(57)【要約】【課題】ジアシルグリセロールＰＥＧ付加物を含む脂質により形成され、良好な皮膚浸透性と皮膚貯留性を備えた荷電ニオソームの調製方法を提供する。【解決手段】ジアシルグリセロールＰＥＧ付加物を含む脂質を液体状態温度にて水溶液と混合し、脂質が自発的にニオソーム形成してニオソーム懸濁液を調製するステップと、脂肪族アミン、脂肪族又は脂肪族アミド第４級アンモニウム塩、脂肪族アミドアミン及びアシルアミノ酸誘導体からなる群から選択されその疎水性部分に炭素数１１〜２１の飽和又は不飽和の直鎖型炭化水素基を有するカチオン性界面活性剤と、酸性水溶液とを混合してカチオン性界面活性剤水溶液を調製するステップと、ニオソームの懸濁液と、カチオン性界面活性剤水溶液とを混合し、カチオン性界面活性剤が親水性部分に正電荷をもってニオソーム表面を修飾することにより荷電ニオソームの懸濁液を調製するステップと、を有する。【選択図】図２
2019059683.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
正に帯電した荷電ニオソームの調製方法であって、
ジアシルグリセロールＰＥＧ付加物を少なくとも含む脂質を、該脂質が液体状態をとり得る温度にて所定の水溶液と混合し、該脂質が自発的にニオソームを形成することにより、ニオソームの懸濁液を調製するステップと、
脂肪族アミン、脂肪族又は脂肪族アミド第４級アンモニウム塩、脂肪族アミドアミン及びアシルアミノ酸誘導体からなる群から選択された１又は複数のカチオン性界面活性剤であってその疎水性部分に炭素数１１〜２１の飽和又は不飽和の直鎖型炭化水素基を有する該カチオン性界面活性剤を、酸性水溶液と混合することにより、カチオン性界面活性剤水溶液を調製するステップと、
前記ニオソームの懸濁液と、前記カチオン性界面活性剤水溶液とを混合し、前記カチオン性界面活性剤がその親水性部分に正電荷をもって前記ニオソームの表面を修飾することにより、荷電ニオソームの懸濁液を調製するステップと、を有することを特徴とする
荷電ニオソームの調製方法。
【請求項２】
前記ジアシルグリセロールＰＥＧ付加物が、ジオレイン酸グリセロールＰＥＧ−１２、ジミリスチン酸グリセロールＰＥＧ−１２、ジパルミチン酸グリセロールＰＥＧ−２３、ジステアリン酸グリセロールＰＥＧ−１２、及びジステアリン酸グリセロールＰＥＧ−２３からなる群から選択された１又は複数のものであることを特徴とする
請求項１に記載の荷電ニオソームの調製方法。
【請求項３】
前記カチオン性界面活性剤である脂肪族アミンが、テトラデシルアミン、パルミチルアミン、ステアリルアミン、オレイルアミン、リノレイルアミン、ベヘニルアミン、Ｎ，Ｎ−ジメチルドデシルアミン及びＮ，Ｎ−ジメチル−ｎ−オクタデシルアミンからなる群から選択された１又は複数のものであることを特徴とする
請求項１又は２に記載の荷電ニオソームの調製方法。
【請求項４】
前記カチオン性界面活性剤である脂肪族又は脂肪族アミド第４級アンモニウム塩が、塩化テトラデシルトリメチルアンモニウム、塩化セチルトリメチルアンモニウム、塩化ステアリルトリメチルアンモニウム、塩化ベヘニルトリメチルアンモニウム及び塩化パルミタミドプロピルトリメチルアンモニウムからなる群から選択された１又は複数のものであることを特徴とする
請求項１又は２に記載の荷電ニオソームの調製方法。
【請求項５】
前記カチオン性界面活性剤である脂肪族アミドアミンが、ミリスチン酸ジエチルアミノエチルアミド、ミリスチン酸ジメチルアミノエチルアミド、ミリスチン酸ジメチルアミノプロピルアミド、ミリスチン酸ジエチルアミノプロピルアミド、パルミチン酸ジエチルアミノエチルアミド、パルミチン酸ジメチルアミノエチルアミド、パルミチン酸ジメチルアミノプロピルアミド、パルミチン酸ジエチルアミノプロピルアミド、ステアリン酸ジエチルアミノエチルアミド、ステアリン酸ジメチルアミノエチルアミド、ステアリン酸ジメチルアミノプロピルアミド、ステアリン酸ジエチルアミノプロピルアミド、ベヘニン酸ジエチルアミノエチルアミド、ベヘニン酸ジメチルアミノエチルアミド、ベヘニン酸ジメチルアミノプロピルアミド及びベヘニン酸ジエチルアミノプロピルアミドからなる群から選択された１又は複数のものであることを特徴とする
請求項１又は２に記載の荷電ニオソームの調製方法。
【請求項６】
前記カチオン性界面活性剤であるアシルアミノ酸誘導体が、ココイルアルギニンエチルＰＣＡであることを特徴とする
請求項１又は２に記載の荷電ニオソームの調製方法。
【請求項７】
前記カチオン性界面活性剤水溶液を調製するための酸性水溶液が、ｐＨ４又はそれ以下であることを特徴とする
請求項１〜６のいずれかに記載の荷電ニオソームの調製方法。
【請求項８】
正に帯電した荷電ニオソームであって、
ジオレイン酸グリセロールＰＥＧ−１２、ジミリスチン酸グリセロールＰＥＧ−１２、ジパルミチン酸グリセロールＰＥＧ−２３、ジステアリン酸グリセロールＰＥＧ−１２、及びジステアリン酸グリセロールＰＥＧ−２３からなる群から選択された１又は複数のジアシルグリセロールＰＥＧ付加物を少なくとも含む脂質を構成成分としかつ所定の水溶液を封入したニオソームと、
親水性部分に正電荷をもって前記ニオソームの表面を修飾するカチオン性界面活性剤と、を有し、
前記カチオン性界面活性剤が、脂肪族アミン、脂肪族アミドアミン及びアシルアミノ酸誘導体からなる群から選択された１又は複数のカチオン性界面活性剤であってその疎水性部分に炭素数１１〜２１の１本の飽和又は不飽和の直鎖型炭化水素基を含むことを特徴とする
荷電ニオソーム。
【請求項９】
請求項８に記載の荷電ニオソームを含むローション製剤、乳液製剤、ジェル製剤又はクリーム製剤である荷電ニオソーム含有製品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、皮膚への浸透性及び皮膚中での貯留性の高いニオソームの調製方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
リポソームは、生体膜を構成するリン脂質又はこれに類似する脂質の二重膜又は多重膜からなる数十ｎｍ〜数百ｎｍの自己閉鎖コロイド粒子として知られている。特に、非イオン性界面活性剤の脂質を用いて調製された自己閉鎖コロイド粒子は、ニオソームと称される。リポソームやニオソームは、医薬品や化粧品等の分野においてドラッグデリバリ等に広く利用されている。
【０００３】
薬剤等の目的物質は、リポソーム内の水相に封入したり、リポソーム膜内に封入したり、リポソームの表面に結合したりすることができる。一般的なリポソームの調製方法では、有機溶媒への脂質溶解、有機溶媒の除去、超音波処理若しくは押出し、及び、均質化等の処理工程が含まれており、リポソームの形成と同時に薬剤等を封入する場合、その後の処理により脂質及び薬剤が分解され易いという問題があった。また、一般的な調製方法では、リポソームのサイズ及び数の不安定さ、製造スケールでの滅菌の困難さ及びバッチ間の品質差等の問題があった。
【０００４】
これらの問題を解決するために特許文献１では、ジアシルグリセロールポリエチレングリコール付加物（以下「ジアシルグリセロールＰＥＧ付加物」と称する）を主体とする脂質と、目的物質を含む水溶液とを混合することにより、リポソームを自発的に形成する調製方法が提示されている。（狭義ではリン脂質を用いた自己閉鎖コロイド粒子をリポソームと称することが多いが、特許文献１では、リン脂質以外の脂質を用いながら、広義の意味でリポソームと称している。本明細書では、リン脂質以外の脂質を主体とするリポソームは「ニオソーム」と称する。）
【０００５】
また、特許文献２に記載のように、リポソームの表面にポリエチレングリコールを修飾することにより、ポリエチレングリコールの水和性と立体障害により、リポソームが細網内皮系に捕捉されずに生体内へ浸透することができ、特に血中での貯留性が向上することも知られている。
【０００６】
特許文献１では、ジアシルグリセロールＰＥＧ付加物である脂質自体がＰＥＧ鎖を有しており、この脂質により形成されたリポソームは、その表面がＰＥＧ鎖で覆われた形態となる。従って特許文献１のリポソームは、特許文献２のようなリポソームの表面にポリエチレングリコールを修飾したものと同様に、生体内への浸透性と血中での安定性が良好である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特許第４４９７７６５号公報
【特許文献２】国際公開第２０１２／１６１１９６号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
特許文献１のリポソームは、表面がＰＥＧ鎖で覆われていることから、皮膚への浸透性は良好であったが、皮膚中、特に角質中に長時間留めることが好ましい用途、例えば化粧品等においては、貯留時間が不十分であるという問題があった。
【０００９】
本発明は、ジアシルグリセロールＰＥＧ付加物を主体とする脂質により形成され、良好な皮膚浸透性と皮膚中での貯留性を備えたニオソームの調製方法を提供することを目的とする。また、そのようなニオソームを提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
上記の目的を達成するために本発明は、以下の構成を提供する。
・  本発明の態様の一つは、正に帯電した荷電ニオソームの調製方法であって、
ジアシルグリセロールＰＥＧ付加物を少なくとも含む脂質を、該脂質が液体状態をとり得る温度にて所定の水溶液と混合し、該脂質が自発的にニオソームを形成することにより、ニオソームの懸濁液を調製するステップと、
脂肪族アミン、脂肪族又は脂肪族アミド第４級アンモニウム塩、脂肪族アミドアミン及びアシルアミノ酸誘導体からなる群から選択された１又は複数のカチオン性界面活性剤であってその疎水性部分に炭素数１１〜２１の飽和又は不飽和の直鎖型炭化水素基を有する該カチオン性界面活性剤を、酸性水溶液と混合することにより、カチオン性界面活性剤水溶液を調製するステップと、
