(57)【要約】【課題】  頭髪の本数の増加、伸長速度の増大、色の黒化、毛髪の太さの増大を促す育毛、発毛促進剤を提供する。【解決手段】  タンパク質分解酵素による加水分解卵殻膜であって、全アミノ酸重量合計に対するシスチンの含量が５重量％以上である加水分解卵殻膜を有効成分とする育毛、発毛促進剤である。酸で分解されやすい卵殻膜の主成分であるシスチン含量の低下を防止しつつ、シスチン以外のアミノ酸含量も上げることのできる特定の方法で製造されており、従来の方法で製造された加水分解卵殻膜に比べて、卵殻膜が本来有する育毛、発毛促進、脱毛防止などの優れた作用効果を十分に発揮することができる。本発明の加水分解卵殻膜は、化粧品、医薬部外品に多量に配合しても、刺激性がなく、頭皮および頭髪にかぶれ等の症状を引き起こすことのない、安全性にも優れたものである。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
タンパク質分解酵素による加水分解卵殻膜であって、全アミノ酸重量合計に対するシスチンの含量が５重量％以上である加水分解卵殻膜を有効成分とする育毛、発毛促進剤。
【請求項２】
前記タンパク質分解酵素による加水分解卵殻膜の全アミノ酸重量合計に対するシスチン、アルギニン、セリン、及びスレオニンのそれぞれの含量が、５重量％以上である、請求項１に記載の育毛、発毛促進剤。
【請求項３】
前記タンパク質分解酵素による加水分解卵殻膜の全アミノ酸重量合計に対するシスチンの含量が、７重量％以上である、請求項１または２に記載の育毛、発毛促進剤。
【請求項４】
前記タンパク質分解酵素による加水分解卵殻膜が、還元剤とキレート剤の共存の下での加水分解物である、請求項１〜３のいずれかに記載の育毛、発毛促進剤。
【請求項５】
前記タンパク質分解酵素がパパインであり、前記還元剤がピロ亜硫酸ナトリウムであり、前記キレート剤がクエン酸である、請求項４に記載の育毛、発毛促進剤。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれかに記載の育毛、発毛促進剤を含有する外用組成物。
【請求項７】
前記育毛、発毛促進剤の含有量が、外用組成物全重量に対して１〜３０重量％である、請求項６に記載の外用組成物。
【請求項８】
センブリエキス、ニンジンエキス、ハイビスカスエキス、柑橘類皮エキス、アロエエキス、竹酢エキス、酢酸トコフェロール、加水分解ケラチンから選択される１種以上の成分をさらに含有する、請求項６または７に記載の外用組成物。
【請求項９】
化粧品、医薬部外品、または医薬品である、請求項６〜８のいずれか１項に記載の外用組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、育毛、発毛促進剤に関する。より詳細には、本発明は、毛髪にハリおよびコシを与え、毛髪自体の成長を促進し、毛髪を太く濃くすることができ、健康な毛髪の数を増やすことのできる、人体への安全性に優れた育毛、発毛促進剤およびそれを使用した化粧品、医薬品等の外用組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
毛髪の質や量には個人差があり、生まれつき、または若いときから、毛髪の本数が少ない、毛髪が細いなどの理由で外見上髪が薄い場合がある。また、加齢とともに、毛髪が細くなったり、早期に抜け易くなったりして、年齢が上がると髪が薄くなる場合がある。さらに、ストレスや薬剤の副作用などの医学的な原因により、頭髪全体又は一部の髪が抜けたり、細くなったり、発毛が低減したりすることもある。
【０００３】
このような髪の状態については、直接的に健康上の問題ではない場合であっても、外見上の悩みとしてとらえる人が多数存在し、改善する手段が望まれている。この問題を解決するために、血行促進作用または免疫抑制作用などを有する薬剤、たとえばミノキシジルなどの化合物や、各種の植物エキスなどを有効成分とする各種の育毛、発毛促進剤または育毛、発毛促進用組成物が開発されている。
【０００４】
しかし、いずれも安定して十分な効果が得られるものではなく、たとえばミノキシジルについては、男性型脱毛症に多い前頭部の頭髪に対しては効果が見られないことが知られている。また、人によっては発赤、かゆみ、かぶれなどの症状を生じる場合の欠点または制限を有するものである。
【０００５】
