(57)【要約】      （修正有）【課題】再発性及び／又は難治性多発性骨髄腫を有するヒト対象を治療する方法の提供。【解決手段】アポトーシス、抗体依存性細胞介在性細胞障害作用（ＡＤＣＣ）、及び補体依存性細胞障害作用（ＣＤＣ）の誘導によりヒト対象においてＣＤ３８＋細胞を殺滅することができる、ＣＤ３８と特異的に結合する抗体を該ヒト対象に投与する工程を含み、前記抗体は、約１ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇの安全な治療用量で該ヒト対象に投与される前記方法。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
再発性および／または難治性多発性骨髄腫を有するヒト対象を治療する方法であって、ＣＤ３８と特異的に結合する抗体を該ヒト対象に投与する工程を含み、前記抗体は、２０ｍｇ／ｋｇ以下の安全な治療用量で該ヒト対象に投与される前記方法。
【請求項２】
再発性および／または難治性多発性骨髄腫の治療における薬剤として使用するためのＣＤ３８と特異的に結合する抗体を含む医薬組成物であって、前記抗体は、約２０ｍｇ／ｋｇ以下の安全な治療用量でヒト対象に投与される前記医薬組成物。
【請求項３】
抗体は、アポトーシス、抗体依存性細胞介在性細胞障害作用（ＡＤＣＣ）、および補体依存性細胞障害作用（ＣＤＣ）の誘導によりヒト対象においてＣＤ３８＋細胞を殺滅することができる、請求項１または２に記載の方法または医薬組成物。
【請求項４】
ヒト対象は、
ａ）約０．５ｇ／ｄＬを超える測定可能な血清中Ｍ−タンパク質レベル、
ｂ）約２００ｍｇを超える尿中Ｍ−タンパク質レベル（２４時間の尿）、
ｃ）異常なＦＬＣ比で約１０ｍｇ／ｄＬを超える高レベルの血清中遊離軽鎖（ＦＬＣ）、
およびこれらの組合せ
からなる群から選択される少なくとも１つの状態を有する、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法または医薬組成物。
【請求項５】
前記抗体は、少なくとも１つの重鎖と少なくとも１つの軽鎖を含み、前記重鎖は、配列番号１３、３７、および１５によって表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、前記軽鎖は、配列番号１６、１７、および１８によって表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法または医薬組成物。
【請求項６】
前記抗体は、配列番号５０によって表されるアミノ酸配列を含む少なくとも１つの重鎖と、配列番号５２によって表されるアミノ酸配列を含む少なくとも１つの軽鎖とを含む、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法または医薬組成物。
【請求項７】
安全な治療用量は、約１ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇである、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法または医薬組成物。
【請求項８】
安全な治療用量は、約５ｍｇ／ｋｇ、または約１０ｍｇ／ｋｇ、または約２０ｍｇ／ｋｇである、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法または医薬組成物。
【請求項９】
前記抗体の安全な治療用量は、静脈内投与される、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法または医薬組成物。
【請求項１０】
前記抗体の安全な治療用量は、１週間に１回または２週間毎に１回投与される、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法または医薬組成物。
【請求項１１】
安全な治療用量は、２週間毎に１回投与される約１０ｍｇ／ｋｇまたは約２０ｍｇ／ｋｇである、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法または医薬組成物。
【請求項１２】
安全な治療用量は、１週間毎に１回投与される約１０ｍｇ／ｋｇまたは約２０ｍｇ／ｋｇである、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法または医薬組成物。
【請求項１３】
前記抗体の安全な治療用量は、約０．０４２ｍｇ／時間〜約２５０ｍｇ／時間の範囲の初期注入速度で投与される、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法または医薬組成物。
【請求項１４】
抗体は、デキサメタゾンと組み合わせて投与される、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の方法または医薬組成物。
【請求項１５】
前記抗体は、約２０ｍｇ／ｋｇ以下の用量でヒト対象に投与されると、前記抗体に対する自己抗体を産生しない、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の方法または医薬組成物。
【請求項１６】
前記抗体は、２週間毎に約１ｍｇ／ｋｇの用量レベルでヒト対象に投与されると、前記ヒト対象において検出可能なＣＤ３８受容体占有率を示すことができる、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法または医薬組成物。
【請求項１７】
前記抗体は、２週間毎に約１０ｍｇ／ｋｇまたは約２０ｍｇ／ｋｇの用量レベルでヒト対象に投与されると、前記ヒト対象において少なくとも約８４．１％のＣＤ３８受容体占有率を示すことができる、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法または医薬組成物。
【請求項１８】
前記抗体は、２週間毎に約１０ｍｇ／ｋｇまたは約２０ｍｇ／ｋｇの用量レベルでヒト対象に投与されると、前記ヒト対象において少なくとも約９７．７％のＣＤ３８受容体占有率を示すことができる、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法または医薬組成物。
【請求項１９】
前記抗体は、２週間毎に約５ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇの範囲の用量レベルでヒト対象に投与されると、前記ヒト対象において腫瘍増殖を阻害することができる、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法または医薬組成物。
【請求項２０】
前記抗体は、１週間毎に約５ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇの範囲の用量レベルでヒト対象に投与されると、前記ヒト対象において腫瘍増殖を阻害することができる、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法または医薬組成物。
【請求項２１】
前記抗体は、２週間毎に約１０ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇの範囲の用量レベルでヒト対象に投与されると、前記ヒト対象において腫瘍増殖を阻害することができる、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法または医薬組成物。
【請求項２２】
前記抗体は、１週間毎に約１０ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇの範囲の用量レベルでヒト対象に投与されると、前記ヒト対象において腫瘍増殖を阻害することができる、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法または医薬組成物。
【請求項２３】
請求項１〜２２のいずれか１項に記載の医薬組成物を含む単位剤形。
【請求項２４】
請求項１〜２２のいずれか１項に記載の医薬組成物と容器とを含む製造品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、参照によりそれらの全体があらゆる目的で本出願に組み入れられる、２０１３年１０月３１日に出願された米国仮特許出願第６１／８９８，３０９号、および２０１４年７月３１日に出願された欧州特許出願第ＥＰ１４３０６２２０．６号の優先権を主張するものである。
【０００２】
配列表
本出願には、本明細書に記載する配列を正確に再現するコンピューター可読な形で配列表を添付する。
【０００３】
本開示は、抗体を使用した疾患の治療に関する。より具体的には本開示は、多発性骨髄腫などのがんを治療するための薬剤としての、またはそのための薬剤を製造する際の抗ＣＤ３８抗体の使用に関する。
【背景技術】
【０００４】
ＣＤ３８は、長いＣ末端細胞外ドメインと短いＮ末端細胞質ドメインを有する４５ｋＤのＩＩ型膜貫通糖タンパク質である。ＣＤ３８タンパク質は、ＮＡＤ＋の環状ＡＤＰ−リボース（ｃＡＤＰＲ）への転換を触媒し、ｃＡＤＰＲをＡＤＰ−リボースに加水分解することもできる二機能性細胞外酵素である。
【０００５】
多くの血液悪性腫瘍、および様々な血液悪性腫瘍由来の細胞株において、ＣＤ３８は上方制御される。さらに、血液系の大部分の初期多能性幹細胞はＣＤ３８−である。血液悪性腫瘍におけるＣＤ３８の発現、および慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）における疾患進行とのその相関関係によって、ＣＤ３８は抗体療法の興味深い標的となる。
【０００６】
ＣＤ３８を特異的に認識する抗ＣＤ３８抗体は、例えば特許文献１中に以前に記載されている。しかしながら、これらの抗体は、単剤として使用しＣＤ３８＋発現細胞とインキュベートすると、アポトーシスを誘導することができない。
【０００７】
３８ＳＢ１３、３８ＳＢ１８、３８ＳＢ１９、３８ＳＢ３０、３８ＳＢ３１および３８ＳＢ３９などの特異的モノクローナル抗ＣＤ３８抗体は、特許文献２中に以前に記載されている。特許文献２は、これらの特異的抗ＣＤ３８抗体の３つの細胞毒性活性、アポトーシス、ＡＤＣＣおよびＣＤＣを記載している。
【０００８】
さらに、シタラビン、ビンクリスチン、シクロホスファミドおよびメルファランなどの細胞毒性薬と組み合わせた、これらの特異的抗ＣＤ３８＋抗体の使用は、特許文献３、特許文献４、特許文献５および特許文献６中に報告されている。しかしながら、単剤としての抗ＣＤ３８抗体の使用は報告されていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】国際特許出願ＷＯ２００６／０９９８７５号
【特許文献２】国際特許出願ＷＯ２００８／０４７２４２号
【特許文献３】国際特許出願ＷＯ２０１０／０６１３５７号
【特許文献４】国際特許出願ＷＯ２０１０／０６１３５８号
【特許文献５】国際特許出願ＷＯ２０１０／０６１３５９号
【特許文献６】国際特許出願ＷＯ２０１０／０６１３６０号
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１０】
一実施形態では、本開示はＣＤ３８と特異的に結合し薬剤として使用するための抗体であって、抗体は、２０ｍｇ／ｋｇ以下の安全な治療用量でヒト対象に投与される前記抗体に関する。
【００１１】
別の実施形態では、本開示の抗体の安全な治療用量は約５ｍｇ／ｋｇ、または約１０ｍｇ／ｋｇ、または約２０ｍｇ／ｋｇである。
【００１２】
別の実施形態では、本開示は、ＣＤ３８と特異的に結合する抗体またはＣＤ３８と特異的に結合する抗体を含む医薬組成物であって、抗体または医薬組成物は再発性および／または難治性多発性骨髄腫の治療における薬剤として使用することができ、抗体は、約２０ｍｇ／ｋｇ以下の安全な治療用量でヒト対象に投与される前記医薬組成物に関する。
【００１３】
別の実施形態では、本開示は、化学療法での患者の負担を軽減する、単剤としての抗ＣＤ３８抗体の使用に関する。
【００１４】
別の実施形態では、本開示はさらに、ＣＤ３８と特異的に結合する抗体のヒト対象への安全な治療用量であって、２０ｍｇ／ｋｇ以下、または約２０ｍｇ／ｋｇ以下である前記安全な治療用量に関する。
【００１５】
別の実施形態では、本開示は、それを必要とするヒト対象におけるＣＤ３８＋血液悪性腫瘍を治療する方法であって、２０ｍｇ／ｋｇ以下、または約２０ｍｇ／ｋｇ以下の安全な治療有効量でＣＤ３８と特異的に結合する抗体を前記ヒト対象に投与する工程を含む前記方法に関する。
【００１６】
別の実施形態では、本開示は、それを必要とするヒト対象におけるＣＤ３８＋多発性骨髄腫を治療する方法であって、有効量でＣＤ３８と特異的に結合する抗体を前記ヒト対象に投与する工程を含む前記方法に関する。
【００１７】
別の実施形態では、本開示は、薬剤を製造するための前記ＣＤ３８と特異的に結合する抗体の使用であって、前記抗体は２０ｍｇ／ｋｇ以下、または約２０ｍｇ／ｋｇ以下の安全な治療用量でヒト対象に投与される前記使用に関する。
【００１８】
一実施形態では、薬剤は、ＣＤ３８＋血液悪性腫瘍、詳細には多発性骨髄腫、最も詳細には再発性および／または難治性ＣＤ３８＋多発性骨髄腫の治療用である。
【００１９】
