(57)【要約】【課題】オーバーブロッキングが起こりにくく、生体由来物質と同程度又はそれ以上の非特異染色抑制効果を有し、非生体由来物質である、細胞又は組織染色用非特異染色抑制剤を提供すること。【解決手段】親水性繰り返し単位（Ａ）および疎水性繰り返し単位（Ｂ）を有し、重量平均分子量が３０００以上のポリマーを含み、該ポリマーの全繰り返し単位中の親水性繰り返し単位（Ａ）の割合が６０質量％を超え９９質量％以下であり、該ポリマーの全繰り返し単位中の疎水性繰り返し単位（Ｂ）の割合が１質量％以上４０質量％未満である、細胞又は組織染色用非特異染色抑制剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
親水性繰り返し単位（Ａ）および疎水性繰り返し単位（Ｂ）を有し、重量平均分子量が３０００以上のポリマーを含み、
該ポリマーの全繰り返し単位中の親水性繰り返し単位（Ａ）の割合が６０質量％を超え９９質量％以下であり、
該ポリマーの全繰り返し単位中の疎水性繰り返し単位（Ｂ）の割合が１質量％以上４０質量％未満である、
細胞又は組織染色用非特異染色抑制剤。
【請求項２】
前記繰り返し単位（Ａ）が、ポリアルキレングリコール鎖、双性イオン構造、複素環基、エステル結合、アミド結合、ヒドロキシ基、イソシアナート基、ブロックイソシアナート基、無水カルボン酸基及びアミノ基から選ばれる１種又は２種以上を含む、請求項１に記載の非特異染色抑制剤。
【請求項３】
前記繰り返し単位（Ａ）が、（メタ）アクリルアミド系モノマーに由来する親水性繰り返し単位及び（メタ）アクリレート系モノマーに由来する親水性繰り返し単位から選ばれる１種又は２種以上を有する、請求項１又は２に記載の非特異染色抑制剤。
【請求項４】
前記繰り返し単位（Ｂ）が、ケト基、ホルミル基、ポリアルキレングリコール鎖、エステル結合、アミド結合及び芳香族炭化水素基から選ばれる１種又は２種以上を含む、請求項１〜３のいずれか１つに記載の非特異染色抑制剤。
【請求項５】
前記繰り返し単位（Ｂ）が、（メタ）アクリルアミド系モノマーに由来する疎水性繰り返し単位、（メタ）アクリレート系モノマーに由来する疎水性繰り返し単位、及びスチレン系モノマーに由来する疎水性繰り返し単位から選ばれる１種又は２種以上を有する、請求項１〜４のいずれか１つに記載の非特異染色抑制剤。
【請求項６】
前記繰り返し単位（Ｂ）が、式（７）、（８）及び（１５）で表される繰り返し単位から選ばれる１種又は２種以上である、請求項１〜５のいずれか１つに記載の非特異染色抑制剤。
【化１】
2019099705.tif 000022
〔式（７）中、
Ｒ31は、水素原子又はメチル基を示し、
Ｒ32は、−Ｏ−、＊−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−、＊−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＲ34−、＊−ＮＲ34−（Ｃ＝Ｏ）−（Ｒ34は、水素原子又は炭素数１〜１０の有機基を示し、＊は、式（７）中のＲ31が結合している炭素原子と結合する位置を示す）又はフェニレン基を示し、
Ｒ33は、炭化水素基を示す。〕
【化２】
2019099705.tif 000023
〔式（８）中、
Ｒ35は、水素原子又はメチル基を示し、
Ｚは、ホルミル基又はケト基を有する有機基を示す。〕
【化３】
2019099705.tif 000024
〔式（１５）中、
Ｒ45は、炭素数２〜４のアルキレン基を示し、
Ｒ46は、炭素数５〜３０のアルキル基、炭素数５〜３０のアルカノイル基、又は、アリール基を示し、
Ｒ47は、水素原子又はメチル基を示し、
Ｒ48は、−Ｏ−、＊＊−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−、＊＊−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＲ49−、＊＊−ＮＲ49−（Ｃ＝Ｏ）−（Ｒ49は、水素原子又は炭素数１〜１０の有機基を示し、＊＊は、式（１５）中のＲ47が結合している炭素原子と結合する位置を示す）又はフェニレン基を示し、
ｍは、平均値で２〜１００を示す。〕
【請求項７】
前記ポリマーの重量平均分子量が３０００〜１００万である、請求項１〜６のいずれか１つに記載の非特異染色抑制剤。
【請求項８】
前記ポリマーが水溶性である、請求項１〜７のいずれか１つに記載の非特異染色抑制剤。
【請求項９】
請求項１〜８のいずれか１つに記載の非特異染色抑制剤を含有する、細胞又は組織染色用キット。
【請求項１０】
請求項１〜８のいずれか１つに記載の非特異染色抑制剤により組織切片を処理する工程、及び、
前記処理した組織切片を染色する工程、
を含む組織染色方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、細胞又は組織染色用非特異染色抑制剤、細胞又は組織染色用キット及び組織染色方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年の抗体医薬を中心とした分子標的薬治療の広がりに伴い、分子標的薬をより効率的に使用するための正確な診断方法の必要性が高まっている。具体的には、標的となる生体物質の発現量を定量的に評価することにより、患者ごとの分子標的薬の適用可否を効率的に行うこと等が求められている。例えば、ある薬剤投与の有効性の判定方法として、薬剤の標的であるタンパク質等の発現を解析する免疫組織化学〔Ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ；ＩＨＣ〕法や、前記タンパク質をコードする遺伝子の増幅等を解析するＦＩＳＨ〔Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ  ｉｎ  ｓｉｔｕ  ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ〕法等の組織染色方法が臨床の場で広く用いられている。
【０００３】
このような組織染色方法として、色素を用いるヘマトキシリン−エオジン〔ＨＥ〕染色や、特許文献１に開示されているような酵素を用いたＤＡＢ染色法、特許文献２に開示されているような蛍光標識を用いた蛍光免疫染色が従来から広く行われている。いずれの方法においても、検出の目的となる生体物質を標識するための物質が組織切片に非特異的に吸着することにより生じるバックグラウンドノイズを抑制するためのブロッキング剤として、アルブミン、カゼイン、ゼラチン、スキムミルク等の生物由来物質がよく用いられている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特許第５６８７８２２号公報
【特許文献２】特許第５６１８５４９号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
しかしながら、前記のような生体由来物質をブロッキング剤として用いた場合、ＢＳＥに代表される生物汚染問題による供給の不安定化や製品ロット間の差の問題などが懸念される。
【０００６】
本発明は、前述したような課題に鑑みてなされたものであり、オーバーブロッキングが起こりにくく、生体由来物質と同程度又はそれ以上の非特異染色抑制効果を有し、非生体由来物質である、細胞又は組織染色用非特異染色抑制剤を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者は、前記課題を解決すべく鋭意検討した結果、特定のポリマーを含む細胞又は組織染色用非特異染色抑制剤によれば、前記課題を解決できることを見出し、本発明を完成させるに至った。
本発明の構成例は以下のとおりである。
【０００８】
なお、本明細書において、数値範囲等を表す「Ａ〜Ｂ」はＡ以上、Ｂ以下を意味し、Ａ及びＢをその数値範囲に含む。
【０００９】
［１］  親水性繰り返し単位（Ａ）および疎水性繰り返し単位（Ｂ）を有し、重量平均分子量が３０００以上のポリマーを含み、
該ポリマーの全繰り返し単位中の親水性繰り返し単位（Ａ）の割合が６０質量％を超え９９質量％以下であり、
該ポリマーの全繰り返し単位中の疎水性繰り返し単位（Ｂ）の割合が１質量％以上４０質量％未満である、
細胞又は組織染色用非特異染色抑制剤。
【００１０】
［２］  前記繰り返し単位（Ａ）が、ポリアルキレングリコール鎖、双性イオン構造、複素環基、エステル結合、アミド結合、ヒドロキシ基、イソシアナート基、ブロックイソシアナート基、無水カルボン酸基及びアミノ基から選ばれる１種又は２種以上を含む、請求項１に記載の非特異染色抑制剤。
［３］  前記繰り返し単位（Ａ）が、（メタ）アクリルアミド系モノマーに由来する親水性繰り返し単位及び（メタ）アクリレート系モノマーに由来する親水性繰り返し単位から選ばれる１種又は２種以上を有する、［１］又は［２］に記載の非特異染色抑制剤。
【００１１】
［４］  前記繰り返し単位（Ｂ）が、ケト基、ホルミル基、ポリアルキレングリコール鎖、エステル結合、アミド結合及び芳香族炭化水素基から選ばれる１種又は２種以上を含む、［１］〜［３］のいずれかに記載の非特異染色抑制剤。
［５］  前記繰り返し単位（Ｂ）が、（メタ）アクリルアミド系モノマーに由来する疎水性繰り返し単位、（メタ）アクリレート系モノマーに由来する疎水性繰り返し単位、及びスチレン系モノマーに由来する疎水性繰り返し単位から選ばれる１種又は２種以上を有する、［１］〜［４］のいずれかに記載の非特異染色抑制剤。
【００１２】
［６］  前記繰り返し単位（Ｂ）が、式（７）、（８）及び（１５）で表される繰り返し単位から選ばれる１種又は２種以上である、［１］〜［５］のいずれかに記載の非特異染色抑制剤。
【００１３】
【化１】
2019099705.tif 000002
〔式（７）中、
Ｒ31は、水素原子又はメチル基を示し、
Ｒ32は、−Ｏ−、＊−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−、＊−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＲ34−、＊−ＮＲ34−（Ｃ＝Ｏ）−（Ｒ34は、水素原子又は炭素数１〜１０の有機基を示し、＊は、式（７）中のＲ31が結合している炭素原子と結合する位置を示す）又はフェニレン基を示し、
Ｒ33は、炭化水素基を示す。〕
【００１４】
【化２】
2019099705.tif 000003
〔式（８）中、
Ｒ35は、水素原子又はメチル基を示し、
Ｚは、ホルミル基又はケト基を有する有機基を示す。〕
【００１５】
【化３】
2019099705.tif 000004
〔式（１５）中、
Ｒ45は、炭素数２〜４のアルキレン基を示し、
Ｒ46は、炭素数５〜３０のアルキル基、炭素数５〜３０のアルカノイル基、又は、アリール基を示し、
Ｒ47は、水素原子又はメチル基を示し、
Ｒ48は、−Ｏ−、＊＊−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−、＊＊−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＲ49−、＊＊−ＮＲ49−（Ｃ＝Ｏ）−（Ｒ49は、水素原子又は炭素数１〜１０の有機基を示し、＊＊は、式（１５）中のＲ47が結合している炭素原子と結合する位置を示す）又はフェニレン基を示し、
ｍは、平均値で２〜１００を示す。〕
【００１６】
