(57)【要約】      （修正有）【課題】血液流動性改善用の加工飲食品、血液流動性改善剤、血液流動性改善方法、及び給食方法の提供。【解決手段】加工紫人参、紫人参由来のアントシアニンあるいはシアニジン系アントシアニンを含有する血液流動性改善用の加工飲食品。紫人参由来のアントシアニンあるいはシアニジン系アントシアニンを有効成分とする血液流動性改善剤。シアニジン系アントシアニンを投与することによる血液流動性改善方法（ヒトに対する医療行為を除く。）。少なくとも、加工紫人参を血行不良者に提供する、血行不良者に対する給食方法（ヒトに対する医療行為を除く。）。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
血液流動性改善用の加工飲食品であって、
含有するのは、加工紫人参である。
【請求項２】
血液流動性改善用の加工飲食品であって、
含有するのは、紫人参由来のアントシアニンである。
【請求項３】
血液流動性改善用の加工飲食品であって、
含有するのは、シアニジン系アントシアニンである。
【請求項４】
請求項３の加工飲食品であって、
前記シアニジン系アントシアニンは、シアニジン‐３‐（２”‐キシロース‐ガラクトシド）、シアニジン‐３‐（２”‐キシロース‐６‐グルコース‐ガラクトシド）、シアニジン‐３‐（２”‐キシロース‐６”‐シナポイル‐グルコース‐ガラクトシド）、シアニジン‐３‐（２”‐キシロース‐６”‐フェルロイル‐グルコース‐ガラクトシド）、及び、シアニジン‐３‐（２”‐キシロース‐６”（４‐クマロイル）グルコース‐ガラクトシド）のうち少なくとも１つである。
【請求項５】
血液流動性改善剤であって、
その有効成分は、紫人参由来のアントシアニンである。
【請求項６】
血液流動性改善剤であって、
その有効成分は、シアニジン系アントシアニンである。
【請求項７】
請求項６の血液流動性改善剤であって、
前記シアニジン系アントシアニンは、シアニジン‐３‐（２”‐キシロース‐ガラクトシド）、シアニジン‐３‐（２”‐キシロース‐６‐グルコース‐ガラクトシド）、シアニジン‐３‐（２”‐キシロース‐６”‐シナポイル‐グルコース‐ガラクトシド）、シアニジン‐３‐（２”‐キシロース‐６”‐フェルロイル‐グルコース‐ガラクトシド）、及び、シアニジン‐３‐（２”‐キシロース‐６”（４‐クマロイル）グルコース‐ガラクトシド）のうち少なくとも１つである。
【請求項８】
血液流動性改善方法（ヒトに対する医療行為を除く。）であって、それに含まれるのは、少なくとも、次の工程である：
投与：投与されるのは、シアニジン系アントシアニンである。
【請求項９】
請求項８の血液流動性改善方法であって、
前記シアニジン系アントシアニンは、シアニジン‐３‐（２”‐キシロース‐ガラクトシド）、シアニジン‐３‐（２”‐キシロース‐６‐グルコース‐ガラクトシド）、シアニジン‐３‐（２”‐キシロース‐６”‐シナポイル‐グルコース‐ガラクトシド）、シアニジン‐３‐（２”‐キシロース‐６”‐フェルロイル‐グルコース‐ガラクトシド）、及び、シアニジン‐３‐（２”‐キシロース‐６”（４‐クマロイル）グルコース‐ガラクトシド）のうち少なくとも１つである。
【請求項１０】
血液流動性改善方法（ヒトに対する医療行為を除く。）であって、それに含まれるのは、少なくとも、次の工程である：
投与：投与されるのは、紫人参由来のアントシアニンである。
【請求項１１】
血行不良者に対する給食方法（ヒトに対する医療行為を除く。）であって、それに含まれるのは、少なくとも、次の工程である：
提供：提供されるのは、少なくとも、加工紫人参であり、その提供先は、血行不良者である。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明に関係するのは、血液流動性改善用の加工飲食品、血液流動性改善剤、血液流動性改善方法、及び給食方法である。
【背景技術】
【０００２】
近年、食品メーカーが力を入れて研究しているのは、食品の成分（機能性成分）と生体調節機能との作用機序（メカニズム）である。なぜなら、人々の理想は、美味しい食品を摂取することで、疾病を予防し、或いは、改善すること（医食同源）だからである。言い換えれば、食品に求められているのは、栄養的機能（身体の形成及び維持）及び嗜好的機能（美味しさ）に加えて、生体調節機能である。ここで、生体調節機能とは、ヒトの身体の一部又は全部を調節することをいう。生体調節機能を分類すると、循環系調節、神経系調節、細胞分化調節、免疫・生体防御、内分泌調節、及び、外分泌調節である。他方、食品の機能性成分は、多種多様であるが、例示すると、ポリフェノール、カロテノイド、イソチオシアネート等である。
【０００３】
