(57)【要約】      （修正有）【課題】動物におけるＣ９0ＲＦ７２ｍＲＮＡおよびタンパク質の発現を低減させる組成物および方法を提供する。【解決手段】神経変性疾患の治療、予防、または緩和を、それを必要とする個体に行うのに有用なＣ９0ＲＦ７２特異的阻害剤には、アンチセンス化合物が含まれる。Ｃ９0ＲＦ７２特異的阻害剤の投与により治療、予防、および緩和することができる神経変性疾患の例としては、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、非定型パーキンソン症候群、およびオリーブ橋小脳変性症（ＯＰＣＤ）が挙げられる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｃ９ＯＲＦ７２核酸またはＣ９ＯＲＦ７２相同核酸に相補的な一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドを含む化合物。
【請求項２】
前記Ｃ９ＯＲＦ７２核酸は、ヒトＣ９ＯＲＦ７２核酸である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
前記Ｃ９ＯＲＦ７２核酸は、ヘキサヌクレオチド反復伸長を含有する、請求項１〜２に記載の化合物。
【請求項４】
前記Ｃ９ＯＲＦ７２核酸は、ヘキサヌクレオチド反復伸長を含有しない、請求項１〜２に記載の化合物。
【請求項５】
前記一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ヒトＣ９ＯＲＦ７２核酸に特異的にハイブリダイズすることができる、請求項１〜４に記載の化合物。
【請求項６】
前記一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ヒトＣ９ＯＲＦ７２核酸の等長部分に少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％相補的である、請求項１〜５に記載の化合物。
【請求項７】
前記一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ヒトＣ９ＯＲＦ７２核酸のエクソン、イントロン、５’ＵＴＲ、３’ＵＴＲ、反復領域、スプライスジャンクション、エクソン：エクソンスプライスジャンクション、エクソンスプライシングサイレンサー（ＥＳＳ）、エクソンスプライシングエンハンサー（ＥＳＥ）、エクソン１ａ、エクソン１ｂ、エクソン１ｃ、エクソン１ｄ、エクソン１ｅ、エクソン２、エクソン３、エクソン４、エクソン５、エクソン６、エクソン７、エクソン８、エクソン９、エクソン１０、エクソン１１、イントロン１、イントロン２、イントロン３、イントロン４、イントロン５、イントロン６、イントロン７、イントロン８、イントロン９、またはイントロン１０のうちのいずれかに相補的である、請求項１〜６に記載の化合物。
【請求項８】
１２〜３０個の結合したヌクレオシドからなり、配列番号３０〜３６９の少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、または少なくとも２０個の連続する核酸塩基を含む核酸塩基配列を含む、一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドを含む、化合物。
【請求項９】
前記一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの修飾を含む、請求項１〜８のいずれかに記載の化合物。
【請求項１０】
前記一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの修飾ヌクレオシド間結合を含む、請求項９に記載の化合物。
【請求項１１】
前記一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドの各ヌクレオシド間結合は、修飾ヌクレオシド間結合である、請求項１０に記載の化合物。
【請求項１２】
前記修飾ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である、請求項１０〜１１に記載の化合物。
【請求項１３】
少なくとも１つの修飾ヌクレオシドを含む、請求項９〜１２に記載の化合物。
【請求項１４】
前記一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドは、修飾糖を有する少なくとも１つの修飾ヌクレオシドを含む、請求項９〜１３に記載の化合物。
【請求項１５】
前記一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドは、二環式糖を含む少なくとも１つの修飾ヌクレオシドを含む、請求項１４に記載の化合物。
【請求項１６】
前記二環式糖は、４’−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−２’架橋（式中、ｎは１または２である）および４’−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−２’の中から選択される、４’〜２’架橋を含む、請求項１５に記載の化合物。
【請求項１７】
前記二環式糖は、４’−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ−２’架橋を含む、請求項１６に記載の化合物。
【請求項１８】
修飾糖を有する前記少なくとも１つの修飾ヌクレオシドは、非二環式の２’修飾された修飾糖部分を含む、請求項１４に記載の化合物。
【請求項１９】
前記２’修飾糖部分は、２’−Ｏ−メトキシエチル基を含む、請求項１８に記載の化合物。
【請求項２０】
前記２’修飾糖部分は、２’−Ｏ−メチル基を含む、請求項１８に記載の化合物。
【請求項２１】
修飾糖を有する前記少なくとも１つの修飾ヌクレオシドは、糖代替物を含む、請求項１４に記載の化合物。
【請求項２２】
前記糖代替物は、モルホリノである、請求項２１に記載の化合物。
【請求項２３】
前記糖代替物は、ペプチド核酸である、請求項２１に記載の化合物。
【請求項２４】
各ヌクレオシドが修飾される、請求項１３〜２３に記載の化合物。
【請求項２５】
前記一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの修飾核酸塩基を含む、請求項９〜２４に記載の化合物。
【請求項２６】
前記修飾核酸塩基は、５’−メチルシトシンである、請求項２５に記載の化合物。
【請求項２７】
前記一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドは、
結合したデオキシヌクレオシドからなるギャップセグメント、
結合したヌクレオシドからなる５’ウイングセグメント
結合したヌクレオシドからなる３’ウイングセグメント、を含み、
前記ギャップセグメントは、前記５’ウイングセグメントおよび前記３’ウイングセグメントに直接隣接して、かつそれらの間に位置付けられ、各ウイングセグメントの各ヌクレオシドが、修飾糖を含む、請求項９〜２６に記載の化合物。
【請求項２８】
前記一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドは、
１０個の結合したデオキシヌクレオシドからなるギャップセグメント、
５個の結合したヌクレオシドからなる５’ウイングセグメント、
５個の結合したヌクレオシドからなる３’ウイングセグメント、を含み、
前記ギャップセグメントは、前記５’ウイングセグメントおよび前記３’ウイングセグメントに直接隣接して、かつそれらの間に位置付けられ、各ウイングセグメントの各ヌク
レオシドが、２’−Ｏ−メトキシエチル糖を含み、各ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート結合である、請求項３７に記載の化合物。
【請求項２９】
前記一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドは、１５個の結合したヌクレオシドからなる、請求項１〜２７に記載の化合物。
【請求項３０】
前記一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドは、１６個の結合したヌクレオシドからなる、請求項１〜２７に記載の化合物。
【請求項３１】
前記一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドは、１７個の結合したヌクレオシドからなる、請求項１〜２７に記載の化合物。
【請求項３２】
前記一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドは、１８個の結合したヌクレオシドからなる、請求項１〜２７に記載の化合物。
【請求項３３】
前記一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドは、１９個の結合したヌクレオシドからなる、請求項１〜２７に記載の化合物。
【請求項３４】
前記一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドは、２０個の結合したヌクレオシドからなる、請求項１〜２８に記載の化合物。
【請求項３５】
前記一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドは、２１個の結合したヌクレオシドからなる、請求項１〜２７に記載の化合物。
【請求項３６】
前記一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドは、２２個の結合したヌクレオシドからなる、請求項１〜２７に記載の化合物。
【請求項３７】
前記一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドは、２３個の結合したヌクレオシドからなる、請求項１〜２７に記載の化合物。
【請求項３８】
前記一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドは、２４個の結合したヌクレオシドからなる、請求項１〜２７に記載の化合物。
【請求項３９】
前記一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドは、２５個の結合したヌクレオシドからなる、請求項１〜２７に記載の化合物。
【請求項４０】
神経変性疾患を治療するための医薬品の製造のための、請求項１〜３９のいずれかに記載の化合物の使用。
【請求項４１】
細胞を、エクソン１Ｂの上流を標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドと接触させることによって、ヘキサヌクレオチド反復伸長を含有するｍＲＮＡ転写産物の発現を選択的に阻害する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
配列表
本出願は、電子形式の配列表とともに出願されている。配列表は、２０１３年１０月１４日に作成された、１８４ＫｂのサイズのＢＩＯＬ０２１１ＷＯＳＥＱ．ｔｘｔと題されるファイルとして提供される。配列表の電子形式での情報は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０００２】
動物におけるＣ９ＯＲＦ７２  ｍＲＮＡおよびタンパク質の発現を低減させるための組成物および方法が提供される。そのような方法は、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、大脳皮質基底核変性症（ｃｏｒｔｉｃａｌｂａｓａｌ  ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）（ＣＢＤ）、非定型パーキンソン症候群、およびオリーブ橋小脳変性症（ｏｌｉｖｏｐｏｎｔｏｃｅｒｅｌｌａｒ  ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ）（ＯＰＣＤ）を含む、神経変性疾患の治療、予防、または緩和に有用である。
【背景技術】
【０００３】
筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）は、典型的には症状の発生から２〜３年以内に呼吸器不全により死に至る、進行性麻痺を臨床特徴とする、致命的な神経変性疾患である（Ｒｏｗｌａｎｄ  ａｎｄ  Ｓｈｎｅｉｄｅｒ，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．，２００１，３４４，１６８８−１７００）。ＡＬＳは、西欧諸国で３番目に多い神経変性疾患であり（Ｈｉｒｔｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，２００７，６８，３２６−３３７）、現在のところ有効な治療法はない。症例のおおよそ１０％は家系性であるが、この疾患と診断された患者の大部分は、集団全体にわたり不規則に発生するとみられるため、孤発性として分類される（Ｃｈｉｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，２００８，７０，５３３−５３７）。臨床的、遺伝子、および疫学的データに基づいて、ＡＬＳおよび前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）が、中枢神経系全体を通して含まれるＴＤＰ−４３陽性の存在により病理学的に特徴付けられる、一連の重複する疾患を表すという認識が高まっている（Ｌｉｌｌｏ  ａｎｄ  Ｈｏｄｇｅｓ，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．，２００９，１６，１１３１−１１３５、Ｎｅｕｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００６，３１４，１３０−１３３）。
【０００４】
現在までに、古典的な家系性ＡＬＳの原因として、いくつかの遺伝子、例えば、ＳＯＤ１、ＴＡＲＤＢＰ、ＦＵＳ、ＯＰＴＮ、およびＶＣＰが、発見されている（Ｊｏｈｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｎ，２０１０，６８，８５７−８６４、Ｋｗｉａｔｋｏｗｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００９，３２３，１２０５−１２０８、Ｍａｒｕｙａｍａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，２０１０，４６５，２２３−２２６、Ｒｏｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，１９９３，３６２，５９−６２、Ｓｒｅｅｄｈａｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００８，３１９，１６６８−１６７２、Ｖａｎｃｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒａｉｎ，２００９，１２９，８６８−８７６）。近年、ＡＬＳ、ＦＴＤ、およびＡＬＳ−ＦＴＤの複数の症例を含む家系の連鎖分析により、この疾患にとって重要な遺伝子座が染色体９の短腕に存在していたことが示唆された（Ｂｏｘｅｒ
ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｌ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ，２０１１，８２，１９６−２０３、Ｍｏｒｉｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，２００６，６６，８３９−８４４、Ｐｅａｒｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｎｅｒｏｌ．，２０１１，２５８，６４７−６５５、Ｖａｎｃｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒａｉｎ，２００６，１２９，８６８−８７６）。染色体９ｐ２１ＡＬＳ−ＦＴＤの遺伝子座には最後の主要な常染色体優性遺伝の遺伝子が含まれ、その突然変異が、ＡＬＳの原因である。ＡＬＳ−ＦＴＤの原因となる突然変異は、Ｃ９ＯＲＦ７２遺伝子の最初のイントロンにおける大きなヘキ
サヌクレオチド（ＧＧＧＧＣＣ）反復伸長である（Ｒｅｎｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｎ，２０１１，７２，２５７−２６８、ＤｅＪｅｓｕｓ−Ｈｅｒｎａｎｄｅｚ  ｅｔ
ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｎ，２０１１，７２，２４５−２５６）。Ｃ９ＯＲＦ７２遺伝子を包含する創始ハプロタイプが、この領域と関連する症例の大部分に存在する（Ｒｅｎｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｎ，２０１１，７２，２５７−２６８）。染色体９ｐ２１上のこの遺伝子座は、４０５人のフィンランドの患者のコホートにおいて家系性ＡＬＳの半数近くおよびすべてのＡＬＳ症例の４分の１近くを占める（Ｌａａｋｓｏｖｉｒｔａ  ｅｔ  ａｌ，Ｌａｎｃｅｔ  Ｎｅｕｒｏｌ．，２０１０，９，９７８−９８５）。
【０００５】
Ｃ９ＯＲＦ７２遺伝子を包含する創始ハプロタイプが、この領域と関連する症例の大部分に存在する。
【０００６】
現在のところ、そのような神経変性疾患を治療するのに効果的な治療法は存在しない。したがって、そのような神経変性疾患の治療のための組成物および方法を提供することが目的である。
【発明の概要】
【０００７】
細胞、組織、および動物におけるＣ９ＯＲＦ７２  ｍＲＮＡおよびタンパク質のレベルを調節するための組成物および方法が、本明細書に提供される。ある特定の実施形態において、Ｃ９ＯＲＦ７２特異的阻害剤は、Ｃ９ＯＲＦ７２  ｍＲＮＡおよびタンパク質の発現を調節する。ある特定の実施形態において、Ｃ９ＯＲＦ７２特異的阻害剤は、核酸、タンパク質、または小分子である。
【０００８】
ある特定の実施形態において、調節は、細胞または組織において起こり得る。ある特定の実施形態において、細胞または組織は、動物におけるものである。ある特定の実施形態において、動物は、ヒトである。ある特定の実施形態において、Ｃ９ＯＲＦ７２  ｍＲＮＡレベルが低減される。ある特定の実施形態において、Ｃ９ＯＲＦ７２タンパク質レベルが低減される。ある特定の実施形態において、ある特定のＣ９ＯＲＦ７２  ｍＲＮＡ変異体が、選択的に低減される。ある特定の実施形態において、選択的に低減されるＣ９ＯＲＦ７２  ｍＲＮＡ変異体は、イントロン１を含有する変異体である。ある特定の実施形態において、イントロン１は、ヘキサヌクレオチド反復伸長を含有する。ある特定の実施形態において、ヘキサヌクレオチド反復伸長は、Ｃ９ＯＲＦ７２関連疾患と関連する。ある特定の実施形態において、ヘキサヌクレオチド反復伸長は、Ｃ９ＯＲＦ７２ヘキサヌクレオチド反復伸長関連疾患と関連する。ある特定の実施形態において、ヘキサヌクレオチド反復伸長は、少なくとも３０個のＧＧＧＧＣＣ反復を含む。ある特定の実施形態において、ヘキサヌクレオチド反復伸長は、核内フォーカスと関連する。ある特定の実施形態において、本明細書に記載される組成物および方法は、Ｃ９ＯＲＦ７２  ｍＲＮＡレベル、Ｃ９ＯＲＦ７２タンパク質レベル、および核内フォーカスの低減に有用である。そのような低減は、時間依存性様式または用量依存性様式で生じ得る。
【０００９】
Ｃ９ＯＲＦ７２と関連する疾患、障害、および状態の予防、治療、および緩和に有用な方法もまた、提供される。ある特定の実施形態において、Ｃ９ＯＲＦ７２と関連するそのような疾患、障害、および状態は、神経変性疾患である。ある特定の実施形態において、神経変性疾患は、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、非定型パーキンソン症候群、およびオリーブ橋小脳変性症（ＯＰＣＤ）である。
【００１０】
そのような疾患、障害、および状態は、１つ以上の危険因子、原因、または予後を共通して有し得る。神経変性疾患ならびに特にＡＬＳおよびＦＴＤの発症に関するある特定の危険因子および原因には、遺伝的素因および加齢が含まれる。
【００１１】
ある特定の実施形態において、治療の方法は、Ｃ９ＯＲＦ７２特異的阻害剤を、それを必要とする個体に投与することを含む。ある特定の実施形態において、Ｃ９ＯＲＦ７２特異的阻害剤は、核酸である。ある特定の実施形態において、核酸は、アンチセンス化合物である。ある特定の実施形態において、アンチセンス化合物は、一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドである。ある特定の実施形態において、一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドは、Ｃ９ＯＲＦ７２核酸に相補的である。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
前述の一般的な説明および以下の詳細な説明のいずれも、例示的および説明的なものにすぎず、特許請求される本発明を限定するものではないことを理解されたい。本明細書に使用される際、単数形の使用は、別段の指示がない限り、複数形を含む。本明細書に使用される際、「または」は、別段の指示がない限り、「および／または」を意味する。加えて、本明細書に使用される際、「および」は、別段の指示がない限り、「および／または」を意味する。さらに、用語「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」ならびに「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」および「含まれる」等の他の形態の使用も限定的なものではない。また、「要素」または「構成要素」等の用語は、別段の指示がない限り、１つのユニットを含む要素および構成要素と、２つ以上のサブユニットを含む要素および構成要素の両方を包含する。
【００１３】
本明細書で使用される項目見出しは、構成的な目的のためでしかなく、説明される主題を限定すると解釈すべきではない。特許、特許出願、公開特許出願、論文、本、専門書、ならびに国立生物工学情報センター（ＮＣＢＩ）等のデータベースを通して得ることができるＧＥＮＢＡＮＫ受託番号および関連する配列情報、ならびに本開示全体を通して参照される他のデータを含むがこれらに限定されない、本開示に引用されるすべての文献または文献の一部は、本明細書において、本明細書に記載される文献の一部の参照により、ならびにその全体が明示的に組み込まれる。
【００１４】
定義
特定の定義がなされない限り、本明細書に記載される分析化学、合成有機化学、医学および薬化学と関連して利用される命名法、ならびにそれらの手順および技法は、当技術分野において周知であり、一般的に使用されるものである。標準的技法が、化学合成および化学分析に使用され得る。
【００１５】
別段の指示がない限り、次の用語は、次の意味を有する。
【００１６】
「２’−Ｏ−メトキシエチル基」（２’−ＭＯＥおよび２’−ＯＣＨ２ＣＨ２−ＯＣＨ３およびＭＯＥも同様）とは、フラノシル環の２’位のＯ−メトキシ−エチル修飾を指す。２’−Ｏ−メトキシエチル修飾糖は、修飾糖である。
【００１７】
「２’−ＭＯＥヌクレオシド」（２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドも同様）とは、２’−Ｏ−メトキシエチル基を含むヌクレオシドを意味する。
【００１８】
「５−メチルシトシン」とは、メチル基が５’位に付着して修飾されたシトシンを意味する。５−メチルシトシンは、修飾核酸塩基である。
【００１９】
「約」は、値の±７％内を意味する。例えば、「化合物は、少なくとも約７０％のＣ９ＯＲＦ７２の阻害に影響を及ぼした」と記載される場合、Ｃ９ＯＲＦ７２のレベルが、６３％〜７７％の範囲内で阻害されることを暗に意味する。
【００２０】
「同時に投与される」とは、両方の薬理学的効果が患者において同時に顕現される任意の様式での２つの薬学的薬剤の共投与を指す。同時投与は、両方の薬学的薬剤が、単一の薬学的組成物で、同一剤形で、または同一投与経路によって、投与されることを必要とするものではない。両方の薬学的薬剤の効果が、同時に顕現される必要はない。その効果は、ある時間期間の間だけ重複すればよく、共存する必要はない。
【００２１】
「投与する」とは、動物に薬学的薬剤を提供することを意味し、医療専門家および自己投与による投与を含むが、これらに限定されない。
【００２２】
「緩和」または「緩和する（ａｍｅｌｉｏｒａｔｅ）」または「緩和する（ａｍｅｌｉｏｒａｔｉｎｇ）」とは、疾患、障害、または状態の少なくとも１つの指標、兆候、または症状を軽減することを指す。指標の重症度は、当業者に既知である主観的または客観的手段により決定され得る。
【００２３】
「動物」とは、ヒトまたは限定されないが、マウス、ラット、ウサギ、イヌ、ネコ、ブタ、および限定されないがサルおよびチンパンジーを含む非ヒト霊長動物、を含む、非ヒト動物を指す。
【００２４】
「抗体」とは、抗原と特異的に何らかの反応をすることを特徴とする分子を指し、抗体および抗原は、それぞれ他方の観点から定義される。抗体は、完全抗体分子またはその任意の断片もしくは領域、例えば、重鎖、軽鎖、Ｆａｂ領域、およびＦｃ領域を指し得る。
【００２５】
「アンチセンス活性」とは、アンチセンス化合物のその標的核酸へのハイブリダイゼーションに起因する、任意の検出可能または測定可能な活性を意味する。ある特定の実施形態では、アンチセンス活性は、標的核酸、またはそのような標的核酸によってコードされるタンパク質の量または発現における減少である。
【００２６】
