(57)【要約】      （修正有）【課題】新たな蛍光タンパク質の提供。【解決手段】本発明の新規タンパク質は、下記（Ｆ１）または（Ｆ２）のタンパク質であることを特徴とする。（Ｆ１）特定のアミノ酸配列において、５２番目のアミノ酸がＨ以外のアミノ酸であるアミノ酸配列からなるタンパク質、（Ｆ２）前記（Ｆ１）のアミノ酸配列に対して、５２番目のアミノ酸を含む同一性が８０％以上のアミノ酸配列からなり、且つ、前記（Ｆ１）のタンパク質の最大蛍光波長±５ｎｍの範囲に最大蛍光波長を有するタンパク質。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記（Ｆ１）または（Ｆ２）のタンパク質であることを特徴とする、新規タンパク質。
（Ｆ１）  配列番号１のアミノ酸配列において、
５２番目のアミノ酸がＨ以外のアミノ酸であるアミノ酸配列からなるタンパク質
（Ｆ２）  前記（Ｆ１）のアミノ酸配列に対して、５２番目のアミノ酸を含む同一性が８０％以上のアミノ酸配列からなり、且つ、前記（Ｆ１）のタンパク質の最大蛍光波長±５ｎｍの範囲に最大蛍光波長を有するタンパク質
【請求項２】
前記（Ｆ１）のタンパク質が、下記（Ｆ１’）のタンパク質であり、前記（Ｆ２）のタンパク質が、下記（Ｆ２’）のタンパク質である、請求項１記載の新規タンパク質。
（Ｆ１’）  配列番号１のアミノ酸配列において、
５２番目のアミノ酸がＨ以外のアミノ酸であり、
１３６番目のアミノ酸がＴ以外のアミノ酸であるアミノ酸配列からなるタンパク質
（Ｆ２’）  前記（Ｆ１’）のアミノ酸配列に対して、５２番目および１３６番目のアミノ酸を含む同一性が８０％以上のアミノ酸配列からなり、且つ、前記（Ｆ１）のタンパク質の最大蛍光波長±５ｎｍの範囲に最大蛍光波長を有するタンパク質
【請求項３】
前記（Ｆ１）のタンパク質が、下記（Ｆ１’’）のタンパク質であり、前記（Ｆ２）のタンパク質が、下記（Ｆ２’’）のタンパク質である、請求項１または２記載の新規タンパク質。
（Ｆ１’’）  配列番号１のアミノ酸配列において、
５２番目のアミノ酸がＨ以外のアミノ酸であり、
５６番目のアミノ酸がＹ以外のアミノ酸であり、
１３６番目のアミノ酸がＴ以外のアミノ酸であり、
１９２番目のアミノ酸がＲ以外のアミノ酸であるアミノ酸配列からなるタンパク質
（Ｆ２’’）  前記（Ｆ１’’）のアミノ酸配列に対して、５２番目、５６番目、１３６番目、および１９２番目のアミノ酸を含む同一性が８０％以上のアミノ酸配列からなり、且つ、前記（Ｆ１）のタンパク質の最大蛍光波長±５ｎｍの範囲に最大蛍光波長を有するタンパク質
【請求項４】
前記配列番号１のアミノ酸配列において、
５２番目のアミノ酸が、Ａ、またはＳであり、
５６番目のアミノ酸が、Ｒ、またはＹであり、
１３６番目のアミノ酸が、Ｍ、Ｓ、またはＴであり、
１９２番目のアミノ酸が、Ｒ、またはＩである、請求項１から３のいずれか一項に記載の新規タンパク質。
【請求項５】
前記（Ｆ１）のタンパク質が、配列番号２〜１１からなる群から選択された少なくとも１つのアミノ酸配列からなるタンパク質である、請求項１から４のいずれか一項に記載の新規タンパク質。
【請求項６】
下記（ｆ１）または（ｆ２）のポリヌクレオチドであることを特徴とする、新規遺伝子。
（ｆ１）  配列番号１２の塩基配列において、
１５４番目の塩基、１５５番目の塩基、および１５６番目の塩基が、Ｈ以外のアミノ酸をコードするコドンであるポリヌクレオチド
（ｆ２）  前記（ｆ１）のポリヌクレオチドに対して、１５４番目の塩基、１５５番目の塩基、および１５６番目の塩基を含む同一性が８０％以上の塩基配列からなり、且つ、前記（ｆ１）のポリヌクレオチドがコードするタンパク質の最大蛍光波長±５ｎｍの範囲に最大蛍光波長を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド
【請求項７】
前記（ｆ１）のポリヌクレオチドが、下記（ｆ１’）のポリヌクレオチドであり、前記（ｆ２）のポリヌクレオチドが、下記（ｆ２’）のポリヌクレオチドである、請求項６記載の新規遺伝子。
（ｆ１’）  配列番号１２の塩基配列において、
１５４番目の塩基、１５５番目の塩基、および１５６番目の塩基が、Ｈ以外のアミノ酸をコードするコドンであり、
４０６番目の塩基、４０７番目の塩基、および４０８番目の塩基が、Ｔ以外のアミノ酸をコードするコドンであるポリヌクレオチド
（ｆ２’）  前記（ｆ１’）のポリヌクレオチドに対して、１５４番目の塩基、１５５番目の塩基、および１５６番目の塩基、４０６番目の塩基、４０７番目の塩基、および４０８番目の塩基を含む同一性が８０％以上の塩基配列からなり、且つ、前記（ｆ１）のポリヌクレオチドがコードするタンパク質の最大蛍光波長±５ｎｍの範囲に最大蛍光波長を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド
【請求項８】
前記（ｆ１）のポリヌクレオチドが、下記（ｆ１’’）のポリヌクレオチドであり、前記（ｆ２）のポリヌクレオチドが、下記（ｆ２’’）のポリヌクレオチドである、請求項６または７記載の新規遺伝子。
（ｆ１’’）  配列番号１２の塩基配列において、
１５４番目の塩基、１５５番目の塩基、および１５６番目の塩基が、Ｈ以外のアミノ酸をコードするコドンであり、
１６６番目の塩基、１６７番目の塩基、および１６８番目の塩基が、Ｙ以外のアミノ酸をコードするコドンであり、
４０６番目の塩基、４０７番目の塩基、および４０８番目の塩基が、Ｔ以外のアミノ酸をコードするコドンであり、
５７４番目の塩基、５７５番目の塩基、および５７６番目の塩基が、Ｒ以外のアミノ酸をコードするコドンであるポリヌクレオチド
（ｆ２’’）  前記（ｆ１’’）のポリヌクレオチドに対して、１５４番目の塩基、１５５番目の塩基、１５６番目の塩基、１６６番目の塩基、１６７番目の塩基、１６８番目の塩基、４０６番目の塩基、４０７番目の塩基、４０８番目の塩基、５７４番目の塩基、５７５番目の塩基、および５７６番目の塩基を含む同一性が８０％以上の塩基配列からなり、且つ、前記（ｆ１）のポリヌクレオチドがコードするタンパク質の最大蛍光波長±５ｎｍの範囲に最大蛍光波長を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド
【請求項９】
前記配列番号１２の塩基配列において、
１５４番目の塩基、１５５番目の塩基、および１５６番目の塩基が、Ｓ、またはＡをコードするコドンであり、
１６６番目の塩基、１６７番目の塩基、および１６８番目の塩基が、Ｒ、またはＹをコードするコドンであり、
４０６番目の塩基、４０７番目の塩基、および４０８番目の塩基が、Ｍ、Ｓ、またはＴをコードするコドンであり、
５７４番目の塩基、５７５番目の塩基、および５７６番目の塩基が、Ｉ、またはＲをコードするコドンである、請求項６から８のいずれか一項に記載の新規遺伝子。
【請求項１０】
前記（ｆ１）のポリヌクレオチドが、配列番号１３〜２２からなる群から選択された少なくとも１つの塩基配列からなるポリヌクレオチドである、請求項６から９のいずれか一項に記載の新規遺伝子。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規タンパク質および新規遺伝子に関する。
【背景技術】
【０００２】
蛍光タンパク質として、ＧＦＰ（Ｇｒｅｅｎ  Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ  Ｐｒｏｔｅｉｎ）やＹＦＰ（Ｙｅｌｌｏｗ  Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ  Ｐｒｏｔｅｉｎ）等が、一般的に用いられている（非特許文献１）。前記蛍光タンパク質は、研究等の様々な用途に使用されている。しかしながら、各種用途に適した蛍光タンパク質が、必ずしも存在するわけではない。このため、新たな蛍光タンパク質が求められている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００３】
【非特許文献１】Chalfie  M  et  al.,  “Green  fluorescent  protein  as  a  marker  for  gene  expression”,  Science,  February  1994,  Vol.263,  no.5148,  p802-805.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
そこで、本発明は、新たな蛍光タンパク質を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明の新規タンパク質は、下記（Ｆ１）または（Ｆ２）のタンパク質であることを特徴とする。
（Ｆ１）  配列番号１のアミノ酸配列において、
５２番目のアミノ酸がＨ以外のアミノ酸であるアミノ酸配列からなるタンパク質
（Ｆ２）  前記（Ｆ１）のアミノ酸配列に対して、５２番目のアミノ酸を含む同一性が８０％以上のアミノ酸配列からなり、且つ、前記（Ｆ１）のタンパク質の最大蛍光波長±５ｎｍの範囲に最大蛍光波長を有するタンパク質
【０００６】
本発明の新規遺伝子は、下記（ｆ１）または（ｆ２）のポリヌクレオチドであることを特徴とする。
（ｆ１）  配列番号１２の塩基配列において、
１５４番目の塩基、１５５番目の塩基、および１５６番目の塩基が、Ｈ以外のアミノ酸をコードするコドンであるポリヌクレオチド
（ｆ２）  前記（ｆ１）のポリヌクレオチドに対して、１５４番目の塩基、１５５番目の塩基、および１５６番目の塩基を含む同一性が８０％以上の塩基配列からなり、且つ、前記（ｆ１）のポリヌクレオチドがコードするタンパク質の最大蛍光波長±５ｎｍの範囲に最大蛍光波長を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド
【０００７】
本発明の発現ベクターは、前記本発明の新規遺伝子を含むことを特徴とする。
【０００８】
本発明の形質転換体は、前記本発明の新規遺伝子を含むことを特徴とする。
【０００９】
本発明の形質転換体の製造方法は、宿主に、前記本発明の新規遺伝子を導入する導入工程を含むことを特徴とする。
【００１０】
本発明の新規蛍光タンパク質のスクリーニング方法は、前記本発明の新規タンパク質に変異を導入した候補タンパク質から、配列番号１のアミノ酸配列における５２番目のアミノ酸がＨ以外のアミノ酸であり、且つ前記（Ｆ１）のタンパク質の最大蛍光波長±５ｎｍの範囲に最大蛍光波長を有するタンパク質を選抜する選抜工程を含むことを特徴とする。
【発明の効果】
【００１１】
本発明によれば、新規な蛍光タンパク質を提供できる。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】図１は、実施例１における異なる励起波長および蛍光波長における蛍光強度を示すグラフである。
【図２】図２は、実施例３における異なる励起波長および蛍光波長における蛍光強度を示すグラフである。
【図３】図３は、実施例３における蛍光強度が極大値となる励起波長および蛍光波長における蛍光強度を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
＜新規タンパク質＞
本発明の新規タンパク質は、前述のように、下記（Ｆ１）または（Ｆ２）のタンパク質であることを特徴とする。
（Ｆ１）  配列番号１のアミノ酸配列において、
５２番目のアミノ酸がＨ以外のアミノ酸であるアミノ酸配列からなるタンパク質
（Ｆ２）  前記（Ｆ１）のアミノ酸配列に対して、５２番目のアミノ酸を含む同一性が８０％以上のアミノ酸配列からなり、且つ、前記（Ｆ１）のタンパク質の最大蛍光波長±５ｎｍの範囲に最大蛍光波長を有するタンパク質
【００１４】
また、本発明の新規タンパク質は、例えば、前記（Ｆ１）のタンパク質が、下記（Ｆ１’）のタンパク質であり、前記（Ｆ２）のタンパク質が、下記（Ｆ２’）のタンパク質である。
（Ｆ１’）  配列番号１のアミノ酸配列において、
５２番目のアミノ酸がＨ以外のアミノ酸であり、
１３６番目のアミノ酸がＴ以外のアミノ酸であるアミノ酸配列からなるタンパク質
（Ｆ２’）  前記（Ｆ１’）のアミノ酸配列に対して、５２番目および１３６番目のアミノ酸を含む同一性が８０％以上のアミノ酸配列からなり、且つ、前記（Ｆ１）のタンパク質の最大蛍光波長±５ｎｍの範囲に最大蛍光波長を有するタンパク質
【００１５】
また、本発明の新規タンパク質は、例えば、前記（Ｆ１）のタンパク質が、下記（Ｆ１’’）のタンパク質であり、前記（Ｆ２）のタンパク質が、下記（Ｆ２’’）のタンパク質である。
（Ｆ１’’）  配列番号１のアミノ酸配列において、
５２番目のアミノ酸がＨ以外のアミノ酸であり、
５６番目のアミノ酸がＹ以外のアミノ酸であり、
１３６番目のアミノ酸がＴ以外のアミノ酸であり、
１９２番目のアミノ酸がＲ以外のアミノ酸であるアミノ酸配列からなるタンパク質
（Ｆ２’’）  前記（Ｆ１’’）のアミノ酸配列に対して、５２番目、５６番目、１３６番目、および１９２番目のアミノ酸を含む同一性が８０％以上のアミノ酸配列からなり、且つ、前記（Ｆ１）のタンパク質の最大蛍光波長±５ｎｍの範囲に最大蛍光波長を有するタンパク質
【００１６】
本発明の新規タンパク質は、例えば、前記配列番号１のアミノ酸配列において、
５２番目のアミノ酸が、Ａ、またはＳであり、
５６番目のアミノ酸が、Ｒ、またはＹであり、
１３６番目のアミノ酸が、Ｍ、Ｓ、またはＴであり、
１９２番目のアミノ酸が、Ｒ、またはＩである。
【００１７】
本発明の新規タンパク質は、例えば、５２番目のアミノ酸、５６番目のアミノ酸、１３６番目のアミノ酸、および１９２番目のアミノ酸の組合せが、下記（ａａ１）〜（ａａ３）のいずれか１つのアミノ酸の組合せである。
【表１】
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【００１８】
本発明の新規タンパク質は、例えば、４番目のアミノ酸が、Ｙに置換されている。
【００１９】
本発明の新規タンパク質は、例えば、２２番目のアミノ酸が、Ｇに置換されている。
【００２０】
本発明の新規タンパク質は、例えば、２９番目のアミノ酸が、Ｖに置換されている。
【００２１】
本発明の新規タンパク質は、例えば、３７番目のアミノ酸が、Ｔに置換されている。
【００２２】
本発明の新規タンパク質は、例えば、６９番目のアミノ酸が、Ｍに置換されている。
【００２３】
本発明の新規タンパク質は、例えば、１５３番目のアミノ酸が、Ｖに置換されている。
【００２４】
本発明の新規タンパク質は、例えば、１７２番目のアミノ酸が、Ｍに置換されている。
【００２５】
本発明の新規タンパク質は、例えば、前記（Ｆ１）のタンパク質が、配列番号２〜１１からなる群から選択された少なくとも１つのアミノ酸配列からなるタンパク質である。
【００２６】
本発明者らは鋭意研究の結果、前記配列番号１のアミノ酸配列を有するタンパク質において、５２番目のアミノ酸が、前記タンパク質の蛍光活性と関連性を有することを見出した。具体的には、前記タンパク質の５２番目のアミノ酸が、例えば、前記タンパク質の発色団と相互作用すると推定された。このため、本発明の新規タンパク質によれば、５２番目のアミノ酸がＨ以外のアミノ酸に変異しているアミノ酸配列とすることにより、前記タンパク質の蛍光活性を調整でき、例えば、前記配列番号１のアミノ酸配列を有するタンパク質とは異なる波長の蛍光を発するタンパク質を得られる。なお、上記推定は、本発明を何ら制限しない。
【００２７】
