(57)【要約】【課題】細胞を大量に培養するために細胞の播種の自動化を目指して、細胞を含む液体培地から細胞を選択して播種する細胞播種装置を提供する。【解決手段】液体培地を配置する遊走手段と、液体培地から一の細胞を選択する支持手段と、前記支持手段で選択した前記一の細胞を移動するために保持する保持手段とを有し、前記遊走手段は、前記液体培地を外部から供給される筐体部と、前記筐体部の内部に配置される略平板形状の平板部と、を備え、前記平板部は、前記支持手段が貫通する支持用開口部を備え、前記支持手段は、略円筒形状であり、前記液体培地を該支持手段の内部の空洞から吸引して流出して、前記液体培地から前記一の細胞を前記平板部の上面に所望の位置に固定し、さらにその後に前記保持手段を降下し、該保持手段の内部の空洞から前記液体培地を吸引して排出することによって、前記平板部の上面に固定した前記一の細胞を保持する。【選択図】図１
2019180360.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
培養する細胞を含む液体培地から前記細胞を選択して播種する細胞播種装置であって、
前記液体培地を配置する遊走手段と、
前記遊走手段に配置した前記液体培地から一の細胞を選択する支持手段と、
前記支持手段で選択した前記一の細胞を移動するために保持する保持手段と
を有し、
前記遊走手段は、前記液体培地を外部から供給される筐体部と、前記筐体部の内部に配置される略平板形状の平板部と、を備え、
前記平板部は、前記支持手段が貫通する支持用開口部を備え、
前記支持手段は、略円筒形状であり、前記液体培地を該支持手段の内部の空洞から吸引して流出し、
前記保持手段は、略円筒形状であり、前記液体培地を該保持手段の内部の空洞から吸引して流出し、
前記遊走手段の前記平板部の下方に前記支持手段を配置し、
前記遊走手段の上方に前記保持手段を配置し、
前記液体培地を前記遊走手段に供給した後に、前記支持用開口部に前記支持手段を貫通させて該液体培地を該支持手段の内部の空洞から吸引して排出することによって、前記液体培地から前記一の細胞を前記平板部の上面の所望の位置に固定し、さらにその後に前記保持手段を降下し、該保持手段の内部の空洞から前記液体培地を吸引して排出することによって、前記平板部の上面に固定した前記一の細胞を保持する、
ことを特徴とする細胞播種装置。
【請求項２】
複数の前記支持用開口部は、所望の間隔で配置され、
複数の前記支持手段は、前記所望の間隔で配置され、
複数の前記保持手段は、前記所望の間隔で配置される、
ことを特徴とする、請求項１に記載の細胞播種装置。
【請求項３】
前記保持手段は、前記一の細胞を保持する端面に複数の孔形状の吸引孔部を備え、前記端面の中央部に略針形状の留針部を備え、
前記吸引孔部の直径は、前記一の細胞の大きさより小さく、
前記保持手段は、前記吸引孔部から前記液体培地を吸引して排出することによって、前記留針部を前記一の細胞に貫通させて、該一の細胞を保持する、
ことを特徴とする、請求項１または請求項２に記載の細胞播種装置。
【請求項４】
請求項１乃至請求項３のいずれか一つに記載の細胞播種装置と、
前記細胞播種装置で保持した細胞を播種する培養容器と
を有する、ことを特徴とする細胞培養装置。
【請求項５】
培養する細胞を含む液体培地から前記細胞を選択して播種する細胞播種方法であって、
前記液体培地を配置する遊走手段と、
前記遊走手段に配置した前記液体培地から一の細胞を選択する支持手段と、
前記支持手段で選択した前記一の細胞を移動するために保持する保持手段と
を有し、
前記遊走手段は、前記液体培地を外部から供給される筐体部と、前記筐体部の内部に配置される略平板形状の平板部と、を備え、
前記平板部は、前記支持手段が貫通する支持用開口部を備え、
前記支持手段は、略円筒形状であり、前記液体培地を該支持手段の内部の空洞から吸引して流出し、
前記保持手段は、略円筒形状であり、前記液体培地を該保持手段の内部の空洞から吸引して流出し、
前記遊走手段の前記平板部の下方に前記支持手段を配置し、
前記遊走手段の上方に前記保持手段を配置した、
細胞播種装置を用いて、
前記液体培地を前記遊走手段の前記筐体部に供給する培地供給ステップと、
