(57)【要約】      （修正有）【課題】花弁形質を含む植物形質を調節する技術を提供すること。【解決手段】A）稲由来の特定のアミノ酸配列をコードする塩基配列、又はB）該アミノ酸配列と90％以上の同一性を有するアミノ酸配列をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを植物に導入すること。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
A）配列番号1に示されるアミノ酸配列をコードする塩基配列、又は
B）配列番号1に示されるアミノ酸配列と90％以上の同一性を有するアミノ酸配列をコードする塩基配列
を含むポリヌクレオチドを含有する、植物形質調節剤。
【請求項２】
前記形質が花弁形質を含む、請求項１に記載の植物形質調節剤。
【請求項３】
前記形質が、花弁の寿命、花弁の形状、及び花弁の色からなる群より選択される少なくとも1種の花弁形質を含む、請求項１又は２に記載の植物形質調節剤。
【請求項４】
前記形質が、花弁の寿命及び花弁の形状からなる群より選択される少なくとも1種の花弁形質を含む、請求項１〜３のいずれかに記載の植物形質調節剤。
【請求項５】
前記形質調節が花弁の緑色化である、請求項１〜４のいずれかに記載の植物形質調節剤。
【請求項６】
前記ポリヌクレオチドがベクターを構成している、請求項１〜５のいずれかに記載の植物形質調節剤。
【請求項７】
A）配列番号1に示されるアミノ酸配列をコードする塩基配列、又は
B）配列番号1に示されるアミノ酸配列と90％以上の同一性を有するアミノ酸配列をコードする塩基配列
を含むポリヌクレオチドを含有する細胞を含む、形質調節された植物又はその部分構造体。
【請求項８】
A）配列番号1に示されるアミノ酸配列をコードする塩基配列、又は
B）配列番号1に示されるアミノ酸配列と90％以上の同一性を有するアミノ酸配列をコードする塩基配列
を含むポリヌクレオチドを含有する細胞を含み、且つ形質調節された器官を含む植物から得られる、或いは該植物へ発生する、種子。
【請求項９】
A）配列番号1に示されるアミノ酸配列をコードする塩基配列、又は
B）配列番号1に示されるアミノ酸配列と90％以上の同一性を有するアミノ酸配列をコードする塩基配列
を含むポリヌクレオチドを植物又は植物細胞に導入する工程を含む、植物形質調節方法。
【請求項１０】
A）配列番号1に示されるアミノ酸配列をコードする塩基配列、又は
B）配列番号1に示されるアミノ酸配列と90％以上の同一性を有するアミノ酸配列をコードする塩基配列
を含むポリヌクレオチドを植物又は植物細胞に導入する工程を含む、形質調節された植物の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、植物形質調節剤等に関する。
【背景技術】
【０００２】
花弁は、その観賞価値の向上、観賞期間の向上等の観点から、形質調節の対象となっている。例えば、花弁の色を変化させる、花弁の形状を変化させる、花弁の寿命を延長させる等の試みがなされている。
【０００３】
このような形質調節には、分子育種が多く利用されている。例えば、APETALA3-1 (AP3-1)遺伝子、SEPALLATA (SEP)遺伝子、UNUSUAL FLORAL ORGANS (UFO)遺伝子、PISTILLATA (PI)遺伝子等を調節することにより、シロイヌナズナの花弁の形質を調節したことが報告されている（非特許文献１〜４）。しかしながら、これらの遺伝子を調節した場合、花弁ががくや葉のように変化してしまい、花弁らしさ（花弁の薄さ、形状の美しさ等）を失ってしまうという問題があった。また、非特許文献５では、EPHEMERAL1遺伝子がアサガオの花弁老化を制御していることが報告されている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】Yi Y, Jack T.  An intragenic suppressor of the Arabidopsis floral organ identity mutant apetala3-1 functions by suppressing defects in splicing.  Plant Cell. 1998 10:1465-1477.
【非特許文献２】Pelaz S, Ditta GS, Baumann E, Wisman E, Yanofsky MF.  B and C floral organ identity functions require SEPALLATA MADS-box genes.  Nature. 2000 405:200-203.
【非特許文献３】Queenie E, Tan KG, Hill TA, Irish VF.  An Arabidopsis F-box protein acts as a transcriptional co-factor to regulate floral development. Development 2008 135:1235-1245.
