(57)【要約】【課題】α−グルコシドの効率的な製造法の提供。【解決手段】α−グルコシダーゼ及びグルコースイソメラーゼの存在下にマルトースと水酸基含有化合物（ＲＯＨ）を反応させることを特徴とする一般式（１） 2019141037.tif 000009（式中、Ｒは置換基を有していてもよい炭化水素基又は置換基を有していてもよい複素環式基を示す）で表されるα−グルコシドの製造法。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
α−グルコシダーゼ及びグルコースイソメラーゼの存在下にマルトースと水酸基含有化合物（ＲＯＨ）を反応させることを特徴とする一般式（１）
【化１】
2019141037.tif 000008
（式中、Ｒは置換基を有していてもよい炭化水素基又は置換基を有していてもよい複素環式基を示す）
で表されるα−グルコシドの製造法。
【請求項２】
α−グルコシダーゼが、アスペルギルス（Aspergillus）属、アブシディア（Absidia）属、アクレモニウム（Acremonium）属、トリコデルマ（Trichoderma）属、ペニシリウム（Penicillium）属、フザリウム（Fusarium）属、サッカロマイセス（Saccharomyces）属、ストレプトマイセス（Streptomyces）属、バチルス（Bacillus）属、バルクホルデリア（Burkholderia）属、ハロモナス（Halomonas）属、シュードモナス（Pseudomonas）属及びキサントモナス（Xanthomonas）属から選ばれる微生物由来のα−グルコシダーゼである請求項１記載の製造法。
【請求項３】
グルコースイソメラーゼが、アスペルギルス（Aspergillus）属、アクチノプラネス（Actinoplanes）属、ストレプトマイセス（Streptomyces）属及びバチルス（Bacillus）属から選ばれる微生物由来のグルコースイソメラーゼである請求項１又は２記載の製造法。
【請求項４】
一般式（１）で表されるα−グルコシドがα−アルブチンである、請求項１〜３のいずれか１項記載の製造法。
【請求項５】
一般式（１）で表されるα−グルコシドがα−エチルグルコシドである、請求項１〜３のいずれか１項記載の製造法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、α−グルコシドの製造法に関する。
【背景技術】
【０００２】
オクチルグルコシド等の長鎖アルキルグルコシドは、天然原料由来の糖系非イオン性界面活性剤として広く用いられている（非特許文献１）。また、α−エチルグルコシド（α−ＥＧ）は、日本酒やみりん等に含まれており、飲用や塗布による整肌作用や保湿作用が報告されている。一方、β−エチルグルコシドには上記の作用がないことから、α−ＥＧに特異的な生理的作用と考えられる（非特許文献２）。近年では、α−ＥＧが線維芽細胞の増殖を促進すること（非特許文献３）、皮膚真皮層のコラーゲン量を増大させること（非特許文献３、４）も報告されている。
【０００３】
また、ヒドロキノングルコシドは、メラニン生成阻害作用を有するため美白成分として化粧品に使用されている。このうち、ヒドロキノン−β−グルコシド（β−アルブチンないし単にアルブチンとも呼ばれる）が一般に使用されており、植物やその果実に見出されている。また、ヒドロキノン−β−グルコシドの異性体であるヒドロキノン−α−グルコシドはα−アルブチンとも呼ばれ、ヒドロキノン−β−グルコシドから酵素や微生物の作用により合成される。ヒドロキノン−α−グルコシドは、酵素チロシナーゼの阻害によりメラニン生成阻害作用することから、肌の美白作用を示し（非特許文献５、６）、同様に美白成分として化粧品に使用されている。
【０００４】