前記支持用開口部に前記支持手段を貫通させて、前記培地供給ステップで供給した前記液体培地を、該支持手段の内部の空洞から吸引して排出することによって、前記液体培地から前記一の細胞を前記平板部の上面で所望の位置に固定する細胞固定ステップと、
前記保持手段を降下して、該保持手段の内部の空洞から前記液体培地を吸引して排出することによって、前記細胞固定ステップで固定した前記一の細胞を、該保持手段の端面に保持する細胞保持ステップと
を含む、ことを特徴とする細胞播種方法。
【請求項６】
前記細胞保持ステップで保持した前記一の細胞を培養容器に播種する細胞播種ステップをさらに含む、請求項５に記載の細胞播種方法を含む細胞培養方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、細胞を培養器に播種する細胞播種装置および細胞を培養する細胞培養装置に関する。
【背景技術】
【０００２】
医薬品の生産、遺伝子治療、再生医療、免疫療法などの医薬学・生化学分野において、細胞（組織、微生物、ウイルスなどを含む）を人工的な環境下で培養する方法や装置が提案されている。特許文献１では、細胞を培養する培養空間が形成された培養容器部材とこの培養容器部材の培養空間の上部に配置された第１の弾性シールとを有する培養容器と、この培養容器に培地等の溶液を供給する供給手段が設けられた継ぎ手部材とこの継ぎ手部材に接着された第２の弾性シールとを有する継ぎ手とを備え、前記継ぎ手に形成した吸引手段を用いて前記培養容器を前記継ぎ手に着脱可能としたことを特徴とする培養装置に関する技術を開示している。特許文献２では、細胞が３次元的に増殖するための足場として機能する多孔性足場材料に、細胞を播種するための細胞播種方法であって、細胞が培養液に懸濁した状態の細胞液を、側面部に複数の吐出口を設けたニードルを備えたシリンジに充填し、足場材料に全ての吐出口が埋没するように穿刺した前記ニードルから細胞液を該足場材料の内部に加圧注入して、細胞を足場材料に均一に播種することを含む、足場材料への細胞播種方法に関する技術を開示している。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】特開２００６−１４９２３７号公報
【特許文献２】特許第６１１５８４２号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
培養器などの底面に細胞組織を播種して培養する場合には、実験者や実施者が手動で位置を決めて播種を行う方法が一般的である。また、被験者（や患者）の負担を考慮した場合に必要最低限の細胞を抽出して、大量に培養することが求められている。また、人の手による作業で組織片（細胞）を培養容器の底面に配置（播種）する場合に、正しい位置に正確な量の組織片を配置（播種）できない場合があった。特許文献１および特許文献２には、大量培養のための細胞の播種方法に関する記載がない。
【０００５】
本発明は、細胞を大量に培養するために、細胞（または組織片）の播種の自動化を目指して、細胞を含む液体培地から細胞を選択して播種する細胞播種装置を提供することを目的とする。また、本発明は、前記細胞播種装置で保持した細胞を播種した培養容器を用いて細胞を大量に培養する細胞培養装置を提供することを目的としてもよい。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
上記課題を解決するために、本発明の一つの実施形態は、培養する細胞を含む液体培地から前記細胞を選択して播種する細胞播種装置であって、前記液体培地を配置する遊走手段と、前記遊走手段に配置した前記液体培地から一の細胞を選択する支持手段と、前記支持手段で選択した前記一の細胞を移動するために保持する保持手段とを有し、前記遊走手段は、前記液体培地を外部から供給される筐体部と、前記筐体部の内部に配置される略平板形状の平板部と、を備え、前記平板部は、前記支持手段が貫通する支持用開口部を備え、前記支持手段は、略円筒形状であり、前記液体培地を該支持手段の内部の空洞から吸引して流出し、前記保持手段は、略円筒形状であり、前記液体培地を該保持手段の内部の空洞から吸引して流出し、前記遊走手段の前記平板部の下方に前記支持手段を配置し、前記遊走手段の上方に前記保持手段を配置し、前記液体培地を前記遊走手段に供給した後に、前記支持用開口部に前記支持手段を貫通させて該液体培地を該支持手段の内部の空洞から吸引して排出することによって、前記液体培地から前記一の細胞を前記平板部の上面の所望の位置に固定し、さらにその後に前記保持手段を降下し、該保持手段の内部の空洞から前記液体培地を吸引して排出することによって、前記平板部の上面に固定した前記一の細胞を保持する、ことを特徴とする細胞播種装置を提供する。