【非特許文献４】Ng M, Yanofsky MF.  Activation of the Arabidopsis B class homeotic genes by APETALA1.  Plant Cell. 2001 13:739-753.
【非特許文献５】Kenichi Shibuya, Keiichi Shimizu, Tomoko Niki, Kazuo Ichimura  Identification of a NAC transcription factor, EPHEMERAL1, that controls petal senescence in Japanese morning glory.  Plant J. (2014) 79, 1044-1051.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、花弁形質を含む植物形質を調節する技術を提供することを課題とする。好ましくは、本発明は、花弁形質を、花弁らしさ（花弁の薄さ、形状の美しさ等）をより保ちながら調節する技術を提供することを課題とする。より好ましくは、本発明は、花弁の寿命、花弁の形状、及び花弁の色からなる群より選択される少なくとも1種の花弁形質を調節する技術を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者は上記課題に鑑みて鋭意研究を進めた結果、A）配列番号1に示されるアミノ酸配列をコードする塩基配列、又はB）配列番号1に示されるアミノ酸配列と90％以上の同一性を有するアミノ酸配列をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを植物に導入することにより、植物形質、特に花弁の寿命、花弁の形状、及び花弁の色からなる群より選択される少なくとも1種を、花弁らしさ（花弁の薄さ、形状の美しさ等）をより保ちながら、調節することができることを見出した。本発明者は、この知見に基づいてさらに研究を進めた結果、本発明を完成させた。
【０００７】
即ち、本発明は、下記の態様を包含する。
【０００８】
項１．  A）配列番号1に示されるアミノ酸配列をコードする塩基配列、又はB）配列番号1に示されるアミノ酸配列と90％以上の同一性を有するアミノ酸配列をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含有する、植物形質調節剤。
【０００９】
項２．  前記形質が花弁形質を含む、項１に記載の植物形質調節剤。
【００１０】
項３．  前記形質が、花弁の寿命、花弁の形状、及び花弁の色からなる群より選択される少なくとも1種の花弁形質を含む、項１又は２に記載の植物形質調節剤。
【００１１】
項４．  前記形質が、花弁の寿命及び花弁の形状からなる群より選択される少なくとも1種の花弁形質を含む、項１〜３のいずれかに記載の植物形質調節剤。
【００１２】
項５．  前記形質調節が花弁の緑色化である、項１〜４のいずれかに記載の植物形質調節剤。
【００１３】
項６．  前記ポリヌクレオチドがベクターを構成している、項１〜５のいずれかに記載の植物形質調節剤。
【００１４】
項７．  A）配列番号1に示されるアミノ酸配列をコードする塩基配列、又はB）配列番号1に示されるアミノ酸配列と90％以上の同一性を有するアミノ酸配列をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含有する細胞を含む、形質調節された植物又はその部分構造体。
【００１５】
項８．  A）配列番号1に示されるアミノ酸配列をコードする塩基配列、又はB）配列番号1に示されるアミノ酸配列と90％以上の同一性を有するアミノ酸配列をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含有する細胞を含み、且つ形質調節された器官を含む植物から得られる、或いは該植物へ発生する、種子。
【００１６】
項９．  A）配列番号1に示されるアミノ酸配列をコードする塩基配列、又はB）配列番号1に示されるアミノ酸配列と90％以上の同一性を有するアミノ酸配列をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを植物又は植物細胞に導入する工程を含む、植物形質調節方法。
【００１７】
項１０．  A）配列番号1に示されるアミノ酸配列をコードする塩基配列、又はB）配列番号1に示されるアミノ酸配列と90％以上の同一性を有するアミノ酸配列をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを植物又は植物細胞に導入する工程を含む、形質調節された植物の製造方法。
