(57)【要約】      （修正有）【課題】皮膚水分保有量増加能、経皮水分保有量抑制能、経皮膚水分損失抑制能、皺改善能、および紅斑改善能を含む皮膚美容食品組成物および化粧料組成物の提供。【解決手段】有効成分としてガラクトオリゴ糖を含有する糖液を含み、皮膚水分保有量増加能を有する食品組成物。前記糖液は、ガラクトビオース及びガラクトシルラクトースを含み、これら糖類が無水物基準で１５〜２２％である食品組成物。【選択図】図３
2019054785.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ガラクトオリゴ糖を含有する糖液を含み、皮膚水分保有量増加能を有する食品組成物。
【請求項２】
前記糖液は、ガラクトビオース及びガラクトシルラクトースを含むことを特徴とする、請求項１に記載の食品組成物。
【請求項３】
前記糖液内の糖のうち、ガラクトビオース及びアロラクトースが無水物基準で１５〜２２％であることを特徴とする、請求項１に記載の食品組成物。
【請求項４】
前記糖液内の糖のうち、乳糖が無水物基準で５〜１８％であることを特徴とする、請求項１に記載の食品組成物。
【請求項５】
前記糖液内の糖のうち、ガラクトシルラクトースが無水物基準で３５〜５０％であることを特徴とする、請求項１に記載の食品組成物。
【請求項６】
前記糖液内の糖のうち、ガラクトシルラクトース量がガラクトビオースおよびアロラクトースの和の量より多いことを特徴とする、請求項１に記載の食品組成物。
【請求項７】
前記糖液内の糖のうち、グルコースおよびガラクトースの和が無水物基準で３〜８重量％であることを特徴とする、請求項１に記載の食品組成物。
【請求項８】
経皮水分損失を抑制することを特徴とする、請求項１に記載の食品組成物。
【請求項９】
皺および紅斑を抑制することを特徴とする、請求項１に記載の食品組成物。
【請求項１０】
ガラクトオリゴ糖を含有する糖液を含み、皮膚水分保有量増加能を有する化粧料組成物。
【請求項１１】
前記糖液は、ガラクトビオース及びガラクトシルラクトースを含むことを特徴とする、請求項１０に記載の化粧料組成物。
【請求項１２】
前記糖液内の糖のうち、ガラクトシルラクトースが無水物基準で３５〜５０％であることを特徴とする、請求項１０に記載の化粧料組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ガラクトオリゴ糖を含み、皮膚美容増進用の食品および化粧料組成物に関する。皮膚美容増進用とは、皮膚水分保有量増加、皮膚経皮水分損失量抑制、皮膚皺改善および皮膚紅斑改善を意味する。
【背景技術】
【０００２】
人体において皮膚は、外部環境と接触する部分であって、外部環境による多様な因子から人体内部を保護する機能を担当している。伝統的には、皮膚状態の改善および保存のため化粧品を使ってきた。しかし最近は、インナービューティーが流行り、健康と皮膚美容ともを達成するための美容食品が注目されている。例えば、韓国登録特許１０−１３４９２４６号は、ジンセンベリー抽出物を含有する皮膚美容増進用の健康機能補助食品組成物に関し、韓国登録特許１０−１４４９２８２号は、複合酵母醗酵麦を含有する皮膚皺改善および皮膚保湿用の食品および化粧料組成物に関する。
【０００３】
皮膚老化は、大きく内因性老化と外因性老化（光老化）に分けられる。内因性老化は、年と取るにつれて繊維芽細胞の作用と細胞数が減少して、コラーゲン、エラスティン、フィブリリンなど細胞外基質タンパク質纎維の合成量が減り、構造が緩んで弾力が減少して、皮膚細胞内の水分が損失されて角質層の構造が変わり、コラゲナーゼ（ｃｏｌｌａｇｅｎａｓｅ）の作用が増加してコラーゲンの架橋形態が増加することによって保湿が減少される。外因性老化（光老化）の場合、紫外線刺激によって活性酸素種が発生して、サイトカイン（ｃｙｔｏｋｉｎｅ）の生成が促進されて信号伝達体系を活性化させる。のみならず、紫外線刺激は、ＡＰ−１（Ａｃｔｉｖａｔｏｒ  ｐｒｏｔｅｉｎ）を活性化させて、ＴＧＦ−ｂｅｔａおよびＴＧＦ−ａｌｆａを抑制し、真皮の主成分であるｃｏｌｌａｇｅｎＩとｃｏｌｌａｇｅｎＩＩの合成を減少させる。