α−グルコシドの製造法としては、発酵法と酵素法を組み合わせた方法（非特許文献２、７）、酵素を利用した方法（非特許文献８、９）が報告されている。また、α−アルブチンの製造法としては、酵素を利用した方法（非特許文献１０、１１、１２）が報告されている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】オレオサイエンス  １４巻（２０１４）１１号  ｐ．４７３−４７７
【非特許文献２】醸造協会誌，９９，８３６−８４１（２００４）
【非特許文献３】Biosci. Biotech. Biochem., 81, 1706-1711(2017)
【非特許文献４】https://prw.kyodonews.jp/opn/release/201709115541/
【非特許文献５】Trends in Glycoscience and Glycotechnology, 19, No.110,235-246 (2007)
【非特許文献６】Journal of Bioscience and  Bioengineering, 99, No.3, 272-276 (2005)
【非特許文献７】生物工学会誌，９４，５９４−６００（２０１６）
【非特許文献８】日本食品保蔵科学会誌，３８，２６５−２７０
【非特許文献９】日本食品工業学会誌，４１，８７８−８８５（１９９４）
【非特許文献１０】Bioscience, Biotechnology, and Biochemistry, 58, No. 4, 752-755 (1994)
【非特許文献１１】Journal of Fermentation and Bioengineering, 80, No. 1, 18-23 (1995)
【非特許文献１２】Journal of Bioscience and Bioengineering, 96, No. 2, 199-202 (2003)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
しかしながら、従来の製造法によるα−グルコシドの収率は十分とは言えず、また生産工程で有機酸やオリゴ糖などの副生が見られることがあった。
従って、本発明の課題は、収率が高く、かつ副生物の少ない工業的に有利なα−グルコシドの製造法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
そこで本発明者は、マルトースを原料としてα−グルコシダーゼを反応させてα−グルコシドの製法を検討してきた。その過程で、α−グルコシダーゼだけでなくグルコースイソメラーゼを併用して、マルトースと水酸基含有化合物とを反応させたところ、α−グルコシドが選択的かつ高収率で製造できることを見出し、本発明を完成した。
【０００８】
すなわち、本発明は、次の〔１〕〜〔５〕を提供するものである。
【０００９】
〔１〕α−グルコシダーゼ及びグルコースイソメラーゼの存在下にマルトースと水酸基含有化合物（ＲＯＨ）を反応させることを特徴とする一般式（１）
【００１０】
【化１】
2019141037.tif 000002
【００１１】
（式中、Ｒは置換基を有していてもよい炭化水素基又は置換基を有していてもよい複素環式基を示す）
で表されるα−グルコシドの製造法。
〔２〕α−グルコシダーゼが、アスペルギルス（Aspergillus）属、アブシディア（Absidia）属、アクレモニウム（Acremonium）属、アクレモニウム（Acremonium）属、トリコデルマ（Trichoderma）属、ペニシリウム（Penicillium）属、フザリウム（Fusarium）属、サッカロマイセス（Saccharomyces）属、ストレプトマイセス（Streptomyces）属、バチルス（Bacillus）属、バルクホルデリア（Burkholderia）属、ハロモナス（Halomonas）属、シュードモナス（Pseudomonas）属及びキサントモナス（Xanthomonas）属から選ばれる微生物由来のα−グルコシダーゼである〔１〕記載の製造法。
