(57)【要約】【課題】本発明の抗チューブリン化合物または他の公知のチューブリン阻害剤と組み合わせてＢＲＡＦ阻害剤（例えばベムラフェニブ）および／またはＭＥＫ阻害剤（例えばトラメチニブ、ＲＯ５０６８７６０）を含む、癌を処置するための薬学的組成物、ならびに黒色腫、薬物耐性癌などの癌および癌転移を処置するためにそのような組成物を提供すること。【解決手段】１つの実施形態では、本発明は、ＢＲＡＦ阻害剤またはＭＥＫ阻害剤のうちの少なくとも１つと組み合わせたチューブリン阻害剤および薬学的に許容され得る担体を含む薬学的組成物に関する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
本明細書に記載の発明。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、本発明の抗チューブリン化合物または他の公知のチューブリン阻害剤と組み合わせて、ＢＲＡＦ阻害剤（例えばベムラフェニブ）および／またはＭＥＫ阻害剤（例えばトラメチニブ、ＲＯ５０６８７６０）を含む、癌を処置するための薬学的組成物、ならびに黒色腫、薬物耐性癌などの癌および癌転移を処置するためにそのような組成物を使用することに関する。
【背景技術】
【０００２】
癌は、米国で２番目に多い死亡原因であり、唯一心臓病だけがこれを上回る。米国では、癌は死亡の４例につき１例を占める。１９９６−２００３年に診断されたすべての癌患者についての５年相対生存率は、１９７５−１９７７年の５０％から増加して、６６％である（Ｃａｎｃｅｒ  Ｆａｃｔｓ  ＆  Ｆｉｇｕｒｅｓ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｏｃｉｅｔｙ：Ａｔｌａｎｔａ，ＧＡ（２００８））。新たな癌症例の割合は、２０００年から２００９年までの間に男性では年に平均０．６％減少し、女性では同じ割合にとどまった。２０００年から２００９年までに、すべての癌を合わせた癌による死亡率は、男性では年に平均１．８％、女性では年に１．４％減少した。この生存率の改善は、より早い段階での診断の進歩および処置の改善を反映している。毒性が低くより効果が高い抗癌剤の発見は、癌研究の第一目標である。
【０００３】
微小管は、αβチューブリンヘテロ二量体から成る細胞骨格フィラメントであり、形態維持、小胞輸送、細胞運動性および細胞分裂を含む広範囲の細胞機能に関与する。チューブリンは微小管の主要な構造成分であり、様々な極めて成功を収めた抗癌薬にとっての十分に実証された標的である。細胞中の微小管−チューブリン平衡を妨げることができる化合物は癌の処置において有効である。細胞中の微小管−チューブリン平衡を妨げることができるタキソールおよびビンブラスチンのような抗癌薬は、癌化学療法において広く使用されている。
残念ながら、臨床で使用される微小管相互作用性抗癌薬は２つの重要な問題、すなわち耐性と神経毒性を共有する。
【０００４】
悪性黒色腫は最も危険な形態の皮膚癌であり、皮膚癌による死亡の約７５％を占める。黒色腫の発生率は、西洋人集団において着実に上昇しつつある。症例数は過去２０年間で倍増した。およそ１６０，０００の黒色腫の新たな症例が毎年世界中で診断されており、男性および白人においてより頻度が高い。ＷＨＯの報告によれば、約４８，０００例の黒色腫関連死亡が毎年世界中で起こっている。
【０００５】
現在のところ、進行／転移性黒色腫を処置する有効な方法はない。前記黒色腫は現在の化学療法、放射線療法および免疫療法に対して高度に抵抗性である。進行／転移性黒色腫は非常に予後不良であり、平均生存期間は６か月、５年生存率は５％未満である。
【０００６】
デカルバジン（ＤＴＩＣとも称される）を含む様々な化学療法剤が使用されており、免疫療法（インターロイキン２（ＩＬ−２）またはインターフェロン（ＩＦＮ）による）ならびに局所灌流が種々の施設によって用いられている。転移性黒色腫における全体的な成功は極めて限られている。ＩＬ−２（Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ）は、２０年間で転移性黒色腫の処置に関して承認された最初の新しい療法である。しかし、これは患者において完全な寛解を５％未満しか提供しない。近年、進行黒色腫に対抗する多大の努力が為されてきた。ＤＴＩＣと他の化学療法薬（例えばシスプラチン、ビンブラスチンおよびカルムスチン）との併用もＤＴＩＣへのインターフェロンα２ｂの追加も、ＤＴＩＣ処置単独に比べて生存上の優位性を示さなかった。ごく最近では、進行黒色腫を処置するための抗体およびワクチンを使用する臨床試験も、満足し得る効果を実証に失敗した。イピリムマブ（Ｙｅｒｖｏｙ（登録商標））は、黒色腫に対抗するために本人の免疫系を利用する薬物である。イピリムマブは、その元の部位を超えて広がった進行黒色腫を処置するために使用される。標的療法は、癌細胞における特異的脆弱性を標的とするように設計された医薬品を使用する。
【０００７】
黒色腫患者約６０％におけるＢＲＡＦ突然変異の発見ならびにＦＤＡで承認されたＢＲＡＦ阻害剤（ＢＲＡＦｉ；例えばベムラフェニブおよびダブラフェニブ（ＧＳＫ２１１８４３６））およびＭＥＫ阻害剤（ＭＥＫｉ；例えばトラメチニブ（ＧＳＫ１１２０２１２）、ＲＯ５０６８７６０）は、ＢＲＡＦＶ６００突然変異黒色腫の処置において強い臨床応答を示した。ＢＲＡＦｉ＋ＭＥＫｉの組合せの事前使用は初期療法において極めて有効であるが、腫瘍の不均一性および代替的経路の活性化のために、約９か月で耐性が発現し、疾患の再発および患者の死亡をもたらす。
【０００８】
ベムラフェニブ（Ｚｅｌｂｏｒａｆ（登録商標））は、手術では処置できない進行黒色腫または身体全体に広がった黒色腫を処置するために承認された標的療法である。黒色腫に関して、ベムラフェニブは特定の遺伝子突然変異（ＢＲＡＦＶ６００）を有する腫瘍だけを処置する。同様に、ベムラフェニブおよび他のＢＲＡＦ阻害剤は、様々なＢＲＡＦ変異癌において活性であり得る。Ｂ−ＲＡＦが高頻度で変異する例には、黒色腫（３０〜６０％）、甲状腺癌（３０〜５０％）、結腸直腸癌（５〜２０％）、卵巣癌（約３０％）および他の癌（１〜３％）が含まれる（Ｗｅｌｌｂｒｏｃｋ  Ｃ，Ｋａｒａｓａｒｉｄｅｓ
Ｍ，Ｍａｒａｉｓ  Ｒ．“Ｔｈｅ  Ｒａｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｔａｋｅｓ  Ｃｅｎｔｒｅ  Ｓｔａｇｅ”．Ｎａｔ．Ｒｅｖ．（２００４）５：８７５−８８５）。
【０００９】
ＢＲＡＦＶ６００突然変異黒色腫を有する患者におけるベムラフェニブの持続的な臨床活性は、獲得耐性の速やかな発現によって制限される（Ｌｅｅ  ＪＴ，Ｌｉ  Ｌ，Ｂｒａｆｆｏｒｄ  ＰＡら、“ＰＬＸ４０３２，ａ  ｐｏｔｅｎｔ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｂ−Ｒａｆ  Ｖ６００Ｅ  ｏｎｃｏｇｅｎｅ，ｓｅｌｅｃｔｉｖｅｌｙ  ｉｎｈｉｂｉｔｓ  Ｖ６００Ｅ−ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ｍｅｌａｎｏｍａｓ．”Ｐｉｇｍｅｎｔ  Ｃｅｌｌ  Ｍｅｌａｎｏｍａ  Ｒｅｓ．（２０１０）２３：８２０−８２７；Ｙａｎｇ  Ｈ，Ｈｉｇｇｉｎｓ  Ｂ，Ｋｏｌｉｎｓｋｙ  Ｋら“ＲＧ７２０４（ＰＬＸ４０３２），ａ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ＢＲＡＦＶ６００Ｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ，ｄｉｓｐｌａｙｓ  ｐｏｔｅｎｔ  ａｎｔｉｔｕｍｏｒ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｉｎ  ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ  ｍｅｌａｎｏｍａ  ｍｏｄｅｌｓ”．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．（２０１０）７０：５５１８−５５２７；Ｙａｎｇ  Ｈ，Ｈｉｇｇｉｎｓ  Ｂ，Ｋｏｌｉｎｓｋｙ  Ｋら、“Ａｎｔｉｔｕｍｏｒ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ＢＲＡＦ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｖｅｍｕｒａｆｅｎｉｂ  ｉｎ  ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ  ｍｏｄｅｌｓ  ｏｆ  ＢＲＡＦ−ｍｕｔａｎｔ  ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ  ｃａｎｃｅｒ”．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．（２０１２）７２：７７９−７８９．）。耐性発現の機構は広く検討されている（Ｌｉｔｔｌｅ  ＡＳ，Ｓｍｉｔｈ  ＰＤ，Ｃｏｏｋ  ＳＪ．“Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｏｆ  ａｃｑｕｉｒｅｄ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｔｏ  ＥＲＫ１／２  ｐａｔｈｗａｙ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ”．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ（２０１３）３２（１０）：１２０７−１２１５；Ｂｏｌｌａｇ  Ｇ，Ｈｉｒｔｈ  Ｐ，Ｔｓａｉ  Ｊら“Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｏｆ  ａ  ＲＡＦ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｎｅｅｄｓ  ｂｒｏａｄ  ｔａｒｇｅｔ  ｂｌｏｃｋａｄｅ  ｉｎ  ＢＲＡＦ−ｍｕｔａｎｔ  ｍｅｌａｎｏｍａ”．Ｎａｔｕｒｅ  （２０１０）４６７：５９６−５９９；Ｆｌａｈｅｒｔｙ  ＫＴ．“Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  ｍｅｌａｎｏｍａ”．Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｍｅｄ．（２０１２）６３：１７１−１８３；Ｓｕ  Ｆ、Ｂｒａｄｌｅｙ  ＷＤ、Ｗａｎｇ  Ｑら、“Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｔｏ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ＢＲＡＦ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｃａｎ  ｂｅ  ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｂｙ  ｍｏｄｅｓｔ  ｕｐｓｔｒｅａｍ  ｐａｔｈｗａｙ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ”．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．（２０１２）７２：９６９−９７８．）。多くの異なる機構が文献において提案されており、これには、ＢＲＡＦｉに対する内因性耐性、ＢＲＡＦ癌遺伝子の増幅（Ｓｈｉ  Ｈ，Ｍｏｒｉｃｅａｕ  Ｇ，Ｋｏｎｇ  Ｘら、“Ｍｅｌａｎｏｍａ  ｗｈｏｌｅ−ｅｘｏｍｅ  ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ  ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｓ（Ｖ６００Ｅ）Ｂ−ＲＡＦ  ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ａｃｑｕｉｒｅｄ  Ｂ−ＲＡＦ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ．”Ｎａｔ．Ｃｏｍｍｕｎ．（２０１２）３：７２４）、下流のＭＥＫキナーゼの上方調節または活性化突然変異、ＣＲＡＦ発現の上方調節（Ｍｏｎｔａｇｕｔ  Ｃ，Ｓｈａｒｍａ  ＳＶ，Ｓｈｉｏｄａ  Ｔら、“Ｅｌｅｖａｔｅｄ  ＣＲＡＦ  ａｓ  ａ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｍｅｃｈ���ｎｉｓｍ  ｏｆ  ａｃｑｕｉｒｅｄ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｔｏ  ＢＲＡＦ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｉｎ  ｍｅｌａｎｏｍａ”．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．（２００８）６８：４８５３−４８６１）、ＮＲＡＳの発癌性活性化（Ｎａｚａｒｉａｎ  Ｒ，Ｓｈｉ  Ｈ，Ｗａｎｇ  Ｑら、“Ｍｅｌａｎｏｍａｓ  ａｃｑｕｉｒｅ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｔｏ  Ｂ−ＲＡＦ（Ｖ６００Ｅ）ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｂｙ  ＲＴＫ  ｏｒ  Ｎ−ＲＡＳ  ｕｐｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ”．Ｎａｔｕｒｅ（２０１０）４６８：９７３−９７７）、上方調節されたＥＧＦＲ−ＳＦＫ−ＳＴＡＴ３経路（Ｇｉｒｏｔｔｉ  ＭＲ，Ｐｅｄｅｒｓｅｎ  Ｍ，Ｓａｎｃｈｅｚ−Ｌａｏｒｄｅｎ  Ｂら、“Ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ  ＥＦＧ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｏｒ  ＳＲＣ  ｆａｍｉｌｙ  ｋｉｎａｓｅ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｏｖｅｒｃｏｍｅｓ  ＢＲＡＦ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｉｎ  ｍｅｌａｎｏｍａ．”Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｉｓｃｏｖ．（２０１３）３（２）：１５８−１６７）、ゲートキーパー変異（Ｗｈｉｔｔａｋｅｒ  Ｓ，Ｋｉｒｋ  Ｒ，Ｈａｙｗａｒｄ  Ｒら、“Ｇａｔｅｋｅｅｐｅｒ  ｍｕｔａｔｉｏｎｓ  ｍｅｄｉａｔｅ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｔｏ  ＢＲＡＦ−ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｔｈｅｒａｐｉｅｓ．”Ｓｃｉ．Ｔｒａｎｓｌ．Ｍｅｄ．（２０１０）２：３５ｒａ４１；Ｂａｌｚａｎｏ  Ｄ，Ｓａｎｔａｇｕｉｄａ  Ｓ，Ｍｕｓａｃｃｈｉｏ  Ａ，Ｖｉｌｌａ  Ｆ．“Ａ  ｇｅｎｅｒａｌ  ｆｒａｍｅｗｏｒｋ  ｆｏｒ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｉｎ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅｓ．”Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．（２０１１）１８：９６６−９７５；Ｓｉｅｒｒａ  ＪＲ，Ｃｅｐｅｒｏ  Ｖ，Ｇｉｏｒｄａｎｏ  Ｓ．“Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｏｆ  ａｃｑｕｉｒｅｄ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｔｏ  ｔｙｒｏｓｉｎｅ  ｋｉｎａｓｅ  ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｔｈｅｒａｐｙ．”Ｍｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ（２０１０）９：７５）、成長因子受容体、例えばインスリン様成長因子１受容体（ＩＦＧ１Ｒ）（Ｖｉｌｌａｎｕｅｖａ  Ｊ，Ｖｕｌｔｕｒ  Ａ，Ｌｅｅ  ＪＴら、“Ａｃｑｕｉｒｅｄ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｔｏ  ＢＲＡＦ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｂｙ  ａ  ＲＡＦ  ｋｉｎａｓｅ  ｓｗｉｔｃｈ  ｉｎ  ｍｅｌａｎｏｍａ  ｃａｎ  ｂｅ  ｏｖｅｒｃｏｍｅ  ｂｙ  ｃｏｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ＭＥＫ  ａｎｄ  ＩＧＦ−１Ｒ／ＰＩ３Ｋ”．Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ（２０１０）１８：６８３−６９５）または血小板由来成長因子受容体（ＰＤＧＦＲ）の上方調節、ならびにいくつかの他の耐性機構（Ｗｉｌｓｏｎ  ＴＲ，Ｆｒｉｄｌｙａｎｄ  Ｊ，Ｙａｎ  Ｙら、“Ｗｉｄｅｓｐｒｅａｄ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｆｏｒ  ｇｒｏｗｔｈ−ｆａｃｔｏｒ−ｄｒｉｖｅｎ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｔｏ  ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  ｋｉｎａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ”．Ｎａｔｕｒｅ（２０１２）４８７：５０５−５０９；Ｓｔｒａｕｓｓｍａｎ  Ｒ，Ｍｏｒｉｋａｗａ  Ｔ，Ｓｈｅｅ  Ｋら、“Ｔｕｍｏｕｒ  ｍｉｃｒｏ−ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ  ｅｌｉｃｉｔｓ  ｉｎｎａｔｅ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｔｏ  ＲＡＦ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ＨＧＦ  ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ”．Ｎａｔｕｒｅ（２０１２）４８７：５００−５０４）が含まれる。ＢＲＡＦ阻害薬の存在下でリン酸化細胞外シグナル関連キナーゼ１および２（ｐ−ＥＲＫｌ／２）レベルを維持するいくつかの方法が記述されており、これには、ＥＲＫキナーゼ１（ＭＥＫ１）変異、選択的ＭＥＫｌ／２活性化因子の動員、ＲＡＳ変異または受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）の上方調節が含まれる。したがって多くの場合、ベムラフェニブ耐性細胞はＭＥＫ阻害剤に対して交差耐性である（Ｌｉｔｔｌｅ  ＡＳ，Ｓｍｉｔｈ  ＰＤ，Ｃｏｏｋ  ＳＪ．“Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｏｆ  ａｃｑｕｉｒｅｄ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｔｏ  ＥＲＫ１／２  ｐａｔｈｗａｙ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ”．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ（２０１３）３２（１０）：１２０７−１２１５；Ａｔｅｆｉ  Ｍ，ｖｏｎ  Ｅｕｗ  Ｅ，Ａｔｔａｒ  Ｎら、“Ｒｅｖｅｒｓｉｎｇ  ｍｅｌａｎｏｍａ  ｃｒｏｓｓ−ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｔｏ  ＢＲＡＦ  ａｎｄ  ＭＥＫ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｂｙ  ｃｏ−ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｔｈｅ  ＡＫＴ／ｍＴＯＲ  ｐａｔｈｗａｙ．”ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ（２０１１）６：ｅ２８９７３；Ｐｏｕｌｉｋａｋｏｓ  ＰＩ，Ｐｅｒｓａｕｄ  Ｙ，Ｊａｎａｋｉｒａｍａｎ  Ｍら、“ＲＡＦ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｉｓ  ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｂｙ  ｄｉｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｂｅｒｒａｎｔｌｙ  ｓｐｌｉｃｅｄ  ＢＲＡＦ（Ｖ６００Ｅ）”Ｎａｔｕｒｅ（２０１１）４８０：３８７−３９０）。主要な獲得ベムラフェニブ耐性機構の１つは持続的な下流のＭＥＫ／ＥＲＫ活性化であるため、ＲＡＦ−ＭＥＫ−ＥＲＫ経路内のエレメントを標的とするＢＲＡＦｉ＋ＭＥＫｉの組合せは最大の注目を集め、２０１３年にダブラフェニブ＋トラメチニブの組合せのＦＤＡ承認を導いた。しかし、腫瘍の不均一性および黒色腫における代替的経路の活性化により、この併用処置に対する耐性が平均９．４か月で発現し、ひとたび耐性が発現するとほとんど臨床活性を有さない。
【００１０】
異なる抗癌機構を有する作用物質を使用した薬物の併用は、特に進行癌患者の処置において、腫瘍応答および患者の生存率を増強することができる（Ｃａｒｒｉｃｋ  Ｓ，Ｐａｒｋｅｒ  Ｓ，Ｗｉｌｃｋｅｎ  Ｎら、“Ｓｉｎｇｌｅ  ａｇｅｎｔ  ｖｅｒｓｕｓ  ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ”．Ｃｏｃｈｒａｎｅ  Ｄａｔａｂａｓｅ  Ｓｙｓｔ．Ｒｅｖ．２００５：ＣＤ００３３７２；Ｆａｓｓｎａｃｈｔ  Ｍ，Ｔｅｒｚｏｌｏ  Ｍ，Ａｌｌｏｌｉｏ  Ｂら、“Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  ｉｎ  ａｄｖａｎｃｅｄ  ａｄｒｅｎｏｃｏｒｔｉｃａｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ”．Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．（２０１２）３６６：２１８９−２１９７；Ｐａｎｎｕ  Ｖ，Ｋａｍａ  Ｐ，Ｓａｊｊａ  ＨＫら、“Ｓｙｎｅｒｇｉｓｔｉｃ  ａｎｔｉｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  ｐｒｏｓｔａｔｅ  ｃａｎｃｅｒ”．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．（２０１１）８１：４７８−４８７）。ＭＥＫまたはＥＲＫ阻害剤などの同じマイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰＫ）経路を標的とする作用物質とベムラフェニブの併用は広範に検討され、臨床効果が示されているが（Ｇｒｅｇｅｒ  ＪＧ，Ｅａｓｔｍａｎ  ＳＤ，Ｚｈａｎｇ  Ｖら、“Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ＢＲＡＦ，ＭＥＫ，ａｎｄ  ＰＢＫ／ｍＴＯＲ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｖｅｒｃｏｍｅ  ａｃｑｕｉｒｅｄ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｔｏ  ｔｈｅ  ＢＲＡＦ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ＧＳＫ２１１８４３６  ｄａｂｒａｆｅｎｉｂ，ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｂｙ  ＮＲＡＳ  ｏｒ  ＭＥＫ  ｍｕｔａｔｉｏｎｓ”Ｍｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ．（２０１２）１１：９０９−９２０；Ｐａｔｅｌ  ＳＰ，Ｌａｚａｒ  ＡＪ，Ｐａｐａｄｏｐｏｕｌｏｓ  ＮＥら、“Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ｔｏ  ｓｅｌｕｍｅｔｉｎｉｂ（ＡＺＤ６２４４；ＡＲＲＹ−１４２８８６）−ｂａｓｅｄ  ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｓｔｒａｔｉｆｉｅｄ  ｂｙ  ｇｅｎｅ  ｍｕｔａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  ｍｅｌａｎｏｍａ”．Ｃａｎｃｅｒ（２０１３）１１９（４）：７９９−８０５；Ｆｌａｈｅｒｔｙ  ＫＴ，Ｉｎｆａｎｔｅ  ＪＲ，Ｄａｕｄ  Ａら、“Ｃｏｍｂｉｎｅｄ  ＢＲＡＦ  ａｎｄ  ＭＥＫ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｉｎ  ｍｅｌａｎｏｍａ  ｗｉｔｈ  ＢＲＡＦ  Ｖ６００  ｍｕｔａｔｉｏｎｓ”．Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．（２０１２）３６７：１６９４−１７０３）、それらは単に細胞をＧｏ／Ｇ１期で停止させることができるだけである。そのような併用戦略は、この細胞周期停止から逃れることができる耐性細胞を扱うのに有効である可能性は低い。
【００１１】
慢性的に選択したベムラフェニブ耐性ヒト黒色腫細胞（例えばＡ３７５ＲＦ２１）を、感受性親細胞株（すなわちＡ３７５）に対して有効な濃度のベムラフェニブによってＧ０／Ｇ１期でブロックすることはできず、ベムラフェニブ耐性細胞は直ちにＧ２／Ｍ期へと進行した（図２Ａ）。したがって、その後のＧ２／Ｍ期ブロックを強力に誘導する化合物とベムラフェニブの併用は、Ｇ０／Ｇ１停止から逃れたベムラフェニブ耐性細胞を成功裏に捕獲するはずであり、したがって強力な相乗効果を生み出す。
【００１２】
最近、２−アリール−４−ベンゾイル−イミダゾール（ＡＢＩ）の骨格によって表される、新規クラスの抗有糸分裂剤が発見された（Ｃｈｅｎ  Ｊ，Ｌｉ  ＣＭ，Ｗａｎｇ  Ｊら、“Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ａｎｄ  ａｎｔｉｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ｎｏｖｅｌ  ２−ａｒｙｌ−４−ｂｅｎｚｏｙｌ−ｉｍｉｄａｚｏｌｅ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｔｕｂｕｌｉｎ  ｐｏｌｙｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ”．Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．（２０１１）１９：４７８２−４７９５；Ｃｈｅｎ  Ｊ，Ｗａｎｇ  Ｚ，Ｌｉ  ＣＭら、“Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ｏｆ  ｎｏｖｅｌ  ２−ａｒｙｌ−４−ｂｅｎｚｏｙｌ−ｉｍｉｄａｚｏｌｅｓ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｔｈｅ  ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅｓ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｓｉｔｅ  ｉｎ  ｔｕｂｕｌｉｎ  ａｓ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  ａｇｅｎｔｓ”．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．（２０１０）５３：７４１４−７４２７；Ｃｈｅｎ  Ｊ，Ａｈｎ  Ｓ，Ｗａｎｇ  Ｊら、“Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ｏｆ  ｎｏｖｅｌ  ２−ａｒｙｌ−４−ｂｅｎｚｏｙｌ−ｉｍｉｄａｚｏｌｅ（ＡＢＩ−ＩＩＩ）ａｎａｌｏｇｕｅｓ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｔｕｂｕｌｉｎ  ｐｏｌｙｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ａｓ  ａｎｔｉｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ  ａｇｅｎｔｓ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．（２０１２）５５：７２８５−７２８９；Ｌｉ  ＣＭ，Ｌｕ  Ｙ，Ｃｈｅｎ  Ｊら、“Ｏｒａｌｌｙ  ｂｉｏａｖａｉｌａｂｌｅ  ｔｕｂｕｌｉｎ  ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ  ｆｏｒ  ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ−ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ  ｃａｎｃｅｒ”．Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．（２０１２）２９：３０５３−３０６３）。これらの化合物は、いくつかのヒトおよびマウス黒色腫細胞株において低いナノモル（ｎＭ）範囲で抗増殖ＩＣ５０値を示した。それらはコルヒチン結合部位でチューブリンに結合する。パクリタキセルおよびビンブラスチンなどの多くの既存のチューブリン阻害剤と比較して、ＡＢＩ化合物は、Ｐ糖タンパク質（Ｐｇｐ）によって媒介される薬物耐性、多剤耐性関連タンパク質（ＭＲＰ）および乳癌耐性タンパク質（ＢＣＲＰ）を含む、いくつかの臨床的に関連する多剤耐性機構を有効に回避することができる。インビボ試験は、それらがマウスにおいて黒色腫Ｂ１６−Ｆ１０細胞の肺転移を有意に阻害することを指し示した（Ｗａｎｇ  Ｚ，Ｃｈｅｎ  Ｊ，Ｗａｎｇ  Ｊら、“Ｎｏｖｅｌ  ｔｕｂｕｌｉｎ  ｐｏｌｙｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｖｅｒｃｏｍｅ  ｍｕｌｔｉｄｒｕｇ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ａｎｄ  ｒｅｄｕｃｅ  ｍｅｌａｎｏｍａ  ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｌｕｎｇ”．Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．（２０１２）２９：３０４０−３０５２）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１３】
【非特許文献１】Ｃａｎｃｅｒ  Ｆａｃｔｓ  ＆  Ｆｉｇｕｒｅｓ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｏｃｉｅｔｙ：Ａｔｌａｎｔａ，ＧＡ（２００８）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１４】
癌、特に黒色腫の急速に上昇しつつある発生率および現在の治療剤に対する高度の耐性により、黒色腫におけるＢＲＡＦｉ耐性を克服するために選択的な経路を標的とするより有効な薬物の組合せを同定することは患者に大きな利益をもたらすであろう。加えて、ＢＲＡＦ変異は、卵巣癌、結腸直腸癌および甲状腺乳頭癌を含む多くの他の型の癌においても一般的であるので、新規併用戦略の開発は、既存のＢＲＡＦｉ＋ＭＥＫｉの組合せの使用がほとんど臨床活性を示さないこれらの型の癌に対してより幅広い影響を有し得、緊急に必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
１つの実施形態では、本発明は、ＢＲＡＦ阻害剤またはＭＥＫ阻害剤のうちの少なくとも１つと組み合わせたチューブリン阻害剤および薬学的に許容され得る担体を含む薬学的組成物に関する。
【００１６】
１つの実施形態では、本発明は、ＢＲＡＦ阻害剤またはＭＥＫ阻害剤のうちの少なくとも１つと組み合わせた、式ＩＩ：
【化１】
2019077727.tif 000002
［式中、
Ａは、単一または縮合芳香族またはヘテロ芳香族環系であり；
Ｒ１は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６直鎖または分岐アルキル、アリール、フェニル、ベンジル、ハロアルキル、アミノアルキル、−ＯＣＨ２Ｐｈ、ＳＯ２−アリール、ＳＯ２−フェニル、−（Ｃ＝Ｏ）−アリール、−（Ｃ＝Ｏ）−フェニルまたはＯＨであり；
Ｒ４およびＲ５は、それぞれ独立して水素、Ｃ１−Ｃ６直鎖または分岐アルキル、Ｃ１−Ｃ６直鎖または分岐ハロアルキル、Ｃ１−Ｃ６直鎖または分岐アルコキシ、Ｃ１−Ｃ６直鎖または分岐ハロアルコキシ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＦ３、ＣＮ、−ＣＨ２ＣＮ、ＮＨ２、ＯＨ、−ＯＣ（Ｏ）ＣＦ３、アルキルアミノ、アミノアルキル、−ＯＣＨ２Ｐｈ、−ＮＨＣＯ−アルキル、ＣＯＯＨ、−Ｃ（Ｏ）Ｐｈ、Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｈ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２またはＮＯ２であり；ならびに
ｎは、１から４の間の整数である］
の構造によって表される化合物またはその薬学的に許容され得る塩、Ｎ−オキシド、水和物、互変異性体もしくは異性体、および薬学的に許容され得る担体を含む薬学的組成物に関する。
【００１７】
１つの実施形態では、本発明は、（ｉ）ＢＲＡＦ変異癌、（ｉｉ）ＢＲＡＦ阻害剤耐性癌、（ｉｉｉ）黒色腫、（ｉｖ）薬物耐性黒色腫、（ｖ）被験体における癌転移を処置する、抑制する、重症度を低減する、危険度を低減するもしくは阻害する、または（ｖｉ）被験体におけるＢＲＡＦ阻害剤耐性癌を遅延させるもしくは予防する方法であって、式ＩＩ：
【化２】
2019077727.tif 000003
［式中、
Ａは、単一または縮合芳香族またはヘテロ芳香族環系であり；
Ｒ１は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６直鎖または分岐アルキル、アリール、フェニル、ベンジル、ハロアルキル、アミノアルキル、−ＯＣＨ２Ｐｈ、ＳＯ２−アリール、ＳＯ２−フェニル、−（Ｃ＝Ｏ）−アリール、−（Ｃ＝Ｏ）−フェニルまたはＯＨであり；
Ｒ４およびＲ５は、それぞれ独立して水素、Ｃ１−Ｃ６直鎖または分岐アルキル、Ｃ１−Ｃ６直鎖または分岐ハロアルキル、Ｃ１−Ｃ６直鎖または分岐アルコキシ、Ｃ１−Ｃ６直鎖または分岐ハロアルコキシ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＦ３、ＣＮ、−ＣＨ２ＣＮ、ＮＨ２、ＯＨ、−ＯＣ（Ｏ）ＣＦ３、アルキルアミノ、アミノアルキル、−ＯＣＨ２Ｐｈ、−ＮＨＣＯ−アルキル、ＣＯＯＨ、−Ｃ（Ｏ）Ｐｈ、Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｈ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２またはＮＯ２であり；ならびに
ｎは、１から４の間の整数である］
の構造によって表される化合物またはその薬学的に許容され得る塩、Ｎ−オキシド、水和物、互変異性体もしくは異性体と組み合わせて、ＢＲＡＦ阻害剤またはＭＥＫ阻害剤のうちの少なくとも１つを含む組成物を、ＢＲＡＦ変異癌に罹患している被験体に、前記癌を処置するのに有効な条件下で投与することを含む方法に関する。
【００１８】
１つの実施形態では、本発明は、以前にタキサン薬物で処置された癌に罹患している被験体においてタキサン薬物に対する耐性がある二次癌を処置する、抑制する、低減する、阻害する、除去する、遅延させるまたは予防する方法であって、式ＩＩ：
【化３】
2019077727.tif 000004
［式中、
Ａは、単一または縮合芳香族またはヘテロ芳香族環系であり；
Ｒ１は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６直鎖または分岐アルキル、アリール、フェニル、ベンジル、ハロアルキル、アミノアルキル、−ＯＣＨ２Ｐｈ、ＳＯ２−アリール、ＳＯ２−フェニル、−（Ｃ＝Ｏ）−アリール、−（Ｃ＝Ｏ）−フェニルまたはＯＨであり；
Ｒ４およびＲ５は、それぞれ独立して水素、Ｃ１−Ｃ６直鎖または分岐アルキル、Ｃ１−Ｃ６直鎖または分岐ハロアルキル、Ｃ１−Ｃ６直鎖または分岐アルコキシ、Ｃ１−Ｃ６直鎖または分岐ハロアルコキシ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＦ３、ＣＮ、−ＣＨ２ＣＮ、ＮＨ２、ＯＨ、−ＯＣ（Ｏ）ＣＦ３、アルキルアミノ、アミノアルキル、−ＯＣＨ２Ｐｈ、−ＮＨＣＯ−アルキル、ＣＯＯＨ、−Ｃ（Ｏ）Ｐｈ、Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｈ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２またはＮＯ２であり；ならびに
ｎは、１から４の間の整数である］
の構造によって表される化合物またはその薬学的に許容され得る塩、Ｎ−オキシド、水和物、互変異性体もしくは異性体と組み合わせて、ＢＲＡＦ阻害剤またはＭＥＫ阻害剤のうちの少なくとも１つを含む組成物を前記被験体に投与することを含む方法に関する。
【００１９】
１つの実施形態では、本発明は、（ｉ）薬物耐性癌を処置する、抑制する、重症度を低減する、危険度を低減するもしくは阻害する；（ｉｉ）獲得されたＢＲＡＦ阻害剤耐性を抑制する；（ｉｉｉ）ＢＲＡＦ阻害剤耐性の発現を遅延させるもしくは予防する；または（ｉｖ）癌転移を処置する、抑制する、阻害する、除去する、低減する、遅延させるもしくは予防する方法であって、チューブリン阻害剤と組み合わせてＢＲＡＦ阻害剤またはＭＥＫ阻害剤のうちの少なくとも１つを含む組成物を、薬物耐性癌に罹患している被験体に、前記癌を処置するのに有効な条件下で投与することを含む方法に関する。
【００２０】
別の実施形態では、本発明の化合物は化合物１２ｄａである。別の実施形態では、本発明の化合物は化合物１７ｙａである。
【００２１】
１つの実施形態では、本発明は、チューブリン阻害剤、ＢＲＡＦ阻害剤および薬学的に許容され得る担体を含む薬学的組成物に関する。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤はベムラフェニブである。別の実施形態では、チューブリン阻害剤はドセタキセルである。別の実施形態では、チューブリン阻害剤は本発明の化合物である。
【００２２】
１つの実施形態では、本発明は、ＢＲＡＦ阻害剤と組み合わせた、以下の構造：
【化４】
2019077727.tif 000005
によって表される化合物、および薬学的に許容され得る担体を含む薬学的組成物に関する。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤はベムラフェニブである。
【００２３】
１つの実施形態では、本発明は、ＭＥＫ阻害剤と組み合わせた、以下の構造：
【化５】
2019077727.tif 000006
によって表される化合物、および薬学的に許容され得る担体を含む薬学的組成物に関する。別の実施形態では、ＭＥＫ阻害剤はＲＯ５０６８７６０である。
【００２４】
１つの実施形態では、本発明は、（ａ）被験体においてＢＲＡＦ変異癌を処置する、抑制する、重症度を低減する、危険度を低減するもしくは阻害する；（ｂ）ＢＲＡＦ阻害剤耐性癌を処置する、抑制する、重症度を低減する、危険度を低減するもしくは阻害する；（ｃ）黒色腫を処置する、抑制する、重症度を低減する、危険度を低減するもしくは阻害する；（ｄ）薬物耐性黒色腫を処置する、抑制する、重症度を低減する、危険度を低減するもしくは阻害する；（ｅ）薬物耐性癌を処置する、抑制する、重症度を低減する、危険度を低減するもしくは阻害する；（ｆ）薬物耐性癌に罹患している被験体においてＢＲＡＦ阻害剤での処置に対する耐性を克服する；または（ｇ）癌に罹患している被験体において癌処置に対する耐性を予防する、除去する、低減するもしくは遅延させる方法であって、ＢＲＡＦ阻害剤またはＭＥＫ阻害剤のうちの少なくとも１つと組み合わせて本発明の化合物を含む組成物を投与することを含む方法に関する。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤はベムラフェニブである。別の実施形態では、癌は、黒色腫、甲状腺癌、結腸直腸癌または卵巣癌である。別の実施形態では、癌は黒色腫である。別の実施形態では、黒色腫はＶ６００Ｅ陽性黒色腫である。別の実施形態では、癌は薬物耐性癌である。別の実施形態では、黒色腫は薬物耐性黒色腫である。別の実施形態では、本発明の化合物は化合物１２ｄａである。別の実施形態では、本発明の化合物は化合物１７ｙａである。
【００２５】
１つの実施形態では、本発明は、薬物耐性癌を処置する、抑制する、重症度を低減する、危険度を低減するまたは阻害する方法であって、ＢＲＡＦ阻害剤またはＭＥＫ阻害剤のうちの少なくとも１つと組み合わせてチューブリン阻害剤を含む組成物を、薬物耐性癌に罹患している被験体に、前記癌を処置するのに有効な条件下で投与することを含む方法に関する。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤はベムラフェニブである。別の実施形態では、チューブリン阻害剤は、ドセタキセル、コルヒチン、ビンブラスチン、タキソールまたはそれらの任意の組合せである。別の実施形態では、癌は、黒色腫、甲状腺癌、結腸直腸癌または卵巣癌である。別の実施形態では、癌は黒色腫である。
本発明は、例えば、以下を提供する。
（項目１）
ＢＲＡＦ阻害剤またはＭＥＫ阻害剤のうちの少なくとも１つと組み合わせた、式ＩＩ：
【化４８】
2019077727.tif 000007
［式中、
Ａは、単一または縮合芳香族またはヘテロ芳香族環系であり；
Ｒ１は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６直鎖または分岐アルキル、アリール、フェニル、ベンジル、ハロアルキル、アミノアルキル、−ＯＣＨ２Ｐｈ、ＳＯ２−アリール、ＳＯ２−フェニル、−（Ｃ＝Ｏ）−アリール、−（Ｃ＝Ｏ）−フェニルまたはＯＨであり；
Ｒ４およびＲ５は、それぞれ独立して水素、Ｃ１−Ｃ６直鎖または分岐アルキル、Ｃ１−Ｃ６直鎖または分岐ハロアルキル、Ｃ１−Ｃ６直鎖または分岐アルコキシ、Ｃ１−Ｃ６直鎖または分岐ハロアルコキシ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＦ３、ＣＮ、−ＣＨ２ＣＮ、ＮＨ２、ＯＨ、−ＯＣ（Ｏ）ＣＦ３、アルキルアミノ、アミノアルキル、−ＯＣＨ２Ｐｈ、−ＮＨＣＯ−アルキル、ＣＯＯＨ、−Ｃ（Ｏ）Ｐｈ、Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｈ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２またはＮＯ２であり；ならびに
ｎは、１から４の間の整数である］
の構造によって表される化合物またはその薬学的に許容され得る塩、Ｎ−オキシド、水和物、互変異性体もしくは異性体、および薬学的に許容され得る担体を含む薬学的組成物。
（項目２）
前記式ＩＩの化合物が、
【化４９】
2019077727.tif 000008
またはそれらの組合せである、項目１に記載の組成物。
（項目３）
ＢＲＡＦ阻害剤またはＭＥＫ阻害剤のうちの少なくとも１つと組み合わせたチューブリン阻害剤および薬学的に許容され得る担体を含む薬学的組成物。
（項目４）
前記チューブリン阻害剤がドセタキセルである、項目３に記載の組成物。
（項目５）
前記ＢＲＡＦ阻害剤がベムラフェニブ、ダブラフェニブまたはそれらの組合せであり、および前記ＭＥＫ阻害剤がトラメチニブまたはＲＯ５０６８７６０またはそれらの組合せである、項目１から４のいずれか一項に記載の組成物。
（項目６）
被験体においてＢＲＡＦ変異癌を処置する、抑制する、重症度を低減する、危険度を低減するまたは阻害する方法であって、式ＩＩ：
【化５０】
2019077727.tif 000009
［式中、
Ａは、単一または縮合芳香族またはヘテロ芳香族環系であり；
Ｒ１は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６直鎖または分岐アルキル、アリール、フェニル、ベンジル、ハロアルキル、アミノアルキル、−ＯＣＨ２Ｐｈ、ＳＯ２−アリール、ＳＯ２−フェニル、−（Ｃ＝Ｏ）−アリール、−（Ｃ＝Ｏ）−フェニルまたはＯＨであり；
Ｒ４およびＲ５は、それぞれ独立して水素、Ｃ１−Ｃ６直鎖または分岐アルキル、Ｃ１−Ｃ６直鎖または分岐ハロアルキル、Ｃ１−Ｃ６直鎖または分岐アルコキシ、Ｃ１−Ｃ６直鎖または分岐ハロアルコキシ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＦ３、ＣＮ、−ＣＨ２ＣＮ、ＮＨ２、ＯＨ、−ＯＣ（Ｏ）ＣＦ３、アルキルアミノ、アミノアルキル、−ＯＣＨ２Ｐｈ、−ＮＨＣＯ−アルキル、ＣＯＯＨ、−Ｃ（Ｏ）Ｐｈ、Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｈ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２またはＮＯ２であり；ならびに
ｎは、１から４の間の整数である］
の構造によって表される化合物またはその薬学的に許容され得る塩、Ｎ−オキシド、水和物、互変異性体もしくは異性体と組み合わせて、ＢＲＡＦ阻害剤またはＭＥＫ阻害剤のうちの少なくとも１つを含む組成物を、ＢＲＡＦ変異癌に罹患している被験体に、前記癌を処置するのに有効な条件下で投与することを含む方法。
（項目７）
癌に罹患している被験体においてＢＲＡＦ阻害剤耐性癌を処置する、抑制する、重症度を低減する、危険度を低減するまたは阻害する方法であって、式ＩＩ：
【化５１】
2019077727.tif 000010
［式中、
Ａは、単一または縮合芳香族またはヘテロ芳香族環系であり；
Ｒ１は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６直鎖または分岐アルキル、アリール、フェニル、ベンジル、ハロアルキル、アミノアルキル、−ＯＣＨ２Ｐｈ、ＳＯ２−アリール、ＳＯ２−フェニル、−（Ｃ＝Ｏ）−アリール、−（Ｃ＝Ｏ）−フェニルまたはＯＨであり；
Ｒ４およびＲ５は、それぞれ独立して水素、Ｃ１−Ｃ６直鎖または分岐アルキル、Ｃ１−Ｃ６直鎖または分岐ハロアルキル、Ｃ１−Ｃ６直鎖または分岐アルコキシ、Ｃ１−Ｃ６直鎖または分岐ハロアルコキシ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＦ３、ＣＮ、−ＣＨ２ＣＮ、ＮＨ２、ＯＨ、−ＯＣ（Ｏ）ＣＦ３、アルキルアミノ、アミノアルキル、−ＯＣＨ２Ｐｈ、−ＮＨＣＯ−アルキル、ＣＯＯＨ、−Ｃ（Ｏ）Ｐｈ、Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｈ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２またはＮＯ２であり；ならびに
ｎは、１から４の間の整数である］
の構造によって表される化合物またはその薬学的に許容され得る塩、Ｎ−オキシド、水和物、互変異性体もしくは異性体と組み合わせて、ＢＲＡＦ阻害剤またはＭＥＫ阻害剤のうちの少なくとも１つを含む組成物を、ＢＲＡＦ阻害剤耐性癌に罹患している被験体に、前記癌を処置するのに有効な条件下で、前記被験体に投与することを含む方法。
（項目８）
黒色腫を処置する、抑制する、重症度を低減する、危険度を低減するまたは阻害する方法であって、式ＩＩ：
【化５２】
2019077727.tif 000011
［式中、
Ａは、単一または縮合芳香族またはヘテロ芳香族環系であり；
Ｒ１は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６直鎖または分岐アルキル、アリール、フェニル、ベンジル、ハロアルキル、アミノアルキル、−ＯＣＨ２Ｐｈ、ＳＯ２−アリール、ＳＯ２−フェニル、−（Ｃ＝Ｏ）−アリール、−（Ｃ＝Ｏ）−フェニルまたはＯＨであり；
Ｒ４およびＲ５は、それぞれ独立して水素、Ｃ１−Ｃ６直鎖または分岐アルキル、Ｃ１−Ｃ６直鎖または分岐ハロアルキル、Ｃ１−Ｃ６直鎖または分岐アルコキシ、Ｃ１−Ｃ６直鎖または分岐ハロアルコキシ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＦ３、ＣＮ、−ＣＨ２ＣＮ、ＮＨ２、ＯＨ、−ＯＣ（Ｏ）ＣＦ３、アルキルアミノ、アミノアルキル、−ＯＣＨ２Ｐｈ、−ＮＨＣＯ−アルキル、ＣＯＯＨ、−Ｃ（Ｏ）Ｐｈ、Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｈ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２またはＮＯ２であり；ならびに
ｎは、１から４の間の整数である］