ＡＰ−１とＮＦ−ｋＢの活性化は、ＭＭＰｓを活性化させて真皮内の結締組織分解を促進させる。皮膚皺の発生機序は、老化と紫外線などによる皮膚露出がＭＡＲＫ（Ｍｉｔｏｇｅｎ−Ａｃｔｉｖａｔｅｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅ）を活性化させるが、ＭＡＲＫに一番多く影響を与える因子はＡＰ−１である。ＡＰ−１は、紫外線などの外部環境刺激によって活性化される。そして、ＡＰ−１は、細胞と分化に係る多くの遺伝子の発現を調節して、ＭＭＰｓ（ｍａｔｒｉｘ  ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎｓｅｓ）の発現を強く調節するが、ＭＭＰｓは、細胞外基質タンパク質を分解する酵素であって、紫外線刺激による信号伝達によってコラーゲンを分解する役割を担う。ＭＭＰｓの発現が抑制されれば、皮膚内コラーゲンの分解が阻害されて皮膚水分保有量の増加、経皮水分損失量の抑制、皺改善などの効果を有する。これにより、本発明者たちは、ガラクトオリゴ糖の皮膚美容増進用の食品および化粧品について研究するうち、一般のガラクトオリゴ糖とは異なる成分組成による皮膚美容増進効能があることを見つけて、本発明を完成することになった。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明の目的は、皮膚保湿能、皮膚皺改善能、紅斑改善能を有するガラクトオリゴ糖が含有された食品組成物および化粧料組成物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
上記目的を達成するために本発明は、有効成分としてガラクトシルラクトース及び４糖類であるガラクトオリゴ糖が強化されたガラクトオリゴ糖を含む皮膚美容増進用の食品組成物と化粧料組成物を提供する。
【発明の効果】
【０００６】
本発明の食品組成物および化粧料組成物は、皮膚水分保有量を増加させて、経表皮水分の損失を抑制し、皺および紅斑を改善する効果を有する。
【図面の簡単な説明】
【０００７】
【図１】ガラクトオリゴ糖内のガラクトビオース、アロラクトース、ガラクトシルラクトースの構造を示す。
【図２】実施例１の糖液製造方法を示す模式図である。
【図３】実施例１および比較例１〜４の糖液のＭＭＰ−２抑制能を示す。
【図４】実施例１および比較例１〜４の糖液のＭＭＰ−９抑制能を示す。
【図５】実施例１の糖液を摂取する場合、皮膚水分保有量の変化を示す。
【図６】実施例１の糖液を摂取する場合、経皮水分損失量の変化を示す。
【図７】実施例１の糖液処理の際の皮膚皺の面積および皺の深みの変化を示す。
【図８】実施例１の糖液処理の際の皮膚状態変化を示す（写真）。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
本発明は、ガラクトオリゴ糖を含有する糖液を含み、皮膚水分保有量の増加能を有する食品組成物に関する。
【０００９】
本発明は、ガラクトオリゴ糖を含有する糖液を含み、皮膚水分保有量の増加能を有する化粧料組成物に関する。
【００１０】
本発明は、対象にガラクトオリゴ糖を含有する糖液を含む組成物を投与する段階を含む、対象の皮膚水分保有量を増加させる方法に関する。
【００１１】
以下、本発明を詳説する。
【００１２】
ガラクトオリゴ糖高含有糖液
【００１３】
本発明は、高含量ガラクトオリゴ糖を含有する糖液を含み、皮膚保湿能、皮膚経皮水分損失抑制能、皮膚皺改善および紅斑を改善する食品組成物および化粧料組成物に関する。前記糖液は、ガラクトオリゴ糖を含む色んな種類の糖混合物である。前記ガラクトオリゴ糖は、複数の糖混合物である。ガラクトオリゴ糖は、グルコースとガラクトースの単糖類と、ガラクトビオースとラクトース及びアロラクトース、３糖類であるガラクトシルラクトースとその他４糖類以上であるガラクトオリゴ糖を含む。前記ガラクトビオースは、４−ベータ−ガラクトビオース、６−ベータ−ガラクトビオースを含む。前記アロラクトースは、６−ガラクトシル−グルコースを含む。前記ベータガラクトシルラクトースは、３’−ガラクトシルラクトース、４’−ガラクトシルラクトース、６’−ガラクトシルラクトース、４−ベータ−ジ−ガラクトシルラクトース、４−ベータ−トリ−ガラクトシルラクトース、４−ベータ−テトラ−ガラクトシルラクトースなどを含む。
