(57)【要約】      （修正有）【課題】ケモカイン受容体４（ＣＸＣＲ４）に結合する抗体および関連分子の提供。【解決手段】ＣＸＣＲ４に結合し、特定の配列を含む重鎖可変（ＶＨ）領域、および特定の配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域を含む、抗体またはその抗原結合断片、該抗体等をコードするポリヌクレオチド、該ポリヌクレオチドを含むベクター、該抗体等を組換え産生する宿主細胞、ならびに該抗体等を含むＣＸＣＲ４機能または発現に関連する障害を治療するための医薬組成物。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ケモカイン受容体４（ＣＸＣＲ４）に結合し、
ａ）（ｉ）配列番号１１５、１２１、または１２２として示した配列を含む重鎖可変（ＶＨ）  ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号１１８または１１９として示した配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２、ならびに（ｉｉｉ）配列番号１２０として示した配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３を含むＶＨ領域、ならびに、
ｂ）（ｉ）配列番号１３５として示した配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）  ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号１３６として示した配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２、ならびに（ｉｉｉ）配列番号１３７として示した配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３を含むＶＬ領域
を含む、単離抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２】
ａ）配列番号１３の重鎖可変（ＶＨ）領域に由来するＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、およびＶＨ  ＣＤＲ３を含むＶＨ領域、ならびに
ｂ）配列番号１５の軽鎖可変（ＶＬ）領域に由来するＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、およびＶＬ  ＣＤＲ３を含むＶＬ領域
を含む、請求項１に記載の単離抗体またはその抗原結合断片。
【請求項３】
ヒト化、キメラ、ＣＤＲ移植、または組換えヒト抗体である、請求項１または２に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項４】
治療有効量の請求項１から３のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片および薬学的に許容できる担体を含む医薬組成物。
【請求項５】
請求項１から３のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片をコードするヌクレオチド配列を含む単離ポリヌクレオチド。
【請求項６】
請求項５に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
【請求項７】
請求項１から３のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片を組換え産生する単離宿主細胞。
【請求項８】
抗体またはその抗原結合断片を生成する方法であって、抗体またはその抗原結合断片の産生をもたらす条件下で請求項７に記載の宿主細胞を培養するステップと、宿主細胞または培養培地から抗体またはその抗原結合断片を単離するステップとを含む、方法。
【請求項９】
対象におけるＣＸＣＲ４機能または発現に関連する障害を治療するための、請求項４に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
障害ががんである、請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
がんが血液がんである、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
がんがＢ細胞またはＴ細胞悪性腫瘍である、請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
がんが、急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、ホジキンリンパ腫、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、濾胞性リンパ腫、ワルデンストレームマクログロブリン血症（ＷＭ）、Ｂ細胞リンパ腫、およびびまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）からなる群から選択される、請求項１２に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
がんが、膀胱、乳房、子宮頸部、絨毛癌、大腸、食道、胃、グリア芽細胞腫、頭頸部、腎臓、肺、口腔、卵巣、膵臓、前立腺、および皮膚のがんからなる群から選択される、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
ＣＸＣＲ４発現腫瘍を有する対象における腫瘍増殖または進行を減少するための、請求項４に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
対象におけるＣＸＣＲ４発現がん細胞の転移を減少させるための、請求項４に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
ＣＸＣＲ４発現腫瘍を有する対象において腫瘍退縮を誘導するための、有効量の請求項４に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
ＣＸＣＲ４の発現に関連した障害を検出、診断、および／または治療するのに使用するための請求項１から３のいずれか一項に記載の単離抗体もしくはその抗原結合断片を含む組成物。
【請求項１９】
ＣＸＣＲ４の発現に関連した障害を治療するための医薬の製造における、請求項１から３のいずれか一項に記載の単離抗体の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ケモカイン受容体４（ＣＸＣＲ４）に結合する抗体および関連分子に関する。本発明はまた、全長抗体、これらの抗体断片またはバリアントを含み、または代わりにこれらからなる分子に関する。本発明はさらに、このような抗体をコードするアミノ酸および核酸配列に関する。本発明はまた、抗ＣＸＣＲ４抗体を含む抗体コンジュゲート（例えば、抗体−薬剤コンジュゲート）、抗ＣＸＣＲ４抗体を含む組成物、ならびにＣＸＣＲ４発現に関連した状態（例えば、がん）を治療するために抗ＣＸＣＲ４抗体およびこれらのコンジュゲートを使用する方法に関する。本発明はさらに、ＣＸＣＲ４の発現に関連した病理学的障害を検出および診断するための前記抗体、これらの抗原結合断片、または抗体−薬剤コンジュゲート、および対応するプロセスの使用を含む。ある特定の態様では、障害は、ＣＸＣＲ４の過剰発現と関連がある通常または任意の他の病理と比べたＣＸＣＲ４の発現の増大に関連した発癌性障害である。他の態様では、障害は、炎症性および免疫障害、アレルギー性障害、感染（ＨＩＶ感染など）、自己免疫障害（例えば、関節リウマチ）、線維症障害（例えば、肺）、ならびに心血管障害である。本発明は最終的に、このような障害の予後または診断または療法のモニタリングのための、少なくともこのような抗体または抗体−薬剤コンジュゲートを含む製品および／もしくは組成物またはキットを含む。
【背景技術】
【０００２】
ケモカインは、特に免疫反応中に、ケモカイン勾配として公知のリガンドの化学勾配に沿って白血球の遊走をコントロールする小さい分泌ペプチドである（Ｚｌｏｔｎｉｋら、２０００、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ、１２：１２１〜１２７）。これらは、Ｎ末端におけるＣｙｓ残基の位置によって４つのクラスに分類される。ＣＸＣクラスは、単一の残基によって分離された一対のＣｙｓを有するケモカインからなる。このクラスの最も顕著なメンバーは、インターロイキン−８（ＩＬ−８、ＣＸＣＬ８）、ストローマ由来因子−１（ＳＤＦ−Ｉ、ＣＸＣＬ１２）、γ−インターフェロン誘導タンパク質−１０（ＩＰ−１０、ＣＸＣＬ１０）、血小板因子−４（ＰＦ−４、ＣＸＣＬ４）、好中球活性化タンパク質−２（ＮＡＰ−２、ＣＸＣＬ７）、およびメラノーマ増殖刺激活性（ＭＧＳＡ、ＣＸＣＬｌ）である。ＣＣクラスのケモカインは、Ｎ末端で２つの隣接するＣｙｓを有し、マクロファージ炎症性タンパク質−１（ＭＩＰ−１α、ＣＣＬ３；ＭＩＰ−１ｊＳａ、ＣＣＬ４）、発現および分泌される正常Ｔの活性化の際の制御（ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｕｐｏｎ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｎｏｒｍａｌ  Ｔ  ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ａｎｄ  ｓｅｃｒｅｔｅｄ）（ＲＡＮＴＥＳ、ＣＣＬ５）、単球走化性タンパク質−１（ＭＣＰ−Ｉ、ＣＣＬ２）を含む。ＣＸ３Ｃクラスのケモカインは、Ｎ末端で３つの残基によって分離された２つのＣｙｓを含有し、フラクタルカイン／ニューロタクチン（ＣＸ３ＣＬ１）によって代表される。Ｃクラスケモカインは、Ｎ末端で単一のＣｙｓを含有し、リンホタクチン／ＡＴＡＣ／ＳＣＭ（ＣＬｌ）によって代表される。ケモカイン受容体は、ケモカインへのこれらの結合選択性によってグループ分けされる。例えば、ＣＸＣＲ４は、ＳＤＦ−Ｉに結合し、ＣＸＣＲ５は、Ｂ細胞誘引ケモカイン１（ＢＣＡ１）に結合する。ＣＸＣＲ４とＳＤＦ−１の相互作用は、腫瘍増殖、浸潤、血管新生、および転移を含めた腫瘍形成の複数のフェーズにおいて重要な役割を果たす。
【０００３】
ＣＸＣＲ４は、７回膜貫通型Ｇタンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ）である（Ｈｅｒｚｏｇら、ＤＮＡ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．、１２：４６５（１９９３）；Ｒｉｍｌａｎｄら、Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、４０：８６９（１９９１）；ＷＯ０３０１４１５３、ＷＯ０２０６１０８７）。多くの医学的に重要な生物学的プロセスは、Ｇタンパク質を伴うシグナル伝達経路によって媒介される（Ｌｅｆｋｏｗｉｔｚ、Ｎａｔｕｒｅ、３５１：３５３〜３５４、（１９９１））。Ｇタンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ）は、推定７回膜貫通ドメイン（ＴＭ）を含有する内在性膜タンパク質である。これらのタンパク質は、ひいては様々なエフェクタータンパク質を活性化し、最終的に生理的応答をもたらすヘテロ三量体Ｇタンパク質の活性化を介して細胞の内部へのシグナルを媒介する。
【０００４】
ＣＸＣＲ４は、胚形成、恒常性、および炎症において役割を果たす。さらに、ＣＸＣＲ４は、Ｔリンパ向性ＨＩＶ−Ｉ分離株の共同受容体として機能することが示された（Ｆｅｎｇ，Ｙ．ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２７２：８７２（１９９６））。ＣＸＣＲ４は、ヒトがんにおいて多面発現性の役割も果たす。その発現は、乳房、肺、大腸、膵臓、脳、前立腺、卵巣のがん、および造血がんを含めた多くの腫瘍型において上方制御される。いくつかの文献報告では、ＳＤＦ−１は、一部の腫瘍の増殖および／または生存因子としてＣＸＣＲ４を通じて作用し得ることが示唆されている。ＣＸＣＲ４は、多くの腫瘍の幹細胞様または腫瘍開始亜集団で発現され、がんの再発および転移拡散を支持するこれらの細胞の能力を媒介し得る。さらに、ＣＸＣＲ４は、内皮前駆細胞（ＥＰＣ）で発現され、その活性は、血管新生中の機能的血管へのＥＰＣの組込みに必要とされる。これは、腫瘍の血管新生および生存期間に著しい寄与をし得る。ＣＸＣＲ４シグナル伝達は、血管新生促進サイトカイン（例えば、ＶＥＧＦ）、ならびに腫瘍細胞による浸潤を媒介し得るインテグリン、接着分子、およびマトリックス分解酵素の誘導をもたらすこともできる。さらに、ＣＸＣＲ４発現は、腫瘍浸潤リンパ球および線維芽細胞、ならびに腫瘍関連マクロファージ上で検出される。これらの細胞は、腫瘍に対する免疫認識および攻撃を抑制し、腫瘍増殖および転移を助長するための腫瘍微小環境を再構築する傾向がある。
【０００５】
多くの一般的な腫瘍型における腫瘍増殖、および転移、およびその広い発現におけるＣＸＣＲ４の複数の役割は、この受容体を、阻害剤を使用する治療的介入に対する魅力的な標的にする。ＣＸＣＲ４のペプチドおよび低分子阻害剤ならびに抗ＣＸＣＲ抗体が、同定され、診療所に入ってきているが、これらの有用性は、薬物動態学的性質および毒性学によって制限されている。選択的であり、長い半減期、改善された有効性および安全性プロファイルを有する抗体または抗体−薬剤コンジュゲートなどの作用物質が、がんの治療で使用するのに望ましい作用物質であるはずである。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
ＣＸＣＲ４を標的にする開発中の様々な作用物質があるが、改善された有効性および安全性プロファイルを有し、ヒト患者に使用するのに適したＣＸＣＲ４を標的にする追加の治療剤（抗体または抗体−薬剤コンジュゲートなど）の必要性が存在する。本発明の抗体および抗体−薬剤コンジュゲートは、腫瘍形成、腫瘍増殖、血管新生、および転移を低減することなどのいくつかの望ましい特性を有する治療的に有用な抗ＣＸＣＲ４抗体である。さらに、本発明の抗体および抗体−薬剤コンジュゲートは、腫瘍細胞のアポトーシスを誘導する。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、ケモカイン受容体４（ＣＸＣＲ４）に結合する単離抗体、これらの抗原結合断片および誘導体、ならびに抗体−薬剤コンジュゲートを提供する。本発明は、抗体の可変重鎖および軽鎖のアミノ酸配列、ならびにこれらの対応する核酸配列を含む。
【０００８】
一態様では、本発明は、相補性決定領域（ＣＤＲ）が得られた親分子のＣＸＣＲ４結合能力を保持する１つもしくは複数のＣＤＲ領域またはＣＤＲ由来領域を含む結合分子を得るための抗体のＣＤＲ配列を含む。
【０００９】
別の態様では、本発明は、本明細書に開示の抗ＣＸＣＲ４抗体を含む抗体−薬剤コンジュゲートを提供する。
【００１０】
別の態様では、本発明は、ＣＸＣＲ４の発現または機能に関連した障害を検出および診断するための、抗ＣＸＣＲ４抗体、その抗原結合断片、および抗体−薬剤コンジュゲート、ならびに対応するプロセスの使用を含む。一態様では、障害は、ＣＸＣＲ４の過剰発現と関連がある通常または任意の他の病理と比べたＣＸＣＲ４の発現の増大に関連したがん障害である。
【００１１】
別の態様では、本発明は、ある特定のがんの予後または診断または療法のモニタリングのための、少なくともこのような抗体、抗原結合断片、または抗体−薬剤コンジュゲートを含む製品および／もしくは組成物またはキットを含む。
【００１２】
一態様では、本発明は、ケモカイン受容体４（ＣＸＣＲ４）に結合し、ａ）（ｉ）配列番号１０７、１１３、１１４、１０８、１０９、１１５、１１６、１１７、１２１、および１２２からなる群から選択される重鎖可変（ＶＨ）  ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号１６２、１２８、１１０、１１１、１１８、１１９、１５４、１２３、１５８、１２４、１５９、１２５、１６０、１２６、１６１、１２７、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１５５、１２９、１５６、および１３０からなる群から選択されるＶＨ  ＣＤＲ２、ならびに（ｉｉｉ）配列番号１１２および１２０からなる群から選択されるＶＨ  ＣＤＲ３を含むＶＨ領域、ならびに／または、ｂ）（ｉ）配列番号１４４、１３１、１３５、１３８、１４１、１４２、１４３、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、および１５１からなる群から選択される軽鎖可変領域（ＶＬ）  ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号１４５、１３２、１３６、および１５２からなる群から選択されるＶＬ  ＣＤＲ２、ならびに（ｉｉｉ）配列番号１３９、１３３、１３７、１４０、および１５３からなる群から選択されるＶＬ  ＣＤＲ３を含むＶＬ領域を含む、単離抗体またはその抗原結合断片を提供する。
【００１３】
別の態様では、本発明は、ケモカイン受容体４（ＣＸＣＲ４）に結合し、ａ）（ｉ）配列番号１０７、１１３、１１４、１０８、１０９、１１５、１１６、１１７、１２１、もしくは１２２として示した配列を含む重鎖可変（ＶＨ）  ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号１６２、１２８、１１０、１１１、１１８、１１９、１５４、１２３、１５８、１２４、１５９、１２５、１６０、１２６、１６１、１２７、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１５５、１２９、１５６、もしくは１３０として示した配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２、ならびに（ｉｉｉ）配列番号１１２もしくは１２０として示した配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３からなる群から選択される相補性決定領域を含むＶＨ領域、ならびに／またはｂ）（ｉ）配列番号１４４、１３１、１３５、１３８、１４１、１４２、１４３、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、もしくは１５１として示した配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）  ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号１４５、１３２、１３６、もしくは１５２として示した配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２、ならびに（ｉｉｉ）配列番号１３９、１３３、１３７、１４０、もしくは１５３として示した配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３からなる群から選択される相補性決定領域を含むＶＬ領域を含む、単離抗体またはその抗原結合断片を提供する。
【００１４】
別の態様では、本発明は、ケモカイン受容体４（ＣＸＣＲ４）に結合し、ａ）（ｉ）配列Ｘ１ＳＸ２Ｘ３ＳＬＦＮＳＸ４Ｘ５ＲＫＮＹＬＸ６（式中、Ｘ１は、ＲもしくはＫであり、Ｘ２は、ＳもしくはＡであり、Ｘ３は、Ｗ、Ｎ、もしくはＱであり、Ｘ４は、ＨもしくはＲであり、Ｘ５は、ＴもしくはＦであり、かつ／またはＸ６は、Ａ、Ｌ、Ｎ、もしくはＭである）（配列番号１５１）を含む軽鎖可変（ＶＬ）  ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列ＷＡＳＡＲＸ１Ｓ（式中、Ｘ１は、ＧもしくはＥである）（配列番号１５２）を含むＶＬ  ＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列ＫＱＳＦＸ１ＬＲＴ（式中、Ｘ１は、ＮもしくはＲである）（配列番号１５３）を含むＶＬ  ＣＤＲ３を含むＶＬ領域、ならびに／またはｂ）（ｉ）配列番号１０７、１０８、１０９、１１３、または１１４として示した配列を含む重鎖可変（ＶＨ）  ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号１５７として示した配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列番号１１２として示した配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３を含むＶＨ領域を含む、単離抗体またはその抗原結合断片を提供する。
【００１５】
一態様では、本発明は、ＣＸＣＲ４に結合し、ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＤＹＹＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＸ１ＦＩＲＨＫＸ２ＮＸ３Ｘ４ＴＸ５ＥＹＳＴＸ６Ｘ７Ｘ８ＧＲＦＴＩＳＲＤＸ９ＳＫＮＸ１０ＬＹＬＱＭＮＳＬＸ１１Ｘ１２ＥＤＴＡＶＹＹＣＡＸ１３ＤＬＰＧＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１０６）（式中、Ｘ１は、ＧもしくはＳであり、Ｘ２は、ＶもしくはＡであり、Ｘ３は、Ｇ、Ｆ、Ｋ、Ｖ、Ｔ、Ｌ、もしくはＩであり、Ｘ４は、ＥもしくはＹであり、Ｘ５は、ＴもしくはＲであり、Ｘ６は、ＷもしくはＳであり、Ｘ７は、ＤもしくはＶであり、Ｘ８は、Ｋ、Ｔ、もしくはＲであり、Ｘ９は、ＤもしくはＮであり、Ｘ１０は、ＴもしくはＳであり、Ｘ１１は、ＲもしくはＫであり、Ｘ１２は、ＡもしくはＴであり、かつ／またはＸ１３は、ＫもしくはＲである）を含む重鎖可変（ＶＨ）領域配列を含む、単離抗体またはその抗原結合断片を提供する。
【００１６】
一態様では、本発明は、ａ）配列番号１０７、１１３、または１１４の重鎖可変（ＶＨ）  ＣＤＲ１、配列番号１６２または１２８のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１４４の軽鎖可変（ＶＬ）  ＣＤＲ１、配列番号１４５のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１３９のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｂ）配列番号１１５、１１６、１１７、１２１、または１２２のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１１８または１１９のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１２０のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１３５のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１３６のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１３７のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｃ）配列番号１０７、１０８、１０９、１１３、または１１４のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１１０または１１１のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１３１のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１３２のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１３３のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｄ）配列番号１０７、１０８、１０９、１１３、または１１４のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１５４または１２３のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１３８のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１３２のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１３９のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ならびにｅ）配列番号１０７、１０８、１０９、１１３、または１１４のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１５７のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１５１のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１５２のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１５３のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域からなる群から選択される、ケモカイン受容体４（ＣＸＣＲ４）に結合する単離抗体またはその抗原結合断片を提供する。
【００１７】
一態様では、本発明は、ａ）配列番号１０７の重鎖可変（ＶＨ）  ＣＤＲ１、配列番号１６２のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１４４の軽鎖可変（ＶＬ）  ＣＤＲ１、配列番号１４５のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１３９のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｂ）配列番号１１５のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１１８のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１２０のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１３５のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１３６のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１３７のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｃ）配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１１０のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１３１のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１３２のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１３３のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｄ）配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１５４のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１３８のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１３２のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１３９のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ならびにｅ）配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１５７のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１５１のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１５２のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１５３のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域からなる群から選択される単離抗体またはその抗原結合断片を提供する。
【００１８】
一態様では、本発明は、ａ）配列番号１０７の重鎖可変（ＶＨ）  ＣＤＲ１、配列番号１５８のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１３８の軽鎖可変（ＶＬ）  ＣＤＲ１、配列番号１３２のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１３９のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｂ）配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１５８のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１３８のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１３２のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１４０のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｃ）配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１５８のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１５０のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１３２のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１４０のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｄ）配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１５８のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１４１のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１３２のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１４０のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｅ）配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１５８のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１４４のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１４５のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１４０のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｆ）配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１５８のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１４７のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１３２のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１４０のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｇ）配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１５９のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１３８のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１３２のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１４０のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｈ）配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１６０のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１３８のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１３２のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１４０のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｉ）配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１６１のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１３８のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１３２のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１４０のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｊ）配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１６２のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１３８のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１３２のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１４０のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｋ）配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１６３のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１３８のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１３２のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１４０のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｌ）配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１６４のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１３８のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１３２のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１４０のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｍ）配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１６５のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１３８のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１３２のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１４０のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｏ）配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１６６のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１３８のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１３２のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１４０のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｐ）配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１６７のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１３８のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１３２のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１４０のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｑ）配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１６８のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１３８のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１３２のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１４０のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｒ）配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１６８のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１３８のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１３２のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１４０のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｓ）配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１６３のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１４４のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１４５のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１４０のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｔ）配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１５８のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１４４のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１４５のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１３９のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｕ）配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１６２のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１４４のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１４５のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１３９のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｖ）配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１６３のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１４４のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１４５のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１３９のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ならびにｗ）配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１６２のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１４４のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１４５のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１４０のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域からなる群から選択される単離抗体またはその抗原結合断片を提供する。
【００１９】
本発明の特定の態様では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１０７、１６２、および１１２として示した３つのＣＤＲを含む重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。いくつかの態様では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１４４、１４５、および１３９として示した３つのＣＤＲを含む軽鎖可変（ＶＬ）領域を含む。いくつかの態様では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１０７、１６２、および１１２として示した３つのＣＤＲを含む重鎖可変（ＶＨ）領域、ならびに配列番号１４４、１４５、および１３９として示した３つのＣＤＲを含む軽鎖可変（ＶＬ）領域を含む。
【００２０】
本発明のいくつかの態様では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３３の重鎖可変（ＶＨ）領域に由来するＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、およびＶＨ  ＣＤＲ３を含むＶＨ領域を含む。他の態様では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号７３の軽鎖可変（ＶＬ）領域に由来するＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、およびＶＬ  ＣＤＲ３を含むＶＬ領域を含む。
【００２１】
本発明のいくつかの態様では、単離抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３３の重鎖可変（ＶＨ）領域に由来するＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、およびＶＨ  ＣＤＲ３を含むＶＨ領域、ならびに配列番号７３の軽鎖可変（ＶＬ）領域に由来するＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、およびＶＬ  ＣＤＲ３を含むＶＬ領域を含む。
【００２２】
本発明のいくつかの態様では、単離抗体またはその抗原結合断片は、ａ）配列番号３３のＶＨ領域および配列番号７３のＶＬ領域を含む抗体またはその抗原結合断片、ｂ）配列番号１３のＶＨ領域および配列番号１５のＶＬ領域を含む抗体またはその抗原結合断片、ｃ）配列番号５のＶＨ領域および配列番号７のＶＬ領域を含む抗体またはその抗原結合断片、ｄ）配列番号２１のＶＨ領域および配列番号４７のＶＬ領域を含む抗体またはその抗原結合断片、ならびにｅ）配列番号１０６のＶＨ領域、ならびに配列番号１３８のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１３２のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１３９のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域を含む抗体またはその抗原結合断片からなる群から選択される。
【００２３】
本発明のいくつかの態様では、単離抗体またはその抗原断片は、配列番号３３と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号７３と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。
【００２４】
本発明の特定の態様では、抗体またはその抗原結合断片は、ａ）配列番号３３の重鎖可変（ＶＨ）領域、および／またはｂ）配列番号７３の軽鎖可変（ＶＬ）領域を含む。
【００２５】
本発明のいくつかの態様では、抗体または抗原結合断片は、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１２１３５３を有する発現ベクターによって生成される重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。本発明のいくつかの態様では、抗体または抗原結合断片は、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１２１３５４を有する発現ベクターによって生成される軽鎖可変（ＶＬ）領域を含む。
【００２６】
本発明のいくつかの態様では、単離抗体またはその抗原結合断片は、
ａ）配列番号１０７の重鎖可変（ＶＨ）  ＣＤＲ１、配列番号１５８のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１３８の軽鎖可変（ＶＬ）  ＣＤＲ１、配列番号１３２のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１３９のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、
ｂ）配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１５８のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１３８のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１３２のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１４０のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｃ）配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１５８のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１５０のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１３２のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１４０のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｄ）配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１５８のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１４１のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１３２のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１４０のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｅ）配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１５８のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１４４のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１４５のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１４０のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｆ）配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１５８のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１４７のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１３２のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１４０のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｇ）配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１５９のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１３８のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１３２のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１４０のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｈ）配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１６０のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１３８のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１３２のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１４０のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｉ）配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１６１のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１３８のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１３２のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１４０のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｊ）配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１６２のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１３８のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１３２のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１４０のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｋ）配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１６３のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１３８のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１３２のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１４０のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｌ）配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１６４のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１３８のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１３２のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１４０のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｍ）配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１���５のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１３８のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１３２のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１４０のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｎ）配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１６６のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１３８のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１３２のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１４０のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｏ）配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１６７のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１３８のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１３２のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１４０のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｐ）配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１６８のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１３８のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１３２のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１４０のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｑ）配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１６８のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１３８のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１３２のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１４０のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｒ）配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１６３のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１４４のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１４５のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１４０のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｓ）配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１５８のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１４４のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１４５のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１３９のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｔ）配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１６２のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１４４のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１４５のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１３９のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｕ）配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１６３のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１４４のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１４５のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１３９のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ならびにｖ）配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１６２のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１４４のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１４５のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１４０のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域からなる群から選択される。
【００２７】
本発明のいくつかの態様では、ＣＸＣＲ４に結合する単離抗体またはその抗原結合断片は、本明細書に開示の抗体またはその抗原結合断片とＣＸＣＲ４への結合を競合し、かつ／またはそれと同じＣＸＣＲ４のエピトープに結合する。
【００２８】
本発明のいくつかの態様では、単離抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１６２のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１４４のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１４５のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１３９のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域を含む。
【００２９】
本発明のいくつかの態様では、抗体またはその抗原結合断片は、ヒト化、キメラ、ＣＤＲ移植、または組換えヒト抗体である。本発明の他の態様では、抗体またはその抗原結合断片は、イヌ化またはネコ化されていない。
【００３０】
本発明のいくつかの態様では、抗体またはその抗原結合断片は、特定の部位で遺伝子工学的に改変されたアシルドナーグルタミン含有タグを含む。
【００３１】
本発明のいくつかの態様では、抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲートが提供される。本発明の抗体−薬剤コンジュゲートは一般に、式：Ａｂ−（Ｔ−Ｌ−Ｄ）（式中、Ａｂは、ケモカイン受容体４（ＣＸＣ４）に結合する抗体またはその抗原結合断片であり、Ｔは、含まれていてもよいアシルドナーグルタミン含有タグであり、Ｌは、リンカーであり、Ｄは、薬剤である）のものである。
【００３２】
特定の態様では、本発明の抗体薬剤コンジュゲートは、ａ）配列番号１０７、１６２、および１１２のＣＤＲを含むＶＨ領域、ならびに配列番号１４４、１４５、および１３９のＣＤＲを含むＶＬ領域を含む抗体またはその抗原結合断片、ｂ）配列番号１１５、１１８、および１２０のＣＤＲを含むＶＨ領域、ならびに配列番号１３５、１３６、および１３７のＣＤＲを含むＶＬ領域を含む抗体またはその抗原結合断片、ｃ）配列番号１０７、１１０、および１１２のＣＤＲを含むＶＨ領域、ならびに配列番号１３１、１３２、および１３３のＣＤＲを含むＶＬ領域を含む抗体またはその抗原結合断片、ｄ）配列番号１０７、１５４、および１１２のＣＤＲを含むＶＨ領域、ならびに配列番号１３８、１３２、および１３９のＣＤＲを含むＶＬ領域を含む抗体またはその抗原結合断片、ｅ）配列番号１０７、１５７、および１１２のＣＤＲを含むＶＨ領域、ならびに配列番号１５１、１５２、および１５３のＣＤＲを含むＶＬ領域を含む抗体またはその抗原結合断片、ｆ）配列番号３３のＶＨ領域、および配列番号７３のＶＬ領域を含む抗体またはその抗原結合断片、ｇ）配列番号１３のＶＨ領域、および配列番号１５のＶＬ領域を含む抗体またはその抗原結合断片、ｈ）配列番号５のＶＨ領域、および配列番号７のＶＬ領域を含む抗体またはその抗原結合断片、ならびにｉ）配列番号２１のＶＨ領域、および配列番号４７のＶＬ領域を含む抗体またはその抗原結合断片からなる群から選択される。