の構造によって表される化合物またはその薬学的に許容され得る塩、Ｎ−オキシド、水和物、互変異性体もしくは異性体と組み合わせて、ＢＲＡＦ阻害剤またはＭＥＫ阻害剤のうちの少なくとも１つを含む組成物を、黒色腫に罹患している被験体に、前記黒色腫を処置するのに有効な条件下で投与することを含む方法。
（項目９）
薬物耐性黒色腫を処置する、抑制する、重症度を低減する、危険度を低減するまたは阻害する方法であって、式ＩＩ：
【化５３】
2019077727.tif 000012
［式中、
Ａは、単一または縮合芳香族またはヘテロ芳香族環系であり；
Ｒ１は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６直鎖または分岐アルキル、アリール、フェニル、ベンジル、ハロアルキル、アミノアルキル、−ＯＣＨ２Ｐｈ、ＳＯ２−アリール、ＳＯ２−フェニル、−（Ｃ＝Ｏ）−アリール、−（Ｃ＝Ｏ）−フェニルまたはＯＨであり；
Ｒ４およびＲ５は、それぞれ独立して水素、Ｃ１−Ｃ６直鎖または分岐アルキル、Ｃ１−Ｃ６直鎖または分岐ハロアルキル、Ｃ１−Ｃ６直鎖または分岐アルコキシ、Ｃ１−Ｃ６直鎖または分岐ハロアルコキシ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＦ３、ＣＮ、−ＣＨ２ＣＮ、ＮＨ２、ＯＨ、−ＯＣ（Ｏ）ＣＦ３、アルキルアミノ、アミノアルキル、−ＯＣＨ２Ｐｈ、−ＮＨＣＯ−アルキル、ＣＯＯＨ、−Ｃ（Ｏ）Ｐｈ、Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｈ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２またはＮＯ２であり；ならびに
ｎは、１から４の間の整数である］
の構造によって表される化合物またはその薬学的に許容され得る塩、Ｎ−オキシド、水和物、互変異性体もしくは異性体と組み合わせて、ＢＲＡＦ阻害剤またはＭＥＫ阻害剤のうちの少なくとも１つを含む組成物を、薬物耐性黒色腫に罹患している被験体に、前記黒色腫を処置するのに有効な条件下で投与することを含む方法。
（項目１０）
癌に罹患している被験体においてＢＲＡＦ阻害剤耐性癌を遅延させるまたは予防する方法であって、式ＩＩ：
【化５４】
2019077727.tif 000013
［式中、
Ａは、単一または縮合芳香族またはヘテロ芳香族環系であり；
Ｒ１は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６直鎖または分岐アルキル、アリール、フェニル、ベンジル、ハロアルキル、アミノアルキル、−ＯＣＨ２Ｐｈ、ＳＯ２−アリール、ＳＯ２−フェニル、−（Ｃ＝Ｏ）−アリール、−（Ｃ＝Ｏ）−フェニルまたはＯＨであり；
Ｒ４およびＲ５は、それぞれ独立して水素、Ｃ１−Ｃ６直鎖または分岐アルキル、Ｃ１−Ｃ６直鎖または分岐ハロアルキル、Ｃ１−Ｃ６直鎖または分岐アルコキシ、Ｃ１−Ｃ６直鎖または分岐ハロアルコキシ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＦ３、ＣＮ、−ＣＨ２ＣＮ、ＮＨ２、ＯＨ、−ＯＣ（Ｏ）ＣＦ３、アルキルアミノ、アミノアルキル、−ＯＣＨ２Ｐｈ、−ＮＨＣＯ−アルキル、ＣＯＯＨ、−Ｃ（Ｏ）Ｐｈ、Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｈ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２またはＮＯ２であり；ならびに
ｎは、１から４の間の整数である］
の構造によって表される化合物またはその薬学的に許容され得る塩、Ｎ−オキシド、水和物、互変異性体もしくは異性体と組み合わせて、ＢＲＡＦ阻害剤またはＭＥＫ阻害剤のうちの少なくとも１つを含む組成物を前記被験体に投与することを含む方法。
（項目１１）
癌に罹患している被験体において癌転移を処置する、抑制する、低減する、阻害する、除去する、遅延させるまたは予防する方法であって、式ＩＩ：
【化５５】
2019077727.tif 000014
［式中、
Ａは、単一または縮合芳香族またはヘテロ芳香族環系であり；
Ｒ１は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６直鎖または分岐アルキル、アリール、フェニル、ベンジル、ハロアルキル、アミノアルキル、−ＯＣＨ２Ｐｈ、ＳＯ２−アリール、ＳＯ２−フェニル、−（Ｃ＝Ｏ）−アリール、−（Ｃ＝Ｏ）−フェニルまたはＯＨであり；
Ｒ４およびＲ５は、それぞれ独立して水素、Ｃ１−Ｃ６直鎖または分岐アルキル、Ｃ１−Ｃ６直鎖または分岐ハロアルキル、Ｃ１−Ｃ６直鎖または分岐アルコキシ、Ｃ１−Ｃ６直鎖または分岐ハロアルコキシ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＦ３、ＣＮ、−ＣＨ２ＣＮ、ＮＨ２、ＯＨ、−ＯＣ（Ｏ）ＣＦ３、アルキルアミノ、アミノアルキル、−ＯＣＨ２Ｐｈ、−ＮＨＣＯ−アルキル、ＣＯＯＨ、−Ｃ（Ｏ）Ｐｈ、Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｈ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２またはＮＯ２であり；ならびに
ｎは、１から４の間の整数である］
の構造によって表される化合物またはその薬学的に許容され得る塩、Ｎ−オキシド、水和物、互変異性体もしくは異性体と組み合わせて、ＢＲＡＦ阻害剤またはＭＥＫ阻害剤のうちの少なくとも１つを含む組成物を前記被験体に投与することを含む方法。
（項目１２）
以前にタキサン薬物で処置された癌に罹患している被験体においてタキサン薬物に対する耐性がある二次癌を処置する、抑制する、低減する、阻害する、除去する、遅延させるまたは予防する方法であって、式ＩＩ：
【化５６】
2019077727.tif 000015
［式中、
Ａは、単一または縮合芳香族またはヘテロ芳香族環系であり；
Ｒ１は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６直鎖または分岐アルキル、アリール、フェニル、ベンジル、ハロアルキル、アミノアルキル、−ＯＣＨ２Ｐｈ、ＳＯ２−アリール、ＳＯ２−フェニル、−（Ｃ＝Ｏ）−アリール、−（Ｃ＝Ｏ）−フェニルまたはＯＨであり；
Ｒ４およびＲ５は、それぞれ独立して水素、Ｃ１−Ｃ６直鎖または分岐アルキル、Ｃ１−Ｃ６直鎖または分岐ハロアルキル、Ｃ１−Ｃ６直鎖または分岐アルコキシ、Ｃ１−Ｃ６直鎖または分岐ハロアルコキシ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＦ３、ＣＮ、−ＣＨ２ＣＮ、ＮＨ２、ＯＨ、−ＯＣ（Ｏ）ＣＦ３、アルキルアミノ、アミノアルキル、−ＯＣＨ２Ｐｈ、−ＮＨＣＯ−アルキル、ＣＯＯＨ、−Ｃ（Ｏ）Ｐｈ、Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｈ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２またはＮＯ２であり；ならびに
ｎは、１から４の間の整数である］
の構造によって表される化合物またはその薬学的に許容され得る塩、Ｎ−オキシド、水和物、互変異性体もしくは異性体と組み合わせて、ＢＲＡＦ阻害剤またはＭＥＫ阻害剤のうちの少なくとも１つを含む組成物を前記被験体に投与することを含む方法。
（項目１３）
前記タキサンがドセタキセルである、項目１２に記載の方法。
（項目１４）
前記ＢＲＡＦ阻害剤が、ベムラフェニブ、ダブラフェニブ、ＧＤＣ−０８７９、ＰＬＸ−４７２０、ソラフェニブトシル酸塩、ＬＧＸ８１８またはそれらの任意の組合せであり、および前記ＭＥＫ阻害剤が、トラメチニブ、セルメチニブ、ＲＯ５０６８７６０、ＭＥＫ１６２、ＰＤ−３２５９０１、コビメチニブ、ＣＩ−１０４０またはそれらの任意の組合せである、項目６から１３のいずれか一項に記載の方法。
（項目１５）
前記癌が、黒色腫、甲状腺癌、結腸直腸癌、乳癌、結腸癌、胆道癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）または卵巣癌である、項目６、７または１０から１４のいずれか一項に記載の方法。
（項目１６）
前記癌が、黒色腫、甲状腺癌、結腸直腸癌または卵巣癌である、項目６、７または１０から１５のいずれか一項に記載の方法。
（項目１７）
前記癌が黒色腫である、項目６、７または１０から１６のいずれか一項に記載の方法。
（項目１８）
前記黒色腫が薬物耐性黒色腫である、項目８または１４から１７のいずれか一項に記載の方法。
（項目１９）
前記黒色腫がＶ６００Ｅ陽性黒色腫である、項目１４から１８のいずれか一項に記載の方法。
（項目２０）
前記癌が薬物耐性癌である、項目６から１９のいずれか一項に記載の方法。
（項目２１）
前記ＢＲＡＦ阻害剤がベムラフェニブ、ダブラフェニブまたはそれらの組合せであり、および前記ＭＥＫ阻害剤がトラメチニブ、ＲＯ５０６８７６０またはそれらの組合せである、項目６から２０のいずれか一項に記載の方法。
（項目２２）
前記化合物が、
【化５７】
2019077727.tif 000016
またはそれらの組合せである、項目６から２１のいずれか一項に記載の方法。
（項目２３）
薬物耐性癌を処置する、抑制する、重症度を低減する、危険度を低減するまたは阻害する方法であって、チューブリン阻害剤と組み合わせてＢＲＡＦ阻害剤またはＭＥＫ阻害剤のうちの少なくとも１つを含む組成物を、薬物耐性癌に罹患している被験体に、前記癌を処置するのに有効な条件下で投与することを含む方法。
（項目２４）
癌に罹患している被験体において獲得ＢＲＡＦ阻害剤耐性を抑制する方法であって、チューブリン阻害剤と組み合わせてＢＲＡＦ阻害剤またはＭＥＫ阻害剤のうちの少なくとも１つを含む組成物を、癌に罹患している前記被験体に、前記獲得耐性を抑制するのに有効な条件下で投与することを含む方法。
（項目２５）
癌に罹患している被験体においてＢＲＡＦ阻害剤耐性の発現を遅延させるまたは予防する方法であって、チューブリン阻害剤と組み合わせてＢＲＡＦ阻害剤またはＭＥＫ阻害剤のうちの少なくとも１つを含む組成物を、癌に罹患している前記被験体に、前記耐性を遅延させるまたは予防するのに有効な条件下で投与することを含む方法。
（項目２６）
癌に罹患している被験体において癌転移を処置する、抑制する、阻害する、除去する、低減する、遅延させるまたは予防する方法であって、チューブリン阻害剤と組み合わせてＢＲＡＦ阻害剤またはＭＥＫ阻害剤のうちの少なくとも１つを含む組成物を、癌に罹患している前記被験体に、前記癌転移を処置する、抑制する、阻害する、低減する、遅延させるまたは予防するのに有効な条件下で投与することを含む方法。
（項目２７）
前記ＢＲＡＦ阻害剤がベムラフェニブ、ダブラフェニブまたはそれらの組合せであり、および前記ＭＥＫ阻害剤がトラメチニブ、ＲＯ５０６８７６０またはそれらの組合せである、項目２３から２６のいずれか一項に記載の方法。
（項目２８）
前記チューブリン阻害剤が、パクリタキセル、エポチロン、ドセタキセル、ディスコデルモリド、コルヒチン、コンブレスタチン、２−メトキシエストラジオール、メトキシベンゼンスルホンアミド（Ｅ７０１０）、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビン、ビンフルイン、ドラスタチン、ハリコンドリン、ヘミアステリン、クリプトフィシン５２、タキソールまたはそれらの任意の組合せである、項目２３から２７のいずれか一項に記載の方法。
（項目２９）
前記チューブリン阻害剤が、ドセタキセル、コルヒチン、ビンブラスチン、タキソールまたはそれらの任意の組合せである、項目２３から２８のいずれか一項に記載の方法。
（項目３０）
前記癌が、黒色腫、甲状腺癌、結腸直腸癌、乳癌、結腸癌、胆道癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）または卵巣癌である、項目２３から２９のいずれか一項に記載の方法。
（項目３１）
前記癌が黒色腫である、項目２３から３０のいずれか一項に記載の方法。
（項目３２）
ＢＲＡＦ阻害剤と組み合わせた、以下の構造：
【化５８】
2019077727.tif 000017
によって表される化合物および薬学的に許容され得る担体を含む薬学的組成物。
（項目３３）
前記ＢＲＡＦ阻害剤がベムラフェニブである、項目３２に記載の組成物。
（項目３４）
ＭＥＫ阻害剤と組み合わせた、以下の構造：
【化５９】
2019077727.tif 000018
によって表される化合物および薬学的に許容され得る担体を含む薬学的組成物。
（項目３５）
前記ＭＥＫ阻害剤がＲＯ５０６８７６０である、項目３４に記載の組成物。
（項目３６）
チューブリン阻害剤、ＢＲＡＦ阻害剤および薬学的に許容され得る担体を含む薬学的組成物。
【図面の簡単な説明】
【００２６】
本発明とみなされる主題は、本明細書の結合部分で特に指摘され、明確に特許請求される。本発明は、しかし、構成および操作方法の両方に関して、その目的、特徴および利点と共に、付属の図面と併せて読むとき、以下の詳細な説明を参照して最も良く理解され得る。
【００２７】
【図１】図１は、漸増濃度のベムラフェニブでの３か月にわたる慢性選択を用いた、ベムラフェニブ耐性Ａ３７５黒色腫細胞株（Ａ３７５ＲＦ２１）の、その親Ａ３７５細胞株からの樹立を表示する。ＭＴＳアッセイは、親Ａ３７５黒色腫における増殖阻害についてのＩＣ５０値（０．５７±０．０３μΜ）が、ベムラフェニブ耐性Ａ３７５ＲＦ２１細胞（２８．９±０．６μΜ）で試験した場合、５０倍以上増大することを示した。これに対し、化合物１２ｄａのＩＣ５０値は有意に影響を受けなかった（それぞれ、Ａ３７５親細胞株では１０．７±１．５ｎＭおよびＡ３７５ＲＦ２１では１３．６±４．４ｎＭ）。化合物１２ｄａおよびベムラフェニブの構造を図に示す。
【００２８】
【図２】図２は細胞周期分析（ｎ＝４）を表示する。Ａ、１μΜベムラフェニブで２４時間処置し、ＤＭＳＯ対照群と比較したＡ３７５またはＡ３７５ＲＦ２１細胞。１μΜのベムラフェニブは、Ａ３７５細胞をＧ０／Ｇ１期で有効に停止させたが、耐性Ａ３７５ＲＦ２１細胞は停止させることができなかった。Ｂ、ＤＭＳＯ、３０μΜベムラフェニブ、２０ｎＭ化合物１２ｄａ、２０ｎＭドセタキセルおよび組合せで２４時間処置したＡ３７５ＲＦ２１細胞。化合物１２ｄａおよびドセタキセルは、Ａ３７５ＲＦ２１細胞においてＧ２／Ｍ停止を誘導し、それらのベムラフェニブとの併用は、細胞をＧ１／Ｇ２／Ｍ期で停止させた。
【００２９】
【図３】図３は、ベムラフェニブとチューブリン阻害剤の併用が、耐性Ａ３７５ＲＦ２１細胞における細胞アポトーシスまたは細胞死の割合を相乗的に増大させたことを表示する。Ａ、Ｑ１（早期アポトーシス）、Ｑ２（アポトーシス）、Ｑ３（生）およびＱ４（死）の細胞分布を例示する代表的な４象限図。高ＳＳＣ（側方散乱）／低ＦＳＣ（前方散乱）の細胞形態学的プロフィールを有する細胞クラスターを黒色に色づけした。灰色集団と黒色集団の間でバックゲートする相違は存在しなかった。Ｂ、アポトーシスの割合を、Ｑ１、Ｑ２およびＱ４における分布パーセントを一緒に足すことによって計算した。薬剤併用群は、２つの単剤処置群におけるアポトーシス割合の単純合計と比較して、有意に高い（＊Ｐ＜０．０５）割合のアポトーシスを誘導した。
【００３０】
【図４】図４は、チューブリン重合アッセイ（ｎ＝３）に基づく精製タンパク質への単剤処置および併用処置の作用を表示する。２０μΜのベムラフェニブは、ＤＭＳＯ対照群と比較してチューブリン重合に有意の影響を及ぼさなかった。併用処置群におけるチューブリン重合阻害作用は、化合物１２ｄａによってのみ与えられた。
【００３１】
【図５】図５は、指示されている抗体を用いたＡ３７５ＲＦ２１の溶解産物に関するウェスタンブロット分析（Ａ）、４８時間の処置後のＭＤＡ−ＭＢ−４３５およびＷＭ１６４細胞（Ｂ）を表示する。ＧＡＰＤＨを負荷対照として使用した。Ａ、指示されている併用処置は、中等度のｐ−ＥＲＫレベルの低下を生じさせただけであったが、ＡＫＴリン酸化を大きく阻害し、ＰＡＲＰ切断およびカスパーゼ−３切断を含むアポトーシスマーカーのレベルを上昇させた。Ｂ、化合物１２ｄａも、他の２つのＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異ヒト黒色腫細胞株、ＭＤＡ−ＭＢ−４３５およびＷＭ１６４においてＡＫＴノックアウト作用を示した。
【００３２】
【図６】図６は、耐性Ａ３７５ＲＦ２１異種移植モデル（ｎ＝７）におけるベムラフェニブおよび化合物１２ｄａのインビボでの併用を表示する。Ａ、単離された腫瘍組織の写真。Ｂ、腫瘍体積成長曲線。Ｃ、時間に対するマウス体重のプロット。Ｄ、３週間の単剤または併用処置後の腫瘍組織切片のＨ＆Ｅ、Ｋｉ６７、ｐＡＫＴ、ｐＥＲＫおよびＳ  １００染色の代表的な免疫組織化学画像。各画像中の青色のスケールバーは１００μｍを表す。
【００３３】
【図７】図７は、Ａ３７５ＲＦ２１異種移植モデル（ｎ＝５）における高用量ベムラフェニブ（３０ｍｇ／ｋｇ）および化合物１２ｄａ（１５ｍｇ／ｋｇ）のインビボでの併用を表示する。Ａ、単離された腫瘍組織の写真。Ｂ、腫瘍体積成長曲線。Ｃ、時間に対するマウス体重のプロット。この用量の化合物１２ｄａとベムラフェニブの併用は４４．９％の腫瘍退縮を達成した。
【００３４】
【図８】図８は、本発明のアリール−ベンゾイル−イミダゾール（ＡＢＩ）化合物の調製のための合成スキームを表示する。試薬および条件：（ａ）ｔ−ＢｕＯＨ、Ｉ２、エチレンジアミン、Ｋ２ＣＯ３、還流；（ｂ）ＰｈＩ（ＯＡｃ）２、Ｋ２ＣＯ３、ＤＭＳＯ；（ｃ）ＤＢＵ、ＣＢｒＣｌ３、ＤＭＦ；（ｄ）ＮａＨ、ＰｈＳＯ２Ｃｌ、ＴＨＦ、０℃〜室温；（ｅ）ｔ−ＢｕＬｉ、置換ベンゾイルクロリド、ＴＨＦ、−７８℃；（ｆ）Ｂｕ４ＮＦ、ＴＨＦ、室温。
【００３５】
【図９】図９は、本発明のアリール−ベンゾイル−イミダゾール（ＡＢＩ）化合物の調製のための合成スキームを表示する。試薬および条件：（ａ）ＮＨ４ＯＨ、オキサルアルデヒド、エタノール、室温；（ｂ）ＮａＨ、ＰｈＳＯ２Ｃｌ、ＴＨＦ、０℃〜室温；（ｃ）ｔ−ＢｕＬｉ、置換ベンゾイルクロリド、ＴＨＦ、−７８℃；（ｄ）Ｂｕ４ＮＦ、ＴＨＦ、室温；（ｅ）ＢＢｒ３、ＣＨ２Ｃｌ２；（ｆ）ｃ−ＨＣｌ、ＡｃＯＨ、還流。
【００３６】
【図１０】図１０は、本発明のアリール−ベンゾイル−イミダゾール（ＡＢＩ）化合物の調製のための合成スキームを表示する。試薬および条件：（ａ）ＮａＨ、置換ベンゾイルクロリド、ＴＨＦ。
【００３７】
【図１１】図１１は、化合物１２ｄｃ、１２ｆｃ、１２ｄａａ、１２ｄａｂ、１２ｃｂａの合成スキームを表示する。（ａ）ＡｌＣｌ３、ＴＨＦ、還流；（ｂ）１２ｄａｂおよび１２ｃｂａについてはＮａＨ、ＣＨ３Ｉならびに１２ｄａａについてはＢｎＢｒ、ＴＨＦ、還流。
【００３８】
【図１２】図１２は、化合物１１ｇａａ、１２ｌａの合成スキームを表示する。（ａ）ＮＨ４ＯＨ、エタノール、グリオキサール、室温；（ｂ）ＮａＨ、置換ＰｈＳＯ２Ｃｌ、ＴＨＦ、０℃〜室温；（ｃ）ｔ−ＢｕＬｉ（ペンタン中１．７Ｍ）、置換ベンゾイルクロリド、ＴＨＦ、−７８℃；（ｄ）Ｂｕ４ＮＦ、室温。
【００３９】
【図１３】図１３は、化合物１２ｆａの合成スキームを表示する。（ａ）ＮＨ４ＯＨ、オキサルアルデヒド、エタノール、室温；（ｂ）ＮａＨ、ＰｈＳＯ２Ｃｌ、ＴＨＦ、０℃〜室温；（ｃ）ｔ−ＢｕＬｉ、３，４，５−トリメトキシベンゾイルクロリド、ＴＨＦ、−７８℃；（ｄ）Ｂｕ４ＮＦ、ＴＨＦ、室温。
【００４０】
【図１４】図１４は、１７ｙａ、１７ｙａｂおよび１７ｙａｃの合成スキームを表示する。（ａ）１．ＫＯＨ、エタノール、２．ＰｈＳＯ２Ｃｌ、アセトン、室温；（ｂ）ＮＨ４ＯＨ、グリオキサール、エタノール、室温；（ｃ）ＮａＨ、ＰｈＳＯ２Ｃｌ、ＴＨＦ、０℃〜室温；（ｄ）ｔ−ＢｕＬｉ（ペンタン中１．７Ｍ）、３，４，５−トリメトキシベンゾイルクロリド、ＴＨＦ、−７８℃；（ｅ）ＮａＯＨ、エタノール、Ｈ２Ｏ、還流；（ｆ）ＴＢＡＦ、ＴＨＦ、室温；（ｇ）ＮａＨ、ＣＨ３Ｉ、ＴＨＦ。
【００４１】
【図１５】図１５は、本発明の化合物（１２ｑ、７０ａ、７０ｆおよび７０ｍ）の２４時間処置に関するＰＣ３細胞周期の分布を表示する。
【００４２】
【図１６】図１６は、多剤耐性黒色腫細胞株（ＭＤＲ細胞）および適合する感受性親細胞株（通常の黒色腫細胞）に関する、他の抗癌薬および化合物と比較した２−アリール−４−ベンゾイル−イミダゾール化合物（ＡＢＩ）の用量反応曲線を表示する。パクリタキセル、ビンブラスチンおよびコルヒチンについての２つの曲線の間の大きな隔たりは、それらがＰ糖タンパク質（Ｐ−ｇｐ）の基質であったことを指し示す。各々のＡＢＩ化合物の重なり合う２つの曲線は、ＡＢＩ化合物がＰ−ｇｐの基質ではなく、多剤耐性を克服したことを指し示す。
【００４３】
【図１７】図１７は、インビトロでのチューブリン重合へのＡＢＩ化合物の作用を提示する。チューブリン（０．４ｍｇ／アッセイ）を１０μΜ  ＡＢＩ化合物（ビヒクル対照、５％ＤＭＳＯ）に暴露した。３４０ｎｍでの吸光度を３７℃で１分ごとに１５分間観測し、ＡＢＩ化合物１２ｄａ、１２ｄｂおよび１２ｃｂがインビトロでチューブリン重合を阻害することを明らかにした。
【００４４】
【図１８】図１８は、軟寒天におけるＢ１６−Ｆ１黒色腫コロニー形成アッセイを表示し、前記アッセイは、ＡＢＩ化合物がコロニー形成を濃度依存的に阻害することを示した。図１８Ａは、対照および１００ｎＭの各試験化合物（１２ｃｂ、１２ｄａおよび１２ｆｂ）の代表的な写真を表示する。各ウェルの直径は３５ｍｍであった。図１８Ｂは、各試験化合物（１２ｃｂ、１２ｄａおよび１２ｆｂ）に関するアッセイ結果の定量化した表示を示す。ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェアにより、スチューデントｔ検定を用いて対照と比較してＰ値を計算した。カラム、３つの複製の平均；バー、ＳＤ。
【００４５】
【図１９−１】図１９は、ＡＢＩ化合物のインビボ試験を表示する。図１９Ａは、Ｃ５７／ＢＬマウスにおけるＢ１６−Ｆ１黒色腫腫瘍に対する１２ｃｂのインビボ活性を表示する。図１９Ｂは、Ｃ５７ＢＬ／６マウスおよびＳＨＯヌードマウスにおけるＢ１６−Ｆ１黒色腫に対する１２ｆｂのインビボ活性を表示する。結果は、１２ｆｂが黒色腫腫瘍成長を用量依存的に阻害することを示した。Ｂ１６−Ｆ１黒色腫同種移植片を担持するＣ５７ＢＬ／６マウス（各群につきｎ＝５）。各々のマウスは、側腹部へのｓ．ｃ．注射によって０．５×１０６細胞を摂取した。腫瘍サイズが〜１００ｍｍ３に達したとき、３０μＬの毎日のｉ．ｐ．処置を開始した。図１９Ｃは、Ａ３７５ヒト黒色腫異種移植片に対する１２ｆｂのインビボ活性を表示する。Ａ３７５ヒト黒色腫異種移植片を担持するＳＨＯヌードマウス（各群につきｎ＝５）。各々のマウスは、側腹部へのｓ．ｃ．注射によって２．５×１０６細胞を摂取した。腫瘍サイズが約１５０ｍｍ３に達したとき、３０μＬの毎日のｉ．ｐ．処置を開始した。対照、ビヒクル溶液のみ；点、平均；バー、ＳＤ。ＤＴＩＣ、（５−（３，３，−ジメチル−１−トリアゼニル）−イミダゾール−４−カルボキサミド、ダカルバジン。
【図１９−２】図１９は、ＡＢＩ化合物のインビボ試験を表示する。図１９Ａは、Ｃ５７／ＢＬマウスにおけるＢ１６−Ｆ１黒色腫腫瘍に対する１２ｃｂのインビボ活性を表示する。図１９Ｂは、Ｃ５７ＢＬ／６マウスおよびＳＨＯヌードマウスにおけるＢ１６−Ｆ１黒色腫に対する１２ｆｂのインビボ活性を表示する。結果は、１２ｆｂが黒色腫腫瘍成長を用量依存的に阻害することを示した。Ｂ１６−Ｆ１黒色腫同種移植片を担持するＣ５７ＢＬ／６マウス（各群につきｎ＝５）。各々のマウスは、側腹部へのｓ．ｃ．注射によって０．５×１０６細胞を摂取した。腫瘍サイズが〜１００ｍｍ３に達したとき、３０μＬの毎日のｉ．ｐ．処置を開始した。図１９Ｃは、Ａ３７５ヒト黒色腫異種移植片に対する１２ｆｂのインビボ活性を表示する。Ａ３７５ヒト黒色腫異種移植片を担持するＳＨＯヌードマウス（各群につきｎ＝５）。各々のマウスは、側腹部へのｓ．ｃ．注射によって２．５×１０６細胞を摂取した。腫瘍サイズが〜１５０ｍｍ３に達したとき、３０μＬの毎日のｉ．ｐ．処置を開始した。対照、ビヒクル溶液のみ；点、平均；バー、ＳＤ。ＤＴＩＣ、（５−（３，３，−ジメチル−１−トリアゼニル）−イミダゾール−４−カルボキサミド、ダカルバジン。
【００４６】
【図２０】図２０は、チューブリン重合への１７ｙａおよび５５の作用を表示する。化合物１７ｙａおよび５５はチューブリン上のコルヒチン結合部位に結合し、チューブリン重合を阻害する。図２０Ａ、競合的マス結合（ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｖｅ  ｍａｓｓ  ｂｉｎｄｉｎｇ）。チューブリン（１ｍｇ／ｍＬ）およびコルヒチン（１．２μΜ）を様々な濃度のポドフィロトキシン（ｐｏｄｏｐｈｙｌｌｔｏｘｉｎ）、ビンブラスチン、化合物１７ｙａおよび５５と共にインキュベートした。Ｎ＝３；平均±ＳＤ。ポドフィロトキシンおよびビンブラスチンをそれぞれ陽性対照および陰性対照として使用した。図２０Ｂ、チューブリン重合への作用。チューブリン（０．４ｍｇ）を試験化合物（５μΜ）に暴露した。コルヒチンを陽性対照として使用した。図２０Ｃおよび２０Ｄ、ＰＣ−３（Ｃ）およびＰＣ−３／ＴｘＲ（Ｄ）細胞（Ｎ＝３）において２４時間目に細胞質ＤＮＡ−ヒストン複合体形成（アポトーシス）を増強する１７ｙａおよび５５の能力；平均±ＳＤ。ドセタキセルを陽性対照として使用した。
【００４７】
【図２１−１】図２１はインビボ抗癌効果を表示する。図２１Ａ、ＰＣ−３腫瘍を担持するヌードマウスを１日目と９日目にドセタキセル（ｉ．ｖ．、１０または２０ｍｇ／ｋｇ）で処置した（Ｎ＝５〜６）。バー、ＳＥ。図２１Ｂ、ＰＣ−３／ＴｘＲ腫瘍を担持するヌードマウスを、１日目と９日目にドセタキセル（ｉ．ｖ．、１０または２０ｍｇ／ｋｇ）で処置し、化合物１７ｙａ（ｐ．ｏ．、６．７ｍｇ／ｋｇ）で１日１回、週に５日処置した（Ｎ＝４〜５）。バー、ＳＥ。図２１Ｃ、ＰＣ−３／ＴｘＲ腫瘍を担持するヌードマウスを、化合物１７ｙａ（ＰＯ、３．３ｍｇ／ｋｇ）で最初の週は１日２回４日間処置し、次に２〜４週目は１日１回、週に５日処置し（Ｎ＝７）、化合物５５（ｐ．ｏ．、１０または３０ｍｇ／ｋｇ）で１日２回、週に５日、４週間処置した（Ｎ＝７）。バー、ＳＥ。図２１Ｄ、ＰＣ−３／ＴｘＲ腫瘍を担持するヌードマウスを化合物１７ｙａ（ＰＯ、１０ｍｇ／ｋｇ）で週に３回、４週間処置した（Ｎ＝５）。バー、ＳＥ。
【図２１−２】図２１はインビボ抗癌効果を表示する。図２１Ａ、ＰＣ−３腫瘍を担持するヌードマウスを１日目と９日目にドセタキセル（ｉ．ｖ．、１０または２０ｍｇ／ｋｇ）で処置した（Ｎ＝５〜６）。バー、ＳＥ。図２１Ｂ、ＰＣ−３／ＴｘＲ腫瘍を担持するヌードマウスを、１日目と９日目にドセタキセル（ｉ．ｖ．、１０または２０ｍｇ／ｋｇ）で処置し、化合物１７ｙａ（ｐ．ｏ．、６．７ｍｇ／ｋｇ）で１日１回、週に５日処置した（Ｎ＝４〜５）。バー、ＳＥ。図２１Ｃ、ＰＣ−３／ＴｘＲ腫瘍を担持するヌードマウスを、化合物１７ｙａ（ＰＯ、３．３ｍｇ／ｋｇ）で最初の週は１日２回４日間処置し、次に２〜４週目は１日１回、週に５日処置し（Ｎ＝７）、化合物５５（ｐ．ｏ．、１０または３０ｍｇ／ｋｇ）で１日２回、週に５日、４週間処置した（Ｎ＝７）。バー、ＳＥ。図２１Ｄ、ＰＣ−３／ＴｘＲ腫瘍を担持するヌードマウスを化合物１７ｙａ（ＰＯ、１０ｍｇ／ｋｇ）で週に３回、４週間処置した（Ｎ＝５）。バー、ＳＥ。
【００４８】
【図２２】図２２は、ＨＬ６０白血病細胞異種移植片における１７ｙａのインビボ抗癌効果を表示する。
【００４９】
【図２３】図２３は、ベムラフェニブ耐性細胞に関する抗ホスホヒストンＨ３およびＰＩ（ヨウ化プロピジウム）二変量染色細胞周期分析を表示する。Ａ３７５ＲＦ２１細胞（生物学的複製物、ｎ＝４）を、抗ホスホヒストンＨ３−ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ（登録商標）４８８抗体およびＰＩでの染色の２４時間前に５‰ＤＭＳＯ（ビヒクル対照）、単剤または指示されている組合せのいずれかを含む細胞培養培地で処置し、次にフローサイトメトリで分析した。Ａ、細胞分布を例示する代表的な図。赤色の線は、細胞周期分布をどのようにして計算したかを示すために手作業で定義した。Ｂ、細胞周期分布についての定量化データ（平均±ＳＤ）。Ｃｔｒｌ：５‰ＤＭＳＯ；Ｖｅｍ：ベムラフェニブ３０μΜ；ＡＢＩ：化合物１２ｄａ  ２０ｎＭ；Ｖｅｍ＋ＡＢＩ：ベムラフェニブ３０μΜ＋化合物１２ｄａ  ２０ｎＭ；Ｄｏｃ：ドセタキセル２０ｎＭ；Ｖｅｍ＋Ｄｏｃ：ベムラフェニブ３０μΜ＋ドセタキセル２０ｎＭ。
【００５０】
【図２４】図２４は、Ａ３７５およびＡ３７５ＲＦ２１細胞における各々の組合せのインビトロ用量反応曲線（ｎ＝５）を表示する。各プロットのｘ軸は、薬剤Ａ＋Ｂの併用処置におけるＡ３７５またはＡ３７５ＲＦ２１細胞に対する薬剤ＡまたはＢのＩＣ５０濃度についての用量密度である。図２４Ａから２４ＣはＡ３７５細胞からのデータであり、図２４Ｄから２４ＦはＡ３７５ＲＦ２１細胞からのデータである。
【００５１】
【図２５】図２５は、Ａ３７５ＲＦ２１細胞における主要なベムラフェニブ耐性機構がＰＤＧＦβの過剰発現およびＰＩ３Ｋ−ＡＫＴ経路の活性化であることを表示する。どちらの耐性機構も臨床腫瘍から広く確立されており、Ａ３７５ＲＦ２１細胞の耐性機構が臨床的に関連する薬物耐性機構を表し得ることを指し示す。パネルＡ：２．５μΜベムラフェニブ（Ａ３７５ＲＦ２１細胞の培養維持濃度）の存在下または不在下での、感受性親Ａ３７５細胞およびベムラフェニブ耐性Ａ３７５ＲＦ２１細胞における種々のタンパク質レベルを比較するウェスタンブロット分析。細胞を対照ビヒクルまたは２．５μΜベムラフェニブと共に２４時間インキュベートした。３０μΜ過酸化水素で３０分間刺激した後、ホスホ−ＰＩ３Ｋレベルを測定した。グラフは、３つの独立した実験の代表的な結果を示した。パネルＢ：Ａ３７５およびＡ３７５ＲＦ２１細胞に対する、ＭＴＳアッセイ（ｎ＝４）で決定したキナーゼ阻害剤の成長阻害効果。トラメチニブおよびセルメチニブ（ｓｅｌｕｍｅｎｉｔｉｂ）はＭＥＫ阻害剤であり、スニチニブ（リンゴ酸塩）はＲＴＫ阻害剤である。パネルＣ：計算したＩＣ５０値の比較（平均±ＳＤとして示した）。
【００５２】
【図２６】図２６は、Ａ３７５およびベムラフェニブ耐性亜株Ａ３７５ＲＦ２１細胞についてのインビトロ成長曲線を表示する。１００μｌの細胞成長培地中の２０００細胞を９６ウェルプレートの各ウェル（ｎ＝６）に接種し、３７℃、５％ＣＯ２でインキュベートした。それに応じて、指示されている各時点でＳＲＢアッセイによって総タンパク質量を測定した。次に５６４ｎｍでの吸光度値を成長時間に対してプロットした。
【００５３】
【図２７】図２７は、研究戦略の図式的説明を表示する。Ｐ２ベムラフェニブ感受性またはベムラフェニブ耐性ＰＤＸ腫瘍を移植したＮＳＧマウスをＪＡＸより購入する。試験用に十分な量のＰ３腫瘍を生成するため、Ｐ２腫瘍を付加的なＮＳＧマウスで増殖させる。採取したＰ３腫瘍の遺伝的プロフィールおよび組織学を特性づけ、腫瘍の忠実度を確保するためＪＡＸで樹立された元のＰ０細胞からの基準で確認する。Ｐ３腫瘍片をマウスに移植し、目的１および２（実施例１１）で述べる効果試験のためのＰ４腫瘍を形成する。加えて、目的３において黒色腫転移に対する併用の効果を評価するため、Ｐ３腫瘍由来の単細胞懸濁液を実験的黒色腫肺転移モデルでマウスに尾静脈注射する。
【００５４】
【図２８】図２８は、マウスにおける肺への黒色腫の変異の、ＡＢＩ  １２ｃｂ、１２ｄａおよび１２ｆｂによる阻害を表示する。パネルＡ：黒色腫結節（黒色の点、各群につきｎ＝８）を有する肺の代表的な写真。処置は、週に５日、２週間のｉ．ｐ．注射であった。パネルＢ：各々の肺上の黒色腫結節の数。点：個々の結節数；真ん中の長い線：平均；上部および下部の短い線：９５％信頼区間＊＊および＃＃：ｐ＜０．０１。パネルＣ：実験の間のマウス体重の変化。点：平均；バー：ＳＤ。対照：ビヒクル溶液のみ。
【００５５】
説明の簡潔さと明瞭さのために、図に示す要素は必ずしも正確な縮尺率ではないことが認識される。例えば、要素の一部の寸法は、明瞭さのために他の要素に比べて誇張されていることがある。さらに、適切とみなされる場合は、参照数値が、対応する要素または類似の要素を指し示すために図面の間で反復されていることがある。
【発明を実施するための形態】
【００５６】
１つの実施形態では、本発明は、式Ｉ：
【化６】
2019077727.tif 000019
［式中、
Ａは、単一または縮合芳香族またはヘテロ芳香族環系であり；
Ｚは、ＯまたはＳであり；  
Ｒ１は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６直鎖または分岐アルキル、アリール、フェニル、ベンジル、ハロアルキル、アミノアルキル、−ＯＣＨ２Ｐｈ、ＳＯ２−アリール、ＳＯ２−フェニル、−（Ｃ＝Ｏ）−アリール、−（Ｃ＝Ｏ）−フェニルまたはＯＨであり；
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５は、それぞれ独立して水素、Ｃ１−Ｃ６直鎖または分岐アルキル、Ｃ１−Ｃ６直鎖または分岐ハロアルキル、Ｃ１−Ｃ６直鎖または分岐アルコキシ、Ｃ１−Ｃ６直鎖または分岐ハロアルコキシ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＦ３、ＣＮ、−ＣＨ２ＣＮ、ＮＨ２、ＯＨ、−ＯＣ（Ｏ）ＣＦ３、アルキルアミノ、アミノアルキル、−ＯＣＨ２Ｐｈ、−ＮＨＣＯ−アルキル、ＣＯＯＨ、−Ｃ（Ｏ）Ｐｈ、Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｈ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２またはＮＯ２であり；ならびに
ｍおよびｎは、それぞれ独立して０から４の間の整数である］
の構造によって表される化合物またはその薬学的に許容され得る塩、Ｎ−オキシド、水和物、互変異性体もしくは異性体に関する。
【００５７】
１つの実施形態では、Ａはアリールである。別の実施形態では、Ａはフェニルである。別の実施形態では、Ａはインドリルである。別の実施形態では、Ａは３−インドリルである。別の実施形態では、ＺはＯである。
【００５８】
１つの実施形態では、Ｒ２はＯＭｅである。別の実施形態では、Ｒ３はＨである。別の実施形態では、ｍは３である。別の実施形態では、Ｒ２はＯＭｅであり、Ｒ３はＨであり、およびｍは３である。
【００５９】
１つの実施形態では、Ｒ４はＣ１−Ｃ６直鎖または分岐アルキルである。別の実施形態では、Ｒ４はＭｅである。別の実施形態では、Ｒ４はＨである。別の実施形態では、Ｒ５はＨである。別の実施形態では、ｎは１である。別の実施形態では、Ｒ４はＭｅであり、Ｒ５はＨであり、およびｎは１である。別の実施形態では、Ｒ４はＨであり、Ｒ５はＨであり、およびｎは１である。
【００６０】
別の実施形態では、Ｒ１はＨである。別の実施形態では、Ｒ１はＣ１−Ｃ６直鎖または分岐アルキルである。別の実施形態では、Ｒ１はＭｅである。
【００６１】
１つの実施形態では、本発明は、式ＩＩ：
【化７】
2019077727.tif 000020
［式中、
Ａは、単一または縮合芳香族またはヘテロ芳香族環系であり；
Ｒ１は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６直鎖または分岐アルキル、アリール、フェニル、ベンジル、ハロアルキル、アミノアルキル、−ＯＣＨ２Ｐｈ、ＳＯ２−アリール、ＳＯ２−フェニル、−（Ｃ＝Ｏ）−アリール、−（Ｃ＝Ｏ）−フェニルまたはＯＨであり；
Ｒ４およびＲ５は、それぞれ独立して水素、Ｃ１−Ｃ６直鎖または分岐アルキル、Ｃ１−Ｃ６直鎖または分岐ハロアルキル、Ｃ１−Ｃ６直鎖または分岐アルコキシ、Ｃ１−Ｃ６直鎖または分岐ハロアルコキシ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＦ３、ＣＮ、−ＣＨ２ＣＮ、ＮＨ２、ＯＨ、−ＯＣ（Ｏ）ＣＦ３、アルキルアミノ、アミノアルキル、−ＯＣＨ２Ｐｈ、−ＮＨＣＯ−アルキル、ＣＯＯＨ、−Ｃ（Ｏ）Ｐｈ、Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｈ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２またはＮＯ２であり；ならびに
ｎは、１から４の間の整数である］
の構造によって表される化合物またはその薬学的に許容され得る塩、Ｎ−オキシド、水和物、互変異性体もしくは異性体に関する。
【００６２】
１つの実施形態では、Ａはアリールである。別の実施形態では、Ａはフェニルである。別の実施形態では、Ａはインドリルである。別の実施形態では、Ａは３−インドリルである。
【００６３】
１つの実施形態では、Ｒ４はＣ１−Ｃ６直鎖または分岐アルキルである。別の実施形態では、Ｒ４はＭｅである。別の実施形態では、Ｒ４はＨである。別の実施形態では、Ｒ５はＨである。別の実施形態では、ｎは１である。別の実施形態では、Ｒ４はＭｅであり、Ｒ５はＨであり、およびｎは１である。別の実施形態では、Ｒ４はＨであり、Ｒ５はＨであり、およびｎは１である。
【００６４】
別の実施形態では、Ｒ１はＨである。別の実施形態では、Ｒ１はＣ１−Ｃ６直鎖または分岐アルキルである。別の実施形態では、Ｒ１はＭｅである。
【００６５】
１つの実施形態では、本発明は、式ＩＩＩ：
【化８】
2019077727.tif 000021
［式中、
Ｒ１およびＲ９は、それぞれ独立してＨ、Ｃ１−Ｃ６直鎖または分岐アルキル、アリール、フェニル、ベンジル、ハロアルキル、アミノアルキル、−ＯＣＨ２Ｐｈ、ＳＯ２−アリール、ＳＯ２−フェニル、−（Ｃ＝Ｏ）−アリール、−（Ｃ＝Ｏ）−フェニルまたはＯＨであり；
Ｒ４およびＲ５は、それぞれ独立して水素、Ｃ１−Ｃ６直鎖または分岐アルキル、Ｃ１−Ｃ６直鎖または分岐ハロアルキル、Ｃ１−Ｃ６直鎖または分岐アルコキシ、Ｃ１−Ｃ６直鎖または分岐ハロアルコキシ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＦ３、ＣＮ、−ＣＨ２ＣＮ、ＮＨ２、ＯＨ、−ＯＣ（Ｏ）ＣＦ３、アルキルアミノ、アミノアルキル、−ＯＣＨ２Ｐｈ、−ＮＨＣＯ−アルキル、ＣＯＯＨ、−Ｃ（Ｏ）Ｐｈ、Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｈ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２またはＮＯ２であり；ならびに
ｎは、１から４の間の整数である］
の構造によって表される化合物またはその薬学的に許容され得る塩、Ｎ−オキシド、水和物、互変異性体もしくは異性体に関する。
【００６６】
１つの実施形態では、Ｒ４はＨである。別の実施形態では、Ｒ５はＨである。別の実施形態では、ｎは１である。別の実施形態では、Ｒ４はＨであり、Ｒ５はＨであり、およびｎは１である。別の実施形態では、Ｒ９はＨである。別の実施形態では、Ｒ９はＭｅである。
【００６７】
別の実施形態では、Ｒ１はＨである。別の実施形態では、Ｒ１はＣ１−Ｃ６直鎖または分岐アルキルである。別の実施形態では、Ｒ１はＭｅである。
【００６８】
別の実施形態では、式ＩＩＩの化合物は、化合物１７ｙａ：
【化９】
2019077727.tif 000022
の構造によって表される。
【００６９】
１つの実施形態では、本発明は、式ＩＶ：
【化１０】
2019077727.tif 000023
［式中、
Ｒ１は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６直鎖または分岐アルキル、アリール、フェニル、ベンジル、ハロアルキル、アミノアルキル、−ＯＣＨ２Ｐｈ、ＳＯ２−アリール、ＳＯ２−フェニル、−（Ｃ＝Ｏ）−アリール、−（Ｃ＝Ｏ）−フェニルまたはＯＨであり；
Ｒ４およびＲ５は、それぞれ独立して水素、Ｃ１−Ｃ６直鎖または分岐アルキル、Ｃ１−Ｃ６直鎖または分岐ハロアルキル、Ｃ１−Ｃ６直鎖または分岐アルコキシ、Ｃ１−Ｃ６直鎖または分岐ハロアルコキシ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＦ３、ＣＮ、−ＣＨ２ＣＮ、ＮＨ２、ＯＨ、−ＯＣ（Ｏ）ＣＦ３、アルキルアミノ、アミノアルキル、−ＯＣＨ２Ｐｈ、−ＮＨＣＯ−アルキル、ＣＯＯＨ、−Ｃ（Ｏ）Ｐｈ、Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｈ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２またはＮＯ２であり；ならびに
ｎは、１から４の間の整数である］
の構造によって表される化合物またはその薬学的に許容され得る塩、Ｎ−オキシド、水和物、互変異性体もしくは異性体に関する。
【００７０】
１つの実施形態では、Ｒ４はＣ１−Ｃ６直鎖または分岐アルキルである。別の実施形態では、Ｒ４はＭｅである。別の実施形態では、Ｒ４はＨである。別の実施形態では、Ｒ５はＨである。別の実施形態では、ｎは１である。別の実施形態では、Ｒ４はＭｅであり、Ｒ５はＨであり、およびｎは１である。
【００７１】
別の実施形態では、Ｒ１はＨである。別の実施形態では、Ｒ１はＣ１−Ｃ６直鎖または分岐アルキルである。別の実施形態では、Ｒ１はＭｅである。
【００７２】
別の実施形態では、式ＩＶの化合物は、化合物１２ｄａ：
【化１１】
2019077727.tif 000024
の構造によって表される。
【００７３】
１つの実施形態では、式ＩおよびＩＩの化合物のＡはＰｈである。別の実施形態では、式ＩおよびＩＩの化合物のＡはインドリルである。別の実施形態では、式ＩおよびＩＩの化合物のＡは２−インドリルである。別の実施形態では、式ＩおよびＩＩの化合物のＡは３−インドリルである。別の実施形態では、式ＩおよびＩＩの化合物のＡは４−インドリルである。別の実施形態では、式ＩおよびＩＩの化合物のＡは５−インドリルである。別の実施形態では、式ＩおよびＩＩの化合物のＡは６−インドリルである。別の実施形態では、式ＩおよびＩＩの化合物のＡは７−インドリルである。
【００７４】
別の実施形態では、Ｒ５はパラ位置にある。別の実施形態では、Ｒ５はメタ位置にある。別の実施形態では、Ｒ５はオルト位置にある。別の実施形態では、Ｒ５は４−Ｍｅである。別の実施形態では、Ｒ５はＨである。別の実施形態では、Ｒ５は４−Ｆである。
【００７５】
別の実施形態では、Ｒ４はＨである。
【００７６】
別の実施形態では、ｎは１である。
【００７７】
１つの実施形態では、式ＩおよびＩＩの化合物のＡ基は、フラニル、ベンゾフラニル、ベンゾチオフェニル、インドリル、ピリジニル、フェニル、ビフェニル、トリフェニル、ジフェニルメタン、アダマンタン−イル、フルオレン−イル、および他の複素環式類似体、例えばピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、ピリジニル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジニル、トリアジニル、テトラジニル、ピロリジニル、インドリル、イソキノリニル、キノリニル、イソキノリニル、ベンゾイミダゾリル、インダゾリル、キノリジニル、シンノリニル、キナロリニル、フタラジニル、ナフチリジニル、キノキサリニル、オキシラニル、オキセタニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロピラニル、ジオキサニル、フラニル、ピリリウム、ベンゾジオキソリル、チラニル、チエタニル、テトラヒドロチオフェン−イル、ジチオラニル、テトラヒドロチオピラニル、チオフェン−イル、チエピニル、チアナフテニル、オキサチオラニル、モルホリニル、チオキサニル、チアゾリル、イソチアゾリル、チアジアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、オキサジアジオリルなどである。
【００７８】
１つの実施形態では、Ａはフェニルである。別の実施形態では、Ａはインドリル基であり、最も好ましくは３−インドリルおよび５−インドリルである。
【００７９】
１つの実施形態では、式ＩのＺはＯである。別の実施形態では、ＺはＳである。
【００８０】
１つの実施形態では、式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩおよびＩＶのＲ１は水素である。別の実施形態では、Ｒ１はＣ１−Ｃ６直鎖または分岐アルキルである。別の実施形態では、Ｒ１はＭｅである。別の実施形態では、Ｒ１はＣ１−Ｃ６直鎖または分岐ハロアルキルである。別の実施形態では、Ｒ１はＣＦ３である。別の実施形態では、Ｒ１はフェニルである。別の実施形態では、Ｒ１はベンジルである。別の実施形態では、Ｒ１はＳＯ２−アリールである。別の実施形態では、Ｒ１は（Ｃ＝Ｏ）−アリールである。
【００８１】
１つの実施形態では、式ＩのＲ３はパラ位置にある。別の実施形態では、Ｒ３はメタ位置にある。別の実施形態では、Ｒ３はオルト位置にある。
【００８２】
１つの実施形態では、式ＩのＲ２およびＲ３は、独立して水素である。別の実施形態では、Ｒ２およびＲ３は、独立してＣ１−Ｃ６直鎖または分岐アルコキシである。別の実施形態では、Ｒ２およびＲ３は、独立してＯＣＨ３である。別の実施形態では、Ｒ２およびＲ３は、独立してＦである。別の実施形態では、Ｒ２およびＲ３は、独立して４−Ｆである。別の実施形態では、Ｒ２およびＲ３は、独立してＣｌである。別の実施形態では、Ｒ２およびＲ３は、独立してＢｒである。別の実施形態では、Ｒ２およびＲ３は、独立してＩである。別の実施形態では、Ｒ２およびＲ３は、独立してＣ１−Ｃ６直鎖または分岐ハロアルキルである。別の実施形態では、Ｒ２およびＲ３は、独立してＣＦ３である。別の実施形態では、Ｒ２およびＲ３は、独立してＣＮである。別の実施形態では、Ｒ２およびＲ３は、独立してＮＨ２である。別の実施形態では、Ｒ２およびＲ３は、独立してＯＨである。別の実施形態では、Ｒ２およびＲ３は、独立してＣ１−Ｃ６直鎖または分岐アルキルである。別の実施形態では、Ｒ２およびＲ３は、独立してＣＨ３である。別の実施形態では、Ｒ２およびＲ３は、独立してＮＯ２である。別の実施形態では、Ｒ２およびＲ３は、独立してアルキルアミノである。別の実施形態では、Ｒ２およびＲ３は、独立して４−Ｎ（Ｍｅ）２である。
【００８３】
１つの実施形態では、式Ｉのｍは０である。別の実施形態では、ｍは１である。別の実施形態では、ｍは２である。別の実施形態では、ｍは３である。別の実施形態では、ｍは４である。
【００８４】
１つの実施形態では、式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩおよびＩＶのＲ５はパラ位置にある。別の実施形態では、Ｒ５はメタ位置にある。別の実施形態では、Ｒ５はオルト位置にある。
【００８５】
１つの実施形態では、式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩおよびＩＶのＲ４およびＲ５は、独立して水素である。別の実施形態では、Ｒ４およびＲ５は、独立してＣ１−Ｃ６直鎖または分岐アルコキシである。別の実施形態では、Ｒ４およびＲ５は、独立してＯＭｅである。別の実施形態では、Ｒ４およびＲ５は、独立してＦである。別の実施形態では、Ｒ４およびＲ５は、独立してＣｌである。別の実施形態では、Ｒ４およびＲ５は、独立してＢｒである。別の実施形態では、Ｒ４およびＲ５は、独立してＩである。別の実施形態では、Ｒ４およびＲ５は、独立してＣ１−Ｃ６直鎖または分岐ハロアルキルである。別の実施形態では、Ｒ４およびＲ５は、独立してＣＦ３である。別の実施形態では、Ｒ４およびＲ５は、独立してＣＮである。別の実施形態では、Ｒ４およびＲ５は、独立してＮＨ２である。別の実施形態では、Ｒ４およびＲ５は、独立してＯＨである。別の実施形態では、Ｒ４およびＲ５は、独立してＣ１−Ｃ６直鎖または分岐アルキルである。別の実施形態では、Ｒ４およびＲ５は、独立してＮＯ２である。別の実施形態では、Ｒ４およびＲ５は、独立してアルキルアミノである。
【００８６】
１つの実施形態では、式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩおよびＩＶのｎは０である。別の実施形態では、ｎは１である。別の実施形態では、ｎは２である。別の実施形態では、ｎは３である。別の実施形態では、ｎは４である。
【００８７】
複素環式環に関して、ｎは、置換に利用できる位置の数、すなわち（ＣＨ基の数−１）に限定されることが理解される。したがって、Ａ環が、例えばフラニル、チオフェニルまたはピロリルである場合、ｎは０から２の間であり；およびＡ環が、例えばオキサゾリル、イミダゾリルまたはチアゾリルである場合、ｎは０または１のいずれかである；およびＡ環が、例えばオキサジアゾリルまたはチアジアゾリルである場合、ｎは０である。
【００８８】
１つの実施形態では、式ＩＩＩのＲ９は水素である。別の実施形態では、Ｒ９はＣ１−Ｃ６直鎖または分岐アルキルである。別の実施形態では、Ｒ９はＣＨ３である。別の実施形態では、Ｒ９はＣ１−Ｃ６直鎖または分岐ハロアルキルである。別の実施形態では、Ｒ９はＣＦ３である。別の実施形態では、Ｒ９はフェニルである。別の実施形態では、Ｒ９は−ＣＨ２Ｐｈである。別の実施形態では、Ｒ９はＳＯ２−アリールである。別の実施形態では、Ｒ９は（Ｃ＝Ｏ）−アリールである。別の実施形態では、Ｒ９は（ＳＯ２）Ｐｈである。別の実施形態では、Ｒ９は（ＳＯ２）−Ｐｈ−ＯＣＨ３である。
【００８９】
