(57)【要約】      （修正有）【課題】ヒトでの使用のために非免疫原性で安全な、ＩＬ−４を阻害する改善された薬剤、ＩＬ−１３を阻害する改善された薬剤、並びにＩＬ−４およびＩＬ−１３の両方を阻害する単一の薬剤の提供。【解決手段】約４３３ｕｇ・ｈ／ｍｌ〜約１４２００ｕｇ・ｈ／ｍｌの時間ゼロから実時間まで台形法を使用して計算した血漿濃度対時間曲線下の面積（ＡＵＣlast）を有する、ヒト対象に対するＩＬ−４およびＩＬ−１３に特異的に結合するデュアルＶ領域抗体様タンパク質またはデュアルＶ領域抗体様領域の断片の最大安全治療用量による。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
約４３３ｕｇ・ｈ／ｍｌ〜約１４２００ｕｇ・ｈ／ｍｌの時間ゼロから実時間まで台形法を使用して計算した血漿濃度対時間曲線下の面積（ＡＵＣlast）を有する、ヒト対象に対するＩＬ−４およびＩＬ−１３に特異的に結合するデュアルＶ領域抗体様タンパク質またはデュアルＶ領域抗体様領域の断片の最大安全治療用量。
【請求項２】
約４５９ｕｇ・ｈ／ｍｌ〜約６７００１４５００ｕｇ・ｈ／ｍｌの無限に外挿された血漿濃度対時間曲線下の面積（ＡＵＣ）を有する、ヒト対象に対するＩＬ−４およびＩＬ−１３に特異的に結合するデュアルＶ領域抗体様タンパク質またはデュアルＶ領域抗体様領域の断片の最大安全治療用量。
【請求項３】
約０．７１７ｕｇ／ｍｌ〜約２８．７ｕｇ／ｍｌの観察された最大血漿濃度（Ｃmax）
を有する、ヒト対象に対するＩＬ−４およびＩＬ−１３に特異的に結合するデュアルＶ領域抗体様タンパク質またはデュアルＶ領域抗体様領域の断片の最大安全治療用量。
【請求項４】
約９６時間〜約１６８時間の最大血漿濃度に達するまでの第１の時間（ｔmax）を有す
る、ヒト対象に対するＩＬ−４およびＩＬ−１３に特異的に結合するデュアルＶ領域抗体様タンパク質またはデュアルＶ領域抗体様領域の断片の最大安全治療用量。
【請求項５】
ヒト対象に投与される、ＩＬ−４およびＩＬ−１３に特異的に結合するデュアルＶ領域抗体様タンパク質またはデュアルＶ領域抗体様領域の断片の治療用量が安全か否かをモニタリングする方法であって、
（ａ）該デュアルＶ領域抗体様タンパク質またはデュアルＶ領域抗体様領域の断片の該治療用量を該ヒト対象に投与する工程；
（ｂ）アレルギー性気管支痙攣についての救急処置室または家庭での集中処置、血液疾患、けいれん、総ビリルビン＞２×正常範囲の上限（ＵＬＮ）と関連するアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）＞３×ＵＬＮ、無症候性ＡＬＴの増加＞１０×ＵＬＮ、薬物依存または薬物乱用の発生、ＡＬＴの増加≧２×ＵＬＮ、≧７２時間にわたるｈｓＣＲＰ＞１０ｍｇ／Ｌ、心筋トロポニンＩ（ｃＴｎＩ）＞２×ＵＬＮ、心電図（ＥＣＧ）マシンでの心室の脱分極および再分極時間（ＱＴ）からなる群より選択される１つまたはそれ以上の事象を測定する工程であって、ＱＴは、ＱＴｃ≧５００ｍｓである、ＥＣＧマシンによって自動的に補正されたものであり（ＱＴｃ）、重症皮膚反応が、ＩＰ注射の部位に限局的である、工程；および
（ｃ）（ｂ）で測定された１つまたはそれ以上の上記事象が生じたことを決定する工程；
を含み、上記治療用量が安全でないと同定され、治療用量が中断または低減される、上記方法。
【請求項６】
ヒト対象への、ＩＬ−４およびＩＬ−１３に特異的に結合するデュアルＶ領域抗体様タンパク質またはデュアルＶ領域抗体様領域の断片の安全治療用量を選択するまたは治療用量の安全な使用をモニタリングする方法であって、
（ａ）該デュアルＶ領域抗体様タンパク質またはデュアルＶ領域抗体様領域の断片の用量を該ヒト対象に投与する工程；
（ｂ）該ヒト対象由来の血液サンプル中のＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）のレベルを測定する工程；および
（ｃ）（ｂ）で測定された該Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）のレベルが２０ｍｇ／Ｌ未満であることを決定する工程；
を含み、該用量が、該ヒト対象に投与される上記安全治療用量として選択される、上記方法。
【請求項７】
ヒト対象への、ＩＬ−４およびＩＬ−１３に特異的に結合するデュアルＶ領域抗体様タンパク質またはデュアルＶ領域抗体様領域の断片の安全治療用量を選択するまたは治療用量の安全な使用をモニタリングする方法であって、
（ａ）該デュアルＶ領域抗体様タンパク質またはデュアルＶ領域抗体様領域の断片の用量を該ヒト対象に投与する工程；
（ｂ）心電図（ＥＣＧ）マシンでの心室の脱分極および再分極時間（ＱＴ）を測定する工程であって、該ヒト対象のＱＴは、ＥＣＧマシンによって自動的に補正される（ＱＴｃ）、該工程；および
（ｃ）（ｂ）で測定された該ＱＴＣが５００ｍｓ未満であることを決定する工程；
を含み、該用量が、該ヒト対象に投与される上記安全治療用量として選択される、上記方法。
【請求項８】
デュアルＶ領域抗体様タンパク質またはデュアルＶ領域抗体様領域の断片が、配列番号１および配列番号３のアミノ酸配列を含む可変軽鎖と、配列番号２および配列番号４のアミノ酸配列を含む可変重鎖とを含む、請求項５〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
配列番号１および配列番号３がペプチドリンカーで一緒に連結され、配列番号２および配列番号４がそのペプチドリンカーで一緒に連結されるように、デュアルＶ領域抗体様タンパク質またはデュアルＶ領域抗体様領域の断片がそのペプチドリンカーを含む、請求項５〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
ペプチドリンカーが配列番号６からなる、請求項５〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
治療用量が約３００ｍｇ以下である、請求項５〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
治療用量が、１０ｍｇ、２０ｍｇ、４０ｍｇ、８０ｍｇ、１５０ｍｇおよび３００ｍｇからなる群より選択される、請求項５〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
インターロイキン−４（ＩＬ−４）は、リンパ系Ｂ細胞およびＴ細胞、ならびに単球、内皮細胞および線維芽細胞を含む多くの非リンパ系細胞に対して広いスペクトルの生物学的影響を有する多面的なサイトカインである。例えば、ＩＬ−４は、いくつかのＩＬ−２依存性細胞株およびＩＬ−３依存性細胞株の増殖を刺激し、休止Ｂ細胞上での主要組織適合複合体クラスＩＩ分子の発現を誘導し、ヒトＢ細胞によるＩｇＧ４およびＩｇＥの分泌を増強する。ＩＬ−４は、Ｔｈ２型免疫応答と関連し、Ｔｈ２細胞によって産生され、Ｔｈ２細胞の分化を促進する。ＩＬ−４は、多数の障害、例えばアレルギーおよび喘息に関与している。
【０００２】
ＩＬ−１３は、活性化後の活性化Ｔリンパ球、Ｂリンパ球および肥満細胞によって分泌される、１１２アミノ酸の最近同定された（非特許文献１および２）サイトカインである。ＩＬ−４と共有されるその多数の生物学的特性によって、ＩＬ−１３はＩＬ−４様サイトカインと記載されてきた。その活性は、Ｂ細胞（非特許文献３、４、５）、単球（非特許文献６、７、８、９、１０）および他の非造血細胞（非特許文献１１および１２）に対するＩＬ−４の活性と実に類似している。他方、ＩＬ−４とは対照的に、ＩＬ−１３は、休止Ｔ細胞または活性化Ｔ細胞に対しては特定の影響を発揮しない（非特許文献１３）。
【０００３】
単球／マクロファージ、Ｂリンパ球および特定の造血前駆体に対するＩＬ−１３の種々の生物学的活性は、Ａ．Ｊ．Ｍｉｎｔｙによって、ならびにＩＬ−１３に関する総説論文中に詳細に記載されている。さらに、いくつかのデータは、このサイトカインが他の細胞型に対して多面的な影響を有することを示している。ＩＬ−１３によって直接影響されるこれらの非造血細胞は、内皮細胞およびミクログリア細胞、ケラチノサイトならびに腎臓癌腫および結腸癌腫である。
【０００４】
細胞内の生物学的分子によって伝達されるシグナルの分析における段階の１つは、その膜レセプターを同定することにある。ＩＬ−１３レセプターについてこの目的を達成するために実施された調査研究は、ＩＬ−１３およびＩＬ−４が、共通のレセプター、または最低でも共通のレセプター複合体の構成要素のいくつか、ならびに共通のシグナル伝達エレメントを有することを示している（非特許文献１４、１５、１６、１７）。このレセプターは、考慮される細胞型によって異なる数で、種々の細胞型の表面に存在する。ＩＬ−１３レセプターおよびＩＬ−４レセプターの分布比較が、非特許文献１８によって示されている。
【０００５】
細胞表面レセプターおよびレセプター複合体は、異なる親和性でＩＬ−４および／またはＩＬ−１３に結合する。ＩＬ−４および／またはＩＬ−１３に結合するレセプターおよびレセプター複合体の素因構成要素は、ＩＬ−４Ｒα、ＩＬ−１３Ｒα１およびＩＬ−１３Ｒα２である。これらの鎖は、ＩＬ−４Ｒα／ＩＬ−１３Ｒα１（ＩＩ型ＩＬ−４Ｒ）またはＩＬ−４Ｒα／ｃ（Ｉ型ＩＬ−４Ｒ）のモノマーまたはヘテロダイマーとして細胞の表面上に発現される。ＩＬ−４ＲαモノマーおよびＩＬ−４Ｒ／ｃヘテロダイマーはＩＬ−４に結合するが、ＩＬ−１３には結合しない。ＩＬ−１３Ｒα１モノマーおよびＩＬ−１３Ｒα２モノマーはＩＬ−１３に結合するが、ＩＬ−４には結合しない。ＩＬ−４Ｒα／ＩＬ−１３Ｒα１ヘテロダイマーは、ＩＬ−４およびＩＬ−１３の両方に結合する（非特許文献１９）。
【０００６】
Ｔｈ２型免疫応答は、抗体産生および体液性免疫を促進し、細胞外病原体を撃退するために複雑に構成されている。Ｔｈ２細胞は、Ｉｇ産生（体液性免疫）のメディエーターで
あり、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−９、ＩＬ−１０およびＩＬ−１３を産生する（非特許文献２０）。Ｔｈ２型免疫応答は、特定のサイトカイン（例えば、ＩＬ−４、ＩＬ−１３）および特定の型の抗体（ＩｇＥ、ＩｇＧ４）の生成を特徴とし、涙目および喘息症状、例えば、気道炎症および肺における気道筋肉細胞の収縮を生じ得るアレルギー性反応に典型的である。
【０００７】
ＩＬ−４およびＩＬ−１３は共に、その生物学的機能に基づいて治療上重要なサイトカインであり、喘息を含む多くの疾患において重要な役割を果たす（非特許文献２１）。ＩＬ−４は、自己免疫疾患を阻害できることが示されており、ＩＬ−４およびＩＬ−１３は共に、抗腫瘍免疫応答を増強する潜在能力を示している。ＩＬ−４およびＩＬ−１３ならびにそれらのレセプターの上昇は、特発性肺線維症（ＩＰＦ）の病理発生に関連付けられている（非特許文献２２；２３）。文献中の証拠は、ＴＨ２サイトカインＩＬ−４およびＩＬ−１３が、この肺組織の再構築および線維症のメディエーターとして、ＩＰＦの病理発生において複数の役割を果たすことを実証している。肺中のＴｈ２型ＣＤ４＋ｔ細胞は、ＩＬ−４およびＩＬ−１３の主な供給源である可能性が高く、細胞外マトリックス再構築の重要なレギュレーターとして暗示されているが（非特許文献２４）、肥満細胞、好塩基球、好酸球、マクロファージおよび上皮細胞を含む他の細胞型もまた、これらのサイトカインの潜在的な供給源であり得る（非特許文献２５）。ＩＰＦ患者において、気管支肺胞洗浄液中のＩＬ−１３レベルおよびＩＬ−４レベルは、正常コントロールと比較して上昇する。かかる証拠は、これらのサイトカインを抑制または中和できる治療が、ＩＰＦ患者における線維症の進行を遅延させる潜在能力を有することを示唆している。両方のサイトカインが、アレルギー性疾患または線維性疾患の病理発生に関与するので、これらのサイトカインのインヒビターは、治療上の利益を提供し得る。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】ＷＯ２００９／０５２０８１（ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０７９７８７）
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】Ｍｉｎｔｙ，Ａ．ら、Ｎａｔｕｒｅ、１９９３年、３６２巻、２４８〜２５０頁
【非特許文献２】ＭｃＫｅｎｚｉｅ，Ａ．Ｎ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ、１９９３年、９０巻、３７３５〜３７３９頁
【非特許文献３】Ｄｅｆｒａｎｃｅ，Ｔ．ら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．、１９９４年、１７９巻、１３５〜１４３頁
【非特許文献４】Ｐｕｎｎｏｎｅｎ，Ｊ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）、１９９３年、９０巻、３７３０〜３７３４頁
【非特許文献５】Ｆｉｏｒ，Ｒ．ら、Ｅｕｒ．Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｎｅｔｗｏｒｋ、１９９４年、５巻、５９３〜６００頁
【非特許文献６】Ｍｕｚｉｏ，Ｍ．Ｒ．Ｆ．ら、Ｂｌｏｏｄ、１９９４年、８３巻、１７３８〜１７４３頁
【非特許文献７】Ｄｅ  Ｗａａｌ  Ｍａｌｅｆｙｔ，Ｒ．ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ、１９９３年、１５１巻、６３７０〜６３８１頁
【非特許文献８】Ｄｏｙｌｅ，Ａ．ら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９４年、２４巻、１４４１〜１４４５頁
【非特許文献９】Ｍｏｎｔａｎｅｒ，Ｌ．Ｊ．ら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．、１９９３年、１７８巻、７４３〜７４７頁
【非特許文献１０】Ｓｏｚｚａｎｉ，Ｐ．ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、１９９５年、２７０巻、５０８４〜５０８８頁
【非特許文献１１】Ｈｅｒｂｅｒｔ，Ｊ．Ｍ．ら、Ｆｅｂｓ  Ｌｅｔｔ．、１９９３年、３２８巻、２６８〜２７０頁
【非特許文献１２】Ｄｅｒｏｃｑ，Ｊ．Ｍ．ら、Ｆｅｂｓ  Ｌｅｔｔ．１９９４年、３４３巻、３２〜３６頁
【非特許文献１３】Ｚｕｒａｗｕｋｉ，Ｇ．ら、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ、１９９４年、１５巻、１９〜２６頁
【非特許文献１４】Ｚｕｒａｗｓｋｉ  Ｓ．Ｍ．ら、Ｅｍｂｏ  Ｊｏｕｒｎａｌ、１９９３年、１２巻、２６６３〜２６７０頁
【非特許文献１５】Ａｖｅｒｓａ，Ｇ．ら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．、１９９３年、１７８巻、２２１３〜２２１８頁
【非特許文献１６】Ｖｉｔａ，Ｎ．ら、Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、１９９５年、２７０巻、３５１２〜３５１７頁
【非特許文献１７】Ｌｅｆｏｒｔ，Ｓ．ら、Ｆｅｂｓ  Ｌｅｔｔ．、１９９５年、３６６巻、１２２〜１２６頁
【非特許文献１８】Ａ．Ｊ．Ｍｉｎｔｙ、Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１３  ｆｏｒ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ  ｉｎ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｄｉｓｅａｓｅ．Ｄ．Ｇ．ＲｅｍｉｃｋおよびＪ．Ｓ．Ｆｒｉｅ編、Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｃｋｅｒ、Ｎ．Ｙ．１９９６年
【非特許文献１９】Ｍｕｒａｔａら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｈｅｍａｔｏｌ．、１９９９年、６９巻、１３〜２０頁
【非特許文献２０】Ｔａｎａｋａら、Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｈｕｍｏｒａｌ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ、２５１〜２７２頁、Ｓｎａｐｐｅｒ編、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９９６年）
【非特許文献２１】Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００５年、５巻、１６１〜１６６頁
【非特許文献２２】Ｊａｋｕｂｚｉｃｋ  Ｃ．ら、Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ．２００４年：１６４巻（６号）：１９８９〜２００１頁
【非特許文献２３】Ｍｕｒｒａｙ  ＬＡら  Ｉｎｔ  Ｊ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．２００８年：４０巻（１０号）：２１７４〜８２頁
【非特許文献２４】Ｗｙｎｎ，ＴＡ、Ｎａａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ、４巻：５８３〜５９４頁、２００４年
【非特許文献２５】Ｇｏｒｄｏｎ  ＳおよびＭａｒｔｉｎｅｚ  ＦＯ、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  Ｒｅｖ．３２巻：５９３〜６０４頁、２０１０年
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
したがって、ヒトでの使用のために非免疫原性で安全な、ＩＬ−４を阻害する改善された薬剤、ＩＬ−１３を阻害する改善された薬剤、ならびにＩＬ−４およびＩＬ−１３の両方を阻害する単一の薬剤が必要とされている。本発明者らは以前に、ＩＬ−４およびＩＬ−１３に特異的に結合する４つの結合部位を有するデュアルＶ領域抗体様結合ペプチドについて報告している（参照によってその全体が組み入れられる特許文献１）。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明の１実施形態は、約４３３ｕｇ・ｈ／ｍｌ〜約１４２００ｕｇ・ｈ／ｍｌの時間ゼロから実時間まで台形法を使用して計算した血漿濃度対時間曲線下の面積（ＡＵＣlast）を有するヒト対象に対するＩＬ−４およびＩＬ−１３に特異的に結合するデュアルＶ領域抗体様タンパク質またはデュアルＶ領域抗体様領域の断片の最大安全治療用量である。本発明のさらなる実施形態において、デュアルＶ領域抗体様タンパク質またはデュアルＶ領域抗体様領域の断片は、配列番号１および配列番号３のアミノ酸配列を含む可変軽鎖と、配列番号２および配列番号４のアミノ酸配列を含む可変重鎖とを含む。さらなる実施形態において、配列番号１および配列番号３はペプチドリンカーで互いに連結され、配列番
号２および配列番号４はそのペプチドリンカーで互いに連結される。さらなる実施形態において、ペプチドリンカーは配列番号６からなる。別の実施形態において、安全治療用量は約３００ｍｇ以下である。さらなる実施形態において、安全治療用量は、１０ｍｇ、２０ｍｇ、４０ｍｇ、８０ｍｇ、１５０ｍｇおよび３００ｍｇからなる群より選択される。
【００１２】
本発明の１実施形態は、約４５９ｕｇ・ｈ／ｍｌ〜約６７００１４５００ｕｇ・ｈ／ｍｌの無限に外挿された血漿濃度対時間曲線下の面積（ＡＵＣ）を有するヒト対象に対するＩＬ−４およびＩＬ−１３に特異的に結合するデュアルＶ領域抗体様タンパク質またはデュアルＶ領域抗体様領域の断片の最大安全治療用量である。本発明のさらなる実施形態において、デュアルＶ領域抗体様タンパク質またはデュアルＶ領域抗体様領域の断片は、配列番号１および配列番号３のアミノ酸配列を含む可変軽鎖と、配列番号２および配列番号４のアミノ酸配列を含む可変重鎖とを含む。さらなる実施形態において、配列番号１および配列番号３はペプチドリンカーで互いに連結され、配列番号２および配列番号４はそのペプチドリンカーで互いに連結される。さらなる実施形態において、ペプチドリンカーは配列番号６からなる。別の実施形態において、安全治療用量は約３００ｍｇ以下である。さらなる実施形態において、安全治療用量は、１０ｍｇ、２０ｍｇ、４０ｍｇ、８０ｍｇ、１５０ｍｇおよび３００ｍｇからなる群より選択される。
【００１３】
本発明の１実施形態は、約０．７１７ｕｇ／ｍｌ〜約２８．７ｕｇ／ｍｌの観察された最大血漿濃度（Ｃmax）を有するヒト対象に対するＩＬ−４およびＩＬ−１３に特異的に
結合するデュアルＶ領域抗体様タンパク質またはデュアルＶ領域抗体様領域の断片の最大安全治療用量である。本発明のさらなる実施形態において、デュアルＶ領域抗体様タンパク質またはデュアルＶ領域抗体様領域の断片は、配列番号１および配列番号３のアミノ酸配列を含む可変軽鎖と、配列番号２および配列番号４のアミノ酸配列を含む可変重鎖とを含む。さらなる実施形態において、配列番号１および配列番号３はペプチドリンカーで互いに連結され、配列番号２および配列番号４はそのペプチドリンカーで互いに連結される。さらなる実施形態において、ペプチドリンカーは配列番号６からなる。別の実施形態において、安全治療用量は約３００ｍｇ以下である。さらなる実施形態において、安全治療用量は、１０ｍｇ、２０ｍｇ、４０ｍｇ、８０ｍｇ、１５０ｍｇおよび３００ｍｇからなる群より選択される。
【００１４】
本発明の１実施形態は、約９６時間〜約１６８時間の最大血漿濃度に達するまでの第１の時間（ｔmax）を有するヒト対象に対するＩＬ−４およびＩＬ−１３に特異的に結合す
るデュアルＶ領域抗体様タンパク質またはデュアルＶ領域抗体様領域の断片の最大安全治療用量である。本発明のさらなる実施形態において、このデュアルＶ領域抗体様タンパク質またはデュアルＶ領域抗体様領域の断片は、配列番号１および配列番号３のアミノ酸配列を含む可変軽鎖と、配列番号２および配列番号４のアミノ酸配列を含む可変重鎖とを含む。さらなる実施形態において、配列番号１および配列番号３はペプチドリンカーで互いに連結され、配列番号２および配列番号４はそのペプチドリンカーで互いに連結される。さらなる実施形態において、ペプチドリンカーは配列番号６からなる。別の実施形態において、安全治療用量は約３００ｍｇ以下である。さらなる実施形態において、安全治療用量は、１０ｍｇ、２０ｍｇ、４０ｍｇ、８０ｍｇ、１５０ｍｇおよび３００ｍｇからなる群より選択される。