以下、前記新規タンパク質は、新規蛍光タンパク質ともいう。前記新規蛍光タンパク質は、本発明者らが新たに作製したタンパク質である。本発明において、前記新規蛍光タンパク質は、例えば、１種類のタンパク質を含んでもよいし、２種類以上のタンパク質を含んでもよい（以下、同様）。
【００２８】
前記（Ｆ１）における配列番号１のアミノ酸配列は、以下の通りである。以下のアミノ酸配列において、４箇所の四角で囲んだアミノ酸（Ｘ）は、それぞれ、５２番目のアミノ酸、５６番目のアミノ酸、１３６番目のアミノ酸、１９２番目のアミノ酸である。また、７箇所の下線を引いたアミノ酸は、それぞれ、４番目のアミノ酸、２２番目のアミノ酸、２９番目のアミノ酸、３７番目のアミノ酸、６９番目のアミノ酸、１５３番目のアミノ酸、および１７２番目のアミノ酸である。前記配列番号１のアミノ酸配列を有するタンパク質を、例えば、ＣｐＹＧＦＰともいう。
【００２９】
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【００３０】
前記（Ｆ１）のタンパク質は、配列番号１における５２番目のアミノ酸がＨ以外のアミノ酸である。Ｈ以外のアミノ酸は、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、またはＹであり、好ましくは、Ａ、またはＳである。
【００３１】
前記（Ｆ１）のタンパク質は、例えば、配列番号２のアミノ酸配列からなるタンパク質があげられる。前記（Ｆ１）が配列番号２のアミノ酸配列からなるタンパク質である場合、前記（Ｆ１）は、Ｙ１３のアミノ酸配列ともいう。
【００３２】
前記（Ｆ１）における配列番号２のアミノ酸配列は、以下の通りである。前記配列番号２のアミノ酸配列は、前記配列番号１のアミノ酸配列において、５２番目のアミノ酸が、Ａの場合に対応する。
【００３３】
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【００３４】
前記（Ｆ２）のタンパク質は、例えば、前記（Ｆ１）の５２番目のアミノ酸が保存され、前記（Ｆ１）のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、前記（Ｆ１）のタンパク質の最大蛍光波長±５ｎｍの範囲に最大蛍光波長を有するタンパク質ということもできる。前記（Ｆ２）において、「同一性」は、例えば、前記（Ｆ２）が、前記最大蛍光波長を有する範囲であればよい。前記（Ｆ２）のアミノ酸配列において、「同一性」は、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。前記「同一性」は、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＦＡＳＴＡ等の解析ソフトウェアを用いて、デフォルトのパラメータにより算出できる（以下、同様）。
【００３５】
前記（Ｆ２）のタンパク質は、例えば、配列番号３および４のアミノ酸配列からなるタンパク質があげられる。配列番号３のアミノ酸配列は、配列番号２のアミノ酸配列において、２２番目のアミノ酸が、Ｇに置換されたアミノ酸配列である。配列番号４のアミノ酸配列は、配列番号２のアミノ酸配列において、４番目のアミノ酸が、Ｙに置換されたアミノ酸配列である。前記（Ｆ２）が配列番号３および４のアミノ酸配列からなるタンパク質である場合、前記（Ｆ２）は、それぞれ、Ｙ３およびＹ６のアミノ酸配列ともいう。
【００３６】
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【００３７】
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【００３８】
本発明の新規タンパク質は、下記（Ｆ３）のタンパク質でもよい。
（Ｆ３）  前記（Ｆ１）の５２番目のアミノ酸以外のアミノ酸配列において、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列からなり、前記（Ｆ１）のタンパク質の最大蛍光波長±５ｎｍの範囲に最大蛍光波長を有するタンパク質
【００３９】
前記（Ｆ３）のタンパク質は、前記（Ｆ１）の５２番目のアミノ酸が保存され、前記（Ｆ１）のアミノ酸配列において、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列からなり、前記（Ｆ１）のタンパク質の最大蛍光波長±５ｎｍの範囲に最大蛍光波長を有するタンパク質ということもできる。前記（Ｆ３）において、「同一性」は、例えば、前記（Ｆ３）が、前記最大蛍光波長を有する範囲であればよい。前記（Ｆ３）のアミノ酸配列において、「１もしくは数個」は、例えば、１〜４３個、１〜３３個、１〜２２個、１〜１１個、１〜９個、１〜７個、１〜５個、１〜３個、１または２個である。本発明において、個数の数値範囲は、例えば、その範囲に属する正の整数を全て開示するものである。つまり、例えば、「１〜５個」との記載は、「１、２、３、４、５個」の全ての開示を意味する（以下、同様）。
【００４０】
前記（Ｆ１）のタンパク質は、例えば、下記（Ｆ１’）のタンパク質でもよい。
（Ｆ１’）  配列番号１のアミノ酸配列において、
５２番目のアミノ酸がＨ以外のアミノ酸であり、
１３６番目のアミノ酸がＴ以外のアミノ酸であるアミノ酸配列からなるタンパク質
【００４１】
前記（Ｆ１’）のタンパク質は、配列番号１における５２番目のアミノ酸がＨ以外のアミノ酸であり、１３６番目のアミノ酸がＴ以外のアミノ酸である。Ｔ以外のアミノ酸は、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｖ、Ｗ、またはＹであり、好ましくは、Ｓ、またはＭである。
【００４２】
前記（Ｆ１’）のタンパク質は、例えば、配列番号５のアミノ酸配列からなるタンパク質があげられる。前記（Ｆ１’）が配列番号５のアミノ酸配列からなるタンパク質である場合、前記（Ｆ１’）は、Ｙのアミノ酸配列ともいう。
【００４３】
前記（Ｆ１’）における配列番号５のアミノ酸配列は、以下の通りである。前記配列番号５のアミノ酸配列は、前記配列番号１のアミノ酸配列において、５２番目のアミノ酸が、Ａであり、１３６番目のアミノ酸が、Ｓの場合に対応する。
【００４４】
2019154380.tif 000008
【００４５】
前記（Ｆ２’）のタンパク質は、例えば、前記（Ｆ１’）の５２番目および１３６番目のアミノ酸が保存され、前記（Ｆ１’）のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、前記（Ｆ１’）のタンパク質の最大蛍光波長±５ｎｍの範囲に最大蛍光波長を有するタンパク質ということもできる。
【００４６】
本発明の新規タンパク質は、下記（Ｆ３’）のタンパク質でもよい。
（Ｆ３’）  前記（Ｆ１’）の５２番目および１３６番目のアミノ酸以外のアミノ酸配列において、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列からなり、前記（Ｆ１’）のタンパク質の最大蛍光波長±５ｎｍの範囲に最大蛍光波長を有するタンパク質
【００４７】
前記（Ｆ３’）のタンパク質は、前記（Ｆ１’）の５２番目および１３６番目のアミノ酸が保存され、前記（Ｆ１）のアミノ酸配列において、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列からなり、前記（Ｆ１）のタンパク質の最大蛍光波長±５ｎｍの範囲に最大蛍光波長を有するタンパク質ということもできる。
【００４８】
前記（Ｆ１）のタンパク質は、例えば、下記（Ｆ１’’）のタンパク質でもよい。
（Ｆ１’’）  配列番号１のアミノ酸配列において、
５２番目のアミノ酸がＨ以外のアミノ酸であり、
１３６番目のアミノ酸がＴ以外のアミノ酸であり、
５６番目のアミノ酸がＹ以外のアミノ酸であり、
１９２番目のアミノ酸がＲ以外のアミノ酸であるアミノ酸配列からなるタンパク質
【００４９】
前記（Ｆ１’’）のタンパク質は、配列番号１における５２番目のアミノ酸がＨ以外のアミノ酸であり、１３６番目のアミノ酸がＴ以外のアミノ酸であり、５６番目のアミノ酸がＹ以外のアミノ酸であり、１９２番目のアミノ酸がＲ以外のアミノ酸である。Ｙ以外のアミノ酸は、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、またはＷであり、好ましくは、Ｒ、またはＩである。Ｒ以外のアミノ酸は、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、またはＹであり、好ましくは、Ｉである。
【００５０】
前記（Ｆ１’’）のタンパク質は、例えば、配列番号６のアミノ酸配列からなるタンパク質があげられる。前記（Ｆ１’’）が配列番号６のアミノ酸配列からなるタンパク質である場合、前記（Ｆ１’’）は、ＢＧのアミノ酸配列ともいう。
【００５１】
前記（Ｆ１’’）における配列番号６のアミノ酸配列は、以下の通りである。前記配列番号６のアミノ酸配列は、前記配列番号１のアミノ酸配列において、５２番目のアミノ酸がＳであり、１３６番目のアミノ酸がＭであり、５６番目のアミノ酸がＲであり、１９２番目のアミノ酸がＩの場合に対応する。
【００５２】
2019154380.tif 000009
【００５３】
前記（Ｆ２’’）のタンパク質は、例えば、前記（Ｆ１’’）の５２番目、１３６番目、５６番目および１９２番目のアミノ酸が保存され、前記（Ｆ１’’）のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、前記（Ｆ１’’）のタンパク質の最大蛍光波長±５ｎｍの範囲に最大蛍光波長を有するタンパク質ということもできる。
【００５４】
前記（Ｆ２’’）のタンパク質は、例えば、配列番号７〜１１のアミノ酸配列からなるタンパク質があげられる。配列番号７のアミノ酸配列は、配列番号６のアミノ酸配列において、３７番目のアミノ酸が、Ｔに置換され、１５３番目のアミノ酸が、Ｖに置換されたアミノ酸配列である。配列番号８のアミノ酸配列は、配列番号６のアミノ酸配列において、２９番目のアミノ酸が、Ｖに置換され、１５３番目のアミノ酸が、Ｖに置換されたアミノ酸配列である。配列番号９のアミノ酸配列は、配列番号６のアミノ酸配列において、６９番目のアミノ酸が、Ｍに置換され、１５３番目のアミノ酸が、Ｖに置換されたアミノ酸配列である。配列番号１０のアミノ酸配列は、配列番号６のアミノ酸配列において、１５３番目のアミノ酸が、Ｖに置換され、１７２番目のアミノ酸が、Ｍに置換されたアミノ酸配列である。配列番号１１のアミノ酸配列は、配列番号６のアミノ酸配列において、２９番目のアミノ酸が、Ｖに置換され、３７番目のアミノ酸が、Ｔに置換され、１５３番目のアミノ酸が、Ｖに置換されたアミノ酸配列である。前記（Ｆ２’’）が配列番号７〜１１のアミノ酸配列からなるタンパク質である場合、前記（Ｆ２’’）は、それぞれ、ＢＧ１５、ＢＧ１７、ＢＧ１９、ＢＧ２３、およびＢＧ２９のアミノ酸配列ともいう。
【００５５】
2019154380.tif 000010
【００５６】
2019154380.tif 000011
【００５７】
2019154380.tif 000012
【００５８】
2019154380.tif 000013
【００５９】
2019154380.tif 000014
【００６０】
本発明の新規タンパク質は、下記（Ｆ３’）のタンパク質でもよい。
（Ｆ３’’）  前記（Ｆ１’’）の５２番目、１３６番目、５６番目および１９２番目のアミノ酸以外のアミノ酸配列において、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列からなり、前記（Ｆ１’’）のタンパク質の最大蛍光波長±５ｎｍの範囲に最大蛍光波長を有するタンパク質
【００６１】
前記（Ｆ３’’）のタンパク質は、前記（Ｆ１’’）の５２番目、１３６番目、５６番目および１９２番目のアミノ酸が保存され、前記（Ｆ１）のアミノ酸配列において、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列からなり、前記（Ｆ１）のタンパク質の最大蛍光波長±５ｎｍの範囲に最大蛍光波長を有するタンパク質ということもできる。
【００６２】
前記（Ｆ３’’）のタンパク質は、例えば、前記配列番号７〜１１のアミノ酸配列からなるタンパク質があげられる。
【００６３】
本発明の新規蛍光タンパク質は、例えば、以下のような化学的特性を有する。以下の励起波長、励起極大波長、蛍光波長および蛍光極大波長は、例えば、３５０〜６５０ｎｍの波長の範囲における化学的特性である。
励起波長：３５０〜６５０ｎｍ
励起極大波長：３８６〜５１４ｎｍ
蛍光波長：３５０〜６５０ｎｍ
蛍光極大波長：５０６〜５２４ｎｍ
【００６４】
本発明の新規蛍光タンパク質が前記Ｙ１３である場合、前記Ｙ１３の励起波長は、例えば、４８５〜４９５ｎｍであり、蛍光波長は、例えば、５０５〜５１５ｎｍである。
【００６５】
本発明の新規蛍光タンパク質が前記Ｙ３である場合、前記Ｙ３の励起波長は、例えば、４８５〜４９５ｎｍであり、蛍光波長は、例えば、５０５〜５１５ｎｍである。
【００６６】
本発明の新規蛍光タンパク質が前記Ｙ６である場合、前記Ｙ６の励起波長は、例えば、４８５〜４９５ｎｍであり、蛍光波長は、例えば、５０５〜５１５ｎｍである。
【００６７】
本発明の新規蛍光タンパク質が前記Ｙである場合、前記Ｙの励起波長は、例えば、４８５〜４９５ｎｍであり、蛍光波長は、例えば、５０５〜５１５ｎｍである。
【００６８】
本発明の新規蛍光タンパク質が前記ＢＧである場合、前記ＢＧの励起波長は、例えば、４４５〜４５５ｎｍであり、蛍光波長は、例えば、４８０〜４９０ｎｍである。
【００６９】
本発明の新規蛍光タンパク質が前記ＢＧ１５である場合、前記ＢＧ１５の励起波長は、例えば、４３５〜４４５ｎｍであり、蛍光波長は、例えば、４８５〜４９５ｎｍである。
【００７０】
本発明の新規蛍光タンパク質が前記ＢＧ１７である場合、前記ＢＧ１７の励起波長は、例えば、４４０〜４５０ｎｍであり、蛍光波長は、例えば、４８５〜４９５ｎｍである。
【００７１】
本発明の新規蛍光タンパク質が前記ＢＧ１９である場合、前記ＢＧ１９の励起波長は、例えば、４３５〜４４５ｎｍであり、蛍光波長は、例えば、４８５〜４９５ｎｍである。
【００７２】
本発明の新規蛍光タンパク質が前記ＢＧ２３である場合、前記ＢＧ２３の励起波長は、例えば、４３５〜４４５ｎｍであり、蛍光波長は、例えば、４８５〜４９５ｎｍである。
【００７３】
本発明の新規蛍光タンパク質が前記ＢＧ２９である場合、前記ＢＧ２９の励起波長は、例えば、４４０〜４５０ｎｍであり、蛍光波長は、例えば、４８５〜４９５ｎｍである。
【００７４】
前記励起波長、前記蛍光波長、および前記蛍光極大波長の測定方法は、特に制限されず、例えば、ＪＩＳ  Ｋ０１２０に基づいて行うことができる。前記励起波長、前記励起極大波長、前記蛍光波長、および前記蛍光極大波長の測定方法は、例えば、後述する実施例１の測定方法に準じて行ってもよい。
【００７５】
前記新規蛍光タンパク質は、例えば、前記ＣｐＹＧＦＰと比較して、異なる波長の蛍光を発する。前記新規蛍光タンパク質と前記ＣｐＹＧＦＰとが異なる波長の蛍光を発することは、例えば、前記新規蛍光タンパク質および前記ＣｐＹＧＦＰについて、最大蛍光波長を測定し、前記最大蛍光波長の差が、例えば、２０ｎｍ以上、１０ｎｍ以上であるか否かにより、判断できる。また、例えば、前記新規蛍光タンパク質および前記ＣｐＹＧＦＰについて、各アミノ酸配列をコードした遺伝子を大腸菌のプラスミドに挿入し、前記大腸菌のコロニーの色を目視により観察し、前記新規蛍光タンパク質と前記ＣｐＹＧＦＰとで前記コロニーの色が異なるか否かにより、判断できる。