［７］  前記ポリマーの重量平均分子量が３０００〜１００万である、［１］〜［６］のいずれかに記載の非特異染色抑制剤。
【００１７】
［８］  前記ポリマーが水溶性である、［１］〜［７］のいずれかに記載の非特異染色抑制剤。
【００１８】
［９］  ［１］〜［８］のいずれかに記載の非特異染色抑制剤を含有する、細胞又は組織染色用キット。
【００１９】
［１０］  ［１］〜［８］のいずれかに記載の非特異染色抑制剤により組織切片を処理する工程、及び、
前記処理した組織切片を染色する工程、
を含む組織染色方法。
【発明の効果】
【００２０】
本発明によれば、オーバーブロッキングが起こりにくく、生体由来物質と同程度又はそれ以上の非特異染色抑制効果を有し、非生体由来物質である、細胞又は組織染色用非特異染色抑制剤を提供することができる。特に、本発明によれば、生体由来物質を使用しなくても、それと同等、更には、それより低濃度で、非特異的な染色を抑制することができ、生体由来物質に含まれる夾雑物等の影響がなく、ロット間の差がなく、安定して同様の品質の非特異染色抑制剤を供給することができる。
さらに、細胞又は組織を染色する際における染色の前処理として、本発明に係る非特異染色抑制剤を用いることで、非特異的な染色を抑制して、検出時にみられるバックグラウンドノイズを低減させることが可能となり、染色画像の評価をするにあたって、精度の向上を図ることができ、より高い精度で目的とする生体物質の検出を行うことができる。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
【図１】図１は、下記試験例２において、ＰＢＳ（ｉ）を用いて明視野観察を行った結果の写真である。
【図２】図２は、下記試験例２において、ＰＢＳ（ｉｉ）（実施例１で得られた共重合体を含む）を用いて明視野観察を行った結果の写真である。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
≪非特異染色抑制剤≫
本発明に係る細胞又は組織（以下、単に「組織等」と記載する。）染色用非特異染色抑制剤（以下「本抑制剤」ともいう。）は、親水性繰り返し単位（Ａ）（以下単に「繰り返し単位（Ａ）」ともいう。）および疎水性繰り返し単位（Ｂ）（以下単に「繰り返し単位（Ｂ）」ともいう。）を有し、重量平均分子量（Ｍｗ）が３０００以上のポリマー（以下「特定ポリマー」ともいう。）を含み、該ポリマーの全繰り返し単位中の親水性繰り返し単位（Ａ）の割合が６０質量％を超え９９質量％以下であり、該ポリマーの全繰り返し単位中の疎水性繰り返し単位（Ｂ）の割合が１質量％以上４０質量％未満であることを特徴とする。
【００２３】
ブロッキング処理されていない組織等に特定ポリマーを接触させること、特定ポリマーを用いて組織等を処理することによって、組織等を染色用試薬を用いて染色した場合における非特異染色を抑制することができ、より高い精度で目的とする生体物質の検出を行うことができる。また、非特異吸着が引き起こす検出ノイズを低減する効果も期待できる。
従って、特定ポリマーは、ブロッキング処理されていない組織等への添加剤、組織等の表面処理剤として有用であり、組織等の表面処理に好適に使用することができる。また、本抑制剤は、ブロッキング剤、検出ノイズ低減剤などとして使用してもよい。
【００２４】
特定ポリマーは、ブロッキング剤として従来用いられてきたアルブミン、カゼイン、ゼラチン、スキムミルク等の生物由来物質の代替品としての利用が期待できる。
なお、本明細書において、「ブロッキング」とは、組織等への非特異染色を抑制することをいい、生体物質を標識するための物質が組織等に非特異吸着することを抑制することに関連する。組織等への非特異染色の抑制は、組織等への非特異染色に起因する検出ノイズを低減することを包含する概念である。
【００２５】
本発明において、「親水性繰り返し単位」とは、水との親和力が強い性質を持つ繰り返し単位のことを意味する。具体的には１種の繰り返し単位のみからなるホモポリマー（実施例の測定法による数平均分子量が１万程度のもの）とした場合に、常温（２５℃）において純水１００ｇに対して１ｇ以上溶解する場合にはその繰り返し単位は親水性であるという。
【００２６】
また、「疎水性繰り返し単位」とは、水との親和力が弱い性質を持つ繰り返し単位のことを意味する。具体的には１種の繰り返し単位のみからなるホモポリマー（実施例の測定法による数平均分子量が１万程度のもの）とした場合に、常温（２５℃）において純水１００ｇに対して１ｇ未満しか溶解しない場合にはその繰り返し単位は疎水性であるという。
【００２７】
なお、特定ポリマーは、繰り返し単位（Ａ）及び繰り返し単位（Ｂ）をそれぞれ、１種以上ずつ含有していればよい。また、特定ポリマーは、繰り返し単位（Ａ）及び（Ｂ）以外の繰り返し単位を含有していてもよい。
【００２８】
＜特定ポリマー＞
前記特定ポリマーは、繰り返し単位（Ａ）及び（Ｂ）を有し、Ｍｗが３０００以上のポリマーである。
本抑制剤は、１種又は２種以上の特定ポリマーを含んでいてもよい。
【００２９】
前記Ｍｗは、オーバーブロッキングが起こりにくく、組織等への付着力及び非特異染色抑制効果に優れる等の点から、好ましくは４０００以上、より好ましくは５０００以上、更に好ましくは６０００以上である。なお、前記Ｍｗの上限は特に制限されないが、好ましくは１００万以下、より好ましくは７５万以下、更に好ましくは５０万以下、特に好ましくは２５万以下である。
Ｍｗが３０００未満であると、特定ポリマーが組織等に付着しにくくなり、非特異染色が起こりやすくなる。
【００３０】
特定ポリマーの数平均分子量（Ｍｎ）としては、好ましくは５００〜１０万、より好ましくは７００〜９５０００、更に好ましくは１０００〜９００００、更に好ましくは１５００〜８５０００である。
【００３１】
分子量分布（Ｍｗ／Ｍｎ）としては、組織等を染色する際における非特異染色をより抑制できる観点から、好ましくは１〜１０、より好ましくは１．５〜８、更に好ましくは１．８〜７、特に好ましくは２〜６である。
前記Ｍｗ、Ｍｎ及びＭｗ／Ｍｎは、後述する実施例に記載の方法に従い測定すればよい。
【００３２】
特定ポリマーとしては水溶性のポリマーが好ましい。また、特定ポリマーとしては、水の他に、有機溶媒（例：アセトン、エタノール、Ｎ−メチルピロリドン）に溶解するものであってもよい。
なお、本明細書では、０．５質量％のポリマー固形分となるように特定ポリマーを水（２５℃）に添加・混合した場合に目視で透明となる場合、その特定ポリマーは水溶性であるという。また、０．５質量％のポリマー固形分となるように特定ポリマーを前記有機溶媒（２５℃）に添加・混合した場合に目視で透明となる場合、その特定ポリマーは前記有機溶媒に溶解するという。
【００３３】
特定ポリマーは共重合体であればよく、ブロック共重合体、ランダム共重合体、交互共重合体、グラフト共重合体のいずれであってもよい。
【００３４】
［繰り返し単位（Ａ）］
特定ポリマーは、親水性繰り返し単位（Ａ）を有する。これにより、非特異染色を抑制することができる。
特定ポリマーに含まれる繰り返し単位（Ａ）は、１種でもよく、２種以上でもよい。
【００３５】
特定ポリマーは、繰り返し単位（Ａ）を、特定ポリマーの全繰り返し単位中６０質量％を超え９９質量％以下の量で有する。繰り返し単位（Ａ）の含有量が６０質量％以下であると、組織等を染色する際の非特異染色が起こりやすくなり、９９質量％を超えると、特定ポリマーが組織等に充分に付着せず、染色時における非特異染色が起こりやすくなる。
【００３６】
前記繰り返し単位（Ａ）の含有量は、組織等を染色する際における非特異染色をより抑制できる等の点から、特定ポリマーの全繰り返し単位中、好ましくは６２質量％以上、より好ましくは６５質量％以上であり、また、特定ポリマーを組織等に接触させた後に、組織等から剥離しにくくなる等の点から、特定ポリマーの全繰り返し単位中、好ましくは９７．５質量％以下、特に好ましくは９５質量％以下である。
特に、繰り返し単位（Ａ）の含有量が７５質量％以上の場合、特定ポリマーの使用量が低濃度であっても、生体由来物質と同程度又はそれ以上の非特異染色抑制効果を有する傾向にある。
なお、各繰り返し単位の含有量は13Ｃ−ＮＭＲ等により測定可能である。
【００３７】
繰り返し単位（Ａ）としては、不飽和結合を末端又は非末端に有するモノマーに由来する繰り返し単位が挙げられる。具体的には、（メタ）アクリルアミド系モノマーに由来する繰り返し単位（以下「（メタ）アクリルアミド系繰り返し単位」とも称する。）、（メタ）アクリレート系モノマーに由来する繰り返し単位（以下「（メタ）アクリレート系繰り返し単位」とも称する。）、スチレン系モノマーに由来する繰り返し単位（以下「スチレン系繰り返し単位」とも称する。）、不飽和ポリアルキレングリコールエーテル系モノマーに由来する繰り返し単位等が挙げられる。これらの中でも、繰り返し単位（Ａ）としては、（メタ）アクリルアミド系繰り返し単位、（メタ）アクリレート系繰り返し単位、スチレン系繰り返し単位が好ましく、（メタ）アクリルアミド系繰り返し単位、（メタ）アクリレート系繰り返し単位がより好ましい。
【００３８】
（メタ）アクリレート系繰り返し単位の含有量は、繰り返し単位（Ａ）全量に対して、好ましくは０〜９０質量％、より好ましくは０〜８０質量％、特に好ましくは０〜７０質量％である。
繰り返し単位（Ａ）としては、（メタ）アクリルアミド系繰り返し単位を少なくとも含む繰り返し単位が好ましい。（メタ）アクリルアミド系繰り返し単位の含有量は、繰り返し単位（Ａ）全量に対して、好ましくは１０〜１００質量％、より好ましくは２０〜１００質量％である。
【００３９】
繰り返し単位（Ａ）は、ポリアルキレングリコール鎖、双性イオン構造、複素環基（モルホリノ基、エポキシ基等）、エステル結合、アミド結合、ヒドロキシ基、イソシアナート基、ブロックイソシアナート基、無水カルボン酸基及びアミノ基から選ばれる１種又は２種以上を含むことが好ましい。
なお、特定ポリマーは、前記ポリアルキレングリコール鎖等を繰り返し単位（Ａ）の主鎖に有していても側鎖に有してもよいが、側鎖に有することが好ましい。
繰り返し単位（Ａ）は、ポリアルキレングリコール鎖、双性イオン構造、複素環基、エステル結合及びアミド結合から選ばれる１種又は２種以上を含むことがより好ましい。
【００４０】
ポリアルキレングリコール鎖としては、−（Ｒ1Ｏ）n−で表される構造が好ましい（Ｒ1は独立に、炭素数２〜４のアルカンジイル基を示し、ｎは、平均値で２〜１００を示す）。
Ｒ1で示されるアルカンジイル基の炭素数は、好ましくは２又は３であり、より好ましくは２である。
Ｒ1で示されるアルカンジイル基は直鎖状でも分岐状でもよく、具体的には、エタン−１，２−ジイル基、プロパン−１，２−ジイル基、プロパン−１，３−ジイル基、プロパン−２，２−ジイル基、ブタン−１，２−ジイル基、ブタン−１，３−ジイル基、ブタン−１，４−ジイル基等が挙げられる。これらの中でも、所望の効果を容易に得ることができ、ポリマーの合成容易性、特に、モノマーの入手容易性等の点から、エタン−１，２−ジイル基が好ましい。なお、ｎ個のＲ1は同一でも異なっていてもよい。
ｎは、好ましくは平均値で４〜９０であり、より好ましくは平均値で８〜９０であり、更に好ましくは平均値で８〜６０であり、より好ましくは平均値で８〜４０であり、特に好ましくは平均値で９〜２５である。
【００４１】