【００３３】
本発明のいくつかの抗体−薬剤コンジュゲートでは、Ａｂは、ヒト化、キメラ、ＣＤＲ移植、もしくは組換えヒト抗体、またはその抗原結合断片である。本発明のいくつかの抗体−薬剤コンジュゲートでは、Ｔは、配列番号１７１、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１７２、１７３、１０２、１０３、およびＬＬＱからなる群から選択される。本発明のいくつかの抗体−薬剤コンジュゲートでは、Ｌは、アセチル−リシン−バリン−シトルリン−ｐ−アミノベンジルオキシカルボニル（ＡｃＬｙｓ−ＶＣ−ＰＡＢＣ）、アミノＰＥＧ６−プロピオニル、マレイミドカプロニック−バリン−シトルリン−ｐ−アミノベンジルオキシカルボニル（ｖｃ）、およびマレイミドカプロイル（ｍｃ）からなる群から選択される。本発明のいくつかの抗体−薬剤コンジュゲートでは、Ｄは、細胞毒性剤、免疫調節剤、造影剤、治療用タンパク質、バイオポリマー、およびオリゴヌクレオチドからなる群から選択される。
【００３４】
本発明の任意の抗体−薬剤コンジュゲートを、細胞毒性剤である薬剤を用いて調製することができる。細胞毒性剤は、アントラサイクリン、オーリスタチン、カンプトテシン、コンブレタスタチン、ドラスタチン、デュオカルマイシン、エンジイン、ゲルダナマイシン、インドリノ−ベンゾジアゼピン二量体、マイタンシン、ピューロマイシン、ピロロベンゾジアゼピン二量体、タキサン、ビンカアルカロイド、ツブリシン、ヘミアステルリン、スプリセオスタチン、プラジエノライド、およびカリケアマイシンであり得る。本発明の任意の抗体−薬剤コンジュゲートを、オーリスタチンである薬剤を用いて調製することができる。一態様では、オーリスタチンは、０１０１（２−メチルアラニル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソ−３−｛［（１Ｓ）−２−フェニル−１−（１，３−チアゾール−２−イル）エチル］アミノ｝プロピル］ピロリジン−１−イル｝−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド）、ＭＭＡＤ（モノメチルオーリスタチンＤまたはモノメチルドラスタチン１０）、および８２６１（２−メチルアラニル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−３−｛［（１Ｓ）−１−カルボキシ−２−フェニルエチル］アミノ｝−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド）であり得る。
【００３５】
特定の態様では、本発明の抗体−薬剤コンジュゲートは、ａ）Ａｂ−ＬＬＱＧＡ（配列番号９１）−（アセチル−リシン−バリン−シトルリン−ｐ−アミノベンジルオキシカルボニル（ＡｃＬｙｓ−ＶＣ−ＰＡＢＣ））−０１０１；Ａｂ−ＬＬＱＧＡ（配列番号９１）−（ＡｃＬｙｓ−ＶＣ−ＰＡＢＣ）−ＭＭＡＤ；ｃ）Ａｂ−ＬＬＱＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５（配列番号１０２）−（ＡｃＬｙｓ−ＶＣ−ＰＡＢＣ）−０１０１；ｄ）Ａｂ−ＬＬＱＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５（配列番号１０２）−（ＡｃＬｙｓ−ＶＣ−ＰＡＢＣ）−ＭＭＡＤ；ｅ）Ａｂ−ＧＧＬＬＱＧＡ（配列番号９２）−（ＡｃＬｙｓ−ＶＣ−ＰＡＢＣ）−０１０１；およびｆ）Ａｂ−ＧＧＬＬＱＧＡ（配列番号９２）−（ＡｃＬｙｓ−ＶＣ−ＰＡＢＣ）−ＭＭＡＤからなる群から選択される。
【００３６】
本発明のいくつかの態様では、ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲートは、本明細書に開示の抗体またはこれらの抗原結合断片のいずれかを含む。本発明の特定の態様では、本発明の抗体−薬剤コンジュゲートは、配列番号１０７、１６２、および１１２のＣＤＲを含むＶＨ領域ならびに配列番号１４４、１４５、および１３９のＣＤＲを含むＶＬ領域を含む抗体を含む。
【００３７】
本明細書に開示のＣＸＣＲ４抗体、その抗原結合断片、または抗体−薬剤コンジュゲート、および薬学的に許容できる担体を含む医薬組成物がさらに提供される。
【００３８】
本発明のいくつかの態様では、本明細書に開示の抗ＣＸＣＲ４抗体またはこれらの抗原結合断片のいずれかをコードするヌクレオチド配列を含む単離ポリヌクレオチドが提供される。いくつかの態様では、本明細書に開示の抗体またはその抗原結合断片を組換え産生する宿主細胞が提供される。
【００３９】
他の態様では、対象におけるＣＸＣＲ４機能または発現に関連した障害を治療する方法であって、対象に、有効量の本発明の医薬組成物を投与するステップを含む、方法が提供される。本発明の特定の態様では、障害は、がんである。
【００４０】
他の態様では、対象におけるＣＸＣＲ４発現がん細胞の転移を減少させる方法であって、それを必要とする対象に、有効量の本明細書に開示の医薬組成物を投与するステップを含む、方法が提供される。他の態様では、ＣＸＣＲ４発現腫瘍を有する対象において腫瘍退縮を誘導する方法であって、それを必要とする対象に、有効量の本明細書に開示の医薬組成物を投与するステップを含む、方法が提供される。
【００４１】
本発明のこれらおよび他の態様は、全体として本願を精査することによって理解されることになる。
【図面の簡単な説明】
【００４２】
【図１】ｈ３Ｇ１０重鎖可変領域（ＶＨ）のアラインメントを示す図である。
【図２】ｈ３Ｇ１０軽鎖可変領域（ＶＬ）のアラインメントを示す図である。
【図３】図３Ａ：ＨＰＢ−ＡＬＬ（ヒトＴ細胞白血病）およびＣｙｎｏ−ＣＸＣＲ４トランスフェクトＣＨＯ細胞に対する希釈系列（０．００７〜２６７ｎＭ）中のフローサイトメトリーによる、カニクイザルＣＸＣＲ４への抗ヒトＣＸＣＲ４  Ａｂ  ｈ３Ｇ１０．１．９１．Ａ５８Ｂの交差反応性を示す図である。    図３Ｂ：Ｒａｊｉ（ＮＨＬ；ヒト非ホジキンリンパ腫）およびＨＳＣ−Ｆ（カニクイザルＴ細胞株）に対する希釈系列（０．００７〜２６７ｎＭ）中のフローサイトメトリーによる、カニクイザルＣＸＣＲ４への抗ヒトＣＸＣＲ４  Ａｂ  ｈ３Ｇ１０．１．９１．Ａ５８Ｂの交差反応性を示す図である。
【図４−１】図４Ａ：ＣＸＣＲ４を発現するヒト細胞株に対する抗ヒトＣＸＣＲ４抗体のＡＤＣＣ活性を示す図である。Ｒａｍｏｓ（ＮＨＬ）細胞に対する１２Ａ１１、６Ｂ６、および３Ｇ１０抗ヒトＣＸＣＲ４抗体のＡＤＣＣ活性を示す図である。    図４Ｂ：ＣＸＣＲ４を発現するヒト細胞株に対する抗ヒトＣＸＣＲ４抗体のＡＤＣＣ活性を示す図である。ＭＯＬＴ−４（Ｔ急性リンパ芽球性白血病）細胞に対するｍ３Ｇ１０−ｈＩｇＧ１およびｍ３Ｇ１０−ｈＩｇＧ４抗ヒトＣＸＣＲ４抗体のＡＤＣＣ活性の比較を示す図である。
【図４−２】図４Ｃ：ＣＸＣＲ４を発現するヒト細胞株に対する抗ヒトＣＸＣＲ４抗体のＡＤＣＣ活性を示す図である。ＭＯＬＴ−４（Ｔ急性リンパ芽球性白血病）細胞に対するマウス（ｍ３Ｇ１０−）およびヒト化（ｈ３Ｇ１０−）抗ヒトＣＸＣＲ４抗体のＡＤＣＣ活性を示す図である。    図４Ｄ：ＣＸＣＲ４を発現するヒト細胞株に対する抗ヒトＣＸＣＲ４抗体のＣＤＣ活性を示す図である。Ｒａｍｏｓ（ＮＨＬ）細胞に対する１２Ａ１１、６Ｂ６、および３Ｇ１０抗ヒトＣＸＣＲ４抗体のＣＤＣ活性を示す図である。
【図４−３】図４Ｅ：ＣＸＣＲ４を発現するヒト細胞株に対する抗ヒトＣＸＣＲ４抗体のＣＤＣ活性を示す図である。Ｄａｕｄｉ（ＮＨＬ）細胞に対するｍ３Ｇ１０−ｈＩｇＧ１およびｍ３Ｇ１０−ｈＩｇＧ４抗ヒトＣＸＣＲ４抗体のＣＤＣ活性の比較を示す図である。    図４Ｆ：ＣＸＣＲ４を発現するヒト細胞株に対する抗ヒトＣＸＣＲ４抗体のＣＤＣ活性を示す図である。Ｄａｕｄｉ（ＮＨＬ）細胞に対するマウス（ｍ３Ｇ１０−）およびヒト化（ｈ３Ｇ１０−）抗ヒトＣＸＣＲ４抗体のＣＤＣ活性を示す図である。
【図５】３Ｇ１０、６Ｂ６、および１２Ａ１１抗ヒトＣＸＣＲ４抗体によるカルシウム流出の阻害を示す図である。
【図６】図６Ａ：３Ｇ１０、６Ｂ６、および１２Ａ１１抗ヒトＣＸＣＲ４抗体が、用量依存様式で、Ｒａｍｏｓ細胞内で細胞死を誘導することができることを示す図である。    図６Ｂ：抗ヒトＣＸＣＲ４抗体３Ｇ１０の細胞死を誘導する能力が、２価依存性であることを示す図である。
【図７】３Ｇ１０、６Ｂ６、および１２Ａ１１抗ヒトＣＸＣＲ４抗体が、アイソタイプ対照抗体と比較して非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）モデル（Ｒａｍｏｓ）において腫瘍増殖を有意に阻害したことを示す図である。
【図８−１】図８Ａ：抗ヒトＣＸＣＲ４抗体３Ｇ１０、６Ｂ６、および１２Ａ１１が、Ｒａｊｉ−ＬＵＣ細胞を全身的に移植された動物の全身腫瘍組織量に対して、アイソタイプ対照抗体と比較して有意な効果を有することを示す図である。    図８Ｂ：抗ヒトＣＸＣＲ４抗体３Ｇ１０、６Ｂ６、および１２Ａ１１による処置が、このモデルにおいてアイソタイプ対照抗体と比べて同等のかつ有意な腫瘍増殖阻害（ＴＧＩ）活性を有していたことを示す図である。
【図８−２】図８Ｃ：Ｒａｊｉ−ＬＵＣ細胞を全身的に移植された動物の生存期間における、アイソタイプ対照抗体と比較した、抗ヒトＣＸＣＲ４抗体３Ｇ１０、６Ｂ６、および１２Ａ１１の有意な効果を示す生存曲線である。
【図９】図９Ａ：急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）モデル（ＭＶ４−１１−ＬＵＣ）における全身腫瘍組織量に対するＣＸＣＲ４  Ａｂ  ６Ｂ６の効果を示す図である。２０日目から４１日目までの５動物／処置群の代表的な生物発光イメージングが示されている。    図９Ｂ：ＭＶ４−１１−ＬＵＣ  ＡＭＬ細胞を全身的に移植された動物の生存期間における、アイソタイプ対照抗体と比較した、抗ＣＸＣＲ４抗体６Ｂ６の有意な効果を示す図である。    図９Ｃ：試験の３５日目におけるアイソタイプ対照処置動物と比較した、抗ＣＸＣＲ４  ６Ｂ６抗体で処置された動物の末梢血（ＰＢ）中のヒトＡＭＬ全身腫瘍組織量の有意な低減を示す図である。
【図１０】図１０Ａ：ＣＸＣＲ４  ３Ｇ１０抗体で処置された全身性慢性リンパ球性白血病腫瘍を有するマウスにおける代表的なルシフェラーゼイメージングを示す図である。    図１０Ｂ：慢性リンパ球性白血病細胞を全身的に移植された動物の生存期間における、アイソタイプ対照抗体と比較した抗ヒトＣＸＣＲ４抗体３Ｇ１０の有意な効果を示す生存曲線である。
【図１１】ヒト化抗ヒトＣＸＣＲ４抗体が、アイソタイプ対照抗体と比較して、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）モデル（Ｒａｍｏｓ）において腫瘍増殖を有意に阻害したことを示す図である。
【図１２−１】図１２Ａ：多発性骨髄腫（ＭＭ）モデル（ＯＰＭ−２−ＬＵＣ）における全身腫瘍組織量に対するＣＸＣＲ４  Ａｂ  ｈ３Ｇ１０．１．９１．Ａ５８Ｂの効果を示す図である。８日目から３０日目までの５動物／処置群の代表的な生物発光イメージングが示されている。
【図１２−２】図１２Ｂ：アイソタイプ（Ｉｓｏｐｙｐｅ）対照抗体およびメルファランで処置された動物と比較した、抗ヒトＣＸＣＲ４抗体ｈ３Ｇ１０．１．９１．Ａ５８Ｂで処置されたマウス全身性多発性骨髄腫（ＭＭ）モデルにおける生物発光（ルシフェラーゼ活性）の定量化を示す図である。    図１２Ｃ：ＯＰＭ−２−Ｌｕｃ  ＭＭ細胞を全身的に移植されたマウスにおける、アイソタイプ対照抗体およびメルファランと比較した、抗ＣＸＣＲ４抗体ｈ３Ｇ１０．１．９１．Ａ５８Ｂの有意な効果を示す生存曲線である。
【図１３】図１３Ａ：Ｒａｍｏｓ（ＮＨＬ）腫瘍モデルにおける、ＣＸＣＲ４  ＡＤＣ  ３Ｇ１０−ＴＧ６−ｖｃ０１０１および６Ｂ６−ＴＧ６−ｖｃ０１０１の有意な抗腫瘍効果を示す図である。    図１３Ｂ：ＨＰＢ−ＡＬＬ（Ｔ−ＡＬＬ）腫瘍モデルにおける、ＣＸＣＲ４  ＡＤＣ  ３Ｇ１０−ＴＧ６−ｖｃ０１０１の有意な抗腫瘍効果を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００４３】
本明細書に開示の発明は、ＣＸＣＲ４（例えば、ヒトＣＸＣＲ４）に結合する抗体および抗体コンジュゲート（例えば、抗体−薬剤コンジュゲート）を提供する。本発明は、これらの抗体をコードするポリヌクレオチド、これらの抗体を含む組成物、ならびにこれらの抗体を作製および使用する方法も提供する。ある特定の態様では、本開示の抗体は、特定の重鎖および軽鎖生殖系列配列に由来し、かつ／または特定のアミノ酸配列を含むＣＤＲ領域などの特定の構造的特徴を含む。本開示は、単離抗体、このような抗体、これらの抗原結合断片、抗体−薬剤コンジュゲート、およびこのような抗体を含む二重特異性分子を作製する方法、ならびに本開示の抗体、これらの抗原結合断片、抗体−薬剤コンジュゲート、または二重特異性分子を含有する医薬組成物を提供する。本開示はまた、がんなどのＣＸＣＲ４の機能または発現に関連した障害における、ＣＸＣＲ４を検出するため、ＣＸＣＲ４活性を調節するため、および／または破壊（例えば、ＡＤＣＣ、ＣＤＣ、毒素）用ＣＸＣＲ４発現細胞を標的にするためなどに抗体を使用する方法に関する。本発明は、がん（例えば、固形腫瘍がんまたは血液がん）などの対象におけるＣＸＣＲ４機能または発現に関連した障害の予防的および／または治療的処置のための方法も提供する。最後に、本発明は、コンジュゲーション（例えば、抗体−薬剤コンジュゲート）で、または他の抗がん化合物、例えば、抗体、毒素、細胞毒性薬／細胞増殖抑制性薬などと組み合わせてこのような抗体を含む組成物、ならびにがんなどのＣＸＣＲ４の機能または発現に関連した障害を予防および／または治療するためのこの組成物の使用を含む。
【００４４】
一般的な技法
本発明の実施では、別段の指定のない限り、分子生物学（組換え技法を含む）、微生物学、細胞生物学、生化学、および免疫学の慣例的な技法を使用し、これらは、当技術分野の技術内である。このような技法は、文献、例えば、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、２版（Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９８９）Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ；Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ編、１９８４）；Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ；Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｎｏｔｅｂｏｏｋ（Ｊ．Ｅ．Ｃｅｌｌｉｓ編、１９９８）Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ；Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ編、１９８７）；Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｃｅｌｌ  ａｎｄ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｊ．Ｐ．ＭａｔｈｅｒおよびＰ．Ｅ．Ｒｏｂｅｒｔｓ、１９９８）Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ；Ｃｅｌｌ  ａｎｄ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ：Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ（Ａ．Ｄｏｙｌｅ、Ｊ．Ｂ．Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ、およびＤ．Ｇ．Ｎｅｗｅｌｌ編、１９９３〜１９９８）Ｊ．Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ；Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）；Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｄ．Ｍ．  ＷｅｉｒおよびＣ．Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ編）；Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  Ｖｅｃｔｏｒｓ  ｆｏｒ  Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｃｅｌｌｓ（Ｊ．Ｍ．ＭｉｌｌｅｒおよびＭ．Ｐ．Ｃａｌｏｓ編、１９８７）；Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌら編、１９８７）；ＰＣＲ：Ｔｈｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ｃｈａｉｎ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ、（Ｍｕｌｌｉｓら編、１９９４）；Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎら編、１９９１）；Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（ＷｉｌｅｙおよびＳｏｎｓ、１９９９）；Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ（Ｃ．Ａ．ＪａｎｅｗａｙおよびＰ．Ｔｒａｖｅｒｓ、１９９７）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｐ．Ｆｉｎｃｈ、１９９７）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ  ｐｒａｃｔｉｃａｌ  ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｄ．Ｃａｔｔｙ編、ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ、１９８８〜１９８９）；Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ  ｐｒａｃｔｉｃａｌ  ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｐ．ＳｈｅｐｈｅｒｄおよびＣ．Ｄｅａｎ編、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ、２０００）；Ｕｓｉｎｇ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ｍａｎｕａｌ（Ｅ．ＨａｒｌｏｗおよびＤ．Ｌａｎｅ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、１９９９）；およびＴｈｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｍ．ＺａｎｅｔｔｉおよびＪ．Ｄ．Ｃａｐｒａ編、Ｈａｒｗｏｏｄ  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、１９９５）などで完全に説明されている。
【００４５】
定義および略語
用語「ケモカイン（Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフ）受容体４」および「ＣＸＣＲ４」は、本明細書において、細胞の膜内に通常埋もれているＧタンパク質共役７回膜貫通ドメインケモカイン受容体を指す。この用語は、バリアント、アイソフォーム、同族体、オルソログ、およびパラログも含む。ヒトＣＸＣＲ４の核酸およびポリペプチド配列は、それぞれ、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿００３４６７およびＮＰ＿００３４５８として開示されている。ヒトＣＸＣＲ４のさらなる記述は、Ｆｅｄｅｒｓｐｐｉｅｌ，Ｂ．ら、Ｇｅｎｏｍｉｃｓ、１６（３）：７０７〜７１２（１９９３）；Ｈｅｒｚｏｇ，Ｈ．ら、ＤＮＡ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．、１２（６）：４６５〜４７１（１９９３）；Ｊａｚｉｎ，Ｅ．Ｅ．ら、Ｒｅｇｕｌ．Ｐｅｐｔ、４７（３）：２４７〜２５８（１９９３）；Ｎｏｍｕｒａ，Ｈ．ら、Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、５（１０）：１２３９〜１２４９（１９９３）；Ｌｏｅｔｓｃｈｅｒ，Ｍ．ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２６９（１）：２３２〜２３７（１９９４）；Ｍｏｒｉｕｃｈｉ，Ｍ．ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５９（９）：４３２２〜４３２９（１９９７）；Ｃａｒｕｚ，Ａ．ら、ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．、４２６（２）：２７１〜２７８（１９９８）；およびＷｅｇｎｅｒ，Ｓ．Ａ．ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２７３（８）：４７５４〜４７６０（１９９８）において見つけることができる。
【００４６】
ＣＸＣＲ４は、例えば、ＬＥＳＴＲ、ＣＤ１８４、ＣＤ１８４抗原、Ｃ−Ｘ−Ｃケモカイン受容体タイプ４、ＣＸＣＲ−４、ＣＸＣＬ−１２、ＣＸＣＲ−Ｒ４、Ｄ２Ｓ２０１Ｅ、ＦＢ２２、融合物、Ｆｕｓｉｎ、ＨＭ８９、ＨＳＹ３ＲＲ、ＬＡＰ３、ＬＣＲ１、白血球由来７回膜貫通ドメイン受容体、ＮＰＹ３Ｒ、ＮＰＹＲ、ＮＰＹＲＬ、ＮＰＹＹ３Ｒ、ＳＤＦ−１受容体、または間質細胞由来因子１受容体としても当技術分野で公知である。
【００４７】
本発明の目的に関して、用語「ＣＸＣＲ４抗原」は、ヒトＣＸＣＲ４、別の哺乳動物のＣＸＣＲ４（マウスＣＸＣＲ４、ラットＣＸＣＲ４、イヌＣＸＣＲ４、ネコＣＸＣＲ４タンパク質、または霊長類ＣＸＣＲ４など）、および異なる形態のＣＸＣＲ４（例えば、グリコシル化ＣＸＣＲ４）を含めた任意のＣＸＣＲ４を包含する。
【００４８】
用語「抗体」および「Ａｂ」は、本明細書において、自己の可変領域に位置した少なくとも１つの抗原認識部位によって、特定の標的または抗原、例えば、炭水化物、ポリヌクレオチド、脂質、ポリペプチドなどを認識し、それに結合することができる免疫グロブリン分子を指す。本明細書において、用語「抗体」は、それだけに限らないが、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、ならびに所与の抗原（例えば、ＣＸＣＲ４）に特異的に結合する能力を保持するインタクト抗体の抗原結合断片、二重特異性抗体、ヘテロコンジュゲート抗体、これらの突然変異体、抗体を有する融合タンパク質、単鎖（ＳｃＦｖ）および単一ドメイン抗体（例えば、サメおよびラクダ抗体）、マキシボディ、ミニボディ、イントラボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ｖ−ＮＡＲおよびビス−ｓｃＦｖ（例えば、ＨｏｌｌｉｎｇｅｒおよびＨｕｄｓｏｎ、２００５、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、２３（９）：１１２６〜１１３６を参照）、ヒト化抗体、キメラ抗体、ならびに抗体のグリコシル化バリアント、抗体のアミノ酸配列バリアント、および共有結合的に修飾された抗体を含めた要求された特異性の抗原認識部位を含む免疫グロブリン分子の任意の他の修飾された構成を含めた、任意のタイプの抗体を包含し得る。抗体は、マウス、ラット、ヒト、または任意の他の起源（キメラもしくはヒト化抗体を含む）であり得る。本発明のいくつかの態様では、本発明の方法で使用するための抗体またはその抗原結合断片は、キメラ、ヒト化、もしくは組換えヒト抗体、またはそのＣＸＣＲ４結合性断片である。
【００４９】
免疫グロブリンの５つの主要クラス、すなわち、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭがあり、これらのうちのいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２にさらに分類することができる。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常領域は、それぞれ、α、δ、ε、γ、およびμと呼ばれる。免疫グロブリンの異なるクラスのサブユニット構造および３次元構成は、周知である。
【００５０】
ネイティブなまたは天然に存在する抗体は、典型的には、２本の同一の軽（Ｌ）鎖および２本の同一の重（Ｈ）鎖から構成される約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。各軽鎖は、１つの共有結合性ジスルフィド結合によって重鎖に連結されており、一方、ジスルフィド連結の数は、異なる免疫グロブリンアイソタイプの重鎖の中で変動する。各重鎖および軽鎖はまた、規則的な間隔の鎖内ジスルフィド架橋を有する。各重鎖は、一端で、可変ドメイン（ＶＨ）、その後にいくつかの定常ドメインを有する。各軽鎖は、一端で可変ドメイン（ＶＬ）およびその他の端で定常ドメインを有し、軽鎖の定常ドメインは、重鎖の第１の定常ドメインと整列され、軽鎖可変ドメインは、重鎖の可変ドメインと整列されている。特定のアミノ酸残基は、軽鎖可変ドメインと重鎖可変ドメインとの間に界面を形成すると考えられている。用語「可変」は、可変ドメインのある特定の部分の配列が抗体間で広範に異なるという事実を指す。
【００５１】
用語「抗原結合断片」、「抗原結合部分」、および「抗体部分」は、本明細書において、所与の抗原（例えば、ＣＸＣＲ４）に結合する能力を保持するインタクト抗体の１つまたは複数の断片を指す。抗体の抗原結合機能は、インタクト抗体の断片によって実施することができる。抗原結合断片の例としては、Ｆａｂ；Ｆａｂ’；Ｆ（ａｂ’）２；ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片；抗体の単一アームのＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖ断片；単一ドメイン抗体（ｄＡｂ）断片（Ｗａｒｄら、Ｎａｔｕｒｅ、３４１：５４４〜５４６、１９８９）、単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）、ナノボディ、ならびに単一可変ドメインおよび２つの定常ドメインを含有する重鎖可変領域がある。さらに、Ｆｖ断片の２つのドメイン、ＶＬおよびＶＨは、別個の遺伝子によってコードされるが、これらは、組換え法を使用して、これらが、ＶＬおよびＶＨ領域が対をなして一価の分子（単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ））として公知を形成する単一のタンパク質鎖として作製されることを可能にする合成リンカーによって接合され得る。例えば、Ｂｉｒｄら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４２：４２３〜４２６（１９８８）、およびＨｕｓｔｏｎら、ＰＮＡＳ、８５：５８７９〜５８８３（１９８８）を参照。このような単鎖抗体も、用語抗体の「抗原結合部分」の中に包含されることが意図されている。これらの抗体断片は、当業者に公知の慣例的な技法を使用して得られ、断片は、インタクト抗体と同じ様式で有用性についてスクリーニングされる。
【００５２】
用語「ＣＤＲ」は、本明細書において、自己の結合特異性を付与する抗体の可変ドメイン中の領域を指す。抗体の各重鎖および軽鎖上に３つのＣＤＲがある。ＣＤＲを構成する可変領域内のアミノ酸残基は、それだけに限らないが、Ｋａｂａｔ（Ｋａｂａｔら、１９９２、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、５版、Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ、ＮＩＨ、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ  Ｄ．Ｃ．）、Ｃｈｏｔｈｉａ（Ｃｈｏｔｈｉａら、１９８９、Ｎａｔｕｒｅ、３４２：８７７〜８８３）、ＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａの両方の蓄積、ＡｂＭ定義（これは、ＫａｂａｔとＣｈｏｔｈｉａの間の妥協案であり、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ’ｓ  ＡｂＭ抗体モデル化ソフトウェア（現在ではＡｃｃｅｌｒｙｓ（登録商標）））を使用して導出される、接触定義（ＭａｃＣａｌｌｕｍら、１９９６、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２６２：７３２〜７４５）、および／またはコンホメーション定義（Ｍａｋａｂｅら、２００８、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２８３：１１５６〜１１６６）を含めた当技術分野で公知の方法を使用して同定することができる。本明細書において、ＣＤＲは、手法の組合せを含めて、当技術分野で公知の任意の手法によって定義されるＣＤＲを指すことができる。本明細書で使用される方法は、これらの手法のいずれかに従って定義されるＣＤＲを利用することができる。
【００５３】
用語「Ｆｃ領域」は、本明細書において、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を指す。「Ｆｃ領域」は、天然配列Ｆｃ領域であっても、バリアントＦｃ領域であってもよい。免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界は、様々であり得るが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、通常、Ｃｙｓ２２６位のアミノ酸残基から、またはＰｒｏ２３０からそのカルボキシル末端まで伸びるように定義される。Ｆｃ領域中の残基の番号付けは、ＫａｂａｔのＥＵインデックスのものである（Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、５版、Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ．、１９９１）。
【００５４】
用語「モノクローナル抗体」および「ｍＡｂ」は、本明細書において、実質的に均質な抗体の集団から得られる抗体を指し、すなわち、集団を構成する個々の抗体は、軽微な量で存在し得る可能な天然に存在する突然変異を除いて同一である。モノクローナル抗体は、高度に特異的であり、単一抗原部位に向けられている。さらに、異なる決定基（エピトープ）に向けられた異なる抗体を一般に含むポリクローナル抗体配合物と対照的に、各モノクローナル抗体は、抗原上の単一決定基に向けられている。修飾語「モノクローナル」は、抗体の実質的に均質な集団から得られる抗体の特徴を示し、任意の特定の方法による抗体の生成を必要とすると解釈されるべきでない。例えば、本発明によって使用されるモノクローナル抗体は、ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ、Ｎａｔｕｒｅ、２５６：４９５、１９７５によって最初に記載されたハイブリドーマ法によって作製することができ、または米国特許第４，８１６，５６７号に記載されたものなどの組換えＤＮＡ法によって作製することができる。モノクローナル抗体は、例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、Ｎａｔｕｒｅ、３４８：５５２〜５５４、１９９０に記載の技法を使用して生成されるファージライブラリーから単離することもできる。
【００５５】
用語「単離抗体」は、本明細書において、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない抗体を指す（例えば、ＣＸＣＲ４に特異的に結合する単離抗体は、ＣＸＣＲ４以外の抗原に特異的に結合する抗体を実質的に含まない）。しかし、ＣＸＣＲ４に特異的に結合する単離抗体は、他の種に由来するＣＸＣＲ４分子などの他の抗原に対する交差反応性を有し得る。さらに、単離抗体は、他の細胞物質および／または化学物質を実質的に含まない場合がある。
【００５６】
用語「ヒト化抗体」および「ＣＤＲ移植抗体」は、本明細書において、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含有する、キメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖、またはこれらの断片（Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、もしくは抗体の他の抗原結合部分配列など）である、非ヒト（例えば、マウス）抗体の形態を指す。好ましくは、ヒト化抗体は、レシピエントの相補性決定領域（ＣＤＲ）に由来する残基が、所望の特異性、親和性、および能力を有する、非ヒト種（ドナー抗体）、例えば、マウス、ラット、またはウサギなどのＣＤＲに由来する残基と置き換えられているヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。
【００５７】
場合によっては、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク領域（ＦＲ）残基が、対応する非ヒト残基によって置き換えられている。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体にも、移入されるＣＤＲもしくはフレームワーク配列にも見つからないが、抗体性能をさらに洗練および最適化するために含められる残基を含むことができる。一般に、ヒト化抗体は、ＣＤＲ領域のすべてまたは実質的にすべてが非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、ＦＲ領域のすべてまたは実質的にすべてがヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のものである、少なくとも１つ、および一般に２つの可変ドメインの実質的にすべてを含むことになる。ヒト化抗体は、最適には、免疫グロブリン定常領域またはドメイン（Ｆｃ）、一般にヒト免疫グロブリンのものの少なくとも一部も含むことになる。ＷＯ９９／５８５７２に記載されたように修飾されたＦｃ領域を有する抗体が好適である。ヒト化抗体の他の形態は、元の抗体に対して変更され、元の抗体からの１つまたは複数のＣＤＲ「に由来する」１つまたは複数のＣＤＲとも呼ばれる、１つまたは複数のＣＤＲ（ＣＤＲ  Ｌ１、ＣＤＲ  Ｌ２、ＣＤＲ  Ｌ３、ＣＤＲ  Ｈ１、ＣＤＲ  Ｈ２、またはＣＤＲ  Ｈ３）を有する。
【００５８】
ヒト化は、ヒト抗体の対応する配列の代わりにげっ歯類または突然変異体げっ歯類ＣＤＲまたはＣＤＲ配列を用いることによって、Ｗｉｎｔｅｒおよび同僚の方法（Ｊｏｎｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ、３２１：５２２〜５２５（１９８６）；ＲｉｅｃｈｍａｎｎらＮａｔｕｒｅ、３３２：３２３〜３２７（１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２３９：１５３４〜１５３６（１９８８））に従って本質的に実施することができる。参照により本明細書に組み込まれている、米国特許第５，２２５，５３９号；同第５，５８５，０８９号；同第５，６９３，７６１号；同第５，６９３，７６２号；同第５，８５９，２０５号も参照。一部の場合では、ヒト免疫グロブリンの１つまたは複数の可変領域のフレームワーク領域内の残基は、対応する非ヒト残基によって置き換えられる（例えば、米国特許第５，５８５，０８９号；同第５，６９３，７６１号；同第５，６９３，７６２号；および同第６，１８０，３７０号を参照）。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体中またはドナー抗体中に見出されない残基を含み得る。これらの修飾は、抗体性能をさらに洗練させるために（例えば、所望の親和性を得るために）行われる。一般に、ヒト化抗体は、超可変領域のすべてまたは実質的にすべてが非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、フレームワーク領域のすべてまたは実質的にすべてがヒト免疫グロブリン配列のものである、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的にすべてを含むことになる。ヒト化抗体は、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部、典型的にはヒト免疫グロブリンの少なくとも一部を含むことになってもよい。さらなる詳細については、参照により本明細書に組み込まれている、Ｊｏｎｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ、３３１：５２２〜５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ、３３２：３２３〜３２９（１９８８）；およびＰｒｅｓｔａ  Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．、２：５９３〜５９６（１９９２）を参照。したがって、このような「ヒト化」抗体は、実質的により少ないインタクトなヒト可変ドメインが非ヒト種に由来する対応する配列によって置換された抗体を含み得る。実際には、ヒト化抗体は、典型的には、いくつかのＣＤＲ残基、および場合によりいくつかのフレームワーク残基がげっ歯類抗体中の類似の部位に由来する残基によって置換されているヒト抗体である。例えば、米国特許第５，２２５，５３９号；同第５，５８５，０８９号；同第５，６９３，７６１号；同第５，６９３，７６２号；同第５，８５９，２０５号を参照。ヒト化抗体、および所定の抗原について改善された親和性を有するヒト化抗体を生成するための技法が開示されている、米国特許第６，１８０，３７０号および国際公開第ＷＯ０１／２７１６０号も参照。
【００５９】
用語「ヒト抗体」は、本明細書において、ヒトによって産生され、かつ／または当業者に公知もしくは本明細書に開示のヒト抗体を作製するための技法のいずれかを使用して作製された抗体のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を有する抗体を指す。ヒト抗体のこの定義には、少なくとも１つのヒト重鎖ポリペプチドまたは少なくとも１つのヒト軽鎖ポリペプチドを含む抗体が含まれる。１つのこのような例は、マウス軽鎖ポリペプチドおよびヒト重鎖ポリペプチドを含む抗体である。ヒト抗体は、様々な当技術分野で公知の技法を使用して生成することができる。一実施形態では、ヒト抗体は、ファージライブラリーから選択され、この場合そのファージライブラリーは、ヒト抗体を発現する（Ｖａｕｇｈａｎら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１４：３０９〜３１４、（１９９６）；Ｓｈｅｅｔｓら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）、９５：６１５７〜６１６２、（１９９８）；ＨｏｏｇｅｎｂｏｏｍおよびＷｉｎｔｅｒ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２７：３８１、（１９９１）；Ｍａｒｋｓら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２２：５８１、（１９９１））。ヒト抗体は、ヒト免疫グロブリン遺伝子座が内因性遺伝子座の代わりに遺伝子導入で導入された動物、例えば、内因性免疫グロブリン遺伝子が部分的または完全に不活化されたマウスの免疫化によっても作製することができる。この手法は、米国特許第５，５４５，８０７号、同第５，５４５，８０６号、同第５，５６９，８２５号、同第５，６２５，１２６号、同第５，６３３，４２５号、および同第５，６６１，０１６号に記載されている。代わりに、ヒト抗体は、標的抗原に対する抗体を生成するヒトＢリンパ球（このようなＢリンパ球は、個体から、もしくはｃＤＮＡの単細胞クローニングから回収することができ、またはｉｎ  ｖｉｔｒｏで免疫化されている場合がある）を不死化することによって調製することができる。例えば、Ｃｏｌｅら、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ、Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ、７７頁、（１９８５）；Ｂｏｅｒｎｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１４７（１）：８６〜９５、（１９９１）；および米国特許第５，７５０，３７３号を参照。
【００６０】
用語「キメラ抗体」は、本明細書において、可変領域配列が１つの種に由来し、定常領域配列が別の種に由来する抗体、例えば、可変領域配列がマウス抗体に由来し、定常領域配列がヒト抗体に由来する抗体などを指す。獣医学的用途については、キメラ抗体の定常ドメインは、他の種、例えば、ネコまたはイヌなどのものに由来し得る。
【００６１】
用語「イヌ化抗体」および「ネコ化抗体」は、本明細書において、それぞれイヌおよびネコにおける治療剤として有用なキメラ抗体を指す。両方の場合において、異種の種のドナー抗体に由来する抗原結合ドメインが、同じ種のレシピエント抗体の非抗原結合ドメインと組み合わされる。
【００６２】
用語「優先的に結合する」または「特異的に結合する」は、本明細書において、抗体の標的（例えば、ＣＸＣＲ４タンパク質）への結合との関連で使用される場合、当技術分野でよく理解されている用語である。このような特異的または選択的な結合を決定する方法も当技術分野で周知である。分子は、これが、特定の細胞または物質と、代替の細胞または物質と反応または会合するより長い持続時間および／またはより大きい親和性を伴って、より頻繁に、より急速に反応または会合する場合、「特異的結合」または「選択的結合」を呈すると言われる。抗体は、これが、他の物質に結合するより、大きい親和性、結合活性を伴って、より容易に、かつ／またはより長い持続時間を伴って結合する場合、標的に「特異的に結合し」または「選択的に結合する」。例えば、あるＣＸＣＲ４エピトープに特異的または選択的に結合する抗体は、これが、他のＣＸＣＲ４エピトープまたは非ＣＸＣＲ４エピトープに結合するより、大きい親和性、結合活性を伴って、より容易に、かつ／またはより長い持続時間を伴ってこのエピトープ結合する抗体である。
【００６３】
用語「結合親和性」および「ＫＤ」は、本明細書において、特定の抗原−抗体相互作用の平衡解離定数を指すように意図されている。ＫＤは、「オフレート」または「ｋｄ」とも呼ばれる解離の速度と、会合の速度、または「オンレート」もしくは「ｋａ」との比である。したがって、ＫＤは、ｋｄ／ｋａに等しく、モル濃度（Ｍ）として表現される。ＫＤが小さいほど、結合親和性が強いことになる。したがって、１μＭのＫＤは、１ｎＭのＫＤと比較して弱い結合親和性を示す。抗体のＫＤ値は、当技術分野で十分に確立されている方法を使用して判定することができる。抗体のＫＤを判定するための一方法は、表面プラズモン共鳴を使用する、典型的には、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）システムなどのバイオセンサーシステムを使用することによるものである。
【００６４】
用語「競合する」は、抗体に関して本明細書で使用する場合、第１の抗体が、第２の抗体の結合と十分に同様の様式でエピトープに結合し、その結果、第１の抗体のその同族エピトープとの結合の結果が、第２の抗体の非存在下での第１の抗体の結合と比較して、第２の抗体の存在下で検出可能な程度に減少することを意味する。本発明の抗体とエピトープ結合を競合する抗体は、本発明によって包含されている。当業者は、本明細書に提供される教示に基づくと、このような競合抗体は、本明細書に開示の方法にとって有用であり得ることを理解するはずである。
【００６５】
用語「薬剤」は、本明細書において、生物学的または検出可能な活性を有する任意の物質を指す。用語の薬剤は、細胞毒性剤、治療剤、免疫調節剤、検出可能標識、造影剤、結合剤、プロドラッグ（これらは、ｉｎ  ｖｉｖｏで代謝されて活性剤になる）、増殖因子、ホルモン、サイトカイン、抗ホルモン、キサンチン、インターロイキン、インターフェロン、および細胞毒性薬を包含することを意味している。薬剤は、低分子、ポリペプチド、オリゴヌクレオチド、またはバイオポリマーであり得る。薬剤は、リンカーを介して本発明の抗体にコンジュゲートされて抗体−薬剤コンジュゲートを形成し得る。
【００６６】
用語「エフェクター機能」は、本明細書において、抗体のＦｃ領域に起因する生物活性を指す。抗体エフェクター機能の例としては、それだけに限らないが、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、Ｆｃ受容体結合、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、食作用、Ｃ１ｑ結合、および細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体、ＢＣＲ）の下方制御がある。例えば、米国特許第６，７３７，０５６号を参照。このようなエフェクター機能は一般に、Ｆｃ領域が結合ドメイン（例えば、抗体可変ドメイン）と結合されることを必要とし、このような抗体エフェクター機能を評価するための当技術分野で公知の様々なアッセイを使用して評価することができる。エフェクター機能の例示的な測定法は、Ｆｃγ３および／またはＣ１ｑ結合によるものである。
【００６７】
用語「エピトープ」は、本明細書において、免疫グロブリンもしくはＴ細胞受容体に結合し、または別段に分子と相互作用することができる任意のタンパク質決定基を含む。エピトープ決定基は一般に、アミノ酸もしくは炭水化物などの分子または糖側鎖の化学的に活性な表面基からなり、一般に、特定の３次元構造特性および特定の帯電特性を有する。エピトープは、「線状」であっても「立体構造的」であってもよい。線状エピトープでは、タンパク質と相互作用分子（抗体など）との相互作用のポイントのすべては、タンパク質の一次アミノ酸配列に沿って線状に起こる。立体構造エピトープでは、相互作用のポイントは、互いに分離したタンパク質上のアミノ酸残基にわたって起こる。抗原上の所望のエピトープが決定された後、例えば、本発明に記載の技法を使用してそのエピトープに対する抗体を生成することが可能である。代わりに、発見プロセス中に、抗体の生成および特徴付けにより、望ましいエピトープについての情報を解明することができる。この情報から、次いで同じエピトープへの結合について、抗体を競合的にスクリーニングすることが可能である。これを実現するための手法は、競合試験を行って互いに競合的に結合する抗体、すなわち、エピトープへの結合を競合する抗体を見つけることである。抗体をこれらの競合に基づいて「ビニングする」ためのハイスループットプロセスは、国際特許出願第ＷＯ０３／４８７３１号に記載されている。本明細書において、用語「ビニングする」は、抗体をこれらの抗原結合特性に基づいてグループ化するための方法を指す。
【００６８】
用語「ポリヌクレオチド」、「核酸／ヌクレオチド」、および「オリゴヌクレオチド」は、本明細書において、デオキシリボヌクレオチドもしくはリボヌクレオチド、これらの類似体のいずれであっても、任意の長さのヌクレオチドのポリマー形態、またはＤＮＡもしくはＲＮＡポリメラーゼによって鎖中に組み込まれ得る任意の基質を指す。ポリヌクレオチドは、任意の３次元構造を有することができ、公知であっても未知であっても任意の機能を実施することができる。以下は、ポリヌクレオチドの非限定的な例である：遺伝子または遺伝子断片、エクソン、イントロン、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、トランスファーＲＮＡ、リボソームＲＮＡ、リボザイム、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、組換えポリヌクレオチド、分枝状ポリヌクレオチド、プラスミド、ベクター、任意の配列の単離ＤＮＡ、任意の配列の単離ＲＮＡ、核酸プローブ、およびプライマー。ポリヌクレオチドは、天然に存在するもの、合成のもの、組換え体、またはこれらの任意の組合せであり得る。ポリヌクレオチドは、修飾ヌクレオチド、例えば、メチル化ヌクレオチド、およびこれらの類似体などを含むことができる。存在する場合、ヌクレオチド構造への修飾は、鎖をアセンブリーする前または後に付与することができる。ヌクレオチドの配列は、非ヌクレオチドコンポーネントによって中断される場合がある。ポリヌクレオチドは、標識コンポーネントとのコンジュゲーションなどによって、重合後にさらに修飾することができる。他のタイプの修飾としては、例えば、「キャップ」、天然に存在するヌクレオチドのうちの１つまたは複数の類似体との置換、ヌクレオチド間修飾、例えば、非荷電連結（例えば、ホスホン酸メチル、ホスホトリエステル、ホスホロアミデート、カルバメートなど）を有するもの、および荷電した連結（例えば、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエートなど）を有するもの、ペンダント部分、例えば、タンパク質（例えば、ヌクレアーゼ、毒素、抗体、シグナルペプチド、ポリ−Ｌ−リシンなど）などを含有するもの、インターカレーター（例えば、アクリジン、ソラレンなど）を有するもの、キレーター（例えば、金属、放射性金属、ホウ素、酸化金属など）を含有するもの、アルキル化剤を含有するもの、修飾連結を有するもの（例えば、αアノマー核酸など）など、ならびにポリヌクレオチド（複数可）の無修飾形態がある。さらに、糖内に通常存在するヒドロキシル基のいずれも、例えば、ホスホネート基、リン酸基によって置き換え、標準的な保護基によって保護し、または活性化して追加のヌクレオチドへの追加の連結を準備することができ、または固体支持体にコンジュゲートすることができる。５’および３’末端ＯＨを、リン酸化し、またはアミンもしくは１〜２０炭素原子の有機キャッピング基部分で置換することができる。他のヒドロキシルも、誘導体化して標準的な保護基にすることができる。ポリヌクレオチドは、例えば、２’−Ｏ−メチル−、２’−Ｏ−アリル、２’−フルオロ−、または２’−アジド−リボース、炭素環糖類似体、α−またはβ−アノマー糖、エピマー糖、例えば、アラビノース、キシロース、またはリキソースなど、ピラノース糖、フラノース糖、セドヘプツロース、非環式類似体、およびメチルリボシドなどの脱塩基ヌクレオシド類似体を含めた、当技術分野で一般に公知であるリボースまたはデオキシリボース糖の類似形態も含有し得る。１つまたは複数のホスホジエステル連結を、代替の連結基によって置き換えることができる。これらの代替の連結基としては、それだけに限らないが、ホスフェートが、Ｐ（Ｏ）Ｓ（「チオエート」）、Ｐ（Ｓ）Ｓ（「ジチオエート」）、（Ｏ）ＮＲ２（「アミデート」）、Ｐ（Ｏ）Ｒ、Ｐ（Ｏ）ＯＲ’、ＣＯ、またはＣＨ２（「ホルムアセタール」）（式中、各ＲまたはＲ’は、独立して、Ｈ、またはエーテル（−Ｏ−）連結、アリール、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、もしくはアラルジル（ａｒａｌｄｙｌ）を含有してもよい置換もしくは非置換のアルキルである（１〜２０Ｃ））によって置き換えられている実施形態がある。ポリヌクレオチド中のすべての連結が同一である必要はない。前述の説明は、ＲＮＡおよびＤＮＡを含めた、本明細書で参照されるすべてのポリヌクレオチドに当てはまる。
【００６９】
用語「ポリペプチド」、「オリゴペプチド」、「ペプチド」、および「タンパク質」は、本明細書において、任意の長さの、好ましくは比較的短いアミノ酸（例えば、１０〜１００アミノ酸）の鎖を指す。鎖は、直鎖状であっても分枝状であってもよく、修飾アミノ酸を含むことができ、かつ／または非アミノ酸によって中断されていてもよい。この用語は、天然に、または介入、例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化、または標識コンポーネントとのコンジュゲーションなどの任意の他の操作もしくは修飾によって修飾されたアミノ酸鎖も包含する。例えば、アミノ酸の１つまたは複数の類似体（例えば、非天然アミノ酸などを含む）、および当技術分野で公知の他の修飾を含有するポリペプチドもこの定義の中に含まれる。ポリペプチドは、単鎖または会合鎖として存在し得ることが理解される。
【００７０】
アミノ酸は、これらの一般に公知の３文字記号によって、またはＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌによって推奨されている１文字記号によって本明細書で言及される場合がある。
【００７１】
用語「アミノ酸」および「天然アミノ酸」は、本明細書において、アルギニン、グルタミン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、リシン、グリシン、アラニン、ヒスチジン、セリン、プロリン、グルタミン酸、アスパラギン酸、トレオニン、システイン、メチオニン、ロイシン、アスパラギン、イソロイシン、およびバリンを指す。
【００７２】
用語「アミノ酸誘導体」は、本明細書において、例えば、アルキル化、グリコシル化、アセチル化、リン酸化などによって、親アミノ酸の共有結合による置換または修飾を有するアミノ酸を指す。例えば、置換された連結を有するアミノ酸の１種または複数の類似体、および当技術分野で公知の他の修飾体が、「誘導体」の定義内にさらに含まれる。
【００７３】
用語「ベクター」は、本明細書において、宿主細胞内で、対象とする１種または複数の遺伝子または配列を送達、および好ましくは発現することができるコンストラクトを指す。ベクターの例としては、それだけに限らないが、ウイルスベクター、裸のＤＮＡまたはＲＮＡ発現ベクター、プラスミド、コスミドまたはファージベクター、カチオン性縮合剤に付随したＤＮＡまたはＲＮＡ発現ベクター、リポソーム中に被包されたＤＮＡまたはＲＮＡ発現ベクター、および産生細胞などのある特定の真核細胞がある。
【００７４】
用語「パーセント配列同一性」は、本明細書において、２つの配列間の類似性の程度を指す。核酸配列との関連で、これは、最大対応に関してアラインメントされたとき同じである２つの配列中の残基を意味する。配列同一性比較の長さは、少なくとも約９ヌクレオチド、通常少なくとも約１８ヌクレオチド、より通常には少なくとも約２４ヌクレオチド、典型的には少なくとも約２８ヌクレオチド、より一般的には少なくとも約３２ヌクレオチド、および好ましくは少なくとも約３６、４８、またはそれ超のヌクレオチドのストレッチにわたる場合がある。ヌクレオチド配列同一性を測定するのに使用することができる当技術分野で公知のいくつかの異なるアルゴリズムがある。例えば、ポリヌクレオチド配列は、Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｐａｃｋａｇｅ  Ｖｅｒｓｉｏｎ  １０．０、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ（ＧＣＧ）、Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ中のプログラムであるＦＡＳＴＡ、Ｇａｐ、またはＢｅｓｔｆｉｔを使用して比較することができる。ＦＡＳＴＡは、例えば、プログラムＦＡＳＴＡ２およびＦＡＳＴＡ３を含み、クエリー配列とサーチ配列の間のベストオーバーラップの領域のアラインメントおよびパーセント配列同一性をもたらす（Ｐｅａｒｓｏｎ、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．、１８３：６３〜９８（１９９０）；Ｐｅａｒｓｏｎ、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ＭｏＩ．Ｂｉｏｌ．、１３２：１８５〜２１９（２０００）；Ｐｅａｒｓｏｎ、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．、２６６：２２７〜２５８（１９９６）；Ｐｅａｒｓｏｎ、Ｊ．ＭｏＩ．Ｂｉｏｌ．、２７６：７１〜８４（１９９８）；参照により本明細書に組み込まれている）。別段の指定のない限り、特定のプログラムまたはアルゴリズムのデフォルトのパラメータが使用される。例えば、核酸配列間のパーセント配列同一性は、参照により本明細書に組み込まれている、そのデフォルトのパラメータ（６のワードサイズおよびスコアリングマトリックスについてＮＯＰＡＭファクター）を用いてＦＡＳＴＡを使用して、またはＧＣＧバージョン６．１中に提供されているそのデフォルトのパラメータを用いてＧａｐを使用して判定することができる。
【００７５】
ヌクレオチド配列への言及は、別段の指定のない限りその相補体を包含する。したがって、特定の配列を有する核酸への言及は、その相補配列とともにその相補鎖を包含することが理解されるべきである。
【００７６】
アミノ酸配列との関連で、これは、２つのアミノ酸配列が、プログラムとともに供給されるデフォルトのギャップ重みを使用するプログラムＧＡＰまたはＢＥＳＴＦＩＴなどによって最適にアラインメントされるとき、少なくとも７０％、７５％、または８０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９０％または９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９７％、９８％、または９９％の配列同一性を共有することを意味する。いくつかの実質的に同様のアミノ酸配列では、同一でない残基位置は、保存的アミノ酸置換によって異なる。
【００７７】
実質的に同様のポリペプチドも、１つまたは複数の残基が機能的に同様の残基と保存的に置換されている保存的に置換されたバリアントを含む。保存的置換の例としては、１つの非極性（疎水性）残基、例えば、イソロイシン、バリン、ロイシン、もしくはメチオニンなどの別のものに対する置換；１つの極性（親水性）残基の別のものに対する置換、例えば、アルギニンとリシンの間、グルタミンとアスパラギンの間、グリシンとセリンの間など；１つの塩基性残基、例えば、リシン、アルギニン、もしくはヒスチジンなどの別のものに対する置換；または１つの酸性残基、例えば、アスパラギン酸もしくはグルタミン酸などの別のものに対する置換がある。
【００７８】
２つのタンパク質が実質的に同一であるさらなる目安は、これらが全体的な３次元構造を共有し、または生物学的に機能的な等価物であることである。
【００７９】
用語「細胞傷害活性」は、本明細書において、細胞殺傷、抗体の細胞増殖抑制または抗増殖作用、ＡＤＣまたは前記ＡＤＣの細胞内代謝産物を指す。細胞傷害活性は、ＩＣ５０値として表現することができ、これは、細胞の半分が生存する単位体積当たりの濃度（モルまたは質量）である。
【００８０】
用語「接触させること」は、本明細書において、本発明の抗体またはその抗原結合部分および標的ＣＸＣＲ４、またはそのエピトープを、抗体がＣＸＣＲ４の生物活性に影響し得る様式で一緒にすることを指す。このような「接触させること」は、「ｉｎ  ｖｉｔｒｏで」、すなわち、試験管、ペトリ皿などの中で達成することができる。試験管では、接触させることは、抗体もしくはその抗原結合部分およびＣＸＣＲ４もしくはそのエピトープのみを伴う場合があり、またはそれは、全細胞を伴う場合がある。細胞を細胞培養皿中で維持し、または増殖させ、その環境中で抗体またはその抗原結合部分と接触させてもよい。この脈絡において、特定の抗体またはその抗原結合部分のＣＸＣＲ４関連障害に影響する能力、すなわち、抗体のＩＣ５０は、より複雑な生体が試みられるｉｎ  ｖｉｖｏで抗体を使用する前に判定することができる。生物外の細胞について、ＣＸＣＲ４を抗体またはこれらの抗原結合断片と接触させるための複数の方法が存在し、当業者に周知である。別の実施形態では、有意な量の有効性がエフェクター機能によって生じる。抗体媒介細胞傷害性に寄与することが示されている免疫エフェクター機能としては、それだけに限らないが、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞媒介食作用（ＡＤＣＰ）、および補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）がある。
【００８１】
用語「アシルドナーグルタミン含有タグ」および「グルタミンタグ」は、本明細書において、トランスグルタミナーゼアミン受容体として作用する１つまたは複数のＧｌｎ残基を含有するポリペプチドまたはタンパク質を指す。例えば、ＷＯ２０１２０５９８８２を参照。
【００８２】
用語「薬学的に許容できる担体」および「薬学的に許容できる賦形剤」は、本明細書において、活性成分と合わせたとき、成分に生物活性を保持させ、対象の免疫系と非反応性である任意の材料を指す。例としては、生理学的に適合性である任意のかつすべての溶媒、分散媒質、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤などがある。標準的な薬学的担体としては、それだけに限らないが、リン酸緩衝溶液、水、油／水エマルジョンなどのエマルジョン、および様々なタイプの湿潤剤がある。エアロゾルまたは非経口投与用の好適な希釈剤は、リン酸緩衝溶液（ＰＢＳ）または通常の（０．９％）生理食塩水である。このような担体を含む組成物は、周知の従来法によって製剤化される（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、１８版、Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏ編、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ、１９９０；およびＲｅｍｉｎｇｔｏｎ、Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、２１版、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ、２００５を参照）。好ましくは、担体は、静脈内、筋肉内、皮下、非経口、脊髄、または表皮投与（例えば、注射または注入による）に適している。投与経路に応じて、活性化合物（例えば、モノクローナル抗体、その抗原結合断片、抗体−薬剤コンジュゲート）を、化合物を不活化し得る酸および他の自然条件の作用から化合物を保護する材料で被覆することができる。
【００８３】
本発明は、１、２、３、４、５、１０、１５、２０、またはそれ超の本発明の抗体（これらの抗体断片またはバリアントを含み、または代わりにこれらからなる分子を含む）を含み、または代わりにこれらからなる組成物も提供する。本発明の組成物は、１種もしくは複数の抗体またはこれらの断片もしくはバリアントの１、２、３、４、５、１０、１５、２０、またはそれ超のアミノ酸配列を含み、または代わりにこれらからなる場合がある。代わりに、本発明の組成物は、本発明の１種または複数の抗体をコードする核酸分子を含み、またはこれらからなる場合がある。
【００８４】
用語「ＣＸＣＲ４関連障害」は、病理がＣＸＣＲ４またはＣＸＣＲ４の不適切な機能の増大または不適切な発現に少なくとも部分的に起因する任意の状態である。このような障害の例としては、それだけに限らないが、正常と比べたＣＸＣＲ４の発現の増大と関連したがん、炎症性および免疫障害、アレルギー性障害、感染（ＨＩＶ感染など）、自己免疫障害（例えば、関節リウマチ）、線維症障害（例えば、肺）、ならびに心血管障害がある。