【００１５】
本発明の１実施形態は、約１６７９時間〜約２０２０時間のｔlastを有するヒト対象に対するＩＬ−４およびＩＬ−１３に特異的に結合するデュアルＶ領域抗体様タンパク質またはデュアルＶ領域抗体様領域の断片の最大安全治療用量である。本発明のさらなる実施形態において、デュアルＶ領域抗体様タンパク質またはデュアルＶ領域抗体様領域の断片は、配列番号１および配列番号３のアミノ酸配列を含む可変軽鎖と、配列番号２および配列番号４のアミノ酸配列を含む可変重鎖とを含む。さらなる実施形態において、配列番号
１および配列番号３はペプチドリンカーで互いに連結され、配列番号２および配列番号４はそのペプチドリンカーで互いに連結される。さらなる実施形態において、ペプチドリンカーは配列番号６からなる。別の実施形態において、安全治療用量は約３００ｍｇ以下である。さらなる実施形態において、安全治療用量は、１０ｍｇ、２０ｍｇ、４０ｍｇ、８０ｍｇ、１５０ｍｇおよび３００ｍｇからなる群より選択される。
【００１６】
本発明の１実施形態は、約２４４時間〜約５３６時間のｔ1/2Zを有するヒト対象に対するＩＬ−４およびＩＬ−１３に特異的に結合するデュアルＶ領域抗体様タンパク質またはデュアルＶ領域抗体様領域の断片の最大安全治療用量である。本発明のさらなる実施形態において、デュアルＶ領域抗体様タンパク質またはデュアルＶ領域抗体様領域の断片は、配列番号１および配列番号３のアミノ酸配列を含む可変軽鎖と、配列番号２および配列番号４のアミノ酸配列を含む可変重鎖とを含む。さらなる実施形態において、配列番号１および配列番号３はペプチドリンカーで互いに連結され、配列番号２および配列番号４はそのペプチドリンカーで互いに連結される。さらなる実施形態において、このペプチドリンカーは配列番号６からなる。別の実施形態において、安全治療用量は約３００ｍｇ以下である。さらなる実施形態において、安全治療用量は、１０ｍｇ、２０ｍｇ、４０ｍｇ、８０ｍｇ、１５０ｍｇおよび３００ｍｇからなる群より選択される。
【００１７】
本発明の１実施形態は、約６８３０ｍｌ〜約１８７７０ｍｌのＶｓｓ／Ｆを有するヒト対象に対するＩＬ−４およびＩＬ−１３に特異的に結合するデュアルＶ領域抗体様タンパク質またはデュアルＶ領域抗体様領域の断片の最大安全治療用量である。本発明のさらなる実施形態において、デュアルＶ領域抗体様タンパク質またはデュアルＶ領域抗体様領域の断片は、配列番号１および配列番号３のアミノ酸配列を含む可変軽鎖と、配列番号２および配列番号４のアミノ酸配列を含む可変重鎖とを含む。さらなる実施形態において、配列番号１および配列番号３はペプチドリンカーで互いに連結され、配列番号２および配列番号４はそのペプチドリンカーで互いに連結される。さらなる実施形態において、ペプチドリンカーは配列番号６からなる。別の実施形態において、安全治療用量は約３００ｍｇ以下である。さらなる実施形態において、安全治療用量は、１０ｍｇ、２０ｍｇ、４０ｍｇ、８０ｍｇ、１５０ｍｇおよび３００ｍｇからなる群より選択される。
【００１８】
本発明の１実施形態は、約１２．１ｍｌ／時間〜約３８．４ｍｌ／時間のＣＬ／Ｆを有するヒト対象に対するＩＬ−４およびＩＬ−１３に特異的に結合するデュアルＶ領域抗体様タンパク質またはデュアルＶ領域抗体様領域の断片の最大安全治療用量である。本発明のさらなる実施形態において、デュアルＶ領域抗体様タンパク質またはデュアルＶ領域抗体様領域の断片は、配列番号１および配列番号３のアミノ酸配列を含む可変軽鎖と、配列番号２および配列番号４のアミノ酸配列を含む可変重鎖とを含む。さらなる実施形態において、配列番号１および配列番号３はペプチドリンカーで互いに連結され、配列番号２および配列番号４はそのペプチドリンカーで互いに連結される。さらなる実施形態において、ペプチドリンカーは配列番号６からなる。別の実施形態において、安全治療用量は約３００ｍｇ以下である。さらなる実施形態において、安全治療用量は、１０ｍｇ、２０ｍｇ、４０ｍｇ、８０ｍｇ、１５０ｍｇおよび３００ｍｇからなる群より選択される。
【００１９】
本発明の１実施形態は、ヒト対象に投与された、ＩＬ−４およびＩＬ−１３に特異的に結合するデュアルＶ領域抗体様タンパク質またはデュアルＶ領域抗体様領域の断片の安全治療用量の出現を同定またはモニタリングする方法であって、（ａ）前記デュアルＶ領域抗体様タンパク質またはデュアルＶ領域抗体様領域の断片の用量を前記ヒト対象に投与する工程；（ｂ）アレルギー性気管支痙攣についての救急処置室または家庭での集中処置、血液疾患、けいれん、総ビリルビン＞２×正常範囲の上限（ＵＬＮ）と関連するアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）＞３×ＵＬＮ、無症候性ＡＬＴの増加＞１０×ＵＬＮ、薬物依存または薬物乱用の発生、ＡＬＴの増加≧２×ＵＬＮ、≧７２時間にわたるｈ
ｓＣＲＰ＞１０ｍｇ／Ｌ、心筋トロポニンＩ（ｃＴｎＩ）＞２×ＵＬＮ、心電図（ＥＣＧ）マシンでの心室の脱分極および再分極時間（ＱＴ）からなる群より選択される１つまたはそれ以上の事象を測定する工程であって、ＱＴは、ＱＴｃ≧５００ｍｓである、ＥＣＧマシンによって自動的に補正されたものであり（ＱＴｃ）、重症皮膚反応は、ＩＰ注射の部位に局所的である、工程；および（ｃ）（ｂ）で測定された１つまたはそれ以上の前記事象が出現していないことを決定する工程を含み、前記用量が、前記ヒト対象に投与された前記安全治療用量として同定される、上記方法である。本発明のさらなる実施形態において、デュアルＶ領域抗体様タンパク質またはデュアルＶ領域抗体様領域の断片は、配列番号１および配列番号３のアミノ酸配列を含む可変軽鎖と、配列番号２および配列番号４のアミノ酸配列を含む可変重鎖とを含む。さらなる実施形態において、配列番号１および配列番号３はペプチドリンカーで互いに連結され、配列番号２および配列番号４はそのペプチドリンカーで互いに連結される。さらなる実施形態において、ペプチドリンカーは配列番号６からなる。別の実施形態において、安全治療用量は約３００ｍｇ以下である。さらなる実施形態において、安全治療用量は、１０ｍｇ、２０ｍｇ、４０ｍｇ、８０ｍｇ、１５０ｍｇおよび３００ｍｇからなる群より選択される。
【００２０】
本発明の１実施形態は、ヒト対象に投与される、ＩＬ−４およびＩＬ−１３に特異的に結合するデュアルＶ領域抗体様タンパク質またはデュアルＶ領域抗体様領域の断片の治療用量が安全か否かをモニタリングする方法であって、（ａ）前記デュアルＶ領域抗体様タンパク質またはデュアルＶ領域抗体様領域の断片の前記治療用量を前記ヒト対象に投与する工程；（ｂ）アレルギー性気管支痙攣についての救急処置室または家庭での集中処置、血液疾患、けいれん、総ビリルビン＞２×正常範囲の上限（ＵＬＮ）と関連するアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）＞３×ＵＬＮ、無症候性ＡＬＴの増加＞１０×ＵＬＮ、薬物依存または薬物乱用の発生、ＡＬＴの増加≧２×ＵＬＮ、≧７２時間にわたるｈｓＣＲＰ＞１０ｍｇ／Ｌ、心筋トロポニンＩ（ｃＴｎＩ）＞２×ＵＬＮ、心電図（ＥＣＧ）マシンでの心室の脱分極および再分極時間（ＱＴ）からなる群より選択される１つまたはそれ以上の事象を測定する工程であって、ＱＴは、ＱＴｃ≧５００ｍｓである、ＥＣＧマシンによって自動的に補正されたものであり（ＱＴｃ）、重症皮膚反応は、ＩＰ注射の部位に局所的である、工程；および（ｃ）（ｂ）で測定された１つまたはそれ以上の前記事象が生じたことを決定する工程を含み、前記治療用量が安全でないと同定され、治療用量が中断または低減される、上記方法である。本発明のさらなる実施形態において、デュアルＶ領域抗体様タンパク質またはデュアルＶ領域抗体様領域の断片は、配列番号１および配列番号３のアミノ酸配列を含む可変軽鎖と、配列番号２および配列番号４のアミノ酸配列を含む可変重鎖とを含む。さらなる実施形態において、配列番号１および配列番号３はペプチドリンカーで互いに連結され、配列番号２および配列番号４はそのペプチドリンカーで互いに連結される。さらなる実施形態において、ペプチドリンカーは配列番号６からなる。別の実施形態において、治療用量は約３００ｍｇ以下である。さらなる実施形態において、治療用量は、１０ｍｇ、２０ｍｇ、４０ｍｇ、８０ｍｇ、１５０ｍｇおよび３００ｍｇからなる群より選択される。
【００２１】
本発明の１実施形態は、ヒト対象への、ＩＬ−４およびＩＬ−１３に特異的に結合するデュアルＶ領域抗体様タンパク質またはデュアルＶ領域抗体様領域の断片の安全治療用量を選択するまたは治療用量の安全な使用をモニタリングする方法であって、（ａ）前記デュアルＶ領域抗体様タンパク質またはデュアルＶ領域抗体様領域の断片の用量を前記ヒト対象に投与する工程；（ｂ）前記ヒト対象由来の血液サンプル中でＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）のレベルを測定する工程；および（ｃ）（ｂ）で測定された前記Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）のレベルが２０ｍｇ／Ｌ未満であることを決定する工程を含み、前記用量が、前記ヒト対象に投与される前記安全治療用量として選択される、上記方法である。本発明のさらなる実施形態において、デュアルＶ領域抗体様タンパク質またはデュアルＶ領域抗体様領域の断片は、配列番号１および配列番号３のアミノ酸配列を含む可変軽鎖と、
配列番号２および配列番号４のアミノ酸配列を含む可変重鎖とを含む。さらなる実施形態において、配列番号１および配列番号３はペプチドリンカーで互いに連結され、配列番号２および配列番号４はそのペプチドリンカーで互いに連結される。さらなる実施形態において、ペプチドリンカーは配列番号６からなる。別の実施形態において、安全治療用量は約３００ｍｇ以下である。さらなる実施形態において、安全治療用量は、１０ｍｇ、２０ｍｇ、４０ｍｇ、８０ｍｇ、１５０ｍｇおよび３００ｍｇからなる群より選択される。
【００２２】
本発明の１実施形態は、ヒト対象への、ＩＬ−４およびＩＬ−１３に特異的に結合するデュアルＶ領域抗体様タンパク質またはデュアルＶ領域抗体様領域の断片の安全治療用量を選択するまたは治療用量の安全な使用をモニタリングする方法であって、（ａ）前記デュアルＶ領域抗体様タンパク質またはデュアルＶ領域抗体様領域の断片の用量を前記ヒト対象に投与する工程；（ｂ）心電図（ＥＣＧ）マシンでの心室の脱分極および再分極時間（ＱＴ）を測定する工程であって、前記ヒト対象のＱＴは、ＥＣＧマシンによって自動的に補正される（ＱＴｃ）、工程；および（ｃ）（ｂ）で測定された前記ＱＴＣが５００ｍｓ未満であることを決定する工程を含み、前記用量が、前記ヒト対象に投与される前記安全治療用量として選択される、上記方法である。本発明のさらなる実施形態において、デュアルＶ領域抗体様タンパク質またはデュアルＶ領域抗体様領域の断片は、配列番号１および配列番号３のアミノ酸配列を含む可変軽鎖と、配列番号２および配列番号４のアミノ酸配列を含む可変重鎖とを含む。さらなる実施形態において、配列番号１および配列番号３はペプチドリンカーで互いに連結され、配列番号２および配列番号４はそのペプチドリンカーで互いに連結される。さらなる実施形態において、このペプチドリンカーは配列番号６からなる。別の実施形態において、安全治療用量は約３００ｍｇ以下である。さらなる実施形態において、安全治療用量は、１０ｍｇ、２０ｍｇ、４０ｍｇ、８０ｍｇ、１５０ｍｇおよび３００ｍｇからなる群より選択される。
【００２３】
本発明の１実施形態は、デュアルＶ領域抗体様タンパク質またはデュアルＶ領域抗体様領域の断片の治療用量がヒトへの投与に安全で容認できるか否かを決定する方法であって、（ａ）非ヒト霊長類において非免疫原性研究を実施する工程；および（ｂ）非ヒト霊長類における非免疫原性研究に基づいて、ヒト患者における安全治療用量を決定する工程を含む上記方法である。本発明のさらなる実施形態において、デュアルＶ領域抗体様タンパク質またはデュアルＶ領域抗体様領域の断片は、配列番号１および配列番号３のアミノ酸配列を含む可変軽鎖と、配列番号２および配列番号４のアミノ酸配列を含む可変重鎖とを含む。さらなる実施形態において、配列番号１および配列番号３はペプチドリンカーで互いに連結され、配列番号２および配列番号４はそのペプチドリンカーで互いに連結される。さらなる実施形態において、ペプチドリンカーは配列番号６からなる。別の実施形態において、治療用量は約３００ｍｇ以下である。さらなる実施形態において、治療用量は、１０ｍｇ、２０ｍｇ、４０ｍｇ、８０ｍｇ、１５０ｍｇおよび３００ｍｇからなる群より選択される。
【００２４】
本発明の１実施形態は、試験サンプル中のヒト抗体の総量を測定する方法であって、（ａ）モノクローナル抗ヒトκ鎖を用意する工程；（ｂ）モノクローナル抗ヒトκ鎖に試験サンプルを添加する工程；（ｃ）モノクローナル抗ヒトκ鎖およびサンプルに、スルホタグ標識化抗ヒト抗体を添加する工程；および（ｄ）サンプルに結合したタグ標識化抗ヒト抗体の量を定量する工程を含み、試験サンプルに結合したタグ標識化抗ヒト抗体の量が、試験サンプル中のヒト抗体の総量を決定する、方法である。本発明のさらなる実施形態において、抗ヒトκ鎖は捕捉デバイスに付着される。
【００２５】
本発明の１実施形態は、試験サンプル中に存在するＩＬ−４およびＩＬ−１３に結合できる二重特異性抗体の割合を測定する方法であって、（ａ）抗ヒトＩＬ−４抗体を用意する工程；（ｂ）抗ヒトＩＬ−４抗体にヒトＩＬ−４を添加する工程；（ｃ）ヒトＩＬ−４
および抗ヒトＩＬ−４抗体に、ＩＬ−４およびＩＬ−１３に結合できる二重特異性抗体を含む試験サンプルを添加する工程；（ｄ）ＩＬ−４およびＩＬ−１３に結合できる二重特異性抗体を含む試験サンプルならびにヒトＩＬ−４および抗ヒトＩＬ−４抗体に、ヒトＩＬ−１３を添加する工程；（ｅ）ＩＬ−４およびＩＬ−１３に結合できる二重特異性抗体を含む試験サンプルならびにヒトＩＬ−４および抗ヒトＩＬ−４抗体に、ビオチン化抗ヒトＩＬ−１３抗体を添加する工程；および（ｆ）ビオチン化抗ヒトＩＬ−１３抗体ならびにＩＬ−４およびＩＬ−１３に結合できる二重特異性抗体を含む試験サンプルならびにヒトＩＬ−４および抗ヒトＩＬ−４抗体に、タグ標識化ストレプトアビジンを添加する工程；および（ｇ）ビオチン化抗ヒトＩＬ−１３抗体に結合したタグ標識化ストレプトアビジンの量を定量する工程を含み、結合したタグ標識化ストレプトアビジンの量が、試験サンプル中に存在するＩＬ−４およびＩＬ−１３に結合できる二重特異性抗体の割合を決定する、上記方法である。本発明のさらなる実施形態において、抗ヒトＩＬ−４抗体は捕捉デバイスに付着される。本発明のさらなる実施形態において、二重特異性抗体は、配列番号１および配列番号３のアミノ酸配列を含む可変軽鎖と、配列番号２および配列番号４のアミノ酸配列を含む可変重鎖とを含む。さらなる実施形態において、配列番号１および配列番号３はペプチドリンカーで互いに連結され、配列番号２および配列番号４はそのペプチドリンカーで互いに連結される。さらなる実施形態において、ペプチドリンカーは配列番号６からなる。
【００２６】
本発明の１実施形態は、試験サンプル中に存在するＩＬ−４およびＩＬ−１３に結合できる二重特異性抗体の割合を測定する方法であって、（ａ）抗ヒトＩＬ−１３抗体を用意する工程；（ｂ）抗ヒトＩＬ−１３抗体にヒトＩＬ−１３を添加する工程；（ｃ）ヒトＩＬ−１３および抗ヒトＩＬ−１３抗体に、ＩＬ−４およびＩＬ−１３に結合できる二重特異性抗体を含む試験サンプルを添加する工程；（ｄ）ＩＬ−４およびＩＬ−１３に結合できる二重特異性抗体を含む試験サンプルならびにヒトＩＬ−１３および抗ヒトＩＬ−１３抗体に、ヒトＩＬ−４を添加する工程；（ｅ）ＩＬ−４およびＩＬ−１３に結合できる二重特異性抗体を含む試験サンプルならびにヒトＩＬ−１３および抗ヒトＩＬ−１３抗体に、ビオチン化抗ヒトＩＬ−４抗体を添加する工程；および（ｆ）ビオチン化抗ヒトＩＬ−４抗体ならびにＩＬ−４およびＩＬ−１３に結合できる二重特異性抗体を含む試験サンプルならびにヒトＩＬ−１３および抗ヒトＩＬ−１３抗体に、タグ標識化ストレプトアビジンを添加する工程；および（ｇ）ビオチン化抗ヒトＩＬ−４抗体に結合したタグ標識化ストレプトアビジンの量を定量する工程を含み、結合したタグ標識化ストレプトアビジンの量が、試験サンプル中に存在するＩＬ−４およびＩＬ−１３に結合できる二重特異性抗体の割合を決定する、上記方法である。本発明のさらなる実施形態において、抗ヒトＩＬ−１３抗体は捕捉デバイスに付着される。本発明のさらなる実施形態において、二重特異性抗体は、配列番号１および配列番号３のアミノ酸配列を含む可変軽鎖と、配列番号２および配列番号４のアミノ酸配列を含む可変重鎖とを含む。さらなる実施形態において、配列番号１および配列番号３はペプチドリンカーで互いに連結され、配列番号２および配列番号４はそのペプチドリンカーで互いに連結される。さらなる実施形態において、ペプチドリンカーは配列番号６からなる。
【００２７】
本発明の１実施形態は、試験サンプル中の抗薬物抗体を測定する方法であって、（ａ）試験サンプルを、ＩＬ−４およびＩＬ−１３に結合できるビオチン化二重特異性抗体ならびにＩＬ−４およびＩＬ−１３に結合できるタグ標識化二重特異性抗体と合わせる工程；（ｂ）試験サンプルならびにＩＬ−４およびＩＬ−１３に結合できるビオチン化二重特異性抗体ならびにＩＬ−４およびＩＬ−１３に結合できるタグ標識化二重特異性抗体に、ストレプトアビジンを添加する工程；および（ｃ）結合したＩＬ−４およびＩＬ−１３に結合できるタグ標識化二重特異性抗体の量を定量する工程を含み、結合したＩＬ−４およびＩＬ−１３に結合できるタグ標識化二重特異性抗体の量が、試験サンプル中の抗薬物抗体ヒト抗体の量を決定する、上記方法である。本発明のさらなる実施形態において、ストレ
プトアビジンは捕捉デバイスに付着される。
【００２８】
本発明の１実施形態は、ＩＬ−４およびＩＬ−１３に特異的に結合するデュアルＶ領域抗体様タンパク質またはデュアルＶ領域抗体様領域の断片である薬物の投与後の、ヒト対象または非ヒト霊長類の血清中の抗薬物抗体の量を定量またはモニタリングする方法であって、（ａ）前記デュアルＶ領域抗体様タンパク質またはデュアルＶ領域抗体様領域の断片の用量を、前記ヒト対象または前記非ヒト霊長類に投与する工程；（ｂ）前記ヒト対象または前記非ヒト霊長類から前記血清のサンプルを得る工程；および（ｃ）前記血清サンプル中の抗薬物抗体の量を決定する工程を含む上記方法である。本発明のさらなる実施形態において、デュアルＶ領域抗体様タンパク質またはデュアルＶ領域抗体様領域の断片は、配列番号１および配列番号３のアミノ酸配列を含む可変軽鎖と、配列番号２および配列番号４のアミノ酸配列を含む可変重鎖とを含む。さらなる実施形態において、配列番号１および配列番号３はペプチドリンカーで互いに連結され、配列番号２および配列番号４はそのペプチドリンカーで互いに連結される。さらなる実施形態において、ペプチドリンカーは配列番号６からなる。
【００２９】
本発明の１実施形態は、ヒト対象または非ヒト霊長類の血清中の、ＩＬ−４およびＩＬ−１３に特異的に結合するデュアルＶ領域抗体様タンパク質またはデュアルＶ領域抗体様領域の断片の総量を定量またはモニタリングする方法であって、（ａ）前記デュアルＶ領域抗体様タンパク質またはデュアルＶ領域抗体様領域の断片の用量を、前記ヒト対象または前記非ヒト霊長類に投与する工程；（ｂ）前記ヒト対象または前記非ヒト霊長類から前記血清のサンプルを得る工程；および（ｃ）前記サンプル中の前記デュアルＶ領域抗体様タンパク質またはデュアルＶ領域抗体様領域の断片の前記総量を決定する工程を含む上記方法である。本発明のさらなる実施形態において、デュアルＶ領域抗体様タンパク質またはデュアルＶ領域抗体様領域の断片は、配列番号１および配列番号３のアミノ酸配列を含む可変軽鎖と、配列番号２および配列番号４のアミノ酸配列を含む可変重鎖とを含む。さらなる実施形態において、配列番号１および配列番号３はペプチドリンカーで互いに連結され、配列番号２および配列番号４はそのペプチドリンカーで互いに連結される。さらなる実施形態において、ペプチドリンカーは配列番号６からなる。
【００３０】
本発明の１実施形態は、ヒト対象または非ヒト霊長類の血清中の、ＩＬ−４およびＩＬ−１３に結合するのに機能的に利用可能な、ＩＬ−４およびＩＬ−１３に特異的に結合するデュアルＶ領域抗体様タンパク質またはデュアルＶ領域抗体様領域の断片の割合を定量またはモニタリングする方法であって、（ａ）前記デュアルＶ領域抗体様タンパク質またはデュアルＶ領域抗体様領域の断片を、前記ヒト対象または前記非ヒト霊長類に投与する工程；（ｂ）前記ヒト対象または前記非ヒト霊長類から血清のサンプルを得る工程；および（ｃ）前記サンプル中の、ＩＬ−４およびＩＬ−１３に結合するのに機能的に利用可能な前記デュアルＶ領域抗体様タンパク質またはデュアルＶ領域抗体様領域の断片の割合を決定する工程を含む上記方法である。本発明のさらなる実施形態において、デュアルＶ領域抗体様タンパク質またはデュアルＶ領域抗体様領域の断片は、配列番号１および配列番号３のアミノ酸配列を含む可変軽鎖と、配列番号２および配列番号４のアミノ酸配列を含む可変重鎖とを含む。さらなる実施形態において、配列番号１および配列番号３はペプチドリンカーで互いに連結され、配列番号２および配列番号４はそのペプチドリンカーで互いに連結される。さらなる実施形態において、ペプチドリンカーは配列番号６からなる。
【００３１】
本発明の１実施形態は、哺乳動物において喘息を処置する方法であって、ＩＬ−４およびＩＬ−１３に特異的に結合するデュアルＶ領域抗体様タンパク質またはデュアルＶ領域抗体様領域の断片の治療有効量を、前記哺乳動物に投与する工程を含む上記方法である。本発明のさらなる実施形態において、デュアルＶ領域抗体様タンパク質またはデュアルＶ領域抗体様領域の断片は、配列番号１および配列番号３のアミノ酸配列を含む可変軽鎖と
、配列番号２および配列番号４のアミノ酸配列を含む可変重鎖とを含む。さらなる実施形態において、配列番号１および配列番号３はペプチドリンカーで互いに連結され、配列番号２および配列番号４はそのペプチドリンカーで互いに連結される。さらなる実施形態において、ペプチドリンカーは配列番号６からなる。別の実施形態において、治療有効量は約３００ｍｇ以下である。さらなる実施形態において、治療有効量は、１０ｍｇ、２０ｍｇ、４０ｍｇ、８０ｍｇ、１５０ｍｇおよび３００ｍｇからなる群より選択される。
【００３２】