前記ニオソームの懸濁液と、前記カチオン性界面活性剤水溶液とを混合し、前記カチオン性界面活性剤がその親水性部分に正電荷をもって前記ニオソームの表面を修飾することにより、荷電ニオソームの懸濁液を調製するステップと、を有することを特徴とする。
・  上記態様において、前記ジアシルグリセロールＰＥＧ付加物が、ジオレイン酸グリセロールＰＥＧ−１２、ジミリスチン酸グリセロールＰＥＧ−１２、ジパルミチン酸グリセロールＰＥＧ−２３、ジステアリン酸グリセロールＰＥＧ−１２、及びジステアリン酸グリセロールＰＥＧ−２３からなる群から選択された１又は複数のものであることが、好適である。
・  上記態様において、前記カチオン性界面活性剤である脂肪族アミンが、テトラデシルアミン、パルミチルアミン、ステアリルアミン、オレイルアミン、リノレイルアミン、ベヘニルアミン、Ｎ，Ｎ−ジメチルドデシルアミン及びＮ，Ｎ−ジメチル−ｎ−オクタデシルアミンからなる群から選択された１又は複数のものであることが、好適である。
・  上記態様において、前記カチオン性界面活性剤である脂肪族又は脂肪族アミド第４級アンモニウム塩が、塩化テトラデシルトリメチルアンモニウム、塩化セチルトリメチルアンモニウム、塩化ステアリルトリメチルアンモニウム、塩化ベヘニルトリメチルアンモニウム及び塩化パルミタミドプロピルトリメチルアンモニウムからなる群から選択された１又は複数のものであることが、好適である。
・  上記態様において、前記カチオン性界面活性剤である脂肪族アミドアミンが、ミリスチン酸ジエチルアミノエチルアミド、ミリスチン酸ジメチルアミノエチルアミド、ミリスチン酸ジメチルアミノプロピルアミド、ミリスチン酸ジエチルアミノプロピルアミド、パルミチン酸ジエチルアミノエチルアミド、パルミチン酸ジメチルアミノエチルアミド、パルミチン酸ジメチルアミノプロピルアミド、パルミチン酸ジエチルアミノプロピルアミド、ステアリン酸ジエチルアミノエチルアミド、ステアリン酸ジメチルアミノエチルアミド、ステアリン酸ジメチルアミノプロピルアミド、ステアリン酸ジエチルアミノプロピルアミド、ベヘニン酸ジエチルアミノエチルアミド、ベヘニン酸ジメチルアミノエチルアミド、ベヘニン酸ジメチルアミノプロピルアミド及びベヘニン酸ジエチルアミノプロピルアミドからなる群から選択された１又は複数のものであることが、好適である。
・  上記態様において、前記カチオン性界面活性剤であるアシルアミノ酸誘導体が、ココイルアルギニンエチルＰＣＡであることが、好適である。
・  上記態様において、前記カチオン性界面活性剤水溶液を調製するための酸性水溶液が、ｐＨ４又はそれ以下であることが、好適である。
・  本発明の別の態様は、正に帯電した荷電ニオソームであって、
ジオレイン酸グリセロールＰＥＧ−１２、ジミリスチン酸グリセロールＰＥＧ−１２、ジパルミチン酸グリセロールＰＥＧ−２３、ジステアリン酸グリセロールＰＥＧ−１２、及びジステアリン酸グリセロールＰＥＧ−２３からなる群から選択された１又は複数のジアシルグリセロールＰＥＧ付加物を少なくとも含む脂質を構成成分としかつ所定の水溶液を封入したニオソームと、
親水性部分に正電荷をもって前記ニオソームの表面を修飾するカチオン性界面活性剤と、を有し、
前記カチオン性界面活性剤が、脂肪族アミン、脂肪族第４級アンモニウム塩及び脂肪族アミドアミンからなる群から選択された１又は複数のカチオン性界面活性剤であってその疎水性部分に炭素数１３〜２１の１本の飽和又は不飽和の直鎖型炭化水素基を含むことを特徴とする。また、この態様の荷電ニオソームを含む荷電ニオソーム含有製品が、ローション製剤、乳液製剤、ジェル製剤又はクリーム製剤である。
【発明の効果】
【００１１】
本発明により得られる荷電ニオソームは、正に帯電しているので、負に帯電している皮膚表層、特に角質層に吸着し易くなる。この結果、荷電ニオソームにより、非帯電のニオソームに比べて角質層への良好な浸透性と長時間の貯留性が実現された。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】図１（ａ）は、第１ステップで用いる主要な脂質であるジアシルグリセロールＰＥＧ付加物の構造を、（ｂ１）〜（ｂ４）は第２ステップで用いるカチオン性界面活性剤の例の構造を概略的に示している。
【図２】図２は、第３ステップで得られる荷電ニオソームのイメージ断面図である。
【図３】図３は、実施例１及び比較例１について、ゼータ電位を測定した結果を示すグラフである。
【図４】図４（ａ）（ｂ）は、実施例１及び比較例１の透過型電子顕微鏡（ＴＥＭ）写真である。
【図５】図５は、実施例２、比較例２ａ及び２ｂの経皮吸収試験の結果を示すグラフである。
【図６】図６は、実施例３及び４、比較例３ａ及び４ａの経皮吸収試験の結果を示すグラフである。
【図７】図７は、実施例５、比較例５ａ、５ｂ及び５ｃの経皮吸収試験の結果を示すグラフである。
【図８】図８は、実施例６、７、８及び９、並びに、比較例６ａ及び６ｂの経皮吸収試験の結果を示すグラフである。
【図９】図９（ａ）は、実施例１０並びに比較例１０ａ、１０ｂ、１０ｃ及び１０ｄの経皮吸収試験結果を示すグラフである。（ｂ）は、実施例１０並びに比較例１０ａ、１０ｂ、１０ｃ及び１０ｄの細胞の明度を計測することによるアルブチンの美白剤としての美白効果試験結果を示すグラフである。
【図１０】図１０は、実施例１４について、図６の実施例３、４と同じ条件の経皮吸収試験を行った結果を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
以下、図面を参照しつつ、本発明の実施の形態を説明する。
「ニオソーム」の用語は、通常、非イオン性の界面活性剤によるベシクル（二重膜の自己閉鎖コロイド粒子）の意味で用いるが、本明細書では、二重膜のみでなく多重膜の自己閉鎖コロイド粒子も含むものとする。
【００１４】
［１］調製方法の基本形態
本発明の調製方法により得られるニオソームは、懸濁液中で正に帯電したニオソーム（以下「荷電ニオソーム」と称する）である。以下において単に「ニオソーム」という場合は、非荷電のものを意味する。本発明による荷電ニオソームの調製方法は、基本的に以下の３つのステップを含む。なお、第１ステップと第２ステップについては、時系列的にこの順序でなくともよく、並行して、又は、逆の順序で実行可能である。第３ステップは、第１ステップと第２ステップの各々の生成物を用いるので、最後に実行されるステップである。
【００１５】
・第１ステップ：ジアシルグリセロールＰＥＧ付加物を少なくとも含む脂質を、その脂質が液体状態をとり得る温度にて所定の水溶液と混合し、その脂質が自発的にニオソームを形成することにより、ニオソームの懸濁液を調製するステップ
・第２ステップ：脂肪族アミン、脂肪族第４級アンモニウム塩、脂肪族アミド第４級アンモニウム塩、脂肪族アミドアミン及びアシルアミノ酸誘導体からなる群から選択された１又は複数のカチオン性界面活性剤であってその疎水性部分に炭素数１１〜２１の飽和又は不飽和の直鎖型炭化水素基を有するカチオン性界面活性剤を、酸性水溶液と混合することにより、カチオン性界面活性剤水溶液を調製するステップ
・第３ステップ：第１ステップで得たニオソームの懸濁液と、第２ステップで得たカチオン性界面活性剤水溶液とを混合し、カチオン性界面活性剤がその親水性部分に正電荷をもってニオソームの表面を修飾することにより、荷電ニオソームの懸濁液を調製するステップ
【００１６】
［２］調製方法の第１ステップ
図１（ａ）は、第１ステップで用いる主要な脂質であるジアシルグリセロールＰＥＧ付加物の構造を概略的に示している。符号１は、グリセロール骨格部分を、符号２は、３つの炭素のうち１つの炭素に直鎖型ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）が結合した親水性部分を、符号３は、グリセロール骨格の３つの炭素のうち他の２つの炭素に、２本の脂肪酸からなるジアシル基がそれぞれ結合した疎水性部分をそれぞれ概略的に示している。以下では、特定のジアシルグリセロールＰＥＧ付加物については、脂肪酸の種類とＰＥＧ鎖のｎの数を基に「〜酸グリセロールＰＥＧ−ｎ」と表す。
【００１７】
ジアシルグリセロールＰＥＧ付加物として、ジオレイン酸グリセロールＰＥＧ−１２、ジミリスチン酸グリセロールＰＥＧ−１２、ジパルミチン酸グリセロールＰＥＧ−２３、ジステアリン酸グリセロールＰＥＧ−１２、及びジステアリン酸グリセロールＰＥＧ−２３からなる群から１又は複数を選択して用いることが、好適である。これらのジアシルグリセロールＰＥＧ付加物は、その分子構造が、水溶液と混合するのみで自発的にニオソームを形成することができるような形状的、力学的要件を備えている。言い換えるならば、水溶液中で自発的にニオソームを形成可能な好適なサイズ、硬さ、曲げ弾性係数等を有している。
【００１８】
本発明に用いるジアシルグリセロールＰＥＧ付加物は、一般的な調製温度範囲である０℃と１００℃の間に融点を有する。ジアシルグリセロールＰＥＧ付加物は、それらが液体状態をとり得る温度において、所定の水溶液と混合することにより、ニオソームを自発的に形成することができる。また、ニオソームを自発的に形成可能な条件の一つとして、第１ステップにおける混合液全体に対する脂質の割合を２質量％〜５０質量％程度とすることが好適である。しかしながら、厳密にこの範囲に限定するものではない。脂質の割合がこの範囲より高くなると、ラメラや逆ヘキサゴナル等のニオソーム以外の構造を形成しやすくなる。
【００１９】
調製温度に関して、例えば、ジオレイン酸グリセロールＰＥＧ−１２及びジミリスチン酸グリセロールＰＥＧ−１２は約２０℃〜６０℃の範囲において、ジパルミチン酸グリセロールＰＥＧ−２３は約３７℃〜６０℃の範囲において、ジステアリン酸グリセロールＰＥＧ−１２及びジステアリン酸グリセロールＰＥＧ−２３は約６０℃近傍にて、それぞれ所定の水溶液と混合するのみで自発的にニオソームを形成することが確認されている（特許文献１参照）。
【００２０】
第１ステップにおいて自発的に形成されたニオソームは安定性が高く、また、同じ条件によるニオソーム形成の再現性が良好である。さらに、製造スケールでの滅菌性並びにバッチ間のサイズ、数及び品質の均一性においても問題ない（特許文献１参照）。