別の実施形態では、本開示はさらに、ＣＤ３８＋多発性骨髄腫、詳細には再発性および／または難治性ＣＤ３８＋多発性骨髄腫の治療用の薬剤を製造するための前記ＣＤ３８と特異的に結合する抗体の使用に関する。
【００２０】
一実施形態では、薬剤として使用するための、ＣＤ３８と特異的に結合することができる抗体またはそのエピトープ結合断片であって、約２０ｍｇ／ｋｇ以下の用量でヒト対象に抗体またはエピトープ結合断片が投与されると、抗体またはエピトープ結合断片はヒト対象による前記抗体またはエピトープ結合断片に対する自己抗体の産生を引き起こさない前記抗体またはそのエピトープ結合断片を開示する。
【００２１】
別の実施形態では、薬剤として使用するための、ＣＤ３８と特異的に結合することがで
きる抗体またはそのエピトープ結合断片であって、２週間毎に約１ｍｇ／ｋｇの用量レベルでヒト対象に投与されると、抗体またはエピトープ結合断片はヒト対象において検出可能なＣＤ３８受容体占有率を示すことができる前記抗体またはそのエピトープ結合断片を開示する。
【００２２】
別の実施形態では、薬剤として使用するための、ＣＤ３８と特異的に結合することができる抗体またはそのエピトープ結合断片であって、２週間毎に約１０ｍｇ／ｋｇの用量レベルでヒト対象に投与されると、抗体またはエピトープ結合断片はヒト対象において少なくとも約８４．１％のＣＤ３８受容体占有率を示すことができる前記抗体またはそのエピトープ結合断片を開示する。
【００２３】
別の実施形態では、薬剤として使用するための、ＣＤ３８と特異的に結合することができる抗体またはそのエピトープ結合断片であって、２週間毎に約１０ｍｇ／ｋｇの用量レベルでヒト対象に投与されると、抗体またはエピトープ結合断片はヒト対象において少なくとも約９７．７％のＣＤ３８受容体占有率を示すことができる前記抗体またはそのエピトープ結合断片を開示する。
【００２４】
別の実施形態では、薬剤として使用するための、ＣＤ３８と特異的に結合することができる抗体またはそのエピトープ結合断片であって、２週間毎、または１週間毎に約５ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇの範囲の用量レベルでヒト対象に投与されると、抗体またはエピトープ結合断片はヒト対象において腫瘍増殖を阻害することができる前記抗体またはそのエピトープ結合断片を開示する。
【００２５】
別の実施形態では、薬剤として使用するための、ＣＤ３８と特異的に結合することができる抗体またはそのエピトープ結合断片であって、２週間毎、または１週間毎に約１０ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇの範囲の用量レベルでヒト対象に投与されると、抗体またはエピトープ結合断片はヒト対象において腫瘍増殖を阻害することができる前記抗体またはそのエピトープ結合断片を開示する。
【００２６】
別の実施形態では、本開示のいずれかの抗体と薬学的に許容される担体または賦形剤とを含む医薬組成物も開示する。
【００２７】
別の実施形態では、本開示は、本明細書で開示する医薬組成物を含む単位剤形を提供する。
【００２８】
別の実施形態では、本開示は、本明細書で開示する医薬組成物と容器とを含む製造品も提供する。
【００２９】
別の実施形態では、本開示の方法は、ＣＤ３８が異常に上方制御される疾患または障害を有するヒト対象を治療するのに適している可能性がある。このような方法は、他の工程のなかでも、ＣＤ３８と特異的に結合することができる抗体またはそのエピトープ結合断片をヒト対象に投与する工程を含むことができ、２週間毎、または１週間毎に約１ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇの範囲の用量レベルでヒト対象に投与されると、抗体はヒト対象において腫瘍増殖を阻害することができる。一態様では、このような疾患または障害はＣＤ３８＋血液悪性腫瘍である。別の態様では、このような疾患または障害はＣＤ３８＋多発性骨髄腫である。
【図面の簡単な説明】
【００３０】
【図１】異なる用量（１、３、５および１０ｍｇ／ｋｇ）で特異的抗ＣＤ３８抗体ｈｕ３８ＳＢ１９を用いて治療した、多発性骨髄腫を有する患者における経時的な応答を示すグラフ図である（Ｎ＝１７）。（進行性疾患のため、数人の患者は短期の治療後に除外した。しかしながら数人の患者は治療中安定状態であり、他の患者は１ｍｇ／ｋｇおよび１０ｍｇ／ｋｇ用量レベルで部分的応答を示す。ＰＲ＝部分的応答、ＭＲ＝最小応答、ＳＤ＝安定疾患またはＰＤ＝進行性疾患）。
【発明を実施するための形態】
【００３１】
本開示の文脈では、用語「ＣＤ３８」は、長いＣ末端細胞外ドメインと短いＮ末端細胞質ドメインを有する４５ｋＤのＩＩ型膜貫通糖タンパク質であるＣＤ３８タンパク質を指す。ＣＤ３８タンパク質は、ＮＡＤ＋の環状ＡＤＰ−リボース（ｃＡＤＰＲ）への転換を触媒し、ｃＡＤＰＲをＡＤＰ−リボースに加水分解することもできる二機能性細胞外酵素である。個体発生中、ＣＤ３４＋関連幹細胞ならびにリンパ球、赤血球および骨髄細胞の系統関連前駆細胞においてＣＤ３８が出現する。Ｔ細胞およびＢ細胞の分化の異なる段階において様々な発現レベルで、リンパ球系統においてＣＤ３８の発現は大抵持続する。
【００３２】
シグナル変換におけるＣＤ３８＋の役割は国際特許出願ＷＯ２００８／０４７２４２号中にさらに記載されている。詳細にはＣＤ３８は、例えば（２０１３年１０月７日に入手された）Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＰ＿００１７６６．２と同様のアミノ酸配列を含むＩＩ型膜貫通タンパク質を指す。
【００３３】
多くの血液悪性腫瘍、および様々な血液悪性腫瘍由来の細胞株において、ＣＤ３８は上方制御される。
【００３４】
「血液悪性腫瘍」は、血液、骨髄、およびリンパ節に影響を与える型のがんである。この３つは免疫系中で密接に関連しているので、この３つのうちの１つに影響を与える疾患は他の２つにも影響を与える可能性がある。血液悪性腫瘍には、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）（例えばバーキットリンパ腫（ＢＬ）およびＴ細胞リンパ腫（ＴＣＬ）を含む）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）（例えば、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病（Ｂ−ＣＬＬ）およびヘアリーセル白血病（ＨＣＬ）など）、ＢおよびＴ細胞急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）、および慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）が含まれる。
【００３５】
他方で、血液系の大部分の初期多能性幹細胞はＣＤ３８−である。血液悪性腫瘍におけるＣＤ３８の発現、および疾患進行とのその相関関係によって、ＣＤ３８は抗体療法の興味深い標的となる。
【００３６】
「ＣＤ３８＋細胞」はＣＤ３８タンパク質を発現する細胞である。詳細には、ＣＤ３８＋細胞は哺乳動物細胞である。一実施形態では、ＣＤ３８＋細胞は、ＣＤ３８タンパク質を発現する非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、ＢおよびＴ細胞急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）、または慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）細胞である。
【００３７】
したがって「ＣＤ３８＋血液悪性腫瘍」は、がん細胞がＣＤ３８＋細胞であるかまたはＣＤ３８＋細胞を含む前に記載した血液悪性腫瘍である。
【００３８】
本開示の文脈において、ＣＤ３８＋血液悪性腫瘍は詳細には、がん細胞がＣＤ３８＋細胞であるかまたはＣＤ３８＋細胞を含む、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）（例えばバーキットリンパ腫（ＢＬ）およびＴ細胞リンパ腫（ＴＣＬ）を含む）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）（例えば、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病（Ｂ−ＣＬＬ）およびヘアリーセル白血病（ＨＣＬ）など）、ＢおよびＴ細胞急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）、および慢性骨髄性白血病
（ＣＭＬ）からなる群から選択される。
【００３９】
詳細にはＣＤ３８＋血液悪性腫瘍は、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（Ｂ細胞ＡＬＬ）および／または慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、より詳細には多発性骨髄腫（ＭＭ）、最も詳細には再発性および／または難治性多発性骨髄腫である。
【００４０】
血液悪性腫瘍を同定するための方法は当業者に公知であり、第１の工程として全血球計算（ＣＢＣ）および末梢血塗抹標本の試験を含む。最終診断は、フローサイトメトリー分析、細胞遺伝学およびさらなる分子学的技法によって最終的に補完される形態試験のため、十分な骨髄穿刺および／または生検を通常必要とする。
【００４１】
この血液悪性腫瘍由来の細胞がＣＤ３８＋であることを確認するための技法は当業者に公知であり、例えば、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）などの標準的な分子生物学の技法、および／またはウエスタンブロット分析などの免疫化学的方法を含む。
【００４２】
本開示の文脈において、「対象」はヒトを示す。
【００４３】
詳細には、「対象」および／または「それを必要とする対象」は、ＣＤ３８＋血液悪性腫瘍に罹患しておりメディカルケアまたは治療下にある個体を本明細書において示す。したがって語句「対象」は本明細書において患者を指すことができる。
【００４４】
本開示による対象は男性または女性であってよい。
【００４５】
幾つかの実施形態では、対象は抗がん剤療法で事前に治療されている。詳細には、前記事前の抗がん剤療法は、化学療法、標的がん療法、放射線療法、骨髄および／または幹細胞移植ならびに免疫療法からなる群から選択することができる。
【００４６】
「化学療法」は、標準レジメンの一部として１つまたはそれ以上の細胞毒性抗腫瘍薬（化学療法薬）を用いるがんの治療を指す。化学療法薬は通常数サイクルで与えられ、治療期間の後に身体を回復させる休息期が続く。
【００４７】
例えば血液悪性腫瘍を治療するために使用される「化学療法薬」は、これらに限定されないが、シタラビン（シトシンアラビノシドまたはａｒａ−Ｃ）ならびにアントラサイクリン系薬（ダウノルビシンおよび／またはダウノマイシン、ドキソルビシンおよびリポソーマルドキソルビシン、イダルビシン、ならびにミトキサントロンなど）、ゲムツズマブ、クロファラビン、クラドリビン、ヒドロキシウレア（ハイドレア（登録商標））、エトポシド、アムサクリン、ＦＬＴ３−阻害剤、ならびに脱メチル化剤（５−アザシチジンおよびデシタビン）、メルファラン、シクロホスファミド、ビンクリスチン、プロテアソーム阻害薬、例えばボルテゾミブ、レナリドミド、サリドマイドおよび／またはポマリドミドなど、詳細にはボルテゾミブおよび／またはレナリドミドである。
【００４８】
「標的がん療法」は、腫瘍の増殖と進行に関与する特異的分子に干渉することによってがんの増殖と蔓延を遮断する薬物または他の物質を指す。
【００４９】
「放射線療法」または「照射」は高エネルギー照射を使用してがん細胞を除去する。放射線療法は骨髄または末梢血幹細胞移植前に使用することができる。
【００５０】
「骨髄および／または幹細胞移植」は、高用量の化学療法および／または放射線療法により破壊された幹細胞の回復を目的とする細胞移植を指す。幹細胞の供給源には骨髄、末
梢血または臍帯血が含まれる。移植する幹細胞の供給源に応じて、手順は骨髄移植（ＢＭＴ）または末梢血幹細胞移植（ＰＢＳＣＴ）または臍帯血移植（ＵＣＢＴ）を区別することができる。さらに骨髄および／または幹細胞移植は、自家幹細胞移植および／または同種移植を指すことができる。
【００５１】
「自家移植」では、対象自身の幹細胞が彼または彼女の骨髄または末梢血から取り出される。人間に治療（高用量の化学療法および／または照射）を施しながら、幹細胞が凍結され保存される。「パージング」と呼ばれるプロセスを使用して、サンプル中の任意の白血病細胞の取り出しを試みることができる。次いで幹細胞が、治療後の対象の血液に再注入される。
【００５２】
「同種移植」は適合ドナーからの移植である。同種骨髄移植の利点は、ドナーから移植した細胞が新たな免疫系を樹立することができ、それが白血病細胞を異物として検出することができそれらを除去することである。同種移植の欠点は適合ドナーの制約と副作用である。
【００５３】
「免疫療法」は、対象の免疫系を刺激して疾患の原因である悪性腫瘍細胞を攻撃することを指す。これは、例えばがんワクチンを投与することによる対象の免疫処置によってなされてもよく、その場合、腫瘍細胞を破壊しようとする標的として認識するように対象自身の免疫系が訓練され、または薬物としての治療用抗体の投与によってなされてもよく、その場合、治療用抗体により腫瘍細胞が破壊されるように対象の免疫系が動員される。