【００７６】
前記新規蛍光タンパク質は、蛍光活性を有し、前記（Ｆ１）のタンパク質の最大蛍光波長±５ｎｍの範囲に最大蛍光波長を有していればよく、例えば、さらに、その他の活性を有してもよい。
【００７７】
＜新規遺伝子＞
本発明の新規遺伝子は、前述のように、下記（ｆ１）または（ｆ２）のポリヌクレオチドであることを特徴とする。
（ｆ１）  配列番号１２の塩基配列において、
１５４番目の塩基、１５５番目の塩基、および１５６番目の塩基が、Ｈ以外のアミノ酸をコードするコドンであるポリヌクレオチド
（ｆ２）  前記（ｆ１）のポリヌクレオチドに対して、１５４番目の塩基、１５５番目の塩基、および１５６番目の塩基を含む同一性が８０％以上の塩基配列からなり、且つ、前記（ｆ１）のポリヌクレオチドがコードするタンパク質の最大蛍光波長±５ｎｍの範囲に最大蛍光波長を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド
【００７８】
また、本発明の新規遺伝子は、例えば、前記（ｆ１）のポリヌクレオチドが、下記（ｆ１’）のポリヌクレオチドであり、前記（ｆ２）のポリヌクレオチドが、下記（ｆ２’）のポリヌクレオチドである。
（ｆ１’）  配列番号１２の塩基配列において、
１５４番目の塩基、１５５番目の塩基、および１５６番目の塩基が、Ｈ以外のアミノ酸をコードするコドンであり、
４０６番目の塩基、４０７番目の塩基、および４０８番目の塩基が、Ｔ以外のアミノ酸をコードするコドンであるポリヌクレオチド
（ｆ２’）  前記（ｆ１’）のポリヌクレオチドに対して、１５４番目の塩基、１５５番目の塩基、および１５６番目の塩基、４０６番目の塩基、４０７番目の塩基、および４０８番目の塩基を含む同一性が８０％以上の塩基配列からなり、且つ、前記（ｆ１）のポリヌクレオチドがコードするタンパク質の最大蛍光波長±５ｎｍの範囲に最大蛍光波長を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド
【００７９】
また、本発明の新規遺伝子は、例えば、前記（ｆ１）のポリヌクレオチドが、下記（ｆ１’’）のポリヌクレオチドであり、前記（ｆ２）のポリヌクレオチドが、下記（ｆ２’’）のポリヌクレオチドである。
（ｆ１’’）  配列番号１２の塩基配列において、
１５４番目の塩基、１５５番目の塩基、および１５６番目の塩基が、Ｈ以外のアミノ酸をコードするコドンであり、
１６６番目の塩基、１６７番目の塩基、および１６８番目の塩基が、Ｙ以外のアミノ酸をコードするコドンであり、
４０６番目の塩基、４０７番目の塩基、および４０８番目の塩基が、Ｔ以外のアミノ酸をコードするコドンであり、
５７４番目の塩基、５７５番目の塩基、および５７６番目の塩基が、Ｒ以外のアミノ酸をコードするコドンであるポリヌクレオチド
（ｆ２’’）  前記（ｆ１’’）のポリヌクレオチドに対して、１５４番目の塩基、１５５番目の塩基、１５６番目の塩基、１６６番目の塩基、１６７番目の塩基、１６８番目の塩基、４０６番目の塩基、４０７番目の塩基、４０８番目の塩基、５７４番目の塩基、５７５番目の塩基、および５７６番目の塩基を含む同一性が８０％以上の塩基配列からなり、且つ、前記（ｆ１）のポリヌクレオチドがコードするタンパク質の最大蛍光波長±５ｎｍの範囲に最大蛍光波長を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド
【００８０】
本発明の新規遺伝子は、例えば、前記配列番号１２の塩基配列において、
１５４番目の塩基、１５５番目の塩基、および１５６番目の塩基が、Ａ、またはＳをコードするコドンであり、
１６６番目の塩基、１６７番目の塩基、および１６８番目の塩基が、Ｒ、またはＹをコードするコドンであり、
４０６番目の塩基、４０７番目の塩基、および４０８番目の塩基が、Ｍ、Ｓ、またはＴをコードするコドンであり、
５７４番目の塩基、５７５番目の塩基、および５７６番目の塩基が、Ｒ、またはＩをコードするコドンである。
【００８１】
本発明の新規遺伝子は、例えば、１５４番目の塩基、１５５番目の塩基、および１５６番目の塩基のコドン、１６６番目の塩基、１６７番目の塩基、および１６８番目の塩基のコドン、４０６番目の塩基、４０７番目の塩基、および４０８番目の塩基のコドン、ならびに５７４番目の塩基、５７５番目の塩基、および５７６番目の塩基のコドンの組合せが、下記（ａａ１’）〜（ａａ３’）のいずれか１つのアミノ酸の組合せをコードするコドンの組合せである。
【表２】
2019154380.tif 000015
【００８２】
本発明の新規遺伝子は、例えば、１５４番目の塩基、１５５番目の塩基、および１５６番目の塩基のコドン、１６６番目の塩基、１６７番目の塩基、および１６８番目の塩基のコドン、４０６番目の塩基、４０７番目の塩基、および４０８番目の塩基のコドン、ならびに５７４番目の塩基、５７５番目の塩基、および５７６番目の塩基のコドンが、下記（ｎ１）〜（ｎ４）のいずれか１つの組合せである。
【表３】
2019154380.tif 000016
【００８３】
本発明の新規遺伝子は、例えば、１０番目の塩基、１１番目の塩基、および１２番目の塩基が、Ｙをコードするコドンに置換されている。
【００８４】
本発明の新規遺伝子は、例えば、６４番目の塩基、６５番目の塩基、および６６番目の塩基が、Ｇをコードするコドンに置換されている。
【００８５】
本発明の新規遺伝子は、例えば、８５番目の塩基、８６番目の塩基、および８７番目の塩基が、Ｖをコードするコドンに置換されている。
【００８６】
本発明の新規遺伝子は、例えば、１０９番目の塩基、１１０番目の塩基、および１１１番目の塩基が、Ｔをコードするコドンに置換されている。
【００８７】
本発明の新規遺伝子は、例えば、２０５番目の塩基、２０６番目の塩基、および２０７番目の塩基が、Ｍをコードするコドンに置換されている。
【００８８】
本発明の新規遺伝子は、例えば、４５７番目の塩基、４５８番目の塩基、および４５９番目の塩基が、Ｖをコードするコドンに置換されている。
【００８９】
本発明の新規遺伝子は、例えば、５１４番目の塩基、５１５番目の塩基、および５１６番目の塩基が、Ｍをコードするコドンに置換されている。
【００９０】
本発明の新規遺伝子は、例えば、前記（ｆ１）のポリヌクレオチドが、配列番号１３〜２２からなる群から選択された少なくとも１つの塩基配列からなるポリヌクレオチドである。
【００９１】
前記新規遺伝子は、前記本発明の新規蛍光タンパク質をコードする遺伝子であることから、以下、新規蛍光タンパク質遺伝子ともいう。前記新規蛍光タンパク質遺伝子は、例えば、１種類のポリヌクレオチドを含んでもよいし、２種類以上のポリヌクレオチドを含んでもよい（以下、同様）。
【００９２】
前記（ｆ１）における配列番号１２の塩基配列は、以下の通りである。以下の塩基配列において、３箇所の四角で囲んだ塩基配列は、１箇所目の塩基配列が、１５４番目の塩基、１５５番目の塩基、および１５６番目の塩基、２箇所目の塩基配列が、１６６番目の塩基、１６７番目の塩基、および１６８番目の塩基、３箇所目の塩基配列が、４０６番目の塩基、４０７番目の塩基、および４０８番目の塩基、４箇所目の塩基配列が、５７４番目の塩基、５７５番目の塩基、および５７６番目の塩基に対応する塩基配列である。７箇所の下線を引いたコドンは、１箇所目のコドンが、１０番目の塩基、１１番目の塩基、および１２番目の塩基、２箇所目のコドンが、６４番目の塩基、６５番目の塩基、および６６番目の塩基、３箇所目のコドンが、８５番目の塩基、８６番目の塩基、および８７番目の塩基、４箇所目のコドンが、１０９番目の塩基、１１０番目の塩基、および１１１番目の塩基、５箇所目のコドンが、２０５番目の塩基、２０６番目の塩基、および２０７番目の塩基、６箇所目のコドンが、４５７番目の塩基、４５８番目の塩基、および４５９番目の塩基、７箇所目のコドンが、５１４番目の塩基、５１５番目の塩基、および５１６番目の塩基に対応するコドンである。配列番号１２の塩基配列がコードするタンパク質を、例えば、ＣｐＹＧＦＰともいう。また、配列番号１２の塩基配列からなるポリヌクレオチドを、ＣｐＹＧＦＰのポリヌクレオチドともいう。
【００９３】
2019154380.tif 000017
【００９４】
前記（ｆ１）のポリヌクレオチドは、１５４番目の塩基、１５５番目の塩基、および１５６番目の塩基が、Ｈ以外のアミノ酸をコードするコドンである。Ｈ以外のアミノ酸をコードするコドンは、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、またはＹをコードするコドンであり、好ましくは、Ａ、またはＳをコードするコドンである。
【００９５】
前記（ｆ１）のポリヌクレオチドは、例えば、配列番号１３の塩基配列からなるポリヌクレオチドがあげられる。前記（ｆ１）が配列番号１３の塩基配列からなるポリヌクレオチドである場合、前記（ｆ１）は、Ｙ１３のポリヌクレオチドともいう。Ｙ１３のポリヌクレオチドは、Ｙ１３のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドである。
【００９６】
配列番号１３の塩基配列は、以下の通りである。前記配列番号１３の塩基配列は、前記配列番号１２の塩基配列において、１５４番目の塩基、１５５番目の塩基、および１５６番目の塩基が、Ａをコードするコドンである場合に対応する。
【００９７】
2019154380.tif 000018
【００９８】
前記（ｆ２）のポリヌクレオチドは、例えば、前記（ｆ１）の１５４番目の塩基、１５５番目の塩基、および１５６番目の塩基が保存され、前記（ｆ１）の塩基配列に対して、８０％以上の同一性を有する塩基配列からなり、前記（ｆ１）のポリヌクレオチドがコードするタンパク質の最大蛍光波長±５ｎｍの範囲に最大蛍光波長を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチドということもできる。前記（ｆ２）において、「同一性」は、例えば、前記（ｆ２）のポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質が、前記最大蛍光波長を有する範囲であればよい。前記（ｆ２）の同一性は、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。前記（ｆ１）において、１５４番目の塩基、１５５番目の塩基、および１５６番目の塩基が、Ａをコードするコドンに置換されている場合、前記（ｆ２）のポリヌクレオチドは、前記（ｆ１）の１５４番目の塩基、１５５番目の塩基、および１５６番目の塩基が保存されていることが好ましい。この場合、前記（ｆ２）のポリヌクレオチドは、例えば、前記（ｆ１）の１５４番目の塩基、１５５番目の塩基、および１５６番目の塩基が保存され、前記（ｆ１）の塩基配列に対して、８０％以上の同一性を有する塩基配列からなり、前記最大蛍光波長を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチドである。
【００９９】
前記（ｆ２）のポリヌクレオチドは、例えば、配列番号１４および１５の塩基配列からなるタンパク質があげられる。配列番号１４の塩基配列は、配列番号１３の塩基配列において、６４番目の塩基、６５番目の塩基、および６６番目の塩基が、Ｇをコードするコドンに置換された塩基配列である。配列番号１５の塩基配列は、配列番号１３の塩基配列において、１０番目の塩基、１１番目の塩基、および１２番目の塩基が、Ｙをコードするコドンに置換された塩基配列である。前記（ｆ２）が配列番号１４および１５の塩基配列からなるポリヌクレオチドである場合、前記（ｆ２）は、それぞれ、Ｙ３およびＹ６のポリヌクレオチドともいう。Ｙ３およびＹ６のポリヌクレオチドは、Ｙ３およびＹ６のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドである。
【０１００】
2019154380.tif 000019
【０１０１】
2019154380.tif 000020
【０１０２】
本発明の新規遺伝子は、下記（ｆ３）〜（ｆ７）のポリヌクレオチドでもよい。
（ｆ３）  前記（ｆ１）のポリヌクレオチドに対して、１５４番目の塩基、１５５番目の塩基、および１５６番目の塩基以外の塩基配列において、１もしくは数個の塩基が欠失、置換、挿入および／または付加された塩基配列からなり、且つ、前記（ｆ１）のポリヌクレオチドがコードするタンパク質の最大蛍光波長±５ｎｍの範囲に最大蛍光波長を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド
（ｆ４）  前記（ｆ１）のポリヌクレオチドに対してストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドに相補的な塩基配列からなり、前記相補的な配列において、前記（ｆ１）の１５４番目の塩基、１５５番目の塩基、および１５６番目の塩基に対応する塩基が保存され、且つ、前記（ｆ１）のポリヌクレオチドがコードするタンパク質の最大蛍光波長±５ｎｍの範囲に最大蛍光波長を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド
（ｆ５）  配列番号１のアミノ酸配列において、５２番目のアミノ酸が、Ｈ以外のアミノ酸であるタンパク質をコードするポリヌクレオチド
（ｆ６）  前記（ｆ５）の５２番目のアミノ酸以外のアミノ酸配列において、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列からなり、且つ、前記（ｆ１）のポリヌクレオチドがコードするタンパク質の最大蛍光波長±５ｎｍの範囲に最大蛍光波長を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド
（ｆ７）  前記（ｆ５）の５２番目のアミノ酸以外のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、且つ、前記（ｆ１）のポリヌクレオチドがコードするタンパク質の最大蛍光波長±５ｎｍの範囲に最大蛍光波長を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド
【０１０３】
前記（ｆ３）のポリヌクレオチドは、例えば、前記（ｆ１）の１５４番目の塩基、１５５番目の塩基、および１５６番目の塩基が保存され、前記（ｆ１）のポリヌクレオチドにおいて、１もしくは数個の塩基が欠失、置換、挿入および／または付加された塩基配列からなり、且つ、前記（ｆ１）のポリヌクレオチドがコードするタンパク質の最大蛍光波長±５ｎｍの範囲に最大蛍光波長を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチドということもできる。前記（ｆ２）において、「１もしくは数個」は、例えば、前記（ｆ２）のポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質が、前記最大蛍光波長を有する範囲であればよい。前記（ｆ２）の「１もしくは数個」は、例えば、１〜１３２個、１〜９９個、１〜６６個、１〜３３個、１〜２６個、１〜２０個、１〜１３個、１〜７個、１個、２個、３個、または４個である。前記（ｆ１）において、１５４番目の塩基、１５５番目の塩基、および１５６番目の塩基が、Ｉをコードするコドンに置換されている場合、前記（ｆ２）のポリヌクレオチドは、前記（ｆ１）の１５４番目の塩基、１５５番目の塩基、および１５６番目の塩基が保存されていることが好ましい。この場合、前記（ｆ２）のポリヌクレオチドは、例えば、前記（ｆ１）の１５４番目の塩基、１５５番目の塩基、および１５６番目の塩基が保存され、前記（ｆ１）の塩基配列において、１もしくは数個の塩基が欠失、置換、挿入および／または付加された塩基配列からなり、前記最大蛍光波長を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチドである。