鶏卵などの鳥類の卵の卵殻の内側にある膜である卵殻膜およびそれを部分加水分解して得られる加水分解卵殻膜は、美肌化、皮膚再生、育毛、発毛促進、脱毛防止などの作用を有することが知られている。本発明者は、加水分解卵殻膜を含有する睫毛用トリートメント（特許文献１）を開発した。しかし、これらの製品は、睫毛に適用することを目的としたものであり、睫毛とより広範囲に存在する毛髪とは生えている皮膚やさらされる環境などが異なるので、毛髪、特に頭髪用の育毛、発毛促進剤とは異なるものである。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開２００７−２３８５８５公報
【特許文献２】特開２０１６−９８２０６号公報
【特許文献３】特開２００８−７４１９号公報
【特許文献４】特許第５９８５３９４号明細書
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明の課題は、高い育毛、発毛促進および脱毛予防作用を有し、頭部に用いたときの安全性にも優れる毛髪用の育毛、発毛促進剤およびそれを含有する外用組成物の各種製品（化粧品、医薬部外品、医薬品）を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
上記の課題を達成するために、本発明者は種々検討を重ね、タンパク質分解酵素による特定の加水分解卵殻膜を含有させることにより、毛髪に対する育毛、発毛促進効果が得られることを見出し、本発明を完成するに至った。
すなわち、本発明は、
（１）タンパク質分解酵素による加水分解卵殻膜であって、全アミノ酸重量合計に対するシスチンの含量が５重量％以上である加水分解卵殻膜を有効成分とする育毛、発毛促進剤。
（２）前記タンパク質分解酵素による加水分解卵殻膜の全アミノ酸重量合計に対するシスチン、アルギニン、セリン、及びスレオニンのそれぞれの含量が、５重量％以上である、上記（１）に記載の育毛、発毛促進剤。
（３）前記タンパク質分解酵素による加水分解卵殻膜の全アミノ酸重量合計に対するシスチンの含量が、７重量％以上である、上記（１）または（２）に記載の育毛、発毛促進剤。
（４）前記タンパク質分解酵素による加水分解卵殻膜が、還元剤とキレート剤の共存の下での加水分解物である、上記（１）〜（３）のいずれかに記載の育毛、発毛促進剤。
（５）前記タンパク質分解酵素がパパインであり、前記還元剤がピロ亜硫酸ナトリウムであり、前記キレート剤がクエン酸である、上記（４）に記載の育毛、発毛促進剤。
に関する。
【０００９】
さらに、本発明は、
（６）上記（１）〜（５）のいずれかに記載の育毛、発毛促進剤を含有する外用組成物。
（７）前記育毛、発毛促進剤の含有量が、外用組成物全重量に対して１〜３０重量％である、上記（６）に記載の外用組成物。
（８）センブリエキス、ニンジンエキス、ハイビスカスエキス、柑橘類皮エキス、アロエエキス、竹酢エキス、酢酸トコフェロール、加水分解ケラチンから選択される１種以上の成分をさらに含有する、上記（６）または（７）に記載の外用組成物。
（９）化粧品、医薬部外品、または医薬品である、上記（６）〜（８）のいずれか１項に記載の外用組成物。
に関する。
【発明の効果】
【００１０】
本発明の育毛、発毛促進剤に含有されるタンパク質分解酵素による加水分解卵殻膜は、製造工程を通して中性近辺の温和なｐＨ条件を保つことで、酸で分解しやすい卵殻膜の主成分であるシスチン含量の低下を防止しつつ、シスチン以外のアミノ酸含量も上げることのできる特定の方法で製造したものであるため、従来の製造方法で作成した加水分解卵殻膜を使用した場合に比べて、卵殻膜が本来有する美肌化、育毛、発毛促進、脱毛防止などの優れた作用効果を十分に発揮できるものになる。
また、卵殻膜という人体や皮膚に対する安全性の高いものを使用しているので、化粧品、医薬部外品などの製造時に多量に配合しても、頭皮および頭髪にかぶれ等の症状を引き起こすことがなく、安全性に優れている。
本発明の育毛、発毛促進剤を使用することにより、従来の加水分解卵殻膜を使用した場合に比べて、頭髪の本数の増加、伸長速度の増大、色の黒化、毛髪の太さの増大といった、より望ましい効果が得られる。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
本発明の育毛、発毛促進剤は、タンパク質分解酵素による特定の加水分解卵殻膜を含有することを特徴とする。本明細書において「育毛」、「発毛促進」という場合、結果として毛髪の量（本数、太さなど）の増大、伸長速度の増大や毛髪の健全化をもたらす作用、たとえば毛髪の成長促進もしくは発毛促進、または脱毛の低減もしくは予防などのいずれか一つ以上を指す。
【００１２】