【００５４】
本開示の文脈において、対象は、上記で定義された、ただし再発性および／または難治性の血液悪性腫瘍に関して、標準的な抗がん剤療法によって事前に治療されていてもよい。
【００５５】
したがって特定の実施形態では、対象はＣＤ３８＋多発性骨髄腫、詳細には再発性および／または難治性ＣＤ３８＋多発性骨髄腫に罹患している。
【００５６】
「再発性」は、血液悪性腫瘍が治療され改善されているが、血液悪性腫瘍が再発した対象を指す。
【００５７】
「難治性」は、血液悪性腫瘍が如何なる改善もなく治療されており、したがって血液悪性腫瘍が進行した対象を指す。
【００５８】
一実施形態では、対象はボルテゾミブおよび／またはレナリドミドで事前に治療されている。
【００５９】
一実施形態では、対象は自家幹細胞移植（ＡＳＣＴ）を事前に受けている。
【００６０】
一実施形態では、対象は自家移植後６カ月以内で再発している。
【００６１】
多発性骨髄腫、および第１７ｐ染色体欠失、転座ｔ（４，１４）、ｔ（１４，１６）、ｔ（１４，２０）、または３を超える１ｑ２１のコピーなどの増幅などのある特定の遺伝子特徴を有する対象は、悪い結果に関連することが当技術分野で公知である。
【００６２】
したがって一実施形態では、対象は第１７ｐ欠失、ｔ（４，１４）、ｔ（１４，１６）、ｔ（１４，２０）および／または３を超える１ｑ２１のコピーを有する。
【００６３】
近年研究者らは、多発性骨髄腫を有する対象に関するゲノムプロファイリング試験を開
発している。この試験は、数箇所の染色体異常だけでなくそのゲノム発現プロファイルに基づいて、医者が多発性骨髄腫を有する対象を分類するのを可能にする。
【００６４】
一実施形態では、したがって対象はハイリスク遺伝子発現プロファイリング（ＧＥＰ）シグネチャーを有する可能性がある（Ｓｈａｕｇｈｎｅｓｓｙ  ＪＤ  Ｊｒ．、Ｚｈａｎ
Ｆ、Ｂｕｒｉｎｇｔｏｎ  ＢＥら（２００７年）、Ｂｌｏｏｄ１０９：２２７６〜２２８４頁）。
【００６５】
対象は前述の特徴の任意の組合せを示す可能性がある。
【００６６】
多発性骨髄腫はモノクローナルタンパク質（Ｍタンパク質）の存在によって検出することができる。
【００６７】
「Ｍ−タンパク質」はパラプロテイン（モノクローナルタンパク質、またはＭタンパク質）を指す。このパラプロテインは、プラズマ細胞のクローン増殖によって過剰に産生される免疫グロブリンまたは免疫グロブリン軽鎖である。ある特定の閾値を超える量は多発性骨髄腫を示す。通常は血清中および尿中のＭ−タンパク質が定量化される。
【００６８】
血清中のＭ−タンパク質レベルは典型的には血清電気泳動によって、または例えば特異的免疫グロブリンアッセイによって測定される；しかしながら、特異的免疫グロブリンの定量化は、正常免疫グロブリンが結果に含まれるためＭ−タンパク質を常に過大評価する。この理由のため、Ｍ−タンパク質のベースラインおよびフォローアップ測定は同じ方法によって行われなければならない（Ｒｉｃｈｅｓ  ＰＧら、１９９１年）。
【００６９】
一実施形態では、０．５ｇ／ｄＬを超える血清中のＭ−タンパク質は多発性骨髄腫を示す。別の実施形態では、約０．５ｇ／ｄＬを超える血清中のＭ−タンパク質は多発性骨髄腫を示す。
【００７０】
尿中のＭ−タンパク質は、尿中に排出され２４時間にわたり測定されたＭ−タンパク質を指す。典型的には２４時間にわたり排出されたタンパク質の合計量を測定し、濃縮尿中タンパク質の電気泳動により決定した尿中Ｍ−タンパク質のパーセンテージ値を掛ける。
【００７１】
一実施形態では、２４時間の尿中で２００ｍｇを超える尿中のＭ−タンパク質は多発性骨髄腫を示す。別の実施形態では、２４時間の尿中で約２００ｍｇを超える尿中のＭ−タンパク質は多発性骨髄腫を示す。
【００７２】
多発性骨髄腫は尿中に見られる免疫グロブリン軽鎖によってさらに同定することができ、このパラプロテインはＢｅｎｃｅ  Ｊｏｎｅｓタンパク質と呼ばれ、軽鎖がラムダ（λ）および／またはカッパ（κ）遊離軽鎖である遊離軽鎖で構成される尿中パラプロテインである。これらの遊離軽鎖（ＦＬＣ）は商用試験によって測定することができる。遊離軽鎖の測定は、ＦＬＣカッパとＦＬＣラムダの遊離軽鎖比（ＦＬＣ）（ＦＬＣ  κ／λ比）を与えるＦＬＣカッパとＦＬＣラムダ遊離軽鎖の測定を指し、正常なＦＬＣ  κ／λ比は０．２６〜１．６５の範囲である。
【００７３】
多発性骨髄腫を有する患者では、軽鎖、カッパまたはラムダのいずれかが主に産生され、これがＦＬＣ  κ／λ比の変化をもたらす。
【００７４】
したがって、多発性骨髄腫を示す異常なＦＬＣ  κ／λ比は０．２６未満または１．６５超のＦＬＣ  κ／λ比である。
【００７５】
一実施形態では、異常なＦＬＣ比でＦＬＣが１０ｍｇ／ｄＬを超える高レベルの血清中遊離軽鎖（ＦＬＣ）は多発性骨髄腫を示す。別の実施形態では、異常なＦＬＣ比でＦＬＣが約１０ｍｇ／ｄＬを超える高レベルの血清中遊離軽鎖（ＦＬＣ）は多発性骨髄腫を示す。
【００７６】
したがって一実施形態では、多発性骨髄腫を有する対象は、ａ）約０．５ｇ／ｄＬを超える測定可能な血清中Ｍ−タンパク質、および／またはｂ）約２００ｍｇを超える尿中Ｍ−タンパク質（２４時間の尿）、および／またはｃ）異常なＦＬＣ比でＦＬＣが約１０ｍｇ／ｄＬを超える高レベルの血清中遊離軽鎖（ＦＬＣ）を有する。
【００７７】
一実施形態では、対象は浸出タンパク質産物に耐性がある。
【００７８】
本開示の文脈での抗体はＣＤ３８と特異的に結合する。一実施形態によれば、本開示の範囲内で使用される抗ＣＤ３８抗体は、アポトーシス、抗体依存性細胞介在性細胞障害作用（ＡＤＣＣ）、および補体依存性細胞障害作用（ＣＤＣ）の誘導によりＣＤ３８＋細胞を殺滅することができる。
【００７９】
本明細書で使用する「アポトーシス」はプログラムされた細胞死のプロセスを指す。
【００８０】
「抗体依存性細胞介在性細胞障害作用」または「ＡＤＣＣ」は、それによって膜表面抗原が特異的抗体により結合した標的細胞を免疫系のエフェクター細胞が活発に溶解する、細胞介在性免疫防御の機構を指す。
【００８１】
「補体依存性細胞障害作用」または「ＣＤＣ」は、本開示の文脈では、補体系タンパク質の存在下での標的細胞の溶解を指す。
【００８２】
本明細書で使用する「コンジュゲート」、「イムノコンジュゲート」、「抗体−薬物コンジュゲート」または「ＡＤＣ」は同じ意味を有し交換可能である。
【００８３】
「抗体」は、２つの重鎖がジスルフィド結合によって互いに結合し各重鎖がジスルフィド結合によって軽鎖と結合した、天然または従来型抗体であってよい。２つのタイプの軽鎖、ラムダ（λ）とカッパ（κ）が存在する。抗体分子の機能活性を決定する５つの主な重鎖クラス（またはアイソタイプ）：ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡおよびＩｇＥが存在する。各鎖が異なる配列ドメインを含む。軽鎖は２つのドメインまたは領域、可変ドメイン（ＶＬ）と定常ドメイン（ＣＬ）を含む。重鎖は４つのドメイン、１つの可変ドメイン（ＶＨ）と３つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３、まとめてＣＨと呼ぶ）を含む。軽鎖と重鎖両方の可変領域（ＶＬ）と（ＶＨ）が、抗原に対する結合認識と特異性を決定する。軽鎖と重鎖の定常領域ドメイン（ＣＬ）と（ＣＨ）は、抗体鎖会合、分泌、経胎盤移行、補体結合、およびＦｃ受容体（ＦｃＲ）との結合などの重要な生物学的性質をもたらす。Ｆｖ断片は免疫グロブリンのＦａｂ断片のＮ末端部分であり、１つの軽鎖と１つの重鎖の可変部分からなる。抗体の特異性は、抗体結合部位と抗原決定基の間の構造相補性に存する。抗体結合部位は超可変または相補性決定領域（ＣＤＲ）に主として由来する残基で構成される。時折、非超可変またはフレームワーク領域（ＦＲ）由来の残基が全体ドメイン構造、したがって結合部位に影響を与える。
【００８４】
「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」は、原型免疫グロブリン結合部位の天然Ｆｖ領域の結合アフィニティーと特異性をまとめて定義するアミノ酸配列を指す。免疫グロブリン各々の軽鎖と重鎖は、ＣＤＲ１−Ｌ、ＣＤＲ２−Ｌ、ＣＤＲ３−ＬとＣＤＲ１−Ｈ、ＣＤＲ２−Ｈ、ＣＤＲ３−Ｈで表される３つのＣＤＲをそれぞれ有する。したがって従来型抗体の抗原結合部位は、重鎖と軽鎖の各々のＶ領域に由来するＣＤＲセットを含む６つのＣ
ＤＲを含む。
【００８５】
「フレームワーク領域」（ＦＲ）は、ＣＤＲ間に挿入されたアミノ酸配列、すなわち単一種の異なる免疫グロブリン間で比較的保存された免疫グロブリン軽鎖および重鎖可変領域のアミノ酸配列部分を指す。免疫グロブリン各々の軽鎖と重鎖は、ＦＲ１−Ｌ、ＦＲ２−Ｌ、ＦＲ３−Ｌ、ＦＲ４−ＬとＦＲ１−Ｈ、ＦＲ２−Ｈ、ＦＲ３−Ｈ、ＦＲ４−Ｈで表される４つのＦＲをそれぞれ有する。
【００８６】
本明細書で使用する「ヒトフレームワーク領域」は、天然に存在するヒト抗体のフレームワーク領域と実質的に（約８５％、またはそれ以上、詳細には９０％、９５％、９７％、９９％または１００％）同一であるフレームワーク領域である。
【００８７】
免疫グロブリン軽鎖または重鎖に関するＣＤＲ／ＦＲの定義はＫａｂａｔの定義に基づいて与えられる（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｂｉｏｉｎｆ．ｏｒｇ．ｕｋ／ａｂｓ／）。
【００８８】
本明細書で使用する用語「抗体」は、従来型抗体およびその断片、ならびに単一ドメイン抗体およびその断片、詳細には単一ドメイン抗体の可変重鎖、およびキメラ、ヒト化、二重特異性または多重特異性抗体を示す。
【００８９】
本明細書で使用する抗体または免疫グロブリンは、ごく最近説明されたものであり、その相補性決定領域が単一ドメインポリペプチドの一部である抗体である、「単一ドメイン抗体」も含む。単一ドメイン抗体の例には、重鎖抗体、軽鎖を元来欠く抗体、従来型４鎖抗体由来の単一ドメイン抗体、操作型単一ドメイン抗体が含まれる。単一ドメイン抗体は、マウス、ヒト、ラクダ、ラマ、ヤギ、ウサギおよびウシだけには限られないが、これらを含めた任意の種に由来する可能性がある。単一ドメイン抗体は、軽鎖を欠く重鎖抗体として知られ天然に存在する単一ドメイン抗体である可能性がある。詳細にはラクダ科種、例えばラクダ、ヒトコブラクダ、ラマ、アルパカおよびグアナコは、軽鎖を元来欠く重鎖抗体を産生する。ラクダ科重鎖抗体はＣＨ１ドメインも欠く。
【００９０】
軽鎖を欠くこれらの単一ドメイン抗体の可変重鎖は、当技術分野では「ＶＨＨ」または「ナノボディ」として公知である。従来のＶＨドメインと同様に、ＶＨＨは４つのＦＲと３つのＣＤＲを含む。ナノボディには従来型抗体に優る利点がある：それらはＩｇＧ分子より約１０倍小さく、結果として、正確にフォールディングされた機能的ナノボディが高収率を得ながらｉｎ  ｖｉｔｒｏ発現により産生される可能性がある。さらに、ナノボディは非常に安定的でありプロテアーゼの作用に耐性がある。ナノボディの性質と産生はＨａｒｍｓｅｎおよびＤｅ  Ｈａａｒｄによって論評されている（Ｈａｒｍｓｅｎ  ａｎｄ
Ｄｅ  Ｈａａｒｄ（２００７年）Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．７７：１３〜２２頁）。
【００９１】
本明細書で使用する用語「モノクローナル抗体」または「ｍＡｂ」は、一つの特異的抗原を対象とする単一アミノ酸組成の抗体分子を指し、何らかの特定方法による抗体の産生を必要とすると解釈すべきではない。モノクローナル抗体はＢ細胞またはハイブリドーマの単一クローンにより産生することができるが、組換えであってもよい、すなわちタンパク質操作によって産生することもできる。
【００９２】
用語「キメラ抗体」は、定常領域またはその一部分が改変、置き換え、または交換され、したがって可変領域が異なる種、または別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する種の定常領域と結合した操作型抗体を指す。キメラ抗体は、可変領域またはその一部分が改変、置き換え、または交換され、したがって定常領域が異なる種、または別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する種の可変領域と結合した抗体も指す。詳細にはキメラ抗体は
、別の抗体、詳細にはヒト抗体のＣＨドメインおよびＣＬドメインと会合した、非ヒト動物由来の抗体のＶＨドメインおよびＶＬドメインを含む。非ヒト動物として、例えばマウス、ラット、ハムスター、ウサギなどの任意の動物を使用することができる。キメラ抗体は、少なくとも２つの異なる抗原に対して特異性を有する多重特異性抗体を示すこともできる。一実施形態ではキメラ抗体は、マウス起源の可変ドメインとヒト起源の定常ドメインを有する。
【００９３】
用語「ヒト化抗体」は、最初は全体的または部分的に非ヒト起源であり、修飾され詳細には重鎖と軽鎖のフレームワーク領域内のある特定アミノ酸が置き換えられて、ヒトにおける免疫応答が回避または最小化された抗体を指す。ヒト化抗体の定常ドメインは大抵ヒトＣＨドメインとＣＬドメインである。一実施形態では、ヒト化抗体はヒト起源の定常ドメインを有する。
