(57)【要約】      （修正有）【課題】従来に比べて尿中の８ＯＨｄＧを精度よく検出することができるキットを提供する。【解決手段】８オキソ２’デオキシグアノシンと夾雑物を含む試料が導入される導入部と、前記試料のうち、前記８オキソ２’デオキシグアノシンと前記夾雑物を展開するための展開液と、前記試料が前記展開液によって展開されて得られる溶液に含まれる前記８オキソ２’デオキシグアノシンの量または濃度を検出するための検出部と、を有する薄層クロマトグラフィー用のキットであって、前記展開液による前記８オキソ２’デオキシグアノシンの展開速度が、前記展開液による前記夾雑物の展開速度よりも速いことを特徴とするキット。【選択図】図１
2019012035.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
８オキソ２’デオキシグアノシンと夾雑物を含む試料が導入される導入部と、
前記試料のうち、前記８オキソ２’デオキシグアノシンと前記夾雑物を展開するための展開液と、
前記試料が前記展開液によって展開されて得られる溶液に含まれる前記８オキソ２’デオキシグアノシンの量または濃度を検出するための検出部と、を有する薄層クロマトグラフィー用のキットであって、
前記展開液による前記８オキソ２’デオキシグアノシンの展開速度が、前記展開液による前記夾雑物の展開速度よりも速いことを特徴とするキット。
【請求項２】
前記展開液に対する前記８オキソ２’デオキシグアノシンの溶解度が、前記展開液に対する前記夾雑物の溶解度よりも高いことを特徴とする請求項１に記載のキット。
【請求項３】
前記夾雑物に尿酸及びクレアチニンの少なくとも何れか一方が含まれることを特徴とする請求項１または２に記載のキット。
【請求項４】
前記展開液が、アルコール及びエーテルの少なくともいずれか一方と、無機電解質と、を含むことを特徴とする請求項１乃至３のいずれか一項に記載のキット。
【請求項５】
前記展開液が、潮解性の無機電解質を有することを特徴とする請求項１乃至４のいずれか一項に記載のキット。
【請求項６】
前記展開液が、水酸化カリウム及び水酸化ナトリウムの少なくともいずれか一方を含むことを特徴とする請求項１乃至５のいずれか一項に記載のキット。
【請求項７】
前記展開液が、メタノール、エタノール、プロパノール及びイソプロパノールの少なくともいずれかを含むことを特徴とする請求項１乃至６のいずれか一項に記載のキット。
【請求項８】
検出対象物を含む試料が導入される導入部と、
前記試料のうち前記検出対象物を展開するための展開液と、
前記試料が前記展開液によって展開されて得られる溶液に含まれる前記検出対象物の量又は濃度を検出するための検出部と、を有する薄層クロマトグラフィー用のキットであって、
前記展開液は、アルコール及びエーテルの少なくともいずれか一方と、水酸化カリウム及び水酸化ナトリウムの少なくともいずれか一方とを含むことを特徴とするキット。
【請求項９】
前記アルコールがメタノール、エタノール、プロパノール及びイソプロパノールのうち少なくともいずれか一種を含み、前記エーテルが、ジメチルエーテル、エチルメチルエーテル、ジエチルエーテル、ジエチレングリコールモノエチルエーテル、ジエチレングリコールモノメチルエーテル、トリエチレングリコールモノブチルエーテルのうち少なくともいずれか一種を含むことを特徴とする請求項８に記載のキット。
【請求項１０】
前記検出対象物が８オキソ２’デオキシグアノシンであることを特徴とする請求項９に記載のキット。
【請求項１１】
前記展開液を保持する保持部を有することを特徴とする請求項１乃至１０のいずれか一項に記載のキット。
【請求項１２】
前記導入部と前記検出部との間に前記夾雑物を吸着させるための担体が設けられていることを特徴とする請求項１乃至７のいずれか一項に記載のキット。
【請求項１３】
前記導入部と前記検出部との間に担体が設けられていることを特徴とする請求項８乃至１０のいずれか一項に記載のキット。