〔３〕グルコースイソメラーゼが、アスペルギルス（Aspergillus）属、アクチノプラネス（Actinoplanes）属、ストレプトマイセス（Streptomyces）属及びバチルス（Bacillus）属から選ばれる微生物由来のグルコースイソメラーゼである〔１〕又は〔２〕記載の製造法。
〔４〕一般式（１）で表されるα−グルコシドがα−アルブチンである、〔１〕〜〔３〕のいずれか１項記載の製造法。
〔５〕一般式（１）で表されるα−グルコシドがα−エチルグルコシドである、〔１〕〜〔３〕のいずれか１項記載の製造法。
【発明の効果】
【００１２】
本発明方法によれば、α−グルコシドが選択的に、かつ高収率で得られるため、本発明方法はα−グルコシドの工業的製造法として有用である。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】グルコースイソメラーゼ添加によるα−エチルグルコシド生産量の増加を示す。四角はα−グルコシダーゼにグルコースイソメラーゼ併用。丸はα−グルコシダーゼ単独使用。
【図２】α−グルコシダーゼとグルコースイソメラーゼ併用によるアルキル−α−グルコシドの生産を示す図である。１，  １−プロパノール；２，  １−ブタノール（上層）；３，  １−ブタノール（下層）；４，  １−ペンタノール（上層）；５，  １−ペンタノール（下層）；６，  １−ヘキサノール（上層）；７，  １−ヘキサノール（下層）；８，  １−ヘプタノール（上層）；９，  １−ヘプタノール（下層）；１０，  １−オクタノール（上層）；１１，  １−オクタノール（下層）；Ｍ，  ２０ｍＭ  マルトース（Ｒｆ＝０．２８）；Ｇ，  ２０ｍＭ  グルコース（Ｒｆ＝０．４１）．
【図３】第二級アルコールの使用によるアルキル−α−グルコシドの生産を示す図である。１，  エタノール；２，  １−プロパノール；３，  ２−プロパノール；４，  １−ブタノール（下層）；５，  １−ヘキサノール（上層）；６，  １−ヘキサノール（下層）；７，  １−ヘプタノール（上層）；８，  １−ヘプタノール（下層）；９，  １−オクタノール（上層）；１０，  １−オクタノール（下層）；；Ｍ，  ２０ｍＭ  マルトース（Ｒｆ＝０．２８）；Ｇ，  ２０ｍＭ  グルコース（Ｒｆ＝０．４１）；Ｅ，  α−ＥＧ（Ｒｆ＝０．６２）．
【図４】α−グルコシダーゼ（ＸｇｔＡ）とグルコースイソメラーゼ（ＧＩ）を併用することによるα−アルブチンの生産において、生成物であるα−アルブチンと原料であるヒドロキノンの濃度の経時的変化を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
本発明の一般式（１）で表されるα−グルコシドの製造法は、α−グルコシダーゼ及びグルコースイソメラーゼの存在下にマルトースと水酸基含有化合物（ＲＯＨ）を反応させることを特徴とする。
【００１５】
一般式（１）中、Ｒは置換基を有していてもよい炭化水素基又は置換基を有していてもよい複素環式基を示す。炭化水素基としては、脂肪族炭化水素基及び芳香族炭化水素基の両方が挙げられる。脂肪族炭化水素基の例としては、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、シクロアルキル基、シクロアルキニル基が挙げられる。これら脂肪族炭化水素基の炭素数は１〜２４が好ましく、１〜２０がより好ましく、１〜１０がさらに好ましく、１〜７が特に好ましい。芳香族炭化水素基の例としては、フェニル基、カテコール基、ナフチル基等が挙げられる。また、これらの炭化水素基に置換し得る基としては、ヒドロキシ基、アルコキシ基、ハロゲン原子等が挙げられる。置換基を有してもよい芳香族炭化水素基として好ましくは、ヒドロキシフェニル基であり、より好ましくは４−ヒドロキシフェニル基である（換言すれば、一般式（１）で表されるα−グルコシドの好ましい一態様は、α−アルブチン（４−ヒドロキシフェニル−α−Ｄ−グルコシド）である）。