機能性成分を代表するのは、ポリフェノールである。ポリフェノールを含有するのは、様々な植物であり、例示すると、カカオ豆、茶葉、リンゴ、ブドウ、ウメなどである。ポリフェノールの生体調節機能は、多数報告されている。例えば、非特許文献１で開示されているのは、リンゴ・ポリフェノールの脂質代謝機能である。非特許文献２で開示されているのは、コーヒー・ポリフェノールの血糖値上昇抑制機能である。
【０００４】
ポリフェノールの一つは、アントシアニンである。アントシアニンは、水溶性色素である。この色素を多く含むのは、紫色の植物（野菜や果物等）である。アントシアニンの種類数は、５００以上である。もっとも、生理調整機能が報告されているのは、その殆どがカシス又はベリー由来のアントシアニンである。例えば、非特許文献３で開示されているのは、ベリー及びカシスの抗炎症機能である。これらの生体調整機能について、その作用機序の多くは、未だ解明されていない。また、アントシアニンの種類が異なれば、それらの生体調整機能も異なってくる。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】G. C. Tenore, G. Calabrese, P. Stiuso他、「ＨｅｐＧ２細胞における脂質代謝に対するリンゴポリフェノールの効能」、Food Res Int. ２０１４年、６３（パートＢ）、２５２−２５７頁
【非特許文献２】Jokura H, Watanabe I, Umeda M他,「Coffee polyphenol consumption improves postprandial hyperglycemia associated with impaired vascular endothelial function in healthy male adults」、Nutr Res. ２０１５年、３５(パート１０)、８７３-８８１頁
【非特許文献３】Kim B, Lee SG, Park YK他、「Blueberry, blackberry, and blackcurrant differentially affect plasma lipids and pro-inflammatory markers in diet-induced obesity mice.」、Nutr Res Pract. ２０１６年、１０(パート５)、４９４−５００頁
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明が解決しようとする課題は、血液流動性の改善である。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本願発明者が鋭意検討して見出したのは、紫人参の血液流動性改善機能であり、具体的には、シアニジン系アントシアニンの血液流動性改善機能である。この観点から、本発明を定義すると、以下のとおりである。
【０００８】
血液流動性改善用の加工飲食品が含有するのは、加工紫人参である。紫人参に含まれているのは、アントシアニンである。そのような観点から定義すると、血液流動性改善用の加工飲食品が含有するのは、紫人参由来のアントシアニンである。更に言えば、紫人参に特有なのは、シアニジン系アントシアニンである。そのような観点から定義すると、血液流動性改善用の加工飲食品が含有するのは、シアニジン系アントシアニンである。
【０００９】
血液流動性改善剤の有効成分は、紫人参由来のアントシアニンである。当該アントシアニンは、前述のとおりである。そのような観点から定義すると、血液流動性改善剤の有効成分は、シアニジン系アントシアニンである。
【００１０】
血液流動性改善方法（ヒトに対する医療行為を除く。）に含まれるのは、少なくとも、シアニジン系アントシアニンの投与である。当該シアニジン系アントシアニンは、前述のとおりである。そのような観点から、好ましくは、血液流動性改善方法（ヒトに対する医療行為を除く。）に含まれるのは、紫人参由来のアントシアニンの投与である。
【００１１】
血行不良者に対する給食方法（ヒトに対する医療行為を除く。）に含まれるのは、少なくとも、加工紫人参の提供である。加工紫人参が提供される先は、血行不良者である。
【発明の効果】
【００１２】
本発明で可能になるのは、血液流動性の改善である。すなわち、加工紫人参又はシアニジン系アントシアニンを摂取し或いは投与することで、血液流動性を改善する。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】紫人参由来アントシアニン画分投与後の挙睾筋血流量の変化
【図２】シアニジングルコシド（Cyanidin-3-o-Glucoside）投与後の挙睾筋血流量の変化
【図３】紫人参アントシアニン画分投与後の大動脈p-eNOS及びp-Aktの発現量