【請求項１４】
前記担体は、シリカゲル及びセルロースの少なくともいずれか一方を含み構成されることを特徴とする請求項１２または１３に記載のキット。
【請求項１５】
前記担体は、オクタデシル基が結合したシリカを含み構成されることを特徴とする請求項１２または１３に記載のキット。
【請求項１６】
前記担体は、互いに疎水性が異なる複数のシリカゲルを含み構成されていることを特徴とする請求項１２または１３に記載のキット。
【請求項１７】
前記検出部には、紫外光を吸収する蛍光物質が設けられていることを特徴とする請求項１乃至１６のいずれか一項に記載のキット。
【請求項１８】
前記検出部には、前記８オキソ２’デオキシグアノシンと反応して蛍光あるいは燐光を発する物質、または発色物質が設けられていることを特徴とする請求項１乃至７のいずれか一項に記載のキット。
【請求項１９】
前記検出部には、前記検出対象物と反応して蛍光あるいは燐光を発する物質、または発色物質が設けられていることを特徴とする請求項８乃至１０のいずれか一項に記載のキット。
【請求項２０】
アルコール及びエーテルの少なくともいずれか一方と、無機電解質と、を含む薄層クロマトグラフィー用の展開液。
【請求項２１】
前記無機電解質が潮解性である事を特徴とする請求項２０に記載の薄層クロマトグラフィー用の展開液。
【請求項２２】
前記アルコールがメタノール、エタノール、プロパノール及びイソプロパノールの少なくともいずれかである事を特徴とする請求項２０または２１に記載の薄層クロマトグラフィー用の展開液。
【請求項２３】
前記無機電解質が水酸化カリウム及び水酸化ナトリウムの少なくともいずれかであることを特徴とする請求項２０乃至２２のいずれか一項に記載の薄層クロマトグラフィー用の展開液。
【請求項２４】
前記展開液に含まれる水のモル濃度が、前記無機電解質のモル濃度の３．２倍以下であることを特徴とする請求項２０乃至２３のいずれか一項に記載の薄層クロマトグラフィー用の展開液。
【請求項２５】
前記展開液に含まれる前記無機電解質の濃度が０．０９ｍｏｌ／ｌ以上であることを特徴とする請求項２０乃至２４のいずれか一項に記載の薄層クロマトグラフィー用の展開液。
【請求項２６】
８オキソ２’デオキシグアノシンを検出する薄層クロマトグラフィーであって、前記８オキソ２’デオキシグアノシンと夾雑物を含む試料を導入する工程と、前記試料に展開液を展開することによって、前記試料から８ＯＨｄＧを分離抽出する工程と、分離抽出された前記８オキソ２’デオキシグアノシンの量または濃度を検出する工程と、を有することを特徴とする薄層クロマトグラフィー。
【請求項２７】
前記夾雑物がクレアチニン及び尿酸の少なくともいずれか一方を含むことを特徴とする請求項２６に記載の薄層クロマトグラフィー。
【請求項２８】
前記試料を濃縮する工程をさらに有することを特徴とする請求項２６または２７に記載の薄層クロマトグラフィー。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は薄層クロマトグラフィー用のキット、薄層クロマトグラフィー用の展開液、及び薄層クロマトグラフィーに関する。
【背景技術】
【０００２】
８−Ｏｘｏ−２’−ｄｅｏｘｙｇｕａｎｏｓｉｎｅ（８オキソ２’デオキシグアノシン、以下８ＯＨｄＧと略すことがある）は活性酸素による生体への影響を反映する物質として知られており、広く用いられている酸化ストレスマーカーの一つである。体内で生成される８ＯＨｄＧの量を測定する事で、病態把握、病気予防などに繋がると考えられている。８ＯＨｄＧは化学的に安定な物質で２次代謝などを受けずに尿中に排出される事から、尿中の８ＯＨｄＧの量を測定する事で非侵襲的に酸化ストレスマーカーを計測することが可能である。
【０００３】