【０００７】
本発明の他の実施形態は、上記の細胞播種装置であって、複数の前記支持用開口部は、所望の間隔で配置され、複数の前記支持手段は、前記所望の間隔で配置され、複数の前記保持手段は、前記所望の間隔で配置される、ことを特徴とする細胞播種装置であってもよい。また、本発明の他の実施形態は、上記のいずれかの細胞播種装置であって、前記保持手段は、前記一の細胞を保持する端面に複数の孔形状の吸引孔部を備え、前記端面の中央部に略針形状の留針部を備え、前記吸引孔部の直径は、前記一の細胞の大きさより小さく、前記保持手段は、前記吸引孔部から前記液体培地を吸引して排出することによって、前記留針部を前記一の細胞に貫通させて、該一の細胞を保持する、ことを特徴とする細胞播種装置であってもよい。また、本発明の他の実施形態は、上記のいずれかの細胞播種装置と、前記細胞播種装置で保持した細胞を播種する培養容器とを有する、ことを特徴とする細胞培養装置であってもよい。
【０００８】
本発明の他の実施形態は、培養する細胞を含む液体培地から前記細胞を選択して播種する細胞播種方法であって、前記液体培地を配置する遊走手段と、前記遊走手段に配置した前記液体培地から一の細胞を選択する支持手段と、前記支持手段で選択した前記一の細胞を移動するために保持する保持手段とを有し、前記遊走手段は、前記液体培地を外部から供給される筐体部と、前記筐体部の内部に配置される略平板形状の平板部と、を備え、前記平板部は、前記支持手段が貫通する支持用開口部を備え、前記支持手段は、略円筒形状であり、前記液体培地を該支持手段の内部の空洞から吸引して流出し、前記保持手段は、略円筒形状であり、前記液体培地を該保持手段の内部の空洞から吸引して流出し、前記遊走手段の前記平板部の下方に前記支持手段を配置し、前記遊走手段の上方に前記保持手段を配置した、細胞播種装置を用いて、前記液体培地を前記遊走手段の前記筐体部に供給する培地供給ステップと、前記支持用開口部に前記支持手段を貫通させて、前記培地供給ステップで供給した前記液体培地を、該支持手段の内部の空洞から吸引して排出することによって、前記液体培地から前記一の細胞を前記平板部の上面で所望の位置に固定する細胞固定ステップと、前記保持手段を降下して、該保持手段の内部の空洞から前記液体培地を吸引して排出することによって、前記細胞固定ステップで固定した前記一の細胞を、該保持手段の端面に保持する細胞保持ステップとを含む、ことを特徴とする細胞播種方法であってもよい。また、本発明の他の実施形態は、上記細胞保持ステップで保持した前記一の細胞を培養容器に播種する細胞播種ステップをさらに含む、細胞播種方法を含む細胞培養方法であってもよい。
【発明の効果】
【０００９】
本発明に係る細胞播種装置によれば、細胞を大量に培養するために細胞（または組織片）の播種の自動化を目指して、細胞を含む液体培地から細胞を選択して播種することができる。また、本発明に係る細胞播種装置によれば、細胞を含む液体培地から細胞を選択して播種することで、細胞を大量に培養するために細胞（組織片）の播種を自動化することができる。また、本発明に係る細胞培養装置によれば、前記細胞播種装置で保持した細胞を播種した培養容器を用いて細胞を大量に培養することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】本発明の実施形態に係る細胞播種装置の一例を説明する説明図である。
【図２】本発明の実施形態に係る遊走手段の一例を説明する説明図である。
【図３】本発明の実施形態に係る保持手段の一例を説明する拡大説明図である。
【図４】本発明の実施形態に係る細胞播種装置の動作の一例を説明する説明図である。
【図５】本発明の実施形態に係る播種した細胞の一例を説明する説明図である。