【００９４】
キメラ抗体に関して、ヒト化は可変領域配列のフレームワーク領域の修飾を典型的に含む。
【００９５】
ＣＤＲの一部であるアミノ酸残基はヒト化に関して典型的には改変されないが、特定の場合、個々のＣＤＲアミノ酸残基を改変して、例えばグリコシル化部位、脱アミド化部位、望ましくないシステイン残基、ＡＤＣの場合リシン残基を除去することが望ましい可能性がある。Ｎ結合グリコシル化はオリゴ糖鎖とトリペプチド配列Ａｓｎ−Ｘ−ＳｅｒまたはＡｓｎ−Ｘ−Ｔｈｒ中のアスパラギン残基の結合によって起こり、この場合ＸはＰｒｏ以外の任意のアミノ酸であってよい。Ｎグリコシル化部位の除去は、特に保存的アミノ酸置換による、ＡｓｎまたはＳｅｒおよび／またはＴｈｒ残基いずれかの異なる残基への突然変異によって行うことができる。アスパラギンおよびグルタミン残基の脱アミド化は、ｐＨおよび表面露出などの要因に応じて起こる可能性がある。アスパラギン残基は、主に配列Ａｓｎ−Ｇｌｙ中、および低い程度でＡｓｎ−Ａｌａなどの他のジペプチド配列中に存在するとき、脱アミド化の影響を特に受けやすい。このような脱アミド化部位、特にＡｓｎ−ＧｌｙがＣＤＲ配列中に存在するとき、したがって、典型的には関連残基の１つを除去するための保存的置換によってその部位を除去することが望ましい可能性がある。ＡＤＣの場合、ｍＡｂへの細胞毒性薬の結合は、リシン側鎖残基への共有結合によって作製される可能性がある。この立体障害がｍＡｂと抗原の結合に干渉する可能性がある。したがって、典型的にはアルギニン保存的置換によってリシン残基を除去することが望ましい可能性がある。関連残基の１つを除去するためのＣＤＲ配列中の置換も本開示によって包含されるものとする。
【００９６】
ヒト化の目標は、抗体の完全抗原結合アフィニティーと特異性を維持しながらの、ヒトへの導入用のネズミ抗体などの、異種抗体の免疫原性の低下である。ヒト化抗体、または他の哺乳動物による非拒絶に適合させた抗体は、抗体の再表面化およびＣＤＲ移植などの幾つかの技術を使用して産生することができる。本明細書で使用する再表面化技術は、分子モデリング、統計解析、および抗体可変領域の非ＣＤＲ表面を改変し標的宿主の既知の抗体表面に類似させる突然変異誘発の組合せを使用する。
【００９７】
抗体の再表面化のための戦略および方法、ならびに異なる宿主内の抗体の免疫原性を低下させるための他の方法は、米国特許第５，６３９，６４１号中に開示されている。簡単に言うと、好ましい方法では、（１）一群の抗体重鎖および軽鎖可変領域の位置アライメントを作製し一組の重鎖および軽鎖可変領域フレームワーク表面露出位置を得て、この場合全可変領域に関するアライメント位置は少なくとも約９８％同一である；（２）一組の重鎖および軽鎖可変領域フレームワーク表面露出アミノ酸残基をげっ歯類抗体（またはその断片）に関して定義する；（３）げっ歯類の一組の表面露出アミノ酸残基に最もよく類似した一組の重鎖および軽鎖可変領域フレームワーク表面露出アミノ酸残基を同定する；
（４）工程（２）において定義した一組の重鎖および軽鎖可変領域フレームワーク表面露出アミノ酸残基を、げっ歯類抗体の相補性決定領域の任意の残基の任意の原子の５Å以内に存在するアミノ酸残基以外、工程（３）において同定した一組の重鎖および軽鎖可変領域フレームワーク表面露出アミノ酸残基と置換する；ならびに（５）結合特異性を有するヒト化げっ歯類抗体が産生される。したがって一実施形態では、ヒト化抗体は「再表面化」抗体と呼ぶこともできる。
【００９８】
ＣＤＲ−移植（ＥＰ０２３９４００；ＷＯ９１／０９９６７；米国特許第５，５３０，１０１号および同第５，５８５，０８９号）、ベニアリングまたは再表面化（ＥＰ０５９２１０６；ＥＰ０５１９５９６；Ｐａｄｌａｎ（１９９１年）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ２８（４／５）：４８９〜４９８頁；Ｓｔｕｄｎｉｃｋａら（１９９４年）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ７（６）：８０５〜８１４頁；Ｒｏｇｕｓｋａら（１９９４年）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃｓｄ．Ｓｃｉ  Ｕ．Ｓ．Ａ．９１：９６９〜９７３頁）、および鎖シャッフリング（米国特許第５，５６５，３３２号）を含めた様々な他の技法を使用して、抗体をさらにヒト化することができる。ヒト抗体は、ファージディスプレイ法を含めた、当技術分野で公知である様々な方法によって作製することができる。米国特許第４，４４４，８８７号、同第４，７１６，１１１号、同第５，５４５，８０６号および同第５，８１４，３１８号；ならびに国際特許出願ＷＯ９８／４６６４５号、ＷＯ９８／５０４３３号、ＷＯ９８／２４８９３号、ＷＯ９８／１６６５４号、ＷＯ９６／３４０９６号、ＷＯ９６／３３７３５号、およびＷＯ９１／１０７４１号も参照。
【００９９】
「保存的アミノ酸置換」は、類似した化学的性質（例えば、電荷または疎水性）を伴う側鎖Ｒ基を有する別のアミノ酸残基によって、アミノ酸残基が置換された置換である。一般に保存的アミノ酸置換が、タンパク質の機能性を実質的に変えることはない。類似した化学的性質を伴う側鎖を有するアミノ酸基の例には、１）脂肪族側鎖：グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、およびイソロイシン；２）脂肪族ヒドロキシル側鎖：セリンおよびスレオニン；３）アミド含有側鎖：アスパラギンおよびグルタミン；４）芳香族側鎖：フェニルアラニン、チロシン、およびトリプトファン；５）塩基性側鎖：リシン、アルギニン、およびヒスチジン；６）酸性側鎖：アスパラギン酸およびグルタミン酸；ならびに７）イオウ含有側鎖：システインおよびメチオニンが含まれる。保存的アミノ酸置換基は：バリン−ロイシン−イソロイシン、フェニルアラニン−チロシン−トリプトファン、リシン−アルギニン、アラニン−バリン、グルタミン酸−アスパラギン酸、およびアスパラギン−グルタミンである。
【０１００】
（従来型）抗体の「断片」は、完全抗体の一部分、詳細には完全抗体の抗原結合領域または可変領域を含む。抗体断片の例には、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’、ｄｓＦｖ、（ｄｓＦｖ）２、ｓｃＦｖ、ｓｃ（Ｆｖ）２、抗体断片から形成されたダイアボディ、二重特異性および多重特異性抗体が含まれる。従来型抗体の断片は、重鎖抗体またはＶＨＨなどの単一ドメイン抗体であってもよい。
【０１０１】
用語「Ｆａｂ」は、Ｈ鎖のＮ末端側の約半分とＬ鎖全体が、プロテアーゼ、パパインでＩｇＧを処理して得た断片間でジスルフィド結合を介して１つに結合した、約５０，０００Ｄａの分子量および抗原結合活性を有する抗体断片を示す。
【０１０２】
用語「Ｆ（ａｂ’）２」は、プロテアーゼ、ペプシンでＩｇＧを処理して得た断片間でヒンジ領域のジスルフィド結合を介して結合したＦａｂより若干大きい、約１００，０００Ｄａの分子量および抗原結合活性を有する抗体断片を指す。
【０１０３】
用語「Ｆａｂ」は、Ｆ（ａｂ’）２断片のヒンジ領域のジスルフィド結合の切断によっ
て得られる、約５０，０００Ｄａの分子量および抗原結合活性を有する抗体断片を指す。
【０１０４】
単鎖Ｆｖ（「ｓｃＦｖ」）ポリペプチドは、ペプチドコードリンカーによって連結したＶＨおよびＶＬコード遺伝子を含む遺伝子融合体から通常発現される、共有結合したＶＨ：：ＶＬヘテロ二量体である。本開示のヒトｓｃＦｖ断片は、詳細には遺伝子組換え技法の使用によって適切な立体配座に保持されたＣＤＲを含む。二価および多価抗体断片は一価ｓｃＦｖの会合によって自然に形成する可能性があり、または二価ｓｃ（Ｆｖ）２などのペプチドリンカーによる一価ｓｃＦｖの連結によって作製することができる。
【０１０５】
「ｄｓＦｖ」はジスルフィド結合によって安定化したＶＨ：：ＶＬヘテロ二量体である。
【０１０６】
「（ｄｓＦｖ）２」はペプチドリンカーによって連結された２つのｄｓＦｖを示す。
【０１０７】
用語「二重特異性抗体」または「ＢｓＡｂ」は、単一分子内で２つの抗体の抗原結合部位を組み合わせた抗体を示す。したがってＢｓＡｂは、２つの異なる抗原と同時に結合することができる。例えばＥＰ２０５０７６４Ａ１中に記載されたように、望ましい一組の結合性とエフェクター機能を有する抗体または抗体誘導体を設計、修飾、および産生するため、遺伝子操作が高頻度で使用されている。
【０１０８】
用語「多重特異性抗体」は、単一分子内で２つまたはそれ以上の抗体の抗原結合部位を組み合わせた抗体を示す。
【０１０９】
用語「ダイアボディ」は２つの抗原結合部位を有する小さな抗体断片を指し、これらの断片は同一ポリペプチド鎖（ＶＨ−ＶＬ）内で軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と連結した重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む。同一鎖上の２つのドメイン間の対形成を可能にするには短すぎるリンカーを使用することによって、ドメインは別の鎖の相補ドメインと対形成し２つの抗原結合部位を作成することになる。
【０１１０】
本開示の範囲内で使用される抗体は、ＷＯ２００８／０４７２４２中に記載された３８ＳＢ１３、３８ＳＢ１８、３８ＳＢ１９、３８ＳＢ３０、３８ＳＢ３１および３８ＳＢ３９と呼ばれる抗ＣＤ３８モノクローナル抗体の１つ、または再表面化技術によって得られるそれらの誘導体であってよい。
【０１１１】
詳細には、本開示の文脈における抗ＣＤ３８抗体は、配列番号１の配列ＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２の配列ＣＤＲ−Ｈ２、および配列番号３の配列ＣＤＲ−Ｈ３を含む少なくとも１つの重鎖と、配列番号４、５、および６からなるアミノ酸配列を有する３つの連続したＣＤＲを含む少なくとも１つの軽鎖を含む。詳細には前記抗体は、配列番号４４を含む重鎖可変ドメインと配列番号３８を含む軽鎖可変ドメインを有する。
【０１１２】
詳細には、本開示の文脈における抗ＣＤ３８抗体は、配列番号７の配列ＣＤＲ−Ｈ１、配列番号８の配列ＣＤＲ−Ｈ２、および配列番号９の配列ＣＤＲ−Ｈ３を含む少なくとも１つの重鎖と、配列番号１０、１１、および１２からなるアミノ酸配列を有する３つの連続したＣＤＲを含む少なくとも１つの軽鎖を含む。詳細には前記抗体は、配列番号４５を含む重鎖可変ドメインと配列番号３９を含む軽鎖可変ドメインを有する。
【０１１３】
詳細には、本開示の文脈における抗ＣＤ３８抗体は、配列番号１３の配列ＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１４の配列ＣＤＲ−Ｈ２、および配列番号１５の配列ＣＤＲ−Ｈ３を含む少なくとも１つの重鎖と、配列番号１６、１７、および１８からなるアミノ酸配列を有する３つの連続したＣＤＲを含む少なくとも１つの軽鎖を含む。詳細には前記抗体は、配列番号
４６を含む重鎖可変ドメインと配列番号４０を含む軽鎖可変ドメインを有する。
【０１１４】
詳細には、本開示の文脈における抗ＣＤ３８抗体は、配列番号１９の配列ＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２０の配列ＣＤＲ−Ｈ２、および配列番号２１の配列ＣＤＲ−Ｈ３を含む少なくとも１つの重鎖と、配列番号２２、２３、および２４からなるアミノ酸配列を有する３つの連続したＣＤＲを含む少なくとも１つの軽鎖を含む。詳細には前記抗体は、配列番号４７を含む重鎖可変ドメインと配列番号４１を含む軽鎖可変ドメインを有する。
【０１１５】
詳細には、本開示の文脈における抗ＣＤ３８抗体は、配列番号２５の配列ＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２６の配列ＣＤＲ−Ｈ２、および配列番号２７の配列ＣＤＲ−Ｈ３を含む少なくとも１つの重鎖と、配列番号２８、２９、および３０からなるアミノ酸配列を有する３つの連続したＣＤＲを含む少なくとも１つの軽鎖を含む。詳細には前記抗体は、配列番号４８を含む重鎖可変ドメインと配列番号４２を含む軽鎖可変ドメインを有する。
【０１１６】
詳細には、本開示の文脈における抗ＣＤ３８抗体は、配列番号３１の配列ＣＤＲ−Ｈ１、配列番号３２の配列ＣＤＲ−Ｈ２、および配列番号３３の配列ＣＤＲ−Ｈ３を含む少なくとも１つの重鎖と、配列番号３４、３５、および３６からなるアミノ酸配列を有する３つの連続したＣＤＲを含む少なくとも１つの軽鎖を含む。詳細には前記抗体は、配列番号４９を含む重鎖可変ドメインと配列番号４３を含む軽鎖可変ドメインを有する。
【０１１７】
本開示の文脈中にさらに含まれるのは、本明細書で開示する配列と少なくとも８５％、より詳細には少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一である配列を含む抗体である。
【０１１８】
「参照配列と少なくとも８５％同一である」配列は、その全長で、参照配列の全長と８５％、またはそれ以上、より詳細には９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有する配列である。
【０１１９】