特許文献１では８ＯＨｄＧに特異的に反応する抗体を用いて酸化ストレス状態を判定するシステムが開示されている。具体的には、８ＯＨｄＧに対して特異的に反応する抗体に金コロイドを結合させた結合体が固定された検査キットに試料を添加し、８ＯＨｄＧと結合しなかった結合体の量を色で判定することで、８ＯＨｄＧの検出を行っている。しかし、特許文献１のシステムでは、試料を展開する溶液を使用していないため、結合体の量を判定する位置に結合体が到達しにくく、精度の良い判定ができない可能性がある。
【０００４】
特許文献２では前処理によって濃縮された８ＯＨｄＧを、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって定量する方法および装置が開示されている。特許文献１ではＨＰＬＣによる定量の前処理として、シリカゲルやエタノールを用いて８ＯＨｄＧを濃縮した溶液を用いた分離・濃縮を行うことが開示されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２０１０−１５６６３９号公報
【特許文献２】特開２００７−１２１２７１号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
ここで、特許文献２の手法では課題が生じることを本発明者らは見出した。特許文献２では、８ＯＨｄＧの分離・濃縮の際にエタノールを用いているが、試料が尿である場合、８ＯＨｄＧと尿酸の分離が十分にできず、８ＯＨｄＧを精度よく検出することが難しいことがわかった。
【０００７】
本発明は上記課題に鑑みなされたものであり、従来に比べて尿中の８ＯＨｄＧを精度よく検出することができるキットを提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明に係る薄層クロマトグラフィー用のキットは、８オキソ２’デオキシグアノシンと夾雑物を含む試料が導入される導入部と、前記試料のうち、前記８オキソ２’デオキシグアノシンと前記夾雑物を分離するための展開液と、前記試料が前記展開液によって展開されて得られる溶液に含まれる前記８オキソ２’デオキシグアノシンの量または濃度を検出するための検出部と、を有する薄層クロマトグラフィー用のキットであって、前記展開液による前記８オキソ２’デオキシグアノシンの展開速度が、前記展開液による前記夾雑物の展開速度よりも速いことを特徴とする。
【０００９】
別の本発明に係る薄層クロマトグラフィー用のキットは、検出対象物を含む試料が導入される導入部と、前記試料のうち前記検出対象物を分離するための展開液と、前記試料が前記展開液によって展開されて得られる溶液に含まれる前記検出対象物の量又は濃度を検出するための検出部と、を有する薄層クロマトグラフィー用のキットであって、前記展開液は、メタノール、エタノール、プロパノール及びイソプロパノールの少なくともいずれかと、水酸化カリウム及び水酸化ナトリウムの少なくともいずれか一方とを含むことを特徴とする。
【００１０】
本発明に係る薄層クロマトグラフィー用の展開液はアルコール及びエーテルの少なくともいずれか一方と、無機電解質と、を含む。
【００１１】
本発明に係る薄層クロマトグラフィーは、８オキソ２’デオキシグアノシンを検出する薄層クロマトグラフィーであって、前記８オキソ２’デオキシグアノシンと夾雑物を含む試料を導入する工程と、前記試料に展開液を展開することによって、前記試料から８ＯＨｄＧを分離抽出する工程と、分離抽出された前記８オキソ２’デオキシグアノシンの量または濃度を検出する工程と、を有する。
【発明の効果】
【００１２】
本発明に係る薄層クロマトグラフィー用のキットによれば、従来に比べて尿中の８ＯＨｄＧを精度よく検出することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】本発明の実施形態に薄層クロマトグラフィー用のキットを説明するための図。
【図２】本発明の実施形態に係る薄層クロマトグラフィー用のキットを用いて８ＯＨｄＧを検出する方法を説明するための図。
