(57)【要約】【課題】  凍結乾燥された粉末の再構成の必要性を無くし、そのまま使用できるか、そのままさらに希釈することが可能とし、医療現場においてより使い勝手がよい長期に亘って安定なベンダムスチン製剤を提供することを課題とする。【解決手段】  ベンダムスチン又はその製薬上許容される塩、並びにポリエチレングリコール及びグリセリンを含む製薬上許容される添加剤を含有するベンダムスチン含有溶液製剤。製薬上許容される液体中のグリセリンの量が１体積％〜５０体積％であり、ポリエチレングリコールとグリセリンとの体積比が９９：１〜５０：５０であることが好ましい。ベンダムスチン遊離塩基としての濃度が５ｍｇ／ｍＬ〜５０ｍｇ／ｍＬであることがさらに好ましい。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ベンダムスチン又はその製薬上許容される塩、並びにポリエチレングリコール及びグリセリンを含むベンダムスチン含有溶液製剤。
【請求項２】
グリセリンの量が１体積％〜５０体積％であり、ポリエチレングリコールとグリセリンとの体積比が９９：１〜５０：５０である、請求項１に記載するベンダムスチン含有溶液製剤。
【請求項３】
ベンダムスチン又はその製薬上許容される塩は、ベンダムスチン遊離塩基としての濃度が５ｍｇ／ｍＬ〜５０ｍｇ／ｍＬである、請求項１又は２に記載するベンダムスチン含有溶液製剤。
【請求項４】
抗酸化剤を含む請求項１〜３の何れか一項に記載のベンダムスチン含有溶液製剤。
【請求項５】
前記ベンダムスチン含有溶液製剤は封止できる密閉容器に封入してなり、前記容器の空隙部分の酸素濃度が５体積％以下である、請求項１〜４の何れか一項に記載のベンダムスチン含有溶液製剤。
【請求項６】
水を０．５〜２．０質量％で含む請求項１〜５の何れか一項に記載のベンダムスチン含有溶液製剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、再構成の必要性を無くした、希釈後すぐ使用可能なベンダムスチン溶液製剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
ベンダムスチンは構造式（１）により表される化合物であり、塩酸塩の形態で白血病及び非ホジキンリンパ腫等の治療に用いられている。ベンダムスチン塩酸塩は、トレアキシン（ＴＲＥＡＫＩＳＹＭ（登録商標））として凍結乾燥製剤が上市されており、注射用水で再構成された後に希釈して投与されている。特許文献１に、ベンダムスチン塩酸塩の凍結乾燥製剤に関する記載がある。
【化１】
2019099557.tif 000002
【０００３】
ベンダムスチンは化学的に不安定な物性であり、水溶液中で急速に分解することが知られている。特に、非常に不安定な脂肪族塩素原子を有するため、この部分の加水分解により対応するヒドロキシ化合物を分解物として生成する。例えば、ベンダムスチンの分解物の１つにモノヒドロキシ化合物（ＨＰ１（加水分解生成物１））が知られている。
【化２】
2019099557.tif 000003
【０００４】
ベンダムスチンの凍結乾燥製剤は優れた化学的安定性を有する。しかしながら、凍結乾燥製剤は、用時に注射用水等による再構成が必要である。このため臨床使用上、極めて煩雑な手間がかかり不便であると共に、溶液調製から投与までに有効成分が加水分解を受ける懸念がある。したがって、用時に再構成の必要がない、希釈してすぐ使用可能なベンダムスチン溶液製剤が求められている。
ベンダムスチン溶液製剤について、特許文献２にＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミド等の極性非プロトン性溶媒を用いた注射用溶液製剤が記載されている。また、特許文献３や４にはポリエチレングリコール及びプロピレングリコールの混合溶媒を用い、更に抗酸化剤を添加した溶液製剤が記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２０１３−０５６９０１号公報
【特許文献２】特表２０１２−５０３６６６号公報
【特許文献３】特表２０１３−５１８１３０号公報