【００８５】
用語「がん」は、未制御の細胞増殖によって典型的には特徴付けられる哺乳動物における生理的状態または障害を指す。血液がんは、それだけに限らないが、とりわけ、白血病、リンパ腫、および骨髄腫を含めた血液のがんを指す。固形がんは、それだけに限らないが、膀胱がん、乳がん、子宮頸がん、絨毛癌、大腸がん、食道がん、胃がん、グリア芽細胞腫、頭頸部がん、腎がん、肺がん、口腔がん、卵巣がん、膵がん、前立腺がん、皮膚がん、肝がん、および肝癌などを含めた血液以外の体組織のがんを指す。
【００８６】
用語「患者」は、本明細書において、ＣＸＣＲ４関連障害を罹患している対象を指す。患者（ｐａｔｅｎｔｓ）として、それだけに限らないが、ヒト、非ヒト霊長類（例えば、サル）、ラット、マウス、モルモット、ブタ、ヤギ、ウシ、ウマ、イヌ、ネコ、トリ、および家禽を挙げることができる。好適な実施形態では、本発明の抗体または抗体−薬剤コンジュゲートを投与される患者は、ヒトである。
【００８７】
用語「有効量」または「有効用量」は、本明細書において、１つまたは複数の有益なまたは所望の治療結果を実現するのに必要な薬剤、化合物、または医薬組成物の量を指す。予防的使用に関して、有益なまたは所望の結果としては、障害、障害の発達中に呈する、その合併症、および中間の病理学的表現型の生化学的、組織学的、および／または行動的症状を含めた、障害のリスクの排除もしくは低減、重症度の軽減、または発症の遅延がある。治療的使用に関して、有益なまたは所望の結果としては、障害の１つもしくは複数の症状の発生率の低減またはこの症状の緩和、障害を治療するのに必要とされる他の薬物療法の用量を減少させる能力、障害を治療するのに使用される別の薬物療法の効果の増強、および／または障害の進行の遅延などの臨床結果がある。
【００８８】
本発明の目的に関して、有益なまたは所望の臨床結果としては、それだけに限らないが、以下のうちの１つまたは複数がある：ＣＸＣＲ４関連障害における新生細胞もしくはがん性細胞の増殖の低減（もしくは破壊）、ＣＸＣＲ４関連障害における新生細胞の転移の低減もしくは阻害、ＣＸＣＲ４発現腫瘍のサイズの縮小もしくは減少、ＣＸＣＲ４関連障害の寛解、ＣＸＣＲ４関連障害に影響された個体の平均余命の増大、ＣＸＣＲ４関連障害から生じる症状の減少、ＣＸＣＲ４関連障害を罹患している者の生活の質の増大、有害な効果を伴わずにＣＸＣＲ４関連障害を治療するのに必要とされる他の薬物療法の用量を減少させる能力、ＣＸＣＲ４関連障害の進行の遅延、ＣＸＣＲ４関連障害の治癒、および／またはＣＸＣＲ４関連障害を有する患者の生存期間の延長。
【００８９】
本明細書で別段の定義のない限り、本発明に関連して使用される科学用語および技術用語は、当業者によって一般に理解されている意味を有するものとする。例えば、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含有する」、および「有する」などは、米国特許法でこれらに対して認められている意味を有することができ、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」などを意味することができ、「〜から本質的になる」または「本質的になる」は、同様に、米国特許法で認められている意味を有し、この用語は、制約がなく、列挙されているものの基本または新規の特性が列挙されているものを超える存在によって変更されない限り、列挙されているものを超える存在を可能にするが、先行技術の実施形態を除外する。
【００９０】
さらに、脈絡による別段の要求のない限り、単数形の用語は、複数存在することを含むものとし、複数形の用語は、単数形を含むものとする。
【００９１】
本明細書で「約」のついた値またはパラメータへの言及は、その値またはパラメータ自体を対象としている実施形態を含む（かつ記述する）。例えば、「約Ｘ」に言及する記述は、「Ｘ」の記述を含む。数値範囲は、その範囲を画定する数値を含む。本発明の態様または実施形態が選択肢のマーカッシュ群または他の分類の観点から記載される場合、本発明は、全体として列挙された群全体だけでなく、群の各メンバーを個々に、および主群のすべての可能な亜群、また群メンバーの１つまたは複数を欠く主群を包含する。本発明は、請求項に係る発明における群メンバーのいずれかの１つまたは複数を明確に除外することも想定する。
【００９２】
本明細書および特許請求の範囲全体にわたって、単語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」または「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」もしくは「含むこと」などの変形は、述べた整数または整数の群を含めることを暗示するが、任意の他の整数または整数の群の除外を暗示しないことが理解されるであろう。脈絡による別段の要求のない限り、単数形の用語は、複数を含むものとし、複数形の用語は、単数形を含むものとする。
【００９３】
別段の定義のない限り、本明細書で使用するすべての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者が一般に理解するのと同じ意味を有する。矛盾する場合、定義を含めて本明細書が支配する。例示的な方法および材料を本明細書に記載するが、本明細書に記載のものと同様または等価な方法および材料も、本発明の実施または試験において使用することができる。材料、方法、および例は、例示的であるだけであり、限定的であるように意図していない。
【００９４】
抗ＣＸＣＲ４抗体およびこれらを作製する方法
本発明は、ヒトＣＸＣＲ４に結合する抗ＣＸＣＲ４抗体または抗原結合断片を提供する。本明細書のこのセクションでは、本開示の例示的な抗ＣＸＣＲ４抗体または抗原結合断片の機能特性および構造特性を詳細に記載する。本開示の抗体または抗原結合断片は、本明細書に記載の構造特性および／または機能特性の任意の１つまたは複数（２、３、４、５、６、７、８、９など）に基づいて記述され得ることが理解されるべきである。本開示のこの部分全体にわたって、機能特性または構造特性が本開示の抗体に関して記載されているとき、脈絡により別段に明らかに示されている場合を除いて、このような構造特性または機能特性が、本開示の抗原結合断片を記述するのに同様に使用され得ることが理解されるべきである。
【００９５】
ヒトＣＸＣＲ４  ｃＤＮＡのヌクレオチド配列およびヒトＣＸＣＲ４タンパク質の予測アミノ酸配列は、それぞれ、配列番号１０４および１０５として示されている（表１）。長さがおよそ１６７９ヌクレオチドであるヒトＣＸＣＲ４遺伝子は、およそ３８．７ｋＤの分子量を有し、長さがおよそ３５２アミノ酸残基である全長タンパク質をコードする。ヒトＣＸＣＲ４核酸およびポリペプチド配列のさらなる記述は、それぞれ、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿００３４６７およびＮＰ＿００３４５８において、かつＦｅｄｅｒｓｐｐｉｅｌ，Ｂ．ら、Ｇｅｎｏｍｉｃｓ、１６（３）：７０７〜７１２（１９９３）；Ｈｅｒｚｏｇ，Ｈ．ら、ＤＮＡ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．、１２（６）：４６５〜４７１（１９９３）；Ｊａｚｉｎ，Ｅ．Ｅ．ら、Ｒｅｇｕｌ．Ｐｅｐｔ、４７（３）：２４７〜２５８（１９９３）；Ｎｏｍｕｒａ，Ｈ．ら、Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、５（１０）：１２３９〜１２４９（１９９３）；Ｌｏｅｔｓｃｈｅｒ，Ｍ．ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２６９（１）：２３２〜２３７（１９９４）；Ｍｏｒｉｕｃｈｉ，Ｍ．ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５９（９）：４３２２〜４３２９（１９９７）；Ｃａｒｕｚ，Ａ．ら、ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．、４２６（２）：２７１〜２７８（１９９８）；およびＷｅｇｎｅｒ，Ｓ．Ａ．ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２７３（８）：４７５４〜４７６０（１９９８）において見つけることができる。
【００９６】
【表１−１】
2019141059.tif 000002
【００９７】
【表１−２】
2019141059.tif 000003
【００９８】
【表１−３】
2019141059.tif 000004
【００９９】
ヒトＣＸＣＲ４配列は、本明細書において、例えば、保存された突然変異または非保存領域中の突然変異を有することによって配列番号１０５のヒトＣＸＣＲ４と異なる場合があり、ＣＸＣＲ４は、配列番号１０５のヒトＣＸＣＲ４と実質的に同じ生物学的機能を有する。例えば、ヒトＣＸＣＲ４の生物学的機能は、本開示の抗体によって結合されたＣＸＣＲ４の細胞外ドメイン中のエピトープを有することであり、またはヒトＣＸＣＲ４の生物学的機能は、転移プロセスにおけるケモカインの結合または関与である。
【０１００】
特定のヒトＣＸＣＲ４配列は、一般に、配列番号１０５のヒトＣＸＣＲ４とアミノ酸配列において少なくとも９０％同一となり、他の種（例えば、マウス）のＣＸＣＲ４アミノ酸配列と比較したとき、ヒトであるとアミノ酸配列を識別するアミノ酸残基を含有する。ある特定の場合では、ヒトＣＸＣＲ４は、配列番号１０５のＣＸＣＲ４とアミノ酸配列において少なくとも９５％、またはさらには少なくとも９６％、９７％、９８％、もしくは９９％同一であり得る。本発明のいくつかの態様では、ヒトＣＸＣＲ４配列は、配列番号１０５のＣＸＣＲ４と１０以下のアミノ酸の差異を示すことになる。本発明のある特定の態様では、ヒトＣＸＣＲ４は、配列番号１０５のＣＸＣＲ４と５以下、またはさらには４、３、２、もしくは１以下のアミノ酸の差異を示す場合がある。パーセント同一性は、本明細書に記載するように判定することができる。
【０１０１】
本発明の抗体、これらの抗原結合断片、および抗体−薬剤コンジュゲートは、以下の特性の任意の１つまたは複数によって特徴付けられる：（ａ）ＣＸＣＲ４に結合し、（ｂ）ＣＸＣＲ４のタンパク質発現を減少させ、または下方制御し、（ｃ）対象におけるＣＸＣＲ４機能または発現と関連した障害（例えば、ＮＨＬ、ＡＭＬ、ＭＭ、ＣＬＬ、Ｔ−ＡＬＬ、胃、頭頸部、肺、卵巣、または膵臓のがんなどのがん）の１つまたは複数の症状を治療し、予防し、緩和させ、（ｄ）対象（ＣＸＣＲ４発現腫瘍を有する）における腫瘍増殖または進行を減少させ、または阻害し、（ｅ）対象（１つまたは複数のＣＸＣＲ４発現がん細胞を有する）におけるＣＸＣＲ４発現がん細胞の転移を減少させ、または阻害し、（ｆ）ＣＸＣＲ４発現腫瘍の退縮（例えば、長期間退縮）を誘導し、（ｇ）ＣＸＣＲ４発現細胞内で細胞傷害活性を発揮し、（ｈ）ＣＸＣＲ４経路を不活化または下方制御し、（ｉ）ＣＸＣＲ４細胞外結合パートナーとのＣＸＣＲ４相互作用を遮断する。例えば、本発明の抗体、その抗原結合断片、および抗体−薬剤コンジュゲートは、ＳＤＦ−Ｉの機能を遮断する。
【０１０２】
本発明で有用な抗体は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、抗体断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、Ｆｃなど）、キメラ抗体、二重特異性抗体、ヘテロコンジュゲート抗体、単鎖（ＳｃＦｖ）、これらの突然変異体、抗体部分（例えば、ドメイン抗体）を含む融合タンパク質、ヒト化抗体、ならびに抗体のグリコシル化バリアント、抗体のアミノ酸配列バリアント、および共有結合的に修飾された抗体を含めた、要求された特異性の抗原認識部位を含む免疫グロブリン分子の任意の他の修飾された構成を包含することができる。抗体は、マウス、ラット、ヒト、または任意の他の起源（キメラ抗体もしくはヒト化抗体を含む）であり得る。
【０１０３】
本発明のいくつかの態様では、本明細書に記載の抗ＣＸＣＲ４抗体は、モノクローナル抗体である。例えば、抗ＣＸＣＲ４抗体は、ヒト化モノクローナル抗体またはキメラモノクローナル抗体である。
【０１０４】
本発明のいくつかの態様では、本発明の抗体は、ヒト以外の種に由来するＣＸＣＲ４、例えば、マウス、ラット、イヌ、ネコ、または霊長類のＣＸＣＲ４など、および異なる形態のＣＸＣＲ４（例えば、グリコシル化ＣＸＣＲ４）と交差反応する。本発明のいくつかの態様では、ヒトＣＸＣＲ４に特異的な抗体は、ヒトＣＸＣＲ４に完全に特異的であり得、種または他のタイプの交差反応性を呈さない場合がある。
【０１０５】
本発明のいくつかの態様では、本明細書に記載の抗ＣＸＣＲ４抗体は、イヌ化抗体またはネコ化抗体である。イヌ化またはネコ化された本発明による抗体は、イヌＣＸＣＲ４タンパク質またはネコＣＸＣＲ４タンパク質の少なくとも１つに結合することができる。一態様では、本発明のモノクローナル抗体は、イヌＣＸＣＲ４タンパク質またはネコＣＸＣＲ４タンパク質に結合し、間質細胞由来因子−１（ＳＤＦ−１）へのその結合を防止する。
【０１０６】
本発明のいくつかの態様では、抗体は、修飾定常領域、例えば、限定することなく、免疫応答を誘発する潜在性が増大した定常領域などを含む。例えば、定常領域は、Ｆｃγ受容体、例えば、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＡ、またはＦｃγＩＩＩなどに対して増大した親和性を有するように修飾することができる。
【０１０７】
本発明のいくつかの態様では、抗体は、修飾定常領域、例えば、免疫学的に不活性である、すなわち、免疫応答を誘発する潜在性が低減されたヒトＦｃγ受容体に対する親和性が増大した定常領域などを含む。本発明のいくつかの態様では、定常領域は、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２９：２６１３〜２６２４、１９９９、ＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＧＢ９９／０１４４１号、および／または英国特許出願第９８０９９５１８号に記載されているように修飾される。Ｆｃは、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２、ヒトＩｇＧ３、またはヒトＩｇＧ４であり得る。Ｆｃは、アミノ酸残基が野生型ＩｇＧ２配列を参照して番号付けられている、Ａ３３０Ｐ３３１からＳ３３０Ｓ３３１への突然変異（ＩｇＧ２Δａ）を含有するヒトＩｇＧ２とすることができる。Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２９：２６１３〜２６２４、１９９９。本発明のいくつかの態様では、抗体は、以下の突然変異を含むＩｇＧ４の定常領域を含む（Ａｒｍｏｕｒら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、４０、５８５〜５９３、２００３）：番号付けが野生型ＩｇＧ４を参照している、Ｅ２３３Ｆ２３４Ｌ２３５からＰ２３３Ｖ２３４Ａ２３５（ＩｇＧ４Δｃ）。本発明のさらに他の態様では、Ｆｃは、欠失Ｇ２３６を伴ったＥ２３３Ｆ２３４Ｌ２３５からＰ２３３Ｖ２３４Ａ２３５への突然変異（ＩｇＧ４Δｂ）を含有するヒトＩｇＧ４である。本発明の別の態様では、Ｆｃは、Ｓ２２８からＰ２２８へのヒンジ安定化突然変異を含有する任意のヒトＩｇＧ４  Ｆｃ（ＩｇＧ４、ＩｇＧ４Δｂ、またはＩｇＧ４Δｃ）である（Ａａｌｂｅｒｓｅら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１０５、９〜１９、２００２）。本発明の特定の態様では、Ｆｃは、非グリコシル化Ｆｃであり得る。
【０１０８】
本発明のいくつかの態様では、定常領域は、オリゴ糖付着残基（Ａｓｎ２９７など）および／または定常領域中のグリコシル化認識配列の一部であるフランキング残基を突然変異させることによって非グリコシル化されている。本発明のいくつかの態様では、定常領域は、酵素的にＮ結合型グリコシル化について非グリコシル化されている。定常領域は、酵素的に、またはグリコシル化欠損宿主細胞内の発現によって、Ｎ結合型グリコシル化について非グリコシル化されていてもよい。
【０１０９】
ＣＸＣＲ４に対する抗体の結合親和性を決定する一方法は、抗体の単機能Ｆａｂ断片の結合親和性を測定することによるものである。単機能Ｆａｂ断片を得るために、抗体（例えば、ＩｇＧ）をパパインで切断し、または組換えで発現させることができる。抗体のＣＸＣＲ４  Ｆａｂ断片の親和性は、事前固定化ストレプトアビジンセンサーチップ（ＳＡ）を備えた表面プラズモン共鳴（Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）３０００（商標）表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）システム、Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）、ＩＮＣ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ  ＮＪ）、またはＨＢＳ−ＥＰランニング緩衝液（０．０１ＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、０．１５のＮａＣｌ、３ｍＭのＥＤＴＡ、０．００５％  ｖ／ｖの界面活性剤Ｐ２０）を使用する抗マウスＦｃもしくは抗ヒトＦｃによって決定することができる。ＣＸＣＲ４タンパク質含有リポ粒子の捕捉を促進するために、ビオチン化ＷＧＡをＳＡチップ上に被覆することができる。Ｆａｂの希釈系列（１０または３０ｎＭのトップ濃度で、５つのメンバーの３×希釈係数）を低〜高濃度まで注射することによって（各濃度についての３分の会合時間を伴って）、Ｋａｒｌｓｓｏｎら（Ｋａｒｌｓｓｏｎ，Ｒ．、Ｋａｔｓａｍｂａ，Ｐ．Ｓ．、Ｎｏｒｄｉｎ，Ｈ．、Ｐｏｌ，Ｅ．＆Ｍｙｓｚｋａ，Ｄ．Ｇ．、Ａｎａｌｙｚｉｎｇ  ａ  ｋｉｎｅｔｉｃ  ｔｉｔｒａｔｉｏｎ  ｓｅｒｉｅｓ  ｕｓｉｎｇ  ａｆｆｉｎｉｔｙ  ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓ．、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．、３４９、１３６〜１４７（２００６））に記載の「速度論的滴定」法を使用してデータの速度論的分析を実施した。いくつかの分析サイクルについて、Ｆａｂの代わりに緩衝液を捕捉された粒子に注射して、二重参照目的用のブランクサイクルをもたらした（二重参照は、Ｍｙｓｚｋａらにおいて記載されたように実施した）（Ｍｙｓｚｋａ，Ｄ．Ｇ．、Ｉｍｐｒｏｖｉｎｇ  ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ  ａｎａｌｙｓｉｓ．、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｒｅｃｏｇｎｉｔ．、１２、２７９〜２８４（１９９９））。
【０１１０】
Ｆａｂタンパク質の濃度は、標準として既知の濃度（アミノ酸分析によって求めた）のＦａｂを使用して、ＥＬＩＳＡおよび／またはＳＤＳ−ＰＡＧＥ電気泳動によって決定される。動的会合速度（ｋｏｎ）および解離速度（ｋｏｆｆ）は、ＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎプログラムを使用して、１：１のラングミュア結合モデル（Ｋａｒｌｓｓｏｎ，Ｒ．、Ｒｏｏｓ，Ｈ．、Ｆａｇｅｒｓｔａｍ，Ｌ．、Ｐｅｔｅｒｓｓｏｎ，Ｂ．（１９９４）、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、６、９９〜１１０）にデータを包括的にフィッティングすることによって同時に得られる。平衡解離定数（ＫＤ）値は、ｋｏｆｆ／ｋｏｎとして計算される。このプロトコールは、ヒトＣＸＣＲ４、別の哺乳動物のＣＸＣＲ４（マウスＣＸＣＲ４、ラットＣＸＣＲ４、イヌＣＸＣＲ４または霊長類ＣＸＣＲ４など）、および異なる形態のＣＸＣＲ４（例えば、グリコシル化ＣＸＣＲ４）を含めた、任意のＣＸＣＲ４に対する抗体の結合親和性の決定において使用するのに適している。抗体の結合親和性は一般に、２５℃で測定されるが、３７℃でも測定され得る。
【０１１１】
本発明のいくつかの態様では、ＣＸＣＲ４に結合する抗体またはその抗原結合断片は、１０，０００μｇ／ｍＬ未満のＭＦＩを有する。本発明の特定の態様では、ＣＸＣＲ４に結合する抗体またはその抗原結合断片は、６０００μｇ／ｍＬ未満のＭＦＩを有する。本発明の特定の態様では、ＣＸＣＲ４に結合する抗体またはその抗原結合断片は、５０００μｇ／ｍＬ未満のＭＦＩを有する。本発明の特定の態様では、ＣＸＣＲ４に結合する抗体またはその抗原結合断片は、２０００μｇ／ｍＬ〜５０００μｇ／ｍＬの範囲内のＭＦＩを有する。
【０１１２】
本明細書において、「ＭＦＩ」は、平均蛍光強度または蛍光強度中央値を指す。
【０１１３】
本発明のいくつかの態様では、ＣＸＣＲ４に結合する抗体またはその抗原結合断片は、３．００Ｅ−０９Ｍ未満のＥＣ５０を有する。本発明のいくつかの態様では、ＣＸＣＲ４に結合する抗体またはその抗原結合断片は、約１．００Ｅ−０９Ｍ〜約３．００Ｅ−０９Ｍの範囲内のＥＣ５０を有する。例えば、ＣＸＣＲ４に結合する抗体またはその抗原結合断片は、２．００Ｅ−０９ＭのＥＣ５０を有する。
【０１１４】
本発明のいくつかの態様では、抗体またはその抗原結合断片は、ＣＸＣＲ４に結合し、ＳＤＦ−１誘導カルシウム流出を阻害する。例えば、抗体またはその抗原結合断片は、ＳＤＦ−１α誘導カルシウム流出を阻害し、阻害のＩＣ５０は、約１ｎＭ〜５０ｎＭの範囲内である。一態様では、抗体またはその抗原結合断片は、ＳＤＦ−１α誘導カルシウム流出を阻害し、阻害のＩＣ５０は、３０ｎＭ未満である。一態様では、抗体またはその抗原結合断片は、ＳＤＦ−１α誘導カルシウム流出を阻害し、阻害のＩＣ５０は、２ｎＭ未満である。
【０１１５】
本発明のいくつかの態様では、抗体またはその抗原結合断片は、ＡＭＬ細胞モデルにおけるＡＭＬ細胞の数を有意に低減する。例えば、ヒト細胞数の数値は、抗ＣＸＣＲ４  ６Ｂ６抗体で処置された動物において有意に減少した。さらに、本発明の抗ＣＸＣＲ４抗体で処置された動物の生存期間は、有意に増大した。
【０１１６】
いくつかの態様では、本発明の抗体は、マウス全身性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）および急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞モデルにおいて生存時間を増大させ、全身腫瘍組織量を減少させた。一態様では、本発明の抗体は、マウス全身性慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）腫瘍モデルにおいて生存期間を増大させた。一態様では、本発明の抗体は、ｉｎ  ｖｉｖｏでＮＨＬ腫瘍増殖を阻害した。いくつかの態様では、本発明の抗体は、マウス全身性多発性骨髄腫（ＭＭ）モデルにおいて生存時間を増大させ、全身腫瘍組織量を減少させた。
【０１１７】
本発明の抗体は、当技術分野で周知の技法、例えば、組換え技術、ファージディスプレイ技術、合成技術、またはこのような技術もしくは当技術分野で直ちに分かる他の技術の組合せを使用して生成することができる。（例えば、Ｊａｙａｓｅｎａ，Ｓ．Ｄ．、Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．、４５：１６２８〜５０（１９９９）およびＦｅｌｌｏｕｓｅ，Ｆ．Ａ．ら、Ｊ．ＭｏＩ．Ｂｉｏｌ．、３７３（４）：９２４〜４０（２００７）を参照）。
【０１１８】
本明細書に記載の抗ＣＸＣＲ４抗体またはこれらの抗原結合断片は、当技術分野で公知の任意の方法によって作製することができる。例えば、ハイブリドーマ細胞株を生成するために、宿主動物の免疫化の経路およびスケジュールは一般に、本明細書でさらに記載するように、抗体を刺激および生成するための確立された技法および慣例的な技法を踏まえている。ヒトおよびマウス抗体を生成するための一般的な技法は、当技術分野で公知であり、かつ／または本明細書に記載されている。
【０１１９】
ヒトを含めた任意の哺乳動物対象またはそれに由来する抗体産生細胞を、ヒトを含めた哺乳動物およびハイブリドーマ細胞株を生成するための基盤として機能を果たすように操作することができることが企図されている。一般に、宿主動物は、本明細書に記載するように、腹腔内、筋肉内、経口的、皮下、足底内、および／または皮内に、ある量の免疫原を接種される。
【０１２０】
ハイブリドーマは、Ｋｏｈｌｅｒ，Ｂ．およびＭｉｌｓｔｅｉｎ，Ｃ．、Ｎａｔｕｒｅ、２５６：４９５〜４９７（１９７５）の、またはＢｕｃｋ，Ｄ．Ｗ．ら、Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ、１８：３７７〜３８１（１９８２）によって改良された一般的な体細胞ハイブリダイゼーション技法を使用して、リンパ球および不死化骨髄腫細胞から調製することができる。それだけに限らないが、Ｘ６３−Ａｇ８．６５３、およびｔｈｅ  Ｓａｌｋ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、Ｃｅｌｌ  Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  Ｃｅｎｔｅｒ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、Ｃａｌｉｆ．、ＵＳＡからのものを含めた利用可能な骨髄腫株を、ハイブリダイゼーションで使用することができる。一般に、この技法では、ポリエチレングリコールなどの融合剤を使用して、または当業者に周知の電気的手段によって、骨髄腫細胞およびリンパ系細胞を融合する。融合後、細胞は、融合培地から分離され、ヒポキサンチン−アミノプテリン−チミジン（ＨＡＴ）培地などの選択的増殖培地内で増殖されて未ハイブリダイズ親細胞が排除される。血清の有無にかかわらず補充された、本明細書に記載の培地のいずれも、モノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマを培養するのに使用することができる。細胞融合技法の別の選択肢として、ＥＢＶ不死化Ｂ細胞を使用して、対象発明のＣＸＣＲ４モノクローナル抗体を生成することができる。ハイブリドーマは、必要に応じて、展開およびサブクローニングされ、慣例的なイムノアッセイ手順（例えば、ラジオイムノアッセイ、酵素免疫アッセイ、または蛍光イムノアッセイ）によって抗免疫原活性について上清がアッセイされる。
【０１２１】
抗体源として使用され得るハイブリドーマは、ＣＸＣＲ４に特異的なモノクローナル抗体、またはこれらの一部を産生するすべての誘導体、親ハイブリドーマの子孫細胞を包含する。
【０１２２】
このような抗体を産生するハイブリドーマは、公知の手順を使用して、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏで増殖させることができる。モノクローナル抗体は、必要に応じて、慣例的な免疫グロブリン精製手順、例えば、硫安分画、ゲル電気泳動、透析、クロマトグラフィー、および限外濾過などによって、培地または体液から単離することができる。望まれない活性は、存在する場合、例えば、固相に付着した免疫原でできた吸着剤上に配合物を流し、免疫原から所望の抗体を溶出または放出することによって除去することができる。ヒトＣＸＣＲ４、または免疫される種内で免疫原性であるタンパク質、例えば、キーホールリンペットヘモシニアン、血清アルブミン、ウシサイログロブリン、もしくはダイズトリプシン阻害剤にコンジュゲートした標的アミノ酸配列を含有する断片を用いて、二機能性剤または誘導体化剤、例えば、マレイミドベンゾイルスルホスクシンイミドエステル（システイン残基によるコンジュゲーション）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（リシン残基による）、グルタルアルデヒド、無水コハク酸、ＳＯＣｌ２、またはＲ１Ｎ＝Ｃ＝ＮＲ（式中、ＲおよびＲ１は、異なるアルキル基である）を使用して、宿主動物を免疫化すると、抗体（例えば、モノクローナル抗体）の集団を生じさせることができる。
【０１２３】
必要に応じて、対象とする抗ＣＸＣＲ４抗体（モノクローナルまたはポリクローナル）を配列決定し、次いで、ポリヌクレオチド配列をベクター中にクローン化し、発現または増殖させることができる。対象とする抗体をコードする配列を、宿主細胞内のベクター中に維持することができ、次いで宿主細胞を展開し、将来使用するために凍結することができる。細胞培養物内での組換えモノクローナル抗体の生成は、当技術分野で公知の手段によって、Ｂ細胞から抗体遺伝子をクローニングすることによって実施することができる。例えば、Ｔｉｌｌｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ、３２９、１１２（２００８）、米国特許第７，３１４，６２２号を参照。
【０１２４】
代替案では、ポリヌクレオチド配列を遺伝子操作に使用して、抗体を「ヒト化」し、または抗体の親和性もしくは他の特性を改善することができる。例えば、抗体がヒトにおける臨床試験および治療で使用される場合、定常領域をヒト定常領域により近く類似しているように遺伝子工学的に改変して、免疫応答を回避することができる。ＣＸＣＲ４に対するより大きい親和性、および／またはＣＸＣＲ４阻害のより大きい効力を得るために、抗体配列を遺伝子操作することが望ましい場合がある。
【０１２５】
モノクローナル抗体をヒト化するのに４つの一般的なステップがある。これらは、（１）出発抗体の軽鎖および重鎖可変ドメインのヌクレオチドおよび予測アミノ酸配列の決定；（２）ヒト化抗体の設計、すなわち、どの抗体フレームワーク領域をヒト化プロセスの間に使用するかの決定；（３）実際のヒト化方法／技法；および（４）ヒト化抗体のトランスフェクションおよび発現である。例えば、米国特許第４，８１６，５６７号、同第５，８０７，７１５号、同第５，８６６，６９２号、同第６，３３１，４１５号、同第５，５３０，１０１号、同第５，６９３，７６１号、同第５，６９３，７６２号、同第５，５８５，０８９号、および同第６，１８０，３７０号を参照。
【０１２６】
げっ歯類または修飾げっ歯類Ｖ領域、およびヒト定常領域に融合したこれらの関連ＣＤＲを有するキメラ抗体を含めた、非ヒト免疫グロブリンに由来する抗原結合部位を含むいくつかの「ヒト化」抗体分子が記載されている。例えば、Ｗｉｎｔｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ、３４９：２９３〜２９９（１９９１）、Ｌｏｂｕｇｌｉｏら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８６：４２２０〜４２２４（１９８９）、Ｓｈａｗら、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１３８：４５３４〜４５３８（１９８７）、およびＢｒｏｗｎら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、４７：３５７７〜３５８３（１９８７）を参照。他の参考文献には、適切なヒト抗体定常領域と融合する前に、ヒト支持フレームワーク領域（ＦＲ）中に移植されたげっ歯類ＣＤＲが記載されている。例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ、３３２：３２３〜３２７（１９８８）、Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２３９：１５３４〜１５３６（１９８８）、およびＪｏｎｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ、３２１：５２２〜５２５（１９８６）を参照。別の参考文献には、組換え遺伝子工学的に改変されたげっ歯類フレームワーク領域によって支持されたげっ歯類ＣＤＲが記載されている。例えば、欧州特許公開第０５１９５９６号を参照。これらの「ヒト化」分子は、ヒトレシピエントにおけるこれらの部分の治療用途の持続時間および有効性を制限する、げっ歯類抗ヒト抗体分子に対する望まれない免疫応答を最小限にするように設計される。例えば、抗体定常領域を、免疫学的に不活性である（例えば、補体溶解を誘発しない）ように遺伝子工学的に改変することができる。例えば、ＰＣＴ公開第ＰＣＴ／ＧＢ９９／０１４４１号、英国特許出願第９８０９９５１．８号を参照。やはり利用することができる、抗体をヒト化する他の方法は、Ｄａｕｇｈｅｒｔｙら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．、１９：２４７１〜２４７６、１９９１によって、米国特許第６，１８０，３７７号、同第６，０５４，２９７号、同第５，９９７，８６７号、同第５，８６６，６９２号、同第６，２１０，６７１号、および同第６，３５０，８６１号に、ならびにＰＣＴ公開第ＷＯ０１／２７１６０号に開示されている。
【０１２７】
上記に論じたヒト化抗体に関する一般的原理はまた、例えば、イヌ、ネコ、霊長類、ウマ、およびウシにおいて使用するために抗体をカスタマイズするのに適用可能である。さらに、本明細書に記載の抗体をヒト化する１つまたは複数の態様、例えば、ＣＤＲ移植、フレームワーク突然変異、およびＣＤＲ突然変異を組み合わせることができる。
【０１２８】
本発明のいくつかの態様では、特定のヒト免疫グロブリンタンパク質を発現するように遺伝子工学的に改変された市販のマウスを使用することによって、完全ヒト抗体を得ることができる。より望ましい（例えば、完全ヒト抗体）、またはよりロバストな免疫応答を生じるように設計されたトランスジェニック動物も、ヒト化抗体またはヒト抗体を生成するのに使用することができる。トランスジェニックマウスからヒト抗体を得るための方法は、Ｇｒｅｅｎら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔ．、７：１３（１９９４）、Ｌｏｎｂｅｒｇら、Ｎａｔｕｒｅ、３６８：８５６（１９９４）、およびＴａｙｌｏｒら、Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎ．、６：５１９（１９９４）によって開示されている。このようなシステムの非限定例は、Ａｂｇｅｎｉｘ（Ｆｒｅｍｏｎｔ、ＣＡ）製のＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（登録商標）（例えば、参照により本明細書に組み込まれているＧｒｅｅｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ、２３１：１１〜２３（１９９９））である。ＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（登録商標）および同様の動物では、マウス抗体遺伝子は、不活化されており、機能的なヒト抗体遺伝子によって置き換えられており、一方、マウス免疫系の残りは、インタクトなままである。
【０１２９】
ＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（登録商標）は、アクセサリー遺伝子および制御配列とともに、可変領域配列の大部分を含む、ヒトＩｇＨおよびＩｇｋａｐｐａ遺伝子座の部分を含有した生殖系列構成ＹＡＣ（酵母人工染色体）で形質転換された。ヒト可変領域レパートリーを、公知の技法によって処理されてハイブリドーマにされ得る抗体産生Ｂ細胞を生成するのに使用することができる。標的抗原で免疫されたＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（登録商標）は、通常の免疫応答によってヒト抗体を産生し、これらは、上記に論じた標準技法によって回収および／または生成され得る。様々な系統のＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（登録商標）が利用可能であり、そのそれぞれは、異なるクラスの抗体を産生することができる。遺伝子導入で産生されるヒト抗体は、通常のヒト抗体の薬物動態学的性質を保持しながら治療可能性を有することが示された（Ｇｒｅｅｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ、２３１：１１〜２３（１９９９））。当業者は、主張した組成物および方法が、ＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（登録商標）システムの使用に限定されず、ヒト抗体を産生するように遺伝子操作された任意のトランスジェニック動物を利用してもよいことを認識するであろう。
【０１３０】
本発明のいくつかの態様では、出発材料として本明細書に開示のＶＨおよび／またはＶＬ配列の１つまたは複数を有する抗体を使用して抗体を調製して、出発抗体から変更された特性を有し得る修飾抗体を遺伝子工学的に改変することができる。抗体は、一方または両方の可変領域（ＶＨおよび／またはＶＬ）内の、例えば、１つもしくは複数のＣＤＲ領域内および／または１つもしくは複数のフレームワーク領域内の１つまたは複数の残基を修飾することによって遺伝子工学的に改変することができる。追加的にまたは代替として、抗体は、定常領域（複数可）内の残基を修飾して、例えば、抗体のエフェクター機能（複数可）を変更することによって遺伝子工学的に改変することができる。ある特定の態様では、ＣＤＲ移植を、抗体の可変領域を遺伝子工学的に改変するのに使用することができる。抗体は、主に６つの重鎖および軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）内に位置したアミノ酸残基によって標的抗原と相互作用する。この理由で、ＣＤＲ内のアミノ酸配列は、ＣＤＲの外側の配列より、個々の抗体間で多様である。ＣＤＲ配列は、ほとんどの抗体−抗原相互作用に関与するので、異なる特性を有する異なる抗体に由来するフレームワーク配列上に移植された特定の天然に存在する抗体に由来するＣＤＲ配列を含む発現ベクターを構築することによって、特定の天然に存在する抗体の特性を模倣する組換え抗体を発現させることが可能である（例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ，Ｌら、Ｎａｔｕｒｅ、３３２、３２３〜３２７（１９９５）、Ｊｏｎｅｓ，Ｐら、Ｎａｔｕｒｅ、３２１、５２２〜５２５（１９８６）、Ｑｕｅｅｎ，Ｃら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ．Ｓ．Ａ、８６、１００２９〜１００３３（１９８９）、米国特許第５，２２５，５３９号；同第５，５３０，１０１号；同第５，５８５，０８９号；同第５，６９３，７６２号；および同第６，１８０，３７０号を参照）。
【０１３１】
このようなフレームワーク配列は、公共のＤＮＡデータベース、または生殖系列抗体遺伝子配列を含む公開された参考文献から得ることができる。例えば、ヒト重鎖および軽鎖可変領域遺伝子についての生殖系列ＤＮＡ配列は、「ＶＢａｓｅ」ヒト生殖系列配列データベース（ｗｗｗ  ｍｒｃ−ｃｐｅ  ｃａｍ  ａｃ  ｕｋ／ｖｂａｓｅで、インターネット上で利用可能）、およびＫａｂａｔ，Ｅ  Ａら（１９９１）、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、５版、Ｕ  Ｓ．  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、ＮＩＨ刊行物番号９１−３２４２、Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎ，Ｉ  Ｍら（１９９２）、「Ｔｈｅ  Ｒｅｐｅｒｔｏｉｒｅ  ｏｆ  Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｒｍｌｉｎｅ  ＶＨ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  Ｒｅｖｅａｌｓ  ａｂｏｕｔ  Ｆｉｆｔｙ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｏｆ  ＶＨ  Ｓｅｇｍｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ  Ｈｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅ  Ｌｏｏｐｓ」、Ｃｏｘ，Ｊ  Ｐ  Ｌら、Ｊ  ＭｏＩ．Ｂｉｏｌ  ＴＴＬ、７７６〜７９８（１９９４）、「Ａ  Ｄｉｒｅｃｔｏｒｙ  ｏｆ  Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｒｍ−ｌｉｎｅ  Ｖｎ  Ｓｅｇｍｅｎｔｓ  Ｒｅｖｅａｌｓ  ａ  Ｓｔｒｏｎｇ  Ｂｉａｓ  ｉｎ  ｔｈｅｉｒ  Ｕｓａｇｅ」、Ｅｗ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ、２Ａ、８２７〜８３６において見つけることができる。これらのそれぞれの内容は、参照により本明細書に明白に組み込まれている。別の例として、ヒト重鎖および軽鎖可変領域遺伝子についての生殖系列ＤＮＡ配列は、Ｇｅｎｂａｎｋデータベースにおいて見つけることができる。例えば、ＨＣｏ７  ＨｕＭＡｂマウスで見つかる以下の重鎖生殖系列配列が、付随するＧｅｎＢａｎｋ受託番号１−６９（ＮＧ＿００１０１０９、ＮＴ＿０２４６３７、およびＢＣ０７０３３３）、３−３３（ＮＧ＿００１０１０９、およびＮＴ＿０２４６３７）、ならびに３−７（ＮＧ＿００１０１０９およびＮＴ＿０２４６３７）で利用可能である。別の例として、ＨＣｏＩ  ２  ＨｕＭＡｂマウスで見つかる以下の重鎖生殖系列配列が、付随するＧｅｎＢａｎｋ受託番号１−６９（ＮＧ＿００１０１０９、ＮＴ＿０２４６３７、およびＢＣＯ７Ｏ３３３）、５−５１（ＮＧ＿００１０１０９およびＮＴ＿０２４６３７）、４−３４（ＮＧ＿００１０１０９およびＮＴ＿０２４６３７）、３−３０  ３（ＣＡＪ５５６６４４）、ならびに３−２３（ＡＪ４０６６７８）で利用可能である。ヒト重鎖および軽鎖生殖系列配列のさらに別の源は、ＩＭＧＴ（ｈｔｔｐ：／／ｉｍｇｔ．ｃｉｎｅｓ．ｆｒ）から利用可能なヒト免疫グロブリン遺伝子のデータベースである。
【０１３２】
本開示の抗体中に使用するための好適なフレームワーク配列は、本開示の選択された抗体によって使用されるフレームワーク配列と構造的に同様のものである。ＶＨ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列、ならびにＶＬ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を、フレームワーク配列が由来する生殖系列免疫グロブリン遺伝子中に見つかるものと同一の配列を有するフレームワーク領域上に移植することができ、またはＣＤＲ配列を、生殖系列配列と比較して１つもしくは複数の突然変異を含有するフレームワーク領域上に移植することができる。別のタイプのフレームワーク修飾は、フレームワーク領域内で、またはさらには１つまたは複数のＣＤＲ領域内で１つまたは複数の残基を突然変異させてＴ細胞エピトープを除去することによって、抗体の潜在的な免疫原性を低減することを含む。この手法は、「脱免疫化（ｄｅｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ）」とも呼ばれ、米国特許公開第２００３０１５３０４３号にさらに詳細に記載されている。
【０１３３】
フレームワークまたはＣＤＲ領域内に作製される修飾に加えて、またはそれの代替として、本開示の抗体は、Ｆｃ領域内に修飾を含めるように、典型的には、抗体の１つまたは複数の機能的性質、例えば、血清半減期、補体結合、Ｆｃ受容体結合、および／または抗原依存性細胞傷害性などを変更するように遺伝子工学的に改変することができる。さらに、本開示の抗体は、化学修飾し（例えば、１つまたは複数の化学部分を抗体に付着させることができる）、またはやはり抗体の１つもしくは複数の機能的性質を変更するように、そのグリコシル化を変更するように修飾することができる。これらの実施形態のそれぞれを、以下にさらに詳細に記載する。Ｆｃ領域内の残基の番号付けは、Ｋａｂａｔおよび／またはＣｈｏｔｈｉａのＥＵインデックスのものである。例えば、ある特定の場合では、抗体の抗原結合能を維持または増強するためにフレームワーク領域内の残基を突然変異させることが有益であることが見出された（例えば、米国特許第５，５３０，１０１号；同第５，５８５，０８９号；同第５，６９３，７６２号を参照）。本発明のいくつかの態様では、ＣＨｌのヒンジ領域は、ヒンジ領域内のシステイン残基の数が変更され、例えば、増加または減少するように修飾される。この手法は、Ｂｏｄｍｅｒらによって米国特許第５，６７７，４２５号でさらに記載されている。ＣＨ１のヒンジ領域内のシステイン残基の数は、例えば、軽鎖および重鎖のアセンブリーを促進し、または抗体の安定性を増大もしくは減少させるために変更される。本発明のいくつかの態様では、抗体のＦｃヒンジ領域は、抗体の生物学的半減期を減少させるために突然変異される。より具体的には、１つまたは複数のアミノ酸突然変異がＦｃ−ヒンジ断片のＣＨ２−ＣＨ３ドメイン界面領域内に導入され、その結果、抗体は、ネイティブなＦｃ−ヒンジドメインブドウ球菌プロテインＡ（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｙｌ  ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａ）（ＳｐＡ）結合と比べて、損なわれたＳｐＡ結合を有する。この手法は、Ｗａｒｄらによって米国特許第６，１６５，７４５号でさらに詳細に記載されている。
【０１３４】
本発明のいくつかの態様では、抗体は、その生物学的半減期を増大させるように修飾される。様々な手法が可能である。例えば、米国特許第６，２７７，３７５号に記載されたように、以下の突然変異、Ｔ２５２Ｌ、Ｔ２５４Ｓ、Ｔ２５６Ｆの１つまたは複数を導入することができる。代わりに、生物学的半減期を増大させるために、Ｐｒｅｓｔａらによって米国特許第５，８６９，０４６号および同第６，１２１，０２２号で記載されたように、抗体は、ＩｇＧのＦｃ領域のＣＨ２ドメインの２つのループに由来するサルベージ受容体結合エピトープを含有するようにＣＨ１またはＣＬ領域内で変更することができる。
【０１３５】
本発明のいくつかの態様では、抗体を組換えで作製し、当技術分野で公知の任意の方法を使用して発現させることができる。別の代替案では、抗体をファージディスプレイ技術によって組換えで作製することができる。例えば、米国特許第５，５６５，３３２号、同第５，５８０，７１７号、同第５，７３３，７４３号、および同第６，２６５，１５０号、ならびにＷｉｎｔｅｒら、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１２：４３３〜４５５（１９９４）を参照。代わりに、ファージディスプレイ技術（ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、Ｎａｔｕｒｅ、３４８：５５２〜５５３（１９９０））を使用して、非免疫化ドナーに由来する免疫グロブリン可変（Ｖ）ドメイン遺伝子レパートリーから、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでヒト抗体および抗体断片を生成することができる。この技法によれば、抗体Ｖドメイン遺伝子が、糸状バクテリオファージのメジャーまたはマイナーコートタンパク質遺伝子、例えば、Ｍ１３またはｆｄなどの中にインフレームでクローニングされ、ファージ粒子の表面上に機能的な抗体断片としてディスプレイされる。糸状粒子は、ファージゲノムの一本鎖ＤＮＡコピーを含有するので、抗体を機能的性質に基づいて選択すると、これらの性質を呈する抗体をコードする遺伝子も選択される。したがって、ファージは、Ｂ細胞の性質の一部を模倣する。ファージディスプレイは、様々な形式で実施することができる。総説については、例えば、Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｋｅｖｉｎ  Ｓ．およびＣｈｉｓｗｅｌｌ，Ｄａｖｉｄ  Ｊ．、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、３：５６４〜５７１（１９９３）を参照。Ｖ遺伝子セグメントのいくつかの源を、ファージディスプレイに使用することができる。Ｃｌａｃｋｓｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ、３５２：６２４〜６２８（１９９１）は、免疫化マウスの脾臓に由来するＶ遺伝子の小ランダムコンビナトリアルライブラリーから、抗オキサゾロン抗体の多様なアレイを単離した。Ｍａｒｋら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２２：５８１〜５９７（１９９１）またはＧｒｉｆｆｉｔｈら、ＥＭＢＯ  Ｊ．、１２：７２５〜７３４（１９９３）によって記載された技法に本質的に従って、非免疫化ヒトドナーに由来するＶ遺伝子のレパートリーを構築することができ、抗原（自己抗原を含む）の多様なアレイに対する抗体を単離することができる。天然の免疫応答では、抗体遺伝子は、高い割合で突然変異を蓄積する（体細胞超変異）。導入された変化のいくつかが、より高い親和性を付与することになり、高親和性表面免疫グロブリンをディスプレイするＢ細胞が、後続の抗原チャレンジの間に選択的に複製および分化される。この自然過程は、「鎖シャッフリング」として公知の技法を使用することによって模倣することができる（Ｍａｒｋｓら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌ．、１０：７７９〜７８３（１９９２））。この方法では、ファージディスプレイによって得られる「一次」ヒト抗体の親和性は、非免疫化ドナーから得られるＶドメイン遺伝子の天然に存在するバリアントのレパートリー（レパートリー）で、重鎖および軽鎖Ｖ領域遺伝子を順次置き換えることによって改善することができる。この技法により、ｐＭ〜ｎＭ範囲の親和性��有する抗体および抗体断片の生成が可能になる。非常に大きいファージ抗体レパートリー（「マザーオブオールライブラリー」としても公知）を作製するためのストラテジーが、Ｗａｔｅｒｈｏｕｓｅら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．、２１：２２６５〜２２６６（１９９３）によって記載されている。げっ歯類抗体からヒト抗体を導出するのに遺伝子シャフリングも使用することができ、この場合、ヒト抗体は、出発げっ歯類抗体と同様の親和性および特異性を有する。「エピトープ刷り込み」とも呼ばれるこの方法によれば、ファージディスプレイ技法によって得られるげっ歯類抗体の重鎖または軽鎖Ｖドメイン遺伝子がヒトＶドメイン遺伝子のレパートリーと置き換えられ、げっ歯類−ヒトキメラが作り出される。抗原の選択により、機能的抗原結合部位を回復することができるヒト可変領域が単離され、すなわち、エピトープがパートナーの選択を支配する（刷り込む）。残りのげっ歯類Ｖドメインを置き換えるためにこのプロセスが繰り返されると、ヒト抗体が得られる（ＰＣＴ公開第ＷＯ９３／０６２１３を参照）。ＣＤＲ移植によるげっ歯類抗体の伝統的なヒト化と異なり、この技法は、げっ歯類起源のフレームワークまたはＣＤＲ残基をまったく有さない完全ヒト抗体をもたらす。
【０１３６】
抗体は、宿主動物から抗体および抗体産生細胞を最初に単離し、遺伝子配列を得、遺伝子配列を使用して、宿主細胞（例えば、ＣＨＯ細胞）内で抗体を組換えで発現させることによって組換えで作製することができる。使用することができる別の方法は、植物（例えば、タバコ）またはトランスジェニック乳内で抗体配列を発現させることである。植物または乳内で、組換えで抗体を発現させるための方法は、開示されている。例えば、Ｐｅｅｔｅｒｓら、Ｖａｃｃｉｎｅ、１９：２７５６（２００１）、Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．およびＤ．Ｈｕｓｚａｒ、Ｉｎｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ、１３：６５（１９９５）ならびにＰｏｌｌｏｃｋら、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ、２３１：１４７（１９９９）を参照。抗体の誘導体、例えば、ヒト化、単鎖などを作製するための方法は、当技術分野で公知である。
【０１３７】
イムノアッセイ、および蛍光活性化細胞分類（ＦＡＣＳ）などのフローサイトメトリーソーティング技法も、ＣＸＣＲ４に対して特異的な抗体を単離するのに使用することができる。
【０１３８】
本明細書に記載の抗体は、多くの異なる担体に結合することができる。担体は、活性および／または不活性であり得る。周知の担体の例としては、ポリプロピレン、ポリスチレン、ポリエチレン、デキストラン、ナイロン、アミラーゼ、ガラス、天然および変性セルロース、ポリアクリルアミド、アガロース、ならびに磁鉄鉱がある。担体の性質は、本発明の目的に関して可溶性または不溶性であり得る。当業者は、結合抗体用の他の適当な担体が分かり、または日常の実験を使用してこのようなものを確認することができるであろう。本発明のいくつかの態様では、担体は、心筋を標的にする部分を含む。
【０１３９】
モノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、慣例的な手順を使用して（例えば、モノクローナル抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）容易に単離および配列決定される。ハイブリドーマ細胞は、このようなＤＮＡなどの好適な源として機能を果たす。単離した後、発現ベクター（ＰＣＴ公開第ＷＯ８７／０４４６２号に開示された発現ベクターなど）内にＤＮＡを配置することができ、次いでこれらは、宿主細胞、例えば、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細胞、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、または免疫グロブリンタンパク質を他の方法で産生しない骨髄腫細胞などの中にトランスフェクトされて、組換え宿主細胞内でモノクローナル抗体の合成が得られる。例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ８７／０４４６２号を参照。ＤＮＡは、例えば、相同マウス配列の代わりにヒト重鎖および軽鎖定常領域のコード配列を置換することによって、Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．、８１：６８５１、１９８４、または免疫グロブリンコード配列に、非免疫グロブリンポリペプチドのコード配列のすべてもしくは一部を共有結合的に接合することによって、修飾することもできる。その様式で、本明細書のＣＸＣＲ４モノクローナル抗体の結合特異性を有する「キメラ」または「ハイブリッド」抗体が調製される。
【０１４０】
抗ＣＸＣＲ４抗体の結合特異性を判定するための方法は、当業者に周知である。一般的な方法は、例えば、ＭＥＴＨＯＤＳ  ＩＮ  ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＢＩＯＬＯＧＹ、１０巻：ＩＭＭＵＮＯＣＨＥＭＩＣＡＬ  ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ、Ｍａｎｓｏｎ（編）、１０５〜１１６頁（Ｔｈｅ  Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．、１９９２）のＭｏｌｅ、「Ｅｐｉｔｏｐｅ  Ｍａｐｐｉｎｇ」によって提供されている。
【０１４１】
本明細書に記載の抗ＣＸＣＲ４抗体またはこれらの抗原結合断片は、当技術分野で公知の方法を使用して同定し、または特徴付けることができ、それによってＣＸＣＲ４発現レベルの低減が検出および／または測定される。本発明のいくつかの態様では、抗ＣＸＣＲ４抗体またはその抗原結合断片は、候補剤をＣＸＣＲ４とともにインキュベートし、ＣＸＣＲ４発現レベルの結合および／または付随的低減を監視することによって同定される。結合アッセイは、精製ＣＸＣＲ４ポリペプチド（複数可）を用いて、またはＣＸＣＲ４ポリペプチド（複数可）を天然に発現し、もしくはこれらを発現するようにトランスフェクトされた細胞を用いて実施することができる。一態様では、結合アッセイは、競合的結合アッセイであり、この場合、候補抗体がＣＸＣＲ４結合を公知の抗ＣＸＣＲ４抗体またはその抗原結合断片と競合する能力が評価される。アッセイは、ＥＬＩＳＡ形式を含めて様々な形式で実施することができる。
【０１４２】
最初に同定した後、候補抗ＣＸＣＲ４抗体またはその抗原結合断片の活性を、標的にされる生物活性を試験することが知られているバイオアッセイによってさらに確認および洗練することができる。代わりに、バイオアッセイを使用して、候補を直接スクリーニングすることができる。抗ＣＸＣＲ４抗体またはその抗原結合断片を同定し、特徴づけるための方法のいくつかを、実施例で詳細に記載する。
【０１４３】
抗ＣＸＣＲ４抗体またはその抗原結合断片は、当技術分野で周知の方法を使用して特徴付けることができる。例えば、一方法は、これが結合するエピトープを同定すること、または「エピトープマッピング」である。例えば、ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ、Ｕｓｉｎｇ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９９９の１１章に記載されている、抗体−抗原複合体の結晶構造の解明、競合アッセイ、遺伝子断片発現アッセイ、および合成ペプチドベースアッセイを含めて、タンパク質上のエピトープの位置をマッピングおよび特徴付けるための多くの当技術分野で公知の方法がある。追加の例では、エピトープマッピングを使用して、抗ＣＸＣＲ４抗体またはその抗原結合断片が結合する配列を求めることができる。エピトープマッピングは、様々な源、例えば、Ｐｅｐｓｃａｎ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｅｄｅｌｈｅｒｔｗｅｇ  １５、８２１９  ＰＨ  Ｌｅｌｙｓｔａｄ、オランダ）から商業的に利用可能である。エピトープは、線状エピトープであり得、すなわち、アミノ酸の単一ストレッチ内に含有され得、または必ずしも単一ストレッチ内に含有されていない場合がある、アミノ酸の３次元相互作用によって形成される立体構造エピトープであり得る。様々な長さ（例えば、少なくとも４〜６アミノ酸の長さ）のペプチドを、単離または合成し（例えば、組換えで）、抗ＣＸＣＲ４抗体またはその抗原結合断片を用いた結合アッセイに使用することができる。別の例では、抗ＣＸＣＲ４抗体またはその抗原結合断片が結合するエピトープは、ＣＸＣＲ４配列に由来する重複ペプチドを使用し、抗ＣＸＣＲ４抗体またはその抗原結合断片による結合を決定することによって、系統的なスクリーニングで決定することができる。遺伝子断片発現アッセイによれば、ＣＸＣＲ４をコードするオープンリーディングフレームがランダムに、または特定の遺伝子構築によって断片化され、ＣＸＣＲ４の発現断片の試験される抗体との反応性が決定される。遺伝子断片は、例えば、放射性アミノ酸の存在下で、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで、ＰＣＲによって生成され、次いで転写され、およびタンパク質に翻訳され得る。次いで放射性標識ＣＸＣＲ４断片への抗体の結合が、免疫沈降およびゲル電気泳動によって決定される。ある特定のエピトープは、ファージ粒子の表面上にディスプレイされたランダムペプチド配列の大きいライブラリー（ファージライブラリー）を使用することによっても同定することができる。代わりに重複ペプチド断片の定義されたライブラリーを、単純な結合アッセイで試験抗体への結合について試験することができる。追加の例では、抗原結合ドメインの突然変異誘発、ドメイン交換実験、およびアラニンスキャニング突然変異誘発を実施して、エピトープ結合に要求され、十分な、かつ／または必要な残基を同定することができる。例えば、ドメイン交換実験は、ＣＸＣＲ４タンパク質の様々な断片が、別の種（例えば、マウス）に由来するＣＸＣＲ４からの配列、または密接に関係するが抗原性の異なるタンパク質（例えば、ＣＸＣＲ４）で置き換えられた（交換された）突然変異体ＣＸＣＲ４を使用して実施することができる。突然変異体ＣＸＣＲ４への抗体の結合を評価することによって、抗体結合に対する特定のＣＸＣＲ４断片の重要性を評価することができる。
【０１４４】
抗ＣＸＣＲ４抗体を特徴付けるのに使用することができるさらに別の方法は、同じ抗原、すなわち、ＣＸＣＲ４上の様々な断片に結合することが知られている他の抗体との競合アッセイを使用して、抗ＣＸＣＲ４抗体が他の抗体と同じエピトープと競合する、および／または他の抗体と同じエピトープに結合するか否かを決定することである。競合アッセイは、当業者に周知である。
【０１４５】
本発明のいくつかの態様では、ＣＸＣＲ４に結合する単離抗体またはその抗原結合断片は、ＣＸＣＲ４への結合を競合し、かつ／またはＣＸＣＲ４の同じエピトープに結合する。ＣＸＣＲ４への結合を競合し、かつ／またはＣＸＣＲ４の同じエピトープに結合する抗体の中には、（ｉ）配列番号１０７、１１３、１１４、１０８、１０９、１１５、１１６、１１７、１２１、および１２２からなる群から選択される重鎖可変（ＶＨ）  ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号１６２、１２８、１１０、１１１、１１８、１１９、１５４、１２３、１５８、１２４、１５９、１２５、１６０、１２６、１６１、１２７、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１５５、１２９、１５６、および１３０からなる群から選択されるＶＨ  ＣＤＲ２、ならびに（ｉｉｉ）配列番号１１２および１２０からなる群から選択されるＶＨ  ＣＤＲ３を含む少なくともＶＨ領域、ならびに／または、（ｉ）配列番号１４４、１３１、１３５、１３８、１４１、１４２、１４３、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、および１５１からなる群から選択される軽鎖可変領域（ＶＬ）  ＣＤＲ１、（ｉｉ）１４５、１３２、１３６、および１５２からなる群から選択されるＶＬ  ＣＤＲ２、ならびに（ｉｉｉ）配列番号１３９、１３３、１３７、１４０、および１５３からなる群から選択されるＶＬ  ＣＤＲ３を含む少なくともＶＬ領域を含む抗体がある。
【０１４６】
本発明のいくつかの態様では、抗体は、配列番号１０７、１６２、および１１２として示した３つのＣＤＲを含む重鎖可変（ＶＨ）領域を含む抗体またはその抗原結合断片とＣＸＣＲ４への結合を競合する。
【０１４７】
本発明のいくつかの態様では、抗体は、配列番号１４４、１４５、および１３９として示した３つのＣＤＲを含む軽鎖可変（ＶＬ）領域を含む抗体またはその抗原結合断片とＣＸＣＲ４への結合を競合する。
【０１４８】
本発明のいくつかの態様では、抗体は、ａ）配列番号１０７、１６２、および１１２として示した３つのＣＤＲを含む重鎖可変（ＶＨ）領域、ならびにｂ）配列番号１４４、１４５、および１３９として示した３つのＣＤＲを含む軽鎖可変（ＶＬ）領域を含む抗体またはその抗原結合断片とＣＸＣＲ４への結合を競合する。
【０１４９】
本発明のいくつかの態様では、抗体は、ａ）配列番号３３の重鎖可変（ＶＨ）領域に由来するＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、およびＶＨ  ＣＤＲ３を含むＶＨ領域、ならびに／またはｂ）配列番号７３の軽鎖可変（ＶＬ）領域に由来するＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、およびＶＬ  ＣＤＲ３を含むＶＬ領域を含む抗体またはその抗原結合断片とＣＸＣＲ４への結合を競合する。
【０１５０】
