(57)【要約】      （修正有）【課題】豚の筋肉内脂肪沈着を同定するためのＬｎｃＲＮＡバイオマーカー、及び試薬の提供。【解決手段】豚の筋肉内脂肪沈着を同定するＬｎｃＲＮＡバイオマーカーであって、特定の配列Ｌｎｃ−２２９８８、Ｌｎｃ−３１１０４、および、Ｌｎｃ−４５０８８６のうちの１つ、２つまたは全てを含む、ことを特徴とする、バイオマーカー。豚の筋肉脂肪沈着を同定する試薬であって、Ｌｎｃ−２２９８８、Ｌｎｃ−３１１０４およびＬｎｃ−４５０８８６のうちの１つ、２つまたは全てを増幅するためのプライマーの組み合わせを含む。【選択図】図１
2019208488.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
豚の筋肉内脂肪沈着を同定するＬｎｃＲＮＡバイオマーカーであって、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１に示すＬｎｃ−２２９８８、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２に示すＬｎｃ−３１１０４、および、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：３に示すＬｎｃ−４５０８８６のうちの１つ、２つまたは全てを含む、ことを特徴とする、
豚の筋肉内脂肪沈着を同定するＬｎｃＲＮＡバイオマーカー。
【請求項２】
Ｌｎｃ−１１０７５、Ｌｎｃ−１１１１１、Ｌｎｃ−１６５５５６、Ｌｎｃ−１９１６３７、Ｌｎｃ−２５７２８３、ＴＣＯＮＳ＿００３７２２８９、およびＬｎｃ−４８２２８６のうちの１つまたは複数を含む、ことを特徴とする、
請求項１に記載のＬｎｃＲＮＡバイオマーカー。
【請求項３】
前記豚の筋肉内脂肪は、基本的に豚背最長筋である、ことを特徴とする、
請求項１に記載のＬｎｃＲＮＡバイオマーカー。
【請求項４】
豚の筋肉脂肪沈着を同定する試薬であって、Ｌｎｃ−２２９８８、Ｌｎｃ−３１１０４およびＬｎｃ−４５０８８６のうちの１つ、２つまたは全てを増幅するためのプライマーの組み合わせを含む、ことを特徴とする、
豚の筋肉脂肪沈着を同定する試薬。
【請求項５】
Ｌｎｃ−２２９８８を増幅するプライマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１１に示すプレプライマー、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１２に示すポストプライマーを含み、Ｌｎｃ−３１１０４を増幅するプライマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１３に示すプレプライマー、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１４に示すポストプライマーを含み、Ｌｎｃ−４５０８８６を増幅するプライマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１５に示すプレプライマー、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１６に示すポストプライマーを含む、ことを特徴とする、
請求項４に記載の試薬。
【請求項６】
Ｌｎｃ−１１０７５プライマー、Ｌｎｃ−１１１１１プライマー、Ｌｎｃ−１６５５５６プライマー、Ｌｎｃ−１９１６３７プライマー、Ｌｎｃ−２５７２８３プライマー、ＴＣＯＮＳ＿００３７２２８９プライマー、およびＬｎｃ−４８２２８６プライマーを含む、ことを特徴とする、
請求項４に記載の試薬。
【請求項７】
前記Ｌｎｃ−１１０７５プライマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１７に示すプレプライマー、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１８に示すポストプライマーを含み、前記Ｌｎｃ−１１１１１プライマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１９に示すプレプライマー、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２０に示すポストプライマーを含み、前記Ｌｎｃ−１６５５５６プライマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２１に示すプレプライマー、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２２に示すポストプライマーを含み、前記Ｌｎｃ−１９１６３７プライマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２３に示すプレプライマー、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２４に示すポストプライマーを含み、前記Ｌｎｃ−２５７２８３プライマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２５に示すプレプライマー、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２６に示すポストプライマーを含み、前記ＴＣＯＮＳ＿００３７２２８９プライマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２７に示すプレプライマー、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２８に示すポストプライマーを含み、前記Ｌｎｃ−４８２２８６プライマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２９に示すプレプライマー、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：３０に示すポストプライマーを含む、ことを特徴とする、
請求項６に記載の試薬。
【請求項８】
異なる筋肉品質の豚の選択における適用、豚肉品質の予測または予測の支援における適用、または豚肉品質の予測または予測支援の薬剤の調製における適用である、ことを特徴とする、
請求項４〜７のいずれか１項に記載の試薬。
【請求項９】
豚の筋肉内脂肪沈着を同定する方法であって、
（１）測定すべき豚由来の生物学的サンプルを分析して、前記サンプル中の１つ以上のバイオマーカーのレベルを決定し、
（２）前記サンプル中の１つまたは複数のバイオマーカーのレベルを、前記１つまたは複数のバイオマーカーの正および／または負の参照レベルと比較して、測定すべき豚の筋肉脂肪沈着状況を同定する、ことを含み、
このうち、前記１つまたは複数のバイオマーカーは、請求項１〜２のいずれか１項に記載のＬｎｃＲＮＡバイオマーカーおよびその組み合わせから選択される、ことを特徴とする、
豚の筋肉内脂肪沈着を同定する方法。
【請求項１０】
豚の筋肉内脂肪沈着を同定するチップであって、固相担体および固相担体上に固定化された請求項１〜２のいずれか１項に記載のＬｎｃＲＮＡバイオマーカーのプローブを含む、ことを特徴とする、
豚の筋肉内脂肪沈着を同定するチップ。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、豚の筋肉内脂肪沈着を同定するためのＬｎｃＲＮＡバイオマーカー、試薬、チップおよび方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
人々の生活水準の向上に伴い、豚肉の品質はますます注目を集め、筋肉内脂肪は１つの重要な指標として、肉の柔らかさ、保水能力、せん断強さ、風味およびジューシー感に影響する。多くの研究により、２％〜３％の筋肉内脂肪含有量は、豚肉の理想的な基準である（Ｂｕｃｈら、２０１６）。筋肉内脂肪含量が２％未満であるとき、肉の質感および味が悪く、３％より高いとき、肉の風味はもはや改善されない（Ｐａｔｒｉｃｉ、１９８５）。
【０００３】
脂肪組織沈着の代謝プロセスは、関連遺伝子の時間的および空間的特異的発現によって制御され、高度遺伝的形質に属する（Ｇｊｅｒｌａｕｇ−Ｅｎｇｅｒ  ｅｔら、２０１０）。このうち、豚の脂肪代謝に影響する関連遺伝子は、脂肪酸結合タンパク質遺伝子（Ｃｈｏら、２０１１；Ｃｈｅｎら、２０１４）、肥満遺伝子（Ｈａｒｒｉｓ、２０１３）、リポタンパク質リパーゼ遺伝子（Ｍｕｒａｓｅら、２０１４）、ホルモン感受性リパーゼ遺伝子（Ｗａｔｔら、２００６）などがあり、いずれも豚の筋肉内脂肪沈着を研究する候補遺伝子とすることができる。しかしながら、豚の体脂肪組成の遺伝的相違に関連する遺伝子が多く、遺伝子調節機構が複雑であり、常に遺伝学と育種領域の研究における問題の１つである。豚胴体性状に関連する脂肪代謝プロセス中のいくつかの酵素遺伝子、ホルモンおよび受容体遺伝子、サイトカイン、および結合タンパク質遺伝子などが既にスクリーニングされたが、効果顕著性検出の遺伝子型およびＱＴＬの増加に伴い、主要遺伝子の実際の同定、調節およびその適用はますます複雑になる。現在、豚の筋肉内脂肪沈着の同定の実施において、依然として機能が明確で、効果が顕著であるバイオマーカーが不足である。
【０００４】
長鎖非コードＲＮＡ（Ｌｏｎｇ  ｎｏｎｃｏｄｉｎｇ  ＲＮＡ、ＬｎｃＲＮＡ）は、動物および植物中に広く存在する２００ｎｔ以上の長さを有する遺伝子発現調節分子である。ＬｎｃＲＮＡは、筋肉発達および筋肉内脂肪沈着においても重要な役割を果たす（Ｓｍｏｌｌｅ  ａｎｄ  Ｈａｙｂａｅｃｋ、２０１４）。哺乳動物から最初のＬｎｃＲＮＡ、すなわちＬｎｃＲＮＡＨ１９（Ｈｕｍａｎ  ｈｏｍｏｌｏｇｕｅ）を発見した後、世界中の科学者はＬｎｃＲＮＡに関する広範な研究を行う（Ｐｒａｖｔｃｈｅｖａ  ａｎｄ  Ｗｉｓｅ、１９９８）。しかしながら、豚の筋肉内脂肪沈着におけるＬｎｃＲＮＡの適用はまだ報告されていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】中国特許出願公開第105063021号明細書
【特許文献１】中国特許出願公開第102559890号明細書
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
従来技術に存在する問題に対して、本発明者らは、筋肉および脂肪組織に特異的に存在する３つのＬｎｃＲＮＡ（Ｌｎｃ−２２９８８、Ｌｎｃ−３１１０４、およびＬｎｃ−４５０８８６）を同定し、脂肪代謝に関連する遺伝子と極めて顕著な関連性を有する。
【０００７】
本発明の目的は、豚の筋肉内脂肪沈着を同定するためのＬｎｃＲＮＡバイオマーカーを提供することであり、豚の筋肉内脂肪沈着の同定に新たな選択を提供し、かつ機能が明確であり、効果が顕著であり、感度と精度が高い利点を有する。
【０００８】
本発明の別の目的は、異なる筋肉品質の豚を飼育し、豚肉の品質を予測または予測を支援するためのＬｎｃＲＮＡバイオマーカーを提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明の一態様によれば、豚の筋肉内脂肪沈着を同定するためのＬｎｃＲＮＡバイオマーカーは、Ｌｎｃ−２２９８８、Ｌｎｃ−３１１０４、およびＬｎｃ−４５０８８６のうちの１つ、２つ、またはすべてを含む。
前記Ｌｎｃ−２２９８８の配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１に示し、
前記Ｌｎｃ−３１１０４の配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２に示し、そして