【０１０４】
前記（ｆ４）において、「ハイブリダイズ可能なポリヌクレオチド」は、例えば、前記（ｆ１）のポリヌクレオチドに対して、完全または部分的に相補的なポリヌクレオチドである。前記ハイブリダイズは、例えば、各種ハイブリダイゼーションアッセイにより検出できる。前記ハイブリダイゼーションアッセイは、特に制限されず、例えば、ザンブルーク（Ｓａｍｂｒｏｏｋ）ら編「モレキュラー・クローニング：ア・ラボラトリーマニュアル第２版（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  ２ｎｄ  Ｅｄ．）」〔（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ  （１９８９）〕等に記載されている方法を採用することもできる。
【０１０５】
前記（ｆ４）において、「ストリンジェントな条件」は、例えば、低ストリンジェントな条件、中ストリンジェントな条件、高ストリンジェントな条件のいずれでもよい。「低ストリンジェントな条件」は、例えば、５×ＳＳＣ、５×デンハルト溶液、０．５％ＳＤＳ、５０％ホルムアミド、３２℃の条件である。「中ストリンジェントな条件」は、例えば、５×ＳＳＣ、５×デンハルト溶液、０．５％ＳＤＳ、５０％ホルムアミド、４２℃の条件である。「高ストリンジェントな条件」は、例えば、５×ＳＳＣ、５×デンハルト溶液、０．５％ＳＤＳ、５０％ホルムアミド、５０℃の条件である。ストリンジェンシーの程度は、当業者であれば、例えば、温度、塩濃度、プローブの濃度および長さ、イオン強度、時間等の条件を適宜選択することで、設定可能である。「ストリンジェントな条件」は、例えば、前述したザンブルーク（Ｓａｍｂｒｏｏｋ）ら編「モレキュラー・クローニング：ア・ラボラトリーマニュアル第２版（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  ２ｎｄ  Ｅｄ．）」〔（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ  （１９８９）〕等に記載の条件を採用することもできる。
【０１０６】
前記（ｆ５）のポリヌクレオチドは、例えば、前記（ｆ５）のポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質が、前記（ｆ１）のポリヌクレオチドがコードするタンパク質の最大蛍光波長±５ｎｍの範囲に最大蛍光波長を有する塩基配列であればよい。前記（ｆ５）のポリヌクレオチドの塩基配列は、例えば、前記配列番号１のアミノ酸配列および５２番目のアミノ酸に基づいて、対応するコドンに置き換えることで設計可能である。前記（ｆ５）のポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質は、例えば、前記本発明の新規タンパク質における（Ｆ１）のタンパク質ということもでき、その説明を援用できる。
【０１０７】
前記（ｆ６）において、アミノ酸配列に関する「１もしくは数個」は、例えば、前記（ｆ６）のポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質が、前記（ｆ１）のポリヌクレオチドがコードするタンパク質の最大蛍光波長±５ｎｍの範囲に最大蛍光波長を有する範囲であればよい。前記（ｆ６）の「１もしくは数個」は、例えば、１〜４３個、１〜３３個、１〜２２個、１〜１１個、１〜９個、１〜７個、１〜５個、１〜３個、１または２個である。前記（ｆ６）のタンパク質は、前記本発明の新規タンパク質における前記（Ｆ２）のタンパク質ということもでき、その説明を援用できる。
【０１０８】
前記（ｆ７）において、アミノ酸配列に関する「同一性」は、例えば、前記（ｆ７）のポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質が、前記（ｆ１）のポリヌクレオチドがコードするタンパク質の最大蛍光波長±５ｎｍの範囲に最大蛍光波長を有する範囲であればよい。前記（ｆ７）の同一性は、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。前記（ｆ７）のタンパク質は、前記本発明の新規タンパク質における前記（Ｆ３）のタンパク質ということもでき、その説明を援用できる。
【０１０９】
前記（ｆ１）のポリヌクレオチドは、例えば、下記（ｆ１’）のポリヌクレオチドでもよい。
（ｆ１’）  配列番号１２の塩基配列において、
１５４番目の塩基、１５５番目の塩基、および１５６番目の塩基が、Ｈ以外のアミノ酸をコードするコドンであり、
４０６番目の塩基、４０７番目の塩基、および４０８番目の塩基が、Ｔ以外のアミノ酸をコードするコドンであるポリヌクレオチド
【０１１０】
前記（ｆ１’）のポリヌクレオチドは、配列番号１２における１５４番目の塩基、１５５番目の塩基、および１５６番目の塩基が、Ｈ以外のアミノ酸をコードするコドンであり、４０６番目の塩基、４０７番目の塩基、および４０８番目の塩基がＴ以外のアミノ酸をコードするコドンである。Ｔ以外のアミノ酸をコードするコドンは、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｖ、Ｗ、またはＹをコードするコドンであり、好ましくは、Ｓ、またはＭをコードするコドンである。
【０１１１】
前記（ｆ１’）のポリヌクレオチドは、例えば、配列番号１６の塩基配列からなるポリヌクレオチドがあげられる。前記（ｆ１’）が配列番号１６の塩基配列からなるポリヌクレオチドである場合、前記（ｆ１’）は、Ｙのポリヌクレオチドともいう。Ｙのポリヌクレオチドは、Ｙのアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドである。
【０１１２】
配列番号１６の塩基配列は、以下の通りである。前記配列番号１６の塩基配列は、前記配列番号１３の塩基配列において、１５４番目の塩基、１５５番目の塩基、および１５６番目の塩基が、Ａをコードするコドンであり、４０６番目の塩基、４０７番目の塩基、および４０８番目の塩基が、Ｓをコードするコドンである場合に対応する。
【０１１３】
2019154380.tif 000021
【０１１４】
前記（ｆ２’）のポリヌクレオチドは、例えば、前記（ｆ１’）の１５４番目の塩基、１５５番目の塩基、および１５６番目の塩基、１６６番目の塩基、１６７番目の塩基、および１６８番目の塩基が保存され、前記（ｆ１’）の塩基配列に対して、８０％以上の同一性を有する塩基配列からなり、前記（ｆ１’）のポリヌクレオチドがコードするタンパク質の最大蛍光波長±５ｎｍの範囲に最大蛍光波長を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチドということもできる。前記（ｆ１’）において、１５４番目の塩基、１５５番目の塩基、および１５６番目の塩基、ならびに１６６番目の塩基、１６７番目の塩基、および１６８番目の塩基が、ＡおよびＳをコードするコドンに置換されている場合、前記（ｆ２’）のポリヌクレオチドは、前記（ｆ１’）の１５４番目の塩基、１５５番目の塩基、および１５６番目の塩基、ならびに１６６番目の塩基、１６７番目の塩基、および１６８番目の塩基が保存されていることが好ましい。この場合、前記（ｆ２’）のポリヌクレオチドは、例えば、前記（ｆ１’）の１５４番目の塩基、１５５番目の塩基、および１５６番目の塩基、ならびに１６６番目の塩基、１６７番目の塩基、および１６８番目の塩基が保存され、前記（ｆ１’）の塩基配列に対して、８０％以上の同一性を有する塩基配列からなり、前記最大蛍光波長を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチドである。
【０１１５】
本発明の新規遺伝子は、下記（ｆ３’）〜（ｆ７’）のポリヌクレオチドでもよい。
（ｆ３’）  前記（ｆ１’）のポリヌクレオチドに対して、１５４番目の塩基、１５５番目の塩基、１５６番目の塩基、１６６番目の塩基、１６７番目の塩基、および１６８番目の塩基以外の塩基配列において、１もしくは数個の塩基が欠失、置換、挿入および／または付加された塩基配列からなり、且つ、前記（ｆ１’）のポリヌクレオチドがコードするタンパク質の最大蛍光波長±５ｎｍの範囲に最大蛍光波長を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド
（ｆ４’）  前記（ｆ１’）のポリヌクレオチドに対してストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドに相補的な塩基配列からなり、前記相補的な配列において、前記（ｆ１’）の１５４番目の塩基、１５５番目の塩基、１５６番目の塩基、１６６番目の塩基、１６７番目の塩基、および１６８番目の塩基に対応する塩基が保存され、且つ、前記（ｆ１’）のポリヌクレオチドがコードするタンパク質の最大蛍光波長±５ｎｍの範囲に最大蛍光波長を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド
（ｆ５’）  配列番号１のアミノ酸配列において、５２番目のアミノ酸が、Ｈ以外のアミノ酸であり、１３６番目のアミノ酸が、Ｔ以外のアミノ酸であるタンパク質をコードするポリヌクレオチド
（ｆ６’）  前記（ｆ５’）の５２番目および１３６番目のアミノ酸以外のアミノ酸配列において、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列からなり、且つ、前記（ｆ１’）のポリヌクレオチドがコードするタンパク質の最大蛍光波長±５ｎｍの範囲に最大蛍光波長を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド
（ｆ７’）  前記（ｆ５’）の５２番目および１３６番目のアミノ酸以外のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、且つ、前記（ｆ１’）のポリヌクレオチドがコードするタンパク質の最大蛍光波長±５ｎｍの範囲に最大蛍光波長を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド
【０１１６】
前記（ｆ１）のポリヌクレオチドは、例えば、下記（ｆ１’’）のポリヌクレオチドでもよい。
（ｆ１’’）  配列番号１２の塩基配列において、
１５４番目の塩基、１５５番目の塩基、および１５６番目の塩基が、Ｈ以外のアミノ酸をコードするコドンであり、
１６６番目の塩基、１６７番目の塩基、および１６８番目の塩基が、Ｙ以外のアミノ酸をコードするコドンであり、
４０６番目の塩基、４０７番目の塩基、および４０８番目の塩基が、Ｔ以外のアミノ酸をコードするコドンであり、
５７４番目の塩基、５７５番目の塩基、および５７６番目の塩基が、Ｒ以外のアミノ酸をコードするコドンであるポリヌクレオチド
【０１１７】
前記（ｆ１’’）のポリヌクレオチドは、配列番号１２における１５４番目の塩基、１５５番目の塩基、および１５６番目の塩基が、Ｈ以外のアミノ酸をコードするコドンであり、１６６番目の塩基、１６７番目の塩基、および１６８番目の塩基が、Ｙ以外のアミノ酸をコードするコドンであり、４０６番目の塩基、４０７番目の塩基、および４０８番目の塩基がＴ以外のアミノ酸をコードするコドンであり、５７４番目の塩基、５７５番目の塩基、および５７６番目の塩基が、Ｒ以外のアミノ酸をコードするコドンである。Ｙ以外のアミノ酸をコードするコドンは、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、またはＷをコードするコドンであり、好ましくは、Ｒ、またはＩをコードするコドンである。Ｒ以外のアミノ酸をコードするコドンは、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、またはＹをコードするコドンであり、好ましくは、Ｉをコードするコドンである。
【０１１８】
前記（ｆ１’’）のポリヌクレオチドは、例えば、配列番号１７の塩基配列からなるポリヌクレオチドがあげられる。前記（ｆ１’’）が配列番号１７の塩基配列からなるポリヌクレオチドである場合、前記（ｆ１’’）は、ＢＧのポリヌクレオチドともいう。ＢＧのポリヌクレオチドは、ＢＧのアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドである。
【０１１９】
配列番号１７の塩基配列は、以下の通りである。前記配列番号１７の塩基配列は、前記配列番号１２の塩基配列において、１５４番目の塩基、１５５番目の塩基、および１５６番目の塩基が、Ｓをコードするコドンであり、１６６番目の塩基、１６７番目の塩基、および１６８番目の塩基が、Ｒをコードするコドンであり、４０６番目の塩基、４０７番目の塩基、および４０８番目の塩基がＭをコードするコドンであり、５７４番目の塩基、５７５番目の塩基、および５７６番目の塩基が、Ｉをコードするコドンである場合に対応する。
【０１２０】
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【０１２１】
前記（ｆ２’’）のポリヌクレオチドは、例えば、前記（ｆ１’’）の１５４番目の塩基、１５５番目の塩基、１５６番目の塩基、１６６番目の塩基、１６７番目の塩基、１６８番目の塩基、４０６番目の塩基、４０７番目の塩基、４０８番目の塩基、５７４番目の塩基、５７５番目の塩基、および５７６番目の塩基が保存され、前記（ｆ１’’）の塩基配列に対して、８０％以上の同一性を有する塩基配列からなり、前記（ｆ１’’）のポリヌクレオチドがコードするタンパク質の最大蛍光波長±５ｎｍの範囲に最大蛍光波長を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチドということもできる。前記（ｆ１’’）において、１５４番目の塩基、１５５番目の塩基、および１５６番目の塩基、１６６番目の塩基、１６７番目の塩基、および１６８番目の塩基、４０６番目の塩基、４０７番目の塩基、および４０８番目の塩基ならびに５７４番目の塩基、５７５番目の塩基、および５７６番目の塩基が、それぞれ、Ｓ、Ｒ、Ｍ、およびＩをコードするコドンに置換されている場合、前記（ｆ２’’）のポリヌクレオチドは、前記（ｆ１’’）の１５４番目の塩基、１５５番目の塩基、１５６番目の塩基、１６６番目の塩基、１６７番目の塩基、および１６８番目の塩基、４０６番目の塩基、４０７番目の塩基、４０８番目の塩基、５７４番目の塩基、５７５番目の塩基、および５７６番目の塩基が保存されていることが好ましい。この場合、前記（ｆ２’’）のポリヌクレオチドは、例えば、前記（ｆ１’’）の１５４番目の塩基、１５５番目の塩基、１５６番目の塩基、１６６番目の塩基、１６７番目の塩基、１６８番目の塩基、４０６番目の塩基、４０７番目の塩基、４０８番目の塩基、５７４番目の塩基、５７５番目の塩基、および５７６番目の塩基が保存され、前記（ｆ１’’）の塩基配列に対して、８０％以上の同一性を有する塩基配列からなり、前記最大蛍光波長を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチドである。
【０１２２】
