(57)【要約】【課題】ノンエンベロープ型ウイルスに対して不活化効果を発揮し、かつ手指への適用や経口摂取も可能な安全性の高い抗ウイルス剤を提供することを課題とする。【解決手段】バチルス・サブチルスの発酵物抽出ペプチドと、他のカチオン性ポリマーとを組み合わせて、抗ウイルス剤の有効成分とする。バチルス・サブチルスの発酵物抽出ペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列からなるペプチド又はその誘導体が好ましい。他のカチオン性ポリマーとしては、ポリリジン、プロタミン、キトサン等が好ましい。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
バチルス・サブチルスの発酵物抽出ペプチドと、他のカチオン性ポリマーとを含有する、抗ウイルス剤。
【請求項２】
前記発酵物抽出ペプチドが、下記（Ａ）及び（Ｂ）からなる群から選択されるペプチドを含む、請求項１に記載の抗ウイルス剤。
（Ａ）配列番号１のアミノ酸配列からなる、ペプチド
（Ｂ）配列番号１のアミノ酸配列において、１又は数個のアミノ酸が欠失、置換または付加されたアミノ酸配列からなり、かつ前記他のカチオン性ポリマー存在下で抗ウイルス活性を有するペプチド
【請求項３】
前記他のカチオン性ポリマーが、カチオン性ポリペプチドである、請求項１又は２に記載の抗ウイルス剤。
【請求項４】
前記他のカチオン性ポリペプチドが、ポリリジン及びプロタミンからなる群から選択される、請求項３に記載の抗ウイルス剤。
【請求項５】
前記他のカチオン性ポリマーが、多糖類である、請求項１又は２に記載の抗ウイルス剤。
【請求項６】
前記多糖類が、キトサンである、請求項５に記載の抗ウイルス剤。
【請求項７】
ノンエンベロープ型ウイルスに対して使用される、請求項１〜６のいずれか一項に記載の抗ウイルス剤。
【請求項８】
前記ノンエンベロープ型ウイルスがノロウイルスである、請求項７に記載の抗ウイルス剤。
【請求項９】
噴霧剤の形態である、請求項１〜８のいずれか一項に記載の抗ウイルス剤。
【請求項１０】
請求項１〜８のいずれか一項に記載の抗ウイルス剤を塗布してなる、繊維製品。
【請求項１１】
請求項１〜８のいずれか一項に記載の抗ウイルス剤を含有する、抗ウイルス用の飲食品組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ノンエンベロープ型ウイルスを不活性化させ得る抗ウイルス剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
ノロウイルスはヒトに感染して非細菌性急性胃腸炎を引き起こすノンエンベロープ型ウイルスである。ノロウイルスを原因とする症例は、日本で報告されている非細菌性食中毒事例で最も多く、冬に大流行するため問題視されている。一般に食品製造現場では抗菌・抗ウイルスの目的でエタノール製剤が多く利用されるが、ノロウイルスはかかる製剤では不活化することができない。
通常、ノロウイルスの不活化には、次亜塩素酸や次亜塩素酸Ｎａが用いられる。しかしながら、有機物が共存する場合にはその不活化効果は劣化する。また、次亜塩素酸は経時的にも不活化効果が劣化し易い上、劣化の程度を判断することが難しいため、使用において十分な不活化効果が得られない場合がある。そのため、次亜塩素酸については、これを効果的に使用できる現場は、次亜塩素酸の製造装置を有し、製造した次亜塩素酸を速やかに使用できる環境である必要がある。また、安全性の観点から、次亜塩素酸Ｎａは手指に使用することができないため、専ら調理器具や食品製造現場などのウイルス汚染除去への適用に限られる。加えて、次亜塩素酸Ｎａには金属腐食性もあることから、使用後は速やかに水で洗い流す必要がある。
【０００３】
近年、卵白リゾチームを加熱処理することにより構造を変化させた熱変性リゾチームにノロウイルス不活化作用があることが見出され（特許文献１）、さらに該熱変性リゾチーム分子中の特定のペプチド領域のみでも抗ノロウイルス効果が得られることも報告されている（特許文献２）。かかる抗ノロウイルス効果は、変性タンパク質及びペプチドのα−ヘリックス構造がノロウイルスのカプシドに穿刺することで発揮されると推測されている。
【０００４】
一方、ヘルペスウイルス等のエンベロープ型ウイルスや肺炎レンサ球菌に対しては、納豆から抽出された分子量約５，０００のペプチドが、不活化作用を発揮することが見出されている（特許文献３）。この納豆抽出ペプチドは、バチルス属細菌が産生するプロテアーゼの一種であるスブチリシン類より派生するペプチドであると推定されている。
該納豆抽出ペプチドは、塩基性ペプチドであり、その構造中にα−ヘリックス構造を有し、このα−ヘリックスがウイルスのエンベロープ又はカプシドや細菌細胞膜に穿孔することによって抗ウイルス・抗菌作用を発揮すると考えられている。
