(57)【要約】      （修正有）【課題】ウシなどの家畜の過剰排卵処理を、天然物を用い、硬結を生じることなく、従来よりも簡易に行なうことのできる技術を提供すること。【解決手段】過剰排卵処理用徐放剤１０は卵胞刺激ホルモン剤（ＦＳＨ）に徐放性を付与するための徐放剤であり、溶媒３中にプロテオグリカン２が含有されている構成とする。プロテオグリカン２の含有量は、１ｍｌあたり２０ｍｇ以上とする。溶媒３としては生理食塩水の使用で十分である。本徐放剤１０は特に、家畜の受精卵生産用として好適に用いることができる。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
卵胞刺激ホルモン剤に徐放性を付与するための徐放剤であって、プロテオグリカンが含有されていることを特徴とする、過剰排卵処理用徐放剤。
【請求項２】
１ｍｌあたり２０ｍｇ以上のプロテオグリカンが含有されている溶液であることを特徴とする、請求項１に記載の過剰排卵処理用徐放剤。
【請求項３】
家畜の受精卵生産用であることを特徴とする、請求項１または２に記載の過剰排卵処理用徐放剤。
【請求項４】
卵胞刺激ホルモン剤とプロテオグリカンを含有することを特徴とする、過剰排卵処理用溶液。
【請求項５】
家畜の受精卵生産用であることを特徴とする、請求項４に記載の過剰排卵処理用溶液。
【請求項６】
請求項１、２、３のいずれかに記載の過剰排卵処理用徐放剤と卵胞刺激ホルモン剤の組合せからなることを特徴とする、過剰排卵処理用セット。
【請求項７】
請求項１、２、３のいずれかに記載の過剰排卵処理用徐放剤を加えた卵胞刺激ホルモン剤、または請求項４もしくは５に記載の過剰排卵要処理用溶液を家畜に投与することで過剰排卵を得ることを特徴とする、過剰排卵処理方法。
【請求項８】
１回のみの前記投与により過剰排卵を得ることを特徴とする、請求項７に記載の過剰排卵処理方法。
【請求項９】
請求項１、２、３のいずれかに記載の過剰排卵処理用徐放剤を加えた卵胞刺激ホルモン剤、または請求項４もしくは５に記載の過剰排卵要処理用溶液を用いて受精卵を得ることを特徴とする、受精卵生産方法。
【請求項１０】
卵胞刺激ホルモン剤に対する徐放剤としての、プロテオグリカンの使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は過剰排卵処理用徐放剤、過剰排卵処理用溶液、過剰排卵処理用セット、過剰排卵処理方法、受精卵生産方法、および徐放剤としてのプロテオグリカンの使用に係り、特に、家畜の受精卵移植技術における過剰排卵処理を簡易に行なうことのできる、過剰排卵処理用徐放剤等に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
図９は、ウシにおける受精卵移植技術の概要を示す説明図である。図示するようにウシにおける受精卵移植技術は、能力の優れた雌ウシ（ドナー）から得られた卵子によって受精卵を生産し、これを借り腹ウシ（レシピエント）へ移植し、これにより能力の優れたウシを生産する技術であり、受精卵移植技術に先立って、過剰排卵処理技術が実施される。過剰排卵処理技術は、ウシ（ドナー）にホルモン剤を注射して卵巣を刺激し、一度に多数の卵子を排卵させる技術である。これにより得られた卵子を用いて受精卵が生産され、生産された受精卵が借り腹ウシ（レシピエント）の子宮内に注入される（受精卵移植）。
【０００３】
