(57)【要約】【課題】低用量で、腸管におけるＩｇＡを十分に増加すると共に、増加したＩｇＡの量を長期間維持することができる、腸管免疫亢進剤を提供することを目的とする。【解決手段】アセチル総置換度が０．４以上１．１以下である酢酸セルロースを含有する、腸管免疫亢進剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
アセチル総置換度が０．４以上１．１以下である酢酸セルロースを含有する、腸管免疫亢進剤。
【請求項２】
前記酢酸セルロースは、下記式で定義される組成分布指数（ＣＤＩ）が２．０以下である、請求項１に記載の腸管免疫亢進剤。
ＣＤＩ＝（組成分布半値幅の実測値）／（組成分布半値幅の理論値）
組成分布半値幅の実測値：酢酸セルロース（試料）の残存水酸基をすべてプロピオニル化して得られるセルロースアセテートプロピオネートをＨＰＬＣ分析して求めた組成分布半値幅
【数１】
2019077652.tif 000012
ＤＳ：アセチル総置換度
ＤＰｗ：重量平均重合度（酢酸セルロース（試料）の残存水酸基をすべてプロピオニル化して得られるセルロースアセテートプロピオネートを用いてＧＰＣ−光散乱法により求めた値）
【請求項３】
請求項１または２に記載の腸管免疫亢進剤を含有する、食品。
【請求項４】
前記食品における前記酢酸セルロースの含有量が０．１重量％以上５重量％未満である、請求項３に記載の食品。
【請求項５】
請求項１または２に記載の腸管免疫亢進剤を含有する、医薬。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、腸管免疫亢進剤、食品、及び医薬に関する。
【背景技術】
【０００２】
糖タンパク質の一種である免疫グロブリン（Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ，Ｉｇ）には、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭ等のクラスがある。そのうち、ＩｇＡは、哺乳類および鳥類に存在する。特に、唾液、涙液、鼻汁、気道粘液、消化管分泌液、乳汁などの外分泌液中に含まれるＩｇＡは、分泌型ＩｇＡとされ、抗原や微生物から粘膜面を防御する免疫機構の最前線として機能している。
【０００３】
消化管は、常に抗原や微生物を含む多くの物質と接しており、これら抗原や微生物が生体内に侵入するのを防ぐ必要があるところ、特に腸管で分泌されるＩｇＡは、粘膜面への細菌やウイルスの付着防止、及び外来抗原を捕捉して体外に排出する異物排除など、粘膜免疫機能において重要な働きを担っている。腸管において、ＩｇＡの分泌を促進することは、粘膜免疫機能を増強させ、感染症やアレルギー疾患を予防するなどの効果が期待できることから、ＩｇＡ分泌促進作用を有する食品等の開発が望まれている。
【０００４】
非特許文献１には、次の記載がある（要旨）。「難消化性オリゴ糖の一種であるガラクトオリゴ糖がマウスの免疫系に与える影響を検討した。ガラクトオリゴ糖を含む飼料を自由摂取させてＢＡＬＢ／ｃマウスを飼育したところ，糞に含まれる総ＩｇＡの量は摂取２週間後に有意に増加し，その後コントロール群と同程度に低下した。摂取４週間後に解剖し，調製したパイエル板細胞培養液および大腸組織抽出液の総ＩｇＡは，ガラクトオリゴ糖群で増加する傾向にあった。」
【０００５】
非特許文献２には、次の旨の記載がある（Ａｂｓｔｒａｃｔ）。ラクトスクロース（４Ｇ−β−Ｄ−ガラクトシルスクロース、以下ＬＳ）が、腸管内におけるＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉａの増加のためのオリゴ糖として提案される。マウスにＬＳ２％または５％添加飼料を４週間摂取させ、小腸粘膜の免疫応答性を調べた結果、ＬＳ２％または５％摂取群で、糞および盲腸内容物中のＩｇＡ量が有意に増加した。
【０００６】
特許文献１には、難消化性のオリゴ糖の一種であるフラクトオリゴ糖が腸管粘膜においてＩｇＡおよびｐＩｇＲ産生を増強することを見出したことが記載されている。
【０００７】
特許文献２には、難消化性デキストリンを経口投与することにより有意なＩｇＡ分泌促進作用が認められたことが記載されている。
【０００８】
特許文献３には、アセチル総置換度が０．４〜１．１である酢酸セルロースを含有することを特徴とする栄養組成物、家畜飼料、脂質代謝改善剤、炎症性腸疾患及び／又は免疫異常の予防及び／又は治療剤、がんの予防及び／又は治療剤、非アルコール性脂肪性肝炎の予防及び／又は治療剤、肥満及び／又は糖尿病の予防及び／又は治療剤、並びに高コレステロール血症の予防及び／又は治療剤が記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】特開２００３−２０１２３９号公報
【特許文献２】特開２０１４−１５２１２５号公報
【特許文献３】国際公開第２０１５／１４６８５３号
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】佐藤、他２名、「ガラクトオリゴ糖がマウスの免疫系に与える影響」、日本栄養・食糧学会誌、２００８年、第６１巻、第２号、ｐ.７９−８８
【非特許文献２】Hino Keiko、他６名、「Effect of Dietary Lactosucrose (4G-.BETA.-D-Galactosylsucrose) on the Intestinal Immune Functions in Mice」、Journal of Applied Glycoscience、２００７年、第５４巻、第３号、ｐ．１６９−１７２
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
非特許文献１には、ガラクトオリゴ糖を含む飼料の摂取により、マウスの大腸組織抽出液等の総ＩｇＡが増加する傾向にあったことが記載されているが、その飼料中にガラクトオリゴ糖が５重量％も含まれるような用量を要している（ｐ．８０右欄、Ｔａｂｌｅ２）。また、ガラクトオリゴ糖を含む飼料の摂取２週間目において、その飼料を摂取した試験群の糞便中総ＩｇＡは最大で対象群の２倍程度となり、有意差となっている場合もあるが、摂取３週間目では、対照群と同程度に低下し、有意差となっていない（ｐ．８１右欄、Ｆｉｇｕｒｅ  １）。さらに、大腸組織抽出液等を分析し、総ＩｇＡが多くなる傾向を認めた旨が報告されているが、これら効果は有意差では無い旨が明記されている（ｐ．８１右欄、Ｆｉｇｕｒｅ  ２及び３）。
【００１２】
非特許文献２は、ラクトスクロース添加飼料の摂取により、１週間後には、マウスの糞便中のＩｇＡの量が対照の群の２倍程度となったが、２週間後には大きく減少し、その後も大きく増加しない（Ｆｉｇ．  １）。特に、２％のラクトスクロース添加飼料の場合には、２週間後にＩｇＡの量が大きく減少した後、ほとんど増加しない（Ｆｉｇ．  １）。
【００１３】
特許文献１においても、フラクトオリゴ糖を５％（ｗ／ｗ）も添加した実験飼料をマウスに摂取させたことが記載されている。その飼料を摂取した試験群の３６日齢のマウスの糞便中のＩｇＡ抗体含量は対象群の２倍程度となり、有意差となっているが（図５）、同じ実験の飼育日数２８日齢および４２日齢では有意差となっていない（図５）。また、試験群の大腸全体のＩｇＡ抗体含量は４４日齢で対照群の１．５倍程度となり有意差となっているが（図７）、大腸組織重量あたりのＩｇＡ抗体量は有意差となっていない（図９）。さらに、プロテオバクテリア門に属するコレラ菌に対する抗コレラトキシン特異ＩｇＡ量を調べた結果として（図１４）、試験群と対象群のｐ値は０．０７と危険率５％で有意差とはならなかった。
【００１４】
特許文献２においても、コントロール飼料に難消化性デキストリンを５質量％及び７．５質量％も配合した飼料でマウスを飼育したことが記載されている。消化管内容物中（図１）及び糞便中（図２）のＩｇＡが増加したことが示されているが、実験に使用したマウスの固体数は示されておらず、また、有意差検定の結果も示されておらず、一部の図ではエラーバーも示されていない（図１〜４）。さらに、エラーバーが示された図では誤差範囲は大きいと読み取ることが出来、検定の結果として有意差は無かったことから何らの記載もされなかったことが伺われる。したがって、そもそもＩｇＡを増加させる技術であるのかどうか確率統計的な検証が為されていない。なお、ＩｇＡの基質特異性も調べられていない。
【００１５】
特許文献３には、アセチル総置換度が０．４〜１．１である酢酸セルロースが記載されているが、腸管免疫亢進剤については記載も示唆もされていない。
【００１６】
従来のガラクトオリゴ糖、ラクトスクロース、フラクトオリゴ糖、及び難消化性デキストリン等を用いる方法では、大腸等におけるＩｇＡを増加させるため、相当に高い用量を要する。高い用量が必要となれば、ヒトが一日に接種する量に換算すれば、医薬品として経口摂取するには苦痛を伴うことや、食品として摂取する場合には通常の食事の楽しみを損なうこと等が懸念される。また、従来の方法では、増加したＩｇＡの量を長期間維持することができない。さらに、ＩｇＡの病原性細菌に対する親和性（基質特異性）に関する設計がされておらず、病原性細菌に対する特異性が低い。
