アミノ酸）との間のアジド−アルキン付加環化反応を行う工程；および
（ｂ）反応物からｐ９７結合体を単離し、それにより、ｐ９７結合体を生成する工程を含
む、ｐ９７結合体の生成方法も含む。
【０２１９】
ｐ９７結合体が融合ポリペプチドである場合、融合ポリペプチドを、一般に、標準的な
技術を使用して調製することができる。しかし、好ましくは、融合ポリペプチドを、本明
細書中に記載され、且つ当該分野で公知の発現系での組換えポリペプチドとして発現する
。本発明の融合ポリペプチドは、ｐ９７ポリペプチド配列の１つまたは複数のコピーを含
むことができ、且つ目的のポリペプチドベースの薬剤（例えば、抗体その抗原結合フラグ
メント）の１つまたは複数のコピーを含むことができる（任意の所望の配置で存在する）
。
【０２２０】
融合タンパク質について、ｐ９７ポリペプチド、ポリペプチド薬剤（例えば、抗体）、
および任意選択的なペプチドリンカー成分をコードするＤＮＡ配列を個別にアセンブリし
、次いで、適切な発現ベクターにライゲートすることができる。一方のポリペプチド成分
をコードするＤＮＡ配列の３’末端を、ペプチドリンカーを使用するか使用しないで他方
のポリペプチド成分をコードするＤＮＡ配列の５’末端に配列の読み枠がインフレームで
あるようにライゲートする。ライゲートしたＤＮＡ配列を、適切な転写調節エレメントま
たは翻訳調節エレメントに作動可能に連結する。ＤＮＡ発現を担う調節エレメントを、第
１のポリペプチドをコードするＤＮＡ配列に対して５’方向のみで位置づける。同様に、
翻訳終止シグナルおよび転写終止シグナルを終了させるのに必要な終止コドンは、ほとん
どのＣ末端ポリペプチドをコードするＤＮＡ配列に対して３’の方向にのみ存在する。こ
れにより、両成分ポリペプチドの生物学的活性を保持する単一の融合ポリペプチドに翻訳
される。
【０２２１】
類似の技術（主に、プロモーター、終止コドン、および転写終止シグナルなどの調節エ
レメントの配置）を、非融合結合体の産生のための非融合タンパク質（例えば、ｐ９７ポ
リペプチド）およびポリペプチド薬剤（例えば、抗体剤）の組換え産生に適用することが
できる。
【０２２２】
本発明のポリヌクレオチドおよび融合ポリヌクレオチドは、ｐ９７ポリペプチド配列を
コードする核酸の１つまたは複数のコピーを含むことができ、そして／またはポリペプチ
ド薬剤をコードする核酸の１つまたは複数のコピーを含むことができる。
【０２２３】
いくつかの実施形態では、対象とされるｐ９７ポリペプチド、ポリペプチド薬剤、およ
び／またはｐ９７−ポリペプチド融合物をコードする核酸を宿主細胞に直接移入し、細胞
を、コードされたポリペプチドの発現を誘導するのに十分な条件下でインキュベートする
。本開示のポリペプチド配列を、当業者に周知の標準的な技術を使用して本明細書中に提
供したポリペプチド配列および核酸配列と組み合わせて調製することができる。
【０２２４】
したがって、一定の関連する実施形態によれば、本明細書中に記載のポリペプチドをコ
ードするポリヌクレオチドまたは融合ポリヌクレオチドを含む組換え宿主細胞を提供する
。宿主細胞中でのｐ９７ポリペプチド、ポリペプチド薬剤、またはｐ９７−ポリペプチド
薬剤融合物の発現を、適切な条件下でのポリヌクレオチドを含む組換え宿主細胞の培養に
よって都合よく行うことができる。発現による産生後、ポリペプチドを、任意の適切な技
術を使用して単離および／または精製し、次いで、必要に応じて使用することができる。
【０２２５】
種々の異なる宿主細胞中でのポリペプチドのクローニングおよび発現のための系は周知
である。適切な宿主細胞には、細菌系、哺乳動物細胞系、酵母系、およびバキュロウイル
ス系が含まれる。当該分野で利用可能な異種ポリペプチド発現のための哺乳動物細胞株に
は、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＨｅＬａ細胞、ベビーハムスター腎臓
細胞、ＨＥＫ−２９３細胞、およびＮＳＯマウス黒色腫細胞などが含まれる。一般的な好
ましい細菌宿主は大腸菌である。大腸菌などの原核細胞中でのポリペプチドの発現は、当
該分野で十分に確立されている。概説については、例えば、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，Ａ．Ｂ
ｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．９：５４５−５５１（１９９１）を参照のこと。培養にお
ける真核細胞中での発現もまた、ポリペプチドの組換え産生の選択肢として当業者が利用
可能である（Ｒｅｆ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．４：５７３−５７６
，１９９３；およびＴｒｉｌｌら，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．６：５
５３−５６０，１９９５を参照のこと）。
【０２２６】
適切な調節配列（プロモーター配列、終結配列、ポリアデニル化配列、エンハンサー配
列、マーカー遺伝子、および必要に応じた他の配列が含まれる）を含む適切なベクターを
選択するか構築することができる。ベクターは、必要に応じて、プラスミド、ウイルス（
例えば、ファージ、すなわちファージミド）であり得る。さらなる詳細については、例え
ば、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ：
２ｎｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｓａｍｂｒｏｏｋら，１９８９，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈ
ａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓを参照のこと。例えば、核酸構築物の調
製における核酸の操作、変異誘発、配列決定、細胞へのＤＮＡの移入および遺伝子発現、
ならびにタンパク質分析のための多数の公知の技術およびプロトコールは、Ｃｕｒｒｅｎ
ｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｓｅｃｏｎｄ  
Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａｕｓｕｂｅｌら編，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，１９９２
またはその後の最新情報に詳述されている。
【０２２７】
用語「宿主細胞」を、１つ以上の本明細書中に記載のポリペプチドをコードする核酸配
列が導入されているか導入することができ、選択された目的の遺伝子（任意の本明細書中
に記載のポリペプチドをコードする遺伝子など）をさらに発現するか発現することができ
る細胞をいうために使用する。この用語は、選択した遺伝子が存在する限り、子孫が元の
親と同一の形態学的性質または遺伝子構造であるかどうか無関係な親細胞の子孫を含む。
宿主細胞を、一定の特徴、例えば、スルファターゼモチーフ内のシステイン残基またはセ
リン残基をホルミルグリシン（ＦＧｌｙ）残基に変換するためのホルミルグリシン生成酵
素（ＦＧＥ）の発現、または非天然アミノ酸（結合体化を容易にするためのアジド側鎖、
アルキン側鎖、または他の所望の側鎖を有する非天然アミノ酸が含まれる）をポリペプチ
ドに組み込むことができるアミノアシルｔＲＮＡシンテターゼの発現について選択するこ
とができる。
【０２２８】
したがって、かかる核酸を宿主細胞に導入する工程を含む方法も意図される。核酸の導
入は、任意の利用可能な技術を使用することができる。真核細胞について、適切な技術に
は、リン酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥＡＥ−デキストラン、エレクトロポレ
ーション、リポソーム媒介トランスフェクション、およびレトロウイルスまたは他のウイ
ルス（例えば、ワクシニア、または昆虫細胞用のバキュロウイルス）を使用した形質導入
が含まれ得る。細菌細胞について、適切な技術には、塩化カルシウム形質転換、エレクト
ロポレーション、およびバクテリオファージを使用したトランスフェクションが含まれ得
る。導入後、例えば、遺伝子発現条件下での宿主細胞の培養によって核酸から発現させる
か発現を可能にすることができる。１つの実施形態では、核酸を、宿主細胞のゲノム（例
えば、染色体）に取り込む。標準的な技術にしたがってゲノムを使用した組換えを促進す
る配列を含めることによって取り込みを促進することができる。
【０２２９】
本発明はまた、一定の実施形態では、特定のポリペプチド（本明細書中に記載のｐ９７
ポリペプチド、ポリペプチド薬剤、またはｐ９７−ポリペプチド薬剤融合タンパク質など
）を発現するために発現系中で本明細書中に記載の核酸構築物を使用する工程を含む方法
を提供する。
【０２３０】
上述の通り、一定のｐ９７結合体（融合タンパク質など）は、１つ以上のリンカー基（
非ペプチドリンカー（例えば、非タンパク質リンカー）およびペプチドリンカーが含まれ
る）を使用することができる。かかるリンカーは安定なリンカーまたは放出可能なリンカ
ーであり得る。
【０２３１】
例示的な非ペプチドの安定性連結には、スクシンイミド、プロピオン酸、カルボキシメ
チラート連結、エステル、カルバマート、アミド、アミン、カルバミド、イミン、脂肪族
Ｃ−Ｃ結合、チオエーテル連結、チオカルバマート、およびチオカルバミドなどが含まれ
る。一般に、加水分解的に安定な連結は、生理学的条件下で約１〜２％から５％／日未満
の加水分解率を示す連結である。
【０２３２】
例示的な非ペプチドの放出性連結には、カルボン酸エステル連結、リン酸エステル連結
、無水物連結、アセタール連結、ケタール連結、アシルオキシアルキルエーテル連結、イ
ミン連結、オルトエステル連結、チオエステル連結、チオールエステル連結、カルボナー
ト連結、およびヒドラゾン連結が含まれる。加水分解的に不安定なまたは弱い連結のさら
なる例示的な実施形態には、以下が含まれるが、これらに限定されない：−Ｏ２Ｃ−（Ｃ
Ｈ２）ｂ−Ｏ−（式中、ｂは１〜５である）、−Ｏ−（ＣＨ２）ｂ−ＣＯ２−（ＣＨ２）
ｃ−（式中、ｂは１〜５であり、ｃは２〜５である）、−Ｏ−（ＣＨ２）ｂ−ＣＯ２−（
ＣＨ２）ｃ−Ｏ−（式中、ｂは１〜５であり、ｃは２〜５である）、−（ＣＨ２）ｂ−Ｏ
ＰＯ３−（ＣＨ２）ｂ’−（式中、ｂは１〜５であり、ｂ’は１〜５である）、−Ｃ（Ｏ
）−（ＮＨ−ＣＨＲ−ＣＯ）ａ−ＮＨ−ＣＨＲ−（式中、ａは２〜２０であり、Ｒは、α
−アミノ酸上に見いだされる置換基である）、−Ｏ−（ＣＨ２）ｂ−ＣＯ２−ＣＨＣＨ２
−ＣＨ２−（式中、ｂは１〜５である）、−Ｏ−Ｃ６Ｈ４−ＣＨ＝Ｎ−（ＣＨ２）ｂ−Ｏ
−（式中、ｂは１〜５である）、および−Ｏ−（ＣＨ２）ｂ−ＣＨ２−ＣＨ＝Ｎ−（ＣＨ
２）ｂ−Ｏ−（式中、各ｂは、独立して、１〜５である）。
【０２３３】
放出可能なリンカーの他の例は、ベンジル脱離ベースのリンカー、トリアルキルロック
ベースのリンカー（またはトリアルキルロックラクトン化ベースのリンカー）、ビシンベ
ースのリンカー、および酸不安定性リンカーであり得る。その内で、酸不安定性リンカー
は、ジスルフィド結合、ヒドラゾン含有リンカー、およびチオプロピオナート含有リンカ
ーであり得る。
【０２３４】
細胞への内在化中または内在化の際に放出可能なまたは切断可能なリンカーも含まれる
。これらのリンカー基からの薬剤の細胞内放出機構には、ジスルフィド結合の還元による
切断（例えば、Ｓｐｉｔｌｅｒの米国特許第４，４８９，７１０号）、光解離性結合の照
射による切断（例えば、Ｓｅｎｔｅｒらの米国特許第４，６２５，０１４号）、誘導体化
アミノ酸側鎖の加水分解による切断（例えば、Ｋｏｈｎらの米国特許第４，６３８，０４
５号）、血清補体媒介加水分解による切断（例えば、Ｒｏｄｗｅｌｌらの米国特許第４，
６７１，９５８号）、および酸触媒加水分解による切断（例えば、Ｂｌａｔｔｌｅｒらの
米国特許第４，５６９，７８９号）が含まれる。１つの実施形態では、酸不安定性リンカ
ーを使用することができる（Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５２：１２７−１３１，
１９９２；および米国特許第５，２０８，０２０号）。
【０２３５】
一定の実施形態では、「水溶性ポリマー」を、ｐ９７ポリペプチド配列の目的の薬剤へ
のカップリングのためのリンカーにおいて使用する。「水溶性ポリマー」は、水溶性であ
り、通常は実質的に非免疫原性であり、通常は原子分子量が約１，０００ダルトンを超え
るポリマーをいう。水溶性ポリマーを介した２つのポリペプチドの付着は、かかる修飾が
血清半減期の増加（例えば、タンパク質分解安定性の増加および／または腎臓クリアラン
スの減少）によって治療指数を増加させることができるので、望ましい可能性がある。さ
らに、１つ以上のポリマーの付着により、タンパク質医薬品の免疫原性が減少し得る。水
溶性ポリマーの特定の例には、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポ
リオキシアルキレン、またはポリエチレングリコールとポリプロピレングリコールとのコ
ポリマーなどが含まれる。
【０２３６】
いくつかの実施形態では、水溶性ポリマーの有効流体学的分子量は、約１０，０００Ｄ
ａ超、約２０，０００〜５００，０００Ｄａ超、約４０，０００Ｄａ〜３００，０００Ｄ
ａ超、約５０，０００Ｄａ〜７０，０００Ｄａ超、通常は約６０，０００Ｄａ超である。
「有効流体学的分子量」は、水ベースのサイズ排除クロマトグラフィ（ＳＥＣ）によって
決定した場合のポリマー鎖の有効な水溶媒和サイズをいう。水溶性ポリマーがポリアルキ
レンオキシド反復単位（エチレンオキシド反復単位など）を有するポリマー鎖を含む場合
、各鎖の原子分子量は、約２００Ｄａと約８０，０００Ｄａとの間または約１，５００Ｄ
ａと約４２，０００Ｄａとの間であり得、２，０００〜約２０，０００Ｄａが特に興味深
い。直鎖、分枝鎖、および末端荷電水溶性ポリマーも含まれる。
【０２３７】
アルデヒドタグ化ポリペプチド間のリンカーとして有用なポリマーは、広範な分子量お
よびポリマーサブユニットを有することができる。これらのサブユニットは、生物学的ポ
リマー、合成ポリマー、またはその組み合わせを含むことができる。かかる水溶性ポリマ
