(57)【要約】【課題】長期の保存安定性とコスト面において有利な新しい標準物質と、それを用いた分析装置を校正する方法を提供する。【解決手段】本発明の標準物質は、フェニルアゾメチン骨格およびカルバゾール骨格から選ばれる少なくとも１種を樹状分岐構造の構成単位とするデンドリマーからなる。このデンドリマーは、通常の高分子とは異なり構造が明確で分子量の分布がきわめて小さく、本発明の標準物質は、質量分析や高速液体クロマトグラフィー等の分析装置の校正等に用いることができる。【選択図】図１
2019137635.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
フェニルアゾメチン骨格およびカルバゾール骨格から選ばれる少なくとも１種を樹状分岐構造の構成単位とするデンドリマーからなる標準物質。
【請求項２】
質量分析に使用される請求項１に記載の標準物質。
【請求項３】
高速液体クロマトグラフィーに使用される請求項１に記載の標準物質。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれか一項に記載の標準物質を用いて、分析装置を校正する方法。
【請求項５】
世代数が異なる複数の前記デンドリマーを用いて、前記分析装置による測定対象となる値について、前記複数のデンドリマーの測定結果に基づいて検量線を作成する請求項４に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、標準物質とそれを用いた分析装置を校正する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
質量分析装置等の分析装置は一般に、検出器の応答能が一定ではなく、また、分析装置の検出器の応答能は、経時的にも変動するため、定量には通常、試料測定毎に検量線の作成が要求される。
【０００３】
従来、質量分析装置では、高分子量かつ単分散性で、入手もし易いことから、標準物質としてタンパク質やペプチドが市販されており、校正に使用されてきた。しかし、これらは精製等の面から高価となり、また化学的作用によって分解し易く保存安定性にも問題があった。
【０００４】
その他、合成したデンドリマーを校正に使用することが提案されているが（特許文献１）、樹状分岐構造の構成単位がエステル結合を有しているため加水分解分解し易く、長期の保存安定性には更に改良の余地がある。
【０００５】
ゲル浸透クロマトグラフィー（ＧＰＣ）では、校正のための標準物質としてポリスチレンが使用されている。しかし、分散のない試料を調製するために特別な精製を要することから高価となる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特表２０１２−５１７０００号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、以上の事情に鑑みてなされたものであり、長期の保存安定性とコスト面において有利な新しい標準物質と、それを用いた分析装置を校正する方法を提供することを課題としている。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
上記の課題を解決するものとして、本発明によれば、フェニルアゾメチン骨格およびカルバゾール骨格から選ばれる少なくとも１種を樹状分岐構造の構成単位とするデンドリマーからなる標準物質が提供される。
【０００９】
この標準物質は、質量分析に好ましく使用される。また、高速液体クロマトグラフィーに好ましく使用される。
【００１０】
本発明の方法は、前記標準物質を用いて、分析装置を校正することを特徴としている。この方法における好ましい態様では、世代数が異なる複数の前記デンドリマーを用いて、前記分析装置による測定対象となる値について、前記複数のデンドリマーの測定結果に基づいて検量線を作成する。