【００２１】
ニオソームの主要構成成分であるジアシルグリセロールＰＥＧ付加物に加えて、さらに別の脂質を構成成分として含めることができる。追加する別の脂質についても、少なくとも混合温度において液体状態をとり得る、という条件を満たすものとする。別の脂質として、例えばコレステロール等のステロール又はそのエステルを用いることができる。コレステロールは、例えば体内でのニオソームの安定性を高めるために用いられる。
【００２２】
第１ステップにおける所定の水溶液とは、ニオソームに封入する目的物質すなわち、医薬や化粧品等の有効成分等を溶解した水溶液である。所定の水溶液は、ニオソームの中心の水相に封入されると共に、ニオソームの周囲にも存在することとなる。第１ステップでは、所定の水溶液中にニオソームが分散した懸濁液が得られる。
【００２３】
［３］調製方法の第２ステップ
次に、第２ステップで用いるカチオン性界面活性剤としては、脂肪族アミン、脂肪族又は脂肪族アミド第４級アンモニウム塩、脂肪族アミドアミン及びアシルアミノ酸誘導体からなる群から選択された１又は複数のカチオン性界面活性剤であってその疎水性部分に炭素数１１〜２１の飽和又は不飽和の直鎖型炭化水素基を有する。好適には、その直鎖型炭化水素基を分子内に一つのみ有する。
【００２４】
図１（ｂ１）は、脂肪族アミンの一例として第一級アミンの構成例を示している。
図１（ｂ２）は、脂肪族又は脂肪族アミド第４級アンモニウム塩の構成例を示しており、左図は、脂肪族第４級アンモニウム塩を、右図は、脂肪族アミド第４級アンモニウム塩を示している。
図１（ｂ３）は脂肪族アミドアミンの一例として第二級アミドの構成例を示している。
図１（ｂ４）はアシルアミノ酸誘導体の構成例を示している。ここでのアシルアミノ酸誘導体は、アシル基を含有するアミノ酸系のカチオン性界面活性剤を意味する。図ではアミノ酸部分の一例としてＬ−アルギニンエチルを示している。
図１（ｂ１）〜（ｂ４）において、符号４は、水溶液中で正電荷をもつイオンとなる親水性部分を、符号５は、飽和又は不飽和の直鎖型炭化水素基からなる疎水性部分をそれぞれ概略的に示している。
【００２５】
脂肪族アミンは、第１級、第２級又は第３級アミンであることが好適である。例えば、テトラデシルアミン、パルミチルアミン、ステアリルアミン、オレイルアミン、リノレイルアミン、ベヘニルアミン、Ｎ，Ｎ−ジメチルドデシルアミン及びＮ，Ｎ−ジメチル−ｎ−オクタデシルアミンからなる群から選択された１又は複数のものであることが、好適である。
【００２６】
脂肪族又は脂肪族アミド第４級アンモニウム塩は、第４級アンモニウム塩であることが好適である。例えば、脂肪族第４級アンモニウム塩は、塩化テトラデシルトリメチルアンモニウム、塩化セチルトリメチルアンモニウム、塩化ステアリルトリメチルアンモニウム、塩化ベヘニルトリメチルアンモニウム及び塩化パルミタミドプロピルトリメチルアンモニウムからなる群から選択された１又は複数のものであることが、好適である。
【００２７】
脂肪族アミドアミンは、第１級、第２級又は第３級アミドアミンであることが好適である。例えば、ミリスチン酸ジエチルアミノエチルアミド、ミリスチン酸ジメチルアミノエチルアミド、ミリスチン酸ジメチルアミノプロピルアミド、ミリスチン酸ジエチルアミノプロピルアミド、パルミチン酸ジエチルアミノエチルアミド、パルミチン酸ジメチルアミノエチルアミド、パルミチン酸ジメチルアミノプロピルアミド、パルミチン酸ジエチルアミノプロピルアミド、ステアリン酸ジエチルアミノエチルアミド、ステアリン酸ジメチルアミノエチルアミド、ステアリン酸ジメチルアミノプロピルアミド、ステアリン酸ジエチルアミノプロピルアミド、ベヘニン酸ジエチルアミノエチルアミド、ベヘニン酸ジメチルアミノエチルアミド、ベヘニン酸ジメチルアミノプロピルアミド及びベヘニン酸ジエチルアミノプロピルアミドからなる群から選択された１又は複数のものであることが、好適である。
【００２８】
アシルアミノ酸誘導体は、ココイルアルギニンエチルＰＣＡであることが、好適である。ココイルアルギニンエチルＰＣＡは、図１（ｂ４）におけるＲ１−ＣＯのアシル基部分がヤシ油脂肪酸（ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸等の混合物）に由来し、Ｒ２−がＤＬ−ＰＣＡ（dl-ピロリドンカルボン酸）である。
【００２９】
上記のカチオン性界面活性剤と混合される酸性水溶液は、例えば、乳酸水溶液又はクエン酸水溶液である。酸性水溶液は、ｐＨ４又はそれ以下が好適であるが、厳密にこの値に限定するものではない。カチオン性界面活性剤を酸性水溶液に溶解することにより、水溶液中でその親水性部分に正電荷を有する形態となる。
【００３０】
［４］調製方法の第３ステップ
第３ステップでは、第１ステップで得たニオソームの懸濁液と、第２ステップで得たカチオン性界面活性剤水溶液とを混合することにより、荷電ニオソームの懸濁液を調製する。具体的には、例えばポストインサーション法を用いる。ポストインサーション法では、混合した液体を、所定の温度にて所定の時間、ボルテックス又は機械にて撹拌することにより混合する。
【００３１】
図２は、第３ステップで得られる荷電ニオソームのイメージ断面図である。ここでは一例として、第１ステップで得られるニオソームが二重膜を形成している。表面にはＰＥＧ鎖の親水性部分２が存在する。カチオン性界面活性剤の疎水性部分５の末端は、ニオソームの殻内の疎水性部分３に付着ないしは結合し、疎水性部分５の炭化水素鎖はニオソームの表面から突出して延び、その先端の親水性部分４がある。親水性部分４は、水溶液中でイオン化して正に帯電している。
【００３２】
第３ステップでは、第１ステップにおける水溶液と第２ステップにおける水溶液が混合された混合水溶液中に荷電ニオソームが分散した懸濁液が得られる。懸濁液中の荷電ニオソーム内の水相には、水溶液中に溶解した目的物質が封入されている。
【００３３】
このようにして調製した荷電ニオソームの懸濁液を用いて、医薬品や化粧品等の荷電ニオソーム含有製品が得られる。例えば、第３ステップにおいてローション剤成分を共に混合することによりローション製剤が得られる。また、上記第１〜第３ステップとは別に調製した乳液、ジェル又はクリームと混合することにより、乳液製剤、ジェル製剤又はクリーム製剤が得られる。
【実施例】
【００３４】
上述した荷電ニオソームの調製方法の実施例、並びに、調製された荷電ニオソームに関する表面電荷及び皮膚浸透性／貯留性等の試験結果を以下に示す。
【００３５】
（１）表面電荷測定
＜試料＞
表１は、荷電ニオソームのゼータ電位測定に用いた荷電ニオソーム（実施例１）と、従来のニオソーム（比較例１）について、調製方法の概略及び成分割合を示している。なお、実施例１は、ゼータ電位測定のための試料であるため、所定の水溶液の替わりに脱イオン水を用いているが、このことは実施例としての結果に影響するものではない。
【００３６】
なお、表１中の各成分の数値は、実施例１については、第３ステップで得られる荷電ニオソーム懸濁液を１００とした場合の質量％であり、比較例１については、第１ステップで得られるニオソーム懸濁液を１００とした場合の質量％である（以下の同様の表についても、最終ステップの生成物を１００として各ステップの成分割合を質量％で示す）。
【００３７】
【表１】
2019059683.tif 000003
【００３８】
＜調製方法＞
・実施例１
第１ステップ：室温にて、２質量％のジミリスチン酸グリセロールＰＥＧ−１２（以下「ＧＤＭ−１２」と略称）へ５質量％の脱イオン水を加え、混合（ボルテックス又は機械にて撹拌。他の実施例の第１ステップでも同じ）し、ニオソーム懸濁液を得た。
第２ステップ：０．４質量％のステアリン酸ジメチルアミノプロピルアミド（以下「ＳＤＭＡＰＡ」と略称）を、０．６質量％の５０％乳酸水溶液に７０〜８０℃で完全に溶解させた後、３０℃以下の室温に冷却し、ＳＤＭＡＰＡ水溶液を得た。
第３ステップ：第１ステップのニオソーム懸濁液へ第２ステップのＳＤＭＡＰＡ水溶液を加え、混合（ボルテックス又は機械にて撹拌。他の実施例の第３ステップでも同じ）した後、８８質量％の脱イオン水を加え、混合した。
【００３９】
・比較例１
室温にて、２質量％のＧＤＭ−１２へ９８質量％の脱イオン水を加え、混合撹拌し、ニオソーム懸濁液を得た。
【００４０】
＜ゼータ電位測定結果＞
図３は、実施例１及び比較例１について、ゼータ電位を測定した結果を示すグラフである。横軸が電位である。実施例１は、６０ｍＶ〜８０ｍＶにピークが現れ、正に帯電していることが判る。一方、比較例１は、−１０〜２０ｍＶにピークが現れている。
【００４１】
（２）電子顕微鏡写真
図４（ａ）（ｂ）は、実施例１及び比較例１の透過型電子顕微鏡（ＴＥＭ）写真である。（ａ）の実施例１では、ネガティブ染色の染色剤が表面の電荷に接触し、表面電荷が観察された。（ｂ）の比較例１では、同心円状に多重層になっていることが確認でき、表面構造は見られない。実施例１の荷電ニオソームは、比較例１のニオソームの最外層の表面に正電荷を帯びた構造であると考えられる。
【００４２】
（３）経皮吸収試験−その１
＜試料＞
表２は、蛍光標識物質であるカルセインＮａを封入して行った経皮吸収試験に用いた荷電ニオソーム（実施例２）と、従来のニオソーム（比較例２ａ）と、水溶液（比較例２ｂ）について、調製方法の概略及び成分割合を示している。
【００４３】
【表２】
2019059683.tif 000004
【００４４】
＜調製方法＞
・実施例２
第１ステップ：室温にて、２質量％のＧＤＭ−１２へ５質量％のカルセインＮａ含有水溶液（０．５質量％のカルセインＮａと４．５質量％の脱イオン水）を加え、混合し、黄褐色の高粘性のニオソーム懸濁液を得た。
第２ステップ：０．４質量％のＳＤＭＡＰＡを、０．６質量％の５０％乳酸水溶液に７０〜８０℃で完全に溶解させた後、３０℃以下の室温に冷却し、ＳＤＭＡＰＡ水溶液を得た。
第３ステップ：第１ステップのニオソーム懸濁液へ第２ステップのＳＤＭＡＰＡ水溶液を加え、穏やかに撹拌し、黄褐色の粘稠な溶液を得た後、８８質量％の脱イオン水を加え、穏やかに撹拌し、黄褐色の荷電ニオソーム懸濁液を得た。