「アンチセンス化合物」とは、水素結合を介して標的核酸にハイブリダーセーションすることが可能なオリゴマー化合物を意味する。アンチセンス化合物の例としては、一本鎖および二本鎖化合物、例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｓｓＲＮＡ、および占有率に基づく化合物が挙げられる。アンチセンス機序には、限定することなく、ＲＮａｓｅ  Ｈ媒介性アンチセンス；ＲＩＳＣ経路を利用し、限定することなく、ｓｉＲＮＡ、ｓｓＲＮＡ、およびマイクロＲＮＡ機序を含む、ＲＮＡｉ機序；ならびに、限定することなく、一様修飾オリゴヌクレオシドを含む、占有率に基づく機序が挙げられる。ある特定のアンチセンス化合物は、１つを上回るそのような機序を通じて、および／または追加の機序を通じて、作用し得る。
【００２７】
「アンチセンス阻害」とは、アンチセンス化合物の不在下における標的核酸レベルまたは標的タンパク質レベルと比較して、標的核酸に相補的なアンチセンス化合物の存在下における標的核酸レベルまたは標的タンパク質レベルの低減を意味する。阻害は、ＲＮａｓｅ  Ｈ分解（例えば、ギャップマー（ｇａｐｍｅｒ）による）および立体障害（例えば、一様修飾オリゴヌクレオシドによる）を含む、任意の手段であり得る。
【００２８】
「アンチセンスオリゴヌクレオチド」とは、標的核酸の対応するセグメントとのハイブリダイゼーションを可能にする核酸塩基配列を有する、一本鎖オリゴヌクレオチドを意味する。
【００２９】
「二環式糖」とは、２つの原子の架橋によって修飾されるフラノシル環を意味する。二環式糖は、修飾糖である。
【００３０】
「二環式ヌクレオシド」（同様にＢＮＡ）とは、糖環の２つの炭素原子を接続する架橋を含む糖部分を有し、それによって、二環式環系を形成する、ヌクレオシドを意味する。ある特定の実施形態において、架橋は、糖環の４’炭素と２’炭素とを接続する。
【００３１】
「Ｃ９ＯＲＦ７２関連疾患」とは、任意のＣ９ＯＲＦ７２核酸またはその発現産物と関連する任意の疾患を意味する。そのような疾患には、神経変性疾患が含まれ得る。そのような神経変性疾患には、ＡＬＳおよびＦＴＤが含まれ得る。
【００３２】
「Ｃ９ＯＲＦ７２ヘキサヌクレオチド反復伸長関連疾患」とは、ヘキサヌクレオチド反復伸長を含有するＣ９ＯＲＦ７２核酸と関連する任意の疾患を意味する。ある特定の実施形態において、ヘキサヌクレオチド反復伸長は、少なくとも３０回反復されるＧＧＧＧＣＣ、ＧＧＧＧＧＧ、ＧＧＧＧＧＣ、またはＧＧＧＧＣＧを含み得る。そのような疾患には、神経変性疾患が含まれ得る。そのような神経変性疾患には、ＡＬＳおよびＦＴＤが含まれ得る。
【００３３】
「Ｃ９ＯＲＦ７２核酸」とは、Ｃ９ＯＲＦ７２をコードする任意の核酸を意味する。例えば、ある特定の実施形態において、Ｃ９ＯＲＦ７２核酸には、Ｃ９ＯＲＦ７２をコードするＤＮＡ配列、Ｃ９ＯＲＦ７２をコードするＤＮＡ（イントロンおよびエクソンを含むゲノムＤＮＡを含む）から転写されるＲＮＡ配列、およびＣ９ＯＲＦ７２をコードするｍＲＮＡ配列が含まれる。「Ｃ９ＯＲＦ７２  ｍＲＮＡ」とは、Ｃ９ＯＲＦ７２タンパク質をコードするｍＲＮＡを意味する。
【００３４】
「Ｃ９ＯＲＦ７２特異的阻害剤」とは、分子レベルでＣ９ＯＲＦ７２  ｍＲＮＡおよび／またはＣ９ＯＲＦ７２タンパク質の発現を特異的に阻害することができる任意の薬剤を指す。例えば、Ｃ９ＯＲＦ７２特異的阻害剤には、Ｃ９ＯＲＦ７２  ｍＲＮＡおよび／またはＣ９ＯＲＦ７２タンパク質の発現を阻害することができる核酸（アンチセンス化合物を含む）、ｓｉＲＮＡ、アプタマー、抗体、ペプチド、小分子、および他の薬剤が含まれる。同様に、ある特定の実施形態において、Ｃ９ＯＲＦ７２特異的阻害剤は、動物における他の分子過程に影響を及ぼし得る。
【００３５】
「キャップ構造」または「末端キャップ部分」とは、アンチセンス化合物の両方の末端に組み込まれている化学修飾を意味する。
【００３６】
「ｃＥｔ」または「拘束エチル（ｃｏｎｓｔｒａｉｎｅｄ  ｅｔｈｙｌ）」とは、４’炭素と２’炭素とを接続する架橋を含む糖部分を有する二環式ヌクレオシドを意味し、ここで、架橋は式４’−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ−２’を有する。
【００３７】
「拘束エチルヌクレオシド」（同様にｃＥｔヌクレオシド）とは、４’−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ−２’架橋を含む二環式糖部分を含むヌクレオシドを意味する。
【００３８】
「化学的に異なる領域」とは、ある点において、同じアンチセンス化合物の別の領域とは化学的に異なる、アンチセンス化合物の領域を指す。例えば、２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドを有する領域は、２’−Ｏ−メトキシエチル修飾を伴わないヌクレオシドを有する領域とは化学的に異なる。
【００３９】
「キメラアンチセンス化合物」とは、少なくとも２つの化学的に異なる領域を有するアンチセンス化合物を意味する。
【００４０】
「共投与」とは、２つ以上の薬学的薬剤を個体に投与することを意味する。２つ以上の
薬学的薬剤は、単一の薬学的組成物に含まれてもよく、または別個の薬学的組成物に含まれてもよい。２つ以上の薬学的薬剤のそれぞれは、同じかまたは異なる投与経路を通じて投与され得る。共投与は、並列または逐次投与を包含する。
【００４１】
「相補性」とは、第１の核酸と第２の核酸の核酸塩基間の対合能力を意味する。
【００４２】
「連続する核酸塩基」とは、互いに直接隣接する核酸塩基を意味する。
【００４３】
「希釈剤」とは、薬理学的活性を欠くが、薬学的に必要であるかまたは望ましい、組成物中の成分を意味する。例えば、注射用組成物の希釈剤は、液体、例えば、生理食塩水溶液であり得る。
【００４４】
「用量」とは、単回投与または指定期間に提供される、薬学的薬剤の指定された量を意味する。ある特定の実施形態において、用量は、１、２、またはそれ以上のボーラス、錠剤、または注射で投与され得る。例えば、皮下投与が所望されるある特定の実施形態において、所望の用量は、単回注射では容易に対応されない体積を要し、したがって、所望の用量を達成するのに２回以上の注射が必要であり得る。ある特定の実施形態において、薬学的薬剤は、長期間にわたって、または連続的に、注入により投与される。用量は、１時間、１日、１週間、または１ヶ月当たりの薬学的薬剤の量として述べられ得る。
【００４５】
「有効量」とは、薬学的薬剤を必要とする個体において所望される生理学的予後を実現するのに十分な薬学的薬剤の量を意味する。有効量は、治療される個体の健康および身体状態、治療される個体の分類学的な群、組成物の配合、個体の病状の評価、および他の関連要因に応じて、個体間で変動し得る。
【００４６】
「発現」とは、Ｃ９ＯＲＦ７２遺伝子からの情報が、転写を介してｍＲＮＡに変換された後、翻訳を介してタンパク質に変換されることを意味する。発現は、Ｃ９ＯＲＦ７２遺伝子の表現型出現をもたらし得る。
【００４７】
「完全に相補的」または「１００％相補的」とは、第１の核酸のそれぞれの核酸塩基が、第２の核酸において相補的な核酸塩基を有することを意味する。ある特定の実施形態において、第１の核酸はアンチセンス化合物であり、標的核酸が第２の核酸である。
【００４８】
「ギャップマー」とは、ＲＮａｓｅ  Ｈ切断を支持する複数のヌクレオシドを有する内部領域が、１つ以上のヌクレオシドを有する外部領域間に位置付けられる、キメラアンチセンス化合物を意味し、ここで、内部領域を有するヌクレオシドは、外部領域を含むヌクレオシド（複数可）とは化学的に異なる。内部領域は、「ギャップ」と称され得、外部領域は、「ウイング」と称され得る。
【００４９】
「ギャップ縮小」とは、１〜６個のヌクレオシドを有する５’および３’ウイングセグメントの間に、かつそれらに直接隣接して位置付けられる、９個以下の連続する２’−デオキシリボヌクレオシドのギャップセグメントを有するキメラアンチセンス化合物を意味する。
【００５０】
「ギャップ拡張」とは、１〜６個のヌクレオシドを有する５’および３’ウイングセグメントの間に、かつそれらに直接隣接して位置付けられる、１２個以上の連続する２’−デオキシリボヌクレオシドのギャップセグメントを有するキメラアンチセンス化合物を意味する。
【００５１】
「ヘキサヌクレオチド反復伸長」とは、少なくとも２回繰り返される、一連の６個の塩
基（例えば、ＧＧＧＧＣＣ、ＧＧＧＧＧＧ、ＧＧＧＧＣＧ、またはＧＧＧＧＧＣ）を意味する。ある特定の実施形態において、ヘキサヌクレオチド反復伸長は、Ｃ９ＯＲＦ７２核酸のイントロン１に位置し得る。ある特定の実施形態において、病因となるヘキサヌクレオチド反復伸長としては、Ｃ９ＯＲＦ７２核酸中の少なくとも３０回のＧＧＧＧＣＣ、ＧＧＧＧＧＧ、ＧＧＧＧＣＧ、またはＧＧＧＧＧＣの反復が挙げられ、これが、疾患と関連する。ある特定の実施形態において、反復は連続的である。ある特定の実施形態において、反復は、１つ以上の核酸塩基によって中断される。ある特定の実施形態において、野生型ヘキサヌクレオチド反復伸長には、Ｃ９ＯＲＦ７２核酸中の２３回以下のＧＧＧＧＣＣ、ＧＧＧＧＧＧ、ＧＧＧＧＣＧ、またはＧＧＧＧＧＣの反復が含まれる。ある特定の実施形態において、反復は連続的である。ある特定の実施形態において、反復は、１つ以上の核酸塩基によって中断される。
【００５２】
「ハイブリダイゼーション」とは、相補的核酸分子のアニーリングを意味する。ある特定の実施形態において、相補的核酸分子は、アンチセンス化合物および標的核酸を含む。
【００５３】
「Ｃ９ＯＲＦ７２関連疾患を有する動物を識別する」とは、Ｃ９ＯＲＦ７２関連疾患と診断されているか、またはＣ９ＯＲＦ７２関連疾患を発症する傾向にある動物を識別することを意味する。Ｃ９ＯＲＦ７２関連疾患を発症する傾向にある個体には、１つ以上のＣ９ＯＲＦ７２関連疾患の個人歴もしくは家族歴または遺伝的素因を有することを含む、Ｃ９ＯＲＦ７２関連疾患を発症する１つ以上の危険因子を有するものが含まれる。そのような識別は、個体の病歴を評価すること、および標準的な臨床試験もしくは評価、例えば遺伝子検査を含む、任意の方法によって達成することができる。
【００５４】
「直接隣接する」とは、直接隣接する要素間に、介在要素が存在しないことを意味する。
【００５５】
「個体」とは、治療または療法のために選択されたヒトまたは非ヒト動物を意味する。
【００５６】
「Ｃ９ＯＲＦ７２を阻害する」とは、Ｃ９ＯＲＦ７２アンチセンスオリゴヌクレオチド等のＣ９ＯＲＦ７２特異的阻害剤の不在下におけるＣ９ＯＲＦ７２  ｍＲＮＡおよび／またはタンパク質の発現のレベルと比較して、Ｃ９ＯＲＦ７２アンチセンスオリゴヌクレオチドを含むＣ９ＯＲＦ７２特異的阻害剤の存在下におけるＣ９ＯＲＦ７２  ｍＲＮＡおよび／またはタンパク質の発現のレベルの低減を意味する。
【００５７】
「ヌクレオシド間結合」とは、ヌクレオシドの間の化学結合を指す。
【００５８】
「結合したヌクレオシド」とは、一緒に結合した隣接するヌクレオチドを意味する。
【００５９】
「ミスマッチ」または「非相補的核酸塩基」とは、第１の核酸の核酸塩基が、第２または標的核酸の対応する核酸塩基と対合することができない場合を指す。
【００６０】
「修飾ヌクレオシド間結合」とは、天然に存在するヌクレオシド間結合（すなわち、ホスホジエステルヌクレオシド間結合）からの置換または任意の変化を指す。
【００６１】
「修飾核酸塩基」とは、アデニン、シトシン、グアニン、チミジン、またはウラシル以外の任意の核酸塩基を指す。「非修飾核酸塩基」とは、プリン塩基であるアデニン（Ａ）およびグアニン（Ｇ）、ならびにピリミジン塩基であるチミン（Ｔ）、シトシン（Ｃ）、およびウラシル（Ｕ）を意味する。
【００６２】
「修飾ヌクレオチド」とは、独立して、修飾糖部分、修飾ヌクレオシド間結合、および
／または修飾核酸塩基を有するヌクレオチドを意味する。「修飾ヌクレオシド」とは、独立して、修飾糖部分および／または修飾核酸塩基を有するヌクレオシドを意味する。
【００６３】
「修飾オリゴヌクレオチド」とは、修飾ヌクレオシド間結合、修飾糖、または修飾核酸塩基を含むオリゴヌクレオチドを意味する。
【００６４】
「修飾糖」とは、天然糖からの置換または変化を指す。
【００６５】
「モチーフ」とは、アンチセンス化合物における化学的に異なる領域のパターンを意味する。
【００６６】
「天然に存在するヌクレオシド間結合」とは、３’から５’のホスホジエステル結合を意味する。
【００６７】
「天然糖部分」とは、ＤＮＡ（２’−Ｈ）またはＲＮＡ（２’−ＯＨ）に見られる糖を意味する。
【００６８】
「核酸」とは、モノマーヌクレオチドから構成される分子を指す。核酸には、リボ核酸（ＲＮＡ）、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、一本鎖核酸、二本鎖核酸、低分子干渉リボ核酸（ｓｉＲＮＡ）、およびマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）が含まれる。
【００６９】
「核酸塩基」とは、別の核酸の塩基と対合することができる複素環式部分を意味する。
【００７０】
「核酸塩基配列」とは、いずれの糖、結合、または核酸塩基修飾とも無関係な連続する核酸塩基の順序を意味する。
【００７１】
「ヌクレオシド」は、糖に結合した核酸塩基を意味する。
【００７２】
「ヌクレオシド模倣体」は、オリゴマー化合物の１つ以上の位置において、糖または糖および塩基を置換するために使用され、必ずしも結合ではない構造を含み、例えば、例として非フラノース糖単位である、モルホリノ、シクロヘキセニル、シクロヘキシル、テトラヒドロピラニル、二環または三環糖模倣体を有するヌクレオシド模倣体等である。「ヌクレオチド模倣体」は、例えば、ペプチド核酸またはモルホリノ（−Ｎ（Ｈ）−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−または他の非ホスホジエステル結合によって結合されるモルホリノ）等のオリゴマー化合物の１つ以上の位置において、ヌクレオシドおよび結合を置き換えるために使用される構造を含む。糖代替物は、わずかに広義であるヌクレオシド模倣体という用語と重なるが、糖単位（フラノース環）のみの置き換えを指すことを意図する。本明細書に提供されるテトラヒドロピラニル環は、糖代替物の例を示すものであり、フラノース糖基が、テトラヒドロピラニル環系で置き換えられている。
【００７３】
「ヌクレオチド」とは、ヌクレオシドの糖部分にリン酸基が共有結合したヌクレオシドを意味する。
【００７４】
「オリゴマー化合物」または「オリゴマー」とは、核酸分子の少なくとも一領域とハイブリダイズすることができる、結合したモノマーサブユニットのポリマーを意味する。
【００７５】
「オリゴヌクレオチド」とは、結合したヌクレオシドのポリマーであって、そのそれぞれが、互いに独立して修飾または非修飾であり得る、結合したヌクレオシドのポリマーを意味する。
【００７６】
「非経口投与」とは、注射または注入による投与を意味する。非経口投与には、皮下投与、静脈内投与、筋肉内投与、動脈内投与、腹腔内投与、または頭蓋内投与、例えば、髄腔内もしくは脳室内投与が含まれる。
【００７７】
「ペプチド」とは、アミド結合によって少なくとも２つのアミノ酸を結合することによって形成される分子を意味する。ペプチドとは、ポリペプチドおよびタンパク質を指す。
【００７８】
「薬学的薬剤」とは、個体に投与されると治療的利益を提供する、薬学的組成物中の物質（複数可）を意味する。例えば、ある特定の実施形態において、Ｃ９ＯＲＦ７２を標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドは、薬学的薬剤である。
【００７９】
「薬学的組成物」とは、個体に投与するのに好適な物質の混合物を意味する。例えば、薬学的組成物は、１つ以上の薬学的薬剤および滅菌水溶液を含み得る。
【００８０】
「薬学的に許容される誘導体」は、本明細書に記載される化合物の薬学的に許容される塩、複合体、プロドラッグ、または異性体を包含する。
【００８１】
「薬学的に許容される塩」とは、アンチセンス化合物の生理学的および薬学的に許容される塩、すなわち、親オリゴヌクレオチドの所望される生物学的活性を保持し、それに望ましくない毒性作用を付与しない塩を意味する。
【００８２】
「ホスホロチオエート結合」とは、ホスホジエステル結合が、非架橋酸素原子のうちの１つを硫黄原子と置き換えることによって修飾される、ヌクレオシド間の結合を意味する。ホスホロチオエート結合（Ｐ＝Ｓ）は、修飾ヌクレオシド間結合である。
【００８３】
「部分」とは、核酸の一定数の連続する（すなわち、結合した）核酸塩基を意味する。ある特定の実施形態において、ある部分は、標的核酸の一定数の連続する核酸塩基である。ある特定の実施形態において、ある部分は、アンチセンス化合物の一定数の連続する核酸塩基である。
【００８４】
「予防する（ｐｒｅｖｅｎｔ）」または「予防する（ｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇ）」とは、数分から不確定の期間の間、疾患、障害、または状態の発症または発達を遅延するまたは未然に防ぐことを指す。予防するはまた、疾患、障害、または状態を発症する危険性を低減することを意味する。
【００８５】
「プロドラッグ」とは、不活性形態で調製され、体内またはその細胞内において、内在性酵素または他の化学物質もしくは条件の作用によって、活性形態に変換される、治療剤を意味する。
【００８６】
「副作用」とは、所望の効果以外の治療に起因する生理学的応答を意味する。ある特定の実施形態において、副作用には、注射部位の反応、肝機能試験異常、腎機能異常、肝毒性、腎毒性、中枢神経系異常、ミオパシー、および倦怠感が含まれる。
【００８７】
「一本鎖オリゴヌクレオチド」とは、相補鎖にハイブリダイズしていないオリゴヌクレオチドを意味する。
【００８８】
「特異的にハイブリダイズできる」とは、所望の効果を誘導するのに十分な程度の相補性をアンチセンスオリゴヌクレオチドと標的核酸との間に有し、同時に特異的結合が所望される条件下、すなわち、インビボアッセイおよび治療的治療の場合には生理学的条件下で、非標的核酸に対する効果を最小限に示すかまたは全く示さない、アンチセンス化合物
を指す。
【００８９】
「標的とする」または「標的とされる」とは、標的核酸に特異的にハイブリダイズして所望の効果を誘導する、アンチセンス化合物の設計および選択の過程を意味する。
【００９０】
「標的核酸」、「標的ＲＮＡ」、および「標的ＲＮＡ転写産物」とは、すべて、アンチセンス化合物によって標的とされ得る核酸を指す。
【００９１】
「標的セグメント」とは、アンチセンス化合物が標的とする標的核酸のヌクレオチドの配列を意味する。「５’標的部位」とは、標的セグメントの最も５’側のヌクレオチドを指す。「３’標的部位」とは、標的セグメントの最も３’側のヌクレオチドを指す。
【００９２】
「治療有効量」とは、個体に治療利益をもたらす薬学的薬剤の量を意味する。
【００９３】
「治療する（ｔｒｅａｔ）」または「治療する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」とは、疾患、障害、または状態の変化または改善を達成するために、薬学的組成物を投与することを指す。
【００９４】
「非修飾ヌクレオチド」とは、天然に存在する核酸塩基、糖部分、およびヌクレオシド間結合から構成されるヌクレオチドを意味する。ある特定の実施形態において、非修飾ヌクレオチドは、ＲＮＡヌクレオチド（すなわち、β−Ｄ−リボヌクレオシド）またはＤＮＡヌクレオチド（すなわち、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシド）である。
【００９５】
ある特定の実施形態
ある特定の実施形態は、Ｃ９ＯＲＦ７２  ｍＲＮＡおよびタンパク質の発現を減少させるための方法を提供する。
【００９６】
ある特定の実施形態は、Ｃ９ＯＲＦ７２と関連する疾患、障害、および状態の治療、予防、または緩和を、それを必要とする個体に行うための方法を提供する。Ｃ９ＯＲＦ７２と関連する疾患、障害、または状態の治療、予防、または緩和のための医薬品の調製のための方法もまた、企図される。Ｃ９ＯＲＦ７２関連疾患、障害、および状態には、神経変性疾患が含まれる。ある特定の実施形態において、神経変性疾患は、ＡＬＳまたはＦＴＤであり得る。ある特定の実施形態において、神経変性疾患は、家系性または孤発性であり得る。
【００９７】
ある特定の実施形態は、Ｃ９ＯＲＦ７２関連疾患を治療、予防、または緩和するためのＣ９ＯＲＦ７２特異的阻害剤の使用を提供する。ある特定の実施形態は、Ｃ９ＯＲＦ７２ヘキサヌクレオチド反復伸長関連疾患を治療、予防、または緩和するためのＣ９ＯＲＦ７２特異的阻害剤の使用を提供する。ある特定の実施形態において、ヘキサヌクレオチド反復伸長は、ＧＧＧＧＣＣ、ＧＧＧＧＧＧ、ＧＧＧＧＧＣ、またはＧＧＧＧＣＧを含み得る。ある特定の実施形態において、Ｃ９ＯＲＦ７２特異的阻害剤は、Ｃ９ＯＲＦ７２  ｍＲＮＡおよび／またはＣ９ＯＲＦ７２タンパク質の発現を阻害することができる核酸（アンチセンス化合物を含む）、ペプチド、抗体、小分子、および他の薬剤である。
【００９８】
Ｃ９ＯＲＦ７２核酸またはＣ９ＯＲＦ７２相同核酸に相補的な一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドを含む化合物が、本明細書に記載される。
【００９９】
ある特定の実施形態において、Ｃ９ＯＲＦ７２核酸は、ヒトＣ９ＯＲＦ７２核酸である。
【０１００】
ある特定の実施形態において、Ｃ９ＯＲＦ７２核酸は、ヘキサヌクレオチド反復伸長を含有する。
【０１０１】
ある特定の実施形態において、Ｃ９ＯＲＦ７２核酸は、ヘキサヌクレオチド反復伸長を含有しない。
【０１０２】
ある特定の実施形態において、一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ヒトＣ９ＯＲＦ７２核酸に特異的にハイブリダイズする。
【０１０３】
ある特定の実施形態において、一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ヒトＣ９ＯＲＦ７２核酸の等長部分に少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％相補的である。
【０１０４】
ある特定の実施形態において、一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ヒトＣ９ＯＲＦ７２核酸のエクソン、イントロン、５’ＵＴＲ、３’ＵＴＲ、反復領域、スプライスジャンクション、エクソン：エクソンスプライスジャンクション、エクソンスプライシングサイレンサー（ＥＳＳ）、エクソンスプライシングエンハンサー（ＥＳＥ）、エクソン１ａ、エクソン１ｂ、エクソン１ｃ、エクソン１ｄ、エクソン１ｅ、エクソン２、エクソン３、エクソン４、エクソン５、エクソン６、エクソン７、エクソン８、エクソン９、エクソン１０、エクソン１１、イントロン１、イントロン２、イントロン３、イントロン４、イントロン５、イントロン６、イントロン７、イントロン８、イントロン９、またはイントロン１０のうちのいずれかに相補的である。
【０１０５】
１２〜３０個の結合したヌクレオシドからなり、配列番号３０〜３６９の少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、または少なくとも２０個の連続する核酸塩基を含む核酸塩基配列を含む、一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドを含む、化合物が、本明細書に記載される。
【０１０６】
ある特定の実施形態において、一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの修飾を含む。
【０１０７】
ある特定の実施形態において、一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの修飾ヌクレオシド間結合を含む。
【０１０８】
ある特定の実施形態において、一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドの各ヌクレオシド間結合は、修飾ヌクレオシド間結合である。
【０１０９】
ある特定の実施形態において、修飾ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
【０１１０】
ある特定の実施形態において、一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの修飾ヌクレオシドを含む。
【０１１１】
ある特定の実施形態において、一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドは、修飾糖を有する少なくとも１つの修飾ヌクレオシドを含む。
【０１１２】
ある特定の実施形態において、一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドは、二環式糖を含む少なくとも１つの修飾ヌクレオシドを含む。
【０１１３】
ある特定の実施形態において、二環式糖は、４’−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−２’架橋（式中、ｎは１または２である）および４’−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−２’から選択される、４’〜２’架橋を含む。
【０１１４】
ある特定の実施形態において、二環式糖は、４’−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ−２’架橋を含む。
【０１１５】
ある特定の実施形態において、修飾糖を有する少なくとも１つの修飾ヌクレオシドは、非二環式の２’修飾された修飾糖部分を含む。
【０１１６】
ある特定の実施形態において、２’−修飾糖部分は、２’−Ｏ−メトキシエチル基を含む。
【０１１７】
ある特定の実施形態において、２’−修飾糖部分は、２’−Ｏ−メチル基を含む。
【０１１８】
ある特定の実施形態において、修飾糖を有する少なくとも１つの修飾ヌクレオシドは、糖代替物を含む。
【０１１９】