本発明の１実施形態は、哺乳動物において特発性肺線維症を処置する方法であって、ＩＬ−４およびＩＬ−１３に特異的に結合するデュアルＶ領域抗体様タンパク質またはデュアルＶ領域抗体様領域の断片の治療有効量を、前記哺乳動物に投与する工程を含む上記方法である。本発明のさらなる実施形態において、デュアルＶ領域抗体様タンパク質またはデュアルＶ領域抗体様領域の断片は、配列番号１および配列番号３のアミノ酸配列を含む可変軽鎖と、配列番号２および配列番号４のアミノ酸配列を含む可変重鎖とを含む。さらなる実施形態において、配列番号１および配列番号３はペプチドリンカーで互いに連結され、配列番号２および配列番号４はそのペプチドリンカーで互いに連結される。さらなる実施形態において、ペプチドリンカーは配列番号６からなる。別の実施形態において、治療有効量は約３００ｍｇ以下である。さらなる実施形態において、治療有効量は、１０ｍｇ、２０ｍｇ、４０ｍｇ、８０ｍｇ、１５０ｍｇおよび３００ｍｇからなる群より選択される。
【００３３】
本発明の１実施形態は、哺乳動物において、ＩＬ−４もしくはＩＬ−１３に媒介される疾患またはＩＬ−４誘導およびＩＬ−１３誘導されたＳＴＡＴ６リン酸化を処置する方法であって、ＩＬ−４およびＩＬ−１３に特異的に結合するデュアルＶ領域抗体様タンパク質またはデュアルＶ領域抗体様領域の断片の治療有効量を投与する工程を含む上記方法である。本発明のさらなる実施形態において、デュアルＶ領域抗体様タンパク質またはデュアルＶ領域抗体様領域の断片は、配列番号１および配列番号３のアミノ酸配列を含む可変軽鎖と、配列番号２および配列番号４のアミノ酸配列を含む可変重鎖とを含む。さらなる実施形態において、配列番号１および配列番号３はペプチドリンカーで互いに連結され、配列番号２および配列番号４はそのペプチドリンカーで互いに連結される。さらなる実施形態において、ペプチドリンカーは配列番号６からなる。別の実施形態において、治療有効量は約３００ｍｇ以下である。さらなる実施形態において、治療有効量は、１０ｍｇ、２０ｍｇ、４０ｍｇ、８０ｍｇ、１５０ｍｇおよび３００ｍｇからなる群より選択される。
【００３４】
本発明の１実施形態は、哺乳動物において、ＩＬ−４もしくはＩＬ−１３に媒介される疾患またはＩＬ−４誘導およびＩＬ−１３誘導されたＩＬ−６放出を処置する方法であって、ＩＬ−４およびＩＬ−１３に特異的に結合するデュアルＶ領域抗体様タンパク質またはデュアルＶ領域抗体様領域の断片の治療有効量を投与する工程を含む上記方法である。本発明のさらなる実施形態において、デュアルＶ領域抗体様タンパク質またはデュアルＶ領域抗体様領域の断片は、配列番号１および配列番号３のアミノ酸配列を含む可変軽鎖と、配列番号２および配列番号４のアミノ酸配列を含む可変重鎖とを含む。さらなる実施形態において、配列番号１および配列番号３はペプチドリンカーで互いに連結され、配列番号２および配列番号４はそのペプチドリンカーで互いに連結される。さらなる実施形態において、ペプチドリンカーは配列番号６からなる。別の実施形態において、この治療有効量は約３００ｍｇ以下である。さらなる実施形態において、治療有効量は、１０ｍｇ、２０ｍｇ、４０ｍｇ、８０ｍｇ、１５０ｍｇおよび３００ｍｇからなる群より選択される。
【００３５】
本発明の１実施形態は、哺乳動物において、ＩＬ−４もしくはＩＬ−１３に媒介される疾患またはＩＬ−４誘導およびＩＬ−１３誘導されたエオタキシン放出を処置する方法であって、ＩＬ−４およびＩＬ−１３に特異的に結合するデュアルＶ領域抗体様タンパク質
またはデュアルＶ領域抗体様領域の断片の治療有効量を投与する工程を含む上記方法である。本発明のさらなる実施形態において、デュアルＶ領域抗体様タンパク質またはデュアルＶ領域抗体様領域の断片は、配列番号１および配列番号３のアミノ酸配列を含む可変軽鎖と、配列番号２および配列番号４のアミノ酸配列を含む可変重鎖とを含む。さらなる実施形態において、配列番号１および配列番号３はペプチドリンカーで互いに連結され、配列番号２および配列番号４はそのペプチドリンカーで互いに連結される。さらなる実施形態において、ペプチドリンカーは配列番号６からなる。別の実施形態において、治療有効量は約３００ｍｇ以下である。さらなる実施形態において、治療有効量は、１０ｍｇ、２０ｍｇ、４０ｍｇ、８０ｍｇ、１５０ｍｇおよび３００ｍｇからなる群より選択される。
【００３６】
本発明の１実施形態は、哺乳動物において、ＩＬ−４もしくはＩＬ−１３に媒介される疾患またはＩＬ−４誘導およびＩＬ−１３誘導されたＬＯＸ発現を治療する方法であって、ＩＬ−４およびＩＬ−１３に特異的に結合するデュアルＶ領域抗体様タンパク質またはデュアルＶ領域抗体様領域の断片の治療有効量を投与する工程を含む上記方法である。本発明のさらなる実施形態において、デュアルＶ領域抗体様タンパク質またはデュアルＶ領域抗体様領域の断片は、配列番号１および配列番号３のアミノ酸配列を含む可変軽鎖と、配列番号２および配列番号４のアミノ酸配列を含む可変重鎖とを含む。さらなる実施形態において、配列番号１および配列番号３はペプチドリンカーで互いに連結され、配列番号２および配列番号４はそのペプチドリンカーで互いに連結される。さらなる実施形態において、ペプチドリンカーは配列番号６からなる。別の実施形態において、治療有効量は約３００ｍｇ以下である。さらなる実施形態において、治療有効量は、１０ｍｇ、２０ｍｇ、４０ｍｇ、８０ｍｇ、１５０ｍｇおよび３００ｍｇからなる群より選択される。
【００３７】
本発明の１実施形態は、哺乳動物において、ＩＬ−４もしくはＩＬ−１３に媒介される疾患またはＩＬ−４誘導およびＩＬ−１３誘導された赤血球増殖を処置する方法であって、ＩＬ−４およびＩＬ−１３に特異的に結合するデュアルＶ領域抗体様タンパク質またはデュアルＶ領域抗体様領域の断片の治療有効量を投与する工程を含む上記方法である。本発明のさらなる実施形態において、デュアルＶ領域抗体様タンパク質またはデュアルＶ領域抗体様領域の断片は、配列番号１および配列番号３のアミノ酸配列を含む可変軽鎖と、配列番号２および配列番号４のアミノ酸配列を含む可変重鎖とを含む。さらなる実施形態において、配列番号１および配列番号３はペプチドリンカーで互いに連結され、配列番号２および配列番号４はそのペプチドリンカーで互いに連結される。さらなる実施形態において、ペプチドリンカーは配列番号６からなる。別の実施形態において、治療有効量は約３００ｍｇ以下である。さらなる実施形態において、治療有効量は、１０ｍｇ、２０ｍｇ、４０ｍｇ、８０ｍｇ、１５０ｍｇおよび３００ｍｇからなる群より選択される。
【図面の簡単な説明】
【００３８】
【図１】ＩＬ−４刺激またはＩＬ−１３刺激された単球におけるＩＬ−４誘導またはＩＬ−１３誘導されたＳｔａｔ６リン酸化に対するｈｕＴＢＴＩ３＿２＿１の影響を示す図である。
【図２】特発性肺線維症患者由来のヒト肺線維芽細胞からの、ＩＬ−４刺激およびＩＬ−１３刺激されたＩＬ−６放出およびエオタキシン放出に対するｈｕＴＢＴＩ３＿２＿１の影響を示す図である。
【図３】特発性肺線維症の肺線維芽細胞におけるＩＬ−４誘導およびＩＬ−１３誘導されたＬＯＸ発現に対するｈｕＴＢＴＩ３＿２＿１の影響を示す図である。
【図４】カニクイザルにおけるアレルゲン誘導された急性喘息に対する抗原誘導された気道応答性亢進に対するｈｕＴＢＴＩ３＿２＿１の影響を示す図である。データは平均±ｓ．ｅ．ｍ．で示される。コントロール抗体処置群と比較して、*ｐ＜０．０５、**ｐ＜０．０１。
【図５】カニクイザルにおけるアレルゲン誘導された急性喘息に対する気道における総白血球の抗原誘導された蓄積に対するｈｕＴＢＴＩ３＿２＿１の影響を示す図である。データは平均±ｓ．ｅ．ｍ．で示される。コントロール抗体処置群と比較して、*ｐ＜０．０５、**ｐ＜０．０１。
【図６】カニクイザルにおけるアレルゲン誘導された急性喘息に対する気道における好酸球の抗原誘導された蓄積に対するｈｕＴＢＴＩ３＿２＿１の影響を示す図である。データは平均±ｓ．ｅ．ｍ．で示される。コントロール抗体処置群と比較して、*ｐ＜０．０５、**ｐ＜０．０１。
【図７】カニクイザルにおけるアレルゲン誘導された急性喘息からの血清ＩｇＥ力価に対するｈｕＴＢＴＩ３＿２＿１の影響を示す図である。データは平均±ｓ．ｅ．ｍ．で示される。コントロール抗体処置群と比較して、*ｐ＜０．０５、**ｐ＜０．０１。
【図８】正常なヒト気管支上皮細胞（ＮＨＢＥ；左のパネル）およびヒト小気道上皮細胞（ＳＡＥＣ；右のパネル）からの、ＩＬ−４媒介およびＩＬ−１３媒介されたＴＧＦβ放出に対するＳＡＲ１５６５９７の影響を示す図である。
【図９】ヒト軽鎖κの濃度を測定することによって血清中のヒト抗体の総量を測定するための（パネルＡ）；ＩＬ−４およびＩＬ−１３に対する機能的抗体の割合を測定するための（パネルＢ）；ならびに抗薬物抗体（ＡＤＡ）を測定するための、アッセイの模式的表示を示す図である。
【図１０】０日目、１４日目、２１日目、２８日目および３５日目における、カニクイザルへの、ＰＢＳ中のｈｕＴＢＴＩ３＿２＿１（バッチ番号ＬＰ０８０４５）２．５ｍｇ／ｋｇの単一用量静脈内潅流投与後の、機能的ｈｕＴＢＴＩ３＿２＿１の平均血清濃度の時間プロット（パネルＡ）表示を示す図である；表（パネルＢ）は、サルにおけるＰＢＳ中のｈｕＴＢＴＩ３＿２＿１（バッチ番号ＬＰ０８０５９）２．５ｍｇ／ｋｇの１回目の用量および５回目の用量の後の、薬物動態パラメータをまとめている。
【図１１】ＴＤＵ１１３２５からの、１０〜３００ｍｇの単一皮下用量後の、ＳＡＲ１５６５９７血漿濃度の平均を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００３９】
特に定義しない限り、本明細書中で使用される全ての技術用語および科学用語は、本発明が属する分野の当業者が一般に理解するのと同じ意味を有する。
【００４０】
本明細書中で引用される各刊行物、特許出願、特許および他の参考文献は、本開示と不整合にならない程度まで、その全体が参照により組み入れられる。
【００４１】
本明細書中では、本明細書および添付の特許請求の範囲で使用する場合、単数形（「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」）には、文脈が明らかに他を示さない限り、複数形の言及が含まれることに留意されたい。
【００４２】
さらに、本発明によれば、当業者の技術範囲内の従来の分子生物学、微生物学および組換えＤＮＡ技術が使用され得る。かかる技術は、文献中に充分に記載されている。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ、ＦｒｉｔｓｃｈおよびＭａｎｉａｔｉｓ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、第２版（１９８９年）Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（本明細書中で「Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９８９年」）；ＤＮＡ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ、第Ｉ巻および第ＩＩ巻（Ｄ．Ｎ．Ｇｌｏｖｅｒ編  １９８５年）；Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ編  １９８４年）；Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ［Ｂ．Ｄ．ＨａｍｅｓおよびＳ．Ｊ．Ｈｉｇｇｉｎｓ編（１９８５年）］；Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  Ａｎｄ  Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ［Ｂ．Ｄ．ＨａｍｅｓおよびＳ．Ｊ．Ｈｉｇｇｉｎｓ、編（１９８４年）］；Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ［Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ、編（１９８６年）］；Ｉ
ｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ  Ｃｅｌｌｓ  Ａｎｄ  Ｅｎｚｙｍｅｓ［ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ、（１９８６年）］；Ｂ．Ｐｅｒｂａｌ、Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ  Ｔｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ（１９８４年）；Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌら（編）、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．（１９９４年）を参照のこと。
【００４３】
以下のいくつかの用語および語句の非限定的な定義が、当業者を導くために提供される。
【００４４】
「インターロイキン−４」（ＩＬ−４）は、天然に存在するまたは内因性の哺乳動物ＩＬ−４タンパク質、および天然に存在するまたは内因性の対応する哺乳動物ＩＬ−４タンパク質のアミノ酸配列と同じアミノ酸配列を有するタンパク質（例えば、組換えタンパク質、合成タンパク質（即ち、合成有機化学の方法を使用して生成されたもの））に関する。したがって、本明細書中で定義する場合、この用語は、成熟ＩＬ−４タンパク質、多型バリアントまたは対立遺伝子バリアントおよびＩＬ−４の他のアイソフォームならびにそれらの改変形態または非改変形態（例えば、脂質付加、グリコシル化）を含む。天然に存在するまたは内因性のＩＬ−４には、野生型タンパク質、例えば、哺乳動物（例えば、ヒト、非ヒト霊長類）中に天然に存在する、成熟ＩＬ−４、多型バリアントまたは対立遺伝子バリアントならびに他のアイソフォームおよび変異体形態が含まれる。かかるタンパク質は、例えばＩＬ−４を天然に産生する供給源から回収または単離され得る。これらのタンパク質および天然に存在するまたは内因性の対応するＩＬ−４と同じアミノ酸配列を有するタンパク質は、対応する哺乳動物の名称によって言及される。例えば、対応する哺乳動物がヒトである場合、そのタンパク質はヒトＩＬ−４と称される。例えばＷＯ０３／０３８０４１中に開示されたものなど、いくつかの変異体ＩＬ−４タンパク質が当技術分野で公知である。
【００４５】
「インターロイキン−１３」（ＩＬ−１３）とは、天然に存在するまたは内因性の哺乳動物ＩＬ−１３タンパク質、および天然に存在するまたは内因性の対応する哺乳動物ＩＬ−１３タンパク質のアミノ酸配列と同じアミノ酸配列を有するタンパク質（例えば、組換えタンパク質、合成タンパク質（即ち、合成有機化学の方法を使用して生成されたもの））を指す。したがって、本明細書中で定義する場合、この用語は、成熟ＩＬ−１３タンパク質、多型または対立遺伝子バリアントおよびＩＬ−１３の他のアイソフォーム（例えば、選択的スプライシングまたは他の細胞性プロセスによって産生されたもの）ならびにそれらの改変形態または非改変形態（例えば、脂質付加、グリコシル化）を含む。天然に存在するまたは内因性のＩＬ−１３には、野生型タンパク質、例えば、哺乳動物（例えば、ヒト、非ヒト霊長類）中に天然に存在する、成熟ＩＬ−１３、多型または対立遺伝子バリアントならびに他のアイソフォームおよび変異体形態が含まれる。例えば、本明細書中で使用する場合、ＩＬ−１３は、喘息（アトピー性および非アトピー性喘息）と関連する、成熟ヒトＩＬ−１３の１１０位におけるＡｒｇがＧｌｎで置き換えられた（成熟ＩＬ−１３の１１０位は、前駆体タンパク質の１３０位に対応する）ヒトＩＬ−１３バリアント、ならびにＩＬ−１３の他のバリアントを包含する（Ｈｅｉｎｚｍａｎｎら、Ｈｕｍ  Ｍｏｌ  Ｇｅｎｅｔ．９巻：５４９〜５５９頁（２０００年））。かかるタンパク質は、例えばＩＬ−１３を天然に産生する供給源から回収または単離され得る。これらのタンパク質および天然に存在するまたは内因性の対応するＩＬ−１３と同じアミノ酸配列を有するタンパク質は、対応する哺乳動物の名称によって言及される。例えば、対応する哺乳動物がヒトである場合、そのタンパク質はヒトＩＬ−１３と称される。例えばＷＯ０３／０３５８４７中に開示されたものなど、いくつかの変異体ＩＬ−１３タンパク質が当技術分野で公知である。
【００４６】
抗体鎖のポリペプチド配列に関して、語句「実質的に同一」とは、参照ポリペプチド配
列に対して、少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の配列同一性を示す抗体鎖として解釈され得る。核酸配列に関して、この用語は、参照核酸配列に対して、少なくとも約８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の配列同一性を示すヌクレオチドの配列として解釈され得る。同一性は、当業者に利用可能な任意の生物情報学的ツールを使用して決定され得る。例えば、Ｂａｓｉｃ  Ｌｏｃａｌ  Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ  Ｓｅａｒｃｈ  Ｔｏｏｌ（ＢＬＡＳＴ）が、配列同一性を決定するために一般に使用される（Ａｌｔｓｃｈｕｌら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ２１５巻（３号）：４０３〜４１０頁、１９９０年）。
【００４７】
用語「同一性」または「相同性」は、必要に応じて、配列全体について最大のパーセント同一性を達成するために配列をアラインしギャップを導入した後の、および配列同一性の一部としていずれの保存的置換も考慮しない、比較対象の対応する配列の残基と同一な、候補配列中のヌクレオチド塩基またはアミノ酸残基の百分率を意味し得る。Ｎ末端もしくはＣ末端の伸長または挿入のいずれも、同一性または相同性を低下させると解釈すべきではない。アラインメントのための方法およびコンピュータプログラムが利用可能であり、当技術分野で周知である。配列同一性は、配列分析ソフトウェアを使用して測定され得る。
【００４８】
抗体または抗原の、語句および用語「機能的断片、バリアント、誘導体またはアナログ」などならびにそれらの形態は、目的の全長抗体または抗原と共通する質的な生物学的活性を有する化合物または分子である。例えば、抗ＩＬ−４抗体の機能的断片またはアナログは、ＩＬ−４分子に結合し得るもの、またはリガンドもしくはアゴニスト抗体もしくはアンタゴニスト抗体がＩＬ−４に結合する能力を抑止し得るまたは実質的に低下させ得るものである。
【００４９】
「置換」バリアントは、ネイティブ配列中の少なくとも１つのアミノ酸残基が除去され、同じ位置においてその場所に挿入された異なるアミノ酸で置き換えられた、バリアントである。置換は、分子中の１つのアミノ酸だけが置換された単一であり得、または２つもしくはそれ以上のアミノ酸が同じ分子中で置換された複数であり得る。複数の置換が連続した部位に存在し得る。また、１つのアミノ酸が複数の残基で置き換えられ得、この場合、かかるバリアントは、置換および挿入の両方を含む。「挿入」バリアントは、ネイティブ配列中の特定の位置におけるあるアミノ酸に直接隣接して挿入された１つまたはそれ以上のアミノ酸を有するバリアントである。あるアミノ酸に直接隣接するとは、アミノ酸のα−カルボキシル官能基またはα−アミノ官能基のいずれかに接続されていることを意味する。「欠失」バリアントは、ネイティブアミノ酸配列中の１つまたはそれ以上のアミノ酸が除去されたバリアントである。通常、欠失バリアントでは、分子の特定の領域中の１つまたは２つのアミノ酸が欠失される。
【００５０】
用語「抗体」は、その最も広い意味で使用され、具体的には、モノクローナル抗体（全長モノクローナル抗体が含まれる）、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、抗体断片、またはそのポリペプチドが所望の生物学的活性を示す限り、１つもしくはそれ以上のＣＤＲ配列またはＣＤＲ由来配列を保有する合成ポリペプチドをカバーする。抗体（Ａｂ）および免疫グロブリン（Ｉｇ）は、同じ構造的特徴を有する糖タンパク質である。一般に、抗体は、規定されたまたは認識された特異性を有するＩｇであるとみなされる。したがって、抗体は、特異的標的に対する結合特異性を示すが、免疫グロブリンは、標的特異性を欠く抗体および他の抗体様分子の両方を含む。本発明の抗体は、任意のクラス（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡなど）またはサブクラス（例えば、ＩｇＧ1、ＩｇＧ2、ＩｇＧ2a、ＩｇＧ3、ＩｇＧ4、ＩｇＡ1、ＩｇＡ2など）（「タイプ」および「クラス」、ならびに「サブタイプ」および「サブクラス」は、
本明細書中で相互交換可能に使用される）のものであり得る。ネイティブまたは野生型の、即ち、集団の人工的に操作されていないメンバーから得られた抗体および免疫グロブリンは、通常、２つの同一の軽（Ｌ）鎖および２つの同一の重（Ｈ）鎖から構成される、約１５０，０００ダルトンのヘテロテトラマー糖タンパク質である。各重鎖は、一方の端に可変ドメイン（ＶH）を有し、その後ろにいくつかの定常ドメインが続く。各軽鎖は、一
方の端に可変ドメイン（ＶL）を有し、もう一方の端に定常ドメインを有する。「人工的
に操作されていない」とは、外来の抗原結合分子を含むかまたは発現するように処理されていないことを意味する。野生型とは、対立遺伝子もしくは多型または抗原結合分子のアミノ酸を変化させるためのある形態の操作、例えば、変異誘発、組換え法の使用などによって得られたバリアントもしくは誘導体と比較して、集団中で見出される最も関連する対立遺伝子もしくは種、または操作されていない動物から得られた抗体を指し得る。
【００５１】
本明細書中で使用する場合、「抗ＩＬ−４抗体」は、本明細書中に規定したようにＩＬ−４に特異的に結合する抗体またはそれに由来するポリペプチド（誘導体）を意味し、ＩＬ−４のそのレセプターへの結合を阻害もしくは実質的に低下させるまたはＩＬ−４活性を阻害する分子が含まれるが、それらに限定されない。
【００５２】
本明細書中で使用する場合、「抗ＩＬ−１３抗体」は、本明細書中に規定したようにＩＬ−１３に特異的に結合する抗体またはそれに由来するポリペプチド（誘導体）を意味し、ＩＬ−１３のそのレセプターへの結合を阻害もしくは実質的に低下させるまたはＩＬ−１３活性を阻害する分子が含まれるが、それらに限定されない。
【００５３】