【００１７】
本発明は、低用量で、腸管におけるＩｇＡを十分に増加すると共に、増加したＩｇＡの量を長期間維持することができる、腸管免疫亢進剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１８】
本発明の第一は、アセチル総置換度が０．４以上１．１以下である酢酸セルロースを含有する、腸管免疫亢進剤に関する。
【００１９】
前記腸管免疫亢進剤において、前記酢酸セルロースは、下記式で定義される組成分布指数（ＣＤＩ）が２．０以下であることが好ましい。
ＣＤＩ＝（組成分布半値幅の実測値）／（組成分布半値幅の理論値）
組成分布半値幅の実測値：酢酸セルロース（試料）の残存水酸基をすべてプロピオニル化して得られるセルロースアセテートプロピオネートをＨＰＬＣ分析して求めた組成分布半値幅
【数１】
2019077652.tif 000002
ＤＳ：アセチル総置換度
ＤＰｗ：重量平均重合度（酢酸セルロース（試料）の残存水酸基をすべてプロピオニル化して得られるセルロースアセテートプロピオネートを用いてＧＰＣ−光散乱法により求めた値）
【００２０】
本発明の第二は、前記腸管免疫亢進剤を含有する、食品に関する。
【００２１】
前記食品における前記酢酸セルロースの含有量が０．１重量％以上５重量％未満であることが好ましい。
【００２２】
本発明の第三は、前記腸管免疫亢進剤を含有する、医薬に関する。
【発明の効果】
【００２３】
本発明によれば、低用量で、腸管におけるＩｇＡを十分に増加すると共に、増加したＩｇＡの量を長期間維持することができる、腸管免疫亢進剤を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００２４】
【図１】野生型マウスの糞便中のＩｇＡ定量結果を示す図である。
【図２】４週間飼育した野生型マウスの糞便中のＩｇＡ結合細菌の定量結果を示す図である。
【図３】４週間飼育した野生型マウスの腸管の各部位におけるＩｇＡ定量結果を示す図である。
【図４】４週間飼育した野生型マウスの大腸粘膜固有層のＩｇＡ産生形質細胞の定量結果を示す図である。
【図５】４週間飼育した単菌定着マウスの盲腸および糞便のＩｇＡ結合細菌の定量結果を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００２５】
［腸管免疫亢進剤］
本開示に係る腸管免疫亢進剤は、アセチル総置換度が０．４以上１．１以下である酢酸セルロースを含有するものである。ここで、腸管とは、十二指腸、空腸、回腸等を含む小腸、並びに盲腸、近位結腸、遠位大腸等を含む大腸を意味する。また、免疫亢進としては、ＩｇＡを増加すること等が挙げられ、そのＩｇＡの増加は、ＩｇＡ産生形質細胞の増加によるもの等が含まれる。
【００２６】
本開示の腸管免疫亢進剤を摂取または投与（特に経口）することにより、腸管（特に大腸の粘膜固有層）の免疫グロブリンＡ（ＩｇＡ）産生形質細胞が増加する、腸管のＩｇＡが増加する、増加したＩｇＡの量を長期間維持することができる、及び／またはＩｇＡのプロテオバクテリア門細菌への抗原抗体反応特異性が増大することから腸管粘膜のプロテオバクテリア門細菌が減少する等の効果が得られる。プロテオバクテリア門は病原性大腸菌、サルモネラ菌、ビブリオ菌などの病原性細菌を多く含む門であり、大腸粘膜のこれら細菌が減少することにより、腸管が病原性細菌から保護される。さらに、本開示の腸管免疫亢進剤は、従来よりも低用量であっても当該効果が得られる。
【００２７】
（酢酸セルロースのアセチル総置換度）
本開示の酢酸セルロースは、アセチル総置換度（平均置換度）が０．４以上１．１以下である。アセチル総置換度がこの範囲であると水に対する溶解性に優れ、この範囲を外れると水に対する溶解性が低下する傾向となる。酢酸セルロースは腸内細菌によって消化管内で酢酸とセルロースに分解し、セルロースはさらにオリゴ糖や単糖を経由して酢酸等の短鎖脂肪酸に分解されると考えられる。このような過程で生じる酢酸などの代謝産物や、このような過程で酢酸セルロースを資化する腸内細菌がＩｇＡ産生細胞の増加とＩｇＡの増加に繋がると考えられる。酢酸セルロースの酢酸とセルロースへの分解は菌体外酵素によって生じると考えられるので水に対する溶解性の高い酢酸セルロースの方が分解されやすく、ＩｇＡ産生細胞の増加とＩｇＡの増加を促進する効果が高い。さらには腸管免疫亢進効果が高まることにつながる。このような観点から、前記アセチル総置換度の好ましい範囲は０．５以上１．０以下であり、さらに好ましい範囲は０．６以上０．９５以下である。
【００２８】
アセチル総置換度は、酢酸セルロースを水に溶解し、酢酸セルロースの置換度を求める公知の滴定法により測定できる。具体的には次のとおりである。
【００２９】
アセチル総置換度は、ＡＳＴＭ：Ｄ−８１７−９１（セルロースアセテートなどの試験方法）における酢化度の測定法に準じて求めた酢化度を次式で換算することにより求められる。これは、最も一般的なセルロースアセテートの置換度の求め方である。
ＤＳ＝１６２．１４×ＡＶ×０．０１／（６０．０５２−４２．０３７×ＡＶ×０．０１）
ＤＳ：アセチル総置換度
ＡＶ：酢化度（％）
【００３０】
まず、乾燥した酢酸セルロース（試料）５００ｍｇを精秤し、超純水とアセトンとの混合溶媒（容量比４：１）５０ｍｌに溶解した後、０．２Ｎ−水酸化ナトリウム水溶液５０ｍｌを添加し、２５℃で２時間ケン化する。次に、０．２Ｎ−塩酸５０ｍｌを添加し、フェノールフタレインを指示薬として、０．２Ｎ−水酸化ナトリウム水溶液（０．２Ｎ−水酸化ナトリウム規定液）で、脱離した酢酸量を滴定する。また、同様の方法によりブランク試験（試料を用いない試験）を行う。そして、下記式にしたがってＡＶ（酢化度）（％）を算出する。
ＡＶ（％）＝（Ａ−Ｂ）×Ｆ×１．２０１／試料重量（ｇ）
Ａ：０．２Ｎ−水酸化ナトリウム規定液の滴定量（ｍｌ）
Ｂ：ブランクテストにおける０．２Ｎ−水酸化ナトリウム規定液の滴定量（ｍｌ）
Ｆ：０．２Ｎ−水酸化ナトリウム規定液のファクター
【００３１】
上記の他、アセチル総置換度は、酢酸セルロースの水酸基をプロピオニル化した上で、重クロロホルムに溶解し、ＮＭＲにより測定することもできる。酢酸セルロースの水酸基のプロピオニル化は、ピリジン／Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド混合溶媒中でＮ，Ｎ−ジメチルアミノピリジンを触媒とし、無水プロピオン酸を作用させる、後述の酢酸セルロースの完全誘導体化の方法にて行うことができる。
【００３２】
（酢酸セルロースの組成分布指数（ＣＤＩ））
本開示において、前記酢酸セルロースの組成分布指数（ＣＤＩ）は特に限定されない。組成分布指数（ＣＤＩ）は、例えば１．０以上３．０以下であってよい。組成分布指数（ＣＤＩ）は、２．０以下が好ましく、１．０以上２．０以下がより好ましく、１．０以上１．８以下がさらに好ましく、１．０以上１．６以下がよりさらに好ましく、１．０以上１．５以下が特に好ましい。
【００３３】
組成分布指数（ＣＤＩ）の下限値は０であるが、これは例えば１００％の選択性でグルコース残基の６位のみをアセチル化し、他の位置はアセチル化しない等の特別な合成技術をもって実現されるものであり、そのような合成技術は知られていない。グルコース残基の水酸基の全てが同じ確率でアセチル化および脱アセチル化される状況において、ＣＤＩは１．０となるが、実際のセルロースの反応においてはこのような理想状態に近付けるためには相当の工夫を要する。前記組成分布指数（ＣＤＩ）が小さいほど、組成分布（分子間置換度分布）が均一となる。組成分布が均一であると、アセチル総置換度が通常よりも広い範囲で水溶性を確保でき、均一な溶解がなされ、構造粘性が発現しないので摂取または投与しやすく、分解されやすく、腸管免疫亢進の効果を発現しやすいなどの利点がある。
【００３４】
ここで、組成分布指数（Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎａｌ  Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  Ｉｎｄｅｘ、ＣＤＩ）とは、組成分布半値幅の理論値に対する実測値の比率［（組成分布半値幅の実測値）／（組成分布半値幅の理論値）］で定義される。組成分布半値幅は「分子間置換度分布半値幅」又は単に「置換度分布半値幅」ともいう。
【００３５】