過剰排卵処理では、ウシの卵巣に対して、持続的に卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）を作用させる必要がある。これは、血液中のホルモン濃度を一定以上に維持しないと、所望の過剰排卵が起きないからである。そこで、１日あたり朝と夕の２回ホルモン剤を投与し、これを３〜４日間に亘って続けるということが、従来行なわれている。つまり、ウシには、計６〜８回のホルモン剤注射がなされている。表１に、従来の過剰排卵処理方法（減量投与法）の例を示す。なお、表中の「ＣＩＤＲ」および「エストラメイト」は登録商標である。また、表１中、７日目午後の「排卵誘発剤」は性腺刺激ホルモン放出ホルモン（ＧｎＲＨ）誘導体製剤である。
【０００４】
【表１】
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【０００５】
家畜の受精卵移植技術については従来、特許出願等による技術的な提案も複数なされている。たとえば後掲特許文献１には、ウシの受精卵移植成功率を遺伝子レベルで簡便に判定する方法として、雌ウシから分離された核酸試料について、エストロゲン合成酵素をコードするＣＹＰ１９Ａ１遺伝子領域における変異の有無を検出することに基づき、雌ウシの受精卵移植成功率を判定する方法が開示されている。そして、エストロゲン分泌量ないしは血中エストロゲン量の低下などをもたらす変異型アリルの存在が、雌ウシに受精卵を移植した場合の成功率の低さの指標となる、としている。
【０００６】
また特許文献２には、哺乳動物の卵子を活性化する方法として、細胞層が形成された状態の脂肪組織由来幹細胞に接触した状態で卵子を共培養する方法が開示されている。そして、これによって活性化された卵子は、不妊症の治療、受精卵移植、体外受精などに利用可能である、としてる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特開２０１６−１９８０２３号公報「ウシの受精卵移植成功率の判定方法」
【特許文献２】特開２０１６−７１６１号公報「卵子活性化方法及びその用途」
【特許文献３】特開２００５−２８１２４５号公報「実験動物用徐放性卵胞刺激剤および過剰排卵誘起法」
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
さて、上述の通りウシの過剰排卵処理では従来、血液中ホルモン濃度を一定以上に保持する必要性から、ウシに対する卵胞刺激ホルモン剤投与を複数回、複数日程に亘って行なわなくてはならないのだが、これには問題がある。まず、作業回数が多くなり、煩雑である。また、ウシに対しても余計にストレスがかかることとなり、良好な過剰排卵を得るためにも望ましくない。投与されるホルモン剤に徐放性（作用効果が徐々に現われ、持続する性質）を付与するための徐放剤、たとえばヒアルロン酸（ＨＡ）、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、金属（水酸化アルミニウムゲル、上記特許文献３）を用いる方法も開示されてはいる。
【０００９】
しかし、ＨＡはその粘稠度の高さ故にホルモンの溶解が困難であるため、複数回の投与が必要である。ＰＶＰは１度の投与で使用可能だが、合成物であり天然物ではないため、注射部位の組織へのダメージが懸念される。また特許文献３開示の水酸化アルミニウムゲルも１度の皮下注射で可能であるが、注射部位に硬結が生じるという副作用が問題である。天然物を用い、硬結を生じず、かつ簡易な手法の開発が求められている。そこで本発明が解決しようとする課題は、かかる従来技術の問題点を踏まえ、ウシなどの家畜の過剰排卵処理を、天然物を用い、硬結を生じず、かつ従来よりも簡易に行なうことのできる技術を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本願発明者は上記課題について種々検討した。