(57)【要約】【課題】骨格に少なくとも１つのＮ３’→Ｐ５’ホスホロジアミデート結合（ＮＰＮ）を含むアンチセンスオリゴヌクレオチド、ならびにそれを使用する方法を提供すること。【解決手段】このアンチセンスオリゴヌクレオチドは、タンパク質の発現を有効に防止または低減することができる。本発明によれば、オリゴヌクレオチドのヌクレオシドサブユニットが、サブユニット間結合によってつながっているオリゴヌクレオチドであって、サブユニット間結合の少なくとも１つが、ホスホロチオエートまたはホスフェート結合である。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
本明細書に記載の発明。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１３年９月３０日に出願された米国仮出願第６１／８８４，８４８号に基づく優先権を請求し、その開示は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる。
技術分野
本発明は、骨格に少なくとも１つのＮ３’→Ｐ５’ホスホロジアミデート結合（ＮＰＮ）を含むアンチセンスオリゴヌクレオチド、ならびにそれを使用する方法に関する。このアンチセンスオリゴヌクレオチドは、タンパク質の発現を有効に防止または低減することができる。
【背景技術】
【０００２】
背景
核酸の医療上の使用は、大きな関心を集めている。例えば、アンチセンス、リボザイム、アプタマーおよびＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）技術は、すべて、潜在的に可能な治療上の適用のために開発されつつある。ｉｎ  ｖｉｖｏ送達するための核酸、特にオリゴヌクレオチドの設計には、結合強度、標的特異性、血清安定性、ヌクレアーゼに対する抵抗性および細胞への取込みを含めた様々な因子を考慮することが必要である。ｉｎ  ｖｉｖｏで使用するのに適した特徴、例えば修飾された骨格の化学的性質、送達ビヒクルによる製剤化、および他の様々な部分とのコンジュゲーションを有するオリゴヌクレオチドを生成するために、いくつかの手法が提案されている。全身送達に適した特徴を有する治療用のオリゴヌクレオチドは、特に有益となる。
【０００３】
修飾された化学的骨格を有するオリゴヌクレオチドは、Micklefield、Backbone  modification  of  nucleic  acids:  synthesis,  structure  and  therapeutic  applications、Curr.  Med.  Chem.、８巻（１０号）：１１５７〜７９頁、２００１年およびLyerら、Modified  oligonucleotides-synthesis、properties  and  applications、Curr.  Opin.  Mol.  Ther.、１巻（３号）：３４４〜３５８頁、１９９９年に総説されている。
【０００４】
修飾された骨格の化学的性質の例として、
・ペプチド核酸（ＰＮＡ）（Nielsen、Methods  Mol.  Biol.、２０８巻：３〜２６頁、２００２年参照）、
・ロックド核酸（ＬＮＡ）（PetersonおよびWengel、Trends  Biotechnol.、２１巻（２号）：７４〜８１頁、２００３年参照）、
・ホスホロチオエート（Eckstein、Antisense  Nucleic  Acid  Drug  Dev.、１０巻（２号）：１１７〜２１頁、２０００年参照）、
・メチルホスホネート（Thiviyanathanら、Biochemistry、４１巻（３号）：８２７〜３８頁、２００２年参照）、
・ホスホルアミデート（Gryaznov、Biochem.  Biophys.  Acta、１４８９巻（１号）：１３１〜４０頁、１９９９年；Pruzanら、Nucleic  Acids  Res.、３０巻（２号）：５５９〜６８頁、２００２年参照）、および
・チオホスホルアミデート（Gryaznovら、Nucleosides  Nucleotides  Nucleic  Acids、２０巻（４〜７号）：４０１〜１０頁、２００１年；Herbertら、Oncogene、２１巻（４号）：６３８〜４２頁、２００２年参照）
が挙げられる。
【０００５】
これらのタイプのオリゴヌクレオチドのそれぞれには、利点および不利益があることが報告されている。例えば、ペプチド核酸（ＰＮＡ）は、良好なヌクレアーゼ抵抗性および結合強度を呈するが、試験培養では細胞への取込みが少ない。ホスホロチオエートは、良好なヌクレアーゼ抵抗性および可溶性を呈するが、典型的にＰ−キラル混合物として合成され、いくつかの配列非特異的生物学的効果を呈する。メチルホスホネートは、良好なヌクレアーゼ抵抗性および細胞への取込みを呈するが、やはり典型的にＰ−キラル混合物として合成され、二本鎖の安定性が低い。Ｎ３’→Ｐ５’ホスホルアミデートのサブユニット間結合は、好ましい結合特性、ヌクレアーゼ抵抗性、および可溶性を呈することが報告されている（GryaznovおよびLetsinger、Nucleic  Acids  Research、２０巻：３４０３〜３４０９頁、１９９２年；Chenら、Nucleic  Acids  Research、２３巻：２６６１〜２６６８頁、１９９５年；Gryaznovら、Proc.  Natl.  Acad.  Sci.、９２巻：５７９８〜５８０２頁、１９９５年；Skorskiら、Proc.  Natl.  Acad.  Sci.、９４巻：３９６６〜３９７１頁、１９９７年）。しかしこの結合は、天然のホスホジエステル対応物に対して高い酸不安定性も示す（Gryaznovら、Nucleic  Acids  Research、２４巻：１５０８〜１５１４頁、１９９６年）。オリゴヌクレオチド薬剤を経口治療薬として使用することが望ましいことを考慮すると、オリゴヌクレオチドの酸安定性は、重要な質である。Ｎ３’→Ｐ５’チオホスホルアミデートオリゴヌクレオチドにおける骨格に硫黄原子を付加すると、酸安定性が増強される。
【０００６】
オリゴヌクレオチドのポリアニオンの性質は、多くの他の治療用化合物と同様に、化合物が脂質膜を通過する能力を低減して、細胞への取込み効率を制限する。リポソーム製剤（総説については、Pedroso  de  Limaら、Curr  Med  Chem、１０巻（１４号）：１２２１〜１２３１頁、２００３年およびMiller、Curr  Med  Chem.、１０巻（１４号）：１１９５〜２１１頁、２００３年参照）および親油性部分とのコンジュゲーションを含めた、治療剤の細胞への取込みを増大するための様々な解決法が提案されてきた。後者の手法の例として、米国特許第５，４１１，９４７号（脂質を薬物に共有結合させることによって、薬物を経口利用可能な形態に変換する方法）および米国特許第６，４４８，３９２号（抗ウイルスヌクレオシドの脂質誘導体：リポソームの組込みおよび使用方法）が挙げられる。
本明細書を通して、様々な特許、特許出願および他のタイプの刊行物（例えば学術論文）が参照されている。本明細書に引用したすべての特許、特許出願および刊行物は、あらゆる目的でその全体が参照によって本明細書に援用される。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】米国特許第５，４１１，９４７号明細書
【特許文献２】米国特許第６，４４８，３９２号明細書
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Micklefield、Backbone  modification  of  nucleic  acids:  synthesis,  structure  and  therapeutic  applications、Curr.  Med.  Chem.、８巻（１０号）：１１５７〜７９頁、２００１年
【非特許文献２】Lyerら、Modified  oligonucleotides-synthesis、properties  and  applications、Curr.  Opin.  Mol.  Ther.、１巻（３号）：３４４〜３５８頁、１９９９年
【非特許文献３】Nielsen、Methods  Mol.  Biol.、２０８巻：３〜２６頁、２００２年
【非特許文献４】PetersonおよびWengel、Trends  Biotechnol.、２１巻（２号）：７４〜８１頁、２００３年
【非特許文献５】Eckstein、Antisense  Nucleic  Acid  Drug  Dev.、１０巻（２号）：１１７〜２１頁、２０００年
【非特許文献６】Thiviyanathanら、Biochemistry、４１巻（３号）：８２７〜３８頁、２００２年
【非特許文献７】Gryaznov、Biochem.  Biophys.  Acta、１４８９巻（１号）：１３１〜４０頁、１９９９年
【非特許文献８】Pruzanら、Nucleic  Acids  Res.、３０巻（２号）：５５９〜６８頁、２００２年
【非特許文献９】Gryaznovら、Nucleosides  Nucleotides  Nucleic  Acids、２０巻（４〜７号）：４０１〜１０頁、２００１年
【非特許文献１０】Herbertら、Oncogene、２１巻（４号）：６３８〜４２頁、２００２年
【非特許文献１１】GryaznovおよびLetsinger、Nucleic  Acids  Research、２０巻：３４０３〜３４０９頁、１９９２年
【非特許文献１２】Chenら、Nucleic  Acids  Research、２３巻：２６６１〜２６６８頁、１９９５年
【非特許文献１３】Gryaznovら、Proc.  Natl.  Acad.  Sci.、９２巻：５７９８〜５８０２頁、１９９５年
【非特許文献１４】Skorskiら、Proc.  Natl.  Acad.  Sci.、９４巻：３９６６〜３９７１頁、１９９７年
【非特許文献１５】Gryaznovら、Nucleic  Acids  Research、２４巻：１５０８〜１５１４頁、１９９６年
【非特許文献１６】Pedroso  de  Limaら、Curr  Med  Chem、１０巻（１４号）：１２２１〜１２３１頁、２００３年
【非特許文献１７】Miller、Curr  Med  Chem.、１０巻（１４号）：１１９５〜２１１頁、２００３年
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本明細書で提供される本開示は、とりわけ、骨格に少なくとも１つのＮ３’→Ｐ５’ホスホロジアミデート結合（ＮＰＮ）を含むアンチセンスオリゴヌクレオチドの調製および使用のための組成物および方法を開示する。
【００１０】
本発明によれば、式（Ｉ）
【化１】
2019065054.tif 000002
［式中、
Ｒ１は、水素、アミノ保護基、またはオリゴヌクレオチドであり、
Ｒ２は、水素、ヒドロキシル保護基、固体支持体、またはオリゴヌクレオチドであり、
各Ｒ３は、独立に、水素、ヒドロキシル、および−Ｏ−Ｒ３ａから選択され、
各Ｒ３ａは、−ＮＲ３ｂＲ３ｃ、イミダゾリル、−（ＣＨ２）ａＯ（ＣＨ２）ｂＮＲ３ｂＲ３ｃ、または−（ＣＨ２）ａＯＮＲ３ｄ（ＣＨ２）ｂＮＲ３ｂＲ３ｃにより任意選択で置換されているＣ１〜６アルキルであり、
各Ｒ３ｂは、水素またはＣ１〜２アルキルであり、
各Ｒ３ｃは、水素またはＣ１〜２アルキルであり、
各Ｒ３ｄは、水素またはＣ１〜２アルキルであり、
各ａは、１〜４から選択される整数であり、
各ｂは、１〜４から選択される整数であり、
各Ｒ４は、−ＮＲ４ａＲ４ｂにより任意選択で置換されているＣ１〜６アルキルであり、
Ｒ４ａは、水素もしくはＣ１〜２アルキルであり、Ｒ４ｂは、水素もしくはＣ１〜２アルキルであり、
各Ｒ５は、−ＮＲ５ａＲ５ｂにより任意選択で置換されているＣ１〜６アルキルであり、
Ｒ５ａは、水素もしくはＣ１〜２アルキルであり、Ｒ５ｂは、水素もしくはＣ１〜２アルキルであり、または
Ｒ４およびＲ５は、それらが結合する窒素と一緒になって、任意選択で置換されている単環式ヘテロシクリル環を形成し、
各Ｗは、独立に、Ｏ、Ｓ、およびＳｅから選択され、
各Ｂ１は、独立に、任意選択で保護されている複素環式塩基部分から選択され、
ｎは、１〜５０から選択される整数である］
を有する化合物またはその塩が提供される。
【００１１】
式（Ｉ）の一実施形態では、各Ｗは、Ｏである。
【００１２】
式（Ｉ）の一実施形態では、各Ｂ１は、独立に、プリンおよびピリミジンから選択される。別の実施形態では、各Ｂ１は、独立に、Ｔｈｙ（チミン）、ＢｚＣｙｔ（４−ベンゾイル−シトシン）、ＢｚＡｄｅ（６−ベンゾイル−アデニン）、ＡｄｅＤＭＦ（６−ジメチルホルムアミジノ−アデニン）、ｉＢｕＧｕａ（２−イソブチリル−グアニン）、およびＧｕａＤＭＦ（２−ジメチルホルムアミジノ−グアニン）から選択される。別の実施形態では、各Ｂ１は、独立に、アデニン、グアニン、シトシン、チミン、およびウラシルから選択される。
【００１３】
式（Ｉ）の一実施形態では、各Ｒ３は、水素である。
【００１４】
式（Ｉ）の一実施形態では、各Ｒ４および各Ｒ５は、メチルである。
【００１５】
式（Ｉ）の一実施形態では、Ｒ１は、水素である。別の実施形態では、Ｒ１は、アミノ保護基である。
【００１６】
式（Ｉ）の一実施形態では、Ｒ２は、水素である。別の実施形態では、Ｒ２は、ヒドロキシル保護基または固体支持体である。
【００１７】
式（Ｉ）の一実施形態では、Ｒ１およびＲ２は、水素である。別の実施形態では、Ｒ１は、アミノ保護基であり、Ｒ２は、固体支持体である。
【００１８】
式（Ｉ）の一実施形態では、ｎは、１〜３０の整数である。
【００１９】
本発明によれば、式（ＩＩ）
【化２】
2019065054.tif 000003
［式中、
Ｒ１は、水素またはアミノ保護基であり、
Ｒ３は、独立に、水素、ヒドロキシル、および−Ｏ−Ｒ３ａから選択され、
Ｒ３ａは、−ＮＲ３ｂＲ３ｃ、イミダゾリル、−（ＣＨ２）ａＯ（ＣＨ２）ｂＮＲ３ｂＲ３ｃ、または−（ＣＨ２）ａＯＮＲ３ｄ（ＣＨ２）ｂＮＲ３ｂＲ３ｃにより任意選択で置換されているＣ１〜６アルキルであり、
Ｒ３ｂは、水素またはＣ１〜２アルキルであり、
Ｒ３ｃは、水素またはＣ１〜２アルキルであり、
Ｒ３ｄは、水素またはＣ１〜２アルキルであり、
ａは、１〜４から選択される整数であり、
ｂは、１〜４から選択される整数であり、
Ｒ４は、−ＮＲ４ａＲ４ｂにより任意選択で置換されているＣ１〜６アルキルであり、
Ｒ４ａは、水素もしくはＣ１〜２アルキルであり、Ｒ４ｂは、水素もしくはＣ１〜２アルキルであり、
Ｒ５は、−ＮＲ５ａＲ５ｂにより任意選択で置換されているＣ１〜６アルキルであり、
Ｒ５ａは、水素もしくはＣ１〜２アルキルであり、Ｒ５ｂは、水素もしくはＣ１〜２アルキルであり、または
Ｒ４およびＲ５は、それらが結合する窒素と一緒になって、任意選択で置換されている単環式ヘテロシクリル環を形成し、
Ｒ６は、脱離基であり、
Ｗは、独立に、Ｏ、Ｓ、およびＳｅから選択され、
Ｂ１は、任意選択で保護されている複素環式塩基部分である］
を有する化合物またはその塩が提供される。
【００２０】
式（ＩＩ）の一実施形態では、Ｗは、Ｏである。
【００２１】
式（ＩＩ）の一実施形態では、Ｂ１は、プリンおよびピリミジンである。別の実施形態では、Ｂ１は、独立に、Ｔｈｙ（チミン）、ＢｚＣｙｔ（４−ベンゾイル−シトシン）、ＢｚＡｄｅ（６−ベンゾイル−アデニン）、ＡｄｅＤＭＦ（６−ジメチルホルムアミジノ−アデニン）、ｉＢｕＧｕａ（２−イソブチリル−グアニン）、およびＧｕａＤＭＦ（２−ジメチルホルムアミジノ−グアニン）から選択される。別の実施形態では、Ｂ１は、アデニン、グアニン、シトシン、チミン、およびウラシルから選択される。
【００２２】
式（ＩＩ）の一実施形態では、Ｒ３は、水素である。
【００２３】
式（ＩＩ）の一実施形態では、Ｒ４およびＲ５は、メチルである。
【００２４】
式（ＩＩ）の一実施形態では、Ｒ１は、水素である。別の実施形態では、Ｒ１は、アミノ保護基である。
【００２５】
式（ＩＩ）の一実施形態では、Ｒ６は、ハロゲンである。
【００２６】
式（ＩＩ）の一実施形態では、Ｒ１は、アミノ保護基であり、Ｒ６は、ハロゲンである。
【００２７】
本発明によれば、式（ＩＩＩ）
【化３】
2019065054.tif 000004
［式中、
Ｒ１は、水素またはアミノ保護基であり、
Ｒ２は、水素、ヒドロキシル保護基、または固体支持体であり、
各Ｒ３は、独立に、水素、ヒドロキシル、および−Ｏ−Ｒ３ａから選択され、
各Ｒ３ａは、−ＮＲ３ｂＲ３ｃ、イミダゾリル、−（ＣＨ２）ａＯ（ＣＨ２）ｂＮＲ３ｂＲ３ｃ、または−（ＣＨ２）ａＯＮＲ３ｄ（ＣＨ２）ｂＮＲ３ｂＲ３ｃにより任意選択で置換されているＣ１〜６アルキルであり、
各Ｒ３ｂは、水素またはＣ１〜２アルキルであり、
各Ｒ３ｃは、水素またはＣ１〜２アルキルであり、
各Ｒ３ｄは、水素またはＣ１〜２アルキルであり、
各ａは、１〜４から選択される整数であり、
各ｂは、１〜４から選択される整数であり、
各Ｒ４は、−ＮＲ４ａＲ４ｂにより任意選択で置換されているＣ１〜６アルキルであり、
Ｒ４ａは、水素もしくはＣ１〜２アルキルであり、Ｒ４ｂは、水素もしくはＣ１〜２アルキルであり、
各Ｒ５は、−ＮＲ５ａＲ５ｂにより任意選択で置換されているＣ１〜６アルキルであり、
Ｒ５ａは、水素もしくはＣ１〜２アルキルであり、Ｒ５ｂは、水素もしくはＣ１〜２アルキルであり、または
Ｒ４およびＲ５は、それらが結合する窒素と一緒になって、任意選択で置換されている単環式ヘテロシクリル環を形成し、
各Ｗは、独立に、Ｏ、Ｓ、およびＳｅから選択され、
各Ｂ１は、独立に、任意選択で保護されている複素環式塩基部分から選択される］
を有する化合物またはその塩が提供される。
【００２８】
式（ＩＩＩ）の一実施形態では、Ｗは、Ｏである。
【００２９】
式（ＩＩＩ）の一実施形態では、Ｂ１は、独立に、プリンおよびピリミジンから選択される。別の実施形態では、各Ｂ１は、独立に、Ｔｈｙ（チミン）、ＢｚＣｙｔ（４−ベンゾイル−シトシン）、ＢｚＡｄｅ（６−ベンゾイル−アデニン）、ＡｄｅＤＭＦ（６−ジメチルホルムアミジノ−アデニン）、ｉＢｕＧｕａ（２−イソブチリル−グアニン）、およびＧｕａＤＭＦ（２−ジメチルホルムアミジノ−グアニン）から選択される。別の実施形態では、各Ｂ１は、独立に、アデニン、グアニン、シトシン、チミン、およびウラシルから選択される。
【００３０】
式（ＩＩＩ）の一実施形態では、各Ｒ３は、水素である。
【００３１】
式（ＩＩＩ）の一実施形態では、各Ｒ４および各Ｒ５は、メチルである。
【００３２】
式（ＩＩＩ）の一実施形態では、Ｒ１は、水素である。別の実施形態では、Ｒ１は、アミノ保護基である。
【００３３】
式（ＩＩＩ）の一実施形態では、Ｒ２は、水素である。別の実施形態では、Ｒ２は、ヒドロキシル保護基または固体支持体である。
【００３４】
式（ＩＩＩ）の一実施形態では、Ｒ１およびＲ２は、水素である。別の実施形態では、Ｒ１は、アミノ保護基であり、Ｒ２は、ヒドロキシル保護基である。別の実施形態では、Ｒ１は、アミノ保護基であり、Ｒ２は、固体支持体である。
【００３５】
本発明によれば、以下から選択される化合物が提供される：
【化４】
2019065054.tif 000005
【００３６】
本発明によれば、以下から選択される化合物が提供される：
【化５】
2019065054.tif 000006
【化６】
2019065054.tif 000007
【化７】
2019065054.tif 000008
【００３７】
本発明によれば、オリゴヌクレオチドのヌクレオシドサブユニットが、サブユニット間結合によってつながっているオリゴヌクレオチドであって、
サブユニット間結合の少なくとも１つが、ホスホロチオエートまたはホスフェート結合であり、
オリゴヌクレオチドが、式（ＩＶ）
【化８】
2019065054.tif 000009
［式中、
各Ｒ３は、独立に、水素、ヒドロキシル、および−Ｏ−Ｒ３ａから選択され、
各Ｒ３ａは、−ＮＲ３ｂＲ３ｃ、イミダゾリル、−（ＣＨ２）ａＯ（ＣＨ２）ｂＮＲ３ｂＲ３ｃ、または−（ＣＨ２）ａＯＮＲ３ｄ（ＣＨ２）ｂＮＲ３ｂＲ３ｃにより任意選択で置換されているＣ１〜６アルキルであり、
各Ｒ３ｂは、水素またはＣ１〜２アルキルであり、
各Ｒ３ｃは、水素またはＣ１〜２アルキルであり、
各Ｒ３ｄは、水素またはＣ１〜２アルキルであり、
各ａは、１〜４から選択される整数であり、
各ｂは、１〜４から選択される整数であり、
各Ｒ４は、−ＮＲ４ａＲ４ｂにより任意選択で置換されているＣ１〜６アルキルであり、
Ｒ４ａは、水素もしくはＣ１〜２アルキルであり、Ｒ４ｂは、水素もしくはＣ１〜２アルキルであり、
各Ｒ５は、−ＮＲ５ａＲ５ｂにより任意選択で置換されているＣ１〜６アルキルであり、
Ｒ５ａは、水素もしくはＣ１〜２アルキルであり、Ｒ５ｂは、水素もしくはＣ１〜２アルキルであり、または
Ｒ４およびＲ５は、それらが結合する窒素と一緒になって、任意選択で置換されている単環式ヘテロシクリル環を形成し、
各Ｗは、独立に、Ｏ、Ｓ、およびＳｅから選択され、
各Ｂ１は、独立に、任意選択で保護されている複素環式塩基部分から選択され、
ｎは、１〜２５から選択される整数である］
の部分またはその塩を含み、
ただしオリゴヌクレオチドが、３’末端または５’末端において式ＩＶの部分で終結している場合、末端基−Ｏ−または−ＮＨ−が、式ＩＶの部分に適した原子価を提供するために水素を含むオリゴヌクレオチドが提供される。
【００３８】
一実施形態では、サブユニット間ホスホロチオエートまたはホスフェート結合は、式（ＩＶ）の部分の２つの隣接領域間に置かれる。別の実施形態では、式（ＩＶ）の部分の２つの隣接領域間のサブユニット間結合は、ホスホロチオエートである。別の実施形態では、式（ＩＶ）の部分の２つの隣接領域間のサブユニット間結合は、ホスフェートである。
【００３９】
一実施形態では、
ａ．オリゴヌクレオチドは、オリゴヌクレオチドの５’末端上に位置している式（ＩＶ）の部分を含み、
ｂ．オリゴヌクレオチドは、オリゴヌクレオチドの３’末端上に位置している式（ＩＶ）の部分を含み、
ｃ．オリゴヌクレオチドは、オリゴヌクレオチドの５’末端上に位置している式（ＩＶ）の前記部分と、３’末端上に位置している式（ＩＶ）の前記部分との間に位置しているホスホロチオエートまたはホスフェート結合によって連結している３〜３０の連続ヌクレオチドを含む。
【００４０】
式（ＩＶ）の部分における一実施形態では、各Ｗは、Ｏである。
【００４１】
式（ＩＶ）の部分における一実施形態では、各Ｂ１は、独立に、プリンおよびピリミジンから選択される。別の実施形態では、各Ｂ１は、独立に、Ｔｈｙ（チミン）、ＢｚＣｙｔ（４−ベンゾイル−シトシン）、ＢｚＡｄｅ（６−ベンゾイル−アデニン）、ＡｄｅＤＭＦ（６−ジメチルホルムアミジノ−アデニン）、ｉＢｕＧｕａ（２−イソブチリル−グアニン）、およびＧｕａＤＭＦ（２−ジメチルホルムアミジノ−グアニン）から選択される。別の実施形態では、各Ｂ１は、独立に、アデニン、グアニン、シトシン、チミン、およびウラシルから選択される。
【００４２】
式（ＩＶ）の部分における一実施形態では、各Ｒ３は、水素である。
【００４３】
式（ＩＶ）の部分における一実施形態では、各Ｒ４および各Ｒ５は、メチルである。
【００４４】
式（ＩＶ）の部分における一実施形態では、各ｎは、１〜１０の整数である。
【００４５】
一実施形態では、オリゴヌクレオチドは、立体障害によってｍＲＮＡの翻訳を防止する。別の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、遺伝子由来のｍＲＮＡのＲＮａｓｅ−Ｈ媒介性分解のための基質である。
【００４６】
一実施形態では、化合物またはオリゴヌクレオチドは、テロメラーゼＲＮＡ（ｈＴＲ）の配列（配列番号１）の任意の部分に相補的な領域を含む配列を含む。別の実施形態では、化合物またはオリゴヌクレオチドは、ＧＴＴＡＧＧＧＴＴＡＧ（配列番号２）、ＴＡＧＧＧＴＴＡＧＡＣＡＡ（配列番号３）、およびＣＡＧＴＴＡＧＧＧＴＴＡＧ（配列番号４）からなる群から選択される配列を含む。別の実施形態では、化合物またはオリゴヌクレオチドは、ＴＡＧＧＧＴＴＡＧＡＣＡＡの配列（配列番号３）を含む。
【００４７】
本発明によれば、実施形態の化合物もしくはオリゴヌクレオチドまたは薬学的に許容されるその塩と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物が提供される。
【００４８】
本発明によれば、実施形態の化合物もしくはオリゴヌクレオチドまたはその塩を含むキットが提供される。
【００４９】
本発明によれば、式（ＩＩ）
【化９】
2019065054.tif 000010
［式中、
Ｒ１は、水素またはアミノ保護基であり、
Ｒ３は、独立に、水素、ヒドロキシル、および−Ｏ−Ｒ３ａから選択され、
Ｒ３ａは、−ＮＲ３ｂＲ３ｃ、イミダゾリル、−（ＣＨ２）ａＯ（ＣＨ２）ｂＮＲ３ｂＲ３ｃ、または−（ＣＨ２）ａＯＮＲ３ｄ（ＣＨ２）ｂＮＲ３ｂＲ３ｃにより任意選択で置換されているＣ１〜６アルキルであり、
Ｒ３ｂは、水素またはＣ１〜２アルキルであり、
Ｒ３ｃは、水素またはＣ１〜２アルキルであり、
Ｒ３ｄは、水素またはＣ１〜２アルキルであり、
ａは、１〜４から選択される整数であり、
ｂは、１〜４から選択される整数であり、
Ｒ４は、−ＮＲ４ａＲ４ｂにより任意選択で置換されているＣ１〜６アルキルであり、
Ｒ４ａは、水素もしくはＣ１〜２アルキルであり、Ｒ４ｂは、水素もしくはＣ１〜２アルキルであり、
Ｒ５は、−ＮＲ５ａＲ５ｂにより任意選択で置換されているＣ１〜６アルキルであり、
Ｒ５ａは、水素もしくはＣ１〜２アルキルであり、Ｒ５ｂは、水素もしくはＣ１〜２アルキルであり、または
Ｒ４およびＲ５は、それらが結合する窒素と一緒になって、任意選択で置換されている単環式ヘテロシクリル環を形成し、
Ｒ６は、脱離基であり、
Ｗは、独立に、Ｏ、Ｓ、およびＳｅから選択され、
Ｂ１は、任意選択で保護されている複素環式塩基部分である］
の化合物またはその塩を調製する方法であって、
ａ）式（Ａ）
【化１０】
2019065054.tif 000011
の化合物をリン酸化試薬と接触させるステップを含む方法が提供される。
【００５０】
一実施形態では、リン酸化試薬は、ジメチルアミノ−ホスホリル化合物である。別の実施形態では、リン酸化試薬は、ジメチルアミノ−ホスホロジクロリデートである。別の実施形態では、Ｒ１は、アミノ保護基である。
【００５１】
本発明によれば、式（Ｉ）
【化１１】
2019065054.tif 000012
［式中、
Ｒ１は、水素またはアミノ保護基であり、
Ｒ２は、水素またはヒドロキシル保護基であり、
各Ｒ３は、独立に、水素、ヒドロキシル、および−Ｏ−Ｒ３ａから選択され、
各Ｒ３ａは、−ＮＲ３ｂＲ３ｃ、イミダゾリル、−（ＣＨ２）ａＯ（ＣＨ２）ｂＮＲ３ｂＲ３ｃ、または−（ＣＨ２）ａＯＮＲ３ｄ（ＣＨ２）ｂＮＲ３ｂＲ３ｃにより任意選択で置換されているＣ１〜６アルキルであり、
各Ｒ３ｂは、水素またはＣ１〜２アルキルであり、
各Ｒ３ｃは、水素またはＣ１〜２アルキルであり、
各Ｒ３ｄは、水素またはＣ１〜２アルキルであり、
各ａは、１〜４から選択される整数であり、
各ｂは、１〜４から選択される整数であり、
各Ｗは、独立に、Ｏ、Ｓ、およびＳｅから選択され、
各Ｂ１は、独立に、任意選択で保護されている複素環式塩基部分から選択され、
各Ｒ４は、−ＮＲ４ａＲ４ｂにより任意選択で置換されているＣ１〜６アルキルであり、
Ｒ４ａは、水素もしくはＣ１〜２アルキルであり、Ｒ４ｂは、水素もしくはＣ１〜２アルキルであり、
各Ｒ５は、−ＮＲ５ａＲ５ｂにより任意選択で置換されているＣ１〜６アルキルであり、
Ｒ５ａは、水素もしくはＣ１〜２アルキルであり、Ｒ５ｂは、水素もしくはＣ１〜２アルキルであり、または
Ｒ４およびＲ５は、それらが結合する窒素と一緒になって、任意選択で置換されている単環式ヘテロシクリル環を形成し、
ｎは、１〜５０から選択される整数である］
の化合物またはその塩を調製する方法であって、
ａ）式（ＩＩ）
【化１２】
2019065054.tif 000013
の化合物を式（Ｂ）
【化１３】
2019065054.tif 000014
の化合物と接触させるステップを含む方法が提供される。
【００５２】
一実施形態では、混合は、ＬｉＢｒの存在下で実施される。別の実施形態では、Ｒ１は、アミノ保護基であり、該方法は、そのアミノ保護基を除去するステップをさらに含む。別の実施形態では、Ｒ２は、ヒドロキシル保護基であり、該方法は、そのヒドロキシル保護基を除去するステップをさらに含む。
【００５３】
本発明によれば、本明細書に開示されている化合物およびオリゴヌクレオチドを使用して、細胞増殖性障害を処置および／または防止する方法が提供される。
【００５４】
本発明によれば、本明細書に開示されている化合物およびオリゴヌクレオチドを使用して、細胞内のテロメア伸長を阻害する方法が提供される。
【００５５】
本発明によれば、本明細書に開示されている化合物およびオリゴヌクレオチドを使用して、細胞内のテロメア長を短縮する方法が提供される。
【００５６】
本発明によれば、本明細書に開示されている化合物およびオリゴヌクレオチドを使用して、非コードＲＮＡを有効に標的化および／または阻害する方法が提供される。
【００５７】
本発明によれば、本明細書に開示されている化合物およびオリゴヌクレオチドを使用して、リボザイムなどの触媒ＲＮＡとして有効に作用させる方法が提供される。