本発明のいくつかの態様では、抗体は、ａ）配列番号３３の重鎖可変（ＶＨ）領域、および／またはｂ）配列番号７３の軽鎖可変（ＶＬ）領域を含む抗体またはその抗原結合断片とＣＸＣＲ４への結合を競合する。
【０１５１】
発現ベクターを抗ＣＸＣＲ４抗体またはその抗原結合断片の直接発現に使用することができる。当業者は、ｉｎ  ｖｉｖｏで外因性タンパク質の発現を得るための発現ベクターの投与に精通している。例えば、米国特許第６，４３６，９０８号、同第６，４１３，９４２号、および同第６，３７６，４７１号を参照。発現ベクターの投与としては、注入、経口投与、粒子銃もしくはカテーテル挿入投与、および局部投与を含めた局所投与または全身投与がある。本発明の別の態様では、発現ベクターは、交感神経幹もしくは神経節に、または冠動脈、心房、心室、もしくは心膜内に直接投与される。
【０１５２】
発現ベクターまたはサブゲノムポリヌクレオチドを含有する治療用組成物の標的化送達も使用することができる。受容体媒介ＤＮＡ送達技法は、例えば、Ｆｉｎｄｅｉｓら、Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．、１１：２０２（１９９３）、Ｃｈｉｏｕら、Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ：Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  Ｏｆ  Ｄｉｒｅｃｔ  Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ、Ｊ．Ａ．Ｗｏｌｆｆ編、１９９４、Ｗｕら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２６３：６２１（１９８８）、Ｗｕら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２６９：５４２（１９９４）、Ｚｅｎｋｅら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８７：３６５５（１９９０）、およびＷｕら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２６６：３３８（１９９１）に記載されている。ポリヌクレオチドを含有する治療用組成物は、遺伝子療法プロトコールの局所投与に関して、約１００ｎｇ〜約２００ｍｇのＤＮＡの範囲内で投与される。約５００ｎｇ〜約５０ｍｇ、約１μｇ〜約２ｍｇ、約５μｇ〜約５００μｇ、および約２０μｇ〜約１００μｇのＤＮＡの濃度範囲も、遺伝子療法プロトコールの間に使用することができる。治療用ポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、遺伝子送達ビヒクルを使用して送達することができる。遺伝子送達ビヒクルは、ウイルス起源であっても、非ウイルス起源であってもよい（一般に、Ｊｏｌｌｙら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ、１：５１（１９９４）、Ｋｉｍｕｒａ、Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ、５：８４５（１９９４）、Ｃｏｎｎｅｌｌｙら、Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ、１：１８５（１９９５）、およびＫａｐｌｉｔｔ、Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ、６：１４８（１９９４）を参照）。このようなコード配列の発現は、内因性哺乳動物プロモーターまたは異種プロモーターを使用して誘導され得る。コード配列の発現は、構成的であってもよく、または制御されてもよい。
【０１５３】
所望のポリヌクレオチドを送達し、所望の細胞内で発現させるためのウイルス系ベクターは、当技術分野で周知である。例示的なウイルス系ビヒクルとしては、それだけに限らないが、組換えレトロウイルス（例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ９０／０７９３６号、同第ＷＯ９４／０３６２２号、同第ＷＯ９３／２５６９８号、同第ＷＯ９３／２５２３４号、同第ＷＯ９３／１１２３０号、同第ＷＯ９３／１０２１８号、同第ＷＯ９１／０２８０５号、米国特許第５，２１９，７４０号および同第４，７７７，１２７号、英国特許第２，２００，６５１号、ならびに欧州特許第０３４５２４２号を参照）、アルファウイルス系ベクター（例えば、シンドビスウイルスベクター、セムリキ森林ウイルス（ＡＴＣＣ  ＶＲ−６７、ＡＴＣＣ  ＶＲ−１２４７）、ロスリバーウイルス（ＡＴＣＣ  ＶＲ−３７３、ＡＴＣＣ  ＶＲ−１２４６）、ならびにベネズエラウマ脳炎ウイルス（ＡＴＣＣ  ＶＲ−９２３、ＡＴＣＣ  ＶＲ−１２５０、ＡＴＣＣ  ＶＲ１２４９、ＡＴＣＣ  ＶＲ−５３２））、ならびにアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター（例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ９４／１２６４９号、同第ＷＯ９３／０３７６９号、同第ＷＯ９３／１９１９１号、同第ＷＯ９４／２８９３８号、同第ＷＯ９５／１１９８４号、および同第ＷＯ９５／００６５５を参照）がある。Ｃｕｒｉｅｌ、Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．、１９９２、３：１４７に記載された死滅アデノウイルスに連結したＤＮＡの投与も使用することができる。
【０１５４】
それだけに限らないが、死滅アデノウイルス単独に連結した、または連結していないポリカチオン凝縮ＤＮＡ（例えば、Ｃｕｒｉｅｌら、Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．、３：１４７（１９９２）を参照）、リガンド連結ＤＮＡ（例えば、Ｗｕ、Ｊ．ら、Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２６４：１６９８５（１９８９）を参照）、真核細胞送達ビヒクル細胞（例えば、米国特許第５，８１４，４８２号、ＰＣＴ公開第ＷＯ９５／０７９９４号、同第ＷＯ９６／１７０７２号、同第ＷＯ９５／３０７６３号、および同第ＷＯ９７／４２３３８号を参照）、ならびに核電荷中和または細胞膜との融合を含めた、非ウイルス送達ビヒクルならびに方法も使用することができる。裸のＤＮＡも使用することができる。例示的な裸のＤＮＡ導入方法は、ＰＣＴ公開第ＷＯ９０／１１０９２号、および米国特許第５，５８０，８５９号に記載されている。遺伝子送達ビヒクルとして作用することができるリポソームは、米国特許第５，４２２，１２０号、ＰＣＴ公開第ＷＯ９５／１３７９６号、同第ＷＯ９４／２３６９７号、同第ＷＯ９１／１４４４５号、およびＥＰ０５２４９６８に記載されている。追加の手法は、Ｐｈｉｌｉｐら、Ｍｏｌ．ＣｅｌｌＢｉｏｌ．、１４：２４１１（１９９４）、およびＷｏｆｆｅｎｄｉｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．、９１：１５８１（１９９４）に記載されている。
【０１５５】
本発明のいくつかの態様では、本発明は、本明細書に記載の抗体を含み、または本方法によって作製され、本明細書に記載の特性を有する、医薬組成物を含めた組成物を包含する。本明細書において、組成物は、ＣＸＣＲ４に結合する１種もしくは複数の抗体および／または１つもしくは複数のこれらの抗体をコードする配列を含む１つもしくは複数のポリヌクレオチドを含む。これらの組成物は、当技術分野で周知である、緩衝液を含めた薬学的に許容できる賦形剤などの適当な賦形剤をさらに含むことができる。
【０１５６】
したがって、本発明は、以下のうちのいずれか、または以下の配列のうちのいずれかを含む組成物（医薬組成物を含む）を提供する：
【０１５７】
【表２−１】
2019141059.tif 000005
【０１５８】
【表２−２】
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【０１５９】
【表２−３】
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【０１６０】
【表２−４】
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【０１６１】
【表２−５】
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【０１６２】
【表２−６】
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【０１６３】
【表２−７】
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【０１６４】
【表２−８】
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【０１６５】
【表２−９】
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【０１６６】
【表２−１０】
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【０１６７】
【表２−１１】
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【０１６８】
【表２−１２】
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【０１６９】
【表２−１３】
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【０１７０】
【表２−１４】
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【０１７１】
【表２−１５】
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【０１７２】
【表２−１６】
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【０１７３】
【表２−１７】
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【０１７４】
【表２−１８】
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【０１７５】
【表２−１９】
2019141059.tif 000023
【０１７６】
表２中、下線を引いた配列は、ＫａｂａｔによるＣＤＲ配列であり、太字は、ＣｈｏｔｈｉａによるＣＤＲ配列である。
【０１７７】
本発明は、ＣＸＣＲ４に対する抗体のＣＤＲ部分（Ｃｈｏｔｈｉａ、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ、およびＣＤＲ接触領域を含む）も提供する。ＣＤＲ領域の決定は、当技術分野の技術の十分範囲内である。本発明のいくつかの態様では、ＣＤＲは、ＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲの組合せであり得る（「組合せＣＲ」または「拡張ＣＤＲ」とも呼ばれる）ことが理解される。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲである。他の実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲである。言い換えれば、複数のＣＤＲを有する実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、組合せＣＤＲ、またはこれらの組合せのいずれかであり得る。表３および表４は、本明細書に提供されるＣＤＲ配列の例を提供する。
【０１７８】
【表３−１】
2019141059.tif 000024
【０１７９】
【表３−２】
2019141059.tif 000025
【０１８０】
【表３−３】
2019141059.tif 000026
【０１８１】
【表３−４】
2019141059.tif 000027
【０１８２】
【表３−５】
2019141059.tif 000028
【０１８３】
【表３−６】
2019141059.tif 000029
【０１８４】
【表３−７】
2019141059.tif 000030
【０１８５】
【表３−８】
2019141059.tif 000031
【０１８６】
【表４−１】
2019141059.tif 000032
【０１８７】
【表４−２】
2019141059.tif 000033
【０１８８】
【表４−３】
2019141059.tif 000034
【０１８９】
一態様では、本発明は、ＣＸＣＲ４に結合し、および／または本明細書に記載の抗体、例えば、ｍ６Ｂ６、ｈ６Ｂ６、ｍ１２Ａ１１、ｈ１２Ａ１１、ｍ３Ｇ１０、ｈ３Ｇ１０、ｈ３Ｇ１０．Ａ５７、ｈ３Ｇ１０．Ｂ４４、ｈ３Ｇ１０．１．７、ｈ３Ｇ１０．１．６０、ｈ３Ｇ１０．２．５、ｈ３Ｇ１０．１．９１、ｈ３Ｇ１０．２．３７、ｈ３Ｇ１０．２．４５、ｈ３Ｇ１０．２．４２、ｈ３Ｇ１０．１．３３、ｈ３Ｇ１０．３．２５、ｈ３Ｇ１０、ｈ３Ｇ１０．２．７２、ｈ３Ｇ１０．Ａ１１Ａ、ｈ３Ｇ１０．Ａ１８Ａ、ｈ３Ｇ１０．Ａ１９Ａ、ｈ３Ｇ１０．Ａ５８Ａ、ｈ３Ｇ１０．Ａ６５Ａ、およびｈ３Ｇ１０．Ｂ１２Ａ、ｈ３Ｇ１０．Ｂ１３Ａ、ｈ３Ｇ１０．Ｂ１８Ａ、ｈ３Ｇ１０．Ａ１１Ｂ、ｈ３Ｇ１０．Ａ１８Ｂ、ｈ３Ｇ１０．Ａ１９Ｂ、ｈ３Ｇ１０．Ａ５８Ｂ、ｈ３Ｇ１０．Ａ６５Ｂ、ｈ３Ｇ１０．Ｂ１２Ｂ、ｈ３Ｇ１０．Ｂ１３Ｂ、ｈ３Ｇ１０．Ｂ１８Ｂ、ｈ３Ｇ１０．２．２５、ｈ３Ｇ１０．Ａ５９、ｈ３Ｇ１０．Ａ６２、またはｈ３Ｇ１０．Ｌ９４Ｄなどと競合する抗体を提供する。
【０１９０】
別の態様では、抗体は、抗体ｍ６Ｂ６、ｈ６Ｂ６、ｍ１２Ａ１１、ｈ１２Ａ１１、ｍ３Ｇ１０、ｈ３Ｇ１０、ｈ３Ｇ１０．Ａ５７、ｈ３Ｇ１０．Ｂ４４、ｈ３Ｇ１０．１．７、ｈ３Ｇ１０．１．６０、ｈ３Ｇ１０．２．５、ｈ３Ｇ１０．１．９１、ｈ３Ｇ１０．２．３７、ｈ３Ｇ１０．２．４５、ｈ３Ｇ１０．２．４２、ｈ３Ｇ１０．１．３３、ｈ３Ｇ１０．３．２５、ｈ３Ｇ１０、ｈ３Ｇ１０．２．７２、ｈ３Ｇ１０．Ａ１１Ａ、ｈ３Ｇ１０．Ａ１８Ａ、ｈ３Ｇ１０．Ａ１９Ａ、ｈ３Ｇ１０．Ａ５８Ａ、ｈ３Ｇ１０．Ａ６５Ａ、およびｈ３Ｇ１０．Ｂ１２Ａ、ｈ３Ｇ１０．Ｂ１３Ａ、ｈ３Ｇ１０．Ｂ１８Ａ、ｈ３Ｇ１０．Ａ１１Ｂ、ｈ３Ｇ１０．Ａ１８Ｂ、ｈ３Ｇ１０．Ａ１９Ｂ、ｈ３Ｇ１０．Ａ５８Ｂ、ｈ３Ｇ１０．Ａ６５Ｂ、ｈ３Ｇ１０．Ｂ１２Ｂ、ｈ３Ｇ１０．Ｂ１３Ｂ、ｈ３Ｇ１０．Ｂ１８Ｂ、ｈ３Ｇ１０．２．２５、ｈ３Ｇ１０．Ａ５９、ｈ３Ｇ１０．Ａ６２、またはｈ３Ｇ１０．Ｌ９４Ｄと、ＣＸＣＲ４の結合を競合する。
【０１９１】
本発明のいくつかの態様では、抗体は、本発明の抗体とＣＸＣＲ４の結合を競合し、表面プラズモン共鳴によって測定して、約６．５ｎＭ、約６．０ｎＭ、約５．５ｎＭ、約５．０ｎＭ、約４．５ｎＭ、約４．０ｎＭ、約３．５ｎＭ、約３．０ｎＭ、約２．５ｎＭ、約２．０ｎＭ、約１．５ｎＭ、約１．０ｎＭ、約０．５ｎＭ、または約０．２５ｎＭのいずれか、またはこれらのいずれか未満の一価抗体結合親和性（ＫＤ）を有する。本発明のいくつかの態様では、抗体は、抗体ｈ３Ｇ１０とＣＸＣＲ４の結合を競合し、約３０ｎＭ、約２５ｎＭ、約２２ｎＭ、約２０ｎＭ、約１５ｎＭ、または約１０ｎＭのいずれか、またはこれらのいずれか未満の一価抗体結合親和性（ＫＤ）を有する。
【０１９２】
いくつかの態様では、本発明は、ＣＤＲ接触領域に基づく抗ＣＸＣＲ４抗体に対する抗体のＣＤＲ部分も提供する。ＣＤＲ接触領域は、抗原に対する抗体に特異性をもたらす、抗体の領域である。一般に、ＣＤＲ接触領域は、ＣＤＲ、および抗体が特異的抗原に結合するための適切なループ構造を維持するために束縛されているバーニアゾーン内に残基位置を含む。例えば、Ｍａｋａｂｅら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２８３：１１５６〜１１６６、２００７を参照。ＣＤＲ接触領域の決定は、当技術分野の技術の十分範囲内である。
【０１９３】
本発明のいくつかの態様では、ケモカイン受容体４（ＣＸＣＲ４）に結合する単離抗体またはその抗原結合断片は、ａ）（ｉ）配列番号１０７、１１３、１１４、１０８、１０９、１１５、１１６、１１７、１２１、および１２２からなる群から選択される重鎖可変（ＶＨ）  ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号１６２、１２８、１１０、１１１、１１８、１１９、１５４、１２３、１５８、１２４、１５９、１２５、１６０、１２６、１６１、１２７、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１５５、１２９、１５６、および１３０からなる群から選択されるＶＨ  ＣＤＲ２、ならびに（ｉｉｉ）配列番号１１２および１２０からなる群から選択されるＶＨ  ＣＤＲ３を含むＶＨ領域、ならびに／または、ｂ）（ｉ）配列番号１４４、１３１、１３５、１３８、１４１、１４２、１４３、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、および１５１からなる群から選択される軽鎖可変領域（ＶＬ）  ＣＤＲ１、（ｉｉ）１４５、１３２、１３６、および１５２からなる群から選択されるＶＬ  ＣＤＲ２、ならびに（ｉｉｉ）配列番号１３９、１３３、１３７、１４０、および１５３からなる群から選択されるＶＬ  ＣＤＲ３を含むＶＬ領域を含む。
【０１９４】
一態様では、ＣＸＣＲ４に結合する抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１０７、１１３、１１４、１０８、１０９、１１５、１１６、１１７、１２１、１２２、１６２、１２８、１１０、１１１、１１８、１１９、１５４、１２３、１５８、１２４、１５９、１２５、１６０、１２６、１６１、１２７、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１５５、１２９、１５６、１３０、１１２、および１２０と少なくとも９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ＣＤＲ領域を含む。一態様では、ＣＸＣＲ４に結合する抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１４４、１３１、１３５、１３８、１４１、１４２、１４３、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１４５、１３２、１３６、および１５２、１３９、１３３、１３７、１４０、および１５３と少なくとも９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＬ）ＣＤＲ領域を含む。
【０１９５】
本発明のいくつかの態様では、ＣＸＣＲ４に結合する単離抗体またはその抗原結合断片は、ａ）（ｉ）配列番号１０７、１１３、１１４、１０８、１０９、１１５、１１６、１１７、１２１、および１２２として示した配列を含む重鎖可変（ＶＨ）  ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号１６２、１２８、１１０、１１１、１１８、１１９、１５４、１２３、１５８、１２４、１５９、１２５、１６０、１２６、１６１、１２７、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１５５、１２９、１５６、および１３０として示した配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２、ならびに（ｉｉｉ）配列番号１１２もしくは１２０として示した配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３からなる群から選択される相補性決定領域を含むＶＨ領域、ならびに／またはｂ）（ｉ）配列番号１４４、１３１、１３５、１３８、１４１、１４２、１４３、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、もしくは１５１として示した配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）  ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号１４５、１３２、１３６、もしくは１５２として示した配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２、ならびに（ｉｉｉ）配列番号１３９、１３３、１３７、１４０、もしくは１５３として示した配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３からなる群から選択される相補性決定領域を含むＶＬ領域を含む。本発明のいくつかの態様では、ＣＸＣＲ４に結合する単離抗体またはその抗原結合断片は、ａ）（ｉ）配列Ｘ１ＳＸ２Ｘ３ＳＬＦＮＳＸ４Ｘ５ＲＫＮＹＬＸ６（式中、Ｘ１は、ＲもしくはＫであり、Ｘ２は、ＳもしくはＡであり、Ｘ３は、Ｗ、Ｎ、もしくはＱであり、Ｘ４は、ＨもしくはＲであり、Ｘ５は、ＴもしくはＦであり、かつ／またはＸ６は、Ａ、Ｌ、Ｎ、もしくはＭである）（配列番号１５１）を含む軽鎖可変（ＶＬ）  ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列ＷＡＳＡＲＸ１Ｓ（式中、Ｘ１は、ＧもしくはＥである）（配列番号１５２）を含むＶＬ  ＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列ＫＱＳＦＸ１ＬＲＴ（式中、Ｘ１は、ＮもしくはＲである）（配列番号１５３）を含むＶＬ  ＣＤＲ３を含むＶＬ領域、ならびに／またはｂ）（ｉ）配列番号１０７、１０８、１０９、１１３、または１１４として示した配列を含む重鎖可変（ＶＨ）  ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号１５７として示した配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列番号１１２として示した配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３を含むＶＨ領域を含む。
【０１９６】
別の態様では、本発明は、ケモカイン受容体４（ＣＸＣＲ４）に結合し、ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＤＹＹＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＸ１ＦＩＲＨＫＸ２ＮＸ３Ｘ４ＴＸ５ＥＹＳＴＸ６Ｘ７Ｘ８ＧＲＦＴＩＳＲＤＸ９ＳＫＮＸ１０ＬＹＬＱＭＮＳＬＸ１１Ｘ１２ＥＤＴＡＶＹＹＣＡＸ１３ＤＬＰＧＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１０６）（式中、Ｘ１は、ＧまたはＳであり、Ｘ２は、ＶまたはＡであり、Ｘ３は、Ｇ、Ｆ、Ｋ、Ｖ、Ｔ、Ｌ、またはＩであり、Ｘ４は、ＥまたはＹであり、Ｘ５は、ＴまたはＲであり、Ｘ６は、ＷまたはＳであり、Ｘ７は、ＤまたはＶであり、Ｘ８は、Ｋ、Ｔ、またはＲであり、Ｘ９は、ＤまたはＮであり、Ｘ１０は、ＴまたはＳであり、Ｘ１１は、ＲまたはＫであり、Ｘ１２は、ＡまたはＴであり、Ｘ１３は、ＫまたはＲである）を含む重鎖可変（ＶＨ）領域配列を含む、単離抗体またはその抗原結合断片を提供する。
【０１９７】
本発明のいくつかの態様では、ケモカイン受容体４（ＣＸＣＲ４）に結合する単離抗体またはその抗原結合断片は、ａ）配列番号１０７、１１３、または１１４の重鎖可変（ＶＨ）  ＣＤＲ１、配列番号１６２または１２８のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１４４の軽鎖可変（ＶＬ）  ＣＤＲ１、配列番号１４５のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１３９のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｂ）配列番号１１５、１１６、１１７、１２１、または１２２のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１１８または１１９のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１２０のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１３５のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１３６のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１３７のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｃ）配列番号１０７、１０８、１０９、１１３、または１１４のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１１０または１１１のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１３１のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１３２のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１３３のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｄ）配列番号１０７、１０８、１０９、１１３、または１１４のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１５４または１２３のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１３８のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１３２のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１３９のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ならびにｅ）配列番号１０７、１０８、１０９、１１３、または１１４のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１５７のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１５１のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１５２のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１５３のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域からなる群から選択される。
【０１９８】
本発明のいくつかの態様では、ケモカイン受容体４（ＣＸＣＲ４）に結合する単離抗体またはその抗原結合断片は、ａ）配列番号１０７の重鎖可変（ＶＨ）  ＣＤＲ１、配列番号１６２のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１４４の軽鎖可変（ＶＬ）  ＣＤＲ１、配列番号１４５のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１３９のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｂ）配列番号１１５のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１１８のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１２０のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１３５のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１３６のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１３７のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｃ）配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１１０のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１３１のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１３２のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１３３のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｄ）配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１５４のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１３８のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１３２のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１３９のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ならびにｅ）配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１５７のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１５１のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１５２のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１５３のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域からなる群から選択される。
【０１９９】
本発明のいくつかの態様では、ケモカイン受容体４（ＣＸＣＲ４）に結合する単離抗体またはその抗原結合断片は、ａ）配列番号１０７の重鎖可変（ＶＨ）  ＣＤＲ１、配列番号１５８のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１３８の軽鎖可変（ＶＬ）  ＣＤＲ１、配列番号１３２のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１３９のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｂ）配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１５８のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１３８のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１３２のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１４０のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｃ）配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１５８のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１５０のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１３２のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１４０のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｄ）配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１５８のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１４１のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１３２のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１４０のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｅ）配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１５８のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１４４のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１４５のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１４０のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｆ）配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１５８のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１４７のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１３２のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１４０のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｇ）配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１５９のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１３８のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１３２のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１４０のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｈ）配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１６０のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１３８のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１３２のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１４０のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｉ）配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１６１のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１３８のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１３２のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１４０のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｊ）配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１６２のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１３８のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１３２のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１４０のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｋ）配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１６３のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１３８のＶＬ  ＣＤＲ１、配���番号１３２のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１４０のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｌ）配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１６４のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１３８のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１３２のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１４０のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｍ）配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１６５のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１３８のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１３２のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１４０のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｏ）配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１６６のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１３８のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１３２のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１４０のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｐ）配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１６７のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１３８のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１３２のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１４０のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｑ）配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１６８のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１３８のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１３２のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１４０のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｒ）配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１６８のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１３８のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１３２のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１４０のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｓ）配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１６３のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１４４のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１４５のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１４０のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｔ）配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１５８のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１４４のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１４５のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１３９のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｕ）配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１６２のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１４４のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１４５のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１３９のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｖ）配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１６３のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１４４のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１４５のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１３９のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ならびにｗ）配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１６２のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１４４のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１４５のＶＬ  ＣＤＲ２、および配��番号１４０のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域からなる群から選択される。
【０２００】
本発明のいくつかの態様では、単離抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１０７、１６２、および１１２として示した３つのＣＤＲを含む重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。本発明のいくつかの態様では、単離抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１４４、１４５、および１３９として示した３つのＣＤＲを含む軽鎖可変（ＶＬ）領域を含む。本発明のいくつかの態様では、単離抗体またはその抗原結合断片は、ａ）配列番号１０７、１６２、および１１２として示した３つのＣＤＲを含む重鎖可変（ＶＨ）領域、ならびにｂ）配列番号１４４、１４５、および１３９として示した３つのＣＤＲを含む軽鎖可変（ＶＬ）領域を含む。
【０２０１】
本発明のいくつかの態様では、単離抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３３の重鎖可変（ＶＨ）領域に由来するＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、およびＶＨ  ＣＤＲ３を含むＶＨ領域を含む。本発明のいくつかの態様では、単離抗体またはその抗原結合断片は、配列番号７３の軽鎖可変（ＶＬ）領域に由来するＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、およびＶＬ  ＣＤＲ３を含むＶＬ領域を含む。本発明のさらに他の態様では、単離抗体またはその抗原結合断片は、ａ）配列番号３３の重鎖可変（ＶＨ）領域に由来するＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、およびＶＨ  ＣＤＲ３を含むＶＨ領域、ならびにｂ）配列番号７３の軽鎖可変（ＶＬ）領域に由来するＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、およびＶＬ  ＣＤＲ３を含むＶＬ領域を含む。
【０２０２】
本発明のいくつかの態様では、単離抗体またはその抗原結合断片は、ａ）配列番号３３のＶＨ領域および配列番号７３のＶＬ領域を含む抗体またはその抗原結合断片、ｂ）配列番号１３のＶＨ領域および配列番号１５のＶＬ領域を含む抗体またはその抗原結合断片、ｃ）配列番号５のＶＨ領域および配列番号７のＶＬ領域を含む抗体またはその抗原結合断片、ｄ）配列番号２１のＶＨ領域および配列番号４７のＶＬ領域を含む抗体またはその抗原結合断片、ならびにｅ）配列番号１０６のＶＨ領域、ならびに配列番号１３８のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１３２のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１３９のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域を含む抗体またはその抗原結合断片からなる群から選択される。
【０２０３】
本発明の一態様では、単離抗体またはその抗原結合断片は、ａ）配列番号３３の重鎖可変（ＶＨ）領域、および／またはｂ）配列番号７３の軽鎖可変（ＶＬ）領域を含む。
【０２０４】
一態様では、本発明は、ＣＸＣＲ４に結合する抗体またはその抗原結合断片であって、配列番号１、５、９、１３、１７、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、８５、８７、もしくは１０６に示した配列を含む重鎖可変（ＶＨ）領域、および／または配列番号３、７、１１、１５、１９、４７、４９、５１、５３、５５、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９、８１、８３、もしくは１６９に示した配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）領域を含む、抗体またはその抗原結合断片を提供する。一態様では、ＣＸＣＲ４に結合する抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１、５、９、１３、１７、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、８５、８７、または１０６と少なくとも９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。一態様では、ＣＸＣＲ４に結合する抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３、７、１１、１５、１９、４７、４９、５１、５３、５５、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９、８１、８３、または１６９と少なくとも９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）領域を含む。
【０２０５】
本発明のいくつかの態様では、ａ）配列番号３３のＶＨ領域および配列番号７３のＶＬ領域を含む抗体またはその抗原結合断片、ｂ）配列番号１３のＶＨ領域および配列番号１５のＶＬ領域を含む抗体またはその抗原結合断片、ｃ）配列番号５のＶＨ領域および配列番号７のＶＬ領域を含む抗体またはその抗原結合断片、ｄ）配列番号２１のＶＨ領域および配列番号４７のＶＬ領域を含む抗体またはその抗原結合断片、ならびにｅ）配列番号１０６のＶＨ領域、ならびに配列番号１３８のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１３２のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１３９のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域を含む抗体またはその抗原結合断片からなる群から選択される請求項６に記載の単離抗体またはその抗原結合断片が提供される。
【０２０６】
本発明のいくつかの態様では、抗体またはその抗原結合断片は、ａ）配列番号３３の重鎖可変（ＶＨ）領域、および／またはｂ）配列番号７３の軽鎖可変（ＶＬ）領域を含む。特定の態様では、抗体またはその抗原結合断片は、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１２１３５３を有する発現ベクターによって産生される重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。他の態様では、抗体または抗原結合断片は、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１２１３５４を有する発現ベクターによって産生される軽鎖可変（ＶＬ）領域を含む。
【０２０７】
本発明のいくつかの態様では、ケモカイン受容体４（ＣＸＣＲ４）に結合する抗体またはその抗原結合断片は、ａ）配列番号１０７の重鎖可変（ＶＨ）  ＣＤＲ１、配列番号１５８のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１３８の軽鎖可変（ＶＬ）  ＣＤＲ１、配列番号１３２のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１３９のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｂ）配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１５８のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１３８のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１３２のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１４０のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｃ）配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１５８のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１５０のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１３２のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１４０のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｄ）配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１５８のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１４１のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１３２のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１４０のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｅ）配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１５８のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１４４のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１４５のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１４０のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｆ）配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１５８のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１４７のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１３２のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１４０のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｇ）配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１５９のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１３８のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１３２のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１４０のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｈ）配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１６０のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１３８のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１３２のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１４０のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｉ）配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１６１のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１３８のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１３２のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１４０のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｊ）配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１６２のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１３８のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１３２のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１４０のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｋ）配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１６３のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１３８のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番���１３２のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１４０のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｌ）配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１６４のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１３８のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１３２のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１４０のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｍ）配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１６５のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１３８のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１３２のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１４０のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｎ）配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１６６のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１３８のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１３２のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１４０のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｏ）配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１６７のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１３８のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１３２のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１４０のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｐ）配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１６８のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１３８のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１３２のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１４０のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｑ）配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１６８のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１３８のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１３２のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１４０のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｒ）配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１６３のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１４４のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１４５のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１４０のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｓ）配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１５８のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１４４のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１４５のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１３９のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｔ）配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１６２のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１４４のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１４５のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１３９のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ｕ）配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１６３のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１４４のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１４５のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１３９のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域、ならびにｖ）配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１６２のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１４４のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１４５のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番��１４０のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域からなる群から選択される。