ある特定の実施形態において、糖代替物は、モルホリノである。
【０１２０】
ある特定の実施形態において、糖代替物は、ペプチド核酸である。
【０１２１】
ある特定の実施形態において、各ヌクレオシドは、修飾される。
【０１２２】
ある特定の実施形態において、一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの修飾核酸塩基を含む。
【０１２３】
ある特定の実施形態において、修飾核酸塩基は、５’−メチルシトシンである。
【０１２４】
ある特定の実施形態において、一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドは、
結合したデオキシヌクレオシドからなるギャップセグメント、
結合したヌクレオシドからなる５’ウイングセグメント
結合したヌクレオシドからなる３’ウイングセグメント、を含み、
ギャップセグメントは、５’ウイングセグメントおよび３’ウイングセグメントに直接隣接して、かつそれらの間に位置付けられ、各ウイングセグメントの各ヌクレオシドが、修飾糖を含む。
【０１２５】
ある特定の実施形態において、一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドは、
１０個の結合したデオキシヌクレオシドからなるギャップセグメント、
５個の結合したヌクレオシドからなる５’ウイングセグメント、
５個の結合したヌクレオシドからなる３’ウイングセグメント、を含み、
ギャップセグメントは、５’ウイングセグメントおよび３’ウイングセグメントに直接隣接して、かつそれらの間に位置付けられ、各ウイングセグメントの各ヌクレオシドが、２’−Ｏ−メトキシエチル糖を含み、各ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート結合である。
【０１２６】
ある特定の実施形態において、一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドは、１５個の結合したヌクレオシドからなる。
【０１２７】
ある特定の実施形態において、一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドは、１６個の結合したヌクレオシドからなる。
【０１２８】
ある特定の実施形態において、一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドは、１７個の結合したヌクレオシドからなる。
【０１２９】
ある特定の実施形態において、一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドは、１８個の結合したヌクレオシドからなる。
【０１３０】
ある特定の実施形態において、一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドは、１９個の結合したヌクレオシドからなる。
【０１３１】
ある特定の実施形態において、一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドは、２０個の結合したヌクレオシドからなる。
【０１３２】
ある特定の実施形態において、一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドは、２１個の結合したヌクレオシドからなる。
【０１３３】
ある特定の実施形態において、一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドは、２２個の結合したヌクレオシドからなる。
【０１３４】
ある特定の実施形態において、一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドは、２３個の結合したヌクレオシドからなる。
【０１３５】
ある特定の実施形態において、一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドは、２４個の結合したヌクレオシドからなる。
【０１３６】
ある特定の実施形態において、一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドは、２５個の結合したヌクレオシドからなる。
【０１３７】
神経変性疾患を治療するための医薬品の製造のための化合物の使用が、本明細書に記載される。
【０１３８】
細胞を、エクソン１Ｂの上流を標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドと接触させることによって、ヘキサヌクレオチド反復伸長を含有するｍＲＮＡ転写産物の発現を選択的に阻害する方法が、本明細書に提供される。
【０１３９】
アンチセンス化合物
オリゴマー化合物には、オリゴヌクレオチド、オリゴヌクレオシド、オリゴヌクレオチド類似体、オリゴヌクレオチド模倣体、アンチセンス化合物、アンチセンスオリゴヌクレオチド、およびｓｉＲＮＡが含まれるが、これらに限定されない。オリゴマー化合物は、標的核酸に対して「アンチセンス」であり得、これは、水素結合を介して標的核酸へのハイブリダイゼーションを受けることができることを意味する。
【０１４０】
ある特定の実施形態において、アンチセンス化合物は、５’から３’の方向に書かれると、それが標的とする、標的核酸の標的セグメントの逆補体を含む、核酸塩基配列を有する。ある特定のそのような実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、５’から３’の方向に書かれると、それが標的とする、標的核酸の標的セグメントの逆補体を含む、核酸塩基配列を有する。
【０１４１】
ある特定の実施形態において、Ｃ９ＯＲＦ７２核酸を標的とするアンチセンス化合物は、長さが１２から３０サブユニットである。換言すると、そのようなアンチセンス化合物は、１２〜３０個の結合したサブユニットである。ある特定の実施形態において、アンチセンス化合物は、８〜８０、１２〜５０、１５〜３０、１８〜２４、１９〜２２、または２０個の結合したサブユニットである。ある特定の実施形態において、アンチセンス化合物は、長さが８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、または８０個の結合したサブユニットであるか、または上述の値のうちのいずれか２つによって定義される範囲である。いくつかの実施形態において、アンチセンス化合物は、アンチセンスオリゴヌクレオチドであり、結合したサブユニットは、ヌクレオシドである。
【０１４２】
ある特定の実施形態において、Ｃ９ＯＲＦ７２核酸を標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドは、短縮または切除されてもよい。例えば、単一のサブユニットが、５’末端から欠失してもよく（５’切除）、または代替として３’末端から欠失してもよい（３’切除）。Ｃ９ＯＲＦ７２核酸を標的とする短縮または切除されたアンチセンス化合物は、アンチセンス化合物の２つのサブユニットが５’末端から欠失していてもよく、または代替として、２つのサブユニットが、３’末端から欠失していてもよい。あるいは、欠失したヌクレオシドは、アンチセンス化合物全体に分散していてもよく、例えば、あるアンチセンス化合物では、１つのヌクレオシドが５’末端から欠失しており、１つのヌクレオシドが３’末端から欠失している。
【０１４３】
延長されたアンチセンス化合物に単一の付加サブユニットが存在する場合、付加サブユニットは、アンチセンス化合物の５’または３’末端に位置し得る。２つ以上の付加サブユニットが存在する場合、付加されたサブユニットは、互いに隣接してもよく、例えば、あるアンチセンス化合物では、２つのサブユニットが、アンチセンス化合物の５’末端に付加されている（５’付加）か、または代替として３’末端に付加されている（３’付加）。あるいは、付加されたサブユニットは、アンチセンス化合物全体に分散していてもよく、例えば、あるアンチセンス化合物では、１つのサブユニットが５’末端に付加されており、１つのサブユニットが３’末端に付加されている。      
【０１４４】
活性を消失させることなく、アンチセンスオリゴヌクレオチド等のアンチセンス化合物の長さを増加もしくは減少させること、および／またはミスマッチ塩基を導入することが可能である。例えば、Ｗｏｏｌｆ  ｅｔ  ａｌ．（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９：７３０５−７３０９，１９９２）では、長さが１３〜２５核酸塩基の一連のアンチセンスオリゴヌクレオチドに、卵母細胞注射モデルにおいてそれらが標的ＲＮＡの切断を誘導する能力について試験が行われた。アンチセンスオリゴヌクレオチドの末端付近に８または１１個のミスマッチ塩基を有する、長さが２５核酸塩基のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ミスマッチを含有しないアンチセンスオリゴヌクレオチドより低い程度であったが、標的ｍＲＮＡの特異的な切断を指示することができた。同様に、１または３つのミスマッチを有するものを含む、１３核酸塩基のアンチセンスオリゴヌクレオチドを使用して、標的特異的切断が達成された。
【０１４５】
Ｇａｕｔｓｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ（Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．９３：４６３−４７１，Ｍａｒｃｈ  ２００１）は、ｂｃｌ−２  ｍＲＮＡに対して１００％の相補性を有し、ｂｃｌ−ｘＬ  ｍＲＮＡに対して３つのミスマッチを有するオリゴヌクレオチ
ドが、インビトロおよびインビボでｂｃｌ−２およびｂｃｌ−ｘＬの両方の発現を低減させる能力を実証した。さらに、このオリゴヌクレオチドは、インビボで強力な抗腫瘍活性を示した。
【０１４６】
ＭａｈｅｒおよびＤｏｌｎｉｃｋ（Ｎｕｃ．Ａｃｉｄ．Ｒｅｓ．１６：３３４１−３３５８，９８８）は、一連のタンデム１４核酸塩基のアンチセンスオリゴヌクレオチド、ならびに、このタンデムアンチセンスオリゴヌクレオチドのうちの２または３つの配列から構成される、それぞれ２８および４２核酸塩基のアンチセンスオリゴヌクレオチドに、ウサギ網状赤血球アッセイにおいてそれらがヒトＤＨＦＲの翻訳を停止させる能力について、試験を行った。３つの１４核酸塩基アンチセンスオリゴヌクレオチドのそれぞれは、２８または４２核酸塩基のアンチセンスオリゴヌクレオチドよりも控えめなレベルであるものの、単独で、翻訳を阻害することができた。
【０１４７】
アンチセンス化合物モチーフ
ある特定の実施形態において、Ｃ９ＯＲＦ７２核酸を標的とするアンチセンス化合物は、阻害活性の強化、標的核酸に対する結合親和性の増加、またはインビボでのヌクレアーゼによる分解に対する耐性といった特性をアンチセンス化合物に付与する、パターンで配置される化学修飾サブユニット、またはモチーフを有する。
【０１４８】
キメラアンチセンス化合物は、典型的に、ヌクレアーゼ分解に対する耐性の増加、細胞取り込みの増加、標的核酸に対する結合親和性の増加、および／または阻害活性の増加を付与することができるように修飾された、少なくとも１つの領域を含有する。キメラアンチセンス化合物の第２の領域は、任意で、ＲＮＡ：ＤＮＡ二重鎖のＲＮＡ鎖を切断する細胞性エンドヌクレアーゼＲＮａｓｅ  Ｈの基質として機能し得る。
【０１４９】
ギャップマーモチーフを有するアンチセンス化合物は、キメラアンチセンス化合物と見なされる。ギャップマーでは、ＲＮａｓｅ  Ｈ切断を支持する複数のヌクレオチドを有する内部領域は、内部領域のヌクレオシドとは化学的に異なる複数のヌクレオチドを有する外部領域の間に位置付けられる。ギャップマーモチーフを有するアンチセンスオリゴヌクレオチドの場合、ウイングセグメントが修飾ヌクレオシドを含むのに対し、ギャップセグメントは、概して、エンドヌクレアーゼ切断のための基質として機能する。ある特定の実施形態において、ギャップマーの領域は、それぞれの異なる領域を含む糖部分の種類によって区別される。ギャップマーの領域を区別するために使用される糖部分の種類としては、いくつかの実施形態では、β−Ｄ−リボヌクレオシド、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシド、２’−修飾ヌクレオシド（そのような２’−修飾ヌクレオシドには、とりわけ、２’−ＭＯＥ、および２’−Ｏ−ＣＨ３が含まれ得る）、ならびに二環式糖修飾ヌクレオシド（そのような二環式糖修飾ヌクレオシドには、４’−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−２’架橋（式中、ｎ＝１またはｎ＝２である）および４’−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−２’を有するものが含まれ得る）を挙げることができる。好ましくは、それぞれの異なる領域が、一様な糖部分を含む。ウイング−ギャップ−ウイングモチーフは、多くの場合、「Ｘ−Ｙ−Ｚ」と記載され、ここで、「Ｘ」は、５’ウイング領域の長さを表し、「Ｙ」は、ギャップ領域の長さを表し、「Ｚ」は、３’ウイング領域の長さを表す。本明細書に使用される際、「Ｘ−Ｙ−Ｚ」として記載されるギャップマーは、ギャップセグメントが、５’ウイングセグメントおよび３’ウイングセグメントのそれぞれに直接隣接して位置付けられるような構成を有する。したがって、５’ウイングセグメントとギャップセグメントとの間、またはギャップセグメントと３’ウイングセグメントとの間に、介在ヌクレオチドは存在しない。本明細書に記載されるアンチセンス化合物のいずれも、ギャップマーモチーフを有し得る。いくつかの実施形態では、ＸおよびＺは同じであり、他の実施形態では、異なる。好ましい実施形態では、Ｙは、８から１５個のヌクレオチドである。Ｘ、Ｙ、またはＺは、
１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、またはそれ以上のヌクレオチドのいずれかであり得る。したがって、本明細書に記載されるギャップマーには、例えば、５−１０−５、５−１０−４、４−１０−４、４−１０−３、３−１０−３、２−１０−２、５−９−５、５−９−４、４−９−５、５−８−５、５−８−４、４−８−５、５−７−５、４−７−５、５−７−４、または４−７−４が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１５０】
ある特定の実施形態において、アンチセンス化合物は、ウイング−ギャップまたはギャップ−ウイング構成、すなわち、ギャップマー構成に関して上に記載される、Ｘ−ＹまたはＹ−Ｚ構成を有する、「ウイングマー（ｗｉｎｇｍｅｒ）」モチーフを有する。したがって、本明細書に記載されるウイングマー構成には、例えば、５−１０、８−４、４−１２、１２−４、３−１４、１６−２、１８−１、１０−３、２−１０、１−１０、８−２、２−１３、５−１３、５−８、または６−８が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１５１】
ある特定の実施形態において、Ｃ９ＯＲＦ７２核酸を標的とするアンチセンス化合物は、５−１０−５ギャップマーモチーフを有する。
【０１５２】
ある特定の実施形態において、Ｃ９ＯＲＦ７２核酸を標的とするアンチセンス化合物は、５−１０−４ギャップマーモチーフを有する。
【０１５３】
ある特定の実施形態において、Ｃ９ＯＲＦ７２核酸を標的とするアンチセンス化合物は、４−１０−４ギャップマーモチーフを有する。
【０１５４】
ある特定の実施形態において、Ｃ９ＯＲＦ７２核酸を標的とするアンチセンス化合物は、４−１０−３ギャップマーモチーフを有する。
【０１５５】
ある特定の実施形態において、Ｃ９ＯＲＦ７２核酸を標的とするアンチセンス化合物は、５−９−５ギャップマーモチーフを有する。
【０１５６】
ある特定の実施形態において、Ｃ９ＯＲＦ７２核酸を標的とするアンチセンス化合物は、ギャップ縮小モチーフを有する。ある特定の実施形態において、Ｃ９ＯＲＦ７２核酸を標的とするギャップ縮小アンチセンスオリゴヌクレオチドは、５、４、３、２、または１個の化学修飾ヌクレオシドのウイングセグメントに直接隣接して、かつそれらの間に位置付けられる、９、８、７、または６個の２’−デオキシヌクレオチドのギャップセグメントを有する。ある特定の実施形態において、化学修飾は、二環式糖を含む。ある特定の実施形態において、二環式糖は、４’−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−２’架橋（式中、ｎは１または２である）および４’−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−２’から選択される、４’〜２’架橋を含む。ある特定の実施形態において、二環式糖は、４’−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ−２’架橋を含む。ある特定の実施形態において、化学修飾は、非二環式２’−修飾糖部分を含む。ある特定の実施形態において、非二環式２’−修飾糖部分は、２’−Ｏ−メチルエチル基または２’−Ｏ−メチル基を含む。
【０１５７】
ある特定の実施形態において、Ｃ９ＯＲＦ７２核酸を標的とするアンチセンス化合物は、一様に修飾される。ある特定の実施形態において、アンチセンス化合物は、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５個のヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、各ヌクレオシドは、化学修飾される。ある特定の実施形態において、化学修飾は、非二環式２’−修飾糖部分を含む。ある特定の実施形態において、２’−修飾糖部分は、２’−Ｏ−メトキシエチル基を含む。ある特定の実施形態において、２’−修飾糖部分は、２’−Ｏ−メチル基を含む。ある特定の実施形態において、一様に修飾されたアンチセンス化合物は、Ｃ９ＯＲＦ７２、または
その任意の部分、例えばヘキサヌクレオチド反復伸長を標的とし得る。ある特定の実施形態において、一様に修飾されたアンチセンス化合物でヘキサヌクレオチド反復伸長を標的とすることは、ＲＮＡ結合タンパク質との相互作用を阻止することにより反復ＲＮＡを低減させる。ある特定の実施形態において、これにより、結果として、毒性ＲＮＡがフォーカスに不在となり、代わりに分解される。
【０１５８】
標的核酸、標的領域、およびヌクレオチド配列
Ｃ９ＯＲＦ７２をコードするヌクレオチド配列には、限定することなく、次のものが含まれる：ＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＮＭ＿００１２５６０５４．１の補体（配列番号１として本明細書に組み込まれる）、核酸塩基２７５３５０００〜２７５６５０００が切除されたＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＮＴ＿００８４１３．１８（配列番号２として本明細書に組み込まれる）、ＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＢＱ０６８１０８．１（配列番号３として本明細書に組み込まれる）、ＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＮＭ＿０１８３２５．３（配列番号４として本明細書に組み込まれる）、ＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＤＮ９９３５２２．１（配列番号５として本明細書に組み込まれる）、ＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＮＭ＿１４５００５．５（配列番号６として本明細書に組み込まれる）、ＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＤＢ０７９３７５．１（配列番号７として本明細書に組み込まれる）、ＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＢＵ１９４５９１．１（配列番号８として本明細書に組み込まれる）、配列識別子４１４１＿０１４＿Ａ（配列番号９として本明細書に組み込まれる）、および配列識別子４００８＿７３＿Ａ（配列番号１０として本明細書に組み込まれる）。
【０１５９】
本明細書に含まれる実施例において、各配列番号に記載される配列は、糖部分、ヌクレオシド間結合、または核酸塩基に対するいずれの修飾とも無関係であることを理解されたい。したがって、配列番号によって定義されるアンチセンス化合物は、独立して、糖部分、ヌクレオシド間結合、または核酸塩基に対する１つ以上の修飾を含み得る。Ｉｓｉｓ番号（Ｉｓｉｓ  Ｎｏ）によって記載されるアンチセンス化合物は、核酸塩基配列およびモチーフの組み合わせを示す。
【０１６０】
ある特定の実施形態において、標的領域は、標的核酸の構造的に定義された領域である。例えば、標的領域は、３’ＵＴＲ、５’ＵＴＲ、エクソン、イントロン、エクソン／イントロンジャンクション、コード領域、翻訳開始領域、翻訳終結領域、または他の定義された核酸領域を包含し得る。Ｃ９ＯＲＦ７２の構造的に定義された領域は、ＮＣＢＩ等の配列データベースからの受託番号により得ることができ、そのような情報は、参照により本明細書に組み込まれる。ある特定の実施形態において、標的領域は、標的領域内の１つの標的セグメントの５’標的部位から、同じ標的領域内の別の標的セグメントの３’標的部位までの配列を包含し得る。
【０１６１】
標的とすることには、所望の効果が生じるように、アンチセンス化合物がハイブリダイズする少なくとも１つの標的セグメントを決定することを含む。ある特定の実施形態において、所望の効果は、ｍＲＮＡ標的核酸レベルの低減である。ある特定の実施形態において、所望の効果は、標的核酸によってコードされるタンパク質のレベルの低減、または標的核酸と関連する表現型の変化である。
【０１６２】
標的領域は、１つ以上の標的セグメントを含有し得る。標的領域内の複数の標的セグメントが、重複してもよい。あるいは、それらは重複しなくてもよい。ある特定の実施形態において、標的領域内の標的セグメントは、約３００個を超えないヌクレオチドによって分離される。ある特定の実施形態において、標的領域内の標的セグメントは、標的核酸上のいくつかのヌクレオチド、すなわち、２５０、２００、１５０、１００、９０、８０、７０、６０、５０、４０、３０、２０、または１０個の、約これらの、これらをこえない
、約これらを超えないヌクレオチド、または前述の値のうちの任意の２つによって定義される範囲のヌクレオチドによって、分離される。ある特定の実施形態において、標的領域内の標的セグメントは、標的核酸上の５個を超えない、または約５個を超えないヌクレオチドによって分離される。ある特定の実施形態において、標的セグメントは、連続している。本明細書に列挙される５’標的部位または３’標的部位のいずれかである開始核酸を有する範囲によって定義される標的領域が、企図される。
【０１６３】
好適な標的セグメントは、５’ＵＴＲ、コード領域、３’ＵＴＲ、イントロン、エクソン、またはエクソン／イントロンジャンクション内に見出され得る。開始コドンまたは終止コドンを含有する標的セグメントもまた、好適な標的セグメントである。好適な標的セグメントは、開始コドンまたは終止コドン等、ある特定の構造的に定義される領域を特異的に排除してもよい。
【０１６４】
好適な標的セグメントの決定には、ゲノム全体にわたって標的核酸の配列と他の配列とを比較することが含まれ得る。例えば、ＢＬＡＳＴアルゴリズムを使用して、異なる核酸間の類似領域を識別することができる。この比較により、非特異的な様式で選択された標的核酸以外の配列（すなわち、非標的または標的外配列）にハイブリダイズし得るアンチセンス化合物配列の選択を防止することができる。
【０１６５】
標的領域内でのアンチセンス化合物の活性（例えば、標的核酸レベルの低減率によって定義される）には、変動があり得る。ある特定の実施形態において、Ｃ９ＯＲＦ７２  ｍＲＮＡレベルの低減は、Ｃ９ＯＲＦ７２発現の阻害を示す。Ｃ９ＯＲＦ７２タンパク質のレベルの低減もまた、標的ｍＲＮＡ発現の阻害を示す。伸長Ｃ９ＯＲＦ７２  ＲＮＡフォーカスの存在の低減は、Ｃ９ＯＲＦ７２発現の阻害を示す。さらに、表現型の変化は、Ｃ９ＯＲＦ７２発現の阻害を示す。例えば、運動機能および呼吸の改善は、Ｃ９ＯＲＦ７２発現の阻害を示し得る。
【０１６６】
ハイブリダイゼーション
いくつかの実施形態において、ハイブリダイゼーションが、本明細書に開示されるアンチセンス化合物とＣ９ＯＲＦ７２核酸との間に生じる。ハイブリダイゼーションの最も一般的な機序は、核酸分子の相補的核酸塩基間での水素結合（例えば、ワトソン・クリック、フーグスティーン、または逆フーグスティーン水素結合）を伴う。
【０１６７】
ハイブリダイゼーションは、多様な条件下で生じ得る。ストリンジェント条件は、配列依存性であり、ハイブリダイズされる核酸分子の性質および組成によって決定される。
【０１６８】
配列が標的核酸に特異的にハイブリダイズできるかどうかを判定する方法は、当該技術分野で周知である。ある特定の実施形態において、本明細書に提供されるアンチセンス化合物は、Ｃ９ＯＲＦ７２核酸と特異的にハイブリダイズし得る。
【０１６９】
相補性
アンチセンス化合物および標的核酸は、アンチセンス化合物の十分な数の核酸塩基が、標的核酸の対応する核酸塩基と水素結合し得、所望の効果（例えば、Ｃ９ＯＲＦ７２核酸等の標的核酸のアンチセンス阻害）が生じるようになる場合、互いに相補的である。
【０１７０】
アンチセンス化合物とＣ９ＯＲＦ７２核酸との間の非相補的な核酸塩基は耐容され得るが、ただし、アンチセンス化合物が標的核酸に特異的にハイブリダイズすることができるままであることを条件とする。さらに、アンチセンス化合物は、介在または隣接セグメン
ト（例えば、ループ構造、ミスマッチ、またはヘアピン構造）が、ハイブリダイゼーション事象に関与しないように、Ｃ９ＯＲＦ７２核酸の１つ以上のセグメントにわたってハイブリダイズし得る。