【図６】本発明の実施形態に係る細胞播種方法の一例を説明する説明図である。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
実施形態に係る細胞播種装置および細胞培養装置の例を用いて、本発明を説明する。なお、本発明は、以後に説明する細胞播種装置および細胞培養装置以外でも、培養する細胞を含む液体培地から細胞を選択して播種するもの（装置、部品、システムなど）であれば、いずれのものにも用いることができる。なお、細胞播種装置および細胞培養装置の色や柄は、特に限定されない。
【００１２】
下記に示す順序で、本発明を説明する。
１．細胞播種装置の構成
２．細胞培養装置の構成
３．細胞播種方法および細胞培養方法
【００１３】
（１．細胞播種装置の構成）
図１乃至図４を用いて、本発明の実施形態に係る細胞播種装置の構成を説明する。ここで、図１は、本発明の実施形態に係る細胞播種装置１００の一例を説明する説明図である。図２は、本発明の実施形態に係る遊走手段１１の一例を説明する説明図である。図３は、本発明の実施形態に係る保持手段１３の一例を説明する拡大説明図である。図４（ａ）は、本発明の実施形態に係る細胞播種装置１００（遊走手段１１）に液体培地ＬＣを供給した動作の一例を説明する説明図である。図４（ｂ）は、本発明の実施形態に係る細胞播種装置１００（支持手段１２）で液体培地から細胞ＣＳを平板部１１Ｂｐの上面の所望の位置に固定した動作の一例を説明する説明図である。図４（ｃ）は、本発明の実施形態に係る細胞播種装置１００（支持手段１２）で細胞ＣＳを支持した動作の一例を説明する説明図である。図４（ｄ）は、本発明の実施形態に係る細胞播種装置１００（支持手段１２）で支持した細胞ＣＳを上昇させる動作の一例を説明する説明図である。図４（ｅ）は、本発明の実施形態に係る細胞播種装置１００（保持手段１３）で細胞ＣＳを保持した動作の一例を説明する説明図である。なお、図１等に示す細胞播種装置の構成等は一例であり、本発明は図１等に示す細胞播種装置等に限定されるものではない。
【００１４】
図１乃至図４に示すように、本発明に係る細胞播種装置１００は、培養する細胞を含む液体培地から細胞を選択して播種するものである。細胞播種装置１００は、本実施形態では、図１に示すように、細胞および／または組織片を含む液体培地を配置する遊走手段１１と、遊走手段１１に配置した液体培地から細胞を選択する支持手段１２と、支持手段１２で選択した細胞を移動するために保持する保持手段１３とを有する。細胞播種装置１００は、図１に示すように、遊走手段１１の内部に配置した略平板形状の平板部１１Ｂｐ（図２）の下方に支持手段１２を配置し、遊走手段１１の上方に保持手段１３を配置している。
【００１５】
遊走手段１１は、図１に示すように、培養する細胞（組織片など）を含む液体培地ＬＣを配置する手段である。遊走手段１１は、図２に示すように、液体培地を外部から供給される筐体部１１Ａと、筐体部１１Ａの内部に配置される略平板形状の平板部１１Ｂｐとを備える。平板部１１Ｂｐは、支持手段１２が貫通する支持用開口部１１Ｂｏを備える。図４（ａ）に示すように、遊走手段１１は、培養する細胞ＣＳを含む液体培地ＬＣを供給され、筐体部１１Ａで保留する。ここで、遊走手段１１（筐体部１１Ａ）に液体培地を供給する方法は、特に限定されるものではなく、公知の技術を用いることができる。なお、本発明において、筐体部１１Ａは特に限定されるものではなく、公知の技術を用いることができる。また、筐体部１１Ａの形状は、設計、実験、計算などで予め定められる形状とすることができる。
【００１６】
平板部１１Ｂｐは、筐体部１１Ａの内部に配置される略平板形状のものである。平板部１１Ｂｐの支持用開口部１１Ｂｏは、所望の間隔で複数配置される。ここで、所望の間隔とは、支持手段１２および保持手段１３に対応する間隔で、設計、実験、計算などで予め定められる間隔とすることができる。所望の間隔は、たとえば複数の細胞を播種する場合に、播種する細胞の配置距離に対応する間隔とすることができる。また、支持用開口部１１Ｂｏの大きさは、培養する細胞（組織片）の大きさおよび支持手段１２に対応する大きさで、設計、実験、計算などで予め定められる大きさとすることができる。支持用開口部１１Ｂｏの大きさは、培養する前の細胞の大きさに対応する大きさとすることができる。