前記Ｌｎｃ−４５０８８６の配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：３に示す。
【００１０】
改善として、前記ＬｎｃＲＮＡバイオマーカーは、Ｌｎｃ−１１０７５、Ｌｎｃ−１１１１１、Ｌｎｃ−１６５５５６、Ｌｎｃ−１９１６３７、Ｌｎｃ−２５７２８３、ＴＣＯＮＳ＿００３７２２８９およびＬｎｃ−４８２２８６のうちの１つ以上をさらに含み得る。
前記Ｌｎｃ−１１０７５の配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：４に示し、
前記Ｌｎｃ−１１１１１の配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：５に示し、
前記Ｌｎｃ−１６５５５６の配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：６に示し、
前記Ｌｎｃ−１９１６３７の配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：７に示し、
前記Ｌｎｃ−２５７２８３の配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：８に示し、
前記ＴＣＯＮＳ＿００３７２２８９の配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：９に示し、そして
前記Ｌｎｃ−４８２２８６の配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１０に示す。
【００１１】
好ましく、前記豚の筋肉内脂肪は、主に豚背最長筋である。
【００１２】
本発明の別の目的は豚の筋肉内脂肪沈着を同定するための試薬を提供することであり、Ｌｎｃ−２２９８８、Ｌｎｃ−３１１０４およびＬｎｃ−４５０８８６のうちの１つ、２つまたは全てを増幅するためのプライマーを含む。
【００１３】
さらに、前記Ｌｎｃ−２２９８８プライマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１１に示す配列を有する定量ＰＣＲプレプライマー、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１２に示す配列を有する定量ＰＣＲポストプライマーを含み、Ｌｎｃ−３１１０４プライマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１３に示す配列を有する定量ＰＣＲプレプライマー、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１４に示す配列を有する定量ＰＣＲポストプライマーを含み、Ｌｎｃ−４５０８８６プライマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１５に示す配列を有する定量ＰＣＲプレプライマー、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１６に示す配列を有する定量ＰＣＲポストプライマーを含む。
【００１４】
本発明の一態様によれば、前記試薬はまた、Ｌｎｃ−１１０７５プライマー、Ｌｎｃ−１１１１１プライマー、Ｌｎｃ−１６５５５６プライマー、Ｌｎｃ−１９１６３７プライマー、Ｌｎｃ−２５７２８３プライマー、ＴＣＯＮＳ＿００３７２２８９プライマーおよびＬｎｃ−４８２２８６プライマーのうちの１つまたは複数を含むことができる。
【００１５】
さらに、前記Ｌｎｃ−１１０７５プライマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１７に示す配列を有する定量ＰＣＲプレプライマー、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１８に示す配列を有する定量ＰＣＲポストプライマーを含み、前記Ｌｎｃ−１１１１１プライマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１９に示す配列を有する定量ＰＣＲプレプライマー、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２０に示す配列を有する定量ＰＣＲポストプライマーを含み、前記Ｌｎｃ−１６５５５６プライマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２１に示す配列を有する定量ＰＣＲプレプライマー、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２２に示す配列を有する定量ＰＣＲポストプライマーを含み、前記Ｌｎｃ−１９１６３７プライマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２３に示す配列を有する定量ＰＣＲプレプライマー、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２４に示す配列を有する定量ＰＣＲポストプライマーを含み、前記Ｌｎｃ−２５７２８３プライマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２５に示す配列を有する定量ＰＣＲプレプライマー、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２６に示す配列を有する定量ＰＣＲポストプライマーを含み、前記ＴＣＯＮＳ＿００３７２２８９プライマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２７に示す配列を有する定量ＰＣＲプレプライマー、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２８に示す配列を有する定量ＰＣＲポストプライマーを含み、前記Ｌｎｃ−４８２２８６プライマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２９に示す配列を有する定量ＰＣＲプレプライマー、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：３０に示す配列を有する定量ＰＣＲポストプライマーを含む。
【００１６】
本発明は、さらに、豚の筋肉内脂肪沈着を同定するための試薬の以下の用途を含み、異なる筋肉品質の豚の選択における適用、豚肉品質の予測または予測の支援における適用、または豚肉品質の予測または予測支援の薬剤の調製における適用である。
【００１７】
本発明のさらなる目的は、豚の筋肉内脂肪沈着を同定する方法を提供することであり、（１）測定すべき豚由来の生物学的サンプルを分析して、前記サンプル中の１つ以上のバイオマーカーのレベルを決定し、（２）前記サンプル中の１つまたは複数のバイオマーカーのレベルを、前記１つまたは複数のバイオマーカーの正および／または負の参照レベルと比較して、測定すべき豚の筋肉脂肪沈着状況を同定することを含み、前記１つまたは複数のバイオマーカーは、上記ＬｎｃＲＮＡバイオマーカーおよびその組み合わせから選択される。
【００１８】
本発明の別のさらなる目的は、豚の筋肉内脂肪沈着を同定するためのＬｎｃＲＮＡチップを提供し、固相担体および固相担体上に固定化された前記のようなＬｎｃＲＮＡバイオマーカーのプローブを含む。
【００１９】
当業者は、経験に基づいて、関連するＬｎｃＲＮＡバイオマーカーを検出することができるプローブ、例えば当該技術分野で広く使用されている蛍光プローブなどを設計することができる。具体的には、前記蛍光プローブはオリゴヌクレオチドプローブであってもよく、前記オリゴヌクレオチドプローブはＬｎｃＲＮＡ配列の一部または全部に対応する。
【００２０】
Ｌｎｃ−３１１０４を例として、本発明の開示する豚の筋肉内脂肪沈着を同定するためのＬｎｃＲＮＡバイオマーカーの作用メカニズムを説明する。
Ｌｎｃ−３１１０４は、筋肉内脂肪沈着プロセスにおいて、下流のＦＳＰ２７遺伝子を調節して脂肪代謝を促進することができ、発明者らは、プレバイオインフォマティクス研究を通じて２７２Ｇの配列決定結果に対して詳細な分析を行い、スクリーニングにより、Ｌｎｃ−３１１０４がＦＳＰ２７の発現を顕著に調節し得るというシグナルが得られ、深度配列決定の結果に基づいて、Ｌｎｃ−３１１０４とＦＳＰ２７との間に相互結合が存在し、しかし、ＦＳＰ２７は脂質液滴形成を促進する役割を有し、Ｌｎｃ−３１１０４およびＦＳＰ２７は脂肪細胞の増殖および細胞形態の変化を調節することができ、第二に、発明者らは、Ｌｎｃ−３１１０４およびＦＳＰ２７の調節部位をバイオインフォマティクス法により予測し、徹底的な研究により、Ｌｎｃ−３１１０４がＦＳＰ２７を調節することは実際に脂肪代謝に関連することを開示する。
【００２１】
Ｌｎｃ−２２９８８、Ｌｎｃ−４５０８８６、Ｌｎｃ−１１０７５、Ｌｎｃ−１１１１１、Ｌｎｃ−１６５５５６、Ｌｎｃ−１９１６３７、Ｌｎｃ−２５７２８３、ＴＣＯＮＳ＿００３７２２８９およびＬｎｃ−４８２２８６を含む他のいくつかのＬｎｃＲＮＡバイオマーカーの作用メカニズムはＬｎｃ−３１１０４と同じであり、ｑＰＣＲおよびＷｅｓｔｅｒｎ  Ｂｌｏｔｔｉｎｇ技術を用いて、関連遺伝子が２頭の豚品種の複数の組織の転写レベルおよび翻訳レベル上に時空間的発現検出を行い、Ｌｎｃ−３１１０４、Ｌｎｃ−２２９８８、Ｌｎｃ−４５０８８６、Ｌｎｃ−１１０７５、Ｌｎｃ−１１１１１、Ｌｎｃ−１６５５５６、Ｌｎｃ−１９１６３７、Ｌｎｃ−２５７２８３、ＴＣＯＮＳ＿００３７２２８９、Ｌｎｃ−４８２２８６およびＦＳＰ２７が脂肪沈着代謝においていずれも極めて顕著な調節関係があることを得る。
【発明の効果】
【００２２】
本発明の有益な効果は以下のとおりである。本発明の豚の筋肉内脂肪沈着を同定するためのＬｎｃ−３１１０４、Ｌｎｃ−２２９８８、Ｌｎｃ−４５０８８６、Ｌｎｃ−１１０７５、Ｌｎｃ−１１１１１、Ｌｎｃ−１６５５５６、Ｌｎｃ−１９１６３７、Ｌｎｃ−２５７２８３、ＴＣＯＮＳ＿００３７２２８９およびＬｎｃ−４８２２８６という１０個のＬｎｃＲＮＡマーカーは、筋肉内脂肪沈着プロセスにおいて、下流のＦＳＰ２７遺伝子を調節して脂肪代謝を促進することができ、脂肪細胞可塑性の調節に関与する能力を有し、マーカーとして豚の筋肉内脂肪沈着を同定する使用することができ、異なる筋肉品質の豚を選択し、豚肉品質を予測または予測を支援し、豚肉品質の予測または予測支援の薬剤を調製するために用いられる。特に、Ｌｎｃ−３１１０４、Ｌｎｃ−２２９８８、Ｌｎｃ−４５０８８６という３つのＬｎｃＲＮＡを、単独でまたは組み合わせて使用すると時に検出効果が良好であり、他の７つのマーカーと組み合わせる時に効果がより高い。豚の筋肉内脂肪沈着を同定するプロセスにおいて、本発明のＬｎｃＲＮＡマーカーの検出の感度が高く、特異性がより高く、検出結果が迅速かつ客観的である。
【図面の簡単な説明】
【００２３】
【図１】図１は豚の一次線維芽細胞および一次筋肉脂肪細胞培養の結果である。
【図２】図２は２つの品種の異なる比較組み合わせ差異ＬｎｃＲＮＡ結果の分析である。
【図３】図３はＬｎｃ−３１１０４およびＦＳＰ２７の調節部位の予測結果である。
【図４Ａ】図４Ａは１０個のＬｎｃＲＮＡのシーケンシャル発現傾向の分析結果である。ここで、Ａ：Ｌｎｃ−３１１０４である。
【図４Ｂ】図４Ｂは１０個のＬｎｃＲＮＡのシーケンシャル発現傾向の分析結果である。ここで、Ｂ：Ｌｎｃ−２２９８８である。
【図４Ｃ】図４Ｃは１０個のＬｎｃＲＮＡのシーケンシャル発現傾向の分析結果である。ここで、Ｃ：Ｌｎｃ−４５０８８６である。