本明細書で使用される場合、「単一または縮合芳香族またはヘテロ芳香族環系」は、フェニル、インドリル、１Ｈ−インドール、イソインドリル、ピリジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、ピラジニル、トリアジニル、テトラジニル、チアゾリル、イソチアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、イミダゾリル、ピラゾリル、ピロリル、フラニル、チオフェン−イル、イソキノリニル、ナフチル、アントラセニル、ベンゾイミダゾリル、インダゾリル、２Ｈ−インダゾール、４，５，６，７−テトラヒドロ−２Ｈ−インダゾール、３Ｈ−インドール−３−オン、プリニル、ベンゾオキサゾリル、１，３−ベンゾオキサゾリル、ベンゾイソオキサゾリル、ベンゾチアゾリル、１，３−ベンゾチアゾール、４，５，６，７−テトラヒドロ−１，３−ベンゾチアゾール、キナゾリニル、キノキサリニル、シンノリニル、フタラジニル、キノリニル、イソキノリニル、アクリジニル、ベンゾフラニル、１−ベンゾフラン、イソベンゾフラニル、ベンゾチオフェニル、ベンゾ［ｃ］チオフェニル、ベンゾジオキソリル、チアジアゾリル、［１，３］オキサゾロ［４，５−ｂ］ピリジン、オキサジアジオリル、イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３］チアゾール、４Ｈ，５Ｈ，６Ｈ−シクロペンタ［ｄ］［１，３］チアゾール、５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン、７−オキソ−６Ｈ，７Ｈ−［１，３］チアゾロ［４，５−ｄ］ピリミジン、［１，３］チアゾロ［５，４−ｂ］ピリジン、２Ｈ，３Ｈ−イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３］チアゾール、チエノ［３，２−ｄ］ピリミジン−４（３Ｈ）−オン、４−オキソ−４Ｈ−チエノ［３，２−ｄ［１，３］チアジン、イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン、ピラゾロ［１，５−ａ］ピリジン、イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン、イミダゾ［１，２−ａ］ピリミジン、ｌＨ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン、ピリド［２，３−ｂ］ピラジン、ピリド［２，３−ｂ］ピラジン−３（４Ｈ）−オン、４Ｈ−チエノ［３，２−ｂ］ピロール、キノキサリン−２（１Ｈ）−オン、１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン、７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン、オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン、チアゾロ［５，４−ｂ］ピリジン等が含まれるがこれらに限定されない、任意のそのような環であり得る。
【００９０】
本明細書で使用される場合、「複素環式環系」は、アザ−およびジアザ−シクロアルキル、例えばアジリジニル、アゼチジニル、ジアザチジニル、ピロリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、ならびにアゾカニル、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、ピリジニル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジニル、トリアジニル、テトラジニル、ピロリジニル、インドリル、キノリニル、イソキノリニル、ベンゾイミダゾリル、インダゾリル、キノリジニル、シンノリニル、キノロリニル、フタラジニル、ナフチリジニル、キノキサリニル等が含まれるがこれらに限定されない、飽和または不飽和Ｎ−複素環；オキシラニル、オキセタニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロピラニル、ジオキサニル、フラニル、ピリリウム、ベンゾフラニル、ベンゾジオキソリル等が含まれるがこれらに限定されない、飽和または不飽和Ｏ複素環；チラニル、チエタニル、テトラヒドロチオフェン−イル、ジチオラニル、テトラヒドロチオピラニル、チオフェン−イル、ベンゾチオフェニル、チエピニル、チアナフテニル等が含まれるがこれらに限定されない、飽和または不飽和Ｓ−複素環；オキサチオラニル、モルホリニル、チオキサニル、チアゾリル、イソチアゾリル、チアジアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、オキサジアジオリル等が含まれるがこれらに限定されない、２またはそれを超えるＳ、ＮまたはＯヘテロ原子を含む任意の複素環であり得る飽和または不飽和混合複素環を指す。
【００９１】
本明細書で使用される場合、「アルキル」という用語は、特に指定されない限り、最大約３０個までの炭素を含む任意の直鎖または分岐鎖アルキル基であり得る。別の実施形態では、アルキルはＣ１−Ｃ６炭素を含む。別の実施形態では、アルキルはＣ１−Ｃ８炭素を含む。別の実施形態では、アルキルはＣ１−Ｃ１０炭素を含む。別の実施形態では、アルキルはＣ１−Ｃ１２炭素を含む。別の実施形態では、アルキルはＣ１−Ｃ２０炭素を含む。別の実施形態では、環状アルキル基は３〜８個の炭素を含む。別の実施形態では、分岐アルキルは、１から５個の炭素のアルキル側鎖によって置換されたアルキルである。１つの実施形態では、アルキル基は置換されていなくてもよい。別の実施形態では、アルキル基は、ハロゲン、ハロアルキル、ヒドロキシル、アルコキシ、カルボニル、アミド、アルキルアミド、ジアルキルアミド、シアノ、ニトロ、ＣＯ２Ｈ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、カルボキシル、チオおよび／またはチオアルキルによって置換されていてもよい。
【００９２】
アルキル基は単独置換基であり得、またはアルキル基は、例えばアルコキシ、ハロアルキル、アリールアルキル、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アルキルアミド、アルキル尿素等におけるような、より大きな置換基の成分であり得る。好ましいアルキル基は、メチル、エチルおよびプロピル、ならびにしたがってハロメチル、ジハロメチル、トリハロメチル、ハロエチル、ジハロエチル、トリハロエチル、ハロプロピル、ジハロプロピル、トリハロプロピル、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、アリールメチル、アリールエチル、アリールプロピル、メチルアミノ、エチルアミノ、プロピルアミノ、ジメチルアミノ、ジエチルアミノ、メチルアミド、アセトアミド、プロピルアミド、ハロメチルアミド、ハロエチルアミド、ハロプロピルアミド、メチル尿素、エチル尿素、プロピル尿素等である。
【００９３】
本明細書で使用される場合、「アリール」という用語は、別の基に直接結合した任意の芳香族環を指す。アリール基は単独置換基であり得、またはアリール基は、例えばアリールアルキル、アリールアミノ、アリールアミド等におけるような、より大きな置換基の成分であり得る。例示的なアリール基には、限定されることなく、フェニル、トリル、キシリル、フラニル、ナフチル、ピリジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、ピラジニル、トリアジニル、チアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、ピラゾリル、イミダゾリル、チオフェン−イル、ピロリル、フェニルメチル、フェニルエチル、フェニルアミノ、フェニルアミド等が含まれる。置換基には、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ｃ１−Ｃ５直鎖または分岐アルキル、Ｃ１−Ｃ５直鎖または分岐ハロアルキル、Ｃ１−Ｃ５直鎖または分岐アルコキシ、Ｃ１−Ｃ５直鎖または分岐ハロアルコキシ、ＣＦ３、ＣＮ、Ｎ０２、−ＣＨ２ＣＮ、ＮＨ２、ＮＨ−アルキル、Ｎ（アルキル）２、ヒドロキシル、−ＯＣ（０）ＣＦ３、−ＯＣＨ２Ｐｈ、−ＮＨＣＯ−アルキル、ＣＯＯＨ、−Ｃ（Ｏ）Ｐｈ、Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｈまたは−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２が含まれるが、これらに限定されない。
【００９４】
本明細書で使用される場合、「アルコキシ」という用語は、上記で定義されたアルキル基によって置換されたエーテル基を指す。アルコキシは、直鎖アルコキシ基および分岐アルコキシ基の両方を指す。アルコキシ基の非限定的な例は、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソ−プロポキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシである。
【００９５】
本明細書で使用される場合、「アミノアルキル」という用語は、上記で定義されたアルキル基によって置換されたアミン基を指す。アミノアルキルは、モノアルキルアミン、ジアルキルアミンまたはトリアルキルアミンを指す。アミノアルキル基の非限定的な例は、−Ｎ（Ｍｅ）２、−ＮＨＭｅ、−ＮＨ３である。
【００９６】
「ハロアルキル」基は、別の実施形態では、１個またはそれを超えるハロゲン原子、例えばＦ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩによって置換された、上記で定義されたアルキル基を指す。ハロアルキル基の非限定的な例は、ＣＦ３、ＣＦ２ＣＦ３、ＣＨ２ＣＦ３である。
【００９７】
「アルコキシアルキル」基は、別の実施形態では、上記で定義されたアルコキシ基、例えばメトキシ、エトキシ、プロポキシ、ｉ−プロポキシ、ｔ−ブトキシ等によって置換された、上記で定義されたアルキル基を指す。アルコキシアルキル基の非限定的な例は、−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ３、−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２−Ｏ−Ｃ（ＣＨ３）３、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ３、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−Ｃ（ＣＨ３）３である。
【００９８】
「シクロアルキル」または「炭素環式」基は、１つの実施形態では、飽和または不飽和、置換または非置換のいずれかであってよい、炭素原子を環原子として含む環構造を指す。別の実施形態では、シクロアルキルは３〜１２員環である。別の実施形態では、シクロアルキルは６員環である。別の実施形態では、シクロアルキルは５〜７員環である。別の実施形態では、シクロアルキルは３〜８員環である。別の実施形態では、シクロアルキル基は、置換されていなくてもよくまたはハロゲン、アルキル、ハロアルキル、ヒドロキシル、アルコキシ、カルボニル、アミド、アルキルアミド、ジアルキルアミド、シアノ、ニトロ、ＣＯ２Ｈ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、カルボキシル、チオおよび／もしくはチオアルキルによって置換されていてもよい。別の実施形態では、シクロアルキル環は、別の飽和もしくは不飽和シクロアルキルまたは複素環式３〜８員環に縮合していてもよい。別の実施形態では、シクロアルキル環は飽和環である。別の実施形態では、シクロアルキル環は不飽和環である。シクロアルキル基の非限定的な例には、シクロヘキシル、シクロヘキセニル、シクロプロピル、シクロプロペニル、シクロペンチル、シクロペンテニル、シクロブチル、シクロブテニル、シクロオクチル、シクロオクタジエニル（ＣＯＤ）、シクロオクテン（ｃｙｃｌｏｃｔａｅｎｅ）（ＣＯＥ）等が含まれる。
【００９９】
「複素環」または「複素環式」基は、１つの実施形態では、炭素原子に加えて、硫黄、酸素、窒素またはそれらの任意の組合せを環の一部として含む環構造を指す。別の実施形態では、複素環は３〜１２員環である。別の実施形態では、複素環は６員環である。別の実施形態では、複素環は５〜７員環である。別の実施形態では、複素環は３〜８員環である。別の実施形態では、複素環基は、置換されていなくてもよくまたはハロゲン、アルキル、ハロアルキル、ヒドロキシル、アルコキシ、カルボニル、アミド、アルキルアミド、ジアルキルアミド、シアノ、ニトロ、ＣＯ２Ｈ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、カルボキシル、チオおよび／もしくはチオアルキルによって置換されていてもよい。別の実施形態では、複素環は、別の飽和もしくは不飽和シクロアルキルまたは複素環式３〜８員環に縮合していてもよい。別の実施形態では、複素環は飽和環である。別の実施形態では、複素環は不飽和環である。複素環の非限定的な例には、ピリジン、ピペリジン、モルホリン、ピペラジン、チオフェン、ピロール、ベンゾジオキソールまたはインドールが含まれる。
【０１００】
１つの実施形態では、本発明は、本発明の化合物またはその異性体、代謝産物、薬学的に許容され得る塩、薬学的生成物、互変異性体、水和物、Ｎ−オキシド、多形体もしくは結晶またはそれらの組合せを提供する。１つの実施形態では、本発明は、本発明の化合物の異性体を提供する。別の実施形態では、本発明は、本発明の化合物の代謝産物を提供する。別の実施形態では、本発明は、本発明の化合物の薬学的に許容され得る塩を提供する。別の実施形態では、本発明は、本発明の化合物の薬学的生成物を提供する。別の実施形態では、本発明は、本発明の化合物の互変異性体を提供する。別の実施形態では、本発明は、本発明の化合物の水和物を提供する。別の実施形態では、本発明は、本発明の化合物のＮ−オキシドを提供する。別の実施形態では、本発明は、本発明の化合物の多形体を提供する。別の実施形態では、本発明は、本発明の化合物の結晶を提供する。別の実施形態では、本発明は、本明細書で述べる本発明の化合物、または別の実施形態では、本発明の化合物の異性体、代謝産物、薬学的に許容され得る塩、薬学的生成物、互変異性体、水和物、Ｎ−オキシド、多形体もしくは結晶の組合せを含む組成物を提供する。
【０１０１】
１つの実施形態では、「異性体」という用語には、光学異性体および類似体、構造異性体および類似体、配座異性体および類似体等が含まれるが、これらに限定されない。別の実施形態では、異性体は光学異性体である。
【０１０２】
１つの実施形態では、本発明の化合物は純粋な（Ｅ）異性体である。別の実施形態では、本発明の化合物は純粋な（Ｚ）異性体である。別の実施形態では、本発明の化合物は（Ｅ）異性体と（Ｚ）異性体の混合物である。１つの実施形態では、本発明の化合物は純粋な（Ｒ）異性体である。別の実施形態では、本発明の化合物は純粋な（Ｓ）異性体である。別の実施形態では、本発明の化合物は（Ｒ）異性体と（Ｓ）異性体の混合物である。
【０１０３】
本発明の化合物はまた、実質的に等しい量の立体異性体を含む、ラセミ混合物の形態で存在することもできる。別の実施形態では、本発明の化合物は、対応する立体異性体を実質的に含まない（すなわち実質的に純粋な）立体異性体を得るために、公知の手順を用いて調製するまたはさもなければ単離することができる。「実質的に純粋」により、立体異性体が少なくとも約９５％純粋、より好ましくは少なくとも約９８％純粋、最も好ましくは少なくとも約９９％純粋であることが意味される。
【０１０４】
本発明の化合物はまた、水和物の形態でもあり得、これは、化合物が非共有結合分子間力によって結合した化学量論的量または非化学量論的量の水をさらに含むことを意味する。
【０１０５】
本発明の化合物は、可能な互変異性体の１つまたはそれより多い形態で存在してもよく、特定の条件に依存して互変異性体の一部または全部を個別の異なる実体に分離することが可能であり得る。すべての付加的なエノールおよびケト互変異性体および／または異性体を含む可能な互変異性体のすべてが本明細書によってカバーされることが理解されるべきである。例えば以下の互変異性体が含まれるが、これらに限定されない。
【化１２】
2019077727.tif 000025
【０１０６】
本発明の互変異性体は、自由に相互変換する互変異性体であり、未分割混合物ではない。本発明のイミダゾールおよび他の環系は互変異性化可能である。すべての互変異性体は本発明の一部とみなされる。
【０１０７】
窒素原子が３未満の結合を有する、本発明で提示される構造において、Ｈ原子は窒素の原子価を満たすように存在することは十分に理解される。
【０１０８】
本発明は、酸または塩基と本発明の化合物との反応によって生成され得る、本発明の化合物の「薬学的に許容され得る塩」を包含する。特定の化合物、特に酸性または塩基性基を有する化合物は、塩、好ましくは薬学的に許容され得る塩の形態でもあり得る。「薬学的に許容され得る塩」という用語は、生物学的有効性および、生物学的にまたはその他の点で望ましくないものではない、遊離塩基または遊離酸の特性を保持する塩を指す。塩は、無機酸、例えば塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸等、および有機酸、例えば酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、シュウ酸（ｏｘｙｌｉｃ  ａｃｉｄ）、マレイン酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、ケイ皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、サリチル酸、Ｎ−アセチルシステイン等と共に形成される。他の塩は当業者に公知であり、本発明に従う使用に容易に適合させることができる。
【０１０９】
本発明の化合物のアミンの適切な薬学的に許容され得る塩は、無機酸または有機酸から調製し得る。１つの実施形態では、アミンの無機塩の例は、重硫酸塩、ホウ酸塩、臭化物、塩化物、ヘミ硫酸塩、臭化水素酸塩、塩素酸塩、２−ヒドロキシエチルスルホン酸塩（ヒドロキシエタンスルホン酸塩）、ヨウ素酸塩、ヨウ化物、イソチオン酸塩、硝酸塩、過硫酸塩、リン酸塩、硫酸塩、スルファミン酸塩、スルファニル酸塩、スルホン酸（アルキルスルホン酸塩、アリールスルホン酸塩、ハロゲン置換アルキルスルホン酸塩、ハロゲン置換アリールスルホン酸塩）、スルホン酸塩およびチオシアン酸塩である。
【０１１０】
１つの実施形態では、アミンの有機酸の例は、脂肪族、脂環式、芳香族、芳香脂肪族、複素環式、炭素環式およびスルホン酸クラスの有機酸から選択されてよく、その例は、酢酸塩、アルギニン、アスパラギン酸塩、アスコルビン酸塩、アジピン酸塩、アントラニル酸塩、アルギン酸塩（ａｌｇｅｎａｔｅｓ）、アルカンカルボン酸塩、置換アルカンカルボン酸塩、アルギン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、重硫酸塩、酪酸塩、重炭酸塩、酒石酸水素塩、クエン酸塩、ショウノウ酸塩、ショウノウスルホン酸塩、シクロヘキシルスルファミン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、エデト酸カルシウム、カンシル酸塩、炭酸塩、クラブラン酸塩、ケイ皮酸塩、ジカルボン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、二塩酸塩、デカン酸塩、エナント酸塩（ｅｎａｎｔｈｕａｔｅｓ）、エタンスルホン酸塩、エデト酸塩、エジシル酸塩、エストール酸塩、フマル酸塩、ギ酸塩、フッ化物、ガラクツロン酸塩、グルコン酸塩、グルタミン酸塩、グリコール酸塩、グルコン酸塩（ｇｌｕｃｏｒａｔｅ）、グルコヘプタン酸塩、グリセロリン酸塩、グルセプト酸塩、グリコリルアルサニル酸塩、グルタル酸塩、グルタミン酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、ヒドロキシマレイン酸塩、ヒドロキシカルボン酸、ヘキシルレゾルシン酸塩、ヒドロキシ安息香酸塩、ヒドロキシナフトエ酸塩、フッ化水素酸塩、乳酸塩、ラクトビオン酸塩、ラウリン酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、メチレンビス（β−オキシナフトエ酸塩）、マロン酸塩、マンデル酸塩、メシル酸塩、メタンスルホン酸塩、臭化メチル、硝酸メチル、メチルスルホン酸塩、マレイン酸一カリウム、ムコ酸塩、モノカルボン酸塩、ナフタレンスルホン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、ナプシル酸塩、Ｎ−メチルグルカミン、シュウ酸塩、オクタン酸塩、オレイン酸塩、パモ酸塩、酢酸フェニル、ピクリン酸塩、フェニル安息香酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、フタル酸塩、酢酸フェニルト、ペクチン酸塩、フェニルプロピオン酸塩、パルミチン酸塩、パントテン酸塩、ポリガラクツロン酸塩、ピルビン酸塩、キナ酸塩、サリチル酸塩、コハク酸塩、ステアリン酸塩、スルファニル酸塩、塩基性酢酸塩、酒石酸塩、テオフィリン酢酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩（トシル酸塩）、トリフルオロ酢酸塩、  テレフタル酸塩、タンニン酸塩、テオクル酸塩、トリハロ酢酸塩、トリエチオダイド、トリカルボン酸塩、ウンデカン酸塩および吉草酸塩である。
【０１１１】
１つの実施形態では、カルボン酸またはヒドロキシルの無機塩の例は、アンモニウム、リチウム、ナトリウム、カリウム、セシウムを含むアルカリ金属；カルシウム、マグネシウム、アルミニウムを含むアルカリ土類金属；亜鉛、バリウム、コリン、第四級アンモニウムから選択されてよい。
【０１１２】
別の実施形態では、カルボン酸またはヒドロキシルの有機塩の例は、アルギニン、脂肪族有機アミン、脂環式有機アミン、芳香族有機アミンを含む有機アミン、ベンザチン、ｔ−ブチルアミン、ベネタミン（Ｎ−ベンジルフェネチルアミン）、ジシクロヘキシルアミン、ジメチルアミン、ジエタノールアミン、エタノールアミン、エチレンジアミン、ヒドラバミン、イミダゾール、リシン、メチルアミン、メグラミン、Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、ニコチンアミド、有機アミン、オルニチン、ピリジン、ピコリン（ｐｉｃｏｌｉｅｓ）、ピペラジン、プロカイン、トリス（ヒドロキシメチル）メチルアミン、トリエチルアミン、トリエタノールアミン、トリメチルアミン、トロメタミンおよび尿素から選択されてよい。
【０１１３】
１つの実施形態では、塩は、従来の手段によって、例えば生成物の遊離塩基または遊離酸形態を、塩が不溶性である溶媒もしくは媒質中、または減圧下でもしくは凍結乾燥によってもしくは既存の塩のイオンを別のイオンもしくは適切なイオン交換樹脂と交換することによって除去される、水などの溶媒中の、１またはそれを超える当量の適切な酸または塩基と反応させることによって形成し得る。
【０１１４】
薬学的組成物
本発明の別の態様は、薬学的に許容され得る担体および本発明の態様による少なくとも１つの化合物を含む薬学的組成物に関する。薬学的組成物は、１つまたはそれを超える本発明の上記で同定された化合物を含有し得る。典型的には、本発明の薬学的組成物は、ＢＲＡＦ阻害剤またはＭＥＫ阻害剤のうちの少なくとも１つと組み合わせた、式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩもしくはＩＶまたは１７ｙａもしくは１２ｄａの化合物またはその薬学的に許容され得る塩などの本発明の化合物、および薬学的に許容され得る担体を含む。本発明の薬学的組成物はまた、ＢＲＡＦ阻害剤またはＭＥＫ阻害剤のうちの少なくとも１つと組み合わせたチューブリン阻害剤、および薬学的に許容され得る担体も含み得る。「薬学的に許容され得る担体」という用語は、任意の適切なアジュバント、担体、賦形剤または安定剤を指し、固体または液体形態、例えば錠剤、カプセル、粉末、溶液、懸濁液または乳剤であり得る。一部の実施形態では、薬学的組成物は、ＢＲＡＦ阻害剤と、式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩもしくはＩＶまたは１７ｙａもしくは１２ｄａの化合物またはその薬学的に許容され得る塩などの本発明の化合物との組合せ、および薬学的に許容され得る担体を含む。一部の実施形態では、薬学的組成物は、ＭＥＫ阻害剤と、式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩもしくはＩＶまたは１７ｙａもしくは１２ｄａの化合物またはその薬学的に許容され得る塩などの本発明の化合物との組合せ、および薬学的に許容され得る担体を含む。一部の実施形態では、薬学的組成物は、ＢＲＡＦ阻害剤およびＭＥＫ阻害剤と、式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩもしくはＩＶまたは１７ｙａもしくは１２ｄａの化合物またはその薬学的に許容され得る塩などの本発明の化合物との組合せ、および薬学的に許容され得る担体を含む。一部の実施形態では、薬学的組成物は、ＢＲＡＦ阻害剤とチューブリン阻害剤との組合せ、および薬学的に許容され得る担体を含む。一部の実施形態では、薬学的組成物は、ＭＥＫ阻害剤とチューブリン阻害剤との組合せ、および薬学的に許容され得る担体を含む。一部の実施形態では、薬学的組成物は、ＢＲＡＦ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤とチューブリン阻害剤との組合せ、および薬学的に許容され得る担体を含む。
【０１１５】
本明細書で述べるように、「ＢＲＡＦ」という用語は、Ｂ−Ｒａｆと呼ばれるタンパク質を作製するヒト遺伝子を指す。Ｂ−Ｒａｆタンパク質は、細胞成長を指令することに関わるシグナルを細胞の内部に送達することに関与する。２００２年に、Ｂ−Ｒａｆタンパク質がヒト癌において変異することが示された。ＢＲＡＦによって推進される癌を処置する薬剤が開発されてきた。ベムラフェニブは、末期黒色腫の処置のためにＦＤＡによって承認された１つのＢＲＡＦ阻害薬である。抗癌用途のための変異Ｂ−ｒａｆタンパク質の他の特異的阻害剤（「本明細書で使用される場合「ＢＲＡＦ阻害剤」）が開発されつつある。これらには、ＧＤＣ−０８７９、ＰＬＸ−４７２０、ソラフェニブトシル酸塩、ダブラフェニブおよびＬＧＸ８１８が含まれる。
【０１１６】
本明細書で述べるように、「ＭＥＫ」という用語は、マイトジェン活性化プロテインキナーゼのキナーゼ酵素ＭＥＫ１および／またはＭＥＫ２を指す。ＭＥＫは、マイトジェン活性化プロテインキナーゼをリン酸化するキナーゼ酵素である。ＭＥＫは、黒色腫において活性化されるＭＡＰＫシグナル伝達カスケードの成員である。ＭＥＫが阻害された場合、細胞増殖はブロックされ、アポトーシス（制御された細胞死）が誘導される。
【０１１７】
「ＭＥＫ阻害剤」という用語は、マイトジェン活性化プロテインキナーゼのキナーゼ酵素ＭＥＫ１および／またはＭＥＫ２を阻害する化学物質または薬剤を指す。それらは、一部の癌においてしばしば過度に活性であるＭＡＰＫ／ＥＲＫ経路に影響を及ぼすために使用することができる。それゆえＭＥＫ阻害剤は、一部の癌、特にＢＲＡＦ変異黒色腫およびＫＲＡＳ／ＢＲＡＦ変異結腸直腸癌の処置のための潜在的可能性を有する。ＭＥＫ阻害剤には、トラメチニブ（ＧＳＫ１１２０２１２）、セルメチニブ、ＲＯ５０６８７６０、ＭＥＫ１６２、ＰＤ−３２５９０１、コビメチニブまたはＸＬ５１８およびＣＩ−１０４０またはＰＤ０３５９０１が含まれるが、これらに限定されない。
【０１１８】
１つの実施形態では、本発明は、抗癌活性を有する治療有効量の２つの化合物および薬学的に許容され得る担体を含む薬学的組成物に関する。別の実施形態では、組成物は、ＢＲＡＦ阻害剤および式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩもしくはＩＶまたは１７ｙａもしくは１２ｄａの化合物などの本発明による化合物を含む。別の実施形態では、組成物は、ＭＥＫ阻害剤および式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩもしくはＩＶまたは１７ｙａもしくは１２ｄａの化合物などの本発明による化合物を含む。１つの実施形態では、本発明は、抗癌活性を有する治療有効量の３つの化合物および薬学的に許容され得る担体を含む薬学的組成物に関する。別の実施形態では、組成物は、ＢＲＡＦ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤および式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩもしくはＩＶまたは１７ｙａもしくは１２ｄａの化合物などの本発明による化合物を含む。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤は、ベムラフェニブ、ダブラフェニブ、ＧＤＣ−０８７９、ＰＬＸ−４７２０、ソラフェニブトシル酸塩、ＬＧＸ８１８またはそれらの任意の組合せである。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤はベムラフェニブである。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤はダブラフェニブである。別の実施形態では、ＭＥＫ阻害剤は、トラメチニブ（ＧＳＫ１１２０２１２）、セルメチニブ、ＲＯ５０６８７６０、ＭＥＫ１６２、ＰＤ−３２５９０１、コビメチニブもしくはＸＬ５１８、ＣＩ−１０４０もしくはＰＤ０３５９０１、またはそれらの任意の組合せである。別の実施形態では、ＭＥＫ阻害剤はトラメチニブである。別の実施形態では、ＭＥＫ阻害剤はＲＯ５０６８７６０である。別の実施形態では、本発明の化合物は、式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩまたはＩＶの化合物である。別の実施形態では、本発明の化合物は化合物１７ｙａである。別の実施形態では、本発明の化合物は化合物１２ｄａである。別の実施形態では、化合物は、その薬学的に許容され得る塩、Ｎ−オキシド、水和物、互変異性体または異性体の形態である。
【０１１９】
１つの実施形態では、本発明は、ＢＲＡＦ阻害剤またはＭＥＫ阻害剤のうちの少なくとも１つと組み合わせた治療有効量のチューブリン阻害剤および薬学的に許容され得る担体を含む薬学的組成物に関する。１つの実施形態では、本発明は、治療有効量のＢＲＡＦ阻害剤とチューブリン阻害剤との組合せおよび薬学的に許容され得る担体を含む薬学的組成物に関する。１つの実施形態では、本発明は、治療有効量のＭＥＫ阻害剤とチューブリン阻害剤との組合せおよび薬学的に許容され得る担体を含む薬学的組成物に関する。１つの実施形態では、本発明は、治療有効量のＢＲＡＦ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、チューブリン阻害剤の組合せおよび薬学的に許容され得る担体を含む薬学的組成物に関する。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤は、ベムラフェニブ、ダブラフェニブ、ＧＤＣ−０８７９、ＰＬＸ−４７２０、ソラフェニブトシル酸塩、ＬＧＸ８１８またはそれらの任意の組合せである。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤はベムラフェニブである。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤はダブラフェニブである。別の実施形態では、ＭＥＫ阻害剤は、トラメチニブ（ＧＳＫ１１２０２１２）、セルメチニブ、ＲＯ５０６８７６０、ＭＥＫ１６２、ＰＤ−３２５９０１、コビメチニブもしくはＸＬ５１８、ＣＩ−１０４０もしくはＰＤ０３５９０１、またはそれらの任意の組合せである。別の実施形態では、ＭＥＫ阻害剤はトラメチニブまたはＲＯ５０６８７６０である。別の実施形態では、チューブリン阻害剤は、パクリタキセル、エポチロン、ドセタキセル、ディスコデルモリド、コルヒチン、コンブレスタチン（ｃｏｍｂｒｅｓｔａｔｉｎ）、２−メトキシエストラジオール、メトキシベンゼンスルホンアミド（Ｅ７０１０）、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビン、ビンフルイン（ｖｉｎｆｌｕｉｎｅ）、ドラスタチン、ハリコンドリン、ヘミアステリン、クリプトフィシン５２、タキソールまたはそれらの任意の組合せである。別の実施形態では、チューブリン阻害剤はドセタキセルである。
【０１２０】
典型的には、組成物は、約０．０１から９９パーセント、好ましくは約２０から７５パーセントの活性化合物を、アジュバント、担体および／または賦形剤と共に含む。個々の必要性は異なり得るが、各成分の有効量の最適範囲の決定は当分野の技術範囲内である。典型的な用量は、約０．０１から約１００ｍｇ／ｋｇ体重を含む。好ましい用量は、約０．１から約１００ｍｇ／ｋｇ体重を含む。最も好ましい用量は、約１から約１００ｍｇ／ｋｇ体重を含む。本発明の化合物の投与のための処置レジメンも、当業者によって容易に決定され得る。すなわち、投与の頻度および用量サイズは、好ましくは副作用を最小限に抑えつつ、日常的な最適化によって確立することができる。
【０１２１】
１つの実施形態では、本発明の方法は、様々な用量の本発明の式Ｉ〜ＩＶの化合物の投与を含み得る。１つの実施形態では、式Ｉ〜ＩＶの化合物は０．１〜２００ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。１つの実施形態では、式Ｉ〜ＩＶの化合物は０．０１〜１ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。１つの実施形態では、式Ｉ〜ＩＶの化合物は、０．１〜１０ｍｇ／ｋｇ、または別の実施形態では、０．１〜２５ｍｇ／ｋｇ、または別の実施形態では、１０〜５０ｍｇ／ｋｇ、または別の実施形態では、１０〜２５ｍｇ／ｋｇ、または別の実施形態では、０．３〜３０ｍｇ／ｋｇ、または別の実施形態では、０．５〜２５ｍｇ／ｋｇ、または別の実施形態では、０．５〜５０ｍｇ／ｋｇ、または別の実施形態では、０．７５〜１５ｍｇ／ｋｇ、または別の実施形態では、０．７５〜６０ｍｇ／ｋｇ、または別の実施形態では、１〜５ｍｇ／ｋｇ、または別の実施形態では、１〜２０ｍｇ／ｋｇ、または別の実施形態では、３〜１５ｍｇ／ｋｇ、または別の実施形態では、３０〜５０ｍｇ／ｋｇ、または別の実施形態では、３０〜７５ｍｇ／ｋｇ、または別の実施形態では、１００〜２０００ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。別の実施形態では、式Ｉ〜ＩＶの化合物は、５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇまたは３５ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。別の実施形態では、式Ｉ〜ＩＶの化合物は１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。別の実施形態では、式Ｉ〜ＩＶの化合物は１５ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。別の実施形態では、式Ｉ〜ＩＶの化合物は２５ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。
【０１２２】
１つの実施形態では、式Ｉ〜ＩＶの化合物は１０ｍｇの用量で投与される。１つの実施形態では、式Ｉ〜ＩＶの化合物は１５ｍｇの用量で投与される。１つの実施形態では、式Ｉ〜ＩＶの化合物は２５ｍｇの用量で投与される。別の実施形態では、式Ｉ〜ＩＶの化合物は、０．０１ｍｇ、０．０３ｍｇ、０．１ｍｇ、０．３ｍｇ、０．７５ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、１５ｍｇ、２０ｍｇ、２５ｍｇ、３０ｍｇ、３５ｍｇ、４０ｍｇ、４５ｍｇ、５０ｍｇ、５５ｍｇ、６０ｍｇ、６５ｍｇ、７０ｍｇ、７５ｍｇ、８０ｍｇ、８５ｍｇ、９０ｍｇ、９５ｍｇまたは１００ｍｇの用量で投与される。
【０１２３】
１つの実施形態では、本発明の方法は、様々な用量の本発明によるＢＲＡＦ阻害剤の投与を含み得る。１つの実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤は０．１〜２００ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。１つの実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤は０．０１〜１ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。１つの実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤は、０．１〜１０ｍｇ／ｋｇ、または別の実施形態では、０．１〜２５ｍｇ／ｋｇ、または別の実施形態では、１０〜５０ｍｇ／ｋｇ、または別の実施形態では、１０〜２５ｍｇ／ｋｇ、または別の実施形態では、０．３〜３０ｍｇ／ｋｇ、または別の実施形態では、０．５〜２５ｍｇ／ｋｇ、または別の実施形態では、０．５〜５０ｍｇ／ｋｇ、または別の実施形態では、０．７５〜１５ｍｇ／ｋｇ、または別の実施形態では、０．７５〜６０ｍｇ／ｋｇ、または別の実施形態では、１〜５ｍｇ／ｋｇ、または別の実施形態では、１〜２０ｍｇ／ｋｇ、または別の実施形態では、３〜１５ｍｇ／ｋｇ、または別の実施形態では、３０〜５０ｍｇ／ｋｇ、または別の実施形態では、３０〜７５ｍｇ／ｋｇ、または別の実施形態では、１００〜２０００ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤は、５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、３５ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ、４５ｍｇ／ｋｇまたは５０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤は１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤は２０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤は３０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤は４０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤は４５ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤はベムラフェニブである。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤はダブラフェニブである。
【０１２４】
１つの実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤は１０ｍｇの用量で投与される。１つの実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤は１５ｍｇの用量で投与される。１つの実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤は２５ｍｇの用量で投与される。１つの実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤は４５ｍｇの用量で投与される。１つの実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤は、５ｍｇ、１０ｍｇ、１５ｍｇ、２０ｍｇ、２５ｍｇ、３０ｍｇ、３５ｍｇ、４０ｍｇ、４５ｍｇまたは５０ｍｇの用量で投与される。
【０１２５】
１つの実施形態では、本発明の方法は、様々な用量の本発明によるＭＥＫ阻害剤の投与を含み得る。１つの実施形態では、ＭＥＫ阻害剤は０．１〜２００ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。１つの実施形態では、ＭＥＫ阻害剤は０．０１〜１ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。１つの実施形態では、ＭＥＫ阻害剤は、０．１〜１ｍｇ／ｋｇ、または別の実施形態では、０．１〜２５ｍｇ／ｋｇ、または別の実施形態では、１０〜５０ｍｇ／ｋｇ、または別の実施形態では、１０〜２５ｍｇ／ｋｇ、または別の実施形態では、０．３〜０．５ｍｇ／ｋｇ、または別の実施形態では、０．５〜２５ｍｇ／ｋｇ、または別の実施形態では、０．５〜５０ｍｇ／ｋｇ、または別の実施形態では、０．７５〜１５ｍｇ／ｋｇ、または別の実施形態では、０．７５〜６０ｍｇ／ｋｇ、または別の実施形態では、１〜５ｍｇ／ｋｇ、または別の実施形態では、１〜２０ｍｇ／ｋｇ、または別の実施形態では、３〜１５ｍｇ／ｋｇ、または別の実施形態では、３０〜５０ｍｇ／ｋｇ、または別の実施形態では、３０〜７５ｍｇ／ｋｇ、または別の実施形態では、１００〜２０００ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。１つの実施形態では、ＭＥＫ阻害剤は、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．２ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．４ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇ、０．７ｍｇ／ｋｇ、０．８ｍｇ／ｋｇ、０．９ｍｇ／ｋｇまたは１ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。別の実施形態では、ＭＥＫ阻害剤は０．１ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。別の実施形態では、ＭＥＫ阻害剤は０．３ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。別の実施形態では、ＭＥＫ阻害剤は０．５ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。別の実施形態では、ＭＥＫ阻害剤は０．７ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。別の実施形態では、ＭＥＫ阻害剤は１ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。別の実施形態では、ＭＥＫ阻害剤はトラメチニブまたはＲＯ５０６８７６０である。
【０１２６】
固体単位剤形は従来のタイプのものであり得る。固体剤形は、カプセル等、例えば本発明の化合物および担体、例えば潤滑剤および不活性充填剤、例えばラクトース、スクロースまたはトウモロコシデンプンを含む通常のゼラチンタイプであり得る。別の実施形態では、これらの化合物は、結合剤、例えばアラビアゴム、トウモロコシデンプンまたはゼラチン、崩壊剤、例えばトウモロコシデンプン、ジャガイモデンプンまたはアルギン酸、および潤滑剤、例えばステアリン酸またはステアリン酸マグネシウムと組み合わせた従来の錠剤基剤、例えばラクトース、スクロースまたはトウモロコシデンプンを用いて錠剤化（ｔａｂｕｌａｔｅｄ）される。
【０１２７】
錠剤、カプセル等はまた、結合剤、例えばトラガカントゴム、アラビアゴム、トウモロコシデンプンまたはゼラチン；賦形剤、例えばリン酸二カルシウム；崩壊剤、例えばトウモロコシデンプン、ジャガイモデンプン、アルギン酸；潤滑剤、例えばステアリン酸マグネシウム；および甘味料、例えばラクトース、スクロースまたはサッカリンも含むことができる。単位剤形がカプセルである場合、これは、上記タイプの物質に加えて、脂肪油などの液体担体を含むことができる。
【０１２８】
様々な他の物質が、コーティングとしてまたは単位剤形の物理的形態を改変するために存在してよい。例えば、錠剤は、シェラック、糖またはその両方で被覆することができる。シロップは、活性成分に加えて、甘味料としてスクロース、防腐剤としてメチルおよびプロピルパラベン、染料、およびサクランボまたはオレンジフレーバーなどの香味料を含むことができる。
【０１２９】
経口治療投与のために、これらの活性化合物を賦形剤と共に組み込み、錠剤、カプセル、エリキシル、懸濁液、シロップ等の形態で使用することができる。そのような組成物および調製物は、少なくとも０．１％の活性化合物を含有すべきである。これらの組成物中の化合物のパーセンテージは、言うまでもなく、様々であり得、好都合には単位の重量の約２％から約６０％であり得る。そのような治療的に有用な組成物中の活性化合物の量は、適切な用量が得られる量である。本発明による好ましい組成物は、すべての経口単位剤形が約１ｍｇから約８００ｍｇの活性化合物を含むように調製される。
【０１３０】
本発明の活性化合物は、例えば不活性希釈剤と共にもしくは同化可能な可食担体と共に経口的に投与されてよく、またはそれらは硬または軟殻カプセルに封入することができ、またはそれらは錠剤に圧縮することができ、または食事の食物と共に直接組み込むことができる。
【０１３１】
注射用途に適する薬学的形態は、滅菌水溶液または分散液および滅菌注射溶液または分散液の即時調製のための滅菌粉末を含む。すべての場合に、この形態は滅菌であるべきであり、容易に注射可能な程度に流動性であるべきである。この形態は、製造および貯蔵の条件下で安定であるべきであり、細菌および真菌などの微生物の汚染作用に対して保護されるべきである。担体は、例えば水、エタノール、ポリオール（例えばグリセロール、プロピレングリコールおよび液体ポリエチレングリコール液）、それらの適切な混合物ならびに植物油を含む溶媒または分散媒であり得る。
【０１３２】
本発明の化合物または薬学的組成物はまた、薬学的アジュバント、担体または賦形剤と共に、生理的に許容され得る希釈剤中のこれらの物質の溶液または懸濁液によって注射用剤形で投与してもよい。そのようなアジュバント、担体および／または賦形剤には、界面活性剤ならびに他の薬学的および生理的に許容され得る成分を添加したまたは添加していない、水および油などの滅菌液体が含まれるが、これらに限定されない。例示的な油は、石油、動物、植物または合成起源の油、例えば落花生油、大豆油または鉱油である。一般に、水、生理食塩水、水性デキストロースおよび関連糖溶液ならびにグリコール、例えばプロピレングリコールまたはポリエチレングリコールは、特に注射用溶液のための、好ましい液体担体である。
【０１３３】
これらの活性化合物は非経口的に投与してもよい。これらの活性化合物の溶液または懸濁液は、ヒドロキシプロピルセルロースなどの界面活性剤と適切に混合した水中で調製することができる。分散液も、グリセロール、液体ポリエチレングリコールおよび油中のそれらの混合物中で調製することができる。例示的な油は、石油、動物、植物または合成起源の油、例えば落花生油、大豆油または鉱油である。一般に、水、生理食塩水、水性デキストロースおよび関連糖溶液ならびにグリコール、例えばプロピレングリコールまたはポリエチレングリコールは、特に注射用溶液のための、好ましい液体担体である。通常の貯蔵および使用の条件下では、これらの調製物は微生物の成長を防止するために防腐剤を含む。
【０１３４】
エアロゾルとしての使用のために、溶液または懸濁液中の本発明の化合物を適切な推進剤、例えばプロパン、ブタンまたはイソブタンのような炭化水素推進剤および従来のアジュバントと共に加圧エアロゾル容器に包装し得る。本発明の物質はまた、ネブライザまたはアトマイザなどの非加圧形態で投与してもよい。
【０１３５】
１つの実施形態では、本発明は、本明細書で述べる式Ｉ〜ＩＶの化合物および／またはその異性体、薬学的に許容され得る塩、薬学的生成物、水和物、Ｎ−オキシドもしくはそれらの任意の組合せを、単独でまたは別の治療薬、例えばチューブリン阻害剤、ＢＲＡＦ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤もしくは本明細書で述べる適用に適した他の作用物質が含まれるがこれらに限定されない抗癌剤と組み合わせて含む薬学的組成物を提供する。１つの実施形態では、本明細書で述べる式Ｉ〜ＩＶの化合物の薬学的組成物は、ＢＲＡＦ阻害剤と組み合わせて本発明の化合物を含む。別の実施形態では、薬学的組成物は、ＭＥＫ阻害剤と組み合わせて本発明の化合物を含む。別の実施形態では、薬学的組成物は、ＢＲＡＦ阻害剤およびＭＥＫ阻害剤と組み合わせて本発明の化合物を含む。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤は、ベムラフェニブ、ダブラフェニブ、ＧＤＣ−０８７９、ＰＬＸ−４７２０、ソラフェニブトシル酸塩、ＬＧＸ８１８またはそれらの任意の組合せである。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤はベムラフェニブである。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤はダブラフェニブである。別の実施形態では、ＭＥＫ阻害剤は、トラメチニブ（ＧＳＫ１１２０２１２）、セルメチニブ、ＲＯ５０６８７６０、ＭＥＫ１６２、ＰＤ−３２５９０１、コビメチニブもしくはＸＬ５１８、ＣＩ−１０４０もしくはＰＤ０３５９０１、またはそれらの任意の組合せである。別の実施形態では、ＭＥＫ阻害剤はトラメチニブまたはＲＯ５０６８７６０である。
【０１３６】
１つの実施形態では、本発明は、ＢＲＡＦ阻害剤またはＭＥＫ阻害剤のうちの少なくとも１つと組み合わせたチューブリン阻害剤、および薬学的に許容され得る担体を含む薬学的組成物に関する。１つの実施形態では、本発明は、ＢＲＡＦ阻害剤と組み合わせたチューブリン阻害剤、および薬学的に許容され得る担体を含む薬学的組成物に関する。１つの実施形態では、本発明は、ＭＥＫ阻害剤と組み合わせたチューブリン阻害剤、および薬学的に許容され得る担体を含む薬学的組成物に関する。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤は、ベムラフェニブ、ダブラフェニブ、ＧＤＣ−０８７９、ＰＬＸ−４７２０、ソラフェニブトシル酸塩、ＬＧＸ８１８またはそれらの任意の組合せである。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤はベムラフェニブである。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤はダブラフェニブである。別の実施形態では、ＭＥＫ阻害剤は、トラメチニブ（ＧＳＫ１１２０２１２）、セルメチニブ、ＲＯ５０６８７６０、ＭＥＫ１６２、ＰＤ−３２５９０１、コビメチニブもしくはＸＬ５１８、ＣＩ−１０４０もしくはＰＤ０３５９０１、またはそれらの任意の組合せである。別の実施形態では、ＭＥＫ阻害剤はトラメチニブまたはＲＯ５０６８７６０である。別の実施形態では、チューブリン阻害剤は、パクリタキセル、エポチロン、ドセタキセル、ディスコデルモリド、コルヒチン、コンブレスタチン、２−メトキシエストラジオール、メトキシベンゼンスルホンアミド（Ｅ７０１０）、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビン、ビンフルイン、ドラスタチン、ハリコンドリン、ヘミアステリン、クリプトフィシン５２、タキソールまたはそれらの任意の組合せである。別の実施形態では、チューブリン阻害剤はドセタキセルである。