酢酸セルロースのアセチル総置換度の均一性を評価するのに、酢酸セルロースの分子間置換度分布曲線の最大ピークの半値幅（「半価幅」ともいう）の大きさを指標とすることができる。なお、半値幅は、アセチル総置換度を横軸（ｘ軸）に、この置換度における存在量を縦軸（ｙ軸）としたとき、チャートのピークの高さの半分の高さにおけるチャートの幅であり、分布のバラツキの目安を表す指標である。置換度分布半値幅は、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）分析により求めることができる。なお、ＨＰＬＣにおけるセルロースエステルの溶出曲線の横軸（溶出時間）を置換度（０〜３）に換算する方法については、特開２００３-２０１３０１号公報（段落００３７〜００４０）に説明されている。
【００３６】
（組成分布半値幅の理論値）
組成分布半値幅（置換度分布半値幅）は確率論的に理論値を算出できる。すなわち、組成分布半値幅の理論値は以下の式（１）で求められる。
【数２】
2019077652.tif 000003
ｍ：酢酸セルロース１分子中の水酸基とアセチル基の全数
ｐ：酢酸セルロース１分子中の水酸基がアセチル置換されている確率
ｑ＝１−ｐ
ＤＰｗ：重量平均重合度（ＧＰＣ−光散乱法による）
なお、重量平均重合度（ＤＰｗ）の測定法は後述する。
【００３７】
式（１）は、セルロースの全ての水酸基が同じ確率でアセチル化および脱アセチル化された際に必然的に生じる組成分布半値幅であり、所謂二項定理に従って導かれるものである。さらに、組成分布半値幅の理論値を置換度と重合度で表すと、以下のように表される。下記式（２）を組成分布半値幅の理論値を求める定義式とする。
【数３】
2019077652.tif 000004
ＤＳ：アセチル総置換度
ＤＰｗ：重量平均重合度（ＧＰＣ−光散乱法による）
なお、重量平均重合度（ＤＰｗ）の測定法は後述する。
【００３８】
ところで、式（１）および式（２）においては、より厳密には重合度分布を考慮に入れるべきであり、この場合には式（１）および式（２）の「ＤＰｗ」は、重合度分布関数に置き換え、式全体を重合度０から無限大までで積分すべきである。しかしながら、ＤＰｗを使う限り、式（１）および式（２）は近似的に十分な精度の理論値を与える。ＤＰｎ（数平均重合度）を使うと、重合度分布の影響が無視できなくなるので、ＤＰｗを使うべきである。
【００３９】
（組成分布半値幅の実測値）
本開示において、組成分布半値幅の実測値とは、酢酸セルロース（試料）の残存水酸基（未置換水酸基）をすべてプロピオニル化して得られるセルロースアセテートプロピオネートをＨＰＬＣ分析して求めた組成分布半値幅である。
【００４０】
一般的に、アセチル総置換度２〜３の酢酸セルロースに対しては、前処理なしに高速液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）分析を行うことができ、それによって組成分布半値幅を求めることができる。例えば、特開２０１１−１５８６６４号公報には、置換度２．２７〜２．５６の酢酸セルロースに対する組成分布分析法が記載されている。
【００４１】
一方、本開示の酢酸セルロースにおける組成分布半値幅（置換度分布半値幅）の実測値は、ＨＰＬＣ分析前に前処理として酢酸セルロースの分子内残存水酸基の誘導体化を行い、しかる後にＨＰＬＣ分析を行って求める。この前処理の目的は、低置換度酢酸セルロース（例えば、アセチル総置換度１．１以下の酢酸セルロース）を有機溶剤に溶解しやすい誘導体に変換してＨＰＬＣ分析可能とすることである。すなわち、分子内の残存水酸基を完全にプロピオニル化し、その完全誘導体化セルロースアセテートプロピオネート（ＣＡＰ）をＨＰＬＣ分析して組成分布半値幅（実測値）を求める。ここで、誘導体化は完全に行われ、分子内に残存水酸基はなく、アセチル基とプロピオニル基のみ存在していなければいけない。すなわち、アセチル総置換度（ＤＳａｃ）とプロピオニル総置換度（ＤＳｐｒ）の和は３である。これは、ＣＡＰのＨＰＬＣ溶出曲線の横軸（溶出時間）をアセチル総置換度（０〜３）に変換するための較正曲線を作成するために関係式：ＤＳａｃ＋ＤＳｐｒ＝３を使用するためである。
【００４２】
酢酸セルロースの完全誘導体化は、ピリジン／Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド混合溶媒中でＮ，Ｎ−ジメチルアミノピリジンを触媒とし、無水プロピオン酸を作用させることにより行うことができる。より具体的には、溶媒として混合溶媒［ピリジン／Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド＝１／１（ｖ/ｖ）］を酢酸セルロース（試料）に対して２０重量部、プロピオニル化剤として無水プロピオン酸を該酢酸セルロースの水酸基に対して６．０〜７．５当量、触媒としてＮ，Ｎ−ジメチルアミノピリジンを該酢酸セルロースの水酸基に対して６．５〜８．０ｍｏｌ％使用し、温度１００℃、反応時間１．５〜３．０時間の条件でプロピオニル化を行う。そして、反応後、沈殿溶媒としてメタノールを用い、沈殿させることにより、完全誘導体化セルロースアセテートプロピオネートを得る。より詳細には、例えば、室温で、反応混合物１重量部をメタノール１０重量部に投入して沈澱させ、得られた沈殿物をメタノールで５回洗浄し、６０℃で真空乾燥を３時間行うことにより、完全誘導体化セルロースアセテートプロピオネート（ＣＡＰ）を得ることができる。なお、後述の分散度（多分散性、Ｍｗ／Ｍｎ）及び重量平均重合度（ＤＰｗ）も、酢酸セルロース（試料）をこの方法により完全誘導体化セルロースアセテートプロピオネート（ＣＡＰ）とし、測定したものである。
【００４３】
上記ＨＰＬＣ分析では、異なるアセチル総置換度を有する複数のセルロースアセテートプロピオネートを標準試料として用いて所定の測定装置および測定条件でＨＰＬＣ分析を行い、これらの標準試料の分析値を用いて作成した較正曲線［セルロースアセテートプロピオネートの溶出時間とアセチル総置換度（０〜３）との関係を示す曲線、通常、三次曲線］から、酢酸セルロース（試料）の組成分布半値幅（実測値）を求めることができる。ＨＰＬＣ分析で求められるのは溶出時間とセルロースアセテートプロピオネートのアセチル総置換度分布の関係である。これは、試料分子内の残存ヒドロキシ基のすべてがプロピオニルオキシ基に変換された物質の溶出時間とアセチル総置換度分布の関係であるから、本開示の酢酸セルロースのアセチル総置換度分布を求めていることと本質的には変わらない。
【００４４】
上記ＨＰＬＣ分析の条件は以下の通りである。
装置:  Ａｇｉｌｅｎｔ  １１００  Ｓｅｒｉｅｓ
カラム:  Ｗａｔｅｒｓ  Ｎｏｖａ−Ｐａｋ  ｐｈｅｎｙｌ  ６０Å ４μｍ（１５０ｍｍ×３．９ｍｍΦ）＋ガードカラム
カラム温度：３０℃
検出:  Ｖａｒｉａｎ  ３８０−ＬＣ
注入量:  ５．０μＬ（試料濃度：０．１％（ｗｔ／ｖｏｌ））
溶離液:  Ａ液：ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ＝８／１（ｖ／ｖ），Ｂ液：ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ＝８／１（ｖ／ｖ）
グラジェント：Ａ／Ｂ＝８０／２０→０／１００（２８ｍｉｎ）；流量：０．７ｍＬ／ｍｉｎ
【００４５】
較正曲線から求めた置換度分布曲線［セルロースアセテートプロピオネートの存在量を縦軸とし、アセチル総置換度を横軸とするセルロースアセテートプロピオネートの置換度分布曲線］（「分子間置換度分布曲線」ともいう）において、平均置換度に対応する最大ピーク（Ｅ）に関し、以下のようにして置換度分布半値幅を求める。ピーク（Ｅ）の低置換度側の基部（Ａ）と、高置換度側の基部（Ｂ）に接するベースライン（Ａ−Ｂ）を引き、このベースラインに対して、最大ピーク（Ｅ）から横軸に垂線をおろす。垂線とベースライン（Ａ−Ｂ）との交点（Ｃ）を決定し、最大ピーク（Ｅ）と交点（Ｃ）との中間点（Ｄ）を求める。中間点（Ｄ）を通って、ベースライン（Ａ−Ｂ）と平行な直線を引き、分子間置換度分布曲線との二つの交点（Ａ’、Ｂ’）を求める。二つの交点（Ａ’、Ｂ’）から横軸まで垂線をおろして、横軸上の二つの交点間の幅を、最大ピークの半値幅（すなわち、置換度分布半値幅）とする。
【００４６】
このような置換度分布半値幅は、試料中のセルロースアセテートプロピオネートの分子鎖について、その構成する高分子鎖一本一本のグルコース環の水酸基がどの程度アセチル化されているかにより、保持時間（リテンションタイム）が異なることを反映している。したがって、理想的には、保持時間の幅が、（置換度単位の）組成分布の幅を示すことになる。しかしながら、ＨＰＬＣには分配に寄与しない管部（カラムを保護するためのガイドカラムなど）が存在する。それゆえ、測定装置の構成により、組成分布の幅に起因しない保持時間の幅が誤差として内包されることが多い。この誤差は、上記の通り、カラムの長さ、内径、カラムから検出器までの長さや取り回しなどに影響され、装置構成により異なる。このため、セルロースアセテートプロピオネートの置換度分布半値幅は、通常、下式で表される補正式に基づいて、補正値Ｚとして求めることができる。このような補正式を用いると、測定装置（および測定条件）が異なっても、同じ（ほぼ同じ）値として、より正確な置換度分布半値幅（実測値）を求めることができる。