従来の加水分解卵殻膜は、卵殻膜を、酸水溶液、アルカリ水溶液（特許文献２）、アルカリ性有機溶媒溶液、タンパク質分解酵素含有液（特許文献３）などのような、タンパク質の分解作用を有する液中で加水分解することによって得られている。しかしながら、卵殻膜は、酸、アルカリ、タンパク質分解酵素に対して比較的安定であり、弱酸から弱アルカリの温和な条件下では加熱しても卵殻膜の分解は進まない。そのため、酸やアルカリ処理による加水分解においては、例えば、強アルカリ条件下高温で分解を行い、さらにその後、大量の酸で中和する必要があり、卵殻膜の主成分のアミノ酸であるシスチンが酸により分解されてしまう。これにより、茶褐色に着色する褐変やアミノ酸分解による異臭が発生し、しかも、シスチン含量の低い卵殻膜加水分解物しか得られなかった。
【００１３】
また、タンパク質分解酵素による加水分解においても分解率が高くない（約２０％)ことから、還元剤の共存下にプロテアーゼを作用させて卵殻膜を可溶化することが提案されている（特許文献４）が、卵殻膜可溶化物中に少なからず還元剤が残存することから、シスチンがシステインに還元されたままとなり、可溶化物中のシスチン含量が高くないという問題が残されていた。
これに対し、本発明において使用されるタンパク質分解酵素による加水分解卵殻膜は、シスチン含量が５重量％以上であり、好ましくは、７重量％以上である。また、アルギニン、セリン、及びスレオニン含量も５重量％以上である。このような加水分解卵殻膜の製造方法は後述する。
【００１４】
加水分解卵殻膜中のシスチン含量が増加し、シスチン以外の特定のアミノ酸含量も増加したことにより、加水分解卵殻膜が本来有する育毛、発毛促進、脱毛防止などの優れた作用効果を十分に発揮できるようになった。
また、タンパク質分解酵素の作用を還元剤の存在下で行う結果、得られた加水分解卵殻膜物の褐変やアミノ酸分解による異臭の発生も防止できるので、多量の加水分解卵殻膜を配合する外用組成物を製造する場合に有利に使用できる。
【００１５】
本発明の育毛、発毛促進剤は、上記のとおりの加水分解卵殻膜を必須の成分とするが、必要に応じて、後述するような他の公知の育毛有効成分や、保存性または分散性などを改良するための各種成分を配合してもよい。
【００１６】
本発明の育毛、発毛促進剤は、化粧品、医薬部外品、医薬品の各種外用組成物として製剤化することができる。これらの外用組成物の形態としては、クリーム（軟膏）、乳液（乳剤）、化粧水（液剤）、ジェル、ムース、シャンプー、トリートメントなどの各種の形態が挙げられる。これらの各種の形態の製剤は、当該業界において公知の方法で、必要に応じて水、アルコール、溶剤、界面活性剤、油脂成分、防腐剤、安定剤、ゲル化剤、増粘剤、乳化剤、紫外線吸収剤、清涼剤、色素、香料、その他の各種成分を使用して製造することができる。さらに、これらの製品の製造に際し、殺菌または抗菌性成分、抗炎症剤、その他の各種薬用有効成分などを適宜配合することができる。
【００１７】
本発明の育毛、発毛促進剤を含有する上記のような外用組成物を製造する場合、外用組成物における加水分解卵殻膜の含有量は、外用組成物の全重量に対して１〜３０重量％であることが好ましく、２〜２０重量％であることがより好ましい。含有量が１重量％を下回ると、迅速に効果が得られにくい、または十分な効果が得られにくく、３０重量％を上回ると効果は変わらないのに原料臭が強くなるという欠点が生じることが多くなる。
【００１８】
本発明の外用組成物には、他の公知の育毛、発毛有効成分を組み合わせてもよい。特に、センブリエキス、ニンジンエキス、ハイビスカスエキス、柑橘類皮エキス、アロエエキス、竹酢エキス、酢酸トコフェロール、加水分解ケラチンの一つ以上を組み合わせて使用することにより、さらに育毛、発毛効果が増強される。これらの追加の成分は、本発明の育毛、発毛促進剤または外用組成物に含有されていてもよい。あるいは、これらの成分を含有する別の化粧品、医薬部外品、医薬品などを、本発明の育毛、発毛促進剤または外用組成物と併用してもよい。
【００１９】
＜センブリエキス＞
センブリエキスは、血行促進作用を有することが知られており、従来から育毛用組成物に含有されている。センブリエキスは、リンドウ科植物センブリ全草を原料とし、抽出溶媒として、水、メタノール、エタノール、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコールなどを用いて得られる抽出物であり、製造方法は公知である。また、市販されている商品を使用してもよい。