【０２０８】
本発明の特定の態様では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１０７のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１６２のＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１１２のＶＨ  ＣＤＲ３を有するＶＨ領域、ならびに配列番号１４４のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１４５のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１３９のＶＬ  ＣＤＲ３を有するＶＬ領域を含む。
【０２０９】
ＣＸＣＲ４（ヒトＣＸＣＲ４など）に対する本明細書に記載の抗ＣＸＣＲ４抗体またはその抗原結合断片の結合親和性（ＫＤ）は、約０．００２〜約２００ｎＭである。本発明のいくつかの態様では、結合親和性は、約２００ｎＭ、約１００ｎＭ、約５０ｎＭ、約４５ｎＭ、約４０ｎＭ、約３５ｎＭ、約３０ｎＭ、約２５ｎＭ、約２０ｎＭ、約１５ｎＭ、約１０ｎＭ、約８ｎＭ、約７．５ｎＭ、約７ｎＭ、約６．５ｎＭ、約６ｎＭ、約５．５ｎＭ、約５ｎＭ、約４ｎＭ、約３ｎＭ、約２ｎＭ、約１ｎＭ、約５００ｐＭ、約１００ｐＭ、約６０ｐＭ、約５０ｐＭ、約２０ｐＭ、約１５ｐＭ、約１０ｐＭ、約５ｐＭ、または約２ｐＭのいずれかである。本発明のいくつかの態様では、結合親和性は、約２５０ｎＭ、約２００ｎＭ、約１００ｎＭ、約５０ｎＭ、約３０ｎＭ、約２０ｎＭ、約１０ｎＭ、約７．５ｎＭ、約７ｎＭ、約６．５ｎＭ、約６ｎＭ、約５ｎＭ、約４．５ｎＭ、約４ｎＭ、約３．５ｎＭ、約３ｎＭ、約２．５ｎＭ、約２ｎＭ、約１．５ｎＭ、約１ｎＭ、約５００ｐＭ、約１００ｐＭ、約５０ｐＭ、約２０ｐＭ、約１０ｐＭ、約５ｐＭ、または約２ｐＭのいずれか未満である。
【０２１０】
本発明のいくつかの態様では、本明細書に記載の抗体の結合親和性（例えば、一価抗体結合）は、表面プラズモン共鳴によって測定して約３５ｎＭ以下である。本発明のいくつかの態様では、本明細書に記載の抗体の結合親和性（例えば、一価抗体結合）は、表面プラズモン共鳴によって測定して約６．５ｎＭ以下である。
【０２１１】
本発明は、これらの抗体のいずれかを作製する方法も提供する。本発明の抗体は、当技術分野で公知の手順によって作製することができる。ポリペプチドは、抗体のタンパク質分解もしくは他の分解によって、上述した組換え法（すなわち、単一もしくは融合ポリペプチド）によって、または化学合成によって生成することができる。抗体のポリペプチド、特に最大約５０アミノ酸のより短いポリペプチドは、化学合成によって好都合に作製される。化学合成の方法は、当技術分野で公知であり、商業的に利用可能である。例えば、抗体は、固相法を使用する自動ポリペプチドシンセサイザーによって生成することができる。米国特許第５，８０７，７１５号、同第４，８１６，５６７号、および同第６，３３１，４１５号も参照。
【０２１２】
本発明の別の態様では、抗体は、当技術分野で周知である手順を使用して組換えで作製することができる。別の態様では、ポリヌクレオチドは、抗体ｍ６Ｂ６、ｈ６Ｂ６、ｍ１２Ａ１１、ｈ１２Ａ１１、ｍ３Ｇ１０、ｈ３Ｇ１０（ＶＨ）、ｈ３Ｇ１０．Ａ５７、ｈ３Ｇ１０．Ｂ４４、ｈ３Ｇ１０．１．７、ｈ３Ｇ１０．１．６０、ｈ３Ｇ１０．２．５、ｈ３Ｇ１０．１．９１、ｈ３Ｇ１０．２．３７、ｈ３Ｇ１０．２．４５、ｈ３Ｇ１０．２．４２、ｈ３Ｇ１０．１．３３、ｈ３Ｇ１０．３．２５、ｈ３Ｇ１０．２．５４、ｈ３Ｇ１０．Ａ５９、ｈ３Ｇ１０．Ａ６２、ｈ３Ｇ１０（ＶＬ）、ｈ３Ｇ１０．２．７２、ｈ３Ｇ１０．Ａ１１Ａ、ｈ３Ｇ１０．Ａ１８Ａ、ｈ３Ｇ１０．Ａ１９Ａ、ｈ３Ｇ１０．Ａ５８Ａ、ｈ３Ｇ１０．Ａ６５Ａ、およびｈ３Ｇ１０．Ｂ１２Ａ、ｈ３Ｇ１０．Ｂ１３Ａ、ｈ３Ｇ１０．Ｂ１８Ａ、ｈ３Ｇ１０．Ａ１１Ｂ、ｈ３Ｇ１０．Ａ１８Ｂ、ｈ３Ｇ１０．Ａ１９Ｂ、ｈ３Ｇ１０．Ａ５８Ｂ、ｈ３Ｇ１０．Ａ６５Ｂ、ｈ３Ｇ１０．Ｂ１２Ｂ、ｈ３Ｇ１０．Ｂ１３Ｂ、ｈ３Ｇ１０．Ｂ１８Ｂ、ｈ３Ｇ１０．２．２５またはｈ３Ｇ１０．Ｌ９４Ｄの重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域をコードする配列を含む。対象とする抗体をコードする配列は、宿主細胞内のベクター中に維持することができ、次いで宿主細胞を展開し、将来使用するために凍結させることができる。ベクター（発現ベクターを含む）および宿主細胞は、本明細書でさらに記載されている。
【０２１３】
本発明は、本発明の抗体のｓｃＦｖも包含する。単鎖可変領域断片は、短い連結ペプチドを使用することによって、軽鎖可変領域および／または重鎖可変領域を連結することによって作製される（Ｂｉｒｄら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３〜４２６、１９８８）。連結ペプチドの例は、（ＧＧＧＧＳ）３（配列番号８９）であり、これは、一方の可変領域のカルボキシ末端と他方の可変領域のアミノ末端との間のおよそ３．５ｎｍを架橋する。他の配列のリンカーも設計および使用されている（Ｂｉｒｄら、１９８８、上記）。リンカーは、短い柔軟なポリペプチドであるべきであり、好ましくは約２０アミノ酸残基未満で構成されるべきである。リンカーは、次に、追加の機能、例えば、薬剤の結合または固体支持体への結合などのために修飾することができる。単鎖バリアントは、組換えで、または合成的に生成することができる。ｓｃＦｖの合成生成のために、自動シンセサイザーを使用することができる。ｓｃＦｖの組換え産生のために、ｓｃＦｖをコードするポリヌクレオチドを含有する適当なプラスミドを、酵母、植物、昆虫、もしくは哺乳動物細胞などの真核生物、または大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）などの原核生物の適当な宿主細胞内に導入することができる。対象とするｓｃＦｖをコードするポリヌクレオチドは、ポリヌクレオチドのライゲーションなどの慣例的な操作によって作製することができる。結果として生じるｓｃＦｖは、当技術分野で公知の標準的なタンパク質精製技法を使用して単離することができる。
【０２１４】
単鎖抗体の他の形態、例えば、ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）またはミニボディ（ｍｉｎｉｂｏｄｙ）なども包含される。ダイアボディは、重鎖可変（ＶＨ）および軽鎖可変（ＶＬ）ドメインが、単一ポリペプチド鎖上であるが、短すぎて同じ鎖上の２つのドメイン間で対形成させることができず、それによって前記ドメインを別の鎖の相補的ドメインと強制的に対形成させ、２つの抗原結合部位を作り出すリンカーを使用して発現される、二価の二重特異性抗体である（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ，Ｐ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ  Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９０：６４４４〜６４４８（１９９３）；Ｐｏｌｊａｋ，Ｒ．Ｊ．ら、Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ、２：１１２１〜１１２３（１９９４）を参照）。ミニボディは、免疫グロブリン分子のヒンジ領域およびＣＨ３ドメインに融合した自然抗体のＶＬおよびＶＨドメインを含む。例えば、米国特許第５，８３７，８２１を参照。
【０２１５】
二重特異性抗体は、２つの異なる標的に同時に結合することができる抗体である。二重特異性抗体（ｂｓＡｂ）および二重特異性抗体断片（ｂｓＦａｂ）は、例えば、腫瘍関連抗原に結合する少なくとも１つのアーム、および治療剤または診断剤を持つ標的設定可能なコンジュゲートに結合する少なくとも１つの他のアームを有し得る。様々な二重特異性融合タンパク質を、分子工学を使用して生成することができる。
【０２１６】
例えば、二重特異性抗体、すなわち、少なくとも２つの異なる抗原に対する結合特異性を有するモノクローナル抗体を、本明細書に開示の抗体を使用して調製することができる。二重特異性抗体を作製するための方法は、当技術分野で公知である（例えば、Ｓｕｒｅｓｈら、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  １２１：２１０（１９８６）を参照）。伝統的に、二重特異性抗体の組換え生産は、２本の重鎖が異なる特異性を有する、２つの免疫グロブリン重鎖−軽鎖対の同時発現に基づいていた（ＭｉｌｌｓｔｅｉｎおよびＣｕｅｌｌｏ、Ｎａｔｕｒｅ  ３０５、５３７〜５３９（１９８３））。
【０２１７】
二重特異性抗体を作製するための一手法によれば、所望の結合特異性（抗体−抗原結合部位）を有する抗体可変ドメインが、免疫グロブリン定常領域配列に融合される。融合は、好ましくは、ヒンジ、ＣＨ２、およびＣＨ３領域の少なくとも一部を含む免疫グロブリン重鎖定常領域とのものである。融合物の少なくとも１つの中に存在する、軽鎖結合に必要な部位を含有する第１重鎖定常領域（ＣＨ１）を有することが好適である。免疫グロブリン重鎖融合物および必要に応じて、免疫グロブリン軽鎖をコードするＤＮＡは、別個の発現ベクター内に挿入され、適当な宿主生物体内にコトランスフェクトされる。これは、構築物内で不等比の３本のポリペプチド鎖が使用されると収率が最適になる実施形態において、３つのポリペプチド断片の相互の比率の調整に大きな柔軟性をもたらす。しかし、少なくとも２本のポリペプチド鎖が等比で発現されると収率が高くなる場合、または比が特に重要でない場合、２本、または３本すべてのポリペプチド鎖のコード配列を１つの発現ベクター内に挿入することが可能である。
【０２１８】
本発明のいくつかの態様では、二重特異性抗体は、一方のアーム内の第１の結合特異性を有するハイブリッド免疫グロブリン重鎖、および他方のアーム内のハイブリッド免疫グロブリン重鎖−軽鎖対（第２の結合特異性をもたらす）から構成される。二重特異性分子の半分のみに免疫グロブリン軽鎖を有する非対称構造は、望まれない免疫グロブリン鎖の組合せからの所望の二重特異性化合物の分離を促進する。この手法は、ＰＣＴ公開第ＷＯ１９９４／００４６９０内に記載されている。
【０２１９】
別の態様では、二重特異性抗体は、一方のアーム内の第１ヒンジ領域内のアミノ酸修飾から構成され、第１ヒンジ領域中の置換された／置き換えられたアミノ酸は、別のアーム内の第２ヒンジ領域中の対応するアミノ酸と反対電荷を有する。この手法は、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１１／１４３５４５に記載されている。
【０２２０】
別の態様では、二重特異性抗体は、トランスグルタミナーゼの存在下で、一方のアーム内のエピトープ（例えば、ＣＸＣＲ４）に向けられた抗体に合わせて遺伝子工学的に改変されたグルタミン含有ペプチドタグ、および別のアーム内の第２エピトープに向けられた第２抗体に合わせて遺伝子工学的に改変された別のペプチドタグ（例えば、Ｌｙｓ含有ペプチドタグまたは反応性内因性Ｌｙｓ）を使用して生成することができる。この手法は、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１２／０５９８８２に記載されている。
【０２２１】
２つの共有結合的に接合された抗体を含むヘテロコンジュゲート抗体も、本発明の範囲内である。このような抗体は、免疫系細胞を望まれない細胞に向けるのに（米国特許第４，６７６，９８０号）、およびＨＩＶ感染を治療するために（ＰＣＴ公開第ＷＯ１９９１／０００３６０）使用されている。ヘテロコンジュゲート抗体は、任意の好都合な架橋法を使用して作製することができる。適当な架橋剤および架橋技法は、当技術分野で周知であり、米国特許第４，６７６，９８０号に記載されている。
【０２２２】
キメラまたはハイブリッド抗体も、架橋剤を伴うものを含めて、合成タンパク質化学の公知の方法を使用してｉｎ  ｖｉｔｒｏで調製することができる。例えば、免疫毒素は、ジスルフィド交換反応を使用して、またはチオエーテル結合を形成することによって構築することができる。この目的用の適当な試薬の例としては、イミノチオレートおよびメチル−４−メルカプトブチルイミデート（ｍｅｒｃａｐｔｏｂｕｔｙｒｉｍｉｄａｔｅ）がある。
【０２２３】
本発明は、本発明のバリアントの性質に有意に影響しない機能的に等価な抗体、ならびに活性および／または親和性が増強され、もしくは減少したバリアントを含めた、表２に示した本発明のバリアントの抗体およびポリペプチドに対する修飾を包含する。例えば、ＣＸＣＲ４に対する所望の結合親和性を有する抗体を得るために、アミノ酸配列を変異導入することができる。ポリペプチドの修飾は、当技術分野で日常の行為であり、本明細書で詳細に説明する必要はない。修飾ポリペプチドの例には、保存的配列修飾を有するポリペプチドが含まれる。本明細書において、用語「保存的配列修飾」は、アミノ酸配列を含有する抗体の結合特性に有意に影響せず、それを変更しないアミノ酸修飾を指すように意図されている。このような保存的修飾は、機能活性を著しく有害に変化させない、またはそのリガンドに対するポリペプチドの親和性を成熟させる（増強する）アミノ酸置換、付加、および欠失、または化学的類似体の使用を含む。
【０２２４】
修飾は、当技術分野で公知の標準技法、例えば、部位特異的突然変異誘発およびＰＣＲ媒介突然変異誘発などによって本開示の抗体中に導入することができる。保存的アミノ酸置換は、アミノ酸残基が同様の側鎖を有するアミノ酸残基で置き換えられているものである。同様の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当技術分野で定義されている。これらのファミリーとしては、塩基性側鎖（例えば、リシン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、無電荷極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、トリプトファン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン）、β分枝状側鎖（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）、および芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を有するアミノ酸がある。したがって、本開示の抗体のＣＤＲ領域内の１つまたは複数のアミノ酸残基を、同じ側鎖ファミリーに由来する他のアミノ酸残基と置き換えることができ、変更された抗体を、本明細書に記載の機能アッセイを使用して、保持された機能（すなわち、上記に示した機能）について試験することができる。
【０２２５】
アミノ酸配列挿入としては、１つの残基から、１００以上の残基を含有するポリペプチドまでの長さの範囲のアミノ末端融合および／またはカルボキシル末端融合、ならびに単一または複数のアミノ酸残基の配列内挿入がある。末端挿入の例としては、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体、またはエピトープタグに融合した抗体がある。抗体分子の他の挿入バリアントには、血液循環中で抗体の半減期を増大させる酵素またはポリペプチドの、抗体のＮ末端またはＣ末端への融合が含まれる。
【０２２６】
置換バリアントは、除去された抗体分子内の少なくとも１つのアミノ酸残基、およびその場所内に挿入された異なる残基を有する。置換突然変異誘発の最も大きな関心のある部位には超可変領域が含まれるが、ＦＲ変化も企図されている。保存的置換を、「保存的置換」の表題で表５に示す。このような置換が生物活性を変化させる場合、表５で「例示的な置換」と命名した、またはアミノ酸クラスを参照して以下にさらに記載する、より実質的な変化を導入することができ、生成物をスクリーニングすることができる。
【０２２７】
【表５】
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【０２２８】
抗体の生物学的性質の実質的な修飾は、（ａ）例えば、シートもしくはヘリックスコンホメーションとしての置換範囲内のポリペプチド骨格の構造、（ｂ）標的部位における分子の電荷もしくは疎水性、または（ｃ）側鎖のバルクを維持することに対する置換の効果が有意に異なる置換を選択することによって達成される。天然に存在するアミノ酸残基は、共通の側鎖の性質に基づいて群に分類される：
（１）非極性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
（２）電荷を有さない極性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
（３）酸性（負に荷電した）：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
（４）塩基性（正に荷電した）：Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
（５）鎖配向に影響を与える残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、および
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、Ｈｉｓ。
【０２２９】
非保存的置換は、これらのクラスの１つのクラスのメンバーを別のクラスと交換することによって行われる。
【０２３０】
抗体の適切なコンホメーションの維持に関与していない任意のシステイン残基も、分子の酸化安定性を改善し、異常な架橋を防止するために、一般にセリンと置換することができる。反対に、システイン結合（複数可）を、特に抗体がＦｖ断片などの抗体断片である場合、抗体の安定性を改善するために抗体に付加することができる。
【０２３１】
アミノ酸修飾は、１つまたは複数のアミノ酸の変更または修飾から、可変領域などの領域の完全な再設計まで及び得る。可変領域を変更すると、結合親和性および／または特異性が変化し得る。本発明のいくつかの態様では、１〜５個以下の保存的アミノ酸置換がＣＤＲドメイン内で行われる。本発明の他の態様では、１〜３個以下の保存的アミノ酸置換がＣＤＲドメイン内で行われる。
【０２３２】
修飾には、グリコシル化および非グリコシル化ポリペプチド、ならびに他の翻訳後修飾、例えば、異なる糖でのグリコシル化、アセチル化、およびリン酸化などを有するポリペプチドも含まれる。抗体は、これらの定常領域内の保存位置でグリコシル化される（ＪｅｆｆｅｒｉｓおよびＬｕｎｄ、Ｃｈｅｍ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、６５：１１１〜１２８（１９９７）；ＷｒｉｇｈｔおよびＭｏｒｒｉｓｏｎ、ＴｉｂＴＥＣＨ、１５：２６〜３２（１９９７））。免疫グロブリンのオリゴ糖側鎖は、タンパク質の機能（Ｂｏｙｄら、Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、３２：１３１１〜１３１８（１９９６）；ＷｉｔｔｗｅおよびＨｏｗａｒｄ、Ｂｉｏｃｈｅｍ．、２９：４１７５〜４１８０（１９９０））、ならびにコンホメーションに影響し得る糖タンパク質の部分と、糖タンパク質の提示された三次元表面との分子内相互作用（ＪｅｆｆｅｒｉｓおよびＬｕｎｄ、上記；ＷｙｓｓおよびＷａｇｎｅｒ、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．、７：４０９〜４１６（１９９６））に影響する。オリゴ糖は、特異的な認識構造に基づいて、ある特定の分子に所与の糖タンパク質を向ける機能を果たすこともできる。抗体のグリコシル化は、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）に影響することも報告されている。特に、バイセクティングＧｌｃＮＡｃのの形成を触媒するグリコシルトランスフェラーゼであるβ（１，４）−Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ（ＧｎＴＩＩＩ）がテトラサイクリンにより発現制御されるＣＨＯ細胞は、改善されたＡＤＣＣ活性を有することが報告された（Ｕｍａｎａら、Ｍａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．、１７：１７６〜１８０（１９９９））。
【０２３３】
抗体のグリコシル化は、一般に、Ｎ結合型またはＯ結合型である。Ｎ結合型は、アスパラギン残基の側鎖への炭水化物部分の結合を指す。トリペプチド配列のアスパラギン−Ｘ−セリン、アスパラギン−Ｘ−トレオニン、およびアスパラギン−Ｘ−システイン（式中、Ｘは、プロリンを除く任意のアミノ酸である）は、炭水化物部分がアスパラギン側鎖に酵素的結合するための認識配列である。したがって、ポリペプチド中にこれらのトリペプチド配列のいずれかが存在すると、潜在的なグリコシル化部位が作り出される。Ｏ結合型グリコシル化は、糖Ｎ−アセチルガラクトサミン、ガラクトース、またはキシロースのうちの１種の、ヒドロキシアミノ酸、最も一般にはセリンまたはトレオニンへの結合を指すが、５−ヒドロキシプロリンまたは５−ヒドロキシリシンも使用することができる。
【０２３４】
グリコシル化部位の抗体への付加は、アミノ酸配列を、これが上述したトリペプチド配列の１つまたは複数を含有するように変更することによって好都合には達成される（Ｎ結合型グリコシル化部位に関して）。変更は、元の抗体の配列への、１つまたは複数のセリンまたはトレオニン残基の付加、またはこれらによる置換によっても行うことができる（Ｏ結合型グリコシル化部位に関して）。
【０２３５】
抗体のグリコシル化パターンも、基本的なヌクレオチド配列を変更することなく変更することができる。グリコシル化は、抗体を発現させるのに使用される宿主細胞に大部分は依存する。潜在的な治療剤としての組換え糖タンパク質、例えば、抗体の発現に使用される細胞型は、まれにネイティブ細胞であるので、抗体のグリコシル化パターンのバリエーションが予期され得る（例えば、Ｈｓｅら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２７２：９０６２〜９０７０（１９９７）を参照）。
【０２３６】
宿主細胞の選択に加えて、抗体を組換え生産する間にグリコシル化に影響する要因としては、増殖モード、培地配合、培養密度、酸素供給、ｐＨ、精製スキームなどがある。オリゴ糖生成に関与するある特定の酵素の導入または過剰発現を含めて、特定の宿主生物体内で実現されるグリコシル化パターンを変更するための様々な方法が提案されている（米国特許第５，０４７，３３５号、同第５，５１０，２６１号、および同第５，２７８，２９９号）。グリコシル化、またはある特定のタイプのグリコシル化は、例えば、エンドグリコシダーゼＨ（Ｅｎｄｏ  Ｈ）、Ｎ−グリコシダーゼＦ、エンドグリコシダーゼＦ１、エンドグリコシダーゼＦ２、エンドグリコシダーゼＦ３を使用して、糖タンパク質から酵素的に除去することができる。さらに、組換え宿主細胞は、ある特定のタイプの多糖のプロセシングにおいて欠陥のあるように遺伝子工学的に改変することができる。これらの技法および同様の技法は、当技術分野で周知である。
【０２３７】
本開示によって企図されている本明細書の抗体の別の修飾は、ＰＥＧ化である。例えば、抗体の生物学的（例えば、血清）半減期を増大させるために、抗体をＰＥＧ化することができる。抗体をＰＥＧ化するために、抗体またはその断片が、典型的には、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、例えば、ＰＥＧの反応性エステルまたはアルデヒド誘導体などと、１つまたは複数のＰＥＧ基が抗体または抗体断片に付着された状態になる条件下で反応される。好ましくは、ＰＥＧ化は、反応性ＰＥＧ分子（または類似の反応性水溶性ポリマー）とのアシル化反応またはアルキル化反応を介して実施される。本明細書において、用語「ポリエチレングリコール」は、他のタンパク質を誘導体化するのに使用されてきたＰＥＧの形態のいずれか、例えば、モノ（Ｃ１−Ｃ１０）アルコキシ−もしくはアリールオキシ−ポリエチレングリコール、またはポリエチレングリコール−マレイミドなどを包含することが意図されている。本発明のある特定の態様では、ＰＥＧ化される抗体は、非グリコシル化抗体である。タンパク質をＰＥＧ化するための方法は、当技術分野で公知であり、本開示の抗体に適用することができる。例えば、ＮｉｓｈｉｍｕｒａらによるＥＰ０１５４３１６、およびＩｓｈｉｋａｗａらによるＥＰ０４０１３８４を参照。
【０２３８】
本発明は、伝統的な抗体に限定されず、抗体断片および抗体模倣体の使用を含む。幅広い種類の抗体断片および抗体模倣技術が開発されており、当技術分野で公知である。いくつかのこれらの技術、例えば、ドメイン抗体、ナノボディ、およびユニボディなどは、伝統的な抗体構造体の断片またはこの構造体への他の修飾を利用する一方、代替の技術、例えば、アフィボディ、ＤＡＲＰｉｎ、アビマー、アンチカリン、およびバーサボディなども存在し、これらは、伝統的な抗体結合を模倣しながら、別個の機構から生成され、この機構を介して機能する結合構造を使用する。
【０２３９】
ドメイン抗体（ｄＡｂ）は、ヒト抗体の重（ＶＨ）鎖または軽（ＶＬ）鎖の可変領域に対応する、抗体の最小の機能的結合ユニットである。Ｄｏｍａｎｔｉｓは、完全ヒトＶＨおよびＶＬ  ｄＡｂの一連の大きな、高度に機能的なライブラリーを開発しており（各ライブラリー中に１００億超の異なる配列）、治療標的に特異的であるｄＡｂを選択するのにこれらのライブラリーを使用する。多くの慣例的な抗体と対照的に、ドメイン抗体は、細菌、酵母、および哺乳動物細胞系において十分に発現される。ドメイン抗体およびその生成の方法のさらなる詳細は、米国特許第６，２９１，１５８号、同第６，５８２，９１５号、同第６，５９３，０８１号、同第６，１７２，１９７号、および同第６，６９６，２４５号、米国特許出願第２００４／０１１０９４１号、欧州特許出願第１４３３８４６号、ならびに欧州特許第０３６８６８４号＆同第０６１６６４０号、ＷＯ０５／０３５５７２、ＷＯ０４／１０１７９０、ＷＯ０４／０８１０２６、ＷＯ０４／０５８８２１、ＷＯ０４／００３０１９、およびＷＯ０３／００２６０９を参照することによって得ることができる。これらのそれぞれは、その全体が参照により本明細書に組み込まれている。
【０２４０】
ナノボディは、天然に存在する重鎖抗体のユニークな構造的および機能的性質を含有する抗体由来治療用タンパク質である。これらの重鎖抗体は、単一可変ドメイン（ＶＨＨ）ならびに２つの定常ドメイン（ＣＨ２およびＣＨ３）を含有する。クローニングされ、単離されたＶＨＨドメインは、最初の重鎖抗体の完全な抗原結合能力を持つ完全に安定なポリペプチドである。ナノボディは、ヒト抗体のＶＨドメインと高い相同性を有し、活性のいずれの喪失も伴うことなくさらにヒト化することができる。さらに、ナノボディは、慣例的な抗体の利点を、慣例的な抗体のような低分子薬剤の重要な特徴と組み合わせる。ナノボディは、高い標的特異性、これらの標的に対する高い親和性、および低い固有の毒性を示す。ナノボディは、単一遺伝子によってコードされ、ほとんどすべての原核生物および真核生物宿主、例えば、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）（例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれている米国特許第６，７６５，０８７号を参照）、カビ（例えば、アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）またはトリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）（Ｔπｃｈｏｄｅｒｍａ））、および酵母（例えば、サッカロミセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）、クルイベロミセス（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ）、ハンゼヌラ（Ｈａｎｓｅｎｕｌａ）、またはピキア（Ｐｉｃｈｉａ））（例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれている米国特許第６，８３８，２５４号を参照）内で効率的に産生される。
【０２４１】
いくつかの態様では、本発明は、ユニボディの使用を提供する。ユニボディは、ＩｇＧ４抗体のヒンジ領域の除去に基づく別の抗体断片技術である。ヒンジ領域を欠失させると、伝統的なＩｇＧ４抗体のサイズの本質的に半分であり、ＩｇＧ４抗体の二価結合領域ではなく、一価結合領域を有する分子がもたらされる。ＩｇＧ４抗体は、不活性であり、したがって免疫系と相互作用しないことも周知であり、それは、免疫応答が望まれない疾患の治療に有利であり得、この利点は、ユニボディに伝えられる。例えば、ユニボディは、これらが結合している細胞を阻害し、またはサイレンシングするが、殺さないように機能し得る。さらに、がん細胞に結合しているユニボディは、がん細胞が増殖するのを刺激しない。さらに、ユニボディは、伝統的なＩｇＧ４抗体のサイズの約半分であるので、潜在的に有利な有効性を伴ってより大きい固形腫瘍にわたってより良好な分布を示すことができる。ユニボディは、全ＩｇＧ４抗体と同様の速度で体から排除され、これらの抗原に対して全抗体と同様の親和性で結合することができる。ユニボディのさらなる詳細は、その全体が参照により本明細書に組み込まれているＰＣＴ公開第ＷＯ２００７／０５９７８２を参照することによって得ることができる。
【０２４２】
いくつかの態様では、本発明は、アフィボディ（Ａｆｉｂｏｄｙ）分子を包含する。アフィボディ分子は、ブドウ球菌プロテインＡのＩｇＧ結合ドメインの１つに由来する５８アミノ酸残基のタンパク質ドメインに基づく新しいクラスの親和性タンパク質である。この３ヘリックス束ドメインは、所望の分子を標的にするアフィボディバリアントがファージディスプレイ技術を使用して選択され得るコンビナトリアルファージミドライブラリーを構築するためのスキャフォールドとして使用されている（Ｎｏｒｄ  Ｋ、Ｇｕｎｎｅｔｔｓｓｏｎ  Ｅ、Ｒｉｎｇｄａｈｌ  Ｊ、Ｓｔａｈｌ  Ｓ、Ｕｈｌｅｎ  Ｍ、Ｎｙｇｒｅｎ  ＰＡ、Ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｓｅｌｅｃｔｅｄ  ｆｒｏｍ  ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ  ｌｉｂｒａｒｉｅｓ  ｏｆ  ａｎ  α−ｈｅｌｉｃａｌ  ｂａｃｔｅｒｉａｌ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｄｏｍａｉｎ、Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ、１５、７７２〜７（１９９７）、Ｒｏｎｍａｒｋ  Ｊ、Ｇｒｏｎｌｕｎｄ  Ｈ、Ｕｈｌｅｎ  Ｍ、Ｎｙｇｒｅｎ  ＰＡ、Ｈｕｍａｎ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  Ａ（ＩｇＡ）−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｌｉｇａｎｄｓ  ｆｒｏｍ  ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ  ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａ、Ｅｕｒ  Ｊ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．、２６９、２６４７〜５５（２００２））。アフィボディ分子の単純な、ロバストな構造は、これらの低分子量（６ｋＤａ）と組み合わせて、これらを多種多様な用途にとって、例えば、検出試薬として（Ｒｏｎｍａｒｋ  Ｊ、Ｈａｎｓｓｏｎ  Ｍ、Ｎｇｕｙｅｎ  Ｔら、Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｆｆｉｂｏｄｙ−Ｆｃ  ｃｈｉｍｅｒａｓ  ｐｒｏｄｕｃｅｄ  ｉｎ  Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ、２６１、１９９〜２１１（２００２））、かつ受容体相互作用を阻害するのに（Ｓａｎｄｓｔｏｒｍ  Ｋ、Ｘｕ  Ｚ、Ｆｏｒｓｂｅｒｇ  Ｇ、Ｎｙｇｒｅｎ  ＰＡ、Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＣＤ２８−ＣＤ８０  ｃｏ−ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ  ｓｉｇｎａｌ  ｂｙ  ａ  ＣＤ２８−ｂｉｎｄｉｎｇ  Ａｆｆｉｂｏｄｙ  ｌｉｇａｎｄ  ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ  ｂｙ  ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．、１６、６９１〜７（２００３））適したものにする。アフィボディおよびその生成の方法のさらなる詳細は、その全体が参照により本明細書に組み込まれている米国特許第５，８３１，０１２号を参照することによって得ることができる。
【０２４３】
本発明との関連で有用な別の抗体模倣技術は、アビマーである。アビマーは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏエクソンシャッフリングおよびファージディスプレイによってヒト細胞外受容体ドメインの大きいファミリーから発展され、結合特性および阻害特性を有するマルチドメインタンパク質を生成する。複数の独立した結合ドメインを連結すると、結合活性がもたらされることが示されており、慣例的な単一エピトープ結合タンパク質と比較して改善された親和性および特異性がもたらされる。他の潜在的な利点としては、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）内でのマルチ標的特異的分子の単純で効率的な生成、改善された熱安定性、およびプロテアーゼに対する耐性がある。ナノモル未満の親和性を有するアビマーは、様々な標的に対して得られている。アビマーに関する追加の情報は、米国特許出願公開第２００６／０２８６６０３号、同第２００６／０２３４２９９号、同第２００６／０２２３１１４号、同第２００６／０１７７８３１号、同第２００６／０００８８４４号、同第２００５／０２２１３８４号、同第２００５／０１６４３０１号、同第２００５／００８９９３２号、同第２００５／００５３９７３号、同第２００５／００４８５１２号、同第２００４／０１７５７５６号に見つけることができる。これらのすべては、その全体が参照により本明細書に組み込まれている。
【０２４４】
バーサボディは、本発明との関連で使用され得る別の抗体模倣技術である。バーサボディは、１５％超のシステインを有する３〜５ｋＤａの小タンパク質であり、これらのシステインは、高ジスルフィド密度スキャフォールドを形成し、典型的なタンパク質が有する疎水性コアを置き換える。疎水性コアを含む多数の疎水性アミノ酸を少数のジスルフィドに置き換えると、より小さく、より親水性であり（より少ない凝集および非特異的結合）、プロテアーゼおよび熱に対してより耐性である、かつＭＨＣ提示に最も寄与する残基は、疎水性であるので、より低い密度のＴ細胞エピトープを有するタンパク質がもたらされる。すべてのこれらの特性は、免疫原性に影響することが周知であり、合わせて、これらは、免疫原性の大きな減少を引き起こすことが予期される。バーサボディに関する追加の情報は、その全体が参照により本明細書に組み込まれている米国特許出願公開第２００７／０１９１２７２号に見つけることができる。
【０２４５】
上記に提供した抗体断片および抗体模倣技術の詳細な説明は、本明細書との関連で使用され得るすべての技術の包括的なリストであるように意図されていない。例えば、かつやはり限定の目的でなく、その全体が参照により本明細書に組み込まれている、Ｑｕｉら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、２５（８）、９２１〜９２９（２００７）に概説された相補性決定領域の融合などの代替のポリペプチドベース技術、ならびにすべてが参照により本明細書に組み込まれている、米国特許第５，７８９，１５７号；同第５，８６４，０２６号；同第５，７１２，３７５号；同第５，７６３，５６６号；同第６，０１３，４４３号；同第６，３７６，４７４号；同第６，６１３，５２６号；同第６，１１４，１２０号；同第６，２６１，７７４号、および同第６，３８７，６２０号に記載されたＲＮＡアプタマー技術などの核酸ベース技術を含めた様々な追加の技術を、本発明との関連で使用することができる。
【０２４６】
修飾の他の方法には、それだけに限らないが、酵素的手段、酸化的置換、およびキレート化を含めた、当技術分野で公知のカップリング技法の使用が含まれる。修飾は、例えば、イムノアッセイ用標識の結合に使用することができる。修飾ポリペプチドは、当技術分野で確立した手順を使用して作製され、当技術分野で公知の標準アッセイを使用してスクリーニングすることができる。これらのアッセイのいくつかを以下および実施例で記載する。
【０２４７】
本発明のいくつかの態様では、抗体は、ヒトＦｃγ受容体に対する親和性が増大した定常領域などの修飾定常領域を含み、免疫学的に不活性もしくは部分的に不活性であり、例えば、補体媒介溶解を誘発せず、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を刺激せず、もしくはマクロファージを活性化せず、または以下、すなわち、補体媒介溶解の誘発、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）の刺激、もしくはミクログリアの活性化のうちの任意の１つもしくは複数において活性が低減している（無修飾抗体と比較して）。エフェクター機能の最適レベルおよび／または組合せを実現するために、定常領域の異なる修飾を使用することができる。例えば、Ｍｏｒｇａｎら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、８６：３１９〜３２４（１９９５）、Ｌｕｎｄら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１５７：４９６３〜９、１５７：４９６３〜４９６９（１９９６）、Ｉｄｕｓｏｇｉｅら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１６４：４１７８〜４１８４、（２０００）、Ｔａｏら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１４３：２５９５〜２６０１（１９８９）、およびＪｅｆｆｅｒｉｓら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ、１６３：５９〜７６（１９９８）を参照。本発明のいくつかの態様では、定常領域は、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２９：２６１３〜２６２４（１９９９）、ＰＣＴ公開第ＷＯ１９９９／０５８５７２に記載されているように修飾される。本発明の他の態様では、抗体は、以下の突然変異、すなわち、Ａ３３０Ｐ３３１からＳ３３０Ｓ３３１（野生型ＩｇＧ２配列を参照したアミノ酸番号付け）を含むヒト重鎖ＩｇＧ２定常領域を含む。Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２９：２６１３〜２６２４（１９９９）。本発明のさらに他の態様では、定常領域は、Ｎ結合型グリコシル化の代わりに非グリコシル化されている。本発明のいくつかの態様では、定常領域は、グリコシル化アミノ酸残基または定常領域内のＮ−グリコシル化認識配列の一部であるフランキング残基を突然変異させることによって、Ｎ結合型グリコシル化の代わりに非グリコシル化されている。例えば、Ｎ−グリコシル化部位Ｎ２９７は、Ａ、Ｑ、Ｋ、またはＨに突然変異され得る。Ｔａｏら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１４３：２５９５〜２６０１（１９８９）、およびＪｅｆｆｅｒｉｓら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ、１６３：５９〜７６（１９９８）を参照。本発明のいくつかの態様では、定常領域は、Ｎ結合型グリコシル化の代わりに非グリコシル化されている。定常領域は、酵素的に（酵素ＰＮＧａｓｅによる炭水化物の除去など）、またはグリコシル化欠損宿主細胞内の発現によって、Ｎ結合型グリコシル化の代わりに非グリコシル化することができる。
【０２４８】
他の抗体修飾には、ＰＣＴ公開第ＷＯ９９／５８５７２号に記載されたように修飾された抗体が含まれる。これらの抗体は、標的分子に向けられた結合ドメインに加えて、ヒト免疫グロブリン重鎖の定常領域のすべてまたは一部に実質的に相同のアミノ酸配列を有するエフェクタードメインを含む。これらの抗体は、標的の著しい補体依存性溶解または細胞媒介性破壊を誘発することなく、標的分子に結合することができる。本発明のいくつかの態様では、エフェクタードメインは、ＦｃＲｎおよび／またはＦｃγＲＩＩｂに特異的に結合することができる。これらは一般に、２つ以上のヒト免疫グロブリン重鎖ＣＨ２ドメインに由来するキメラドメインに基づく。このようにして修飾された抗体は、慣例的な抗体療法に対する炎症反応および他の拒絶反応を回避するための長期抗体療法で使用するのに特に適している。
【０２４９】
本発明は、親和性成熟した抗体を含む。例えば、親和性成熟抗体は、当技術分野で公知の手順によって生成することができる（Ｍａｒｋｓら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１０：７７９〜７８３（１９９２）、Ｂａｒｂａｓら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ，ＵＳＡ、９１：３８０９〜３８１３（１９９４）、Ｓｃｈｉｅｒら、Ｇｅｎｅ、１６９：１４７〜１５５（１９９５）、Ｙｅｌｔｏｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５５：１９９４〜２００４（１９９５）、Ｊａｃｋｓｏｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５４（７）：３３１０〜９（１９９５）、Ｈａｗｋｉｎｓら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２６：８８９〜８９６（１９９２）、およびＰＣＴ公開第ＷＯ２００４／０５８１８４）。
【０２５０】
以下の方法は、抗体の親和性を調整し、ＣＤＲを特徴付けるのに使用することができる。抗体のＣＤＲを特徴付け、かつ／または抗体などのポリペプチドの結合親和性を変更する（改善するなど）一方法は、「ライブラリースキャンニング突然変異誘発」と呼ばれた。一般に、ライブラリースキャンニング突然変異誘発は、以下のように働く。ＣＤＲ内の１つまたは複数のアミノ酸位置が、当技術分野で承認されている方法を使用して、２つ以上（３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０など）のアミノ酸と置き換えられる。これにより、クローンの小ライブラリーが生成され（本発明のいくつかの態様では、分析されるアミノ酸位置毎に１つ）、それぞれは、２つ以上のメンバーの複雑性を有する（位置毎に２つ以上のアミノ酸が置換される場合）。一般に、ライブラリーは、天然（非置換）アミノ酸を含むクローンも含む。各ライブラリーから少数のクローン、例えば、約２０〜８０クローン（ライブラリーの複雑性に応じて）が、標的ポリペプチド（または他の結合標的）に対する結合親和性についてスクリーニングされ、結合性が増大した、同じ、減少した、またはまったくない候補が同定される。結合親和性を決定するための方法は、当技術分野で周知である。結合親和性は、約２倍以上の結合親和性の差異を検出するＢｉａｃｏｒｅ（商標）表面プラズモン共鳴分析を使用して求めることができる。Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）は、出発抗体が比較的高い親和性、例えば、約１０ｎＭ以下のＫＤで既に結合する場合、特に有用である。Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）表面プラズモン共鳴を使用するスクリーニングは、本明細書の実施例で記載する。
【０２５１】
別の態様では、本発明は、ＣＸＣＲ４に結合する抗体またはその抗原結合断片であって、１００ｎＭ未満のＥＣ５０を有する、抗体またはその抗原結合断片に関する。さらに別の態様では、本発明は、ＣＸＣＲ４に結合する抗体またはその抗原結合断片であって、５０ｎＭ未満のＥＣ５０を有する、抗体またはその抗原結合断片に関する。さらに別の態様では、本発明は、ＣＸＣＲ４に結合する抗体またはその抗原結合断片であって、１ｎＭ未満のＥＣ５０を有する、抗体またはその抗原結合断片に関する。用語「ＥＣ５０」は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでその最大効果の５０％阻害に必要とされる、試験抗体、その抗原結合断片、または抗体−薬剤コンジュゲートの濃度を意味する。用語「ＩＣ５０」平均は、「５０％の阻害濃度」として定義される。
【０２５２】
結合親和性は、Ｋｉｎｅｘａ  Ｂｉｏｃｅｎｓｏｒ、シンチレーション近接アッセイ、ＥＬＩＳＡ、ＯＲＩＧＥＮイムノアッセイ（ＩＧＥＮ）、蛍光消光、蛍光移動、および／または酵母ディスプレイを使用して求めることができる。結合親和性は、適当なバイオアッセイを使用してスクリーニングすることもできる。
【０２５３】
本発明のいくつかの態様では、ＣＤＲ内のすべてのアミノ酸位置が、当技術分野で承認されている突然変異誘発法（これらのいくつかを本明細書に記載する）を使用して、２０すべての天然アミノ酸で置き換えられる（いくつかの実施形態では、一つずつ）。これにより、クローンの小ライブラリーが生成され（本発明のいくつかの態様では、分析されるアミノ酸位置毎に１つ）、それぞれは、２０のメンバーの複雑性を有する（位置毎に２０すべてのアミノ酸が置換される場合）。
【０２５４】
本発明のいくつかの態様では、スクリーニングされるライブラリーは、２つ以上の位置に置換を含み、これらは、同じＣＤＲ内にあっても、２つ以上のＣＤＲ内にあってもよい。したがって、ライブラリーは、１つのＣＤＲ内の２つ以上の位置に置換を含み得る。ライブラリーは、２つ以上のＣＤＲ内の２つ以上の位置に置換を含み得る。ライブラリーは、２、３、４、５、または６つのＣＤＲ内に見つかる、３、４、５、またはそれ以上の位置に置換を含み得る。置換は、低冗長性コドンを使用して調製することができる。例えば、Ｂａｌｉｎｔら、Ｇｅｎｅ１３７（１）：１０９〜１８（１９９３）の表２を参照。
【０２５５】
ＣＤＲは、ＣＤＲＨ３および／またはＣＤＲＬ３であり得る。ＣＤＲは、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、および／またはＣＤＲＨ３の１つまたは複数であり得る。ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ、または拡張ＣＤＲであってもよい。
【０２５６】
結合性が改善された候補を配列決定し、それによって、親和性を改善するＣＤＲ置換突然変異体（「改善された」置換とも呼ばれる）を同定することができる。結合する候補を配列決定し、それによって、結合性を保持するＣＤＲ置換を同定することもできる。
【０２５７】
複数ラウンドのスクリーニングを行うことができる。例えば、結合性が改善された候補（それぞれは、１つまたは複数のＣＤＲの１つまたは複数の位置でアミノ酸置換を含む）は、それぞれの改善されたＣＤＲ位置（すなわち、置換突然変異体が結合性の改善を示したＣＤＲ内のアミノ酸位置）で少なくとも元のアミノ酸および置換されたアミノ酸を含有する第２ライブラリーの設計にも有用である。このライブラリーの調製、スクリーニング、または選択を以下でさらに論じる。
【０２５８】
改善された結合性、同じ結合性、減少した結合性を有し、または結合性をまったく有さないクローンの頻度も、抗体−抗原複合体の安定性について各アミノ酸位置の重要性に関する情報を提供する限り、ライブラリースキャンニング突然変異誘発も、ＣＤＲを特徴付けるための手段を提供する。例えば、ＣＤＲの位置が、２０すべてのアミノ酸に変更されたとき結合性を保持する場合、その位置は、抗原結合に必要とされそうにない位置として同定される。反対に、ＣＤＲの位置が、置換の小パーセンテージのみにおいて結合性を保持する場合、その位置は、ＣＤＲ機能に重要である位置として同定される。したがって、ライブラリースキャンニング突然変異誘発法により、多くの異なるアミノ酸（２０すべてのアミノ酸を含む）に変更することができるＣＤＲ内の位置、および変更することができないか、または数種のアミノ酸に変更することができるだけであるＣＤＲ内の位置に関する情報が生成される。
【０２５９】
親和性が改善された候補は、第２ライブラリー内で組み合わせることができ、このライブラリーは、改善されたアミノ酸、その位置における元のアミノ酸を含み、望まれる、または所望のスクリーニングもしくは選択法を使用して許容されるライブラリーの複雑性に応じて、その位置で追加の置換をさらに含むことができる。さらに、必要に応じて、隣接するアミノ酸位置は、少なくとも２つ以上のアミノ酸に対してランダム化することができる。隣接するアミノ酸をランダム化すると、突然変異体ＣＤＲ内の追加の立体構造的柔軟性を可能にすることができ、それはさらには、より多数の改善突然変異の導入を可能にし、または促進することができる。このライブラリーはまた、スクリーニングの第１ラウンドで親和性の改善を示さなかった位置で置換を含むことができる。
【０２６０】
第２ライブラリーは、Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）表面プラズモン共鳴分析を使用するスクリーニング、ならびにファージディスプレイ、酵母ディスプレイ、およびリボソームディスプレイを含む、選択のための当技術分野で公知の任意の方法を使用する選択を含めて、当技術分野で公知の任意の方法を使用して、結合親和性が改善および／または変更されたライブラリーメンバーについてスクリーニングまたは選択される。
【０２６１】
本発明は、本発明の抗体に由来する１つまたは複数の断片または領域を含む融合タンパク質も包含する。本発明のいくつかの態様では、配列番号１、５、９、１３、１７、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、８５、８７、および１０６に示したＶＨ領域の少なくとも１０の連続したアミノ酸、ならびに／または配列番号３、７、１１、１５、１９、４７、４９、５１、５３、５５、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９、８１、８３、および１６９に示したＶＬ領域の少なくとも１０のアミノ酸を含む融合ポリペプチドが提供される。本発明の様々な態様では、可変軽鎖領域の少なくとも約１０、少なくとも約１５、少なくとも約２０、少なくとも約２５、もしくは少なくとも約３０の連続したアミノ酸、および／または可変重鎖領域の少なくとも約１０、少なくとも約１５、少なくとも約２０、少なくとも約２５、もしくは少なくとも約３０の連続したアミノ酸を含む融合ポリペプチドが提供される。別の態様では、融合ポリペプチドは、表２中の配列対のいずれかに示した軽鎖可変領域および／または重鎖可変領域を含む。例えば、配列番号３と５、３と９、７と５、１１と１３、１５と１３、１９と１７、６９と３１、４９と３７、および３３と７３。いくつかの態様では、融合ポリペプチドは、１つまたは複数のＣＤＲを含む。さらに他の態様では、融合ポリペプチドは、ＣＤＲ  Ｈ３（ＶＨ  ＣＤＲ３）および／またはＣＤＲ  Ｌ３（ＶＬ  ＣＤＲ３）を含む。本発明の目的に関して、融合タンパク質は、１種または複数の抗体、および天然分子内に結合されていない別のアミノ酸配列、例えば、異種配列、または別の領域からの相同配列を含有する。例示的な異種配列としては、それだけに限らないが、ＦＬＡＧタグまたは６Ｈｉｓタグなどの「タグ」がある。タグは、当技術分野で周知である。
【０２６２】
融合ポリペプチドは、当技術分野で公知の方法によって、例えば、合成的に、または組換えで作り出すことができる。一般に、本発明の融合タンパク質は、本明細書に記載の組換え法を使用して、これらをコードするポリヌクレオチドを調製し、発現させることによって作製されるが、これらは、例えば、化学合成を含めた当技術分野で公知の他の手段によっても調製することができる。
【０２６３】
本発明は、固体支持体へのカップリングを促進する作用物質（ビオチンまたはアビジンなど）にコンジュゲートした（例えば、連結した）抗体を含む組成物も提供する。単純性のために、これらの方法が本明細書に記載の抗ＣＸＣＲ４抗体またはその抗原結合断片の実施形態のいずれかに適用されるという理解で、一般に、抗体に言及する。コンジュゲーションは一般に、本明細書に記載のこれらのコンポーネントを連結することを指す。連結（これは一般に、少なくとも投与のために、近接会合でこれらのコンポーネントを固定することである）は、任意の数の方法で実現され得る。例えば、作用物質と抗体との直接反応は、それぞれが他方の置換基と反応することができる置換基を有する場合、可能である。例えば、一方上の求核基、例えば、アミノ基またはスルフヒドリル基などは、他方上のカルボニル含有基、例えば、無水物もしくは酸ハロゲン化物など、または良好な脱離基（例えば、ハロゲン化物）を含有するアルキル基と反応することができる。
【０２６４】
本発明は、本発明の抗体をコードする単離ポリヌクレオチド、ならびにこのポリヌクレオチドを含むベクターおよび宿主細胞も提供する。
【０２６５】
したがって、本発明は、以下、すなわち、ｍ６Ｂ６、ｈ６Ｂ６、ｍ１２Ａ１１、ｈ１２Ａ１１、ｍ３Ｇ１０、ｈ３Ｇ１０、ｈ３Ｇ１０．Ａ５７、ｈ３Ｇ１０．Ｂ４４、ｈ３Ｇ１０．１．７、ｈ３Ｇ１０．１．６０、ｈ３Ｇ１０．２．５、ｈ３Ｇ１０．１．９１、ｈ３Ｇ１０．２．３７、ｈ３Ｇ１０．２．４５、ｈ３Ｇ１０．２．４２、ｈ３Ｇ１０．１．３３、ｈ３Ｇ１０．３．２５、ｈ３Ｇ１０、ｈ３Ｇ１０．２．７２、ｈ３Ｇ１０．Ａ１１Ａ、ｈ３Ｇ１０．Ａ１８Ａ、ｈ３Ｇ１０．Ａ１９Ａ、ｈ３Ｇ１０．Ａ５８Ａ、ｈ３Ｇ１０．Ａ６５Ａ、およびｈ３Ｇ１０．Ｂ１２Ａ、ｈ３Ｇ１０．Ｂ１３Ａ、ｈ３Ｇ１０．Ｂ１８Ａ、ｈ３Ｇ１０．Ａ１１Ｂ、ｈ３Ｇ１０．Ａ１８Ｂ、ｈ３Ｇ１０．Ａ１９Ｂ、ｈ３Ｇ１０．Ａ５８Ｂ、ｈ３Ｇ１０．Ａ６５Ｂ、ｈ３Ｇ１０．Ｂ１２Ｂ、ｈ３Ｇ１０．Ｂ１３Ｂ、ｈ３Ｇ１０．Ｂ１８Ｂ、ｈ３Ｇ１０．２．２５、ｈ３Ｇ１０．Ａ５９  ｈ３Ｇ１０．Ａ６２、ｈ３Ｇ１０．Ｌ９４Ｄのうちのいずれか、またはＣＸＣＲ４に結合する能力を有するこれらの任意の断片もしくは部分をコードするポリヌクレオチドを含むポリヌクレオチド（または医薬組成物を含めた組成物）を提供する。
【０２６６】
いくつかの態様では、本発明は、本明細書に記載の抗体（抗体断片を含む）およびポリペプチド、例えば、エフェクター機能を損なったまたは改善された抗体およびポリペプチドなどのいずれかをコードするポリヌクレオチドを提供する。ポリヌクレオチドは、当技術分野で公知の手順によって作製し、発現させることができる。
【０２６７】
他の態様では、本発明は、本発明のポリヌクレオチドのいずれかを含む組成物（医薬組成物など）を提供する。いくつかの態様では、組成物は、本明細書に記載の抗体のいずれかをコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターを含む。例えば、組成物は、配列番号２および配列番号４、または配列番号６および配列番号８、または配列番号８６および配列番号６８に示したポリヌクレオチドのいずれか、または両方を含む。
【０２６８】
発現ベクター、およびポリヌクレオチド組成物の投与は、本明細書にさらに記載されている。
【０２６９】
他の態様では、本発明は、本明細書に記載のポリヌクレオチドのいずれかを作製する方法を提供する。
【０２７０】
任意のこのような配列に相補的なポリヌクレオチドも本発明によって包含される。ポリヌクレオチドは、一本鎖（コードまたはアンチセンス）であっても、二本鎖であってもよく、ＤＮＡ（ゲノム、ｃＤＮＡ、または合成）であっても、ＲＮＡ分子であってもよい。ＲＮＡ分子には、イントロンを含有し、１対１の様式でＤＮＡ分子に対応するＨｎＲＮＡ分子、およびイントロンを含有しないｍＲＮＡ分子が含まれる。追加のコード配列または非コード配列が本発明のポリヌクレオチド内に存在してもよいが、その必要はなく、ポリヌクレオチドは、他の分子および／または支持材に連結されていてもよいが、その必要はない。
【０２７１】
ポリヌクレオチドは、天然配列（すなわち、抗体またはその部分をコードする内因性配列）を含むことができ、またはこのような配列のバリアントを含むことができる。ポリヌクレオチドバリアントは、コードされるポリペプチドの免疫反応性が天然の免疫反応性分子と比べて減少しないように、１つまたは複数の置換、付加、欠失、および／または挿入を含有する。コードされるポリペプチドの免疫反応性に対する効果は、一般に、本明細書に記載するように評価することができる。バリアントは、好ましくは、自然抗体またはその部分をコードするポリヌクレオチド配列と、少なくとも約７０％の同一性、より好ましくは、少なくとも約８０％の同一性、さらにより好ましくは、少なくとも約９０％の同一性、最も好ましくは、少なくとも約９５％の同一性を呈する。
【０２７２】
２つのポリヌクレオチド配列またはポリペプチド配列は、２つの配列中のヌクレオチドまたはアミノ酸の配列が、以下に記載するように、最大対応に関してアラインメントされたとき同じである場合、「同一」であると言われる。２つの配列間の比較は、一般に、比較ウィンドウにわたって配列を比較して、配列類似性の局所領域を同定および比較することによって実施される。「比較ウィンドウ」は、本明細書において、少なくとも約２０の連続した位置、通常３０〜約７５、または４０〜約５０のセグメントを指し、この中で１つの配列を同じ数の連続した位置の参照配列と、２つの配列を最適にアラインメントさせた後に比較することができる。
【０２７３】
比較するための配列の最適なアラインメントは、バイオインフォマティクスソフトウェアのＬａｓｅｒｇｅｎｅ一式内のＭｅｇａｌｉｇｎプログラム（ＤＮＡＳＴＡＲ，Ｉｎｃ．、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）を使用して、デフォルトのパラメータを使用して行うことができる。このプログラムは、以下の参考文献に記載されたいくつかのアラインメントスキームを具現する：Ｄａｙｈｏｆｆ，Ｍ．Ｏ．、１９７８、Ａ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ  ｃｈａｎｇｅ  ｉｎ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  −  Ｍａｔｒｉｃｅｓ  ｆｏｒ  ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ  ｄｉｓｔａｎｔ  ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ．  Ｉｎ  Ｄａｙｈｏｆｆ，Ｍ．Ｏ．（編）、Ａｔｌａｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ  ＤＣ、５巻、増補３、３４５〜３５８頁；Ｈｅｉｎ  Ｊ．、１９９０、Ｕｎｉｆｉｅｄ  Ａｐｐｒｏａｃｈ  ｔｏ  Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ  ａｎｄ  Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｓ、６２６〜６４５頁、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、１８３巻、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ；Ｈｉｇｇｉｎｓ，Ｄ．Ｇ．およびＳｈａｒｐ，Ｐ．Ｍ．、ＣＡＢＩＯＳ、５：１５１〜１５３（１９８９）；Ｍｙｅｒｓ，Ｅ．Ｗ．およびＭｕｌｌｅｒ  Ｗ．、ＣＡＢＩＯＳ、４：１１〜１７（１９８８）；Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，Ｅ．Ｄ．、Ｃｏｍｂ．Ｔｈｅｏｒ．、１１：１０５（１９７１）；Ｓａｎｔｏｕ，Ｎ．、Ｎｅｓ，Ｍ．、Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｅｖｏｌ．、４：４０６〜４２５（１９８７）；Ｓｎｅａｔｈ，Ｐ．Ｈ．Ａ．およびＳｏｋａｌ，Ｒ．Ｒ．、１９７３、Ｎｕｍｅｒｉｃａｌ  Ｔａｘｏｎｏｍｙ  ｔｈｅ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｎｕｍｅｒｉｃａｌ  Ｔａｘｏｎｏｍｙ、Ｆｒｅｅｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ、ＣＡ；Ｗｉｌｂｕｒ，Ｗ．Ｊ．およびＬｉｐｍａｎ，Ｄ．Ｊ．、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．、ＵＳＡ  ８０：７２６〜７３０（１９８３）。
【０２７４】
好ましくは、「配列同一性のパーセンテージ」は、少なくとも２０の位置の比較のウィンドウにわたって２つの最適にアラインメントされた配列を比較することによって求められ、ここで、比較ウィンドウ内のポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列の部分は、２つの配列の最適なアラインメントのための参照配列（これは、付加または欠失を含まない）と比較して、２０パーセント以下、通常５〜１５パーセント、または１０〜１２パーセントの付加または欠失（すなわち、ギャップ）を含み得る。パーセンテージは、同一の核酸塩基またはアミノ酸残基が両配列内で起こる位置の数を求めてマッチした位置の数を得、マッチした位置の数を参照配列（すなわち、ウィンドウサイズ）内の位置の総数で除し、結果に１００を乗じて、配列同一性のパーセンテージを得ることによって計算される。
【０２７５】
バリアントは、加えて、または代わりに、天然遺伝子またはその部分もしくは相補鎖に実質的に相同である。このようなポリヌクレオチドバリアントは、自然抗体（または相補配列）をコードする天然に存在するＤＮＡ配列に、中程度にストリンジェントな条件下でハイブリダイズすることができる。
【０２７６】
適当な「中程度にストリンジェントな条件」は、５×ＳＳＣ、０．５％のＳＤＳ、１．０ｍＭのＥＤＴＡ（ｐＨ８．０）の溶液中での予洗、５０℃〜６５℃、５×ＳＳＣで一晩のハイブリダイゼーション、その後の０．１％のＳＤＳを含有する２×、０．５×、および０．２×ＳＳＣのそれぞれを用いた６５℃で２０分間の２回の洗浄を含む。
【０２７７】