ーの例には、以下が含まれる：デキストランおよびデキストラン誘導体（硫酸デキストラ
ン、Ｐ−アミノ架橋デキストリン、およびカルボキシメチルデキストリンが含まれる）、
セルロースおよびセルロース誘導体（メチルセルロースおよびカルボキシメチルセルロー
スが含まれる）、デンプンおよびデキストリン、ならびにデンプンの誘導体および加水分
解物（ｈｙｄｒｏｙｌａｃｔｅ）、ポリアルキレングリコール（ｐｏｌｙａｌｋｌｙｅｎ
ｅ  ｇｌｙｃｏｌ）およびその誘導体（ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、メトキシポ
リエチレングリコール、ポリエチレングリコールホモポリマー、ポリプロピレングリコー
ルホモポリマー、エチレングリコールのプロピレングリコールとのコポリマー（ここで、
前記ホモポリマーおよびコポリマーは非置換であるか、１つの末端がアルキル基、ヘパリ
ンおよびヘパリンのフラグメント、ポリビニルアルコールおよびポリビニルエチルエーテ
ル、ポリビニルピロリドン、アスパルトアミド、およびポリオキシエチル化ポリオール、
デキストランおよびデキストラン誘導体、デキストリンおよびデキストリン誘導体と置換
されている）が含まれる）。具体的に記載した水溶性ポリマーの種々の誘導体も含まれる
と認識されるであろう。
【０２３８】
水溶性ポリマー、特に、ポリエチレングリコール「ＰＥＧ」などのポリアルキレンオキ
シドベースのポリマーが当該分野で公知である（Ｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃ
ｏｌ）Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ：Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ
Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｊ．Ｍ．Ｈａｒｒｉｓ，Ｅｄ．，Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓ
ｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．（１９９２）；およびＰｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｇ
ｌｙｃｏｌ）Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉ
ｏｎｓ，Ｊ．Ｍ．Ｈａｒｒｉｓ  ａｎｄ  Ｓ．Ｚａｌｉｐｓｋｙ，Ｅｄｓ．，ＡＣＳ（１
９９７）；ならびに国際特許出願：ＷＯ９０／１３５４０号、ＷＯ９２／００７４８号、
ＷＯ９２／１６５５５号、ＷＯ９４／０４１９３号、ＷＯ９４／１４７５８号、ＷＯ９４
／１７０３９号、ＷＯ９４／１８２４７号、ＷＯ９４／２８９３７号、ＷＯ９５／１１９
２４号、ＷＯ９６／０００８０号、ＷＯ９６／２３７９４号、ＷＯ９８／０７７１３号、
ＷＯ９８／４１５６２号、ＷＯ９８／４８８３７号、ＷＯ９９／３０７２７号、ＷＯ９９
／３２１３４号、ＷＯ９９／３３４８３号、ＷＯ９９／５３９５１号、ＷＯ０１／２６６
９２号、ＷＯ９５／１３３１２号、ＷＯ９６／２１４６９号、ＷＯ９７／０３１０６号、
ＷＯ９９／４５９６４号、および米国特許第４，１７９，３３７号；同第５，０７５，０
４６号；同第５，０８９，２６１号；同第５，１００，９９２号；同第５，１３４，１９
２号；同第５，１６６，３０９号；同第５，１７１，２６４号；同第５，２１３，８９１
号；同第５，２１９，５６４号；同第５，２７５，８３８号；同第５，２８１，６９８号
；同第５，２９８，６４３号；同第５，３１２，８０８号；同第５，３２１，０９５号；
同第５，３２４，８４４号；同第５，３４９，００１号；同第５，３５２，７５６号；同
第５，４０５，８７７号；同第５，４５５，０２７号；同第５，４４６，０９０号；同第
５，４７０，８２９号；同第５，４７８，８０５号；同第５，５６７，４２２号；同第５
，６０５，９７６号；同第５，６１２，４６０号；同第５，６１４，５４９号；同第５，
６１８，５２８号；同第５，６７２，６６２号；同第５，６３７，７４９号；同第５，６
４３，５７５号；同第５，６５０，３８８号；同第５，６８１，５６７号；同第５，６８
６，１１０号；同第５，７３０，９９０号；同第５，７３９，２０８号；同第５，７５６
，５９３号；同第５，８０８，０９６号；同第５，８２４，７７８号；同第５，８２４，
７８４号；同第５，８４０，９００号；同第５，８７４，５００号；同第５，８８０，１
３１号；同第５，９００，４６１号；同第５，９０２，５８８号；同第５，９１９，４４
２号；同第５，９１９，４５５号；同第５，９３２，４６２号；同第５，９６５，１１９
号；同第５，９６５，５６６号；同第５，９８５，２６３号；同第５，９９０，２３７号
；同第６，０１１，０４２号；同第６，０１３，２８３号；同第６，０７７，９３９号；
同第６，１１３，９０６号；同第６，１２７，３５５号；同第６，１７７，０８７号；同
第６，１８０，０９５号；同第６，１９４，５８０号；同第６，２１４，９６６号（参考
として援用される）を参照のこと）。
【０２３９】
例示的な目的のポリマーには、ポリアルキレンオキシド、ポリアミドアルキレンオキシ
ド、またはその誘導体（式−−（ＣＨ２−−ＣＨ２−−Ｏ）−−のエチレンオキシド反復
単位を含むポリアルキレンオキシドおよびポリアミドアルキレンオキシドが含まれる）を
含むポリマーが含まれる。さらなる例示的な目的のポリマーには、分子量が約１，０００
ダルトンを超える式−−［Ｃ（Ｏ）−−Ｘ−−Ｃ（Ｏ）−−ＮＨ−−Ｙ−−ＮＨ］ｎ−ま
たは−−［ＮＨ−−Ｙ−−ＮＨ−−Ｃ（Ｏ）−−Ｘ−−Ｃ（Ｏ）］ｎ−−（式中、Ｘおよ
びＹは、同一でも異なっていてもよく、分枝鎖または直鎖であり得る２価のラジカルであ
り、ｎは２〜１００、通常は２〜５０の個別の整数であり、ＸおよびＹのいずれかまたは
両方が直鎖または分枝鎖であり得る生体適合性の実質的に非抗原性の水溶性反復単位を含
む）のポリアミドが含まれる。
【０２４０】
さらなる例示的な水溶性反復単位は、式−−（ＣＨ２−−ＣＨ２−−Ｏ）−−または−
−（ＣＨ２−−ＣＨ２−−Ｏ）−−のエチレンオキシドを含む。かかる水溶性反復単位数
は有意に変化することができ、かかる単位の通常の数は２〜５００、２〜４００、２〜３
００、２〜２００、２〜１００、最も通常には２〜５０である。例示的な実施形態は、Ｘ
およびＹの一方または両方が以下から選択される水溶性反復単位である：−−（（ＣＨ２
）ｎ１−−（ＣＨ２−−ＣＨ２−−Ｏ）ｎ２−−（ＣＨ２）−−または−−（（ＣＨ２）
ｎ１−−（Ｏ−−ＣＨ２−−ＣＨ２）ｎ２−−（ＣＨ２）ｎ１−−）（式中、ｎ１は１〜
６、１〜５、１〜４、最も通常には１〜３であり、ｎ２は、２〜５０、２〜２５、２〜１
５、２〜１０、２〜８、最も通常には２〜５である）。さらなる例示的な実施形態は、い
くつかあるバリエーションのうちで、Ｘが−−（ＣＨ２−−ＣＨ２）−−であり、Ｙが−
−（ＣＨ２−−（ＣＨ２−−ＣＨ２−−Ｏ）３−−ＣＨ２−−ＣＨ２−−ＣＨ２）−−−
または−−（ＣＨ２−−ＣＨ２−−ＣＨ２−−（Ｏ−−ＣＨ２−−ＣＨ２）３−−ＣＨ２
）−−である水溶性反復単位である。
【０２４１】
一定の実施形態では、ペプチドリンカー配列を使用して、ｐ９７結合体の成分を分離ま
たはカップリングすることができる。例えば、ポリペプチド−ポリペプチド結合体につい
て、ペプチドリンカーは、確実に各ポリペプチドがその二次構造および三次構造に折りた
たまれるのに十分な距離で成分を分離することができる。かかるペプチドリンカー配列を
、本明細書中に記載されており、且つ当該分野で周知の標準的な技術を使用して、結合体
（例えば、融合タンパク質）に組み込むことができる。適切なペプチドリンカー配列を、
以下の要因に基いて選択することができる：（１）可動性の伸長高次構造を採用する能力
；（２）第１および第２のポリペプチド上の機能的エピトープと相互作用することができ
る二次構造を採用できないこと；および（３）ポリペプチド機能性エピトープと反応し得
る疎水性残基または荷電残基の欠如。リンカーとして有用に使用することができるアミノ
酸配列には、Ｍａｒａｔｅａら，Ｇｅｎｅ  ４０：３９−４６，１９８５；Ｍｕｒｐｈｙ
ら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８３：８２５８−８２６２，１９
８６；米国特許第４，９３５，２３３号、および米国特許第４，７５１，１８０号に開示
のアミノ酸配列が含まれる。
【０２４２】
一定の例示的な実施形態では、ペプチドリンカーは、約１〜５アミノ酸、５〜１０アミ
ノ酸、５〜２５アミノ酸、５〜５０アミノ酸、１０〜２５アミノ酸、１０〜５０アミノ酸
、１０〜１００アミノ酸、または任意のその間の範囲のアミノ酸である。他の例示的な実
施形態では、ペプチドリンカーは、約１、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４
０、４５、５０、またはそれを超えるアミノ酸長を含む。特定のリンカーは、約１〜２０
０アミノ酸、１〜１５０アミノ酸、１〜１００アミノ酸、１〜９０アミノ酸、１〜８０ア
ミノ酸、１〜７０アミノ酸、１〜６０アミノ酸、１〜５０アミノ酸、１〜４０アミノ酸、
１〜３０アミノ酸、１〜２０アミノ酸、１〜１０アミノ酸、１〜５アミノ酸、１〜４アミ
ノ酸、１〜３アミノ酸の全アミノ酸長、または約１、２、３、４、５、６、７、８、９、
１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２
３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６
、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、
５０、６０、７０、８０、９０、１００、もしくはそれを超えるアミノ酸を有することが
できる。
【０２４３】
ペプチドリンカーは、本明細書中の他の場所に記載されており、且つ当該分野で公知の
任意の１つ以上の天然に存在するアミノ酸、天然に存在しないアミノ酸、アミノ酸アナロ
グ、および／またはアミノ酸模倣物を使用することができる。リンカーとして有用に使用
することができる一定のアミノ酸配列には、Ｍａｒａｔｅａら，Ｇｅｎｅ  ４０：３９−
４６，１９８５；Ｍｕｒｐｈｙら，ＰＮＡＳ  ＵＳＡ．８３：８２５８−８２６２，１９
８６；米国特許第４，９３５，２３３号、および米国特許第４，７５１，１８０号に開示
のアミノ酸配列が含まれる。特定のペプチドリンカー配列は、Ｇｌｙ残基、Ｓｅｒ残基、
および／またはＡｓｎ残基を含む。他の中性に近いアミノ酸（ＴｈｒおよびＡｌａなど）
も、必要に応じてペプチドリンカー配列中で使用することができる。
【０２４４】
一定の例示的なリンカーには、以下のＧｌｙ、Ｓｅｒ、および／またはＡｓｎ含有リン
カーが含まれる：［Ｇ］ｘ、［Ｓ］ｘ、［Ｎ］ｘ、［ＧＳ］ｘ、［ＧＧＳ］ｘ、［ＧＳＳ
］ｘ、［ＧＳＧＳ］ｘ（配列番号２１）、［ＧＧＳＧ］ｘ（配列番号２２）、［ＧＧＧＳ
］ｘ（配列番号２３）、［ＧＧＧＧＳ］ｘ（配列番号２４）、［ＧＮ］ｘ、［ＧＧＮ］ｘ
、［ＧＮＮ］ｘ、［ＧＮＧＮ］ｘ（配列番号２５）、［ＧＧＮＧ］ｘ（配列番号２６）、
［ＧＧＧＮ］ｘ（配列番号２７）、［ＧＧＧＧＮ］ｘ（配列番号２８）リンカー（式中、
ｘは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１
６、１７、１８、１９、もしくは２０、またはそれを超える数である）。これらのアミノ
酸および関連するアミノ酸の他の組み合わせが当業者に明らかであろう。
【０２４５】
特定の実施形態では、リンカー配列は、３つのグリシン残基を含むＧｌｙ３リンカー配
列を含む。特定の実施形態では、可動性リンカーを、ＤＮＡ結合部位およびペプチド自体
の両方をモデリングすることができるコンピュータプログラム（Ｄｅｓｊａｒｌａｉｓ  
＆  Ｂｅｒｇ，ＰＮＡＳ．９０：２２５６−２２６０，１９９３；およびＰＮＡＳ．９１
：１１０９９−１１１０３，１９９４）を使用するかファージディスプレイ法によって合
理的にデザインすることができる。
【０２４６】
ペプチドリンカーは、生理学的に安定であり得るか、放出可能なリンカー（生理学的分
解性リンカーまたは酵素分解性リンカー（例えば、タンパク質分解性リンカー）など）が
含まれ得る。一定の実施形態では、１つ以上の放出可能なリンカーにより、結合体の半減
期がより短くなり、且つクリアランスがより迅速になり得る。これらおよび関連する実施
形態を使用して、例えば、血流中のｐ９７結合体の溶解性および血液循環寿命を向上させ
ることができる一方で、薬剤を血流中に（またはＢＢＢを通過して）送達させることもで
き、リンカーの分解後、ｐ９７配列を実質的に含まない。これらの態様は、ポリペプチド
または他の薬剤が、ｐ９７配列に持続的に結合体化した時に活性の減少が認められる場合
に特に有用である。本明細書中に提供したリンカーの使用により、かかる抗体は、結合体
化形態である場合にその治療活性を維持することができる。これらおよび他の方法では、
ｐ９７結合体の性質を、長期間にわたって抗体の生物活性および循環半減期のバランスを
とるようにより有効に調整することができる。
【０２４７】
本発明の特定の実施形態での使用に適切な酵素分解性連結には、以下が含まれるが、こ
れらに限定されない：セリンプロテアーゼ（トロンビン、キモトリプシン、トリプシン、
エラスターゼ、カリクレイン、またはサブチリシン（ｓｕｂｓｔｉｌｉｓｉｎ）など）に
よって切断されるアミノ酸配列。トロンビン切断性アミノ酸配列の実例には、以下が含ま
れるが、これらに限定されない：−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−（配列番号２９）
、−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−、−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ａｓｎ−Ｐｒｏ−
（配列番号３０）、−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−（配列番号３１）、−
Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−（配列番号３２）、−Ｇｌ
ｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−、−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−、および−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ａｒｇ
−。エラスターゼ切断性アミノ酸配列の実例には、以下が含まれるが、これらに限定され
ない：−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ−、−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ−（配列番号３
３）、−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−（配列番号３４）、−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｐｒ
ｏ−Ｐｈｅ−（配列番号３５）、−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−（配列番号３６）
、および−Ａｌａ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−（配列番号３７）。
【０２４８】
本発明の特定の実施形態での使用に適切な酵素分解性連結には、マトリックスメタロプ
ロテイナーゼ（コラゲナーゼ、ストロメライシン、およびゼラチナーゼなど）によって切
断することができるアミノ酸配列も含まれる。マトリックスメタロプロテイナーゼ切断性
アミノ酸配列の実例には、以下が含まれるが、これらに限定されない：−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ
−Ｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｚ−（配列番号３８）、−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−、Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−
Ｐｒｏ−Ｚ−（配列番号３９）、−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｚ−（配
列番号４０）、および−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｚ−（配列番号４１）（式中
、ＹおよびＺはアミノ酸である）。コラゲナーゼ切断性アミノ酸配列の実例には、以下が
含まれるが、これらに限定されない：−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｒｇ−
Ｚ−（配列番号４２）、−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｚ−（配
列番号４３）、−Ｐｒｏ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｔｒｐ−（配列番
号４４）、−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｍｅ）−Ｈｉｓ−（配列番号４５）、−
Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ａｌａ−（配列番号４６）、−Ｐｒｏ−Ｌｅ
ｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ａｒｇ−（配列番号４７）、および−Ｐｒｏ−Ｌ
ｅｕ−Ａｌａ−Ｔｙｒ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ａｒｇ−（配列番号４８）（式中、Ｚはアミノ
酸である）。ストロメライシン切断性アミノ酸配列の実例は、−Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ａｌａ
−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ａｒｇ−（配列番号４９）であり、ゼラチナーゼ切断性アミ
ノ酸配列の例は、−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｍｅｔ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−（配列
番号５０）である。
【０２４９】
本発明の特定の実施形態での使用に適切な酵素分解性連結には、アンギオテンシン変換
酵素によって切断することができるアミノ酸配列（例えば、−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−
、−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−（配列番号５１）および−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ａｓ
ｐ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−（配列番号５２）など）も含まれる。
【０２５０】
本発明の特定の実施形態での使用に適切な酵素分解性連結には、カテプシンＢによって
切断することができるアミノ酸配列（例えば、−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−、−Ａｌａ−Ｌｅｕ−
Ａｌａ−Ｌｅｕ−（配列番号５３）、−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−（配列番号５
４）、および−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−など）も含まれる。
【０２５１】
しかし、一定の実施形態では、１つ以上の非ペプチドリンカーまたはペプチドリンカー
のいずれかは任意である。例えば、第１および第２のポリペプチドが機能的ドメインを分
離し、且つ立体障害を防止するために使用することができる非必須Ｎ末端および／または
Ｃ末端アミノ酸領域を有する融合タンパク質ではリンカー配列は必要ないかもしれない。
【０２５２】
本明細書中に記載のｐ９７ポリペプチドおよびｐ９７ポリペプチド結合体の機能的性質
を、当業者に公知の種々の方法（例えば、親和性／結合アッセイ（例えば、表面プラズモ
ン共鳴、競合阻害アッセイ）、細胞毒性アッセイ、細胞生存度アッセイ、細胞増殖または
分化アッセイ、ｉｎ  ｖｉｔｒｏモデルまたはｉｎ  ｖｉｖｏモデルを使用する癌細胞お
よび／または腫瘍増殖阻害が含まれる）を使用して評価することができる。例えば、本明
細書中に記載の結合体を、受容体内在化に及ぼす影響、ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖ
ｉｖｏでの有効性など（血液脳関門を通過する輸送速度が含まれる）について試験するこ
とができる。かかるアッセイを、当業者に公知の十分に確立されているプロトコール（例
えば、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇ
ｙ（Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂｌ．Ａｓｓｏｃ．Ｉｎｃ．＆  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓ
ｏｎｓ，Ｉｎｃ．，ＮＹ，ＮＹ）；Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍ
ｕｎｏｌｏｇｙ（Ｅｄｉｔｅｄ  ｂｙ：Ｊｏｈｎ  Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ，Ａｄａ  Ｍ．Ｋ
ｒｕｉｓｂｅｅｋ，Ｄａｖｉｄ  Ｈ．Ｍａｒｇｕｌｉｅｓ，Ｅｔｈａｎ  Ｍ．Ｓｈｅｖａ
ｃｈ，Ｗａｒｒｅｎ  Ｓｔｒｏｂｅｒ  ２００１  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ
，ＮＹ，ＮＹ）を参照のこと）または市販のキットを使用して行うことができる。
【０２５３】
使用方法および薬学的組成物
本発明の一定の実施形態は、本明細書中に記載のｐ９７ポリペプチドおよびｐ９７結合
体の組成物の使用方法に関する。かかる方法の例には、例えば、一定の器官／組織（神経
系の器官／組織など）の医用画像のためのｐ９７結合体の使用を含む処置方法および診断
方法が含まれる。具体的な実施形態は、中枢神経系（ＣＮＳ）の障害もしくは容態または
ＣＮＳ成分を有する障害もしくは容態の診断および／または処置方法を含む。
【０２５４】
したがって、一定の実施形態は、本明細書中に記載のｐ９７結合体を含む組成物を投与
する工程を含む、処置を必要とする被験体の処置方法を含む。本明細書中に記載のｐ９７
結合体を含む組成物を投与する工程を含む、被験体の神経系（例えば、中枢神経系組織）
への薬剤の送達方法も含まれる。一定のこれらおよび関連する実施形態では、本方法によ
り、例えば、薬剤のみを含む組成物による送達と比較して、中枢神経系組織への薬剤の送
達速度が増大する。
【０２５５】
いくつかの例では、被験体は、ＣＮＳの疾患、障害、または容態を有し、ここで、末梢
組織と比較して血液脳関門を介したＣＮＳ組織への治療薬の送達の増大は、例えば、末梢
組織への薬剤の曝露に関連する副作用の低下によって処置を改善させることができる。例
示的なＣＮＳの疾患、障害、および容態には、原発性および転移性のＣＮＳ癌、リソソー
ム蓄積症、神経変性疾患（アルツハイマー病など）、および自己免疫疾患（多発性硬化症
など）が含まれる種々の癌が含まれる。
【０２５６】
したがって、一定の実施形態は、中枢神経系（ＣＮＳ）、任意選択的には脳の癌の処置
方法であって、ここで、処置を必要とする被験体は、かかる癌を有するか、かかる容態の
発症リスクがある、方法に関する。いくつかの実施形態では、癌は、ＣＮＳの原発性癌（
脳の原発性癌など）である。例えば、方法は、神経膠腫、髄膜腫、下垂体腺腫、前庭神経
鞘腫、原発性ＣＮＳリンパ腫、または未分化神経外胚葉性腫瘍（髄芽腫）の処置方法であ
り得る。いくつかの実施形態では、神経膠腫は、星状細胞腫、乏突起膠腫、上衣腫、また
は脈絡叢乳頭腫である。一定の実施形態では、原発性のＣＮＳまたは脳の癌は、多形性膠
芽細胞腫（巨細胞膠芽腫（ｇｉａｎｔ  ｃｅｌｌ  ｇｌｉｏｂａｓｔｏｍａ）または神経
膠肉腫など）である。
【０２５７】
特定の実施形態では、癌は、ＣＮＳの転移性癌（例えば、脳に転移した癌）である。か
かる癌の例には、乳癌、肺癌、尿生殖路癌、胃腸管癌（例えば、結腸直腸癌、膵癌）、骨
肉腫、黒色腫、頭頸部癌、前立腺癌（例えば、前立腺腺癌）、およびリンパ腫が含まれる
が、これらに限定されない。したがって、一定の実施形態は、治療有効量の本明細書中に
開示の結合体の患者への（例えば、投与後に、すなわち、当業者に公知の適切なコントロ
ールと比較して統計的に有意な様式で癌の転移を阻害、防止、または遅延させる量での）
投与によって癌の転移を処置、阻害、または防止する方法を含む。特定の実施形態では、
被験体は、当該分野で公知の癌の中で特に中枢神経系に依然として転移していない癌（１
つ以上の上記の癌が含まれる）を有する。
【０２５８】
特定の実施形態では、癌（細胞）は、１つ以上のＨｅｒ２／ｎｅｕ、Ｂ７Ｈ３、ＣＤ２
０、Ｈｅｒ１／ＥＧＦ受容体、ＶＥＧＦ受容体、ＰＤＧＦ受容体、ＣＤ３０、ＣＤ５２、
ＣＤ３３、ＣＴＬＡ−４、またはテネイシンを発現または過剰発現する。
【０２５９】
他の癌（乳癌、前立腺癌、消化管癌、肺癌、卵巣癌、睾丸癌、頭頸部癌、胃癌、膀胱癌
、膵臓癌、肝臓癌、腎臓癌、扁平上皮癌、黒色腫、非黒色腫癌、甲状腺癌、子宮内膜癌、
上皮腫瘍、骨の癌、または造血性癌が含まれる）の処置も含まれる。それ故、一定の実施
形態では、ｐ９７結合体によって処置される癌細胞は、癌抗原（ヒトＨｅｒ２／ｎｅｕ、
Ｈｅｒ１／ＥＧＦ受容体（ＥＧＦＲ）、Ｈｅｒ３、Ａ３３抗原、Ｂ７Ｈ３、ＣＤ５、ＣＤ
１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３（ＩｇＥ受容体）、Ｃ２４２抗原、５Ｔ４、ＩＬ−
６、ＩＬ−１３、血管内皮成長因子ＶＥＧＦ（例えば、ＶＥＧＦ−Ａ）ＶＥＧＦＲ−１、
ＶＥＧＦＲ−２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４０、ＣＤ４４、ＣＤ５１、ＣＤ
５２、ＣＤ５６、ＣＤ７４、ＣＤ８０、ＣＤ１５２、ＣＤ２００、ＣＤ２２１、ＣＣＲ４
、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＴＬＡ−４、ＮＰＣ−１Ｃ、テネイシン、ビメンチン、インスリン様
成長因子１受容体（ＩＧＦ−１Ｒ）、α−フェトプロテイン、インスリン様成長因子１（
ＩＧＦ−１）、炭酸脱水酵素９（ＣＡ−ＩＸ）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、インテグリン
αｖβ３、インテグリンα５β１、葉酸受容体１、膜貫通糖タンパク質ＮＭＢ、線維芽細
胞活性化タンパク質α（ＦＡＰ）、糖タンパク質７５、ＴＡＧ−７２、ＭＵＣ１、ＭＵＣ
１６（またはＣＡ−１２５）、ホスファチジルセリン、前立腺特異的膜抗原（ＰＭＳＡ）
、ＮＲ−ＬＵ−１３抗原、ＴＲＡＩＬ−Ｒ１、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメ
ンバー１０ｂ（ＴＮＦＲＳＦ１０ＢまたはＴＲＡＩＬ−Ｒ２）、ＳＬＡＭファミリーメン
バー７（ＳＬＡＭＦ７）、ＥＧＰ４０汎癌腫抗原、Ｂ細胞活性化因子（ＢＡＦＦ）、血小
板由来成長因子受容体、糖タンパク質ＥｐＣＡＭ（１７−１Ａ）、プログラム死−１、タ
ンパク質ジスルフィドイソメラーゼ（ＰＤＩ）、再生肝ホスファターゼ３（ＰＲＬ−３）
、前立腺酸性ホスファターゼ、ルイス−Ｙ抗原、ＧＤ２（神経外胚葉起源の腫瘍上に発現
するジシアロガングリオシド）、グリピカン−３（ＧＰＣ３）、および／またはメソテリ
ンなど）を過剰発現するか、これらに関連する。
【０２６０】
癌（ＣＮＳの癌が含まれる）処置のためのｐ９７結合体の使用を、他の治療方法と組み