「配列同一性」のパーセンテージは比較ウインドウで最適アライメントをとる２つの配列を比較することにより決定することができ、比較ウインドウ内のポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列の一部分は、２つの配列の最適アライメントに関する（付加または欠失を含まない）参照配列と比較して付加または欠失（すなわちギャップ）を含む可能性がある。パーセンテージは、同一核酸塩基またはアミノ酸残基が両配列中に存在する位置の数を決定し適合位置の数を得て、その適合位置の数を比較ウインドウ内の全位置数で割り、その結果に１００を掛けて配列同一性のパーセンテージを得ることによって計算する。比較用配列の最適アライメントは、包括的ペアワイズアライメントによって、例えばＮｅｅｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃｈ  Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３（１９７０年）のアルゴリズムを使用して行われる。配列同一性のパーセンテージは、例えばおよびＢＬＯＳＵＭ６２マトリックスを用いるプログラムＮｅｅｄｌｅ、および以下のパラメーター、ギャップ−オープン＝１０、ギャップ−エクステンド＝０．５を使用して容易に決定することができる。
【０１２０】
一実施形態では、抗ＣＤ３８抗体は、再表面化技術によって得られるヒト化抗ＣＤ３８抗体である。このような抗体は「再表面化」抗体と呼ぶこともできる。
【０１２１】
一実施形態では、再表面化および／またはヒト化型の抗体は少なくとも１つの重鎖と少なくとも１つの軽鎖を含み、前記重鎖は配列番号１、２、および３によって表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を含み、かつ前記軽鎖は配列番号４、５、および６によって表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を含む。
【０１２２】
別の実施形態では、再表面化および／またはヒト化型の抗体は少なくとも１つの重鎖と少なくとも１つの軽鎖を含み、前記重鎖は配列番号７、８、および９によって表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を含み、かつ前記軽鎖は配列番号１０、１１、および１２によって表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を含む。
【０１２３】
別の実施形態では、再表面化および／またはヒト化型の抗体は少なくとも１つの重鎖と少なくとも１つの軽鎖を含み、前記重鎖は配列番号１３、３７、および１５によって表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を含み、かつ前記軽鎖は配列番号１６、１７、および１８によって表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を含む。
【０１２４】
別の実施形態では、再表面化および／またはヒト化型の抗体は少なくとも１つの重鎖と少なくとも１つの軽鎖を含み、前記重鎖は配列番号１９、２０、および２１によって表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を含み、かつ前記軽鎖は配列番号２２、２３、および２４によって表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を含む。
【０１２５】
別の実施形態では、再表面化および／またはヒト化型の抗体は少なくとも１つの重鎖と少なくとも１つの軽鎖を含み、前記重鎖は配列番号２５、２６、および２７によって表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を含み、かつ前記軽鎖は配列番号２８、２９、および３０によって表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を含む。
【０１２６】
さらなる実施形態では、再表面化および／またはヒト化型の抗体は少なくとも１つの重鎖と少なくとも１つの軽鎖を含み、前記重鎖は配列番号３１、３２、および３３によって表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を含み、かつ前記軽鎖は配列番号３４、３５、および３６によって表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を含む。
【０１２７】
一実施形態では、本開示は、配列番号５０および５１の群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨを含む再表面化および／またはヒト化抗体を提供する。さらなる実施形態では、再表面化および／またはヒト化型の抗体は配列番号５０によって表されるアミノ酸配列を有するＶＨを含む。別の実施形態では、ヒト化型の抗体は配列番号５１によって表されるアミノ酸配列を有するＶＨを含む。
【０１２８】
別の実施形態では、本開示は、配列番号５２、５３、５４および５５の群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬを含むヒト化抗体を提供する。別の実施形態では、ヒト化型の抗体は配列番号５２および５３の群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬを含む。別の実施形態では、ヒト化型の抗体は配列番号５４および５５の群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬを含む。
【０１２９】
具体的実施形態では、本開示による抗体は、配列番号５０によって表されるアミノ酸配列を有するＶＨを含み、配列番号５２によって表されるアミノ酸配列を有するＶＬを含む、ｈｕ３８ＳＢ１９と呼ばれるヒト化および／または再表面化抗体である。
【０１３０】
別の実施形態では、本開示による抗体はダラツムマブである。
【０１３１】
具体的実施形態では、本開示に従い使用するための抗体は裸状態の抗体である。すなわ
ち抗体は、抗体−薬物コンジュゲートを形成するための如何なる薬物とも結合していない。
【０１３２】
本開示に従い使用するための抗体はＣＤ３８に特異的に結合し、アポトーシス、抗体依存性細胞介在性細胞障害作用（ＡＤＣＣ）の誘導によりＣＤ３８＋細胞を殺滅することができる。具体的実施形態では、本開示に従い使用するための抗体は、抗ヒトＩｇＧ二次抗体と架橋していない抗体で細胞を処理したときでさえｉｎ  ｖｉｔｒｏでのアポトーシス誘導によってＣＤ３８＋細胞を殺滅することができる。
【０１３３】
本開示の文脈中にさらに含まれるのは、本明細書で前に開示した配列と少なくとも８５％、より詳細には少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一である配列を含むヒト化抗体である。
【０１３４】
本開示による抗体は、動物免疫処置、ハイブリドーマ形成、および特異的性質を有する抗体選択の標準的技法によって得ることができる。詳細にはＣＤ３８抗体３８ＳＢ１９は、国際特許出願ＷＯ２００８／０４７２４２号の実施例４中に記載されたように、すなわち抗ＣＤ３８抗体の軽鎖と重鎖のクローニングおよび配列決定の以下のプロトコールに従い得られる：
【０１３５】
（ｉ）以下のような３８ＳＢ１９抗体を産生するハイブリドーマ細胞からのＲＮＡ調製：全ＲＮＡの調製物を、ＱｉａｇｅｎのＲＮｅａｓｙ  ｍｉｎｉｐｒｅｐキットを使用して、３８ＳＢ１９抗体を産生する５×１０６個のハイブリドーマ細胞から得た。簡単に言うと、５×１０６個の細胞をペレット状にし、（１％β−メルカプトエタノールを含む）３５０μＬのＲＬＴバッファー中に再懸濁した。懸濁液は、それをおおよそ１０〜２０回２１．５ゲージニードルおよびシリンジに通すことによって、またはそれが粘性状態でなくなるまで均質化した。エタノール（３５０μＬの７０％エタノール水溶液）をホモジェネートに加え、それを十分混合した。溶液をスピンカラムに移し、２ｍＬ回収用チューブ中に置き、１５秒間＞８０００×ｇで回転させた。カラムを５００μＬのＲＰＥバッファーで２回洗浄し、次いで新たなチューブに移し、３０μＬのＲＮａｓｅを含まない水で溶出し１分間回転させた。溶出液（３０μＬ）を、２回目の１分間の溶出回転のためにカラムに戻し入れた。３０μＬ溶出液のアリコートを水で希釈し、それを使用してＲＮＡ定量化のため２６０ｎｍでのＵＶ吸収を測定した。
【０１３６】
（ｉｉ）以下のような逆転写酵素（ＲＴ）反応を用いたｃＤＮＡ調製：可変領域３８ＳＢ１９抗体ｃＤＮＡを、ＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎのＳｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔＩＩキットを使用して全ＲＮＡから作製した。Ｑｉａｎｅａｓｙ  ｍｉｎｉ  ｐｒｅｐからの最大５μｇの全ＲＮＡを利用してキットのプロトコールに厳密に従った。簡単に言うと、ＲＮａｓｅを含まない滅菌蒸留水でＲＮＡ、１μＬのランダムプライマー、および１μＬのｄＮＴＰミックスを最大１２μＬにし、５分間６５℃でインキュベートした。次いでミックスを、氷上に少なくとも１分間置いた。次に４μＬの５×反応バッファー、２μＬの０．１Ｍ  ＤＴＴ、および１μＬのＲＮａｓｅＯＵＴを加え、ミックスをＭＪ  Ｒｅｓｅａｒｃｈサーマルサイクラー中で２分間２５℃でインキュベートした。１μＬのＳｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔＩＩ酵素を加えることができるようにサーマルサイクラーを停止させ、次いで、５０分間５５℃に移行する前に、２５℃でさらに１０分間再開させた。反応物を１５分間７０℃まで加熱することにより熱失活させ、１μＬのＲＮａｓｅ  Ｈを加えることによりＲＮＡを除去し、２０分間３７℃でインキュベートした。
【０１３７】
（ｉｉｉ）縮重ＰＣＲ反応：ハイブリドーマ細胞由来のｃＤＮＡにおける第１のラウンド縮重ＰＣＲ反応に関する手順は、Ｗａｎｇら（２０００年）およびＣｏら（１９９２年）中に記載された方法に基づいた。このラウンド用のプライマー（表１）は、ｐＢｌｕｅ
ｓｃｒｉｐｔＩＩプラスミドへのクローニングを容易にするための制限部位を含む。
【０１３８】
【表１】
2019070004.tif 000002
【０１３９】
ＰＣＲ反応成分（表２）を薄壁ＰＣＲ用チューブ内の氷上で混合し、次いで予め加熱したＭＪ  ｒｅｓｅａｒｃｈサーマルサイクラーに移し９４℃で停止した。反応は以下のようにＷａｎｇら２０００年に基づくプログラムを使用して実行した：
名称：Ｗａｎｇ４５
９４℃で３：００分
９４℃で０：１５秒
４５℃で１：００分
７２℃で２：００分
２に戻り２９回
７２℃で６：００分
４℃で長時間
終了。
【０１４０】
次いでＰＣＲ反応混合物を１％低溶解性アガロースゲル上に施し、３００〜４００ｂｐのバンドを切除し、Ｚｙｍｏ  ＤＮＡミニカラムを使用して精製し、配列決定のためＡｇｅｎｃｏｕｒｔ  ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓに送った。それぞれ５’および３’ＰＣＲプライマーを配列決定用プライマーとして使用し、両方向から３８ＳＢ１９可変領域ｃＤＮＡを作製した。
【０１４１】
（ｉｖ）以下のような５’末端配列のクローニング：３８ＳＢ１９可変領域軽鎖および重鎖ｃＤＮＡ配列をクローニングするため使用した縮重プライマーは５’末端配列を改変するので、完全配列を解読するため追加的な配列決定労力が必要とされた。前に記載した
方法からの予備ｃＤＮＡ配列を使用して、３８ＳＢ１９配列が由来したネズミ生殖細胞系列配列に関するＮＣＢＩ  ＩｇＢｌａｓｔ部位を検索した（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｉｇｂｌａｓｔ／）。ＰＣＲプライマーを設計し（表３）、ネズミ抗体のリーダー配列とアニーリングさせ、その結果新たなＰＣＲ反応によって、ＰＣＲプライマーによって改変されない完全可変領域ｃＤＮＡを生成することができた。ＰＣＲ反応、バンド精製、および配列決定は前に記載したように実行した。
【０１４２】
【表２】
2019070004.tif 000003
【０１４３】
（ｖ）以下のような配列確認のためのペプチド解析：可変領域に関するｃＤＮＡ配列情報を生殖細胞系列定常領域配列と組み合わせ、完全長抗体ｃＤＮＡ配列を得た。次いで重鎖と軽鎖の分子量を計算し、ＬＣ／ＭＳ解析によって得たネズミ３８ＳＢ１９抗体の分子量と比較した。米国特許第８，１５３，７６５号の表５は、ＬＣ／ＭＳにより測定した値と共に、３８ＳＢ１９のＬＣおよびＨＣに関するｃＤＮＡ配列から計算した質量を与える。分子量測定は３８ＳＢ１９の軽鎖と重鎖両方に関するｃＤＮＡ配列と一致する。
【０１４４】
【表３】
2019070004.tif 000004
【０１４５】
表３は、３８ＳＢ１９第２のラウンドＰＣＲ反応に使用した５’末端ネズミリーダー配列プライマーを提供する。３’末端プライマーは第１のラウンド反応中で使用したプライマーと同一である。それらは、それぞれの定常領域配列とプライマー形成するからである。
【０１４６】