前記（ｆ２’’）のポリヌクレオチドは、例えば、配列番号１８〜２２の塩基配列からなるタンパク質があげられる。配列番号１８の塩基配列は、配列番号１７の塩基配列において、１０９番目の塩基、１１０番目の塩基、および１１１番目の塩基が、Ｔをコードするコドンに置換され、４５７番目の塩基、４５８番目の塩基、および４５９番目の塩基が、Ｖをコードするコドンに置換された塩基配列である。配列番号１９の塩基配列は、配列番号１７の塩基配列において、８５番目の塩基、８６番目の塩基、および８７番目の塩基が、Ｖをコードするコドンに置換され、４５７番目の塩基、４５８番目の塩基、および４５９番目の塩基が、Ｖをコードするコドンに置換された塩基配列である。配列番号２０の塩基配列は、配列番号１７の塩基配列において、２０５番目の塩基、２０６番目の塩基、および２０７番目の塩基が、Ｍをコードするコドンに置換され、４５７番目の塩基、４５８番目の塩基、および４５９番目の塩基が、Ｖをコードするコドンに置換された塩基配列である。配列番号２１の塩基配列は、配列番号１７の塩基配列において、４５７番目の塩基、４５８番目の塩基、および４５９番目の塩基が、Ｖをコードするコドンに置換され、５１４番目の塩基、５１５番目の塩基、および５１６番目の塩基が、Ｍをコードするコドンに置換された塩基配列である。配列番号２２の塩基配列は、配列番号１７の塩基配列において、８５番目の塩基、８６番目の塩基、および８７番目の塩基が、Ｖをコードするコドンに置換され、１０９番目の塩基、１１０番目の塩基、および１１１番目の塩基が、Ｔをコードするコドンに置換され、４５７番目の塩基、４５８番目の塩基、および４５９番目の塩基が、Ｖをコードするコドンに置換された塩基配列である。前記（ｆ２’’）が配列番号１８〜２２の塩基配列からなるポリヌクレオチドである場合、前記（ｆ２’’）は、それぞれ、ＢＧ１５、ＢＧ１７、ＢＧ１９、ＢＧ２３、およびＢＧ２９のポリヌクレオチドともいう。ＢＧ１５、ＢＧ１７、ＢＧ１９、ＢＧ２３、およびＢＧ２９のポリヌクレオチドは、それぞれ、ＢＧ１５、ＢＧ１７、ＢＧ１９、ＢＧ２３、およびＢＧ２９のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドである。
【０１２３】
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【０１２４】
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【０１２５】
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【０１２６】
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【０１２７】
2019154380.tif 000027
【０１２８】
本発明の新規遺伝子は、下記（ｆ３’’）〜（ｆ７’’）のポリヌクレオチドでもよい。
（ｆ３’’）  前記（ｆ１’’）のポリヌクレオチドに対して、１５４番目の塩基、１５５番目の塩基、１５６番目の塩基、１６６番目の塩基、１６７番目の塩基、１６８番目の塩基、４０６番目の塩基、４０７番目の塩基、４０８番目の塩基、５７４番目の塩基、５７５番目の塩基、および５７６番目の塩基以外の塩基配列において、１もしくは数個の塩基が欠失、置換、挿入および／または付加された塩基配列からなり、且つ、前記（ｆ１’’）のポリヌクレオチドがコードするタンパク質の最大蛍光波長±５ｎｍの範囲に最大蛍光波長を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド
（ｆ４’’）  前記（ｆ１’’）のポリヌクレオチドに対してストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドに相補的な塩基配列からなり、前記相補的な配列において、前記（ｆ１’’）の１５４番目の塩基、１５５番目の塩基、１５６番目の塩基、１６６番目の塩基、１６７番目の塩基、１６８番目の塩基、４０６番目の塩基、４０７番目の塩基、４０８番目の塩基、５７４番目の塩基、５７５番目の塩基、および５７６番目の塩基に対応する塩基が保存され、且つ、前記（ｆ１’’）のポリヌクレオチドがコードするタンパク質の最大蛍光波長±５ｎｍの範囲に最大蛍光波長を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド
（ｆ５’’）  配列番号１のアミノ酸配列において、５２番目のアミノ酸が、Ｈ以外のアミノ酸であり、１３６番目のアミノ酸が、Ｔ以外のアミノ酸であり、５６番目のアミノ酸が、Ｙ以外のアミノ酸であり、１９２番目のアミノ酸が、Ｒ以外のアミノ酸であるタンパク質をコードするポリヌクレオチド
（ｆ６’’）  前記（ｆ５’’）の５２番目、１３６番目、１３６番目および１９２番目のアミノ酸以外のアミノ酸配列において、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列からなり、且つ、前記（ｆ１’’）のポリヌクレオチドがコードするタンパク質の最大蛍光波長±５ｎｍの範囲に最大蛍光波長を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド
（ｆ７’’）  前記（ｆ５’’）の５２番目、１３６番目、１３６番目および１９２番目のアミノ酸以外のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、且つ、前記（ｆ１’’）のポリヌクレオチドがコードするタンパク質の最大蛍光波長±５ｎｍの範囲に最大蛍光波長を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド
【０１２９】
本発明において、前記各種ポリヌクレオチドは、例えば、公知の遺伝子工学的手法または合成手法によって製造できる。
【０１３０】
＜新規タンパク質の発現ベクター＞
本発明の発現ベクターは、前述のように、前記本発明の新規遺伝子を含むことを特徴とする。本発明の発現ベクターによれば、例えば、前記発現ベクターを前記宿主に導入することで、前記本発明の新規タンパク質を容易に製造できる。本発明の発現ベクターは、例えば、前記本発明の新規遺伝子の説明等を援用できる。
【０１３１】
前記発現ベクターは、例えば、前記本発明の新規遺伝子である前記ポリヌクレオチドがコードする新規タンパク質を発現可能なように、機能的に、前記ポリヌクレオチドを含んでいればよく、その他の構成は、特に制限されない。
【０１３２】
前記発現ベクターは、例えば、骨格となるベクター（以下、「基本ベクター」ともいう。）に、前記ポリヌクレオチドを挿入することで作製できる。前記ベクターの種類は、特に制限されず、例えば、前記宿主の種類に応じて、適宜決定できる。前記ベクターは、ウイルスベクターおよび非ウイルスベクターがあげられる。前記ベクターは、例えば、バイナリーベクターが好ましい。植物に形質転換を行う場合、前記ベクターは、Ｔ−ＤＮＡ型バイナリーベクターが好ましい。アグロバクテリウムを使用する方法により、植物に形質転換を行う場合、前記ベクターは、例えば、ｐＢＩ１２１ベクター、ｐＰＺＰ２０２ベクター、ｐＢＩＮＰＬＵＳベクター、ｐＢＩＮ１９ベクター、ｐＢＩＧ２１１３Ｎ、ｐＢＩＧ２１１３ＳＦ、ｐＲＩ１０１ＤＮＡベクター（ＴａＫａＲａ社製）、ｐＲＩ２０１ＤＮＡベクター（ＴａＫａＲａ社製）、ｐＲＩ９０９ＤＮＡベクター（ＴａＫａＲａ社製）、ｐＲＩ９１０ＤＮＡベクター（ＴａＫａＲａ社製）等があげられる。大腸菌等の微生物に形質転換を行う場合、前記ベクターは、例えば、ｐＥＴＤｕｅｔ−１ベクター（ノバジェン社）、ｐＱＥ−８０Ｌベクター（ＱＩＡＧＥＮ社）、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ  ＩＩ  ＳＫベクター、ｐＥＴ１０１／Ｄ−ＴＯＰＯベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製）、ｐＧＥＸ−６Ｐ−１ベクター（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社製）、ｐｃＤＮＡ３．２／Ｖ５−ＧＷ／Ｄ−ＴＯＰＯベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製）、ｐＥＧＦＰベクター、ｐｃＤＮＡ３．１−ｈｙｇｒｏ（−）ベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製）等があげられる。
【０１３３】
前記発現ベクターは、例えば、前記ポリヌクレオチドの発現および前記ポリヌクレオチドがコードする前記本発明の新規タンパク質の発現を調節する、調節配列を有することが好ましい。前記調節配列は、例えば、プロモーター、ターミネーター、エンハンサー、ポリアデニル化シグナル配列、複製起点配列（ｏｒｉ）等があげられる。前記発現ベクターにおいて、前記調節配列の配置は特に制限されない。前記発現ベクターにおいて、前記調節配列は、例えば、前記ポリヌクレオチドの発現およびこれがコードする前記新規タンパク質の発現を、機能的に調節できるように配置されていればよく、公知の方法に基づいて配置できる。前記調節配列は、例えば、前記基本ベクターが予め備える配列を利用してもよいし、前記基本ベクターに、さらに、前記調節配列を挿入してもよいし、前記基本ベクターが備える調節配列を、他の調節配列に置き換えてもよい。
【０１３４】
前記発現ベクターは、例えば、さらに、選択マーカーのコード配列を有してもよい。前記選択マーカーは、例えば、薬剤耐性マーカー、蛍光タンパク質マーカー、酵素マーカー、細胞表面レセプターマーカー等があげられる。
【０１３５】
＜新規タンパク質の製造方法＞
本発明の新規タンパク質の製造方法は、特に制限されず、例えば、遺伝子工学的手法により製造してもよいし、公知の合成方法により製造してもよい。前者の場合、本発明の製造方法は、前記本発明の新規遺伝子を発現させる発現工程を含む。これにより、本発明の新規タンパク質の製造方法は、例えば、前記本発明の新規蛍光タンパク質を容易に製造できる。
【０１３６】
前記本発明の新規遺伝子であるポリヌクレオチドの発現は、例えば、前記本発明の発現ベクターを使用して行ってもよい。
【０１３７】
前記ポリヌクレオチドを発現させる方法は、特に制限されず、公知の方法が採用でき、例えば、無細胞タンパク質合成系を使用してもよいし、宿主を使用してもよい。
【０１３８】
前者の場合、無細胞タンパク質合成系において前記ポリヌクレオチドを発現させることが好ましい。この場合、前記ポリヌクレオチドの発現には、発現ベクターを使用してもよい。前記無細胞タンパク質合成系は、例えば、細胞抽出液と、各種成分を含むバッファーと、目的のポリヌクレオチドが導入された発現ベクターとを用いて、公知の方法により行うことができ、例えば、市販の試薬キットが使用できる。
【０１３９】
後者の場合、例えば、前記ポリヌクレオチドが導入された前記宿主を使用し、前記宿主の培養により、前記宿主において前記ポリヌクレオチドを発現させることが好ましい。このように、例えば、前記ポリヌクレオチドを宿主に導入することで、本発明の新規タンパク質を合成する形質転換体を製造でき、また、前記形質転換体の培養により、本発明の新規タンパク質を合成できる。
【０１４０】
前記宿主は、例えば、微生物、植物、動物、昆虫またはこれらの培養細胞等の非ヒト宿主、単離したヒト細胞またはその培養細胞等があげられ、好ましくは、植物である。前記宿主が植物の場合、前記植物は、例えば、植物体またはその部分であってもよい。前記植物体の部分は、例えば、器官、組織、細胞または栄養繁殖体等があげられる。前記器官は、例えば、花弁、花冠、花、葉、種子、果実、茎、根等があげられる。前記組織は、例えば、前記器官の部分である。前記細胞は、例えば、前記植物体またはその組織から採取した細胞、前記細胞の培養細胞、プロトプラスト、カルス等があげられる。前記植物の由来は、特に制限されず、例えば、アブラナ科、ナス科、イネ科、マメ科、バラ科、ナデシコ科、キク科、リンドウ科、ゴマノハグサ科、クマツヅラ科、サクラソウ科、サボテン科、ラン科等があげられる。前記アブラナ科は、例えば、シロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａ）等のシロイヌナズナ属等があげられる。前記ナス科は、例えば、タバコ（Ｎｉｃｏｔｉａｎａ ｔａｂａｃｕｍ）等のタバコ属、ペチュニア（Ｐｅｔｕｎｉａ×ｈｙｂｒｉｄａ）等のツクバネアサガオ属（Ｐｅｔｕｎｉａ）、ニーレンベルギア（Ｎｉｅｒｅｍｂｅｒｇｉａ ｈｉｐｐｏａｍａｎｉｃａ）等のアマモドキ属、カリブラコア（Ｃａｌｉｂｒａｃｈｏａ ｈｙｂｒｉｄ Ｃｕｌｔｉｖａｒ）等のカリブラコア属等があげられる。前記イネ科は、例えば、トウモロコシ（Ｚｅａ ｍａｙｓ）等のトウモロコシ属、イネ（Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ）等のイネ属等があげられる。前記マメ科は、例えば、ダイズ（Ｇｌｙｃｉｎｅ ｍａｘ）等のダイズ属等があげられる。前記バラ科は、例えば、バラ（Ｒｏｓａ）等のバラ属があげられる。前記ナデシコ科は、例えば、カーネーション（Ｄｉａｎｔｈｕｓ ｃａｒｙｏｐｈｙｌｌｕｓ）等のナデシコ属等があげられる。前記キク科は、例えば、栽培ギク（Ｃｈｒｙｓａｎｔｅｍｕｍ ｍｏｒｉｆｏｌｉｕｍ）等のキク属、ガーベラ（Ｇｅｒｂｅｒａ ｃｖｓ．）等のガーベラ（オオセンボンヤリ）属等があげられる。前記リンドウ科は、例えば、トルコキキョウ（Ｅｕｓｔｏｍａ ｇｒａｎｄｉｆｌｏｒｕｍ）等のユーストマ属等があげられる。前記ゴマノハグサ科は、例えば、トレニア（Ｔｏｒｅｎｉａ ｆｏｕｒｎｉｅｒｉ）トレニア属等があげられる。前記クマツヅラ科は、例えば、バーベナ（Ｇａｒｄｅｎ ｖｅｒｂｅｎａ）等のバーベナ属等があげられる。前記サクラソウ科は、例えば、シクラメン（Ｃｙｃｌａｍｅｎ ｐｅｒｓｉｃｕｍ）等のシクラメン属等があげられる。前記サボテン科は、例えば、アウストロキリンドロプンティア属、アストロフィツム属、エキノカクツス属、エキノセレウス属、エキノプシス属、エピフィラム属、オプンティア属、カニバサボテン属、カマエセレウス属、キリンドロプンティア属、ギムノカリキウム属、シャコバサボテン属、セレニセレウス属、テフロカクツス属、ネオブクスバウミア属、ネオライモンディア属、ノパレア属、フェロカクツス属、マミラリア属、メロカクツス属、リプサリス属、ロセオカクツス属、ロフォフォラ属等があげられる。前記ラン科は、例えば、ファレノプシス（Ｐｈａｌａｅｎｏｐｓｉｓ ｃｖｓ．）等のファレノプシス（コチョウラン）属、シンビジウム（Ｃｙｍｂｉｄｉｕｍ ｃｖｓ．）等のシンビジウム（シュンラン）属、デンドロビウムのノビル系（Ｄｅｎｄｒｏｂｉｕｍ ｎｏｂｉｌｅ ｈｙｂｒｉｄｓ）、デンドロビウムのデンファレ系（Ｄ． ｐｈａｌａｅｎｏｐｓｉｓ ｈｙｂｒｉｄｓ）等のデンドロビウム（セッコク）属、オンシジウム（Ｏｎｃｉｄｉｕｍ ｃｖｓ．）等のオンシジウム属、カトレア（Ｃａｔｔｌｅｙａ ｃｖｓ．）等のカトレア属等があげられる。前記微生物は、例えば、真核生物、原核生物等があげられる。前記原核生物は、例えば、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）等のエッシェリヒア属、シュードモナス・プチダ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｐｕｔｉｄａ）等のシュードモナス属等の細菌があげられる。前記真核生物は、例えば、サッカロミセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）等の酵母等があげられる。前記動物細胞は、例えば、ＣＯＳ細胞、ＣＨＯ細胞等があげられ、前記昆虫細胞は、例えば、Ｓｆ９、Ｓｆ２１等があげられる。
