(57)【要約】      （修正有）【課題】ユコウ（柚香：Ｃｉｔｒｕｓ  Ｙｏｋｏ）の新たな用途、すなわち医薬品、飲食品、化粧品、日用品などに利用可能な組成物の提供。【解決手段】ユコウの果汁、果皮、果皮抽出物または果汁搾汁滓抽出物を有効成分として含有する、抗菌用組成物、整腸用組成物、歯周病及び／又は口臭の予防及び／又は改善用組成物、糖尿病の予防及び／又は改善用組成物、並びに食品組成物。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ユコウまたはその抽出物を有効成分として含有する、抗菌用組成物。
【請求項２】
ユコウまたはその抽出物が、ユコウの果汁、果皮、果皮抽出物または果汁搾汁滓抽出物である、請求項１記載の抗菌用組成物。
【請求項３】
該果汁が、果実を搾汁して得た液汁（原果汁）、原果汁を希釈した果汁、濃縮果汁、または濃縮還元果汁である、請求項２記載の抗菌用組成物。
【請求項４】
ユコウまたはその抽出物を有効成分として含有する、整腸用組成物。
【請求項５】
高脂肪食による腸内細菌叢の悪化を改善することを特徴とする、請求項４記載の整腸用組成物。
【請求項６】
腸内のアッカーマンシア菌を増加させることを特徴とする、請求項４または５記載の整腸用組成物。
【請求項７】
ユコウまたはその抽出物を有効成分として含有する、歯周病および／または口臭の予防および／または改善用組成物。
【請求項８】
ユコウまたはその抽出物を有効成分として含有する、糖尿病の予防および／または改善用組成物。
【請求項９】
高脂肪食誘導性耐糖能異常を改善することを特徴とする、請求項８記載の糖尿病の予防および／または改善用組成物。
【請求項１０】
ユコウまたはその抽出物を有効成分として含有する、食品組成物。
【請求項１１】
ユコウまたはその抽出物が、ユコウ果汁、果皮、果皮抽出物または果汁搾汁滓抽出物である、請求項１０記載の食品組成物。
【請求項１２】
該果汁が、果実を搾汁して得た液汁（原果汁）、原果汁を希釈した果汁、濃縮果汁、または濃縮還元果汁である、請求項１１記載の食品組成物。
【請求項１３】
高脂肪食による腸内細菌叢の悪化を改善するための、請求項１０〜１２のいずれか一項に記載の食品組成物。
【請求項１４】
腸内のアッカーマンシア菌を増大させることを特徴とする、請求項１３記載の食品組成物。
【請求項１５】
歯周病および／または口臭の予防および／または改善するための、請求項１０〜１２のいずれか一項に記載の食品組成物。
【請求項１６】
糖尿病を予防および／または改善するための、請求項１０〜１２のいずれか一項に記載の食品組成物。
【請求項１７】
高脂肪食誘導性耐糖能異常を改善することを特徴とする、請求項１６記載の食品組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ユコウまたはその抽出物を有効成分として含有する組成物に関する。また、本発明は、抗菌用組成物、整腸用組成物、歯周病および／または口臭の予防・改善用組成物、糖尿病の予防・改善用組成物として有用であり、また、当該組成物を含む飲食品、化粧品、パーソナルケア製品および家庭用ケア製品としても有用であり得る。
【背景技術】
【０００２】
ユコウ（柚香：Ｃｉｔｒｕｓ  Ｙｏｋｏ）は、ミカン科の香酸柑橘類で、ユズとダイダイの自然交雑種であり、スダチの原種として知られている。ユコウは、ユズおよびスダチと比較して耐寒性に乏しく、そして、徳島県を中心とする特定の地域に生産が限られることから、生産量が少なく、全国的に知名度が低い。そのため、これまでユコウに関する栄養学的・食品学的な研究はほとんど行われていない。
【０００３】
天然素材であるユコウの組成成分および有効成分は明確には解明されていないが、ユコウは、ユズおよびスダチなどの他の柑橘類にはない特徴を持ち合わせていると考えられている。そのため、ユコウは、他の柑橘類とは異なる用途を有すると考えられる。
【０００４】