より詳細には、ヒト化３８ＳＢ１９抗体は、国際特許出願ＷＯ２００８／０４７２４２号の実施例５中に記載されたように、すなわち以下のプロトコールに従い産生することができる：ｈｕ３８ＳＢ１９に関する可変領域配列はＢｌｕｅ  Ｈｅｒｏｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙによってコドン最適化され合成された。これらの配列は、両単鎖内のそれぞれの定常配列とインフレームでのクローニング用の制限酵素部位、およびタンデム二本鎖哺乳動物発現プラスミドに隣接する。軽鎖可変領域はｐｓ３８ＳＢ１９ＬＣＺｖ１．０とｐｓ３８ＳＢ１９ｖ１．００プラスミドの両方においてＥｃｏＲＩおよびＢｓｉＷＩ部位にクローニングされる（ＷＯ２００８／０４７２４２の図２Ａおよび２Ｃ）。重鎖可変領域はｐｓ３８ＳＢ１９ＨＣＮｖ１．０とｐｓ３８ＳＢ１９ｖ１．００プラスミドの両方においてＨｉｎｄＩＩＩおよびＡｐａ１部位にクローニングされる（ＷＯ２００８／０４７２４２の図２Ｂおよび２Ｃ）。これらのプラスミドを使用して、哺乳動物細胞中での一過的または安定的トランスフェクションのいずれかにおいてｈｕ３８ＳＢ１９を発現させることが可能である。同様の発現ベクター構築物を使用して他のキメラおよびヒト化抗体を産生した。ＨＥＫ−２９３Ｔ細胞中でｈｕ３８ＳＢ１９を発現させるための一過的トランスフェクションを、ＢＤ  ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓからのＣａＰＯ４試薬を使用して実行した。供給されたプロトコールは高発現収率のため若干修正した。簡単に言うと、２×１０６個のＨＥＫ−２９３Ｔ細胞を、トランスフェクション２４時間前にポリエチレンイミン（ＰＥＩ）でコーティングした１０ｃｍ組織培養プレート上に平板培養した。トランスフェクションは、ＰＢＳで細胞を洗浄し、１％Ｕｌｔｒａ  Ｌｏｗ  ＩｇＧ  ＦＢＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）を含む１０ｍＬのＤＭＥＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）と培地を置き換えることによって開始した。溶液Ａ（１０μｇのＤＮＡ、８６．８μＬのＣａ２＋溶液、および最大５００μＬのＨ２Ｏ）をボルテックスしながら溶液Ｂに滴下添加した。混合物を１分間室温でインキュベートし、１ｍＬの混合物を各１０ｃｍプレートに滴下添加した。トランスフェクション後約１６時間で、１％Ｕｌｔｒａ  Ｌｏｗ  ＩｇＧ  ＦＢＳを含む１０ｍＬの新たなＤＭＥＭと培地を置き換えた。約２４時間後、２ｍＭの酪酸ナトリウムを各１０ｃｍプレートに加えた。トランスフェクション体は４日後に採集した。１／１０体積の１Ｍトリス／ＨＣｌバッファー、ｐＨ８．０を加えることにより、プロテインＡア
フィニティークロマトグラフィー用に上澄みを調製した。ｐＨ調節した上澄みは０．２２μｍフィルター膜を介して濾過し、結合バッファー（ＰＢＳ、ｐＨ７．３）で平衡状態にしたプロテインＡセファロースカラム（ＨｉＴｒａｐ  プロテインＡ  ＨＰ、１ｍＬ、Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）に充填した。Ｑ−セファロースプレカラム（１０ｍＬ）をサンプル充填中にプロテインＡカラムの上流に連結して、ＤＮＡなどの細胞物質からの汚染を減らした。サンプル充填後、プレカラムを除去し、洗浄および溶出用にプロテインＡカラムの方向を逆にした。２８０ｎｍでの吸光度なしで安定したベースラインを得るまで、結合バッファーでカラムを洗浄した。０．５ｍＬ／分の流速を使用して、０．１５ＭのＮａＣｌを含む０．１Ｍ酢酸バッファー、ｐＨ２．８で抗体を溶出した。約０．２５ｍＬの分画を回収し、１／１０体積の１Ｍトリス／ＨＣｌバッファー、ｐＨ８．０を加えることによって中和した。ピーク分画をＰＢＳで一晩２回透析し、ＯＤ２８０での吸光度により精製抗体を定量化した。ヒト化抗体とキメラ抗体も、若干異なる手順でプロテインＧカラムを使用して精製することができる。
【０１４７】
全ての例示的キメラ、ヒト化および／または再表面化抗ＣＤ３８抗体は、前に記載した手順と類似した手順を使用して発現させ精製した。
【０１４８】
本発明者らは、本開示の抗体に関する適切な投与用量およびレジメンを決定し、ＣＤ３８＋血液悪性腫瘍、詳細にはＣＤ３８＋多発性骨髄腫、より詳細には再発性および／または難治性ＣＤ３８＋多発性骨髄腫に罹患した対象を治療することができる十分容認される抗がん剤治療を達成した。
【０１４９】
したがって、加速的用量漸増スケジュールを０．０００１ｍｇ／ｋｇ〜０．１ｍｇ／ｋｇの範囲の第１の５用量レベルに使用し、２週間毎に投与し、用量レベル当たり１人の対象が評価可能であった。０．３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇおよび２０ｍｇ／ｋｇなどの全ての後の用量レベルは２週間毎に投与し、用量レベル毒性に基づき用量漸増に関する古典的３＋３設計に従い１週間毎に１０ｍｇ／ｋｇも投与し、投与に関するサイクルの中央値は２．０〜５０．０の範囲であった。
【０１５０】
この試験内で、本発明者らは、使用した抗体には、１０ｍｇ／ｋｇを超える最大許容用量で処理可能な安全性プロファイルがあることを実証した。
【０１５１】
本発明者らによって実行された免疫原性試験は、ヒト対象が抗ＣＤ３８抗体に対する抗体を産生しなかったことを示した。
【０１５２】
さらに本発明者らは、本開示の抗体はヒトにおいて、低用量での高受容体占有率により実証される高い結合効率があることを示すことができた。受容体占有率は２週間毎に例えば１ｍｇ／ｋｇの用量レベルで検出し、１０ｍｇ／ｋｇで８４．１〜９７．７％の範囲に達した。
【０１５３】
受容体占有率は、典型的にはＣＤ３８抗原の２つの異なるエピトープと結合する２つのモノクローナル抗体（ｍＡｂ）を使用して評価する。ＭＡｂ１は例えばｈｕ３８ＳＢ１９と同じエピトープに特異的であり、したがって（例えばｈｕ３８ＳＢ１９に占有されていない）遊離ＣＤ３８部位のレポーターである。ｈｕ３８ＳＢ１９のエピトープと異なるエピトープを対象とする第２のモノクローナル抗体ｍＡｂ２は、ＣＤ３８＋細胞の存在に関する陽性対照、およびｉｎ  ｖｉｔｒｏ薬物刺激後細胞表面上に残存するＣＤ３８抗原の量の評価をもたらす。キャリブレーターおよび間接的検出としてビーズを使用することにより、ｈｕ３８ＳＢ１９の結合能力を全く変えずに定量的手法が可能となる。結果の組合せは細胞毎の受容体密度と占有率をもたらす。
【０１５４】
０．０３〜３ｍｇ／ｋｇの用量範囲に関してサイクル１でのＣｍａｘと比較して、サイクル２でＣｍａｘの有意な増大はなかった。
【０１５５】
本発明者らは、抗体が１人の患者に関して５ｍｇ／ｋｇの用量レベルおよび５人の患者に関して１０ｍｇ／ｋｇの用量レベルでＣｍａｘにおける閾値での腫瘍増殖阻害を達成したことをさらに実証する。
【０１５６】
本発明者らは、ＣＤ３８＋血液悪性腫瘍、詳細にはＣＤ３８＋多発性骨髄腫、最も詳細には再発性および／または難治性ＣＤ３８＋多発性骨髄腫に罹患した対象が、１ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇおよび１０ｍｇ／ｋｇの用量で本開示の抗ＣＤ３８抗体を投与したとき、詳細な応答を示したことを詳細に実証している。
【０１５７】
本発明者らは、１人の患者に関して５ｍｇ／ｋｇの用量レベルおよび５人の患者に関して１０ｍｇ／ｋｇの用量レベルにおいてＣｍａｘで腫瘍増殖阻害閾値に達したことを詳細に観察した。
【０１５８】
本開示によれば、抗体は薬剤として使用するためのものであり、前記抗体は２０ｍｇ／ｋｇ以下の安全な治療用量でヒト対象に投与する。
【０１５９】
一実施形態では、抗体はＣＤ３８＋血液悪性腫瘍を治療するため、詳細には多発性骨髄腫を治療するため、最も詳細には再発性および／または難治性多発性骨髄腫を治療するために使用するためのものである。
【０１６０】
本開示の文脈において治療されるＣＤ３８＋血液悪性腫瘍はセクション「ＣＤ３８＋血液悪性腫瘍」中に定義する。
【０１６１】
ヒト対象はセクション「対象」中で前に定義する。
【０１６２】
本開示の文脈において、本明細書中で使用する用語「治療する」または「治療」は、このような用語を適用する障害もしくは状態、またはこのような障害もしくは状態の１つもしくはそれ以上の症状の進行の逆行、緩和、阻害、または予防を意味する。
【０１６３】
本明細書中で使用する用語「ＣＤ３８＋血液悪性腫瘍を治療する」によって、腫瘍のＣＤ３８＋悪性細胞の増殖および／または前記ＣＤ３８＋腫瘍からの転移の進行の阻害を意味する。このような治療は、腫瘍増殖の退行、すなわち測定可能な腫瘍の大きさの縮小につながる可能性もある。詳細にはこのような治療は、ＣＤ３８＋腫瘍またはＣＤ３８＋転移の完全な退行につながる。
【０１６４】
本開示の文脈における抗体の「治療有効量」によって、本発明者らにより発見され本明細書中に開示する、前記ＣＤ３８＋血液悪性腫瘍を治療するのに十分な抗体の量を意味する。
【０１６５】
特定の実施形態では、対象に投与する抗体の前記治療有効量は、０．０００１ｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇの範囲の用量、詳細には１ｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇの範囲の用量、より詳細には０．１ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、７．５ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１１ｍｇ／ｋｇ、１２ｍｇ／ｋｇ、１３ｍｇ／ｋｇ、１４ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、１６ｍｇ／ｋｇ、１７ｍｇ／ｋｇ、１８ｍｇ／ｋｇ、１９ｍｇ／ｋｇまたは２０ｍｇ／ｋｇである。
【０１６６】
一実施形態では、本開示の抗体は１週間に１回または２週間毎に１回投与することができる。
【０１６７】
別の実施形態では、対象に投与する抗体の前記治療有効量は、例えば１週間に１回または２週間に１回、１ｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇ、または１０ｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇの範囲の用量である。実際これらの用量は、幾つかの個体で効能を示しながら安全であることが示されている。
【０１６８】
さらに別の実施形態では、対象に投与する抗体の前記治療有効量は、１週間に１回１０ｍｇ／ｋｇ、または例えば１週間に１回もしくは２週間に１回２０ｍｇ／ｋｇの用量である。
【０１６９】
幾つかの実施形態では、本開示の抗体は各投与間の間隔が１週間または２週間の断続的プログラムに従い投与することができ、これは前回の投与に対する耐性に応じて１〜２週間延長することができる。しかしながら本発明者らは、多くの場合副作用は重症ではなかったことを観察した。
【０１７０】
したがって特定の実施形態では、前のサイクルの直後に新しいサイクルとして抗体の投与を繰り返す。
【０１７１】
本明細書中で使用する「サイクル」は「１週間に１回の」投与の場合は１週間を指し、「２週間に１回の」投与の場合、１サイクルは２週間に相当する。
【０１７２】
一実施形態では、投与のサイクル数は２〜５０、詳細には２、３、４、５、６、７、８、９、０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４５、５０サイクルであってよい。
【０１７３】
したがって、本開示の抗体の投与のサイクル数は２、３、４、５、６、７、８、９、０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４５、５０サイクルからなる群から選択することができる。
【０１７４】
本開示の抗体は静脈内に投与される。
【０１７５】
幾つかの実施形態では、疾患応答評価後治療中に用量を増大することができる。
【０１７６】
本開示の文脈における最小用量は０．０００１ｍｇ／ｋｇに相当し、０．０００１ｍｇ／ｋｇの用量レベルは正常なＢ細胞およびＴ細胞における理論上１０％のＣＤ３８受容体占有率を表す。
【０１７７】
幾つかの実施形態では、ある特定の注入率で静脈内投与を行う。
【０１７８】
詳細には、抗体は０．０４２ｍｇ／時間〜２５０ｍｇ／時間の初期注入速度で投与され、詳細には初期注入速度は０．０４２ｍｇ／時間である。
【０１７９】
幾つかの実施形態では、初期注入速度は投与される用量に依存する。
【０１８０】
したがって一例では、本開示の抗体は、例えば合計３ｍｌに関して０．０４２ｍｇ／時間の初速度において０．０００１ｍｇ／ｋｇの用量で、例えば合計３ｍｌに関して０．４２ｍｇ／時間の初速度において０．００１ｍｇ／ｋｇの用量で、例えば１．４ｍｇ／時間
の初速度において０．０１ｍｇ／ｋｇの用量で、例えば４．２ｍｇ／時間の初速度において０．０３ｍｇ／ｋｇの用量で、例えば７ｍｇ／時間の初速度において０．１ｍｇ／ｋｇの用量で、例えば１．４ｍｇ／時間の初速度において０．０１ｍｇ／ｋｇの用量で、例えば１０．５ｍｇ／時間の初速度において０．３ｍｇ／ｋｇの用量で、例えば１７．５ｍｇ／時間の初速度において１ｍｇ／ｋｇの用量で、例えば５２．５ｍｇ／時間の初速度において３ｍｇ／ｋｇの用量で、例えば８７．５ｍｇ／時間の初速度において５ｍｇ／ｋｇの用量で、例えば１７５ｍｇ／時間の初速度において１０ｍｇ／ｋｇの用量で、および例えば２５０ｍｇ／時間の初速度において２０ｍｇ／ｋｇの用量で典型的に投与される。