なお、本明細書における各「平均値」はＮＭＲで測定できる。例えば、下記式（２）の構造について、1Ｈ−ＮＭＲを測定し、Ｒ1で示されるアルカンジイル基と、Ｒ2で示されるアルキル基の末端のメチル基との、それぞれのプロトンピークの積分値を比較することで、ｎの平均値を算出可能である。
【００４２】
ポリアルキレングリコール鎖を有する繰り返し単位（Ａ）としては、例えば、ポリアルキレングリコール鎖を側鎖に有する繰り返し単位（以下「繰り返し単位（Ａ−１）」とも称する。）が挙げられる。
繰り返し単位（Ａ−１）としては、前記不飽和結合を末端又は非末端に有するモノマーとして例示したモノマー種と同様のモノマーに由来する繰り返し単位が挙げられるが、（メタ）アクリレート系繰り返し単位が特に好ましい。
【００４３】
また、繰り返し単位（Ａ−１）は、ポリアルキレングリコール鎖の末端に水素原子又は炭素数１〜４のアルキル基が結合していることが好ましい。このような繰り返し単位（Ａ−１）としては、例えば、下記式（１）で表される構造を側鎖に有する親水性繰り返し単位が挙げられ、下記式（２）で表される繰り返し単位が好ましい。
【００４４】
【化４】
2019099705.tif 000005
〔式（１）中、
Ｒ1及びｎは、前記と同義であり、
Ｒ2は、水素原子又は炭素数１〜４のアルキル基を示す。〕
【００４５】
【化５】
2019099705.tif 000006
〔式（２）中、
Ｒ3は、水素原子又はメチル基を示し、
Ｒ4は、−Ｏ−、＊−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−、＊−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＲ5−、＊−ＮＲ5−（Ｃ＝Ｏ）−（Ｒ5は、水素原子又は炭素数１〜１０の有機基を示し、＊は、式（２）中のＲ3が結合している炭素原子と結合する位置を示す）又はフェニレン基を示し、
その他の符号は式（１）と同義である。〕
【００４６】
Ｒ2で示されるアルキル基の炭素数は、所望の効果を容易に得ることができ、ポリマーの合成容易性、特に、モノマーの入手容易性等の点から、好ましくは１〜３であり、より好ましくは１又は２であり、更に好ましくは１である。また、Ｒ2で示されるアルキル基は直鎖状でも分岐状でもよく、具体的には、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基が挙げられる。
斯様なＲ2の中でも、所望の効果を容易に得ることができ、ポリマーの合成容易性、特に、モノマーの入手容易性等の観点から、水素原子又は炭素数１〜３のアルキル基が好ましく、水素原子、又は、炭素数１若しくは２のアルキル基がより好ましく、水素原子又はメチル基が更に好ましく、メチル基が特に好ましい。
【００４７】
また、Ｒ4におけるフェニレン基としては、１，２−フェニレン基、１，３−フェニレン基、１，４−フェニレン基が挙げられる。
【００４８】
また、前記Ｒ5における有機基の炭素数は、好ましくは１〜６である。該有機基としては、炭化水素基が挙げられる。斯かる炭化水素基は、脂肪族炭化水素基、脂環式炭化水素基及び芳香族炭化水素基を包含する概念である。
【００４９】
前記脂肪族炭化水素基は直鎖状でも分岐状でもよく、具体的には、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、ヘプチル基、オクチル基、ノニル基、デシル基等のアルキル基が挙げられる。
【００５０】
前記脂環式炭化水素基は、単環の脂環式炭化水素基と橋かけ環炭化水素基に大別される。前記単環の脂環式炭化水素基としては、シクロプロピル基、シクロヘキシル基等のシクロアルキル基が挙げられる。また、橋かけ環炭化水素基としては、イソボルニル基等が挙げられる。
【００５１】
前記芳香族炭化水素基としては、フェニル基等のアリール基が挙げられる。
【００５２】
Ｒ4の中でも、親水性化性能に優れる等の観点から、＊−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−が特に好ましい。
【００５３】
繰り返し単位（Ａ−１）を誘導するモノマーとしては、ポリエチレングリコール（メタ）アクリレート、ポリプロピレンレングリコール（メタ）アクリレート、ポリエチレングリコールポリプロピレングリコール（メタ）アクリレート、ポリエチレングリコールポリテトラメチレングリコール（メタ）アクリレート、ポリプロピレングリコールポリテトラメチレングリコール（メタ）アクリレート、メトキシポリエチレングリコール（メタ）アクリレート、エトキシポリエチレングリコール（メタ）アクリレート等が挙げられ、これらの中でも、ポリエチレングリコール（メタ）アクリレート、メトキシポリエチレングリコール（メタ）アクリレートが好ましい。これらは、単独で又は２種以上を用いてもよい。
【００５４】
前記双性イオン構造としては、側鎖中にカチオン性基と、アニオン性基とを有する構造が好ましい。
【００５５】
双性イオン構造を有する繰り返し単位（Ａ）としては、例えば、双性イオン構造を側鎖に有する繰り返し単位（以下「繰り返し単位（Ａ−２）」とも称する。）が挙げられる。
繰り返し単位（Ａ−２）としては、前記不飽和結合を末端又は非末端に有するモノマーとして例示したモノマー種と同様のモノマーに由来する繰り返し単位が挙げられるが、（メタ）アクリレート系繰り返し単位が特に好ましい。
繰り返し単位（Ａ−２）としては、具体的には、下記式（３）又は（４）で表される繰り返し単位が挙げられる。なお、繰り返し単位（Ａ）は、式（３）で表される繰り返し単位と式（４）で表される繰り返し単位の両方を含んでいてもよい。
【００５６】
【化６】
2019099705.tif 000007
〔式（３）中、
Ｒ6は、水素原子又はメチル基を示し、
Ｒ7は独立に、炭素数２〜４のアルカンジイル基を示し、
Ｒ8は、炭素数１〜１０のアルカンジイル基を示し、
Ｒ9、Ｒ10及びＲ11はそれぞれ独立に、水素原子又は炭素数１〜８の炭化水素基を示し、
ｑは、平均値で１〜１０を示す。〕
【００５７】
Ｒ7で示されるアルカンジイル基の炭素数は、好ましくは２又は３であり、より好ましくは２である。
Ｒ7で示されるアルカンジイル基は直鎖状でも分岐状でもよく、具体的には、Ｒ1で例示した基と同様の基等が挙げられる。これらの中でも、所望の効果を容易に得ることができ、ポリマーの合成容易性、特に、モノマーの入手容易性等の観点から、エタン−１，２−ジイル基が好ましい。
なお、Ｒ7が複数ある場合、Ｒ7は同一でも異なっていてもよい。
【００５８】
Ｒ8で示されるアルカンジイル基の炭素数は、好ましくは１〜６であり、より好ましくは１〜４であり、更に好ましくは２又は３であり、特に好ましくは２である。
Ｒ8で示されるアルカンジイル基は直鎖状でも分岐状でもよく、好適な具体例としては、前記Ｒ7で示されるアルカンジイル基と同様の基が挙げられる。
【００５９】
Ｒ9、Ｒ10及びＲ11はそれぞれ独立して、炭素数１〜８の炭化水素基が好ましい。斯かる炭化水素基の炭素数は、好ましくは１〜４であり、より好ましくは１又は２であり、特に好ましくは１である。
該炭化水素基としては、アルキル基；フェニル基等のアリール基；ベンジル基等のアラルキル基等が挙げられるが、アルキル基が好ましい。
このアルキル基は直鎖状でも分岐状でもよく、好適な具体例としては、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基が挙げられる。
【００６０】
ｑは、好ましくは平均値で１〜７であり、より好ましくは平均値で１〜４であり、特に好ましくは１である。
【００６１】
式（３）で表される繰り返し単位を誘導するモノマーとしては、２−（メタ）アクリロイルオキシエチル−２’−（トリメチルアンモニオ）エチルホスフェート、３−（メタ）アクリロイルオキシプロピル−２’−（トリメチルアンモニオ）エチルホスフェート、４−（メタ）アクリロイルオキシブチル−２’−（トリメチルアンモニオ）エチルホスフェート、２−（メタ）アクリロイルオキシエトキシエチル−２’−（トリメチルアンモニオ）エチルホスフェート、２−（メタ）アクリロイルオキシジエトキシエチル−２’−（トリメチルアンモニオ）エチルホスフェート、２−（メタ）アクリロイルオキシエチル−２’−（トリエチルアンモニオ）エチルホスフェート、２−（メタ）アクリロイルオキシエチル−２’−（トリブチルアンモニオ）エチルホスフェート等が挙げられる。これらは、単独で又は２種以上を用いてもよい。
【００６２】
【化７】
2019099705.tif 000008
〔式（４）中、
Ｙは、−（Ｃ＝Ｏ）Ｏ-、−（Ｏ＝Ｓ＝Ｏ）Ｏ-、−Ｏ（Ｏ＝Ｓ＝Ｏ）Ｏ-、−（Ｓ＝Ｏ）Ｏ-、−Ｏ（Ｓ＝Ｏ）Ｏ-、−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＲ17）Ｏ-、−ＯＰ（＝Ｏ）（Ｒ17）Ｏ-、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ17）Ｏ-、又は−Ｐ（＝Ｏ）（Ｒ17）Ｏ-を示し（Ｒ17は炭素数１〜３のアルキル基を示す）、
Ｒ12は、水素原子又はメチル基を示し、
Ｒ13及びＲ14はそれぞれ独立に、炭素数１〜１０の２価の有機基を示し、
Ｒ15及びＲ16はそれぞれ独立に、炭素数１〜１０の炭化水素基を示す。〕
【００６３】
Ｙとしては、−（Ｃ＝Ｏ）Ｏ-が好ましい。なお、Ｒ17で示されるアルキル基としては、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基が挙げられる。
【００６４】
Ｒ13及びＲ14における２価の有機基の炭素数は、好ましくは１〜８、より好ましくは１〜６である。
また、該２価の有機基としては、２価の炭化水素基が好ましく、２価の脂肪族炭化水素基がより好ましい。当該２価の脂肪族炭化水素基は、直鎖状でも分岐状でもよい。また、２価の脂肪族炭化水素基としては、アルカンジイル基が好ましい。例えば、メタン−１，１−ジイル基、エタン−１，２−ジイル基、プロパン−１，１−ジイル基、プロパン−１，２−ジイル基、プロパン−１，３−ジイル基、プロパン−２，２−ジイル基、ブタン−１，４−ジイル基、ペンタン−１，５−ジイル基、ヘキサン−１，６−ジイル基が挙げられる。
【００６５】
Ｒ15及びＲ16における炭化水素基の炭素数は、好ましくは１〜１０、より好ましくは１〜６、さらに好ましくは１〜４である。
Ｒ15及びＲ16における炭化水素基としては、アルキル基；フェニル基等のアリール基；ベンジル基等のアラルキル基などが挙げられるが、アルキル基が好ましい。当該アルキル基は、直鎖状でも分岐状でもよく、例えば、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基が挙げられる。
【００６６】
なお、式（４）で表される繰り返し単位は、ナトリウムイオン、カリウムイオン等のアルカリ金属イオン、カルシウムイオン、マグネシウムイオン等のアルカリ土類金属イオン、アンモニウムイオン、水素イオン、水酸化物イオン等の対イオンを有していてもよい。
【００６７】
式（４）で表される繰り返し単位を誘導するモノマーとしては、Ｎ−（メタ）アクリロイルオキシエチル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウム−α−Ｎ−メチルカルボキシベタイン、Ｎ−（メタ）アクリロイルオキシエチル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウム−α−Ｎ−プロピルスルホベタイン等が挙げられる。これらは、単独で又は２種以上を用いてもよい。