ユコウについては、育毛剤や化粧料に利用できることはこれまで報告されているが、他の柑橘類との成分比較に用いられることを除けば、他に用途については特に報告がない（非特許文献１〜２および特許文献１〜２）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開平０７−１２６１２９号公報
【特許文献２】特開平０７−１２６１４２号公報
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】三宅義明、日本食生活学会誌  第２６巻  第２号７１−７８（２０１５）
【非特許文献２】津嘉山正夫ら、日本食品科学工学雑誌  第５６巻  第６号３５９−３６２（２００９年）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、全国的に知名度が低く、大部分が廃棄物として処理されているユコウの新たな用途を見出し、医薬品、飲食品、化粧品、日用品などの幅広い分野において利用可能な組成物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意検討した結果、ユコウ、特にユコウ果汁が抗菌活性を有していることを発見し、更にそれに付随する効果として、
（１）高脂肪食による腸内細菌叢の乱れを改善する、具体的には、善玉菌と言われている乳酸菌やビフィズス菌の減少および悪玉菌と言われているクロストリジウム菌（Clostridium）の増大を抑制して、腸内細菌叢を改善する、
（２）抗糖尿病・抗肥満作用をもたらすアッカーマンシア菌（Akkermansia）の増大をもたらす、
（３）口腔内細菌の増殖および口腔内揮発性硫化物濃度を抑制する、および
（４）高脂肪食誘導性耐糖能異常を改善する
という実用適応可能な種々の優れた効果を有することを見出し、本発明を完成させた。
【０００９】
すなわち、本発明は、以下の態様を提供するものである。
［１］  ユコウまたはその抽出物を有効成分として含有する、抗菌用組成物。
［２］  ユコウまたはその抽出物が、ユコウの果汁、果皮、果皮抽出物または果汁搾汁滓抽出物である、［１］記載の抗菌用組成物。
［３］  該果汁が、果実を搾汁して得た液汁（原果汁）、原果汁を希釈した果汁、濃縮果汁、または濃縮還元果汁である、［２］記載の抗菌用組成物。
［４］  ユコウまたはその抽出物を有効成分として含有する、整腸用組成物。
［５］  高脂肪食による腸内細菌叢の悪化を改善することを特徴とする、［４］記載の整腸用組成物。
［６］  腸内のアッカーマンシア菌を増大させることを特徴とする、［４］または［５］記載の整腸用組成物。
［７］  ユコウまたはその抽出物を有効成分として含有する、歯周病および／または口臭の予防および／または改善用組成物。
［８］  ユコウまたはその抽出物を有効成分として含有する、糖尿病の予防および／または改善用組成物。
［９］  高脂肪食誘導性耐糖能異常を改善することを特徴とする、［８］記載の糖尿病の予防および／または改善用組成物。
【００１０】
［１０］  ユコウまたはその抽出物を有効成分として含有する、食品組成物。
［１１］  ユコウまたはその抽出物が、ユコウ果汁、果皮、果皮抽出物または果汁搾汁滓抽出物である、［１０］記載の食品組成物。
［１２］  該果汁が、果実を搾汁して得た液汁（原果汁）、原果汁を希釈した果汁、濃縮果汁、または濃縮還元果汁である、［１１］記載の食品組成物。
［１３］  高脂肪食による腸内細菌叢の悪化を改善するための、［１０］〜［１２］のいずれかに記載の食品組成物。
［１４］  腸内のアッカーマンシア菌を増大させることを特徴とする、［１３］記載の食品組成物。
［１５］  歯周病および／または口臭の予防および／または改善するための、［１０］〜［１２］のいずれかに記載の食品組成物。
［１６］  糖尿病を予防および／または改善するための、［１０］〜［１２］のいずれかに記載の食品組成物。
［１７］  高脂肪食誘導性耐糖能異常を改善することを特徴とする、［１６］記載の食品組成物。