【発明の効果】
【００１８】
本発明によれば、花弁形質を含む植物形質を調節する技術を提供することができる。好ましくは、本発明によれば、花弁形質を、花弁らしさ（花弁の薄さ、形状の美しさ等）をより保ちながら調節する技術を提供することができる。より好ましくは、本発明によれば、花弁の寿命、花弁の形状、及び花弁の色からなる群より選択される少なくとも1種の花弁形質を調節する技術を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】実施例4におけるシロイヌナズナの観察像を示す。Aは花序における花及び長角果を示す。A中、WTは野生型のシロイヌナズナを示し、GPP oxは実施例1で得られたシロイヌナズナを示す。BはAの像中、最も古い花及びその花弁を示す。B中、スケールバーは1 mmを表す。
【図２】実施例4におけるアサガオの花の観察像を示す。WTは野生型のアサガオを示し、escape (n37-2)は実施例2でGPPを導入したもののエスケープにより非形質転換体となった株を示し、GPP oxの3つの株それぞれは実施例2で得られたアサガオを示す。
【図３】実施例4におけるアサガオの花の経時的観察像を示す。WTは野生型のアサガオを示し、GPP oxは実施例2で得られたアサガオを示す。
【図４】実施例4における、実施例3で得られたペチュニアの花の観察像を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
本明細書中において、「含有」及び「含む」なる表現については、「含有」、「含む」、「実質的にからなる」及び「のみからなる」という概念を含む。
【００２１】
本明細書中において、アミノ酸配列の「同一性」とは、2以上の対比可能なアミノ酸配列の、お互いに対するアミノ酸配列の一致の程度をいう。従って、ある2つのアミノ酸配列の一致性が高いほど、それらの配列の同一性又は類似性は高い。アミノ酸配列の同一性のレベルは、例えば、配列分析用ツールであるFASTAを用い、デフォルトパラメータを用いて決定される。若しくは、Karlin及びAltschulによるアルゴリズムBLAST（KarlinS，Altschul SF．“Methods for assessing the statistical significance of molecular sequence features by using general scoringschemes”Proc Natl Acad Sci USA．87:2264−2268（1990）、KarlinS，Altschul SF．“Applications and statistics for multiple high−scoring segments in molecular sequences．”Proc Natl Acad Sci USA．90:5873−7（1993））を用いて決定できる。このようなBLASTのアルゴリズムに基づいたblastpと呼ばれるプログラムやtblastnと呼ばれるプログラムが開発されている。これらの解析方法の具体的な手法は公知であり、National Center of Biotechnology Information（NCBI）のウェエブサイト（http://www.ncbi.nlm.nih.gov/）を参照すればよい。また、塩基配列の「同一性」も上記に準じて定義される。
【００２２】
本明細書中において、「保存的置換」とは、アミノ酸残基が類似の側鎖を有するアミノ酸残基に置換されることを意味する。例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジンといった塩基性側鎖を有するアミノ酸残基同士で置換されることが、保存的な置換にあたる。その他、アスパラギン酸、グルタミン酸といった酸性側鎖を有するアミノ酸残基；グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システインといった非帯電性極性側鎖を有するアミノ酸残基；アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファンといった非極性側鎖を有するアミノ酸残基；スレオニン、バリン、イソロイシンといったβ−分枝側鎖を有するアミノ酸残基；チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジンといった芳香族側鎖を有するアミノ酸残基同士での置換も同様に、保存的な置換にあたる。
【００２３】
1．植物形質調節剤