【図４Ｄ】図４Ｄは１０個のＬｎｃＲＮＡのシーケンシャル発現傾向の分析結果である。ここで、Ｄ：Ｌｎｃ−１１０７５である。
【図４Ｅ】図４Ｅは１０個のＬｎｃＲＮＡのシーケンシャル発現傾向の分析結果である。ここで、Ｅ：Ｌｎｃ−１１１１１である。
【図４Ｆ】図４Ｆは１０個のＬｎｃＲＮＡのシーケンシャル発現傾向の分析結果である。ここで、Ｆ：Ｌｎｃ−１６５５５６である。
【図４Ｇ】図４Ｇ は１０個のＬｎｃＲＮＡのシーケンシャル発現傾向の分析結果である。ここで、Ｇ：Ｌｎｃ−１９１６３７である。
【図４Ｈ】図４Ｈは１０個のＬｎｃＲＮＡのシーケンシャル発現傾向の分析結果である。ここで、Ｈ：Ｌｎｃ−２５７２８３である。
【図４Ｉ】図４Ｉは１０個のＬｎｃＲＮＡのシーケンシャル発現傾向の分析結果である。ここで、Ｉ：ＴＣＯＮＳ＿００３７２２８９である。
【図４Ｊ】図４Ｊは１０個のＬｎｃＲＮＡのシーケンシャル発現傾向の分析結果である。ここで、Ｊ：Ｌｎｃ−４８２２８６である。
【発明を実施するための形態】
【００２４】
実施例１
実験用豚グループの確立
発明者は、２０１５年から山西省大同市の養豚場で実験用豚グループ（馬体豚と大型白豚）の選抜と繁殖を開始し、統一された給餌条件を確立し、実験豚舎内の温度、光などの環境を厳密に制御し、環境などの因子による実験誤差を最小限に抑える。
【００２５】
実験用豚グループの構築：２つの品種の試験豚群を種付けする。子豚を離乳した後、２つの品種においてそれぞれ体重が近い３０頭の豚を選択する。馬体豚の成長速度が遅く、８ヶ月までに９０ｋｇに達することができるため、本研究では、大型白豚のサンプリングサイトは７つ（１日目、３０日目、６０日目、９０日目、１２０日目、１５０日目および１８０日目）を選択し、馬体豚のサンプリングサイトは６つ（１日目、３０日目、６０日目、９０日目、１２０日目、１５０日目、１８０日目および１８０日目）を選択し、サンプリングポイントごとに３回繰り返す。
【００２６】
屠殺前の１２ｈに餌を止め、屠殺後に、迅速に背最長筋、心臓、肝臓、脾臓、肺、腎臓、腸、胃、脳、背部脂肪、腹部脂肪などの組織サンプルを収集し、液体窒素中で保存して使用に備える。同時に骨、肉、皮膚、脂肪、器官の分離を行い、各個体の生体、胴体、心臓、肝臓、肺、脾臓、腎臓、胃、小腸、大腸、背最長筋、腰筋、大腿二頭筋の重量および長さなどの指標を測定かつ記録し、肩甲骨の皮膚の厚さ（脂身の厚さ）、腰椎の皮膚の厚さ（脂身の厚さ）、脚頬の皮膚の厚さ（脂身の厚さ）などの指標を測定し、背最長筋、腰筋、大腿二頭筋のサンプルの脂肪酸含量、２１種類のアミノ酸含量、トリグリセリドおよびリン脂質含量、および豚肉色、保水能力、柔らかさなどの多くの指標を測定かつ検出し、かつリポプロテインリパーゼ（ＬＰＬ）、脂肪酸シンターゼ（ＦＡＳ）、ホルモン感受性リパーゼ（ＨＳＬ）などの酵素の酵素活性を測定する。組織培養技術を用いて一次豚筋線維芽細胞および一次筋肉脂肪細胞を培養し、図１に示すとおりである。
【００２７】
実施例２
１０個のＬｎｃＲＮＡ（Ｌｎｃ−３１１０４、Ｌｎｃ−２２９８８、Ｌｎｃ−４５０８８６、Ｌｎｃ−１１０７５、Ｌｎｃ−１１１１１、Ｌｎｃ−１６５５５６、Ｌｎｃ−１９１６３７、Ｌｎｃ−２５７２８３、ＴＣＯＮＳ＿００３７２２８９およびＬｎｃ−４８２２８６ＦＳＰ２７）が筋肉内脂肪沈着プロセスにおける作用への研究である。
【００２８】
１）筋肉内脂肪沈着ＬｎｃＲＮＡとｍＲＮＡとの相互作用ネットワークの探索
背部脂肪に対してＲＮＡ−ｓｅｑ分析（広州ヂディオバイオテクノロジー株式会社）を行う。データが標準化された後、各遺伝子のＰＫＲＭ値に基づいて差異性発現遺伝子を比較し、トランスクリプトーム配列決定の結果に基づいて、Ｅｎｇｅｎｂｌ、ＧＯ、ＫＥＧＧおよび他のゲノムデータベースと組み合わせて、Ｒ言語などのソフトウェアを適用して傾向性分析および共発現ネットワーク分析を行い、筋肉内脂肪沈着に関連するＬｎｃＲＮＡおよび遺伝子発現の変化を取得し、分析により、これらの特異的に発現した遺伝子が共発現関係を有することが発見される。ｑＰＣＲ技術を使用して予測を検証し、得られた豚背最長筋のＬｃｎＲＮＡ分析を図２に示す。
【００２９】
結論：２つの品種の差異ｌｎｃＲＮＡ発現傾向の類似性は非常に高く、この１０個のｌｎｃＲＮＡと大型白豚と馬体豚の肉質および脂肪特性との間の相関性は基本的に同じであることが示される。
【００３０】
１）脂肪沈着調節ネットワークにおけるＦＳＰ２７と作用するＬｎｃＲＮＡのスクリーニングおよびゲノムデータベースの同定およびトランスクリプトーム処理結果は、主にＦＳＰ２７に対して深層掘削を行う。ｑＰＣＲおよびＷｅｓｔｅｒｎ  Ｂｌｏｔｔｉｎｇ技術を用いて、関連遺伝子が２頭の豚品種の複数の組織の転写レベルおよび翻訳レベル上に時空間的発現検出を行い、Ｌｎｃ−３１１０４、Ｌｎｃ−２２９８８、Ｌｎｃ−４５０８８６、Ｌｎｃ−１１０７５、Ｌｎｃ−１１１１１、Ｌｎｃ−１６５５５６、Ｌｎｃ−１９１６３７、Ｌｎｃ−２５７２８３、ＴＣＯＮＳ＿００３７２２８９およびＬｎｃ−４８２２８６がいずれも脂肪沈着代謝においてＦＳＰ２７と極めて顕著な調節関係があることを得る。
【００３１】
２）実験研究により、Ｌｎｃ−３１１０４およびＦＳＰ２７の調節部位の予測結果を図３に示し、結論：これらの１０個のＬｎｃＲＮＡはＦＳＰ２７発見傾向と顕著に関連し、したがって、筋肉内脂肪沈着プロセス中に、これらの１０個のｌｎｃＲＮＡは下流ＦＳＰ２７遺伝子を調節して脂肪代謝を促進することができる。
【００３２】
実施例３
ＬｎｃＲＮＡ定量ＰＣＲおよび配列決定
それぞれ上記実施例１における６０頭の試験豚グループの脂肪組織サンプルを収集し、ＬｎｃＲＮＡ定量ＰＣＲ実験を行い、
１、Ｔｒｉｚｏｌを用いて凍結組織から総ＲＮＡを抽出し、微量分光光度計を用いてＲＮＡを定量する。
２、各ＬｎｃＲＮＡバイオマーカーのプライマー配列はＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１１〜ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：３０に示す：
ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１１：５′  ＡＡＡＧＴＴＣＣＧＧＴＣＡＡＧＴＧＧＣＡ  ３′、
ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１２：５′ＴＴＣＣＴＧＡＧＣＣＡＣＡＡＧＴＧＣＴＧ  ３′、
ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１３：５′  ＣＴＧＧＴＴＣＡＧＡＴＧＣＡＣＧＴＡＧＴＧＡ  ３′、
ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１４：５′  ＣＡＡＧＣＡＧＡＧＧＴＧＧＴＴＣＣＡＧＡＧ  ３′、
ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１５：５′  ＡＧＧＴＣＡＴＧＧＡＣＡＴＣＴＴＣＧＧＴＴ  ３′、
ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１６：５′ＴＧＴＣＣＴＴＧＡＧＣＣＴＴＧＴＡＧＡＧＣ３′、
ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１７：５′  ＧＣＡＣＴＧＧＡＡＴＣＣＧＡＧＡＡＧＧＴ３′、
ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１８：５′ＡＣＧＡＡＧＡＡＣＣＡＣＧＴＧＡＧＡＡＧ  ３′、
ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１９：５′  ＴＧＡＣＡＣＣＴＣＣＴＣＣＴＣＣＴＣＴＧ  ３′、
ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２０：５′ＧＴＣＣＡＡＧＴＣＡＣＣＡＡＡＧＴＡＣＣＴＧ  ３′、
ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２１：５′ＣＡＴＣＣＣＡＣＡＡＴＣＣＡＧＣＣＡＡＴＣＡ  ３′、
ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２２：５′ＡＴＡＡＴＴＧＧＣＡＧＣＣＡＧＧＡＧＡＡＧＧ  ３′、
ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２３：５′  ＴＴＴＡＴＣＧＣＡＡＣＡＧＡＧＧＣＡＣＣ３′、
ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２４：５′ＧＡＣＡＴＣＴＧＧＧＧＡＣＡＣＴＴＡＧＧＡＧ３′、
ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２５：５′  ＧＡＴＡＧＧＴＣＴＣＧＴＴＴＣＣＴＴＴＧＣＴ３′、
ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２６：５′  ＴＧＧＴＴＴＴＧＧＧＧＴＣＡＣＴＴＣＣ３′、
ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２７：５′ＴＧＣＧＴＧＴＡＴＣＡＡＡＣＣＡＣＣＴＡＡＣ  ３′、
ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２８：５′ＣＡＡＣＡＧＡＣＡＡＴＧＣＣＡＧＴＴＴＡＣＧ  ３′、
ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２９：５′ＧＡＧＡＣＴＣＡＧＴＧＧＡＡＣＣＧＴＣＧ  ３′、
ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：３０：５′ＴＧＡＡＧＧＡＧＣＡＣＡＴＣＧＡＣＡＧＣ３′。  
【００３３】
３、逆転写反応、リアルタイム定量ＰＣＲ反応
ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ３  Ｆｉｒｓｔ  Ｓｔｒａｎｄ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  Ｓｙｓｔｅｍキットを用いて逆転写を行い、ＲＮＡの初期量は１μｇであり、逆転写反応体系は表１に示す。
逆転写反応パラメーター：２５℃１０ｍｉｎ、５０℃５０ｍｉｎ、８５℃５ｍｉｎ。
逆転写反応体系
【００３４】
【表１】
2019208488.tif 000003
【００３５】
４、リアルタイム定量ＰＣＲ反応
反応体系は表２に示すとおりであり、反応条件は表３に示すとおりであり、各リアルタイム定量ＰＣＲ反応および対照は３回繰り返す。
リアルタイム定量ＰＣＲプレミックス
【００３６】
【表２】
2019208488.tif 000004
リアルタイム定量ＰＣＲサーマルサイクル
【００３７】
【表３】
2019208488.tif 000005
【００３８】
ＳＰＳＳ  １７．０ソフトウェアを使用してデータの統計分析を行う。データは、特に明記しない限り、平均±標準偏差の形式で表される。実験豚グループの脂肪組織におけるＬｎｃＲＮＡの発現差異統計は、ペアリングサンプルｔ検証の方法を使用し、すべてのｐ値は両側性であり、ｐ＜０．０５は統計的に有意義であると考えられる。
【００３９】
上記２頭の豚品種のＰＣＲ産物はＧｅｌＥｘｔｒａｃｔｉｏｎ  Ｋｉｔ  Ｋｉｔキット（上海バイオエンジニアリングテクノロジー株式会社から購入され、キットの指示に従って操作する）で精製する。増幅産物のヌクレオチド配列はＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１〜ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１０に示す。
