(57)【要約】      （修正有）【課題】核酸を有効成分として含有し、有効成分の安定性が改善された新規な医薬組成物の提供。【解決手段】核酸分子及び緩衝液を含有し、下記（ａ）及び（ｂ）の特徴を有する組成物。（ａ）常温で溶液の形態、（ｂ）２５℃、相対湿度６０％で４週間保存後の該核酸分子の含量が保存開始時の含量に対して８０％以上である。該核酸分子は、標的遺伝子の発現もしくは標的タンパク質の機能を制御する配列を含む核酸分子。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
核酸分子及び緩衝液を含有する組成物であって、以下の特徴：
（ａ）常温で溶液の形態である；および
（ｂ）２５℃、相対湿度６０％で４週間保存後の該核酸分子の含量が、保存開始時の含量に対して８０％以上である；
を有する組成物。
【請求項２】
４０℃、相対湿度７５％で４週間保存後の該核酸分子の含量が、保存開始時の含量に対して８０％以上である、請求項１記載の組成物。
【請求項３】
６０℃で４週間保存後の該核酸分子の含量が、保存開始時の含量に対して６０％以上である、請求項１または２記載の組成物。
【請求項４】
緩衝液が、組成物のｐＨを４.０以上９.０以下とする緩衝液である、請求項１から３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５】
緩衝液が、組成物のｐＨを５.５以上７.５以下とする緩衝液である、請求項１から３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６】
緩衝液が、組成物のｐＨを６.０以上７.０以下とする緩衝液である、請求項１から３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７】
緩衝液が、リン酸水素ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム、リン酸水素二ナトリウム、塩化ナトリウム、塩酸アルギニン、クエン酸ナトリウム、クエン酸三ナトリウム二水和物、Ｌ−グルタミン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、乳酸ナトリウム、リン酸１カリウム、水酸化ナトリウム、メグルミン、グリシン、クエン酸、及び酢酸から選択される１又は２以上の緩衝剤を含有する緩衝液である、請求項１から６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項８】
緩衝液が、クエン酸及び／又はリン酸を含有する緩衝液である、請求項１から７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項９】
前記核酸分子が一本鎖核酸分子または二本鎖核酸分子である、請求項１から８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１０】
前記核酸分子が、ＤＮＡ分子、ＲＮＡ分子、またはＤＮＡとＲＮＡのキメラ核酸分子である、請求項１から９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１１】
前記核酸分子のヌクレオチド数が、１０〜３００ヌクレオチドである、請求項１から１０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１２】
前記核酸分子が、標的遺伝子の発現もしくは標的タンパク質の機能を制御する配列を含む核酸分子である、請求項１から１１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１３】
標的遺伝子の発現を制御する配列を含む核酸分子を含有する、請求項１から１１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１４】
前記核酸分子が、アンチセンス核酸、ｓｉＲＮＡもしくはｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、リボザイム、デコイ核酸またはアプタマーである、請求項１から１３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１５】
医薬組成物である、請求項１から１４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１６】
請求項１から１５のいずれか一項に記載の組成物の製造方法であって、前記核酸分子を、該組成物のｐＨを６.０以上７.０以下とする緩衝液に溶解し、常温で保存することを含む、方法。
【請求項１７】
組成物中の核酸分子の安定化方法であって、該核酸分子を、該組成物のｐＨを６.０以上７.０以下とする緩衝液に溶解し、常温で保存することを含む、方法。
【請求項１８】
緩衝液が、クエン酸及び／又はリン酸を含有する緩衝液である、請求項１６または請求項１７記載の方法。
【請求項１９】
組成物が医薬組成物である、請求項１６から１８のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、生物学的な活性を有する核酸分子、例えば、標的遺伝子の発現もしくは標的タンパク質の機能を制御する核酸分子を含有する組成物であって、該核酸分子の安定性が改善された新規な組成物、特に医薬組成物、及びその製造方法、液状組成物中での核酸分子の安定化方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
生物学的な活性を有する短鎖核酸分子として、アンチセンス核酸、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉｃｒｏＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、デコイ核酸、リボザイム、アプタマー等が知られており、これらを利用した医薬品開発が進められている(例えば、特許文献１−３参照)。
これらの核酸は、溶液中で分解されやすく不安定であることから、常温での取扱いは非常に困難であった。そのため通常は、凍結乾燥や、トリスエデト酸（ＴＥ）緩衝液に５０％のエタノールを加えて、−２０℃で凍らさないで保存する方法が用いられていた。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】特許第２７０８９６０号公報
【特許文献２】特許第３６２６５０３号公報
【特許文献３】米国特許第７，５１１，１３１号明細書
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
このような状況で、有効成分である核酸を常温で安定に存在させ得る、取扱いに優れた安定な核酸製剤の開発が望まれていた。
本発明は、該核酸を有効成分として含有する医薬組成物であって、該有効成分の安定性が改善された新規な医薬組成物、及びその製造方法を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意検討を行った結果、核酸分子溶液のｐＨを特定範囲に調整し得る緩衝液を用いることにより、意外にも該核酸の安定性が顕著に改善されることを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００６】
すなわち、本発明は、次の通りである。
［１］核酸分子及び緩衝液を含有する組成物であって、以下の特徴：
（ａ）常温で溶液の形態である；および
（ｂ）２５℃、相対湿度６０％で４週間保存後の該核酸分子の含量が、保存開始時の含量に対して８０％以上である；
を有する組成物。
［２］４０℃、相対湿度７５％で４週間保存後の該核酸分子の含量が、保存開始時の含量に対して８０％以上である、［１］記載の組成物。
［３］６０℃で４週間保存後の該核酸分子の含量が、保存開始時の含量に対して６０％以上である、［１］または［２］記載の組成物。
［４］緩衝液が、組成物のｐＨを４.０以上９.０以下とする緩衝液である、［１］から［３］のいずれかに記載の組成物。
［５］緩衝液が、組成物のｐＨを５.５以上７.５以下とする緩衝液である、［１］から［３］のいずれかに記載の組成物。
［６］緩衝液が、組成物のｐＨを６.０以上７.０以下とする緩衝液である、［１］から［３］のいずれかに記載の組成物。
［７］緩衝液が、リン酸水素ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム、リン酸水素二ナトリウム、塩化ナトリウム、塩酸アルギニン、クエン酸ナトリウム、クエン酸三ナトリウム二水和物、Ｌ−グルタミン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、乳酸ナトリウム、リン酸１カリウム、水酸化ナトリウム、メグルミン、グリシン、クエン酸、及び酢酸から選択される１又は２以上の緩衝剤を含有する緩衝液である、[１]から[６]のいずれかに記載の組成物。
［８］緩衝液が、クエン酸及び／又はリン酸を含有する緩衝液である、[１]から[７]のいずれかに記載の組成物。
［９］前記核酸分子が一本鎖核酸分子または二本鎖核酸分子である、［１］から［８］のいずれかに記載の組成物。
［１０］前記核酸分子が、ＤＮＡ分子、ＲＮＡ分子、またはＤＮＡとＲＮＡのキメラ核酸分子である、［１］から［９］のいずれかに記載の組成物。
［１１］前記核酸分子のヌクレオチド数が、１０〜３００ヌクレオチドである、［１］から［１０］のいずれかに記載の組成物。
［１２］前記核酸分子が、標的遺伝子の発現もしくは標的タンパク質の機能を制御する配列を含む核酸分子である、［１］から［１１］のいずれかに記載の組成物。
［１３］標的遺伝子の発現を制御する配列を含む核酸分子を含有する、［１］から［１１］のいずれかに記載の組成物。
［１４］前記核酸分子が、アンチセンス核酸、ｓｉＲＮＡもしくはｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、リボザイム、デコイ核酸またはアプタマーである、［１］から［１３］のいずれかに記載の組成物。
［１５］医薬組成物である、［１］から［１４］のいずれかに記載の組成物。
［１６］［１］から［１５］のいずれかに記載の組成物の製造方法であって、前記核酸分子を、該組成物のｐＨを６.０以上７.０以下とする緩衝液に溶解し、常温で保存することを含む、方法。
［１７］組成物中の核酸分子の安定化方法であって、該核酸分子を、該組成物のｐＨを６.０以上７.０以下とする緩衝液に溶解し、常温で保存することを含む、方法。
［１８］緩衝液が、クエン酸及び／又はリン酸を含有する緩衝液である、［１６］または[１７]記載の方法。
［１９］組成物が医薬組成物である、［１６］から［１８］のいずれかに記載の方法。
【発明の効果】
【０００７】
本発明によれば、有効成分である核酸分子の安定性が改善された、取扱いに優れた新規な組成物、特に医薬組成物を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１】各ｐＨの緩衝液を用いて調製したＰＨ−０００９溶液について、２５℃の安定性試験を行った結果を示す図である。
【図２】各ｐＨの緩衝液を用いて調製したＰＨ−０００９溶液について、４０℃の安定性試験を行った結果を示す図である。
【図３】各ｐＨの緩衝液を用いて調製したＰＨ−０００９溶液について、６０℃の安定性試験を行った結果を示す図である。
【図４】各濃度のクエン酸緩衝液を用いて調製したＰＨ−０００９溶液について、４０℃の安定性試験を行った結果を示す図である。
【図５】各濃度のクエン酸緩衝液を用いて調製したＰＨ−０００９溶液について、６０℃の安定性試験を行った結果を示す図である。
【図６】１０ｍｇ／ｍＬのＰＨ−０００９溶液について、安定性試験を行った結果を示す図である。
【図７】０．０５Ｍクエン酸緩衝液を用いて調製したＮＫ−７００６溶液について、安定性試験を行った結果を示す図である。
【図８】０．０５Ｍクエン酸緩衝液を用いて調製したＮＫ−７００７溶液について、安定性試験を行った結果を示す図である。
【図９】０．０５Ｍクエン酸緩衝液を用いて調製したＰＫ−７００６溶液について、安定性試験を行った結果を示す図である。
【図１０】０．０５Ｍクエン酸緩衝液を用いて調製したＰＫ−７０１５溶液について、安定性試験を行った結果を示す図である。
【図１１】０．０５Ｍクエン酸緩衝液を用いて調製したＰＨ−７０６９溶液について、安定性試験を行った結果を示す図である。
【図１２】０．０５Ｍクエン酸緩衝液を用いて調製したＫｙｎａｍｒｏ−７００１溶液について、安定性試験を行った結果を示す図である。
【図１３】０．０５Ｍクエン酸緩衝液を用いて調製したＰＨ−７０８１溶液について、安定性試験を行った結果を示す図である。
【図１４】０．０５Ｍクエン酸緩衝液を用いて調製したＮＩ−７００１溶液について、安定性試験を行った結果を示す図である。
【図１５】０．０５Ｍクエン酸緩衝液を用いて調製したＮＭ−７００１溶液について、安定性試験を行った結果を示す図である。
【図１６】０．０５Ｍクエン酸緩衝液を用いて調製したＭａｃｕｇｅｎ−７００１溶液について、安定性試験を行った結果を示す図である。
【図１７】各pHの０．０５Ｍクエン酸緩衝液、０．０５Ｍリン酸緩衝液及び０．０５Ｍクエン酸リン酸（５：５）緩衝液を用いて調製したＰＫ−７００６溶液について、６０℃の安定性試験を行った結果を示す図である。
【図１８】各pHの０．０５Ｍクエン酸緩衝液、０．０５Ｍリン酸緩衝液及び０．０５Ｍクエン酸リン酸（５：５）緩衝液を用いて調製したＮＫ−７００６溶液について、６０℃の安定性試験を行った結果を示す図である。
【図１９】各pHの０．０５Ｍクエン酸緩衝液、０．０５Ｍリン酸緩衝液及び０．０５Ｍクエン酸リン酸（５：５）緩衝液を用いて調製したＰＨ−７０６９溶液について、６０℃の安定性試験を行った結果を示す図である。
【図２０】各pHの０．０５Ｍクエン酸緩衝液、０．０５Ｍリン酸緩衝液及び０．０５Ｍクエン酸リン酸（５：５）緩衝液を用いて調製したＮＩ−７００１溶液について、６０℃の安定性試験を行った結果を示す図である。
【図２１】各pHの０．０５Ｍクエン酸緩衝液、０．０５Ｍリン酸緩衝液及び０．０５Ｍクエン酸リン酸（５：５）緩衝液を用いて調製したＮＭ−７００１溶液について、６０℃の安定性試験を行った結果を示す図である。
【図２２】各pHの０．０５Ｍクエン酸緩衝液、０．０５Ｍリン酸緩衝液及び０．０５Ｍクエン酸リン酸（５：５）緩衝液を用いて調製したＫｙｎａｍｒｏ−７００１溶液について、６０℃の安定性試験を行った結果を示す図である。
【図２３】各pHの０．０５Ｍクエン酸緩衝液、０．０５Ｍリン酸緩衝液及び０．０５Ｍクエン酸リン酸（５：５）緩衝液を用いて調製したＭａｃｕｇｅｎ−７００１溶液について、６０℃の安定性試験を行った結果を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
本発明は、生物学的な活性を有する核酸分子を、常温で溶液の形態で安定に保存し得る、該核酸分子含有組成物（以下、「本発明の組成物」ともいう）を提供する。ここで「常温」とは１５〜３０℃の温度範囲を意味し、「安定に保存」とは、保存開始時（組成物の調製時）の核酸分子の８０％以上が、（１）４週間以上、好ましくは（２）１２週（約３ヶ月）以上、より好ましくは（３）２００週（約３．７年）以上、分解されずに保存されることを意味する。かかる保存安定性は、それぞれ以下の安定性試験の結果により確認又は予測することができる。
（１）２５℃、相対湿度６０％の条件下で４週間保存後の組成物中の核酸分子の含量が、保存開始時の含量に対して８０％以上である。
（２）４０℃、相対湿度７５％の条件下で４週間保存後の組成物中の核酸分子の含量が、保存開始時の含量に対して８０％以上である。
（３）６０℃で４週間保存後の組成物中の核酸分子の含量が保存開始時の含量に対して６０％以上、好ましくは７０％以上、より好ましくは８０％以上である。
ここで、組成物中の核酸分子の含量は、被検試料と同量の核酸分子を注射用水に溶解した溶液（100%）、該溶液と注射用水とをそれぞれ9:1、8:2、7:3及び6:4の割合で混合した溶液（それぞれ90%。80%、70%及び60%）を検量線試料とし、各検量線試料10 μLをHPLCにかけてピーク面積を測定し、横軸（X）に理論含量（%）、縦軸（Y）にピーク面積をとり、各検量線試料の測定値をプロットして、最小二乗法により回帰直線（Y＝aX＋b）（検量線）を求め、同一条件下でのHPLCにて測定された被検試料のピーク面積を該検量線に当てはめて、理論含量（%）を求めることにより決定される。上記HPLCの測定条件は以下のとおりである。
検出器：紫外吸光光度計（測定波長：254 nm）
カラム：X-Bridge OST C18（2.5μm，4.6×50mm）
カラム温度：40℃
移動相A：50mM TEAA（pH7.0）、 0.5% Acetonitrile
移動相B：100% Acetonitrile
移動相の送液：移動相A及び移動相Bの混合比を次のように変えて濃度勾配を制御する。
【００１０】
【表１】
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【００１１】
好ましくは、本発明の組成物は、６０℃で４週間保存後の組成物中の核酸分子の含量が保存開始時の含量に対して６０％以上、好ましくは７０％以上、より好ましくは８０％以上、さらに好ましくは８５％以上、特に好ましくは９０％以上である。
【００１２】
１.核酸分子
本発明の組成物に含有される核酸分子は、デオキシリボヌクレオチド（DNA）及び／又はリボヌクレオチド（RNA）を構成単位とするオリゴヌクレオチド又はポリヌクレオチドであれば特に制限されず、DNA又はRNAのみから構成されてもよいし、DNAとRNAとのキメラ核酸であってもよい。また、該核酸分子は、一本鎖であっても、二本鎖であってもよい。二本鎖の場合、DNA二本鎖、RNA二本鎖、DNA-RNAハイブリッドのいずれであってもよい。また、核酸由来構造物（LNA、DNA、RNA等の核酸より構成される分子体、具体的にはキメラ核酸、ヘテロ2本鎖核酸あるいは三本鎖核酸構造体等）に広く適応が可能である。
【００１３】
本発明の組成物に含有される核酸分子の塩基数は、通常１０塩基〜３００塩基、好ましくは１０塩基〜２００塩基、より好ましくは１０塩基〜１５０塩基、さらに好ましくは１５塩基〜１００塩基、特に好ましくは２０塩基〜８０塩基である。本明細書において「ｓｉＲＮＡ」、「ｓｈＲＮＡ」、「ｍｉＲＮＡ」、「リボザイム」という場合、特にことわらない限り機能に基づく呼称であり、すべてＲＮＡによって構成されているものだけでなく、１以上（例えば、１〜３０個、１〜２０個、１〜１０個、１〜５（１、２、３、４、５）個）のヌクレオチドがＤＮＡで置換されていてもよい。
【００１４】
好ましくは、本発明の組成物に含有される核酸分子は、生物学的な活性を有する分子であり、例えば、標的遺伝子の発現もしくは標的タンパク質の機能を制御するヌクレオチド配列を含む分子などが挙げられる。ここで「制御」とは、上方制御（発現もしくは機能の促進）と下方制御（発現もしくは機能の抑制）のいずれをも包含する。標的遺伝子の発現を制御するヌクレオチド配列を含む核酸分子としては、例えば、アンチセンス核酸、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、リボザイム等が挙げられる。また、標的タンパク質の機能を抑制する該核酸分子としては、例えば、アプタマー、デコイ核酸などが挙げられる。
【００１５】
アンチセンス核酸とは、標的ｍＲＮＡ（もしくはその初期転写産物）又は標的ｍｉＲＮＡを発現する細胞の生理的条件下で該標的ｍＲＮＡ（もしくはその初期転写産物）又は標的ｍｉＲＮＡとハイブリダイズし得る塩基配列からなり、立体障害や該標的ｍＲＮＡを分解（もしくはその初期転写産物のスプライシングを阻害）することで該ｍＲＮＡにコードされるタンパク質への翻訳を阻害するか、あるいは該標的ｍｉＲＮＡを阻害もしくは分解することで、該ｍｉＲＮＡによる遺伝子発現制御を阻害し得る核酸をいう。
【００１６】
アンチセンス核酸の標的領域は、該アンチセンス核酸がハイブリダイズすることにより、結果として蛋白質への翻訳やｍｉＲＮＡによる遺伝子発現制御が阻害されるものであればその長さに特に制限はなく、短いもので約１０塩基程度、長いものでｍＲＮＡもしくは初期転写産物の全配列が挙げられる。合成の容易さや抗原性、細胞内移行性の問題等を考慮すれば、約１０〜約４０塩基長、特に約１５〜約３０塩基長が好ましいが、それに限定されない。
【００１７】
アンチセンス核酸としては、任意の公知のｍＲＮＡを標的とする核酸を用いることができるが、ヒト疾患の創薬標的となり得るタンパク質をコードするｍＲＮＡに対するアンチセンス核酸が好ましく例示される。ヒト疾患と関連するアンチセンス核酸の具体例として、例えば、ApoB100（高コレステロール血症）、ジストロフィン（筋ジストロフィー）、STAT3（悪性リンパ腫）等のｍＲＮＡ（もしくはその初期転写産物）を標的とするアンチセンス核酸、ｍｉＲ−１２２（Ｃ型肝炎）等のｍｉＲＮＡなどを標的とするアンチセンス核酸が挙げられるが、それらに限定されるものではない。
【００１８】
アンチセンス核酸のより具体的な例として、配列番号１に示すミポメルセン（商品名：Kynamro；但し、上市薬はRNAが2’-O-メトキシエチル化されており、シトシン及びウラシルが5-メチル化されている）（ApoB100mRNAに対するアンチセンス核酸）が挙げられるが、これに限定されるものではない。
５’−GCCUCagtctgcttcGCACC−３’  （配列番号１）
（大文字はRNA、小文字はDNAを示す）
【００１９】
アンチセンス核酸は、ｃＤＮＡ配列もしくはゲノミックＤＮＡ配列に基づいて標的配列を決定し、市販のＤＮＡ/ＲＮＡ自動合成機（アプライド・バイオシステムズ社、ベックマン社等）を用いて、これに相補的な配列を合成することにより調製することができる。
【００２０】
ｓｉＲＮＡとは、標的遺伝子のｍＲＮＡのヌクレオチド配列またはその部分配列（以下、標的ヌクレオチド配列）と相補的な配列を有するＲＮＡとその相補鎖からなる２本鎖オリゴＲＮＡである。また、ヘアピンループ部分を介して、標的ヌクレオチド配列に相補的な配列（第１の配列）と、その相補配列（第２の配列）とが連結された一本鎖ＲＮＡであって、ヘアピンループ型の構造をとることにより、第１の配列が第２の配列と２重鎖構造を形成するＲＮＡ（ｓｍａｌｌｈａｉｒｐｉｎ ＲＮＡ：ｓｈＲＮＡ）もｓｉＲＮＡの好ましい態様の１つである。さらに、第１の配列と第２の配列の２重鎖構造の両末端をループ構造で閉環状にしたダンベル型の核酸も、好ましい態様の１つである。
【００２１】
ｓｉＲＮＡ／ｓｈＲＮＡは、センス鎖若しくはアンチセンス鎖の一方、又は双方の５’末端または３’末端においてオーバーハング（ｏｖｅｒｈａｎｇ）を有していてもよい。オーバーハングは、センス鎖及び／又はアンチセンス鎖の末端における１〜数個（例えば、１、２又は３個）の塩基の付加により形成されるものである。
【００２２】
ｓｉＲＮＡ／ｓｈＲＮＡの塩基長は、ＲＮＡ干渉を誘導できる限り特に制限されないが、例えば、片側鎖として１０〜５０塩基長、好ましくは１５〜３０塩基長、より好ましくは２１〜２７塩基長であり得る。
【００２３】
ｓｉＲＮＡ／ｓｈＲＮＡとしては、任意の公知のｍＲＮＡを標的とするｓｉＲＮＡ／ｓｈＲＮＡを用いることができるが、ヒト疾患の創薬標的となり得るタンパク質をコードするｍＲＮＡに対するｓｉＲＮＡ／ｓｈＲＮＡが好ましく例示される。ヒト疾患と関連するｓｉＲＮＡ／ｓｈＲＮＡの具体例として、結合組織増殖因子（ＣＴＧＦ）（線維症）、呼吸器発疹ウイルス（ＲＳＶ）ヌクレオカプシド（ＲＳＶ感染症）、ＲＴＰ８０１（糖尿病性黄斑浮腫）、トランスサイレチン（アミドイドーシス）、コラーゲン特異的シャペロン（ＨＳＰ４７）（肝硬変）等を標的とするｓｉＲＮＡ／ｓｈＲＮＡなどが挙げられるが、それらに限定されるものではない。
【００２４】
ｓｉＲＮＡは、従来公知の手法を用いて、化学的に合成することにより、又は遺伝子組み換え技術を用いて産生することにより得ることができる。また、適宜市販されている核酸を用いることも可能である。
【００２５】
例えば、ｓｉＲＮＡは、標的となるｍＲＮＡの塩基配列情報に基づいて、市販のソフトウェア（例：ＲＮＡｉＤｅｓｉｇｎｅｒ； Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて適宜設計することができる。ｍＲＮＡ上の標的配列のセンス鎖およびアンチセンス鎖を市販のＤＮＡ/ＲＮＡ自動合成機（アプライド・バイオシステムズ社、ベックマン社等）でそれぞれ合成し、適当なアニーリング緩衝液中、約９０〜約９５℃で約１分程度変性させた後、約３０〜約７０℃で約１〜約８時間アニーリングさせることにより調製することができる。
【００２６】
ｍｉＲＮＡとは、ゲノム上にコードされた内在性の２０〜２５塩基程度の非コードＲＮＡ（ｎｏｎ−ｃｏｄｉｎｇＲＮＡ：ｎｃＲＮＡ）であり、ｓｉＲＮＡのように標的ｍＲＮＡを切断するのではなく、標的ｍＲＮＡの３’非翻訳領域（ＵＴＲ）を認識して、翻訳を制御する。本発明におけるｍｉＲＮＡは、細胞質で標的ｍＲＮＡに作用してタンパク質への翻訳を阻害する内在型のｍｉＲＮＡに加えて、両端部にＲＮＡオリゴマー、中央部にＤＮＡオリゴマーを配したギャップマー構造により、核で作用してＲＮａｓｅＨ依存的にｍＲＮＡを分解するものも包含する。
【００２７】
ｍｉＲＮＡとしては、任意の公知のｍｉＲＮＡを用いることができるが、ヒト疾患の創薬標的となり得るタンパク質をコードするｍＲＮＡを標的とするｍｉＲＮＡもしくはその前駆体が好ましく例示される。ヒト疾患と関連するｍｉＲＮＡの具体例として、ｌｅｔ−７（肺癌）、ｍｉＲ−１５ａ（Ｂ細胞慢性リンパ性白血病）、ｍｉＲ−１４３(結腸直腸癌)、ｍｉＲ−１３９（膵臓癌）及びそれらの前駆体などが挙げられるが、それらに限定されるものではない。
【００２８】
ｍｉＲＮＡのより具体的な例として、配列番号２に示すヒト let7a-1 precursorが挙げられるが、これに限定されるものではない。
５’−UGGGAUGAGGUAGUAGGUUGUAUAGUUUUAGGGUCACACCCACCACUGGGAGAUAACUAUACAAUCUACUGUCUUUCCUA−３’  （配列番号２）
【００２９】
ｍｉＲＮＡは、従来公知の手法を用いて、哺乳動物細胞（ヒト細胞等）から単離することにより、又は化学的に合成することにより、又は遺伝子組み換え技術を用いて産生することにより得ることができる。また、適宜市販されている核酸を用いることも可能である。
【００３０】
例えば、ｍｉＲＮＡは、ｍｉＲＢａｓｅデータベース等から目的のｍｉＲＮＡの塩基配列情報を取得し、これに基づいてｓｉＲＮＡの化学合成で述べたのと同様にして２本鎖のｍｉＲＮＡあるいは一本鎖のその前駆体を作製することができる。
【００３１】
アプタマーとは、タンパク質等の標的分子に結合してその機能を制御（通常は阻害）する活性を有する核酸分子である。
【００３２】
アプタマーの長さは特に限定されず、通常、約１６〜約２００個のヌクレオチドであり得るが、例えば約１００個のヌクレオチド以下であり、好ましくは約５０個のヌクレオチド以下であり、より好ましくは約４０個のヌクレオチド以下であり得る。
【００３３】
アプタマーとしては、任意の公知のタンパク質を標的とするアプタマーを用いることができるが、ヒト疾患の創薬標的となり得るタンパク質を標的とするアプタマーが好ましく例示される。ヒト疾患に関連するタンパク質に対するアプタマーの具体例として、血管内皮増殖因子（VEGF）（加齢黄斑変性）、第ＩＸａ因子（冠動脈疾患における血液凝固抑制）、神経成長因子（NGF）（疼痛）、塩基性線維芽細胞増殖因子（FGF2）（慢性関節リウマチ）等に対するアプタマーなどが挙げられるが、それらに限定されるものではない。
【００３４】
アプタマーのより具体的な例として、配列番号３に示すペガプタヌイブ（商品名：マクジェン（登録商標）；但し、すべてのピリミジンヌクレオチドは2’-フルオロ化しており、一部のプリンヌクレオチドは2’-メトキシ化している）（VEGFタンパク質に対するアプタマー）が挙げられるが、これに限定されるものではない。
５’−CGGAAUCAGUGAAUGCUUAUACAUCCGt−３’   （配列番号３）
（tは3’,3’-dTを示す）
【００３５】
アプタマーは、例えば、以下の手順により取得することができる。即ち、まず、ＤＮＡ／ＲＮＡ自動合成機を用いてランダムにオリゴヌクレオチド（例えば、約６０塩基）を合成し、オリゴヌクレオチドのプールを作製する。次に、目的のタンパク質と結合するオリゴヌクレオチドをアフィニティーカラムで分離する。分離したオリゴヌクレオチドをＰＣＲで増幅し、前述の選抜プロセスで再度選抜する。この過程を約５回以上繰り返すことによって、目的のタンパク質に親和性の強いアプタマーを選抜することができる。
【００３６】
リボザイムとは、核酸を切断する酵素活性を有する核酸分子である。リボザイムとして最も汎用性の高いものとしては、ウイロイドやウイルソイドなどの感染性ＲＮＡに見られるセルフスプライシングＲＮＡがあり、ハンマーヘッド型やヘアピン型などが知られている。ハンマーヘッド構造をとる部分に隣接する両端の数塩基ずつ（合わせて約１０塩基程度）をｍＲＮＡの所望の切断部位と相補的な配列にすることにより、標的ｍＲＮＡのみを特異的に切断することが可能である。
【００３７】
リボザイムは、ｃＤＮＡ配列もしくはゲノミックＤＮＡ配列に基づいて標的配列を決定し、市販のＤＮＡ/ＲＮＡ自動合成機（アプライド・バイオシステムズ社、ベックマン社等）を用いて、これに相補的な配列を合成することにより調製することができる。
【００３８】
デコイ核酸とは、転写因子が特異的に結合するヌクレオチド配列を有する、塩基長２０塩基程度の二本鎖ＤＮＡ分子であり、転写因子をトラップすることにより、該転写因子の標的遺伝子の発現を制御（転写活性化因子であれば抑制、転写抑制因子であれば促進）する。
【００３９】
デコイ核酸としては、任意の公知の転写因子を標的とするデコイ核酸を用いることができるが、ヒト疾患の創薬標的となり得る転写因子を標的とするデコイ核酸が好ましく例示される。ヒト疾患に関連する転写因子に対するデコイ核酸の具体例として、ＮＦκＢ（アトピー性皮膚炎、血管再狭窄、慢性関節リウマチ）等に対するデコイ核酸などが挙げられるが、それらに限定されるものではない。
【００４０】
デコイ核酸は、従来公知の手法を用いて、化学的に合成することにより得ることができる。
【００４１】
例えば、デコイ核酸は、標的となる転写因子の結合コンセンサス配列の塩基配列情報に基づいて適宜設計することができる。センス鎖およびアンチセンス鎖を市販のＤＮＡ/ＲＮＡ自動合成機（アプライド・バイオシステムズ社、ベックマン社等）でそれぞれ合成し、適当なアニーリング緩衝液中、約９０〜約９５℃で約１分程度変性させた後、約３０〜約７０℃で約１〜約８時間アニーリングさせることにより調製することができる。
【００４２】
好ましい一実施態様において、本発明の組成物に含有される核酸分子は、国際公開第２０１２/０１７９１９号パンフレット、国際公開第２０１３/１０３１４６号パンフレット、国際公開第２０１２/００５３６８号パンフレット、国際公開第２０１３/０７７４４６号パンフレット、国際公開第２０１３/１３３３９３号パンフレット等に記載される一本鎖核酸分子であり得る。
【００４３】
これらの一本鎖核酸分子は、標的遺伝子の発現を制御する配列を含む領域と、該配列と相補的な配列を含む領域とが、直接またはリンカーを介して結合した核酸分子である。該リンカーの具体例として、ピロリジン骨格およびピペリジン骨格の少なくとも一方を含む非ヌクレオチド構造を有するリンカー、ヌクレオチド残基および／または非ヌクレオチド残基で構成されるリンカー、ならびにアミノ酸残基、ポリアミン残基、およびポリカルボン酸残基等の非ヌクレオチド構造を有するリンカー等が挙げられるが、それらに限定されるものではない。以下に、該リンカーを含む前記一本鎖核酸分子の具体例を挙げるが、それらに限定されるものではない。
【００４４】
Ｉ．ピロリジン骨格およびピペリジン骨格の少なくとも一方を含む非ヌクレオチド構造を有するリンカーを含む、標的遺伝子の発現を制御する配列（以下、発現制御配列と略記する場合がある）を含む一本鎖核酸分子
（１）ｓｓＰＮ分子
前記一本鎖核酸分子の一例として、国際公開第２０１２／０１７９１９号パンフレットに記載される、
領域（Ｘ）、リンカー領域（Ｌｘ）および領域（Ｘｃ）を含み、
前記領域（Ｘ）と前記領域（Ｘｃ）との間に、前記リンカー領域（Ｌｘ）が連結され、
前記領域（Ｘｃ）が、前記領域（Ｘ）と相補的であり、
前記領域（Ｘ）および前記領域（Ｘｃ）の少なくとも一方が、前記発現制御配列を含み、前記リンカー領域（Ｌｘ）が、ピロリジン骨格およびピペリジン骨格の少なくとも一方を含む非ヌクレオチド構造を有する、一本鎖核酸分子（以下、「ｓｓＰＮ分子」ともいう）を挙げることができる。
【００４５】
前記ｓｓＰＮ分子において、前記発現制御配列は、前記ｓｓＰＮ分子が、ｉｎ  ｖｉｖｏまたはｉｎ  ｖｉｔｒｏで細胞内に導入された場合に、前記標的遺伝子の発現を制御する活性を示す配列である。前記発現制御配列は、特に制限されず、目的の標的遺伝子の種類に応じて、適宜設定できる。前記発現制御配列は、例えば、ｓｉＲＮＡによるＲＮＡ干渉に関与する配列を適宜適用できる。即ち、前記ｓｉＲＮＡの、標的ｍＲＮＡと結合する鎖のＲＮＡ配列を、前記発現制御配列として使用できる。
【００４６】
前記発現制御配列は、例えば、前記標的遺伝子の所定領域に対して、９０％以上の相補性を有していることが好ましく、より好ましくは９５％であり、さらに好ましくは９８％であり、特に好ましくは１００％である。このような相補性を満たすことにより、例えば、オフターゲットを十分に軽減できる。
【００４７】
具体例として、標的遺伝子がＴＧＦ−β１の場合、前記発現制御配列は、例えば、配列番号４に示す１８塩基長の配列が使用できる。
５’−UAUGCUGUGUGUACUCUG−３’  （配列番号４）
【００４８】
前記ｓｓＰＮ分子において、前記リンカー領域（Ｌｘ）は、例えば、前記ピロリジン骨格を含む非ヌクレオチド構造を有してもよいし、前記ピペリジン骨格を含む非ヌクレオチド構造を有してもよいし、前記ピロリジン骨格を含む非ヌクレオチド構造と、前記ピペリジン骨格を含む非ヌクレオチド構造との両方を有してもよい。前記ｓｓＰＮ分子は、例えば、生体内におけるインターフェロン誘導等の副作用を抑制でき、ヌクレアーゼ耐性に優れる。
【００４９】