本発明は、例えば、以下の項目を提供する。
（項目１）
式（Ｉ）
【化３８】
2019065054.tif 000015
［式中、
Ｒ１は、水素、アミノ保護基、またはオリゴヌクレオチドであり、
Ｒ２は、水素、ヒドロキシル保護基、固体支持体、またはオリゴヌクレオチドであり、
各Ｒ３は、独立に、水素、ヒドロキシル、および−Ｏ−Ｒ３ａから選択され、
各Ｒ３ａは、−ＮＲ３ｂＲ３ｃ、イミダゾリル、−（ＣＨ２）ａＯ（ＣＨ２）ｂＮＲ３ｂＲ３ｃ、または−（ＣＨ２）ａＯＮＲ３ｄ（ＣＨ２）ｂＮＲ３ｂＲ３ｃにより任意選択で置換されているＣ１〜６アルキルであり、
各Ｒ３ｂは、水素またはＣ１〜２アルキルであり、
各Ｒ３ｃは、水素またはＣ１〜２アルキルであり、
各Ｒ３ｄは、水素またはＣ１〜２アルキルであり、
各ａは、１〜４から選択される整数であり、
各ｂは、１〜４から選択される整数であり、
各Ｒ４は、−ＮＲ４ａＲ４ｂにより任意選択で置換されているＣ１〜６アルキルであり、
Ｒ４ａは、水素もしくはＣ１〜２アルキルであり、Ｒ４ｂは、水素もしくはＣ１〜２アルキルであり、
各Ｒ５は、−ＮＲ５ａＲ５ｂにより任意選択で置換されているＣ１〜６アルキルであり、
Ｒ５ａは、水素もしくはＣ１〜２アルキルであり、Ｒ５ｂは、水素もしくはＣ１〜２アルキルであり、または
Ｒ４およびＲ５は、それらが結合する窒素と一緒になって、任意選択で置換されている単環式ヘテロシクリル環を形成し、
各Ｗは、独立に、Ｏ、Ｓ、およびＳｅから選択され、
各Ｂ１は、独立に、任意選択で保護されている複素環式塩基部分から選択され、
ｎは、１〜５０から選択される整数である］
の化合物またはその塩。
（項目２）
各Ｗが、Ｏである、項目１に記載の化合物またはその塩。
（項目３）
各Ｂ１が、独立に、プリンおよびピリミジンから選択される、項目１に記載の化合物またはその塩。
（項目４）
各Ｂ１が、独立に、Ｔｈｙ（チミン）、ＢｚＣｙｔ（４−ベンゾイル−シトシン）、ＢｚＡｄｅ（６−ベンゾイル−アデニン）、ＡｄｅＤＭＦ（６−ジメチルホルムアミジノ−アデニン）、ｉＢｕＧｕａ（２−イソブチリル−グアニン）、およびＧｕａＤＭＦ（２−ジメチルホルムアミジノ−グアニン）から選択される、項目１に記載の化合物またはその塩。
（項目５）
各Ｂ１が、独立に、アデニン、グアニン、シトシン、チミン、およびウラシルから選択される、項目１に記載の化合物またはその塩。
（項目６）
各Ｒ３が、水素である、項目１〜５のいずれかに記載の化合物またはその塩。
（項目７）
各Ｒ４および各Ｒ５が、メチルである、項目１〜６のいずれかに記載の化合物またはその塩。
（項目８）
Ｒ１が、水素である、項目１〜７のいずれかに記載の化合物またはその塩。
（項目９）
Ｒ１が、アミノ保護基である、項目１〜７のいずれかに記載の化合物またはその塩。
（項目１０）
Ｒ２が、水素である、項目１〜９のいずれかに記載の化合物またはその塩。
（項目１１）
Ｒ２が、ヒドロキシル保護基または固体支持体である、項目１〜９のいずれかに記載の化合物またはその塩。
（項目１２）
Ｒ１およびＲ２が、水素である、項目１〜７のいずれかに記載の化合物またはその塩。（項目１３）
Ｒ１が、アミノ保護基であり、Ｒ２が、固体支持体である、項目１〜７のいずれかに記載の化合物またはその塩。
（項目１４）
ｎが、１〜３０の整数である、項目１〜１３のいずれかに記載の化合物またはその塩。
（項目１５）
式（ＩＩ）
【化３９】
2019065054.tif 000016
［式中、
Ｒ１は、水素またはアミノ保護基であり、
Ｒ３は、独立に、水素、ヒドロキシル、および−Ｏ−Ｒ３ａから選択され、
Ｒ３ａは、−ＮＲ３ｂＲ３ｃ、イミダゾリル、−（ＣＨ２）ａＯ（ＣＨ２）ｂＮＲ３ｂＲ３ｃ、または−（ＣＨ２）ａＯＮＲ３ｄ（ＣＨ２）ｂＮＲ３ｂＲ３ｃにより任意選択で置換されているＣ１〜６アルキルであり、
Ｒ３ｂは、水素またはＣ１〜２アルキルであり、
Ｒ３ｃは、水素またはＣ１〜２アルキルであり、
Ｒ３ｄは、水素またはＣ１〜２アルキルであり、
ａは、１〜４から選択される整数であり、
ｂは、１〜４から選択される整数であり、
Ｒ４は、−ＮＲ４ａＲ４ｂにより任意選択で置換されているＣ１〜６アルキルであり、
Ｒ４ａは、水素もしくはＣ１〜２アルキルであり、Ｒ４ｂは、水素もしくはＣ１〜２アルキルであり、
Ｒ５は、−ＮＲ５ａＲ５ｂにより任意選択で置換されているＣ１〜６アルキルであり、
Ｒ５ａは、水素もしくはＣ１〜２アルキルであり、Ｒ５ｂは、水素もしくはＣ１〜２アルキルであり、または
Ｒ４およびＲ５は、それらが結合する窒素と一緒になって、任意選択で置換されている単環式ヘテロシクリル環を形成し、
Ｒ６は、脱離基であり、
Ｗは、独立に、Ｏ、Ｓ、およびＳｅから選択され、
Ｂ１は、任意選択で保護されている複素環式塩基部分である］
の化合物またはその塩。
（項目１６）
Ｗが、Ｏである、項目１５に記載の化合物またはその塩。
（項目１７）
Ｂ１が、プリンおよびピリミジンである、項目１５に記載の化合物またはその塩。
（項目１８）
Ｂ１が、独立に、Ｔｈｙ（チミン）、ＢｚＣｙｔ（４−ベンゾイル−シトシン）、ＢｚＡｄｅ（６−ベンゾイル−アデニン）、ＡｄｅＤＭＦ（６−ジメチルホルムアミジノ−アデニン）、ｉＢｕＧｕａ（２−イソブチリル−グアニン）、およびＧｕａＤＭＦ（２−ジメチルホルムアミジノ−グアニン）から選択される、項目１５に記載の化合物またはその塩。
（項目１９）
Ｂ１が、アデニン、グアニン、シトシン、チミン、およびウラシルから選択される、項目１５に記載の化合物またはその塩。
（項目２０）
Ｒ３が、水素である、項目１５〜１９のいずれかに記載の化合物またはその塩。
（項目２１）
Ｒ４およびＲ５が、メチルである、項目１５〜２０のいずれかに記載の化合物またはその塩。
（項目２２）
Ｒ１が、水素である、項目１５〜２１のいずれかに記載の化合物またはその塩。
（項目２３）
Ｒ１が、アミノ保護基である、項目１５〜２１のいずれかに記載の化合物またはその塩。
（項目２４）
Ｒ６が、ハロゲンである、項目１５〜２２のいずれかに記載の化合物またはその塩。
（項目２５）
Ｒ１が、アミノ保護基であり、Ｒ６が、ハロゲンである、項目１５〜２１のいずれかに記載の化合物またはその塩。
（項目２６）
式（ＩＩＩ）
【化４０】
2019065054.tif 000017
［式中、
Ｒ１は、水素またはアミノ保護基であり、
Ｒ２は、水素、ヒドロキシル保護基、または固体支持体であり、
各Ｒ３は、独立に、水素、ヒドロキシル、および−Ｏ−Ｒ３ａから選択され、
各Ｒ３ａは、−ＮＲ３ｂＲ３ｃ、イミダゾリル、−（ＣＨ２）ａＯ（ＣＨ２）ｂＮＲ３ｂＲ３ｃ、または−（ＣＨ２）ａＯＮＲ３ｄ（ＣＨ２）ｂＮＲ３ｂＲ３ｃにより任意選択で置換されているＣ１〜６アルキルであり、
各Ｒ３ｂは、水素またはＣ１〜２アルキルであり、
各Ｒ３ｃは、水素またはＣ１〜２アルキルであり、
各Ｒ３ｄは、水素またはＣ１〜２アルキルであり、
各ａは、１〜４から選択される整数であり、
各ｂは、１〜４から選択される整数であり、
各Ｒ４は、−ＮＲ４ａＲ４ｂにより任意選択で置換されているＣ１〜６アルキルであり、
Ｒ４ａは、水素もしくはＣ１〜２アルキルであり、Ｒ４ｂは、水素もしくはＣ１〜２アルキルであり、
各Ｒ５は、−ＮＲ５ａＲ５ｂにより任意選択で置換されているＣ１〜６アルキルであり、
Ｒ５ａは、水素もしくはＣ１〜２アルキルであり、Ｒ５ｂは、水素もしくはＣ１〜２アルキルであり、または
Ｒ４およびＲ５は、それらが結合する窒素と一緒になって、任意選択で置換されている単環式ヘテロシクリル環を形成し、
各Ｗは、独立に、Ｏ、Ｓ、およびＳｅから選択され、
各Ｂ１は、独立に、任意選択で保護されている複素環式塩基部分から選択される］
の化合物またはその塩。
（項目２７）
Ｗが、Ｏである、項目２６に記載の化合物またはその塩。
（項目２８）
各Ｂ１が、独立に、プリンおよびピリミジンから選択される、項目２６に記載の化合物またはその塩。
（項目２９）
各Ｂ１が、独立に、Ｔｈｙ（チミン）、ＢｚＣｙｔ（４−ベンゾイル−シトシン）、ＢｚＡｄｅ（６−ベンゾイル−アデニン）、ＡｄｅＤＭＦ（６−ジメチルホルムアミジノ−アデニン）、ｉＢｕＧｕａ（２−イソブチリル−グアニン）、およびＧｕａＤＭＦ（２−ジメチルホルムアミジノ−グアニン）から選択される、項目２６に記載の化合物またはその塩。
（項目３０）
各Ｂ１が、独立に、アデニン、グアニン、シトシン、チミン、およびウラシルから選択される、項目２６に記載の化合物またはその塩。
（項目３１）
各Ｒ３が、水素である、項目２６〜３０のいずれかに記載の化合物またはその塩。
（項目３２）
各Ｒ４および各Ｒ５が、メチルである、項目２６〜３１のいずれかに記載の化合物またはその塩。
（項目３３）
Ｒ１が、水素である、項目２６〜３２のいずれかに記載の化合物またはその塩。
（項目３４）
Ｒ１が、アミノ保護基である、項目２６〜３２のいずれかに記載の化合物またはその塩。
（項目３５）
Ｒ２が、水素である、項目２６〜３４のいずれかに記載の化合物またはその塩。
（項目３６）
Ｒ２が、ヒドロキシル保護基または固体支持体である、項目２６〜３４のいずれかに記載の化合物またはその塩。
（項目３７）
Ｒ１およびＲ２が、水素である、項目２６〜３２のいずれかに記載の化合物またはその塩。
（項目３８）
Ｒ１が、アミノ保護基であり、Ｒ２が、ヒドロキシル保護基である、項目２６〜３２のいずれかに記載の化合物またはその塩。
（項目３９）
Ｒ１が、アミノ保護基であり、Ｒ２が、固体支持体である、項目２６〜３２のいずれかに記載の化合物またはその塩。
（項目４０）
【化４１】
2019065054.tif 000018
から選択される化合物またはその塩。
（項目４１）
【化４２】
2019065054.tif 000019
【化４３】
2019065054.tif 000020
【化４４】
2019065054.tif 000021
【化４５】
2019065054.tif 000022
から選択される化合物またはその塩。
（項目４２）
オリゴヌクレオチドのヌクレオシドサブユニットが、サブユニット間結合によってつながっているオリゴヌクレオチドであって、
該サブユニット間結合の少なくとも１つが、ホスホロチオエートまたはホスフェート結合であり、
該オリゴヌクレオチドが、式（ＩＶ）
【化４６】
2019065054.tif 000023
［式中、
各Ｒ３は、独立に、水素、ヒドロキシル、および−Ｏ−Ｒ３ａから選択され、
各Ｒ３ａは、−ＮＲ３ｂＲ３ｃ、イミダゾリル、−（ＣＨ２）ａＯ（ＣＨ２）ｂＮＲ３ｂＲ３ｃ、または−（ＣＨ２）ａＯＮＲ３ｄ（ＣＨ２）ｂＮＲ３ｂＲ３ｃにより任意選択で置換されているＣ１〜６アルキルであり、
各Ｒ３ｂは、水素またはＣ１〜２アルキルであり、
各Ｒ３ｃは、水素またはＣ１〜２アルキルであり、
各Ｒ３ｄは、水素またはＣ１〜２アルキルであり、
各ａは、１〜４から選択される整数であり、
各ｂは、１〜４から選択される整数であり、
各Ｒ４は、−ＮＲ４ａＲ４ｂにより任意選択で置換されているＣ１〜６アルキルであり、
Ｒ４ａは、水素もしくはＣ１〜２アルキルであり、Ｒ４ｂは、水素もしくはＣ１〜２アルキルであり、
各Ｒ５は、−ＮＲ５ａＲ５ｂにより任意選択で置換されているＣ１〜６アルキルであり、
Ｒ５ａは、水素もしくはＣ１〜２アルキルであり、Ｒ５ｂは、水素もしくはＣ１〜２アルキルであり、または
Ｒ４およびＲ５は、それらが結合する窒素と一緒になって、任意選択で置換されている単環式ヘテロシクリル環を形成し、
各Ｗは、独立に、Ｏ、Ｓ、およびＳｅから選択され、
各Ｂ１は、独立に、任意選択で保護されている複素環式塩基部分から選択され、
ｎは、１〜２５から選択される整数である］
の部分またはその塩を含み、
ただし該オリゴヌクレオチドが、３’末端または５’末端において式ＩＶの該部分で終結している場合、末端基−Ｏ−または−ＮＨ−が、式ＩＶの該部分に適した原子価を提供するために水素を含む、オリゴヌクレオチド。
（項目４３）
前記サブユニット間ホスホロチオエートまたはホスフェート結合が、式（ＩＶ）の前記部分の２つの隣接領域間に置かれる、項目４２に記載のオリゴヌクレオチドまたはその塩。
（項目４４）
式（ＩＶ）の前記部分の２つの隣接領域間の前記サブユニット間結合が、ホスホロチオエートである、項目４２に記載のオリゴヌクレオチドまたはその塩。
（項目４５）
式（ＩＶ）の前記部分の２つの隣接領域間の前記サブユニット間結合が、ホスフェートである、項目４２に記載のオリゴヌクレオチドまたはその塩。
（項目４６）
ａ．前記オリゴヌクレオチドが、前記オリゴヌクレオチドの５’末端上に位置している式（ＩＶ）の前記部分を含み、
ｂ．前記オリゴヌクレオチドが、前記オリゴヌクレオチドの３’末端上に位置している式（ＩＶ）の前記部分を含み、
ｃ．前記オリゴヌクレオチドが、前記オリゴヌクレオチドの５’末端上に位置している式（ＩＶ）の前記部分と、３’末端上に位置している式（ＩＶ）の前記部分との間に位置しているホスホロチオエート結合またはホスフェート結合によって連結した３〜３０の連続ヌクレオチドを含む、
項目４２に記載のオリゴヌクレオチドまたはその塩。
（項目４７）
各Ｗが、Ｏである、項目４２〜４６のいずれかに記載のオリゴヌクレオチドまたはその塩。
（項目４８）
各Ｂ１が、独立に、プリンおよびピリミジンから選択される、項目４２〜４７のいずれかに記載のオリゴヌクレオチドまたはその塩。
（項目４９）
各Ｂ１が、独立に、Ｔｈｙ（チミン）、ＢｚＣｙｔ（４−ベンゾイル−シトシン）、ＢｚＡｄｅ（６−ベンゾイル−アデニン）、ＡｄｅＤＭＦ（６−ジメチルホルムアミジノ−アデニン）、ｉＢｕＧｕａ（２−イソブチリル−グアニン）、およびＧｕａＤＭＦ（２−ジメチルホルムアミジノ−グアニン）から選択される、項目４２〜４７のいずれかに記載のオリゴヌクレオチドまたはその塩。
（項目５０）
各Ｂ１が、独立に、アデニン、グアニン、シトシン、チミン、およびウラシルから選択される、項目４２〜４７のいずれかに記載のオリゴヌクレオチドまたはその塩。
（項目５１）
各Ｒ３が、水素である、項目４２〜５０のいずれかに記載のオリゴヌクレオチドまたはその塩。
（項目５２）
各Ｒ４および各Ｒ５が、メチルである、項目４２〜５１のいずれかに記載のオリゴヌクレオチドまたはその塩。
（項目５３）
各ｎが、１〜１０の整数である、項目４２〜５２のいずれかに記載のオリゴヌクレオチドまたはその塩。
（項目５４）
前記オリゴヌクレオチドが、立体障害によってｍＲＮＡの翻訳を防止する、項目４２〜５３のいずれかに記載のオリゴヌクレオチドまたはその塩。
（項目５５）
前記オリゴヌクレオチドが、遺伝子由来のｍＲＮＡのＲＮａｓｅ−Ｈ媒介性分解のための基質である、項目４２〜５３のいずれかに記載のオリゴヌクレオチドまたはその塩。
（項目５６）
テロメラーゼＲＮＡの配列（配列番号１）の任意の部分に相補的な領域を含む配列を含む、項目１〜４１のいずれかに記載の化合物または項目４２〜５５のいずれかに記載のオリゴヌクレオチド。
（項目５７）
ＧＴＴＡＧＧＧＴＴＡＧ（配列番号２）、ＴＡＧＧＧＴＴＡＧＡＣＡＡ（配列番号３）、およびＣＡＧＴＴＡＧＧＧＴＴＡＧ（配列番号４）からなる群から選択される配列を含む、項目１〜４１のいずれかに記載の化合物または項目４２〜５５のいずれかに記載のオリゴヌクレオチド。
（項目５８）
ＴＡＧＧＧＴＴＡＧＡＣＡＡ（配列番号３）の配列を含む、項目１〜４１のいずれかに記載の化合物または項目４２〜５５のいずれかに記載のオリゴヌクレオチド。
（項目５９）
項目１〜４１のいずれかに記載の化合物、項目４２〜５５のいずれかに記載のオリゴヌクレオチド、または薬学的に許容されるその塩と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物。
（項目６０）
項目１〜４１のいずれかに記載の化合物、項目４２〜５５のいずれかに記載のオリゴヌクレオチド、またはその塩を含むキット。
（項目６１）
式（ＩＩ）
【化４７】
2019065054.tif 000024
［式中、
Ｒ１は、水素またはアミノ保護基であり、
Ｒ３は、独立に、水素、ヒドロキシル、および−Ｏ−Ｒ３ａから選択され、
Ｒ３ａは、−ＮＲ３ｂＲ３ｃ、イミダゾリル、−（ＣＨ２）ａＯ（ＣＨ２）ｂＮＲ３ｂＲ３ｃ、または−（ＣＨ２）ａＯＮＲ３ｄ（ＣＨ２）ｂＮＲ３ｂＲ３ｃにより任意選択で置換されているＣ１〜６アルキルであり、
Ｒ３ｂは、水素またはＣ１〜２アルキルであり、
Ｒ３ｃは、水素またはＣ１〜２アルキルであり、
Ｒ３ｄは、水素またはＣ１〜２アルキルであり、
ａは、１〜４から選択される整数であり、
ｂは、１〜４から選択される整数であり、
Ｒ４は、−ＮＲ４ａＲ４ｂにより任意選択で置換されているＣ１〜６アルキルであり、
Ｒ４ａは、水素もしくはＣ１〜２アルキルであり、Ｒ４ｂは、水素もしくはＣ１〜２アルキルであり、
Ｒ５は、−ＮＲ５ａＲ５ｂにより任意選択で置換されているＣ１〜６アルキルであり、
Ｒ５ａは、水素もしくはＣ１〜２アルキルであり、Ｒ５ｂは、水素もしくはＣ１〜２アルキルであり、または
Ｒ４およびＲ５は、それらが結合する窒素と一緒になって、任意選択で置換されている単環式ヘテロシクリル環を形成し、
Ｒ６は、脱離基であり、
Ｗは、独立に、Ｏ、Ｓ、およびＳｅから選択され、
Ｂ１は、任意選択で保護されている複素環式塩基部分である］
の化合物またはその塩を調製する方法であって、
ｂ）式（Ａ）
【化４８】
2019065054.tif 000025
の化合物をリン酸化試薬と接触させるステップを含む方法。
（項目６２）
前記リン酸化試薬が、ジメチルアミノ−ホスホリル化合物である、項目６１に記載の方法。
（項目６３）
前記リン酸化試薬が、ジメチルアミノ−ホスホロジクロリデートである、項目６１に記載の方法。
（項目６４）
Ｒ１が、アミノ保護基である、項目６１に記載の方法。
（項目６５）
式（Ｉ）
【化４９】
2019065054.tif 000026
［式中、
Ｒ１は、水素またはアミノ保護基であり、
Ｒ２は、水素またはヒドロキシル保護基であり、
各Ｒ３は、独立に、水素、ヒドロキシル、および−Ｏ−Ｒ３ａから選択され、
各Ｒ３ａは、−ＮＲ３ｂＲ３ｃ、イミダゾリル、−（ＣＨ２）ａＯ（ＣＨ２）ｂＮＲ３ｂＲ３ｃ、または−（ＣＨ２）ａＯＮＲ３ｄ（ＣＨ２）ｂＮＲ３ｂＲ３ｃにより任意選択で置換されているＣ１〜６アルキルであり、
各Ｒ３ｂは、水素またはＣ１〜２アルキルであり、
各Ｒ３ｃは、水素またはＣ１〜２アルキルであり、
各Ｒ３ｄは、水素またはＣ１〜２アルキルであり、
各ａは、１〜４から選択される整数であり、
各ｂは、１〜４から選択される整数であり、
各Ｗは、独立に、Ｏ、Ｓ、およびＳｅから選択され、
各Ｂ１は、独立に、任意選択で保護されている複素環式塩基部分から選択され、
各Ｒ４は、−ＮＲ４ａＲ４ｂにより任意選択で置換されているＣ１〜６アルキルであり、
Ｒ４ａは、水素もしくはＣ１〜２アルキルであり、Ｒ４ｂは、水素もしくはＣ１〜２アルキルであり、
各Ｒ５は、−ＮＲ５ａＲ５ｂにより任意選択で置換されているＣ１〜６アルキルであり、
Ｒ５ａは、水素もしくはＣ１〜２アルキルであり、Ｒ５ｂは、水素もしくはＣ１〜２アルキルであり、または
Ｒ４およびＲ５は、それらが結合する窒素と一緒になって、任意選択で置換されている単環式ヘテロシクリル環を形成し、
ｎは、１〜５０から選択される整数である］
の化合物またはその塩を調製する方法であって、
ｃ）式（ＩＩ）
【化５０】
2019065054.tif 000027
の化合物を式（Ｂ）
【化５１】
2019065054.tif 000028
の化合物と接触させるステップを含む方法。
（項目６６）
前記混合が、ＬｉＢｒの存在下で実施される、項目６５に記載の方法。
（項目６７）
Ｒ１がアミノ保護基であり、前記アミノ保護基を除去するステップをさらに含む、項目６５に記載の方法。
（項目６８）
Ｒ２がヒドロキシル保護基であり、前記ヒドロキシル保護基を除去するステップをさらに含む、項目６５に記載の方法。
【図面の簡単な説明】
【００５８】
【図１】図１は、テロメラーゼＲＮＡの配列を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００５９】
詳細な説明
本明細書で提供される本開示は、とりわけ、骨格に少なくとも１つのＮ３’→Ｐ５’ホスホロジアミデート結合（ＮＰＮ）を含むアンチセンスオリゴヌクレオチドの調製および使用のための組成物および方法を開示する。
【００６０】
本開示は、とりわけ、タンパク質の発現を有効に防止または低減することができるアンチセンスオリゴヌクレオチド、およびそのアンチセンスオリゴヌクレオチドを使用する方法を提供する。本発明者らは、とりわけ、骨格に少なくとも１つのホスホロジアミデート結合を含むアンチセンスオリゴヌクレオチドを発見した。本明細書に開示されているアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ホスホロジアミデート結合を含む場合、有効なＲＮａｓｅ  Ｈ基質として作用し、したがってオリゴヌクレオチドに結合するｍＲＮＡのＲＮＡｓｅ  Ｈ媒介性分解を引き起こす能力を有することができる。また、本明細書で提供されるアンチセンスオリゴヌクレオチドは、立体遮断剤として作用することができる。本開示は、標的分解、占有率に基づく阻害（すなわち立体遮断剤）、またはそれら両方の組合せによって有効となり得るアンチセンスオリゴヌクレオチドを提供する。
一般技術
【００６１】
本発明の実施では、別段指定されない限り、当業者に周知の核酸の化学、分子生物学、微生物学、細胞生物学、生化学、および免疫学の従来技術を用いる。このような技術は、Molecular  Cloning:  A  Laboratory  Manual、第２版（Sambrookら、１９８９年）およびMolecular  Cloning:  A  Laboratory  Manual、第３版（SambrookおよびRussel、２００１年）、（本明細書では合わせて「Sambrook」と呼ぶ）；Current  Protocols  in  Molecular  Biology（F.M.  Ausubelら編、１９８７年、２００１年までの付録を含む）；PCR:  The  Polymerase  Chain  Reaction、（Mullisら編、１９９４年）などの文献に完全に説明されている。核酸は、例えばCarruthers（１９８２年）Cold  Spring  Harbor  Symp.  Quant.  Biol.４７巻：４１１〜４１８頁；Adams（１９８３年）J.  Am.  Chem.  Soc.１０５巻：６６１頁；Belousov（１９９７年）Nucleic  Acids  Res.５巻２５号：３４４０〜３４４４頁；Frenkel（１９９５年）Free  Radic.  Biol.  Med.１９巻：３７３〜３８０頁；Blommers（１９９４年）Biochemistry  ３３巻：７８８６〜７８９６頁；Narang（１９７９年）Meth.  Enzymol.６８巻：９０頁；Brown（１９７９年）Meth.  Enzymol.６８巻：１０９頁；Beaucage（１９８１年）Tetra.  Lett.２２巻：１８５９頁；KombergおよびBaker、DNA  Replication、第２版（Freeman、San  Francisco、１９９２年）；Scheit、Nucleotide  Analogs（John  Wiley、New  York、１９８０年）；UhlmannおよびPeyman、Chemical  Reviews、９０巻：５４３〜５８４頁、１９９０年に記載の通り、周知の化学合成技術によってｉｎ  ｖｉｔｒｏで合成することができる。
【００６２】
別段示されている場合を除き、本実施形態の方法および技術は、一般に、当技術分野で周知の従来の方法に従って、本明細書を通して引用され、論じられている様々な一般的な参考文献およびより具体的な参考文献に記載されている通り、実施される。例えば、Loudon、Organic  Chemistry、第４版、New  York:  Oxford  University  Press、２００２年、３６０〜３６１頁、１０８４〜１０８５頁；SmithおよびMarch、March's  Advanced  Organic  Chemistry:  Reactions,  Mechanisms,  and  Structure、第５版、Wiley-Interscience、２００１年参照。
用語
【００６３】
以下の用語は、別段指定されない限り、以下の意味を有する。定義されていない任意の用語は、当技術分野で認識されているそれらの意味を有する。
【００６４】
用語「Ｃ１〜ｎアルキル」は、本明細書で使用される場合、脂肪族または脂環式またはそれらの組合せであってもよく、飽和、部分的に不飽和、または完全に不飽和であってもよい、１〜ｎ個の炭素原子（ｎは１を超える数である）を有するＣ１〜ｎ炭化水素化合物から水素原子を除去することによって得られた一価の部分に関する。同様に、用語「Ｃ１〜２０アルキル」は、本明細書で使用される場合、脂肪族または脂環式またはそれらの組合せであってもよく、飽和、部分的に不飽和、または完全に不飽和であってもよい、１〜２０個の炭素原子を有するＣ１〜２０炭化水素化合物から水素原子を除去することによって得られた一価の部分に関する。
【００６５】
用語「アリール」は、単一の環（フェニル基で存在するものなど）または複数の縮合環を有する環系（このような芳香環系の例として、ナフチル、アントリルおよびインダニルが挙げられる）を有する、６〜１８個の炭素原子の一価の芳香族炭素環式基を指し、その縮合環は、芳香族であっても芳香族でなくてもよく、ただし結合点は芳香環の原子を介する。
【００６６】
用語「ヘテロアリール」は、環内に１〜１５個の炭素原子、例えば１〜１０個の炭素原子、ならびに酸素、窒素および硫黄からなる群から選択される１〜１０個のヘテロ原子を有する芳香族基を指す。このようなヘテロアリール基は、単一の環（例えば、ピリジニル、イミダゾリルまたはフリル）または環系中の複数の縮合環（例えば、インドリジニル、キノリニル、ベンゾフラン、ベンズイミダゾリルまたはベンゾチエニルなどの基におけるような）を有することができ、ここでその環系中の少なくとも１つの環は、芳香族であり、その環系中の少なくとも１つの環は、芳香族であり、ただし結合点は芳香環の原子を介する。ある特定の実施形態では、ヘテロアリール基の窒素および／または硫黄環原子（複数可）は、任意選択で酸化されて、Ｎ−オキシド（Ｎ→Ｏ）、スルフィニル、またはスルホニル部分を提供する。
【００６７】
ヘテロアリールの例として、ピロール、イミダゾール、ピラゾール、ピリジン、ピラジン、ピリミジン、ピリダジン、インドリジン、イソインドール、インドール、プリン、イソキノリン、キノリン、フタラジン、ナフチルピリジン、キノキサリン、キナゾリン、シンノリン、プテリジン、カルバゾール、カルボリン、フェナントリジン、アクリジン、フェナントロリン、イソチアゾール、フェナジン、イソオキサゾール、フェノキサジン、フェノチアジン、ピペリジン、ピペラジン、フタルイミド、４，５，６，７−テトラヒドロベンゾ［ｂ］チオフェン、チアゾール、チオフェン、ベンゾ［ｂ］チオフェン等が挙げられるが、これらに限定されない。
【００６８】
用語「シクロアルキル」は、縮合、架橋、およびスピロ環系を含む、単一または複数の環式環を有する３〜１０個の炭素原子の環式アルキル基を指す。適切なシクロアルキル基の例として、例えば、アダマンチル、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロオクチル等が挙げられる。このようなシクロアルキル基には、例えば単環構造、例えばシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロオクチル等、または複数の環構造、例えばアダマンタニル等が含まれる。
【００６９】
用語「複素環」、「複素環式」、「ヘテロシクロアルキル」または「ヘテロシクリル」は、縮合、架橋、またはスピロ環系を含み、１〜１０個のヘテロ原子を含む３〜２０個の環原子を有する、単環または複数の縮合環を有する飽和または部分的に不飽和の基を指す。これらの環原子は、炭素、窒素、硫黄、または酸素からなる群から選択され、縮合環系では、環の１つまたは複数は、シクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであってもよく、ただし結合点は非芳香環を介する。ある特定の実施形態では、複素環式基の窒素および／または硫黄原子（複数可）は、任意選択で酸化されて、Ｎ−オキシド、−Ｓ（Ｏ）−、または−ＳＯ２−部分を提供する。
【００７０】
複素環の例として、アゼチジン、ジヒドロインドール、インダゾール、キノリジン、イミダゾリジン、イミダゾリン、ピペリジン、ピペラジン、インドリン、１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン、チアゾリジン、モルホリニル、チオモルホリニル（チアモルホリニルとも呼ばれる）、１，１−ジオキソチオモルホリニル、ピペリジニル、ピロリジン、テトラヒドロフラニル等が挙げられるが、これらに限定されない。
【００７１】