【００６８】
（メタ）アクリルアミド系繰り返し単位としては、前記ポリアルキレングリコール鎖や双性イオン構造を側鎖に有する繰り返し単位であってもよいが、下記式（５）又は（６）で表される繰り返し単位が特に好ましい。なお、繰り返し単位（Ａ）は、式（５）で表される繰り返し単位と式（６）で表される繰り返し単位の両方を含んでいてもよい。また、繰り返し単位（Ａ）としては、組織等を染色する際における非特異染色をより容易に抑制することができる等の点から、式（６）で表される繰り返し単位を少なくとも含むことがより好ましい。
【００６９】
【化８】
2019099705.tif 000009
〔式（５）中、
Ｒ18は、水素原子又はメチル基を示し、
Ｒ19及びＲ20はそれぞれ独立に、水素原子、炭素数１〜６のアルキル基又はヒドロキシアルキル基を示す。〕
【００７０】
Ｒ19及びＲ20におけるアルキル基の炭素数は、好ましくは１〜３である。
また、該アルキル基は直鎖状でも分岐状でもよく、好適な具体例としては、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基が挙げられる。
【００７１】
Ｒ19及びＲ20におけるヒドロキシアルキル基の炭素数は、好ましくは１〜６、より好ましくは１〜３である。ヒドロキシアルキル基に含まれるアルキル基は直鎖状でも分岐状でもよく、ヒドロキシアルキル基の好適な具体例としては、ヒドロキシメチル基、ヒドロキシエチル基、ヒドロキシプロピル基、ヒドロキシイソプロピル基が挙げられる。なお、ヒドロキシアルキル基におけるヒドロキシ基の置換位置は任意である。
【００７２】
式（５）で表される繰り返し単位を誘導するモノマーとしては、ジメチル（メタ）アクリルアミド、ジエチル（メタ）アクリルアミド、Ｎ−イソプロピル（メタ）アクリルアミド、Ｎ−（ヒドロキシメチル）（メタ）アクリルアミド、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）（メタ）アクリルアミド等が挙げられる。これらは、単独で又は２種以上を用いてもよい。
【００７３】
【化９】
2019099705.tif 000010
〔式（６）中、
Ｒ21は、水素原子又はメチル基を示し、
Ｒ22及びＲ23はそれぞれ独立に、炭素数１〜３のアルカンジイル基を示す。〕
【００７４】
Ｒ22及びＲ23におけるアルカンジイル基の炭素数は、好ましくは１〜２である。
また、該アルカンジイル基は直鎖状でも分岐状でもよいが、直鎖状が好ましい。好適な具体例としては、メタン−１，１−ジイル基、エタン−１，２−ジイル基が挙げられる。
【００７５】
式（６）で表される繰り返し単位を誘導するモノマーとしては、４−（メタ）アクリロイルモルホリン等が挙げられる。該モノマーは、単独で又は２種以上を用いてもよい。
【００７６】
なお、特定ポリマーは、繰り返し単位（Ａ）として、アニオン性繰り返し単位を含んでいてもよい。当該繰り返し単位としては、カルボキシ基、スルホ基、リン酸基等のアニオン性基を有する繰り返し単位が挙げられ、これらを１個有していてもよく、２個以上有していてもよい。当該アニオン性基は、塩を形成していてもよく、その場合の塩としては、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩；マグネシウム塩、カルシウム塩等のアルカリ土類金属塩；アンモニウム塩；有機アンモニウム塩等が挙げられる。
【００７７】
アニオン性繰り返し単位を誘導するモノマーとしては、フマル酸、マレイン酸、イタコン酸等の不飽和ジカルボン酸又はその塩；（メタ）アクリル酸等の不飽和カルボン酸又はその塩；エチレンスルホン酸、アリルスルホン酸、メタアリルスルホン酸、２−スルホエチル（メタ）アクリレート、２−アクリルアミド−２−メチルプロパンスルホン酸等のスルホ基含有重合性不飽和モノマー又はその塩；２−（メタ）アクリロイルオキシエチルアシッドホスフェート、２−（メタ）アクリロイルオキシプロピルアシッドホスフェート等のリン酸基含有重合性不飽和モノマー又はその塩等が挙げられる。また、アニオン性繰り返し単位は、（メタ）アクリル酸エステルの加水分解物；無水マレイン酸、無水イタコン酸等の不飽和ジカルボン酸の酸無水物の加水分解物；グリシジルメタクリレートや（４−ビニルベンジル）グリシジルエーテル等のエポキシ基への酸性基含有チオールの付加物などを用いて得ることもできる。これらは、単独で又は２種以上を用いてもよい。
【００７８】
［繰り返し単位（Ｂ）］
特定ポリマーは、疎水性繰り返し単位（Ｂ）を有する。これにより、特定ポリマーは組織等に付着しやすくなる。
特定ポリマーに含まれる繰り返し単位（Ｂ）は、１種でもよく、２種以上でもよい。
【００７９】
特定ポリマーは、繰り返し単位（Ｂ）を、特定ポリマーの全繰り返し単位中、１質量％以上４０質量％未満の量で有する。繰り返し単位（Ｂ）の含有量が１質量％未満であると、特定ポリマーが組織等に充分に付着せず、組織等を染色する際における非特異染色が起こりやすくなり、４０質量％以上の場合も、組織等を染色する際における非特異染色が起こりやすくなる。
前記繰り返し単位（Ｂ）の含有量は、組織等への付着力により優れる特定ポリマーを容易に得ることができる等の点から、特定ポリマーの全繰り返し単位中、好ましくは２．５質量％以上、より好ましくは５質量％以上であり、また、組織等を染色する際における非特異染色をより抑制できる等の点から、特定ポリマーの全繰り返し単位中、好ましくは３８質量％以下、より好ましくは３５質量％以下である。
特に、繰り返し単位（Ｂ）の含有量が３５質量％以下の場合、特定ポリマーの使用量が低濃度であっても、生体由来物質と同程度又はそれ以上の非特異染色抑制効果を有する傾向にある。
【００８０】
繰り返し単位（Ｂ）は、ケト基、ホルミル基、ポリアルキレングリコール鎖、エステル結合、アミド結合及び芳香族炭化水素基（例えば、フェニル基等のアリール基、フェニレン基等のアリーレン基）から選ばれる１種又は２種以上を含むことが好ましい。
なお、特定ポリマーは、前記ケト基等を繰り返し単位（Ｂ）の主鎖に有していても側鎖に有してもよいが、側鎖に有することが好ましい。
【００８１】
繰り返し単位（Ｂ）としては、不飽和結合を末端又は非末端に有するモノマーに由来する繰り返し単位が挙げられる。具体的には、（メタ）アクリルアミド系繰り返し単位、（メタ）アクリレート系繰り返し単位、スチレン系繰り返し単位等が挙げられる。これらの中でも、繰り返し単位（Ｂ）としては、（メタ）アクリルアミド系繰り返し単位、（メタ）アクリレート系繰り返し単位がより好ましい。
【００８２】
なお、スチレン系モノマーとしては、スチレン、４−メチルスチレン、２，４−ジメチルスチレン、２，４，６−トリメチルスチレン、４−エチルスチレン、４−イソプロピルスチレン、４−ｔｅｒｔ−ブチルスチレン、α−メチルスチレン等が挙げられる。
【００８３】
繰り返し単位（Ｂ）としては、疎水性が向上し、非特異染色をより抑制できる等の点から、下記式（７）、（８）、（１４）で表される繰り返し単位が好ましく、アルキル（メタ）アクリレート由来の繰り返し単位、式（８）で表される繰り返し単位、式（１４）で表される繰り返し単位がより好ましい。
なお、繰り返し単位（Ｂ）は、式（７）で表される繰り返し単位と式（８）で表される繰り返し単位及び式（１４）で表される繰り返し単位の２種類以上を含んでいてもよい。
【００８４】
【化１０】
2019099705.tif 000011
〔式（７）中、
Ｒ31は、水素原子又はメチル基を示し、
Ｒ32は、−Ｏ−、＊−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−、＊−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＲ34−、＊−ＮＲ34−（Ｃ＝Ｏ）−（Ｒ34は、水素原子又は炭素数１〜１０の有機基を示し、＊は、式（７）中のＲ31が結合している炭素原子と結合する位置を示す）又はフェニレン基を示し、
Ｒ33は、炭化水素基を示す。〕
【００８５】
Ｒ32におけるフェニレン基としては、１，２−フェニレン基、１，３−フェニレン基、１，４−フェニレン基が挙げられる。
Ｒ32の中でも、所望の効果を容易に得ることができ、ポリマーの合成容易性、特に、モノマーの入手容易性等の観点から、＊−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−、＊−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＲ34−、フェニレン基が好ましく、＊−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−、＊−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＲ34−がより好ましく、＊−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−、＊−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ−が特に好ましい。
【００８６】
Ｒ34における有機基の炭素数は、好ましくは１〜６である。該有機基としては、炭化水素基が挙げられる。
【００８７】
Ｒ33における炭化水素基の炭素数は、好ましくは１〜３０であり、より好ましくは１〜２４であり、更に好ましくは１〜１８であり、特に好ましくは１〜１４である。
【００８８】
Ｒ33及びＲ34における炭化水素基は、脂肪族炭化水素基、脂環式炭化水素基及び芳香族炭化水素基を包含する概念である。また、直鎖状、分岐状のいずれでもよく、環構造を含んでいてもよい。
【００８９】
前記脂肪族炭化水素基は直鎖状でも分岐状でもよく、具体的には、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、ヘプチル基、オクチル基、ノニル基、デシル基等のアルキル基が挙げられる。
【００９０】
前記脂環式炭化水素基は、単環の脂環式炭化水素基と橋かけ環炭化水素基に大別される。前記単環の脂環式炭化水素基としては、シクロプロピル基、シクロヘキシル基等のシクロアルキル基が挙げられる。また、橋かけ環炭化水素基としては、イソボルニル基等が挙げられる。
【００９１】
前記芳香族炭化水素基としては、フェニル基等のアリール基が挙げられる。
【００９２】
前記の中でもＲ33としては、アルキル基が好ましい。その炭素数は前記と同様に、好ましくは１〜３０、より好ましくは１〜２４、更に好ましくは１〜１８、特に好ましくは１〜１４である。
【００９３】
式（７）で表される繰り返し単位を誘導するモノマーとしては、アルキル（メタ）アクリレートが好ましく、具体的には、メチル（メタ）アクリレート、２−エチルヘキシル（メタ）アクリレート、ラウリル（メタ）アクリレート、ステアリル（メタ）アクリレート等が挙げられる。これらは、単独で又は２種以上を用いてもよい。
【００９４】
【化１１】
2019099705.tif 000012
〔式（８）中、
Ｒ35は、水素原子又はメチル基を示し、
Ｚは、ホルミル基又はケト基を有する有機基を示す。〕
【００９５】
Ｒ35は、好ましくは水素原子である。
【００９６】
Ｚにおける有機基の総炭素数としては、４以上が好ましく、４〜１３がより好ましく、５〜１１が更に好ましく、６〜９が特に好ましい。ホルミル基又はケト基の個数は特に限定されず１個以上であればよいが、１個又は２個が好ましい。