その結果、天然物であるプロテオグリカンを用いた卵胞刺激ホルモン１回ウシに投与することにより、従来の多回投与法と変わらない採卵成績が得られた。このことから、プロテオグリカンには徐放効果があり、持続的にホルモンを作用させていると推測され、プロテオグリカンが過剰排卵処理に応用可能であることが示唆された。そこで、プロテオグリカン溶液濃度の影響、ＦＳＨ血中濃度の変化、透析膜を用いたプロテオグリカン溶液の徐放効果等を検討した結果、過剰排卵処理用途におけるプロテオグリカンの有効性を確認し、これを基礎として本発明を完成するに至った。すなわち、上記課題を解決するための手段として本願で特許請求される発明、もしくは少なくとも開示される発明は、以下の通りである。
【００１１】
〔１〕  卵胞刺激ホルモン剤に徐放性を付与するための徐放剤であって、プロテオグリカンが含有されていることを特徴とする、過剰排卵処理用徐放剤。
〔２〕  １ｍｌあたり２０ｍｇ以上のプロテオグリカンが含有されている溶液であることを特徴とする、〔１〕に記載の過剰排卵処理用徐放剤。
〔３〕  家畜の受精卵生産用であることを特徴とする、〔１〕または〔２〕に記載の過剰排卵処理用徐放剤。
〔４〕  卵胞刺激ホルモン剤とプロテオグリカンを含有することを特徴とする、過剰排卵処理用溶液。
〔５〕  家畜の受精卵生産用であることを特徴とする、〔４〕に記載の過剰排卵処理用溶液。
【００１２】
〔６〕  〔１〕、〔２〕、〔３〕のいずれかに記載の過剰排卵処理用徐放剤と卵胞刺激ホルモン剤の組合せからなることを特徴とする、過剰排卵処理用セット。
〔７〕  〔１〕、〔２〕、〔３〕のいずれかに記載の過剰排卵処理用徐放剤を加えた卵胞刺激ホルモン剤、または請求項４もしくは５に記載の過剰排卵要処理用溶液を家畜に投与することで過剰排卵を得ることを特徴とする、過剰排卵処理方法。
〔８〕  １回のみの前記投与により過剰排卵を得ることを特徴とする、〔７〕に記載の過剰排卵処理方法。
〔９〕  〔１〕、〔２〕、〔３〕のいずれかに記載の過剰排卵処理用徐放剤を加えた卵胞刺激ホルモン剤、または請求項４もしくは５に記載の過剰排卵要処理用溶液を用いて受精卵を得ることを特徴とする、受精卵生産方法。
〔１０〕  卵胞刺激ホルモン剤に対する徐放剤としての、プロテオグリカンの使用。
【発明の効果】
【００１３】
本発明の過剰排卵処理用徐放剤、過剰排卵処理用溶液、過剰排卵処理用セット、過剰排卵処理方法、受精卵生産方法、および徐放剤としてのプロテオグリカンの使用は上述のように構成されるため、これらによれば、天然物利用によって、従来は煩雑だったウシなどの家畜の過剰排卵処理におけるホルモン剤投与を、硬結を生じることなく、ただ１回のみとすることができ、従来よりも格段に簡易に過剰排卵処理を行なうことができる。これにより、作業者（農家、獣医）の労力負担が大いに軽減され、農家の経費削減にもつながるとともに、ウシ（ドナー）のストレスも軽減でき、過剰排卵処理の円滑化につながる。
【００１４】
なお本発明は、ウシの受精卵移植技術の研究過程において産み出された発明であり、実施例に詳述するようにウシへの１回投与により、従来のような多回投与と同等の過剰排卵効果が確認されている。このように、発明の効果はウシにおいて確認されているが、本発明はホルモン剤の徐放剤としてプロテオグリカンを用いるという簡素な構成を基礎とするものであり、ウシ以外の家畜、たとえばブタ、ヒツジ、ヤギ等にも十分に応用可能な発明であると考えられる。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】本発明の過剰排卵処理用徐放剤の構成を示す概念図である。