【００４５】
・比較例２ａ
室温にて、２質量％のＧＤＭ−１２へ５質量％のカルセインＮａ含有水溶液（０．５質量％のカルセインＮａと４．５質量％の脱イオン水）及び９３質量％の脱イオン水を加え、穏やかに撹拌し、ニオソーム懸濁液を得た。
・比較例２ｂ
室温にて、５質量％のカルセインＮａ含有水溶液（０．５質量％のカルセインＮａと４．５質量％の脱イオン水）と９５質量％の脱イオン水を混合し、カルセインＮａ含有水溶液を得た。
【００４６】
＜結果＞
図５は、実施例２、比較例２ａ及び２ｂの経皮吸収試験の結果を示すグラフである。皮膚表面に適用してから３０分後、３時間後及び６時間後の皮膚（角質層）中のカルセインＮａの量（皮膚中量）と皮膚を透過したカルセインＮａの量（皮膚透過量）の和を皮膚移行量として示している。実施例２は、比較例２ａ及び２ｂに比べて良好な皮膚浸透性を示した。
【００４７】
（４）経皮吸収試験−その２
＜試料＞
表３及び表４はそれぞれ、蛍光標識物質であるカルセインＮａを封入して行った経皮吸収試験に用いた荷電ニオソーム（実施例３、４）と、従来のニオソーム（比較例３ａ、４ａ）について、調製方法の概略及び成分割合を示している。
【００４８】
【表３】
2019059683.tif 000005
【００４９】
【表４】
2019059683.tif 000006
【００５０】
＜調製方法＞
・実施例３
第１ステップ：室温にて、２質量％のＧＤＭ−１２へ５質量％のカルセインＮａ含有水溶液（０．１質量％のカルセインＮａと４．９質量％の脱イオン水）を加え、混合し、黄褐色の高粘性のニオソーム懸濁液を得た。
第２ステップ：０．４質量％のＳＤＭＡＰＡを、０．６質量％の５０％乳酸水溶液に７０〜８０℃で完全に溶解させた後、３０℃以下の室温に冷却し、ＳＤＭＡＰＡ水溶液を得た。
第３ステップ：第１ステップのニオソーム懸濁液へ第２ステップのＳＤＭＡＰＡ水溶液を加え、穏やかに撹拌し、黄褐色の粘稠な溶液を得た後、６６質量％の脱イオン水と、７質量％の１，３−ブチレングリコールと、１５質量％の１，３−プロパンジオールとを加え、穏やかに撹拌し、黄褐色の荷電ニオソーム懸濁液を得た。
【００５１】
・比較例３ａ
室温にて、２質量％のＧＤＭ−１２へ５質量％のカルセインＮａ含有水溶液（０．１質量％のカルセインＮａと４．９質量％の脱イオン水）及び７１質量％の脱イオン水と、７質量％の１，３−ブチレングリコールと、１５質量％の１，３−プロパンジオールとを加え、穏やかに撹拌し、ニオソーム懸濁液を得た。
【００５２】
・実施例４
第１ステップ：室温にて、２．２７質量％のＧＤＭ−１２へ５質量％のカルセインＮａ含有水溶液（０．１質量％のカルセインＮａと４．９質量％の脱イオン水）を加え、混合し、黄褐色の高粘性のニオソーム懸濁液を得た。
第２ステップ：０．４質量％のＳＤＭＡＰＡを、０．６質量％の５０％乳酸水溶液に７０〜８０℃で完全に溶解させた後、３０℃以下の室温に冷却し、ＳＤＭＡＰＡ水溶液を得た。
第３ステップ：第１ステップのニオソーム懸濁液へ第２ステップのＳＤＭＡＰＡ水溶液を加え、穏やかに撹拌し、黄褐色の粘稠な溶液を得た後、８７．７３質量％の脱イオン水を加え、穏やかに撹拌し、黄褐色の荷電ニオソーム懸濁液を得た。
【００５３】
・比較例４ａ
室温にて、２．２７質量％のＧＤＭ−１２へ５質量％のカルセインＮａ含有水溶液（０．１質量％のカルセインＮａと４．９質量％の脱イオン水）と９２．７３質量％の脱イオン水を加え、穏やかに撹拌し、ニオソーム懸濁液を得た。
【００５４】
＜結果＞
図６は、実施例３及び４、比較例３ａ及び４ａの経皮吸収試験の結果を示すグラフである。皮膚表面に適用してから２４時間後における、皮膚表面から皮膚中への移行量（皮膚移行量）、皮膚（角質層）中のカルセインＮａの量（皮膚中量）と、皮膚を透過した量（皮膚透過量）とを示している。実施例３、４は、比較例３ａ及び４ａに比べて良好な皮膚浸透性及び皮膚貯留性を示した。実施例３、４の皮膚貯留率は、８８％、９６％であるのに対し、比較例３ａ、４ａの皮膚貯留率は、５１〜５６％程度である。この皮膚貯留率は、［皮膚中量／皮膚移行量］×１００％の式にて算出した。
【００５５】
（５）経皮吸収試験−その３
＜試料＞
表５は、３−Ｏ−エチルアスコルビン酸を封入して行った経皮吸収試験３に用いた荷電ニオソーム（実施例５）と、従来のニオソーム（比較例５ａ）及びニオソーム無しの３−Ｏ−エチルアスコルビン酸水溶液（比較例５ｂ）について、調製方法の概略及び成分割合を示している。
【００５６】
【表５】
2019059683.tif 000007
【００５７】
＜調製方法＞
・実施例５
第１ステップ：室温にて、２質量％のＧＤＭ−１２へ１０質量％の３−Ｏ−エチルアスコルビン酸含有水溶液（５質量％の３−Ｏ−エチルアスコルビン酸と５質量％の脱イオン水）を加え、混合し、ニオソーム懸濁液を得た。
第２ステップ：０．４質量％のＳＤＭＡＰＡを、０．６質量％の５０％乳酸水溶液に７０〜８０℃で完全に溶解させた後、３０℃以下の室温に冷却し、ＳＤＭＡＰＡ水溶液を得た。
第３ステップ：第１ステップのニオソーム懸濁液へ第２ステップのＳＤＭＡＰＡ水溶液を加え、穏やかに撹拌し、溶液を得た後、７３質量％の脱イオン水と、５質量％のグリセリンと、３質量％の１，３−ブチレングリコールと、２質量％の１，２−ペンタンジオールとを加え、穏やかに撹拌し、荷電ニオソーム懸濁液を得た。
【００５８】
・比較例５ａ
室温にて、２質量％のＧＤＭ−１２へ１０質量％の３−Ｏ−エチルアスコルビン酸含有水溶液（５質量％の３−Ｏ−エチルアスコルビン酸と５質量％の脱イオン水）と、７８質量％の脱イオン水と、５質量％のグリセリンと、３質量％の１，３−ブチレングリコールと、２質量％の１，２−ペンタンジオールとを加え、穏やかに撹拌し、ニオソーム懸濁液を得た。
・比較例５ｂ
室温にて、１０質量％の３−Ｏ−エチルアスコルビン酸含有水溶液（５質量％の３−Ｏ−エチルアスコルビン酸と５質量％の脱イオン水）と、８０質量％の脱イオン水と、５質量％のグリセリンと、３質量％の１，３−ブチレングリコールと、２質量％の１，２−ペンタンジオールとを混合し、３−Ｏ−エチルアスコルビン酸含有水溶液を得た。
【００５９】
＜結果＞
図７は、実施例５、比較例５ａ、５ｂ及び５ｃの経皮吸収試験の結果を示すグラフである。皮膚透過量の時間変化を示している。実施例５は、比較例に比べて皮膚浸透性が良好であることが判る。また、荷電ニオソームである実施例５は、皮膚貯留性が良好であることから、長時間持続して皮膚透過量が増加している。
【００６０】
（６）経皮吸収試験−その４
＜試料＞
表６、表７、表８、表９は、アルブチンを封入して行った経皮吸収試験４に用いた荷電ニオソームのローション製剤（実施例６）、乳液製剤（実施例７）、ジェル製剤（実施例８）及びクリーム製剤（実施例９）と、アルブチン含有ＰＢＳ（−）（比較例６ａ）と、ＰＢＳ（−）（比較例６ｂ）について、調製方法の概略及び成分割合を示している。
【００６１】
【表６】
2019059683.tif 000008
【００６２】
【表７】
2019059683.tif 000009
【００６３】
【表８】
2019059683.tif 000010
【００６４】
【表９】
2019059683.tif 000011
【００６５】
＜調製方法＞
・実施例６
第１ステップ：室温にて、２質量％のＧＤＭ−１２へ６質量％のアルブチン含有水溶液（１質量％のアルブチンと５質量％の脱イオン水）を加え、混合し、白い粘性のニオソーム懸濁液を得た。
第２ステップ：０．４質量％のＳＤＭＡＰＡを、０．６質量％の５０％乳酸水溶液に７０〜８０℃で完全に溶解させた後、３０℃以下の室温に冷却し、ＳＤＭＡＰＡ水溶液を得た。
第３ステップ：第１ステップのニオソーム懸濁液へ第２ステップのＳＤＭＡＰＡ水溶液を加え、穏やかに撹拌し、粘稠な溶液を得た後、７６質量％の脱イオン水と、６質量％のグリセリンと、６質量％のジグリセリンと、４重量％の１，３−ブチレングリコールとを加え、穏やかに撹拌し、荷電ニオソーム懸濁液からなるローション製剤を得た。
【００６６】
・比較例６ａ
室温にて、１質量％のアルブチンと、９９質量％のＰＢＳ（−）とを混合し、アルブチンＰＢＳ（−）水溶液を得た。
・比較例６ｂ
ＰＢＳ（−）をそのまま用いた。
【００６７】
・実施例７
第１ステップ：室温にて、２質量％のＧＤＭ−１２へ６質量％のアルブチン含有水溶液（１質量％のアルブチンと５質量％の脱イオン水）を加え、混合し、白い粘性のニオソーム懸濁液を得た。
第２ステップ：０．４質量％のＳＤＭＡＰＡを、０．６質量％の５０％乳酸水溶液に７０〜８０℃で完全に溶解させた後、３０℃以下の室温に冷却し、ＳＤＭＡＰＡ水溶液を得た。
第３ステップ：第１ステップのニオソーム懸濁液へ第２ステップのＳＤＭＡＰＡ水溶液を加え、穏やかに撹拌し、粘稠な溶液を得た後、７６質量％の脱イオン水を加え、穏やかに撹拌し、荷電ニオソーム懸濁液を得た。
第４ステップ：８０℃にて、６１．５質量％の脱イオン水と、６質量％のグリセリンと、１質量％のジグリセリンと、４重量％の１，３−ブチレングリコールと、６質量％のスクワランと、１質量％のセチルアルコールと、０．５質量％のTinovis(登録商標)CD（BASF製）とを混合し、乳化した後、室温まで冷却して乳液を得た。
第５ステップ：第３ステップで得た荷電ニオソーム懸濁液を、第４ステップで得た乳液へ加えて乳液製剤を得た。
【００６８】
・実施例８
第１ステップ：室温にて、２質量％のＧＤＭ−１２へ６質量％のアルブチン含有水溶液（１質量％のアルブチンと５質量％の脱イオン水）を加え、混合し、白い粘性のニオソーム懸濁液を得た。
第２ステップ：０．４質量％のＳＤＭＡＰＡを、０．６質量％の５０％乳酸水溶液に７０〜８０℃で完全に溶解させた後、３０℃以下の室温に冷却し、ＳＤＭＡＰＡ水溶液を得た。
第３ステップ：第１ステップのニオソーム懸濁液へ第２ステップのＳＤＭＡＰＡ水溶液を加え、穏やかに撹拌し、粘稠な溶液を得た後、７質量％の脱イオン水を加え、穏やかに撹拌し、粘稠な荷電ニオソーム懸濁液を得た。