【０１３７】
１つの実施形態では、本発明の化合物を抗癌剤と組み合わせて投与する。１つの実施形態では、抗癌剤はＢＲＡＦ阻害剤である。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤は、ベムラフェニブ、ダブラフェニブ、ＧＤＣ−０８７９、ＰＬＸ−４７２０、ソラフェニブトシル酸塩、ＬＧＸ８１８またはそれらの任意の組合せである。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤はベムラフェニブである。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤はダブラフェニブである。１つの実施形態では、抗癌剤はＭＥＫ阻害剤である。別の実施形態では、ＭＥＫ阻害剤は、トラメチニブ（ＧＳＫ１１２０２１２）、セルメチニブ、ＲＯ５０６８７６０、ＭＥＫ１６２、ＰＤ−３２５９０１、コビメチニブもしくはＸＬ５１８、ＣＩ−１０４０もしくはＰＤ０３５９０１、またはそれらの任意の組合せである。別の実施形態では、ＭＥＫ阻害剤はトラメチニブまたはＲＯ５０６８７６０である。
【０１３８】
１つの実施形態では、本発明は、ＢＲＡＦ阻害剤またはＭＥＫ阻害剤のうちの少なくとも１つと組み合わせた、式ＩＩ：
【化１３】
2019077727.tif 000026
［式中、
Ａは、単一または縮合芳香族またはヘテロ芳香族環系であり；
Ｒ１は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６直鎖または分岐アルキル、アリール、フェニル、ベンジル、ハロアルキル、アミノアルキル、−ＯＣＨ２Ｐｈ、ＳＯ２−アリール、ＳＯ２−フェニル、−（Ｃ＝Ｏ）−アリール、−（Ｃ＝Ｏ）−フェニルまたはＯＨであり；
Ｒ４およびＲ５は、それぞれ独立して水素、Ｃ１−Ｃ６直鎖または分岐アルキル、Ｃ１−Ｃ６直鎖または分岐ハロアルキル、Ｃ１−Ｃ６直鎖または分岐アルコキシ、Ｃ１−Ｃ６直鎖または分岐ハロアルコキシ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＦ３、ＣＮ、−ＣＨ２ＣＮ、ＮＨ２、ＯＨ、−ＯＣ（Ｏ）ＣＦ３、アルキルアミノ、アミノアルキル、−ＯＣＨ２Ｐｈ、−ＮＨＣＯ−アルキル、ＣＯＯＨ、−Ｃ（Ｏ）Ｐｈ、Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｈ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２またはＮＯ２であり；ならびに
ｎは、１から４の間の整数である］
の構造によって表される化合物またはその薬学的に許容され得る塩、Ｎ−オキシド、水和物、互変異性体もしくは異性体、および薬学的に許容され得る担体を含む薬学的組成物に関する。別の実施形態では、別の実施形態では、本発明の化合物は化合物１７ｙａである。別の実施形態では、本発明の化合物は化合物１２ｄａである。
【０１３９】
本発明のさらに別の態様は、癌を処置する方法であって、癌のための処置を必要とする被験体を選択すること、ならびにＢＲＡＦ阻害剤またはＭＥＫ阻害剤のうちの少なくとも１つと組み合わせた、治療有効量の式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩまたはＩＶの化合物および薬学的に許容され得る担体を含む薬学的組成物を、癌を処置するのに有効な条件下で被験体に投与することを含む方法に関する。別の実施形態では、癌は薬物耐性癌である。別の実施形態では、癌は黒色腫である。別の実施形態では、癌はＢＲＡＦ変異黒色腫である。別の実施形態では、癌はベムラフェニブ耐性癌である。別の実施形態では、本発明の化合物は化合物１７ｙａである。別の実施形態では、本発明の化合物は化合物１２ｄａである。
【０１４０】
本発明の化合物を投与する場合、全身的に投与することができ、または選択的に、癌細胞または前癌細胞が存在する特定の部位に直接投与することができる。したがって、投与は、化合物または薬学的組成物を癌細胞または前癌細胞に送達するために有効な任意の方法で達成することができる。例示的な投与方法には、限定されることなく、化合物または組成物を経口的、局所的、経皮的、非経口的、皮下的、静脈内、筋肉内、腹腔内に、鼻腔内滴下によって、腔内もしくは嚢内滴下によって、眼内、動脈内、病巣内に、または粘膜、例えば鼻、喉および気管支の粘膜への適用によって投与することが含まれる。
【０１４１】
一部の実施形態では、本発明の組成物のいずれかは、本明細書で述べる任意の形態または実施形態で、ＢＲＡＦ阻害剤またはＭＥＫ阻害剤のうちの少なくとも１つと組み合わせた、式Ｉ〜ＩＶの化合物またはチューブリン阻害剤を含む。一部の実施形態では、本発明の組成物のいずれかは、本明細書で述べる任意の形態または実施形態で、ＢＲＡＦ阻害剤またはＭＥＫ阻害剤のうちの少なくとも１つと組み合わせた、式Ｉ〜ＩＶの化合物またはチューブリン阻害剤から成る。一部の実施形態では、本発明の組成物のいずれかは、本明細書で述べる任意の形態または実施形態で、ＢＲＡＦ阻害剤またはＭＥＫ阻害剤のうちの少なくとも１つと組み合わせた、式Ｉ〜ＩＶの化合物またはチューブリン阻害剤から基本的に成る。一部の実施形態では、「含む」という用語は、指示される活性物質、例えば式Ｉ〜ＩＶの化合物またはチューブリン阻害剤を包含すること、ならびに他の活性物質および製薬業界で公知のように、薬学的に許容され得る担体、賦形剤、皮膚軟化剤、安定剤等を包含することを指す。一部の実施形態では、「から基本的に成る」という用語は、唯一の活性成分が指示される活性成分である組成物を指すが、しかし、製剤を安定化する、保存する等のためであるが指示される活性成分の治療効果には直接関与しない他の化合物が含まれてもよい。一部の実施形態では、「から基本的に成る」という用語は、活性成分の放出を促進する成分を指してもよい。一部の実施形態では、「成る」という用語は、活性成分および薬学的に許容され得る担体または賦形剤を含む組成物を指す。
【０１４２】
１つの実施形態では、本発明は混合調製物を提供する。１つの実施形態では、「混合調製物」という用語は、上記で定義された組合せパートナーを独立してまたは異なる量の組合せパートナーとの異なる固定された組合せを使用して、すなわち同時に、一斉に、別々にまたは連続的に投薬することができるという意味で、特に「パーツのキット」を定義する。一部の実施形態では、パーツのキットのパーツを、次に、例えば同時にまたは時間的にずらして、すなわち異なる時点で、パーツのキットの任意のパーツについて等しいまたは異なる時間間隔で投与することができる。組合せパートナーの総量の比率を、一部の実施形態では、混合調製物中で投与することができる。１つの実施形態では、例えば、当業者によって容易に為され得るように、特定の疾患、疾患の重症度、年齢、性別もしくは体重に起因して必要性が異なり得る、処置する患者亜集団の必要性または単一患者の必要性に対処するために、混合調製物を変化させることができる。
【０１４３】
本発明は、当業者に認識されるように、適宜に、任意の疾患、障害または状態のための本明細書で述べる組成物および併用療法に関することが理解されるべきである。そのような組成物および併用療法の特定の適用は、本発明の実施形態を表す特定の疾患、障害および状態に関して上記で説明されており、本明細書で述べる化合物を単独でもしくは併用療法の一部として投与することまたは本発明の組成物を使用することによって、被験体においてそのような疾患、障害および状態を処置する方法は、本発明の付加的な実施形態を表す。
【０１４４】
生物学的活性
１つの実施形態では、本発明は、本発明の方法のいずれかにおける使用のための、本明細書で述べる任意の実施形態を含む、化合物および組成物を提供する。１つの実施形態では、本発明の化合物またはこれを含む組成物の使用は、当業者に理解されるように、被験体において所望の応答を阻害する、抑制する、増強するまたは刺激するうえで有用性を有する。別の実施形態では、組成物は、その活性が本発明の化合物が投与される特定の適用のために有用である付加的な活性成分をさらに含んでもよい。
【０１４５】
１つの実施形態では、本発明は、癌を処置する、抑制する、重症度を低減する、発症の危険度を低減するまたは阻害する方法であって、癌に罹患している被験体に癌を処置するのに有効な条件下で本発明の化合物を投与することを含む方法に関する。別の実施形態では、化合物をＢＲＡＦ阻害剤と組み合わせて投与する。別の実施形態では、化合物をＭＥＫ阻害剤と組み合わせて投与する。別の実施形態では、化合物をＢＲＡＦ阻害剤およびＭＥＫ阻害剤と組み合わせて投与する。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤はベムラフェニブである。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤はダブラフェニブである。別の実施形態では、ＭＥＫ阻害剤はトラメチニブである。別の実施形態では、ＭＥＫ阻害剤はＲＯ５０６８７６０である。別の実施形態では、癌は、黒色腫、甲状腺癌、結腸直腸癌または卵巣癌である。
【０１４６】
１つの実施形態では、本発明は、ａ）薬物耐性腫瘍を処置する、抑制する、重症度を低減する、危険度を低減するもしくは阻害する；ｂ）転移性癌を処置する、抑制する、重症度を低減する、危険度を低減するもしくは阻害する；ｃ）薬物耐性癌を処置する、抑制する、重症度を低減する、危険度を低減するもしくは阻害する；ｄ）黒色腫を処置する、抑制する、重症度を低減する、危険度を低減するもしくは阻害する；ｅ）癌が黒色腫、甲状腺癌、胆道癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、結腸直腸癌もしくは卵巣癌である、薬物耐性癌を処置する、抑制する、重症度を低減する、危険度を低減するもしくは阻害する；ｆ）転移性黒色腫を処置する、抑制する、重症度を低減する、危険度を低減するもしくは阻害する；ｇ）ＢＲＡＦ変異癌を処置する、抑制する、重症度を低減する、危険度を低減するもしくは阻害する；ｈ）ＢＲＡＦ阻害剤耐性癌を処置する、抑制する、重症度を低減する、危険度を低減するもしくは阻害する；ｉ）ＢＲＡＦ阻害剤耐性癌を処置する、抑制する、重症度を低減する、危険度を低減する、阻害する、除去する、遅延させるもしくは予防する；ｊ）ＢＲＡＦ阻害剤耐性黒色腫を処置する、抑制する、重症度を低減する、危険度を低減するもしくは阻害する；ｋ）以前に化学療法、放射線療法もしくは生物学的療法で処置されたことがある被験体において癌を処置する、抑制する、重症度を低減する、危険度を低減するもしくは阻害する；ｌ）被験体においてＢＲＡＦ阻害剤での処置に対する耐性を克服する；ｍ）甲状腺癌を処置する、抑制する、重症度を低減する、危険度を低減するもしくは阻害する；ｎ）結腸直腸癌を処置する、抑制する、重症度を低減する、危険度を低減するもしくは阻害する；ｏ）卵巣癌を処置する、抑制する、重症度を低減する、危険度を低減するもしくは阻害する；ｐ）癌に罹患している被験体において癌転移を処置する、抑制する、低減する、阻害する、除去する、遅延させるもしくは予防する；またはｑ）以前にタキサン薬物で処置された癌に罹患している被験体においてタキサン薬物に対する耐性がある二次癌を処置する、抑制する、低減する、阻害する、除去する、遅延させるもしくは予防する方法であって、ＢＲＡＦ阻害剤またはＭＥＫ阻害剤のうちの少なくとも１つと組み合わせて、本発明の化合物および／または前記化合物の異性体、代謝産物、薬学的に許容され得る塩、薬学的生成物、互変異性体、水和物、Ｎ−オキシド、多形体もしくは結晶またはそれらの任意の組合せ、またはそれを含む組成物を前記被験体に投与する段階を含む方法を提供する。別の実施形態では、この方法は、ＢＲＡＦ阻害剤と組み合わせた、本発明の化合物および／または前記化合物の異性体、代謝産物、薬学的に許容され得る塩、薬学的生成物、互変異性体、水和物、Ｎ−オキシド、多形体もしくは結晶またはそれらの任意の組合せ、またはそれを含む組成物を投与することを含む。別の実施形態では、この方法は、ＭＥＫ阻害剤と組み合わせた、本発明の化合物および／または前記化合物の異性体、代謝産物、薬学的に許容され得る塩、薬学的生成物、互変異性体、水和物、Ｎ−オキシド、多形体もしくは結晶またはそれらの任意の組合せ、またはそれを含む組成物を投与することを含む。別の実施形態では、前記方法は、ＢＲＡＦ阻害剤およびＭＥＫ阻害剤と組み合わせた、本発明の化合物および／または前記化合物の異性体、代謝産物、薬学的に許容され得る塩、薬学的生成物、互変異性体、水和物、Ｎ−オキシド、多形体もしくは結晶またはそれらの任意の組合せ、またはそれを含む組成物を投与することを含む。別の実施形態では、前記方法は、ＢＲＡＦ阻害剤またはＭＥＫ阻害剤のうちの少なくとも１つと組み合わせたチューブリン阻害剤またはそれを含む組成物を投与することを含む。別の実施形態では、前記方法は、ＢＲＡＦ阻害剤と組み合わせたチューブリン阻害剤またはそれを含む組成物を投与することを含む。別の実施形態では、前記方法は、ＭＥＫ阻害剤と組み合わせたチューブリン阻害剤またはそれを含む組成物を投与することを含む。別の実施形態では、前記方法は、ＢＲＡＦ阻害剤およびＭＥＫ阻害剤と組み合わせたチューブリン阻害剤またはそれを含む組成物を投与することを含む。
【０１４７】
１つの実施形態では、本発明は、被験体においてＢＲＡＦ変異癌を処置する、抑制する、重症度を低減する、危険度を低減するまたは阻害する方法であって、本発明の化合物またはその薬学的に許容され得る塩、Ｎ−オキシド、水和物、互変異性体もしくは異性体と組み合わせてＢＲＡＦ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤またはそれらの組合せを含む組成物を、ＢＲＡＦ変異癌に罹患している被験体に、前記癌を処置するのに有効な条件下で投与することを含む方法に関する。別の実施形態では、組合せは、本発明の化合物とＢＲＡＦ阻害剤から基本的に成る。別の実施形態では、組合せは、本発明の化合物とＭＥＫ阻害剤から基本的に成る。別の実施形態では、組合せは、本発明の化合物およびＢＲＡＦ阻害剤およびＭＥＫ阻害剤から基本的に成る。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤は、ベムラフェニブ、ダブラフェニブ、ＧＤＣ−０８７９、ＰＬＸ−４７２０、ソラフェニブトシル酸塩、ＬＧＸ８１８またはそれらの任意の組合せである。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤はベムラフェニブである。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤はダブラフェニブである。別の実施形態では、ＭＥＫ阻害剤は、トラメチニブ、セルメチニブ、ＲＯ５０６８７６０、ＭＥＫ１６２、ＰＤ−３２５９０１、コビメチニブ、ＣＩ−１０４０またはそれらの任意の組合せである。別の実施形態では、ＭＥＫ阻害剤はトラメチニブである。別の実施形態では、ＭＥＫ阻害剤はＲＯ５０６８７６０である。別の実施形態では、癌は、黒色腫、甲状腺癌、結腸直腸癌または卵巣癌である。別の実施形態では、癌は黒色腫である。別の実施形態では、黒色腫はＶ６００Ｅ陽性黒色腫である。別の実施形態では、癌は転移性癌である。別の実施形態では、癌は薬物耐性癌である。別の実施形態では、癌はＢＲＡＦ阻害剤に耐性である。別の実施形態では、癌はタキサン類に耐性である。別の実施形態では、癌はドセタキセルに耐性である。別の実施形態では、本発明の化合物は式Ｉ〜ＩＶの化合物である。別の実施形態では、本発明の化合物は化合物１７ｙａである。別の実施形態では、本発明の化合物は化合物１２ｄａである。
【０１４８】
１つの実施形態では、本発明は、被験体においてＢＲＡＦ阻害剤耐性癌を処置する、抑制する、重症度を低減する、危険度を低減するまたは阻害する方法であって、本発明の化合物またはその薬学的に許容され得る塩、Ｎ−オキシド、水和物、互変異性体もしくは異性体と組み合わせてＢＲＡＦ阻害剤またはＭＥＫ阻害剤のうちの少なくとも１つを含む組成物を、ＢＲＡＦ阻害剤耐性癌に罹患している被験体に、前記癌を処置するのに有効な条件下で投与することを含む方法に関する。別の実施形態では、組合せは、本発明の化合物とＢＲＡＦ阻害剤から基本的に成る。別の実施形態では、組合せは、本発明の化合物とＭＥＫ阻害剤から基本的に成る。別の実施形態では、組合せは、本発明の化合物、ＢＲＡＦ阻害剤およびＭＥＫ阻害剤から基本的に成る。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤は、ベムラフェニブ、ダブラフェニブ、ＧＤＣ−０８７９、ＰＬＸ−４７２０、ソラフェニブトシル酸塩、ＬＧＸ８１８またはそれらの任意の組合せである。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤はベムラフェニブである。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤はダブラフェニブである。別の実施形態では、ＭＥＫ阻害剤は、トラメチニブ、セルメチニブ、ＲＯ５０６８７６０、ＭＥＫ１６２、ＰＤ−３２５９０１、コビメチニブ、ＣＩ−１０４０またはそれらの任意の組合せである。別の実施形態では、ＭＥＫ阻害剤はトラメチニブである。別の実施形態では、ＭＥＫ阻害剤はＲＯ５０６８７６０である。別の実施形態では、癌は、黒色腫、甲状腺癌、胆道癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、結腸直腸癌または卵巣癌である。別の実施形態では、癌は黒色腫である。別の実施形態では、黒色腫はＶ６００Ｅ陽性黒色腫である。別の実施形態では、癌は転移性癌である。別の実施形態では、本発明の化合物は式Ｉ〜ＩＶの化合物である。別の実施形態では、本発明の化合物は化合物１７ｙａである。別の実施形態では、本発明の化合物は化合物１２ｄａである。
【０１４９】
１つの実施形態では、本発明は、被験体においてベムラフェニブ耐性癌を処置する、抑制する、重症度を低減する、危険度を低減するまたは阻害する方法であって、本発明の化合物またはその薬学的に許容され得る塩、Ｎ−オキシド、水和物、互変異性体もしくは異性体と組み合わせてＢＲＡＦ阻害剤またはＭＥＫ阻害剤のうちの少なくとも１つを含む組成物を、ベムラフェニブ耐性癌に罹患している被験体に、前記癌を処置するのに有効な条件下で投与することを含む方法に関する。別の実施形態では、組合せは、本発明の化合物とＢＲＡＦ阻害剤から基本的に成る。別の実施形態では、組合せは、本発明の化合物とＭＥＫ阻害剤から基本的に成る。別の実施形態では、組合せは、本発明の化合物、ＢＲＡＦ阻害剤およびＭＥＫ阻害剤から基本的に成る。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤は、ベムラフェニブ、ダブラフェニブ、ＧＤＣ−０８７９、ＰＬＸ−４７２０、ソラフェニブトシル酸塩、ＬＧＸ８１８またはそれらの任意の組合せである。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤はベムラフェニブである。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤はダブラフェニブである。別の実施形態では、ＭＥＫ阻害剤は、トラメチニブ、セルメチニブ、ＲＯ５０６８７６０、ＭＥＫ１６２、ＰＤ−３２５９０１、コビメチニブ、ＣＩ−１０４０またはそれらの任意の組合せである。別の実施形態では、ＭＥＫ阻害剤はトラメチニブである。別の実施形態では、ＭＥＫ阻害剤はＲＯ５０６８７６０である。別の実施形態では、癌は、黒色腫、甲状腺癌、胆道癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、結腸直腸癌または卵巣癌である。別の実施形態では、癌は黒色腫である。別の実施形態では、黒色腫はＶ６００Ｅ陽性黒色腫である。別の実施形態では、癌はタキサン類に対して二次耐性がある。別の実施形態では、癌は転移性癌である。別の実施形態では、化合物は式Ｉ〜ＩＶの化合物である。別の実施形態では、本発明の化合物は化合物１７ｙａである。別の実施形態では、本発明の化合物は化合物１２ｄａである。
【０１５０】
１つの実施形態では、本発明は、被験体において黒色腫を処置する、抑制する、重症度を低減する、危険度を低減するまたは阻害する方法であって、本発明の化合物またはその薬学的に許容され得る塩、Ｎ−オキシド、水和物、互変異性体もしくは異性体と組み合わせてＢＲＡＦ阻害剤またはＭＥＫ阻害剤のうちの少なくとも１つを含む組成物を、黒色腫に罹患している被験体に、黒色腫を処置するのに有効な条件下で投与することを含む方法に関する。別の実施形態では、組合せは、本発明の化合物とＢＲＡＦ阻害剤から基本的に成る。別の実施形態では、組合せは、本発明の化合物とＭＥＫ阻害剤から基本的に成る。別の実施形態では、組合せは、本発明の化合物、ＢＲＡＦ阻害剤およびＭＥＫ阻害剤から基本的に成る。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤は、ベムラフェニブ、ダブラフェニブ、ＧＤＣ−０８７９、ＰＬＸ−４７２０、ソラフェニブトシル酸塩、ＬＧＸ８１８またはそれらの任意の組合せである。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤はベムラフェニブである。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤はダブラフェニブである。別の実施形態では、ＭＥＫ阻害剤は、トラメチニブ、セルメチニブ、ＲＯ５０６８７６０、ＭＥＫ１６２、ＰＤ−３２５９０１、コビメチニブ、ＣＩ−１０４０またはそれらの任意の組合せである。別の実施形態では、ＭＥＫ阻害剤はトラメチニブである。別の実施形態では、ＭＥＫ阻害剤はＲＯ５０６８７６０である。別の実施形態では、黒色腫は薬物耐性である。別の実施形態では、黒色腫はＶ６００Ｅ陽性黒色腫である。別の実施形態では、黒色腫は転移性黒色腫である。別の実施形態では、化合物は式Ｉ〜ＩＶの化合物である。別の実施形態では、本発明の化合物は化合物１７ｙａである。別の実施形態では、本発明の化合物は化合物１２ｄａである。
【０１５１】
１つの実施形態では、本発明は、被験体において甲状腺癌を処置する、抑制する、重症度を低減する、危険度を低減するまたは阻害する方法であって、本発明の化合物またはその薬学的に許容され得る塩、Ｎ−オキシド、水和物、互変異性体もしくは異性体と組み合わせてＢＲＡＦ阻害剤またはＭＥＫ阻害剤のうちの少なくとも１つを含む組成物を、甲状腺癌に罹患している被験体に、甲状腺癌を処置するのに有効な条件下で投与することを含む方法に関する。別の実施形態では、組合せは、本発明の化合物とＢＲＡＦ阻害剤から基本的に成る。別の実施形態では、組合せは、本発明の化合物とＭＥＫ阻害剤から基本的に成る。別の実施形態では、組合せは、本発明の化合物、ＢＲＡＦ阻害剤およびＭＥＫ阻害剤から基本的に成る。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤は、ベムラフェニブ、ダブラフェニブ、ＧＤＣ−０８７９、ＰＬＸ−４７２０、ソラフェニブトシル酸塩、ＬＧＸ８１８またはそれらの任意の組合せである。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤はベムラフェニブである。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤はダブラフェニブである。別の実施形態では、ＭＥＫ阻害剤は、トラメチニブ、セルメチニブ、ＲＯ５０６８７６０、ＭＥＫ１６２、ＰＤ−３２５９０１、コビメチニブ、ＣＩ−１０４０またはそれらの任意の組合せである。別の実施形態では、ＭＥＫ阻害剤はトラメチニブである。別の実施形態では、ＭＥＫ阻害剤はＲＯ５０６８７６０である。別の実施形態では、甲状腺癌は薬物耐性である。別の実施形態では、甲状腺癌は転移性癌である。別の実施形態では、本発明の化合物は式Ｉ〜ＩＶの化合物である。別の実施形態では、本発明の化合物は化合物１７ｙａである。別の実施形態では、本発明の化合物は化合物１２ｄａである。
【０１５２】
１つの実施形態では、本発明は、被験体において卵巣癌を処置する、抑制する、重症度を低減する、危険度を低減するまたは阻害する方法であって、本発明の化合物またはその薬学的に許容され得る塩、Ｎ−オキシド、水和物、互変異性体もしくは異性体と組み合わせてＢＲＡＦ阻害剤またはＭＥＫ阻害剤のうちの少なくとも１つを含む組成物を、卵巣癌に罹患している被験体に、卵巣癌を処置するのに有効な条件下で投与することを含む方法に関する。別の実施形態では、組合せは、本発明の化合物とＢＲＡＦ阻害剤から基本的に成る。別の実施形態では、組合せは、本発明の化合物とＭＥＫ阻害剤から基本的に成る。別の実施形態では、組合せは、本発明の化合物、ＢＲＡＦ阻害剤およびＭＥＫ阻害剤から基本的に成る。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤は、ベムラフェニブ、ダブラフェニブ、ＧＤＣ−０８７９、ＰＬＸ−４７２０、ソラフェニブトシル酸塩、ＬＧＸ８１８またはそれらの任意の組合せである。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤はベムラフェニブである。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤はダブラフェニブである。別の実施形態では、ＭＥＫ阻害剤は、トラメチニブ、セルメチニブ、ＲＯ５０６８７６０、ＭＥＫ１６２、ＰＤ−３２５９０１、コビメチニブ、ＣＩ−１０４０またはそれらの任意の組合せである。別の実施形態では、ＭＥＫ阻害剤はトラメチニブである。別の実施形態では、ＭＥＫ阻害剤はＲＯ５０６８７６０である。別の実施形態では、卵巣癌は薬物耐性である。別の実施形態では、卵巣癌は転移性癌である。別の実施形態では、本発明の化合物は式Ｉ〜ＩＶの化合物である。別の実施形態では、本発明の化合物は化合物１７ｙａである。別の実施形態では、本発明の化合物は化合物１２ｄａである。
【０１５３】
１つの実施形態では、本発明は、被験体において結腸直腸癌を処置する、抑制する、重症度を低減する、危険度を低減するまたは阻害する方法であって、本発明の化合物またはその薬学的に許容され得る塩、Ｎ−オキシド、水和物、互変異性体もしくは異性体と組み合わせてＢＲＡＦ阻害剤またはＭＥＫ阻害剤のうちの少なくとも１つを含む組成物を、結腸直腸癌に罹患している被験体に、結腸直腸癌を処置するのに有効な条件下で投与することを含む方法に関する。別の実施形態では、組合せは、本発明の化合物とＢＲＡＦ阻害剤から基本的に成る。別の実施形態では、組合せは、本発明の化合物とＭＥＫ阻害剤から基本的に成る。別の実施形態では、組合せは、本発明の化合物、ＢＲＡＦ阻害剤およびＭＥＫ阻害剤から基本的に成る。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤は、ベムラフェニブ、ダブラフェニブ、ＧＤＣ−０８７９、ＰＬＸ−４７２０、ソラフェニブトシル酸塩、ＬＧＸ８１８またはそれらの任意の組合せである。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤はベムラフェニブである。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤はダブラフェニブである。別の実施形態では、ＭＥＫ阻害剤は、トラメチニブ、セルメチニブ、ＲＯ５０６８７６０、ＭＥＫ１６２、ＰＤ−３２５９０１、コビメチニブ、ＣＩ−１０４０またはそれらの任意の組合せである。別の実施形態では、ＭＥＫ阻害剤はトラメチニブである。別の実施形態では、ＭＥＫ阻害剤はＲＯ５０６８７６０である。別の実施形態では、結腸直腸癌は薬物耐性である。別の実施形態では、結腸直腸癌は転移性癌である。別の実施形態では、本発明の化合物は式Ｉ〜ＩＶの化合物である。別の実施形態では、本発明の化合物は化合物１７ｙａである。別の実施形態では、本発明の化合物は化合物１２ｄａである。
【０１５４】
１つの実施形態では、本発明は、被験体において薬物耐性黒色腫を処置する、抑制する、重症度を低減する、危険度を低減するまたは阻害する方法であって、本発明の化合物またはその薬学的に許容され得る塩、Ｎ−オキシド、水和物、互変異性体もしくは異性体と組み合わせてＢＲＡＦ阻害剤またはＭＥＫ阻害剤のうちの少なくとも１つを含む組成物を、薬物耐性黒色腫に罹患している被験体に、前記黒色腫を処置するのに有効な条件下で投与することを含む方法に関する。別の実施形態では、組合せは、本発明の化合物とＢＲＡＦ阻害剤から基本的に成る。別の実施形態では、組合せは、本発明の化合物とＭＥＫ阻害剤から基本的に成る。別の実施形態では、組合せは、本発明の化合物、ＢＲＡＦ阻害剤およびＭＥＫ阻害剤から基本的に成る。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤は、ベムラフェニブ、ダブラフェニブ、ＧＤＣ−０８７９、ＰＬＸ−４７２０、ソラフェニブトシル酸塩、ＬＧＸ８１８またはそれらの任意の組合せである。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤はベムラフェニブである。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤はダブラフェニブである。別の実施形態では、ＭＥＫ阻害剤は、トラメチニブ、セルメチニブ、ＲＯ５０６８７６０、ＭＥＫ１６２、ＰＤ−３２５９０１、コビメチニブ、ＣＩ−１０４０またはそれらの任意の組合せである。別の実施形態では、ＭＥＫ阻害剤はトラメチニブである。別の実施形態では、ＭＥＫ阻害剤はＲＯ５０６８７６０である。別の実施形態では、黒色腫はＶ６００Ｅ陽性黒色腫である。別の実施形態では、黒色腫は転移性黒色腫である。別の実施形態では、化合物は式Ｉ〜ＩＶの化合物である。別の実施形態では、本発明の化合物は化合物１７ｙａである。別の実施形態では、本発明の化合物は化合物１２ｄａである。
【０１５５】
１つの実施形態では、本発明は、被験体において薬物耐性癌を処置する、抑制する、重症度を低減する、危険度を低減するまたは阻害する方法であって、本発明の化合物またはその薬学的に許容され得る塩、Ｎ−オキシド、水和物、互変異性体もしくは異性体と組み合わせてＢＲＡＦ阻害剤またはＭＥＫ阻害剤のうちの少なくとも１つを含む組成物を、薬物耐性癌に罹患している被験体に、前記癌を処置するのに有効な条件下で投与することを含む方法に関する。別の実施形態では、組合せは、本発明の化合物とＢＲＡＦ阻害剤から基本的に成る。別の実施形態では、組合せは、本発明の化合物とＭＥＫ阻害剤から基本的に成る。別の実施形態では、組合せは、本発明の化合物、ＢＲＡＦ阻害剤およびＭＥＫ阻害剤から基本的に成る。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤は、ベムラフェニブ、ダブラフェニブ、ＧＤＣ−０８７９、ＰＬＸ−４７２０、ソラフェニブトシル酸塩、ＬＧＸ８１８またはそれらの任意の組合せである。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤はベムラフェニブである。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤はダブラフェニブである。別の実施形態では、ＭＥＫ阻害剤は、トラメチニブ、セルメチニブ、ＲＯ５０６８７６０、ＭＥＫ１６２、ＰＤ−３２５９０１、コビメチニブ、ＣＩ−１０４０またはそれらの任意の組合せである。別の実施形態では、ＭＥＫ阻害剤はトラメチニブである。別の実施形態では、ＭＥＫ阻害剤はＲＯ５０６８７６０である。別の実施形態では、癌は、黒色腫、甲状腺癌、胆道癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、結腸直腸癌または卵巣癌である。別の実施形態では、癌は転移性癌である。別の実施形態では、癌は黒色腫である。別の実施形態では、癌はＶ６００Ｅ陽性黒色腫である。別の実施形態では、化合物は式Ｉ〜ＩＶの化合物である。別の実施形態では、本発明の化合物は化合物１７ｙａである。別の実施形態では、本発明の化合物は化合物１２ｄａである。
【０１５６】
１つの実施形態では、本発明は、薬物耐性癌に罹患している被験体においてＢＲＡＦ阻害剤での処置に対する耐性を克服する方法であって、本発明の化合物またはその薬学的に許容され得る塩、Ｎ−オキシド、水和物、互変異性体もしくは異性体と組み合わせてＢＲＡＦ阻害剤またはＭＥＫ阻害剤のうちの少なくとも１つを含む組成物を、薬物耐性癌に罹患している被験体に投与することを含む方法に関する。別の実施形態では、組合せは、本発明の化合物とＢＲＡＦ阻害剤から基本的に成る。別の実施形態では、組合せは、本発明の化合物とＭＥＫ阻害剤から基本的に成る。別の実施形態では、組合せは、本発明の化合物、ＢＲＡＦ阻害剤およびＭＥＫ阻害剤から基本的に成る。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤は、ベムラフェニブ、ダブラフェニブ、ＧＤＣ−０８７９、ＰＬＸ−４７２０、ソラフェニブトシル酸塩、ＬＧＸ８１８またはそれらの任意の組合せである。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤はベムラフェニブである。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤はダブラフェニブである。別の実施形態では、ＭＥＫ阻害剤は、トラメチニブ、セルメチニブ、ＲＯ５０６８７６０、ＭＥＫ１６２、ＰＤ−３２５９０１、コビメチニブ、ＣＩ−１０４０またはそれらの任意の組合せである。別の実施形態では、ＭＥＫ阻害剤はトラメチニブである。別の実施形態では、ＭＥＫ阻害剤はＲＯ５０６８７６０である。別の実施形態では、癌は、黒色腫、甲状腺癌、胆道癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、結腸直腸癌または卵巣癌である。別の実施形態では、癌は転移性癌である。別の実施形態では、癌は黒色腫である。別の実施形態では、癌はＶ６００Ｅ陽性黒色腫である。別の実施形態では、化合物は式Ｉ〜ＩＶの化合物である。別の実施形態では、本発明の化合物は化合物１７ｙａである。別の実施形態では、本発明の化合物は化合物１２ｄａである。
【０１５７】
１つの実施形態では、癌に罹患している被験体において癌処置に対する耐性を予防する、除去する、低減するまたは遅延させる方法であって、本発明の化合物またはその薬学的に許容され得る塩、Ｎ−オキシド、水和物、互変異性体もしくは異性体と組み合わせてＢＲＡＦ阻害剤またはＭＥＫ阻害剤のうちの少なくとも１つを含む組成物を、薬物耐性癌に罹患している被験体に投与することを含む方法に関する。別の実施形態では、組合せは、本発明の化合物とＢＲＡＦ阻害剤から基本的に成る。別の実施形態では、組合せは、本発明の化合物とＭＥＫ阻害剤から基本的に成る。別の実施形態では、組合せは、本発明の化合物、ＢＲＡＦ阻害剤およびＭＥＫ阻害剤から基本的に成る。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤は、ベムラフェニブ、ダブラフェニブ、ＧＤＣ−０８７９、ＰＬＸ−４７２０、ソラフェニブトシル酸塩、ＬＧＸ８１８またはそれらの任意の組合せである。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤はベムラフェニブである。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤はダブラフェニブである。別の実施形態では、ＭＥＫ阻害剤は、トラメチニブ、セルメチニブ、ＲＯ５０６８７６０、ＭＥＫ１６２、ＰＤ−３２５９０１、コビメチニブ、ＣＩ−１０４０またはそれらの任意の組合せである。別の実施形態では、ＭＥＫ阻害剤はトラメチニブである。別の実施形態では、ＭＥＫ阻害剤はＲＯ５０６８７６０である。別の実施形態では、癌は、黒色腫、甲状腺癌、胆道癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、結腸直腸癌または卵巣癌である。別の実施形態では、癌は転移性である。別の実施形態では、癌は黒色腫である。別の実施形態では、癌はＶ６００Ｅ陽性黒色腫である。別の実施形態では、化合物は式Ｉ〜ＩＶの化合物である。別の実施形態では、本発明の化合物は化合物１７ｙａである。別の実施形態では、本発明の化合物は化合物１２ｄａである。
【０１５８】
１つの実施形態では、本発明は、被験体においてＢＲＡＦ変異癌を処置する、抑制する、重症度を低減する、危険度を低減するまたは阻害する方法であって、ＢＲＡＦ阻害剤またはＭＥＫ阻害剤のうちの少なくとも１つと組み合わせてチューブリン阻害剤を含む組成物を、ＢＲＡＦ変異癌に罹患している被験体に、前記癌を処置するのに有効な条件下で投与することを含む方法に関する。別の実施形態では、組合せは、チューブリン阻害剤とＢＲＡＦ阻害剤から基本的に成る。別の実施形態では、組合せは、チューブリン阻害剤とＭＥＫ阻害剤から基本的に成る。別の実施形態では、組合せは、チューブリン阻害剤、ＢＲＡＦ阻害剤およびＭＥＫ阻害剤から基本的に成る。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤は、ベムラフェニブ、ダブラフェニブ、ＧＤＣ−０８７９、ＰＬＸ−４７２０、ソラフェニブトシル酸塩、ＬＧＸ８１８またはそれらの任意の組合せである。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤はベムラフェニブである。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤はダブラフェニブである。別の実施形態では、ＭＥＫ阻害剤は、トラメチニブ、セルメチニブ、ＲＯ５０６８７６０、ＭＥＫ１６２、ＰＤ−３２５９０１、コビメチニブ、ＣＩ−１０４０またはそれらの任意の組合せである。別の実施形態では、ＭＥＫ阻害剤はトラメチニブである。別の実施形態では、ＭＥＫ阻害剤はＲＯ５０６８７６０である。別の実施形態では、チューブリン阻害剤は、パクリタキセル、エポチロン、ドセタキセル、ディスコデルモリド、コルヒチン、コンブレスタチン、２−メトキシエストラジオール、メトキシベンゼンスルホンアミド（Ｅ７０１０）、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビン、ビンフルイン、ドラスタチン、ハリコンドリン、ヘミアステリン、クリプトフィシン５２、タキソールまたはそれらの任意の組合せである。別の実施形態では、チューブリン阻害剤は、ドセタキセル、コルヒチン、ビンブラスチン、タキソールまたはそれらの任意の組合せである。別の実施形態では、チューブリン阻害剤はドセタキセルである。別の実施形態では、癌は、黒色腫、甲状腺癌、胆道癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、結腸直腸癌または卵巣癌である。別の実施形態では、癌は黒色腫である。別の実施形態では、黒色腫はＶ６００Ｅ陽性黒色腫である。別の実施形態では、癌は薬物耐性癌である。別の実施形態では、癌は転移性癌である。別の実施形態では、癌はＢＲＡＦ阻害剤に耐性である。
【０１５９】
１つの実施形態では、本発明は、被験体においてＢＲＡＦ阻害剤耐性癌を処置する、抑制する、重症度を低減する、危険度を低減するまたは阻害する方法であって、ＢＲＡＦ阻害剤またはＭＥＫ阻害剤のうちの少なくとも１つと組み合わせてチューブリン阻害剤を含む組成物を、ＢＲＡＦ阻害剤耐性癌に罹患している被験体に、前記癌を処置するのに有効な条件下で投与することを含む方法に関する。別の実施形態では、組合せは、チューブリン阻害剤とＢＲＡＦ阻害剤から基本的に成る。別の実施形態では、組合せは、チューブリン阻害剤とＭＥＫ阻害剤から基本的に成る。別の実施形態では、組合せは、チューブリン阻害剤、ＢＲＡＦ阻害剤およびＭＥＫ阻害剤から基本的に成る。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤は、ベムラフェニブ、ダブラフェニブ、ＧＤＣ−０８７９、ＰＬＸ−４７２０、ソラフェニブトシル酸塩、ＬＧＸ８１８またはそれらの任意の組合せである。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤はベムラフェニブである。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤はダブラフェニブである。別の実施形態では、ＭＥＫ阻害剤は、トラメチニブ、セルメチニブ、ＲＯ５０６８７６０、ＭＥＫ１６２、ＰＤ−３２５９０１、コビメチニブ、ＣＩ−１０４０またはそれらの任意の組合せである。別の実施形態では、ＭＥＫ阻害剤はトラメチニブである。別の実施形態では、ＭＥＫ阻害剤はＲＯ５０６８７６０である。別の実施形態では、チューブリン阻害剤は、パクリタキセル、エポチロン、ドセタキセル、ディスコデルモリド、コルヒチン、コンブレスタチン、２−メトキシエストラジオール、メトキシベンゼンスルホンアミド（Ｅ７０１０）、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビン、ビンフルイン、ドラスタチン、ハリコンドリン、ヘミアステリン、クリプトフィシン５２、タキソールまたはそれらの任意の組合せである。別の実施形態では、チューブリン阻害剤は、ドセタキセル、コルヒチン、ビンブラスチン、タキソールまたはそれらの任意の組合せである。別の実施形態では、チューブリン阻害剤はドセタキセルである。別の実施形態では、癌は、黒色腫、甲状腺癌、胆道癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、結腸直腸癌または卵巣癌である。別の実施形態では、癌は転移性癌である。別の実施形態では、癌は黒色腫である。別の実施形態では、黒色腫はＶ６００Ｅ陽性黒色腫である。
【０１６０】
１つの実施形態では、本発明は、被験体においてベムラフェニブ耐性癌を処置する、抑制する、重症度を低減する、危険度を低減するまたは阻害する方法であって、ＢＲＡＦ阻害剤またはＭＥＫ阻害剤のうちの少なくとも１つと組み合わせてチューブリン阻害剤を含む組成物を、ベムラフェニブ耐性癌に罹患している被験体に、前記癌を処置するのに有効な条件下で投与することを含む方法に関する。別の実施形態では、組合せは、チューブリン阻害剤とＢＲＡＦ阻害剤から基本的に成る。別の実施形態では、組合せは、チューブリン阻害剤とＭＥＫ阻害剤から基本的に成る。別の実施形態では、組合せは、チューブリン阻害剤、ＢＲＡＦ阻害剤およびＭＥＫ阻害剤から基本的に成る。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤は、ベムラフェニブ、ダブラフェニブ、ＧＤＣ−０８７９、ＰＬＸ−４７２０、ソラフェニブトシル酸塩、ＬＧＸ８１８またはそれらの任意の組合せである。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤はベムラフェニブである。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤はダブラフェニブである。別の実施形態では、ＭＥＫ阻害剤は、トラメチニブ、セルメチニブ、ＲＯ５０６８７６０、ＭＥＫ１６２、ＰＤ−３２５９０１、コビメチニブ、ＣＩ−１０４０またはそれらの任意の組合せである。別の実施形態では、ＭＥＫ阻害剤はトラメチニブである。別の実施形態では、ＭＥＫ阻害剤はＲＯ５０６８７６０である。別の実施形態では、チューブリン阻害剤は、パクリタキセル、エポチロン、ドセタキセル、ディスコデルモリド、コルヒチン、コンブレスタチン、２−メトキシエストラジオール、メトキシベンゼンスルホンアミド（Ｅ７０１０）、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビン、ビンフルイン、ドラスタチン、ハリコンドリン、ヘミアステリン、クリプトフィシン５２、タキソールまたはそれらの任意の組合せである。別の実施形態では、チューブリン阻害剤は、ドセタキセル、コルヒチン、ビンブラスチン、タキソールまたはそれらの任意の組合せである。別の実施形態では、チューブリン阻害剤はドセタキセルである。別の実施形態では、癌は、黒色腫、甲状腺癌、胆道癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、結腸直腸癌または卵巣癌である。別の実施形態では、癌は転移性癌である。別の実施形態では、癌は黒色腫である。別の実施形態では、黒色腫はＶ６００Ｅ陽性黒色腫である。
【０１６１】
１つの実施形態では、本発明は、被験体において黒色腫を処置する、抑制する、重症度を低減する、危険度を低減するまたは阻害する方法であって、ＢＲＡＦ阻害剤またはＭＥＫ阻害剤のうちの少なくとも１つと組み合わせてチューブリン阻害剤を含む組成物を、黒色腫に罹患している被験体に、黒色腫を処置するのに有効な条件下で投与することを含む方法に関する。別の実施形態では、組合せは、チューブリン阻害剤とＢＲＡＦ阻害剤から基本的に成る。別の実施形態では、組合せは、チューブリン阻害剤とＭＥＫ阻害剤から基本的に成る。別の実施形態では、組合せは、チューブリン阻害剤、ＢＲＡＦ阻害剤およびＭＥＫ阻害剤から基本的に成る。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤は、ベムラフェニブ、ダブラフェニブ、ＧＤＣ−０８７９、ＰＬＸ−４７２０、ソラフェニブトシル酸塩、ＬＧＸ８１８またはそれらの任意の組合せである。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤はベムラフェニブである。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤はダブラフェニブである。別の実施形態では、ＭＥＫ阻害剤は、トラメチニブ、セルメチニブ、ＲＯ５０６８７６０、ＭＥＫ１６２、ＰＤ−３２５９０１、コビメチニブ、ＣＩ−１０４０またはそれらの任意の組合せである。別の実施形態では、ＭＥＫ阻害剤はトラメチニブである。別の実施形態では、ＭＥＫ阻害剤はＲＯ５０６８７６０である。別の実施形態では、チューブリン阻害剤は、パクリタキセル、エポチロン、ドセタキセル、ディスコデルモリド、コルヒチン、コンブレスタチン、２−メトキシエストラジオール、メトキシベンゼンスルホンアミド（Ｅ７０１０）、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビン、ビンフルイン、ドラスタチン、ハリコンドリン、ヘミアステリン、クリプトフィシン５２、タキソールまたはそれらの任意の組合せである。別の実施形態では、チューブリン阻害剤は、ドセタキセル、コルヒチン、ビンブラスチン、タキソールまたはそれらの任意の組合せである。別の実施形態では、チューブリン阻害剤はドセタキセルである。別の実施形態では、黒色腫は薬物耐性である。別の実施形態では、黒色腫は転移性黒色腫である。別の実施形態では、黒色腫はＶ６００Ｅ陽性黒色腫である。
【０１６２】
１つの実施形態では、本発明は、被験体において甲状腺癌を処置する、抑制する、重症度を低減する、危険度を低減するまたは阻害する方法であって、ＢＲＡＦ阻害剤またはＭＥＫ阻害剤のうちの少なくとも１つと組み合わせてチューブリン阻害剤を含む組成物を、甲状腺癌に罹患している被験体に、甲状腺癌を処置するのに有効な条件下で投与することを含む方法に関する。別の実施形態では、組合せは、チューブリン阻害剤とＢＲＡＦ阻害剤から基本的に成る。別の実施形態では、組合せは、チューブリン阻害剤とＭＥＫ阻害剤から基本的に成る。別の実施形態では、組合せは、チューブリン阻害剤、ＢＲＡＦ阻害剤およびＭＥＫ阻害剤から基本的に成る。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤は、ベムラフェニブ、ダブラフェニブ、ＧＤＣ−０８７９、ＰＬＸ−４７２０、ソラフェニブトシル酸塩、ＬＧＸ８１８またはそれらの任意の組合せである。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤はベムラフェニブである。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤はダブラフェニブである。別の実施形態では、ＭＥＫ阻害剤は、トラメチニブ、セルメチニブ、ＲＯ５０６８７６０、ＭＥＫ１６２、ＰＤ−３２５９０１、コビメチニブ、ＣＩ−１０４０またはそれらの任意の組合せである。別の実施形態では、ＭＥＫ阻害剤はトラメチニブである。別の実施形態では、ＭＥＫ阻害剤はＲＯ５０６８７６０である。別の実施形態では、チューブリン阻害剤は、パクリタキセル、エポチロン、ドセタキセル、ディスコデルモリド、コルヒチン、コンブレスタチン、２−メトキシエストラジオール、メトキシベンゼンスルホンアミド（Ｅ７０１０）、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビン、ビンフルイン、ドラスタチン、ハリコンドリン、ヘミアステリン、クリプトフィシン５２、タキソールまたはそれらの任意の組合せである。別の実施形態では、チューブリン阻害剤は、ドセタキセル、コルヒチン、ビンブラスチン、タキソールまたはそれらの任意の組合せである。別の実施形態では、チューブリン阻害剤はドセタキセルである。別の実施形態では、甲状腺癌は薬物耐性である。別の実施形態では、甲状腺癌は転移性である。