【００４０】
Ｌｎｃ−２２９８８の配列、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１：
ＴＣＡＧＡＴＴＴＣＴＴＣＡＧＣＣＧＴＧＡＴＣＴＣＡＧＴＣＡＴＧＧＴＧＧＴＧＧＴＴＧＧＡＧＡＡＡＡＧＡＡＡＡＧＧＣＡＧＧＣＧＡＡＡＡＧＴＴＣＣＧＧＴＣＡＡＧＴＧＧＣＡＣＴＴＴＧＣＡＧＡＡＴＡＣＴＴＴＡＧＡＡＴＴＣＧＡＧＡＡＣＴＣＴＧＡＴＡＧＧＧＧＧＣＴＣＡＧＴＧＴＧＡＡＡＡＧＧＴＧＡＧＧＧＣＴＣＴＴＣＧＴＴＴＴＣＣＴＧＧＣＴＧＴＴＴＣＴＧＣＴＧＣＴＣＣＴＴＴＧＴＴＧＴＣＣＴＧＴＴＧＡＡＣＴＴＴＧＴＣＴＣＴＴＣＴＣＴＧＣＡＧＡＧＴＴＣＴＣＣＣＣＣＣＣＧＧＡＡＡＣＡＡＣＣＴＧＡＧＣＣＣＴＴＴＣＣＡＡＧＣＡＧＣＡＣＴＴＧＴＧＧＣＴＣＡＧＧＡＡＧＡＡＧＴＡＴＣＡＧＣＴＴＣＧＡＡＣＡＡＡＡＡＴＡＧＣＣＴＣＡＴＣＴＣＣＣＴＡＧＧＡＣＴＣＴＴＣＡＧＣＡＣ
【００４１】
Ｌｎｃ−３１１０４の配列、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２：
ＣＣＣＴＴＴＡＣＣＣＣＡＣＣＣＣＣＧＣＣＣＣＣＴＣＡＡＣＴＧＣＴＧＣＡＧＧＡＴＣＣＴＣＣＧＣＴＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＧＧＣＣＴＧＧＧＣＴＴＧＣＣＡＧＣＴＧＧＧＡＧＴＣＣＧＧＴＧＣＣＡＡＧＣＧＧＣＡＧＧＴＣＴＴＣＡＧＣＣＧＣＡＧＧＣＣＡＴＧＧＣＴＡＣＡＧＣＴＧＧＧＣＧＧＧＧＡＴＣＧＣＣＴＴＧＣＴＣＴＧＴＡＡＡＡＡＧＧＡＧＣＴＧＡＴＧＡＣＡＣＣＧＧＣＣＡＣＧＴＧＣＴＧＧＧＧＣＴＧＧＴＴＣＡＧＡＴＧＣＡＣＧＴＡＧＴＧＡＴＴＧＣＣＴＧＧＧＡＣＴＴＣＣＡＣＧＴＡＣＴＧＧＡＡＣＣＧＣＴＣＴＴＧＧＡＧＡＡＴＡＧＡＴＣＴＣＡＧＴＧＴＧＣＴＧＧＴＣＡＣＧＡＡＣＴＧＣＡＴＧＧＧＣＴＣＣＴＴＧＴＣＡＧＣＧＴＣＧＴＴＣＴＣＣＣＴＣＣＴＣＡＣＧＴＴＡＴＡＡＡＡＴＣＣＴＴＧＣＧＣＴＧＣＴＣＴＧＧＡＡＡＡＣＡＡＧＡＣＡＧＣＴＣＣＴＣＴＧＧＡＡＣＣＡＣＣＴＣＴＧＣＴＴＧＣＣＣＧＣＣＣＣＡＧＣＣＣＴＧＡＧＣＴＣＣＡＧＧＣＡＣＴ
【００４２】
Ｌｎｃ−４５０８８６の配列、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：３：
ＣＣＡＡＴＴＧＡＣＴＴＣＡＴＧＴＡＧＴＣＡＴＣＧＡＡＡＴＴＣＴＴＧＣＴＧＴＣＣＡＣＴＡＧＣＴＴＣＣＡＧＧＴＧＣＣＣＧＣＧＡＡＧＧＣＧＴＣＣＡＣＣＡＴＧＧＴＧＡＧＧＣＴＧＧＧＣＴＡＧＧＣＴＧＡＧＡＡＡＧＡＧＡＣＧＡＣＡＧＡＡＣＡＧＧＣＧＣＧＣＡＡＡＡＡＴＴＣＣＡＧＧＡＣＣＧＧＣＧＧＣＴＣＣＣＡＧＣＣＣＧＣＧＣＴＡＣＣＧＣＴＴＴＡＡＡＴＧＧＣＣＣＴＡＧＣＧＴＣＡＣＧＴＧＡＣＧＡＧＧＣＧＴＧＧＣＧＴＡＣＧＣＣＣＣＣＧＣＴＣＣＣＧＡＡＡＴＡＧＧＡＡＧＣＣＣＣＡＴＧＣＡＧＧＣＧＣＴＧＣＣＴＣＧＣＣＧＧＧＴＴＧＡＴＣＧＣＣＣＡＴＣＣＣＣＣＡＧＣＣＴＧＣＣＧＡＡＡＧＡＧＧＡＡＧＧＧＧＣＡＧＣＣＣＧＴＡＧＧＣＧＣＣＣＧＧＣＡＧＣＡＣＧＧＧＴＡＣＣＣＧＧＧＡＴＣＣＧＡＡＴＣＣＣＴＣＣＣＣＧＧＧＧＣＴＧＧＣＡＧＧＡＣＣＡＧＴＣＣＣＣＴＴＴＣＣＴＧＧＣＣＴＣＡＡＧＧＣＧＣＴＣＴＴＣＧＧＡＡＴＣＴＧＡＧＡＡＧＧＡＡＧＣＣＧＣＴＧＧＧＧＧＣＡＣＧＧＡＧＣＣＣＧＣＧＡＧＴＴＧＧＧＧＣＧＣＡＧＧＴＣＡＴＧＧＡＣＡＴＣＴＴＣＧＧＴＴＴＣＣＴＧＧＴＣＣＣＴＣＣＡＣＧＡＧＣＣＴＧＧＧＧＴＣＣＧＡＡＣＡＧＡＧＡＴＧＡＧＡＧＡＣＴＣＴＧＴＡＧＧＣＡＣＡＡＧＣＧＴＴＴＧＣＴＣＣＣＧＴＣＧＧＣＣＧＧＧＣＧＧＴＴＣＣＣＴＣＣＴＣＡＡＣＣＴＣＣＴＴＣＡＧＡＡＡＧＴＣＴＧＴＧＣＴＴＧＣＡＧＣＣＡＧＣＴＣＴＡＣＡＡＧＧＣＴＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＴＣＣＣＴＧ
【００４３】
Ｌｎｃ−１１０７５の配列、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：４：
ＡＧＧＧＡＣＣＡＣＴＴＣＴＴＣＴＧＧＧＡＣＴＧＧＴＴＴＣＴＴＧＧＧＴＧＧＣＴＣＴＧＧＧＡＣＴＴＴＡＧＧＴＧＧＡＧＧＣＴＣＡＡＴＣＴＴＴＴＴＧＧＡＡＡＣＡＧＣＡＡＣＴＴＧＡＡＴＴＴＴＣＴＣＴＴＣＡＧＴＡＡＣＡＧＴＴＴＴＣＣＴＴＴＧＴＡＣＣＴＣＧＧＧＧＡＣＣＴＧＴＧＡＣＴＧＡＣＡＣＣＴＣＣＴＣＣＴＣＣＴＣＴＧＴＧＴＧＡＧＡＡＧＣＡＡＡＧＡＡＣＡＴＣＴＴＴＴＣＴＴＣＴＧＡＡＡＴＡＡＣＣＡＴＣＴＴＣＴＴＴＧＴＡＴＧＴＡＣＡＧＣＡＧＧＴＡＣＴＴＴＣＡＣＴＴＣＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＴＣＣＴＧＣＡＣＴＧＧＡＡＴＣＣＧＡＧＡＡＧＧＴＴＴＴＴＧＴＧＧＡＡＣＡＡＴＣＴＴＣＴＴＴＧＡＡＡＣＴＴＣＡＧＧＴＡＣＴＴＴＧＧＴＧＡＣＴＴＧＧＡＣＴＴＴＴＴＣＴＴＣＴＴＣＣＡＴＴＣＴＴＣＧＡＧＡＡＧＴＣＴＴＴＴＣＡＡＴＴＴＴＴＴＣＡＡＣＴＡＣＡＧＧＣＴＴＣＴＴＴＡＣＡＡＣＴＴＴＡＧＧＡＧＧＴＧＧＴＡＣＴＴＣＴＴＴＣＴＴＴＴＣＡＧＧＡＡＣＴＴＴＴＧＣＴＧＧＡＡＴＴＴＴＣＴＴＣＴＣＡＣＧＴＧＧＴＴＣＴＴＣＧＴＡＡＡＣＣＴＣＣＴＴＴＴＧＡＡＴＴＴＧＧＡＴＧＡＣＴＴＣＴＴＴＴＴＣＣＣＣＧＴＡＣＧＴＣＴＣＴＴＣＣＣＡＣＴＣＴＴＣＣＴＣＣＣＣＴＴＣＣＴＣＡＴＡＡＣＣＴＴＣＴＴＣＣＣＴＴＴＣＡＴＡＧＴＡＣＴＣＴＴＧＣＣＣＴＴＣＴＴＣＡＡＡＡＴＣＴＴＣＴＴＣＣＣＡＴＴＣＣＴＣＡＴＧＡＡＣＴＴＣＴＣＧＴＣＴＡＧＣＴＴＣＴＡＣＴＴＧＧＧＣＣＴＣＴＴＣＡＴＡＧＴＣＴＴＣＣＴＣＴＧＧＣＴＣＣＴＣＡＴＡＡＴＡＡＧＧＴＴＣＣＴＣＡＴＡＴＧＧＣＴＣＴＧＴＧＴＡＴＧＧＴＴＣＣＡＣＣＴＣＴＡＡＴＴＣＡＴＣＡＴＡＡＧＧＴＴＣＴＴＣＣＡＡＡＧＡＴＴＣＴＡＴＧＡＡＡＡＣＴＴＴＣＴＴＣＴＣＣＴＣＡＴＡＧＡＣＴＧＣＴＴＧＣＴＴＴＴＴＣＴＣＡＴＡＣＡＣＡＧＣＴＴＣＴＴＴＴＴＣＴＴＴＣＴＧＡＡＣＴＴＣＴＴＴＣＴＴＴＣＴＧＧＴＧＡＴＧＧＴＣＧＴＴＡＴＴＴＴＣＡＣＴＴＣＴＴＣＡＧＣＣＴＴＧＧＡＧＧＡＴＡＴＡＴＣＡＡＴＡＡＴＴＴＣＡＧＧＡＧＣＴＡＡＡＡＡＡＴＡＡＡＴＡＡＡＴＴＧＡＡＡＡＡＧＡＴＡＡＴＧＴＴＡＧＣＡＴＡＴＴＡＣＴＴＡＴＡＴＣＴＧＴＡＣＡＡＴＴＡＣＴＴＣＡＣＴＡＡＡＴＧＡＡＡＧＴＣＡＧＡＧＴＡＡＴＣＡＡＧＣＡＡＴＡＴＣＡＧＧＡＴＣＴＣＡＧＡＴＣＴＴＡＧＣＡＴＴＣＴＡＴＴＧＡＴＴＡＴＴＴＡＣＡＴＴＴＴＣＴＴＴＧＴＴＴＴＡＡＡＴＴＴＴＴＧＴＴＧＡＧＴＡＴＡＧＡＡＣＡＣＡＡＴＣＡＧＧＡＧＧＧＴＴＡＡＧＧＧＡＣＣＡＴＣＴＡＣＴＣＴＴＧＡＧＧＡＴＴＴＴＴＣＣＡＧＴＧＴＴＡＡＡＡＡＡＡＡＴＧＧＴＡＴＴＣＡＧＴＡＡＡＴＧＴＴＡＴＣＡＡＡＴＧＧＡＣＡＣＡＴＡＴＴＣＣＡＴＴＧＴＴＴＴＡＴＧＧＧＡＧＴＴＣＴＡＧＴＴＴＧＣＡＡＡＡＣＣＣＴＴＡＴＴＴＴＴＴＣＣＣＡＴＡＧＡＧＴＡＴＡＴＴＡＡＴＧＴＴＴＧＡＴＣＡＴＴＴＴＡＴＧＧＡＡＴＴＴＧＴＡＴＴＴＡＡＴＡＴＴＴＣＴＧＣＡＧＣＴＡＡＣＣＴＣＴＡＴＴＴＡＡＡＴＣＣＣＣＡＴＣＴＡＴＴＣＴＴＴＣＡＡＡＡＡＣＡＣＴＴＣＴＡＡＴＴＴＴＡＴＴＴＡＴＴＴＡＴＴＴＡＴＴＴＡＴＴＴＧＣＴＴＴＴＴＴＣＡＧＧＣＴＧＣＡＴＧＴＧＴＧＧＴＡＣＡＴＧＧＡＡＧＴＴＣＣＴＡ
【００４４】
Ｌｎｃ−１１１１１の配列、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：５：
ＧＧＧＡＣＴＧＧＴＴＴＣＴＴＧＧＧＴＧＧＣＴＣＴＧＧＧＡＣＴＴＴＡＧＧＴＧＧＡＧＧＣＴＣＡＡＴＣＴＴＴＴＴＧＧＡＡＡＣＡＧＣＡＡＣＴＴＧＡＡＴＴＴＴＣＴＣＴＴＣＡＧＴＡＡＣＡＧＴＴＴＴＣＣＴＴＴＧＴＡＣＣＴＣＧＧＧＧＡＣＴＧＴＧＡＣＴＧＡＣＡＣＣＴＣＣＴＣＣＴＣＣＴＣＴＧＴＧＴＧＡＧＡＡＧＣＡＡＡＧＡＡＣＡＴＣＴＴＴＴＣＴＴＣＴＧＡＡＡＴＡＡＣＣＡＴＣＴＴＣＴＴＴＧＴＡＴＧＴＡＣＡＧＣＡＧＧＴＡＣＴＴＴＣＴＴＴＣＡＣＴＴＣＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＴＣＣＴＧＣＡＣＴＧＧＡＡＴＣＣＧＡＧＡＡＧＧＴＴＴＴＴＧＴＧＧＡＡＣＡＡＴＣＴＴＣＴＴＴＧＡＡＡＣＴＴＣＡＧＧＴＡＣＴＴＴＧＧＴＧＡＣＴＴＧＧＡＣＴＴＴＴＴＣＴＴＣＴＴＣＣＡＴＴＣＴＴＣＧＡＧＡＡＧＴＣＴＴＴＴＣＡＡＴＴＴＴＴＴＣＡＡＣＴＡＣＡＧＧＣＴＴＣＴＴＴＡＣＡＡＣＴＴＴＡＧＧＡＧＧＴＧＧＴＡＣＴＴＣＴＴＴＣＴＴＴＴＣＡＧＧＡＡＣＴＴＴＴＧＣＴＧＧＡＡＴＴＴＴＣＴＴＣＴＣＡＣＧＴＧＧＴＴＣＴＴＣＧＴＡＡＡＣＣＴＣＣＴＴＴＴＧＡＡＴＴＴＧＧＡＴＧＡＣＴＴＣＴＴＴＴＴＣＣＣＣＧＴＡＣＧＴＣＴＣＴＴＣＣＣＡＣＴＣＴＴＣＣＴＣＣＣＣＴＴＣＣＴＣＡＴＡＡＣＣＴＴＣＴＴＣＣＣＴＴＴＣＡＴＡＧＴＡＣＴＣＴＴＧＣ
【００４５】
Ｌｎｃ−１６５５５６の配列、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：６：
ＴＧＴＣＡＴＴＴＴＣＡＴＧＡＴＴＴＴＣＴＴＡＡＴＴＣＴＴＣＴＡＡＡＴＧＡＴＧＴＣＡＡＴＣＴＧＡＡＧＴＣＴＴＣＴＴＧＣＣＴＴＴＣＴＡＴＧＡＧＡＡＧＡＣＡＡＣＡＴＡＡＡＣＣＡＴＴＡＣＧＡＴＧＣＡＴＣＣＣＡＣＡＡＴＣＣＡＧＣＣＡＡＴＣＡＡＧＡＧＡＡＧＡＡＴＡＧＧＧＡＣＣＡＧＡＡＧＧＴＧＴＧＡＴＡＡＴＧＴＡＧＡＴＴＣＴＴＴＴＴＣＡＧＣＣＡＴＴＣＴＴＣＣＴＧＴＴＧＴＴＧＧＧＴＧＧＧＴＴＧＧＴＣＡＧＡＧＣＣＡＣＧＣＴＴＡＣＣＴＴＣＴＴＧＴＴＡＴＴＧＴＴＡＴＣＣＴＧＣＧＴＣＴＴＴＴＴＧＡＡＣＴＴＴＡＡＡＴＡＧＡＴＣＴＣＴＧＡＡＧＡＧＴＧＴＧＧＣＡＧＣＴＧＣＣＣＴＴＣＴＣＣＴＧＧＣＴＧＣＣＡＡＴＴＡＴＣＴＧＧＧＴＧＡＴＧＴＡＡＧＡＣＡＣＴＧＧＡＡＡＧＣＡＧＡＡＣＣＴＣＴＧＧＣＴＣＴＴＴＣＴＴＴＡＴＣＣＴＧＴＴＧＴＴＡＴＧＧＡＧＧＡＡＡＣＡＡＧＧＧＧＣＴＡＣＡＣＧＡＣＣＴＡＧＡＡＴＴＴＴＣＡＧＡＧＡＧＡＡＧＴＣＡＴＣＡＧＣＴＴＧＴＴＧＴＴＴＴ
【００４６】
Ｌｎｃ−１９１６３７の配列、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：７：