【００１４】
好ましくは、本発明の糖液は、２糖類であるガラクトビオースとアロラクトース及びガラクトシルラクトースを含む３糖類以上であるガラクトオリゴ糖を含む。ガラクトオリゴ糖内の糖のうち、ガラクトビオースとアロラクトースは、糖液の無水物を基準で１５〜２２％であってもよい。３糖類であるガラクトシルラクトースは、糖液の無水物基準で３５〜５５％であってもよい。４糖類以上であるガラクトオリゴ糖は、糖液の無水物基準で１０〜２０％であってもよい。また、本発明のガラクトオリゴ糖液内の糖のうち、グルコースとガラクトースの場合、その和が糖液の無水物基準で３〜８％であってもよい。ラクトースは、糖液の無水物基準で５％〜１８％であってもよい。このとき、前記糖液内の糖のう
ち、ガラクトシルラクトース量がガラクトビオース及びアロラクトースの和の量より多い。
【００１５】
本発明の糖液は、経皮水分損失を抑制して、皺および紅斑を抑制する。
【００１６】
ガラクトオリゴ糖高含有糖液の製造
【００１７】
ラクトース（乳糖）を反応タンクに投入した後、熱水を加えて撹拌機を稼働させ、乳糖溶液濃度が約４０〜４５％となるようにする。乳糖溶液濃度が４０〜４５％範囲内になれば、酵素の反応温度を５５−６０℃となるように反応タンク温度を調整する。反応タンク温度を調整した後、β−ガラクトシダーゼを反応タンクに投入して酵素反応を起こした。このとき、β−ガラクトシダーゼは、乳糖を分解してガラクトオリゴ糖に合成させる。
【００１８】
約２４〜４８時間の間酵素反応させて、このとき、ＨＰＬＣを利用して反応液の糖組成を分析して、ガラクトオリゴ糖の含量が５０〜５５重量％以上になれば、その後、酵母を反応タンクに投入して、既に生成済みである糖液内に存在するグルコーストース成分を発酵してエタノールと酢酸に変換させる。
【００１９】
このとき、グルコース成分が発酵しながら、ガラクトオリゴ糖内の３糖類であるガラクトシルラクトース及び４糖類以上であるガラクトオリゴ糖の成分が比較的に徐々に高くなりながら、酵母醗酵の前、ガラクトオリゴ糖内のガラクトシルラクトースおよび４糖類以上の含量が約４０％水準から醗酵後には５５重量％以上の水準に高くなり、ガラクトオリゴ糖の含量も初期５５％水準から約７５％以上に高くなる。このとき、醗酵時間は約２４〜４８時間かかる。酵素反応と酵母反応とも完了すれば、反応タンクに粉末活性炭を投入して、７０〜８０℃で２０分〜５０分の間撹拌しながら糖液の色相物質を吸着させる。
【００２０】
次の工程において、糖液を濾過して糖液の活性炭と異物を除去した後、イオン精製工程によって酢酸成分を除去する。このとき、除去反応メカニズムは、下記式１のとおりであり、生成された−ＣＨ３ＣＯＯ（−）は、イオン精製工程で除去される。
【００２１】
＜式１＞
Ｒ−ＯＨ（−）＋ＣＨ３ＣＯＯ（−）／Ｈ（＋）−＞Ｒ−ＣＨ３ＣＯＯ（−）＋Ｈ２Ｏ
注１）Ｒ：Ｒｅｓｉｎ本体
注２）ＯＨ（−）：Ｒｅｓｉｎ本体に結合されている官能基
【００２２】
糖液をイオン精製処理して酢酸を除去した後、濃縮工程によって所望の濃度で糖液を濃縮する。糖液の濃縮濃度は、用途、需要などによって適度に定めることができるが、約７５％の濃度に濃縮することが一般的である（図２）。
【００２３】
組成物
【００２４】
本発明は、対象にガラクトオリゴ糖を含有する糖液を含む組成物を投与する段階を含む、対象の皮膚水分保有量を増加させる方法に関する。
【００２５】
また本発明は、対象にガラクトオリゴ糖を含有する糖液を含む組成物を投与する段階を含む、対象の経皮で水分損失を抑制する方法に関する。
【００２６】
また本発明は、対象にガラクトオリゴ糖を含有する糖液を含む組成物を投与する段階を含む、対象の皺および紅斑を抑制する方法に関する。
【００２７】
前記組成物は、食品組成物、好ましくは皮膚美容食品組成物であってもよい。前記組成物は、化粧料組成物、すなわち、皮膚美容化粧料組成物であってもよい。前記対象は、哺乳動物、好ましくは人間である。
【００２８】
皮膚美容食品組成物
【００２９】
本発明のガラクトオリゴ糖を含む食品組成物は、皮膚水分保有量（Ｓｋｉｎ  Ｗａｔｅｒ