Ｚ＝（Ｘ２−Ｙ２）１／２
［式中、Ｘは所定の測定装置および測定条件で求めた置換度分布半値幅（未補正値）である。Ｙ＝（ａ−ｂ）ｘ／３＋ｂ（０≦ｘ≦３）である。ここで、ａは前記Ｘと同じ測定装置および測定条件で求めた総置換度３のセルロースアセテートの見掛けの置換度分布半値幅（実際は総置換度３なので、置換度分布は存在しない）、ｂは前記Ｘと同じ測定装置および測定条件で求めた総置換度３のセルロースプロピオネートの見掛けの置換度分布半値幅である。ｘは測定試料のアセチル総置換度（０≦ｘ≦３）である］
【００４７】
なお、上記総置換度３のセルロースアセテート（もしくはセルロースプロピオネート）とは、セルロースのヒドロキシル基の全てがエステル化されたセルロースエステルを示し、実際には（理想的には）置換度分布半値幅を有しない（すなわち、置換度分布半値幅０の）セルロースエステルである。
【００４８】
前記酢酸セルロースの組成分布半値幅（置換度分布半値幅）の実測値としては、好ましくは０．１２〜０．３４であり、より好ましくは０．１３〜０．３１であり、さらに好ましくは０．１３〜０．２５である。
【００４９】
先に説明した置換度分布理論式は、すべてのアセチル化と脱アセチル化が独立かつ均等に進行することを仮定した確率論的計算値である。すなわち、二項分布に従った計算値である。このような理想的な状況は現実的にはあり得ない。酢酸セルロースの加水分解反応が理想的なランダム反応に近づくような、および/または、反応後の後処理について組成について分画が生じるような特別な工夫をしない限り、セルロースエステルの置換度分布は確率論的に二項分布で定まるものよりも大幅に広くなる。
【００５０】
反応の特別な工夫の一つとしては、例えば、脱アセチル化とアセチル化が平衡する条件で系を維持することが考えられる。しかし、この場合には酸触媒によりセルロースの分解が進行するので好ましくない。他の反応の特別な工夫としては、脱アセチル化速度が低置換度物について遅くなる反応条件を採用することである。しかし、従来、そのような具体的な方法は知られていない。つまり、セルロースエステルの置換度分布を反応確率論通り二項分布にしたがうよう制御するような反応の特別な工夫は知られていない。さらに、酢化過程(セルロースのアセチル化工程）の不均一性や、熟成過程（酢酸セルロースの加水分解工程）で段階的に添加する水による部分的、一時的な沈殿の発生などの様々な事情は、置換度分布を二項分布よりも広くする方向に働き、これらを全て回避し、理想条件を実現することは、現実的には不可能である。これは、理想気体があくまで理想の産物であり、実在する気体の挙動はそれとは多かれ少なかれ異なることと似ている。
【００５１】
従来の低置換度酢酸セルロースの合成と後処理においては、このような置換度分布の問題について殆ど関心が払われておらず、置換度分布の測定や検証、考察が行われていなかった。例えば、文献（繊維学会誌、42、p25 (1986)）によれば、低置換度酢酸セルロースの溶解性は、グルコース残基２、３、６位へのアセチル基の分配で決まると論じられており、組成分布は全く考慮されていない。
【００５２】
本発明者らの検討によれば、後述するように、酢酸セルロースの置換度分布は、驚くべきことに酢酸セルロースの加水分解工程の後の後処理条件の工夫で制御することができる。文献（CiBment, L., and Rivibre, C., Bull. SOC. chim., (5) 1, 1075 (1934)、Sookne, A. M., Rutherford, H. A., Mark, H., and Harris, M. J. Research Natl. Bur. Standards, 29, 123 (1942)、A. J. Rosenthal, B. B. White Ind. Eng. Chem., 1952, 44 (11), pp 2693-2696.）によれば、総置換度２．３の酢酸セルロースの沈澱分別では、分子量に依存した分画と置換度（化学組成）に伴う微々たる分画が起こるとされており、本発明者らが見出したような置換度（化学組成）で顕著な分画ができるとの報告はない。さらに、低置換度酢酸セルロースについて、溶解分別や沈澱分別で置換度分布（化学組成）を制御できることは検証されていなかった。
【００５３】
本発明者らが見出した置換度分布を狭くするもう１つの工夫は、酢酸セルロースの９０℃以上の（又は９０℃を超える）高温での加水分解反応（熟成反応）である。従来、高温反応で得られた生成物の重合度について詳細な分析や考察がなされて来なかったにもかかわらず、９０℃以上の高温反応ではセルロースの分解が優先するとされてきた。この考えは、粘度に関する考察のみに基づいた思い込み（ステレオタイプ）と言える。本発明者らは、酢酸セルロースを加水分解して低置換度酢酸セルロースを得るに際し、９０℃以上の（又は９０℃を超える）高温下、好ましくは硫酸等の強酸の存在下、多量の酢酸中で反応させると、重合度の低下は見られない一方で、ＣＤＩの減少に伴い粘度が低下することを見出した。すなわち、高温反応に伴う粘度低下は、重合度の低下に起因するものではなく、置換度分布が狭くなることによる構造粘性の減少に基づくものであることを解明した。上記の条件で酢酸セルロースの加水分解を行うと、正反応だけでなく逆反応も起こるため、生成物（低置換度酢酸セルロース）のＣＤＩが極めて小さい値となり、水に対する溶解性も著しく向上する。これに対し、逆反応が起こりにくい条件で酢酸セルロースの加水分解を行うと、置換度分布は様々な要因で広くなり、水に溶けにくいアセチル総置換度０．４未満の酢酸セルロース及びアセチル総置換度１．１を超える酢酸セルロースの含有量が増大し、全体として水に対する溶解性が低下する。
【００５４】
（２，３，６位の置換度の標準偏差）
前記酢酸セルロースのグルコース環の２，３，６位の各アセチル総置換度は、手塚（Ｔｅｚｕｋａ，Ｃａｒｂｏｎｙｄｒ．Ｒｅｓ．２７３，８３（１９９５））の方法に従いＮＭＲ法で測定できる。すなわち、酢酸セルロース試料の遊離水酸基をピリジン中で無水プロピオン酸によりプロピオニル化する。得られた試料を重クロロホルムに溶解し、１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを測定する。アセチル基の炭素シグナルは１６９ｐｐｍから１７１ｐｐｍの領域に高磁場から２位、３位、６位の順序で、そして、プロピオニル基のカルボニル炭素のシグナルは、１７２ｐｐｍから１７４ｐｐｍの領域に同じ順序で現れる。それぞれ対応する位置でのアセチル基とプロピオニル基の存在比から、元のセルロースジアセテートにおけるグルコース環の２，３，６位の各アセチル置換度を求めることができる。なお、このように求めた２，３，６位の各アセチル置換度の和はアセチル総置換度であり、この方法でアセチル総置換度を求めることもできる。なお、アセチル総置換度は、１３Ｃ−ＮＭＲのほか、１Ｈ−ＮＭＲで分析することもできる。
【００５５】
２，３，６位の置換度の標準偏差σは、次の式で定義される。
【数４】
2019077652.tif 000005
【００５６】
酢酸セルロースのグルコース環の２，３及び６位のアセチル置換度の標準偏差が０．０８以下（０〜０．０８）であることが好ましい。該標準偏差が０．０８以下である酢酸セルロースは、グルコース環の２，３，６位が均等に置換されており、水に対する溶解性に優れる。
【００５７】
（分散度（多分散性、Ｍｗ／Ｍｎ））
分子量分布（重合度分布）の分散度（多分散性、Ｍｗ／Ｍｎ）は、酢酸セルロース（試料）の残存水酸基をすべてプロピオニル化して得られるセルロースアセテートプロピオネートを用いてＧＰＣ−光散乱法により求めた値である。
【００５８】
本開示の酢酸セルロースの分散度（多分散性、Ｍｗ／Ｍｎ）は、１．２〜２．５の範囲であることが好ましい。分散度Ｍｗ／Ｍｎが上記の範囲にある酢酸セルロースは、分子の大きさが揃っており、水に対する溶解性に優れる。酢酸セルロースは腸内細菌によって消化管内で酢酸とセルロースに分解し、セルロースはさらにオリゴ糖や単糖を経由して酢酸等の短鎖脂肪酸に分解されると考えられる。このような過程で生じる酢酸などの代謝産物や、このような過程で酢酸セルロースを資化する腸内細菌がＩｇＡ産生細胞の増加とＩｇＡの増加に繋がると考えられる。酢酸セルロースの酢酸とセルロースへの分解は菌体外酵素によって生じると考えられるので水に対する溶解性の高い酢酸セルロースの方が分解されやすく、ＩｇＡ産生細胞の増加とＩｇＡの増加を促進する効果が高い。さらには腸管免疫亢進効果が高まることにつながる。
【００５９】
酢酸セルロースの数平均分子量（Ｍｎ）、重量平均分子量（Ｍｗ）及び分散度（多分散性、Ｍｗ／Ｍｎ）は、ＨＰＬＣを用いた公知の方法で求めることができる。酢酸セルロースの分散度（多分散性、Ｍｗ／Ｍｎ）は、測定試料を有機溶剤に可溶とするため、前記組成分布半値幅の実測値を求める場合と同様の方法で、酢酸セルロース（試料）を完全誘導体化セルロースアセテートプロピオネート（ＣＡＰ）とした後、以下の条件でサイズ排除クロマトグラフィー分析を行うことにより決定される（ＧＰＣ−光散乱法）。