【図３】本発明に実施形態に係る薄層クロマトグラフィー用のキットを用いて８ＯＨｄＧを定量した結果を表すグラフ。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
以下、本発明の実施形態について説明するが本発明はこれらに限られない。
【００１５】
＜薄層クロマトグラフィー用のキット＞
本実施形態に薄層クロマトグラフィー用の検出キットの一例について図１を用いて説明する。本実施形態に係るキットは支持体１０４上に試料を導入するための導入部１０２と、試料中の検出対象物と、それ以外の物質の少なくとも一部とを分離するための分離部１０３と、検出対象物の量または濃度を検出するための検出部１０６を有する。本実施形態では、分離部１０３の一部に導入部１０２と検出部１０６が設けられている。
【００１６】
１０５の展開液導入部から後述する展開液Ｌを導入し、導入部１０２に導入された試料１０１は展開液Ｌによって検出部１０６に向けて移動を開始する。図１は、保持部１１０に展開液が保持された例を示すが、それに限定されず、外部から展開液導入部１０５に展開液を導入しても良い。
【００１７】
分離部１０３を移動する試料の速さは試料中の各成分の物性によって変化し、展開液が検出部１０６に達する頃には、試料中の各成分は分離部１０３から検出部１０６にかけての領域の異なる場所に分布する。定量を行う検出対象物１０９に対して検出用照明１０７を照射し、信号受信部１０８によって検出対象物を定量的に検出する。本明細書において検出対象物の定量的な検出とは、厳密には量や濃度がわかることが望ましいが、例えばＡ（０〜１０％）Ｂ（１０％〜３０％）Ｃ（３０％〜５０％）Ｄ（５０％以上）のように複数の範囲のいずれかに属するかがわかることも含む概念である。または、本実施形態に係るキットを用いて検出対象物の量や濃度に関する情報を取得することができる。
【００１８】
このように本実施形態にかかるキットは、試料を付与し、展開液Ｌで試料１０１を展開できれば良く、構造が簡単であり、設計自由度も高い。
【００１９】
本実施形態に係るキットについてより詳細に説明する。本実施形態における定量を行う検出対象物は８ＯＨｄＧであり、定量を行う検出対象物を含む試料としては尿を想定している。なお、本実施形態に係るキットは、８ＯＨｄＧと同じようなグアニン骨格をもつ、８−ｏｘｏ−Ｇｕａｎｏｓｉｎｅ、ＤｅｏｘｙＧｕａｎｏｓｉｎｅ等でも同様の効果を得られると考えられる。本明細書では、同様の効果が得られると考えられるものも含めて８ＯＨｄＧと記載することがある。
【００２０】
尿中には様々な成分が存在し、特に尿酸は８ＯＨｄＧと構造が似ている上に、尿中の尿酸の存在量は、８ＯＨｄＧの存在量の数十から数千倍である事が知られている。８ＯＨｄＧを精度よく検出し定量するためには尿酸との分離が必要である。
【００２１】
導入部１０２に導入された尿は分離部１０３に進む。試料はこの段階で一度乾燥させた方が好ましい。分離部１０３の試料はこの段階では８ＯＨｄＧや尿酸等、多数の成分を含む。なお、本実施形態において試料を乾燥する方法としては特に限定されないが、所定の時間放置して水分を自然に蒸発させる方法や、水分を吸収する材料を接触させる方法、加熱して水分を蒸発させる方法等が挙げられる。
【００２２】
１０５の展開液導入部から後述する展開液を導入し、展開液が導入部１０２を通過すると、試料の展開が開始される。展開液中の試料成分は固相である分離部１０３と吸脱着を繰り返し、検出部に向けて展開される。この際、後述する展開液を用いることで、夾雑物としての尿酸は固相である分離部１０３に強く吸着し、展開液によって展開されにくい。一方、８ＯＨｄＧは展開液と共に展開される。すなわち、展開液に対する８ＯＨｄＧの展開速度を、尿酸やクレアチニンといった夾雑物の展開速度よりも速くすることができる。その他の夾雑物に関しては８ＯＨｄＧとの構造の差から、８ＯＨｄＧとは異なる場所に展開される。