また、Ｚとしては、エステル結合又はアミド結合を有する基が好ましい。エステル結合又はアミド結合の個数は特に限定されないが、１個が好ましい。
Ｚとしては、ホルミル基又はケト基を１個有し、且つエステル結合又はアミド結合を１個有する有機基が好ましく、下記式（９）で表される基がより好ましい。
【００９７】
【化１２】
2019099705.tif 000013
〔式（９）中、
Ｘ1は、−Ｏ−又は−ＮＨ−を示し、
Ｘ2は、ホルミル基又はケト基を有する炭素数３〜１２、好ましくは炭素数４〜１０、より好ましくは炭素数５〜８の有機基を示し、
＊は、結合手を示す。〕
【００９８】
Ｘ1としては、−ＮＨ−が好ましい。
Ｘ2としては、下記式（１０）で表される基が好ましい。
【００９９】
【化１３】
2019099705.tif 000014
〔式（１０）中、
Ｒ36は、炭素数２〜１０、好ましくは炭素数３〜８、より好ましくは炭素数４〜６の直鎖状又は分岐状のアルカンジイル基を示し、
Ｘ3は、ホルミル基又は−（Ｃ＝Ｏ）−ＣＨ3を示し、
＊は、結合手を示す。〕
【０１００】
Ｘ2の好適な具体例としては、下記式（１１）又は（１２）で表される基が挙げられる。中でも、式（１１）で表される基がより好ましく、式（１３）で表される基が特に好ましい。
【０１０１】
【化１４】
2019099705.tif 000015
〔式（１１）中、
Ｒ37〜Ｒ40はそれぞれ独立に、水素原子、メチル基又はエチル基を示し、
＊は、結合手を示す。〕
【０１０２】
【化１５】
2019099705.tif 000016
【０１０３】
〔式（１２）中、
Ｒ41〜Ｒ44はそれぞれ独立に、水素原子、メチル基又はエチル基を示し、
＊は、結合手を示す。〕
【０１０４】
【化１６】
2019099705.tif 000017
〔式（１３）中、＊は、結合手を示す。〕
【０１０５】
式（８）で表される繰り返し単位を誘導するモノマーとしては、ジアセトン（メタ）アクリルアミド等が挙げられる。該モノマーは、単独で又は２種以上を用いてもよい。
【０１０６】
ポリアルキレングリコール鎖を有する繰り返し単位（Ｂ）としては、例えば、ポリアルキレングリコール鎖を側鎖に有する繰り返し単位（以下「繰り返し単位（Ｂ−１）」とも称する。）が挙げられる。
繰り返し単位（Ｂ−１）としては、側鎖にポリオキシアルキレン基を有し、その側鎖の末端が、炭素数５〜３０のアルキル基、炭素数５〜３０のアルカノイル基、又は、アリール基である繰り返し単位が好ましい。斯様な繰り返し単位（Ｂ−１）としては、下記式（１４）で表される構造を側鎖に含む繰り返し単位が挙げられる。式（１４）で表される構造を側鎖に有する繰り返し単位としては、（メタ）アクリレート系繰り返し単位、（メタ）アクリルアミド系繰り返し単位、スチレン系繰り返し単位が好ましい。これらの中でも、下記式（１５）で表される繰り返し単位が好ましい。
【０１０７】
【化１７】
2019099705.tif 000018
〔式（１４）中、
Ｒ45は、炭素数２〜４のアルキレン基を示し、
Ｒ46は、炭素数５〜３０のアルキル基、炭素数５〜３０のアルカノイル基、又は、アリール基を示し、
ｍは、平均値で２〜１００を示す。〕
【０１０８】
Ｒ45におけるアルキレン基の炭素数は、好ましくは２又は３であり、より好ましくは２である。
また、Ｒ45におけるアルキレン基は直鎖状でも分岐鎖状でもよく、具体的には、エタン−１，２−ジイル基、プロパン−１，２−ジイル基、プロパン−１，３−ジイル基、プロパン−２，２−ジイル基、ブタン−１，２−ジイル基、ブタン−１，３−ジイル基、ブタン−１，４−ジイル基等が挙げられる。これらの中でも、ポリマーの合成容易性、特に、モノマーの入手容易性、非特異染色をより抑制できる等の点から、エタン−１，２−ジイル基が好ましい。
なお、ｍ個のＲ45は同一でも異なっていてもよい。
【０１０９】
Ｒ46は、炭素数５〜３０のアルキル基、炭素数５〜３０のアルカノイル基、又は、アリール基を示す。
Ｒ46におけるアルキル基、アルカノイル基の炭素数は、ポリマーの合成容易性、特に、モノマーの入手容易性、非特異染色をより抑制できる等の点から、好ましくは６〜２５、より好ましくは７〜２０、更に好ましくは８〜１８、更に好ましくは９〜１６、特に好ましくは１０〜１４である。
【０１１０】
Ｒ46におけるアルキル基は直鎖状でも分岐鎖状でもよく、具体的には、２−エチルヘキシル基、オクチル基、デシル基、ラウリル基、パルミチル基、ステアリル基等が挙げられる。これらの中でも、２−エチルヘキシル基、ラウリル基、ステアリル基が好ましく、ラウリル基、ステアリル基がより好ましい。
【０１１１】
Ｒ46におけるアルカノイル基としては、２−エチルヘキサノイル基、ラウロイル基、ステアロイル基等が挙げられる。
【０１１２】
Ｒ46におけるアリール基の炭素数は、好ましくは６〜１２である。該アリール基としては、具体的には、フェニル基等が挙げられる。
前記アリール基は、炭素数１〜３０のアルキル基を置換基として有していてもよい。該アルキル基の炭素数としては、好ましくは３〜２４、より好ましくは５〜１６である。なお、斯かるアルキル基の置換位置及び置換個数は任意であるが、好適な置換個数は１又は２個である。
斯様な炭素数１〜３０のアルキル基を置換基として有するアリール基としては、ノニルフェニル基が挙げられる。
【０１１３】
上述のようなＲ46の中でも、ポリマーの合成容易性、特に、モノマーの入手容易性、非特異染色をより抑制できる等の点から、炭素数５〜３０のアルキル基、又は、アリール基が好ましく、炭素数５〜３０のアルキル基がより好ましい。
【０１１４】
【化１８】
2019099705.tif 000019
〔式（１５）中、
Ｒ47は、水素原子又はメチル基を示し、
Ｒ48は、−Ｏ−、＊＊−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−、＊＊−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＲ49−、＊＊−ＮＲ49−（Ｃ＝Ｏ）−（Ｒ49は、水素原子又は炭素数１〜１０の有機基を示し、＊＊は、式（１５）中のＲ47が結合している炭素原子と結合する位置を示す）又はフェニレン基を示し、
その他の符号は式（１４）と同義である。〕
【０１１５】
Ｒ48におけるフェニレン基としては、１，２−フェニレン基、１，３−フェニレン基、１，４−フェニレン基が挙げられる。
【０１１６】
Ｒ49における有機基の炭素数は、好ましくは１〜６である。該有機基としては、炭化水素基が挙げられる。斯かる炭化水素基は、脂肪族炭化水素基、脂環式炭化水素基及び芳香族炭化水素基を包含する概念である。
【０１１７】
Ｒ49における脂肪族炭化水素基は直鎖状でも分岐鎖状でもよく、具体的には、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基等のアルキル基が挙げられる。
【０１１８】
前記脂環式炭化水素基は、単環の脂環式炭化水素基と橋かけ環炭化水素基に大別される。前記単環の脂環式炭化水素基としては、シクロプロピル基、シクロヘキシル基等のシクロアルキル基が挙げられる。また、橋かけ環炭化水素基としては、イソボルニル基等が挙げられる。
【０１１９】
前記芳香族炭化水素基としては、フェニル基等のアリール基が挙げられる。
【０１２０】
Ｒ48の中でも、＊＊−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−又はフェニレン基が好ましく、＊＊−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−が特に好ましい。
【０１２１】
ｍは、好ましくは平均値で２〜９０、より好ましくは平均値で４〜９０、更に好ましくは平均値で９〜６０であり、特に好ましくは平均値で１０〜４０である。
【０１２２】
特定ポリマーは、例えば、各繰り返し単位を誘導するモノマーを混合し、この混合物を、必要に応じて、水、アセトニトリル、エクアミドＢ−１００（出光興産（株）製）等の溶媒に溶解又は分散させ、重合開始剤を加えてラジカル重合することにより得ることができる。
【０１２３】
前記重合開始剤としては、通常のラジカル重合開始剤であれば特に限定されはないが、例えば、過酸化ベンゾイル、過酸化ラウロイル、ジイソプロピルペルオキシジカーボネート、ｔ−ブチルペルオキシ−２−エチルヘキサノエート、ｔ−ブチペルオキシピバレート、ｔ−ブチルペルオキシジイソブチレート、アゾビスイソブチロニトリル、アゾビスイソジメチルバレロニトリル、２，２'−アゾビス（２−メチルプロピオンアミジン）・二塩酸塩、過硫酸塩、過硫酸塩一亜硫酸水素塩等が挙げられる。
【０１２４】
重合開始剤の使用量は、全モノマーの合計１００質量部に対して、好ましくは０．００１〜３０質量部、より好ましくは０．０１〜２０質量部である。
【０１２５】
前記重合の重合温度は、好ましくは２０〜１００℃であり、重合時間は、好ましくは０．５〜４８時間である。
【０１２６】
＜他の成分＞
なお、本抑制剤は、特定ポリマー以外に、他の成分を含んでいてもよい。本抑制剤の形態は特に限定されないが、好ましくはＰＢＳ等の緩衝液に溶解又は分散された液、特に、ＰＢＳ等の緩衝液に溶解した溶液が好ましい。
【０１２７】
本抑制剤中の特定ポリマーの含有量としては、好ましくは０．０１〜１００質量％、より好ましくは０．１〜８０質量％である。
本抑制剤は、特定ポリマーを含有するため、該特定ポリマーの含有量が、例えば０．１質量％以下であっても、オーバーブロッキングが起こりにくく、生体由来物質と同程度又はそれ以上の非特異染色抑制効果を有する。
【０１２８】
前記他の成分としては、例えば、溶剤が挙げられる。該溶剤としては、例えば、水；エタノール、メタノール、イソプロパノール等の低級アルコール；アセトン、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトン等のケトン；Ｎ−メチルピロリドン等のアミドが挙げられる。
【０１２９】
≪染色方法≫
以下、染色の対象となる標本として、組織切片を用いた場合の本発明の染色方法の好適な一例について述べる。
【０１３０】
染色の対象となる標本としては、一般的な病理組織診断に用いる組織切片、例えば、従来公知の方法、具体的には被験体から採取した組織を、固定、脱水処理した後、パラフィン包埋を行うことで作製した組織試料を３〜４μｍの切片にすることで得た組織切片を好適に用いることができる。本発明の染色方法は、組織切片を用いる場合に限定されず、例えば細胞染色にも適用可能である。
【０１３１】
１）脱パラフィン工程
キシレンを入れた容器に組織切片を浸漬させ、パラフィンを除去する。温度は特に限定されないが、室温で行うことができる。浸漬時間は、３分以上４０分以下程度であることが好ましい。また、必要により浸漬途中でキシレンを交換してもよい。
【０１３２】
次いで、エタノールを入れた容器に組織切片を浸漬させ、キシレンを除去する。温度は特に限定されないが、室温で行うことができる。浸漬時間は、３分以上４０分以下程度であることが好ましい。また、必要により浸漬途中でエタノールを交換してもよい。
【０１３３】
次いで、水を入れた容器に組織切片を浸漬させ、エタノールを除去する。温度は特に限定されないが、室温で行うことができる。浸漬時間は、３分以上４０分以下程度であることが好ましい。また、必要により浸漬途中で水を交換してもよい。