本発明は、その一態様において、A）配列番号1に示されるアミノ酸配列をコードする塩基配列（塩基配列A）、又はB）配列番号1に示されるアミノ酸配列と90％以上の同一性を有するアミノ酸配列をコードする塩基配列（塩基配列B）を含むポリヌクレオチド（本明細書において、「本発明のポリヌクレオチド」と示すこともある。）を含有する、植物形質調節剤（本明細書において、「本発明の植物形質調節剤」と示すこともある。）に係る。以下に、これについて説明する。
【００２４】
配列番号1に示されるアミノ酸配列からなるタンパク質は、イネの内在タンパク質であり、他の植物においても同様のタンパク質が存在すると考えられる。
【００２５】
塩基配列Aは、配列番号1に示されるアミノ酸配列をコードするものである限り特に制限されない。塩基配列Aとしては、好ましくは配列番号2に示される塩基配列が挙げられる。
【００２６】
塩基配列Bの定義において、塩基配列Bでコードされるタンパク質のアミノ酸配列と配列番号1に示されるアミノ酸配列との同一性は、好ましくは95％以上、より好ましくは97％以上、さらに好ましくは99％以上、よりさらに好ましくは99.5％以上である。
【００２７】
塩基配列Bの一態様としては、以下の塩基配列B1が挙げられる：
B1）配列番号1に示されるアミノ酸配列に対して1又は複数のアミノ酸が変異してなるアミノ酸配列をコードする塩基配列（塩基配列B1）。
【００２８】
塩基配列B1において、複数とは、例えば2〜100、好ましくは2〜50、より好ましくは2〜10、さらに好ましくは2〜5である。
【００２９】
塩基配列B及びB1において、アミノ酸が変異する塩基配列の変異としては、特に制限されず、置換、欠失、挿入、付加等が挙げられる。これらの中でも、置換が好ましく、中でも保存的置換が好ましい。
【００３０】
塩基配列B及びB1において、「配列番号1に示されるアミノ酸配列と90％以上の同一性を有するアミノ酸配列」は、該配列からなるタンパク質がその本来の機能を著しく損なわない限りにおいて特に制限されない。典型的には、該アミノ酸配列は、由来植物であるイネにおいて内在的に発現する、自然界において生じた変異を含む。
【００３１】
塩基配列B及びB1は、好ましくは、塩基配列A（好ましくは配列番号2）の相補鎖と、ストリンジェントな条件でハイブリダイズすることができる。ストリンジェントな条件は、Berger and Kimmel (1987, Guide to Molecular Cloning Techniques Methods in Enzymology, Vol. 152, Academic Press, San Diego CA) に教示されるように、複合体或いはプローブを結合する核酸の融解温度(Tm)に基づいて決定することができる。例えばハイブリダイズ後の洗浄条件として、通常「1×SSC、0.1%SDS、37℃」程度の条件を挙げることができる。かかる条件で洗浄してもハイブリダイズ状態を維持するものであることが好ましい。特に制限されないが、より厳しいハイブリダイズ条件として「0.5×SSC、0.1%SDS、42℃」程度、さらに厳しいハイブリダイズ条件として「0.1×SSC、0.1%SDS、65℃」程度の洗浄条件を挙げることができる。
【００３２】
本発明のポリヌクレオチドは、塩基配列A又はB以外にも、プロモーターを含むことが好ましい。プロモーターは、塩基配列A又はBでコードされるタンパク質を発現可能なように配置される。プロモーターとしては、植物細胞内で転写活性を有し得るものである限り特に制限されない。プロモーターの具体例としては、CaMV35Sプロモーター、UBQ（ユビキチン）プロモーター、NOSプロモーター等の器官非特異的な恒常性プロモーター；  器官特異的（例えば、花弁特異的）プロモーター等が挙げられる。
【００３３】
本発明のポリヌクレオチドは、上記以外の他の塩基配列を含むことができる。他の塩基配列としては、例えば薬剤耐性遺伝子、レポータータンパク質コード配列、これらの発現カセット；  タンパク質タグコード配列；  シグナル配列コード配列；  複製起点；  アグロバクテリウム法で使用されるバイナリーベクターの各エレメント配列（例えば左境界領域、右境界領域等）等が挙げられる。
【００３４】
薬剤耐性遺伝子としては、例えばクロラムフェニコール耐性遺伝子、テトラサイクリン耐性遺伝子、ネオマイシン耐性遺伝子、エリスロマイシン耐性遺伝子、スペクチノマイシン耐性遺伝子、カナマイシン耐性遺伝子、ハイグロマイシン耐性遺伝子、ピューロマイシン耐性遺伝子等が挙げられる。
【００３５】