前記ｓｓＰＮ分子において、前記ピロリジン骨格は、例えば、ピロリジンの５員環を構成する炭素原子が、１個以上、置換されたピロリジン誘導体の骨格でもよく、置換される場合、例えば、Ｃ−２の炭素以外の炭素原子であることが好ましい。前記炭素原子は、例えば、窒素原子、酸素原子または硫黄原子で置換されてもよい。前記ピロリジン骨格は、例えば、ピロリジンの５員環内に、例えば、炭素−炭素二重結合または炭素−窒素二重結合を含んでもよい。前記ピロリジン骨格において、ピロリジンの５員環を構成する炭素原子および窒素原子は、例えば、水素原子が結合してもよいし、後述するような置換基が結合してもよい。前記リンカー領域（Ｌｘ）は、例えば、前記ピロリジン骨格のいずれの基を介して、前記領域（Ｘ）および前記領域（Ｘｃ）と結合してもよく、好ましくは、前記５員環のいずれか１個の炭素原子と窒素原子であり、好ましくは、前記５員環の２位の炭素（Ｃ−２）原子と窒素原子である。前記ピロリジン骨格としては、例えば、プロリン骨格、プロリノール骨格等があげられる。前記プロリン骨格およびプロリノール骨格等は、例えば、生体内物質およびその還元体であるため、安全性にも優れる。
【００５０】
前記ｓｓＰＮ分子において、前記ピペリジン骨格は、例えば、ピペリジンの６員環を構成する炭素原子が、１個以上、置換されたピペリジン誘導体の骨格でもよく、置換される場合、例えば、Ｃ−２の炭素以外の炭素原子であることが好ましい。前記炭素原子は、例えば、窒素原子、酸素原子または硫黄原子で置換されてもよい。前記ピペリジン骨格は、例えば、ピペリジンの６員環内に、例えば、炭素−炭素二重結合または炭素−窒素二重結合を含んでもよい。前記ピペリジン骨格において、ピペリジンの６員環を構成する炭素原子および窒素原子は、例えば、水素原子が結合してもよいし、後述するような置換基が結合してもよい。前記リンカー領域（Ｌｘ）は、例えば、前記ピペリジン骨格のいずれの基を介して、前記領域（Ｘ）および前記領域（Ｘｃ）と結合してもよく、好ましくは、前記６員環のいずれか１個の炭素原子と窒素原子であり、好ましくは、前記６員環の２位の炭素（Ｃ−２）原子と窒素原子である。
【００５１】
前記リンカー領域は、例えば、前記非ヌクレオチド構造からなる非ヌクレオチド残基のみを含んでもよいし、前記非ヌクレオチド構造からなる非ヌクレオチド残基と、ヌクレオチド残基とを含んでもよい。
【００５２】
前記ｓｓＰＮ分子において、前記リンカー領域は、例えば、下記式（Ｉ）で表わされる。
【００５３】
【化１】
2019077696.tif 000003
【００５４】
前記式（Ｉ）中、例えば、
Ｘ１およびＸ２は、それぞれ独立して、Ｈ２、Ｏ、ＳまたはＮＨであり；
Ｙ１およびＹ２は、それぞれ独立して、単結合、ＣＨ２、ＮＨ、ＯまたはＳであり；
Ｒ３は、環Ａ上のＣ−３、Ｃ−４、Ｃ−５またはＣ−６に結合する水素原子または置換基であり、
Ｌ１は、ｎ個の原子からなるアルキレン鎖であり、ここで、アルキレン炭素原子上の水素原子は、ＯＨ、ＯＲａ、ＮＨ２、ＮＨＲａ、ＮＲａＲｂ、ＳＨ、もしくはＳＲａで置換されても置換されていなくてもよく、または、
Ｌ１は、前記アルキレン鎖の一つ以上の炭素原子が、酸素原子で置換されたポリエーテル鎖であり、
ただし、Ｙ１が、ＮＨ、ＯまたはＳの場合、Ｙ１に結合するＬ１の原子は炭素であり、ＯＲ１に結合するＬ１の原子は炭素であり、酸素原子同士は隣接せず；
Ｌ２は、ｍ個の原子からなるアルキレン鎖であり、ここで、アルキレン炭素原子上の水素原子は、ＯＨ、ＯＲｃ、ＮＨ２、ＮＨＲｃ、ＮＲｃＲｄ、ＳＨもしくはＳＲｃで置換されても置換されていなくてもよく、または、
Ｌ２は、前記アルキレン鎖の一つ以上の炭素原子が、酸素原子で置換されたポリエーテル鎖であり、
ただし、Ｙ２が、ＮＨ、ＯまたはＳの場合、Ｙ２に結合するＬ２の原子は炭素であり、ＯＲ２に結合するＬ２の原子は炭素であり、酸素原子同士は隣接せず；
Ｒａ、Ｒｂ、ＲｃおよびＲｄは、それぞれ独立して、置換基または保護基であり；
ｌは、１または２であり；
ｍは、０〜３０の範囲の整数であり；
ｎは、０〜３０の範囲の整数であり；
環Ａは、前記環Ａ上のＣ−２以外の１個の炭素原子が、窒素原子、酸素原子、硫黄原子で置換されてもよく、
前記環Ａ内に、炭素−炭素二重結合または炭素−窒素二重結合を含んでもよく、
前記領域（Ｙｃ）および前記領域（Ｙ）は、それぞれ、−ＯＲ１−または−ＯＲ２−を介して、前記リンカー領域（Ｌｙ）に結合し、
ここで、Ｒ１およびＲ２は、存在しても存在しなくてもよく、存在する場合、Ｒ１およびＲ２は、それぞれ独立して、ヌクレオチド残基または前記構造（Ｉ)である。
【００５５】
前記式（Ｉ）中、Ｘ１およびＸ２は、例えば、それぞれ独立して、Ｈ２、Ｏ、ＳまたはＮＨである。前記式（Ｉ）中において、Ｘ１がＨ２であるとは、Ｘ１が、Ｘ１の結合する炭素原子とともに、ＣＨ２（メチレン基）を形成することを意味する。Ｘ２についても同様である。
【００５６】
前記式（Ｉ）中、Ｙ１およびＹ２は、それぞれ独立して、単結合、ＣＨ２、ＮＨ、ＯまたはＳである。
【００５７】
前記式（Ｉ）中、環Ａにおいて、ｌは、１または２である。ｌ＝１の場合、環Ａは、５員環であり、例えば、前記ピロリジン骨格である。前記ピロリジン骨格は、例えば、プロリン骨格、プロリノール骨格等があげられ、これらの二価の構造が例示できる。ｌ＝２の場合、環Ａは、６員環であり、例えば、前記ピペリジン骨格である。環Ａは、環Ａ上のＣ−２以外の１個の炭素原子が、窒素原子、酸素原子または硫黄原子で置換されてもよい。また、環Ａは、環Ａ内に、炭素−炭素二重結合または炭素−窒素二重結合を含んでもよい。環Ａは、例えば、Ｌ型およびＤ型のいずれでもよい。
【００５８】
前記式（Ｉ）中、Ｒ３は、環Ａ上のＣ−３、Ｃ−４、Ｃ−５またはＣ−６に結合する水素原子または置換基である。Ｒ３が前記置換基の場合、置換基Ｒ３は、１でも複数でも、存在しなくてもよく、複数の場合、同一でも異なってもよい。
【００５９】
置換基Ｒ３は、例えば、ハロゲン、ＯＨ、ＯＲ４、ＮＨ２、ＮＨＲ４、ＮＲ４Ｒ５、ＳＨ、ＳＲ４またはオキソ基（＝Ｏ）等である。
【００６０】
Ｒ４およびＲ５は、例えば、それぞれ独立して、置換基または保護基であり、同一でも異なってもよい。前記置換基は、例えば、ハロゲン、アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキルアルキル、シクリルアルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、アミノアルキル、ヘテロシクリルアルケニル、ヘテロシクリルアルキル、ヘテロアリールアルキル、シリル、シリルオキシアルキル等があげられる。以下、同様である。置換基Ｒ３は、これらの列挙する置換基であってもよい。
【００６１】
前記保護基は、例えば、反応性の高い官能基を不活性に変換する官能基であり、公知の保護基等があげられる。前記保護基は、例えば、文献（J. F. W. McOmie, 「Protecting Groups in Organic Chemistry」 Prenum Press, London and New York, 1973）の記載を援用できる。前記保護基は、特に制限されず、例えば、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル基（ＴＢＤＭＳ）、ビス（２−アセトキシエチルオキシ）メチル基（ＡＣＥ）、トリイソプロピルシリルオキシメチル基（ＴＯＭ）、１−（２−シアノエトキシ）エチル基（ＣＥＥ）、２−シアノエトキシメチル基（ＣＥＭ）およびトリルスルフォニルエトキシメチル基（ＴＥＭ）、ジメトキシトリチル基（ＤＭＴｒ）等があげられる。Ｒ３がＯＲ４の場合、前記保護基は、特に制限されず、例えば、ＴＢＤＭＳ基、ＡＣＥ基、ＴＯＭ基、ＣＥＥ基、ＣＥＭ基およびＴＥＭ基等があげられる。この他にも、後述するシリル含有基もあげられる。以下、同様である。
【００６２】
前記式（Ｉ）中、Ｌ１は、ｎ個の原子からなるアルキレン鎖である。前記アルキレン炭素原子上の水素原子は、例えば、ＯＨ、ＯＲａ、ＮＨ２、ＮＨＲａ、ＮＲａＲｂ、ＳＨ、もしくはＳＲａで置換されてもよいし、置換されていなくてもよい。または、Ｌ１は、前記アルキレン鎖の１つ以上の炭素原子が酸素原子で置換されたポリエーテル鎖でもよい。前記ポリエーテル鎖は、例えば、ポリエチレングリコールである。なお、Ｙ１が、ＮＨ、ＯまたはＳの場合、Ｙ１に結合するＬ１の原子は炭素であり、ＯＲ１に結合するＬ１の原子は炭素であり、酸素原子同士は隣接しない。つまり、例えば、Ｙ１がＯの場合、その酸素原子とＬ１の酸素原子は隣接せず、ＯＲ１の酸素原子とＬ１の酸素原子は隣接しない。
【００６３】
前記式（Ｉ）中、Ｌ２は、ｍ個の原子からなるアルキレン鎖である。前記アルキレン炭素原子上の水素原子は、例えば、ＯＨ、ＯＲｃ、ＮＨ２、ＮＨＲｃ、ＮＲｃＲｄ、ＳＨもしくはＳＲｃで置換されてもよいし、置換されていなくてもよい。または、Ｌ２は、前記アルキレン鎖の１つ以上の炭素原子が酸素原子で置換されたポリエーテル鎖でもよい。なお、Ｙ２が、ＮＨ、ＯまたはＳの場合、Ｙ２に結合するＬ２の原子は炭素であり、ＯＲ２に結合するＬ２の原子は炭素であり、酸素原子同士は隣接しない。つまり、例えば、Ｙ２がＯの場合、その酸素原子とＬ２の酸素原子は隣接せず、ＯＲ２の酸素原子とＬ２の酸素原子は隣接しない。
【００６４】
Ｌ１のｎおよびＬ２のｍは、特に制限されず、それぞれ、下限は、例えば、０であり、上限も、特に制限されない。ｎおよびｍは、例えば、前記リンカー領域（Ｌｘ）の所望の長さに応じて、適宜設定できる。ｎおよびｍは、例えば、製造コストおよび収率等の点から、それぞれ、０〜３０が好ましく、より好ましくは０〜２０であり、さらに好ましくは０〜１５である。ｎとｍは、同じでもよいし（ｎ＝ｍ）、異なってもよい。ｎ＋ｍは、例えば、０〜３０であり、好ましくは０〜２０であり、より好ましくは０〜１５である。
【００６５】
Ｒａ、Ｒｂ、ＲｃおよびＲｄは、例えば、それぞれ独立して、置換基または保護基である。前記置換基および前記保護基は、例えば、前述と同様である。
【００６６】
前記式（Ｉ）において、水素原子は、例えば、それぞれ独立して、Ｃｌ、Ｂｒ、ＦおよびＩ等のハロゲンに置換されてもよい。
【００６７】
前記領域（Ｘｃ）および前記領域（Ｘ）は、例えば、それぞれ、−ＯＲ１−または−ＯＲ２−を介して、前記リンカー領域（Ｌｘ）に結合する。ここで、Ｒ１およびＲ２は、存在しても存在しなくてもよい。Ｒ１およびＲ２が存在する場合、Ｒ１およびＲ２は、それぞれ独立して、ヌクレオチド残基または前記式（Ｉ)の構造である。Ｒ１および／またはＲ２が前記ヌクレオチド残基の場合、前記リンカー領域（Ｌｘ）は、例えば、ヌクレオチド残基Ｒ１および／またはＲ２を除く前記式（Ｉ）の構造からなる前記非ヌクレオチド残基と、前記ヌクレオチド残基とから形成される。Ｒ１および／またはＲ２が前記式（Ｉ）の構造の場合、前記リンカー領域（Ｘｃ）は、例えば、前記式（Ｉ）の構造からなる前記非ヌクレオチド残基が、２つ以上連結された構造となる。前記式（Ｉ）の構造は、例えば、１個、２個、３個または４個含んでもよい。このように、前記構造を複数含む場合、前記（Ｉ）の構造は、例えば、直接連結されてもよいし、前記ヌクレオチド残基を介して結合してもよい。他方、Ｒ１およびＲ２が存在しない場合、前記リンカー領域（Ｌｘ）は、例えば、前記式（Ｉ）の構造からなる前記非ヌクレオチド残基のみから形成される。
【００６８】
前記領域（Ｘｃ）および前記領域（Ｘ）と、−ＯＲ１−および−ＯＲ２−との結合の組合せは、特に制限されず、例えば、以下のいずれかの条件があげられる。
条件（１）
前記領域（Ｘｃ）は、−ＯＲ２−を介して、前記領域（Ｘ）は、−ＯＲ１−を介して、前記式（Ｉ）の構造と結合する。
条件（２）
前記領域（Ｘｃ）は、−ＯＲ１−を介して、前記領域（Ｘ）は、−ＯＲ２−を介して、前記式（Ｉ）の構造と結合する。
【００６９】
前記式（Ｉ）の構造は、例えば、下記式（Ｉ−１）〜式（Ｉ−９）が例示でき、下記式において、ｎおよびｍは、前記式（Ｉ）と同じである。下記式において、ｑは、０〜１０の整数である。
【００７０】
【化２】
2019077696.tif 000004
【００７１】
前記式（Ｉ−１）〜（Ｉ−９）において、ｎ、ｍおよびｑは、特に制限されず、前述の通りである。具体例として、前記式（Ｉ−１）において、ｎ＝８、前記（Ｉ−２）において、ｎ＝３、前記式（Ｉ−３）において、ｎ＝４または８、前記（Ｉ−４）において、ｎ＝７または８、前記式（Ｉ−５）において、ｎ＝３およびｍ＝４、前記（Ｉ−６）において、ｎ＝８およびｍ＝４、前記式（Ｉ−７）において、ｎ＝８およびｍ＝４、前記（Ｉ−８）において、ｎ＝５およびｍ＝４、前記式（Ｉ−９）において、ｑ＝１およびｍ＝４があげられる。前記式（Ｉ−４）の一例（ｎ＝８）を、下記式（Ｉ−４ａ）に、前記式（Ｉ−８）の一例（ｎ＝５、ｍ＝４）を、下記式（Ｉ−８ａ）に示す。
【００７２】
【化３】
2019077696.tif 000005
【００７３】
前記ｓｓＰＮ分子において、前記領域（Ｘｃ）は、前記領域（Ｘ）と相補的である。このため、前記ｓｓＰＮ分子において、前記領域（Ｘｃ）が前記領域（Ｘ）に向かって折り返し、前記領域（Ｘｃ）と前記領域（Ｘ）とが、自己アニーリングによって、二重鎖を形成可能である。
【００７４】
前記ｓｓＰＮ分子は、例えば、前記領域（Ｘｃ）のみが折り返して前記領域（Ｘ）と二重鎖を形成してもよいし、さらに、他の領域において新たな二重鎖を形成してもよい。以下、前者のｓｓＰＮ分子、すなわち、二重鎖形成が１カ所である分子を「第１のｓｓＰＮ分子」といい、後者のｓｓＰＮ分子、すなわち、二重鎖形成が２カ所である分子を「第２のｓｓＰＮ分子」という。以下に、前記第１のｓｓＰＮ分子および前記第２のｓｓＰＮ分子について、例示するが、本発明は、これには制限されない。
【００７５】
（１−１）第１のｓｓＰＮ分子
前記第１のｓｓＰＮ分子は、例えば、前記領域（Ｘ）、前記領域（Ｘｃ）および前記リンカー領域（Ｌｘ）からなる分子である。
【００７６】
前記第１のｓｓＰＮ分子は、例えば、５’側から３’側にかけて、前記領域（Ｘｃ）、前記リンカー領域（Ｌｘ）および前記領域（Ｘ）を、前記順序で有してもよいし、３’側から５’側にかけて、前記領域（Ｘｃ）、前記リンカー領域（Ｌｘ）および前記領域（Ｘ）を、前記順序で有してもよい。
【００７７】
前記第１のｓｓＰＮ分子において、前記領域（Ｘｃ）は、前記領域（Ｘ）に相補的である。ここで、前記領域（Ｘｃ）は、前記領域（Ｘ）の全領域またはその部分領域に対して相補的な配列を有していればよく、好ましくは、前記領域（Ｘ）の全領域またはその部分領域に相補的な配列を含む、または、前記相補的な配列からなる。前記領域（Ｘｃ）は、前記領域（Ｘ）の相補的な前記全領域または相補的な前記部分領域に対して、例えば、完全に相補的でもよいし、１もしくは数塩基が非相補的であってもよいが、完全に相補的であることが好ましい。前記１塩基若しくは数塩基は、例えば、１〜３塩基、好ましくは１塩基または２塩基である。
【００７８】
前記第１のｓｓＰＮ分子において、前記発現制御配列は、前述のように、前記領域（Ｘｃ）および前記領域（Ｘ）の少なくとも一方に含まれる。前記第１のｓｓＰＮ分子は、前記発現制御配列を、例えば、１つ有してもよいし、２つ以上有してもよい。
【００７９】
後者の場合、前記第１のｓｓＰＮ分子は、例えば、同じ標的遺伝子に対する同じ発現制御配列を２つ以上有してもよいし、同じ標的に対する異なる発現制御配列を２つ以上有してもよいし、異なる標的遺伝子に対する異なる発現制御配列を２つ以上有してもよい。前記第１のｓｓＰＮ分子が、２つ以上の前記発現制御配列を有する場合、各発現制御配列の配置箇所は、特に制限されず、前記領域（Ｘ）および前記領域（Ｘｃ）のいずれか一領域でもよいし、異なる領域であってもよい。前記第１のｓｓＰＮ分子が、異なる標的遺伝子に対する前記発現制御配列を２つ以上有する場合、例えば、前記第１のｓｓＰＮ分子によって、２種類以上の異なる標的遺伝子の発現を制御可能である。
【００８０】
前記第１のｓｓＰＮ分子の一例が、国際公開第２０１２/０１７９１９号パンフレットの図１に示されており、これを参照することができる。
【００８１】
前記第１のｓｓＰＮ分子において、前記領域（Ｘｃ）および前記領域（Ｘ）の塩基数は、特に制限されない。以下に各領域の長さを例示するが、本発明は、これには制限されない。本発明において、「塩基数」は、例えば、「長さ」を意味し、「塩基長」ということもできる。本発明において、塩基数の数値範囲は、例えば、その範囲に属する正の整数を全て開示するものであり、具体例として、「１〜４塩基」との記載は、「１、２、３、４塩基」の全ての開示を意味する（以下、同様）。
【００８２】
前記領域（Ｘｃ）は、例えば、前記領域（Ｘ）の全領域に完全に相補的でもよい。この場合、前記領域（Ｘｃ）は、例えば、前記領域（Ｘ）の５’末端から３’末端の全領域に相補的な塩基配列からなることを意味し、すなわち、前記領域（Ｘｃ）と前記領域（Ｘ）とが、同じ塩基長であり、且つ、前記領域（Ｘｃ）の全ての塩基が、前記領域（Ｘ）の全ての塩基と相補的であることを意味する。
【００８３】
また、前記領域（Ｘｃ）は、例えば、前記領域（Ｘ）の部分領域に完全に相補的でもよい。この場合、前記領域（Ｘｃ）は、例えば、前記領域（Ｘ）の部分領域に相補的な塩基配列からなることを意味し、すなわち、前記領域（Ｘｃ）は、前記領域（Ｘ）よりも、１塩基以上短い塩基長の塩基配列からなり、前記領域（Ｘｃ）の全ての塩基が、前記領域（Ｘ）の前記部分領域の全ての塩基と相補的であることを意味する。前記領域（Ｘ）の前記部分領域は、例えば、前記領域（Ｘ）における、前記領域（Ｘｃ）側の末端の塩基（１番目の塩基）から連続する塩基配列からなる領域であることが好ましい。
【００８４】
前記第１のｓｓＰＮ分子において、前記領域（Ｘ）の塩基数（Ｘ）と前記領域（Ｘｃ）の塩基数（Ｘｃ）との関係は、例えば、下記（３）または（５）の条件を満たし、前者の場合、具体的には、例えば、下記（１１）の条件を満たす。
Ｘ＞Ｘｃ  ・・・（３）
Ｘ−Ｘｃ＝１〜１０、好ましくは１、２または３、
より好ましくは１または２      ・・・（１１）
Ｘ＝Ｘｃ  ・・・（５）
【００８５】
前記領域（Ｘ）および／または前記領域（Ｘｃ）が前記発現制御配列を含む場合、前記領域は、例えば、前記発現制御配列のみから構成される領域でもよいし、前記発現制御配列を含む領域でもよい。前記発現制御配列の塩基数は、例えば、１９〜３０塩基であり、好ましくは、１９、２０または２１塩基である。前記発現制御配列を含む領域は、例えば、前記発現制御配列の５’側および／または３’側に、さらに付加配列を有してもよい。前記付加配列の塩基数は、例えば、１〜３１塩基であり、好ましくは、１〜２１塩基であり、より好ましくは、１〜１１塩基である。
【００８６】
前記領域（Ｘ）の塩基数は、特に制限されない。前記領域（Ｘ）が、前記発現制御配列を含む場合、その下限は、例えば、１９塩基である。その上限は、例えば、５０塩基であり、好ましくは３０塩基であり、より好ましくは２５塩基である。前記領域（Ｘ）の塩基数の具体例は、例えば、１９塩基〜５０塩基であり、好ましくは、１９塩基〜３０塩基、より好ましくは１９塩基〜２５塩基である。
【００８７】
前記領域（Ｘｃ）の塩基数は、特に制限されない。その下限は、例えば、１９塩基であり、好ましくは２０塩基であり、より好ましくは２１塩基である。その上限は、例えば、５０塩基であり、より好ましくは４０塩基であり、さらに好ましくは３０塩基である。
【００８８】
前記ｓｓＰＮ分子において、前記リンカー領域（Ｌｘ）の長さは、特に制限されない。前記リンカー領域（Ｌｘ）は、例えば、前記領域（Ｘ）と前記領域（Ｘｃ）とが二重鎖を形成可能な長さであることが好ましい。前記リンカー領域（Ｌｘ）が、前記非ヌクレオチド残基の他に、前記ヌクレオチド残基を含む場合、前記リンカー領域（Ｌｘ）の塩基数は、その下限が、例えば、１塩基であり、好ましくは２塩基であり、より好ましくは３塩基であり、その上限が、例えば、１００塩基であり、好ましくは８０塩基であり、より好ましくは５０塩基である。
【００８９】
前記第１のｓｓＰＮ分子の全長は、特に制限されない。前記第１のｓｓＰＮ分子において、前記塩基数の合計（全長の塩基数）は、下限が、例えば、３８塩基であり、好ましくは４２塩基であり、より好ましくは５０塩基であり、さらに好ましくは５１塩基であり、特に好ましくは５２塩基であり、その上限は、例えば、３００塩基であり、好ましくは２００塩基であり、より好ましくは１５０塩基であり、さらに好ましくは１００塩基であり、特に好ましくは８０塩基である。前記第１のｓｓＰＮ分子において、前記リンカー領域（Ｌｘ）を除く塩基数の合計は、下限が、例えば、３８塩基であり、好ましくは４２塩基であり、より好ましくは５０塩基であり、さらに好ましくは５１塩基であり、特に好ましくは５２塩基であり、上限が、例えば、３００塩基であり、好ましくは２００塩基であり、より好ましくは１５０塩基であり、さらに好ましくは１００塩基であり、特に好ましくは８０塩基である。
【００９０】
（１−２）第２のｓｓＰＮ分子
前記第２のｓｓＰＮ分子は、例えば、前記領域（Ｘ）、前記リンカー領域（Ｌｘ）および前記領域（Ｘｃ）の他に、さらに、領域（Ｙ）および前記領域（Ｙ）に相補的な領域（Ｙｃ）を有する分子である。前記第２のｓｓＰＮ分子において、前記領域（Ｘ）と前記領域（Ｙ）とが連結して、内部領域（Ｚ）を形成している。なお、特に示さない限り、前記第２のｓｓＰＮ分子は、前記第１のｓｓＰＮ分子の記載を援用できる。
【００９１】
前記第２のｓｓＰＮ分子は、例えば、５’側から３’側にかけて、前記領域（Ｘｃ）、前記リンカー領域（Ｌｘ）、前記領域（Ｘ）、前記領域（Ｙ）および前記領域（Ｙｃ）を、前記順序で有してもよい。この場合、前記領域（Ｘｃ）を、５’側領域（Ｘｃ）、前記内部領域（Ｚ）中の前記領域（Ｘ）を、内部５’側領域（Ｘ）、前記内部領域（Ｚ）中の前記領域（Ｙ）を、内部３’領域（Ｙ）、前記領域（Ｙｃ）を、３’側領域（Ｙｃ）ともいう。また、前記第２のｓｓＰＮ分子は、例えば、３’側から５’側にかけて、前記領域（Ｘｃ）、前記リンカー領域（Ｌｘ）、前記領域（Ｘ）、前記領域（Ｙ）および前記領域（Ｙｃ）を、前記順序で有してもよい。この場合、前記領域（Ｘｃ）を、３’側領域（Ｘｃ）、前記内部領域（Ｚ）中の前記領域（Ｘ）を、内部３’側領域（Ｘ）、前記内部領域（Ｚ）中の前記領域（Ｙ）を、内部５’領域（Ｙ）、前記領域（Ｙｃ）を、５’側領域（Ｙｃ）ともいう。
【００９２】
前記内部領域（Ｚ）は、前述のように、例えば、前記領域（Ｘ）と前記領域（Ｙ）とが連結されている。前記領域（Ｘ）と前記領域（Ｙ）は、例えば、直接的に連結され、その間に介在配列を有していない。前記内部領域（Ｚ）は、前記領域（Ｘｃ）および前記領域（Ｙｃ）との配列関係を示すために、「前記領域（Ｘ）と前記領域（Ｙ）が連結して構成される」と定義するものであって、前記内部領域（Ｚ）において、前記領域（Ｘ）と前記領域（Ｙ）とが、前記ｓｓＰＮ分子の使用において、別個の独立した領域であることを限定するものではない。すなわち、例えば、前記内部領域（Ｚ）が、前記発現制御配列を有する場合、前記内部領域（Ｚ）において、前記領域（Ｘ）と前記領域（Ｙ）とにわたって、前記発現制御配列が配置されてもよい。
【００９３】
前記第２のｓｓＰＮ分子において、前記領域（Ｘｃ）は、前記領域（Ｘ）に相補的である。ここで、前記領域（Ｘｃ）は、前記領域（Ｘ）の全領域またはその部分領域に対して相補的な配列を有していればよく、好ましくは、前記領域（Ｘ）の全領域またはその部分領域に相補的な配列を含む、または、前記相補的な配列からなる。前記領域（Ｘｃ）は、前記領域（Ｘ）の相補的な前記全領域または相補的な前記部分領域に対して、例えば、完全に相補的でもよいし、１もしくは数塩基が非相補的であってもよいが、完全に相補的であることが好ましい。前記１塩基若しくは数塩基は、例えば、１〜３塩基、好ましくは１塩基または２塩基である。
【００９４】
前記第２のｓｓＰＮ分子において、前記領域（Ｙｃ）は、前記領域（Ｙ）に相補的である。ここで、前記領域（Ｙｃ）は、前記領域（Ｙ）の全領域またはその部分領域に相補的な配列を有していればよく、好ましくは、前記領域（Ｙ）の全領域またはその部分領域に対して相補的な配列を含む、または、前記相補的な配列からなる。前記領域（Ｙｃ）は、前記領域（Ｙ）の相補的な前記全領域または相補的な前記部分領域に対して、例えば、完全に相補的でもよいし、１もしくは数塩基が非相補的であってもよいが、完全に相補的であることが好ましい。前記１塩基若しくは数塩基は、例えば、１〜３塩基、好ましくは１塩基または２塩基である。
【００９５】
前記第２のｓｓＰＮ分子において、前記発現制御配列は、例えば、前記領域（Ｘ）と前記領域（Ｙ）とから形成される前記内部領域（Ｚ）および前記領域（Ｘｃ）の少なくとも一つに含まれ、さらに、前記領域（Ｙｃ）に含まれてもよい。前記内部領域（Ｚ）が前記発現制御配列を有する場合、例えば、前記領域（Ｘ）および前記領域（Ｙ）のいずれに前記発現制御配列を有してもよく、また、前記領域（Ｘ）と前記領域（Ｙ）とにわたって、前記発現制御配列を有してもよい。前記第２のｓｓＰＮ分子は、前記発現制御配列を、例えば、１つ有してもよいし、２つ以上有してもよい。
【００９６】
前記第２のｓｓＰＮ分子が、２つ以上の前記発現制御配列を有する場合、各発現制御配列の配置箇所は、特に制限されず、前記内部領域（Ｚ）および前記領域（Ｘｃ）のいずれか一方でもよいし、前記内部領域（Ｚ）および前記領域（Ｘｃ）のいずれか一方と、さらに他の異なる領域であってもよい。
【００９７】
前記第２のｓｓＰＮ分子において、前記領域（Ｙｃ）と前記領域（Ｙ）とは、例えば、直接連結してもよいし、間接的に連結してもよい。前者の場合、直接的な連結は、例えば、ホスホジエステル結合による連結等があげられる。後者の場合、例えば、前記領域（Ｙｃ）と前記領域（Ｙ）との間に、リンカー領域（Ｌｙ）を有し、前記リンカー領域（Ｌｙ）を介して、前記領域（Ｙｃ）と前記領域（Ｙ）とが連結している形態等があげられる。
【００９８】
前記第２のｓｓＰＮ分子が前記リンカー領域（Ｌｙ）を有する場合、前記リンカー領域（Ｌｙ）は、例えば、前記ヌクレオチド残基からなるリンカーでもよいし、前述した、ピロリジン骨格およびピペリジン骨格の少なくとも一方を含む非ヌクレオチド構造を有するリンカーでもよい。後者の場合、前記リンカー領域（Ｌｙ）は、例えば、前記式（Ｉ）で表わすことができ、前記リンカー領域（Ｌｘ）における前記式（Ｉ）の説明を全て援用できる。
【００９９】
前記領域（Ｙｃ）および前記領域（Ｙ）は、例えば、それぞれ、−ＯＲ１−または−ＯＲ２−を介して、前記リンカー領域（Ｌｙ）に結合する。ここで、Ｒ１およびＲ２は、前述のリンカー領域（Ｌｘ）と同様に、存在しても存在しなくてもよい。
【０１００】
前記領域（Ｘｃ）および前記領域（Ｘ）、ならびに、前記領域（Ｙｃ）および前記（Ｙ）と、前記−ＯＲ１−および−ＯＲ２−との結合の組合せは、特に制限されず、例えば、以下のいずれかの条件があげられる。
条件（１）
前記領域（Ｘｃ）は、−ＯＲ２−を介して、前記領域（Ｘ）は、−ＯＲ１−を介して、前記式（Ｉ）の構造と結合し、
前記領域（Ｙｃ）は、−ＯＲ１−を介して、前記領域（Ｙ）は、−ＯＲ２−を介して、前記式（Ｉ）の構造と結合する。
条件（２）
前記領域（Ｘｃ）は、−ＯＲ２−を介して、前記領域（Ｘ）は、−ＯＲ１−を介して、前記式（Ｉ）の構造と結合し、
前記領域（Ｙｃ）は、−ＯＲ２−を介して、前記領域（Ｙ）は、−ＯＲ１−を介して、前記式（Ｉ）の構造と結合する。
条件（３）
前記領域（Ｘｃ）は、−ＯＲ１−を介して、前記領域（Ｘ）は、−ＯＲ２−を介して、前記式（Ｉ）の構造と結合し、
前記領域（Ｙｃ）は、−ＯＲ１−を介して、前記領域（Ｙ）は、−ＯＲ２−を介して、前記式（Ｉ）の構造と結合する。
条件（４）
前記領域（Ｘｃ）は、−ＯＲ１−を介して、前記領域（Ｘ）は、−ＯＲ２−を介して、前記式（Ｉ）の構造と結合し、
前記領域（Ｙｃ）は、−ＯＲ２−を介して、前記領域（Ｙ）は、−ＯＲ１−を介して、前記式（Ｉ）の構造と結合する。
【０１０１】
前記第２のｓｓＰＮ分子について、前記リンカー領域（Ｌｙ）を有するｓｓＰＮ分子の一例が、国際公開第２０１２/０１７９１９号パンフレットの図２に示されており、これを参照することができる。
【０１０２】
前記第２のｓｓＰＮ分子において、前記領域（Ｘｃ）、前記領域（Ｘ）、前記領域（Ｙ）および前記領域（Ｙｃ）の塩基数は、特に制限されない。各領域の長さを以下に例示するが、本発明は、これには制限されない。
【０１０３】
前記領域（Ｘｃ）は、前述のように、例えば、前記領域（Ｘ）の全領域に相補的でもよい。この場合、前記領域（Ｘｃ）は、例えば、前記領域（Ｘ）と同じ塩基長であり、前記領域（Ｘ）の全領域に相補的な塩基配列からなることが好ましい。前記領域（Ｘｃ）は、より好ましくは、前記領域（Ｘ）と同じ塩基長であり、且つ、前記領域（Ｘｃ）の全ての塩基が、前記領域（Ｘ）の全ての塩基と相補的である、つまり、例えば、完全に相補的である。なお、これには制限されず、例えば、前述のように、１もしくは数塩基が非相補的であってもよい。
【０１０４】
また、前記領域（Ｘｃ）は、前述のように、例えば、前記領域（Ｘ）の部分領域に相補的でもよい。この場合、前記領域（Ｘｃ）は、例えば、前記領域（Ｘ）の部分領域と同じ塩基長であり、すなわち、前記領域（Ｘ）よりも、１塩基以上短い塩基長の塩基配列からなることが好ましい。前記領域（Ｘｃ）は、より好ましくは、前記領域（Ｘ）の前記部分領域と同じ塩基長であり、且つ、前記領域（Ｘｃ）の全ての塩基が、前記領域（Ｘ）の前記部分領域の全ての塩基と相補的である、つまり、例えば、完全に相補的である。前記領域（Ｘ）の前記部分領域は、例えば、前記領域（Ｘ）における、前記領域（Ｘｃ）側の末端の塩基（１番目の塩基）から連続する塩基配列からなる領域であることが好ましい。
【０１０５】
前記領域（Ｙｃ）は、前述のように、例えば、前記領域（Ｙ）の全領域に相補的でもよい。この場合、前記領域（Ｙｃ）は、例えば、前記領域（Ｙ）と同じ塩基長であり、前記領域（Ｙ）の全領域に相補的な塩基配列からなることが好ましい。前記領域（Ｙｃ）は、より好ましくは、前記領域（Ｙ）と同じ塩基長であり、且つ、前記領域（Ｙｃ）の全ての塩基が、前記領域（Ｙ）の全ての塩基と相補的である、つまり、例えば、完全に相補である。なお、これには制限されず、例えば、前述のように、１もしくは数塩基が非相補的であってもよい。
【０１０６】
また、前記領域（Ｙｃ）は、前述のように、例えば、前記領域（Ｙ）の部分領域に相補的でもよい。この場合、前記領域（Ｙｃ）は、例えば、前記領域（Ｙ）の部分領域と同じ塩基長であり、すなわち、前記領域（Ｙ）よりも、１塩基以上短い塩基長の塩基配列からなることが好ましい。前記領域（Ｙｃ）は、より好ましくは、前記領域（Ｙ）の前記部分領域と同じ塩基長であり、且つ、前記領域（Ｙｃ）の全ての塩基が、前記領域（Ｙ）の前記部分領域の全ての塩基と相補的である、つまり、例えば、完全に相補である。前記領域（Ｙ）の前記部分領域は、例えば、前記領域（Ｙ）における、前記領域（Ｙｃ）側の末端の塩基（１番目の塩基）から連続する塩基配列からなる領域であることが好ましい。
【０１０７】
前記第２のｓｓＰＮ分子において、前記内部領域（Ｚ）の塩基数（Ｚ）と、前記領域（Ｘ）の塩基数（Ｘ）および前記領域（Ｙ）の塩基数（Ｙ）との関係、前記内部領域（Ｚ）の塩基数（Ｚ）と、前記領域（Ｘ）の塩基数（Ｘ）および前記領域（Ｘｃ）の塩基数（Ｘｃ）との関係は、例えば、下記式（１）および（２）の条件を満たす。
Ｚ＝Ｘ＋Ｙ      ・・・（１）
Ｚ≧Ｘｃ＋Ｙｃ  ・・・（２）
【０１０８】
前記第２のｓｓＰＮ分子において、前記領域（Ｘ）の塩基数（Ｘ）と前記領域（Ｙ）の塩基数（Ｙ）の関係は、特に制限されず、例えば、下記式のいずれの条件を満たす。
Ｘ＝Ｙ  ・・・（１９）
Ｘ＜Ｙ  ・・・（２０）
Ｘ＞Ｙ  ・・・（２１）
【０１０９】
第２のｓｓＰＮ分子において、前記領域（Ｘ）の塩基数（Ｘ）、前記領域（Ｘｃ）の塩基数（Ｘｃ）、前記領域（Ｙ）の塩基数（Ｙ）および前記領域（Ｙｃ）の塩基数（Ｙｃ）の関係は、例えば、下記（ａ）〜（ｄ）のいずれかの条件を満たす。
（ａ）下記式（３）および（４）の条件を満たす。
Ｘ＞Ｘｃ  ・・・（３）
Ｙ＝Ｙｃ  ・・・（４）
（ｂ）下記式（５）および（６）の条件を満たす。
Ｘ＝Ｘｃ  ・・・（５）
Ｙ＞Ｙｃ  ・・・（６）
（ｃ）下記式（７）および（８）の条件を満たす。
Ｘ＞Ｘｃ  ・・・（７）
Ｙ＞Ｙｃ  ・・・（８）
（ｄ）下記式（９）および（１０）の条件を満たす。
Ｘ＝Ｘｃ  ・・・（９）
Ｙ＝Ｙｃ  ・・・（１０）
【０１１０】
前記（ａ）〜（ｄ）において、前記領域（Ｘ）の塩基数（Ｘ）と前記領域（Ｘｃ）の塩基数（Ｘｃ）の差、前記領域（Ｙ）の塩基数（Ｙ）と前記領域（Ｙｃ）の塩基数（Ｙｃ）の差は、例えば、下記条件を満たすことが好ましい。
（ａ）下記式（１１）および（１２）の条件を満たす。
Ｘ−Ｘｃ＝１〜１０、好ましくは１、２、３または４、
より好ましくは１、２または３      ・・・（１１）
Ｙ−Ｙｃ＝０      ・・・（１２）
（ｂ）下記式（１３）および（１４）の条件を満たす。
Ｘ−Ｘｃ＝０      ・・・（１３）
Ｙ−Ｙｃ＝１〜１０、好ましくは１、２、３または４、
より好ましくは１、２または３      ・・・（１４）
（ｃ）下記式（１５）および（１６）の条件を満たす。
Ｘ−Ｘｃ＝１〜１０、好ましくは、１、２または３、
より好ましくは１または２      ・・・（１５）
Ｙ−Ｙｃ＝１〜１０、好ましくは、１、２または３、
より好ましくは１または２      ・・・（１６）
（ｄ）下記式（１７）および（１８）の条件を満たす。
Ｘ−Ｘｃ＝０      ・・・（１７）
Ｙ−Ｙｃ＝０      ・・・（１８）
【０１１１】
前記（ａ）〜（ｄ）の第２のｓｓＰＮ分子について、それぞれの構造の一例が、国際公開第２０１２/０１７９１９号パンフレットの図３に示されており、これを参照することができる。
【０１１２】
前記（ａ）〜（ｃ）のｓｓＰＮ分子は、例えば、前記領域（Ｘｃ）と前記領域（Ｘ）、および、前記領域（Ｙｃ）と前記領域（Ｙ）が、それぞれ二重鎖を形成することによって、前記内部領域（Ｚ）において、前記領域（Ｘｃ）および前記領域（Ｙｃ）のいずれともアライメントしない塩基を有する構造であり、二重鎖を形成しない塩基を有する構造ともいえる。前記内部領域（Ｚ）において、前記アライメントしない塩基（二重鎖を形成しない塩基ともいう）を、以下、「フリー塩基」という。国際公開第２０１２/０１７９１９号パンフレットの図３においては、前記フリー塩基の領域が、「Ｆ」で示されている。前記領域（Ｆ）の塩基数は、特に制限されない。前記領域（Ｆ）の塩基数（Ｆ）は、例えば、前記（ａ）のｓｓＰＮ分子の場合、「Ｘ−Ｘｃ」の塩基数であり、前記（ｂ）のｓｓＰＮ分子の場合、「Ｙ−Ｙｃ」の塩基数であり、前記（ｃ）のｓｓＰＮ分子の場合、「Ｘ−Ｘｃ」の塩基数と「Ｙ−Ｙｃ」の塩基数との合計数である。
【０１１３】
他方、前記(ｄ)のｓｓＰＮ分子は、例えば、前記内部領域（Ｚ）の全領域が、前記領域（Ｘｃ）および前記領域（Ｙｃ）とアライメントする構造であり、前記内部領域（Ｚ）の全領域が二重鎖を形成する構造ともいえる。なお、前記（ｄ）のｓｓＰＮ分子において、前記領域（Ｘｃ）の５’末端と前記領域（Ｙｃ）の３’末端は、未連結である。
【０１１４】
前記領域（Ｘｃ）、前記領域（Ｙｃ）、および前記内部領域（Ｚ）における前記フリー塩基（Ｆ）の塩基数の合計は、前記内部領域（Ｚ）の塩基数となる。このため、前記領域（Ｘｃ）および前記領域（Ｙｃ）の長さは、例えば、前記内部領域（Ｚ）の長さ、前記フリー塩基の数およびその位置に応じて、適宜決定できる。