【０１７１】
ある特定の実施形態において、本明細書に提供されるアンチセンス化合物、またはその特定の部分は、Ｃ９ＯＲＦ７２核酸、標的領域、標的セグメント、またはその特定の部分に７０％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％相補的であるか、または少なくともこれらの割合で相補的である。アンチセンス化合物と標的核酸との相補性パーセントは、日常的な方法を使用して決定され得る。
【０１７２】
例えば、アンチセンス化合物の２０個の核酸塩基中１８個が標的領域に相補的であり、したがって、特異的にハイブリダイズするアンチセンス化合物は、９０パーセントの相補性を表すであろう。この例では、残りの非相補的核酸塩基は、密集していても、相補的核酸塩基とともに分散されてもよく、互いに、または相補的核酸塩基に連続している必要はない。したがって、長さが１８核酸塩基であり、標的核酸と完全に相補性の２つの領域が隣接する４つの（４）非相補的核酸塩基を有するアンチセンス化合物は、標的核酸と７７．8％の全体的な相補性を有し、そのため、本発明の範囲内に含まれるであろう。アンチ
センス化合物と標的核酸の領域との相補性パーセントは、当該技術分野で既知のＢＬＡＳＴプログラム（基本的なローカルアライメント検索ツール）およびＰｏｗｅｒＢＬＡＳＴプログラムを使用して、日常的に決定され得る（Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９９０，２１５，４０３  ４１０、Ｚｈａｎｇ  ａｎｄ  Ｍａｄｄｅｎ，Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓ．，１９９７，７，６４９  ６５６）。相同性、配列同一性、または相補性パーセントは、例えば、初期設定を使用して、ＳｍｉｔｈおよびＷａｔｅｒｍａｎのアルゴリズム（Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．，１９８１，２，４８２  ４８９）を用いるＧａｐプログラム（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｐａｃｋａｇｅ，Ｖｅｒｓｉｏｎ  ８  ｆｏｒ  Ｕｎｉｘ，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｐａｒｋ，Ｍａｄｉｓｏｎ  Ｗｉｓ．）によって判定することができる。
【０１７３】
ある特定の実施形態において、本明細書に提供されるアンチセンス化合物またはその特定の部分は、標的核酸またはその特定の部分に完全に相補的（すなわち、１００％相補的）である。例えば、アンチセンス化合物は、Ｃ９ＯＲＦ７２核酸、またはその標的領域、または標的セグメント、または標的配列に完全に相補的であり得る。本明細書に使用される際、「完全に相補的」とは、アンチセンス化合物の各核酸塩基が、標的核酸の対応する核酸塩基と正確に塩基対合できることを意味する。例えば、２０核酸塩基のアンチセンス化合物は、アンチセンス化合物に完全に相補的な標的核酸の対応する２０核酸塩基部分が存在する限り、４００核酸塩基長である標的配列に完全に相補的である。完全に相補的とは、第１および／または第２の核酸の特定の部分を参照して使用することもできる。例えば、３０核酸塩基のアンチセンス化合物の２０核酸塩基部分は、４００核酸塩基長の標的配列に「完全に相補的」であり得る。３０核酸塩基のオリゴヌクレオチドの２０核酸塩基部分は、標的配列が対応する２０核酸塩基部分を有する場合、標的配列に完全に相補的であり、ここで、各核酸塩基は、アンチセンス化合物の２０核酸塩基部分に相補的である。同時に、３０核酸塩基のアンチセンス化合物全体は、アンチセンス化合物の残りの１０核酸塩基もまた標的配列に相補的かどうかに応じて、標的配列に完全に相補的であり得るか、またはそうでない場合もある。
【０１７４】
非相補的核酸塩基の位置は、アンチセンス化合物の５’末端または３’末端であり得る。あるいは、非相補的核酸塩基（複数可）は、アンチセンス化合物の内部位置にあってもよい。２つ以上の非相補的核酸塩基が存在する場合、それらは、連続する（すなわち、結
合する）か、または非連続であり得る。一実施形態において、非相補的核酸塩基は、ギャップマーアンチセンスオリゴヌクレオチドのウイングセグメントに位置する。
【０１７５】
ある特定の実施形態において、長さが１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、もしくは２０核酸塩基、または最大でこれらの数の核酸塩基であるアンチセンス化合物は、標的核酸、例えば、Ｃ９ＯＲＦ７２核酸またはその特定の部分に対して、４個を超えない、３個を超えない、２個を超えない、または１個を超えない非相補的核酸塩基（複数可）を含む。
【０１７６】
ある特定の実施形態において、長さが１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０核酸塩基であるか、または最大でこれらの数の核酸塩基であるアンチセンス化合物は、標的核酸、例えば、Ｃ９ＯＲＦ７２核酸、またはその特定の部分に対して、６個を超えない、５個を超えない、４個を超えない、３個を超えない、２個を超えない、または１個を超えない非相補的核酸塩基（複数可）を含む。
【０１７７】
本明細書に提供されるアンチセンス化合物には、標的核酸の一部分に相補的なものも含まれる。本明細書に使用される際、「部分」とは、標的核酸の領域またはセグメント内の一定数の連続する（すなわち、結合した）核酸塩基を指す。「部分」はまた、アンチセンス化合物の一定数の連続する核酸塩基も指し得る。ある特定の実施形態において、アンチセンス化合物は、標的セグメントの少なくとも８核酸塩基部分に相補的である。ある特定の実施形態において、アンチセンス化合物は、標的セグメントの少なくとも９核酸塩基部分に相補的である。ある特定の実施形態において、アンチセンス化合物は、標的セグメントの少なくとも１０核酸塩基部分に相補的である。ある特定の実施形態において、アンチセンス化合物は、標的セグメントの少なくとも１１核酸塩基部分に相補的である。ある特定の実施形態において、アンチセンス化合物は、標的セグメントの少なくとも１２核酸塩基部分に相補的である。ある特定の実施形態において、アンチセンス化合物は、標的セグメントの少なくとも１３核酸塩基部分に相補的である。ある特定の実施形態において、アンチセンス化合物は、標的セグメントの少なくとも１４核酸塩基部分に相補的である。ある特定の実施形態において、アンチセンス化合物は、標的セグメントの少なくとも１５核酸塩基部分に相補的である。標的セグメントの少なくとも９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、もしくはそれ以上、またはこれらの値のうちの任意の２つによって定義される範囲の核酸塩基部分に相補的である、アンチセンス化合物もまた企図される。
【０１７８】
同一性
本明細書に提供されるアンチセンス化合物はまた、特定のヌクレオチド配列、配列番号、または特定のＩｓｉｓ番号によって表される化合物もしくはその部分に対して、一定の同一性パーセントを有し得る。本明細書に使用される際、アンチセンス化合物は、同じ核酸塩基対合能力を有する場合、本明細書に開示される配列と同一である。例えば、開示されるＤＮＡ配列において、チミジンの代わりにウラシルを含有するＲＮＡは、ウラシルとチミジンのいずれもアデニンと対合するため、このＤＮＡ配列に同一であると見なされる。本明細書に記載されるアンチセンス化合物の短縮または延長されたバージョン、ならびに本明細書に提供されるアンチセンス化合物に対して非同一塩基を有する化合物もまた、企図される。非同一塩基は、互いに隣接していてもよく、またはアンチセンス化合物全体に分散していてもよい。アンチセンス化合物の同一性パーセントは、比較される配列に対して同一の塩基対合を有する塩基の数に従って計算される。
【０１７９】
ある特定の実施形態において、アンチセンス化合物またはその部分は、本明細書に開示されるアンチセンス化合物もしくは配列番号、またはそれらの部分のうちの１つ以上に、
少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である。
【０１８０】
ある特定の実施形態において、アンチセンス化合物の一部分を、標的核酸の等長部分と比較する。ある特定の実施形態において、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５核酸塩基部分を、標的核酸の等長部分と比較する。
【０１８１】
ある特定の実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドの一部分を、標的核酸の等長部分と比較する。ある特定の実施形態において、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５核酸塩基部分を、標的核酸の等長部分と比較する。
【０１８２】
修飾
ヌクレオシドは、塩基−糖の組み合わせである。ヌクレオシドの核酸塩基（塩基としても知られる）部分は、通常、複素環式塩基部分である。ヌクレオチドは、ヌクレオシドの糖部分に共有結合したリン酸基をさらに含むヌクレオシドである。ペントフラノシル糖を含むヌクレオシドについては、リン酸基は、糖の２’、３’、または５’ヒドロキシル部分に結合し得る。オリゴヌクレオチドは、互いに隣接するヌクレオシドの共有結合を通じて形成され、線状のポリマーオリゴヌクレオチドを形成する。オリゴヌクレオチド構造内で、リン酸基は、一般に、オリゴヌクレオチドのヌクレオシド間結合を形成すると称される。
【０１８３】
アンチセンス化合物への修飾は、ヌクレオシド間結合、糖部分、または核酸塩基に対する置換または変化を包含する。修飾アンチセンス化合物は、多くの場合、例えば、細胞取り込みの強化、核酸標的に対する親和性の強化、ヌクレアーゼの存在下での安定性の増加、または阻害活性の増加といった、望ましい特性のため、天然の形態よりも好ましい。
【０１８４】
化学修飾ヌクレオシドはまた、短縮または切除されたアンチセンスオリゴヌクレオチドの、その標的核酸に対する結合親和性を増加させるために用いられ得る。結果として、そのような化学修飾ヌクレオシドを有するより短いアンチセンス化合物では、多くの場合、同等の結果を得ることができる。
【０１８５】
修飾ヌクレオシド間結合
ＲＮＡおよびＤＮＡの天然に存在するヌクレオシド間結合は、３’から５のホスホジエステル結合である。１つ以上の修飾された、すなわち、天然に存在しない、ヌクレオシド間結合を有するアンチセンス化合物は、多くの場合、例えば、細胞取り込みの強化、標的核酸に対する親和性の強化、およびヌクレアーゼの存在下での安定性の増加といった望ましい特性のため、天然に存在するヌクレオシド間結合を有するアンチセンス化合物に優って選択される。
【０１８６】
修飾ヌクレオシド間結合を有するオリゴヌクレオチドは、リン原子を保持するヌクレオシド間結合、ならびにリン原子を有さないヌクレオシド間結合を含む。代表的なリン含有ヌクレオシド間結合には、ホスホジエステル、ホスホトリエステル、メチルホスホネート、ホスホラミデート、およびホスホロチオエートが挙げられるが、これらに限定されない。リン含有および非リン含有結合の調製方法は、周知である。
【０１８７】
ある特定の実施形態において、Ｃ９ＯＲＦ７２核酸を標的とするアンチセンス化合物は、１つ以上の修飾ヌクレオシド間結合を含む。ある特定の実施形態において、修飾ヌクレオシド間結合は、アンチセンス化合物全体にわたって分散される。ある特定の実施形態に
おいて、修飾ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート結合である。ある特定の実施形態において、アンチセンス化合物の各ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
【０１８８】
修飾糖部分
アンチセンス化合物は、任意で、糖基が修飾されている１つ以上のヌクレオシドを含有し得る。そのような糖修飾ヌクレオシドは、ヌクレアーゼ安定性の強化、結合親和性の増加、または何らかの他の有益な生物学的特性を、アンチセンス化合物に付与し得る。ある特定の実施形態において、ヌクレオシドは、化学修飾リボフラノース環部分を含む。化学修飾リボフラノース環の例としては、置換基の付加（５’および２’置換基を含む、二環式核酸（ＢＮＡ）を形成するための非ジェミナル環原子の架橋、リボシル環酸素原子のＳ、Ｎ（Ｒ）、またはＣ（Ｒ１）（Ｒ２）との置き換え（Ｒ、Ｒ１、およびＲ２は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、または保護基である）、ならびにこれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。化学修飾糖の例としては、２’−Ｆ−５’−メチル置換ヌクレオシド（他の開示された５’，２’−ビス置換ヌクレオシドについては、２００８年８月２１日公開のＰＣＴ国際出願国際公開第２００８／１０１１５７号を参照されたい）、またはリボシル環酸素原子とＳとの置き換えと２’位でのさらなる置換（２００５年６月１６日公開の公開米国特許出願第２００５−０１３０９２３号を参照されたい）、または代替として、ＢＮＡの５’置換（２００７年１１月２２日公開のＰＣＴ国際出願国際公開第２００７／１３４１８１号を参照されたく、ここで、ＬＮＡは、例えば５’−メチルまたは５’−ビニル基で置換される）が挙げられる。
【０１８９】
修飾糖部分を有するヌクレオシドの例としては、５’−ビニル、５’−メチル（ＲまたはＳ）、４’−Ｓ、２’−Ｆ、２’−ＯＣＨ３、２’−ＯＣＨ２ＣＨ３、２’−ＯＣＨ２ＣＨ２Ｆ、および２’−Ｏ（ＣＨ２）２ＯＣＨ３置換基を含むヌクレオシドが挙げられるが、これらに限定されない。２’位での置換基はまた、アリル、アミノ、アジド、チオ、Ｏ−アリル、Ｏ−Ｃ１−Ｃ１０アルキル、ＯＣＦ３、ＯＣＨ２Ｆ、Ｏ（ＣＨ２）２ＳＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）２−Ｏ−Ｎ（Ｒｍ）（Ｒｎ）、Ｏ−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒｍ）（Ｒｎ）、およびＯ−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒｌ）−（ＣＨ２）２−Ｎ（Ｒｍ）（Ｒｎ）から選択され得、ここで、各Ｒｌ、Ｒｍ、およびＲｎは、独立して、Ｈであるか、または置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ１０アルキルである。
【０１９０】
本明細書に使用される際、「二環式ヌクレオシド」とは、二環式糖部分を含む修飾ヌクレオシドを指す。二環式ヌクレオシドの例としては、４’リボシル環原子と２’リボシル環原子との間の架橋を含むヌクレオシドが挙げられるが、これに限定されない。ある特定の実施形態において、本明細書に提供されるアンチセンス化合物は、４’〜２’架橋を含む１つ以上の二環式ヌクレオシドを含む。そのような４’〜２’架橋二環式ヌクレオシドの例としては、次の式のうちの１つが挙げられるが、これらに限定されない：４’−（ＣＨ２）−Ｏ−２’（ＬＮＡ）、４’−（ＣＨ２）−Ｓ−２’、４’−（ＣＨ２）２−Ｏ−２’（ＥＮＡ）、４’−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ−２’、および４’−ＣＨ（ＣＨ２ＯＣＨ３）−Ｏ−２’（およびそれらの類似体、２００８年７月１５日に発行された米国特許第７，３９９，８４５号を参照されたい）、４’−Ｃ（ＣＨ３）（ＣＨ３）−Ｏ−２’（およびその類似体、２００９年１月８日に公開された公開国際出願国際公開第／２００９／００６４７８号を参照）、４’−ＣＨ２−Ｎ（ＯＣＨ３）−２’（およびその類似体、２００８年１２月１１日に公開された公開国際出願国際公開第２００８／１５０７２９号を参照されたい）、４’−ＣＨ２−Ｏ−Ｎ（ＣＨ３）−２’（２００４年９月２日に公開された公開米国特許出願第２００４−０１７１５７０号を参照されたい）、４’−ＣＨ２−Ｎ（Ｒ）−Ｏ−２’（式中、Ｒは、Ｈ、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、または保護基である）（２００８年９月２３日に発行された米国特許第７，４２７，６７２号を参照されたい）、４’−ＣＨ２−Ｃ（Ｈ）（ＣＨ３）−２’（Ｃｈａｔｔｏｐａｄｈｙａｙａ  ｅｔ  ａｌ．
，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２００９，７４，１１８−１３４）、および４’−ＣＨ２−Ｃ（＝ＣＨ２）−２’（およびその類似体、２００８年１２月８日に公開された公開国際出願国際公開第２００８／１５４４０１号を参照されたい）。
【０１９１】
二環式ヌクレオシドに関連するさらなる報告は、公開文献にも見出すことができる（例えば、Ｓｉｎｇｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．，１９９８，４，４５５−４５６、Ｋｏｓｈｋｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，１９９８，５４，３６０７−３６３０、Ｗａｈｌｅｓｔｅｄｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，２０００，９７，５６３３−５６３８、Ｋｕｍａｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．，１９９８，８，２２１９−２２２２、Ｓｉｎｇｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，１９９８，６３，１００３５−１００３９、Ｓｒｉｖａｓｔａｖａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，２００７，１２９（２６）  ８３６２−８３７９、Ｅｌａｙａｄｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｒｕｇｓ，２００１，２，５５８−５６１、Ｂｒａａｓｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．，２００１，８，１−７、およびＯｒｕｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ  Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．，２００１，３，２３９−２４３、米国特許第６，２６８，４９０号、同第６，５２５，１９１号、同第６，６７０，４６１号、同第６，７７０，７４８号、同第６，７９４，４９９号、同第７，０３４，１３３号、同第７，０５３，２０７号、同第７，３９９，８４５号、同第７，５４７，６８４号、および同第７，６９６，３４５号、米国特許公開第２００８−００３９６１８号、同第２００９−００１２２８１号、米国特許出願第６０／９８９，５７４号、同第６１／０２６，９９５号、同第６１／０２６，９９８号、同第６１／０５６，５６４号、同第６１／０８６，２３１号、同第６１／０９７，７８７号、および同第６１／０９９，８４４号、公開ＰＣＴ国際出願国際公開第１９９４／０１４２２６号、同第２００４／１０６３５６号、同第２００５／０２１５７０号、同第２００７／１３４１８１号、同第２００８／１５０７２９号、同第２００８／１５４４０１号、および同第２００９／００６４７８号を参照されたい）。前述の二環式ヌクレオシドのそれぞれは、例えば、α−Ｌ−リボフラノースおよびβ−Ｄ−リボフラノースを含む、１つ以上の立体化学糖構成を有するように調製することができる（国際公開第９９／１４２２６号として、１９９９年３月２５日公開のＰＣＴ国際出願第ＰＣＴ／ＤＫ９８／００３９３号を参照されたい）。
【０１９２】
ある特定の実施形態において、ＢＮＡヌクレオシドの二環式糖部分は、ペントフラノシル糖部分の４’位と２’位との間に少なくとも１つの架橋を有する化合物を含むが、これらに限定されず、ここで、そのような架橋は、独立して、−［Ｃ（Ｒａ）（Ｒｂ）］ｎ−、−Ｃ（Ｒａ）＝Ｃ（Ｒｂ）−、−Ｃ（Ｒａ）＝Ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝ＮＲａ）−、−Ｃ（＝Ｓ）−、−Ｏ−、−Ｓｉ（Ｒａ）２−、−Ｓ（＝Ｏ）ｘ−、および−Ｎ（Ｒａ）−から独立して選択される１個または２〜４個の結合基を含み、
式中、
ｘは、０、１、または２であり、
ｎは、１、２、３、または４であり、
各ＲａおよびＲｂは、独立して、Ｈ、保護基、ヒドロキシル、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、置換Ｃ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、置換Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、Ｃ２−Ｃ１２アルキニル、置換Ｃ２−Ｃ１２アルキニル、Ｃ５−Ｃ２０アリール、置換Ｃ５−Ｃ２０アリール、複素環ラジカル、置換複素環ラジカル、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、Ｃ５−Ｃ７脂環式ラジカル、置換Ｃ５−Ｃ７脂環式ラジカル、ハロゲン、ＯＪ１、ＮＪ１Ｊ２、ＳＪ１、Ｎ３、ＣＯＯＪ１、アシル（Ｃ（＝Ｏ）−Ｈ）、置換アシル、ＣＮ、スルホニル（Ｓ（＝Ｏ）２−Ｊ１）、またはスルホキシル（Ｓ（＝Ｏ）−Ｊ１）であり、
各Ｊ１およびＪ２は、独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、置換Ｃ１−Ｃ１２ア
ルキル、Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、置換Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、Ｃ２−Ｃ１２アルキニル、置換Ｃ２−Ｃ１２アルキニル、Ｃ５−Ｃ２０アリール、置換Ｃ５−Ｃ２０アリール、アシル（Ｃ（＝Ｏ）−Ｈ）、置換アシル、複素環ラジカル、置換複素環ラジカル、Ｃ１−Ｃ１２アミノアルキル、置換Ｃ１−Ｃ１２アミノアルキル、または保護基である。
【０１９３】
ある特定の実施形態において、二環式糖部分の架橋は、−［Ｃ（Ｒａ）（Ｒｂ）］ｎ−、−［Ｃ（Ｒａ）（Ｒｂ）］ｎ−Ｏ−、−Ｃ（ＲａＲｂ）−Ｎ（Ｒ）−Ｏ−、または−Ｃ（ＲａＲｂ）−Ｏ−Ｎ（Ｒ）−である。ある特定の実施形態では、架橋は、４’−ＣＨ２−２’、４’−（ＣＨ２）２−２’、４’−（ＣＨ２）３−２’、４’−ＣＨ２−Ｏ−２’、４’−（ＣＨ２）２−Ｏ−２’、４’−ＣＨ２−Ｏ−Ｎ（Ｒ）−２’、および４’−ＣＨ２−Ｎ（Ｒ）−Ｏ−２’−であり、式中、各Ｒは、独立して、Ｈ、保護基、またはＣ１−Ｃ１２アルキルである。
【０１９４】
ある特定の実施形態において、二環式ヌクレオシドは、異性体構成によってさらに、定義される。例えば、４’−２’メチレン−オキシ架橋を含むヌクレオシドは、α−Ｌ構成またはβ−Ｄ構成にあってもよい。以前は、α−Ｌ−メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）ＢＮＡは、アンチセンス活性を示すアンチセンスオリゴヌクレオチド中に組み込まれていた（Ｆｒｉｅｄｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００３，２１，６３６５−６３７２）。
【０１９５】
ある特定の実施形態において、二環式ヌクレオシドには、下に示されるような、（Ａ）α−Ｌ−メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）ＢＮＡ、（Ｂ）β−Ｄ−メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）ＢＮＡ、（Ｃ）エチレンオキシ（４’−（ＣＨ２）２−Ｏ−２’）ＢＮＡ、（Ｄ）アミノオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−Ｎ（Ｒ）−２’）ＢＮＡ、（Ｅ）オキシアミノ（４’−ＣＨ２−Ｎ（Ｒ）−Ｏ−２’）ＢＮＡ、および（Ｆ）メチル（メチレンオキシ）（４’−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ−２’）ＢＮＡ、（Ｇ）メチレン−チオ（４’−ＣＨ２−Ｓ−２’）ＢＮＡ、（Ｈ）メチレン−アミノ（４’−ＣＨ２−Ｎ（Ｒ）−２’）ＢＮＡ、（Ｉ）メチル炭素環式（４’−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）−２’）ＢＮＡ、および（Ｊ）プロピレン炭素環式（４’−（ＣＨ２）３−２’）ＢＮＡが含まれるが、これらに限定されない。
【化１】
2019141075.tif 000002
式中、Ｂｘは、塩基部分であり、Ｒは、独立して、Ｈ、保護基、またはＣ１−Ｃ１２アルキルである。
【０１９６】
ある特定の実施形態において、式Ｉ
【化２】
2019141075.tif 000003
を有する二環式ヌクレオシドが提供され、式中、
Ｂｘは、複素環式塩基部分であり、
−Ｑａ−Ｑｂ−Ｑｃ−は、−ＣＨ２−Ｎ（Ｒｃ）−ＣＨ２−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒｃ）−ＣＨ２−、−ＣＨ２−Ｏ−Ｎ（Ｒｃ）−、−ＣＨ２−Ｎ（Ｒｃ）−Ｏ−、または−Ｎ（Ｒｃ）−Ｏ−ＣＨ２であり、
Ｒｃは、Ｃ１−Ｃ１２アルキルまたはアミノ保護基であり、
ＴａおよびＴｂはそれぞれ、独立して、Ｈ、ヒドロキシル保護基、複合基、反応リン基、リン部分、または支持媒体への共有結合である。
【０１９７】
ある特定の実施形態では、式ＩＩ
【化３】
2019141075.tif 000004
を有する二環式ヌクレオシドが提供され、式中、
Ｂｘは、複素環式塩基部分であり、