【図４】シアニジングルコシド投与後の大動脈p-eNOSおよびp-Akt の発現量
【発明を実施するための形態】
【００１４】
＜血液流動性改善用の加工飲食品＞
血液流動性改善用の加工飲食品（以下、「本加工飲食品」という。）とは、加工飲食品であって、その用途が血液流動性の改善であるものをいう。本加工飲食品が少なくとも含有するのは、加工紫人参、紫人参由来のアントシアニン、又は、シアニジン系アントシアニンである。これらの詳細は、後述する。
【００１５】
＜血液流動性の改善＞
血液流動性の改善とは、血液を流れ易くすることをいう。具体的には、末梢血管での血流量（末梢血流量）を増加させることである。末梢血管は、収縮し、拡張する。末梢血管の働きが悪くなると、末梢血管の収縮期間が長くなる。収縮期間が長くなると、末梢体温が継続的に低下する。そのような症状を冷え症という。シアニジン系アントシアニン、紫人参由来のアントシアニン、又は、加工紫人参を摂取することで促進されるのは、血管内皮細胞からのＮＯ産生である。そのようにＮＯ産生が促進されると、血管のしなやかさが向上する。それによって、血管の収縮が緩和され、末梢血流量が増加する。血液流動性が改善すると、冷え症も改善する。
【００１６】
＜加工飲食品＞
加工飲食品とは、飲食品であって、加工されたものをいう。加工飲食品を例示すると、飲料、調味料、菓子、麺、練り物、サプリメント等である。飲料を例示すると、野菜飲料、野菜果実混合飲料等である。つまり、加工飲食品から除外されるのは、天然物（野菜や果物等）それ自体である。
【００１７】
＜紫人参＞
紫人参とは、人参であって、その全体又は一部の色が紫であるものをいう。紫色を呈しているのは、アントシアニンである。紫人参の品種を例示すると、パープルスティック、パープルスイート、パープルターゲット、パープルパープル、ダークパープル等である。
【００１８】
＜加工紫人参＞
加工紫人参とは、紫人参であって、加工されたものをいう。加工紫人参を例示すると、切断物、破砕物、抽出物、乾燥物、搾汁などである。
【００１９】
＜紫人参由来のアントシアニン＞
紫人参由来のアントシアニンとは、アントシアニンであって、その由来が紫人参であるものをいう。紫人参由来のアントシアニンを例示すると、シアニジン系アントシアニンである。ここで、シアニジン系アントシアニンを例示すると、シアニジン‐３‐（２”‐キシロース‐ガラクトシド）、シアニジン‐３‐（２”‐キシロース‐６‐グルコース‐ガラクトシド）、シアニジン‐３‐（２”‐キシロース‐６”‐シナポイル‐グルコース‐ガラクトシド）、シアニジン‐３‐（２”‐キシロース‐６”‐フェルロイル‐グルコース‐ガラクトシド）、及び、シアニジン‐３‐（２”‐キシロース‐６”（４‐クマロイル）グルコース‐ガラクトシド）である。これら５種類のシアニジン系アントシアニンを含有するのは、紫人参のみである。
【００２０】
＜シアニジン系アントシアニン＞
シアニジン系アントシアニンとは、配糖体であって、そのベンゼン環部位のヒドロキシ基の数が２つであるものをいい、具体的には、以下の構造式（化１）のとおりである。シアニジン系アントシアニンが排除しないのは、合成品であるが、好ましくは、天然物由来品である。
【００２１】
【化１】
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【００２２】
＜シアニジン‐３‐（２”‐キシロース‐ガラクトシド）、”cyanidin-3-(2”-xylose-galactoside)”＞
具体的には、以下の構造式（化２）のとおりである。
【００２３】
【化２】
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【００２４】
＜シアニジン‐３‐（２”‐キシロース‐６‐グルコース‐ガラクトシド）、”cyanidin-3-(2”-xylose-6-glucose-galactoside)”＞
具体的には、以下の構造式（化３）のとおりである。
【００２５】
【化３】
2019170164.tif 000005
【００２６】
＜シアニジン‐３‐（２”‐キシロース‐６”‐シナポイル‐グルコース‐ガラクトシド）、”cyanidin-3-(2”-xylose-6”-sinapoyl-glucose-galactoside)”＞
具体的には、以下の構造式（化４）のとおりである。
【００２７】
【化４】
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【００２８】
＜シアニジン‐３‐（２”‐キシロース‐６”‐フェルロイル‐グルコース‐ガラクトシド）、”cyanidin-3-(2”-xylose-6”-feruloyl-glucose-galactoside)”＞
具体的には、以下の構造式（化５）のとおりである。
【００２９】