レポータータンパク質としては、特に制限されず、例えば特定の基質と反応して発光（発色）する発光（発色）タンパク質、或いは励起光によって蛍光を発する蛍光タンパク質等が挙げられる。発光（発色）タンパク質としては、例えばルシフェラーゼ、βガラクトシダーゼ、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ、βグルクロニダーゼ等が挙げられ、蛍光タンパク質としては、例えばGFP、Azami-Green、ZsGreen、GFP2、HyPer、Sirius、BFP、CFP、Turquoise、Cyan、TFP1、YFP、Venus、ZsYellow、Banana、KusabiraOrange、RFP、DsRed、AsRed、Strawberry、Jred、KillerRed、Cherry、HcRed、mPlum等が挙げられる。また、レポータータンパク質には、発光（発色）タンパク質や蛍光タンパク質と、他のタンパク質（例えば種子特異的タンパク質）との融合タンパク質や、発光（発色）タンパク質や蛍光タンパク質に公知のタンパク質タグ、公知のシグナル配列等が付加されてなるタンパク質も包含される。
【００３６】
タンパク質タグとしては、例えばビオチン、Hisタグ、FLAGタグ、Haloタグ、MBPタグ、HAタグ、Mycタグ、V5タグ、PAタグ等が挙げられる。
【００３７】
シグナル配列としては、例えば転写の終結シグナルが挙げられる。終結シグナルとしては、特に制限されず、例えば、ヒートショックタンパク質終結シグナル（HspT: Heat shock protein Terminator）、NosT (Noparin synthase Terminator)、35sT (CaMV35S Terminator)等が挙げられる。
【００３８】
本発明のポリヌクレオチドは、ベクターを構成していてもよい。ベクターの種類としては、特に制限されず、例えばプラスミドベクター；  アグロバクテリウムベクター；  タバコモザイクウイルス、キュウリモザイクウイルス、アフリカキャッサバモザイクウイルス、リンゴ小球形潜在ウイルス、オオムギ斑葉モザイクウイルス、Bean pod mottle virus、Beet curly top virus、Brome mosaic virus、Cabbage leaf curl virus、Cotton leaf crumple virus、シンビジュームモザイクウイルス、ブドウAウイルス、Pea early browning virus、Poplar mosaic virus、ジャガイモXウイルス、Rice tungro bacilliform virus、サテライトタバコモザイクウイルス、Tobacco curly shoot virus、タバコ茎えそウイルス等の植物ウイルスベクター等が挙げられる。また、上記のベクターのように、植物又は植物細胞への導入に適したベクター以外にも、このようなベクターに本発明のポリヌクレオチドを移し替えるためのベクター（例えば、ゲートウェイ（登録商標）のエントリークローンベクター等）も一例として挙げることができる。
【００３９】
本発明のポリヌクレオチドが植物に導入された場合、内在性の転写制御領域の制御下で、及び／又は本発明のポリヌクレオチドがプロモーターを含む場合はそのプロモーターの制御下で、塩基配列A又はBでコードされるタンパク質を発現することができる。
【００４０】
本発明のポリヌクレオチドは、公知の遺伝子工学的手法に従って容易に作製することができる。例えば、PCR、制限酵素切断、DNA連結技術、in vitro転写技術等を利用して作製することができる。
【００４１】
本発明の植物形質調節剤の形態は特に制限されず、例えば試薬の形態であっても、キットの形態であってもよい。
【００４２】
試薬の形態である場合、本発明の植物形質調節剤は、本発明のポリヌクレオチドを含有する限りにおいて特に制限されず、必要に応じてさらに他の成分を含んでいてもよい。他の成分としては、特に限定されるものではないが、例えば基剤、担体、溶剤、分散剤、乳化剤、緩衝剤、安定剤、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、増粘剤、保湿剤、着色料、香料、キレート剤等が挙げられる。
【００４３】
キットの形態である場合、本発明の植物形質調節剤は、本発明のポリヌクレオチド及び／又は上記試薬を含有する限りにおいて特に制限されず、必要に応じて核酸導入試薬、緩衝液等、本発明のゲノム編集方法の実施に必要な他の材料、試薬、器具等を適宜含んでいてもよい。
【００４４】