【０１１５】
前記内部領域（Ｚ）の塩基数は、例えば、１９塩基以上である。前記塩基数の下限は、例えば、１９塩基であり、好ましくは２０塩基であり、より好ましくは２１塩基である。前記塩基数の上限は、例えば、５０塩基であり、好ましくは４０塩基であり、より好ましくは３０塩基である。前記内部領域（Ｚ）の塩基数の具体例は、例えば、１９塩基、２０塩基、２１塩基、２２塩基、２３塩基、２４塩基、２５塩基、２６塩基、２７塩基、２８塩基、２９塩基、または、３０塩基である。前記内部領域（Ｚ）が、前記発現制御配列を有する場合、例えば、この条件が好ましい。
【０１１６】
前記内部領域（Ｚ）が前記発現制御配列を含む場合、前記内部領域（Ｚ）は、例えば、前記発現制御配列のみから構成される領域でもよいし、前記発現制御配列を含む領域でもよい。前記発現制御配列の塩基数は、例えば、１９〜３０塩基であり、好ましくは、１９、２０または２１塩基である。前記内部領域（Ｚ）が前記発現制御配列を含む場合、前記発現制御配列の５’側および／または３’側に、さらに付加配列を有してもよい。前記付加配列の塩基数は、例えば、１〜３１塩基であり、好ましくは、１〜２１塩基であり、より好ましくは、１〜１１塩基であり、さらに好ましくは、１〜７塩基である。
【０１１７】
前記領域（Ｘｃ）の塩基数は、例えば、１〜２９塩基であり、好ましくは１〜１１塩基であり、好ましくは１〜７塩基であり、より好ましくは１〜４塩基であり、さらに好ましくは１塩基、２塩基、３塩基である。前記内部領域（Ｚ）または前記領域（Ｙｃ）が前記発現制御配列を含む場合、例えば、このような塩基数が好ましい。具体例として、前記内部領域（Ｚ）の塩基数が、１９〜３０塩基（例えば、１９塩基）の場合、前記領域（Ｘｃ）の塩基数は、例えば、１〜１１塩基であり、好ましくは１〜７塩基であり、より好ましくは１〜４塩基であり、さらに好ましくは１塩基、２塩基、３塩基である。
【０１１８】
前記領域（Ｘｃ）が前記発現制御配列を含む場合、前記領域（Ｘｃ）は、例えば、前記発現制御配列のみから構成される領域でもよいし、前記発現制御配列を含む領域でもよい。前記発現制御配列の長さは、例えば、前述の通りである。前記領域（Ｘｃ）が前記発現制御配列を含む場合、前記発現制御配列の５’側および／または３’側に、さらに付加配列を有してもよい。前記付加配列の塩基数は、例えば、１〜１１塩基であり、好ましくは、１〜７塩基である。
【０１１９】
前記領域（Ｙｃ）の塩基数は、例えば、１〜２９塩基であり、好ましくは１〜１１塩基であり、好ましくは１〜７塩基であり、より好ましくは１〜４塩基であり、さらに好ましくは１塩基、２塩基、３塩基である。前記内部領域（Ｚ）または前記領域（Ｘｃ）が前記発現制御配列を含む場合、例えば、このような塩基数が好ましい。具体例として、前記内部領域（Ｚ）の塩基数が、１９〜３０塩基（例えば、１９塩基）の場合、前記領域（Ｙｃ）の塩基数は、例えば、１〜１１塩基であり、好ましくは１〜７塩基であり、より好ましくは１塩基、２塩基、３塩基または４塩基であり、さらに好ましくは１塩基、２塩基、３塩基である。
【０１２０】
前記領域（Ｙｃ）が前記発現制御配列を含む場合、前記領域（Ｙｃ）は、例えば、前記発現制御配列のみから構成される領域でもよいし、前記発現制御配列を含む領域でもよい。前記発現制御配列の長さは、例えば、前述の通りである。前記領域（Ｙｃ）が前記発現制御配列を含む場合、前記発現制御配列の５’側および／または３’側に、さらに付加配列を有してもよい。前記付加配列の塩基数は、例えば、１〜１１塩基であり、好ましくは、１〜７塩基である。
【０１２１】
前述のように、前記内部領域（Ｚ）、前記領域（Ｘｃ）および前記領域（Ｙｃ）の塩基数は、例えば、前記式（２）の「Ｚ≧Ｘｃ＋Ｙｃ」で表わすことができる。具体例として、「Ｘｃ＋Ｙｃ」の塩基数は、例えば、前記内部領域（Ｚ）と同じ、または、前記内部領域（Ｚ）より小さい。後者の場合、「Ｚ−（Ｘｃ＋Ｙｃ）」は、例えば、１〜１０、好ましくは１〜４、より好ましくは１、２または３である。前記「Ｚ−（Ｘｃ＋Ｙｃ）」は、例えば、前記内部領域（Ｚ）におけるフリーの領域（Ｆ）の塩基数（Ｆ）に相当する。
【０１２２】
前記第２のｓｓＰＮ分子において、前記リンカー領域（Ｌｘ）および前記リンカー領域（Ｌｙ）の長さは、特に制限されない。前記リンカー領域（Ｌｘ）は、前述の通りである。前記リンカー領域（Ｌｙ）の構成単位が塩基を含む場合、前記リンカー領域（Ｌｙ）の塩基数は、その下限が、例えば、１塩基であり、好ましくは２塩基であり、より好ましくは３塩基であり、その上限が、例えば、１００塩基であり、好ましくは８０塩基であり、より好ましくは５０塩基である。前記各リンカー領域の塩基数は、具体例として、例えば、１〜５０塩基、１〜３０塩基、１〜２０塩基、１〜１０塩基、１〜７塩基、１〜４塩基等が例示できるが、これには制限されない。
【０１２３】
前記リンカー領域（Ｌｙ）は、例えば、前記リンカー領域（Ｌｘ）と同じでもよいし、異なってもよい。
【０１２４】
前記第２のｓｓＰＮ分子の全長は、特に制限されない。前記第２のｓｓＰＮ分子において、前記塩基数の合計（全長の塩基数）は、下限が、例えば、３８塩基であり、好ましくは４２塩基であり、より好ましくは５０塩基であり、さらに好ましくは５１塩基であり、特に好ましくは５２塩基であり、その上限は、例えば、３００塩基であり、好ましくは２００塩基であり、より好ましくは１５０塩基であり、さらに好ましくは１００塩基であり、特に好ましくは８０塩基である。前記第２のｓｓＰＮ分子において、前記リンカー領域（Ｌｘ）およびリンカー領域（Ｌｙ）を除く塩基数の合計は、下限が、例えば、３８塩基であり、好ましくは４２塩基であり、より好ましくは５０塩基であり、さらに好ましくは５１塩基であり、特に好ましくは５２塩基であり、上限が、例えば、３００塩基であり、好ましくは２００塩基であり、より好ましくは１５０塩基であり、さらに好ましくは１００塩基であり、特に好ましくは８０塩基である。
【０１２５】
前記ｓｓＰＮ分子は、前述のように、前記リンカー領域（Ｌｘ）が、前記非ヌクレオチド構造を有していればよく、その他の構成単位は、特に制限されない。前記構成単位は、例えば、ヌクレオチド残基等があげられる。前記ヌクレオチド残基は、例えば、リボヌクレオチド残基およびデオキシリボヌクレオチド残基等があげられる。前記ヌクレオチド残基は、例えば、修飾されていない非修飾ヌクレオチド残基および修飾された修飾ヌクレオチド残基等があげられる。前記ｓｓＰＮ分子は、例えば、前記修飾ヌクレオチド残基を含むことによって、ヌクレアーゼ耐性を向上し、安定性を向上可能である。また、前記ｓｓＰＮ分子は、例えば、前記ヌクレオチド残基の他に、さらに、非ヌクレオチド残基を含んでもよい。
【０１２６】
前記領域（Ｘｃ）、前記領域（Ｘ）、前記領域（Ｙ）および前記領域（Ｙｃ）の構成単位は、それぞれ、前記ヌクレオチド残基が好ましい。前記各領域は、例えば、下記（１）〜（３）の残基で構成される。
（１）非修飾ヌクレオチド残基
（２）修飾ヌクレオチド残基
（３）非修飾ヌクレオチド残基および修飾ヌクレオチド残基
【０１２７】
前記リンカー領域（Ｌｘ）は、例えば、前記非ヌクレオチド残基のみから構成されてもよいし、前記非ヌクレオチドと前記ヌクレオチド残基から構成されてもよい。前記リンカー領域（Ｌｘ）は、例えば、下記（４）〜（７）の残基で構成される。
（４）非ヌクレオチド残基
（５）非ヌクレオチド残基および非修飾ヌクレオチド残基
（６）非ヌクレオチド残基および修飾ヌクレオチド残基
（７）非ヌクレオチド残基、非修飾ヌクレオチド残基および修飾ヌクレオチド残基
【０１２８】
前記リンカー領域（Ｌｙ）の構成単位は、特に制限されず、例えば、前述のように、前記ヌクレオチド残基および前記非ヌクレオチド残基等があげられる。前記リンカー領域（Ｌｙ）は、例えば、前記ヌクレオチド残基のみから構成されてもよいし、前記非ヌクレオチド残基のみから構成されてもよいし、前記ヌクレオチド残基と前記非ヌクレオチド残基から構成されてもよい。前記リンカー領域（Ｌｙ）は、例えば、下記（１）〜（７）の残基で構成される。
（１）非修飾ヌクレオチド残基
（２）修飾ヌクレオチド残基
（３）非修飾ヌクレオチド残基および修飾ヌクレオチド残基
（４）非ヌクレオチド残基
（５）非ヌクレオチド残基および非修飾ヌクレオチド残基
（６）非ヌクレオチド残基および修飾ヌクレオチド残基
（７）非ヌクレオチド残基、非修飾ヌクレオチド残基および修飾ヌクレオチド残基
【０１２９】
前記ｓｓＰＮ分子は、例えば、前記リンカー領域（Ｌｘ）を除き、前記ヌクレオチド残基のみから構成される分子、前記ヌクレオチド残基の他に前記非ヌクレオチド残基を含む分子等があげられる。前記ｓｓＰＮ分子において、前記ヌクレオチド残基は、前述のように、例えば、前記非修飾ヌクレオチド残基のみでもよいし、前記修飾ヌクレオチド残基のみでもよいし、前記非修飾ヌクレオチド残基および前記修飾ヌクレオチド残基の両方であってもよい。前記ｓｓＰＮ分子が、前記非修飾ヌクレオチド残基と前記修飾ヌクレオチド残基を含む場合、前記修飾ヌクレオチド残基の個数は、特に制限されず、例えば、「１もしくは数個」であり、具体的には、例えば、１〜５個、好ましくは１〜４個、より好ましくは１〜３個、最も好ましくは１または２個である。前記ｓｓＰＮ分子が、前記非ヌクレオチド残基を含む場合、前記非ヌクレオチド残基の個数は、特に制限されず、例えば、「１もしくは数個」であり、具体的には、例えば、１または２個である。
【０１３０】
前記ｓｓＰＮ分子において、前記ヌクレオチド残基は、例えば、リボヌクレオチド残基が好ましい。この場合、前記ｓｓＰＮ分子は、例えば、「ｓｓＲＮＡ分子」、または「Ｐ−ｓｓＲＮＡ分子」ともいう。前記ｓｓＲＮＡ分子は、例えば、前記リンカー領域（Ｌｘ）を除き、前記リボヌクレオチド残基のみから構成される分子、前記リボヌクレオチド残基の他に前記非ヌクレオチド残基を含む分子等があげられる。前記ｓｓＲＮＡ分子において、前記リボヌクレオチド残基は、前述のように、例えば、前記非修飾リボヌクレオチド残基のみでもよいし、前記修飾リボヌクレオチド残基のみでもよいし、前記非修飾リボヌクレオチド残基および前記修飾リボヌクレオチド残基の両方を含んでもよい。
【０１３１】
前記ｓｓＲＮＡ分子が、例えば、前記非修飾リボヌクレオチド残基の他に前記修飾リボヌクレオチド残基を含む場合、前記修飾リボヌクレオチド残基の個数は、特に制限されず、例えば、「１もしくは数個」であり、具体的には、例えば、１〜５個、好ましくは１〜４個、より好ましくは１〜３個、最も好ましくは１または２個である。前記非修飾リボヌクレオチド残基に対する前記修飾リボヌクレオチド残基としては、例えば、リボース残基がデオキシリボース残基に置換された前記デオキシリボヌクレオチド残基等があげられる。前記ｓｓＲＮＡ分子が、例えば、前記非修飾リボヌクレオチド残基の他に前記デオキシリボヌクレオチド残基を含む場合、前記デオキシリボヌクレオチド残基の個数は、特に制限されず、例えば、「１もしくは数個」であり、具体的には、例えば、１〜５個、好ましくは１〜４個、より好ましくは１〜３個、最も好ましくは１または２個である。
【０１３２】
前記ｓｓＰＮ分子は、例えば、標識物質を含み、前記標識物質で標識化されてもよい。前記標識物質は、特に制限されず、例えば、蛍光物質、色素、同位体等があげられる。前記標識物質は、例えば、ピレン、ＴＡＭＲＡ、フルオレセイン、Ｃｙ３色素、Ｃｙ５色素等の蛍光団があげられ、前記色素は、例えば、Ａｌｅｘａ４８８等のＡｌｅｘａ色素等があげられる。前記同位体は、例えば、安定同位体および放射性同位体があげられ、好ましくは安定同位体である。前記安定同位体は、例えば、被ばくの危険性が少なく、専用の施設も不要であることから取り扱い性に優れ、また、コストも低減できる。また、前記安定同位体は、例えば、標識した化合物の物性変化がなく、トレーサーとしての性質にも優れる。前記安定同位体は、特に制限されず、例えば、２Ｈ、１３Ｃ、１５Ｎ、１７Ｏ、１８Ｏ、３３Ｓ、３４Ｓおよび３６Ｓ等があげられる。
【０１３３】
本発明において、「アルキル」は、例えば、直鎖状または分枝状のアルキル基を含む。前記アルキルの炭素数は、特に制限されず、例えば、１〜３０であり、好ましくは、１〜６または１〜４である。前記アルキル基は、例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ぺンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ｎ−ヘキシル、イソヘキシル、ｎ−ヘプチル、ｎ−オクチル、ｎ−ノニル、ｎ−デシル等があげられる。好ましくは、例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ぺンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ｎ-ヘキシル、イソヘキシル等があげられる。
【０１３４】
本発明において、「アルケニル」は、例えば、直鎖状または分枝状のアルケニルを含む。前記アルケニルは、前記アルキルにおいて、１個または複数の二重結合を有するもの等があげられる。前記アルケニルの炭素数は、特に制限されず、例えば、前記アルキルと同様であり、好ましくは２〜８である。前記アルケニルは、例えば、ビニル、１−プロペニル、２−プロペニル、１−ブテニル、２−ブテニル、３−ブテニル、１，３−ブタジエニル、３−メチル−２−ブテニル等があげられる。
【０１３５】
本発明において、「アルキニル」は、例えば、直鎖状または分枝状のアルキニルを含む。前記アルキニルは、前記アルキルにおいて、１個または複数の三重結合を有するもの等があげられる。前記アルキニルの炭素数は、特に制限されず、例えば、前記アルキルと同様であり、好ましくは２〜８である。前記アルキニルは、例えば、エチニル、プロピニル、ブチニル等があげられる。前記アルキニルは、例えば、さらに、１個または複数の二重結合を有してもよい。
【０１３６】
本発明において、「アリール」は、例えば、単環芳香族炭化水素基および多環芳香族炭化水素基を含む。前記単環芳香族炭化水素基は、例えば、フェニル等があげられる。前記多環芳香族炭化水素基は、例えば、１−ナフチル、２−ナフチル、１−アントリル、２−アントリル、９−アントリル、１−フェナントリル、２−フェナントリル、３−フェナントリル、４−フェナントリル、９−フェナントリル等があげられる。好ましくは、例えば、フェニル、１−ナフチルおよび２−ナフチル等のナフチル等があげられる。
【０１３７】
本発明において、「ヘテロアリール」は、例えば、単環芳香族複素環式基および縮合芳香族複素環式基を含む。前記ヘテロアリールは、例えば、フリル（例：２−フリル、３−フリル）、チエニル（例：２−チエニル、３−チエニル）、ピロリル（例：１−ピロリル、２−ピロリル、３−ピロリル）、イミダゾリル（例：１−イミダゾリル、２−イミダゾリル、４−イミダゾリル）、ピラゾリル（例：１−ピラゾリル、３−ピラゾリル、４−ピラゾリル）、トリアゾリル（例：１，２，４−トリアゾール−１−イル、１，２，４−トリアゾール−３−イル、１，２，４−トリアゾール−４−イル）、テトラゾリル（例：１−テトラゾリル、２−テトラゾリル、５−テトラゾリル）、オキサゾリル（例：２−オキサゾリル、４−オキサゾリル、５−オキサゾリル）、イソキサゾリル（例：３−イソキサゾリル、４−イソキサゾリル、５−イソキサゾリル）、チアゾリル（例：２−チアゾリル、４−チアゾリル、５−チアゾリル）、チアジアゾリル、イソチアゾリル（例：３−イソチアゾリル、４−イソチアゾリル、５−イソチアゾリル）、ピリジル（例：２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル）、ピリダジニル（例：３−ピリダジニル、４−ピリダジニル）、ピリミジニル（例：２−ピリミジニル、４−ピリミジニル、５−ピリミジニル）、フラザニル（例：３−フラザニル）、ピラジニル（例：２−ピラジニル）、オキサジアゾリル（例：１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）、ベンゾフリル（例：２−ベンゾ［ｂ］フリル、−ベンゾ［ｂ］フリル、４−ベンゾ［ｂ］フリル、５−ベンゾ［ｂ］フリル、６−ベンゾ［ｂ］フリル、７−ベンゾ［ｂ］フリル）、ベンゾチエニル（例：２−ベンゾ［ｂ］チエニル、３−ベンゾ［ｂ］チエニル、４−ベンゾ［ｂ］チエニル、５−ベンゾ［ｂ］チエニル、６−ベンゾ［ｂ］チエニル、７−ベンゾ［ｂ］チエニル）、ベンズイミダゾリル（例：１−ベンゾイミダゾリル、２−ベンゾイミダゾリル、４−ベンゾイミダゾリル、５−ベンゾイミダゾリル）、ジベンゾフリル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾチアゾリル、キノキサリル（例：２−キノキサリニル、５−キノキサリニル、６−キノキサリニル）、シンノリニル（例：３−シンノリニル、４−シンノリニル、５−シンノリニル、６−シンノリニル、７−シンノリニル、８−シンノリニル）、キナゾリル（例：２−キナゾリニル、４−キナゾリニル、５−キナゾリニル、６−キナゾリニル、７−キナゾリニル、８−キナゾリニル）、キノリル（例：２−キノリル、３−キノリル、４−キノリル、５−キノリル、６−キノリル、７−キノリル、８−キノリル）、フタラジニル（例：１−フタラジニル、５−フタラジニル、６−フタラジニル）、イソキノリル（例：１−イソキノリル、３−イソキノリル、４−イソキノリル、５−イソキノリル、６−イソキノリル、７−イソキノリル、８−イソキノリル）、プリル、プテリジニル（例：２−プテリジニル、４−プテリジニル、６−プテリジニル、７−プテリジニル）、カルバゾリル、フェナントリジニル、アクリジニル（例：１−アクリジニル、２−アクリジニル、３−アクリジニル、４−アクリジニル、９−アクリジニル）、インドリル（例：１−インドリル、２−インドリル、３−インドリル、４−インドリル、５−インドリル、６−インドリル、７−インドリル）、イソインドリル、フェナジニル（例：１−フェナジニル、２−フェナジニル）またはフェノチアジニル（例：１−フェノチアジニル、２−フェノチアジニル、３−フェノチアジニル、４−フェノチアジニル）等があげられる。
【０１３８】
本発明において、「シクロアルキル」は、例えば、環状飽和炭化水素基であり、炭素数は、例えば、３〜１５である。前記シクロアルキルは、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、橋かけ環式炭化水素基、スピロ炭化水素基等があげられ、好ましくは、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、橋かけ環式炭化水素基等があげられる。
【０１３９】
本発明において、「橋かけ環式炭化水素基」は、例えば、ビシクロ［２．１．０］ペンチル、ビシクロ［２．２．１］ヘプチル、ビシクロ［２．２．２］オクチルおよびビシクロ［３．２．１］オクチル、トリシクロ［２．２．１．０］ヘプチル、ビシクロ［３．３．１］ノナン、１−アダマンチル、２−アダマンチル等があげられる。
【０１４０】
本発明において、「スピロ炭化水素基」は、例えば、スピロ［３．４］オクチル等があげられる。
【０１４１】
本発明において、「シクロアルケニル」は、例えば、環状の不飽和脂肪族炭化水素基を含み、炭素数は、例えば、３〜７個である。前記基は、例えば、シクロプロペニル、シクロブテニル、シクロペンテニル、シクロヘキセニル、シクロヘプテニル等があげられ、好ましくは、シクロプロペニル、シクロブテニル、シクロペンテニル、シクロヘキセニル等である。前記シクロアルケニルは、例えば、環中に不飽和結合を有する橋かけ環式炭化水素基およびスピロ炭化水素基も含む。
【０１４２】
本発明において、「アリールアルキル」は、例えば、ベンジル、２−フェネチル、およびナフタレニルメチル等があげられ、「シクロアルキルアルキル」または「シクリルアルキル」は、例えば、シクロヘキシルメチル、アダマンチルメチル等があげられ、「ヒドロキシアルキル」は、例えば、ヒドロキシメチルおよび２−ヒドロキシエチル等があげられる。
【０１４３】
本発明において、「アルコキシ」は、例えば、前記アルキル−Ｏ−基を含み、例えば、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、イソプロポキシ、およびｎ−ブトキシ等があげられ、「アルコキシアルキル」は、例えば、メトキシメチル等があげられ、「アミノアルキル」は、例えば、２−アミノエチル等があげられる。
【０１４４】
本発明において、「ヘテロシクリル」は、例えば、１−ピロリニル、２−ピロリニル、３−ピロリニル、１−ピロリジニル、２−ピロリジニル、３−ピロリジニル、ピロリジノン、１−イミダゾリニル、２−イミダゾリニル、４−イミダゾリニル、１−イミダゾリジニル、２−イミダゾリジニル、４−イミダゾリジニル、イミダゾリジノン、１−ピラゾリニル、３−ピラゾリニル、４−ピラゾリニル、１−ピラゾリジニル、３−ピラゾリジニル、４−ピラゾリジニル、ピペリジノン、ピペリジノ、２−ピペリジニル、３−ピペリジニル、４−ピペリジニル、１−ピペラジニル、２−ピペラジニル、ピペラジノン、２−モルホリニル、３−モルホリニル、モルホリノ、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロフラニル等があげられる。
【０１４５】
本発明において、「ヘテロシクリルアルキル」は、例えば、ピペリジニルメチル、ピペラジニルメチル等があげられ、「ヘテロシクリルアルケニル」は、例えば、２−ピペリジニルエテニル等があげられ、「ヘテロアリールアルキル」は、例えば、ピリジルメチルおよびキノリン−３−イルメチル等があげられる。
【０１４６】
本発明において、「シリル」は、式Ｒ３Ｓｉ−で表される基を含み、Ｒは、独立して、前記アルキル、アリールおよびシクロアルキルから選択でき、例えば、トリメチルシリル基、tert-ブチルジメチルシリル基等があげられ、「シリルオキシ」は、例えば、トリメチルシリルオキシ基等があげられ、「シリルオキシアルキル」は、例えば、トリメチルシリルオキシメチル等があげられる。
【０１４７】
本発明において、「アルキレン」は、例えば、メチレン、エチレン、およびプロピレン等があげられる。
【０１４８】
本発明において、前述した各種基は、置換されてもよい。前記置換基は、例えば、ヒドロキシ、カルボキシ、ハロゲン、ハロゲン化アルキル（例：ＣＦ３、ＣＨ２ＣＦ３、ＣＨ２ＣＣｌ３）、ニトロ、ニトロソ、シアノ、アルキル（例：メチル、エチル、イソプロピル、ｔｅｒｔ−ブチル）、アルケニル（例：ビニル）、アルキニル（例：エチニル）、シクロアルキル（例：シクロプロピル、アダマンチル）、シクロアルキルアルキル（例：シクロヘキシルメチル、アダマンチルメチル）、シクロアルケニル（例：シクロプロペニル）、アリール（例：フェニル、ナフチル）、アリールアルキル（例：ベンジル、フェネチル）、ヘテロアリール（例：ピリジル、フリル）、ヘテロアリールアルキル（例：ピリジルメチル）、ヘテロシクリル（例：ピペリジル）、ヘテロシクリルアルキル（例：モルホリルメチル）、アルコキシ（例：メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ）、ハロゲン化アルコキシ（例：ＯＣＦ３）、アルケニルオキシ（例：ビニルオキシ、アリルオキシ）、アリールオキシ（例：フェニルオキシ）、アルキルオキシカルボニル（例：メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）、アリールアルキルオキシ（例：ベンジルオキシ）、アミノ［アルキルアミノ（例：メチルアミノ、エチルアミノ、ジメチルアミノ）、アシルアミノ（例：アセチルアミノ、ベンゾイルアミノ）、アリールアルキルアミノ（例：ベンジルアミノ、トリチルアミノ）、ヒドロキシアミノ］、アルキルアミノアルキル（例：ジエチルアミノメチル）、スルファモイル、オキソ等があげられる。
【０１４９】
（２）ヌクレオチド残基
本発明の組成物に含有される前記核酸分子を構成するヌクレオチド残基は、例えば、構成要素として、糖、塩基およびリン酸を含む。前記ヌクレオチド残基は、前述のように、例えば、リボヌクレオチド残基およびデオキシリボヌクレオチド残基等があげられる。前記リボヌクレオチド残基は、例えば、糖としてリボース残基を有し、塩基として、アデニン（Ａ）、グアニン（Ｇ）、シトシン（Ｃ）およびＵ（ウラシル）を有し、前記デオキシリボース残基は、例えば、糖としてデオキシリボース残基を有し、塩基として、アデニン（Ａ）、グアニン（Ｇ）、シトシン（Ｃ）およびチミン（Ｔ）を有する。
【０１５０】
前記ヌクレオチド残基は、未修飾ヌクレオチド残基および修飾ヌクレオチド残基等があげられる。前記未修飾ヌクレオチド残基は、前記各構成要素が、例えば、天然に存在するものと同一または実質的に同一であり、好ましくは、人体において天然に存在するものと同一または実質的に同一である。
【０１５１】
前記修飾ヌクレオチド残基は、例えば、前記未修飾ヌクレオチド残基を修飾したヌクレオチド残基である。前記修飾ヌクレオチドは、例えば、前記未修飾ヌクレオチド残基の構成要素のいずれが修飾されてもよい。本発明において、「修飾」は、例えば、前記構成要素の置換、付加および／または欠失、前記構成要素における原子および／または官能基の置換、付加および／または欠失であり、「改変」ということができる。前記修飾ヌクレオチド残基は、例えば、天然に存在するヌクレオチド残基、人工的に修飾したヌクレオチド残基等があげられる。前記天然由来の修飾ヌクレオチド残基は、例えば、リンバックら（Ｌｉｍｂａｃｈ  ｅｔ  ａｌ．、１９９４、Ｓｕｍｍａｒｙ：ｔｈｅ  ｍｏｄｉｆｉｅｄ  ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ  ｏｆ  ＲＮＡ、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２２：２１８３〜２１９６）を参照できる。また、前記修飾ヌクレオチド残基は、例えば、前記ヌクレオチドの代替物の残基であってもよい
【０１５２】
前記ヌクレオチド残基の修飾は、例えば、リボース−リン酸骨格（以下、リボリン酸骨格）の修飾等があげられる。
【０１５３】
前記リボリン酸骨格において、例えば、リボース残基を修飾できる。前記リボース残基は、例えば、２’位炭素を修飾でき、具体的には、例えば、２’位炭素に結合する水酸基を、水素またはフルオロ等に置換できる。前記２’位炭素の水酸基を水素に置換することで、リボース残基をデオキシリボースに置換できる。前記リボース残基は、例えば、立体異性体に置換でき、例えば、アラビノース残基に置換してもよい。
【０１５４】
前記リボリン酸骨格は、例えば、非リボース残基および／または非リン酸を有する非リボリン酸骨格に置換してもよい。前記非リボリン酸骨格は、例えば、前記リボリン酸骨格の非荷電体等があげられる。前記非リボリン酸骨格に置換された、前記ヌクレオチドの代替物は、例えば、モルホリノ、シクロブチル、ピロリジン等があげられる。前記代替物は、この他に、例えば、人工核酸モノマー残基等があげられる。具体例として、例えば、ＰＮＡ（ペプチド核酸）、ＬＮＡ（Ｌｏｃｋｅｄ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ）、ＥＮＡ（２’−Ｏ，４’−Ｃ−Ｅｔｈｙｌｅｎｅｂｒｉｄｇｅｄ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ）等があげられ、好ましくはＰＮＡである。
【０１５５】
前記リボリン酸骨格において、例えば、リン酸基を修飾できる。前記リボリン酸骨格において、糖残基に最も近いリン酸基は、αリン酸基と呼ばれる。前記αリン酸基は、負に荷電し、その電荷は、糖残基に非結合の２つの酸素原子にわたって、均一に分布している。前記αリン酸基における４つの酸素原子のうち、ヌクレオチド残基間のホスホジエステル結合において、糖残基と非結合である２つの酸素原子は、以下、「非結合（ｎｏｎ−ｌｉｎｋｉｎｇ）酸素」ともいう。他方、前記ヌクレオチド残基間のホスホジエステル結合において、糖残基と結合している２つの酸素原子は、以下、「結合（ｌｉｎｋｉｎｇ）酸素」という。前記αリン酸基は、例えば、非荷電となる修飾、または、前記非結合原子における電荷分布が非対称型となる修飾を行うことが好ましい。
【０１５６】
前記リン酸基は、例えば、前記非結合酸素を置換してもよい。前記酸素は、例えば、Ｓ（硫黄）、Ｓｅ（セレン）、Ｂ（ホウ素）、Ｃ（炭素）、Ｈ（水素）、Ｎ（窒素）およびＯＲ（Ｒは、例えば、アルキル基またはアリール基）のいずれかの原子で置換でき、好ましくは、Ｓで置換される。前記非結合酸素は、例えば、両方が置換されていることが好ましく、より好ましくは、両方がＳで置換される。前記修飾リン酸基は、例えば、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホロセレネート、ボラノホスフェート、ボラノホスフェートエステル、ホスホネート水素、ホスホロアミデート、アルキルまたはアリールホスホネート、およびホスホトリエステル等があげられ、中でも、前記２つの非結合酸素が両方ともＳで置換されているホスホロジチオエートが好ましい。
【０１５７】
前記リン酸基は、例えば、前記結合酸素を置換してもよい。前記酸素は、例えば、Ｓ（硫黄）、Ｃ（炭素）およびＮ（窒素）のいずれかの原子で置換でき。前記修飾リン酸基は、例えば、Ｎで置換した架橋ホスホロアミデート、Ｓで置換した架橋ホスホロチオエート、およびＣで置換した架橋メチレンホスホネート等があげられる。前記結合酸素の置換は、例えば、前記ｓｓＰＮ分子の５’末端ヌクレオチド残基および３’末端ヌクレオチド残基の少なくとも一方において行うことが好ましく、５’側の場合、Ｃによる置換が好ましく、３’側の場合、Ｎによる置換が好ましい。
【０１５８】
前記リン酸基は、例えば、前記リン非含有のリンカーに置換してもよい。前記リンカーは、例えば、シロキサン、カーボネート、カルボキシメチル、カルバメート、アミド、チオエーテル、エチレンオキサイドリンカー、スルホネート、スルホンアミド、チオホルムアセタール、ホルムアセタール、オキシム、メチレンイミノ、メチレンメチルイミノ、メチレンヒドラゾ、メチレンジメチルヒドラゾ、およびメチレンオキシメチルイミノ等を含み、好ましくは、メチレンカルボニルアミノ基およびメチレンメチルイミノ基を含む。
【０１５９】
前記ｓｓＰＮ分子は、例えば、３’末端および５’末端の少なくとも一方のヌクレオチド残基が修飾されてもよい。前記修飾は、例えば、３’末端および５’末端のいずれか一方でもよいし、両方でもよい。前記修飾は、例えば、前述の通りであり、好ましくは、末端のリン酸基に行うことが好ましい。前記リン酸基は、例えば、全体を修飾してもよいし、前記リン酸基における１つ以上の原子を修飾してもよい。前者の場合、例えば、リン酸基全体の置換でもよいし、欠失でもよい。
【０１６０】
前記末端のヌクレオチド残基の修飾は、例えば、他の分子の付加等があげられる。前記他の分子は、例えば、前述のような標識物質、保護基等の機能性分子等があげられる。前記保護基は、例えば、Ｓ（硫黄）、Ｓｉ（ケイ素）、Ｂ（ホウ素）、エステル含有基等があげられる。前記標識物質等の機能性分子は、例えば、前記ｓｓＰＮ分子の検出等に利用できる。
【０１６１】
前記他の分子は、例えば、前記ヌクレオチド残基のリン酸基に付加してもよいし、スペーサーを介して、前記リン酸基または前記糖残基に付加してもよい。前記スペーサーの末端原子は、例えば、前記リン酸基の前記結合酸素、または、糖残基のＯ、Ｎ、ＳもしくはＣに、付加または置換できる。前記糖残基の結合部位は、例えば、３’位のＣもしくは５’位のＣ、またはこれらに結合する原子が好ましい。前記スペーサーは、例えば、前記ＰＮＡ等のヌクレオチド代替物の末端原子に、付加または置換することもできる。
【０１６２】
前記スペーサーは、特に制限されず、例えば、−（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＮ−、−（ＣＨ２）ｎＯ−、−（ＣＨ２）ｎＳ−、Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、無塩基糖、アミド、カルボキシ、アミン、オキシアミン、オキシイミン、チオエーテル、ジスルフィド、チオ尿素、スルホンアミド、およびモルホリノ等、ならびに、ビオチン試薬およびフルオレセイン試薬等を含んでもよい。前記式において、ｎは、正の整数であり、ｎ＝３または６が好ましい。
【０１６３】
前記末端に付加する分子は、これらの他に、例えば、色素、インターカレート剤（例えば、アクリジン）、架橋剤（例えば、ソラレン、マイトマイシンＣ）、ポルフィリン（ＴＰＰＣ４、テキサフィリン、サッフィリン）、多環式芳香族炭化水素（例えば、フェナジン、ジヒドロフェナジン）、人工エンドヌクレアーゼ（例えば、ＥＤＴＡ）、親油性担体（例えば、コレステロール、コール酸、アダマンタン酢酸、１−ピレン酪酸、ジヒドロテストステロン、１，３−ビス−Ｏ（ヘキサデシル）グリセロール、ゲラニルオキシヘキシル基、ヘキサデシルグリセロール、ボルネオール、メントール、１，３−プロパンジオール、ヘプタデシル基、パルミチン酸、ミリスチン酸、Ｏ３−（オレオイル）リトコール酸、Ｏ３−（オレオイル）コール酸、ジメトキシトリチル、またはフェノキサジン）およびペプチド複合体（例えば、アンテナペディアペプチド、Ｔａｔペプチド）、アルキル化剤、リン酸、アミノ、メルカプト、ＰＥＧ（例えば、ＰＥＧ−４０Ｋ）、ＭＰＥＧ、［ＭＰＥＧ］２、ポリアミノ、アルキル、置換アルキル、放射線標識マーカー、酵素、ハプテン（例えば、ビオチン）、輸送／吸収促進剤（例えば、アスピリン、ビタミンＥ、葉酸）、合成リボヌクレアーゼ（例えば、イミダゾール、ビスイミダゾール、ヒスタミン、イミダゾールクラスター、アクリジン−イミダゾール複合体、テトラアザマクロ環のＥｕ３＋複合体）等があげられる。
【０１６４】
前記ｓｓＰＮ分子は、前記５’末端が、例えば、リン酸基またはリン酸基アナログで修飾されてもよい。前記リン酸化は、例えば、５’一リン酸（(HO)2(O)P-O-5’）、５’二リン酸（(HO)2(O)P-O-P(HO)(O)-O-5’）、５’三リン酸（(HO)2(O)P-O-(HO)(O)P-O-P(HO)(O)-O-5’）、５’−グアノシンキャップ（７−メチル化または非メチル化、7m-G-O-5’-(HO)(O)P-O-(HO)(O)P-O-P(HO)(O)-O-5’）、５’−アデノシンキャップ（Ａｐｐｐ）、任意の修飾または非修飾ヌクレオチドキャップ構造（N-O-5’-(HO)(O)P-O-(HO)(O)P-O-P(HO)(O)-O-5’）、５’一チオリン酸（ホスホロチオエート：(HO)2(S)P-O-5’）、５’一ジチオリン酸（ホスホロジチオエート：(HO)(HS)(S)P-O-5’）、５’−ホスホロチオール酸（(HO)2(O)P-S-5’）、硫黄置換の一リン酸、二リン酸および三リン酸（例えば、５’−α−チオ三リン酸、５’−γ−チオ三リン酸等）、５’−ホスホルアミデート（(HO)2(O)P-NH-5’、(HO)(NH2)(O)P-O-5’）、５’−アルキルホスホン酸（例えば、RP(OH)(O)-O-5’、(OH)2(O)P-5’-CH2、Ｒはアルキル（例えば、メチル、エチル、イソプロピル、プロピル等））、５’−アルキルエーテルホスホン酸（例えば、RP(OH)(O)-O-5’、Ｒはアルキルエーテル（例えば、メトキシメチル、エトキシメチル等））等があげられる。
