(57)【要約】【課題】ｃＧＡＭＰの異性体の使用及び／または開発、並びに酵素ｃＧＡＳの構造に関する組成物、方法、キット及びアッセイを提供すること【解決手段】本発明は、ｃＧＡＭＰの異性体の使用及び／または開発、並びに酵素ｃＧＡＳの構造に関する組成物、方法、キット及びアッセイに関する。本発明は、とりわけ、新規の環状−ＧＭＰ−ＡＭＰ（ｃＧＡＭＰ）の類似体、模倣体、模倣剤及び変異体を提供する。これらのｃＧＡＭＰの化合物及び組成物は、とりわけ、研究ツールの設計において、研究ツールとして、及びｃＧＡＳのアゴニストやアンタゴニストを含む酵素調節因子のような治療手段として有用である。本発明はまた、環状−ＧＭＰ−ＡＭＰシンターゼ（ｃＧＡＳ）の結晶学的データも提供する。【選択図】図１
2019137692.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式ＩＩ：
【化５１】
2019137692.tif 000057
（式中、
環Ａは、
【化５２】
2019137692.tif 000058
から成る群から選択され；
環Ｂは、
【化５３】
2019137692.tif 000059
から成る群から選択され；
Ｘ１及びＸ２はそれぞれ独立して−ＣＲ−または−Ｎ−であり、式中、Ｒはそれぞれ独立して、水素またはＣ１−６脂肪族であり；
Ｘ３は−ＮＨ−であり；
Ｘａ及びＸｂは独立して−Ｏ−または−Ｓ−であり；
Ｘａ１及びＸｂ１は−ＣＨ−であり；
Ｘｃ及びＸｄは、独立して酸素または硫黄であり；
Ｘｅ及びＸｆはそれぞれ−Ｏ−であり；
ＷはそれぞれＰであり；
Ｒ１及びＲ２はそれぞれ独立して、水素、ハロゲン、−ＣＮ、−ＯＲａ（式中、Ｒａは水素またはＣ１−６脂肪族である）、−Ｎ（Ｒ）２（式中、Ｒはそれぞれ独立して水素またはＣ１−６脂肪族である）、並びに、ハロゲン、−ＯＲ°、及び−Ｎ（Ｒ°）２から成る群から独立して選択される１以上の置換基で任意で置換されたＣ１−１２脂肪族から成る群から選択され、式中、Ｒ°はそれぞれ独立して水素またはＣ１−６脂肪族であり；
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６及びＲ７はそれぞれ独立して、水素、ハロゲン、−ＣＮ、−ＯＲ（式中、Ｒは水素またはＣ１−６脂肪族である）、−ＳＲ（式中、Ｒは水素またはＣ１−６脂肪族である）、−Ｎ（Ｒ）２（式中、Ｒはそれぞれ独立して水素またはＣ１−６脂肪族である）、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２（式中、Ｒはそれぞれ独立して水素またはＣ１−６脂肪族である）、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ（式中、Ｒは水素、Ｃ１−６脂肪族、またはフェニルである）、並びに、ハロゲン、−ＯＲ°、及び−Ｎ（Ｒ°）２から成る群から独立して選択される１以上の置換基で任意で置換されたＣ１−１２脂肪族から成る群から選択され、式中、Ｒ°はそれぞれ独立して水素またはＣ１−６脂肪族であり；
Ｒ８及びＲ９がそれぞれ結合する炭素原子の下付き数字は０であり；そして
Ｒ１０及びＲ１１はそれぞれ独立して水素又はＣ１−２アルキルである）
の化合物または薬学上許容可能なその塩、及び薬学上許容可能なキャリアを含む医薬組成物。
【請求項２】
Ｘｃ及びＸｄの少なくとも１つは硫黄である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
Ｘｃ及びＸｄが双方とも硫黄である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項４】
環Ａが
【化５４】
2019137692.tif 000060
である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項５】
環Ｂが
【化５５】
2019137692.tif 000061
である、請求項４に記載の医薬組成物。
【請求項６】
環Ｂが
【化５６】
2019137692.tif 000062
である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項７】
Ｘ１がそれぞれ−Ｎ−である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項８】
Ｘ２がそれぞれ−Ｎ−である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項９】
Ｘａが−Ｏ−である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
Ｘｂが−Ｏ−である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
Ｒ１及びＲ２がそれぞれ独立して水素、ハロゲン、−ＮＨ２、及び−ＯＲａ（式中、Ｒａは水素またはＣ１−６アルキルである）から成る群から選択される、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
Ｒ１及びＲ２の少なくとも１つは−ＯＨである、請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
Ｒ１及びＲ２がそれぞれ独立して水素、ハロゲン、−ＮＨ２及び−ＯＲａ（式中、Ｒａは水素またはＣ１−６アルキルである）から成る群から選択され；そして、Ｒ１０及びＲ１１はそれぞれ水素である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６及びＲ７がそれぞれ独立して水素、ハロゲン、−ＯＨ、−ＳＨ、−ＮＨ２、及び−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２から成る群から選択される、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
Ｒ１及びＲ２がそれぞれ独立して水素、ハロゲン、−ＮＨ２、及び−ＯＲａ（式中、Ｒａは水素またはＣ１−６アルキルである）から成る群から選択される、請求項１４に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
Ｒ３、Ｒ５及びＲ７がそれぞれ独立して水素及びハロゲンからなる群から選択される、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
Ｒ３、Ｒ５及びＲ７がそれぞれ水素である、請求項１６に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
Ｒ４及びＲ６がそれぞれ独立して水素、ハロゲン、及び−ＮＨ２からなる群から選択される、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１９】
Ｒ４及びＲ６がそれぞれ−ＮＨ２である、請求項１８に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
Ｒ１０及びＲ１１が水素である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項２１】
前記化合物が、式ＩＩ−ａのもの
【化５７】
2019137692.tif 000063
または薬学上許容可能なその塩である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項２２】
前記化合物が、式Ｘ、ＸＩ、ＸＩＩ、ＸＩＩＩ、ＸＩＶ、ＸＶ、またはＸＶＩのもの
【化５８】
2019137692.tif 000064
【化５９】
2019137692.tif 000065
または薬学上許容可能なその塩である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項２３】
環Ａが、
【化６０】
2019137692.tif 000066
（式中、Ｘ１はそれぞれ−Ｎ−であり、Ｒ３及びＲ５は水素であり、そしてＲ４は−ＮＨ２である）であり；
Ｘａ及びＸｂは−Ｏ−であり；
Ｒ１及びＲ２は−ＯＨであり；そして
Ｒ１０及びＲ１１は水素である、請求項２１に記載の医薬組成物。
【請求項２４】
Ｘｃ及びＸｄの少なくとも１つは硫黄である、請求項２３に記載の医薬組成物。
【請求項２５】
Ｘｃ及びＸｄが双方とも酸素である、請求項２３に記載の医薬組成物。
【請求項２６】
Ｘｃ及びＸｄが双方とも硫黄である、請求項２３に記載の医薬組成物。
【請求項２７】
前記化合物が、式ＸＩＶのもの
【化６１】
2019137692.tif 000067
または薬学上許容可能なその塩であり、式中、
Ｒ３、Ｒ５及びＲ７がそれぞれ独立して水素またはハロゲンであり；
Ｒ４及びＲ６がそれぞれ独立して水素、ハロゲンまたは−ＮＨ２であり；そして
Ｒ１及びＲ２がそれぞれ独立して水素、ハロゲン、−ＮＨ２及び−ＯＲａ（式中、Ｒａは水素またはＣ１−６アルキルである）から成る群から選択される、
請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項２８】
前記化合物が、式ＸＶＩのもの
【化６２】
2019137692.tif 000068
または薬学上許容可能なその塩であり、式中、
Ｒ３、Ｒ５及びＲ７がそれぞれ独立して水素またはハロゲンであり；
Ｒ４及びＲ６がそれぞれ独立して水素、ハロゲンまたは−ＮＨ２であり；そして
Ｒ１及びＲ２がそれぞれ独立して水素、ハロゲン、−ＮＨ２及び−ＯＲａ（式中、Ｒａは水素またはＣ１−６アルキルである）から成る群から選択される、
請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項２９】
Ｘｃ及びＸｄが双方とも酸素である、請求項１に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
本発明は、そのそれぞれの内容すべてが全体として参照によって本明細書に組み入れら
れる、２０１３年４月２９日に出願された米国仮特許出願第６１／８１７，２６９号及び
２０１３年５月３日に出願された同第６１／８１９，３６９号に対して優先権を主張する
。
【背景技術】
【０００２】
細菌のセカンドメッセンジャーとして環状ジヌクレオチドの重要性は揺るぎないもので
あり、環状ジ−ＧＭＰ（ｃ−ジ−ＧＭＰ）は今や遍在する細菌のセカンドメッセンジャー
として認識されている。この多目的な分子は、細胞周期及び分化、運動性及び菌力、と同
様にバイオフィルムの形成及び分散の調節において重要な役割を担うことが示されている
。ｃ−ジ−ＧＭＰの我々の理解の前進は、このセカンドメッセンジャーの合成及び分解に
関与する細菌酵素の触媒活性の特定、構造的特徴付け及び機械的な理解と共に明らかにな
っている。遊離の状態での及びその合成と分解に関与する酵素に結合した場合のｃ−ジ−
ＧＭＰの結晶構造は、このセカンドメッセンジャーが単量体または二量体のビス挿入の折
り畳みを採用することができることを示している。２分子のＧＴＰからのｃ−（３’，５
’）−ジ−ＧＭＰの形成は、２工程の反応及び環化反応の副産物としての２分子のピロリ
ン酸による３’，５’−ホスホジエステル結合の形成を介して生じると思われる。さらに
、ｃ−（３’，５’）−ジ−ＧＭＰが標的とする複数の受容体及びこのセカンドメッセン
ジャーを介した多様な方法の細菌のシグナルが同定されている。実際、セカンドメッセン
ジャーとしてのｃ−ジ−ＧＭＰ研究の分野は大いに成長しており、最近２５年にわたって
細菌の環状ジヌクレオチドのシグナル伝達の生理学及びメカニズムの我々の理解で主要な
前進が得られている。並行した試験では、環状ジヌクレオチドが誘導するＲＮＡのスプラ
イシングに関与するものを含むｃ−（３’，５’）−ジ−ＧＭＰに特異的なリボスイッチ
も同定されている。
【０００３】
細胞質にて核酸を認識し、Ｉ型インターフェロン誘導を誘発する高等後生動物の自然免
疫のセンサーの分子的な及び機能的な理解を得る方向に現在大きな興味がある。病原性の
細菌またはウイルスが起源の細胞質ｄｓＤＮＡが、及びたぶん細胞性のストレスに続いて
置き換えられた核またはミトコンドリアのＤＮＡもそのような誘因を表す。自己核酸の認
識を含むこれらの事象は同様に、たとえば、全身性エリテマトーデス及びシェーグレン症
候群のような自己免疫疾患を誘発し得る。実際、近年、ＤＡＩ（ＩＦＮ−調節因子のＤＮ
Ａ−依存性の活性化因子）、ＬＲＲＦＩＰ１（ロイシン−リッチ反復及びフライトレスＩ
相互作用タンパク質１）、ＤＤＸ４１（ＤＥＡＤボックスポリペプチド４１）、及びＡＩ
Ｍ２（黒色腫２に存在しない）及びＩＦＩ１６（インターフェロン誘導性のタンパク質１
６）のようなＨＩＮ−２００（造血系のインターフェロン誘導性の核タンパク質）ファミ
リーのメンバーを含む多数の細胞質ＤＮＡセンサーが同定されている。ｄｓＤＮＡを伴う
複合体の構造で反映されるようにＨＩＮドメインファミリーで分子情報が利用可能である
。複数のセンサーについて要求は独特の細胞型に特異的な活性の反映であり得る。ｄｓＤ
ＮＡの細胞質での検出は細胞質におけるインターフェロン遺伝子の刺激因子（ＳＴＩＮＧ
）を活性化し、それは順に、先ずキナーゼＩＫＫ（ＩκＢキナーゼ）及びＴＢＫ１（ＴＡ
ＮＫ結合キナーゼ１）を活性化し、転写因子ＮＦ−κＢ（核因子κＢ）及びＩＲＦ３（イ
ンターフェロン調節因子）のリン酸化及び活性化をもたらすことによって事象のカスケー
ドを開始する。これらのリン酸化された転写因子は核に移行し、サイトカイン及びＩ型イ
ンターフェロンの産生をもたらす免疫遺伝子及び炎症遺伝子を標的とし、それによって宿
主の免疫応答を誘発する。従って、これらの経路におけるインターフェロン及び他の関連
する成分の誘導を調節する治療剤に対するニーズがある。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明は、とりわけ、以下で詳細に記載されるような新規の環状−ＧＭＰ−ＡＭＰ（ｃ
ＧＡＭＰ）の類似体、模倣体、模倣剤及び変異体を提供する。これらのｃＧＡＭＰの化合
物及び組成物は、とりわけ、研究ツールの設計において、研究ツールとして、及びｃＧＡ
Ｓのアゴニストやアンタゴニストを含む酵素調節因子のような治療手段として有用である
。本発明はまた、環状−ＧＭＰ−ＡＭＰシンターゼ（ｃＧＡＳ）の結晶学的データも提供
する。これらの結晶学的データは、研究、治療及び／または診断の分野で有用であるｃＧ
ＡＭＰ化合物または小分子のような調節因子（アゴニストやアンタゴニスト）を設計する
ための基礎を提供する。
【図面の簡単な説明】
【０００５】
【図１】遊離の状態での及びｄｓＤＮＡに結合したｃＧＡＭＰシンターゼ（ｃＧＡＳ）の構造を示す図である。（Ａ）遊離の状態でのｃＧＡＳの２．０Åの結晶構造。リボン表示のタンパク質の主鎖は明灰色で色付けする。（Ｂ）相補性の１６-ｂｐのＤＮＡ二本鎖（各末端で１塩基の５’オーバーハング）に結合したｃＧＡＳの２．１Åの結晶構造。タンパク質及びＤＮＡは二元複合体における暗灰色で色付けする。（Ｃ）二元ｃＧＡＳ−ＤＮＡ複合体における分子間水素結合の模式図。（Ｄ）遊離の状態でのｃＧＡＳ（明灰色）及びｃＧＡＳ−ＤＮＡ複合体（暗灰色）の重ね合わせ構造。（Ｅ，Ｆ）遊離の状態でのｃＧＡＳ（明灰色）から結合したＤＮＡを伴う二元複合体（暗灰色）への事態の推移におけるβシート（パネルＥ）及び触媒ポケット（パネルＦ）断片の範囲内での大きな変化。（Ｇ）静電気表示でのタンパク質を伴う、遊離の状態でのｃＧＡＳの構造における触媒ポケットへの狭い入口。（Ｈ）二元ｃＧＡＳ−ＤＮＡ複合体の構造における触媒ポケットへの広げた入口。
【図２】ｃＧＡＳ、ｄｓＤＮＡ及びＡＴＰの三元複合体の構造を示す図である。（Ａ）ｄｓＤＮＡ及びＡＴＰに結合したｃＧＡＳの三元複合体の２．４Åの結晶構造。タンパク質及びｄｓＤＮＡをリボンで示し、結合したＡＴＰが空間を満たす。（Ｂ）ｃＧＡＳとＤＮＡの二元複合体及びＡＴＰを加えた三元複合体の重ね合わせ構造。（Ｃ，Ｄ）二元のｃＧＡＳとｄｓＤＮＡの複合体からＡＴＰを加えた三元複合体へのβシート（パネルＣ）及び触媒ポケット（パネルＤ）断片の範囲内での主鎖における変化はない。（Ｅ，Ｆ）三元複合体におけるＡＴＰと触媒ポケット残基の間での分子間接触の２つの交互の図。２つのカチオンを球形として示し、水素結合は点線で示す。（Ｇ）触媒ポケットにおける結合したＡＴＰ、カチオンの対及び配位残基の１．２σで形成した２Ｆｏ−Ｆｃマップ（明灰色）及び３．０σで形成した２Ｆｏ−Ｆｃマップ（暗灰色）。このマップは一部の弱い説明されない電子密度を含有する（暗灰色）。（Ｈ）静電表示のタンパク質を伴う、触媒ポケット内で空間を満たす結合したＡＴＰの図。
【図３】結合した産物５’−ｐｐｐＧ（２’，５’）ｐＧ及び５’−ｐＧ（２’，５’）ｐＡを伴ったｃＧＡＳ、ｄｓＤＮＡの三元複合体の構造を示す図である。（Ａ）ｄｓＤＮＡに結合したｃＧＡＳと５’−ｐｐｐＧ（２’，５’）ｐＧの三元複合体の１．９Åの結晶構造。タンパク質とＤＮＡはリボンで示し、結合した５’−ｐｐｐＧ（２’，５’）ｐＧは空間を満たす。（Ｂ，Ｃ）三元複合体における５’−ｐｐｐＧ（２’，５’）ｐＧと触媒ポケット残基との間の分子間接触の２つの交互の図。２つのカチオンを球形として示し、水素結合は点線で示す。（Ｄ）三元複合体の触媒ポケットにおける結合した５’−ｐｐｐＧ（２’，５’）ｐＧの１．２σで形成した２Ｆｏ−Ｆｃ電子密度マップ。（Ｅ）静電表示のタンパク質を伴う、触媒ポケット内で空間を満たす結合した５’−ｐｐｐＧ（２’，５’）ｐＧの図。（Ｆ，Ｇ）ｃＧＡＳ、ｄｓＤＮＡ及びＧＭＰ＋ＡＴＰの２．３Åの三元複合体における５’−ｐＧ（２’，５’）ｐＡと触媒ポケット残基との間の分子間接触の２つの交互の図。（Ｈ）結合した５’−ｐｐｐＧ（２’，５’）ｐＧ（暗灰色）と５’−ｐＧ（２’，５’）ｐＡ（明灰色）の構造の重ね合わせ。
【図４】結合した産物ｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］を伴ったｃＧＡＳ、ＤＮＡの三元複合体の構造を示す図である。（Ａ）ｄｓＤＮＡに結合したｃＧＡＳと産物ｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］の三元複合体の２．３Åの結晶構造。タンパク質とＤＮＡはリボンで示し、結合したｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］は空間を満たす。（Ｂ，Ｃ）三元複合体における産物ｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］と触媒ポケット残基との間の分子間接触の２つの交互の図。（Ｄ）三元複合体の触媒ポケットにおける結合したｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］の１．２σで形成した２Ｆｏ−Ｆｃ電子密度マップ。（Ｅ）触媒ポケットの末端に向かって位置づけられた空間を満たす結合したｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］の図。（Ｆ）ＧｐＡ段階での２’，５’連結及びＡｐＧ段階での３’，５’連結を強調するｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］の図。（Ｇ）ｃＧＡＳとｄｓＤＮＡによる三元複合体におけるＴｙｒ４２１での５’−ｐＧ（２’，５’）ｐＡのＧ残基の積み重ね。（Ｈ）ｃＧＡＳとｄｓＤＮＡによる三元複合体におけるＴｙｒ４２１でのｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］のＡ残基の積み重ね。
【図５】ｃＧＡＳによるｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］の形成の性状分析を示す図である。精製した組換え切り詰めｃＧＡＳ（パネルＡ、結晶化試験を用いてアミノ酸１４７〜５０７）及び完全長のｃＧＡＳ（パネルＢ〜Ｄ、アミノ酸１〜５０７）を用いて薄層クロマトグラフィ（ＴＬＣ）によってｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］及び線状の産物及び中間体の生成をアッセイした。長い点線及び短い点線はそれぞれ起源及び溶媒の先頭を示す。（Ａ）示された二価のカチオン（またはＥＤＴＡ）及びα３２ｐ−ＡＴＰ及び−ＧＴＰを含有する反応緩衝液にてｃＧＡＳ（ｘ−ｙ）と共に４５−ｎｔのｄｓＤＮＡをインキュベートした。３’、５’の連結双方を含有する化学合成したｃＧＡＭＰを試料ごとに同時スポットし、ＵＶによって視覚化されるその移動を示す（破線の輪郭）。（Ｂ）ｃＧＡＳを一本鎖または二本鎖のＤＮＡ、ＲＮＡ、ＤＮＡ／ＲＮＡ二本鎖、または類似の配列の８−オキソグアニン（８−Ｏ−Ｇ）修飾したＤＮＡと共にインキュベートし、α３２ｐ−ＡＴＰを用いてｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］の形成をモニターした。（Ｃ）モノリン酸化及びジリン酸化されたアデノシン及びグアノシンを基質として用いて、ｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］の形成の順を決定した。ｃＧＡＳ及びｄｓＤＮＡをα３２ｐ−ＡＴＰ及びＧＭＰ（５’−ｐＧｐＡ）またはＧＤＰ（５’−ｐｐＧｐＡ）と共にインキュベートする場合ゆっくり移動する２’，５’連結の中間体種。（Ｄ）２’または３’のｄＡＴＰ及びｄＧＴＰを用いてｄｓＤＮＡ依存性のｃＧＡＭＰ反応中間体を視覚化した。ＴＬＣ移動相の組成を変えることによってｐｐｐＧｐＡ（レーン１）またはｐｐｐＧｐｄＡ（レーン２及びレーン３）に相当するゆっくり移動する中間体種が見られる。γ３２ｐ−ＧＴＰを用いて中間体種を確認した。
【図６】ｃＧＡＳの酵素的産物としてのｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］の最終的な同定を示す図である。（Ａ）逆相ＨＰＬＣ解析からのＧＴＰ、ＡＴＰ、ｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（２’，５’）ｐ］、ｃ［Ｇ（３’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］、ｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］及びｃＧＡＳ反応（ｒｘｎ、星印）の溶液のＵＶ２６０ｎｍでのクロマト図。ｃＧＡＳ反応試料を単独でまたは示された参照標準の添加と共に注入した。網掛け領域はｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］の溶出に相当する保持時間を示す。（Ｂ）単独で（上のトレース）注入した場合またはｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］参照化合物（真ん中のトレース）と共に同時注入した場合の溶解した結晶から得られたｃＧＡＳ産物のＨＰＬＣ解析のＵＶ２６０ｎｍでのクロマト図。溶解した結晶溶液には追加の同定されなかったピークが存在したが、後で溶出する。溶解した結晶溶液をカラムにかけた結果としてのｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］の保持時間の変化（０．５秒）のために３つの参照ｃＧＡＭＰ化合物を同時に注入した。（Ｃ）１０ｍＭのＫ２ＨＰＯ４−ＫＨ２ＰＯ４（ｐＨ６．６）緩衝液での９９．９％のＤ２ＯにてｃＧＡＳ反応によって化学的に合成された３つのｃＧＡＭＰ参照化合物の糖Ｈ１’プロトン領域のＮＭＲスペクトル。ｃＧＡＳ反応のＮＭＲスペクトルはｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］参照化合物に相当する。リン酸が２’位に結合する場合Ｈ１’プロトンは二重項（３ＪＨＨ＝９Ｈｚ）であるが、リン酸が３’位に結合する場合一重項であるということは、結合したリン酸基の位置に応じて５員環の糖環の異なる歪みを反映する。
【図７】ｃＧＡＳ変異体の機能的な解析及びｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］の２段階生成のモデルを示す図である。（Ａ）完全長重量の及び示された変異体のｃＧＡＳによるｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］形成のレベルをＴＬＣ解析によって比較した。長い点線及び短い点線はそれぞれ起源及び溶媒の先頭を示す。（Ｂ，Ｃ）マウスのｃＧＡＳＷＴの発現ベクターまたはＤＮＡ結合の単一及び複数のアラニン変異を運ぶ（パネルＢ）及び触媒残基（パネルＣ）を運ぶ発現ベクターを、ＩＦＮ−βＧｌｕｃレポーター及び構成的なＳＴＩＮＧ及びホタルＬｕｃの発現プラスミドと一緒にＨＥＫ２９３細胞に一時的に形質移入した。この設定では、発現されたｃＧＡＳは同時形質移入したＤＮＡプラスミドによって細胞質ゾルに係合される。形質移入の３６時間後、３つ組にてＧｌｕｃの値を測定し、ホタルＬｕｃに対して基準化し、対照プラスミドに対する倍数指示として示す（平均値±ｓ．ｅ．ｍ．として）。パネルＢ及びＣにおけるデータは各変異体について３〜５回の独立した実験の代表である。（Ｄ）ｃＧＡＳの単一の触媒ポケット内でのｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］の２段階生成に関連する提案されたモデルの模式図。このモデルでは、第１の段階には５’−ｐｐｐＧｐＡ中間体の形成に続くｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］の形成が関与する。結合したリガンドがｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］形成への経路で２回のフリップオーバーを受けると考えられることにも留意のこと。
【図Ｓ１Ａ】遊離の状態でのｃＧＡＳの配列比較及び結晶構造及びヒトＯＡＳ１との比較を示す図である。（Ａ）アミノ酸１４７〜５０７（Ｃ末端）にわたるマウス及びヒト（構造試験に使用された構築物）に由来するｃＧＡＳの配列比較。推定上の触媒残基はボックスの中で示す。（Ｂ）遊離の状態でのｃＧＡＳの構造の２つの交互の図。タンパク質の主鎖はリボン表示で示し、明灰色に色付ける。（Ｃ）遊離の状態でのｃＧＡＳ（明灰色）及びヒトのオリゴアデニレート合成酵素１（ＯＡＳ１）（黒色；ＰＤＢ：１ＰＸ５）の重ね合わせた構造の立体図。構造間のｒ．ｍ．ｓ．ｄ．は４．１Åだった。
【図Ｓ１Ｂ】遊離の状態でのｃＧＡＳの配列比較及び結晶構造及びヒトＯＡＳ１との比較を示す図である。（Ａ）アミノ酸１４７〜５０７（Ｃ末端）にわたるマウス及びヒト（構造試験に使用された構築物）に由来するｃＧＡＳの配列比較。推定上の触媒残基はボックスの中で示す。（Ｂ）遊離の状態でのｃＧＡＳの構造の２つの交互の図。タンパク質の主鎖はリボン表示で示し、明灰色に色付ける。（Ｃ）遊離の状態でのｃＧＡＳ（明灰色）及びヒトのオリゴアデニレート合成酵素１（ＯＡＳ１）（黒色；ＰＤＢ：１ＰＸ５）の重ね合わせた構造の立体図。構造間のｒ．ｍ．ｓ．ｄ．は４．１Åだった。
【図Ｓ１Ｃ】遊離の状態でのｃＧＡＳの配列比較及び結晶構造及びヒトＯＡＳ１との比較を示す図である。（Ａ）アミノ酸１４７〜５０７（Ｃ末端）にわたるマウス及びヒト（構造試験に使用された構築物）に由来するｃＧＡＳの配列比較。推定上の触媒残基はボックスの中で示す。（Ｂ）遊離の状態でのｃＧＡＳの構造の２つの交互の図。タンパク質の主鎖はリボン表示で示し、明灰色に色付ける。（Ｃ）遊離の状態でのｃＧＡＳ（明灰色）及びヒトのオリゴアデニレート合成酵素１（ＯＡＳ１）（黒色；ＰＤＢ：１ＰＸ５）の重ね合わせた構造の立体図。構造間のｒ．ｍ．ｓ．ｄ．は４．１Åだった。
【図Ｓ２】ｄｓＤＮＡに結合したｃＧＡＳの構造における分子認識特性及びｄｓＤＮＡと２’−Ｄａｔｐに結合したｈＯＡＳ１との比較を示す図である。（Ａ，Ｂ）ｃＧＡＳとｄｓＤＮＡの間での分子間接触の例。水分子は黒色の球形として示し、水素結合は点線によって示す。我々は、パネルＢで示されるようにＴ８のＡｒｇ１６１の側鎖とＯ２カルボニルの間で配列特異的な水素結合を１つ観察する。（Ｃ，Ｄ，Ｅ）遊離の状態でのｃＧＡＳ（明灰色）から結合したｄｓＤＮＡとの二元複合体（灰色）への事態の推移における立体構造の移動の例。複合体形成におけるβシート断片にて５．１Åの移動が観察される（パネルＣ）。長いα螺旋が２つの断片に分解し、一方の断片は、Ａｒｇ１６１の側鎖を含む、複合体形成におけるｄｓＤＮＡに向かって移動し、それは９．２Å移動する（パネルＤ）。ループ断片内での幾つかのＴｙｒ及びＬｙｓ残基は複合体形成において６．７〜１７．６Åの間移動する（パネルＥ）。（Ｆ）ｄｓＤＮＡに結合した状態でのｃＧＡＳのタンパク質成分（明灰色）とｄｓＤＮＡに結合した状態でのＯＡＳ１と２’−ｄＡＴＰ（黒色、ＰＤＢ：４ＩＧ８）の重ね合わせた構造の立体図。構造の間でのｒ．ｍ．ｓ．ｄ．は３．２Åである。ｃＧＡＳに結合したｄｓＤＮＡ及びＯＡＳ１に結合したｄｓＤＮＡは明瞭さのために図から省略する。
【図Ｓ３】ＧＴＰによる結晶化の際に形成される三元複合体の触媒ポケットにおける５’−ｐｐｐＧ（２’，５’）ｐＧを伴ったｃＧＡＳ構造を示す図である。（Ａ）ｃＧＡＳのＤＮＡとの二元複合体（灰色）と結合した５’−ｐｐｐＧ（２’，５’）ｐＧ中間体産物との三元複合体（暗灰色）の重ね合わせた構造。（Ｂ，Ｃ）二元複合体から結合した５’−ｐｐｐＧ（２’，５’）ｐＧを伴った三元複合体への事態の推移においてβシート内の主鎖（パネルＢ）及び触媒ポケット断片（パネルＣ）にて最小限の変化が観察される。（Ｄ）三元複合体の触媒ポケットにおける結合した５’−ｐｐｐＧ（２’，５’）ｐＧの２つの交互の図。Ｍｇ２＋カチオンは球形として示す。結合したリガンドの配列比較は５’−ｐｐｐＧ（ｓｙｎ）ｐ（２’，５’）ｐＧ（ａｎｔｉ）であることに留意のこと。（Ｅ）三元複合体の触媒ポケットにおける結合した５’−ｐｐｐＧ（２’，５’）ｐＧの３．０σで形成されたオミットＦｏ−Ｆｃオミット電子密度マップの２つの交互の図。（Ｆ）ｃＧＡＳ及びｄｓＤＮＡによる各三元複合体における結合した５’−ｐｐｐＧ（２’，５’）ｐＧ（灰色）とＡＴＰ（暗灰色）の重ね合わせた構造の２つの交互の図。（Ｇ）三元複合体の構造にて２つの結合したカチオンを同定する４σで記録されたオミットマップ。（Ｈ，Ｉ）複合体の構造にて２つの結合したカチオン回りでの８面体の配位構造。
【図Ｓ４】ＧＴＰ＋ＡＴＰによる結晶化の際に形成される三元複合体の触媒ポケットにおける結合したｃＧＡＳ及びｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］の構造を示す図である。（Ａ）ｃＧＡＳ及びＤＮＡの二元複合体（灰色）と、結合した産物がＧＴＰ及びＡＴＰによる結晶化から得られたｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］（暗灰色）である追加したＧＴＰ＋ＡＴＰによる三元複合体の重ね合わせた構造。（Ｂ，Ｃ）二元複合体から結合したｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］を伴う三元複合体への事態の推移においてβシート内の主鎖（パネルＢ）及び触媒ポケット断片（パネルＣ）にて立体構造の変化は生じなかった。（Ｄ）三元複合体の触媒ポケットにおける結合した産物ｃＧＡＭＰの２つの交互の図。結合したリガンドｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］はＧｐＡ段階の中で２’，５’ホスホジエステル結合を示したことに留意のこと。ＨＰＬＣの比較に基づいて、ｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］の構造はＡｐＧ段階での３’，５’連結と共に示される。Ｇ残基及びＡ残基の双方はそのグリコシド結合にてアンチ配列比較を採用する。（Ｅ）三元複合体の触媒ポケットにおける結合したｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］の３．０σにて形成されたＦｏ−Ｆｃ電子密度オミットマップの２つの交互の図。（Ｆ）ｃＧＡＳ及びｄｓＤＮＡ伴った各三元複合体における結合したｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］（灰色）及びＡＴＰ（暗灰色）の重ね合わせた構造の２つの交互の図。
【図Ｓ５】Ｃｇａｍｐの形成をモニターするための薄層クロマトグラフィ（ＴＬＣ）の条件を示す図である。（Ａ，Ｂ）示したヌクレオチドを高速シリカゲルＴＬＣプレートでスポットにし、種々の溶媒系で分解し、ＵＶによって視覚化した。２つの移動相条件を使用した（Ａ及びＢ）。ｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］の検出のための大半の実験で溶媒系１を用いたのに対して、モノリン酸化及びトリリン酸化された線状中間体のさらに良好な分離には溶媒２を使用した。点線は溶媒の先頭を示す。（Ｃ）算出されたＲｆ値。
【図Ｓ６】ｄｓＤＮＡの長さ及びｃＧＡＳ活性のヌクレオチド要件を示す図である。（Ａ）完全長のｃＧＡＳを等モル量または質量基準化した量の１６−、３６−または４５−ｎｔのｄｓＤＮＡと共にインキュベートし、次いでｃＧＡＭＰの形成についてアッセイした。パネルＡ〜Ｃにおける長い点線及び短い点線はそれぞれ起源及び溶媒の先頭を示す。（Ｂ）種々の示したヌクレオチドを含有する反応緩衝液にて４５ｂｐのｄｓＤＮＡと共に切り詰めた（ｔｒ）及び完全長（ｆｌ）のｃＧＡＳをインキュベートした。ｃＧＡＳ（ｔｒ）はｃＧＡＳ（ｆｌ）未満ではあるが、活性を呈する。２’−ｄＡＴＰまたはＧＴＰを放射性標識した場合、２’−ｄＡＴＰを用いてｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］が生じるが、２’−ｄＧＴＰを用いた場合、全く生じない。２’−ｄＧＴＰを伴った２’−ｄＡＴＰがｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］を生じなかったということは、アデノシン、及びさらに重要にはグアノシンにおける２’ＯＨ位置の遮断がｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］の生成を妨げたことを示している。星印（＊）はどのヌクレオチドがα３２Ｐ−放射性標識された形態で補完されたかを示す。ｄＮＴＰはトリリン酸化された２’−デオキシヌクレオチドを指し示す。（Ｃ）ｄｓＤＮＡ及びリボヌクレオチドの示した組み合わせを含有する反応緩衝液にて完全長のｃＧＡＳをインキュベートし、次いでＴＬＣによって解析した。ＵＴＰとのα３２ｐ−ＡＴＰのまたはＧＴＰ、ＣＴＰ及びＵＴＰとのα３２ｐ−ＧＴＰのインキュベートの際、微量の環状産物が形成された。最適な産物形成にはＧＴＰ及びＡＴＰが必要とされる。ＵＴＰ及びＡＴＰによって低レベルの環状産物が形成されるが、ＡＴＰ単独では形成されないということは、ＵＴＰはＧＴＰ結合部位にて受け入れられ得るが、親和性及び／または活性が低下し得ることを示唆している。産物すべての移動は環状ジヌクレオチドの形成に一致する。（Ｄ）ｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］のｄｓＤＮＡ依存性の経時的なｃＧＡＳ生成のＨＰＬＣ解析。単一のｃＧＡＳ反応が開始され、示した時間に試料をＨＰＬＣによって解析した。（Ｅ）高度に保存された残基Ｇ１９８及びＳ１９９をアラニンにまたはＧ１９８をプロリンに変異させて立体柔軟性を低下させた。変異体及びＷＴのｃＧＡＳのための発現ベクターを、ＩＦＮ−βＧｌｕｃレポーター及び構成的なＳＴＩＮＧ及びホタルＬｕｃの発現プラスミドと一緒にＨＥＫ２９３細胞に一時的に形質移入した。形質移入の３６時間後、３つ組にてＧｌｕｃの値を測定し、ホタルＬｕｃに対して基準化し、対照プラスミドに対する倍数指示として示す（平均値±ｓ．ｅ．ｍ．として）。データは各変異体について３回の独立した実験の代表である。
【図Ｓ７Ａ】ｃＧＡＭＰの異性体の合成を示す図である。ＧｐＡ及びＡｐＧ双方の段階で２’，５’連結を含有するｃＧＡＭＰの合成（６）（上のパネル）。ＧｐＡ段階にて２’，５’及びＡｐＧ段階にて３’，５’を含有するｃＧＡＭＰの合成（１１）（真ん中のパネル）。ＧｐＡ及びＡｐＧ双方の段階で３’，５’連結を含有するｃＧＡＭＰの合成（１５）（下のパネル）。
【図Ｓ７Ｂ】ｃＧＡＭＰの異性体の合成を示す図である。ＧｐＡ及びＡｐＧ双方の段階で２’，５’連結を含有するｃＧＡＭＰの合成（６）（上のパネル）。ＧｐＡ段階にて２’，５’及びＡｐＧ段階にて３’，５’を含有するｃＧＡＭＰの合成（１１）（真ん中のパネル）。ＧｐＡ及びＡｐＧ双方の段階で３’，５’連結を含有するｃＧＡＭＰの合成（１５）（下のパネル）。
【図Ｓ８−１】ＨＭＢＣ、ＣＯＳＹ及びＨＳＱＣの二次元ＮＭＲスペクトルに由来するｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］の共鳴割り当てを示す図である。（Ａ）芳香族化合物と糖Ｃ１’−Ｈ１’の間の相関を示すＨＭＢＣスペクトル。（Ｂ）糖環の中で相関を示すＨＭＢＣスペクトル。（Ａ）及び（Ｂ）において、グアニン塩基内の相関は実線によって関係付け、割り当てはそれぞれプロトンと炭素について上端と左端で特定する一方で、アデニン塩基内の相関は点線によって関係付け、割り当てはそれぞれプロトンと炭素について下端と右端で特定する。シグナルの結合した対を関係付ける青線によって大きな抑制されない１−結合Ｃ−Ｈカップリングが示される。（Ｃ）二重量子でフィルターをかけたＣＯＳＹスペクトル。グアニンの相関は実線で関係付け、共鳴は対角線上の交差ピークで標識される。アデニンの相関は点線で関係付け、共鳴は対角線下の交差ピークで標識される。（Ｄ）糖プロトンと炭素の割り当てを要約する脂肪族ＨＳＱＣスペクトル。図６Ｃ及び表Ｓ４も参照のこと。
【図Ｓ８−２】ＨＭＢＣ、ＣＯＳＹ及びＨＳＱＣの二次元ＮＭＲスペクトルに由来するｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］の共鳴割り当てを示す図である。（Ａ）芳香族化合物と糖Ｃ１’−Ｈ１’の間の相関を示すＨＭＢＣスペクトル。（Ｂ）糖環の中で相関を示すＨＭＢＣスペクトル。（Ａ）及び（Ｂ）において、グアニン塩基内の相関は実線によって関係付け、割り当てはそれぞれプロトンと炭素について上端と左端で特定する一方で、アデニン塩基内の相関は点線によって関係付け、割り当てはそれぞれプロトンと炭素について下端と右端で特定する。シグナルの結合した対を関係付ける青線によって大きな抑制されない１−結合Ｃ−Ｈカップリングが示される。（Ｃ）二重量子でフィルターをかけたＣＯＳＹスペクトル。グアニンの相関は実線で関係付け、共鳴は対角線上の交差ピークで標識される。アデニンの相関は点線で関係付け、共鳴は対角線下の交差ピークで標識される。（Ｄ）糖プロトンと炭素の割り当てを要約する脂肪族ＨＳＱＣスペクトル。図６Ｃ及び表Ｓ４も参照のこと。
【図Ｓ９−１】ｃＧＡＭＰ化合物によるマウスαインターフェロン及びヒトＣＸＣＬ１０のＳＴＩＮＧ依存性の誘導を示す図である。内在性のマウスαインターフェロン（ｍ−Ｉｆｎａ）またはヒトＣＸＣＬ１０（ｈ−ＣＸＣＬ１０）タンパク質を定量する酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）によって、示されたｃＧＡＭＰ異性体の用量依存性の生物活性を測定した。（Ａ，Ｂ）マウス骨髄由来のマクロファージを先ずジギトニン（Ｄｉｇ）で処理してｃＧＡＭＰ添加に先立って細胞膜を透過化した（Ａ）、または培養培地における添加によってｃＧＡＭＰを細胞に受動的に送達した（Ｂ）。（Ｃ）ｃＧＡＭＰの活性化はヒトＴＨＰ−１細胞でも測定した。データはそれぞれ３つ組で行った２回の独立した実験の代表である（誤差棒、ｓ．ｅ．ｍ．）。４パラメータのＳ字状用量反応曲線の基づいて最大半量の有効濃度（ＥＣ５０）値を概算した；９５％信頼区間範囲（ＣＩ）を提供する。
【図Ｓ９−２】ｃＧＡＭＰ化合物によるマウスαインターフェロン及びヒトＣＸＣＬ１０のＳＴＩＮＧ依存性の誘導を示す図である。内在性のマウスαインターフェロン（ｍ−Ｉｆｎａ）またはヒトＣＸＣＬ１０（ｈ−ＣＸＣＬ１０）タンパク質を定量する酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）によって、示されたｃＧＡＭＰ異性体の用量依存性の生物活性を測定した。（Ａ，Ｂ）マウス骨髄由来のマクロファージを先ずジギトニン（Ｄｉｇ）で処理してｃＧＡＭＰ添加に先立って細胞膜を透過化した（Ａ）、または培養培地における添加によってｃＧＡＭＰを細胞に受動的に送達した（Ｂ）。（Ｃ）ｃＧＡＭＰの活性化はヒトＴＨＰ−１細胞でも測定した。データはそれぞれ３つ組で行った２回の独立した実験の代表である（誤差棒、ｓ．ｅ．ｍ．）。４パラメータのＳ字状用量反応曲線の基づいて最大半量の有効濃度（ＥＣ５０）値を概算した；９５％信頼区間範囲（ＣＩ）を提供する。
【図Ｓ１０】コンピュータ装置及び可動性コンピュータ装置の例となるブロック図である。
【図Ｓ１１】多重チャンネル状況認識通信環境を確立するためのネットワーク環境の例となるブロック図である。
【発明を実施するための形態】
【０００６】
ＶＳＰ−１（Ｖｉｂｒｉｏ第７パンデミックアイランド−１）遺伝子が新規のクラスの
ジヌクレオチドシクラーゼをコードすることが示されており、それは環状ＧＭＰ−ＡＭＰ
（指名されたｃＧＡＭＰ）分子を優先的に合成し、それによって我々の知識の範囲が環状
ＧＡジヌクレオチドに拡大している（Ｄａｖｉｅｓら．２０１２）。さらに最近、環状Ｇ