本発明の形質調節対象である「植物」は、その成長過程において花弁を有することがある植物である限り特に制限されない。植物としては、例えば裸子植物、被子植物のモクレン類、単子葉類、真正双子葉類（バラ類I、バラ類II、キク類I、キク類II及びそれらの外群）を含む広い範囲の植物を挙げることができる。植物としては、被子植物が好ましい。植物のより具体的な例としては、アオイ科、アブラナ科、キク科、ヤナギ科、キンポウゲ科、クスノキ科、センリョウ科、ドクダミ科、サトイモ科、シソ科、スミレ科、セリ科、ツゲ科、ツツジ科、タデ科、ヒユ科、ヒルガオ科、バラ科、ビャクダン科、フウチョウソウ科、フウロソウ科、ブドウ科、ブナ科、スイカズラ科、マツムシソウ科、マメ科、ミカン科、ムクロジ科、ヤマモガシ科、ユキノシタ科、キョウチクトウ科、リンドウ科、オシダ科、ヒノキ科、ウリ科、ナス科、ゴマ科、オオバコ科、ハマウツボ科、アゼナ科、フウチョウボク科、カリケラ科、クサトベラ科、ミツガシワ科、スティリディウム科、ヒメハギ科、スリアナ科、ムンティンギア科、キティヌス科、フタバガキ科、サルコラエナ科、ハンニチバナ科、ベニノキ科、スファエロセパルム科、テトラメレス科、ベゴニア科、ダティスカ科、メギ科、ツヅラフジ科、ヒブリス科、スチルベ科、ゴマノハグサ科、サギゴケ科、ハエドクソウ科、キリ科、コショウ科、ディディメラ科、キンモウワラビ科、ツルキジノオシダ科、タマシダ科、ナナバケシダ科、ツルシダ科、ウラボシ科、シノブ科、キンモウワラビ科、ツルキジノオシダ科、タマシダ科、ナナバケシダ科、ツルシダ科、ウラボシ科、シノブ科等に属する植物が挙げられる。
【００４５】
後述の実施例では、植物の分類上離れた種間（シロイヌナズナとアサガオ・ペチュニアとの間）で植物形質調節効果が得られたことから、この効果は、植物種を問わずに発揮されると考えられる。
【００４６】
また、限定的な解釈を望むものではないが、本発明のメカニズムの一端は次のように考えられる。本発明のポリヌクレオチドから発現した塩基配列A又はBでコードされるタンパク質は、花弁を構成する細胞内の葉緑体を増加させることにより花弁の色を変化させ、さらに花弁の構造を葉の構造に近付けることにより、花弁の形状を変化させ、また花弁の構造的強靭性を高めてその寿命を延長させると考えられる。
【００４７】
本発明の植物形質調節剤によれば、各種植物形質、例えば花弁形質、より具体的には例えば花弁の寿命、花弁の形状、花弁の色等を調節することができる。これらのより具体的な例において、発明の植物形質調節剤によれば、花弁の寿命を延長することができ、或いは花弁の形状を変化させることができ、或いは花弁の色を変化（例えば緑色化）させることができる。この場合、本発明の植物形質調節剤は、花弁寿命延長剤、花弁老化抑制剤、花弁形状改変剤、花弁色改変剤、花弁緑色化剤等として使用することができる。
【００４８】
本発明の植物形質調節剤は、後述の「2．植物形質調節方法、形質調節された植物又は植物細胞の製造方法」のように使用することができる。
【００４９】
2．植物形質調節方法、形質調節された植物の製造方法
本発明は、その一態様において、本発明のポリヌクレオチドを植物又は植物細胞に導入する工程を含む、植物形質調節方法、及び形質調節された植物の製造方法（本明細書において、これらを総称して「本発明の方法」と示すこともある。）に係る。以下に、これらについて説明する。
【００５０】
導入対象の植物は、「1．植物形質調節剤」における定義と同様である。導入対象の植物細胞としては、花弁へと発生し得る細胞である限り特に制限されず、例えば卵細胞が挙げられる。また、植物における導入部位としては、特に制限されず、例えば花（特に、花の中の、卵細胞、花粉等）、葉、根等が挙げられる。
【００５１】
導入方法は、特に制限されず、導入する物の種類や導入対象に応じて、適宜選択することができる。導入方法としては、例えばフローラル・ディップ法、フローラル・スプレー法、アグロバクテリウム法、パーティクル・ガン法、インフィルトレーション法、爪楊枝接種法、吸引注入法、リーフディスク法、花序浸潤法、減圧濾過法、ウイルス媒介性核酸送達等が挙げられる。これらの中でも、簡便性や安全性等の観点から、好ましくはアグロバクテリウム法が挙げられる。
【００５２】
導入後は、得られた植物又は植物細胞を成長させることにより、或いは得られた植物からカルスを経て成長させることにより、形質調節された植物を得ることができる。また、導入後は、必要に応じて、本発明のポリヌクレオチドが導入された細胞、組織等を、薬剤で選別することができる。
【００５３】
本発明の方法によって、GPPの発現量等に応じて、形質調節の程度の異なる種々の植物が得られ得る。この場合、例えば花弁緑色化の程度、花弁形状等の観点から、望みの形質を有する植物をスクリーニングすることができる。
【００５４】
3．植物、部分構造体、種子
本発明は、その一態様において、本発明のポリヌクレオチドを含有する細胞を含む、形質調節された植物又はその部分構造体、及び該植物から得られる、或いは該植物へ発生する、種子に係る。
【００５５】