本発明の育毛、発毛促進剤または外用組成物に含有させる場合、センブリエキスは、外用組成物の全質量に対して、０．０１〜１０重量％になるように含有させることが好ましく、０．５〜５重量％になるようにすることがより好ましい。
【００２０】
＜ニンジンエキス＞
ニンジンエキスは、育毛有効成分として周知であり、容易に入手することができる。
＜ハイビスカスエキス＞
ハイビスカスエキスは、ハイビスカスの花および／ または果実をエチルアルコール、１，３−ブチレングリコールなどの溶媒を用いて抽出処理して得られる液状生成物であり、保湿作用を有する。ハイビスカスエキスは、従来から市販されており、 例えばラボラトワール  セオビオロジックス製「ハイビスカスエキスＨＰ」（商品名）など 、本発明ではいずれのハイビスカスエキスを用いてもよい。
本発明の育毛、発毛促進剤または外用組成物に含有させる場合、ニンジンエキスまたはハイビスカスエキスは、外用組成物の全重量に対して、０．０１〜１０重量％になるように含有させることが好ましく、０．５〜５重量％になるようにすることがより好ましい。
【００２１】
＜柑橘類エキス＞
柑橘類皮エキスは、ミカン、オレンジなどの柑橘類の皮（外果皮）をエチルアルコール、１，３−ブチレングリコールなどの溶媒を用いて抽出処理して得られる、柑橘油を多く含む液状生成物であり、ｄ−リモネンなどを多く含み、育毛・発毛促進作用を有する。従来から種々の柑橘類皮エキスが市販されており、例えば一丸ファルコス社製「チンピキッド」（商品名）など、本発明ではいずれの柑橘類皮エキスを用いてもよい。
＜アロエエキス＞
アロエエキスは、アロエをエチルアルコール、精製水などの溶媒を用いて抽出処理して得られる液状生成物であり、育毛・発毛促進作用を有する。アロエエキスは従来から種々市販されており、例えば丸善製薬製「アロエベラ抽出液ＪＣ」（商品名）など、本発明ではいずれのアロエエキスを使用してもよい。
本発明の育毛、発毛促進剤または外用組成物に含有させる場合、柑橘類エキスまたはアロエエキスは、外用組成物の全重量に対して、０．０１〜１０重量％になるように含有させることが好ましく、０．５〜５重量％になるようにすることがより好ましい。
【００２２】
＜竹酢エキス＞
竹酢エキスは、竹を乾留して得られる液体生成物を静置したときに分かれる２層のうち、酢酸を多量に含む上層液を分取して得られる液状生成物である。従来から種々の竹酢エキスが市販されたおり、例えばエコマテック研究所製「竹の精」（商品名）など、本発明ではいずれの竹酢エキスを用いてもよい。
＜酢酸トコフェロール＞
酢酸トコフェロールは、発毛有効成分として周知であり、容易に入手することができる。
本発明の育毛、発毛促進剤または外用組成物に含有させる場合、竹酢エキスまたは酢酸トコフェロールは、外用組成物の全重量に対して、０．０１〜１０重量％になるように含有させることが好ましく、０．１〜５重量％になるようにすることがより好ましい。
【００２３】
＜加水分解ケラチン＞
加水分解ケラチンは、人を含めた動物の表皮、角、爪、ウロコ、毛、羽などのような、皮膚由来の組織に存在するタンパク質であるケラチンを、タンパク質分解酵素、酸、アルカリなどを用いて加水分解したものであり、加水分解処理によって水などの液体への溶解性または乳化性を向上させたものである。その製造方法は公知であり、市販品として、たとえば、羊毛に由来する株式会社成和製の「プロモイスＷＫ−Ｈ」（商品名）、羊毛に由来する株式会社成和製の「プロモイスＷＫ」（商品名）などを挙げることができる。本発明において使用する加水分解ケラチンとしては、皮膚に対して害を与えず、しかも水に可溶であるかまたは水に易分散性の加水分解ケラチンであれば、いずれも好適に用いることができる。特に、高分子の加水分解ケラチンが好ましく、たとえば平均分子量２００〜３０，０００、さらには１０，０００〜３０，０００の範囲のものが特に好ましい。なお、この平均分子量は、ゲル浸透クロマトグラフィー法により測定した平均分子量である。
本発明の育毛、発毛促進剤または外用組成物に含有させる場合、加水分解ケラチンの含有量は、外用組成物の全重量に基づいて、０．０１〜０．５重量％になるように含有させることが好ましく、０．０１〜０．１重量％になるようにするであることがより好ましく、０．０１〜０．０５重量％であることが更に好ましい。加水分解ケラチンの含有量が０．０１重量％未満であると、毛髪の成長促進効果が小さくなり、期待どおりの効果を得ることが困難になり易い。一方、加水分解ケラチンの含有量が０．５重量％を超えると、コストが上昇し、また粘着性が増加して使用感の不良を招き易くなる。
【００２４】