抗体の可変ドメインの文脈における用語「可変」とは、抗体間で配列が大きく異なっており、その特定の標的に対する特定の抗体の特異的認識および結合において使用される、関連の分子の特定の部分を指す。しかし、可変性は、抗体の可変ドメイン中に均等に分布しているわけではない。可変性は、軽鎖可変ドメインおよび重鎖可変ドメインの両方中の、超可変領域としても知られる、相補性決定領域と呼ばれる３つのセグメント（ＣＤＲ；即ち、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３）中に集中している。可変ドメインのより高度に保存された部分は、フレームワーク（ＦＲ）領域またはＦＲ配列と呼ばれる。ネイティブの重鎖および軽鎖の可変ドメインはそれぞれ、ループ接続を形成し、ある場合にはβシート構造の一部を形成する３つのＣＤＲによって接続された、おおまかにβシート立体配置を取る４つのＦＲ領域を含む。各鎖中のＣＤＲは、ＦＲ領域によって近位にまとめられていることが多く、他の鎖由来のＣＤＲと共に、抗体の標的（エピトープまたは決定基）結合部位の形成に寄与する（Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ（１９８７年）を参照のこと）。本明細書中で使用する場合、免疫グロブリンアミノ酸残基の番号付けは、特に示さない限り、Ｋａｂａｔらの免疫グロブリンアミノ酸残基番号付け体系に従って行われる。１つのＣＤＲが、同族エピトープに特異的に結合する能力を保有し得る。
【００５４】
用語「ヒンジ」または「ヒンジ領域」は、本発明において使用する場合、抗体の第１の定常ドメインと第２の定常ドメインとの間のアミノ酸を含む柔軟性の高いポリペプチドを指す。
【００５５】
用語「抗体断片」とは、インタクトなもしくは全長の鎖または抗体の一部分、一般には、標的結合領域または可変領域を指す。抗体断片の例には、Ｆab、Ｆab'、Ｆ(ab')2およ
びＦv断片が含まれるが、これらに限定されない。「機能的断片」または「抗ＩＬ−４抗
体および／または抗ＩＬ−１３抗体のアナログ」は、レセプターがリガンドに結合する能力またはシグナル伝達を開始する能力を、抑止し得るまたは実質的に低下させ得るものである。本明細書中で使用する場合、機能的断片は一般に、「抗体断片」と同義であり、抗
体に関して、レセプターがリガンドに結合する能力またはシグナル伝達を開始する能力を抑止し得るまたは実質的に低下させ得る、例えばＦv、Ｆab、Ｆ(ab')2などの断片を指し
得る。「Ｆv」断片は、非共有会合した１つの重鎖可変ドメインおよび１つの軽鎖可変ド
メインのダイマーからなる（ＶH−ＶLダイマー）。その立体配置において、各可変ドメインの３つのＣＤＲは、相互作用して、インタクトな抗体と同様に、ＶH−ＶLダイマーの表面上の標的結合部位を規定する。集合的に、６つのＣＤＲが、インタクトな抗体に標的結合特異性を付与する。しかし、単一の可変ドメイン（または標的に特異的な３つのＣＤＲだけを含むＦvの半分）さえ、標的を認識しそれに結合する能力を有し得る。
【００５６】
「単鎖Ｆv」、「ｓＦv」または「ｓｃＡｂ」抗体断片は、抗体のＶHドメインおよびＶLドメインを含み、これらのドメインは、単一のポリペプチド鎖中に存在する。一般に、Ｆvポリペプチドは、ＶHドメインとＶLドメインとの間に、ｓＦvが標的結合のための所望の構造を形成するのを可能にする、しばしば柔軟性の高い分子であるポリペプチドリンカーをさらに含む。
【００５７】
用語「ディアボディ」とは、２つの抗原結合部位を有する抗体断片を指し、この断片は、同じポリペプチド鎖中の軽鎖可変ドメイン（ＶL）に接続された重鎖可変ドメイン（ＶH）を含み得る。同じ鎖上の２つの可変ドメイン間の対形成を可能にするには短すぎるリンカーを使用することによって、ディアボディのドメインは、２つの抗原結合部位を創出するように別の鎖の結合ドメインと対形成するよう強いられる。
【００５８】
Ｆab断片は、軽鎖の可変ドメインおよび定常ドメインと重鎖の可変ドメインおよび第１の定常ドメイン（ＣH1）とを含む。Ｆab'断片は、抗体ヒンジ領域由来の１つまたはそれ
以上のシステインを含むための、ＣH1ドメインのカルボキシル末端における数個の残基の付加によって、Ｆab断片とは異なっている。Ｆab'断片は、Ｆ(ab')2ペプシン消化生成物
のヒンジシステインにおけるジスルフィド結合の切断によって生成される。抗体のさらなる酵素処理および化学的処理により、目的の他の機能的断片が得られ得る。
【００５９】
用語「線状Ｆａｂ」とは、Ｍｉｌｌｅｒら（２００３年）、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７０巻：４８５４〜４８６１頁によって記載されるような、４価抗体を指す。「線状Ｆａｂ」は、各ＣＨ１−ＶＨ位置において同一の軽鎖と対形成した、同じＣＨ１−ＶＨドメインのタンデムから構成される。これらの分子は、結合力の影響を介してその機能的親和性を増強して抗体の結合価を増加させるために開発されたものであるが、単一特異性である。
【００６０】
用語「二重特異性抗体（ＢｓＡｂ）」とは、単一分子内に２つの抗体の抗原結合部位を組み合わせる分子を指す。したがって、二重特異性抗体は、２つの異なる抗原に同時に結合できる。診断目的のための適用に加えて、ＢｓＡｂは、強力なエフェクター系を罹患領域に再指向させることにより、または抗体の中和活性もしくは刺激活性を増加させることにより、新規治療適用への道を開く。
【００６１】
本明細書中で、モノクローナル抗体は、「キメラ」抗体を具体的に含み、このキメラ抗体では、それらがＩＬ−４および／もしくはＩＬ−１３に結合するまたはＩＬ−４および／もしくはＩＬ−１３の活性または代謝に影響を与える所望の生物学的活性を示す限り、重鎖および／または軽鎖の一部分が、特定の種に由来するまたは特定の抗体クラスもしくはサブクラス（タイプまたはサブタイプ）に属する抗体中の対応する配列と同一であるかまたは相同であり、鎖（複数可）の残りの部分は、別の種に由来するまたは別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体ならびにかかる抗体の断片中の対応する配列と同一または相同である（米国特許第４，８１６，５６７号；およびＭｏｒｒｉｓｏｎら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８１巻：６８５１頁（１９８４年））。したがって、１つのクラスの抗体由来のＣＤＲが、異なるクラスまたはサブクラスの抗体のＦ
Ｒ中に移植され得る。
【００６２】
モノクローナル抗体は、高度に特異的であり、単一の標的部位、エピトープまたは決定基に対するものである。さらに、抗原の異なる決定基（エピトープ）に対する異なる抗体を典型的に含む従来の（ポリクローナル）抗体調製物とは対照的に、各モノクローナル抗体は、標的上の単一の決定基に対するものである。それらの特異性に加えて、モノクローナル抗体は、宿主細胞によって合成され、他の免疫グロブリンによって汚染されず、その鎖の抗体をコードする関連の遺伝子およびｍＲＮＡのクローニングを実現する点で有利である。修飾語「モノクローナル」は、抗体の実質的に均質な集団から得られた抗体の特徴を示しているのであって、任意の特定の方法による抗体の生成を必要とすると解釈すべきではない。例えば、本発明で使用されるモノクローナル抗体は、周知技術を使用してファージ抗体ライブラリーから単離され得るか、またはポリクローナル調製物から精製され得る。本発明に従って使用される親モノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ
２５６巻：４９５頁（１９７５年）に記載されたハイブリドーマ法によって作製され得るか、または当技術分野で周知の組換え法によって作製され得る。
【００６３】
用語「多価抗体」とは、本発明において使用する場合、２つまたはそれ以上の抗原結合部位を含む抗体、したがって、同じまたは異なる構造を有し得る２つまたはそれ以上の抗原に同時に結合できる抗体を指す。用語「二価」とは、抗体が２つの抗原結合部位を含むことを意味する。用語「四価」とは、抗体が４つの抗原結合部位を含むことを意味する。
【００６４】
用語「抗原結合部位」とは、本発明において使用する場合、抗原の一部または全てに特異的に結合し、かつ相補的である領域を含む抗体の一部を指す。抗原が大きい場合、抗体は、その抗原の特定の一部にのみ結合し得、この一部は、エピトープ上で命名される。抗原結合ドメインは、１つまたはそれ以上の抗体可変ドメインによって提供され得る。好ましくは、抗原結合ドメインは、抗体軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と抗体重鎖可変ドメイン（ＶＨ）との会合で作製される。
【００６５】
用語「抗原」とは、本発明において使用する場合、本発明の抗体によって結合され得る分子または分子の一部分を指す。抗原は、１つまたは１つより多いエピトープを有し得る。本発明の抗体によって認識される抗原の例には、血清タンパク質、例えば、サイトカイン、例えばＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−９およびＩＬ−１３、生理活性ペプチド、細胞表面分子、例えば、レセプター、トランスポーター、イオンチャネル、ウイルスおよび細菌タンパク質が含まれるが、これらに限定されない。
【００６６】
用語「単一特異性」とは、本発明において使用する場合、本発明の多価抗体が、１つの抗原だけを認識し、全ての抗原結合部位が同一であることを意味する。
【００６７】
用語「二重特異性」とは、本発明において使用する場合、本発明の多価抗体が、同じまたは２つの異なる抗原上の２つの異なるエピトープを認識することを意味する。
【００６８】
単一の分子内に２つの抗体の抗原結合部位を組み合わせる二重特異性抗体（ＢｓＡｂ）を生成することが目的とされてきた。したがって、かかる分子は、２つの異なる抗原に同時に結合できる。診断目的のための適用に加えて、これらは、例えば、強力なエフェクター系を罹患領域（ここでは、癌性細胞が、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）などの、モノクローナル抗体によって誘発される正常な免疫応答を抑制するための機構をしばしば発達させている）に再指向させることにより、または抗体の中和活性もしくは刺激活性を増加させることにより、新規治療適用への道を開く。治療目的のために異なる標的抗原に対する２つの抗体全体の結合特異性をカップリングさせる最初の試みは、化学的に融合させたヘテロコンジュゲート分子を利用した（Ｓｔａｅｒ
ｚら（１９８５年）、Ｎａｔｕｒｅ  ３１４巻：６２８〜６３１頁）。
【００６９】
二重特異性抗体は元々、それぞれが異なる免疫グロブリンを生成し得る２つのハイブリドーマを融合させることによって作製された（ＭｉｌｓｔｅｉｎおよびＣｕｅｌｌｏ、１９８３年、１９８４年）が、細胞培養物中で生成された種（最大で１０の異なる種）の複雑性により、精製は困難で費用がかかる（ＧｅｏｒｇｅおよびＨｕｓｔｏｎ、１９９７年）。上で引用したように細胞融合物から生成されたヘテロコンジュゲートまたは二重特異性抗体を使用して得られた有望な結果にもかかわらず、いくつかの要因により、大規模な治療適用の実現は困難であった。かかる要因には、以下が含まれる：ｉｎ  ｖｉｖｏでのヘテロコンジュゲートの迅速なクリアランス、いずれかの型の分子を生成するために必要な実験室での集約的技術、ホモコンジュゲートまたは単一特異性抗体からのヘテロコンジュゲートの大掛かりな精製の必要性、および一般に低い収率。
【００７０】
遺伝子操作が、所望のセットの結合特性およびエフェクター機能を有する抗体または抗体誘導体を設計、改変および生成するために、漸増する頻度で使用されている。種々の組換え法が、抗体断片（Ｃａｒｔｅｒら（１９９５年）、Ｊ．Ｈｅｍａｔｏｔｈｅｒａｐｙ
４巻：４６３〜４７０頁；Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎら（１９９７年）Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈｏｌｏｇｙ  ３巻：８３〜１０５頁；Ｔｏｄｏｒｏｖｓｋａら（２００１年）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２４８巻：４７〜６６頁）および全長ＩｇＧフォーマット（Ｃａｒｔｅｒ（２００１年）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２４８巻：７〜１５頁）の両方としての、ＢｓＡｂの効率的な生成のために開発されてきた。
【００７１】
Ａｂｂｏｔｔは、米国特許第７６１２１８１号において、Ｕｎｉｌｅｖｅｒの特許（米国特許第５９８９８３０号）に記載されたデュアルＦｖフォーマットに基づくマウスデュアル可変ドメインＩｇＧ（ＤＶＤ−ＩｇＧ）二重特異性抗体を記載した。ヒト化二重特異性フォーマットは、その全体が参照により本明細書中に組み入れられるＷＯ２００９／０５２０８１中に記載された（ＴＢＴＩ）。デュアルＦｖのそれぞれの鎖への定常ドメインの付加（重鎖へのＣＨ１−Ｆｃおよび軽鎖へのκもしくはλ定常ドメイン）により、機能的二重特異性デュアルＶ領域抗体様結合タンパク質が得られる。
【００７２】
本発明の１実施形態は、同じまたは２つの異なる抗原上の２つの異なるエピトープに特異的に結合するデュアルＶ領域抗体様タンパク質またはその断片を含むように操作された二重特異性抗体である。本発明の１実施形態は、ＩＬ−１３およびＩＬ−４に特異的に結合する二重特異性抗体またはその二重特異性抗体断片であり、前記二重特異性抗体またはその二重特異性抗体断片は、可変軽鎖ドメインおよび可変重鎖ドメインを含み、前記可変軽鎖ドメインは、配列番号１および配列番号３のアミノ酸配列を含む。本発明のさらなる実施形態は、ＩＬ−１３およびＩＬ−４に特異的に結合する二重特異性抗体またはその二重特異性抗体断片であり、前記二重特異性抗体またはその二重特異性抗体断片は、可変軽鎖ドメインおよび可変重鎖ドメインを含み、前記可変重鎖ドメインは、配列番号２および配列番号５のアミノ酸配列を含む。本発明の別の実施形態は、ＩＬ−１３およびＩＬ−４に特異的に結合する二重特異性抗体またはその二重特異性抗体断片であり、前記二重特異性抗体またはその二重特異性抗体断片は、可変軽鎖ドメインおよび可変重鎖ドメインを含み、前記可変重鎖ドメインは、配列番号２および配列番号４のアミノ酸配列を含む。本発明の１実施形態は、ＩＬ−１３およびＩＬ−４に特異的に結合する二重特異性抗体またはその二重特異性抗体断片であり、前記二重特異性抗体またはその二重特異性抗体断片は、配列番号１および配列番号３のアミノ酸配列を含む可変軽鎖ドメインと、配列番号２および配列番号４のアミノ酸配列を含む可変重鎖ドメインとを含む。本発明のさらなる実施形態は、ＩＬ−１３およびＩＬ−４に特異的に結合する二重特異性抗体またはその二重特異性抗体断片であり、前記二重特異性抗体またはその二重特異性抗体断片は、配列番号１および配列番号３のアミノ酸配列を含む可変軽鎖ドメインと、配列番号２および配列番号４
のアミノ酸配列を含む可変重鎖ドメインとを含み、ペプチドリンカーが配列番号１を配列番号３に連結し、ペプチドリンカーが配列番号２を配列番号４に連結する。本発明の１実施形態は、（ａ）配列番号１および配列番号３のアミノ酸配列を含む可変軽鎖ドメイン；（ｂ）配列番号２および配列番号４のアミノ酸配列を含む可変重鎖ドメイン；（ｃ）配列番号１を配列番号３に連結するペプチドリンカーおよび配列番号２を配列番号４に連結するペプチドリンカーであって、ペプチドリンカーは配列番号６からなるアミノ酸配列を有する、ペプチドリンカー；および（ｄ）定常領域ドメイン、を含む、ＩＬ−１３およびＩＬ−４に特異的に結合する二重特異性抗体またはその二重特異性抗体断片を含むｈｕＴＢＴＩ３＿２＿１またはＳＡＲ１５６５９７である。
【００７３】
用語「多重特異性」とは、本発明において使用する場合、本発明の多価抗体が、同じまたは複数の異なる抗原上の複数の異なるエピトープを認識することを意味する。
【００７４】
用語「リンカー」とは、本発明において使用する場合、本発明の抗体構築物の可変ドメインを接続するために適合されたペプチドを指す。ペプチドリンカーは、任意のアミノ酸を含み得、アミノ酸グリシン（Ｇ）およびセリン（Ｓ）が好ましい。リンカーは、重鎖ポリペプチドと軽鎖ポリペプチドとの間ならびに重鎖ポリペプチドおよび軽鎖ポリペプチド内で、互いに等しくても異なってもよい。さらに、リンカーは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０アミノ酸の長さを有し得る。重鎖ドメインに好ましいペプチドリンカー単位は、軽鎖ドメインの場合と同様、ＧＧＧＧＳである。重鎖および軽鎖のリンカー単位の数は、等しくても（対称的な順序）よく、互いに異なってもよい（非対称的な順序）。
【００７５】
ペプチドリンカーは好ましくは、例えば立体障害によって抗体部分が互いの活性を妨害するのを防ぐのに、適切なタンパク質折り畳みを可能にするのに、および必要に応じて同じ細胞上の２つまたはそれ以上の、場合によっては広く間隔をあけたレセプターと抗体分子が相互作用するのを可能にするのに適切な程度の柔軟性を付与するのに充分な長さである；しかし好ましくは、抗体部分が細胞中で安定なままでいることができるように充分に短い。
【００７６】
したがって、ペプチドリンカーの長さ、組成および／またはコンフォメーションは、多価抗体の所望の特性を最適化するために、当業者によって容易に選択され得る。
【００７７】
「ヒト化」形態の非ヒト（例えば、マウス）抗体は、ヒト抗体と比較すると非ヒト免疫グロブリン由来の配列を含む、キメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖またはそれらの断片（例えば、Ｆv、Ｆab、Ｆab'、Ｆ(ab')2または抗体の他の標的結合部分配列）である。一般に、ヒト化抗体は、全てまたは実質的に全てのＣＤＲ領域が非ヒト免疫グロブリンのＣＤＲ領域に対応し、全てまたは実質的に全てのＦＲ領域がヒト免疫グロブリン鋳型配列のＦＲ領域である、１つおよび典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含む。ヒト化抗体は、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部分、典型的には選択されたヒト免疫グロブリン鋳型の少なくとも一部分もまた含み得る。一般に、その目的は、ヒトにおいて最小限に免疫原性の抗体分子を有することである。したがって、１つまたはそれ以上のＣＤＲ中の１つまたはそれ以上のアミノ酸がまた、ＩＬ−４および／またはＩＬ−１３に対する１つまたはそれ以上のＣＤＲの特異的結合機能を実質的に最小化することなしに、ヒト宿主に対して免疫原性が低いアミノ酸に変化され得ることも可能である。あるいは、ＦＲは非ヒトであり得るが、最も免疫原性のアミノ酸は、免疫原性が低いアミノ酸で置き換えられ得る。それにもかかわらず、上で考察したように、ＣＤＲ移植は、ヒト化抗体を得るための唯一の方法ではない。ＣＤＲループの３次元構造およびそのリガンドへの抗体の全体的親和性を決定することにおいて役割を有することはフレームワーク残基に関して一般的でないわけではないので、例えば、ＣＤＲ領域だけを改変することは不
充分であり得る。したがたて、非ヒト親抗体分子がヒトに対する免疫原性が低い分子へと改変されるように任意の手段が実施され得、ヒト抗体との全体的な配列同一性が常に必要なわけではない。したがって、ヒト化は、例えば、たった数個の残基、特に、抗体分子上に露出しており分子内に埋まっていない、したがって宿主免疫系には容易にアクセスできない残基の単なる置換によっても、達成され得る。かかる方法は、抗体分子上の「可動性」残基または「柔軟性の高い」残基を置換することに関して本明細書中で教示されており、その目的は、そのエピトープまたは決定基に対する抗体の特異性を含むことなく、得られた分子の免疫原性を低下させるまたは削ぐことである。例えば、Ｓｔｕｄｎｉｃｋａら、Ｐｒｏｔ  Ｅｎｇ  ７巻（６号）８０５〜８１４頁、１９９４年；Ｍｏｌ  Ｉｍｍ  ４４巻：１９８６〜１９８８頁、２００７年；Ｓｉｍｓら、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １５１巻：２２９６頁（１９９３年）；Ｃｈｏｔｈｉａら、Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  １９６巻：９０１頁（１９８７年）；Ｃａｒｔｅｒら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８９巻：４２８５頁（１９９２年）；Ｐｒｅｓｔａら、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １５１巻：２６２３頁（１９９３年）、ＷＯ２００６／０４２３３３および米国特許第５，８６９，６１９号を参照のこと。
【００７８】
「抗体ホモログ」または「ホモログ」とは、本明細書中に教示されるような、ＩＬ−４および／またはＩＬ−１３に特異的に結合する任意の分子を指す。したがって、抗体ホモログには、改変されたものであれ改変されていないものであれ、ネイティブ抗体または組換え抗体、例えば、ＩＬ−４またはＩＬ−１３に結合する、目的の生物学的特性を保持する抗体の一部分、例えば、ＦabもしくはＦv分子、単鎖抗体、１つまたはそれ以上のＣＤ
Ｒ領域を保有するポリペプチドなどが含まれる。ホモログのアミノ酸配列は、天然に存在する抗体のアミノ酸配列と同一である必要はないが、増強された特性または他の有益な特性を有するポリペプチドを得るために、置換アミノ酸、挿入アミノ酸、欠失アミノ酸、タンパク質中に通常見出される２０種以外のアミノ酸などを保有するように変更または改変され得る。
【００７９】
相同配列を有する抗体は、本発明のＩＬ−４抗体、ＩＬ−１３抗体または二重特異性ＩＬ−４／ＩＬ−１３抗体のアミノ酸配列との配列相同性を有するアミノ酸配列を有する抗体である。好ましくは、相同性は、本発明の抗体の可変領域のアミノ酸配列を有する。「配列相同性」は、本明細書中でアミノ酸配列に適用される場合、例えば、ＰｅａｒｓｏｎおよびＬｉｐｍａｎ、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８５巻、２４４４〜２４４８頁（１９８８年）に従うＦＡＳＴＡ検索法によって決定されるように、別のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列相同性を有する配列として規定される。
【００８０】