【特許文献４】特表２０１５−５０６９８９号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、長期にわたって安定なベンダムスチン溶液製剤を提供することを課題とする。また、医療現場においてより使い勝手がよい製剤を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本願は以下の［１］〜［６］に係る発明に関する。
［１］  ベンダムスチン又はその製薬上許容される塩、並びにポリエチレングリコール及びグリセリンを含むベンダムスチン含有溶液製剤。
［２］  グリセリンの量が１体積％〜５０体積％であり、ポリエチレングリコールとグリセリンとの体積比が９９：１〜５０：５０である、前記［１］に記載するベンダムスチン含有溶液製剤。
［３］  ベンダムスチン又はその製薬上許容される塩は、ベンダムスチン遊離塩基としての濃度が５ｍｇ／ｍＬ〜５０ｍｇ／ｍＬである、前記［１］又は［２］に記載するベンダムスチン含有溶液製剤。
［４］  抗酸化剤を含む前記［１］〜［３］の何れか一項に記載のベンダムスチン含有溶液製剤。
［５］  前記ベンダムスチン含有溶液製剤は封止できる密閉容器に封入してなり、前記容器の空隙部分の酸素濃度が５体積％以下である、前記［１］〜［４］の何れか一項に記載のベンダムスチン含有溶液製剤。
［６］  水を０．５〜２．０質量％で含む前記［１］〜［５］の何れか一項に記載のベンダムスチン含有溶液製剤。
【発明の効果】
【０００８】
本願発明のポリエチレングリコール及びグリセリンを含むベンダムスチン溶液製剤は、長期にわたって安定な製剤であり、再構成の必要性を無くし、簡単な希釈操作により投与することができる。すなわち、ベンダムスチンの安定で使用しやすい溶液製剤を提供することができる。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
本発明は、ベンダムスチン又はその製薬上許容される塩を用いる。ベンダムスチンは、４−［５−｛ビス（２−クロロエチル）アミノ｝−１−メチル−２−ベンズイミダゾリル］酪酸である。
ベンダムスチンの薬学的に許容されるその塩として、無機酸又は有機酸の塩が挙げられる。当該無機酸としては、例えば塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸等が挙げられる。また有機酸としては、例えば酢酸、マレイン酸、フマル酸、クエン酸、シュウ酸、コハク酸、酒石酸、リンゴ酸、乳酸、メチルスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸等が挙げられる。ベンダムスチンの薬学的に許容されるその塩としては、塩酸、臭化水素酸及びヨウ化水素酸から調製された酸性塩が好ましい。
本発明において、ベンダムスチン塩酸塩を用いることが特に好ましい。
【００１０】
本発明の溶液製剤において、ベンダムスチン又はその製薬上許容される塩は、ベンダムスチン遊離塩基としての濃度が５ｍｇ／ｍＬ〜１００ｍｇ／ｍＬで用いることが好ましい。特に好ましくはベンダムスチン遊離塩基としての濃度が５ｍｇ／ｍＬ〜５０ｍｇ／ｍＬであり、１５ｍｇ／ｍＬ〜４０ｍｇ／ｍＬであることが殊更好ましい。
【００１１】
本発明は、溶液製剤としてポリエチレングリコールとグリセリンの混合溶媒を用いることを特徴とする。
ポリエチレングリコールとしては、エチレングリコール重合物であって温度３０℃以上において液体状態で存在するポリエチレングリコールを用いることが好ましい。好ましくは日本薬局方（局方）又は医薬品添加物規格（薬添規）に収載された規格を満たすポリエチレングリコールであって、マクロゴールを用いることが好ましい。マクロゴールは、医薬製剤において、安定化剤、可溶化剤、基剤、コーティング剤、湿潤剤、乳化剤、分散剤、溶剤、溶解補助剤などとして用いられている。好ましくはマクロゴール３００、マクロゴール４００若しくはマクロゴール６００である。マクロゴール３００は、平均分子量が３００の分子で構成される無色透明の粘性の液体である。