【０１６５】
前記ヌクレオチド残基において、前記塩基は、特に制限されない。前記塩基は、例えば、天然の塩基でもよいし、非天然の塩基でもよい。前記塩基は、例えば、天然由来でもよいし、合成品でもよい。前記塩基は、例えば、一般的な塩基、その修飾アナログ等が使用できる。
【０１６６】
前記塩基は、例えば、アデニンおよびグアニン等のプリン塩基、シトシン、ウラシルおよびチミン等のピリミジン塩基等があげられる。前記塩基は、この他に、イノシン、チミン、キサンチン、ヒポキサンチン、ヌバラリン（ｎｕｂｕｌａｒｉｎｅ）、イソグアニシン（ｉｓｏｇｕａｎｉｓｉｎｅ）、ツベルシジン（ｔｕｂｅｒｃｉｄｉｎｅ）等があげられる。前記塩基は、例えば、２−アミノアデニン、６−メチル化プリン等のアルキル誘導体；２−プロピル化プリン等のアルキル誘導体；５−ハロウラシルおよび５−ハロシトシン；５−プロピニルウラシルおよび５−プロピニルシトシン；６−アゾウラシル、６−アゾシトシンおよび６−アゾチミン；５−ウラシル（プソイドウラシル）、４−チオウラシル、５−ハロウラシル、５−（２−アミノプロピル）ウラシル、５−アミノアリルウラシル；８−ハロ化、アミノ化、チオール化、チオアルキル化、ヒドロキシル化および他の８−置換プリン；５−トリフルオロメチル化および他の５−置換ピリミジン；７−メチルグアニン；５−置換ピリミジン；６−アザピリミジン；Ｎ−２、Ｎ−６、およびＯ−６置換プリン（２−アミノプロピルアデニンを含む）；５−プロピニルウラシルおよび５−プロピニルシトシン；ジヒドロウラシル；３−デアザ−５−アザシトシン；２−アミノプリン；５−アルキルウラシル；７−アルキルグアニン；５−アルキルシトシン；７−デアザアデニン；Ｎ６，Ｎ６−ジメチルアデニン；２，６−ジアミノプリン；５−アミノ−アリル−ウラシル；Ｎ３−メチルウラシル；置換１，２，４−トリアゾール；２−ピリジノン；５−ニトロインドール；３−ニトロピロール；５−メトキシウラシル；ウラシル−５−オキシ酢酸；５−メトキシカルボニルメチルウラシル；５−メチル−２−チオウラシル；５−メトキシカルボニルメチル−２−チオウラシル；５−メチルアミノメチル−２−チオウラシル；３−（３−アミノ−３−カルボキシプロピル）ウラシル；３−メチルシトシン；５−メチルシトシン；Ｎ４−アセチルシトシン；２−チオシトシン；Ｎ６−メチルアデニン；Ｎ６−イソペンチルアデニン；２−メチルチオ−Ｎ６−イソペンテニルアデニン；Ｎ−メチルグアニン；Ｏ−アルキル化塩基等があげられる。また、プリンおよびピリミジンは、例えば、米国特許第３，６８７，８０８号、「Ｃｏｎｃｉｓｅ  Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  Ｏｆ  Ｐｏｌｙｍｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ａｎｄ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ」、８５８〜８５９頁、クロシュビッツ  ジェー  アイ（Ｋｒｏｓｃｈｗｉｔｚ  Ｊ．Ｉ．）編、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ、１９９０、およびイングリッシュら（Ｅｎｇｌｉｓｃｈら）、Ａｎｇｅｗａｎｄｔｅ  Ｃｈｅｍｉｅ、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｅｄｉｔｉｏｎ、１９９１、３０巻、ｐ．６１３に開示されるものが含まれる。
【０１６７】
本発明において用いられる前記ｓｓＰＮ分子の具体例としては、後述のPH-0009、PK-7006、PK-7015、PH-7069、およびPH-7081で示されるｓｓＰＮ分子が挙げられるが、それらに限定されるものではない。
【０１６８】
ＩＩ．ヌクレオチド残基および／または非ヌクレオチド残基で構成されるリンカーを含む、標的遺伝子の発現を制御する配列を含む一本鎖核酸分子
（１）ｓｓＮｃ分子
前記一本鎖核酸分子として、ヌクレオチド残基および／または非ヌクレオチド残基で構成されるリンカーを含む一本鎖核酸分子が挙げられる。その一例として、国際公開第２０１２/００５３６８号パンフレットに記載される、５’側から３’側にかけて、５’側領域（Ｘｃ）、内部領域（Ｚ）および３’側領域（Ｙｃ）を、前記順序で含み、前記内部領域（Ｚ）が、内部５’側領域（Ｘ）および内部３’側領域（Ｙ）が連結して構成され、
前記５’側領域（Ｘｃ）が、前記内部５’側領域（Ｘ）と相補的であり、
前記３’側領域（Ｙｃ）が、前記内部３’側領域（Ｙ）と相補的であり、
前記内部領域（Ｚ）、前記５’側領域（Ｘｃ）および前記３’側領域（Ｙｃ）の少なくとも一つが、前記発現制御配列を含む、一本鎖核酸分子（以下、「ｓｓＮｃ分子」ともいう）を挙げることができる。もちろん、これは単なる例示であって、任意の核酸分子に適用できることは、当業者に自明である。従って、当業者は、公知技術と当該分野における技術常識に基づいて、所望の核酸分子を適宜調製することができる。
【０１６９】
前記ｓｓＮｃ分子において、前記発現制御配列は、前記ｓｓＮｃ分子が、ｉｎ  ｖｉｖｏまたはｉｎ  ｖｉｔｒｏで細胞内に導入された場合に、前記標的遺伝子の発現を抑制する活性を示す配列である。前記発現制御配列は、特に制限されず、目的の標的遺伝子の種類に応じて、適宜設定できる。前記発現制御配列は、例えば、ｓｉＲＮＡによるＲＮＡ干渉に関与する配列を適宜適用できる。即ち、前記ｓｉＲＮＡの、標的ｍＲＮＡと結合する鎖のＲＮＡ配列を、前記発現制御配列として使用できる。
【０１７０】
前記ｓｓＮｃ分子において、前記５’側領域（Ｘｃ）は、前記内部５’側領域（Ｘ）と相補的であり、前記３’側領域（Ｙｃ）は、前記内部３’側領域（Ｙ）と相補的である。このため、５’側において、前記領域（Ｘｃ）が前記領域（Ｘ）に向かって折り返し、前記領域（Ｘｃ）と前記領域（Ｘ）とが、自己アニーリングによって、二重鎖を形成可能であり、また、３’側において、前記領域（Ｙｃ）が前記領域（Ｙ）に向かって折り返し、前記領域（Ｙｃ）と前記領域（Ｙ）とが、自己アニーリングによって、二重鎖を形成可能である。前記ｓｓＮｃ分子は、このように、分子内で二重鎖を形成可能であり、例えば、従来のＲＮＡ干渉に使用するｓｉＲＮＡのように、分離した２本の一本鎖ＲＮＡがアニーリングによって二本鎖ＲＮＡを形成するものとは、明らかに異なる構造である。
【０１７１】
前記発現制御配列は、例えば、前記標的遺伝子の所定領域に対して、９０％以上の相補性を有していることが好ましく、より好ましくは９５％であり、さらに好ましくは９８％であり、特に好ましくは１００％である。このような相補性を満たすことにより、例えば、オフターゲットを十分に軽減できる。
【０１７２】
具体例として、標的遺伝子がLuciferase遺伝子の場合、前記発現制御配列は、例えば、配列番号５に示す配列が使用でき、標的遺伝子がマウスGAPDH遺伝子の場合、前記発現制御配列は、例えば、配列番号６に示す配列が使用できる。
５’−UCGAAGUACUCGGCGUAGG−３’  （配列番号５）
５’−GUUGUCAUAUUUCUCGUGG−３’  （配列番号６）
【０１７３】
前記ｓｓＮｃ分子において、前記発現制御配列は、前述のように、前記内部領域（Ｚ）、前記５’側領域（Ｘｃ）および前記３’側領域（Ｙｃ）の少なくとも一つに含まれる。前記ｓｓＮｃ分子は、前記発現制御配列を、例えば、１つ有してもよいし、２つ以上有してもよい。
【０１７４】
後者の場合、前記ｓｓＮｃ分子は、例えば、同じ標的遺伝子に対する同じ発現制御配列を２つ以上有してもよいし、同じ標的遺伝子に対する異なる発現制御配列を２つ以上有してもよいし、異なる標的遺伝子に対する異なる発現制御配列を２つ以上有してもよい。前記ｓｓＮｃ分子が、２つ以上の前記発現制御配列を有する場合、各発現制御配列の配置箇所は、特に制限されず、前記内部領域（Ｚ）、前記５’側領域（Ｘｃ）および前記３’側領域（Ｙｃ）のいずれか一領域でもよいし、異なる領域であってもよい。前記ｓｓＮｃ分子が、異なる標的遺伝子に対する前記発現制御配列を２つ以上有する場合、例えば、前記ｓｓＮｃ分子によって、２種類以上の異なる標的遺伝子の発現を抑制可能である。
【０１７５】
前記内部領域（Ｚ）は、前述のように、前記内部５’領域（Ｘ）と前記内部３’領域（Ｙ）が連結されている。前記領域（Ｘ）と前記領域（Ｙ）は、例えば、直接的に連結され、その間に介在配列を有していない。前記内部領域（Ｚ）は、前記５’側領域（Ｘｃ）および前記３’側領域（Ｘｃ）との配列関係を示すために、「前記内部５’側領域（Ｘ）と前記内部３’側領域（Ｙ）が連結して構成される」と表わすものであって、前記内部領域（Ｚ）において、前記５’側領域（Ｘｃ）と前記３’側領域（Ｘｃ）とが、例えば、前記ｓｓＮｃ分子の使用において、別個の独立した領域であることを限定するものではない。すなわち、例えば、前記内部領域（Ｚ）が、前記発現制御配列を有する場合、前記内部領域（Ｚ）において、前記領域（Ｘ）と前記領域（Ｙ）とにわたって、前記発現制御配列が配置されてもよい。
【０１７６】
前記ｓｓＮｃ分子において、前記５’側領域（Ｘｃ）は、前記内部５’側領域（Ｘ）に相補的である。ここで、前記領域（Ｘｃ）は、前記領域（Ｘ）の全領域またはその部分領域に対して相補的な配列を有していればよく、具体的には、例えば、前記領域（Ｘ）の全領域またはその部分領域に相補的な配列を含む、または、前記相補的な配列からなることが好ましい。前記領域（Ｘｃ）は、前記領域（Ｘ）の相補的な前記全領域または相補的な前記部分領域に対して、例えば、完全に相補的でもよいし、１もしくは数塩基が非相補的であってもよいが、完全に相補的であることが好ましい。前記ｓｓＮｃ分子において、前記３’側領域（Ｙｃ）は、前記内部３’側領域（Ｙ）に相補的である。ここで、前記領域（Ｙｃ）は、前記領域（Ｙ）の全領域またはその部分領域に相補的な配列を有していればよく、具体的には、例えば、前記領域（Ｙ）の全領域またはその部分領域に対して相補的な配列を含む、または、前記相補的な配列からなることが好ましい。前記領域（Ｙｃ）は、前記領域（Ｙ）の相補的な前記全領域または相補的な前記部分領域に対して、例えば、完全に相補的でもよいし、１もしくは数塩基が非相補的であってもよいが、完全に相補的であることが好ましい。前記１塩基若しくは数塩基は、例えば、１〜３塩基、好ましくは１塩基または２塩基である。
【０１７７】
前記ｓｓＮｃ分子において、前記５’側領域（Ｘｃ）と前記内部５’側領域（Ｘ）とは、例えば、直接連結してもよいし、間接的に連結してもよい。前者の場合、直接的な連結は、例えば、ホスホジエステル結合による連結があげられる。後者の場合、例えば、前記領域（Ｘｃ）と前記領域（Ｘ）との間に、リンカー領域（Ｌｘ）を有し、前記リンカー領域（Ｌｘ）を介して、前記領域（Ｘｃ）と前記領域（Ｘ）とが連結している形態があげられる。
【０１７８】
前記ｓｓＮｃ分子において、前記３’側領域（Ｙｃ）と前記内部３’側領域（Ｙ）とは、例えば、直接連結してもよいし、間接的に連結してもよい。前者の場合、直接的な連結は、例えば、ホスホジエステル結合による連結があげられる。後者の場合、例えば、前記領域（Ｙｃ）と前記領域（Ｙ）との間に、リンカー領域（Ｌｙ）を有し、前記リンカー領域（Ｌｙ）を介して、前記領域（Ｙｃ）と前記領域（Ｙ）とが連結している形態があげられる。
【０１７９】
前記ｓｓＮｃ分子は、例えば、前記リンカー領域（Ｌｘ）および前記リンカー領域（Ｌｙ）の両方を有してもよいし、いずれか一方を有してもよい。後者の場合、例えば、前記５’側領域（Ｘｃ）と前記内部５’側領域（Ｘ）との間に前記リンカー領域（Ｌｘ）を有し、前記３’側領域（Ｙｃ）と前記内部３’側領域（Ｙ）との間に前記リンカー領域（Ｌｙ）を有さない、つまり、前記領域（Ｙｃ）と前記領域（Ｙ）とが直接連結された形態があげられる。また、後者の場合、例えば、前記３’側領域（Ｙｃ）と前記内部３’側領域（Ｙ）との間に前記リンカー領域（Ｌｙ）を有し、前記５’側領域（Ｘｃ）と前記内部５’側領域（Ｘ）との間に前記リンカー領域（Ｌｘ）を有さない、つまり、前記領域（Ｘｃ）と前記領域（Ｘ）とが直接連結された形態があげられる。
【０１８０】
前記リンカー領域（Ｌｘ）および前記リンカー領域（Ｌｙ）は、それぞれ、それ自体の領域内部において、自己アニーリングを生じない構造であることが好ましい。
【０１８１】
前記ｓｓＮｃ分子について、前記リンカー領域を有さないｓｓＮｃ分子の一例が、国際公開第２０１２/００５３６８号パンフレットの図１に示されており、これを参照することができる。
【０１８２】
前記ｓｓＮｃ分子について、前記リンカー領域を有するｓｓＮｃ分子の一例が、国際公開第２０１２/００５３６８号パンフレットの図２に示されており、これを参照することができる。
【０１８３】
前記ｓｓＮｃ分子において、前記５’側領域（Ｘｃ）、前記内部５’側領域（Ｘ）、前記内部３’側領域（Ｙ）および前記３’側領域（Ｙｃ）の塩基数は、特に制限されず、例えば、以下の通りである。本発明において、「塩基数」は、例えば、「長さ」を意味し、「塩基長」ということもできる。
【０１８４】
前記５’側領域（Ｘｃ）は、前述のように、例えば、前記内部５’側領域（Ｘ）の全領域に相補的でもよい。この場合、前記領域（Ｘｃ）は、前記第２のｓｓＰＮ分子の説明を用いることができる。
【０１８５】
また、前記５’側領域（Ｘｃ）は、前述のように、例えば、前記内部５’側領域（Ｘ）の部分領域に相補的でもよい。この場合、前記領域（Ｘｃ）は、前記第２のｓｓＰＮ分子の説明を用いることができる。
【０１８６】
前記３’側領域（Ｙｃ）は、前述のように、例えば、前記内部３’側領域（Ｙ）の全領域に相補的でもよい。この場合、前記領域（Ｙｃ）は、前記第２のｓｓＰＮ分子の説明を用いることができる。
【０１８７】
また、前記３’側領域（Ｙｃ）は、前述のように、例えば、前記内部３’側領域（Ｙ）の部分領域に相補的でもよい。この場合、前記領域（Ｙｃ）は、前記第２のｓｓＰＮ分子の説明を用いることができる。
【０１８８】
前記ｓｓＮｃ分子において、前記内部領域（Ｚ）の塩基数（Ｚ）と、前記内部５’側領域（Ｘ）の塩基数（Ｘ）および前記内部３’側領域（Ｙ）の塩基数（Ｙ）との関係、前記内部領域（Ｚ）の塩基数（Ｚ）と、前記内部５’側領域（Ｘ）の塩基数（Ｘ）および前記５’側領域（Ｘｃ）の塩基数（Ｘｃ）との関係は、前記第２のｓｓＰＮ分子の説明を用いることができる。
【０１８９】
前記ｓｓＮｃ分子において、前記内部５’側領域（Ｘ）の塩基数（Ｘ）と前記内部３’側領域（Ｙ）の塩基数（Ｙ）の長さの関係は、前記第２のｓｓＰＮ分子の説明を用いることができる。
【０１９０】
前記ｓｓＮｃ分子において、前記内部５’側領域（Ｘ）の塩基数（Ｘ）、前記５’側領域（Ｘｃ）の塩基数（Ｘｃ）、前記内部３’側領域（Ｙ）の塩基数（Ｙ）および前記３’側領域（Ｙｃ）の塩基数（Ｙｃ）の関係は、前記第２のｓｓＰＮ分子の説明を用いることができる。
【０１９１】
前記ｓｓＮｃ分子について、各領域の長さの例として、前記第２のｓｓＰＮ分子の説明を用いることができるが、本発明は、これには制限されない。本発明において、例えば、塩基数の数値範囲は、その範囲に属する正の整数を全て開示するものであり、例えば、「１〜４塩基」との記載は、「１、２、３、４塩基」の全ての開示を意味する（以下、同様）。
【０１９２】
前記ｓｓＮｃ分子において、前記リンカー領域（Ｌｘ）および前記リンカー領域（Ｌｙ）の長さは、特に制限されない。前記リンカー領域（Ｌｘ）は、例えば、前記内部５’側領域（Ｘ）と前記５’側領域（Ｘｃ）とが二重鎖を形成可能な長さであることが好ましく、前記リンカー領域（Ｌｙ）は、例えば、前記内部３’側領域（Ｙ）と前記３’側領域（Ｙｃ）とが二重鎖を形成可能な長さであることが好ましい。前記リンカー領域（Ｌｘ）および前記リンカー領域（Ｌｙ）の構成単位が塩基を含む場合、前記リンカー領域（Ｌｘ）および前記リンカー領域（Ｌｙ）のそれぞれの塩基数は、同じであっても異なってもよく、また、その塩基配列も、同じであっても異なってもよい。前記リンカー領域（Ｌｘ）および前記リンカー領域（Ｌｙ）の塩基数は、その下限が、例えば、１塩基であり、好ましくは２塩基であり、より好ましくは３塩基であり、その上限が、例えば、１００塩基であり、好ましくは８０塩基であり、より好ましくは５０塩基である。前記各リンカー領域の塩基数は、具体例として、例えば、１〜５０塩基、１〜３０塩基、１〜２０塩基、１〜１０塩基、１〜７塩基、１〜４塩基等が例示できるが、これには制限されない。
【０１９３】
前記ｓｓＮｃ分子の全長は、特に制限されない。前記ｓｓＮｃ分子において、前記塩基数の合計（全長の塩基数）は、下限が、例えば、３８塩基であり、好ましくは４２塩基であり、より好ましくは５０塩基であり、さらに好ましくは５１塩基であり、特に好ましくは５２塩基であり、その上限は、例えば、３００塩基であり、好ましくは２００塩基であり、より好ましくは１５０塩基であり、さらに好ましくは１００塩基であり、特に好ましくは８０塩基である。前記ｓｓＮｃ分子において、前記リンカー領域（Ｌｘ）およびリンカー領域（Ｌｙ）を除く塩基数の合計は、下限が、例えば、３８塩基であり、好ましくは４２塩基であり、より好ましくは５０塩基であり、さらに好ましくは５１塩基であり、特に好ましくは５２塩基であり、上限が、例えば、３００塩基であり、好ましくは２００塩基であり、より好ましくは１５０塩基であり、さらに好ましくは１００塩基であり、特に好ましくは８０塩基である。
【０１９４】
前記ｓｓＮｃ分子の構成単位は、特に制限されず、例えば、ヌクレオチド残基があげられる。前記ヌクレオチド残基は、例えば、リボヌクレオチド残基およびデオキシリボヌクレオチド残基があげられる。前記ヌクレオチド残基は、例えば、修飾されていない非修飾ヌクレオチド残基および修飾された修飾ヌクレオチド残基があげられる。前記ｓｓＮｃ分子は、例えば、前記修飾ヌクレオチド残基を含むことによって、ヌクレアーゼ耐性を向上し、安定性を向上可能である。また、前記ｓｓＮｃ分子は、例えば、前記ヌクレオチド残基の他に、さらに、非ヌクレオチド残基を含んでもよい。
【０１９５】
前記ｓｓＮｃ分子において、前記内部領域（Ｚ）、前記５’側領域（Ｘｃ）および前記３’側領域（Ｙｃ）の構成単位は、それぞれ、前記ヌクレオチド残基が好ましい。前記各領域は、例えば、下記（１）〜（３）の残基で構成される。
（１）非修飾ヌクレオチド残基
（２）修飾ヌクレオチド残基
（３）非修飾ヌクレオチド残基および修飾ヌクレオチド残基
【０１９６】
前記ｓｓＮｃ分子において、前記リンカー領域（Ｌｘ）および前記リンカー領域（Ｌｙ）の構成単位は、特に制限されず、例えば、前記ヌクレオチド残基および前記非ヌクレオチド残基があげられる。前記リンカー領域は、例えば、前記ヌクレオチド残基のみから構成されてもよいし、前記非ヌクレオチド残基のみから構成されてもよいし、前記ヌクレオチド残基と前記非ヌクレオチド残基から構成されてもよい。前記リンカー領域は、例えば、下記（１）〜（７）の残基で構成される。
（１）非修飾ヌクレオチド残基
（２）修飾ヌクレオチド残基
（３）非修飾ヌクレオチド残基および修飾ヌクレオチド残基
（４）非ヌクレオチド残基
（５）非ヌクレオチド残基および非修飾ヌクレオチド残基
（６）非ヌクレオチド残基および修飾ヌクレオチド残基
（７）非ヌクレオチド残基、非修飾ヌクレオチド残基および修飾ヌクレオチド残基
【０１９７】
前記ｓｓＮｃ分子が、前記リンカー領域（Ｌｘ）および前記リンカー領域（Ｌｙ）の両方を有する場合、例えば、両方の構成単位が同じでもよいし、異なってもよい。具体例として、例えば、両方のリンカー領域の構成単位が前記ヌクレオチド残基である形態、両方のリンカー領域の構成単位が前記非ヌクレオチド残基である形態、一方の領域の構成単位が前記ヌクレオチド残基であり、他方のリンカー領域の構成単位が非ヌクレオチド残基である形態等があげられる。
【０１９８】
前記ｓｓＮｃ分子は、例えば、前記ヌクレオチド残基のみから構成される分子、前記ヌクレオチド残基の他に前記非ヌクレオチド残基を含む分子等があげられる。前記ｓｓＮｃ分子において、前記ヌクレオチド残基は、前述のように、例えば、前記非修飾ヌクレオチド残基のみでもよいし、前記修飾ヌクレオチド残基のみでもよいし、前記非修飾ヌクレオチド残基および前記修飾ヌクレオチド残基の両方であってもよい。前記ｓｓＮｃ分子が、前記非修飾ヌクレオチド残基と前記修飾ヌクレオチド残基を含む場合、前記修飾ヌクレオチド残基の個数は、特に制限されず、例えば、「１もしくは数個」であり、具体的には、例えば、１〜５個、好ましくは１〜４個、より好ましくは１〜３個、最も好ましくは１または２個である。前記ｓｓＮｃ分子が、前記非ヌクレオチド残基を含む場合、前記非ヌクレオチド残基の個数は、特に制限されず、例えば、「１もしくは数個」であり、具体的には、例えば、１〜８個、１〜６個、１〜４個、１、２または３個である。
【０１９９】
前記ｓｓＮｃ分子において、前記ヌクレオチド残基は、例えば、リボヌクレオチド残基が好ましい。この場合、前記ｓｓＮｃ分子は、例えば、「ＲＮＡ分子」または「ｓｓＲＮＡ分子」ともいう。前記ｓｓＲＮＡ分子は、例えば、前記リボヌクレオチド残基のみから構成される分子、前記リボヌクレオチド残基の他に前記非ヌクレオチド残基を含む分子があげられる。前記ｓｓＲＮＡ分子において、前記リボヌクレオチド残基は、前述のように、例えば、前記非修飾リボヌクレオチド残基のみでもよいし、前記修飾リボヌクレオチド残基のみでもよいし、前記非修飾リボヌクレオチド残基および前記修飾リボヌクレオチド残基の両方を含んでもよい。
【０２００】
前記ｓｓＲＮＡ分子が、例えば、前記非修飾リボヌクレオチド残基の他に前記修飾リボヌクレオチド残基を含む場合、前記修飾リボヌクレオチド残基の個数は、前記第２のｓｓＰＮ分子の説明を用いることができる。
【０２０１】
前記ｓｓＮｃ分子は、例えば、標識物質を含み、前記標識物質で標識化されてもよい。前記標識物質は、前記第２のｓｓＰＮ分子の説明を用いることができる。
【０２０２】
（２）ヌクレオチド残基
前記ヌクレオチド残基は、前記ｓｓＰＮ分子におけるヌクレオチド残基の説明を用いることができる。
【０２０３】
（３）非ヌクレオチド残基
前記非ヌクレオチド残基は、特に制限されない。前記ｓｓＮｃ分子は、例えば、前記非ヌクレオチド残基として、ピロリジン骨格またはピペリジン骨格を含む非ヌクレオチド構造を有してもよい。前記非ヌクレオチド残基は、例えば、前記リンカー領域（Ｌｘ）および前記リンカー領域（Ｌｙ）の少なくとも一方に有することが好ましい。前記非ヌクレオチド残基は、例えば、前記リンカー領域（Ｌｘ）に有してもよいし、前記リンカー領域（Ｌｙ）に有してもよいし、両方の前記リンカー領域に有してもよい。前記リンカー領域（Ｌｘ）および前記リンカー領域（Ｌｙ）は、例えば、同じでもよいし、異なってもよい。
【０２０４】
前記ピロリジン骨格は、前記ｓｓＰＮ分子におけるピロリジン骨格の説明を用いることができる。
【０２０５】
前記ピペリジン骨格は、前記ｓｓＰＮ分子におけるピペリジン骨格の説明を用いることができる。
【０２０６】
前記リンカー領域は、例えば、前記非ヌクレオチド構造からなる非ヌクレオチド残基のみでもよいし、前記非ヌクレオチド構造からなる非ヌクレオチド残基と、ヌクレオチド残基とを含んでもよい。
【０２０７】
前記リンカー領域は、例えば、下記式（Ｉ）で表わされる。前記リンカー領域は、前記ｓｓＰＮ分子におけるリンカー領域の説明を用いることができる。
【０２０８】
【化４】
2019077696.tif 000006
【０２０９】
また、前記リンカー領域（Ｌｙ）が、前記式（Ｉ）で表わされる場合、例えば、前記リンカー領域（Ｌｙ）について、前記リンカー領域（Ｌｘ）の説明を用いることができる。
【０２１０】
前記ｓｓＮｃ分子において、前記リンカー領域（Ｌｘ）は、例えば、アミノ酸残基、ポリアミン残基、およびポリカルボン酸残基からなる群から選択される少なくとも一つを含んでいてもよい。前記リンカー領域は、アミノ酸残基、ポリアミン残基、およびポリカルボン酸残基以外の残基を含んでいてもよいし、含んでいなくてもよい。例えば、前記リンカー領域は、ポリカルボン酸残基、テレフタル酸残基またはアミノ酸残基のいずれかを含むものであってよい。
【０２１１】
本発明において、「ポリアミン」は、アミノ基を複数（２つ、または３つ以上）含む任意の化合物をいう。前記「アミノ基」は、−ＮＨ２基に限定されず、イミノ基（−ＮＨ−）も含む。本発明において、前記ポリアミンは、特に限定されないが、例えば、１，４−ジアミノベンゼン、１，３−ジアミノベンゼン、１，２−ジアミノベンゼン等が挙げられる。また、本発明において、「ポリカルボン酸」は、カルボキシ基を複数（２つ、または３つ以上）含む任意の化合物をいう。本発明において、前記ポリカルボン酸は、特に限定されないが、例えば、１，４−ジカルボキシベンゼン（テレフタル酸）、１，３−ジカルボキシベンゼン（イソフタル酸）、１，２−ジカルボキシベンゼン（フタル酸）等が挙げられる。また、本発明において、「アミノ酸」は、後述するように、分子中にアミノ基およびカルボキシ基をそれぞれ１つ以上含む任意の有機化合物をいう。前記「アミノ基」は、−ＮＨ２基に限定されず、イミノ基（−ＮＨ−）も含む。
【０２１２】
前記ｓｓＮｃ分子において、前記アミノ酸残基は、複数のアミノ酸残基が連結したものであってもよい。なお、本発明において、複数のアミノ酸残基が連結したアミノ酸残基とは、例えば、ペプチド構造を含む残基をいう。より具体的には、前記複数のアミノ酸残基が連結したアミノ酸残基は、例えば、後述する化学式（Ｉ）のアミノ酸残基において、後述する化学式（Ｉａ）がペプチド（例えば、グリシン二量体またはグリシン三量体等）であるアミノ酸残基をいう。
【０２１３】
前記ｓｓＮｃ分子において、前記アミノ酸残基は、グリシン残基、テレフタル酸アミド残基、プロリン残基またはリシン残基であってもよい。また、前記アミノ酸残基は、修飾アミノ酸残基またはアミノ酸の誘導体であってもよい。
【０２１４】
前記ｓｓＮｃ分子において、前記リンカー領域は、例えば、下記化学式（Ｉ−０）で表わされる。
【０２１５】
【化５】
2019077696.tif 000007
【０２１６】
前記化学式（Ｉ−０）中、
Ｑ１１およびＱ１２は、それぞれ独立して、単結合、ＣＨ２（メチレン基）、ＮＨ（イミノ基）、Ｃ＝Ｏ（カルボニル基）、Ｃ＝Ｓ（チオカルボニル基）、Ｃ＝ＮＨ（イミノメチレン基）、Ｏ、またはＳであり、
Ｑ１およびＱ２は、それぞれ独立して、単結合、ＣＨ２（メチレン基）、ＮＨ（イミノ基）、Ｃ＝Ｏ（カルボニル基）、Ｃ＝Ｓ（チオカルボニル基）、Ｃ＝ＮＨ（イミノメチレン基）、Ｏ、またはＳであり、
Ｙ１およびＹ２は、それぞれ独立して、単結合、ＣＨ２、ＮＨ、ＯまたはＳであり；
Ｌ１は、ｎ個の炭素原子を有するアルキレン鎖であり、アルキレン炭素原子上の水素原子は、ＯＨ、ＯＲａ、ＮＨ２、ＮＨＲａ、ＮＲａＲｂ、ＳＨ、もしくはＳＲａで置換されても置換されていなくてもよく、または、
Ｌ１は、前記アルキレン鎖の一つ以上の炭素原子が、酸素原子で置換されたポリエーテル鎖であり、
ただし、Ｙ１が、ＮＨ、ＯまたはＳの場合、Ｙ１に結合するＬ１の原子は炭素であり、ＯＲ１に結合するＬ１の原子は炭素であり、酸素原子同士は隣接せず；
Ｌ２は、ｍ個の炭素原子を有するアルキレン鎖であり、アルキレン炭素原子上の水素原子は、ＯＨ、ＯＲｃ、ＮＨ２、ＮＨＲｃ、ＮＲｃＲｄ、ＳＨもしくはＳＲｃで置換されても置換されていなくてもよく、または、
Ｌ２は、前記アルキレン鎖の一つ以上の炭素原子が、酸素原子で置換されたポリエーテル鎖であり、
ただし、Ｙ２が、ＮＨ、ＯまたはＳの場合、Ｙ２に結合するＬ２の原子は炭素であり、ＯＲ２に結合するＬ２の原子は炭素であり、酸素原子同士は隣接せず；
Ｒａ、Ｒｂ、ＲｃおよびＲｄは、それぞれ独立して、置換基または保護基であり；
ｍは、０〜３０の範囲の整数であり；
ｎは、０〜３０の範囲の整数であり；
前記Ｘ領域および前記Ｙ領域は、それぞれ、−ＯＲ１−または−ＯＲ２−を介して、前記リンカー残基に結合し、
ここで、Ｒ１およびＲ２は、存在しても存在しなくてもよく、存在する場合、Ｒ１およびＲ２は、それぞれ独立して、ヌクレオチド残基または前記構造（Ｉ−０）であり、
Ａは、任意の原子団である。
【０２１７】
前記Ｘ領域および前記Ｙ領域と、−ＯＲ１−および−ＯＲ２−との結合の組合せは、特に制限されず、例えば、以下のいずれかの条件があげられる。
条件（１）
前記Ｘ領域は、−ＯＲ２−を介して、前記Ｙ領域は、−ＯＲ１−を介して、前記式（Ｉ）の構造と結合する。
条件（２）
前記Ｘ領域は、−ＯＲ１−を介して、前記Ｙ領域は、−ＯＲ２−を介して、前記式（Ｉ）の構造と結合する。
【０２１８】
前記化学式（Ｉ−０）において、例えば、Ｑ１１がＣ＝Ｏ（カルボニル基）であり、Ｑ１がＮＨ（イミノ基）であってもよい。また、例えば、Ｑ１１がＮＨ（イミノ基）であり、Ｑ１がＣ＝Ｏ（カルボニル基）であってもよい。また例えば、Ｑ１２がＣ＝Ｏ（カルボニル基）であり、Ｑ２がＮＨ（イミノ基）であってもよい。また、例えば、Ｑ１２がＮＨ（イミノ基）であり、Ｑ２がＣ＝Ｏ（カルボニル基）であってもよい。
【０２１９】
前記化学式（Ｉ−０）中、Ｑ１１およびＱ１２は、例えば、それぞれカルボニル基であってもよい。この場合において、Ｑ１およびＱ２が、それぞれイミノ基であることが好ましい。また、この場合において、下記化学式（Ｉα）の構造が、下記化学式（Ｉα２）で表されることがより好ましい。
【０２２０】
【化６】
2019077696.tif 000008
【０２２１】
前記化学式（Ｉα２）中、
Ｒ１００は、任意の置換基であり、存在しても存在しなくてもよく、存在する場合は、１個でも複数でもよく、複数の場合は、互いに同一でも異なっていてもよい。Ｒ１００における前記任意の置換基としては、例えば、前記Ｒａ、Ｒｂ、ＲｃおよびＲｄにおいて例示する後述の置換基が挙げられ、より具体的には、例えば、ハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ、アミノ、カルボキシ、スルホ、ニトロ、カルバモイル、スルファモイル、アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロアルキル、アリール、アリールアルキル、アルキルアリール、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキルアルキル、シクリルアルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、アミノアルキル、シリル、シリルオキシアルキル、ピロールイル、イミダゾリル、等があげられる。また、前記化学式（Ｉα２）の構造が、下記化学式（Ｉα３）で表されることがさらに好ましい。
【０２２２】
【化７】
2019077696.tif 000009
【０２２３】
なお、Ｑ１１およびＱ１２がカルボニル基であり、かつＱ１およびＱ２がイミノ基である場合、前記化学式（Ｉ−０）のリンカー残基は、カルボン酸アミド残基であるということもできるが、カルボン酸残基であるということもできる。例えば、「TPA」構造は、テレフタル酸アミド残基であるということもできるが、前記化学式（Ｉα３）で表されるテレフタル酸の残基であるということもできる。
【０２２４】
前記化学式（Ｉ−０）中、Ｑ１１およびＱ１２が、それぞれイミノ基であってもよい。この場合において、Ｑ１およびＱ２が、それぞれカルボニル基であることが好ましい。また、この場合において、下記化学式（Ｉβ）の構造が、下記化学式（Ｉβ２）で表されることがより好ましい。
【０２２５】
【化８】
2019077696.tif 000010
【０２２６】
前記化学式（Ｉβ２）中、
Ｒ１００は、任意の置換基であり、存在しても存在しなくてもよく、存在する場合は、１個でも複数でもよく、複数の場合は、互いに同一でも異なっていてもよい。具体的には、例えば、前記化学式（Ｉα２）中のＲ１００と同様である。また、前記化学式（Ｉβ２）の構造が、下記化学式（Ｉβ３）で表されることがさらに好ましい。
【０２２７】
【化９】
2019077696.tif 000011
【０２２８】
前記ｓｓＮｃ分子において、前記リンカー残基が、アミノ酸残基である場合、前記アミノ酸残基は、例えば、下記化学式（Ｉ）で表わされる。なお、下記化学式（Ｉ）の構造は、前記化学式（Ｉ−０）で表される構造の一例である。
【０２２９】
【化１０】
2019077696.tif 000012
【０２３０】
前記式（Ｉ）中、例えば、Ｘ１、Ｘ２、Ｙ１、Ｙ２、Ｌ１およびＬ２は、前記と同様である。
発現制御配列に対する相補的配列は、それぞれ、−ＯＲ１−または−ＯＲ２−を介して、前記アミノ酸残基に結合し、
ここで、Ｒ１およびＲ２は、存在しても存在しなくてもよく、存在する場合、Ｒ１およびＲ２は、それぞれ独立して、ヌクレオチド残基または前記構造（Ｉ）であり、
Ａは、任意の原子団であり、ただし、下記化学式（Ｉａ）は、アミノ酸またはペプチドである。
【０２３１】
【化１１】
2019077696.tif 000013
【０２３２】
前記化学式（Ｉ）、（Ｉα）または（Ｉａ）中の原子団Ａは、例えば、鎖式原子団、脂環式原子団、芳香族性原子団、ヘテロ芳香族性原子団、およびヘテロ脂環式原子団からなる群から選択される少なくとも一つを含んでいても含んでいなくても良い。前記鎖式原子団は、特に限定されないが、例えば、アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロアルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、アミノアルキル、シリル、シリルオキシアルキル等が挙げられる。前記脂環式原子団は、特に限定されないが、例えば、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキルアルキル、シクリルアルキル等が挙げられる。前記芳香族性原子団は、特に限定されないが、例えば、アリール、アリールアルキル、アルキルアリール、縮環系アリール、縮環系アリールアルキル、縮環系アルキルアリール等が挙げられる。前記ヘテロ芳香族性原子団は、特に限定されないが、例えば、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、アルキルヘテロアリール、縮環系ヘテロアリール、縮環系ヘテロアリールアルキル、縮環系アルキルヘテロアリール等が挙げられる。また、前記化学式（Ｉ）、（Ｉα）または（Ｉａ）中の原子団Ａにおいて、前記各原子団は、さらに置換基または保護基を有していても有していなくても良い。前記置換基または保護基は、複数の場合は同一でも異なってもよい。前記置換基としては、例えば、前記Ｒａ、Ｒｂ、ＲｃおよびＲｄで例示した置換基が挙げられ、より具体的には、例えば、ハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ、アミノ、カルボキシ、スルホ、ニトロ、カルバモイル、スルファモイル、アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロアルキル、アリール、アリールアルキル、アルキルアリール、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキルアルキル、シクリルアルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、アミノアルキル、シリル、シリルオキシアルキル、ピロールイル、イミダゾリル、等があげられる。前記保護基は、例えば、前記Ｒａ、Ｒｂ、ＲｃおよびＲｄで例示した保護基と同様である。