【図２】本発明の過剰排卵処理用溶液の構成を示す概念図である。
【図３】本発明過剰排卵処理用セットの構成を示す概念図である。以下の各図は実施例に係る図である。
【図４】ＦＳＨ投与方法の説明図である。
【図５】プロテオグリカン区および減量投与区における血中ＦＳＨ濃度推移のグラフを示す。
【図６】濃度を変えたプロテオグリカン区計２区、および生理食塩水区における血中ＦＳＨ濃度推移のグラフである。
【図７】各徐放剤試料の粘度測定結果を示すグラフである。
【図８】各徐放剤試料の拡散ＦＳＨ濃度推移を示すグラフである。以下は従来技術を示す図である。
【図９】ウシにおける受精卵移植技術の概要を示す説明図である。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
以下、図面により本発明を詳細に説明する。
図１は、本発明の過剰排卵処理用徐放剤の構成を示す概念図である。また、
図２は、本発明の過剰排卵処理用溶液の構成を示す概念図である。これらに示すように本過剰排卵処理用徐放剤１０は、卵胞刺激ホルモン剤（ＦＳＨ）５に徐放性を付与するための徐放剤であり、溶媒３中にプロテオグリカン２が含有されていることを、主たる構成とする。プロテオグリカン２の含有量は、１ｍｌあたり２０ｍｇ以上とすることが、所期の徐放効果を得る上で望ましい。また、溶媒３としては生理食塩水の使用で十分である。本徐放剤１０は特に、ウシ等の家畜の受精卵生産用として好適に用いることができる。
【００１７】
徐放剤１０は、ＦＳＨ５に所定量添加され、過剰排卵処理用溶液１５が調製される。かかる過剰排卵処理用溶液１５を、ウシ等の家畜への投与（注射）に用いることができる。なお、図２に示した、卵胞刺激ホルモン剤５と、徐放剤１０の添加によりプロテオグリカン２とが含有されて構成されている過剰排卵処理用溶液１５もまた、本発明の範囲内である。徐放剤１０は、既存のＦＳＨ５に添加して用いることができ、また過剰排卵処理用溶液１５は、既に徐放剤１０により所定の希釈がなされていてそのままで徐放効果が得られる溶液として、用いることができる。過剰排卵処理用溶液１５は特に、ウシ等の家畜の受精卵生産用として用いることができる。
【００１８】
図３は、本発明過剰排卵処理用セットの構成を示す概念図である。図示するように本過剰排卵処理用セット２０は、上述した過剰排卵処理用徐放剤１０とＦＳＨ５の組合せからなるセットである。図２に示した過剰排卵処理用溶液１５とは異なり、本セット２０は、徐放剤１０とＦＳＨ５とは混合されていない状態のものが組み合わされて構成されており、使用者において、徐放剤１０をＦＳＨ５に適宜に添加して用いる形態である。
【００１９】
以上説明した過剰排卵処理用徐放剤１０を加えたＦＳＨ５、すなわち過剰排卵処理用溶液１５、または、徐放剤１０とＦＳＨ５とがあらかじめ混合済みの過剰排卵要処理用溶液１５、そのいずれかをウシ等の家畜に投与することにより過剰排卵を得る、過剰排卵処理方法もまた、本発明の範囲内である。特に本発明方法によれば、ただ１回のみの投与により、十分な過剰排卵効果が得られる。
【００２０】
また、上述した過過剰排卵処理用徐放剤１０を加えたＦＳＨ５、すなわち過剰排卵処理用溶液１５、または、徐放剤１０とＦＳＨ５とがあらかじめ混合済みの過剰排卵要処理用溶液１５、そのいずれかを用い、卵子を得、図９に示したように受精卵生産過程に供して行なう受精卵生産方法も、本発明の範囲内である。さらに、かかる受精卵生産方法により得られた受精卵を用いてこれをレシピエントに移植して行なう固体生産方法もまた、本発明の範囲内である。これらの方法は特に、ウシ等の家畜に好適に用いることができる。なおまた、ＦＳＨ５に対する徐放剤１０としてのプロテオグリカン２の使用も、本発明の範囲内である。