キメラ抗体は、異なる供給源、例えば、異なる抗体、異なるクラスの抗体、異なる動物種に由来する抗体、例えば、ヒト免疫グロブリン定常領域と対形成したマウスモノクローナル抗体由来の可変領域を有する抗体などの、異なる部分を有する抗体である。したがって、ヒト化抗体はキメラ抗体の１種である。キメラ抗体を生成するための方法は当技術分野で公知であり、例えば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ、１９８５年、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９巻：１２０２頁；Ｏｉら、１９８６年、ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ４巻：２１４頁；Ｇｉｌｌｉｅｓら、１９８９年、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  １２５巻：１９１〜２０２頁；ならびに米国特許第５，８０７，７１５号、米国特許第４，８１６，５６７号および米国特許第４，８１６，３９７号を参照のこと。
【００８１】
人工抗体には、ｓｃＦｖ断片、キメラ抗体、ディアボディ、トリアボディ、テトラボディおよびｍｒｕが含まれ（ＷｉｎｔｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ、１９９１年、Ｎａｔｕｒｅ  ３４９巻：２９３〜２９９頁；ならびにＨｕｄｓｏｎ、１９９９年、Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｉｍｍ  １１巻：５４８〜５５７頁による総説を参照のこと）、それぞれが抗原
結合能またはエピトープ結合能を有する。単鎖Ｆv断片（ｓｃＦv）において、抗体のＶH
ドメインおよびＶLドメインは、柔軟性の高いペプチドによって連結される。典型的には
、リンカーは、約１５アミノ酸のペプチドである。リンカーがかなり小さい場合、例えば５アミノ酸の場合、ディアボディが形成される。抗体の最小の結合単位は、ＣＤＲ、典型的には、十分な特異的認識および結合能を有する重鎖のＣＤＲ２である。かかる断片は、分子認識単位すなわちｍｒｕと呼ばれる。いくつかのかかるｍｒｕは、短いリンカーペプチドで互いに連結され得、したがって、単一のｍｒｕよりも高い結合力を有する人工結合タンパク質を形成し得る。
【００８２】
本発明の範囲内には、目的の抗体の機能的等価物も含まれる。用語「機能的等価物」には、相同配列を有する抗体、抗体ホモログ、キメラ抗体、人工抗体および改変抗体が含まれ、例えば、各機能的等価物は、ＩＬ−４および／もしくはＩＬ−１３に結合する能力、ＩＬ−４および／もしくはＩＬ−１３のシグナル伝達能または機能を阻害すること、またはＩＬ−４および／もしくはＩＬ−１３のそのレセプターへの結合を阻害することによって、規定される。当業者は、「抗体断片」と称される分子の群と「機能的等価物」と称される群とで重複が存在することを理解する。ＩＬ−４および／またはＩＬ−１３結合能を保持する機能的等価物を生成する方法は当業者に公知であり、例えば、ＷＯ９３／２１３１９、欧州特許第２３９，４００号、ＷＯ８９／０９６２２、欧州特許第３３８，７４５号および欧州特許第３３２，４２４号に開示される。
【００８３】
本出願の機能的等価物には、改変抗体、例えば、抗体に任意の型の分子を共有結合させることによって改変された抗体もまた含まれる。例えば、改変抗体には、例えば、グリコシル化、アセチル化、ペグ化、脱アミド化、リン酸化、アミド化、公知の保護基／ブロッキング基による誘導体化、タンパク質分解性切断、細胞性リガンドへの連結、毒素もしくは細胞傷害性部分または他のタンパク質への連結などによって改変された抗体が含まれる。共有結合は、抗イディオタイプ応答を生じることからくる免疫である抗体を必ずしも生じない。改変は、特異的な化学的切断、アセチル化、ホルミル化、代謝的合成などが含まれるがこれらに限定されない公知の技術によって、達成され得る。さらに、改変抗体は、１つまたはそれ以上の非典型的アミノ酸を含み得る。
【００８４】
処置の目的としての「哺乳動物」とは、哺乳動物として分類される任意の動物を指し、ヒト、家畜（ｄｏｍｅｓｔｉｃ  ａｎｉｍａｌ）および家畜（ｆａｒｍ  ａｎｉｍａｌ）、非ヒト霊長類、ならびに動物園動物、競技用動物またはペット動物、例えば、イヌ、ウマ、ネコ、ウシなどが含まれる。
【００８５】
用語「処置」、「治療用量」または「治療有効量を投与する」とは、本発明において使用する場合、治療過程としての、治療的処置および予防的（ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ）または予防的（ｐｒｅｖｅｎｔａｔｉｖｅ）手段の両方を指す。これは、疾患状態、疾患の進行、疾患の原因因子（例えば、細菌またはウイルス）または他の異常な状態の有害な影響を、予防、治癒、逆転、減弱、軽減、最小化、抑制または停止させることを指す。
【００８６】
本発明の１実施形態は、喘息および特発性肺線維症の処置である。ＩＬ−４およびＩＬ−１３は、それらの生物学的機能に基づいて治療上重要なサイトカインであり、喘息を含む多数の疾患において重要な役割を果たす（Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００５年、５巻、１６１〜１６６頁）。ＩＬ−４は、自己免疫疾患を阻害できることが示されており、ＩＬ−４およびＩＬ−１３は共に、抗腫瘍免疫応答を増強する潜在能力を示している。ＩＬ−４およびＩＬ−１３ならびにそれらのレセプターの上昇は、特発性肺線維症（ＩＰＦ）の病理発生と関連付けられている（Ｊａｋｕｂｚｉｃｋ  Ｃ．ら、Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ．２００４年：１６４巻（６号）：１９８９〜２００１頁；Ｍｕｒｒａｙ  ＬＡら  Ｉｎｔ  Ｊ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏ
ｌ．２００８年：４０巻（１０号）：２１７４〜８２頁）。文献中の証拠は、ＴＨ２サイトカインＩＬ−４およびＩＬ−１３が、肺の組織再構築および線維症のメディエーターとしてＩＰＦの病理発生において複数の役割を果たしていること（Ｗｙｎｎ，ＴＡ、Ｎａａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ、４巻：５８３〜５９４頁、２００４年）、ならびに肥満細胞、好塩基球、好酸球、マクロファージおよび上皮細胞を含む他の細胞型もまた、これらのサイトカインの潜在的な供給源であり得ること（Ｇｏｒｄｏｎ  ＳおよびＭａｒｔｉｎｅｚ  ＦＯ、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  Ｒｅｖ．３２巻：５９３〜６０４頁、２０１０年）を実証している。ＩＰＦ患者において、気管支肺胞洗浄液中のＩＬ−１３およびＩＬ−４のレベルは、正常コントロールと比較して上昇する。かかる証拠は、これらのサイトカインを抑制または中和することができる治療が、ＩＰＦ患者における線維症の進行を遅延させる潜在能力を有することを示唆している。両方のサイトカインが、アレルギー性疾患または線維性疾患の病理発生に関与するので、これらのサイトカインのインヒビターは、治療上の利益を提供し得る。
【００８７】
「単離された」または「精製された」抗体は、そのタンパク質が誘導される細胞もしくは組織供給源または培地由来の細胞性材料または他の汚染タンパク質を実質的に含まないか、または化学合成された場合には化学物質前駆体もしくは他の化学物質を実質的に含まない。語「細胞性材料を実質的に含まない」には、ポリペプチド／タンパク質が単離または組換え生成される細胞の細胞性構成要素から分離された、抗体の調製物が含まれる。したがって、細胞性材料を実質的に含まない抗体には、約３０％、２０％、１０％、５％、２．５％または１％未満（乾燥重量）の汚染タンパク質を有する、抗体の調製物が含まれる。抗体が組換え生成される場合、培養培地を実質的に含まないこともまた好ましく、即ち、培養培地は、タンパク質調製物の体積の約２０％、１０％、５％、２．５％または１％未満を占める。抗体が化学合成によって生成される場合、化学物質前駆体または他の化学物質および試薬を実質的に含まないことが好ましく、即ち、目的の抗体は、タンパク質の合成に関与する化学物質前駆体または他の化学物質から分離されている。したがって、かかる抗体の調製物は、約３０％、２０％、１０％、５％または１％未満（乾燥重量）の、目的の抗体以外の化学物質前駆体または化合物を有する。本発明の好ましい実施形態において、抗体は単離または精製されている。
【００８８】
本明細書中で使用する場合、用語「治療剤（単数および複数）」とは、異常なＩＬ−４および／またはＩＬ−１３の代謝および活性に関連する疾患、障害、病弊などの処置、管理または寛解において使用され得る任意の薬剤（複数可）を指す。
【００８９】
本明細書中で使用する場合、「治療用量」とは、異常なＩＬ−４および／またはＩＬ−１３の代謝および活性に関連する疾患、障害、病弊などの処置、管理または寛解において使用され得る任意の薬剤（複数可）の量を指す。
【００９０】
本明細書中で使用する場合、「安全治療用量」とは、臨床的に許容可能な利益／リスクプロフィールを維持しつつ、異常なＩＬ−４および／またはＩＬ−１３の代謝および活性に関連する疾患、障害、病弊などの処置、管理または寛解において使用され得る任意の薬剤（複数可）または任意の薬剤（複数可）の用量を指す。安全治療用量は、１０ｍｇ、２０ｍｇ、４０ｍｇ、８０ｍｇ、１５０ｍｇおよび３００ｍｇからなる群より選択される。安全治療用量の１実施形態は、約１０ｍｇ〜約３００ｍｇである。安全治療用量のさらなる実施形態は、約３００ｍｇまたは約３００ｍｇ未満の任意の用量である。
【００９１】
本発明の１実施形態は、アレルギー性気管支痙攣についての救急処置室または家庭での集中処置、血液疾患、けいれん、総ビリルビン＞２×正常範囲の上限（ＵＬＮ）と関連するアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）＞３×ＵＬＮ、無症候性ＡＬＴの増加＞１０×ＵＬＮ、薬物依存または薬物乱用の発生、ＡＬＴの増加≧２×ＵＬＮ、≧７２時間
にわたるｈｓＣＲＰ＞１０ｍｇ／Ｌ、心筋トロポニンＩ（ｃＴｎＩ）＞２×ＵＬＮ、心電図（ＥＣＧ）マシンでの心室の脱分極および再分極時間（ＱＴ）からなる群より選択される１つまたはそれ以上の事象を測定することにより、安全治療用量を同定またはモニタリングすることであって、ＱＴは、ＱＴｃ≧５００ｍｓである、ＥＣＧマシンによって自動的に補正されたものであり（ＱＴｃ）、重症皮膚反応は、ＩＰ注射の部位に局所的であり、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）のレベルは２０ｍｇ／Ｌ未満である。上記事象を計算するために使用される方法は、以下に示す実施例において詳細に考察する。上記事象を計算するために使用される方法は、当業者に一般に公知である。
【００９２】
ＩＬ−４およびＩＬ−１３とそれらの細胞表面レセプターとのライゲーションの後の細胞内シグナル伝達は、シグナル伝達分子シグナルトランスデューサーアンドアクチベーターオブトランスクリプション６（ｓｉｇｎａｌ  ｔｒａｎｓｄｕｃｅｒ  ａｎｄ  ａｃｔｉｖａｔｏｒ  ｏｆ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ６（Ｓｔａｔ６））のリン酸化によって一部媒介される。したがって、Ｓｔａｔ６リン酸化（ｐＳｔａｔ６）の阻害は、ＩＬ−４レセプターおよびＩＬ−１３レセプターの活性化を阻害する分子の能力を試験するために使用され得る。
【００９３】
ＩＬ−４およびＩＬ−１３は、ヒト特発性肺線維症の肺線維芽細胞からのＩＬ−６およびエオタキシンの放出を刺激する。したがって、ＩＬ−６放出およびエオタキシン放出の阻害は、ＩＬ−４レセプターおよびＩＬ−１３レセプターの活性化を阻害する分子の能力を試験するために使用され得る。
【００９４】
本発明の１実施形態は、約０．０１ｎＭ〜約１００ｎＭのＩＣ５０で、ＩＬ−４誘導またはＩＬ−１３誘導されたＳＴＡＴ６リン酸化、ＩＬ−６放出またはエオタキシンを阻害する抗体である。さらなる実施形態は、約０．１ｎＭ〜約１０ｎＭのＩＣ５０を包含する。さらなる実施形態は、約０．１ｎＭ〜約１０ｎＭのＩＣ５０を包含する。本発明のさらなる実施形態は、約０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．１、１．２、１．３、１．４１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４．０、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．７、７．８、７．９、８．０、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９または１０．０ｎＭのＩＣ５０値である。
【００９５】
用語「約」は、数値と合わせて使用する場合、示された数値よりも５％、１０％または１５％小さい下限を有し、示された数値よりも５％、１０％または１５％大きい上限を有する範囲内の数値を包含する意味である。
【００９６】
本発明の１実施形態は、総ヒト抗体レベルもしくは特異的抗体（例えば二重特異性抗体）の割合を測定するため、または試験サンプル中の抗薬物抗体を測定するための、検出方法である。試験サンプルは、哺乳動物由来の任意の肉体サンプルであり得る。非限定的な例には、血液サンプル、血清サンプルまたは組織サンプルが含まれる。検出方法は、１つまたはそれ以上の抗体が捕捉デバイスに付着された「捕捉デバイス」を使用することを含み得る。「捕捉デバイス」の非限定的な例には、プレートのウェルが含まれ、そのプレートは、１２ウェルプレートまたは９６ウェルプレートなどのような、任意の数のウェルを含み得る。しかし、捕捉デバイスはプレートに限定されず、抗体が付着し得る任意の基材
、例えば溶出カラムが含まれ得る。本発明の１実施形態は、タグ標識化抗体を利用する。タグは、検出が可能な任意のタグであり得る。非限定的な例には、ローダミンなどの蛍光タグ、ルシフェラーゼなどの酵素タグ、またはスルホタグが含まれる。
【実施例】
【００９７】
本発明は、本発明の例示である以下の非限定的な実施例を参照してより良く理解され得る。以下に示される実施例は、本発明の広い範囲を限定すると決して解釈すべきではない。
【００９８】
用語「ｈｕＴＢＴＩ３＿２＿１」および「ＳＡＲ１５６５９７」は、相互交換可能であり、配列番号１および配列番号３のアミノ酸配列を含む可変軽鎖と、配列番号２および配列番号４のアミノ酸配列を含む可変重鎖とを含む同じデュアルＶ領域抗体様タンパク質を指す。
【００９９】
〔実施例１〕
ヒト化抗ＩＬ−４／ＩＬ−１３二重特異性抗体のクローニングおよび生成
ヒト化抗ＩＬ−４／ＩＬ−１３二重特異性抗体のクローニングおよび生成は、本明細書中でその全体が参照により組み入れるＷＯ２００９／０５２０８１（ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０７９７８７）中に記載されている。参照を容易にするために、短い説明を以下に与える。
【０１００】
二重特異性抗体（ＢｓＡｂ）の発現のために使用したフォーマットは、米国特許第５，９８９，８３０号に記載されるデュアルドメインダブルヘッドフォーマットのＩｇＧバリアントである。このフォーマットでは、ＩｇＧ分子は、第２の抗体のさらなる可変ドメインによって、対応する重鎖および軽鎖上でそのＮ末端が伸長されている。したがって、得られたＩｇＧ分子は、２つの重鎖および２つの軽鎖から構成されるヘテロテトラマーである。重鎖は、１０アミノ酸から構成されるリンカー（Ｇ４Ｓ）2によって互いに接続され
、ＩｇＧ４定常ドメインに融合された、２つの異なる抗体に由来する２つの可変重ドメイン（ＶＨ１−ＶＨ２）からなる。軽鎖は、１０アミノ酸から構成されるリンカー（Ｇ４Ｓ）2によって互いに接続され、定常κ領域に融合された、２つの異なる抗体に由来する２
つの可変軽ドメイン（ＶＬ１−ＶＬ２）からなる。
【０１０１】
８Ｄ４−８バリアント（８Ｄ４−８；Ｂｉｏｚｏｌ  ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃａ  Ｖｅｒｔｒｉｅｂ  ＧｍｂＨ、Ｅｃｈｉｎｇ  Ｇｅｒｍａｎｙのマウス抗ＩＬ−４モノクローナル抗体クローン８Ｄ４−８；Ｂｉｏｚｏｌは、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ、ＵＳＡのドイツ代理店である）の可変重ドメインおよび可変軽ドメインの配列を、そのそれぞれの５’末端において、（Ｇ４Ｓ）2−（ＧＧＡ  ＴＣＣ）−８Ｄ４−８の
一部をコードするＢａｍＨＩ制限部位（ＧＧＡ  ＴＣＣ）を導入するＰＣＲによって生成した。８Ｄ４−８ヒト化バリアントのＶＨの３’配列は、ＩＧＨＧ４配列（Ｑ５６９Ｆ４、末端Ｌｙｓの欠失ならびに二重変異Ｓ２４１ＰおよびＬ２４８Ｅを有する）への後の融合のための、ＡｐａＩ制限部位（ＣＨ１ドメインの最初のアミノ酸をコードする）で終わっていた。ＶＬ８Ｄ４−８の３’末端は、ＩＧＫＣ（Ｇｅｎｅ  Ｂａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｕｍｂｅｒ  Ｑ５０２Ｗ４）への後の融合のための、定常κ鎖の最初の２つのアミノ酸をコードするＢｓｉＷＩ制限部位で終わっていた。
【０１０２】
Ｂ−Ｂ１３バリアント（Ｂ−Ｂ１３；Ｃｅｌｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．、Ｃａｎｔｏｎ、ＭＡ  ＵＳＡのマウス抗ＩＬ−１３モノクローナル抗体クローンＢ−Ｂ１３）の可変重ドメインおよび可変軽ドメインの配列を、それらのそれぞれの３’末端において、（Ｇ４Ｓ）2−（Ｂ−Ｂ１３）−（ＧＧＡ  ＧＧＣ  ＧＧＡ  ＧＧＧ  ＴＣＣ  ＧＧＡ  
ＧＧＣ  ＧＧＡ  ＧＧＡ  ＴＣＣ（配列番号７））の一部をコードするＢａｍＨＩ制限部
位を導入するＰＣＲによって生成した。Ｂ−Ｂ１３バリアントのＶＨおよびＶＬの両配列を、それらのそれぞれの５’末端におけるＮｈｅＩ制限部位、その後ろのＡＴＧ開始コドンおよびリーダーペプチドコード配列を有するように生成した。
【０１０３】
Ｂ−Ｂ１３および８Ｄ４−８のＶＨを、（Ｇ４Ｓ）2リンカー内のＢａｍＨＩ部位を介
して互いに融合させた。Ｂ−Ｂ１３および８Ｄ４−８のＶＬを、（Ｇ４Ｓ）2リンカー内
のＢａｍＨＩ部位を介して互いに融合させた。したがって、生成された重鎖および軽鎖のタンデムは、以下の組成を有した。
【０１０４】
二重特異性抗体重鎖：ＮｈｅＩ−リーダーペプチド−ＶＨ−Ｂ−Ｂ１３−（Ｇ４Ｓ）2
−ＶＨ８Ｄ４−８−ＡｐａＩ。
【０１０５】
二重特異性抗体軽鎖：ＮｈｅＩ−リーダーペプチド−ＶＬ−Ｂ−Ｂ１３−（Ｇ４Ｓ）2
−ＶＬ８Ｄ４−８−ＢｓｉＷＩ。
【０１０６】
全ての中間体ＰＣＲ断片を、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  ＴＯＰＯ  ＴＡクローニングキット（カタログ番号：４５−０６４１）を使用してｐＣＲ（登録商標）４−ＴＯＰＯ中にクローニングし、Ｍ１３フォワードプライマーおよびＭ１３リバースプライマーを使用して配列決定した。
【０１０７】
配列確証後、重鎖タンデムを、それらのＡｐａＩ部位を介してＩＧＨＧ４配列に融合させ、可変軽鎖タンデムを、それらのＢｓｉＷＩ部位を介してＩＧＫＣに融合させた。創出されたデュアルドメイン重鎖および軽鎖を、ＮｈｅＩおよびＨｉｎｄＩＩＩで消化し、それぞれエピソーム発現ベクターｐＸＬのＮｈｅＩ／ＨｉｎｄＩＩＩ部位中にライゲーションして、それぞれＴＢＴＩ−重鎖および軽鎖の哺乳動物発現のためのプラスミドを創出した。
【０１０８】
４つのヒト化二重特異性抗ＩＬ−４／抗ＩＬ−１３構築物を、表１に示したＢ−Ｂ１３および８Ｄ４−８のヒト化ＶＨおよびＶＬバージョンの以下の組み合わせに基づいて生成した。対応する軽鎖および重鎖の配列を表２に示す。
【０１０９】
【表１】
2019059762.tif 000002
【０１１０】
【表２】
2019059762.tif 000003
【０１１１】
〔実施例２〕
ヒト全血単球におけるＩＬ−４誘導またはＩＬ−１３誘導されたＳＴＡＴ６リン酸化に対するｈｕＴＢＴＩ３＿２＿１の影響
クエン酸ナトリウムで抗凝固処理したヒト全血を、施設内の正常ドナーパネルから得た。ドナー番号２４５、２１７、２２９および００２を使用した。
【０１１２】
ｈｕＴＢＴＩ３＿２＿１は、ｓａｎｏｆｉ−ａｖｅｎｔｉｓで生成され、バッチ番号は
ＬＰ０８０５９であり、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）中５．６３ｍｇ／ｍｌで供給され、４℃で保存した。
【０１１３】
Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓの組換えヒトＩＬ−１３（凍結乾燥）、カタログ番号２１３−ＩＬを、０．２％ウシ血清アルブミンを含むＰＢＳで１０μｇ／ｍｌに再構成した。アッセイで使用したＩＬ−１３の最終濃度は、完全ＲＰＭＩ培地中３ｎｇ／ｍｌであった。ＡＭＳ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ＬＴＤの組換えヒトＩＬ−４（凍結乾燥）、カタログ番号１１１−４０−１３４を、０．２％ウシ血清アルブミンを含むＰＢＳで２０μｇ／ｍｌに再構成した。アッセイで使用したＩＬ−４の最終濃度は、完全ＲＰＭＩ培地中１ｎｇ／ｍｌであった。
【０１１４】
ｈｕＴＢＴＩ３＿２＿１を完全ＲＰＭＩ培地で連続希釈して１０×溶液を作製し、９６深型ウェルプレート中で、１ウェル当たり１００μｌの正常ヒト末梢血と混合して、ドナー番号２４５、２１７および００２については、１００ｎＭ、３３．３３ｎＭ、１１．１１ｎＭ、３．７０ｎＭ、１．２４ｎＭ、０．４１ｎＭ、０．１４ｎＭ、０．０５ｎＭ、０．０２ｎＭおよび０．００５ｎＭの最終濃度のｈｕＴＢＴＩ３＿２＿１にした。ドナー番号２２９については、試験したｈｕＴＢＴＩ３＿２＿１の最終濃度は、１００ｎＭ、３３．３３ｎＭ、１１．１１ｎＭ、３．７０ｎＭ、１．２４ｎＭ、０．４１ｎＭおよび０．１４ｎＭであった。
【０１１５】
プレートを、１５〜３０分間３７℃、５％ＣＯ2中でインキュベートした。次いで、組
換えヒトＩＬ−４（１ｎｇ／ｍｌ）またはＩＬ−１３（３ｎｇ／ｍｌ）を各ウェルに添加し、プレートを、１５分間３７℃、５％ＣＯ2中でさらにインキュベートした。次いで、
血球細胞を、３７℃で１０分間、溶解／固定緩衝液で溶解／固定し、室温で５分間３００×ｇで遠心分離した。上清を除去し、残った細胞ペレットを、リン酸緩衝食塩水で１回洗浄した。細胞を、予め冷却したメタノールで４℃で３０分間透過処理し、次いでＦＡＣＳ染色緩衝液（ＢＤ、カタログ番号５５４６５６）で１回洗浄した。蛍光標識抗体（１：５の最終希釈での抗ホスホ−Ｓｔａｔ６−Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ６４７および１：１０の最終希釈での抗ＣＤ３３−ＦＩＴＣ）を細胞に添加し、暗中にて室温で３０分間インキュベートした。ＦＡＣＳ染色緩衝液で洗浄した後、細胞を、ＦＡＣＳ  Ｃａｌｉｂｕｒ（商標）フローサイトメトリーで取得して、ＦＡＣＳデータを生成した。