ＴａおよびＴｂはそれぞれ、独立して、Ｈ、ヒドロキシル保護基、複合基、反応リン基、リン部分、または支持媒体への共有結合であり、
Ｚａは、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換Ｃ２−Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２−Ｃ６アルキニル、アシル、置換アシル、置換アミド、チオール、または置換チオである。
【０１９８】
一実施形態において、置換された基のそれぞれは、独立して、ハロゲン、オキソ、ヒドロキシル、ＯＪｃ、ＮＪｃＪｄ、ＳＪｃ、Ｎ３、ＯＣ（＝Ｘ）Ｊｃ、およびＮＪｅＣ（＝Ｘ）ＮＪｃＪｄから独立して選択される置換基で一置換または多置換され、式中、各Ｊｃ、ＪｄおよびＪｅは、独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、または置換Ｃ１−Ｃ６アルキルであり、Ｘは、ＯまたはＮＪｃである。
【０１９９】
ある特定の実施形態において、式ＩＩＩ
【化４】
2019141075.tif 000005
を有する二環式ヌクレオシドが提供され、式中、
Ｂｘは、複素環式塩基部分であり、
ＴａおよびＴｂはそれぞれ、独立して、Ｈ、ヒドロキシル保護基、複合基、反応リン基、リン部分、または支持媒体への共有結合であり、
Ｚｂは、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換Ｃ２−Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２−Ｃ６アルキニル、または置換アシル（Ｃ（＝Ｏ）−）である。
【０２００】
ある特定の実施形態において、式ＩＶ
【化５】
2019141075.tif 000006
を有する二環式ヌクレオシドが提供され、式中、
Ｂｘは、複素環式塩基部分であり、
ＴａおよびＴｂはそれぞれ、独立して、Ｈ、ヒドロキシル保護基、複合基、反応リン基、リン部分、または支持媒体への共有結合であり、
Ｒｄは、Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、または置換Ｃ２−Ｃ６アルキニルであり、
各ｑａ、ｑｂ、ｑｃ、およびｑｄは、独立して、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、もしくは置換Ｃ２−Ｃ６アルキニル、Ｃ１−Ｃ６アルコキシル、置換Ｃ１−Ｃ６アルコキシル、アシル、置換アシル、Ｃ１−Ｃ６アミノアルキル、または置換Ｃ１−Ｃ６アミノアルキルである。
【０２０１】
ある特定の実施形態において、式Ｖ
【化６】
2019141075.tif 000007
を有する二環式ヌクレオシドが提供され、式中、
Ｂｘは、複素環式塩基部分であり、
ＴａおよびＴｂはそれぞれ、独立して、Ｈ、ヒドロキシル保護基、複合基、反応リン基、リン部分、または支持媒体への共有結合であり、
ｑａ、ｑｂ、ｑｅ、およびｑｆはそれぞれ、独立して、水素、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、置換Ｃ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、置換Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、Ｃ２−Ｃ１２アルキニル、置換Ｃ２−Ｃ１２アルキニル、Ｃ１−Ｃ１２アルコキシ、置換Ｃ１−Ｃ１２アルコキシ、ＯＪｊ、ＳＪｊ、ＳＯＪｊ、ＳＯ２Ｊｊ、ＮＪｊＪｋ、Ｎ３、ＣＮ、Ｃ（＝Ｏ）ＯＪｊ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＪｊＪｋ、Ｃ（＝Ｏ）Ｊｊ、Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）ＮＪｊＪｋ、Ｎ（Ｈ）Ｃ（＝ＮＨ）ＮＪｊＪｋ、Ｎ（Ｈ）Ｃ（＝Ｏ）ＮＪｊＪｋ、またはＮ（Ｈ）Ｃ（＝Ｓ）ＮＪｊＪｋであるか、
あるいはｑｅおよびｑｆは一緒に、＝Ｃ（ｑｇ）（ｑｈ）であり、
ｑｇおよびｑｈはそれぞれ、独立して、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、または置換Ｃ１−Ｃ１２アルキルである。
メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）ＢＮＡ単量体アデニン、シトシン、グアニン、５−メチルシトシン、チミン、およびウラシルの合成および調製が、それらのオリゴマー化、および核酸認識特性とともに記載されている（例えば、Ｋｏｓｈｋｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，１９９８，５４，３６０７−３６３０を参照されたい）。ＢＮＡおよびそれらの調製もまた、国際公開第９８／３９３５２号および同第９９／１４２２６号に記載される。
【０２０２】
メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）ＢＮＡおよび２’−チオ−ＢＮＡの類似体もまた、調製されている（Ｋｕｍａｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．，１９９８，８，２２１９−２２２２）。核酸ポリメラーゼのための基質としてオリゴデオキシリボヌクレオチド二重鎖を含む、固定されたヌクレオシド類似体の調製もまた、記載されている（Ｗｅｎｇｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，国際公開第９９／１４２２６号）。さらに、新規の立体配座的に制限された高親和性オリゴヌクレオチド類似体である２’−アミノ−ＢＮＡの合成が、当該技術分野において記載されている（Ｓｉｎｇｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，１９９８，６３，１００３５−１００３９）。加えて、２’−アミノ−および２’−メチルアミノ−ＢＮＡが調製されており、相補的ＲＮＡおよびＤＮＡ鎖によるそれらの二重鎖の熱安定性が以前に報告されている。
【０２０３】
ある特定の実施形態では、式ＶＩ
【化７】
2019141075.tif 000008
を有する二環式ヌクレオシドが提供され、式中、
Ｂｘは、複素環式塩基部分であり、
ＴａおよびＴｂはそれぞれ、独立して、Ｈ、ヒドロキシル保護基、複合基、反応リン基、リン部分、または支持媒体への共有結合であり、
各ｑｉ、ｑｊ、ｑｋ、およびｑｌは、独立して、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、置換Ｃ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、置換Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、Ｃ２−Ｃ１２アルキニル、置換Ｃ２−Ｃ１２アルキニル、Ｃ１−Ｃ１２アルコキシル、置換Ｃ１−Ｃ１２アルコキシル、ＯＪｊ、ＳＪｊ、ＳＯＪｊ、ＳＯ２Ｊｊ、ＮＪｊＪｋ、Ｎ３、ＣＮ、Ｃ（＝Ｏ）ＯＪｊ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＪｊＪｋ、Ｃ（＝Ｏ）Ｊｊ、Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）ＮＪｊＪｋ、Ｎ（Ｈ）Ｃ（＝ＮＨ）ＮＪｊＪｋ、Ｎ（Ｈ）Ｃ（＝Ｏ）ＮＪｊＪｋ、またはＮ（Ｈ）Ｃ（＝Ｓ）ＮＪｊＪｋであり、
ｑｉおよびｑｊまたはｑｌおよびｑｋは一緒に、＝Ｃ（ｑｇ）（ｑｈ）であり、式中、ｑｇおよびｑｈはそれぞれ、独立して、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、または置換Ｃ１−Ｃ１２アルキルである。
【０２０４】
４’−（ＣＨ２）３−２’架橋およびアルケニル類似体架橋４’−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ２−２’を有する１つの炭素環式二環式ヌクレオシドが記載されている（Ｆｒｉｅｒ  ｅｔ
ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９９７，２５（２２），４４２９−４４４３およびＡｌｂａｅｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２００６，７１，７７３１−７７４０）。また、炭素環式二環式ヌクレオシドの合成および調製が、それらのオリゴマー化ならびに生化学的研究とともに、記載されている（Ｓｒｉｖａｓｔａｖａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，２００７，１２９（２６），８３６２−８３７９）。
【０２０５】
本明細書に使用される際、「４’−２’二環式ヌクレオシド」または「４’〜２’二環式ヌクレオシド」とは、糖環の２’炭素原子と４’炭素原子とを接続するフラノース環の２個の炭素原子を接続する架橋を含むフラノース環を含む二環式ヌクレオシドを指す。
【０２０６】
本明細書に使用される際、「単環式ヌクレオシド」とは、二環式糖部分ではない修飾された糖部分を含むヌクレオシドを指す。ある特定の実施形態において、ヌクレオシドの糖部分または糖部分類似体は、任意の位置において修飾または置換され得る。
【０２０７】
本明細書に使用される際、「２’修飾糖」とは、２’位において修飾されたフラノシル糖を意味する。ある特定の実施形態において、そのような修飾は、置換および非置換アルコキシ、置換および非置換チオアルキル、置換および非置換アミノアルキル、置換および非置換アルキル、置換および非置換アリル、ならびに置換および非置換アルキニルを含むが、これらに限定されないハロゲン化物から選択される置換基を含む。ある特定の実施形態において、２’修飾は、Ｏ［（ＣＨ２）ｎＯ］ｍＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）ｎＮＨ２、Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）ｎＦ、Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＮＨ２、ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｈ）ＣＨ３、およびＯ（ＣＨ２）ｎＯＮ［（ＣＨ２）ｎＣＨ３］２を含むが、これらに限定されない置換基から選択され、式中、ｎおよびｍは、１〜約１０である。他の２’置換基もまた、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、置換アルキル、アルケニル、アルキニル、アルカリル、アラルキル、Ｏ−アルカリル、もしくはＯ−アラルキル、ＳＨ、ＳＣＨ３、ＯＣＮ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＮ、Ｆ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＳＯＣＨ３、ＳＯ２ＣＨ３、ＯＮＯ２、ＮＯ２、Ｎ３、ＮＨ２、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルカリル、アミノアルキルアミノ、ポリアルキルアミノ、置換シリル、ＲＮＡ切断基、レポーター基、インターカレーター、薬物動態特性を改善するための基、またはアンチセンス化合物の薬力学的特性を改善するための基、および類似した特性を有する他の置換基から選択することができる。ある特定の実施形態において、修飾ヌクレオシドは、２’−ＭＯＥ側鎖を含む（Ｂａｋｅｒ
ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１９９７，２７２，１１９４４−１２０００）。そのような２’−ＭＯＥ置換は、非修飾ヌクレオシド、ならびに２’−Ｏ−メチル、Ｏ−プロピル、およびＯ−アミノプロピル等の他の修飾ヌクレオシドと比較して、改善された結合親和性を有することが記載されている。２’−ＭＯＥ置換基を有するオリゴヌクレオチドもまた、インビボでの使用に有望な特徴を有する、遺伝子発現のアンチセンス阻害物質であることが示されている（Ｍａｒｔｉｎ，Ｈｅｌｖ．Ｃｈｉｍ．Ａｃｔａ，１９９５，７８，４８６−５０４、Ａｌｔｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｈｉｍｉａ，１９９６，５０，１６８−１７６、Ａｌｔｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓ．，１９９６，２４，６３０−６３７、およびＡｌｔｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ  Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ，１９９７，１６，９１７−９２６）。
【０２０８】
本明細書に使用される際、「修飾されたテトラヒドロピランヌクレオシド」または「修飾されたＴＨＰヌクレオシド」とは、通常のヌクレオシドにおけるペントフラノシル残基の代わりに置換された６員テトラヒドロピラン「糖」を有するヌクレオシドを意味する（糖代替物）。修飾されたＴＨＰヌクレオシドは、当該技術分野でヘキシトール核酸（ＨＮＡ）、アニトール（ａｎｉｔｏｌ）核酸（ＡＮＡ）、マンニトール核酸（ｍａｎｉｔｏｌ）（ＭＮＡ）（Ｌｅｕｍａｎｎ, Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２００２，１０：８４１−８５４を参照されたい）、フルオロＨＮＡ（Ｆ−ＨＮＡ）と称されるもの、または式ＶＩＩ：
【化８】
2019141075.tif 000009
を有する化合物が含まれるが、これらに限定されず、式中、式ＶＩＩの当該少なくとも１つのテトラヒドロピランヌクレオシド類似体のそれぞれについて、独立して、
【０２０９】
Ｂｘは、複素環式塩基部分であり、
ＴａおよびＴｂはそれぞれ、独立して、テトラヒドロピランヌクレオシド類似体をアンチセンス化合物に結合するヌクレオシド間結合基であるか、あるいはＴａおよびＴｂのうちの１つが、テトラヒドロピランヌクレオシド類似体とアンチセンス化合物とを結合するヌクレオシド間結合基であり、ＴａおよびＴｂのうちのもう１つが、Ｈ、ヒドロキシル保護基、結合複合基、または５’もしくは３’末端基であり、
ｑ１、ｑ２、ｑ３、ｑ４、ｑ５、ｑ６、およびｑ７はそれぞれ、独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、または置換Ｃ２−Ｃ６アルキニルであり、Ｒ１およびＲ２のそれぞれは、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、置換または非置換アルコキシ、ＮＪ１Ｊ２、ＳＪ１、Ｎ３、ＯＣ（＝Ｘ）Ｊ１、ＯＣ（＝Ｘ）ＮＪ１Ｊ２、ＮＪ３Ｃ（＝Ｘ）ＮＪ１Ｊ２、およびＣＮから選択され、式中、Ｘは、Ｏ、Ｓ、またはＮＪ１であり、各Ｊ１、Ｊ２、およびＪ３は、独立して、ＨまたはＣ１−Ｃ６アルキルである。
【０２１０】
ある特定の実施形態において、式ＶＩＩの修飾されたＴＨＰヌクレオシドが提供され、式中、ｑ１、ｑ２、ｑ３、ｑ４、ｑ５、ｑ６、およびｑ７は、それぞれ、Ｈである。ある特定の実施形態において、ｑ１、ｑ２、ｑ３、ｑ４、ｑ５、ｑ６、およびｑ７のうちの少
なくとも１つは、Ｈ以外である。ある特定の実施形態において、ｑ１、ｑ２、ｑ３、ｑ４、ｑ５、ｑ６、およびｑ７のうちの少なくとも１つは、メチルである。ある特定の実施形態において、式ＶＩＩのＴＨＰヌクレオシドが提供され、式中、Ｒ１およびＲ２は、フルオロである。ある特定の実施形態において、Ｒ１はフルオロであり、Ｒ２はＨである、Ｒ１はメトキシであり、Ｒ２は水素である、およびＲ１はＨであり、Ｒ２はメトキシエトキシである。
【０２１１】
本明細書に使用される際、「２’修飾」または「２’置換」とは、２’位において、ＨまたはＯＨ以外の置換基を含む糖を含むヌクレオシドを指す。２’修飾ヌクレオシドは、その中で糖環の２個の炭素原子を結合する架橋が２’炭素および糖環の別の炭素を結合する、二環式ヌクレオシド、ならびにアリル、アミノ、アジド、チオ、Ｏ−アリル、Ｏ−Ｃ１−Ｃ１０アルキル、−ＯＣＦ３、Ｏ−（ＣＨ２）２−Ｏ−ＣＨ３、２’−Ｏ（ＣＨ２）２ＳＣＨ３、Ｏ−（ＣＨ２）２−Ｏ−Ｎ（Ｒｍ）（Ｒｎ）、またはＯ−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒｍ）（Ｒｎ）等の非架橋２’置換基を有するヌクレオシドを含むが、これらに限定されず、式中、各ＲｍおよびＲｎは、独立して、Ｈ、または置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ１０アルキルである。２’修飾ヌクレオシドは、例えば、糖の他の位置におけるおよび／または核酸塩基における、他の修飾をさらに含んでもよい。
【０２１２】
本明細書に使用される際、「２’−Ｆ」とは、２’位においてフルオロ基を含む糖を含むヌクレオシドを指す。
【０２１３】
本明細書に使用される際、「２’−ＯＭｅ」または「２’−ＯＣＨ３」または「２’−Ｏ−メチル」はそれぞれ、糖環の２’位において−ＯＣＨ３基を含む糖を含むヌクレオシドを指す。
【０２１４】
本明細書に使用される際、「ＭＯＥ」または「２’−ＭＯＥ」または「２’−ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３」または「２’−Ｏ−メトキシエチル」はそれぞれ、糖環の２’位において−ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３基を含む糖を含むヌクレオシドを指す。
【０２１５】
本明細書に使用される際、「オリゴヌクレオチド」とは、複数の結合したヌクレオシドを含む化合物を指す。ある特定の実施形態では、複数のヌクレオシドのうちの１つ以上が修飾される。ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、１つ以上のリボヌクレオシド（ＲＮＡ）および／またはデオキシリボヌクレオシド（ＤＮＡ）を含む。
【０２１６】
アンチセンス化合物への組み込み用にヌクレオシドを修飾するために使用され得る、多くの他の二環および三環糖代用環系も、当該技術分野において既知である（例えば、総説：Ｌｅｕｍａｎｎ，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２００２，１０，８４１−８５４を参照されたい）。
そのような環系は、活性を強化するために、種々の追加の置換を受け得る。    
【０２１７】
修飾糖の調製方法は、当業者に周知である。
【０２１８】
修飾糖部分を有するヌクレオチドにおいて、核酸塩基部分（天然、修飾、またはそれらの組み合わせ）は、適切な核酸標的とのハイブリダイゼーションのために維持される。
【０２１９】
ある特定の実施形態において、アンチセンス化合物は、修飾糖部分を有する、１つ以上のヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、修飾糖部分は、２’−ＭＯＥである。ある特定の実施形態において、２’−ＭＯＥ修飾ヌクレオシドは、ギャップマーモチーフで配置される。ある特定の実施形態において、修飾糖部分は、（４’−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ−２’）架橋基を有する二環式ヌクレオシドである。ある特定の実施形態において
、（４’−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ−２’）修飾ヌクレオシドは、ギャップマーモチーフのウイング全体に配置される。
【０２２０】
組成物および薬学的組成物を製剤化するための方法
アンチセンスオリゴヌクレオチドは、薬学的組成物または製剤の調製のために、薬学的に許容される活性または不活性物質と混合され得る。組成物および薬学的組成物の製剤化のための方法は、限定されないが、投与経路、疾患の程度、投与される用量を含む、いくつかの基準に依存する。
【０２２１】
Ｃ９ＯＲＦ７２核酸を標的とするアンチセンス化合物は、アンチセンス化合物と、好適な薬学的に許容される希釈剤または担体とを組み合わせることによって、薬学的組成物において用いることができる。薬学的に許容される希釈剤には、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）が含まれる。ＰＢＳは、非経口で送達される組成物における使用に好適な希釈剤である。したがって、一実施形態では、Ｃ９ＯＲＦ７２核酸を標的とするアンチセンス化合物と、薬学的に許容される希釈剤とを含む薬学的組成物が、本明細書に記載の方法に利用される。ある特定の実施形態において、薬学的に許容される希釈剤は、ＰＢＳである。ある特定の実施形態において、アンチセンス化合物は、アンチセンスオリゴヌクレオチドである。
【０２２２】
アンチセンス化合物を含む薬学的組成物は、任意の薬学的に許容される塩、エステル、もしくはそのようなエステルの塩、またはヒトを含む動物に投与した際に、生物学的に活性な代謝物もしくはその残基を（直接的または間接的に）提供することができる任意の他のオリゴヌクレオチドを包含する。したがって、例えば、本開示はまた、アンチセンス化合物の薬学的に許容される塩、プロドラッグ、そのようなプロドラッグの薬学的に許容される塩、および他の生物学的同等物に向けられる。好適な薬学的に許容される塩には、ナトリウムおよびカリウムの塩が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２２３】
プロドラッグは、アンチセンス化合物の一端または両端に追加のヌクレオシドの組み込みを含み得、これが、身体内で内因性ヌクレアーゼによって切断されて、活性なアンチセンス化合物を形成する。
【０２２４】
複合体化したアンチセンス化合物
アンチセンス化合物は、結果として得られるアンチセンスオリゴヌクレオチドの活性、細胞分布、または細胞取り込みを強化する、１つ以上の部分または複合体に共有結合されてもよい。典型的な複合基には、コレステロール部分および脂質部分が含まれる。追加の複合基には、炭水化物、リン脂質、ビオチン、フェナジン、葉酸、フェナントリジン、アントラキノン、アクリジン、フルオレセイン、ローダミン、クマリン、および色素が含まれる。
【０２２５】
アンチセンス化合物はまた、例えば、ヌクレアーゼ安定性等の特性を強化するために、一般的にはアンチセンス化合物の一端または両端に付着する、１つ以上の安定化基を有するように修飾することができる。安定化基にはキャップ構造が含まれる。これらの末端修飾は、末端核酸を有するアンチセンス化合物をエクソヌクレアーゼ分解から保護し、細胞内での送達および／または局在化に役立ち得る。キャップは、５’末端（５’キャップ）もしくは３’末端（３’キャップ）に存在し得るか、または両方の末端に存在し得る。キャップ構造は、当技術分野において周知であり、例えば、逆位デオキシ脱塩基キャップが含まれる。ヌクレアーゼ安定性を付与するためにアンチセンス化合物の一端または両端をキャップするのに使用することができるさらなる３’および５’安定化基には、国際公開第０３／００４６０２号（２００３年１月１６日公開）に開示されるものが含まれる。
【０２２６】
細胞培養およびアンチセンス化合物処理
Ｃ９ＯＲＦ７２核酸のレベル、活性、または発現に対するアンチセンス化合物の効果は、多様な細胞種において、インビトロで試験することができる。そのような分析に使用される細胞種は、市販の供給業者（例えば、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ
Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｍａｎａｓｓｕｓ，ＶＡ、Ｚｅｎ−Ｂｉｏ，Ｉｎｃ．，Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｔｒｉａｎｇｌｅ  Ｐａｒｋ，ＮＣ、Ｃｌｏｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ，ＭＤ）から入手可能であり、供給業者の説明書に従って、市販入手可能な試薬（例えば、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）を使用して培養される。例示的な細胞種としては、ＨｅｐＧ２細胞、Ｈｅｐ３Ｂ細胞、および初代肝細胞が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２２７】
アンチセンスオリゴヌクレオチドのインビトロ試験
アンチセンスオリゴヌクレオチドでの細胞の処理のための方法が本明細書に記載され、これは、他のアンチセンス化合物での処理のために適宜修正することができる。
【０２２８】
一般に、細胞が培養液中おおよそ６０〜８０％の密集度に達したときに、細胞をアンチセンスオリゴヌクレオチドで処理する。
【０２２９】
アンチセンスオリゴヌクレオチドを培養細胞中に導入するのに一般的に使用される１つの試薬には、カチオン性脂質トランスフェクション試薬ＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）が挙げられる。アンチセンスオリゴヌクレオチドを、ＯＰＴＩ−ＭＥＭ  １（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）中、ＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮと混合して、アンチセンスオリゴヌクレオチドの所望の最終濃度、および典型的には１００ｎＭアンチセンスオリゴヌクレオチド当たり２〜１２μｇ／ｍＬの範囲に及ぶＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ濃度を達成する。
【０２３０】