合わせることができる。例えば、ｐ９７結合体を含む組成物を、他の治療的介入（対症ケ
ア、照射療法、手術、移植、免疫療法、ホルモン療法、光力学療法、抗生物質治療、また
はその任意の組み合わせが含まれる）の前、間、または後に被験体に施すことができる。
対症ケアには、脳浮腫、頭痛、認知障害、および嘔吐を軽減するためのコルチコステロイ
ドの投与ならびに痙攣を軽減するための抗痙攣薬の投与が含まれる。照射療法には、伝統
的な手術とさらに組み合わせることができる全脳照射、分割照射療法、および放射線手術
（定位手術的照射など）が含まれる。
【０２６１】
特定の併用療法では、ｐ９７−抗体結合体の抗体部分はセツキシマブを含み、ｐ９７−
セツキシマブ結合体を、放射線療法と組み合わせて頭頸部の局所的または領域的に進行し
た扁平上皮癌を有する被験体の処置のために使用する。他の態様では、ｐ９７−セツキシ
マブ結合体を、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）を使用した白金ベースの治療と組み合
わせて頭頸部の再発性の局所領域的疾患または転移性扁平上皮癌を有する被験体の処置の
ために使用する。いくつかの態様では、ｐ９７−セツキシマブ結合体を、ＥＧＦＲ発現結
腸直腸癌を有し、且つイリノテカンベースの化学療法に抵抗性を示す被験体の処置のため
にイリノテカンと組わせて使用する。
【０２６２】
いくつかの例では、被験体は、リソソーム蓄積症を有するか、これを有するリスクが有
る。したがって、一定の方法は、処置を必要とする被験体におけるリソソーム蓄積症、任
意選択的に中枢神経系に関連するリソソーム蓄積症の処置に関する。例示的なリソソーム
蓄積症には、アスパルチルグルコサミン尿症、コレステロールエステル蓄積症、ウォルマ
ン病、シスチン蓄積症、ダノン病、ファブリー病、ファーバー脂肪肉芽腫症、ファーバー
病、フコース蓄積症、ガラクトシアリドーシスタイプＩ／ＩＩ、ゴーシェ病タイプＩ／Ｉ
Ｉ／ＩＩＩ、ゴーシェ病、グロボイド細胞白質ジストロフィ（ｇｌｏｂｏｉｄ  ｃｅｌｌ
ｌｅｕｃｏｄｙｓｔｒｏｐｈｙ）、クラッベ病、糖原貯蔵障害ＩＩ、ポンぺ病、ＧＭ１
−ガングリオシドーシスタイプＩ／ＩＩ／ＩＩＩ、ＧＭ２−ガングリオシドーシスタイプ
Ｉ、テイ・サックス病、ＧＭ２−ガングリオシドーシスタイプＩＩ、サンドホフ病、ＧＭ
２−ガングリオシドーシス、α−マンノシドーシスタイプＩ／ＩＩ、β−マンノシドーシ
ス、異染性白質ジストロフィ（ｍｅｔａｃｈｒｏｍａｔｉｃ  ｌｅｕｃｏｄｙｓｔｒｏｐ
ｈｙ）、ムコリピドーシスタイプＩ、シアリドーシスタイプＩ／ＩＩムコリピドーシスタ
イプＩＩ／ＩＩＩ  Ｉ−細胞疾患、ムコリピドーシスタイプＩＩＩＣ偽性ハーラーポリジ
ストロフィ、ムコ多糖体沈着症タイプＩ、ムコ多糖体沈着症タイプＩＩ、ハンター症候群
、ムコ多糖体沈着症タイプＩＩＩＡ、サンフィリッポ症候群、ムコ多糖体沈着症タイプＩ
ＩＩＢ、ムコ多糖体沈着症タイプＩＩＩＣ、ムコ多糖体沈着症タイプＩＩＩＤ、ムコ多糖
体沈着症タイプＩＶＡ、モルキオ症候群、ムコ多糖体沈着症タイプＩＶＢモルキオ症候群
、ムコ多糖体沈着症タイプＶＩ、ムコ多糖体沈着症タイプＶＩＩ、スライ症候群、ムコ多
糖体沈着症タイプＩＸ、多発性スルファターゼ欠損症、神経セロイドリポフスチノーシス
、ＣＬＮ１バッテン病、ニーマン・ピック病タイプＮＢ、ニーマン・ピック病、ニーマン
・ピック病タイプＣ１、ニーマン・ピック病タイプＣ２、濃化異骨症、シンドラー病タイ
プＩ／ＩＩ、シンドラー病、およびシアル酸蓄積症が含まれる。これらおよび関連する実
施形態では、ｐ９７ポリペプチドを、本明細書中に記載のように、リソソーム蓄積症に関
連する１つ以上のポリペプチドに結合体化することができる。
【０２６３】
一定の例では、被験体は、任意選択的にＣＮＳの自己免疫障害および／または神経変性
障害を有するか、有するリスクがある。それ故、処置を必要とする被験体における中枢神
経系（ＣＮＳ）の変性障害または自己免疫障害の処置方法も含まれる。例えば、特定の実
施形態では、ＣＮＳの変性障害または自己免疫障害は、アルツハイマー病、ハンチントン
病、パーキンソン病、または多発性硬化症（ＭＳ）である。それ故、一定の実施形態は、
アルツハイマー病、ハンチントン病、パーキンソン病、またはＭＳを有する被験体にｐ９
７結合体を投与する工程を含む。特定の実施形態では、ｐ９７ポリペプチドを、アルツハ
イマー病についてはアミロイド−β（例えば、Ａβ（１−４２））、ハンチントン病につ
いてはハンチンチン、パーキンソン病についてはα−シヌクレイン、またはＭＳについて
はα４インテグリン、ＣＤ２５、もしくはＩＬ−２３に特異的に結合する抗体または他の
薬剤に結合体化する。いくつかの実施形態では、ｐ９７ポリペプチドを、ＭＳ処置のため
にインターフェロン−βポリペプチドに結合体化する。特定の実施形態では、ｐ９７ポリ
ペプチドを、ＭＳ処置のためにダクリズマブに結合体化する。
【０２６４】
処置を必要とする被験体における疼痛の処置方法も含まれる。例には、急性疼痛、慢性
疼痛、および神経因性疼痛（その組み合わせが含まれる）が含まれる。いくつかの態様で
は、疼痛は中枢作用の構成要素（中心性疼痛症候群（ＣＰＳ）など）を有し、ここで、疼
痛は、ＣＮＳ（脳、脳幹、および／または脊髄が含まれる）の損傷または機能障害に関連
する。特定の実施形態では、ｐ９７ポリペプチドを、ＮＧＦまたはＴｒｋＡに特異的に結
合する抗体または他の薬剤に結合体化する。特定の実施形態では、ｐ９７ポリペプチドを
、疼痛の処置、任意選択的に、膝または臀部の骨関節炎、慢性腰痛、骨の癌の疼痛、また
は間質性膀胱炎の処置のためのタネズマブに結合体化する。
【０２６５】
処置を必要とする被験体における炎症または炎症状態の処置方法も含む。「炎症」は、
一般に、有害な刺激（病原体、損傷細胞（例えば、創傷）、および刺激物質など）に対す
る組織の生物学的応答をいう。用語「炎症応答」は、いくつかの本明細書中に記載され、
且つ当該分野で公知の機構の中で特に、炎症が生じ、そして調節される特定の機構（例示
にすぎないが、免疫細胞の活性化または移動、サイトカイン産生、血管拡張（キニン遊離
が含まれる）、繊維素溶解、および凝血が含まれる）をいう。理想的には、炎症は、罹患
組織の傷害性の刺激を除去し、治癒過程を惹起するための身体の防御的試みである。炎症
の非存在下では、創傷および感染は決して治癒せず、組織の進行性の破壊が生命を脅かす
状況に陥るであろう。他方では、過剰な炎症または慢性炎症は、種々の疾患（いくつかの
本明細書中に記載され、且つ当該分野で公知の疾患の中で特に、枯草熱、アテローム性動
脈硬化症、および関節リウマチなど）に関連し得る。
【０２６６】
本発明のｐ９７結合体は、急性炎症、慢性炎症、またはその両方を調整することができ
る。被験体のニーズに応じて、一定の実施形態は急性炎症または炎症応答の軽減に関し、
一定の実施形態は慢性炎症また慢性炎症応答の軽減に関する。
【０２６７】
急性炎症は、恐らく有害な刺激に対する身体の最初の応答に関し、血液から損傷組織へ
の血漿および白血球の移動の増加を含む。急性炎症は、短期間の過程であり、典型的には
、数分または数時間以内に開始され、傷害性刺激が除去された際に終了する。急性炎症を
、任意の１つ以上の発赤、発熱、腫脹、疼痛、および機能喪失によって特徴づけることが
できる。発赤および発熱は、主に深部体温での炎症部位への血流の増加に起因し、腫脹は
流動物の蓄積に原因し、疼痛は典型的には神経終末を刺激する化学物質の放出に起因し、
機能喪失は複数の原因を有する。
【０２６８】
急性炎症応答は、主に、局所免疫細胞（常在マクロファージ、樹状細胞、組織球、クッ
パー細胞（Ｋｕｐｐｆｅｒ  ｃｅｌｌｓ）、およびマスト細胞など）によって開始される
。感染、熱傷、または他の傷害の発症時、これらの細胞は活性化され、炎症の臨床徴候を
担う炎症メディエーター（血管作用性アミンおよびエイコサノイドなど）を放出する。血
管拡張およびそれによる血流量の増加により、発赤および発熱を引き起こす。血管透過性
の増加により、血漿タンパク質および流動物が組織内に滲出および漏出し、それにより腫
脹を引き起こす。ブランジキニンなどのメディエーターの一定の放出により、疼痛に対す
る感受性が増大し、血管が変化して好中球などの白血球が遊走または血管外遊出され、典
型的には、局所免疫細胞による走化性勾配に沿って遊走する。
【０２６９】
急性炎症応答はまた、予め形成された血漿タンパク質調整物質からなり、炎症応答を開
始および伝播するように並行して作用する１つ以上の無細胞の生化学的カスケード系を含
む。これらの系には、主に細菌によって活性化される補体系ならびに主に一定の感染、熱
傷、または他の外傷によって引き起こされる組織損傷型などの壊死によって活性化される
凝血系および繊維素溶解系が含まれる。それ故、ｐ９７結合体を使用して、急性炎症、ま
たは任意の１つ以上の個別の急性炎症応答を調整することができる。
【０２７０】
慢性炎症（延長および遅延された炎症応答）は、炎症部位に存在し、しばしば同時また
はほぼ同時の破壊および炎症過程からの組織の治癒を誘導する細胞型の進行性の変化によ
って特徴づけられる。細胞レベルでは、慢性炎症応答は、種々の免疫細胞（単球、マクロ
ファージ、リンパ球、形質細胞、および線維芽細胞など）を含み、主に顆粒球によって媒
介される急性炎症と対照的に、慢性炎症は主に単核球（単球およびリンパ球など）によっ
て媒介される。慢性炎症はまた、種々の炎症メディエーター（ＩＦＮ−γおよび他のサイ
トカイン、成長因子、反応性酸素種、および加水分解性酵素など）を含む。慢性炎症は何
ヶ月または何年も持続し、望ましくない組織破壊および線維症を引き起こし得る。
【０２７１】
慢性炎症の臨床徴候は、疾病の持続時間、炎症性病変、原因、および解剖学的罹患領域
に依存する（例えば、Ｋｕｍａｒら，Ｒｏｂｂｉｎｓ  Ｂａｓｉｃ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ
−８ｔｈ  Ｅｄ．，２００９  Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｌｏｎｄｏｎ；Ｍｉｌｌｅｒ，ＬＭ，
Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ  Ｌｅｃｔｕｒｅ  Ｎｏｔｅｓ，Ａｔｌａｎｔｉｃ  Ｖｅｔｅｒｉｎ
ａｒｙ  Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｃｈａｒｌｏｔｔｅｔｏｗｎ，ＰＥＩ，Ｃａｎａｄａを参照の
こと）。慢性炎症は、種々の病的状態または疾患（例えば、いくつかの本明細書中に記載
され、且つ当該分野で公知のもの中で特に、アレルギー、アルツハイマー病、貧血、大動
脈弁狭窄症、関節炎（関節リウマチおよび骨関節炎など）、癌、鬱血性心不全、線維筋痛
、線維症、心臓発作、腎臓不全、狼瘡、膵炎、卒中、手術合併症、炎症性肺疾患、炎症性
腸疾患、アテローム性動脈硬化症、および乾癬が含まれる）に関連する。それ故、ｐ９７
結合体を使用して、慢性炎症を処置または管理するか、任意の１つ以上の個別の慢性炎症
応答を調整するか、任意の１つ以上の慢性炎症に関連する疾患または容態を処置すること
ができる。
【０２７２】
一定の実施形態では、ｐ９７結合体は、炎症に関与する種々の細胞の活性化、炎症性分
子分泌（例えば、サイトカインまたはキニンの分泌）、増殖、活性、遊走、または接着の
調整などによって細胞レベルで炎症応答を調整することができる。かかる細胞の例には、
免疫細胞および血管細胞が含まれる。免疫細胞には、例えば、顆粒球（好中球、好酸球、
および好塩基球など）、マクロファージ／単球、リンパ球（Ｂ細胞、キラーＴ細胞（すな
わち、ＣＤ８＋Ｔ細胞）、ヘルパーＴ細胞（すなわち、ＣＤ４＋Ｔ細胞（Ｔｈ１細胞およ
びＴｈ２細胞が含まれる））、ナチュラルキラー細胞、γδＴ細胞、樹状細胞、および肥
満細胞など）が含まれる。血管細胞の例には、平滑筋細胞、内皮細胞、および線維芽細胞
が含まれる。１つ以上の免疫細胞または血管細胞に関連する炎症状態（好中球媒介性炎症
状態、マクロファージ媒介性炎症状態、およびリンパ球媒介性炎症状態が含まれる）の調
整方法も含まれる。
【０２７３】
一定の実施形態では、ｐ９７結合体は、炎症性分子（血漿由来炎症性分子および細胞由
来炎症性分子が含まれる）のレベルまたは活性を調整することができる。炎症促進性分子
および抗炎症性分子が含まれる。血漿由来炎症性分子の例には、任意の１つ以上の補体系
、キニン系、凝血系、および繊維素溶解系のタンパク質または分子が含まれるが、これら
に限定されない。補体系メンバーの例には、約６分子のＣ１ｑ、２分子のＣ１ｒ、および
２分子のＣ１ｓを含む分子複合体として血清中に存在するＣ１、Ｃ２（ａおよびｂ）、Ｃ
３（ａおよびＢ）、Ｃ４（ａおよびｂ）、Ｃ５、ならびにＣ５ａ、Ｃ５ｂ、Ｃ６、Ｃ７、
Ｃ８、およびＣ９の膜侵襲複合体が含まれる。キニン系の例には、ブランジキニン、カリ
ジン、カリクレイン（ｋａｌｌｉｄｒｅｉｎｓ）、カルボキシペプチダーゼ、アンギオテ
ンシン変換酵素、および中性エンドペプチダーゼが含まれる。
【０２７４】
細胞由来炎症性分子の例には、リソソーム顆粒内に含まれる酵素、血管作用性アミン、
エイコサノイド、サイトカイン、急性期タンパク質、および可溶性ガス（一酸化窒素など
）が含まれるが、これらに限定されない。血管作用性アミンは、少なくとも１つのアミノ
基を含み、血管を標的にしてその透過性を変化させて血管拡張させる。血管作用性アミン
の例には、ヒスタミンおよびセロトニンが含まれる。エイコサノイドは、２０炭素必須脂
肪酸の酸化によって作製されたシグナル伝達分子をいい、プロスタグランジン、プロスタ
サイクリン、トロンボキサン、およびロイコトリエンが含まれる。
【０２７５】
ｐ９７結合体はまた、急性期タンパク質のレベルまたは活性を調整することもできる。
急性期タンパク質の例には、Ｃ反応性タンパク質、血清アミロイドＡ、血清アミロイドＰ
、およびバソプレシンが含まれる。一定の例では、急性期タンパク質の発現は、一定範囲
の望ましくない全身作用（アミロイド症、発熱、血圧上昇、発汗低下、倦怠、無食欲、お
よび傾眠が含まれる）を引き起こし得る。したがって、ｐ９７結合体は、急性期タンパク
質のレベルもしくは活性、その全身作用、またはその両方を調整することができる。
【０２７６】
一定の実施形態では、ｐ９７結合体は、局所炎症、全身炎症、またはその両方を軽減す
る。一定の実施形態では、ｐ９７結合体は、局所炎症または局所炎症応答を軽減または維