【００１１】
さらに、本発明は、以下の態様を提供する。
［１８］  ［１］〜［３］のいずれかに記載の抗菌用組成物を含む、飲食品、化粧品、パーソナルケア製品または家庭用ケア製品。
［１９］  飲食品に［１］〜［３］のいずれかに記載の抗菌用組成物を配合することを特徴とする、飲食品の保存方法。
［２０］  化粧品に［１］〜［３］のいずれかに記載の抗菌用組成物を配合することを特徴とする、化粧品の保存方法。
［２１］  治療が必要な患者に、治療上有効量のユコウまたはその抽出物を投与することを特徴とする、高脂肪食による腸内細菌叢の悪化を改善する方法。
［２２］  治療が必要な患者に、治療上有効量のユコウまたはその抽出物を投与することを特徴とする、歯周病および／または口臭の治療方法。
［２３］  治療が必要な患者に、治療上有効量のユコウまたはその抽出物を投与することを特徴とする、糖尿病の治療方法。
［２４］  高脂肪食による腸内細菌叢の悪化を改善するための医薬の製造におけるユコウまたはその抽出物の使用。
［２５］  歯周病および／または口臭の予防および／または治療するための医薬の製造におけるユコウまたはその抽出物の使用。
［２６］  糖尿病を予防および／または治療するための医薬の製造におけるユコウまたはその抽出物の使用。
【発明の効果】
【００１２】
本発明によれば、ユコウまたはその抽出物が、大腸菌、黄色ブドウ球菌などの細菌および真菌の増殖を効果的に抑制することから、その抗菌作用を利用した医薬品、食品、家庭用ケア製品などへの適応が期待でき、更にそれに付随する効果、すなわち、整腸作用、歯周病および／または口臭の予防および／または改善作用、糖尿病の予防および／または改善作用から、各種医薬品、食品などへの利用も期待できる。特にユコウは天然素材の果実であることから、安全性も高く、広く適応可能である。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】図１は、各群（普通食＋ユコウ果汁100％投与群、普通食＋生理食塩水投与群、高脂肪食（HFD-60%）＋ユコウ果汁100%投与群、高脂肪食＋生理食塩水投与群）における腸内細菌叢の組成を示す。
【図２】図２は、（Ａ）大腸菌株K12についての阻止円（ユコウ果汁30%、60%および100%）、（Ｂ）黄色ブドウ球菌についての阻止円（ユコウ果汁100%、スダチ果汁100%およびユズ果汁100%）、（Ｃ）パン酵母（真菌）についての阻止円（ユコウ果汁100%およびユズ果汁100%）を示す。
【図３】図３は、（Ａ）各種濃度のユコウ果汁、安息香酸および酢酸における大腸菌のコロニー形成数、および（Ｂ）各種濃度のユコウ果汁、安息香酸および酢酸におけるアリサイクロバチルスアシドテレストリス菌のコロニー形成数を示す。
【図４】図４は、（Ａ）ユコウ果汁の摂取前と１週間摂取後の口腔内細菌数（歯周病菌数）、および（Ｂ）ユコウ果汁の摂取前と１週間摂取後の抗菌ペプチドであるヒトβ−ディフェンシン１の量(pg/ml)を示す。
【図５】図５は、通常時の細菌数を100％とした場合のユコウ石鹸液(0.1g/100μL)添加後の細菌数の割合を示す。
【図６】図６は、ユコウ投与群と生理食塩水投与群（対照群）におけるグルコース負荷０〜１２０分後の血糖値を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
以下に、本発明について詳細に説明する。
【００１５】
本発明における、「ユコウ」とは、Ｃｉｔｒｕｓ  Ｙｕｋｏ（柚香）に由来する果汁、果皮またはそれらの凍結乾燥粉末などをいう。果汁、果皮またはそれらの凍結乾燥粉末は、目的に応じて適宜使用することができる。
【００１６】
ユコウの果汁は、ユコウから得られた果汁であれば特に限定されるものではない。また、ユコウの果汁は、水、エタノールなどの溶媒で希釈して使用してもよい。果汁は、例えば、果実を搾汁して得た液汁（原果汁）、原果汁を希釈した果汁、濃縮果汁および濃縮還元果汁として用いることができる。