ＣＣＡＧＡＧＡＴＴＧＡＡＧＴＣＡＴＴＣＡＧＡＧＡＡＡＡＡＴＴＡＡＡＡＴＡＧＴＣＴＴＴＧＡＣＣＧＡＡＧＡＧＡＴＡＴＴＧＡＧＡＡＡＴＣＡＣＡＣＡＣＣＣＴＡＡＡＡＴＧＡＡＡＡＴＡＴＧＧＡＡＴＡＡＡＡＧＣＡＡＡＴＡＧＴＡＴＡＣＡＡＴＴＧＣＴＴＴＴＴＡＣＴＣＴＡＡＡＡＡＡＴＴＴＡＡＡＴＧＡＴＧＣＡＡＧＴＴＡＡＴＧＡＡＡＧＡＧＴＡＣＡＡＡＡＴＧＧＴＡＧＴＴＧＡＡＴＡＴＧＣＴＡＡＧＴＣＴＡＧＴＡＣＴＴＧＡＡＣＡＣＴＣＴＴＣＡＡＴＣＡＴＧＧＧＣＣＴＴＣＣＡＡＡＴＣＡＧＡＡＣＴＣＴＡＡＴＴＡＧＡＧＴＴＧＴＡＡＴＣＧＴＡＣＣＴＴＧＴＴＧＡＣＣＴＣＴＧＣＡＣＣＣＡＣＡＴＣＴＣＴＧＡＡＴＴＣＴＧＣＴＴＡＴＴＴＴＴＴＴＡＡＴＣＡＡＡＴＡＡＧＡＴＴＣＴＧＣＴＡＧＡＡＡＴＣＴＡＧＧＡＣＣＡＧＧＡＴＣＡＧＴＧＧＴＡＧＡＡＴＴＡＴＡＡＴＴＡＴＴＣＡＴＣＣＣＣＡＧＧＡＧＡＡＡＴＧＧＡＧＧＡＧＧＴＧＴＴＴＴＣＣＣＴＧＡＡＡＧＡＣＣＴＣＴＡＡＴＴＣＣＣＡＧＡＴＡＣＴＣＴＧＴＣＣＡＡＴＡＴＡＡＡＣＣＡＣＴＴＡＡＴＴＧＴＣＴＡＣＡＣＴＧＡＣＡＴＴＴＣＡＡＡＧＣＴＴＧＡＧＡＡＡＧＧＧＡＡＴＧＴＴＧＴＡＴＡＡＣＣＣＴＧＧＡＣＴＴＣＡＴＴＣＴＧＧＴＴＡＴＴＴＣＣＴＡＴＡＡＧＣＡＧＡＧＡＡＧＡＴＡＡＧＡＡＡＡＧＧＧＣＣＴＣＴＣＡＡＧＣＴＡＡＧＡＧＡＧＧＴＡＣＣＴＡＡＴＴＡＧＡＧＡＣＡＴＡＴＡＴＡＣＣＴＡＡＴＧＴＣＴＧＴＴＣＣＣＡＡＴＴＡＡＴＧＡＣＡＣＡＡＡＴＧＡＴＴＴＧＧＧＧＡＡＧＴＧＡＡＴＴＡＧＧＡＣＴＡＴＴＧＣＴＴＧＧＡＴＴＡＡＡＧＡＧＡＧＣＴＡＣＡＴＣＡＣＡＡＡＧＴＣＧＴＴＧＴＣＴＴＴＴＡＴＣＣＴＴＡＣＣＴＣＴＡＡＴＴＴＡＡＡＴＡＡＴＴＴＡＧＡＡＴＡＧＡＴＡＡＴＧＧＣＴＡＡＣＴＴＴＡＡＣＴＴＴＴＧＡＧＡＡＴＡＡＡＣＡＴＴＴＡＧＣＣＴＧＣＡＴＡＡＡＡＧＡＴＡＣＣＴＴＴＴＴＡＴＡＡＡＧＴＡＡＡＣＡＧＣＴＴＡＴＡＴＡＧＴＴＴＣＴＣＴＴＴＴＡＡＡＡＡＴＡＧＣＴＴＣＡＡＴＡＴＡＣＴＴＴＴＧＡＴＧＣＣＣＣＴＡＡＧＣＡＴＴＴＧＴＧＣＴＡＴＡＧＡＴＧＣＴＡＣＡＧＣＴＧＴＡＴＴＴＴＣＡＡＡＧＡＣＴＧＡＴＧＣＡＧＧＧＧＣＣＡＣＴＧＣＡＡＴＡＴＴＡＧＡＡＡＴＣＣＣＴＴＴＧＣＴＧＧＣＡＡＡＡＣＡＴＣＡＧＡＧＴＧＡＴＣＡＴＴＣＡＧＴＣＡＡＴＴＣＡＡＡＧＴＴＡＡＧＣＴＡＡＡＣＣＡＣＴＧＧＴＴＣＴＣＡＧＴＴＴＴＴＡＣＣＴＴＧＣＣＴＴＡＧＡＡＴＣＡＣＣＴＧＧＡＡＡＴＣＴＣＣＴＴＡＡＡＡＴＡＣＡＧＡＡＴＡＣＴＴＧＧＣＣＣＡＣＣＣＣＴＡＧＡＧＴＴＴＣＴＧＡＴＴＣＡＧＴＧＧＧＴＣＴＧＧＧＧＣＴＡＧＧＣＴＧＡＧＡＡＣＣＴＧＣＡＴＴＴＣＴＧＡＣＡＡＧＴＴＴＣＴＡＧＧＴＧＣＴＧＣＴＧＧＴＧＣＴＧＣＴＧＧＴＣＴＡＡＧＧＡＣＣＡＴＧＣＡＴＴＧＡＡＡＣＣＡＣＴＧＣＴＴＴＡＡＣＣＴＡＣＴＡＡＴＴＴＡＴＡＣＣＴＣＣＴＴＴＡＡＡＧＡＡＣＡＡＴＧＡＡＡＧＣＴＴＣＧＡＡＣＣＣＡＡＡＧＣＣＣＡＣＡＴＧＧＴＡＣＴＴＡＴＴＡＡＡＣＴＣＣＣＴＴＣＡＡＧＧＣＴＣＴＣＴＣＣＣＡＣＧＧＡＴＧＡＴＣＴＴＴＧＡＧＡＡＡＡＧＣＣＡＴＣＴＧＴＣＡＴＴＡＣＣＴＣＣＴＴＴＡＴＣＧＣＡＡＣＡＧＡＧＧＣＡＣＣＣＡＧＧＣＡＧＣＴＡＡＡＣＡＧＴＣＣＴＴＡＡＡＴＣＴＡＴＴＣＡＣＴＴＡＧＣＡＴＴＴＴＧＧＴＴＴＴＧＣＴＧＧＧＣＡＡＧＧＡＴＧＧＡＧＴＡＣＡＴＴＴＣＣＴＡＴＴＴＣＴＣＡＴＣＡＧＡＡＣＡＧＣＴＧＣＧＡＴＣＴＣＣＴＡＡＧＴＧＴＣＣＣＣＡＧＡＴＧＴＣＣＴＧＧＡＴＣＴＧＣＡＡＣＣＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＣＣＣＡＧＧＣＣＴＣＴＧＧＧＧＧＡＣＣＡＡＡＡＧＣＣＡＣＡＧＣＴＡＣＡＴＧＴＣＣＣＴＡＣＣＣＡＧＡＡＧＧＴＣＴＡＴＣＴＣＧＴＣＣＡＧＧＡＧＧＡＡＧＴＣＣＡＴＧＴＣＣＴＣＣＣＧＧＣＴＧＡＣＴＴＧＡＧＧＧＣＴＧＡＴＣＡＣＣＡＣＣＴＧＣＣＧＧＡＡＧＡＡＧＴＴＧＡＣＣＴＴＣＣＣＣＣＧＧＴＧＧＧＧＣＴＧＧＴＡＣＣＣＣＡＡＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＣＣＣＴＴＣＴＴＣＡＴＣＡＴＣＣＧＣＴＣＣＴＴＡＡＴＧＧＣＣＧＧＧＧＣＣＡＣＣＴＡＴＧＧＡＧＡＡＧＡＧＴＡＧＡＡＴＴＴＧＡＴＴＣＣＡＧＴＴＣＴＴＡＡＴＧＴＧＴＣＡＧ
【００４７】
Ｌｎｃ−２５７２８３の配列、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：８：
ＣＣＴＣＣＣＣＣＴＣＣＣＣＡＣＡＴＣＣＡＴＣＴＣＡＣＡＧＡＡＧＴＴＧＡＡＧＣＴＡＡＴＴＴＴＣＴＣＴＧＣＡＡＴＧＡＡＣＴＧＴＣＴＧＣＣＣＣＣＣＡＧＣＴＴＡＣＣＣＣＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＴＧＡＧＡＣＡＡＧＡＧＧＡＴＧＴＧＡＧＡＧＧＧＧＴＧＧＡＧＣＧＣＣＡＧＣＴＣＴＧＣＴＧＧＴＡＡＣＣＡＣＡＣＡＣＴＧＧＣＡＧＣＴＴＴＧＴＡＣＡＡＡＣＧＴＣＴＣＡＧＧＧＣＴＣＡＴＣＡＧＧＧＴＡＧＴＧＣＴＧＣＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＡＣＧＴＧＣＴＣＴＴＣＴＣＣＡＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＴＣＣＡＣＡＧＧＡＧＴＣＡＴＣＣＧＡＴＴＴＧＣＡＡＡＧＡＡＧＣＣＣＡＴＧＣＣＣＣＴＧＡＡＡＡＴＡＴＴＣＡＧＡＣＣＣＣＣＧＡＴＴＴＡＣＴＧＣＡＣＣＡＧＡＣＣＣＣＡＧＴＧＧＧＣＣＧＡＧＧＧＡＧＴＧＴＧＣＡＧＧＧＡＣＡＧＴＴＡＧＡＡＣＴＴＣＴＧＧＣＴＧＣＣＴＧＴＡＴＣＣＡＣＴＴＣＣＴＴＴＴＣＡＣＴＴＣＴＣＴＴＴＴＧＴＧＡＡＴＡＴＴＴＴＡＣＡＴＣＡＴＡＴＣＡＡＡＴＡＣＡＴＡＧＡＴＡＴＡＡＡＴＡＡＡＣＡＣＡＣＧＴＧＣＡＴＧＣＴＴＴＧＧＧＧＧＧＧＡＣＣＴＧＴＧＴＧＣＴＴＴＧＧＧＧＧＧＣＡＧＧＧＡＴＣＡＣＡＧＡＣＡＴＣＡＧＴＣＧＧＣＣＧＣＴＧＧＴＧＣＡＧＧＧＧＴＴＧＡＧＣＴＧＣＡＧＧＡＡＧＣＣＴＧＧＣＡＣＣＴＧＧＧＧＧＣＴＣＴＧＧＧＣＡＧＡＡＧＧＧＡＣＡＧＣＴＧＧＧＧＣＴＧＧＧＴＡＧＧＣＡＡＧＡＣＴＴＧＧＣＡＧＡＣＴＣＧＧＡＧＧＡＧＡＧＡＧＴＧＣＣＣＡＡＣＴＴＡＡＧＡＡＴＴＴＧＴＣＣＡＣＡＧＧＴＣＡＣＴＴＧＡＧＡＣＣＣＡＣＡＧＧＣＣＴＧＡＣＣＡＣＡＧＣＣＣＡＧＧＧＡＧＣＴＣＣＡＡＣＣＴＴＴＣＴＣＴＣＣＣＴＣＣＣＡＡＡＧＣＣＡＣＡＡＡＡＧＧＡＧＡＡＧＣＡＣＴＴＣＡＣＴＡＧＣＣＣＡＣＡＧＧＧＣＣＴＡＡＴＴＴＧＡＧＣＣＴＴＴＡＣＴＴＣＡＴＧＣＴＣＴＣＡＧＡＡＡＣＴＧＣＡＡＧＣＡＡＧＴＧＡＴＴＡＡＧＧＧＧＣＡＡＡＡＧＧＧＴＴＴＡＴＴＴＴＣＴＴＴＴＴＧＴＴＴＴＴＴＧＴＴＴＴＴＴＧＧＴＴＴＴＴＧＧＴＴＴＴＴＧＧＴＴＴＴＴＴＴＧＴＴＴＧＴＴＴＧＴＴＴＧＴＴＴＴＡＴＴＴＴＴＴＴＴＡＧＧＧＴＴＴＡＴＴＴＴＣＴＡＴＴＴＧＧＡＣＡＧＧＡＴＣＣＣＴＧＧＡＴＡＧＧＴＣＴＣＧＴＴＴＣＣＴＴＴＧＣＴＣＴＣＡＡＴＴＧＴＴＡＣＡＡＡＣＴＴＣＴＡＴＧＡＧＧＣＡＣＴＴＴＡＴＡＴＣＣＣＡＡＡＴＣＣＴＧＧＡＴＧＧＡＡＧＴＧＡＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＡＣＴＣＧＧＡＧＧＡＧＡＡＡＣＴＡＡＴＧＣＴＧＣＴＣＣＡＴＣＴＡＴＴＴＴＡＡＡＧＡＡＧＧＧＡＧＡＣＡＴＡＣＣＣＴＧＴＧＴＣＣＴＴＡＡＡＧＡＧＧＧＧＡＧＡＴＧＣＧＴＴＡＡＧＴＧＧＣＣＣＡＧＧＴＡＴＣＴＣＴＣＣＴＧＧＧＴＡＧＴＣＡＧＧＣＣＡＣＧＴＧＴＣＣＴＣＡＡＡＣＴＣＴＣＡＧＣＧＧＴＧＴＴＧＡＣＡＴＧＧＧＡＴＴＴＡＡＡＡＴＴＴＡＡＣＴＣＡＡＡＧＴＡＧＡＡＴＴＴＧＡＡＴＡＴＣＡＡＡＧＴＣＴＧＴＴＧＡＴＣＴＣＣＡＧＧＧＴＧＴＧＣＡＣＧＣＣＡＴＡＣＴＴＧＣＴＣＴＣＡＡＴＣＣＴＧＴＡＣＴＴＧＣＣＣＧＧＣＴＣＣＣＣＣＧＣＣＴＧＧＣＡＧＡＴＣＡＡＧＣＴＧＣＣＧＴＣＴＴＴＡＴＡＣＣＡＣＴＧＣＡＣＣＡＣＡＧＧＧＧＴＧＧＧＧＡＡＧＣＣＣＴＧＴＡＣＧＧＴＧＡＡＧＣＡＣＡＧＣＴＴＧＡＣＣＧＡＣＡＴＣＣＧＴＴＣＣＣＡＧＡＣＧＧＴＧＴＧＴＧＡＣＣＴＣＡＧＣＣＧＣＡＣＣＡＧＧＡＴＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＣＴＴＡＴＣＣＧＡＴＣＣＴＣＡＡＡＴＧＡＧＴＧＣＣＴＣＴＣＣＣＡＧＧＣＣＡＧＣＣＴＧＴＣＧＣＣＣＡＣＣＧＣＧＴＧＣＣＧＣＡＧＧＧＣＡＴＧＴＧＴＧＴＣＣＡＣＧＴＧＣＴＧＣＡＧＣＧＣＧＡＡＴＣＴＡＴＣＣＡＧＣＴＴＧＴＣＣＣＧＧＧＣＧＴＧＧＧＴＧＣＧＧＧＣＣＡＧＧＴＧＡＡＣＧＴＣＣＴＣＴＴＣＣＡＧＣＴＧＧＧＣＣＡＧＣＴＣＧＣＴＧＡＧＧＴＡＧＣＧＣＴＣＣＣＧＣＴＴＧＧＣＣＴＣＣＣＣＡＴＡＧＧＣＡＧＣＣＡＧＣＡＧＣＧＡＡＴＧＧＴＡＣＣＴＧＣＧＣＴＴＣＣＴＣＴＣＣＴＧＣＴＣＴＴＣＣＴＣＴＴＣＴＡＧＴＧＣＴＧＴＧＣＴＣＡＣＣＣＴＣＴＴＣＧＣＧＣＡＧＡＧＣＣＴＡＣＡＧＧＴＧＧＴＣＣＣＴＣＣＣＡＧＣＡＡＧＧＴＣＴＧＧＣＴＧＧＡＣＧＣＣＣＴＣＴＣＧＧＡＴＧＡＴＧＡＣＴＣＴＣＴＣＴＧＧＧＡＣＧＡＴＧＡＣＴＣＣＴＧＡＧＴＧＡＣＡＧＡＣＴＴＣＴＧＧＧＡＡＧＡＴＧＡＣＴＧＧＧＴＧＧＡＡＧＣＴＣＧＣＴＴＴＴＴＣＧＣＡＧＣＡＴＡＴＴＣＡＴＣＣＡＧＡＡＧＡＴＡＣＣＴＴＧＴＴＴＧＡＡＴＡＴＴＣＣＧＧＴＡＧＧＡＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＴＧＴＣＴＧＴＧＴＣＴＣＴＴＴＴＧＧＴＡＧＡＡＧＧＧＣＡＣＧＧＣＧＡＣＡＡＧＣＧＡＣＡＴＣＴＴＴＧＴＧＴＡＣＡＣＣＡＧＡＧＡＧＡＡＧＧＧＧＡＡＧＣＧＧＣＡＡＧＧＡＡＧＡＧＴＧＧＧＣＴＣＴＧＣＣＴＣＧＡＧＧＧＣＴＣＡＣＣＡＧＧＣＴＧＣＡＧＧＡＧＡＡＣＴＴＣＴＣＣＣＴＣＣＡＡＡＴＧＣＣＣＧＧＣＣＴＣ
【００４８】
Ｌｎｃ−００３７２２８９の配列、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：９：
ＴＴＧＣＡＡＴＣＴＴＣＴＴＴＴＧＴＧＣＡＧＣＴＡＧＴＴＴＴＧＡＴＧＣＧＴＧＴＡＴＣＡＡＡＣＣＡＣＣＴＡＡＣＡＧＴＴＣＣＡＴＣＴＴＣＡＣＣＡＣＡＡＧＡＧＡＧＡＡＡＡＧＴＡＴＡＣＧＧＧＴＣＡＴＴＡＧＧＴＡＣＡＧＴＣＡＴＡＡＴＣＴＣＡＴＡＧＧＴＡＧＴＴＣＣＡＴＡＡＴＧＧＣＡＣＧＴＡＡＡＣＴＧＧＣＡＴＴＧＴＣＴＧＴＴＧＧＴＴＴＣＴＧＣＡＴＣＴＴＧＣＴＣＡＡＣＡＴＴＧＧＴＡＴＡＡＡＡＴＡＴＴＡＣＴＣＣＡＴＣＡＣＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＴＡＣＡＡＴＣＴＧＣＴＴＡＴＣＡＴＴＴＧＴＧＣＡＴＧＧＣＡＡＧＡＡＣＴＴＴＧＣＡＣＴＡＡＡＴＡＴＡＴＴＴＧＣＴＣＧＧＴＧＣＣＣＴＧＡＡＣＧＡＡＴＴＧＴＴＧＴＣＡＡＡＡＣＣＴＴＴＣＴＧＣＴＧＴＡＡＧＧＡＴＴＡＣＴＡＡＴＴＡＣＴＡＡＣＴＴＧＧＴＧＴＣＡＴＣＴＧＡＧＣＣＡＧＡＴＡＡＡＡＴＡＴＡＴＴＣＴＣＣＡＧＴＣＴＣＡＴＴＣＣＡＡＣＡＧＡＴＴＧＴＡＴＴＡＡＣＡＣＡＧＣＣＡＴＣＡＴＧＣＡＣＡＴＴＣＡＧＧＧＴＴＧＣＴＴＣＡＡＧＴＴＴＴＡＡＴＣＴＴＴＧＧＡＴＡＡＡＴＴＣＴＣＴＴＣＴＴＣＣＣＡＧＧＴＡＧＣＧＧＣＴＣＣＧＣＡＧＣＣＧＧＧＡＧＧＧＧＴＣＣＴＣＣＡＧＣＣＣＧＡＧＡＧＡＣＣＴＴＴＴＣＣＴＣＡＣＧＴＣＣＣＡＣＡＡＣＡＧＧＴＧＴＧＧＧＣＡＧＧＡＡＣＣＡＣＣＣＣＧＡＧＡＣＡＴＧＧＣＴＣＴＧＣＣＧＧＧＣＣＧＧＧＧＧＡＧＧＡＧＧＧＧＡＧＡＣＣＡＣＣＧＣＧＴＧＧＧＧＧＡＧＧＧＧＡＧＧＡＡＧＧＧＧＡＧＧＧＧＡＣＡＣＧＣＧＧＣＴＣＡＡＣＡＣＣＣＣＡＧＣＣＧＣＡＣＣＧＧＣＡＣＣＡＴＣＣＧＣＧＣＧＣＣＧＡＧＣＣＴＣＧＣＧＧＧＣＧＣＡＧＣＧＡＧＴＴＡＧＡＴＧＧＣＧＧＣＧＧＣＡＧＧＡＴＣＧＡＣＣＣＧＣＧＣＧＣＣＴＴＣＧＣＣＣＣＣＧＡＡＧＣＣＴＧＧＣＣＧＣＡＣＣＣＧＧＧＣＣＡＧＡＧＣＴＣＧＣＣＴＣＡＴＡＣＴＣＴＣＣＣＴＣＴＣＡＧＡＣＴＡＣＣＣＡＧＡＡＣＡＴＣＣＡＧＡＧＡＴＣＡＧＣＡＡＣＡＧＴＣＣＣＣＴＣＣＣＴＣＧＧＣＣＣＣＣＣＴＣＣＡＡＣＡＧＧＡＧＧＡＧＡＣＣＧＡＧＧＡＧＧＣＧＧＡＡＧＣＧＧＣＣＴＣＧＡＣＴＣＣＴＣＣＣＴＣＴＣＣＴＣＧＴＴＣＴＣＴＡＣＡＣＣＣＴＣＣＣＴＴＣＣＡＡＧＣＣＴＴＣＴＣＧＣＧＡＧＡＴＡＡＣＧＡＣＣＡＣＣＴＴＧＧＧＧ
【００４９】
Ｌｎｃ−４８２２８６の配列、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１０：