アリール、シクロアルキル、ヘテロアリール、またはヘテロシクリル基が「置換されている」場合、アリール、シクロアルキル、ヘテロアリール、またはヘテロシクリル置換基の定義によって別段制約されない限り、このようなアリール、シクロアルキル、ヘテロアリール、またはヘテロシクリル基は、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アルコキシ、置換アルコキシ、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アミノ、置換アミノ、アミノアシル、アミノアシルオキシ、アジド、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシル、オキソ、オキシアシルアミノ、チオケト、カルボキシル、カルボキシルエステル、チオアリールオキシ、チオヘテロアリールオキシ、チオヘテロシクロオキシ、チオール、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロオキシ、ヒドロキシアミノ、アルコキシアミノ、ニトロ、スルホニルアミノ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−置換アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ−ヘテロシクリル、−ＳＯ２−アルキル、−ＳＯ２−置換アルキル、−ＳＯ２−アリール、−ＳＯ２−ヘテロアリール、−ＳＯ２−ヘテロシクリル、トリハロメチル、スペルミン、およびスペルミジンから選択される１〜５個または１〜３個の置換基で置換されていてもよい。
【００７２】
用語「アミノ保護基」は、アミノ基が分子の意図する標的官能基と反応する間、アミノ基が試薬と反応しないようにする（すなわち「遮断する」または「保護する」）ために一般に用いられる基を指す。代表的な保護基は、GreeneおよびWuts、Protective  Groups  in  Organic  Synthesis、第７章、第３版、John  Wiley  &  Sons、New  York、１９９９年に開示されている。アミノ保護基の例として、イソブチリル、ジアルキルホルムアミジノ（例えば、ジメチルホルムアミジノおよびジエチルホルムアミジノ）、ジアリールホルムアミジノ（例えば、ジフェニルホルムアミジノ）、ｔ−ブトキシカルボニル、トリチル、ベンジルオキシカルボニル、９−フルオレニルメトキシカルボニル、ホルミル、ｔｅｒｔ−アリルオキシカルボニル（Ａｌｌｏｃ）、９−フルオレニルメチル（Ｆｍ）、メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、ベンジル（Ｂｎ）、２，２，４，６，７−ペンタメチルジヒドロベンゾフラン−５−スルホニル（Ｐｂｆ）、アセチル、ベンゾイル、Ｃ６Ｈ５−ＳＯ２−、４−ＮＯ２Ｃ６Ｈ４−ＳＯ２−、２−ＮＯ２Ｃ６Ｈ４−ＳＯ２−、および２，４−（ＮＯ２）２Ｃ６Ｈ３−ＳＯ２−が挙げられるが、これらに限定されない。ある場合には、アミノ保護基は、酸不安定な保護基である。ある場合には、アミノ保護基は、塩基不安定な保護基である。
【００７３】
用語「ヒドロキシル保護基」は、ヒドロキシル基が分子の意図する標的官能基と反応する間、ヒドロキシル基が試薬と反応しないようにする（すなわち「遮断する」または「保護する」）ために一般に用いられる基を指す。代表的な保護基は、GreeneおよびWuts、Protective  Groups  in  Organic  Synthesis、第２章、第３版、John  Wiley  &  Sons、New  York、１９９９年に開示されている。ヒドロキシル保護基の例として、アセチル、ｔ−ブチル、ｔ−ブトキシメチル、ヒドロキシメチル、メトキシメチル、テトラヒドロピラニル、１−エトキシエチル、１−（２−クロロエトキシ）エチル、２−トリメチルシリルエチル、ｐ−クロロフェニル、２，４−ジニトロフェニル、ベンジル、ベンゾイル、ｐ−フェニルベンゾイル、２，６−ジクロロベンジル、ジフェニルメチル、ｐ−ニトロベンジル、トリフェニルメチル（トリチル）、４，４’−ジメトキシトリチル、トリメチルシリル、トリエチルシリル、ｔ−ブチルジメチルシリル、ｔ−ブチルジフェニルシリル、トリフェニルシリル、トリイソプロピルシリル、ベンゾイルホルメート、クロロアセチル、トリクロロアセチル、トリフルオロアセチル、ピバロイル、９−フルオレニルメチルカーボネート、トリチル、モノメトキシトリチル、ジメトキシトリチル、９−フェニルキサンチン−９−イル（Ｐｉｘｙｌ）または９−（ｐ−メトキシフェニル）キサンチン−９−イル（ＭＯＸ）が挙げられるが、これらに限定されない。ある場合には、ヒドロキシル保護基は、酸不安定な保護基である。ある場合には、ヒドロキシル保護基は、塩基不安定な保護基である。
【００７４】
用語「酸不安定な保護基」は、官能基が分子の意図する標的官能基と反応する間、官能基が試薬と反応しないようにする（すなわち「遮断する」または「保護する」）ために一般に用いられる基を指し、酸の存在下で除去することができる。
【００７５】
用語「塩基不安定な保護基」は、官能基が分子の意図する標的官能基と反応する間、官能基が試薬と反応しないようにする（すなわち「遮断する」または「保護する」）ために一般に用いられる基を指し、塩基の存在下で除去することができる。
【００７６】
用語「脱離基」は、求核置換を受ける基である。適切な脱離基は、当技術分野で周知であり、例えば、「Advanced  Organic  Chemistry」、Jerry  March、第５版、３５１〜３５７頁、John  Wiley  and  Sons、N.Y.を参照されたい。脱離基の例として、クロロ、ヨード、ブロモ、フルオロ、メタンスルホニルオキシ（メシルオキシ）、トシルオキシ、トリフリルオキシ、ニトロ−フェニルスルホニルオキシ（ノシルオキシ）、ブロモ−フェニルスルホニルオキシ（ブロシルオキシ）、トリアゾリル、ベンゾトリアゾリル、ヒドロキシベンゾトリアゾリルエステル、および１−（メシチレン−２−スルホニル）−３−ニトロ−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール（ＭＳＮＴ）が挙げられる。ある場合には、脱離基は、ハロゲン、例えばクロロ、ブロモ、またはヨードである。
【００７７】
用語「ヌクレオシド」は、下記に表される一般構造を有する部分を指し、ここでＢは、核酸塩基を表し、２’炭素は、下記の通り置換されていてもよい。３’炭素は、オリゴマーまたはポリマーに組み込まれる場合、酸素または窒素原子にさらに連結している。
【化１４】
2019065054.tif 000029
【００７８】
この構造には、２’−デオキシおよび２’−ヒドロキシル（すなわちデオキシリボースおよびリボース）形態ならびに類似体が含まれる。５’−ＮＨ基は、頻度は多くないが、５’−酸素で置換される場合がある。ヌクレオシドに言及する「類似体」は、修飾核酸塩基部分（以下の「核酸塩基」の定義を参照）および／または修飾糖部分、例えば２’−フルオロ糖を有する合成ヌクレオシド、ならびにさらなる類似体を含む。このような類似体は、典型的に、結合特性、例えば安定性、特異性等に影響を及ぼすように設計される。
【００７９】
用語「核酸塩基」（または「塩基」）は、（ｉ）天然ＤＮＡおよびＲＮＡ核酸塩基（ウラシル、チミン、アデニン、グアニン、およびシトシン）、（ｉｉ）修飾核酸塩基または核酸塩基類似体（例えば、それらに限定されるものではないが、５−メチルシトシン、５−ブロモウラシル、またはイノシン）、および（ｉｉｉ）核酸塩基類似体を含む。「核酸塩基類似体」は、分子構造が典型的なＤＮＡまたはＲＮＡ核酸塩基の分子構造と類似している化合物である。
【００８０】
用語「非修飾核酸塩基」および「天然に生じる核酸塩基」は、プリン塩基であるアデニン（Ａ）およびグアニン（Ｇ）、ならびにピリミジン塩基であるチミン（Ｔ）、シトシン（Ｃ）およびウラシル（Ｕ）を含む。
【００８１】
修飾核酸塩基の例として、本明細書で定義の通り、他の合成および天然の核酸塩基、例えばＢｚＣｙｔ（４−ベンゾイル−シトシン）、ＢｚＡｄｅ（６−ベンゾイル−アデニン）、ＡｄｅＤＭＦ  ６−ジメチルホルムアミジノ−アデニン）、ｉＢｕＧｕａ（２−イソブチリル−グアニン）、ＧｕａＤＭＦ（２−ジメチルホルムアミジノ−グアニン）、チオグアニン、５−メチルシトシン（５−ｍｅ−Ｃ）、５−ヒドロキシメチルシトシン、キサンチン、ヒポキサンチン、２−アミノアデニン、アデニンおよびグアニンの６−メチルおよび他のアルキル誘導体、アデニンおよびグアニンの２−プロピルおよび他のアルキル誘導体、２−チオウラシル、２−チオチミンおよび２−チオシトシン、５−ハロウラシルおよびシトシン、５−プロピニル（−Ｃ≡Ｃ−ＣＨ３）ウラシルおよびシトシンおよびピリミジン塩基の他のアルキニル誘導体、６−アゾウラシル、シトシンおよびチミン、５−ウラシル（プソイドウラシル（pseudouracil））、４−チオウラシル、８−ハロ、８−アミノ、８−チオール、８−チオアルキル、８−ヒドロキシルおよび他の８置換アデニンおよびグアニン、５−ハロ、特に５−ブロモ、５−トリフルオロメチルおよび他の５置換ウラシルおよびシトシン、７−メチルグアニンおよび７−メチルアデニン、２−Ｆ−アデニン、２−アミノ−アデニン、８−アザグアニンおよび８−アザアデニン、７−デアザグアニンおよび７−デアザアデニン、３−デアザグアニンおよび３−デアザアデニン、普遍的塩基、疎水性塩基、無差別塩基（promiscuous  base）、サイズ拡大塩基、ならびにフッ素
化塩基が挙げられる。
【００８２】
用語「複素環式塩基部分」は、ヌクレオシドの塩基部分を指す。このような複素環式塩基の最も一般的な２つのクラスは、プリンおよびピリミジンである。用語「複素環式塩基部分」は、本明細書で使用される場合、修飾されていないまたは天然に生じる核酸塩基、修飾されているまたは天然に生じない核酸塩基、およびそれらの合成模倣物を含む。一般に、複素環式塩基部分は、核酸の塩基と水素結合することができる１つまたは複数の原子または原子の基を含有する複素環式系である。複素環式塩基部分は、保護形態および脱保護形態を含む。
【００８３】
「ポリヌクレオシド」、「オリゴヌクレオシド」、「ポリヌクレオチド」または「オリゴヌクレオチド」は、本明細書では、それらの５’位と３’位の間の特定のサブユニット間結合によってつながっている約６〜約１００のヌクレオシド部分を有している、先に言及したヌクレオシド部分のオリゴマーまたはポリマーを指すために、交換可能に使用することができる。また、これらの用語「オリゴヌクレオチド」および「オリゴヌクレオシド」は、当業者に公知の糖への修飾（例えば２’置換）、塩基への修飾（以下の「核酸塩基」の定義を参照）、ならびに３’および５’末端への修飾を有するようなポリマーまたはオリゴマーを含む。
【００８４】
用語「サブユニット間結合」は、前述の構造における５’酸素と３’炭素の間の結合を指す。このような結合は、分子内で同じであっても、または異なっていてもよい。
【００８５】
用語「ヌクレオチド間結合」は、前述の構造における５’酸素と３’炭素の間のリンに基づく結合を指し、リンは、５’酸素を３’炭素上の窒素または酸素原子に連結する。このような結合は、分子内で同じであっても、または異なっていてもよい。
【００８６】
実施形態の化合物における「ＮＰＮ結合」は、３’−ＮＨ−Ｐ（＝Ｗ）（ＮＲＲ）−５’基
【化１５】
2019065054.tif 000030
であり、式中、ＷおよびＲは、本明細書で定義されている。「ＮＰＮ結合」は、例えば式（Ｉ）に示されている。
【００８７】
用語「任意選択で置換されている」は、本明細書で使用される場合、非置換であってもよく、または置換されていてもよい親基に関する。
【００８８】
別段の指定がない限り、用語「置換されている」は、本明細書で使用される場合、１つまたは複数の置換基を担持している親基に関する。用語「置換基」は、本明細書では従来の意味で使用され、親基に共有結合しているか、付加されているか、または適切な場合には縮合している化学的部分を指す。
【００８９】
別段の指定がない限り、本明細書で明確に定義されていない置換基の命名は、官能基の末端部分を命名し、その後、結合点に向かって近接している官能基を命名することによって得られる。例えば、置換基「アリールアルキルオキシカルボニル」は、（アリール）−（アルキル）−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−基を指す。
【００９０】
１つまたは複数の置換基を含有する本明細書に開示されている基のいずれに関して、このような基は、当然のことながら立体的に非実用的な、かつ／または合成で実現不可能ないかなる置換も置換パターンも含有しないと理解される。さらに、対象化合物は、これらの化合物の置換から生じるあらゆる立体化学的な異性体を含む。
【００９１】
用語「ＲＮＡ標的」は、アンチセンスオリゴヌクレオチドが配列特異的な方式で結合するＲＮＡ転写物を指す。
【００９２】
用語「ＲＮＡｓｅ  Ｈ媒介性分解」は、非特異的な内因性細胞のリボヌクレアーゼＲＮＡｓｅ  Ｈによって、ＤＮＡ／ＲＮＡ二本鎖におけるＲＮＡの３’−Ｏ−Ｐ結合を特異的に切断して、３’−ヒドロキシルおよび５’−リン酸が末端にある生成物を生成することを指す。
【００９３】
用語「ギャップマー」は、２つの隣接領域（「５’隣接領域」および「３’隣接領域」）および中心領域（「ギャップ」）を含むオリゴヌクレオチドを指し、ここで５’および３’隣接領域は、ギャップ領域と比較して少なくとも１つの修飾差異を含む。このような修飾には、モノマーの結合および糖の修飾、ならびに修飾の不在（非修飾ＲＮＡまたはＤＮＡ）が含まれる。したがって、ある特定の実施形態では、５’および３’隣接領域のそれぞれにおけるヌクレオチド結合は、ギャップにおけるヌクレオチド結合とは異なっている。ある特定の実施形態では、５’および３’隣接領域の修飾は、互いに同じである。ある特定の実施形態では、５’および３’隣接領域の修飾は、互いに異なっている。ある特定の実施形態では、ギャップにおけるヌクレオチドは、修飾されておらず、５’および３’隣接領域におけるヌクレオチドは、修飾されている。ある特定の実施形態では、各５’および３’隣接領域内の修飾（複数可）は、同じである。ある特定の実施形態では、５’または３’隣接領域の一方における修飾（複数可）は、その他の隣接領域における修飾（複数可）とは異なっている。一部の実施形態では、標的ｍＲＮＡ分子とのギャップマーオリゴヌクレオチドのハイブリダイゼーションによって、標的ｍＲＮＡ分子のＲＮＡｓｅ  Ｈ媒介性分解が生じる。
【００９４】
本明細書で使用される場合、「立体障害」によって標的ｍＲＮＡ翻訳を防止するアンチセンスオリゴヌクレオチドは、標的ｍＲＮＡに結合することによって、遺伝子発現または他のｍＲＮＡ依存性細胞プロセス（例えば、ｍＲＮＡスプライシングまたはリボソームレベルの翻訳開始）を妨害するオリゴヌクレオチドである。このようなオリゴヌクレオチドは、官能性がＲＮａｓｅ−Ｈと独立であっても、または独立でなくてもよい。
【００９５】
本明細書で使用される場合、薬物、化合物、または医薬組成物の「有効投与量」または「有効量」は、有益なまたは所望の結果をもたらすのに十分な量である。予防的な使用については、有益なまたは所望の結果には、疾患の生化学的、組織学的および／もしくは行動学的な症状、その合併症ならびに疾患の発生中に現れる中間の病理学的表現型を含む疾患の、危険性の排除もしくは低減、重症度の低下、または発症の遅延などの結果が含まれる。治療的な使用については、有益なまたは所望の結果には、疾患から生じる１つもしくは複数の症状の低減、疾患に罹患している者の生活の質の増大、疾患の処置に必要な他の医薬品の用量の低減、標的化などによる別の医薬品の効果の増強、疾患の進行の遅延、および／または生存期間の延長などの臨床結果が含まれる。がんまたは腫瘍の場合、有効量の薬物は、がん細胞の数の低減、腫瘍サイズの低減、末梢器官へのがん細胞の浸潤の阻害（すなわちある程度の緩徐、好ましくは停止）、腫瘍転移の阻害（すなわちある程度の緩徐、好ましくは停止）、腫瘍成長のある程度の阻害、および／または障害に関連する症状の１つもしくは複数のある程度の緩和に効果を有することができる。有効投与量は、１回または複数回の投与で投与することができる。本開示の目的では、薬物、化合物、または医薬組成物の有効投与量は、予防的または治療的な処置を、直接的または間接的に行うのに十分な量である。臨床的な文脈において理解される通り、薬物、化合物、または医薬組成物の有効投与量は、別の薬物、化合物、または医薬組成物と併せて達成できる場合があり、または達成できない場合もある。したがって、「有効投与量」は、１つまたは複数の治療剤を投与する文脈で考慮することができ、単一の薬剤は、１つまたは複数の他の薬剤と併せて望ましい結果が達成され得るか、または達成される場合、有効量で与えられるとみなすことができる。
【００９６】
本明細書で使用される場合、「と併せて」は、１つの処置様式に加えて、別の処置様式を投与することを指す。したがって、「と併せて」は、他の処置様式を個体に投与する前、投与している間または投与した後に、１つの処置様式を投与することを指す。
【００９７】
本明細書で使用される場合、「処置」または「処置する」は、好ましくは臨床結果を含む有益なまたは所望の結果を得るための手法である。本開示の目的では、有益なまたは所望の臨床結果には、これらに限定されないが、以下の１つまたは複数が含まれる：癌性細胞の増殖の低減（または破壊）、疾患から生じる症状の低減、疾患に罹患している者の生活の質の増大、疾患を処置するのに必要な他の医薬品の用量の低減、標的化などによる別の医薬品の効果の増強、疾患の進行の遅延、および／または生存期間の延長。がんまたは腫瘍の場合、処置は、がん細胞の数の低減、腫瘍サイズの低減、末梢器官へのがん細胞の浸潤の阻害（すなわちある程度の緩徐、好ましくは停止）、腫瘍転移の阻害（すなわちある程度の緩徐、好ましくは停止）、腫瘍成長のある程度の阻害、および／または障害に関連する症状の１つもしくは複数のある程度の緩和に効果を有することを含み得る。
【００９８】
本明細書で使用される場合、「疾患の発生の遅延」は、疾患（例えばがん）の発生の先送り、妨げ、緩徐、遅延、安定化および／または延期を意味する。この遅延は、処置対象となる疾患および／または個体の病歴に応じて、様々な期間であり得る。当業者には明らかである通り、十分なまたは著しい遅延は、実際、個体が疾患を発生しないという点で防止を網羅し得る。例えば末期がん、例えば転移の発生は、遅延させることができる。
【００９９】
「個体」または「対象」または「患者」は、哺乳動物である。また哺乳動物には、家畜動物、スポーツ用動物、愛玩動物（例えばネコ、イヌ、ウマ）、霊長類、マウスおよびラットが含まれるが、これらに限定されない。一部の実施形態では、個体は、ヒトである。
【０１００】
本明細書および添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」および「その（ｔｈｅ）」は、文脈によって別段明示されない限り、複数への言及を含む。例えば、「１つの抗体」への言及は、モル量などの１つから多くの抗体に言及するものであり、当業者に公知のその等価物等を含む。
【０１０１】
本明細書において「約」が付いている値またはパラメータへの言及は、その値またはパラメータ自体を対象とする実施形態を含む（説明する）。例えば、「約Ｘ」に言及する説明は、「Ｘ」の説明を含む。
【０１０２】
本明細書に記載の本発明の態様および変更形態は、態様および変更形態「からなる」および／または「から本質的になる」ことを含むと理解される。
【０１０３】
別段定義されない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語および科学用語は、本発明が属する分野の技術者によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書に記載のものと類似のまたは等しいいずれの方法および材料も、本発明の実施または試験で使用することができるが、好ましい方法および材料をここに記載する。本明細書で言及されるあらゆる刊行物は、引用されている刊行物に関連する方法および／または材料を開示し説明するために、参照によって本明細書に援用される。
【０１０４】
対象化合物を命名するために本明細書で使用される命名法は、本明細書の実施例において例示されている。この命名法は、一般的に、市販のＡｕｔｏＮｏｍソフトウェアを使用して導出されている。
【０１０５】
また、明らかにするために別個の実施形態の文脈において記載されている本発明のある特定の特色は、単一の実施形態において組み合わせて提供され得ると理解される。それとは逆に、簡潔にするために単一の実施形態の文脈において記載されている本発明の様々な特色は、別個にまたは任意の適切な部分的組合せで提供することもできる。変数によって表されている化学基に関する実施形態のすべての組合せは、このような組合せが、安定な化合物である化合物（すなわち単離され、特徴付けられ、生物活性について試験され得る化合物）を包含する程度まで、ありとあらゆる組合せが個々に明確に開示されているかのように、本発明によって具体的に包含され、本明細書に開示されている。さらに、このような変数を説明している実施形態に列挙されている化学基のすべての部分的組合せも、化学基のありとあらゆるこのような部分的組合せが本明細書に個々に明確に開示されているかのように、本発明によって具体的に包含され、本明細書に開示されている。
アンチセンスオリゴヌクレオチド
【０１０６】
アンチセンス技術の根本的な原理は、アンチセンスオリゴヌクレオチドが標的核酸にハイブリダイズし、転写、翻訳またはスプライシングに影響を及ぼすなどによって遺伝子発現をモジュレートする能力にある。遺伝子発現のこのモジュレーションは、具体的には例えば標的分解、占有率に基づく阻害（すなわち立体遮断剤（sterics））、またはそれら両方の組合せによって達成することができる。分解によるｍＲＮＡ標的機能のモジュレーションの一例は、ＤＮＡ様のアンチセンス化合物とのハイブリダイゼーション時の、標的ｍＲＮＡのＲＮａｓｅ  Ｈに基づく分解である。別の例は、立体障害に起因するｍＲＮＡ翻訳の妨害である。この配列特異性によって、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、様々な疾患（例えば細胞増殖性障害）のいずれか１つの病原性に関与する遺伝子の発現を選択的にモジュレートするための治療薬として魅力的なものになる。アンチセンス技術は、１つまたは複数の特異的遺伝子産物の発現を低減するのに有効な手段であり、したがっていくつかの治療上の適用において独自に有用であることを示し得る。本開示は、標的分解、占有率に基づく阻害（すなわち立体遮断剤）、またはそれら両方の組合せによって有効となり得るアンチセンスオリゴヌクレオチドを提供する。
【０１０７】
立体遮断機序を介して標的ｍＲＮＡ翻訳を防止するオリゴヌクレオチドについて、オリゴヌクレオチド標的ｍＲＮＡヘテロ二本鎖の形成は、ＲＮＡ代謝回転をもたらさないが（ＲＮＡｓｅ−Ｈ媒介性分解の場合と同様）、その代わりに、ＲＮＡプロセシング、核細胞質間輸送またはリボソームレベルのｍＲＮＡ自体の翻訳を妨げる。このことは、特にアンチセンスオリゴヌクレオチドが、標的ｍＲＮＡの翻訳開始領域（すなわちＳＴＡＲＴコドン上およびその周りの領域）を標的化する場合に当てはまる。
【０１０８】
ＲＮａｓｅ  Ｈ依存性オリゴヌクレオチドには、立体遮断性のオリゴヌクレオチドを上回る利点がある。その利点には、立体遮断機序に関するオリゴヌクレオチドの化学量論量と比較して、ＲＮａｓｅ  Ｈ依存機序では少量のオリゴヌクレオチドの使用で済むことが含まれる。ＲＮａｓｅ  Ｈ依存性オリゴヌクレオチドは、ｍＲＮＡに結合するときＲＮａｓｅ  Ｈによって切断されないが、放出され、ｍＲＮＡの新しいコピーを結合し、ＲＡＮａｓｅ  ＨによるｍＲＮＡの新しいコピーの切断を誘発する（すなわち再循環して戻る）のに利用可能であるため、ＲＮａｓｅ  Ｈ依存性オリゴヌクレオチドの量は触媒量である。
【０１０９】
Ｎ３’→Ｐ５’ホスホロジアミデート（ＮＰＮ）骨格を均一にまたは不均一に使用すると、オリゴヌクレオチド上の電荷を低減することができる。全オリゴヌクレオチドは、ＮＰＮ骨格を含有することができ、あるいはＮＰＮ骨格と、天然サブユニット間結合（リン酸）の骨格または修飾骨格もしくは非天然サブユニット間結合とのミックスが存在してもよい。ＮＰＮ骨格は、混合されると、天然サブユニット間結合（リン酸）の骨格、または修飾骨格もしくは非天然サブユニット間結合に隣接することができる。ある特定の実施形態では、ホスホロチオエート骨格内にＮＰＮ骨格のミックスが存在してもよい。
【０１１０】
ある特定の実施形態では、化合物は、ＮＰＮ結合である骨格の約３５〜１００％を含む。ある特定の実施形態では、化合物は、骨格の約３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、または１００％であるＮＰＮ結合を含む。コードｍＲＮＡに対するアンチセンス
【０１１１】
本明細書に開示のアンチセンスオリゴヌクレオチドのいずれかの配列は、特異的にハイブリダイズ可能な特異的遺伝子由来のｍＲＮＡに１００％相補的であり得るが、必ずしもそうである必要はない。一実施形態では、本実施形態のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、特異的遺伝子由来のｍＲＮＡに対して、少なくとも７０％、または少なくとも７５％、または少なくとも８０％、または少なくとも８５％の配列相補性を含む。他の実施形態では、本実施形態のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、それらが標的化する特異的遺伝子由来のｍＲＮＡに対して、少なくとも９０％の配列相補性を含み、さらには少なくとも９５％または少なくとも９９％の配列相補性を含む。例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチドの２０の核酸塩基のうちの１８が特異的遺伝子由来のｍＲＮＡに相補的であるアンチセンスオリゴヌクレオチドは、特異的にハイブリダイズし、９０パーセントの相補性を示す。この例では、残りの非相補的な核酸塩基は、相補的な核酸塩基とクラスター化するか、または相補的な核酸塩基が散在していてもよく、互いに連続する必要はなく、相補的な核酸塩基に連続している必要もない。標的核酸領域とのアンチセンス化合物の相補性のパーセントは、当技術分野で公知のＢＬＡＳＴプログラム（基本局所的アライメント検索ツール）およびＰｏｗｅｒＢＬＡＳＴプログラムを使用して、日常的に決定することができる（Altschulら、J.  Mol.  Biol、１９９０年、２１５巻、４０３〜４１０頁；ZhangおよびMadden、Genome  Res.、１９９７年、７巻、６４９〜６５６頁）。
【０１１２】
本明細書に開示のアンチセンスオリゴヌクレオチドのいずれかの一部の態様では、オリゴヌクレオチドは、約６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５ヌクレオチド長のいずれかから、２５、または３０、または５０、または１００ヌクレオチド長のいずれかまでである。別の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５ヌクレオチド長を含む。
【０１１３】
本明細書に開示のアンチセンスオリゴヌクレオチドのいずれかの他の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ｍＲＮＡの翻訳開始領域の部位において、特異的遺伝子由来のｍＲＮＡに相補的である（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％相補的であり、これらの値の間の任意のパーセンテージも含まれる）。本明細書に開示のアンチセンスオリゴヌクレオチドのいずれかの他の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、２つのエクソンが一緒になってスプライスされるｍＲＮＡ上の部位において、特異的遺伝子由来のｍＲＮＡに相補的である（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％相補的であり、これらの値の間の任意のパーセンテージも含まれる）。
【０１１４】
本明細書では、オリゴヌクレオチドが特異的タンパク質の発現を有効に低減または防止する、特異的サブユニット間結合を有するアンチセンスオリゴヌクレオチドが提供される。一部の態様では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、立体障害によって特異的遺伝子由来のｍＲＮＡの翻訳を低減または防止する。他の態様では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、特異的遺伝子由来のｍＲＮＡのＲＮａｓｅ−Ｈ媒介性分解によって、特異的遺伝子由来のｍＲＮＡの翻訳を低減または防止する。さらに他の態様では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、立体障害によって、および／または特異的遺伝子由来のｍＲＮＡのＲＮａｓｅ−Ｈ媒介性分解によって、特異的遺伝子由来のｍＲＮＡの翻訳を低減または防止する。一部の実施形態では、本明細書に開示のオリゴヌクレオチドのいずれかを細胞と接触させると、オリゴヌクレオチドと接触していない細胞と比較して、細胞における特異的遺伝子のタンパク質の相対的発現が、少なくとも約３５％超（例えば、両端を含み少なくとも約４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％であり、これらの値の間の任意のパーセンテージも含まれる）低減される。一部の実施形態では、本明細書に開示のオリゴヌクレオチドのいずれかを細胞と接触させると、オリゴヌクレオチドと接触していない細胞と比較して、細胞における特異的遺伝子のタンパク質の相対的発現が、少なくとも約３５％超〜４５％、４０％〜５０％、４５％〜５５％、５０％〜６０％、５５％〜６５％、６０％〜７０％、６５％〜７５％、７０％〜８０％、７５％〜８５％、８０％〜９０％、８５％〜９５％、または９０％〜１００％低減される。