ｈｏｌｄｉｎｇ  ｃａｐａｃｉｔｙ）の増進量、経表皮水分損失抑制能（ＴｒａｎｓＥｐｉｄｅｒｍａｌ  Ｗａｔｅｒ  Ｌｏｓｅ）、皮膚皺抑制能および紅潮抑制能を有する。
【００３０】
本発明の食品組成物は、皮膚の美容および改善の目的に使うことができ、紅潮で苦しむ人に紅潮改善の目的に使うこともできる。前記食品組成物は、一般食品、健康補助食品、健康機能食品、機能性食品などであるが、これに制限されるものではなく、天然食品、加工食品、一般食材などに本発明のガラクトオリゴ糖を添加したものも含まれる。好ましくは本発明の食品組成物は、皮膚美容食品、健康機能食品、機能性食品などである。
【００３１】
皮膚美容化粧料組成物
【００３２】
本発明の組成物が化粧品に製剤化される場合、本発明の化粧料組成物に含まれる成分としてガラクトオリゴ糖のほか、化粧料組成物に通常使われる成分を含み、例えば安定化剤、溶解剤、顔料、ビタミン、抗酸化剤のような通常化粧品組成に用いられる補助剤を含む。
【００３３】
本発明の利点および特徴、そしてそれらを達成する方法は、添付図面とともに詳細に後述されている実施例を参照すれば明確になる。しかし、本発明は、以下に開示される実施例に限定されるものではなく、異なる様々な形態に具現されるものであって、但し、本実施例は、本発明の開示を完全なものにして、本発明が属する技術分野における通常の知識を有する者に発明の範疇を完全に知らせるために提供されるものであり、本発明は、請求項の範疇によって定義されるだけである。
【００３４】
＜材料および方法＞
【００３５】
原材料である乳糖および酵素は、市販されているものを購入して用いた。
【００３６】
糖液内の糖組成のＨＰＬＣ分析
【００３７】
試料である糖液に超純水（非伝導率値：０.０５μＳ／ｃｍ以下）を添加して、試料の糖
液濃度が約２.５−３.０％となるように希釈する。（試料の濃度分析は、 Ｒｅｆｒａｃ
ｔｏｍｅｔｅｒを使用する）。試料の糖液濃度を調整した後、０.２−０.４５μｍフィルターを用いて試料溶液に含有されている異物を除去した後、この試料をＨＰＬＣ分析試料として用いる。
【００３８】
ガラクトオリゴ糖の含量（ＤＢ％）分析は、ＨＰＬＣを利用して測定した。ＨＰＬＣ分析用カラムは、ｐｏｌｙａｍｉｎｅ系カラムを利用しており、ガラクトオリゴ糖内のグルコースとガラクトースおよびラクトースの含量を求めて、下記式２に従ってガラクトオリゴ糖の含量を求める。
【００３９】
＜式２＞
ガラクトオリゴ糖含量（ＤＢ％）＝１００−（グルコース含量＋ガラクトース含量＋乳糖含量）
注３）ＤＢ％：Ｄｒｙ  Ｂａｓｉｓ。無水物基準という意味である。
【００４０】
＜実施例１＞ガラクトオリゴ糖高含有糖液の製造
【００４１】
ラクトース（乳糖）を反応タンクに投入した後、熱水を加えて撹拌機を稼働させ、乳糖溶液濃度が約４３％となるようにした。乳糖溶液濃度が４０〜４５％範囲内になれば、酵素の反応温度を５８℃となるように反応タンク温度を調整した。反応タンク温度を調整した後、β−ガラクトシダーゼを反応タンクに投入して酵素反応を起こした。このとき、β−ガラクトシダーゼは、乳糖を分解してガラクトオリゴ糖に合成させる。
【００４２】
約３６時間の間酵素反応させて、このとき、ＨＰＬＣを利用して反応液の糖組成を分析し、ガラクトオリゴ糖の含量が５３重量％以上になれば、その後に酵母を反応タンクに投入して、既に生成済みである糖液内に存在するグルコーストース成分を発酵してエタノールと酢酸に変換させた。  
【００４３】
このとき、グルコース成分が発酵しながら、ガラクトオリゴ糖内の３糖類であるガラクトシルラクトース及び４糖類以上であるガラクトオリゴ糖の成分が比較的に徐々に高くなりながら、酵母醗酵の前、ガラクトオリゴ糖内のガラクトシルラクトースおよび４糖類以上の含量が約４０％水準から醗酵後５５重量％以上の水準に高くなり、ガラクトオリゴ糖の含量も初期５５％水準から約７５％以上に高くなる。このとき、醗酵時間は約４０時間かかった。酵素反応と酵母反応とも完了すれば、反応タンクに粉末活性炭を投入して、７５℃で４０分の間撹拌しながら糖液の色相物質を吸着させた。
【００４４】