【００２３】
このようにして、導入部１０２に導入された試料は分離部１０３上で成分ごとに異なる場所に展開され、分離される。
【００２４】
次に、本実施形態にかかるキットが、試料中の検出対象物を定量的に検出する原理について、一例を挙げて説明する。本例では、分離部１０３が担体を含み構成され、その担体が、オクタデシル基が結合したシリカゲルである場合について説明する。
【００２５】
分離部１０３上で分離された８ＯＨｄＧは無色である為、基本的に目視では確認できない。分離部１０３を構成するシリカゲルに予め蛍光物質を混合しておくと、紫外光（ＵＶ光）によって分離部１０３が蛍光する。８ＯＨｄＧを含む多くの有機化合物はＵＶ光を吸収する為、８ＯＨｄＧが存在する領域は蛍光の強度が弱くなる。つまり、８ＯＨｄＧ濃度が高い領域ほど、ＵＶ光による蛍光の強度は弱くなるため、検出される蛍光強度によって８ＯＨｄＧ濃度を測定する事が出来る。
【００２６】
次に、本実施形態に係る検査キットを構成する各部位、及びそれらを構成する各部材の材料等の具体例について説明する。
【００２７】
（試料）
検出対象物を含有する試料としては尿、血液、汗、涙およびこれらをもとにする、液体
状の試料が挙げられる。また、含有する水の量を増減させた希釈、濃縮液が挙げられる。８ＯＨｄＧの試料としては尿が使われる事が多い。尿中８ＯＨｄＧ量は酸化ストレスのマーカーとして有用である事が知られている。尿中には８ＯＨｄＧの他、尿酸、クレアチニン、尿素、各種塩等が含まれている。
【００２８】
（支持体）
支持体１０４の材質は、ガラス、プラスチック、アルミ等が用いられ、試料の種類、展開液の種類等により適宜選択できる。支持体１０４の寸法や形状については、取り扱いの簡便さからは試料が移動する方向の長さ３ｃｍ〜１５ｃｍ、幅１ｃｍ〜５ｃｍの方形が好ましい。すなわち、支持体は、使いやすさの観点から、手の平サイズのスティック形状であることが好ましい。
【００２９】
（導入部）
導入部１０２は試料１０１が導入される部位である。試料１０１を導入部１０２上に導入する管状のものが付随していても良いし、スポイトのようなもので試料１０１を分離部１０３上に滴下することで試料を導入しても良い。
【００３０】
導入部の大きさは小さい方が好ましい。試料が小さいスポットにまとまっていると、分離能が向上する。ここで言う分離能とは、各成分の分離精度を意味しており、分離能が高い場合は分離後の成分に他成分が混ざらない。
【００３１】
導入部の形状は円形であっても矩形であってもよい。円形の場合は直径５ｍｍ以下が好ましく、直径３ｍｍ以下がより好ましい。また矩形が正方形でない場合、長手方向は展開液が流れる方向に対して垂直方向に５ｍｍ以上の長さであることが好ましく、１０ｍｍ以上の長さがであることより好ましい。短手方向の幅は３ｍｍ以下が好ましく、１ｍｍ以下がより好ましい。導入部が矩形である場合、展開液の進行方向において、試料が添加される領域の幅を狭くしやすいため、試料中の検出対象物と夾雑物との展開速度の差が見やすくなる。
【００３２】
導入部で導入した試料は、その場で乾燥させる事が好ましい。試料中の水分を除く事で展開液による展開の再現性が向上し、試料も濃縮される為検出感度も向上する。試料導入時に別途、濃縮する工程を行っても良い。
【００３３】
（分離部）
分離部１０３はクロマトグラフィーに用いられる担体（固定相）を含み構成されている。担体は、例えば、数十から数百ミクロン程度の粒子状シリカゲルまたはセルロースで構成されている。また、担体がギプス剤や有機高分子等によって結着していても良い。
【００３４】
シリカゲルは表面に有機物を修飾していても良く、例えばオクタデシル基が結合したシリカゲルを用いても良い。未修飾のシリカゲルは表面が強い親水性であるが、オクタデシル基を修飾する事で疎水性表面を得る事が出来る。疎水性表面のシリカゲルはアルコール中の尿酸を吸着し易く、８ＯＨｄＧとの分離能を向上させることが出来る。なお、担体は、互いに疎水性が異なる複数のシリカゲルを含み構成されていてもよい。