アンチセンスオリゴヌクレオチドを培養細胞に導入するために使用される別の試薬には、ＬＩＰＯＦＥＣＴＡＭＩＮＥ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）が挙げられる。アンチセンスオリゴヌクレオチドを、ＯＰＴＩ−ＭＥＭ  １低濃度血清培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）中、ＬＩＰＯＦＥＣＴＡＭＩＮＥと混合して、アンチセンスオリゴヌクレオチドの所望の最終濃度、および典型的には１００ｎＭアンチセンスオリゴヌクレオチド当たり２〜１２μｇ／ｍＬの範囲に及ぶＬＩＰＯＦＥＣＴＡＭＩＮＥ濃度を達成する。
【０２３１】
アンチセンスオリゴヌクレオチドを培養細胞に導入するために使用される別の技術には、エレクトロポレーションが挙げられる。
【０２３２】
細胞を、日常的な方法によってアンチセンスオリゴヌクレオチドで処理する。典型的には、アンチセンスオリゴヌクレオチド処理の１６〜２４時間後に細胞を採取し、この時点で、標的核酸のＲＮＡまたはタンパク質レベルを、当該技術分野で既知および本明細書に記載される方法によって、測定する。一般に、処理を複数の繰り返しで実施する場合、データは、その繰り返し処理の平均として提示される。
【０２３３】
使用されるアンチセンスオリゴヌクレオチドの濃度は、細胞系ごとに変動する。特定の細胞系に最適なアンチセンスオリゴヌクレオチド濃度を決定する方法は、当該技術分野で周知である。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、典型的に、ＬＩＰＯＦＥＣＴＡＭＩＮＥを用いてトランスフェクトする場合、１ｎＭ〜３００ｎＭの範囲の濃度で使用される。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、エレクトロポレーションを用いてトランスフェクトする場合、６２５〜２０，０００ｎＭの範囲のより高い濃度で使用される。
【０２３４】
ＲＮＡ単離
ＲＮＡ分析は、全細胞ＲＮＡまたはポリ（Ａ）＋ｍＲＮＡで実施することができる。ＲＮＡ単離の方法は、当該技術分野において周知である。ＲＮＡは、当該技術分野で周知の方法を使用して、例えば、製造業者の推奨プロトコルに従って、ＴＲＩＺＯＬ試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）を用いて調製される。
【０２３５】
標的レベルまたは発現の阻害の分析
Ｃ９ＯＲＦ７２核酸のレベルまたは発現の阻害は、当該技術分野で既知の多様な手段でアッセイすることができる。例えば、標的核酸レベルは、例えば、ノーザンブロット分析、競合的ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）、または定量的リアルタイムＰＣＲによって、定量化することができる。ＲＮＡ分析は、全細胞ＲＮＡまたはポリ（Ａ）＋ｍＲＮＡで実施することができる。ＲＮＡ単離の方法は、当該技術分野において周知である。ノーザンブロット分析もまた、当該技術分野では日常的である。定量的リアルタイムＰＣＲは、簡便には、市販入手可能なＡＢＩ  ＰＲＩＳＭ  ７６００、７７００、または７９００配列検出システム（ＰＥ−Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，ＣＡより入手可能）を使用して、製造業者の説明書に従って使用して達成することができる。
【０２３６】
標的ＲＮＡレベルの定量的リアルタイムＰＣＲ分析
標的ＲＮＡレベルの定量化は、ＡＢＩ  ＰＲＩＳＭ７６００、７７００、または７９００配列検出システム（ＰＥ−Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，ＣＡ）を製造業者の説明書に従って使用する、定量的リアルタイムＰＣＲによって達成することができる。定量的リアルタイムＰＣＲの方法は、当該技術分野において周知である。
【０２３７】
リアルタイムＰＣＲに先立って、単離したＲＮＡを逆転写酵素（ＲＴ）反応に供し、相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）を生成した後に、これをリアルタイムＰＣＲ増幅の基質として使用する。ＲＴ反応およびリアルタイムＰＣＲ反応は、同じ試料ウェルにおいて逐次的にに実施する。ＲＴおよびリアルタイムＰＣＲの試薬は、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）より入手される。ＲＴリアルタイムＰＣＲ反応は、当業者に周知の方法によって行う。
【０２３８】
リアルタイムＰＣＲによって得られる遺伝子（またはＲＮＡ）標的の量は、シクロフィリンＡ等、その発現が一定である遺伝子の発現レベルを使用して、またはＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｉｎｃ．Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）を用いて全ＲＮＡを定量化することによって、正規化される。シクロフィリンＡの発現は、標的と同時に実施するリアルタイムＰＣＲによって、多重化することによって、または別々に定量化される。全ＲＮＡは、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ  ＲＮＡ定量試薬（Ｉｎｖｅｔｒｏｇｅｎ，Ｉｎｃ．Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）を用いて定量化される。ＲＩＢＯＧＲＥＥＮによるＲＮＡ定量化の方法は、Ｊｏｎｅｓ，Ｌ．Ｊ．ら（Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９９８，２６５，３６８−３７４）に教示されている。ＣＹＴＯＦＬＵＯＲ  ４０００機器（ＰＥ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ蛍光を測定する。
【０２３９】
プローブおよびプライマーは、Ｃ９ＯＲＦ７２核酸とハイブリダイズするように設計される。リアルタイムＰＣＲのプローブおよびプライマーを設計する方法は、当該技術分野で周知であり、ＰＲＩＭＥＲ  ＥＸＰＲＥＳＳソフトウェア（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，ＣＡ）等のソフトウェアの使用を含み得る。
【０２４０】
タンパク質レベルの分析
Ｃ９ＯＲＦ７２核酸のアンチセンス阻害は、Ｃ９ＯＲＦ７２タンパク質レベルを測定することによって評価することができる。Ｃ９ＯＲＦ７２のタンパク質レベルは、免疫沈降、ウエスタンブロット分析（免疫ブロット法）、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、定量的タンパク質アッセイ、タンパク質活性アッセイ（例えば、カスパーゼ活性アッセイ）、免疫組織化学、免疫細胞化学、または蛍光活性化細胞分類法（ＦＡＣＳ）といった、当該技術分野で周知の多様な手段で評価または定量化することができる。標的を対象とする抗体は、抗体のＭＳＲＳカタログ（Ａｅｒｉｅ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ，ＭＩ）等の多様な供給源から特定および入手することができるか、または当該技術分野で周知の従来的なモノクローナルもしくはポリクローナル抗体生成方法によって調製することができる。マウス、ラット、サル、およびヒトＣ９ＯＲＦ７２の検出に有用な抗体は、市販入手可能である。
【０２４１】
アンチセンス化合物のインビボ試験
アンチセンス化合物、例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチドを、それらがＣ９ＯＲＦ７２の発現を阻害し、表現型の変化、例えば運動機能および呼吸の改善をもたらす能力を評価するために、動物において試験する。ある特定の実施形態において、運動機能は、動物においてロータロッド、握力、棒登り、オープンフィールド行動、バランスビーム、後肢足跡試験によって測定される。ある特定の実施形態において、呼吸は、動物において全身プレチスモグラフ、侵襲的抵抗（ｉｎｖａｓｉｖｅ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ）、およびコンプライアンス測定によって、測定される。試験は、正常な動物において、または実験的な疾患モデルにおいて実施され得る。動物への投与のために、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、リン酸緩衝食塩水等の薬学的に許容される希釈剤中に製剤化される。投与は、腹腔内、静脈内、および皮下といった非経口の投与経路を含む。アンチセンスオリゴヌクレオチドの投薬量および投与頻度の計算は、当業者の能力の範囲内であり、投与経路および動物の体重といった要因に依存する。アンチセンスオリゴヌクレオチドでの処理期間の後、ＲＮＡを、ＣＮＳ組織またはＣＳＦから単離し、Ｃ９ＯＲＦ７２核酸発現における変化を測定する。
【０２４２】
Ｃ９ＯＲＦ７２を標的とすること
本明細書に記載されるアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＲＮＡプロセシングの任意の段階においてＣ９ＯＲＦ７２核酸とハイブリダイズし得る。例えば、プレ−ｍＲＮＡまたは成熟ｍＲＮＡに相補的なアンチセンスオリゴヌクレオチドが、本明細書に記載される。さらに、本明細書に記載されるアンチセンスオリゴヌクレオチドは、Ｃ９ＯＲＦ７２核酸の任意の要素とハイブリダイズし得る。例えば、Ｃ９ＯＲＦ７２核酸のエクソン、イントロン、５’ＵＴＲ、３’ＵＴＲ、反復領域、ヘキサヌクレオチド反復伸長、スプライスジャンクション、エクソン：エクソンスプライスジャンクション、エクソンスプライシングサイレンサー（ＥＳＳ）、エクソンスプライシングエンハンサー（ＥＳＥ）、エクソン１ａ、エクソン１ｂ、エクソン１ｃ、エクソン１ｄ、エクソン１ｅ、エクソン２、エクソン３、エクソン４、エクソン５、エクソン６、エクソン７、エクソン８、エクソン９、エクソン１０、エクソン１１、イントロン１、イントロン２、イントロン３、イントロン４、イントロン５、イントロン６、イントロン７、イントロン８、イントロン９、またはイントロン１０に相補的なアンチセンスオリゴヌクレオチドが、本明細書に記載される。
【０２４３】
ある特定の実施形態において、本明細書に記載されるアンチセンスオリゴヌクレオチドは、Ｃ９ＯＲＦ７２のすべての変異体とハイブリダイズする。ある特定の実施形態において、本明細書に記載されるアンチセンスオリゴヌクレオチドは、Ｃ９ＯＲＦ７２のある特定の変異体と選択的にハイブリダイズする。ある特定の実施形態において、本明細書に記載されるアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ヘキサヌクレオチド反復伸長を含有するＣ９ＯＲＦ７２の変異体と選択的にハイブリダイズする。ある特定の実施形態において、ヘ
キサヌクレオチド反復伸長を含有するＣ９ＯＲＦ７２のそのような変異体には、配列番号１〜３および６〜１０が含まれる。ある特定の実施形態において、そのようなヘキサヌクレオチド反復伸長は、ＧＧＧＧＣＣ、ＧＧＧＧＧＧ、ＧＧＧＧＧＣ、またはＧＧＧＧＣＧのいずれかの少なくとも３０回の反復を含む。
【０２４４】
ある特定の実施形態において、本明細書に記載されるアンチセンスオリゴヌクレオチドは、Ｃ９ＯＲＦ７２のすべての変異体の発現を阻害する。ある特定の実施形態において、本明細書に記載されるアンチセンスオリゴヌクレオチドは、Ｃ９ＯＲＦ７２のすべての変異体の発現を同等に阻害する。ある特定の実施形態において、本明細書に記載されるアンチセンスオリゴヌクレオチドは、Ｃ９ＯＲＦ７２のある特定の変異体の発現を選択的に阻害する。ある特定の実施形態において、本明細書に記載されるアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ヘキサヌクレオチド反復伸長を含有するＣ９ＯＲＦ７２の変異体の発現を選択的に阻害する。ある特定の実施形態において、ヘキサヌクレオチド反復伸長を含有するＣ９ＯＲＦ７２のそのような変異体には、配列番号１〜３および６〜１０が含まれる。ある特定の実施形態において、そのようなヘキサヌクレオチド反復伸長は、ＧＧＧＧＣＣ、ＧＧＧＧＧＧ、ＧＧＧＧＧＣ、またはＧＧＧＧＣＧのいずれかの少なくとも３０回の反復を含む。ある特定の実施形態において、ヘキサヌクレオチド反復伸長は、核内フォーカスを形成する。ある特定の実施形態において、本明細書に記載されるアンチセンスオリゴヌクレオチドは、核内フォーカスを低減するのに有用である。核内フォーカスは、フォーカスを有する細胞の割合（％）、ならびに細胞１つ当たりのフォーカスの数に関して、低減され得る。
【０２４５】
反復伸長を対象とした先行研究に基づいて、２つの理由から、ヘキサヌクレオチド反復伸長の外側のＣ９ＯＲＦ７２を標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドが、Ｃ９ＯＲＦ７２の発現の阻害に成功するかどうかを予測することは不可能である。第１に、Ｃ９ＯＲＦ７２反復伸長は、イントロン内に位置し、フォーカス内のＲＮＡが、反復のみを含有するか、または隣接するイントロン配列も同様に含有するかについてはわからない。例えば、ＺＮＦ9遺伝子のイントロン１におけるＣＣＴＧ伸長の突然変異によって引き起こさ
れる疾患である筋強直性ジストロフィー２型（ＤＭ２）についての先行研究は、大きなＤＭ２伸長が、アレル特異的なプレ−ｍＲＮＡのスプライシング、転写産物の核外輸送、または定常状態のｍＲＮＡもしくはタンパク質レベルを防止しなかったことを示した。この研究は、疾患と関連して見出されたリボ核封入体は、ＣＣＵＧ伸長では高まるが、隣接するイントロン配列では高まらないことをさらに示した。これらのデータは、ＤＭ２突然変異の下流分子効果が、ＣＣＵＧ反復領域単独の集積によって引き起こされ得ることを示唆する。したがって、この研究は、ＣＣＵＧ反復伸長を単独で標的とすることにより、疾患の緩和をもたらすであろうことを暗示し、これは、隣接する配列、特に反復伸長の下流の領域を標的とすることは、リボ核封入体の形成に影響を及ぼすことがないであろうためである（Ｍａｒｇｏｌｉｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｈｕｍ．Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔ．，２００６，１５：１８０８−１８１５）。第２に、反復を含有するＣ９ＯＲＦ７２のイントロン１が切除され、フォーカスに集積する速度はわかっていない。したがって、プレ−ｍＲＮＡを標的とすることが、反復ＲＮＡおよびフォーカスの排除をもたらすかどうかを予測することは不可能である。
【０２４６】
Ｃ９ＯＦＦ７２の特徴
本明細書に記載されるアンチセンスオリゴヌクレオチドは、Ｃ９ＯＲＦ７２遺伝子の任意の要素内においてプロセシングの任意の段階で任意のＣ９ＯＲＦ７２変異体とハイブリダイズし得る。例えば、本明細書に記載されるアンチセンスオリゴヌクレオチドは、エクソン、イントロン、５’ＵＴＲ、３’ＵＴＲ、反復領域、ヘキサヌクレオチド反復伸長、スプライスジャンクション、エクソン：エクソンスプライスジャンクション、エクソンスプライシングサイレンサー（ＥＳＳ）、エクソンスプライシングエンハンサー（ＥＳＥ）
、エクソン１ａ、エクソン１ｂ、エクソン１ｃ、エクソン１ｄ、エクソン１ｅ、エクソン２、エクソン３、エクソン４、エクソン５、エクソン６、エクソン７、エクソン８、エクソン９、エクソン１０、エクソン１１、イントロン１、イントロン２、イントロン３、イントロン４、イントロン５、イントロン６、イントロン７、イントロン８、イントロン９、またはイントロン１０とハイブリダイズし得る。例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、以下に記載される種々のＣ９ＯＲＦ７２変異体に関して、以下の表１〜５に特徴付けされるエクソンのいずれかを標的とし得る。本明細書に記載されるアンチセンスオリゴヌクレオチドはまた、以下に特徴付けされない変異体を標的としてもよく、そのような変異体は、ＧＥＮＢＡＮＫにおいて特徴付けされている。さらに、本明細書に記載されるアンチセンスオリゴヌクレオチドはまた、エクソン以外の要素を標的としてもよく、そのような要素は、ＧＥＮＢＡＮＫにおいて特徴付けされている。
【表１】
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【表２】
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【表３】
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【表４】
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【表５】
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【０２４７】
ある特定の適応症
ある特定の実施形態において、１つ以上の本明細書に記載される薬学的組成物を投与することを含む、個体を治療する方法が、本明細書に提供される。ある特定の実施形態において、個体は、神経変性疾患を有する。ある特定の実施形態において、個体は、ＡＬＳまたはＦＴＤを含むがこれらに限定されない、神経変性疾患を発症する危険性にある。ある特定の実施形態において、個体は、Ｃ９ＯＲＦ７２関連疾患を有すると識別されている。ある特定の実施形態において、個体は、Ｃ９ＯＲＦ７２ヘキサヌクレオチド反復伸長関連疾患を有すると識別されている。ある特定の実施形態において、個体におけるＣ９ＯＲＦ７２発現を予防的に低減させるための方法が、本明細書に提供される。ある特定の実施形態は、治療を必要とする個体を、Ｃ９ＯＲＦ７２核酸を標的とするアンチセンス化合物の治療有効量を個体に投与することによって治療することを含む。
【０２４８】
一実施形態において、Ｃ９ＯＲＦ７２核酸を標的とするアンチセンス化合物の治療有効量の投与は、個体におけるＣ９ＯＲＦ７２レベルを監視し、アンチセンス化合物の投与に対する個体の応答を判定することを伴う。アンチセンス化合物の投与に対する個体の応答は、治療介入の量および期間を決定するために医師によって使用され得る。
【０２４９】
ある特定の実施形態において、Ｃ９ＯＲＦ７２核酸を標的とするアンチセンス化合物の
投与は、結果として、少なくとも１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、もしくは９９％、またはこれらの値のうちの任意の２つによって定義される範囲の、Ｃ９ＯＲＦ７２発現の低減をもたらす。ある特定の実施形態において、Ｃ９ＯＲＦ７２核酸を標的とするアンチセンス化合物の投与は、結果として、動物における運動機能および呼吸の改善をもたらす。ある特定の実施形態において、Ｃ９ＯＲＦ７２アンチセンス化合物の投与は、運動機能および呼吸を、少なくとも１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、もしくは９９％、またはこれらの値のうちの任意の２つによって定義される範囲で改善する。
【０２５０】
ある特定の実施形態において、Ｃ９ＯＲＦ７２を標的とするアンチセンス化合物を含む薬学的組成物は、ＡＬＳおよびＦＴＤを含む神経変性疾患を患うか、またはそれを罹患する傾向にある患者を治療するための医薬品の調製に使用される。
【０２５１】
ある特定の組み合わせ療法
ある特定の実施形態において、１つ以上の本明細書に記載される薬学的組成物は、１つ以上の他の薬学的薬剤と共投与される。ある特定の実施形態において、そのような１つ以上の他の薬学的薬剤は、１つ以上の本明細書に記載される薬学的組成物と同じ疾患、障害、または状態を治療するように設計される。ある特定の実施形態において、そのような１つ以上の他の薬学的薬剤は、１つ以上の本明細書に記載される薬学的組成物とは異なる疾患、障害、または状態を治療するように設計される。ある特定の実施形態において、そのような１つ以上の他の薬学的薬剤は、１つ以上の本明細書に記載される薬学的組成物の望ましくない副作用を治療するように設計される。ある特定の実施形態において、１つ以上の本明細書に記載される薬学的組成物は、他の薬学的薬剤の望ましくない作用を治療するために、別の薬学的薬剤と共投与される。ある特定の実施形態において、１つ以上の本明細書に記載される薬学的組成物は、併用効果をもたらすために、別の薬学的薬剤と共投与される。ある特定の実施形態において、１つ以上の本明細書に記載される薬学的組成物は、相乗効果をもたらすために、別の薬学的薬剤と共投与される。
【０２５２】
ある特定の実施形態において、１つ以上の本明細書に記載される薬学的組成物と、１つ以上の他の薬学的薬剤は、同時に投与される。ある特定の実施形態において、１つ以上の本明細書に記載される薬学的組成物と、１つ以上の他の薬学的薬剤は、異なる時間に投与される。ある特定の実施形態において、１つ以上の本明細書に記載される薬学的組成物と、１つ以上の他の薬学的薬剤は、単一製剤に一緒に調製される。ある特定の実施形態において、１つ以上の本明細書に記載される薬学的組成物と、１つ以上の他の薬学的薬剤は、別個に調製される。
【０２５３】
ある特定の実施形態において、本明細書に記載される薬学的組成物と共投与され得る薬学的薬剤には、Ｒｉｌｕｚｏｌｅ（Ｒｉｌｕｔｅｋ）、Ｌｉｏｒｅｓａｌ（Ｌｉｏｒｅｓａｌ）、およびＤｅｘｐｒａｍｉｐｅｘｏｌｅが挙げられる。
【０２５４】
ある特定の実施形態において、本明細書に記載されるＣ９ＯＲＦ７２特異的阻害剤と共投与され得る薬学的薬剤には、追加のＣ９ＯＲＦ７２阻害剤が挙げられるが、これに限定されない。ある特定の実施形態において、共投与される薬学的薬剤は、本明細書に記載される薬学的組成物の投与の前に投与される。ある特定の実施形態において、共投与される薬学的薬剤は、本明細書に記載される薬学的組成物の投与の後に投与される。ある特定の実施形態において、共投与される薬学的薬剤は、本明細書に記載される薬学的組成物と同時に投与される。ある特定の実施形態において、共投与される薬学的薬剤の用量は、共投与される薬学的薬剤が単独で投与される場合に投与されるであろう用量と同じである。ある特定の実施形態において、共投与される薬学的薬剤の用量は、共投与される薬学的薬剤
が単独で投与される場合に投与されるであろう用量よりも低い。ある特定の実施形態において、共投与される薬学的薬剤の用量は、共投与される薬学的薬剤が単独で投与される場合に投与されるであろう用量よりも高い。
【０２５５】
ある特定の実施形態において、第２の化合物の共投与は、第１の化合物の効果を強化し、結果として化合物の共投与は、第１の化合物単独で投与する場合の効果よりも高い効果をもたらす。他の実施形態において、共投与は、単独で投与される時の化合物の効果の付加的な効果をもたらす。ある特定の実施形態において、共投与は、単独で投与される時の化合物の効果の相乗的な効果をもたらす。ある特定の実施形態において、第１の化合物は、アンチセンス化合物である。ある特定の実施形態において、第２の化合物は、アンチセンス化合物である。
【実施例】
【０２５６】
非限定的な開示および参照による組み込み
本明細書に記載されるある特定の化合物、組成物、および方法が、ある特定の実施形態に従って特異的に記載されたが、次の例は、本明細書に記載される化合物を例証するのみの役割を果たしており、それらを限定するようには意図されない。本出願に列挙される参考文献のそれぞれは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０２５７】
実施例１：ＨｅｐＧ２細胞におけるヒトＣ９ＯＲＦ７２のアンチセンス阻害
Ｃ９ＯＲＦ７２核酸を標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドを設計し、インビトロでそれらがＣ９ＯＲＦ７２  ｍＲＮＡに及ぼす効果について試験した。アンチセンスオリゴヌクレオチドを、類似の培養条件を有する一連の実験において試験した。各実験の結果を、以下に示される別々の表に提示する。１ウェル当たり２０，０００細胞の密度で培養したＨｅｐＧ２細胞に、エレクトロポレーションを使用して７，０００ｎＭアンチセンスオリゴヌクレオチドをトランスフェクトした。おおよそ２４時間の処理期間の後、ＲＮＡを細胞から単離し、Ｃ９ＯＲＦ７２  ｍＲＮＡレベルを、定量的リアルタイムＰＣＲによって測定した。ヒトプライマープローブセットＲＴＳ３７５０（順方向配列ＴＧＴＧＡＣＡＧＴＴＧＧＡＡＴＧＣＡＧＴＧＡ、本明細書に配列番号１５として指定される；逆方向配列ＧＣＣＡＣＴＴＡＡＡＧＣＡＡＴＣＴＣＴＧＴＣＴＴＧ、本明細書に配列番号１６として指定される；プローブ配列ＴＣＧＡＣＴＣＴＴＴＧＣＣＣＡＣＣＧＣＣＡ、本明細書に配列番号１７として指定される）を使用して、ｍＲＮＡレベルを測定した。Ｃ９ＯＲＦ７２  ｍＲＮＡレベルを、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定される全ＲＮＡ含量に応じて調整した。結果を、未処理の対照細胞に対するＣ９ＯＲＦ７２の阻害パーセントとして提示する。
【０２５８】
表６〜１０のアンチセンスオリゴヌクレオチドを、５−１０−５ＭＯＥギャップマーとして設計した。ギャップマーは、長さが２０ヌクレオシドであり、ここで、中央のギャップセグメントは、１０個の２’−デオキシヌクレオシドを含み、５’末端および３’末端の両方にそれぞれ５個のヌクレオシドを含むウイングセグメントが隣接する。５’ウイングセグメントの各ヌクレオシドおよび３’ウイングセグメントの各ヌクレオシドは、ＭＯＥ修飾を有する。各ギャップマー全体にわたるヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート結合である。各ギャップマー全体のすべてのシトシン残基は、５−メチルシトシンである。「開始部位」は、ヒト遺伝子配列においてアンチセンスオリゴヌクレオチドが標的とする、最も５’側のヌクレオシドを示す。「終止部位」は、ヒト遺伝子配列においてアンチセンスオリゴヌクレオチドが標的とする、最も３’側のヌクレオシドを示す。表６〜９に列挙される各アンチセンスオリゴヌクレオチドは、本明細書に配列番号１として指定されるヒトＣ９ＯＲＦ７２  ｍＲＮＡ配列（ＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＮＭ＿００１２５６０５４．１）もしくは本明細書に配列番号２として指定されるヒトＣ９ＯＲＦ７２ゲノム配列（ヌクレオシド２７５３５０００〜２７５６５０００が切除されたＧＥＮＢＡＮＫ受託