マクロゴール４００は、平均分子量が４００の分子で構成される無色透明の粘稠性のある液体である。マクロゴール６００は、平均分子量６００の分子で構成される無色透明の粘性の液又は白色ワセリンようの固体である。マクロゴール３００及び／又はマクロゴール４００を用いることがより好ましい。マクロゴール３００とマクロゴール４００を混合して用いる場合、任意の比率で混合して用いて良いが、マクロゴール３００：マクロゴール４００は、１：０．１〜２．０（ｖ／ｖ）で用いることが好ましく、１：０．１〜１．０（ｖ／ｖ）がより好ましい。マクロゴール４００を過量で用いることが好ましく、マクロゴール３００：マクロゴール４００が１：０．１〜０．５（ｖ／ｖ）で用いることが特に好ましい。
本発明の溶液製剤において、ポリエチレングリコールは体積％で５０体積％〜９９体積％で含有することが好ましい。より好ましくは８０体積％〜９９体積％であり、更に好ましくは９０体積％〜９９体積％で含有する。
【００１２】
本発明は、グリセリンを用いることを特徴とする。グリセリンとしては、特に限定されないが、好ましくは濃グリセリンである。濃グリセリンは、常温で粘性の液で、安定化剤、可塑剤、可溶化剤、甘味剤、基剤、矯味剤、結合剤、コーティング剤、剤皮、湿潤剤、湿潤調整剤、等張化剤、粘稠剤、粘稠化剤、賦形剤、分散剤、溶剤、溶解剤、溶解補助剤、流動化剤などとして用いられている。
本発明の溶液製剤において、グリセリンは体積％で１体積％〜５０体積％で含有することが好ましい。より好ましくは１体積％〜２０体積％であり、更に好ましくは１体積％〜１０体積％で含有する。
【００１３】
本発明のベンダムスチン溶液製剤において、ベンダムスチンの安定性が維持又は向上する目的のために、抗酸化剤を用いても良い。抗酸化剤としては、リポ酸、モノチオグリセロール及びその類似物、アスコルビン酸及びその塩、没食子酸プロピル、メチオニン、システイン、メタ重亜硫酸塩、ナトリウムホルムアルデヒドスルホキシレート、フェノール含有芳香族、脂肪族化合物及びジヒドロリポ酸から１種以上を用いることができる。好ましくは、抗酸化剤としてはモノチオグリセロール、アスコルビン酸又はその塩、若しくはそれらの混合物である。
溶液製剤中の好適な抗酸化剤濃度は、２．５ｍｇ／ｍＬ〜４０ｍｇ／ｍＬで適用することが好ましく、より好ましくは２．５ｍｇ／ｍＬ〜２０ｍｇ／ｍＬである。
【００１４】
本発明のベンダムスチン溶液製剤において、ベンダムスチンの安定性が維持又は向上する目的のために、他の添加剤を用いても良い。他の添加剤として、通常の医薬製剤に用いる緩衝剤、ｐＨ調節剤、等調化剤、安定化剤、補助溶剤等を添加しても良い。
緩衝剤としては、例えば、リン酸塩、クエン酸塩、酢酸塩等を挙げることができる。
ｐＨ調節剤としては、例えば、塩酸、水酸化ナトリウム、酢酸やその塩、リン酸やその塩、クエン酸やその塩、酒石酸やその塩などがあげられる。
等張化剤としては、例えば、塩化ナトリウム、塩化カルシウム、塩化マグネシウム、果糖、キシリトール、ソルビトール、トレハロース、ニコチンアミド、ブドウ糖、精製白糖、マンニトールなどがあげられる。
安定化剤としては、例えば、アセチルトリプトファン、アラニン、アルギニン、アルブミン、安息香酸、イノシトール、ヒスチジン、果糖、カルジアミドナトリウム、カルバゾクロムスルホン酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、キシリトール、グリシン、グルタミン酸、クレアチニン、リン酸二水素ナトリウム、コンドロイチン硫酸ナトリウム、ジエチレントリアミン五酢酸、シスチン、臭化カルシウム、ゼラチン、ソルビトール、炭酸水素ナトリウム、チオシアン酸カリウム、デキストラン、糖酸カルシウム、ナトリウムホルムアルデヒドスルホシレート、ニコチン酸アミド、乳酸、乳糖、尿素、パラオキシ安息香酸プロピル、パラオキシ安息香酸メチル、氷酢酸、ベンザルコニウム、ベンゼトニウム、マルトース、ピロリン酸ナトリウム、マレイン酸、リン酸やその塩、メグルミン、メタスルホ安息香酸ナトリウム、リジン塩酸塩、硫酸マグネシウムなどがあげられる。