【０２３３】
本発明において、「アミノ酸」は、前述のとおり、分子中にアミノ基およびカルボキシ基をそれぞれ１つ以上含む任意の有機化合物をいう。前記「アミノ基」は、−ＮＨ２基に限定されず、イミノ基（−ＮＨ−）も含む。例えば、プロリン、ヒドロキシプロリン等は、分子中に−ＮＨ２基を含まず、イミノ基（−ＮＨ−）を含むが、本発明における「アミノ酸」の定義に含まれる。本発明において、前記「アミノ酸」は、後述するとおり、天然アミノ酸でもよいし、人工アミノ酸でもよい。例えば、後述する化学式（Ｉａ２）または（Ｉａ３）で表される化合物も、分子中にアミノ基およびカルボキシ基を含むため、本発明における「アミノ酸」の定義に含まれる。したがって、例えば、前記化学式（Ｉ）において、原子団Ａが、後述の化学式（Ａ２）または化学式（Ａ２ａ）で表される構造は、本発明における「アミノ酸残基」の定義に含まれる。また、例えば、「TPA」構造も、本発明における「アミノ酸残基」の定義に含まれる。また、本発明において、「ペプチド」は、２分子以上のアミノ酸がペプチド結合により結合した構造の有機化合物をいう。前記ペプチド結合は、酸アミド構造でも良いし、酸イミド構造でも良い。また、前記化学式（Ｉａ）で表すアミノ酸またはペプチド分子中にアミノ基が複数存在する場合は、前記化学式（Ｉａ）中に明示しているアミノ基は、いずれのアミノ基であっても良い。また、前記化学式（Ｉａ）で表すアミノ酸またはペプチド分子中にカルボキシ基が複数存在する場合は、前記化学式（Ｉａ）中に明示しているカルボキシ基は、いずれのカルボキシ基であっても良い。
【０２３４】
前記ｓｓＮｃ分子の前記アミノ酸残基において、前記アミノ酸は、例えば、前述のとおり、天然アミノ酸でも良いし、人工アミノ酸であっても良い。なお、本発明において、「天然アミノ酸」は、天然に存在する構造のアミノ酸またはその光学異性体をいう。前記天然アミノ酸の製造方法は特に限定されず、例えば、天然から抽出しても良いし、合成しても良い。また、本発明において、「人工アミノ酸」は、天然に存在しない構造のアミノ酸をいう。すなわち、前記人工アミノ酸は、アミノ酸すなわちアミノ基を含むカルボン酸誘導体（分子中にアミノ基およびカルボキシ基をそれぞれ１つ以上含む有機化合物）であって、天然に存在しない構造のカルボン酸誘導体をいう。前記人工アミノ酸は、例えば、ヘテロ環を含まないことが好ましい。前記アミノ酸は、例えば、タンパク質を構成するアミノ酸であっても良い。前記アミノ酸は、例えば、グリシン、α−アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、シスチン、グルタミン、グルタミン酸、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リシン、ヒドロキシリシン、メチオニン、フェニルアラニン、セリン、トレオニン、チロシン、バリン、プロリン、４−ヒドロキシプロリン、トリプトファン、β−アラニン、１−アミノ−２−カルボキシシクロペンタン、アミノ安息香酸、アミノピリジンカルボン酸および下記化学式（Ｉａ２）で表されるアミノ酸からなる群から選択される少なくとも１種類であっても良く、さらに置換基または保護基を有していても有していなくても良い。前記置換基としては、例えば、前記Ｒａ、Ｒｂ、ＲｃおよびＲｄで例示した置換基が挙げられ、より具体的には、例えば、ハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ、アミノ、カルボキシ、スルホ、ニトロ、カルバモイル、スルファモイル、アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロアルキル、アリール、アリールアルキル、アルキルアリール、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキルアルキル、シクリルアルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、アミノアルキル、シリル、シリルオキシアルキル、ピロールイル、イミダゾリル、等があげられる。前記保護基は、例えば、前記Ｒａ、Ｒｂ、ＲｃおよびＲｄで例示した保護基と同様である。また、前記化学式（Ｉａ）のペプチドでないアミノ酸に、光学異性体、幾何異性体、立体異性体等の異性体が存在する場合は、いずれの異性体でも良い。
【０２３５】
【化１２】
2019077696.tif 000014
【０２３６】
前記化学式（Ｉａ２）中、
Ｒ１００は、任意の置換基であり、存在しても存在しなくてもよく、存在する場合は、１個でも複数でもよく、複数の場合は、互いに同一でも異なっていてもよい。Ｒ１００における前記任意の置換基としては、例えば、前記Ｒａ、Ｒｂ、ＲｃおよびＲｄで例示した置換基が挙げられ、より具体的には、例えば、ハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ、アミノ、カルボキシ、スルホ、ニトロ、カルバモイル、スルファモイル、アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロアルキル、アリール、アリールアルキル、アルキルアリール、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキルアルキル、シクリルアルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、アミノアルキル、シリル、シリルオキシアルキル、ピロールイル、イミダゾリル、等があげられる。また、前記化学式（Ｉａ２）の構造は、例えば、下記化学式（Ｉａ３）であってもよい。
【０２３７】
【化１３】
2019077696.tif 000015
【０２３８】
なお、前記化学式（Ｉａ）の構造が、前記化学式（Ｉａ２）である場合、前記化学式（Ｉ）中の原子団Ａの構造は、下記化学式（Ａ２）で表される。下記化学式（Ａ２）中のＲ１００は、前記化学式（Ｉａ２）中のＲ１００と同じである。また、前記化学式（Ｉａ）の構造が、前記化学式（Ｉａ３）である場合、前記化学式（Ｉ）中の原子団Ａの構造は、下記化学式（Ａ２ａ）で表される。
【０２３９】
【化１４】
2019077696.tif 000016
【０２４０】
前記化学式（Ｉ）の構造は、例えば、下記化学式（Ｉ−１）〜（Ｉ−７）が例示でき、下記化学式（Ｉ−１）〜（Ｉ−７）において、ｎおよびｍは、前記化学式（Ｉ）と同じである。
【０２４１】
【化１５】
2019077696.tif 000017
【０２４２】
前記化学式（Ｉ−１）〜（Ｉ−７）において、ｎおよびｍは、特に制限されず、前述の通りである。具体例として、前記化学式（Ｉ−１）においてｎ＝１１およびｍ＝１２、または、ｎ＝５およびｍ＝４と、前記化学式（Ｉ−４）においてｎ＝５およびｍ＝４と、前記化学式（Ｉ−６）において、ｎ＝４およびｍ＝４と、前記化学式（１−７）においてｎ＝５およびｍ＝４とがあげられる。その構造を、下記化学式（Ｉ−１ａ）、（Ｉ−１ｂ）（Ｉ−４ａ）、（Ｉ−６ａ）および（Ｉ−７ａ）に示す。
【０２４３】
【化１６】
2019077696.tif 000018
【０２４４】
本発明において用いられる前記ｓｓＮｃ分子としては、例えば、後述のNK-7006、およびNK-7007で示されるｓｓＮｃ分子が挙げられる。
【０２４５】
本発明の組成物に含有される核酸分子は、自体公知の方法により製造することができる。例えば、国際公開第２０１２/０１７９１９号パンフレット、国際公開第２０１３/１０３１４６号パンフレット、国際公開第２０１２/００５３６８号パンフレット、国際公開第２０１３/０７７４４６号パンフレットに記載の方法に従って製造することができる。
【０２４６】
本発明の組成物における核酸分子の含有量は特に制限はないが、該組成物が医薬組成物である場合、医薬組成物全体に対して、通常０．０００１〜６０重量％、好ましくは０．００１〜１５重量％、さらに好ましくは０．０１〜１重量％である。
【０２４７】
２．緩衝液
本発明の組成物は、緩衝液を含有する。本発明において、緩衝液とは緩衝作用をもつ溶液（特に水溶液）をいい、緩衝剤を含有することにより構成される。本発明で緩衝剤とは、水溶液のｐＨの安定剤を意味し、医薬製造の分野で一般的に使用されているものを選択することができる。
本発明においては、緩衝液を使用することで、組成物中における核酸分子の分解を防ぐことができる。
本発明に用いられる緩衝液としては、組成物のｐＨを４.０以上９.０以下とする緩衝液が挙げられ、組成物のｐＨを５．５以上７．５以下とする緩衝液が好ましく、中でも、組成物のｐＨを６.０以上７.０以下とする緩衝液がより好ましい。さらに、組成物のｐＨを６.１以上６.９以下とする緩衝液が好ましく、組成物のｐＨを６.２以上６.８以下とする緩衝液が好ましく、組成物のｐＨを６.３以上６.７以下とする緩衝液がより好ましく、組成物のｐＨを６.４以上６.６以下とする緩衝液がさらに好ましく、組成物のｐＨを６.５とする緩衝液が特に好ましい。
【０２４８】
本発明に用いられる緩衝剤としては、具体的には、アスコルビン酸、L-アスパラギン酸マグネシウム、亜硫酸ナトリウム、L-アルギニン、L-アルギニン塩酸塩、安息香酸、安息香酸ナトリウム、イプシロン-アミノカプロン酸、塩化アンモニウム、塩化カリウム、塩化ナトリウム、塩化グルコサミン、塩酸トリエタノールアミン、希塩酸、クエン酸、無水クエン酸、無水クエン酸ナトリウム、クエン酸水和物、クエン酸ナトリウム水和物、クエン酸二水素ナトリウム、クエン酸二ナトリウム、クエン酸三ナトリウム、クエン酸三ナトリウム二水和物、クエン酸カリウム、グリシルグリシン、グリシン、グルコノ-σ-ラクトン、グルコン酸、グルコン酸カルシウム水和物、L-グルタミン酸、L-グルタミン酸ナトリウム、クレアチニン、クロロブタノール、リン酸水素二ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム、コハク酸、コハク酸二ナトリウム六水和物、酢酸、酢酸アンモニウム、酢酸カリウム、酢酸ナトリウム水和物、ジイソプロパノールアミン、ジエタノールアミン、酒石酸、L-酒石酸ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化ナトリウム、タウリン、炭酸ナトリウム、炭酸ナトリウム水和物、炭酸水素ナトリウム、トリイソプロパノールアミン、トリエタノールアミン、トロメタモール、二酸化炭素、乳酸、乳酸カルシウム水和物、乳酸ナトリウム液、L-ヒスチジン、4-（2-ヒドロキシエチル）、氷酢酸、ブドウ糖、フマル酸一ナトリウム、プロピオン酸ナトリウム、ベンザルコニウム塩化物、芳香族炭化水素混合溶剤、ホウ酸アンモニウム、マレイン酸、無水酢酸ナトリウム、無水炭酸ナトリウム、無水リン酸一水素ナトリウム、無水リン酸三ナトリウム、無水リン酸二水素ナトリウム、メタリン酸ナトリウム、メタンスルホン酸、硫酸、硫酸アルミニウムカリウム水和物、リン酸、リン酸一水素ナトリウム七水和物、リン酸三ナトリウム、リン酸水素ナトリウム水和物、リン酸水素二ナトリウム水和物、リン酸二水素ナトリウム水和物、リン酸二水素カリウム、リン酸二水素ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム一水和物から選択される１又は２以上の緩衝剤が挙げられる。中でも、クエン酸が好ましい。
従って、本発明の組成物に用いられる緩衝液として、好ましくはクエン酸を含有する緩衝液が挙げられる。
また、本発明において、緩衝液は、上記緩衝剤として例示した酸とその塩、あるいは上記緩衝剤として例示した酸の２種以上の塩を含有することが好ましい。より好ましくは、クエン酸とその塩（例えば、クエン酸とクエン酸ナトリウム、クエン酸とクエン酸三ナトリウムなど）を含有する緩衝液、リン酸とその塩（例えば、リン酸とリン酸二水素ナトリウムなど）を含有する緩衝液、２種のリン酸塩（例えば、リン酸水素二ナトリウムとリン酸二水素ナトリウム）を含有する緩衝液が挙げられる。特に好ましくは、クエン酸とその塩とを含有する緩衝液である。
【０２４９】
本発明の組成物における緩衝液の使用量は、所望のｐＨの範囲に調整できる量であればよいが、例えば、該組成物中の緩衝剤の含有量が下記の範囲となるように適宜決定すればよい。すなわち、本発明の組成物における緩衝剤の含有量は、組成物全体に対して、通常０．０００１〜４０重量％、好ましくは０．０００５〜２０重量％、さらに好ましくは０．００１〜１０重量％である。
【０２５０】
３．その他の添加剤
本発明の組成物は、さらに溶剤を含有していてもよい。溶剤としては、例えば、薬学的に許容される有機溶剤（例えば、エタノール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、グリセリン等）、水、注射用水、生理食塩水、ブドウ糖液等が挙げられる。溶剤は１種または２種以上を組合せて用いてもよい。
本発明においては、核酸分子を予め溶剤に溶解した後に、緩衝液と混合することが、核酸分子を短時間で溶解できるという点で好ましい。溶剤としては、水が好ましい。尚、本明細書において、特にことわらない限り、「核酸分子を緩衝液に溶解させる」という語は、固体である核酸分子を直接緩衝液に溶解させる場合だけでなく、前述のように、核酸分子を一旦水等の溶剤に溶解して得られた溶液と、緩衝液とを混合する場合をも包含する意味で用いるものとする。
本発明において、溶剤の含有量は、総量として、組成物全体に対して、通常０．０００１重量％以上１００重量％未満、好ましくは０．００１重量％以上１００重量％未満、さらに好ましくは０．００５重量％以上１００重量％未満である。
【０２５１】
本発明の組成物が医薬組成物である場合、該組成物は、公知の方法で、例えば、吸入液剤、注射剤、液剤等に製剤化して、非経口投与（例えば、経鼻投与、静脈投与、点滴投与、筋肉内投与、皮下投与等）により投与することができる。また、適当な剤形(例えばカプセル剤等)により経口的に投与することができる。
【０２５２】
本発明の医薬組成物は、上記の成分の他にも、必要に応じて、薬学的に許容される添加剤を含有していてもよく、本発明の医薬組成物が注射剤である場合、添加剤としては、例えば、等張化剤（例、ブドウ糖、Ｄ−ソルビトール、塩化ナトリウム、グリセリン、Ｄ−マンニトール等）、無痛化剤（例、ベンジルアルコール等）、防腐剤（例、安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸エステル類、クロロブタノール、ベンジルアルコール等）等が挙げられる。好ましい添加剤は、安息香酸メチルである。
また、本発明の医薬組成物が注射剤である場合、核酸分子を緩衝液に溶解して得られた溶液と、脂質膜構成分子とを接触させて、核酸分子が封入されたリポソーム製剤として製造することもできる。該リポソーム製剤は、静脈内注射や筋肉内注射等の全身投与のための注射剤として、好ましく用いることができる。
【０２５３】
本発明の医薬組成物を吸入剤に製剤化する場合は、例えば、核酸分子を水等の溶剤に溶解して得られた溶液に、緩衝剤（例、クエン酸およびその塩、リン酸およびその塩）を加えた水溶液を混合し、混合液を除菌ろ過し、得られた薬液をバイアル、アンプル等の密封容器に充填して吸入剤を製造することができる。また、例えば、核酸分子を、水と緩衝剤（例、クエン酸およびその塩、リン酸およびその塩）を含む水溶液と混合し、超音波処理等により溶解し、除菌ろ過し、得られた薬液をバイアル、アンプル等の密封容器に充填して吸入剤を製造することもできる。通常、使用する密封容器としては、無色透明の硼珪酸ガラス製容器であるが、ガラス内面の接液部分が石英のような表面特性を有する容器を使用することもできる。
【０２５４】
本発明の医薬組成物は、有効成分である核酸分子が種々の疾患の治療及び予防に有用である。
例えば、遺伝子が原因となる疾患の患者に投与することで、前記遺伝子の発現を制御し、前記疾患を治療することができる。本発明において、「治療」は、前述のように、例えば、前記疾患の予防、疾患の改善、予後の改善の意味を含み、いずれでもよい。
【０２５５】
具体例として、前記標的遺伝子をＴＧＦ−β１遺伝子に設定し、前記遺伝子に対する発現抑制配列（例えば、配列番号４で表されるヌクレオチド配列）を、前記ｓｓＰＮ分子に配置すれば、ＴＧＦ−β１を抑制することにより治療効果が期待される疾患や病態の治療に使用することができる。
【０２５６】
本発明の医薬組成物の使用方法は、特に制限されず、例えば、前記標的遺伝子を有する投与対象に、前記医薬組成物を投与すればよい。
【０２５７】
前記投与対象は、例えば、細胞、組織または器官等があげられる。前記投与対象は、例えば、ヒト、ヒトを除く非ヒト哺乳類等の非ヒト動物等があげられる。前記投与は、例えば、ｉｎ  ｖｉｖｏでもｉｎ  ｖｉｔｒｏでもよい。前記細胞は、特に制限されず、例えば、ＨｅＬａ細胞、２９３細胞、ＮＩＨ３Ｔ３細胞、ＣＯＳ細胞等の各種培養細胞、ＥＳ細胞、造血幹細胞等の幹細胞、初代培養細胞等の生体から単離した細胞等があげられる。
【０２５８】
本発明の医薬組成物は、低毒性であるので、哺乳動物（例、ヒト、マウス、ラット、ウサギ、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ブタ、サル）、特にヒトに対し、安全に投与することができる。
【０２５９】
本発明の医薬組成物の投与量は、投与対象、投与ルート、疾患等によっても異なる。例えば突発性肺線維症治療剤として、成人に対し、吸入液剤として投与する場合、有効成分である核酸分子の投与量が、約０．００１ないし約２０ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは約０．００５ないし約５ｍｇ／ｋｇ体重、更に好ましくは約０．０１ないし約１ｍｇ／ｋｇ体重であって、１日１ないし数回に分けて投与することができる。
【０２６０】
本発明はまた、核酸分子に緩衝液を添加することを特徴とする、組成物中の該核酸分子の安定化方法、あるいは安定な核酸分子含有組成物の製造方法に関する。当該方法に用いられる緩衝液としては、前記の本発明の組成物について例示したものと同様のものが挙げられ、同様のものが好ましい。
本発明の安定化／製造方法における緩衝液の添加量は、所望のｐＨの範囲に調整できる量であればよいが、例えば、緩衝剤の添加量が下記の範囲となるように適宜決定すればよい。すなわち、本発明の安定化／製造方法における、緩衝剤の添加量は、当該方法により得られる組成物全体に対して、通常０．０００１〜４０重量％、好ましくは０．０００５〜２０重量％、さらに好ましくは０．００１〜１０重量％である。
【０２６１】
以下に、実施例を挙げて、本発明を更に具体的に説明するが、これによって本発明が限定されるものではない。
【実施例】
【０２６２】
製造例１  （一本鎖核酸分子の合成）
以下に示す一本鎖核酸分子を、ホスホロアミダイト法に基づき、核酸合成機（商品名ＡＢＩ  Ｅｘｐｅｄｉｔｅ（登録商標）  ８９０９  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  Ｓｙｓｔｅｍ、アプライドバイオシステムズ）により合成した。前記合成には、ＲＮＡアミダイトとして、ＲＮＡ  Ｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｉｔｅｓ（２’−Ｏ−ＴＢＤＭＳｉ、商品名、三千里製薬）を用いた（以下、同様）。前記アミダイトの脱保護は、定法に従った。合成したＲＮＡは、ＨＰＬＣにより精製した。精製後のＲＮＡは、それぞれ凍結乾燥した。
【０２６３】
実施例１〜４の一本鎖核酸分子としてＰＨ−０００９（ＰｓｈＲＮＡ）を上記のように合成した。ＰｓｈＲＮＡにおいて、Ｌｘは、リンカー領域Ｌｘであり、Ｌ−プロリンジアミドアミダイトを用いて下記構造式とした。下線部は、ヒトＴＧＦ−β１遺伝子の発現抑制配列である。
ＰｓｈＲＮＡ（ＰＨ−０００９）
5’-GCAGAGUACACACAGCAUAUACC-Ｌｘ-GGUAUAUGCUGUGUGUACUCUGCUU-3’（配列番号７）
【０２６４】
【化１７】
2019077696.tif 000019
【０２６５】
実施例１（pHが及ぼす保存温度の影響評価）
実施例１−１（被験組成物の調製）
核酸吸入プロトタイプのPH-0009含有組成物の熱による安定性を評価した。以下の被験組成物１〜１２は通常のこの分野で行われる方法で調製した。
被験組成物１：PH-0009  処方19（0.04 M  Britton-Robinson緩衝液（pH 2.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物２：PH-0009  処方20（0.04 M  Britton-Robinson緩衝液（pH3.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物３：PH-0009  処方21（0.04 M  Britton-Robinson緩衝液（pH 4.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物４：PH-0009  処方22（0.04 M  Britton-Robinson緩衝液（pH5.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物５：PH-0009  処方23（0.04 M  Britton-Robinson緩衝液（pH 6.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物６：PH-0009  処方24（0.04 M  Britton-Robinson緩衝液（pH 7.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物７：PH-0009  処方25（0.04 M  Britton-Robinson緩衝液（pH 8.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物８：PH-0009  処方26（0.04 M  Britton-Robinson緩衝液（pH 9.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物９：PH-0009  処方27（0.04 M  Britton-Robinson緩衝液（pH 10.0））,（0.1mg/mL）
被験組成物１０：PH-0009  処方28（0.04 M  Britton-Robinson緩衝液（pH 11.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物１１：PH-0009  処方29（0.04 M  Britton-Robinson緩衝液（pH 12.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物１２：PH-0009  処方30（0.04 M  塩酸-塩化カリウム緩衝液（pH1.5））,（0.1 mg/mL）
【０２６６】
実施例１−２（試験方法及び判定基準）
被験組成物１〜１２をそれぞれ25℃/60%RH、40℃/75%RH及び60℃の安定性試験器に保存した。各保存品を1週間ごとに取り出し、イオン交換HPLCにより含量を算出し、保存開始時の含量に対する含量割合（%）の減少による安定性の評価を行った。保存期間及び保存数量を表２〜表５に示した。
各保存条件で4週間までの保存開始時の含量に対する含量割合（%）の変化を確認し、安定性に優れていると判断された処方については継続して評価を行った。
25℃/60%RH、40℃/75%RH及び60℃でそれぞれ開始時、1週間、2週間、3週間及び4週間保存した被験組成物１〜１２を保存試料とした。
別に、PH-0009を0.1 mg／mLになるよう注射用水を用いて調製し検量線試料（100%）とした。検量線試料（100%）を90 μL取り注射用水10 μLを加えて100 μLとし検量線試料（90%）とした。検量線試料（100%）を80 μL取り注射用水20 μLを加えて100 μLとし検量線試料（80%）とした。検量線試料（100%）を70 μL取り注射用水30 μLを加えて100 μLとし検量線試料（70%）とした。検量線試料（100%）を60 μL取り注射用水40 μLを加えて100 μLとし検量線試料（60%）とした。
検量線試料（60%〜100%）及び各保存試料につき10 μLをHPLCにて測定した。検量線試料（60%〜100%）から得られるピーク面積につき、横軸（X）に理論含量（%），縦軸（Y）にピーク面積をとり最小二乗法により回帰直線（Y＝aX＋b）及びその相関係数（r）を求め、各試料の保存開始時の含量に対する含量割合（%）を算出した（excel 2013）。
【０２６７】
【表２】
2019077696.tif 000020
【０２６８】
【表３】
2019077696.tif 000021
【０２６９】
【表４】
2019077696.tif 000022
【０２７０】
【表５】
2019077696.tif 000023
【０２７１】
測定方法
下記測定条件にて検量線試料（60%〜100%）及び各試料を測定した。
検出器：紫外吸光光度計（測定波長：254 nm）
カラム：X-Bridge OST C18（2.5μm，4.6×50mm）
カラム温度：40℃
移動相A：50mM TEAA（pH7.0）、 0.5% Acetonitrile
移動相B：100% Acetonitrile
移動相の送液：移動相A及び移動相Bの混合比を次のように変えて濃度勾配制御した（表６）。
【０２７２】
【表６】
2019077696.tif 000024
【０２７３】
実施例１−３（結果）
結果を図１〜図３に示す。最も苛酷な条件である60℃、4週間保存においてpH5〜7の範囲において明確な保存開始時の含量に対する含量割合（%）の低下が見られなかったことから、PH-0009含有組成物においてpHの範囲を5〜7に規定した。
また、一般的に核酸は温度の影響を受けやすく常温以上で長時間保存が不可能といわれているが、本結果から一本鎖核酸は溶液のpHをコントロールすることで常温以上であっても長期間保存可能であることが示された。
【０２７４】
実施例２（クエン酸緩衝液とその濃度における安定性評価）
実施例２−１（被験組成物）
核酸吸入プロトタイプのPH-0009含有組成物の熱による安定性を評価した。
0.05 Mクエン酸緩衝液（pH6.8）及び0.005 Mクエン酸緩衝液（pH6.8）を基剤処方とし、以下の被験組成物１３および１４について、各溶液での熱安定性について評価した。
被験組成物13は以下の通りに調製した。
クエン酸水和物21.0gを1 L注射用水に溶解し0.1 Mクエン酸溶液とした。同様にクエン酸三ナトリウム二水和物29.4 gを1 L注射用水に溶解し0.1 Mクエン酸ナトリウム溶液とした。0.1 Mクエン酸ナトリウム溶液に0.1 Mクエン酸溶液を加えてpH6.8に調整し、0.1Mクエン酸緩衝液（pH6.8）とした。
別に、核酸（PH-0009）10 mgを注射用水0.5 mLに溶解した。この液0.2 mLに注射用水20mLを加え混合した。これに0.1Mクエン酸緩衝液（pH6.8）20 mLを加え混合し、ポリフッ化ビニリデン（PVDF）製0.22 μmフィルターを通して4 mg/40 mL（0.1 mg/mL）のPH-0009含有組成物とした。
被験組成物14は以下の通りに調製した。
クエン酸水和物21.0gを1 L注射用水に溶解し0.1 Mクエン酸溶液とした。同様にクエン酸三ナトリウム二水和物29.4 gを1 L注射用水に溶解し0.1 Mクエン酸ナトリウム溶液とした。0.1 Mクエン酸ナトリウム溶液に0.1 Mクエン酸溶液を加えてpH6.8に調整し、0.1Mクエン酸緩衝液（pH6.8）とした。18mLの0.1 Mクエン酸溶液、82mLの0.1 Mクエン酸ナトリウム溶液、及び900mLの注射用水を混合し、1N NaOHでpH6.8に調製し、0.01Mクエン酸緩衝液（pH6.8）とした。
別に、核酸（PH-0009）13.9 mgを注射用水1 mLに溶解した。この液0.0719 mLに注射用水4.9281 mLを加え混合した。これに0.01Mクエン酸緩衝液（pH6.8）5 mLを加え混合し、ポリフッ化ビニリデン（PVDF）製0.22 μmフィルターを通して1 mg/10 mL（0.1 mg/mL）のPH-0009含有組成物とした。
被験組成物１３：PH-0009  処方3（0.05 Mクエン酸緩衝液（pH 6.8））,（0.1 mg/mL）
被験組成物１４：PH-0009  処方7（0.005 Mクエン酸緩衝液（pH 6.8））,（0.1 mg/mL）
【０２７５】
実施例２−２（試験方法及び判定基準）
被験組成物１３および１４をそれぞれ40℃/75%RH及び60℃の安定性試験器に保存した。各保存品を1週間ごとに取り出し、イオン交換HPLCにより含量を算出し、保存開始時の含量に対する含量割合（%）の減少による安定性の評価を行った。保存期間及び保存数量を表７に示した。
各保存条件で4週間までの保存開始時の含量に対する含量割合（%）変化を確認し、安定性に優れていると判断された処方については継続して評価を行った。
40℃/75%RH及び60℃でそれぞれ開始時、1週間、2週間、3週間及び4週間保存した被験組成物１３および１４を保存試料とした。
別に、PH-0009を0.1 mg／mLになるよう注射用水を用いて調製し検量線試料（100%）とした。検量線試料（100%）を90 μL取り注射用水10 μLを加えて100 μLとし検量線試料（90%）とした。検量線試料（100%）を80 μL取り注射用水20 μLを加えて100 μLとし検量線試料（80%）とした。検量線試料（100%）を70 μL取り注射用水30 μLを加えて100 μLとし検量線試料（70%）とした。検量線試料（100%）を60 μL取り注射用水40 μLを加えて100 μLとし検量線試料（60%）とした。
検量線試料（60%〜100%）及び各保存試料につき10 μLをHPLCにて測定した。検量線試料（60%〜100%）から得られるピーク面積につき、横軸（X）に理論含量（%），縦軸（Y）にピーク面積をとり最小二乗法により回帰直線（Y＝aX＋b）及びその相関係数（r）を求め、各試料の保存開始時の含量に対する含量割合（%）を算出した（excel 2013）。
【０２７６】
【表７】
2019077696.tif 000025
【０２７７】
測定方法
下記測定条件にて検量線試料（60%〜100%）及び各試料を測定した。
検出器：紫外吸光光度計（測定波長：254 nm）
カラム：X-Bridge OST C18（2.5μm，4.6×50mm）
カラム温度：40℃
移動相A：50mM TEAA（pH7.0）、 0.5% Acetonitrile
移動相B：100% Acetonitrile
移動相の送液：移動相A及び移動相Bの混合比を次のように変えて濃度勾配制御した（表８）。
【０２７８】
【表８】
2019077696.tif 000026
【０２７９】
実施例２−３（結果）
結果を図４および図５に示す。本結果より、一本鎖核酸0.1mg/mLで調製した際に、クエン酸緩衝液の濃度が0.005M〜0.05Mの範囲で60℃4週間でも明確な保存開始時の含量に対する含量割合（%）の変化がないことが示された。これにより一本鎖核酸の濃度が増えてもクエン酸緩衝液の濃度をコントロールする事で核酸安定性の効果を持続させる事が可能であることが示唆された。
【０２８０】
実施例３（PH-0009含有組成物の調製（10 mg/mL））
10 mg/mLのPH-0009含有組成物の調製方法を行った。なお、1 mg/mLのPH-0009含有組成物の場合は核酸量の標準的仕込み量を1.0 gに、0.1 mg/mLの場合は0.10 gに変更する事で調製が可能である。
クエン酸水和物21.0gを1 L注射用水に溶解し0.1 Mクエン酸溶液とした。同様にクエン酸三ナトリウム二水和物29.4 gを1 L注射用水に溶解し0.1 Mクエン酸ナトリウム溶液とした。0.1 Mクエン酸ナトリウム溶液に0.1 Mクエン酸溶液を加えてpH6.5に調整し、0.1Mクエン酸緩衝液（pH6.5）とした。
別に、核酸（PH-0009）10 gを注射用水500 mLに溶解した。これに0.1Mクエン酸緩衝液（pH6.5）500 mLを加え混合し、ポリフッ化ビニリデン（PVDF）製0.22 μmフィルターを通して10 g/L（10 mg/mL）のPH-0009含有組成物とした。該組成物はIPF吸入製剤等として利用することができる。
【０２８１】
【表９】
2019077696.tif 000027
【０２８２】
実施例４（PH-0009含有組成物の温度安定性評価）
実施例４−１（被験組成物）
一本鎖核酸の製剤開発において、種々の処方についてPH-0009含有組成物の安定性を評価した結果、被験組成物１５および１６が核酸医薬品として最も優れている処方であると判断し、これらの熱安定性を評価した。
被験組成物１５及び１６は、実施例３及び被験組成物１３、１４と同様にして得られた。
被験組成物１５：PH-0009  処方44（0.05 Mクエン酸緩衝液（pH 6.5）,（1 mg/mL）
被験組成物１６：PH-0009  処方44（0.05 Mクエン酸緩衝液（pH 6.5）,（10 mg/mL）
【０２８３】
実施例４−２（試験方法及び判定基準）
被験組成物１５および１６をそれぞれ25℃/60%RH、40℃/75%RH及び60℃の安定性試験器に保存した。各保存品を1週間ごとに取り出し、イオン交換HPLCにより含量を算出し、保存開始時の含量に対する含量割合（%）の減少による安定性の評価を行った。保存期間及び保存数量を表１０に示した。
各保存条件で4週間までの保存開始時の含量に対する含量割合（%）変化を確認し、安定性に優れていると判断された処方については継続して評価を行った。
40℃/75%RH及び60℃でそれぞれ開始時、1週間、2週間、3週間及び4週間保存した被験組成物１５および１６を保存試料とした。