【実施例】
【００２１】
以下、本発明の実施例を説明するが、本発明はかかる実施例に限定されない。なお、本発明完成に至る研究開発経緯の概要説明をもって、実施例の説明に替える。
＜研究開発テーマ  ウシの過剰排卵処理簡易化技術の検討＞
＜１＞  課題
ウシの過剰排卵処理は従来、複数回、数日に亘るホルモン投与が必要であるところ、この回数および日数を減らせる方法を開発すること。
【００２２】
＜２＞  目標
ホルモン注射回数を１回だけとしても、十分な過剰排卵を得られるようにする。そのためには、１回の注射でいかにしてホルモンの血中濃度を維持し、持続的に作用させるかが肝要である。すなわち、十分な徐放効果を有する徐放剤を開発することが目標である。また、徐放剤は天然物であることとする。
＜３＞  方針
天然物であるプロテオグリカンは、保湿性、保水性を有することが知られている。これを、ホルモンの溶媒として用い、上記徐放効果を得られないか、検討する。
【００２３】
＜４＞  材料および方法
＜４−１＞  ＣＩＤＲ（登録商標）挿入およびＦＳＨ投与
試験ウシは、（地独）青森県産業技術センター畜産研究所で飼養されている正常な発情周期を繰り返している経産の黒毛和種９頭（延べ２４頭）を用いた。ウシ１頭あたり、発情日を避けて腟内留置型ホルモン製剤として、ＣＩＤＲ（登録商標、ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｉｎｔｒａｖａｇｉｎａｌ  ｄｒｕｇ  ｒｅｌｅａｓｉｎｇ  ｄｅｖｉｃｅ（ゾエティス・ジャパン社製））を腟内に挿入した。ＣＩＤＲ（登録商標）挿入日を０日とし、４日目に試験区として２０ｍｇ／ｍｌ（ＰＧ２０ｍｇ区）または３０ｍｇ／ｍｌ（ＰＧ３０ｍｇ区）となるようにプロテオグリカン（鮭鼻軟骨由来のプロテオグリカン、角弘プロテオグリカン研究所社製）を溶解した生理食塩水５ｍｌを溶媒とし、これにブタ由来卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）としてアントリン（登録商標）Ｒ−１０（共立製薬株式会社製）２０ＡＵ（アーマー単位）を溶解し、投与用試料とした。なお図４に示す通りウシへのＦＳＨ投与は、各試験区試料をウシ頚部筋肉内へ１回注射することにより行なった。
【００２４】
＜４−２＞  ホルモンの調製方法および試験区
４ｍｌの生理食塩水にプロテオグリカン１００ｍｇ、または１５０ｍｇを溶解、それぞれに１ｍｌの生理食塩水に溶解したＦＳＨ２０ＡＵを加えて、計５ｍｌとし、プロテオグリカン区とした。また、プロテオグリカンの徐放性の有無を確認するため、プロテオグリカンを含まない生理食塩水５ｍｌにＦＳＨを２０ＡＵ溶解（生理食塩水区）し、これらはＣＩＤＲ（登録商標）から４日目の朝に、注射により全量投与した。また、従来法である減量投与区（対照区）として、４日目の朝と夕方に各５ＡＵ、５日目の朝と夕方に各３ＡＵ、６日目の朝と夕方に各２ＡＵを１ＡＵ／ｍｌ生理食塩水の濃度で計２０ＡＵを注射した（前掲図９参照）。
【００２５】
＜４−３＞  排卵誘発および人工授精
すべての区について、上記のＦＳＨを注射したのと同時に、つまりＣＩＤＲ（登録商標）挿入から４日目に、プロスタグランジンＦ２α類縁体製剤であるエストラメイト（登録商標、ナガセ医薬品販売株式会社製）３ｍｌ、すなわちクロプロステノール７５０μｇを、頚部筋肉内に注射投与した。また、すべての区について、挿入から６日目にＣＩＤＲ（登録商標）を抜去し、除去後３１時間後に性腺刺激ホルモン放出ホルモン誘導体製剤である動物用イトレリン（登録商標、あすかアニマルヘルス株式会社製）２．５ｍｌ、すなわちブセレリン１０μｇを、頚部筋肉内に注射投与した。ブセレリン投与から２４時間目に人工授精を行い、人工授精後７日目に受精卵の回収を行った。