次の工程において、糖液を濾過して糖液の活性炭と異物を除去した後、前記式１のイオン精製工程によって酢酸成分を除去した。
【００４５】
糖液をイオン精製処理して酢酸を除去した後、濃縮工程によって糖液を濃縮した。
【００４６】
＜比較例１＞
【００４７】
酵母反応を省略したことを除いて、前記実施例１と同様な方法で糖液を製造した。糖液の製造方法は、下記のとおりである。
【００４８】
ラクトース（乳糖）を反応タンクに投入した後、熱水を加えて撹拌機を稼働させ、乳糖溶液濃度が約４３％となるようにした。乳糖溶液濃度が４０〜４５％範囲内になれば、酵素の反応温度を５８℃となるように反応タンク温度を調整した。反応タンク温度を調整した後、β−ガラクトシダーゼを反応タンクに投入して酵素反応を起こした。このとき、β−ガラクトシダーゼは、乳糖を分解してガラクトオリゴ糖に合成させる。
【００４９】
約３６時間の間酵素反応させて、酵素反応が完了した後、反応タンクに粉末活性炭を投入して、７５℃で４０分の間撹拌しながら糖液の色相物質を吸着させた。
【００５０】
次の工程において、糖液を濾過して糖液の活性炭と異物を除去した後、前記式１のイオン精製工程によって酢酸成分を除去した。そして、糖液をイオン精製処理して酢酸を除去した後、濃縮工程によって糖液を濃縮した。
【００５１】
＜比較例２〜４＞
【００５２】
市販されている糖液を３種類購入して、それぞれ比較例２〜４で用いた。
【００５３】
＜実験例１＞糖液の組成分析
【００５４】
実施例１および比較例１〜４の糖液に対して、ＨＰＬＣを利用して糖組成を分析した。
【００５５】
その結果、実施例１の糖液は、ガラクトオリゴ糖の３糖類であるガラクトシルラクトースおよび４糖類以上であるガラクトオリゴ糖の含量が比較例１〜４より顕著に高いことが分かった（表１）。
【００５６】
＜表１＞
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単位：ＤＢ％
ＤＢ％：無水物基準（Ｄｒｙ  Ｂａｓｉｓ，重量％）
＊全体ガラクトオリゴ糖（Ｔｏｔａｌ  ｇａｌａｃｔｏｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ）：ガラクトビオース＋アロラクトース＋ガラクトシルラクトース＋４糖類以上であるガラクトオリゴ糖
【００５７】
＜実験例２＞動物モデルにおける皮膚美容増進比較実験
【００５８】
実施例１および比較例１〜４の糖液に対して皮膚美容増進能を評価した。皮膚美容増進能試験は、皮膚水分保有量（Ｓｋｉｎ  Ｗａｔｅｒ Ｈｏｌｄｉｎｇ  ｃａｐａｃｉｔｙ）
、経皮水分損失量（ＴｒａｎｓＥｐｉｄｅｒｍａｌ  Ｗａｔｅｒ  Ｌｏｓｓ）及び紅斑抑制御能実験によって比較した。
【００５９】
動物モデルは、総３６匹に該当する毛のない（ｈａｉｒｌｅｓｓ）雄ＳＫＨ−１マウス（５週齢）を購買して、各６匹ずつ６個群に分けた。具体的には、前記マウスは、プラスチックケージで２４±１℃、６０％相対湿度維持条件で飼育されて、１２時間間隔で昼と夜を区分できるようにしており、食餌の場合、水と一般食餌を適用して実験順応（適応）時間を経た。
【００６０】
適応期間を完了した後、１２週の間、対照群は、一般食餌を摂取しながらＵＶＢ（Ｕｌ
ｔｒａ ｖｉｏｌｅｔ Ｂ）を処理した。一方、実験群は、一般食餌と試料（糖液）をマウス１ｋｇ当１００ｍｇを追加食餌処理しながらＵＶＢを処理した。試験測定は、適応期間を完了した直後と試験を完了した１２週後に測定した。
【００６１】
このとき、紫外線（ＵＶＢ）処理は、論文（Ｇｕｅｎｉｃｈｅ Ａ，Ｈｅｎｎｉｎｏ  
Ａ，Ｇｏｕｊｏｎ  Ｃ  ｅｔ  ａｌ．（２００６）Ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ａｔｏｐｉｃ  ｄｅｒｍａｔｉｔｉｓ  ｓｋｉｎ  ｓｙｍｐｔｏｍｓ  ｂｙ  Ｖｉｔｒｅｏｓｃｉｌｌａ  ｆｉｌｉｆｏｒｍｉｓ  ｂａｃｔｅｒｉａｌ  ｅｘｔｒａｃｔ．Ｅｕｒ  Ｊ
Ｄｅｒｍａｔｏｌ  １６：３８０−４）の方法で行った。
【００６２】
そして、紫外線（ＵＶＢ）処理装置は、ＦＬＢ２０ＳＢＬ（Ｓａｎｋｙｏ Ｄｅｎｋｉ，