【００１６】
複素環式基としては、フラボン、フラボノール、フラバノン、フラバノール、カテキン類等のポリフェノール類が挙げられる。
【００１７】
本発明の方法における原料の一つはマルトースである。マルトースを含むデンプン加水分解物を使用してもよい。またもう一方の原料である水酸基含有化合物（ＲＯＨ）は、前記の置換基を有していてもよい炭化水素基又は置換基を有していてもよい複素環式基に１個以上の水酸基が結合した化合物である。具体的には炭素数１〜２４のアルコール、炭素数３〜２４の環状アルコール、フェノール類、ポリフェノール類等が挙げられる。アルコールは第一級アルコール、第二級アルコール及び第三級アルコールを使用可能であるが、第一級アルコール又は第二級アルコールを使用することが好ましい。原料の濃度は、その溶解度や反応性等に応じて適宜設定することができる。マルトースの濃度は、好ましくは０．０１〜３Ｍ、より好ましくは０．１〜２Ｍである。水酸基含有化合物（ＲＯＨ）の濃度は、例えばエタノールを基質とする場合（α−エチルグルコシドを製造する場合）、好ましくは０．１〜１０Ｍであり、より好ましくは０．５〜５Ｍであり、例えばヒドロキノンを基質とする場合（α−アルブチンを製造する場合）、好ましくは０．１〜５００ｍＭであり、より好ましくは１〜３００ｍＭである。
【００１８】
本発明においては、酵素として、α−グルコシダーゼとグルコースイソメラーゼを併用する。マルトースと水酸基含有化合物（ＲＯＨ）にα−グルコシダーゼが作用するとＲ−α−グルコシドが生成する。しかし、このＲ−α−グルコシド生成反応が進行すると、遊離したグルコースにより生成物阻害が生じ、平衡状態で反応は止まってしまう。しかし、マルトースから遊離したグルコースをグルコースイソメラーゼの作用によりフルクトースに変換すれば、Ｒ−α−グルコシドの生成反応は進行が継続することになる。原料にデンプンを使用する場合、上記の酵素に加え、アミラーゼ等のデンプン加水分解酵素を併用しても良い。
【００１９】
α−グルコシダーゼとしては、市販のα−グルコシダーゼを用いることができるし、食経験上安全な微生物から取得しても良い。例えば、アスペルギルス（Aspergillus）属、アブシディア（Absidia）属、アクレモニウム（Acremonium）属、トリコデルマ（Trichoderma）属、ペニシリウム（Penicillium）属、フザリウム（Fusarium）属、サッカロマイセス（Saccharomyces）属、ストレプトマイセス（Streptomyces）属、バチルス（Bacillus）属、バルクホルデリア（Burkholderia）属、ハロモナス（Halomonas）属、シュードモナス（Pseudomonas）属及びキサントモナス（Xanthomonas）属から選ばれる微生物由来のα−グルコシダーゼが挙げられる。このうち、キサントモナス（Xanthomonas）属由来のα−グルコシダーゼが特に好ましい。α−グルコシダーゼの活性値は反応液中において、好ましくは０．１〜１，０００Ｕ／ｍＬであり、より好ましくは０．５〜１００Ｕ／ｍＬである。
【００２０】
グルコースイソメラーゼとしては、市販のグルコースイソメラーゼを用いることができる。例えば、アスペルギルス（Aspergillus）属、アクチノプラネス（Actinoplanes）属、ストレプトマイセス（Streptomyces）属及びバチルス（Bacillus）属から選ばれる微生物由来のグルコースイソメラーゼが挙げられる。このうち、ストレプトマイセス（Streptomyces）属由来のグルコースイソメラーゼが特に好ましい。グルコースイソメラーゼの活性値は反応液中において、好ましくは１０〜２０，０００Ｕ／ｍＬであり、より好ましくは１００〜１０，０００Ｕ／ｍＬである。