補助溶剤としては、ポリエチレングリコール及びグリセリンと共に用いる溶剤であって、例えば、ベンダムスチンの溶解をより促進させるために使用する。使用する補助溶剤としては、例えば、エタノール、オレイン酸、ゴマ油、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、精製オリブ油、精製オレイン酸、ソルビタン脂肪酸エステル、ダイズ油、中鎖脂肪酸トリグリセリド、プロピレングリコール、ベンジルアルコール、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油６０、ポリソルベート８０、マクロゴール４０００、リドカインなどがあげられる。
本発明のベンダムスチン溶液製剤において、ｐＨを制御することにより類縁物質の生成を抑制することができる。好適なｐＨとしては３．０〜４．５であり、ｐＨ３．３〜４．１がより好ましく、更に好ましくはｐＨ３．４〜３．９に調整することである。
本発明のベンダムスチン溶液製剤において、製剤中の水分値を低く制御することにより類縁物質の生成を抑制することができる。当該溶液製剤に好適な水分値としては４．０％以下であり、より好ましくは３．０％以下である。水分含量を２．０％以下に調整することで、特にポリエチレングリコールやグリセリンといった溶媒由来の類縁物質の生成を抑制することができ更に好ましい。
【００１５】
本発明は、ポリエチレングリコール及びグリセリンの混合溶媒を含んだベンダムスチン溶液製剤である。ポリエチレングリコール及びグリセリンの混合溶媒は、例えば、体積％で５０％のポリエチレングリコール及び５０％のグリセリンを含み得る混合溶媒である。あるいは、体積％で９９％のポリエチレングリコール及び１％のグリセリンを含む混合溶媒である。すなわち、当該溶液製剤中のポリエチレングリコール：グリセリンの体積比は、９９：１〜５０：５０の範囲で用いることが好ましい。ポリエチレングリコール及びグリセリンの量は、この範囲内で適宜変えることができる。より好ましくは、ポリエチレングリコール：グリセリンの体積比は９９：１〜８０：２０の範囲である。
【００１６】
本発明の溶液製剤における好ましい態様として、当該溶液製剤中のグリセリンの量が１体積％〜５０体積％であり、ポリエチレングリコールとグリセリンとの体積比が、９９：１〜５０：５０であるベンダムスチン含有溶液製剤である。この際、ベンダムスチン遊離塩基としての濃度が、１８ｍｇ／ｍＬの濃度で含有することが好ましい。若しくは、ベンダムスチン遊離塩基としての濃度が、３６ｍｇ／ｍＬの濃度で含有することが好ましい。場合によって、ベンダムスチン遊離塩基としての濃度が、９ｍｇ／ｍＬの濃度で含有することが好ましい。また、ベンダムスチン遊離塩基としての濃度が、５４ｍｇ／ｍＬの濃度で含有することが好ましい。
また、別の態様として、当該溶液製剤中のグリセリンの量が１体積％〜２０体積％であり、ポリエチレングリコールとグリセリンとの体積比が、９９：１〜８０：２０であるベンダムスチン含有溶液製剤が挙げられる。この際、ベンダムスチン遊離塩基としての濃度が、１８ｍｇ／ｍＬの濃度で含有することが好ましい。若しくは、ベンダムスチン遊離塩基としての濃度が、３６ｍｇ／ｍＬの濃度で含有することが好ましい。場合によって、ベンダムスチン遊離塩基としての濃度が、９ｍｇ／ｍＬの濃度で含有することが好ましい。また、ベンダムスチン遊離塩基としての濃度が、５４ｍｇ／ｍＬの濃度で含有することが好ましい。
【００１７】
本発明のベンダムスチンを含有する溶液製剤の基本的な薬調方法は、特に限定されないが、例えば、予めポリエチレングリコールとグリセリンとを任意の割合で混合して混合溶媒を調製した後、これにベンダムスチン又はその塩を添加して、室温で撹拌又はソニケーションにより溶解させることで調製される。若しくは、予めポリエチレングリコールとグリセリンとを任意の割合で混合して混合溶媒を調製した後、ベンダムスチンの安定性が維持又は向上する目的のために使用する添加剤を添加し、室温で撹拌又はソニケーションにより溶解させ、溶解を確認後、これにベンダムスチン又はその塩を添加して、室温で撹拌又はソニケーションにより溶解させることで調製される。