ＧＣＣＧＡＴＧＣＣＴＴＣＣＣＣＣＣＣＡＧＡＡＧＣＴＣＡＧＣＴＴＴＧＣＡＧＣＡＧＡＡＣＡＧＧＴＧＡＧＣＡＧＧＡＴＧＣＧＡＡＧＡＴＧＴＴＧＣＣＡＧＧＧＧＡＣＧＣＧＧＧＴＧＴＡＡＧＡＣＡＡＧＣＣＣＡＣＧＴＧＣＣＡＧＧＡＧＡＣＴＴＧＴＡＧＧＣＴＣＴＧＡＧＡＣＣＣＴＧＴＴＴＧＧＧＡＴＧＡＡＧＣＴＣＴＴＧＴＴＴＣＣＡＴＧＧＴＧＡＣＴＧＡＡＣＣＡＧＣＡＧＡＧＡＡＡＡＡＧＣＡＡＣＣＴＴＧＧＣＴＧＣＴＣＴＧＡＧＣＡＣＡＧＧＧＣＧＧＡＡＡＧＣＴＧＣＣＣＣＣＴＣＴＣＣＴＣＣＧＡＣＴＧＴＣＧＧＧＴＣＴＣＴＴＣＴＧＧＴＴＡＡＣＡＡＣＣＧＡＣＡＴＧＣＴＣＴＣＴＴＧＧＧＴＣＴＴＴＣＡＧＡＡＧＣＣＡＡＡＧＣＡＴＣＣＣＡＡＡＣＡＧＧＧＧＴＣＴＧＧＧＴＧＣＣＣＴＧＴＣＣＣＡＧＣＣＣＣＴＧＣＣＣＣＡＣＣＣＣＣＡＣＴＣＣＴＧＣＣＡＧＧＣＧＣＡＧＧＧＣＴＧＡＧＧＡＣＣＴＧＣＧＣＣＣＣＴＧＧＡＧＧＧＧＴＣＴＧＧＴＧＡＡＡＧＧＧＡＣＴＴＣＡＣＴＧＧＧＣＡＧＧＧＣＧＣＣＡＴＣＴＧＴＧＣＧＡＣＡＴＴＴＡＴＴＧＴＡＣＣＴＡＡＧＧＡＡＧＣＣＣＴＣＴＧＧＧＣＴＧＡＧＧＴＣＴＣＣＣＣＡＣＣＣＣＡＣＣＣＣＣＴＴＧＧＧＣＣＡＣＧＧＣＴＴＴＧＧＧＧＡＧＡＡＡＧＣＴＣＡＧＡＧＴＣＡＡＧＡＧＧＡＧＡＧＴＴＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＡＡＧＡＧＧＧＡＧＧＧＡＣＡＴＧＧＧＧＧＣＣＣＴＧＣＡＧＴＧＡＧＧＴＴＧＴＣＣＡＧＧＡＡＡＧＴＴＣＴＣＣＡＧＣＣＡＣＡＧＣＴＣＡＧＡＧＴＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＣＴＴＣＣＴＧＧＣＴＧＧＣＴＣＴＧＣＴＣＴＣＣＣＣＡＧＡＣＣＡＣＣＣＴＡＡＧＴＴＣＴＧＣＣＣＴＧＧＣＣＣＣＧＧＧＧＣＣＣＣＧＧＣＣＣＣＡＧＧＡＡＴＧＣＡＧＣＴＴＴＣＴＧＣＡＡＴＴＣＣＣＧＡＴＧＧＣＡＧＡＧＡＣＧＣＣＣＴＧＧＧＡＴＣＴＣＡＴＴＣＡＴＡＴＧＡＧＡＡＴＴＡＡＴＧＴＧＧＧＴＴＴＴＣＴＣＣＴＣＣＴＴＧＡＴＡＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＣＧＣＴＣＴＧＧＧＣＡＡＡＧＣＡＣＴＧＧＣＣＣＡＧＡＧＡＣＴＧＧＴＧＡＧＧＴＣＡＣＡＧＣＡＧＣＡＧＣＣＣＣＡＧＣＴＧＡＧＡＧＧＧＡＧＧＣＡＧＣＣＣＣＣＧＧＣＣＴＣＡＴＣＴＧＴＣＡＣＣＡＧＧＴＧＣＣＣＴＴＡＧＣＴＴＴＧＧＧＧＡＣＡＣＣＧＣＴＧＴＣＣＴＧＡＧＡＣＴＣＡＧＴＧＧＡＡＣＣＧＴＣＧＧＡＧＧＡＧＣＣＧＣＴＣＣＴＴＣＣＣＧＣＧＴＧＧＣＣＣＧＧＴＴＡＣＴＧＧＧＴＧＴＴＣＴＣＧＴＡＣＴＴＣＡＧＧＴＡＴＣＴＴＡＴＣＡＧＣＣＴＧＣＣＴＧＧＣＡＧＴＧＧＣＡＡＴＧＴＧＴＣＣＡＧＧＡＧＴＴＴＴＡＴＡＣＧＧＴＡＴＴＴＴＣＣＡＡＴＧＧＣＣＴＴＴＣＧＡＡＣＣＴＧＣＡＧＣＣＧＧＣＡＧＡＧＧＴＧＡＧＣＣＡＧＡＧＧＴＣＴＣＧＧＡＧＧＴＴＣＴＧＣＣＴＴＣＴＣＣＴＴＧＡＴＧＡＣＡＧＣＣＣＡＧＴＣＣＴＣＧＡＡＧＣＴＧＴＣＧＡＴＧＴＧＣＴＣＣＴＴＣＡＧＣＣＧＣＧＡＧＣＡＧＡＧＣＴＧＣＡＣＧＴＴＧＣＣＣＡＣＧＴＡＧＴＣＣＡＧＧＡＧＧＡＣＧＴＣＧＡＴＧＡＴＧＧＧＣＣＣＣＧＣＣＣＡＧＣＧＧＣＴＣＡＣＣＴＣＣＧＧＧＧＣＡＧＡＣＡＧＧＡＴＣＴＣＧＣＡＧＡＡＣＴＧＧＡＣＣＡＣＧＣＣＧＧＧＣＧＧＣＴＴＡＴＣＣＧＴＧＧＣＧＧＧＣＧＴＧＴＣＡＴＴＧＡＡＣＣＴＧＴＡＡＴＴＧＣＣＴＣＴＣＴＴＧＧＡＧＧＣＧＡＴＧＴＧＣＡＧＣＧＧＧＡＧＣＡＴＧＣＣＧＴＣＣＴＴＧＴＴＧＧＣＣＴＴＧＴＴＧＧＣＡＴＣＣＧＣＧＣＣＣＴＧＣＧＡＣＡＧＣＡＧＧＡＡＣＴＣＣＡＣＣＡＣＣＴＣＣＴＣＧＴＧＣＴＣＧＴＴＣＴＴＧＣＡＧＧＣＣＴＣＡＴＡＧＡＧＧＧＣＧＧＡＣＧＣＧＣＴＧＴＣＧＣＴＧＧＣＣＴＧＣＧＴＧＴＴＧＡＴＧ
【００５０】
実施例４
１０個のＬｎｃＲＮＡが馬体豚および大型白豚の各年齢層での筋肉内脂肪の発現
ｑＲＴ−ＰＣＲ、免疫組織化学、タンパク質インプリンティングなどの試験により、１０個のＬｎｃＲＮＡ遺伝子（Ｌｎｃ−３１１０４、Ｌｎｃ−２２９８８、Ｌｎｃ−４５０８８６、Ｌｎｃ−１１０７５、Ｌｎｃ−１１１１１、Ｌｎｃ−１６５５５６、Ｌｎｃ−１９１６３７、Ｌｎｃ−２５７２８３、ＴＣＯＮＳ＿００３７２２８９およびＬｎｃ−４８２２８６およびＦＳＰ２７）が肉品質、脂質液滴形成などの方面での遺伝的メカニズムを調べる。そのシーケンシャル表現傾向の解析結果を図４に示す。
【００５１】
結果により、上記１０個のＬｎｃＲＮＡは、馬体豚および大型白豚の各年齢層での筋肉内脂肪にいずれも高発現である。
【００５２】
実施例５
差異発現ＬｎｃＲＮＡのリアルタイム定量ＰＣＲ検証
馬体豚の筋肉内組織および大型白豚の筋肉内組織の１０個の差異発現ＬｎｃＲＮＡ（Ｌｎｃ−３１１０４、Ｌｎｃ−２２９８８、Ｌｎｃ−４５０８８６、Ｌｎｃ−１１０７５、Ｌｎｃ−１１１１１、Ｌｎｃ−１６５５５６、Ｌｎｃ−１９１６３７、Ｌｎｃ−２５７２８３、ＴＣＯＮＳ＿００３７２２８９およびＬｎｃ−４８２２８６）を選択し、各遺伝子に３つの生物学的複製を設定し、アクチンβ（ａｃｔｉｎ  ｂｅｔａ、ＡＣＴＢ）遺伝子を内部基準として、ｑＲＴ−ＰＣＲ方法を用いて遺伝子の発現レベルを検証する。ＰＣＲ  Ｓｙｓｔｅｍ  ９７００（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、ＵＳＡ）を用いて、約０．５μｇのＲＮＡサンプルを取って逆転写してｃＤＮＡテンプレートを合成する。Ｇｒｅｅｎ  ＰＣＲ  Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ）および４８０  ２  Ｒｅａｌ−ｔｉｍｅ  ＰＣＲ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ（Ｒｏｃｈｅ、Ｓｗｉｓｓ）を用いてｑＲＴ−ＰＣＲ分析を行う。
【００５３】
ＨｉＳｃｒｉｐｔ  ２  Ｑ  ＲＴ  ＳｕｐｅｒＭｉｘ  ｆｏｒ  ｑＰＣＲ（＋ｇＤＮＡ  ｗｉｐｅｒ）（Ｖａｚｙｍｅ、Ｒ２２３−０１）を用いて測定すべきＲＮＡをｃＤＮＡに逆転写する。
（１）−８０℃冷蔵庫で保存した事前に取った総ＲＮＡサンプルを取り出し、室温で解凍し、０．２ｍＬ  ＰＣＲチューブで以下のように逆転写系を設定する。
（２）逆転写系（１０μＬ）：総ＲＮＡ、０．５μｇ；４×ｇＤＮＡ  ｗｉｐｅｒ  Ｍｉｘ、２μＬ；Ｎｕｃｌｅａｓｅ−ｆｒｅｅ  Ｈ２Ｏを８μＬに加え、反応条件：４２℃、２ｍｉｎ。５×ＨｉＳｃｒｉｐｔ  ２  Ｑ  ＲＴ  ＳｕｐｅｒＭｉｘ  ＩＩａ、２μＬを加え、反応条件：２５℃、１０ｍｉｎ、５０℃、３０ｍｉｎ、８５℃、５ｍｉｎ。
（３）逆転写後にＮｕｃｌｅａｓｅ−ｆｒｅｅ  Ｈ２Ｏを加えて１００μＬに希釈し、−２０℃で保存する。
Ｒｅａｌ−ｔｉｍｅ  ＲＣＲ反応
（１）体系構成
ＲＣＲ体系における成分および体積（μＬ）
【００５４】
【表４】
2019208488.tif 000006
（２）サイクル条件
ＲＣＲサイクル条件
【００５５】
【表５】
2019208488.tif 000007
【００５６】
ＲＣＲ体系を均一に混合し、反応後に遠心分離し、３８４ウェルプレートに分け、４８０  ２  Ｒｅａｌ−ｔｉｍｅ  ＰＣＲ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ（Ｒｏｃｈｅ、Ｓｗｉｓｓ）上でｑＲＴ−ＰＣＲ反応およびの分析を行い、各グループのサンプル間の遺伝子の相対的発現量を計算し、相対的発現量に対して統計分析を行い、結果により、Ｌｎｃ−３１１０４、Ｌｎｃ−２２９８８、Ｌｎｃ−４５０８８６、Ｌｎｃ−１１０７５、Ｌｎｃ−１１１１１、Ｌｎｃ−１６５５５６、Ｌｎｃ−１９１６３７、Ｌｎｃ−２５７２８３、ＴＣＯＮＳ＿００３７２２８９およびＬｎｃ−４８２２８６が馬体豚および大型白豚の筋肉内脂肪内で顕著に高い。以上の結果は配列決定の結果と一致し、配列決定結果が信頼できることを示す。
【００５７】
実施例６
１０個の馬体豚の筋肉内組織サンプルおよび１０個の大型白豚の筋肉内組織サンプルを収集し、Ｌｎｃ−３１１０４、Ｌｎｃ−２２９８８、Ｌｎｃ−４５０８８６、Ｌｎｃ−１１０７５、Ｌｎｃ−１１１１１、Ｌｎｃ−１６５５５６、Ｌｎｃ−１９１６３７、Ｌｎｃ−２５７２８３、ＴＣＯＮＳ＿００３７２２８９およびＬｎｃ−４８２２８６遺伝子蛍光定量検証を行う。
【００５８】
ＰＣＲ増幅は２０μｌの反応体系を使用する：２×ＰＣＲ  Ｍｉｘ１０μｌ、１００ｎｇの測定すべき豚のゲノムＤＮＡ、１０μｍｏｌ／Ｌのフォワードおよびリバースプライマーが各０．５μｌで、最後にｄｄＨ２Ｏを２０μｌに補充し、均一に混合する。ＰＣＲ増幅反応体系を９４〜９５℃で５ｍｉｎ予備変性し、以下のサイクルを３６回実施し、９４〜９５℃で３０ｓ予備変性し、６０℃で３０ｓアニーリングし、７２℃で４０ｓ伸長し、７２℃で７ｍｉｎ伸長し、ＰＣＲ産物を得る。
【００５９】
上記２頭の豚品種のＰＣＲ産物はＧｅｌＥｘｔｒａｃｔｉｏｎ  Ｋｉｔ  Ｋｉｔキット（上海バイオエンジニアリングテクノロジー株式会社から購入され、キットの指示に従って操作する）で精製かつ配列決定する（北京ゲノミクス研究所）。増幅産物のヌクレオチド配列はそれぞれＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１〜ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１０に示す。このうち、プライマー設計を表６に示す。
プライマー設計表
【００６０】
【表６】
2019208488.tif 000008
【００６１】
蛍光定量結果により、Ｌｎｃ−３１１０４、Ｌｎｃ−２２９８８、Ｌｎｃ−４５０８８６、Ｌｎｃ−１１０７５、Ｌｎｃ−１１１１１、Ｌｎｃ−１６５５５６、Ｌｎｃ−１９１６３７、Ｌｎｃ−２５７２８３、ＴＣＯＮＳ＿００３７２２８９およびＬｎｃ−４８２２８６は、馬体豚および大型白豚の筋肉内脂肪で高発現を示す。
【００６２】
上記ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１１〜ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：３０のプライマーは馬体豚および大型白豚のゲノムＤＮＡでＰＣＲ増幅を行い、ＰＣＲ産物を得る。増幅産物のヌクレオチド配列はそれぞれＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１〜ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１０に示す。
【００６３】
実施例７
豚筋肉内脂肪組織および非脂肪組織におけるＬｎｃＲＮＡの発現を分析し、それにより、ＬｎｃＲＮＡが豚筋肉内脂肪沈着を同定するために使用できるかどうかを決定し、結果を表７に示す。
１０個のＬｎｃＲＮＡが豚脂肪組織サンプルにおける発現情況（注：＋陽性、−陰性）
【００６４】
【表７】
2019208488.tif 000009
【００６５】
表７により、１０個のＬｎｃＲＮＡは豚の脂肪組織サンプルにおいていずれも陽性発現であり、豚の非脂肪組織においていずれも陰性発現であり、該試薬が豚の筋肉内脂肪組織および非脂肪組織を正確に区別できることを示す。
【００６６】
実施例８
４８部の豚サンプル（２６部の豚脂肪組織および２２部の非脂肪組織）を測定し、その結果を表８に示す。
【００６７】
【表８】
2019208488.tif 000010
表８により、４８部のサンプルへの測定結果はいずれも正確であり、該試薬が豚の筋肉内脂肪組織および非脂肪組織を正確に区別できることを示す。
【００６８】
実施例９
Ｌｎｃ−３１１０４、Ｌｎｃ−２２９８８、およびＬｎｃ−４５０８８６という３つのＬｎｃＲＮＡをそれぞれ豚の筋肉内脂肪沈着の診断に使用され、診断結果は以下のとおりである。
【００６９】
【表９】
2019208488.tif 000011
【００７０】
実施例１０
Ｌｎｃ−３１１０４、Ｌｎｃ−２２９８８、およびＬｎｃ−４５０８８６という３つのＬｎｃＲＮＡを豚の筋肉内脂肪沈着の診断に使用されるＡＵＣは０．７５０〜０．８８９であり、感度は６６．７％〜８８．９％であり、特異性は５５．６％〜８３．３％である。
【００７１】
これにより、Ｌｎｃ−３１１０４、Ｌｎｃ−２２９８８、およびＬｎｃ−４５０８８６という３つのＬｎｃＲＮＡを豚の筋肉内脂肪沈着の診断に使用される効果が大幅に向上される。
【００７２】
実施例１１
上記１０個のＬｎｃＲＮＡを組み合わせて６０個の豚の脂肪組織サンプルの診断に使用され、かつ２つの非脂肪組織サンプルの対照グループを設定し、そのＡＵＣは０．９６３に達することができ、感度および特異度はそれぞれ９４．４％および８８．９％である。
【００７３】
スキャン法により１０個のＬｎｃＲＮＡの発現と脂肪沈着との関係を検証し、結果により、１０個のＬｎｃＲＮＡの発現が高いほど、豚の筋肉内組織中の脂肪含有量が高く、基本的に正の比例であり、したがって、これらの１０個のＬｎｃＲＮＡを豚の筋肉脂肪沈着を同定するためのバイオマーカーとして、顕著な効果を有し、上記のキットを検出ツールとして、結果は非常に敏感である。
【００７４】