しかしながら、該納豆抽出ペプチドがノンエンベロープ型ウイルスに対していかなる作用を有するかは不明であった。
【０００５】
ところで、ε−ポリ−Ｌ−リジンは、Ｌ−リジンのε位のアミノ基とカルボキシル基とがペプチド結合により直鎖状に連なったカチオン性ポリペプチドである。ε−ポリ−Ｌ−リジンは、抗菌作用を示すことが知られており、保存料として食品添加物や化粧品原料等に実用化されている（非特許文献１）。ただし、ε−ポリ−Ｌ−リジンは、細菌や真菌に対して幅広く優れた不活化作用を示すが、ノンエンベロープタイプのウイルスに対する不活化作用は認められない。
他にも、ε−ポリ−Ｌ−リジンと同様に正に荷電するポリマーであるプロタミンやキトサンにおいても、抗菌作用を有することが知られており、食品や繊維製品等への抗菌性付与剤として用いられている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特許第５８０６４３４号
【特許文献２】特開２０１６−１４１６５９号公報
【特許文献３】特開２０１６−１２１０８１号公報
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Hiraki, J. Antibact. Antifung. Agents, Vol. 23, No.6, pp.349-354, 1995
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明の課題は、ノンエンベロープ型ウイルスに対して不活化効果を発揮し、かつ手指への適用や経口摂取も可能な安全性の高い抗ウイルス剤を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、前記課題を解決するために鋭意研究を重ねた結果、特許文献３に開示される納豆抽出ペプチドは単独ではノンエンベロープ型ウイルスを不活化することはできないが、カチオン性ポリマーと併用することにより、ノンエンベロープ型ウイルスを不活化できることを見出し、本発明を完成した。
【００１０】
すなわち、本発明は以下の通りである。
［１］バチルス・サブチルスの発酵物抽出ペプチドと、他のカチオン性ポリマーとを含有する、抗ウイルス剤。
［２］前記発酵物抽出ペプチドが、下記（Ａ）及び（Ｂ）からなる群から選択されるペプチドを含む、［１］に記載の抗ウイルス剤。
（Ａ）配列番号１のアミノ酸配列からなる、ペプチド
（Ｂ）配列番号１のアミノ酸配列において、１又は数個のアミノ酸が欠失、置換または付加されたアミノ酸配列からなり、かつ前記他のカチオン性ポリマー存在下で抗ウイルス活性を有するペプチド
［３］前記他のカチオン性ポリマーが、カチオン性ポリペプチドである、［１］又は［２］に記載の抗ウイルス剤。
［４］前記他のカチオン性ポリペプチドが、ポリリジン及びプロタミンからなる群から選択される、［３］に記載の抗ウイルス剤。
［５］前記他のカチオン性ポリマーが、多糖類である、［１］又は［２］に記載の抗ウイルス剤。
［６］前記多糖類が、キトサンである、［５］に記載の抗ウイルス剤。
［７］ノンエンベロープ型ウイルスに対して使用される、［１］〜［６］のいずれかに記載の抗ウイルス剤。
［８］前記ノンエンベロープ型ウイルスがノロウイルスである、［７］に記載の抗ウイルス剤。
［９］噴霧剤の形態である、［１］〜［８］のいずれかに記載の抗ウイルス剤。
［１０］［１］〜［８］のいずれかに記載の抗ウイルス剤を塗布してなる、繊維製品。
［１１］［１］〜［８］のいずれかに記載の抗ウイルス剤を含有する、抗ウイルス用の飲食品組成物。
【発明の効果】
【００１１】
本発明によれば、ノンエンベロープ型ウイルスに対して不活化効果を発揮し、かつ手指への適用や経口摂取も可能な安全性の高い、新規な抗ウイルス剤が提供される。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
＜抗ウイルス剤＞
本発明の抗ウイルス剤は、バチルス・サブチルスの発酵物抽出ペプチドと、他のカチオン性ポリマーとを含有する。
【００１３】
本発明において、バチルス・サブチルスの発酵物抽出ペプチドは、バチルス・サブチルスを培養した培養物から、常法により抽出されるペプチドをいい、精製されたものに限らず、粗精製物や抽出物の分画の態様であってもよい。ここで、バチルス・サブチルスの培養物は、特に限定されないが、大豆発酵物が好ましく、具体的には、大豆粉、大豆かす、脱脂大豆かす、大豆ペプチド、大豆加水分解物、ソイトン、又は沿いペプトン等をチッソ源として含む培地でバチルス・サブチルスを用いて発酵した発酵物が挙げられ、あるいは納豆や味噌などの大豆発酵食品も好ましく挙げられる。納豆などのバチルス・サブチルスの発酵大豆食品は、古くから食経験があり、安全性の観点で優れる。
【００１４】
本発明におけるバチルス・サブチルスの発酵物抽出ペプチドは、上記発酵物から抽出される５〜６ＫＤａのペプチドを含むことが好ましい。かかるペプチドの抽出方法及び分子量の測定方法は、特許文献３に開示される方法にて行われる。