【００１８】
本発明の溶液製剤は、バイアル状容器に無菌的に充填され、気密性のゴム栓で封止した密封充填製剤として調製される。
使用される容器としては、ゴム栓等で密封可能であれば、バイアル状、シリンジ状等の形状は特に限定されないが、バイアル状の形状が好ましい。容器の材質としては、例えばソーダライムガラス製、ホウケイ酸ガラス製、環状ポリオレフィンポリマー製、環状ポリオレフィンコポリマー製があげられる。また当該容器は、安定性の向上やガラス成分の溶出抑制等の目的に応じて表面処理された容器を用いることができる。表面処理されたバイアルの例として、シリコートバイアル（不二硝子（株）製）、ＶＩＳＴバイアル（大和特殊硝子（株）製）、ＶＩＡＬＥＸ（ニプロ（株）製）、ｔｙｐｅ１  ｐｌｕｓ（ＳＣＨＯＴＴ（株）製）などが挙げられる。
ゴム栓の材質としては、ブチルゴム製のもの、さらにフッ素樹脂によりラミネートされたブチルゴム製のゴム栓を使用するのが好ましい。
これらの封止可能な容器は、容器及びゴム栓共に適当な方法により滅菌処理を施した包材であることが好ましい。
【００１９】
ベンダムスチンは、酸化によって類縁物質を生成することが知られている。従って、本発明のベンダムスチン含有溶液製剤は、溶液中の溶存酸素の濃度を低くすることで類縁物質が抑制される。溶液の溶存酸素濃度は、容器中の充填された溶液以外の空間（ヘッドスペース）の酸素分圧に影響する。溶存酸素濃度を減少させるためには、ヘッドスペース内の酸素を除去することが有効であり、窒素やアルゴン等の不活性ガスを充填しておくことが好ましい。具体的には、該製剤の容器の空隙の酸素濃度が１０体積％以下であることが好ましい。より好ましくは、容器の空隙の酸素濃度が５．０体積％以下の溶液製剤であり、さらに好ましくは３．０体積％以下であり、１．５体積％以下に制御することが特に好ましい。
【００２０】
本発明の溶液製剤における溶液中の溶存酸素の濃度を制御する方法として、溶液が充填された容器内に、窒素やアルゴン等の不活性ガスを直接注入し、一定量の不活性ガスを注入した後に、容器をゴム栓等で密封する方法が挙げられる。この方法を用いることで、容器内を所望の空隙酸素濃度に制御することが可能となる。
また、本発明に係る溶液製剤を充填した容器を密閉空間に設置し、空間内を薬液の任意の温度における蒸気圧を下回らない程度まで減圧し、その後、窒素やアルゴン等の不活性ガスを大気圧になるまで注入し、数時間静置した後、ゴム栓等で密栓する方法を用いても良い。この方法を用いることで、容器内の空隙酸素濃度を所望の濃度以下に制御することが可能となる。
溶液中の空隙の酸素濃度は、酸素センサーを用いた酸素濃度測定器により測定することができる。例えば、ニードル式酸素センサーを接続した酸素濃度計（ＭｉｃｒｏｘＴＸ３、製造元：ＰｒｅＳｅｎｓ社）を用いることで、本発明に係る密封状態の製剤中の容器の空隙酸素濃度を測定することができる。
【００２１】
本発明の注射用溶液製剤は、ベンダムスチンを治療剤とする疾病に対する医薬品として注射用水もしくは生理食塩水にて希釈して使用することができる。
【００２２】
［実施例１］
ベンダムスチン塩酸塩４０．５ｍｇにベンダムスチン塩酸塩としての濃度が２０ｍｇ／ｍＬになるようにＰＥＧ３００（関東化学工業株式会社）：濃グリセリン（純正化学株式会社）＝９：１（体積％）の溶液を加え、室温条件下ソニケーションにて溶解させることで、実施例１の溶液製剤を調製した。
【００２３】
［実施例２］
ベンダムスチン塩酸塩４１．５ｍｇにベンダムスチン塩酸塩としての濃度が２０ｍｇ／ｍＬになるようにＰＥＧ３００（関東化学工業株式会社）：濃グリセリン（純正化学株式会社）＝８：２（体積％）の溶液を加え、室温条件下ソニケーションにて溶解させることで、実施例２の溶液製剤を調製した。
【００２４】
［実施例３］
ベンダムスチン塩酸塩４０．８ｍｇにベンダムスチン塩酸塩としての濃度が４０ｍｇ／ｍＬになるようにＰＥＧ３００（関東化学工業株式会社）：濃グリセリン（純正化学株式会社）＝９：１（体積％）の溶液を加え、室温条件下ソニケーションにて溶解させることで、実施例４の溶液製剤を調製した。
【００２５】