第４ステップ：８０℃にて、６６質量％の脱イオン水と、６質量％のグリセリンと、１質量％のジグリセリンと、４重量％の１，３−ブチレングリコールと、２質量％のセチルアルコールと、１質量％のTinovis(登録商標)CD（BASF製）とを混合し、乳化した後、室温まで冷却して粘性の高いジェルを得た。
第５ステップ：第３ステップで得た荷電ニオソーム懸濁液を、第４ステップで得たジェルへ加えてジェル製剤を得た。
【００６９】
・実施例９
第１ステップ：室温にて、２質量％のＧＤＭ−１２へ６質量％のアルブチン含有水溶液（１質量％のアルブチンと５質量％の脱イオン水）を加え、混合し、白い粘性のニオソーム懸濁液を得た。
第２ステップ：０．４質量％のＳＤＭＡＰＡを、０．６質量％の５０％乳酸水溶液に７０〜８０℃で完全に溶解させた後、３０℃以下の室温に冷却し、ＳＤＭＡＰＡ水溶液を得た。
第３ステップ：第１ステップのニオソーム懸濁液へ第２ステップのＳＤＭＡＰＡ水溶液を加え、穏やかに撹拌し、粘稠な溶液を得た後、７質量％の脱イオン水を加え、穏やかに撹拌し、粘稠な荷電ニオソーム懸濁液を得た。
第４ステップ：８０℃にて、４７．５質量％の脱イオン水と、６質量％のグリセリンと、１質量％のジグリセリンと、４重量％の１，３−ブチレングリコールと、１．４質量％のモノステアリン酸ポリエチレングリコールと、１．６質量％のステアリン酸グリセルる、２．５質量％のセチルアルコールと、１６質量％のスクワランとを混合し、乳化した後、室温まで冷却して白色のクリームを得た。
第５ステップ：第３ステップで得た荷電ニオソーム懸濁液を、第４ステップで得たクリームへ加えてクリーム製剤を得た。
【００７０】
＜結果＞
図８は、実施例６、７、８及び９、並びに、比較例６ａ及び６ｂの経皮吸収試験の結果を示すグラフである。皮膚中の累積量を示している。実施例は、比較例に比べて皮膚浸透性及び皮膚貯留性が良好であることが判る。
【００７１】
（７）経皮吸収試験−その５及び美白効果試験
＜試料＞
表１０は、アルブチンを封入して行った経皮吸収試験５と美白効果試験に用いた荷電ニオソームの乳化製剤（実施例１０）と、ニオソームの乳化剤（比較例１０ａ）と、ニオソーム無しのアルブチン含有水溶液（比較例１０ｂ）と、アルブチン含有ＰＢＳ（−）（比較例１０ｃ）と、ＰＢＳ（−）（比較例１０ｄ）について、調製方法の概略及び成分割合を示している。
【００７２】
【表１０】
2019059683.tif 000012
【００７３】
＜調製方法＞
・実施例１０
第１ステップ：室温にて、２質量％のＧＤＭ−１２へ６質量％のアルブチン含有水溶液（１質量％のアルブチンと５質量％の脱イオン水）を加え、混合し、白い粘性のニオソーム懸濁液を得た。
第２ステップ：０．４質量％のＳＤＭＡＰＡを、０．６質量％の５０％乳酸水溶液に７０〜８０℃で完全に溶解させた後、３０℃以下の室温に冷却し、ＳＤＭＡＰＡ水溶液を得た。
第３ステップ：第１ステップのニオソーム懸濁液へ第２ステップのＳＤＭＡＰＡ水溶液を加え、穏やかに撹拌し、粘稠な溶液を得た後、７質量％の脱イオン水を加え、穏やかに撹拌し、荷電ニオソーム懸濁液を得た。
第４ステップ：８０℃にて、５８．８５質量％の脱イオン水と、６質量％のグリセリンと、１質量％のジグリセリンと、４重量％の１，３−ブチレングリコールと、１質量％の１，２−ペンタンジオールと、０．３質量％のマンナンと、１．４質量％のモノステアリン酸ポリエチレングリコールと、１．６質量％のステアリン酸グリセリルと、６質量％のスクワランと、１．５質量％のセチルアルコールとを混合し、乳化した後、室温まで冷却して乳液を得た。
第５ステップ：第３ステップで得た荷電ニオソーム懸濁液を、第４ステップで得た乳液へ加えて乳液製剤を得た。
【００７４】
・比較例１０ａ
第１ステップ：室温にて、２質量％のＧＤＭ−１２へ６質量％のアルブチン含有水溶液（１質量％のアルブチンと５質量％の脱イオン水）と、１２質量％の脱イオン水とを加え、穏やかに撹拌し、ニオソーム懸濁液を得た。
第２ステップ：第１ステップで得たニオソーム懸濁液を、実施例１０の第４ステップと同じ方法で得た乳液へ加えて乳液製剤を得た。
【００７５】
・比較例１０ｂ
第１ステップ：室温にて、６質量％のアルブチン含有水溶液（１質量％のアルブチンと５質量％の脱イオン水）と、１４質量％の脱イオン水とを混合し、アルブチン含有水溶液を得た。
第２ステップ：第１ステップで得たアルブチン含有水溶液を、実施例１０の第４ステップと同じ方法で得た乳液へ加えて乳液製剤を得た。  
・比較例１０ｃ：
室温にて、１質量％のアルブチンと、９９質量％のＰＢＳ（−）とを混合し、アルブチンＰＢＳ（−）水溶液を得た。
・比較例１０ｄ：
ＰＢＳ（−）をそのまま用いた。
【００７６】
＜経皮吸収試験の結果＞
図９（ａ）は、実施例１０並びに比較例１０ａ、１０ｂ、１０ｃ及び１０ｄの経皮吸収試験結果を示すグラフである。実施例１０は、各比較例に比べて皮膚貯留性が高い。
【００７７】
＜美白効果試験の結果＞
図９（ｂ）は、実施例１０並びに比較例１０ａ、１０ｂ、１０ｃ及び１０ｄの細胞の明度を計測することによるアルブチンの美白剤としての美白効果試験結果を示すグラフである。実施例１０は、各比較例に比べて最も美白効果が得られた。これは図９（ａ）に示される高い皮膚貯留性によると考えられる。
【００７８】
（８）その他の実施例
（８−１）実施例１１
表１１は、カチオン性界面活性剤として塩化ステアリルトリメチルアンモニウムを用いた実施例１１の調製方法の概略及び成分割合を示している。実施例１１では、所定の水溶液に替えて脱イオン水を用いているが、このことは荷電ニオソームの形成に影響するものではない。
【００７９】
【表１１】
2019059683.tif 000013
【００８０】
＜調製方法＞
第１ステップ：室温にて、２質量％のＧＤＭ−１２へ５質量％の脱イオン水を加え、混合し、白い粘性のニオソーム懸濁液を得た。
第２ステップ：０．４質量％の塩化ステアリルトリメチルアンモニウムと、０．２質量％のエタノールと、０．１質量％のクエン酸とを、４．３質量％の脱イオン水に７０〜８０℃で完全に溶解させた後、３０℃以下の室温に冷却し、塩化ステアリルトリメチルアンモニウム水溶液を得た。
第３ステップ：第１ステップのニオソーム懸濁液へ第２ステップの塩化ステアリルトリメチルアンモニウム水溶液を加え、穏やかに撹拌し、粘稠な溶液を得た後、８８質量％の脱イオン水を加え、穏やかに撹拌し、荷電ニオソーム懸濁液を得た。
【００８１】
（８−２）実施例１２
表１２は、カチオン性界面活性剤としてステアリン酸ジエチルアミノエチルアミドを用いた実施例１２の調製方法の概略及び成分割合を示している。
【００８２】
【表１２】
2019059683.tif 000014
【００８３】
＜調製方法＞
第１ステップ：室温にて、２質量％のＧＤＭ−１２へ５質量％の脱イオン水を加え、混合し、白い粘性のニオソーム懸濁液を得た。
第２ステップ：０．４質量％のステアリン酸ジエチルアミノエチルアミドと、０．６質量％の５０％乳酸水溶液と、４質量％の脱イオン水とを７０〜８０℃で完全に溶解させた後、３０℃以下の室温に冷却し、ステアリン酸ジエチルアミノエチルアミド水溶液を得た。
第３ステップ：第１ステップのニオソーム懸濁液へ第２ステップのステアリン酸ジエチルアミノエチルアミドを加え、穏やかに撹拌し、粘稠な溶液を得た後、８８質量％の脱イオン水を加え、穏やかに撹拌し、荷電ニオソーム懸濁液を得た。
【００８４】
（８−３）実施例１３
表１３は、脂質としてジステアリン酸グリセロールＰＥＧ−２３（以下「ＧＤＳ−２３」と略称）及びコレステロールエステルを用いた実施例１３の調製方法の概略及び成分割合を示している。
【００８５】
【表１３】
2019059683.tif 000015
【００８６】
＜調製方法＞
第１ステップ：２質量％のＧＤＳ−２３と、１質量％のマカダミアナッツ脂肪酸コレステリル（商品名「YOFCO-MAC」：日本精化株式会社製）を８０℃で加熱溶解し、８０℃の５質量％の脱イオン水を加え、混合した後、４５〜５０℃まで冷却し、ニオソーム懸濁液を得た。
第２ステップ：０．４質量％のＳＤＭＡＰＡと、０．６質量％の５０％乳酸水溶液と、４質量％の脱イオン水とを７０〜８０℃で完全に溶解させた後、５０℃まで冷却し、ＳＤＭＡＰＡ水溶液を得た。
第３ステップ：第１ステップのニオソーム懸濁液へ第２ステップのＳＤＭＡＰＡ水溶液を４５〜５０℃で加え、混合した後、３０℃以下の室温まで冷却し、さらに８７質量％の脱イオン水を加え混合し、荷電ニオソーム懸濁液を得た。
【００８７】
（８−４）実施例１４
表１４は、脂質としてＧＤＳ−２３及びコレステロールエステルを用いた実施例１４の調製方法の概略及び成分割合を示している。
【００８８】
【表１４】
2019059683.tif 000016
【００８９】
＜調製方法＞
第１ステップ：１．７９質量％のＧＤＳ−２３と、０．７質量％のマカダミアナッツ脂肪酸コレステリル（商品名「YOFCO-MAC」：日本精化株式会社製）を８０℃で加熱溶解し、８０℃の５質量％のカルセインＮａ含有水溶液（０．１質量％のカルセインＮａと４．９質量％の脱イオン水）を加え、混合し、黄褐色の粘性の高いニオソーム懸濁液を得た。
第２ステップ：０．４質量％のＳＤＭＡＰＡと、０．６質量％の５０％乳酸水溶液と、４質量％の脱イオン水とを７０〜８０℃で完全に溶解させた後、５０℃まで冷却し、ＳＤＭＡＰＡ水溶液を得た。
第３ステップ：第１ステップのニオソーム懸濁液へ第２ステップのＳＤＭＡＰＡ水溶液を加え穏やかに撹拌し、黄褐色の粘稠な溶液を得た後、８７．５１質量％の脱イオン水を加え穏やかに撹拌し、荷電ニオソーム懸濁液を得た。
【００９０】
＜実施例１４の経皮吸収試験結果＞
図１０は、実施例１４について、図６の実施例３、４と同じ条件の経皮吸収試験を行った結果を示すグラフである。高い皮膚浸透性と皮膚貯留性を有することが判る。
【００９１】
（８−５）実施例１５
脂質としてジステアリン酸グリセロールＰＥＧ−１２（以下「ＧＤＳ−１２」と略称）を用いた実施例１５の調製を行い、荷電ニオソーム懸濁液を得た。脂質の種類が異なる以外、成分割合は実施例１と同じであるので、成分表を省略する。実施例１５の荷電ニオソームは、ゼータ電位並びに外観及び光学顕微鏡観察に関して、実施例１の荷電ニオソームと同等であった（以下の実施例１６〜５４についても同様）。