【００１５】
本発明におけるバチルス・サブチルスの発酵物抽出ペプチドは、好ましくは下記（Ａ）及び（Ｂ）からなる群から選択されるペプチドを含む。
（Ａ）配列番号１のアミノ酸配列からなる、ペプチド（以下、「ペプチド（Ａ）」とも記す）
（Ｂ）配列番号１のアミノ酸配列において、１又は数個のアミノ酸が欠失、置換または付加されたアミノ酸配列からなり、かつ前記他のカチオン性ポリマー存在下で抗ウイルス活性を有するペプチド（以下、「ペプチド（Ｂ）」とも記す）
【００１６】
ペプチド（Ａ）は、塩基性アミノ酸リッチな一次構造であり、正に荷電している。また、ペプチド（Ａ）の９〜２１番目のアミノ酸（Ｐｒｏ９〜Ｌｙｓ２１）及び２７〜３７番目のアミノ酸（Ａｌａ２７〜Ｔｈｒ３７）はα−へリックス構造をとると考えられる。このため、ペプチド（Ａ）は、後述の他のカチオン性ポリマーと協働してノンエンベロープ型ウイルスのカプシドに穿孔し、ウイルスから核酸を放出させて不活化に至らしめるものと推測される。
【００１７】
ペプチド（Ｂ）は、このように他のカチオン性ポリマーと協働してノンエンベロープ型ウイルスに対する抗ウイルス活性を示す限りにおいて、ペプチド（Ａ）に変異を加えたものであってよく、すなわち配列番号１のアミノ酸配列において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換または付加されたアミノ酸配列からなるものである。また、ペプチド（Ａ）と同様に、ペプチド（Ｂ）も、後述の他のカチオン性ポリマーと協働してノンエンベロープ型ウイルスのカプシドに穿孔し、ウイルスから核酸を放出させて不活化に至らしめるものと推測される。
【００１８】
一般にアミノ酸は、その側鎖の相違に基づいて、類似の性質を有するアミノ酸と置換しうることが、本技術分野においては知られている（保存的置換）。例えば、非極性中性アミノ酸（Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｍｅｔ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ）、親水性中性アミノ酸（Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ、Ｔｙｒ、Ｃｙｓ）、酸性アミノ酸（Ａｓｐ、Ｇｌｕ）、塩基性アミノ酸（Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｈｉｓ）、および芳香族アミノ酸（Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ）のように類似の性質を有するものにグループ分けでき、これらのグループ内のアミノ酸は相互に置換し得る。
【００１９】
また、生理活性を有するペプチドをそっくり含み、その一端または両端に１個または数個のアミノ酸配列が連結されたペプチドもまた、当該生理活性を維持し得ることが、本技
術分野において知られている。したがって、上記した抗ウイルス活性を有するペプチド（Ａ）を部分配列として含み、その一端または両端に１個または数個のアミノ酸が連結され、抗ウイルス活性を有するペプチドもまた、抗ウイルス剤に用いることが可能である。
なお、本明細書において、アミノ酸についての「数個」とは、通常２〜５個、好ましくは２〜３個である。
【００２０】
ペプチド（Ｂ）は、２次構造（α−へリックス構造）保持の観点から、アミノ酸配列（Ａ）における９〜２１番目のアミノ酸（Ｐｒｏ９〜Ｌｙｓ２１）と相同な領域を有していてもよい。本発明の一実施形態では、ペプチド（Ｂ）は、アミノ酸配列（Ａ）において１または数個のアミノ酸が欠失、置換または付加されたアミノ酸配列からなり、アミノ酸配列（Ａ）における９〜２１番目のアミノ酸（Ｐｒｏ９〜Ｌｙｓ２１）と相同な領域を有し、かつ抗ウイルス活性を有する。また、アミノ酸配列（Ａ）における９〜２１番目のアミノ酸（Ｐｒｏ９〜Ｌｙｓ２１）、および２７〜３７番目のアミノ酸（Ａｌａ２７〜Ｔｈｒ３７）と相同な領域を有していてもよい。本発明の一実施形態では、ペプチド（Ｂ）は、アミノ酸配列（Ａ）において１または数個のアミノ酸が欠失、置換または付加されたアミノ酸配列からなり、アミノ酸配列（Ａ）における９〜２１番目のアミノ酸（Ｐｒｏ９〜Ｌｙｓ２１）、および／または２７〜３７番目のアミノ酸（Ａｌａ２７〜Ｔｈｒ３７）と相同な領域を有し、かつ他のカチオン性ポリマーと協働してノンエンベロープ型ウイルスに対する抗ウイルス活性を有する。
【００２１】