本発明の外用組成物は、上記した成分以外にも、必要に応じて、育毛・発毛促進作用、消炎作用、血行促進作用、細胞活性化作用、フケ防止作用、カユミ防止作用、保湿作用、毛髪の保護と艶出し作用、毛髪の損傷の修復能、防腐作用、ｐＨ調整作用などを有する他の成分の１種または２種以上を含有することができる。本発明の育毛・発毛促進剤が含有し得る他の成分の具体例としては、ヒノキチオール（育毛・発毛促進作用、殺菌殺菌）、グリチルリチン酸ジカリウム（消炎作用）、マロニエエキス（ 消炎作用）、朝鮮ニンジンエキス（発毛促進作用、血行促進作用）、大豆エキス（育毛・発毛促進作用）、イガイグリコーゲン（育毛・発毛促進作用）、オクラエキス（保湿作用）、ボタンの花エキス（カユミ防止作用）、クロレラエキス（育毛・発毛促進作用、細胞活性化作用）、トウガラシエキス（育毛・発毛促進作用、血行促進作用）、チョウジエキス（フケ防止作用）、セイヨウハッカエキス（育毛・発毛促進作用）、Ｄ−パントテルアルコール（育毛・発毛促進作用）、ヒアルロン酸ナトリウム（保湿作用）、アミノ酸系保湿剤、加水分解シルク（毛髪保護・艶出し作用）、アーモンドエキス（毛髪の損傷の修復、キューティクルの整調作用）、パラオキシ安息香酸メチル（防腐作用）、クエン酸、クエン酸ナトリウムなどのｐＨ調整剤などを挙げることができる。本発明の育毛・発毛促進剤は、前記した成分の１種または２種以上を含有することができる。
【００２５】
さらに、本発明の外用組成物は、上記した成分の他に、必要に応じて、セチルアルコール、ステアリルアルコールなどのアルコール類、グリセリン、プロピレングリコールなどの多価アルコール類、ステアリン酸、オレイン酸、パルミチン酸などの脂肪酸類、オリーブ油、ヒマシ油、スクワランなどの同植物性油脂類、エアゾール噴射剤として用いられる底沸点炭化水素類などの１ 種または２ 種以上を含有していてもよい。
【００２６】
本発明の外用組成物は、化粧品、医薬部外品または医薬品などとして、育毛、発毛を必要とする対象に適用することができる。対象は、皮膚に毛を有する動物であれば特に限定されないが、ヒトが好ましい。適用方法は、外用組成物の剤型に適した任意の方法でよく、たとえば、塗布、噴霧などが挙げられる。
【００２７】
本発明の化粧品、医薬部外品または医薬品として使用される外用組成物の投与量は、対象の状態、育毛を必要とする原因疾患の有無、性別、年齢などの要因によって変動し、特に限定されないが、本発明の育毛、発毛促進剤は非常に安全性が高いので、対象に効果を認められる量以上であればよい。たとえば、適用箇所１平方センチメートルあたり０．５〜１５μｌ（加水分解卵殻膜量として１０〜１２００ｎｇ）／日、好ましくは３〜６μｌ（加水分解卵殻膜量として６０〜４８０ｎｇ）／日を、２〜数回に分けて塗布するなどして適用することができる。適用期間も特に限定されず、長期にわたって継続的に投与することができるが、一般的には、数週間〜数カ月間、連続して投与することが好ましい。
【００２８】
本発明で使用される全アミノ酸重量合計に対するシスチン、アルギニン、セリン、及びスレオニンの含量がそれぞれ５重量％以上である加水分解卵殻膜は、
（ａ）加水した卵殻膜に還元剤を添加して撹拌した後静置して、上清中の還元剤を除去する工程、
（ｂ）キレート剤を添加してから、アルカリによりタンパク質分解酵素の至適ｐＨ６〜８に調整した後、タンパク質分解酵素を作用させる工程、
（ｃ）タンパク質分解酵素の至適ｐＨから弱酸性のｐＨに調整し、加熱して還元剤を除去する工程、
（ｄ）工程（ｃ）で得られる加水分解卵殻膜を含有する水溶液を生成してから加水分解卵殻膜を粉末状で回収する工程；
を有する製造方法によって製造することができる。
【００２９】
以下に、上記した加水分解卵殻膜の製造方法について、具体的に説明する。
本発明で用いる卵殻膜としては、外殻から常法により分離したものであればよく、湿潤状態のもの、湿潤状態のものを乾燥（天日乾燥、熱風乾燥、真空乾燥、吸引乾燥、凍結乾燥など）させたものを用いることができる。また、裁断されたものや粉砕により粉末状にしたものであってもよい。
【００３０】
工程（ａ）では、まず、卵殻膜１重量部（乾物換算）に対し清水を６〜１２重量部の割合で加えて撹拌を開始する。次いで、加水した卵殻膜に対して、ピロ亜硫酸ナトリウム等の還元剤を卵殻膜の乾物に対し０．５〜８重量％添加する。液中の還元剤の濃度は、１０ｍＭ〜２００ｍＭ、好ましくは１０ｍＭ〜３０ｍＭであることが好ましい。添加後約２〜４時間撹拌を続けてから、約９０℃の温度に加熱してそのまま約６時間撹拌して、加熱下で卵殻膜を還元剤と反応させる。還元剤としては、ピロ亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウム、亜硫酸水素ナトリウム、Ｌ−システイン、Ｌ−システイン塩酸塩、グルタチオン等、公知の還元剤を用いることができるが、ピロ亜硫酸ナトリウムが好ましい。