【０１３４】
２）賦活化処理工程
公知の方法にならい、目的とする生体物質の賦活化処理を行う。
賦活液としては、０．０１Ｍクエン酸緩衝液（ｐＨ６．０）、１ｍＭＥＤＴＡ溶液（ｐＨ８．０）、５％尿素、０．１Ｍトリス塩酸緩衝液等が挙げられる。
賦活化は、特に限定されないが、室温で行ってもよく、加熱下で行ってもよい。加熱の際に用いる加熱機器としては、オートクレーブ、マイクロウェーブ、圧力鍋、ウォーターバス等が挙げられ、その際の温度は特に限定されないが、好ましくは５０〜１３０℃程度、加熱時間は、好ましくは５〜３０分程度が挙げられる。
【０１３５】
次いで、ＰＢＳ（Phosphate Buffered Saline：リン酸緩衝生理食塩水）等を入れた容器に、賦活化処理後の組織切片を浸漬させ、洗浄を行う。温度は特に限定されるものではないが、室温で行うことができる。浸漬時間は、３分以上３０分以下程度であることが好ましい。また、必要により浸漬途中でＰＢＳを交換してもよい。
【０１３６】
３）ブロッキング工程
ブロッキング工程においては、前記賦活化処理を行った組織切片に対して本抑制剤を用いてブロッキング処理を行う。この際には、本抑制剤をＰＢＳ等の緩衝液に溶解した溶液を組織切片に接触させることが好ましい。組織切片に対して行う「ブロッキング処理」は、本抑制剤が組織表面の一部又は全部に付着するように組織と直接接触させることにより行うことが好ましい。前記接触させる際の温度は特に限定されないが、室温で行うことができる。また、接触時間は、好ましくは３０〜１２０分程度である。
【０１３７】
４）染色工程
染色工程は、蛍光染色および／または色素染色を行うことが好ましく、必要であれば形態観察用染色を行うことが好ましい。
【０１３８】
４−１）蛍光染色
蛍光染色は、目的生体物質と蛍光物質とを生体関連結合性物質を介して結合させることにより、目的生体物質を染色する方法である。例えば、前記ブロッキング工程を行った組織切片に、蛍光物質を結合させた生体関連結合性物質のＰＢＳ液を載せ、目的生体物質と反応させることで行うことができる。具体的には、蛍光物質と結合した一次抗体を組織切片上の目的生体物質（目的タンパク質）と抗原抗体反応させることで染色を行う方法や、予め組織切片上の目的生体物質に反応させた一次抗体に、さらに蛍光物質を結合させた二次抗体を反応させることで染色を行う方法等が挙げられる。
【０１３９】
用いる生体関連結合性物質を変えることにより、さまざまな目的生体物質の染色が可能となる。数種類の生体関連結合性物質と蛍光物質とを用いて染色を行う場合には、それぞれの生体関連結合性物質が分散したＰＢＳ液などの液と蛍光物質が分散したＰＢＳ液などの液とを予め混合したものを組織切片に載せることにより染色を行ってもよいし、それぞれを別々に順次組織切片に載せてもよい。
染色時の温度は特に限定されないが、室温で行うことができる。反応時間は、３０分以上２４時間以下程度であることが好ましい。
【０１４０】
４−２）色素染色
染色工程では、前記蛍光染色方法に代えて、又は前記蛍光染色方法と同時に、色素染色工程を行うことが好ましい。色素染色は目的生体物質を明視野観察可能な色素で染色する手法であれば特に限定されないが、例えば、目的物質を生体関連結合性物質を介して目的生体物質に結合させ、酵素基質反応により呈色する色素を添加することで目的生体物質を染色する方法が広く用いられており、特に前記酵素としてペルオキシダーゼ、前記色素としてＤＡＢを用いる方法が好適である。
【０１４１】
４−３）形態観察用染色
本発明では、必要により、明視野において細胞、組織等の形態を観察することができるようにするための、形態観察染色工程を含んでもよい。形態観察染色工程は、常法、例えば、ヘマトキシリン・エオジン染色（ＨＥ染色）に従って行うことができる。形態観察用染色を行う場合には、前記蛍光染色工程及び／又は色素染色工程の後に行ってもよいし、前記蛍光染色工程及び／又は色素染色工程の前に行ってもよい。
【０１４２】
前記各染色を行った後には、ＰＢＳ等を入れた容器に、染色後の切片を浸漬させることで洗浄を行うことが好ましい。温度は特に限定されないが、室温で行うことができる。浸漬時間は、３分以上４０分以下程度であることが好ましい。また、必要により浸漬途中でＰＢＳを交換してもよい。染色・洗浄後、観察工程の前に、カバーガラスを切片に載せ、必要に応じて市販の封入剤を滴下し、封入することが好ましい。
【０１４３】
５）観察工程
観察工程では、前記染色工程を行った組織切片に対して、行った染色に応じた明視野観察及び／又は蛍光観察を行うことが好ましい。
蛍光観察を行う場合には、目的生体物質を標識している蛍光物質に応じた適切な波長を有する励起光を照射することにより、その蛍光物質が発する蛍光を観察する。このような工程により、その組織切片内に存在する抗原等の所定の生体分子を検出することができる。
【０１４４】
蛍光観察時の励起光の照射には、一般的な蛍光観察と同様の照射手段を用いればよく、例えば、蛍光顕微鏡が備えるレーザ光源から、必要に応じて所定の波長を選択的に透過させるフィルタを用いて、適切な波長及び出力の励起光を染色された組織切片に照射すればよい。蛍光観察は、蛍光顕微鏡の鏡筒から行ってもよいし、蛍光顕微鏡に設置されたカメラが撮影した画像を別途表示手段（モニタ等）に表示して行ってもよい。蛍光物質によっては、蛍光顕微鏡の鏡筒からの目視で十分に蛍光を観察することができないが、カメラによる画像の撮影を通じて蛍光を観察することが可能な場合もある。
【０１４５】
明視野観察を行う場合、つまり前記染色工程において色素染色または形態観察用染色を行った場合には、光学顕微鏡と同様の観察条件下で観察すればよい。
【０１４６】
［目的生体物質］
本抑制剤を用いて染色を行う際にその検出対象となる目的生体物質は、組織又は細胞に発現しているタンパク質（抗原）や遺伝子等の生体物質であって、主に病理診断において定量又は検出を行うための蛍光標識体等を用いた免疫染色や遺伝子染色の対象であることが好ましい。
【０１４７】
目的生体物質は、病理診断など所望の用途を考慮しながら選択すればよく、特に限定されない。
典型的な目的生体物質としては、各種の癌細胞の核、細胞質又は細胞膜上で発現しており、癌のバイオマーカーとして利用することができるタンパク質、例えば、Ｋｉ６７（核内増殖因子）、ＥＲ（エストロゲン受容体）、ＰＲ（プロゲステロン受容体）、ＥＧＦＲ（ＨＥＲ１）（Epidermal Growth Factor Receptor：上皮成長因子受容体）、ＨＥＲ２（Human Epidermal Growth Factor Receptor：ヒト上皮成長因子受容体）、ＨＥＲ３、ＨＥＲ４、ＶＥＧＦＲ（Vascular Endothelial Growth Factor Receptor：血管内皮細胞増殖因子受容体）、ＩＧＦＲ（Insulin-like Growth Factor Receptor：インスリン様増殖因子受容体）、ＨＧＦＲ（Hepatocyte Growth Factor  Receptor：肝細胞増殖因子受容体）といった増殖因子の受容体（レセプター）や、ＰＤ−１（Programmed cell death 1）、ＰＤ−Ｌ１（Programmed cell death ligand  1）などの免疫系の受容体であるタンパク質が挙げられる。
【０１４８】
ＥＧＦＲ／ＨＥＲには、大腸がんなどの癌細胞において過剰発現しているＥＧＦＲ／ＨＥＲ１（ＥｒｂＢ１とも呼ばれる）、乳がんなどの癌細胞において過剰発現しているＥＧＦＲ２／ＨＥＲ２（ＥｒｂＢ２、ｎｅｕとも呼ばれる）、ＥＧＦＲ３／ＨＥＲ３及びＥＧＦＲ４／ＨＥＲ４が包含される。ＶＥＧＦＲには、肝臓がん、食道がんなどの腫瘍組織における血管内皮細胞において発現が亢進しているＶＥＧＦＲ−１（Ｆｌｔ−１とも呼ばれる）、ＶＥＧＦＲ−２（Ｆｌｋ−１、ＫＤＲとも呼ばれる）及びリンパ管内皮細胞において発現が亢進しているＶＥＧＦＲ−３（Ｆｌｔ−４とも呼ばれる）が包含される。特にＨＥＲ２は、乳がんの病理診断において染色目的とする目的生体物質として好適である。
【０１４９】
目的生体物質としては、前記タンパク質に加えて、癌の増殖に関連する遺伝子であって分子標的薬の奏効率の判断等に用いられる、ＴＯＰ２Ａ、Ｐ５３、ＭＥＴ等が挙げられる。さらなる癌関連遺伝子としては、以下の遺伝子が挙げられる。チロシンキナーゼ関連遺伝子としては、ＡＬＫ、ＦＬＴ３、ＡＸＬ、ＦＬｔ−４（ＶＥＧＦＲ−３、ＤＤＲ１、ＦＭＳ（ＣＳＦ１Ｒ）、ＤＤＲ２、ＥＧＦＲ（ＥｒｂＢ１）、ＨＥＲ４（ＥｒｂＢ４）、ＥＭＬ４−ＡＬＫ、ＩＧＦ１Ｒ、ＥＰＨＡ１、ＩＮＳＲ、ＥＰＨＡ２、ＩＲＲ（ＩＮＳＲＲ）、ＥＰＨＡ３、ＫＩＴ、ＥＰＨＡ４、ＬＴＫ、ＥＰＨＡ５、ＭＥＲ（ＭＥＲＴＫ）、ＥＰＨＡ６、ＭＥＴ、ＥＰＨＡ７、ＭＵＳＫ、ＥＰＨＡ８、ＮＰＭ１−ＡＬＫ、ＥＰＨＢ１、ＰＤＧＦＲα（ＰＤＧＦＲＡ）、ＥＰＨＢ２、ＰＤＧＦＲβ（ＰＤＧＦＲＢ）、ＥＰＨＢ３、ＲＥＴ、ＥＰＨＢ４、ＲＯＮ（ＭＳＴ１Ｒ）、ＦＧＦＲ１、ＲＯＳ（ＲＯＳ１）、ＦＧＦＲ２、ＴＩＥ２（ＴＥＫ）、ＦＧＦＲ３、ＴＲＫＡ（ＮＴＲＫ１）、ＦＧＦＲ４、ＴＲＫＢ（ＮＴＲＫ２）、ＦＬｔ−１（ＶＥＧＦＲ−１）、ＴＲＫＣ（ＮＴＲＫ３）等が挙げられる。また、乳がん関連の遺伝子としては、ＡＴＭ、ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２、ＢＲＣＡ３、ＣＣＮＤ１、Ｅ−Ｃａｄｈｅｒｉｎ、ＥＴＶ６、ＦＧＦＲ１、ＨＲＡＳ、ＫＲＡＳ、ＮＲＡＳ、ＮＴＲＫ３、ｐ５３、ＰＴＥＮ等が挙げられる。カルチノイド腫瘍に関連する遺伝子としては、ＢＣＬ２、ＢＲＤ４、ＣＣＮＤ１、ＣＤＫＮ１Ａ、ＣＤＫＮ２Ａ、ＣＴＮＮＢ１、ＨＥＳ１、ＭＡＰ２、ＭＥＮ１、ＮＦ１、ＮＯＴＣＨ１、ＮＵＴ、ＲＡＦ、ＳＤＨＤ、ＶＥＧＦＡ等が挙げられる。大腸がん関連遺伝子としては、ＡＰＣ、ＭＳＨ６、ＡＸＩＮ２、ＭＹＨ、ＢＭＰＲ１Ａ、ｐ５３、ＤＣＣ、ＰＭＳ２、ＫＲＡＳ２（Ｋｉ−ｒａｓ）、ＰＴＥＮ、ＭＬＨ１、ＳＭＡＤ４、ＭＳＨ２、ＳＴＫ１１、ＭＳＨ６等が挙げられる。肺がん関連の遺伝子としては、ＡＬＫ、ＰＴＥＮ、ＣＣＮＤ１、ＲＡＳＳＦ１Ａ、ＣＤＫＮ２Ａ、ＲＢ１、ＥＧＦＲ、ＲＥＴ、ＥＭＬ４、ＲＯＳ１、ＫＲＡＳ２、ＴＰ５３、ＭＹＣ等が挙げられる。肝臓がん関連の遺伝子としては、Ａｘｉｎ１、ＭＡＬＡＴ１、ｂ−ｃａｔｅｎｉｎ、ｐ１６（ＩＮＫ４Ａ）、ｃ−ＥＲＢＢ−２、ｐ５３、ＣＴＮＮＢ１、ＲＢ１、Ｃｙｃｌｉｎ  Ｄ１、ＳＭＡＤ２、ＥＧＦＲ、ＳＭＡＤ４、ＩＧＦＲ２、ＴＣＦ１、ＫＲＡＳ等が挙げられる。腎臓がん関連遺伝子としては、Ａｌｐｈａ、ＰＲＣＣ、ＡＳＰＳＣＲ１、ＰＳＦ、ＣＬＴＣ、ＴＦＥ３、ｐ５４ｎｒｂ／ＮＯＮＯ、ＴＦＥＢ等が挙げられる。甲状腺がん関連遺伝子として、ＡＫＡＰ１０、ＮＴＲＫ１、ＡＫＡＰ９、ＲＥＴ、ＢＲＡＦ、ＴＦＧ、ＥＬＥ１、ＴＰＭ３、Ｈ４／Ｄ１０Ｓ１７０、ＴＰＲ等が挙げられる。卵巣がん関連遺伝子としては、ＡＫＴ２、ＭＤＭ２、ＢＣＬ２、ＭＹＣ、ＢＲＣＡ１、ＮＣＯＡ４、ＣＤＫＮ２Ａ、ｐ５３、ＰＩＫ３ＣＡ、ＧＡＴＡ４、ＲＢ、ＨＲＡＳ、ＲＥＴ、ＫＲＡＳ、ＲＮＡＳＥＴ２等が挙げられる。前立腺がん関連遺伝子としては、ＡＲ、ＫＬＫ３、ＢＲＣＡ２、ＭＹＣ、ＣＤＫＮ１Ｂ、ＮＫＸ３．１、ＥＺＨ２、ｐ５３、ＧＳＴＰ１、ＰＴＥＮ等が挙げられる。骨腫瘍関連遺伝子としては、ＣＤＨ１１、ＣＯＬ１２Ａ１、ＣＮＢＰ、ＯＭＤ、ＣＯＬ１Ａ１、ＴＨＲＡＰ３、ＣＯＬ４Ａ５、ＵＳＰ６等が挙げられる。
【０１５０】
［生体関連結合性物質］