【０１４１】
前記ポリヌクレオチドを前記宿主に導入する方法、すわなち、前記宿主の形質転換の方法は、特に制限されず、例えば、前記発現ベクターを用いて導入する方法でもよいし、前記発現ベクターを用いずに導入する公知の方法でもよい。後者の場合、前記導入方法は、例えば、前記宿主の種類に応じて、適宜設定できる。前記導入方法は、例えば、ヒートショック法、酢酸リチウム法、パーティクルガン等の遺伝子銃による導入法、リン酸カルシウム法、ポリエチレングリコール法、リポソームを用いるリポフェクション法、エレクトロポレーション法、超音波核酸導入法、ＤＥＡＥ−デキストラン法、微小ガラス管等を用いた直接注入法、ハイドロダイナミック法、カチオニックリポソーム法、導入補助剤を用いる方法、アグロバクテリウムを介する方法等があげられる。前記リポソームは、例えば、リポフェクタミンおよびカチオニックリポソーム等があげられ、前記導入補助剤は、例えば、アテロコラーゲン、ナノ粒子およびポリマー等があげられる。前記宿主が植物の場合、前記導入方法は、アグロバクテリウムを介する方法が好ましい。前記本発明の新規遺伝子であるポリヌクレオチドは、例えば、前記本発明の発現ベクターにより前記宿主に導入してもよい。
【０１４２】
前記宿主の培養の方法は、特に制限されず、前記宿主の種類に応じて適宜設定できる。前記宿主の培養に使用する培地は、特に制限されず、前記宿主の種類に応じて適宜決定できる。
【０１４３】
前記宿主の培養に使用する培地の形態は、特に制限されず、例えば、固体培地、液体培地、寒天培地等、従来公知の培地を適宜使用できる。前記培地に含まれる成分は、特に制限されない。前記培地は、例えば、市販の培地を含んでもよい。前記宿主が植物である場合、前記植物の市販培地は、特に制限されず、例えば、Murashige-Skoog（ＭＳ）培地等があげられる。前記宿主が植物細胞である場合、前記植物細胞の市販培地は、特に制限されず、例えば、ハイポネックス培地、ＭＳ培地、Gamborg  B5（Ｂ５）培地、White培地等があげられる。前記宿主が微生物である場合、前記微生物の市販培地は、特に制限されず、例えば、ＬＢ培地、スーパーブロス培地、Ｍ９培地等があげられる。前記培地は、例えば、１種類を単独で使用してもよいし、２種類以上を併用してもよい。前記培地のｐＨは、特に制限されず、例えば、ｐＨ６〜８の範囲、ｐＨ６．５〜７．５の範囲である。
【０１４４】
前記宿主の培養方法は、特に制限されず、例えば、前記宿主の種類に応じて、適宜決定できる。前記宿主が植物の場合、前記培養方法は、例えば、前記植物を土壌栽培、水性栽培する方法等があげられる。前記植物が植物細胞の場合、前記培養方法は、例えば、カルス培養、根の培養、胚珠培養、胚培養等があげられる。
【０１４５】
前記宿主の培養時の培養温度は、特に制限されず、例えば、前記宿主の種類に応じて、適宜決定できる。前記宿主が植物の場合、前記培養温度は、例えば、植物の生育可能温度、生育最適温度等があげられる。具体的には、前記培養温度は、例えば、１５〜４０℃の範囲、３０〜３７℃の範囲等で行うことができる。前記宿主が植物細胞の場合、前記培養温度は、例えば、植物細胞の生育可能温度、生育最適温度等があげられる。具体的には、前記培養温度は、例えば、１５〜４０℃の範囲、３０〜３７℃の範囲等で行うことができる。
【０１４６】
前記宿主は、例えば、好気的条件下で培養してもよく、嫌気的条件下で培養してもよい。前記好気的条件または嫌気的条件は、特に制限されず、従来公知の方法を用いて設定できる。
【０１４７】
＜形質転換体＞
本発明の形質転換体は、前述のように、前記本発明の新規遺伝子を含むことを特徴とする。本発明の形質転換体は、前記本発明の新規遺伝子を含むことが特徴であり、その他の構成および条件は、特に制限されない。本発明の形質転換体は、前記本発明の新規遺伝子を含むため、例えば、蛍光活性を有する。本発明の形質転換体は、例えば、前記本発明の新規タンパク質等の説明を援用できる。
【０１４８】
本発明において、前記形質転換体は、特に制限されず、動物、植物等があげられるが、植物が好ましい。前記形質転換体が動物である場合、前記形質転換体としては、例えば、ヒト大腸がん細胞等のがん細胞があげられる。前記形質転換体が植物である場合、前記植物および植物の由来は、特に制限されず、例えば、前述の説明を援用できる。具体的に、前記植物は、例えば、植物体またはその部分であってもよい。前記植物体の部分は、例えば、器官、組織、細胞または栄養繁殖体等があげられる。前記器官は、例えば、花弁、花冠、花、葉、種子、果実、茎、根等があげられる。前記組織は、例えば、前記器官の部分である。前記細胞は、例えば、前記植物体またはその組織から採取した細胞、前記細胞の培養細胞、プロトプラスト、カルス等があげられる。
【０１４９】
本発明において、前記形質転換体が植物の場合、本発明の形質転換体は、例えば、さらに繁殖させることができる。この際、本発明の形質転換体は、前記繁殖材料として使用できる。前記繁殖材料は、特に制限されず、例えば、前記形質転換体の全体でもよいし、部分でもよい。前記形質転換体が、前記植物体またはその部分の場合、前記繁殖材料は、例えば、種子、果実、シュート、塊茎等の茎、塊根等の根、株、プロトプラスト、カルス等があげられる。
【０１５０】
本発明の形質転換体の繁殖方法は、特に制限されず、公知の方法が採用できる。前記繁殖方法は、例えば、有性生殖および無性生殖のいずれでもよく、好ましくは無性生殖である。前記無性生殖による繁殖は、例えば、栄養繁殖（vegetative  propagation）があげられ、栄養生殖（vegetative  reproduction）ともいう。前記栄養繁殖の方法は、特に制限されず、前記植物体またはその部分の場合、例えば、挿し芽、挿し木による繁殖、器官からの植物個体への細分化、カルスによる増殖等があげられる。前記器官は、例えば、前述したような葉、茎、根等が利用できる。
【０１５１】
前記形質転換体を栄養繁殖することにより得られる繁殖体を、以下、本発明の栄養繁殖体という。本発明の栄養繁殖体は、前記本発明の形質転換体と同一の性質を有することが好ましい。本発明の栄養繁殖体は、前記形質転換体と同様に、特に制限されず、例えば、植物体またはその部分があげられる。
【０１５２】
また、前記形質転換体を有性生殖した場合、例えば、種子、これから生育した生育体等の子孫が得られる。本発明の子孫は、前記本発明の形質転換体と同一の性質を得ることが好ましい。本発明の子孫は、例えば、前記形質転換体と同様に、例えば、植物体またはその部分のいずれでもよい。
【０１５３】
本発明の形質転換体は、例えば、さらに加工してもよい。加工する前記形質転換体の種類は、特に制限されず、例えば、花、葉、枝等があげられる。前記形質転換体の加工品は、特に制限されず、例えば、花、葉、枝等を乾燥させたポプリ、押し花、ドライフラワー、プリザーブドフラワー、樹脂密封品等があげられる。また、本発明の加工品は、例えば、前記形質転換体の栄養繁殖体、器官、組織または細胞の加工品でもよい。
【０１５４】
＜形質転換体の製造方法＞
本発明の形質転換体の製造方法は、前述のように、宿主に、本発明の新規遺伝子を導入する導入工程を含むことを特徴とする。本発明の形質転換体の製造方法は、宿主に、本発明の新規遺伝子を導入する導入工程を含むことを特徴とし、その他の工程および条件は、特に制限されない。本発明の形質転換体の製造方法によれば、例えば、前記本発明の形質転換体を容易に製造できる。
【０１５５】
本発明の形質転換体の製造方法は、さらに、前記宿主に、前記新規遺伝子を発現させる発現工程を含んでいてもよい。
【０１５６】
前記導入工程において、本発明の新規遺伝子を前記宿主に導入する方法は、特に制限されず、例えば、前記本発明の新規タンパク質の製造方法における前記ポリヌクレオチドを前記宿主に導入する方法の説明を援用できる。本発明の製造方法において、前記宿主は、植物が好ましい。
【０１５７】
前記発現工程は、例えば、宿主内で、本発明の新規遺伝子から本発明の新規タンパク質を発現させる工程である。前記発現工程において、前記宿主は、例えば、本発明の新規遺伝子または前記発現ベクターが導入された形質転換体であることが好ましく、前記形質転換体の培養により、前記宿主において本発明の新規タンパク質を発現させることが好ましい。
【０１５８】
前記宿主が植物の場合、本発明の形質転換体の製造方法は、さらに、前記導入工程により得られた形質転換体を繁殖する繁殖工程を含んでもよい。前記繁殖工程における繁殖方法は、例えば、前述の説明を援用できる。また、本発明の形質転換体の製造方法は、繁殖した形質転換体から採種する採種工程を含んでもよく、さらに、前記採種工程で得られた種子から生育体を生育する生育工程を含んでもよい。
【０１５９】
＜新規蛍光タンパク質のスクリーニング方法＞
本発明の新規蛍光タンパク質のスクリーニング方法（以下、「本発明のスクリーニング方法」ともいう。）は、前述のように、前記本発明の新規タンパク質に変異を導入した候補タンパク質から、配列番号１のアミノ酸配列における５２番目のアミノ酸が、Ｈ以外のアミノ酸であり、前記（Ｆ１）のタンパク質の最大蛍光波長±５ｎｍの範囲に最大蛍光波長を有するタンパク質を選抜する選抜工程を含むことを特徴とし、その他の工程および条件は、特に制限されない。本発明のスクリーニング方法によれば、例えば、蛍光活性を有するタンパク質を容易にスクリーニングできる。本発明のスクリーニング方法は、例えば、前記本発明の新規タンパク質、新規遺伝子、発現ベクター、および製造方法等の説明を援用できる。
【０１６０】
前記候補タンパク質は、前記本発明の新規タンパク質に変異を導入したタンパク質である。前記新規タンパク質に導入する変異の種類は、特に制限されず、例えば、アミノ酸の欠失、置換、挿入および／または付加である。具体例として、前記候補タンパク質は、例えば、前記新規タンパク質のアミノ酸配列において、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列からなるタンパク質、または前記新規タンパク質のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列からなるタンパク質があげられる。
【０１６１】
前記候補タンパク質のアミノ酸配列において、「１もしくは数個」は、例えば、１〜４３個、１〜３３個、１〜２２個、１〜１１個、１〜９個、１〜７個、１〜５個、１〜３個、１または２個である。
【０１６２】
前記候補タンパク質のアミノ酸配列において、「同一性」は、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。
【０１６３】
前記候補タンパク質は、前記候補タンパク質のアミノ酸配列に基づき、公知のタンパク質の合成方法により製造してもよいし、遺伝子工学的手法により製造してもよい。後者の場合、本発明のスクリーニング方法は、例えば、前記新規タンパク質をコードする塩基配列、すなわち、本発明の新規遺伝子に変異を導入し、変異ポリヌクレオチドを作製する変異工程、前記変異ポリヌクレオチドから前記候補タンパク質を発現させる発現工程を含む。
【０１６４】
前記変異工程において、前記新規遺伝子に導入する変異は、特に制限されず、例えば、塩基の欠失、置換、挿入および／または付加である。前記新規遺伝子への変異の導入方法は、特に制限されず、例えば、公知のポリヌクレオチドへの変異導入方法により実施でき、具体例として、前記本発明の新規遺伝子のポリヌクレオチドのランダムな断片化とＰＣＲを用いる再結合により、遺伝子を再構築する方法（いわゆる、ＤＮＡシャフリング法）等があげられる。
【０１６５】
前記発現工程において、前記変異ポリヌクレオチドを発現させる方法は、特に制限されず、例えば、前述の本発明の新規タンパク質の製造方法の説明を援用でき、無細胞タンパク質合成系を使用してもよいし、宿主を使用してもよい。前記宿主は、例えば、原核生物、特に、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）を用いることが好ましい。
【０１６６】
本発明のスクリーニング方法は、例えば、前記発現工程において得られた候補タンパク質を精製する工程を含んでもよい。前記精製方法は、特に制限されず、例えば、塩析、各種カラムクロマトグラフィー等があげられる。前記各種精製工程において使用する溶媒は、特に制限されず、例えば、緩衝液が使用できる。本発明のスクリーニング方法は、例えば、前記発現工程において得られた候補タンパク質を、そのまま後述する選抜工程で使用してもよいし、部分的に精製した部分精製候補タンパク質を使用してもよいし、単一に精製した精製候補タンパク質を使用してもよい。
【０１６７】
前記選抜工程は、候補タンパク質から、配列番号１のアミノ酸配列における５２番目のアミノ酸が、Ｈ以外のアミノ酸であり、且つ前記（Ｆ１）のタンパク質の最大蛍光波長±５ｎｍの範囲に最大蛍光波長を有するタンパク質を選抜する工程である。
【０１６８】
前記選抜工程において、選抜された候補タンパク質の５２番目のアミノ酸は、Ｈ以外のアミノ酸である。Ｈ以外のアミノ酸は、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、またはＹであり、好ましくは、Ａ、またはＳである。
【０１６９】
本発明のスクリーニング方法は、例えば、前記選抜工程において、前記本発明の新規タンパク質に変異を導入した候補タンパク質から、配列番号１のアミノ酸配列における５２番目のアミノ酸がＨ以外のアミノ酸であり、１３６番目のアミノ酸がＴ以外のアミノ酸であり、且つ前記（Ｆ１）のタンパク質の最大蛍光波長±５ｎｍの範囲に最大蛍光波長を有するタンパク質を選抜してもよい。
【０１７０】
前記選抜工程において、選抜された候補タンパク質の５２番目のアミノ酸は、Ｈ以外のアミノ酸であり、１３６番目のアミノ酸は、Ｔ以外のアミノ酸である。前記Ｔ以外のアミノ酸は、ＳまたはＭである。
【０１７１】
本発明のスクリーニング方法は、例えば、前記選抜工程において、前記本発明の新規タンパク質に変異を導入した候補タンパク質から、配列番号１のアミノ酸配列における５２番目のアミノ酸がＨ以外のアミノ酸であり、１３６番目のアミノ酸がＴ以外のアミノ酸であり、５６番目のアミノ酸がＹ以外のアミノ酸であり、１９２番目のアミノ酸がＲ以外のアミノ酸であり、且つ前記（Ｆ１）のタンパク質の最大蛍光波長±５ｎｍの範囲に最大蛍光波長を有するタンパク質を選抜してもよい。
【０１７２】
前記選抜工程において、選抜された候補タンパク質の５２番目のアミノ酸は、Ｈ以外のアミノ酸であり、１３６番目のアミノ酸は、Ｔ以外のアミノ酸であり、５６番目のアミノ酸は、Ｙ以外のアミノ酸であり、１９２番目のアミノ酸は、Ｒ以外のアミノ酸である。前記Ｙ以外のアミノ酸は、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、またはＷであり、好ましくは、Ｒ、またはＩである。前記Ｒ以外のアミノ酸は、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、またはＹであり、好ましくは、Ｉである。
【０１７３】
前記選抜工程において、前記選抜された候補タンパク質は、例えば、前記配列番号１のアミノ酸配列における５２番目のアミノ酸、５６番目のアミノ酸、１３６番目のアミノ酸、および１９２番目のアミノ酸の組合せが、下記（ａａ１）〜（ａａ３）のいずれか１つの組合せであり、且つ前記（Ｆ１）のタンパク質の最大蛍光波長±５ｎｍの範囲に最大蛍光波長を有するタンパク質である。
【０１７４】
【表４】