【発明の効果】
【００１１】
フェニルアゾメチン骨格およびカルバゾール骨格から選ばれる少なくとも１種を樹状分岐構造の構成単位とするデンドリマーは、通常の高分子とは異なり構造が明確で分子量の分布がきわめて小さく、本発明の標準物質および方法によれば、質量分析や高速液体クロマトグラフィー等の分析装置の校正等を行うことができる。
【００１２】
またフェニルアゾメチン骨格やカルバゾール骨格の樹状分岐構造は、加水分解のような化学的分解が生じにくいため長期の保存安定性に優れ、コスト面においても従来品と比べて有利である。
【００１３】
本発明の方法によれば、世代数が異なる各デンドリマーは離散的分子量分布を示すため、多点の校正標準として好適である。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】実施例１の標準物質で校正して測定したヒトＩｎｓｕｌｉｎのＭＳスペクトルである。
【図２】実施例２の標準物質で校正して測定したヒトＩｎｓｕｌｉｎのＭＳスペクトルである。
【図３】実施例３の標準物質で校正して測定したウシＵｂｉｑｕｉｔｉｎのＭＳスペクトルである。
【図４】実施例４の標準物質をＳＥＣで測定したリテンションタイムと分子量の対数プロットである。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
以下に、本発明を詳細に説明する。
【００１６】
本発明の標準物質は、フェニルアゾメチン骨格およびカルバゾール骨格から選ばれる少なくとも１種を樹状分岐構造の構成単位とするデンドリマーからなる。
【００１７】
デンドリマーは、中心から規則的に分枝した構造を持つ樹状高分子であり、コアとなる中心分子と、側鎖部分となるデンドロンとから構成される。また、デンドロン部分の分岐回数は世代とも呼ばれる。デンドリマーの中心分子から一段階分岐した部分を第１世代、二段階分岐した部分を第２世代と呼ぶ。一般にデンドリマーはコアから規則正しく、完全に樹状分岐をしているポリマーであり、中心付近が疎、表面付近が密な球形構造をしており、中心から分岐を繰り返すごとに世代数が増えていく。これに対してハイパーブランチポリマーは、完全な樹状構造を持つデンドリマーとは異なり、不完全な樹状分岐を持つポリマーである。本発明においてデンドリマーは、このような部分的に分岐ユニットの欠陥をもつハイパーブランチ型高分子であってもよい。
【００１８】
デンドリマーは、ダイバージェント法、コンバージェント法等によって製造することができる。ダイバージェント法は、官能基を複数持つ分子をコアとし、中心から外側に向かって枝を伸ばしていく方法である。コンバージェント法は、外側から内側に枝を伸ばしていき、最後にコアに接着させて球状高分子にする方法であり、デンドリマーの外殻となる部分から内側に向かってデンドロンの合成を進めていき、最後にコアにいくつかのデンドロンを結合させる。
【００１９】
本発明に使用されるデンドリマーとしては、例えば、下記式（１）で表される化合物が挙げられる。
【００２０】
【化１】
2019137635.tif 000003
上記式（１）中のＡは、デンドリマーのコアとなる中核分子基であり、デンドリマー分子は、この中核分子基を中心として、外側に向かって式（１）中のＢで表される単位の連鎖を有する。その結果、デンドリマー分子は、上記Ａを中心として、上記Ｂが連鎖して放射状に成長した構造を有する。Ｂが連鎖しＣに至る回数を「世代」と呼び、中核分子基Ａに隣接する世代を第１世代として、外側に向かって世代数が増加していく。中核分子基Ａに直接結合するＢが第１世代となり、Ｃは、末端基としてＢに結合を形成し、デンドリマー分子の放射状に伸びた構造の末端に位置することになる。上記式（１）中のＡは、ｒ価の残基である有機基Ｒ１（Ｒ１−（Ｎ…）ｒとしてＢと結合する。）であり、有機基Ｒ１としては、特に限定されないが、単環または多環の芳香族基やヘテロ芳香族基、ポルフィリン基、フタロシアニン基、サイクラム基等が挙げられ、これらは置換基を有してもよい。上記式（１）において、ｐはＢの世代数を示し、ｑはデンドリマーの末端基Ｃの数を表し、ｑ＝２ｐｒである。上記式Ｒ１−（Ｎ…）ｒで表される中核部分において、ｒとしては、特に限定されないが、例えば１〜４の整数が挙げられる。また、上記式（１）におけるｐは、特に限定されないが、０〜６であることが好ましく例示される。