＜調製方法＞
第１ステップ：２質量％のＧＤＳ−１２を５０〜６０℃で加熱溶解し、５０〜６０℃の５質量％の脱イオン水を加え、混合した後、４５〜５０℃まで冷却し、ニオソーム懸濁液を得た。
第２ステップ：０．４質量％のＳＤＭＡＰＡと、０．６質量％の５０％乳酸水溶液と、４質量％の脱イオン水とを７０〜８０℃で完全に溶解させた後、５０℃まで冷却し、ＳＤＭＡＰＡ水溶液を得た。
第３ステップ：第１ステップのニオソーム懸濁液へ第２ステップのＳＤＭＡＰＡ水溶液を４５〜５０℃で加え、混合した後、３０℃以下の室温まで冷却し、さらに８８質量％の脱イオン水を加え混合し、荷電ニオソーム懸濁液を得た。
【００９２】
（８−６）実施例１６
脂質としてジステアリン酸グリセロールＰＥＧ−２３（以下「ＧＤＳ−２３」と略称）を用いた実施例１６の調製を行い、荷電ニオソーム懸濁液を得た。脂質の種類が異なる以外、成分割合は実施例１と同じであるので、成分表を省略する。
＜調製方法＞
第１ステップ：２質量％のＧＤＳ−２３を５０〜６０℃で加熱溶解し、５０〜６０℃の５質量％の脱イオン水を加え、混合した後、４５〜５０℃まで冷却し、ニオソーム懸濁液を得た。
第２ステップ：０．４質量％のＳＤＭＡＰＡと、０．６質量％の５０％乳酸水溶液と、４質量％の脱イオン水とを７０〜８０℃で完全に溶解させた後、５０℃まで冷却し、ＳＤＭＡＰＡ水溶液を得た。
第３ステップ：第１ステップのニオソーム懸濁液へ第２ステップのＳＤＭＡＰＡ水溶液を４５〜５０℃で加え、混合した後、３０℃以下の室温まで冷却し、さらに８８質量％の脱イオン水を加え混合し、荷電ニオソーム懸濁液を得た。
【００９３】
（８−７）実施例１７〜２０
表１５は、脂質としてＧＤＭ−１２を用い、カチオン性界面活性剤としてＳＤＭＡＰＡを用いた実施例１７〜２０の調製方法の概略及び成分割合を示している。実施例１７〜２０は、第２ステップにおいてそれぞれ異なるｐＨ調整剤を用いた。
【００９４】
【表１５】
2019059683.tif 000017
【００９５】
＜調製方法＞
第１ステップ：室温にて、２質量％のＧＤＭ−１２へ５質量％の脱イオン水を加え、混合し、ニオソーム懸濁液を得た。
第２ステップ：０．４質量％のＳＤＭＡＰＡと表１５中の各質量％の各ｐＨ調整剤を、適温（実施例２０については８０℃）の各質量％の脱イオン水で完全に溶解させた後、３０℃以下の室温（実施例２０については６０℃）に冷却し、ＳＤＭＡＰＡ水溶液を得た。
第３ステップ：実施例１７〜１９については、第１ステップのニオソーム懸濁液へ第２ステップのカチオン性界面活性剤水溶液を（実施例２０については６０°で）加え、混合した後、８８質量％の脱イオン水を加え混合（実施例２０については４０〜５０℃で加え混合し、３０℃以下の室温に冷却）し、荷電ニオソーム懸濁液を得た。
【００９６】
（８−８）実施例２１〜２４
表１６は、脂質としてＧＤＭ−１２を用い、カチオン性界面活性剤としてステアリン酸ジエチルアミノエチルアミドを用いた実施例２１〜２４の調製方法の概略及び成分割合を示している。実施例２１〜２４は、第２ステップにおいてそれぞれ異なるｐＨ調整剤を用いた。
【００９７】
【表１６】
2019059683.tif 000018
【００９８】
＜調製方法＞
第１ステップ：実施例１７〜１９の第１ステップと同じ。
第２ステップ：０．４質量％のステアリン酸ジエチルアミノエチルアミドと表１６中の各質量％の各ｐＨ調整剤を、適温（実施例２４については８０℃）の各質量％の脱イオン水で完全に溶解させた後、３０℃以下の室温（実施例２４については６０℃）に冷却し、ステアリン酸ジエチルアミノエチルアミド水溶液を得た。
第３ステップ：実施例２１〜２３については、第１ステップのニオソーム懸濁液へ第２ステップのカチオン性界面活性剤水溶液を（実施例２４については６０°で）加え、混合後、８８質量％の脱イオン水を加え混合（実施例２４については４０〜５０℃で加え混合し、３０℃以下の室温に冷却）し、荷電ニオソーム懸濁液を得た。
【００９９】
（８−９）実施例２５〜２８
表１７は、脂質としてＧＤＭ−１２を用い、カチオン性界面活性剤としてココイルアルギニンエチルＰＣＡを用いた実施例２５〜２８の調製方法の概略及び成分割合を示している。実施例２５〜２８は、第２ステップにおいてそれぞれ異なるｐＨ調整剤を用いた。
【０１００】
【表１７】
2019059683.tif 000019
【０１０１】
＜調製方法＞
第１ステップ：実施例１７〜１９の第１ステップと同じ。
第２ステップ：１質量％のココイルアルギニンエチルＰＣＡと表１７中の各質量％の各ｐＨ調整剤を、適温（実施例２４については８０℃）の各質量％の脱イオン水で完全に溶解させた後、３０℃以下の室温（実施例２４については６０℃）に冷却し、ココイルアルギニンエチルＰＣＡ水溶液を得た。
第３ステップ：実施例２５〜２７については、第１ステップのニオソーム懸濁液へ第２ステップのカチオン性界面活性剤水溶液を（実施例２８については６０°で）加え、混合した後、８８質量％の脱イオン水を加え混合（実施例２８については４０〜５０℃で加え混合し、３０℃以下の室温に冷却）し、荷電ニオソーム懸濁液を得た。
【０１０２】
（８−１０）実施例２９
表１８は、脂質としてＧＤＭ−１２を用い、カチオン性界面活性剤として塩化パルミタミドプロピルトリメチルアンモニウムを用いた実施例２９の調製方法の概略及び成分割合を示している。
【０１０３】
【表１８】
2019059683.tif 000020
【０１０４】
＜調製方法＞
第１ステップ：実施例１７〜１９の第１ステップと同じ。
第２ステップ：０．９質量％の塩化パルミタミドプロピルトリメチルアンモニウムと１．２質量％の５０％乳酸水溶液を、適温の２．９質量％の脱イオン水で完全に溶解させた後、３０℃以下の室温に冷却し、塩化パルミタミドプロピルトリメチルアンモニウム水溶液を得た。
第３ステップ：第１ステップのニオソーム懸濁液へ第２ステップのカチオン性界面活性剤水溶液を加え、混合した後、８８質量％の脱イオン水を加え混合し、荷電ニオソーム懸濁液を得た。
【０１０５】
（８−１１）実施例３０
表１９は、脂質としてＧＤＭ−１２を用い、カチオン性界面活性剤としてセトリモニウムクロリドを用いた実施例３０の調製方法の概略及び成分割合を示している。
【表１９】
2019059683.tif 000021
【０１０６】
＜調製方法＞
第１ステップ：実施例１７〜１９の第１ステップと同じ。
第２ステップ：０．４質量％のセトリモニウムクロリドと０．６質量％の５０％乳酸水溶液を、適温の４質量％の脱イオン水で完全に溶解させた後、３０℃以下の室温に冷却し、セトリモニウムクロリド水溶液を得た。
第３ステップ：第１ステップのニオソーム懸濁液へ第２ステップのカチオン性界面活性剤水溶液を加え、混合した後、８８質量％の脱イオン水を加え混合し、荷電ニオソーム懸濁液を得た。
【０１０７】
（８−１２）実施例３１、３２
表２０は、脂質としてＧＤＭ−１２を用い、カチオン性界面活性剤としてセトリモニウムクロリドを用いた実施例３１、３２の調製方法の概略及び成分割合を示している。実施例３１、３２は、第２ステップにおいてそれぞれ異なるｐＨ調整剤を用いた。また第２ステップにおいてエタノールを用いた。
【０１０８】
【表２０】
2019059683.tif 000022
＜調製方法＞
第１ステップ：実施例１７〜１９の第１ステップと同じ。
第２ステップ：０．４質量％のセトリモニウムクロリドと表２０中の各質量％の各ｐＨ調整剤を、０．３質量％のエタノール及び適温の各質量％の脱イオン水で完全に溶解させた後、３０℃以下の室温に冷却し、セトリモニウムクロリド水溶液を得た。
第３ステップ：第１ステップのニオソーム懸濁液へ第２ステップのカチオン性界面活性剤水溶液を加え、混合した後、８８質量％の脱イオン水を加え混合し、荷電ニオソーム懸濁液を得た。
【０１０９】
（８−１３）実施例３３
表２１は、脂質としてＧＤＭ−１２を用い、カチオン性界面活性剤としてベヘントリモニウムクロリドを用いた実施例３３の調製方法の概略及び成分割合を示している。
【０１１０】
【表２１】
2019059683.tif 000023
【０１１１】
＜調製方法＞
第１ステップ：実施例１７〜１９の第１ステップと同じ。
第２ステップ：０．４質量％のベヘントリモニウムクロリドと０．８質量％の５０％乳酸水溶液を、０．１質量％のエタノール及び８０℃の３．７質量％の脱イオン水で完全に溶解させた後、３０℃以下の室温に冷却し、ベヘントリモニウムクロリド水溶液を得た。
第３ステップ：第１ステップのニオソーム懸濁液へ第２ステップのカチオン性界面活性剤水溶液を８０℃で加え、混合した後、６０〜７０℃の８８質量％の脱イオン水を加え混合し、荷電ニオソーム懸濁液を得た。
【０１１２】
（８−１４）実施例３４
表２２は、脂質としてＧＤＭ−１２を用い、カチオン性界面活性剤としてベンザルコニウムクロリドを用いた実施例３４の調製方法の概略及び成分割合を示している。
【０１１３】
【表２２】
2019059683.tif 000024
【０１１４】
＜調製方法＞
第１ステップ：実施例１７〜１９の第１ステップと同じ。
第２ステップ：０．４質量％のベンザルコニウムクロリドと０．６質量％の５０％乳酸水溶液を、適温の４質量％の脱イオン水で完全に溶解させた後、３０℃以下の室温に冷却し、ベンザルコニウムクロリド水溶液を得た。
第３ステップ：第１ステップのニオソーム懸濁液へ第２ステップのカチオン性界面活性剤水溶液を加え、混合した後、８８質量％の脱イオン水を加え混合し、荷電ニオソーム懸濁液を得た。
【０１１５】
（８−１５）実施例３５、３６
表２３は、脂質としてＧＤＭ−１２を用い、カチオン性界面活性剤としてエチル硫酸ラノリン脂肪酸アミノプロピルエチルジメチルアンモニウム（以下、「クオタニウム−３３」と称する）を用いた実施例３５、３６の調製方法の概略及び成分割合を示している。実施例３５、３６は、第２ステップにおいてそれぞれ異なるｐＨ調整剤を用いた。また、第２ステップでＤＰＧ（ジプロピレングリコール）を用いた。
【０１１６】
【表２３】
2019059683.tif 000025
【０１１７】
＜調製方法＞