2019154380.tif 000028
【０１７５】
前記選抜工程において、前記候補タンパク質のアミノ酸配列の同定方法は、特に制限されず、例えば、公知のアミノ酸の同定方法により実施できる。前記候補タンパク質を前記変異ポリヌクレオチドから発現させる場合、前記候補タンパク質のアミノ酸配列は、例えば、前記変異ポリヌクレオチドの塩基配列のコドンを対応するアミノ酸配列に置き換えることで同定してもよい。
【０１７６】
前記選抜工程において、前記候補タンパク質の蛍光活性の確認方法は、特に制限されず、公知の蛍光活性の確認方法が使用でき、例えば、公知の光学測定機器を用い、各励起波長の励起光により生じる蛍光のスペクトルを測定することにより確認できる。前記候補タンパク質を前記大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）に発現させている場合、前記蛍光活性の確認方法は、特に制限されず、例えば、ＬＥＤＵＶ（Ｌｉｇｈｔ  Ｅｍｉｔｔｉｎｇ  Ｄｉｏｄｅ  Ｕｌｔｒａ  Ｖｉｏｌｅｔ）光源およびＵＶ透過フィルタを用いて、確認できる。
【０１７７】
本発明のスクリーニング方法は、前記選抜工程において、前記配列番号１のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、蛍光活性を有するタンパク質を選抜することが好ましい。前記「同一性」は、例えば、前記選抜された候補タンパク質が、前記蛍光活性を有する範囲であればよい。前記「同一性」は、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。
【実施例】
【０１７８】
次に、本発明の実施例について説明する。ただし、本発明は、下記実施例により制限されない。
【０１７９】
［実施例１］
本発明の新規タンパク質が蛍光活性を有することを確認した。
【０１８０】
（１）発現ベクターの構築
新規蛍光タンパク質（配列番号５および６）をコードする新規遺伝子（配列番号１６および１７）を含むベクター挿入配列（配列番号２３および２４）を、化学合成により取得した。前記ベクター挿入配列において、かっこで囲んだ下線部の塩基配列が、前記新規蛍光タンパク質をコードする前記新規遺伝子に対応する塩基配列である。これらを、それぞれ、ＹおよびＢＧベクター挿入配列とした。
【０１８１】
2019154380.tif 000029
【０１８２】
2019154380.tif 000030
【０１８３】
前記ＹおよびＢＧベクター挿入配列を、それぞれ、制限酵素ＨｉｎｄIIIおよびＥｃｏＲＩサイトを用いてｐＵＣ１９ベクターに連結した。前記ＹおよびＢＧのベクター挿入配列を挿入したベクターを、それぞれ、ＹおよびＢＧ発現ベクターとした。なお、発現ベクター構築は、Ｇｅｎｅ  Ｓｃｒｉｐｔ社が行った。
【０１８４】
（２）大腸菌への導入
大腸菌ＤＨ５α株に、前記ＹおよびＢＧ発現ベクターを、それぞれ単独で、形質導入した。得られた形質転換体を、抗生物質（カルベニシリン）１００μｇ／ｍＬを含有するＬＢ培地において、３７℃で一晩培養した。そして、培養した菌体を、６０００ｒｐｍ、４℃の条件で、１０分間遠心し、集菌した。得られたペレットを、４０ｍＬのＰＢＳ溶液を用いて、１回洗浄した。前記洗浄後のペレットを、１．６ｍＬのＰＢＳ溶液に懸濁した。つぎに、得られた懸濁液を、超音波ホモジナイザー（ＱＳＯＮＩＣＡ、和研薬株式会社製）を用いて、Ａｍｐ３０％、１分間の条件で、超音波処理した。そして、前記処理後の懸濁液を、１５０００ｒｐｍ、４℃の条件で、１０分間遠心し、得られた上清を回収した。前記上清に、０．２ｍｌ（５０％スラリー）のＴＡＬＯＮ（登録商標）Ｍｅｔａｌ  Ａｆｆｉｎｉｔｙ  Ｒｅｓｉｎ（Ｚ５５０２Ｎ、ＴＡＫＡＲＡ社製）を加え、室温で１時間反応させた。前記反応液を、ＰＢＳ溶液を用いて洗浄した後、３００ｍｍｏｌ／Ｌのイミダゾールを含有する０．５ｍｌのＰＢＳ溶液を加え、タンパク質を溶出させた。そして、アミコンウルトラ−０．５（ＵＦＣ５０１０、Ｍｅｒｃｋ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社製）を用いて、前記反応液のバッファー交換を行い、ＰＢＳ溶液に置換した。前記ＹおよびＢＧ発現ベクターを導入した形質転換体から得られた精製サンプルを、それぞれ、ＹおよびＢＧタンパク質とし、以下の実験に使用した。前記各精製サンプル中のタンパク質濃度は、前記各サンプルを、１０％ＳＤＳ溶液で希釈した後、Ｐｉｅｒｃｅ  ＢＣＡ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ（♯２３２２５、Ｐｉｅｒｃｅ社製）を用いて発色させ、マイクロプレートリーダー（Ｉｎｆｉｎｉｔｅ（登録商標）  Ｍ１０００Ｐｒｏ、ＴＥＣＡＮ社製）を用いて、５６２ｎｍにおける吸光度を測定することにより決定した。
【０１８５】
（３）蛍光活性の測定
前記（２）の精製サンプルを、前記（２）で得られた各サンプルのタンパク質濃度に基づき、前記各サンプル中のタンパク質濃度が、１ｍｇ／ｍＬとなるように希釈した。前記希釈後の各サンプル７０μＬについて、前記マイクロプレートリーダーを用い、下記測定条件で蛍光強度（ＦＩ）を測定した。
【０１８６】
（測定条件）
励起波長：３５０〜６５０ｎｍ（バンド幅：５ｎｍ）
蛍光（検出）波長：３５０〜６５０ｎｍ（バンド幅：５ｎｍ）
レーザー強度（Ｇａｉｎ）：１０５
【０１８７】
図１に、励起波長の全範囲および蛍光波長の全範囲の測定結果を示す。図１において、（Ａ）は、Ｙタンパク質の結果を示し、（Ｂ）は、ＢＧタンパク質の結果を示す。また、図１において、Ｘ軸方向が、励起波長を示し、Ｙ軸方向が、蛍光波長を示し、Ｚ軸方向が、蛍光強度を示す。図１に示すように、ＹおよびＢＧタンパク質は、蛍光活性を示した。
【０１８８】
下記表５に、各サンプルにおける、蛍光強度（ＦＩ）が極大値となる励起波長（Ｅｘ）および蛍光波長（Ｅｍ）の組合せを示す。表５に示すように、Ｙタンパク質は、励起波長が４９０ｎｍ、蛍光波長が５１０ｎｍにおいて蛍光強度が極大値となり、ＢＧタンパク質は、励起波長が４５０ｎｍ、蛍光波長が４８５ｎｍにおいて蛍光強度が極大値となった。ＣｐＹＧＦＰの励起波長および蛍光波長は、それぞれ、５０８ｎｍおよび５１８ｎｍであることが知られている（参考文献：PLoS  One.  2017  Jul  11;12(7):e0181186.）ことから、ＹおよびＢＧタンパク質は、ＣｐＹＧＦＰと比較して、蛍光波長が変化していることがわかった。
【０１８９】
【表５】
2019154380.tif 000031
【０１９０】
これらの結果から、本発明の新規蛍光タンパク質が、蛍光活性を有し、ＣｐＹＧＦＰと比較して、蛍光波長が変化していることがわかった。
【０１９１】
［実施例２］
本発明のスクリーニング方法により、新規蛍光タンパク質をスクリーニングできることを確認した。
【０１９２】
（１）発現ベクターの構築
ＤＮＡシャフリング法を用いて、変異ポリヌクレオチドを作製し、前記変異ポリヌクレオチドをベクターに連結して、変異ポリヌクレオチド発現ベクターを構築した。具体的には、以下のようにして行った。まず、Ｙのポリヌクレオチド（配列番号１６）およびＢＧのポリヌクレオチド（配列番号１７）を、以下のプライマーセットを用いて、１ｓｔＰＣＲ（Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ｃｈａｉｎ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ）により増幅し、１ｓｔＰＣＲ産物を得た。ＰＣＲ反応液は、ＴａＫａＲａ  ＥＸ  Ｔａｑ（登録商標）（ＴＡＫＡＲＡ社製）のキットを用い、説明書に従って調製した。
【０１９３】
プライマーセット
プライマー配列１（配列番号２５）
5'-AATAAGCTTGATGCATCATCATCATCATC-3'
プライマー配列２（配列番号２６）
5'-GTACGGCCGACTAGTAGGCC-3'
【０１９４】
前記１ｓｔＰＣＲ産物１．９μｇを、デオキシリボヌクレアーゼ（ｄｅｏｘｙｒｉｂｏｎｕｃｌｅａｓｅ、ＤＮａｓｅ）が入った以下の組成の緩衝液に懸濁し、２５℃で２０分間反応させ、さらに、９０℃で１０分間反応させることにより、ＤＮＡの断片化を行った。
【０１９５】
［緩衝液の組成］
総量                                ４０μＬ
ＤＮａｓｅI（ＴａＫａＲａ  社製）  ０．０５Ｕ
（ＹのポリヌクレオチドのＰＣＲ産物）
０．０２５Ｕ
（ＢＧのポリヌクレオチドのＰＣＲ産物）
Ｔｒｉｓ−Ｈｃｌ                    ５０ｍｍｏｌ／Ｌ
ＭｎＣｌ２                          １０ｍｍｏｌ／Ｌ
ｐＨ７．４
【０１９６】
断片化されたＤＮＡそれぞれを、アガロースゲル電気泳動およびゲル抽出により精製した。そして、得られた精製物を、液中濃度が１０〜３０μｇ／μＬとなるように前記ＰＣＲ反応液に添加し、２ｎｄＰＣＲにより増幅し、多数の２ｎｄＰＣＲ産物を得た。なお、２ｎｄＰＣＲにおいては、前記プライマーセットを用いなかった。そして、前記多数の２ｎｄＰＣＲ産物の５０分の１の量を、それぞれ、前記ＰＣＲ反応液に添加し、前記プライマーセットを用いて、３ｒｄＰＣＲにより増幅し、変異ポリヌクレオチドを得た。前記変異ポリヌクレオチドを、前記制限酵素を用いて切断し、前記制限酵素で切断したｐＥＧＦＰベクター（ｃｌｏｎｅｔｅｃ社製）に連結した。前記変異ポリヌクレオチドを挿入したベクターを、変異ポリヌクレオチド発現ベクターとした。このようにして、多数の変異ポリヌクレオチド発現ベクターを得た。
【０１９７】
（２）大腸菌への導入
大腸菌ＤＨ５α株に、前記変異ポリヌクレオチド発現ベクターを、それぞれ単独で、形質導入した。得られた形質転換体を、抗生物質（カルベニシリン）１００μｇ／ｍＬを含有するＬＢ培地を用いて、約５０００〜１００００コロニーが生えるまで３７℃で一晩（１８時間）培養した。
【０１９８】
（３）蛍光活性の確認
そして、培養した菌体を集菌し、光源として、蛍光励起用４２０ｎｍＬＥＤハンディライト（ＬＥＤ４２０−３Ｗ、オプトコード株式会社製）、蛍光励起用４７０ｎｍＬＥＤハンディライト（ＬＥＤ４７０−３Ｗ、オプトコード株式会社製）、紫外線吸収フィルタとして、ＳＣ−４８（４９０２５２００６７６５４、富士フィルム社製）を用いて、前記菌体の蛍光活性を確認した。蛍光活性が確認できた前記菌体について、プラスミドを精製し、本実施例２（１）および（２）の操作を、３回繰り返した後に、同様にして、菌体の蛍光活性を確認した。
【０１９９】
（４）大腸菌のシーケンス
前記（３）で蛍光活性が確認できた菌体のコロニーを収集し、プラスミドを精製し、以下の条件でダイレクトシーケンスに供した。その結果、蛍光活性が確認できた前記菌体は、前記本発明の新規遺伝子（配列番号１３〜１５および１８〜２２）を有していることが確認できた。これらの結果から、本発明のスクリーニング方法により、本発明の新規蛍光タンパク質をスクリーニングできることがわかった。
【０２００】
［ダイレクトシーケンスの条件］
シーケンサー          ABI  3130xl（Applied  Biosystems社製）
シーケンス試薬        BigDye  Terminator  V1-1  cycle  sequencing  kit（Applied  Biosystems社製）
シーケンスプライマー
プライマー配列１（配列番号２７）
5'-ATGCTTCCGGCTCGTATGTTG-3'
プライマー配列２（配列番号２８）
5'-GTACGGCCGACTAGTAGGCC-3'
【０２０１】
［実施例３］
本発明の新規タンパク質が蛍光活性を有することを確認した。なお、実験条件、実験方法等の記載は、特に記載がない限り、前記実施例１と同様とした。
【０２０２】
（１）発現ベクターの構築
新規蛍光タンパク質（配列番号２〜４および７〜１１）をコードする新規遺伝子（配列番号１３〜１５および１８〜２２）のＮ末端に、Ｈｉｓタグ配列を付加した配列をそれぞれ含むベクター挿入配列（それぞれ、配列番号２９〜３６）は、それぞれ化学合成により取得した。前記ベクター挿入配列において、かっこで囲んだ塩基配列が、前記新規蛍光タンパク質をコードする前記新規遺伝子に対応する塩基配列であり、かっこで囲んだ外における下線部の塩基配列が、Ｈｉｓタグ配列である。前記ベクター挿入配列を、それぞれ、Ｙ１３、Ｙ３、Ｙ６、ＢＧ１５、ＢＧ１７、ＢＧ１９、ＢＧ２３、およびＢＧ２９ベクター挿入配列とした。
【０２０３】
2019154380.tif 000032
【０２０４】
2019154380.tif 000033
【０２０５】
2019154380.tif 000034
【０２０６】
2019154380.tif 000035
【０２０７】
2019154380.tif 000036
【０２０８】
2019154380.tif 000037
【０２０９】
2019154380.tif 000038
【０２１０】
2019154380.tif 000039
【０２１１】
前記ベクター挿入配列を、それぞれ、前記制限酵素を用いて切断し、前記制限酵素で切断した前記ｐＥＧＦＰベクターに連結した。前記ベクター挿入配列を挿入したベクターを、それぞれ、Ｙ１３、Ｙ３、Ｙ６、ＢＧ１５、ＢＧ１７、ＢＧ１９、ＢＧ２３、およびＢＧ２９発現ベクターとした。
【０２１２】
（２）大腸菌への導入
下記に示す実験条件以外は、前記実施例１（２）と同様にして、前記発現ベクターを、前記大腸菌ＤＨ５α株に導入し、前記形質転換体から得られた精製サンプルを、それぞれ、Ｙ１３、Ｙ３、Ｙ６、ＢＧ１５、ＢＧ１７、ＢＧ１９、ＢＧ２３、およびＢＧ２９タンパク質とした。
【０２１３】
（３）蛍光活性の測定
前記精製サンプルについて、前記実施例１と同様にして、蛍光強度（ＦＩ）を測定した。
【０２１４】
図２に、励起波長の全範囲および蛍光波長の全範囲の測定結果を示す。図２において、（Ａ）〜（Ｈ）は、それぞれ、Ｙ３、Ｙ６、Ｙ１３、ＢＧ１５、ＢＧ１７、ＢＧ１９、ＢＧ２３、およびＢＧ２９タンパク質の結果を示す。また、図２において、Ｘ軸方向が、励起波長を示し、Ｙ軸方向が、蛍光波長を示し、Ｚ軸方向が、蛍光強度を示す。図中の数字は、蛍光強度（ＦＩ）が極大値となる励起波長（Ｅｘ）および蛍光波長（Ｅｍ）の組合せを示す。図２に示すように、Ｙ３、Ｙ６、Ｙ１３、ＢＧ１５、ＢＧ１７、ＢＧ１９、ＢＧ２３、およびＢＧ２９タンパク質は、蛍光活性を示した。
【０２１５】
図３に、各タンパク質についての、前記極大値における蛍光強度（ＦＩ）を示す。図３において、縦軸が、蛍光強度（ＦＩ）の相対値を示し、横軸が、各タンパク質を示し、エラーバーは標準偏差（ＳＤ）を示す。図３において、（Ａ）は、Ｙ６タンパク質の結果を１とした場合における、Ｙ３、Ｙ６、およびＹ１３タンパク質の蛍光強度の相対値を示し、（Ｂ）は、ＢＧ２３タンパク質の結果を１とした場合における、ＢＧ１５、ＢＧ１７、ＢＧ１９、ＢＧ２３、およびＢＧ２９タンパク質の蛍光強度の相対値を示す。図２および３に示すように、Ｙ３タンパク質は、励起波長が４９０ｎｍ、蛍光波長が５１０ｎｍにおいて蛍光強度が極大値となり、Ｙ６タンパク質は、励起波長が４９０ｎｍ、蛍光波長が５１０ｎｍにおいて蛍光強度が極大値となり、Ｙ１３タンパク質は、励起波長が４９０ｎｍ、蛍光波長が５１０ｎｍにおいて蛍光強度が極大値となり、ＢＧ１５タンパク質は、励起波長が４４０ｎｍ、蛍光波長が４９０ｎｍにおいて蛍光強度が極大値となり、ＢＧ１７タンパク質は、励起波長が４４５ｎｍ、蛍光波長が４９０ｎｍにおいて蛍光強度が極大値となり、ＢＧ１９タンパク質は、励起波長が４４０ｎｍ、蛍光波長が４９０ｎｍにおいて蛍光強度が極大値となり、ＢＧ２３タンパク質は、励起波長が４４０ｎｍ、蛍光波長が４９０ｎｍにおいて蛍光強度が極大値となり、ＢＧ２９タンパク質は、励起波長が４４５ｎｍ、蛍光波長が４９０ｎｍにおいて蛍光強度が極大値となり、前記極大値において、強い蛍光活性を示した。ＣｐＹＧＦＰの励起波長および蛍光波長は、それぞれ、５０８ｎｍおよび５１８ｎｍであることが知られていることから、ＹおよびＢＧタンパク質は、ＣｐＹＧＦＰと比較して、蛍光波長が変化し、強い蛍光活性を示すことがわかった。