【００３１】
加熱を停止して３０分程室温で静置した後、上清を廃棄し、また加水して洗浄する。この上清の廃棄と加水による洗浄を２、３回繰り返して、上清中の還元剤を除去する。洗浄後、卵殻膜に加水して卵殻膜の水分散液を調製する。加水する水の量は、卵殻膜の乾物１重量部に対して、５〜３０重量部が好ましい。
【００３２】
次いで、工程（ｂ）において、上記の工程（ａ）で生成した卵殻膜の水分散液に、クエン酸のキレート作用によりタンパク質分解酵素の触媒作用を促進させるために、クエン酸を添加する。添加するクエン酸の量は、その後に添加するタンパク質分解酵素の使用量によって異なり、クエン酸の濃度が２〜１０ｍＭ程度になるように添加するのが好ましい。
【００３３】
クエン酸の添加により酸性となった卵殻膜の水分散液に、アルカリを添加してｐＨをタンパク質分解酵素の至適ｐＨに調整してから、タンパク質分解酵素を添加する。アルカリは、ＫＯＨのようなクエン酸のキレート作用を阻害しないものであれば、特に限定されない。タンパク質分解酵素がパパインであれば、ｐＨは８に調整する。
タンパク質分解酵素を作用させる工程、およびその前後の工程を通して、中性付近の温和なｐＨ条件であるｐＨが６．０〜８．０（以下、この範囲のｐＨ条件を「中性ｐＨ条件」という。）の間で反応を行わせることが重要である。
【００３４】
至適ｐＨに調整した卵殻膜の水分散液に、タンパク質分解酵素を添加して卵殻膜の加水分解処理を行う。反応温度は、使用するタンパク質分解酵素の至適温度の近傍に設定すればよく、３０℃〜８０℃、好ましくは４０℃〜７０℃の範囲である。また、反応時間は、上記したｐＨおよび加熱温度下で、１〜７時間程の範囲内で任意に設定可能であり、卵殻膜の完全な加水分解が達成できるように１〜３時間の反応時間を設定する。本発明の製造方法においては、還元剤とキレート剤の併用効果により反応効率が高められているが、さらに、攪拌や振盪などを加えて反応を促進してもよい。
【００３５】
用いるタンパク質分解酵素は、至適ｐＨ域が６〜８のプロテアーゼを用いることができる。具体的には、至適ｐＨ域が中性のシステインエンドペプチダーゼであるパパイン、至適ｐＨ域が中性のセリンエンドペプチダーゼであるトリプシン、至適ｐＨ域がアルカリ性のセリンエンドペプチダーゼであるキモトリプシン、トリプシンとキモトリプシンと他の酵素の混合酵素であるパンクレアチン等が挙げられる。その中でもシステインエンドペプチダーゼであるパパインが好適に用いられる。
【００３６】
添加するタンパク質分解酵素の使用量、添加濃度は、特に限定されない。一般に、使用する酵素の種類によって最適な使用量は異なり、例えば、反応液中のタンパク質分解酵素が卵殻膜の乾物に対して、０．１〜８重量％、好ましくは、０．５〜８重量％となる量の酵素を添加する。
【００３７】
次いで、工程（ｃ）において、酵素反応が終了した加水分解溶液を加熱して、酵素を失活させる。加熱は１００℃未満の酵素が失活するのに必要な、例えば９０℃３０分のような常用の条件で行う。
あるいは、酵素反応後の上記酵素失活処理をすることなく、次の、加熱して還元剤を除去する際に同時に酵素を失活させてもよい。還元剤を除去するために、酵素反応後の反応液に酸を添加して、ｐＨを中性ｐＨ条件の下限近くのｐＨ６付近に調整してから約９０℃で加熱する。このｐＨ条件下での加熱処理により、反応液中の還元剤のピロ亜硫酸ナトリウムを除去することができる。
【００３８】
ピロ亜硫酸ナトリウムは、加熱することにより亜硫酸ナトリウムへと変化する。また、亜硫酸ナトリウムは、酸性下で分解が進み、Ｎａ＋(ナトリウム)、Ｈ２Ｏ(水)、ＳＯ２ (二酸化硫黄)となる。これらの性質を利用し、製造工程中に熱を加え、ピロ亜硫酸ナトリウムを亜硫酸ナトリウムに変え、ｐＨを下げて亜硫酸ナトリウムの分解を行う。その結果、ピロ亜硫酸ナトリウムは、ナトリウム、水、二酸化硫黄に分解され、二酸化硫黄は、加熱することにより揮発し、最終的には、ナトリウムと水のみになる。
Ｎａ２Ｓ２Ｏ５（ピロ亜硫酸ナトリウム)
↓加熱
Ｎａ２ＳＯ３(亜硫酸ナトリウム)+ＳＯ２(二酸化硫黄)*気体
↓
Ｎａ２ＳＯ３(亜硫酸ナトリウム)+２Ｈ＋(酸)
↓弱い酸を処理し、加熱する
２Ｎａ＋＋Ｈ２Ｏ(水)＋ＳＯ２(二酸化硫黄)*気体