【００２１】
上記式（１）中のＢ、Ｃは、下記式（２−１）または式（２−２）の構造で表される。
【００２２】
【化２】
2019137635.tif 000004
【００２３】
【化３】
2019137635.tif 000005
上記式（１）中のＢにおいて、Ｒａ１〜Ｒａ５のうちいずれか１つ、およびＲａ６〜Ｒａ１０のうちいずれか１つは、次世代の式（２−１）、（２−２）の構造における窒素原子Ｎと結合する部分を示す。好ましい態様において、当該部分はパラ位Ｒａ３とＲａ８であるか、あるいはメタ位Ｒａ２とＲａ９である。上記式（１）中のＢにおいて、Ｒｂ１〜Ｒｂ４のうちいずれか１つ、およびＲｂ５〜Ｒｂ８のうちいずれか１つは、次世代の式（２−１）、（２−２）の構造の窒素原子Ｎと結合する部分を示す。好ましい態様において、当該部分はパラ位Ｒｂ３とＲｂ６である。上記式（１）中のＢにおいて、当該部分以外のＲａ１〜Ｒａ１０、Ｒｂ１〜Ｒｂ８は、それぞれ独立に、水素原子または置換基を示し、置換基としては、特に限定されないが、例えば、塩素原子、臭素原子、フッ素原子等のハロゲン原子、メチル基、エチル基等のアルキル基、クロロメチル基、トリフルオロメチル基等のハロアルキル基、メトキシ基、エトキシ基等のアルコキシ基、メトキシエチル基等のアルコキシアルキル基、アルキルチオ基、カルボニル基、シアノ基、アミノ基、ニトロ基や、これらを置換基として有してもよい芳香族基等が挙げられる。これらの中でも、水素原子が好ましい。
【００２４】
上記式（１）中のＣにおいて、Ｒａ１〜Ｒａ１０、Ｒｂ１〜Ｒｂ８は、それぞれ独立に、水素原子または置換基を示し、置換基としては、特に限定されないが、例えば、塩素原子、臭素原子、フッ素原子等のハロゲン原子、メチル基、エチル基等のアルキル基、クロロメチル基、トリフルオロメチル基等のハロアルキル基、メトキシ基、エトキシ基等のアルコキシ基、メトキシエチル基等のアルコキシアルキル基、アルキルチオ基、カルボニル基、シアノ基、アミノ基、ニトロ基や、これらを置換基として有してもよい芳香族基等が挙げられる。
【００２５】
標準物質として使用するデンドリマーの典型的な例における基本構造を以下に示す。下記はデンドロン（枝一枚）の構造を示しているが（ｎ、ｍは０以上の整数）、これをコアと呼ばれる中心分子に結合することでデンドリマーとなる。
【００２６】
フェニルアゾメチンを樹状分岐構造の構成単位とするフェニルアゾメチンデンドリマーは、下記式（Ｉ−１）のパラ位連結型をはじめ、下記式（Ｉ−２）のメタ位連結型が挙げられる。また、メタ位連結型の構造とパラ位連結型の構造のそれぞれを外層、内層に配置したものや、これらを交互に連結した構造が挙げられる。
【００２７】
【化４】
2019137635.tif 000006
【００２８】
【化５】
2019137635.tif 000007
カルバゾールを樹状分岐構造の構成単位とするカルバゾールデンドリマーは、下記式（ＩＩ）のパラ位連結型が挙げられる。
【００２９】
【化６】
2019137635.tif 000008
さらに、フェニルアゾメチンとカルバゾールを組み合わせた構造、例えば下記式（ＩＩＩ）のように内層がフェニルアゾメチンで外層がカルバゾールである、カルバゾール・フェニルアゾメチンデンドリマーであってもよい。
【００３０】
【化７】
2019137635.tif 000009