持（すなわち、さらなる増大を防止）することができる。一定の実施形態では、ｐ９７結
合体は、全身炎症または全身炎症応答を軽減または維持（すなわち、さらなる増大を防止
）することができる。
【０２７７】
一定の実施形態では、炎症または炎症応答の調整は、１つ以上の組織または器官と関連
し得る。かかる組織または器官の非限定的な例には、皮膚（例えば、真皮、表皮、皮下の
層）、毛嚢、神経系（例えば、脳、脊髄、末梢神経、髄膜（硬膜、クモ膜、および軟膜が
含まれる））、聴覚系または平衡器官（例えば、内耳、中耳、外耳）、呼吸器系（例えば
、鼻、気管、肺）、胃食道組織（ｇａｓｔｒｏｅｓｏｐｈｏｇｅａｌ  ｔｉｓｓｕｅ）、
胃腸系（例えば、口腔、食道、胃、小腸、大腸、直腸）、脈管系（例えば、心臓、血管、
および動脈）、肝臓、胆嚢、リンパ系／免疫系（例えば、リンパ節、リンパ濾胞、脾臓、
胸腺、骨髄）、泌尿生殖系（例えば、腎臓、尿管、膀胱、尿道、子宮頸部、ファロピウス
管、卵巣、子宮、外陰、前立腺、尿道球腺、精巣上体（ｅｐｉｄｉｙｍｉｓ）、前立腺、
精嚢、精巣）、骨格筋系（例えば、骨格筋、平滑筋、骨、軟骨、腱、靭帯）、脂肪組織、
乳房、および内分泌系（例えば、視床下部、下垂体、甲状腺、膵臓、副腎）が含まれる。
したがって、ｐ９７結合体を使用して、任意のこれらの組織または器官に関連する炎症を
調整し、それによって、これらの組織または器官の炎症に関連する容態または疾患を処置
することができる。
【０２７８】
特定の実施形態では、炎症状態は、神経系または中枢神経系の構成要素（脳、脊髄、お
よび／または髄膜の炎症が含まれる）を有する。特定の実施形態では、ＣＮＳの炎症状態
は、髄膜炎（例えば、細菌性、ウイルス性）、脳炎（例えば、感染または急性播種性脳脊
髄炎などの自己免疫性炎症によって引き起こされる）、サルコイドーシス、新形成に関連
する非転移性疾患である。神経系またはＣＮＳに関連する炎症状態の特定の例には、髄膜
炎（すなわち、脳および脊髄を覆う保護膜の炎症）、脊髄炎、脳脊髄炎（ｅｎｃａｐｈａ
ｌｏｙｍｙｅｌｉｔｉｓ）（例えば、筋痛性脳脊髄炎、急性散在性脳脊髄炎、播種性脳脊
髄炎または多発性硬化症、自己免疫性脳脊髄炎）、くも膜炎（すなわち、くも膜（中枢神
経系の神経を取り囲んで保護する膜の１つ）の炎症）、肉芽腫、薬物誘導性炎症、または
髄膜炎、神経変性疾患（アルツハイマー病、卒中、ＨＩＶ−認知症など）、脳炎（ウイル
ス性脳炎および細菌性脳炎など）、寄生虫感染、炎症性脱髄性障害、および自己免疫障害
（ＣＮＳのＣＤ８＋Ｔ細胞媒介性自己免疫疾患など）が含まれるが、これらに限定されな
い。さらなる例には、パーキンソン病、重症筋無力症、運動ニューロパシー、ギラン・バ
レー症候群、自己免疫性ニューロパシー、ランバート・イートン筋無力症候群、腫瘍随伴
性神経学的疾患、腫瘍随伴性小脳萎縮、非腫瘍随伴性スティッフマン症候群、進行性小脳
萎縮、ラスムッセン脳炎、筋萎縮性側索硬化症、シデナム舞踏病、ジルドラトゥレット症
候群、自己免疫性多腺性内分泌症、異常免疫ニューロパシー、後天性神経性筋強直症、多
発性関節拘縮、視神経炎、全身強直症候群、卒中、外傷性脳損傷（ＴＢＩ）、脊柱狭窄症
、急性脊髄損傷、および脊髄圧迫が含まれる。
【０２７９】
上述の通り、神経系またはＣＮＳの感染に関連する炎症も含まれる。神経系の炎症に関
連する細菌感染の具体例には、連鎖球菌感染（Ｂ群連鎖球菌（例えば、サブタイプＩＩＩ
）および肺炎レンサ球菌（例えば、セロタイプ６、９、１４、１８、および２３）など）
、大腸菌（例えば、Ｋ１抗原保有）、リステリア・モノサイトゲネス（例えば、セロタイ
プＩＶｂ）、ナイセリア感染（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ（髄膜炎
菌）など）、ブドウ球菌感染、ヘモフィルス感染（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕ
ｅｎｚａｅタイプＢなど）、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）、および結核菌が含
まれるが、これらに限定されない。髄膜隙に侵入する可能性のある鼻腔中または大脳シャ
ントまたは関連するデバイス（例えば、心室外ドレーン、オマヤレザバー）を装着したヒ
トにおいて細菌がもたらす主に頭蓋に対する外傷に関連するブドウ球菌およびシュードモ
ナスならびに他のグラム陰性桿菌による感染も含まれる。神経系の炎症に関連するウイル
ス感染の具体例には、エンテロウイルス、単純ヘルペスウイルスタイプ１および２、ヒト
Ｔリンパ球向性ウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス（水疱および帯状疱疹）、ムンプスウイ
ルス、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、およびリンパ球脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ
）が含まれるが、これらに限定されない。髄膜炎はまた、スピロヘータ（Ｔｒｅｐｏｎｅ
ｍａ  ｐａｌｌｉｄｕｍ（梅毒）およびＢｏｒｒｅｌｉａ  ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ（ラ
イム病）など）、寄生虫（マラリア（例えば、大脳マラリア）など）、真菌（Ｃｒｙｐｔ
ｏｃｏｃｃｕｓ  ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓなど）、ならびにアメーバ（ａｍｅｏｂａ）（Ｎ
ａｅｇｌｅｒｉａ  ｆｏｗｌｅｒｉなど）による感染に起因し得る。
【０２８０】
髄膜炎または神経系炎症の他の形態もまた、髄膜への癌の拡大（悪性髄膜炎）、一定の
薬物（非ステロイド性抗炎症薬、抗生物質、および静脈内免疫グロブリンなど）、サルコ
イドーシス（または神経サルコイドーシス）、結合組織障害（全身性エリテマトーデスな
ど）、および一定の脈管炎の形態（血管壁の炎症状態）（ベーチェット病など）に関連し
得る。類表皮嚢胞および類皮嚢胞は、クモ膜下腔内への刺激物の放出によって髄膜炎を生
じ得る。したがって、ｐ９７結合体を使用して、任意の１つ以上のこれらの容態を処置ま
たは管理することができる。
【０２８１】
上述の通り、一定の被験体は、他の心毒性薬（すなわち、その結合体化されていない形
態で心毒性を示す薬剤（ｐ９７に結合体化していない薬剤））を使用した治療を受ける予
定であるか、治療中であるか、治療を受けていた。かかる被験体は、薬剤のみの投与と比
較してｐ９７−薬剤結合体の投与から恩恵を受け得る。これは、ｐ９７がそのＢＢＢ輸送
特性が異なると考えられる機構によって他の心毒性薬に対して心保護作用を発揮すること
ができることが理由の一部であるからである。それ故、かかる被験体を、種々の病状（本
明細書中に記載のＣＮＳの疾患および末梢の非ＣＮＳ組織に関連する疾患が含まれる）の
ためにｐ９７−心毒性薬結合体で処置することができる。
【０２８２】
例示的な心毒性薬は、本明細書中の他の場所に記載されており、周知のｉｎ  ｖｉｖｏ
診断技術およびｉｎ  ｖｉｔｒｏスクリーニング技術にしたがって同定することができる
。Ｂｏｖｅｌｌｉら，２０１０，ｓｕｐｒａ；Ｉｎｏｕｅら，ＡＡＴＥＸ  １４，Ｓｐｅ
ｃｉａｌ  Ｉｓｓｕｅ，４５７−４６２，２００７；およびＤｏｒｒら，Ｃａｎｃｅｒ  
Ｒｅｓｅａｒｃｈ．４８：５２２２−５２２７，１９８８を参照のこと。
【０２８３】
例えば、心毒性の疑いのある薬剤を使用した治療を受ける被験体を、ＬＶ収縮機能障害
および拡張機能障害、心臓弁膜症、心包炎および心内膜液滲出、ならびに頸動脈病変を評
価するための画像化技術によってモニタリングすることができる。ＬＶ短縮率およびＬＶ
ＥＦは、例えば化学療法中の心機能評価のためのＬＶ収縮機能の最も一般的な指標である
。また、ドプラ誘導拡張期指標は、治療を受けた患者におけるＬＶ機能障害の初期徴候を
示し、その結果、僧帽弁拡張期血流パターン、初期ピーク流速度対心房ピーク流（Ｅ／Ａ
）比、Ｅ波の減速時間、および等容性弛緩期の評価は、収縮機能障害が起こる前の弛緩期
のＬＶ機能の変化の検出に有用であり得る。パルス組織ドプラを標準的なドプラ心エコー
試験中に行うことができ、これは、心筋拡張期弛緩および収縮期機能（Ｅ’波、Ａ’波、
およびＳ波の速度）に関する定量的情報を得るのに信頼できる。ＬＶ側方僧帽弁輪の組織
ドプラは、予後の役割が認識されており、僧帽弁流入のＰＷドプラと組み合わせて、ＬＶ
充満圧の程度に関する正確な情報が得られる。ＬＶ心筋機能の初期の変化を、複数のＬＶ
部位のパルス組織ドプラによって同定し、この変化は心毒性の関連する決定要因であり得
る。
【０２８４】
特定の実施形態では、心毒性薬は化学療法薬であり、被験体は癌を有する。癌の具体例
には、乳癌、前立腺癌、消化管癌、肺癌、卵巣癌、睾丸癌、頭頸部癌、胃癌、膀胱癌、膵
臓癌、肝臓癌、腎臓癌、扁平上皮癌、ＣＮＳまたは脳の癌（本明細書中に記載）、黒色腫
、非黒色腫癌、甲状腺癌、子宮内膜癌、上皮腫瘍、骨の癌、および造血性癌が含まれるが
、これらに限定されない。
【０２８５】
特定の実施形態では、被験体は、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ発現癌（乳癌、卵巣癌、胃癌、侵襲
性子宮癌、または転移性癌（転移性ＣＮＳ癌など）など）を有し、ｐ９７ポリペプチドを
トラスツズマブに結合体化する。かかる患者は、特にＣＮＳ癌についてｐ９７とトラスツ
ズマブとの組み合わせに起因する治療相乗作用からだけでなく、ｐ９７の潜在的な心保護
作用に起因するトラスツズマブの心毒性の低下からも恩恵を受け得る。
【０２８６】
本明細書中に記載の１つ以上の疾患または容態を有する被験体の同定方法は、当該分野
で公知である。
【０２８７】
被験体の器官または組織の構成要素を画像化する方法であって、（ａ）ヒトｐ９７（メ
ラノトランスフェリン）ポリペプチドまたはその改変体を含む組成物を被験体に投与する
工程であって、ｐ９７ポリペプチドが検出可能な実体に結合体化されている、工程と、（
ｂ）被験体、器官、または組織中の検出可能な実体を視覚化する工程とを含む、方法も含
まれる。
【０２８８】
特定の実施形態では、器官または組織の構成要素は、中枢神経系（例えば、脳、脳幹、
脊髄）を含む。特定の実施形態では、器官または組織の構成要素は、脳またはその一部（
例えば、脳の実質）を含む。
【０２８９】
種々の方法を使用して、被験体、器官、または組織中の検出可能な実体を視覚化するこ
とができる。例示的な非侵襲性の方法は、Ｘ線撮影法（透視検査および射影Ｘ線写真など
）、ＣＴスキャンまたはＣＡＴスキャン（コンピュータ断層撮影法（ＣＴ）またはコンピ
ュータ体軸断層撮影法（ＣＡＴ））（Ｘ線ＣＴスキャン、陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）
、または単一光子放射型コンピュータ断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）のいずれかを使用する）
、および一定のタイプの磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）（特に、造影剤を利用する方法）（そ
の組み合わせが含まれる）が含まれる。
【０２９０】
単なる例として、陽電子放出造影剤または放射性同位体（１８Ｆなど）を使用してＰＥ
Ｔを行うことができ、γ線放射造影剤または放射性同位体（２０１ＴＩ、９９ｍＴＣ、１
２３Ｉ、および６７Ｇａなど）を使用してＳＰＥＣＴを行うことができ、造影剤または放
射性同位体（３Ｈ、１３Ｃ、１９Ｆ、１７Ｏ、２３Ｎａ、３１Ｐ、および１２９Ｘｅなど
）およびＧｄ（ガドリニウム（ｇａｄｏｌｉｄｉｎｉｕｍ）；キレート化有機Ｇｄ（ＩＩ
Ｉ）錯体）を使用してＭＲＩを行うことができる。任意の１つ以上のこれらの例示的造影
剤または放射性同位体を、画像化のためにｐ９７ポリペプチドに結合体化するか、そうで
なければｐ９７ポリペプチド中に組込み、被験体に投与することができる。例えば、ｐ９
７ポリペプチドを、１つ以上のこれらの放射性同位体で直接標識することができるか、１
つ以上のこれらの放射性同位体造影剤または本明細書中に記載の任意の他の造影剤を含む
分子（例えば、小分子）に結合体化することができる。
【０２９１】
ｉｎ  ｖｉｖｏでの使用（例えば、ヒト疾患の処置、医用画像、または試験）のために
、本明細書中に記載の結合体を、一般に、投与前に薬学的組成物に組み込む。薬学的組成
物は、生理学的に許容され得るキャリアまたは賦形剤と組み合わせた１つ以上の本明細書
中に記載のｐ９７ポリペプチドまたは結合体を含む。
【０２９２】
薬学的組成物を調製するために、有効量または所望の量の１つ以上のｐ９７ポリペプチ
ドまたは結合体を、特定の投与様式に適切であることが当業者に公知の任意の薬学的キャ
リアまたは賦形剤と混合する。薬学的キャリアは、液体、半液体、または固体であり得る
。非経口、皮内、皮下、または局所への適用のために使用される溶液または懸濁液には、
例えば、滅菌希釈剤（水など）、生理食塩水（例えば、リン酸緩衝生理食塩水；ＰＢＳ）
、固定油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールまたは他の合成
溶媒；抗菌薬（ベンジルアルコールおよびメチルパラベンなど）；抗酸化剤（アスコルビ
ン酸および亜硫酸水素ナトリウムなど）およびキレート剤（エチレンジアミン四酢酸（Ｅ
ＤＴＡ）など）；緩衝液（酢酸緩衝液、クエン酸緩衝液、およびリン酸緩衝液など）が含
まれ得る。静脈内投与する場合、適切なキャリアには、生理的食塩水またはリン酸緩衝生
理食塩水（ＰＢＳ）、ならびに増粘剤および溶解補助剤（グルコース、ポリエチレングリ
コール、ポリプロピレングリコール、およびその混合物など）を含む溶液が含まれる。
【０２９３】
本明細書中に記載のポリペプチドおよび結合体を、純粋な形態または適切な薬学的組成
物の形態で、類似の用途の薬剤の許容された任意の投与様式によって投与することができ
る。薬学的組成物を、ポリペプチドまたは結合体または結合体含有組成物を生理学的に許
容され得るキャリア、希釈剤、または賦形剤と組み合わせることによって調製することが
でき、これを固体、半固体、液体、または気体の調製物（錠剤、カプセル、散剤、顆粒、
軟膏、溶液、坐剤、注射液、吸入剤、ゲル、ミクロスフィア、およびエアロゾルなど）に