このようにして、ピロ亜硫酸ナトリウムを反応液から除去することができ、また、酵素失活処理をしていなければ、同時に酵素を失活させることもできる。この工程により、還元剤を除去された卵殻膜加水分解物を含有する液体が得られる。
【００３９】
上記工程で添加する酸としては、例えば塩酸のような無機酸を使用するのが好ましく、加熱温度は８０〜９５℃程度であり、８５〜９２℃が好ましい。加熱時間は、上記したｐＨおよび加熱温度下で、ピロ亜硫酸ナトリウムを除くことのできる１〜３時間程の範囲内で任意に設定可能である。また、加熱後に得られる卵殻膜加水分解物を含有する液体は、必要に応じてアルカリで中和してもよい。
【００４０】
このようにして得られた還元剤を除去された卵殻膜加水分解物を含有する液体から、工程（ｄ）において、ろ過により夾雑物である固形分を除去する。ろ過は、珪藻土ろ過装置、セラミックろ過装置、ろ過圧搾機等の固液分離装置のいずれも使用できる。ろ過により精製された卵殻膜加水分解物を含有する液体は、さらに加熱殺菌することが好ましい。
【００４１】
加熱殺菌は、８５〜１００℃、特に８５〜９５℃の温度で１時間程度加熱することにより行う。加熱殺菌後にさらに濃縮してもよく、濃縮は、６０〜１００℃、特に７０〜９０℃の温度で、液体の容量が１／２〜１／３程度になるまで加熱することにより行う。
【００４２】
また、加熱殺菌後、卵殻膜加水分解物を含有する液体を粉末化して、卵殻膜加水分解物粉末にしてもよい。粉末化する場合には、粉末化する前に再度ろ過処理を行うことが好ましく、ポアサイズが０．２〜１０μｍ、特に０．４〜１μｍのフィルターを用いて、加熱殺菌された卵殻膜加水分解物を含有する液体をろ過する。
粉末化方法は、噴霧乾燥方法、凍結乾燥方法、温風棚式乾燥方法のいずれも用いることができるが、卵殻膜加水分解物の損傷を防ぎながら粒度の揃った粉末を得ることができ、他の方法に比べて低コストで、効率のよい噴霧乾燥方法が好ましい。噴霧乾燥は、気体の吹き出し口温度が１６０〜２００℃、特に１７０〜１９０℃である気体雰囲気中（空気中や、窒素ガスなどの不活性ガス雰囲気中）に、ろ過後の卵殻膜加水分解物を含有する液体を噴霧することによって行い、卵殻膜加水分解物粉末を得ることができる。
【００４３】
上記で得られる卵殻膜加水分解物粉末は、そのまま本発明の育毛、発毛促進剤として使用してもよいし、そのまま本発明の育毛、発毛促進剤に含有させてもよいが、篩などを用いて分級処理することによって、粒度の揃った加水分解卵殻膜粉末にすることができる。
また、マグネット処理を行うことによって、卵殻膜加水分解物粉末中に含まれる可能性のある金属異物を除去することができる。
【００４４】
以下に、本発明を実施例に基づいて詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例により限定されるものではない。
【実施例１】
【００４５】
水溶液のｐＨ測定は、ガラス電極法方式によるｐＨ測定装置（株式会社堀場製作所製「Ｔｗｉｎ ｐＨ Ｂ−２１２」）のｐＨ測定端子を各水溶液中に浸漬して液のｐＨを測定した。
【００４６】
（１）加水した卵殻膜にピロ亜硫酸ナトリウムを添加して反応させる工程
６０ｋｇ（乾物換算）の裁断した卵殻膜を撹拌翼付きのニーダーに入れ、４８０ｋｇの清水を加水して撹拌を開始した。３ｋｇのピロ亜硫酸ナトリウムを添加して、添加後約２〜４時間撹拌を続けてから、その後９０℃の温度に加熱しながら約６時間撹拌した。撹拌をやめて、約３０分間室温で静置した。
【００４７】
３０分の静置により沈殿物と上清に分離した。上清を廃棄してから、再び４８０ｋｇの清水を加えて撹拌後、再び静置した。再び分離した上清を廃棄してから加水するという洗浄操作を、３度繰り返し、上清中から反応していないピロ亜硫酸ナトリウムを除去した。洗浄後、４８０ｋｇの精製水を加えて撹拌し、還元剤と反応させた卵殻膜の水分散液を得た。
【００４８】
（２）クエン酸を添加し、タンパク質分解酵素を添加して反応させる工程
卵殻膜の水分散液に、食添用のクエン酸１ｋｇを添加してよく撹拌した。ＫＯＨを添加して、ｐＨをパパインの至適ｐＨである８に調整してから、市販の酵素剤パパインＷ−４０（天野エンザイム製）２ｋｇを添加して、酵素反応を開始させた。
【００４９】
反応温度は６０℃で、ｐＨ８という条件下時々撹拌しながら反応させたところ、約３時間で卵殻膜全体の可溶化が観察されたので、反応を終了させるため、９０℃で３０分加熱して酵素を失活させた。
【００５０】
（３）反応液のｐＨを酸でｐＨ６に調整してから加熱して還元剤を除去する工程