【００３５】
分離部１０３には蛍光あるいは燐光を発する物質、または発色物質が含まれていても良い。蛍光物質（蛍光剤）が含まれているとＵＶ光で分離部１０３上の有機物の一部を視認する事が出来る。８ＯＨｄＧはその構造中に炭素の環状構造を有しＵＶ光を吸収する。その為、蛍光物質を含む分離部上ではＵＶ光で黒い影として視認できる。
【００３６】
分離部１０３に８ＯＨｄＧと反応し蛍光を発する成分が含まれていても良い。また、８ＯＨｄＧと反応し呈色する成分でも良い。これらの成分によって検出部１０６で検出する事が出来るようになる。
【００３７】
（検出部）
検出部１０６は８ＯＨｄＧの量または濃度を測定する場所である。検出部１０６では８ＯＨｄＧ濃度を可視化する必要があり、可視化するための手段として以下の例が挙げられる。
【００３８】
（可視化手段１）分離部１０３にＵＶ光を吸収して蛍光を発する蛍光物質を含有させ、ＵＶ光を照射する。８ＯＨｄＧ濃度が高い程、黒い影として可視化される。この場合、検出用照明１０７はＵＶ光源になる。
【００３９】
（可視化手段２）展開後、８ＯＨｄＧと反応し呈色する試薬を分離部１０３に散布する。散布する試薬によって発色の様子は変化するが、基本的に８ＯＨｄＧ濃度に従った発色が起こる。この場合、検出用照明１０７は無くても構わない。
【００４０】
（可視化手段３）展開後、８ＯＨｄＧと反応し蛍光する試薬を分離部１０３に散布する。ＵＶ光によって８ＯＨｄＧ濃度に従った強度の蛍光が得られる。この場合、検出用照明１０７はＵＶ光源になる。
【００４１】
（信号受信部）
８ＯＨｄＧの量の計測のための信号受信部１０８の例として以下の手段がある。
【００４２】
（計測手段１）ＣＣＤやＣＭＯＳセンサーを有するデジタルカメラ等により８ＯＨｄＧ濃度の分布を画像として解析する。
【００４３】
（計測手段２）フォトダイオード等で光の反射量、蛍光量を計測する。
【００４４】
（計測手段３）目視にて８ＯＨｄＧ濃度を判断する。ここでは可視化手段１と計測手段１を用いた場合の例を具体的に説明する。
【００４５】
（検出部での８ＯＨｄＧ定量）
検出部上部に２５４ｎｍのＵＶ光源を用意し、ＵＶ光を照射して８ＯＨｄＧの影をデジタルカメラを用いて撮影する。
【００４６】
ＵＶ光を照射して８ＯＨｄＧの影を撮影すると、８ＯＨｄＧ量が多い程暗い影として記録される。図３は撮影した画像の例であり、２０１は導入部、２０２は分離部、２０３は検出部である。２０５には予め既知の濃度の８ＯＨｄＧ水溶液（例えば１ｍｇ／ｍｌを２μｌ）を滴下、乾燥させてある。２０３には２０１にサンプルを導入し、展開した後のサンプル中の８ＯＨｄＧの影が写っている。２０４は８ＯＨｄＧを含まない領域で何の影も写っていない。まず２０４の領域の各画素のＲ、Ｇ、Ｂ値其々を平均化し、平均Ｒ、平均Ｇ、平均Ｂの値を得る。次に、前記画像全体の各画素のＲＧＢ値から其々平均Ｒ、平均Ｇ、平均Ｂの値を減算し差分を得る。この段階で前記画像は８ＯＨｄＧを含まない領域では画素のＲ、Ｇ、Ｂの値がほぼ０となり、８ＯＨｄＧを含む領域ではマイナスの値を取る。さらに２０３の領域の画素のＲＧＢ値を積算し、ＲＧＢの平均値（（Ｒ＾２＋Ｇ＾２＋Ｂ＾２）＾（１／２））を算出する（以下、このＲＧＢ平均値をサンプル輝度と表記する）。同様に２０５の領域の画素のＲＧＢ平均値を算出する（以下、このＲＧＢ平均値をリファレンス輝度と表記する）。サンプル輝度値をリファレンス輝度値で除算し、２０５に付与した８ＯＨｄＧ量を乗算すればサンプル中の８ＯＨｄＧの濃度に関する情報
が得られる。
【００４７】
（保持部、展開液導入部）
本実施形態におけるキットは、例えば保持部を押すなどして圧力をかけると、保持部に保持された展開液が展開液導入部に流入して、導入部へと流れていく構成とすることができる。
【００４８】
＜展開液＞