装置：Ｓｈｏｄｅｘ製  ＧＰＣ  「ＳＹＳＴＥＭ−２１Ｈ」
溶媒：アセトン
カラム：ＧＭＨｘｌ（東ソー）２本、ガードカラム（東ソー製ＴＳＫｇｅｌ  ｇｕａｒｄｃｏｌｕｍｎ  ＨＸＬ−Ｈ）
流速：０．８ｍｌ／ｍｉｎ
温度：２９℃
試料濃度：０．２５％（ｗｔ／ｖｏｌ）
注入量：１００μｌ
検出：ＭＡＬＬＳ（多角度光散乱検出器）（Ｗｙａｔｔ製、「ＤＡＷＮ−ＥＯＳ」）
ＭＡＬＬＳ補正用標準物質：ＰＭＭＡ（分子量２７６００）
【００６０】
（重量平均重合度（ＤＰｗ））
重量平均重合度（ＤＰｗ）は、酢酸セルロース（試料）の残存水酸基をすべてプロピオニル化して得られるセルロースアセテートプロピオネートを用いてＧＰＣ−光散乱法により求めた値である。
【００６１】
本開示の酢酸セルロースの重量平均重合度（ＤＰｗ）は、５０〜８００の範囲であることが好ましい。重量平均重合度（ＤＰｗ）が高すぎると、水に対する溶解性が悪くなりやすい。前記重量平均重合度（ＤＰｗ）は、好ましくは５５〜７００、さらに好ましくは６０〜６００である。酢酸セルロースは腸内細菌によって消化管内で酢酸とセルロースに分解し、セルロースはさらにオリゴ糖や単糖を経由して酢酸等の短鎖脂肪酸に分解されると考えられる。このような過程で生じる酢酸などの代謝産物や、このような過程で酢酸セルロースを資化する腸内細菌がＩｇＡ産生細胞の増加とＩｇＡの増加に繋がると考えられる。酢酸セルロースの酢酸とセルロースへの分解は菌体外酵素によって生じると考えられるので水に対する溶解性の高い酢酸セルロースの方が分解されやすく、ＩｇＡ産生細胞の増加とＩｇＡの増加を促進する効果が高い。さらには腸管免疫亢進効果が高まることにつながる。
【００６２】
上記重量平均重合度（ＤＰｗ）は、前記分散度（多分散性、Ｍｗ／Ｍｎ）と同じく、前記組成分布半値幅の実測値を求める場合と同様の方法で、酢酸セルロース（試料）を完全誘導体化セルロースアセテートプロピオネート（ＣＡＰ）とした後、サイズ排除クロマトグラフィー分析を行うことにより求められる（ＧＰＣ−光散乱法）。
【００６３】
上述のように、酢酸セルロースの分子量（重合度）、分散度（多分散性、Ｍｗ／Ｍｎ）はＧＰＣ−光散乱法（ＧＰＣ−ＭＡＬＬＳ、ＧＰＣ−ＬＡＬＬＳなど）により測定される。なお、光散乱の検出は、一般に水系溶媒では困難である。これは水系溶媒は一般的に異物が多く、一旦精製しても二次汚染されやすいことによる。また、水系溶媒では、微量に存在するイオン性解離基の影響のため分子鎖の広がりが安定しない場合があり、それを抑えるために水溶性無機塩（例えば塩化ナトリウム）を添加したりすると、溶解状態が不安定になり、水溶液中で会合体を形成したりすることがある。この問題を回避するための有効な方法の一つは、酢酸セルロースを誘導体化し、異物が少なく、二次汚染されにくい有機溶媒に溶解するようにし、有機溶媒でＧＰＣ−光散乱測定を行うことである。この目的の酢酸セルロースの誘導体化としてはプロピオニル化が有効であり、具体的な反応条件及び後処理は前記組成分布半値幅の実測値の説明箇所で記載した通りである。
【００６４】
（酢酸セルロースの製造）
前記酢酸セルロース（酢酸セルロース）は、例えば、（Ａ）中乃至高置換度酢酸セルロースの加水分解工程（熟成工程）、（Ｂ）沈殿工程、及び、必要に応じて行う（Ｃ）洗浄、中和工程により製造できる。なお、中乃至高置換度酢酸セルロースのアセチル総置換度は、例えば、１．５以上３以下、好ましくは２以上３以下である。
【００６５】
［（Ａ）加水分解工程（熟成工程）］
加水分解反応は、有機溶媒中、触媒（熟成触媒）の存在下、原料酢酸セルロースと水を反応させることにより行うことができる。有機溶媒としては、例えば、酢酸、アセトン、アルコール（メタノール等）、これらの混合溶媒などが挙げられる。これらの中でも、酢酸を少なくとも含む溶媒が好ましい。触媒としては、一般に脱アセチル化触媒として用いられる触媒を使用できる。触媒としては、特に硫酸が好ましい。
【００６６】
有機溶媒（例えば、酢酸）の使用量は、原料酢酸セルロース１重量部に対して、例えば、０．５〜５０重量部、好ましくは１〜２０重量部、さらに好ましくは３〜１０重量部である。
【００６７】
触媒（例えば、硫酸）の使用量は、原料酢酸セルロース１重量部に対して、例えば、０．００５〜１重量部、好ましくは０．０１〜０．５重量部、さらに好ましくは０．０２〜０．３重量部である。触媒の量が少なすぎると、加水分解の時間が長くなりすぎ、酢酸セルロースの分子量の低下を引き起こすことがある。一方、触媒の量が多すぎると、加水分解温度に対する解重合速度の変化の度合いが大きくなり、加水分解温度がある程度低くても解重合速度が大きくなり、分子量がある程度大きい酢酸セルロースが得られにくくなる。
【００６８】
加水分解工程における水の量は、原料酢酸セルロース１重量部に対して、例えば、０．５〜２０重量部、好ましくは１〜１０重量部、さらに好ましくは２〜７重量部である。また、該水の量は、有機溶媒（例えば、酢酸）１重量部に対して、例えば、０．１〜５重量部、好ましくは０．３〜２重量部、さらに好ましくは０．５〜１．５重量部である。水は、反応開始時において全ての量を系内に存在させてもよいが、酢酸セルロースの沈殿を防止するため、使用する水の一部を反応開始時に系内に存在させ、残りの水を１〜数回に分けて系内に添加してもよい。
【００６９】
加水分解工程における反応温度は、例えば、４０〜１３０℃、好ましくは５０〜１２０℃、さらに好ましくは６０〜１１０℃である。特に、反応温度を９０℃以上（或いは９０℃を超える温度）とする場合には、正反応（加水分解反応）に対する逆反応（アセチル化反応）の速度が増加する方向に反応の平衡が傾く傾向があり、その結果、置換度分布が狭くなり、後処理条件を特に工夫しなくとも、組成分布指数ＣＤＩの極めて小さい酢酸セルロースを得ることができる。この場合、触媒として硫酸等の強酸を用いるのが好ましく、また、反応溶媒として酢酸を過剰に用いるのが好ましい。また、反応温度を９０℃以下とする場合であっても、後述するように、沈殿工程において、沈殿溶媒として２種以上の溶媒を含む混合溶媒を用いて沈殿させたり、沈殿分別及び／又は溶解分別を行うことにより、組成分布指数ＣＤＩが非常に小さい酢酸セルロースを得ることができる。
【００７０】
［（Ｂ）沈殿工程］
この工程では、加水分解反応終了後、反応系の温度を室温まで冷却し、沈殿溶媒を加えて酢酸セルロースを沈殿させる。沈殿溶媒としては、水と混和する有機溶剤若しくは水に対する溶解度の大きい有機溶剤を使用できる。例えば、アセトン、メチルエチルケトン等のケトン；メタノール、エタノール、イソプロピルアルコール等のアルコール；酢酸エチル等のエステル；アセトニトリル等の含窒素化合物；テトラヒドロフラン等のエーテル；これらの混合溶媒などが挙げられる。
【００７１】
沈殿溶媒として２種以上の溶媒を含む混合溶媒を用いると、後述する沈殿分別と同様の効果が得られ、組成分布（分子間置換度分布）が狭く、組成分布指数（ＣＤＩ）が小さい酢酸セルロースを得ることができる。好ましい混合溶媒として、例えば、アセトンとメタノールの混合溶媒、イソプロピルアルコールとメタノールの混合溶媒などが挙げられる。
【００７２】
また、沈殿して得られた酢酸セルロースに対して、さらに沈殿分別（分別沈殿）及び／又は溶解分別（分別溶解）を行うことにより、組成分布（分子間置換度分布）が狭く、組成分布指数ＣＤＩが非常に小さい酢酸セルロースを得ることができる。
【００７３】
沈殿分別は、例えば、沈殿して得られた酢酸セルロース（固形物）を水に溶解し、適当な濃度（例えば、２〜１０重量％、好ましくは３〜８重量％）の水溶液とし、この水溶液に貧溶媒を加え（又は、貧溶媒に前記水溶液を加え）、適宜な温度（例えば、３０℃以下、好ましくは２０℃以下）に保持して、酢酸セルロースを沈殿させ、沈殿物を回収することにより行うことができる。貧溶媒としては、例えば、メタノール等のアルコール、アセトン等のケトンなどが挙げられる。貧溶媒の使用量は、前記水溶液１重量部に対して、例えば１〜１０重量部、好ましくは２〜７重量部である。
【００７４】
溶解分別は、例えば、前記沈殿して得られた酢酸セルロース（固形物）或いは前記沈殿分別で得られた酢酸セルロース（固形物）に、水と有機溶媒（例えば、アセトン等のケトン、エタノール等のアルコールなど）の混合溶媒を加え、適宜な温度（例えば、２０〜８０℃、好ましくは２５〜６０℃）で撹拌後、遠心分離により濃厚相と希薄相とに分離し、希薄相に沈殿溶剤（例えば、アセトン等のケトン、メタノール等のアルコールなど）を加え、沈殿物（固形物）を回収することにより行うことができる。前記水と有機溶媒の混合溶媒における有機溶媒の濃度は、例えば、５〜５０重量％、好ましくは１０〜４０重量％である。
【００７５】