酵素を失活させた反応液に、ＨＣｌを添加して撹拌しながらｐＨを６に調整して、９０℃に加熱して２時間反応させ、還元剤のピロ亜硫酸ナトリウムを除去し、卵殻膜加水分解物を含有する液体を得た。ピロ亜硫酸ナトリウムの分解が進むとｐＨが若干上がるため、得られた液体にＫＯＨを添加して中和した。
【００５１】
（４）卵殻膜加水分解物を含有する液体を精製して粉末化する工程
中和した卵殻膜加水分解物を含有する液体を、活性炭１％を添加した珪藻土ろ過装置で固液分離して、固形分を除去した精製された卵殻膜加水分解物を含有する液体を得た。次いで、液体を容器に入れて９０℃で１時間加熱殺菌処理してから、ポアサイズが０．４５μｍのメンブレンフィルターを通過させ、さらにろ過した。この液体を窒素ガス雰囲気中で、噴霧乾燥装置（大川原化工機株式会社製「Ｌ−８」）を使用して約１８０℃で噴霧乾燥して、３３ｋｇの卵殻膜加水分解物粉末を得た。
【００５２】
得られた加水分解物粉末のアミノ酸分析を行い、アルカリによる卵殻膜加水分解物粉末のアミノ酸組成と比較した。アルカリによる卵殻膜加水分解物粉末として、ＥＣエキスパウダ−（アルマード社製）を用いた。
結果を表１に示す。
【表１】
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【００５３】
表１に示すように、本発明の製造方法によって得られた卵殻膜加水分解物は、シスチン含量が従来品の０．７重量％から７．８重量％となり、加水分解物におけるシスチン含量の低下を大幅に改善できることがわかった。また、アルギニン、セリン、スレオニンの含量も大幅に増加した。アルギニンは従来品の０．１重量％から７．４重量％に、セリンは従来品の１．４重量％から５．４重量％に、スレオニンは従来品の０．２重量％から６．０重量％に含量が増加した。
【実施例２】
【００５４】
＜外用組成物の製造例＞
実施例１で製造した卵殻膜加水分解物粉末を、１３重量％含む外用組成物を製造した。比較例として、アルカリによる卵殻膜加水分解物粉末であるＥＣエキスパウダ−（アルマード社製）を１３重量％含む外用組成物および卵殻膜加水分解物粉末を含まない外用組成物を製造して用いた。
【００５５】
試験に用いる外用組成物は、卵殻膜加水分解物１３重量％に、ヒアルロン酸Ｎａ、スクワラン、センチフォリアバラ花油、アカヤジオウ根エキス、カンゾウ根エキス等を適量加え、最後に水、海水、ブチレングリコールを加えて１００重量％としてから、混合撹拌後ろ過することによって製造した。
【００５６】
＜試験例＞
（１）年齢が４０歳から６０歳までの被験者１５名を、各組の平均年齢が５０〜５５歳になるようにして５名ずつ３組に分けた。第１組〜第３組の被験者には、それぞれ以下の外用組成物を渡し、同時に使用を開始させ、頭髪の状態を定期的に観察した。第１組：外用組成物１、第２組：外用組成物２、第３組：外用組成物３。
（２）各組の被験者には、各外用組成物を、毎日朝晩の２回、２週間にわたって１回２ｍＬ程度を頭皮に塗布してもらった。なお、この間、被験者は、他のスキンローションや、乳液、クリームの使用を停止していたが、試験開始４週間後からはサプリメント「アドカペリ」（株式会社アルマード社製）を１日４錠摂取した。
（３）２週間ごとに、それぞれの被験者の髪の状態を、評価した。
【００５７】
本発明の育毛、発毛促進剤およびそれを含有する外用組成物を用いることにより、副作用がなく安全かつ迅速に育毛が促進され、毛髪のハリ、コシ、太さ、本数などが改善されるという著しい効果が得られることが示された。
【産業上の利用可能性】
【００５８】
本発明の育毛、発毛促進剤に含有されるタンパク質分解酵素による加水分解卵殻膜は、製造工程を通して中性近辺の温和なｐＨ条件を保つことで、酸で分解しやすい卵殻膜の主成分であるシスチン含量の低下を防止しつつ、シスチン以外のアミノ酸含量も上げることのできる特定の方法で製造したものであるため、従来の製造方法で作成した加水分解卵殻膜を使用した場合に比べて、卵殻膜が本来有する美肌化、育毛、発毛促進、脱毛防止などの優れた作用効果を十分に発揮できる。
卵殻膜という人体や皮膚に対する安全性の高いものを使用しているので、化粧品、医薬部外品などの製造時に多量に配合しても、頭皮および頭髪にかぶれ等の症状を引き起こすことがなく、安全性にも優れている。
本発明の育毛、発毛促進剤は、従来の加水分解卵殻膜を使用した場合に比べて、より頭髪の本数の増加、伸長速度の増大、色の黒化、毛髪の太さの増大を促すことができ、発毛剤としてより優れた効果をもたらすものである。