【００１７】
支持手段１２は、図１に示すように、略円筒形状であり、培養する細胞（組織片など）を支持する手段である。支持手段１２は、本実施形態では、所望の間隔で配置される複数の略円筒形状の支持する手段を備える。ここで、所望の間隔とは、設計、実験、計算などで予め定められる間隔とすることができる。所望の間隔は、たとえば複数の細胞を播種する場合に、播種する細胞の配置距離に対応する間隔とすることができる。支持手段１２は、図４（ａ）に示すように、液体培地ＬＣを支持手段１２の略円筒形状の内部の空洞から吸引して流出する。これにより、支持手段１２は、図４（ｂ）に示すように、液体培地ＬＣから細胞ＣＳを平板部１１Ｂｐの上面の所望の位置に固定することができる。すなわち、支持手段１２（細胞播種装置１００）は、図４（ｂ）に示すように、液体培地ＬＣから複数の細胞ＣＳをそれぞれ選択し、所望の間隔で（平板部１１Ｂｐの上面の所望の位置に）それぞれ固定することができる。また、支持手段１２は、図４（ｃ）に示すように、支持（固定）した細胞ＣＳを上方に移動（図１のＭ２）することができる。なお、支持手段１２は、設計、実験、計算などで予め定められる形状とすることができる。また、支持手段１２の略円筒形状の手段の数は、設計、実験、計算などで予め定められる数とすることができる。また、支持手段１２の移動方法は公知の技術を利用することができる。また、支持手段１２は、後述する細胞を保持する端面に複数の孔形状の吸引孔部１３Ｂと、端面の中央部に略針形状の留針部１３Ａとを備えてもよい。これにより、後述する保持手段１３と同様に、支持手段１２（細胞播種装置１００）は、留針部１３Ａに細胞を貫通させて細胞を固定することができるので、細胞を吸い込んでしまうことを防ぐことができる。また、支持手段１２（細胞播種装置１００）は、留針部１３Ａに細胞を貫通させて細胞を支持（固定）することができるので、留針部がない場合と比較して、大きい細胞を安定的に支持することができる。
【００１８】
保持手段１３は、図１に示すように、略円筒形状であり、培養する細胞（組織片など）を保持する手段である。保持手段１３は、本実施形態では、所望の間隔で配置される複数の略円筒形状の保持する手段を備える。ここで、所望の間隔とは、設計、実験、計算などで予め定められる間隔とすることができる。所望の間隔は、たとえば複数の細胞を播種する場合に、播種する細胞の配置距離に対応する間隔とすることができる。保持手段１３は、図４（ｄ）に示すように、下方に移動（図１のＭ３）して、液体培地を保持手段の略円筒形状の内部の空洞から吸引して流出する。これにより、保持手段１３は、図４（ｅ）に示すように、支持手段１２が支持（固定）した細胞ＣＳを保持することができる。すなわち、保持手段１３（細胞播種装置１００）は、図４（ｅ）に示すように、支持手段１２がそれぞれ選択（固定）した複数の細胞ＣＳを、所望の間隔でそれぞれ保持することができる。ここで、保持手段１３の吸引力は、支持手段１２の吸引力より強くすることによって、支持手段１２から細胞を受け取ることができる。なお、保持手段１３は、設計、実験、計算などで予め定められる形状とすることができる。また、保持手段１３の略円筒形状の手段の数は、設計、実験、計算などで予め定められる数とすることができる。また、保持手段１３の移動方法は公知の技術を利用することができる。
【００１９】
図３に示すように、保持手段１３は、細胞を保持する端面に複数の孔形状の吸引孔部１３Ｂを備え、端面の中央部に略針形状の留針部１３Ａを備える。ここで、吸引孔部の直径は、培養する細胞（組織片）の大きさより小さい。また、吸引孔部の数は、３個以上であってもよい。これにより、保持手段１３は、本実施形態では、吸引孔部１３Ｂから液体培地を吸引して排出することによって、留針部１３Ａを一の細胞に貫通させて、細胞を保持することができる。また、細胞播種装置１００は、留針部１３Ａに細胞を貫通させて細胞を固定することができるので、細胞を吸い込んでしまうことを防ぐことができる。また、細胞播種装置１００は、留針部１３Ａに細胞を貫通させて細胞を固定することができるので、留針部がない場合と比較して、大きい細胞を安定的に保持することができる。なお、留針部１３Ａおよび吸引孔部１３Ｂの形状は、設計、実験、計算などで予め定められる形状とすることができる。