第１ステップ：実施例１７〜１９の第１ステップと同じ。
第２ステップ：０．４質量％のクオタニウム−３３と表２３中の各質量％の各ｐＨ調整剤を、０．４質量％のＤＰＧ及び適温の各質量％の脱イオン水で完全に溶解させた後、３０℃以下の室温に冷却し、クオタニウム−３３水溶液を得た。
第３ステップ：第１ステップのニオソーム懸濁液へ第２ステップのカチオン性界面活性剤水溶液を加え、混合した後、８８質量％の脱イオン水を加え混合し、荷電ニオソーム懸濁液を得た。
【０１１８】
（８−１６）実施例３７
表２４は、脂質としてＧＤＳ−１２を用い、カチオン性界面活性剤としてセトリモニウムクロリドを用いた実施例３７の調製方法の概略及び成分割合を示している。
【０１１９】
【表２４】
2019059683.tif 000026
【０１２０】
＜調製方法＞
第１ステップ：２質量％のGDS-12を４５〜５５℃で溶解させ、４５〜５５℃の５質量％の脱イオン水を加え、混合し、４５℃〜５０℃のニオソーム懸濁液を得た。
第２ステップ：０．４質量％のセトリモニウムクロリドと０．８質量％の５０％乳酸水溶液、０．３質量％のエタノールを適温の３．５質量％の脱イオン水で完全に溶解させた後、４５℃〜５０℃へ加温し、セトリモニウムクロリド水溶液を得た。
第３ステップ：第１ステップのニオソーム懸濁液へ第２ステップのカチオン性界面活性剤水溶液を４５〜５０℃で加え、混合した後、４５〜５０℃の８８質量％の脱イオン水を加え混合し、３０℃以下の室温へ冷却、荷電ニオソーム懸濁液を得た。
【０１２１】
（８−１７）実施例３８
表２５は、脂質としてＧＤＳ−１２を用い、カチオン性界面活性剤としてクオタニウム−３３を用いた実施例３８の調製方法の概略及び成分割合を示している。
【０１２２】
【表２５】
2019059683.tif 000027
【０１２３】
＜調製方法＞
第１ステップ：実施例３７の第１ステップと同じ。
第２ステップ：０．４質量％のクオタニウム−３３と０．８質量％の５０％乳酸水溶液、０．４質量％のＤＰＧを適温の３．４質量％の脱イオン水で完全に溶解させた後、４５℃〜５０℃へ加温し、クオタニウム−３水溶液を得た。
第３ステップ：第１ステップのニオソーム懸濁液へ第２ステップのカチオン性界面活性剤水溶液を４５〜５０℃で加え、混合した後、４５〜５０℃の８８質量％の脱イオン水を加え混合し、３０℃以下の室温へ冷却、荷電ニオソーム懸濁液を得た。
【０１２４】
（８−１８）実施例３９〜４２
表２６は、脂質としてＧＤＳ−２３を用い、カチオン性界面活性剤としてココイルアルギニンエチルＰＣＡを用いた実施例３９〜４２の調製方法の概略及び成分割合を示している。実施例３９〜４２は、第２ステップにおいてそれぞれ異なるｐＨ調整剤を用いた。
【０１２５】
【表２６】
2019059683.tif 000028
【０１２６】
＜調製方法＞
第１ステップ：２質量％のＧＤＳ−２３を４５〜５５℃で溶解させ、４５〜５５℃の５質量％の脱イオン水を加え、混合し、４５℃〜５０℃のニオソーム懸濁液を得た。
第２ステップ：０．４質量％のココイルアルギニンエチルＰＣＡと表２６中の各質量％の各ｐＨ調整剤を適温（実施例４２については８０℃）の各質量％の脱イオン水で完全に溶解させた後、４５℃〜５０℃へ調整（実施例４２については６０℃まで冷却）し、ココイルアルギニンエチルＰＣＡ水溶液を得た。
第３ステップ：第１ステップのニオソーム懸濁液へ第２ステップのカチオン性界面活性剤水溶液を４５〜５０℃（実施例４２については６０℃）で加え、混合した後、４５〜５０℃の８８質量％の脱イオン水を加え混合し、３０℃以下の室温へ冷却、荷電ニオソーム懸濁液を得た。
【０１２７】
（８−１９）実施例４３〜４５
表２７は、脂質としてＧＤＳ−２３を用い、カチオン性界面活性剤としてステアリン酸ジメチルアミノプロピルアミド（以下、「アミドアミンＭＰＳ」と称する）を用いた実施例４３〜４５の調製方法の概略及び成分割合を示している。実施例４３〜４５は、第２ステップにおいてそれぞれ異なるｐＨ調整剤を用いた。
【０１２８】
【表２７】
2019059683.tif 000029
【０１２９】
＜調製方法＞
第１ステップ：実施例３９〜４２の第１ステップと同じ。
第２ステップ：０．４質量％のアミドアミンＭＰＳと表２７中の各質量％の各ｐＨ調整剤を適温（実施例４４については８０℃）の各質量％の脱イオン水で完全に溶解させた後、４５℃〜５０℃へ調整（実施例４４については６０℃まで冷却）し、アミドアミンＭＰＳ水溶液を得た。
第３ステップ：第１ステップのニオソーム懸濁液へ第２ステップのカチオン性界面活性剤水溶液を４５〜５０℃（実施例４４については６０℃）で加え、混合した後、４５〜５０℃の８８質量％の脱イオン水を加え混合し、３０℃以下の室温へ冷却、荷電ニオソーム懸濁液を得た。
【０１３０】
（８−２０）実施例４６
表２８は、脂質としてＧＤＳ−２３を用い、カチオン性界面活性剤として塩化パルミタミドプロピルトリメチルアンモニウムを用いた実施例４６の調製方法の概略及び成分割合を示している。
【０１３１】
【表２８】
2019059683.tif 000030
【０１３２】
＜調製方法＞
第１ステップ：実施例３９〜４２の第１ステップと同じ。
第２ステップ：０．４質量％の塩化パルミタミドプロピルトリメチルアンモニウムと０．８質量％の５０％乳酸水溶液を適温の３．８質量％の脱イオン水で完全に溶解させた後、４５℃〜５０℃へ調整し、塩化パルミタミドプロピルトリメチルアンモニウム水溶液を得た。
第３ステップ：第１ステップのニオソーム懸濁液へ第２ステップのカチオン性界面活性剤水溶液を４５〜５０℃で加え、混合した後、４５〜５０℃の８８質量％の脱イオン水を加え混合し、３０℃以下の室温へ冷却、荷電ニオソーム懸濁液を得た。
【０１３３】
（８−２１）実施例４７〜４９
表２９は、脂質としてＧＤＳ−２３を用い、カチオン性界面活性剤としてセトリモニウムクロリドを用いた実施例４７〜４９の調製方法の概略及び成分割合を示している。実施例４７〜４９は、第２ステップにおいてそれぞれ異なるｐＨ調整剤を用いた。また、第２ステップにおいてエタノールを用いた。
【０１３４】
【表２９】
2019059683.tif 000031
【０１３５】
＜調製方法＞
第１ステップ：実施例３９〜４２の第１ステップと同じ。
第２ステップ：０．４質量％のセトリモニウムクロリドと表２９中の各質量％の各ｐＨ調整剤を適温（実施例４８については８０℃）の各質量％の脱イオン水で完全に溶解させた後、４５℃〜５０℃へ調整（実施例４８については６０℃まで冷却）し、セトリモニウムクロリド水溶液を得た。
第３ステップ：第１ステップのニオソーム懸濁液へ第２ステップのカチオン性界面活性剤水溶液を４５〜５０℃（実施例４８については６０℃）で加え、混合した後、４５〜５０℃の８８質量％の脱イオン水を加え混合し、３０℃以下の室温へ冷却、荷電ニオソーム懸濁液を得た。
【０１３６】
（８−２２）実施例５０
表３０は、脂質としてＧＤＳ−２３を用い、カチオン性界面活性剤としてステアトリモニウムクロリドを用いた実施例５０の調製方法の概略及び成分割合を示している。第２ステップにおいてエタノールを用いた。
【０１３７】
【表３０】
2019059683.tif 000032
【０１３８】
＜調製方法＞
第１ステップ：実施例３９〜４２の第１ステップと同じ。
第２ステップ：０．４質量％のステアトリモニウムクロリドと０．６質量％の５０％乳酸水溶液、０．３質量％のエタノールを適温の３．７質量％の脱イオン水で完全に溶解させた後、４５℃〜５０℃へ調製し、ステアトリモニウムクロリド水溶液を得た。
第３ステップ：第１ステップのニオソーム懸濁液へ第２ステップのカチオン性界面活性剤水溶液を４５〜５０℃で加え、混合した後、４５〜５０℃の８８質量％の脱イオン水を加え混合し、３０℃以下の室温へ冷却、荷電ニオソーム懸濁液を得た。
【０１３９】
（８−２３）実施例５１
表３１は、脂質としてＧＤＳ−２３を用い、カチオン性界面活性剤としてベヘントリモニウムクロリドを用いた実施例５１の調製方法の概略及び成分割合を示している。第２ステップにおいてエタノールを用いた。
【０１４０】
【表３１】
2019059683.tif 000033
【０１４１】
＜調製方法＞
第１ステップ：実施例３９〜４２の第１ステップと同じ。
第２ステップ：０．４質量％のベヘントリモニウムクロリドと０．８質量％の５０％乳酸水溶液、０．１質量％のエタノールを適温の３．７質量％の脱イオン水で完全に溶解させた後、４５℃〜５０℃へ調製し、ベヘントリモニウムクロリド水溶液を得た。
第３ステップ：第１ステップのニオソーム懸濁液へ第２ステップのカチオン性界面活性剤水溶液を４５〜５０℃で加え、混合した後、４５〜５０℃の８８質量％の脱イオン水を加え混合し、３０℃以下の室温へ冷却、荷電ニオソーム懸濁液を得た。
【０１４２】
（８−２４）実施例５２
表３２は、脂質としてＧＤＳ−２３を用い、カチオン性界面活性剤としてベンザムコニウムクロリドを用いた実施例５２の調製方法の概略及び成分割合を示している。
【表３２】
2019059683.tif 000034
【０１４３】
＜調製方法＞
第１ステップ：実施例３９〜４２の第１ステップと同じ。
第２ステップ：０．４質量％のベンザムコニウムクロリドと０．６質量％の５０％乳酸水溶液を適温の４質量％の脱イオン水で完全に溶解させた後、４５℃〜５０℃へ調製し、ベンザムコニウムクロリド水溶液を得た。
第３ステップ：第１ステップのニオソーム懸濁液へ第２ステップのカチオン性界面活性剤水溶液を４５〜５０℃で加え、混合した後、４５〜５０℃の８８質量％の脱イオン水を加え混合し、３０℃以下の室温へ冷却、荷電ニオソーム懸濁液を得た。
【０１４４】
（８−２５）実施例５３、５４
表３３は、脂質としてＧＤＳ−２３を用い、カチオン性界面活性剤としてクオタニウム−３を用いた実施例５３、５４の調製方法の概略及び成分割合を示している。第２ステップにおいてＤＰＧを用いた。
【０１４５】
【表３３】
2019059683.tif 000035
【０１４６】
＜調製方法＞
第１ステップ：実施例３９〜４２の第１ステップと同じ。