【０１６３】
１つの実施形態では、本発明は、被験体において結腸直腸癌を処置する、抑制する、重症度を低減する、危険度を低減するまたは阻害する方法であって、ＢＲＡＦ阻害剤またはＭＥＫ阻害剤のうちの少なくとも１つと組み合わせてチューブリン阻害剤を含む組成物を、結腸直腸癌に罹患している被験体に、結腸直腸癌を処置するのに有効な条件下で投与することを含む方法に関する。別の実施形態では、組合せは、チューブリン阻害剤とＢＲＡＦ阻害剤から基本的に成る。別の実施形態では、組合せは、チューブリン阻害剤とＭＥＫ阻害剤から基本的に成る。別の実施形態では、組合せは、チューブリン阻害剤、ＢＲＡＦ阻害剤およびＭＥＫ阻害剤から基本的に成る。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤は、ベムラフェニブ、ダブラフェニブ、ＧＤＣ−０８７９、ＰＬＸ−４７２０、ソラフェニブトシル酸塩、ＬＧＸ８１８またはそれらの任意の組合せである。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤はベムラフェニブである。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤はダブラフェニブである。別の実施形態では、ＭＥＫ阻害剤は、トラメチニブ、セルメチニブ、ＲＯ５０６８７６０、ＭＥＫ１６２、ＰＤ−３２５９０１、コビメチニブ、ＣＩ−１０４０またはそれらの任意の組合せである。別の実施形態では、ＭＥＫ阻害剤はトラメチニブである。別の実施形態では、ＭＥＫ阻害剤はＲＯ５０６８７６０である。別の実施形態では、チューブリン阻害剤は、パクリタキセル、エポチロン、ドセタキセル、ディスコデルモリド、コルヒチン、コンブレスタチン、２−メトキシエストラジオール、メトキシベンゼンスルホンアミド（Ｅ７０１０）、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビン、ビンフルイン、ドラスタチン、ハリコンドリン、ヘミアステリン、クリプトフィシン５２、タキソールまたはそれらの任意の組合せである。別の実施形態では、チューブリン阻害剤は、ドセタキセル、コルヒチン、ビンブラスチン、タキソールまたはそれらの任意の組合せである。別の実施形態では、チューブリン阻害剤はドセタキセルである。別の実施形態では、結腸直腸癌は薬物耐性である。別の実施形態では、結腸直腸癌は転移性である。
【０１６４】
１つの実施形態では、本発明は、被験体において卵巣癌を処置する、抑制する、重症度を低減する、危険度を低減するまたは阻害する方法であって、ＢＲＡＦ阻害剤またはＭＥＫ阻害剤のうちの少なくとも１つと組み合わせてチューブリン阻害剤を含む組成物を、卵巣癌に罹患している被験体に、卵巣癌を処置するのに有効な条件下で投与することを含む方法に関する。別の実施形態では、組合せは、チューブリン阻害剤とＢＲＡＦ阻害剤から基本的に成る。別の実施形態では、組合せは、チューブリン阻害剤とＭＥＫ阻害剤から基本的に成る。別の実施形態では、組合せは、チューブリン阻害剤、ＢＲＡＦ阻害剤およびＭＥＫ阻害剤から基本的に成る。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤は、ベムラフェニブ、ダブラフェニブ、ＧＤＣ−０８７９、ＰＬＸ−４７２０、ソラフェニブトシル酸塩、ＬＧＸ８１８またはそれらの任意の組合せである。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤はベムラフェニブである。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤はダブラフェニブである。別の実施形態では、ＭＥＫ阻害剤は、トラメチニブ、セルメチニブ、ＲＯ５０６８７６０、ＭＥＫ１６２、ＰＤ−３２５９０１、コビメチニブ、ＣＩ−１０４０またはそれらの任意の組合せである。別の実施形態では、ＭＥＫ阻害剤はトラメチニブである。別の実施形態では、ＭＥＫ阻害剤はＲＯ５０６８７６０である。別の実施形態では、チューブリン阻害剤は、パクリタキセル、エポチロン、ドセタキセル、ディスコデルモリド、コルヒチン、コンブレスタチン、２−メトキシエストラジオール、メトキシベンゼンスルホンアミド（Ｅ７０１０）、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビン、ビンフルイン、ドラスタチン、ハリコンドリン、ヘミアステリン、クリプトフィシン５２、タキソールまたはそれらの任意の組合せである。別の実施形態では、チューブリン阻害剤は、ドセタキセル、コルヒチン、ビンブラスチン、タキソールまたはそれらの任意の組合せである。別の実施形態では、チューブリン阻害剤はドセタキセルである。別の実施形態では、卵巣癌は薬物耐性である。別の実施形態では、卵巣癌は転移性癌である。
【０１６５】
１つの実施形態では、本発明は、被験体において薬物耐性黒色腫を処置する、抑制する、重症度を低減する、危険度を低減するまたは阻害する方法であって、ＢＲＡＦ阻害剤またはＭＥＫ阻害剤のうちの少なくとも１つと組み合わせてチューブリン阻害剤を含む組成物を、薬物耐性黒色腫に罹患している被験体に、前記黒色腫を処置するのに有効な条件下で投与することを含む方法に関する。別の実施形態では、組合せは、チューブリン阻害剤とＢＲＡＦ阻害剤から基本的に成る。別の実施形態では、組合せは、チューブリン阻害剤とＭＥＫ阻害剤から基本的に成る。別の実施形態では、組合せは、チューブリン阻害剤、ＢＲＡＦ阻害剤およびＭＥＫ阻害剤から基本的に成る。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤は、ベムラフェニブ、ダブラフェニブ、ＧＤＣ−０８７９、ＰＬＸ−４７２０、ソラフェニブトシル酸塩、ＬＧＸ８１８またはそれらの任意の組合せである。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤はベムラフェニブである。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤はダブラフェニブである。別の実施形態では、ＭＥＫ阻害剤は、トラメチニブ、セルメチニブ、ＲＯ５０６８７６０、ＭＥＫ１６２、ＰＤ−３２５９０１、コビメチニブ、ＣＩ−１０４０またはそれらの任意の組合せである。別の実施形態では、ＭＥＫ阻害剤はトラメチニブである。別の実施形態では、ＭＥＫ阻害剤はＲＯ５０６８７６０である。別の実施形態では、チューブリン阻害剤は、パクリタキセル、エポチロン、ドセタキセル、ディスコデルモリド、コルヒチン、コンブレスタチン、２−メトキシエストラジオール、メトキシベンゼンスルホンアミド（Ｅ７０１０）、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビン、ビンフルイン、ドラスタチン、ハリコンドリン、ヘミアステリン、クリプトフィシン５２、タキソールまたはそれらの任意の組合せである。別の実施形態では、チューブリン阻害剤は、ドセタキセル、コルヒチン、ビンブラスチン、タキソールまたはそれらの任意の組合せである。別の実施形態では、チューブリン阻害剤はドセタキセルである。別の実施形態では、黒色腫はＶ６００Ｅ陽性黒色腫である。別の実施形態では、黒色腫は転移性である。
【０１６６】
１つの実施形態では、本発明は、被験体において薬物耐性癌を処置する、抑制する、重症度を低減する、危険度を低減するまたは阻害する方法であって、ＢＲＡＦ阻害剤またはＭＥＫ阻害剤のうちの少なくとも１つと組み合わせてチューブリン阻害剤を含む組成物を、薬物耐性癌に罹患している被験体に、前記癌を処置するのに有効な条件下で投与することを含む方法に関する。別の実施形態では、組合せは、チューブリン阻害剤とＢＲＡＦ阻害剤から基本的に成る。別の実施形態では、組合せは、チューブリン阻害剤とＭＥＫ阻害剤から基本的に成る。別の実施形態では、組合せは、チューブリン阻害剤、ＢＲＡＦ阻害剤およびＭＥＫ阻害剤から基本的に成る。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤は、ベムラフェニブ、ダブラフェニブ、ＧＤＣ−０８７９、ＰＬＸ−４７２０、ソラフェニブトシル酸塩、ＬＧＸ８１８またはそれらの任意の組合せである。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤はベムラフェニブである。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤はダブラフェニブである。別の実施形態では、ＭＥＫ阻害剤は、トラメチニブ、セルメチニブ、ＲＯ５０６８７６０、ＭＥＫ１６２、ＰＤ−３２５９０１、コビメチニブ、ＣＩ−１０４０またはそれらの任意の組合せである。別の実施形態では、ＭＥＫ阻害剤はトラメチニブである。別の実施形態では、ＭＥＫ阻害剤はＲＯ５０６８７６０である。別の実施形態では、チューブリン阻害剤は、パクリタキセル、エポチロン、ドセタキセル、ディスコデルモリド、コルヒチン、コンブレスタチン、２−メトキシエストラジオール、メトキシベンゼンスルホンアミド（Ｅ７０１０）、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビン、ビンフルイン、ドラスタチン、ハリコンドリン、ヘミアステリン、クリプトフィシン５２、タキソールまたはそれらの任意の組合せである。別の実施形態では、チューブリン阻害剤は、ドセタキセル、コルヒチン、ビンブラスチン、タキソールまたはそれらの任意の組合せである。別の実施形態では、チューブリン阻害剤はドセタキセルである。別の実施形態では、癌は、黒色腫、甲状腺癌、胆道癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、結腸直腸癌または卵巣癌である。別の実施形態では、癌は転移性癌である。別の実施形態では、癌は黒色腫である。別の実施形態では、癌はＶ６００Ｅ陽性黒色腫である。
【０１６７】
１つの実施形態では、本発明は、被験体においてＢＲＡＦ阻害剤での処置に対する耐性を克服する方法であって、ＢＲＡＦ阻害剤またはＭＥＫ阻害剤のうちの少なくとも１つと組み合わせたチューブリン阻害剤を含む組成物を、薬物耐性癌に罹患している被験体に投与することを含む方法に関する。別の実施形態では、組合せは、チューブリン阻害剤とＢＲＡＦ阻害剤から基本的に成る。別の実施形態では、組合せは、チューブリン阻害剤とＭＥＫ阻害剤から基本的に成る。別の実施形態では、組合せは、チューブリン阻害剤、ＢＲＡＦ阻害剤およびＭＥＫ阻害剤から基本的に成る。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤は、ベムラフェニブ、ダブラフェニブ、ＧＤＣ−０８７９、ＰＬＸ−４７２０、ソラフェニブトシル酸塩、ＬＧＸ８１８またはそれらの任意の組合せである。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤はベムラフェニブである。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤はダブラフェニブである。別の実施形態では、ＭＥＫ阻害剤は、トラメチニブ、セルメチニブ、ＲＯ５０６８７６０、ＭＥＫ１６２、ＰＤ−３２５９０１、コビメチニブ、ＣＩ−１０４０またはそれらの任意の組合せである。別の実施形態では、ＭＥＫ阻害剤はトラメチニブである。別の実施形態では、ＭＥＫ阻害剤はＲＯ５０６８７６０である。別の実施形態では、チューブリン阻害剤は、パクリタキセル、エポチロン、ドセタキセル、ディスコデルモリド、コルヒチン、コンブレスタチン、２−メトキシエストラジオール、メトキシベンゼンスルホンアミド（Ｅ７０１０）、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビン、ビンフルイン、ドラスタチン、ハリコンドリン、ヘミアステリン、クリプトフィシン５２、タキソールまたはそれらの任意の組合せである。別の実施形態では、チューブリン阻害剤は、ドセタキセル、コルヒチン、ビンブラスチン、タキソールまたはそれらの任意の組合せである。別の実施形態では、チューブリン阻害剤はドセタキセルである。別の実施形態では、癌は、黒色腫、甲状腺癌、胆道癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、結腸直腸癌または卵巣癌である。別の実施形態では、癌は転移性癌である。別の実施形態では、癌は黒色腫である。別の実施形態では、癌はＶ６００Ｅ陽性黒色腫である。
【０１６８】
本発明の化合物は、癌、転移性癌、薬物耐性腫瘍、薬物耐性癌および様々な形態の癌の処置、重症度の低減、危険度の低減または阻害において有用である。好ましい実施形態では、癌は、皮膚癌（例えば黒色腫）、甲状腺癌、結腸直腸癌、卵巣癌、前立腺癌、乳癌、肺癌、結腸癌、胆道癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、白血病、リンパ腫、頭頸部癌、膵癌、食道癌、腎癌またはＣＮＳ癌（例えば神経膠腫、神経膠芽腫）である。これらの種々の癌の処置は本明細書の実施例によって支持される。さらに、チューブリン阻害剤としてそれらの考えられる作用機構に基づき、他の形態の癌が、同様に本発明の化合物または組成物の患者への投与後に処置可能または予防可能であると考えられる。本発明の好ましい化合物は、癌細胞に対して選択的に破壊的な影響を及ぼし、癌細胞の切断を生じさせるが、好ましくは正常細胞には影響を及ぼさない。重要な点として、癌細胞は本発明の化合物のはるかに低い濃度で破壊を受けやすいので、正常細胞への損傷は最小限に抑えられる。
【０１６９】
一部の実施形態では、本発明は、被験体において癌を処置する、抑制する、重症度を低減する、危険度を低減するまたは阻害するための、ＢＲＡＦ阻害剤またはＭＥＫ阻害剤のうちの少なくとも１つと組み合わせた本明細書で述べる化合物またはその異性体、代謝産物、薬学的に許容され得る塩、薬学的生成物、互変異性体、多形体、結晶、Ｎ−オキシド、水和物もしくはそれらの任意の組合せの使用を提供する。別の実施形態では、癌は、皮膚癌（例えば黒色腫）、甲状腺癌、結腸直腸癌、卵巣癌、副腎皮質細胞癌、肛門癌、膀胱癌、脳の癌、脳幹腫瘍、乳癌、神経膠腫、小脳星状細胞腫、大脳星状細胞腫、脳室上衣細胞腫、髄芽細胞腫、テント上原始神経外胚葉性松果体腫瘍、視床下部神経膠腫、類癌腫、癌腫、子宮頸癌、結腸癌、中枢神経系（ＣＮＳ）の癌、子宮内膜癌、食道癌、肝外胆管癌、ユーイングファミリー腫瘍（Ｐｎｅｔ）、頭蓋外胚細胞腫瘍、眼の癌、眼内黒色腫、胆嚢癌、胃癌、胚細胞腫瘍、性腺外妊娠性絨毛腫瘍、頭頸部癌、下咽頭癌、膵島細胞癌、喉頭癌、白血病、急性リンパ芽球性白血病、口腔癌、肝癌、肺癌、非小細胞肺癌、小細胞リンパ腫、エイズ関連リンパ腫、中枢神経系（原発性）リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、ホジキン病、非ホジキン病、悪性中皮腫、メルケル細胞癌、転移性扁平上皮癌、多発性骨髄腫、形質細胞腫、菌状息肉腫、骨髄異形成症候群、骨髄増殖障害、鼻咽頭癌、神経芽細胞腫、口咽頭癌、骨肉腫、卵巣上皮癌、卵巣胚細胞腫瘍、卵巣低悪性度腫瘍、膵癌、外分泌膵癌、膵島細胞癌、副鼻腔および鼻腔癌、副甲状腺癌、陰茎癌、褐色細胞腫、下垂体癌、形質細胞腫、前立腺癌、横紋筋肉腫、直腸癌、腎癌、腎細胞癌、唾液腺癌、セザリー症候群、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、皮膚癌、カポジ肉腫、皮膚癌、黒色腫、小腸癌、軟組織肉腫、軟組織肉腫、精巣癌、胸腺腫、悪性尿道癌、子宮癌、肉腫、小児のまれな癌、膣癌、外陰癌、ウィルムス腫瘍またはそれらの任意の組合せである。別の実施形態では、被験体は以前に以前に化学療法、放射線療法または生物学的療法で処置されたことがある。
【０１７０】
一部の実施形態では、本発明は、被験体において転移性癌を処置する、抑制する、重症度を低減する、危険度を低減するまたは阻害するための、ＢＲＡＦ阻害剤またはＭＥＫ阻害剤のうちの少なくとも１つと組み合わせた本明細書で述べる化合物またはその異性体、代謝産物、薬学的に許容され得る塩、薬学的生成物、互変異性体、多形体、結晶、Ｎ−オキシド、水和物もしくはそれらの任意の組合せの使用を提供する。別の実施形態では、癌は、皮膚癌（例えば黒色腫）、甲状腺癌、結腸直腸癌、卵巣癌、副腎皮質細胞癌、肛門癌、膀胱癌、脳の癌、脳幹腫瘍、乳癌、神経膠腫、小脳星状細胞腫、大脳星状細胞腫、脳室上衣細胞腫、髄芽細胞腫、テント上原始神経外胚葉性松果体腫瘍、視床下部神経膠腫、類癌腫、癌腫、子宮頸癌、結腸癌、中枢神経系（ＣＮＳ）の癌、子宮内膜癌、食道癌、肝外胆管癌、ユーイングファミリー腫瘍（Ｐｎｅｔ）、頭蓋外胚細胞腫瘍、眼の癌、眼内黒色腫、胆嚢癌、胃癌、胚細胞腫瘍、性腺外妊娠性絨毛腫瘍、頭頸部癌、下咽頭癌、膵島細胞癌、喉頭癌、白血病、急性リンパ芽球性白血病、口腔癌、肝癌、肺癌、非小細胞肺癌、小細胞リンパ腫、エイズ関連リンパ腫、中枢神経系（原発性）リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、ホジキン病、非ホジキン病、悪性中皮腫、メルケル細胞癌、転移性扁平上皮癌、多発性骨髄腫、形質細胞腫、菌状息肉腫、骨髄異形成症候群、骨髄増殖障害、鼻咽頭癌、神経芽細胞腫、口咽頭癌、骨肉腫、卵巣上皮癌、卵巣胚細胞腫瘍、卵巣低悪性度腫瘍、膵癌、外分泌膵癌、膵島細胞癌、副鼻腔および鼻腔癌、副甲状腺癌、陰茎癌、褐色細胞腫、下垂体癌、形質細胞腫、前立腺癌、横紋筋肉腫、直腸癌、腎癌、腎細胞癌、唾液腺癌、セザリー症候群、皮膚癌、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、皮膚癌、カポジ肉腫、黒色腫、小腸癌、軟組織肉腫、軟組織肉腫、精巣癌、胸腺腫、悪性尿道癌、子宮癌、肉腫、小児のまれな癌、膣癌、外陰癌、ウィルムス腫瘍またはそれらの任意の組合せである。
【０１７１】
一部の実施形態では、本発明は、被験体において薬物耐性癌または耐性癌を処置する、抑制する、重症度を低減する、危険度を低減するまたは阻害するための、ＢＲＡＦ阻害剤またはＭＥＫ阻害剤のうちの少なくとも１つと組み合わせた本明細書で述べる化合物またはその異性体、代謝産物、薬学的に許容され得る塩、薬学的生成物、互変異性体、多形体、結晶、Ｎ−オキシド、水和物もしくはそれらの任意の組合せの使用を提供する。別の実施形態では、癌は、皮膚癌（例えば黒色腫）、甲状腺癌、結腸直腸癌、卵巣癌、副腎皮質細胞癌、肛門癌、膀胱癌、脳の癌、脳幹腫瘍、乳癌、神経膠腫、小脳星状細胞腫、大脳星状細胞腫、脳室上衣細胞腫、髄芽細胞腫、テント上原始神経外胚葉性松果体腫瘍、視床下部神経膠腫、類癌腫、癌腫、子宮頸癌、結腸癌、中枢神経系（ＣＮＳ）の癌、子宮内膜癌、食道癌、肝外胆管癌、ユーイングファミリー腫瘍（Ｐｎｅｔ）、頭蓋外胚細胞腫瘍、眼の癌、眼内黒色腫、胆嚢癌、胃癌、胚細胞腫瘍、性腺外妊娠性絨毛腫瘍、頭頸部癌、下咽頭癌、膵島細胞癌、喉頭癌、白血病、急性リンパ芽球性白血病、口腔癌、肝癌、肺癌、非小細胞肺癌、小細胞リンパ腫、エイズ関連リンパ腫、中枢神経系（原発性）リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、ホジキン病、非ホジキン病、悪性中皮腫、黒色腫、メルケル細胞癌、転移性扁平上皮癌、多発性骨髄腫、形質細胞腫、菌状息肉腫、骨髄異形成症候群、骨髄増殖障害、鼻咽頭癌、神経芽細胞腫、口咽頭癌、骨肉腫、卵巣上皮癌、卵巣胚細胞腫瘍、卵巣低悪性度腫瘍、膵癌、外分泌膵癌、膵島細胞癌、副鼻腔および鼻腔癌、副甲状腺癌、陰茎癌、褐色細胞腫、下垂体癌、形質細胞腫、前立腺癌、横紋筋肉腫、直腸癌、腎癌、腎細胞癌、唾液腺癌、セザリー症候群、皮膚癌、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、カポジ肉腫、皮膚癌、黒色腫、小腸癌、軟組織肉腫、軟組織肉腫、精巣癌、胸腺腫、悪性尿道癌、子宮癌、肉腫、小児のまれな癌、膣癌、外陰癌、ウィルムス腫瘍またはそれらの任意の組合せである。
【０１７２】
１つの実施形態では、「転移性癌」は、そのもとの部位から身体の別の部分に広がった（転移した）癌を指す。実質的にすべての癌が拡大する潜在能を有する。転移が発現するかどうかは、多くの腫瘍細胞因子の複雑な相互作用に依存し、これには癌のタイプ、腫瘍細胞の成熟（分化）の程度、癌が存在している場所および期間、ならびに他の十分に理解されていない因子が含まれる。転移は３つの方法で、すなわち腫瘍から周囲組織への局所的な拡大によって、血流を介して遠隔部位へまたはリンパ系を介して隣接もしくは遠隔リンパ節へと広がる。各々の種類の癌が典型的な拡大経路を有し得る。腫瘍は原発部位によって名付けられる（例えば脳に広がった乳癌は脳への転移性乳癌と呼ばれる）。
【０１７３】
１つの実施形態では、「薬物耐性癌」は、化学療法に対する耐性を獲得した癌細胞を指す。癌細胞は、薬剤標的の突然変異もしくは過剰発現、薬剤の不活性化または細胞からの薬剤の除去を含む、様々な機構によって化学療法に対する耐性を獲得することができる。化学療法に対する初期応答後に再発する腫瘍は、複数の薬剤に対して耐性であり得る（それらは多剤耐性である）。従来の薬物耐性の見地からすると、腫瘍集団中の１個または数個の細胞が、薬物耐性を付与する遺伝的変化を獲得する。したがって、薬物耐性の理由は、中でも特に以下のものである：ａ）化学療法によって死滅されない細胞の一部が突然変異し（変化し）、薬剤に対して耐性となる。ひとたびそれらが増幅すると、化学療法に感受性である細胞よりも多くの耐性細胞が存在し得る；ｂ）遺伝子増幅。癌細胞は特定の遺伝子の数百のコピーを産生し得る。この遺伝子が、抗癌薬を無効にするタンパク質の過剰産生を引き起こす；ｃ）癌細胞は、Ｐ糖タンパク質と呼ばれる分子を利用してできるだけ迅速に薬剤を細胞から排出し得る；ｄ）細胞壁を横切って薬剤を輸送するタンパク質が働きを停止するので、癌細胞は薬剤の摂取を停止し得る；ｅ）癌細胞は、一部の抗癌薬によって引き起こされるＤＮＡ切断をどのようにして修復するかを学習し得る；ｆ）癌細胞は薬剤を不活性化する機構を開発し得る。多剤耐性への１つの重要な寄与因子は、Ｐ糖タンパク質（Ｐ−ｇｐ）または他の薬剤排出ポンプ（ＯＡＴ、ＯＣＴ、ＢＣＲＰ等）の過剰発現である。このタンパク質は、細胞膜輸送体のＡＴＰ結合カセットファミリーに属する臨床的に重要な輸送体タンパク質である。これは、ＡＴＰ依存性機構を介して抗癌薬を含む基質を腫瘍細胞外に排出することができる。したがって、化学療法において使用される抗癌剤に対する耐性は、悪性障害の処置失敗の主たる原因であり、腫瘍が耐性になることを誘発する。薬物耐性は癌化学療法の失敗の主要原因である。
【０１７４】
１つの実施形態では、「耐性癌」は、上述した薬物耐性癌を指す。別の実施形態では、「耐性癌」は、化学療法、放射線療法または生物学的療法などの何らかの処置に対する耐性を獲得した癌細胞を指す。
【０１７５】
１つの実施形態では、本発明は、以前に以前に化学療法、放射線療法または生物学的療法で処置されたことがある被験体において癌を処置する、抑制する、重症度を低減する、危険度を低減するまたは阻害することに関する。
【０１７６】
１つの実施形態では、「化学療法」は、癌細胞を直接死滅させる薬剤などの、癌のための化学的処置を指す。そのような薬剤は、「抗癌」薬または「抗腫瘍薬」と称される。今日の療法は、癌を処置するために１００を超える薬剤を使用する。特定の癌を治療するため。化学療法は、治癒が可能でない場合に腫瘍成長を制御するため；手術または放射線療法の前に腫瘍を縮小させるため；症状（疼痛など）を緩和するために；および既知の腫瘍が手術によって除去された後に存在する可能性がある顕微鏡的癌細胞を破壊するため（補助療法と呼ばれる）に使用される。補助療法は、起こり得る癌の再発を予防するために与えられる。
【０１７７】
１つの実施形態では、「放射線療法」は、疾患を処置するための高エネルギーｘ線および同様の放射線（電子など）を指す。癌を有する多くの人々は、処置の一部として放射線療法を受ける。これは、ｘ線を使用した体外からの外部放射線療法としてまたは体内から内部放射線療法として与えられ得る。放射線療法は、処置された領域内の癌細胞を破壊することによって機能する。正常細胞も放射線療法によって損傷され得るが、それらは、通常は自ら修復することができる。放射線療法処置は一部の癌を治療することができ、手術後に癌が再び起きる可能性も低減することができる。これは、癌の症状を低減するために使用され得る。
【０１７８】
１つの実施形態では、「生物学的療法」は、癌細胞を破壊するために体内で自然に生じる物質を指す。モノクローナル抗体、癌成長阻害剤、ワクチンおよび遺伝子療法を含むいくつかのタイプの処置がある。生物学的療法は免疫療法としても知られる。
【０１７９】
本発明のなおさらなる態様は、癌状態を処置するまたは予防する方法であって、式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩもしくはＩＶまたは１７ｙａもしくは１２ｄａの化合物などの本発明の化合物およびＢＲＡＦ阻害剤またはＭＥＫ阻害剤のうちの少なくとも１つを含む組成物を提供すること；次に有効量の組成物を、癌状態を処置するまたは予防するのに有効な方法で患者に投与することを含む方法に関する。
【０１８０】
１つの実施形態によれば、処置される患者は前癌状態の存在を特徴とし、組成物の投与は、前癌状態が癌状態へと進行するのを予防するのに有効である。これは、前癌細胞が癌状態へとさらに進行する前にまたはそれと同時に、前癌細胞を破壊することによって行われ得る。
【０１８１】
別の実施形態によれば、処置される患者は癌状態の存在を特徴とし、組成物の投与は、癌状態の後退を生じさせるまたは癌状態の成長を阻害する、すなわちその成長を完全に停止させるもしくはその成長の速度を低減するのに有効である。これは、好ましくは、患者の体内での癌細胞の位置に関わりなく、癌細胞を破壊することによって行われる。すなわち、癌細胞が原発腫瘍部位に位置するかまたは癌細胞が転移して、患者の体内で二次腫瘍を生成しているかどうかに関わらない。
【０１８２】
本明細書で使用される場合、被験体または患者は、限定されることなく、ヒトおよび他の霊長動物、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ヒツジ、ブタ、ラット、マウスおよび他のげっ歯動物を含む、任意の哺乳動物患者を指す。１つの実施形態では、被験体は雄性である。別の実施形態では、被験体は雌性である。一部の実施形態では、本明細書で述べる方法は、雄性および雌性の両方を処置するのに有用であり得る。
【０１８３】
本発明の化合物を投与する場合、それらは全身的に投与することができ、または選択的に、癌細胞または前癌細胞が存在する特定の部位に直接投与することができる。したがって、投与は、化合物または薬学的組成物を癌細胞または前癌細胞に送達するために有効な任意の方法で達成することができる。例示的な投与方法には、限定されることなく、化合物または組成物を経口的、局所的、経皮的、非経口的、皮下的、静脈内、筋肉内、腹腔内に、鼻腔内滴下によって、腔内もしくは嚢内滴下によって、眼内、動脈内、病巣内に、または粘膜、例えば鼻、喉および気管支の粘膜への適用によって投与することが含まれる。
【０１８４】
本発明の化合物または薬学的組成物を、癌状態を処置する、抑制する、重症度を低減する、危険度を低減するまたは阻害するために投与する場合、薬学的組成物は、様々なタイプの癌の処置のための現在公知のまたは今後開発される他の治療薬または処置レジメンも含むことができ、またはそれらと共に投与することができる。他の治療薬または処置レジメンの例には、限定されることなく、放射線療法、免疫療法、化学療法、外科的介入処置およびそれらの組合せが含まれる。
【０１８５】
以下の実施例は、本発明の好ましい実施形態をより詳細に説明するために提示されるものである。それらは、しかし、決して本発明の広い範囲を限定すると解釈されるべきではない。
【実施例】
【０１８６】
以下に示す実施例は例示だけを目的とし、いかなる意味で本発明の範囲を限定することを意図しない。
【０１８７】
（実施例１）
ＢＲＡＦ変異黒色腫およびベムラフェニブ耐性癌の処置のための化合物１２ｄａまたは１７ｙａおよびベムラフェニブの併用
ベクターは、Ｖ６００Ｅ変異体に関して承認された新規抗黒色腫薬であるが、約９か月の間に耐性を発現する。化合物１２ｄａおよび１７ｙａを含むいくつかのチューブリン阻害剤を、どちらもＢＲＡＦ  Ｖ６００Ｅ変異細胞株である親Ａ３７５およびＭＤＡ−ＭＢ−４３５細胞に対するベムラフェニブとの抗増殖併用効果を評価するためにスクリーニングした。これらの組合せは耐性を克服するのに役立ち得る。
【０１８８】
１２ｄａまたはドセタキセルとベムラフェニブの併用による相乗的細胞周期停止の仮説を、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異親黒色腫細胞株および慢性選択したベムラフェニブ耐性Ａ３７５ＲＦ２１亜株のパネルで試験した（Ｓｕ  Ｆ，Ｂｒａｄｌｅｙ  ＷＤ，Ｗａｎｇ  Ｑら、“Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｔｏ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ＢＲＡＦ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｃａｎ  ｂｅ  ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｂｙ  ｍｏｄｅｓｔ  ｕｐｓｔｒｅａｍ  ｐａｔｈｗａｙ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ．”Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．（２０１２）７２：９６９−９７８）。提案した相乗的薬剤併用が、関連する臨床ベムラフェニブ耐性に潜在的な治療上の利益があるかどうかを試験するため、樹立されたベムラフェニブ耐性Ａ３７５ＲＦ２１細胞を疾患再発モデルとしてインビトロおよびインビボで使用した。
【０１８９】
試験材料および方法
試薬および細胞株
ベムラフェニブ（ＰＬＸ４０３２、ＲＧ７２０４またはＲ０５１８５４２６としても公知）、トラメチニブ、スニチニブ（リンゴ酸塩）およびドセタキセルをＬＣ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｗｏｂｕｒｎ，ＭＡ）より購入した。化合物１２ｄａは、以下で述べるように社内で合成した。化合物をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）に溶解し、１０ｍＭの保存溶液を作製した。ヒト黒色腫Ａ３７５細胞株をＡＴＣＣ（Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）より入手した。ＷＭ１６４およびＭＤＡ−ＭＢ−４３５細胞は、Ｄｒ．Ｍｅｅｎｈａｒｄ  Ｈｅｒｌｙｎ（Ｗｉｓｔａｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ）およびＤｒ．Ｒｏｂｅｒｔ  Ｃｌａｒｋｅ（Ｇｅｏｒｇｅｔｏｗｎ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，ＤＣ）からそれぞれ入手した。すべての細胞株をこの試験のための使用に先立って確認した。細胞を、１０％胎仔ウシ血清（ＦＢＳ、Ａｔｌａｎｔａ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ，Ｌａｗｒｅｎｃｅｖｉｌｌｅ，ＧＡ）、１％抗生物質／抗真菌薬混合物（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）および５μｇ／ｍＬウシインスリン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を添加したＤＭＥＭ培地（Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）中で培養した。
【０１９０】
インビトロで獲得されたベムラフェニブ耐性
ベムラフェニブに対する獲得耐性を有する黒色腫細胞株を、報告されている方法（Ｓｕ  Ｆ，Ｂｒａｄｌｅｙ  ＷＤ，Ｗａｎｇ  Ｑら、“Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｔｏ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ＢＲＡＦ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｃａｎ  ｂｅ  ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｂｙ  ｍｏｄｅｓｔ  ｕｐｓｔｒｅａｍ  ｐａｔｈｗａｙ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ．”Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．（２０１２）７２：９６９−９７８）に従って、漸増濃度のベムラフェニブ中で親Ａ３７５細胞を少なくとも３か月間培養することによって慢性選択した。単離された耐性Ａ３７５ＲＦ２１細胞株は、ベムラフェニブについてのＩＣ５０が着実に５０倍以上増大した（ＭＴＳアッセイによって決定された親Ａ３７５細胞株における０．５７±０．０３μΜと比較してＡ３７５ＲＦ２１細胞では２８．９±０．６μΜ、図１）。耐性Ａ３７５ＲＦ２１細胞株を、２．５μΜベムラフェニブを含む完全成長培地中で維持した。
【０１９１】
細胞増殖およびインビトロ併用アッセイ
先に述べたようにＭＴＳまたはＳＲＢアッセイを用いて細胞増殖生存能を検討した。ベムラフェニブとチューブリン阻害剤の併用のインビトロ試験を設計し、各セットの処置の５つの複製と共にＣａｌｃｕＳｙｎソフトウェア（Ｂｉｏｓｏｆｔ，Ｆｅｒｇｕｓｏｎ，ＭＯ）を用いて実施した。薬剤濃度は、パイロット試験からの各試験薬のＩＣ５０値に基づいて選択した。相乗作用、付加的な活性または拮抗作用は、Ｃｈｏｕ−Ｔａｌａｌａｙ法（Ｃｈｏｕ  ＴＣ．“Ｄｒｕｇ  ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ｓｔｕｄｉｅｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ｓｙｎｅｒｇｙ  ｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｕｓｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｃｈｏｕ−Ｔａｌａｌａｙ  ｍｅｔｈｏｄ．”Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．（２０１０）７０：４４０−４４６）を介して決定し、ソフトウェア出力で計算した併用指数（ＣＩ）を示した。
【０１９２】
細胞周期分析
フローサイトメトリ分析を以前に記述されているように実施した（Ｗａｎｇ  Ｚ，Ｃｈｅｎ  Ｊ，Ｗａｎｇ  Ｊら、“Ｎｏｖｅｌ  ｔｕｂｕｌｉｎ  ｐｏｌｙｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｖｅｒｃｏｍｅ  ｍｕｌｔｉｄｒｕｇ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ａｎｄ  ｒｅｄｕｃｅ  ｍｅｌａｎｏｍａ  ｌｕｎｇ  ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ．”Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．（２０１２）２９：３０４０−３０５２）。Ｇ２およびＭ期の細胞周期分布（図２３）を決定するために、細胞をトリプシンで採取し、抗ホスホヒストンＨ３−ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ（登録商標）４８８抗体を用いて暗所にて氷上で１時間染色し、次いでＰＩ／ＲＮアーゼ溶液を用いて製造者の指示に従って（＃ＦＣＣＨ０２５１０３、ＥＭＤ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｂａｌｌｅｒｉｃａ，ＭＡ）暗所にて室温で３０分間染色した。データをさらに処理し、Ｍｏｄｆｉｔ  ２．０プログラム（Ｖｅｒｉｔｙ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｈｏｕｓｅ，Ｔｏｐｓｈａｍ，ＭＥ）を使用してグラフを作成した。
【０１９３】
チューブリン重合アッセイ
ＨＴＳ−チューブリン重合アッセイを、市販のキットを製造者の指示に従って（＃ＢＫ００４Ｐ、Ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔｏｎ，Ｉｎｃ．，Ｄｅｎｖｅｒ，ＣＯ）使用して、以前に記述されているように実施した。ウシ脳チューブリン（０．４ｍｇ）を５μΜ  １２ｄａ、２０μΜベムラフェニブまたは２つの薬剤の組合せと混合し、１１０μＬの一般的チューブリン緩衝液（８０ｍＭ  ＰＩＰＥＳ、２．０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、０．５ｍＭ  ＥＤＴＡおよび１ｍＭ  ＧＴＰ）、ｐＨ６．９中でインキュベートした。３４０ｎｍでの吸光度を、ＳＹＮＥＲＧＹ  ＨＴマイクロプレートリーダー（Ｂｉｏ−Ｔｅｋ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｗｉｎｏｏｓｋｉ，ＶＴ）によって３７℃で１分ごとに４５分間、動力学的に記録した。単剤処置または併用処置のいずれかからのデータを、陽性対照群である１０μＭコルヒチンからのデータと比較した。
【０１９４】
ウェスタンブロット分析
指示されている時点の処置時に、ヒト黒色腫Ａ３７５ＲＦ２１、ＭＤＡ−ＭＢ−４３５またはＷＭ１６４細胞を収集し、ウェスタンブロット法によって関連カスケードタンパク質またはアポトーシスマーカーを検討した。ホスファターゼ−プロテイナーゼ阻害剤カクテル（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を含むＲＩＰＡ緩衝液（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）で細胞を溶解することによって全タンパク質を抽出した。次にキット（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を使用してＢＣＡ法によって一般タンパク質濃度を測定した。細胞溶解物を、Ｌａｅｍｍｌｉ負荷緩衝液（Ｂｉｏ−Ｒａｄ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）を使用して等しい一般タンパク質濃度に希釈し、５分間煮沸してタンパク質を変性させた。次に１０μｇの一般タンパク質を含む群試料を電気泳動のために４〜１５％トリス−ＨＣｌプレキャストポリアクリルアミドゲル（Ｂｉｏ−Ｒａｄ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）の各ウェルに負荷し、その後０．２μｍニトロセルロース膜（Ｂｉｏ−Ｒａｄ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）に移した。１×ＴＢＳＴ中で室温にて１時間、５％ウシ血清アルブミンでブロックした後、膜を一次ウサギ抗体（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．，Ｄａｎｖｅｒｓ，ＭＡ）：抗ホスホＥＲＫ１／２（Ｔｈｒ２０２／Ｔｙｒ２０４；＃９１０１）、抗ｐ４４／４２  ＭＡＰＫ（ＥＲＫ１／２；＃９１０２）、抗ホスホＡＫＴ（Ｓｅｒ４７３；＃９２７１）、抗ＡＫＴ（＃９２７２）、抗サイクリンＤ１（９２Ｇ２；＃２９７８）；抗切断ＰＡＲＰ（Ａｓｐ２１４；＃９１８５）、抗切断カスパーゼ３（Ａｓｐ  １７５；＃９６６４）、抗ＲＡＳ（＃３３３９）、抗ＡＲＡＦ（＃４４３２）、抗ＢＲＡＦ（＃９４３３）、抗ＣＲＡＦ（＃９４２２）、ホスホＰＩ３キナーゼｐ８５（Ｔｙｒ４５８）／ｐ５５（Ｔｙｒｌ９９）（＃４２２８）、抗ＰＴＥＮ（＃９１８８）、抗ＰＤＧＦ受容体β（＃３１６９）または抗ＧＡＰＤＨ（＃３６８３）と共に別々に４℃で一晩さらにインキュベートした。次に膜を抗ウサギＩｇＧ  ＨＲＰ結合二次抗体（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ、＃７０７１）と共に室温で１時間インキュベートした。１×ＬｕｍｉＧＬＯ（登録商標）試薬（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ、＃７００３）と共に１分間インキュベートすることによって標的タンパク質を検出し、ｘ線フィルムに暴露した。フィルムをグレースケールでスキャンし、レーン強度をＩｍａｇｅＪソフトウェア（ＮＩＨ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，ＵＳＡ）で定量化した。
【０１９５】
アポトーシス検出
Ａ３７５ＲＦ２１細胞を６ウェルプレート（１×１０６／ウェル）に接種し、５‰ＤＭＳＯ、ベムラフェニブ、１２ｄａ、ドセタキセルまたは指示されている組合せを含む成長培地で処置した。４８時間のインキュベーション後、アネキシンＶ−ＦＩＴＣアポトーシス検出キット（Ａｂｃａｍ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）を製造者の指示通りに使用してアポトーシス分析を実施し、ＢＤ  ＬＳＲ−ＩＩサイトメータ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，ＣＡ）によって分析した。
【０１９６】
腫瘍異種移植および処置
７〜８週齢の雄性ヌードマウスをＣｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＭＡ）より購入した。Ａ３７５ＲＦ２１細胞を、ＦＢＳを含まない氷冷フェノールレッド不含およびＦＢＳ不含ＤＭＥＭ培地に懸濁し、使用の直前に高濃度のマトリゲル（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ  Ｊｏｅｓ，ＣＡ）と１：１の比率で混合した。３×ｌ０６細胞を含む１００μＬのこの混合物を各マウスの左背側側腹部に皮下（ｓ．ｃ．）注射した。接種の１週間後に、マウスを４つの群に無作為に割り付け（初期低用量についてはｎ＝７およびその後の高用量薬剤併用についてはｎ＝５）、処置を開始した。化合物１２ｄａまたはベムラフェニブをＰＥＧ３００（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）に希釈し、１日１回、週に５日で連続３週間、腹腔内（ｉ．ｐ．）注射によって投与した。ビヒクル対照群には、同じ容量（１００μＬ）のＰＥＧ３００を同じ投与頻度でｉ．ｐ．注射した。実験の最後に、マウスを安楽死させ、腫瘍組織を単離して、計量し、次に１０％ホルマリンリン酸緩衝液中に固定した。
【０１９７】
各マウスの腫瘍体積および体重を週に３回評価した。腫瘍体積を式ａ×ｂ２×０．５を用いて計算し、ここでａおよびｂは腫瘍の大直径および小直径を表した。データを各群について平均±ＳＤとして示し、時間の関数としてプロットした。腫瘍成長阻害（ＴＧＩ）を１００−１００×［（Ｔ−Ｔ０）／（Ｃ−Ｃ０）］として計算し、腫瘍退縮を（Ｔ−Ｔ０）／Ｔ０×１００として計算し、ここでＴ、Ｔ０、ＣおよびＣ０は、それぞれ、処置の最終日の特定の群についての平均腫瘍体積、処置の１日目の同じ群の平均腫瘍体積、処置の最終日のビヒクル対照群についての平均腫瘍体積および処置の１日目のビヒクル対照群についての平均腫瘍体積である。
【０１９８】
病理学および免疫組織化学分析
１週間以上ホルマリン緩衝液に固定した腫瘍組織をヘマトキシリンおよびエオシンで染色した。免疫組織化学（ＩＨＣ）分析のために、以下の一次抗体を使用した：ウサギ抗Ｋｉ６７、抗ホスホＡＫＴ（Ｓｅｒ４７３）および抗ホスホＥＲＫ１／２（Ｔｈｒ２０２／Ｔｙｒ２０４）（＃９０２７；＃４０６０；＃４３７６；Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．，Ｄａｎｖｅｒｓ，ＭＡ）。抗Ｓ１００一次抗体をＡｂｃａｍ（＃ａｂ８６８、Ａｂｃａｍ  Ｉｎｃ．，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）より購入した。製造者のプロトコルに従って分析を実施した。
【０１９９】
統計分析
Ｐｒｉｓｍ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  ５．０（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を使用してデータを分析した。統計的有意性（Ｐ＜０．０５）を、インビトロアポトーシス検出および異種移植試験に関してマン‐ホイットニー順位和検定（Ｍａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ  Ｒａｎｋ  Ｔｅｓｔ）、ノンパラメトリックｔ検定および一方向ＡＮＯＶＡによって評価した。処置群をビヒクル群と比較し、併用処置群を、それに応じて、単剤処置を受けた群と比較した。
【０２００】
試験結果
チューブリン阻害剤１７ｙａおよび１２ｄａとベムラフェニブの併用は、親細胞株およびベムラフェニブ耐性黒色腫細胞株の両方において強力な相乗作用を示した。
化合物１７ｙａおよび１２ｄａを含むいくつかのチューブリン阻害剤を、どちらもＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異細胞株である親Ａ３７５およびＭＤＡ−ＭＢ−４３５細胞に対するベムラフェニブとの抗増殖併用効果を評価するためにスクリーニングした。どちらも周知の２つのチューブリン阻害剤、ドセタキセルおよびコルヒチンを比較のために含めた（表１および図２４）。１２ｄａとベムラフェニブの併用に関して計算されたＣＩ値は、それらのＥＤ５０で０．３２（Ａ３７５細胞株）および０．１０（ＭＤＡ−ＭＢ−４３５細胞株）という低さであることが認められた。さらに、ＭＥＫｉ（トラメチニブ）および一般的受容体チロシンキナーゼ阻害剤（ＲＴＫｉ；スニチニブ）は付加的なＣＩ値しか示さないことが明らかになった（表１）。
【０２０１】
以下の結果に基づき、これらの組合せはベムラフェニブ処置患者でみられる耐性を克服するのに役立ち得る。
【０２０２】
１７ｙａおよび１２ｄａの両方が、ベムラフェニブまたはドセタキセルと組み合わせた場合、相乗的活性を実証した。１７ｙａで研究を開始したが、インビボ試験のために１２ｄａに移行した。併用指数（ＣＩ）の概念を導入する。基本的に、ＣＩ値＜１．０は相乗的活性を指示し、１．０の値は付加的な活性を指示し、＞１．０の値は付加的未満の活性または拮抗活性を指示する。
【表１】
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【０２０３】
臨床的に黒色腫腫瘍は、ベムラフェニブ化学療法を受けた後わずか３から６か月で不可避的に再発し、それゆえ観察された相乗作用がベムラフェニブ耐性細胞において有効なままであるかどうかを判定することが望ましかった。この目標に向けて、ベムラフェニブ耐性Ａ３７５ＲＦ２１亜株を、文献に報告されている手順に従って（Ｓｕ  Ｆ，Ｂｒａｄｌｅｙ  ＷＤ，Ｗａｎｇ  Ｑら、“Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｔｏ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ＢＲＡＦ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｃａｎ  ｂｅ  ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｂｙ  ｍｏｄｅｓｔ  ｕｐｓｔｒｅａｍ  ｐａｔｈｗａｙ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ．”Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．（２０１２）７２：９６９−９７８）親Ａ３７５ヒト黒色腫細胞から慢性選択によって樹立した。Ａ３７５およびＡ３７５ＲＦ２１の両細胞を使用してウェスタンブロット分析を実施し、ベムラフェニブ耐性をもたらすことが公知の特異的タンパク質活性化を測定した。図２５Ａに示すように、２．５μΜベムラフェニブ（その培地の維持濃度）の存在下でＡ３７５ＲＦ２１中のｐＥＲＫレベルは変化せず、獲得ベムラフェニブ耐性の発現を確認した。ｐＭＥＫ発現もＡ３７５ＲＦ２１細胞において活性なままであり、ＭＥＫ１／２阻害剤に対するそれらの潜在的交差耐性を指示した。この交差耐性は、細胞を２つの公知のＭＥＫ阻害剤（トラメチニブおよびセルメニチブ、図２５Ｂおよび２５Ｃ）と共にインキュベートすることによって確認された。ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ経路はＡ３７５ＲＦ２１細胞において過度に活性化されたが、ＲＡＳ、ＢＲＡＦ、ＡＲＡＦ、ＣＲＡＦレベルの有意の変化は認められなかった。これらの結果はＦｅｉ  Ｓｕらの報告と一致する。興味深いことに、ＰＤＧＦ受容体βのレベルも、２．５μΜベムラフェニブ維持培地の存在下または不在下でＡ３７５ＲＦ２１細胞において有意に増大することが認められた。Ａ３７５ＲＦ２１細胞において薬物耐性を付与する両方の耐性機構（ｐＡＫＴおよびＰＤＧＦβ）がベムラフェニブ耐性患者腫瘍中に存在することは周知である。
【０２０４】
表１に示すように、薬剤併用試験は、Ａ３７５ＲＦ２１細胞を使用して反復した場合、ベムラフェニブと組み合わせた化合物１２ｄａに関してすべて０．９未満（範囲：０．５３〜０．７０）の算出ＣＩ値を生じ、試験したすべての濃度で強力な相乗作用を指示した。ＥＤ５０で、３つすべてのチューブリン阻害剤がベムラフェニブと相乗的に作用した。薬剤濃度の上昇と共に、ドセタキセルまたはコルヒチン群についてのＣＩ値は比較的に急速に増大した。ＥＤ９０の用量で、ベムラフェニブとドセタキセルの併用はほとんど付加的であった（０．９０のＣＩ値）が、ベムラフェニブとコルヒチンの併用効果は拮抗作用に逆転した（１．３６のＣＩ値）。その他の２つのチューブリン阻害剤と比較して、化合物１２ｄａは、耐性Ａ３７５ＲＦ２１細胞においてベムラフェニブと併用した場合、より大きな相乗作用を示した。