【００２１】
反応条件は、α−グルコシダーゼとグルコースイソメラーゼが作用する条件であれば特に限定されないが、例えば反応温度は２５〜８０℃が好ましく、より好ましくは３０〜６０℃である。反応ｐＨは、３．０〜１０．０が好ましく、より好ましくは４．０〜８．５である。α−グルコシダーゼとグルコースイソメラーゼの使用比は、特に限定されないが、精製酵素（ＸｇｔＡ）を１．２５Ｕ／ｍＬ、グルコースイソメラーゼ（合同酒精製）を５０μＬ／ｍＬの混合比とするなどが一例となる。マルトースと水酸基含有化合物の使用比は、マルトース１モルに対して水酸基含有化合物が０．０１モル以上であることが好ましく、０．０３モル以上であることがより好ましい。水酸基含有化合物は反応開始時に一度に添加しても良いが、反応を円滑に進行させる観点から、反応の進行に応じて段階的に添加しても良い。
【００２２】
本発明方法によれば、α−グルコシダーゼを単独で使用する場合の１．５倍以上の収率でＲ−α−グルコシドを得ることも可能である。反応の進行も速やかであり、得られるＲ−α−グルコシドの純度も高くなり、工業的に極めて有利である。
【実施例１】
【００２３】
次に実施例を挙げて本発明を更に詳細に説明する。
【００２４】
実施例１
（１）精製ＸｇｔＡ（α−グルコシダーゼ）の調製
使用は、Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ  ＷＵ−９７０１（クラス１の非病原性細菌）である。
使用菌を表１に示す培地に植菌し、３０℃、４８ｈ、往復振とう培養を行った。所定時間培養後、遠心分離して細菌を回収し（注：ＸｇｔＡは細胞内酵素）、培養液を除去してから１０ｍＭ  Ｃｉｔｒａｔｅ−Ｎａ2ＨＰＯ4  ｂｕｆｆｅｒ（ｐＨ７．０；以下では洗浄用ｂｕｆｆｅｒと表記）に懸濁した。この懸濁液を遠心分離し、溶液画分を除去して細菌を含む画分を回収した。再度この操作（洗浄用ｂｕｆｆｅｒへの懸濁と細菌画分の回収）を行い、細菌画分（洗浄菌体）を回収した。回収した細菌は液体窒素にて凍結し、冷凍庫（−８０℃）にて凍結保存した（注：以下、凍結菌体）。
凍結菌体を洗浄用ｂｕｆｆｅｒに分散させ、超音波破砕（２０ｋＨｚ，１２０ｍｉｎ，４℃）した。この超音波破砕懸濁液を遠心分離（２５０００Ｇ，６０ｍｉｎ，４℃）し、上清５０ｍＬを粗酵素抽出液として回収した。
取得した粗酵素抽出液に３０％（ｗ／ｖ）となるように硫酸アンモニウムを添加し、４℃で８ｈ攪拌を続けた。この溶液を遠心分離し（２５０００Ｇ，６０ｍｉｎ，４℃）、上清を回収した。つぎに、この上清に６０％（ｗ／ｖ）となるように硫酸アンモニウムを添加し、４℃で８ｈ攪拌を続けた。
懸濁液を透析膜に封入し、洗浄用ｂｕｆｆｅｒで４℃で８ｈ透析した。透析後の粗酵素溶液を洗浄用ｂｕｆｆｆｅｒで平衡化したＤＥＡＥ−Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ  ６５０Ｓカラム（２．５ｃｍ×６ｃｍ；Ｔｏｓｏｈ  Ｃｏ．）に供し、０〜０．３Ｍ  ＮａＣｌを添加した洗浄用ｂｕｆｆｅｒで直線的にグラジエント（ｌｉｎｅａｒ−ｇｒａｄｉｅｎｔ）をかけ、活性画分を回収した。回収した活性画分（酵素溶液）を限外ろ過により濃縮した。さらに、この濃縮液を０．１５Ｍ  ＮａＣｌを添加した洗浄用ｂｕｆｆｅｒで平衡化したＳｕｐｅｒｄｅｘ  ２００カラム（１．６ｃｍ  ｄｉａｍｅｔｅｒ×６０ｃｍ；ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に供し、活性画分（酵素溶液）を回収した。回収した活性画分（酵素溶液）を精製ＸｇｔＡとした。以後の実験では、この精製ＸｇｔＡ（溶液）を洗浄用ｂｕｆｆｅｒ  で適宜希釈し、活性を調整して使用した。