本発明に使用されるデンドリマーは、フェニルアゾメチン骨格およびカルバゾール骨格から選ばれる少なくとも１種を樹状分岐構造の構成単位としているため、加水分解のような化学的分解が生じにくいため長期の保存安定性に優れる。例えばカルバゾールデンドリマーは、室温大気中で保存した場合、１年以上安定である。
【００３１】
本発明に使用されるデンドリマーは、コスト面においても従来品と比べて有利である。標準物質として使用する量にも影響されるが、一例では、市販のタンパク質やペプチドの１／１００程度である。
【００３２】
本発明に使用されるデンドリマーは、高純度であり、このことはマススペクトルやＮＭＲのデータによって確認できる。
【００３３】
本発明の標準物質は、分析対象となる物質の分子量、含有量等を測定するための種々の化学分析において、分析装置の校正等に用いることができる。
【００３４】
分析対象となる物質としては、特に限定されないが、生体分子（例えば、タンパク質、ペプチド、糖、オリゴヌクレオチド等）、大きい有機分子（例えば、ポリマーや、その他の高分子等）等が挙げられる。
【００３５】
化学分析としては、例えば、質量分析、クロマトグラフィー等が挙げられる。
【００３６】
質量分析（ＭＳ）は、試料をイオン化し帯電分子（およびそのフラグメント）を生成し、その質量電荷比を測定する手法である。その一つである飛行時間質量分析（ＴＯＦ−ＭＳ）は、加速させたイオンの飛行時間を計測することにより対象の質量を測定するものであり、イオンは、既知の電界強度の電場によって加速されることで、電荷に比例した運動エネルギーを得る。加速されたイオンが一定距離を飛行する時間を測定することで、質量電荷比を測定することができる。
【００３７】
質量分析において使用されるイオン化手法としては、例えば、基材支援レーザー脱着イオン化（ＭＡＬＤＩ）、エレクトロスプレイイオン化（ＥＳＩ）、大気圧化学イオン化（ＡＰＣＩ）、高速原子衝撃（ＦＡＢ）等が挙げられる。
【００３８】
質量分析装置としては、例えば、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳ、ＥＳＩ−ＴＯＦ−ＭＳ等を用いることができる。質量分析装置の中でも、生体分子（例えば、タンパク質、ペプチド、糖、オリゴヌクレオチド等）、大きい有機分子（例えば、ポリマーや、その他の高分子等）等の分子量の大きい物質を分析する場合、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳが好ましく使用される。
【００３９】
また、液体クロマトグラフィー、ガスクロマトグラフィー、超臨界流体クロマトグラフィー、電気泳動法、誘導結合プラズマ法等と質量分析を組みあわせた分析装置であってもよい。
【００４０】
標準物質による校正において、分子量が単分散性を持つことは前提条件となるが、本発明者らは、亜鉛ポルフィリンコアのカルバゾールデンドリマーやカルバゾール・フェニルアゾメチンデンドリマー（ＺｎＰＧ１−１、ＺｎＰＧ１−２、ＺｎＰＧ２−２  下記に構造式を示す。）が、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳスペクトルにおいて、デンドリマー自体の目的の分子量ピークが下記のように明確に現れ、単一分子量であることを報告している（Macromolecules 2008, 41, 3793）。
[ＺｎＰＧ１−１＋Ｈ]＋
Ｃａｌｃｄ：２７１５．９
Ｆｏｕｎｄ：２７１５．４
[ＺｎＰＧ１−２＋Ｈ]＋
Ｃａｌｃｄ：５３５７．９
Ｆｏｕｎｄ：５３５５．７
[ＺｎＰＧ２−２＋Ｈ]＋
Ｃａｌｃｄ：１０７５３．９
Ｆｏｕｎｄ：１０７５２．９
【００４１】
【化８】
2019137635.tif 000010