本発明におけるバチルス・サブチルス発酵物抽出ペプチドには、抗ウイルス活性を有する限りにおいて、細胞膜透過性、プロテアーゼ耐性、ペプチド合成・精製工程の簡便性等を考慮し、従来公知の手法により修飾したペプチドも含まれる。ペプチドの修飾としては、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ、例えば分子量１００〜５万程度）の付加、膜透過性ペプチド（例えば、Ｔｒａｎｓ−Ａｃｔｉｖａｔｏｒ ｏｆ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ（Ｔａｔ）ペプチド、オリゴアルギニン、またはペネトラチン）の付加、ゲラニル化およびファルネシル化等のプレニル化（例えば、イソプレン単位数１〜５のプレニル基）、ビオチン化、アルキル化（例えば、炭素数１〜１５のアルキル基）、アセチル化およびパルミトイル化等のアシル化（例えば、炭素数１〜１５のアシル基）、ベンジルオキシカルボニル化、ならびに９−フルオレニルメチルオキシカルボニル化などが挙げられる。
【００２２】
本発明において、ペプチド（Ｂ）は、ペプチド（Ａ）と好ましくは７０％以上、より好ましくは８０％以上、さらに好ましくは９０％以上の配列相同性を有する。なお、ここでペプチドの配列相同性はＢＬＡＳＴＰプログラムによって評価されるものをいう。
【００２３】
本発明においてバチルス・サブチルスの発酵物抽出ペプチドは、ペプチド（Ａ）及び／又はペプチド（Ｂ）を、発酵物抽出ペプチド全体の好ましくは７０質量％以上、より好ましくは８０質量％以上、さらに好ましくは９０質量％以上含有するが、特に限定されない。
【００２４】
本発明の抗ウイルス剤が含有する「他のカチオン性ポリマー」は、前述のバチルス・サブチルス発酵物抽出ペプチド以外のカチオン性ポリマーをいう。
かかるカチオン性ポリマーとしては、カチオン性ポリペプチド、カチオン性多糖類などが好ましく挙げられ、さらに天然由来のものが好ましい。
【００２５】
カチオン性ポリペプチドとしては、ポリリジン、プロタミンなどが好ましく挙げられる。また、カチオン性多糖類としては、キトサンが好ましく挙げられる。
これらは天然に存在するカチオン性ポリマーであり、すでに保存料等の食品添加物や、繊維製品に抗菌性を付与する処理剤としても用いられており、有効性も安全性も高く、有
用である。
なお、プロタミンは魚類精子核由来のヒストン様ペプチドの総称を指し、具体的にはアルギニンリッチな構造を有するポリペプチドである。
【００２６】
本発明における他のカチオン性ポリマーとしては、ポリリジンが特に好ましい。
ポリリジンはα−ポリリジン、ε−ポリリジンのいずれでもよく、特に限定されるものではないが、毒性の低さ、入手の容易さからε−ポリリジンが好ましい。また、通常はＬ−リジンのポリマーである。
また、ポリリジンは、通常はリジンのホモポリマーであるが、本発明の効果を損なわない限りにおいて、他のアミノ酸をモノマーとして含んでもよい。
また、ポリリジンの大きさは、特に限定されないが、重量平均分子量が好ましくは３０００以上、より好ましくは４０００以上であり、好ましくは１００００以下、より好ましくは８０００以下、さらに好ましくは６０００以下であり、３０００〜６０００の範囲が特に好ましい。なお、ここで重量平均分子量は、ＧＰＣ−ＬＡＬＬＳ法により測定された値である。
【００２７】
ε−ポリリジンは、例えば特許第１２４５３６１号に記載の方法で製造することができる。具体的には、上記特許に開示されるストレプトマイセス・アルブラス・サブスピーシーズ・リジノポリメラスを、その組成が、グルコース５重量％、酵母エキス０．５重量％、硫酸アンモニウム１重量％、リン酸水素二カリウム０．０８重量％、リン酸二水素カリウム０．１３６重量％、硫酸マグネシウム・７水和物０．０５重量％、硫酸亜鉛・７水和物０．００４重量％、及び硫酸鉄・７水和物０．０３重量％であり、ｐＨが６．８に調整された液体培地にて培養し、得られた培養物からε−ポリリジンを分離・回収する。
他にも、化学的手法によりポリリジンを製造してもよい。
【００２８】
また、ε−ポリリジンは、遊離の形であってもよいし、塩酸、硫酸、リン酸及び臭化水素酸から選ばれた少なくとも１種の無機酸、または酢酸、プロピオン酸、フマル酸、リンゴ酸及びクエン酸から選ばれた少なくとも１種の有機酸の塩の形であってもよい。
ポリリジン塩は常法により製造される。例えば含水メタノール溶液に前記ε−ポリリジンを溶解させ、これに前記酸を加え、溶液が中和点を過ぎたところで、冷アセトンを加えて沈澱した塩を乾燥させることによって得られる。
【００２９】
本発明の抗ウイルス剤における、バチルス・サブチルスの発酵物抽出ペプチドと、他のカチオン性ポリマーとの含有比率は、使用時の質量比として１：１０〜１０：１であることが好ましい。
【００３０】
本発明に係る抗ウイルス剤は、ウイルスを不活化させることができ、その結果、ウイルスの感染を減弱化又は阻止することができる。
また、本発明に係る抗ウイルス剤は、次亜塩素酸と異なり、有機物が共存下であっても抗ウイルス活性が低下しないため、適用し得る対象、条件、環境、形態等についての選択の幅が次亜塩素酸よりも格段に広い点でも優れる。