［ベンダムスチン、及びベンダムスチン由来類縁物質の液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）分析条件］
実施例及び比較例の溶液製剤を、以下の液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）条件にて分析した。
カラム：ＡＧＩＬＥＮＴ社製ＺＯＲＢＡＸ  Ｂｏｎｕｓ−ＲＰ（内径４．６ｍｍ、長さ１５．０ｃｍ）
カラム温度：３０℃
移動相Ａ：０．１％（ｖ／ｖ）トリフルオロ酢酸水溶液
移動相Ｂ：０．１％（ｖ／ｖ）トリフルオロ酢酸アセトニトリル溶液
送液量：１．０ｍＬ／ｍｉｎ．
波長：２５４ｎｍ
試料調整方法：５ｍＬのメスフラスコに溶液製剤約２５０ｍｇを精密に測りとり、移動相Ａ：Ｎ−メチル−２−ピロリドン＝１：１溶液にてメスアップした。
移動相の送液：表１に示す条件で送液した。
【００２６】
【表１】
2019099557.tif 000004
【００２７】
［試験例１］４０℃保存安定性試験
実施例１〜３の注射用溶液製剤を、４０℃の条件下にて１週間保存した。各製剤ベンダムスチン含有比率、並びにベンダムスチン由来の類縁物質をＨＰＬＣで分析した。表２にベンダムスチンの含有比率（％）、総類縁物質含有比率（％）及び加水分解類縁物質であるモノヒドロキシ化合物（ＨＰ１）の含有比率（％）をまとめた。
【００２８】
【表２】
2019099557.tif 000005
【００２９】
表２に記載のベンダムスチン（ＢＭ）比率（％）は、開始時のベンダムスチンピーク面積に対する保存試験後のベンダムスチンピーク面積をパーセントで表した数値である。総類縁物質（％）は、ベンダムスチンとベンダムスチン由来の類縁物質ピーク面積の合計に対するベンダムスチン由来の類縁物質ピーク面積の合計をパーセントで表した数値である。また、加水分解類縁物質であるＨＰ１（％）は、ベンダムスチンとベンダムスチン由来の類縁物質ピーク面積の合計に対するＨＰ１由来のピーク面積をパーセントで表した数値である。
検討の結果、混合液体の使用割合に関わらず、ポリエチレングリコールと濃グリセリンの混合溶媒を用いた実施例１〜３が、ベンダムスチンの分解を抑えており、総類縁物質及び酸化類縁物質の量も抑えていることを確認できた。さらに、ベンダムスチン濃度が高い実施例３においても、実施例１、２と比較して、ベンダムスチンの分解、総類縁物質及びＨＰ１の増加に大差ないことを確認できた。
【００３０】
特許文献２に記載されているベンダムスチン溶液製剤は、２５℃以上の保存環境下においては、分解反応等が進行して含量低下することが知られており、冷所のみの保存を推奨している。特許文献３によれば、ポリエチレングリコールとプロピレングリコールの混合溶媒に抗酸化剤や塩化物等の安定化剤を添加することで、２５℃で１５か月〜２４か月の貯蔵寿命を有すると言うことができると記載されている。本発明に係る溶液製剤は、ポリエチレングリコールと濃グリセリンの混合溶媒を使用することでより安定性が向上したことから、抗酸化剤や塩化物等の安定化剤を添加することで、２５℃で２４か月以上の安定性を有するベンダムスチン含有溶液製剤ができると考察できる。
【００３１】
［実施例４］
ＰＥＧ４００（日油株式会社）：濃グリセリン（純正化学株式会社）＝９５：５（体積％）の溶液を調製し、アスコルビン酸（スリーＦ株式会社）を２．５ｍｇ／ｍＬとなるように加えて溶解させた。この溶液にベンダムスチン塩酸塩を、２５ｍｇ／ｍＬになるように加えて溶解させた。この溶液を、水酸化ナトリウム水溶液を用いてｐＨを３．５に調整し２ｍＬずつガラスバイアルに充填した。このバイアルに窒素を吹き込みゴム栓・アルミキャップにより密栓して実施例４の製剤とした。
この製剤の空隙部分の酸素濃度を、ニードル式酸素センサーを接続した酸素濃度計（ＭｉｃｒｏｘＴＸ３、製造元：ＰｒｅＳｅｎｓ社）を用いて測定したところ、０．２％であった。
【００３２】
［実施例５］
ＰＥＧ４００（日油株式会社）：濃グリセリン（純正化学株式会社）＝９０：１０（体積％）の溶液を調製し、アスコルビン酸（スリーＦ株式会社）を２．５ｍｇ／ｍＬとなるように加えて溶解させた。これを用いて、実施例４と同様の操作により実施例５の製剤とした。