クロマトグラフィーとしては、移動相に気体を用いたガスクロマトグラフィー、移動相に液体を用いた液体クロマトグラフィー、移動相に超臨界流体を用いた超臨界流体クロマトグラフィー等が挙げられる。
【００４２】
その中でも、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）に好適に使用できる。ＨＰＬＣでは、液体の移動相をポンプ等によって加圧してカラムを通過させ、分析種を固定相および移動相との相互作用（吸着、分配、イオン交換、サイズ排除等）の差を利用して高性能に分離して検出する。
【００４３】
本発明の標準物質は、ＨＰＬＣのうち、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）やその一種であるゲル浸透クロマトグラフィー（ＧＰＣ）に好適に使用できる。ＳＥＣは、分子サイズの差に基づいて分離を行なう液体クロマトグラフィーの一種であり、高分子物質の分子量分布および平均分子量を測定する手法である。標準物質による校正において、分子量が単分散性を持つことは前提条件となるが、本発明者らは、次の報告をしている。
【００４４】
テトラフェニル亜鉛ポルフィリンをコアとする第１世代〜第４世代のフェニルアゾメチンデンドリマーＤＰＡＧｎ−ＺｎＰ（ｎは１〜４の整数：ＤＰＡＧ１−ＺｎＰ、ＤＰＡＧ２−ＺｎＰ、ＤＰＡＧ３−ＺｎＰ、ＤＰＡＧ４−ＺｎＰ）のＧＰＣチャートはいずれもＰＤＩ（多分散性指標、高分子の分子量分布を示す指標で完全な単分散であれば１となり、分散が広いほど大きな数値となる。数平均分子量を重量平均分子量で割ったもの）が１．０２以下で単峰性となっており、分析の誤差も含めると単分散であることを報告している（J. AM. CHEM. SOC. 2005, 127, 13896のサポーティング）。これらのうち第４世代のＤＰＡＧ４−ＺｎＰの構造式を以下に示す。
【００４５】
【化９】
2019137635.tif 000011
ベンゾフェノンをコアとする第１世代〜第４世代のカルバゾールデンドリマー：ＧｎＢ（ｎは１〜４の整数：Ｇ１Ｂ、Ｇ２Ｂ、Ｇ３Ｂ、Ｇ４Ｂ）も単一分子量（分散がない）であることを報告している（J. Am. Chem. Soc. 2009, 131, 2244）のサポーティング）。これらのうち第３世代のＧ３Ｂの構造式を以下に示す。
【００４６】
【化１０】
2019137635.tif 000012
テトラフェニルメタンをコアとする第１世代〜第３世代のカルバゾール・フェニルアゾメチンデンドリマーＴＰＭＧ１−ｎ（ｎは１〜３の整数：ＴＰＭＧ１−１、ＴＰＭＧ１−２、ＴＰＭＧ１−３）も単一分子量（分散がない）であることを報告している（Macromolecules 2012, 45, 1288のサポーティング）。これらのうちＴＰＭＧ１−３の構造式を以下に示す。
【００４７】
【化１１】
2019137635.tif 000013
本発明の標準物質により分析装置を校正し、分子量測定を行う際には、分子量が既知である本発明の標準物質により検量線を作成する。例えば質量分析では、本発明の標準物質を測定し、得られたマススペクトルに基づいて質量数の校正を行い、ＳＥＣやＧＰＣではリテンションタイム（溶出時間）と分子量のグラフを作成し校正を行うことができる。
【００４８】
定量分析においては、通常、分析対象化合物の測定点を挟んで複数の濃度の標準物質を分析して検量線を作製する、検量線法が一般に用いられる。このような検量線法を用いる定量分析法には、外部標準法、内部標準法等がある。外部標準法は、既知濃度の外部標準を用いて濃度とシグナル（信号、具体的には、ピーク面積やピーク高さ等を表す。）との相関を予め求め、そこで得られた情報（検量線）に基づいて検体試料中の濃度を求める方法である。内部標準法は、標準試料と未知試料に内部標準物質と呼ばれる成分を一定量添加し、検量線の横軸に、対象成分の濃度ではなく、内部標準物質と対象成分の濃度比をとる方法である。本発明の標準物質により分析装置を校正し、分子量等の測定を行う際には、外部標準法や内部標準法等に対応する手法を用いることができる。