【０１１５】
当技術分野で公知の方法は、アンチセンスオリゴヌクレオチドが、細胞における特異的タンパク質の発現を防止または低減するのに有効であるかどうかを決定するために使用することができる。これらには、限定なしに、ｍＲＮＡを評価する方法、例えば逆転写−定量的ＰＣＴ（ＲＴ−ｑＰＣＲ）、ノーザンブロット、ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション、マイクロアレイ、遺伝子発現の連続分析（ＳＡＧＥ）、またはＲＮＡ−Ｓｅｑが含まれる。細胞におけるある特定のタンパク質レベルを評価するための、当技術分野で公知の一般法、例えばウエスタンブロット、免疫組織化学的検査、酵素結合免疫吸着（immunosorbant）アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、放射免疫アッセイ（ＲＩＡ）、または２Ｄゲル電気泳動法後の定量的質量分析も含まれるが、これらに限定されない。
非コードＲＮＡに対するアンチセンス
【０１１６】
本開示は、非コード−＋ＲＮＡ、例えばマイクロＲＮＡを有効に標的化することができるアンチセンスオリゴヌクレオチドを提供する。マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）は、植物および動物において見出された小型非コードＲＮＡ分子であり、遺伝子発現の転写調節および転写後調節において機能する。小型非コードＲＮＡのモジュレーターが機能するとき、実施形態の組成物は、細胞の機能またはプロセスの制御および操作、例えばスプライシングの調節、染色体パッケージングまたはメチル化、発生タイミング事象の制御、特異的な生物学的経路への送達のタイミングに応じた標的ＲＮＡ発現レベルの増大または低下、ならびに翻訳制御または転写制御に実用性がある。さらに、実施形態の組成物は、ある特定の細胞内コンパートメント、例えば細胞質、核、核小体またはミトコンドリアにおいてそれらの効果を最適化するために、修飾することができる。
リボザイム
【０１１７】
本開示は、リボザイムとして有効に作用し得るアンチセンスオリゴヌクレオチドを提供する。リボザイムは、タンパク質酵素の作用に類似の、特異的な生化学的反応を実施することができるＲＮＡ分子である。ある特定の実施形態では、リボザイムは、それらが相補的な領域を有するｍＲＮＡなどの一本鎖核酸を切断することができるリボヌクレアーゼ活性を有する触媒ＲＮＡ分子である。したがって、リボザイム（例えば、ハンマーヘッドリボザイム（HaselhoffおよびGerlach、Nature、３３４巻：５８５〜５９１頁、１９８８年に記載されている））を使用して、ｍＲＮＡ転写物を触媒作用的に切断し、それによってｍＲＮＡによってコードされたタンパク質の翻訳を阻害することができる。リボザイムを設計し、生成する方法は、当技術分野で公知である（例えば、Scanlon、１９９９年、Therapeutic  Applications  of  Ribozymes、Humana  Press参照）。ある特定の遺伝子に対して特異性を有するリボザイムは、ヌクレオチド配列に基づいて設計することができる。化合物
式Ｉ
【０１１８】
本開示は、式（Ｉ）
【化１６】
2019065054.tif 000031
［式中、
Ｒ１は、水素、アミノ保護基、またはオリゴヌクレオチドであり、
Ｒ２は、水素、ヒドロキシル保護基、固体支持体、またはオリゴヌクレオチドであり、
各Ｒ３は、独立に、水素、ヒドロキシル、および−Ｏ−Ｒ３ａから選択され、
各Ｒ３ａは、−ＮＲ３ｂＲ３ｃ、イミダゾリル、−（ＣＨ２）ａＯ（ＣＨ２）ｂＮＲ３ｂＲ３ｃ、または−（ＣＨ２）ａＯＮＲ３ｄ（ＣＨ２）ｂＮＲ３ｂＲ３ｃにより任意選択で置換されているＣ１〜６アルキルであり、
各Ｒ３ｂは、水素またはＣ１〜２アルキルであり、
各Ｒ３ｃは、水素またはＣ１〜２アルキルであり、
各Ｒ３ｄは、水素またはＣ１〜２アルキルであり、
各ａは、１〜４から選択される整数であり、
各ｂは、１〜４から選択される整数であり、
各Ｒ４は、−ＮＲ４ａＲ４ｂにより任意選択で置換されているＣ１〜６アルキルであり、
Ｒ４ａは、水素もしくはＣ１〜２アルキルであり、Ｒ４ｂは、水素もしくはＣ１〜２アルキルであり、
各Ｒ５は、−ＮＲ５ａＲ５ｂにより任意選択で置換されているＣ１〜６アルキルであり、
Ｒ５ａは、水素もしくはＣ１〜２アルキルであり、Ｒ５ｂは、水素もしくはＣ１〜２アルキルであり、または
Ｒ４およびＲ５は、それらが結合する窒素と一緒になって、任意選択で置換されている単環式ヘテロシクリル環を形成し、
各Ｗは、独立に、Ｏ、Ｓ、およびＳｅから選択され、
各Ｂ１は、独立に、任意選択で保護されている複素環式塩基部分から選択され、
ｎは、１〜５０から選択される整数である］
の化合物またはその塩を提供する。
【０１１９】
式（Ｉ）のある特定の実施形態では、Ｒ１は、水素である。
【０１２０】
ある特定の実施形態では、Ｒ１は、アミノ保護基である。適切なアミノ保護基の例として、トリチル、ジメトキシトリチル、およびメトキシトリチルが挙げられる。ある特定の実施形態では、Ｒ１は、トリチルである。ある特定の実施形態では、Ｒ１は、メトキシトリチルである。
【０１２１】
ある特定の実施形態では、Ｒ１は、オリゴヌクレオチドである。オリゴヌクレオチドは、１〜５０ヌクレオシドを含むことができる。ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、約１〜約２５ヌクレオチド、または約１〜約２０ヌクレオチド長、または約１〜約１０ヌクレオチド長である。ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、３０、３５、４０、４５、または５０ヌクレオチドである。
【０１２２】
オリゴヌクレオチドのサブユニット間結合は、同じであっても、または異なっていてもよい。オリゴヌクレオチドのサブユニット間結合は、通常の３’−５’結合を有する、ホスホロチオエート、キラルホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホトリエステル、アミノアルキルホスホトリエステル、３’−アルキレンホスホネート、５’−アルキレンホスホネートおよびキラルホスホネートを含むメチルおよび他のアルキルホスホネート、ホスフィネート、３’−アミノホスホルアミデートおよびアミノアルキルホスホルアミデートを含むホスホルアミデート、チオホスホルアミデート、チオノアルキルホスホネート、チオノアルキルホスホトリエステル、チオホスフェート、セレノホスフェートおよびボラノホスフェート、これらの２’−５’連結類似体、ならびに逆極性を有するもの（ここで、１つまたは複数のサブユニット間結合は、３’−３’、５’−５’または２’−２’結合である）から選択することができる。ある特定の実施形態では、サブユニット間結合は、ホスフェートまたはホスホロチオエートである。
【０１２３】
ある特定の実施形態では、各Ｒ１は、
【化１７】
2019065054.tif 000032
ではなく、式中、Ｗは、Ｏ、Ｓ、またはＳｅであり、Ｘは、ＯＨまたはＳＨであり、Ｚは、ＯＨ、ＳＨ、ＣＨ３、またはＯＣ２Ｈ５である。
【０１２４】
式（Ｉ）のある特定の実施形態では、Ｒ２は、水素である。
【０１２５】
ある特定の実施形態では、Ｒ２は、固体支持体である。適切な固体支持体は、ガラスまたはポリマーから作製され得る。例えば、適切な固体支持体は、ポリスチレン（例えばジビニルベンゼンで架橋されたポリスチレン）、制御細孔ガラス（ＣＰＧ）、またはＴｅｎｔａＧｅｌ（登録商標）（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）から作製され得る。適切な固体支持体には、スライド、ビーズ、チップ、粒子、ストランド、ゲル、シート、チューブ、球、容器、毛細管、パッド、スライス、フィルム、プレート状のもの等が含まれるが、これらに限定されない。ある特定の実施形態では、固体支持体は、生物学的なもの、非生物学的なもの、有機、無機、またはそれらの任意の組合せであり得る。
【０１２６】
ある特定の実施形態では、Ｒ２は、ヒドロキシル保護基である。適切なヒドロキシル保護基の例として、ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチルシリル、メトキシメチル、テトラヒドロピラニル、ｔｅｒｔ−ブチル、ベンジル、およびｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリルが挙げられる。ある特定の実施形態では、Ｒ２は、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルである。
【０１２７】
ある特定の実施形態では、Ｒ２は、オリゴヌクレオチドである。オリゴヌクレオチドは、１〜５０ヌクレオシドを含むことができる。ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、約１〜約２５ヌクレオチド、または約１〜約２０ヌクレオチド長、または約１〜約１０ヌクレオチド長である。ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、３０、３５、４０、４５、または５０ヌクレオチドである。
【０１２８】
オリゴヌクレオチドのサブユニット間結合は、同じであっても、または異なっていてもよい。オリゴヌクレオチドのサブユニット間結合は、通常の３’−５’結合を有する、ホスホロチオエート、キラルホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホトリエステル、アミノアルキルホスホトリエステル、３’−アルキレンホスホネート、５’−アルキレンホスホネートおよびキラルホスホネートを含むメチルおよび他のアルキルホスホネート、ホスフィネート、３’−アミノホスホルアミデートおよびアミノアルキルホスホルアミデートを含むホスホルアミデート、チオホスホルアミデート、チオノアルキルホスホネート、チオノアルキルホスホトリエステル、チオホスフェート、セレノホスフェートおよびボラノホスフェート、これらの２’−５’連結類似体、ならびに逆極性を有するもの（ここで、１つまたは複数のサブユニット間結合は、３’−３’、５’−５’または２’−２’結合である）から選択することができる。ある特定の実施形態では、サブユニット間結合は、ホスフェートまたはホスホロチオエートである。
【０１２９】
ある特定の場合、Ｒ１およびＲ２は、水素である。ある特定の場合、Ｒ１は、水素であり、Ｒ２は、ヒドロキシル保護基である。ある特定の場合、Ｒ１は、アミノ保護基であり、Ｒ２は、水素である。ある特定の場合、Ｒ１は、アミノ保護基であり、Ｒ２は、固体支持体である。ある特定の場合、Ｒ１は、アミノ保護基であり、Ｒ２は、ヒドロキシル保護基である。
【０１３０】
式（Ｉ）では、各Ｒ３は、独立に、水素、ヒドロキシル、および−Ｏ−Ｒ３ａから選択され、各Ｒ３ａは、−ＮＲ３ｂＲ３ｃ、イミダゾリル、−（ＣＨ２）ａＯ（ＣＨ２）ｂＮＲ３ｂＲ３ｃ、または−（ＣＨ２）ａＯＮＲ３ｄ（ＣＨ２）ｂＮＲ３ｂＲ３ｃにより任意選択で置換されているＣ１〜６アルキルである。
【０１３１】
ある特定の実施形態では、各Ｒ３は、水素である。ある特定の実施形態では、各Ｒ３は、ヒドロキシルである。ある特定の実施形態では、各Ｒ３は、−Ｏ−Ｒ３ａである。ある特定の場合、少なくとも１つのＲ３は、−Ｏ−Ｒ３ａである。
【０１３２】
ある特定の実施形態では、少なくとも１つのＲ３ａは、Ｃ１〜６アルキル、例えばメチル、エチル、またはプロピルである。ある特定の実施形態では、少なくとも１つのＲ３ａは、−ＮＲ３ｂＲ３ｃ、イミダゾリル、−（ＣＨ２）ａＯ（ＣＨ２）ｂＮＲ３ｂＲ３ｃ、または−（ＣＨ２）ａＯＮＲ３ｄ（ＣＨ２）ｂＮＲ３ｂＲ３ｃで置換されているＣ１〜６アルキルである。
【０１３３】
ある特定の実施形態では、Ｒ３ｂは、水素である。ある特定の実施形態では、Ｒ３ｂは、メチルまたはエチルである。ある特定の実施形態では、Ｒ３ｃは、水素である。ある特定の実施形態では、Ｒ３ｃは、メチルまたはエチルである。ある特定の実施形態では、Ｒ３ｄは、水素である。ある特定の実施形態では、Ｒ３ｄは、メチルまたはエチルである。
【０１３４】
ある特定の実施形態では、ａは１である。ある特定の実施形態では、ａは２である。ある特定の実施形態では、ａは３である。ある特定の実施形態では、ａは４である。
【０１３５】
ある特定の実施形態では、ｂは１である。ある特定の実施形態では、ｂは２である。ある特定の実施形態では、ｂは３である。ある特定の実施形態では、ｂは４である。
【０１３６】
式（Ｉ）のある特定の実施形態では、各Ｒ４は、−ＮＲ４ａＲ４ｂにより任意選択で置換されているＣ１〜６アルキルであり、Ｒ４ａは、水素またはＣ１〜２アルキルであり、Ｒ４ｂは、水素またはＣ１〜２アルキルである。ある特定の実施形態では、各Ｒ４は、Ｃ１〜６アルキル、例えばメチル、エチル、またはプロピルである。ある特定の実施形態では、各Ｒ４は、メチルである。ある特定の実施形態では、各Ｒ４は、エチルである。
【０１３７】
式（Ｉ）のある特定の実施形態では、各Ｒ５は、−ＮＲ５ａＲ５ｂにより任意選択で置換されているＣ１〜６アルキルであり、Ｒ５ａは、水素またはＣ１〜２アルキルであり、Ｒ５ｂは、水素またはＣ１〜２アルキルである。ある特定の実施形態では、各Ｒ５は、Ｃ１〜６アルキル、例えばメチル、エチル、またはプロピルである。ある特定の実施形態では、各Ｒ５は、メチルである。ある特定の実施形態では、各Ｒ５は、エチルである。
【０１３８】
式（Ｉ）のある特定の実施形態では、Ｒ４およびＲ５は、それらが結合する窒素と一緒になって、任意選択で置換されている単環式ヘテロシクリル環を形成する。ある特定の場合、任意選択で置換されている単環式ヘテロシクリル環は、４〜８員の環、例えば４、５、６、７または８員環である。ある特定の場合、Ｒ４およびＲ５が結合している窒素を含む、任意選択で置換されている単環式ヘテロシクリル環は、１、２または３個のヘテロ原子を含む。ある特定の場合、Ｒ４およびＲ５が結合している窒素を含む、任意選択で置換されている単環式ヘテロシクリル環は、窒素、酸素および硫黄から選択される１、２または３個のヘテロ原子を含む。ある特定の場合、Ｒ４およびＲ５が結合している窒素を含む、任意選択で置換されている単環式ヘテロシクリル環は、１個の窒素を含む６員環である。ある特定の場合、Ｒ４およびＲ５が結合している窒素を含む、任意選択で置換されている単環式ヘテロシクリル環は、１個の窒素を含む５員環である。ある特定の場合、単環式ヘテロシクリル環は、Ｃ１〜６アルキル（例えばメチル、エチル、またはプロピル）、スペルミン、またはスペルミジンで置換されている。ある特定の場合、Ｒ４およびＲ５が結合している窒素を含む単環式ヘテロシクリル環は、２個の窒素を含む６員環であり、Ｃ１〜６アルキル（例えばメチル、エチル、またはプロピル）、スペルミン、またはスペルミジンで置換されている。ある特定の場合、Ｒ４およびＲ５が結合している窒素を含む単環式ヘテロシクリル環は、２個の窒素を含む５員環であり、Ｃ１〜６アルキル（例えばメチル、エチル、またはプロピル）、スペルミン、またはスペルミジンで置換されている。
【０１３９】
ある特定の場合、Ｒ４およびＲ５は、メチルである。ある特定の場合、Ｒ４およびＲ５は、エチルである。ある特定の場合、Ｒ４およびＲ５は、−ＮＲ５ａＲ５ｂで置換されているＣ１アルキルである。
【０１４０】
式（Ｉ）のある特定の実施形態では、各Ｗは、Ｏである。ある特定の実施形態では、各Ｗは、Ｓである。ある特定の実施形態では、各Ｗは、Ｓｅである。ある特定の実施形態では、少なくとも１つのＷは、Ｏである。ある特定の実施形態では、少なくとも１つのＷは、Ｓである。ある特定の実施形態では、少なくとも１つのＷは、Ｓｅである。
【０１４１】
式（Ｉ）では、各Ｂ１は、独立に、任意選択で保護されている複素環式塩基部分から選択される。ある特定の実施形態では、各Ｂ１は、独立に、プリンおよびピリミジンから選択される。ある特定の実施形態では、少なくとも１つのＢ１は、プリンである。ある特定の実施形態では、少なくとも１つのＢ１は、ピリミジンである。ある特定の実施形態では、各Ｂ１は、天然に生じる核酸塩基である。ある特定の実施形態では、少なくとも１つのＢ１は、修飾されているまたは天然に生じない核酸塩基である。ある特定の実施形態では、各Ｂ１は、修飾されているまたは天然に生じない核酸塩基である。
【０１４２】
ある特定の実施形態では、各Ｂ１は、独立に、Ｔｈｙ（チミン）、ＢｚＣｙｔ（４−ベンゾイル−シトシン）、ＢｚＡｄｅ（６−ベンゾイル−アデニン）、ＡｄｅＤＭＦ（６−ジメチルホルムアミジノ−アデニン）、ｉＢｕＧｕａ（２−イソブチリル−グアニン）、およびＧｕａＤＭＦ（２−ジメチルホルムアミジノ−グアニン）から選択される。ある特定の実施形態では、各Ｂ１は、独立に、アデニン、グアニン、シトシン、チミン、およびウラシルから選択される。
【０１４３】
ある特定の実施形態では、各Ｂ１は、アザプリンではない。ある特定の実施形態では、各Ｂ１は、フルオロ置換アザプリンではない。
【０１４４】
式（Ｉ）のある特定の実施形態では、ｎは、１〜５０、例えば１〜１０、１〜２０、１〜３０、１〜４０、または１〜５０から選択される整数である。ある特定の実施形態では、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、３０、３５、４０、４５、または５０である。
【０１４５】
ある特定の場合、Ｒ１およびＲ２は、水素であり、Ｒ４およびＲ５は、メチルである。ある特定の場合、Ｒ１およびＲ２は、水素であり、Ｒ４およびＲ５は、エチルである。
【０１４６】
ある特定の場合、Ｒ１およびＲ２は、水素であり、Ｒ４およびＲ５は、メチルであり、各Ｒ３は、水素である。ある特定の場合、Ｒ１およびＲ２は、水素であり、Ｒ４およびＲ５は、エチルであり、各Ｒ３は、水素である。
【０１４７】
ある特定の場合、Ｒ１およびＲ２は、水素であり、Ｒ４およびＲ５は、メチルであり、各Ｒ３は、ヒドロキシルである。ある特定の場合、Ｒ１およびＲ２は、水素であり、Ｒ４およびＲ５は、エチルであり、各Ｒ３は、ヒドロキシルである。
【０１４８】
ある特定の場合、Ｒ１およびＲ２は、水素であり、Ｒ４およびＲ５は、メチルであり、各Ｂ１は、独立に、Ｔｈｙ（チミン）、ＢｚＣｙｔ（４−ベンゾイル−シトシン）、ＢｚＡｄｅ（６−ベンゾイル−アデニン）、ＡｄｅＤＭＦ（６−ジメチルホルムアミジノ−アデニン）、ｉＢｕＧｕａ（２−イソブチリル−グアニン）、およびＧｕａＤＭＦ（２−ジメチルホルムアミジノ−グアニン）から選択される。ある特定の場合、Ｒ１およびＲ２は、水素であり、Ｒ４およびＲ５は、メチルであり、各Ｂ１は、独立に、アデニン、グアニン、シトシン、チミン、およびウラシルから選択される。
【０１４９】
ある特定の場合、Ｒ１およびＲ２は、水素であり、Ｒ４およびＲ５は、エチルであり、各Ｂ１は、独立に、Ｔｈｙ（チミン）、ＢｚＣｙｔ（４−ベンゾイル−シトシン）、ＢｚＡｄｅ（６−ベンゾイル−アデニン）、ＡｄｅＤＭＦ（６−ジメチルホルムアミジノ−アデニン）、ｉＢｕＧｕａ（２−イソブチリル−グアニン）、およびＧｕａＤＭＦ（２−ジメチルホルムアミジノ−グアニン）から選択される。ある特定の場合、Ｒ１およびＲ２は、水素であり、Ｒ４およびＲ５は、エチルであり、各Ｂ１は、独立に、アデニン、グアニン、シトシン、チミン、およびウラシルから選択される。
【０１５０】
ある特定の実施形態では、化合物は、ＮＰＮ結合である骨格の約３５〜１００％を含む。ある特定の実施形態では、化合物は、骨格の約３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、または１００％であるＮＰＮ結合を含む。式ＩＩ
【０１５１】
本開示は、式（ＩＩ）
【化１８】
2019065054.tif 000033
［式中、
Ｒ１は、水素またはアミノ保護基であり、
Ｒ３は、独立に、水素、ヒドロキシル、および−Ｏ−Ｒ３ａから選択され、
Ｒ３ａは、−ＮＲ３ｂＲ３ｃ、イミダゾリル、−（ＣＨ２）ａＯ（ＣＨ２）ｂＮＲ３ｂＲ３ｃ、または−（ＣＨ２）ａＯＮＲ３ｄ（ＣＨ２）ｂＮＲ３ｂＲ３ｃにより任意選択で置換されているＣ１〜６アルキルであり、
Ｒ３ｂは、水素またはＣ１〜２アルキルであり、
Ｒ３ｃは、水素またはＣ１〜２アルキルであり、
Ｒ３ｄは、水素またはＣ１〜２アルキルであり、
ａは、１〜４から選択される整数であり、
ｂは、１〜４から選択される整数であり、
Ｒ４は、−ＮＲ４ａＲ４ｂにより任意選択で置換されているＣ１〜６アルキルであり、
Ｒ４ａは、水素もしくはＣ１〜２アルキルであり、Ｒ４ｂは、水素もしくはＣ１〜２アルキルであり、
Ｒ５は、−ＮＲ５ａＲ５ｂにより任意選択で置換されているＣ１〜６アルキルであり、
Ｒ５ａは、水素もしくはＣ１〜２アルキルであり、Ｒ５ｂは、水素もしくはＣ１〜２アルキルであり、または
Ｒ４およびＲ５は、それらが結合する窒素と一緒になって、任意選択で置換されている単環式ヘテロシクリル環を形成し、
Ｒ６は、脱離基であり、
Ｗは、独立に、Ｏ、Ｓ、およびＳｅから選択され、
Ｂ１は、任意選択で保護されている複素環式塩基部分である］
の化合物またはその塩を提供する。
【０１５２】
式（ＩＩ）のある特定の実施形態では、Ｒ１は、水素である。
【０１５３】
ある特定の実施形態では、Ｒ１は、アミノ保護基である。適切なアミノ保護基の例として、トリチル、ジメトキシトリチル、およびメトキシトリチルが挙げられる。ある特定の実施形態では、Ｒ１は、トリチルである。ある特定の実施形態では、Ｒ１は、メトキシトリチルである。
【０１５４】
ある特定の実施形態では、各Ｒ１は、
【化１９】
2019065054.tif 000034
ではなく、式中、Ｗは、Ｏ、Ｓ、またはＳｅであり、Ｘは、ＯＨまたはＳＨであり、Ｚは、ＯＨ、ＳＨ、ＣＨ３、またはＯＣ２Ｈ５である。
【０１５５】
式（ＩＩ）では、Ｒ３は、水素、ヒドロキシル、および−Ｏ−Ｒ３ａから選択され、Ｒ３ａは、−ＮＲ３ｂＲ３ｃ、イミダゾリル、−（ＣＨ２）ａＯ（ＣＨ２）ｂＮＲ３ｂＲ３ｃ、または−（ＣＨ２）ａＯＮＲ３ｄ（ＣＨ２）ｂＮＲ３ｂＲ３ｃにより任意選択で置換されているＣ１〜６アルキルである。
【０１５６】
ある特定の実施形態では、Ｒ３は、水素である。ある特定の実施形態では、Ｒ３は、ヒドロキシルである。ある特定の実施形態では、Ｒ３は、−Ｏ−Ｒ３ａである。
【０１５７】
ある特定の実施形態では、Ｒ３ａは、Ｃ１〜６アルキル、例えばメチル、エチル、またはプロピルである。ある特定の実施形態では、Ｒ３ａは、−ＮＲ３ｂＲ３ｃ、イミダゾリル、−（ＣＨ２）ａＯ（ＣＨ２）ｂＮＲ３ｂＲ３ｃ、または−（ＣＨ２）ａＯＮＲ３ｄ（ＣＨ２）ｂＮＲ３ｂＲ３ｃで置換されているＣ１〜６アルキルである。
【０１５８】
ある特定の実施形態では、Ｒ３ｂは、水素である。ある特定の実施形態では、Ｒ３ｂは、メチルまたはエチルである。ある特定の実施形態では、Ｒ３ｃは、水素である。ある特定の実施形態では、Ｒ３ｃは、メチルまたはエチルである。ある特定の実施形態では、Ｒ３ｄは、水素である。ある特定の実施形態では、Ｒ３ｄは、メチルまたはエチルである。
【０１５９】
ある特定の実施形態では、ａは１である。ある特定の実施形態では、ａは２である。ある特定の実施形態では、ａは３である。ある特定の実施形態では、ａは４である。
【０１６０】
ある特定の実施形態では、ｂは１である。ある特定の実施形態では、ｂは２である。ある特定の実施形態では、ｂは３である。ある特定の実施形態では、ｂは４である。
【０１６１】
式（ＩＩ）のある特定の実施形態では、Ｒ４は、−ＮＲ４ａＲ４ｂにより任意選択で置換されているＣ１〜６アルキルであり、Ｒ４ａは、水素またはＣ１〜２アルキルであり、Ｒ４ｂは、水素またはＣ１〜２アルキルである。ある特定の実施形態では、Ｒ４は、Ｃ１〜６アルキル、例えばメチル、エチル、またはプロピルである。ある特定の実施形態では、Ｒ４は、メチルである。ある特定の実施形態では、Ｒ４は、エチルである。
【０１６２】
式（ＩＩ）のある特定の実施形態では、Ｒ５は、−ＮＲ５ａＲ５ｂにより任意選択で置換されているＣ１〜６アルキルであり、Ｒ５ａは、水素またはＣ１〜２アルキルであり、
Ｒ５ｂは、水素またはＣ１〜２アルキルである。ある特定の実施形態では、Ｒ５は、Ｃ１〜６アルキル、例えばメチル、エチル、またはプロピルである。ある特定の実施形態では、Ｒ５は、メチルである。ある特定の実施形態では、Ｒ５は、エチルである。
【０１６３】
式（ＩＩ）のある特定の実施形態では、Ｒ４およびＲ５は、それらが結合する窒素と一緒になって、任意選択で置換されている単環式ヘテロシクリル環を形成する。ある特定の場合、任意選択で置換されている単環式ヘテロシクリル環は、４〜８員の環、例えば４、５、６、７または８員環である。ある特定の場合、Ｒ４およびＲ５が結合している窒素を含む、任意選択で置換されている単環式ヘテロシクリル環は、１、２または３個のヘテロ原子を含む。ある特定の場合、Ｒ４およびＲ５が結合している窒素を含む、任意選択で置換されている単環式ヘテロシクリル環は、窒素、酸素および硫黄から選択される１、２または３個のヘテロ原子を含む。ある特定の場合、Ｒ４およびＲ５が結合している窒素を含む、任意選択で置換されている単環式ヘテロシクリル環は、１個の窒素を含む６員環である。ある特定の場合、Ｒ４およびＲ５が結合している窒素を含む、任意選択で置換されている単環式ヘテロシクリル環は、１個の窒素を含む５員環である。ある特定の場合、単環式ヘテロシクリル環は、Ｃ１〜６アルキル（例えばメチル、エチル、またはプロピル）、スペルミン、またはスペルミジンで置換されている。ある特定の場合、Ｒ４およびＲ５が結合している窒素を含む単環式ヘテロシクリル環は、２個の窒素を含む６員環であり、Ｃ１〜６アルキル（例えばメチル、エチル、またはプロピル）、スペルミン、またはスペルミジンで置換されている。ある特定の場合、Ｒ４およびＲ５が結合している窒素を含む単環式ヘテロシクリル環は、２個の窒素を含む５員環であり、Ｃ１〜６アルキル（例えばメチル、エチル、またはプロピル）、スペルミン、またはスペルミジンで置換されている。
【０１６４】
ある特定の場合、Ｒ４およびＲ５は、メチルである。ある特定の場合、Ｒ４およびＲ５は、エチルである。ある特定の場合、Ｒ４およびＲ５は、−ＮＲ５ａＲ５ｂで置換されているＣ１アルキルである。
【０１６５】
式（ＩＩ）では、Ｒ６は、脱離基である。脱離基は、求核置換を受ける基である。適切な脱離基は、当技術分野で周知であり、例えば、「Advanced  Organic  Chemistry」、Jerry  March、第５版、３５１〜３５７頁、John  Wiley  and  Sons、N.Y.を参照されたい。脱離基の例として、クロロ、ヨード、ブロモ、フルオロ、メタンスルホニルオキシ（メシルオキシ）、トシルオキシ、トリフリルオキシ、ニトロ−フェニルスルホニルオキシ（ノシルオキシ）、ブロモ−フェニルスルホニルオキシ（ブロシルオキシ）、トリアゾリル、ベンゾトリアゾリル、ヒドロキシベンゾトリアゾリルエステル、および１−（メシチレン−２−スルホニル）−３−ニトロ−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール（ＭＳＮＴ）が挙げられる。ある特定の実施形態では、Ｒ６は、ハロゲン、例えばクロロ、ブロモ、またはヨードである。
【０１６６】
式（ＩＩ）のある特定の実施形態では、Ｗは、Ｏである。ある特定の実施形態では、Ｗは、Ｓである。ある特定の実施形態では、Ｗは、Ｓｅである。
【０１６７】
式（ＩＩ）では、Ｂ１は、独立に、任意選択で保護されている複素環式塩基部分から選択される。ある特定の実施形態では、Ｂ１は、独立に、プリンおよびピリミジンから選択される。ある特定の実施形態では、Ｂ１は、プリンである。ある特定の実施形態では、Ｂ１は、ピリミジンである。ある特定の実施形態では、Ｂ１は、天然に生じる核酸塩基である。ある特定の実施形態では、Ｂ１は、修飾されているまたは天然に生じない核酸塩基である。
【０１６８】
ある特定の実施形態では、各Ｂ１は、独立に、Ｔｈｙ（チミン）、ＢｚＣｙｔ（４−ベンゾイル−シトシン）、ＢｚＡｄｅ（６−ベンゾイル−アデニン）、ＡｄｅＤＭＦ（６−ジメチルホルムアミジノ−アデニン）、ｉＢｕＧｕａ（２−イソブチリル−グアニン）、およびＧｕａＤＭＦ（２−ジメチルホルムアミジノ−グアニン）から選択される。ある特定の実施形態では、各Ｂ１は、独立に、アデニン、グアニン、シトシン、チミン、およびウラシルから選択される。
【０１６９】
ある特定の実施形態では、Ｂ１は、アザプリンではない。ある特定の実施形態では、Ｂ１は、フルオロ置換アザプリンではない。
【０１７０】