【００３１】
本発明に係る抗ウイルス剤は種々のウイルスに対して好ましく適用できるが、ノンエンベロープ型ウイルスに対して特に好ましく適用できる。ノンエンベロープ型ウイルスとしては、特に制限されるものではないが、例えばノロウイルス、ロタウイルス、ポリオウイルス、アデノウイルス、ネコカリシウイルス等が挙げられ、特にノロウイルスに対して有効に使用され得る。
【００３２】
なお、本明細書において、「抗ウイルス活性」は、例えば、実施例に記載の方法にて評価される。具体的には、試料未添加の場合に比べて試料添加時のｌｏｇ ＴＣＩＤ５０値
が小さい、より好ましくは１以上小さい、さらに好ましくは２以上小さいときに、該試料は抗ウイルス活性を有する、と判断する（ＴＣＩＤ５０：median tissue culture infectious dose、５０％組織培養感染量）。
なお、ノロウイルスの培養は困難であることから、一般的に代替試験として使用されているネコカリシウイルスに対する試験によって、ノンエンベロープ型ウイルスに対する不活化試験として評価することができる。
【００３３】
＜医薬組成物＞
本発明の抗ウイルス剤は、医薬組成物に含有させる態様とすることができ、かかる医薬組成物はウイルス感染症の治療用及び／又は予防用として好適である。
かかる医薬組成物の投与対象は、例えばヒト、サル、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、モルモット、ウシ、ブタ、イヌ、ウマ、ネコ、ヤギ、ヒツジを含む哺乳類を含む動物であり、好ましくはヒトである。
【００３４】
本発明の別の側面は、ウイルス感染症の治療用及び／又は予防用の医薬組成物の製造における、バチルス・サブチルス発酵物抽出ペプチド及び他のカチオン性ポリマーの使用である。
また、別の側面は、ウイルス感染症の治療及び／又は予防における、バチルス・サブチルス発酵物抽出ペプチド及び他のカチオン性ポリマーの加水分解物の使用である。
また、別の側面は、バチルス・サブチルス発酵物抽出ペプチド及び他のカチオン性ポリマーを動物に投与することを含む、ウイルス感染症を治療及び／又は予防する方法である。
【００３５】
本発明の医薬組成物の投与経路は、経口及び非経口のいずれでもよい。非経口投与としては、皮下注射、直腸投与、吸入等が挙げられる。
【００３６】
本発明の医薬組成物の投与量は、製剤化方法、投与方式、投与時間、投与対象の年齢、体重、性別、病的状態、排泄速度、及び反応感応性といった要因によって多様に処方されることができる。
【００３７】
本発明の医薬組成物の好ましい投与量は、疾患の症状、患者の年齢などにより異なるが、例えば、投与対象が成人の場合、１日当たり、バチルス・サブチルス発酵物抽出ペプチド量として０．１〜１００００ｍｇ／６０ｋｇ体重、好ましくは１０〜１００００ｍｇ／６０ｋｇ体重、より好ましくは１００〜５０００ｍｇ／６０ｋｇ体重とすることが好ましく、他のカチオン性ポリマー量として０．０１〜１０００００ｍｇ／６０ｋｇ体重、好ましくは１〜１０００００ｍｇ／６０ｋｇ体重、より好ましくは１０〜５００００ｍｇ／６０ｋｇ体重とすることが、十分に効果が発揮される観点から好ましい。この１日分の量を一度に又は数回に分けて投与することができる。
本発明の医薬組成物を投与するタイミングは、特に限定されず、任意でよい。また、食前、食後、食間のいずれでもよい。また、投与／摂取期間は特に限定されない。
【００３８】
本発明の医薬組成物は、当該技術分野における通常の知識を有する者が通常実施する方法によって、薬剤学的に許容される担体及び／又は賦形剤を用いて製剤化することで単位用量形態に製造されるか、あるいは多用量容器内に内入させて製造されることができる。
本発明の医薬組成物は、投与方法に応じて、適宜所望の剤形に製剤化することができる。例えば、経口投与の場合は、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤等の固形製剤；溶液剤、シロップ剤、懸濁剤、乳剤等の液剤等に製剤化することができる。また、非経口投与の場合は、液剤、座剤、軟膏剤等に製剤化することができる。
【００３９】
本発明の医薬組成物における、本発明の抗ウイルス剤の含有量は、医薬組成物の最終物
に対し、少なくとも０．００１質量％であることが好ましい。
製剤化に際しては、抗ウイルス剤の他に、通常製剤化に用いられている賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、安定剤、矯味剤、矯臭剤、ｐＨ調整剤、着色剤等の成分を用いることができる。また、公知の又は将来的に見出されるウイルス感染症の治療用及び／又は予防用の医薬や、他の疾患の治療用及び／又は予防用の医薬などを併用することも可能である。
【００４０】