この製剤の空隙部分の酸素濃度を、ニードル式酸素センサーを接続した酸素濃度計（ＭｉｃｒｏｘＴＸ３、製造元：ＰｒｅＳｅｎｓ社）を用いて測定したところ、０．２％であった。
【００３３】
［比較例］
ＰＥＧ４００（日油株式会社）５０ｍＬに１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液５０μＬを加えて撹拌し、塩基処理済みＰＥＧ４００とした。この溶液にプロピレングリコール（ＰＧ、丸石製薬）を加え、ＰＥＧ４００：ＰＧ＝９０：１０（体積％）の溶液を調製し、α−チオグリセロール（東京化成工業株式会社）を５．０ｍｇ／ｍＬとなるように加えて溶解させた。この溶液にベンダムスチン塩酸塩を、２５ｍｇ／ｍＬになるように加えて溶解させた。この溶液を２ｍＬずつガラスバイアルに充填した。このバイアルに窒素を吹き込みゴム栓・アルミキャップにより密栓して比較例の製剤とした。
この製剤のｐＨは３．１、空隙部分の酸素濃度を、ニードル式酸素センサーを接続した酸素濃度計（ＭｉｃｒｏｘＴＸ３、製造元：ＰｒｅＳｅｎｓ社）を用いて測定したところ、０．２％であった。
【００３４】
［試験例２］
実施例４、５及び比較例の注射用溶液製剤を、４０℃の条件下にて４週間保存した。各製剤ベンダムスチン含有比率、並びにベンダムスチン由来の類縁物質をＨＰＬＣで分析した。表３に、総類縁物質、ＰＥＧ由来の類縁物質及びグリセリン（Ｇｌｙ）又はプロピレングリコール（ＰＧ）由来の類縁物質の含有比率（％）をまとめた。
【００３５】
【表３】
2019099557.tif 000006
【００３６】
実施例４、５と比較例を比べると、混合溶媒としてグリセリンを使用した実施例において溶媒由来の類縁物質を優位に抑制できており、ベンダムスチンとＰＥＧのエステル化を抑えることができている。
【００３７】
［実施例６］
ＰＥＧ３００（日油株式会社）：ＰＥＧ４００（日油株式会社）：濃グリセリン（純正化学株式会社）＝６０：３５：５（体積％）の溶液を調製し、アスコルビン酸（スリーＦ株式会社）を２．５ｍｇ／ｍＬとなるように加えて溶解させた。この溶液にベンダムスチン塩酸塩を、２５ｍｇ／ｍＬになるように加えて溶解させた。この溶液を、水酸化ナトリウム水溶液を用いてｐＨを３．５に調整し１ｍＬずつガラスバイアルに充填した。このバイアルに窒素および空気を吹き込みゴム栓・アルミキャップにより密栓して実施例６の製剤とした。
この製剤の空隙部分の酸素濃度を、ニードル式酸素センサーを接続した酸素濃度計（ＭｉｃｒｏｘＴＸ３、製造元：ＰｒｅＳｅｎｓ社）を用いて測定したところ、５．３％であった。
【００３８】
［実施例７］
実施例６と同様の操作によりベンダムスチン溶液を調製し、ガラスバイアルに充填した。このバイアルに窒素および空気を吹き込みゴム栓・アルミキャップにより密栓して実施例７の製剤とした。
この製剤の空隙部分の酸素濃度を測定したところ、２．９％であった。
【００３９】
［実施例８］
実施例６と同様の操作によりベンダムスチン溶液を調製し、ガラスバイアルに充填した。このバイアルに窒素を吹き込みゴム栓・アルミキャップにより密栓して実施例８の製剤とした。
この製剤の空隙部分の酸素濃度を測定したところ、０．２％であった。
【００４０】
［試験例３］
実施例６〜８の注射用溶液製剤を、４０℃の条件下にて４週間保存した。各製剤のベンダムスチン由来の類縁物質をＨＰＬＣで分析した。総類縁物質、酸化類縁物質、ＰＥＧ類縁物質、グリセリン（Ｇｌｙ）類縁物質の含有比率（％）を表４にまとめた。
【００４１】
【表４】
2019099557.tif 000007
【００４２】
製剤中の酸素濃度が高くなるにつれ、総類縁物質が増加していく傾向が認められた。類縁物質の多い実施例ほど空隙酸素濃度が大きく減少しており、空隙中の酸素量が類縁物質の生成に関与していることが示唆された。酸化による分解を防ぐためには窒素置換により酸素濃度を低減させることが有用で、１０％以下、好ましくは５％以下、より好ましくは３％以下、更に好ましくは１．５％以下とすることが有用であった。