処方することができる。さらに、他の薬学的に有効な成分（本明細書中の他の場所に記載
の他の抗癌剤が含まれる）および／または適切な賦形剤（塩、緩衝液、および安定剤など
）は、組成物内に存在し得るが、必須ではない。
【０２９４】
種々の異なる経路（経口、非経口、鼻、静脈内、皮内、皮下、または局所が含まれる）
によって投与することができる。好ましい投与様式は、処置または防止される容態の性質
に依存する。
【０２９５】
キャリアは、例えば、使用される投薬量および濃度で曝露される細胞または哺乳動物に
無毒の薬学的に許容され得るキャリア、賦形剤、または安定剤が含まれ得る。しばしば、
生理学的に許容され得るキャリアは、ｐＨ緩衝化水溶液である。生理学的に許容され得る
キャリアの例には、リン酸、クエン酸、および他の有機酸などの緩衝液；抗酸化剤（アス
コルビン酸が含まれる）；低分子量（約１０未満の残基）ポリペプチド；タンパク質（血
清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリンなど）；親水性ポリマー（ポリビニルピ
ロリドンなど）；アミノ酸（グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン、または
リジンなど）；モノサッカリド、ジサッカリド、および他の炭水化物（グルコース、マン
ノース、またはデキストリンが含まれる）；キレート剤（ＥＤＴＡなど）；糖アルコール
（マンニトールまたはソルビトールなど）；塩形成対イオン（ナトリウムなど）；および
／または非イオン性界面活性剤（ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（商標））ポリエチレ
ングリコール（ＰＥＧ）、およびポロキサマー（ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標））など）が
含まれる。
【０２９６】
一定の態様では、ｐ９７ポリペプチド配列および薬剤を、各々か、個別にか、または依
存の結合体としてか、粒子（例えば、ナノ粒子、ビーズ、脂質処方物、脂質粒子、または
リポソーム（例えば、免疫リポソーム））に結合するか、粒子内にカプセル化する。例え
ば、特定の実施形態では、ｐ９７ポリペプチド配列を粒子表面に結合させ、目的の薬剤を
粒子表面に結合させ、そして／または粒子内にカプセル化する。いくつかのこれらおよび
関連する実施形態では、ｐ９７ポリペプチドおよび薬剤を、粒子自体（例えば、ナノ粒子
、リポソーム）のみを介して相互に共有結合性にまたは作動可能に連結させ、且つ任意の
別の方法では相互に共有結合性に結合させない（すなわち、これらを同一粒子に個別に結
合させる）。他の実施形態では、ｐ９７ポリペプチドおよび薬剤を、最初に本明細書中に
記載のように（例えば、リンカー分子を介して）相互に共有結合性または非共有結合性に
結合体化し、次いで、粒子（例えば、免疫リポソーム、ナノ粒子）に結合させるか粒子内
にカプセル化する。特定の実施形態では、粒子はリポソームであり、組成物は、１つ以上
のｐ９７ポリペプチド、１つ以上の目的の薬剤、およびリポソームを形成するための脂質
混合物（例えば、リン脂質（界面活性を有する混合脂質鎖））を含む。いくつかの態様で
は、リポソーム構造の形成によって共有結合性の結合体化を必要とすることなくｐ９７ポ
リペプチドおよび薬剤が作動可能に連結されるように、ｐ９７ポリペプチドおよび薬剤を
脂質／リポソーム混合物と個別に混合する。他の態様では、ｐ９７ポリペプチドおよび薬
剤を、本明細書中に記載のように最初に共有結合性または非共有結合性に相互に結合体化
し、次いで、脂質と混合してリポソームを形成する。ｐ９７ポリペプチド、薬剤またはｐ
９７−薬剤結合体を、例えば、コアセルベーション技術または界面重合（例えば、それぞ
れ、ヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチン−マイクロカプセルおよびポリ−（メチ
ルメタクリラート）マイクロカプセル）によって調製したマイクロカプセル中、コロイド
薬物送達系中（例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフィア、マイクロエマルジョン
、ナノ粒子、およびナノカプセル）またはマクロエマルジョン中に捕捉することができる
。かかる技術は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎ
ｃｅｓ，１６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｌｏ，Ａ．，Ｅｄ．，（１９８０）に開示され
ている。粒子またはリポソームは、他の治療薬または診断薬（細胞毒性薬など）をさらに
含むことができる。
【０２９７】
正確な投薬量および処置の持続時間は、処置される疾患の関数であり、公知の試験プロ
トコールを使用するか、当該分野で公知のモデル系において組成物を試験し、それから外
挿することによって経験的に決定することができる。比較臨床試験も行うことができる。
投薬量はまた、緩和すべき容態の重症度によって異なり得る。薬学的組成物を、一般に、
望ましくない副作用を最小にしながら治療的に有用な効果が発揮されるように処方および
投与する。組成物を１回投与することができるか、間隔をあけて投与すべきいくつかのよ
り小さな用量に分割することができる。任意の特定の被験体のために、特定の投薬レジメ
ンを各必要性に応じて長期間にわたって調整することができる。
【０２９８】
したがって、これらおよび関連する薬学的組成物の典型的な投与経路には、経口、局所
、経皮、吸入、非経口、舌下、口内、直腸、膣、および鼻腔内が含まれるが、これらに限
定されない。用語「非経口」には、本明細書中で使用する場合、皮下注射、静脈内、筋肉
内、胸骨内への注射または注入技術が含まれる。本発明の一定の実施形態の薬学的組成物
を、患者への組成物の投与の際に組成物中に含まれる有効成分が生物学的に利用可能なよ
うに処方する。被験体または患者に投与される組成物は、例えば、錠剤が単回投薬単位で
あり得る場合に１つ以上の投薬単位の形態を取ることができ、エアロゾル形態の本明細書
中に記載の結合体の容器は複数の投薬単位を保持することができる。かかる投薬形態の実
際の調製方法は公知であり、当業者に明らかであろう。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔ
ｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，２０ｔｈ
Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃ
ｙ  ａｎｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，２０００）を参照のこと。投与すべき組成物は、任意の事
象において、目的の疾患または容態の処置のための治療有効量の本明細書中に記載のｐ９
７ポリペプチド、薬剤または結合体を含むであろう。
【０２９９】
薬学的組成物は、固体または液体であり得る。１つの実施形態では、組成物が、例えば
、錠剤または散剤の形態であるように、キャリアは粒子である。組成物が、例えば、経口
用油、注射液、またはエアロゾル（例えば、吸入投与に有用）である場合、キャリアは液
体であり得る。経口投与を意図する場合、薬学的組成物は固体または液体のいずれかが好
ましく、本明細書中で固体または液体と見なされる範囲内に半固体、半液体、懸濁液、お
よびゲル形態が含まれる。
【０３００】
経口投与のための固体組成物として、薬学的組成物を、散剤、顆粒、圧縮錠、丸薬、カ
プセル、チューインガム、またはウェハなどに処方することができる。かかる固体組成物
は、典型的には、１つ以上の不活性希釈剤または食用キャリアを含むであろう。さらに、
１つ以上の以下が存在することができる：結合剤（カルボキシメチルセルロース、エチル
セルロース、微結晶性セルロース、トラガカントゴム、またはゼラチンなど）；賦形剤（
デンプン、ラクトース、またはデキストリンなど）、崩壊剤（アルギン酸、アルギン酸ナ
トリウム、プリモゲル、およびトウモロコシデンプンなど）；潤滑剤（ステアリン酸マグ
ネシウムまたはステロテックスなど）；流動促進剤（コロイド状二酸化ケイ素など）；甘
味剤（スクロースまたはサッカリンなど）；香味物質（ペパーミント、サリチル酸メチル
、またはオレンジフレーバーなど）；および着色剤。薬学的組成物がカプセル形態（例え
ば、ゼラチンカプセル）である場合、薬学的組成物は、上記タイプの材料に加えて、液体
キャリア（ポリエチレングリコールまたは油など）を含むことができる。
【０３０１】
薬学的組成物は、液体、例えば、エリキシル、シロップ、溶液、乳濁液、または懸濁液
の形態であり得る。液体は、２つの例を挙げると、経口投与用または注射による送達用で
あり得る。経口投与と意図する場合、好ましい組成物は、本発明の化合物に加えて、１つ
以上の甘味剤、防腐剤、色素／着色剤、および香味増強剤を含む。注射による投与を意図
する組成物では、１つ以上の界面活性剤、防腐剤、湿潤薬、分散剤、懸濁剤、緩衝液、安
定剤、および等張剤を含めることができる。
【０３０２】
溶液、懸濁液、または他の類似の形態である液体薬学的組成物は、１つ以上の以下のア
ジュバントを含むことができる：滅菌希釈剤（注射用蒸留水、生理食塩水（好ましくは生
理的食塩水）、リンゲル液、等張塩化ナトリウム、固定油（合成モノグリセリドまたはジ
グリセリド（溶剤または懸濁媒質としての役割を果たし得る）、ポリエチレングリコール
、グリセリン、プロピレングリコール、または他の溶剤など）；抗菌薬（ベンジルアルコ
ールまたはメチルパラベンなど）；抗酸化剤（アスコルビン酸または亜硫酸水素ナトリウ
ムなど）；キレート剤（エチレンジアミン四酢酸など）；緩衝液（酢酸緩衝液、クエン酸
緩衝液、またはリン酸緩衝液など）、および張度を調整するための薬剤（塩化ナトリウム
またはデキストロースなど）。非経口調製物を、アンプル、使い捨てのシリンジ、または
ガラス製またはプラスチック製の多用量バイアル中に封入することができる。生理的食塩
水は好ましいアジュバントである。注射用薬学的組成物は無菌であることが好ましい。
【０３０３】
非経口または経口投与のいずれかを意図する液体薬学的組成物は、適切な投薬量が得ら
れるような量の本明細書中に開示のｐ９７ポリペプチドまたは結合体を含むべきである。
典型的には、目的の薬剤のこの量は、組成物中において少なくとも０．０１％である。経
口投与を意図する場合、この量は、組成物の０．１重量％と約７０重量％との間で変化し
得る。一定の経口薬学的組成物は、約４％と約７５％との間の目的の薬剤を含む。一定の
実施形態では、本発明の薬学的組成物および薬学的調製物を、希釈前に非経口投薬単位が
０．０１重量％〜１０重量％の目的の薬剤を含むように調製する。
【０３０４】
キャリアが溶液、乳濁液、軟膏、またはゲル基剤を適切に含むことができる場合、薬学
的組成物は、局所投与を意図することができる。基剤は、例えば、１つ以上の以下を含む
ことができる：ペトロラタム、ラノリン、ポリエチレングリコール、蜜蝋、鉱油、希釈剤
（水およびアルコールなど）、ならびに乳化剤および安定剤。増粘剤は、局所投与用の薬
学的組成物中に存在することができる。経皮投与を意図する場合、組成物は、経皮貼布ま
たはイオン導入デバイスを含むことができる。
【０３０５】
薬学的組成物は、例えば、直腸内で融解して薬物を放出する坐剤の形態で、直腸投与を
意図し得る。直腸投与用組成物は、適切な非刺激性賦形剤として油脂性基剤を含むことが
できる。かかる基剤には、ラノリン、カカオバター、およびポリエチレングリコールが含
まれるが、これらに限定されない。
【０３０６】
薬学的組成物は、固体または液体の投薬単位の物理的形態を改変する種々の材料を含む
ことができる。例えば、組成物は、有効成分周囲にコーティングシェルを形成する材料を
含むことができる。コーティングシェルを形成する材料は、典型的には不活性であり、例
えば、糖、シェラック、および他の腸溶コーティング剤から選択することができる。ある
いは、有効成分を、ゼラチンカプセルにカプセル化することができる。固体または液体の
薬学的組成物は、結合体または薬剤に結合し、それにより、化合物の送達を補助する薬剤
を含むことができる。この能力で作用することができる適切な薬剤には、モノクローナル
抗体またはポリクローナル抗体、１つ以上のタンパク質またはリポソームが含まれる。
【０３０７】
薬学的組成物は、エアロゾルとして投与することができる投薬単位から本質的になり得
る。用語「エアロゾル」を、コロイド性の系から圧縮パッケージからなる系までの範囲の
種々の系を示すために使用する。液化ガスまたは圧縮ガスによるか、有効成分を分注する
適切なポンプシステムによって送達することができる。エアロゾルを、有効成分を送達す
るための単相系、二相系、または三相系で送達することができる。エアロゾルの送達には
、必要な容器、アクチベーター、バルブ、およびサブコンテナなどを含み、これらが共に
キットを形成し得る。当業者は、過度に実験を行うことなく、好ましいエアロゾルを決定
することができる。
【０３０８】
本明細書中に記載の結合体を含む組成物を、身体からの急速な排出から結合体を防御す
るキャリア（持続放出性の処方物またはコーティングなど）を使用して調製することがで
きる。かかるキャリアには、制御放出処方物（挿入物およびマイクロカプセル化送達系）
および生分解性の生体適合性ポリマー（エチレン酢酸ビニル、ポリ酸無水物、ポリグリコ
ール酸、ポリオルソエステル、ポリ乳酸、および当業者に公知の他のポリマーなど）など
が含まれるが、これらに限定されない。
【０３０９】
薬学的組成物を、薬学分野で周知の方法論によって調製することができる。例えば、注
射による投与を意図する薬学的組成物を、本明細書中に記載の結合体、および、任意選択
的に１つ以上の塩、緩衝液、および／または安定剤を含む組成物を、滅菌蒸留水と組み合
わせて溶液を形成することによって調製することができる。均一な溶液または懸濁液の形
成を容易にするために、界面活性剤を添加することができる。界面活性剤は、水性送達系
中での結合体の溶解または均一な懸濁を容易にするために結合体と非共有結合性に相互作
用する化合物である。
【０３１０】
組成物を治療有効量で投与することができ、治療有効量は、種々の要因（使用した特定