別に、PH-0009を1 mg／mLになるよう注射用水を用いて調製し検量線試料（100%）とした。検量線試料（100%）を90 μL取り注射用水10 μLを加えて100 μLとし検量線試料（90%）とした。検量線試料（100%）を80 μL取り注射用水20 μLを加えて100 μLとし検量線試料（80%）とした。検量線試料（100%）を70 μL取り注射用水30 μLを加えて100 μLとし検量線試料（70%）とした。検量線試料（100%）を60 μL取り注射用水40μLを加えて100 μLとし検量線試料（60%）とした。
検量線試料（60%〜100%）及び各保存試料につき10 μLをHPLCにて測定した。ただし、10 mg/mLの試料は1 μLをHPLCにて測定した。検量線試料（60%〜100%）から得られるピーク面積につき、横軸（X）に理論含量（%），縦軸（Y）にピーク面積をとり最小二乗法により回帰直線（Y＝aX＋b）及びその相関係数（r）を求め、各試料の保存開始時の含量に対する含量割合（%）を算出した（excel 2013）。
【０２８４】
【表１０】
2019077696.tif 000028
【０２８５】
測定方法
下記測定条件にて検量線試料（60%〜100%）及び各試料を測定した。
検出器：紫外吸光光度計（測定波長：254 nm）
カラム：X-Bridge OST C18（2.5μm，4.6×50mm）
カラム温度：40℃
移動相A：50mM TEAA（pH7.0）、 0.5% Acetonitrile
移動相B：100% Acetonitrile
移動相の送液：移動相A及び移動相Bの混合比を次のように変えて濃度勾配制御した（表１１）。
【０２８６】
【表１１】
2019077696.tif 000029
【０２８７】
実施例４−３（結果）
被験組成物１６の結果を図６に示す。本結果より、10 mg/mLのPH-0009含有組成物において、60℃、4週間でも明確な保存開始時の含量に対する含量割合（%）の変化がないことが示された。また、被験組成物１５（1 mg/mLのPH-0009含有組成物）についても同様の結果が得られた。これにより、本処方で調製したPH-0009含有組成物（一本鎖核酸吸入液剤など）は高い保存安定性を有することが示された。
【０２８８】
製造例２
実施例５の核酸分子として、以下に示す鎖核酸分子を、ホスホロアミダイト法に基づき、核酸合成機（商品名ＡＢＩ  Ｅｘｐｅｄｉｔｅ（登録商標）  ８９０９  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  Ｓｙｓｔｅｍ、アプライドバイオシステムズ）により合成した。前記合成には、ＲＮＡアミダイトとして、ＲＮＡ  Ｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｉｔｅｓ（２’−Ｏ−ＴＢＤＭＳｉ、商品名、三千里製薬）を用いた。前記アミダイトの脱保護は、定法に従った。合成したＲＮＡは、ＨＰＬＣにより精製した。精製後のＲＮＡは、それぞれ凍結乾燥した。
【０２８９】
実施例５の一本鎖核酸分子および二本鎖核酸分子（ｓｉＲＮＡ）を上記のように合成した。NK-7006およびNK-7007のカッコで囲んだ部分は、リンカー領域である。また、NK-7006、NK-7007、PK-7006、PK-7015、PH-7069、およびPH-7081の下線部は各標的遺伝子の発現抑制配列であり、Ｌｘはリンカー領域である。リンカー領域ＬｘはＬ−プロリンジアミドアミダイトを用いて下記構造式とした。
NkRNA（NK-7006）（標的遺伝子：Luciferase）
５’−ACCUACGCCGAGUACUUCGAUUCC（CCACACC）GGAAUCGAAGUACUCGGCGUAGGUUC（UUCG）G−３’（配列番号８）
NkRNA（NK-7007）（標的遺伝子：マウスGAPDH）
５’−ACCACGAGAAAUAUGACAACUCCC（CCACACC）GGGAGUUGUCAUAUUUCUCGUGGUUC（UUCG）G−３’（配列番号９）
PnkRNA（PK-7006）（標的遺伝子：マウスTGF-β1）
５’−GGAACUCUACCAGAAAUAUAGCCC-Ｌｘ-GGGCUAUAUUUCUGGUAGAGUUCCAC-Ｌｘ-G−３’（配
列番号１０）
PnkRNA（PK-7015）（標的遺伝子：マウス CCR3）
５’−AGCCUUGUACAGCGAGAUCUUUCC-Ｌｘ-GGAAAGAUCUCGCUGUACAAGGCUUC-Ｌｘ-G−３’（配
列番号１１）
PshRNA（PH-7069）（標的遺伝子：マウスSmad3）
５’−GGUGCUCCAUCUCCUACUACGACC-Ｌｘ-GGUCGUAGUAGGAGAUGGAGCACCA−３’
（配列番号１２）
アンチセンス核酸（Kynamro-7001）（ApoB100mRNAに対するアンチセンスDNA）
5’-GCCUCagtctgcttcGCACC-3’（配列番号１）
（小文字はDNAを示す）
PshRNA（PH-7081）（標的遺伝子：firefly luciferase）
５’−CUUACGCUGAGUACUUCGAAACC-Ｌｘ-GGUUUCGAAGUACUCAGCGUAAGUG−３’（配列番号１３）
siRNA（NI-7001）（マウス CTGF）
5’-GUGUGACCAAAAGUUACAUGU-3’（配列番号１４）
5’-AUGUAACUUUUGGUCACACUC-3’（配列番号１５）
miRNA（NM-7001）（ヒト let7a-1 precursor）
5’- UGGGAUGAGGUAGUAGGUUGUAUAGUUUUAGGGUCACACCCACCACUGGGAGAUAACUAUACAAUCUACUGUCUUUCCUA-3’（配列番号２）
アプタマー（Macugen-7001）（VEGFタンパク質に対するアプタマー）
5’-CGGAAUCAGUGAAUGCUUAUACAUCCGt-3’（配列番号３）
（tは3’3’-dT）
【０２９０】
【化１８】
2019077696.tif 000030
【０２９１】
実施例５（クエン酸緩衝液による各種核酸の安定性評価）
実施例５−１（被験組成物の調製）
以下の被験組成物１７〜３６は、実施例３及び被験組成物１３、１４と同様にして得られた。
被験組成物17：NK-7006  処方44（0.05 Mクエン酸緩衝液（pH 6.5））,（0.1 mg/mL）
被験組成物18：NK-7006  注射用水,（0.1 mg/mL）
被験組成物19：NK-7007  処方44（0.05 Mクエン酸緩衝液（pH 6.5））,（0.1 mg/mL）
被験組成物20：NK-7007  注射用水,（0.1 mg/mL）
被験組成物21：PK-7006  処方44（0.05 Mクエン酸緩衝液（pH 6.5））,（0.1 mg/mL）
被験組成物22：PK-7006  注射用水,（0.1 mg/mL）
被験組成物23：PK-7015  処方44（0.05 Mクエン酸緩衝液（pH 6.5））,（0.1 mg/mL）
被験組成物24：PK-7015  注射用水,（0.1 mg/mL）
被験組成物25：PH-7069  処方44（0.05 Mクエン酸緩衝液（pH 6.5））,（0.1 mg/mL）
被験組成物26：PH-7069  注射用水,（0.1 mg/mL）
被験組成物27：Kynamro-7001  処方44（0.05 Mクエン酸緩衝液（pH 6.5））,（0.1 mg/mL）
被験組成物28：Kynamro-7001  注射用水,（0.1 mg/mL）
被験組成物29：PH-7081  処方44（0.05 Mクエン酸緩衝液（pH 6.5））,（0.1 mg/mL）
被験組成物30：PH-7081  注射用水,（0.1 mg/mL）
被験組成物31：NI-7001  処方44（0.05 Mクエン酸緩衝液（pH 6.5））,（0.1 mg/mL）
被験組成物32：NI-7001  注射用水,（0.1 mg/mL）
被験組成物33：NM-7001  処方44（0.05 Mクエン酸緩衝液（pH 6.5））,（0.1 mg/mL）
被験組成物34：NM-7001  注射用水,（0.1 mg/mL）
被験組成物35：Macugen-7001  処方44（0.05 Mクエン酸緩衝液（pH 6.5））,（0.1 mg/mL）
被験組成物36：Macugen-7001  注射用水,（0.1 mg/mL）
【０２９２】
実施例５−２（試験方法及び判定基準）
被験組成物１７〜３６を60℃の安定性試験器に保存した。各保存品を1週間ごとに取り出し、逆相HPLCにより含量を算出し、保存開始時の含量に対する含量割合（%）の減少による安定性の評価を行った。保存期間及び保存数量を表１２に示す。
60℃でそれぞれ開始時、1週間、2週間、3週間及び4週間保存した被験組成物１７〜３６を保存試料とした。
別に、被験組成物１７〜３６の4℃保存品を検量線試料（100%）とした。各検量線試料（100%）を90 μL取り注射用水10 μLを加えて100 μLとしそれぞれ検量線試料（90%）とした。各検量線試料（100%）を80 μL取り注射用水20 μLを加えて100 μLとしそれぞれ検量線試料（80%）とした。各検量線試料（100%）を70 μL取り注射用水30 μLを加えて100μLとしそれぞれ検量線試料（70%）とした。各検量線試料（100%）を60 μL取り注射用水40 μLを加えて100 μLとしそれぞれ検量線試料（60%）とした。検量線試料調製を表１３に示す。
各検量線試料（60%〜100%）及び各保存試料につき10 μLをHPLCにて測定した。各検量線試料（60%〜100%）から得られるピーク面積につき、横軸（X）に理論含量（%），縦軸（Y）にピーク面積をとり最小二乗法により回帰直線（Y＝aX＋b）及びその相関係数（r）を求め、各試料の保存開始時の含量に対する含量割合（%）を算出した。
【０２９３】
【表１２】
2019077696.tif 000031
【０２９４】
【表１３】
2019077696.tif 000032
【０２９５】
測定方法
下記測定条件にて検量線試料（60%〜100%）及び各試料を測定した。
検出器：紫外吸光光度計（測定波長：254 nm）
カラム：X-Bridge OST C18（2.5μm，4.6×50mm）
カラム温度：40℃
移動相A：50mM TEAA（pH7.0）、 0.5% Acetonitrile
移動相B：100% Acetonitrile
移動相の送液：移動相A及び移動相Bの混合比を次のように変えて濃度勾配制御した。
【０２９６】
【表１４】
2019077696.tif 000033
【０２９７】
実施例５−３（結果）
結果を図７〜１６に示す。
本結果より、0.05Mクエン酸緩衝液 pH6.5の処方は、注射用水（WFI）と比較して、核酸の種類に関わらず熱による安定性に寄与する事が示された。
【０２９８】
製造例３
実施例６の核酸分子として、以下に示す鎖核酸分子を、ホスホロアミダイト法に基づき、核酸合成機（商品名ＡＢＩ  Ｅｘｐｅｄｉｔｅ（登録商標）  ８９０９  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  Ｓｙｓｔｅｍ、アプライドバイオシステムス）により合成する。前記合成には、ＲＮＡアミダイトとして、ＲＮＡ  Ｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｉｔｅｓ（２’−Ｏ−ＴＢＤＭＳｉ、商品名、三千里製薬）を用いる。前記アミダイトの脱保護は、定法に従う。合成するＲＮＡは、ＨＰＬＣにより精製する。精製後のＲＮＡは、それぞれ凍結乾燥する。
【０２９９】
実施例６の一本鎖核酸分子および二本鎖核酸分子（ｓｉＲＮＡ）を上記のように合成する。NK-7006およびNK-7007のカッコで囲んだ部分は、リンカー領域である。また、NK-7006、NK-7007、PK-7006、PK-7015、PH-7069、およびPH-7081の下線部は各標的遺伝子の発現抑制配列であり、Ｌｘはリンカー領域である。リンカー領域Ｌｘは、Ｌ−プロリンジアミドアミダイトを用いて下記構造式とする。
NkRNA（NK-7006）（標的遺伝子：Luciferase）
５’−ACCUACGCCGAGUACUUCGAUUCC（CCACACC）GGAAUCGAAGUACUCGGCGUAGGUUC（UUCG）G−３’（配列番号８）
NkRNA（NK-7007）（標的遺伝子：マウスGAPDH）
５’−ACCACGAGAAAUAUGACAACUCCC（CCACACC）GGGAGUUGUCAUAUUUCUCGUGGUUC（UUCG）G−３’（配列番号９）
PnkRNA（PK-7006）（標的遺伝子：マウスTGF-β1）
５’−GGAACUCUACCAGAAAUAUAGCCC-Ｌｘ-GGGCUAUAUUUCUGGUAGAGUUCCAC-Ｌｘ-G−３’（配
列番号１０）
PnkRNA（PK-7015）（標的遺伝子：マウス CCR3）
５’−AGCCUUGUACAGCGAGAUCUUUCC-Ｌｘ-GGAAAGAUCUCGCUGUACAAGGCUUC-Ｌｘ-G−３’（配
列番号１１）
PshRNA（PH-7069）（標的遺伝子：マウスSmad3）
５’−GGUGCUCCAUCUCCUACUACGACC-Ｌｘ-GGUCGUAGUAGGAGAUGGAGCACCA−３’
（配列番号１２）
アンチセンス核酸（Kynamro-7001）（ApoB100mRNAに対するアンチセンスDNA）
5’-GCCUCagtctgcttcGCACC-3’（配列番号１）
（小文字はDNAを示す）
PshRNA（PH-7081）（標的遺伝子：firefly luciferase）
５’−CUUACGCUGAGUACUUCGAAACC-Ｌｘ-GGUUUCGAAGUACUCAGCGUAAGUG−３’（配列番号１３）
siRNA（NI-7001）（マウス CTGF）
5’-GUGUGACCAAAAGUUACAUGU-3’（配列番号１４）
5’-AUGUAACUUUUGGUCACACUC-3’（配列番号１５）
miRNA（NM-7001）（ヒト let7a-1 precursor）
5’- UGGGAUGAGGUAGUAGGUUGUAUAGUUUUAGGGUCACACCCACCACUGGGAGAUAACUAUACAAUCUACUGUCUUUCCUA-3’（配列番号２）
アプタマー（Macugen-7001）（VEGFタンパク質に対するアプタマー）
5’-CGGAAUCAGUGAAUGCUUAUACAUCCGt-3’（配列番号３）
（tは3’3’-dT）
【０３００】
【化１９】
2019077696.tif 000034
【０３０１】
実施例６（リン酸緩衝液による各種核酸の安定性評価）
実施例６−１（被験組成物の調製）
以下の被験組成物３７〜５６は、以下の通りに調製する。
0.1 Mリン酸緩衝液（pH6.5）は、13.006gのリン酸二水素ナトリウム・二水和物と、6.017gのリン酸水素二ナトリウム十二水和物を混合し、１Lにメスアップして調製する。
核酸0.1 gを注射用水500 mLに溶解する。これに0.1Mリン酸緩衝液（pH6.5）500 mLを加え混合し、ポリフッ化ビニリデン（PVDF）製0.22 μmフィルターを通して0.1 g/L（0.1 mg/mL）の核酸含有組成物とする。
被験組成物37：NK-7006  処方44（0.05 Mリン酸緩衝液（pH 6.5））,（0.1 mg/mL）
被験組成物38：NK-7006  注射用水,（0.1 mg/mL）
被験組成物39：NK-7007  処方44（0.05 Mリン酸緩衝液（pH 6.5））,（0.1 mg/mL）
被験組成物40：NK-7007  注射用水,（0.1 mg/mL）
被験組成物41：PK-7006  処方44（0.05 Mリン酸緩衝液（pH 6.5））,（0.1 mg/mL）
被験組成物42：PK-7006  注射用水,（0.1 mg/mL）
被験組成物43：PK-7015  処方44（0.05 Mリン酸緩衝液（pH 6.5））,（0.1 mg/mL）
被験組成物44：PK-7015  注射用水,（0.1 mg/mL）
被験組成物45：PH-7069  処方44（0.05 Mリン酸緩衝液（pH 6.5））,（0.1 mg/mL）
被験組成物46：PH-7069  注射用水,（0.1 mg/mL）
被験組成物47：Kynamro-7001  処方44（0.05 Mリン酸緩衝液（pH 6.5））,（0.1 mg/mL）
被験組成物48：Kynamro-7001  注射用水,（0.1 mg/mL）
被験組成物49：PH-7081  処方44（0.05 Mリン酸緩衝液（pH 6.5））,（0.1 mg/mL）
被験組成物50：PH-7081  注射用水, （0.1 mg/mL）
被験組成物51：NI-7001  処方44（0.05 Mリン酸緩衝液（pH 6.5））,（0.1 mg/mL）
被験組成物52：NI-7001  注射用水,（0.1 mg/mL）
被験組成物53：NM-7001  処方44（0.05 Mリン酸緩衝液（pH 6.5））,（0.1 mg/mL）
被験組成物54：NM-7001  注射用水,（0.1 mg/mL）
被験組成物55：Macugen-7001  処方44（0.05 Mリン酸緩衝液（pH 6.5））,（0.1 mg/mL）
被験組成物56：Macugen-7001  注射用水,（0.1 mg/mL）
【０３０２】
実施例６−２（試験方法及び判定基準）
被験組成物３７〜５６を60℃の安定性試験器に保存する。各保存品を1週間ごとに取り出し、逆相HPLCにより含量を算出し、保存開始時の含量に対する含量割合（%）の減少による安定性の評価を行う。保存期間及び保存数量を表に示す。
60℃でそれぞれ開始時、1週間、2週間、3週間及び4週間保存した被験組成物３７〜５６を保存試料とする。
別に、被験組成物３７〜５６の4℃保存品を検量線試料（100%）とする。各検量線試料（100%）を90 μL取り注射用水10 μLを加えて100 μLとしそれぞれ検量線試料（90%）とする。各検量線試料（100%）を80 μL取り注射用水20 μLを加えて100 μLとしそれぞれ検量線試料（80%）とする。各検量線試料（100%）を70 μL取り注射用水30 μLを加えて100μLとしそれぞれ検量線試料（70%）とする。各検量線試料（100%）を60 μL取り注射用水40 μLを加えて100 μLとしそれぞれ検量線試料（60%）とする。
各検量線試料（60%〜100%）及び各保存試料につき10 μLをHPLCにて測定する。各検量線試料（60%〜100%）から得られるピーク面積につき、横軸（X）に理論含量（%），縦軸（Y）にピーク面積をとり最小二乗法により回帰直線（Y＝aX＋b）及びその相関係数（r）を求め、各試料の保存開始時の含量に対する含量割合（%）を算出する（excel 2013）。
【０３０３】
【表１５】
2019077696.tif 000035
【０３０４】
測定方法
下記測定条件にて検量線試料（60%〜100%）及び各試料を測定する。
検出器：紫外吸光光度計（測定波長：254 nm）
カラム：X-Bridge OST C18（2.5μm，4.6×50mm）
カラム温度：40℃
移動相A：50mM TEAA（pH7.0）、 0.5% Acetonitrile
移動相B：100% Acetonitrile
移動相の送液：移動相A及び移動相Bの混合比を次のように変えて濃度勾配制御する。
【０３０５】
【表１６】
2019077696.tif 000036
【０３０６】
製造例４
実施例７の核酸分子として、PK-7006、NK-7006、PH-7069、NI-7001、NM-7001、Kynamro-7001及びMacugen-7001を、製造例２と同様の方法で合成した。
【０３０７】
実施例７（クエン酸緩衝液及び／又はリン酸緩衝液による各種核酸の安定性評価）
実施例７−１（被験組成物の調製）
被験組成物57〜74、105〜122、153〜170の調製は以下のように行った。
0.1Mクエン酸水溶液と0.1Mクエン酸三ナトリウム二水和物溶液を混合しpH4.0〜8.0に調製した各pHの0.1Mクエン酸緩衝液を調製した。
注射用水で調製した25mg/mLの被験組成物（0.02mL）、注射用水（2.48mL）、及び各pHの0.1Mクエン酸緩衝液（2.50mL）を混合し、0.1mg/mLの各被験組成物を各5mL調製した。
被験組成物201〜218の調製は以下のように行った。
上記と同様の方法で0.1Mクエン酸緩衝液を調製した。注射用水で調製した10mg/mLの被験組成物（0.05mL）、注射用水（2.45mL）、及び各pHの0.1Mクエン酸緩衝液（2.50mL）を混合し、0.1mg/mLの各被験組成物を各5mL調製した。
被験組成物249〜266、297〜314、345〜362の調製は以下のように行った。
上記と同様の方法で0.1Mクエン酸緩衝液を調製した。注射用水で調製した20mg/mLの被験組成物（0.025mL）、注射用水（2.475mL）、及び各pHの0.1Mクエン酸緩衝液（2.50mL）を混合し、0.1mg/mLの各被験組成物を各5mL調製した。
被験組成物75〜95、123〜143、171〜191の調製は以下のように行った。
0.1Mリン酸二水素ナトリウム水溶液と0.1Mリン酸水素二ナトリウム溶液を混合しpH4.0〜8.0に調製した各pHの0.1Mリン酸緩衝液を調製した。
注射用水で調製した25mg/mLの被験組成物（0.02mL）、注射用水（2.48mL）、及び各pHの0.1Mリン酸緩衝液（2.50mL）を混合し、0.1mg/mLの各被験組成物を各5mL調製した。
被験組成物219〜239の調製は以下のように行った。
上記と同様の方法で0.1Mリン酸緩衝液を調製した。注射用水で調製した10mg/mLの被験組成物（0.05mL）、注射用水（2.45mL）、及び各pHの0.1Mリン酸緩衝液（2.50mL）を混合し、0.1mg/mLの各被験組成物を各5mL調製した。
被験組成物267〜287、315〜335、363〜383の調製は以下のように行った。
上記と同様の方法で0.1Mリン酸緩衝液を調製した。注射用水で調製した20mg/mLの被験組成物（0.025mL）、注射用水（2.475mL）、及び各pHの0.1Mリン酸緩衝液（2.50mL）を混合し、0.1mg/mLの各被験組成物を各5mL調製した。
被験組成物96〜104、144〜152、192〜200の調製は以下のように行った。
0.1Mクエン酸ナトリウム水溶液と0.1Mクエン酸水溶液を混合しpH4.2〜7.6に調製した各pHの0.1Mクエン酸緩衝液を調製した。同様に0.1Mリン酸二水素ナトリウム水溶液と0.1Mリン酸水素二ナトリウム溶液を混合しpH4.2〜7.6に調製した各pHの0.1Mリン酸緩衝液を調製した。それぞれ同一pHの0.1Mクエン酸緩衝液対0.1Mリン酸緩衝液を5:5(3mL:3mL)の割合で混合し、各pHの0.1Mクエン酸リン酸緩衝液（5:5）、を調製した。
注射用水で調製した25mg/mLの被験組成物（0.02mL）、注射用水（2.48mL）、及び各pHの0.1Mクエン酸リン酸緩衝液（5:5）（2.50mL）を混合し、0.1mg/mLの各被験組成物を各5mL調製した。
被験組成物240〜248の調製は以下のように行った。
上記と同様の方法で0.1Mクエン酸リン酸緩衝液（5:5）、を調製した。注射用水で調製した10mg/mLの被験組成物（0.05mL）、注射用水（2.45mL）、及び各pHの0.1Mクエン酸リン酸緩衝液（5:5）（2.50mL）を混合し、0.1mg/mLの各被験組成物を各5mL調製した。
被験組成物288〜296、336〜344、384〜392の調製は以下のように行った。
上記と同様の方法で0.1Mクエン酸リン酸緩衝液（5:5）、を調製した。注射用水で調製した20mg/mLの被験組成物（0.025mL）、注射用水（2.475mL）、及び各pHの0.1Mクエン酸リン酸緩衝液（5:5）（2.50mL）を混合し、0.1mg/mLの各被験組成物を各5mL調製した。
【０３０８】
核酸分子：PK-7006
被験組成物57：PK-7006  処方199（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 4.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物58：PK-7006  処方200（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 4.2））,（0.1 mg/mL）
被験組成物59：PK-7006  処方201（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 4.4））,（0.1 mg/mL）
被験組成物60：PK-7006  処方202（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 4.6））,（0.1 mg/mL）
被験組成物61：PK-7006  処方203（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 4.8））,（0.1 mg/mL）
被験組成物62：PK-7006  処方204（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 5.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物63：PK-7006  処方205（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 5.2））,（0.1 mg/mL）
被験組成物64：PK-7006  処方206（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 5.4））,（0.1 mg/mL）
被験組成物65：PK-7006  処方207（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 5.6））,（0.1 mg/mL）
被験組成物66：PK-7006  処方208（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 5.8））,（0.1 mg/mL）
被験組成物67：PK-7006  処方209（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 6.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物68：PK-7006  処方210（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 6.2））,（0.1 mg/mL）
被験組成物69：PK-7006  処方211（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 6.4））,（0.1 mg/mL）
被験組成物70：PK-7006  処方212（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 6.6））,（0.1 mg/mL）
被験組成物71：PK-7006  処方213（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 6.8））,（0.1 mg/mL）
被験組成物72：PK-7006  処方214（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 7.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物73：PK-7006  処方215（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 7.2））,（0.1 mg/mL）
被験組成物74：PK-7006  処方216（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 7.4））,（0.1 mg/mL）
被験組成物75：PK-7006  処方217（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 4.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物76：PK-7006  処方218（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 4.2））,（0.1 mg/mL）
被験組成物77：PK-7006  処方219（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 4.4））,（0.1 mg/mL）
被験組成物78：PK-7006  処方220（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 4.6））,（0.1 mg/mL）
被験組成物79：PK-7006  処方221（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 4.8））,（0.1 mg/mL）
被験組成物80：PK-7006  処方222（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 5.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物81：PK-7006  処方223（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 5.2））,（0.1 mg/mL）
被験組成物82：PK-7006  処方224（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 5.4））,（0.1 mg/mL）
被験組成物83：PK-7006  処方225（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 5.6））,（0.1 mg/mL）
被験組成物84：PK-7006  処方226（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 5.8））,（0.1 mg/mL）
被験組成物85：PK-7006  処方227（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 6.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物86：PK-7006  処方228（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 6.2））,（0.1 mg/mL）
被験組成物87：PK-7006  処方229（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 6.4））,（0.1 mg/mL）
被験組成物88：PK-7006  処方230（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 6.6））,（0.1 mg/mL）
被験組成物89：PK-7006  処方231（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 6.8））,（0.1 mg/mL）
被験組成物90：PK-7006  処方232（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 7.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物91：PK-7006  処方233（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 7.2））,（0.1 mg/mL）
被験組成物92：PK-7006  処方234（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 7.4））,（0.1 mg/mL）
被験組成物93：PK-7006  処方235（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 7.6））,（0.1 mg/mL）
被験組成物94：PK-7006  処方236（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 7.8））,（0.1 mg/mL）
被験組成物95：PK-7006  処方237（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 8.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物96：PK-7006  処方238（0.05 M  クエン酸リン酸（5:5）緩衝液（pH 4.2））,（0.1 mg/mL）
被験組成物97：PK-7006  処方239（0.05 M  クエン酸リン酸（5:5）緩衝液（pH 4.4））,（0.1 mg/mL）
被験組成物98：PK-7006  処方240（0.05 M  クエン酸リン酸（5:5）緩衝液（pH 4.6））,（0.1 mg/mL）
被験組成物99：PK-7006  処方241（0.05 M  クエン酸リン酸（5:5）緩衝液（pH 5.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物100：PK-7006  処方242（0.05 M  クエン酸リン酸（5:5）緩衝液（pH 6.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物101：PK-7006  処方243（0.05 M  クエン酸リン酸（5:5）緩衝液（pH 6.6））,（0.1 mg/mL）
被験組成物102：PK-7006  処方244（0.05 M  クエン酸リン酸（5:5）緩衝液（pH 7.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物103：PK-7006  処方245（0.05 M  クエン酸リン酸（5:5）緩衝液（pH 7.4））,（0.1 mg/mL）
被験組成物104：PK-7006  処方246（0.05 M  クエン酸リン酸（5:5）緩衝液（pH 7.6））,（0.1 mg/mL）
【０３０９】
核酸分子：NK-7006
被験組成物105：NK-7006  処方247（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 4.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物106：NK-7006  処方248（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 4.2））,（0.1 mg/mL）