【０１１６】
ＣｅｌｌＱｕｅｓｔソフトウェア（商標）（ＢＤ、バージョン５．２）を使用してＦＡＣＳデータを分析した。ＣＤ３３染色（フルオレセインイソチオシアネート）対ｐＳｔａｔ６染色（Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ６４７）を使用してドットプロットを創出した（図１を参照のこと）。総単球を、側方散乱対前方散乱に基づいてゲーティングした。ＣＤ３３+染色、Ｓｔａｔ６リン酸化陽性の単球を、ベースラインコントロールとｈｕＴＢＴＩ
３＿２＿１の非存在下でＩＬ−４刺激またはＩＬ−１３刺激されたサンプルとの間の蛍光強度に基づいてゲーティングした。総単球中のｐＳｔａｔ６陽性単球の％を、ＣｅｌｌＱｕｅｓｔ  ソフトウェア（ＢＤ、バージョン５．２）に基づいて、領域統計から得た。
【０１１７】
ＩＬ−４誘導またはＩＬ−１３誘導されたＳｔａｔ６リン酸化に対するｈｕＴＢＴＩ３＿２＿１の影響を、ＩＬ−４刺激またはＩＬ−１３刺激された単球における最大応答（Ｓｔａｔ６リン酸化）の％阻害を使用して決定した。
【０１１８】
最大応答を、ｈｕＴＢＴＩ３＿２＿１の非存在下でＩＬ−４刺激またはＩＬ−１３刺激によって生成されたｐＳｔａｔ６+細胞の％として規定した。非刺激単球から生成された
ｐＳｔａｔ６+細胞の％をベースラインシグナルとして使用した。最大応答の％を、以下
の式を使用して計算した：
【数１】
2019059762.tif 000004
【０１１９】
用量応答曲線を、ＳＰＥＥＤ  ｖ２．０−ＬＴＳによって、Ｙ：最大応答の％対Ｘ：ｈｕＴＢＴＩ３＿２＿１の濃度（ｎＭ）としてプロットして、最大応答の５０％を与える濃度（ＩＣ50）を計算した。
【０１２０】
用量応答曲線を、４パラメータロジスティックモデルによってモデル化した：
【数２】
2019059762.tif 000005
【０１２１】
パラメータｃおよびｄは、下限および上限であり、負のｂは、ｅ前後での相対的傾きであり、ｅパラメータはＩＣ50であり、かつ上限ｄと下限ｃとの間の応答中間を生じる用量である。４つのパラメータ（ｂ、ｃ、ｄ、ｅ）を、非線形最小二乗法によって概算した。ＳＰＥＥＤ  ｖ２．０−ＬＴＳ内部ソフトウェアを介したｓｕｎ社のｓｏｌａｒｉｓのためのＳＡＳシステムリリース８．２中のＳＡＳ手順ＮＬＩＮを使用した。３つの曲線のそれぞれからＩＣ50概算値を得た後、３つのＩＣ50値の幾何平均を計算した。
【０１２２】
ｈｕＴＢＴＩ３＿２＿１は、それぞれ１．３２ｎＭ、０．７３ｎＭおよび０．７８ｎＭのＩＣ50で、ドナー２４５、２２９および２１７においてＩＬ−４誘導されたＳｔａｔ６リン酸化を阻害した。ｈｕＴＢＴＩ３＿２＿１は、それぞれ２．６５ｎＭ、３．６８ｎＭおよび１．３２ｎＭのＩＣ50で、ドナー２４５、２２９および００２においてＩＬ−１３誘導されたＳｔａｔ６リン酸化を阻害した。
【０１２３】
３つの別個の実験からの、ＩＬ−１３誘導またはＩＬ−４誘導されたＳｔａｔ６リン酸化の阻害におけるｈｕＴＢＴＩ３＿２＿１の幾何平均ＩＣ50は、それぞれ２．３４ｎＭおよび０．９１ｎＭであった（表３）。
【０１２４】
【表３】
2019059762.tif 000006
【０１２５】
〔実施例３〕
ヒトＩＰＦの肺線維芽細胞からのＩＬ−４誘導またはＩＬ−１３誘導されたＩＬ−６放出およびエオタキシン放出に対するｈｕＴＢＴＩ３＿２＿１の影響
特発性肺線維症（ＩＰＦ）患者のヒト肺線維芽細胞、記号表示ＬＬ９７Ａ（ＡｌＭｙ）、項目番号ＣＣＬ−１９１、Ｆ−１２Ｋ培地（ＨａｍのＦ−１２培地のＫａｉｇｈｎ改変）および胎仔ウシ血清（ＦＢＳ）は、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ、Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ）のものであった。ウシ血清由来のアルブミン（ＢＳＡ）は、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）のものであった。組換えヒトＩＬ−１３（ｒｈＩＬ−１３）は、ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ（Ｒｏｃｋｙ  Ｈｉｌｌ、ＮＪ）のものであり；組換えヒトＩＬ−４（ｒｈＩＬ−４）は、Ｒ＆Ｄ  ＳＹＳＴＥＭＳ（Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ＭＮ）のものであった。ヒトＣＣＬ１１／エオタキシンおよびＩＬ−６についてのＤｕｏＳｅｔ  ＥＬＩＳＡ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  Ｓｙｓｔｅｍは、共にＲ＆Ｄ  ＳＹＳＴＥＭＳのものであった。
【０１２６】
継代７代目のＬＬ９７Ａ細胞を、９６ウェルの細胞培養プレート上に、１５％ＦＢＳ含有Ｆ−１２Ｋ培地中で１ウェル当たり２０，０００細胞でプレーティングし、加湿インキュベータ中で２４時間、３７℃、５％ＣＯ2でインキュベートした。次いで、培地を０．
１％ＢＳＡ含有Ｆ−１２Ｋ培地で置き換え、プレートを、血清飢餓のために加湿インキュベータ中で３７℃、５％ＣＯ2で一晩インキュベートした。次いで、細胞を、１ウェル当
たり２００μｌの総体積で、１５ｎｇ／ｍｌ（１．２ｎＭ）ｒｈＩＬ−１３＋５ｎｇ／ｍｌ（０．３６ｎＭ）ｒｈＩＬ−４の組み合わせと共に、３倍連続希釈した８つの濃度ポイントのｈｕＴＢＴＩ３＿２＿１によって、加湿インキュベータ中で３７℃、５％ＣＯ2で
一晩処理した。各処理は三連であった。次いで、１ウェル当たり１５０μｌの細胞培養上清を採取し、エオタキシンおよびＩＬ−６のＥＬＩＳＡのために、０．１％ＢＳＡ含有Ｆ−１２Ｋ培地３００μｌ中に希釈した（３倍希釈）。
【０１２７】
Ｒ＆Ｄ  ＳＹＳＴＥＭＳのヒトＣＣＬ１１／エオタキシンおよびＩＬ−６についてのＤｕｏＳｅｔ  ＥＬＩＳＡ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  Ｓｙｓｔｅｍの指示に従って、ＥＬＩＳＡを実施した。ＥＬＩＳＡプレートを、４５０ｎｍおよび５４０ｎｍにおいて、光学密度（ＯＤ）についてＳＰＥＣＴＲＡMAX３４０ＰＣプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌ
ａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）中で読み取った。５４０ｎｍでのＯＤ値を、計算の前に４５０ｎｍでのＯＤから差し引いた。
【０１２８】
上清中のＣＣＬ１１（エオタキシン）およびＩＬ−６のレベルを、ＳＯＦＴｍａｘにおいて４パラメータ較正曲線を用いて導出した。ｒｈＩＬ−１３／ｒｈＩＬ−４刺激なしのサンプル平均（基底レベル）を各サンプルから差し引き、次いで各サンプルを、％陽性コントロールについてｈｕＴＢＴＩ３＿２＿１なしのｒｈＩＬ−１３／ｒｈＩＬ−４刺激のサンプル平均（１００％陽性とする）と比較した。エラーバーは、三連の生物学的サンプルの平均の標準誤差を示す（細胞処理）。ｈｕＴＢＴＩ３＿２＿１は、ＩＣ５０＝７．８ｎＭでＩＬ−４／ＩＬ−１３刺激されたＩＬ−６放出を抑制し、ＩＣ５０＝３．８ｎＭでＩＬ−４／ＩＬ−１３刺激されたエオタキシン放出を抑制した（図２）。
【０１２９】
〔実施例４〕
ＩＰＦの肺線維芽細胞におけるＩＬ−４誘導またはＩＬ−１３誘導されたＬＯＸ発現に対するｈｕＴＢＴＩ３＿２＿１の影響
線維化促進性酵素のＩＬ−４刺激およびＩＬ−１３刺激された発現に対するｈｕＴＢＴＩ３＿２＿１の影響を評価するために、リジルオキシダーゼ（ＬＯＸ）のｍＲＮＡレベルを、実施例３に示したのと類似の実験で測定した。ＬＯＸ遺伝子発現をＴａｑｍａｎによって決定し、ハウスキーピング遺伝子ＧＡＰＤＨに対して正規化した。
【０１３０】
標準的なＴａｑｍａｎ法を使用した。簡潔に述べると、細胞溶解物を、Ｃｅｌｌｓ−ｔｏ−Ｃｔキット（ＡＢＩ、カタログ番号ＡＭ１７２９）を用いて調製した。２０×ヒトＧＡＰＤＨ  ＴａｑＭａｎ内因性コントロールプライマー／プローブセット：Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、品番４３１０８８４Ｅ、プローブ色素：ＶＩＣ−ＴＡＭＲＡ。２０×ヒトプライマープローブセット（５’末端においてＦＡＭ色素で、３’末端において非蛍光クエンチャーで標識したプローブ）は、ヒトＬＯＸ：Ａｐｐｌｉｅｄ  ＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓのＡＯＤ、遺伝子名：リジルオキシダーゼ；アッセイＩＤ：Ｈｓ００１８４７００＿ｍ１であった。逆転写（ＲＴ）を、４ブロックのアセンブリを有するＭＪ  ＲＥＳＥＡＲＣＨのＰＥＬＴＩＥＲ  ＴＨＥＲＭＡＬ  ＣＹＣＬＥＲ、Ｍｏｄｅｌ  ＰＴＣ
２２５で実施した。Ｔａｑｍａｎ機器は、７９００ＨＴ  Ｆａｓｔ  Ｒｅａｌ−Ｔｉｍｅ  ＰＣＲ  Ｓｙｓｔｅｍ、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、品番：４３３０９６６；シリアル番号：２７９００１６７４であった。１サンプル当たり２０ｕｌの細胞溶解物（または鋳型なしコントロールの場合には水）を、８０ｕｌのＲＴマスターミックス（５０ｕｌの２×ＲＴ緩衝液、５ｕｌの２０×ＲＴ酵素ミックス、２５ｕｌのＲＮａｓｅ非含有水）に添加した。ＲＴシーケンス：３７℃で６０分間の逆転写、９５℃で５分間のＲＴ不活化、４℃で永久維持。ＴａｑｍａｎリアルタイムＰＣＲについて、ＰＣＲカクテルを以下のように調製した：１０ｕｌのＴａｑｍａｎ遺伝子発現マスターミックス（２×）、１ｕｌのＴａｑｍａｎ遺伝子発現アッセイ（２０×）、１ｕｌのヒトＧＡＰＤＨ内因性コントロール（２０×）、３ｕｌの水、５ｕｌのＤＮＡを添加。Ｔａｑｍａｎサイクル条件：ＵＤＧインキュベーション維持は、５０℃で２分間１反復であり、酵素活性化は、９５℃で１０分間１反復であり、ＰＣＲサイクルは、９５℃で１５秒間その後６０℃で１分間を４０反復であった。
【０１３１】
ＬＯＸ活性は、細胞外マトリックスの安定化を生じる、細胞外コラーゲンとエラスチンとの架橋を生じ、その上方制御は、実験的肺線維症に関与している（Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ，Ｃ．ら、Ｄｒｕｇ  Ｎｅｗｓ  Ｐｅｒｓｐｅｃｔ．２１巻：２１８〜２２４頁、２００８年）。
【０１３２】
ＩＬ−４誘導およびＩＬ−１３誘導されたＬＯＸ遺伝子発現、ならびにこの発現は、３〜６ｎＭのＩＣ５０で、用量依存的様式でｈｕＴＢＴＩ３＿２＿１によって阻害された（
図４）。この効果は、少なくとも３人のＩＰＦ患者由来の肺線維芽細胞において観察された。ＩＬ−４およびＩＬ−１３は、フィブロネクチンおよびインスリン−増殖因子（ＩＧＦ；データ示さず）の遺伝子を誘導できなかった。このデータは、ＩＰＦ対象由来の肺線維芽細胞が、機能的ＩＬ−４／ＩＬ−１３レセプターを発現し、ＩＬ−４およびＩＬ−１３によるその活性化が、直接的および間接的な線維化促進効果を生じることを実証している。サイトカインＩＬ−４およびＩＬ−１３による、ＩＰＦ患者由来の肺線維芽細胞の線維化促進効果の活性化は、ｈｕＴＢＴＩ３＿２＿１によって阻害された。
【０１３３】
〔実施例５〕
カニクイザルにおけるアレルゲン誘導された急性喘息に対するｈｕＴＢＴＩ３＿２＿１の影響
ｈｕＴＢＴＩ３＿２＿１はげっ歯類のＩＬ−４にもＩＬ−１３にも結合しないので、本発明者らは、肺線維症のげっ歯類モデルにおける保護効果について、この分子を試験できなかった。ｈｕＴＢＴＩ３＿２＿１はカニクイザルのＩＬ−４およびＩＬ−１３に結合するが、この種において利用可能な肺線維症のモデルは存在しない。したがって、肺区画におけるＩＬ−４およびＩＬ−１３の効果を阻害するｈｕＴＢＴＩ３＿２＿１の能力を試験するために、本発明者らは、非ヒト霊長類種（カニクイザル）における急性喘息のモデルにおいてその保護効果を調査した。この研究では、アスカリス・スーム（Ａｓｃａｒｉｓ
ｓｕｕｍ）アレルゲンに対して天然に感作される雄性カニクイザル（マカカ・ファシクラリス（Ｍａｃａｃａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ））を使用した。
【０１３４】
気道応答性亢進および気道炎症を誘導するために、サルを、吸入アスカリス・スーム（Ａｓｃａｒｉｓ  ｓｕｕｍ）抽出物でチャレンジした。抗原チャレンジの６日前に、サルに、ｈｕＴＢＴＩ３＿２＿１（２．５ｍｇ／ｋｇ  ＩＶ）、または同じ用量の競合抗体（抗ＩＬ−１３、ＩＭＡ６３８）またはコントロール抗体（コントロール抗体はＩＬ−４にもＩＬ−１３にも結合しない）を受けさせた。
【０１３５】
漸増用量の吸入メタコリンに対する気管支収縮応答（肺抵抗において増加する）を、ＭＩ2呼吸分析器を使用して測定した。チャレンジの少なくとも２４時間前およびチャレン
ジの２４時間後に再び、測定を行った。気道応答性を、肺抵抗における１００％の増加（ＰＣ100）を引き起こすのに必要なメタコリンの誘発濃度として計算した。気道応答性の
測定直後に、気管支肺胞洗浄を実施して、気道における総白血球および好酸球の計数を可能にした。細胞計数を、洗浄液１ｍｌ当たりの細胞数として表した。抗原チャレンジの前および後のメタコリンＰＣ100値および気道細胞数における差異（  ）を計算した。
【０１３６】
血液サンプルを、抗原チャレンジの２４時間前に収集し、チャレンジの７日後に再度収集して、総免疫グロブリンＥ（ＩｇＥ）力価のアッセイを可能にした。ＩｇＥ力価の％変化を計算した。
【０１３７】
抗原チャレンジは、気道応答性亢進（即ち、減少したメタコリンＰＣ１００（図４）ならびに気道における総白血球および好酸球の蓄積（図５および６））を引き起こした。コントロール抗体と比較した場合、ｈｕＴＢＴＩ３＿２＿１（２．５ｍｇ／ｋｇ）またはＩＭＡ６３８（２．５ｍｇ／ｋｇ）のいずれかによる予防的処置は、気道応答性亢進の発生を顕著に抑制した。ＩＭＡ６３８は、気道における総白血球の抗原誘導された蓄積を顕著に低下させたが、ｈｕＴＢＴＩ３＿２＿１は顕著に低下させなかった（図５および６）。ｈｕＴＢＴＩ３＿２＿１もＩＭＡ６３８も、好酸球の蓄積に対して顕著な影響を有さなかった。ｈｕＴＢＴＩ３＿２＿１はＩｇＥ力価を顕著に低下させたが、ＩＭＡ６３８は顕著に低下させなかった（図７）。
【０１３８】
〔実施例６〕
組換えヒトおよびカニクイザルのＩＬ−４およびＩＬ−１３によってｉｎ  ｖｉｔｒｏで誘導されたＴＦ−１細胞増殖に対するｈｕＴＢＴＩ３＿２＿１の影響
ＩＬ−４誘導およびＩＬ−１３誘導された細胞活性化を阻害するｈｕＴＢＴＩ３＿２＿１の能力のさらなる研究として、組換えヒトＩＬ−４（ｈＩＬ−４）およびＩＬ−１３（ｈＩＬ−１３）によって誘導されたＴＦ−１細胞（ヒト赤血球系統）増殖の阻害に関するＩＣ50値を決定した。ＩＬ−４誘導またはＩＬ−１３誘導されたＴＦ−１細胞増殖は、これらのサイトカインの生理活性に関するアッセイとして文献中で一般に使用されている。
【０１３９】
ＴＦ−１細胞を、ｈＩＬ−４（５ｎｇ／ｍｌ）、ｈＩＬ−１３（１５ｎｇ／ｍｌ）、ｃＩＬ−４（５ｎｇ／ｍｌ）またはｃＩＬ−１３（３０ｎｇ／ｍｌ）のいずれかと共に、種々の濃度のｈｕＴＢＴＩ３＿２＿１と共に７２時間インキュベートした。３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミドを、細胞増殖のマーカーとして最後の３時間にわたり添加した。次いで、４９０ｎｍでの光学密度値を記録した。
【０１４０】
ｈｕＴＢＴＩ３＿２＿１は、濃度依存的様式で、匹敵する効力で、ｈＩＬ−４誘導、ｃＩＬ−４誘導、ｈＩＬ−１３誘導およびｃＩＬ−１３誘導されたＴＦ−１細胞増殖を顕著に阻害した。幾何平均ＩＣ50値は、ｈＩＬ−４誘導およびｃＩＬ−４誘導された増殖に対してそれぞれ２．０３ｎＭおよび０．５３ｎＭであり、ｈＩＬ−１３誘導およびｃＩＬ−１３誘導された増殖に対してそれぞれ３．０２ｎＭおよび０．４５ｎＭを、表４中に示す。
【０１４１】
【表４】
2019059762.tif 000007
【０１４２】
この研究の結果は、ＩＬ−４およびＩＬ−１３による刺激後のＴＦ−１細胞の細胞増殖の減少によって示されるように、ｈｕＴＢＴＩ３＿２＿１がこれらのサイトカインの生物学的活性を中和することを実証した。したがって、ｈｕＴＢＴＩ３＿２＿１を用いてこれらのサイトカインを標的化することは、ＩＰＦを有する患者において線維化プロセスを妨げ得る治療アプローチを可能にする。
【０１４３】
〔実施例７〕
ＩＬ−４媒介およびＩＬ−１３媒介されたＴＧＦβ放出に対するＳＡＲ１５６５９７の影響
ＩＬ−４およびＩＬ−１３は、ヒト肺上皮細胞からのＴＧＦβ放出を刺激することが示されている。本発明者らは、ヒト小気道上皮細胞（ＳＡＥＣ）およびヒト気管支上皮細胞（ＮＨＢＥ）からのこの線維化促進性サイトカインの放出に対するＳＡＲ１５６５９７の影響を決定した。ＳＡＥＣを、小気道上皮培養培地（Ｌｏｎｚａ）中に１ウェル当たり５
０，０００細胞で１２ウェルプレート上にプレーティングし、３日間培養した。ＮＨＢＥ細胞を、ＢＭＥＭ（Ｌｏｎｚａ）中で１ウェル当たり７５，０００細胞で１２ウェルプレート中で３日間培養した。細胞を、５μｇ／ｍｌインスリンおよび５μｇ／ｍｌトランスフェリンを含む基礎培地で一晩飢餓状態にし、次いで、種々の濃度のＳＡＲ１５６５９７の存在下で、１５ｎｇ／ｍｌ（１．２ｎＭ）ｒｈＩＬ−１３＋５ｎｇ／ｍｌ（０．３６ｎＭ）ｒｈＩＬ−４の組み合わせで処理した。細胞上清中のＴＧＦβ２を、ＥＬＩＳＡ（Ｅ−ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、カタログ番号ＢＭＳ２５４）によって決定した。ＳＡＲ１５６５９７は、ＮＨＢＥおよびＳＡＥＣ細胞からのＩＬ−４刺激およびＩＬ−３刺激されたＴＧＦβ２放出を、用量依存的様式で阻害した（図８）。
【０１４４】
〔実施例８〕
カニクイザルへの２．５ｍｇ／ｋｇのヒト化二重特異性抗ＩＬ−４／ＩＬ−１３（ｈｕＴＢＴＩ３＿２＿１）モノクローナル抗体の５分間の反復静脈内注入後の薬物動態研究
この研究では、ＩＬ−４／ＩＬ−１３に対するヒト化二重特異性モノクローナル抗体（ＢｓＡｂ）ｈｕＴＢＴＩ３＿２＿１の薬物動態特性を、反復用量投与後に測定した。その目的は、経時的なｈｕＴＢＴＩ３＿２＿１の蓄積が存在することを実証すること、および抗薬物抗体の動物産生をモニタリングすることであった。
【０１４５】
雄性マカカ・ファシクラリス（Ｍａｃａｃａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）（６〜８ｋｇ）は、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ、Ｈｏｕｓｔｏｎ、Ｔｘから得た。投与経路は、５分間のｉ／ｖ灌流によった。５回の投与を連続的に与えた。以下の時点で血液サンプル（１ｍｌ）を採取した：（第１の用量）０ｈ、０．５ｈ、２ｈ、４ｈ、８ｈ、２４ｈ、４８ｈ、７２ｈ、９６ｈ、１２０ｈ、１４４ｈ、１６８ｈ、２４０ｈ；（第２、第３および第４の用量）０ｈ、０．５ｈ、２ｈ、２４ｈ；（第５の用量）０ｈ、０．５ｈ、２ｈ、４ｈ、８ｈ、２４ｈ、４８ｈ、７２ｈ、９６ｈ、１２０ｈ、１４４ｈ、１６８ｈ、２４０ｈ、３３６ｈ、５０４ｈ、６７２ｈ、８４０ｈ、１００８ｈ（ｈ＝時間）。
【０１４６】
血清サンプルを、分析まで−２０℃で保存した。Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ）技術を用いる高感度エレクトロケミルミネッセンス（ＥＥＣＬ）アッセイを使用する２つの別個のアッセイを使用して、血清中のｈｕＴＢＴＩ３＿２＿１レベルを決定した（図９）。第３のアッセイを開発して、抗薬物抗体（ＡＤＡ）、即ち、抗二重特異性サル抗体の応答を評価した。
【０１４７】
第１のアッセイ（図９のパネルＡに図示した）を設計して、ヒト軽鎖κの濃度を測定することによって血清中のヒト抗体の総量を検出した。このアッセイでは、ＭＳＤ高結合プレートを、ＰＢＳ中に希釈したマウスモノクローナル抗ヒトκ鎖（クローン４Ｇ７；Ａｂｃａｍ；＃ａｂ１９３６）１μｇ／ｍＬによって一晩被覆した。１：１０００希釈および１：５０００希釈した血清サンプルと共に４℃で一晩インキュベートした後、１μｇ／ｍＬの濃度のスルホタグ標識化ヤギ抗ヒト抗体（ＭＳＤ；＃Ｒ３２ＡＪ−１）を添加し、ＭＳＤ  ｐｌａｔｅ  Ｓｅｃｔｏｒ  Ｉｍａｇｅｒ  ６０００を使用して検出した。
【０１４８】
第２のアッセイ（図９のパネルＢに図示した）を設計して、血清中のＩＬ−４およびＩＬ−１３に結合できる二重特異性抗体の割合を測定した（機能的抗体の量の測定）。このアッセイでは、ＭＳＤ高結合プレートを、２μｇ／ｍＬのマウス抗ヒトＩＬ−４（クローン４Ｄ９；Ａｎｃｅｌｌ；＃ＡＮＣ−３９６）、次いで２００ｎｇ／ｍＬの組換えヒトＩＬ−４（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、＃３４−８０４９）ならびに最後に１：１０００希釈および１：５０００希釈したサル血清と共に、順次４℃で一晩インキュベートした。結合した二重特異性抗体を、２００ｎｇ／ｍＬの組換えヒトＩＬ−１３（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ；＃３４−８１３９）、次いで２００ｎｇ／ｍＬのビオチン化ウサギポリクローナル抗ヒトＩＬ−１３抗体（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ；＃１３−７１３８）および最後に１μ
ｇ／ｍＬの濃度のスルホタグストレプトアビジン（ＭＳＤ；＃Ｒ３２ＡＡ−１）と共に順次インキュベートすることによって明らかにした。
【０１４９】
第３に、ＡＤＡを、架橋アッセイ（図８のパネルＣに図示した）で検出した。簡潔に述べると、１：１０希釈した血清を、ビオチン化およびスルホタグ化ｈｕＴＢＴＩ３＿２＿１（２μｇ／ｍＬの各最終）の混合物と共に４℃で一晩インキュベートした。次いで、複合体を、室温で４時間のインキュベーションによって、ストレプトアビジン被覆したプレート（ＭＳＤ；＃Ｌ１１ＳＡ−１）中に捕捉し、ＭＳＤ  ｐｌａｔｅ  Ｓｅｃｔｏｒ  Ｉｍａｇｅｒ  ６０００を使用して明らかにした。
【０１５０】