上記実施例の説明は、本発明の方法およびその核心的な考え方を理解するためだけである。当業者であれば、本発明の原理から逸脱することなく、本発明に対するいくつかの改良および変更を行うことができ、これらの改良および変更も本発明の保護範囲内にあることを指摘すべきである。
【図１】
2019208488.tif 000012
【図２】
2019208488.tif 000013
【図３】
2019208488.tif 000014
【図４Ａ】
2019208488.tif 000015
【図４Ｂ】
2019208488.tif 000016
【図４Ｃ】
2019208488.tif 000017
【図４Ｄ】
2019208488.tif 000018
【図４Ｅ】
2019208488.tif 000019
【図４Ｆ】
2019208488.tif 000020
【図４Ｇ】
2019208488.tif 000021
【図４Ｈ】
2019208488.tif 000022
【図４Ｉ】
2019208488.tif 000023
【図４Ｊ】
2019208488.tif 000024
【手続補正書】
【提出日】平成30年9月24日(2018.9.24)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
豚の筋肉脂肪沈着を同定する試薬であって、
Ｌｎｃ−３１１０４プライマー、Ｌｎｃ−２２９８８プライマー、Ｌｎｃ−４５０８８６プライマー、Ｌｎｃ−１１０７５プライマー、Ｌｎｃ−１１１１１プライマー、Ｌｎｃ−１６５５５６プライマー、Ｌｎｃ−１９１６３７プライマー、Ｌｎｃ−２５７２８３プライマー、ＴＣＯＮＳ＿００３７２２８９プライマー、およびＬｎｃ−４８２２８６プライマーの全てを含み、
前記Ｌｎｃ−３１１０４プライマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１１に示すプレプライマー（５′ＡＡＡＧＴＴＣＣＧＧＴＣＡＡＧＴＧＧＣＡ３′）、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１２に示すポストプライマー（５′ＴＴＣＣＴＧＡＧＣＣＡＣＡＡＧＴＧＣＴＧ３′）を含み、
前記Ｌｎｃ−２２９８８プライマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１３に示すプレプライマー（５′ＣＴＧＧＴＴＣＡＧＡＴＧＣＡＣＧＴＡＧＴＧＡ３′）、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１４に示すポストプライマー（５′ＣＡＡＧＣＡＧＡＧＧＴＧＧＴＴＣＣＡＧＡＧ３′）を含み、
前記Ｌｎｃ−４５０８８６プライマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１５に示すプレプライマー（５′ＡＧＧＴＣＡＴＧＧＡＣＡＴＣＴＴＣＧＧＴＴ３′）、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１６に示すポストプライマー（５′ＴＧＴＣＣＴＴＧＡＧＣＣＴＴＧＴＡＧＡＧＣ３′）を含み、
前記Ｌｎｃ−１１０７５プライマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１７に示すプレプライマー（５′ＧＣＡＣＴＧＧＡＡＴＣＣＧＡＧＡＡＧＧＴ３′）、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１８に示すポストプライマー（５′ＡＣＧＡＡＧＡＡＣＣＡＣＧＴＧＡＧＡＡＧ３′）を含み、
前記Ｌｎｃ−１１１１１プライマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１９に示すプレプライマー（５′ＴＧＡＣＡＣＣＴＣＣＴＣＣＴＣＣＴＣＴＧ３′）、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２０に示すポストプライマー（５′ＧＴＣＣＡＡＧＴＣＡＣＣＡＡＡＧＴＡＣＣＴＧ３′）を含み、
前記Ｌｎｃ−１６５５５６プライマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２１に示すプレプライマー（５′ＣＡＴＣＣＣＡＣＡＡＴＣＣＡＧＣＣＡＡＴＣＡ３′）、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２２に示すポストプライマー（５′ＡＴＡＡＴＴＧＧＣＡＧＣＣＡＧＧＡＧＡＡＧＧ?３′）を含み、
前記Ｌｎｃ−１９１６３７プライマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２３に示すプレプライマー（５′ＴＴＴＡＴＣＧＣＡＡＣＡＧＡＧＧＣＡＣＣ３′）、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２４に示すポストプライマー（５′ＧＡＣＡＴＣＴＧＧＧＧＡＣＡＣＴＴＡＧＧＡＧ３′）を含み、
前記Ｌｎｃ−２５７２８３プライマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２５に示すプレプライマー（５′ＧＡＴＡＧＧＴＣＴＣＧＴＴＴＣＣＴＴＴＧＣＴ３′）、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２６に示すポストプライマー（５′ＴＧＧＴＴＴＴＧＧＧＧＴＣＡＣＴＴＣＣ３′）を含み、
前記ＴＣＯＮＳ＿００３７２２８９プライマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２７に示すプレプライマー（５′ＴＧＣＧＴＧＴＡＴＣＡＡＡＣＣＡＣＣＴＡＡＣ３′）、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２８に示すポストプライマー（５′ＣＡＡＣＡＧＡＣＡＡＴＧＣＣＡＧＴＴＴＡＣＧ３′）を含み、
前記Ｌｎｃ−４８２２８６プライマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２９に示すプレプライマー（５′ＧＡＧＡＣＴＣＡＧＴＧＧＡＡＣＣＧＴＣＧ３′）、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：３０に示すポストプライマー（５′ＴＧＡＡＧＧＡＧＣＡＣＡＴＣＧＡＣＡＧＣ３′）を含む、ことを特徴とする、
豚の筋肉脂肪沈着を同定する試薬。
【請求項２】
異なる筋肉品質の豚の選択における適用、豚肉品質の予測または予測の支援における適用、または豚肉品質の予測または予測支援の薬剤の調製における適用である、ことを特徴とする、
請求項１に記載の試薬。
【請求項３】
豚の筋肉内脂肪沈着を同定する方法であって、
（１）測定すべき豚由来の生物学的サンプルを分析して、前記サンプル中の１つ以上のバイオマーカーのレベルを決定し、
（２）前記サンプル中の１つまたは複数のバイオマーカーのレベルを、前記１つまたは複数のバイオマーカーの正および／または負の参照レベルと比較して、測定すべき豚の筋肉脂肪沈着状況を同定する、ことを含み、
このうち、前記１つまたは複数のバイオマーカーは、
Ｌｎｃ−３１１０４プライマー、Ｌｎｃ−２２９８８プライマー、Ｌｎｃ−４５０８８６プライマー、Ｌｎｃ−１１０７５プライマー、Ｌｎｃ−１１１１１プライマー、Ｌｎｃ−１６５５５６プライマー、Ｌｎｃ−１９１６３７プライマー、Ｌｎｃ−２５７２８３プライマー、ＴＣＯＮＳ＿００３７２２８９プライマー、およびＬｎｃ−４８２２８６プライマーの全てを含み、
前記Ｌｎｃ−３１１０４プライマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１１に示すプレプライマー（５′ＡＡＡＧＴＴＣＣＧＧＴＣＡＡＧＴＧＧＣＡ３′）、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１２に示すポストプライマー（５′ＴＴＣＣＴＧＡＧＣＣＡＣＡＡＧＴＧＣＴＧ３′）を含み、
前記Ｌｎｃ−２２９８８プライマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１３に示すプレプライマー（５′ＣＴＧＧＴＴＣＡＧＡＴＧＣＡＣＧＴＡＧＴＧＡ３′）、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１４に示すポストプライマー（５′ＣＡＡＧＣＡＧＡＧＧＴＧＧＴＴＣＣＡＧＡＧ３′）を含み、
前記Ｌｎｃ−４５０８８６プライマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１５に示すプレプライマー（５′ＡＧＧＴＣＡＴＧＧＡＣＡＴＣＴＴＣＧＧＴＴ３′）、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１６に示すポストプライマー（５′ＴＧＴＣＣＴＴＧＡＧＣＣＴＴＧＴＡＧＡＧＣ３′）を含み、
前記Ｌｎｃ−１１０７５プライマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１７に示すプレプライマー（５′ＧＣＡＣＴＧＧＡＡＴＣＣＧＡＧＡＡＧＧＴ３′）、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１８に示すポストプライマー（５′ＡＣＧＡＡＧＡＡＣＣＡＣＧＴＧＡＧＡＡＧ３′）を含み、
前記Ｌｎｃ−１１１１１プライマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１９に示すプレプライマー（５′ＴＧＡＣＡＣＣＴＣＣＴＣＣＴＣＣＴＣＴＧ３′）、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２０に示すポストプライマー（５′ＧＴＣＣＡＡＧＴＣＡＣＣＡＡＡＧＴＡＣＣＴＧ３′）を含み、
前記Ｌｎｃ−１６５５５６プライマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２１に示すプレプライマー（５′ＣＡＴＣＣＣＡＣＡＡＴＣＣＡＧＣＣＡＡＴＣＡ３′）、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２２に示すポストプライマー（５′ＡＴＡＡＴＴＧＧＣＡＧＣＣＡＧＧＡＧＡＡＧＧ?３′）を含み、
前記Ｌｎｃ−１９１６３７プライマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２３に示すプレプライマー（５′ＴＴＴＡＴＣＧＣＡＡＣＡＧＡＧＧＣＡＣＣ３′）、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２４に示すポストプライマー（５′ＧＡＣＡＴＣＴＧＧＧＧＡＣＡＣＴＴＡＧＧＡＧ３′）を含み、
前記Ｌｎｃ−２５７２８３プライマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２５に示すプレプライマー（５′ＧＡＴＡＧＧＴＣＴＣＧＴＴＴＣＣＴＴＴＧＣＴ３′）、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２６に示すポストプライマー（５′ＴＧＧＴＴＴＴＧＧＧＧＴＣＡＣＴＴＣＣ３′）を含み、
前記ＴＣＯＮＳ＿００３７２２８９プライマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２７に示すプレプライマー（５′ＴＧＣＧＴＧＴＡＴＣＡＡＡＣＣＡＣＣＴＡＡＣ３′）、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２８に示すポストプライマー（５′ＣＡＡＣＡＧＡＣＡＡＴＧＣＣＡＧＴＴＴＡＣＧ３′）を含み、