生体関連結合性物質は前記目的生体物質と直接的又は間接的に結合することができる物質であり、さらに後述する標識物質と直接的又は間接的に結合することができる物質である。前記染色方法においては、生体関連結合性物質が、目的生体物質および標識物質と結合することで、目的生体物質と標識物質とが間接的に結合することで目的生体物質が標識物質で標識され、染色・観察される。
検出対象物質がタンパク質である場合、生体関連結合性物質としては抗体を用いることができ、一次抗体または二次抗体が好ましく用いられる。
【０１５１】
例えば、生体関連結合性物質として一次抗体を用いる場合は、一次抗体と標識物質を結合させることで目的生体物質を標識・染色することができ、生体関連結合性物質として二次抗体を用いる場合は、標識物質と結合させた二次抗体と、予め組織切片上の目的物質に反応させた一次抗体とを反応させることで目的生体物質を標識・染色することができる。
【０１５２】
一次抗体としては、前述したような目的生体物質であるタンパク質を抗原として特異的に認識して結合する抗体を用いることができる。例えば、ＥＧＦＲを目的生体物質とする場合は抗ＥＧＦＲ抗体を、ＨＥＲ２を目的生体物質とする場合は抗ＨＥＲ２抗体を用いることができる。標的物質を特異的に認識することができれば、いずれのアイソタイプの抗体を用いてもよいが、特にＩｇＧ抗体（免疫グロブリンＧ）が好適に用いられる。
【０１５３】
二次抗体としては、目的生体物質であるタンパク質を抗原として特異的に認識して結合する一次抗体を特異的に認識して結合する抗体（ＩｇＧ）を用いることができる。例えば、一次抗体がウサギ抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体である場合、二次抗体としては抗ウサギＩｇＧ抗体を用いることができる。
【０１５４】
前記一次抗体及び二次抗体はいずれも、ポリクローナル抗体であってもよいが、定量の安定性の観点から、モノクローナル抗体が好ましい。抗体を産生する動物（免疫動物）の種類は特に限定されるものではなく、従来と同様、マウス、ラット、モルモット、ウサギ、ウシ、ヤギ、ヒツジ、イヌ、チキンなどから選択すればよい。
【０１５５】
前記一次抗体および二次抗体は、特定の抗原を特異的に認識して結合する能力を有するものであれば、全長の抗体でなく、抗体断片又は誘導体であってもよい。すなわち、本明細書における「抗体」という用語には、全長の抗体だけでなく、Ｆａｂ、Ｆ(ａｂ')2、Ｆｖ、ｓｃＦｖなどの抗体断片及びキメラ抗体（ヒト化抗体等）、多機能抗体などの誘導体が包含される。
【０１５６】
また、検出対象物質が核酸である場合、生体関連結合性物質としては、当該核酸分子と相補的な塩基配列を有する核酸分子を用いることができる。核酸にはＤＮＡ、ＲＮＡ（ｍＲＮＡ，ｔＲＮＡ，ｍｉＲＮＡ，ｓｉＲＮＡ，ｎｏｎ−ｃｏｒｄｉｎｇ−ＲＮＡなど）等の天然に存在する核酸やＰＮＡ、ＬＮＡ（又はＢＮＡ:Ｂｒｉｄｇｅｄ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ）等の人工核酸が含まれる。核酸分子は、天然の核酸、人工核酸又は天然の核酸と人工の核酸とが連結した核酸の分子であってもよい。これら核酸の中でも、ＤＮＡ、ＲＮＡおよびＰＮＡが特に好ましい。
【０１５７】
［標識物質］
標識物質は病理診断等において染色および観察を行うため、目的生体物質を標識するための物質である。前記病理診断において、蛍光観察を行うための染色には標識物質として蛍光物質を用いることが好ましく、明視野観察のための染色には、例えば、色素を呈色させるための酵素が標識物質として用いられることが好ましい。
【０１５８】
標識物質は染色と同時に生体関連結合性物質と連結してもよいが、染色に用いる前に生体関連結合性物質と連結されることが好ましい。
標識物質と生体関連結合性物質との連結様式は特に限定されず、両者が直接結合していてもよいし、他の物質を介して間接的にしていてもよい。標識物質と生体関連結合性物質とを直接連結させる態様としては、特に限定されず、共有結合、イオン結合、水素結合、配位結合、物理吸着等が挙げられるが、結合の安定性の観点から共有結合等の結合力の強い結合が好ましい。間接的に結合する場合の態様としては、標識物質と生体関連結合性物質との間にポリエチレングリコール等のリンカーを介在させる態様が挙げられる。間接的に結合する場合のさらなる態様としては、標識物質と生体関連結合性物質とが、例えば、アビジン／ビオチン、ストレプトアビジン／ビオチン、ニュートラアビジン／ビオチン等、互いに特異的に結合する分子を介して結合している様態が挙げられる。具体的には、例えば、予め標識物質にビオチンを、生体関連結合性物質にアビジンを公知の手段で結合させ、染色前又は染色工程において両者を接触させることで、標識物質と生体関連結合性物質とを連結させることができる
【０１５９】
［蛍光物質］
前記蛍光物質は、所定の波長の電磁波（Ｘ線、紫外線又は可視光線）が照射されてそのエネルギーを吸収することで電子が励起し、その励起状態から基底状態に戻る際に余剰のエネルギーを「蛍光」として発する物質一般を指す。従って、前記蛍光物質は、励起状態から基底状態に戻るときの遷移態様の如何を問うものでなく、励起一重項からの失活に伴う発光である狭義の蛍光を発する物質であってもよいし、三重項からの失活に伴う発光である燐光を発する物質であってもよい。また、「蛍光」は広義的な意味を持ち、励起のための電磁波の照射を止めても発光が持続する発光寿命の長い燐光と、発光寿命が短い狭義の蛍光とを包含する。
【０１６０】
前記蛍光物質は、所望の蛍光観察を行うために適当な蛍光物質であれば特に限定されず、例えば有機蛍光色素、量子ドット、または有機蛍光色素もしくは量子ドットを内包した粒子等から選択することができる。
【０１６１】
蛍光物質の発光波長は用途に応じて所望の範囲を選択することができる。例えば、病理診断において、エオジン等を用いた形態観察用の染色と同時に蛍光色素を用いた免疫染色を行う用途が想定される場合は、蛍光色素からの発光を目視で観察することができ、かつ蛍光を発するエオジンの発光波長と重ならないよう、蛍光色素の発光波長は赤〜近赤外とすることが好適である。例えば、励起極大波長が５５５〜６２０ｎｍ、発光極大波長が５８０〜７７０ｎｍの範囲にある蛍光色素が好ましい。
【０１６２】
前記有機蛍光色素としては、例えば、５−カルボキシ−Ｘ−ローダミン（５−ＲＯＸ）、Ｓｐｅｃｔｒｕｍ Ｒｅｄ、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ５９４、ＡＴＴＯ ５９０、ＤＹ−５９０、ＣＡＬ Ｆｌｕｏｒ Ｒｅｄ ６１０、ＤｙＬｉｇｈｔ ５９４、ＢＯＤＩＰＹ ５７６／５８９、ＰＹＲＲＯＭＥＴＨＥＮＥ ６５０、Ｃｒｅｓｙｌ ｖｉｏｌｅｔ、ＤＹ−６１０、Ｔｅｘａｓ Ｒｅｄ等が挙げられ、前記量子ドットとしては、例えば、ＩＩ−ＶＩ族化合物、ＩＩＩ−Ｖ族化合物又はＩＶ族元素を成分として含有する量子ドット等が挙げられる。
【０１６３】
≪免疫染色用キット≫
本発明の別の側面においては、本抑制剤を含む組織染色用又は遺伝子染色用キットが提供される。このキットは少なくとも、本抑制剤を含み、さらに標識物質を結合した生体関連結合性物質を含んでいるか、又は標識物質、生体関連結合性物質、及び標識物質と生体関連結合性物質を結合させるための試薬類を含んでいてもよい。このキットはさらに、必要に応じて、前記生体関連結合性物質と組み合わせて用いられる他の物質（例えばストレプトアビジン及びビオチン）を含んでいてもよく、さらにこれらの物質と標識物質または生体関連結合性物質とを連結させるための試薬類を含んでいてもよく、さらにその他の免疫組織染色に用いられる試薬類などを含んでいてもよい。
【実施例】
【０１６４】
以下、実施例を挙げて本発明を詳細に説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。
【０１６５】
実施例における分子量の測定条件は以下に示すとおりである。
重量平均分子量（Ｍｗ）及び数平均分子量（Ｍｎ）は、東ソー（株）製、ＴＳＫｇｅｌ  α−Ｍカラムを用い、流量：０．５ミリリットル／分、溶出溶媒：ＮＭＰ溶媒（Ｈ3ＰＯ4：０．０１６Ｍ、ＬｉＢｒ：０．０３０Ｍ）、カラム温度：４０℃の分析条件で、ポリスチレンを標準とするゲルパーミエーションクロマトグラフィー（ＧＰＣ）により測定した。また、前記Ｍｗ及びＭｎから分子量分布（Ｍｗ／Ｍｎ）を算出した。
【０１６６】
〔実施例１〕
４−アクリロイルモルホリン（以下「ＡＣＭＯ」と称する。興人フィルム＆ケミカルズ（株）製）２．０ｇ、エチレンオキシドの平均付加モル数９のメトキシポリエチレングリコールメタクリレート（以下「Ｍ９０Ｇ」と称する。新中村化学工業（株）製）２．５ｇ及びジアセトンアクリルアミド（以下「ＤＡＡＭ」と称する。東京化成工業（株）製）０．５ｇからなるモノマー組成物と、水４０．０５ｇとをフラスコに入れ、撹拌子で撹拌した。これに窒素を吹き込みながら６０℃まで昇温し、重合開始剤として２，２’−アゾビス（２−メチルプロピオンアミジン）・二塩酸塩の１０質量％水溶液５ｇ、及び、連鎖移動剤としてα−チオグリセロール０．０１ｇを添加した。次いで３時間重合させた後、室温まで冷却した。得られた共重合体を共重合体（Ｐ１）とする。
得られた共重合体（Ｐ１）のＧＰＣによるＭｗは１０７４００であり、Ｍｗ／Ｍｎは４．０１であった。
【０１６７】
〔実施例２〕
モノマー組成物を、ＡＣＭＯ  ２．０ｇ、Ｍ９０Ｇ  ２．２５ｇ、Ｎ−メタクリロイルオキシエチル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウム−α−Ｎ−メチルカルボキシベタイン（以下「ＧＬＢＴ」と称する。大阪有機化学工業（株）製）０．２５ｇ及びメチルメタクリレート（以下「ＭＭＡ」と称する。）０．５ｇからなるモノマー組成物に変更した以外は、実施例１と同様にして共重合体を合成した。得られた共重合体を共重合体（Ｐ２）とする。
【０１６８】
〔実施例３〕
モノマー組成物を、ＡＣＭＯ  １．５ｇ、Ｎ，Ｎ−ジメチルアクリルアミド（以下「ＤＭＡＡ」と称する。）０．２５ｇ、Ｍ９０Ｇ  １．０ｇ、エチレンオキシドの平均付加モル数２３のメトキシポリエチレングリコールメタクリレート（以下「Ｍ２３０Ｇ」と称する。新中村化学工業（株）製）１．２５ｇ、ＧＬＢＴ  ０．７５ｇ及びＭＭＡ  ０．２５ｇからなるモノマー組成物に変更した以外は、実施例１と同様にして共重合体を合成した。得られた共重合体を共重合体（Ｐ３）とする。
【０１６９】
〔実施例４〕
モノマー組成物を、ＡＣＭＯ  １．０ｇ、ＤＭＡＡ  ０．５ｇ、Ｍ９０Ｇ  １．２５ｇ、Ｍ２３０Ｇ  １．２５ｇ及びＤＡＡＭ  １．０ｇからなるモノマー組成物に変更した以外は、実施例１と同様にして共重合体を合成した。得られた共重合体を共重合体（Ｐ４）とする。
【０１７０】
〔実施例５〕
モノマー組成物を、ＡＣＭＯ  ２．０ｇ、ＤＭＡＡ  ２．５ｇ及びＤＡＡＭ  ０．５ｇからなるモノマー組成物に変更した以外は、実施例１と同様にして共重合体を合成した。得られた共重合体を共重合体（Ｐ５）とする。
【０１７１】
〔実施例６〕
モノマー組成物を、ＡＣＭＯ  １．０ｇ、ＤＭＡＡ  １．７５ｇ、Ｍ２３０Ｇ  １．０ｇ、ＧＬＢＴ  ０．２５ｇ及びＭＭＡ  １．０ｇからなるモノマー組成物に変更した以外は、実施例１と同様にして共重合体を合成した。得られた共重合体を共重合体（Ｐ６）とする。
【０１７２】
〔実施例７〕