Ｊａｐａｎ）を使用した。実験動物の背中に照射して紫外線に露出させており、露出される紫外線光源の波長範囲は、２７０−４００ｎｍ（ｏｕｔｐｕｔ  ｐｅａｋ  ａｔ  ３１３ｎｍ）を使用した。
【００６３】
＜２−１＞皮膚水分保有量評価
【００６４】
皮膚水分保有量（Ｓｋｉｎ  ｗａｔｅｒ  ｃａｐａｃｉｔｙ）は、Ｃｏｒｎｅｏｍｅｔｅｒ  ＣＭ８２５（Ｃｏｕｒａｇｅ  ａｎｄ  Ｋｈａｚａｋａ ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ  Ｇ
ｍｂＨ，Ｃｏｌｏｇｎｅ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を利用して測定した。 Ｃｏｒｎｅｏｍｅｔ
ｅｒは、皮膚の表面に接着する電極間隔によって電導される電流の静電負荷容量（ｃａｐａｃｉｔａｎｃｅ）を計測する原理を利用した機器であって、皮膚水分保有量と静電負荷容量は、相互比例するため皮膚が乾燥するほど数値が低く表れ、測定単位は、皮膚湿度の相対的な数値であるａｒｂｉｔｒａｒｙ  ｕｎｉｔ（ＡＵ）である。皮膚水分保有量の測定値は、感知器を測定部位の皮膚の表面に密着した後、軽く押すと表れる数値を使用した。統計分析は、ＳＰＳＳ １２．０（ＳＰＳＳ Ｉｎｃ．，Ｃｈｉｇａｇｏ，ＩＬ）を利用して行った。
【００６５】
その結果、実施例１および比較例１〜４の糖液は、いずれも対照群に比べて優れた皮膚水分保有量を有していた。特に、実施例１の糖液は、比較例２〜４より水分保有量が優れた。比較例１〜４の糖液は、糖組成のうち３糖類であるガラクトシルラクトースと４糖類以上であるガラクトオリゴ糖の和の含量が３６〜４１％位である反面、実施例１の糖液は、３糖類であるガラクトシルラクトースと４糖類以上であるガラクトオリゴ糖の含量が５５％位であった。したがって、ガラクトシルラクトースと４糖類以上であるガラクトオリゴ糖の含量の和が高いほど皮膚水分保有量が高いと判断された（表２）。
【００６６】
＜表２＞
2019054785.tif 000004
【００６７】
＜２−２＞経皮水分損失量評価
【００６８】
経皮水分損失量（ＴｒａｎｓＥｐｉｄｅｒｍａｌ  Ｗａｔｅｒ Ｌｏｓｓ：ＴＥＷＬ）は
、Ｔｅｗａｍｅｔｅｒ  ＴＭ３００（Ｃｏｕｒａｇｅ ａｎｄ  Ｋｈａｚａｋａ  ｅｌｅ
ｃｔｒｏｎｉｃ  ＧｍｂＨ，Ｃｏｌｏｇｎｅ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を利用して測定した。これは、皮膚の表面で空気中に水分がＦｉｃｋ法則に基づいて拡散することによって蒸気圧を求めて、表皮から蒸発する水分量を算定することである。角質層からの水分蒸発は、受動拡散で皮膚の乾燥状態の際に活発に変化する表皮の生理から３０−５０秒内に蒸発量（ｇ／ｈ／ｍ２）を得ることができる（Ｖｅｒｔｕａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００３）。評価は、約２０秒間、数値が安定するまで測定して、安定した５つの値のうち、最大値と最小値を除いた３つの値に対する平均を使用した。乾燥症状が悪くなるほど測定値が高くなり、測定係数はｇ／ｈ／ｍ２である。
【００６９】
その結果、実施例１および比較例１〜４の糖液は、いずれも対照群経皮水分損失量（％）を抑制すると確認された。
【００７０】
特に、実施例１の糖液は、市販の糖液である比較例２〜４より経皮水分損失をさらに多く抑制することを確認した。
【００７１】
比較例１〜４の糖液は、糖組成のうち、３糖類であるガラクトシルラクトースと４糖類以上であるガラクトオリゴ糖の和の量が３６〜４１％位である一方、実施例１の糖液は、３糖類であるガラクトシルラクトースと４糖類以上であるガラクトオリゴ糖の含量が５５％位であるため、ガラクトシルラクトースと４糖類以上であるガラクトオリゴ糖の含量の和が高いほど経皮水分損失量が低いと判断された（表３）。
【００７２】
＜表３＞
2019054785.tif 000005
【００７３】
＜２−３＞紅斑指数評価
【００７４】
紅斑指数（Ｅｒｙｔｈｅｍａ  ｌｅｖｅｌ）は、Ｍｅｘａｍｅｔｅｒ ＭＸ１８（Ｃｏｕ
ｒａｇｅ  ａｎｄ  Ｋｈａｚａｋａ  ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ ＧｍｂＨ，  ｃｏｌｏｇｎ