【００２０】
以上のとおり、本発明に係る細胞播種装置１００によれば、細胞を大量に培養するために細胞（または組織片）の播種の自動化を目指して、細胞を含む液体培地から細胞を選択して播種（保持、選択など）することができる。また、本発明に係る細胞播種装置によれば、支持手段を用いて細胞を含む液体培地から複数の細胞を所望の間隔でそれぞれ選択することができ、保持手段を用いて支持手段から複数の細胞を所望の間隔でそれぞれ保持することができ、所望の間隔で複数保持した複数の細胞を、所定の位置（培養器など）に所望の間隔でそれぞれ播種することができる。これにより、本発明に係る細胞播種装置によれば、細胞を大量に培養するために、複数の細胞を所望の間隔で播種することを自動化することができる。
【００２１】
（２．細胞培養装置の構成）
図５を用いて、本発明の実施形態に係る細胞培養装置の構成を説明する。ここで、図５（ａ）は、ディッシュ（培養容器）ＤＳに培養する細胞ＣＳを播種（配置）した一例を説明する説明図である。図５（ｂ）は、ディッシュ（培養容器）ＤＳに播種した細胞ＣＳの一例を説明する説明図である。なお、図５（ａ）および図５（ｂ）に示す細胞等は一例であり、本発明は図５（ａ）等に示す細胞等に限定されるものではない。
【００２２】
図５（ａ）に示すように、本発明の実施形態に係る細胞培養装置は、上記の（１．細胞播種装置の構成）に記載の細胞播種装置と、細胞播種装置で保持した細胞を播種する培養容器ＤＳとを有する。図５（ｂ）に示すように、所定の環境下（温度、ＣＯ２濃度、放置時間など）で、細胞ＣＳを液体培地ＬＣで覆って培養する。ここで、本発明に係る細胞培養装置は、保持手段１３で保持した複数の細胞を所望の間隔でそれぞれ播種（配置）することができる。
【００２３】
これにより、本発明に係る細胞培養装置および細胞播種装置によれば、細胞を含む液体培地から複数の細胞をそれぞれ選択して播種することで、細胞を大量に培養するために細胞（組織片）の播種作業を自動化することができる。また、本発明に係る細胞培養装置および細胞播種装置によれば、細胞播種装置（保持手段）で保持した複数の細胞を所望の間隔で播種した培養容器を用いて細胞を大量に培養することができる。また、本発明に係る細胞培養装置および細胞播種装置によれば、培養する細胞（組織片）を等間隔で置くことができるので、より多くの細胞を効率的に配列させることができ、より多くの細胞を培養することができる。また、本発明に係る細胞培養装置および細胞播種装置によれば、培養する細胞（組織片）を等間隔に整列した状態で置くことができるので、顕微鏡などで培養状態を確認する際に、不必要、不適切と思われる細胞（組織片）を容易に把握することができる。なお、培養容器の大きさは、培養する細胞の数に対応する大きさとすることができ、特に限定されない。
【００２４】
これにより、本発明に係る細胞培養装置および細胞播種装置によれば、手作業で（ピンセットなどで挟んで）播種する場合と比較して、細胞へのダメージを軽減することができる。本発明に係る細胞培養装置および細胞播種装置によれば、手作業で（ピンセットなどで挟んで）播種する場合と比較して、培養容器底面を傷つけずに組織を播種することができる。
【００２５】
（３．細胞播種方法および細胞培養方法）
図６を用いて、本発明に係る細胞播種方法および細胞培養方法を説明する。ここで、図６は、本発明の実施形態に係る細胞播種方法の一例を説明する説明図である。なお、図６に示す細胞播種方法は一例であり、本発明は図６に示す細胞播種方法に限定されるものではない。
【００２６】
図６に示すように、本発明の実施形態に係る細胞播種方法は、ステップＳ６０１において、先ず、細胞を播種する動作を開始する。細胞播種方法は、例えば装置の使用者の都合のよいタイミングで、細胞を播種する動作を開始することができる。その後、本発明に係る細胞播種方法は、ステップＳ６０２に進む。
【００２７】
次に、本発明に係る細胞播種方法は、ステップＳ６０２において、例えば装置の使用者によって、培養する細胞を含む液体培地を遊走手段の筐体部に供給する（培地供給ステップ）（たとえば図４（ａ））。その後、本発明に係る細胞播種方法は、ステップＳ６０３に進む。