【００４９】
本発明における好ましい態様では、本発明の標準物質として、世代数が異なる複数の前記デンドリマーを用いて、分析装置による測定対象となる値について、前記複数のデンドリマーの測定結果に基づいて検量線を作成する。世代数が異なる各デンドリマーは、離散的分子量分布を示すため、より高分子量の化合物の並列調整が可能であり、多点の校正標準として好適である。
【００５０】
本発明の標準物質は、校正の他、分解能の調整、感度の調整等にも使用し得る。例えば質量分析においては、得られたマススペクトルに基づいて、質量数の校正の他、質量分解能の調整、感度の調整にも使用し得る。
【実施例】
【００５１】
以下に、実施例により本発明を更に詳しく説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
実施例１
ＴＰＭＧ３（テトラフェニルメタンコア第３世代フェニルアゾメチンデンドリマー）とＴＰＭＧ４（テトラフェニルメタンコア第４世代フェニルアゾメチンデンドリマー）の２種類のデンドリマーをＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＡＳＳ装置の標準物質（外部標準）として校正（キャリブレーション）した。
【００５２】
次に、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＡＳＳ装置を使用して、市販のタンパク質であるヒトＩｎｓｕｌｉｎのＭＳスペクトルを測定した。その結果を図１に示す。計算値（Ｍ＋Ｈ：最大強度質量に対して水素１原子が付加した質量）５８０６．６４に対して５８０６．８６という質量ピークが得られ、計算値と実測値が一致した結果が得られた。
【００５３】
標準物質として使用したＴＰＭＧ３とＴＰＭＧ４の構造式を以下に示す。
【００５４】
【化１２】
2019137635.tif 000014
【００５５】
実施例２
Ｇ３ＴＡＺ（１，３，５−トリアジンコア第３世代カルバゾールデンドリマー）とＧ４ＴＡＺ（１，３，５−トリアジンコア第４世代カルバゾールデンドリマー）の２種類のデンドリマーをＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＡＳＳ装置の標準物質（外部標準）として校正（キャリブレーション）した。
【００５６】
次に、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＡＳＳ装置を使用して、市販のタンパク質であるヒトＩｎｓｕｌｉｎのＭＳスペクトルを測定した。その結果を図２に示す。計算値（Ｍ＋Ｈ：最大強度質量に対して水素１原子が付加した質量）５８０６．６４に対して５８０７．２３という質量ピークが得られ、計算値と実測値が一致した結果が得られた。
【００５７】
使用した標準物質のうちＧ３ＴＡＺの構造式を以下に示す。
【００５８】
【化１３】
2019137635.tif 000015
【００５９】
実施例３
Ｇ３ＴＡＺ（１，３，５−トリアジンコア第３世代カルバゾールデンドリマー）とＧ４ＴＡＺ（１，３，５−トリアジンコア第４世代カルバゾールデンドリマー）の２種類のデンドリマーをＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＡＳＳ装置の標準物質（外部標準）として校正（キャリブレーション）した。
【００６０】
ＭＳスペクトルを測定する装置には、島津／ＫＲＡＴＯＳ 飛行時間質量分析装置ＡＸＩＭＡ−ＣＦＲ  Ｐｌｕｓを使用した。
【００６１】