被験組成物107：NK-7006  処方249（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 4.4））,（0.1 mg/mL）
被験組成物108：NK-7006  処方250（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 4.6））,（0.1 mg/mL）
被験組成物109：NK-7006  処方251（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 4.8））,（0.1 mg/mL）
被験組成物110：NK-7006  処方252（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 5.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物111：NK-7006  処方253（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 5.2））,（0.1 mg/mL）
被験組成物112：NK-7006  処方254（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 5.4））,（0.1 mg/mL）
被験組成物113：NK-7006  処方255（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 5.6））,（0.1 mg/mL）
被験組成物114：NK-7006  処方256（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 5.8））,（0.1 mg/mL）
被験組成物115：NK-7006  処方257（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 6.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物116：NK-7006  処方258（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 6.2））,（0.1 mg/mL）
被験組成物117：NK-7006  処方259（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 6.4））,（0.1 mg/mL）
被験組成物118：NK-7006  処方260（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 6.6））,（0.1 mg/mL）
被験組成物119：NK-7006  処方261（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 6.8））,（0.1 mg/mL）
被験組成物120：NK-7006  処方262（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 7.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物121：NK-7006  処方263（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 7.2））,（0.1 mg/mL）
被験組成物122：NK-7006  処方264（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 7.4））,（0.1 mg/mL）
被験組成物123：NK-7006  処方265（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 4.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物124：NK-7006  処方266（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 4.2））,（0.1 mg/mL）
被験組成物125：NK-7006  処方267（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 4.4））,（0.1 mg/mL）
被験組成物126：NK-7006  処方268（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 4.6））,（0.1 mg/mL）
被験組成物127：NK-7006  処方269（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 4.8））,（0.1 mg/mL）
被験組成物128：NK-7006  処方270（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 5.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物129：NK-7006  処方271（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 5.2））,（0.1 mg/mL）
被験組成物130：NK-7006  処方272（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 5.4））,（0.1 mg/mL）
被験組成物131：NK-7006  処方273（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 5.6））,（0.1 mg/mL）
被験組成物132：NK-7006  処方274（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 5.8））,（0.1 mg/mL）
被験組成物133：NK-7006  処方275（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 6.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物134：NK-7006  処方276（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 6.2））,（0.1 mg/mL）
被験組成物135：NK-7006  処方277（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 6.4））,（0.1 mg/mL）
被験組成物136：NK-7006  処方278（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 6.6））,（0.1 mg/mL）
被験組成物137：NK-7006  処方279（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 6.8））,（0.1 mg/mL）
被験組成物138：NK-7006  処方280（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 7.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物139：NK-7006  処方281（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 7.2））,（0.1 mg/mL）
被験組成物140：NK-7006  処方282（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 7.4））,（0.1 mg/mL）
被験組成物141：NK-7006  処方283（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 7.6））,（0.1 mg/mL）
被験組成物142：NK-7006  処方284（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 7.8））,（0.1 mg/mL）
被験組成物143：NK-7006  処方285（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 8.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物144：NK-7006  処方286（0.05 M  クエン酸リン酸（5:5）緩衝液（pH 4.2））,（0.1 mg/mL）
被験組成物145：NK-7006  処方287（0.05 M  クエン酸リン酸（5:5）緩衝液（pH 4.4））,（0.1 mg/mL）
被験組成物146：NK-7006  処方288（0.05 M  クエン酸リン酸（5:5）緩衝液（pH 4.6））,（0.1 mg/mL）
被験組成物147：NK-7006  処方289（0.05 M  クエン酸リン酸（5:5）緩衝液（pH 5.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物148：NK-7006  処方290（0.05 M  クエン酸リン酸（5:5）緩衝液（pH 6.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物149：NK-7006  処方291（0.05 M  クエン酸リン酸（5:5）緩衝液（pH 6.6））,（0.1 mg/mL）
被験組成物150：NK-7006  処方292（0.05 M  クエン酸リン酸（5:5）緩衝液（pH 7.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物151：NK-7006  処方293（0.05 M  クエン酸リン酸（5:5）緩衝液（pH 7.4））,（0.1 mg/mL）
被験組成物152：NK-7006  処方294（0.05 M  クエン酸リン酸（5:5）緩衝液（pH 7.6））,（0.1 mg/mL）
【０３１０】
核酸分子：PH-7069
被験組成物153：PH-7069  処方295（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 4.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物154：PH-7069  処方296（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 4.2））,（0.1 mg/mL）
被験組成物155：PH-7069  処方297（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 4.4））,（0.1 mg/mL）
被験組成物156：PH-7069  処方298（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 4.6））,（0.1 mg/mL）
被験組成物157：PH-7069  処方299（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 4.8））,（0.1 mg/mL）
被験組成物158：PH-7069  処方300（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 5.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物159：PH-7069  処方301（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 5.2））,（0.1 mg/mL）
被験組成物160：PH-7069  処方302（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 5.4））,（0.1 mg/mL）
被験組成物161：PH-7069  処方303（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 5.6））,（0.1 mg/mL）
被験組成物162：PH-7069  処方304（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 5.8））,（0.1 mg/mL）
被験組成物163：PH-7069  処方305（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 6.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物164：PH-7069  処方306（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 6.2））,（0.1 mg/mL）
被験組成物165：PH-7069  処方307（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 6.4））,（0.1 mg/mL）
被験組成物166：PH-7069  処方308（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 6.6））,（0.1 mg/mL）
被験組成物167：PH-7069  処方309（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 6.8））,（0.1 mg/mL）
被験組成物168：PH-7069  処方310（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 7.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物169：PH-7069  処方311（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 7.2））,（0.1 mg/mL）
被験組成物170：PH-7069  処方312（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 7.4））,（0.1 mg/mL）
被験組成物171：PH-7069  処方313（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 4.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物172：PH-7069  処方314（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 4.2））,（0.1 mg/mL）
被験組成物173：PH-7069  処方315（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 4.4））,（0.1 mg/mL）
被験組成物174：PH-7069  処方316（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 4.6））,（0.1 mg/mL）
被験組成物175：PH-7069  処方317（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 4.8））,（0.1 mg/mL）
被験組成物176：PH-7069  処方318（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 5.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物177：PH-7069  処方319（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 5.2））,（0.1 mg/mL）
被験組成物178：PH-7069  処方320（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 5.4））,（0.1 mg/mL）
被験組成物179：PH-7069  処方321（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 5.6））,（0.1 mg/mL）
被験組成物180：PH-7069  処方322（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 5.8））,（0.1 mg/mL）
被験組成物181：PH-7069  処方323（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 6.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物182：PH-7069  処方324（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 6.2））,（0.1 mg/mL）
被験組成物183：PH-7069  処方325（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 6.4））,（0.1 mg/mL）
被験組成物184：PH-7069  処方326（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 6.6））,（0.1 mg/mL）
被験組成物185：PH-7069  処方327（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 6.8））,（0.1 mg/mL）
被験組成物186：PH-7069  処方328（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 7.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物187：PH-7069  処方329（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 7.2））,（0.1 mg/mL）
被験組成物188：PH-7069  処方330（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 7.4））,（0.1 mg/mL）
被験組成物189：PH-7069  処方331（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 7.6））,（0.1 mg/mL）
被験組成物190：PH-7069  処方332（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 7.8））,（0.1 mg/mL）
被験組成物191：PH-7069  処方333（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 8.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物192：PH-7069  処方334（0.05 M  クエン酸リン酸（5:5）緩衝液（pH 4.2））,（0.1 mg/mL）
被験組成物193：PH-7069  処方335（0.05 M  クエン酸リン酸（5:5）緩衝液（pH 4.4））,（0.1 mg/mL）
被験組成物194：PH-7069  処方336（0.05 M  クエン酸リン酸（5:5）緩衝液（pH 4.6））,（0.1 mg/mL）
被験組成物195：PH-7069  処方337（0.05 M  クエン酸リン酸（5:5）緩衝液（pH 5.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物196：PH-7069  処方338（0.05 M  クエン酸リン酸（5:5）緩衝液（pH 6.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物197：PH-7069  処方339（0.05 M  クエン酸リン酸（5:5）緩衝液（pH 6.6））,（0.1 mg/mL）
被験組成物198：PH-7069  処方340（0.05 M  クエン酸リン酸（5:5）緩衝液（pH 7.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物199：PH-7069  処方341（0.05 M  クエン酸リン酸（5:5）緩衝液（pH 7.4））,（0.1 mg/mL）
被験組成物200：PH-7069  処方342（0.05 M  クエン酸リン酸（5:5）緩衝液（pH 7.6））,（0.1 mg/mL）
【０３１１】
核酸分子：NI-7001
被験組成物201：NI-7001  処方343（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 4.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物202：NI-7001  処方344（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 4.2））,（0.1 mg/mL）
被験組成物203：NI-7001  処方345（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 4.4））,（0.1 mg/mL）
被験組成物204：NI-7001  処方346（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 4.6））,（0.1 mg/mL）
被験組成物205：NI-7001  処方347（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 4.8））,（0.1 mg/mL）
被験組成物206：NI-7001  処方348（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 5.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物207：NI-7001  処方349（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 5.2））,（0.1 mg/mL）
被験組成物208：NI-7001  処方350（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 5.4））,（0.1 mg/mL）
被験組成物209：NI-7001  処方351（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 5.6））,（0.1 mg/mL）
被験組成物210：NI-7001  処方352（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 5.8））,（0.1 mg/mL）
被験組成物211：NI-7001  処方353（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 6.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物212：NI-7001  処方354（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 6.2））,（0.1 mg/mL）
被験組成物213：NI-7001  処方355（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 6.4））,（0.1 mg/mL）
被験組成物214：NI-7001  処方356（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 6.6））,（0.1 mg/mL）
被験組成物215：NI-7001  処方357（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 6.8））,（0.1 mg/mL）
被験組成物216：NI-7001  処方358（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 7.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物217：NI-7001  処方359（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 7.2））,（0.1 mg/mL）
被験組成物218：NI-7001  処方360（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 7.4））,（0.1 mg/mL）
被験組成物219：NI-7001  処方361（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 4.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物220：NI-7001  処方362（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 4.2））,（0.1 mg/mL）
被験組成物221：NI-7001  処方363（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 4.4））,（0.1 mg/mL）
被験組成物222：NI-7001  処方364（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 4.6））,（0.1 mg/mL）
被験組成物2223：NI-7001  処方365（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 4.8））,（0.1 mg/mL）
被験組成物224：NI-7001  処方366（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 5.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物225：NI-7001  処方367（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 5.2））,（0.1 mg/mL）
被験組成物226：NI-7001  処方368（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 5.4））,（0.1 mg/mL）
被験組成物227：NI-7001  処方369（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 5.6））,（0.1 mg/mL）
被験組成物228：NI-7001  処方370（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 5.8））,（0.1 mg/mL）
被験組成物229：NI-7001  処方371（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 6.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物230：NI-7001  処方372（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 6.2））,（0.1 mg/mL）
被験組成物231：NI-7001  処方373（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 6.4））,（0.1 mg/mL）
被験組成物232：NI-7001  処方374（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 6.6））,（0.1 mg/mL）
被験組成物233：NI-7001  処方375（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 6.8））,（0.1 mg/mL）
被験組成物234：NI-7001  処方376（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 7.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物235：NI-7001  処方377（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 7.2））,（0.1 mg/mL）
被験組成物236：NI-7001  処方378（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 7.4））,（0.1 mg/mL）
被験組成物237：NI-7001  処方379（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 7.6））,（0.1 mg/mL）
被験組成物238：NI-7001  処方380（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 7.8））,（0.1 mg/mL）
被験組成物239：NI-7001  処方381（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 8.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物240：NI-7001  処方382（0.05 M  クエン酸リン酸（5:5）緩衝液（pH 4.2））,（0.1 mg/mL）
被験組成物241：NI-7001  処方383（0.05 M  クエン酸リン酸（5:5）緩衝液（pH 4.4））,（0.1 mg/mL）
被験組成物242：NI-7001  処方384（0.05 M  クエン酸リン酸（5:5）緩衝液（pH 4.6））,（0.1 mg/mL）
被験組成物243：NI-7001  処方385（0.05 M  クエン酸リン酸（5:5）緩衝液（pH 5.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物244：NI-7001  処方386（0.05 M  クエン酸リン酸（5:5）緩衝液（pH 6.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物245：NI-7001  処方387（0.05 M  クエン酸リン酸（5:5）緩衝液（pH 6.6））,（0.1 mg/mL）
被験組成物246：NI-7001  処方388（0.05 M  クエン酸リン酸（5:5）緩衝液（pH 7.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物247：NI-7001  処方389（0.05 M  クエン酸リン酸（5:5）緩衝液（pH 7.4））,（0.1 mg/mL）
被験組成物248：NI-7001  処方390（0.05 M  クエン酸リン酸（5:5）緩衝液（pH 7.6））,（0.1 mg/mL）
【０３１２】
核酸分子：NM-7001
被験組成物249：NM-7001  処方391（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 4.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物250：NM-7001  処方392（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 4.2））,（0.1 mg/mL）
被験組成物251：NM-7001  処方393（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 4.4））,（0.1 mg/mL）
被験組成物252：NM-7001  処方394（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 4.6））,（0.1 mg/mL）
被験組成物253：NM-7001  処方395（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 4.8））,（0.1 mg/mL）
被験組成物254：NM-7001  処方396（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 5.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物255：NM-7001  処方397（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 5.2））,（0.1 mg/mL）
被験組成物256：NM-7001  処方398（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 5.4））,（0.1 mg/mL）
被験組成物257：NM-7001  処方399（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 5.6））,（0.1 mg/mL）
被験組成物258：NM-7001  処方400（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 5.8））,（0.1 mg/mL）
被験組成物259：NM-7001  処方401（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 6.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物260：NM-7001  処方402（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 6.2））,（0.1 mg/mL）