賦形剤としては、例えば、乳糖、白糖、ブドウ糖、マンニット、ソルビット等の糖誘導体；トウモロコシデンプン、馬鈴薯デンプン、α−デンプン、デキストリン、カルボキシメチルデンプン等のデンプン誘導体；結晶セルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム等のセルロース誘導体；アラビアゴム；デキストラン；プルラン；軽質無水珪酸、合成珪酸アルミニウム、メタ珪酸アルミン酸マグネシウム等の珪酸塩誘導体；リン酸カルシウム等のリン酸塩誘導体；炭酸カルシウム等の炭酸塩誘導体；硫酸カルシウム等の硫酸塩誘導体等が挙げられる。
【００４１】
結合剤としては、例えば、上記賦形剤の他、ゼラチン；ポリビニルピロリドン；マクロゴール等が挙げられる。
【００４２】
崩壊剤としては、例えば、上記賦形剤の他、クロスカルメロースナトリウム、カルボキシメチルスターチナトリウム、架橋ポリビニルピロリドン等の化学修飾されたデンプン又はセルロース誘導体等が挙げられる。
【００４３】
滑沢剤としては、例えば、タルク；ステアリン酸；ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム等のステアリン酸金属塩；コロイドシリカ；ピーガム、ゲイロウ等のワックス類；硼酸；グリコール；フマル酸、アジピン酸等のカルボン酸類；安息香酸ナトリウム等のカルボン酸ナトリウム塩；硫酸ナトリウム等の硫酸塩類；ロイシン；ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリル硫酸マグネシウム等のラウリル硫酸塩；無水珪酸、珪酸水和物等の珪酸類；デンプン誘導体等が挙げられる。
【００４４】
安定剤としては、例えば、メチルパラベン、プロピルパラベン等のパラオキシ安息香酸エステル類；クロロブタノール、ベンジルアルコール、フェニルエチルアルコール等のアルコール類；塩化ベンザルコニウム；無水酢酸；ソルビン酸等が挙げられる。
【００４５】
矯味矯臭剤としては、例えば、甘味料、酸味料、香料等が挙げられる。
なお、液剤の場合に使用する担体としては、特に限定されないが水等の溶剤等が挙げられる。
【００４６】
＜食品組成物＞
本発明の抗ウイルス剤は、経口摂取しても安全なため、食品組成物に含有させる態様とすることができ、かかる食品組成物は抗ウイルス用として好適である。
【００４７】
本発明の抗ウイルス用の食品組成物の態様としては、通常の食品、飲料、食品添加物、機能性表示食品、特定保健用食品等の保健機能食品、サプリメント等が挙げられ、特に限定されない。
【００４８】
本発明の抗ウイルス用の食品組成物の有する有用性や機能性に関しては、製品化の際に表示を付してもよい。
かかる「表示」行為には、需要者に対して前記用途を知らしめるための全ての行為が含まれ、「抗ウイルス用」や「ウイルス感染の改善・予防用」といった用途を想起・類推さ
せうるような表現であれば、表示の目的、表示の内容、表示する対象物・媒体等の如何に拘わらず、全て本発明の「表示」行為に該当する。
また、「表示」は、需要者が上記用途を直接的に認識できるような表現により行われることが好ましい。具体的には、飲食品に係る商品又は商品の包装、容器等に前記用途を記載したものを譲渡し、引き渡し、譲渡若しくは引き渡しのために展示し、輸入する行為、商品に関する広告、価格表、カタログ、パンフレット、ＰＯＰ等の販売現場における宣伝材等、若しくは取引書類に上記用途を記載して展示し、若しくは頒布し、又はこれらを内容とする情報に上記用途を記載して電磁気的（インターネット等）方法により提供する行為等が挙げられる。なお、本発明の食品組成物が保健機能食品等の行政が定める各種制度に基づいて認可を受けその認可のもとで実施される場合は、該認可に基づく態様で表示することが好ましい。
【００４９】
本発明の抗ウイルス用の食品組成物への「表示」としては、例えば、「抗ウイルスの機能性」、「ウイルス感染を改善・予防する機能性」、「ウイルスに負けないように」等の表示が挙げられる。
【００５０】
食品組成物の形態としては、液状、ペースト状、固体、粉末等の形態を問わず、また錠菓、流動食、飼料等としてもよい。
かかる形態にする際には、本発明の抗ウイルス剤の他に、食品製造時に通常添加される成分、例えば、タンパク質、炭水化物、脂肪、栄養素、調味料及び香味料等を用いることができる。炭水化物としては、単糖類、例えば、ブドウ糖、果糖など；二糖類、例えば、マルトース、スクロース、オリゴ糖など；及び多糖類、例えば、デキストリン、シクロデキストリンなどのような通常の糖及び、キシリトール、ソルビトール、エリトリトールなどの糖アルコールが挙げられる。香味料としては、天然香味料（タウマチン、ステビア抽出物等）及び合成香味料（サッカリン、アスパルテーム等）を使用することができる。その他に、前述の医薬組成物で用いられる添加物であって通常食品にも添加されるものを同様に用いてもよい。
【００５１】