【０２０５】
驚くべきことに、１２ｄａとベムラフェニブの併用について計算されたＣＩ値は、ＥＣ５０で０．１および０．３と低いことが認められた。ベムラフェニブ化学療法を受けた後わずか３から６か月で臨床的腫瘍退縮が広く発現したので、併用処置に関して主として観察された相乗作用がベムラフェニブ耐性Ａ３７５ＲＦ２１細胞株で一致し得るかどうかについてのこの試験を継続した。
【０２０６】
試験した化学療法剤のパネル全体にわたって、Ｂ−ＲＡＦ変異阻害剤ベムラフェニブは、当初は乳癌細胞であると考えられたが現在は黒色腫細胞であることが公知のＭＤＡ−ＭＢ−４３５細胞において特に相乗的な細胞傷害性を明らかにし（表２）、ベムラフェニブ＋１７ｙａについては０．１０のＣＩ値を示し、またＥＣ７５およびＥＣ９０でも強力な、しかしより低い相乗作用を示した（表５）。この活性は、Ｂ−ＲＡＦ阻害剤としておよび細胞周期の異なる期、Ｇ１およびＧ２／Ｍで細胞を停止させる（本明細書で論じたように）抗チューブリン剤（１７ｙａ）としてそれぞれ理論的に説明することができる。したがって、有糸分裂の二重標的化は、細胞死のための有糸分裂細胞をより完全に標的とするはずである。相乗的ＣＩ結果はまた、Ａ３７５黒色腫細胞に関して、１７ｙａだけでなく他の抗チューブリン剤、例えばコルヒチン、ビンブラスチンおよびタキソールについても表３に示している。ＡＫＴ阻害剤に関しては限られた相乗作用が見られ、ＭＥＫ阻害剤では相乗作用は認められなかった（表４）。
【表２】
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【表３】
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【表４】
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【表５】
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【０２０７】
１２ｄａとベムラフェニブの併用はＡ３７５ＲＦ２１細胞において相乗的細胞周期停止を生じさせた（表１）。
コルヒチン部位に結合するチューブリン阻害剤として、化合物１２ｄａは、親Ａ３７５細胞株においてＧ２／Ｍ期を用量依存的に有効にブロックする。化合物１２ｄａとベムラフェニブの併用がベムラフェニブ耐性細胞を異なる複製期で停止させるかどうかを判定するため、Ａ３７５ＲＦ２１細胞において細胞周期分析を実施した。指示濃度の化合物溶液に２４時間暴露した後、図２Ｂのデータは相乗的細胞周期停止を明らかに示した。ＤＭＳＯ対照に関しては、５０％のＡ３７５ＲＦ２１細胞がＧ０／Ｇ１期に分布し、Ｓ期またはＧ２／Ｍ期の細胞の割合は、対応して１２％または３２％であった。２０ｎＭの濃度の化合物１２ｄａ単剤処置群については、Ｇ２／Ｍ期に分布する細胞の割合は７０％まで蓄積していた。耐性Ａ３７５ＲＦ２１細胞株で同様のＧ０／Ｇ１細胞周期停止を生じさせるためにベムラフェニブを単剤として使用すると、親Ａ３７５細胞での１μΜ未満と比較して、ベムラフェニブの濃度を３０μΜまたはそれを超える濃度まで上昇させなければならなかった。予想されたように、ベムラフェニブと化合物１２ｄａの併用はＡ３７５ＲＦ２１細胞をＧ０／Ｇ１期（４８％）およびＧ２／Ｍ（４３％）期の両方で強力に停止させた。加えて、併用処置ははるかに多い細胞デブリを生成し、これは癌細胞アポトーシスの増大を指示した。ベムラフェニブとドセタキセルの併用による処置は同様の相乗作用を生じさせた。
【０２０８】
併用処置はベムラフェニブ耐性細胞におけるアポトーシス細胞死の有意の増大を誘導した。
併用処置の細胞アポトーシス誘導作用の可能性をより明瞭に理解するために、アネキシンＶおよびヨウ化プロピジウム共染色フローサイトメトリを利用して、Ａ３７５ＲＦ２１において生細胞とアポトーシス細胞を区別した。予想されたように、単剤処置は試験濃度で細胞アポトーシスを誘導することに控えめな作用しか生じさせなかった；これに対し、併用処置群はアポトーシスを有意に増強した（図３Ａ）。Ｑ１（早期アポトーシス）、Ｑ２（アポトーシス）およびＱ４（死細胞）に分布する細胞のパーセント合計を定量化した図３Ｂに示すように、化合物１２ｄａとベムラフェニブの併用は５０±７．６％の計数された細胞アポトーシスまたは細胞死をもたらし、これは２つの単剤処置群のアポトーシスパーセント（化合物１２ｄａについては１１．８±３．０％およびベムラフェニブについては１１．９±３．５％）の単純合計よりはるかに高い。アポトーシス誘導の同様の相乗作用はドセタキセルを含む併用処置群でも観察された（ドセタキセル群については６．４±３．０％、併用については３８．１±２．６％）。
【０２０９】
併用はｐＡＫＴまたは全ＡＫＴを下方調節することおよびアポトーシスカスケードを活性化することを介して獲得ベムラフェニブ耐性を軽減する。
化合物１２ｄａはチューブリン重合を標的とし（Ｃｈｅｎ  Ｊ，Ｌｉ  ＣＭ，Ｗａｎｇ  Ｊら、“Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ａｎｄ  ａｎｔｉｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ｎｏｖｅｌ  ２−ａｒｙｌ−４−ｂｅｎｚｏｙｌ−ｉｍｉｄａｚｏｌｅ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｔｕｂｕｌｉｎ  ｐｏｌｙｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ．”Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．（２０１１）１９：４７８２−４７９５；Ｃｈｅｎ  Ｊ，Ｗａｎｇ  Ｚ，Ｌｉ  ＣＭら、“Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ｏｆ  ｎｏｖｅｌ  ２−ａｒｙｌ−４−ｂｅｎｚｏｙｌ−ｉｍｉｄａｚｏｌｅｓ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｔｈｅ  ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅｓ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｓｉｔｅ  ｉｎ  ｔｕｂｕｌｉｎ  ａｓ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  ａｇｅｎｔｓ．”Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．（２０１０）５３：７４１４−７４２７）、ベムラフェニブはＢＲＡＦＶ６００Ｅを標的とすることが確認されている。この強力な相乗的併用を導く原因となる分子機構を理解するための最初のアプローチとして、相乗作用が化合物１２ｄａまたはベムラフェニブの直接標的の増強によって媒介されるかどうかを検討した。図４に示すように、ベムラフェニブ単独では、２０μΜの高濃度でも、チューブリン重合に全く影響を及ぼさなかった。化合物１２ｄａにベムラフェニブを付加すると、単剤の化合物１２ｄａと比較して、多くてもチューブリン重合の阻害をかろうじて増大させる程度であった。併用処置におけるチューブリン重合の阻害はもっぱら化合物１２ｄａによって寄与され、相乗的併用は化合物１２ｄａの直接標的阻害の増強によって媒介されるのではないことを示唆した。次に、併用が、ベムラフェニブによるＢＲＡＦＶ６００Ｅ阻害の特徴であるｐＥＲＫに何らかの作用を及ぼすかどうかを、ウェスタンブロット法を用いて測定した。図５Ａは、化合物１２ｄａまたは併用処置のいずれも、Ａ３７５ＲＦ２１耐性細胞との４８時間のインキュベーション後にｐＥＲＫまたは全ＥＲＫレベルに明確な影響を及ぼさないことを明らかにした。化合物１２ｄａを別のチューブリン阻害剤、ドセタキセルに置き換えても同様の結果を生じた（図５Ａ）。それゆえ、相乗的併用はＢＲＡＦＶ６００Ｅの阻害の増強を介するのではないと考えられた。
【０２１０】
併用はｐＡＫＴまたは全ＡＫＴを下方調節することおよびアポトーシスカスケードを活性化することを介して獲得ベムラフェニブ耐性を軽減する。
【０２１１】
最近、Ｆｅｉ  Ｓｕらは、Ａ３７５ベムラフェニブ耐性クローンではそれらの親ベムラフェニブ感受性細胞と比較してｐＡＫＴレベルが上昇していることを報告した（Ｓｕ  Ｆ，Ｂｒａｄｌｅｙ  ＷＤ，Ｗａｎｇ  Ｑら、“Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｔｏ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ＢＲＡＦ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｃａｎ  ｂｅ  ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｂｙ  ｍｏｄｅｓｔ  ｕｐｓｔｒｅａｍ  ｐａｔｈｗａｙ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ．”Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．（２０１２）７２：９６９−９７８）。Ａ３７５ＲＦ２１細胞も強力なｐＡＫＴ活性化を有するので（図２５Ａ）、併用処置は、ベムラフェニブ耐性Ａ３７５ＲＦ２１細胞においてＡＫＴ経路の活性を下方調節することを介してその強力な相乗作用を生じさせ得るという仮説を立てた。図５Ａに示すように、ｐＡＫＴおよび全ＡＫＴ（ｔＡＫＴ）の両方が、単剤化合物１２ｄａまたはその併用処置群において４８時間のインキュベーション後に大きく低減し、相乗的抗増殖作用がＥＲＫおよびＡＫＴリン酸化の両方を同時に標的とすることによって媒介され得ることを示唆した。ドセタキセルもｐＡＫＴおよびｔＡＫＴ発現を低減し、ベムラフェニブとのその併用処置において同様の作用を及ぼした。例えば、ｔＡＫＴレベルの明らかな低下に加えて、化合物１２ｄａとベムラフェニブの併用はｐＡＫＴのレベルをｔＡＫＴに比べて６１％まで低下させた（レーン密度の定量化した相対倍数から計算した：０．０８／０．１３×１００％）が、単剤処置はｐＡＫＴのレベルを、ｔＡＫＴの対応するレベルに比べてそれぞれ７７％（１２ｄａ、０．６／０．７７×１０％）および７０％（ベムラフェニブ、０．３４／０．４８×１００％）までしか低下させなかった。化合物１２ｄａの強力な用量依存的ｐＡＫＴ／ｔＡＫＴ阻害作用は、他の２つのＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異細胞株、ＷＭ１６４およびＭＤＡ−ＭＢ−４３５でさらに確認された（図５Ｂ）。ベムラフェニブ耐性細胞において（図５Ａ）、ベムラフェニブおよび併用処置群におけるサイクリンＤ１レベルの低下はＧ０／Ｇ１細胞周期進行に対する阻害を指示した。アポトーシスマーカーである切断ＰＡＲＰおよびカスパーゼ３はチューブリン阻害剤によって高度に誘導されたが、ベムラフェニブはそれらの発現をわずかに増大させた。この結果は、アポトーシス検出実験における所見と一致する。
【０２１２】
ベムラフェニブと化合物１２ｄａの併用は、インビボでベムラフェニブ耐性腫瘍の成長を相乗的に抑制する。
インビトロでＡ３７５ＲＦ２１細胞に対して観察された強力な相乗作用がインビボでベムラフェニブ耐性腫瘍に移行され得るかどうかを評価するため、腫瘍成長への併用効果の影響を単剤処置の影響と比較した。化合物１２ｄａが２５ｍｇ／ｋｇの用量で親Ａ３７５黒色腫腫瘍成長をインビボで抑制するのに有効であることが以前に確認された（Ｗａｎｇ  Ｚ，Ｃｈｅｎ  Ｊ，Ｗａｎｇ  Ｊら、“Ｎｏｖｅｌ  ｔｕｂｕｌｉｎ  ｐｏｌｙｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｖｅｒｃｏｍｅ  ｍｕｌｔｉｄｒｕｇ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ａｎｄ  ｒｅｄｕｃｅ  ｍｅｌａｎｏｍａ  ｌｕｎｇ  ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ”．Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．２９（１１）：３０４０−３０５２）。パイロット試験は、ベムラフェニブ耐性Ａ３７５ＲＦ２１細胞が薬剤処置の不在下でそれらの親Ａ３７５細胞と類似の成長動態を有する（図２６）ことを示した。ベムラフェニブとのその併用に起因する潜在的に不測の毒性を回避するため、化合物１２ｄａの用量を１０ｍｇ／ｋｇに低減した。
【０２１３】
表６．耐性Ａ３７５ＲＦ２１異種移植モデルにおけるベムラフェニブと化合物１２ｄａのインビボ併用に関する腫瘍成長阻害（ＴＧＩ）および腫瘍重量の比較（ｎ＝７）。１０ｍｇ／ｋｇの化合物１２ｄａと２０ｍｇ／ｋｇのベムラフェニブの併用は、２つの単剤処置群における抗腫瘍活性（ＴＧＩ）の単純合計と比較してより大きなＴＧＩを達成した（＊Ｐ＜０．０５）。さらなる処置を行わずにさらに１週間後、相乗的増殖阻害が持続した（＊Ｐ＜０．０５）。
【表６】
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【０２１４】
図６および表６に示すように、ベムラフェニブ（２０ｍｇ／ｋｇ）単剤療法は最小限の（２２．６５％）ＴＧＩしか達成せず、化合物１２ｄａ（１０ｍｇ／ｋｇ）は単独で、このベムラフェニブ耐性腫瘍モデルにおいて３８．１２％のわずかにより良好なＴＧＩを生じさせた；これに対し、それらの併用処置は、３週間の処置後に腫瘍阻害を８８．５６％に増強した（図６Ａ、６Ｂおよび６Ｄ、表６）。併用療法を受けた７匹のマウスのうち３匹は、さらなる処置を行わずにさらに７日間保持され、有意の（Ｐ＝０．２８５７）腫瘍再発を示さず、８１．２７％の腫瘍抑制を維持した。実験全体の間、４つの群のいずれのマウスも１０％を超える体重減少はなく（図６Ｃ）、これらの処置に関して大きな毒性が存在しないことを指示した。マウスを安楽死させたとき、脳、心臓、腎臓、肝臓、脾臓および肺を含む主要な器官を単離し、病理学的分析に供した。これらの器官に関して異常は認められなかった。合わせると、これらの結果は、この併用処置がＡ３７５ＲＦ２１黒色腫モデルにおいてベムラフェニブに対する獲得耐性を克服するのを有効に助けることを強く指示し、インビトロで観察された相乗的抗増殖作用をさらに確認した。
【０２１５】
インビトロで認められた併用処置によるＡＫＴシグナル伝達の下方調節がインビボでも機能するかどうかを判定するため、すべての実験群からの腫瘍切片に関して免疫組織化学分析を実施した。ＥＲＫ経路の活性も測定し、腫瘍切片中の細胞マーカーＫｉ−６７によって指示される増殖レベルを評価した。図６Ｄで実証されるように、併用処置群における改善された経路および増殖阻害は全体的な腫瘍応答ＴＧＩ結果と良好に対応した。ＥＲＫおよびＡＫＴリン酸化は、核内または細胞質内のＫｉ６７発現レベルと共に、併用処置群において大きく低減した。さらに、併用処置群における腫瘍切片のＨ＆Ｅ染色でのマトリゲルから着色されたバックグラウンドの桃色の広い面積は、併用処置後に腫瘍細胞が、存在するにしても、ごくわずかしか残っていないことを指示した。併用処置群での黒色腫細胞の有意の低減は、Ｓ１００免疫染色での密度低下によってさらに確認された（図６Ｄ）。
【０２１６】
化合物１２ｄａとベムラフェニブのより高用量での併用は、観察可能な毒性を伴わずにベムラフェニブ耐性腫瘍の有意の退縮をもたらした。
図６および表６に提示する結果は有望であるが、腫瘍退縮をもたらすとは思われなかったので、化合物１２ｄａとベムラフェニブの両方について用量を５０％増加することによって実験を反復した。結果を図７および表７に示す。
【表７−１】
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【表７−２】
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【０２１７】
ベムラフェニブに関して効果のわずかな増大があり（２０ｍｇ／ｋｇで２２．６５％のＴＧＩに対し、３０ｍｇ／ｋｇでは２８．１０％）、化合物１２ｄａについては効果の実質的な増大がある（１０ｍｇ／ｋｇで３８．１２％のＴＧＩに対し、１５ｍｇ／ｋｇでは７２．７２％）。図７Ｂに示すように薬剤用量を増加した併用処置群では中等度の腫瘍退縮（４４．９％）が明白であったが、低用量では退縮は見られなかった。合わせると、これらのデータは、ベムラフェニブと化合物１２ｄａなどの新規チューブリン阻害剤との併用が、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異を有する黒色腫患者に関してベムラフェニブに対する獲得耐性を克服する可能性が高いことの初めての説得力のある証拠を提供した。
【０２１８】
要約すると、これらの試験は、ＢＲＡＦ阻害剤（例えばベムラフェニブ）と新規チューブリン阻害剤（例えば化合物１２ｄａ）の併用が、相乗的細胞周期停止、アポトーシスの増強およびＡＫＴ経路の強力な阻害を含むいくつかの考えられる機構によって、ＢＲＡＦ変異黒色腫において獲得ＢＲＡＦ阻害剤耐性を有効に克服することを強く示唆した。少なくともインビトロでは、そのような併用は、ＭＥＫもしくはＡＫＴ阻害剤または既存のチューブリン阻害剤とベムラフェニブの併用よりも有効であると思われる。黒色腫に対してＢＲＡＦｉ＋ＭＥＫｉの組合せは持続的な効果がないので、代替的経路を標的とするこの併用戦略を開発することは、この分野において大きな影響を及ぼし得る。
【０２１９】
考察
ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異を保持する黒色腫患者に関して承認された最初の薬剤であるベムラフェニブは、初期療法において著明な応答を示したが、この薬剤を服用したほとんどすべての患者が数か月以内にベムラフェニブに対する耐性を発現した（Ｂｏｌｌａｇ  Ｇ，Ｔｓａｉ  Ｊ，Ｚｈａｎｇ  Ｊら、“Ｖｅｍｕｒａｆｅｎｉｂ：ｔｈｅ  ｆｉｒｓｔ  ｄｒｕｇ  ａｐｐｒｏｖｅｄ  ｆｏｒ  ＢＲＡＦ−ｍｕｔａｎｔ  ｃａｎｃｅｒ．”Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ．（２０１２）１１：８７３−８８６）。初期耐性または獲得耐性の基礎となる機構を理解することおよび適切な併用戦略を開発することは、そのような耐性を克服するより有効な方法を提供し得る。ＢＲＡＦまたはＭＥＫ１／２阻害剤に対する黒色腫腫瘍耐性を除去するまたは低減するために、ベムラフェニブと他剤との有効な併用を模索するために前臨床試験および臨床試験の両方において豊富な文献が存在する（Ｇｒｅｇｅｒ  ＪＧ，Ｅａｓｔｍａｎ  ＳＤ，Ｚｈａｎｇ  Ｖら、“Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ＢＲＡＦ，ＭＥＫ，ａｎｄ  ＰＩ３Ｋ／ｍＴＯＲ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｖｅｒｃｏｍｅ  ａｃｑｕｉｒｅｄ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｔｏ  ｔｈｅ  ＢＲＡＦ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ＧＳＫ２１１８４３６  ｄａｂｒａｆｅｎｉｂ，ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｂｙ  ＮＲＡＳ  ｏｒ  ＭＥＫ  ｍｕｔａｔｉｏｎｓ．”Ｍｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ．（２０１２）１１：９０９−９２０；Ｐａｔｅｌ  ＳＰ，Ｌａｚａｒ  ＡＪ，Ｐａｐａｄｏｐｏｕｌｏｓ  ＮＥら、“Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ｔｏ  ｓｅｌｕｍｅｔｉｎｉｂ（ＡＺＤ６２４４；ＡＲＲＹ−１４２８８６）−ｂａｓｅｄ  ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｓｔｒａｔｉｆｉｅｄ  ｂｙ  ｇｅｎｅ  ｍｕｔａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  ｍｅｌａｎｏｍａ．”Ｃａｎｃｅｒ（２０１３）１１９（４）：７９９−８０５；Ｆｌａｈｅｒｔｙ  ＫＴ，Ｉｎｆａｎｔｅ  ＪＲ，Ｄａｕｄ  Ａら、“Ｃｏｍｂｉｎｅｄ  ＢＲＡＦ  ａｎｄ  ＭＥＫ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｉｎ  ｍｅｌａｎｏｍａ  ｗｉｔｈ  ＢＲＡＦ  Ｖ６００  ｍｕｔａｔｉｏｎｓ．”Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．（２０１２）３６７：１６９４−１７０３；Ｎｉｅｈｒ  Ｆ，ｖｏｎ  Ｅｕｗ  Ｅ，Ａｔｔａｒ  Ｎら、“Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｗｉｔｈ  ｖｅｍｕｒａｆｅｎｉｂ（ＰＬＸ４０３２／ＲＧ７２０４）ａｎｄ  ｍｅｔｆｏｒｍｉｎ  ｉｎ  ｍｅｌａｎｏｍａ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅｓ  ｗｉｔｈ  ｄｉｓｔｉｎｃｔ  ｄｒｉｖｅｒ  ｍｕｔａｔｉｏｎｓ．”Ｊ．Ｔｒａｎｓｌ．Ｍｅｄ．（２０１１）９：７６；Ｐａｒａｉｓｏ  ＫＨ，Ｈａａｒｂｅｒｇ  ＨＥ，Ｗｏｏｄ  Ｅら、“Ｔｈｅ  ＨＳＰ９０  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ＸＬ８８８  ｏｖｅｒｃｏｍｅｓ  ＢＲＡＦ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｄｉｖｅｒｓｅ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ．”Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．（２０１２）１８：２５０２−２５１４；Ｋｏｙａ  ＲＣ，Ｍｏｋ  Ｓ，Ｏｔｔｅ  Ｎら、“ＢＲＡＦ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｖｅｍｕｒａｆｅｎｉｂ  ｉｍｐｒｏｖｅｓ  ｔｈｅ  ａｎｔｉｔｕｍｏｒ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ａｄ��ｐｔｉｖｅ  ｃｅｌｌ  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ．”Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．（２０１２）７２：３９２８−３９３７）。ＲＡＦ／ＭＥＫ／ＥＲＫ経路に対する阻害剤は、黒色腫腫瘍細胞死ではなく主としてＧ１細胞周期停止を生じさせる。したがって同じ経路内の異なる成分を標的とする作用物質の併用（例えばベムラフェニブとＭＥＫ１／２阻害剤の併用）は、最初は有効であるが（Ｌｉｔｔｌｅ  ＡＳ，Ｓｍｉｔｈ  ＰＤ，Ｃｏｏｋ  ＳＪ．“Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｏｆ  ａｃｑｕｉｒｅｄ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｔｏ  ＥＲＫ１／２  ｐａｔｈｗａｙ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ．”Ｏｎｃｏｇｅｎｅ（２０１２）３２（１０）：１２０７−１２１５）、これらのＧ１細胞周期停止から逃れることができる耐性細胞に対しては持続的な相乗作用を維持することができない。チューブリン阻害剤の主要な特徴の１つは、細胞をＧ２／Ｍ期で強力に停止させるそれらの能力であるので、ベムラフェニブとチューブリン阻害剤の併用は、黒色腫細胞を相乗的に停止させてアポトーシスの増強をもたらし、獲得耐性を克服すると考えられた。この試験では、新規チューブリン阻害剤、化合物１２ｄａを、黒色腫腫瘍に対するベムラフェニブとのその併用を検討するために選択した。ベムラフェニブ耐性ヒト黒色腫細胞株Ａ３７５ＲＦ２１を開発し、化合物１２ｄａとベムラフェニブの併用がインビトロで強力な相乗作用を有することを示した。相乗作用は、チューブリン重合の阻害の増強またはｐ−ＥＲＫ活性化の低減を介する可能性は低いことが確認された。その代わりに、実験結果は、この併用処置が、相乗的Ｇ１およびＧ２／Ｍ細胞周期停止によって生じるアポトーシス誘導の増強を介して獲得ベムラフェニブ耐性を克服し、ＡＫＴリン酸化に関連する生存シグナル伝達経路を実質的に損傷することを明らかにした。インビトロで認められた強力な相乗作用は、ベムラフェニブ耐性異種移植モデルで試験した場合、インビボでの有意の効果に明らかに移行することが示された。組織切片に関するさらなる免疫組織化学分析は、腫瘍増殖の強力な阻害とｐＡＫＴの活性低下を確認した。ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲシグナル伝達経路の活性化は、ヒト黒色腫細胞株においてＥＲＫ１／２阻害に対する感受性低下に寄与することが示されており（Ｂａｒｔｈｏｌｏｍｅｕｓｚ  Ｃ，Ｇｏｎｚａｌｅｚ−Ａｎｇｕｌｏ  ＡＭ．“Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｔｈｅ  ＰＩ３Ｋ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｐａｔｈｗａｙ  ｉｎ  ｃａｎｃｅｒ  ｔｈｅｒａｐｙ．”Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．Ｔｈｅｒ．Ｔａｒｇｅｔｓ（２０１２）１６：１２１−１３０）、いくつかの最近の試験は、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ経路を標的とする阻害剤とＢＲＡＦ阻害剤またはＭＥＫ阻害剤との相乗的併用を明らかに示している（Ｌｉｕ  Ｒ，Ｌｉｕ  Ｄ，Ｘｉｎｇ  Ｍ．“Ｔｈｅ  Ａｋｔ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ＭＫ２２０６  ｓｙｎｅｒｇｉｚｅｓ，ｂｕｔ  ｐｅｒｉｆｏｓｉｎｅ  ａｎｔａｇｏｎｉｚｅｓ，ｔｈｅ  ＢＲＡＦ（Ｖ６００Ｅ）ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ＰＬＸ４０３２  ａｎｄ  ｔｈｅ  ＭＥＫ１／２  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ＡＺＤ６２４４  ｉｎ  ｔｈｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｙｒｏｉｄ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌｓ．”Ｊ．  Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉ���ｏｌ．Ｍｅｔａｂ．（２０１２）９７：Ｅ１７３−１８２）。最近、いくつかの新規クラス化合物がチューブリン重合の阻害剤として報告され、ＡＫＴ経路の強力な阻害も示した（Ｋｒｉｓｈｎｅｇｏｗｄａ  Ｇ，Ｐｒａｋａｓｈａ  Ｇｏｗｄａ  ＡＳら、“Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ａｎｄ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｃｌａｓｓ  ｏｆ  ｉｓａｔｉｎ  ａｎａｌｏｇｓ  ａｓ  ｄｕａｌ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  ｔｕｂｕｌｉｎ  ｐｏｌｙｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ａｋｔ  ｐａｔｈｗａｙ．”Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．（２０１１）１９：６００６−６０１４；Ｖｉｏｌａ  Ｇ，Ｂｏｒｔｏｌｏｚｚｉ  Ｒ，Ｈａｍｅｌ  Ｅら、“ＭＧ−２４７７，ａ  ｎｅｗ  ｔｕｂｕｌｉｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ，ｉｎｄｕｃｅｓ  ａｕｔｏｐｈａｇｙ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｋｔ／ｍＴＯＲ  ｐａｔｈｗａｙ  ａｎｄ  ｄｅｌａｙｅｄ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  ｉｎ  Ａ５４９  ｃｅｌｌｓ．”Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．（２０１２）８３：１６−２６；Ｚｈａｎｇ  Ｃ，Ｙａｎｇ  Ｎ，Ｙａｎｇ  ＣＨら、“Ｓ９，ａ  ｎｏｖｅｌ  ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  ａｇｅｎｔ，ｅｘｅｒｔｓ  ｉｔｓ  ａｎｔｉ−ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｂｙ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ  ｗｉｔｈ  ｂｏｔｈ  ＰＩ３Ｋ−Ａｋｔ−ｍＴＯＲ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ａｎｄ  ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅ  ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔｏｎ．”ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ（２００９）４：ｅ４８８１）。加えて、構成的に活性なＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ経路は、微小管を標的とするチューブリン重合剤（ＭＴＰＡ）に対する多剤耐性をもたらすことが示されており、またＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ媒介性シグナル伝達経路の阻害は、ＭＴＰＡ誘導性アポトーシスに対して癌細胞を感作することが示されている（Ｂｈａｌｌａ  ＫＮ．“Ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅ−ｔａｒｇｅｔｅｄ  ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  ａｇｅｎｔｓ  ａｎｄ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ．”Ｏｎｃｏｇｅｎｅ（２００３）２２：９０７５−９０８６）。これらの試験は、癌細胞におけるチューブリン重合阻害剤とＡＫＴ下方調節との間の密接な相互作用を指示する。加えて、ＭＥＫ阻害剤ＡＺＤ６２４４が、ドセタキセルと併用した場合、黒色腫細胞における成長停止および腫瘍退縮を誘導することが最近報告された（Ｈａａｓｓ  ＮＫ，Ｓｐｒｏｅｓｓｅｒ  Ｋ，Ｎｇｕｙｅｎ  ＴＫら、“Ｔｈｅ  ｍｉｔｏｇｅｎ  ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ／ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｓｉｇｎａｌ−ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｋｉｎａｓｅ  ｋｉｎａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ＡＺＤ６２４４（ＡＲＲＹ−１４２８８６）ｉｎｄｕｃｅｓ  ｇｒｏｗｔｈ  ａｒｒｅｓｔ  ｉｎ  ｍｅｌａｎｏｍａ  ｃｅｌｌｓ  ａｎｄ  ｔｕｍｏｒ  ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ  ｗｈｅｎ  ｃｏｍｂｉｎｅｄ  ｗｉｔｈ  ｄｏｃｅｔａｘｅｌ．”Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．（２００８）１４：２３０−２３９）。興味深いことに、今回の結果はこれらの試験と一致する。本発明で提示したインビボ試験は、Ａ３７５ＲＦ２１異種移植モデルを使用することにより、既にベムラフェニブ耐性である腫瘍細胞における有効な併用処置を示す。腫瘍細胞がベムラフェニブに耐性になる前に併用を用いた場合、腫瘍退縮はより増強され得、耐性腫瘍細胞の発現が有意に遅延され得るまたはさらには予防され得ることが考えられる。これは、患者における少なくとも実質的により長い進行のない期間および／または疾患後退の増強となり得る。合わせると、この試験は、黒色腫患者に対する大きく改善された療法のために強力なチューブリン阻害剤をＲＡＦ／ＭＥＫ／ＥＲＫ経路を標的とする阻害剤と併用することについての最初の直接の証拠および論理的根拠を提供する。
（実施例２）
選択したアリール−ベンゾイル−イミダゾール化合物の合成
【化１４】
2019077727.tif 000035
２−アリール−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール１４ｂ、１４ｃ、１４ｘの調製（図８）。
【化１５】
2019077727.tif 000036
【０２２０】
ｔ−ＢｕＯＨ（３００ｍＬ）中の適切なベンズアルデヒド８（ｂ、ｃ、ｘ）（６０ｍｍｏｌ）の溶液にエチレンジアミン（６６ｍｍｏｌ）を添加し、室温で３０分間撹拌した。炭酸カリウム（７５ｍｍｏｌ）およびヨウ素（１８０ｍｍｏｌ）を反応混合物に連続的に添加し、続いて７０℃で３時間撹拌した。亜硫酸ナトリウム（Ｎａ２ＳＯ３）を添加し、混合物をクロロホルムによって抽出した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥し、濃縮した。残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィ（クロロホルム：メタノール  ２０：１）によって精製し、白色固体を得た。収率：５０〜６０％。
２−アリール−１Ｈ−イミダゾール（９ａ〜ｊ、ｐ、ｘ；図８および９）の調製。
【化１６】
2019077727.tif 000037
【０２２１】
方法Ａ（９ｂ、９ｘに関してのみ必須、図８）：ＤＭＳＯ（１００ｍＬ）中の２−アリール−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール１４ｂ、ｘ（３５ｍｍｏｌ）の溶液に炭酸カリウム（３８．５ｍｍｏｌ）およびジアセトキシヨードベンゼン（３８．５ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を暗所で一晩撹拌した。水を添加し、続いてジクロロメタンで抽出した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥し、濃縮した。残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィ（ヘキサン：酢酸エチル  ３：２）に供し、白色固体を得た。収率：３０％〜５０％。
【０２２２】
方法Ｂ（９ｃに関してのみ必須；図８）：ＤＭＦ（７０ｍＬ）中の２−アリール−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール１４ｃ（５０ｍｍｏｌ）の溶液にＤＢＵ（５５ｍｍｏｌ）およびＣＢｒＣｌ３（５５ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を一晩撹拌し、飽和ＮａＨＣＯ３（水性）溶液を添加して、続いてジクロロメタンで抽出した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥し、濃縮した。残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィ（クロロホルム：メタノール  ５０：１）に供し、白色固体を得た。収率：７％。
【０２２３】
方法Ｃ（９ａ、９ｄ〜ｊ、９ｐに関してのみ必須；図９）：０℃のエタノール（３５０ｍＬ）中の適切なベンズアルデヒド（８ａ、８ｄ〜ｊ、８ｐ）（１００ｍｍｏｌ）の溶液に４０％オキサルアルデヒド水溶液（１２．８ｍＬ、１１０ｍｍｏｌ）および２９％水酸化アンモニウム水溶液（１０００ｍｍｏｌ、１４０ｍＬ）を添加した。室温で２〜３日間撹拌した後、反応混合物を濃縮し、残留物を、ジクロロメタンを溶離液とするフラッシュカラムクロマトグラフィに供し、表題化合物を黄色粉末として得た。収率：２０％〜４０％。
２−アリール−１−（フェニルスルホニル）−１Ｈ−イミダゾール（１０ａ〜ｊ、ｐ、ｘ；図８および９）の調製。
【化１７】
2019077727.tif 000038
【０２２４】
０℃の無水ＴＨＦ（２００ｍＬ）中の２−アリール−１Ｈ−イミダゾール９ａ〜ｊ、ｐ、ｘ（２０ｍｍｏｌ）の溶液に水素化ナトリウム（鉱油中６０％分散液、１．２ｇ、３０ｍｍｏｌ）を添加し、３０分間撹拌した。ベンゼンスルホニルクロリド（２．８２ｍＬ、２２ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を一晩撹拌した。１００ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ３溶液（水性）によって希釈した後、反応混合物を酢酸エチル（５００ｍＬ）によって抽出した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥し、濃縮した。残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィ（ヘキサン：酢酸エチル  ２：１）によって精製し、淡色固体を得た。収率：５０％〜７０％。
アリール（２−アリール−１−（フェニルスルホニル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）メタノン（１１ａａ〜ａｉ、ｂａ、ｃａ、ｃｂ、ｄａ、ｄｂ、ｅａ、ｅｂ、ｆａ、ｆｂ、ｇａ、ｇｂ、ｈａ、ｈｂ、ｉａ、ｉｂ、ｊａ、ｊｂ、ｐａ；図８および９）の調製。
【化１８】
2019077727.tif 000039
【０２２５】
−７８℃の無水ＴＨＦ（３０ｍＬ）中の２−アリール−１−（フェニルスルホニル）−１Ｈ−イミダゾール（６．０ｍｍｏｌ）１０ａ〜ｊ、ｐ、ｘの溶液にペンタン中１．７Ｍ  ｔｅｒｔ−ブチルリチウム（５．３ｍＬ、９．０ｍｍｏｌ）を添加し、１０分間撹拌した。適切な置換ベンゾイルクロリド（７．２ｍｍｏｌ）を−７８℃で添加し、一晩撹拌した。反応混合物を１００ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ３溶液（水性）で希釈し、酢酸エチル（２００ｍＬ）によって抽出した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥し、濃縮した。残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィ（ヘキサン：酢酸エチル  ４：１）によって精製し、白色固体を得た。収率：１５％〜４０％。
アリール（２−アリール−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）メタノン（１２ａａ〜ａｉ、ｂａ、ｃａ、ｃｂ、ｄａ、ｄｂ、ｅａ、ｅｂ、ｆａ、ｆｂ、ｇａ、ｇｂ、ｈａ、ｈｂ、ｉａ、ｉｂ、ｊａ、ｊｂ、ｐａ；図８および９）の調製のための一般的手順
【化１９】
2019077727.tif 000040
【０２２６】
ＴＨＦ（２０．０ｍＬ）中のアリール（２−アリール−１−（フェニルスルホニル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）メタノン（２．０ｍｍｏｌ）１１ａａ〜ａｉ、ｂａ、ｃａ、ｃｂ、ｄａ、ｄｂ、ｅａ、ｅｂ、ｆａ、ｆｂ、ｇａ、ｇｂ、ｈａ、ｈｂ、ｉａ、ｉｂ、ｊａ、ｊｂ、ｐａの溶液に１．０Ｍテトラブチルアンモニウムフルオリド（４．０ｍｍｏｌ）を添加し、一晩撹拌した。反応混合物を５０ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ３溶液（水性）によって希釈し、酢酸エチル（１００ｍＬ）によって抽出した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥し、濃縮した。残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィ（ヘキサン：酢酸エチル  ３：１）によって精製し、水およびメタノールから再結晶化させて、白色固体を得た。収率：８０〜９５％。
（２−（４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）（アリール）メタノン（１２ｋａ、１２ｋｂ；図９）の調製。
【化２０】
2019077727.tif 000041
【０２２７】
ＡｃＯＨ（２０ｍＬ）中の（２−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）（アリール）メタノン１２ｊａまたは１２ｊｂ（１ｍｍｏｌ）の溶液に濃ＨＣｌ（２ｍＬ）を添加し、一晩還流した。溶媒を除去した後、残留物をジクロロメタンから再結晶化させ、表題化合物を黄色固体として得た。収率：７０〜８５％。
（２−アリール−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）（３，４，５−トリヒドロキシフェニル）メタノン１３ｅａ、１３ｆａ、１３ｈａの調製（図９）。
【化２１】
2019077727.tif 000042
【０２２８】
ＣＨ２Ｃｌ２（６．０ｍＬ）中のアリール（２−アリール−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）メタノン１２ｅａ、１２ｆａまたは１２ｈａ（０．５ｍｍｏｌ）の溶液にＣＨ２Ｃｌ２中１．０Ｍ  ＢＢｒ３（２ｍｍｏｌ）を添加し、室温で１時間撹拌した。水を添加して過剰のＢＢｒ３を破壊した。沈殿した固体をろ過し、ＭｅＯＨから再結晶化させて、黄色固体を得た。収率：６０〜８０％。
アリール（２−アリール−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）メタノン−ＨＣｌ塩（１２ｄｂ−ＨＣｌ）の調製。
【化２２】
2019077727.tif 000043
【０２２９】
メタノール（２０ｍＬ）中の１２ｄｂ（０．５ｍｍｏｌ）の溶液にエチルエーテル中２Ｍ塩化水素溶液（５ｍｍｏｌ）を添加し、室温で一晩撹拌した。反応混合物を濃縮し、残留物をＣＨ２Ｃｌ２によって洗浄して、表題化合物を得た。収率：９５％。
アリール（２−フェニル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）メタノン（１２ａｂａ、１２ａａａ；図１０）の調製。
【化２３】
2019077727.tif 000044
【０２３０】
ＴＨＦ（２０ｍＬ）中の２−フェニル−１Ｈ−イミダゾール９ａ（１０ｍｍｏｌ）の溶液に０℃でＮａＨ（１５ｍｍｏｌ）および置換ベンゾイルクロリド（１２ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を一晩撹拌し、飽和ＮａＨＣＯ３溶液によって希釈して、続いて酢酸エチルで抽出した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥し、濃縮した。残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィ（クロロホルム）によって精製し、白色固体を得た。収率：１２〜１６％。
１−置換−（２−フェニル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−アリール−メタノン（１２ｄｃ、１２ｆｃ、１２ｄａａ、１２ｄａｂ、１２ｃｂａ、１１ｇａａ、１２ｌａ；図１１〜１２）の調製。
【化２４】
2019077727.tif 000045
【０２３１】
１２ｄｃ、１２ｆｃおよび１２ｄａａ、１２ｄａｂおよび１２ｃｂａの合成を図１１に要約する。化合物１２ｄａ、１２ｃｂおよび１２ｆａは、上記ならびに図８および９で示す合成法に従って合成した。１２ｄａおよび１２ｆａを塩化アルミニウムで処理して、３，５−ジメトキシが無傷であるパラ脱メチル化１２ｄｃ、１２ｆｃを得た。化合物１２ｄａａは、１２ｄａのＮ−１位のベンジル化によって調製した。一方１２ｄａおよび１２ｃｂのＮ−１位のメチル化により、それぞれ化合物１２ｄａｂおよび１２ｃｂａを得た。
【０２３２】
１２ｄｃ、１２ｆｃ、１２ｄａａ、１２ｄａｂ、１２ｃｂａの合成：方法Ｄ（１２ｄｃおよび１２ｆｃに関して）［図１１］：
【化２５】
2019077727.tif 000046
Ｒ１＝ＣＨ３（１２ｄｃ）  
Ｒ１＝Ｃｌ（１２ｆｃ）
【０２３３】
ＴＨＦ（２０ｍＬ）中の１２ｄａおよび１２ｆａ（２００ｍｇ）の溶液に塩化アルミニウム（１０当量）を添加した。反応混合物を一晩撹拌した。水を添加し、続いて酢酸エチルで抽出した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥し、濃縮した。残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィ（ヘキサン：酢酸エチル  １：１）に供し、帯黄白色固体を得た。収率：６０％〜８０％。
１２ｄａａ、１２ｄａｂ、１２ｃｂａの合成、方法Ｅ：［図１１］：
【化２６】
2019077727.tif 000047
Ｒ１＝Ｍｅ；Ｒ２＝Ｂｎ；Ｒ３＝３，４，５−（ＯＭｅ）３（１２ｄａａ）
Ｒ１＝Ｍｅ；Ｒ２＝ＣＨ３；Ｒ３＝３，４，５−（ＯＭｅ）３（１２ｄａｂ）
Ｒ１＝ＯＭｅ；Ｒ２＝ＣＨ３；Ｒ３＝Ｆ（１２ｃｂａ）
【０２３４】
氷浴中のＴＨＦ（１０ｍＬ）中の１２ｄａおよび１２ｃｂ（１００ｍｇ）の溶液に水素化ナトリウム（１．２当量）を添加し、続いてヨウ化メチル（１２ｄａｂ、１２ｃｂａに関して）または臭化ベンジル（１２ｄａａに関して）（２当量）を添加した。生じた反応混合物を還流条件下で５時間撹拌した。５０ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ３溶液（水性）によって希釈した後、反応混合物を酢酸エチル（１００ｍＬ）によって抽出した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥し、濃縮した。残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィ（ヘキサン：酢酸エチル  ２：１）によって精製し、白色固体を得た。収率：５０％〜９８％。１２ｄａａ：収率：９２．８％；融点１３５〜１３７℃。
【化２７】
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１１ｇａａおよび１２ｌａの合成（図１２）：
【化２８】
2019077727.tif 000049
Ｒ１＝Ｎ（Ｍｅ）２；Ｒ２＝（４−ＯＭｅ）ＰｈＳＯ２（１１ｇａａ）  
Ｒ１＝Ｂｒ；Ｒ２＝Ｈ（１２ｌａ）
【０２３５】
置換ベンズアルデヒド化合物８（ｌ、ｇ）を水酸化アンモニウムおよびグリオキサールの存在下で化合物９（ｌ、ｇ）に変換し、イミダゾール骨格を構築した。化合物９（ｌ、ｇ）のイミダゾール環を適切なフェニルスルホニル基によって保護し、続いて３，４，５−トリメトキシベンゾイルクロリドとカップリングして、化合物１１（ｌａ，ｇａａ）を生成した。１１ｌａをｔｅｒｔ−ブチルアンモニウムフルオリドで処理して、保護基を除去し、１２ｌａを得た。
（２−（４−ブロモフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）（３，４，５−トリメトキシフェニル）メタノン（１２ｌａ）の合成（図１２）
【化２９】
2019077727.tif 000050
【０２３６】
９ｌ、９ｇの合成：０℃のエタノール（４００ｍＬ）中の適切なベンズアルデヒド（８ｌおよび８ｇ、１００ｍｍｏｌ）の溶液に４０％オキサルアルデヒド（グリオキサール）水溶液（１．１当量）および２９％水酸化アンモニウム水溶液（１０当量）を添加した。室温で２〜３日間撹拌した後、反応混合物を濃縮し、残留物を、ジクロロメタンを溶離液とするフラッシュカラムクロマトグラフィに供し、表題化合物を黄色粉末として得た。収率：１０％〜３０％。
【０２３７】
１０ｌａ、１０ｇｂの合成：０℃の無水ＴＨＦ（２００ｍＬ）中のイミダゾール（９ｌ、９ｇ）（１０ｍｍｏｌ）の溶液に水素化ナトリウム（鉱油中６０％分散液、１．２当量）を添加し、２０分間撹拌した。４−メトキシベンゼンスルホニルクロリド（１０ｇｂに関して）またはベンゼンスルホニルクロリド（その他に関して）（１．２当量）を添加し、反応混合物を一晩撹拌した。２００ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ３溶液（水性）によって希釈した後、反応混合物を酢酸エチル（６００ｍＬ）によって抽出した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥し、濃縮した。残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィ（ヘキサン：酢酸エチル  ２：１）によって精製し、淡色固体を得た。収率：４０％〜９５％。