【００４３】
［実施例９］
ＰＥＧ３００（日油株式会社）：濃グリセリン（純正化学株式会社）＝９０：１０（体積％）の溶液を調製し、α−チオグリセロール（モノチオグリセロール、東京化成工業株式会社）を２．５ｍｇ／ｍＬとなるように加えて溶解させた。この溶液にベンダムスチン塩酸塩を、２５ｍｇ／ｍＬになるように加えて溶解させた。この溶液を、水酸化ナトリウム水溶液を用いてｐＨを３．７に調整し１ｍＬずつガラスバイアルに充填した。このバイアルに窒素を吹き込みゴム栓・アルミキャップにより密栓して実施例９の製剤とした。
この製剤の空隙部分の酸素濃度を測定したところ、０．２％であった。
【００４４】
［実施例１０］
ＰＥＧ３００（日油株式会社）：濃グリセリン（純正化学株式会社）＝９０：１０（体積％）の溶液を調製し、アスコルビン酸（スリーＦ株式会社）を２．５ｍｇ／ｍＬとなるように加えて溶解させた。この溶液にベンダムスチン塩酸塩を、２５ｍｇ／ｍＬになるように加えて溶解させた。この溶液を、水酸化ナトリウム水溶液を用いてｐＨを３．６に調整し１ｍＬずつガラスバイアルに充填した。このバイアルに窒素を吹き込みゴム栓・アルミキャップにより密栓して実施例１０の製剤とした。
この製剤の空隙部分の酸素濃度を測定したところ、０．２％であった。
【００４５】
［試験例４］
実施例９、１０の注射用溶液製剤を、４０℃の条件下にて４週間保存した。各製剤のベンダムスチン由来の類縁物質をＨＰＬＣで分析した。総類縁物質、酸化類縁物質、ＨＰ１の含有比率（％）を表５にまとめた。
【００４６】
【表５】
2019099557.tif 000008
【００４７】
抗酸化剤として、モノチオグリセロール、アスコルビン酸を用いた場合には酸化類縁物質の生成を優位に抑制していることが確認された。使用する抗酸化剤としては、モノチオグリセロールまたはアスコルビン酸が好ましい。
【００４８】
［実施例１１］
ＰＥＧ３００（日油株式会社）：濃グリセリン（純正化学株式会社）＝９０：１０（体積％）の溶液を調製し、α−チオグリセロール（東京化成工業株式会社）を５．０ｍｇ／ｍＬとなるように加えて溶解させた。この溶液にベンダムスチン塩酸塩を、２５ｍｇ／ｍＬになるように加えて溶解させた。この溶液を、水酸化ナトリウム水溶液を用いてｐＨを３．２に調整し、注射用水を適量加えた後１ｍＬずつガラスバイアルに充填した。このバイアルに窒素を吹き込みゴム栓・アルミキャップにより密栓して実施例１１の製剤とした。
この製剤の水分値をカールフィッシャー法により測定したところ１．８％（ｗ／ｗ）、空隙部分の酸素濃度を測定したところ、０．２％であった。
【００４９】
［実施例１２］
ＰＥＧ３００（日油株式会社）：濃グリセリン（純正化学株式会社）＝９０：１０（体積％）の溶液を調製し、α−チオグリセロール（東京化成工業株式会社）を５．０ｍｇ／ｍＬとなるように加えて溶解させた。この溶液にベンダムスチン塩酸塩を、２５ｍｇ／ｍＬになるように加えて溶解させた。この溶液を、水酸化ナトリウム水溶液を用いてｐＨを３．２に調整し、注射用水を適量加えた後１ｍＬずつガラスバイアルに充填した。このバイアルに窒素を吹き込みゴム栓・アルミキャップにより密栓して実施例１２の製剤とした。
この製剤の水分値をカールフィッシャー法により測定したところ２．１％（ｗ／ｗ）、空隙部分の酸素濃度を測定したところ、０．３％であった。
【００５０】
［試験例５］
実施例１１、１２の注射用溶液製剤を、４０℃の条件下にて２週間保存した。各製剤のベンダムスチン由来の類縁物質をＨＰＬＣで分析した。総類縁物質、ＨＰ１、溶媒類縁物質（PEG由来類縁物質とグリセリン由来類縁物質の和）の含有比率（％）を表６にまとめた。
【００５１】
【表６】
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【００５２】
表６の結果から、製剤中の水分含量をコントロールすることにより、保存時の加水分解類縁物質を抑制させることが明らかとなった。また、水分含量を２．０％（ｗ／ｗ）に制御することにより、溶媒類縁物質（ＰＥＧエステル体及び／又はグリセリンエステル体）の生成を抑制することができた。