また、他に一般の食品に含有させる態様であってもよく、例えば、パン、マカロニ、スパゲッティ、めん類、ケーキミックス、から揚げ粉、パン粉の小麦粉製品；即席めん、カップめん、レトルト・調理食品、調理缶詰め、電子レンジ食品、即席スープ・シチュー、即席みそ汁・吸い物、スープ缶詰め、フリーズ・ドライ食品等の即席食品；農産缶詰め、果実缶詰め、ジャム・マーマレード類、漬物、煮豆類、農産乾物類、シリアル（穀物加工品）等の農産加工品；水産缶詰め、魚肉ハム・ソーセージ、水産練り製品、水産珍味類、つくだ煮類等の水産加工品；畜産缶詰め・ペースト類、畜肉ハム・ソーセージ等の畜産加工品；加工乳、乳飲料、ヨーグルト類、乳酸菌飲料類、チーズ、アイスクリーム類、調製粉乳類、クリーム、その他の乳製品等の乳・乳製品；バター、マーガリン類、植物油等の油脂類；しょうゆ、みそ、ソース類、トマト加工調味料、みりん類、食酢類等の基礎調味料；調理ミックス、カレーの素類、たれ類、ドレッシング類、めんつゆ類、スパイス類、その他の複合調味料等の複合調味料・食品類；素材冷凍食品、半調理冷凍食品、調理済冷凍食品等の冷凍食品；キャラメル、キャンディー、チューインガム、チョコレート、クッキー、ビスケット、ケーキ、パイ、スナック、クラッカー、和菓子、米菓子、豆菓子、デザート菓子等の菓子類；炭酸飲料、天然果汁、果汁飲料、果汁入り清涼飲料、果肉飲料、果粒入り果実飲料、野菜系飲料、豆乳、豆乳飲料、コーヒー飲料、お茶飲料、粉末飲料、濃縮飲料、スポーツ飲料、栄養飲料、アルコール飲料等の飲料類；これら以外の食品等に、本発明の抗ウイルス剤を添加してもよい。
【００５２】
また、食品添加物の一形態として、食品処理剤が挙げられ、これは生鮮食品を含む食品に対して抗ウイルス処理を施し、食中毒の発生を予防するために使用するものである。例えば、ノロウイルスに汚染された生カキ等に対して、本発明の食品組成物である処理剤を
用いて洗浄する態様が好ましく挙げられ、洗浄の際に該処理剤を生カキの洗い流し用の水に添加したり、該処理剤を含む水に生カキを浸漬したりすればよく、特に限定されない。
【００５３】
本発明の食品組成物の好ましい摂取量及び摂取するタイミングは、前述の本発明の医薬組成物における説明に準じる。
【００５４】
本発明の食品組成物における、本発明の抗ウイルス剤の含有量は、食品組成物全体に対し、少なくとも０．００１質量％であることが好ましい。
【００５５】
本発明の別の側面は、抗ウイルス用の食品組成物の製造における、バチルス・サブチルス発酵物抽出ペプチド及び他のカチオン性ポリマーの使用である。
また、別の側面は、ウイルス感染症の改善及び／又は予防における、バチルス・サブチルス発酵物抽出ペプチド及び他のカチオン性ポリマーの加水分解物の使用である。
また、別の側面は、バチルス・サブチルス発酵物抽出ペプチド及び他のカチオン性ポリマー、又はこれを有効成分として含有する抗ウイルス用の食品組成物を摂取することを含む、ウイルス感染症を改善及び／又は予防する方法である。
【００５６】
＜他の製品の態様＞
その他に、本発明の抗ウイルス剤は、日用品、衛生用品、医薬部外品など、種々の態様とすることができ、かかる製品は抗ウイルス用として好適である。
その際の剤型としては、噴霧剤の形態とすることが好ましい。噴霧剤は、例えば、スプレー、エアロゾル、または乾燥噴霧の形態で使用される。噴霧剤は、圧縮ガスやポンプによる噴霧および／または吐出に適した剤型に加工される。例えば水、ｐＨ６〜８程度の緩衝液、または生理食塩水等に本発明の抗ウイルス剤を溶解させたり、揮発性溶媒に懸濁して製剤化したりする。噴霧剤は、口腔用噴霧剤や鼻腔噴霧剤など、生体に直接投与できる他、フェイスマスクや衣類などの繊維製品に塗布したり、加湿器等により室内に霧散させたりして使用できる。
【００５７】
また、本発明の抗ウイルス剤を塗布してなる繊維製品も、本発明に包含される。
繊維製品は、合成繊維、再生繊維もしくは天然繊維、またはこれらの混紡を加工した衣類、衛生用品、寝装品、フィルム類、およびインテリア用品等である。特に限定されるものではないが、繊維製品としては、例えば、シャツ、外套、ズボン、スカート、ナイトウェア、下着類、靴下、手袋、帽子、白衣、看護衣、介護衣、作業着、フェイスマスク、シーツ、枕カバー、カーペット、布団、座布団、壁紙、各種フィルター類、カーテン、およびカーペット等が例示できる。
本発明に係る繊維製品は、例えば、繊維製品または製品加工前の繊維に、本発明の抗ウイルス剤をスプレー、浸漬、含浸、またはコーティング等の方法により塗布すればよい。
【００５８】
本発明の抗ウイルス剤を種々の製品（医薬組成物、食品組成物も含む）の態様とする場合には、本発明の効果を損なわない限りにおいて、適当な成分と任意に併用することができる。