標準サンプル濃度を、以下の表に示すように、０．５％ＢＳＡを含むＰＢＳ中で調製した。ｈｕＴＢＴＩ３＿２＿１の総量を検出するためのアッセイについて、較正サンプルを０．５％ＢＳＡ、０．１％サル血漿を含むＰＢＳ中で調製した場合でも０．５％ＢＳＡのみを含むＰＢＳ中で調製した場合でも、有意な差異は存在しなかった。ＩＬ−４およびＩＬ−１３に特異的なｈｕＴＢＴＩ３＿２＿１の画分を検出するためのアッセイについて、較正サンプルを０．５％ＢＳＡ、０．１％サル血漿を含むＰＢＳ中で調製した場合でも０．５％ＢＳＡのみを含むＰＢＳ中で調製した場合でも、有意な差異は存在しなかった。両方の較正曲線は、線形回帰を使用して１／ｘ2重み付けし、全ての較正点内で線形である
ことが示された（Ｒ2＞０．９８）。
【０１５１】
【表５】
2019059762.tif 000008
【０１５２】
血清からのＡＤＡ測定と平行して、モックＡＤＡの希釈物をビオチン化およびスルホタグ化ｈｕＴＢＴＩ３＿２＿１と混合することによって、データバリデーション曲線を得た。抗体はマウス抗ヒトＩｇＧ４（Ａｂｃａｍ；＃ａｂ１９５０−１）であり、試験したいくつかの抗体からのノイズ比に対する最良のシグナルを示した。
【０１５３】
【表６】
2019059762.tif 000009
【０１５４】
ｈｕＴＢＴＩ３＿２＿１の定量下限（ＬＬＯＱ）は、総アッセイおよび特異的アッセイについてそれぞれ７０ｎｇ／ｍＬおよび５ｎｇ／ｍＬであった。ＡＤＡ応答の決定は定量的ではないが、モックＡＤＡ応答と比較して定性的である。
【０１５５】
薬物動態パラメータを、プログラムＷｉｎＮｏｎＬｉｎ  ５．２．、ノンコンパートメントモデル２０２を使用して、第５の用量後に血清濃度／個々の動物の算術平均から計算した。
【０１５６】
【表７】
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【０１５７】
【表８】
2019059762.tif 000011
【０１５８】
【表９】
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【０１５９】
【表１０】
2019059762.tif 000013
【０１６０】
【表１１】
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【０１６１】
【表１２】
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【０１６２】
【表１３】
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【０１６３】
ＩＬ−１３／ＩＬ−４に対する二重特異性抗体ｈｕＴＢＴＩ３＿２＿１の血清曝露を、雄性カニクイザルにおいて測定して、反復用量薬物動態パラメータを確立した。
【０１６４】
２．５ｍｇ／ｋｇの用量のｈｕＴＢＴＩ３＿２＿１を、連続サンプリングパラダイムにおいて、静脈内注入を介して、カニクイザルに反復して与えた。この抗体は、第１の用量から第５の用量までの蓄積を示した。Ｃmaxおよび部分的ＡＵＣ0〜336hはそれぞれ、１２８，０００ｎｇ／ｍＬから２２０，０００ｎｇ／ｍＬに、および１８，０００，０００ｎｇ．ｈ／ｍＬから４２，０００，０００ｎｇ．ｈ／ｍＬに、増加した。第５の用量後、８１，０００，０００ｎｇ．ｈ／ｍＬのＡＵＣ0〜infで、抗体に対する良好な曝露が存在した（図１０を参照のこと）。この抗体は、０．００００３２Ｌ／ｈｒ−ｋｇの血清クリアランスおよび０．０１４Ｌ／ｋｇの分布体積を示した。最終排出半減期は、３３０時間であることが見出された。
【０１６５】
研究の１匹のサルは、５日目〜７日目にピークに達する一過的な抗薬物抗体（ＡＤＡ）応答を示した。ＡＤＡレベルは、第２の注入の日に背景レベルに戻った。その後ＡＤＡレベルの顕著な上昇は見られなかった。他のサルは、どの時点でも顕著なレベルのＡＤＡを示さなかった。
【０１６６】
特定の臨床的徴候または体重喪失は、投与の間にも後にも観察されなかった。
【０１６７】
〔実施例９〕
健康な若い男性対象におけるｈｕＴＢＴＩ３＿２＿１の漸増単一皮下用量の安全性、耐容性および薬物動態の、無作為化二重盲検プラセボ対照研究についての研究設計の概要
これは、ヒトにおけるｈｕＴＢＴＩ３＿２＿１の第１の調査であり、単一皮下（ＳＣ）用量の安全性、耐容性および薬物動態（ＰＫ）に関する最初の情報を得るために、健康な対象における注意深い用量増大を含んだ。用量増大は、健康な若い男性対象のコホート（１８歳〜４５歳の年齢、５０．０ｋｇと９５ｋｇとの間の体重、１８．０ｋｇ／ｍ2と３
０．０ｋｇ／ｍ2との間の肥満度指数；包括的臨床評価によって健康であると認定された
；仰臥位での１０分間の安静後の正常な心拍数および血圧：９５ｍｍＨｇ＜収縮期血圧＜１４０ｍｍＨｇ；４５ｍｍＨｇ＜拡張期血圧＜９０ｍｍＨｇ；４０ｂｐｍ＜心拍数＜１００ｂｐｍ；仰臥位での１０分間の安静後の正常な標準的１２誘導ＥＣＧ；１２０ｍｓ＜ＰＲ＜２２０ｍｓ；ＱＲＳ＜１２０ｍｓ；ＱＴｃ≦４３０ｍｓ；正常範囲内の実験室パラメータ；Ｃ反応性タンパク質は、３ｍｇ／Ｌを超えるべきではない（高感度の測定法を使用して）；心筋トロポニンＩは、実験室標準の上限を超えるべきではない）において実施した。
【０１６８】
これは、健康な若い男性対象の４つの連続コホートにおける、単施設無作為化二重盲検プラセボ対照の、漸増する単一ＳＣ用量研究であった。各用量コホート／群は、８人の対
象からなるように設計した（６人の対象はｈｕＴＢＴＩ３＿２＿１を受け、２人の対象はプラセボを受けた）。この段階的な用量増大設計は、ヒトへの新たな治療的実体の導入に典型的であった。
【０１６９】
約１５日間のモノクローナル抗体についての典型的排出半減期を考慮に入れた、処置により発現した有害事象（ＴＥＡＥ）およびＰＫ分析のための投薬後８５日間（約１２週間）の観察期間が適切であった。投薬の１２週間後に測定したＡＤＡまたは自己免疫抗体（リウマチ因子［ＲＦ］、抗核抗体［ＡＮＡ］または抗好中球細胞質抗体［ＡＮＣＡ］）は、ベースラインから増加し、次いで、さらなる追跡通院を、投薬の６ヶ月後に行い、消散または長期残留を報告した。４つの連続的用量コホートにおける用量増大の最後に、最も高い投与用量を下回る用量でのさらなる情報が必要な場合、８人の対象からなる第５の用量コホートに投薬し、評価する。
【０１７０】
ｈｕＴＢＴＩ３＿２＿１の作用の免疫調節機構を考慮して、炎症に関連するいくつかの特定の実験室試験を企図した。
【０１７１】
Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）：
炎症は、ＣＲＰなどの急性期タンパク質の上昇と関連する。高感度の方法論を使用して、高感度Ｃ反応性タンパク質（ｈｓＣＲＰ）についての正常の上限（ＵＬＮ）は現在、心血管リスクを評価する目的で、３ｍｇ／Ｌであると述べられることが多い；しかし、米国の健康な対象の約３分の１は、１０ｍｇ／Ｌと１５ｍｇ／Ｌとの間の時折の擬似上昇を伴う、３ｍｇ／Ｌと１０ｍｇ／Ｌとの間のＣＲＰ値を有する（Ｋｕｓｈｎｅｒ  Ｉ．ら、Ａｍ  Ｊ  Ｍｅｄ  ２００６年；１１９巻（２号）：１６６．ｅ１７〜２８頁；Ｒｉｄｋｅｒ，ＰＭら、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ２００３年：１０７巻（３号）：３９１〜７頁；Ｐｅａｒｓｏｎ  ＴＡら、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ２００３年：１０７巻（３号）：４９９〜５１１頁；Ｒｉｄｋｅｒ  ＰＭら、２０００年：３４２巻（１２号）：８３６〜４３頁；Ｕｎｅｋ，ＩＴら、Ｃｌｉｎ  Ｍｅｄ  Ｒｅｓ．２０１０年；８巻（２号）８９〜９５頁）。健康な対象からの連続的サンプリングを使用して、Ｐ＜０．０５で有意な連続的値についての臨界的差異（即ち、分析による変動または正常な対象内の変動に起因する可能性が低い最小の百分率変化）は、１１８％であると報告されている（Ｍａｃｙ  ＥＭら、Ｃｌｉｎ  Ｃｈｅｍ  １９９７年：４３巻（１号）：５２〜８頁）。Ｃ反応性タンパク質値は、典型的には、１０ｍｇ／Ｌを上回るレベルで臨床的に有意であるとみなされ、このレベルを上回る持続性の上昇は、心配の種になり得る。急性炎症応答の間、１００ｍｇ／Ｌを超える値が観察され得る（Ｃｌｉｎ  ＢおよびＯｌｓｈａｋｅｒ  ＪＳ、Ｊ．Ｅｍｅｒｇ  Ｍｅｄ．１９９９年：１７巻（６号）１０１９〜２５頁）。ＣＲＰにおける上昇は、活動性血管炎の状態について一貫して報告されている（Ｋｏｎｔｔｉｎｅｎ  ＹＴら、Ｉｎｄ  Ｊ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ  ２００７年：２巻（３号）：１００〜４頁；Ｈｅｓｓｅｌｉｎｋ  ＤＡら、Ｓｃａｎｄ  Ｊ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ  ２００３年：３２巻（３号）１５１〜５頁）。このプロトコルについて、薬物関連の炎症および起こり得る血管炎の検出のための一次的手段として、臨床的所見と共にｈｓＣＲＰを使用した。少なくとも７２時間にわたり１０ｍｇ／Ｌを上回るｈｓＣＲＰにおける持続性の上昇を、血管炎のあり得る初期証拠とみなした。一般に、薬物誘導された血管炎は、処置の中断の際に可逆的であり、ｈｓＣＲＰなどの炎症のマーカーは、正常またはベースラインの値に戻るはずである（Ｗｉｉｋ，Ａ、Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ  ２００８年：２０巻（１号）３５〜９頁；Ｃａｌａｂｒｅｓｅ  ＬＨおよびＤｕｎａ  ＧＦ、Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ  １９９６年；８巻（１号）３４〜４０頁）。さらに、薬物投与後の２０ｍｇ／Ｌを上回る連続した上昇は、起こり得る薬物関連の炎症促進刺激の証拠とみなされ得、急性感染症などの炎症の他の原因を排除した後には、さらなる投薬の休止のあり得る理由とみなされ得る。
【０１７２】
心筋トロポニンＩ：
血清心筋トロポニンＩ（ｃＴｎＩ）を、潜在的な冠血管炎によって引き起こされる心筋傷害を検出するためにモニタリングした（Ｋｉｍ  ＭおよびＫｉｍ  Ｋ、Ｐｅｄｉａｔｒ
Ｃａｒｄｉｏｌ、１９９９年：２０巻（３号）：１８４〜８頁）。ｃＴｎＩ上昇は、心筋傷害以外の要因（激しい運動を含む）によって引き起こされ得るので（Ｗｕ  ＡＨ、ら
Ｃｌｉｎ  Ｃｈｅｍ．２００７年；５３巻（１２号）：２０８６〜９６頁）、この研究におけるｃＴｎＩの解釈を、臨床徴候、症状、ＥＣＧおよびｈｓＣＲＰに関して行った。
【０１７３】
血管炎についての補充的試験：
個々の対象におけるｈｓＣＲＰの持続性の上昇に関連する炎症をさらに特徴付けるために、補体（Ｃ３、Ｃ４およびＣＨ50）、クリオグロブリン、ＡＮＣＡ（核周囲および細胞質のＡＮＣＡについての免疫蛍光ならびに抗プロテアーゼ３［ＰＲ３］および抗ミエロペルオキシダーゼについての確証的イムノアッセイ）、ＲＦおよびＡＮＡについての試験を含む、血管炎に関するさらなる実験室試験を実施した。ベースライン値を、全ての対象について投薬前に確立した；血管炎についてのこれらの補充的試験のさらなるアッセイを、ｈｓＣＲＰにおける持続性の上昇（少なくとも７２時間にわたって＞１０ｍｇ／Ｌ）を示した個々の対象について実施し、その場合、補充的試験は、直ぐに（実行可能な限り直ぐに）および数回の引き続く通院の際に実施した。
【０１７４】
補充的試験の提案されたアレイは、発生した場合には血管炎の機構に関する知見を提供した。ＡＮＣＡは新たな分類基準である（Ｓｕｎｄｅｒｋｏｔｔｅｒ  ＣおよびＳｉｎｄｒｉｌａｒｕ  Ａ．Ｅｕｒ  Ｊ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ．２００６年；１６巻（２号）：１１４〜２４頁；Ｗａｔｔｓ  Ｒら、Ａｎｎ  Ｒｈｅｕｍ  Ｄｉｓ．２００７年；６６巻（２号）：２２２〜７頁；Ｗａｔｔｓ  ＲＡら、Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ（Ｏｘｆｏｒｄ）．２０１０年７月２０日：１〜３頁）。ＡＮＣＡは、それらが正常な好中球上に生成する間接的免疫蛍光（ＩＩＦ）パターンに従って、およびそれらの標的抗原に従って、分類される（Ｐｏｌｌｏｃｋ  Ｗら、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ．２００９年；３４７巻（１〜２号）：１９〜２３頁；Ｄｅ  Ｒｏｓａ  ＦＧおよびＡｇｎｅｌｌｏ  Ｖ．Ｊ
Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．２００９年；３６巻（９号）：１９５３〜５頁；Ｃｌｉｎ  Ｓｃｉ（Ｌｏｎｄ）．２００５年；１０８巻（２号）：１０１〜１２頁）。ミエロペルオキシダーゼ−ＡＮＣＡが陽性である場合、チャーグ・ストラウス症候群または顕微鏡的多発動脈炎を疑うことができる。ＰＲ３−ＡＮＣＡが陽性である場合、ウェゲナー肉芽腫症の可能性が最も高い。ＡＮＣＡ試験が陰性でありかつクリオグロブリン試験が陽性である場合、クリオグロブリン血管炎を疑うべきであり、その原因となる疾患、特にＣ型肝炎およびＢ型肝炎、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）ならびにシェーグレン症候群を排除すべきである。血清Ｃ３およびＣ４は、クリオグロブリン血症では消費される場合が多いが、結節性多発動脈炎およびＡＮＣＡ血管炎では通常正常である。ＡＮＣＡは、感染症、炎症性腸疾患および他の結合組織疾患（例えば、関節リウマチ）を含む他の疾患の存在下で陽性であり得る。これらの場合、ＡＮＣＡは陽性であるが、ＰＲ３およびミエロペルオキシダーゼに関しては陰性である。
【０１７５】
血管内皮活性化バイオマーカー：
血管炎性病変の発生は、内皮細胞および好中球の活性化と関連している（Ｔｅｓｆａｍａｒｉａｍ  ＢおよびＤｅＦｅｌｉｃｅ  ＡＦ．Ｖａｓｃｕｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２００７年；４６巻（４号）：２２９〜３７頁；Ｔｏｘｉｃｏｌ  Ａｐｐｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２００５年；２０７巻（補遺２）：４４１〜５頁）。ｅ−セレクチンなどの接着分子の発現増強は、内皮と循環炎症細胞との相互作用を促進する。種々の内皮活性化マーカー、例えば、エンドセリン−１およびトロンボモジュリンは、報告によれば血管炎の間に上昇する。血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）は、血管透過性を変更し得、ベーチェット病、顕微鏡的多発血管炎、結節性多発動脈炎、巨細胞性動脈炎および全身性血管炎を有する
患者由来の血清において上昇する（Ｃｅｋｍｅｎ  Ｍら、Ｉｎｔ  Ｊ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ．２００３年；４２巻（１１号）：８７０〜５頁）。処置により発現した炎症（例えば、持続性のｈｓＣＲＰ上昇）または血管炎と一致する実験室値における変化が複数の対象において見られ、次いでアーカイブ血清サンプルおよび血漿サンプル（薬物投与の前に収集し、薬物投与の後に周期的に収集した）を、血管内皮活性化と関連する種々の探索バイオマーカーについてアッセイして、炎症の性質をさらに特徴付けた。
【０１７６】
リンパ球サブセット：
ヒトリンパ球の特定のサブセットがｈｕＴＢＴＩ３＿２＿１によって選択的に影響を受けるわけではないことを保証するために、リンパ球サブセットを、フローサイトメトリーを使用して評価した。これには、絶対数として、および総リンパ球の％として、ならびにＣＤ４／ＣＤ８比として表される、総Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞（ＣＤ４）、Ｔサプレッサー細胞（ＣＤ８）および総Ｂ細胞（ＣＤ１９）が含まれる。
【０１７７】
免疫原性
モノクローナル抗体の全身投与は、治療的抗体のＰＫおよび／または活性を変更し得るＡＤＡの生成と関連している（Ｈａｎｓｅｌ  ＴＴら、Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ．２０１０年；９巻（４号）：３２５〜３８頁）。免疫原性を、抗ｈｕＴＢＴＩ３＿２＿１抗体について酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）を使用して評価した；ｈｕＴＢＴＩ３＿２＿１の抗体中和を評価するための機能的アッセイが、さらなる研究の間に使用され得る。
【０１７８】
尿中アルブミン：
尿中のタンパク質の出現は、薬物臨床試験の間の腎糸球体の透過性増加の徴候であり、潜在的な腎傷害の証拠である。タンパク質についての標準的な尿試験紙アッセイが、この目的のために典型的に使用される。しかし、尿試験紙方法論は、血管炎の初期段階の間に生じ得る糸球体機能におけるより微妙な変化を検出できない可能性がある。したがって、尿中アルブミンに対するより高感度のアッセイを、ｈｕＴＢＴＩ３＿２＿１の初期臨床試験の間に使用した。早朝スポット採尿を使用して、微量アルブミン尿症の潜在的な出現をモニタリングし、アルブミン／クレアチニン比として報告して、尿溶質希釈の程度における増減について補正した。微量アルブミン尿症の処置後出現を、真性糖尿病を有する患者のモニタリングのために推奨されるように、３回の連続した採尿のうち２回におけるアルブミン／クレアチニン比＞３０μｇ／ｍｇの所見として規定した（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ．Ｓｔａｎｄａｒｄｓ  ｏｆ  ｍｅｄｉｃａｌ
ｃａｒｅ  ｉｎ  ｄｉａｂｅｔｅｓ−−２００９年．Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｃａｒｅ．２００９年；３２巻、補遺１：Ｓ１３〜６１頁）。運動は尿中アルブミンを一時的に上昇させ得るので、激しい肉体的運動は採尿前には制限しなくてはならない（Ｈｅａｔｈｃｏｔｅ  ＫＬら、Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  Ｍｅｄ．２００９年；３２巻（４号）：Ｅ２６１〜５頁）。激しい肉体的運動の２４時間以内に得た尿中アルブミン結果は、微量アルブミン尿症を規定する目的のためには、考慮から外さなくてはならない。３回の連続した採尿のうち２回におけるアルブミン／クレアチニン比＞３００μｇ／ｍｇの所見を、顕性アルブミン尿症の証拠として評価した（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ．Ｓｔａｎｄａｒｄｓ  ｏｆ  ｍｅｄｉｃａｌ  ｃａｒｅ  ｉｎ  ｄｉａｂｅｔｅｓ−２００９年．Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｃａｒｅ．２００９年；３２巻、補遺１：Ｓ１３〜６１頁）。
【０１７９】
治験薬（ＩＰ）注射の部位における耐容性：
存在する疼痛に関する標準的な定性的および定量的評価（言語による尺度）（Ｍｅｌｚａｃｋ  Ｒ．Ｔｈｅ  ＭｃＧｉｌｌ  Ｐａｉｎ  Ｑｕｅｓｔｉｏｎｎａｉｒｅ：ｍａｊｏｒ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ａｎｄ  ｓｃｏｒｉｎｇ  ｍｅｔｈｏｄｓ．Ｐａｉｎ  １９
７５年；１巻：２７７〜２９９頁）を含め、ならびに紅斑症および腫脹／硬結／浮腫について（Ｇｕｉｄａｎｃｅ  ｆｏｒ  ｉｎｄｕｓｔｒｙ：ｔｏｘｉｃｉｔｙ  ｇｒａｄｉｎｇ  ｓｃａｌｅ  ｆｏｒ  ｈｅａｌｔｈｙ  ａｄｕｌｔ  ａｎｄ  ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔ
ｖｏｌｕｎｔｅｅｒｓ  ｅｎｒｏｌｌｅｄ  ｉｎ  ｐｒｅｖｅｎｔｉｖｅ  ｖａｃｃｉｎｅ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｔｒｉａｌｓ、ＵＳ  Ｄｅｐｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ
Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、Ｆｏｏｄ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ、Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ａｎｄ
Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２００７年９月）、ＩＰ注射の部位における不快感および組織反応の程度を、最大で投薬の２週間後までモニタリングした。
【０１８０】
ＴＤＵ１１３２５についての用量増大工程を表１１中に示す。用量増大比率は、各増大工程において２倍である。用量におけるこの連続的増加は、治療的モノクローナル抗体の最初の臨床試験に典型的であり、潜在的な安全性シグナルの注意深いモニタリングによって支持される。
【０１８１】
【表１４】
2019059762.tif 000017
【０１８２】
より低い用量の結果に依存して、より高い用量のｈｕＴＢＴＩ３＿２＿１が試験され得る。より高い用量には、３００ｍｇコホートよりも低いか、それと等しいか、またはそれより高い任意の用量が含まれ得る。企図されたさらなる用量コホートには、１７５ｍｇ、２００ｍｇ、２２５ｍｇ、２５０ｍｇ、２７５ｍｇおよび３００ｍｇが含まれるが、それらに限定されない。さらなる用量コホートは、３００ｍｇ、３５０ｍｇ、４００ｍｇまたはそれより高いものであり得る。
【０１８３】
ｈｕＴＢＴＩ３＿２＿１またはプラセボを、臍の右または左に対し４〜１０ｃｍの領域中に、かつウエストラインの上で、飢餓条件下で臍周囲ＳＣ注射として投与した。安全措置として、ＴＤＵ１１３２５における用量コホートを、より小さい下位群として義務的に開始した。各用量コホートについて、２人の対象に第１日目に投薬した。コホート中の残りの対象には、２日（約４８時間）後直ぐに投薬し、２人以下の対象には各日に投薬した。
【０１８４】
用量「ｎ」から次の「ｎ＋１」用量に進むという決定は、治験責任医師によって提供された予備的安全性報告に基づいて、治験依頼者および治験責任医師によって合同で行ったが、この報告には、用量レベルコホート「ｎ」の８人の対象のうち少なくとも６人の対象の、投与後少なくとも２１日間にわたる（２２日目）盲検安全性データが含まれる。した
がって、コホート内の交互の投薬を考慮に入れ、新たな用量コホートを、約４週間毎に開始した。この決定のための適切なデータは、少なくとも、有害事象、血液学、リンパ球サブセット、凝固、尿検査、血清生化学（ｈｓＣＲＰおよびｃＴｎＩを含む）、ＥＣＧ、血圧、心拍数および体温であるべきである。入手可能なＰＫデータもまた、研究進行の間に検討した。