濃縮果汁とは、原果汁に対し、加熱濃縮法や冷凍濃縮法などによって果汁中の水分を取り除き、果汁の濃度を高めたものをいい、濃縮還元果汁とは、濃縮果汁に対し、計算上、原果汁と同等の濃度となるように水などの溶媒で希釈した果汁をいう。
【００１７】
ユコウの果汁は、果実を搾汁して得られたものおよび果皮を含むものを搾汁して得られたものであってもよい。搾汁方法としては、手で搾汁する方法、当該分野において一般的に使用される機器により搾汁する方法が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【００１８】
本発明における、「ユコウ抽出物」とは、ユコウを原料として、各種溶媒を用いて抽出して得られたものである。ユコウ抽出物としては、例えば、果皮抽出物、果汁搾汁滓抽出物などが挙げられる。
抽出方法としては、例えば、熱水抽出法、煮沸抽出法、浸漬抽出法、振とう抽出法、ソックスレー抽出法、水蒸気蒸留法などが挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【００１９】
抽出溶媒として、例えば、水、有機溶媒またはそれらの混合溶媒を使用することができる。有機溶媒としては、例えば、エタノールなどの低級アルコール、クロロホルム、酢酸エチル、ｎ−ヘキサンが挙げられる。好ましくは、水およびエタノールである。また、これらの溶媒を２種類以上混合して用いてもよい。
【００２０】
抽出溶媒の使用量は、ユコウの部位、抽出溶媒の種類などにより適宜決定されうる。また、抽出時間は、例えば、１分〜５０日、好ましくは１時間〜３０日であり、抽出温度は、例えば、０℃〜１００℃、好ましくは１０℃〜８０℃である。
【００２１】
ユコウ抽出物は、抽出した溶液のままで用いることができ、必要に応じて、さらに精製処理を加えることもできる。該精製処理は、通常の方法により行えばよく、例えば、濾過、クロマトグラフィーなどにより精製することができる。その後、得られた濾液を減圧濃縮、凍結乾燥などして、ユコウの乾燥物とすることもできる。
【００２２】
本発明における「抗菌用組成物」とは、静菌（細菌の増殖の抑制）、殺菌、滅菌、消毒、除菌、防腐、防カビなどの効果を有する組成物をいう。対象としては、細菌、真菌が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【００２３】
細菌の例として、大腸菌、緑膿菌、サルモネラ菌、モラクセラ菌、レジオネラ菌などのグラム陰性菌；黄色ブドウ球菌、クロストリジウム属細菌などのグラム陽性菌が挙げられる。真菌の例として、カンジダ菌、ロドトルラ、パン酵母などの酵母類；赤カビ、黒カビなどのカビ類が挙げられる。
【００２４】
本発明における「整腸用組成物」とは、腸の機能を正常状態に改善する組成物をいう。例えば、高脂肪食を摂取することによって悪化した腸内細菌叢の組成（悪玉菌が増大している状態）を通常の腸内細菌叢の組成に改善する組成物をいう。
【００２５】
本発明における「腸内細菌叢の悪化」とは、善玉菌に属する乳酸菌およびビフィズス菌が減少し、悪玉菌に属するウェルシュ菌（Clostridium perfringens）およびブドウ球菌が増大している状態をいう。エネルギーの過剰摂取、脂質摂取量の増加、運動不足といった生活習慣の乱れ、特に食事内容により腸内環境が変化することが報告されており、動物性食品（動物性蛋白質と飽和脂肪）中心の食事は、植物性食品と比較して、悪玉菌が増加し、善玉菌が減少することが知られている。
【００２６】
本発明における「歯周病および／または口臭の予防および／または改善用組成物」とは、歯周病を引き起こす口腔内細菌（歯周病菌）、例えば、Streptococcus属、Veillonella属、Prevotella属、Actinomyces属、Rothia属、Granulicatella属の増加を抑制し、そして、口臭の原因となる硫化水素およびメチルメルカプタンの濃度を低減する組成物をいう。また、口腔内において抗菌ペプチド（例えば、ヒトβ−ディフェンシン１）を増加させる組成物も含まれる。