【００２６】
以上の試験は、同一ウシを用い、ＰＧ２０ｍｇ区（またはこれに加えてＰＧ３０ｍｇ区）、生理食塩水区、および減量投与区について、各々の過剰排卵処間隔を６２日以上空けて実施し、データを得た。
【００２７】
＜５＞  試験結果
＜５−１＞  発明方法による過剰排卵効果
表２に、プロテオグリカン区における試験方法を示す。また、
図５にはプロテオグリカン区および減量投与区における血中ＦＳＨ濃度推移のグラフを示す。なお、図中では、プロテオグリカン（以下、「ＰＧ」）１００ｍｇ／５ｍｌ生理食塩水であるＰＧ区（ＰＧ２０ｍｇ区）を、２０ｍｇ／ｍｌと表示している。図示するようにＰＧ溶液にホルモンを溶かして１回のみ注射した場合（ＰＧ２０ｍｇ区）、従来法である減量投与法（毎日２回朝夕、３日間）と同様に過剰排卵が発生することが認められた。特に投与後４８時間程度までは、ただ１回のみ投与のＰＧ区の方が複数回・複数日に亘る減量投与区よりも高いレベルで、血中ＦＳＨ濃度が推移した。
【００２８】
すなわち、ＰＧはホルモンの血中濃度を維持して持続的に作用可能とする徐放性を有することが確認できた。上述の通り従来法（減量投与法）では、ＦＳＨを合計６回注射しなくてはならず、作業が大変な上、ウシに対してもストレスがあった。ＰＧを徐放剤として用いた本発明の１回投与法により、従来法に劣らない過剰排卵効果が得られたことで、過剰排卵処理の省力化、作業労力低減化、低コスト化が可能になるとともに、ウシに対するストレスを軽減できる可能性も示唆された。なお、表２中、７日目午後の「排卵誘発剤」は性腺刺激ホルモン放出ホルモン（ＧｎＲＨ）誘導体製剤である。
【００２９】
【表２】
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【００３０】
＜５−２＞  ＰＧ濃度試験および過剰排卵成績
図６は、濃度を変えたＰＧ区計２区、および生理食塩水区における血中ＦＳＨ濃度推移のグラフである。なお、図中では、ＰＧ１００ｍｇ／５ｍｌ生理食塩水であるＰＧ区を２０ｍｇ／ｍｌ、ＰＧ１５０ｍｇ／５ｍｌ生理食塩水であるＰＧ区を３０ｍｇ／ｍｌと表示している。また、図中の「生食」は生理食塩水である。図示するように、ＰＧ溶液にＦＳＨを溶かして注射した場合（ＰＧ２０ｍｇ区、ＰＧ３０ｍｇ区）、生理食塩水に溶かした場合（生理食塩水区）と比べ、投与後１０時間以降は全期間に亘って、血液中のホルモン濃度が高濃度に維持されることが確認できた。一方、ＰＧを含まない生理食塩水区ではＦＳＨが血中に維持されないことが確認された。
【００３１】
図示する通り、ＰＧ濃度２０ｍｇ／ｍｌ（ＰＧ２０ｍｇ区）と３０ｍｇ／ｍｌ（ＰＧ３０ｍｇ区）とで、徐放効果に差異は見られなかった。したがって、ＦＳＨと混合して血液中のＦＳＨ濃度を維持する作用、すなわち徐放作用を得るためのＰＧの濃度は、２０ｍｇ／ｍｌで十分であることが確認できた。なお、表３に各試験区における過剰排卵成績を示す。ここに示す通り、本発明方法により黄体数、採卵卵子数、および正常胚数ともに、十分な実用性のあるレベルであった。
【００３２】
【表３】
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【００３３】
＜６＞  ＰＧの粘度評価
徐放剤としての取扱い性を評価するために、ＰＧの粘度測定を行ない、徐放効果が知られている従来例と比較した。
＜６−１＞  評価方法