［（Ｃ）洗浄、中和工程］
沈殿工程（Ｂ）で得られた沈殿物（固形物）は、メタノール等のアルコール、アセトン等のケトンなどの有機溶媒（貧溶媒）で洗浄するのが好ましい。また、塩基性物質を含む有機溶媒（例えば、メタノール等のアルコール、アセトン等のケトンなど）で洗浄、中和することも好ましい。なお、中和工程は加水分解工程の直後に設けても良く、その場合には塩基性物質またはその水溶液を加水分解反応浴に添加するのが好ましい。
【００７６】
前記塩基性物質としては、例えば、アルカリ金属化合物（例えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等のアルカリ金属水酸化物；炭酸ナトリウム、炭酸カリウム等のアルカリ金属炭酸塩；炭酸水素ナトリウム等のアルカリ金属炭酸水素塩；酢酸ナトリウム、酢酸カリウム等のアルカリ金属カルボン酸塩；ナトリウムメトキシド、ナトリウムエトキシド等のナトリウムアルコキシドなど）、アルカリ土類金属化合物（例えば、水酸化マグネシウム、水酸化カルシウム等のアルカリ土類金属水酸化物、炭酸マグネシウム、炭酸カルシウム等のアルカリ土類金属炭酸塩；酢酸マグネシウム、酢酸カルシウム等のアルカリ土類金属カルボン酸塩；マグネシウムエトキシド等のアルカリ土類金属アルコキシドなど）などを使用できる。これらの中でも、特に、酢酸カリウム等のアルカリ金属化合物が好ましい。
【００７７】
洗浄、中和により、加水分解工程で用いた触媒（硫酸等）などの不純物を効率よく除去することができる。
【００７８】
このようにして得られた酢酸セルロースは、必要に応じて、粉砕、篩別又は造粒して、特定粒度の範囲に調整することができる。
【００７９】
［食品、医薬］
本開示の腸管免疫亢進剤は、食品または医薬に含有されていてもよく、アセチル総置換度が０．４以上１．１以下である酢酸セルロースのみを食品または医薬としてもよいが、以下のように各種食品または医薬の構成要素として使うことが出来る。
【００８０】
その食品または医薬の摂取または投与方法としては、特に経口による摂取または投与が挙げられる。形態は種々のものを選択できる。例えば、散剤、顆粒剤、錠剤、糖衣錠剤、カプセル剤、シロップ剤、丸剤、懸濁剤、液剤及び乳剤等の通常の医薬品の形態、並びに飲料；ガム、チョコレート、飴、羊羹、及びゼリー等の糖菓製品；麺類；パン、ケーキ、ビスケット等の焼いた食品；缶詰；レトルト食品；畜肉食品；水産練食品；マーガリン、ドレッシング、及びマヨネーズ等の食用油組成物；栄養補助食品；バター、アイスクリーム、ヨーグルト等の牛乳製品；等の通常の食品の形態を採用することができる。
【００８１】
本開示の食品または医薬は、ヒトに限らず、家畜（ウシ、ブタ、ウマ、ヒツジなど）、家禽（ニワトリ、アヒルなど）、ペット（イヌ、ネコ、サル、マウス、ラット、モルモットなど）などの動物にも適用できる。これらの中でも、ヒトにおいて効果を得るための用量は、酢酸セルロースの摂取量として１日あたり１ｇ〜１０ｇが好ましく、比較的多量の摂取が可能となることから、糖衣錠剤；麺類；ビスケット等の焼いた食品等が好ましい。また、本開示の腸管免疫亢進剤は、医薬品の形態または食品の形態に増粘剤として組み込むこともできる。
【００８２】
本開示の食品における、アセチル総置換度が０．４以上１．１以下である酢酸セルロースの含有量は特に限定されないが、食品のうち０．１重量％以上であることが好ましい。当該食品の一日の摂取で、有効な量の酢酸セルロースを摂取することができるためである。食品の味や食感を損なうことなく、腸管におけるＩｇＡを十分に増加すると共に、増加したＩｇＡの量を長期間（例えば、２週間〜４週間、または４週間以上）維持する観点から、０．１重量％以上５重量％未満が好ましく、１．５重量％以上３重量％未満がより好ましい。
【００８３】
本開示の腸管免疫亢進剤が食品または医薬に含有されている場合の予防及び／又は治療（有害作用の軽減又は予防）に有用な対象疾患の具体的な例としては、プロテオバクテリア門に属する病原菌による感染症であり、サルモネラ感染症、コレラ、腸炎ビブリオ等が挙げられる。腸管のうち、特に大腸の粘膜固有層（ｌａｍｉｎａ  ｐｒｏｐｒｉａ）におけるＩｇＡ産生形質細胞が増加することにより、ＩｇＡを増加し、粘膜免疫機能を増強させ、感染症やアレルギー疾患を予防するなどの効果が期待できる。
【００８４】
本開示の腸管免疫亢進剤の摂取または投与量は、所望の腸管免疫亢進の効果をもたらすのに十分な量であればよい。具体的には、個体の年齢、体重、性別、健康状態、並びに胃、小腸、及び大腸等の状態等の個体に関する条件、摂取または投与方法、及び製剤形態等を考慮して経験的に決定され得る。１回あたりの摂取または投与量は、例えば、５ｍｇ／ｋｇ体重〜６０ｍｇ／ｋｇ体重であってよく、１０ｍｇ／ｋｇ体重〜４０ｍｇ／ｋｇ体重であってよい。また、個体が摂取、または個体に投与される回数は、１回でもよいし、１回を超えてもよい。１回を超える場合は、定期的に、不定期に、または必要に応じて投与され得る。適切な回数は、摂取または投与量と同様に、個体に関する条件、摂取または投与方法、及び製剤形態等を考慮して経験的に決定され得る。
【実施例】
【００８５】
以下、実施例により本発明を具体的に説明するが、本発明は、これらの実施例によりその技術的範囲が限定されるものではない。
【００８６】
［酢酸セルロースの調製］
酢酸セルロース（ダイセル社製、商品名「Ｌ−７０」、アセチル総置換度２．４３、６％粘度：１４５ｍＰａ・ｓ）１重量部に対して、４．４重量部の酢酸および１．９重量部の水を加え、混合物を３時間攪拌して酢酸セルロースを溶解した。この溶液に０．５８部の酢酸と０．１３重量部の硫酸の混合物を加え、得られた溶液を７０℃に保持し、加水分解を行った。加水分解の間に酢酸セルロースが沈殿するのを防止するために、系への水の添加を２回に分けて行った。すなわち、反応を開始して１時間後に０．６５重量部の水を５分間にわたって系に加えた。さらに２時間後、１．２９重量部の水を１０分間にわたって系に加え、さらに４時間反応させた。合計の加水分解時間は７時間である。なお、反応開始時から１回目の水の添加までを第１加水分解工程（第１熟成工程）、１回目の水の添加から２回目の水の添加までを第２加水分解工程（第２熟成工程）、２回目の水の添加から反応終了までを第３加水分解工程（第３熟成工程）という。
【００８７】
加水分解を実施した後、硫酸に対して１．１当量の酢酸マグネシウムを含む２４％酢酸マグネシウム水溶液を反応混合物に加えて反応を停止した。この反応混合物に対して３．６倍重量のアセトン中に反応混合物を攪拌下で６０分を要して滴下し、沈殿を形成させた。ろ過によって固形分１５重量％のウェットケーキとして沈殿を回収した。得られた沈殿物の固形分１重量部に対し、１６重量部のアセトン／水の混合溶剤（アセトン濃度２０重量％）を加え、４０℃で８時間撹拌後、ろ過によって固形分１５重量％のウェットケーキとして固形物を回収した。得られたウェットケーキの固形分１重量部に対し、１６重量部のメタノールを加え、２５℃で１時間撹拌後、ろ過によって固形分１５重量％のウェットケーキとして固形物を回収する操作を５回繰り返し、乾燥して、低置換度酢酸セルロースを得た。
【００８８】
得られた酢酸セルロースのアセチル総置換度、重量平均重合度（ＤＰｗ）、分散度（多分散性、Ｍｗ／Ｍｎ）、組成分布半値幅の実測値、及び組成分布指数（ＣＤＩ）を前記の方法で測定した。その結果、酢酸セルロースのアセチル総置換度は０．７８、重量平均重合度（ＤＰｗ）は１２４、分散度（多分散性、Ｍｗ／Ｍｎ）は２．０、組成分布半値幅の実測値は０．３０５、組成分布指数（ＣＤＩ）は１．９０であった。
【００８９】
［腸管免疫亢進剤の評価］
＜飼料の調製＞
精製飼料ＡＩＮ−９３Ｇ（REEVEら、Journal of Nutrition, 123, 1939-1951(1993）)、およびＡＩＮ−９３Ｇには５重量％のセルロースが含まれるところ、２重量％のセルロースを上記得られた酢酸セルロースに置き換えたもの（以下、ＡＩＮ−９３Ｇ−ａｃｅｔａｔｅと称することがある）を用いた。
【００９０】
＜飼育実験＞
（実験動物）
・野生型マウス
７週齢のＣ５７ＢＬ／６Ｊ系オス性マウスを用いた。
・単菌定着マウス
雄のＣ５７ＢＬ／６Ｎ系無菌マウスをアイソレーター中、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）Ｋ−１２株（Ｅ．ｃｏｌｉ）を投与して飼育することでＥ．ｃｏｌｉ単菌定着マウスを作成した。また、同様の方法で、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｔｈｅｔａｉｏｔａｏｍｉｃｒｏｎ単菌定着マウスを作成した。
・ＡＩＤ  ＫＯマウス
ＡＩＤ  ＫＯマウス（言い換えれば、Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｃｙｔｉｄｉｎｅ  ｄｅａｍｉｎａｓｅを欠損（ノックアウト）させたマウス）は、Ｍｕｒａｍａｔｓｕらの方法（Cell,102,553-563 (2000)）で作成した。なお、ＡＩＤ  ＫＯマウスは、ＩｇＡを産生しない。