【０２３８】
１１ｌａ、１１ｇａａの合成：−７８℃の無水ＴＨＦ（３０ｍＬ）中の２−アリール−１−（フェニルスルホニル）−１Ｈ−イミダゾール（１０ｌａ、１０ｇｂ）（５．０ｍｍｏｌ）の溶液にペンタン中１．７Ｍ  ｔｅｒｔ−ブチルリチウム（１．２当量）を添加し、１０分間撹拌した。３，４，５−トリメトキシベンゾイルクロリド（１．２当量）を−７８℃で添加し、一晩撹拌した。反応混合物を１００ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ３溶液（水性）で希釈し、酢酸エチル（３００ｍＬ）によって抽出した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥し、濃縮した。残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィ（ヘキサン：酢酸エチル
３：１）によって精製し、白色固体を得た。収率：５％〜４５％。
【０２３９】
１２ｌａの合成：ＴＨＦ（２５．０ｍＬ）中のアリール（２−アリール−１−（フェニルスルホニル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）メタノン（１１ｌａ）、２．０ｍｍｏｌ）の溶液に１．０Ｍテトラブチルアンモニウムフルオリド（２当量）を添加し、一晩撹拌した。反応混合物を６０ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ３溶液（水性）によって希釈し、酢酸エチル（１５０ｍＬ）によって抽出した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥し、濃縮した。残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィ（ヘキサン：酢酸エチル  ４：１）によって精製するかまたは水およびメタノールから再結晶化させて、白色固体を得た。収率：８０〜９８％。
（４−フルオロフェニル）（２−（４−メトキシフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）メタノン（１２ｃｂ）の合成（図８）。
【化３０】
2019077727.tif 000051
【０２４０】
ＴＨＦ（２０．０ｍＬ）中の（４−フルオロフェニル）（２−（４−メトキシフェニル）−１−（フェニルスルホニル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）メタノン（１１ｃｂ、８７２ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ）の溶液に１．０Ｍテトラブチルアンモニウムフルオリド（４．０ｍＬ、４．０ｍｍｏｌ）を添加し、一晩撹拌した。反応混合物を５０ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ３溶液（水性）によって希釈し、酢酸エチル（１００ｍＬ）によって抽出した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥し、濃縮した。残留物を水およびメタノールから再結晶化させ、白色固体を得た。収率：９０％；融点２４５〜２４７℃。
（２−（ｐ−トリル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）（３，４，５−トリメトキシフェニル）メタノン（１２ｄａ）の合成（図９）。
【化３１】
2019077727.tif 000052
【０２４１】
ＴＨＦ（１５．０ｍＬ）中の（１−（フェニルスルホニル）−２−（ｐ−トリル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）（３，４，５−トリメトキシフェニル）メタノン（１１ｄａ、４９２ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）の溶液に１．０Ｍテトラブチルアンモニウムフルオリド（２．０ｍＬ、２．０ｍｍｏｌ）を添加し、一晩撹拌した。反応混合物を３０ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ３溶液（水性）によって希釈し、酢酸エチル（８０ｍＬ）によって抽出した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥し、濃縮した。残留物を水およびメタノールから再結晶化させ、白色固体を得た。収率：８８．５％。
（２−（４−クロロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）（３，４，５−トリメトキシフェニル）メタノン（１２ｆａ）の合成（図９および１３）。
【化３２】
2019077727.tif 000053
【０２４２】
２−（４−クロロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール（９ｆ）：０℃のエタノール（３５０ｍＬ）中の４−クロロベンズアルデヒド（８ｆ）（１００ｍｍｏｌ）の溶液に４０％オキサルアルデヒド水溶液（１２．８ｍＬ、１１０ｍｍｏｌ）および２９％水酸化アンモニウム水溶液（１０００ｍｍｏｌ、１４０ｍＬ）を添加した。室温で２〜３日間撹拌した後、反応混合物を濃縮し、残留物を、ジクロロメタンを溶離液とするフラッシュカラムクロマトグラフィに供し、表題化合物を黄色粉末として得た。収率：１９．８％。
【化３３】
2019077727.tif 000054
【０２４３】
２−（４−クロロフェニル）−１−（フェニルスルホニル）−１Ｈ−イミダゾール（１０ｆ）：０℃の無水ＴＨＦ（２００ｍＬ）中の２−（４−クロロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール（９ｆ）（２０ｍｍｏｌ）の溶液に水素化ナトリウム（鉱油中６０％分散液、１．２ｇ、３０ｍｍｏｌ）を添加し、３０分間撹拌した。ベンゼンスルホニルクロリド（２．８２ｍＬ、２２ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を一晩撹拌した。１００ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ３溶液（水性）によって希釈した後、反応混合物を酢酸エチル（５００ｍＬ）によって抽出した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥し、濃縮した。残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィ（ヘキサン：酢酸エチル  ２：１）によって精製し、淡色固体を得た。収率：５４．９％。
【化３４】
2019077727.tif 000055
【０２４４】
（２−（４−クロロフェニル）−１−（フェニルスルホニル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）（３，４，５−トリメトキシフェニル）メタノン（１１ｆａ）：−７８℃の無水ＴＨＦ（３０ｍＬ）中の２−（４−クロロフェニル）−１−（フェニルスルホニル）−１Ｈ−イミダゾール（１０ｆ）（６．０ｍｍｏｌ）の溶液にペンタン中１．７Ｍ  ｔｅｒｔ−ブチルリチウム（５．３ｍＬ、９．０ｍｍｏｌ）を添加し、１０分間撹拌した。３，４，５−トリメトキシベンゾイルクロリド（７．２ｍｍｏｌ）を−７８℃で添加し、一晩撹拌した。反応混合物を１００ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ３溶液（水性）で希釈し、酢酸エチル（２００ｍＬ）によって抽出した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥し、濃縮した。残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィ（ヘキサン：酢酸エチル  ４：１）によって精製し、白色固体を得た。収率：３６．８％；
【化３５】
2019077727.tif 000056
【０２４５】
（２−（４−クロロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）（３，４，５−トリメトキシフェニル）メタノン（１２ｆａ）：ＴＨＦ（２０．０ｍＬ）中の（２−（４−クロロフェニル）−１−（フェニルスルホニル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）（３，４，５−トリメトキシフェニル）メタノン（１１ｆａ）（２．０ｍｍｏｌ）の溶液に１．０Ｍテトラブチルアンモニウムフルオリド（４．０ｍｍｏｌ）を添加し、一晩撹拌した。反応混合物を５０ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ３溶液（水性）によって希釈し、酢酸エチル（１００ｍＬ）によって抽出した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥し、濃縮した。残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィ（ヘキサン：酢酸エチル  ３：１）によって精製するかまたは水およびメタノールから再結晶化させて、白色固体を得た。収率：８０〜９５％。収率：３６．９％；融点１９３〜１９５℃。
【化３６】
2019077727.tif 000057
（２−（４−クロロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）（４−フルオロフェニル）メタノン（１２ｆｂ）の合成（図９）。
【化３７】
2019077727.tif 000058
【０２４６】
ＴＨＦ（１２．０ｍＬ）中の（２−（４−クロロフェニル）−１−（フェニルスルホニル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）（４−フルオロフェニル）メタノン（１１ｆｂ、４４０ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）の溶液に１．０Ｍテトラブチルアンモニウムフルオリド（２．０ｍＬ、２．０ｍｍｏｌ）を添加し、一晩撹拌した。反応混合物を２０ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ３溶液（水性）によって希釈し、酢酸エチル（６０ｍＬ）によって抽出した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥し、濃縮した。残留物を水およびメタノールから再結晶化させ、白色固体を得た。収率：８３．７％。
【表Ａ−１】
2019077727.tif 000059
【表Ａ−２】
2019077727.tif 000060
【表Ａ−３】
2019077727.tif 000061
【表Ａ−４】
2019077727.tif 000062
【表Ａ−５】
2019077727.tif 000063
【表Ａ−６】
2019077727.tif 000064
【表Ａ−７】
2019077727.tif 000065
【表Ａ−８】
2019077727.tif 000066
【表Ａ−９】
2019077727.tif 000067
【表Ａ−１０】
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【表Ａ−１１】
2019077727.tif 000069
【表Ａ−１２】
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【表Ａ−１３】
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【表Ａ−１４】
2019077727.tif 000072
【表Ａ−１５】
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【表Ａ−１６】
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【表Ａ−１７】
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【表Ａ−１８】
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【表Ａ−１９】
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【表Ａ−２０】
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【表Ａ−２１】
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【表Ａ−２２】
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（実施例３）
（インドリル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）（３，４，５−トリメトキシフェニルメタノン（１７ｙａ）、（１７ｙａｂ）および（１７ｙａｃ）の合成（図１４）
（２−（１Ｈ−インドール−３−イル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）（３，４，５−トリメトキシフェニル）メタノン（１７ｙａ）の合成：
【化３８】
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【０２４７】
１−（フェニルスルホニル）−１Ｈ−インドール−３−カルボキシアルデヒド（８ｙａ）の合成：室温のエタノール（５００ｍＬ）中のインドール３−カルボキシアルデヒド（８ｙ）（１００ｍｍｏｌ）の溶液に水酸化カリウム（１．１当量）を添加した。混合物を完全に溶解するまで撹拌した。エタノールを減圧下で完全に除去し、残留物をアセトン（２５０ｍＬ）に溶解して、続いてベンゼンスルホニルクロリド（１．１当量、１１０ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を半時間撹拌した。沈殿物をろ取し、ろ液を濃縮して、メタノールから再結晶化させ、白色固体を得た。収率：３３％。
【化３９】
2019077727.tif 000082
【０２４８】
３−（１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−１−（フェニルスルホニル）−１Ｈ−インドール（９ｙａ）の合成：０℃のエタノール（４００ｍＬ）中の１−（フェニルスルホニル）−１Ｈ−インドール−３−カルボキシアルデヒド（８ｙａ）（１００ｍｍｏｌ）の溶液に４０％オキサルアルデヒド（グリオキサール）水溶液（１．１当量、１１０ｍｍｏｌ）および２９％水酸化アンモニウム水溶液（１０当量、１０００ｍｍｏｌ）を添加した。室温で２〜３日間撹拌した後、反応混合物を水によってクエンチングし、ジクロロメタンによって抽出した。有機層を減圧によって除去し、残留物を、ヘキサン／酢酸エチル（４：
１〜２：１）を溶離液とするフラッシュカラムクロマトグラフィに供し、表題化合物を黄色粉末として得た。収率：１２％。
【化４０】
2019077727.tif 000083
【０２４９】
１−（フェニルスルホニル）−３−（１−（フェニルスルホニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−１Ｈ−インドール（１０ｙａ）の合成：０℃の無水ＴＨＦ（３００ｍＬ）中の３−（１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−１−（フェニルスルホニル）−１Ｈ−インドール（９ｙａ）（２０ｍｍｏｌ）の溶液に水素化ナトリウム（鉱油中６０％分散液、１．２当量、２４ｍｍｏｌ）を添加し、２０分間撹拌した。ベンゼンスルホニルクロリド（１．２当量、２４ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を一晩撹拌した。２００ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ３溶液（水性）によって希釈した後、反応混合物を酢酸エチル（６００ｍＬ）によって抽出した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥し、濃縮した。残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィ（ヘキサン：酢酸エチル  ５：１）によって精製し、白色固体を得た  収率：４０％。
【化４１】
2019077727.tif 000084
【０２５０】
（１−（フェニルスルホニル）−２−（１−（フェニルスルホニル）−１Ｈ−インドール−３−イル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）（３，４，５−トリメトキシフェニル）メタノン（１７ｙａａ）の合成：−７８℃の無水ＴＨＦ（１００ｍＬ）中の１−（フェニルスルホニル）−３−（１−（フェニルスルホニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−１Ｈ−インドール（１０ｙａ）（５．０ｍｍｏｌ）の溶液にペンタン中１．７Ｍ  ｔｅｒｔ−ブチルリチウム（１．２当量、６．０ｍｍｏｌ）を添加し、１０分間撹拌した。ＴＨＦ中の３，４，５−トリメトキシベンゾイルクロリド（１．２当量、６．０ｍｍｏｌ）の溶液を−７８℃で添加し、一晩撹拌した。反応混合物を１００ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ３溶液（水性）でクエンチングし、酢酸エチル（３００ｍＬ）によって抽出した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥し、濃縮した。残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィ（ヘキサン：酢酸エチル  ３：１）によって精製し、白色固体を得た。収率：３０％。
【化４２】
2019077727.tif 000085
【０２５１】
（２−（１Ｈ−インドール−３−イル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）（３，４，５−トリメトキシフェニル）メタノン（１７ｙａ）の合成：エタノール（４０ｍＬ）および水（４ｍＬ）中の（１−（フェニルスルホニル）−２−（１−（フェニルスルホニル）−１Ｈ−インドール−３−イル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）（３，４，５−トリメトキシフェニル）メタノン（１７ｙａａ）（１ｍｍｏｌ）の溶液に水酸化ナトリウム（１０当量、１０ｍｍｏｌ）を添加し、暗所にて還流条件下で一晩撹拌した。反応混合物を５０ｍＬの水によって希釈し、酢酸エチル（２００ｍＬ）によって抽出した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥し、濃縮した。残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィ（ヘキサン：酢酸エチル  １：１）によって精製し、黄色固体を得た。収率：６０％。
【化４３】
2019077727.tif 000086
（２−（１−（フェニルスルホニル）−１Ｈ−インドール−３−イル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）（３，４，５−トリメトキシフェニル）メタノン（１７ｙａｂ）の合成：
【化４４】
2019077727.tif 000087
【０２５２】
ＴＨＦ（１．０ｍｌ）中の化合物１７ｙａａ（６６ｍｇ）の溶液に１．０Ｍテトラブチルアンモニウムフルオリド（０．４ｍＬ、０．４ｍｍｏｌ）を添加し、一晩撹拌した。反応混合物を２０ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ３溶液（水性）によって希釈し、酢酸エチル（２０ｍｌ）によって抽出した。有機層を硫酸マグネシウム乾燥し、濃縮した。残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィ（ヘキサン：酢酸エチル  ２：１）によって精製し、淡白色固体を得た。収率：４５％。融点１１０〜１１２℃。
【化４５】
2019077727.tif 000088
（１−メチル−２−（１−（メチル）−１Ｈ−インドール−３−イル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）（３，４，５−トリメトキシフェニル）メタノン（１７ｙａｃ）の合成：
【化４６】
2019077727.tif 000089
【０２５３】
０℃の無水ＴＨＦ（２０ｍｌ）中の１７ｙａ（７５ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）の溶液に水素化ナトリウム（鉱油中６０％分散液、２０ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）を添加し、２０分間撹拌した。ヨウ化メチル（７０ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を１時間撹拌した。２０ｍｌの飽和ＮａＨＣＯ３溶液（水性）によって希釈し、反応混合物を酢酸エチル（６０ｍｌ）によって抽出した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥し、濃縮した。残留物を水およびメタノールから再結晶化させ、白色固体を得た。７５％収率。融点１６４〜１６６℃。
【化４７】
2019077727.tif 000090
（実施例４）
選択した本発明のＡＢＩ化合物の抗増殖活性
細胞培養細胞傷害性アッセイ
実験材料および方法
【０２５４】
３つの黒色腫細胞株（Ａ３７５およびＷＭ−１６４ヒト黒色腫細胞株；Ｂ１６−Ｆ１マウス黒色腫細胞株）ならびに４つのヒト前立腺癌細胞株（ＬＮＣａＰ、ＤＵ  １４５、ＰＣ−３およびＰＰＣ−１）におけるＡＢＩ化合物の抗増殖活性を検討した。ＰＰＣ−１細胞株を除き、これらの細胞株すべてをＡＴＣＣ（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）より購入した。ＭＤＡ−ＭＢ−４３５およびＭＤＡ−ＭＢ−４３５／ＬＣＣＭＤＲ１細胞は、Ｄｒ．Ｒｏｂｅｒｔ  Ｃｌａｒｋｅ  ａｔ  Ｇｅｏｒｇｅｔｏｗｎ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｓｃｈｏｏｌ  ｏｆ
Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，ＤＣの好意により提供された。黒色腫細胞をＤＭＥＭ（Ｃｅｌｌｇｒｏ  Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．，Ｈｅｒｎｄｏｎ，ＶＡ）中で培養し、前立腺癌細胞を、１０％ＦＢＳ（Ｃｅｌｌｇｒｏ  Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ）を添加したＲＰＭＩ  １６４０（Ｃｅｌｌｇｒｏ  Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．，Ｈｅｒｎｄｏｎ，ＶＡ）中で培養した。培養物を、５％ＣＯ２を含む加湿雰囲気中、３７℃で維持した。１０００〜５０００細胞を、成長速度に応じて９６ウェルプレートの各ウェルに塗布し、３〜５の複製物において異なる濃度の試験化合物に４８時間（迅速に成長する黒色腫細胞）または９６時間（緩やかに成長する前立腺癌細胞）暴露した。薬剤処置の最後に細胞数をスルホローダミンＢ（ＳＲＢ）アッセイによって測定した。簡単に述べると、細胞を１０％トリクロロ酢酸で固定し、０．４％ＳＲＢで染色して、５４０ｎＭでの吸光度をプレートリーダー（ＤＹＮＥＸ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｃｈａｎｔｉｌｌｙ，ＶＡ）を用いて測定した。薬剤濃度に対する細胞生存率のパーセントをプロットし、ＩＣ５０（細胞成長を未処置対照の５０％阻害した濃度）値を、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を使用して非線形回帰分析によって得た。
【０２５５】
結果
３つの黒色腫細胞株（１つのマウス黒色腫細胞株、Ｂ１６−Ｆ１および２つのヒト転移性黒色腫細胞株、Ａ３７５およびＷＭ−１６４）ならびに４つのヒト前立腺癌細胞株（ＬＮＣａＰ、ＰＣ−３、Ｄｕ  １４５およびＰＰＣ−１）を使用した本発明の化合物のインビトロ抗成長活性の結果を表８〜１０に要約する。
【０２５６】
【表８】
2019077727.tif 000091
【０２５７】
表８から、化合物１２ａａ〜１２ａｉは、μΜ範囲内のＩＣ５０値（７つの細胞株全部の平均）で中等度の活性を示した。このシリーズの最も強力な化合物は、１６０ｎＭの平均  ＩＣ５０値を有する１２ａａであった。Ｃ環上の３，４，５−トリメトキシからの１個のメトキシ基の除去は（１２ａｄ、１２ａｅ）、活性の有意の損失をもたらした（１２ａｅについてはＩＣ５０＞１０μΜおよび１２ａｄについては３．１μΜの平均ＩＣ５０）。Ｃ環上に４−フルオロを有する化合物（１２ａｆ）も比較的良好な活性を示し（ＩＣ５０＝０．９１μΜ）、トリメトキシ部分を４−フルオロ基で置き換えると良好な活性および改善された代謝安定性を提供し得るので、これは重要な意味を有する所見であった。４−フルオロから３−フルオロへのシフトは活性の完全な喪失（１２ａｆの０．９１μΜと比較して１２ａｇについてはＩＣ５０＞１０μΜ）をもたらしたので、Ｃ環上のフッ素の位置は極めて重要であった。この結果は、潜在的な水素結合供与体がこの環の４位の近くに存在することを示唆した。
【０２５８】
表８に明らかに示されるように、Ａ環およびＣ環の位置は極めて重要であった、イミダゾール環（Ｂ環）内の４位から１位へのＣ環部分の単純なシフトが活性の完全な喪失をもたらした（１２ａｂａ、１２ａａａ、１０ａ、１０ｘ、１０ｊに関してＩＣ５０＞１０μΜ）。
【０２５９】
【表９−１】
2019077727.tif 000092
【表９−２】
2019077727.tif 000093
【０２６０】
表９から、Ｃ環上に３，４，５−トリメトキシおよび４−フルオロ置換基を有する化合物は、Ａ環上の種々の置換と共に良好な活性を示した。これらの化合物は、ＷＭ１６４細胞株に関して８．０ｎＭという低いＩＣ５０値で優れた抗増殖活性を明らかにした（１２ｄａ）。一般に、Ａ環のパラ位置に単一置換基を組み込んだ化合物は、１２ｃａ、１２ｃｂ、１２ｄａ、１２ｄｂ、１２ｆａ、１２ｆｂ、１２ｇａおよび１２ｇｂの活性からわかるようにより強力であった（ＩＣ５０＝７．９〜１１０ｎＭ）。１２ｄｂ−ＨＣｌ塩（ＩＣ５０＝１７２ｎＭ）は、対応する遊離塩基１２ｄｂ（ＩＣ５０＝１０９ｎＭ）と比較してわずかに低い活性を示した。Ａ環およびＣ環のパラ位置に単一ハロゲン置換基を有する化合物１２ｆｂ（ＩＣ５０＝６３．７ｎＭ）は強力であることを示し、メトキシ部分を有さなかった。Ａ環上に３，４，５−トリメトキシ置換基を有する化合物は活性を完全に喪失しており（１２ｅａ、１２ｅｂに関してＩＣ５０＞１０μΜ）、Ａ環とＣ環の付近の非常に異なる結合環境を示唆した。Ａ環からの５−メトキシ置換基の除去は活性を有意に改善した（１２ｈａ、１２ｅａに関してそれぞれＩＣ５０＝３３０ｎＭおよび＞１０μΜ）。３，４，５−トリメトキシの脱メチル化は、活性を４３ｎＭ（１２ｆａ）から３．８９μΜ（１３ｆａ）に大きく低下させた。同様の結果が、Ａ環またはＣ環のいずれかの置換基の脱メチル化に起因して１３ｅａ、１２ｋａ、１２ｋｂおよび１３ｈａに関して認められた。Ａ環上の電子供与性基（４−メトキシ、４−ジメチルアミノ、４−メチル）および電子求引性基（４−クロロ、２−トリフルオロメチル）は実質的な活性の差を示さなかった。Ａ環のオルト位置におけるトリフルオロメチル基の導入は、活性の完全な喪失を引き起こした（１２ｉａ、１２ｉｂに関してＩＣ５０＞１０μΜ）。Ａ環のパラ位置のベンジルオキシ基の存在は（１２ｊｂに関してＩＣ５０＝７５ｎＭ）、パラヒドロキシ化合物１２ｋｂ（ＩＣ５０＝３３μΜ）と比較した場合４４０倍の活性上昇をもたらした。Ｃ環に４−フルオロを有する化合物１２ｊｂが、Ｃ環に３，４，５−トリメトキシ基を有するその対応物１２ｊａよりも良好な活性を有することは注目に値する（ＩＣ５０は、１２ｊｂに関しては７５ｎＭおよび１２ｊａに関しては７．３μΜである）。
【０２６１】
【表１０】
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【表１０Ａ−１】
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【表１０Ａ−２】
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【表１０Ｂ】
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【０２６２】
表１０から、イミダゾール環の窒素に結合したフェニルスルホニル保護基を有する化合物（１１ｃｂ、１１ｄｂ、１１ｆｂ、１１ｇａ、１１ｇｂ、１１ｈａ、１１ｊｂ）も、ｎＭ範囲内のＩＣ５０で非常に活性であった（表１０）。一般にこれらの化合物の活性は、１１ｃｂ（４３ｎＭ）、１１ｄｂ（１１１ｎＭ）、１１ｆｂ（７２ｎＭ）、１１ｇａ（２８５ｎＭ）、１１ｇｂ（８７ｎＭ）、１１ｈａ（２６８ｎＭ）および１１ｊｂ（６１ｎＭ）の活性をそれらの対応する非保護対応物１２ｃｂ（３６ｎＭ）、１２ｄｂ（１０９ｎＭ）、１２ｆｂ（６４ｎＭ）、１２ｇａ（１３１ｎＭ）、１２ｇｂ（７２ｎＭ）、１２ｈａ（３３０ｎＭ）および１２ｊｂ（７５ｎＭ）比較することによって例示されるように、それらの対応する非保護対応物と同等である。他の化合物（１１ａｂ〜１１ａｇ、１１ｅａ、１１ｅｂ、１１ｈｂ、１１ｉａおよび１１ｉｂ、１〜５０μΜ）は、一般にはるかに活性が低く、それらの対応物とも一致した（１２ａｂ〜１２ａｇ、１２ｅａ、１２ｅｂ、１２ｈｂ、１２ｉａおよび１２ｉｂ、１〜５０μΜ）。
【０２６３】
本発明の化合物のＰＣ３細胞周期分布を図１５に提示する。
【０２６４】
細胞周期分析
細胞周期分布をヨウ化プロピジウム（ＰＩ）染色によって測定した。処置した細胞をＰＢＳで洗浄し、７０％氷冷エタノールで一晩固定した。次に固定細胞をＲＮアーゼＡ（３００μｇ／ｍＬ）の存在下に２０μｇ／ｍＬのＰＩで３７℃にて３０分間染色した。細胞周期分布は、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｔｅｎｎｅｓｓｅｅ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｃｅｎｔｅｒ，ＴＮの蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）分析コアサービスによって分析された。
【０２６５】
結果
反転ＡＢＩ（ＲＡＢＩ）は、細胞周期分析により、それらが細胞をＧ２／Ｍ期で停止させることを明らかにした。化合物１２ｑ、７０ａ、７０ｆおよび７０ｍをＰＣ３細胞に関して２４時間処置し（図１５）、ＰＩ染色細胞の分布をＦＡＣＳ分析によって検討した。４つの異なる濃度−１、１０、５０および１００ｎＭの各化合物を、用量効果を調べるために選択した。ビヒクル処置群では、約１８％のＰＣ３細胞がＧ２／Ｍ期に分布した。ＲＡＢＩは、Ｇ２／Ｍ期の細胞の割合を約７０％まで濃度依存的に増大させた。Ｇ２／Ｍ期で細胞を停止させる種々の濃度の効力は、インビトロ細胞成長阻害活性と正に相関した。ＲＡＢＩの抗増殖作用を表１０Ａおよび１０Ｂに報告する。一部のＲＡＢＩは極めて強力な抗増殖作用を示した（例えば７０ａ参照）。
【０２６６】
（実施例５）
薬物耐性黒色腫細胞におけるアリール−ベンゾイル−イミダゾール（ＡＢＩ）化合物の活性
Ｐ糖タンパク質（Ｐｇｐ）媒介性薬剤排出は、癌細胞が有効な細胞内抗癌薬濃度の蓄積を妨げる主要機構である。ＡＢＩ化合物の活性を多剤耐性（ＭＤＲ）黒色腫細胞（ＭＤＡ−ＭＢ−４３５／ＬＣＣＭＤＲ１）およびそれらの親非耐性癌細胞（ＭＤＡ−ＭＢ−４３５）に対して比較した。ＭＤＡ−ＭＢ−４３５細胞は、最初は乳癌細胞株と指定されたが、Ｍ１４黒色腫細胞株が起源であることが決定的に示された。化合物１２ｄａ、１２ｆｂ、１２ｃｂ、１１ｃｂおよび１１ｆｂを、コルヒチン、パクリタキセルおよびビンブラスチンを含む他のチューブリン標的化薬剤と共に、ＭＤＲ黒色腫細胞株およびその親黒色腫細胞株の両方に関して試験した（表１１Ａ）。パクリタキセルおよびビンブラスチンは、細胞チューブリンを標的とすることが公知の臨床的に使用される抗癌薬である。コルヒチンは癌処置のためのＦＤＡ承認薬ではないが、そのプロドラッグであるＺＤ６１２６が固形腫瘍に関して臨床試験中である。ボルテゾミブは最初の治療用プロテアソーム阻害剤であり、多発性骨髄腫における使用に関して２００３年にＦＤＡによって承認された。ＡＢＴ−７５１は、チューブリンコルヒチン結合部位を標的とすることが公知である。これは、再発性または難治性神経芽細胞腫を有する小児のための臨床試験下にある有望な薬剤候補物である。化合物１２ｄａ、１２ｆｂ、１２ｃｂ、１１ｃｂ、１１ｆｂは、コルヒチン（６５．８）、パクリタキセル（６９．３）およびビンブラスチン（２７．５）よりもはるかに良好な耐性指数を有していた（１２ｄａについては３．０、１２ｆｂは０．９、１２ｃｂは１．３、１１ｃｂは０．８、１１ｆｂは０．７）。コルヒチン、パクリタキセルおよびビンブラスチンは非耐性黒色腫細胞株において優れた活性を示したが（０．５〜１０ｎＭ）、これらの化合物はＭＤＲ黒色腫細胞株では効力が有意に低かった（２７７〜６５８ｎＭ）。これに対し、１２ｃｂ、１１ｃｂ、１１ｆｂは、ＭＤＲ（１２ｄａ、１２ｆｂ、１２ｃｂ、１１ｃｂおよび１１ｆｂについてそれぞれ１５ｎＭ、３８ｎＭ、３０ｎＭ、３０ｎＭ、３５ｎＭ）ならびに非耐性黒色腫細胞株（１２ｄａ、１２ｆｂ、１２ｃｂ、１１ｃｂおよび１１ｆｂについてそれぞれ５ｎＭ、４１ｎＭ、２４ｎＭ、３８ｎＭ、５０ｎＭ）の両方に基本的に等しい効力を有していた。化合物１２ｄａは、Ａ３７５およびＷＭ−１６４細胞に対してパクリタキセルおよびコルヒチンよりも活性であった。
【表１１Ａ】
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【表１１Ｂ−１】
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【表１１Ｂ−２】
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【表１１Ｃ−１】
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【表１１Ｃ−２】
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【表１１Ｄ】
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【０２６７】
表１１Ａの結果は、細胞株ＭＤＡ−ＭＢ−４３５／ＬＣＣＭＤＲ１がコルヒチン、パクリタキセルおよびビンブラスチンに対して非常に耐性であることを示した。しかし本発明のＡＢＩは、薬物耐性株と感受性親細胞株に対して等しい効力を示した。この結果は、ＡＢＩがＰ−ｇｐの基質ではないことを強く示唆する。したがって、それらはＭＤＡ−ＭＢ−４３５／ＬＣＣＭＤＲ１細胞において認められる多剤耐性を克服する。用量反応曲線を１２ｆｂ、１２ｄａおよび１２ｃｂに関して図１６に示す。表１１Ｂは、ＡＢＩ  １２ｃｂ、１２ｄａおよび１２ｆｂと比較したパクリタキセル、ＳＮ−３８、ビンブラスチンおよびコルヒチンについての耐性機構をさらに検討する。ＭＲＰおよびＢＣＲＰは、パクリタキセル（それぞれ４および６の耐性指数）、ビンブラスチン（それぞれ６および５の耐性指数）に中等度の耐性を付与し、ＢＣＲＰはＳＮ−３８（４１の耐性指数）に有意の耐性を付与した。しかし、いずれのＡＢＩも、ＭＲＰまたはＢＣＲＰ媒介性耐性に感受性ではなかった（耐性指数は０．４から１．０の範囲であった）。ＡＢＴ−７５１は、ＡＢＩと同様に、ＭＤＲ１、ＭＲＰまたはＢＣＲＰに感受性ではなかった。
【０２６８】
（実施例６）
インビトロ微小管重合アッセイ
実験材料および方法
ウシ脳チューブリン（０．４ｍｇ）（Ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔｏｎ，Ｄｅｎｖｅｒ，ＣＯ）を１０μΜの試験化合物と混合し、１１０μｌの一般的チューブリン緩衝液（８０ｍＭ  ＰＩＰＥＳ、２．０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、０．５ｍＭ  ＥＧＴＡおよび１ｍＭ  ＧＴＰ）、ｐＨ６．９中でインキュベートした。３４０ｎｍでの吸光度を、ＳＹＮＥＲＧＹ  ４マイクロプレートリーダー（Ｂｉｏ−Ｔｅｋ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｗｉｎｏｏｓｋｉ，ＶＴ）によって１分ごとに１５分間観測した。分光光度計をチューブリン重合のために３７℃に設定した。
【０２６９】
結果
アリール−ベンゾイル−イミダゾール（ＡＢＩ）化合物によるチューブリン重合の阻害を検討した。ウシ脳チューブリン（純度＞９７％）を１０μΜの濃度の３つの強力なＡＢＩ化合物、１２ｃｂ、１２ｄａおよび１２ｄｂと共にインキュベートし、これらのＡＢＩ化合物のチューブリン重合への作用を測定した（図１７）。チューブリン重合は化合物１２ｄａによって完全に阻害され、化合物１２ｃｂおよび１２ｄｂとのインキュベーションの間に〜８０％の阻害が観察された。
【０２７０】
この微小管不安定化作用は、コルヒチンおよびビンブラスチンの作用と同様であったが、パクリタキセルの作用とは逆であった。結果は、ＡＢＩがチューブリンと直接相互作用できることを確認しただけでなく、それらがコルヒチン（またはビンブラスチン）と同じ結合部位を共有し得ることも示唆した。
【０２７１】
（実施例７）
インビトロでの黒色腫阻害
実験材料および方法
Ｂ１６−Ｆ１黒色腫細胞を０．８％基礎寒天の上にコロニー形成密度（６ウェルプレートで２０００細胞／ウェル）で塗布した。細胞を、胎仔ウシ血清および抗生物質−抗真菌薬溶液を添加したＤＭＥＭ培地と共に０．４％寒天中で、３７℃にて９５％空気および５％ＣＯ２の雰囲気中で成長させた。細胞を種々の濃度（２０、１００および５００ｎＭ）の化合物１２ｄａ、１２ｃｂおよび１２ｆｂで処置した。化合物を１ｍＭ  ＤＭＳＯ保存溶液から培地に添加し、ＤＭＳＯの対応する希釈物を対照として使用した。細胞を１４日間成長させた。プレートを写真撮影し、コロニーの数をＡｒｔｅｋ  ８８０  Ａｕｔｏｍａｔｅｄ  Ｃｏｌｏｎｙ  Ｃｏｕｎｔｅｒ（Ａｒｔｅｋ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｆａｒｍｉｎｇｄａｌｅ，ＮＹ）によって測定した。
【０２７２】
結果
４つの代表的な写真を図１８に示す。１４日間のインキュベーション後、約１３０の検出可能なコロニー（１００μｍを超える直径）が対照（処置なし）において形成された。
【０２７３】
化合物１２ｃｂおよび１２ｄａは、最小試験濃度、２０ｎＭでもＢ１６−Ｆ１黒色腫コロニーの形成を有効に阻害した（対照と比較してｐ＜０．０５）。１２ｆｂは１００ｎＭで有効な阻害を示した。３つの試験化合物すべてが０．５μΜでコロニー形成の完全な阻害を示し、ＡＢＩの抗黒色腫効果をさらに証明した。
【０２７４】
（実施例８）
インビボ抗腫瘍活性
実験材料および方法
動物：４〜６週齢の雌性Ｃ５７／ＢＬマウスをＨａｒｌａｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｈａｒｌａｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  Ｉｎｃ．，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）より購入した。動物の飼育施設は実験動物ケア評価認証協会（Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ａｎｄ  Ａｃｃｒｅｄｉｔａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ）の規格に適合した。すべての手順を我々の施設内動物実験委員会（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ）のガイドラインに従って実施した。
【０２７５】
効果のインビボ評価。マウス黒色腫Ｂ１６−Ｆ１細胞をＦＢＳ不含ＤＭＥＭ培地（Ｃｅｌｌｇｒｏ  Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ）において５×１０６生細胞／ｍＬの濃度で調製した。細胞懸濁液（１００μＬ）を各マウスの右背側側腹部に皮下注射した。細胞接種の約７日後、腫瘍サイズが約１００〜１５０ｍｍ３に達したとき、腫瘍を担持するすべてのマウスを腫瘍サイズに基づいて対照群と処置群に分けた（ｎ＝５／群）。各々の群は同様の平均腫瘍サイズを有していた。対照群（陰性対照）のマウスには５０μＬのビヒクル溶液単独または６０ｍｇ／ｋｇのＤＴＩＣ（陽性対照）を１日１回腹腔内注射した。腫瘍体積を追跡可能な電子デジタルカリパス（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｉｎｃ．，Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ，ＰＡ）で２日ごとに測定して、式ａ×ｂ２×０．５を用いて計算し、ここでａおよびｂはそれぞれ大直径および小直径を表した。腫瘍体積を立法ミリメートルで表示した。データを各群について平均±ＳＥとして表示し、時間の関数としてプロットした。実験の終了時（処置開始から１４日後）の腫瘍縮小パーセントを式１００−１００×［（Ｔ−Ｔ０）／（Ｃ−Ｃ０）］を用いて計算し、ここでＴは特定の日の処置群の平均腫瘍体積を表し、Ｔ０は処置の１日目の同じ群の平均腫瘍体積を表し、Ｃは特定の日の対照の平均腫瘍体積を表し、およびＣ０は処置の１日目の同じ群の平均腫瘍体積を表す。各群の動物の活動および平均体重を実験期間全体にわたって観測し、化合物の毒性を評価した。処置の最後に、すべてのマウスをＣＯ２、続いて頸椎脱臼によって安楽死させ、さらなる試験のために腫瘍を採取した。
【０２７６】
結果
ＡＢＩ類似体の効果をインビボで評価するため、マウス黒色腫Ｂ１６−Ｆ１異種移植片への化合物１２ｃｂの抗腫瘍活性を試験した。悪性黒色腫処置におけるゴールドスタンダードであるＤＴＩＣ（Ａｇａｉｎｓｔ  ＤＴＩＣ）を陽性対照として使用した（図１９Ａ）。２０匹の雌性Ｃ５７／ＢＬマウスを４つの群：ビヒクル対照群、ＤＴＩＣ（６０ｍｇ／ｋｇ）処置群、１２ｃｂ（１０ｍｇ／ｋｇ）処置群および１２ｃｂ（３０ｍｇ／ｋｇ）処置群に分けた。各々のマウスに５０万個のＢ１６−Ｆ１黒色腫細胞を皮下注射した。腫瘍接種の７日後、処置を開始し、各化合物を毎日腹腔内注射した（図１９）。腫瘍体積は、１４日間の処置後に、１２ｃｂ（１０ｍｇ／ｋｇ）、ＤＴＩＣ（６０ｍｇ／ｋｇ）および１２ｃｂ（３０ｍｇ／ｋｇ）に関してそれぞれ４７％、５１％および７３％有意に縮小した（ｐ＜０．０５）。実験期間中、いずれの処置群においても有意の体重減少を認めなかった。
【０２７７】
１２ｆｂの２つの用量レベル、１５および４５ｍｇ／ｋｇを選択した。６０ｍｇ／ｋｇのＤＴＩＣを陽性対照として使用した。Ｃ５７ＢＬ／６マウスでのＢ１６−Ｆ１黒色腫同種移植モデルを試験のために最初に選択した。１３日間の処置後（図１９Ｂ）、化合物１２ｆｂは黒色腫腫瘍成長を１５ｍｇ／ｋｇで３２％および４５ｍｇ／ｋｇで８２％阻害した（ＴＧＩ値）。対照と比較した４５ｍｇ／ｋｇの１２ｆｂのスチューデントｔ検定のｐ値は０．００１未満であり、有意差を示した。対照と比較した１５ｍｇ／ｋｇの１２ｆｂのｔ検定のｐ値は０．０８であり、この用量が有効でないことを示唆した。４５ｍｇ／ｋｇの１２ｆｂを、５１％のＴＧＩを有する６０ｍｇ／ｋｇのＤＴＩＣと比較すると、ｔ検定のｐ値は約０．００１であり、１２ｆｂがＤＴＩＣよりも実質的に良好な活性を有することを示唆した。対照および１５ｍｇ／ｋｇの１２ｆｂ処置群に関して、実験期間全体を通じて平均体重がわずかに増加した。
【０２７８】
ＡＢＩのインビボ活性をさらに確認するため、ＳＨＯマウスでのＡ３７５ヒト黒色腫異種移植モデルを使用し、２５ｍｇ／ｋｇの１２ｆｂを試験した。６０ｍｇ／ｋｇのＤＴＩＣを再び陽性対照として使用した。３１日間の処置後（図１９Ｃ）、１２ｆｂは黒色腫腫瘍成長を６９％阻害し（ＴＧＩ値）、一方ＤＴＩＣは成長を５２％阻害した。対照に対する１２ｆｂ処置のｔ検定のｐ値は０．００１未満であり、１２ｆｂが２５ｍｇ／ｋｇで黒色腫腫瘍成長を有意に阻害することを示唆した。ＤＴＩＣに対する１２ｆｂ処置のｔ検定のｐ値は０．０５未満であり、１２ｆｂがＤＴＩＣよりも良好な活性を有することを再び示唆した。すべての群の平均体重が実験期間全体を通じて平均体重がわずかに増加した。マウスの身体活動も正常に見え、２５ｍｇ／ｋｇがＳＨＯマウスに関して良好に耐容される用量であることを示唆した。
【０２７９】
（実施例９）
化合物１７ｙａ、１２ｆａおよび５５のインビトロおよびインビボ薬理学
実験材料および方法
前立腺癌の細胞培養および細胞傷害性アッセイ。すべての前立腺癌細胞株（ＬＮＣａＰ、ＰＣ−３およびＤＵ１４５、ＰＰＣ−１）をＡＴＣＣ（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ，ＵＳＡ）より入手した。ヒトＰＣ−３＿ＴｘＲはパクリタキセルに耐性であり、ＰＣ−３と比較したＭＤＲモデルとして使用した。細胞培養用品はＣｅｌｌｇｒｏ  Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ（Ｈｅｒｎｄｏｎ，ＶＡ，ＵＳＡ）より購入した。すべての細胞株を使用して、スルホローダミンＢ（ＳＲＢ）アッセイによって化合物１７ｙａ、１２ｆａおよび５５の抗増殖活性を試験した。すべての細胞株を、２ｍＭグルタミンおよび１０％胎仔ウシ血清（ＦＢＳ）を含むＲＰＭＩ  １６４０培地中で維持した。
【０２８０】
インビトロ微小管重合アッセイ。ブタ脳チューブリン（０．４ｍｇ）（Ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔｏｎ，Ｄｅｎｖｅｒ，ＣＯ）を１および５μΜの試験化合物またはビヒクル（ＤＭＳＯと混合し、１００μＬの緩衝液（８０ｍＭ  ＰＩＰＥＳ、２．０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、０．５ｍＭ  ＥＧＴＡ、ｐＨ６．９および１ｍＭ  ＧＴＰ）中でインキュベートした。３４０ｎｍ波長での吸光度を１分ごとに１５分間観測した（ＳＹＮＥＲＧＹ  ４マイクロプレートリーダー、Ｂｉｏ−Ｔｅｋ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｗｉｎｏｏｓｋｉ，ＶＴ）。分光光度計をチューブリン重合のために３７℃に維持した。
【０２８１】
代謝インキュベーション。代謝安定性試験を、反応緩衝液［０．２Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）、１．３ｍＭ  ＮＡＤＰ＋、３．３ｍＭグルコース−６−リン酸および０．４Ｕ／ｍＬグルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ］中に１ｍｇ／ｍＬのミクロソームタンパク質を含む１ｍＬの総反応容量中０．５μΜの試験化合物を、振とう水浴中３７℃でインキュベートすることによって実施した。ＮＡＤＰＨリジェネレーションシステム（溶液ＡおよびＢ）をＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｂｅｄｆｏｒｄ，ＭＡ）より入手した。グルクロン酸抱合試験のために、脱イオン水中の２ｍＭ  ＵＤＰ−グルクロン酸（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）補因子を、脱イオン水中の８ｍＭ  ＭｇＣｌ２、２５μｇのアラメチシン（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）およびＮＡＤＰＨリジェネレーション溶液（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｅｄｆｏｒｄ，ＭＡ）と共に以前に記述されているようにインキュベートした。反応溶液中の総ＤＭＳＯ濃度は約０．５％（ｖ／ｖ）であった。代謝安定性を測定するのに使用した反応混合物からのアリコート（１００μＬ）を５、１０、２０、３０、６０および９０分に採取した。２００ｎＭの内部標準を含むアセトニトリル（１５０μＬ）を添加して反応物をクエンチングし、タンパク質を沈殿させた。次に試料を４，０００ｇで室温にて３０分間遠心分離し、上清をＬＣ−ＭＳ／ＭＳによって直接分析した。
【０２８２】
分析方法。試料溶液（１０μＬ）をＡｇｉｌｅｎｔシリーズＨＰＬＣシステム（Ａｇｉｌｅｎｔ  １１００  Ｓｅｒｉｅｓ  Ａｇｉｌｅｎｔ  １１００  Ｃｈｅｍｓｔａｔｉｏｎ，Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｃｏ，Ｌｔｄ）に注入した。すべての分析物をナローボアＣ１８カラム（Ａｌｌｔｅｃｈ  Ａｌｌｔｉｍａ  ＨＰ、２．１×１００ｍｍ、３μｍ、Ｆｉｓｈｅｒ，Ｆａｉｒ  Ｌａｗｎ，ＮＪ）で分離した。２つの勾配方式を用いた。代謝安定性試験のために、移動相Ａ［０．１％ギ酸を含むＡＣＮ／Ｈ２Ｏ（５％／９５％、ｖ／ｖ）］および移動相Ｂ［０．１％ギ酸を含むＡＣＮ／Ｈ２Ｏ（９５％／５％、ｖ／ｖ）］の混合物を３００μＬ／分の流速で使用して分析物の分離を達成する勾配方式を用いた。移動相Ａを１０％で０〜１分、続いて４分以内に１００％の移動相Ｂまで直線的にプログラムされた勾配を使用し、１００％の移動相Ｂを０．５分維持した後、１０％移動相Ａに急速に傾斜させた。移動相Ａを分析の終了に向けてさらに１０分間継続した。