徐放剤試料として、３０％ポリビニルピロリドン（以下、「ＰＶＰ」）、０．１〜１％ヒアルロン酸（以下、「ＨＡ」）、１〜３％ＰＧを用いた。粘度計（ＴＶＢ―１５、東機産業製）により、少量サンプル用治具「Ｌアダプタ」を使用し（サンプル量約２２ｍｌ）、測定温度２０℃、３７℃として測定した。
【００３４】
＜６−２＞  結果
図７は、各徐放剤試料の粘度測定結果を示すグラフである。図示するように、ＰＧ、ＨＡ、およびＰＶＰの粘度を比較したところ、ＰＧはＨＡと比較して１０倍の濃度でも粘度が低く、取り扱いが容易であることが確認できた。
【００３５】
＜７＞  ＰＧの徐放特性評価
ハンドリングを考慮して、３０％ＰＶＰよりも粘度の低い３％ＰＧと０．２％ＨＡを用い、透析法により徐放効果を比較した。
＜７−１＞  評価方法
徐放剤試料には０．２％ＨＡ、および３％ＰＧ、対照には生理食塩水を用いた。徐放剤５ｍｌにＦＳＨ（分子量３２，０００、１０Ａ．Ｕ．）を溶解し、透析膜内に封入した。透析膜にはセルロースエステル膜（ＭＷＣＯ：５０，０００  、Ｗ１６ｍｍ、０．７９ｍｌ／ｃｍ）を用い、透析温度は４℃、０、１、２、４〜３００時間経過時に外液２００μｌを採取し、膜外の外液中（生理食塩水、２００ｍｌ）に拡散するＦＳＨの濃度変化を追跡した。
【００３６】
＜７−２＞  結果
図８は、各徐放剤試料の拡散ＦＳＨ濃度推移を示すグラフである。図示するように、ＰＧは、ＨＡや生理食塩水と比較して、膜外の外液中に拡散するＦＳＨの濃度レベルが測定時間全範囲に亘って低く、したがってより高い徐放効果を有することが認められ、図６等を用いて既に述べたウシでの試験結果を裏付けるデータを得ることができた。
【００３７】
＜８＞  まとめ
１）ＦＳＨをプロテオグリカン溶液に混合し、ウシ頚部筋肉内へ１回投与することで、従来行なわれてきた多回投与と同等の過剰排卵効果が認められた。
２）ＦＳＨをプロテオグリカン溶液に混合し、ウシ頚部筋肉内へ１回投与した区分において、従来行なわれてきた多回投与と同様に血中ＦＳＨ濃度が保持されることが認められた。
３）ＦＳＨをプロテオグリカン溶液に混合し、ウシ頚部筋肉内へ１回投与した区分において、従来行なわれてきた多回投与と同様に多数の黄体が形成され、また採卵卵子数、正常胚数においても、十分な実用性が認められた。
４）透析膜を用いたＦＳＨの拡散速度の検討により、プロテオグリカン溶液を用いた区分が生理食塩水やＨＡと比較して徐放効果が高いことが認められた。
【産業上の利用可能性】
【００３８】
本発明の過剰排卵処理用徐放剤、過剰排卵処理用溶液、過剰排卵処理用セット、過剰排卵処理方法、受精卵生産方法、および徐放剤としてのプロテオグリカンの使用によれば、天然物を用いて、従来は煩雑だったウシなどの家畜の過剰排卵処理におけるホルモン剤投与をただ１回のみとすることができ、従来よりも格段に簡易に過剰排卵処理を行なうことができ、しかも硬結を生じることがない。これにより、作業者（農家、獣医）の労力負担が大いに軽減され、農家の経費削減にもつながるとともに、ウシ（ドナー）のストレスも軽減でき、過剰排卵処理の円滑化につながる。したがって、畜産分野および関連する全分野において、産業上利用性が極めて高い発明である。
【符号の説明】
【００３９】
２…プロテオグリカン
３…溶媒
５…卵胞刺激ホルモン剤（ＦＳＨ）
１０…過剰排卵処理用徐放剤
１５…過剰排卵処理用溶液
２０…過剰排卵処理用セット
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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