本明細書において、「高度にストリンジェントな条件」または「高ストリンジェンシー条件」は、（１）洗浄のために低イオン強度および高温、例えば、５０℃で、０．０１５Ｍの塩化ナトリウム／０．００１５Ｍのクエン酸ナトリウム／０．１％のドデシル硫酸ナトリウムを使用し、（２）ハイブリダイゼーションの間に、４２℃で、ホルムアミド、例えば、０．１％のウシ血清アルブミンを含む５０％（ｖ／ｖ）のホルムアミド／０．１％のフィコール／０．１％のポリビニルピロリドン／７５０ｍＭの塩化ナトリウム、７５ｍＭのクエン酸ナトリウムを含むｐＨ６．５の５０ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液などの変性剤を使用し、または（３）４２℃で０．２×ＳＳＣ（塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム）および５５℃で５０％のホルムアミド中での洗浄、その後の５５℃でＥＤＴＡを含有する０．１×ＳＳＣからなる高ストリンジェンシー洗浄を伴った、４２℃で、５０％のホルムアミド、５×ＳＳＣ（０．７５ＭのＮａＣｌ、０．０７５Ｍのクエン酸ナトリウム）、５０ｍＭのリン酸ナトリウム（ｐＨ６．８）、０．１％のピロリン酸ナトリウム、５×デンハルト溶液、超音波処理したサケ精子ＤＮＡ（５０μｇ／ｍｌ）、０．１％のＳＤＳ、および１０％のデキストラン硫酸を使用するものである。当業者は、プローブ長などの要因に対応するために、必要に応じてどのように温度、イオン強度などを調整するかを認識するであろう。
【０２７８】
遺伝子コードの縮退の結果として、本明細書に記載のポリペプチドをコードする多くのヌクレオチド配列が存在することを、当業者が理解することになる。これらのポリヌクレオチドのいくつかは、任意の天然遺伝子のヌクレオチド配列に対して最小の相同性を持つ。それにもかかわらず、コドン使用頻度の差異に起因して変化するポリヌクレオチドは、本発明によって具体的に企図されている。さらに、本明細書に提供するポリヌクレオチド配列を含む遺伝子の対立遺伝子は、本発明の範囲内である。対立遺伝子は、ヌクレオチドの１つまたは複数の突然変異、例えば、欠失、付加、および／または置換などの結果として変更されている内因性遺伝子である。得られるｍＲＮＡおよびタンパク質は、変更された構造または機能を有し得るが、その必要はない。対立遺伝子は、標準技法（ハイブリダイゼーション、増幅、および／またはデータベース配列比較など）を使用して同定することができる。
【０２７９】
本発明のポリヌクレオチドは、化学合成、組換え法、またはＰＣＲを使用して得ることができる。化学的なポリヌクレオチド合成の方法は、当技術分野で周知であり、本明細書で詳細に記載する必要はない。当業者は、所望のＤＮＡ配列を生成するために、本明細書に提供する配列、および市販のＤＮＡシンセサイザーを使用することができる。
【０２８０】
組換え法を使用してポリヌクレオチドを調製するために、本明細書でさらに論じるように、所望の配列を含むポリヌクレオチドを適当なベクター中に挿入することができ、ベクターを次に、複製および増幅のために適当な宿主細胞内に導入することができる。ポリヌクレオチドは、当技術分野で公知の任意の手段によって宿主細胞内に挿入することができる。細胞は、直接取込み、エンドサイトーシス、トランスフェクション、Ｆ−接合、または電気穿孔により、外因性ポリヌクレオチドを導入することによって形質転換される。導入された後、外因性ポリヌクレオチドは、非組込みベクター（プラスミドなど）として細胞内で維持し、または宿主細胞ゲノム中に組み込むことができる。このように増幅されたポリヌクレオチドは、当技術分野で周知の方法によって宿主細胞から単離することができる。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９８９を参照。
【０２８１】
代わりに、ＰＣＲにより、ＤＮＡ配列の複製が可能になる。ＰＣＲ技術は、当技術分野で周知であり、米国特許第４，６８３，１９５号、同第４，８００，１５９号、同第４，７５４，０６５号、および同第４，６８３，２０２号、ならびにＰＣＲ：Ｔｈｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ｃｈａｉｎ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ、Ｍｕｌｌｉｓら編、Ｂｉｒｋａｕｓｗｅｒ  Ｐｒｅｓｓ、Ｂｏｓｔｏｎ、１９９４に記載されている。
【０２８２】
ＲＮＡは、適切なベクター中で単離ＤＮＡを使用し、適当な宿主細胞内にこれを挿入することによって得ることができる。細胞が複製し、ＤＮＡがＲＮＡに転写される場合、次いで、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９８９、上記に示されているように、当業者に周知の方法を使用してＲＮＡを単離することができる。
【０２８３】
適当なクローニングベクターを標準技法によって構築することができ、または当技術分野で利用可能な多数のクローニングベクターから選択することができる。選択されるクローニングベクターは、使用されるように意図された宿主細胞によって変更することができるが、有用なクローニングベクターは一般に、自己複製する能力を有することになり、特定の制限エンドヌクレアーゼに対する単一標的を有することができ、かつ／またはベクターを含有するクローンの選択に使用することができるマーカー用遺伝子を担持することができる。適当な例としては、プラスミドならびに細菌ウイルス、例えば、ｐＵＣ１８、ｐＵＣ１９、Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔ（例えば、ｐＢＳ  ＳＫ＋）およびその誘導体、ｍｐ１８、ｍｐ１９、ｐＢＲ３２２、ｐＭＢ９、ＣｏｌＥ１、ｐＣＲ１、ＲＰ４、ファージＤＮＡ、ならびにｐＳＡ３およびｐＡＴ２８などのシャトルベクターがある。これらの、および多くの他のクローニングベクターは、市販供給業者、例えば、ＢｉｏＲａｄ、Ｓｔｒａｔｅｇｅｎｅ、およびＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎから入手可能である。
【０２８４】
発現ベクターは一般に、本発明によるポリヌクレオチドを含有する複製可能ポリヌクレオチドコンストラクトである。発現ベクターは、エピソームとして、または染色体ＤＮＡの一体部分として宿主細胞内で複製可能でなければならないことが暗示されている。適当な発現ベクターとしては、それだけに限らないが、プラスミド、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、レトロウイルスを含めたウイルスベクター、コスミド、およびＰＣＴ公開第ＷＯ８７／０４４６２号に開示された発現ベクター（複数可）がある。ベクターコンポーネントとして一般に、それだけに限らないが、以下、すなわちシグナル配列、複製起点、１つまたは複数のマーカー遺伝子、適当な転写制御エレメント（プロモーター、エンハンサー、およびターミネーターなど）の１つまたは複数を挙げることができる。発現（すなわち、翻訳）のために、１つまたは複数の翻訳制御エレメント、例えば、リボソーム結合部位、翻訳開始部位、および終止コドンなども通常必要とされる。
【０２８５】
対象とするポリヌクレオチドを含有するベクターは、電気穿孔、塩化カルシウム、塩化ルビジウム、リン酸カルシウム、ＤＥＡＥ−デキストラン、または他の物質を使用するトランスフェクション；微粒子銃；リポフェクション；および感染（例えば、この場合、ベクターは、ワクシニアウイルスなどの感染性病原体である）を含めたいくつかの適切な手段のいずれかによって宿主細胞内に導入することができる。ベクターまたはポリヌクレオチドを導入する選択は、宿主細胞の特徴に依存することになることが多い。
【０２８６】
本発明は、本明細書に記載のポリヌクレオチドのいずれかを含む宿主細胞も提供する。異種ＤＮＡを過剰発現することができる任意の宿主細胞を、対象とする抗体、ポリペプチド、またはタンパク質をコードする遺伝子を単離する目的に使用することができる。哺乳動物宿主細胞の非限定例としては、それだけに限らないが、ＣＯＳ、ＨｅＬａ、およびＣＨＯ細胞がある。ＰＣＴ公開第ＷＯ８７／０４４６２号も参照。適当な非哺乳動物宿主細胞としては、原核生物（大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）またはＢ．スブチリス（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｌｉｓ）など）、および酵母（Ｓ．セレビサエ（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓａｅ）、Ｓ．ポンベ（Ｓ．ｐｏｍｂｅ）、またはＫ．ラクチス（Ｋ．ｌａｃｔｉｓ）など）がある。好ましくは、宿主細胞は、存在する場合、宿主細胞中の対象とする、対応する内因性抗体またはタンパク質のレベルより、約５倍高い、より好ましくは１０倍高い、さらにより好ましくは２０倍高いレベルでｃＤＮＡを発現する。ＣＸＣＲ４またはＣＸＣＲ４ドメイン（例えば、ドメイン１〜４）への特異的結合のための宿主細胞のスクリーニングは、イムノアッセイまたはＦＡＣＳによって行われる。対象とする抗体またはタンパク質を過剰発現する細胞を同定することができる。
【０２８７】
抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲート
本発明は、式Ａｂ−（Ｔ−Ｌ−Ｄ）（式中、ａ）Ａｂは、ＣＸＣＲ４に結合する抗体またはその抗原結合断片であり、ｂ）Ｔは、含まれていてもよいアシルドナーグルタミン含有タグであり、ｃ）Ｌは、リンカーであり、ｄ）Ｄは、薬剤である）の抗体−薬剤コンジュゲートを提供する。このような抗体−薬剤コンジュゲートを調製および製造する方法、ならびに臨床用途におけるこれらの使用も提供される。「抗体−薬剤コンジュゲート」または「ＡＤＣ」は、ＣＸＣＲ４に結合し、薬剤とコンジュゲートされている抗体誘導体を含めた抗体またはこれらの抗原結合断片を指す。
【０２８８】
本発明のいくつかの態様では、Ａｂは、ａ）配列番号１０７、１６２、および１１２のＣＤＲを含むＶＨ領域、ならびに配列番号１４４、１４５、および１３９のＣＤＲを含むＶＬ領域を含む抗体またはその抗原結合断片、ｂ）配列番号１１５、１１８、および１２０のＣＤＲを含むＶＨ領域、ならびに配列番号１３５、１３６、および１３７のＣＤＲを含むＶＬ領域を含む抗体またはその抗原結合断片、ｃ）配列番号１０７、１１０、および１１２のＣＤＲを含むＶＨ領域、ならびに配列番号１３１、１３２、および１３３のＣＤＲを含むＶＬ領域を含む抗体またはその抗原結合断片、ｄ）配列番号１０７、１５４、および１１２のＣＤＲを含むＶＨ領域、ならびに配列番号１３８、１３２、および１３９のＣＤＲを含むＶＬ領域を含む抗体またはその抗原結合断片、ｅ）配列番号１０７、１５７、および１１２のＣＤＲを含むＶＨ領域、ならびに配列番号１５１、１５２、および１５３のＣＤＲを含むＶＬ領域を含む抗体またはその抗原結合断片、ｆ）配列番号３３のＶＨ領域、および配列番号７３のＶＬ領域を含む抗体またはその抗原結合断片、ｇ）配列番号１３のＶＨ領域、および配列番号１５のＶＬ領域を含む抗体またはその抗原結合断片、ｈ）配列番号５のＶＨ領域、および配列番号７のＶＬ領域を含む抗体またはその抗原結合断片、ならびにｉ）配列番号２１のＶＨ領域、および配列番号４７のＶＬ領域を含む抗体またはその抗原結合断片からなる群から選択される。
【０２８９】
細胞毒性剤または他の治療剤を抗体にコンジュゲートするための方法は、様々な刊行物に記載されている。例えば、リシン側鎖アミンによって、またはコンジュゲーション反応が起こるように鎖間ジスルフィド結合を低減することにより活性化されたシステインスルフヒドリル基によって、抗体中に化学修飾を行うことができる。例えば、Ｔａｎａｋａら、ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｅｒｓ、５７９：２０９２〜２０９６、（２００５）、およびＧｅｎｔｌｅら、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ．Ｃｈｅｍ．、１５：６５８〜６６３、（２００４）を参照。規定された化学量論比を有する特定の薬剤コンジュゲーションのために抗体の特定の部位で遺伝子工学的に改変された反応性システイン残基も記載されている。例えば、Ｊｕｎｕｔｕｌａら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、２６：９２５〜９３２、（２００８）を参照。アシルドナーグルタミン含有タグ、ならびに／またはトランスグルタミナーゼおよびアミンの存在下でポリペプチドの遺伝子工学的な改変によって反応性にされた（すなわち、アシルドナーとして共有結合を形成する能力）内因性グルタミンを使用するコンジュゲーション（例えば、反応性アミンを含み、またはこれに結合した細胞毒性剤）も、国際特許出願第ＰＣＴ／ＩＢ２０１１／０５４８９９号（ＷＯ２０１２／０５９８８２）、Ｓｔｒｏｐら、Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．、２０（２）：１６１〜１６７（２０１３）、およびＦａｒｉａｓら、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ．Ｃｈｅｍ．、２５（２）：２４５〜２５０（２０１４）に記載されている。
【０２９０】
適当なコンジュゲーション手順の一例は、ヒドラジドおよび他の求核体の、抗体上に天然に存在する炭水化物の酸化によって生成されるアルデヒドへのコンジュゲーションを利用する。ヒドラゾン含有コンジュゲートは、所望の薬剤−放出特性をもたらすカルボニル基を導入して作製することができる。コンジュゲートは、一端にジスルフィド、中間にアルキル鎖、および他端にヒドラジン誘導体を有するリンカーを用いても作製することができる。アントラサイクリンは、この技術を使用して抗体にコンジュゲートすることができる細胞毒の一例である。
【０２９１】
本発明の他の態様では、本明細書に記載の抗ＣＸＣＲ４抗体もしくはその抗原結合断片、またはコンジュゲートは、抗体の特定の部位で（例えば、カルボキシル末端、アミノ末端、または抗ＣＸＣＲ４抗体中の別の部位で）遺伝子工学的に改変されたアシルドナーグルタミン含有タグ（Ｔ）を含む。本発明のいくつかの態様では、タグは、アミノ酸グルタミン（Ｑ）またはアミノ酸配列ＬＬＱＧＧ（配列番号１７１）、ＧＧＬＬＱＧＧ（配列番号９０）、ＬＬＱＧＡ（配列番号９１）、ＧＧＬＬＱＧＡ（配列番号９２）、ＬＬＱ、ＬＬＱＧＰＧＫ（配列番号９３）、ＬＬＱＧＰＧ（配列番号９４）、ＬＬＱＧＰＡ（配列番号９５）、ＬＬＱＧＰ（配列番号９６）、ＬＬＱＰ（配列番号９７）、ＬＬＱＰＧＫ（配列番号９８）、ＬＬＱＧＡＰＧＫ（配列番号９９）、ＬＬＱＧＡＰＧ（配列番号１００）、ＬＬＱＧＡＰ（配列番号１０１）、ＧＧＬＬＱＧＰＰ（配列番号１７２）、ＬＬＱＧＰＰ（配列番号１７３）、ＬＬＱＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５（式中、Ｘ１は、ＧもしくはＰであり、Ｘ２は、Ａ、Ｇ、Ｐであるかもしくは存在せず、Ｘ３は、Ａ、Ｇ、Ｋ、Ｐであるかもしくは存在せず、Ｘ４は、Ｋ、Ｇであるかもしくは存在せず、Ｘ５は、Ｋであるかもしくは存在しない）（配列番号１０２）、またはＬＬＱＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５（式中、Ｘ１は、任意の天然に存在するアミノ酸であり、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、およびＸ５は、任意の天然に存在するアミノ酸であるかもしくは存在しない）（配列番号１０３）を含む。本発明の特定の態様では、Ｔは、配列番号９１、９２、および１０２のいずれかからなる群から選択される。
【０２９２】
本発明の他の態様では、アシルドナーグルタミン含有タグ、および抗体の２２２位、３４０位、または３７０位（ＥＵ番号付けスキーム）におけるアミノ酸修飾を含む単離抗体であって、修飾が、アミノ酸の欠失、挿入、置換、突然変異、またはこれらの任意の組合せである、単離抗体が提供される。例えば、アミノ酸修飾は、Ｋ２２２Ｒ、Ｋ３４０Ｒ、およびＫ３７０Ｒである。
【０２９３】
本発明のいくつかの態様では、抗体または抗原結合断片のコンジュゲートは、薬剤にコンジュゲートされており、薬剤は、細胞毒性剤、免疫調節剤、造影剤、治療剤（例えば、治療用タンパク質）、バイオポリマー、およびオリゴヌクレオチドからなる群から選択される。
【０２９４】
本発明のいくつかの態様では、薬剤は、腫瘍（例えば、ＣＸＣＲ４発現腫瘍）への薬剤の局所的送達の標的化のために、本明細書に記載の抗ＣＸＣＲ４抗体またはその抗原結合断片に連結またはコンジュゲートすることができる。本発明の特定の態様では、薬剤は、細胞毒性剤である。細胞毒性剤の例としては、それだけに限らないが、アントラサイクリン、オーリスタチン、カンプトテシン、コンブレタスタイン、ドラスタチン、デュオカルマイシン、エンジイン、ゲルダナマイシン、インドリノ−ベンゾジアゼピン二量体、マイタンシン、ピューロマイシン、ピロロベンゾジアゼピン二量体、タキサン、ビンカアルカロイド、ツブリシン、ヘミアステルリン、スプリセオスタチン、プラジエノライド、カリケアマイシン、およびこれらの立体異性体、アイソスター、類似体、または誘導体がある。本発明のいくつかの態様では、アントラサイクリンは、細菌ストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｏｍｙｃｅｓ）に由来し、広範囲のがん、例えば、白血病、リンパ腫、乳房、子宮、卵巣、および肺のがんなどを治療するのに使用されている。例示的なアントラサイクリンとしては、それだけに限らないが、ダウノルビシン、ドキソルビシン（すなわち、アドリアマイシン）、エピルビシン、イダルビシン、バルルビシン、およびミトキサントロンがある。
【０２９５】
ドラスタチン、ならびにこれらのペプチド類似体および誘導体、オーリスタチンは、抗がん活性および抗真菌活性を有することが示されている高度に強力な抗有糸分裂剤である。例えば、米国特許第５，６６３，１４９号、およびＰｅｔｔｉｔら、Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．、４２：２９６１〜２９６５（１９９８）を参照。例示的なドラスタチンおよびオーリスタチンとしては、それだけに限らないが、ドラスタチン１０、オーリスタチンＥ、オーリスタチンＥＢ（ＡＥＢ）、オーリスタチンＥＦＰ（ＡＥＦＰ）、ＭＭＡＤ（モノメチルオーリスタチンＤまたはモノメチルドラスタチン１０）、ＭＭＡＦ（モノメチルオーリスタチンＦまたはＮ−メチルバリン−バリン−ドライソロイイン−ドラプロイン−フェニルアラニン）、ＭＭＡＥ（モノメチルオーリスタチンＥまたはＮ−メチルバリン−バリン−ドライソロイイン−ドラプロイン−ノルエフェドリン）、５−ベンゾイル吉草酸−ＡＥエステル（ＡＥＶＢ）、および他の新規オーリスタチン（米国特許出願公開第２０１３０１２９７５３号に記載されたものなど）がある。
【０２９６】
本発明の特定の態様では、オーリスタチンは、０１０１（２−メチルアラニル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソ−３−｛［（１Ｓ）−２−フェニル−１−（１，３−チアゾール−２−イル）エチル］アミノ｝プロピル］ピロリジン−１−イル｝−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド）、ＭＭＡＤ（モノメチルオーリスタチンＤまたはモノメチルドラスタチン１０、および８２６１（２−メチルアラニル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−３−｛［（１Ｓ）−１−カルボキシ−２−フェニルエチル］アミノ｝−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド）からなる群から選択される。
【０２９７】
本発明のいくつかの態様では、オーリスタチンは、以下の構造を有する、０１０１（２−メチルアラニル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソ−３−｛［（１Ｓ）−２−フェニル−１−（１，３−チアゾール−２−イル）エチル］アミノ｝プロピル］ピロリジン−１−イル｝−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド）である：
【０２９８】
【化１】
2019141059.tif 000036
【０２９９】
他の態様では、オーリスタチンは、以下の構造を有する３３７７（Ｎ，２−ジメチルアラニル−Ｎ−｛（１Ｓ，２Ｒ）−４−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−３−｛［（１Ｓ）−１−カルボキシル−２−フェニルエチル］アミノ｝−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−２−メトキシ−１−［（１Ｓ）−１−メチルプロピル］−４−オキソブチル｝−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド）である：
【０３００】
【化２】
2019141059.tif 000037
【０３０１】
本発明の他の態様では、オーリスタチンは、以下の構造を有する０１３１（２−メチル−Ｌ−プロリ（ｐｒｏｌｙ）−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−３−｛［（１Ｓ）−１−カルボキシ−２−フェニルエチル］アミノ｝−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド）である：
【０３０２】
【化３】
2019141059.tif 000038
【０３０３】
いくつかの態様では、オーリスタチンは、以下の構造を有する０１２１（２−メチル−Ｌ−プロリ−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−３−｛［（２Ｓ）−１−メトキシ−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル］アミノ｝−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド）である：
【０３０４】
【化４】
2019141059.tif 000039
【０３０５】
他の態様では、オーリスタチンは、以下の構造を有する８２６１、（２−メチルアラニル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−３−｛［（１Ｓ）−１−カルボキシ−２−フェニルエチル］アミノ｝−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド）である：
【０３０６】
【化５】
2019141059.tif 000040
【０３０７】
カンプトテシンは、酵素トポイソメラーゼＩを阻害する細胞毒性キノリンアルカロイドである。カンプトテシンおよびその誘導体の例としては、それだけに限らないが、トポテカンおよびイリノテカン、ならびにＳＮ−３８などのこれらの代謝産物がある。
【０３０８】
コンブレタスタチンは、腫瘍における血管破壊特性を有する天然フェノールである。例示的なコンブレタスタチンおよびこれらの誘導体としては、それだけに限らないが、コンブレタスタチンＡ−４（ＣＡ−４）およびオンブラブリンがある。
【０３０９】
デュオカルマイシンは、細胞傷害性効力を有するＤＮＡアルキル化剤である。ＢｏｇｅｒおよびＪｏｈｎｓｏｎ、ＰＮＡＳ、９２：３６４２〜３６４９（１９９５）を参照。例示的なデュオカルマイシンとしては、それだけに限らないが、デュオカルマイシンＡ、デュオカルマイシンＢ１、デュオカルマイシンＢ２、デュオカルマイシンＣ１、デュオカルマイシンＣ２、デュオカルマイシンＤ、デュオカルマイシンＳＡ、およびＣＣ−１０６５がある。エンジインは、９員環および１０員環、または共役三重−二重−三重結合の環系の存在のいずれかを特徴とする、一クラスの抗腫瘍細菌産物である。例示的なエンジインとしては、それだけに限らないが、カリケアマイシン、エスペラマイシン、およびジネマイシンがある。
【０３１０】
ゲルダナマイシンは、Ｈｓｐ９０（熱ショックタンパク質９０）に結合し、抗腫瘍薬として使用されているベンゾキノンアンサマイシン抗生物質である。例示的なゲルダナマイシンとしては、それだけに限らないが、１７−ＡＡＧ（１７−Ｎ−アリルアミノ−１７−デメトキシゲルダナマイシン）および１７−ＤＭＡＧ（１７−ジメチルアミノエチルアミノ−１７−デメトキシゲルダナマイシン）がある。
【０３１１】
メイタンシンまたはこれらの誘導体メイタンシノイドは、チューブリン重合の阻害により有糸分裂の間に微小管形成を阻害することによって、細胞増殖を阻害する。Ｒｅｍｉｌｌａｒｄら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、１８９：１００２〜１００５（１９７５）を参照。例示的なメイタンシンおよびメイタンシノイドとしては、それだけに限らないが、メルタンシン（ＤＭ１）およびその誘導体、ならびにアンサミトシンがある。
【０３１２】
ピロロベンゾジアゼピン二量体（ＰＢＤ）およびインドリノ−ベンゾジアゼピン二量体（ＩＧＮ）は、デュプレックスＤＮＡに結合する１つまたは複数のイミン官能基またはこれらの等価物を含有する抗腫瘍剤である。ＰＢＤおよびＩＧＮ分子は、天然産物アントラマイシンに基づき、プリン−グアニン−プリン配列を優先して配列選択的な様式でＤＮＡと相互作用する。例示的なＰＢＤおよびこれらの類似体としては、それだけに限らないが、ＳＪＧ−１３６がある。
【０３１３】
スプリセオスタチンおよびプラジエノライドは、スプライシングを阻害し、スプライセオソーム、ＳＦ３ｂと相互作用する抗腫瘍化合物である。スプリセオスタチンの例としては、それだけに限らないが、スプリセオスタチンＡ、ＦＲ９０１４６４がある。プラジエノライドの例としては、それだけに限らないが、プラジエノライドＢ、プラジエノライドＤ、およびＥ７１０７がある。
【０３１４】
タキサンは、抗チューブリン剤または有糸分裂阻害剤として作用するジテルペンである。例示的なタキサンとしては、それだけに限らないが、パクリタキセル（例えば、ＴＡＸＯＬ（登録商標））およびドセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標））がある。
【０３１５】
ビンカアルカロイドも抗チューブリン剤である。例示的なビンカアルカロイドとしては、それだけに限らないが、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシン、およびビノレルビンがある。
【０３１６】
本発明のいくつかの態様では、薬剤は、免疫調節剤である。免疫調節剤の例としては、それだけに限らないが、ガンシクロビル、エタネルセプト、タクロリムス、シロリムス、ボクロスポリン、シクロスポリン、ラパマイシン、シクロホスファミド、アザチオプリン、ミコフェノール酸モフェチル、メトトレキセート、糖質コルチコイドおよびその類似体、サイトカイン、幹細胞増殖因子、リンホトキシン、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、造血因子、インターロイキン（例えば、インターロイキン−１（ＩＬ−１）、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１８、およびＩＬ−２１）、コロニー刺激因子（例えば、顆粒球−コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）および顆粒球マクロファージ−コロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ））、インターフェロン（例えば、インターフェロン−α、−β、および−γ）、「Ｓ１因子」と呼ばれる幹細胞増殖因子、エリスロポエチン、ならびにトロンボポエチン、またはこれらの組合せがある。
【０３１７】
本発明のいくつかの態様では、薬剤は、造影剤（例えば、フルオロフォアまたはキレーター）、例えば、フルオレセイン、ローダミン、ランタニドリン光体、およびこれらの誘導体などである。フルオロフォアの例としては、それだけに限らないが、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）（例えば、５−ＦＩＴＣ）、フルオレセインアミダイト（ＦＡＭ）（例えば、５−ＦＡＭ）、エオシン、カルボキシフルオレセイン、エリトロシン、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）（例えば、Ａｌｅｘａ３５０、４０５、４３０、４８８、５００、５１４、５３２、５４６、５５５、５６８、５９４、６１０、６３３、６４７、６６０、６８０、７００、または７５０）、カルボキシテトラメチルローダミン（ＴＡＭＲＡ）（例えば、５−ＴＡＭＲＡ）、テトラメチルローダミン（ＴＭＲ）、およびスルホローダミン（ＳＲ）（例えば、ＳＲ１０１）がある。キレーターの例としては、それだけに限らないが、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’，Ｎ’’’−四酢酸（ＤＯＴＡ）、１，４，７−トリアザシクロノナン−１，４，７−三酢酸（ＮＯＴＡ）、１，４，７−トリアザシクロノナン，１−グルタル酸−４，７−酢酸（ＮＯＤＡＧＡ）、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）、および１，２−ビス（ｏ−アミノフェノキシ）エタン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸）（ＢＡＰＴＡ）がある。
【０３１８】
本発明のいくつかの態様では、治療用もしくは診断用放射性同位体または他の標識（例えば、ＰＥＴもしくはＳＰＥＣＴ標識）は、本明細書に記載の抗ＣＸＣＲ４抗体、または抗原結合断片へのコンジュゲーションのために薬剤中に組み込むことができる。放射性同位体または他の標識の例としては、それだけに限らないが、３Ｈ、１１Ｃ、１３Ｎ、１４Ｃ、１５Ｎ、１５Ｏ、３５Ｓ、１８Ｆ、３２Ｐ、３３Ｐ、４７Ｓｃ、５１Ｃｒ、５７Ｃｏ、５８Ｃｏ、５９Ｆｅ、６２Ｃｕ、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、７５Ｓｅ、７６Ｂｒ、７７Ｂｒ、８６Ｙ、８９Ｚｒ、９０Ｙ、９４Ｔｃ、９５Ｒｕ、９７Ｒｕ、９９Ｔｃ、１０３Ｒｕ、１０５Ｒｈ、１０５Ｒｕ、１０７Ｈｇ、１０９Ｐｄ、１１１Ａｇ、１１１Ｉｎ、１１３Ｉｎ、１２１Ｔｅ、１２２Ｔｅ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１２５Ｔｅ、１２６Ｉ、１３１Ｉ、１３１Ｉｎ、１３３Ｉ、１４２Ｐｒ、１４３Ｐｒ、１５３Ｐｂ、１５３Ｓｍ、１６１Ｔｂ、１６５Ｔｍ、１６６Ｄｙ、１６６Ｈ、１６７Ｔｍ、１６８Ｔｍ、１６９Ｙｂ、１７７Ｌｕ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１８９Ｒｅ、１９７Ｐｔ、１９８Ａｕ、１９９Ａｕ、２０１Ｔｌ、２０３Ｈｇ、２１１Ａｔ、２１２Ｂｉ、２１２Ｐｂ、２１３Ｂｉ、２２３Ｒａ、２２４Ａｃ、および２２５Ａｃがある。
【０３１９】
本発明のいくつかの態様では、薬剤は、それだけに限らないが、毒素、ホルモン、酵素、および増殖因子を含めた治療用タンパク質である。
【０３２０】
毒素タンパク質（またはポリペプチド）の例としては、それだけに限らないが、ジフテリア（例えば、ジフテリアＡ鎖）、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）外毒素およびエンドトキシン、リシン（例えば、リシンＡ鎖）、アブリン（例えば、アブリンＡ鎖）、モデッシン（例えば、モデッシンＡ鎖）、α−サルシン、アレウリテス・フォルジ（Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ  ｆｏｒｄｉｉ）タンパク質、ジアンチンタンパク質、リボヌクレアーゼ（ＲＮａｓｅ）、ＤＮａｓｅ  Ｉ、ブドウ球菌エンテロトキシン−Ａ、ヨウシュヤマゴボウ抗ウイルス剤タンパク質、ゲロニン、ジフテリア毒素、フィトラカ・アメリカナ（Ｐｈｙｔｏｌａｃａ  ａｍｅｒｉｃａｎａ）タンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、およびＰＡＰ−Ｓ）、ツルレイシ（ｍｏｍｏｒｄｉｃａ  ｃｈａｒａｎｔｉａ）阻害剤、クルシン、クロチン、サパオナリア・オフィシナリス（ｓａｐａｏｎａｒｉａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）阻害剤、ミトゲリン、レストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシン、トリコテセン、阻害剤シスチンノット（ＩＣＫ）ペプチド（例えば、セラトトキシン）、ならびにコノトキシン（例えば、ＫＩＩＩＡまたはＳｍＩＩＩａ）がある。
【０３２１】
本発明のいくつかの態様では、薬剤は、生体適合性ポリマーである。本明細書に記載の抗ＣＸＣＲ４抗体または抗原結合断片を生体適合性ポリマーにコンジュゲートさせて、血清半減期および生物活性を増大させ、かつ／またはｉｎ  ｖｉｖｏ半減期を延長することができる。生体適合性ポリマーの例としては、水溶性ポリマー、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）またはその誘導体など、および双性イオン含有生体適合性ポリマー（例えば、ホスホリルコリン含有ポリマー）がある。
【０３２２】
本発明のいくつかの態様では、薬剤は、アンチセンスオリゴヌクレオチドなどのオリゴヌクレオチドである。
【０３２３】
別の態様では、本発明は、本明細書に記載の抗体または抗原結合断片のコンジュゲートであって、抗体−薬剤コンジュゲートが、式：抗体−（アシルドナーグルタミン含有タグ）−（リンカー）−（薬剤）を有し、アシルドナーグルタミン含有タグが、抗体または抗原結合断片の特定の部位（例えば、重鎖もしくは軽鎖のカルボキシル末端または別の部位）で遺伝子工学的に改変されており、リンカー（例えば、１種または複数の反応性アミン（例えば、第一級アミンＮＨ２）を含有するリンカー）にコンジュゲートしており、リンカーが、細胞毒性剤（例えば、ＭＭＡＤまたは本明細書に記載の他のオーリスタチン）にコンジュゲートしている、コンジュゲートを提供する。本発明のいくつかの態様では、抗体−薬剤コンジュゲートは、アシルドナーグルタミン含有タグを含まない。
【０３２４】
１種または複数の反応性アミンを含有するリンカーの例としては、それだけに限らないが、アセチル−リシン−バリン−シトルリン−ｐ−アミノベンジルオキシカルボニル（ＡｃＬｙｓ−ＶＣ−ＰＡＢＣ）、またはアミノＰＥＧ６−プロピオニルがある。例えば、ＷＯ２０１２／０５９８８２を参照。
【０３２５】
本発明のいくつかの態様では、リンカーは、ジペプチドリンカー、例えば、バリン−シトルリン（ｖａｌ−ｃｉｔ）、フェニルアラニン−リシン（ｐｈｅ−ｌｙｓ）リンカー、またはマレイミドカプロニック−バリン−シトルリン−ｐ−アミノベンジルオキシカルボニル（ｖｃ）リンカーなどであり得る。別の態様では、リンカーは、スルホスクシンイミジル−４−［Ｎ−マレイミドメチル］シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ｓｍｃｃ）であってもよい。スルホ−ｓｍｃｃコンジュゲーションは、スルフヒドリル（チオール、−ＳＨ）と反応するマレイミド基を介して起こる一方、そのスルホ−ＮＨＳエステルは、第一級アミン（リシンおよびタンパク質またはペプチドＮ末端に見つかるような）に対して反応性である。さらに、リンカーは、マレイミドカプロイル（ｍｃ）であってもよい。本発明のいくつかの態様では、アシルドナーグルタミン含有タグは、ＬＬＱＧＧ（配列番号１７１）、ＧＧＬＬＱＧＧ（配列番号９０）、ＬＬＱＧＡ（配列番号９１）、ＧＧＬＬＱＧＡ（配列番号９２）、ＬＬＱ、ＬＬＱＧＰＧＫ（配列番号９３）、ＬＬＱＧＰＧ（配列番号９４）、ＬＬＱＧＰＡ（配列番号９５）、ＬＬＱＧＰ（配列番号９６）、ＬＬＱＰ（配列番号９７）、ＬＬＱＰＧＫ（配列番号９８）、ＬＬＱＧＡＰＧＫ（配列番号９９）、ＬＬＱＧＡＰＧ（配列番号１００）、ＬＬＱＧＡＰ（配列番号１０１）、ＧＧＬＬＱＧＰＰ（配列番号１７２）、ＬＬＱＧＰＰ（配列番号１７３）、ＬＬＱＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５（式中、Ｘ１は、ＧもしくはＰであり、Ｘ２は、Ａ、Ｇ、Ｐであるかもしくは存在せず、Ｘ３は、Ａ、Ｇ、Ｋ、Ｐであるかもしくは存在せず、Ｘ４は、Ｋ、Ｇであるかもしくは存在せず、Ｘ５は、Ｋであるかもしくは存在しない）（配列番号１０２）、またはＬＬＱＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５（式中、Ｘ１は、任意の天然に存在するアミノ酸であり、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、およびＸ５は、任意の天然に存在するアミノ酸であるかもしくは存在しない）（配列番号１０３）を含む。
【０３２６】
本発明のいくつかの態様では、本明細書に記載の抗ＣＸＣＲ４抗体またはコンジュゲートは、抗ＣＸＣＲ４抗体の２９７位でアスパラギン（Ｎ）からグルタミン（Ｑ）への、またはＮからアラニン（Ａ）へのアミノ酸置換を含む。
【０３２７】
本発明のいくつかの態様では、例えば、ＬＬＱ、配列番号９１、９０、９４、９５、９５、９７、９８、９９、１００、１７１、１０１、１７２、または１７３を含むアシルドナーグルタミン含有タグは、抗体の重鎖のＣ末端で遺伝子工学的に改変されており、Ｃ末端のリシン残基は、欠失している。他の態様では、アシルドナーグルタミン含有タグ（例えば、ＧＧＬＬＱＧＡ（配列番号９２））は、抗体の軽鎖のＣ末端で遺伝子工学的に改変されている。抗体の例としては、それだけに限らないが、ｍ６Ｂ６、ｈ６Ｂ６、ｍ１２Ａ１１、ｈ１２Ａ１１、ｍ３Ｇ１０、ｈ３Ｇ１０、ｈ３Ｇ１０．Ａ５７、ｈ３Ｇ１０．Ｂ４４、ｈ３Ｇ１０．１．７、ｈ３Ｇ１０．１．６０、ｈ３Ｇ１０．２．５、ｈ３Ｇ１０．１．９１、ｈ３Ｇ１０．２．３７、ｈ３Ｇ１０．２．４５、ｈ３Ｇ１０．２．４２、ｈ３Ｇ１０．１．３３、ｈ３Ｇ１０．３．２５、ｈ３Ｇ１０、ｈ３Ｇ１０．２．７２、ｈ３Ｇ１０．Ａ１１Ａ、ｈ３Ｇ１０．Ａ１８Ａ、ｈ３Ｇ１０．Ａ１９Ａ、ｈ３Ｇ１０．Ａ５８Ａ、ｈ３Ｇ１０．Ａ６５Ａ、およびｈ３Ｇ１０．Ｂ１２Ａ、ｈ３Ｇ１０．Ｂ１３Ａ、ｈ３Ｇ１０．Ｂ１８Ａ、ｈ３Ｇ１０．Ａ１１Ｂ、ｈ３Ｇ１０．Ａ１８Ｂ、ｈ３Ｇ１０．Ａ１９Ｂ、ｈ３Ｇ１０．Ａ５８Ｂ、ｈ３Ｇ１０．Ａ６５Ｂ、ｈ３Ｇ１０．Ｂ１２Ｂ、ｈ３Ｇ１０．Ｂ１３Ｂ、ｈ３Ｇ１０．Ｂ１８Ｂ、ｈ３Ｇ１０．２．２５、ｈ３Ｇ１０．Ａ５９、ｈ３Ｇ１０．Ａ６２またはｈ３Ｇ１０．Ｌ９４Ｄがある。
【０３２８】
本発明の他の態様では、コンジュゲートは、式：抗体−（アシルドナーグルタミン含有タグ）−（Ｌ）−（細胞毒性剤）を含む。本発明のいくつかの態様では、コンジュゲートは、ａ）Ａｂ−ＬＬＱＧＡ（配列番号９１）−（アセチル−リシン−バリン−シトルリン−ｐ−アミノベンジルオキシカルボニル（ＡｃＬｙｓ−ＶＣ−ＰＡＢＣ））−０１０１；ｂ）Ａｂ−ＬＬＱＧＡ（配列番号９１）−（ＡｃＬｙｓ−ＶＣ−ＰＡＢＣ）−ＭＭＡＤ；ｃ）Ａｂ−ＬＬＱＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５（配列番号１０２）−（ＡｃＬｙｓ−ＶＣ−ＰＡＢＣ）−０１０１；ｄ）Ａｂ−ＬＬＱＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５（配列番号１０２）−（ＡｃＬｙｓ−ＶＣ−ＰＡＢＣ）−ＭＭＡＤ；ｅ）Ａｂ−ＧＧＬＬＱＧＡ（配列番号９２）−（ＡｃＬｙｓ−ＶＣ−ＰＡＢＣ）−０１０１；およびｆ）Ａｂ−ＧＧＬＬＱＧＡ（配列番号９２）−（ＡｃＬｙｓ−ＶＣ−ＰＡＢＣ）−ＭＭＡＤである。
【０３２９】
抗体の例としては、それだけに限らないが、ｍ６Ｂ６、ｈ６Ｂ６、ｍ１２Ａ１１、ｈ１２Ａ１１、ｍ３Ｇ１０、ｈ３Ｇ１０、ｈ３Ｇ１０．Ａ５７、ｈ３Ｇ１０．Ｂ４４、ｈ３Ｇ１０．１．７、ｈ３Ｇ１０．１．６０、ｈ３Ｇ１０．２．５、ｈ３Ｇ１０．１．９１、ｈ３Ｇ１０．２．３７、ｈ３Ｇ１０．２．４５、ｈ３Ｇ１０．２．４２、ｈ３Ｇ１０．１．３３、ｈ３Ｇ１０．３．２５、ｈ３Ｇ１０、ｈ３Ｇ１０．２．７２、ｈ３Ｇ１０．Ａ１１Ａ、ｈ３Ｇ１０．Ａ１８Ａ、ｈ３Ｇ１０．Ａ１９Ａ、ｈ３Ｇ１０．Ａ５８Ａ、ｈ３Ｇ１０．Ａ６５Ａ、およびｈ３Ｇ１０．Ｂ１２Ａ、ｈ３Ｇ１０．Ｂ１３Ａ、ｈ３Ｇ１０．Ｂ１８Ａ、ｈ３Ｇ１０．Ａ１１Ｂ、ｈ３Ｇ１０．Ａ１８Ｂ、ｈ３Ｇ１０．Ａ１９Ｂ、ｈ３Ｇ１０．Ａ５８Ｂ、ｈ３Ｇ１０．Ａ６５Ｂ、ｈ３Ｇ１０．Ｂ１２Ｂ、ｈ３Ｇ１０．Ｂ１３Ｂ、ｈ３Ｇ１０．Ｂ１８Ｂ、ｈ３Ｇ１０．２．２５、ｈ３Ｇ１０．Ｌ９４Ｄ、ｈ３Ｇ１０．Ａ５９、ｈ３Ｇ１０．Ａ６２またはｈ３Ｇ１０．Ｌ９４Ｄがある。
【０３３０】
本発明のいくつかの態様では、Ａｂは、配列番号１０７、１６２、および１１２のＣＤＲを含むＶＨ領域、ならびに配列番号１４４、１４５、および１３９のＣＤＲを含むＶＬ領域を含む抗体またはその抗原結合断片である。
【０３３１】
本発明のいくつかの態様では、抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲートは、腫瘍退縮を誘導する。
【０３３２】
抗ＣＸＣＲ４抗体を使用する方法
これらの抗原結合断片またはこれらの抗体−薬剤コンジュゲート
本発明の抗体および抗体−薬剤コンジュゲートは、それだけに限らないが、治療的処置方法および診断的処置方法を含めた、様々な用途で有用である。
【０３３３】
本発明のいくつかの態様では、患者に投与されるとき、抗体またはコンジュゲートおよび薬学的に許容できる担体は、滅菌されている。水は、化合物またはコンジュゲートが静脈内に投与されるときの例示的な担体である。食塩液ならびに水性デキストロースおよびグリセロール溶液も、特に注射用溶液用に液体担体として使用することができる。本組成物は、必要に応じて、少量の湿潤剤もしくは乳化剤、またはｐＨ緩衝剤も含有し得る。
【０３３４】
本組成物は、溶液、ペレット、粉末、徐放製剤の形態、または使用に適した任意の他の形態をとることができる。適当な薬学的担体の他の例は、Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎによって「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」に記載されている。
【０３３５】
いくつかの態様では、本発明の抗体および／またはその抗体−薬剤コンジュゲートは、動物、特にヒトへの静脈内投与に適応した医薬組成物として、慣例的な手順に従って製剤化される。典型的には、静脈内投与用担体またはビヒクルは、滅菌等張性緩衝水溶液である。必要な場合、組成物は、可溶化剤も含み得る。静脈内投与用組成物は、注射部位での痛みを和らげるためにリグノカインなどの局所麻酔薬を含んでもよい。一般に、成分は、別個に、または例えば、活性剤の量を示したアンプルもしくはサシェなどの密封容器内のドライ凍結乾燥粉末または無水濃縮物として単位剤形で一緒に混合されて供給される。本発明の化合物および／またはその抗体−薬剤コンジュゲートが注入によって投与される場合、これは、例えば、滅菌した医薬品グレード水または生理食塩水を含有する点滴ボトルを用いて施すことができる。本発明の化合物および／またはその抗体−薬剤コンジュゲートが注射によって投与される場合、投与前に成分を混合することができるように、注射用滅菌水または生理食塩水のアンプルを提供することができる。
【０３３６】
組成物は、固体または液体投与単位の物理的形態を修正する様々な材料を含み得る。例えば、組成物は、活性成分の周囲にコーティングシェルを形成する材料を含み得る。コーティングシェルを形成する材料は、典型的には不活性であり、例えば、糖、シェラック、および他の腸溶コーティング剤から選択することができる。代わりに、活性成分は、ゼラチンカプセルに入れることができる。
【０３３７】
固体形態であっても液体形態であっても、本組成物は、がんの治療で使用される薬理学的物質を含み得る。一態様では、本発明は、対象におけるＣＸＣＲ４発現に関連した状態を治療するための方法を提供する。本発明のいくつかの態様では、対象におけるＣＸＣＲ４機能または発現に関連した障害を治療する方法は、それを必要とする対象に、本明細書に記載の抗ＣＸＣＲ４抗体、これらの抗原結合断片、または抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲートを含む有効量の組成物（例えば、医薬組成物）を投与するステップを含む。ＣＸＣＲ４発現に関連した障害としては、それだけに限らないが、異常なＣＸＣＲ４発現、変化した、または異所性のＣＸＣＲ４発現、ＣＸＣＲ４過剰発現、および増殖性障害（例えば、がん）がある。
【０３３８】
したがって、いくつかの態様では、対象におけるがんを治療する方法であって、それを必要とする対象に、本明細書に記載の抗ＣＸＣＲ４抗体、その抗原結合断片、または抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲートを含む有効量の組成物を投与するステップを含む、方法が提供される。本明細書において、がんとしては、それだけに限らないが、膀胱、乳房、子宮頸部、絨毛癌、大腸、食道、胃、グリア芽細胞腫、頭頸部、腎臓、肺、口腔、卵巣、膵臓、前立腺、皮膚、および血液のがんがある。本発明のいくつかの態様では、ＣＸＣＲ４発現腫瘍を有する対象における腫瘍増殖または進行を減少させる方法であって、それを必要とする対象に、本明細書に記載の抗ＣＸＣＲ４抗体もしくはその抗原結合断片、または抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲートを含む有効量の組成物を投与するステップを含む、方法が提供される。他の態様では、対象におけるＣＸＣＲ４発現がん細胞の転移を減少させる方法であって、それを必要とする対象に、本明細書に記載の抗ＣＸＣＲ４抗体、その抗原結合断片、または抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲートを含む有効量の組成物を投与するステップを含む、方法が提供される。他の態様では、対象におけるＣＸＣＲ４発現腫瘍の退縮を誘導する方法であって、それを必要とする対象に、本明細書に記載の抗ＣＸＣＲ４抗体もしくはその抗原結合断片、または抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲートを含む有効量の組成物を投与するステップを含む、方法が提供される。
【０３３９】
いくつかの態様では、本発明は、ＣＸＣＲ４の機能または発現に関連した病理学的障害を検出、診断、および治療するのに使用するための本明細書に記載の抗体のいずれか１つの単離抗体、抗原結合断片、または抗体−薬剤コンジュゲートを提供する。一態様では、障害は、ＣＸＣＲ４の過剰発現と関連がある通常または任意の他の病理と比べて、ＣＸＣＲ４の発現の増大に関連した発癌性障害である。
【０３４０】
本発明のいくつかの態様では、対象におけるがんを治療する方法であって、それを必要とする対象に、（ｉ）配列番号１０７、１１３、１１４、１０８、１０９、１１５、１１６、１１７、１２１、および１２２からなる群から選択される重鎖可変（ＶＨ）  ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号１６２、１２８、１１０、１１１、１１８、１１９、１５４、１２３、１５８、１２４、１５９、１２５、１６０、１２６、１６１、１２７、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１５５、１２９、１５６、および１３０からなる群から選択されるＶＨ  ＣＤＲ２、ならびに（ｉｉｉ）配列番号１１２および１２０からなる群から選択されるＶＨ  ＣＤＲ３を含むＶＨ領域、ならびに／または、ｂ）（ｉ）配列番号１４４、１３１、１３５、１３８、１４１、１４２、１４３、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、および１５１からなる群から選択される軽鎖可変領域（ＶＬ）  ＣＤＲ１、（ｉｉ）１４５、１３２、１３６、および１５２からなる群から選択されるＶＬ  ＣＤＲ２、ならびに（ｉｉｉ）配列番号１３９、１３３、１３７、１４０、および１５３からなる群から選択されるＶＬ  ＣＤＲ３を含むＶＬ領域を含む有効量の組成物を投与するステップを含む、方法が提供される。
【０３４１】
本発明のいくつかの態様では、対象におけるがんを治療する方法であって、それを必要とする対象に、抗体またはその抗原結合断片を含む有効量の組成物を投与するステップを含み、抗体が、配列番号１０７、１６２、および１１２として示された３つのＣＤＲを含む重鎖可変（ＶＨ）領域を含む、方法が提供される。本発明のいくつかの態様では、対象におけるがんを治療する方法であって、それを必要とする対象に、抗体またはその抗原結合断片を含む有効量の組成物を投与するステップを含み、抗体が、配列番号１４４、１４５、および１３９として示された３つのＣＤＲを含む軽鎖可変（ＶＬ）領域を含む、方法が提供される。
【０３４２】
本発明のいくつかの態様では、対象におけるがんを治療する方法であって、それを必要とする対象に、前記に記載の抗体またはその抗原結合断片を含む有効量の組成物を投与するステップを含み、抗体が、配列番号１０７、１６２、および１１２として示された３つのＣＤＲを含む重鎖可変（ＶＨ）領域、ならびに配列番号１４４、１４５、および１３９として示された３つのＣＤＲを含む軽鎖可変（ＶＬ）領域を含む、方法が提供される。
【０３４３】
いくつかの態様では、本発明は、対象におけるがんを治療する方法であって、それを必要とする対象に、ＣＸＣＲ４に結合し、配列番号３３の重鎖可変（ＶＨ）領域に由来するＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、およびＶＨ  ＣＤＲ３を含むＶＨ領域、ならびに配列番号７３の軽鎖可変（ＶＬ）領域に由来するＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、およびＶＬ  ＣＤＲ３を含むＶＬ領域を含む、単離抗体またはその抗原結合断片を含む有効量の組成物を投与するステップを含む、方法を提供する。
【０３４４】
さらに他の態様では、本発明は、対象におけるがんを治療する方法であって、それを必要とする対象に、前記に記載の抗体またはその抗原結合断片を含む有効量の組成物を投与するステップを含み、抗体が、ａ）配列番号３３の重鎖可変（ＶＨ）領域、およびｂ）配列番号７３の軽鎖可変（ＶＬ）領域を含む、方法を提供する。
【０３４５】
いくつかの態様では、本発明は、ＣＸＣＲ４機能または発現に関連した障害を治療するための医薬の製造における本明細書に記載の抗体のいずれか１つの単離抗体、抗原結合断片、または抗体−薬剤コンジュゲートの使用を提供する。一態様では、障害は、ＣＸＣＲ４の過剰発現と関連がある通常または任意の他の病理と比べて、ＣＸＣＲ４の発現の増大に関連した発癌性障害である。
【０３４６】
本発明の他の態様では、抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲートは、少なくとも１つの重鎖可変領域および少なくとも１つの軽鎖可変領域を有する抗体またはその抗原結合断片を含み、少なくとも１つの重鎖可変領域は、配列番号１０７、１１３、１１４、１６２、１２８、および１１２として示された３つのＣＤＲを含む。本発明のいくつかの態様では、抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲートは、少なくとも１つの重鎖可変領域および少なくとも１つの軽鎖可変領域を有する抗体またはその抗原結合断片を含み、少なくとも１つの軽鎖可変領域は、配列番号１４４、１４５、および１３９として示された３つのＣＤＲを含む。
【０３４７】
本発明のいくつかの態様では、ＣＸＣＲ４に結合する抗体−薬剤コンジュゲートは、配列番号３３、５、９、１３、１７、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３５、３７、３９、４１、４３、４５、８５、もしくは８７のいずれか１つとして示された重鎖可変領域、および／または配列番号７３、３、７、１１、１５、１９、４７、４９、５１、５３、５５、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７５、７７、７９、８１、８３、もしくは１６９のいずれか１つとして示された軽鎖可変領域を有する抗体またはその抗原結合断片を含む。例えば、本発明の抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲートは、配列番号３３と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号７３と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合断片；または配列番号３３として示された重鎖可変領域、および配列番号７３として示されたアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合断片を含み得る。
【０３４８】
本発明の特定の態様では、抗体は、イヌ化またはネコ化されていない。
【０３４９】
抗体は、例えば、抗体の結合性を変更するために、例えば、重鎖および／または軽鎖の可変ドメインにおいて修飾することもできる。例えば、抗ＣＸＣＲ４抗体のＫＤを増大もしくは減少させるために、ｋｏｆｆを増大もしくは減少させるために、または抗体の結合特異性を変更するために、ＣＤＲ領域の１つまたは複数において突然変異を作製することができる。部位特異的突然変異誘発における技法は、当技術分野で周知である。例えば、ＳａｍｂｒｏｏｋらおよびＡｕｓｕｂｅｌら、上記を参照。
【０３５０】
本発明のいくつかの態様では、ＣＸＣＲ４機能または発現に関連する障害を検出、診断、および／または監視する方法が提供される。例えば、本明細書に記載の抗ＣＸＣＲ４抗体は、造影剤および酵素−基質標識などの検出可能部分で標識することができる。本明細書に記載の抗体は、ｉｎ  ｖｉｖｏイメージング（例えば、ＰＥＴもしくはＳＰＥＣＴ）などのｉｎ  ｖｉｖｏ診断アッセイ、または染色試薬に使用することもできる。
【０３５１】
本発明の一態様では、ＣＸＣＲ４機能または発現に関連した障害を検出、診断、および／または監視する方法であって、（ｉ）ＣＸＣＲ４機能または発現に関連した障害を有すると疑われる患者から生体試料を得るステップと、（ｉｉ）試験される試料を抗体またはその抗原結合部分と、抗体とタンパク質抗原ＣＸＣＲ４との間の複合体の形成を可能にする条件下で接触させるステップと、（ｉｉｉ）前記抗体−タンパク質抗原複合体を検出するステップであって、検出される前記抗体−タンパク質抗原複合体の存在が、前記患者がＣＸＣＲ４機能または発現に関連した障害を有することを示す、ステップとを含む、方法が提供される。本発明の特定の態様では、本方法は、患者に、治療有効量の本明細書に記載の抗体のいずれか１つの単離抗体、抗原結合断片、または抗体−薬剤コンジュゲートを投与するステップをさらに含む。
【０３５２】
本発明のいくつかの態様では、ＡＤＣは、化合物（例えば、治療剤、標識、細胞毒、放射性毒、免疫抑制剤など）を、このような化合物を抗体またはその断片に連結することによって、ＣＸＣＲ４細胞表面受容体を有する細胞に向けるのに使用することができる。したがって、本発明のいくつかの態様では、ＣＸＣＲ４を発現する細胞をｅｘ−ｖｉｖｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏでローカライズするための方法が提供される（例えば、検出可能標識、例えば、放射性同位体、蛍光化合物、および酵素など）。代わりに、ＡＤＣは、細胞毒または放射性毒をＣＸＣＲ４に向けることによって、ＣＸＣＲ４細胞表面受容体を有する細胞を殺すのに使用することができる。
【０３５３】
本発明のいくつかの態様では、本明細書に記載の方法は、追加の形態の療法で対象を治療するステップをさらに含む。いくつかの態様では、追加の形態の療法は、それだけに限らないが、化学療法、放射線、手術、ホルモン療法、および／または追加の免疫療法を含めた追加の抗がん療法である。
【０３５４】
本発明のいくつかの態様では、療法の追加の形態は、本明細書に記載の抗ＣＸＣＲ４抗体、その抗原結合断片、または抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲートに加えて、１種または複数の治療剤を投与するステップを含む。治療剤としては、それだけに限らないが、第２抗体（例えば、抗ＶＥＧＦ抗体、抗ＨＥＲ２抗体、抗ＣＤ２５抗体、および／または抗ＣＤ２０抗体）、血管新生阻害剤、細胞毒性剤、抗炎症剤（例えば、パクリタキセル、ドセタキセル、シスプラチン、ドキソルビシン、プレドニゾン、マイトマイシン、プロゲステロン、タモキシフェン、またはフルオロウラシル）がある。一態様では、療法の追加の形態は、本明細書に記載の抗ＣＸＣＲ４抗体、その抗原結合断片、または抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲートと同時に、または順次、または同時的に投与することができる。
【０３５５】
本発明の抗ＣＸＣＲ４抗体、その抗原結合断片、または抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲートは、任意の適当な経路を介して個体に投与することができる。本明細書に記載の例は、利用可能な技法を限定するように意図されておらず、例示するものであるように意図されていることが当業者によって理解されるべきである。したがって、本発明のいくつかの態様では、抗ＣＸＣＲ４抗体、その抗原結合断片、または抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲートは、公知の方法、例えば、ボーラスのような静脈内投与、またはある時間にわたる持続注入によるもの、筋肉内、腹腔内、脳脊髄内、頭蓋内、経皮、皮下、関節内、舌下、滑液包内や、ガス注入を介した、クモ膜下、経口、吸入、または局部的の経路によるものなどに合わせて個体に投与される。投与は、全身的、例えば、静脈内投与であっても、局在的であってもよい。ジェット噴霧器および超音波噴霧器を含めた液体製剤用市販噴霧器は、投与に有用である。液体製剤を直接噴霧することができ、凍結乾燥粉末を再構成後に噴霧することができる。代わりに、抗ＣＸＣＲ４抗体、その抗原結合断片、または抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲートは、フルオロカーボン製剤および定量吸入器を使用してエアロゾル化することができ、凍結乾燥し、粉砕した粉末として吸入することができる。本発明のいくつかの態様では、抗ＣＸＣＲ４抗体、その抗原結合断片、または抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲートは、本明細書に記載するように、吸入を介して投与することができる。他の態様では、本発明の抗ＣＸＣＲ４抗体、その抗原結合断片、または抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲートは、薬学的に許容できるビヒクル、例えば、生理食塩水、リンガー液、デキストロース溶液などと組み合わせることができる。特定の投薬レジメン、すなわち、用量、タイミング、および繰り返しは、特定の個体およびその個体の病歴に依存する。
【０３５６】
一態様では、抗ＣＸＣＲ４抗体、その抗原結合断片、または抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲートは、部位特異的、または標的化局所的送達技法を介して投与される。部位特異的、または標的化局所的送達技法の例としては、抗ＣＸＣＲ４抗体、その抗原結合断片、または抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲートの様々な移植可能なデポー源、または局所的送達カテーテル、例えば、注入カテーテル、留置カテーテル、もしくはニードルカテーテルなど、合成移植片、外膜ラップ、シャントおよびステントもしくは他の埋め込み型デバイス、部位特異的担体、直接注入、または直接塗布がある。例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ００／５３２１１号および米国特許第５，９８１，５６８号を参照。
【０３５７】
抗ＣＸＣＲ４抗体、その抗原結合断片、または抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲートの様々な製剤が投与のために使用され得る。本発明のいくつかの態様では、抗ＣＸＣＲ４抗体（その抗原結合断片、または抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲート）および薬学的に許容できる賦形剤が様々な製剤中に存在し得る。本発明のいくつかの製剤は、薬学的に許容できる賦形剤を含む。薬学的に許容できる賦形剤は、当技術分野で公知であり、薬理学的に有効な物質の投与を促進する相対的に不活性な物質である。例えば、賦形剤は、形態もしくは粘稠度を与え、または希釈剤として作用することができる。適当な賦形剤としては、それだけに限らないが、安定化剤、湿潤剤および乳化剤、モル浸透圧濃度を変更するための塩、封入剤、緩衝剤、および皮膚浸透エンハンサーがある。非経口および非腸管外の（ｎｏｎｐａｒｅｎｔｅｒａｌ）薬物送達用賦形剤および製剤は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ、Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、２０版、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ、２０００に示されている。
【０３５８】
一般に、抗ＣＸＣＲ４抗体、その抗原結合断片、および／または抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲートを投与するために、最初の候補投与量を約２ｍｇ／ｋｇとすることができる。本発明の目的に関して、一般的な１日投与量は、上述した要因に応じて、約３μｇ／ｋｇ〜約３０μｇ／ｋｇ〜約３００μｇ／ｋｇ〜約３ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇまたはそれ以上のいずれかの範囲となり得る。例えば、約１ｍｇ／ｋｇ、約２．５ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、および約２５ｍｇ／ｋｇの投与量を使用することができる。状態に応じて数日間またはそれ以上にわたって投与を繰り返すことに関して、治療は、症状の所望の抑制が起こるまで、または例えば、腫瘍増殖／進行もしくはがん細胞の転移を阻害し、もしくは遅延させるのに十分な治療レベルが実現されるまで持続される。例示的な投薬レジメンは、抗ＣＸＣＲ４抗体、その抗原結合断片、または抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲートの約２ｍｇ／ｋｇの初期用量、その後の約１ｍｇ／ｋｇの毎週の維持用量、またはその後の１週間おきの約１ｍｇ／ｋｇの維持用量の投与を含む。他の例示的な投薬レジメンは、漸増用量（例えば、１ｍｇ／ｋｇの初期用量、および１週間またはそれより長い時間おきに１回または複数のより高い用量への段階的増加）の投与を含む。他の投薬レジメンも、開業医が実現するように望む薬物動態学的減衰のパターンに応じて有用であり得る。例えば、いくつかの態様では、１週間に１〜４回の投薬が企図されている。他の態様では、１カ月に１回、または隔月もしくは３ヶ月毎に１回の投薬が企図されている。この療法の進行は、慣例的な技法およびアッセイによって容易に監視される。投薬レジメン（使用される抗ＣＸＣＲ４抗体、その抗原結合断片、または抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲートを含む）は、経時的に変更することができる。
【０３５９】