ＭＰ−ＡＭＰシンターゼ（ｃＧＡＳ、公式なヒトの遺伝子記号はＭＢ２１Ｄ１）が、セカ
ンドメッセンジャーｃＧＡＭＰを合成することによってＩ型インターフェロン経路を活性
化する細胞質ＤＮＡセンサーとして同定された（Ｓｕｎら．２０１３；Ｗｕら．２０１３
）。ｃＧＡＳはヌクレオチジルトランスフェラーゼファミリーのメンバーであり、ｄｓＤ
ＮＡ（しかしｄｓＲＮＡではない）の存在下でＧＴＰ及びＡＴＰから試験管内でｃＧＡＭ
Ｐを生成することが可能であることが示された一方で、３’，５’連結を含有する化学的
に合成されたｃＧＡＭＰは１０ｎＭほどの低い濃度でＴＨＰ１細胞及びＲａｗ２６４．７
細胞にてインターフェロンの産生を刺激することが示された。著者らはｃＧＡＳの過剰発
現またはノックダウンが関与する実験を介して、ｃＧＡＭＰがＳＴＩＮＧに結合し、それ
を活性化して転写因子ＩＲＦ３の活性化及びその後のインターフェロンの誘導を生じるこ
とも明らかにした（Ｓｕｎら．２０１３；Ｗｕら．２０１３）。
【０００７】
これらの研究における決定的な前提は、上記で要点を述べたように、細菌系におけるｃ
−ジ−ＧＭＰについて以前報告されたものに一致して、ｃＧＡＭＰが３’，５’連結の対
を含有するということだった（Ｓｕｎら．２０１３；Ｗｕら．２０１３）。本発明はＳｕ
ｎ及びＷｕによって以前与えられたｃＧＡＭＰの構造が間違っていたという認識を包含す
る。従って、本発明の態様の１つは、ｃＧＡＭＰの構造の誤認の以前未知の問題を特定す
ることである。本開示は、構造アッセイ、化学アッセイ、試験管内の生化学アッセイ及び
生体内の細胞アッセイを組み合わせて、このセカンドメッセンジャーが予想外にＧｐＡ段
階で２’，５’連結を及びＡｐＧ段階で３’，５’連結を含有する｛指定されたｃ［Ｇ（
２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］｝ので、細胞質ＤＮＡに応答したＩ型インターフェ
ロンの誘導を調節する後生動物のセカンドメッセンジャーの新しいファミリーの創始メン
バーを正しく、初めて同定する。
【０００８】
特定の実施形態では、本発明は２’，５’連結（ＧｐＡ段階にて）を含有する環状ＧＡ
−ジヌクレオチドｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］を含む化合物を提供する
。一部の実施形態では、そのような化合物は後生動物における細胞のシグナル伝達及び免
疫監視の研究に有用である。一部の実施形態では、そのような化合物は薬物療法における
障害、疾患または状態の治療、診断または予防に有用である。一部の実施形態では、その
ような化合物は免疫応答に関与する標的を調節するのに有用である。一部の実施形態では
、本発明の化合物及び／または組成物は研究ツール及び／または試薬として、特に生物研
究または化学研究のためのキット及びアッセイにて有用である。
【０００９】
本発明はｃＧＡＳの調節因子の設計に有用な結晶学データも提供する。特定の実施形態
では、本発明はｃＧＡＳとの適当な結合相互作用を形成する特徴を含むｃＧＡＳの調節因
子を提供する。一部の実施形態では、そのような調節因子はｃＧＡＭＰに結合する標的と
の適当な結合相互作用を形成する特徴を含む。
【００１０】
定義
本発明の化合物には上記で一般に記載されるものが含まれ、本明細書で開示されるクラ
ス、サブクラス及び種によってさらに説明される。本明細書で使用されるとき、特に指示
されない限り、以下の定義が適用されるべきである。本発明の目的では、化学元素はＴｈ
ｅ  Ｐｅｒｉｏｄｉｃ  Ｔａｂｌｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｅｌｅｍｅｎｔｓ，  ＣＡＳ  ｖｅ
ｒｓｉｏｎ，  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｐｈｙｓｉｃｓ
，  第７５版  Ｅｄに従って同定される。さらに、有機化学の一般的な原理は、その内容
全体が参照によって本明細書に組み入れられる“Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ”
，Ｔｈｏｍａｓ  Ｓｏｒｒｅｌｌ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｂｏｏｋｓ
，Ｓａｕｓａｌｉｔｏ：１９９９、並びに“Ｍａｒｃｈ’ｓ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇ
ａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ”，第５版，Ｅｄ．：Ｓｍｉｔｈ，Ｍ．Ｂ．及びＭａｒｃ
ｈ，Ｊ．，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：２００１にて記載
されている。
【００１１】
本明細書で使用される略語は化学技術及び生物学技術の範囲内での従来の意味を有する
。本明細書で述べられる化学構造及び化学式は化学技術で既知の化学価数の標準規則に従
って構成される。
【００１２】
特に言及されない限り、本明細書で描かれる構造は、構造の異性体（たとえば、エナン
チオマー、ジアステレオマー、及び幾何（または立体構造））形態のすべて；たとえば、
各不斉中心についてのＲ及びＳの配置、Ｚ及びＥの二重結合異性体、並びにＺ及びＥの立
体構造異性体も含むこととする。従って、単一の立体化学異性体と同様に本化合物のエナ
ンチオマー、ジアステレオマー及び幾何（または立体構造）の混合物は本発明の範囲内に
ある。特に言及されない限り、本発明の化合物の互変異性体形態すべては本発明の範囲内
にある。さらに特に言及されない限り、本明細書で描かれる構造は、１以上の同位体を濃
縮した原子の存在のみで異なる化合物も含むこととする。たとえば、重水素若しくは三重
水素による水素の置換、または１３Ｃ若しくは１４Ｃを濃縮した炭素による炭素の置換を
含む本構造を有する化合物は本発明の範囲内にある。そのような化合物は、たとえば、分
析ツールとして、生物アッセイにおけるプローブとして、または本発明に係る治療剤とし
て有用である。
【００１３】
提供される化合物は１以上の糖部分を含み得る。特に特定されない限り、Ｄ−及びＬ−
の立体構造、及びそれらの混合物は本開示の範囲内にある。特に特定されない限り、α−
及びβ−連結の実施形態及びそれら混合物は本開示によって熟考される。
【００１４】
たとえば、本開示の化合物の特定のエナンチオマーが所望であるならば、それは、不斉
合成、キラルクロマトグラフィによって、またはキラル補助剤による導出によって調製さ
れてもよく、その際、得られるジアステレオマー混合物は分離され、補助基を切断して純
粋な所望のエナンチオマーを提供する。或いは、分子がアミノのような基礎官能基または
カルボキシルのような酸性官能基を含有する場合、適当な光学活性のある酸または塩基に
よってジアステレオマー塩が形成され、その後、こうして形成されたジアステレオマーの
当該技術で周知の分画結晶化またはクロマトグラフィの手段による分解、及び純粋なエナ
ンチオマーのその後の回収が続く。
【００１５】
用語「アシル」は本明細書で使用されるとき、本明細書で定義されるようなカルボニル
基を介して親分子基に連結される本明細書で定義されるような水素またはアルキル基（た
とえば、ハロアルキル基）を表し、ホルミル（すなわち、カルボキシアルデヒド基）、ア
セチル、プロピオニル、ブタノイル等によって例示される。例となる非置換のアシル基は
１〜７、１〜１１または１〜２１の炭素を含む。一部の実施形態では、アルキル基はさら
に本明細書で記載されるような１、２、３または４の置換基で置換される。
【００１６】
用語「脂肪族の」または「脂肪族基」は本明細書で使用されるとき、完全に飽和される
または１以上の単位の不飽和を含有する直鎖（すなわち、非分枝）若しくは分枝鎖の置換
された若しくは非置換の炭化水素鎖、または完全に飽和される若しくは１以上の単位の不
飽和を含有するが、芳香族（本明細書では「炭素環式」、「シクロ脂肪族」または「シク
ロアルキル」とも呼ばれる）ではなく、分子の残りに対する単一点の連結を有する単環式
炭化水素若しくは二環式炭化水素を意味する。特に特定されない限り、脂肪族基は１〜６
の脂肪族炭素原子を含有する。一部の実施形態では、脂肪族基は１〜５の脂肪族炭素原子
を含有する。一部の実施形態では、脂肪族基は１〜４の脂肪族炭素原子を含有する。一部
の実施形態では、脂肪族基は１〜３の脂肪族炭素原子を含有し、さらに他の実施形態では
、脂肪族基は１〜２の脂肪族炭素原子を含有する。一部の実施形態では、「シクロ脂肪族
」（または「炭素環式」または「シクロアルキル」）は、完全に飽和されるまたは１以上
の単位の不飽和を含有するが、芳香族ではなく、分子の残りに対する単一点の連結を有す
る単環式のＣ３〜Ｃ６の炭化水素を指す。好適な脂肪族基には、直鎖または分枝鎖の飽和
または不飽和のアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、及びたとえば、（シクロアル
キル）アルキル、（シクロアルケニル）アルキルまたは（シクロアルキル）アルケニルの
ようなそれらのハイブリッドが挙げられるが、これらに限定されない。
【００１７】
用語「ヘテロ原子」は、酸素、イオウ、窒素、リンまたはケイ素（窒素、イオウ、リン
またはケイ素の酸化形態；塩基性窒素の四級化形態；たとえば、Ｎ（３，４−ジヒドロ−
２Ｈ−ピロリルのような）、ＮＨ（ピロリジニルのような）若しくはＮＲ＋（Ｎ置換のピ
ロリジニルのような）複素環の置換可能な窒素を含む）の１以上を意味する。
【００１８】
用語「不飽和の」は本明細書で使用されるとき、部分が１以上の単位の不飽和を有する
ことを意味する。
【００１９】
用語「アルキル」は本明細書で使用されるとき、１〜６の間の炭素原子を含有する脂肪
族部分から単一の水素原子の取り外しによって導出される飽和の直鎖または分枝鎖の炭化
水素ラジカルを指す。特に特定されない限り、アルキル基は１〜１２の炭素原子を含有す
る。特定の実施形態では、アルキル基は１〜８の炭素原子を含有する。特定の実施形態で
は、アルキル基は１〜６の炭素原子を含有する。一部の実施形態では、アルキル基は１〜
５の炭素原子を含有し、一部の実施形態では、アルキル基は１〜４の炭素原子を含有し、
一部の実施形態では、アルキル基は１〜３の炭素原子を含有し、一部の実施形態では、ア
ルキル基は１〜２の炭素原子を含有する。アルキルラジカルの例には、メチル、エチル、
ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｓｅｃ−ペン
チル、イソペンチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、ネオペンチル、ｎ−ヘキシル、
ｓｅｃ−ヘキシル、ｎ−ヘプチル、ｎ−オクチル、ｎ−デシル、ｎ−ウンデシル、ドデシ
ル等が挙げられるが、これらに限定されない。
【００２０】
用語「アルケニル」は本明細書で使用されるとき、単一の水素原子の取り外しによって
少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を有する直鎖または分枝鎖の脂肪族部分に由来する
一価の基を意味する。特に特定されない限り、アルケニル基は２〜１２の炭素原子を含有
する。特定の実施形態では、アルケニル基は２〜８の炭素原子を含有する。特定の実施形
態では、アルケニル基は２〜６の炭素原子を含有する。一部の実施形態では、アルケニル
基は２〜５の炭素原子を含有し、一部の実施形態では、アルケニル基は２〜４の炭素原子
を含有し、一部の実施形態では、アルケニル基は２〜３の炭素原子を含有し、一部の実施
形態では、アルケニル基は２の炭素原子を含有する。アルケニル基には、たとえば、エテ
ニル、プロペニル、ブテニル、１−メチル−２−ブテン−１−イル等が挙げられる。
【００２１】
用語「アルキニル」は、本明細書で使用されるとき、単一の水素原子の取り外しによっ
て少なくとも１つの炭素−炭素三重結合を有する直鎖または分枝鎖の脂肪族部分に由来す
る一価の基を意味する。特に特定されない限り、アルキニル基は２〜１２の炭素原子を含
有する。特定の実施形態では、アルキニル基は２〜８の炭素原子を含有する。特定の実施
形態では、アルキニル基は２〜６の炭素原子を含有する。一部の実施形態では、アルキニ
ル基は２〜５の炭素原子を含有し、一部の実施形態では、アルキニル基は２〜４の炭素原
子を含有し、一部の実施形態では、アルキニル基は２〜３の炭素原子を含有し、一部の実
施形態では、アルキニル基は２の炭素原子を含有する。代表的なアルキニル基には、エチ
ニル、２−プロピニル（プロパルギル）、１−プロピニル等が挙げられるが、これらに限
定されない。
【００２２】
用語「アルキレン」は二価のアルキル基を指す。「アルキレン鎖」はポリメチレン基、
すなわち、−（ＣＨ２）ｎ−であり、その際、ｎは正の整数、好ましくは１〜６、１〜４
、１〜３、１〜２または２〜３である。置換されたアルキレン鎖は１以上のメチレンの水
素原子が置換基で置き換えられるポリメチレン基である。好適な置換基には置換された脂
肪族基について以下で記載されるものが挙げられる。
【００２３】
用語「アルケニレン」は二価のアルケニル基を指す。置換されたアルケニレン鎖は１以
上の水素原子が置換基で置き換えられる、少なくとも１つの二重結合を含有するポリメチ
レン基である。好適な置換基には以下で記載されるものが挙げられる。
【００２４】
用語「ハロ」は本明細書で使用されるとき、臭素、塩素、ヨウ素またはフッ素から選択
されるハロゲンを表す。
【００２５】
用語「ハロゲン」はＦ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩを意味する。
【００２６】
用語「ハロアルコキシ」は本明細書で使用されるとき、ハロゲン基（すなわち、Ｆ、Ｃ
ｌ、ＢｒまたはＩ）によって置換された、本明細書で定義されるようなアルコキシ基を表
す。ハロアルコキシは１、２、３の、または２以上の炭素のアルキル基の場合、４のハロ
ゲンで置換され得る。ハロアルコキシ基には、パーフルオロアルコキシ（たとえば、−Ｏ
ＣＦ３）、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨ２Ｆ、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＨ２ＣＨ２Ｂｒ、−ＯＣ
Ｈ２ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ２Ｂｒ）ＣＨ３、及び−ＯＣＨＩＣＨ３が挙げられる。一部の実施
形態では、ハロアルコキシ基はアルキル基について本明細書で記載されるような１、２、
３または４の置換基でさらに置換することができる。
【００２７】
用語「ハロアルキル」は本明細書で使用されるとき、ハロゲン基（すなわち、Ｆ、Ｃｌ
、ＢｒまたはＩ）によって置換された、本明細書で定義されるようなアルキル基を表す。
ハロアルキル基は１、２、３の、または２以上の炭素のアルキル基の場合、４のハロゲン
で置換され得る。ハロアルキル基には、パーフルオロアルキル（たとえば、−ＣＦ３）、
−ＣＨＦ２、−ＣＨ２Ｆ、−ＣＣｌ３、−ＣＨ２ＣＨ２Ｂｒ、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ
２Ｂｒ）ＣＨ３、及び−ＣＨＩＣＨ３が挙げられる。一部の実施形態では、ハロアルキル
基はアルキル基について本明細書で記載されるような１、２、３または４の置換基でさら
に置換することができる。
【００２８】
単独で使用されるまたは「アラルキル」、「アラルコキシ」若しくは「アリールオキシ
アルキル」にあるようなさらに大きな部分の一部として使用される用語「アリール」は、
合計５〜１０の環員を有する単環式及び二環式の環系を指し、その際、系における少なく
とも１つの環が芳香族であり、系における各環が３〜７の環員を含有する。用語「アリー
ル」は用語「アリール環」と相互交換可能に使用され得る。一部の実施形態では、８〜１
０員環の二環式アリール基は任意で置換されたナフチル環である。本発明の特定の実施形
態では、「アリール」は芳香族環系を指し、それには、フェニル、ビフェニル、ナフチル
、アントラシル等が挙げられるが、これらに限定されず、それらは１以上の置換基を担い
得る。本明細書で使用されるとき、用語「アリール」の範囲内に含められるのはまた、た
とえば、インダニル、フタリミジル、ナフチミジル、フェナントリジニルまたはテトラヒ
ドロナフチルのような、芳香族環が１以上の非芳香族環に縮合する基である。
【００２９】
単独で使用されるまたはさらに大きな部分、たとえば、「ヘテロアラルキル」若しくは
「ヘテロアラルコキシ」の一部として使用される用語「ヘテロアリール」及び「ヘテロア
リ−」は５〜１０の環原子、好ましくは５、６または９の環原子を有し；環状配置で共有
される６、１０または１４のπ電子を有し；炭素原子に加えて１〜５のヘテロ原子を有す
る基を指す。ヘテロアリール基には限定しないで、チエニル、フラニル、ピロリル、イミ
ダゾリル、ピラゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル
、オキサジアゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、チアジアゾリル、ピリジル、ピリダ
ジニル、ピリミジニル、ピラジニル、インドリジニル、プリニル、ナフチリジニル、及び
プテリジニルが挙げられる。用語「ヘテロアリール」及び「ヘテロアリ−」には本明細書
で使用されるとき、ヘテロ芳香族環が１以上のアリール環、環状脂肪族環またはヘテロシ
クリル環に縮合し、結合のラジカルまたは点がヘテロ芳香族環上である基も挙げられる。
非限定例には、インドリル、イソインドリル、ベンゾチエニル、ベンゾフラニル、ジベン
ゾフラニル、インダゾリル、ベンズイミダゾリル、ベンズチアゾリル、キノリル、イソキ
ノリル、シンノリニル、フタラジニル、キナゾリニル、キノキサリニル、４Ｈ−キノリジ
ニル、カルバゾリル、アクリジニル、フェナジニル、フェノチアジニル、フェノキサジニ
ル、テトラヒドロキノリニル、テトラヒドロイソキノリニル、及びピリド［２，３−ｂ］
−１，４−オキサジン−３（４Ｈ）−オンが挙げられる。ヘテロアリール基は単環式であ
ってもまたは二環式であってもよい。用語「ヘテロアリール」は用語「ヘテロアリール環
」、「ヘテロアリール基」または「ヘテロ芳香族」と相互交換可能に使用されてもよく、
用語のいずれかは任意で置換される環を含む。用語「ヘテロアラルキル」はヘテロアリー
ルによって置換されたアルキル基を指し、その際、アルキル及びヘテロアリールの部分は
独立して任意で置換される。
【００３０】
本明細書で使用されるとき、用語「複素環」、「ヘテロシクリル」、「複素環ラジカル
」及び「複素環式環」は相互交換可能に使用され、特に特定されない限り、窒素、酸素及
びイオウから成る群から独立して選択される１、２、３または４のヘテロ原子を含有する
５−、６−または７−員環を指す。５員環は０〜２の二重結合を有し、６員環及び７員環
は０〜３の二重結合を有する。例となる非置換のヘテロシクリル基は１〜１２（たとえば
、１〜１１、１〜１０、１〜９、２〜１２、２〜１１、２〜１０または２〜９）の炭素の
ものである。用語「ヘテロシクリル」はまた、１以上の炭素及び／またはヘテロ原子が単
環式の環の２つの隣接しないメンバーを架橋する架橋された多重環状構造を有する複素環
化合物、たとえば、キヌクリジニル基も表す。用語「ヘテロシクリル」には、上記の複素
環式環が、１、２または３の炭素環式環、たとえば、アリール環、シクロヘキサン環、シ
クロヘキセン環、シクロペンタン環、シクロペンテン環、または他の単環式複素環式環、
たとえば、インドリル、キノリル、イソキノリル、テトラヒドロキノリル、ベンゾフリル
、ベンゾチエニル等に縮合する二環式、三環式及び四環式の基が含まれる。縮合ヘテロシ
クリルの例にはトロパン及び１，２，３，５，８，８ａ−ヘキサヒドロインドリジンが挙
げられる。複素環には、そのジヒドロ形態及びテトラヒドロ形態を含めて、ピロリル、ピ
ロリニル、ピロリジニル、ピラゾリル、ピラゾリニル、ピラゾリジニル、イミダゾリル、
イミダゾリニル、イミダゾリジニル、ピリジル、ピペリジニル、ホモピペリジニル、ピラ
ジニル、ピペラジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、オキサゾリル、オキサゾリジニル
、イソオキサゾリル、イソオキサゾリジニル、モルフォリニル、チオモルフォリニル、チ
アゾリル、チアゾリジニル、イソチアゾリル、イソチアゾリジニル、インドリル、インダ
ゾリル、キノリル、イソキノリル、キノキサリニル、ジヒドロキノキサリニル、キナゾリ
ニル、シンノリニル、フタラジニル、ベンズイミダゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾオ
キサゾリル、ベンゾチアジアゾリル、フリル、チエニル、チアゾリジニル、イソチアゾリ
ル、トリアゾリル、テトラゾリル、オキサジアゾリル（たとえば、１，２，３−オキサジ
アゾリル）、プリニル、チアジアゾリル（たとえば、１，２，３−チアジアゾリル）、テ
トラヒドロフラニル、ジヒドロフラニル、テトラヒドロチエニル、ジヒドロチエニル、ジ
ヒドロインドリル、ジヒドロキノリル、テトラヒドロキノリル、テトラヒドロイソキノリ
ル、ジヒドロイソキノリル、ピラニル、ジヒドロピラニル、ジチアゾリル、ベンゾフラニ
ル、イソベンゾフラニル、ベンゾチエニル等が挙げられ、その際、１以上の二重結合が減
らされ、水素によって置き換えられる。さらに他の例となるヘテロシクリルには、２，３
，４，５−テトラヒドロ−２−オキソ−オキサゾリル；２，３−ジヒドロ−２−オキソ−
１Ｈ−イミダゾリル；２，３，４，５−テトラヒドロ−５−オキソ−１Ｈ−ピラゾリル（
たとえば、２，３，４，５−テトラヒドロ−２−フェニル−５−オキソ−１Ｈ−ピラゾリ
ル）；２，３，４，５−テトラヒドロ−２，４−ジオキソ−１Ｈ−イミダゾリル（たとえ
ば、２，３，４，５−テトラヒドロ−２，４−ジオキソ−５−メチル−５−フェニル−１
Ｈ−イミダゾリル）；２，３−ジヒドロ−２−チオキソ−１，３，４−オキサジアゾリル
（たとえば、２，３−ジヒドロ−２−チオキソ−５−フェニル−１，３，４−オキサジア
ゾリル）；４，５−ジヒドロ−５−オキソ−１Ｈ−トリアゾリル（たとえば、４，５−ジ
ヒドロ−３−メチル−４−アミノ５−オキソ−１Ｈ−トリアゾリル）；１，２，３，４−
テトラヒドロ−２，４−ジオキソピリジニル（たとえば、１，２，３，４−テトラヒドロ
−２，４−ジオキソ−３，３−ジエチルピリジニル）；２，６−ジオキソ−ピペリジニル
（たとえば、２，６−ジオキソ−３−エチル−３−フェニルピペリジニル）；１，６−ジ
ヒドロ−６−オキソピリジミニル；１，６−ジヒドロ−４−オキソピリミジニル（たとえ
ば、２−（メチルチオ）−１，６−ジヒドロ−４−オキソ−５−メチルピリミジン−１−
イル）；１，２，３，４−テトラヒドロ−２，４−ジオキソピリミジニル（たとえば、１
，２，３，４−テトラヒドロ−２，４−ジオキソ−３−エチルピリミジニル）；１，６−
ジヒドロ−６−オキソ−ピリダジニル（たとえば、１，６−ジヒドロ−６−オキソ−３−
エチルピリダジニル）；１，６−ジヒドロ−６−オキソ−１，２，４−トリアジニル（た
とえば、１，６−ジヒドロ−５−イソプロピル−６−オキソ−１，２，４−トリアジニル
）；２，３−ジヒドロ−２−オキソ−１Ｈ−インドリル（たとえば、３，３−ジメチル−
２，３−ジヒドロ−２−オキソ−１Ｈ−インドリル及び２，３−ジヒドロ−２−オキソ−
３，３’−スピロプロパン−１Ｈ−インドール−１−イル）；１，３−ジヒドロ−１−オ
キソ−２Ｈ−イソ−インドリル；１，３−ジヒドロ−１，３−ジオキソ−２Ｈ−イソ−イ
ンドリル；１Ｈ−ベンゾピラゾリル（たとえば、１−（エトキシカルボニル）−１Ｈ−ベ
ンゾピラゾリル）；２，３−ジヒドロ−２−オキソ−１Ｈ−ベンズイミダゾリル（たとえ
ば、３−エチル−２，３−ジヒドロ−２−オキソ−１Ｈ−ベンズイミダゾリル）；２，３
−ジヒドロ−２−オキソ−ベンズオキサゾリル（たとえば、５−クロロ−２，３−ジヒド
ロ−２−オキソ−ベンズオキサゾリル）；２，３−ジヒドロ−２−オキソ−ベンズオキサ
ゾリル；２−オキソ−２Ｈ−ベンゾピラニル；１，４−ベンゾジオキサニル；１，３−ベ
ンゾジオキサニル；２，３−ジヒドロ−３−オキソ，４Ｈ−１，３−ベンゾチアジニル；
３，４−ジヒドロ−４−オキソ−３Ｈ−キナゾリニル（たとえば、２−メチル−３，４−
ジヒドロ−４−オキソ−３Ｈ−キナゾリニル）；１，２，３，４−テトラヒドロ−２，４
−ジオキソ−３Ｈ−キナゾリル（たとえば、１−エチル−１，２，３，４−テトラヒドロ
−２，４−ジオキソ−３Ｈ−キナゾリル）；１，２，３，６−テトラヒドロ−２，６−ジ
オキソ−７Ｈ−プリニル（たとえば、１，２，３，６−テトラヒドロ−１，３−ジメチル
−２，６−ジオキソ−７Ｈ−プリニル）；１，２，３，６−テトラヒドロ−２，６−ジオ
キソ−１Ｈ−プリニル（たとえば、１，２，３，６−テトラヒドロ−３，７−ジメチル−
２，６−ジオキソ−１Ｈ−プリニル）；２−オキソベンズ［ｃ，ｄ］インドリル；１，１
−ジオキソ−２Ｈ−ナフト［１，８−ｃ，ｄ］イソチアゾリル；及び１，８−ナフチレン
ジカルボキサミドが挙げられる。追加の複素環には、３，３ａ，４，５，６，６ａ−ヘキ
サヒドロ−ピロロ［３，４−ｂ］ピロール−（２Ｈ）−イル、及び２，５−ジアザビシク
ロ［２．２．１］ヘプタン−２−イル、ホモピペラジニル（またはジアゼパニル）、テト
ラヒドロピラニル、ジチアゾリル、ベンゾフラニル、ベンゾチエニル、オキセパニル、チ
エパニル、アゾカニル、オキセカニル及びチオカニルが挙げられる。
【００３１】
本明細書で使用されるとき、用語「部分的に不飽和の」は少なくとも１つの二重結合ま
たは三重結合を含む環部分を指す。用語「部分的に不飽和の」は複数部位の不飽和を有す
る環を包含するように意図されるが、本明細書で定義されるようなアリールまたはヘテロ
アリールの部分を含むようには意図されない。
【００３２】
本明細書で記載されるように、本発明の化合物は特定される場合、「任意で置換された
」部分を含有し得る。一般に、用語「置換された」は用語「任意で」が先行しようとすま
いと、指定された部分の１以上の水素が好適な置換基で置き換えられることを意味する。
特に指示されない限り、「任意で置換された」基は、基の各置換可能な位置にて好適な置
換基を有してもよく、所与の構造における１を超える位置が特定された基から選択される
１を超える置換基で置換され得る場合、置換基は位置ごとに同一であってもよいし、異な
っていてもよい。本発明によって想定される置換基の組み合わせは好ましくは、安定なま
たは化学的に実現可能な化合物の形成を生じるものである。用語「安定な」は本明細書で
使用されるとき、その製造、検出を可能にする条件、及び特定の実施形態では、その回収
、精製、及び本明細書で開示される目的の１以上での使用を可能にする条件に供された場
合、実質的に変化しない化合物を指す。
【００３３】
「任意で置換された」基の置換可能な炭素原子上での好適な一価の置換基は独立して、
ハロゲン；Ｒ°で置換され得る−（ＣＨ２）０-４Ｒ°；−（ＣＨ２）０-４ＯＲ°；−Ｏ
（ＣＨ２）０−４Ｒｏ，−Ｏ−（ＣＨ２）０-４Ｃ（Ｏ）ＯＲ°；−（ＣＨ２）０-４ＣＨ
（ＯＲ°）２；−（ＣＨ２）０-４ＳＲ°；−（ＣＨ２）０-４Ｐｈ；Ｒ°で置換され得る
−（ＣＨ２）０-４Ｏ（ＣＨ２）０-１Ｐｈ；Ｒ°で置換され得る−ＣＨ＝ＣＨＰｈ；Ｒ°
で置換され得る−（ＣＨ２）０-４Ｏ（ＣＨ２）０-１−ピリジル；−ＮＯ２；−ＣＮ；−
Ｎ３；−（ＣＨ２）０-４Ｎ（Ｒ°）２；−（ＣＨ２）０-４Ｎ（Ｒ°）Ｃ（Ｏ）Ｒ°；−
Ｎ（Ｒ°）Ｃ（Ｓ）Ｒ°；−（ＣＨ２）０-４Ｎ（Ｒ°）Ｃ（Ｏ）ＮＲ°２；−Ｎ（Ｒ°
）Ｃ（Ｓ）ＮＲ°２；−（ＣＨ２）０-４Ｎ（Ｒ°）Ｃ（Ｏ）ＯＲ°；−Ｎ（Ｒ°）Ｎ（
Ｒ°）Ｃ（Ｏ）Ｒ°；−Ｎ（Ｒ°）Ｎ（Ｒ°）Ｃ（Ｏ）ＮＲ°２；−Ｎ（Ｒ°）Ｎ（Ｒ°
）Ｃ（Ｏ）ＯＲ°；−（ＣＨ２）０-４Ｃ（Ｏ）Ｒ°；−Ｃ（Ｓ）Ｒ°；−（ＣＨ２）０-
４Ｃ（Ｏ）ＯＲ°；−（ＣＨ２）０-４Ｃ（Ｏ）ＳＲ°；−（ＣＨ２）０-４Ｃ（Ｏ）ＯＳ
ｉＲ°３；−（ＣＨ２）０-４ＯＣ（Ｏ）Ｒ°；−ＯＣ（Ｏ）（ＣＨ２）０-４ＳＲ−，Ｓ
Ｃ（Ｓ）ＳＲ°；−（ＣＨ２）０-４ＳＣ（Ｏ）Ｒ°；−（ＣＨ２）０-４Ｃ（Ｏ）ＮＲ°
２；−Ｃ（Ｓ）ＮＲ°２；−Ｃ（Ｓ）ＳＲ°；−ＳＣ（Ｓ）ＳＲ°，−（ＣＨ２）０-４
ＯＣ（Ｏ）ＮＲ°２；−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＯＲ°）Ｒ°；−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ°；−Ｃ（Ｏ
）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ°；−Ｃ（ＮＯＲ°）Ｒ°；−（ＣＨ２）０-４ＳＳＲ°；−（ＣＨ
２）０-４Ｓ（Ｏ）２Ｒ°；−（ＣＨ２）０-４Ｓ（Ｏ）２ＯＲ°；−（ＣＨ２）０-４Ｏ
Ｓ（Ｏ）２Ｒ°；−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ°２；−（ＣＨ２）０-４Ｓ（Ｏ）Ｒ°；−Ｎ（Ｒ°
）Ｓ（Ｏ）２ＮＲ°２；−Ｎ（Ｒ°）Ｓ（Ｏ）２Ｒ°；−Ｎ（ＯＲ°）Ｒ°；−Ｃ（ＮＨ
）ＮＲ°２；−Ｐ（Ｏ）２Ｒ°；−Ｐ（Ｏ）Ｒ°２；−ＯＰ（Ｏ）Ｒ°２；−ＯＰ（Ｏ）
（ＯＲ°）２；ＳｉＲ°３；−（Ｃ１-４直鎖または分枝鎖のアルキレン）Ｏ−Ｎ（Ｒ°
）２；または−（Ｃ１-４直鎖または分枝鎖のアルキレン）Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｎ（Ｒ°）２で
あり、その際、各Ｒ°は、以下で定義されるように置換されてもよく、独立して水素、Ｃ
１-６の脂肪族化合物、−ＣＨ２Ｐｈ、−Ｏ（ＣＨ２）０-１Ｐｈ、−ＣＨ２−（５−６員
環のヘテロアリール環）、または飽和、部分不飽和の５−６員環、または窒素、酸素若し
くはイオウから独立して選択される０〜４のヘテロ原子を有するアリール環であり、また
は上記の定義にもかかわらず、その介在原子と一緒にＲ°の２つの独立した存在は、以下
で定義されるように置換されてもよい、窒素、酸素若しくはイオウから独立して選択され
る０〜４のヘテロ原子を有する３−１２員環の飽和、部分不飽和のまたはアリールの単環
式若しくは二環式の環を形成する。
【００３４】
Ｒ°（またはその介在原子と一緒にＲ°の２つの独立した存在を利用して形成される環
）上での好適な一価の置換基は独立してハロゲン、−（ＣＨ２）０-２Ｒ●、−（ハロＲ
●）、−（ＣＨ２）０-２ＯＨ、−（ＣＨ２）０-２ＯＲ●、−（ＣＨ２）０-２ＣＨ（Ｏ
Ｒ●）２；−Ｏ（ハロＲ●）、−ＣＮ、−Ｎ３、−（ＣＨ２）０-２Ｃ（Ｏ）Ｒ●、−（
ＣＨ２）０-２Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−（ＣＨ２）０-２Ｃ（Ｏ）ＯＲ●、−（ＣＨ２）０-２Ｓ
Ｒ●、−（ＣＨ２）０-２ＳＨ、−（ＣＨ２）０-２ＮＨ２、−（ＣＨ２）０-２ＮＨＲ●
、−（ＣＨ２）０-２ＮＲ●２、−ＮＯ２、−ＳｉＲ●３、−ＯＳｉＲ●３、−Ｃ（Ｏ）
ＳＲ●、−（Ｃ１-４直鎖または分枝鎖のアルキレン）Ｃ（Ｏ）ＯＲ●、または−ＳＳＲ
●であり、その際、各Ｒ●は、非置換であり、または「ハロ」が先行する場合、１以上の
ハロゲンによってのみ置換され、独立してＣ１-４の脂肪族化合物、−ＣＨ２Ｐｈ、−Ｏ
（ＣＨ２）０-１Ｐｈ、または飽和、部分不飽和の５−６員環、または窒素、酸素若しく
はイオウから独立して選択される０〜４のヘテロ原子を有するアリール環である。Ｒ°の
飽和炭素原子上の好適な二価の置換基には＝Ｏ及び＝Ｓが挙げられる。
【００３５】
「任意で置換された」基の飽和炭素原子上の好適な二価の置換基には、以下：＝Ｏ、＝
Ｓ、＝ＮＮＲ＊２、＝ＮＮＨＣ（Ｏ）Ｒ＊、＝ＮＮＨＣ（Ｏ）ＯＲ＊、＝ＮＮＨＳ（Ｏ）
２Ｒ＊、＝ＮＲ＊、＝ＮＯＲ＊、−Ｏ（Ｃ（Ｒ＊２））２-３Ｏ−、または−Ｓ（Ｃ（Ｒ
＊２））２-３Ｓ−が挙げられ、Ｒ＊の各独立した存在は、水素、以下で定義されるよう
に置換され得るＣ１-６の脂肪族化合物、または飽和、部分不飽和の非置換５−６員環、
または窒素、酸素若しくはイオウから独立して選択される０〜４のヘテロ原子を有するア
リール環から選択される。「任意で置換された」基の近接する置換可能な炭素に結合する
好適な二価の置換基には−Ｏ（ＣＲ＊２）２-３Ｏ−が挙げられ、その際、Ｒ＊の各独立
した存在は、水素、以下で定義されるように置換され得るＣ１-６の脂肪族化合物、また
は飽和、部分不飽和の非置換５−６員環、または窒素、酸素若しくはイオウから独立して
選択される０〜４のヘテロ原子を有するアリール環から選択される。
【００３６】
Ｒ＊の脂肪族基上の好適な置換基には、ハロゲン、−Ｒ●、−（ハロＲ●）、−ＯＨ、
−ＯＲ●、−Ｏ（ハロＲ●）、−ＣＮ、−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ●、−ＮＨ２、
−ＮＨＲ●、−ＮＲ●２、または−ＮＯ２が挙げられ、その際、各Ｒ●は非置換であり、
または「ハロ」が先行する場合、１以上のハロゲンによってのみ置換され、独立してＣ１
-４の脂肪族化合物、−ＣＨ２Ｐｈ、−Ｏ（ＣＨ２）０-１Ｐｈ、または飽和、部分不飽和
の５−６員環、または窒素、酸素若しくはイオウから独立して選択される０〜４のヘテロ
原子を有するアリール環である。
【００３７】
「任意で置換された」基の置換可能な窒素上の好適な置換基には、−Ｒ†、−ＮＲ†２
、−Ｃ（Ｏ）Ｒ†、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ†、−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ†、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（
Ｏ）Ｒ†、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ†、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ†２、−Ｃ（Ｓ）ＮＲ†２、−Ｃ（ＮＨ
）ＮＲ†２、または−Ｎ（Ｒ†）Ｓ（Ｏ）２Ｒ†が挙げられ、その際、各Ｒ†は独立して
水素、以下で定義されるように置換され得るＣ１-６の脂肪族化合物、非置換の−Ｏｐｈ
、または飽和、部分不飽和の非置換５−６員環、または窒素、酸素若しくはイオウから独
立して選択される０〜４のヘテロ原子を有するアリール環であり、または上記の定義にも
かかわらず、その介在原子と一緒にＲ†の２つの独立した存在は、窒素、酸素若しくはイ
オウから独立して選択される０〜４のヘテロ原子を有する非置換の３−１２員環の飽和、
部分不飽和のまたはアリールの単環式若しくは二環式環を形成する。
【００３８】
Ｒ†の脂肪族基上の好適な置換基は独立してハロゲン、Ｒ●、−（ハロＲ●）、−ＯＨ
、−ＯＲ●、−Ｏ（ハロＲ●）、−ＣＮ、−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ●、−ＮＨ２
、−ＮＨＲ●、−ＮＲ●２、または−ＮＯ２であり、その際、Ｒ●は非置換であり、また
は「ハロ」が先行する場合、１以上のハロゲンによってのみ置換され、独立してＣ１-４
の脂肪族化合物、−ＣＨ２Ｐｈ、−Ｏ（ＣＨ２）０-１Ｐｈ、または飽和、部分不飽和の
５−６員環、または窒素、酸素若しくはイオウから独立して選択される０〜４のヘテロ原
子を有するアリール環である。
【００３９】
別の態様では、本開示は「薬学上許容可能な」組成物を提供し、それは、１以上の薬学
上許容可能なキャリア（添加剤）及び／または希釈剤と一緒に製剤化される、本明細書で
記載される、治療上有効な量の化合物の１以上を含む。詳細に記載されるように、本開示
の医薬組成物は、以下：経口投与、たとえば、水薬（水性または非水性の溶液または懸濁
液）、錠剤、たとえば、頬内、舌下及び全身性の吸収を目的としたもの、ボーラス、粉剤
、顆粒剤、舌に適用するためのペースト；たとえば、無菌の溶液または懸濁液または徐放
性製剤のような皮下、筋肉内、静脈内または硬膜外の注射による非経口投与；たとえば、
皮膚、肺または口腔に適用するためのクリーム、軟膏または徐放性の貼付剤またはスプレ
ーのような局所投与；たとえば、ペッサリー、クリームまたは泡状物のような膣内または
直腸内に；舌下で；眼内に；皮内に；または鼻内に、肺に及び他の粘膜表面に適合させる
ものを含む、固体形態または液体形態での投与のために特に製剤化され得る。
【００４０】
語句「薬学上許容可能な」は、理に適った利益／リスクの比と釣り合って、過度の毒性
、刺激、アレルギー反応、または他の問題または合併症が起きないで、健康な医学的判断
の範囲内でヒト及び動物の組織との接触に使用するのに好適なそれら化合物、物質、組成
物及び／または剤形を指すのに本明細書で採用される。
【００４１】
語句「薬学上許容可能なキャリア」は本明細書で使用されるとき、１つの臓器または体
の一部から別の臓器または体の一部に主題の化合物を運ぶまたは輸送するのに含まれる、
薬学上許容可能な物質、組成物またはビヒクル、たとえば、液体または固体の充填剤、希
釈剤、賦形剤または溶媒を被包する物質を意味する。各キャリアは、製剤の他の成分と適
合性であり、患者に対して有害ではないという意味で「許容可能」でなければならない。
薬学上許容可能なキャリアとして役立つことができる物質の一部の例には、たとえば、ラ
クトース、グルコース及びスクロースのような糖類；たとえば、コーンスターチ及びジャ
ガイモデンプンのようなデンプン；たとえば、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、
エチルセルロース及びセルロースアセテートのようなセルロース及びその誘導体；粉末化
トラガカント；麦芽；ゼラチン；タルク；たとえば、ココアバター及び坐薬ワックスのよ
うな賦形剤；たとえば、ピーナッツ油、綿実油、ベニバナ油、ゴマ油、オリーブ油、コー
ン油及び大豆油のような油；たとえば、プロピレングリコールのようなグリコール；たと
えば、グリセリン、ソルビトール、マンニトール及びポリエチレングリコールのようなポ
リオール；たとえば、オレイン酸エチル及びラウリン酸エチルのようなエステル；寒天；
たとえば、水酸化マグネシウム及び水酸化アルミニウムのような緩衝剤；アルギン酸；発
熱物質を含まない水；等張生理食塩水；リンガー溶液；エチルアルコール；ｐＨ緩衝化溶
液；ポリエステル、ポリカーボネート及び／またはポリ無水物；及び医薬製剤で採用され
る他の非毒性の適合性の物質が挙げられる。
【００４２】
本明細書で使用されるとき、用語「薬学上許容可能な塩」は、理に適った利益／リスク
の比と釣り合って、過度の毒性、刺激、アレルギー反応等が起きないで、健康な医学的判
断の範囲内でヒト及び下等動物の組織との接触に使用するのに好適なそれらの塩を指す。
薬学上許容可能な塩は当該技術で周知である。たとえば、Ｓ．Ｍ．Ｂｅｒｇｅらは、参照
によって本明細書に組み入れられるＪ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ
ｓ，１９７７，６６，１−１９にて薬学上許容可能な塩を詳細に記載している。本発明の
薬学上許容可能な塩には、好適な無機及び有機の酸及び塩基に由来するものが挙げられる
。薬学上許容可能な非毒性の酸付加塩の例は、たとえば、塩酸、臭化水素酸、リン酸、硫
酸及び過塩素酸のような無機酸と共にまたはたとえば、酢酸、シュウ酸、マレイン酸、酒
石酸、クエン酸、コハク酸またはマロン酸のような有機酸と共に形成される、またはイオ
ン交換のような当該技術で使用される他の方法を使用することによって形成されるアミノ
基の塩である。他の薬学上許容可能な塩には、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコルビ
ン酸塩、アスパラギン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、重硫酸塩、ホウ酸塩、
酪酸塩、樟脳酸塩、樟脳スルホン酸塩、クエン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジ
グルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、ギ酸塩、フマル酸塩、グルコヘプ
タン酸塩、グリセロリン酸塩、グルコン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩
、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシ−エタンスルホン酸塩、ラクトビオン酸塩、乳酸塩、
ラウリン酸塩、ラウリル硫酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メタンスルホ
ン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸
塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩
、リン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石
酸塩、チオシアン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、ウンデカン酸塩、吉草酸塩等が挙げ
られる。
【００４３】