植物の部分構造体としては、特に制限されず、接木用の穂木、接木用の台木、枝、地上部等が挙げられ、特に花、つぼみを含む、或いはこれらが発生し得る部分構造体が好ましい。
【００５６】
本項における植物、部分構造体、種子は、上述の「2．植物形質調節方法、形質調節された植物又は植物細胞の製造方法」に従って得ることができる。
【実施例】
【００５７】
以下に、実施例に基づいて本発明を詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例によって限定されるものではない。
【００５８】
参考例1．GPP発現カセット含有ベクターの調製
カリフラワーモザイクウイルス35Sプロモーターの下流にGPP（Green Petal inducible Protein）タンパク質（アミノ酸配列は配列番号1）をコードする塩基配列（配列番号2）が配置されてなる発現カセットをバイナリーベクター（pBIG2113SF）に組み込み、GPP発現カセット含有バイナリーベクターを得た。
【００５９】
実施例1．シロイヌナズナへのGPPの導入
GPP発現カセット含有バイナリーベクター（参考例1）を含有するアグロバクテリウム（Agrobacterium tumefaciens GV3101）をシロイヌナズナ（Arabidopsis thaliana (ecotype Col-0)）の花に滴下して、種子を獲得した（既報：ドロップ法，Narusaka et al., Plant Biotechnol. 27: 349-351.）。得られた種子を選抜マーカー（ハイグロマイシン）を含む培地に播種し、培地上で生育したGPP発現カセットが導入されたシロイヌナズナ植物を獲得した。
【００６０】
実施例2．アサガオへのGPPの導入
既報（Shimizu et al., (2003), J. Japan.Soc. Hort. Sci. 72: 409-414.及び Kikuchi et al., (2005), Plant Biotechnol. 22: 295-302.）に準じて、GPP発現カセット含有バイナリーベクター（参考例1）を含有するアグロバクテリウム（Agrobacterium tumefaciens EHA105）をアサガオ（Japanese morning glory (Ipomoea nil, the white petal mutant of ‘Violet’ ：Ishimaru et al. (1996), J. Plant Physiol. 148: 672-676.)）に導入した。導入後、カルスを経て、GPP発現カセットが導入されたアサガオを得た。
【００６１】
実施例3．ペチュニアへのGPPの導入
既報（Jorgensen et al.,1996. Plant Mol. Biol. 31, 957-73）に準じて、GPP発現カセット含有バイナリーベクター（参考例1）を含有するアグロバクテリウム（Agrobacterium tumefaciens GV3101）をペチュニア（Petunia×hybrida）に導入した。導入後、カルスを経て、GPP発現カセットが導入されたペチュニアを得た。
【００６２】
実施例4．形質の評価
実施例1〜3で得られた植物を観察した。シロイヌナズナの観察像を図１に示し、アサガオの観察像を図２及び図３に示し、ペチュニアの観察像を図４に示す。
【００６３】
図１〜４より、GPPが導入された植物においては、花弁が、花弁らしさ（花弁の薄さ、形状の美しさ等）を維持しながらも緑色化していることが分かった。このことからGPPは花弁の色を調節する機能（花弁の緑色化能）を有することが分かった。
【００６４】
図１より、GPPが導入されたシロイヌナズナの花弁は、野生型（データ非表示）に比べて、短く、且つ丸い形状であることが分かった。また、図２及び３より、GPPが導入されたアサガオの花弁は、野生型に比べて、先が尖っている（拮梗咲き）ことが分かった。さらに、図４より、GPPが導入されたペチュニアの花弁は、野生型（データ非表示）に比べて、少し縮れて、やや小さい傾向であった。これらの結果より、GPPは花弁の形状を変化させる機能を有することが分かった。
【００６５】
図１より、GPPが導入されたシロイヌナズナの花弁は、より長い時間脱落せずに、開花時の形態をより長い時間保っていることが分かった。また、図３より、GPPが導入されたアサガオの花弁も、開花時の形態をより長い時間保っていることが分かった。これらの結果より、GPPは、花弁の寿命を延長させる機能（花弁老化抑制機能）を有することが分かった。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【配列表】
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