【００２７】
本発明における「糖尿病の予防および／または改善用組成物」とは、糖尿病を引き起こす疾患およびそれに伴う自覚症状を予防、改善および／または治療するための組成物をいう。例えば、高脂肪食を摂取し続けることによって起こる耐糖能異常を改善する組成物をいう。
【００２８】
本発明における「高脂肪食誘導性耐糖能異常」とは、脂質の高い食事を続けることによって起きるインスリン抵抗性のことをいう。インスリン抵抗性が進行すると、２型糖尿病になる。
【００２９】
本発明における「改善」とは、疾患の症状・状態の好転、疾患の症状・状態の悪化の防止もしくは遅延、疾患の症状の進行の逆転、防止もしくは遅延または疾患の治療を意味し、「予防」とは、適用対象における疾患の発症の防止もしくは発症の遅延または適用対象の疾患の発症の危険性を低下させることを意味する。本発明における「治療」とは、疾患のあらゆる治療（例えば、改善、軽減、進行の抑制など）を意味する。また、疾患の発症および／または進行の阻止を含んでもよい。
【００３０】
本発明における「患者」とは、ヒトおよびその他の動物、例えば、イヌ、ネコ、ウマなどを意味する。患者は、好ましくは哺乳動物であり、より好ましくはヒトである。
【００３１】
本発明における「治療上の有効量」とは、組織、系、動物またはヒトにおいて、研究者または医師によって要求される生物学的または医薬的応答を誘発する有効成分の量を意味する。また、「治療上の有効量」とは、疾患を治療するために哺乳動物に投与される場合に、その疾患のそのような治療をもたらすために充分である、有効成分の量の意味を包含する。「治療上の有効量」は、有効成分、疾患およびその重篤度、ならびに治療されるべき哺乳動物の年齢、体重などに依存して変化する。
【００３２】
さらに、「有効量」とは、適切な用量での投与の際に、急性または慢性の治療効果を生じる、有効成分の量の意味を包含する。この治療効果としては、疾患／状態および関連する合併症の症状、兆候および基礎にある病理の、検出可能な程度までの予防、矯正、阻害、または逆転が挙げられる。
【００３３】
本発明における「食品組成物」とは、医薬組成物以外のものであって、溶液、懸濁液、乳濁液、粉末、固体成形物など、経口摂取可能な形態であればよく、特に限定されるものではない。
【００３４】
食品組成物としては、例えば、即席麺、レトルト食品、缶詰、即席スープ・みそ汁類、フリーズドライ食品などの即席食品類；清涼飲料、野菜飲料、粉末飲料、濃縮飲料、アルコール飲料などの飲料類；パン、麺、パン粉などの小麦粉製品；飴、キャラメル、チューイングガム、チョコレート、クッキー、ビスケット、ケーキ、クラッカー、和菓子、デザート菓子などの菓子類；ソース、ドレッシング類、つゆ類などの調味料；バター、マーガリン、マヨネーズなどの油脂類；乳飲料、ヨーグルト類、アイスクリーム類、クリーム類などの乳製品；ジャム・マーマレード類、シリアルなどの農産加工品；冷凍食品などが挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【００３５】
本発明の抗菌用組成物は、パーソナルケア製品および家庭用ケア製品に配合して用いてもよい。すなわち、本発明の抗菌用組成物を含む、パーソナルケア製品および家庭用ケア製品を提供することもできる。
【００３６】
本発明の抗菌用組成物を含むパーソナルケア製品としては、例えば、石鹸、ハンドソープ、身体洗浄剤、口腔洗浄剤、練り歯磨き、シャンプー、コンディショナー、整髪剤、制汗剤、ボディローション、防臭剤などが挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【００３７】