適当な塩基に由来する塩には、アルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩、アンモニウム塩
及びＮ＋（Ｃ１-４アルキル）４塩が挙げられる。代表的なアルカリ金属塩またはアルカ
リ土類金属塩には、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム等が挙
げられる。さらなる薬学上許容可能な塩には、適宜、非毒性のアンモニウム、四級アンモ
ニウム及び、たとえば、ハロゲン化合物、水酸化物、カルボン酸、硫酸、リン酸、硝酸、
低級アルキルスルホン酸及びアリールスルホン酸のような対イオンを用いて形成されるア
ミンカチオンが挙げられる。
【００４４】
特定の実施形態では、化合物の中性形態は、塩を塩基または酸に接触させ、従来の方法
で親化合物を単離することによって再生される。一部の実施形態では、化合物の親形態は
特定の物性、たとえば、極性溶媒における溶解性で種々の塩の形態とは異なる。
【００４５】
本明細書で記載されるような合成法は種々の保護基を利用することを当業者は十分に理
解するであろう。本明細書で使用されるとき、用語「保護基」によって特定の官能部分、
たとえば、Ｏ、ＳまたはＮが覆い隠されるまたは遮断されて、所望であれば、多官能性化
合物における別の反応部位で反応が選択的に行われることを可能にすることを意味する。
好適な保護基は当該技術で周知であり、それにはその全体が参照によって本明細書に組み
入れられるＰｒｏｔｅｃｔｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅ
ｓｉｓ，Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ及びＰ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，第３版，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅ
ｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，１９９９にて詳細に記載されたものが挙げられる。特定の実施形態で
は、保護基は良好な収率で選択的に反応して予測される反応に対して安定である保護され
た基質を提供し；保護基は好ましくは、他の官能基を攻撃しない容易に利用できる、好ま
しくは非毒性の試薬によって選択的に取り外し可能であり；保護基は分離可能な誘導体を
形成し（さらに好ましくは新しい立体中心を生成することなく）；且つ保護基は好ましく
は最小限の追加の官能性を有して反応のさらなる部位を回避する。本明細書で詳述するよ
うに酸素、イオウ、窒素及び炭素の保護基が利用され得る。非限定例の目的で、ヒドロキ
シル保護基には、メチル、メトキシルメチル（ＭＯＭ）、メチルチオメチル（ＭＴＭ）、
ｔ−ブチルチオメチル、（フェニルジメチルシリル）メトキシメチル（ＳＭＯＭ）、ベン
ジルオキシメチル（ＢＯＭ）、ｐ−メトキシベンジルオキシメチル（ＰＭＢＭ）、（４−
メトキシフェノキシ）メチル（ｐ−ＡＯＭ）、グアイアコルメチル（ＧＵＭ）、ｔ−ブト
キシメチル、４−ペンテニルオキシメチル（ＰＯＭ）、シロキシメチル、２−メトキシエ
トキシメチル（ＭＥＭ）、２，２，２−トリクロロエトキシメチル、ビス（２−クロロエ
トキシ）メチル、２−（トリメチルシリル）エトキシメチル（ＳＥＭＯＲ）、テトラヒド
ロピラニル（ＴＨＰ）、３−ブロモテトラヒドロピラニル、テトラヒドロチオピラニル、
１−メトキシシクロヘキシル、４−メトキシテトラヒドロピラニル（ＭＴＨＰ）、４−メ
トキシテトラヒドロチオピラニル、Ｓ，Ｓ−二酸化４−メトキシテトラヒドロチオピラニ
ル、１−［（２−クロロ−４−メチル）フェニル］−４−メトキシピペリジン−４−イル
（ＣＴＭＰ）、１，４−ジオキサン−２−イル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロチ
オフラニル、２，３，３ａ，４，５，６，７，７ａ−オクタヒドロ−７，８，８−トリメ
チル−４，７−メタノベンゾフラン−２−イル、１−エトキシエチル、１−（２−クロロ
エトキシ）エチル、１−メチル−１−メトキシエチル、１−メチル−１−ベンジルオキシ
エチル、１−メチル−１−ベンジルオキシ−２−フルオロエチル、２，２，２−トリクロ
ロエチル、２−トリメチルシリルエチル、２−（フェニルセレニル）エチル、ｔ−ブチル
、アリル、ｐ−クロロフェニル、ｐ−メトキシフェニル、２，４−ジニトロフェニル、ベ
ンジル、ｐ−メトキシベンジル、３，４−ジメトキシベンジル、ｏ−ニトロベンジル、ｐ
−ニトロベンジル、ｐ−ハロベンジル、２，６−ジクロロベンジル、ｐ−シアノベンジル
、ｐ−フェニルベンジル、２−ピコリル、４−ピコリル、３−メチル−２−ピコリルＮ−
オキシド、ジフェニルメチル、ｐ，ｐ’−ジニトロベンズヒドリル、５−ジベンゾスベリ
ル、トリフェニルメチル、α−ナフチルジフェニルメチル、ｐ−メトキシフェニルジフェ
ニルメチル、ジ（ｐ−メトキシフェニル）フェニルメチル、トリ（ｐ−メトキシフェニル
）メチル、４−（４’−ブロモフェナシルオキシフェニル）ジフェニルメチル、４，４’
，４’’−トリス（４，５−ジクロロフタリミドフェニル）メチル、４，４’，４’’−
トリス（レブリノイルオキシフェニル）メチル、４，４’，４’’−トリス（ベンゾイル
オキシフェニル）メチル、３−（イミダゾール−１−イル）ビス（４’，４’’−ジメト
キシフェニル）メチル、１，１−ビス（４−メトキシフェニル）−１’−ピレニルメチル
、９−アントリル、９−（９−フェニル）キサンテニル、９−（９−フェニル−１０−オ
キソ）アントリル、１，３−ベンゾジチオラン−２−イル、Ｓ，Ｓ−二酸化ベンズイソチ
アゾリル、トリメチルシリル（ＴＭＳ）、トリエチルシリル（ＴＥＳ）、トリイソプロピ
ルシリル（ＴＩＰＳ）、ジメチルイソプロピルシリル（ＩＰＤＭＳ）、ジエチルイソプロ
ピルシリル（ＤＥＩＰＳ）、ジメチルヘキシルシリル、ｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢ
ＤＭＳ）、ｔ−ブチルジフェニルシリル（ＴＢＤＰＳ）、トリベンジルシリル、トリ−ｐ
−キシリルシリル、トリフェニルシリル、ジフェニルメチルシリル（ＤＰＭＳ）、ｔ−ブ
チルメトキシフェニルシリル（ＴＢＭＰＳ）、ギ酸塩、ベンゾイルギ酸塩、酢酸塩、クロ
ロ酢酸塩、ジクロロ酢酸塩、トリクロロ酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、メトキシ酢酸塩、
トリフェニルメトキシ酢酸塩、フェノキシ酢酸塩、ｐ−クロロフェノキシ酢酸塩、３−フ
ェニルプロピオン酸塩、４−オキソペンタン酸塩（レブリン酸塩）、４，４−（エチレン
ジチオ）ペンタン酸塩（レブリノイルジチオアセタール）、ピバロン酸塩、アダマントエ
ート、クロトン酸塩、４−メトキシクロトン酸塩、安息香酸塩、ｐ−フェニル安息香酸塩
、２，４，６−トリメチル安息香酸塩（メシトエート）、アルキルメチル炭酸塩、９−フ
ルオレニルメチル炭酸塩（Ｆｍｏｃ）、アルキルエチル炭酸塩、アルキル２，２，２−ト
リクロロエチル炭酸塩（Ｔｒｏｃ）、２−（トリメチルシリル）エチル炭酸塩（ＴＭＳＥ
Ｃ）、２−（フェニルスルホニル）エチル炭酸塩（Ｐｓｅｃ）、２−（トリフェニルホス
フォニオ）エチル炭酸塩（Ｐｅｏｃ）、アルキルイソブチル炭酸塩、アルキルビニル炭酸
塩、アルキルアリル炭酸塩、アルキルｐ−ニトロフェニル炭酸塩、アルキルベンジル炭酸
塩、アルキルｐ−メトキシベンジル炭酸塩、アルキル３，４−ジメトキシベンジル炭酸塩
、アルキルｏ−ニトロベンジル炭酸塩、アルキルｐ−ニトロベンジル炭酸塩、アルキルＳ
−ベンジルチオ炭酸塩、４−エトキシ−１−ナフトチル炭酸塩、メチルジチオ炭酸塩、２
−ヨード安息香酸塩、４−アジド酪酸塩、４−ニトロ−４−メチルペンタン酸塩、ｏ−（
ジブロモメチル）安息香酸塩、２−ホルミルベンゼンスルホン酸塩、２−（メチルチオメ
トキシ）エチル、４−（メチルチオメトキシ）酪酸塩、２−（メチルチオメトキシメチル
）安息香酸塩、２，６−ジクロロ−４−メチルフェノキシ酢酸塩、２，６−ジクロロ−４
−（１，１，３，３−テトラメチルブチル）フェノキシ酢酸塩、２，４−ビス（１，１−
ジメチルプロピル）フェノキシ酢酸塩、クロロジフェニル酢酸塩、イソ酪酸塩、モノコハ
ク酸塩、（Ｅ）−２−メチル−２−ブテン酸塩、ｏ−（メトキシカルボニル）安息香酸塩
、α−ナフトエ酸塩、硝酸塩、アルキルＮ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルホスホロジア
ミデート、アルキルＮ−フェニルカルバメート、ホウ酸塩、ジメチルホスフィノチオイル
、アルキル２，４−ジニトロフェニルスルフェン酸塩、硫酸塩、メタンスルホン酸塩（メ
シレート）、ベンジルスルホン酸塩、及びトシレート（Ｔｓ）が挙げられる。１，２−ま
たは１，３−ジオールを保護することについては、保護基には、メチレンアセタール、エ
チリデンアセタール、１−ｔ−ブチルエチリデンケタール、１−フェニルエチリデンケタ
ール、（４−メトキシフェニル）エチリデンアセタール、２，２，２−トリクロロエチリ
デンアセタールアセトニド、シクロペンチリデンケタール、シクロヘキシリデンケタール
、シクロヘプチリデンケタール、ベンジリデンアセタール、ｐ−メトキシアセタール、３
，４−ジメトキシベンジリデンアセタール、２−ニトロベンジリデンアセタール、メトキ
シメチレンアセタール、エトキシメチレンアセタール、α−メトキシベンジリデンオルソ
エステル、α−（Ｎ，Ｎ’−ジメチルアミノ）ベンジリデン誘導体、２−オキサシクロペ
ンチリデンオルソエステル、ジ−ｔ−ブチルシリレン基（ＤＴＢＳ）、１，３−（１，１
，３，３−テトライソプロピルジシロキサニリデン）誘導体（ＴＩＰＤＳ）、環状炭酸塩
、環状ボロン酸塩、エチルボロン酸塩、及びフェニルボロン酸塩が挙げられる。例となる
保護基を本明細書で詳述するが、本発明はこれらの保護基に限定されるように意図される
のではなく、むしろ上記の基準を用いて種々の追加の同等の保護基を容易に特定すること
ができ、本発明の方法で利用することができることが十分に理解されるであろう。さらに
、種々の保護基はＧｒｅｅｎｅ及びＷｕｔｓ（上記）によって記載されている。
【００４６】
記号
【化１−１】
2019137692.tif 000003
は、未知のまたは混合された立体化学を描くための結合として使用される場合を除いて、
分子または化学式の残りに対する化学部分の結合の点を示す。
【００４７】
本明細書で使用されるとき、用語「単離される」は、（１）当初生成されたとき（自然
であろうと及び／または実験の設定であろうと）それが会合していた成分の少なくとも一
部から分離されている、及び／または（２）ヒトの手によって設計され、作製され、調製
され、及び／または製造されている物質及び／または実体を指す。単離された物質及び／
または実体は、それらが当初会合していた他の成分の約１０％、約２０％、約３０％、約
４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９１％、約９２％、約
９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％から、または約
９９％を上回って分離され得る。一部の実施形態では、単離された化学物質は、約８０％
、約８５％、約９０％、約９１％、９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、
約９７％、約９８％、約９９％純粋であり、または約９９％を上回って純粋である。本明
細書で使用されるとき、物質は、それが実質的に他の成分を含まなければ「純粋」である
。一部の実施形態では、当業者によって理解されるであろうように、物質は１以上のキャ
リアまたは賦形剤（たとえば、緩衝液、溶媒、水等）のような特定の他の成分と組み合わ
せた後、「単離された」または「純粋」であるとさえ見なされ；そのような実施形態では
、物質の単離または純粋の比率はそのようなキャリアまたは賦形剤を含めないで算出され
る。一部の実施形態では、単離には共有結合の崩壊が関与するまたはそれが必要とされる
（たとえば、さらに長いポリペプチドからポリペプチドドメインを単離するために及び／
またはオリゴヌクレオチドまたは核酸からヌクレオチド配列要素を単離するために）。
【００４８】
用語「調節因子」は、調節因子が存在しない場合さもなければ匹敵する条件下で認めら
れるものと比べて、当該活性が認められる系の存在がその活性のレベル及び／または性質
における変化と相関する実体を指すのに使用される。一部の実施形態では、調節因子は、
調節因子が存在しない場合さもなければ匹敵する条件下で認められるものと比べて、その
存在下で活性が上昇するという点で活性化因子またはアゴニストである。一部の実施形態
では、調節因子は、調節因子が存在しない場合さもなければ匹敵する条件と比べて、その
存在下で活性が低下するという点で阻害剤またはアンタゴニストである。一部の実施形態
では、調節因子は、その活性に興味がある標的実体と直接相互作用する。一部の実施形態
では、調節因子は、その活性に興味がある標的実体と間接的に（すなわち、標的実体と相
互作用する中間体物質と直接）相互作用する。一部の実施形態では、調節因子は当該標的
実体のレベルに影響を及ぼし；代わりにまたはさらに、一部の実施形態では、調節因子は
標的実体のレベルに影響を及ぼすことなく当該標的実体の活性に影響を及ぼす。一部の実
施形態では、調節因子は当該標的実体のレベル及び活性の双方に影響を及ぼすので、活性
において認められる差異は、レベルにおいて認められる差異によってすべて説明されるわ
けではなくまたはそれとすべて同じというわけではない。本明細書で使用されるとき、「
活性」は分子、化合物、細胞、組織または臓器によって実行される任意の過程である。そ
のような過程は触媒的であってもよいし、非触媒的であってもよい。たとえば、本発明の
ｃＧＡＳ分子は酵素として作用してもよく、そのようなものとして酵素活性を有し得る。
【００４９】
用語「核酸」はその最も広い意味で、ヌクレオチドのポリマーを含む化合物及び／また
は物質を含む。これらのポリマーはポリヌクレオチドと呼ばれることが多い。本発明の例
となる核酸またはポリヌクレオチドには、リボ核酸（ＲＮＡ）、デオキシリボ核酸（ＤＮ
Ａ）、トレオース核酸（ＴＮＡ）、グリコール核酸（ＧＮＡ）、ペプチド核酸（ＰＮＡ）
、ロックド核酸（ＬＮＡ、β−Ｄ−リボ配置を有するＬＮＡ、α−Ｌ−リボ配置を有する
α−ＬＮＡ（ＬＮＡのジアステレオマー）、２’−アミノ官能化を有する２’−アミノ−
ＬＮＡ、及び２’−アミノ官能化を有する２’−アミノ−α−ＬＮＡを含む）またはそれ
らのハイブリッドが挙げられるが、これらに限定されない。
【００５０】
本開示は修飾されたヌクレオシド及びヌクレオチドを提供する。本明細書で記載される
ように、「ヌクレオシド」は、有機塩基（たとえば、プリンまたはピリミジン）またはそ
の誘導体（本明細書では「核酸塩基」とも呼ばれる）との組み合わせで糖分子（たとえば
、ペントースまたはリボース）またはその誘導体を含有する化合物として定義される。本
明細書で記載されるように、「ヌクレオチド」はリン酸基を含むヌクレオシドとして定義
される。修飾されたヌクレオチドは本明細書で記載されるように、普通の方法によって（
たとえば、１以上の修飾されたまたは非天然のヌクレオチドを含むように化学的に、酵素
的にまたは組換えで）合成され得る。
【００５１】
修飾されたヌクレオチドの塩基対合は、標準のアデノシン−チミン、アデノシン−ウラ
シルまたはグアノシン−シトシンの塩基対合だけでなく、ヌクレオチドと非標準のまたは
修飾された塩基を含む修飾されたヌクレオチドとの間で形成される塩基対合も包含し、そ
の際、水素結合ドナーと水素結合アクセプターの配置は非標準の塩基と標準の塩基の間、
または２つの相補性の非標準の塩基構造間の水素結合を可能にする。そのような非標準の
塩基対合の例は、修飾されたヌクレオチド、イノシンとアデニン、シトシンまたはウラシ
ルとの間での塩基対合である。
【００５２】
修飾されたヌクレオシド及びヌクレオチドは修飾された核酸塩基を含むことができる。
ＲＮＡにて見いだされる核酸塩基の例にはアデニン、グアニン、シトシン及びウラシルが
挙げられるが、これらに限定されない。ＤＮＡにて見いだされる核酸塩基の例にはアデニ
ン、グアニン、シトシン及びチミンが挙げられるが、これらに限定されない。
【００５３】
文脈から明瞭であるように、一部の実施形態では、「核酸」は個々の核酸残基（たとえ
ば、ヌクレオチド及び／またはヌクレオシド）を指し、一部の実施形態では、「核酸」は
個々の核酸残基を含むオリゴヌクレオチド鎖を指す。一部の実施形態では、「核酸」はＲ
ＮＡでありまたはＲＮＡを含み；一部の実施形態では、「核酸」はＤＮＡでありまたはＤ
ＮＡを含む。一部の実施形態では、核酸は１以上の天然の核酸残基である、それを含む、
またはそれから成る。一部の実施形態では、核酸は１以上の核酸類似体である、それを含
む、またはそれから成る。一部の実施形態では、核酸類似体はそれがホスホジエステル主
鎖を利用しないという点で核酸とは異なる。たとえば、一部の実施形態では、核酸は「ペ
プチド核酸」であり、それを含み、またはそれから成り、それは当該技術で既知であり、
主鎖にてホスホジエステル結合の代わりにペプチド結合を有し、本発明の範囲内であると
見なされる。代わりにまたはさらに、一部の実施形態では、核酸はホスホジエステル結合
ではなく１以上のホスホロチオエート結合及び／または５’−Ｎ−ホスホロアミダイト結
合を有する。一部の実施形態では、核酸は１以上の天然のヌクレオシド（たとえば、アデ
ノシン、チミジン、グアノシン、シチジン、ウリジン、デオキシアデノシン、デオキシチ
ミジン、デオキシグアノシン及びデオキシシチジン）である、それを含む、またはそれか
ら成る。一部の実施形態では、核酸は１以上のヌクレオシド類似体（たとえば、２−アミ
ノアデノシン、２−チオチミジン、イノシン、ピロロ−ピリミジン、３−メチルアデノシ
ン、５−メチルシチジン、Ｃ−５プロピニル−シチジン、Ｃ−５プロピニル−ウリジン、
２−アミノアデノシン、Ｃ５−ブロモウリジン、Ｃ５−フルオロウリジン、Ｃ５−ヨード
ウリジン、Ｃ５−プロピニル−ウリジン、Ｃ５−プロピニル−シチジン、Ｃ５−メチルシ
チジン、２−アミノアデノシン、７−デアザアデノシン、７−デアザグアノシン、８−オ
キソアデノシン、８−オキソグアノシン、Ｏ（６）−メチルグアニン、２−チオシチジン
、メチル化塩基、挿入塩基、及びそれらの組み合わせ）である、それを含む、またはそれ
から成る。一部の実施形態では、核酸は、天然の核酸におけるものに比べて１以上の修飾
された糖（たとえば、２’−フルオロリボース、リボース、２’−デオキシリボース、ア
ラビノース及びヘキソース）を含む。一部の実施形態では、核酸はＲＮＡまたはタンパク
質のような機能的な遺伝子産物をコードするヌクレオチド配列を有する。一部の実施形態
では、核酸は、天然供給源からの単離、相補性の鋳型に基づく重合による酵素的合成（生
体内または試験管内）、組換え細胞または組換え系における複製、及び化学的な合成の１
以上によって調製される。一部の実施形態では、核酸は少なくとも２（ジヌクレオチドま
たはジヌクレオシド）、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、
３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１
００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２
０、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５
０、４７５、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、１５００、２０００
、２５００、３０００、３５００、４０００、４５００、５０００以上の残基の長さであ
る。
【００５４】
用語「ポリペプチド」は本明細書で使用されるとき一般に、互いにペプチド結合で連結
された少なくとも３つのアミノ酸のポリマーという当該技術で認識された意味を有する。
一部の実施形態では、その用語はポリペプチドの特定の機能的なクラス、たとえば、受容
体、酵素、シグナル伝達タンパク質、構造タンパク質、自己抗原ポリペプチド、ニコチン
性アセチルコリン受容体ポリペプチド、同種抗原ポリペプチド等を指すのに使用される。
そのようなクラスのそれぞれについて、本明細書は、クラス内の既知の例となるポリペプ
チドのアミノ酸配列の幾つかの例を提供する；一部の実施形態では、そのような既知のポ
リペプチドはクラスのための参照ポリペプチドである。一部の例では、コードされるポリ
ペプチドは約５０アミノ酸より小さく、そのとき、ポリペプチドはペプチドと呼ばれる。
ポリペプチドがペプチドであるならば、それは少なくとも約２、３、４または少なくとも
５のアミノ酸残基の長さである。従って、ポリペプチドには、遺伝子産物、天然に存在す
るポリペプチド、合成のポリペプチド、前述のホモログ、オルソログ、パラログ、断片及
び他の同等物、変異体及び類似体が含まれる。ポリペプチドは単一分子であってもよいし
、たとえば、二量体、三量体若しくは四量体のような多重分子複合体であってもよい。そ
れらはまた単鎖またはたとえば、抗体若しくはインスリンのような多連鎖のポリペプチド
であってもよく、会合してもよくまたは連結されてもよい。最も一般的なジスルフィド結
合は多連鎖ポリペプチドにて見いだされる。用語、ポリペプチドは１以上のアミノ酸残基
が相当する天然に存在するアミノ酸の人工的な化学類似体であるアミノ酸ポリマーにも適
用され得る。一部の実施形態では、用語「ポリペプチド」は関連する参照ポリペプチドと
の有意な配列の相同性または同一性を示すクラスの任意のメンバーを指す。多数の実施形
態では、そのようなメンバーは参照ポリペプチドと有意な活性も共有する。たとえば、一
部の実施形態では、メンバーのポリペプチドは、少なくとも約３０〜４０％であり、５０
％、６０％、７０％、８０％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６
％、９７％、９８％、９９％以上であることが多い参照ポリペプチドとの配列の相同性ま
たは同一性の全体的な程度を示し、及び／または９０％またはさらに９５％、９６％、９
７％、９８％、または９９％を上回ることが多い非常に高い配列同一性を示す少なくとも
１つの領域（すなわち、特徴的な配列要素を含むことが多い保存された領域）を含む。そ
のような保存された領域は普通、少なくとも３〜４、及び２０以上までが多いアミノ酸を
包含し；一部の実施形態では、保存された領域は少なくとも２、３、４、５、６、７、８
、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５以上の連続するアミノ酸の少なくとも１つの
ストレッチを包含する。一部の実施形態では、本明細書で記載されるような有用なポリペ
プチドは親ポリペプチドの断片を含み得るまたはそれから成り得る。一部の実施形態では
、本明細書で記載されるような有用なポリペプチドは、複数の断片を含んでもよくまたは
それから成ってもよく、そのそれぞれは、当該ポリペプチドで見いだされる互いに対して
異なる空間配置にて同じ親ポリペプチドにて見いだされる（たとえば、親にて直接連結さ
れる断片は当該ポリペプチドにて空間的に離れてもよく、逆も同様であり、及び／または
親におけるよりも当該ポリペプチドにて断片が異なる順で存在し得る）ので、当該ポリペ
プチドはその親ポリペプチドの誘導体である。
【００５５】
用語「ポリペプチド変異体」はネイティブのまたは参照の配列とはアミノ酸配列で異な
る分子を指す。アミノ酸配列の変異体は、ネイティブのまたは参照の配列と比べて、アミ
ノ酸配列内にて特定の位置で置換、欠失及び／または挿入を持ち得る。普通、変異体はネ
イティブのまたは参照の配列に対して少なくとも約５０％の同一性（相同性）を持ち、好
ましくはそれらは、ネイティブのまたは参照の配列に対して少なくとも約８０％、さらに
好ましくは少なくとも約９０％同一性（相同性）であるであろう。
【００５６】
一部の実施形態では、「変異体模倣体」が提供される。本明細書で使用されるとき、用
語「変異体模倣体」は活性化された配列を模倣する１以上のアミノ酸を含有するものであ
る。たとえば、グルタミン酸塩はホスホロ−スレオニン及び／またはホスホロ−セリンの
模倣体として役立ち得る。或いは、変異体模倣体は模倣体を含有する脱活性化産物または
不活化産物を生じてもよく、たとえば、フェニルアラニンはチロシンについて不活化する
置換として作用してもよく；またはアラニンはセリンについて不活化する置換として作用
してもよい。
【００５７】
アミノ酸配列に適用するとき「相同性」は、配列を並べ、必要に応じてギャップを導入
し最大比率の相同性を達成した後、第２の配列のアミノ酸配列における残基と同一である
候補アミノ酸配列における残基の比率として定義される。配列比較のための方法及びコン
ピュータプログラムは当該技術で周知である。相同性は同一性比率の算出に依存するが、
算出に導入されるギャップ及びペナルティのために値が異なり得ることが理解される。
【００５８】
「ホモログ」によって、それがポリペプチド配列に適用されるとき、第２の種の第２の
配列に対して実質的な同一性を有する他の種の相当する配列を意味する。
【００５９】
ポリペプチドの文脈における「類似体」は、１以上のアミノ酸の変化、たとえば、アミ
ノ酸残基の置換、付加または欠失によって異なり、親ポリペプチドまたは出発ポリペプチ
ドの特性の１以上を依然として維持するポリペプチド変異体を含むことにする。
【００６０】
本明細書で使用されるとき、用語「タンパク質」は、ポリペプチド（すなわち、互いに
ペプチド結合によって連結される少なくとも２つのアミノ酸の列）を指す。タンパク質は
、アミノ酸以外の部分を含んでもよく（たとえば、糖タンパク質、プロテオグリカン等で
あってもよい）、及び／またはさもなければ、処理されてもよくまたは修飾されてもよい
。当業者は、「タンパク質」が細胞によって産生されるとき完全なポリペプチド鎖である
ことができ（シグナル配列を伴ったまたは伴わない）、またはその特徴的な部分であるこ
とができることを十分に理解するであろう。当業者は、タンパク質が時には、たとえば、
１以上のジスルフィド結合によって連結されるまたは他の手段によって会合する１を超え
るポリペプチド鎖を含むことができることを十分に理解するであろう。ポリペプチドはＬ
−アミノ酸、Ｄ−アミノ酸または双方を含有してもよく、当該技術で既知の種々のアミノ
酸修飾または類似体のいずれかを含有してもよい。有用な修飾には、たとえば、末端のア
セチル化、アミド化、メチル化等が挙げられる。一部の実施形態では、タンパク質は天然
のアミノ酸、非天然のアミノ酸、合成のアミノ酸、及びそれらの組み合わせを含み得る。
用語「ペプチド」は一般に、約１００未満のアミノ酸、約５０未満のアミノ酸、２０未満
のアミノ酸または１０未満のアミノ酸の長さを有するポリペプチドを指すのに使用される
。一部の実施形態では、タンパク質は抗体、抗体断片、生物学的に活性のあるその一部、
及び／または特徴的なその一部である。
【００６１】
語句「非経口投与」及び「非経口で投与される」は本明細書で使用されるとき、腸投与
及び局所投与以外の、普通注射による投与の方式を意味し、それには限定しないで静脈内
、筋肉内、クモ膜下、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関
節内、被膜下、クモ膜下、髄腔内、及び胸骨下の注射及び注入が挙げられる。
【００６２】
語句「全身性投与」、「全身性に投与される」、「末梢性投与」及び「末梢性に投与さ
れる」は本明細書で使用されるとき、中枢神経系に直接投与する以外の化合物、薬剤また
は他の物質の投与、たとえば、皮下投与を意味し、それが患者の系に入り、従って代謝及
び他の類似の過程の対象となる。
【００６３】
用語「苦痛緩和」は疾患の症状及び／または治療計画の副作用の緩和に焦点を絞るが、
治癒的ではない治療を指す。
【００６４】
用語「治療剤」または「治療法」は対象に投与すると、治療効果、診断効果及び／また
は予防効果を有し、及び／または所望の生物学的な効果及び／または薬学上の効果を引き
出す任意の化学物質を指す。
【００６５】
本明細書で使用されるとき、「治療上有効な量」は治療計画の一部として投与した場合
、所望の生物反応を引き出す物質（たとえば、治療剤、組成物及び／または製剤）の量を
意味する。一部の実施形態では、物質の治療上有効な量は、疾患、障害及び／または状態
を患っているまたはそれに感受性である対象に投与した場合、その疾患、障害及び／また
は状態を治療するのに十分である量である。当業者によって十分に理解されるように、物
質の有効量は、所望の生物学的な評価項目、送達される物質、標的の細胞または組織等の
ような因子に応じて変化し得る。たとえば、疾患、障害及び／または状態を治療するのに
有効な製剤における化合物の量は、その疾患、障害及び／または状態の１以上の症状また
は特徴を緩和する、改善する、和らげる、抑制する、予防する、その発症を遅らせる、そ
の重症度を軽減する及び／またはその発生を減らす量である。一部の実施形態では、治療
上有効な量は単回用量で投与され；一部の実施形態では、治療上有効な量を送達するのに
複数の単位用量が必要とされる。
【００６６】
本明細書で使用されるとき、用語「治療する」、「治療」または「治療すること」は、
部分的にまたは完全に、疾患、障害及び／または状態の１以上の症状または特徴を緩和す
る、改善する、和らげる、抑制する、予防する、その発症を遅らせる、その重症度を軽減
する及び／またはその発生を減らすのに使用される方法を指す。治療は、疾患、障害及び
／または状態の兆候を呈さない対象に投与され得る。一部の実施形態では、治療は、疾患
、障害及び／または状態に関連する病的状態を発生するリスクを減らす目的で、疾患、障
害及び／または状態の早期の兆候のみを呈する対象に投与され得る。
【００６７】
表現「単位用量」は本明細書で使用されるとき、治療される対象に適する製剤の物理的
に別個の単位を指す。しかしながら、本発明の製剤の１日の総使用量は健全な医学的判断
の範囲内で主治医によって決定されることが理解されるであろう。特定の対象または生物
のための特定の有効な用量レベルは、治療される障害及び障害の重症度；採用される特定
の活性化合物の活性；採用される特定の化合物；対象の年齢、体重、全身状態、性別及び
食事；投与の時間；採用される特定の活性化合物の排泄の速度；治療の持続時間；採用さ
れる特定の化合物との併用でまたはそれと同時に使用される薬剤及び／または追加の治療
剤、並びに医療技術で周知の類似の因子を含む種々の因子に左右され得る。特定の単位用
量は治療上有効な量の治療剤を含有してもよいし、または含有しなくてもよい。
【００６８】
本明細書で使用されるとき、用語「患者」または「対象」は治療が投与されるヒトまた
は非ヒト動物（たとえば、マウス、ラット、ウサギ、イヌ、ネコ、ウシ、ブタ、ヒツジ、
ウマまたは霊長類）を指す。多数の実施形態では、患者はヒトである。ヒトは出生前及び
出生後の形態を含む。一部の実施形態では、患者は疾患、障害及び／または状態の診断ま
たは治療のために医療提供者に提示しているヒトである。一部の実施形態では、患者は疾
患、障害及び／または状態の１以上の症状または特徴を提示する。一部の実施形態では、
患者は疾患、障害または状態の症状または特徴を提示しない。一部の実施形態では、患者
は疾患、障害または状態に対する感受性に特徴的な１以上の特徴またはそのリスクを持つ
誰かである。
【００６９】
本明細書で使用されるとき、用語「試料」または「生物試料」は、その組織、細胞また
は成分部分（たとえば、血液、粘液、リンパ液、滑液、脳脊髄液、唾液、羊水、羊膜臍帯
血、尿、膣液及び精液）のサブセットを指す。試料にはさらに、生物全体または組織のサ
ブセットから調製されるホモジネート、溶解物または抽出物、たとえば、血漿、血清、脊
髄液、リンパ液、皮膚、呼吸器、腸及び消化管の外部切片、涙液、唾液、乳、血液細胞、
腫瘍、組織を含むが、これらに限定されない細胞または成分の一部、または分画またはそ
の一部が挙げられる。試料はさらに、たとえば、タンパク質または核酸の分子のような細
胞性の成分を含有し得る栄養ブロスまたはゲルのような培地を指す。
【００７０】
本明細書で使用されるとき、「安定な」は、反応混合物からの有用な程度の純度までの
単離を乗り切るのに十分に堅牢であり、好ましくは有効な治療剤に製剤化することが可能
である化合物または分子を指す。或いは、化合物または分子は、それが選択される時点、
事象または局在化に先立って実質的な分解を受けることなく任意の処理、損傷または利用
に耐えるのに十分に堅牢であれば安定であると言われ得る。
【００７１】
本明細書で使用されるとき、用語「安定化する」、「安定化された」、「安定化された
領域」は安定にするまたは安定になることを意味する。
【００７２】
疾患、障害及び／または状態を「患って」いる個体はその疾患、障害及び／または状態
の１以上の症状があると診断されている及び／またはそれを提示する。
【００７３】
疾患、障害及び／または状態に「感受性」である個体はその疾患、障害及び／または状
態であるとは診断されていない。一部の実施形態では、疾患、障害及び／または状態に感
受性である個体はその疾患、障害及び／または状態の症状を呈し得る。一部の実施形態で
は、疾患、障害及び／または状態に感受性である個体はその疾患、障害及び／または状態
の症状を呈さなくてもよい。一部の実施形態では、疾患、障害及び／または状態に感受性
である個体はその疾患、障害及び／または状態を発症するであろう。一部の実施形態では
、疾患、障害及び／または状態に感受性である個体はその疾患、障害及び／または状態を
発症しないであろう。
【００７４】
用語「コンピュータで読み取り可能な媒体」は本明細書で使用されるとき、電源を入れ
ない場合でさえ、デジタルデータを保持する不揮発性（すなわち、二次保存）のコンピュ
ータデータの保存及び／またはメモリを指す。コンピュータで読み取り可能な媒体の例に
は、ハードディスク、フロッピー（登録商標）ディスク、フラッシュメモリ（すなわち、
固体状態のメモリ）、強誘電体ＲＡＭ（Ｆ−ＲＡＭ）、磁気抵抗性ＲＡＭ（ＭＲＡＭ）、
光学ディスク、独立型ＲＡＭディスク、ＺＩＰデバイス、磁気テープ及びホログラムメモ
リが挙げられるが、これらに限定されない。
【００７５】
用語「コンピュータシステム」または「コンピュータ」は本明細書で使用されるとき、
本開示にて記載される技法を実施するのに使用することができるコンピュータ装置を指す
。例となるコンピュータ装置２５００及び可動式コンピュータ装置を図Ｓ１１にて示す。
【００７６】
本明細書で使用されるとき、組成物の、用語「結晶構造」は組成物の原子についての三
次元位置情報（すなわち、配位）の描写が保存されるコンピュータで読み取り可能な媒体
を意味するべきである。
【００７７】
本明細書で使用されるとき、用語「ドッキング」は、距離配置またはエネルギーに基づ
いて結合ポケット、ドメイン、分子または分子複合体またはその一部にて化学物質を配向
する、回転する、変換することを指す。ドッキングは、結合ポケット、ドメイン、分子ま
たは分子複合体またはその一部の球体中心のセットに一致する化学物質の原子のセットを
見いだす距離配置法によって実施され得る。Ｍｅｎｇら．Ｊ．Ｃｏｍｐ．Ｃｈｅｍ．４：
５０５−５２４（１９９２）を参照のこと。球体中心は結合ポケット、ドメイン、分子ま
たは分子複合体またはその一部にて原子（水素原子を除外して）からの所与の長さの追加
区域を提供することによって生成される。化学物質を配向させてドッキングを促進しなが
ら、リアルタイム相互作用のエネルギー計算、エネルギーの最小化または剛体最小化（Ｇ
ｓｃｈｗｅｎｄら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ、９：１７５−１８６（１９９
６））を行うことができる。たとえば、相互作用ドッキング実験は最小抵抗の経路を追跡
するように設計することができる。相互作用ドッキング実験におけるユーザーがエネルギ
ーを増やすように行動を起こせば、系はその行動に抵抗するであろう。しかしながら、ユ
ーザーがエネルギーを減らすように行動を起こせば、系は高い応答性によってその行動の
方を好むであろう（Ｃｏｈｅｎら，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３３：８８９−８９４（１９
９０））。ドッキングは、分子親和性ポテンシャルを用いた迅速なエネルギー評価にＭｏ
ｎｔｅ  Ｃａｒｌｏ検索法を組み合わせることによっても実施することができる。Ｇｏｏ
ｄｓｅｌｌ及びＯｌｓｏｎ，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｆｕｎｃｔｉｏｎ
ａｎｄ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ８：１９５−２０２（１９９０）を参照のこと。分子親和
性ポテンシャルを用いた迅速エネルギー評価にＭｏｎｔｅ  Ｃａｒｌｏ検索法を組み合わ
せることによってもドッキングを実施することができる。ＧｏｏｄｓｅｌｌおよびＯｌｓ
ｏｎ，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｇｅｎｅｔ
ｉｃｓ、８：１９５−２０２（１９９０）を参照のこと。ドッキング機能を実施するソフ
トウエアのプログラムにはＭＡＴＣＨＭＯＬ（Ｃｏｒｙら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｇｒａｐｈｉｃ
ｓ、２：３９（１９８４）；ＭＯＬＦＩＴ（Ｒｅｄｉｎｇｔｏｎ，Ｃｏｍｐｕｔ．Ｃｈｅ
ｍ．１６：２１７（１９９２））及びＤＯＣＫ（Ｍｅｎｇら，上記）が挙げられるが、こ
れらに限定されない。
【００７８】
本明細書で使用されるとき、用語「設計される」は、（ｉ）その構造がヒトの手によっ
て選択されるまたは選択された；（ｉｉ）ヒトの手を必要とする過程によって製造される
及び／または（ｉｉｉ）天然の物質及び他の既知の化学物質とは異なる化学物質を指す。
【００７９】
本明細書で使用されるとき、用語「保存環境」は二次保存、すなわち、長期の持続する
保存を含む環境を含む。一部の実施形態では、保存環境はコンピュータで読み取り可能な
媒体を含む。一部の実施形態では、保存環境は多重チャンネルのコンテクストアウェア情
報通信環境（すなわち、クラウド演算）を確立するためのネットワーク環境を含む。たと
えば、図Ｓ１１は多重チャンネルのコンテクストアウェア情報通信環境を確立するための
ネットワーク環境のブロック図である。
【００８０】
本明細書で使用されるとき、用語「実質的に」は、当該特徴または当該特性の全体のま
たはほぼ全体の範囲または程度を示す量的な状態を指す。生物学的技術分野における当業
者は、生物学的な及び化学的な現象が、仮にあるとしても稀にしか完了せず及び／または
完全性に向かわず、または全体的な結果を達成しない若しくは回避しないことを理解する
であろう。従って、用語「実質的に」は多数の生物学的な及び化学的な現象において固有
の完全性の潜在的な欠如を捉えるために本明細書で使用される。
【００８１】
本発明の化合物及び組成物
当該技術の開示に反して驚くべきことに、細胞質ＤＮＡに反応してＩ型インターフェロ
ン誘導を生じる後生動物の環状ジヌクレオチドのセカンドメッセンジャーのファミリーの
創始メンバーは従来知られていなかった独特の特徴を含むことが発見されている。これら
の洞察は今や、特定された分子の類似体、模倣体及び／または模倣剤を設計し、親分子ま
たは親分子の構造に基づいて設計される分子を研究及び開発にてさらに使用する機会を提
供する。
【００８２】
ｃＧＡＭＰの類似体、模倣体、模倣剤及び修飾体
ｃＧＡＭＰまたは環状ＧＡＭＰと呼ばれるセカンドメッセンジャーのファミリーは、少
なくとも１つのグアニン（Ｇ）及び１つのアデニン（Ａ）ヌクレオチドを有し、環状の方
式で連結されると定義される環状構造の１以上を含む。２つのヌクレオチド間の連結には
主鎖結合形成に対する糖が関与する。本発明によれば、ｃＧＡＭＰファミリーの４つの一
次親メンバーが存在する。これらには、［ｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］
］、［ｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（２’，５’）ｐ］］、［ｃ［Ｇ（３’，５’）ｐＡ（
２’，５’）ｐ］］、及び［ｃ［Ｇ（３’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］］が挙げられ
る。さらに、対のヌクレオチドのそれぞれはｓｙｎまたはａｎｔｉのグリコシドねじれ配
向性を採用し得る。
【００８３】
本明細書で使用されるとき、用語「ｃＧＡＭＰ」は考えられるねじれ配向性のいずれか
と同様にファミリーの親分子のいずれかを指す。ファミリーの個々のメンバーは糖／主鎖
の結合の形態と呼ばれてもよく、たとえば、新しく発見されたセカンドメッセンジャー［
ｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］］は糖／主鎖の結合を形成する糖環の位置
を参照して「２−プライム−３’プライム」異性体と呼ばれてもよい。他の異性体も同様