ある特定の場合、Ｒ１は、水素であり、Ｒ４およびＲ５は、メチルであり、Ｒ３は、水素である。ある特定の場合、Ｒ１は、水素であり、Ｒ４およびＲ５は、エチルであり、Ｒ３は、水素である。
【０１７１】
ある特定の場合、Ｒ１は、水素であり、Ｒ４およびＲ５は、メチルであり、Ｒ３は、ヒドロキシルである。ある特定の場合、Ｒ１は、水素であり、Ｒ４およびＲ５は、エチルであり、Ｒ３は、ヒドロキシルである。
【０１７２】
ある特定の場合、Ｒ１は、水素であり、Ｒ４およびＲ５は、メチルであり、各Ｂ１は、独立に、Ｔｈｙ（チミン）、ＢｚＣｙｔ（４−ベンゾイル−シトシン）、ＢｚＡｄｅ（６−ベンゾイル−アデニン）、ＡｄｅＤＭＦ（６−ジメチルホルムアミジノ−アデニン）、ｉＢｕＧｕａ（２−イソブチリル−グアニン）、およびＧｕａＤＭＦ（２−ジメチルホルムアミジノ−グアニン）から選択される。ある特定の場合、Ｒ１は、水素であり、Ｒ４およびＲ５は、メチルであり、各Ｂ１は、独立に、アデニン、グアニン、シトシン、チミン、およびウラシルから選択される。
【０１７３】
ある特定の場合、Ｒ１は、水素であり、Ｒ４およびＲ５は、エチルであり、各Ｂ１は、独立に、Ｔｈｙ（チミン）、ＢｚＣｙｔ（４−ベンゾイル−シトシン）、ＢｚＡｄｅ（６−ベンゾイル−アデニン）、ＡｄｅＤＭＦ（６−ジメチルホルムアミジノ−アデニン）、ｉＢｕＧｕａ（２−イソブチリル−グアニン）、およびＧｕａＤＭＦ（２−ジメチルホルムアミジノ−グアニン）から選択される。ある特定の場合、Ｒ１は、水素であり、Ｒ４およびＲ５は、エチルであり、各Ｂ１は、独立に、アデニン、グアニン、シトシン、チミン、およびウラシルから選択される。
式ＩＩＩ
【０１７４】
本開示は、式（ＩＩＩ）
【化２０】
2019065054.tif 000035
［式中、
Ｒ１は、水素またはアミノ保護基であり、
Ｒ２は、水素、ヒドロキシル保護基、または固体支持体であり、
各Ｒ３は、独立に、水素、ヒドロキシル、および−Ｏ−Ｒ３ａから選択され、
各Ｒ３ａは、−ＮＲ３ｂＲ３ｃ、イミダゾリル、−（ＣＨ２）ａＯ（ＣＨ２）ｂＮＲ３ｂＲ３ｃ、または−（ＣＨ２）ａＯＮＲ３ｄ（ＣＨ２）ｂＮＲ３ｂＲ３ｃにより任意選択で置換されているＣ１〜６アルキルであり、
各Ｒ３ｂは、水素またはＣ１〜２アルキルであり、
各Ｒ３ｃは、水素またはＣ１〜２アルキルであり、
各Ｒ３ｄは、水素またはＣ１〜２アルキルであり、
各ａは、１〜４から選択される整数であり、
各ｂは、１〜４から選択される整数であり、
各Ｒ４は、−ＮＲ４ａＲ４ｂにより任意選択で置換されているＣ１〜６アルキルであり、
Ｒ４ａは、水素もしくはＣ１〜２アルキルであり、Ｒ４ｂは、水素もしくはＣ１〜２アルキルであり、
各Ｒ５は、−ＮＲ５ａＲ５ｂにより任意選択で置換されているＣ１〜６アルキルであり、
Ｒ５ａは、水素もしくはＣ１〜２アルキルであり、Ｒ５ｂは、水素もしくはＣ１〜２アルキルであり、または
Ｒ４およびＲ５は、それらが結合する窒素と一緒になって、任意選択で置換されている単環式ヘテロシクリル環を形成し、
各Ｗは、独立に、Ｏ、Ｓ、およびＳｅから選択され、
各Ｂ１は、独立に、任意選択で保護されている複素環式塩基部分から選択される］
の化合物またはその塩を提供する。
【０１７５】
式（ＩＩＩ）のある特定の実施形態では、Ｒ１は、水素である。
【０１７６】
ある特定の実施形態では、Ｒ１は、アミノ保護基である。適切なアミノ保護基の例として、トリチル、ジメトキシトリチル、およびメトキシトリチルが挙げられる。ある特定の実施形態では、Ｒ１は、トリチルである。ある特定の実施形態では、Ｒ１は、メトキシトリチルである。
【０１７７】
ある特定の実施形態では、各Ｒ１は、
【化２１】
2019065054.tif 000036
ではなく、式中、Ｗは、Ｏ、Ｓ、またはＳｅであり、Ｘは、ＯＨまたはＳＨであり、Ｚは、ＯＨ、ＳＨ、ＣＨ３、またはＯＣ２Ｈ５である。
【０１７８】
式（ＩＩＩ）のある特定の実施形態では、Ｒ２は、水素である。
【０１７９】
ある特定の実施形態では、Ｒ２は、固体支持体である。適切な固体支持体は、ガラスまたはポリマーから作製され得る。例えば、適切な固体支持体は、ポリスチレン（例えばジビニルベンゼンで架橋されたポリスチレン）、制御細孔ガラス（ＣＰＧ）、またはＴｅｎｔａＧｅｌ（登録商標）（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）から作製され得る。適切な固体支持体には、スライド、ビーズ、チップ、粒子、ストランド、ゲル、シート、チューブ、球、容器、毛細管、パッド、スライス、フィルム、プレート状のもの等が含まれるが、これらに限定されない。ある特定の実施形態では、固体支持体は、生物学的なもの、非生物学的なもの、有機、無機、またはそれらの任意の組合せであり得る。
【０１８０】
ある特定の実施形態では、Ｒ２は、ヒドロキシル保護基である。適切なヒドロキシル保護基の例として、ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチルシリル、メトキシメチル、テトラヒドロピラニル、ｔｅｒｔ−ブチル、ベンジル、およびｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリルが挙げられる。ある特定の実施形態では、Ｒ２は、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルである。
【０１８１】
ある特定の場合、Ｒ１およびＲ２は、水素である。ある特定の場合、Ｒ１は、水素であり、Ｒ２は、ヒドロキシル保護基である。ある特定の場合、Ｒ１は、アミノ保護基であり、Ｒ２は、水素である。ある特定の場合、Ｒ１は、アミノ保護基であり、Ｒ２は、固体支持体である。ある特定の場合、Ｒ１は、アミノ保護基であり、Ｒ２は、ヒドロキシル保護基である。
【０１８２】
式（ＩＩＩ）では、各Ｒ３は、独立に、水素、ヒドロキシル、および−Ｏ−Ｒ３ａから選択され、各Ｒ３ａは、−ＮＲ３ｂＲ３ｃ、イミダゾリル、−（ＣＨ２）ａＯ（ＣＨ２）ｂＮＲ３ｂＲ３ｃ、または−（ＣＨ２）ａＯＮＲ３ｄ（ＣＨ２）ｂＮＲ３ｂＲ３ｃにより任意選択で置換されているＣ１〜６アルキルである。
【０１８３】
ある特定の実施形態では、各Ｒ３は、水素である。ある特定の実施形態では、各Ｒ３は、ヒドロキシルである。ある特定の実施形態では、各Ｒ３は、−Ｏ−Ｒ３ａである。ある特定の場合、少なくとも１つのＲ３は、−Ｏ−Ｒ３ａである。
【０１８４】
ある特定の実施形態では、少なくとも１つのＲ３ａは、Ｃ１〜６アルキル、例えばメチル、エチル、またはプロピルである。ある特定の実施形態では、少なくとも１つのＲ３ａは、−ＮＲ３ｂＲ３ｃ、イミダゾリル、−（ＣＨ２）ａＯ（ＣＨ２）ｂＮＲ３ｂＲ３ｃ、または−（ＣＨ２）ａＯＮＲ３ｄ（ＣＨ２）ｂＮＲ３ｂＲ３ｃで置換されているＣ１〜６アルキルである。
【０１８５】
ある特定の実施形態では、Ｒ３ｂは、水素である。ある特定の実施形態では、Ｒ３ｂは、メチルまたはエチルである。ある特定の実施形態では、Ｒ３ｃは、水素である。ある特定の実施形態では、Ｒ３ｃは、メチルまたはエチルである。ある特定の実施形態では、Ｒ３ｄは、水素である。ある特定の実施形態では、Ｒ３ｄは、メチルまたはエチルである。
【０１８６】
ある特定の実施形態では、ａは１である。ある特定の実施形態では、ａは２である。ある特定の実施形態では、ａは３である。ある特定の実施形態では、ａは４である。
【０１８７】
ある特定の実施形態では、ｂは１である。ある特定の実施形態では、ｂは２である。ある特定の実施形態では、ｂは３である。ある特定の実施形態では、ｂは４である。
【０１８８】
式（ＩＩＩ）のある特定の実施形態では、Ｒ４は、−ＮＲ４ａＲ４ｂにより任意選択で置換されているＣ１〜６アルキルであり、Ｒ４ａは、水素またはＣ１〜２アルキルであり、Ｒ４ｂは、水素またはＣ１〜２アルキルである。ある特定の実施形態では、Ｒ４は、Ｃ１〜６アルキル、例えばメチル、エチル、またはプロピルである。ある特定の実施形態では、Ｒ４は、メチルである。ある特定の実施形態では、Ｒ４は、エチルである。
【０１８９】
式（ＩＩＩ）のある特定の実施形態では、Ｒ５は、−ＮＲ５ａＲ５ｂにより任意選択で置換されているＣ１〜６アルキルであり、Ｒ５ａは、水素またはＣ１〜２アルキルであり、Ｒ５ｂは、水素またはＣ１〜２アルキルである。ある特定の実施形態では、Ｒ５は、Ｃ１〜６アルキル、例えばメチル、エチル、またはプロピルである。ある特定の実施形態では、Ｒ５は、メチルである。ある特定の実施形態では、各Ｒ５は、エチルである。
【０１９０】
式（ＩＩＩ）のある特定の実施形態では、Ｒ４およびＲ５は、それらが結合する窒素と一緒になって、任意選択で置換されている単環式ヘテロシクリル環を形成する。ある特定の場合、任意選択で置換されている単環式ヘテロシクリル環は、４〜８員の環、例えば４、５、６、７または８員環である。ある特定の場合、Ｒ４およびＲ５が結合している窒素を含む、任意選択で置換されている単環式ヘテロシクリル環は、１、２または３個のヘテロ原子を含む。ある特定の場合、Ｒ４およびＲ５が結合している窒素を含む、任意選択で置換されている単環式ヘテロシクリル環は、窒素、酸素および硫黄から選択される１、２または３個のヘテロ原子を含む。ある特定の場合、Ｒ４およびＲ５が結合している窒素を含む、任意選択で置換されている単環式ヘテロシクリル環は、１個の窒素を含む６員環である。ある特定の場合、Ｒ４およびＲ５が結合している窒素を含む、任意選択で置換されている単環式ヘテロシクリル環は、１個の窒素を含む５員環である。ある特定の場合、単環式ヘテロシクリル環は、Ｃ１〜６アルキル（例えばメチル、エチル、またはプロピル）、スペルミン、またはスペルミジンで置換されている。ある特定の場合、Ｒ４およびＲ５が結合している窒素を含む単環式ヘテロシクリル環は、２個の窒素を含む６員環であり、Ｃ１〜６アルキル（例えばメチル、エチル、またはプロピル）、スペルミン、またはスペルミジンで置換されている。ある特定の場合、Ｒ４およびＲ５が結合している窒素を含む単環式ヘテロシクリル環は、２個の窒素を含む５員環であり、Ｃ１〜６アルキル（例えばメチル、エチル、またはプロピル）、スペルミン、またはスペルミジンで置換されている。
【０１９１】
ある特定の場合、Ｒ４およびＲ５は、メチルである。ある特定の場合、Ｒ４およびＲ５は、エチルである。ある特定の場合、Ｒ４およびＲ５は、−ＮＲ５ａＲ５ｂで置換されているＣ１アルキルである。
【０１９２】
式（ＩＩＩ）のある特定の実施形態では、Ｗは、Ｏである。ある特定の実施形態では、Ｗは、Ｓである。ある特定の実施形態では、Ｗは、Ｓｅである。
【０１９３】
式（ＩＩＩ）では、各Ｂ１は、独立に、任意選択で保護されている複素環式塩基部分から選択される。ある特定の実施形態では、各Ｂ１は、独立に、プリンおよびピリミジンから選択される。ある特定の実施形態では、少なくとも１つのＢ１は、プリンである。ある特定の実施形態では、少なくとも１つのＢ１は、ピリミジンである。ある特定の実施形態では、各Ｂ１は、天然に生じる核酸塩基である。ある特定の実施形態では、少なくとも１つのＢ１は、修飾されているまたは天然に生じない核酸塩基である。ある特定の実施形態では、各Ｂ１は、修飾されているまたは天然に生じない核酸塩基である。
【０１９４】
ある特定の実施形態では、各Ｂ１は、独立に、Ｔｈｙ（チミン）、ＢｚＣｙｔ（４−ベンゾイル−シトシン）、ＢｚＡｄｅ（６−ベンゾイル−アデニン）、ＡｄｅＤＭＦ（６−ジメチルホルムアミジノ−アデニン）、ｉＢｕＧｕａ（２−イソブチリル−グアニン）、およびＧｕａＤＭＦ（２−ジメチルホルムアミジノ−グアニン）から選択される。ある特定の実施形態では、各Ｂ１は、独立に、アデニン、グアニン、シトシン、チミン、およびウラシルから選択される。
【０１９５】
ある特定の実施形態では、各Ｂ１は、アザプリンではない。ある特定の実施形態では、各Ｂ１は、フルオロ置換アザプリンではない。
【０１９６】
ある特定の場合、Ｒ１およびＲ２は、水素であり、Ｒ４およびＲ５は、メチルである。ある特定の場合、Ｒ１およびＲ２は、水素であり、Ｒ４およびＲ５は、エチルである。
【０１９７】
ある特定の場合、Ｒ１およびＲ２は、水素であり、Ｒ４およびＲ５は、メチルであり、各Ｒ３は、水素である。ある特定の場合、Ｒ１およびＲ２は、水素であり、Ｒ４およびＲ５は、エチルであり、各Ｒ３は、水素である。
【０１９８】
ある特定の場合、Ｒ１およびＲ２は、水素であり、Ｒ４およびＲ５は、メチルであり、各Ｒ３は、ヒドロキシルである。ある特定の場合、Ｒ１およびＲ２は、水素であり、Ｒ４およびＲ５は、エチルであり、各Ｒ３は、ヒドロキシルである。
【０１９９】
ある特定の場合、Ｒ１およびＲ２は、水素であり、Ｒ４およびＲ５は、メチルであり、各Ｂ１は、独立に、Ｔｈｙ（チミン）、ＢｚＣｙｔ（４−ベンゾイル−シトシン）、ＢｚＡｄｅ（６−ベンゾイル−アデニン）、ＡｄｅＤＭＦ（６−ジメチルホルムアミジノ−アデニン）、ｉＢｕＧｕａ（２−イソブチリル−グアニン）、およびＧｕａＤＭＦ（２−ジメチルホルムアミジノ−グアニン）から選択される。ある特定の場合、Ｒ１およびＲ２は、水素であり、Ｒ４およびＲ５は、メチルであり、各Ｂ１は、独立に、アデニン、グアニン、シトシン、チミン、およびウラシルから選択される。
【０２００】
ある特定の場合、Ｒ１およびＲ２は、水素であり、Ｒ４およびＲ５は、エチルであり、各Ｂ１は、独立に、Ｔｈｙ（チミン）、ＢｚＣｙｔ（４−ベンゾイル−シトシン）、ＢｚＡｄｅ（６−ベンゾイル−アデニン）、ＡｄｅＤＭＦ（６−ジメチルホルムアミジノ−アデニン）、ｉＢｕＧｕａ（２−イソブチリル−グアニン）、およびＧｕａＤＭＦ（２−ジメチルホルムアミジノ−グアニン）から選択される。ある特定の場合、Ｒ１およびＲ２は、水素であり、Ｒ４およびＲ５は、エチルであり、各Ｂ１は、独立に、アデニン、グアニン、シトシン、チミン、およびウラシルから選択される。
【０２０１】
本開示は、以下の式の化合物またはその塩、および実施形態の方法におけるそれらの使用を提供する。
【化２２】
2019065054.tif 000037
【０２０２】
本開示は、以下の式の化合物またはその塩、および実施形態の方法におけるそれらの使用を提供する。
【化２３】
2019065054.tif 000038
【化２４】
2019065054.tif 000039
【化２５】
2019065054.tif 000040
式ＩＶの部分を含むギャップマー
【０２０３】
本開示は、オリゴヌクレオチドのヌクレオシドサブユニットが、サブユニット間結合によってつながっているオリゴヌクレオチドであって、
サブユニット間結合の少なくとも１つが、ホスホロチオエートまたはホスフェート結合であり、
オリゴヌクレオチドが、式（ＩＶ）
【化２６】
2019065054.tif 000041
［式中、
各Ｒ３は、独立に、水素、ヒドロキシル、および−Ｏ−Ｒ３ａから選択され、
各Ｒ３ａは、−ＮＲ３ｂＲ３ｃ、イミダゾリル、−（ＣＨ２）ａＯ（ＣＨ２）ｂＮＲ３ｂＲ３ｃ、または−（ＣＨ２）ａＯＮＲ３ｄ（ＣＨ２）ｂＮＲ３ｂＲ３ｃにより任意選択で置換されているＣ１〜６アルキルであり、
各Ｒ３ｂは、水素またはＣ１〜２アルキルであり、
各Ｒ３ｃは、水素またはＣ１〜２アルキルであり、
各Ｒ３ｄは、水素またはＣ１〜２アルキルであり、
各ａは、１〜４から選択される整数であり、
各ｂは、１〜４から選択される整数であり、
各Ｒ４は、−ＮＲ４ａＲ４ｂにより任意選択で置換されているＣ１〜６アルキルであり、
Ｒ４ａは、水素もしくはＣ１〜２アルキルであり、Ｒ４ｂは、水素もしくはＣ１〜２アルキルであり、
各Ｒ５は、−ＮＲ５ａＲ５ｂにより任意選択で置換されているＣ１〜６アルキルであり、
Ｒ５ａは、水素もしくはＣ１〜２アルキルであり、Ｒ５ｂは、水素もしくはＣ１〜２アルキルであり、または
Ｒ４およびＲ５は、それらが結合する窒素と一緒になって、任意選択で置換されている単環式ヘテロシクリル環を形成し、
各Ｗは、独立に、Ｏ、Ｓ、およびＳｅから選択され、
各Ｂ１は、独立に、任意選択で保護されている複素環式塩基部分から選択され、
ｎは、１〜５０から選択される整数である］
の部分またはその塩を含み、
ただしオリゴヌクレオチドが、３’末端または５’末端において式ＩＶの部分で終結している場合、末端基−Ｏ−または−ＮＨ−が、式ＩＶの部分に適した原子価を提供するために水素を含むオリゴヌクレオチドを提供する。
【０２０４】
ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、特異的遺伝子由来のｍＲＮＡに相補的な配列を含む。
【０２０５】
ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、非天然サブユニット間結合、例えば通常の３’−５’結合を有する、ホスホロチオエート、キラルホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホトリエステル、アミノアルキルホスホトリエステル、３’−アルキレンホスホネート、５’−アルキレンホスホネートおよびキラルホスホネートを含むメチルおよび他のアルキルホスホネート、ホスフィネート、３’−アミノホスホルアミデートおよびアミノアルキルホスホルアミデートを含むホスホルアミデート、チオホスホルアミデート、チオノアルキルホスホネート、チオノアルキルホスホトリエステル、チオホスフェート、セレノホスフェートおよびボラノホスフェート、これらの２’−５’連結類似体、ならびに逆極性を有するもの（ここで、１つまたは複数のサブユニット間結合は、３’−３’、５’−５’または２’−２’結合である）を含むことができるが、これらに限定されない。これらの修飾サブユニット間結合を合成する方法は、米国特許第５，１７７，１９６号、同第５，１８８，８９７号、同第５，２６４，４２３号、同第５，２７６，０１９号、同第５，２７８，３０２号、同第５，２８６，７１７号、同第５，３２１，１３１号、同第５，３９９，６７６号、４０  同第５，４０５，９３９号、同第５，４５３，４９６号、同第５，４５５，２３３号、同第５，４６６，６７７号、同第５，４７６，９２５号、同第５，５１９，１２６号、同第５，５３６，８２１号、同第５，５４１，３０６号、同第５，５５０，１１１号、同第５，５６３，２５３号、同第５，５７１，７９９号、同第５，５８７，３６１号、同第５，１９４，５９９号、同第５，５６５，５５５号、同第５，５２７，８９９号、同第５，７２１，２１８号、同第５，６７２，６９７号および同第５，６２５，０５０号に見出すことができ、これらの開示はそれらの全体が参照によって本明細書に援用される。
【０２０６】
様々なタイプのサブユニット間結合を有するオリゴヌクレオチドを合成する技術は、とりわけ、米国特許第７，４９４，９８２号に見出すことができ、この開示は、その全体が本明細書に援用される。
【０２０７】
ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、約６〜約１００ヌクレオチド長、または約６〜約５０ヌクレオチド長、または約６〜約３０ヌクレオチド長、または約６〜約２０ヌクレオチド長である。ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３５、４０、４５、または５０ヌクレオチドである。
【０２０８】
式（ＩＶ）の部分において、各Ｒ３は、独立に、水素、ヒドロキシル、および−Ｏ−Ｒ３ａから選択され、各Ｒ３ａは、−ＮＲ３ｂＲ３ｃ、イミダゾリル、−（ＣＨ２）ａＯ（ＣＨ２）ｂＮＲ３ｂＲ３ｃ、または−（ＣＨ２）ａＯＮＲ３ｄ（ＣＨ２）ｂＮＲ３ｂＲ３ｃにより任意選択で置換されているＣ１〜６アルキルである。
【０２０９】
ある特定の実施形態では、各Ｒ３は、水素である。ある特定の実施形態では、各Ｒ３は、ヒドロキシルである。ある特定の実施形態では、各Ｒ３は、−Ｏ−Ｒ３ａである。ある特定の場合、少なくとも１つのＲ３は、−Ｏ−Ｒ３ａである。
【０２１０】
ある特定の実施形態では、少なくとも１つのＲ３ａは、Ｃ１〜６アルキル、例えばメチル、エチル、またはプロピルである。ある特定の実施形態では、少なくとも１つのＲ３ａは、−ＮＲ３ｂＲ３ｃ、イミダゾリル、−（ＣＨ２）ａＯ（ＣＨ２）ｂＮＲ３ｂＲ３ｃ、または−（ＣＨ２）ａＯＮＲ３ｄ（ＣＨ２）ｂＮＲ３ｂＲ３ｃで置換されているＣ１〜６アルキルである。
【０２１１】
ある特定の実施形態では、Ｒ３ｂは、水素である。ある特定の実施形態では、Ｒ３ｂは、メチルまたはエチルである。ある特定の実施形態では、Ｒ３ｃは、水素である。ある特定の実施形態では、Ｒ３ｃは、メチルまたはエチルである。ある特定の実施形態では、Ｒ３ｄは、水素である。ある特定の実施形態では、Ｒ３ｄは、メチルまたはエチルである。
【０２１２】
ある特定の実施形態では、ａは１である。ある特定の実施形態では、ａは２である。ある特定の実施形態では、ａは３である。ある特定の実施形態では、ａは４である。
【０２１３】
ある特定の実施形態では、ｂは１である。ある特定の実施形態では、ｂは２である。ある特定の実施形態では、ｂは３である。ある特定の実施形態では、ｂは４である。
【０２１４】
式（ＩＶ）の部分のある特定の実施形態では、各Ｒ４は、−ＮＲ４ａＲ４ｂにより任意選択で置換されているＣ１〜６アルキルであり、Ｒ４ａは、水素またはＣ１〜２アルキルであり、Ｒ４ｂは、水素またはＣ１〜２アルキルである。ある特定の実施形態では、各Ｒ４は、Ｃ１〜６アルキル、例えばメチル、エチル、またはプロピルである。ある特定の実施形態では、各Ｒ４は、メチルである。ある特定の実施形態では、各Ｒ４は、エチルである。
【０２１５】
式（ＩＶ）の部分のある特定の実施形態では、各Ｒ５は、−ＮＲ５ａＲ５ｂにより任意選択で置換されているＣ１〜６アルキルであり、Ｒ５ａは、水素またはＣ１〜２アルキルであり、Ｒ５ｂは、水素またはＣ１〜２アルキルである。ある特定の実施形態では、各Ｒ５は、Ｃ１〜６アルキル、例えばメチル、エチル、またはプロピルである。ある特定の実施形態では、各Ｒ５は、メチルである。ある特定の実施形態では、各Ｒ５は、エチルである。
【０２１６】
式（ＩＶ）の部分のある特定の実施形態では、Ｒ４およびＲ５は、それらが結合する窒素と一緒になって、任意選択で置換されている単環式ヘテロシクリル環を形成する。ある特定の場合、任意選択で置換されている単環式ヘテロシクリル環は、４〜８員の環、例えば４、５、６、７または８員環である。ある特定の場合、Ｒ４およびＲ５が結合している窒素を含む、任意選択で置換されている単環式ヘテロシクリル環は、１、２または３個のヘテロ原子を含む。ある特定の場合、Ｒ４およびＲ５が結合している窒素を含む、任意選択で置換されている単環式ヘテロシクリル環は、窒素、酸素および硫黄から選択される１、２または３個のヘテロ原子を含む。ある特定の場合、Ｒ４およびＲ５が結合している窒素を含む、任意選択で置換されている単環式ヘテロシクリル環は、１個の窒素を含む６員環である。ある特定の場合、Ｒ４およびＲ５が結合している窒素を含む、任意選択で置換されている単環式ヘテロシクリル環は、１個の窒素を含む５員環である。ある特定の場合、単環式ヘテロシクリル環は、Ｃ１〜６アルキル（例えばメチル、エチル、またはプロピル）、スペルミン、またはスペルミジンで置換されている。ある特定の場合、Ｒ４およびＲ５が結合している窒素を含む単環式ヘテロシクリル環は、２個の窒素を含む６員環であり、Ｃ１〜６アルキル（例えばメチル、エチル、またはプロピル）、スペルミン、またはスペルミジンで置換されている。ある特定の場合、Ｒ４およびＲ５が結合している窒素を含む単環式ヘテロシクリル環は、２個の窒素を含む５員環であり、Ｃ１〜６アルキル（例えばメチル、エチル、またはプロピル）、スペルミン、またはスペルミジンで置換されている。
【０２１７】
ある特定の場合、Ｒ４およびＲ５は、メチルである。ある特定の場合、Ｒ４およびＲ５は、エチルである。ある特定の場合、Ｒ４およびＲ５は、−ＮＲ５ａＲ５ｂで置換されているＣ１アルキルである。
【０２１８】
式（ＩＶ）の部分におけるある特定の実施形態では、各Ｗは、Ｏである。ある特定の実施形態では、各Ｗは、Ｓである。ある特定の実施形態では、各Ｗは、Ｓｅである。ある特定の実施形態では、少なくとも１つのＷは、Ｏである。ある特定の実施形態では、少なくとも１つのＷは、Ｓである。ある特定の実施形態では、少なくとも１つのＷは、Ｓｅである。
【０２１９】
式（ＩＶ）の部分において、各Ｂ１は、独立に、任意選択で保護されている複素環式塩基部分から選択される。ある特定の実施形態では、各Ｂ１は、独立に、プリンおよびピリミジンから選択される。ある特定の実施形態では、少なくとも１つのＢ１は、プリンである。ある特定の実施形態では、少なくとも１つのＢ１は、ピリミジンである。ある特定の実施形態では、各Ｂ１は、天然に生じる核酸塩基である。ある特定の実施形態では、少なくとも１つのＢ１は、修飾されているまたは天然に生じない核酸塩基である。ある特定の実施形態では、各Ｂ１は、修飾されているまたは天然に生じない核酸塩基である。
【０２２０】
ある特定の実施形態では、各Ｂ１は、独立に、Ｔｈｙ（チミン）、ＢｚＣｙｔ（４−ベンゾイル−シトシン）、ＢｚＡｄｅ（６−ベンゾイル−アデニン）、ＡｄｅＤＭＦ（６−ジメチルホルムアミジノ−アデニン）、ｉＢｕＧｕａ（２−イソブチリル−グアニン）、およびＧｕａＤＭＦ（２−ジメチルホルムアミジノ−グアニン）から選択される。ある特定の実施形態では、各Ｂ１は、独立に、アデニン、グアニン、シトシン、チミン、およびウラシルから選択される。
【０２２１】
ある特定の実施形態では、各Ｂ１は、アザプリンではない。ある特定の実施形態では、各Ｂ１は、フルオロ置換アザプリンではない。
【０２２２】
式（ＩＶ）の部分のある特定の実施形態では、ｎは、１〜５０、例えば１〜１０、１〜２０、１〜３０、１〜４０、または１〜５０から選択される整数である。ある特定の実施形態では、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、３０、３５、４０、４５、または５０である。
【０２２３】
ある特定の場合、Ｒ４およびＲ５は、メチルであり、各Ｒ３は、水素である。ある特定の場合、Ｒ４およびＲ５は、エチルであり、各Ｒ３は、水素である。
【０２２４】
ある特定の場合、Ｒ４およびＲ５は、メチルであり、各Ｒ３は、ヒドロキシルである。ある特定の場合、Ｒ４およびＲ５は、エチルであり、各Ｒ３は、ヒドロキシルである。
【０２２５】
ある特定の場合、Ｒ４およびＲ５は、メチルであり、各Ｂ１は、独立に、Ｔｈｙ（チミン）、ＢｚＣｙｔ（４−ベンゾイル−シトシン）、ＢｚＡｄｅ（６−ベンゾイル−アデニン）、ＡｄｅＤＭＦ（６−ジメチルホルムアミジノ−アデニン）、ｉＢｕＧｕａ（２−イソブチリル−グアニン）、およびＧｕａＤＭＦ（２−ジメチルホルムアミジノ−グアニン）から選択される。ある特定の場合、Ｒ４およびＲ５は、メチルであり、各Ｂ１は、独立に、アデニン、グアニン、シトシン、チミン、およびウラシルから選択される。
【０２２６】
ある特定の場合、Ｒ４およびＲ５は、エチルであり、各Ｂ１は、独立に、Ｔｈｙ（チミン）、ＢｚＣｙｔ（４−ベンゾイル−シトシン）、ＢｚＡｄｅ（６−ベンゾイル−アデニン）、ＡｄｅＤＭＦ（６−ジメチルホルムアミジノ−アデニン）、ｉＢｕＧｕａ（２−イソブチリル−グアニン）、およびＧｕａＤＭＦ（２−ジメチルホルムアミジノ−グアニン）から選択される。ある特定の場合、Ｒ４およびＲ５は、エチルであり、各Ｂ１は、独立に、アデニン、グアニン、シトシン、チミン、およびウラシルから選択される。
【０２２７】
ある特定の実施形態では、少なくとも１つのサブユニット間ホスホロチオエートまたはホスフェート結合は、式（ＩＶ）の部分の２つの隣接領域間に置かれる。ある特定の実施形態では、式（ＩＶ）の部分の２つの隣接領域間のサブユニット間結合は、ホスホロチオエートである。ある特定の実施形態では、式（ＩＶ）の部分の２つの隣接領域間のサブユニット間結合は、ホスフェートである。ある特定の実施形態では、サブユニット間ホスホロチオエートと、式（ＩＶ）の部分の２つの隣接領域間に置かれるホスフェート結合との混合物によって連結したヌクレオチドを含む領域が存在する。
【０２２８】
ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、オリゴヌクレオチドの５’末端上に位置している式（ＩＶ）の部分、オリゴヌクレオチドの３’末端上に位置している式（ＩＶ）の部分、ならびにオリゴヌクレオチドの５’末端上に位置している式（ＩＶ）の前記部分と、３’末端上に位置している式（ＩＶ）の前記部分との間に位置しているホスホロチオエートまたはホスフェート結合によって連結した３〜３０の連続ヌクレオチドを含む。
【０２２９】
ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドの５’末端上に位置している式（ＩＶ）の部分について、ｎは、１〜５０、例えば１〜１０、１〜２０、または１〜２５から選択される整数である。ある特定の実施形態では、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５である。ある特定の実施形態では、ｎは、２、３、４、５、または６である。
【０２３０】
ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドの３’末端上に位置している式（ＩＶ）の部分について、ｎは、１〜５０、例えば１〜１０、１〜２０、または１〜２５から選択される整数である。ある特定の実施形態では、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５である。ある特定の実施形態では、ｎは、２、３、４、５、または６である。