本発明の抗菌用組成物を含む家庭用ケア製品としては、例えば、衣料用洗剤、柔軟剤、消臭剤、布地洗浄組成物、食器手洗い用洗剤、自動食器洗い器用洗剤、フロアケア組成物、台所クリーナー、台所消毒剤、浴室クリーナー、浴室消毒剤などが挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【００３８】
また、本発明の抗菌用組成物において使用するユコウは、天然素材であることから、飲食品または化粧品に配合して保存料として用いてもよい。
【００３９】
本発明の抗菌用組成物を保存料として使用する方法は、飲食品、化粧品に適当な方法で添加すればよく、特に限定されるものではない
【００４０】
本発明の抗菌用組成物を配合する飲食品としては、例えば、米飯に添加するふりかけ、パン類に添加するトッピングやジャムなどが挙げられるが、これらに限定されるものではない。また、本発明の抗菌用組成物を配合する化粧品としては、クリーム、乳液、ローション、洗顔料、パックなどの基礎化粧品、口紅、ファンデーションなどのメイクアップ化粧品などが挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【００４１】
飲食品または化粧品への本発明の抗菌用組成物の配合量は、飲食品または化粧品の種類により異なり、その目的に応じた量を添加すればよい。
【００４２】
本発明の組成物は、有効成分としてユコウまたはその抽出物を含有するものであればよく、ユコウまたはその抽出物による効果を妨げない限り、さらに賦形剤などを含むものであってもよい。したがって、本発明の組成物中のユコウまたはその抽出物の割合は特に限定されるものではない。あるいは、本発明の組成物は、ユコウまたはその抽出物のみからなるものであってもよい。
【００４３】
本発明の組成物は、経口または非経口（例えば、経胃、経腸）投与することができる。本発明の組成物は、医薬または食品組成物として使用することができる。
【００４４】
本発明において、本発明の組成物を医薬組成物（医薬品、医薬部外品など）として調製する場合には、ユコウまたはその抽出物と、他の薬効成分、薬学的に許容される担体および添加剤を配合することができる。例えば、薬学的に許容される担体および添加剤として、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、湿潤化剤、緩衝剤、香料などを混合して、所望の剤形に調製することができる。医薬の剤形としては、特に限定されるものではないが、注射剤、外用剤、吸入剤、座剤、フィルム剤、トローチ剤、液剤、散剤、錠剤、顆粒剤、カプセル剤、シロップ剤、点眼剤、洗眼剤、点鼻剤が挙げられる。
【００４５】
本発明において、本発明の組成物を食品組成物（健康食品、機能性食品、栄養補助食品、サプリメント、保健機能食品、特定保健用食品、栄養機能性食品、機能性表示食品など）として調製する場合は、ユコウまたはその抽出物と、甘味料、着色料、増粘剤、安定剤、ゲル化剤、糊剤、酸化防止剤、発色剤、漂白剤、イーストフード、ガムベース、香料、酸味料、調味料、乳化剤、ｐＨ調整剤、かんすい、膨脹剤、栄養強化剤またはその他飲食品素材を混合して、所望の形態を調製することができる。
【実施例】
【００４６】
以下に、実施例を挙げて本発明をさらに詳しく説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００４７】
実施例１：ユコウ果汁による高脂肪食による腸内細菌叢の悪化の抑制効果の検討
（１）方法
６週齢の雄性Ｃ５７Ｂ１６マウス（日本ＳＬＣ社；ｎ＝２０）を、ＳＰＦ環境下にて２週間飼育した。８週齢のＣ５７Ｂ１６マウスを無作為に４群（普通食群（ユコウ果汁100％投与）、普通食群（生理食塩水投与）、高脂肪食（ＨＦＤ−６０％）群（ユコウ果汁100%投与）、高脂肪食群（生理食塩水投与））に分別し（各実験群あたりｎ＝５）、各群のマウスに200μLのユコウ果汁100%または生理食塩水を７日間、毎日経口投与した。７日後の糞便を回収し、ＤＮＡを抽出して、ＩＣＬＡＳ（実験動物中央研究所）にてＴ−ＲＦＬＰ法により腸内フローラ解析を行い、腸内細菌叢の解析を行った。