に命名され得る。まとめて、ｃＧＡＭＰファミリーの野生型、類似体、模倣体または模倣
化した型である本発明の化合物は「ｃＧＭＰ化合物」の群と呼ばれる。
【００８４】
本明細書で提供される教示によって、当業者は今や、ｃＧＡＳ酵素のアゴニストまたは
アンタゴニストである調節因子として使用するために、及び最終的にはインターフェロン
のシグナル伝達に関連する生理的事象の下流の調節因子として使用するために親分子のい
ずれかに対する類似体、模倣体または修飾体を設計し得る。線状型もｃＧＡＳ酵素活性ま
たはインターフェロンのシグナル伝達に関連するｃＧＡＳまたは下流のシグナル伝達事象
のアゴニスト、アンタゴニストまたは競合阻害剤としても設計され得る。
【００８５】
本発明は、変異体及び誘導体を含む核酸に基づいた幾つかの型の化合物または組成物を
熟考する。これらには、置換、挿入、欠失及び共有結合の変異体及び誘導体が含まれる。
用語「誘導体」は用語「変異体」と同義に使用されるが、参照分子または出発分子に比べ
て多少なりとも修飾されている及び／または変化している分子を一般に指す。
【００８６】
本明細書で使用されるとき、「類似体」は、親分子または出発分子の特性の１以上を依
然として維持する、１以上の変化、たとえば、置換、付加または欠失によって異なるｃＧ
ＡＭＰ変異体を含むことにする。類似体は通常、本明細書で記載されるもののような構造
／活性の関係（ＳＡＲ）を用いて設計される。
【００８７】
ｃＧＡＳのタンパク質、変異体、誘導体及び突然変異体
ネイティブの及び種々の結合状態での幾つかのタンパク質結晶構造を手中にして、ｃＧ
ＡＳ酵素の変異体、誘導体または突然変異体を設計することによってこれらのタンパク質
の構造を活用することが可能である。そのようなものとして、ｃＧＡＳ酵素ポリペプチド
はその変異体、誘導体及び突然変異体を含めて本発明の化合物と見なされる。これらの変
異体、誘導体及び突然変異体は研究ツールとして、たとえば、キットまたはアッセイにて
、または治療法の供給源として有用である。この目的で、抗体の作出のための抗原として
、または断片が活性に関連する構造要素を維持する場合、結合、触媒若しくは輸送が酵素
自体の調節因子としてまたはｄｓＤＮＡの代理としても使用されようがされまいが、ｃＧ
ＡＳポリペプチドまたは変異体、誘導体及び突然変異体の断片または一部が使用され得る
。まとめて、ｃＧＡＳの野生型、変異体、誘導体または突然変異体である本発明の化合物
は「ｃＧＡＳ分子」の群と呼ばれる。ｃＧＡＳ分子は、ｃＧＡＳ分子の一部若しくは断片
を含んでもよく、または本明細書で開示される結晶構造によって定義されるような異なる
構造から生じるｃＧＡＳ分子に由来する混合されたドメインまたは断片を含んでもよい。
【００８８】
本発明は、変異体及び誘導体を含むポリペプチドに基づく幾つかの型の組成物を熟考す
る。これらには、置換、挿入、欠失及び共有結合の変異体及び誘導体が含まれる。用語「
誘導体」は用語「変異体」と同義に使用されるが、参照分子または出発分子に比べて多少
なりとも修飾されている及び／または変化している分子を一般に指す。
【００８９】
そのようなものとして、参照配列、特に本明細書で開示されるポリペプチド配列に関し
て置換、挿入及び／または付加、欠失及び共有結合の修飾を含有するポリペプチドをコー
ドするｃＧＡＳは本発明の範囲内に含められる。たとえば、配列タグまたは１以上のリジ
ンのようなアミノ酸を本発明のペプチド配列に付加することができる（たとえば、Ｎ末端
またはＣ末端にて）。配列タグはペプチドの精製または局在判定に使用することができる
。リジンを用いてペプチドの溶解性を高め、またはビオチン化を可能にすることができる
。或いは、ペプチドまたはタンパク質のアミノ酸配列のカルボキシ末端またはアミノ末端
の領域に位置するアミノ酸残基を任意で欠失させて切り詰めた配列を提供する。配列の使
用に応じて、たとえば、可溶性であるまたは固体支持体に連結されるさらに大きな配列の
一部としての配列の発現に応じて特定のアミノ酸（たとえば、Ｃ末端またはＮ末端の残基
）を代わりに欠失させ得る。
【００９０】
「置換変異体」はポリペプチドを指す場合、ネイティブな配列または出発配列における
少なくとも１つのアミノ酸残基を取り外している及び異なるアミノ酸を同じ位置でその場
所に挿入しているものである。置換は、分子におけるたった１つのアミノ酸が置換されて
いる単一であってもよく、またはそれらは２以上のアミノ酸が同一分子で置換されている
複数であってもよい。
【００９１】
本明細書で使用されるとき、用語「保存的なアミノ酸置換」は、類似のサイズ、電荷ま
たは極性を持つ異なるアミノ酸による配列にて正常に存在するアミノ酸の置換を指す。保
存的置換の例には、イソロイシン、バリン及びロイシンのような非極性（疎水性）残基の
別の非極性残基についての置換が挙げられる。同様に、保存的置換の例には、アルギニン
及びリジンの間、アルギニンとリジンの間、グルタミンとアスパラギンの間、及びグリシ
ンとセリンの間のような、１つの極性残基（親水性）の別への置換が挙げられる。さらに
、リジン、アルギニン若しくはヒスチジンのような塩基性残基の別の残基についての置換
、またはアスパラギン酸若しくはグルタミン酸のような酸性残基の別の残基についての置
換は、保存的置換の追加の例である。非保存的置換の例には、イソロイシン、バリン、ロ
イシン、アラニン、メチオニンのような非極性（疎水性）アミノ酸残基のシステイン、グ
ルタミン、グルタミン酸若しくはリジンのような極性（親水性）残基についての置換、及
び／または極性残基の非極性残基についての置換が挙げられる。
【００９２】
「挿入変異体」はポリペプチドを指す場合、ネイティブ配列または出発配列における特
定の位置でのアミノ酸にすぐ隣接して挿入される１以上のアミノ酸を伴うものである。「
すぐ隣接して」はアミノ酸のαカルボキシまたはαアミノの官能基に接続してを意味する
。
【００９３】
「欠失変異体」はポリペプチドを指す場合、ネイティブ配列または出発配列における１
以上のアミノ酸が取り外されたものである。普通、欠失変異体は分子の特定の領域で欠失
させられた１以上のアミノ酸を有するであろう。
【００９４】
「共有結合性誘導体」はポリペプチドを指す場合、有機タンパク質様または非タンパク
質様の誘導体化剤によるネイティブタンパク質または出発タンパク質の修飾及び／または
翻訳後修飾を含む。共有結合性の修飾は従来、選択された側鎖または末端残基と反応する
ことが可能である有機誘導体化剤とタンパク質の標的アミノ酸残基を反応させることによ
って、または選択された組換え宿主細胞で機能する翻訳後修飾のメカニズムを利用するこ
とによって導入される。得られる共有結合性誘導体は、生物活性、免疫アッセイ、または
組換え糖タンパク質の免疫親和性精製のための抗タンパク質抗体の調製のために重要な残
基を特定することに向けられるプログラムで有用である。そのような修飾は当該技術の普
通の技量の範囲内であり、過度の実験を行うことなく実施される。
【００９５】
特定の翻訳後修飾は発現されたポリペプチドに対する組換え宿主細胞の作用の結果であ
る。グルタミニル残基及びアスパラギニル残基は相当するグルタミル残基及びアスパルチ
ル残基に翻訳後脱アミド化されることが多い。或いは、これらの残基は穏やかな酸性条件
下で脱アミド化される。これらの残基のいずれかの形態が本発明に従って作出されるポリ
ペプチドに存在し得る。
【００９６】
他の翻訳後修飾には、プロリン及びリジンのヒドロキシル化、セリル残基またはスレオ
ニル残基のヒドロキシル基のリン酸化、リジン、アルギニン及びヒスチジンの側鎖のαア
ミノ基のメチル化が挙げられる（その内容が全体として参照によって組み入れられるＴ．
Ｅ．Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃ
ｕｌａｒ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ＆  Ｃｏ．，Ｓａｎ  Ｆｒ
ａｎｃｉｓｃｏ，ｐｐ．７９−８６（１９８３））。
【００９７】
「特徴」はポリペプチドを指す場合、分子の異なるアミノ酸配列に基づく部分として定
義される。本発明によってコードされるｃＧＡＳポリペプチドの特徴には、表面表示、局
所立体構造形状、折り畳み、ループ、半ループ、ドメイン、半ドメイン、部位、末端、ま
たはそれらの組み合わせが挙げられる。
【００９８】
ポリペプチドを指す場合、本明細書で使用されるとき、用語「表面表示」は最外部表面
に現れるタンパク質のポリペプチドに基づく部分を指す。
【００９９】
ポリペプチドを指す場合、本明細書で使用されるとき、用語「局所立体構造形状」はタ
ンパク質の定義できる空間内に局在するタンパク質のポリペプチドに基づく構造表示を意
味する。
【０１００】
ポリペプチドを指す場合、本明細書で使用されるとき、用語「折り畳み」はエネルギー
最小化の際のアミノ酸配列の得られる立体構造を指す。折り畳みは折り畳み過程の二次ま
たは三次のレベルで生じ得る。二次レベルの折り畳みの例にはβシート及びα螺旋が挙げ
られる。三次折り畳みの例にはエネルギー力の凝集または分離のために形成されるドメイ
ン及び領域が挙げられる。この方法で形成される領域には疎水性ポケット及び親水性ポケ
ット等が挙げられる。
【０１０１】
本明細書で使用されるとき、用語「旋回」はそれがタンパク質の立体構造に関するとき
、ペプチドまたはポリペプチドの主鎖の方向を変える屈曲を意味し、１、２、３以上のア
ミノ酸残基が関与し得る。
【０１０２】
ポリペプチドを指す場合、本明細書で使用されるとき、用語「ループ」は、ペプチドま
たはポリペプチドの主鎖の方向を反転するのに役立ち得るポリペプチドの構造的な特徴を
指す。ループがポリペプチドで見いだされ、主鎖の方向を変えるだけである場合、それは
４以上のアミノ酸残基を含み得る。Ｏｌｉｖａらは少なくとも５つのクラスのタンパク質
ループを特定している（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６６（４）：８１４−８３０；１９９
７）。ループは開放されてもよいし、閉鎖されてもよい。閉鎖されたループまたは「環状
」のループは架橋された部分間で２、３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれを超
えるアミノ酸を含み得る。そのような架橋部分はジスルフィド結合を有するポリペプチド
にて典型的なシステイン−システイン架橋（Ｃｙｓ−Ｃｙｓ）を含んでもよく、または代
わりに架橋部分は、たとえば、本明細書で使用されるジブロモジリルのような非タンパク
質に基づき得る。
【０１０３】
ポリペプチドを指す場合、本明細書で使用されるとき、用語「半ループ」は、それが由
来するループの少なくとも半分の数のアミノ酸残基を有する特定されたループの一部を指
す。ループは常に偶数のアミノ酸残基を含有するとは限らないことが理解される。従って
、ループが奇数のアミノ酸を含有する場合または含むと特定される場合、奇数の数のルー
プの半ループは整数部分を含む、またはループの次の整数部分（ループのアミノ酸の数／
２±０．５アミノ酸）を含むであろう。たとえば、７アミノ酸ループとして特定されたル
ープは３アミノ酸または４アミノ酸の半ループを生じ得る（７／２＝３．５±０．５＝３
または４）。
【０１０４】
ポリペプチドを指す場合、本明細書で使用されるとき、用語「ドメイン」は、１以上の
特定可能な構造上のまたは機能的な特徴または特性（たとえば、結合能、タンパク質−タ
ンパク質の相互作用のための部位として役立つ）を有するポリペプチドのモチーフを指す
。
【０１０５】
ポリペプチドを指す場合、本明細書で使用されるとき、用語「半ドメイン」は、それが
由来するドメインとしてのアミノ酸残基の数の少なくとも半分を有する特定されたドメイ
ンの一部を意味する。ドメインは常に偶数のアミノ酸残基を含有し得るとは限らないこと
が理解される。従って、ドメインが奇数のアミノ酸を含有する場合または含むと特定され
る場合、奇数の数のドメインの半ドメインは整数部分を含む、またはドメインの次の整数
部分（ドメインのアミノ酸の数／２±０．５アミノ酸）を含むであろう。たとえば、７ア
ミノ酸ドメインとして特定されたドメインは３アミノ酸または４アミノ酸の半ドメインを
生じ得る（７／２＝３．５±０．５＝３または４）。サブドメインはドメインまたは半ド
メインの範囲内で特定されてもよく、これらのサブドメインは、それらが由来するドメイ
ンまたは半ドメインで特定される構造的または機能的な特性のすべて未満を持つことも理
解される。本明細書のドメイン型のいずれかを含むアミノ酸がポリペプチドの主鎖に沿っ
て連続する必要がないことも理解される（すなわち、非隣接アミノ酸は構造的に折り畳ん
でドメイン、半ドメインまたはサブドメインを作出し得る）。
【０１０６】
ポリペプチドを指す場合、本明細書で使用されるとき、用語「部位」はアミノ酸に基づ
く実施形態に関するとき、「アミノ酸残基」及び「アミノ酸側鎖」と同義で使用される。
部位は、本発明のポリペプチドに基づく分子の範囲内で修飾され、操作され、変化させ、
誘導体化させ、または変えさせてもよいペプチドまたはポリペプチドの中での位置を表す
。
【０１０７】
本明細書で使用されるとき、用語「末端（複数）」または「末端（単数）」はポリペプ
チドを指す場合、ペプチドまたはポリペプチドの先端を指す。そのような先端はペプチド
またはポリペプチドの最初の部位または最後の部位のみに限定されないが、末端領域の追
加のアミノ酸を含み得る。本発明のポリペプチドに基づく分子は、Ｎ末端（遊離のアミノ
基（ＮＨ２）を持つアミノ酸によって終結する）及びＣ末端（遊離のカルボキシル基（Ｃ
ＯＯＨ）を持つアミノ酸によって終結する）の双方を有することを特徴とする。本発明の
タンパク質は場合によっては、ジスルフィド結合または非共有結合力によって一緒にされ
る複数のポリペプチド鎖で構成される（多量体、オリゴマー）。これらの種類のタンパク
質は複数のＮ末端及びＣ末端を有するであろう。或いは、ポリペプチドの末端は、場合に
よっては、有機抱合体のような非ポリペプチド系の部分によってそれらが開始するまたは
終了するように修飾され得る。
【０１０８】
特徴のいずれかがいったん、本発明のポリペプチドの所望の成分として特定されるまた
は定義されると、移動させること、交換すること、反転すること、欠失させることまたは
複製することによってこれらの特徴の幾つかの操作及び／または修飾のいずれかが実施さ
れ得る。さらに特徴の操作は本発明の分子に対する修飾と同じ結果を生じ得ることが理解
される。たとえば、ドメインを欠失させることが関与した操作は、完全長未満の分子をコ
ードする核酸の修飾と同じように分子の長さに変化を生じる。
【０１０９】
修飾及び操作は、たとえば、部位特異的変異誘発のような、しかし、これに限定されな
い当該技術で既知の方法によって達成することができる。次いで、たとえば、本明細書で
記載されるものまたは当該技術で既知の他の好適なスクリーニング法のような試験管内ま
たは生体内のアッセイを用いて、得られる修飾された分子を活性について調べ得る。
【０１１０】
本発明によれば、ポリペプチドは何回もの実験を介して発見されるコンセンサス配列を
含み得る。本明細書で使用されるとき、「コンセンサス」配列は１以上の部位で変動性を
可能にする配列の共有する集団を代表する単一の配列である。
【０１１１】
当業者によって認識されるように、タンパク質断片、機能的なタンパク質ドメイン及び
相同性のタンパク質は本発明の当該ポリペプチドの範囲内にあるとも見なされる。たとえ
ば、本明細書で提供されるのは、参照タンパク質、長さ１０、２０、３０、４０、５０、
６０、７０、８０、９０、１００または１００を超えるアミノ酸の任意のタンパク質断片
（参照ポリペプチド配列より少なくともアミノ酸残基１つ短い、しかし、さもなければ同
一であるポリペプチド配列を意味する）である。別の例では、本明細書で記載される配列
のいずれかに対して約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約
９５％または約１００％同一である約２０、約３０、約４０、約５０、または約１００ア
ミノ酸のストレッチを含む任意のタンパク質を本発明に従って利用することができる。特
定の実施形態では、本発明に従って利用されるポリペプチドは、本明細書で提供されるま
たは参照される配列のいずれかで示されるように２、３、４、５、６、７、８、９、１０
またはそれを超える突然変異を含む。
【０１１２】
抗体
一部の実施形態では、ｃＧＡＭＰ化合物またはｃＧＡＳ分子を用いて抗体を生成し得る
。そのようなものとして、そのように生成される抗体は本発明のさらなる化合物及び組成
物と見なされる。本明細書で使用されるとき、用語「抗体」には、モノクローナル抗体（
免疫グロブリンＦｃ領域を有する完全長の抗体を含む）、多エピトープ特異性を持つ抗体
組成物、多重特異性抗体（たとえば、二重特異性抗体、ダイアボディ、及び単鎖抗体）と
同様に抗体断片が含まれる。用語「免疫グロブリン」（Ｉｇ）は本明細書では「抗体」と
相互交換可能に使用される。本明細書で使用されるとき、用語「モノクローナル抗体」は
実質的に均質な抗体の集団から得られる抗体を指し、すなわち、集団を構成する個々の抗
体は、軽微な量で存在し得る考えられる天然に存在する突然変異及び／または翻訳後修飾
（たとえば、異性体化、アミド化）を除いて同一である。モノクローナル抗体は高度に特
異的であり、単一の抗原部位に向けられる。
【０１１３】
本明細書のモノクローナル抗体は、重鎖及び／または軽鎖の一部が特定の種に由来する
または特定の抗体のクラス若しくはサブクラスに属する抗体における相当する配列と同一
であるまたは相同である一方で、鎖の残りが別の種に由来するまたは別の抗体のクラス若
しくはサブクラスに属する抗体における相当する配列と同一であるまたは相同である「キ
メラ」抗体（免疫グロブリン）、並びに所望の生物活性を示す限りそのような抗体の断片
を特に含む。本明細書の当該キメラ抗体には、非ヒト霊長類（たとえば、旧世界サル、類
人猿等）に由来する可変ドメイン抗原結合配列及びヒトの定常領域配列を含む「霊長類化
」抗体が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１１４】
「抗体断片」はインタクトな抗体の一部、好ましくはインタクトな抗体の抗原結合領域
及び／または可変領域を含む。抗体断片の例には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、
及びＦｖ断片、ダイアボディ、線状抗体、ナノ抗体、単鎖抗体分子及び抗体断片から形成
される多重特異性抗体が挙げられる。
【０１１５】
それぞれα、δ、ε、γ及びμと命名された重鎖を含む免疫グロブリンＩｇＡ、ＩｇＤ
、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭの５つのクラスのいずれかが本発明の化合物または分子によ
って生成され得る。
【０１１６】
理論によって束縛されることを望まないが、本明細書で開示されるｃＧＡＭＰ化合物ま
たはｃＧＡＳ分子を用いて生成される抗体は改善された治療有効性を生じると考えられる
。
【０１１７】
本発明の抗体を利用して、たとえば、血液、循環器、ＣＮＳ、中毒（抗毒素を含む）、
皮膚科学、内分泌学、消化器、医用画像、筋骨格、腫瘍学、免疫学、炎症、呼吸、感覚及
び抗感染のような、しかし、これらに限定されない多数の治療領域にて状態または疾患を
治療し得る。
【０１１８】
一実施形態では、抗体の変異体には、置換変異体、保存的アミノ酸置換、挿入変異体、
欠失変異体及び／または共有結合性の誘導体も挙げられ得るが、これらに限定されない。
【０１１９】
ワクチン
本明細書で使用されるとき、「ワクチン」は特定の疾患または感染性因子に対する免疫
を改善する生物製剤である。本発明によれば、及び理論によって束縛されることを望まな
いが、本発明のｃＧＡＭＰ化合物またはｃＧＡＳ分子の利用をワクチンとしてまたはワク
チンアジュバントとして使用し得ると考えられる。
【０１２０】
本発明のワクチンを利用して、たとえば、循環器、ＣＮＳ、皮膚科学、内分泌学、腫瘍
学、免疫学及び自己免疫、炎症、呼吸及び抗感染のような、しかし、これらに限定されな
い多数の治療領域にて状態または疾患を治療し得る。
【０１２１】
ＡＬＢ化合物
一部の実施形態では、本発明は以下の特徴：
Ａ−−−Ｌ−−−Ｂ
を含む構造を有するｃＧＡＭＰを結合するポリペプチドの調節因子を提供するが、
式中、
ＡはｃＧＡＳのアデノシン結合部位に適合する部分でありまたはそれを含み；
ＢはｃＧＡＳのグアノシン結合部位に適合する部分でありまたはそれを含み；
任意でＬは、ＡとＢが適当な相互作用を採用してｃＧＡＳを結合するのを可能にする方法
でＡとＢを連結するリンカー部分である。
【０１２２】
一部の実施形態では、ｃＧＡＭＰを結合するポリペプチドはｃＧＡＳである。一部の実
施形態では、ｃＧＡＭＰを結合するポリペプチドはＳＴＩＮＧである。
【０１２３】
一部の実施形態では、Ａは以下で定義されるような環Ａであり、単一で及び組み合わせ
で本明細書のクラス及びサブクラスにて記載される。一部の実施形態では、Ａは任意で、
Ｓｅｒ１９９、Ｓｅｒ４２０、Ｌｙｓ４０２、Ｇｌｕ２１１、Ａｓｐ２１３、Ａｓｐ３０
７、Ｔｙｒ４２１、Ａｒｇ３６４、及びそれらの組み合わせから成る群から選択される１
以上の部位にてｃＧＡＳとの１以上の相互作用を行う。一部の実施形態では、Ａは任意で
、Ｔｙｒ４２１、Ａｓｐ２１３、Ａｓｐ３０７、Ａｒｇ３６４及びそれらの組み合わせか
ら成る群から選択される１以上の部位にてｃＧＡＳとの１以上の相互作用を行う。
【０１２４】
一部の実施形態では、Ｂは以下で定義されるような環Ｂであり、単一で及び組み合わせ
で本明細書のクラス及びサブクラスにて記載される。一部の実施形態では、Ｂは任意で、
Ｔｙｒ４２１、Ｔｈｒ１９７、Ｓｅｒ３６６、Ｓｅｒ３６８、Ａｒｇ３６４及びそれらの
組み合わせから成る群から選択される１以上の部位にてｃＧＡＳとの１以上の相互作用を
行う。
【０１２５】
一部の実施形態では、リンカー部分は、ＡとＢを共有結合させるのに好適な、ＡとＢが
適当な相互作用を採用してｃＧＡＳを結合するのを可能にするリンカーである。一部の実
施形態では、リンカーはＡ及び／またはＢと一緒に１以上のリン酸基を任意で含有するヌ
クレオシドを含む。一部の実施形態では、リンカーはＡ及びＢと一緒に１以上のリン酸基
を任意で含有する環状ジヌクレオシドを含む。一部の実施形態では、調節因子は環状ＧＭ
Ｐ-ＡＭＰ類似体である。
【０１２６】
一部の実施形態では、リンカー部分は１以上のリボースまたはリン酸基を含む。一部の
実施形態では、そのようなリボース及びリン酸基は環ＡまたはＢと共にリボヌクレオチド
を形成する。一部の実施形態では、調節因子は１以上の修飾されたリボヌクレオチドを含
む。修飾されたリボヌクレオチドは当該技術分野で周知であり、それにはリン酸基、リボ
ース基、ヌクレオチド塩基の基及びそれらの組み合わせへの修飾が挙げられる。本発明は
、本明細書で記載される調節因子及び化合物のための考えられる修飾されたリボヌクレオ
チドすべてを熟考する。一部の実施形態では、これらの修飾は生体内で化合物の安定性を
高める。一部の実施形態では、修飾はホスホジエステラーゼに対する化合物の復元力を高
める。
【０１２７】
一部の実施形態では、リンカーは修飾されたホスホジエステル基を含む。そのような修
飾は当該技術分野で既知であり、限定しないで、ホスホロチオエート、キラルホスホロチ
オエート、ホスホロジチオエート、ホスホトリエステル、アミノ−アルキルホスホトリエ
ステル、３’−アルキレンホスホネート、５’−アルキレンホスホネート及びキラルホス
ホネートを含むメチル及び他のアルキルホスホネート、ホスフィネート、３’−アミノホ
スホルアミデート及びアミノアルキルホスホルアミデートを含むホスホルアミデート、チ
オノホスホルアミデート、チオノアルキルホスホネート、チオノアルキルホスホトリエス
テル、セレノホスフェート、ボラノホスフェート及びそれらの組み合わせによるホスホジ
エステルの置換が挙げられる。一部の実施形態では、ホスホジエステルはホスホルアミデ
ートに修飾される。好適なホスホルアミデートには限定しないで、その内容全体が参照に
よって本明細書に組み入れられるｗｗｗ．ｇｌｅｎｒｅｓｅａｒｃｈ．ｃｏｍ／Ｒｅｆｅ
ｒｅｎｃｅ／ＳｔｒｕｃｔｕｒｅＬｉｓｔｉｎｇ．ｐｈｐにて利用可能な列記されたもの
が挙げられる。
【０１２８】
一部の実施形態では、リンカーはリンを含まない。一部の実施形態では、リンカーは、
短鎖アルキルまたはシクロアルキルヌクレオシド間結合、混合ヘテロ原子及びアルキルま
たはシクロアルキルヌクレオシド間結合、または１以上の短鎖ヘテロ原子のまたは複素環
のヌクレオシド間結合を含む。これらには、モルフォリノ結合を有するもの（ヌクレオシ
ドの糖部分から部分的に形成される）；シロキサン部分；硫化物、スルホキシド及びスル
ホンの部分；アミド、カルボキシレート、ホルムアセチル及びチオホルムアセチルの部分
；メチレンホルムアセチル及びチオホルムアセチルの部分；リボアセチル部分；アルケン
含有部分；スルファメート部分；メチレンイミノ及びメチレンヒドラジノ部分；スルホネ
ート及びスルホンアミド部分；アミド部分；及び混合されたＮ、Ｏ、Ｓ及びＣＨ２の成分
部分を有するその他が挙げられる。
【０１２９】
加えて、ホスホジエステルリンカーを修飾して化合物の安定性を改善し得る。たとえば
、特定の例では、Ｐ＝Ｏ結合を生体内でのヌクレアーゼによる分解に感受性ではないＰ＝
Ｓ結合に変更する。特定の例では、ヌクレオチドの糖部分のＣ−２ヒドロキシル基をアル
キルエーテルまたはヘテロアルキルエーテルに変換する。この修飾はオリゴヌクレオチド
が核酸分解する傾向を少なくする。
【０１３０】
追加のホスホジエステル修飾は、その内容全体が参照によって本明細書に組み入れられ
るＤｅｌｌｉｎｇｅｒら．Ｃｕｒｒ．Ｐｒｏｔｏｃ．Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｃｈｅ
ｍ．２００４、Ｏｃｔ；Ｃｈａｐｔｅｒ  ４：Ｕｎｉｔ  ４；Ｍａｒｓｈａｌｌら．Ｓｃ
ｉｅｎｃｅ．１９９３、Ｍａｒ．１２；２５９（５１０１）：１５６４−７０によって記
載されている。
【０１３１】
リンカー部分は１以上の修飾されたリボース部分も含み得る。一部の実施形態では、リ
ンカーは、２’または３’位での以下：ＯＨ；Ｆ；Ｏ−、Ｓ−、またはＮ−アルキル；Ｏ
−、Ｓ−、またはＮ−アルケニル；Ｏ−、Ｓ−またはＮ−アルキニル；またはＯ−アルキ
ル−Ｏ−アルキルの１つで修飾されたリボースを含み、その際、アルキル、アルケニル及
びアルキニルは置換されたまたは非置換のＣ１〜Ｃ１０アルキルまたはＣ２〜Ｃ１０アル
ケニル及びアルキニルであり得る。一部の実施形態では、２’または３’の修飾には２’
−Ｏ−Ｍｅ、２’−Ｏ−ＭＯＥ、２’−Ｏ−アリル、２’−Ｏ−ジニトロホスフェート、
２’−フルオロ、２’−チオ、２’−アミノエチル、２’−グアニジノプロピルが挙げら
れる。一部の実施形態では、２’または３’の修飾にはＯ［（ＣＨ２）ｎＯ］ｍＣＨ３、
Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）ｎＮＨ２、Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）
ｎＯＮＨ２、及びＯ（ＣＨ２）ｎＯＮ［（ＣＨ２）ＣＨ３］２が挙げられ、その際、ｎ及
びｍは１〜約１０である。一部の実施形態では、リンカーは、２’または３’位にてＣ１
〜Ｃ１０低級アルキル、置換された低級アルキル、アルケニル、アルキニル、アルカリル
、アラルキル、Ｏ−アルカリルまたはＯ−アラルキル、ＳＨ、ＳＣＨ３、ＯＣＮ、Ｃｌ、
Ｂｒ、ＣＮ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＳＯＣＨ３、ＳＯ２ＣＨ３、ＯＮＯ２、ＮＯ２、Ｎ３、
ＮＨ２、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルカリル、アミノアルキルアミノ、ポリ
アルキルアミノ、置換されたシリル、ＲＮＡ−切断基、レポーター基、挿入剤、オリゴヌ
クレオチドの薬物動態特性を改善する基、またはオリゴヌクレオチドの薬物動力学特性を
改善する基、及び類似の特性を有する他の置換基によって修飾されたリボースを含む。一
部の実施形態では、修飾には２’−Ｏ−メトキシエチル（２’−Ｏ-ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ
３、２’−Ｏ−（２−メトキシエチル）または２’−メトキシエトキシまたは２’−ＭＯ
Ｅとしても知られる）（Ｍａｒｔｉｎら，Ｈｅｌｖ．Ｃｈｉｍ．Ａｃｔａ，１９９５，７
８，４８６−５０４）、すなわち、アルコキシアルコキシ基が挙げられる。さらに好まれ
る修飾には、２’−ジメチルアミノオキシエトキシ、すなわち、２’−ＤＭＡＯＥとして
も知られるＯ（ＣＨ２）２ＯＮ（ＣＨ３）２基、及び２’−ジメチルアミノ−エトキシエ
トキシ（２’−Ｏ−ジメチル−アミノ−エトキシ−エチルまたは２’−ＤＭＡＥＯＥとし
ても当該技術分野で知られる）、すなわち、２’−Ｏ−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−Ｎ（ＣＨ３
）２が挙げられる。リンカーリボースに対する他の修飾には、２’−メトキシ（２’−Ｏ
−ＣＨ３）、２’−アミノプロポキシ（２’−ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２）、２’−ア
リル（２’−ＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ２）、２’−Ｏ−アリル（２’−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ−Ｃ
Ｈ２）及び２’−フルオロ（２’−Ｆ）が挙げられる。２’−修飾はアラビノ（上）位ま
たはリボ（下）位であり得る。一部の実施形態では、２’−アラビノ修飾は２’−Ｆであ
る。
【０１３２】
類似の修飾は、オリゴヌクレオチドの他の位置、特に３’末端ヌクレオチドの糖の３’
位、及び５’位にても行い得る。オリゴヌクレオチドはペントフラノシル糖の代わりにシ
クロブチル部分のような糖部分も有し得る。
【０１３３】
一部の実施形態では、リンカーリボースは、２’−ヒドロキシル基が糖環の３’または
４’炭素原子に連結され、それによって二環式の糖部分を形成するロックド核酸（ＬＮＡ
）に修飾される。結合は好ましくは、２’酸素原子と４’炭素原子を架橋するメチレン（
−ＣＨ２−）ｎ基であり、ｎは１または２である。ＬＮＡ及びその調製は、その内容全体
が参照によって本明細書に組み入れられる国際特許出願ＷＯ９８／３９３５２及びＷＯ９
９／１４２２６にて記載されている。一部の実施形態では、ＬＮＡは
部分：
【化１】
2019137692.tif 000004
を形成する。
【０１３４】
特定の実施形態では、リンカーはヘキソース部分を含む。一部の実施形態では、ヘキソ
ースはグルコースまたはマンノースである。特定の例では、リボース糖部分はシクロヘキ
セニル基または多環式ヘテロアルキル環で置き換えられる。一部の実施形態では、リボー
ス糖部分はモルフォリノ基で置き換えられる。追加のリボース修飾は、その内容全体が参
照によって本明細書に組み入れられるＥｎｇｅｌｓ，Ｎｅｗ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇ
ｙ，Ｖｏｌ．３０，３，ｐ．３０２（２０１３）によって議論されている。
【０１３５】
一部の実施形態では、ＡまたはＢは未修飾である核酸塩基またはアデニン（Ａ）及びグ
アニン（Ｇ）、及びピリミジン塩基チミン（Ｔ）、シトシン（Ｃ）及びウラシル（Ｕ）か
ら選択される天然の核酸塩基である。一部の実施形態では、ＡまたはＢは修飾された核酸
塩基である。修飾された核酸塩基は当該技術で既知であり、それには限定しないで、たと
えば、５−メチルシトシン（５−ｍｅ−Ｃ）、５−ヒドロキシメチルシトシン、キサンチ
ン、ヒポキサンチン、２−アミノアデニン、アデニン及びグアニンの６−メチル及び他の
アルキル誘導体、アデニン及びグアニンの２−プロピル及び他のアルキル誘導体、２−チ
オウラシル、２−チオチミン及び２−チオシトシン、５−ハロウラシル及びシトシン、５
−プロピニル（−Ｃ≡Ｃ−ＣＨ３）ウラシル及びシトシン及びピリミジン塩基の他のアル
キニル誘導体、６−アゾウラシル、シトシン及びチミン、５−ウラシル（シュードウラシ
ル）、４−チオウラシル、８−ハロ、８−アミノ、８−チオール、８−チオアルキル、８
−ヒドロキシル及び他の８−置換アデニン及びグアニン、５−ハロ、特に５−ブロモ、５
−トリフルオロメチル及び他の５−置換ウラシル及びシトシン、７−メチルグアニン及び
７−メチルアデニン、２−Ｆ−アデニン、２−アミノ−アデニン、８−アザグアニン及び
８−アザアデニン、７−デアザグアニン及び７−デアザアデニン及び３−デアザグアニン
及び３−デアザアデニンのような合成の及び天然の核酸塩基が挙げられるが、これらに限
定されない。さらなる修飾された核酸塩基には、フェノキサジンシチジン（１Ｈ−ピリミ
ド［５，４−ｂ］［１，４］ベンゾキサジン−２（３Ｈ）−オン）、フェノチアジンシチ
ジン（１Ｈ−ピリミド［５，４−ｂ］［１，４］ベンゾチアジン−２（３Ｈ）−オン）、
置換されたフェノキサジンシチジン（たとえば、９−（２−アミノエトキシ）−Ｈ−ピリ
ミド［５，４−ｂ］［１，４］ベンゾキサジン−２（３Ｈ）−オン）のようなＧ−クラン
プ、カルバゾールシチジン（２Ｈ−ピリミド［４，５−ｂ］インドール−２−オン）、ピ
リドインドールシチジン（Ｈ−ピリド［３’，２’：４，５］ピロロ［２，３−ｄ］ピリ
ミジン−２−オン）のような三環式ピリミジンが挙げられる。修飾された核酸塩基には、
プリン塩基またはピリミジン塩基が他の複素環、たとえば、７−デアザアデニン、７−デ
アザグアノシン、２−アミノピリジン及び２−ピリドンで置き換えられているものも挙げ
られ得る。さらなる核酸塩基には、米国特許第３，６８７，８０８号にて開示されたもの
、Ｔｈｅ  Ｃｏｎｃｉｓｅ  Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  Ｏｆ  Ｐｏｌｙｍｅｒ  Ｓｃｉ
ｅｎｃｅ  Ａｎｄ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ｐａｇｅｓ  ８５８−８５９，  Ｋｒｏｓ
ｃｈｗｉｔｚ，Ｊ．Ｉ．，編．Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，１９９０にて開示
されたもの、Ｅｎｇｌｉｓｃｈら，Ａｎｇｅｗａｎｄｔｅ  Ｃｈｅｍｉｅ，Ｉｎｔｅｒｎ
ａｔｉｏｎａｌ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９１，３０，６１３によって開示されたもの、及
びＳａｎｇｈｖｉ，Ｙ．Ｓ．，Ｃｈａｐｔｅｒ  １５，Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｒｅｓｅａ
ｒｃｈ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐａｇｅｓ  ２８９−３０２，Ｃｒｏｏｋ
ｅ，Ｓ．Ｔ．ａｎｄ  Ｌｅｂｌｅｕ，Ｂ．，編，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，１９９３によって
開示されたものが挙げられる。一部の実施形態では、非天然の核酸塩基はジフルオロトリ
ル、ニトロピロリルまたはニトロイミダゾリルである。特定の実施形態では、非天然の核
酸塩基は、７−デアザアデニン、３−デアザアデニン、Ｎ１−メチル−グアノシン、６−
チオグアノシン、２−ピリミジノン、４−チオウリジン、２−ピリジノン、５−プロピニ
ル−ウリジン、イミダゾール−４−カルボキサミド、５−ニトロインドール、３−ニトロ
ピロール、２−アミノプリン、５−メチル−２−ピリミジノン、Ｎ３−チオエチルチミジ
ン、６−チオプリン、５−ヨードウリジン、８−アジドアデノシン、５−メルカプトウリ
ジンであり、または５−ブロモウラシル、ジアミノプリン、２−チオウラシル、４−チオ
ウラシル、シュードウラシル、ジフルオロトルエン、及びジヒドロウラシルに由来するも
のである。追加の修飾された核酸塩基には、その内容全体が参照によって本明細書に組み
入れられるｗｗｗ．ｇｌｅｎｒｅｓｅａｒｃｈ．ｃｏｍ／Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ／Ｓｔｒｕ
ｃｔｕｒｅＬｉｓｔｉｎｇ．ｐｈｐ及びｗｗｗ．ｔｈｅｒｍｏｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃｂｉ
ｏ．ｃｏｍ／ｒｎａ−ｐｒｉｃｉｎｇ−ａｎｄ−ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ／にて見い
だされるものが挙げられる。追加の修飾は、Ｖｅｒｍａら．Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃ
ｈｅｍ．１９９８．６７：９９−１３４によって議論されている。
【０１３６】
一部の実施形態では、リンカー部分はリボヌクレオチドのホスホジエステル基及びリボ
ース基の双方を置き換える基を含む。そのようなリンカーの１つはペプチド核酸（ＰＮＡ
）と呼ばれる。ＰＮＡ化合物では、オリゴヌクレオチドの普通の糖主鎖がアミド含有主鎖
、たとえば、アミノエチルグリシン主鎖で置き換えられる。核酸塩基は保持され、主鎖の
アミド部分のアザ窒素原子に直接または間接的に結合される。ＰＮＡ化合物の調製を教示
する代表的な米国特許には、そのそれぞれが参照によって本明細書に組み入れられる米国
特許第５，５３９，０８２号；同第５，７１４，３３１号；及び同第５，７１９，２６２
号が挙げられるが、これらに限定されない。ＰＮＡ化合物のさらなる教示は、Ｎｉｅｌｓ
ｅｎら，Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９１，２５４，１４９７−１５００；Ｎｉｅｌｓｅｎら，
Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｒｅｖ．，１９９７，２６，７３−７８；Ｓｈａｋｅｅｌら，Ｊｏｕ
ｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ＆  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ
ｏｇｙ，第８１巻，第６号，Ｊｕｎｅ、２００６，ｐｐ．８９２−８９９（８）；Ｎｉｅ
ｌｓｅｎ，ＣＨＥＭＩＳＴＲＹ  ＆  ＢＩＯＤＩＶＥＲＳＩＴＹ−Ｖｏｌ．７（２０１０
），ｐ．７８６にて見いだすことができる。
【０１３７】
これら及び他の好適なリンカーは、そのそれぞれの内容全体が参照によって本明細書に
組み入れられる米国特許第７，３６５，０５８号、同第８，１０１，３４８号、同第８，
０８８，９０２号、同第７，５７９，４５１号、同第７，５８２，７４４号、同第８，３
３４，３７３号、同第８，０１７，７６２号、同第７，９１９，６１２号、同第７，８１
２，１４９号及び同第７，７２３，５０８号にて議論されている。
【０１３８】
一部の実施形態では、本発明は式Ｉの化合物または薬学上許容可能なその塩を提供する
。
【化２】
2019137692.tif 000005
式中
環Ａは、
【化３】
2019137692.tif 000006
から成る群から選択され；
環Ｂは、
【化４】
2019137692.tif 000007
から成る群から選択され；
Ｘ１及びＸ２はそれぞれ独立して−ＣＲ−または−Ｎ−であり；
Ｘ３は−Ｃ（Ｒ）２−、−Ｏ−、または−ＮＲ−であり；
Ｘａ及びＸｂは独立して−Ｃ（Ｒ）２−、−Ｃ（Ｒ）＝Ｃ（Ｒ）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−
Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、または−Ｎ（Ｒ）−であり；
Ｘａ１及びＸｂ１は独立して−Ｃ（Ｒ）−または−Ｎ−であり；
Ｘｃ及びＸｄは、存在する場合、独立して任意で置換された酸素、任意で置換されたイオ
ウ、置換された窒素原子、ＢＨ３、または任意で置換されたＣ１−１２脂肪族化合物であ
り；
Ｘｅ及びＸｆはそれぞれ独立して−Ｏ−、−Ｓ−、または−Ｎ（Ｒ）−であり；
Ｗはそれぞれ独立してＰまたはＳであり；
Ｒ１及びＲ２はそれぞれ独立して水素、ハロゲン、−ＮＯ２、−ＣＮ、−ＯＲａ、−ＳＲ
、−Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−ＣＯ２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２
Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ）
２、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝
ＮＲ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（＝ＮＲ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ＝ＮＯＲ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（
Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２Ｒ、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、
及び任意で置換されたＣ１−１２脂肪族化合物またはＣ１−４アルコキシ−Ｃ１−４アル
キルから成る群から選択され；
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ１０、及びＲ１１はそれぞれ独立して水素、ハロゲン
、−ＮＯ２、−ＣＮ、−ＯＲ、−ＳＲ、−Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−ＣＯ２Ｒ、−Ｃ
（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｃ
（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ
（Ｒ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＮＲ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（＝ＮＲ）Ｎ（Ｒ）２、−
Ｃ＝ＮＯＲ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）
ＳＯ２Ｒ、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、または、Ｃ１−１２脂肪族化合物、フェニル、３−
７員環の飽和または部分不飽和の単環式炭素環、７−１０員環の飽和または部分不飽和の
二環式炭素環、３−７員環の飽和または部分不飽和の、窒素、酸素またはイオウから独立
して選択される１−２のヘテロ原子を有する複素環、７−１０員環の飽和または部分不飽
和の、窒素、酸素またはイオウから独立して選択される１−３のヘテロ原子を有する二環
式複素環、及び窒素、酸素またはイオウから独立して選択される１−３のヘテロ原子を有
する５−６員環のヘテロアリール環から選択される任意で置換された基から成る群から選
択され；
Ｒ８及びＲ９は存在する場合、それぞれ独立して水素、ハロゲン、−ＮＯ２、−ＣＮ、−
ＯＲａ、−ＳＲ、−Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−ＣＯ２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−
Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−
ＳＯ２Ｎ（Ｒ）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｎ（Ｒ）２、−
Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＮＲ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（＝ＮＲ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ＝ＮＯＲ、−Ｎ（Ｒ
）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２Ｒ、−ＯＣ（Ｏ
）Ｎ（Ｒ）２、及び任意で置換されたＣ１−１２脂肪族化合物から成る群から選択され；
Ｒはそれぞれ独立して、水素若しくは、Ｃ１−６脂肪族化合物、フェニル、３−７員環の
飽和または部分不飽和の炭素環式環、３−７員環の飽和または部分不飽和の、窒素、酸素
またはイオウから独立して選択される１−２のヘテロ原子を有する単環式複素環、及び窒
素、酸素またはイオウから独立して選択される１−３のヘテロ原子を有する５−６員環の
ヘテロアリール環から成る群から選択される任意で置換された基から成る群から選択され
；または：
同じ窒素上の２つのＲ基はその介在原子と一緒になって、窒素、酸素またはイオウから独
立して選択される１−４のヘテロ原子を有する任意で置換された３−７員環の飽和または
部分不飽和の環、またはヘテロアリール環を形成し；並びに
Ｒａは酸素保護基またはＲである。
【０１３９】
一部の実施形態では、環Ａは
【化５】
2019137692.tif 000008
である。
【０１４０】
一部の実施形態では、環Ａは
【化６】
2019137692.tif 000009
である。
【０１４１】
一部の実施形態では、環Ａは
【化７】
2019137692.tif 000010
である。
【０１４２】
一部の実施形態では、環Ｂは
【化８】
2019137692.tif 000011
である。
【０１４３】
一部の実施形態では、環Ｂは
【化９】
2019137692.tif 000012
である。
【０１４４】
一部の実施形態では、Ｘ１は−ＣＲ−である。一部の実施形態では、Ｘ１は−Ｎ−であ
る。一部の実施形態では、Ｘ２は−ＣＲ−である。一部の実施形態では、Ｘ２は−Ｎ−で
ある。一部の実施形態では、Ｘ３は−Ｃ（Ｒ）２−である。一部の実施形態では、Ｘ３は
−Ｏ−である。一部の実施形態では、Ｘ３は−ＮＲ−である。
【０１４５】
特定の実施形態では、Ｘａは−Ｃ（Ｒ）２−である。特定の実施形態では、Ｘａは−Ｃ
（Ｒ）＝Ｃ（Ｒ）−である。特定の実施形態では、Ｘａは−Ｏ−である。特定の実施形態
では、Ｘａは−Ｓ−である。特定の実施形態では、Ｘａは−Ｓ（Ｏ）−である。
【０１４６】
特定の実施形態では、Ｘａは−Ｓ（Ｏ）２−である。特定の実施形態では、Ｘａは−Ｎ
Ｒ−である。
【０１４７】
特定の実施形態では、Ｘｂは−Ｃ（Ｒ）２−である。特定の実施形態では、Ｘｂは−Ｃ
（Ｒ）＝Ｃ（Ｒ）−である。特定の実施形態では、Ｘｂは−Ｏ−である。特定の実施形態
では、Ｘｂは−Ｓ−である。特定の実施形態では、Ｘｂは−Ｓ（Ｏ）−である。特定の実
施形態では、Ｘｂは−Ｓ（Ｏ）２−である。特定の実施形態では、Ｘｂは−ＮＲ−である
。
【０１４８】
特定の実施形態では、Ｘａ１は−Ｃ（Ｒ）−である。特定の実施形態では、Ｘａ１は−
Ｎ−である。特定の実施形態では、Ｘｂ１は−Ｃ（Ｒ）−である。特定の実施形態では、
Ｘｂ１は−Ｎ−である。
【０１４９】
一部の実施形態では、Ｘｃは酸素である。一部の実施形態では、Ｘｃはイオウである。
Ｘｃが酸素またはイオウである特定の実施形態では、酸素原子またはイオウ原子は負の形
式電荷を持ち得ることが十分に理解されるであろう。一部の実施形態では、Ｘｃは置換さ
れた窒素原子である。一部の実施形態では、窒素は独立して水素または任意で置換された
Ｃ１−１２脂肪族基で置換される。一部の実施形態では、Ｘｃは任意で置換されたＣ１−
１２脂肪族化合物である。
【０１５０】
一部の実施形態では、Ｘｄは酸素である。一部の実施形態では、Ｘｄはイオウである。
Ｘｄが酸素またはイオウである特定の実施形態では、酸素原子またはイオウ原子は負の形
式電荷を持ち得ることが十分に理解されるであろう。一部の実施形態では、Ｘｄは置換さ
れた窒素原子である。一部の実施形態では、窒素は独立して水素または任意で置換された
Ｃ１−１２脂肪族基で置換される。一部の実施形態では、Ｘｄは任意で置換されたＣ１−
１２脂肪族化合物である。
【０１５１】
一部の実施形態では、Ｘｅは−Ｏ−である。一部の実施形態では、Ｘｅは−Ｓ−である
。一部の実施形態では、Ｘｅは−Ｎ（Ｒ）−である。
【０１５２】
一部の実施形態では、Ｘｆは−Ｏ−である。一部の実施形態では、Ｘｆは−Ｓ−である
。一部の実施形態では、Ｘｆは−Ｎ（Ｒ）−である。
【０１５３】
一部の実施形態では、ＷはＰである。他の実施形態では、ＷはＳである。
【０１５４】
一部の実施形態では、Ｒ１は水素、ハロゲン、−ＯＲａ、−ＳＲ、−Ｎ（Ｒ）２、及び
任意で置換されたＣ１−１２脂肪族化合物またはＣ１−４アルコキシ−Ｃ１−４アルキル
である。一部の実施形態では、Ｒ１は水素である。一部の実施形態では、Ｒ１はハロゲン
である。一部の実施形態では、Ｒ１は−ＯＲａである。一部の実施形態では、Ｒ１は−Ｏ
Ｈである。一部の実施形態では、Ｒ１はフルオロである。一部の実施形態では、Ｒ１はＣ
１−１２脂肪族化合物である。一部の実施形態では、Ｒ１はＣ１−６脂肪族化合物である
。一部の実施形態では、Ｒ１はＣ１−３脂肪族化合物である。一部の実施形態では、Ｒ１
はメチルである。一部の実施形態では、Ｒ１はＣ１−４アルコキシ−Ｃ１−４アルキルで
ある。一部の実施形態では、Ｒ１はメトキシ−エチルである。
【０１５５】
一部の実施形態では、Ｒ２は水素、ハロゲン、−ＯＲａ、−ＳＲ、−Ｎ（Ｒ）２、及び
任意で置換されたＣ１−１２脂肪族化合物またはＣ１−４アルコキシ−Ｃ１−４アルキル
である。一部の実施形態では、Ｒ２は水素である。一部の実施形態では、Ｒ２はハロゲン
である。一部の実施形態では、Ｒ２は−ＯＲａである。一部の実施形態では、Ｒ２は−Ｏ
Ｈである。一部の実施形態では、Ｒ２はフルオロである。一部の実施形態では、Ｒ２はＣ
１−１２脂肪族化合物である。一部の実施形態では、Ｒ２はＣ１−６脂肪族化合物である
。一部の実施形態では、Ｒ２はＣ１−３脂肪族化合物である。一部の実施形態では、Ｒ２
はメチルである。一部の実施形態では、Ｒ２はＣ１−４アルコキシ−Ｃ１−４アルキルで
ある。一部の実施形態では、Ｒ２はメトキシ−エチルである。
【０１５６】
一部の実施形態では、Ｒ３は水素、ハロゲン、−ＮＯ２、−ＣＮ、−ＯＲ、−ＳＲ、−
Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−ＣＯ２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（
Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ）２、
−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＮＲ
）Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（＝ＮＲ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ＝ＮＯＲ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）
２、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２Ｒ、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、また
は任意で置換されたＣ１−１２脂肪族化合物である。特定の実施形態では、Ｒ３は水素で
ある。一部の実施形態では、Ｒ３はハロゲンである。特定の実施形態では、Ｒ３は−ＮＯ
２である。一部の実施形態では、Ｒ３は−ＣＮである。特定の実施形態では、Ｒ３は−Ｏ
Ｒである。一部の実施形態では、Ｒ３はＣ１−１２脂肪族化合物である。一部の実施形態
では、Ｒ３はＣ１−６脂肪族化合物である。
【０１５７】
一部の実施形態では、Ｒ４は水素、ハロゲン、−ＮＯ２、−ＣＮ、−ＯＲ、−ＳＲ、−
Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−ＣＯ２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（
Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ）２、
−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＮＲ
）Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（＝ＮＲ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ＝ＮＯＲ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）
２、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２Ｒ、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、また
は任意で置換されたＣ１−１２脂肪族化合物である。特定の実施形態では、Ｒ４は水素で
ある。一部の実施形態では、Ｒ４はハロゲンである。特定の実施形態では、Ｒ４は−ＮＯ
２である。一部の実施形態では、Ｒ４は−ＣＮである。特定の実施形態では、Ｒ４は−Ｏ
Ｒである。一部の実施形態では、Ｒ４はＣ１−１２脂肪族化合物である。一部の実施形態
では、Ｒ４はＣ１−６脂肪族化合物である。
【０１５８】
一部の実施形態では、Ｒ５は水素、ハロゲン、−ＮＯ２、−ＣＮ、−ＯＲ、−ＳＲ、−
Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−ＣＯ２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（
Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ）２、
−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＮＲ
）Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（＝ＮＲ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ＝ＮＯＲ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）
２、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２Ｒ、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、また
は任意で置換されたＣ１−１２脂肪族化合物である。特定の実施形態では、Ｒ５は水素で
ある。一部の実施形態では、Ｒ５はハロゲンである。特定の実施形態では、Ｒ５は−ＮＯ
２である。一部の実施形態では、Ｒ５は−ＣＮである。特定の実施形態では、Ｒ５は−Ｏ
Ｒである。一部の実施形態では、Ｒ５はＣ１−１２脂肪族化合物である。一部の実施形態
では、Ｒ５はＣ１−６脂肪族化合物である。
【０１５９】
一部の実施形態では、Ｒ６は水素、ハロゲン、−ＮＯ２、−ＣＮ、−ＯＲ、−ＳＲ、−
Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−ＣＯ２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（
Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ）２、
−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＮＲ
）Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（＝ＮＲ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ＝ＮＯＲ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）
２、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２Ｒ、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、また
は任意で置換されたＣ１−１２脂肪族化合物である。特定の実施形態では、Ｒ６は水素で
ある。一部の実施形態では、Ｒ６はハロゲンである。特定の実施形態では、Ｒ６は−ＮＯ
２である。一部の実施形態では、Ｒ６は−ＣＮである。特定の実施形態では、Ｒ６は−Ｏ
Ｒである。一部の実施形態では、Ｒ６はＣ１−１２脂肪族化合物である。一部の実施形態
では、Ｒ６はＣ１−６脂肪族化合物である。
【０１６０】
一部の実施形態では、Ｒ７は水素、ハロゲン、−ＮＯ２、−ＣＮ、−ＯＲ、−ＳＲ、−
Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−ＣＯ２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（
Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ）２、
−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＮＲ
）Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（＝ＮＲ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ＝ＮＯＲ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）
２、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２Ｒ、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、また
は任意で置換されたＣ１−１２脂肪族化合物である。特定の実施形態では、Ｒ７は水素で
ある。一部の実施形態では、Ｒ７はハロゲンである。特定の実施形態では、Ｒ７は−ＮＯ
２である。一部の実施形態では、Ｒ７は−ＣＮである。特定の実施形態では、Ｒ７は−Ｏ
Ｒである。一部の実施形態では、Ｒ７はＣ１−１２脂肪族化合物である。一部の実施形態
では、Ｒ７はＣ１−６脂肪族化合物である。
【０１６１】
一部の実施形態では、Ｒ８が存在する。他の実施形態では、Ｒ８は存在しない。一部の
実施形態では、Ｒ８は水素である。一部の実施形態では、Ｒ８はハロゲンである。一部の
実施形態では、Ｒ８は−ＯＲａである。一部の実施形態では、Ｒ８は任意で置換されたＣ
１−１２脂肪族化合物である。一部の実施形態では、Ｒ８はＣ１−６脂肪族化合物である
。一部の実施形態では、Ｒ８はＣ１−３脂肪族化合物である。
【０１６２】
一部の実施形態では、Ｒ９が存在する。他の実施形態では、Ｒ９は存在しない。一部の
実施形態では、Ｒ９は水素である。一部の実施形態では、Ｒ９はハロゲンである。一部の
実施形態では、Ｒ９は−ＯＲａである。一部の実施形態では、Ｒ９は任意で置換されたＣ
１−１２脂肪族化合物である。一部の実施形態では、Ｒ９はＣ１−６脂肪族化合物である
。一部の実施形態では、Ｒ９はＣ１−３脂肪族化合物である。
【０１６３】
一部の実施形態では、Ｒ１０は水素、ハロゲン、−ＮＯ２、−ＣＮ、−ＯＲ、−ＳＲ、
−Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−ＣＯ２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ
（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ）２
、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝Ｎ
Ｒ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（＝ＮＲ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ＝ＮＯＲ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ
）２、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２Ｒ、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、ま
たは任意で置換されたＣ１−１２脂肪族化合物である。一部の実施形態では、Ｒ１０は、
任意で置換されたフェニル、３−７員環の飽和または部分不飽和の単環式炭素環、窒素、
酸素またはイオウから独立して選択される１−２のヘテロ原子を有する３−７員環の飽和
または部分不飽和の複素環、または窒素、酸素またはイオウから独立して選択される１−
３のヘテロ原子を有する５−６員環のヘテロアリール環である。特定の実施形態では、Ｒ
１０は水素である。一部の実施形態では、Ｒ１０はハロゲンである。一部の実施形態では
、Ｒ１０はＣ１−１２脂肪族化合物である。一部の実施形態では、Ｒ１０はＣ１−６脂肪
族化合物である。
【０１６４】
一部の実施形態では、Ｒ１１は水素、ハロゲン、−ＮＯ２、−ＣＮ、−ＯＲ、−ＳＲ、
−Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−ＣＯ２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ
（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ）２
、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝Ｎ
Ｒ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（＝ＮＲ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ＝ＮＯＲ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ
）２、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２Ｒ、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、ま
たは任意で置換されたＣ１−１２脂肪族化合物である。一部の実施形態では、Ｒ１１は、
任意で置換されたフェニル、３−７員環の飽和または部分不飽和の単環式炭素環、窒素、
酸素またはイオウから独立して選択される１−２のヘテロ原子を有する３−７員環の飽和
または部分不飽和の複素環、または窒素、酸素またはイオウから独立して選択される１−
３のヘテロ原子を有する５−６員環のヘテロアリール環である。特定の実施形態では、Ｒ
１１は水素である。一部の実施形態では、Ｒ１１はハロゲンである。一部の実施形態では
、Ｒ１１はＣ１−１２脂肪族化合物である。一部の実施形態では、Ｒ１１はＣ１−６脂肪
族化合物である。
【０１６５】
本明細書で描かれる化合物については、負に荷電するリン酸塩が示される場合、本開示
はそのような化合物の遊離の形態及び塩の形態の双方、及びその互変異性体を熟考するこ
とが十分に理解されるであろう。一部の実施形態では、提供される化合物は遊離のリン酸
の電荷のバランスを取る１以上のプロトン化した窒素を有し得る。
【０１６６】
一部の実施形態では、本発明は式ＩＩの化合物または薬学上許容可能なその塩を提供す
る。
【化１０】
2019137692.tif 000013
式中、環Ａ、環Ｂ、Ｘａ、Ｘｂ、Ｘｃ、Ｘｄ、Ｘｅ、Ｘｆ、Ｘａ１、Ｘｂ１、Ｘ２、Ｘ３
、Ｗ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、及びＲ１１のそれぞれは上記で定
義された通りであり、本明細書のクラス及びサブクラスにて単一で及び組み合わせでの双
方で記載される。
【０１６７】
一部の実施形態では、提供される化合物は、
【化１１】
2019137692.tif 000014
以外である。
【０１６８】
一部の実施形態では、提供される化合物は式Ｉ−ａまたはＩＩ−ａのもの、
【化１２】
2019137692.tif 000015
または薬学上許容可能なその塩である。
【０１６９】
一部の実施形態では、提供される化合物は式ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ、ＶＩ、ＶＩＩ、ＶＩＩ
ＩまたはＩＸのもの、
【化１３】
2019137692.tif 000016
【化１４】
2019137692.tif 000017
または薬学上許容可能なその塩であり、式中、環Ａ、Ｘｃ、Ｘｄ、Ｘｅ、Ｘｆ、Ｒ１、Ｒ
２、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｘ２、及びＸ３のそれぞれは上記で定義された通りであり
、本明細書のクラス及びサブクラスにて単一で及び組み合わせでの双方で記載される。
【０１７０】
一部の実施形態では、提供される化合物は式Ｘ、ＸＩ、ＸＩＩ、ＸＩＩＩ、ＸＩＶ、Ｘ
ＶまたはＸＶＩのもの、
【化１５】
2019137692.tif 000018
【化１６】
2019137692.tif 000019
または薬学上許容可能なその塩であり、式中、環Ａ、Ｘｃ、Ｘｄ、Ｘｅ、Ｘｆ、Ｒ１、Ｒ
２、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｘ２、及びＸ３のそれぞれは上記で定義された通りであり
、本明細書のクラス及びサブクラスにて単一で及び組み合わせでの双方で記載される。
【０１７１】
一部の実施形態では、提供される化合物は、
【化１７】
2019137692.tif 000020
【化１８】
2019137692.tif 000021
または薬学上許容可能なその塩から選択され、式中、環Ａ、Ｘｃ、Ｘｄ、Ｘｅ、Ｘｆ、Ｒ
１、Ｒ２、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｘ２、及びＸ３のそれぞれは上記で定義された通り
であり、本明細書のクラス及びサブクラスにて単一で及び組み合わせでの双方で記載され
る。
【０１７２】
一部の実施形態では、提供される化合物は、
【化１９】
2019137692.tif 000022
【化２０】
2019137692.tif 000023
または薬学上許容可能なその塩から選択され、式中、環Ａ、Ｘｃ、Ｘｄ、Ｘｅ、Ｘｆ、Ｒ
１、Ｒ２、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｘ２、及びＸ３のそれぞれは上記で定義された通り
であり、本明細書のクラス及びサブクラスにて単一で及び組み合わせでの双方で記載され
る。
【０１７３】
一部の実施形態では、提供される化合物は、
【化２１】
2019137692.tif 000024
または薬学上許容可能なその塩から選択される。
【０１７４】
直前の段落で描かれた化合物は他の慣例を用いて描かれ得ることが十分に理解されるで
あろう。たとえば、以下の２つの化合物は化学構造及び立体化学において同等であると見
なされる。
【化２２】
2019137692.tif 000025
【０１７５】
一部の実施形態では、提供される化合物は単離された形態である。一部の実施形態では
、提供される化合物は純粋である。
【０１７６】
医薬組成物
提供される医薬組成物は、経口剤形、局所クリーム、局所貼付剤、イオントフォレーシ
スの形態、坐薬、鼻内スプレー及び吸入剤、点眼剤、眼内注入形態、デポー形態、と同様
に注射及び点滴用の溶液を含む種々の形態であることができる。医薬組成物を調製する方
法は当該技術分野で周知である。
【０１７７】
医薬組成物は通常、所望の治療効果を達成する一方で有害な副作用を回避するまたはで
きるだけ抑えるのに有効な量で本明細書で記載される活性剤を含有する。活性剤の薬学上
許容可能な製剤及び塩が本明細書で提供され、当該技術で周知である。ｃＧＡＳ調節因子
等の投与については、治療上有効であり、有害な副作用がほとんどないまたはない望まし
く投与される量が選択される。特定の疾患、障害または状態の治療に有効である治療用組
成物または医薬組成物の量は、疾患の性質及び重症度、作用の標的部位、対象の体重、対
象が従う特別の食事、使用される併用薬、投与経路及び当業者によって認識される他の因
子に左右される。投与量は、疾患の程度及び対象に由来する異なるパラメータのような従
来の因子に従って臨床家が適合させることができる。有効な用量は試験管内の試験系また
は動物モデルの試験系に由来する用量反応曲線から外挿され得る（たとえば、その内容全
体が参照によって本明細書に組み入れられるＵ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅ
ａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，  Ｆｏｏｄ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ａ
ｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ，  ａｎｄ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｄｒｕｇ  Ｅｖａｌｕ
ａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ｉｎ“Ｇｕｉｄａｎｃｅ  ｆｏｒ  Ｉｎｄｕｓ
ｔｒｙ：Ｅｓｔｉｍａｔｉｎｇ  Ｍａｘｉｍｕｍ  Ｓａｆｅ  Ｓｔａｒｔｉｎｇ  Ｄｏｓ
ｅ  ｉｎ  Ｉｎｉｔｉａｌ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｒｉａｌｓ  ｆｏｒ  Ｔｈｅｒａｐｅ
ｕｔｉｃｓ  ｉｎ  Ａｄｕｌｔ  Ｈｅａｌｔｈｙ  Ｖｏｌｕｎｔｅｅｒｓ”，Ｐｈａｒｍ
ａｃｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ，Ｊｕｌｙ  ２００５によって記載され
たように）。
【０１７８】
種々の送達系が知られており、本明細書で記載される活性剤またはそれを含む医薬組成
物を投与するのに使用することができる。
【０１７９】
本明細書で記載される医薬組成物は、腸管、消化管、硬膜外、経口、経皮、硬膜外（硬
膜外）、脳内（脳の中に）、脳室内（脳室の中に）、経皮（皮膚への塗布）、皮内（皮膚
自体の中に）、皮下（皮膚の下に）、鼻内投与（鼻を介して）、静脈内（静脈の中に）、
動脈内（動脈の中に）、筋肉内（筋肉の中に）、心臓内（心臓の中に）、骨内点滴（骨髄
の中に）、クモ膜下（脊柱管の中に）、腹腔内（腹膜内への点滴または注射）、膀胱内注
入、硝子体内（眼を介して）、陰茎海綿体内（陰茎の付け根の中に）、膣内投与、子宮内
、羊水外投与、経皮（全身分布のための無傷な皮膚を介した拡散）、吹送（吸引）、舌下
、口唇下、浣腸、点眼（結膜の中に）または点耳を含むが、これらに限定されない好適な
経路によって投与することができる。特定の実施形態では、組成物は、脳血管関門、血管
バリアまたは他の上皮バリアをそれが交差できるような方法で投与され得る。当該技術で
周知の他の送達系を、たとえば、水溶液、微細粒子またはマイクロカプセルにおけるカプ
セル化を介した、本明細書で記載される医薬組成物の送達に使用することができる。本発
明の医薬組成物は制御された放出系で送達することもできる。たとえば、ポリマー物質を
使用することができる（たとえば、Ｓｍｏｌｅｎ及びＢａｌｌ，Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  
Ｄｒｕｇ  Ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ，Ｄｒｕｇ  ｐｒｏｄｕｃｔ  ｄｅｓｉｇｎ
ａｎｄ  ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ，１９８４，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ；
Ｒａｎａｄｅ及びＨｏｌｌｉｎｇｅｒ，Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，
ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ  ｓｅｒｉｅｓ，２００３，
２ｎｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ，ＣＲＲＣ  Ｐｒｅｓｓを参照）。或いは、ポンプが使用され得
る（Ｓａｕｄｅｋら，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３２１：５７４（１９８９））。本明
細書で記載される組成物は、薬剤の制御放出を達成するのに有用な生分解性ポリマー、た
とえば、ポリ乳酸、ポリオルソエステル、架橋両親媒性ブロックコポリマー及びヒドロゲ
ル、ポリヒドロキシ酪酸、及びポリジヒドロピランのクラスにカップリングもされ得る。
【０１８０】
上述のように、医薬組成物は望ましくは薬学上許容可能なキャリアを含む。用語、キャ
リアは調節因子が共に投与される希釈剤、補助剤、賦形剤またはビヒクルを指す。そのよ
うな医薬キャリアには、たとえば、水及び、鉱物油、植物油（たとえば、大豆油またはコ
ーン油）、動物油または合成起源の油を含む油のような無菌の液体が挙げられる。水性の
グリセロール及びデキストロースの溶液並びに生理食塩水溶液も本発明の医薬組成物の液
体キャリアとして採用され得る。キャリアの選択は、たとえば、ペプチド、ペプチド誘導
体またはペプチド模倣体の性質、その溶解性及び他の生理的特性、並びに送達及び適用の
標的部位のような当該技術で十分に認識される因子に左右される。好適な医薬キャリアの
例は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ
Ｐｈａｒｍａｃｙ  ｂｙ  Ａｌｆｏｎｓｏ  Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ，２００３，第２１版
ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙにて記載されてい
る。さらに経口投与に好適なキャリアは当該技術で既知であり、たとえば、その開示が参
照によって本明細書に組み入れられる米国特許第６，０８６，９１８号、同第６，６７３
，５７４号、同第６，９６０，３５５号及び同第７，３５１，７４１号及びＷＯ２００７
／１３１２８６にて記載されている。
【０１８１】
医薬製剤に組み込まれ得るさらなる薬学上好適な物質には、傍細胞吸収を高めることを
意図したものを含む吸収増強剤、ｐＨ調節剤及び緩衝液、浸透圧調整剤、保存剤、安定剤
、抗酸化剤、界面活性剤、増粘剤、皮膚軟化剤、分散剤、風味剤、着色剤及び湿潤剤が挙
げられる。
【０１８２】
好適な医薬賦形剤の例には、水、グルコース、スクロース、ラクトース、グリコール、
エタノール、モノステアリン酸グリセロール、ゼラチン、デンプン粉（たとえば、米粉）
、胡粉、ステアリン酸ナトリウム、麦芽、塩化ナトリウム等が挙げられる。調節因子を含
む医薬組成物は溶液、カプセル、錠剤、クリーム、ジェル、粉末、徐放製剤等の形態を取
ることができる。組成物は、従来の結合剤及びトリグリセリドのようなキャリアによって
坐薬として製剤化することができる（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａ
ｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  ｂｙ  Ａｌｆｏｎｓｏ  Ｒ．Ｇｅｎ
ｎａｒｏ，２００３，第２１版  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃ
ｏｍｐａｎｙを参照）。そのような組成物は、対象に適正な投与の形態を提供できるよう
に、好適な量のキャリアと一緒に治療上有効な量の治療用組成物を含有する。製剤は、投
与の方式及び作用の標的部位（たとえば、特定の臓器または細胞型）に適合するように設
計される。
【０１８３】
本明細書で記載される活性剤を含む医薬組成物は中性または塩の形態として製剤化され
る組成物も含む。薬学上許容可能な塩には、遊離のアミノ基と共に生じるもの及び遊離の
カルボキシル基と反応するものが挙げられる。製薬業界で一般に使用される非毒性のアル
カリ金属、アルカリ土類金属及びアンモニウム塩には、ナトリウム、カリウム、リチウム
、カルシウム、マグネシウム、バリウム、アンモニウム及びプロタミン亜鉛塩が挙げられ
、それらは当該技術で周知の方法によって調製される。挙げられるのはまた、非毒性の酸
付加塩であり、それらは一般に本発明の化合物を好適な有機酸または無機酸と反応させる
ことによって調製される。代表的な塩には、臭化水素酸塩、塩酸塩、吉草酸塩、シュウ酸
塩、オレイン酸塩、ラウリル酸塩、ホウ酸塩、安息香酸塩、硫酸塩、重硫酸塩、酢酸塩、
リン酸塩、トシル酸塩、クエン酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、酒石酸塩、コハク酸塩
、ナプシル酸塩等が挙げられる。
【０１８４】
本発明に従って使用され得る充填剤または結合剤の例には、アカシア、アルギン酸、リ
ン酸カルシウム（二塩基）、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース
ナトリウム、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシ
プロピルメチルセルロース、デキストリン、デキストレート、スクロース、チロース、ア
ルファ化デンプン、硫酸カルシウム、アミロース、グリシン、ベントナイト、マルトース
、ソルビトール、エチルセルロース、リン酸水素二ナトリウム、リン酸二ナトリウム、ピ
ロ亜硫酸二ナトリウム、ポリビニルアルコール、ゼラチン、グルコース、グアーゴム、液
状グルコース、圧縮性糖、ケイ酸マグネシウムアルミニウム、マルトデキストリン、酸化
ポリエチレン、ポリメタクリレート、ポビドン、アルギン酸ナトリウム、トラガカント、
微細結晶セルロース、デンプン及びゼインが挙げられる。特定の実施形態では、充填剤ま
たは結合剤は微細結晶セルロースである。
【０１８５】
使用され得る崩壊剤の例には、アルギン酸、カルボキシメチルセルロース、カルボキシ
メチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルセルロース（低置換）、微細結晶セル
ロース、粉末化セルロース、コロイド状酸化ケイ素、ナトリウムクロスカルメロース、ク
ロスポビドン、メチルセルロース、ポラクリリンカリウム、ポビドン、アルギン酸ナトリ
ウム、デンプングリコール酸ナトリウム、デンプン、二亜硫酸二ナトリウム、二ナトリウ
ムエダタミル、エデト酸二ナトリウム、エチレンジアミン四酢酸二ナトリウム（ＥＤＴＡ
）架橋のポリビニルピロリドン、アルファ化デンプン、カルボキシメチルデンプン、ナト
リウムカルボキシメチルデンプン、微細結晶セルロースが挙げられる。
【０１８６】
潤滑剤の例には、ステアリン酸カルシウム、カノーラ油、パルミトステアリン酸グリセ
リル、水素添加植物油（Ｉ型）、酸化マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、鉱物油
、ポロキサマー、ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸フマ
ル酸ナトリウム、ステアリン酸、タルク及びステアリン酸亜鉛、二ヘプタン酸グリセリル
、ラウリル硫酸マグネシウム、ホウ酸、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、安息香酸
ナトリウム／酢酸ナトリウム（組み合わせで）、ＤＬ−ロイシンが挙げられる。
【０１８７】
シリカ流量調整剤の例には、コロイド状二酸化ケイ素、ケイ酸マグネシウムアルミニウ
ム及びグアーゴムが挙げられる。別の最も好まれるシリカ流量調整剤は二酸化ケイ素から
成る。
【０１８８】
安定剤の例には、アカシア、アルブミン、ポリビニルアルコール、アルギン酸、ベント
ナイト、リン酸二カルシウム、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロ
ース、コロイド状二酸化ケイ素、シクロデキストリン、モノステアリン酸グリセリル、ヒ
ドロキシプロピルメチルセルロース、三ケイ酸マグネシウム、ケイ酸マグネシウムアルミ
ニウム、プロピレングリコール、アルギン酸プロピレングリコール、アルギン酸ナトリウ
ム、カルナウバ蝋、キサンタンゴム、デンプン、ステアリン酸塩、ステアリン酸、ステア
リン酸モノグリセリド及びステアリルアルコールが挙げられる。
【０１８９】
一部の実施形態では、本発明は本明細書で記載される活性剤を含有する経口製剤を熟考
する。たとえば、本明細書で記載される医薬組成物はシクロデキストリンまたはシクロデ
キストリン誘導体を含み得る。シクロデキストリンは一般に１−＞４結合した５以上のα
−Ｄ−グリコピラノシド単位で構成される。通常、シクロデキストリンは環にて６〜８の
単位で多数のグルコース単量体を含有して錐体形状を生成する（α−シクロデキストリン
：６員環の糖環分子；β−シクロデキストリン：７員環の糖環分子；γ−シクロデキスト
リン：８員環の糖環分子）。例となるシクロデキストリン及びシクロデキストリン誘導体
は、そのそれぞれの内容全体が参照によって本明細書に組み入れられる米国特許第７，７
２３，３０４号、米国特許出願公開第２０１０／０１９６４５２号及び米国特許出願公開
第２０１０／０１４４６２４号にて開示されている。たとえば、一部の実施形態では、本
発明に係るシクロデキストリンはアルキル化シクロデキストリン、ヒドロキシアルキル化
シクロデキストリンまたはアシル化シクロデキストリンである。一部の実施形態では、シ
クロデキストリンはヒドロキシプロピルβ−シクロデキストリンである。例となるシクロ
デキストリン誘導体は、そのそれぞれの内容全体が参照によって本明細書に組み入れられ