番号ＮＴ＿００８４１３．１８の補体）のいずれか、またはその両方を標的とする。「ｎ／ａ」は、アンチセンスオリゴヌクレオチドが、その特定の遺伝子配列を標的としなかったことを示す。表１０のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、配列番号３（ＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＢＱ０６８１０８．１）または配列番号４（ＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＮＭ＿０１８３２５．３）のいずれかを標的とする。
【０２５９】
以下の表６〜１０に示されるように、配列番号１の核酸塩基９０〜６４７、７２８〜１５４１、１５９８〜１８６３、１９３５〜２１４６、２２３２〜２２５１、２４２９〜２５７６、２６３２〜２７４３、２７８８〜２８０７、２８６０〜２８７９、２９４９〜２９６８、３０６２〜３０８１、３１３２〜３１５１、および３２５０〜３２６９を標的とするものを含む、配列番号１を標的とするオリゴヌクレオチドのうちのいくつかは、少なくとも５０％の阻害を示す。これらには、配列番号３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、５０、５１、５３、５５、５６、５７、６１、６２、６４、６６、６７、７２、７３、７５、７６、８１、８２、８５、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９６、９７、１００、１０２、１０３、１０９、１１１、１１２、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１３０、１３１、１３２、１３３、１３７、１３９、１４０、１４１、１４５、１４６、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１６５、１６６、１６８、１６９、１７０、１７１、１７４、１７９、１８１、１８２、１８３、１８５、１８６、１８７、１８８、１９０、１９２、１９５、１９７、１９９、３２０、３２１、３２２、３２３、３２４、３２５、３２６、３２７、３２８、３２９、３３０、３３１、および３３２が含まれる。配列番号１の核酸塩基９０〜３５９、４３０〜４７９、５５０〜５６９、６１７〜６４７、９４０〜９５９、１０１３〜１０３３、１４４６〜１４６５、１６８７〜１７０６、１８４４〜１８６３、１９３５〜２００７、および２６７９〜２６９８を標的とするものを含む、オリゴヌクレオチドのうちのいくつかは、少なくとも７０％の阻害を示す。これらには、配列番号３２、３３、３４、３５、３６、４０、４１、４２、４３、４４、４７、６６、６７、８５、９６、１０３、１１７、１１９、１５４、１６５、１６８、１８６、３２０、３２１、３２４、３２７、３２８、および３３１が含まれる。核酸塩基９０〜２６５および３１０〜３２９を標的とするものを含む、オリゴヌクレオチドのうちのいくつかは、少なくとも８０％の阻害を示す。これらには、配列番号３２、３３、３５、４０、４２、および３２１が含まれる。配列番号１の核酸塩基１９０〜２０９および３１０〜３２９を標的とするものを含む、オリゴヌクレオチドのうちのいくつかは、少なくとも９０％の阻害を示す。これらには、配列番号４０および３２１が含まれる。
【０２６０】
以下の表６〜２０に示されるように、配列番号２の核酸塩基１５５２〜１５７２、２１８７〜２２３８、２７２８〜２７７９、３４５２〜２４７１、３７５２〜３７７１、５０２５〜５０４４、５６５６〜５６７５、６２００〜６２１９、７５９４〜７６１３、７８４０〜８３２８、９４１５〜９４３４、１２５２６〜１２５４５、１３３５７〜１３５２４、１３６４２〜１３６６１、１３７９０〜１４１３０、１４２４３〜１４３３５、１４６９９〜１４７７７、１５５８７〜１５６０６、１６３９５〜１６４８８、１８２３３〜１８３７３、２４３０６〜２４３４０、２４４７２〜２４４９１、２４５６５〜２４６７６、２６４００〜２６４２４、２６６０６〜２６９８２、２７０５４〜２７２６５、２７３５１〜２７３７０、２７５４８〜２７９９８、２８０６８〜２８０８７、２８１８１〜２８２７０、および２８３６９〜２８３８８を標的とするものを含む、配列番号２を標的とするオリゴヌクレオチドのうちのいくつかは、少なくとも５０％の阻害を示す。これらには、配列番号３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、５０、５１、５３、５５、５６、５７、６４、６７、７２、７３、７５、７６、８１、８２、８５、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９６、９７、１００、１０２、１０３、１１１、１１２、１１５、１１７、１１８、１１９、１２１
、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１３０、１３１、１３２、１３３、１３７、１３９、１４０、１４１、１４５、１４６、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１６５、１６６、１６８、１６９、１７０、１７１、１７４、１７９、１８１、１８２、１８３、１８５、１８６、１８７、１８８、１９０、１９２、１９５、１９７、１９９、２０５、２０６、２０８、２１１、２１２、２２４、２２６、２３０、２３１、２５０、２５１、２５２、２５６、３００、３０１、３０４、３０６、３０７、３１０、３２０、３２１、３２２、３２３、３２４、３２５、３２６、３２７、３２８、３２９、３３０、３３１、および３３２が含まれる。配列番号２の核酸塩基３４５２〜２４７１、７８４０〜８１５９、８２３０〜８２４９、１２５２６〜１２５４５、１３６４２〜１３６６１、１４０７５〜１４０９４、１４３１６〜１４３３５、１４７５８〜１４７７７、１６３９５〜１６４１４、１６４６９、１６４８８、２４６５５〜２４６７４、２６９６３、２６９８２、２７０５４〜２７１２６、および２７７９８〜２７８１７を標的とするものを含む、オリゴヌクレオチドのうちのいくつかは、少なくとも７０％の阻害を示す。これらには、配列番号３２、３３、３４、３５、３６、４０、４１、４２、４３、４４、４７、６７、８５、９６、１０３、１１７、１１９、１５４、１６５、１６８、１８６、２５１、３０６、３２０、３２１、３２４、３２７、３２８、および３３１が含まれる。配列番号２の核酸塩基７８４８〜８０２３を標的とするものを含む、オリゴヌクレオチドのうちのいくつかは、少なくとも８０％の阻害を示す。これらには、配列番号３２、３３、３５、４０、４２、および３２１が含まれる。配列番号２の核酸塩基７８７０〜７８８９および７９９０〜８００９を標的とするものを含む、オリゴヌクレオチドのうちのいくつかは、少なくとも９０％の阻害を示す。これらには、配列番号４０および３２１が含まれる。
【表６−１】
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【表６−２】
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【表６−３】
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【表７−１】
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【表７−２】
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【表７−３】
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【表８−１】
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【表８−２】
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【表８−３】
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【表９−１】
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【表９−２】
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【表９−３】
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【表１０】
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【０２６１】
実施例２：ＨｅｐＧ２細胞におけるヒトＣ９ＯＲＦ７２の用量依存性アンチセンス阻害
Ｃ９ＯＲＦ７２  ｍＲＮＡの有意なインビトロ阻害を示した上述の研究からのアンチセンスオリゴヌクレオチドを選択し、ＨｅｐＧ２細胞において種々の用量で試験した。アンチセンスオリゴヌクレオチドを、類似の培養条件を有する一連の実験において試験した。各実験の結果を、以下に示される別々の表に提示する。１ウェル当たり２０，０００細胞の密度で細胞を播種し、エレクトロポレーションを使用して、８２．３ｎＭ、２４６．９ｎＭ、７４０．７ｎＭ、２，２２２．２ｎＭ、６，６６６．７ｎＭ、または２０，０００ｎＭの濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチドをトランスフェクトした。おおよそ１６時間の処理期間の後、ＲＮＡを細胞から単離し、Ｃ９ＯＲＦ７２  ｍＲＮＡレベルを、定量的リアルタイムＰＣＲによって測定した。ヒトＣ９ＯＲＦ７２プライマープローブセットＲＴＳ３７５０を使用してｍＲＮＡレベルを測定した。Ｃ９ＯＲＦ７２  ｍＲＮＡレベルを、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定される全ＲＮＡ含量に応じて調整した。結果を、未処理の対照細胞に対するＣ９ＯＲＦ７２の阻害パーセントとして提示する。
【０２６２】
各オリゴヌクレオチドの半最大阻害濃度（ＩＣ５０）もまた、表１１〜１３に提示する。示されるように、Ｃ９ＯＲＦ７２  ｍＲＮＡレベルは、アンチセンスオリゴヌクレオチ
ド処理細胞において、用量依存性様式で低減された。
【表１１】
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【表１２】
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【表１３】
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【０２６３】
実施例３：ＨｅｐＧ２細胞におけるヒトＣ９ＯＲＦ７２の用量依存性アンチセンス阻害
Ｃ９ＯＲＦ７２  ｍＲＮＡの有意なインビトロ阻害を示した上述の研究からのアンチセンスオリゴヌクレオチドを選択し、ＨｅｐＧ２細胞において種々の用量で試験した。アンチセンスオリゴヌクレオチドを、類似の培養条件を有する一連の実験において試験した。各実験の結果を、以下に示される別々の表に提示する。１ウェル当たり２０，０００細胞の密度で細胞を播種し、エレクトロポレーションを使用して、２４６．９ｎＭ、７４０．７ｎＭ、２，２２２．２ｎＭ、６，６６６．７ｎＭ、または２０，０００ｎＭの濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチドをトランスフェクトした。おおよそ１６時間の処理期間の後、ＲＮＡを細胞から単離し、Ｃ９ＯＲＦ７２全ｍＲＮＡレベル、ならびにエクソン１転写産物のｍＲＮＡを、定量的リアルタイムＰＣＲによって測定した。ヒトＣ９ＯＲＦ７２プライマープローブセットＲＴＳ３７５０を使用して全Ｃ９ＯＲＦ７２  ｍＲＮＡレベルを測定した。プライマープローブセットＲＴＳ３９０５（順方向配列ＧＧＧＴＣＴＡＧＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧ、本明細書に配列番号１８として指定される；逆方向配列ＧＴＣＴＴＧＧＣＡＡＣＡＧＣＴＧＧＡＧＡＴ、本明細書に配列番号１９として指定される；プローブ配列ＴＧＡＴＧＴＣＧＡＣＴＣＴＴＴＧＣＣＣＡＣＣＧＣ、本明細書に配列番号２０として指定される）を使用して、エクソン１メッセージ転写産物を測定した。Ｃ９ＯＲＦ７２  ｍＲＮＡレベルを、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定される全ＲＮＡ含量に応じて調整した。結果を、未処理の対照細胞に対するＣ９ＯＲＦ７２の阻害パーセントとして提示する。
【０２６４】
各オリゴヌクレオチドの半最大阻害濃度（ＩＣ５０）もまた、表１４および１５に提示する。示されるように、Ｃ９ＯＲＦ７２  ｍＲＮＡレベルは、アンチセンスオリゴヌクレオチド処理細胞において、用量依存性様式で低減された。「ｎ．ｄ．」は、その特定の用量に関してデータが存在しないことを示す。
【表１４】
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【表１５】
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【０２６５】
実施例４：ＨｅｐＧ２細胞におけるヒトＣ９ＯＲＦ７２のアンチセンス阻害
Ｃ９ＯＲＦ７２核酸のヘキサヌクレオチド反復伸長を標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドを設計し、インビトロでそれらがＣ９ＯＲＦ７２  ｍＲＮＡに及ぼす効果について試験した。アンチセンスオリゴヌクレオチドを、類似の培養条件を有する一連の実験において試験した。各実験の結果を、以下に示される別々の表に提示する。比較のためにＩＳＩＳ  ５７６８１６およびＩＳＩＳ  ５７７０６５がこれらのアッセイに含まれた。１ウェル当たり３５，０００細胞の密度で培養したＣ９ＯＲＦ７２線維芽細胞に、エレクトロポレーションを使用して、７，０００ｎＭアンチセンスオリゴヌクレオチドをトランスフェクトした。おおよそ２４時間の処理期間の後、ＲＮＡを細胞から単離し、Ｃ９ＯＲＦ７２  ｍＲＮＡレベルを、定量的リアルタイムＰＣＲによって測定した。ヒトプライマープローブセットＲＴＳ３７５０、ＲＴＳ  ３９０５、またはＲＴＳ４０９７（順方向配列ＣＡＡＧＣＣＡＣＣＧＴＣＴＣＡＣＴＣＡＡ、本明細書に配列番号２４として指定される；逆方向配列ＧＴＡＧＴＧＣＴＧＴＣＴＡＣＴＣＣＡＧＡＧＡＧＴＴＡＣＣ、本明細書に配列番号２５として指定される；プローブ配列ＣＴＴＧＧＣＴＴＣＣＣＴＣＡＡＡＡＧＡＣＴＧＧＣＴＡＡＴＧＴ、本明細書に配列番号２６として指定される）を使用して、ｍＲＮＡレベルを測定した。ＲＴＳ３７５０は、ｍＲＮＡ転写産物のエクソン２を標的とするため、全ｍＲＮＡ転写産物を測定する。ＲＴＳ３９０５は、ヘキサヌクレオチド反復伸長含有転写産物を標的とするため、ヘキサヌクレオチド反復伸長を含有するｍＲＮＡ転写産物のみを測定する。ＲＴＳ４０９７は、ヘキサヌクレオチド反復伸長の３’部位の遺伝子配列を標的とする。ｍＲＮＡレベルを、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定される全ＲＮＡ含量に応じて調整した。結果を、未処理の対照細胞に対するＣ９ＯＲＦ７２の阻害パーセントとして提示する。「ｎ．ｄ．」は、その特定のアンチセンスオリゴヌクレオチドに関してデータが存在しないことを示す。
【０２６６】
表１６のアンチセンスオリゴヌクレオチドを、一様なＭＯＥオリゴヌクレオチド、または３−１０−３ＭＯＥ、４−１０−３ＭＯＥ、４−１０−４ＭＯＥ、５−１０−４ＭＯＥ、もしくは５−１０−５ＭＯＥギャップマーとして設計した。一様なＭＯＥオリゴヌクレオチドは、長さが２０ヌクレオシドであり、ここで、各ヌクレオシドは、２’−ＭＯＥ基を含む。３−１０−３ＭＯＥギャップマーは、長さが１６ヌクレオシドであり、ここで、中央のギャップセグメントは、１０個の２’−デオキシヌクレオシドを含み、５’末端および３’末端の両方にそれぞれ３個のヌクレオシド含むウイングセグメントが隣接する。４−１０−３ギャップマーは、長さが１７ヌクレオシドであり、ここで、中央のギャップセグメントは、１０個の２’−デオキシヌクレオシドを含み、５’末端および３’末端の両方にそれぞれ４個および３個のヌクレオシドを含むウイングセグメントが隣接する。４−１０−４ギャップマーは、長さが１８ヌクレオシドであり、ここで、中央のギャップセグメントは、１０個の２’−デオキシヌクレオシドを含み、５’末端および３’末端の両方にそれぞれ４個のヌクレオシドを含むウイングセグメントが隣接する。５−１０−４ギャップマーは、長さが１９ヌクレオシドであり、ここで、中央のギャップセグメントは、１０個の２’−デオキシヌクレオシドを含み、５’末端および３’末端の両方にそれぞれ５および４個のヌクレオチドを含むウイングセグメントが隣接する。５−１０−５ギャップマーは、長さが２０ヌクレオシドであり、ここで、中央のギャップセグメントは、１０個の２’−デオキシヌクレオシドを含み、５’末端および３’末端の両方にそれぞれ５個のヌクレオシドを含むウイングセグメントが隣接する。５’ウイングセグメントの各ヌクレオシドおよび３’ウイングセグメントの各ヌクレオシドは、２’−ＭＯＥ基を含む。各オリゴヌクレオチド全体にわたるヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート結合である。各オリゴヌクレオチド全体のすべてのシトシン残基は、５−メチルシトシンである。「開始部位」は、ヒト遺伝子配列においてアンチセンスオリゴヌクレオチドが標的とする、最も５’側のヌクレオシドを示す。「終止部位」は、ヒト遺伝子配列においてアンチセンスオリゴヌクレオチドが標的とする、最も３’側のヌクレオシドを示す。表１６に列挙される各アンチセンスオリゴヌクレオチドは、本明細書に配列番号２として指定されるヒトＣ９ＯＲＦ７２ゲノム配列（ヌクレオシド２７５３５０００〜２７５６５０００が切除さ
れたＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＮＴ＿００８４１３．１８の補体）またはＣ９ＯＲＦ７２遺伝子のイントロン１からのヘキサヌクレオチド反復の伸長バージョンである配列番号１３を標的とする。
【０２６７】
データは、ある特定のアンチセンスオリゴヌクレオチドが、ヘキサヌクレオチド反復を含有するＣ９ＯＲＦ７２  ｍＲＮＡ転写産物レベルのレベルを選択的に阻害することを示す。
【表１６−１】
2019141075.tif 000033
【表１６−２】
2019141075.tif 000034
【表１６−３】
2019141075.tif 000035
【表１６−４】
2019141075.tif 000036
【表１６−５】
2019141075.tif 000037
【表１６−６】
2019141075.tif 000038
【０２６８】
実施例５：Ｃ９ＯＲＦ７２アンチセンスオリゴヌクレオチドの処理によるインビボでの齧歯類阻害および耐容性
インビボでのＣ９ＯＲＦ７２発現の阻害の耐容性を評価するために、マウスＣ９ＯＲＦ７２核酸を標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドを設計し、マウスおよびラットモデルにおいて評価した。
【０２６９】
長さが２０ヌクレオシドであり、中央のギャップセグメントが１０個の２’−デオキシヌクレオシドを含み、５’末端および３’末端の両方にそれぞれ５個のヌクレオシドを含むウイングセグメントが隣接する、５−１０−５ＭＯＥギャップマーとして、ＩＳＩＳ  ５７１８８３を設計した。５’ウイングセグメントの各ヌクレオシドおよび３’ウイング
セグメントの各ヌクレオシドは、ＭＯＥ修飾を有する。ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート結合である。ギャップマー全体のすべてのシトシン残基は、５−メチルシトシンである。ＩＳＩＳ  ５７１８８３は、本明細書に配列番号１１として指定されるマウスＣ９ＯＲＦ７２ゲノム配列（ヌクレオシド３５８７０００〜３６２５０００が切除されたＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＮＴ＿１６６２８９．１の補体）にヌクレオシド３３７０４という標的開始部位を有する。
【０２７０】
長さが２０ヌクレオシドであり、中央のギャップセグメントが１０個の２’−デオキシヌクレオシドを含み、５’末端および３’末端の両方にそれぞれ５個のヌクレオシドを含むウイングセグメントが隣接する、５−１０−５ＭＯＥギャップマーとして、ＩＳＩＳ  ６０３５３８を設計した。５’ウイングセグメントの各ヌクレオシドおよび３’ウイングセグメントの各ヌクレオシドは、ＭＯＥ修飾を有する。ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート結合またはリン酸エステル結合のいずれかである（Ｇｓ  Ａｏ  Ｃｏ  Ｃｏ  Ｇｓ  Ｃｓ  Ｔｓ  Ｔｓ  Ｇｓ  Ａｓ  Ｇｓ  Ｔｓ  Ｔｓ  Ｔｓ  Ｇｓ  Ｃｏ  Ｃｏ  Ａｏ  Ｃｓ  Ａ；ここで、「ｓ」は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表し、「ｏ」は、リン酸エステル結合を表し、Ａ、Ｇ、Ｃ、Ｔは、関連するヌクレオシドを表す）。ギャップマー全体のすべてのシトシン残基は、５−メチルシトシンである。ＩＳＩＳ  ６０３５３８は、本明細書に配列番号１２として指定されるラットＣ９ＯＲＦ７２  ｍＲＮＡ配列（ＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＮＭ＿００１００７７０２．１）にヌクレオシド２８７２という標的開始部位を有する。
【０２７１】
マウス実験１
それぞれ４匹ずつのＣ５７ＢＬ／６マウスの群に、脳室内ボーラス注射で投与される５０μｇ、１００μｇ、３００μｇ、５００μｇ、または７００μｇのＩＳＩＳ  ５７１８８３を注射した。４匹のＣ５７／ＢＬ６マウスの対照群を、同様にＰＢＳで処理した。動物に、３％イソフルオランで麻酔を行い、定位フレームに入れた。手術部位を滅菌した後、各マウスに、ブレグマから前後方向に−０．２ｍｍ、ブレグマに対して背腹方向に３ｍｍで、Ｈａｍｉｌｔｏｎシリンジを使用して上述の用量のＩＳＩＳ  ５７１８８３を注射した。切開部を縫合により閉じた。マウスを１４日間回復させ、その後、動物をＩｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅによって承認された人道的なプロトコルに従って安楽死させた。脳および脊髄の組織を採取し、液体窒素で瞬間凍結させた。凍結の前に、マウス用ブレインマトリックスを使用して脳組織を横方向に５つの切片に切断した。
【０２７２】
ＲＮＡ分析
ＲＮＡを、Ｃ９ＯＲＦ７２  ｍＲＮＡ発現の分析のために、注射部位の後方の２〜３ｍｍの脳切片から、脳前頭皮質から、および脊髄組織の腰部切片から抽出した。Ｃ９ＯＲＦ７２  ｍＲＮＡ発現を、ＲＴ−ＰＣＲによって測定した。データを表１７に提示する。結果は、漸増用量のＩＳＩＳ  ５７１８８３での処理が、Ｃ９ＯＲＦ７２  ｍＲＮＡ発現の用量依存性阻害をもたらしたことを示す。
【０２７３】
ＣＮＳ毒性の尺度として小膠細胞マーカーであるＡＩＦ−１の誘導もまた評価した。データを表１８に提示する。結果は、漸増用量のＩＳＩＳ  ５７１８８３での処理が、ＡＩＦ−１  ｍＲＮＡ発現の有意な増加をもたらさなかったことを示す。したがって、ＩＳＩＳ  ５７１８８３の注射を、このモデルにおいて耐容可能であると見なした。
【表１７】
2019141075.tif 000039
【表１８】
2019141075.tif 000040
【０２７４】
マウス実験２
それぞれ４匹ずつのＣ５７ＢＬ／６マウスの群に、上述のものに類似の手順で脳室内ボーラス注射によって投与される５００μｇのＩＳＩＳ  ５７１８８３を注射した。４匹のＣ５７／ＢＬ６マウスの対照群を、同様にＰＢＳで処理した。ＩＣＶ投与後に通常の時点でマウスを試験した。
【０２７５】
挙動分析
運動挙動を評価するための２つの標準的なアッセイを用いた；ロータロッドアッセイおよび握力アッセイ。ロータロッドアッセイの場合、落下するまでの時間を測定した。アッセイのデータを、表１９および２０に提示する。結果は、ＩＳＩＳ  ５７１８８３またはＩＣＶ注射に起因するアンチセンス阻害の結果として、マウスの運動挙動に有意な変化がなかったことを示す。したがって、Ｃ９ＯＲＦ７２のアンチセンス阻害は、このモデルにおいて耐容可能であると見なした。
【表１９】
2019141075.tif 000041
【表２０】
2019141075.tif 000042
【０２７６】
ラット実験
それぞれ４匹ずつのスプラーグ・ドーリーラットに、髄腔内ボーラス注射によって投与される７００μｇ、１，０００μｇ、または３，０００μｇのＩＳＩＳ  ６０３５３８を注射した。４匹のスプラーグ・ドーリーラットの対照群を、ＰＢＳで同様に処理した。動物に、３％イソフルオランで麻酔を行い、定位フレームに入れた。手術部位を滅菌した後、各ラットに、５０μＬのフラッシュとともに、脊柱内２ｃｍに８ｃｍの髄腔内カテーテルを介して投与される３０μＬのＡＳＯ溶液を注射した。ラットを４週間回復させ、その後、動物を、Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅによって承認された人道的なプロトコルに従って安楽死させた。
【０２７７】
ＲＮＡ分析
ＲＮＡを、Ｃ９ＯＲＦ７２  ｍＲＮＡ発現．の分析のために、注射部位の後方の２〜３ｍｍの脳切片から、脳前頭皮質から、ならびに脊髄組織の頸部および腰部切片から抽出した。Ｃ９ＯＲＦ７２  ｍＲＮＡ発現を、ＲＴ−ＰＣＲによって測定した。データを表２１に提示する。結果は、漸増用量のＩＳＩＳ  ６０３５３８での処理が、Ｃ９ＯＲＦ７２  ｍＲＮＡ発現の用量依存性阻害をもたらしたことを示す。