【００４８】
（２）結果
結果を図１に示す。図１は、各群における腸内細菌叢の組成を示す。
高脂肪食群では、普通食群に比べて、乳酸菌やビフィズス菌が減少し、クロストリジウム菌が増大しており、腸内細菌叢の組成悪化が認められる。普通食群および高脂肪食群において、ユコウ果汁を投与することにより腸内細菌叢の組成悪化が改善された。したがって、ユコウ果汁には腸機能の改善効果があることが立証された。
また、ユコウ果汁投与群において、普通食群と高脂肪食群ともに抗糖尿病作用を有するとされているアッカーマンシア菌の出現が認められた。
【００４９】
実施例２：ユコウ果汁の抗菌効果の検討
大腸菌株K12、黄色ブドウ球菌およびパン酵母（真菌）について、普通寒天培地上での増殖阻止円形成を観察し、ユコウ果汁の抗菌活性を評価した。
（１）方法
(１−ｉ)円形濾紙にユコウ果汁（30%、60%または100%）を染み込ませて、ユコウ果汁含有ディスクを作成し、大腸菌株K12を播種したプレートに各ディスクを置き、37℃で24時間培養し、形成された阻止円を観察した。
（１−ｉｉ）ユコウ、スダチまたはユズの100%果汁を染み込ませた各ディスクを、黄色ブドウ球菌を播種したプレートに置き、37℃で24時間培養し、形成された阻止円を観察し、ユコウと他の柑橘類との抗菌活性を比較した。また、ユコウまたはユズの100%果汁を染み込ませた各ディスクを、パン酵母（真菌）を播種したプレートに置き、37℃で24時間培養し、形成された阻止円を観察した。
【００５０】
（２）結果
結果を図２に示す。図２は、（Ａ）大腸菌株K12についての阻止円、（Ｂ）黄色ブドウ球菌についての阻止円、（Ｃ）パン酵母（真菌）についての阻止円を示す。
ユコウ果汁は、大腸菌株K12、黄色ブドウ球菌および真菌に対して明確な阻止円が観察された。一方、スダチ果汁およびユズ果汁は、黄色ブドウ球菌および真菌に対して阻止円が観察されなかった。すなわち、スダチ果汁およびユズ果汁は、細菌および真菌の増殖を十分に抑制することができないと認められる。
【００５１】
以上の結果から、ユコウ果汁は、優れた抗菌効果を有し、さらに、他の柑橘類に比べて、抗菌効果が優れていることが立証された。
【００５２】
実施例３：ユコウ果汁と既存保存料との抗菌効果の比較検討
大腸菌（E. coli）および耐性熱好酸性菌（AAT；アリサイクロバチルスアシドテレストリス菌）について、ユコウ果汁（1%、5%、25%、50%、75%および100%）、安息香酸（60ppm、125ppm、190ppmおよび250ppm）および酢酸（0.15%、0.23%および0.30%）を用いて、抗菌活性を比較検討した。
（１）方法
ユコウ果汁100%を蒸留水で希釈し、ユコウ果汁1%、5%、25%、50%および75%の希釈液を調製した。対照として安息香酸および酢酸を用いた。各種濃度のユコウ果汁、安息香酸および酢酸を103個の大腸菌またはAATと37℃にて16時間培養し、プレート上に形成されたコロニー数を計測した。
【００５３】
（２）結果
結果を図３に示す。図３は、（Ａ）ユコウ果汁、安息香酸および酢酸の大腸菌に対するコロニー形成数、および（Ｂ）ユコウ果汁、安息香酸および酢酸のAAT菌に対するコロニー形成数を示す。
ユコウ果汁50%希釈液、75%希釈液およびユコウ果汁100%は、飲食品の保存料として用いられる安息香酸および酢酸と同様に、コロニー形成がほとんど認められず、大腸菌およびAAT菌を死滅させていると認められる。すなわち、ユコウ果汁の濃度を50%〜100%で用いた場合には抗菌作用を発揮することから、濃度が50%〜100%のユコウ果汁は飲食品の保存料として使用できることが示唆された。
【００５４】
実施例４：ユコウ果汁による口腔内環境の改善効果の検討
方法
健常人に50ccのユコウ果汁100％を1週間継続摂取させ、摂取前後における口腔内揮発性硫化物（硫化水素およびメチルメルカプタン）の濃度を口臭測定器（VSCモニター）であるオーラルクロマ（日本歯科商社製）で測定した。同様の測定を７回行った。