本実施形態に係る展開液はクロマトグフィーにおける移動相であり、試料中の検出対象物を展開させる役割を担う。本実施形態に係る展開液は、その展開液による８ＯＨｄＧの展開速度が、夾雑物の展開速度よりも速くなるようなものを選ぶ。
【００４９】
例えば、展開液に対する８ＯＨｄＧの溶解度が、夾雑物の溶解度よりも高くなるように展開液を選べば、上記のような展開速度の関係を実現することができる。そのような展開液として例えばアルコール及びエーテルの少なくともいずれか一方と、無機電解質を含む溶液が挙げられる。
【００５０】
（展開液の主成分）
本実施形態において、展開液の主成分はアルコール及びエーテルである。アルコールの例はメタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノールのうち少なくともいずれか一種が挙げられる。エーテルの例は、ジメチルエーテル、エチルメチルエーテル、ジエチルエーテル、ジエチレングリコールモノエチルエーテル、ジエチレングリコールモノメチルエーテル、トリエチレングリコールモノブチルエーテルのうち少なくともいずれか一種である。
【００５１】
これらのアルコールは尿中の８ＯＨｄＧ以外の物質（以下、夾雑物）、特に尿酸の溶解度が低い。一方８ＯＨｄＧは溶解させる為、分離に最適である。
【００５２】
（無機電解質）
これまで、展開液中に無機電解質を含有させても、多くの無機電解質は固相中のシリカゲルに吸着してしまい、展開結果に影響を及ぼさないと考えられていた。その為、一般的には薄層クロマトグラフィーの展開液に無機電解質は使用されてこなかった。
【００５３】
ところが、本発明者らが検討したところ無機電解質は尿中の夾雑物、特にクロマトグラフィーにおける尿酸の展開を抑える効果がある事が分かった。詳細なメカニズムは不明であるが、展開液の主成分中に僅かに残存する水分を無機電解質が保持したまま固相中のシリカゲルに吸着し、尿酸に水分が関与する事を抑えていると考えられる。また、尿酸が無機電解質によって電離し、固相中のシリカゲルに吸着し易い形態になっているとも考えられる。この効果によって、８ＯＨｄＧと尿酸を分離しやすく出来る。無機電解質は水分を保持し易い潮解性である事が好ましい。なお、潮解性であるとはその物質を空気中においたときに、空気中の水分を取り込んで水溶液になるものである。
【００５４】
無機電解質として例えば、水酸化カリウムや水酸化ナトリウムが挙げられる。無機電解質の濃度は０．０９ｍｏｌ／ｌ以上である事が好ましい。
【００５５】
（水分）
展開液が水分を含有すると尿酸が溶解するようになる為、分離能が低下する。そのため、展開液の主成分中の水分量は展開液重量に対して１．５％以下が好ましい。より好ましくは１％以下で、０．５％以下が更に好ましい。また、水のモル濃度が、無機電解質のモル濃度の３．２倍以下であることが好ましい。この濃度以下であれば水分を含有していても８ＯＨｄＧと尿酸を分離する事が出来る。
【００５６】
（薄層クロマトグラフィー）
本実施形態に係る、８オキソ２’デオキシグアノシンを検出する薄層クロマトグラフィーは、以下の各工程を含む。
（１）８オキソ２’デオキシグアノシンと夾雑物を含む試料を導入する工程。
（２）試料に展開液を展開することによって、試料から８ＯＨｄＧを分離抽出する工程。
（３）分離抽出された８オキソ２’デオキシグアノシンの量または濃度を検出する工程。
なお、展開液を展開する前に、試料に含まれる水分を除去する工程を含んでいても良い。水分を除去することで、前述のように、８ＯＨｄＧと尿酸を分離しやすくなる。また、試料を濃縮する工程をさらに有していても良い。なお、試料が尿である場合、夾雑物は、クレアチニン及び尿酸の少なくともいずれか一方を含む。
【実施例】
【００５７】
（サンプルの調製）
下記表１に記載の含有量となるように各材料を混合し、１Ｎ水酸化ナトリウム溶液を含有させて１ｍｌに調整した。各サンプルは使用直前に１Ｎ硫酸溶液を等量入れて中和した。
【００５８】