るＳｚｅｊｔｌｉ，Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ，（１９９８），９８，１７４３−１７５３；
及びＳｚｅｎｔｅ，Ｌ．及びＳｚｅｊｔｌｉ，Ｊ．，Ａｄｖａｎｃｅ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌ
ｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖｉｅｗｓ，３６（１９９９）１７−２８にて記載されている。シクロ
デキストリン誘導体の例には、メチル化シクロデキストリン（たとえば、ＲＡＭＥＢ；無
作為メチル化β−シクロデキストリン）；ヒドロキシアルキル化シクロデキストリン（ヒ
ドロキシプロピル−β−シクロデキストリン及びヒドロキシプロピルγ−シクロデキスト
リン）；アセチル化シクロデキストリン（アセチル−γ−シクロデキストリン）；反応性
シクロデキストリン（クロロトリアジニルβ−シクロデキストリン）；及び分岐シクロデ
キストリン（グルコシル−及びマルトシルβ−シクロデキストリン）；アセチル−γ−シ
クロデキストリン；アセチル−β−シクロデキストリン、スルホブチル−βシクロデキス
トリン、硫酸化α−，β−及びγ−シクロデキストリン；スルホアルキル化シクロデキス
トリン；及びヒドロキシプロピルβ−シクロデキストリンが挙げられる。
【０１９０】
投薬
通常、０．００１〜１００ｍｇ／ｋｇ／日の範囲に及ぶ量での本明細書で記載される活
性剤が対象に投与される。たとえば、一部の実施形態では、約０．０１ｍｇ／ｋｇ／日〜
約２５ｍｇ／ｋｇ／日、約１ｍｇ／ｋｇ／日〜約２０ｍｇ／ｋｇ／日、０．２ｍｇ／ｋｇ
／日〜約１０ｍｇ／ｋｇ／日、約０．０２ｍｇ／ｋｇ／日〜約０．１ｍｇ／ｋｇ／日、ま
たは約１ｍｇ／ｋｇ／日〜約１００ｍｇ／ｋｇ／日が対象に投与される。一部の実施形態
では、約１０μｇ／ｋｇ／日、５０μｇ／ｋｇ／日、１００μｇ／ｋｇ／日、２００μｇ
／ｋｇ／日、３００μｇ／ｋｇ／日、４００μｇ／ｋｇ／日、５００μｇ／ｋｇ／日、６
００μｇ／ｋｇ／日、７００μｇ／ｋｇ／日、８００μｇ／ｋｇ／日、９００μｇ／ｋｇ
／日、または１０００μｇ／ｋｇ／日の量での本明細書で記載される活性剤が対象に投与
される。
【０１９１】
一部の実施形態では、化合物は、約１〜１，０００μｇ／ｋｇ／日（たとえば、約１〜
９００μｇ／ｋｇ／日、１〜８００μｇ／ｋｇ／日、１〜７００μｇ／ｋｇ／日、１〜６
００μｇ／ｋｇ／日、１〜５００μｇ／ｋｇ／日、１〜４００μｇ／ｋｇ／日、１〜３０
０μｇ／ｋｇ／日、１〜２００μｇ／ｋｇ／日、１〜１００μｇ／ｋｇ／日、１〜９０μ
ｇ／ｋｇ／日、１〜８０μｇ／ｋｇ／日、１〜７０μｇ／ｋｇ／日、１〜６０μｇ／ｋｇ
／日、１〜５０μｇ／ｋｇ／日、１〜４０μｇ／ｋｇ／日、１〜３０μｇ／ｋｇ／日、１
〜２０μｇ／ｋｇ／日、１〜１０μｇ／ｋｇ／日の範囲に及ぶ）の範囲に及ぶ有効用量で
投与される。一部の実施形態では、化合物は約１〜５００μｇ／ｋｇ／日の範囲に及ぶ有
効用量で投与される。一部の実施形態では、化合物は約１〜１００μｇ／ｋｇ／日の範囲
に及ぶ有効用量で投与される。一部の実施形態では、化合物は約１〜６０μｇ／ｋｇ／日
の範囲に及ぶ有効用量で投与される。一部の実施形態では、化合物は約１、２、４、６、
８、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、７５、１００、１５０、
２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、
７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０、または１、０００μｇ／ｋｇ／日か
ら選択される有効用量で投与される。
【０１９２】
一部の実施形態では、化合物の治療上有効な量は、約１０〜１，０００ｍｇ（たとえば
、約２０ｍｇ〜１，０００ｍｇ、３０ｍｇ〜１，０００ｍｇ、４０ｍｇ〜１，０００ｍｇ
、５０ｍｇ〜１，０００ｍｇ、６０ｍｇ〜１，０００ｍｇ、７０ｍｇ〜１，０００ｍｇ、
８０ｍｇ〜１，０００ｍｇ、９０ｍｇ〜１，０００ｍｇ、約１０〜９００ｍｇ、１０〜８
００ｍｇ、１０〜７００ｍｇ、１０〜６００ｍｇ、１０〜５００ｍｇ、１００〜１，００
０ｍｇ、１００〜９００ｍｇ、１００〜８００ｍｇ、１００〜７００ｍｇ、１００〜６０
０ｍｇ、１００〜５００ｍｇ、１００〜４００ｍｇ、１００〜３００ｍｇ、２００〜１０
００ｍｇ、２００〜９００ｍｇ、２００〜８００ｍｇ、２００〜７００ｍｇ、２００〜６
００ｍｇ、２００〜５００ｍｇ、２００〜４００ｍｇ、３００〜１０００ｍｇ、３００〜
９００ｍｇ、３００〜８００ｍｇ、３００〜７００ｍｇ、３００〜６００ｍｇ、３００〜
５００ｍｇ、４００ｍｇ〜１，０００ｍｇ、５００ｍｇ〜１，０００ｍｇ、１００ｍｇ〜
９００ｍｇ、２００ｍｇ〜８００ｍｇ、３００ｍｇ〜７００ｍｇ、４００ｍｇ〜７００ｍ
ｇ、及び５００ｍｇ〜６００ｍｇ）の範囲に及ぶ量であり得る。一部の実施形態では、化
合物は、約１０ｍｇ、５０ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３
００ｍｇ、３５０ｍｇ、４００ｍｇ、４５０ｍｇ、５００ｍｇ、５５０ｍｇ、６００ｍｇ
、６５０ｍｇ、７００ｍｇ、７５０ｍｇ、８００ｍｇの量またはそれを上回る量で存在す
る。一部の実施形態では、化合物は、約１，０００ｍｇ、９５０ｍｇ、９００ｍｇ、８５
０ｍｇ、８００ｍｇ、７５０ｍｇ、７００ｍｇ、６５０ｍｇ、６００ｍｇ、５５０ｍｇ、
５００ｍｇ、４５０ｍｇ、４００ｍｇ、３５０ｍｇ、３００ｍｇ、２５０ｍｇ、２００ｍ
ｇ、１５０ｍｇ、または１００ｍｇの量でまたはそれを下回る量で存在する。一部の実施
形態では、本明細書で記載される治療上有効な量は単回用量で提供される。一部の実施形
態では、本明細書で記載される治療上有効な量は１日で提供される。
【０１９３】
他の実施形態では、治療上有効な量は、たとえば、約０．００１ｍｇ／ｋｇ体重〜５０
０ｍｇ／ｋｇ体重、たとえば、約０．００１ｍｇ／ｋｇ体重〜４００ｍｇ／ｋｇ体重、約
０．００１ｍｇ／ｋｇ体重〜３００ｍｇ／ｋｇ体重、約０．００１ｍｇ／ｋｇ体重〜２０
０ｍｇ／ｋｇ体重、約０．００１ｍｇ／ｋｇ体重〜１００ｍｇ／ｋｇ体重、約０．００１
ｍｇ／ｋｇ体重〜９０ｍｇ／ｋｇ体重、約０．００１ｍｇ／ｋｇ体重〜８０ｍｇ／ｋｇ体
重、約０．００１ｍｇ／ｋｇ体重〜７０ｍｇ／ｋｇ体重、約０．００１ｍｇ／ｋｇ体重〜
６０ｍｇ／ｋｇ体重、約０．００１ｍｇ／ｋｇ体重〜５０ｍｇ／ｋｇ体重、約０．００１
ｍｇ／ｋｇ体重〜４０ｍｇ／ｋｇ体重、約０．００１ｍｇ／ｋｇ体重〜３０ｍｇ／ｋｇ体
重、約０．００１ｍｇ／ｋｇ体重〜２５ｍｇ／ｋｇ体重、約０．００１ｍｇ／ｋｇ体重〜
２０ｍｇ／ｋｇ体重、約０．００１ｍｇ／ｋｇ体重〜１５ｍｇ／ｋｇ体重、約０．００１
ｍｇ／ｋｇ体重〜１０ｍｇ／ｋｇ体重であり得る。一部の実施形態では、本明細書で記載
される治療上有効な量は単回用量で提供される。一部の実施形態では、本明細書で記載さ
れる治療上有効な量は１日で提供される。
【０１９４】
さらに他の実施形態では、治療上有効な量は、たとえば、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ体
重〜０．１ｍｇ／ｋｇ体重、たとえば、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ体重〜０．０９ｍｇ／
ｋｇ体重、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ体重〜０．０８ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０００１ｍ
ｇ／ｋｇ体重〜０．０７ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ体重〜０．０６ｍｇ
／ｋｇ体重、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ体重〜０．０５ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０００１
ｍｇ／ｋｇ体重〜約０．０４ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ体重〜０．０３
ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ体重〜０．０２ｍｇ／ｋｇ体重、約０．００
０１ｍｇ／ｋｇ体重〜０．０１９ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ体重〜０．
０１８ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ体重〜０．０１７ｍｇ／ｋｇ体重、約
０．０００１ｍｇ／ｋｇ体重〜０．０１６ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ体
重〜０．０１５ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ体重〜０．０１４ｍｇ／ｋｇ
体重、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ体重〜０．０１３ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０００１ｍｇ
／ｋｇ体重〜０．０１２ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ体重〜０．０１１ｍ
ｇ／ｋｇ体重、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ体重〜０．０１ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０００
１ｍｇ／ｋｇ体重〜０．００９ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ体重〜０．０
０８ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ体重〜０．００７ｍｇ／ｋｇ体重、約０
．０００１ｍｇ／ｋｇ体重〜０．００６ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ体重
〜０．００５ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ体重〜０．００４ｍｇ／ｋｇ体
重、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ体重〜０．００３ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０００１ｍｇ／
ｋｇ体重〜０．００２ｍｇ／ｋｇ体重であり得る。一部の実施形態では、治療上有効な量
は、０．０００１ｍｇ／ｋｇ体重、０．０００２ｍｇ／ｋｇ体重、０．０００３ｍｇ／ｋ
ｇ体重、０．０００４ｍｇ／ｋｇ体重、０．０００５ｍｇ／ｋｇ体重、０．０００６ｍｇ
／ｋｇ体重、０．０００７ｍｇ／ｋｇ体重、０．０００８ｍｇ／ｋｇ体重、０．０００９
ｍｇ／ｋｇ体重、０．００１ｍｇ／ｋｇ体重、０．００２ｍｇ／ｋｇ体重、０．００３ｍ
ｇ／ｋｇ体重、０．００４ｍｇ／ｋｇ体重、０．００５ｍｇ／ｋｇ体重、０．００６ｍｇ
／ｋｇ体重、０．００７ｍｇ／ｋｇ体重、０．００８ｍｇ／ｋｇ体重、０．００９ｍｇ／
ｋｇ体重、０．０１ｍｇ／ｋｇ体重、０．０２ｍｇ／ｋｇ体重、０．０３ｍｇ／ｋｇ体重
、０．０４ｍｇ／ｋｇ体重、０．０５ｍｇ／ｋｇ体重、０．０６ｍｇ／ｋｇ体重、０．０
７ｍｇ／ｋｇ体重、０．０８ｍｇ／ｋｇ体重、０．０９ｍｇ／ｋｇ体重、または０．１ｍ
ｇ／ｋｇ体重であり得る。特定の個体にとっての有効量は個体のニーズに応じて経時的に
変化することができる（たとえば、増えるまたは減る）。一部の実施形態では、本明細書
で記載される治療上有効な量は単回用量で提供される。一部の実施形態では、本明細書で
記載される治療上有効な量は１日で提供される。
【０１９５】
一部の実施形態では、本明細書で記載されるような化合物を含む製剤は単回用量として
投与される。一部の実施形態では、本明細書で記載されるような化合物を含む製剤は定期
的な間隔で投与される。「間隔」での投与は本明細書で使用されるとき、治療上有効な量
が定期的に（１回用量と区別されるように）投与されることを示す。間隔は標準の臨床技
術によって決定することができる。一部の実施形態では、本明細書で記載されるような化
合物を含む製剤は、２ヵ月に１回、毎月、月に２回、３週に１回、２週に１回、毎週、週
に２回、週に３回、毎日、１日２回、または６時間ごとに投与される。単一個体にとって
の投与間隔は固定された間隔である必要はないが、その個体のニーズに応じて経時的に変
化することができる。
【０１９６】
本明細書で使用されるとき、用語「２ヵ月に１回」は２ヵ月当たり１回の投与（すなわ
ち、２ヵ月ごとに１回）を意味し；用語「毎月」は１ヵ月に１回の投与を意味し；用語「
３週に１回」は３週間当たり１回の投与（すなわち、３週ごとに１回）を意味し；用語「
２週に１回」は２週間当たり１回の投与（すなわち、２週ごとに１回）を意味し；用語「
毎週」は１週間に１回の投与を意味し；用語「毎日」は１日当たり１回の投与を意味する
。
【０１９７】
一部の実施形態では、本明細書で記載されるような化合物を含む製剤は、無制限に定期
的な間隔で投与される。一部の実施形態では、本明細書で記載されるような化合物を含む
製剤は、定義された期間の間、定期的な間隔で投与される。一部の実施形態では、本明細
書で記載されるような化合物を含む製剤は定期的な間隔で、５年間、４年間、３年間、２
年間、１年間、１１ヵ月間、１０ヵ月間、９ヵ月間、８ヵ月間、７ヵ月間、６ヵ月間、５
ヵ月間、４ヵ月間、３ヵ月間、２ヵ月間、１ヵ月間、３週間、２週間、１週間、６日間、
５日間、４日間、３日間、２日間、または１日間投与される。
【０１９８】
使用方法
特定の実施形態では、提供される化合物は医療で有用である。一部の実施形態では、提
供される化合物は免疫性の疾患、障害または状態を治療することにおいて有用である。一
部の実施形態では、本発明は、それを必要とする対象に提供される化合物またはその医薬
組成物を投与することを含む、免疫性の疾患、障害または状態の治療または予防のための
方法を提供する。
【０１９９】
一部の実施形態では、免疫性の疾患、障害または状態は自己免疫性の疾患、障害または
状態である。特定の実施形態では、免疫性の疾患、障害または状態は、以下：自己免疫障
害（たとえば、糖尿病、ループス、多発性硬化症、乾癬、関節リウマチ）；炎症性障害（
たとえば、関節炎、骨盤炎症性疾患）；感染性疾患（たとえば、ウイルス感染（たとえば
、ＨＩＶ、ＨＣＶ、ＲＳＶ）、細菌感染、真菌感染、敗血症）；神経障害（たとえば、ア
ルツハイマー病、ハンチントン病、自閉症、デュシエンヌ筋ジストロフィー）；循環器障
害（たとえば、アテローム性硬化症、高コレステロール血症、血栓症、凝固障害、たとえ
ば、黄斑変性症のような血管形成障害）；増殖性障害（たとえば、癌、良性新生物）；呼
吸器障害（たとえば、慢性閉塞性肺疾患）；消化器障害（たとえば、炎症性大腸疾患、潰
瘍）；筋骨格障害（たとえば、線維筋痛、関節炎）；内分泌、代謝及び栄養の障害（たと
えば、糖尿病、骨粗鬆症）；泌尿器障害（たとえば、腎疾患）；精神障害（たとえば、鬱
病、統合失調症）；皮膚障害（たとえば、創傷、湿疹）；血液及びリンパ系の障害（たと
えば、貧血、血友病）；等の１以上を含むが、これらに限定されない種々の疾患、障害ま
たは状態のいずれかから成る群から選択される。一部の実施形態では、免疫性の疾患、障
害または状態はｃＧＡＳの活性化が原因となる、それによって持続される、またはそれに
関連する。一部の実施形態では、免疫性の疾患、障害または状態はＳＴＩＮＧの活性化が
原因となる、それによって持続される、またはそれに関連する。
【０２００】
一部の実施形態では、自己免疫性の障害または疾患は、急性播種性脳脊髄炎（ＡＤＥＭ
）、アジソン病、無ガンマグロブリン血症、円形脱毛症、筋委縮性側索硬化症（Ｇｅｈｒ
ｉｇ’ｓ病、運動ニューロン病）、強直性脊椎炎、抗リン脂質症候群、抗合成酵素症候群
、アトピー性アレルギー、アトピー性皮膚炎、自己免疫性再生不良性貧血、自己免疫性心
筋症、自己免疫性腸疾患、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性内耳疾患
、自己免疫性リンパ増殖性症候群、自己免疫性末梢神経障害、自己免疫性膵炎、自己免疫
性多内分泌症候群、自己免疫性プロゲステロン皮膚炎、自己免疫性血小板減少性紫斑症、
自己免疫性蕁麻疹、自己免疫性ブドウ膜炎、Ｂａｌｏ病／Ｂａｌｏ同心性硬化症、Ｂｅｈ
ｃｅｔ’ｓ病、Ｂｅｒｇｅｒ’ｓ病、Ｂｉｃｋｅｒｓｔａｆｆ’ｓ脳炎、Ｂｌａｕ症候群
、Ｂｕｌｌｏｕｓ類天疱瘡癌、Ｃａｓｔｌｅｍａｎ’ｓ病、Ｃｅｌｉａｃ病、Ｃｈａｇａ
ｓ病、慢性炎症性脱髄性多発性神経障害、慢性再発性多発性骨髄炎、慢性閉塞性肺疾患、
Ｃｈｕｒｇ−Ｓｔｒａｕｓｓ症候群、瘢痕性類天疱瘡Ｃｏｇａｎ症候群、寒冷凝集素症、
補体成分２欠乏症、接触皮膚炎、頭部動脈炎、ＣＲＥＳＴ症候群、クローン病（特発性炎
症性大腸疾患、「ＩＢＤ」）、クッシング症候群、皮膚白血球破砕性血管炎、Ｄｅｇｏ’
ｓ病、疱疹状皮膚炎、皮膚筋炎、Ｉ型糖尿病、びまん性皮膚全身性硬化症、Ｄｒｅｓｓｌ
ｅｒ’ｓ症候群、薬剤誘発性ループス、円盤状エリテマトーデス、湿疹、子宮内膜症、腱
付着部炎関連の関節炎、好酸球性筋膜炎、好酸球性胃腸炎、後天性表皮水疱症、結節性紅
斑、胎児赤芽球症、本態性混合型クリオグロブリン血症、Ｅｖａｎ’ｓ症候群、進行性骨
化性線維形成異常症、線維化性肺胞炎（または特発性肺線維症）、胃炎、消化管類天疱瘡
、糸球体腎炎、Ｇｏｏｄｐａｓｔｕｒｅ’ｓ症候群、Ｇｒａｖｅ’ｓ病、Ｇｕｉｌｌａｉ
ｎ−Ｂａｒｒｅ症候群（ＧＢＳ）、ハシモト脳症、ハシモト甲状腺炎、Ｈｅｎｏｃｈ−Ｓ
ｃｈｏｎｌｅｉｎ紫斑症、妊娠性疱疹、別名妊娠性類天疱瘡、汗腺膿瘍、Ｈｕｇｈｅｓ−
Ｓｔｏｖｉｎ症候群、低ガンマグロブリン血症、特発性炎症性脱髄疾患、特発性肺線維症
、特発性血小板減少性紫斑症、ＩｇＡ腎症、封入体筋炎、慢性炎症性脱髄性多発性神経障
害、間質性膀胱炎、若年性特発性関節炎、別名若年性関節リウマチ、カワサキ病、Ｌａｍ
ｂｅｒｔ−Ｅａｔｏｎ筋無力症候群、白血球破砕性血管炎、扁平苔癬、硬化性苔癬、線状
ＩｇＡ疾患（ＬＡＤ）、ルポイド肝炎、別名自己免疫肝炎、全身性エリテマトーデス、Ｍ
ａｊｅｅｄ症候群、Ｍｅｎｉｅｒｅ’ｓ病、顕微鏡レベルの多発性血管炎、Ｍｉｌｌｅｒ
−Ｆｉｓｈｅｒ症候群、Ｇｕｉｌｌａｉｎ−Ｂａｒｒｅ症候群を参照、混合型結合組織病
、限局性強皮症、Ｍｕｃｈａ−Ｈａｂｅｒｍａｎｎ病、別名急性痘瘡状苔癬状粃糠疹、多
発性硬化症、重症筋無力症、筋炎、発作性睡眠、視神経脊髄炎（また、Ｄｅｖｉｃ’ｓ疾
患）、神経性筋緊張病、眼瘢痕性類天疱瘡、オプソクローヌス・ミオクローヌス症候群、
Ｏｒｄ’ｓ甲状腺炎、回帰性リウマチ、ＰＡＮＤＡＳ（連鎖球菌に関連する小児自己免疫
性神経精神障害）、傍腫瘍性小脳変性症、発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）、Ｐａ
ｒｒｙ−Ｒｏｍｂｅｒｇ症候群、Ｐａｒｓｏｎａｇｅ−Ｔｕｒｎｅｒ症候群、扁平部炎、
尋常性天疱瘡、悪性貧血、静脈周囲脳脊髄炎、ＰＯＥＭＳ症候群、結節性多発動脈炎、リ
ウマチ性多発筋痛、多発性筋痛、原発性胆汁性肝硬変、原発性硬化性胆管炎、進行性炎症
性神経障害、乾癬、乾癬性関節炎、壊疽性膿皮症、赤芽球癆、Ｒａｓｍｕｓｓｅｎ’ｓ脳
炎、Ｒａｙｎａｕｄ現象、再発性多発性軟骨炎、Ｒｅｉｔｅｒ’ｓ症候群、脚不穏症症候
群、後腹膜線維化症、関節リウマチ、リウマチ熱、サルコイドーシス、統合失調症、Ｓｃ
ｈｍｉｄｔ症候群、Ｓｃｈｎｉｔｚｌｅｒ症候群、強膜炎、強皮症、血清病、シェーグレ
ン症候群、脊椎関節症、Ｓｔｉｌｌ’ｓ病、亜急性細菌性心内膜炎（ＳＢＥ）、Ｓｕｓａ
ｃ’ｓ症候群、Ｓｗｅｅｔ’ｓ症候群、シデナム舞踏病、ＰＡＮＤＡＳを参照、交感性眼
炎、全身性エリテマトーデス、Ｔａｋａｙａｓｕ’ｓ動脈炎、一過性動脈炎（「巨細胞動
脈炎」としても知られる）、血小板減少症、Ｔｏｌｏｓａ−Ｈｕｎｔ症候群、横断性脊髄
炎、潰瘍性結腸炎（特発性炎症性大腸疾患「ＩＢＤ」の２つの型の１つ）、混合型結合組
織疾患とは異なる未分化結合組織疾患、未分化脊椎関節症、蕁麻疹様血管炎、血管炎、白
斑及びＷｅｇｅｎｅｒ’ｓ肉芽腫症から選択される。
【０２０１】
特定の実施形態では、それを必要とする患者への化合物の投与はｃＧＡＳ活性の低下を
生じる。一部の実施形態では、それを必要とする患者への化合物の投与はＳＴＩＮＧ活性
の低下を生じる。
【０２０２】
一部の実施形態では、提供される方法で使用される化合物は化学合成によって調製され
る。
【０２０３】
特定の実施形態では、本発明は提供される化合物にｃＧＡＳを接触させることを含むｃ
ＧＡＳを阻害する方法を提供する。一部の実施形態では、本発明は提供される化合物を患
者に投与することを含む患者にてｃＧＡＳを阻害する方法を提供する。特定の実施形態で
は、本発明は提供される化合物にＳＴＩＮＧを接触させることを含むＳＴＩＮＧを阻害す
る方法を提供する。一部の実施形態では、本発明は提供される化合物を患者に投与するこ
とを含む患者にてＳＴＩＮＧを阻害する方法を提供する。
【０２０４】
特定の実施形態では、本発明はｃＧＡＳポリペプチドの活性を調節する方法を提供し、
該方法は、本明細書で記載される方法によって設計されたｃＧＡＳ調節因子にｃＧＡＳポ
リペプチドを接触させることを含み、調節剤はｃＧＡＳの既知の調節因子、基質または産
物ではない。一部の実施形態では、調節剤は提供される化合物である。
【０２０５】
キット
本発明は本発明の方法を好都合に及び／または効果的に実施するための種々のキットを
提供する。通常、キットは、ユーザーが対象の複数の治療を行う及び／または複数の実験
を行うのを可能にする十分な量及び／または数の成分を含むであろう。
【０２０６】
態様の１つでは、本発明は本発明の分子（上述のような化合物及び組成物）を含むキッ
トを提供する。一実施形態では、キットは１以上の機能的な抗体またはその機能断片を含
む。
【０２０７】
本発明のキットは、１以上のｃＧＡＭＰ親分子、またはその模倣体、類似体若しくは変
異体を含み得る。キットはまた本明細書で記載されるｃＧＡＳの変異体、誘導体または突
然変異体も含み得る。キットはさらに包装及び指示書及び／または製剤組成物を形成する
送達剤を含み得る。送達剤は、生理食塩水、緩衝化溶液、液体または本明細書で開示され
る送達剤を含み得る。
【０２０８】
一実施形態では、緩衝化溶液には塩化ナトリウム、塩化カルシウム、リン酸塩及び／ま
たはＥＤＴＡが含まれ得る。別の実施形態では、緩衝化溶液には、生理食塩水、２ｍＭの
カルシウムを伴う生理食塩水、５％スクロース、２ｍＭのカルシウムを伴う５％スクロー
ス、５％マンニトール、２ｍＭのカルシウムを伴う５％マンニトール、リンガーの乳酸塩
、塩化ナトリウム、２ｍＭのカルシウムを伴う塩化ナトリウム及びマンノースが含まれ得
るが、これらに限定されない（たとえば、その全体が参照によって本明細書に組み入れら
れる米国特許出願公開第２０１２０２５８０４６号を参照）。さらなる実施形態では、緩
衝溶液を沈殿させ得るまたは凍結乾燥させ得る。一貫した、再現性のある高い濃度の生理
食塩水または単純な緩衝液製剤を可能にするための各成分の量を変化させ得る。ある期間
にわたって及び／または種々の条件下で緩衝溶液にて化合物または組成物の安定性を高め
るためにも成分を変化させ得る。態様の１つでは、本発明は、標的細胞に導入された際、
付随するシグナル伝達経路を研究するのに有効な量で提供される、ｃＧＡＳ活性またはｃ
ＧＡＭＰシグナル伝達に関連する研究適用のためのキットを提供する。キットはさらに本
明細書で記載される第２のまたはさらなる化合物または組成物を含み得る。そのような第
２のまたはさらなる分子は免疫応答または炎症反応を調節してもよく、または１以上の治
療用分子を含んでもよい。一実施形態では、キットは少なくとも１つのｃＧＡＳポリペプ
チド及び少なくとも１つのｃＧＡＭＰ分子を含む。一実施形態では、本発明のキットは包
装及び指示書を含む。
【０２０９】
ｃＧＡＳ結晶構造
とりわけ、本発明は、本明細書で記載されるようなｃＧＡＳポリペプチドを含む結晶性
（すなわち、少なくとも１つの結晶を含有する）または結晶化可能な組成物を提供する（
補完物質を含む、Ｇａｏら．Ｃｅｌｌ、１５３，１０９４−１１０７（２０１３）も参照
のこと）。一部の実施形態では、そのような提供される組成物はｃＧＡＳポリペプチドか
ら成るまたは本質的に成る。一部の実施形態では、組成物は、それがたった１つのポリペ
プチド、１以上の溶媒及び任意で塩及び／または金属を含むのであれば、ｃＧＡＳポリペ
プチド「から成る」と見なされる。一部の実施形態では、そのような提供される組成物は
、１以上の他のポリペプチドのような１以上の他の剤（たとえば、１以上の潜在的なまた
は実際のｃＧＡＳ結合相手のポリペプチドまたは核酸）、及び／または１以上の相互作用
剤（たとえば、小分子）を含む。
【０２１０】
本発明はまたｃＧＡＳポリペプチド結晶及び／またはそのセットの構造情報及び／また
は解析も提供する。一部の実施形態では、そのような構造情報には、回折パターン及び／
または配位、と同様にデータセット、画像、モデル及び／またはそのまたはそれから生成
されたグラフ表示が挙げられるが、これらに限定されない。一部の実施形態では、そのよ
うなグラフ表示には、たとえば、空間充填モデル、分子表面表示、シェルまたは境界モデ
ル、リボンモデル、棒モデル及び／またはそれらの組み合わせが挙げられ得る。
【０２１１】
一部の実施形態では、提供される情報は、１以上の結合相手及び／または相互作用剤の
存在下または非存在下で互いに異なる構造間でまたは構造の間で認められる差異であるま
たは差異を含む。一部の実施形態では、提供される情報は、１以上の結合相手及び／また
は１以上の調節因子の存在下または非存在下で互いに異なる構造間でまたは構造の間で認
められる差異であるまたは差異を含む。
【０２１２】
一部の実施形態では、そのような構造情報及び／または解析は、有形的表現媒体（たと
えば、コンピュータで読み取り可能な媒体）または保存環境にて具体化され得る。従って
、本発明は、種々の適用のいずれかにて、たとえば、コンピュータシステムによってまた
はそれと共にｃＧＡＳポリペプチド結晶の構造情報と同様にその使用の具体的な実施形態
を提供する。たとえば、一部の実施形態では、そのような構造情報及び／または解析は、
コンピュータシステムまたはその上で実行するプログラムによってアクセスされてもよく
、それにまたはそれから転送されてもよく、及び／またはさもなければそれによって利用
されてもよい。
【０２１３】
構造に基づく薬剤設計
一部の実施形態では、本開示はｃＧＡＳ調節因子を特定する及び／または特徴付けるた
めのシステムを提供する。一部の実施形態では、本開示は
（ａ）少なくとも１つの潜在的な相互作用部位を含むｃＧＡＳ結晶の画像を提供する工程
と；
（ｂ）潜在的なｃＧＡＳ調節因子の構造要素である少なくとも１つの部分を画像にてドッ
キングさせる工程と；
（ｃ）潜在的な部分／相互作用部位の相互作用の１以上の特徴を評価する工程とを
含むｃＧＡＳ調節因子を設計するまたは特徴付ける方法を提供する。
【０２１４】
一部の実施形態では、少なくとも１つの潜在的な相互作用部位には、Ｓｅｒ１９９、Ｓ
ｅｒ４２０、Ｌｙｓ４０２、Ｇｌｕ２１１、Ａｓｐ２１３、Ａｓｐ３０７、Ｔｙｒ４２１
、Ａｒｇ３６４及びそれらの組み合わせから成る群から選択される部位が挙げられる。特
定の実施形態では、少なくとも１つの潜在的な相互作用部位には、Ｔｙｒ４２１、Ｔｈｒ
１９７、Ｓｅｒ３６６、Ｓｅｒ３６８、Ａｒｇ３６４及びそれらの組み合わせから成る群
から選択される部位が挙げられる。特定の実施形態では、少なくとも１つの潜在的な相互
作用部位には、Ｔｙｒ４２１、Ａｓｐ２１３、Ａｓｐ３０７、Ａｒｇ３６４及びそれらの
組み合わせから成る群から選択される部位が挙げられる。一部の実施形態では、少なくと
も１つの潜在的な相互作用部位にはＡｒｇ１６１が挙げられる。一部の実施形態では、調
節因子は本明細書で開示される化合物である。
【０２１５】
一部の実施形態では、１以上の特徴には、部分と潜在的な相互作用部位との間の空間的
な分離；潜在的な部分と相互作用部位の相互作用のエネルギー、及び／またはそれらの組
み合わせから成る群から選択される少なくとも１つの特徴が挙げられる。
【０２１６】
一部の実施形態では、方法はさらに、ｃＧＡＳ結晶の画像にドッキングされた部分を含
む潜在的なｃＧＡＳ調節因子の画像を提供する工程を含む。一部の実施形態では、方法は
さらに、結合した既知の調節因子、基質または産物を含むｃＧＡＳ結晶のそれと画像を比
較する工程を含む。
【０２１７】
コンピュータシステム
当業者によって十分に理解されるように、本開示を読んで、一部の態様では、本発明は
コンピュータで実施される発明での使用に理想的に適合する。図Ｓ１０で示すように、例
となるクラウドコンピューティング環境２４００の実施を示し、記載する。クラウドコン
ピューティング環境２４００には、１以上の資源提供者２４０２ａ、２４０２ｂ、２４０
２ｃ（まとめて２４０２）が含まれ得る。各資源提供者２４０２はコンピューティング資
源を含み得る。一部の実施形態では、コンピューティング資源には、データを処理するの
に使用されるハードウエア及び／またはソフトウエアが含まれ得る。たとえば、コンピュ
ーティング資源には、アルゴリズム、コンピュータプログラム及び／またはコンピュータ
アプリケーションを実行することが可能であるハードウエア及び／またはソフトウエアが
含まれ得る。一部の実施では、例となるコンピューティング資源には、保存能力及び検索
能力を伴ったアプリケーションサービス及び／またはデータベースが挙げられ得る。各資
源提供者２４０２はクラウドコンピューティング環境２４００における任意の他の資源提
供者２４０２に接続され得る。一部の実施では、資源提供者２４０２はコンピュータネッ
トワーク２４０８にわたって接続され得る。各資源提供者２４０２はコンピュータネット
ワーク２４０８にわたって１以上のコンピューティングデバイス２４０４ａ、２４０４ｂ
、２４０４ｃ（まとめて２４０４）に接続され得る。
【０２１８】
クラウドコンピューティング環境２４００には資源管理者２４０６が含まれ得る。資源
管理者２４０６は、コンピュータネットワーク２４０８にわたって資源提供者２４０２及
びコンピューティングデバイス２４０４に接続され得る。一部の実施では、資源管理者２
４０６は、１以上の資源提供者２４０２によるコンピューティング資源の１以上のコンピ
ューティングデバイス２４０４への提供を促進し得る。資源管理者２４０６は、特定のコ
ンピューティングデバイス２４０４からコンピューティング資源についての要求を受け取
り得る。資源管理者２４０６は、コンピューティングデバイス２４０４によって要求され
るコンピューティング資源を提供することが可能である１以上の資源提供者２４０２を特
定し得る。資源管理者２４０６は、資源提供者２４０２を選択してコンピューティング資
源を提供する。資源管理者２４０６は、資源提供者２４０２と特定のコンピューティング
デバイス２４０４との接続を円滑にし得る。一部の実施では、資源管理者２４０６は、特
定の資源提供者２４０２と特定のコンピューティングデバイス２４０４との接続を確立し
得る。一部の実施では、資源管理者２４０６は、要求されたコンピューティング資源によ
って特定のコンピューティングデバイス２４０４を特定の資源提供者２４０２にリダイレ
クトし得る。
【０２１９】
図Ｓ１１は、本開示で記載される技術を実施するのに使用することができるコンピュー
ティングデバイス２５００と可動式コンピューティングデバイス２５５０の例を示す。コ
ンピューティングデバイス２５００は、たとえば、ラップトップ、デスクトップ、ワーク
ステーション、パーソナルデジタル補助、サーバー、ブレードサーバー、大型汎用コンピ
ュータ及び他の適当なコンピュータのような種々の形態のデジタルコンピュータを表すよ
うに意図される。可動式コンピューティングデバイス２５５０は、たとえば、パーソナル
デジタル補助、携帯電話、スマートフォン、タブレットコンピュータ、及び他の類似のコ
ンピューティングデバイスのような種々の形態の可動式デバイスを表すように意図される
。ここで示す構成要素、その接続及び関係、及びその機能は例示のみとし、限定とはしな
いことにする。
【０２２０】
コンピューティングデバイス２５００には、プロセッサ２５０２、メモリ２５０４、保
存装置２５０６、メモリ２５０４と複数の高速拡張ポート２５１０を接続する高速インタ
ーフェース２５０８、及び低速拡張ポート２５１４と保存装置２５０６を接続する低速イ
ンターフェース２５１２が含まれる。プロセッサ２５０２、メモリ２５０４、保存装置２
５０６、高速インターフェース２５０８、高速拡張ポート２５１０及び低速インターフェ
ース２５１２のそれぞれは種々のバス用いて互いに連結され、共通のマザーボードにてま
たは適宜他の方法で搭載され得る。プロセッサ２５０２は、コンピューティングデバイス
２５００内でのメモリ２５０４または保存装置２５０６に保存された指示を含む実行のた
めの指示を処理し、たとえば、高速インターフェース２５０８に連結されたディスプレイ
２５１６のような外部入力／出力装置にてＧＵＩのためのグラフ情報を提示することがで
きる。他の実施では、複数のメモリ及びメモリの種類と共に、適宜、複数のプロセッサ及
び／または複数のバスが使用され得る。また、複数のコンピューティングデバイスが必要
な操作（たとえば、サーバーバンク、ブレードサーバーの群、または多プロセッサシステ
ム）の一部を提供する各デバイスと接続され得る。
【０２２１】
メモリ２５０４はコンピューティングデバイス２５００内で情報を保存する。一部の実
施では、メモリ２５０４は揮発性のメモリユニット（単数）またはユニット（複数）であ
る。一部の実施では、メモリ２５０４は不揮発性のメモリユニット（単数）またはユニッ
ト（複数）である。メモリ２５０４は、たとえば、磁気ディスクまたは光ディスクのよう
なコンピュータで読み取り可能な媒体の別の形態でもあり得る。
【０２２２】
保存装置２５０６はコンピューティングデバイス２５００に大量保存を提供することが
可能である。一部の実施では、保存装置２５０６は、たとえば、フロッピー（登録商標）
ディスク装置、光学ディスク装置またはテープ装置、フラッシュメモリまたは他の類似の
固体メモリ装置、または保存領域ネットワークまたは他の構成における装置を含む数々の
装置のようなコンピュータで読み取り可能な媒体であり得る、またはそれを含有し得る。
指示は情報キャリアにて保存することができる。指示は、１以上の処理装置（たとえば、
プロセッサ２５０２）によって実行される場合、たとえば、上述のもののような１以上の
方法を実施する。たとえば、コンピュータまたは機械で読み取り可能な媒体のような１以
上の保存装置（たとえば、メモリ２５０４、保存装置２５０６またはプロセッサ上のメモ
リ２５０２）によっても指示を保存することができる。
【０２２３】
高速インターフェース２５０８はコンピューティングデバイス２５００の帯域消費型操
作を管理する一方で低速インターフェース２５１２は低い帯域消費型操作を管理する。そ
のような機能の割り当ては例示に過ぎない。一部の実施では、高速インターフェース２５
０８はメモリ２５０４、ディスプレイ２５１６（たとえば、グラフィックプロセッサまた
は加速器を介して）及び高速拡張ポート２５１０に連結され、それは種々の拡張カード（
示さず）を許容し得る。実施では、低速インターフェース２５１２は保存装置２５０６及
び低速拡張ポート２５１４に連結される。種々のコミュニケーションポート（たとえば、
ＵＳＢ、Ｂｌｕｅｔｏｏｔｈ（登録商標）、Ｅｔｈｅｒｎｅｔ（登録商標）、ｗｉｒｅｌ
ｅｓｓ  Ｅｔｈｅｒｎｅｔ（登録商標））を含み得る低速拡張ポート２５１４は、１以上
の入力／出力装置、たとえば、キーボード、ポインティング装置、スキャナー、またはネ
ットワークアダプタを介してスイッチ若しくはルータのようなネットワーク形成装置に連
結され得る。
【０２２４】
図に示すように多数の異なる形態でコンピューティングデバイス２５００を実施し得る
。たとえば、標準のサーバー２５２０として、またはそのようなサーバーの群にて複数回
、それを実施し得る。加えて、ノート型パソコン２５２２のようなパソコンにてそれは実
施され得る。それはラックサーバーシステム２５２４の一部としても実施され得る。或い
は、コンピューティングデバイス２５００の成分を可動式コンピューティングデバイス２
５５０のような可動式デバイス（示さず）における他の成分と組み合わせ得る。そのよう
なデバイスのそれぞれは１以上のコンピューティングデバイス２５００及び可動式コンピ
ューティングデバイス２５５０を含有してもよく、システム全体は互いに通信する複数の
コンピューティングデバイスで構成され得る。
【０２２５】
可動式コンピューティングデバイス２５５０には、他の成分の中でプロセッサ２５５２
、メモリ２５６４、ディスプレイ２５５４のような入力／出力装置、通信インターフェー
ス２５６６、及び送受信機２５６８が含まれる。可動式コンピューティングデバイス２５
５０にも保存装置、たとえば、マイクロ装置または他の装置が提供されて追加の保存を提
供し得る。プロセッサ２５５２、メモリ２５６４、ディスプレイ２５５４、通信インター
フェース２５６６、及び送受信機２５６８のそれぞれは種々のバスを使用して互いに連結
され、成分の幾つかは共通のマザーボードにてまたは適宜他の方法で搭載され得る。
【０２２６】
プロセッサ２５５２は可動式コンピューティングデバイス２５５０内にてメモリ２５６
４に保存された指示を含めて指示書を実行することができる。プロセッサ２５５２は、別
々の及び複数のアナログ及びデジタルのプロセッサを含むチップのチップセットとして実
施され得る。プロセッサ２５５２は、たとえば、ユーザーのインターフェース、可動式コ
ンピューティングデバイス２５５０によるアプリケーションの実行、及び可動式コンピュ
ーティングデバイス２５５０によるワイヤレスの通信の制御のような可動式コンピューテ
ィングデバイス２５５０の他の成分の協調を提供する。
【０２２７】
プロセッサ２５５２は、ディスプレイ２５５４に連結された制御インターフェース２５
５８及びディスプレイインターフェース２５５６を介してユーザーと通信し得る。ディス
プレイ２５５４は、たとえば、ＴＦＴ（薄層トランジスタ液晶ディスプレイ）ディスプレ
イまたはＯＬＥＤ（有機発光ダイオード）ディスプレイ、または他の適当なディスプレイ
技術であり得る。ディスプレイインターフェース２５５６は、グラフ及び他の情報をユー
ザーに提示するためにディスプレイ２５５４を作動させるための適当な回路を含み得る。
制御インターフェース２５５８はユーザーからの指令を受け取り、それをプロセッサ２５
５２への服従に変換し得る。加えて、外部インターフェース２５６２は可動式コンピュー
ティングデバイス２５５０の他のデバイスとも近隣領域通信を可能にできるようにプロセ
ッサ２５５２との通信を提供し得る。外部インターフェース２５６２は、たとえば、一部
の実施では有線の通信を提供し、または他の実施ではワイヤレスの通信を提供してもよく
、複数のインターフェースも使用されてもよい。
【０２２８】
メモリ２５６４は可動式コンピューティングデバイス２５５０内で情報を保存する。メ
モリ２５６４は、コンピュータで読み取り可能な媒体（単数）若しくは媒体（複数）、揮
発性のメモリユニット（単数）若しくはユニット（複数）、または非揮発性のメモリユニ
ット（単数）若しくはユニット（複数）の１以上として実施することができる。拡張メモ
リ２５７４も提供され、たとえば、ＳＩＭＭ（単一インラインメモリモジュール）カード
インターフェースを含み得る拡張インターフェース２５７２を介して可動式コンピューテ
ィングデバイス２５５０に接続され得る。拡張メモリ２５７４は可動式コンピューティン
グデバイス２５５０のために余分な保存空間を提供してもよく、または可動式コンピュー
ティングデバイス２５５０のためのアプリケーションまたは他の情報を保存してもよい。
特に、拡張メモリ２５７４は上述の過程を実施するまたは補完する指示を含み、セキュリ
ティ情報も含み得る。従って、たとえば、拡張メモリ２５７４は可動式コンピューティン
グデバイス２５５０のためのセキュリティモジュールとして提供されてもよく、可動式コ
ンピューティングデバイス２５５０の安全な使用を可能にする指示でプログラムされ得る
。加えて、ハッキングできない方法でＳＩＭＭカード上で情報を特定することを配置する
ことのような追加の情報と共に、ＳＩＭＭカードを介して安全なアプリケーションが提供
され得る。
【０２２９】
メモリには、以下で議論されるように、たとえば、フラッシュメモリ及び／またはＮＶ
ＲＡＭメモリ（非揮発性のランダムアクセスメモリ）が挙げられ得る。一部の実施では、
指示は情報キャリアにて保存される。指示は、１以上の処理装置（たとえば、プロセッサ
２５５２）によって実行されると、上述のもののような１以上の方法を実施する。指示は
また、たとえば、１以上のコンピュータまたは機械で読み取り可能な媒体（たとえば、メ
モリ２５６４、拡張メモリ２５７４またはプロセッサ２５５２上のメモリ）のような１以
上の保存装置によって保存することもできる。一部の実施では、指示は伝播シグナルにて