標準物質Ｇ３ＴＡＺ、Ｇ４ＴＡＺの試料は次のとおり調製した。溶媒（クロロホルム）に標準物質を溶解し、同様の溶媒（クロロホルム）にマトリックス試薬（ジスラノール）を溶解した。次に標準物質溶液、マトリックス試薬溶液の順番でサンプルプレートに載せ、室温で放置し乾燥させ共結晶化させた。サンプルプレートを装置にセットして正イオン・リフレクトロンモードで測定し、質量数の理論値を使用して校正ファイルを作成した。
【００６２】
生体物質ウシＵｂｉｑｕｉｔｉｎｅ試料は次のとおり調製した。まず溶媒（水：アセトニトリル：ＴＦＡ＝５０％：５０％：０．１％）にマトリックス試薬（ＣＨＣＡ：α−シアノ−４−ヒドロキシケイ皮酸）を溶解した。次に調製したマトリックス試薬溶液と測定する生体物質を混合し、混合液をサンプルプレートに載せ、室温で放置し乾燥させ共結晶化させた。
【００６３】
サンプルプレートを装置にセットして正イオン・リフレクトロンモードで測定し、上記校正ファイルを適用（外部標準法で校正）した。
【００６４】
以上のように、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＡＳＳ装置を使用して、市販のタンパク質であるウシＵｂｉｑｕｉｔｉｎｅのＭＳスペクトルを測定した結果を図３に示す。計算値（Ｍ＋Ｈ：平均質量に対して水素１原子が付加した質量）８５６５．８４に対して８５６５．４５という質量ピークが得られ、計算値と実測値が一致した結果が得られた。
【００６５】
実施例４
ＳＥＣ（ＧＰＣ）の標準物質として、次の［１］〜［３］の各群を用いた。
［１］テトラフェニル亜鉛ポルフィリンをコアとする第１世代〜第４世代のフェニルアゾメチンデンドリマーＤＰＡＧｎ−ＺｎＰ（ｎは１〜４の整数：ＤＰＡＧ１−ＺｎＰ、ＤＰＡＧ２−ＺｎＰ、ＤＰＡＧ３−ＺｎＰ、ＤＰＡＧ４−ＺｎＰ）
［２］ベンゾフェノンをコアとする第１世代〜第４世代のカルバゾールデンドリマー：ＧｎＢ（ｎは１〜４の整数：Ｇ１Ｂ、Ｇ２Ｂ、Ｇ３Ｂ、Ｇ４Ｂ）
［３］テトラフェニルメタンをコアとする第１世代〜第３世代のカルバゾール・フェニルアゾメチンデンドリマーＴＰＭＧ１−ｎ（ｎは１〜３の整数：フェニルアゾメチン:カルバゾール＝１：１の第１世代フェニルアゾメチン−第１世代カルバゾールデンドリマーＴＰＭＧ１−１、フェニルアゾメチン:カルバゾール＝１：２の第１世代フェニルアゾメチン−第２世代カルバゾールデンドリマーＴＰＭＧ１−２、フェニルアゾメチン:カルバゾール＝１：３の第１世代フェニルアゾメチン−第３世代カルバゾールデンドリマーＴＰＭＧ１−３）
【００６６】
［１］〜［３］の各々について、サイズ排除クロマトグラフィー分析を行った。
サイズ排除クロマトグラフィー分析は、高速液体クロマトグラフィー（島津、ＬＣ−１０ＡＰ）にＴＳＫ−ＧＥＬ ＣＭＨＸＬ カラム（東ソー）を接続して４０℃で行った。溶媒はテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）を使用し流速は１ｍｌ／ｍｉｎであった。検出器は粘度、光散乱、屈折率の３元検出器（Ｖｉｓｋｏｔｅｃ社、ＴｒｉＳＥＣ ｍｏｄｅｌ ３０２）を使用した。測定に際してはサンプルの約５ｍｇ／ｍｌの溶液を準備し、１００μｌをインジェクトした。
【００６７】
その結果を図４に示す。図４において、［１］のＤＰＡＧｎ−ＺｎＰを◆、［２］のＧｎＢを▲、［３］のＴＰＭＧ１−ｎを■で示している。上記の各種デンドリマーのリテンションタイムと分子量には、対数プロットにおいて明確な線形性（直線性）があることを確認した。従って、上記の各種デンドリマーは、ＳＥＣの標準物質として利用可能である。具体的には、未知の物質を測定し、そのＳＥＣのリテンションタイムより、図４のデータから未知の物質のデンドリマー換算分子量が導出される。
【図１】
2019137635.tif 000016
【図２】
2019137635.tif 000017
【図３】
2019137635.tif 000018
【図４】
2019137635.tif 000019