【０２３１】
ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、オリゴヌクレオチドの５’末端上に位置している式（ＩＶ）の前記部分と、３’末端上に位置している式（ＩＶ）の前記部分との間に位置しているホスホロチオエートまたはホスフェートサブユニット間結合によって連結した３〜３０（例えば、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０）の連続ヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ホスホロチオエートまたはホスフェートサブユニット間結合によって連結した３、４、５、または６の連続ヌクレオチドを含む。
【０２３２】
ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、オリゴヌクレオチドの５’末端上に位置している式（ＩＶ）の前記部分と、３’末端上に位置している式（ＩＶ）の前記部分との間に位置しているホスホロチオエートサブユニット間結合によって連結した連続ヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、オリゴヌクレオチドの５’末端上に位置している式（ＩＶ）の前記部分と、３’末端上に位置している式（ＩＶ）の前記部分との間に位置しているホスフェートサブユニット間結合によって連結した連続ヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、オリゴヌクレオチドの５’末端上に位置している式（ＩＶ）の前記部分と、３’末端上に位置している式（ＩＶ）の前記部分との間に位置しているホスホロチオエート結合およびホスフェート結合の混合物を含むサブユニット間結合によって連結した連続ヌクレオチドを含む。
【０２３３】
ある特定の実施形態では、式（ＩＶ）の部分の領域は、少なくとも１つのサブユニット間ホスホロチオエートまたはホスフェート結合によって連結したヌクレオチドの２つの隣接領域間に置かれる。ある特定の実施形態では、式（ＩＶ）の部分の領域は、サブユニット間ホスホロチオエート結合によって連結したヌクレオチドの２つの隣接領域間に置かれる。ある特定の実施形態では、式（ＩＶ）の部分の領域は、サブユニット間ホスフェート結合によって連結したヌクレオチドの２つの隣接領域間に置かれる。ある特定の実施形態では、式（ＩＶ）の部分の領域は、ホスホロチオエート結合およびホスフェート結合の混合物を含むサブユニット間結合によって連結したヌクレオチドの２つの隣接領域間に置かれる。
【０２３４】
ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、オリゴヌクレオチドの５’末端上に位置しているホスホロチオエートまたはホスフェート結合によって連結した少なくとも２つの連続ヌクレオチド、オリゴヌクレオチドの３’末端上に位置しているホスホロチオエートまたはホスフェート結合によって連結した少なくとも２つの連続ヌクレオチド、ならびにオリゴヌクレオチドの５’末端上に位置しているホスホロチオエートまたはホスフェート結合によって連結した前記少なくとも２つの連続ヌクレオチドとオリゴヌクレオチドの３’末端上に位置しているホスホロチオエートまたはホスフェート結合によって連結した前記少なくとも２つの連続ヌクレオチドとの間に位置している式（ＩＶ）の部分（式中、ｎは、２〜３０である）を含む。
【０２３５】
ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、オリゴヌクレオチドの５’末端上に位置しているホスホロチオエートまたはホスフェート結合によって連結した少なくとも２つの連続ヌクレオチドを含み、ここでホスホロチオエートまたはホスフェート結合によって連結した連続ヌクレオチドは、１〜５０ヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、ホスホロチオエートまたはホスフェート結合によって連結した連続ヌクレオチドに、１〜１０、１〜２０、または１〜２５ヌクレオチドが存在する。ある特定の実施形態では、ホスホロチオエートまたはホスフェート結合によって連結した、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５ヌクレオチドが存在する。ある特定の実施形態では、ホスホロチオエートまたはホスフェート結合によって連結した２、３、４、５、または６ヌクレオチドが存在する。
【０２３６】
ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、オリゴヌクレオチドの３’末端上に位置しているホスホロチオエートまたはホスフェート結合によって連結した少なくとも２つの連続ヌクレオチドを含み、ここでホスホロチオエートまたはホスフェート結合によって連結した連続ヌクレオチドは、１〜５０ヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、ホスホロチオエートまたはホスフェート結合によって連結した連続ヌクレオチドに、１〜１０、１〜２０、または１〜２５ヌクレオチドが存在する。ある特定の実施形態では、ホスホロチオエートまたはホスフェート結合によって連結した１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５ヌクレオチドが存在する。ある特定の実施形態では、ホスホロチオエートまたはホスフェート結合によって連結した２、３、４、５、または６ヌクレオチドが存在する。
【０２３７】
ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、オリゴヌクレオチドの５’末端および３’末端に位置しているホスホロチオエートサブユニット間結合によって連結した連続ヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、オリゴヌクレオチドの５’末端および３’末端に位置しているホスフェートサブユニット間結合によって連結した連続ヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、オリゴヌクレオチドの５’末端または３’末端のいずれかに位置しているホスホロチオエートサブユニット間結合によって連結した連続ヌクレオチド、およびオリゴヌクレオチドの５’末端または３’末端の他の末端に位置しているホスフェートサブユニット間結合によって連結した連続ヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、オリゴヌクレオチドの５’末端および３’末端に位置しているホスホロチオエート結合およびホスフェート結合の混合物を含むサブユニット間結合によって連結した連続ヌクレオチドを含む。
【０２３８】
ある特定の実施形態では、式（ＩＶ）の部分について、ｎは、２〜３０から選択される整数、例えば２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０である。ある特定の実施形態では、ｎは、２、３、４、５、または６である。
【０２３９】
ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、立体障害によってｍＲＮＡの翻訳を防止する。ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、遺伝子由来のｍＲＮＡのＲＮａｓｅ−Ｈ媒介性分解のための基質である。
化合物の合成
【０２４０】
また実施形態は、対象化合物またはそれらの塩もしくは溶媒和物もしくは立体異性体を調製するのに有用な方法および中間体を対象とする。
【０２４１】
一般に公知の化学合成スキームおよび開示の化合物を合成するのに有用な条件を提供する多くの一般的な参考文献が、利用可能である（例えば、SmithおよびMarch、March's  Advanced  Organic  Chemistry:  Reactions,  Mechanisms,  and  Structure、第５版、Wiley-Interscience、２００１年参照）。
【０２４２】
本明細書に記載の化合物は、クロマトグラフィーによる手段、例えば高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、分取薄層クロマトグラフィー、フラッシュカラムクロマトグラフィーおよびイオン交換クロマトグラフィーを含めた、当技術分野で公知の手段のいずれかによって精製することができる。順相および逆相ならびにイオン性樹脂を含めた、任意の適切な固定相を使用することができる。最も典型的には、開示の化合物は、シリカゲルおよび／またはアルミナクロマトグラフィーによって精製される。例えば、Introduction  to  Modern  Liquid  Chromatography、第２版、L.  R.  SnyderおよびJ.  J.  Kirkland編、John  Wiley  and  Sons、１９７９年およびThin  Layer  Chromatography、E.  Stahl（編）、Springer-Verlag、New  York、１９６９年参照。
【０２４３】
対象化合物を調製するプロセスのいずれかの最中に、関与する分子のいずれかの上の感受性または反応基を保護することが必要であり、かつ／または望ましい場合がある。このことは、標準作業書、例えばT.  W.  GreeneおよびP.  G.  M.  Wuts、「Protective  Groups  in  Organic  Synthesis」、第４版、Wiley、New  York  ２００６年に記載の通り、従来の保護基を用いることによって達成することができる。保護基は、当技術分野で公知の方法を使用して、その後の好都合な段階で除去することができる。
【０２４４】
ここで、実施形態の方法において有用な例示的な化学物質を、本明細書のそれらの一般的調製のための例示的な合成スキームおよび以下の具体例を参照することによって説明する。当業者は、本明細書の様々な化合物を得るために、最終的に望ましい置換基が、適宜保護を伴ってまたは保護を伴わずに反応スキームを介して担持されて所望の生成物が得られるように、出発材料を適切に選択し得ることを認識されよう。あるいは、最終的に望ましい置換基の代わりに、反応スキームを介して担持され、所望の置換基で適宜置き換えることができる適切な基を用いることが必要であり、または望ましい場合がある。さらに当業者は、以下のスキームに示されている変換が、特定のペンダント基の官能基と適合性を示す任意の順序で実施され得ることを認識されよう。一般的スキームに図示されている反応のそれぞれは、好ましくは約０℃から使用される有機溶媒の還流温度までの温度で実施される。別段の指定がない限り、変数は、式（Ｉ）への言及において上で定義した通りである。
【０２４５】
本開示の化合物の代表的な合成を、以下のスキームおよび以下の特定の例で説明する。
【０２４６】
スキーム１は、実施形態で使用したモノマーの代表的な合成を示す。
【化２７】
2019065054.tif 000042
【０２４７】
スキーム１では、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、ＷおよびＢ１は、本明細書で定義されている。化合物１−ＡおよびＩ−Ｂは、市販されており、または当業者によって合成され得る。
【０２４８】
ある特定の場合、化合物１−Ａ（３’位にアミノ基を有するヌクレオシド）が得られる。例えば、本明細書の合成における出発材料として有用な３’−アミノ−２’，３’−ジデオキシヌクレオシドは、フィンランド、Ｌｉｔｔｏｉｎｅｎに位置するＭｅｔｋｉｎｅｎ  Ｏｙから商業的に得ることができる。３’−アミノ−２’，３’−ジデオキシヌクレオシドの様々な合成調製物は、文献に報告されている（例えば、Zaitseva,  G.  V.ら、Nucleosides  &  Nucleotides  １３巻（１〜３号）：８１９〜８３８頁（１９９４年）；Cech,  D.ら、Coll.  Czech.  Chem.  Comm.６１巻：Ｓ２９７〜Ｓ３００頁（１９９６年）；Zaitseva,  V.  E.ら、Sov.  J.  Bioorg.  Chem.１０巻（５号）５：３６９〜３７８頁（Bioorg.  Khim.１０巻（５号）：６７０〜６８０頁）（１９８４年）の翻訳版）。部分Ｒ１は、３’アミノ基の保護基であり、標準技術を用いて化合物１−Ａに付加して、化合物１−Ｂを得ることができる。アミノ保護基を有する化合物の調製例は、T.  W.  GreeneおよびP.  G.  M.  Wuts、「Protective  Groups  in  Organic  Synthesis」、第４版、Wiley、New  York  ２００６年に見出すことができる。
【０２４９】
スキーム１をさらに参照すると、化合物１−Ｂを、リン酸化試薬と反応させて、化合物１−Ｃを得る。ある特定の実施形態では、リン酸化試薬は、ジメチルアミノ−ホスホリル化合物、例えばジメチルアミノ−ホスホロジクロリデートである。ある特定の実施形態では、リン酸化試薬は、チオホスホロジクロリデートまたはセレノホスホロジクロリデートである。反応は、塩基、例えば２，６−ルチジンおよびＮ−メチルイミダゾールの存在下で実施することができる。
【０２５０】
スキーム２は、実施形態の化合物の代表的な合成を示す。
【化２８】
2019065054.tif 000043
【０２５１】
スキーム２では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｗ、およびＢ１は、本明細書で定義されている。化合物２−Ａおよび２−Ｂは、市販されており、または当業者によって合成され得る。
【０２５２】
ある特定の場合、化合物２−Ａ（３’位にアミノ基を有するヌクレオシド）が得られる。部分Ｒ２は、５’ヒドロキシル基または固体支持体の保護基であり、標準技術を用いて化合物２−Ａに付加して、化合物２−Ｂを得ることができる。ヒドロキシル保護基を有する化合物の調製例は、T.  W.  GreeneおよびP.  G.  M.  Wuts、「Protective  Groups  in  Organic  Synthesis」、第４版、Wiley、New  York  ２００６年に見出すことができる。ある特定の場合、Ｒ２は、塩基不安定な保護基である。ある特定の場合、Ｒ２は、固体支持体である。ある特定の場合、Ｒ２は、塩基不安定な固体支持体である（例えば、塩基を用いて脱遮断することができる）。適切な固体支持体の例として、スライド、ビーズ、チップ、粒子、ストランド、ゲル、シート、チューブ、球、容器、毛細管、パッド、スライス、フィルム、プレート状のもの等が挙げられるが、これらに限定されない。ある特定の実施形態では、固体支持体は、生物学的なもの、非生物学的なもの、有機、無機、またはそれらの任意の組合せであり得る。適切な固体支持体は、ガラスまたはポリマーから作製され得る。例えば、適切な固体支持体は、ポリスチレン（例えばジビニルベンゼンで架橋されたポリスチレン）、制御細孔ガラス（ＣＰＧ）、またはＴｅｎｔａＧｅｌ（登録商標）（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）から作製され得る。
【０２５３】
スキーム２をさらに参照すると、化合物２−Ｂを、化合物１−Ｃと反応させて、化合物２−Ｃを得る。化合物２−Ｂのアミノ基を、化合物１−Ｃのリンと反応させて、部分Ｒ６を置き換える。ある特定の実施形態では、化合物２−Ｂおよび化合物１−Ｃのカップリング反応は、ＬｉＢｒなどのハロゲン交換剤を使用して容易にすることができる。
【０２５４】
一合成経路では、化合物２−Ｃは、ヌクレオシドサブユニットをさらに付加するための出発材料として働くことができる。化合物２−Ｃでは、部分Ｒ１は、アミノ保護基であり、酸不安定であり得る（例えば、弱酸などの酸の存在下で除去することができる）。部分Ｒ１を、化合物２−Ｃから除去して、化合物２−Ｆを提供することができる。化合物２−Ｆには、化合物１−Ｃと容易に反応して、別のヌクレオシドサブユニットを付加することができるアミノ基が存在する。さらなるヌクレオシドサブユニットを付加する反応は、反復することができる。オリゴヌクレオチドを調製するための標準的手順を使用することができる。
【０２５５】
オリゴヌクレオチドを、部分Ｒ１の脱保護およびヌクレオシドサブユニットの付加によって調製する場合、特定の長さのオリゴヌクレオチドを、Ｒ１、Ｒ２およびＢ１部分において脱保護することができる。上で論じた通り、部分Ｒ１は、アミノ保護基であり、酸不安定であり得る（例えば、弱酸などの酸の存在下で除去することができる）。部分Ｒ２は、ヒドロキシル保護基または固体支持体であり、塩基不安定であり得る（例えば、塩基の存在下で除去することができる）。Ｒ２がヒドロキシル保護基である場合に部分Ｒ２を除去することができる適切な塩基の一例として、テトラ−ｎ−ブチルアンモニウムフルオリド（ＴＢＡＦ）が挙げられる。Ｒ２が固体支持体である場合に部分Ｒ２を除去することができる適切な塩基の一例として、水酸化アンモニウム（ＮＨ４ＯＨ）が挙げられる。部分Ｂ１が、合成中に保護基を含んでいる場合、保護基は除去することができる。ある特定の場合、部分Ｂ１は、塩基不安定であるアミノ保護基を含む（例えば、塩基の存在下で除去することができる）。
【０２５６】
別の合成経路では、化合物２−Ｄおよび２−Ｅは、部分Ｒ２の初期脱保護によって得られる。部分Ｒ２を、化合物２−Ｃから除去して、化合物２−Ｄを提供する。次に、部分Ｒ１を、化合物２−Ｄから除去して、化合物２−Ｅを提供する。部分Ｒ２は、ヒドロキシル保護基または固体支持体であり、塩基不安定であり得る（例えば、塩基の存在下で除去することができる）。Ｒ２がヒドロキシル保護基である場合に部分Ｒ２を除去することができる適切な塩基の一例として、テトラ−ｎ−ブチルアンモニウムフルオリド（ＴＢＡＦ）が挙げられる。Ｒ２が固体支持体である場合に部分Ｒ２を除去することができる適切な塩基の一例として、水酸化アンモニウム（ＮＨ４ＯＨ）が挙げられる。部分Ｒ１は、アミノ保護基であり、酸不安定であり得る（例えば、弱酸などの酸の存在下で除去することができる）。
【０２５７】
化合物２−Ｄは、ヌクレオシドサブユニットをさらに付加するための出発材料として働くことができる。化合物２−Ｄの５’−ヒドロキシル基は、リン酸化（phosphitylated）することができる。あるいは、化合物２−Ｄの５’−ヒドロキシル基は、コハク酸と反応し、固体支持体に付加されるようにさらに反応することができる。５’ヒドロキシル基が遮断された後、Ｒ１部分を除去し、さらなる反応のためにアミノ基を曝露することができる。３’−アミンは、化合物１−Ｃと反応して、別のヌクレオシドサブユニットを付加することができる。さらなるヌクレオシドサブユニットを付加するための反応は、反復することができる。
【０２５８】
これらの方法は、市販の様々な自動化オリゴヌクレオチド合成機によって実施することができる。
【０２５９】
本開示は、式（ＩＩ）
【化２９】
2019065054.tif 000044
［式中、
Ｒ１は、水素またはアミノ保護基であり、
Ｒ３は、独立に、水素、ヒドロキシル、および−Ｏ−Ｒ３ａから選択され、
Ｒ３ａは、−ＮＲ３ｂＲ３ｃ、イミダゾリル、−（ＣＨ２）ａＯ（ＣＨ２）ｂＮＲ３ｂＲ３ｃ、または−（ＣＨ２）ａＯＮＲ３ｄ（ＣＨ２）ｂＮＲ３ｂＲ３ｃにより任意選択で置換されているＣ１〜６アルキルであり、
Ｒ３ｂは、水素またはＣ１〜２アルキルであり、
Ｒ３ｃは、水素またはＣ１〜２アルキルであり、
Ｒ３ｄは、水素またはＣ１〜２アルキルであり、
ａは、１〜４から選択される整数であり、
ｂは、１〜４から選択される整数であり、
Ｒ４は、−ＮＲ４ａＲ４ｂにより任意選択で置換されているＣ１〜６アルキルであり、
Ｒ４ａは、水素もしくはＣ１〜２アルキルであり、Ｒ４ｂは、水素もしくはＣ１〜２アルキルであり、
Ｒ５は、−ＮＲ５ａＲ５ｂにより任意選択で置換されているＣ１〜６アルキルであり、
Ｒ５ａは、水素もしくはＣ１〜２アルキルであり、Ｒ５ｂは、水素もしくはＣ１〜２アルキルであり、または
Ｒ４およびＲ５は、それらが結合する窒素と一緒になって、任意選択で置換されている単環式ヘテロシクリル環を形成し、
Ｒ６は、脱離基であり、
Ｗは、独立に、Ｏ、Ｓ、およびＳｅから選択され、
Ｂ１は、任意選択で保護されている複素環式塩基部分である］
の化合物またはその塩を調製する方法であって、
式（Ａ）
【化３０】
2019065054.tif 000045
の化合物をリン酸化試薬と接触させるステップを含む方法を提供する。
【０２６０】
ある特定の実施形態では、リン酸化試薬は、ジメチルアミノ−ホスホリル化合物である。ある特定の実施形態では、リン酸化試薬は、ジメチルアミノ−ホスホロジクロリデートである。ある特定の実施形態では、Ｒ１は、式（Ａ）および（ＩＩ）におけるアミノ保護基である。
【０２６１】
本開示は、式（Ｉ）
【化３１】
2019065054.tif 000046
［式中、
Ｒ１は、水素またはアミノ保護基であり、
Ｒ２は、水素またはヒドロキシル保護基であり、
各Ｒ３は、独立に、水素、ヒドロキシル、および−Ｏ−Ｒ３ａから選択され、
各Ｒ３ａは、−ＮＲ３ｂＲ３ｃ、イミダゾリル、−（ＣＨ２）ａＯ（ＣＨ２）ｂＮＲ３ｂＲ３ｃ、または−（ＣＨ２）ａＯＮＲ３ｄ（ＣＨ２）ｂＮＲ３ｂＲ３ｃにより任意選択で置換されているＣ１〜６アルキルであり、
各Ｒ３ｂは、水素またはＣ１〜２アルキルであり、
各Ｒ３ｃは、水素またはＣ１〜２アルキルであり、
各Ｒ３ｄは、水素またはＣ１〜２アルキルであり、
各ａは、１〜４から選択される整数であり、
各ｂは、１〜４から選択される整数であり、
各Ｗは、独立に、Ｏ、Ｓ、およびＳｅから選択され、
各Ｂ１は、独立に、任意選択で保護されている複素環式塩基部分から選択され、
各Ｒ４は、−ＮＲ４ａＲ４ｂにより任意選択で置換されているＣ１〜６アルキルであり、
Ｒ４ａは、水素もしくはＣ１〜２アルキルであり、Ｒ４ｂは、水素もしくはＣ１〜２アルキルであり、
各Ｒ５は、−ＮＲ５ａＲ５ｂにより任意選択で置換されているＣ１〜６アルキルであり、
Ｒ５ａは、水素もしくはＣ１〜２アルキルであり、Ｒ５ｂは、水素もしくはＣ１〜２アルキルであり、または
Ｒ４およびＲ５は、それらが結合する窒素と一緒になって、任意選択で置換されている単環式ヘテロシクリル環を形成し、
ｎは、１〜５０から選択される整数である］
の化合物またはその塩を調製する方法であって、
ｂ）式（ＩＩ）
【化３２】
2019065054.tif 000047
の化合物を式（Ｂ）
【化３３】
2019065054.tif 000048
の化合物と接触させるステップを含む方法を提供する。
【０２６２】
ある特定の実施形態では、混合は、ＬｉＢｒなどのハロゲン交換剤の存在下で実施される。ある特定の実施形態では、Ｒ１は、アミノ保護基であり、該方法は、そのアミノ保護基を除去するステップをさらに含む。ある特定の実施形態では、Ｒ２は、ヒドロキシル保護基または固体支持体であり、該方法は、そのヒドロキシル保護基または固体支持体を除去するステップをさらに含む。
【０２６３】
ある特定の実施形態では、部分Ｂ１が、合成中に保護基を含んでいる場合、その保護基は除去することができる。ある特定の場合、部分Ｂ１は、塩基不安定であるアミノ保護基を含む（例えば、塩基の存在下で除去することができる）。
異性体、塩、溶媒和物、保護形態、およびプロドラッグ
【０２６４】
式（Ｉ）〜（ＩＩＩ）のいずれかの化合物または式（ＩＶ）の部分を含むオリゴヌクレオチドには、キラル原子（例えばリン原子）を含む結合または部分が存在する。式（Ｉ）〜（ＩＩＩ）のいずれかの化合物または式（ＩＶ）の部分を含むオリゴヌクレオチドを含む組成物は、キラルリン原子に基づくいずれかの鏡像異性体のラセミ混合物または鏡像異性体が濃縮された組成物として調製することができる。用語「鏡像異性体が濃縮された」は、一方の鏡像異性体が、存在する化合物の総量の５０％超を構成するように、ラセミ混合物（すなわち、鏡像異性体の５０／５０混合物）が精製されていることを指す。
【０２６５】
ある特定の実施形態では、式（Ｉ）〜（ＩＩＩ）のいずれかの化合物または式（ＩＶ）の部分を含むオリゴヌクレオチドを含む組成物は、ラセミ混合物である。ある特定の実施形態では、式（Ｉ）〜（ＩＩＩ）のいずれかの化合物または式（ＩＶ）の部分を含むオリゴヌクレオチドを含む組成物は、鏡像異性体が濃縮された組成物である。
【０２６６】
ある特定の化合物は、１つまたは複数の特定の幾何形態、光学形態、鏡像異性形態、ジアステレオマー形態、エピマー形態、立体異性形態、互変異性体形態、立体構造形態、またはアノマー形態で存在することができ、それらには、シスおよびトランス形態、ＥおよびＺ形態、ｃ、ｔ、およびｒ形態、エンドおよびエキソ形態、Ｒ、Ｓ、およびメソ形態、ＤおよびＬ形態、（＋）および（−）形態、ケト、エノール、およびエノラート形態、ｓｙｎおよびａｎｔｉ形態、向斜および背斜形態、αおよびβ形態、アキシアルおよびエクアトリアル形態、舟型、椅子型、ねじれ型、エンベロープ型、および半椅子型形態、ならびにそれらの組合せが含まれるが、これらに限定されず、これらは以下まとめて「異性体」（または「異性体形態」）と呼ばれる。
【０２６７】
互変異性体形態について以下に論じられている以外、用語「異性体」からは、本明細書で使用される場合、構造（または構成）異性体（すなわち、単に空間における原子の位置によってではなく、原子間の接続が異なっている異性体）が具体的に除外されることに留意されたい。例えば、メトキシ基、−ＯＣＨ３への言及は、その構造異性体であるヒドロキシメチル基、−ＣＨ２ＯＨへの言及と解釈されるべきではない。同様に、オルト−クロロフェニルへの言及は、その構造異性体であるメタ−クロロフェニルへの言及と解釈されるべきではない。しかし、あるクラスの構造への言及は、そのクラスに該当する構造異性体形態を十分に含み得る（例えば、Ｃ１〜７アルキルは、ｎ−プロピルおよびイソ−プロピルを含み、ブチルは、ｎ−、イソ−、ｓｅｃ−、およびｔｅｒｔ−ブチルを含み、メトキシフェニルは、オルト−、メタ−、およびパラ−メトキシフェニルを含む）。
【０２６８】
上の除外は、例えば、以下の互変異性体の対、ケト／エノール、イミン／エナミン、アミド／イミノアルコール、アミジン／アミジン、ニトロソ／オキシム、チオケトン／エンチオール、Ｎ−ニトロソ／ヒドロキシアゾ、およびニトロ／アシ−ニトロに見られるように、互変異性体形態、例えば、ケト、エノール、およびエノラート形態に関するものではない。
【０２６９】
１つまたは複数の同位体置換を有する化合物は、用語「異性体」に具体的に含まれることに留意されたい。例えば、Ｈは、１Ｈ、２Ｈ（Ｄ）、および３Ｈ（Ｔ）を含めた任意の同位体形態であってもよく、Ｃは、１２Ｃ、１３Ｃ、および１４Ｃを含めた任意の同位体形態であってもよく、Ｏは、１６Ｏおよび１８Ｏを含めた任意の同位体形態であってもよい等となる。
【０２７０】
別段の指定がない限り、特定の化合物への言及は、ラセミおよび他のこれらの混合物を含めたすべてのこのような異性体形態を含む。このような異性体形態を調製する方法（例えば、不斉合成）および分離する方法（例えば、分別結晶およびクロマトグラフィーによる手段）は、当技術分野で公知であり、または本明細書に教示されている方法を適合することによって公知の方式で容易に得られる。
【０２７１】
別段の指定がない限り、特定の化合物への言及は、例えば以下に論じる通り、それらのイオン、塩、溶媒和物（例えば水和物）、保護形態、およびプロドラッグも含む。
【０２７２】
活性化合物の対応する塩、例えば薬学的に許容される塩を調製し、精製し、かつ／または取り扱うことが好都合であり、または望ましい場合がある。薬学的に許容される塩の例は、Bergeら、１９７７年、「Pharmaceutically  Acceptable  Salts」、J.  Pharm.  Sci.、６６巻、１〜１９頁に論じられている。
【０２７３】
例えば、化合物がアニオン性であるか、またはアニオン性であり得る官能基を有する場合（例えば、−ＣＯＯＨは−ＣＯＯ−となり得る）、塩は、適切なカチオンを用いて形成することができる。適切な無機カチオンの例として、アルカリ金属イオン、例えばＮａ＋およびＫ＋、アルカリ土類カチオン、例えばＣａ２＋およびＭｇ２＋、ならびにＡｌ＋３などの他のカチオンが挙げられるが、これらに限定されない。適切な有機カチオンの例として、アンモニウムイオン（すなわち、ＮＨ４＋）および置換アンモニウムイオン（例えば、ＮＨ３Ｒ＋、ＮＨ２Ｒ２＋、ＮＨＲ３＋、ＮＲ４＋）が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの適切な置換アンモニウムイオンの例は、エチルアミン、ジエチルアミン、ジシクロヘキシルアミン、トリエチルアミン、ブチルアミン、エチレンジアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、ピペラジン、ベンジルアミン、フェニルベンジルアミン、コリン、メグルミン、およびトロメタミン、ならびにアミノ酸、例えばリシンおよびアルギニンから導出されたものである。一般的な第四級アンモニウムイオンの一例は、Ｎ（ＣＨ３）４＋である。
【０２７４】