、たとえば、送受信機２５６８または外部インターフェース２５６２によって受け取るこ
とができる。
【０２３０】
可動式コンピューティングデバイス２５５０は、必要に応じてデジタルシグナル処理回
路を含み得る通信インターフェース２５６６を介してワイヤレスで通信し得る。通信イン
ターフェース２５６６は種々のモードまたはプロトコールのもとで、たとえば、とりわけ
、ＧＳＭ（登録商標）音声電話（Ｇｌｏｂａｌ  Ｓｙｓｔｅｍ  ｆｏｒ  Ｍｏｂｉｌｅ  
ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ）、ＳＭＳ（Ｓｈｏｒｔ  Ｍｅｓｓａｇｅ  Ｓｅｒｖｉｃ
ｅ）、ＥＭＳ（Ｅｎｈａｎｃｅｄ  Ｍｅｓｓａｇｉｎｇ  Ｓｅｒｖｉｃｅ）、またはＭＭ
Ｓメッセージ交換（Ｍｕｌｔｉｍｅｄｉａ  Ｍｅｓｓａｇｉｎｇ  Ｓｅｒｖｉｃｅ）、Ｃ
ＤＭＡ（コード分割複数アクセス）、ＴＤＭＡ（時間分割複数アクセス）、ＰＤＣ（パー
ソナルデジタル携帯）、ＷＣＤＭＡ（登録商標）（広帯域コード分割複数アクセス）、Ｃ
ＤＭＡ２０００、またはＧＰＲＳ（Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｐａｃｋｅｔ  Ｒａｄｉｏ  Ｓｅｒ
ｖｉｃｅ）のもとで通信を提供し得る。そのような通信は、たとえば、ラジオ周波数を用
いて送受信機２５６８を介して生じ得る。加えて、短距離通信は、たとえば、Ｂｌｕｅｔ
ｏｏｔｈ（登録商標）、Ｗｉ−Ｆｉ（商標）、または他のそのような送受信機（示さず）
を用いて生じ得る。加えて、ＧＰＳ（全地球測位システム）レシーバーモジュール２５７
０は追加のナビゲーション及び位置に関連するワイヤレスデータを可動式コンピューティ
ングデバイス２５５０に提供してもよく、それは可動式コンピューティングデバイス２５
５０上で実行するアプリケーションによって適宜使用され得る。
【０２３１】
可動式コンピューティングデバイス２５５０は、音声コーデック２５６０を用いて可聴
性にも通信してもよく、それはユーザーからの音声情報を受け取り、それを利用可能なデ
ジタル情報に変換し得る。音声コーデック２５６０は同様に、たとえば、可動式コンピュ
ーティングデバイス２５５０の送受話器にてスピーカーを介してユーザーのための可聴性
の音声を生成し得る。そのような音声には音声通話が挙げられてもよく、記録された音声
が挙げられてもよく（たとえば、音声メッセージ、音楽ファイル等）、及び可動式コンピ
ューティングデバイス２５５０で操作するアプリケーションによって生成される音声も挙
げられてもよい。
【０２３２】
可動式コンピューティングデバイス２５５０は、図で示されるように多数の異なる形態
で実施され得る。たとえば、それは携帯電話２５８０として実施され得る。それはまた、
スマートフォン２５８２、パーソナルデジタル補助、または他の類似の可動式デバイスの
一部としても実施され得る。
【０２３３】
ここで記載されるシステム及び技術の種々の実施は、デジタル電子回路、集積回路、特
に設計されたＡＳＩＣ（アプリケーションに特異的な集積回路）、コンピュータのハード
ウエア、ファームウエア、ソフトウエア及び／またはそれらの組み合わせにて実現するこ
とができる。これらの種々の実施には、特定のまたは一般的な目的であり得る、連結され
て、保存システムである少なくとも１つの入力デバイス及び１つの出力デバイスからデー
タ及び指示を受け取り、データ及び指示をそれに伝達する少なくとも１つのプログラム可
能なプロセッサを含むプログラム可能なシステムで実行可能である及び／または解釈可能
である１以上のコンピュータプログラムでの実施を挙げることができる。
【０２３４】
これらのコンピュータプログラム（プログラム、ソフトウエア、ソフトウエアアプリケ
ーションまたはコードとしても知られる）はプログラム可能なプロセッサ用の機械命令を
含み、高レベルの手続き型プログラミング言語及び／またはオブジェクト指向プログラミ
ング言語及び／またはアセンブリ／機械言語にて実施することができる。本明細書で使用
されるとき、機械で読み取り可能な媒体及びコンピュータで読み取り可能な媒体は、機械
で読み取り可能なシグナルとして機械命令を受け取る機械で読み取り可能な媒体を含む、
機械命令及び／またはデータをプログラム可能なプロセッサに提供するのに使用されるコ
ンピュータプログラム産物、装置及び／またはデバイス（たとえば、磁気ディスク、光デ
ィスク、メモリ、プログラム可能な論理デバイス（ＰＬＤ））を指す。用語、機械で読み
取り可能なシグナルは機械命令及び／またはデータをプログラム可能なプロセッサに提供
するのに使用されるシグナルを指す。
【０２３５】
ユーザーとの相互関係を提供するために、ユーザーに情報を提示するためのディスプレ
イ装置（たとえば、ＣＲＴ（陰極線管）またはＬＣＤ（液晶ディスプレイ）モニター）及
びユーザーがコンピュータに入力を提供することができるキーボードと印刷装置（たとえ
ば、マウスまたはトラックボール）を有するコンピュータにて本明細書で記載されるシス
テム及び技法を実施することができる。他の種類のデバイスを用いて同様にユーザーとの
相互関係を提供することができ；たとえば、ユーザーに提供されるフィードバックは感覚
的なフィードバックの形態（たとえば、視覚フィードバック、聴覚フィードバックまたは
触覚フィードバック）であることができ、ユーザーからの入力は音響、音声または触知の
入力を含む任意の形態で受け取られ得る。
【０２３６】
バックエンド成分（たとえば、データサーバーとして）を含む、またはミドルウエア成
分（たとえば、アプリケーションサーバー）を含む、またはフロントエンド成分（たとえ
ば、それを介してユーザーがここで記載されるシステム及び技法の実施と相互関係するこ
とができる図式的なユーザーのインターフェースまたはウェブのブラウザーを有するクラ
イアントのコンピュータ）を含む、またはバックエンド成分、ミドルウエア成分若しくは
フロントエンド成分の組み合わせを含むコンピューティングシステムにてここで記載され
るシステム及び技法を実施することができる。デジタルデータ通信の形態または媒体（た
とえば、通信ネットワーク）によってシステムの成分を相互接続することができる。通信
ネットワークの例にはローカルエリアネットワーク（ＬＡＮ）、ワイドエリアネットワー
ク（ＷＡＮ）及びインターネットが挙げられる。
【０２３７】
コンピューティングシステムにはクライアント及びサーバーが含まれる。クライアント
及びサーバーは一般に互いに遠隔であり、通常、通信ネットワークを介して相互に関係す
る。クライアント及びサーバーの関係は各コンピュータ上で実行し、互いにクライアント
／サーバーの関係を有するコンピュータプログラムのお蔭で生じる。
【０２３８】
特定の実施形態では、本発明は、ｃＧＡＳの結晶構造またはその配位が具体化される及
び／または表示されるコンピュータ及びコンピュータで読み取り可能な媒体を含むシステ
ムを提供する。
【０２３９】
一部の実施形態では、本発明は、ｃＧＡＳ調節因子を設計する及び／または特徴付ける
方法を提供し、その方法は
（ｉ）提供されるシステムを用いてｃＧＡＳ調節因子の１以上の構造的特徴を評価する工
程と、
（ｉｉ）１以上の試験管内の、生体内のまたは細胞に基づくアッセイを行ってｃＧＡＳ調
節因子を特徴付ける工程とを含む。
【０２４０】
一部の実施形態では、方法はさらにｃＧＡＳ調節因子と既知のｃＧＡＳ調節因子、基質
または産物との間で競合実験を行う工程を含む。一部の実施形態では、方法はさらに、阻
害剤の三次元形状を定義する工程を含む。
【０２４１】
一部の実施形態では、本発明は、ｃＧＡＳ阻害剤の設計または特徴付けを行うために一
連の情報を含有し、ディスプレイユニットを含むユーザーインターフェースを有するコン
ピュータシステムを提供し、一連の情報は
（ｉ）ｃＧＡＳタンパク質を結合することが知られる部分へのｃＧＡＳタンパク質の結合
に関する情報を入力するための論理回路と；
（ｉｉ）ｃＧＡＳタンパク質を結合することが知られる部分へのｃＧＡＳタンパク質の結
合に基づいて候補ｃＧＡＳ阻害剤を設計するための論理回路と；
（ｉｉｉ）候補ｃＧＡＳ阻害剤へのｃＧＡＳタンパク質の結合に関する情報を判定するた
めの論理回路と；
（ｉｖ）工程（ｉｉｉ）での判定に基づいて候補ｃＧＡＳ阻害剤のｃＧＡＳ阻害特性に関
する結論を出すための論理回路とを含む。
【０２４２】
一部の実施形態では、本発明は、ディスプレイユニットを含むユーザーインターフェー
スを有する一般目的のコンピュータについて一連の情報を含有するコンピュータで読み取
り可能な保存媒体を提供し、一連の情報は
（ｉ）ｃＧＡＳタンパク質を結合することが知られる化学物質へのｃＧＡＳタンパク質の
結合に関する情報を入力するための論理回路と；
（ｉｉ）ｃＧＡＳタンパク質を結合することが知られる化学物質へのｃＧＡＳタンパク質
の結合に基づいて候補ｃＧＡＳ阻害剤を設計するための論理回路と；
（ｉｉｉ）候補ｃＧＡＳ阻害剤へのｃＧＡＳタンパク質の結合に関する情報を判定するた
めの論理回路と；
（ｉｖ）工程（ｉｉｉ）での判定に基づいて候補ｃＧＡＳ阻害剤のｃＧＡＳ阻害特性に関
する結論を出すための論理回路とを含む。
【０２４３】
一部の実施形態では、本発明は、ディスプレイユニットを含むユーザーインターフェー
スを有する一般目的のコンピュータについて一連の情報を含むコンピュータ間でインター
ネットを通じて伝播する電子シグナルまたは搬送波を提供し、一連の情報はディスプレイ
ユニットを含むユーザーインターフェースを有する一般目的のコンピュータについて一連
の情報を含有するコンピュータで読み取り可能な保存媒体を含み、一連の情報は、
（ｉ）ｃＧＡＳタンパク質を結合することが知られる化学物質へのｃＧＡＳタンパク質の
結合に関する情報を入力するための論理回路と；
（ｉｉ）ｃＧＡＳタンパク質を結合することが知られる化学物質へのｃＧＡＳタンパク質
の結合に基づいて候補ｃＧＡＳ阻害剤を設計するための論理回路と；
（ｉｉｉ）候補ｃＧＡＳ阻害剤へのｃＧＡＳタンパク質の結合に関する情報を判定するた
めの論理回路と；
（ｉｖ）工程（ｉｉｉ）での判定に基づいて候補ｃＧＡＳ阻害剤のｃＧＡＳ阻害特性に関
する結論を出すための論理回路とを含む。
【実施例】
【０２４４】
以下の配位は、当業者が精通し、本明細書で参照される表１〜７に対応するＲＣＳＢタ
ンパク質データバンクに寄託されている。補完物質を含めて、その内容全体が参照によっ
て本明細書に組み入れられるＧａｏら．Ｃｅｌｌ、１５３，１０９４−１１０７（２０１
３）も参照のこと。さらに、図１〜４、７及びＳ１〜Ｓ４を保証する文脈で、２０１３年
５月３日に出願された米国特許出願第６１／８１９，３６９号の表１〜７で提示されたデ
ータは参照によって本明細書に組み入れられる。
【表Ｅ１】
2019137692.tif 000026
【０２４５】
実施例１
結晶構造
タンパク質の発現及び精製
マウスｃＧＡＳをコードする遺伝子はＯｐｅｎ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社から購入した
。ｃＧＡＳの完全長及び残基１４７〜５０７に相当する配列を改変ｐＲＳＦＤｕｅｔ−１
ベクター（Ｎｏｖａｇｅｎ）に挿入したが、その中でｃＧＡＳはユビキチン様のプロテア
ーゼ（ＵＬＰ１）の切断部位によって先行するＨｉｓ６ＳＵＭＯタグから分離された。そ
の後、配列決定によって遺伝子配列を確認した。融合タンパク質をＢＬ２１（ＤＥ３）Ｒ
ＩＬ細胞株にて発現させた。ＯＤ６００でおよそ０．６に達するまで細胞を３７℃で増殖
させた。次いで温度を１８℃に移し、０．３ｍＭの最終濃度で培養培地にイソプロピルβ
−Ｄ−１−チオガラクトピラノシド（ＩＰＴＧ）を添加することによって細胞を誘導した
。誘導の後、細胞を一晩増殖させた。Ｎｉ−ＮＴＡ親和性カラムによって融合タンパク質
を精製した。４０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ、０．３ＭのＮａＣｌ、１ｍＭのＤＴＴ、ｐＨ
７．５を含有する緩衝液に対する透析の間にＵＬＰ１切断によってＨｉｓ６−ＳＵＭＯタ
グを取り除いた。透析の後、タンパク質試料をさらにヘパリンカラム、その後の１６／６
０Ｇ２００Ｓｕｐｅｒｄｅｘカラムによって分画した。ｃＧＡＳ（完全長）及びｃＧＡＳ
（１４７〜５０７）の最終試料は約３０ｍｇのタンパク質、２０ｍＭのＴｒｉｓ，３００
ｍＭのＮａＣｌ、１ｍＭのＤＴＴ、ｐＨ７．５を含有する。Ｓｅ／メチオニン置換したタ
ンパク質をＳｅ／メチオニン（Ｓｉｇｍａ）含有のＭ９培地で発現させ、野生型タンパク
質に用いたのと同じプロトコールを用いて精製した。突然変異体はすべてクローニングし
、野生型タンパク質の調製に用いたのと同じプロトコールを用いて精製した。
【０２４６】
結晶化
遊離な状態でのｃＧＡＳ（１４７〜５０７）の結晶化については、タンパク質を先ず約
１５ｍｇ／ｍｌに希釈し、次いで懸滴蒸気拡散法を用いることによって４℃にて等容量の
リザーバ溶液（０．１ＭのＨＥＰＥＳ、０．１ＭのＭｇＡｃ２、２０％のＰＥＧ３３５０
、ｐＨ７．６）と混合した。
【０２４７】
ｃＧＡＳ（１４７〜５０７）-ｄｓＤＮＡ二元複合体については、１：１．２のモル比
でタンパク質を１６-ｂｐのＤＮＡ（いずれかの末端で１−ｎｔ５’−オーバーハング：
上の鎖５’−ＡＡＡＴＴＧＣＣＧＡＡＧＡＣＧＡＡ−３’；下の鎖５’−ＴＴＴＣＧＴＣ
ＴＴＣＧＧＣＡＡＴＴ−３’）と直接混合することによって試料を調製した。１μｌのｃ
ＧＡＳ／ｄｓＤＮＡ溶液と１μｌのリザーバ溶液（０．１ＭのＭＥＳ、８％ＭＰＤ、ｐＨ
６．６）から混合された液滴から２０℃にて懸滴蒸気拡散法によって結晶を生成させた。
ｄｓＤＮＡとの複合体におけるＳｅ／メチオニン置換されたｃＧＡＳ（１４７〜５０７）
の結晶を同じ条件下で成長させた。
【０２４８】
１：１．２のモル比でタンパク質をｄｓＤＮＡと混合することによってｃＧＡＳ（１４
７〜５０７）−ｄｓＤＮＡ−ＡＴＰ、ｃＧＡＳ（１４７〜５０７）−ｄｓＤＮＡ−ＧＴＰ
及びｃＧＡＳ（１４７〜５０７）−ｄｓＤＮＡ−３’−ｄＧＴＰの三元複合体を調製し、
ＡＴＰ／ＧＴＰ／３’−ｄＧＴＰ（５ｍＭ）及びＭｇＣｌ２（１０ｍＭ）の存在下で室温
にて０．５時間インキュベートした。ｃＧＡＳ（１４７〜５０７）−ｄｓＤＮＡ−ＡＴＰ
複合体についての結晶は、１μｌのｃＧＡＳ−ｄｓＤＮＡ−ＡＴＰ溶液と１μｌのリザー
バ溶液（０．１ＭのＨＥＰＥＳ，０．２ＭのＣａＡｃ２，２０％のＰＥＧ３００，ｐＨ７
．７）から混合した液滴から２０℃にて懸滴蒸気拡散法によって生成した。ｃＧＡＳ（１
４７〜５０７）−ｄｓＤＮＡ−ＧＴＰ及びｃＧＡＳ（１４７〜５０７）−ｄｓＤＮＡ−３
’−ｄＧＴＰの複合体については、結晶は、等容量のリザーバ溶液（ＧＴＰについては：
０．１ＭのＮａＡｃ，１０％ＭＰＤ，ｐＨ５．０；３’−ｄＧＴＰについては：０．１Ｍ
のＮａＡｃ，１２％ＭＰＤ，ｐＨ５．２）を試料と混合することによって２０℃にて座滴
蒸気拡散法によって生成させた。
【０２４９】
１：１．２のモル比でタンパク質をｄｓＤＮＡと混合することによってｃＧＡＳ（１４
７〜５０７）−ｄｓＤＮＡ−ＧＭＰ＋ＡＴＰ及びｃＧＡＳ（１４７〜５０７）−ｄｓＤＮ
Ａ−ＧＴＰ＋ＡＴＰの三元複合体を調製し、次いで室温にてＧＭＰ／ＧＴＰ（５ｍＭ）、
ＡＴＰ（５ｍＭ）及びＭｇＣｌ２（１０ｍＭ）と共に０．５時間インキュベートした。ｃ
ＧＡＳ（１４７〜５０７）−ｄｓＤＮＡ−ＧＭＰ＋ＡＴＰ複合体の結晶は、等容量のリザ
ーバ溶液（０．１ＭのＭＥＳ，４０％ＭＰＤ，ｐＨ６．０）と混合したｃＧＡＳ−ｄｓＤ
ＮＡ−ＧＭＰ＋ＡＴＰ溶液の液滴から２０℃にて座滴蒸気拡散法によって生成させた。ｃ
ＧＡＳ（１４７〜５０７）−ＤＮＡ−ＧＴＰ＋ＡＴＰ複合体の結晶は、等容量のリザーバ
溶液（０．１ＭのＨＥＰＥＳ，０．２ＭのＭｇＣｌ２，３０％ＰＥＧ３００，ｐＨ７．５
）を試料と混合することによって２０℃にて座滴蒸気拡散法によって２週間かけて生成さ
せた。
【０２５０】
構造決定
遊離の状態の重原子派生結晶はリザーバ溶液にて５ｍＭのチメロサールに２４時間浸す
ことによって生成させた。遊離の状態（ネイティブ及びＨｇ派生の双方）及びＤＮＡに結
合した状態（ネイティブ及びＳｅ派生の双方）におけるｃＧＡＳ（１４７〜５０７）の回
折データセットをＢｒｏｏｋｈａｖｅｎ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙで集
めた。三元複合体すべてのデータセットはＡｒｇｏｎｎｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｌａｂｏ
ｒａｔｏｒｙでのＡｄｖａｎｃｅｄ  Ｐｈｏｔｏ  Ｓｏｕｒｃｅ（ＡＰＳ）にて回収した
。ＨＫＬ２０００プログラム（Ｏｔｗｉｎｏｗｓｋｉ  ａｎｄ  Ｍｉｎｏｒ，  １９９７
）を用いて回折データに索引を付け、それを統合し、スケール化した。プログラムＰＨＥ
ＮＩＸ（Ａｄａｍｓら，２０１０）にて実施されたように、単一波長異常分散法を用いて
遊離状態でのＨｇ置換されたｃＧＡＳ（１４７−５０７）及びＤＮＡを結合した状態での
Ｓｅ置換されたｃＧＡＳ（１４７−５０７）の構造を双方とも解いた。プログラムＣＯＯ
Ｔ（Ｅｍｓｌｅｙら，２０１０）を用いてモデル構築を行い、プログラムＰＨＥＮＩＸ（
Ａｄａｍｓら，２０１０）を用いて構造微細化を行った。データ収集の統計並びに遊離の
構造及び二元構造の微細化を表Ｓ１にて示す。検索モデルとして二元構造を用いてＰＨＡ
ＳＥＲ（ＭｃＣｏｙら，２００７）における分子置換法を用いて三元複合体すべての構造
を解いた。プログラムＣＯＯＴ（Ｅｍｓｌｅｙら，２０１０）を用いてモデル構築を行い
、プログラムＰＨＥＮＩＸ（Ａｄａｍｓら，２０１０）を用いて構造の微細化を行った。
データ収集の統計及び微細化を表Ｓ２及びＳ３にて示す。
【表Ｓ１】
2019137692.tif 000027
【表Ｓ２】
2019137692.tif 000028
【表Ｓ３】
2019137692.tif 000029
【０２５１】
環状ＧＭＰ／ＡＭＰシンターゼ（ｃＧＡＳ）の構造
我々は、遊離の状態における（図１Ａ及びＳ１Ｂ）ｃＧＡＳ（構築物１４７〜５０７）
（図Ｓ１Ａ）の２．０Åの結晶構造を解いた。タンパク質は、ヌクレオチジルトランスフ
ェラーゼスーパーファミリーのメンバーに特徴的な混合α／βトポロジー（図１Ａ；表Ｓ
１におけるx線統計）と共に二葉性の足場を採用する。ＤＡＬＩ検索は、ｃＧＡＳの折り
畳みに最も密接に似る、１５．１のＺスコアと３．８Åのｒ．ｍ．ｓ．ｄを持つヌクレオ
チジルトランスフェラーゼの折り畳み（ＰＤＢ：４ＡＴ８）（Ｗｏｌｋｏｗｉｃｚ及びＣ
ｏｏｋ，２０１２）を含有するＩＬＦ２／ＮＦ４５を同定した。加えて、ヒトのオリゴア
デニレート合成酵素１（ＯＡＳ１）（ＰＤＢ：１ＰＸ５）（Ｈａｒｔｍａｎｎら．２００
３）は１３．３のＺスコアと４．１Åのｒ．ｍ．ｓ．ｄ，を示した（図Ｓ１Ｃにおける立
体での遊離の状態でのｃＧＡＳとＯＡＳ１の比較）。
【０２５２】
結合したｄｓＤＮＡを伴ったｃＧＡＳの二元複合体の構造
我々は、１６ｂｐの相補性ｄｓＤＮＡ（いずれかの末端ｄの１ｎｔの５’オーバーハン
グを加える）に結合したｃＧＡＳを共結晶化し、２．１Åの分解能で（表Ｓ１におけるＸ
線統計）二元複合体の構造を解いた。二元複合体の構造を図１Ｂにて示す。二元ｃＧＡＳ
／ｄｓＤＮＡ複合体における分子間接触の大半（図１Ｃにて要約された）はｃＧＡＳとＤ
ＮＡの糖／リン酸主鎖との間であり（図Ｓ２Ａ、Ｂ）、塩基特異的な接触は１つに過ぎな
い（図Ｓ２Ｂ）。遊離の状態（明灰色）とｄｓＤＮＡに結合した状態（暗灰色）における
ｃＧＡＳの重ね合わせた構造を図１Ｄにて示す。触媒性のＧｌｕ２１１、Ａｓｐ２１３及
びＡｓｐ３０７の残基を含有するβシート断片（図１Ｅ）内に見ることができるように二
元ｄｓＤＮＡ複合体の形成には、同様にＳｅｒ１９９を含有する触媒ポケット内のループ
と螺旋の断片（図１Ｆ）についても、大きな立体構造変化がある。従って、βシート断片
は、塩基特異的な認識に関与するＡｒｇ１６１で９．２Åであるように（図Ｓ２Ｄ）、ル
ープ断片内のＴｒｙ及びＬｙｓ残基で１７．６Åまでであるように（図Ｓ２Ｅ）、複合体
形成の際、５．１Å移動する（図Ｓ２Ｃ）。同等に重要な、非常に狭い入口は遊離の状態
にてｃＧＡＳについて触媒ポケットに繋がる（図１Ｇ）一方で、この入口はＤＮＡとの二
元複合体にて十分に広がった（図１Ｈ）。ｄｓＤＮＡに結合した状態でのｃＧＡＳの折り
畳みは、ｄｓＤＮＡに結合した状態プラス２’−ｄＡＴＰ（ＰＤＢ：４ＩＧ８）（Ｄｏｎ
ｏｖａｎら．２０１３）にてＯＡＳ１について最近報告されたものに類似する（図Ｓ２Ｄ
における立体での複合体におけるタンパク質の比較；２つのタンパク質の折り畳みの間で
の１８．２のＺスコアと３．２Åのｒ．ｍ．ｓ．ｄ．）。
【０２５３】
ｄｓＤＮＡ及び結合したＡＴＰを伴ったｃＧＡＳの三元複合体の構造
我々は、ｄｓＤＮＡとＡＴＰに結合したｃＧＡＳを共結晶化し、２．４Åの分解能で三
元複合体の構造を解いた。ＡＴＰは三元複合体におけるｃＧＡＳの内部の中に位置する触
媒ポケットにて結合される（図２Ａ）。図２Ｂで示すように結合したＡＴＰを含有する三
元複合体（図２Ａ）とのｃＧＡＳとｄｓＤＮＡの二元複合体のそっくりな重ね合わせがあ
り、いずれかのβシート断片における本質的に最少の立体構造変化は、三元複合体形成の
際に触媒ポケット（図２Ｄ）を形成する触媒の酸性残基（図２Ｃ）またはループと螺旋の
断片を支える。唯一の顕著な変化は、三元複合体における他の２つの酸性残基に向かうＧ
ｌｕ２１１の側鎖の動きである（図２Ｃ）。ＡＴＰの三リン酸基は極性の側鎖（Ｓｅｒ１
９９、Ｓｅｒ４２０及びＬｙｓ４０２）に水素結合する一方で、２つの結合カチオン（暫
定的にＭｇ２＋に割り当てられる）は三リン酸と触媒酸性残基（Ｇｌｕ２１１、Ａｓｐ２
１３及びＡｓｐ３０７）との間での相互作用のために架橋の役割を果たす（図２Ｅ）。加
えて、結合したＡＴＰのアデニン環は、一方向ではＴｙｒ４２１の上に重なり、他方の方
向では、Ａｒｇ３６４のグアニジニウム基の上に部分的に重なり合う（図２Ｆ）。
【０２５４】
我々が三元複合体の２．４Åの構造で今回説明されない追加の弱い電子密度（図２Ｇに
おける暗灰色の輪郭）を観察することが言及されるべきである。追加の密度は、適度（３
０％）の占有率を持つ水分子またはＡＭＰ分子のいずれかであり得る。三元複合体の触媒
ポケットをのぞき込む結合したＡＴＰの図を図２Ｈにて示す。
【０２５５】
ｄｓＤＮＡ及び結合した５’ｐｐｐＧ（２’，５’）ｐＧを伴ったｃＧＡＳの三元複合
体の構造
我々は、ｄｓＤＮＡとＧＴＰに結合したｃＧＡＳを共結晶化し、１．９Åの分解能で三
元複合体の構造を解いた。三元複合体の構造を図３Ａ（表Ｓ２におけるＸ線統計）にて示
す。特に、結合したリガンド５’ｐｐｐＧｐＧ（図３Ａにおける空間を満たす表示での触
媒ポケットに位置すると示された）を得る触媒ポケットにてホスホジエステル結合の形成
が生じた。重要なことに、結合した５’ｐｐｐＧｐＧによる二元複合体から三元複合体へ
の事態の推移で最小限の立体構造変化が生じた（図Ｓ３Ａ〜Ｃ）。
【０２５６】
際立って、５’ｐｐｐＧｐＧのＧｐＧ結合は予想された３’，５’ではなく２’，５’
であり、加えて第１と第２のＧ残基はそれぞれｓｙｎ及びａｎｔｉのグリコシドねじれ配
向を採用する（図Ｓ３Ｄ）。５’−ｐｐｐＧ（２’，５’）ｐＧの三リン酸基は２つのカ
チオンと配位し（図３Ｂ）、第１のＧはＴｙｒ４２１に重なる一方で、第２のＧは、極性
側鎖を伴う水素結合（Ｔｈｒ１９７、Ｓｅｒ３６６及びＳｅｒ３６８）に対してＷａｔｓ
ｏｎ／Ｃｒｉｃｋ端を使用し、Ａｒｇ３６４を伴う水素結合に対してＨｏｏｇｓｔｅｅｎ
端を使用する（図３Ｃ）。観察された５’−ｐｐｐＧ（ｓｙｎ）（２’，５’）ｐＧ（ａ
ｎｔｉ）トポロジーは、三元複合体の１．９Å構造における反応のこの中間体の観察され
た明瞭な密度のために高い程度の信頼性で追跡することができる（図３Ｄにおける２Ｆｏ
−Ｆｃマップ、図Ｓ３Ｅで示すＦｏ−Ｆｃオミットマップの２つの図を伴う）。示される
三元複合体の触媒ポケットをのぞき込む結合した５’−ｐｐｐＧ（２’，５’）ｐＧの図
は図３Ｅである。我々は、ｃＧＡＳとｄｓＤＮＡを伴った各三元複合体にて結合した５’
−ｐｐｐＧ（２’，５’）ｐＧの構造を重ね合わせ、結合した５’−ｐｐｐＧ（２’，５
’）ｐＧの第１のＧが結合したＡＴＰの面に位置することを認めた（図Ｓ３Ｆ）。２つの
結合したカチオンは、オミットマップ（図Ｓ３Ｇ）及び各カチオンの周りの８面体の配位
（図Ｓ３Ｈ、Ｉ）に基づいて暫定的にＭｇ２＋に割り当てた。
【０２５７】
我々はまた、３’−ｄＧＴＰを伴った三元複合体の結晶を成長させ、この複合体（表Ｓ
２におけるＸ線統計）の２．１Å構造にて関連する５’−ｐｐｐｄＧ（２’，５’）ｐｄ
Ｇ中間体（３’，５’連結を形成することができない）の形成を観察した。
【０２５８】
ｄｓＤＮＡ及び結合した５’−ｐＧ（２’，５’）ｐＡを伴ったｃＧＡＳの三元複合体
の構造
我々は、ｄｓＤＮＡ、ＧＭＰ及びＡＴＰの存在下でｃＧＡＳを結晶化し、２．３Åの分
解能で複合体の構造を解いた（表Ｓ３における構造統計）。ＧＴＰではなくＧＭＰを用い
ることによって、我々は、第１のホスホジエステル結合の形成に続く中間体を捕捉するこ
とを期待し、実際、５’−ｐＧ（ｓｙｎ）（２’，５’）ｐＡ（ａｎｔｉ）の結合した線
状産物を観察した（図３Ｆ、Ｇ）。産物における三リン酸部分の非存在下ではＭｇ２＋カ
チオンは認められなかった。特に、ｄｓＤＮＡ、ＧＴＰ及びＡＭＰを伴ったｃＧＡＳの結
晶化の試みはほんのわずかしか回折しない（１２Åの分解能）結晶しか得られなかった。
我々は、図３Ｈで示すように中間体５’−ｐｐｐＧ（ｓｙｎ）（２’，５’）ｐＧ（ａｎ
ｔｉ）（暗灰色で）及び５’−ｐＧ（ｓｙｎ）（２’，５’）ｐＡ（ａｎｔｉ）（明灰色
で）の良好な重ね合わせを観察した。
【０２５９】
ｄｓＤＮＡ及び結合したｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］を伴ったｃＧＡ
Ｓの三元複合体の構造
我々は、ｄｓＤＮＡ、ＧＴＰ及びＡＴＰを伴ったｃＧＡＳを結晶化し、２．３Åの分解
能で複合体の構造を解いた。これらの結晶は、２、３日以内で成長した上述の他の結晶と
は異なって、成長するのに２週間かかった。三元複合体の構造を図４Ａにて示す（表Ｓ３
におけるＸ線統計）。最も予想外に、図４Ａにおける空間充填表示で示された結合した小
さなリガンドは環状ジヌクレオチドである。特に、二元複合体から結合した環状ジヌクレ
オチドを伴った三元複合体への事態の推移にて立体構造の変化は起きず、Ｇｌｕ２１１の
側鎖でさえ同一の配向を採用した（図Ｓ４Ａ〜Ｃ）。
【０２６０】
重要なことに、我々は、曖昧さなしで結合した環状ジヌクレオチドにおけるＧｐＡ段階
を追跡することができ（Ｇの３’−ＯＨを追跡できる）、この結合が２’，５’であるこ
とを立証することができる（図Ｓ４Ｄ）。他方で、結合した環状ジヌクレオチドにおける
ＡｐＧ段階での結合は、観察された密度に基づいて２’，５’または３’，５’のいずれ
かであり、構造に基づくのみでは確実に割り当てることができない。我々は、後で概略さ
れる証拠に基づいてＡｐＧ段階での３’，５’連結による純化を企て、ＧｐＡ段階におけ
る２’，５’連結及びＡｐＧ段階における３’，５’連結によって図４及びＳ４にて図面
を作成した。我々は、Ｇのアミノ基について観察された密度に基づいてＡからＧを区別す
ることができ、双方とも結合した環状ジヌクレオチド｛ｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’
，５’）ｐ］｝にてａｎｔｉ配置を採用することを言及することができる（図Ｓ４Ｄ）。
結合したｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］のＡ残基はＴｙｒ４２１に重なる
（図４Ｂ、Ｃ）一方で、結合したｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］のＧ残基
はＡｓｐ２１３、Ａｓｐ３０７及びＡｒｇ３６４の側鎖への水素結合を介してその場で係
留される（図４Ｂ、Ｃ）。さらに、Ａ残基及びＧ残基は部分的に互いに重なる。結合した
ｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］の２Ｆｏ−Ｆｃ電子密度は図４Ｄに示し、
オミットマップは図Ｓ４Ｅにて示す。三元複合体の触媒ポケットをのぞき込む結合したｃ
［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］の図は図４Ｅに示し、ｃ［Ｇ（２’，５’）
ｐＡ（３’，５’）ｐ］は開口部の一端に向かって結合する。我々は、ｃ［Ｇ（２’，５
’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］が三リン酸を含有しないことを考えて結合したカチオンも観
察せず、Ｇ塩基はＡｓｐ２１３及びＡｓｐ３０７と直接配位する（図４Ｃ）。我々は、ｃ
ＧＡＳとｄｓＤＮＡによる各三元複合体にて結合したｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，
５’）ｐ］とＡＴＰの構造を重ね合わせ、結合したｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５
’）ｐ］のＡが結合したＡＴＰの面に位置することを観察した（図Ｓ４Ｆ）。
【０２６１】
ＧｐＡ段階にて２’，５’連結を及びＡｐＧ段階にて３’，５’連結を強調するｃ［Ｇ
（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］の図を図４Ｆにて示す。我々は、５’−ｐＧ（２
’，５’）ｐＡ線状産物を伴った三元複合体では、それはＴｙｒ４２１に重なるＧ塩基で
ある（図３Ｇ及び４Ｇ）一方で、ｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］産物を伴
った三元複合体では、それはＴｙｒ４２１に重なるＡ塩基である（図４Ｃ、Ｈ）ことを言
及する。従って、線状産物及び環状最終産物は触媒ポケットの中で異なる配置を採用する
。
【０２６２】
実施例２
ｃＧＡＳ活性の生化学的な特徴付け
構造的な結果を検証するために、我々は薄層クロマトグラフィを用いた活性アッセイを
確立し（図Ｓ５）、精製した組換えの完全長の及び切り詰めたｃＧＡＳタンパク質を用い
てＡＴＰ及びＧＴＰからの環状ジヌクレオチドｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）
ｐ］の形成をモニターした。ｃＧＡＳは活性のためにｄｓＤＮＡ及びＭｇ２＋またはＭｎ
２＋を必要とした（図５Ａ〜Ｂ）。我々は、ｓｄＤＮＡの長さの関数としてｃ［Ｇ（２’
，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］の形成を調べ、３６ｂｐ以上のｓｄＤＮＡが最適である
ことを見いだしたが、結晶学が引き出す一部の活性には１６ｂｐのｄｓＤＮＡを用いた（
図Ｓ６Ａ）。二本鎖ＲＮＡ、ＤＮＡ／ＲＮＡ二本鎖または一本鎖のＤＮＡ若しくはＲＮＡ
は環状ジヌクレオチドの形成を刺激しなかった（図５Ｂ）。この実験で使用した特定のｓ
ｓＤＮＡについて検出された微量のｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］は配列
相補性の伸長に起因し、８−オキソグアニン（８−オキソＧ）によるＧの置換は予測され
た相互作用を不安定化し、残留ｃＧＡＳ活性を排除するのに十分だった。ｄｓＤＮＡ内で
の８−オキソＧによるグアニンの置換はｃＧＡＳ活性を変化させなかった。
【０２６３】
我々は複数の代謝回転の条件下でｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］を得る
ｃＧＡＳの活性を定量した。元々のＡＴＰ及びＧＴＰの７８％余り（ｓ．ｄ．±２．６％
、ｎ＝５）が４０分以内にｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］に変換され、０
．１９分−１の推定観察速度定数をもたらし、酵素分子当たり７５０を超える代謝回転を
含んだ。
【０２６４】
中間体形成の順を決定するために、我々は先ず、ＧＭＰまたはＧＤＰによってＧＴＰを
置換した（図５Ｃ）。双方の化合物はそれぞれ５’−ｐＧ（２’，５’）ｐＡ産物及び５
’−ｐｐＧ（２’，５’）ｐＡ中間体の形成をもたらし、５’−ｐｐＧ（２’，５’）ｐ
Ａのみがさらに反応し、少ない量の環状ジヌクレオチドを生じることができた。ＡＤＰま
たはＡＭＰによるＡＴＰの置換は産物または中間体の形成を生じず、ＡＤＰだけが（ＧＴ
Ｐと共に）低レベルのｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］の生成をもたらした
。
【０２６５】
ｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］の形成へのＧＴＰ及びＡＴＰの２’−ま
たは３’−ヒドロキシル（ＯＨ）基の関与を判定するために、我々は、ｃＧＡＳの基質と
して２’−及び３’−デオキシグアノシン三リン酸及び２’−及び３’−デオキシアデノ
シン三リン酸を調べた（図５Ｄ及びＳ６Ｂ）。３’−ｄＧＴＰとは異なって、２’−ｄＧ
ＴＰが環状ジヌクレオチドを形成できなかったということは、グアノシンの２’−ＯＨは
アデノシンの５’位でのα−リン酸との結合の形成に必要とされたことを示す。対照的に
、２’−ｄＡＴＰ＋ＧＴＰが顕著に多い産物を生じたけれども、２’−及び３’−ｄＡＴ
Ｐは双方とも環状ＧＡ−ジヌクレオチドの顕著に少ない形成をもたらした。双方の場合で
我々は、リボース中間体（５’−ｐｐｐＧ（２’，５’）ｐＡ、レーン１）すべてよりや
や速く移動する５’−ｐｐｐＧ（２’，５’）ｐｄＡ反応中間体（図５Ｄ、レーン２及び
３）の蓄積を認めた。
【０２６６】
実施例３
ｄｓＤＮＡ依存性のｃＧＡＳ活性によって形成される産物としてのｃ［Ｇ（２’，５’
）ｐＡ（３’，５’）ｐ］の同定
Ｊｏｎｅｓ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（Ｇａｆｆｎｅｙら．２０１０；Ｇａｆｆｎｅｙ  
ａｎｄ  Ｊｏｎｅｓ，２０１２）によって以前報告された手順を用いて、図Ｓ７で示す３
つの異性体ｃＧＡＭＰ分子、ｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（２’，５’）ｐ］（ＧｐＡ及び
ＡｐＧ段階での２’，５’連結）６、ｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］（Ｇ
ｐＡ段階での２’，５’及びＡｐＧ段階での３’，５’）１１及びｃ［Ｇ（３’，５’）
ｐＡ（３’，５’）ｐ］（ＧｐＡ及びＡｐＧ段階での３’，５’）１５の合成及び精製を
行った。スルー結合連続性を用いた異核ＮＭＲ解析から３つの異性体ｃＧＡＭＰ分子６、
１１及び１５（図Ｓ７）の独自性を検証した。ｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）
ｐ］についての実験ＮＭＲのデータを図Ｓ８にまとめ、表Ｓ４で列記された３つの異性体
ｃＧＭＰすべてについてプロトンと炭素の化学シフトを伴う。
【０２６７】
我々は、逆相高速液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）を用いてｄｓＤＮＡ依存性のｃＧ
ＡＳ活性によって生成される産物を解析し、化学的に合成されたｃ［Ｇ（３’，５’）ｐ
Ａ（３’，５’）ｐ］、ｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（２’，５’）ｐ］及びｃ［Ｇ（２’
，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］化合物とその溶出特性を比較した（図６Ａ及びＳ６Ｄ）
。目立ったピークは正確に２３．５分でＨＰＬＣシステムから一貫して溶出し、それはｃ
［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］の溶出特性に相当した。ｃ［Ｇ（３’，５’
）ｐＡ（３’，５’）ｐ］またはｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（２’，５’）ｐ］との同時
注入は、化学合成されたｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］との同時注入とは
異なって、ｃＧＡＳ反応産物が同時溶出しないことを明らかにした。
【０２６８】
試験管内で作製された環状ジヌクレオチドが結晶学的に決定された分子と一致すること
を明らかにするために、我々は、ＤＮＡ、ＡＴＰ及びＧＴＰと共に同時インキュベートさ
れた溶解されたｃＧＡＳ結晶をＨＰＬＣによって解析した（図６Ｂ）。前述同様に同時注
入された参照分子であるｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（２’，５’）ｐ］とは異なって、ｃ
［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］に相当するピークが認められた。さらに長い
保持時間の追加の同定されていないピークも見られた。たぶん、結晶化緩衝液及び／また
は添加剤を起源とするこれらの同定されない化合物はＨＰＬＣ解析に先立つ結晶の洗浄に
もかかわらず完全には取り除かれなかった。
【０２６９】
加えて、ｃＧＡＳが生成したｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］をＨＰＬＣ
によって精製し、一次元ＮＭＲ解析に供した。糖Ｈ１’の領域におけるそのＮＭＲスペク
トルは化学的に合成された標準のｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］のそれと
同一であり、化学的に合成されたｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（２’，５’）ｐ］及びｃ［
Ｇ（３’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］とは異なる（図６Ｃ）。従って、ＨＰＬＣ（図
６Ａ）及びＮＭＲ（図６Ｃ）の双方は独立してｃＧＡＳによって生成される産物がｃ［Ｇ
（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］であることを検証している。
【０２７０】
実施例４
ｃＧＡＳ突然変異体タンパク質の機能的な解析
我々は次に、試験管内でｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］を形成する及び
細胞にてＩ型インターフェロンの経路を刺激するその能力におけるｃＧＡＳでの突然変異
の生化学的な及び機能的な結果を解析した。我々は、共結晶構造がｄｓＤＮＡの結合また
はｃＧＡＳの活性に関与することを明らかにしているアミノ酸残基に相当するアラニン置
換突然変異を生成した。試験管内のｃＧＡＳ活性のアッセイについては、我々は６つの組
換え変異体ｃＧＡＳ形態を生成し、精製した；４つはｄｓＤＮＡ結合を除くと予測され；
２つの点突然変異体タンパク質は潜在的にカギとなる触媒残基でアラニンによって置換さ
れた。変異体ｃＧＡＳタンパク質とのＤＮＡのインキュベートは、２つの変異体（Ｒ１６
１Ａ、Ｓ１９９Ａ、図７Ａ）以外のすべてについてｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５
’）ｐ］をほとんど形成しなかったまたは形成しなかった。
【０２７１】
細胞におけるｃＧＡＳの機能に対する影響を評価するために、我々は、哺乳類細胞にお
ける発現のためにｃＧＡＳの追加のアラニン変異体を生成した。完全長のｃＧＡＳ変異体
をＳＴＩＮＧ及びＩＦＮ−βのルシフェラーゼレポーターと一緒にＨＥＫ２９３細胞にて
一時的に発現させた。このアッセイでは、ｃＧＡＳは同時形質移入されたＤＮＡプラスミ
ドにはめ込まれ、ＷＴのｃＧＡＳの発現は対照プラスミドに比べて１５倍近く高いルシフ
ェラーゼ活性を生じた（図７Ｂ）。ＤＮＡ塩基との直接的な相互作用にのみ関与するＡｒ
ｇ１６１を含むＤＮＡ結合残基の単一変異は、ｃＧＡＳ活性を損傷するには十分ではなか
った。しかしながら、いずれかのＤＮＡ鎖における２または３の連続するホスホジエステ
ルとの相互作用の除去（図１Ｃ、Ｓ２Ｂ〜Ｃ）は、低下したまたは完全に無効にされたｃ
ＧＡＳ機能を生じた（図７Ｂ）。触媒部位では、二価のカチオンの結合に影響する単一変
異Ｇｌｕ２１１、Ａｓｐ２１３またはＡｓｐ３０７はすべて非機能的ｃＧＡＳを生じた（
図７Ｃ）。さらに、ｃＧＡＳ活性の無効化は、（ｉ）ＡＴＰ（またはＧＴＰ）のγリン酸
の結合（Ｌｙｓ４０２、Ｓｅｒ４２０；図２Ｅ、３Ｂ）、（ｉｉ）ＡＴＰアデノシンの結
合（Ｇｌｕ３７１、Ｌｙｓ４２４；図２Ｆ）、または（ｉｉｉ）ＡＴＰ及びｃ［Ｇ（２’
，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］の塩基の積み重ね（Ａｒｇ３６４、Ｔｙｒ４２１；図２
Ｆ、４Ｂ）に関与する双方のアミノ酸残基の変異を必要としたが、これらの残基の単一変
異はｃＧＡＳの機能をやや損傷するに過ぎなかった（図７Ｃ）。Ｇｌｙ１９８及びＳｅｒ
１９９はリガンド結合の際に十分な立体構造変化を受けることが見いだされた高度に保存
された残基である（図１Ｆ、２Ｄ）。にもかかわらず、単一変異Ｇ１９８Ａ及びＳ１９９
ＡはｃＧＡＳの機能を激しく損傷することはないが、これらの位置の二重変異は機能的で