かかる併用成分は、製品の剤型等に応じて適宜選択すればよく、例えば、水；エタノール、イソプロパノール等の炭素数５以下の低級アルコール；グリセリン、ポリエチレングリコール、ブチレングリコール、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、ソルビトール等の多価アルコール；グリシン、有機酸、グリセリン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、安息香酸ナトリウム、ソルビン酸ナトリウム、プロピオン酸ナトリウム、デヒドロ酸ナトリウム、パラオキシ安息香酸エステル、亜硫酸ナトリウム、ＥＤＴＡ、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、グルコン酸クロルヘキシジン、塩化アルキルジアミノエチルグリシン、ヨードチンキ、ポピドンヨード、セチル酸化ベンザルコニウム、トリクロサン、クロルキシレノール、イソプロピルメチルフェノール、ε-ポリリシン
、ラクトフェリン、ナイシン、バクテリオシン、ウド抽出物、エゴノキ抽出物、カワラヨモギ抽出物、酵素分解ハトムギ抽出物、しらこタンパク抽出物、ツヤプリシン、ペクチン分解物等の抗菌剤などが挙げられ、特に限定されない。これらのうち、水、低級アルコール及び多価アルコールからなる群から選択される少なくなくとも１種が併用成分として好ましく、抗菌性をも付与しうる観点から低級アルコール及び多価アルコールからなる群から選択される少なくなくとも１種がより好ましい。
【００５９】
この他にも、クエン酸、クエン酸ナトリウム、水酸化ナトリウム、トリエタノールアミン等のｐＨ調整剤、トコフェロール酢酸エステル等の酸化防止剤、カルボキシビニルポリマー、ヒドロキシエチルセルロース等の増粘剤などの添加剤も、併用成分として好ましく挙げられる。
【実施例】
【００６０】
次に実施例を挙げて本発明を詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
【００６１】
＜実施例＞
特許文献３に記載の方法で、納豆抽出ペプチドを製造した。得られたペプチド凍結乾燥物には、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有するペプチドが、９０質量％以上含まれることを確認した。
ε−ポリ−Ｌリジン（以降「ＥＰＬ」と記す）はＪＮＣ株式会社製のものを用意した（Ｍｎ：４０９０、Ｍｗ：４７００）。
検体である納豆抽出ペプチド及びＥＰＬはそれぞれ、精製水に溶解して試料とした。
【００６２】
日本食品分析センターに依頼して、ネコカリシウイルス不活化試験を行った。なお、ネコカリシウイルスは、細胞培養が不可能なノロウイルスの代替ウイルスとして試験に広く使用されるものである。
試験ウイルス（Ｆｅｌｉｎｅ Ｃａｌｉｃｉｖｉｒｕｓ Ｆ−９ ＡＴＣＣ ＶＲ−７８２）の培養液を遠心分離して得られた上澄み液を精製水で１０倍希釈して得たウイルス液０．５ｍＬと、試料０．５ｍＬとを混合して、作用液とした。なお、試料中の納豆抽出ペプチドとＥＰＬはそれぞれ、各試験区の所定の終濃度になるように精製水で調製した。
予め、細胞維持培地で作用液を１０００倍に希釈することにより、検体の影響を受けずにウイルス感染価を測定できることを確認した。
細胞増殖培地（１０％牛仔血清加イーグルＭＥＭ培地「ニッスイ」（日水製薬株式会社））を用い、ＣＲＦＫ細胞（大日本製薬株式会社）を組織培養用９６穴マイクロプレート内で単層培養した後、細胞増殖培地を除いて、細胞維持培地（２％牛仔血清加イーグルＭＥＭ培地「ニッスイ」（日水製薬株式会社））を０．１ｍＬずつ加えた。次に、１０００媒希釈した作用液又は対照（精製水）を、細胞維持培地を用いて１０倍段階希釈した。その希釈液０．１ｍＬを上記培養細胞４穴ずつに接種し、室温にて３０又は６０分間インキュベートした。
Ｂｅｈｒｅｎｓ−Ｋａｒｂｅｒ法によりｌｏｇＴＣＩＤ５０を算出して、作用液１ｍＬあたりのウイルス感染価に換算した。
【００６３】
各試験区のｌｏｇ ＴＣＩＤ５０の結果を表１に示す。数値が小さいほど、試料により５０％以下に不活化できるウイルス液の希釈度が小さい（すなわち、濃度が大きい）ことを表す。
納豆ペプチド単独、又はＥＰＬ単独では、いずれの濃度でも対照（６．２）よりもｌｏｇ ＴＣＩＤ５０が１以上小さくならず、ウイルス不活化効果は認められなかった。一方、これらを併用した場合は、本実験系で細胞に影響の出ないもっとも濃いウイルス液（１０３希釈程度）でも、いずれの濃度でも対照（６．２）よりも明らかに小さいｌｏｇ Ｔ
ＣＩＤ５０値となり、十分にウイルスを不活化することができた。
【００６４】
【表１】
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【産業上の利用可能性】
【００６５】
本発明によれば、ノンエンベロープ型ウイルスに対して不活化効果を発揮し、かつ手指への適用や経口摂取も可能な安全性の高い、新規な抗ウイルス剤が提供されるため、非常に有用である。
【配列表】
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