【０２１６】
以上、実施形態および実施例を参照して本発明を説明したが、本発明は、上記実施形態および実施例に限定されるものではない。本発明の構成や詳細には、本発明のスコープ内で当業者が理解しうる様々な変更をできる。
【産業上の利用可能性】
【０２１７】
本発明によれば、新規な蛍光タンパク質を提供できる。このため、本発明は、例えば、生命科学分野、医療分野、農芸分野等の分野において、極めて有用な技術といえる。
【０２１８】
上記の実施形態の一部または全部は、以下の付記のようにも記載しうるが、以下には限定されない。
（付記１）
下記（Ｆ１）または（Ｆ２）のタンパク質であることを特徴とする、新規タンパク質。
（Ｆ１）  配列番号１のアミノ酸配列において、
５２番目のアミノ酸がＨ以外のアミノ酸であるアミノ酸配列からなるタンパク質
（Ｆ２）  前記（Ｆ１）のアミノ酸配列に対して、５２番目のアミノ酸を含む同一性が８０％以上のアミノ酸配列からなり、且つ、前記（Ｆ１）のタンパク質の最大蛍光波長±５ｎｍの範囲に最大蛍光波長を有するタンパク質
（付記２）
前記（Ｆ１）のタンパク質が、下記（Ｆ１’）のタンパク質であり、前記（Ｆ２）のタンパク質が、下記（Ｆ２’）のタンパク質である、付記１記載の新規タンパク質。
（Ｆ１’）  配列番号１のアミノ酸配列において、
５２番目のアミノ酸がＨ以外のアミノ酸であり、
１３６番目のアミノ酸がＴ以外のアミノ酸であるアミノ酸配列からなるタンパク質
（Ｆ２’）  前記（Ｆ１’）のアミノ酸配列に対して、５２番目および１３６番目のアミノ酸を含む同一性が８０％以上のアミノ酸配列からなり、且つ、前記（Ｆ１）のタンパク質の最大蛍光波長±５ｎｍの範囲に最大蛍光波長を有するタンパク質
（付記３）
前記（Ｆ１）のタンパク質が、下記（Ｆ１’’）のタンパク質であり、前記（Ｆ２）のタンパク質が、下記（Ｆ２’’）のタンパク質である、付記１または２記載の新規タンパク質。
（Ｆ１’’）  配列番号１のアミノ酸配列において、
５２番目のアミノ酸がＨ以外のアミノ酸であり、
５６番目のアミノ酸がＹ以外のアミノ酸であり、
１３６番目のアミノ酸がＴ以外のアミノ酸であり、
１９２番目のアミノ酸がＲ以外のアミノ酸であるアミノ酸配列からなるタンパク質
（Ｆ２’’）  前記（Ｆ１’’）のアミノ酸配列に対して、５２番目、５６番目、１３６番目、および１９２番目のアミノ酸を含む同一性が８０％以上のアミノ酸配列からなり、且つ、前記（Ｆ１）のタンパク質の最大蛍光波長±５ｎｍの範囲に最大蛍光波長を有するタンパク質
（付記４）
前記配列番号１のアミノ酸配列において、
５２番目のアミノ酸が、Ａ、またはＳであり、
５６番目のアミノ酸が、Ｒ、またはＹであり、
１３６番目のアミノ酸が、Ｍ、Ｓ、またはＴであり、
１９２番目のアミノ酸が、Ｒ、またはＩである、付記１から３のいずれかに記載の新規タンパク質。
（付記５）
５２番目のアミノ酸、５６番目のアミノ酸、１３６番目のアミノ酸、および１９２番目のアミノ酸の組合せが、下記（ａａ１）〜（ａａ３）のいずれか１つのアミノ酸の組合せである、付記１から４のいずれかに記載の新規タンパク質。
【表１】
2019154380.tif 000040
（付記６）
４番目のアミノ酸が、Ｙに置換された、付記１から５のいずれかに記載の新規タンパク質。
（付記７）
２２番目のアミノ酸が、Ｇに置換された、付記１から６のいずれかに記載の新規タンパク質。
（付記８）
２９番目のアミノ酸が、Ｖに置換された、付記１から７のいずれかに記載の新規タンパク質。
（付記９）
３７番目のアミノ酸が、Ｔに置換された、付記１から８のいずれかに記載の新規タンパク質。
（付記１０）
６９番目のアミノ酸が、Ｍに置換された、付記１から９のいずれかに記載の新規タンパク質。
（付記１１）
１５３番目のアミノ酸が、Ｖに置換された、付記１から１０のいずれかに記載の新規タンパク質。
（付記１２）
１７２番目のアミノ酸が、Ｍに置換された、付記１から１１のいずれかに記載の新規タンパク質。
（付記１３）
前記（Ｆ１）のタンパク質が、配列番号２〜１１からなる群から選択された少なくとも１つのアミノ酸配列からなるタンパク質である、付記１から１２のいずれかに記載の新規タンパク質。
（付記１４）
下記（ｆ１）または（ｆ２）のポリヌクレオチドであることを特徴とする、新規遺伝子。
（ｆ１）  配列番号１２の塩基配列において、
１５４番目の塩基、１５５番目の塩基、および１５６番目の塩基が、Ｈ以外のアミノ酸をコードするコドンであるポリヌクレオチド
（ｆ２）  前記（ｆ１）のポリヌクレオチドに対して、１５４番目の塩基、１５５番目の塩基、および１５６番目の塩基を含む同一性が８０％以上の塩基配列からなり、且つ、前記（ｆ１）のポリヌクレオチドがコードするタンパク質の最大蛍光波長±５ｎｍの範囲に最大蛍光波長を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド
（付記１５）
前記（ｆ１）のポリヌクレオチドが、下記（ｆ１’）のポリヌクレオチドであり、前記（ｆ２）のポリヌクレオチドが、下記（ｆ２’）のポリヌクレオチドである、付記１４記載の新規遺伝子。
（ｆ１’）  配列番号１２の塩基配列において、
１５４番目の塩基、１５５番目の塩基、および１５６番目の塩基が、Ｈ以外のアミノ酸をコードするコドンであり、
４０６番目の塩基、４０７番目の塩基、および４０８番目の塩基が、Ｔ以外のアミノ酸をコードするコドンであるポリヌクレオチド
（ｆ２’）  前記（ｆ１’）のポリヌクレオチドに対して、１５４番目の塩基、１５５番目の塩基、および１５６番目の塩基、４０６番目の塩基、４０７番目の塩基、および４０８番目の塩基を含む同一性が８０％以上の塩基配列からなり、且つ、前記（ｆ１）のポリヌクレオチドがコードするタンパク質の最大蛍光波長±５ｎｍの範囲に最大蛍光波長を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド
（付記１６）
前記（ｆ１）のポリヌクレオチドが、下記（ｆ１’’）のポリヌクレオチドであり、前記（ｆ２）のポリヌクレオチドが、下記（ｆ２’’）のポリヌクレオチドである、付記１４または１５記載の新規遺伝子。
（ｆ１’’）  配列番号１２の塩基配列において、
１５４番目の塩基、１５５番目の塩基、および１５６番目の塩基が、Ｈ以外のアミノ酸をコードするコドンであり、
１６６番目の塩基、１６７番目の塩基、および１６８番目の塩基が、Ｙ以外のアミノ酸をコードするコドンであり、
４０６番目の塩基、４０７番目の塩基、および４０８番目の塩基が、Ｔ以外のアミノ酸をコードするコドンであり、
５７４番目の塩基、５７５番目の塩基、および５７６番目の塩基が、Ｒ以外のアミノ酸をコードするコドンであるポリヌクレオチド
（ｆ２’’）  前記（ｆ１’’）のポリヌクレオチドに対して、１５４番目の塩基、１５５番目の塩基、１５６番目の塩基、１６６番目の塩基、１６７番目の塩基、１６８番目の塩基、４０６番目の塩基、４０７番目の塩基、４０８番目の塩基、５７４番目の塩基、５７５番目の塩基、および５７６番目の塩基を含む同一性が８０％以上の塩基配列からなり、且つ、前記（ｆ１）のポリヌクレオチドがコードするタンパク質の最大蛍光波長±５ｎｍの範囲に最大蛍光波長を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド
（付記１７）
前記配列番号１２の塩基配列において、
１５４番目の塩基、１５５番目の塩基、および１５６番目の塩基が、Ｓ、またはＡをコードするコドンであり、
１６６番目の塩基、１６７番目の塩基、および１６８番目の塩基が、Ｒ、またはＹをコードするコドンであり、
４０６番目の塩基、４０７番目の塩基、および４０８番目の塩基が、Ｍ、Ｓ、またはＴをコードするコドンであり、
５７４番目の塩基、５７５番目の塩基、および５７６番目の塩基が、Ｉ、またはＲをコードするコドンである、付記１４から１６のいずれかに記載の新規遺伝子。
（付記１８）
１５４番目の塩基、１５５番目の塩基、および１５６番目の塩基のコドン、１６６番目の塩基、１６７番目の塩基、および１６８番目の塩基のコドン、４０６番目の塩基、４０７番目の塩基、および４０８番目の塩基のコドン、ならびに５７４番目の塩基、５７５番目の塩基、および５７６番目の塩基のコドンの組合せが、下記（ａａ１’）〜（ａａ３’）のいずれか１つのアミノ酸の組合せをコードするコドンの組合せである、付記１４から１７のいずれかに記載の新規遺伝子。
【表２】
2019154380.tif 000041
（付記１９）
１５４番目の塩基、１５５番目の塩基、および１５６番目の塩基のコドン、１６６番目の塩基、１６７番目の塩基、および１６８番目の塩基のコドン、４０６番目の塩基、４０７番目の塩基、および４０８番目の塩基のコドン、ならびに５７４番目の塩基、５７５番目の塩基、および５７６番目の塩基のコドンが、下記（ｎ１）〜（ｎ４）のいずれか１つの組合せである、付記１４から１８のいずれかに記載の新規遺伝子。
【表３】
2019154380.tif 000042
（付記２０）
１０番目の塩基、１１番目の塩基、および１２番目の塩基が、Ｙをコードするコドンに置換された、付記１４から１９のいずれかに記載の新規遺伝子。
（付記２１）
６４番目の塩基、６５番目の塩基、および６６番目の塩基が、Ｇをコードするコドンに置換された、付記１４から２０のいずれかに記載の新規遺伝子。
（付記２２）
８５番目の塩基、８６番目の塩基、および８７番目の塩基が、Ｖをコードするコドンに置換された、付記１４から２１のいずれかに記載の新規遺伝子。
（付記２３）
１０９番目の塩基、１１０番目の塩基、および１１１番目の塩基が、Ｔをコードするコドンに置換された、付記１４から２２のいずれかに記載の新規遺伝子。
（付記２４）
２０５番目の塩基、２０６番目の塩基、および２０７番目の塩基が、Ｍをコードするコドンに置換された、付記１４から２３のいずれかに記載の新規遺伝子。
（付記２５）
４５７番目の塩基、４５８番目の塩基、および４５９番目の塩基が、Ｖをコードするコドンに置換された、付記１４から２４のいずれかに記載の新規遺伝子。
（付記２６）
５１４番目の塩基、５１５番目の塩基、および５１６番目の塩基が、Ｍをコードするコドンに置換された、付記１４から２５のいずれかに記載の新規遺伝子。
（付記２７）
前記（ｆ１）のポリヌクレオチドが、配列番号１３〜２２からなる群から選択された少なくとも１つの塩基配列からなるポリヌクレオチドである、付記１４から２６のいずれかに記載の新規遺伝子。
（付記２８）
付記１４から２７のいずれかに記載の新規遺伝子を含むことを特徴とする、発現ベクター。
（付記２９）
付記１４から２７のいずれかに記載の新規遺伝子を含むことを特徴とする、形質転換体。
（付記３０）
前記形質転換体が、植物である、付記２９記載の形質転換体。
（付記３１）
宿主に、付記１４から２７のいずれかに記載の新規遺伝子を導入する導入工程を含むことを特徴とする、形質転換体の製造方法。
（付記３２）
さらに、前記宿主に、前記新規遺伝子を発現させる発現工程を含む、付記３１記載の形質転換体の製造方法。
（付記３３）
前記宿主が、植物である、付記３１または３２記載の形質転換体の製造方法。
（付記３４）
付記１から１２のいずれかに記載の新規タンパク質に変異を導入した候補タンパク質から、配列番号１のアミノ酸配列における５２番目のアミノ酸がＨ以外のアミノ酸であり、且つ前記（Ｆ１）のタンパク質の最大蛍光波長±５ｎｍの範囲に最大蛍光波長を有するタンパク質を選抜する選抜工程を含むことを特徴とする、新規蛍光タンパク質のスクリーニング方法。
（付記３５）
付記１から１２のいずれかに記載の新規タンパク質に変異を導入した候補タンパク質から、配列番号１のアミノ酸配列における５２番目のアミノ酸がＨ以外のアミノ酸であり、１３６番目のアミノ酸がＴ以外のアミノ酸であり、且つ前記（Ｆ１）のタンパク質の最大蛍光波長±５ｎｍの範囲に最大蛍光波長を有するタンパク質を選抜する、付記３４記載のスクリーニング方法。
（付記３６）
付記１から１２のいずれかに記載の新規タンパク質に変異を導入した候補タンパク質から、配列番号１のアミノ酸配列における５２番目のアミノ酸がＨ以外のアミノ酸であり、１３６番目のアミノ酸がＴ以外のアミノ酸であり、５６番目のアミノ酸がＹ以外のアミノ酸であり、１９２番目のアミノ酸がＲ以外のアミノ酸であり、且つ前記（Ｆ１）のタンパク質の最大蛍光波長±５ｎｍの範囲に最大蛍光波長を有するタンパク質を選抜する、付記３４または３５記載のスクリーニング方法。
（付記３７）
前記選抜工程において、
前記配列番号１のアミノ酸配列における５２番目のアミノ酸が、Ｓ、またはＡであり、
５６番目のアミノ酸が、Ｒ、またはＹであり、
１３６番目のアミノ酸が、Ｍ、Ｓ、またはＴであり、
１９２番目のアミノ酸が、Ｉ、またはＲであり、且つ前記（Ｆ１）のタンパク質の最大蛍光波長±５ｎｍの範囲に最大蛍光波長を有するタンパク質を選抜する、付記３４から３６のいずれかに記載のスクリーニング方法。
（付記３８）
前記選抜工程において、
前記配列番号１のアミノ酸配列における、５２番目のアミノ酸、５６番目のアミノ酸、１３６番目のアミノ酸、および１９２番目のアミノ酸の組合せが、下記（ａａ１）〜（ａａ３）のいずれか１つの組合せであり、且つ前記（Ｆ１）のタンパク質のタンパク質の最大蛍光波長±５ｎｍの範囲に最大蛍光波長を有するタンパク質を選抜する、付記３４から３７のいずれかに記載のスクリーニング方法。
【表４】
2019154380.tif 000043
（付記３９）
付記１４から２７のいずれかに記載の新規遺伝子に変異を導入した変異ポリヌクレオチドがコードする候補タンパク質から、配列番号１のアミノ酸配列における５２番目のアミノ酸がＨ以外のアミノ酸であり、且つ前記（Ｆ１）のタンパク質の最大蛍光波長±５ｎｍの範囲に最大蛍光波長を有するタンパク質を選抜する、付記３４から３８のいずれかに記載のスクリーニング方法。
（付記４０）
付記１４から２７のいずれかに記載の新規遺伝子に変異を導入した変異ポリヌクレオチドがコードする候補タンパク質から、配列番号１のアミノ酸配列における５２番目のアミノ酸がＨ以外のアミノ酸であり、１３６番目のアミノ酸がＴ以外のアミノ酸であり、且つ前記（Ｆ１）のタンパク質の最大蛍光波長±５ｎｍの範囲に最大蛍光波長を有するタンパク質を選抜する、付記３４から３９のいずれかに記載のスクリーニング方法。
（付記４１）
付記１４から２７のいずれかに記載の新規遺伝子に変異を導入した変異ポリヌクレオチドがコードする候補タンパク質から、配列番号１のアミノ酸配列における５２番目のアミノ酸がＨ以外のアミノ酸であり、１３６番目のアミノ酸がＴ以外のアミノ酸であり、５６番目のアミノ酸がＹ以外のアミノ酸であり、１９２番目のアミノ酸がＲ以外のアミノ酸であり、且つ前記（Ｆ１）のタンパク質の最大蛍光波長±５ｎｍの範囲に最大蛍光波長を有するタンパク質を選抜する、付記３４から４０のいずれかに記載のスクリーニング方法。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【配列表】
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