活性測定には、ｐ−ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｌ  α−ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ（ｐＮＰＧ）を用い、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｃａｔａｌ．Ｂ：Ｅｎｚｙｍａｔｉｃ，８０，２０−１７（２０１２）．に準じて加水分解活性により精製ＸｇｔＡの活性を評価した。１ｕｎｉｔ（Ｕ）は１ｍｉｎ当り１μｍｏｌのｐ−ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｏｌ（ｐＮＰ）を遊離させる酵素量と定義した。
標準的な実験方法では、精製ＸｇｔＡは５０Ｕ／ｍＬとなるように調製し、反応溶液全体では１．２５Ｕ／ｍＬとなるように調整した。
【００２５】
【表１】
2019141037.tif 000003
【００２６】
（２）反応溶液の調製
反応溶液の組成は表２に示した。ただし、反応溶液１９００μＬとＸｇｔＡ５０μＬ、ＧＩ５０μＬを混合して反応させるため、マルトースとエタノールは２０／１９倍濃度で調製（酵素添加による希釈を考慮）した。
純水にＨＥＰＥＳとＫＣｌを３０ｍＭ分溶解し、定量及びＮａＯＨによるｐＨ調整を行った。作製した３０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ−ＫＣｌ−ＮａＯＨ  ｂｕｆｆｅｒ（ｐＨ８．０）にマルトースを溶解し、エタノールを添加後、定量及びｐＨ調整を行った。作製した反応溶液はフィルターろ過後ＵＶ滅菌した。
【００２７】
【表２】
2019141037.tif 000004
【００２８】
（３）α−エチルグルコシド（α−ＥＧ）の生産
１０ｍＬ褐色スクリュー管に（２）で作製した反応溶液１９００μＬ、（１）で調製したＸｇｔＡ５０μＬ、グルコースイソメラーゼ（ＧＯＤＯ−ＡＧＩＥＧ、合同酒精社製）５０μＬを添加、混合した。最終的な反応溶液組成は表３に示す。
スクリュー管はエアシェーカーに傾けて設置し、４５℃、１６０ｒｐｍで往復振とうした。
反応停止は１００℃、１０ｍｉｎの熱失活により行った。
【００２９】
【表３】
2019141037.tif 000005
【００３０】
（４）α−アルキルグルコシドの生産
ＸｇｔＡを用いたα−エチルグルコシド以外のα−アルキルグルコシドの生産について検討した。基質アルコール（エタノール）を他のアルコール（１−プロパノール、１−ブタノール、１−ペンタノール、１−ヘキサノール、１−ヘプタノール、１−オクタノール）に変更し、他の条件は表３に示すα−エチルグルコシド生産最適条件で実験を行った（基質アルコールの濃度はいずれも０．８０Ｍとした）。１−ブタノール、１−ペンタノール、１−ヘキサノール、１−ヘプタノール、１−オクタノールは水と分離するため、二相系の反応となった。
反応後、反応溶液についてＴＬＣ（薄層シリカクロマトグラフィー）分析を行った。この際、展開溶媒は１−ブタノール：２−プロパノール：水＝５：４：２（ｖ／ｖ／ｖ）を用いた。展開後、呈色液としてアニスアルデヒド溶液を噴霧・加熱し、スポットの確認を行った。上層（アルコール層）と下層（水層）に分離したものについては、それぞれの層についてＴＬＣ分析を行った。
【００３１】
（５）グルコースイソメラーゼ非存在下でのα−アルキルグルコシドの生産