【０１８５】
治験依頼者および治験責任医師による、深刻な有害事象および他の有害事象の出現／重症度の古典的評価に加えて、潜在的な交絡因子を調査した後、以下の基準を、投薬停止の決定のためのガイダンスとみなした：
・治療への関連性が合理的に排除できない１より多い重症強度の有害事象（逐語的に同じ）。有害事象の「重症」強度の定義は、その事象が毎日の活動を阻み、対症的処置を必要とすることである；
・ＱＴｃ≧５００ｍｓ；
・≧２４時間離れた２回の連続した血液収集にわたり持続したｈｓＣＲＰ＞２０ｍｇ／Ｌ
注記：予定した収集時点においてｈｓＣＲＰが＞２０ｍｇ／Ｌである場合、さらなる血液サンプルを、再試験のために２４時間後に（またはその後可能な限り直ぐに）収集すべきである。
【０１８６】
各バイアルが１８５ｍｇのｈｕＴＢＴＩ３＿２＿１＋賦形剤を含有する、ＳＣ用量溶液の調製のための凍結乾燥形態の、２℃と８℃との間（華氏３６度と華氏４６度との間）で保存したｈｕＴＢＴＩ３＿２＿１。１．７ｍＬの無菌で発熱物質を含まない蒸留水によって、室温で、投薬の日の朝に（ＳＣ注射の僅か１時間前に）再構成する。注射のための再構成後の溶液中の構成成分の濃度は、以下であった：７．０の最終ｐＨで、６．３ｍｍｏｌ／Ｌリン酸二水素ナトリウム、３．７ｍｍｏｌ／Ｌトロメタミン、５％（重量／体積）スクロース、３％（ｗ／Ｖ）プロリンおよび０．２％（ｗ／Ｖ）ポリソルベート８０中１００ｍｇ／ｍＬのｈｕＴＢＴＩ３＿２＿１。プラセボについて、各バイアルは、再構成したｈｕＴＢＴＩ３＿２＿１製剤と同じ濃度の同じ賦形剤からなる液体２ｍＬを含む。
【０１８７】
【表１５】
2019059762.tif 000018
【０１８８】
推奨される投薬前の飢餓期間は、投薬前少なくとも１０時間であり、投薬後２時間継続される。
【０１８９】
ベースラインでのおよび研究の間の安全性調査および耐容性調査は、以下からなるものとした：
・肉体的試験（少なくとも以下が含まれる：心臓および呼吸の聴診；両腕および両脚における末梢動脈拍動；瞳孔、膝、アキレス腱および足底反射；末梢リンパ節および腹部試
験；皮膚、手および足の診察）；
・体重（ｋｇ）；
・前後方向胸部ｘ線（投薬後に臨床的に示されない場合に限りスクリーニング）；
・体温（口腔または鼓室のいずれかであるが、全ての対象について研究を通じて一貫して同じ方法）；
・安静仰臥位で１０分間の後におよび起立位で３分間の後に測定した、心拍数ならびに収縮期および拡張期血圧）；
・実験室試験（飢餓条件下、即ち、特に示さない限り、少なくとも１０時間前に水のみで、朝に収集した全ての血液サンプル）：
−血液学：赤血球計数（ＲＢＣ）、ヘマトクリット（Ｈｃｔ）、ヘモグロビン（Ｈｂ）、差示的な（好中球、好酸球、好塩基球、単球およびリンパ球）白血球計数（ＷＢＣ）、血小板；
−凝固：プロトロンビン時間（ＰＴ）、国際標準化比（ＩＮＲ）、フィブリノーゲンおよび活性化部分トロンボプラスチン時間（ａＰＴＴ）；
−血清生化学：
電解質：ナトリウム、カリウム、クロライド、カルシウム；
肝機能：ＡＳＴ、ＡＬＴ、アルカリホスファターゼ、γ−グルタミルトランスフェラーゼ（ＧＧＴ）、総ビリルビンおよびコンジュゲート化ビリルビン；
腎機能：尿素、クレアチニン；
代謝：グルコース、アルブミン、総タンパク質、総コレステロール、トリグリセリド；
潜在的筋毒性：クレアチンキナーゼ（ＣＫ）；
潜在的心毒性：ｃＴｎＩ；
炎症バイオマーカー：高感度ＣＲＰ（ｈｓＣＲＰ）；
−リンパ球サブセット：
フローサイトメトリーによる、絶対数として、および総リンパ球の％として、ならびにＣＤ４／ＣＤ８比として表される、総Ｔ細胞（ＣＤ３）、Ｔヘルパー細胞（ＣＤ４）、Ｔサプレッサー細胞（ＣＤ８）および総Ｂ細胞（ＣＤ１９）
−免疫原性：抗ｈｕＴＢＴＩ３＿２＿１抗体；
−血管炎についての補充的試験（ベースラインにおいて、および次いで≧７２時間にわたりｈｓＣＲＰ＞１０ｍｇ／Ｌを示した対象についてのみ投薬後に）：
補体アッセイ：Ｃ３、Ｃ４、ＣＨ50；
クリオグロブリン；
リウマチ因子（ＲＦ）；
抗核自己抗体（ＡＮＡ）：ＨＥｐ２  ＩＩＦ（力価およびパターン）；
抗好中球細胞質自己抗体（ＡＮＣＡ）：核周囲および細胞質ＡＮＣＡについての免疫蛍光ならびに抗プロテアーゼ３および抗ミエロペルオキシダーゼについての確証的イムノアッセイ。
・血清学的試験：ＨＢｓＡｇ、Ｂ型肝炎コア抗体、抗ＨＣＶ抗体、抗ＨＩＶ１抗体および抗ＨＩＶ２抗体；
・アーカイブ血液サンプル：血清サンプルおよび血漿サンプルを調製し、安全性評価を支持するのに必要な実験室パラメータのさらなるアッセイのために保存した。特に、複数の対象における持続性炎症の所見（例えば、少なくとも７２時間にわたるｈｓＣＲＰ＞１０ｍｇ／Ｌ）または血管炎の処置により発現したマーカーの出現は、血管内皮活性化の探索バイオマーカーのアッセイにつながり得る。
血清について、１０ｍＬの血液サンプルを、乾燥した上部が赤いチューブ中に収集し、収集の１５分以内に、およそ１５００ｇで４℃にて１０分間遠心分離した；次いで血清を、ほぼ等しいアリコートで（プラスチックのトランスファーピペットを使用して）３つの保存チューブ中に移し、これを直ぐにキャップし、直立位で−２０℃以下で凍結した；
血漿について、１０ｍＬのエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）血液サンプルを、上部が紫のチューブ中に収集し、収集の１５分以内に、およそ１５００ｇで４℃にて１０分間
遠心分離した；次いで血漿を、ほぼ等しいアリコートで（プラスチックのトランスファーピペットを使用して）３つの保存チューブ中に移し、これを直ぐにキャップし、直立位で−２０℃以下で凍結した；
・尿検査：
−中間尿標本を収集し、以下の分析に供した。
−タンパク質、グルコース、血液（ヘム）、白血球、ケトン体およびｐＨの検出のための、試薬ストリップ尿試験紙分析。陽性のグルコース結果は、地方臨床実験室標準操作手順に従って、グルコースについての代替的方法論を用いて確認すべきである。対象の尿中のタンパク質、グルコースまたは血液の最初の検出の際に、さらなる尿標本を収集し、確認のために尿検査に供するべきである。
−尿沈渣は、最低でも、以下の形成された要素について試験すべきである：赤血球、変形赤血球、白血球、腎上皮細胞、円柱（硝子、ＲＢＣ、ＷＢＣ、顆粒、ロウ状、脂肪、腎細胞）、細菌、酵母およびトリコモナス。これらの要素のそれぞれの豊富さは、地方実験室で使用される標準的な実験室用語法および単位（例えば、高倍率視野当たりの細胞数、僅か、豊富）を使用してスコア付けすべきである。任意のさらなる異常な所見を、報告上に注記すべきである。
−尿微量アルブミン：アルブミンおよびクレアチニンの定量的アッセイならびにアルブミン／クレアチニン比（μｇ／ｍｇ）の計算。
・尿薬物スクリーニング：アンフェタミン／メタンフェタミン、バルビツレート、ベンゾジアゼピン、カンナビノイド、コカイン、オピエート；
・アルコール呼気または血中試験；
・対象によって自発的に報告されたまたは治験責任医師によって観察された有害事象を、有害事象および関連応答の定義のためにモニタリングした；
・標準的１２誘導ＥＣＧ。
バイタルサイン、ＥＣＧおよび血液サンプルを、治験薬投与および／または食餌と同じ時間に予定した場合、それらを、ＩＰ摂取および／または食餌の前に行った。ＰＫまたは安全性についてバイタルサイン、ＥＣＧおよび血液サンプリングの測定が同時期に起きる場合はいつでも、以下の順を尊重した：ＥＣＧ、バイタルサイン、ＰＫサンプルおよび安全性サンプル。
【０１９０】
１２誘導ＥＣＧを、心電図デバイスを使用して、仰臥位で少なくとも１０分間の後に記録した。電極を、研究の間の各ＥＣＧ記録について同じ位置に配置した（リードの付着部位には、消えないペンでマークをつける）。
【０１９１】
各ＥＣＧは、１２誘導の１０秒間の同時記録からなり、以下につながる：
−日付、時間、対象のイニシャルおよび番号、研究医のサイン、ならびに各リードについて少なくとも３つの群を含む、心拍数、ＰＲ、ＱＲＳ、ＱＴ、ＱＴｃ自動補正評価を有する１回の単一１２誘導ＥＣＧ（２５ｍｍ／ｓ、１０ｍｍ／ｍＶ）プリントアウト。治験責任医師の医学的意見および自動的な値を、ｅＣＲＦに記録した。このプリントアウトを、施設レベルで保持した。例外として、投薬前１日目に３連で記録を得た。
【０１９２】
臍周囲領域周辺の皮膚を、ＳＣ注射に対する潜在的な反応について試験した。紅斑症および腫脹（硬結および／または浮腫を含む）の最大直径を、ミリメートル単位で個別に測定し、記録した。紅斑症および腫脹を、ワクチンの評価に関するＦＤＡガイダンスと類似の様式で、以下のように個別に等級分けした。観察の時点で、パラメータにおいて処置により発現した変化が存在しない場合、０の値を記録した。
【０１９３】
【表１６】
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【０１９４】
さらに、そう痒感の程度ならびに丘疹、膿疱および小胞形成の出現を、以下の等級分け尺度を使用してそれぞれスコア付けした：
０＝なし；１＝殆ど知覚できない；２＝軽度；３＝中程度；４＝重症
【０１９５】
中程度の強度またはそれより悪い皮膚反応を、有害事象として記録した。以下の症状または表面的な所見の存在または非存在を、等級分けせずに記録した：びらん、乾燥、鱗屑化、ひび割れ、痂皮化およびグレージング（ｇｌａｚｉｎｇ）。
【０１９６】
さらに、この疼痛強度を、ＭｃＧｉｌｌ  Ｐａｉｎ  Ｑｕｅｓｔｉｏｎｎａｉｒｅのサブセットに基づく、以下の言語的数的評点尺度（研究対象による自己評価）を使用して記録した。対象が評価した疼痛スコアが≧３のとき、有害事象と報告される。
０＝疼痛なし；１＝軽度；２＝不快；３＝苦痛；４＝ひどい；５＝極度な痛み
【０１９７】
薬物動態
ｈｕＴＢＴＩ３＿２＿１  ＰＫ分析のための全ての血液収集を、サンプリング時間の±１５％以内で行うように予定した。対象による血漿サンプルの数および研究のためのサンプルの総数を、表１４に示す。
【０１９８】
【表１７】
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【０１９９】
【表１８】
2019059762.tif 000021
【０２００】
ＥＬＩＳＡを、ヒト血漿中のｈｕＴＢＴＩ３＿２＿１の定量のために使用した。ストレプトアビジンプレート上を被覆したビオチン化ＩＬ−４を使用してｈｕＴＢＴＩ３＿２＿１を捕捉し、次いでスルホタグ−ＩＬ−１３によってこれを検出した。エレクトロケミルミネッセンス検出を使用するこのフォーマットは、ＩＬ−４に対する占有されていない１つの結合部位およびＩＬ−１３に対する占有されていない１つの結合部位を少なくとも保持するｈｕＴＢＴＩ３＿２＿１を検出することができる。ｈｕＴＢＴＩ３＿２＿１血漿濃度は典型的に、ＩＬ−４およびＩＬ−１３の濃度と比較して大モル濃度過剰で存在するので、このアッセイは、ｈｕＴＢＴＩ３＿２＿１の総濃度を反映した。
【０２０１】
臨床サンプルをアッセイする場合、ｈｕＴＢＴＩ３＿２＿１測定によるＡＤＡの潜在的な妨害を考慮に入れた。
【０２０２】
【表１９】
2019059762.tif 000022
【０２０３】
ヒト血漿中の潜在的抗ｈｕＴＢＴＩ３＿２＿１抗体（ＡＤＡ）の分析のために、エレクトロケミルミネッセンス検出を使用する架橋定性ＥＬＩＳＡを使用した。それを上回ると血漿サンプルが抗ｈｕＴＢＴＩ３＿２＿１抗体に関して潜在的に陽性であるとみなされる５％偽陽性率を示すカットオフを、各スクリーニングアッセイにおいて使用した。
【０２０４】
次いで、抗体の存在を実証し、最初のスクリーニングアッセイから生じた偽陽性結果を排除するために、スクリーニングアッセイにおける陽性サンプルを、確証的アッセイ（ｈｕＴＢＴＩ３＿２＿１との競合）において試験した。ＡＤＡアッセイにおけるｈｕＴＢＴＩ３＿２＿１の妨害が報告され、その結果、ＡＤＡの検出限界に影響を与えない最も高い
薬物濃度が分かり、免疫原性の解釈はこのパラメータを考慮に入れた。
【０２０５】
【表２０】
2019059762.tif 000023
【０２０６】
血漿濃度を使用し、標準的なノンコンパートメント技術を使用して、表１８に列挙したｈｕＴＢＴＩ３＿２＿１のＰＫパラメータを決定した。
【０２０７】
【表２１】
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【０２０８】
【表２２】
2019059762.tif 000025
【０２０９】
Ｃmax、ＡＵＣlast、ＡＵＣについて、用量の釣り合いを、Ｇｏｕｇｈら、Ｐｈａｒｍ
ａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ  ＵＫ  Ｊｏｉｎｔ  Ｗｏｒｋｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐ  Ｄｒｕｇ  Ｉｎｆｏｒ  Ｊ  １９９５年：２９巻：１０３９〜１０４８頁の推奨に従い、「推定」解釈と共に実験的パワーモデル（ＰＫパラメータ＝α×用量β）を使用して評価した。
【０２１０】
このパワーモデルは、対数変換尺度上にフィッティングされる：
ｌｏｇ（パラメータ）＝ｌｏｇ（α）＋β×ｌｏｇ（用量）＋誤差。
【０２１１】
モデルラックオブフィットを、残差プロットによって、および残差平均平方対純粋誤差残差平均平方のＦ検定によって評価した。モデルフィットが適切である場合、βについて９０％信頼区間と共に推定を得、ｒをβ推定（「ｂ」）および信頼限界で累乗することによって、用量におけるｒ倍（ｒ＝２およびｒ＝高い用量／低い用量）の増加と関連するＰＫパラメータの増加について推定および９０％信頼区間を得るために、さらに使用した。
ｒb±t×SE(b)
【０２１２】
モデルラックオブフィットの証拠が存在する場合、このモデルを低下した用量範囲にフィッティングする試みを行った（例えば、１つの極端な用量レベルを排除する）。他の場合、適切なＰＫパラメータの対数を使用して、用量について固定した項と共に、固定効果モデル（ｆｉｘｅｄ  ｅｆｆｅｃｔ  ｍｏｄｅｌ）を使用した。ペアワイズ用量増加と関連したパラメータ増加について、９０％信頼区間と共に、推定を、固定効果モデルのフレームワーク中のペアワイズ用量群間の差異についての信頼区間と共に推定を最初に計算し、次いで真数変換を使用して比率に換算することによって得た。
【０２１３】
ｔ1/2zについて、線形固定効果モデルを用いて用量効果を評価する。
Ｌｏｇ（ｔ1/2z）＝用量＋誤差
【０２１４】
ｔ1/2zの幾何平均についての点推定および９０％信頼区間を、各用量群について用量レベルを横断して個別にプールして提供した。ｔmax値の分布を、各用量レベルについてヒ
ストグラムプロットによって示した。
【０２１５】
有害事象および深刻な有害事象の定義
有害事象は、医薬製品が投与された、この処置との因果関係を必ずしも有さない対象における、任意の医療上好ましくないことの出現である。
【０２１６】
深刻な有害事象は、任意の用量における任意の医療上好ましくないことの出現である：
・死亡という結果を生じる、または
・生命を脅かす、または
−注記：「深刻な」の定義における用語「生命を脅かす」とは、対象がその事象の時点において死亡の危険性がある事象を指す；これは、より重症である場合には仮定としては死亡を引き起こし得る事象を指さない。
・患者の入院もしくは現在の入院の延長を要する、または
・持続性もしくは顕著な能力障害／無能を生じる、または
・先天性異常／先天性欠損症である、または
・医学的に重要な事象である：
−他の状況、例えば、直ぐに生命を脅かさないまたは死亡もしくは入院を生じないかもしれないが、対象を危険にさらし得る、あるいは上記定義において列挙した他の結果のうち１つを予防するための介入を必要とし得る、重要な医学的事象において迅速な報告が適切であるか否かを決定するにあたり、医学的および科学的判断を行使すべきである。
注記：どの状態が医学的に重要な事象であるかを決定するためのガイダンスとして、以下の例が提供されるが、網羅的であることは意図しない：
アレルギー性気管支痙攣についての救急処置室または家庭での集中処置；
血液疾患、例えば、無顆粒球症、再生不良性貧血、骨髄形成不全、骨髄異形成、汎血球減少症；
けいれん；
総ビリルビン＞２×正常範囲の上限（ＵＬＮ）と関連するアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）＞３×ＵＬＮ；
無症候性ＡＬＴの増加＞１０×ＵＬＮ；または
薬物依存または薬物乱用の発生。
【０２１７】
直ぐに治験依頼者に報告する必要がある有害事象：
・ＡＬＴの増加≧２×ＵＬＮ
・≧７２時間にわたるｈｓＣＲＰ＞１０ｍｇ／Ｌ
・心筋トロポニンＩ（ｃＴｎＩ）＞２×ＵＬＮ
ｃＴｎＩ＞２×ＵＬＮが観察された場合、ｃＴｎＩ、クレアチンキナーゼ（ＣＫ）、お
よびクレアチンキナーゼの心筋Ｂ分画（ＣＫ−ＭＢ）値は、試験結果が正常に戻るまで、さらなるＥＣＧ記録と共に連続的に追跡すべきである（最低でも、直ぐのさらなる血液収集および次の日の血液収集）。ｃＴｎＩの上昇が持続する場合、ＣＫ−ＭＢ／ＣＫ比が上昇する場合、および／またはＥＣＧ記録において処置により発現した異常が観察される場合には、心臓専門医の助言を直ぐに検討すべきである。
・ＱＴｃ≧５００ｍｓ
ＱＴを補正するためのＦｒｉｄｅｒｉｃｉａ公式を使用して、治験責任医師または治験責任医師に権限委任された医師がマニュアルを読んで確認する、≧５００ｍｓのＱＴｃの自動的測定の延長が出現した場合、対象を特別な環境で監督下に置くべきである。適切な血液サンプルを収集する（例えば、ｃＴｎＩについて）。次いで、治験依頼者と同意見の治験責任医師によって決定されるように、ＱＴｃ間隔が安全な値に戻るまで、一定の臨床的に責任のある方式で、対象の引き続くＥＣＧモニタリングを実施すべきである。
・ＩＰ注射の部位に局所的な重症皮膚反応
・ＩＰによる症候性の過剰投薬
−ＩＰによる過剰投薬（偶発的または意図的）は、治験責任医師により疑われる事象、または対象によって自発的に告知される（体系的ＩＰバイアル計数に基づかない）事象、および意図した用量の少なくとも２倍と規定される事象である。
【０２１８】
実験室での異常には以下が含まれる：
・好中球減少症、
−好中球血球計数＜１５００／ｍｍ3として規定される（ただし、アフリカ系の対象で
は＜１０００／ｍｍ3）
・血小板減少症、
−血小板計数＜１０００００／ｍｍ3として規定される
・急性腎不全
−１５０μｍｏｌ／Ｌ（１．７ｍｇ／ｄＬ）を超える血清クレアチニンの迅速な増加
・横紋筋融解症の疑い
【０２１９】
〔実施例１０〕
健康な若い男性対象（ＴＤＵ１１３２５）におけるＳＡＲ１５６５９７の漸増単一皮下用量の安全性、耐容性および薬物動態の無作為化二重盲検プラセボ対照研究からの結果
以下の表、表２０〜３５は、ＴＤＵ１１３２５研究からのデータをまとめている。
【０２２０】
【表２３】
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【０２２１】
【表２４】
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【０２２２】
【表２５】
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【０２２３】
【表２６】
2019059762.tif 000029
【０２２４】
【表２７】
2019059762.tif 000030
【０２２５】
【表２８】
2019059762.tif 000031
【０２２６】
【表２９】
2019059762.tif 000032
【０２２７】
【表３０】
2019059762.tif 000033
【０２２８】
【表３１】
2019059762.tif 000034
【０２２９】
【表３２】
2019059762.tif 000035
【０２３０】
【表３３】
2019059762.tif 000036
【０２３１】
【表３４】
2019059762.tif 000037
【０２３２】
【表３５】
2019059762.tif 000038
【０２３３】
【表３６】
2019059762.tif 000039
【０２３４】
【表３７】
2019059762.tif 000040
【０２３５】
【表３８】
2019059762.tif 000041
【０２３６】
【表３９】
2019059762.tif 000042
【０２３７】
【表４０】
2019059762.tif 000043
【０２３８】
【表４１】
2019059762.tif 000044
【０２３９】
【表４２】
2019059762.tif 000045
【０２４０】
【表４３】
2019059762.tif 000046
【０２４１】
【表４４】
2019059762.tif 000047
【０２４２】
【表４５】
2019059762.tif 000048
【０２４３】
【表４６】
2019059762.tif 000049
【０２４４】
【表４７】
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【０２４５】
【表４８】
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【０２４６】
【表４９】
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【０２４７】
【表５０】
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【０２４８】
【表５１】
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【図１】
2019059762.tif 000055
【図２】
2019059762.tif 000056
【図３】
2019059762.tif 000057
【図４】
2019059762.tif 000058
【図５】
2019059762.tif 000059
【図６】
2019059762.tif 000060
【図７】
2019059762.tif 000061
【図８】
2019059762.tif 000062
【図９】
2019059762.tif 000063
【図１０】
2019059762.tif 000064
【図１１】
2019059762.tif 000065
【配列表】
2019059762000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成31年1月4日(2019.1.4)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
本明細書に記載の発明。
【外国語明細書】
2019059762000001.pdf