の化合物（例えば、結合体）の活性；化合物の代謝安定性および作用期間；患者の年齢、
体重、一般的な健康状態、性別、および食事；投与の様式および時間；排出速度；薬物の
組み合わせ；特定の障害または容態の重症度；および治療を受ける被験体が含まれる）に
応じて変化するであろう。一般に、治療有効１日量は（７０ｋｇの哺乳動物について）、
約０．００１ｍｇ／ｋｇ（すなわち、約０．０７ｍｇ）〜約１００ｍｇ／ｋｇ（すなわち
、約７．０ｇ）であり、好ましくは、治療有効用量は（７０ｋｇの哺乳動物について）は
、約０．０１ｍｇ／ｋｇ（すなわち、約０．７ｍｇ）〜約５０ｍｇ／ｋｇ（すなわち、約
３．５ｇ）であり、より好ましくは、治療有効用量（７０ｋｇの哺乳動物について）は、
約１ｍｇ／ｋｇ（すなわち、約７０ｍｇ）〜約２５ｍｇ／ｋｇ（すなわち、約１．７５ｇ
）である。
【０３１１】
本明細書中に記載の結合体を含む組成物を、本明細書中に記載のように、１つ以上の他
の治療薬の投与と同時、投与前、または投与後に投与することもできる。例えば、１つの
実施形態では、結合体を、抗炎症剤と共に投与する。抗炎症剤または抗炎症薬には、ステ
ロイドおよび糖質コルチコイド（ベタメタゾン、ブデソニド、デキサメタゾン、酢酸ヒド
ロコルチゾン、ヒドロコルチゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニ
ゾロン、プレドニゾン、トリアムシノロンが含まれる）、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳ
ＡＩＤＳ）（アスピリン、イブプロフェン、ナプロキセン、メトトレキサート、スルファ
サラジン、レフルノミド、抗ＴＮＦ薬、シクロホスファミド、およびミコフェノラートが
含まれる）が含まれるが、これらに限定されない。
【０３１２】
かかる併用療法は、本発明の化合物および１つ以上のさらなる活性薬剤を含む単一の薬
学的投薬形態の投与、ならびに本発明の結合体および各活性薬剤をその個別の薬学的投薬
処方物中に含む組成物の投与を含むことができる。例えば、本明細書中に記載の結合体お
よび他の活性薬剤を、患者に錠剤またはカプセルなどの単一の経口投薬組成物中で共に投
与することができるか、各薬剤を個別の経口投薬処方物で投与することができる。同様に
、本明細書中に記載の結合体および他の活性薬剤を、単一の非経口投薬組成物中で（生理
食塩水または他の生理学的に許容され得る溶液中など）共に患者に投与することができる
か、各薬剤を個別の非経口投薬処方物で投与することができる。個別の投薬処方物を使用
する場合、結合体および１つ以上のさらなる活性薬剤を含む組成物を、本質的に同時に（
すなわち、一斉に）または個別にずらした時間で（すなわち、連続的および任意の順序で
）投与することができ、併用療法は全てのこれらのレジメンが含まれると理解される。
【０３１３】
以下の実施例を例示のために示すが、本発明を制限するものではない。
【実施例】
【０３１４】
実施例１
ヒトメラノトランスフェリン（Ｐ９７）フラグメントの生成
血液脳関門（ＢＢＢ）輸送のｉｎ  ｖｉｔｒｏモデルでの試験のためのｐ９７フラグメ
ントを生成するために、臭化シアン（ＣＮＢｒ）およびトリプシンを使用してヒトメラノ
トランスフェリン（ｐ９７）の選択的な化学的消化および酵素的消化を行った。
【０３１５】
ＣＮＢｒ消化：ヒトｐ９７の５００μＬタンパク質サンプル（１０ｍｇ／ｍｌ）に、２
．６６４ｍｌの８８％ギ酸および１６６．５μＬの５Ｍ  ＣＮＢｒを含むアセトニトリル
を添加した。サンプルをボルテックスし、アルミニウム箔で覆い、ドラフト内にて室温で
２４時間インキュベートした。反応を停止させるために、１０体積のＭＳグレードの水を
添加した。消化材料を−８０℃で凍結し、一晩凍結乾燥させた。サンプルを精製するまで
−２０℃で保存した。消化材料を５ｍＬの０．１％ギ酸に再溶解し、ＷａｔｅｒｓのＳｅ
ｐ−Ｐａｃｋ  Ｃ８  １２ｃｃカートリッジを使用して精製した。精製された消化材料を
−８０℃で凍結し、一晩凍結乾燥させた。次いで、凍結乾燥させた生成物を、−２０℃で
保存した。表１は、ＣＮＢｒ消化物由来の推定ｐ９７フラグメントの例を示す。
【０３１６】
【表１−５】
2019147800.tif 000008
【０３１７】
消化生成物および精製生成物についてＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析を行った。未変性タンパク
質サンプルおよび消化タンパク質サンプルを４〜１２％Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓゲル上にロード
し、ゲルを２００Ｖの定電圧を使用して３５分間、開始電流１１４ｍＡおよび終了電流６
５ｍＡで泳動した。電気泳動後、ゲルを、それぞれ２００ｍＬのＭｉｌｌｉ−Ｑ水を使用
して５分間ずつ３回リンスした。次いで、ゲルを、２０ｍＬのＧｅｌＣｏｄｅ  Ｂｌｕｅ
染色試薬を使用して一晩染色し、その後に２００ｍＬのＭｉｌｌｉ−Ｑ水で１時間脱色し
た。ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析を図１に示す（レーン１、空；レーン２、青文字（Ｂｌｕｅ  
Ｌａｔｔｅｒ）を参照のこと；レーン２〜５、空；レーン６、５０μｇ未消化ｐ９７；レ
ーン７〜９、空；レーン１０、５０μｇ  ＣＮＢｒ消化ｐ９７；レーン１１〜１２、空）
。レーン６（未消化タンパク質サンプル）は、ｐ９７タンパク質が夾雑物を有することを
示す多数のバンドを有していた。レーン１０（ＣＮＢｒ消化物）および巨大な消化物フラ
グメントとして認められる少なくとも３つのバンド。
【０３１８】
これら３つのバンドを切り出し、トリプシンを使用してゲル内消化させ、抽出し、ＬＣ
−ＭＳ／ＭＳ分析によって分析した。結果を図３〜６に示す。図３は、ヒトｐ９７のＣＮ
Ｂｒ消化物のＭＳ／ＭＳ分析によって同定されたｐ９７フラグメントの配列範囲マップを
示す。図３Ａはバンド１の結果を示し、図３Ｂはバンド２の結果を示し、図３Ｂはバンド
３の結果を示す。
【０３１９】
図４Ａは、バンド１中に検出されたペプチドのヒトｐ９７のアミノ酸配列とのマッチン
グを示す。適合したペプチドの配列範囲を太字で示す。図４Ｂは、一定の物理的特徴と共
に各ペプチドを列挙している。図５Ａは、バンド２中に検出されたペプチドのヒトｐ９７
のアミノ酸配列とのマッチングを示す。適合したペプチドの配列範囲を太字で示す。図５
Ｂは、一定の物理的特徴と共に各ペプチドを列挙している。図６Ａは、バンド３中に検出
されたペプチドのヒトｐ９７のアミノ酸配列とのマッチングを示す。適合したペプチドの
配列範囲を太字で示す。図６Ｂは、一定の物理的特徴と共に各ペプチドを列挙している。
【０３２０】
トリプシン消化：ヒトｐ９７の５００μＬタンパク質サンプル（１０ｍｇ／ｍｌ）に、
０．５ｍｌの２５ｍＭ重炭酸アンモニウムを添加した。５０μｌの２００ｍＭ  ＤＴＴ（
２５ｍＭアンビック含有）を添加し、３７℃で３０分間還元した。２００μｌの２００ｍ
Ｍヨードアセトアミド（２５ｍＭアンビック含有）を添加し、遊離システインを３７℃で
３０分間アルキル化した。次に、２５０μｇのブタトリプシン（Ｐｒｏｍｅｇａ）をサン
プルに添加し、３７℃で一晩消化した。消化材料をＷａｔｅｒｓのＯａｓｉｓ  ＨＬＢ  
６ｃｃカートリッジを使用して精製した。精製された消化材料を−８０℃（８０Ｃ）で凍
結し、一晩凍結乾燥させた。凍結乾燥した生成物を−２０℃で保存した。
【０３２１】
ＭＳ分析のために、凍結乾燥したｐ９７トリプシン消化物を１ｍＬの０．１％ギ酸およ
び３％アセトニトリルで再水和した。１μｇをＣ１８カラムにロードし、ＬＴＱ  Ｏｒｂ
ｉｔｒａｐ  Ｖｅｌｏｓ質量分析計（Ｔｈｅｒｍｏ）に注入した。ＭＳ／ＭＳ分析は、サ
ンプルがいくつかのタンパク質夾雑物を含むことを示したが、ｐ９７トリプシン消化が成
功したことも確認された。
【０３２２】
結果を図２に示す。図２Ａ〜２Ｄは、ＭＳ／ＭＳ分析によって同定された溶液中のヒト
ｐ９７のトリプシン消化物のｐ９７フラグメントのリストを示し、図２Ｅはその分析の配
列範囲マップを示す。
【０３２３】
実施例２
血液脳関門のｉｎ  ｖｉｔｒｏモデルにおけるｐ９７フラグメントの試験
関連および推定ＢＢＢのｉｎ  ｖｉｔｒｏモデルを使用したｐ９７ペプチドフラグメン
ト混合物の血液脳関門（ＢＢＢ）の通過を評価するための実験を行った（Ｃｅｃｃｈｅｌ
ｌｉら，Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．３６：１６５−１７８，１９９９を参
照のこと）。モデルは、ｉｎ  ｖｉｖｏ  ＢＢＢを忠実に模倣するために膠細胞と共培養
した脳毛細血管内皮細胞を利用する（Ｌｕｎｄｑｕｉｓｔら，Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．１６
：９７６−９８１，２００２を参照のこと）。
【０３２４】
細胞ベースのＢＢＢモデル：脳毛細血管機能を研究するためのｉｎ  ｖｉｔｒｏ系を提
供するために、ｉｎ  ｖｉｖｏ  ＢＢＢを忠実に模倣する共培養過程を、フィルターの片
側で脳毛細血管内皮細胞を培養し、反対側で支持膠細胞を培養することによって確立した
。具体的には、内皮細胞を、フィルターの上部区画中で培養し、膠細胞をプラスチック製
の６ウェルプレート上の下部区画中で培養した（図７および８を参照のこと）。これらの
条件下で、内皮細胞は、適切な内皮マーカー（例えば、第ＶＩＩＩ因子関連抗原、非血栓
形成表面、プロスタサイクリンの産生、アンギオテンシン変換酵素活性）を保持し、ＢＢ
Ｂの関連する特徴（例えば、密着結合の存在、少数の飲小胞、モノアミンオキシダーゼ活
性、γ−グルタミルトランスペプチダーゼ活性、Ｐ−糖タンパク質活性、低密度リポタン
パク質の特異的受容体、およびトランスフェリン）も保持している。
【０３２５】
膠細胞培養。膠細胞の初代培養物を、新生ラット大脳皮質から単離した（Ｂｏｏｈｅｒ
＆  Ｓｅｎｓｅｎｂｒｅｎｎｅｒ，Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌｏｇｙ．２：９７−１０５，１
９７２）。髄膜の除去後、脳組織を穏やかにナイロン篩にかけた。１０％（ｖ／ｖ）仔ウ
シ胎児血清（ＦＣＳ、ウシ胎児血清と同一：ＦＢＳ）、２ｍＭグルタミン、および５０μ
ｇ．ｍｌ−１のゲンタマイシンを補足したＤＭＥＭ（ダルベッコ改変イーグル培地）を、
脳組織の分離および膠細胞の成長のために使用した。播種３週間後、膠細胞培養物は安定
化し、星状膠細胞（約６０％）、乏突起膠細胞、および小膠細胞から構成された（Ｄｅｓ
ｃａｍｐｓら，Ｇｌｉａ．４２：４６−５８，２００３）。
【０３２６】
フィルターインサートの調製。培養プレートインサート（Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ  ＰＥ  
３μｍ細孔サイズ；直径２４ｍｍ，ＣＯＳＴＡＲ，３４５２／Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ  ＰＣ
３μｍ細孔サイズ；直径２４ｍｍ，ＣＯＳＴＡＲ，３４１４）の上側を、ラット尾コラ
ーゲンでコーティングした。
【０３２７】
脳毛細血管内皮細胞の膠細胞との共培養。膠細胞を、プラスチック製６ウェルプレート
中に約１．２５×１０５細胞／ｍｌの濃度でプレートし、５％ＣＯ２下にて３７℃でイン
キュベートした。１週間に２回培地を交換した。播種３週間後、膠細胞培養物は安定化す
るようになった。次いで、継代数３で凍結した内皮細胞のサブクローンを、直径６０ｍｍ
のゼラチンコーティングしたペトリ皿上で培養した。コンフルエントな内皮細胞をトリプ
シン処理し、密度４×１０５細胞／ｍｌでフィルターの上側にプレートした。共培養のた
めに使用した培地は、１０％（ｖ／ｖ）仔ウシ血清（ＣＳ）および１０％（ｖ／ｖ）ウマ
血清（ＨＳ）、２ｍＭグルタミン、および５０μｇ／ｍｌのゲンタマイシンを補足したＤ
ＭＥＭであり、１ｎｇ／ｍｌの塩基性線維芽細胞成長因子を１日おきに添加した。これら
の条件下で、内皮細胞は、約１２日後にコンフルエントな単層を形成した。
【０３２８】
ルシファーイエローを、ＢＢＢモデルの完全性を確認するための試験ペプチドの評価に
おける傍細胞マーカーとして使用した。この小型の親水性分子は脳透過性が低く、その内
皮透過係数によって内皮細胞単層の完全性が明らかとなり、それにより、有用なコントロ
ールとして役立つ。実験当日、リンゲル−ＨＥＰＥＳ（ＮａＣｌ、１５０ｍＭ；ＫＣｌ、
５．２ｍＭ；ＣａＣｌ２、２．２ｍＭ；ＭｇＣｌ２  ６Ｈ２Ｏ、０．２ｍＭ；ＮａＨＣＯ
３、６ｍＭ；ＨＥＰＥＳ、５ｍＭ；グルコース、２．８ｍＭ）を、６ウェルプレートの下
部区画（反管腔側）に添加した（ウェルあたり３ｍＬ）。内皮細胞を含むか含まないフィ
ルターを、リンゲル−ＨＥＰＥＳ溶液にて３７℃で１０分間洗浄して血清の形跡を最小に
し、次いで、６ウェルプレートの各ウェルに移した。ルシファーイエロー（２０μＭ）と
組み合わせてペプチドフラグメントを含む、体積１ｍＬのリンゲル−ＨＥＰＥＳ溶液を、
ウェルの上部区画（管腔側）に入れた。
【０３２９】
実験を、コンフルエントな内皮細胞単層を含むフィルターを使用して３連で行うか（Ｂ
ＢＢ完全性試験またはペプチドフラグメント通過の評価用）、コラーゲンのみをコーティ
ングした空のフィルターを使用して３連で行った（フィルター試験）。ロッキングプラッ
トフォーム上にて３７℃で１２０分間インキュベートした。インキュベーション期間の終
了後、以下に詳述するように、管腔側および反管腔側の液体のアリコートを蛍光計数のた
めに回収して膜完全性を評価し（ルシファーイエロー）、ＬＣ／ＭＳ分析を行って空のフ
ィルターまたは内皮単層のｐ９７ペプチドフラグメントの通過を評価した。
【０３３０】
蛍光分析。ルシファーイエロー（２０μＭ）を、ＢＢＢの透過性をモニタリングするた
めの傍細胞マーカーとして使用し、蛍光カウンター（Ｆｌｏｕｒｏｓｋａｎ  Ａｓｃｅｎ
ｔ，Ｔｈｅｒｍｏｌａｂｓ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）によって分析した。３連の各下部区画およ
び初期溶液（試験ペプチドおよびルシファーイエローを含有）由来の代表的サンプル中の
蛍光を決定した。反管腔側（下部区画）については、２００μＬのアリコートを９６ウェ
ルプレートに添加して蛍光計数によって測定し、管腔側（上部区画）については、Ｔ０分