前記Ｌｎｃ−４８２２８６プライマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２９に示すプレプライマー（５′ＧＡＧＡＣＴＣＡＧＴＧＧＡＡＣＣＧＴＣＧ３′）、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：３０に示すポストプライマー（５′ＴＧＡＡＧＧＡＧＣＡＣＡＴＣＧＡＣＡＧＣ３′）を含む、ＬｎｃＲＮＡバイオマーカーおよびその組み合わせから選択される、ことを特徴とする、
豚の筋肉内脂肪沈着を同定する方法。
【請求項４】
豚の筋肉内脂肪沈着を同定するチップであって、固相担体および固相担体上に固定化され、
Ｌｎｃ−３１１０４プライマー、Ｌｎｃ−２２９８８プライマー、Ｌｎｃ−４５０８８６プライマー、Ｌｎｃ−１１０７５プライマー、Ｌｎｃ−１１１１１プライマー、Ｌｎｃ−１６５５５６プライマー、Ｌｎｃ−１９１６３７プライマー、Ｌｎｃ−２５７２８３プライマー、ＴＣＯＮＳ＿００３７２２８９プライマー、およびＬｎｃ−４８２２８６プライマーの全てを含み、
前記Ｌｎｃ−３１１０４プライマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１１に示すプレプライマー（５′ＡＡＡＧＴＴＣＣＧＧＴＣＡＡＧＴＧＧＣＡ３′）、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１２に示すポストプライマー（５′ＴＴＣＣＴＧＡＧＣＣＡＣＡＡＧＴＧＣＴＧ３′）を含み、
前記Ｌｎｃ−２２９８８プライマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１３に示すプレプライマー（５′ＣＴＧＧＴＴＣＡＧＡＴＧＣＡＣＧＴＡＧＴＧＡ３′）、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１４に示すポストプライマー（５′ＣＡＡＧＣＡＧＡＧＧＴＧＧＴＴＣＣＡＧＡＧ３′）を含み、
前記Ｌｎｃ−４５０８８６プライマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１５に示すプレプライマー（５′ＡＧＧＴＣＡＴＧＧＡＣＡＴＣＴＴＣＧＧＴＴ３′）、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１６に示すポストプライマー（５′ＴＧＴＣＣＴＴＧＡＧＣＣＴＴＧＴＡＧＡＧＣ３′）を含み、
前記Ｌｎｃ−１１０７５プライマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１７に示すプレプライマー（５′ＧＣＡＣＴＧＧＡＡＴＣＣＧＡＧＡＡＧＧＴ３′）、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１８に示すポストプライマー（５′ＡＣＧＡＡＧＡＡＣＣＡＣＧＴＧＡＧＡＡＧ３′）を含み、
前記Ｌｎｃ−１１１１１プライマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１９に示すプレプライマー（５′ＴＧＡＣＡＣＣＴＣＣＴＣＣＴＣＣＴＣＴＧ３′）、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２０に示すポストプライマー（５′ＧＴＣＣＡＡＧＴＣＡＣＣＡＡＡＧＴＡＣＣＴＧ３′）を含み、
前記Ｌｎｃ−１６５５５６プライマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２１に示すプレプライマー（５′ＣＡＴＣＣＣＡＣＡＡＴＣＣＡＧＣＣＡＡＴＣＡ３′）、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２２に示すポストプライマー（５′ＡＴＡＡＴＴＧＧＣＡＧＣＣＡＧＧＡＧＡＡＧＧ?３′）を含み、
前記Ｌｎｃ−１９１６３７プライマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２３に示すプレプライマー（５′ＴＴＴＡＴＣＧＣＡＡＣＡＧＡＧＧＣＡＣＣ３′）、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２４に示すポストプライマー（５′ＧＡＣＡＴＣＴＧＧＧＧＡＣＡＣＴＴＡＧＧＡＧ３′）を含み、
前記Ｌｎｃ−２５７２８３プライマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２５に示すプレプライマー（５′ＧＡＴＡＧＧＴＣＴＣＧＴＴＴＣＣＴＴＴＧＣＴ３′）、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２６に示すポストプライマー（５′ＴＧＧＴＴＴＴＧＧＧＧＴＣＡＣＴＴＣＣ３′）を含み、
前記ＴＣＯＮＳ＿００３７２２８９プライマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２７に示すプレプライマー（５′ＴＧＣＧＴＧＴＡＴＣＡＡＡＣＣＡＣＣＴＡＡＣ３′）、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２８に示すポストプライマー（５′ＣＡＡＣＡＧＡＣＡＡＴＧＣＣＡＧＴＴＴＡＣＧ３′）を含み、
前記Ｌｎｃ−４８２２８６プライマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２９に示すプレプライマー（５′ＧＡＧＡＣＴＣＡＧＴＧＧＡＡＣＣＧＴＣＧ３′）、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：３０に示すポストプライマー（５′ＴＧＡＡＧＧＡＧＣＡＣＡＴＣＧＡＣＡＧＣ３′）を含む、ＬｎｃＲＮＡバイオマーカーのプローブを含む、ことを特徴とする、
豚の筋肉内脂肪沈着を同定するチップ。
【手続補正書】
【提出日】令和1年9月10日(2019.9.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
豚の筋肉脂肪沈着を同定する試薬であって、
Ｌｎｃ−３１１０４プライマー、Ｌｎｃ−２２９８８プライマー、Ｌｎｃ−４５０８８６プライマー、Ｌｎｃ−１１０７５プライマー、Ｌｎｃ−１１１１１プライマー、Ｌｎｃ−１６５５５６プライマー、Ｌｎｃ−１９１６３７プライマー、Ｌｎｃ−２５７２８３プライマー、ＴＣＯＮＳ＿００３７２２８９プライマー、およびＬｎｃ−４８２２８６プライマーのうちの１つのプライマーのみを有し、
前記Ｌｎｃ−３１１０４プライマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１１に示すプレプライマー（５′ＡＡＡＧＴＴＣＣＧＧＴＣＡＡＧＴＧＧＣＡ３′）、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１２に示すポストプライマー（５′ＴＴＣＣＴＧＡＧＣＣＡＣＡＡＧＴＧＣＴＧ３′）を含み、
前記Ｌｎｃ−２２９８８プライマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１３に示すプレプライマー（５′ＣＴＧＧＴＴＣＡＧＡＴＧＣＡＣＧＴＡＧＴＧＡ３′）、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１４に示すポストプライマー（５′ＣＡＡＧＣＡＧＡＧＧＴＧＧＴＴＣＣＡＧＡＧ３′）を含み、
前記Ｌｎｃ−４５０８８６プライマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１５に示すプレプライマー（５′ＡＧＧＴＣＡＴＧＧＡＣＡＴＣＴＴＣＧＧＴＴ３′）、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１６に示すポストプライマー（５′ＴＧＴＣＣＴＴＧＡＧＣＣＴＴＧＴＡＧＡＧＣ３′）を含み、
前記Ｌｎｃ−１１０７５プライマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１７に示すプレプライマー（５′ＧＣＡＣＴＧＧＡＡＴＣＣＧＡＧＡＡＧＧＴ３′）、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１８に示すポストプライマー（５′ＡＣＧＡＡＧＡＡＣＣＡＣＧＴＧＡＧＡＡＧ３′）を含み、
前記Ｌｎｃ−１１１１１プライマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１９に示すプレプライマー（５′ＴＧＡＣＡＣＣＴＣＣＴＣＣＴＣＣＴＣＴＧ３′）、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２０に示すポストプライマー（５′ＧＴＣＣＡＡＧＴＣＡＣＣＡＡＡＧＴＡＣＣＴＧ３′）を含み、
前記Ｌｎｃ−１６５５５６プライマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２１に示すプレプライマー（５′ＣＡＴＣＣＣＡＣＡＡＴＣＣＡＧＣＣＡＡＴＣＡ３′）、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２２に示すポストプライマー（５′ＡＴＡＡＴＴＧＧＣＡＧＣＣＡＧＧＡＧＡＡＧＧ?３′）を含み、
前記Ｌｎｃ−１９１６３７プライマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２３に示すプレプライマー（５′ＴＴＴＡＴＣＧＣＡＡＣＡＧＡＧＧＣＡＣＣ３′）、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２４に示すポストプライマー（５′ＧＡＣＡＴＣＴＧＧＧＧＡＣＡＣＴＴＡＧＧＡＧ３′）を含み、
前記Ｌｎｃ−２５７２８３プライマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２５に示すプレプライマー（５′ＧＡＴＡＧＧＴＣＴＣＧＴＴＴＣＣＴＴＴＧＣＴ３′）、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２６に示すポストプライマー（５′ＴＧＧＴＴＴＴＧＧＧＧＴＣＡＣＴＴＣＣ３′）を含み、
前記ＴＣＯＮＳ＿００３７２２８９プライマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２７に示すプレプライマー（５′ＴＧＣＧＴＧＴＡＴＣＡＡＡＣＣＡＣＣＴＡＡＣ３′）、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２８に示すポストプライマー（５′ＣＡＡＣＡＧＡＣＡＡＴＧＣＣＡＧＴＴＴＡＣＧ３′）を含み、
前記Ｌｎｃ−４８２２８６プライマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２９に示すプレプライマー（５′ＧＡＧＡＣＴＣＡＧＴＧＧＡＡＣＣＧＴＣＧ３′）、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：３０に示すポストプライマー（５′ＴＧＡＡＧＧＡＧＣＡＣＡＴＣＧＡＣＡＧＣ３′）を含む、ことを特徴とする、
豚の筋肉脂肪沈着を同定する試薬。
【請求項２】
異なる筋肉品質の豚の選択における適用、豚肉品質の予測または予測の支援における適用、または豚肉品質の予測または予測支援の薬剤の調製における適用である、ことを特徴とする、
請求項１に記載の試薬。