第２ステップ：０．４質量％のクオタニウム−３と表３３中の各質量％のｐＨ調整剤、０．４質量％のＤＰＧを適温（実施例５４については８０℃）の各質量％の脱イオン水で完全に溶解させた後、４５℃〜５０℃へ調整（実施例５４については６０℃まで冷却）し、クオタニウム−３水溶液を得た。
第３ステップ：第１ステップのニオソーム懸濁液へ第２ステップのカチオン性界面活性剤水溶液を４５〜５０℃（実施例５４については６０℃）で加え、混合した後、４５〜５０℃の８８質量％の脱イオン水を加え混合し、３０℃以下の室温へ冷却、荷電ニオソーム懸濁液を得た。
【０１４７】
以上、実施例を参照して本発明を説明したが、本発明はこれらの実施例に限られるものではなく、これらから自明の変形例も本発明に含まれる。
【符号の説明】
【０１４８】
１  グリセロール骨格部分
２  親水性部分
３  疎水性部分
４  親水性部分
５  疎水性部分
【図１】
2019059683.tif 000036
【図２】
2019059683.tif 000037
【図３】
2019059683.tif 000038
【図４】
2019059683.tif 000039
【図５】
2019059683.tif 000040
【図６】
2019059683.tif 000041
【図７】
2019059683.tif 000042
【図８】
2019059683.tif 000043
【図９】
2019059683.tif 000044
【図１０】
2019059683.tif 000045
【手続補正書】
【提出日】平成30年1月18日(2018.1.18)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
正に帯電した荷電ニオソームの調製方法であって、
ジアシルグリセロールＰＥＧ付加物を少なくとも含む脂質を、該脂質が液体状態をとり得る温度にて所定の水溶液と混合し、該脂質が自発的にニオソームを形成することにより、ニオソームの懸濁液を調製するステップと、
脂肪族アミン、脂肪族又は脂肪族アミド第４級アンモニウム塩、脂肪族アミドアミン及びアシルアミノ酸誘導体からなる群から選択された１又は複数のカチオン性界面活性剤であってその疎水性部分に炭素数１１〜２１の飽和又は不飽和の直鎖型炭化水素基を有する該カチオン性界面活性剤を、酸性水溶液と混合することにより、カチオン性界面活性剤水溶液を調製するステップと、
前記ニオソームの懸濁液と、前記カチオン性界面活性剤水溶液とを混合し、前記カチオン性界面活性剤がその親水性部分に正電荷をもって前記ニオソームの表面を修飾することにより、荷電ニオソームの懸濁液を調製するステップと、を有し、
前記ジアシルグリセロールＰＥＧ付加物が、ジオレイン酸グリセロールＰＥＧ−１２、ジミリスチン酸グリセロールＰＥＧ−１２、ジパルミチン酸グリセロールＰＥＧ−２３、ジステアリン酸グリセロールＰＥＧ−１２、及びジステアリン酸グリセロールＰＥＧ−２３からなる群から選択された１又は複数のものであり、
前記カチオン性界面活性剤である脂肪族アミンが、テトラデシルアミン、パルミチルアミン、ステアリルアミン、オレイルアミン、リノレイルアミン、ベヘニルアミン、Ｎ，Ｎ−ジメチルドデシルアミン及びＮ，Ｎ−ジメチル−ｎ−オクタデシルアミンからなる群から選択された１又は複数のものであり、
前記カチオン性界面活性剤である脂肪族又は脂肪族アミド第４級アンモニウム塩が、塩化テトラデシルトリメチルアンモニウム、塩化セチルトリメチルアンモニウム、塩化ステアリルトリメチルアンモニウム、塩化ベヘニルトリメチルアンモニウム及び塩化パルミタミドプロピルトリメチルアンモニウムからなる群から選択された１又は複数のものであり、
前記カチオン性界面活性剤である脂肪族アミドアミンが、ミリスチン酸ジエチルアミノエチルアミド、ミリスチン酸ジメチルアミノエチルアミド、ミリスチン酸ジメチルアミノプロピルアミド、ミリスチン酸ジエチルアミノプロピルアミド、パルミチン酸ジエチルアミノエチルアミド、パルミチン酸ジメチルアミノエチルアミド、パルミチン酸ジメチルアミノプロピルアミド、パルミチン酸ジエチルアミノプロピルアミド、ステアリン酸ジエチルアミノエチルアミド、ステアリン酸ジメチルアミノエチルアミド、ステアリン酸ジメチルアミノプロピルアミド、ステアリン酸ジエチルアミノプロピルアミド、ベヘニン酸ジエチルアミノエチルアミド、ベヘニン酸ジメチルアミノエチルアミド、ベヘニン酸ジメチルアミノプロピルアミド及びベヘニン酸ジエチルアミノプロピルアミドからなる群から選択された１又は複数のものであり、
前記カチオン性界面活性剤であるアシルアミノ酸誘導体が、ココイルアルギニンエチルＰＣＡであることを特徴とする
荷電ニオソームの調製方法。
【請求項２】
前記カチオン性界面活性剤水溶液を調製するための酸性水溶液が、ｐＨ４又はそれ以下であることを特徴とする
請求項１に記載の荷電ニオソームの調製方法。
【請求項３】
正に帯電した荷電ニオソームであって、
ジオレイン酸グリセロールＰＥＧ−１２、ジミリスチン酸グリセロールＰＥＧ−１２、ジパルミチン酸グリセロールＰＥＧ−２３、ジステアリン酸グリセロールＰＥＧ−１２、及びジステアリン酸グリセロールＰＥＧ−２３からなる群から選択された１又は複数のジアシルグリセロールＰＥＧ付加物を少なくとも含む脂質を構成成分としかつ所定の水溶液を封入したニオソームと、
親水性部分に正電荷をもって前記ニオソームの表面を修飾するカチオン性界面活性剤と、を有し、
前記カチオン性界面活性剤が、脂肪族アミン、脂肪族アミドアミン及びアシルアミノ酸誘導体からなる群から選択された１又は複数のカチオン性界面活性剤であってその疎水性部分に炭素数１１〜２１の１本の飽和又は不飽和の直鎖型炭化水素基を含むことを特徴とする
荷電ニオソーム。
【請求項４】
請求項３に記載の荷電ニオソームを含むローション製剤、乳液製剤、ジェル製剤又はクリーム製剤である荷電ニオソーム含有製品。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１０】
上記の目的を達成するために本発明は、以下の構成を提供する。
・  本発明の態様の一つは、正に帯電した荷電ニオソームの調製方法であって、
ジアシルグリセロールＰＥＧ付加物を少なくとも含む脂質を、該脂質が液体状態をとり得る温度にて所定の水溶液と混合し、該脂質が自発的にニオソームを形成することにより、ニオソームの懸濁液を調製するステップと、
脂肪族アミン、脂肪族又は脂肪族アミド第４級アンモニウム塩、脂肪族アミドアミン及びアシルアミノ酸誘導体からなる群から選択された１又は複数のカチオン性界面活性剤であってその疎水性部分に炭素数１１〜２１の飽和又は不飽和の直鎖型炭化水素基を有する該カチオン性界面活性剤を、酸性水溶液と混合することにより、カチオン性界面活性剤水溶液を調製するステップと、
前記ニオソームの懸濁液と、前記カチオン性界面活性剤水溶液とを混合し、前記カチオン性界面活性剤がその親水性部分に正電荷をもって前記ニオソームの表面を修飾することにより、荷電ニオソームの懸濁液を調製するステップと、を有し、
前記ジアシルグリセロールＰＥＧ付加物が、ジオレイン酸グリセロールＰＥＧ−１２、ジミリスチン酸グリセロールＰＥＧ−１２、ジパルミチン酸グリセロールＰＥＧ−２３、ジステアリン酸グリセロールＰＥＧ−１２、及びジステアリン酸グリセロールＰＥＧ−２３からなる群から選択された１又は複数のものである。
・  上記態様において、前記カチオン性界面活性剤である脂肪族アミンが、テトラデシルアミン、パルミチルアミン、ステアリルアミン、オレイルアミン、リノレイルアミン、ベヘニルアミン、Ｎ，Ｎ−ジメチルドデシルアミン及びＮ，Ｎ−ジメチル−ｎ−オクタデシルアミンからなる群から選択された１又は複数のものであり、
前記カチオン性界面活性剤である脂肪族又は脂肪族アミド第４級アンモニウム塩が、塩化テトラデシルトリメチルアンモニウム、塩化セチルトリメチルアンモニウム、塩化ステアリルトリメチルアンモニウム、塩化ベヘニルトリメチルアンモニウム及び塩化パルミタミドプロピルトリメチルアンモニウムからなる群から選択された１又は複数のものであり、
前記カチオン性界面活性剤である脂肪族アミドアミンが、ミリスチン酸ジエチルアミノエチルアミド、ミリスチン酸ジメチルアミノエチルアミド、ミリスチン酸ジメチルアミノプロピルアミド、ミリスチン酸ジエチルアミノプロピルアミド、パルミチン酸ジエチルアミノエチルアミド、パルミチン酸ジメチルアミノエチルアミド、パルミチン酸ジメチルアミノプロピルアミド、パルミチン酸ジエチルアミノプロピルアミド、ステアリン酸ジエチルアミノエチルアミド、ステアリン酸ジメチルアミノエチルアミド、ステアリン酸ジメチルアミノプロピルアミド、ステアリン酸ジエチルアミノプロピルアミド、ベヘニン酸ジエチルアミノエチルアミド、ベヘニン酸ジメチルアミノエチルアミド、ベヘニン酸ジメチルアミノプロピルアミド及びベヘニン酸ジエチルアミノプロピルアミドからなる群から選択された１又は複数のものであり、
前記カチオン性界面活性剤であるアシルアミノ酸誘導体が、ココイルアルギニンエチルＰＣＡであることを特徴とする。
・  上記態様において、前記カチオン性界面活性剤水溶液を調製するための酸性水溶液が、ｐＨ４又はそれ以下であることが、好適である。
・  本発明の別の態様は、正に帯電した荷電ニオソームであって、
ジオレイン酸グリセロールＰＥＧ−１２、ジミリスチン酸グリセロールＰＥＧ−１２、ジパルミチン酸グリセロールＰＥＧ−２３、ジステアリン酸グリセロールＰＥＧ−１２、及びジステアリン酸グリセロールＰＥＧ−２３からなる群から選択された１又は複数のジアシルグリセロールＰＥＧ付加物を少なくとも含む脂質を構成成分としかつ所定の水溶液を封入したニオソームと、
親水性部分に正電荷をもって前記ニオソームの表面を修飾するカチオン性界面活性剤と、を有し、
前記カチオン性界面活性剤が、脂肪族アミン、脂肪族第４級アンモニウム塩及び脂肪族アミドアミンからなる群から選択された１又は複数のカチオン性界面活性剤であってその疎水性部分に炭素数１３〜２１の１本の飽和又は不飽和の直鎖型炭化水素基を含むことを特徴とする。また、この態様の荷電ニオソームを含む荷電ニオソーム含有製品が、ローション製剤、乳液製剤、ジェル製剤又はクリーム製剤である。