被験組成物261：NM-7001  処方403（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 6.4））,（0.1 mg/mL）
被験組成物262：NM-7001  処方404（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 6.6））,（0.1 mg/mL）
被験組成物263：NM-7001  処方405（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 6.8））,（0.1 mg/mL）
被験組成物264：NM-7001  処方406（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 7.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物265：NM-7001  処方407（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 7.2））,（0.1 mg/mL）
被験組成物266：NM-7001  処方408（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 7.4））,（0.1 mg/mL）
被験組成物267：NM-7001  処方409（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 4.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物268：NM-7001  処方410（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 4.2））,（0.1 mg/mL）
被験組成物269：NM-7001  処方411（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 4.4））,（0.1 mg/mL）
被験組成物270：NM-7001  処方412（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 4.6））,（0.1 mg/mL）
被験組成物271：NM-7001  処方413（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 4.8））,（0.1 mg/mL）
被験組成物272：NM-7001  処方414（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 5.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物273：NM-7001  処方415（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 5.2））,（0.1 mg/mL）
被験組成物274：NM-7001  処方416（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 5.4））,（0.1 mg/mL）
被験組成物275：NM-7001  処方417（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 5.6））,（0.1 mg/mL）
被験組成物276：NM-7001  処方418（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 5.8））,（0.1 mg/mL）
被験組成物277：NM-7001  処方419（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 6.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物278：NM-7001  処方420（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 6.2））,（0.1 mg/mL）
被験組成物279：NM-7001  処方421（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 6.4））,（0.1 mg/mL）
被験組成物280：NM-7001  処方422（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 6.6））,（0.1 mg/mL）
被験組成物281：NM-7001  処方423（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 6.8））,（0.1 mg/mL）
被験組成物282：NM-7001  処方424（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 7.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物283：NM-7001  処方425（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 7.2））,（0.1 mg/mL）
被験組成物284：NM-7001  処方426（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 7.4））,（0.1 mg/mL）
被験組成物285：NM-7001  処方427（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 7.6））,（0.1 mg/mL）
被験組成物286：NM-7001  処方428（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 7.8））,（0.1 mg/mL）
被験組成物287：NM-7001  処方429（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 8.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物288：NM-7001  処方430（0.05 M  クエン酸リン酸（5:5）緩衝液（pH 4.2））,（0.1 mg/mL）
被験組成物289：NM-7001  処方431（0.05 M  クエン酸リン酸（5:5）緩衝液（pH 4.4））,（0.1 mg/mL）
被験組成物290：NM-7001  処方432（0.05 M  クエン酸リン酸（5:5）緩衝液（pH 4.6））,（0.1 mg/mL）
被験組成物291：NM-7001  処方433（0.05 M  クエン酸リン酸（5:5）緩衝液（pH 5.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物292：NM-7001  処方434（0.05 M  クエン酸リン酸（5:5）緩衝液（pH 6.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物293：NM-7001  処方435（0.05 M  クエン酸リン酸（5:5）緩衝液（pH 6.6））,（0.1 mg/mL）
被験組成物294：NM-7001  処方436（0.05 M  クエン酸リン酸（5:5）緩衝液（pH 7.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物295：NM-7001  処方437（0.05 M  クエン酸リン酸（5:5）緩衝液（pH 7.4））,（0.1 mg/mL）
被験組成物296：NM-7001  処方438（0.05 M  クエン酸リン酸（5:5）緩衝液（pH 7.6））,（0.1 mg/mL）
【０３１３】
核酸分子：Kynamro-7001
被験組成物297：Kynamro-7001  処方439（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 4.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物298：Kynamro-7001  処方440（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 4.2））,（0.1 mg/mL）
被験組成物299：Kynamro-7001  処方441（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 4.4））,（0.1 mg/mL）
被験組成物300：Kynamro-7001  処方442（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 4.6））,（0.1 mg/mL）
被験組成物301：Kynamro-7001  処方443（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 4.8））,（0.1 mg/mL）
被験組成物302：Kynamro-7001  処方444（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 5.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物303：Kynamro-7001  処方445（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 5.2））,（0.1 mg/mL）
被験組成物304：Kynamro-7001  処方446（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 5.4））,（0.1 mg/mL）
被験組成物305：Kynamro-7001  処方447（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 5.6））,（0.1 mg/mL）
被験組成物306：Kynamro-7001  処方448（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 5.8））,（0.1 mg/mL）
被験組成物307：Kynamro-7001  処方449（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 6.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物308：Kynamro-7001  処方450（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 6.2））,（0.1 mg/mL）
被験組成物309：Kynamro-7001  処方451（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 6.4））,（0.1 mg/mL）
被験組成物310：Kynamro-7001  処方452（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 6.6））,（0.1 mg/mL）
被験組成物311：Kynamro-7001  処方453（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 6.8））,（0.1 mg/mL）
被験組成物312：Kynamro-7001  処方454（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 7.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物313：Kynamro-7001  処方455（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 7.2））,（0.1 mg/mL）
被験組成物314：Kynamro-7001  処方456（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 7.4））,（0.1 mg/mL）
被験組成物315：Kynamro-7001  処方457（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 4.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物316：Kynamro-7001  処方458（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 4.2））,（0.1 mg/mL）
被験組成物317：Kynamro-7001  処方459（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 4.4））,（0.1 mg/mL）
被験組成物318：Kynamro-7001  処方460（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 4.6））,（0.1 mg/mL）
被験組成物319：Kynamro-7001  処方461（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 4.8））,（0.1 mg/mL）
被験組成物320：Kynamro-7001  処方462（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 5.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物321：Kynamro-7001  処方463（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 5.2））,（0.1 mg/mL）
被験組成物322：Kynamro-7001  処方464（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 5.4））,（0.1 mg/mL）
被験組成物323：Kynamro-7001  処方465（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 5.6））,（0.1 mg/mL）
被験組成物324：Kynamro-7001  処方466（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 5.8））,（0.1 mg/mL）
被験組成物325：Kynamro-7001  処方467（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 6.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物326：Kynamro-7001  処方468（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 6.2））,（0.1 mg/mL）
被験組成物327：Kynamro-7001  処方469（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 6.4））,（0.1 mg/mL）
被験組成物328：Kynamro-7001  処方470（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 6.6））,（0.1 mg/mL）
被験組成物329：Kynamro-7001  処方471（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 6.8））,（0.1 mg/mL）
被験組成物330：Kynamro-7001  処方472（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 7.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物331：Kynamro-7001  処方473（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 7.2））,（0.1 mg/mL）
被験組成物332：Kynamro-7001  処方474（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 7.4））,（0.1 mg/mL）
被験組成物333：Kynamro-7001  処方475（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 7.6））,（0.1 mg/mL）
被験組成物334：Kynamro-7001  処方476（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 7.8））,（0.1 mg/mL）
被験組成物335：Kynamro-7001  処方477（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 8.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物336：Kynamro-7001  処方478（0.05 M  クエン酸リン酸（5:5）緩衝液（pH 4.2））,（0.1 mg/mL）
被験組成物337：Kynamro-7001  処方479（0.05 M  クエン酸リン酸（5:5）緩衝液（pH 4.4））,（0.1 mg/mL）
被験組成物338：Kynamro-7001  処方480（0.05 M  クエン酸リン酸（5:5）緩衝液（pH 4.6））,（0.1 mg/mL）
被験組成物339：Kynamro-7001  処方481（0.05 M  クエン酸リン酸（5:5）緩衝液（pH 5.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物340：Kynamro-7001  処方482（0.05 M  クエン酸リン酸（5:5）緩衝液（pH 6.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物341：Kynamro-7001  処方483（0.05 M  クエン酸リン酸（5:5）緩衝液（pH 6.6））,（0.1 mg/mL）
被験組成物342：Kynamro-7001  処方484（0.05 M  クエン酸リン酸（5:5）緩衝液（pH 7.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物343：Kynamro-7001  処方485（0.05 M  クエン酸リン酸（5:5）緩衝液（pH 7.4））,（0.1 mg/mL）
被験組成物344：Kynamro-7001  処方486（0.05 M  クエン酸リン酸（5:5）緩衝液（pH 7.6））,（0.1 mg/mL）
【０３１４】
核酸分子：Macugen-700
被験組成物345：Macugen-7001  処方487（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 4.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物346：Macugen-7001  処方488（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 4.2））,（0.1 mg/mL）
被験組成物347：Macugen-7001  処方489（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 4.4））,（0.1 mg/mL）
被験組成物348：Macugen-7001  処方490（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 4.6））,（0.1 mg/mL）
被験組成物349：Macugen-7001  処方491（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 4.8））,（0.1 mg/mL）
被験組成物350：Macugen-7001  処方492（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 5.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物351：Macugen-7001  処方493（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 5.2））,（0.1 mg/mL）
被験組成物352：Macugen-7001  処方494（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 5.4））,（0.1 mg/mL）
被験組成物353：Macugen-7001  処方495（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 5.6））,（0.1 mg/mL）
被験組成物354：Macugen-7001  処方496（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 5.8））,（0.1 mg/mL）
被験組成物355：Macugen-7001  処方497（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 6.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物356：Macugen-7001  処方498（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 6.2））,（0.1 mg/mL）
被験組成物357：Macugen-7001  処方499（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 6.4））,（0.1 mg/mL）
被験組成物358：Macugen-7001  処方500（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 6.6））,（0.1 mg/mL）
被験組成物359：Macugen-7001  処方501（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 6.8））,（0.1 mg/mL）
被験組成物360：Macugen-7001  処方502（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 7.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物361：Macugen-7001  処方503（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 7.2））,（0.1 mg/mL）
被験組成物362：Macugen-7001  処方504（0.05 M  クエン酸緩衝液（pH 7.4））,（0.1 mg/mL）
被験組成物363：Macugen-7001  処方505（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 4.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物364：Macugen-7001  処方506（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 4.2））,（0.1 mg/mL）
被験組成物365：Macugen-7001  処方507（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 4.4））,（0.1 mg/mL）
被験組成物366：Macugen-7001  処方508（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 4.6））,（0.1 mg/mL）
被験組成物367：Macugen-7001  処方509（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 4.8））,（0.1 mg/mL）
被験組成物368：Macugen-7001  処方510（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 5.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物369：Macugen-7001  処方511（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 5.2））,（0.1 mg/mL）
被験組成物370：Macugen-7001  処方512（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 5.4））,（0.1 mg/mL）
被験組成物371：Macugen-7001  処方513（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 5.6））,（0.1 mg/mL）
被験組成物372：Macugen-7001  処方514（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 5.8））,（0.1 mg/mL）
被験組成物373：Macugen-7001  処方515（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 6.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物374：Macugen-7001  処方516（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 6.2））,（0.1 mg/mL）
被験組成物375：Macugen-7001  処方517（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 6.4））,（0.1 mg/mL）
被験組成物376：Macugen-7001  処方518（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 6.6））,（0.1 mg/mL）
被験組成物377：Macugen-7001  処方519（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 6.8））,（0.1 mg/mL）
被験組成物378：Macugen-7001  処方520（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 7.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物379：Macugen-7001  処方521（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 7.2））,（0.1 mg/mL）
被験組成物380：Macugen-7001  処方522（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 7.4））,（0.1 mg/mL）
被験組成物381：Macugen-7001  処方523（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 7.6））,（0.1 mg/mL）
被験組成物382：Macugen-7001  処方524（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 7.8））,（0.1 mg/mL）
被験組成物383：Macugen-7001  処方525（0.05 M  リン酸緩衝液（pH 8.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物384：Macugen-7001  処方526（0.05 M  クエン酸リン酸（5:5）緩衝液（pH 4.2））,（0.1 mg/mL）
被験組成物 385：Macugen-7001  処方527（0.05 M  クエン酸リン酸（5:5）緩衝液（pH 4.4））,（0.1 mg/mL）
被験組成物386：Macugen-7001  処方528（0.05 M  クエン酸リン酸（5:5）緩衝液（pH 4.6））,（0.1 mg/mL）
被験組成物387：Macugen-7001  処方529（0.05 M  クエン酸リン酸（5:5）緩衝液（pH 5.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物388：Macugen-7001  処方530（0.05 M  クエン酸リン酸（5:5）緩衝液（pH 6.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物389：Macugen-7001  処方531（0.05 M  クエン酸リン酸（5:5）緩衝液（pH 6.6））,（0.1 mg/mL）
被験組成物390：Macugen-7001  処方532（0.05 M  クエン酸リン酸（5:5）緩衝液（pH 7.0））,（0.1 mg/mL）
被験組成物391：Macugen-7001  処方533（0.05 M  クエン酸リン酸（5:5）緩衝液（pH 7.4））,（0.1 mg/mL）
被験組成物392：Macugen-7001  処方534（0.05 M  クエン酸リン酸（5:5）緩衝液（pH 7.6））,（0.1 mg/mL）
【０３１５】
実施例７−２（試験方法及び判定基準）
被験組成物57〜392をそれぞれ4℃に1本、60℃の安定性試験器に4本保存した。各4℃保存品を開始時、各60℃保存品を1週間ごとに取り出し、逆相HPLCにより含量を算出し、保存開始時の含量に対する含量割合（%）の減少による安定性の評価を行った。
各被験組成物の開始時を検量線試料（100%）として、実施例１−２と同様の方法で検量線試料（60%〜100%）を調製した。検量線試料（60%〜100%）及び各保存試料につき30 μLを実施例１−２と同様の方法でHPLCにて測定した。
【０３１６】
実施例７−３（結果）
結果を図１７〜２３に示す。本結果より、PK-7006、NK-7006及びPH-7069は、60℃、4週間でも高い保存安定性を有することが示された。
【産業上の利用可能性】
【０３１７】
本発明によれば、核酸分子の安定性が改善された、新規な液状核酸含有組成物、特に医薬組成物を提供することができるので、常温での保存・輸送などが可能となり、取扱いに優れた核酸含有組成物を提供できる点で、きわめて有用である。
本出願は、日本で出願された特願2014-267087（出願日：2014年12月29日）及び特願2015-081298（出願日：2015年4月10日）を基礎としており、その内容は全て本明細書に包含されるものとする。
【図１】
2019077696.tif 000037
【図２】
2019077696.tif 000038
【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
2019077696.tif 000047
【図１２】
2019077696.tif 000048
【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】平成31年1月25日(2019.1.25)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
核酸分子及び緩衝液を含有する組成物であって、以下の特徴：
（ａ）常温で溶液の形態である；および
（ｂ）２５℃、相対湿度６０％で４週間保存後の該核酸分子の含量が、保存開始時の含量に対して８０％以上である；
を有し、
該緩衝液は、クエン酸緩衝液、またはクエン酸緩衝液およびリン酸緩衝液（１：１）であり、
該緩衝液は、組成物のｐＨを５.８以上６.８以下とする緩衝液であり、
該核酸分子の濃度は、０.１〜１０ｍｇ／ｍＬであり、
該核酸分子のヌクレオチド数は、２０〜８０ヌクレオチドであり、
該核酸分子は、アンチセンス核酸、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、リボザイム、デコイ核酸およびアプタマーからなる群から選択される１以上である、
組成物。
【請求項２】
４０℃、相対湿度７５％で４週間保存後の該核酸分子の含量が、保存開始時の含量に対して８０％以上である、請求項１記載の組成物。
【請求項３】
６０℃で４週間保存後の該核酸分子の含量が、保存開始時の含量に対して６０％以上である、請求項１または２記載の組成物。
【請求項４】
前記核酸分子が一本鎖核酸分子または二本鎖核酸分子である、請求項１から３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５】
前記核酸分子が、ＤＮＡ分子、ＲＮＡ分子、またはＤＮＡとＲＮＡのキメラ核酸分子である、請求項１から４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６】
医薬組成物である、請求項１から５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７】
請求項１から５のいずれか一項に記載の組成物の製造方法であって、前記核酸分子を、該組成物のｐＨを５．８以上６．８以下とする緩衝液に溶解し、常温で保存することを含む、方法。
【請求項８】
請求項１から５のいずれか一項に記載の組成物中の核酸分子の安定化方法であって、該核酸分子を、該組成物のｐＨを５．８以上６．８以下とする緩衝液に溶解し、常温で保存することを含む、方法。
【請求項９】
組成物が医薬組成物である、請求項７または８に記載の方法。