【００２８】
次いで、本発明に係る細胞播種方法は、ステップＳ６０３において、支持用開口部１１Ｂｏ（図２）に支持手段１２を貫通させて、培地供給ステップ（ステップＳ６０２）で供給した液体培地を、支持手段１２の内部の空洞から吸引して排出することによって、液体培地から細胞を平板部１１Ｂｐの上面で所望の位置に固定する（細胞固定ステップ）（たとえば図４（ｂ））。その後、本発明に係る細胞播種方法は、ステップＳ６０４に進む。
【００２９】
ステップＳ６０４において、本発明に係る細胞播種方法は、保持手段１３（図１）を降下して、保持手段１３の内部の空洞から液体培地を吸引して排出することによって、細胞固定ステップ（ステップＳ６０３）で固定した細胞を、保持手段１３の端面に保持する（細胞保持ステップ）（たとえば図４（ｃ）および（ｄ））。その後、本発明に係る細胞播種方法は、ステップＳ６０５に進む。ここで、本発明に係る細胞播種方法は、支持手段１２を上昇させることによって固定（支持）している細胞を保持手段１３に近づけてもよい。また、保持手段１３の端面に保持するときに、支持手段１２の吸引を停止してもよい。
【００３０】
ステップＳ６０５において、細胞培養方法として、ステップＳ６０４（細胞保持ステップ）で保持した細胞を培養容器に播種する（細胞播種ステップ）。その後、本発明に係る細胞播種方法は、ステップＳ６０６に進む。ここで、予め充填しておいた液体培地に播種してもよいし、播種した後に液体培地を添加してもよい。なお、等間隔で播種された細胞には細胞の遊走を促進させるための培地が必要であるが、大量の培地を加えると細胞が浮力により浮くリスクがある（例えば、組織が脂肪の場合や加えた培地の量が多い）。そこで細胞を覆う程度の必要最小量（例えば１００μＬから２００μＬ程度）の培地を細胞の上から添加することで遊走を促進させ且つ細胞が浮くリスクを低減することができる。その後、例えば数日おきに培地の交換を行い細胞の遊走・成長を促し、細胞の増殖が十分に確認されたら継代を行い、さらに細胞数を増やしていくことができる。
【００３１】
ステップＳ６０６において、本発明に係る細胞播種方法は、細胞を播種する動作を繰り返すか否かを判断する。これにより、本発明に係る細胞播種方法は、所望の個数の細胞を播種することができる。その後、細胞を播種する動作を繰り返すと判断した場合には、本発明に係る細胞播種方法は、ステップＳ６０２に戻る。細胞を播種する動作を終了すると判断した場合には、本発明に係る細胞播種方法は、図中の「ＥＮＤ」に進み、動作を終了する。
【００３２】
以上のとおり、本発明に係る細胞播種方法および細胞培養方法は、実施形態に係る細胞播種装置１００（図１乃至図４）および細胞培養装置（図５）と同様の効果を得ることができる。また、本発明に係る細胞播種方法および細胞培養方法は、手作業による実行者の技術の差による組織の播種量、播種効率のばらつきを低減し、ピンセットや器具で挟んで移動させることで生じる組織・細胞へのダメージを低減し、ピンセットや器具を使用する場合に接着底面に傷がつくことを防止することができる。また、本発明に係る細胞播種方法および細胞培養方法は、差圧による組織片の固定により人的要因による組織や細胞へのダメージの軽減し、ディッシュ底面上に差圧吸引の開放により播種するので接着底面に傷をつけてしまうことを防止することができる。また、本発明に係る細胞播種方法および細胞培養方法は、培地の添加を機械的に制御することで組織片が接着底面から剥がれるたり浮いたりするのを防ぐことができる。
【符号の説明】
【００３３】
１００  ：  細胞播種装置
１１  ：  遊走手段
１１Ａ：  筐体部
１１Ｂｐ：平板部
１１Ｂｏ：支持用開口部
１２  ：  支持手段
１３  ：  保持手段
１３Ａ：  留針部
１３Ｂ：  吸引孔部
ＣＳ  ：  細胞（細胞組織）
ＤＳ  ：  ディッシュ（培養容器）
ＬＣ  ：  液体培地
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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