本発明の目的に関して、抗ＣＸＣＲ４抗体、その抗原結合断片、または抗ＣＸＣＲ４抗体コンジュゲートの適切な投与量は、使用される抗ＣＸＣＲ４抗体、その抗原結合断片、またはＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲート（またはその組成物）、治療される症状のタイプおよび重症度、作用物質が治療目的に投与されるか否か、以前の療法、患者の病歴および作用物質に対する応答、投与される作用物質の患者のクリアランス速度、ならびに主治医の自由裁量に依存する。一般に、臨床医は、抗ＣＸＣＲ４抗体、その抗原結合断片、または抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲートを、投与量が所望の結果を実現するものに到達するまで投与する。用量および／または頻度は、治療の過程にわたって変更することができる。半減期などの経験的な考慮事項は一般に、投与量の決定に寄与する。例えば、ヒト免疫系と適合した抗体、例えば、ヒト化抗体または完全ヒト抗体などを、抗体の半減期を延ばし、抗体が宿主の免疫系によって攻撃されるのを防止するために使用することができる。投与の頻度は、療法の過程にわたって決定および調整することができ、症状の治療および／または抑制および／または緩和および／または遅延、例えば、腫瘍増殖阻害または遅延などに必ずではないが一般に基づく。代わりに、抗ＣＸＣＲ４抗体、その抗原結合断片、または抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲートの持続的連続的放出製剤が適切となり得る。徐放を実現するための様々な製剤およびデバイスが当技術分野で公知である。
【０３６０】
本発明のいくつかの態様では、抗ＣＸＣＲ４抗体、その抗原結合断片、または抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲートの投与量は、抗ＣＸＣＲ４抗体、その抗原結合断片、またはその抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲートの１つまたは複数の投与を与えられた個体において経験的に決定され得る。個体は、抗ＣＸＣＲ４抗体、その抗原結合断片、または抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲートの漸増投与量を与えられる。有効性を評価するために、疾患の指標をフォローすることができる。
【０３６１】
本発明の方法による抗ＣＸＣＲ４抗体、その抗原結合断片、または抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲートの投与は、例えば、レシピエントの生理的条件、投与の目的が治療的であるか、または予防的であるか、および熟練した開業医に公知の他の要因に応じて、連続的であっても、断続的であってもよい。抗ＣＸＣＲ４抗体、その抗原結合断片、または抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲートの投与は、予め選択された時間にわたって本質的に連続的であってもよく、または間隔を置いた一連の投薬におけるものであってもよい。
【０３６２】
本発明のいくつかの態様では、１種を超える抗ＣＸＣＲ４抗体、その抗原結合断片、または抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲートが存在する場合がある。少なくとも１種、少なくとも２種、少なくとも３種、少なくとも４種、少なくとも５種の異なる、またはそれ超の抗ＣＸＣＲ４抗体、その抗原結合断片、または抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲートが存在し得る。一般に、これらの抗ＣＸＣＲ４抗体、その抗原結合断片、または抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲートは、互いに悪影響しない相補的な活性を有し得る。例えば、以下の抗ＣＸＣＲ４抗体の１種または複数を使用することができる：ＣＸＣＲ４上の１つのエピトープに向けられた第１の抗ＣＸＣＲ４抗体およびＣＸＣＲ４上の異なるエピトープに向けられた第２の抗ＣＸＣＲ４抗体。
【０３６３】
本発明によって使用される抗ＣＸＣＲ４抗体、その抗原結合断片、または抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲートの治療製剤は、凍結乾燥製剤または水性液剤の形態で、所望の程度の純度を有する抗体を、任意選択の薬学的に許容できる担体、賦形剤、または安定剤（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ、Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、２１版、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ、２００５）と混合することによって、貯蔵用に調製することができる。許容できる担体、賦形剤、または安定剤は、使用される投与量および濃度でレシピエントに無毒性であり、緩衝剤、例えば、リン酸塩、クエン酸塩、および他の有機酸など；塩化ナトリウムなどの塩；アスコルビン酸およびメチオニンを含めた抗酸化剤；防腐剤（オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチル、もしくはベンジルアルコール；アルキルパラベン、例えば、メチルもしくはプロピルパラベンなど；カテコール；レソルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；およびｍ−クレゾールなど）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；タンパク質、例えば、血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリンなど；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；アミノ酸、例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、もしくはリシンなど；グルコース、マンノース、もしくはデキストリンを含めた単糖、二糖、および他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート化剤；糖、例えば、スクロース、マンニトール、トレハロース、もしくはソルビトールなど；ナトリウムなどの塩形成対イオン；金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質錯体）；ならびに／または非イオン性界面活性剤、例えば、ＴＷＥＥＮ（商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）、もしくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などを含むことができる。
【０３６４】
抗ＣＸＣＲ４抗体、その抗原結合断片、または抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲートを含有するリポソームは、Ｅｐｓｔｅｉｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８２：３６８８（１９８５）；Ｈｗａｎｇら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、７７：４０３０（１９８０）；ならびに米国特許第４，４８５，０４５号、および同第４，５４４，５４５号に記載されたものなどの、当技術分野で公知の方法によって調製される。循環時間が増強されたリポソームは、米国特許第５，０１３，５５６号に開示されている。特に有用なリポソームは、ホスファチジルコリン、コレステロール、およびＰＥＧ−誘導体化ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥＧ−ＰＥ）を含む脂質組成物を用いて、逆相蒸発法によって生成することができる。リポソームは、所望の直径を有するリポソームを生じるように、規定孔サイズのフィルターを通して押し出される。
【０３６５】
活性成分は、コロイド薬物送達システム（例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子、およびナノカプセル）内で、またはマクロエマルジョン内で、例えば、コアセルベーション技法によって、または界面重合によって調製されるマイクロカプセル、例えば、それぞれ、ヒドロキシメチルセルロースもしくはゼラチン−マイクロカプセル、およびポリ−（メチルメタクリレート）マイクロカプセル中に封入することもできる。このような技法は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ、Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、２１版、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ、２００５に開示されている。
【０３６６】
徐放配合物を調製することができる。徐放配合物の適当な例には、抗体を含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスが含まれ、これらのマトリックスは、造形品、例えば、フィルムまたはマイクロカプセルの形態にある。徐放マトリックスの例としては、ポリエステル、ヒドロゲル（例えば、ポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリレート）、またはポリ（ビニルアルコール））、ポリラクチド（米国特許第３，７７３，９１９号）、Ｌ−グルタミン酸と７エチル−Ｌ−グルタメートのコポリマー、非分解性エチレン−酢酸ビニル、分解性乳酸−グリコール酸コポリマー、例えば、ＬＵＰＲＯＮ  ＤＥＰＯＴ（商標）（乳酸−グリコール酸コポリマーおよび酢酸ロイプロリドから構成される注射用ミクロスフェア）など、スクロースアセテートイソブチレート、およびポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸がある。
【０３６７】
ｉｎ  ｖｉｖｏ投与に使用される製剤は、滅菌されていなければならない。これは、例えば、滅菌濾過膜を通す濾過によって容易に達成される。治療用抗ＣＸＣＲ４抗体、その抗原結合断片、または抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲート組成物は一般に、滅菌したアクセスポートを有する容器、例えば、皮下注射針で穿孔可能なストッパーを有する静脈注射用溶液バッグまたはバイアル内に入れられる。
【０３６８】
本発明による組成物は、経口、非経口もしくは直腸投与、または吸入もしくはガス注入による投与のための単位剤形、例えば、錠剤、丸剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、液剤もしくは懸濁剤、または坐剤などであり得る。
【０３６９】
錠剤などの固体組成物を調製するために、主な活性成分は、薬学的担体、例えば、慣例的な錠剤化成分、例えば、コーンスターチ、ラクトース、スクロース、ソルビトール、タルク、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、リン酸二カルシウム、またはガムなど、および他の薬学的希釈剤、例えば、水と混合されて、本発明の化合物、または無毒性の薬学的に許容できるその塩の均質な混合物を含有する固体予備製剤組成物が形成される。これらの予備製剤組成物が均質であるという場合、活性成分が組成物全体にわたって均等に分散されており、その結果、組成物が同様に有効な単位剤形、例えば、錠剤、丸剤、およびカプセル剤などに容易にさらに分割され得ることを意味する。次いで、この固体予備製剤組成物は、０．１〜約５００ｍｇの本発明の活性成分を含有する上述したタイプの単位剤形にさらに分割される。新規組成物の錠剤または丸剤は、持続性作用の利点をもたらす剤形を提供するために、被覆または他の方法で調合することができる。例えば、錠剤または丸剤は、内側投与および外側投与コンポーネントを含むことができ、後者は、前者の上の外被の形態である。２つのコンポーネントは、胃内での崩壊に耐える機能を果たし、内側コンポーネントがインタクトで十二指腸内に入り、または放出が遅延されることを可能にする腸溶性層によって分離することができる。様々な材料を、このような腸溶性層または被覆に使用することができ、このような材料には、多数のポリマー酸ならびにシェラック、セチルアルコール、および酢酸セルロースのような材料とのポリマー酸の混合物が含まれる。
【０３７０】
適当な表面活性剤としては、特に、非イオン性剤、例えば、ポリオキシエチレンソルビタン（例えば、Ｔｗｅｅｎ（商標）２０、４０、６０、８０、または８５）、および他のソルビタン（例えば、Ｓｐａｎ（商標）２０、４０、６０、８０、または８５）などがある。表面活性剤を含む組成物は、好都合には、０．０５〜５％の間の表面活性剤を含むことになり、０．１〜２．５％の間であり得る。必要であれば、他の成分、例えば、マンニトールまたは他の薬学的に許容できるビヒクルを添加することができることが理解されるであろう。
【０３７１】
適当なエマルジョンは、市販の脂肪エマルジョン、例えば、Ｉｎｔｒａｌｉｐｉｄ（商標）、Ｌｉｐｏｓｙｎ（商標）、Ｉｎｆｏｎｕｔｒｏｌ（商標）、Ｌｉｐｏｆｕｎｄｉｎ（商標）、およびＬｉｐｉｐｈｙｓａｎ（商標）などを使用して調製することができる。活性成分を、予備混合エマルジョン組成物中に溶解させることができ、または代わりに、活性成分を、油（例えば、ダイズ油、サフラワー油、綿実油、ゴマ油、トウモロコシ油、または扁桃油）、ならびにリン脂質（例えば、卵リン脂質、ダイズリン脂質、またはダイズレシチン）および水と混合して形成されたエマルジョン中に溶解させることができる。エマルジョンの張性を調整するために、他の成分、例えば、グリセロールまたはグルコースを添加してもよいことが理解されるであろう。適当なエマルジョンは一般に、最大２０％の油、例えば、５〜２０％の間の油を含有することになる。脂肪エマルジョンは、０．１〜１．０μｍ、特に０．１〜０．５μｍの間の脂肪滴を含み、５．５〜８．０の範囲内のｐＨを有することができる。
【０３７２】
エマルジョン組成物は、抗ＣＸＣＲ４抗体、その抗原結合断片、または抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲートをＩｎｔｒａｌｉｐｉｄ（商標）またはそのコンポーネント（ダイズ油、卵リン脂質、グリセロール、および水）と混合することによって調製されるものであり得る。
【０３７３】
吸入またはガス注入用組成物は、薬学的に許容できる水性溶媒もしくは有機溶媒、またはこれらの混合物中の溶液および懸濁液、ならびに粉末を含む。液体または固体組成物は、上記に示した適当な薬学的に許容できる賦形剤を含有し得る。本発明のいくつかの態様では、組成物は、局所的または全身的効果のために、経口呼吸経路または鼻呼吸経路によって投与される。好ましくは滅菌した薬学的に許容できる溶媒中の組成物は、ガスを使用して霧状化することができる。霧状化溶液は、噴霧器から直接吸い込むことができ、または噴霧器をフェイスマスク、テント、もしくは間欠的陽圧呼吸機に取り付けてもよい。溶液、懸濁液、または粉末組成物は、適切な様式で製剤を送達するデバイスから、好ましくは経口的または経鼻的に投与することができる。
【０３７４】
組成物
本発明の方法で使用される組成物は、有効量の本明細書に記載の抗ＣＸＣＲ４抗体、その抗原結合断片、または抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲートを含む。このような組成物の例および製剤化方法は、先のセクションおよび以下にも記載されている。本発明のいくつかの態様では、組成物は、１種または複数の抗ＣＸＣＲ４抗体、その抗原結合断片、または抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲートを含む。例えば、抗ＣＸＣＲ４抗体は、ヒトＣＸＣＲ４を認識する。いくつかの態様では、ＣＸＣＲ４抗体は、ヒト抗体、ＣＤＲ移植抗体、ヒト化抗体、またはキメラ抗体である。他の態様では、抗ＣＸＣＲ４抗体は、所望の免疫応答、例えば、抗体媒介溶解またはＡＤＣＣなどを誘発することができる定常領域を含む。さらに他の態様では、抗ＣＸＣＲ４抗体は、望まれない、または望ましくない免疫応答、例えば、抗体媒介溶解またはＡＤＣＣなどを誘発しない定常領域を含む。本発明のいくつかの態様では、抗ＣＸＣＲ４抗体は、本明細書に記載の抗ＣＸＣＲ４抗体、またはその抗ＣＸＣＲ４もしくは抗原結合断片の１つまたは複数のＣＤＲ（１、２、３、４、５、または一部の実施形態では、６つすべてのＣＤＲなど）を含む。
【０３７５】
組成物は、１種を超える抗ＣＸＣＲ４抗体、その抗原結合断片、または抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲート（例えば、ＣＸＣＲ４の異なるエピトープを認識する抗ＣＸＣＲ４抗体の混合物）を含み得ることが理解される。他の例示的な組成物は、同じエピトープ（複数可）を認識する１種を超える抗ＣＸＣＲ４抗体、その抗原結合断片、もしくは抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲート、またはＣＸＣＲ４（例えば、ヒトＣＸＣＲ４）の異なるエピトープに結合する抗ＣＸＣＲ４抗体、その抗原結合断片、もしくは抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲートの異なる種を含む。
【０３７６】
本発明で使用される組成物は、凍結乾燥製剤または水性液剤の形態で、薬学的に許容できる担体、賦形剤、または安定剤（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ、Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、２１版、２００５、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ａｎｄ  Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｅｄ．Ｋ．Ｅ．Ｈｏｏｖｅｒ）をさらに含むことができる。許容できる担体、賦形剤、または安定剤は、投与量および濃度でレシピエントに無毒性であり、緩衝剤、例えば、リン酸塩、クエン酸塩、および他の有機酸など；アスコルビン酸およびメチオニンを含めた抗酸化剤；防腐剤（オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチル、もしくはベンジルアルコール；アルキルパラベン、例えば、メチルもしくはプロピルパラベンなど；カテコール；レソルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；およびｍ−クレゾールなど）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；タンパク質、例えば、血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリンなど；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；アミノ酸、例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、もしくはリシンなど；グルコース、マンノース、もしくはデキストランを含めた単糖、二糖、および他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート化剤；糖、例えば、スクロース、マンニトール、トレハロース、もしくはソルビトールなど；ナトリウムなどの塩形成対イオン；金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質錯体）；ならびに／または非イオン性界面活性剤、例えば、ＴＷＥＥＮ（商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）、もしくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などを含むことができる。薬学的に許容できる賦形剤は、本明細書でさらに記載されている。
【０３７７】
キット
本発明は、本方法で使用するためのキットも提供する。本発明のキットは、本明細書に記載の抗ＣＸＣＲ４抗体、その抗原結合断片、または抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲートを含む１つまたは複数の容器、および本明細書に記載の本発明の方法のいずれかに従って使用するための指示書を含む。一般に、これらの指示書は、上述した治療的処置のための抗ＣＸＣＲ４抗体、その抗原結合断片、または抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲートの投与の記述を含む。
【０３７８】
本明細書に記載の抗ＣＸＣＲ４抗体、その抗原結合断片、または抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲートの使用に関する指示書は、一般に、意図された治療のための投与量、投薬スケジュール、および投与経路に関する情報を含む。容器は、単位用量、バルクパッケージ（例えば、マルチドーズパッケージ）、またはサブユニット用量のものであり得る。本発明のキット内に供給される指示書は、一般に、ラベルまたは添付文書（例えば、キット内に含まれる紙シート）での書面による指示書であるが、機械可読な指示書（例えば、磁気または光記憶ディスクで携帯される指示書）も許容できる。
【０３７９】
本発明のキットは、適当な包装内にある。適当な包装としては、それだけに限らないが、バイアル、ボトル、広口瓶、フレキシブル包装（例えば、密封されたマイラーバッグまたはビニール袋）などがある。特定のデバイス、例えば、吸入器、経鼻投与デバイス（例えば、アトマイザ）、またはミニポンプなどの注入デバイスなどと組み合わせて使用するためのパッケージも企図されている。キットは、滅菌したアクセスポートを有することができる（例えば、容器は皮下注射針で穿孔可能なストッパーを有する静脈注射用溶液バッグまたはバイアルであり得る）。容器も、滅菌したアクセスポートを有することができる（例えば、容器は皮下注射針で穿孔可能なストッパーを有する静脈注射用溶液バッグまたはバイアルであり得る）。組成物中の少なくとも１種の活性剤は、抗ＣＸＣＲ４抗体である。容器は、第２医薬活性剤をさらに含むことができる。
【０３８０】
キットは、追加のコンポーネント、例えば、緩衝液および解釈情報などを任意選択により提供することができる。通常、キットは、容器、および容器上の、またはこれに付随したラベルまたは添付文書（複数可）を含む。
【０３８１】
突然変異および修飾
本発明の抗ＣＸＣＲ４抗体またはその抗原結合断片を発現させるために、ＶＨおよびＶＬ領域をコードするＤＮＡ断片を、上述した方法のいずれかを使用して最初に得ることができる。様々な修飾、例えば、突然変異、置換、欠失、および／または付加も、当業者に公知の標準方法を使用して、ＤＮＡ配列中に導入することができる。例えば、突然変異誘発は、ＰＣＲ媒介突然変異誘発などの標準方法を使用して実施することができ、ＰＣＲ媒介突然変異誘発では、突然変異したヌクレオチドがＰＣＲプライマー中に組み込まれ、その結果、ＰＣＲ産物が所望の突然変異または部位特異的突然変異誘発を含有する。
【０３８２】
行うことができる１つのタイプの置換は、例えば、別の残基、例えば、限定することなく、アラニンまたはセリンなどに化学反応性であり得る、抗体中の１つまたは複数のシステインを変更することである。例えば、非カノニカルシステインの置換が存在し得る。置換は、可変ドメインのＣＤＲもしくはフレームワーク領域内、または抗体の定常領域内で行うことができる。本発明のいくつかの態様では、システインは、カノニカルである。
【０３８３】
抗体は、例えば、抗体の結合性を変更するために、例えば、重鎖および／または軽鎖の可変ドメイン内で修飾することもできる。例えば、ＣＸＣＲ４に対する抗体のＫＤを増減し、ｋｏｆｆを増減し、または抗体の結合特異性を変更するために、ＣＤＲ領域の１つまたは複数内で突然変異を行うことができる。部位特異的突然変異誘発における技法は、当技術分野で周知である。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、およびＡｕｓｕｂｅｌら、上記を参照。
【０３８４】
修飾または突然変異をフレームワーク領域または定常領域内で行って、抗ＣＸＣＲ４抗体の半減期を延ばすこともできる。例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ００／０９５６０号を参照。フレームワーク領域または定常領域内での突然変異を行って、抗体の免疫原性を変更し、別の分子への共有結合性もしくは非共有結合性結合のための部位を提供し、または補体結合、ＦｃＲ結合、および抗体依存性細胞媒介性細胞傷害などの性質を変更することもできる。本発明によれば、単一抗体は、可変ドメインのＣＤＲもしくはフレームワーク領域の任意の１つまたは複数内、または定常領域内に突然変異を有することができる。
【０３８５】
「生殖系列化（ｇｅｒｍｌｉｎｉｎｇ）」として公知のプロセスでは、ＶＨおよびＶＬ配列中のある特定のアミノ酸を突然変異させて、生殖系列ＶＨおよびＶＬ配列中に天然に見つかるものとマッチさせることができる。特に、抗体が投与されるときの免疫原性のリスクを低減するために、ＶＨおよびＶＬ配列中のフレームワーク領域のアミノ酸配列を突然変異させて、生殖系列配列とマッチさせることができる。ヒトＶＨおよびＶＬ遺伝子についての生殖系列ＤＮＡ配列は、当技術分野で公知である（例えば、「Ｖｂａｓｅ」ヒト生殖系列配列データベースを参照；Ｋａｂａｔ、Ｅ．Ａ．ら（１９９１）、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、５版、Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、ＮＩＨ刊行物番号９１−３２４２；Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２７：７７６〜７９８（１９９２）；およびＣｏｘら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２４：８２７〜８３６（１９９４）も参照。
【０３８６】
行うことができる別のタイプのアミノ酸置換は、抗体中の潜在的なタンパク質分解部位を除去することである。このような部位は、可変ドメインのＣＤＲもしくはフレームワーク領域内または抗体の定常領域内に存在し得る。システイン残基を置換し、タンパク質分解部位を除去すると、抗体生成物中の不均質性のリスクを減少させ、したがってその均質性を増大させることができる。別のタイプのアミノ酸置換は、潜在的なアミド分解部位を形成するアスパラギン−グリシン対を、これらの残基の一方または両方を変更することによって排除することである。別の例では、本発明の抗ＣＸＣＲ４抗体の重鎖のＣ末端リシンを切断することができる。本発明の様々な態様では、抗ＣＸＣＲ４抗体の重鎖および軽鎖は、シグナル配列を任意選択により含む場合がある。
【０３８７】
本発明のＶＨおよびＶＬセグメントをコードするＤＮＡ断片が得られた後、これらのＤＮＡ断片を、標準的な組換えＤＮＡ技法によってさらに操作して、例えば、可変領域遺伝子を全長抗体鎖遺伝子、Ｆａｂ断片遺伝子、またはｓｃＦｖ遺伝子に変換することができる。これらの操作では、ＶＬまたはＶＨコードＤＮＡ断片は、抗体定常領域などの別のタンパク質をコードする別のＤＮＡ断片、または可動性リンカーに作動可能に連結される。用語「作動可能に連結した」は、本脈絡において使用する場合、２つのＤＮＡ断片によってコードされるアミノ酸配列がインフレームのままであるように２つのＤＮＡ断片が接合されていることを意味するように意図されている。
【０３８８】
ＶＨ領域をコードする単離ＤＮＡは、ＶＨコードＤＮＡを、重鎖定常領域（ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３）をコードする別のＤＮＡ分子に作動可能に連結することによって、完全長重鎖遺伝子に変換することができる。ヒト重鎖定常領域遺伝子の配列は、当技術分野で公知であり（例えば、Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．ら、１９９１、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、５版、Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、ＮＩＨ刊行物番号９１−３２４２を参照）、これらの領域を包含するＤＮＡ断片は、標準的なＰＣＲ増幅によって得ることができる。重鎖定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、またはＩｇＤ定常領域とすることができるが、最も好ましくはＩｇＧ１またはＩｇＧ２定常領域である。ＩｇＧ定常領域配列は、異なる個体の中で存在することが知られている様々な対立遺伝子またはアロタイプ、例えば、Ｇｍ（１）、Ｇｍ（２）、Ｇｍ（３）、およびＧｍ（１７）などのいずれかであり得る。これらのアロタイプは、ＩｇＧ１定常領域中の天然に存在するアミノ酸置換を代表する。Ｆａｂ断片重鎖遺伝子に関して、ＶＨコードＤＮＡは、重鎖ＣＨ１定常領域のみをコードする別のＤＮＡ分子に作動可能に連結することができる。ＣＨ１重鎖定常領域は、重鎖遺伝子のいずれかに由来し得る。
【０３８９】
ＶＬ領域をコードする単離ＤＮＡは、ＶＬコードＤＮＡを軽鎖定常領域、ＣＬをコードする別のＤＮＡ分子に作動可能に連結することによって、完全長軽鎖遺伝子（およびＦａｂ軽鎖遺伝子）に変換することができる。ヒト軽鎖定常領域遺伝子の配列は、当技術分野で公知であり（例えば、Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．ら、１９９１、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、５版、Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、ＮＩＨ刊行物番号９１−３２４２を参照）、これらの領域を包含するＤＮＡ断片は、標準的なＰＣＲ増幅によって得ることができる。軽鎖定常領域は、κまたはλ定常領域とすることができる。κ定常領域は、異なる個体の中で存在することが知られている様々な対立遺伝子、例えば、Ｉｎｖ（１）、Ｉｎｖ（２）、およびＩｎｖ（３）のいずれかであり得る。λ定常領域は、３種のλ遺伝子のいずれかに由来し得る。
【０３９０】
ｓｃＦｖ遺伝子を作り出すために、ＶＨおよびＶＬコードＤＮＡ断片は、可動性リンカーをコードする、例えば、アミノ酸配列（Ｇｌｙ４−Ｓｅｒ）３、（配列番号８０）をコードする別の断片に、ＶＨおよびＶＬ配列が、ＶＬおよびＶＨ領域が可動性リンカーによって接合された連続した単鎖タンパク質として発現され得るように作動可能に連結される（例えば、Ｂｉｒｄら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４２：４２３〜４２６（１９８８）；Ｈｕｓｔｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８５：５８７９〜５８８３（１９８８）；ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２〜５５４（１９９０）を参照）。単鎖抗体は、単一のＶＨおよびＶＬのみが使用される場合、一価であり得、２つのＶＨおよびＶＬが使用される場合、二価であり得、または２つを超えるＶＨおよびＶＬが使用される場合、多価であり得る。ＣＸＣＲ４および別の分子に結合する二重特異性抗体または多価抗体を生成することができる。
【０３９１】
本発明のいくつかの態様では、別のポリペプチドに連結した本発明の抗ＣＸＣＲ４抗体のすべてまたは一部を含む融合抗体またはイムノアドヘシンを作製することができる。他の態様では、抗ＣＸＣＲ４抗体の可変ドメインのみがポリペプチドに連結される。本発明のいくつかの態様では、抗ＣＸＣＲ４抗体のＶＨドメインは、第１ポリペプチドに連結され、一方、抗ＣＸＣＲ４抗体のＶＬドメインは、ＶＨおよびＶＬドメインが互いに相互作用して抗原結合部位を形成することができる様式で第１ポリペプチドと会合する第２ポリペプチドに連結される。他の態様では、ＶＨドメインは、ＶＨおよびＶＬドメインが互いに相互作用することができるように、リンカーによってＶＬドメインから分離される。次いで、ＶＨ−リンカー−ＶＬ抗体は、対象とするポリペプチドに連結される。さらに、２つ（またはそれ以上）の単鎖抗体が互いに連結された融合抗体を作り出すことができる。これは、単一ポリペプチド鎖上に二価もしくは多価抗体を作り出したい場合、または二重特異性抗体を作り出したい場合、有用である。
【０３９２】
本発明のいくつかの態様では、抗ＣＸＣＲ４抗体コード核酸分子を使用して他の修飾抗体を調製することができる。例えば、「カッパボディ」（Ｉｌｌら、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．、１０：９４９〜５７（１９９７））、「ミニボディ」（Ｍａｒｔｉｎら、ＥＭＢＯ  Ｊ．、１３：５３０３〜９（１９９４））、「ダイアボディ」（Ｈｏｌｌｉｇｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９０：６４４４〜６４４８（１９９３））、または「ジャヌシン（Ｊａｎｕｓｉｎ）」（Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒら、ＥＭＢＯ  Ｊ．、１０：３６５５〜３６５９（１９９１）およびＴｒａｕｎｅｃｋｅｒら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ（補遺）、７：５１〜５２（１９９２））を、本明細書の教示に従って、標準的な分子生物学的技法を使用して調製することができる。
【０３９３】
二重特異性抗体または抗原結合断片は、ハイブリドーマの融合、またはＦａｂ’断片の連結を含めた様々な方法によって生成することができる。例えば、Ｓｏｎｇｓｉｖｉｌａｉ＆Ｌａｃｈｍａｎｎ、Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、７９：３１５〜３２１（１９９０）、Ｋｏｓｔｅｌｎｙら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１４８：１５４７〜１５５３（１９９２）を参照。さらに、二重特異性抗体を「ダイアボディ」または「ジャヌシン」として形成することができる。本発明のいくつかの態様では、二重特異性抗体は、ＣＸＣＲ４の２つの異なるエピトープに結合する。いくつかの態様では、上述した修飾抗体は、本明細書に提供される抗ＣＸＣＲ４抗体に由来する可変ドメインまたはＣＤＲ領域の１つまたは複数を使用して調製される。
【０３９４】
一態様では、本発明は、多重特異性抗体（ｍｕｌｉｔｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）の使用を含む。多重特異性抗体は、異なる構造のものである少なくとも２つの標的、例えば、２つの異なる抗原、同じ抗原上の２つの異なるエピトープ、またはハプテンおよび／または抗原もしくはエピトープに同時に結合することができる抗体である。多重特異性、多価抗体は、１つを超える結合部位を有する構築物であり、結合部位は、異なる特異性のものである。
【０３９５】
本発明の代表的な材料は、２０１４年６月１９日にアメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）に寄託した。ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１２１３５３を有するベクターは、ヒト化抗ＣＸＣＲ４抗体重鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドであり、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１２１３５４を有するベクターは、ヒト化抗ＣＸＣＲ４抗体軽鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドである。寄託は、特許手続上の微生物の寄託の国際承認に関するブダペスト条約およびその下の規定（ブダペスト条約）の条項下で行った。これにより、寄託日から３０年間、寄託物の生存培養が保証される。寄託物は、ブダペスト条約の条項、ならびにＰｆｉｚｅｒ，Ｉｎｃ．とＡＴＣＣとの契約の対象であって、関係する米国特許の発行の後、または米国もしくは外国特許出願の公共への公開の後のいずれか早い方に、公共に寄託物の培養の子孫の永続的および非制限的利用可能性を保証し、米国特許法第１２２条およびこれに準じた長官規則（８８６ＯＧ６３８を特に参照して連邦規則法典第３７巻第１．１４条を含む）によって、米国特許商標庁長官が権利を有すると決定したものへの子孫の利用可能性を保証する、契約の対象の下でＡＴＣＣによって利用可能にされることになる。
【０３９６】
本願の代理人は、寄託した材料の培養物が、適当な条件下で培養されたとき、死滅し、または失われ、もしくは破壊された場合、通知された後、材料を別の同じものに即座に置き換えることに同意している。寄託した材料の利用可能性は、任意の政府の権限下でその特許法に従って付与された権利に違反した本発明の実施のライセンスと解釈されるべきでない。
【０３９７】
本発明はまた、ＣＸＣＲ４調節に関連した疾患および状態、例えば、骨髄移植、化学増感、がん、転移性疾患（例えば、がん）、自己免疫疾患（例えば、関節リウマチ）、線維症疾患（例えば、肺）、ＡＩＤＳ感染、心血管疾患、ブドウ膜炎、炎症疾患、セリアック病、ＨＩＶ感染、および幹細胞ベース再生医療などの治療における、これらの抗ＣＸＣＲ４抗体、例えば、全長抗体、これらの抗原結合断片、または抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲート、およびＣＸＣＲ４受容体抗体、例えば、全長抗体またはこれらの抗原結合断片を含む医薬組成物の使用に関する。
【０３９８】
がん
ＣＸＣＲ４受容体は、それだけに限らないが、乳房（Ｍｕｌｌｅｒ，Ａ．ら．Ｎａｔｕｒｅ、４１０：５０〜５６（２００１））；卵巣（Ｓｃｏｔｔｏｎ，Ｃ．ら、Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ、８５：８９１〜８９７（２００１）；前立腺（Ｔａｉｃｈｍａｎ，Ｒ．Ｓ．ら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、６２：１８３２〜１８３７（２００２）；非小細胞肺（Ｓｐａｎｏ  Ｊ．Ｐ．ら、Ａｎｎ．Ｏｎｃｏｌ．、１５：６１３〜６１７（２００４））；膵臓（Ｋｏｓｈｉｂａ，Ｔ．ら、Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、６：３５３０〜３５３５（２０００））；甲状腺（Ｈｗａｎｇ，Ｊ．Ｈ．ら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．、８８：４０８〜４１６（２００３））；上咽頭癌（Ｗａｎｇ，Ｎ．ら、Ｊ．Ｔｒａｎｓｌ．Ｍｅｄ．、３：２６〜３３（２００５））；メラノーマ（Ｓｃａｌａ，Ｓ．ら、Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、１１：１８３５〜１８４１（２００５））；腎細胞癌（Ｓｔａｌｌｅｒ，Ｐ．ら、Ｎａｔｕｒｅ、４２５：３０７〜３１１（２００３））；リンパ腫（Ｂｅｒｔｏｌｉｎｉ，Ｆ．ら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、６２：３５３０〜３５３５（２００２））；神経芽細胞腫（Ｇｅｍｉｎｄｅｒ，Ｈ．ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１６７：４７４７〜４７５７（２００１））；グリア芽細胞腫（Ｒｅｍｐｅｌ，Ｓ．Ａ．ら、Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、６：１０２〜１１１（２０００））；横紋筋肉腫（Ｌｉｂｕｒａ，Ｊ．ら、Ｂｌｏｏｄ、１００：２５９７〜２６０６（２００２））；結腸直腸（Ｚｅｅｌｅｎｂｅｒｇ，Ｉ．Ｓ．ら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、６３：３８３３〜３８３９（２００３））；腎臓（Ｓｃｈｒａｄｅｒ，Ａ．Ｊ．ら、Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ、８６：１２５０〜１２５６（２００２））；骨肉腫（Ｌａｖｅｒｄｉｅｒｅ，Ｃ．ら、Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、１１：２５６１〜２５６７（２００５））；急性リンパ芽球性白血病（Ｃｒａｚｚｏｌａｒａ，Ｒ．ら、Ｂｒ．Ｊ．Ｈａｅｍａｔｏｌ．、１１５：５４５〜５５３（２００１））；および急性骨髄性白血病（Ｒｏｍｂｏｕｔｓ，Ｅ．Ｊ．Ｃ．ら、Ｂｌｏｏｄ、１０４：５５０〜５５７（２００４））を含めた多数のがんにおいて過剰発現される。
【０３９９】
上記を考慮すると、本開示の抗ＣＸＣＲ４抗体、その抗原結合断片、または抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲートを、それだけに限らないが、乳房、卵巣、前立腺、非小細胞肺、膵臓、甲状腺、上咽頭癌、メラノーマ、腎細胞癌、リンパ腫、神経芽細胞腫、グリア芽細胞腫、横紋筋肉腫、結腸直腸、腎臓、骨肉腫、急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、ホジキンリンパ腫、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、濾胞性リンパ腫、ワルデンストレームマクログロブリン血症（ＷＭ）、ならびにＢ細胞リンパ腫およびびまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）を含めたがんの治療において使用することができる。抗体は、単独で、または手術および／もしくは放射線などの他のがん治療と、かつ／または、化学療法薬、およびＣＤ２０、Ｈｅｒ２、ＰＳＭＡ、Ｃａｍｐａｔｈ−１、ＥＧＦＲなどに結合するものなどの他の抗腫瘍抗原抗体を含めた上記に論じ、示した抗新生物剤などの他の抗新生物剤と組み合わせて使用することができる。
【０４００】
いくつかの態様では、本発明の抗ＣＸＣＲ４抗体は、抗ＣＤ２２もしくは抗ＣＤ３３抗体、抗体−薬剤コンジュゲート、またはこのような抗体を含む組成物と組み合わせて使用することができる。例えば、本発明の抗ＣＸＣＲ４抗体は、イノツズマブオゾガマイシンまたはゲムツズマブオゾガマイシン（Ｍｙｌｏｔａｒｇ（登録商標））と組み合わせることができる。
【０４０１】
「組合せ療法」、または１種もしくは複数のさらなる治療剤「と組み合わせた」投与は、同時の、同時的な投与、および任意の順序での連続投与を含む。本発明の複合配合物の構成要素の投与は、同時に、別個に、または順次行うことができる。
【０４０２】
本発明によれば、がんを治療するための方法であって、本発明の抗ＣＸＣＲ４抗体およびイノツズマブオゾガマイシンの同時、同時的、または連続投与を含む、方法が提供される。例えば、抗ＣＸＣＲ４抗体は、イノツズマブオゾガマイシンの前もしくは後、またはそれと同時に投与することができる。さらに、本発明は、ＡＭＬなどのがんを治療するための方法であって、本発明の抗ＣＸＣＲ４抗体およびマイロターグの同時、同時的、または連続投与を含む、方法を本明細書で提供する。例えば、抗ＣＸＣＲ４抗体は、マイロターグの前もしくは後、またはそれと同時に投与することができる。
【０４０３】
抗ＣＸＣＲ４抗体またはその断片は、治療部分および／または診断剤、例えば、細胞毒、薬剤（例えば、免疫抑制剤）、または放射性毒などとコンジュゲートすることができる。このようなコンジュゲートは、抗体−薬剤コンジュゲートと本明細書で呼ばれる。抗体−薬剤コンジュゲートは、１種または複数の細胞毒を含み得る。
【０４０４】
本発明のいくつかの態様では、治療は、本発明の抗ＣＸＣＲ４抗体、その抗原結合断片、または抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲートを、抗体、増殖因子、ホルモン、サイトカイン、抗ホルモン、キサンチン、インターロイキン、インターフェロン、および細胞毒性薬から選択される１種または複数の生物活性剤とともに投与するステップを含む。本発明の特定の態様では、生物活性剤は、抗体であり、Ｂ細胞悪性腫瘍上で発現される細胞表面抗原に向けられている。
【０４０５】
本発明のいくつかの態様では、Ｂ細胞悪性腫瘍上で発現される細胞表面抗原に向けられる抗体は、抗ＣＤ１９、抗ＣＤ２０、および抗ＣＤ３３抗体からなる群から選択される。このような抗体としては、抗ＣＤ２０抗体、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（商標））がある。
【０４０６】
本発明のいくつかの態様では、生物活性剤は、サイトカインまたは増殖因子であり、これらとしては、それだけに限らないが、インターロイキン２（ＩＬ−２）、ＴＮＦ、ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、およびＧ−ＣＳＦがある。本発明の特定の態様では、生物活性剤は、ホルモンであり、これらとしては、エストロゲン、アンドロゲン、プロゲスチン、およびコルチコステロイドがある。
【０４０７】
本発明のいくつかの態様では、薬剤は、ドキソルビシン、ダウノルビシン、イダルビシン、アクラルビシン、ゾルビシン、ミトキサントロン、エピルビシン、カルビシン、ベンダムスチン、ベバシズマブ、ボルテゾミブ、レナリドミド、メルファラン、ノガラマイシン、メノガリル、ピラルビシン、バルルビシン、シタラビン、ゲムシタビン、トリフルリジン、アンシタビン、エノシタビン、アザシチジン、ドキシフルリジン、ペントスタチン、ブロクスウリジン、カペシタビン、クラドリビン、デシタビン、フロクスウリジン、フルダラビン、ゴウゲロチン、ピューロマイシン、テガフール、チアゾフリン、アドリアマイシン、シスプラチン、カルボプラチン、シクロホスファミド、ダカルバジン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ミトキサントロン、ブレオマイシン、メクロレタミン、プレドニゾン、プロカルバジン、メトトレキセート、フルオロウラシル、エトポシド、タキソール、タキソール類似体、およびマイトマイシンから選択される薬剤である。
【０４０８】
本発明のいくつかの態様では、治療有効用量の本発明の抗ＣＸＣＲ４抗体、その断片、または抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲートは、チロシンキナーゼ阻害剤の１種または複数の組合せと一緒に投与される。チロシンキナーゼ阻害剤は、タンパク質および非タンパク質部分の両方を含む。チロシンキナーゼ阻害剤は、例えば、抗体、受容体リガンド、または低分子阻害剤であり得る。本発明の方法で使用するのに適したチロシンキナーゼ阻害剤の例としては、それだけに限らないが、ゲフィチニブ、スニチニブ、エルロチニブ、ラパチニブ、カネルチニブ、セマキシニブ、バタラニブ、ソラフェニブ、イマチニブ、ダサチニブ、レフルノミド、バンデタニブ、これらの誘導体、これらの類似体、およびこれらの組合せがある。本発明で使用するのに適した追加のチロシンキナーゼ阻害剤は、例えば、米国特許第５，６１８，８２９号；同第５，６３９，７５７号；同第５，７２８，８６８号；同第５，８０４，３９６号；同第６，１００，２５４号；同第６，１２７，３７４号；同第６，２４５，７５９号；同第６，３０６，８７４号；同第６，３１３，１３８号；同第６，３１６，４４４号、同第６，３２９，３８０号；同第６，３４４，４５９号；同第６，４２０，３８２号；同第６，４７９，５１２号；同第６，４９８，１６５号；同第６，５４４，９８８号；同第６，５６２，８１８号；同第６，５８６，４２３号；同第６，５８６，４２４号；同第６，７４０，６６５号；同第６，７９４，３９３号；同第６，８７５，７６７号、同第６，９２７，２９３号；および同第６，９５８，３４０号に記載されている。
【０４０９】
いくつかの態様では、治療有効用量の本発明の抗ＣＸＣＲ４抗体、その断片、または抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲートは、治療レジメンの一部としての薬剤の１種または複数の組合せと一緒に投与され、細胞毒性剤の組合せは、ＣＨＯＰＰ（シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、プレドニゾン、およびプロカルバジン）；ＣＨＯＰ（シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、およびプレドニゾン）；ＣＯＰ（シクロホスファミド、ビンクリスチン、およびプレドニゾン）；ＣＡＰ−ＢＯＰ（シクロホスファミド、ドキソルビシン、プロカルバジン、ブレオマイシン、ビンクリスチン、およびプレドニゾン）；ｍ−ＢＡＣＯＤ（メトトレキセート、ブレオマイシン、ドキソルビシン、シクロホスファミド、ビンクリスチン、デキサメタゾン、およびロイコボリン）；ＰｒｏＭＡＣＥ−ＭＯＰＰ（プレドニゾン、メトトレキセート、ドキソルビシン、シクロホスファミド、エトポシド、ロイコボリン、メクロレタミン、ビンクリスチン、プレドニゾン、およびプロカルバジン）；ＰｒｏＭＡＣＥ−ＣｙｔａＢＯＭ（プレドニゾン、メトトレキセート、ドキソルビシン、シクロホスファミド、エトポシド、ロイコボリン、シタラビン、ブレオマイシン、およびビンクリスチン）；ＭＡＣＯＰ−Ｂ（メトトレキセート、ドキソルビシン、シクロホスファミド、ビンクリスチン、プレドニゾン、ブレオマイシン、およびロイコボリン）；ＭＯＰＰ（メクロレタミン、ビンクリスチン、プレドニゾン、およびプロカルバジン）；ＡＢＶＤ（アドリアマイシン／ドキソルビシン、ブレオマイシン、ビンブラスチン、およびダカルバジン）；ＡＢＶ（アドリアマイシン／ドキソルビシン、ブレオマイシン、およびビンブラスチン）と交互してＭＯＰＰ（メクロレタミン、ビンクリスチン、プレドニゾン、およびプロカルバジン）；ＡＢＶＤ（アドリアマイシン／ドキソルビシン、ブレオマイシン、ビンブラスチン、およびダカルバジン）と交互してＭＯＰＰ（メクロレタミン、ビンクリスチン、プレドニゾン、およびプロカルバジン）；ＣｈＩＶＰＰ（クロランブシル、ビンブラスチン、プロカルバジン、およびプレドニゾン）；ＩＭＶＰ−１６（イホスファミド、メトトレキセート、およびエトポシド）；ＭＩＭＥ（メチル−ｇａｇ、イホスファミド、メトトレキセート、およびエトポシド）；ＤＨＡＰ（デキサメタゾン、高用量シタラビン、およびシスプラチン）；ＥＳＨＡＰ（エトポシド、メチルプレドニゾロン、高用量シタラビン、およびシスプラチン）；ＣＥＰＰ（Ｂ）（シクロホスファミド、エトポシド、プロカルバジン、プレドニゾン、およびブレオマイシン）；ＣＡＭＰ（ロムスチン、ミトキサントロン、シタラビン、およびプレドニゾン）；ＣＶＰ−１（シクロホスファミド、ビンクリスチン、およびプレドニゾン）、ＥＳＨＯＰ（エトポシド、メチルプレドニゾロン、高用量シタラビン、ビンクリスチン、およびシスプラチン）；ＥＰＯＣＨ（ボーラス用量のシクロホスファミドおよび経口プレドニゾンとともに９６時間にわたるエトポシド、ビンクリスチン、およびドキソルビシン）、ＩＣＥ（イホスファミド、シクロホスファミド、およびエトポシド）、ＣＥＰＰ（Ｂ）（シクロホスファミド、エトポシド、プロカルバジン、プレドニゾン、およびブレオマイシン）、ＣＨＯＰ−Ｂ（シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、プレドニゾン、およびブレオマイシン）、ＣＥＰＰ−Ｂ（シクロホスファミド、エトポシド、プロカルバジン、およびブレオマイシン）、ならびにＰ／ＤＯＣＥ（エピルビシンまたはドキソルビシン、ビンクリスチン、シクロホスファミド、およびプレドニゾン）から選択される。
【０４１０】
本発明のいくつかの態様では、薬剤は、本明細書に記載の抗ＣＸＣＲ４抗体、その抗原結合断片、または抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲートと同時に、または順次、または同時的に投与することができる。例えば、抗ＣＸＣＲ４抗体、その抗原結合断片、または抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲートは、治療レジメンの一部としての細胞毒性剤の１種または複数の組合せを投与する前に投与することができる。本発明のいくつかの態様では、治療有効用量（ｄｏｅｓ）の抗ＣＸＣＲ４抗体、その抗原結合断片、または抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲートは、治療レジメンの一部としての細胞毒性剤の１種または複数の組合せの投与に続いて投与される。
【０４１１】
本発明のいくつかの態様では、抗ＣＸＣＲ４抗体、その抗原結合断片、または抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲートは、治療レジメンの一部としての細胞毒性剤の１種または複数の組合せと一緒に投与される。
【０４１２】
本発明の抗ＣＸＣＲ４抗体、その抗原結合断片、または抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲートは、非薬剤治療、例えば、手術、放射線療法、化学療法、免疫療法、および食餌／運動レジメンなどと併せて投与することもできる。他の療法は、本発明の抗ＣＸＣＲ４抗体、その抗原結合断片、または抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲートを用いた治療の前、それと同時的に、またはその後に投与される場合がある。異なる治療の投与間に数時間、数日、および一部の場合では数週間の遅延もあり得、その結果、本発明の抗ＣＸＣＲ４抗体、その抗原結合断片、または抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲートが他の治療の前または後に投与される場合がある。
【０４１３】
ＣＸＣＲ４の治療的使用
本発明の様々な態様によれば、抗ＣＸＣＲ４抗体、これらの抗原結合断片、または抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲートは、様々ながん、炎症性障害、アレルギー性障害、感染（ＨＩＶ感染など）、自己免疫障害（例えば、関節リウマチ）、線維症障害（例えば、肺）、および心血管障害を含めた様々な障害を治療し、またはそれを治療する医薬を生産するのに使用することができる。がん障害としては、固形腫瘍がん（例えば、胃、頭頸部、肺、卵巣、および膵臓のがん）、ならびに血液がん（例えば、骨髄異形成症候群、骨髄増殖性障害、および急性白血病）がある。造血障害の例としては、非Ｂ系統由来のもの、例えば、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、非Ｂ細胞急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、骨髄異形成障害、骨髄増殖性障害、赤血球増加症、血小板血症、または非Ｂ非定型免疫性リンパ球増殖などがある。Ｂ細胞またはＢ細胞系統由来障害の例としては、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、Ｂリンパ球系統白血病、多発性骨髄腫、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、前駆体Ｂリンパ芽球性白血病、有毛細胞白血病、または形質細胞障害、例えば、アミロイド症もしくはワルデンストレームマクログロブリン血症がある。
【０４１４】
血液学的障害
血液学的障害は、血液およびすべてのその構成要素の疾患、ならびに血液のすべての構成要素の生成または分解に関与する臓器および組織の疾患を含む。本発明のいくつかの態様では、血液学的障害としては、それだけに限らないが、急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、ホジキンリンパ腫、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、濾胞性リンパ腫、ワルデンストレームマクログロブリン血症（ＷＭ）、Ｂ細胞リンパ腫、およびびまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）がある。ＮＨＬとしては、無痛性非ホジキンリンパ腫（ｉＮＨＬ）または侵攻型非ホジキンリンパ腫（ａＮＨＬ）を挙げることができる。ある特定の態様では、対象は、他の治療から再発され、または難治性である。ある特定の態様では、対象は、少なくとも２つ以上の他の治療から再発され、または難治性である。本発明のいくつかの態様では、対象は、少なくとも３つ以上の他の治療から再発され、または難治性である。本発明のいくつかの態様では、対象は、少なくとも５つ以上の他の治療から再発され、または難治性である。
【０４１５】
本発明は、血液学的障害を治療するための主要な治療用組成物としての抗ＣＸＣＲ４抗体、その抗原結合断片、または抗ＣＸＣＲ抗体を含む抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲートの使用を企図する。このような組成物は、ポリクローナル抗ＣＸＣＲ４またはモノクローナル抗ＣＸＣＲ４抗体を含有し得る。さらに、本発明の治療用組成物は、異なる非ブロッキングＣＸＣＲ４エピトープに向けられたモノクローナル抗ＣＸＣＲ４抗体の混合物、または抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲートの混合物、またはモノクローナル抗ＣＸＣＲ４および抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲートの混合物を含有し得る。
【０４１６】
慢性リンパ球性白血病
ＣＬＬ細胞は、高レベルのＣＸＣＲ４を発現する（Ｂｕｒｇｅｒ  ＪＡ、Ｂｕｒｇｅｒ  Ｍ、Ｋｉｐｐｓ  ＴＪ．、Ｃｈｒｏｎｉｃ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ  ｌｅｕｋｅｍｉａ  Ｂ  ｃｅｌｌｓ  ｅｘｐｒｅｓｓ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ＣＸＣＲ４  ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｔｈａｔ  ｍｅｄｉａｔｅ  ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓ  ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  ｂｅｎｅａｔｈ  ｂｏｎｅ  ｍａｒｒｏｗ  ｓｔｒｏｍａｌ  ｃｅｌｌｓ．、Ｂｌｏｏｄ．、９４：３６５８〜３６６７（１９９９））。本発明は、Ｂ細胞慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）を治療するための主要な治療用組成物としての抗ＣＸＣＲ４抗体、その抗原結合断片、または抗ＣＸＣＲ抗体を含む抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲートの使用を企図する。このような組成物は、ポリクローナル抗ＣＸＣＲ４もしくはモノクローナル抗ＣＸＣＲ４抗体、またはポリクローナル抗ＣＸＣＲ４もしくはモノクローナル抗ＣＸＣＲ４抗体の混合物を含有し得る。さらに、本発明の治療用組成物は、異なる非ブロッキングＣＸＣＲ４エピトープに向けられたモノクローナル抗ＣＸＣＲ４抗体の混合物、または抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲートの混合物、またはモノクローナル抗ＣＸＣＲ４および抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲートの混合物を含有し得る。
【０４１７】
他のＢ細胞リンパ腫
ＣＸＣＲ４発現がＢ細胞（Ｂｕｒｇｅｒら、Ｃｈｒｏｎｉｃ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ  ｌｅｕｋｅｍｉａ  Ｂ  ｃｅｌｌｓ  ｅｘｐｒｅｓｓ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ＣＸＣＲ４  ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｔｈａｔ  ｍｅｄｉａｔｅ  ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓ  ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  ｂｅｎｅａｔｈ  ｂｏｎｅ  ｍａｒｒｏｗ  ｓｔｒｏｍａｌ  ｃｅｌｌｓ．、Ｂｌｏｏｄ．、９４：３６５８〜３６６７（１９９９））、およびＴ細胞（Ｔｒｅｎｔｉｎ  Ｌ、Ａｇｏｓｔｉｎｉ  Ｃ、Ｆａｃｃｏ  Ｍら、Ｔｈｅ  ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ＣＸＣＲ４  ｉｓ  ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ｏｎ  ｍａｌｉｇｎａｎｔ  Ｂ  ｃｅｌｌｓ  ａｎｄ  ｍｅｄｉａｔｅｓ  ｃｈｅｍｏｔａｘｉｓ．、Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．、１０４：１１５〜１２１（１９９９））非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）内で実証された。Ｂ−ＮＨＬを有する患者に由来する悪性Ｂ細胞は、機能的なＣＸＣＲ４受容体を発現する。ケモカイン受容体発現の別個のパターンがリンパ腫細胞輸送およびホーミングに関与していると考えられており、異なるＮＨＬサブセットを区別することを可能にし得る（Ｊｏｎｅｓ  Ｄ、Ｂｅｎｊａｍｉｎ  ＲＪ、Ｓｈａｈｓａｆａｅｉ  Ａ、Ｄｏｒｆｍａｎ  ＤＭ．、Ｔｈｅ  ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ＣＸＣＲ４  ｉｓ  ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ｉｎ  ａ  ｓｕｂｓｅｔ  ｏｆ  Ｂ−ｃｅｌｌ  ｌｙｍｐｈｏｍａｓ  ａｎｄ  ｉｓ  ａ  ｍａｒｋｅｒ  ｏｆ  Ｂ−ｃｅｌｌ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ  ｌｅｕｋｅｍｉａ．、Ｂｌｏｏｄ．、９５：６２７〜６３２（２０００））。動物モデルにおいて、マウスが、細胞質内でＣＸＣＲ４を保持するように遺伝子工学的に改変されたＴ細胞ハイブリドーマ細胞でチャレンジされた。ヒト高悪性度ＮＨＬの別のマウスモデルでは、モノクローナル抗体によってＣＸＣＲ４を中和すると、循環ＮＨＬ細胞のホーミングが阻害され、生存期間が改善され（Ｂｅｒｔｏｌｉｎｉ  Ｆ、Ｄｅｌｌ’Ａｇｎｏｌａ  Ｃ、Ｍａｎｃｕｓｏ  Ｐら、ＣＸＣＲ４  ｎｅｕｔｒａｌｉｚａｔｉｏｎ，  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ａｐｐｒｏａｃｈ  ｆｏｒ  ｎｏｎ−Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ  ｌｙｍｐｈｏｍａ．、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、６２：３１０６〜３１１２（２００２））、したがって、ＮＨＬの新規治療手法としてＣＸＣＲ４中和が示唆された。本発明は、Ｂ細胞慢性Ｂ細胞リンパ腫を治療するための主要な治療用組成物としての抗ＣＸＣＲ４抗体、その抗原結合断片、または抗ＣＸＣＲ４抗体を含む抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲートの使用を企図する。このような組成物は、ポリクローナル抗ＣＸＣＲ４またはモノクローナル抗ＣＸＣＲ４抗体を含有し得る。さらに、本発明の治療用組成物は、異なる非ブロッキングＣＸＣＲ４エピトープに向けられたモノクローナル抗ＣＸＣＲ４抗体の混合物、または抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲートの混合物、またはモノクローナル抗ＣＸＣＲ４および抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲートの混合物を含有し得る。