【００９１】
（飼育方法）
後述の実験で用いたマウスは、次の方法で飼育した。８個体のマウスにＡＩＮ−９３Ｇを与えて１週間飼育した。飼料は自由摂取とした。その後、マウスを２群各４個体にグループ分けし、さらに４週間飼育した。この４週間飼育中には、１群にはＡＩＮ−９３Ｇを与え、これをＣｏｎｔｒｏｌ群とした。残り１群にはＡＩＮ−９３Ｇ−ａｃｅｔａｔｅを与え、これをａｃｅｔａｔｅ群とした。ただし、ＡＩＤ  ＫＯマウス及びＥ．ｃｏｌｉ単菌定着マウスは、その他のマウスと個体数が異なり、１０個体のマウスを、２群各５個体にグループ分けして飼育した。
【００９２】
＜糞便中のＩｇＡ定量＞
ＡＩＮ−９３ＧまたはＡＩＮ−９３Ｇ−ａｃｅｔａｔｅの投与開始から０日目、１週目、２週目、３週目及び４週目の糞便を採取し、糞便中のＩｇＡ濃度（μｇ／ｍＬ）を定量した。定量は、マウスＩｇＡ  ＥＬＩＳＡ定量セット（Ｍｏｕｓｅ  ＩｇＡ  ＥＬＩＳＡ  Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎ  Ｓｅｔ、米国Ｂｅｔｈｙｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  Ｉｎｃ．製）を用いて行った。結果は図１に示す。
【００９３】
ＡＩＮ−９３ＧまたはＡＩＮ−９３Ｇ−ａｃｅｔａｔｅの投与開始から１週目以降、ａｃｅｔａｔｅ群は、Ｃｏｎｔｒｏｌ群に対し高い値を示し、２週目では、プラトーに達して４週目まで有意にＩｇＡ濃度の上昇が認められた。
【００９４】
＜ＩｇＡ結合細菌（ＩｇＡ−ｃｏａｔｅｄ  ｂａｃｔｅｒｉａ）の定量＞
ＡＩＮ−９３ＧまたはＡＩＮ−９３Ｇ−ａｃｅｔａｔｅの投与開始から４週間飼育した野生型マウスの糞便の細菌叢を、ＰＥ標識された抗ＩｇＡ抗体（Ｒａｔ  ａｎｔｉ−ｍｏｕｓｅ  ＩｇＡ，  ｃｌｏｎｅ  １１−４４−２，  ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｉｏｔｅｃｈ社）ならびに４，６−ジアミノ−２−フェニルインドール（ＤＡＰＩ）で染色し、フローサイトメトリーにより分析を行い、フローサイトメトリー一次データを得た。そして、ＤＡＰＩで染色されるＤＡＰＩ陽性細胞をゲーティングし（Ｇａｔｅｄ  ｏｎ  ＤＡＰＩ  ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ｃｅｌｌｓ）、そのうちＩｇＡ陽性の部分をＩｇＡ結合細菌として定量した。フローサイトメトリーはＦＡＣＳ  ＡｒｉａＩＩを使用して行い、データはＦｌｏｗＪｏ  ソフトウェア（ＴｒｅｅＳｔａｒ  Ｉｎｃ．）により解析した。結果は図２に示す。図２（ａ）は、フローサイトメトリー一次データ、図２（ｂ）は、ＤＡＰＩ陽性細胞におけるＩｇＡ結合細菌の数の割合（％）（％ＤＡＰＩ  ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ｃｅｌｌｓ）を示す。
【００９５】
ＤＡＰＩ陽性細胞におけるＩｇＡ結合細菌の数の割合（％）（％ＤＡＰＩ  ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ｃｅｌｌｓ）において、Ａｃｅｔａｔｅ群の方が、Ｃｏｎｔｒｏｌ群に対し高い値を示した。言い換えれば、Ａｃｅｔａｔｅ群においてより多くの細菌に対して親和性を持つＩｇＡが増加した結果、ＩｇＡ結合細菌が増加した。本開示の酢酸セルロースの摂食により、腸管が特定の細菌から保護されるなどの免疫亢進作用が期待される。
【００９６】
＜糞便中ＩｇＡ結合細菌の細菌叢分析＞
ＡＩＮ−９３ＧまたはＡＩＮ−９３Ｇ−ａｃｅｔａｔｅの投与開始から４週間飼育した野生型マウスの糞便を細菌叢リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で懸濁・遠心して上清を得た。この上清に含まれる細菌をＩｇＡ‐ＰＥ抗体（Ｒａｔ  ａｎｔｉ−ｍｏｕｓｅ  ＩｇＡ，  ｃｌｏｎｅ  １１−４４−２，  ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｉｏｔｅｃｈ社）並びにＤＡＰＩで染色し、磁気細胞分離（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ）を行いＩｇＡ陰性の細菌を採取した後、ＦＡＣＳ  Ａｒｉａ  ＩＩを使用してＩｇＡ陽性の細菌を採取した。これらの試料を用いて１６Ｓ  ｒＲＮＡ遺伝子解析により細菌を同定した。４週間飼育した野生型マウスＡｃｅｔａｔｅ群の糞便の細菌叢分析結果を表１に、４週間飼育した野生型マウスＣｏｎｔｒｏｌ群の糞便の細菌叢分析結果を表２に示す。
【００９７】
【表１】
2019077652.tif 000006
【００９８】
表１に示すように、４週間飼育した野生型マウスＡｃｅｔａｔｅ群の糞便では、アクチノバクテリア門（Ａｃｔｉｎｏｂａｃｔｅｒｉａ）、バクテロイデス門（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｔｅｓ）、フィルミクテス門（Ｆｉｒｍｉｃｕｔｅｓ）、プロテオバクテリア門（Ｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ）、テネリクテス門（Ｔｅｎｅｒｉｃｕｔｅｓ）、及びウェルコミクロビウム門（Ｖｅｒｒｕｃｏｍｉｃｒｏｂｉａ）の中でも、プロテオバクテリア門の細菌が他の分類の細菌に比較し、有意にＩｇＡ陽性を示し、ＩｇＡとの親和性が高い。なお、プロテオバクテリア門には、大腸菌、サルモネラ、ビブリオ、ヘリコバクターなど病原となり得る細菌が含まれる。
【００９９】
【表２】
2019077652.tif 000007
【０１００】
表２に示すように、４週間飼育した野生型マウスＣｏｎｔｒｏｌ群の糞便では、アクチノバクテリア門（Ａｃｔｉｎｏｂａｃｔｅｒｉａ）、バクテロイデス門（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｔｅｓ）、フィルミクテス門（Ｆｉｒｍｉｃｕｔｅｓ）、プロテオバクテリア門（Ｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ）、テネリクテス門（Ｔｅｎｅｒｉｃｕｔｅｓ）、及びウェルコミクロビウム門（Ｖｅｒｒｕｃｏｍｉｃｒｏｂｉａ）の中で、特にプロテオバクテリア門の細菌が他の分類の細菌に比較して、ＩｇＡ陽性を示すものではなく、ＩｇＡとの親和性が高いことはない。
【０１０１】
＜腸管の各部位のＩｇＡ濃度の定量＞
腸管内のどの部位でＩｇＡ濃度が増加しているか調べるため部位に分けてＩｇＡ濃度を定量した。その方法は次のとおりである。
【０１０２】
ＡＩＮ−９３ＧまたはＡＩＮ−９３Ｇ−ａｃｅｔａｔｅの投与開始から４週間飼育した野生型マウスについて、十二指腸（Ｄｕｏｄｅｎｕｍ）、空腸（Ｊｅｊｕｎｕｍ）、回腸（Ｉｌｅｕｍ）、盲腸（Ｃｅｃｕｍ）、近位結腸（Ｐｒｏｘｉｍａｌ  ｃｏｌｏｎ）、および遠位結腸（Ｄｉｓｔａｌ  ｃｏｌｏｎ）の各組織を採取しコンプリートＥＤＴＡフリープロテアーゼインヒビターカクテル錠（Ｒｏｃｈｅ社）を加えたＰＢＳに保存後、ステンレスビーズで破砕した。ＢＣＡタンパク質アッセイ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）を利用してタンパク質濃度を測定し、各組織の濃度を統一した後、ＩｇＡ濃度を定量した。定量は、マウスＩｇＡ  ＥＬＩＳＡ定量セット（Ｍｏｕｓｅ  ＩｇＡ  ＥＬＩＳＡ  Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎ  Ｓｅｔ、米国Ｂｅｔｈｙｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  Ｉｎｃ．製）を用いて行った。結果は、図３（ａ）および（ｂ）に示す。
【０１０３】
十二指腸（Ｄｕｏｄｅｎｕｍ）、盲腸（Ｃｅｃｕｍ）、近位結腸（Ｐｒｏｘｉｍａｌ  ｃｏｌｏｎ）、および遠位結腸（Ｄｉｓｔａｌ  ｃｏｌｏｎ）において、Ａｃｅｔａｔｅ群の組織ＩｇＡ濃度は、Ｃｏｎｔｒｏｌ群に対し高い値を示した。特に、盲腸から結腸にかけて大きな増加が認められた。
【０１０４】
＜大腸粘膜固有層のＩｇＡ産生形質細胞の定量＞