【０１８１】
投与中、典型的には過敏性反応の徴候に関して対象を観察し、過敏性反応の不在下でのみ投与を続ける。
【０１８２】
しかしながら、投与の正確な時間（１週間に１回または２週間毎に１回）、サイクル数および初期注入速度は本明細書中に開示する値の範囲内にあるが、しかしながら正確な値は、任意の特定の対象に関して、治療するＣＤ３８＋血液悪性腫瘍および障害の重症度；利用する特異的抗体の活性；対象の利用する特異的組成物、年齢、体重、一般的健康状態、性別および食生活を含めた要因に応じて担当医により決定されることは理解される。
【０１８３】
担当医が、疾患応答性に基づき投与レジメを修正し適合させることができることは理解される。
【０１８４】
「疾患応答性」は、血液悪性腫瘍および段階付けに関する標準的基準に従い決定することができる。
【０１８５】
血液悪性腫瘍、詳細にはＣＤ３８＋血液悪性腫瘍の疾患応答性を評価するための方法は当業者には公知である。
【０１８６】
典型的には、疾患応答性を評価するための方法は、Ｋａｒｎｏｆｓｋｙ性能状態評価、特異的マーカーの定量化、骨髄生検および／または骨髄穿刺、プラズマ細胞腫の放射線イメージング、骨格検査、Ｍ−タンパク質定量化（血清および／または２４時間の尿）および血清中遊離軽鎖レベルまたは尿中軽鎖レベル、血清中β２−マイクログロブリン、リンパ節生検および／または（Ｘ線、コンピューター断層撮影法［ＣＴ］スキャン、ＰＥＴスキャン、または磁気共鳴イメージング［ＭＲＩ］による）放射線腫瘍アセスメント、芽球計数を含めた血球計数からなる群から選択することができる。
【０１８７】
血液悪性腫瘍の疾患応答性を評価するための最良の方法はＣＤ３８＋血液悪性腫瘍の型に依存し、これらの方法は当業者に公知である。
【０１８８】
疾患応答性の評価から得た結果に基づくと、疾患応答性は潜在的疾患に関する標準的基準に従い階層化することができ、完全応答または完全寛解（ＣＲ）、部分的応答（ＰＲ）、安定的疾患（ＳＤ）または進行性疾患（ＰＤ）に分類することができる。
【０１８９】
「Ｋａｒｎｏｆｓｋｙスコア」は１００〜０のスコアを指し、この場合１００は「完全な」健康状態であり０は死である。
【０１９０】
応答性評価の文脈で使用する「マーカー」は、血清および／または血漿マーカー、これらに限定されないが、Ｈｓ−ＣＲＰ、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）、ＩＬ−６、ＩＬ−１−β、ＩＦＮ−λ、ならびにＣＤ３８受容体密度および占有率マーカーなどを典型的に含むことができる。
【０１９１】
一例では、多発性骨髄腫に罹患した対象における疾患応答性を評価するための技法は、骨髄生検および／または骨髄穿刺、プラズマ細胞腫の放射線イメージング、骨格検査、前に説明したＭ−タンパク質の定量化、および血清中β２−マイクログロブリンの測定である。
【０１９２】
疾患応答性の評価は、循環腫瘍細胞（末梢血）における受容体密度と受容体占有率、骨髄中の芽球および血漿細胞における受容体密度と受容体占有率、ならびにヒト抗薬物抗体（ＡＤＡ）のレベルをさらに含むことができる。
【０１９３】
本開示の抗体は、薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物、および場合により治療用組成物を形成するための生分解性ポリマーなどの徐放性マトリックスの型で投与することができる。
【０１９４】
「薬学的に」または「薬学的に許容される」は、適時に哺乳動物、特にヒトに投与したとき、有害、アレルギーまたは他の望ましくない反応をもたらさない分子体および組成物を指す。薬学的に許容される担体または賦形剤は、任意の型の無毒な固体、半固体または液体充填剤、希釈剤、封入物質または製剤補助剤を指す。
【０１９５】
本開示の抗体を含む医薬組成物の型は、治療される状態、疾病の重症度、対象の年齢、体重および性別などに当然ながら依存する。
【０１９６】
本開示の抗体は静脈内投与用に製剤化する。
【０１９７】
詳細には、本開示の抗体を含む医薬組成物は、注射可能な製剤に関して薬学的に許容されるビヒクルを含むことができる。これらは詳細には、等張、滅菌、生理食塩水溶液（リン酸一ナトリウムまたはリン酸二ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウムまたは塩化マグネシウムなど、またはこのような塩の混合物）、または場合に応じて滅菌水もしくは生理食塩水の添加する時に注射溶液を構成することができる乾燥、特に凍結−乾燥組成物であってよい。
【０１９８】
医薬組成物を調製するため、有効量の本開示の抗体を薬学的に許容される担体または水性媒体に溶解または分散させることが可能である。
【０１９９】
注射用途に適した薬剤形には、滅菌水溶液または分散液、および滅菌注射溶液または分散液の即席調製物用の滅菌粉末が含まれる。全ての場合、薬剤形は滅菌状態でなければならず、容易な注射が可能である程度に流体状でなければならない。それは製造および貯蔵条件下で安定状態でなければならず、細菌および真菌などの微生物の汚染作用に対して保護されなければならない。
【０２００】
担体は、例えば水、エタノール、ポリオール（例えばグリセリン、プロピレングリコール、および液状ポリエチレングリコールなど）およびこれらの適切な混合物を含む溶媒または分散媒であってよい。適切な流動性は、例えばレシチンなどのコーティングの使用によって、分散液の場合必要な粒径を維持することによって、および界面活性剤、安定剤、凍結防止剤または抗酸化剤の使用によって維持することができる。微生物の作用の防止は抗菌剤および抗真菌剤によって行うことができる。多くの場合、等張化剤、例えば糖または塩化ナトリウムを含むことが好ましい。
【０２０１】
滅菌注射溶液は、必要に応じて、前に列挙した他の数種の成分を含む適切な溶媒に必要量の活性化合物を取り込ませ、次に滅菌濾過によって調製される。一般に分散液は、基本分散媒と前に列挙した成分以外の必要な他の成分を含む滅菌ビヒクルに、様々な滅菌活性
成分を取り込ませることによって調製される。滅菌注射溶液の調製用の滅菌粉末の場合、調製の好ましい方法は、事前に滅菌−濾過したその溶液から活性成分の粉末および任意の他の望ましい成分を生成する真空−乾燥および凍結−乾燥技法である。
【０２０２】
製剤化する時、投与製剤に適した形式および治療上有効であるような量で溶液を投与する。製剤は前に記載した注射溶液型などの様々な剤形で容易に投与されるが、薬物放出カプセルなども利用することができる。
【０２０３】
水溶液の静脈内投与用に、例えば必要な場合溶液は適切に緩衝液処理しなければならず、液状希釈剤は最初に十分な生理食塩水またはグルコースで等張にする。これら個々の水溶液は静脈内投与に特に適している。この点で、利用することができる滅菌水性媒体は本開示を鑑みて当業者に公知である。例えば、一投与量を１ｍＬの等張ＮａＣｌ溶液に溶解し、１０００ｍＬの皮下注入液に加える、または指定注入部位に静脈内注射することができる（例えば、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」、第１５版、１０３５〜１０３８頁および１５７０〜１５８０頁を参照）。治療する対象の状態に応じて、ある程度の投与量変更を必要に応じて行う。投与を担う人間は、如何なる場合でも個々の対象に適した用量を決定する。
【０２０４】
一例では静脈内投与用に抗体を製剤化し、したがって、例えば５ｍｇ／ｍＬ（１００ｍｇ／２０ｍＬ）の本開示の抗体を含むバイアル中の注入溶液の濃縮物として抗体を示す。
【０２０５】
対象への投与用に、適切な体積の抗体製剤を、典型的には例えば０．９％塩化ナトリウム溶液の注入用バッグ中に希釈する。本開示の抗体の用量に相当する最終注入体積を、投与される用量、したがって１時間当たりに与えられるタンパク質量に応じて一定時間投与する。
【０２０６】
具体的実施形態では、本開示に従い使用するための抗ＣＤ３８抗体は裸状態の抗体として投与する。裸状態の抗ＣＤ３８抗体は単独で、またはデキサメタゾンと共に、またはレナリドミド、カルフィルゾミブ、ボルテゾミブ、メルファラン、ビンクリスチン、シタラビンおよびシクロホスファミドからなる群から選択される化学療法薬と組み合わせて、場合によりデキサメタゾンと共に投与することができる。単独投与しない場合、抗ＣＤ３８抗体と他の薬物を同時または別々（例えば、一定期間逐次的）のいずれかで投与することができる。
【０２０７】
本開示の抗体は薬物療法と組み合わせて投与して、疲労、悪心、発熱、咳、嘔吐、高カルシウム血症、頭痛、便秘、骨痛、悪寒、下痢、肺炎、貧血、味覚異常、低カリウム血症、熱、および高血糖症を予防または制御することができる。
【０２０８】
別の実施形態では、疲労、悪心、発熱、咳、嘔吐、高カルシウム血症、頭痛、便秘、骨痛、悪寒、下痢、肺炎、貧血、味覚異常、低カリウム血症、熱、および高血糖症を予防または制御するための薬物療法を抗体治療前に投与することができる。
【０２０９】
本開示の文脈において、医師は疾患応答性を評価することができ、したがって投与レジメを適合させることができる。
【０２１０】
本出願を通じて、用語「含む」は、全ての具体的に言及する特徴、および任意選択の、追加的な、明記されていない特徴も包含するものとして解釈されたい。本明細書で使用するように、用語「含む」の使用は、具体的に言及する特徴以外の特徴が存在しない（すなわち「からなる」）実施形態も開示する。
【０２１１】
本開示の幾つかの実施形態を、本開示を限定することなく例示目的で以下にさらに示す：
【０２１２】
項目１：一実施形態では、再発性および／または難治性多発性骨髄腫を有する患者を治療する方法であって、ＣＤ３８と特異的に結合する抗体を患者に投与する工程を含み、前記抗体は、２０ｍｇ／ｋｇ以下の安全な治療用量で患者に投与される前記方法を開示する。
【０２１３】
項目２：別の実施形態では、再発性および／または難治性多発性骨髄腫の治療における薬剤として使用するためのＣＤ３８と特異的に結合する抗体を含む医薬組成物であって、前記抗体は、約２０ｍｇ／ｋｇ以下の安全な治療用量でヒト対象に投与される前記医薬組成物を開示する。
【０２１４】
項目３：別の実施形態では、抗体は、アポトーシス、抗体依存性細胞介在性細胞障害作用（ＡＤＣＣ）、および補体依存性細胞障害作用（ＣＤＣ）の誘導によりヒト対象においてＣＤ３８＋細胞を殺滅することができる、項目１または２に記載の方法または医薬組成物をここで開示する。
【０２１５】
項目４：別の実施形態では、患者は、（ａ）約０．５ｇ／ｄＬを超える測定可能な血清中Ｍ−タンパク質レベル、（ｂ）約２００ｍｇを超える尿中Ｍ−タンパク質レベル（２４時間の尿）、（ｃ）異常なＦＬＣ比で約１０ｍｇ／ｄＬを超える高レベルの血清中遊離軽鎖（ＦＬＣ）、およびこれらの組合せからなる群から選択される少なくとも１つの状態を有する、項目１〜３のいずれか１項目に記載の方法または医薬組成物もここで開示する。
【０２１６】
項目５：別の実施形態では、前記抗体は、少なくとも１つの重鎖と少なくとも１つの軽鎖を含み、前記重鎖は、配列番号１３、３７、および１５によって表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、前記軽鎖は、配列番号１６、１７、および１８によって表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、項目１〜４のいずれか１項目に記載の方法または医薬組成物もここで開示する。
【０２１７】
項目６：別の実施形態では、前記抗体は、配列番号５０によって表されるアミノ酸配列を含む少なくとも１つの重鎖と、配列番号５２によって表されるアミノ酸配列を含む少なくとも１つの軽鎖とを含む、項目１〜５のいずれか１項目に記載の方法または医薬組成物もここで開示する。
【０２１８】
項目７：別の実施形態では、安全な治療用量は、約１ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇである、項目１〜６のいずれか１項目に記載の方法または医薬組成物もここで開示する。
【０２１９】
項目８：別の実施形態では、安全な治療用量は、約５ｍｇ／ｋｇ、または約１０ｍｇ／ｋｇ、または約２０ｍｇ／ｋｇである、項目１〜６のいずれか１項目に記載の方法または医薬組成物もここで開示する。
【０２２０】
項目９：別の実施形態では、前記抗体の安全な治療用量は、静脈内投与される、項目１〜８のいずれか１項目に記載の方法または医薬組成物もここで開示する。
【０２２１】
項目１０：別の実施形態では、前記抗体の安全な治療用量は、１週間に１回または２週間毎に１回投与される、項目１〜９のいずれか１項目に記載の方法または医薬組成物もここで開示する。
【０２２２】
項目１１：別の実施形態では、安全な治療用量は、２週間毎に１回投与される約１０ｍｇ／ｋｇまたは約２０ｍｇ／ｋｇである、項目１〜１０のいずれか１項目に記載の方法または医薬組成物もここで開示する。
【０２２３】
項目１２：別の実施形態では、安全な治療用量は、１週間毎に１回投与される約１０ｍｇ／ｋｇまたは約２０ｍｇ／ｋｇである、項目１〜１０のいずれか１項目に記載の方法または医薬組成物もここで開示する。