【０４１８】
多発性骨髄腫におけるＣＸＣＲ４
多発性骨髄腫（ＭＭ）は、形質細胞の大きな不治の新生物によるものである。ケモカイン受容体ＣＸＣＲ４は、患者のＭＭ細胞の大部分によって発現される。これは、骨髄（ＢＭ）コンパートメントへの骨髄腫細胞遊走およびホーミングを促進し、腫瘍細胞生存を支持し、化学療法誘導アポトーシスから骨髄腫細胞を保護する。したがって、ＣＸＣＲ４活性（例えば、アンタゴニスト抗体）を阻害する本発明の抗ＣＸＣＲ４抗体、その抗原結合断片、または抗ＣＸＣＲ抗体を含む抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲートは、多発性骨髄腫などの血液学的障害の治療において使用することができる。さらに、本発明の治療用組成物は、異なる非ブロッキングＣＸＣＲ４エピトープに向けられたモノクローナル抗ＣＸＣＲ４抗体の混合物、または抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲートの混合物、またはモノクローナル抗ＣＸＣＲ４および抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲートの混合物を含有し得る。
【０４１９】
急性白血病におけるＣＸＣＲ４
ＣＸＣＲ４は、骨髄における造血前駆細胞の保持に決定的な役割を果たすので、いくつかのグループが、前駆細胞白血病においてＣＸＣＲ４が果たす役割を検査した。前駆Ｂ細胞急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）は、非肥満糖尿病重症複合免疫不全（ＮＯＤ／ＳＣＩＤ）マウスにおける骨髄への白血病細胞のホーミングに参加する機能的なＣＸＣＲ４受容体を発現する（Ｂｒａｄｓｔｏｃｋ  ＫＦ、Ｍａｋｒｙｎｉｋｏｌａ  Ｖ、Ｂｉａｎｃｈｉ  Ａ、Ｓｈｅｎ  Ｗ、Ｈｅｗｓｏｎ  Ｊ、Ｇｏｔｔｌｉｅｂ  ＤＪ．、Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ  ｓｔｒｏｍａｌ  ｃｅｌｌ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｆａｃｔｏｒ−１  ｏｎ  ｔｈｅ  ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ−Ｂ  ａｃｕｔｅ  ｌｙｍｐｈｏｂｌａｓｔｉｃ  ｌｅｕｋｅｍｉａ  ｃｅｌｌｓ  ｗｉｔｈｉｎ  ｂｏｎｅ  ｍａｒｒｏｗ  ｓｔｒｏｍａｌ  ｌａｙｅｒｓ．、Ｌｅｕｋｅｍｉａ．、１４：８８２〜８８８（２０００））（Ｓｈｅｎ  Ｗ、Ｂｅｎｄａｌｌ  ＬＪ、Ｇｏｔｔｌｉｅｂ  ＤＪ、Ｂｒａｄｓｔｏｃｋ  ＫＦ．、Ｔｈｅ  ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ＣＸＣＲ４  ｅｎｈａｎｃｅｓ  ｉｎｔｅｇｒｉｎ−  ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ａｄｈｅｓｉｏｎ  ａｎｄ  ｆａｃｉｌｉｔａｔｅｓ  ｅｎｇｒａｆｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｌｅｕｋｅｍｉｃ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ−Ｂ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｂｏｎｅ  ｍａｒｒｏｗ．、Ｅｘｐ  Ｈｅｍａｔｏｌ．、２９：１４３９〜１４４７（２００１））。洗練された動物モデルにおいて、Ｓｉｐｋｉｎｓら（Ｓｉｐｋｉｎｓ  ＤＡ、Ｗｅｉ  Ｘ、Ｗｕ  ＪＷら、Ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｉｍａｇｉｎｇ  ｏｆ  ｓｐｅｃｉａｌｉｚｅｄ  ｂｏｎｅ  ｍａｒｒｏｗ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｍｉｃｒｏｄｏｍａｉｎｓ  ｆｏｒ  ｔｕｍｏｕｒ  ｅｎｇｒａｆｔｍｅｎｔ．、Ｎａｔｕｒｅ．、４３５：９６９〜９７３（２００５））は、機能的なＣＸＣＲ４が骨髄微小環境へのＡＬＬ細胞のホーミングに必要であるという直接の証拠を提供した。本発明は、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）を治療するための主要な治療用組成物としての抗ＣＸＣＲ４抗体、その抗原結合断片、または抗ＣＸＣＲ抗体を含む抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲートの使用を企図する。このような組成物は、ポリクローナル抗ＣＸＣＲ４またはモノクローナル抗ＣＸＣＲ４抗体を含有し得る。
【０４２０】
さらに、本発明の治療用組成物は、異なる非ブロッキングＣＸＣＲ４エピトープに向けられたモノクローナル抗ＣＸＣＲ４抗体の混合物、または抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲートの混合物、またはモノクローナル抗ＣＸＣＲ４および抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲートの混合物を含有し得る。
【０４２１】
急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）におけるＣＸＣＲ４
化学療法に対する一般的な感受性にもかかわらず、ＡＭＬにおける長期間無疾患生存期間は低いままであり、理由は、患者の大部分は、微小残存病変（ＭＲＤ）から再発するためである。ＣＸＣＲ４は、抗がん薬耐性の主要因である生存シグナルの中心的制御因子であると思われる。この概念は、白血病細胞によるＣＸＣＲ４の高レベル発現は、ＡＭＬにおける有害な予後の指標であるという知見によって支持されている。Ｓｐｏｏ  ＡＣ、Ｗｉｅｒｄａ  ＷＧ、Ｂｕｒｇｅｒ  ＪＡ．、Ｔｈｅ  ＣＸＣＲ４  ｓｃｏｒｅ：ａ  ｎｅｗ  ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ  ｍａｒｋｅｒ  ｉｎ  ａｃｕｔｅ  ｍｙｅｌｏｇｅｎｏｕｓ  ｌｅｕｋｅｍｉａ［抄録］．、Ｂｌｏｏｄ．、１０４：３０４ａ（２００４）。本発明は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）を治療するための主要な治療用組成物としての抗ＣＸＣＲ４抗体、その抗原結合断片、または抗ＣＸＣＲ抗体を含む抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲートの使用を企図する。このような組成物は、ポリクローナル抗ＣＸＣＲ４またはモノクローナル抗ＣＸＣＲ４抗体を含有し得る。
【０４２２】
さらに、本発明の治療用組成物は、異なる非ブロッキングＣＸＣＲ４エピトープに向けられたモノクローナル抗ＣＸＣＲ４抗体の混合物、または抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲートの混合物、またはモノクローナル抗ＣＸＣＲ４および抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲートの混合物を含有し得る。
【０４２３】
非造血がんにおけるＣＸＣＲ４
ケモカインおよびケモカイン受容体が有する最も興味深くかつおそらく重要な役割の１つは、固形腫瘍の転移を制御することである。ＣＸＣＲ４は、最もよく研究されたケモカイン受容体の１つであり、これは、ＣＸＣＬ１２としても公知であるＣＸＣケモカイン間質細胞由来因子１（ＳＤＦ−１）に選択的に結合する（Ｆｒｅｄｒｉｋｓｓｏｎら、Ｍｏｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、６３：１２５６〜７２（２００３））。これまで、ＣＸＣＲ４は、乳がん、前立腺がん、腎がん、大腸がん、甲状腺がん、および膵がんを含めた２０を超えるヒト悪性腫瘍において過剰発現されることが実証された（Ｍｕｌｌｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ、４１０：５０〜６（２００１）；Ａｋａｓｈｉら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｃｉ．、９９（３）：５３９〜５４２（２００８）；Ｍａｒｅｃｈａｌら、Ｂｒ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ、１００、１４４４〜５１（２００９）；Ｗａｎｇら、Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ、２６、１０４９〜５４（２００９）；Ｈｅ  Ｘら、Ｐａｔｈｏｌ  Ｒｅｓ  Ｐｒａｃｔ、２０６、７１２〜５（２０１０））。
【０４２４】
本発明は、非造血がんを治療するための主要な治療用組成物としての抗ＣＸＣＲ４抗体、その抗原結合断片、または抗ＣＸＣＲ抗体を含む抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲートの使用を企図する。このような組成物は、ポリクローナル抗ＣＸＣＲ４またはモノクローナル抗ＣＸＣＲ４抗体を含有し得る。さらに、本発明の治療用組成物は、異なる非ブロッキングＣＸＣＲ４エピトープに向けられたモノクローナル抗ＣＸＣＲ４抗体の混合物、または抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲートの混合物、またはモノクローナル抗ＣＸＣＲ４および抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲートの混合物を含有し得る。
【０４２５】
乳がんにおけるＣＸＣＲ４
新生細胞上のＣＸＣＲ４の高レベル発現は、乳がんを有する患者において相対的に芳しくない全生存期間に関連する（Ｌｉ  ＹＭ、Ｐａｎ  Ｙ、Ｗｅｉ  Ｙら、Ｕｐ−ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＣＸＣＲ４  ｉｓ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  ｆｏｒ  ＨＥＲ２−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｔｕｍｏｒ  ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ．、Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ．、６：４５９〜４６９（２００４））。すべての乳がんの約３０％で観察されるＨＥＲ２／ｎｅｕの高レベル発現も、相対的に芳しくない予後に関連する。Ｌｉらは最近、ＨＥＲ２／ｎｅｕは、ＣＸＣＲ４分解を阻害することによってＣＸＣＲ４の発現および機能を増強することを実証した（Ｌｉ  ＹＭ、Ｐａｎ  Ｙ、Ｗｅｉ  Ｙら、Ｕｐ−ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＣＸＣＲ４  ｉｓ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  ｆｏｒ  ＨＥＲ２−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｔｕｍｏｒ  ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ．、Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ．、６：４５９〜４６９（２００４））。したがって、本発明は、乳がんを治療するための主要な治療用組成物としての抗ＣＸＣＲ４抗体、その抗原結合断片、または抗ＣＸＣＲ抗体を含む抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲートの使用を企図する。このような組成物は、ポリクローナル抗ＣＸＣＲ４またはモノクローナル抗ＣＸＣＲ４抗体を含有し得る。さらに、本発明の治療用組成物は、異なる非ブロッキングＣＸＣＲ４エピトープに向けられたモノクローナル抗ＣＸＣＲ４抗体の混合物、または抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲートの混合物、またはモノクローナル抗ＣＸＣＲ４および抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲートの混合物を含有し得る。
【０４２６】
肺がんにおけるＣＸＣＲ４
小細胞肺がん（ＳＣＬＣ）は、骨髄関与の高い傾向を伴ったアグレッシブな急速転移性の新生物である。組合せ化学療法および放射線療法治療を用いてさえ、５年生存は、薬剤耐性が急速に発達するためにわずか約５％である。ＳＣＬＣ細胞では、ＣＸＣＲ４活性化がＣＸＣＲ４−およびインテグリン依存様式で遊走性および侵襲性応答、ならびに骨髄間質細胞への接着を誘導する。ＣＸＣＲ４は、ＳＣＬＣを有する患者において観察される別個の転移型を指示し得る。したがって、本発明は、肺がんを治療するための主要な治療用組成物としての抗ＣＸＣＲ４抗体、その抗原結合断片、または抗ＣＸＣＲ抗体を含む抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲートの使用を企図する。このような組成物は、ポリクローナル抗ＣＸＣＲ４またはモノクローナル抗ＣＸＣＲ４抗体を含有し得る。さらに、本発明の治療用組成物は、異なる非ブロッキングＣＸＣＲ４エピトープに向けられたモノクローナル抗ＣＸＣＲ４抗体の混合物、または抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲートの混合物、またはモノクローナル抗ＣＸＣＲ４および抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲートの混合物を含有し得る。
【０４２７】
腎細胞癌（ＲＣＣ）におけるＣＸＣＲ４
最近、ｍＲＣＣにおけるＣＸＣＲ４の役割が徹底的に解明された。結果は、ＣＸＣＲ４の高い発現が、ｍＲＣＣを有する患者の芳しくない生存期間に強く関連することを実証した（Ｗａｎｇら、Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ、２６、１０４９〜５４（２００９）；Ｚｈａｏら、Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  Ｒｅｐ、３８、１０３９〜４５（２０１１））。さらに、ＣＸＣＲ４発現ＲＣＣ細胞の転移能力が、がん細胞上のＣＸＣＲ４タンパク質レベルおよび標的臓器内のＳＤＦ−１α発現と強く相関したマウスモデルにおける結果（Ｍｏｔｚｅｒら、Ｔｈｅ  Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、３３５巻、１２号、８６５〜８７５頁（１９９６））。したがって、ＣＸＣＲ４は、腎明細胞癌のマルチモーダル療法において興味深い治療標的であり得る。
【０４２８】
本発明は、腎細胞癌（ＲＣＣ）を治療するための主要な治療用組成物としての抗ＣＸＣＲ４抗体、その抗原結合断片、または抗ＣＸＣＲ抗体を含む抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲートの使用を企図する。このような組成物は、ポリクローナル抗ＣＸＣＲ４またはモノクローナル抗ＣＸＣＲ４抗体を含有し得る。
【０４２９】
さらに、本発明の治療用組成物は、異なる非ブロッキングＣＸＣＲ４エピトープに向けられたモノクローナル抗ＣＸＣＲ４抗体の混合物、または抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲートの混合物、またはモノクローナル抗ＣＸＣＲ４および抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲートの混合物を含有し得る。
【０４３０】
非腫瘍学適応症におけるＣＸＣＲ４
ケモカイン受容体は、様々な特定の細胞および特定の時間において発現される。これらは、これらの効果細胞が、ケモカインが産生される部位に蓄積する機構による炎症性および免疫性応答のコントロールに概ね関連する。例えば、ＳＤＦ−１は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでＴ細胞指向（Ｘ４）ＨＩＶの感染を特異的に阻害することが示された（Ｂｌｅｕｌら、Ｎａｔｕｒｅ、３８２：８２９〜８３３（１９９６）、Ｏｂｅｒｌｉｎら、Ｎａｔｕｒｅ、８３３〜８３５（１９９６））。これは、ＳＤＦ−１がＨＩＶの前にＣＸＣＲ４に結合し、それによって細胞がＨＩＶから感染するためのスキャフォールドを除去し、ＨＩＶ感染を阻害すると考えることができる。さらに、ＨＩＶ感染阻害剤は、ＣＸＣＲ４のアンタゴニストであることが示された（Ｎａｔ．Ｍｅｄ．、４、７２（１９９８））。
【０４３１】
したがって、本発明は、炎症および免疫疾患、アレルギー性疾患、感染（ＨＩＶ感染など）、ＨＩＶ感染に関連した疾患（後天性免疫不全症候群など）を治療するための治療用組成物としての抗ＣＸＣＲ４抗体、その抗原結合断片、または抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲートの使用を企図する。このような組成物は、ポリクローナル抗ＣＸＣＲ４またはモノクローナル抗ＣＸＣＲ４抗体を含有し得る。
【０４３２】
さらに、本発明の治療用組成物は、異なる非ブロッキングＣＸＣＲ４エピトープに向けられたモノクローナル抗ＣＸＣＲ４抗体の混合物、または抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲートの混合物、またはモノクローナル抗ＣＸＣＲ４および抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲートの混合物を含有し得る。
【０４３３】
ＷＨＩＭ症候群
ＷＨＩＭ症候群は、主な臨床兆候：いぼ、低ガンマグロブリン症、再発性細菌感染、およびミエロカテキシスによって特徴付けられる稀有な先天性免疫不全障害である［ＭｃＤｅｒｍｏｔｔ，ＤＨら、Ｂｌｏｏｄ、１１８（１８）：４９５７〜４９６２（２０１１）；Ｍｃｅｒｍｏｔｔ  ＤＨら、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．、１５（１０）：２０７１〜２０８１（２０１１）］。ミエロカテキシスは、成熟した好中球が骨髄を出ることができず、ＢおよびＴ細胞存在量または機能が欠乏した異常な血液学的障害としてさらに特徴付けることができる（Ｚｕｅｌｅｒ  ＷＷら、Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．、２７０：６９９〜７０４（１９６４））。Ｈｅｒｎａｎｄｅｚ  ＰＡらは、ＣＸＣＲ４の突然変異がＷＨＩＭ症候群に関連していると最初に記載した。ＣＸＣＲ４Ｒ３３４Ｘが、最も一般的で、最もよく研究されたバリアントである（Ｈｅｒｎａｎｄｅｚ  ＰＡら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ、３４：７０〜７４（２００３））。ＣＸＣＲ４Ｒ３３４Ｘは、機能獲得突然変異として、内因性リガンドＣＸＣＬ１２に対して増強されたシグナル伝達能力を呈する。したがって、ＣＸＣＲ４Ｒ３３４Ｘの増大したシグナル伝達能力をそぐことを、ＷＨＩＭ症候群を治療するのに利用することができる。
【０４３４】
本発明のいくつかの態様では、本発明は、ＷＨＩＭ症候群を治療するための主要な治療用組成物としての抗ＣＸＣＲ４抗体を含む抗体−薬剤コンジュゲートの使用であって、前記組成物が、ポリクローナル抗ＣＸＣＲ４またはモノクローナル抗ＣＸＣＲ４抗体を含有し得る、使用を企図する。さらに、本発明の治療用組成物は、異なる非ブロッキングＣＸＣＲ４エピトープに向けられたモノクローナル抗ＣＸＣＲ４抗体の混合物、または抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲートの混合物、またはモノクローナル抗ＣＸＣＲ４および抗ＣＸＣＲ４抗体−薬剤コンジュゲートの混合物を含有し得る。さらに、いくつかの態様では、本発明によって開示される治療用組成物は、単独で、またはＷＨＩＭ症候群のいくつかの現在の治療、例えば、Ｇ−ＣＳＦ（フィルグラスチム（Ｎｅｕｐｏｇｅｎ；Ａｍｇｅｎ  Ｉｎｃ．））、静注用免疫グロブリン、および低分子ＣＸＣＲ４アンタゴニストＡＭＤ３１００（プレリキサホル、商品名Ｍｏｚｏｂｉｌ（Ｇｅｎｙｚｍｅ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ））などと組み合わせて投与される場合がある。
【０４３５】
以下の実施例は、例示的な目的だけのために提供されており、本発明の範囲を決して限定するように意図されていない。実際に、本明細書に示し、記載したものに加えて、本発明の様々な修正形態が、前述の説明から当業者に明らかとなり、添付の特許請求の範囲内に入る。
【実施例】
【０４３６】
（実施例１）
キメラ抗ＣＸＣＲ４マウス抗体の抗体結合親和性決定
キメラマウス抗ＣＸＣＲ４抗体１２Ａ１１、６Ｂ６、および３Ｇ１０（ｈＩｇＧ１サブタイプとして発現される）の結合を、フローサイトメトリーによって、ＣＸＣＲ４発現ヒト非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）Ｒａｍｏｓ細胞に対して評価した。１００，０００細胞を、結合緩衝液（ＰＢＳ＋０．５％のＢＳＡ）１００ｕＬ中で連続希釈抗ＣＸＣＲ４抗体とともにインキュベートし、その後、Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ製のＤｙｌｉｇｈｔ４８８結合ヤギ抗ヒトＦｃ二次抗体とともにインキュベートした。％は、最大値に対して各希釈のＭＦＩ値を正規化することによって導出した。ＥＣ５０は、ＰＲＩＳＭソフトウェアによって計算した。
【０４３７】
【表６】
2019141059.tif 000041
【０４３８】
（実施例２）
ヒト化３Ｇ１０  ＦａｂのＣＸＣＲ４発現ＨＰＢ−ＡＬＬ細胞への結合
ヒト化３Ｇ１０  Ｆａｂの結合を、フローサイトメトリーによって、ＣＸＣＲ４発現ＨＰＢ−ＡＬＬ細胞に対して評価した。１５０，０００細胞を、結合緩衝液（ＰＢＳ＋０．５％  ＢＳＡ）１００ｕＬ中で、２．５または０．２５μｇ／ｍＬで様々なｈ３Ｇ１０  Ｆａｂとともにインキュベートし、その後、Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ製のＡＰＣ結合ヤギ抗ヒトＦａｂ−特異的二次抗体とともにインキュベートした。
【０４３９】
【表７】
2019141059.tif 000042
【０４４０】
（実施例３）
ＣＸＣＲ４抗体結合：ＣＸＣＲ４  Ａｂ  Ｆａｂの細胞結合および親和性測定
ＣＸＣＲ４  ＦａｂのＣＸＣＲ４発現細胞への結合を、ＨＰＢ−ＡＬＬ（ヒトＴ細胞白血病）細胞に対してフローサイトメトリーによって測定した。１５０，０００個のＨＰＢ−ＡＬＬ細胞を、９６ウェルプレート上でＦＡＣＳ緩衝液（１×ＰＢＳ＋０．５％のＢＳＡ）１００ｕＬ中に再懸濁した。抗ＣＸＣＲ４  Ｆａｂを各ウェルに添加して０．２５μｇ／ｍＬの最終濃度にし、４度で３０分間インキュベートした。一次抗体を除去した後、細胞をＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄し、次いでＦＡＣＳ緩衝液中に再懸濁し、次いで第２のＡｂ（アレキサフルオル６４７結合ヤギ抗ヒトＩｇＧ、Ｆ（ａｂ’）２特異的、Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｗｅｓｔ  Ｇｒｏｖｅ  ＰＡ）２ｕＬ（３ｕｇ）を各ウェルに添加した。プレートを４度でさらに３０分間インキュベートした。蛍光シグナルは、細胞分析装置ＬＳＲＩＩ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ  ＣＡ）によって取得した。各試料のＭＦＩ（平均蛍光強度）を表に示す。
【０４４１】
各Ｆａｂの結合親和性を、ヒトＣＸＣＲ４に富むリポ粒子（ＬＥＶ１０１、Ｉｎｔｅｇｒａｌ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ  ＰＡ）を使用して判定した。ビオチン化ＷＧＡ（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ  ＭＯ））をＳＡチップ上に被覆して、ＣＸＣＲ４タンパク質を含有するリポ粒子の捕捉を促進することができる。Ｆａｂの希釈系列（１０または３０ｎＭのトップ濃度で、５つのメンバーの３×希釈係数）を低〜高濃度まで注射することによって（各濃度についての３分の会合時間を伴って）、Ｋａｒｌｓｓｏｎら（Ｋａｒｌｓｓｏｎ，Ｒ．、Ｋａｔｓａｍｂａ，Ｐ．Ｓ．、Ｎｏｒｄｉｎ，Ｈ．、Ｐｏｌ，Ｅ．＆Ｍｙｓｚｋａ，Ｄ．Ｇ．、Ａｎａｌｙｚｉｎｇ  ａ  ｋｉｎｅｔｉｃ  ｔｉｔｒａｔｉｏｎ  ｓｅｒｉｅｓ  ｕｓｉｎｇ  ａｆｆｉｎｉｔｙ  ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓ．、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．、３４９、１３６〜１４７（２００６））に記載の「速度論的滴定」法を使用してデータの速度論的分析を実施した。いくつかの分析サイクルについて、Ｆａｂの代わりに緩衝液を捕捉された粒子に注射して、二重参照目的用のブランクサイクルをもたらした（二重参照は、Ｍｙｓｚｋａら、Ｉｍｐｒｏｖｉｎｇ  ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ  ａｎａｌｙｓｉｓ．、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｒｅｃｏｇｎｉｔ．、１２、２７９〜２８４（１９９９）において記載されたように実施した）。
【０４４２】
【表８】
2019141059.tif 000043
【０４４３】
（実施例４）
サルＣｙｎｏおよびヒトＣＸＣＲ４へのＣＸＣＲ４  Ａｂの結合
抗ヒトＣＸＣＲ４  Ａｂ  ｈ３Ｇ１０．１．９１．Ａ５８Ｂを、１）ＨＰＢ−ＡＬＬ（ヒトＴ細胞白血病）およびＣｙｎｏ−ＣＸＣＲ４トランスフェクトＣＨＯ細胞、ならびに２）Ｒａｊｉ（ヒト非ホジキンリンパ腫）およびＨＳＣ−Ｆ（カニクイザルＴ細胞株）に対する希釈系列（０．００７〜２６７ｎＭ）中のフローサイトメトリーによって、カニクイザルＣＸＣＲ４に対するその交差反応性について試験した。結合を、第２のＡｂ（アレキサフルオル６４７−結合ヤギ抗ヒトＩｇＧ、Ｆｃγ特異的、Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｗｅｓｔ  Ｇｒｏｖｅ  ＰＡ）によって検出し、ＬＳＲＦｏｒｔｅｓｓａ細胞分析装置（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ  ＣＡ）を用いて取得した。曲線フィッティングおよびＥＣ５０計算は、Ｐｒｉｓｍソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ、Ｌａ  Ｊｏｌｌａ  ＣＡ）を用いて実施した。表９Ａおよび９Ｂならびに図３Ａおよび３Ｂ。
【０４４４】
【表９】
2019141059.tif 000044
【０４４５】
【表１０】
2019141059.tif 000045
【０４４６】
（実施例５）
ＣＸＣＲ４抗体のエフェクター機能
治療的な裸の抗体は、臨床的有効性を実現するのに２つのタイプの機能性を利用する：Ｆａｂ（抗原結合断片）ドメインによる標的特異的結合、ならびに抗体のＦｃドメインの様々な細胞型上のＦｃ受容体との相互作用を介した免疫媒介エフェクター機能、例えば、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）および補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）など。ＡＤＣＣでは、抗体のＦｃ領域が、免疫効果細胞、例えば、ナチュラルキラーおよびマクロファージなどの表面上のＦｃ受容体（ＦｃγＲ）に結合し、標的細胞の食作用または溶解をもたらす。ＣＤＣでは、抗体は、細胞表面において補体カスケードを誘発することによって標的細胞を殺す。したがって、治療抗体のＦｃ部分は、ＡＤＣＣまたはＣＤＣに対するその影響を通じてその作用機序において重要な役割を有し得る。
【０４４７】
ヒトＩｇＧの各サブクラス（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４）は、ＦｃγＲおよび補体複合タンパク質（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ｃｏｍｐｌｅｘ  ｐｒｏｔｅｉｎ）のそれぞれへの異なる結合によって命令される、エフェクター機能の別個のプロファイルを呈する。ＩｇＧ１およびＩｇＧ３はともに相対的に強く結合する一方、ＩｇＧ２およびＩｇＧ４は、Ｆｃ受容体に対してはるかに低い親和性を有し、高レベルのＡＤＣＣを誘発しない。ＩｇＧ１はまた、補体複合タンパク質に対してより高い親和性を有し、はるかにより低いＣＤＣがＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４によって誘発される。
【０４４８】
抗ＣＸＣＲ４抗体のＡＤＣＣ（抗体依存性細胞傷害）活性を、ｃｙｔｏＴｏｘ９６非放射性細胞傷害性アッセイキット（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ  ＷＩ）を用いて求めた。ＣＸＣＲ４発現ヒト腫瘍細胞を、アッセイの前の日に１０，０００細胞で播種した。ドナーＰＢＭＣ細胞をフィコール勾配によって単離し、ｘ−ｖｉｖｏ培地中で、３７℃で一晩培養した。翌日、１０または２０μｇ／ｍＬの抗体を、ＲＰＭＩ＋５％のＦＢＳ中の１０００，０００個のＰＢＭＣ細胞（Ｅ：Ｔ＝１００：１）を添加して、または添加しないで、ウェルに添加した。次いでプレートを３７℃で４時間インキュベートした。３時間半の時点で、溶解液２０μＬを、標的細胞単独のウェルに添加した。プレートを８０００ｒｐｍで３分間回転させた後、上清５０μＬを別のプレートに移した。次いで基質５０μｌを各ウェルに添加し、プレートを、暗所で、室温で３０分間インキュベートした。停止液５０μＬを各ウェルに添加することによって、反応を停止した。次いで、分光光度計（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）を用いて４９０ｎｍでプレートを読み取った。特異的溶解のパーセンテージ（％）を以下の式で計算した：
％特異的溶解＝（処置ＬＤＨ放出−標的細胞自発的ＬＤＨ放出−効果細胞自発的ＬＤＨ放出）／（標的細胞最大ＬＤＨ放出−標的細胞自発的ＬＤＨ放出）×１００
【０４４９】
抗ＣＸＣＲ４抗体のＣＤＣ（補体依存性細胞傷害）活性は、ｃｙｔｏＴｏｘ９６非放射性細胞傷害性アッセイキット（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ  ＷＩ）を用いて判定した。ＣＸＣＲ４発現ヒト腫瘍細胞を、アッセイの前の日に１０，０００細胞で播種した。翌日、５〜２０μｇ／ｍＬの各Ａｂを、単独で、または２．５％、１０％、もしくは２０％のドナーＡＢ補体（Ｉｎｎｏｖａｔｉｖｅ  ＢｉｏｔｅｃｈもしくはＳｉｇｍａ製）とともに細胞に添加した。プレートを現像し、特異的溶解をＡＤＣＣアッセイと同様に分析した。
【０４５０】
ＡＤＣＣアッセイを、ＣＸＣＲ４発現Ｒａｍｏｓ（ＮＨＬ）またはＭＯＬＴ−４（ヒトＴ細胞白血病）細胞内で、２０μｇ／ｍＬ（図４Ａ）または１０μｇ／ｍＬ（図４Ｃ）の抗体と、１００：１（エフェクター：標的）比の正常ドナーＰＢＭＣ細胞を使用して実施した。４時間インキュベートした後、ＡＤＣＣ活性は、Ｒａｍｏｓ（ＮＨＬ）細胞上でキメラｈＩｇＧ１（図４Ａ）またはＭＯＬＴ−４細胞上でヒト化３Ｇ１０抗体（図４Ｃ）として産生された抗ヒトＣＸＣＲ４マウスＡｂ  １２Ａ１１、６Ｂ６、および３Ｇ１０で明白であった。およそ８０％の細胞溶解が、ＭＯＬＴ−４細胞に対するｍ３Ｇ１０−ｈＩｇＧ４サブタイプからの約２０％の細胞溶解と比較して、ｍ３Ｇ１０−ｈＩｇＧ１処置から見られた（図４Ｂ）。
【０４５１】
ＣＤＣ活性を、ＣＸＣＲ４発現Ｒａｍｏｓ細胞内での２０μｇ／ｍＬのキメラマウス１２Ａ１１−、６Ｂ６−、および３Ｇ１０−ｈＩｇＧ１抗体の（図４Ｄ）、ならびにＤａｕｄｉ（ＮＨＬ）細胞に対する５μｇ／ｍＬのヒト化抗体を用いた（図４Ｆ）処置から観察した。最大２０〜３０％の特異的溶解活性が、ＩｇＧ１バックボーン中の５μｇ／ｍＬの抗ＣＸＣＲ４  ３Ｇ１０抗体で検出され、Ｄａｕｄｉ細胞に対する陽性対照抗体リツキサンと同様であった一方、ｈＩｇＧ４フォーマット中の３Ｇ１０は、ＣＤＣ活性を示さなかった（図４Ｅ）。
【０４５２】
（実施例６）
抗ＣＸＣＲ４抗体によるＳＤＦ−１誘導カルシウム流出の阻害
ＳＤＦ−１（リガンド）がＣＸＣＲ４受容体に結合すると、カルシウム流出反応が誘発される。ＣＸＣＲ４  Ａｂの機能的なアンタゴニスト活性、抗ヒトＣＸＣＲ４抗体のＳＤＦ−１誘導カルシウム流出を阻害する能力の証拠として、ヒトＴ細胞白血病（ジャーカット）細胞を、Ｆｌｕｏ−ＮＷカルシウムアッセイキット（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ／ｌｉｆｅ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）と併せて使用した。細胞を、ＣＯ２インキュベーター内で、３７℃で、１０％のウシ胎児血清、１％のグルタミンを含有するＲＰＭＩ１６４０培地中でサブコンフルエンスまで培養した。アッセイの日に、細胞を、アッセイ緩衝液２５ｕｌ中１ウェル当たり７０，０００細胞で黒色クリアボトム３８４ウェルプレート内に蒔いた。次いで、キットのアッセイ色素を、光から保護して室温で１１０分間、２５ｕｌ／ウェルでプレートに添加した。１１ポイントの１：３の連続希釈液を、Ｆｌｕｏ−ＮＷ  Ｃａアッセイキット緩衝液中で各抗ヒトＣＸＣＲ４抗体について調製し、５００ｎＭ〜８ｐＭの濃度範囲をもたらした。細胞を抗体とともに室温で２０分間インキュベートした。次いで細胞を、８ｎＭの最終濃度で、ＳＤＦ−１α（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で刺激した。次いでカルシウム流出を、ＦＬＩＰＲ  Ｔｅｔｒａ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）を使用して９５秒間測定した。陽性対照は、ＳＤＦ−１αの存在下の細胞および抗体処置なしからなった。ベースラインは、ＳＤＦ−１αなしおよび抗体処置なしの細胞から測定した。カルシウムのＳＤＦ−１α誘導を、経時的に蛍光シグナルを発色させることによって測定した。データを、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェアを使用してエクスポートおよびプロットし、シグモイド用量応答式を用いた非線形曲線フィットを使用してＥＣ５０値を計算した。抗ヒトＣＸＣＲ４抗体によるカルシウム流出の得られた阻害を図５に示す。抗体３Ｇ１０、６Ｂ６、および１２Ａ１１は、ＳＤＦ−１α誘導カルシウム流出を阻害し、阻害のＩＣ５０は、それぞれ、１．５５５ｎＭ、１．４１８ｎＭ、および２７．０７ｎＭであった（表１０）。カルシウム流出機能アッセイで評価したヒト化ＣＸＣＲ４抗体のＩＣ５０を表１１に要約する（平均ｎ＝３の独立した実験／抗体）。要約すると、ヒト化ＣＸＣＲ４抗体の効力は、このアッセイにおけるキメラｍ３Ｇ１０抗体のものと同様である。
【０４５３】
【表１１】
2019141059.tif 000046
【０４５４】
【表１２】
2019141059.tif 000047
【０４５５】
（実施例７）
サイクリックＡＭＰ（ｃＡＭＰ）細胞ベース機能アッセイにおけるＣＸＣＲ４抗体活性
ＣＸＣＬ１２（リガンド）がＣＸＣＲ４受容体に結合すると、ｃＡＭＰが阻害されることが知られている。ＣＸＣＲ４  Ａｂのアンタゴニスト活性の証拠として、ｃＡＭＰアッセイを、ＤｉｓｃｏｖｅＲｘ、Ｆｒｅｍｏｎｔ、ＣＡから購入したヒトＣＸＣＲ４をトランスフェクトされたＣＨＯ−Ｋ１細胞を使用して実施した。ｃＡＭＰ  Ｈｕｎｔｅｒ  ｅＸｐｒｅｓｓ  ＧＰＣＲアッセイキット（ＤｉｓｃｏｖｅＲｘ）を、アッセイを実施するのに使用した。ＣＸＣＲ４抗体の非存在下で、ＣＸＣＲ４のリガンド、ＣＸＣＬ１２を用いた処置により、ｃＡＭＰ産生が阻害された。ＣＸＣＲ４抗体で処置すると、この阻害は、阻止され、ｃＡＭＰ産生が増大した。この応答のＥＣ５０を表１２に示す。要約すると、試験したすべてのＣＸＣＲ４抗体は、２４．３〜４５．６ｎＭの範囲でこのアッセイにおける同様の強力な活性を有した。この試験により、マウス（キメラ）３Ｇ１０およびヒト化３Ｇ１０  ＣＸＣＲ４抗体が、ｃＡＭＰ機能アッセイにおいてＣＸＣＲ４リガンド活性を競合および遮断することができることが確認される。
【０４５６】
【表１３】
2019141059.tif 000048
【０４５７】
（実施例８）
抗ＣＸＣＲ４抗体による細胞死誘導
抗ＣＸＣＲ４抗体を、ヒト非ホジキンリンパ腫Ｒａｍｏｓ細胞株内で細胞死を誘導する能力について検査した。細胞を、ＣＯ２インキュベーター内で、３７℃で、１０％のウシ胎児血清および２ｎＭのグルタミンを含有するＲＰＭＩ１６４０培地中でサブコンフルエンシーまで培養した。細胞を、２．５×１０６細胞／ｍＬで４８ウェルプレート中の増殖培地中に播種した。示した濃度までＰＢＳ中に希釈した抗ＣＸＣＲ４抗体を細胞に添加し、３７℃で２４時間インキュベートした。細胞死は、ＬＳＲＩＩフローサイトメーター（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で測定したアネキシンＶ−ＰＥおよびヨウ化プロピジウム（ＰＩ）蛍光シグナルによって測定した。総細胞死は、アネキシンＶ＋／ＰＩ−（早期）集団にアネキシンＶ＋／ＰＩ＋（後期）集団を加えることによって判定した。
【０４５８】
図６Ａの結果は、６Ｂ６および３Ｇ１０抗ＣＸＣＲ４抗体が、用量依存様式で、Ｒａｍｏｓ細胞内で細胞死を誘導することができることを実証する。試験した最高濃度、１００ｎＭで、３Ｇ１０および６Ｂ６は、７０％超の細胞死をもたらした。この効果は、陽性対照スタウロスポリン（Ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎ）（ＳＴＳ）、公知の強力な細胞死誘導因子（およそ６０％）より大きかった。未処置細胞は、このアッセイにおいておよそ３０％の細胞死を示した。抗ＣＸＣＲ４  １２Ａ１１抗体は、試験した条件下で細胞死を誘導することができなかった。同様の結果が、Ｒａｊｉ非ホジキンリンパ腫細胞に対するこれらの抗体の活性を試験するとき観察された。
【０４５９】
同様の試験では、単鎖（Ｆａｂ）および二価Ｆ（ａｂ）２’を３Ｇ１０抗体から生成した。Ｆａｂは、単鎖抗体（一価）であり、抗原結合部位の一部である免疫グロブリン可変領域および第１の免疫グロブリン（ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｇｕｌｉｎ）定常領域を含有する。この断片は、タンパク質分解酵素パパインを用いた３Ｇ１０抗体の消化によって得た。Ｆ（ａｂ’）２をペプシン消化によって生成して、Ｆｃ領域のほとんどを除去する一方、ヒンジ領域のインタクトな一部を残した。Ｆ（ａｂ’）２断片は、ジスルフィド結合によって一緒に連結された２つの抗原結合Ｆａｂ部分を有し、したがって二価である。ＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２を、Ｒａｍｏｓ細胞の細胞死を誘導するこれらの能力について、二価全長３Ｇ１０抗体と一緒に試験した。図６Ｂで示した結果は、細胞死を誘導する能力が２価依存性であり、インタクト抗体（３Ｇ１０）およびＦ（ａｂ’）２抗体は、細胞死を誘導することができる一方、３Ｇ１０Ｆａｂは、細胞死に対して非常に限定された効果を有していたことを示す。
【０４６０】
（実施例９）
抗ＣＸＣＲ４抗体によるｉｎ  ｖｉｖｏでの非ホジキンリンパ腫固形腫瘍増殖の阻害
ＳＤＦ−１／ＣＸＣＲ４シグナル伝達は、腫瘍増殖、血管新生、浸潤、および転移を含めた腫瘍発達の複数の段階において重要な役割を果たすと考えられている。抗ヒトＣＸＣＲ４  Ａｂの腫瘍増殖を阻害する能力を評価するために、雌の生後４〜６週のＣＢ１７  ＳＣＩＤベージュマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）および皮下に移植したヒト非ホジキンリンパ腫Ｒａｍｏｓ細胞を使用する腫瘍異種移植片モデルを使用した。細胞を、１０％のウシ胎児血清を含有するＲＰＭＩ１６４０培地中で、５％ＣＯ２インキュベーター内で、３７℃で培養した。本試験では、５×１０６細胞を、各マウスの右後側腹部領域中に移植し、式（体積＝長さ×幅２）／２によって計算しておよそ１７５ｍｍ３の平均サイズ体積まで固形腫瘍として増殖させた。次いでマウスを、４つの異なる処置群、１群当たりｎ＝１０匹の動物でランダム化した。マウスの群を、滅菌ＰＢＳの溶液中の抗体の静脈内（ｉ．ｖ．）注射で処置した：（ｉ）アイソタイプ対照Ａｂ（１５ｍｇ／ｋｇ）、（ｉｉ）３Ｇ１０（１５ｍｇ／ｋｇ）、（ｉｉｉ）６Ｂ６（１５ｍｇ／ｋｇ）、および（ｉｖ）１２Ａ１１（１５ｍｇ／ｋｇ）。動物に、合計３用量について３週間にわたって週１回抗体を投薬した。腫瘍体積は、試験の継続時間にわたって週１回〜３回キャリパーで測定した。実験の結果を図７に提示する。結果は、試験した３種すべての抗ＣＸＣＲ４抗体が、アイソタイプ対照抗体と比較して腫瘍増殖を有意に阻害したことを示す。結果は、抗ＣＸＣＲ４抗体が、ｉｎ  ｖｉｖｏで確立された固形腫瘍の増殖を阻害することができることを示す。この腫瘍増殖阻害作用は、抗体投薬を停止した後、長い時間にわたって（４２日）持続した。試験した３種すべての抗ＣＸＣＲ４抗体の活性は、この固形腫瘍モデルにおいて同等であった。図７。
【０４６１】
（実施例１０）
マウス全身性非ホジキンリンパ腫細胞モデルにおける抗ＣＸＣＲ４抗体による生存時間の増大および全身腫瘍組織量の減少
抗ＣＸＣＲ４抗体の抗腫瘍活性を、Ｒａｊｉ非ホジキンリンパ腫細胞を使用して血液学的なリンパ腫モデルでさらに調査した。本試験で使用したＲａｊｉ細胞にルシフェラーゼ遺伝子（ＬＵＣ）をトランスフェクトして、経時的な全身腫瘍組織量の「生存中の」監視を可能にした。細胞を、１０％のウシ胎児血清を含有するＲＰＭＩ１６４０培地中で、５％のＣＯ２インキュベーター内で、３７℃で培養した。モデルは、尾静脈を介して雌の生後６〜８週のＳＣＩＤベージュマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｏｒａｔｏｒｉｅｓ製）中に１×１０６個のＲａｊｉ−ＬＵＣ細胞を注射することによって確立した。０日目（移植日）に、Ｒａｊｉ−ＬＵＣ細胞は、肺内に逗留し、すべての動物における腫瘍細胞の正確なｉ．ｖ．注射を示した。細胞移植の１日後に、マウスを肺生物発光の存在に基づいて処置群（１群当たり１０匹の動物）に割り当てた。マウスを、６７日目まで、腹腔内に（ｉ．ｐ．）週１回、滅菌ＰＢＳの溶液中の１０ｍｇ／ｋｇのアイソタイプ対照抗体、３Ｇ１０、６Ｂ６、および１２Ａ１１で処置した。全身腫瘍組織量を、Ｘｅｎｏｇｅｎ  ＩＶＩＳ２００イメージングシステムを使用して生物発光イメージングによって監視した。マウスを、腹側の位置で５日毎に画像化し、ルシフェリンを、１５ｍｇ／ｍｌ、２００ｕｌの注射でＩＰ送達し、全身生物発光を、Ｘｅｎｏｇｅｎ  Ｌｉｖｉｎｇ  Ｉｍａｇｅを使用して判定した。マウスが後肢麻痺を示し始め、または他の人道的なエンドポイントに到達したとき、これらを安楽死させた。全身腫瘍組織量（生物発光による）および生存期間の両方を、エンドポイントとして評価した。
【０４６２】
図８ＡおよびＢは、本試験の生物発光結果を示す。全身腫瘍組織量の減少は、経時的な生物発光のレベルの減少によって示される。図８Ａは、試験の０（移植ベースライン）、１５、および２５日目の各群の４〜５匹の動物の代表的なイメージングを示す。３種すべての抗ＣＸＣＲ４抗体は、発光のレベルによって測定した場合、全身腫瘍組織量を有意に減少させた。図８Ｂは、３Ｇ１０、６Ｂ６、および１２Ａ１１抗体での処置が、このモデルにおいてアイソタイプ対照抗体と比べて同等のＴＧＩ活性を有したことを示す。
【０４６３】
図８Ｃに示した生存曲線は、Ｒａｊｉ−ＬＵＣ細胞を全身的に移植された動物の生存期間において、アイソタイプ対照抗体と比較して、抗ＣＸＣＲ４抗体３Ｇ１０、６Ｂ６、および１２Ａ１１の非常に有意な効果を実証する。アイソタイプ（ｉｓｏｐｔｙｐｅ）対照処置動物は、１８日の生存期間中央値を示した一方、抗ＣＸＣＲ４抗体で処置した動物は、試験の終結の前に生存期間中央値に到達しなかった。試験した３種すべての抗ＣＸＣＲ４抗体の効果は、同等であり、これらの間に統計的差異はなかった。抗ＣＸＣＲ４抗体処置動物の生存期間は、最後の抗体用量が投与された６７日目を超えて十分持続した。
【０４６４】
（実施例１１）
マウス全身性急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞モデルにおける抗ＣＸＣＲ４抗体による生存時間の増大および全身腫瘍組織量の減少
抗ＣＸＣＲ４抗体６Ｂ６を、ＡＭＬの播種性／全身性静脈内モデルを使用してＮＳＧマウスの生存期間を増大させ、全身腫瘍組織量を低減するその能力について試験した。ヒトＡＭＬがん株ＭＶ４−１１にルシフェラーゼ遺伝子を形質導入して（ＭＶ４−１１−ＬＵＣ）、経時的な全身腫瘍組織量の「生存中の」監視を可能にした。細胞を、ルシフェラーゼ発現選択のための１μｇ／ｍＬのピューロマイシンとともに１０％のウシ胎児血清を含有するＩＭＤＭ培地中で、５％のＣＯ２インキュベーター内で、３７℃で培養した。生後４〜６週のＮＳＧ雌マウス（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ製）に、ＭＶ４−１１−ＬＵＣ  ＡＭＬ細胞（１×１０６／動物）を静脈内に注射した。
【０４６５】
細胞移植して１３日後に、マウスを、全身生物発光強度に基づいて３つの処置群（１群当たり１０匹の動物）にランダム化した。滅菌ＰＢＳの溶液中１０ｍｇ／ｋｇでの毎週の皮下（ｓ．ｃ．）抗体処置を、１３日目（アイソタイプ対照および抗ＣＸＣＲ４  ６Ｂ６抗体）および２０日目（抗ＣＸＣＲ４  ６Ｂ６抗体）に、図に示したように（１３日目；２０日目）開始した。全身腫瘍組織量を、Ｘｅｎｏｇｅｎ  ＩＶＩＳ２００イメージングシステムを使用して評価した。マウスを、腹側の位置で７日毎に画像化し、全身生物発光を、Ｘｅｎｏｇｅｎ  Ｌｉｖｉｎｇ  Ｉｍａｇｅソフトウェアを使用して判定した。マウスが後肢麻痺を示し始め、または他の人道的なエンドポイントに到達したとき、これらを安楽死させた。全身腫瘍組織量（生物発光による）および生存期間の両方を、エンドポイントとして評価した。マウス（１群当たりｎ＝１０）の末梢血（ＰＢ）中の血液循環内のヒトＡＭＬ細胞の数を、試験の３５日目に収集した血液試料で監視した。ＡＭＬ  ＣＤ４５およびＣＤ３３マーカーを、抗ヒトＣＤ４５および抗ヒトＣＤ３３抗体（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ製）を用いたフローサイトメトリー染色によって血液循環内のヒトＡＭＬ細胞のパーセンテージを判定するのに使用した。
【０４６６】
図９Ａは、本試験の５動物／処置群の代表的な生物発光イメージングを示す（２０日目〜４１日目）。全身腫瘍組織量の減少は、経時的な生物発光のレベルの減少によって示される。より早期（１３日目）に開始する抗ＣＸＣＲ４  ６Ｂ６抗体での全身腫瘍組織量阻害は、これを１週間遅く（２０日目）開始したときより顕著であった。６Ｂ６抗ＣＸＣＲ４抗体は、アイソタイプ対照抗体と比較して両処置群において全身腫瘍組織量を有意に減少させ、抗ＣＸＣＲ４抗体がヒトＡＭＬの段階的な播種性マウスモデルにおいて全身腫瘍組織を阻害することに効果的であることを示した。
【０４６７】
図９Ｂに示した生存曲線は、ＭＶ４−１１−ＬＵＣ  ＡＭＬ細胞を全身的に移植された動物の生存期間において、アイソタイプ対照抗体と比較して、抗ＣＸＣＲ４抗体６Ｂ６の有意な効果を実証する。アイソタイプ対照処置動物は、４０日の生存期間中央値を示した一方、１３日目および２０日目に抗ＣＸＣＲ４  ６Ｂ６抗体で処置した動物は、それぞれ、５３および６１日の生存期間中央値を有した。これらの差異は、マンテル−コック検定によって統計的に有意であった（ｐ＜０．０５）。
【０４６８】
図９Ｃは、試験の３５日目においてアイソタイプ対照処置動物と比較して、抗ＣＸＣＲ４  ６Ｂ６抗体で処置した動物におけるヒトＡＭＬ細胞数の有意な低減を示す。
【０４６９】
（実施例１２）
マウス全身性慢性リンパ球性白血病腫瘍モデルにおける抗ＣＸＣＲ４抗体による生存期間の増大
ＣＸＣＲ４抗体の抗腫瘍活性を、播種性静脈内慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）モデルにおいてさらに調査した。ルシフェラーゼ遺伝子を発現するように安定にトランスフェクトされたヒトＪＶＭ−１３腫瘍細胞株を、１０％のウシ胎児血清および０．２５ｍｇ／ｍＬのピューロマイシンを含有するＲＰＭＩ１６４０培地中で、５％のＣＯ２インキュベーター内で、３７℃で培養した。モデルは、尾静脈を介して雌の生後６〜８週のＳＣＩＤベージュマウス中に１×１０６個のＪＶＭ−１３−Ｌｕｃ細胞を注射することによって確立した。細胞移植して２１日後に、マウスを、生物発光（ＢＬＩ）の読みに基づいて処置群（１群当たり１０匹の動物）に割り当てた。マウスをアイソタイプ対照抗体および３Ｇ１０で処置し、滅菌ＰＢＳの溶液中１０ｍｇ／ｋｇで週１回皮下に（ｓ．ｃ．）投薬した。ＣＬＬ患者を治療するために承認されたリツキシマブ、抗ＣＤ２０Ａｂを陽性対照として使用した。リツキシマブを、滅菌ＰＢＳの溶液中１０ｍｇ／ｋｇで、週１回、ｓ．ｃ．投薬した。全身腫瘍組織量を、Ｘｅｎｏｇｅｎ  ＩＶＩＳ  ２００イメージングシステムを使用して評価した。マウスを、腹側の位置で７日毎に画像化し、全身生物発光を、Ｘｅｎｏｇｅｎ  Ｌｉｖｉｎｇ  Ｉｍａｇｅソフトウェアを使用して判定した。マウスが後肢麻痺を示し始め、または他の人道的なエンドポイントに到達したとき、これらを安楽死させた。全身腫瘍組織量（生物発光による）および生存期間の両方をエンドポイントとして評価した。
【０４７０】
図１０Ａは、試験の２８、３５、４２、４９、および５６日目の各処置の各群におけるマウスの代表的なルシフェラーゼ活性イメージングを示す。３Ｇ１０で処置すると、アイソタイプ対照抗体と比較して、経時的な発光のレベルによって測定した場合、大きな骨中のＪＶＭ−１３−Ｌｕｃ全身腫瘍組織量が有意に減少した。リツキシマブで処置しても、アイソタイプ対照抗体と比較して全身腫瘍組織量が有意に減少した。
【０４７１】
図１０Ｂは、本試験のカプラン−マイヤー生存曲線を示す。生存期間の有意な増大が、アイソタイプ対照Ａｂと比較して３Ｇ１０およびリツキシマブ抗体について観察された（ｐ＜０．０００１）。アイソタイプ対照処置動物は、３２．５日の生存期間中央値を示した一方、リツキサンで処置した動物は４５日の生存期間中央値を示し、３Ｇ１０で処置した動物は、６０日目の前に生存期間中央値に到達しなかった。本試験からの結果は、抗ＣＸＣＲ４抗体がヒトＣＬＬの段階的な播種性マウスモデルにおいて全身腫瘍組織量を阻害することに効果的であることを示す。
【０４７２】
（実施例１３）
ヒト化抗ＣＸＣＲ４抗体によるｉｎ  ｖｉｖｏでのＲａｍｏｓ非ホジキンリンパ腫腫瘍増殖の阻害
ヒト化ＣＸＣＲ４  Ａｂの腫瘍増殖を阻害する能力を評価するために、雌の生後４〜６週のＣＢ１７．ｃｇ−Ｐｒｋｄｃ  ＳＣＩＤベージュマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ）および皮下に移植したヒト非ホジキンリンパ腫Ｒａｍｏｓ細胞を使用する腫瘍異種移植片モデル使用した。細胞を、１０％のウシ胎児血清を含有するＲＰＭＩ１６４０培地中で、５％のＣＯ２インキュベーター内で、３７℃で培養した。本試験では、５×１０６細胞を、各マウスの右後側腹部領域中に移植し、式（体積＝長さ×幅２）／２によって計算しておよそ３５０ｍｍ３の平均サイズ体積まで固形腫瘍として増殖させた。次いでマウスを、７つの異なる処置群、１群当たりｎ＝１０匹の動物でランダム化した。マウスの群を、滅菌ＰＢＳの溶液中の各抗体の１０ｍｇ／ｋｇで、皮下（ｓ．ｃ．）で処置した：（アイソタイプ対照抗体；ｍ３Ｇ１０；ｈ３Ｇ１０．Ａ５７．ＷＴ；ｈ３Ｇ１０．２．３７．２．７２；ｈ３Ｇ１０．Ａ５７．Ａ５８；ｈ３Ｇ１０．１．９１．Ａ５８Ａ；ｈ３Ｇ１０．１．９１．Ａ５８Ｂ。動物に、合計２用量について２週間にわたって週１回抗体を投薬した。腫瘍体積は、試験の継続時間にわたって週２回キャリパーで測定した。実験の結果を図１１に提示する。結果は、試験したすべての抗ＣＸＣＲ４抗体が、アイソタイプ対照抗体と比較して腫瘍増殖を有意に阻害したことを示す。結果は、試験したヒト化ＣＸＣＲ４抗体が、キメラｍ３Ｇ１０抗体のものと同様の有効性を有することを示す。腫瘍増殖阻害作用は、抗体投薬を停止した後（７日目）、数日間にわたって持続した。
【０４７３】
（実施例１４）
マウス全身性多発性骨髄腫（ＭＭ）モデルにおけるヒト化抗ＣＸＣＲ４抗体による生存時間の増大および全身腫瘍組織量の減少
ヒト化抗ＣＸＣＲ４抗体ｈ３Ｇ１０．１．９１．Ａ５８Ｂを、ＭＭの播種性／全身性静脈内モデルを使用して、ＮＳＧマウスの生存期間を増大させ、全身腫瘍組織量を低減するその能力について試験した。ヒトＭＭがん株ＯＰＭ−２にルシフェラーゼ遺伝子を形質導入して（ＯＰＭ−２−ＬＵＣ）、経時的な全身腫瘍組織量の「生存中の」監視を可能にした。細胞を、ルシフェラーゼ発現選択のための０．５μｇ／ｍＬのピューロマイシンとともに１０％のウシ胎児血清を含有するＲＰＭＩ１６４０培地中で、５％のＣＯ２インキュベーター内で、３７℃で培養した。生後４〜６週のＮＳＧ雌マウスに、ＯＰＭ−２−Ｌｕｃ細胞（５×１０６／動物）を静脈内に注射した。
【０４７４】
細胞移植して８日後に、マウスを、全身生物発光強度に基づいて３つの処置群（１群当たり１０匹の動物）にランダム化した。滅菌ＰＢＳの溶液中１０ｍｇ／ｋｇでの毎週の皮下（ｓ．ｃ．）抗体処置を開始し、５週間実施した。多発性骨髄腫患者を治療するための承認された薬剤の１つであるメルファランを１ｍｇ／ｋｇで投薬し、２回／週を３週間実施した。全身腫瘍組織量を、Ｘｅｎｏｇｅｎ  ＩＶＩＳ２００イメージングシステムを使用して評価した。マウスを、腹側の位置で７日毎に画像化し、全身生物発光を、Ｘｅｎｏｇｅｎ  Ｌｉｖｉｎｇ  Ｉｍａｇｅソフトウェアを使用して判定した。マウスが後肢麻痺を示し始め、または他の人道的なエンドポイントに到達したとき、これらを安楽死させた。全身腫瘍組織量（生物発光による）および生存期間の両方をエンドポイントとして評価した。
【０４７５】
図１２ＡおよびＢは、本試験における生物発光（ルシフェラーゼ活性）結果を示す。全身腫瘍組織量の減少は、経時的な生物発光のレベルの減少によって示される。図１２Ａは、本試験の５動物／処置群の代表的な生物発光イメージングを示す。図１２Ｂは、ＣＸＣＲ４抗体ｈ３Ｇ１０．１．９１．Ａ５８Ｂで処置すると、経時的にアイソタイプ対照抗体と比較して腫瘍増殖が有意に阻害される（３０日目でｐ＜０．０００１）ことを示し、抗ＣＸＣＲ４抗体がヒト多発性骨髄腫の段階的な播種性異種移植片モデルにおいて全身腫瘍組織量を阻害することに効果的であることを示す。図１２Ｃに示した本試験の生存曲線は、ＯＰＭ−２−Ｌｕｃ  ＭＭ細胞を全身的に移植された動物の生存期間において、アイソタイプ対照抗体と比較して抗ＣＸＣＲ４抗体ｈ３Ｇ１０．１．９１．Ａ５８Ｂの有意な効果を実証する。アイソタイプ対照およびメルファラン処置動物は、それぞれ、３３．５および３６日の生存期間中央値を示した一方、ｈ３Ｇ１０．１．９１．Ａ５８Ｂ  ＣＸＣＲ４抗体で処置された動物は、未確定の生存期間中央値を有し、試験の５０日目までに死亡は観察されなかった。表１３。これらの差異は、マンテル−コック検定によって統計的に有意であった（ｐ＜０．０００１）。
【０４７６】
【表１４】
2019141059.tif 000049
【０４７７】
（実施例１５）
ＣＸＣＲ４陽性細胞内の抗ＣＸＣＲ４ＡＤＣの細胞傷害性
抗ＣＸＣＲ４抗体（例えば、３Ｇ１０）を、グルタミン含有トランスグルタミナーゼ（「Ｑ」）タグ  ＴＧ６（配列番号９１（ＬＬＱＧＡ））で遺伝子工学的に改変し、ＡｃＬｙｓ−ｖｃ−ＰＡＢＣ−ＭＭＡＤ（アセチル−リシン−バリン−シトルリン−ｐ−アミノベンジルオキシカルボニル−ＭＭＡＤ）、およびＡｃＬｙｓ−ｖｃ−ＰＡＢＣ−０１０１（（２−メチルアラニル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソ−３−｛［（１Ｓ）−２−フェニル−１−（１，３−チアゾール−２−イル）エチル］アミノ｝プロピル］ピロリジン−１−イル｝−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド）とコンジュゲートし、ヒトＩｇＧ１サブタイプとして発現させた。トランスグルタミナーゼタグを、抗体の重鎖Ｃ末端で遺伝子工学的に改変させた。次いで、細胞毒性剤ＭＭＡＤまたは０１０１への抗ＣＸＣＲ４抗体コンジュゲーションを、特定の部位（例えば、抗体の重鎖のカルボキシル末端）でグルタミン含有タグを担持する抗ＣＸＣＲ４抗体と、ペイロード（例えば、ＭＭＡＤまたは０１０１）のアミン含有誘導体との間の微生物トランスグルタミナーゼ触媒アミド基転移反応を介して実現した。合によっては、カルボキシル末端（ＥＵ番号付けスキームによる４４７位）の野生型アミノ酸リシンを欠失させ、Ｑ−タグと置き換えた。他の例では、２２２位（ＥＵ番号付けスキームによる）の野生型アミノ酸リシンを、アミノ酸アルギニンと置き換えた（「Ｋ２２２Ｒ」）。Ｋ２２２Ｒ置換は、より均質な抗体とペイロードのコンジュゲート、および／または抗体とペイロードとのより良好な分子間架橋をもたらすという有意な効果を提供した。アミド基転移反応では、グルタミン含有タグ上のグルタミンは、アシルドナーとして作用し、アミン含有化合物は、アシルアクセプター（アミンドナー）として作用した。精製抗ＣＸＣＲ４抗体を、６．２〜８．８のｐＨ範囲の、１５０〜９００ｍＭのＮａＣｌ、および２５ｍＭのＭＥＳ、ＨＥＰＥＳ［４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸］、またはＴｒｉｓ  ＨＣｌ緩衝液中で、ストレプトベルチシリウム・モバラエンス（Ｓｔｒｅｐｔｏｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｍｏｂａｒａｅｎｓｅ）トランスグルタミナーゼ（ＡＣＴＩＶＡ（商標）、Ａｊｉｎｏｍｏｔｏ、日本）の存在下で、過剰のアシルアクセプターとともにインキュベートした。反応条件を個々のアシルアクセプター誘導体について調整した。室温で２．５時間インキュベートした後、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅから市販されている親和性クロマトグラフィーなどの当業者に公知の標準的な親和性クロマトグラフィー法を使用して、ＭａｂＳｅｌｅｃｔ樹脂（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｗａｕｋｅｓｈａ、ＷＩ）上で抗体−薬剤コンジュゲートを精製した。
【０４７８】
次いで、ＣＸＣＲ４発現細胞を、処置の２４時間前に、４０００〜８０００細胞／ウェルで白色壁透明底プレート上に播種した。次いで、４倍連続希釈した抗体−薬剤コンジュゲートを用いて三つ組で細胞を処置した。処置して９６時間後に、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ  Ｃｅｌｌ  Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  Ａｓｓａｙ  ９６（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ  ＷＩ）によって細胞生存能を求めた。相対的な細胞生存能を、未処置対照のパーセンテージとして求めた。次いで、ＩＣ５０を計算した。トランスグルタミナーゼタグによってＭＭＡＤまたは０１０１にコンジュゲートした抗ＣＸＣＲ４抗体が、ＣＸＣＲ４発現細胞内で強力な細胞殺傷活性を発揮する。
【０４７９】
【表１５】
2019141059.tif 000050
【０４８０】
（実施例１６）
ＣＸＣＲ４−ＡＤＣのｉｎ  ｖｉｖｏ抗腫瘍活性
ＣＸＣＲ４  ＡＤＣのｉｎ  ｖｉｖｏ抗腫瘍有効性を、Ｒａｍｏｓ（ＮＨＬ）およびＨＰＢ−ＡＬＬ（Ｔ−ＡＬＬ）の異種移植片モデルにおいて評価した。雌の生後４〜６週のＣＢ１７  ＳＣＩＤマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）に、式（体積＝長さ×幅２）／２によって計算しておよそ５００ｍｍ３の平均サイズ体積まで、実施例９に記載したように５×１０６Ｒａｍｏｓ（ＮＨＬ）を皮下に移植した。１０×１０６個のＨＰＢ−ＡＬＬ細胞を、平均腫瘍サイズ体積がやはり約５００ｍｍ３に到達するまで、雌の生後４〜６週のＣＢ１７  ＳＣＩＤマウスに移植した。Ｒａｍｏｓモデルでは、マウスの群を、６．０ｍｇ／ｋｇでの陰性対照ＡＤＣ（ｎｅｇ  ｃｔｒｌ−ＴＧ６−ｖｃ０１０１）、または１．５、３．０、もしくは６．０ｍｇ／ｋｇでのＣＸＣＲ４  ＡＤＣ（３Ｇ１０−ＴＧ６−ｖｃ０１０１および６Ｂ６−ＴＧ６−ｖｃ０１０１）の単一用量静脈内（ｉ．ｖ．）注射で処置した。腫瘍体積は、試験の継続時間にわたって週１回キャリパーで測定した。実験の結果を図１３Ａに提示する。結果は、両ＣＸＣＲ４  ＡＤＣが、３ｍｇ／ｋｇ以上の用量で腫瘍退縮を誘導したことを示す。対照ＡＤＣは、腫瘍増殖に対して効果を有さなかった。ＨＰＢ−ＡＬＬモデルでは、３Ｇ１０−ＴＧ６−ｖｃ０１０１の１．５ｍｇ／ｋｇの単一用量注射が腫瘍退縮を誘導するのに十分である（図１３Ｂ）。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４−１】
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【図４−２】
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【図４−３】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８−１】
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【図８−２】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２−１】
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【図１２−２】
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【図１３】
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【配列表】
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