【表１】
2019012035.tif 000003
【００５９】
（展開液の調製）
無水エタノールに水および水酸化カリウムを含有させて展開液を調製した。無水エタノールはモレキュラーシーブ３Ａを含有させ撹拌し、２４時間静置して充分に含有水分を除去したものを使用した。水および水酸化カリウムの含有量は下記表２の通りである。何れも単位はｍｏｌ／ｌである。
【００６０】
【表２】
2019012035.tif 000004
【００６１】
（実施例１）
分離部として２ｃｍ×５ｃｍに切断したシリカゲルプレート（ＰＬＣシリカゲルＲＰ−１８Ｆ２５４  メルク社製）を用いた。このシリカゲルプレートは支持体がガラスで分離部のシリカゲル層にはＵＶを吸収する蛍光物質（蛍光剤）が含まれている。シリカゲルプレートの短辺の一方を底辺とし、底辺から１０ｍｍの位置を導入部とし、ガラス管のスポイトにてサンプル１を２μｌ付与した。サンプルは６０℃のホットプレート上で乾燥させた。ＴＬＣ用展開層（アズワン社製）の底部に２ｍｍ程度の深さとなるように展開液１を入れ、展開層に蓋をして１０分静置した。その後、展開層中にシリカゲルプレートの底辺が下になるように入れ、展開液が導入部から２０ｍｍ上に上がるまで静置した。シリカゲルプレートを取り出し、底辺と対になるもう一つの短辺から５ｍｍの所にガラス管のスポイトにてサンプル１を２μｌ付与した（リファレンス）。サンプル１展開液が上がった部分から底辺に向かって１０ｍｍの範囲を検出部とし、２５４ｎｍのＵＶ光源（アズワン社製  ハンディＵＶランプ）を照射して、デジタルカメラで撮影した。撮影した画像を上記検出部での８ＯＨｄＧ定量の方法に従い数値化した。
【００６２】
（実施例２）
展開液２を用いること以外は実施例１と同様の実験を行った。
【００６３】
（実施例３）
展開液３を用いること以外は実施例１と同様の実験を行った。
【００６４】
サンプル２から７についてもサンプル１と同様に８ＯＨｄＧ量を定量した。リファレンスは全てサンプル１とした。図３横軸にサンプル調製時に含有させた８ＯＨｄＧ量を、縦軸に定量した８ＯＨｄＧ量をとり、サンプル１から７までをプロットした。調製時に含有させた８ＯＨｄＧとほぼ同等の量が定量できており、本手法により簡易に８ＯＨｄＧを定量できた。
【００６５】
（実施例４）
展開液４を用いること以外は実施例１と同様の実験を行った。
【００６６】
（実施例５）
展開液５を用いること以外は実施例１と同様の実験を行った。
【００６７】
（比較例１）
展開液６を用いること以外は実施例１と同様の実験を行った。
【００６８】
（評価）
各サンプルの８ＯＨｄＧ検出量と、サンプル調製時に仕込んだ８ＯＨｄＧ量が全てのサンプルで１０％以内の差であった場合はＡ（好ましいレベル）、１０％を超える差のサンプルが多数あった場合はＣ（許容できないレベル）、それ以外をＢとした。評価結果を表３に示す。
【００６９】
展開液６のように水酸化カリウムが含まれない場合、８ＯＨｄＧを精度よく検出できないことがわかった。また、展開液中の水酸化カリウムを適切な範囲とすることで、８ＯＨｄＧの定量的な検出を精度よくできた。
【００７０】
【表３】
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【符号の説明】
【００７１】
１０１  試料
１０２  導入部
１０３  分離部
１０４  支持体
１０５  展開液導入部
１０６  検出部
１０７  検出用照明
１０８  信号受信部
１０９  検出対象物（８ＯＨｄＧ）
１１０  保持部
【図１】
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【図２】
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【図３】
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