およびＴ１２０分由来の２０μＬのアリコートを９６ウェルプレートに添加して蛍光計数
によって測定した。
【０３３１】
トリプシン消化物のＬＣ／ＭＳ分析。各ウェルから３００μｌを取り出し、各時点／画
分／細孔サイズについて単一のチューブにプールした。５００μｌの０．１％ギ酸を、酸
性化のために各サンプルに添加した。ペプチドを、ＷａｔｅｒｓのＯａｓｉｓ  ＨＬＢ  
１０ｃｃカートリッジを使用して精製し、精製したペプチドを−８０℃で凍結し、一晩凍
結乾燥させた。サンプルを３０μｌ（２０％アセトニトリル、０．１％ＦＡ）で再水和し
た。１５μｌの各サンプルを、ＬＴＱ  Ｏｒｂｉｔｒａｐ  Ｖｅｌｏｓ質量分析計（Ｔｈ
ｅｒｍｏ）におけるＬＣ−ＭＳ／ＭＳによって分析し、データ（生ファイル）を、Ｐｒｏ
ｔｅｏｍｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｅｒ  １．３．０．３３９ソフトウェアスイート（Ｔｈｅ
ｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して分析した。ピークリストを、Ｕｎｉｐｒｏｔ
−ＳｗｉｓｓｐｒｏｔデータベースのＭａｓｃｏｔ２．３サーバにサブミットした。高信
頼度で検出された各タンパク質の上位３つのペプチドのピーク領域を計算した。
【０３３２】
細孔サイズ０．３μｍおよび０．４μｍの両方について、１２０分後に管腔側区画およ
び反管腔側区画中にトリプシンペプチドが検出された。上位３つのｐ９７ペプチドのピー
ク領域に基づいて、管腔側の反管腔側に対するペプチド比は約２：１であった。特異的ｐ
９７ペプチドの結果を、以下の表２（細孔サイズ３ミクロン）および表３（細孔サイズ４
ミクロン）に示す。
【０３３３】
【表２−１】
2019147800.tif 000009
【０３３４】
【表２−２】
2019147800.tif 000010
【０３３５】
【表２−３】
2019147800.tif 000011
【０３３６】
【表２−４】
2019147800.tif 000012
【０３３７】
【表３−１】
2019147800.tif 000013
【０３３８】
【表３−２】
2019147800.tif 000014
【０３３９】
【表３−３】
2019147800.tif 000015
【０３４０】
【表３−４】
2019147800.tif 000016
【０３４１】
ＣＮＢｒ消化物のＬＣ／ＭＳ分析。各ウェルから３００μｌを取り出し、各時点／画分
／細孔サイズについて単一のチューブにプールした。５００μｌの０．１％ギ酸を、酸性
化のために各サンプルに添加した。ＣＮＢｒタンパク質フラグメントを、Ｓｅｐ＝Ｐａｋ
Ｖａｃ  １２ｃｃ  Ｃ８カートリッジを使用して精製した。精製したフラグメントを−
８０℃で凍結し、一晩凍結乾燥させた。ＣＮＢｒフラグメントを２５ｍＭ重炭酸アンモニ
ウムで再水和し、ＤＴＴで還元し、ヨードアセトアミドでアルキル化した。ＤＴＴの分割
添加によってアルキル化を停止させた。次いで、６μｇの精製ブタトリプシンを各ウェル
に添加し、サンプルを３７℃のインキュベーターに一晩置いた。翌朝に、ペプチドを、Ｗ
ａｔｅｒｓのＯａｓｉｓ  ＨＬＢ  １０ｃｃカートリッジを使用して精製した。精製した
ペプチドを−８０℃で凍結し、一晩凍結乾燥させた。サンプルを３０μｌ（２０％アセト
ニトリル、０．１％ＦＡ）で再水和した。１５μｌの各サンプルを、ＬＴＱ  Ｏｒｂｉｔ
ｒａｐ  Ｖｅｌｏｓ質量分析計（Ｔｈｅｒｍｏ）におけるＬＣ−ＭＳ／ＭＳによって分析
し、データ（生ファイル）を、Ｐｒｏｔｅｏｍｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｅｒ  １．３．０．
３３９ソフトウェアスイート（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して分析し
た。ピークリストを、Ｕｎｉｐｒｏｔ−ＳｗｉｓｓｐｒｏｔデータベースのＭａｓｃｏｔ
２．３サーバにサブミットした。高信頼度で検出された各タンパク質の上位３つのペプチ
ドのピーク領域を計算した。
【０３４２】
細孔サイズ０．３μｍおよび０．４μｍの両方について、１２０分後に管腔側区画およ
び反管腔側区画中にＣＮＢｒｐ９７フラグメント由来のトリプシンペプチドが検出された
。上位３つのｐ９７ペプチドのピーク領域に基づいて、管腔側の反管腔側に対するペプチ
ド比は約２００：１であった。特異的ｐ９７ペプチドの結果を、以下の表４（細孔サイズ
３ミクロン）および表５（細孔サイズ４ミクロン）に示す。３つの個別のｐ９７ＣＮＢｒ
フラグメント由来のトリプシンペプチドが検出された（図９Ｂを参照のこと）。
【０３４３】
【表４−１】
2019147800.tif 000017
【０３４４】
【表４−２】
2019147800.tif 000018
【０３４５】
【表５−１】
2019147800.tif 000019
【０３４６】
【表５−２】
2019147800.tif 000020
【０３４７】
１つの可能な基準として反管腔側１２０／管腔側１２０ピーク領域比を使用して、最高
のＢＢＢ輸送活性を有するｐ９７ペプチドを、以下の表６（トリプシン消化物）および表
７（ＣＮＢｒ消化物）に示す。しかし、反管腔側１２０領域の値を示す表２〜５中の任意
のｐ９７フラグメントがＢＢＢ輸送活性を有することが潜在的に興味深いかもしれない。
【０３４８】
【表６】
2019147800.tif 000021
【０３４９】
【表７】
2019147800.tif 000022
【０３５０】
実施例３
血液脳関門のｉｎ  ｖｉｖｏモデルにおけるｐ９７フラグメント
ｐ９７（Ｍｔｆ）フラグメント（ＤＳＳＨＡＦＴＬＤＥＬＲ；配列番号１３）をモノク
ローナル抗体（ｍＡｂ）に結合体化し、コントロールタンパク質と共にマウスに末梢投与
し、脳組織内への分布についてコントロールタンパク質と比較試験した。定量的検出のた
めに、日常的技術にしたがって全試験タンパク質をアレクサフルオル６４７（ＡＦ６４７
）で標識した。
【０３５１】
以下の試験タンパク質を調製した：ＡＦ６４７標識モノクローナル抗体（ｍＡｂ）、Ａ
Ｆ６４７標識ＭＴｆ−ｍＡｂ結合体（ＭＴｆ−ｍＡｂ；ＭＴｆは可溶性ヒトｐ９７である
）、ＡＦ６４７標識ＭＴｆＰＥＰ−ｍＡｂ結合体（ＭＴｆＰＥＰ−ｍＡｂ；ＭＴＦＰＥＰ
はヒトｐ９７のＤＳＳＨＡＦＴＬＤＥＬＲＹＣ（配列番号９２）フラグメントである）；
および抗体を含まないＡＦ６４７標識ＭＴｆフラグメント（ＭＴｆＰＥＰ）。ＭＴｆ−ｍ
ＡｂおよびＭＴｆＰＥＰ−ｍＡｂ結合体の合成経路を、図１０中に示す。
【０３５２】
ＡＦ６４７標識被験物質を、以下の表８中の研究デザインにしたがってマウスに投与し
た。
【０３５３】
【表８】
2019147800.tif 000023
【０３５４】
試験タンパク質の投与２時間後、テキサスレッドを投与し、動物を屠殺し、脳組織を取
り出した。脳組織の中央環状切片および大脳皮質由来の無作為な５〜６野を冷凍切片にし
た。次いで、共焦点顕微鏡法を実施して試験タンパク質の脳生体内分布を評価した。
【０３５５】
共焦点顕微鏡法のために、蛍光標識した細胞の共焦点画像を、Ａ  Ｌｅｉｃａ  ＡＯＢ
Ｓ  ＳＰ８レーザー走査型共焦点顕微鏡（Ｌｅｉｃａ，Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ，Ｇｅｒｍ
ａｎｙ）を使用して得た。励起波長は、４０５（ＤＡＰＩ）、５９５ｎｍ（テキサスレッ
ド）、および６５３ｎｍ（ＡＦ６４７）であり、８０ＭＨｚ白色光レーザーを使用して、
各発光シグナルを回収した。全ての画像およびスペクトルデータ（ＤＡＰＩ以外）を、高
感度ＨｙＤ検出器を使用して作成した。サンプル由来の後方散乱発光シグナルを、波長可
変フィルター（ＡＯＢＳ）によって伝送した。
【０３５６】
三次元（３Ｄ）画像／体積分率分析のために、３Ｄスタック体積のための一連の二次元
（２Ｄ）画像（１０２４×１０２４ピクセル）を得た。およそ０．３ミクロンの至適切片
厚（ｚ軸）を有する３Ｄスタック画像を、２０ミクロン脳組織切片から得た。各組織体積
のために、ｚ切片画像をコンパイルし、Ｉｍａｒｉｓ（ＢＩＴＰＬＡＮＥ  Ｓｃｉｅｎｔ
ｉｆｉｃ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ）を使用して三次元画像を修復した。５つ以上の異なる大脳
皮質領域から記録した３Ｄ画像データセットに基づいて体積を評価した。ガウス雑音除去
フィルターを適用してフォアグラウンドとバックグラウンドとの間の境界を画定し、ヒス
トグラム中の低い方の閾値を、バックグラウンドボクセル値を可能な限り全て排除するよ
うに設定した。この閾値を超える全ボクセル値の和を、体積と確定した。
【０３５７】
ＶＢＣ（脳毛細血管中の試験タンパク質の体積分率）、ＶＢＰ（脳実質中の試験タンパ
ク質の体積分率）、およびＶＴＯＴ（脳毛細血管および脳実質中の試験タンパク質の体積
分率）を計算した。図１１に示すように、結合体化されていないｍＡｂは、脳実質中の低
分布によって示されるように、ＢＢＢを効率的に通過しなかった。対照的に、ＭＴｆまた
はＭＴｆＰＥＰのいずれかへのｍＡｂの結合体化により、脳実質へのｍＡｂの分布が約５
倍に増加した。また、結合体化されていないＭＴｆＰＥＰは、ＢＢＢを効率的に通過して
脳実質に分布した。これらの結果は、ｐ９７のフラグメントへの結合体化を使用して抗体
などのポリペプチドのＢＢＢを通過した脳などのＣＮＳ組織への送達を有意に改善するこ
とができることを示す。
【０３５８】
実施例４
ｐ９７ペプチド結合体
ｐ９７ＰＥＰフラグメント（ＤＳＳＨＡＦＴＬＤＥＬＲ；配列番号１３）を、４４ｋｄ
試験タンパク質であるセイヨウワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）に結合体化した。この
結合体をコントロールタンパク質と共にマウスに末梢投与し（ＩＶ注射による）、脳組織
中への分布についてコントロールタンパク質と比較試験した。定量的検出のために、日常
的技術にしたがって全試験タンパク質をアレクサフルオル６８０（ＡＦ６８０）で標識し
た。
【０３５９】
以下の試験タンパク質を調製した：ＡＦ６８０標識ＨＲＰ（ＨＲＰ）；ＡＦ６８０標識
ＭＴｆＰＥＰ−ＨＲＰ結合体（ＭＴＦＰＥＰ−ＨＲＰ；ＭＴＦＰＥＰはヒトｐ９７のＤＳ
ＳＨＡＦＴＬＤＥＬＲＹＣ（配列番号９２）フラグメントである）。結合体化およびヨウ
素化のためにＣ末端のシステイン残基およびチロシン残基をＭＴｆペプチドにそれぞれ添
加した。ＨＲＰ結合体の合成経路を、図１２中に示す。
【０３６０】
ＡＦ６８０標識被験物質を、以下の表９中の研究デザインにしたがってマウスに投与し
た。
【０３６１】
【表９】
2019147800.tif 000024
【０３６２】
試験タンパク質の投与２時間後、トマトレクチン−ＦＩＴＣ（８０μｇを１０分間）を
投与して脳脈管構造を染色後、１０ｍｌヘパリン処理生理食塩水で心臓内灌流し、脳組織
を取り出し、顕微鏡分析のために処理した。脳組織の中央環状切片由来の３つの無作為領
域を冷凍切片にし、冷アセトン／メタノールで固定し、顕微鏡法のためにマウントした。
次いで、三次元（３Ｄ）共焦点顕微鏡法を実施して、試験タンパク質の脳生体内分布を評
価した。
【０３６３】
結果を図１３Ａ〜図１３Ｃに示す。図１３ＡはＰＢＳの結果を示し、図１３ＢはＡＦ６
８０標識ＨＲＰの結果を示し、図１３ＣはＡＦ６８０標識ＭＴｆＰＥＰ−ＨＲＰ結合体の
結果を示す。図１３Ａおよび図１３Ｂは、脳組織中にＡＦ６８０標識は検出不可能である
ことを示す。対照的に、図１３Ｃは、矢印で示すように、検出可能なＡＦ６８０標識を示
す。これらの結果は、ＤＳＳＨＡＦＴＬＤＥＬＲペプチドへの結合体化が目的のタンパク
質のＢＢＢを通過した脳組織内への送達を有意に強化することができることを示す。
【０３６４】
本明細書中に記載の種々の実施形態を組み合わせてさらなる実施形態を提供することが
できる。本明細書中で言及され、そして／または出願データシートに列挙された全ての米
国特許、米国特許出願公開、米国特許出願、外国特許、外国特許出願、および非特許刊行
物は、その全体が本明細書中で参考として援用される。実施形態の態様を、必要に応じて
種々の特許、出願、および刊行物の概念を使用して修正してなおさらなる実施形態を得る
ことができる。
【０３６５】
上記の詳細な説明を考慮して実施形態に対するこれらのおよび他の変更形態を得ること
ができる。一般に、以下の特許請求の範囲では、使用用語を、明細書および特許請求の範
囲中に開示の特定の実施形態に特許請求の範囲を制限すると解釈すべきではなく、かかる
特許請求の範囲が権利を与えられる等価物の全範囲と共に全ての可能な実施形態が含まれ
ると解釈すべきである。したがって、特許請求の範囲は開示によって制限されない。
【図１】
2019147800.tif 000025
【図２−１】
2019147800.tif 000026
【図２−２】
2019147800.tif 000027
【図２−３】
2019147800.tif 000028
【図２−４】
2019147800.tif 000029
【図３Ａ】
2019147800.tif 000030
【図３Ｂ】
2019147800.tif 000031
【図３Ｃ】
2019147800.tif 000032
【図４Ａ】
2019147800.tif 000033
【図４Ｂ】
2019147800.tif 000034
【図５Ａ】
2019147800.tif 000035
【図５Ｂ】
2019147800.tif 000036
【図６Ａ】
2019147800.tif 000037
【図６Ｂ】
2019147800.tif 000038
【図７】
2019147800.tif 000039
【図８】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３−１】
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【図１３−２】
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【配列表】
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【外国語明細書】
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