ＡＩＮ−９３ＧまたはＡＩＮ−９３Ｇ−ａｃｅｔａｔｅの投与開始から４週間飼育した野生型マウスの大腸粘膜固有層からリンパ球を単離するために、大腸を採取し、長手方向に開裂して中の糞便等を洗浄し除去した。そして、洗浄した大腸を３７℃で３０分間、２０ｍＭ  ＥＤＴＡ含有ＨＢＳＳ中にて振盪した。上皮細胞及び脂肪組織を除去した後、腸組織を細かく小切片にし、ＲＰＭＩ  １６４０培地（２％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）、４００単位／ｍｌ（ロシュ・ダイアグノスティックス株式会社製）  コラゲナーゼＤ、０．２５単位／ｍｌディスパーゼ（コーニング社製）、及び０．１ｍｇ／ｍｌ  ＤＮａｓｅＩ（和光純薬工業株式会社製）含有）を添加し、３７℃の水浴中で３０時間振盪した。消化した組織をＲＰＭＩ  １６４０培地（２％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）含有）で洗浄し、１０ｍｌ  ３５％パーコール（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に再懸濁し、１５ｍｌファルコンチューブ中の２．５ｍｌ  ７０％パーコールの上に重層した。そして、室温下にて２０００ｒｐｍで２０分間遠心し、パーコール密度勾配による細胞分離を行った。境界面の細胞を回収して粘膜固有層リンパ球として使用した。
【０１０５】
単離した粘膜固有層リンパ球を染色バッファー（ＰＢＳ、２％  ＦＢＳ）に懸濁し、IｇＡ−ＰＥ抗体（Ｃｌｏｎｅ：  １１−４４−１、ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｉｏｔｅｃｈ社）およびＢ２２０−ＡＰＣ抗体（Ｃｌｏｎｅ：  ＲＡ３−６Ｂ２、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ社）で染色した。
【０１０６】
このように処理した粘膜固有層リンパ球はフローサイトメトリーで分析した。ゲーティングし、IｇＡ−ＰＥ抗体で染色されるもののＢ２２０−ＡＰＣ抗体で染色されないものをIｇＡ産生形質細胞（IｇＡ＋  Ｐｌａｓｍａ  ｃｅｌｌｓ）として定量した。また、IｇＡ−ＰＥ抗体びＢ２２０−ＡＰＣ抗体の両方で染色されるものをＢ細胞（IｇＡ＋  Ｂ  ｃｅｌｌｓ）として定量した。
【０１０７】
ここで、Ｂ細胞はリンパ球の一種であり、成熟・分化が進むと抗体産生に特化した形質細胞となる。１つのＢ細胞は、１種類の抗体しか産出できないため、その抗体タイプに見合った抗原または細菌抗原が出現した場合にのみ、その抗体を算出するＢ細胞が活性化して抗体産生を開始することになる。
【０１０８】
フローサイトメトリーはＦＡＣＳｃａｎｔ  ＩＩを使用して行い、データはＦｌｏｗＪｏ  ソフトウェア（ＴｒｅｅＳｔａｒ  Ｉｎｃ．）により解析した。結果は図４に示す。図４（ａ）は、フローサイトメトリー一次データ、図４（ｂ）は、各細菌の数（ａｂｓｏｌｕｔｅ  ｃｅｌｌ  ｎｕｍｂｅｒ）（×１０４）を示す。
【０１０９】
Ａｃｅｔａｔｅ群の大腸粘膜固有層におけるＩｇＡ産生形質細胞の数が、Ｃｏｎｔｒｏｌ群に対し、有意に増加した。これにより、本開示の酢酸セルロースの摂取によりＩｇＡの増加が期待される。
【０１１０】
＜盲腸内容物および糞便のＩｇＡ結合細菌の定量＞
ＡＩＮ−９３ＧまたはＡＩＮ−９３Ｇ−ａｃｅｔａｔｅの投与開始から４週間飼育したＢａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｔｈｅｔａｉｔａｏｍｉｃｒｏｎ単菌定着マウスならびにＥ．ｃｏｌｉ単菌定着マウスの盲腸内容物ならびに糞便の細菌叢を、ＰＥ標識された抗ＩｇＡ抗体（Ｒａｔ  ａｎｔｉ−ｍｏｕｓｅ  ＩｇＡ，  ｃｌｏｎｅ  １１−４４−２，  ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｉｏｔｅｃｈ社）ならびに４，６−ジアミノ−２−フェニルインドール（ＤＡＰＩ）で染色し、フローサイトメトリーにより分析を行い、フローサイトメトリー一次データを得た。そして、ＤＡＰＩで染色されるＤＡＰＩ陽性細胞をゲーティングし（Ｇａｔｅｄ  ｏｎ  ＤＡＰＩ  ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ｃｅｌｌｓ）、そのうちＩｇＡ陽性の部分をＩｇＡ結合細菌として定量した。フローサイトメトリーはＦＡＣＳ  ＡｒｉａＩＩを使用して行い、データはＦｌｏｗＪｏ  ソフトウェア（ＴｒｅｅＳｔａｒ  Ｉｎｃ．）により解析した。
【０１１１】
結果は図５に示す。図５（ａ）は、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｔｈｅｔａｉｏｔａｏｍｉｃｒｏｎ単菌定着マウスの盲腸（左：Ｃｅｃａｌ）および糞便（右：Ｆｅｃａｌ）のＤＡＰＩ陽性細胞におけるＩｇＡ結合細菌の数の割合（％）（％ＤＡＰＩ  ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ｃｅｌｌｓ）、図５（ｂ）はプロテオバクテリア門（Ｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ）に属するＥ．ｃｏｌｉ単菌定着マウスの盲腸（左：Ｃｅｃａｌ）および糞便（右：Ｆｅｃａｌ）のＤＡＰＩ陽性細胞におけるＩｇＡ結合細菌の数の割合（％）（％ＤＡＰＩ  ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ｃｅｌｌｓ）である。
【０１１２】
図５（ａ）に示すように、Ａｃｅｔａｔｅ群は、Ｃｏｎｔｒｏｌ群に対し、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｔｈｅｔａｉｏｔａｏｍｉｃｒｏｎ単菌定着マウスの盲腸および糞便におけるＩｇＡ結合細菌の割合が減少しているが、図５（ｂ）に示すように、Ｅ．ｃｏｌｉ単菌定着マウスの盲腸および糞便におけるＩｇＡ結合細菌の割合が増加した。つまり、Ａｃｅｔａｔｅ群におけるＩｇＡは特にプロテオバクテリア門に属するＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ  Ｋ−１２株に対して親和性が高くなった。前述の通りプロテオバクテリア門には病原となりうる大腸菌、サルモネラ、ビブリオ、ヘリコバクターなどの細菌が含まれるところ、本開示の酢酸セルロースによって誘導されるＩｇＡにより、腸管がこれらの細菌から保護されること（腸管保護作用）が期待される。
【０１１３】
＜腸管管腔内容物および腸管粘液層内の細菌叢の評価＞
（細菌叢分析）
ＡＩＮ−９３ＧまたはＡＩＮ−９３Ｇ−ａｃｅｔａｔｅの投与開始から４週間飼育した野生型マウス、及びＡＩＮ−９３ＧまたはＡＩＮ−９３Ｇ−ａｃｅｔａｔｅの投与開始から４週間飼育したＡＩＤ  ＫＯマウスの大腸管腔内容物および大腸腸管粘液層内の細菌叢は、Ｇｏｎｇらの方法（ＦＥＭＳ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  Ｅｃｏｌ．  ２００７  Ｊａｎ；５９（１）：１４７−５７．）で採取し、さらに１６Ｓ  ｒＲＮＡ遺伝子解析により細菌を同定した。
【０１１４】
４週間飼育した野生型マウスＡｃｅｔａｔｅ群の大腸管腔内容物と大腸粘液層内の細菌叢分析結果を表３に、４週間飼育した野生型マウスＣｏｎｔｒｏｌ群の管腔内容物と粘液層内の細菌叢分析結果を表４に示す。さらに、４週間飼育したＡＩＤ  ＫＯマウスＡｃｅｔａｔｅ群の管腔内容物と大腸粘液層内の細菌叢分析結果を表５に、４週間飼育したＡＩＤ  ＫＯマウスＣｏｎｔｒｏｌ群の管腔内容物と大腸粘液層内の細菌叢分析結果を表６に示す。
【０１１５】
【表３】
2019077652.tif 000008
【０１１６】
【表４】
2019077652.tif 000009
【０１１７】
野生型マウスＡｃｅｔａｔｅ群は、表３に示すように、プロテオバクテリア門の細菌が管腔内容物では２．１％、粘液層内では０．７％と、管腔に比べ粘液層内に定着しにくい。これに対し、野生型マウスＣｏｎｔｒｏｌ群は、表４に示すように、プロテオバクテリア門の細菌が管腔内容物では０．０％、粘液層内でも０．０％と、管腔に比べ粘液層内に定着しにくいとは言えない。
【０１１８】
【表５】
2019077652.tif 000010
【０１１９】
【表６】
2019077652.tif 000011
【０１２０】
ＩｇＡを産生しないＡＩＤ  ＫＯマウスは、Ａｃｅｔａｔｅ群であっても、表５に示すように、プロテオバクテリア門の細菌が管腔内容物では１．８％、粘液層内では３２．３％と、管腔に比べ粘液層内に非常に定着しやすい。また、ＡＩＤ  ＫＯマウスＣｏｎｔｒｏｌ群でも、表６に示すように、プロテオバクテリア門の細菌が管腔内容物では１．４％、粘液層内では２２．２％と、管腔に比べ粘液層内に非常に定着しやすい。以上から、ＩｇＡの増加は、大腸粘液層内におけるＰｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａの減少を導くことで、腸管保護に寄与するものと考えられる。
【図１】
2019077652.tif 000013
【図２】
2019077652.tif 000014
【図３】
2019077652.tif 000015
【図４】
2019077652.tif 000016
【図５】
2019077652.tif 000017