化合物がカチオン性であるか、またはカチオン性であり得る官能基を有する場合（例えば、−ＮＨ２は−ＮＨ３＋となり得る）、塩は、適切なアニオンを用いて形成することができる。適切な無機アニオンの例として、以下の無機酸、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、亜硫酸、硝酸、亜硝酸、リン酸、および亜リン酸から導出されたものが挙げられるが、これらに限定されない。適切な有機アニオンの例として、以下の有機酸、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、コハク酸、グリコール酸（gycolic）、ステアリン酸、パルミチン酸、乳酸、リンゴ酸、パモン酸、酒石酸、クエン酸、グルコン酸、アスコルビン酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、フェニル酢酸、グルタミン酸、アスパラギン酸、安息香酸、ケイ皮酸、ピルビン酸、サリチル酸（salicyclic）、スルファニル酸、２−アセトキシ安息香酸（acetyoxybenzoic）、フマル酸、トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、エタンジスルホン酸、シュウ酸、イセチオン酸、吉草酸、およびグルコン酸から導出されたものが挙げられるが、これらに限定されない。適切なポリマー性アニオンの例として、以下のポリマー酸、タンニン酸、カルボキシメチルセルロースから導出されたものが挙げられるが、これらに限定されない。
【０２７５】
活性化合物の対応する溶媒和物を調製し、精製し、かつ／または取り扱うことが好都合であり、または望ましい場合がある。用語「溶媒和物」は、本明細書では、溶質（例えば、活性化合物、活性化合物の塩）と溶媒の複合体を指すために、従来の意味で使用される。溶媒が水である場合、溶媒和物は、好都合には水和物、例えば一水和物、二水和物、三水和物等と呼ぶことができる。
【０２７６】
化学的に保護された形態の活性化合物を調製し、精製し、かつ／または取り扱うことが好都合であり、または望ましい場合がある。用語「化学的に保護された形態」または「保護された形態」は、本明細書で使用される場合、１つまたは複数の反応性官能基が望ましくない化学反応から保護され、すなわち保護された基または保護する基（遮蔽された基または遮蔽する基としても公知）の形態である化合物に関する。反応性官能基を保護することによって、他の保護されていない反応性官能基を伴う反応を、保護された基に影響を及ぼさずに実施することができ、保護基は、通常、その後のステップで、分子の残りに実質的に影響を及ぼさずに除去することができる。例えば、Protective  Groups  in  Organic  Synthesis（T.  GreenおよびP.  Wuts、Wiley、１９９１年）、およびProtective  Groups  in  Organic  Synthesis（T.  GreenおよびP.  Wuts；第３版；John  Wiley  and  Sons、１９９９年）参照。
【０２７７】
例えば、ヒドロキシ基は、エーテル（−ＯＲ）またはエステル（−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ）として、例えばｔ−ブチルエーテル、ベンジル、ベンズヒドリル（ジフェニルメチル）もしくはトリチル（トリフェニルメチル）エーテル、トリメチルシリルもしくはｔ−ブチルジメチルシリルエーテル、またはアセチルエステル（−ＯＣ（＝Ｏ）ＣＨ３、−ＯＡｃ）として保護することができる。
【０２７８】
例えば、アルデヒドまたはケトン基は、それぞれアセタールまたはケタールとして保護することができ、ここでカルボニル基（＞Ｃ＝Ｏ）は、例えば第一級アルコールとの反応によって、ジエーテル（＞Ｃ（ＯＲ）２）に変換される。アルデヒドまたはケトン基は、酸の存在下で、大過剰の水を使用して加水分解することによって容易に再生される。
【０２７９】
例えば、アミン基は、例えばアミド（−ＮＲＣＯ−Ｒ）またはウレタン（−ＮＲＣＯ−ＯＲ）として、例えばメチルアミド（−ＮＨＣＯ−ＣＨ３）、イソブチリルアミド（−ＮＨＣＯ−ＣＨ（ＣＨ３）２、ベンジルオキシアミド（−ＮＨＣＯ−ＯＣＨ２Ｃ６Ｈ５、−ＮＨ−Ｃｂｚ）として、ｔ−ブトキシアミド（−ＮＨＣＯ−ＯＣ（ＣＨ３）３、−ＮＨ−Ｂｏｃ）、２−ビフェニル−２−プロポキシアミド（−ＮＨＣＯ−ＯＣ（ＣＨ３）２Ｃ６Ｈ４Ｃ６Ｈ５、−ＮＨ−Ｂｐｏｃ）として、９−フルオレニルメトキシアミド（−ＮＨ−Ｆｍｏｃ）として、６−ニトロベラトリルオキシアミド（−ＮＨ−Ｎｖｏｃ）として、２−トリメチルシリルエチルオキシアミド（−ＮＨ−Ｔｅｏｃ）として、２，２，２−トリクロロエチルオキシアミド（−ＮＨ−Ｔｒｏｃ）として、アリルオキシアミド（−ＮＨ−Ａｌｌｏｃ）として、２（−フェニルスルホニル）エチルオキシアミド（−ＮＨ−Ｐｓｅｃ）として、アミジノ、例えばジメチルホルムアミジノ（−＝ＣＨＮ（ＣＨ３）２）またはジアリールホルムアミジノ（−＝ＣＨＮ（Ｃ６Ｈ５）２）として、または適切な場合（例えば、環状アミン）、ニトロキシドラジカル（＞Ｎ−Ｏ．）として保護することができる。
【０２８０】
例えば、カルボン酸基は、エステルとして、例えばＣ１〜７アルキルエステル（例えば、メチルエステル、ｔ−ブチルエステル）、Ｃ１〜７ハロアルキルエステル（例えば、Ｃ１〜７トリハロアルキルエステル）、トリＣ１〜７アルキルシリル−Ｃ１〜７アルキルエステル、もしくはＣ５〜２０アリール−Ｃ１〜７アルキルエステル（例えば、ベンジルエステル、ニトロベンジルエステル）として、またはアミドとして、例えばメチルアミドとして保護することができる。
医薬組成物
【０２８１】
治療上の適用では、実施形態の化合物は、薬学的に許容される担体を用いて治療有効量で製剤化される。１つまたは複数の化合物は、任意の所与の製剤に含まれ得る。薬剤用担体は、固体であっても、または液体であってもよい。液体担体は、溶液、乳濁液、懸濁液および加圧組成物の調製に使用することができる。化合物は、活性成分のビヒクル、担体または媒体として作用する、薬学的に許容される固体、半固体または液体賦形剤に、溶解または懸濁され、またはそれで希釈される。化合物の非経口投与のための液体担体の適切な例として、水（添加剤、例えばセルロース誘導体を含有することができる。カルボキシメチルセルロースナトリウム溶液）、リン酸緩衝食塩水溶液（ＰＢＳ）、アルコール（一価アルコールおよび多価アルコール、例えばグリコールを含む）およびそれらの誘導体、ならびに油（例えば、分留ヤシ油およびラッカセイ油）が挙げられる。液体担体は、以下に限定されるものではないが、可溶化剤、懸濁化剤、乳化剤、緩衝液、増粘剤、着色剤、粘度調節剤、保存剤、安定剤およびモル浸透圧濃度調節剤を含む他の適切な薬学的添加剤を含有することができる。
【０２８２】
化合物の非経口投与では、担体は、オレイン酸エチルおよびミリスチン酸イソプロピルなどの油性エステルであってもよい。滅菌担体は、非経口投与のための滅菌の液体形態の組成物において有用である。
【０２８３】
滅菌の液体医薬組成物、溶液または懸濁液は、例えば、腹腔内注射、皮下注射、静脈内、または局所によって利用することができる。化合物は、血管内に、または血管ステントを介して投与することもできる。
【０２８４】
加圧組成物のための液体担体は、ハロゲン化炭化水素または他の薬学的に許容される噴霧剤であってもよい。このような加圧組成物は、吸入を介して送達するために、脂質で被包されていてもよい。鼻腔内または気管支内吸入または吹送による投与では、化合物は、水溶液または部分水溶液に製剤化することができ、それを次にエアロゾルの形態で利用することができる。
【０２８５】
実施形態の組成物は、錠剤、丸剤、散剤、ロゼンジ剤、サシェ剤、カシェ剤、エリキシル剤、懸濁液剤、乳濁液剤、溶液剤、シロップ剤、エアロゾル剤（固体としてまたは液体媒体で）、例えば最大１０重量％の活性化合物を含有する軟膏剤、軟質および硬質ゼラチンカプセル剤、坐剤、注入可能な滅菌溶液剤、ならびに滅菌パッケージ散剤の形態であってもよい。化合物は、活性化合物を含有する薬学的に許容されるビヒクルを用いて製剤化することによって、溶液、クリームまたはローションとして、局所投与することができる。適切な賦形剤または担体のいくつかの例として、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、デンプン、アカシアガム、リン酸カルシウム、アルギネート、トラガント、ゼラチン、ケイ酸カルシウム、微結晶性セルロース、ポリビニルピロリドン、セルロース、滅菌水、シロップ、およびメチルセルロースが挙げられる。製剤はさらに、潤滑剤、例えばタルク、ステアリン酸マグネシウム、および鉱油、湿潤剤、乳化剤および懸濁化剤、保存剤、例えば安息香酸メチルおよび安息香酸プロピルヒドロキシ、甘味剤、ならびに香味剤を含むことができる。実施形態の組成物は、当技術分野で公知の手順を用いることによって、患者に投与した後に活性成分の急速、持続または遅延放出をもたらすように製剤化することができる。
【０２８６】
製剤を調製するには、活性な凍結乾燥化合物を、他の成分と組み合わせる前に製粉して、適切な粒径を提供することが必要な場合がある。活性化合物が実質的に不溶性である場合、活性化合物は、普通は２００メッシュ未満の粒径まで製粉される。活性化合物が実質的に水溶性である場合、粒径は、普通は、製粉して製剤において実質的に均一な分布、例えば約４０メッシュを提供することによって調整される。
【０２８７】
実施形態のこれらの医薬組成物は、経口、直腸、経皮、皮下、静脈内、筋肉内、および鼻腔内を含む様々な経路によって投与することができる。これらの化合物は、注射可能な組成物および経口組成物の両方として有効である。このような組成物は、調剤分野で周知の方式で調製され、少なくとも１つの活性化合物を含む。一部の実施形態では、医薬組成物は、それらに限定されるものではないが、カプセル剤、錠剤、散剤または顆粒剤の製剤を含む任意の許容される投与剤形で、および水または非水性媒体中の懸濁液または溶液として、経口投与することができる。化合物を含む医薬組成物および／または製剤は、担体、滑沢剤、希釈剤、増粘剤、香味剤、乳化剤、分散助剤または結合剤を含むことができる。経口で使用するための錠剤の場合、一般に使用される担体には、ラクトースおよびトウモロコシデンプンが含まれる。潤滑剤、例えばステアリン酸マグネシウムも、典型的に添加される。カプセル形態の経口投与では、有用な希釈剤には、ラクトースおよび乾燥トウモロコシデンプンが含まれる。水性懸濁液が経口で使用するために必要とされる場合、活性成分は、乳化剤および懸濁化剤と組み合わされる。所望に応じて、ある特定の甘味剤、香味剤または着色剤を添加することもできる。
【０２８８】
本実施形態の化合物は、経口組成物として用いられる場合、薬学的に許容される保護剤によって胃内の酸による消化から保護することができる。例えば、錠剤または丸剤は、内側の投与量および外側の投与量構成成分を含むことができ、外側の構成成分は、内側の構成成分を覆うエンベロープの形態である。２つの構成成分は、胃内での崩壊に抵抗し、内側の構成成分を十二指腸に無傷で通過させ、または放出を遅延させるように働く腸溶層によって分離することができる。様々な材料を、このような腸溶層またはコーティングのために使用することができ、このような材料は、いくつかのポリマー酸、ならびにポリマー酸とセラック、セチルアルコールおよび酢酸セルロースなどの材料の混合物を含む。
【０２８９】
吸入または吹送のための組成物は、薬学的に許容される水性もしくは有機溶媒、またはこれらの混合物中の溶液および懸濁液、ならびに散剤を含む。液体または固体組成物は、前述の適切な薬学的に許容される賦形剤を含有することができる。該組成物は、局所的または全身的効果のために、経口または経鼻呼吸器経路によって投与することができる。薬学的に許容される溶媒中の組成物は、不活性ガスを使用することによって噴霧することができる。噴霧された溶液は、噴霧装置から直接吸入することができ、または噴霧装置は、フェイスマスクテントもしくは間欠的陽圧呼吸器につなぐことができる。また、溶液剤、懸濁液剤、または散剤の組成物は、製剤を適切な方式で送達する装置から、経口または経鼻投与することができる。
【０２９０】
実施形態の化合物は、細胞および組織浸透に優れた特徴を有しているが、例えばリポソーム担体で製剤化して、さらにより高い利益をもたらすことができる。細胞への取込みを容易にするリポソームの使用は、例えば米国特許第４，８９７，３５５号および米国特許第４，３９４，４４８号に記載されている。数々の刊行物が、リポソームの製剤化および調製を記載している。また化合物は、脂肪酸およびそれらの誘導体を含む前述の脂質部分の非コンジュゲート形態などの、追加の浸透増強剤と混合することによって製剤化することができる。その例として、オレイン酸、ラウリン酸、カプリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、リノール酸、リノレン酸、ジカプリン酸、トリカプリン酸、リシノール酸（recinleate）、モノオレイン（別名１−モノオレオイル−ｒａｃ−グリセロール）、ジラウリン、カプリル酸、アラキドン（arichidonic）酸、１−モノカプリン酸グリセリル、１−ドデシルアザシクロヘプタン−２−オン、アシルカルニチン、アシルコリン、モノ−およびジ−グリセリド、ならびに生理的に許容されるそれらの塩（すなわち、オレイン酸塩、ラウリン酸塩、カプリン酸塩、ミリスチン酸塩、パルミチン酸塩、ステアリン酸塩、リノール酸塩等）が挙げられる。
【０２９１】
１つまたは複数の浸透増強剤を含む複合製剤を使用することができる。例えば胆汁塩を、脂肪酸と組み合わせて使用して、複合製剤を作製することができる。例示的な組合せとして、一般に約０．５〜５％の濃度で使用されるカプリン酸ナトリウムまたはラウリン酸ナトリウムと組み合わされる、一般に約０．５〜２％の濃度で使用されるケノデオキシコール酸（ＣＤＣＡ）が挙げられる。
【０２９２】
本実施形態の化合物を含む医薬組成物および／または製剤は、キレート剤、界面活性剤および非界面活性剤を含むこともできる。キレート剤には、エチレンジアミン四酢酸二ナトリウム（ＥＤＴＡ）、クエン酸、サリチル酸塩（例えば、サリチル酸ナトリウム、５−メトキシサリチル酸塩およびホモバニリン酸塩（homovanilate））、コラーゲンのＮ−アシル誘導体、ラウレス−９およびベータ−ジケトン（エナミン）のＮ−アミノアシル誘導体が含まれるが、これらに限定されない。界面活性剤には、例えばラウリル硫酸ナトリウム、ポリオキシエチレン−９−ラウリルエーテルおよびポリオキシエチレン−２０−セチルエーテル、ならびに全フッ素置換化合物乳濁液、例えばＦＣ−４３が含まれる。非界面活性剤には、例えば、不飽和環式尿素、１−アルキル−および１−アルケニルアザシクロ−アルカノン誘導体、ならびに非ステロイド系抗炎症剤、例えばジクロフェナクナトリウム、インドメタシンおよびフェニルブタゾンが含まれる。
【０２９３】
したがって、別の態様では、医薬組成物を製剤化する方法が提供され、該方法は、本明細書に記載の化合物を用意するステップと、その化合物を薬学的に許容される賦形剤と組み合わせるステップとを含む。ある特定の実施形態では、化合物は、以下に定義の薬学的純度で提供される。該方法は、化合物に、賦形剤を添加する前または添加した後に、浸透増強剤を添加するステップをさらに含むことができる。
【０２９４】
医薬組成物は、典型的に薬学的純度基準に従う。実施形態の化合物は、医薬調製物において活性成分として使用するために、一般に化合物が調製される混合物中に存在する他の反応性構成成分または潜在的に免疫原性の構成成分から精製される。典型的に、核酸に基づく化合物が活性成分である場合の薬学的純度を達成するために、活性成分は、機能アッセイ、クロマトグラフィー、またはゲル電気泳動法によって決定される通り、少なくとも約５０％の均一性、例えば６０％、７０％、８０％または９０％の均一性で提供される。次に、活性成分は、医薬調製物の調製に一般に認められている手順に従って、医薬に化合される。したがって、本実施形態では、化合物を薬学的純度で提供するには、化合物が少なくとも約５０％の均一性、例えば少なくとも８０％または９０％の均一性で提供されることが必要である。
【０２９５】
医薬組成物は、典型的に一定分量にされ、単回用量または複数回用量の単位でパッケージされる。化合物を用いて処置するための必要投与量は、用いられる特定の組成物、投与経路、現れた症状の重症度、化合物の形態、および処置対象となる特定の対象によって変わる。
【０２９６】
組成物は、単位剤形に製剤化することができ、各投与量は、以下の値の間の任意の範囲を含み、両端を含み約５ｍｇ〜約１００ｍｇまたはそれ超、例えば約１ｍｇ〜約５ｍｇ、１ｍｇ〜約１０ｍｇ、約１ｍｇ〜約２０ｍｇ、約１ｍｇ〜約３０ｍｇ、約１ｍｇ〜約４０ｍｇ、約１ｍｇ〜約５０ｍｇ、約１ｍｇ〜約６０ｍｇ、約１ｍｇ〜約７０ｍｇ、約１ｍｇ〜約８０ｍｇ、または約１ｍｇ〜約９０ｍｇのいずれかの活性成分を含有する。用語「単位剤形」は、個体のための単位投与量として適した物理的に別個の単位を指し、各単位は、適切な薬学的賦形剤または担体と関連して所望の治療効果をもたらすように算出された所定量の活性材料を含有する。
【０２９７】
このような効果を達成するのに必要な、投与当たりの化合物の量および投与回数は、疾患の徴候、処置対象となる患者の特徴、および投与方法を含む多くの因子に応じて変わる。典型的に、製剤および投与経路は、疾患部位において１μＭ〜１ｎＭの化合物の局所濃度を提供する。一般に、化合物は、害を及ぼすまたは有害な任意の副作用を引き起こすことなく有効な結果をもたらす濃度で投与される。このような濃度は、単一の単位用量を投与することによって、または好都合な部分単位に分割された用量を、１日を通して適切な間隔で投与することによって、達成することができる。本実施形態の化合物は、広範な投与量範囲にわたって有効であり、一般に治療有効量で投与される。しかし、実際に投与される化合物の量は、処置を受ける状態、選択された投与経路、投与される実際の化合物、個々の患者の年齢、体重および応答、患者の症状の重症度等を含む関連する環境に照らして、医師によって決定されることが理解されよう。
方法
【０２９８】
アンチセンスオリゴヌクレオチドは、一般に、研究試薬、診断用助剤および治療剤として使用される。例えば、極めて高い特異性で遺伝子発現を阻害することができるアンチセンスオリゴヌクレオチドは、特定の遺伝子の機能を解明するために、例えば生物学的経路の様々なメンバーの機能を区別するために、当業者によってしばしば使用される。したがって、特異的阻害効果は、研究で使用するために当業者によって使用されてきた。またアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ある特定の病状に存在するＤＮＡまたはｍＲＮＡに対するそれらの特異的結合またはハイブリダイゼーションに基づいて、ポリメラーゼ連鎖反応の一部を利用するハイブリダイゼーションに基づくアッセイおよび増幅アッセイが高い感度を提供することに起因して、診断用助剤として使用されている。
【０２９９】
またオリゴヌクレオチドの特異性および感度は、治療的な使用のために当業者によって使用されている。さらにオリゴヌクレオチドの特異性および感度は、タンパク質の望ましくない生成によって特徴付けられる疾患を有する生物を処置するために使用することができる。生物は、望ましくないタンパク質をコードする核酸ストランドと特異的にハイブリダイズすることができる配列を有する実施形態の化合物と接触させることができる。
【０３００】
例えば、以下の米国特許は、アンチセンスオリゴヌクレオチドを利用する対症方法、治療方法および他の方法を実証している。米国特許第５，１３５，９１７号は、ヒトインターロイキン−１受容体の発現を阻害するアンチセンスオリゴヌクレオチドを提供している。米国特許第５，０９８，８９０号は、ｃ−ｍｙｂ癌遺伝子に相補的なアンチセンスオリゴヌクレオチド、およびある特定の癌性状態のためのアンチセンスオリゴヌクレオチド治療を対象としている。米国特許第５，０８７，６１７号は、アンチセンスオリゴヌクレオチドを用いてがん患者を処置する方法を提供している。米国特許第５，１６６，１９５号は、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）のオリゴヌクレオチド阻害剤を提供している。米国特許第５，００４，８１０号は、単純ヘルペスウイルスＶｍｗ６５  ｍＲＮＡにハイブリダイズし、複製を阻害することができるオリゴマーを提供している。米国特許第５，１９４，４２８号は、インフルエンザウイルスに対して抗ウイルス活性を有するアンチセンスオリゴヌクレオチドを提供している。米国特許第４，８０６，４６３号は、アンチセンスオリゴヌクレオチドおよびＨＴＬＶ−ＩＩＩ複製を阻害するためのそれらの使用方法を提供している。米国特許第５，２８６，７１７号は、癌遺伝子の一部に相補的な塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを提供している。米国特許第５，２７６，０１９号および米国特許第５，２６４，４２３号は、細胞において外来核酸の複製を防止するために使用されるオリゴヌクレオチド類似体を対象としている。米国特許第４，６８９，３２０号は、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）に特異的な抗ウイルス剤としてのアンチセンスオリゴヌクレオチドを対象としている。米国特許第５，０９８，８９０号は、ヒトｃ−ｍｙｂ遺伝子のｍＲＮＡ転写物の少なくとも一部に相補的なオリゴヌクレオチドを提供している。米国特許第５，２４２，９０６号は、潜在性Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒウイルス（ＥＢＶ）感染症の処置において有用なアンチセンスオリゴヌクレオチドを提供している。
【０３０１】
ある特定の実施形態では、本明細書に開示の化合物は、細胞増殖性障害の処置および／または防止のために使用することができる。一部の実施形態では、個体は、細胞増殖性障害を有すると診断されているか、または細胞増殖性障害を有している疑いがある。「増殖性障害」は、正常な組織成長よりも急速に細胞が増殖する、任意の細胞障害である。したがって「増殖性細胞」は、正常細胞よりも急速に増殖している細胞である。増殖性障害には、新生物が含まれるが、これに限定されない。「新生物」は、一般に細胞増殖によって正常な組織成長よりも急速に成長する明確な塊を形成する、異常な組織成長である。新生物は、構造的組織化および正常組織との機能的協調の、部分的または完全な欠如を示す。これらは、広範に３つの主なタイプに分類することができる。上皮構造から生じる悪性新生物は、癌腫と呼ばれ、筋肉、軟骨、脂肪または骨などの結合組織を起源とする悪性新生物は、肉腫と呼ばれ、免疫系の構成成分を含む造血（hematopoetic）構造（血液細胞の形成に関する構造）に影響を及ぼす悪性腫瘍は、白血病およびリンパ腫と呼ばれる。腫瘍は、がん疾患の新生物の成長である。本明細書で使用される場合、新生物はまた、「腫瘍」と呼ばれ、造血性新生物ならびに充実性新生物を網羅するものとする。
【０３０２】
一部の実施形態では、疾患は、以下のいずれか１つのがんである：基底細胞癌、髄芽腫、膠芽腫、多発性骨髄腫、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性骨髄性白血病、膵臓がん、肺がん（小細胞肺がんおよび非小細胞肺がん）、食道がん、胃がん、胆道（billary）がん、前立腺がん、肝臓がん、肝細胞がん、消化管がん、胃がん、ならびに卵巣がんおよび膀胱がん。一部の実施形態では、がんは、膵管腺癌、結腸腺癌、および卵巣嚢胞腺癌からなる群から選択される。一部の実施形態では、がんは、膵管腺癌である。一部の実施形態では、がんは、灌流が不十分であり、かつ／または血管形成が不十分である腫瘍である。
【０３０３】
一部の実施形態では、がんは、例えば膵臓腺癌、膵臓腺扁平上皮癌、膵臓扁平上皮癌、および膵臓巨細胞癌を含む膵臓がんである。一部の実施形態では、膵臓がんは、外分泌膵臓がんである。一部の実施形態では、膵臓がんは、内分泌膵臓がん（例えば島細胞癌）である。一部の実施形態では、膵臓がんは、進行転移性膵臓がんである。
【０３０４】
本発明の方法によって処置できるがんの他の例として、副腎皮質（adenocortical）癌、特発性骨髄化生、ＡＩＤＳに関係するがん（例えば、ＡＩＤＳに関係するリンパ腫）、肛門がん、虫垂がん、星状細胞腫（例えば、小脳および大脳）、基底細胞癌、胆管がん（例えば、肝外）、膀胱がん、骨がん（骨肉腫および悪性線維性組織球腫）、脳腫瘍（例えば、神経膠腫、脳幹神経膠腫、小脳性または大脳性星状細胞腫（例えば、毛様細胞性星状細胞腫、びまん性星状細胞腫、未分化（悪性）星状細胞腫）、悪性神経膠腫、上衣腫、乏突起神経膠腫（oligodenglioma）、髄膜腫、頭蓋咽頭腫、血管芽腫、髄芽腫、テント上原始神経外胚葉腫瘍、視覚路および視床下部の神経膠腫、ならびに膠芽腫）、乳房がん、気管支腺腫／カルチノイド、カルチノイド腫瘍（例えば、消化管カルチノイド腫瘍）、未知の原発性癌、中枢神経系リンパ腫、子宮頸がん、結腸がん、結腸直腸がん、慢性骨髄増殖性障害、子宮内膜がん（例えば、子宮がん）、上衣腫、食道がん、ユーイングファミリー腫瘍、眼がん（例えば、眼内黒色腫および網膜芽細胞腫）、胆嚢がん、胃（gastric）（胃（stomach））がん、消化管カルチノイド腫瘍、消化管間質性腫瘍（ＧＩＳＴ）、胚細胞腫瘍（例えば、頭蓋外、性腺外、卵巣）、妊娠性絨毛腫瘍、頭頸部がん、肝細胞（肝臓）がん（例えば、肝癌および肝臓癌（heptoma））、下咽頭がん、島細胞癌（膵内分泌部）、喉頭がん、喉頭がん、白血病、口唇および口腔のがん、口腔がん、肝臓がん、肺がん（例えば、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、肺腺癌、および肺扁平上皮癌）、リンパ系新生物（例えば、リンパ腫）、髄芽腫、卵巣がん、中皮腫、転移性扁平上皮頸部がん、口のがん、多発性内分泌腺腫症候群、骨髄異形成症候群、骨髄異形成性／骨髄増殖性疾患、鼻腔および副鼻腔がん、上咽頭がん、神経芽細胞腫、神経内分泌がん、口腔咽頭がん、卵巣がん（例えば、卵巣上皮がん、卵巣胚細胞腫瘍、卵巣の低悪性度腫瘍）、膵臓がん、副甲状腺がん、陰茎がん、腹膜がん、咽頭がん、褐色細胞腫、松果体芽腫およびテント上原始神経外胚葉腫瘍、下垂体腫瘍、胸膜肺芽腫、リンパ腫、原発性中枢神経系リンパ腫（小膠細胞腫）、肺リンパ管筋腫症、直腸がん、腎臓がん、腎盂および尿管がん（移行細胞がん）、横紋筋肉腫、唾液腺がん、皮膚がん（例えば、非黒色腫（例えば、扁平上皮癌）、黒色腫、およびメルケル細胞癌）、小腸がん、扁平上皮がん、精巣がん、咽喉がん、胸腺腫および胸腺癌、甲状腺がん、結節性硬化症、尿道がん、腟がん、外陰がん、ウィルムス腫瘍、および移植後リンパ増殖性障害（ＰＴＬＤ）、母斑症（phakomatoses）に関連する異常血管増殖、浮腫（例えば脳腫瘍に関連する）、ならびにメイグス症候群が挙げられるが、これらに限定されない。
【０３０５】
一部の実施形態では、がんは、固形腫瘍（例えば進行固形腫瘍）である。固形腫瘍には、肉腫および癌腫、例えば線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、カポジ肉腫、軟組織肉腫、子宮サクロノーマ滑膜腫（sacronomasynovioma）、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌、膵臓がん、乳房がん、卵巣がん、前立腺がん、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、脂腺癌、乳頭状癌、乳頭状腺癌、嚢胞腺癌、髄質癌、気管支癌、腎細胞癌（例えば腺癌、明細胞腎細胞癌、乳頭腎細胞癌、嫌色素性腎細胞癌、集合管腎細胞癌、顆粒腎細胞癌、混合顆粒腎細胞癌、腎臓血管筋脂肪腫、または紡錘腎細胞癌を含む）、肝臓癌、胆管癌、絨毛癌、精上皮腫、胚性癌、ウィルムス腫瘍、子宮頸がん、精巣腫瘍、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神経膠腫、星状細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、乏突起神経膠腫、髄膜腫（menangioma）、黒色腫、神経芽細胞腫、および網膜芽細胞腫が含まれるが、これらに限定されない。
【０３０６】