【化５】
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【００３０】
＜シアニジン‐３‐（２”‐キシロース‐６”（４‐クマロイル）グルコース‐ガラクトシド）、”cyanidin-3-(2”-xylose-6”(4-coumaroyl)glucose-galactoside)”＞
具体的には、以下の構造式（化６）のとおりである。
【００３１】
【化６】
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【００３２】
＜血液流動性改善剤＞
血液流動性改善剤とは、医薬品又はそれに類するものであって、その用途が血液流動性の改善であるものをいう。剤形は、不問であるが、例示すると、錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、液剤などである。血液流動性改善の定義は、前述のとおりである。
【００３３】
＜血液流動性改善剤の有効成分＞
血液流動性改善剤の有効成分は、シアニジン系アントシアニンであり、好ましくは、紫人参由来のアントシアニンである。もちろん、本願が排除しないのは、合成されたシアニジン系アントシアニンである。
【００３４】
＜血液流動性改善方法＞
血液流動性改善方法（ヒトに対する医療行為を除く。）に含まれるのは、少なくとも、シアニジン系アントシアニンの投与であり、好ましくは、紫人参由来のアントシアニンの投与である。それによって、血管内皮細胞からのＮＯ産生が促進し、平滑筋が弛緩する。つまり、血管が拡張して、末梢血流量が増加する。
【００３５】
＜血行不良者に対する給食方法＞
血行不良者に対する給食方法（ヒトに対する医療行為を除く。）に含まれるのは、少なくとも、加工紫人参の提供である。加工紫人参が提供される先は、血行不良者である。血行不良者を例示すると、冷え症者である。給食方法を使用する場所は、様々であるが、例示すると、学校、介護施設などである。
【実施例】
【００３６】
＜実験概要＞
Wistar系雄性ラットの挙睾筋を用いて、紫人参から抽出したアントシアニン及びその構成成分投与後の骨格筋血流量を測定し、その循環刺激作用を検証した。
【００３７】
＜紫人参由来のアントシアニンの分画方法＞
紫人参濃縮汁（Diana Naturals社製）9 gに81 mlの精製水を加え、酢酸エチル45 mlと共に分液ロート内で振とう抽出後、静置し上層の酢酸エチル層を除いた。分離後、下層を回収し、ロータリーエバポレーターにて減圧濃縮するとともに、残留した酢酸エチルを除去した。この濃縮物を、ゲル濾過クロマト単体であるsephadex LH-20（GE Healthcare製）を充てんしたクロマトグラフ管（51 mmφ×600 mm）に供した。濃縮物を供した後に精製水を2.4 L、その後30%メタノールを2.4 L通液し回収した。水画分の初めの400 mLを除いた全ての溶出液を回収し、ロータリーエバポレーターで減圧乾固した。最終的に得られた紫ニンジンアントシアニン抽出粉末中のシアニジン系アントシアニン含量を高速液体クロマトグラフィー（HPLC）法により測定したところ、２３５ｍｇ/ｇであった。この粉末を紫ニンジン由来アントシアニン画分とし、後述の動物試験に使用した。
【００３８】
＜動物の飼育方法＞
実験動物は、埼玉実験動物供給所から購入した８〜１０週齢のWistar系雄性ラットを用いた。Wistar系雄性ラットを予め４日間予備飼育した後、精製水、10mg/kg BW 紫ニンジン由来アントシアニン画分、シアニジングルコシド（Cyanidin-3-Glucoside、長良サイエンス社製）群に群わけした。
実験動物は、温度２３−２５℃、明暗１２時間サイクルの条件で飼育した。
【００３９】
＜試験食品の投与と挙睾筋の採取＞
ウレタン麻酔後、胃内にカニューレを留置し、窒素９５％、５％二酸化炭素、３７℃の条件で挙睾筋を露出させ、生理食塩水及びポリ塩化ビニリデン膜で覆った。
【００４０】
＜挙睾筋細動脈血流量の測定方法＞
挙睾筋細動脈血流量はPerimed社製レーザードップラー式血流計Peri ScanIIを用いて測定した。１０分間の前測定の後に、精製水、紫人参アントシアニン画分10 mg/kgまたはシアニジングルコシド1mg/kgの各試験食品をカニューレを通して１分あたり１．０ｍｌの流速で経口投与した。その後６０分間の血流変化を計測した。
【００４１】
＜ウエスタンブロット法を用いたp-eNOSおよびp-Akt の発現量の定量方法＞