【０２２４】
項目１３：別の実施形態では、前記抗体の安全な治療用量は、約０．０４２ｍｇ／時間〜約２５０ｍｇ／時間の範囲の初期注入速度で投与される、項目１〜１２のいずれか１項目に記載の方法または医薬組成物もここで開示する。
【０２２５】
項目１４：別の実施形態では、抗体は、デキサメタゾンと組み合わせて投与される、項目１〜１３のいずれか１項目に記載の方法または医薬組成物もここで開示する。
【０２２６】
項目１５：別の実施形態では、前記抗体は、約２０ｍｇ／ｋｇ以下の用量でヒト対象に投与されると、前記抗体に対する自己抗体を産生しない、項目１〜１４のいずれか１項目に記載の方法または医薬組成物もここで開示する。
【０２２７】
項目１６：別の実施形態では、前記抗体は、２週間毎に約１ｍｇ／ｋｇの用量レベルでヒト対象に投与されると、前記ヒト対象において検出可能なＣＤ３８受容体占有率を示すことができる、項目１〜１０のいずれか１項目に記載の方法または医薬組成物もここで開示する。
【０２２８】
項目１７：別の実施形態では、前記抗体は、２週間毎に約１０ｍｇ／ｋｇまたは約２０ｍｇ／ｋｇの用量レベルでヒト対象に投与されると、前記ヒト対象において少なくとも約８４．１％のＣＤ３８受容体占有率を示すことができる、項目１〜１０のいずれか１項目に記載の方法または医薬組成物もここで開示する。
【０２２９】
項目１８：別の実施形態では、前記抗体は、２週間毎に約１０ｍｇ／ｋｇまたは約２０ｍｇ／ｋｇの用量レベルでヒト対象に投与されると、前記ヒト対象において少なくとも約９７．７％のＣＤ３８受容体占有率を示すことができる、項目１〜１０のいずれか１項目に記載の方法または医薬組成物もここで開示する。
【０２３０】
項目１９：別の実施形態では、前記抗体は、２週間毎に約５ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇの範囲の用量レベルでヒト対象に投与されると、前記ヒト対象において腫瘍増殖を阻害することができる、項目１〜１０のいずれか１項目に記載の方法または医薬組成物もここで開示する。
【０２３１】
項目２０：別の実施形態では、前記抗体は、１週間毎に約５ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇの範囲の用量レベルでヒト対象に投与されると、前記ヒト対象において腫瘍増殖を阻害することができる、項目１〜１０のいずれか１項目に記載の方法または医薬組成物もここで開示する。
【０２３２】
項目２１：別の実施形態では、前記抗体は、２週間毎に約１０ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇの範囲の用量レベルでヒト対象に投与されると、前記ヒト対象において腫瘍増殖を阻害することができる、項目１〜１０のいずれか１項目に記載の方法または医薬組成物もここで開示する。
【０２３３】
項目２２：別の実施形態では、前記抗体は、１週間毎に約１０ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ
／ｋｇの範囲の用量レベルでヒト対象に投与されると、前記ヒト対象において腫瘍増殖を阻害することができる、項目１〜１０のいずれか１項目に記載の方法または医薬組成物もここで開示する。
【０２３４】
項目２３：別の実施形態では、項目１〜２２のいずれか１項目に記載の医薬組成物を含む単位剤形もここで開示する。
【０２３５】
項目２４：別の実施形態では、項目１〜２２のいずれか１項目に記載の医薬組成物と容器とを含む製造品もここで開示する。
【０２３６】
配列の簡単な説明
配列番号１〜３は「３８ＳＢ１３」抗体のＣＤＲ１−Ｈ、ＣＤＲ２−Ｈ、ＣＤＲ３−Ｈの配列を示す。
配列番号４〜６は「３８ＳＢ１３」抗体のＣＤＲ１−Ｌ、ＣＤＲ２−Ｌ、ＣＤＲ３−Ｌの配列を示す。
配列番号７〜９は「３８ＳＢ１８」抗体のＣＤＲ１−Ｈ、ＣＤＲ２−Ｈ、ＣＤＲ３−Ｈの配列を示す。
配列番号１０〜１２は「３８ＳＢ１８」抗体のＣＤＲ１−Ｌ、ＣＤＲ２−Ｌ、ＣＤＲ３−Ｌの配列を示す。
配列番号１３〜１５は「３８ＳＢ１９」抗体のＣＤＲ１−Ｈ、ＣＤＲ２−Ｈ、ＣＤＲ３−Ｈの配列を示す。
配列番号１６〜１８は「３８ＳＢ１９」抗体のＣＤＲ１−Ｌ、ＣＤＲ２−Ｌ、ＣＤＲ３−Ｌの配列を示す。
配列番号１９〜２１は「３８ＳＢ３０」抗体のＣＤＲ１−Ｈ、ＣＤＲ２−Ｈ、ＣＤＲ３−Ｈの配列を示す。
配列番号２２〜２４は「３８ＳＢ３０」抗体のＣＤＲ１−Ｌ、ＣＤＲ２−Ｌ、ＣＤＲ３−Ｌの配列を示す。
配列番号２５〜２７は「３８ＳＢ３１」抗体のＣＤＲ１−Ｈ、ＣＤＲ２−Ｈ、ＣＤＲ３−Ｈの配列を示す。
配列番号２８〜３０は「３８ＳＢ３１」抗体のＣＤＲ１−Ｌ、ＣＤＲ２−Ｌ、ＣＤＲ３−Ｌの配列を示す。
配列番号３１〜３３は「３８ＳＢ３９」抗体のＣＤＲ１−Ｈ、ＣＤＲ２−Ｈ、ＣＤＲ３−Ｈの配列を示す。
配列番号３４〜３６は「３８ＳＢ３９」抗体のＣＤＲ１−Ｌ、ＣＤＲ２−Ｌ、ＣＤＲ３−Ｌの配列を示す。
配列番号３７はヒト化「３８ＳＢ１９」抗体のＣＤＲ２−Ｈの配列を示す。
配列番号３８〜４３は抗体のＶＬ配列を示す。
配列番号４４〜４９は抗体のＶＨ配列を示す。
配列番号５０〜５１はヒト化抗体のＶＨ配列を示す。
配列番号５２〜５５はヒト化抗体のＶＬ配列を示す。
配列番号５６〜６１は、抗ＣＤ３８抗体の軽鎖と重鎖のクローニングおよび配列決定に関する第１のラウンド縮重ＰＣＲ反応に使用したプライマーの配列を示す。
配列番号６２〜６３は、抗ＣＤ３８抗体の軽鎖と重鎖のクローニングおよび配列決定に関する３８ＳＢ１９第２のラウンドＰＣＲ反応に使用した、５’末端ネズミリーダー配列プライマーを示す。
【０２３７】
本開示を以下の実施例によってさらに例示する。
【実施例１】
【０２３８】
本発明者らは、抗体ｈｕ３８ＳＢ１９に関する適切な投与用量およびレジメンを決定し
、ＣＤ３８＋血液悪性腫瘍、詳細には多発性骨髄腫、より詳細には再発性および／または難治性多発性骨髄腫に罹患した患者を治療することができる十分容認される抗がん剤治療を達成した。
【０２３９】
したがって以下の実施例は、ヒトにおける多発性骨髄腫などのＣＤ３８＋血液悪性腫瘍の効率的な治療に関するこの特異的抗ＣＤ３８抗体ｈｕ３８ＳＢ１９の安全な治療用量を実証した、第１相臨床試験の結果を開示する。
【０２４０】
患者
この試験では合計３２人の患者を治療した。集団の４０．６％は女性であり；平均年齢は６４．８（±８．８）歳であった。コルノフスキーステイタス（Kornofsky status）は全ての患者で６０％を超えた。
【０２４１】
３２人の患者は、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）を有する３人の患者、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）を有する２人の患者、および多発性骨髄腫（ＭＭ）を有する２７人の患者を含んでいた。
【０２４２】
多発性骨髄腫患者の８０．０％は女性であり、平均年齢は６３．６（±８．０）歳であった。多発性骨髄腫患者は、症例の１００％で事前の抗がん治療としてボルテゾミブ、９２．６％でレナリドミドを受け、８１．５％で自家幹細胞移植（ＡＳＣＴ）を受けた。
【０２４３】
方法
裸状態のヒト化ＩｇＧ１モノクローナル抗体（ｍＡｂ）ｈｕ３８ＳＢ１９を、選択ＣＤ３８＋血液悪性腫瘍が進行中、または標準療法後、または有効な標準療法が存在しない成人患者に、１週間毎（ＱＷ）または２週間毎（Ｑ２Ｗ）にＩＶ注入用単剤として投与した。
【０２４４】
加速的用量漸増スケジュールを第１の５用量レベル（ＤＬ）に使用し（２週間毎に０．０００１ｍｇ／ｋｇ〜０．１ｍｇ／ｋｇ）、毒性用量レベル（ＤＬＴ）を経験していない限り用量レベル当たり１人の患者が評価可能であった。全ての後の用量レベル（２週間毎に０．３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、および１週間毎に１０ｍｇ／ｋｇ）は、用量レベル毒性に基づき用量漸増に関する古典的３＋３設計に従った。
【０２４５】
３２人の患者が用量レベル毒性終点アセスメントで評価可能であり、３２人が腫瘍応答アセスメントで評価可能であった。
【０２４６】
サイクルの中央値は２．０〜５０．０の範囲であった。
【０２４７】
結果
Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）を有する３人の患者、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）を有する２人の患者、および多発性骨髄腫（ＭＭ）を有する２７人の患者を含む３２人の患者を全ての用量レベルにわたり治療した。
【０２４８】
２週間毎に２０ｍｇ／ｋｇおよび１週間に１回１０ｍｇ／ｋｇ用量の用量レベルに関する試験が現在評価されており、最大許容用量には達していない。
【０２４９】
用量制限毒性は、ＤＬ０．３ｍｇ／ｋｇでの１およびＤＬ３．０ｍｇ／ｋｇでの１で、サイクル１中グレード２輸注反応に限られた。これはメチルプレドニソン、ジフェンヒドラミン、ラニチジンおよびアセトアミノフェンを用いた通常の前処置の実行によって軽減
した。
【０２５０】
作因と無関係に全ての用量レベルで最も頻繁に（１０％以上）起こった有害事象は、疲労（４６．９％）、悪心（３１．３％）、発熱（２８．１％）、咳（２５％）、嘔吐（２１．９％）、高カルシウム血症（１８．８％）であり、頭痛、便秘、骨痛、悪寒および下痢がそれぞれ１５．６％の患者で起こった。さらに、肺炎、貧血、味覚異常および低カリウム血症がそれぞれ１２．５％の患者で起こった。
【０２５１】
療法と関係がある重大な有害事象は、グレード３肺炎（６．３％）、発熱関連（３．１％）、高血糖症（３．１％）および１種のグレード２輸注反応（３．１％）を含む。
【０２５２】
２週間毎に１．０ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇの用量レベルで治療した１９人の患者のうち、１人が慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）を有しており、１人が非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）を有しており、１７人が多発性骨髄腫（ＭＭ）を有していた。
【０２５３】
１７人の多発性骨髄腫患者は、高齢かつ事前に十分処置された患者であった；年齢中央値６４歳（範囲：５５〜７４歳）；および７回の事前レジメンの中央値（範囲：２〜１４）。全てのＭＭ患者は、事前にレナリドミドとボルテゾミブを受けた。診断からｈｕ３８ＳＢ１９の初回投与までの時間の中央値は６．８年（範囲１．８〜１６．８年）であった。
【０２５４】
この群（図１）における応答は、Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｇｒｏｕｐ  ｆｏｒ  Ｂｏｎｅ  Ｍａｒｒｏｗ  ａｎｄ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ（ＥＢＭＴ）の多発性骨髄腫基準に従うと、１ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝３）と５ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝３）で１つの部分的応答（ＰＲ）、および用量レベル３ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝６）で１つの最小応答（ＭＲ）を含んでいた。用量レベル１０ｍｇ／ｋｇは、治療した６人の多発性骨髄腫患者間で３つの部分的応答（ＰＲ）および２つの安定疾患（ＳＤ）を実証した。
【０２５５】
１ｍｇ／ｋｇ以上のＤＬで治療した１９人の患者に関して、治療の平均期間は８週間（範囲２〜５０週）であった。
【０２５６】
免疫原性試験は抗ｈｕ３８ＳＢ１９抗体を示さない。
【０２５７】
受容体占有率は１ｍｇ／ｋｇの用量レベルから検出することができ、１０ｍｇ／ｋｇで８４．１〜９７．７％の範囲に達した。
【０２５８】
薬物動態分析（ＰＫ）は、０．０３〜１０ｍｇ／ｋｇの用量範囲にわたるより一層用量比例的な露出増大、および５ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇの類似範囲のクリアランスを示す。
【０２５９】
０．０３〜３ｍｇ／ｋｇの用量範囲にわたりサイクル２でＣｍａｘに基づくと蓄積は観察されなかった。
【０２６０】
腫瘍増殖阻害閾値は、１人の患者に関してＤＬ５ｍｇ／ｋｇおよび５人の患者に関してＤＬ１０ｍｇ／ｋｇでＣｍａｘに達した。
【０２６１】
抗ＣＤ３８抗体ｈｕ３８ＳＢ１９は、事前に十分処置された再発性および／または難治性多発性骨髄腫を有する患者において有望な単剤活性であることを実証する。
【０２６２】
本明細書全体で引用または以下に列挙できる（参照文献、特許、特許出願、およびウエ
ブサイトを含む）全ての引用文献の内容は、本開示中にあらゆる目的でそれらの全容を参照によって明確に組み入れる。本開示は、他に示さない限り、当技術分野で周知の免疫学、分子生物学および細胞生物学の従来の技術を利用することができる。
【図１】
2019070004.tif 000005
【配列表】
2019070004000001.app
【外国語明細書】
2019070004000001.pdf