ｅ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を利用して測定した。測定結果は、皮膚にセンサーを接触した１秒内にｍｅｌａｎｉｎ  ｉｎｄｅｘ（ＭＩ）とｅｒｙｔｈｅｍａ  ｉｎｄｅｘ（ＥＩ）に表示される（Ｃｈｒｉｓｔｉａｎ，２００３）。紅斑症状が悪くなるほど測定値が高くなる。
【００７５】
その結果、実施例１および比較例１〜４の糖液は、いずれも対照群に比べて紅斑を抑制することを確認することができた。特に、実施例１の紅斑抑制能が優れた。
【００７６】
比較例１〜４の糖液の糖組成のうち、３糖類であるガラクトシルラクトースと４糖類以上であるガラクトオリゴ糖の和の含量は、３６〜４１％位である一方、実施例１の糖液のガラクトオリゴ糖の３糖類であるガラクトシルラクトースと４糖類以上であるガラクトオリゴ糖の含量は、５５％位であるため、ガラクトシルラクトースと４糖類以上であるガラクトオリゴ糖の含量の和が高いほど紅斑指数が低くなると判断された（表４）。
【００７７】
＜表４＞
2019054785.tif 000006
【００７８】
＜２−４＞ＭＭＰに対する抑制能評価
【００７９】
Ｔｒｉｚｏｌ試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）を購入して、製造社のプロトコルに従って、試験した動物の皮膚サンプルから全体ＲＮＡを分離した。相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）は、ＲＥｖｅｒＡｉｄ  Ｆｉｒｓｔ−Ｓｔｒａｎｄ  ＤＮＡ合成キット（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｆｉｓｈｅｒ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）を用いて、１ｍｇ皮膚サンプルのＲＮＡを逆転写して合成した。合成されたサンプルを製造者のプロトコルに従って、ＲＱ１  ＲＮａｓｅ−ｆｒｅｅ  ＤｎａｓｅＩ（ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）で処理した。合成されたｃＤＮＡは、Ｐｏｗｅｒ  Ｔａｑｍａｎ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘキット（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ，Ｃａ）を使用して、リアルタイム重合酵素反応（ｒｅａｌ−ｔｉｍｅ  Ｐ
ＣＲ）に適用した。本実験に用いられたプライマーおよびプローブ（ｐｒｉｍｅｒ  ａｎｄ  ｐｒｏｖｅ）は、ＭＭＰ２（ＧＥｎＢＡｎｋ ＩＤ：ＮＭ_００８６１０．２）およびＭＭＰ９（ＧｅｎｅＢａｎｋ ＩＤ：ＮＭ_００８０８４．２）を内部標準物質として用いた。
【００８０】
上記のように測定して決定された動物モデルにおけるＭＭＰ−２とＭＭＰ−９抑制効果実験結果を下記図１に示した。
【００８１】
その結果、実施例１および比較例１〜４の糖液は、いずれも対照群に比べてＭＭＰ−２およびＭＭＰ−９を抑制する効果を有していた。特に、実施例１の場合、市販の糖液である比較例２〜４よりＭＭＰ−２およびＭＭＰ−９をさらに多く抑制することを確認した。この結果は、糖液内のガラクトオリゴ糖がＭＭＰ−２とＭＭＰ−９を抑制することで、皺、皮膚水分保有量、経皮水分損失量などを改善する作用機序を有することを意味する。
【００８２】
また、実施例１の糖液のＭＭＰ−２抑制効果およびＭＭＰ−９抑制効果は、糖液内のガラクトオリゴ糖の３糖類であるガラクトシルラクトースと４糖類以上であるガラクトオリゴ糖の和の含量が、比較例１〜４の糖液より約２０％以上多く含まれているので表れた効果と判断された（図３および図４）。
【００８３】
＜実験例３＞皮膚状態改善能評価
【００８４】