挙睾筋細動脈血流量の測定後は大動脈を摘出し、プロテアーゼインヒビターと０．２％SDSを含むlysis buffer（Sigma Aldrich社製）でホモジナイズした。Bradford法でタンパク質量を定量し、タンパク質50 μg を4-12%Bis-TrisゲルにアプライしてSDS-PAGEに供した。SDS-PAGEにより分離したタンパクのバンドをPVDF膜（Life Technologies社製）に転写した。転写後のPVDF膜をmembrane-blocking regent（GE Healthcare社製）を用いて１時間ブロッキングし、rabbit polyclonal primary antibodies against phosphorylated eNOS (Ser 1177, 1:800，Santa Cruz Biotech社製 )、eNOS (1:2000，Abcam社製)、phosphorylated Akt (Ser 34, 1:500, Abcam, Cambridge, UK )、 Akt (1:2000， Abcam社製 )の各1次抗体を用いて2時間インキュベートした。一次抗体処理の後、二次抗体であるhorseradish peroxidase-conjugated secondary antibodies (1:100,000)を用いて1時間反応した。その後、chemiluminescence with the ECL SelectTM Western Blotting Reagent (GE Healthcare社製)を用いて処理し、 TLC analysis software (SWEDAY社製). を用いて蛍光発光を検出することでp-eNOSとeNOSおよびp-AktとAkt の発現量を定量した。各測定項目の差異はANOVA検定の後、Dunnet法を用いて検定を行った。危険率５％未満で差が認められた場合に、両群間に統計学的に有意な差があるとした。
【００４２】
＜結果（血流量）＞
図１に示すのは、紫人参由来アントシアニン画分投与後の挙睾筋血流量の変化である。紫人参由来アントシアニン画分投与群において、投与２０分以降において精製水投与群と比較して挙睾筋血流量が有意に増大した。また、図２に示すのは、シアニジングルコシド投与後の挙睾筋血流量の変化である。シアニジングルコシド投与群では、投与２５分以降において精製水摂取群と比較して有意に挙睾筋血流量が有意に増大した。この結果より、挙睾筋血流量はシアニジン系アントシアニンの摂取により有意に高値となりうることが分かる。
【００４３】
＜結果（大動脈p-eNOS及びp-Aktの発現量）＞
図３に示すのは、紫人参由来アントシアニン画分投与後の大動脈p-eNOS及びp-Aktの発現量である。紫人参由来アントシアニン画分投与群では投与６０分後において、精製水投与群と比較してp-eNOSおよびp-Aktが有意に増大した。図４に示すのは、シアニジングルコシド投与後の大動脈p-eNOS及びp-Akt の発現量である。シアニジングルコシド投与群では、投与６０分後において、精製水投与群と比較してp-eNOS及びp-Aktが有意に増大した。なお、p-eNOS及びp-Akt の発現量の上昇率は紫ニンジン由来アントシアニン画分と同等であった。
【００４４】
＜考察＞
アントシアニンは投与直後から挙睾筋動脈血流を増加させ、また投与60分後に摘出した大動脈ではp-eNOS及びp-Akt 発現を有意に増加させることがわかった。10 mg/kgの紫ニンジン由来アントシアニン画分の投与は大動脈のeNOSとAktのリン酸化と共に挙睾筋の血流を顕著に増加させた。また、この効果は1 mg/kg シアニジングルコシドとほぼ同程度であった。シアニジングルコシドと紫ニンジン由来アントシアニン画分に含まれるアントシアニンの違いは配糖体部分構造である。これらの結果からアントシアニンの単回投与による血流動態の変化は、配糖体部分によるものではないということが示唆される。本試験における血流改善のメカニズムとして以下のメカニズムが考えられる。血流によるシェアストレスにさらされた血管内皮細胞はAktのリン酸化とeNOSのリン酸化を促進し、結果としてNO産生を上昇する。産生されたNOが平滑筋細胞を弛緩させることで血管が弛緩し、血流が改善する。本試験ではこのメカニズムにおけるAktやeNOSのリン酸化の上昇と血流の増加を確認した。本試験の結果から紫ニンジン由来アントシアニン画分の単回投与によりAktやeNOSのリン酸化が上昇することで血流量が上昇することが言える。
【産業上の利用可能性】
【００４５】
本発明によりp-eNOS及びp-Aktの発現量を増加させ、血流量を増加するという紫ニンジン由来アントシアニンの新たな用途が提供される。本発明が有用な分野は、食品及び医薬品、学校給食、並びに、介護（医療を除く。）である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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