【０２８３】
ＴｕｒｂｏＩｏｎＳｐｒａｙソースで操作する、トリプル四重極（ｔｒｉｐｌｅ−ｑｕａｄｒｕｐｏｌｅ）質量分析計、ＡＰＩ  Ｑｔｒａｐ  ４０００（商標）（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ／ＭＤＳ  ＳＣＩＥＸ，Ｃｏｎｃｏｒｄ，Ｏｎｔａｒｉｏ，Ｃａｎａｄａ）を使用した。スプレー針の電圧をポジティブモード用に５ｋＶに設定した。
カーテンガスを１０に設定した；ガス１およびガス２を５０に設定した。衝突支援解離（ＣＡＤ）ガスは中等度およびソースヒータープローブ温度は５００℃に設定した。多重反応モニタリング（ＭＲＭ）モード、走査ｍ／ｚ  ３７８→２１０（１７ｙａ）、ｍ／ｚ  ３７３→２０５（１２ｆａ）、ｍ／ｚ  ４１０→２４２（５５）およびｍ／ｚ  ３０９→１７１（内部標準）を使用して最も高感度のシグナルを得た。データの取得および定量化処理はＡｎａｌｙｓｔ（商標）ソフトウェア、バージョン１．４．１（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて達成した。
【０２８４】
水溶解度。薬剤の溶解度を、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳと連結したＭｕｌｔｉｓｃｒｅｅｎ  Ｓｏｌｕｂｉｌｉｔｙ  Ｆｉｌｔｅｒ  Ｐｌａｔｅ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｅ，Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ，ＭＡ）によって測定した。簡単に述べると、１９８μＬのリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）緩衝液（ｐＨ７．４）を９６ウェルプレートに負荷し、２  μＬの１０ｍＭ試験化合物（ＤＭＳＯ中）を分注して、静かに振とうしながら（２００〜３００ｒｐｍ）室温で１時間半混合した（Ｎ＝３）。プレートを８００ｇで１０分間遠心分離し、ろ液を使用して、以前に記述されているようにＬＣ−ＭＳ／ＭＳによってその濃度および試験化合物の溶解度を測定した。
【０２８５】
薬物動態試験。６〜８週齢の雄性ＩＣＲマウス（ｎ＝３／群）をＨａｒｌａｎ  Ｉｎｃ．より購入し、１７ｙａ、１２ｆａおよび５５の薬物動態（ＰＫ）を検討するために使用した。すべての化合物（１０ｍｇ／ｋｇ）をＤＭＳＯ／ＰＥＧ３００（１／９）に溶解し、単回静脈内（ｉ．ｖ．）注射（５０μＬ）によって尾静脈に投与した。血液試料をｉ．ｖ．投与の５、１５および３０分後、１、１．５、２、３、４、８、１２および２４時間後に採取した。マウスに２０ｍｇ／ｋｇ（Ｔｗｅｅｎ８０／ＤＭＳＯ／Ｈ２Ｏ、２／２／６中）の各試験化合物を経口栄養によって与え（ｐ．ｏ．）、それらの経口バイオアベイラビリティを評価した。血液試料をｐ．ｏ．投与の０．５、１、１．５、２、３、４、８、１２および２４時間後に採取した。
【０２８６】
雌性Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（ｎ＝３；２５４±４ｇ）をＨａｒｌａｎ  Ｉｎｃ．（Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）より購入した。ラット胸部頸静脈カテーテルをＢｒａｉｎｔｒｅｅ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｉｎｃ．（Ｂｒａｉｎｔｒｅｅ，ＭＡ）より購入した。動物施設に到着後すぐに、いずれの処置の前にも動物を温度制御された部屋（２０〜２２℃）において１２時間の明／暗サイクルで３日間順化させた。化合物１７ｙａ、１２ｆａおよび５５を５ｍｇ／ｋｇ（ＤＭＳＯ／ＰＥＧ３００、１／９中）の用量で胸部頸静脈にｉ．ｖ．投与した。等容量のヘパリン化生理食塩水を注入して除去した血液を置き換え、血液試料（２５０μＬ）を頸静脈カテーテルによって１０、２０、３０分および１、２、４、８、１２、２４時間目に採取した。ラットに１０ｍｇ／ｋｇ（Ｔｗｅｅｎ８０／ＤＭＳＯ／Ｈ２Ｏ、２／２／６中）の各試験化合物を経口栄養によって与え（ｐ．ｏ．）、それらの経口バイオアベイラビリティを評価した。経口投与後すべての血液試料（２５０μＬ）を頸静脈カテーテルによって３０、６０、９０分、１２０分、１５０分、１８０分、２１０分、２４０分および８、１２、２４時間目に採取した。血液採取の前にヘパリン化シリンジおよびバイアルを調製した。血液試料を８，０００ｇで５分間遠心分離することによって血漿試料を調製した。すべての血漿試料を直ちに−８０℃で分析時まで保存した。
【０２８７】
分析物を、２００ｎＭの内部標準を含む２００μＬのアセトニトリルを用いて１００μＬの血漿から抽出した。試料を十分に混合し、遠心分離して、有機抽出物をＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析のためにオートサンプラーに移した。
【０２８８】
ＰＣ−３＿ＴｘＲ異種移植試験。ＰＣ−３＿ＴｘＲ細胞（１０×１０７／ｍＬ）を、１０％ＦＢＳを含むＲＰＭＩ１６４０成長培地中で調製し、マトリゲル（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，ＣＡ）と１：１の比率で混合した。１００μＬの混合物（５×ｌ０６細胞／動物）を６〜８週齢の雄性無胸腺ヌードマウスの側腹部に皮下（ｓ．ｃ．）注射することによって腫瘍を樹立した。腫瘍の長さと幅を測定して、腫瘍体積（ｍｍ３）を式、π／６×Ｌ×Ｗ２によって計算し、ここで長さ（Ｌ）および幅（Ｗ）はｍｍで測定した。腫瘍体積が３００ｍｍ３に達したとき、ＰＣ−３＿ＴｘＲ腫瘍を担持する動物をビヒクル［Ｔｗｅｅｎ８０／ＤＭＳＯ／Ｈ２Ｏ（２／２／６）］または１７ｙａ（１０ｍｇ／ｋｇ）で経口的に処置した。投薬スケジュールは、週に３回、４週間であった。
【０２８９】
結果
１７ｙａおよび５５は、多剤耐性細胞を含む細胞において幅広い細胞傷害性を示す。
癌細胞株の成長を阻害する１７ｙａおよび５５の能力を、ＳＲＢアッセイを用いて評価した（表１２）。両化合物は、５つの前立腺癌および１つの神経膠腫癌細胞株を含むいくつかのヒト癌細胞株の成長を、低いナノモル範囲のＩＣ５０値で阻害した。１７ｙａは、これらの細胞株において５５より１．７〜４．３倍高い効力を示した。Ｐ糖タンパク質（Ｐ−ｇｐ）を過剰発現するパクリタキセル耐性ＰＣ−３（ＰＣ−３／ＴｘＲ）細胞株を使用して、１７ｙａおよび５５に関する薬物耐性の作用を検討し、その親であるＰＣ−３細胞株に対して比較した。ドセタキセルのＩＣ５０値は、ＰＣ−３およびＰＣ−３／ＴｘＲ細胞株においてそれぞれ１．２±０．１ｎＭおよび１７．７±０．７ｎＭであった。１７ｙａおよび５５はどちらも、親ＰＣ−３およびＰＣ−３／ＴｘＲに対して等効力であったが、パクリタキセルおよびドセタキセルはそれぞれ８５倍および１５倍の相対的耐性を示した。これらのデータは、１７ｙａおよび５５の両方がＰ−ｇｐ媒介性薬物耐性を回避することを指示する。
【表１２】
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ＩＣ５０値（平均±ＳＤ）を９６時間の処置後に測定した（Ｎ＝３）。パクリタキセルを陽性対照として使用した。括弧内のデータは、ＰＣ−３およびＰＣ−３／ＴｘＲにおけるＩＣ５０値と比較した場合の耐性係数を指示した。ＮＲ、報告されず。
【０２９０】
１７ｙａおよび５５はチューブリン上のコルヒチン結合部位に結合し、チューブリン重合を阻害して、細胞アポトーシスを誘導する（図２０）。
チューブリンと低分子阻害剤の相互作用を検討するために競合的マス結合アッセイを開発した。この試験では、様々な濃度の１７ｙａおよび５５を使用して、コルヒチン−チューブリン結合部位と競合させた。両化合物はチューブリン結合に関してコルヒチンと有効に競合した（図２０Ａ）；しかし、それらの競合的結合曲線は、公知の強力なコルヒチン部位結合リガンドであるポドフィロトキシンと比較した場合、より高い濃度で実質的にゼロから逸脱した。これは、１７ｙａおよび５５の両方がポドフィロトキシンよりも低い親和性を示したことまたはそれらがコルヒチン結合部位に部分的に結合することを示唆する。陰性対照であるビンブラスチンは、コルヒチン−チューブリン結合を阻害せず、この競合的マス結合アッセイの特異性を成功裏に実証した。
【０２９１】
ブタ脳チューブリン（純度＞９７％）を１７ｙａまたは５５（５μΜ）と共にインキュベートし、チューブリン重合へのそれらの作用を試験した（図２０Ｂ）。１７ｙａおよび５５は、１５分にチューブリン重合をそれぞれ４７％および４０％阻害した。５μΜのコルヒチンを陽性対照として使用し、これはチューブリン重合を３２％阻害した。これらのデータは、１７ｙａおよび５５の両方がコルヒチンよりもわずかに大きなチューブリン重合の阻害を有することを示唆する。それゆえ、これらの化合物の分子機構は、コルヒチン結合部位に結合し、チューブリン重合を阻害して、細胞傷害性を誘導することである。
【０２９２】
ＰＣ−３およびＰＣ−３／ＴｘＲ細胞を０．８〜６００ｎｍｏｌ／Ｌの１７ｙａ、５５またはドセタキセルに２４時間暴露した。ＤＮＡ−ヒストン複合体のレベルを用いて細胞アポトーシスを示した。１７ｙａおよび５５はどちらも、２４時間でＰＣ−３（図２０Ｃ）およびＰＣ−３／ＴｘＲ（図２０Ｄ）において細胞アポトーシスを誘導するのに等しく強力であった。ドセタキセルはＰＣ−３細胞のアポトーシスを誘導するのに極めて強力であったが、ＰＣ−３／ＴｘＲ細胞ではＰ−ｇｐの過剰発現に起因して効力がより低かった。
【０２９３】
１７ｙａおよび５５は好ましい薬剤様特性を示した。
薬剤様特性、例えば代謝安定性、透過性、水溶解度および薬剤間相互作用を１７ｙａおよび５５に関して検討した（表１３Ａ）。１７ｙａは、５５より大きな代謝安定性および水溶解度を示した。両方の化学物質が十分すぎるほどの透過性値を示し、それらを経口的に使用する潜在的可能性を示唆した。加えて、１７ｙａおよび５５はどちらも、ＣＹＰ酵素阻害アッセイでマイクロモル範囲の高いＩＣ５０値を示し、両化合物が主要なＣＹＰ肝酵素を介した薬剤間相互作用を回避し得ることを指示した。全体として、両化合物は好ましい薬剤様特性を示した。
【表１３Ａ】
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【表１３Ｂ】
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【０２９４】
図１３Ｂに示すように、１７ｙａは第Ｉ相反応により８０分の半減期を有しており、１７ｙａが第Ｉ相代謝工程で安定であることを示唆した。ＵＤＰ−グルクロン酸の存在下での半減期（９０分）は、その不在下で認められたものと同様であった。これらのデータは、１７ｙａがヒト肝ミクロソームにおいて安定であることを示唆し、ヒトにおいて低いクリアランスと長い半減期が得られることが期待された。他方で、５５は、ＵＤＰ−グルクロン酸の存在下と不在下に置いた場合、それぞれ３０分および４３分の半減期を示した。化合物１２ｆａは第Ｉ相で４４の半減期を示す。これらのデータは、３つの化合物すべてがヒト肝ミクロソームにおいて許容され得る安定性を示し、１７ｙａが１２ｆａおよび５５より安定であることを示唆した。それらの代謝を検討した場合、１２ｆａおよび５５はより高いレベルのケトン還元を示すことが認められ（データは示していない）、１２ｆａおよび５５が１７ｙａより不安定であることを示唆した。
【０２９５】
化合物１７ｙａは大きな水溶解度を示し、１２ｆａおよび５５は許容され得る溶解度を示した。
化合物１７ｙａはイミダゾール環を含んでおり、この環は水溶解度を改善し、＞７５μｇ／ｍＬの水溶解度をもたらした（表１３Ａ）。化合物１２ｆａおよび５５はより低い溶解度を示し、それぞれ１２および１９μｇ／ｍＬを示した。全体として、１７ｙａは高い水溶解度を明らかにし、１２ｆａおよび５５は許容され得る溶解度を示し、１ｈより大きく改善した。１２ｆａのより高い溶解度は、１ｈと比較してはるかに改善された経口バイオアベイラビリティとなった（ラットにおいて３５％対３．３％）。１７ｙａおよび５５についても同様に、水溶解度は、以下で論じるようにはるかに改善された経口バイオアベイラビリティと相関した（表１４）。
【０２９６】
マウス、ラットおよびイヌにおける１７ｙａおよび５５の薬物動態試験
ＩＣＲマウス、Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットおよびビーグル犬において単回（ｉ．ｖ．またはｐ．ｏ．）投与で与えた１７ｙａおよび５５の薬物動態パラメータを表１４に要約する。１７ｙａはマウスおよびラットにおいて低いクリアランスを示し、１７ｙａがこれらの種で代謝安定性および最小限の初回通過代謝を示すことを示唆した。１７ｙａはマウスおよびラットで中等度の容積の分布を有し、腫瘍を含む組織中に適切に分布し得ることを指示した。マウスおよびラットと異なり、驚くべきことに、イヌにおける１７ｙａの総クリアランスは高かった。イヌ血漿中の２つの豊富な代謝産物、ヒドロキシル化代謝産物および親の＋３４ｍ／ｚを有する未知の代謝産物（データは示していない）は、イヌ肝ミクロソームで認められたものと一致した。要約すると、イヌでは５５と比較してより高いクリアランスとより低い経口暴露が１７ｙａに関して得られたが、マウスおよびラットでは得られなかった。加えて、１７ｙａはイヌ肝ミクロソームにおいてのみ豊富な代謝産物を示したが、マウス、ラットまたはヒト肝ミクロソームではこれを示さなかった（データは示していない）。１７ｙａは、ラット、マウスおよびイヌにおいてそれぞれ２１％、３６％および５０％の許容され得る経口バイオアベイラビリティを示した。その一方で、５５はラットで低いクリアランスを有し、マウスおよびイヌでは中等度のクリアランスを有していた。１７ｙａと同様に、５５はこれらの種で中等度の容積の分布を示した。５５は、３つの種の間で一定な経口バイオアベイラビリティを有していた（２４％〜３６％）。これらの特性は、１７ｙａおよび５５の両方が潜在的に経口で使用可能なチューブリン阻害剤であることを指示する。
【０２９７】
【表１４】
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【０２９８】
１７ｙａおよび５５はパクリタキセル耐性前立腺（ＰＣ−３／ＴｘＲ）異種移植片成長を阻害する。
ＰＣ−３（図２１Ａ）およびパクリタキセル耐性前立腺癌（ＰＣ−３／ＴｘＲ）（図２１Ｂ）細胞をヌードマウスに接種し、腫瘍体積を約１５０〜３００ｍｍ３まで増大させた。  前立腺癌のために臨床で使用されている、ドセタキセル（１０または２０ｍｇ／ｋｇ）を使用して、インビボでＰ−ｇｐ媒介性薬物耐性のモデルにおけるその有効性を評価した。ＰＣ−３／ＴｘＲ腫瘍は迅速に成長することが認められ、その体積は試験の終了時に１５００〜２５００ｍｍ３に達した。１０および２０ｍｇ／ｋｇの静脈内投与したドセタキセルは両方のモデルで用量反応を示したが（図２１Ａおよび２１Ｂ）、１０ｍｇ／ｋｇで静脈内投与した場合、腫瘍成長阻害（ＴＧＩ）作用はＰＣ−３腫瘍での８４％ＴＧＩからＰＣ−３／ＴｘＲ腫瘍では１４％ＴＧＩに低下した（表１５）。加えて、より高用量（２０ｍｇ／ｋｇ）で、ドセタキセルはＰＣ−３腫瘍の部分的な退縮（＞１００％ＴＧＩ）を生じさせたが、ＰＣ−３／ＴｘＲ腫瘍では辛うじて５６％ＴＧＩであった。ＰＣ−３／ＴｘＲ腫瘍におけるドセタキセルの有効性は、ＰＣ−３腫瘍におけるものと比較した場合著しく低下し、効果がＰ−ｇｐ媒介性薬物耐性によって損なわれることを示唆し、またこれらの結果は、我々のインビトロ細胞傷害性またはアポトーシスデータと非常に良好に一致する。ＰＣ−３／ＴｘＲ腫瘍におけるドセタキセルの効果の欠如に対し、経口投与した１７ｙａ（６．７ｍｇ／ｋｇ）は、体重への影響を伴わずに１００％を超えるＴＧＩを明らかにした（図２１Ｂおよび表１５）。加えて、ＰＣ−３／ＴｘＲ腫瘍を担持する４匹のヌードマウスのうち２匹は１９日目に腫瘍が存在しなかった（データは示していない）。
ＰＣ−３／ＴｘＲ異種移植モデルをさらに利用して、１７ｙａ（他の投薬スケジュールで）および５５の効果を評価した。１７ｙａの最大耐容量（体重減少＞２０％）は、１日１回４日間経口投与した場合、１０ｍｇ／ｋｇ；または１日２回（ｂ．ｉ．ｄ．）５日間投与した場合は３．３ｍｇ／ｋｇであることが認められた（データは示していない）。図２１Ｃに示すように、３．３ｍｇ／ｋｇの１７ｙａを第１週目の最初の連続４日間ｂ．ｉ．ｄ．で投与し、その後スケジュールを２週目から４週目まで１日１回に変更した。結果は、４〜１９日目の間部分的な退縮が得られ、ＴＧＩは９７％であり、７匹のマウスのうち１匹は２６日目に腫瘍を有していなかったことを示す。より低い投与頻度（ｑ２ｄ）でより高用量（１０ｍｇ／ｋｇ）の１７ｙａは（図２１Ｄ）、１３日目から２９日目までの間部分的な退縮を生じさせた。これらのデータは、最適用量および投薬スケジュールでのレジメンは１７ｙａがＰＣ−３／ＴｘＲ腫瘍を成功裏に阻害するのを促進することを示唆する。５５を、１０または３０ｍｇ／ｋｇ  ｂ．ｉ．ｄ．で１週目から４週目まで週に５回、ヌードマウスに経口投与した。図２１Ｃに示すように、阻害プロフィールはＰＣ−３／ＴｘＲ腫瘍における用量反応を示す。ＴＧＩ値は、低用量（１０ｍｇ／ｋｇ）での処置群に関して５９％であった。さらに、高用量（３０ｍｇ／ｋｇ）は、１９日目から試験の終了時（２６日目）まで部分的退縮（＞１００％ＴＧＩ）を示し始めた。ビヒクル群の一部のマウスは、一部には癌悪液質のために、終了時に体重が減少していた。これに対し、１７ｙａ（３．３ｍｇ／ｋｇ）または５５（３０ｍｇ／ｋｇ）で処置したマウスは体重が増加しつつあり（表１５）、１７ｙａまたは５５のこれらの最適用量が良好に耐容され得ることおよび癌悪液質を予防することを示唆した。
【表１５】
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【０２９９】
ヌードマウスにおける１７ｙａおよび５５の脳透過性
２０ｍｇ／ｋｇの１７ｙａまたは５５の経口投与後１時間目と４時間目にヌードマウスにおける全脳濃度を測定した（表１６）。脳濃度対血漿濃度の比率を測定し、ヌードマウスにおけるドセタキセルと比較した。５５は、１７ｙａおよびドセタキセルより高い脳透過性を示した。１７ｙａだけが１時間目と４時間目の両方でドセタキセルよりわずかに高い脳／血漿濃度比を示した。５５の脳濃度は、１時間目と４時間目にそれぞれ血漿濃度の１４〜１９％に達し、ドセタキセルと比較して１時間目と４時間目の両方で３．２倍高い脳／血漿比を示した。これらのデータは、５５が、より高い脳透過性および神経膠腫細胞における高い効力（２２ｎＭ、表１２）を有するので、神経膠腫を処置するために潜在的に好ましい特性を示したことを示唆する。
【０３００】
【表１６】
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【０３０１】
（実施例１０）
白血病（ＨＬ６０）異種移植におけるインビボ効果（図２２）
ＨＬ６０細胞（１０×１０７／ｍＬ）を、１０％ＦＢＳを含むＲＰＭＩ１６４０成長培地中で調製し、マトリゲル（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，ＣＡ）と１：１の比率で混合した。１００μＬの混合物（５×ｌ０６細胞／動物）を６〜８週齢の雄性無胸腺ヌードマウスの側腹部に皮下注射することによって腫瘍を確立した。腫瘍の長さと幅を測定して、腫瘍体積（ｍｍ３）を式、π／６×Ｌ×Ｗ２によって計算し、ここで長さ（Ｌ）および幅（Ｗ）はｍｍで測定した。腫瘍体積が約２００ｍｍ３に達したとき、ＨＬ６０腫瘍を担持する動物をビヒクル［Ｔｗｅｅｎ８０／ＤＭＳＯ／Ｈ２Ｏ（２／２／６）］または１７ｙａ（２０ｍｇ／ｋｇ）で経口的に処置した。投薬スケジュールは週に１回、２週間であった。ビンブラスチン（１ｍｇ／ｍＬ）を週に１回腹腔内注射によって投与した。
【０３０２】
結果
ヒト前骨髄球性白血病細胞、ＨＬ６０細胞をヌードマウスに接種し、腫瘍体積を約２００ｍｍ３まで増大させた。白血病を含む血液癌のために臨床で使用されているビンブラスチン（１ｍｇ／ｋｇ）を使用して、陽性対照薬に対するこのインビボモデルの応答を評価した。腫瘍体積（ｍｍ３）を時間に対してプロットし、４〜５匹の動物からの平均±ＳＤを示している。ＨＬ６０腫瘍は迅速に成長することが認められ、体積は２週間以内に２０００〜３０００ｍｍ３に達した。ビンブラスチンの１ｍｇ／ｋｇの腹腔内注射は非常に強力な腫瘍成長阻害作用を示し（図２２）、腫瘍成長阻害（ＴＧＩ）は８４％であった。経口投与した１７ｙａ（２０ｍｇ／ｋｇ）は４０％の腫瘍成長阻害を示した。ＨＬ６０腫瘍のサイズは、著しい増大を伴わずに１７ｙａ処置後５日目まで維持されたが、その次の２日間に腫瘍サイズが有意に増大した（６０〜１００％）。これは、より頻度の高い投薬スケジュールが１７ｙａの腫瘍成長阻害作用を増強し得ることを示唆する。
【０３０３】
（実施例１１）
ＢＲＡＦｉと代替的な経路を標的とするチューブリン阻害剤との併用はベムラフェニブ耐性の発現を遅延させるまたは予防することができる。
この試験の治療上の具体的な目的を図２７に要約する。
ＢＲＡＦｉ（ベムラフェニブもしくはダブラフェニブ）またはＭＥＫｉ（トラメチニブ）とドセタキセル（承認されているチューブリン阻害剤）との併用は黒色腫患者由来の異種移植（ＰＤＸまたは「ｘｅｎｏｐａｔｉｅｎｔ」）腫瘍モデルにおける獲得ベムラフェニブ耐性を抑制することができる。
【０３０４】
新しい処置戦略の有用性は、最終的には持続的な臨床効果を示すその能力に基づく。黒色腫は、微小環境または後成的因子に応答して高い表現型および機能的可塑性を示す不均一な腫瘍であることが周知である。実際に、最近の報告は、ベムラフェニブ耐性腫瘍が１名の患者内でまたはさらには単一転移部位から採取した同じ腫瘍生検内で複数の耐性機構を発現できることを明らかにした。患者における黒色腫腫瘍と異なり、Ａ３７５などの樹立細胞株から成長させた腫瘍には２つの主要な限界がある：（ａ）それらは、薬剤効果に有意に影響を及ぼし得る、それらのもとの腫瘍の不均一性を喪失している；および（ｂ）それらは、自然の腫瘍微小環境とは異なる細胞培養条件への適応に起因して不可逆的な遺伝的変化をしばしば発現する。広範な試験が、初期継代ＰＤＸ腫瘍（≦５継代）は患者腫瘍への遺伝的忠実性を維持し、もとの腫瘍の形態および不均一性を保存し、臨床で認められるものに類似する、療法に対する応答のパターンを有することを明らかにした。それゆえ、Ａ３７５ＲＦ２１腫瘍で認められた強力な相乗作用および効果が（図６および７参照）ＰＤＸ腫瘍においても有効なままであることを確認することが不可欠である。また、より直接的なベンチからベッドサイドへの移行のために、樹立細胞株から成長させた腫瘍ではなくＰＤＸ腫瘍を使用して薬物耐性の潜在的発現を評価することも極めて重要である。
【０３０５】
承認済みのチューブリン阻害剤が存在するので、速やかに患者の利益となるこの革新的な併用の開発を促進するために、３つの現在承認されているＢＲＡＦｉ／ＭＥＫｉとドセタキセルの併用効果の評価を最初に確立して、最適の組合せを決定する。さらに、新たな併用戦略は、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異を有する黒色腫患者の２つの群を処置するのに使用した場合、より大きな影響を及ぼす。最初の群は、ＢＲＡＦｉおよび／またはＭＥＫｉを摂取したことがないＢＲＡＦｉナイーブ患者である。そのような患者は、併用がＢＲＡＦｉ耐性の潜在的発現を有意に遅延させるまたはさらには予防することができる場合、最も恩恵を受ける。２番目の群は、現実に臨床の場でＢＲＡＦｉおよび／またはＭＥＫｉによって処置されたことがあるＢＲＡＦｉ耐性患者である。これらの患者は、併用が獲得薬物耐性を有効に克服することができる場合、恩恵を受ける。
【０３０６】
ベムラフェニブ感受性ＰＤＸ腫瘍におけるインビボ併用効果および薬物耐性の潜在的発現を測定し、ＢＲＡＦｉナイーブ黒色腫患者を処置するために臨床での使用（例えばベムラフェニブ耐性が生じる前の併用処置の事前使用）を模倣する。というのは、獲得薬物耐性を克服する最良の戦略はその発現を有意に遅延させるまたはさらには予防することであるからである。
【０３０７】
ＰＤＸ腫瘍担持マウスに基づく初期ＰＤＸ腫瘍の確立
この分野における最近の取り組みにより、ＰＤＸモデルを成功率に確立するために一部のプロトコルが標準化された。現在、様々なＰＤＸモデルが商業的ソースから入手可能である。購入した、低継代の２つの（Ｐ２）ＰＤＸ腫瘍を移植したＮＳＧマウス（典型的には１〜２匹のマウス）を使用する。腫瘍を約１，５００ｍｍ３まで成長させ、５匹までの新たなＮＳＧマウスに伝播させて、十分なＰ３腫瘍を提供する。全体的な遺伝的および組織学的忠実性を確保するために、５つの無作為に採取したＰ３腫瘍の遺伝的プロフィールおよび組織学を特性付け、もとのＰ０腫瘍からのデータで検証した後、腫瘍片をその後の試験のために多数のマウスに移植する（図２７）。これらの検証分析における明瞭さを確実にするために組織学的分析を実施する。
【０３０８】
ａ．ベムラフェニブ、ダブラフェニブまたはトラメチニブとドセタキセルとの併用で処置したベムラフェニブ感受性ＰＤＸ腫瘍におけるインビボ効果を測定する。
３つの現在承認されているＢＲＡＦｉまたはＭＥＫｉを試験し、臨床での今後の優先順位付けのためにそれらの併用効果を順位付ける。ＮＳＧマウスは腫瘍増殖のための最適マウスであるが、毛皮を有しており、ヌードマスより高価である（２〜３倍）。数多くの試験が、ヌードマウスを使用した終末実験結果は、ＰＤＸ試験においてより高価で困難なＮＳＧマウスを用いた場合と比較して等しく良好であることを明らかにしている。それゆえ、終末効果試験ではヌードマウスを使用する。ダブラフェニブ＋トラメチニブの標準的な組合せを参照併用処置として含める。加えて、この工程で使用するすべての薬剤は承認薬であり、それらの薬物動態特性は公知である。したがってこの試験に関しては確立されている用量および投与経路に従う。具体的には、ベムラフェニブ（４５ｍｇ／ｋｇ）、ダブラフェニブ（３０ｍｇ／ｋｇ）およびトラメチニブ（０．３ｍｇ／ｋｇ）を経口栄養によってマウスに与える。ドセタキセル（１０ｍｇ／ｋｇ）は、経口では使用可能でないため、尾静脈に静脈内注射する。
【０３０９】
各群につき７匹のマウスを使用して、３つの独立したベムラフェニブ感受性ＰＤＸ腫瘍において持続的な腫瘍退縮が達成されるかどうかを評価する。これらの重要な動物試験における統計的有意性を確保するために統計分析および標本サイズ計算を実施する。
【０３１０】
簡単に述べると、６週齢の雄性無胸腺ヌードマウスをＣｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒより購入する。Ｐ３ベムラフェニブ感受性ＰＤＸ腫瘍を小片（〜３ｍｍ３）に細分化した後、文献に報告されている確立された手順に従ってそれらを６３匹の麻酔したヌードマウスの側腹部の皮下に外科的に移植する。移植の２〜３週間後に腫瘍が約１００〜２００ｍｍ３に達したとき、マウスを、体重および腫瘍サイズの差を最小限に抑えつつ、９つの群（ｎ＝７）に無作為に割り付ける：ビヒクル単独による陰性対照群（第１群）；ベムラフェニブ、ダブラフェニブ、トラメチニブを経口的にまたはドセタキセル（ｉ．ｖ．）を使用する毎日の連続処置による４つの単剤処置群（第２〜５群）；ならびに単剤と同じ用量および投与経路を用いてダブラフェニブ＋トラメチニブ（参照併用）、ドセタキセル＋ベムラフェニブ、ドセタキセル＋ダブラフェニブおよびドセタキセル＋トラメチニブを使用する毎日の連続処置による４つの併用処置群（第６〜９群）。
【０３１１】
ＰＤＸの性質に起因して、腫瘍観測のために何らかのインビボルミネセンスプローブを取り付けることは実際的でない。したがって、腫瘍を３日ごとにカリパスで測定し、式：
（幅２×長さ）／２を用いて体積を計算する。これまでの報告に基づくと、ベムラフェニブ感受性腫瘍は６０日以内にマウスにおいて単剤ベムラフェニブ処置に対する獲得耐性を明らかに発現した。したがって、最大９０日間または腫瘍が完全に退縮するまで腫瘍を観測する。薬物耐性の潜在的発現を腫瘍成長動態によって詳細に観測する。加えて、各々の腫瘍から連続的な腫瘍生検を、報告されている手順に従って微細針で週２回採取する。これらの生検中のＢＲＡＦおよびｐＥＲＫ／ｔＥＲＫのレベルをウェスタンブロット法によって測定し、ＢＲＡＦｉおよびＭＥＫｉに対する薬物耐性の潜在的発現を観測する。マウスの体重、活動および外観を潜在的毒性に関して詳細に観測する。
【０３１２】
実験の最後に、終末血液試料（０．８〜１ｍＬ／マウス）を、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓによって提供される包括的臨床病理学分析のために心臓穿刺によって採取する。すべての動物を、血液採取後直ちにＣＯ２吸入とそれに続く頸椎脱臼によって犠死させ、各々のマウスの主要な器官（脳、心臓、肺、肝臓、脾臓、腎臓）を採取して、１０％ホルマリンリン酸緩衝液中で別々に保存する。これらの器官を潜在的薬剤毒性（例えば肝毒性）および転移の徴候に関して注意深く検査し、分析する。腫瘍を慎重に採取し、計量して、細胞増殖、抗血管新生およびアポトーシスの重要な指標への薬剤作用を測定するために処理し、ならびに組織病理学的検査のために固定し、処理する。効果が特定のＰＤＸ腫瘍モデルに関連しないことを確実にするため、２つの付加的なベムラフェニブ感受性ＰＤＸ腫瘍モデルを使用して上記実験を反復し、したがってこの工程で使用する総マウスは６３×３＝１８９までと推定される。
【０３１３】
ｂ．ベムラフェニブ、ダブラフェニブまたはトラメチニブとドセタキセルの併用で処置したベムラフェニブ耐性ＰＤＸ腫瘍におけるインビボ効果を測定する。
獲得ベムラフェニブ耐性を克服する理想的な戦略は、その発現を防ぐ非常に有効な療法を事前使用することである。残念ながら、これは既存の療法では現実的でなく、大部分の患者は急速にベムラフェニブ耐性を発現する。Ｓｔｕａｒｔらは最近、単剤ベムラフェニブの間欠的な高用量投薬スケジュールが連続的な投薬スケジュールと比較して薬物耐性の発現を減弱し得ることを示唆した。しかし、この「休薬期間」戦略の患者への心理的影響と長期的な臨床効果は今のところ不明のままである。耐性黒色腫腫瘍はしばしば活性化ＭＥＫ−ＥＲＫ経路への依存を発現するため、単剤の使用は十分ではないことがあるが、ＢＲＡＦｉ／ＭＥＫｉとチューブリン阻害剤の適切な併用は腫瘍増殖を抑制するうえでまだ非常に有効である（図６および７）。それゆえ、ＢＲＡＦｉ／ＭＥＫｉとドセタキセルの併用がベムラフェニブ耐性腫瘍に対して実質的な腫瘍退縮を誘導することを確認することは重要である。そのような結果は、腫瘍がベムラフェニブ耐性となった場合でも長期的な患者の生存につながり得る。
【０３１４】
上述した実験手順と同様にして、ベムラフェニブ耐性ＰＤＸ腫瘍担持マウスに基づき初期ＰＤＸ腫瘍を確立した後、９つの群（１つのビヒクル単独群、４つの単剤処置群および４つの併用処置群）に分けた６３匹のマウスを使用して、承認済みＢＲＡＦｉまたはＭＥＫｉ薬とドセタキセルの併用がベムラフェニブ耐性ＰＤＸモデルにおいて有効であるかどうかを判定する。前の章で述べたのと同様にして、腫瘍サイズ、連続的な腫瘍生検、終末血液試料および主要器官を測定または採取し、効果および潜在的毒性を評価する。併用試験を２つの付加的なベムラフェニブ耐性ＰＤＸ腫瘍モデルで反復する；それゆえ、この工程では６３×３＝１８９匹のマウスを使用する。
【０３１５】
これらのベムラフェニブ耐性ＰＤＸ腫瘍は、臨床試験およびＡ３７５ＲＦ２１異種移植モデルに関する上記で提示した結果で明らかにされたように、単剤ＢＲＡＦｉ／ＭＥＫｉまたはダブラフェニブ＋トラメチニブの併用に対して耐性であると予想されるが、これらは、ドセタキセルを含む併用の潜在的効果を客観的に評価するための有益な参考であると考えられる。ベムラフェニブ感受性ＰＤＸモデルに関する実験と同様に、これらの併用の効果を順位付けるために腫瘍サイズ、潜在的急性毒性、臨床病理学および腫瘍生検中のｐＥＲＫ／ＥＲＫのレベルを測定する。
【０３１６】
潜在的毒性の測定および処置効果を評価し、臨床的疾患モニタリングのための潜在的バイオマーカーを同定するための集中的ウェスタンブロット分析。
ＰＤＸモデルにおける併用処置の潜在的毒性を測定する：
処置の期間中ＰＤＸ腫瘍担持マウスの体重および活動を詳細に観測することに加えて、終末点で採取した血液試料を、採取後２４時間以内に包括的臨床病理学分析（血液化学）に送る。完全な病理学、化学および血液学（分画を伴う完全血球算定）プロフィールを検定し、詳細な結果を提供する。先に述べたのと同様に結果を毒性の潜在的指標の徴候に関して分析する。病理学的分析のために、ホルマリン固定腫瘍組織をパラフィンブロックに加工し、切片をヘマトキシリンとエオシンで染色する。スライドガラスを走査し、ＳｃａｎＳｃｏｐｅ（登録商標）ＸＴ（Ａｐｅｒｉｏ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．，ＣＡ）を用いて０．２５ピクセル／μｍで顕微鏡スライドガラス上に組織全体のデジタル複製を作製する。走査工程は、組織画像を表示し、種々の倍率で分析することを可能にし、従来の顕微鏡による組織の伝統的な観察を詳細に模倣する。
【０３１７】
ＰＤＸ腫瘍切片における細胞増殖およびアポトーシスの病理学的評価
薬剤併用が増強された効果を維持するかどうかを評価するため、採取したＰＤＸ腫瘍を腫瘍切片に加工し、免疫組織化学を実施する。
【０３１８】
抗増殖性評価のために、標準的な免疫組織化学手順に従って腫瘍切片をそれらのｐＥＲＫレベルの低下および腫瘍細胞増殖のマーカーであるＫｉ６７染色に関して検査する。腫瘍切片内の黒色腫細胞の割合を測定するために、黒色腫特異的マーカー、Ｓ  １００およびＨＭＢ−４５をＨ＆Ｅ染色と共に使用する。
【０３１９】
アポトーシス評価のために、腫瘍切片を固定し、Ｈｏｅｃｈｓｔ  ３３３４２で切片を染色して、断片化した形態または正常な形態を示す核を計数することによって核形態を核断片化の証拠に関して評価する。あるいは、核の変化をＴＵＮＥＬによって評価し、続いてアポトーシス経路を分析する。ミトコンドリア膜電位の変化をフローサイトメトリＭｉｔｏＳｃｒｅｅｎキットで測定する。シトクロムｃの濃度および細胞内分布（ミトコンドリアからサイトゾルへの転移）をウェスタンブロット法によって評価する。抗アポトーシスタンパク質Ｂｃｌ−２およびＢｃｌ−ｘｌの発現；プロアポトーシスタンパク質ＢａｘおよびＮｏｘａ；ならびにプロアポトーシスタンパク質Ｂａｄのリン酸化状態をウェスタンブロット法によって評価する。イニシエータカスパーゼ９およびエフェクタカスパーゼ３の活性化を、蛍光性（ｆｌｕｏｒｉｇｅｎｉｃ）基質Ａｃ−ＬＥＨＤ−ＡＦＣ（カスパーゼ９）およびＡｃ−ＤＥＶＤ−ＡＭＣ（カスパーゼ３）の特異的タンパク質分解切断を測定することによって評価する。
【０３２０】
併用処置効果を評価し、臨床的疾患モニタリングのための潜在的バイオマーカーを同定するための集中的ウェスタンブロット分析。
最初はベムラフェニブ感受性であるＰＤＸ腫瘍に関して、集中的ウェスタンブロット分析を実施し、ＢＲＡＦｉまたはＭＥＫｉ耐性を付与することが公知の極めて重要なタンパク質レベルの変化を測定し、実験の間に採取した連続的腫瘍生検を使用して治療効果の今後のモニタリングのために有用な潜在的バイオマーカーを同定する。特に、上記で提示したデータに基づき、ＭＡＰＫ、ＰＤＧＦβ、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ中の要素およびアポトーシス経路はベムラフェニブ耐性に関与することが周知であるので、それらを検討することに集中的に取り組む。ＲＡＳ、ＲＡＦ、ＲＡＦ、ＭＥＫ１／２、ホスホ−ＭＥＫ１／２（Ｓｅｒ２１７／２２１）、ＥＲＫ１／２、ホスホ−ＥＲＫ１／２（Ｔｈｒ２０２／Ｔｙｒ２０４）、ＡＫＴ、ホスホ−ＡＫＴ（Ｓｅｒ４７３）、ＰＤＧＦβ、切断ＰＡＲＰまたはカスパーゼ３のタンパク質の発現レベルを、Ａ３７５ＲＦ２１モデルに関する作業と同様にして分析する。ベムラフェニブ耐性であるＰＤＸ腫瘍に関して、それらの遺伝子プロフィールをＰ０腫瘍について得て、基線耐性機構を測定し、初期基線耐性に関与するタンパク質についての集中的ウェスタンブロット分析によって治療効果を観測する。
【０３２１】
加えて、ドセタキセルを含むタキサン類の使用は、控えめな生存上の利益を与えるにとどまり、大部分の患者は特有の獲得薬物耐性のために最終的に進行する。主要な耐性機構の１つは、ドセタキセルの細胞内濃度を低下させ得るＡＢＣ輸送体によって媒介される。それゆえ、ＢＲＡＦｉ／ＭＥＫｉ耐性に関与するタンパク質レベルを観測することに加えて、先の試験で述べたのと同様の手順を用いて、Ｐ糖タンパク質（Ｐｇｐ）、多剤耐性タンパク質（ＭＲＰ）および乳癌耐性タンパク質（ＢＣＲＰ）を含む重要なＡＢＣ輸送体の発現を検討することによってドセタキセルに対する潜在的な発現を観測する。タンパク質抽出、ウェスタンブロット法および抗原検出は、標的抗原に応じて修正を加えて、標準プロトコルに従って実施する。タンパク質レベルをデンシトメトリ分析によって正確に定量する（３回の実験からの平均）。
【０３２２】
予想される結果、潜在的危険性および選択的アプローチ
ＢＲＡＦｉまたはＭＥＫｉとドセタキセルの併用は、ベムラフェニブ感受性およびベムラフェニブ耐性の両方のＰＤＸモデルに対して有効であると予想される。この試験で使用するすべての薬剤が承認されているので、有効と証明された場合、この目的からの結果は、直ちに患者の利益となる第一選択併用療法としての役割を果たすことを意味し、速やかに臨床で試験することができる。
ＢＲＡＦｉまたはＭＥＫｉとＡＢＩ（新規チューブリン阻害剤）の併用はＰＤＸ腫瘍における獲得ＢＲＡＦｉ耐性および二次タキサン耐性を抑制する。
【表１７】
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【０３２３】
ドセタキセルの臨床（ｌｉｎｉｃａｌ）使用は、ＢＲＡＦｉ／ＭＥＫｉ処置とドセタキセルの併用において二次タキサン耐性を引き起こし得る。承認されているチューブリン阻害剤と比較して、ＡＢＩはチューブリン中の異なる部位に結合し、高い効力、許容され得る経口バイオアベイラビリティ、優れた薬物動態特性およびＡＢＣ輸送体媒介性多剤耐性細胞を克服するうえでの有効性を含む明確な利点を有する（表１７）。予備毒性試験は、ＡＢＩがドセタキセルまたはビンブラスチンなどの既存のチューブリン阻害剤よりも有意に低い毒性を有することを指示した。それゆえ、ドセタキセルを含む第一選択併用に対する潜在的二次耐性を克服する新世代の併用処置を開発するため、２つの先進的ＡＢＩ（化合物１２ｄａおよび化合物１７ｙａ）とＢＲＡＦｉ／ＭＥＫｉの併用の効果をＰＤＸモデルにおいて測定する。ＡＢＩと承認済みＢＲＡＦｉ／ＭＥＫｉはどちらも経口活性薬剤である。チューブリン阻害剤とＢＲＡＦｉ／ＭＥＫｉとの有害な薬剤間相互作用は報告されていない。それゆえ、Ａ３７５ＲＦ２１異種移植モデルに基づき、ベムラフェニブ、ダブラフェニブまたはトラメチニブとＡＢＩの経口での同時投与は、ＰＤＸ腫瘍において黒色腫腫瘍増殖を抑制するうえでの強力な相乗作用を保持する可能性が高い。
【０３２４】
以下で簡単に述べるように、上述したのと同じ手順に従う。
【０３２５】
ｃ．ベムラフェニブ、ダブラフェニブまたはトラメチニブとＡＢＩ（化合物１２ｄａおよび１７ｙａ）の併用で処置したベムラフェニブ感受性ＰＤＸ腫瘍におけるインビボ効果を測定する。
低継代の２つの（Ｐ２）ＰＤＸ腫瘍を移植したＮＳＧマウス（典型的には１〜２匹のマウス）をこの試験のために使用する。腫瘍を約１，５００ｍｍ３まで成長させ、５匹までの新たなＮＳＧマウスに伝播させて、十分なＰ３腫瘍を提供する。全体的な遺伝的および組織学的忠実性を確保するために、５つの無作為に採取したＰ３腫瘍の遺伝的プロフィールおよび組織学を特性付け、もとのＰ０腫瘍からのデータで検証した後、腫瘍片をその後の試験のために多数のマウスに移植する（図２７）。
【０３２６】
ＡＢＩおよびＢＲＡＦｉ／ＭＥＫｉの両方に関する薬物動態特性が確立されているので、上述したのと同様に、併用効果、潜在的毒性および可能性のある疾患モニタリングバイオマーカーを３つの独立したベムラフェニブ感受性ＰＤＸモデルにおいて測定する。標準的な単剤ベムラフェニブ、ダブラフェニブまたはトラメチニブに関する結果は上述したように既に得られているので、ドセタキセルを含む併用の評価が終了した場合、ドセタキセル併用ならびに参照併用（ダブラフェニブ＋トラメチニブ）において同定された最良効果を含めることによって併用処置に関する試験を継続する。それゆえ、化合物１２ｄａに関して、ベムラフェニブ感受性Ｐ３腫瘍の小片（〜３ｍｍ３）を、４９匹の麻酔したヌードマウス（６週齢の雄性無胸腺ヌードマウス）の側腹部の皮下に外科的に移植する。移植の２〜３週間後に腫瘍が約１００〜２００ｍｍ３に達したとき、マウスを、体重および腫瘍サイズの差を最小限に抑えつつ、７つの群（ｎ＝７）に無作為に割り付ける：ビヒクル単独による陰性対照群（第１群）；１つの単剤化合物１２ｄａ（１５ｍｇ／ｋｇ５３  、第２群）；ならびにダブラフェニブ＋トラメチニブ（参照併用、第３群）、上記で同定されたドセタキセルを含む最も有効な併用（第４群）およびベムラフェニブ、ダブラフェニブまたはトラメチニブと組み合わせた化合物１２ｄａ（第５〜７群）を使用する毎日の連続処置を含む５つの併用処置群。腫瘍を３日ごとにカリパスで測定し、式：（幅２×長さ）／２を用いて体積を計算する。腫瘍を最大９０日間または腫瘍が完全に退縮するまで観測する。薬物耐性の潜在的発現を腫瘍増殖動態によって詳細に観測する。マウスの体重、活動および外観を潜在的毒性に関して詳細に観測する。終末血液試料を血液化学分析に送り、腫瘍切片を臨床病理学分析用に処理する。加えて、各々の腫瘍から連続的な腫瘍生検を、報告されている手順に従って微細針で週１回採取する。ＭＡＰＫ、ＰＤＧＦβ−ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ中の要素およびアポトーシス経路を検討することに関する集中的ウェスタンブロット分析を実施し、獲得薬物耐性および治療効果を評価するための潜在的バイオマーカーを観測する。２つの付加的なベムラフェニブ感受性ＰＤＸ腫瘍を使用して実験を反復し、したがって化合物１２ｄａに関する試験のために、最大で４９×３＝１４７匹までのマウスを使用する。化合物１７ｙａに関する試験を完了するために、最大で１４７×２＝２９４匹までのマウスを使用する。
【０３２７】
ｄ．ベムラフェニブ、ダブラフェニブまたはトラメチニブとＡＢＩ（１２ｄａまたは１７ｙａ）の併用で処置したベムラフェニブ耐性ＰＤＸ腫瘍におけるインビボ効果を測定する。
上記の章で簡単に述べた実験手順と同様にして、３つのベムラフェニブ耐性ＰＤＸ腫瘍モデルを使用して実験を反復し、最大２９４匹までのマウスを使用してベムラフェニブ、ダブラフェニブまたはトラメチニブとＡＢＩ（化合物１２ｄａまたは１７ｙａ）の併用における効果を測定する。前の章で述べたのと同様にして、腫瘍サイズ、連続的な腫瘍生検、終末血液試料および主要器官を測定または採取し、効果および潜在的毒性を評価する。潜在的毒性は、実験期間中および病理学的分析後の体重減少を観測することによって判定する。上記で詳述したように処置効果を評価し、潜在的バイオマーカーを同定するために集中的ウェスタンブロット分析を実施する。
【０３２８】
予想される結果、潜在的危険性および選択的アプローチ
ＢＲＡＦｉまたはＭＥＫｉとＡＢＩの併用は、ベムラフェニブ感受性およびベムラフェニブ耐性の両方のＰＤＸモデルに対して有効であると予想される。そのような併用は、ドセタキセルを含む併用と同等またはより良好な効果を有すると予想されるが、ドセタキセルの使用に関連する潜在的二次薬物耐性を克服するという利点を有する。
【０３２９】
ＢＲＡＦｉまたはＭＥＫｉとチューブリン阻害剤の併用は黒色腫転移のモデルにおいて有効である。
黒色腫患者に長期的な生存を提供するうえでの主要な課題は、黒色腫転移のための有効は処置を見出すことである。皮下の性質に起因して、ＰＤＸモデルはまれにしか転移を生じない。それゆえ、上述したようにこれらの皮下ＰＤＸモデルにおいて黒色腫腫瘍に対する全身投与した薬剤併用の効果を評価することに加えて、ヌードマウスを用いて実験的肺転移モデルでの併用効果を測定する。肺転移モデルは、これが悪性黒色腫の主要な転移部位の１つであり、すべての黒色腫転移の中で最も低い５年生存率を有することから選択する。ＰＩの研究室は黒色腫肺転移を評価するための十分に確立されたプロトコルを有しており（図２８）、単剤としてのＡＢＩが黒色腫肺転移を有効に抑制できることを示した（化合物１７ｙａを一例として示す）。同様のモデルは文献で広く使用されている。加えて、Ａ３７５などの長年にわたる樹立細胞株から培養した細胞と異なり、ＰＤＸ腫瘍から直接単離した初期継代単細胞懸濁液はプラスチック製品中では絶対に増殖しない。それゆえ、それらは腫瘍の不均一性、遺伝的忠実性およびもとの患者腫瘍中の細胞に対して予想される薬剤処置への応答を保持する可能性が高い。
【０３３０】
初期継代ＰＤＸ腫瘍からの単細胞懸濁液の単離
単細胞懸濁液を標準的なプロトコルに従ってＰＤＸ腫瘍から作製する。簡単に述べると、ＮＳＧマウス（典型的には１〜２匹のマウス）を購入し、低継代の２つの（Ｐ２）ＰＤＸ腫瘍を移植した後、腫瘍を約２，０００ｍｍ３まで成長させる。ＮＳＧマウスからの外科的切除から１時間以内に、汚染を避けるために新鮮腫瘍をＤＭＥＭ培地で３回洗浄する（氷上でそれぞれ５分）。壊死組織および結合組織がないＰＤＸ腫瘍を、無菌条件下で滅菌交差ブレードを使用して小片（１×１ｍｍまたはそれ未満）に細分化する。腫瘍片をＤＭＥＭ培地中１ｍｇ／ｍＬの濃度で超純粋コラゲナーゼＩＶ型（Ｇｉｂｃｏ，１７１０４−０１９）溶液と混合し、静かに振とうしながら３７℃で１時間インキュベートする。消化後、生じた混合物をナイロンメッシュ細胞ストレーナー（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，７０μｍ細孔、３５２３４０）でろ過して、単細胞懸濁液を得る。Ａｕｔｏ  Ｔ４  Ｃｅｌｌ  Ｃｏｕｎｔｅｒで細胞数を数え、ペレット化して、尾静脈注射のためにＤＭＥＭ中に再懸濁する。トリパンブルー試験においてこの方法によって得られる細胞の生存率は、典型的には９５％を超える。
【０３３１】
ベムラフェニブ感受性またはベムラフェニブ耐性単細胞懸濁液を用いた肺転移抑制。
上述した先の試験で最良の組合せが既に順位付けられているので、最適併用を試験する。承認されているダブラフェニブ＋トラメチニブの併用は既に参照併用として含まれている。簡単に述べると、ベムラフェニブ感受性またはベムラフェニブ耐性ＰＤＸ腫瘍モデルから生成した、１００μＬのＤＭＥＭ中に懸濁した７５０００個の単細胞を、５０匹のヌードマウス（６週齢、雄性および雌性）の各々に尾静脈を介して注入し、マウスを５つの群（ｎ＝１０）に分ける：ビヒクル単独による陰性対照群（第１群）；ダブラフェニブ＋トラメチニブによる参照併用処置群（第２群）；上記で決定したＢＲＡＦｉ／ＭＥＫｉとドセタキセルの最適併用（第３群）；上記で決定したＢＲＡＦｉ／ＭＥＫｉと化合物１２ｄａまたは１７ｙａの最適併用（第４および５群）。この実験的肺転移モデルに関して高い変動が予想されるので、統計的有意性を確保するために各群のマウスの数を７匹から１０匹に増加する。腫瘍細胞注射の７〜１０日後、マウスをビヒクルまたは薬剤併用で４週間毎日経口的に（経口的に使用可能でなく、ｉ．ｖ．経路によって投与するドセタキセルを除く）処置する。処置の最後に、すべてのマウスをＣＯ２吸入とそれに続く頸椎脱臼によって犠死させる。マウスを解剖して肺を切除する。肺中の腫瘍結節の数を正確に計数し、肺の腫瘍結節の不在または数の減少に基づいて処置の効果を評価する。固定し、その後のＨ＆Ｅ染色を伴うパラフィン包埋切片用に処理した後、結節の黒色腫性および腫瘍形態学も検査する。３つのベムラフェニブ感受性および３つのベムラフェニブ耐性ＰＤＸモデルからの細胞を使用してこの実験を実施するために、最大で５０×３×２＝３００匹までのヌードマウスを使用すると予想される。
【０３３２】
予想される結果、潜在的危険性および選択的アプローチ
これらの併用は、ベムラフェニブ感受性腫瘍において、およびより小さな度合いで、ベムラフェニブ耐性腫瘍において肺転移の数を低減するのに有効であると予想される。チューブリン阻害剤（ドセタキセル、化合物１２ｄａまたは１７ｙａ）を含む併用は、特にベムラフェニブ耐性腫瘍転移に関して、ダブラフェニブ＋トラメチニブの参照併用よりも有効であると考えられる。ＰＤＸ腫瘍から単離した単細胞懸濁液が肺転移を形成することができないという起こりそうにないケースでは、選択的アプローチとして、樹立された初期継代ＢＲＡＦＶ６００Ｅヒト黒色腫株（ＹＵＧＥＮ８、ＹＵＳＡＣ２、ＹＵＫＯＬＩおよびＹＵＳＩＫ）を使用する。
【０３３３】
本明細書（付属の特許請求の範囲、要約書および図面を含む）で述べるすべての特徴および／またはそのようにして開示される任意の方法または工程のすべての段階、そのような特徴および／または段階の少なくとも一部が相互に排他的である組合せを除き、任意の組合せで上記態様のいずれかと組み合わせてもよい。本明細書で好ましい実施形態を示し、詳細に説明したが、本発明の精神から逸脱することなく様々な変更、追加、置換等を行い得ることは当業者に明白であり、それゆえこれらは以下の特許請求の範囲で定義される本発明の範囲内であるとみなされる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９−１】
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【図１９−２】
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【図２０】
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【図２１−１】
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【図２１−２】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【外国語明細書】
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