上記実験例１および２において、皮膚美容効果が優れると確認された実施例１の糖液を利用して臨床評価を行った。このとき、健康な成人に１２週の間試料を摂取させて皮膚関連変数を調べた。試験方法とデザインは、二重盲検（ｄｏｕｂｌｅ  ｂｌｉｎｄｅｄ）、無作為割り付け（ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ）、偽薬対照（ｐｌａｃｅｂｏ  ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ）法を利用して、対照群および実験群（実施例１が糖液投与群）を層化ブロック無作為化（ｓｔｒａｔｉｆｉｅｄ  ｂｌｏｃｋ  ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ）して割り付けて試験した。実験群は、試料を一日１.０ｇずつ２回提供されて、対照群は、単に偽薬を提供さ
れた。
【００８５】
臨床実験結果の統計分析は、ＳＰＳＳ  １２.０（ＳＰＳＳ Ｉｎｃ．，Ｃｈｉｃａｇｏ，ＩＬ）を利用して行った。対照群と実験群間の有意差は、Ｓｔｕｄｅｎｔ'ｓ  ｔ−ｔｅ
ｓｔを使用して比較した。各実験値は、測定項目に対して平均（ｍｅａｎｓ）±ＳＥＭ（標準誤差）に表した。
【００８６】
＜３−１＞皮膚水分保有量評価
【００８７】
皮膚水分保有量（ｓｋｉｎ  ｗａｔｅｒ  ｈｏｌｄｉｎｇ ｃａｐａｃｉｔｙ）の測定結
果、実施例１の糖液を摂取した実験群は、対照群に比べて統計的に有意な水準に皮膚水分変化量が高く測定された。実験群は、対照群に比べて、時間が増加するほど皮膚水分保有量が増加することが確認された。これは、実験例２で確認されたとおり、糖液内のガラクトオリゴ糖がＭＭＰ−２とＭＭＰ−９を有意に抑制して、皮膚水分保有量が改善する作用機序と判断された（図５）。
【００８８】
＜３−２＞経皮水分損失量評価
【００８９】
１２週の間測定した経皮水分損失量（ＴｒａｎｓＥｐｉｄｅｒｍａｌ  Ｗａｔｅｒ  Ｌｏｓｓ）の変化を測定した結果、実施例１の糖液を摂取した群は、対照群に比べて統計的に有意に抑制された。実験群は、対照群に比べて、時間が増加するほど皮膚内経皮の水分損失量が有意に抑制されることが確認されたが、これは、実験例２の結果と一致する（図６）。
【００９０】
＜３−３＞皮膚皺改善能評価
【００９１】
模写本を製作してこれを分析することで、実施例１の糖液の皮膚皺改善能を評価した。試料攝取の前、試料攝取の１２週後に１１ｍｍ（ｄｉａｍｅｔｅｒ）大きさの接着用紙を皮膚に付着した後、半透明シリコーンを基本物質および触媒が入っている小さいプラスチックコップ（ｃｏｕｒａｇｅ  ａｎｄ  ｋｈａｚａｋａ  Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ  ＧｍｂＨ）に混合した。シリコーン混合物層を接着紙の制限された領域上に広げて５分間乾燥した。シリコーン混合物が十分に乾燥したとき、製作した模写本は、分析が完了するまでトレーシングペーパー（ｔｒａｃｉｎｇ  ｐａｐｅｒ）封筒に保管された。皺の分析は、ｓｋｉｎ−ｖｉｓｉｏｍｅｔｅｒ  ＳＶ  ６００（Ｃｏｕｒａｇｅ  ａｎｄ  ｋｈｚａｋａ 
Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ  ＧｍｂＨ）を用いて分析した。総皺の面積（Ｔｏｔａｌ  ｗｒｉｎｋｌｅ  ａｒｅａ，ｍｍ2）、皺の面積の割合（ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ  ｏｆ  ｗｒｉ
ｎｋｌｅ  ａｒｅａ（％））、平均皺の深み（ａｖｅｒａｇｅ  ｏｆ  ｗｒｉｎｋｌｅ  ｄｅｐｔｈ，ｕｍ）、皺の数（ｎｕｍｂｅｒ  ｏｆ  ｗｒｉｎｋｌｅｓ）などを測定した。このとき、測定の前、最小２時間の間測定された部位にスキンケア製品を使用していなかった。
【００９２】
その結果、実施例１の糖液処理群は、１２週後の対照群に比べて、総皺の面積および皺の
深みが有意に減少したことが確認された（図７）。また、実施例１の糖液処理群は、試験開始に比べて、試験終了後に皺の数が少ないことが確認された（図８）。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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