一部の実施形態では、リンパ系新生物（例えば、リンパ腫）は、Ｂ細胞新生物である。Ｂ細胞新生物の例として、前駆Ｂ細胞新生物（例えば、前駆Ｂリンパ芽球性白血病／リンパ腫）および末梢Ｂ細胞新生物（例えば、Ｂ細胞慢性リンパ球性白血病／前リンパ球性白血病／小リンパ球性リンパ腫（小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ）、リンパ形質細胞性リンパ腫／免疫細胞腫、マントル（mantel）細胞リンパ腫、濾胞中心リンパ腫、濾胞性リンパ腫（例えば、細胞学的グレード：Ｉ（小細胞型）、ＩＩ（小細胞型および大細胞型の混合）、ＩＩＩ（大細胞型）および／またはサブタイプ、びまん性および主に小細胞タイプ）、低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、中悪性度／濾胞性ＮＨＬ、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（例えば、節外性（例えば、ＭＡＬＴ−タイプ＋／−単球様Ｂ細胞）および／または結節性（例えば、＋／−単球様Ｂ細胞））、脾性辺縁帯リンパ腫（例えば、＋／−絨毛リンパ球）、有毛細胞白血病、形質細胞腫／形質細胞骨髄腫（例えば、骨髄腫および多発性骨髄腫）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（例えば、原発性縦隔（胸腺）Ｂ細胞リンパ腫）、中悪性度びまん性ＮＨＬ、バーキットリンパ腫、高悪性度Ｂ細胞リンパ腫、バーキット様、高悪性度免疫芽球性ＮＨＬ、高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ、高悪性度小型非切れ込み核細胞性ＮＨＬ、巨大腫瘤病変ＮＨＬ、ＡＩＤＳに関係するリンパ腫、ならびにワルデンストレームマクログロブリン血症）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０３０７】
一部の実施形態では、リンパ系新生物（例えば、リンパ腫）は、Ｔ細胞および／または推定ＮＫ細胞新生物である。Ｔ細胞および／または推定ＮＫ細胞新生物の例として、前駆Ｔ細胞新生物（前駆Ｔリンパ芽球性リンパ腫／白血病）ならびに末梢Ｔ細胞およびＮＫ細胞新生物（例えば、Ｔ細胞慢性リンパ球性白血病／前リンパ球性白血病、および大型顆粒リンパ球白血病（ＬＧＬ）（例えば、Ｔ細胞タイプおよび／またはＮＫ細胞タイプ）、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（例えば、菌状息肉症／セザリー症候群）、不特定原発性Ｔ細胞リンパ腫（例えば、細胞学的分類（例えば、中サイズの細胞、中細胞および大細胞の混合）、大細胞型、リンパ上皮腫（lymphoepitheloid）細胞、サブタイプ肝脾γδＴ細胞リンパ腫、および皮下脂肪織炎（panniculitic）Ｔ細胞リンパ腫）、血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫（ＡＩＬＤ）、血管中心性リンパ腫、腸管Ｔ細胞リンパ腫（例えば、＋／−腸症関連）、成人Ｔ細胞リンパ腫／白血病（ＡＴＬ）、未分化大細胞型リンパ腫（ＡＬＣＬ）（例えば、ＣＤ３０＋、Ｔ細胞タイプおよびヌル細胞タイプ）、未分化大細胞リンパ腫、およびホジキンリンパ腫）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０３０８】
一部の実施形態では、リンパ系新生物（例えば、リンパ腫）は、ホジキン病である。例えば、ホジキン病は、リンパ球優位型、結節性硬化症、混合細胞型、リンパ球減少型、および／またはリンパ球豊富型であり得る。
【０３０９】
一部の実施形態では、がんは、白血病である。一部の実施形態では、白血病は、慢性白血病である。慢性白血病の例として、慢性骨髄性Ｉ（顆粒球性）白血病、慢性骨髄性白血病、慢性骨髄単球性白血病（ＣＭＭＬ）、および慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）が挙げられるが、これらに限定されない。一部の実施形態では、白血病は、急性白血病である。急性白血病の例として、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、および急性骨髄球性白血病（例えば、骨髄芽球性白血病、前骨髄球性白血病、骨髄単球性白血病、単球性白血病、および赤白血病）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０３１０】
一部の実施形態では、がんは、骨髄増殖性新生物または骨髄異形成症候群である。骨髄増殖性新生物および骨髄異形成症候群の例として、本態性血小板血症（ＥＴ）、真性赤血球増加症（ＰＶ）、および骨髄線維症（ＭＦ）が挙げられるが、これらに限定されない。一部の実施形態では、本明細書に開示の化合物は、難治性貧血、過剰芽細胞を伴う難治性貧血、または難治性血球減少症を処置するために使用することができる。
【０３１１】
一部の実施形態では、がんは、液性腫瘍または形質細胞腫である。形質細胞腫には、骨髄腫が含まれるが、これに限定されない。骨髄腫には、髄外性形質細胞腫、孤立性骨髄腫、および多発性骨髄腫が含まれるが、これらに限定されない。一部の実施形態では、形質細胞腫は、多発性骨髄腫である。
【０３１２】
一部の実施形態では、がんは、多発性骨髄腫である。多発性骨髄腫の例として、ＩｇＧ多発性骨髄腫、ＩｇＡ多発性骨髄腫、ＩｇＤ多発性骨髄腫、ＩｇＥ多発性骨髄腫、および非分泌性多発性骨髄腫が挙げられるが、これらに限定されない。一部の実施形態では、多発性骨髄腫は、ＩｇＧ多発性骨髄腫である。一部の実施形態では、多発性骨髄腫は、ＩｇＡ多発性骨髄腫である。一部の実施形態では、多発性骨髄腫は、くすぶり型または緩徐進行性多発性骨髄腫である。一部の実施形態では、多発性骨髄腫は、進行性多発性骨髄腫である。一部の実施形態では、多発性骨髄腫は、それらに限定されるものではないが、ボルテゾミブ、デキサメタゾン（Ｄｅｘ−）、ドキソルビシン（Ｄｏｘ−）、およびメルファラン（ＬＲ）などの薬物に対して抵抗性である場合がある。
【０３１３】
実施形態の化合物を使用して、染色体末端へのテロメア反復配列の付加を触媒するリボ核タンパク質であるテロメラーゼを阻害することによって、テロメラーゼ活性を有する細胞のテロメア伸長および／または増殖を阻害または低減することができる。
【０３１４】
オリゴヌクレオチドの配列は、図１に示されているテロメラーゼＲＮＡの配列（配列番号１）に相補的な領域を含むように選択される。テロメラーゼＲＮＡ構成成分に相補的な領域は、テロメラーゼＲＮＡの任意の部分を標的にすることができるが、テロメラーゼＲＮＡの特定の領域は、阻害性オリゴヌクレオチドのためのある特定の標的である。ある特定の１つの標的領域は、配列番号１のヌクレオチド３０〜６７にわたる領域であり、これは、配列番号１のヌクレオチド４６〜５６にわたる配列５’−ＣＵＡＡＣＣＣＵＡＡＣ−３’の１１ヌクレオチド領域である「鋳型領域」を含む。鋳型領域は、テロメラーゼが染色体末端に付加するテロメア反復配列を特定する機能を果たし、テロメラーゼ酵素の活性因子である（Chenら、Cell  １００巻：５０３〜５１４頁、２０００年、Kimら、Proc.  Natl.  Acad.  Sci.、USA  ９８巻（１４号）：７９８２〜７９８７頁、２００１年参照）。鋳型領域のすべてまたは一部に相補的な配列を含むオリゴヌクレオチド部分を含有する実施形態の化合物を、使用することができる。別の標的領域は、ｈＴＲのヌクレオチド１３７〜１７９にわたる領域である（Pruzanら、Nucl.  Acids  Research、３０巻：５５９〜５６８頁、２００２年参照）。この領域内では、１４１〜１５３にわたる配列が標的である。ＰＣＴ公開ＷＯ９８／２８４４２は、テロメラーゼを阻害するために、少なくとも７ヌクレオチド長のオリゴヌクレオチドを使用することを記載しており、ここでオリゴヌクレオチドは、ｈＴＲのヌクレオチド１３７〜１９６、２９０〜３１９、および３５０〜３８０を含む、鋳型領域の外側のｈＴＲ配列の利用可能な部分に相補的になるように設計されている。
【０３１５】
ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ＧＴＴＡＧＧＧＴＴＡＧ（配列番号２）、ＴＡＧＧＧＴＴＡＧＡＣＡＡ（配列番号３）、およびＣＡＧＴＴＡＧＧＧＴＴＡＧ（配列番号４）からなる群から選択される配列を含む。
【０３１６】
これらの文脈では、テロメア延長または細胞増殖の阻害または低減は、酵素または細胞が、実施形態の化合物で処置されていない対照実験と比較して、測定された長さまたは活性がより低いレベルであることを指す。特定の実施形態では、測定された長さまたは活性の阻害または低減は、少なくとも１０％の低減または阻害である。当業者は、少なくとも２０％、５０％、７５％、９０％または１００％の測定された長さまたは活性の低減または阻害が、特定の適用のために使用できることを理解されよう。テロメア伸長を阻害する実施形態の化合物の能力は、細胞を含まないアッセイ（生化学アッセイと呼ばれる）において、および細胞において決定することができる。
【０３１７】
したがって、本明細書では、細胞におけるテロメア伸長を阻害する方法が提供される。一実施形態では、該方法は、細胞を、テロメア伸長を阻害するのに有用な本明細書に記載の化合物のいずれか（医薬組成物のいずれかを含む）と接触させるステップを含む。一部の実施形態では、細胞は、がん細胞である。
【０３１８】
また本明細書では、細胞におけるテロメア長を短縮する方法が提供される。一実施形態では、該方法は、細胞を、テロメア伸長を阻害するのに有用な本明細書に記載の化合物のいずれか（医薬組成物のいずれかを含む）と接触させるステップを含む。一部の実施形態では、細胞は、がん細胞である。
【０３１９】
テロメア伸長の阻害を測定する方法および化合物の阻害活性を決定するためのこのような方法の使用は、本明細書に記載されている。例えば、ＴＲＡＰアッセイは、細胞抽出物系におけるテロメラーゼ活性を測定するための標準アッセイ法であり、テロメラーゼ阻害化合物の研究に広く使用されている（Kimら、Science  ２６６巻：２０１１頁、１９９７年、Weinrichら、Nature  Genetics  １７巻：４９８頁、１９９７年）。ＴＲＡＰアッセイは、テロメラーゼ基質またはプライマーへのヌクレオチドの付加によって形成された伸長生成物（ポリヌクレオチド）に組み込まれた放射性ヌクレオチドの量を測定する。組み込まれた放射活性は、放射性生成物を分離するためのゲルに曝露した検出スクリーン（例えばＰｈｏｓｐｈｏｒｉｍａｇｅｒスクリーン）上のバンドの強度として測定することができる。またＴＲＡＰアッセイは、米国特許第５，６２９，１５４号、第５，８３７，４５３号および第５，８６３，７２６号に詳説されており、テロメラーゼ阻害性化合物の活性試験におけるその使用は、ＷＯ０１／１８０１５を含む様々な刊行物に記載されている。さらに、テロメラーゼ活性を測定する研究目的では、以下のキットが市販されている。ＴＲＡＰｅｚｅ（登録商標）ＸＫテロメラーゼ検出キット（Ｃａｔ．ｓ７７０７；Ｉｎｔｅｒｇｅｎ  Ｃｏ．、Ｐｕｒｃｈａｓｅ  ＮＹ）およびＴｅｌｏＴＡＧＧＧテロメラーゼＰＣＲ  ＥＬＩＳＡプラス（Ｃａｔ．２，０１３，８９；Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ  ＩＮ）。ＴＲＡＰアッセイは、テロメラーゼ活性の阻害ではなく、テロメア伸長の阻害を測定するために使用することができる。本化合物が、テロメラーゼ基質またはプライマーへのヌクレオチドの付加によって形成された伸長生成物に組み込まれると、本化合物は、伸長生成物を停止または「キャップ」し、したがって追加のヌクレオチドが伸長生成物に付加されないようにする。このようにして、伸長生成物は、化合物より長くは延長せず、伸長生成物は、異なる長さの伸長生成物のラダーではなく、ゲル上で非常にごく短いバンドとなる。
【０３２０】
生化学アッセイにおけるテロメア伸長を阻害する化合物の能力を測定するための別のプロトコルは、直接的（非ＰＣＲベース）無細胞テロメラーゼアッセイであり、これは「Ｆｌａｓｈｐｌａｔｅアッセイ」と呼ばれ、Asaiら、Cancer  Research、６３巻：３９３１〜３９３９頁（２００３年）に記載されている。
【０３２１】
細胞におけるテロメア伸長を阻害する実施形態の化合物の能力は、化合物を、テロメラーゼを発現する細胞と共に規定された期間にわたってインキュベートし、次に細胞におけるテロメア長を決定することによって、決定することができる。このようなアッセイに適したテロメラーゼを発現する腫瘍細胞株には、ＨＭＥ５０−５Ｅヒト乳房上皮細胞（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｔｅｘａｓ  Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔｅｒｎ  Ｍｅｄｉｃａｌ  ＣｅｎｔｅｒのＪｅｒｒｙ  Ｓｈａｙ博士によって提供された）、卵巣腫瘍細胞株ＯＶＣＡＲ−５（ＭＩＩＳＢ、Ｍｉｌａｎ）およびＳＫ−ＯＶ−３（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ
Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ、ＡＴＣＣ）、ヒト腎臓癌Ｃａｋｉ−１細胞（Ｊａｐａｎｅｓｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｂｉｏｒｅｓｏｕｒｃｅｓ、ＪＣＲＢ）、ヒト肺癌１５４９細胞（ＡＴＣＣ）、ヒト類表皮癌Ａ４３１細胞（ＪＣＲＢ）、ならびにヒト前立腺がんＤＵ１４５細胞（ＡＴＣＣ）が含まれる。
【０３２２】
また本開示は、例えばマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）および短鎖干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）などの非コードＲＮＡを有効に標的化および／または阻害するアンチセンスオリゴヌクレオチドを提供する。
【０３２３】
ｍｉＲＮＡの官能性分析によって、これらの小型非コードＲＮＡが、発生タイミング、臓器形成、分化、パターン形成、胚発生、成長制御およびプログラム化細胞死を含む、動物の異なる生理的プロセスに寄与することが明らかになった。ｍｉＲＮＡが関与する特定のプロセスの例として、幹細胞分化、神経発生、血管新生、造血発生、および開口分泌が挙げられる（Alvarez-GarciaおよびMiska、Development、２００５年、１３２巻、４６５３〜４６６２頁により総説されている）。
【０３２４】
ｍｉＲＮＡファミリーおよびクラスターを含むｍｉＲＮＡ間の連結、ならびにヒトの疾患も、同定されている。多くのｍｉＲＮＡは、ヒトの原発性腫瘍において調節解除される。さらに、多くのヒトｍｉＲＮＡは、がんに連結したゲノム領域に位置している。また、ｍｉＲＮＡは、サイトカイン、例えばコロニー刺激性因子（ＣＳＦ）を含む免疫調節性タンパク質をモジュレートするために使用することができる。
【０３２５】
本開示はまた、ある特定の状態と関連するアンチセンス治療において有効であり得るアンチセンスオリゴヌクレオチドを提供する。したがって、実施形態の化合物は、慢性または急性炎症性または自己免疫疾患、特に異常なリンパ球または単球の蓄積と関連するもの、例えば慢性および急性炎症性または自己免疫疾患、異常なリンパ球または単球の蓄積、関節炎、若年性特発性関節炎、関節リウマチ、急性および慢性関節炎、喘息、アテローム性動脈硬化症、糖尿病性腎症、炎症性腸疾患、クローン病、多発性硬化症、腎炎、糸球体腎炎、膵炎、肺線維症、乾癬、再狭窄、移植片拒絶反応、アレルギー応答の初期段階、ＡＨＲ（気道過敏性）を防止するためのＬＴＣ４の阻害、結核感染症および悪性腫瘍、脳卒中、キャッスルマン病、新生物、高悪性度多発性骨髄腫、悪性中皮腫、中皮腫の腫瘍随伴症候群、免疫抑制、悪液質、血小板増加症、アミロイドーシス、骨形成不全症、ホモシスチン尿症、骨粗鬆症、大理石骨病、関節炎を伴う骨量の炎症およびｒ．関節炎、歯周疾患、線維性骨異形成症、パジェット病、慢性腎不全、内分泌疾患、高カルシウム血症、欠乏状態、吸収不良症候群、慢性肝疾患、がん転移、乳房腫瘍の転移への進行、筋ジストロフィー（例えばデュシェンヌ型筋ジストロフィー）、心血管疾患、高コレステロール血症、高トリグリセリド血症、冠動脈疾患、凝固障害、高脂血症、代謝性障害、糖尿病、肥満、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、炎症性障害、局所性線維症、眼の疾患、慢性疾患貧血（ＡＣＤ）、嚢炎、ＴＴＲアミロイドーシス、脊髄性筋ジストロフィー、重症高トリグリセリド血症（ＨＴＧ）、末端肥大症、クッシング症候群、遺伝性血管性浮腫、ならびに骨髄線維症の防止または処置に非常に有用である。
【０３２６】
本開示はまた、リボザイムなどの触媒ＲＮＡとして有効に作用するアンチセンスオリゴヌクレオチドを提供する。したがって、実施形態のオリゴヌクレオチドは、タンパク質酵素の作用に類似の特異的な生化学的反応を行うことができる。
併用治療
【０３２７】
いくつかの態様では、本明細書に開示の方法のいずれかは、本明細書に開示のｃ−ｍｙｃアンチセンスオリゴヌクレオチドのいずれかに加えて、個体に治療有効量（例えば前述の治療有効量のいずれか）の１つまたは複数の追加の抗がん治療剤を投与する（医薬組成物などで）ステップをさらに含むことができる。様々なクラスの抗がん剤を使用することができる。非限定的な例として、アルキル化剤、代謝拮抗物質、アントラサイクリン、植物性アルカロイド、トポイソメラーゼ阻害剤、ポドフィロトキシン、抗体（例えば、モノクローナルまたはポリクローナル）、チロシンキナーゼ阻害剤（例えば、イマチニブメシレート（Ｇｌｅｅｖｅｃ（登録商標）またはＧｌｉｖｅｃ（登録商標）））、ホルモン処置、可溶性受容体および他の抗悪性腫瘍薬が挙げられる。
【０３２８】
トポイソメラーゼ阻害剤も、使用できる別のクラスの抗がん剤である。トポイソメラーゼは、ＤＮＡのトポロジーを維持する必須の酵素である。タイプＩまたはタイプＩＩトポイソメラーゼを阻害すると、適切なＤＮＡ高次コイル形成を混乱させることによって、ＤＮＡの転写と複製の両方が妨害される。いくつかのタイプＩトポイソメラーゼ阻害剤には、カンプトテシンであるイリノテカンおよびトポテカンが含まれる。タイプＩＩの阻害剤の例として、アムサクリン、エトポシド、リン酸エトポシド、およびテニポシドが挙げられる。これらは、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｍａｙａｐｐｌｅ（Ｐｏｄｏｐｈｙｌｌｕｍ  ｐｅｌｔａｔｕｍ）の根において天然に生じるアルカロイドであるエピポドフィロトキシンの半合成誘導体である。
【０３２９】
抗悪性腫瘍薬には、免疫抑制剤であるダクチノマイシン、ドキソルビシン、エピルビシン、ブレオマイシン、メクロレタミン、シクロホスファミド、クロラムブシル、イホスファミドが含まれる。抗悪性腫瘍薬化合物は、一般に、細胞のＤＮＡを化学的に修飾することによって働く。
【０３３０】
アルキル化剤は、細胞に存在する条件下で多くの求核性官能基をアルキル化することができる。シスプラチンおよびカルボプラチンおよびオキサリプラチンは、アルキル化剤である。これらは、生物学的に重要な分子においてアミノ、カルボキシル、スルフヒドリル、およびリン酸基と共有結合を形成することによって細胞機能を損なう。
【０３３１】
ビンカアルカロイドは、チューブリン上の特異的な部位に結合し、微小管へのチューブリンの集合（細胞周期のＭ期）を阻害する。ビンカアルカロイドには、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、およびビンデシンが含まれる。
【０３３２】
代謝拮抗物質は、プリン（アザチオプリン、メルカプトプリン）またはピリミジンに似ており、これらの物質が細胞周期の「Ｓ」期中にＤＮＡに組み込まれないようにし、正常な発生および分裂を停止させる。代謝拮抗物質も、ＲＮＡ合成に影響を及ぼす。
【０３３３】
植物性アルカロイドおよびテルペノイドは、植物に由来しており、微小管機能を防止することによって細胞分裂を遮断する。微小管は細胞分裂にとって不可欠なので、微小管がないと細胞分裂が生じることができない。主な例は、ビンカアルカロイドおよびタキサンである。ポドフィロトキシンは、消化の一助になることが報告されており、他の２種の細胞分裂阻害薬物であるエトポシドおよびテニポシドを生成するためにも使用されている、植物由来の化合物である。これらは、細胞がＧ１期（ＤＮＡ複製の開始）およびＤＮＡの複製（Ｓ期）に入るのを防止する。一群としてのタキサンには、パクリタキセルおよびドセタキセルが含まれる。パクリタキセルは、元々タキソールとして公知であり、Ｐａｃｉｆｉｃ  Ｙｅｗの木の樹皮から最初に導出された天然生成物である。ドセタキセルは、パクリタキセルの半合成類似体である。タキサンは、微小管の安定性を増強し、分裂後期において染色体の分離を防止する。
キット
【０３３４】
本開示は、式（Ｉ）〜（ＩＩＩ）のいずれかの化合物または式（ＩＶ）の部分を含むオリゴヌクレオチドを含む１つまたは複数の容器を含む薬学的なパックまたはキットを提供する。
【０３３５】
本開示はまた、本実施形態の医薬組成物の成分の１つまたは複数を含む１つまたは複数の容器を含む薬学的なパックまたはキットを提供する。任意選択でこのような容器（複数可）との関連物は、医薬品または生物学的生成物の製造、使用または販売を規制する行政機関によって処方された形態の注意書きであってよく、この注意書きは、ヒトへの投与のための製造、使用または販売の行政機関による承認を反映している。
【実施例】
【０３３６】
以下の実施例は、実施形態の化合物の合成および活性を例示する。
（実施例１）ジメチルアミノ−ホスホロクロリデートモノマーの合成のための一般手順
【０３３７】
ジメチルアミノ−ホスホロクロリデートモノマーを合成するためのスキームを、以下のスキームに示す。
【化３４】
2019065054.tif 000049
【０３３８】
７ｍｍｏｌの５’−ヒドロキシル保護された３’−アミノ−ヌクレオシドを、乾燥ジクロロメタン３０〜１００ｍｌに溶解した。１４ｍｍｏｌの２，６−ルチジンおよび７ｍｍｏｌのＮ−メチルイミダゾールを添加し、溶液または懸濁液を０℃に冷却した。１４ｍｍｏｌのジメチルアミノ−ホスホロジクロリデートを５分かけて滴下添加した。反応混合物を室温まで温め、１〜２時間撹拌した。反応を、ＴＬＣによってジクロロメタン／メタノール９：１溶媒系を使用して追跡した。出発材料が消失した後、反応混合物を、クロロホルム／アセトン９５：５を用いて調製したシリカゲルカラム上に搭載した。アセトン含量を、２５％まで徐々に増大した。生成物の２つの異性体を収集し、真空中で蒸発させた。クロマトグラフィー後の反応収率は、４０〜７０％であった。
【０３３９】
ＭＭＴｒ−チミジンモノマー：３１Ｐ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＣＮ）：１８．１３０、１７．７７５ｐｐｍ
【０３４０】
Ｎ６−Ｂｚ−３’−ＮＨ−Ｔｒ−２’−デオキシ−アデノシンモノマー：３１Ｐ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＣＮ）：１７．９３７、１７．４８０ｐｐｍ
【０３４１】
Ｎ２−ｉＢｕ−３’−ＮＨ−Ｔｒ−２’−デオキシ−グアノシンモノマー：３１Ｐ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＣＮ）：１８．５１４、１７．９９８ｐｐｍ
【０３４２】
Ｎ４−Ｂｚ−３’−ＮＨ−Ｔｒ−２’−デオキシ−シチジンモノマー：３１Ｐ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＣＮ）：１８．１９４、１７．６８５ｐｐｍ
【０３４３】
Ｎ６−ＤＭＦ−３’−ＮＨ−Ｔｒ、２’−デオキシ−アデノシンモノマー：３１Ｐ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＣＮ）：１８．３３５、１７．９２４ｐｐｍ
【０３４４】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＣＮ）：２つの異性体の混合物のジメチル−アミノ部分におけるメチル基の共鳴を、２．５〜２．８ｐｐｍで検出する。
【０３４５】
質量分析：化合物の分子量を、ＥＳ  ＭＳによって正イオンモードで確認した。
（実施例２）固相上のダイマーの合成
【０３４６】
トリチル基で保護されたチミジン−アデノシンダイマーを合成するための手順を、以下に記載する。
【０３４７】
Ａｐｐｌｉｅｄ  ＢｉｏＳｙｓｔｅｍｓ（Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ、ＣＡ）ＤＮＡ合成機でデフォルト１μｍｏｌの合成サイクルを、以下の通り改変した。カップリングのための待ち時間を、６０分に設定し、酸化ステップを削除し、脱遮断ステップ後に、通常酸化剤を含有する容器からジクロロメタン中５％ＤＩＥＡ溶液を５秒間かけてカラムに送達した。モノマーは、ジクロロメタン中０．２Ｍ溶液であった。活性化因子の容器は、ジイソプロピルアミノ−エタノールの０．６Ｍ溶液を含有していた。脱遮断溶液は、１０％トリフルオロエタノールを含有するジクロロメタン中５％シアノ酢酸であった。
【０３４８】
合成カラムは、およそ１μｍｏｌの３’−アミノトリチル−ＣＰＧを含有していた。合成カラムを、加熱テープを用いて４０℃に加熱した。
【０３４９】
サイクルの最後に、エタノール−ｃｃ．アンモニア１：２を使用して、５５℃で１時間、ダイマーを脱遮断した。
【０３５０】
生成物の２つの異性体を、５０ｍＭの酢酸トリエチルアンモニウム中アセトニトリルの９０％までの直線勾配を３０分、流速：１ｍｌ／分で使用して、それぞれ１７．０および１７．３分において溶出した。
【０３５１】
３１Ｐ  ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：１８．６１３、１８．４７８ｐｐｍ
（実施例３）化合物Ｃの合成
【０３５２】
トリチル基およびｔ−ブチル−ジメチルシリル基で保護されたチミジン−チミジンダイマー（化合物Ｃ）を合成するための手順を、以下に記載する。
【化３５】
2019065054.tif 000050
【０３５３】
１．２ｇ（３．３８ｍｍｏｌ、１．２当量）の化合物Ｂを、ＣＨ３ＣＮ／ＤＣＭ（１５ｍｌ／１０ｍｌ）の混合物に溶解し、それにＤＩＰＥＡ１．２ｍＬ（６．７６ｍｍｏｌ、２．２当量）を添加した後、化合物Ａ１．７ｇ（２．８１ｍｍｏｌ、１当量）を添加した。この混合物に、ＬｉＢｒ５００ｍｇ（６．７６ｍｍｏｌ、２．２当量）を添加し、反応混合物を３０分間撹拌した。ＴＬＣは、１の完全な消費を示し、その時点で溶媒を蒸発させ、残渣をジクロロメタンに溶解し、２×Ｈ２Ｏ、１×ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発させた。粗製物の収量は、２．７グラムであった（適量）。ＨＰＬＣおよびＬＣ−ＭＳトレースは、化合物Ｃに相当していた。
【０３５４】
化合物ＡのＨＰＬＣトレース：化合物Ａを１３．８分において溶出した。
【０３５５】
粗製生成物のＨＰＬＣトレースでは、１５．２および１７．９分において溶出した。
【０３５６】
化合物ＣのＨＰＬＣトレース：化合物Ｃの異性体を、１７．４および１７．６分において溶出した。
【０３５７】
化合物ＣのＬＣ−ＭＳスペクトルは、質量が９２６（Ｍ−１）であることを示した。
（実施例４）化合物Ｄの合成
【０３５８】
トリチル基およびｔ−ブチル−ジメチルシリル基で保護されたチミジン−チミジンダイマーを５’ＴＢＤＭＳ脱保護して化合物Ｄを形成するための手順を、以下に記載する。
【化３６】
2019065054.tif 000051
【０３５９】
化合物Ｃ２．７ｇ（３．０ｍｍｏｌ）に、ＴＢＡＦ／ＴＨＦの１Ｍ溶液２０ｍｌを添加し、反応混合物を２時間撹拌し、その時点でＴＬＣは反応が完了したことを示した。溶媒を蒸発させ、残渣をジクロロメタンに溶解し、フラッシュクロマトグラフィーによって精製した。化合物Ｄの精製収量は、２．３ｇ（８５％）であった。ＨＰＬＣおよびＬＣ−ＭＳトレースは、化合物Ｄに相当していた。
【０３６０】
化合物ＤのＨＰＬＣトレースは、２つの異性体が１２．８２および１３．０１分において溶出されたことを示した。
【０３６１】
化合物ＤのＬＣ−ＭＳスペクトルは、２つの異性体が、同一の質量値８１２（Ｍ−１）を有していることを示した。
（実施例５）化合物Ｅの合成
【０３６２】
トリチル基で保護されたチミジン−チミジンダイマーを３’−ＮＨ脱トリチル化して化合物Ｅを形成するための手順を、以下に記載する。
【化３７】
2019065054.tif 000052
【０３６３】
化合物Ｄ３００ｍｇ（０．３３ｍｍｏｌ）に、４％シアノ酢酸０．５ｍｌを添加し、反応混合物を５分間撹拌し、氷浴中で冷却し、トリエチルアミンで中和した。溶媒を蒸発させ、粗製混合物をＲＰ−ＨＰＬＣによって精製した。収量１５０ｍｇ（収率８０％）。ＨＰＬＣ、ＬＣ−ＭＳトレースおよびＰ３１ＮＭＲは、化合物Ｅに相当していた。
【０３６４】
化合物ＥのＨＰＬＣトレースは、２つの異性体が８．６６および８．９２分において溶出されたことを示した。
【０３６５】
化合物ＥのＬＣ−ＭＳスペクトルは、２つの異性体が、同一の質量値５７０（Ｍ−１）を有していることを示した。
【０３６６】
Ｄ２Ｏにおける化合物Ｅの３１Ｐ  ＮＭＲスペクトル（δ、ｐｐｍ）：１８．７３３、１８．８２２。
【０３６７】
ＨＰＬＣカラムおよび方法：Ｈｙｐｅｒｃｌｏｎｅ  ５μＭ、ＯＤＳ  Ｃ１８、４．６×２５０ｍｍ。５０ｍＭの酢酸トリエチルアンモニウム中アセトニトリルの９０％までの直線勾配、３０分、流速：１ｍｌ／分。
【図１】
2019065054.tif 000053
【外国語明細書】
2019065054000001.pdf