【０２７８】
ＣＮＳ毒性の尺度として小膠細胞マーカーであるＡＩＦ−１の誘導もまた評価した。データを表２２に提示する。結果は、漸増用量のＩＳＩＳ  ６０３５３８での処理が、ＡＩＦ−１  ｍＲＮＡ発現の有意な増加をもたらさなかったことを示す。したがって、ＩＳＩＳ  ６０３５３８の注射は、このモデルにおいて耐容可能であると見なした。
【表２１】
2019141075.tif 000043
【表２２】
2019141075.tif 000044
【０２７９】
体重分析
ラットの体重を、通常の時間間隔で測定した。データを表２３に提示する。結果は、漸増用量のＩＳＩＳ  ６０３５３８での処理が、ラットの体重に有意な変化を全く有さなかったことを示す。
【表２３】
2019141075.tif 000045
【０２８０】
実施例６：２つの患者線維芽細胞系におけるヒトＣ９ＯＲＦ７２発現の選択的阻害
ヒト患者由来の２つの異なる線維芽細胞の細胞系（Ｆ０９−１５２およびＦ０９−２２９）を、エクソン１Ｂの前のＣ９ＯＲＦ７２プレ−ｍＲＮＡ配列を標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチド、すなわち、ヘキサヌクレオチド反復伸長含有転写産物を標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチド、およびエクソン１の下流を標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドを用いて分析した。各オリゴヌクレオチドについて配列番号１および２に対する標的の開始および終止部位、ならびに標的領域を、表２４に提示する。ＩＳＩＳ  ５７７０６１およびＩＳＩＳ  ５７７０６５は、エクソン１Ｂの上流かつヘキサヌクレオチド反復のすぐ上流のＣ９ＯＲＦ７２を標的とする。表２４の残りのＩＳＩＳオリゴヌクレオチドは、エクソン１Ｂおよびヘキサヌクレオチド反復の下流のＣ９ＯＲＦ７２を標的とする。
【表２４】
2019141075.tif 000046
【０２８１】
１ウェル当たり２０，０００細胞の密度で細胞を播種し、エレクトロポレーションを使用して、２４６．９ｎＭ、７４０．７ｎＭ、２，２２２．２ｎＭ、６，６６６．７ｎＭ、および２０，０００．０ｎＭの濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチドをトランスフェクトした。おおよそ１６時間の処理期間の後、ＲＮＡを細胞から単離し、Ｃ９ＯＲＦ７２  ｍＲＮＡレベルを、定量的リアルタイムＰＣＲによって測定した。２つのプライマープローブセットを使用した：（１）全ｍＲＮＡレベルを測定するヒトＣ９ＯＲＦ７２プライマープローブセットＲＴＳ３７５０、および（２）ヘキサヌクレオチド反復伸長含有転写産物を標的とし、ヘキサヌクレオチド反復伸長を含有するｍＲＮＡ転写産物のみを測定する、ＲＴＳ３９０５。Ｃ９ＯＲＦ７２  ｍＲＮＡレベルを、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定される全ＲＮＡ含量に応じて調整した。結果を、未処理の対照細胞に対するＣ９ＯＲＦ７２の阻害パーセントとして提示する。
【０２８２】
以下の表２５に示されるように、エクソン１Ｂの上流を標的とし、したがってヘキサヌクレオチド反復伸長を含有するｍＲＮＡ転写産物を標的とする２つのオリゴヌクレオチド（ＩＳＩＳ  ５７７０６１およびＩＳＩＳ  ５７７０６５）は、Ｃ９ＯＲＦ７２の全ｍＲＮＡレベル（ＲＴＳ３７５０によって測定される）を阻害せず、エクソン１Ｂの下流を標的とし、したがってヘキサヌクレオチド反復伸長を含有するｍＲＮＡ転写産物を標的としないＩＳＩＳ  ５７６９７４、５７６８１６、および５７７０８３も同様である。ヘキサヌクレオチド反復伸長を含有するＣ９ＯＲＦ７２  ｍＲＮＡ転写産物の発現レベルは、低く（全Ｃ９ＯＲＦ７２発現産物の約１０％）、したがって、ヘキサヌクレオチド反復伸長を含有するｍＲＮＡ転写産物を標的とするオリゴヌクレオチドは、以下の表２５によって示唆されるように、全Ｃ９ＯＲＦ７２  ｍＲＮＡ（ＲＴＳ３９０５によって測定される）を強力に阻害することはない。したがって、ＩＳＩＳ  ５７７０６１およびＩＳＩＳ  ５７７０６５は、ヘキサヌクレオチド反復伸長を含有するｍＲＮＡ転写産物の発現を選択的に阻害する。
【表２５】
2019141075.tif 000047
【表２６】
2019141075.tif 000048
【表２７】
2019141075.tif 000049
【表２８】
2019141075.tif 000050
【配列表】
2019141075000001.app
【手続補正書】
【提出日】令和1年5月17日(2019.5.17)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
１２〜５０個の結合したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物であって、該修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列が、Ｃ９ＯＲＦ７２核酸の等長部分に少なくとも９０％相補的であり、該修飾オリゴヌクレオチドが、修飾糖、糖代替物、及び修飾ヌクレオシド間結合から選択される少なくとも一つの修飾を含む、前記化合物。
【請求項２】
Ｃ９ＯＲＦ７２核酸が、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号６、配列番号７及び／又は配列番号８のいずれかである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
修飾オリゴヌクレオチドが、ヒトＣ９ＯＲＦ７２核酸のエクソン、イントロン、５’ＵＴＲ、３’ＵＴＲ、反復領域、スプライスジャンクション、エクソン：エクソンスプライスジャンクション、エクソンスプライシングサイレンサー（ＥＳＳ）、エクソンスプライシングエンハンサー（ＥＳＥ）、エクソン１、エクソン１ａ、エクソン１ｂ、エクソン１ｃ、エクソン１ｄ、エクソン１ｅ、エクソン２、エクソン３、エクソン４、エクソン５、エクソン５ａ、エクソン５ｂ、エクソン６、エクソン７、エクソン８、エクソン９、エクソン１０、エクソン１１、イントロン１、イントロン２、イントロン３、イントロン４、イントロン５、イントロン６、イントロン７、イントロン８、イントロン９、又はイントロン１０のいずれか１つに相補的である、請求項１又は２に記載の化合物。
【請求項４】
１２〜３０個の結合したヌクレオシドからなり、配列番号３０〜３６９の少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、または少なくとも２０個の連続する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する、修飾オリゴヌクレオチドを含む、化合物。
【請求項５】
１２〜５０個の結合したヌクレオシドからなり、
核酸塩基
（ｉ）配列番号２の１４４６〜１４７９；
（ｉｉ）配列番号２の２２０９〜２２３８；
（ｉｉｉ）配列番号２の７８７０〜７９４９；
（ｉｖ）配列番号２の７９９０〜８０７２；
（ｖ）配列番号２の８０８０〜８１２９；
（ｖｉ）配列番号２の８２００〜８２５８；
（ｖｉｉ）配列番号２の１３３５７〜１３４０９；
（ｖｉｉｉ）配列番号２の２４３０６〜２４３４０；
（ｉｘ）配列番号２の２６６３０〜２６６４９；又は
（ｘ）配列番号２の２７０３７〜２７０７５
の等長部分に１００％相補的な少なくとも１２個の連続する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する、修飾オリゴヌクレオチドを含む、化合物。
【請求項６】
（ｉ）修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列が、配列番号２８８、３４０〜３４３、３４６、３４８、３４９、３５２、３５４〜３５６、３５８〜３６１、及び３６５〜３６８の少なくとも１２個の連続する核酸塩基を含む；
（ｉｉ）修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列が、配列番号２０６〜２０８の少なくとも１２個の連続する核酸塩基を含む；
（ｉｉｉ）修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列が、配列番号３３〜３７及び３２１〜３２３の少なくとも１２個の連続する核酸塩基を含む；
（ｉｖ）修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列が、配列番号４０〜４７、３２４、及び３２５の少なくとも１２個の連続する核酸塩基を含む；
（ｖ）修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列が、配列番号５０、５１、３２６、及び３２７の少なくとも１２個の連続する核酸塩基を含む；
（ｖｉ）修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列が、配列番号５６、５７、５８、３３０、及び３３１の少なくとも１２個の連続する核酸塩基を含む；
（ｖｉｉ）修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列が、配列番号７２〜７６の少なくとも１２個の連続する核酸塩基を含む；
（ｖｉｉｉ）修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列が、配列番号１３０〜１３３の少なくとも１２個の連続する核酸塩基を含む；
（ｉｘ）修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列が、配列番号１４０〜１４２の少なくとも１２個の連続する核酸塩基を含む；又は
（ｘ）修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列が、配列番号１６４〜１６６の少なくとも１２個の連続する核酸塩基を含む、
請求項４又は５に記載の化合物。
【請求項７】
修飾オリゴヌクレオチドが１２〜３０個の結合したヌクレオシドからなる、請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項８】
修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列が、
ａ．配列番号２の等長部分に少なくとも９０％相補的である；又は
ｂ．配列番号２の等長部分に１００％相補的である、
請求項３〜６のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項９】
修飾オリゴヌクレオチドが一本鎖修飾オリゴヌクレオチドである、請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１０】
一本鎖修飾オリゴヌクレオチドがギャップマーである、請求項９に記載の化合物。
【請求項１１】
ａ．修飾オリゴヌクレオチドの少なくとも１つのヌクレオシド間結合が修飾ヌクレオシド間結合であり、場合により該修飾ヌクレオシド間結合がホスホロチオエートヌクレオシド間結合である；又は
ｂ．修飾オリゴヌクレオチドの各ヌクレオシド間結合が修飾ヌクレオシド間結合であり、場合により該修飾ヌクレオシド間結合がホスホロチオエートヌクレオシド間結合である、
請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１２】
修飾オリゴヌクレオチドの少なくとも１つの核酸塩基が修飾核酸塩基であり、場合により該修飾核酸塩基が５−メチルシトシンである、請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１３】
ａ．修飾オリゴヌクレオチドの少なくとも１つのヌクレオシドが修飾糖を含む；又は
ｂ．修飾オリゴヌクレオチドの各ヌクレオシドが修飾糖を含む、
請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１４】
修飾糖が二環式糖である、請求項１３に記載の化合物。
【請求項１５】
修飾糖が糖の４’位と２’位との間の化学架橋を含み、該化学架橋が、４’−ＣＨ（Ｒ）−Ｏ−２’及び４’−（ＣＨ２）２−Ｏ−２’（式中、Ｒは、独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、又はＣ１−Ｃ６アルコキシである）より選択され、場合により該化学架橋が、４’−ＣＨ（Ｒ）−Ｏ−２’であり、式中、Ｒは、
ａ．メチル；
ｂ．Ｈ；又は
ｃ．−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ３
である、請求項１４に記載の化合物。
【請求項１６】
修飾糖が２’−Ｏ−メトキシエチル基又は２’−Ｏ−メチル基を含む、請求項１３に記載の化合物。
【請求項１７】
オリゴヌクレオチドの少なくとも１つのヌクレオシドが糖代替物を含み、場合により該糖代替物がモルホリノ又はペプチド核酸である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１８】
修飾オリゴヌクレオチドが、ヘキサヌクレオチド反復伸長以外のＣ９ＯＲＦ７２の領域に相補的な核酸塩基配列を有し、該ヘキサヌクレオチド反復伸長が、ＧＧＧＧＣＣ、ＧＧＧＧＧＧ、ＧＧＧＧＣＧ、及びＧＧＧＧＧＣのいずれかを含む、請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１９】
修飾オリゴヌクレオチドが二本鎖修飾オリゴヌクレオチドである、請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２０】
オリゴヌクレオチドからなる、請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２１】
請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物を含む、複合体化したアンチセンス化合物。
【請求項２２】
請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物を含む、二本鎖化合物。
【請求項２３】
請求項２１に記載の二本鎖化合物を含む、複合体化したアンチセンス化合物。
【請求項２４】
請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物、及び薬学的に許容される担体又は希釈剤を含む、組成物。
【請求項２５】
ａ．薬学的に許容される希釈剤がリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）である；及び／又は
ｂ．化合物のオリゴヌクレオチドがナトリウム塩である、
請求項２４に記載の組成物。
【請求項２６】
請求項２１に記載の複合体化したアンチセンス化合物、及び薬学的に許容される担体又は希釈剤を含む、組成物。
【請求項２７】
ａ．薬学的に許容される希釈剤がリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）である；及び／又は
ｂ．化合物のオリゴヌクレオチドがナトリウム塩である、
請求項２６に記載の組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２５５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２５５】
ある特定の実施形態において、第２の化合物の共投与は、第１の化合物の効果を強化し、結果として化合物の共投与は、第１の化合物単独で投与する場合の効果よりも高い効果をもたらす。他の実施形態において、共投与は、単独で投与される時の化合物の効果の付加的な効果をもたらす。ある特定の実施形態において、共投与は、単独で投与される時の化合物の効果の相乗的な効果をもたらす。ある特定の実施形態において、第１の化合物は、アンチセンス化合物である。ある特定の実施形態において、第２の化合物は、アンチセンス化合物である。
ある態様において、本発明は以下であってもよい。
［態様１］Ｃ９ＯＲＦ７２核酸またはＣ９ＯＲＦ７２相同核酸に相補的な一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドを含む化合物。
［態様２］前記Ｃ９ＯＲＦ７２核酸は、ヒトＣ９ＯＲＦ７２核酸である、態様１に記載の化合物。
［態様３］前記Ｃ９ＯＲＦ７２核酸は、ヘキサヌクレオチド反復伸長を含有する、態様１〜２に記載の化合物。
［態様４］前記Ｃ９ＯＲＦ７２核酸は、ヘキサヌクレオチド反復伸長を含有しない、態様１〜２に記載の化合物。
［態様５］前記一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ヒトＣ９ＯＲＦ７２核酸に特異的にハイブリダイズすることができる、態様１〜４に記載の化合物。
［態様６］前記一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ヒトＣ９ＯＲＦ７２核酸の等長部分に少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％相補的である、態様１〜５に記載の化合物。
［態様７］前記一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ヒトＣ９ＯＲＦ７２核酸のエクソン、イントロン、５’ＵＴＲ、３’ＵＴＲ、反復領域、スプライスジャンクション、エクソン：エクソンスプライスジャンクション、エクソンスプライシングサイレンサー（ＥＳＳ）、エクソンスプライシングエンハンサー（ＥＳＥ）、エクソン１ａ、エクソン１ｂ、エクソン１ｃ、エクソン１ｄ、エクソン１ｅ、エクソン２、エクソン３、エクソン４、エクソン５、エクソン６、エクソン７、エクソン８、エクソン９、エクソン１０、エクソン１１、イントロン１、イントロン２、イントロン３、イントロン４、イントロン５、イントロン６、イントロン７、イントロン８、イントロン９、またはイントロン１０のうちのいずれかに相補的である、態様１〜６に記載の化合物。
［態様８］１２〜３０個の結合したヌクレオシドからなり、配列番号３０〜３６９の少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、または少なくとも２０個の連続する核酸塩基を含む核酸塩基配列を含む、一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドを含む、化合物。
［態様９］前記一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの修飾を含む、態様１〜８のいずれかに記載の化合物。
［態様１０］前記一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの修飾ヌクレオシド間結合を含む、態様９に記載の化合物。
［態様１１］前記一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドの各ヌクレオシド間結合は、修飾ヌクレオシド間結合である、態様１０に記載の化合物。
［態様１２］前記修飾ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である、態様１０〜１１に記載の化合物。
［態様１３］少なくとも１つの修飾ヌクレオシドを含む、態様９〜１２に記載の化合物。
［態様１４］前記一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドは、修飾糖を有する少なくとも１つの修飾ヌクレオシドを含む、態様９〜１３に記載の化合物。
［態様１５］前記一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドは、二環式糖を含む少なくとも１つの修飾ヌクレオシドを含む、態様１４に記載の化合物。
［態様１６］前記二環式糖は、４’−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−２’架橋（式中、ｎは１または２である）および４’−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−２’の中から選択される、４’〜２’架橋を含む、態様１５に記載の化合物。
［態様１７］前記二環式糖は、４’−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ−２’架橋を含む、態様１６に記載の化合物。
［態様１８］修飾糖を有する前記少なくとも１つの修飾ヌクレオシドは、非二環式の２’修飾された修飾糖部分を含む、態様１４に記載の化合物。
［態様１９］前記２’修飾糖部分は、２’−Ｏ−メトキシエチル基を含む、態様１８に記載の化合物。
［態様２０］前記２’修飾糖部分は、２’−Ｏ−メチル基を含む、態様１８に記載の化合物。
［態様２１］修飾糖を有する前記少なくとも１つの修飾ヌクレオシドは、糖代替物を含む、態様１４に記載の化合物。
［態様２２］前記糖代替物は、モルホリノである、態様２１に記載の化合物。
［態様２３］前記糖代替物は、ペプチド核酸である、態様２１に記載の化合物。
［態様２４］各ヌクレオシドが修飾される、態様１３〜２３に記載の化合物。
［態様２５］前記一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの修飾核酸塩基を含む、態様９〜２４に記載の化合物。
［態様２６］前記修飾核酸塩基は、５’−メチルシトシンである、態様２５に記載の化合物。
［態様２７］前記一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドは、
結合したデオキシヌクレオシドからなるギャップセグメント、
結合したヌクレオシドからなる５’ウイングセグメント
結合したヌクレオシドからなる３’ウイングセグメント、を含み、
前記ギャップセグメントは、前記５’ウイングセグメントおよび前記３’ウイングセグメントに直接隣接して、かつそれらの間に位置付けられ、各ウイングセグメントの各ヌクレオシドが、修飾糖を含む、態様９〜２６に記載の化合物。
［態様２８］前記一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドは、
１０個の結合したデオキシヌクレオシドからなるギャップセグメント、
５個の結合したヌクレオシドからなる５’ウイングセグメント、
５個の結合したヌクレオシドからなる３’ウイングセグメント、を含み、
前記ギャップセグメントは、前記５’ウイングセグメントおよび前記３’ウイングセグメントに直接隣接して、かつそれらの間に位置付けられ、各ウイングセグメントの各ヌクレオシドが、２’−Ｏ−メトキシエチル糖を含み、各ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート結合である、態様３７に記載の化合物。
［態様２９］前記一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドは、１５個の結合したヌクレオシドからなる、態様１〜２７に記載の化合物。
［態様３０］前記一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドは、１６個の結合したヌクレオシドからなる、態様１〜２７に記載の化合物。
［態様３１］前記一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドは、１７個の結合したヌクレオシドからなる、態様１〜２７に記載の化合物。
［態様３２］前記一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドは、１８個の結合したヌクレオシドからなる、態様１〜２７に記載の化合物。
［態様３３］前記一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドは、１９個の結合したヌクレオシドからなる、態様１〜２７に記載の化合物。
［態様３４］前記一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドは、２０個の結合したヌクレオシドからなる、態様１〜２８に記載の化合物。
［態様３５］前記一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドは、２１個の結合したヌクレオシドからなる、態様１〜２７に記載の化合物。
［態様３６］前記一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドは、２２個の結合したヌクレオシドからなる、態様１〜２７に記載の化合物。
［態様３７］前記一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドは、２３個の結合したヌクレオシドからなる、態様１〜２７に記載の化合物。
［態様３８］前記一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドは、２４個の結合したヌクレオシドからなる、態様１〜２７に記載の化合物。
［態様３９］前記一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドは、２５個の結合したヌクレオシドからなる、態様１〜２７に記載の化合物。
［態様４０］神経変性疾患を治療するための医薬品の製造のための、態様１〜３９のいずれかに記載の化合物の使用。
［態様４１］細胞を、エクソン１Ｂの上流を標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドと接触させることによって、ヘキサヌクレオチド反復伸長を含有するｍＲＮＡ転写産物の発現を選択的に阻害する方法。
【外国語明細書】
2019141075000001.pdf