モノマー組成物を、ＤＭＡＡ  ２．０ｇ、Ｍ９０Ｇ  １．５ｇ及びＤＡＡＭ  １．５ｇからなるモノマー組成物に変更した以外は、実施例１と同様にして共重合体を合成した。得られた共重合体を共重合体（Ｐ７）とする。
【０１７３】
〔実施例８〕
モノマー組成物を、ＤＭＡＡ  ３．５ｇ及びＤＡＡＭ  １．５ｇからなるモノマー組成物に変更した以外は、実施例１と同様にして共重合体を合成した。得られた共重合体を共重合体（Ｐ８）とする。
【０１７４】
〔実施例９〕
モノマー組成物を、ＡＣＭＯ  １．０ｇ、ＤＭＡＡ  ３．０ｇ及びＭＭＡ  １．０ｇからなるモノマー組成物に変更した以外は、実施例１と同様にして共重合体を合成した。得られた共重合体を共重合体（Ｐ９）とする。
【０１７５】
〔実施例１０〕
モノマー組成物を、ＡＣＭＯ  ２．０ｇ、Ｍ９０Ｇ  ２．７５ｇ及びＭＭＡ  ０．２５ｇからなるモノマー組成物とし、連鎖移動剤の添加量を０．１５ｇに変更した以外は、実施例１と同様にして共重合体を合成した。得られた共重合体を共重合体（Ｐ１０）とする。
【０１７６】
〔実施例１１〕
モノマー組成物を、ＡＣＭＯ  １．０ｇ、Ｍ２３０Ｇ  ２．２５ｇ及びＤＡＡＭ  １．７５ｇからなるモノマー組成物に変更した以外は、実施例１と同様にして共重合体を合成した。得られた共重合体を共重合体（Ｐ１１）とする。
【０１７７】
〔実施例１２〕
ＤＭＡＡ  １．５ｇ、Ｍ９０Ｇ  １．７５ｇと、ラウロキシポリエチレングリコール（３０）モノメタクリレート（ＰＬＥ−１３００（日油（株）製）、以下「ＬＰＥＧＭ」と称する。）１．７５ｇと、重合開始剤として２，２'−アゾビス（イソブチロニトリル）０．０３ｇと、溶媒としてエクアミドＢ−１００（出光興産（株）製）１２ｇとを混合し、フラスコに入れた。これに窒素を吹き込み、７０℃まで昇温し、８時間重合させ、その後室温まで冷却した。得られた溶液を純水で透析することで、共重合体の水溶液を得た。得られた共重合体を共重合体（Ｐ１２）とする。
得られた共重合体（Ｐ１２）において、ＤＭＡＡ由来の繰り返し単位の含有量は３０質量％、Ｍ９０Ｇ由来の繰り返し単位の含有量は３５質量％であり、ＬＰＥＧＭ由来の繰り返し単位の含有量は３５質量％であった。なお、これら含有量は1Ｈ−ＮＭＲにより測定した。
また、得られた共重合体（Ｐ１２）のＭｗは１１１０００であり、Ｍｎは２３３００であり、Ｍｗ／Ｍｎは４．７６であった。
【０１７８】
〔比較例１〕
連鎖移動剤であるα−チオグリセロールの添加量を０．１ｇとした以外は、実施例１と同様にして共重合体を合成した。得られた共重合体を共重合体（Ｐ１３）とする。
【０１７９】
〔比較例２〕
モノマー組成物を、ＡＣＭＯ  ０．５ｇ、Ｍ９０Ｇ  ２．２５ｇ、ＧＬＢＴ  ０．２５ｇ及びＭＭＡ  ２．０ｇからなるモノマー組成物に変更した以外は、実施例１と同様にして共重合体を合成した。得られた共重合体を共重合体（Ｐ１４）とする。
【０１８０】
〔参考例〕
ＡＣＭＯ由来の繰り返し単位からなるホモポリマー、ＤＭＡＡ由来の繰り返し単位からなるホモポリマー、Ｍ９０Ｇ由来の繰り返し単位からなるホモポリマー、Ｍ２３０Ｇ由来の繰り返し単位からなるホモポリマー、ＧＬＢＴ由来の繰り返し単位からなるホモポリマーをそれぞれ合成し（いずれもＭｎ約１万）、得られたホモポリマー１ｇを純水１００ｇに添加したところ、常温（２５℃）で溶解した。
また、ＤＡＡＭ由来の繰り返し単位からなるホモポリマー、ＭＭＡ由来の繰り返し単位からなるホモポリマー、ＬＰＥＧＭ由来の繰り返し単位からなるホモポリマーをそれぞれ合成し（いずれもＭｎ約１万）、得られたホモポリマー１ｇを純水１００ｇに添加したところ、常温（２５℃）で溶解しきらなかった。
【０１８１】
試験例１  ＤＡＢ染色試験
ＨｅＬａ細胞セルブロック又はヒト乳房腫瘍隣接組織に対して、ホルマリン固定およびパラフィン包埋を施して組織切片を作成し、コスモ・バイオ（株）製のガラススライドに載せて標本スライドを作製した。
下記工程（１）〜（１４）の方法により、該標本スライドに対しＤＡＢ染色を行い、明視野観察を行い、染色様態及び非特異染色抑制を下記の基準で評価した。
なお、下記工程（１）〜（１４）はその数字順で行った。
【０１８２】
試験例１および２の各工程において用いられるＰＢＳ（ｉ）〜ＰＢＳ（ｉｖ）は以下のとおりである。
ＰＢＳ（ｉ）；１質量％ＢＳＡ含有ＰＢＳ
ＰＢＳ（ｉｉ）；前記各実施例または各比較例において合成した共重合体を、その濃度が０．１質量％となるようにＰＢＳに溶解又は分散させたＰＢＳ
ＰＢＳ（ｉｉｉ）；前記各実施例または各比較例に従って合成した共重合体を、その濃度が１質量％となるようにＰＢＳに溶解又は分散させたＰＢＳ
ＰＢＳ（ｉｖ）；ＢＳＡ及び前記各実施例または各比較例において合成した共重合体を含まないＰＢＳ
ここで、ＰＢＳ（ｉｉ）およびＰＢＳ（ｉｉｉ）については各実施例・比較例の共重合体ごとにそれぞれ調製した。
【０１８３】
工程（１）：キシレンを入れた容器に標本スライドを３０分浸漬させた。途中３回キシレンを交換した。
工程（２）：エタノールを入れた容器に標本スライドを３０分浸漬させた。途中３回エタノールを交換した。
工程（３）：水を入れた容器に標本スライドを３０分浸漬させた。途中３回水を交換した。
工程（４）：９５℃の１０ｍＭクエン酸緩衝液（ｐＨ６．０）に標本スライドを２０分浸漬させ、賦活化処理を行った。
工程（５）：ＰＢＳ（ｉｖ）を入れた容器に、賦活化処理後の標本スライドを３０分浸漬させた。
工程（６）：３％過酸化水素水を標本スライドに載せて、１０分間放置し、ＰＢＳ（ｉｖ）を入れた容器に、標本スライドを３０分浸漬させた。
工程（７）：下記条件に基づいて、ＰＢＳ（ｉ）〜（ｉｖ）のいずれかを標本スライドに載せて、１時間放置した（ブロッキング処理工程）。
工程（８）：前記工程（７）で用いたＰＢＳと同様のＰＢＳで０．０５ｎＭに希釈した抗Ｋｉ−６７抗体（Ａｂｎｏｖａ社製）を、各標本スライドに載せて１時間放置し、その後、ＰＢＳ（ｉｖ）を入れた容器に、標本スライドを３０分浸漬させた。
工程（９）：ＭＢＬ社製Ｈｉｓｔｏｓｔａｒ（ペルオキシダーゼ結合抗ＩｇＧポリクローナル抗体）を、各標本スライドに載せて３０分放置し、その後、ＰＢＳ（ｉｖ）を入れた容器に、標本スライドを３０分浸漬させた。
工程（１０）：ジアミノベンジジン（ＤＡＢ）を、各標本スライドに載せて３０分放置し、その後、ＰＢＳ（ｉｖ）を入れた容器に、標本スライドを２０分浸漬させた。
工程（１１）：ＰＢＳ（ｉｖ）を入れた容器に、染色後の標本スライドをそれぞれ３０分浸漬させた。
工程（１２）：２５％ヘマトキシリンで１分間処理し、ＰＢＳ（ｉｖ）を入れた容器に、染色後の標本スライドをそれぞれ３０分浸漬させた。
工程（１３）：Ｂｉｏｃａｒｅ社製ＥｃｏＭｏｕｎｔを滴下後、カバーガラスを載せ封入した。
工程（１４）：得られた標本スライドについて、蛍光顕微鏡ＢＺ−９０００（（株）キーエンス製）を用いて明視野観察を行なった。
【０１８４】
試験例２  蛍光染色試験
ＨｅＬａ細胞セルブロック又はヒト乳房腫瘍隣接組織に対して、ホルマリン固定、パラフィン包埋を施して切片を作成し、コスモ・バイオ（株）製のガラススライドに載せて標本スライドを作製した。
下記工程（１）〜（１１）の方法により、該標本スライドに対し蛍光染色を行い、蛍光観察を行い、染色様態及び非特異染色抑制を下記基準で評価した。
なお、下記工程（１）〜（１１）はその数字順で行った。
【０１８５】
工程（１）：キシレンを入れた容器に標本スライドを３０分浸漬させた。途中３回キシレンを交換した。
工程（２）：エタノールを入れた容器に標本スライドを３０分浸漬させた。途中３回エタノールを交換した。
工程（３）：水を入れた容器に標本スライドを３０分浸漬させた。途中３回水を交換した。
工程（４）：９５℃の１０ｍＭクエン酸緩衝液（ｐＨ６．０）に標本スライドを２０分浸漬させ、賦活化処理を行った。
工程（５）：下記ＰＢＳ（ｉｖ）を入れた容器に、賦活化処理後の標本スライドを３０分浸漬させた。
工程（６）：下記条件に基づいて、ＰＢＳ（ｉ）〜（ｉｖ）のいずれかを標本スライドに載せて、１時間放置した。
工程（７）：前記工程（６）で用いたＰＢＳと同様のＰＢＳで０．０５ｎＭに希釈した蛍光標識した抗Ｋｉ−６７抗体（Ａｂｎｏｖａ社製）を、各標本スライドに載せて１時間放置した。
工程（８）：ＰＢＳ（ｉｖ）を入れた容器に、染色後の標本スライドをそれぞれ３０分浸漬させた。
工程（９）：２５％ヘマトキシリンで１分間処理し、ＰＢＳ（ｉｖ）を入れた容器に、染色後の標本スライドをそれぞれ３０分浸漬させた。
工程（１０）：Ｂｉｏｃａｒｅ社製ＥｃｏＭｏｕｎｔを滴下後、カバーガラスを載せ封入した。
工程（１１）：得られた標本スライドについて、蛍光顕微鏡ＢＺ−９０００（（株）キーエンス製）を用いて蛍光観察を行なった。
【０１８６】
［染色様態評価］
ＨｅＬａ細胞セルブロックから作製した標本スライドを用いた場合又はヒト乳房腫瘍隣接組織から作製した標本スライドを用いた場合のそれぞれの染色様態評価を行った。
試験例１の工程（７）及び試験例２の工程（６）で用いるＰＢＳとして、実施例１〜１２及び比較例１〜２についてはＰＢＳ（ｉｉ）を用い、比較例３についてはＰＢＳ（ｉｖ）を用いた標本スライドについてそれぞれ明視野観察、蛍光観察を行った。それぞれの染色像について、下記基準にて評価した。結果を表１又は２に示す。
【０１８７】
・基準
＋・・・目的生体物質の検出可（明視野観察においてはＤＡＢの呈色、蛍光観察においては輝点がそれぞれ観察できた）
−・・・目的生体物質の検出不可（例えば、オーバーブロッキングによる）
【０１８８】
［非特異染色抑制評価］
ＨｅＬａ細胞セルブロックから作製した標本スライドを用いた場合又はヒト乳房腫瘍隣接組織から作製した標本スライドを用いた場合のそれぞれの非特異染色抑制評価を行った。
非特異染色抑制評価は、まず、ＰＢＳ（ｉ）を用いて明視野観察を行い、次いで、ＰＢＳ（ｉｉ）を用いて明視野観察を行った。ここで、ＰＢＳ（ｉ）を用いた場合と、ＰＢＳ（ｉｉ）を用いた場合とが、同様の非特異染色量（非特異染色の箇所が同程度）となった場合、下記の通りＡと評価し、非特異染色抑制評価を終了した。
ＰＢＳ（ｉ）を用いた場合に対し、ＰＢＳ（ｉｉ）を用いた場合の観察画像中に多くの非特異染色が見られた場合、ＰＢＳ（ｉｉｉ）を用いて明視野観察を行い、下記基準のＢに相当するか、Ｃに相当するかを判断した。
なお、比較例３では、ＰＢＳ（ｉｖ）を用いて、ＰＢＳ（ｉ）を用いた場合との非特異染色量の相違を評価した。
実施例１において、ＰＢＳ（ｉ）を用いて明視野観察を行った結果を図１に示し、ＰＢＳ（ｉｉ）を用いて明視野観察を行った結果を図２に示す。図１と図２とは、同等の非特異染色量であるといえる。
【０１８９】
・基準
Ａ・・・０．１質量％以下の共重合体濃度で１質量％濃度のＢＳＡを用いた場合と同等の非特異染色量
Ｂ・・・１質量％以下の共重合体濃度で１質量％濃度のＢＳＡを用いた場合と同等の非特異染色量
Ｃ・・・１％質量の共重合体濃度でも１質量％濃度のＢＳＡを用いた場合を超えて非特異染色が見られた
【０１９０】
【表１】
2019099705.tif 000020
【０１９１】
【表２】
2019099705.tif 000021
【０１９２】
表１に示すとおり、実施例１〜１２で得られた共重合体を用いた場合は、オーバーブロッキングせず、非特異染色抑制効果に優れることが分かった。
【図１】
2019099705.tif 000025
【図２】
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