さらに、健常人から唾液を採取し、採取した唾液サンプルからＤＮＡを抽出して、株式会社生物技研にてＴ−ＲＦＬＰ法により口腔内細菌数（歯周病菌数）を解析した。
また、抗菌ペプチドであるヒトβ−ディフェンシン１の量をhuman beta defensin 1 ELISA kit（Signal Way Antibody社製）で測定した。
【００５５】
（２）結果
ユコウ果汁の摂取前および１週間摂取後の口腔内揮発性硫化物（硫化水素およびメチルメルカプタン）の濃度の平均値を、以下の表１に示す。
【表１】
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上記の結果から、ユコウ果汁を摂取することにより、口臭の原因である硫化水素およびメチルメルカプタンの濃度が有意に低下した。そのため、ユコウ果汁には口臭抑制効果があると認められる。
【００５６】
歯周病の改善効果に関する結果を図４に示す。図４は、（Ａ）ユコウ果汁の摂取前と１週間摂取後の口腔内細菌数（歯周病菌数）、および（Ｂ）ユコウ果汁の摂取前と１週間摂取後の抗菌ペプチドであるヒトβ−ディフェンシン１の量（ｐｇ／ｍｌ）を示す。
ユコウ果汁を１週間継続摂取することによって、歯周病菌であるStreptococcus属、Veillonella属、Prevotella属、Actinomyces属、Rothia属およびGranulicatella属が有意に減少し、そして、抗菌ペプチドであるヒトβ−ディフェンシン１の量が顕著に増大した。すなわち、ユコウ果汁には歯周病の改善効果があることが立証された。
【００５７】
以上の結果から、ユコウ果汁は、口臭および歯周病を改善することによって、口腔内環境を改善することができると認められる。
【００５８】
実施例５：ユコウ石鹸の静菌効果の検討
（１）方法
有限会社クリーンメーカーから提供された、ユコウ果汁3％を含有する天然成分の固形石鹸を蒸留水に溶かして、ユコウ石鹸液（0.1g/100μL）を調製した。調製したユコウ石鹸液と103個の大腸菌を混合して、37℃で1時間振とう培養して、大腸菌数を測定した。
【００５９】
（２）結果
結果を図５に示す。図５は、通常時の細菌数を100％とした場合のユコウ石鹸液(0.1g/100μL)添加後の細菌数の割合を示す。
ユコウ石鹸液を添加することにより、細菌数が約20%減少したことが確認された。
【００６０】
実施例６：ユコウ果汁による高脂肪食誘導性耐糖能異常の改善効果の検討
（１）方法
６週齢のＣ５７Ｂ１６マウス（日本ＳＬＣ社より購入）に高脂肪食（HFD-60）を２８日間与え、同時に、200μLのユコウ果汁100%を２８日間、１日１回経口投与した（ｎ＝６）。対照群では、ユコウ果汁100%の代わりに生理食塩水を投与した（ｎ＝６）。２８日後、一晩絶食させて、経口グルコース負荷試験を行った。
【００６１】
（２）結果
結果を図６に示す。図６は、ユコウ投与群と生理食塩水投与群（対照群）におけるグルコース負荷０〜１２０分後の血糖値を示す。
経口グルコース負荷試験において、グルコース負荷後３０分後の血糖値は、対照群と比較して、ユコウ投与群で有意に低値を示した。この結果は、ユコウ果汁が高脂肪食誘導性耐糖能異常の改善効果を有することを示している。
なお、４週間の間、ユコウ果汁投与群および生理食塩水投与群の体重に有意な差はなかった。
【産業上の利用可能性】
【００６２】
本発明は、有効成分としてユコウまたはその抽出物を使用することから、医薬組成物としてだけではなく、飲食品やサプリメントなどの食品組成物、化粧品、ケア製品としても有用であり、幅広い分野において、安全性が高い組成物を提供することが可能である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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