グルコースイソメラーゼ非存在下で、ＸｇｔＡを用いたα−アルキルグルコシドの生産について検討した。基質アルコール（エタノール）を他のアルコール（１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、１−ヘキサノール、１−ヘプタノール、１−オクタノール）に変更したこととグルコースイソメラーゼを添加しなかったこと以外は表３に示した内容で実験を行った（基質アルコールの濃度はいずれも０．８０Ｍとした）。
反応後、反応溶液について上記（４）と同じ方法でＴＬＣ分析を行った。
【００３２】
（６）α−アルブチン（ヒドロキノン−α−グルコシド）の生産
１０ｍＬ褐色スクリュー管に上記（２）で作製した反応溶液１９００μＬ、上記（１）で調製したＸｇｔＡ５０μＬ、及びグルコースイソメラーゼ（ＧＯＤＯ−ＡＧＩＥＧ、合同酒精社製）５０μＬを加えて混合した（実施例）。なお、対比のために、前記実施例の方法においてグルコースイソメラーゼを用いずに生産を行った（比較例）。最終的な反応溶液組成を表４に示す。
スクリュー管はエアシェーカーに傾けて設置し、４５℃、１６０ｒｐｍで往復振とうした。
反応停止は１００℃、１０ｍｉｎの熱失活により行った。
【００３３】
【表４】
2019141037.tif 000006
【００３４】
（７）結果
（７−１）α−ＥＧ生産
グルコースイソメラーゼ添加によりα−ＥＧ生産速度、生産量ともに増大した（図１）。
ＸｇｔＡのみでは、６０ｈで２０２ｍＭのα−ＥＧ生産であったところ、グルコースイソメラーゼ添加により２４ｈで２０４ｍＭ、１００ｈで２９４ｍＭのα−ＥＧ生産を達成した。生産量は４５％向上した（３回の平均値）。
【００３５】
（７−２）α−アルキルグルコシド生産
α−ＥＧ以外の他のα−アルキルグルコシドの生産については、以下の結果を得た。１−プロパノール、１−ブタノール、１−ペンタノール、１−ヘキサノール、１−ヘプタノール、１−オクタノールを基質とした際に、それぞれのα−グルコシドのスポットがグルコースイソメラーゼ添加無しの場合と比較して、濃く検出された（図２、図３）。一方、１−ペンタノールにおいてもグルコースイソメラーゼ添加によって強く検出されたと考えられた。１−ブタノールより長鎖のアルコールでは上層（アルコール層）に新規スポットが強く検出された。
基質アルコールとして２−プロパノールを使用しても、１−プロパノールとほぼ同様の結果が得られた（図３）。
【００３６】
（７−３）α−アルブチン（ヒドロキノン−α−グルコシド）生産
α−アルブチンの生産量について、ＸｇｔＡ＋ＧＩ併用によるもの（実施例）と、ＸｇｔＡ単独によるもの（比較例）を対比した結果を表５に示す。また、ＸｇｔＡ＋ＧＩ併用によるα−アルブチンとヒドロキノンの濃度の経時的変化を図４に示す。
【００３７】
【表５】
2019141037.tif 000007
【００３８】
表５及び図４の結果から、以下のことがいえる。
（１）グルコースイソメラーゼ添加によりα−アルブチンの生産速度及び生産量が増大した。
（２）１５ｍｉｎではα−アルブチンの生産量は、ＸｇｔＡ単独とＸｇｔＡ＋ＧＩ併用では同等であった。
（３）３０ｍｉｎ以降では、ＸｇｔＡ＋ＧＩ併用だとＸｇｔＡ単独に比べて生産量が大きく、６０ｍｉｎ以降は４３ｍＭの生産量を維持した（基質としてヒドロキノン４５ｍＭを初期添加したが、これがすべてα−アルブチンに変化したため、これ以上の変化が現れなかったと考えられる）。
（４）ＸｇｔＡ単独では、３０ｍｉｎ以降で生産速度が鈍化したが、これはグルコースの急激な増大により、グルコース転移活性が減少したことが原因と考えられる。
（５）ＸｇｔＡ単独の場合でも、１２０ｍｉｎではα−アルブチンの生産量は４３ｍＭに達し、生産量がＸｇｔＡ＋ＧＩ併用と同等となった。
【図１】
2019141037.tif 000010
【図２】
2019141037.tif 000011
【図３】
2019141037.tif 000012
【図４】
2019141037.tif 000013