はなかった（図Ｓ６Ｅ）。同様に、高度に可動性のＧｌｙ１９８の立体的に制約されるプ
ロリンへの変換はｃＧＡＳ活性を無効にした（図Ｓ６Ｅ）。
【０２７２】
実施例５
複合体形成の際のｃＧＡＳにおける構造遷移、結合形成及び中間体の構造遷移に関する
研究
我々の構造研究は、ｃＧＡＳがｄｓＤＮＡの結合の際、顕著な立体構造変化を受け（図
１Ｄ）、それによってそれは触媒残基Ｇｌｕ２１１、Ａｓｐ２１３、Ａｓｐ３０７と同様
にＳｅｒ１９９を再配置する（図１Ｅ、Ｆ）一方で、同時に触媒ポケットに自由にアクセ
スする（図１Ｇ、Ｈ）という事実を強調している。要するに、ｃＧＡＳはｄｓＤＮＡをは
め込む場合にのみ触媒上要求にかなう立体構造を採用し、それによって細胞質ｄｓＤＮＡ
センサーとしてのその役割を説明する。それに反して、Ｇｌｕ２１１の側鎖に制約される
最小限に過ぎない立体構造変化は、ｃＧＡＳとｄｓＤＮＡの二元複合体からＡＴＰ（図２
Ｂ〜Ｄ）及びＧＴＰ（ポケットがオフ経路の中間体５’−ｐｐｐＧ（２’，５’）Ｇを含
有する場合；図Ｓ３Ａ〜Ｃ）を伴った三元複合体に事態が推移する場合に観察され、ＡＴ
Ｐ＋ＧＴＰを伴った三元複合体の形成（ポケットが産物ｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’
，５’）ｐ］を含有する場合、図Ｓ４Ａ〜Ｃ）の際、Ｇｌｕ２１１の側鎖でさえ、変化は
観察されない。
【０２７３】
触媒ポケットにおけるホスホジエステル結合の形成
構造と機能の実験は双方とも、追加の成分の非存在下でｄｓＤＮＡのｃＧＡＳへの結合
の後、触媒ポケットにてホスホジエステル結合の形成を立証した。ｄｓＤＮＡとＧＴＰの
存在下でのｃＧＡＳに関する構造研究は線状反応中間体５’−ｐｐｐＧ（２’，５’）ｐ
Ｇの蓄積を同定した（図３Ｂ、Ｃ）一方で、ＧＭＰとＡＴＰの存在下で線状反応産物５’
−ｐＧ（２’，５’）ｐＡの蓄積を同定した。特定の理論に制約されることを望まないが
、第１のＧがｓｙｎであり、距離が第２のＧの２’−ＯＨ（または３’−ＯＨ）と三リン
酸部分のα−リン酸の間で長いことを考えると、前者の中間体はオフ経路であるので、環
状産物を形成する第２のホスホジエステル結合の形成について損傷されると考えられる。
にもかかわらず、これらの結果は、ｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］の形成
が、環状ジヌクレオチドを得るための順次のホスホジエステル結合の形成を含む段階的な
方法で生じる可能性があることを示唆している。それに反して、ｄｓＤＮＡ、ＧＴＰ及び
ＡＴＰの存在下でのｃＧＡＳに関する構造試験は、中間体の蓄積なしで且つ順次のホスホ
ジエステル結合の対の形成を含むオン経路反応と矛盾せずにｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（
３’，５’）ｐ］（図４Ｂ、Ｃ）の形成を生じた。
【０２７４】
結合したｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］のＧ残基及びＡ残基の位置決め
ｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］のＧ残基及びＡ残基はｃＧＡＳとｄｓＤ
ＮＡを伴った三元複合体の構造にて異なる位置を採用する。結合したｃ［Ｇ（２’，５’
）ｐＡ（３’，５’）ｐ］のＡ残基はＴｙｒ４２１に重なり（図４Ｂ）、ＡＴＰ複合体（
図２Ｆ）におけるアデニン及び５’−ｐｐｐＧ（２’，５’）ｐＧ（図３Ｃ）と５’−ｐ
Ｇ（２’，５’）ｐＡ（図３Ｇ）の複合体における第１の塩基を占有する。結合したｃ［
Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］のＡ残基は分子間水素結合に関与しないのでピ
リミジン（ＣまたはＵ）残基によってさえ置き換えられる可能性がある。それに反して、
部分的にＡ残基と重なる結合したｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］のＧ残基
は、そのＷａｔｓｏｎ／Ｃｒｉｃｋ及びＨｏｏｇｓｔｅｅｎの端（図４Ｂ、Ｃ）を含む分
子間水素結合のネットワークを形成し、他の３つの塩基（Ｃ、Ａ及びＵ）のいずれによっ
ても置き換えることができない。従って、ｃＧＡＳ−結合のポケットはＧとＡの間で区別
するので独特の配向でｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］を結合することがで
きる異なる認識要素を有する。
【０２７５】
結晶学的なデータに一致して、生化学的な結果は、ｃＧＡＳとこの塩基の間で構造に認
められる複雑なアミノ酸の相互作用と矛盾することなく、ＧＴＰに対する強い優先性を示
す。ＧＴＰのみとのｃＧＡＳのインキュベートは、ＧＴＰにＣＴＰまたはＵＴＰのいずれ
かを加えた場合と同様に、環状ジヌクレオチドの形成をもたらすことができる（図Ｓ６Ｃ
）。ＡＴＰのみでは環状産物または中間体産物は得られないが、ＵＴＰとのインキュベー
トが一部の環状産物の形成を生じるということは、はるかに低い反応速度ではあるが、Ｕ
ＴＰもＧＴＰを置換することができることを示唆している。合わせて、これらの知見は、
ｃＧＡＳが第１のグアノシンに比べて第２のヌクレオチドについてさらに緩和された要件
を有することを示している。
【０２７６】
線状５’−ｐＧ（２’，５’）ｐＡ産物と環状ｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’
）ｐ］産物の構造的な比較
我々は、オフ経路の線状５’−ｐＧ（ｓｙｎ）（２’，５’）ｐＡ（ａｎｔｉ）産物（
図３Ｆ、Ｇ）と環状５’−ｐＧ（ａｎｔｉ）（２’，５’）Ａ（ａｎｔｉ）産物（図４Ｂ
、Ｃ）の間で触媒ポケットの中での配置で著しい差異を観察している。前者の場合、Ｔｙ
ｒ４２１に重なるのはＧ塩基である（図３Ｇ）が、後者の場合、Ｔｙｒ４２１に重なるの
はＡ塩基である（図４Ｃ）。線状５’−ｐＧ（２’，５’）ｐＡを図４Ｇで示し、環状ｃ
［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］を図４Ｈで示す場合、２つの配置を立体で比
較する。これは、中間体が環化反応に先立って触媒ポケットの中で完全なフリップオーバ
ーによってその配向を再配置しなければならない可能性があることを暗示している。これ
は、触媒ポケットに並ぶ３つの塩基性（Ｇｌｕ２１１、Ａｓｐ２１３及びＡｓｐ３０７）
及び１つの極性（Ｓｅｒ１９９）のアミノ酸から判断して、触媒残基の単一セットしかな
いので、第１のホスホジエステル結合の形成に続いて中間体は環化を完了するために第２
のホスホジエステル結合の形成を円滑にするように並び直さなければならない可能性があ
るので、さほど驚くべきではあり得ない。
【０２７７】
ホスホジエステル結合
細胞質ｄｓＤＮＡセンサーｃＧＡＳによって生成されるセカンドメッセンジャーとして
の環状ＧＡＭＰの同定をもたらす早期の研究の明瞭な前提（Ｓｕｎら．２０１３；Ｗｕら
．２０１３）は、双方のホスホジエステル結合が３’，５’の性質のものであるというこ
とだった。そのような３’，５’連結はＳＴＩＮＧ（Ｙｉｎら、２０１０；Ｏｕｙｇａｎ
ｇら．２０１２；Ｈｕａｎｇら．２０１２；Ｓｈｕら．２０１２）及びリボスイッチ（Ｓ
ｍｉｔｈら．２００９；Ｋｕｌｓｈｉｎａら．２００９）の双方に結合する細菌のセカン
ドメッセンジャーｃ−ジ−ＧＭＰの構造で以前観察されている。にもかかわらず、利用さ
れた質量分光分析のアプローチ（Ｗｕら．２０１３）は環状ＧＡＭＰのホスホジエステル
結合の一方または双方について２’，５’連結と３’，５’連結との間で区別することが
できない。
【０２７８】
オフ経路の産物が触媒ポケットで生じる場合の、ｃＧＡＳ、ｄｓＤＮＡ及びＧＴＰの構
造から現れた２’，５’連結の最初の指摘は５’−ｐｐｐＧ（２’，５’）ｐＧ結合を示
した（図３Ｂ、Ｃ）。加えて、ｐＧ（２’，５’）ｐＡはｃＧＡＳ、ｄｓＤＮＡ及びＧＭ
Ｐ＋ＡＴＰの構造で認められた（図３Ｆ、Ｇ）。さらに重要なことに、２’，５’連結も
ｃＧＡＳ、ｄｓＤＮＡ及びＧＴＰ＋ＡＴＰの構造における触媒ポケットでの結合したｃ［
Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］産物のＧｐＡ段階について認められた（図４Ｂ
、Ｃ）。
【０２７９】
我々の当初の生化学的な解析は、ＧＴＰとＡＴＰの間での２’，５’連結が、グアノシ
ンに戻るアデノシンの環化に先立って先ず起きることを示した。この証拠はさらに、２’
−ｄＡＴＰの２’−ｄＧＴＰとのインキュベートが環状反応産物を形成するように反応し
ないという所見によって支持された（図Ｓ６）。第２の段階では、２’−ｄＡＴＰの利用
について目に見える優先性はあったけれども、アデノシンの２’または３’ＯＨを介した
環状ジヌクレオチドの形成は、酸素の除去を介して他の位置が遮断された場合でさえ、進
行することができる。いずれの場合も環状ジヌクレオチドの生成が非常に不十分であると
いうことは、双方の位置が効率の高いリン酸の加水分解及び環化について遷移状態の形成
に関与し得ることを示唆している。この理解しにくい結果は、アデノシンからグアノシン
への接続に関する三元構造のデータと併せて、ｃＧＡＳが最終的に環化について２’，５
’連結または３’，５’連結を生成するのに優先性を有するのかどうかをさらに調べるよ
うに我々を駆り立てた。
【０２８０】
我々は、２つの環状ＧＡジヌクレオチド参照分子（双方とも２’，５’連結または双方
とも３’，５’連結）とは異なり、ｄｓＤＮＡ依存性のｃＧＡＳ活性の産物としてのｃ［
Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］と一致する単一のＨＰＬＣピークを観察した（
図６Ａ）。この結論を独立したＮＭＲ試験から検証した（図６Ｃ）。環状ジヌクレオチド
の生物学的生産は原核細胞から真核細胞まで進化的に保存されていると思われるが、化学
的な連結に基づくその形成ははっきりと異なる。ｃＧＡＳの場合、ｃ［Ｇ（２’，５’）
ｐＡ（３’，５’）ｐ］の形成はＯＡＳによって生成される２’，５’オリゴアデニレー
トに類似すると思われるが、細菌のシクラーゼによって生成される３’，５’ジヌクレオ
チド連結（Ｓａｄｌｅｒ及びＷｉｌｌｉａｍｓ，２００８；Ｋｏｄｙｍら．２００９；Ｄ
ｏｎｏｖａｎら．２０１３）にも類似すると思われる。
【０２８１】
ｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］における２’，５’（ＧＡ段階）連結及
び３’，５’（ＡＧ段階）の連結の潜在的な利益
何故ｃＧＡＳが２’，５’（ＧｐＡ段階）及び３’，５’（ＡｐＧ段階）の環状ＧＡジ
ヌクレオチドの双方を生成するのを好むのかは明らかではない。２’，５’ホスホジエス
テル結合は稀であり、そのような連結を加水分解できることが知られているヌクレアーゼ
はほとんどない（Ｋｕｂｏｔａら．２００４）。特定の理論によって束縛されることを望
まないで、２’，５’連結は、細胞にて大きな安定性を助長してセカンドメッセンジャー
の効果的な伝達を可能にし得るが、３’，５’連結は多数の従来のエンドヌクレアーゼに
よる分解を促進して長いインターフェロンの応答を防ぐ。総合すれば、我々の構造と機能
の研究は、後生動物のｃＧＡＭＰの化学的性質を同定し、Ｉ型インターフェロン経路を活
性化するセカンドメッセンジャーにおける２’，５’連結の役割を強調している。
【０２８２】
ｃＧＡＳ−ｄｓＤＮＡ結合変異体の意味
構造研究によって、ｃＧＡＳ−ｄｓＤＮＡ複合体の形成における分子間のタンパク質−
ＤＮＡの接触が同定されている（図１Ｃ）。これらは主として静電気的な性質であり、Ｄ
ＮＡのホスホジエステル主鎖の非特異的な認識が関与するので、試験管内のアッセイ（図
７Ａ）及び細胞アッセイ（図７Ｂ）によってそれらを３組の三重変異体に分類し、Ｓ１６
５Ａ、Ｎ１７２Ａ、Ｋ３７２Ａ三重変異体、Ｎ１９６Ａ、Ｙ２００Ａ、Ｋ３７２Ａ三重変
異体及びＲ１５８Ａ、Ｒ１６１Ａ、Ｋ３９５Ａ三重変異体についてはインターフェロン産
生を刺激する活性及び能力の完全な欠如、及びＳ１６５Ａ、Ｎ１７２Ａ、Ｙ２００Ａ三重
変異体については活性の部分的欠如を立証した。これは、ｃＧＡＳの触媒活性についてｃ
ＧＡＳとｄｓＤＮＡの間での複合体形成の重要性を強化している。
【０２８３】
ｃＧＡＳ触媒ポケット変異体の意味
結合したＮＴＰを伴ったｃＧＡＳとｄｓＤＮＡの三元複合体の構造研究によってＧｌｕ
２１１、Ａｓｐ２１３、Ａｓｐ３０７がホスホジエステル結合の形成について重要な触媒
残基として同定されている。これら３つの触媒酸性残基はすべて試験管内のアッセイ（図
７Ａ；Ｇｌｕ２１１Ａ）または細胞性のアッセイ（図７Ｃ；３つの触媒残基すべて）にて
観察されたようにＡｌａによる置換で機能的に効力をなくす一方で、Ｓ１９９Ａは実質的
な活性を保持した。Ｔｙｒ４２１はＡとの重なり相互作用に関与する一方で、Ａｒｇ３６
４はｃＧＡＭＰ三元複合体にてＧと水素結合される（図４Ｂ、Ｃ）。二重変異体Ｙ４２１
Ａ、Ｒ３６４Ａは細胞性アッセイにて活性の大半の喪失を生じる（図７Ｃ）。
【０２８４】
二価カチオンの役割
リガンドを伴ったｄｓＤＮＡに結合したｃＧＡＳの三元複合体の構造研究は、ＡＴＰ（
図２Ｅ、Ｆ）及び５’−ｐｐｐＧ（２’，５’）ｐＧ（図３Ｂ、Ｃ）の三リン酸部分が１
対のカチオン（暫定的にＭｇ２＋に割り当てられた）に配位することを示している。実際
、機能的な研究はホスホジエステル結合の形成に対する二価のカチオンの重要性を強調し
ている。二価カチオンの削除またはＥＤＴＡの使用はｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，
５’）ｐ］の形成を妨げるのに対してＭｇ２＋及びＭｎ２＋はｃＧＡＳ活性を助長する（
図５Ａ）。
【０２８５】
細胞質ｄｓＲＮＡセンサーＯＡＳ１との比較
我々の寄与に並行した研究では、ＡＴＰを線状２’，５’連結オリゴアデニレートに重
合するｄｓＲＮＡセンサーであるヒトのオリゴアデニレート合成酵素１（ＯＡＳ１）の性
状分析に関して構造研究及び生化学的アッセイが最近報告されている（Ｄｏｎｏｖａｎら
．２０１３）。結晶学的な研究は、遊離の状態から結合したｄｓＤＮＡと２’−ｄＡＴＰ
を伴った三元複合体への事態の推移にてＯＡＳ１における構造推移を明白に実証したが、
それはｄｓＤＮＡと結合したリガンドを伴ったｃＧＡＳの複合体形成に関するこの研究に
て我々によって観察されたものに類似するパターンに従う。従って、ＯＡＳ１の３つの触
媒Ｇｌｕ残基がｄｓＲＮＡと２’−ｄＡＴＰを伴った三元複合体の形成の際、非常に近接
し、それによって、ｃＧＡＳシステムで我々が観察しているものに類似する、２つのＭｇ
２＋イオンと２’−ｄＡＴＰの結合についての配位構造を創る（Ｄｏｎｏｖａｎら．２０
１３）。利用できる構造が遊離のＯＡＳ１（Ｈａｒｔｍａｎｎら．２００３）及びｄｓＤ
ＮＡと結合したリガンドを伴うその三元複合体（Ｄｏｎｏｖａｎら．２０１３）だったに
過ぎないことを考えると、これらの著者は、遊離のＯＡＳ１からｄｓＤＮＡを伴った二元
複合体への変換及び２’−ｄＡＴＰの存在下での二元複合体から三元複合体への変換を反
映する段階間で構造遷移がどのように区分化されるかを決定する位置にはいなかった。細
胞質ｄｓＤＮＡセンサーであるｃＧＡＳに関する我々の結果は、主要な構造遷移が遊離の
状態からｄｓＤＮＡを結合する複合体へのＯＡＳ１の変換を含む段階について制約される
可能性が最も高く、三元複合体を形成するための２’−ｄＡＴＰの付加では最小限の変化
であることを示唆している。
【０２８６】
上述の類似性に加えて、ｃＧＡＳはｄｓＤＮＡ二本鎖の中心断片の中でｄｓＤＮＡの糖
−リン酸主鎖を標的とする（図１Ｃ）一方で、ＯＡＳ１は３０Åで分離された２つの副溝
断片を接触させることによってｄｓＤＮＡの糖／リン酸主鎖を標的とする（Ｄｏｎｏｖａ
ｎら．２０１３）という点で、ｃＧＡＳｄｓＤＮＡセンサー（我々の研究）とＯＡＳ１ｄ
ｓＤＮＡセンサー（Ｄｏｎｏｖａｎら．２０１３）の間にはタンパク質／核酸の認識原理
にも差異がある。ｄｓＲＮＡとｄｓＤＮＡの螺旋パラメータは非常に異なり、タンパク質
−ｄｓＲＮＡ（Ｌｕｎｄｅら．２００７にて概説された）複合体及びタンパク質−ｄｓＤ
ＮＡ（Ｈｕｆｆｍａｎ及びＢｒｅｎｎａｎ，２００２にて概説された）複合体では異なる
認識原理が使用される。にもかかわらず、共通する原理を利用して決定的な触媒部位の構
造を生成し、それは今度は核酸認識（細胞質におけるｄｓＲＮＡまたはｄｓＤＮＡ）を、
Ｉ型インターフェロン応答（ｃＧＡＳ）及びＲＮＡ分解酵素Ｌの活性化（ＯＡＳ１）含む
抗ウイルス状態に繋がる下流事象のカスケードに結び付ける。
【０２８７】
さらに、ＯＡＳ１が介在する線状の２’，５’連結イソ−ＲＮＡの形成はｃＧＡＳによ
るＧｐＡ段階での２’，５’連結を含有するｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ
］の形成と同等である。従って、細菌のセカンドメッセンジャーであるｃ−ジ−ＧＭＰに
ついて以前観察されたような３’，５’連結の以前の唯一の強調（Ｒｏｍｌｉｎｇら．２
０１３にて概説された）とは違って、我々は後生動物のセカンドメッセンジャーであるｃ
［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］がＧｐＡ段階での２’，５’及びＡｐＧ段階
での３’，５’を含む混合された連結を利用することを強調する。
【０２８８】
ｃＧＡＳは段階的なホスホジエステル結合の形成について単一の活性部位を含有する
以前の研究は、ジグアニレートシクラーゼ（ＰｌｅＤ）が頭尾ホモ二量体を形成しその
界面に反応中心を形成するので、中間体はｃ−ジ−ＧＭＰを形成するための経路でその配
向を変化させなくてもよいことを立証した（Ｃｈａｎら．２００４）。それに反して、ｃ
ＧＡＳ、ｄｓＤＮＡ及び結合したリガンドの三元複合体の我々の現在の研究では、我々は
結晶において二量体またはさらに高次のオリゴマー形成の証拠を観察していない。さらに
、我々の構造におけるリガンド結合ポケットはｃＧＡＳトポロジーの中に埋められ、Ｐｌ
ｅＤのように（Ｃｈａｎら．２００４）表面には位置しない。
【０２８９】
実際、ｃＧＡＳは順次ホスホジエステル結合の形成の段階について単一の活性中心を含
有するが、それは、リガンドがＧＴＰとＡＴＰであり、先ず生じるＧｐＡ連結が２’，５
’であり、２番目に生じるＡｐＧ連結が３’，５’であり、ｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（
３’，５’）ｐ］の生成を生じることを考えると全く顕著な特徴である。特定の理論に束
縛されることを望まないで、我々は、図７ＤにおけるｄｓＤＮＡ結合のｃＧＡＳの単一の
触媒ポケットの中でのＧＴＰとＡＴＰからのｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ
］の形成のためのモデルの要点をまとめる。このモデルでは、第１の段階には５’−ｐｐ
ｐＧｐＡ中間体の形成が関与し、第２の段階でｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）
ｐ］の形成が続く。結合したリガンドはｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］形
成の経路にて２回のフリップオーバーを受けると考えられることにも留意のこと。
【０２９０】
ジヌクレオチドシクラーゼＤｎｃＶの意味
早期の研究では、細菌のジヌクレオチドシクラーゼＤｎｃＶは環状ＧＭＰ−ＡＭＰ（ｃ
ＧＡＭＰ）を生成することが示された（Ｄａｖｉｓら．２０１２）。ｃＧＡＭＰの形成に
関するこの最初の報告はこの細菌系におけるホスホジエステル結合の対の性質に関して興
味深い疑問を生じる。
【０２９１】
実施例６
合成されたｃＧＡＭＰ連結異性体のＮＭＲスペクトル解析
凍結乾燥したｃＧＡＭＰ連結異性体を１０ｍＭのＫ２ＨＰＯ４−ＫＨ２ＰＯ４（ｐＨ６
．６）緩衝液における９９．９％Ｄ２Ｏに溶解した。ＮＭＲ実験はすべてＮｅｗ  Ｙｏｒ
ｋ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ＣｅｎｔｅｒにてＢｒｕｋｅｒ  ９００Ｍ
Ｈｚ分光光度計によって３５℃で実施する。ＨＭＢＣ（絶対値モード処理による２ｓのリ
サイクル遅延、０．８ｓの１Ｈ取得時間、２０ｍｓの１３Ｃ取得時間、相−非感受性の１
３Ｃ取得及び逆位相１Ｈ検出）、二重量子でフィルターをかけたＣＯＳＹスペクトル（２
ｓのリサイクル遅延、０．８ｓの直接取得時間、１２ｍｓの間接取得時間）、及びＨＳＱ
Ｃ実験（１ｓのリサイクル遅延、４８ｍｓの１Ｈ取得時間、２０ｍｓの１３Ｃ取得時間）
に基づいて共鳴配置を行う。水で予備飽和した１Ｄのプロトンのスペクトルを、合成され
たｃＧＡＭＰ連結異性体の標準について８走査及び生物酵素的に作製されたｃＧＡＳ反応
について１２８走査にわたって蓄積する。
【０２９２】
実施例７
薄層クロマトグラフィ（ＴＬＣ）解析
ＴＬＣアッセイのためのオリゴヌクレオチドの調製
ｃＧＡＳヌクレオチジルトランスフェラーゼ活性の生化学アッセイに使用したオリゴヌ
クレオチドを表Ｓ６で列記する。オリゴデオキシヌクレオチドは３４００ＤＮＡ合成機（
Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて社内で合成し、オリゴリボヌクレオチ
ドは購入した（Ｄｈａｒｍａｃｏｎ）。二本鎖ＤＮＡ、ＲＮＡ及びＤＮＡ／ＲＮＡ二本鎖
は、Ｐｅｌｔｉｅｒ  ｔｈｅｒｍｏｙｃｌｅｒ（ＭＪ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）にて９５℃で
開始し、その後秒当たり０．１℃で２５℃まで低下させるインキュベートによって等モル
濃度で７０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．６，１０ｍＭのＭｇＣｌ２，５ｍＭのＤＴ
Ｔにてアニーリングし、使用前にアガロースゲル電気泳動によってアニーリングについて
検証した。
【０２９３】
ｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］形成のＴＬＣ解析
切り詰めた変異体型１〜６を含む精製した組換えの完全長（ｆｌ、アミノ酸１〜５０７
）及び切り詰めた（ｔｒ、アミノ酸１４７〜５０７）マウスｃＧＡＳを、１μＭのｃＧＡ
Ｓ、３．３μＭのｄｓＤＮＡ、５ｍＭのＭｇＣｌ２、１５０ｍＭのＮａＣｌ、２０ｍＭの
Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、２５℃でｐＨ７．５、１ｍＭのＤＴＴ、１０％グリセロール、１ｍＭ
の各ヌクレオチド（通常、ＡＴＰ及びＧＴＰ）、及びα３２Ｐまたはγ３２Ｐ放射性標識
のＮＴＰまたはｄＮＴＰを含有する２０μＬの反応物にて３７℃で４０分間インキュベー
トした。５０ｍＭのＥＤＴＡ２０μＬの添加によって反応を止めた。２μＬの反応溶液を
高速ＴＬＣプレート（ＨＰＴＬＣシリカゲル、６０Åの孔、Ｆ２５４、１０×１０ｃｍ，
カタログ番号１．０５６２８．０００１，ＥＭＤ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）上でスポットに
し、２５℃にて１時間、産物を溶媒１（ＮＨ４ＨＣＯ３：Ｃ２Ｈ５ＯＨ：Ｈ２Ｏ［０．２
Ｍ：３０％：７０％］，ｗ：ｖ：ｖ）または溶媒２（ＮＨ４ＨＣＯ３：Ｃ２Ｈ５ＯＨ：Ｈ
２Ｏ［０．０２５Ｍ：３０％：７０％］，ｗ：ｖ：ｖ）で分離した。ＵＶ（２５４ｎｍ）
及びホスホルイメージング（Ｔｙｐｈｏｏｎ  ＦＬＡ  ９５００，ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃ
ａｒｅ）によって反応産物を視覚化した。Ａｄｏｂｅ  Ｐｈｏｔｏｓｈｏｐ及びＩｌｌｕ
ｓｔｒａｔｏｒ  ＣＳ５を用いて画像を処理した。使用したＴＬＣの条件は３’，５’ｃ
ＡＭＰを分離するのに確立されたプロトコール（Ｈｉｇａｓｈｉｄａら、２０１２）に大
部分基づいた。
【０２９４】
実施例８
ｃＧＡＳ反応産物の定量
ＨＰＬＣからの精製の後、ＦＩＪＩ（ＩｍａｇｅＪ  １．４７ｉ）を用いて、または分
光光度計で（２６０ｎｍでの吸光度、Ｅ２６０＝２５．４×１０３）、ＴＬＣ実験のデン
シトメータ解析によって、生成されたｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］の収
量を算出した。デンシトメータ解析については、レーン（ｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３
’，５’）ｐ］プラス残りのα３２Ｐ標識したＡＴＰまたはＧＴＰ）当たりの総放射線活
性に関してα３２Ｐ標識したｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］の分画を計算
した。
【０２９５】
実施例９
高速液体クロマトグラフィ解析のためのｃＧＡＳ反応産物の調製
試験管内で生成したｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］の反応産物、または
洗浄し、溶解したｃＧＡＳ結晶を２５単位のベンゾナーゼ（Ｎｏｖａｇｅｎ、カタログ番
号７０７４６）によって３７℃で３０分間処理し、９５℃で１０分間、熱不活化し、次い
で２１，０００ｇにて１５分間遠心分離し（Ｓｏｒｖａｌｌ  Ｌｅｇｅｎｄ  Ｍｉｃｒｏ
２１Ｒ，  Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）；上清をＨＰＬＣ解析に用いた。３
〜８ナノモルの化学的に合成されたすべて３’，５’のｃＧＡＭＰ、すべて２’，５’の
ｃＧＡＭＰ、またはｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］と共にまたはそれを伴
わずに、反応産物を、Ｃ１８カラム（２５ｃｍ×４．５ｍｍ、５μＭの孔、Ｓｕｐｅｌｃ
ｏ  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ）を用いた逆相ＨＰＬＣ（ＡＫＴＡ  Ｐｕｒｉｆｉｅｒ，ＧＥ
Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）解析に供した。ＵＶ２６０ｎｍ及び２８０ｎｍで検体をモニタ
ーした。０−１０％の溶媒Ｂ（２カラム容量）、１０−５０％溶媒Ｂ（２カラム容量）２
段階線状勾配を用いた；溶媒Ａ（酢酸トリエチルアンモニウム：アセトニトリル：Ｈ２Ｏ
［０．１Ｍ：３％：９７％］、ｗ：ｖ：ｖ）及び溶媒Ｂ（メタノール：アセトニトリル：
Ｈ２Ｏ［４５％：４５％：１０：］、ｖ：ｖ：ｖ）。
【０２９６】
１Ｄ  ＮＭＲ解析のためのｃＧＡＳ反応産物の調製
ＨＰＬＣによる分画に先立って、試験管内で生成されたｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３
’，５’）ｐ］反応産物１００μｌを前のようにベンゾナーゼ処理し、熱処理した。３回
の一連のＨＰＬＣ実行を行い（２回の４０μl及び１回の２０μlの反応注入）、ｃ［Ｇ（
２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］に相当するピークを１５ｍlのファルコンチューブ
に回収した（およそ合計４．５ｍＬ）。室温にて完全な乾燥までの３日間の真空遠心（Ｖ
ａｃｕｆｕｇｅ，Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ）によって溶媒の除去を達成した。
【０２９７】
実施例１０
細胞性アッセイ
ｃＧＡＳ点突然変異体の生成
マウスのｃＧＡＳ  ＣＤＳを改変したｐＭＡＸクローニングベクター（Ａｍａｘａ，Ｃ
ｏｌｏｇｎｅ，Ｇｅｒｍａｎｙ）に挿入した。Ｐｆｕ  Ｕｌｔｒａ  Ｈｏｔ  Ｓｔａｒｔ
ＤＮＡポリメラーゼ（Ａｇｉｌｅｎｔ）またはＫＯＤ  Ｈｏｔ  Ｓｔａｒｔ  ＤＮＡポ
リメラーゼ（Ｍｅｒｃｋ，Ｄａｒｍｓｔａｄｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いたＱｕｉｋｃｈ
ａｎｇｅ法（Ａｇｉｌｅｎｔ，Ｓａｎｔａ  Ｃｌａｒａ，ＣＡ）を用いて部位特異的変異
誘発を行った。マウスのＳＴＩＮＧ  ＣＤＳ及びホタルルシフェラーゼ（Ｐｒｏｍｅｇａ
，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）をＥＦ１／プロモータ／改変ｐＬｅｎｔｉ６（Ｉｎｖｉｔｒｏ
ｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）発現プラスミドにクローニングした。ｐＧＬ３  ＩＦ
Ｎ−βＧｌｕｃレポーターはＢｒｉａｎ  Ｍｏｎｋｓ（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｉｎ
ｎａｔｅ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｂｏｎｎ，  Ｇｅｒｍａｎ
ｙ）から入手した。構築物はすべてＣＤＳの配列決定によって検証した。
【０２９８】
ルシフェラーゼアッセイ
Ｔｒａｎｓ−ＩＴ  ＬＴ１（ＭｉｒｕｓＢｉｏ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を用いて、ｐ
ＧＬ３−ＩＦＮβ−Ｇｌｕｃ（５０ｎｇ）、ｐＬｅｎｔｉ−ＥＦ１−Ｆｌｕｃ（２５ｎｇ
）、ｐＬｅｎｔｉ−ＥＦ１−ｍＳＴＩＮＧ（２５ｎｇ）及びｃＧＡＳ−発現プラスミド（
２５ｎｇ、ｐＭＡＸ−ｃＧＡＳのＷＴまたは変異体）または対照プラスミドｐＭＡＸ−Ｇ
ＦＰ（Ａｍａｘａ）の混合物で９６穴プレートのウェル当たり３×１０４個のＨＥＫ２９
３細胞に３つ組で逆形質移入した。３６時間後、受動溶解緩衝液にて細胞を溶解した。そ
れぞれの基質、Ｄ−ルシフェリン及びセレンテラジン（ＰＪＫ  ＧｍｂＨ，Ｋｌｅｉｎｂ
ｌｉｔｔｅｒｓｄｏｒｆ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いてＥｎＶｉｓｉｏｎリーダー（Ｐｅｒ
ｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）にてホタル及びガウシアのルシフェラーゼ
活性を測定した。ＩＦＮβ−Ｇｌｕｃの値を構成的なホタルルシフェラーゼの値に対して
基準化し、対照プラスミドｐＭＡＸ−ＧＦＰに関して誘導倍率を算出した。
【０２９９】
実施例１１
環状ＧＡ−ジヌクレオチドの合成
Ｊｏｎｅｓ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（Ｇａｆｆｎｅｙら．２０１０；Ｇａｆｆｎｅｙ  
ａｎｄ  Ｊｏｎｅｓ、２０１２）によって以前報告された手順を用いて、すべて２’，５
’のｃＧＡＭＰ（６，図Ｓ７）、ｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］（１１，
図Ｓ７）、及びすべて３’，５’のｃＧＡＭＰ（１５，図Ｓ７）の調製を行った。５ｍＬ
のＣＨ３ＣＮと水（０．０２８ｍＬ，１．６ミリモル，２当量）に溶解したアデノシンホ
スホルアミダイト１または７（０．７８４ｇ，０．７９３ミリモル）にトリフルオロ酢酸
ピリジニウム（０．１８４ｇ，０．９５ミリモル，１．２当量）を加えた。１分後、６ｍ
Ｌのｔｅｒｔ−ＢｕＮＨ２を加えた。さらに１０分後、混合物を濃縮した。１０ｍＬのＣ
Ｈ２Ｃｌ２に溶解した残留物にＨ２Ｏ（０．１４ｍＬ，７．９ミリモル，１０当量）を加
え、その後ＣＨ２Ｃｌ２中の１０ｍＬの６％ジクロロ酢酸（ＤＣＡ，７．５ミリモル）を
加えた。１０分後、ピリジン（１．２ｍＬ，１５ミリモル，ＤＣＡに対して２当量）の添
加によって反応を止めた。次いで混合物を濃縮し、残留物を７ｍＬのＣＨ３ＣＮに溶解し
、再び濃縮した。
【０３００】
この過程を２回以上繰り返し、最後にＡＨ−ホスホネート２または８を２ｍＬで残した
。この溶液に３ｍＬのＣＨ３ＣＮ中のＧアミダイト３または１２（１．００ｇ，１．０３
ミリモル，１．３当量）の無水溶液を加えた。２分後、デカン中の水酸化ｔｅｒｔ−ブチ
ル５．５Ｍ（０．４３ｍＬ，２．４ミリモル，３当量）を加えた。３０分後、０．５ｍＬ
のＨ２Ｏに溶解した０．２０ｇのＮａＨＳＯ３を加えた。混合物を５分間撹拌し、次いで
濃縮した。残留油を１４ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２に溶解し、その後Ｈ２Ｏ（０．１５ｍＬ，８
．５ミリモル，１０当量）、次いでＣＨ２Ｃｌ２中の１４ｍＬの６％ＤＣＡ（９．８ミリ
モル）を加えた。１０分後、９ｍＬのピリジンで反応を止めた。混合物を小容量に濃縮し
、２５ｍＬ以上のピリジンを加え、溶液を再び濃縮し、線状の二量体４、９または１３を
１７ｍＬで残した。この溶液に、５，５−ジメチル−２−オキソ−２−クロロ−１，３，
２−ジオキサホスフィナン（ＤＭＯＣＰ，９５％試薬の０．５４ｇ，２．８ミリモル，３
．５当量）を加えた。１０分後、Ｈ２Ｏ（０．５０ｍＬ，２８ミリモル，ＤＭＯＣＰに対
して１０当量）の添加によって反応を止め、直ちにＩ２（０．２６ｇ，１．０ミリモル，
１．３当量）を加えた。５分後、０．１７ｇのＮａＨＳＯ３を含有する１２０ｍＬのＨ２
Ｏに混合物を注いだ。撹拌の５分後、３．４ｇのＮａＨＣＯ３をゆっくり加えた。撹拌の
５分以上後、固形物を含有する水溶液を１３５ｍＬの１：１のＥｔＯＡｃ：Ｅｔ２Ｏで区
分化した。分離した水性層を次いで３５ｍＬの１：１のＥｔＯＡｃ：Ｅｔ２Ｏで区分化し
た。
【０３０１】
５、１０または１４を含有する有機層を合わせ、油に濃縮した。１４については、油を
５ｍＬのＣＨ３ＣＮに溶解し、５ｍＬのｔｅｒｔ−ＢｕＮＨ２の１０分間の添加によって
シアノエチル基を取り除いた。ＣＨ２Ｃｌ２中０〜２５％のＣＨ３ＯＨの勾配を用いて８
０ｇのＳｉＯ２カラムにて５０分間かけて残留物を精製した。５及び１０はｔｅｒｔ−Ｂ
ｕＮＨ２の処理を行わずにＳｉＯ２にて直接精製した。それぞれの場合、精製後の残留物
を無水ＥｔＯＨ中の２１ｍＬのＣＨ３ＣＨ２（３３重量％、１６８ミリモル、アミノ保護
基に対して２１２当量）で処理した。室温で４時間後、混合物を固体に濃縮し、そこに３
ｍＬのピリジンと１ｍＬのＥｔ３Ｎを加えた。混合物を油に濃縮し、この過程を２回以上
繰り返し、ｔｅｒｔ−ＢｕＮＨ３＋をＥｔ３ＮＨ＋塩に変換した。油に１ｍＬのピリジン
を加え、フラスコを５５℃の油槽に入れた。Ｅｔ３Ｎ（７．５ｍＬ）及びＥｔ３Ｎ・３Ｈ
Ｆ（２．６ｍＬ，４８ミリモルのＦ−，それぞれＴＢＳに対して３０当量）を同時に加え
た。混合物を５５℃で撹拌した。３時間後、フラスコを油槽から取り出し、撹拌している
混合物にＨＰＬＣ等級のアセトン（７０ｍＬ）を加えた。１０分後、濾過によって固形物
を回収し、アセトンの３ｍＬ部分で５回洗浄し、デシケータにてＫＯＨ上で一晩乾燥させ
た。この過程によって純粋な１５が得られたが、６及び１１は０．１ＭのＮＨ４ＨＣＯ３
中の２〜２０％のＣＨ３ＣＮの勾配を用いて１９×３００ｍｍのＰｒｅｐ  Ｎｏｖａ−Ｐ
ａｋ  Ｃ１８カラムで精製した。
【０３０２】
Ａｔｌａｎｔｉｓ  Ｃ１８カラム、１００Å、４．６ｍｍ×５０ｍｍ、３．０μｍを用
い、光ダイオードアレイ検出器を伴ったＷａｔｅｒｓ２９６５システムで分析用逆相ＨＰ
ＬＣを行った。流速１．０ｍＬ／分でＣＨ３ＣＮと０．１Ｍの酢酸トリエチルアンモニウ
ム緩衝液（ｐＨ６．８）の勾配を用いた。Ｗａｔｅｒｓ  Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ単一四重極
ＬＣＺシステムを用いて低分解能のＥＳＩ−ＭＳを常法的に取得した。６、１１及び１５
のＬＣＭＳはｍ／ｚ（Ｍ−Ｈ）６７３を提示した（Ｃ２０Ｈ２３Ｎ１０Ｏ１３Ｐ２−につ
いての計算値：６７３）。
【０３０３】
実施例１２
ｃＧＡＭＰ化合物によるマウスα−インターフェロン及びヒトＣＸＣＬ１０のＳＴＩＮ
Ｇ依存性の誘導
ＴＨＰ−１の培養及びアッセイ条件
１０％ＦＢＳ、ピルビン酸ナトリウム及びペニシリン／ストレプトマイシン（Ｇｉｂｃ
ｏ，Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を伴ったＲＰＭＩ１６４０にてＴＨＰ−１細
胞を培養した。１００μＬの培地にて９６穴プレートのウェル当たり８×１０４個の細胞
を入れ、３７℃／５％ＣＯ２にて２時間平衡化した。マクロファージ様の細胞を生成する
ために、１０ｎｇ／ｍＬのＰＭＡ（Ｓｉｇｍａ）によって８×１０４個のＴＨＰ−１細胞
を一晩分化させ、培地を交換し、刺激の前にさらに２４時間インキュベートした。
【０３０４】
ＢＭＤＭの培養及びアッセイ条件
骨髄由来のマクロファージ細胞をＣ５７ＢＬ／６マウスの大腿骨から洗い出した。赤血
球を溶解し（ＰｈａｒｍＬｙｓｅ，ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、３０％のＬ９２９
上清を伴ったＤＭＥＭ、１０％ＦＢＳ、ピルビン酸ナトリウム及びペニシリン／ストレプ
トマイシン（Ｇｉｂｃｏ，  Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）にてペトリ皿当たり
１×１０７個の細胞をインキュベートした。ＰＢＳ、２ｍＭのＥＤＴＡによって細胞を回
収し、９６穴プレートのウェル当たり１×１０５個の密度で細胞を入れた。示したｃＧＡ
ＭＰ濃度の存在下で３０分間、ＢＭＤＭにジギトニンを浸透させ、または対照処理し、次
いで新鮮な培地を補完した。１８時間後、上清を採取し、ＥＬＩＳＡによってサイトカイ
ンを測定した。
【０３０５】
細胞の透過化／刺激
環状ジヌクレオチドの送達のための細胞の透過化は以前記載された（Ｗｏｏｄｗａｒｄ
ら，２０１０）ように行った。手短には、上清を取り除き、細胞を５μＬのＰｅｒｍ緩衝
液（５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．０、１００ｍＭのＫＣｌ、３ｍＭのＭｇＣｌ２、１
ｍＭのＡＴＰ、０．１ｍＭのＧＴＰ、０．１ｍＭのＤＴＴ、８５ｍＭのスクロース，０．
２％ＢＳＡ）、±１０μｇ／ｍlのジギトニン及び連続希釈したｃＧＡＭＰ異性体で覆い
、その後３７℃で３０分間インキュベートした。次いでＰｅｒｍ緩衝液を取り除き、事前
に温めた１００μＬの培地で細胞を回収した。光学顕微鏡及びＣｅｌｌ  Ｔｉｔｅｒ  Ｂ
ｌｕｅ（Ｒｏｃｈｅ）によってモニターしたとき、未処理に比べて透過化した細胞の生存
率は＞５０％だった。
【０３０６】
刺激の１６時間後に上清を回収し、それぞれＥＬＩＳＡ及びＨＥＫ−Ｂｌｕｅ（商標）
ＩＦＮ−α／βバイオアッセイによってサイトカインを測定した。
【０３０７】
ＥＬＩＳＡ
ヒトＣＸＣＬ−１０は製造元の推奨に従ってＥＬＩＳＡ（ＢＤ  Ｏｐｔｅｉａ  ｈｕｍ
ａｎ  ＩＰ−１０  ＥＬＩＳＡ−Ｓｅｔ）によって測定した。マウスＩｆｎａはサンドイ
ッチＥＬＩＳＡによって測定し：モノクローナルラット抗Ｉｆｎａ（クローンＲＭＭＡ−
１）を捕捉抗体として使用し、組換えＩｆｎａは基準として用い、Ｉｆｎａに対するポリ
クローナルのウサギ血清を検出に用い（すべてＰＢＬ  Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  Ｓｏｕｒ
ｃｅ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ，ＵＳＡから）、その後、抗ウサギＨＲＰ（Ｂｉｏ−
Ｒａｄ）を用いた。
【０３０８】
用量応答曲線の適合
Ｇｒａｐｈ  Ｐａｄ  Ｐｒｉｓｍ（Ｇｒａｐｈ  Ｐａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｌａ  Ｊ
ｏｌｌａ、ＣＡ，ＵＳＡ）によって４パラメータのＳ字用量応答曲線及びＥＣ５０値を解
析した。
【表Ｓ４】
2019137692.tif 000030
【表Ｓ５−１】
2019137692.tif 000031
【表Ｓ５−２】
2019137692.tif 000032
【０３０９】
太字及び下線のヌクレオチドは、別々に生成された修飾されたオリゴで利用された８−
オキソグアノシンを表す。オリゴヌクレオチドは社内の３４００ＤＮＡ合成機（Ａｐｐｌ
ｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）にて合成したまたは購入した（Ｄｈａｒｍａｃｏｎ）。
【０３１０】
参考文献
Ａｄａｍｓ，Ｐ．Ｄ．，Ａｆｏｎｉｎｅ，Ｐ．Ｖ．，Ｂｕｎｋｏｃｚｉ，Ｇ．，Ｃｈｅｎ
，Ｖ．Ｂ．，Ｄａｖｉｓ，Ｉ．Ｗ．，Ｅｃｈｏｌｓ，Ｎ．，Ｈｅａｄｄ，Ｊ．Ｊ．，Ｈｕ
ｎｇ，Ｌ．Ｗ．，Ｋａｐｒａｌ，Ｇ．Ｊ．，Ｇｒｏｓｓｅ−Ｋｕｎｓｔｌｅｖｅ，Ｒ．Ｗ
．ら．（２０１０）．ＰＨＥＮＩＸ：ａ  ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｐｙｔｈｏｎ−
ｂａｓｅｄ  ｓｙｓｔｅｍ  ｆｏｒ  ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｓｔｒｕｃｔｕｒ
ｅ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ．Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．Ｄ．Ｂｉｏｌ．Ｃｒｙｓｔ
ａｌｌｏｇｒ．６６，２１３−２２１．
Ｂｕｒｃｋｓｔｕｍｍｅｒ，Ｔ．，Ｂａｕｍａｎｎ，Ｃ．，Ｂｌｕｍｉ，Ｓ．，Ｄｉｘｉ
ｔ，Ｅ．，Ｄｕｒｎｂｅｒｇｅｒ，Ｇ．，Ｊａｈｎ，Ｈ．，Ｐｌａｎｙａｖｓｋｙ，Ｍ．
，Ｂｉｌｂａｎ，Ｍ．，Ｃｏｌｉｎｇｅ，Ｊ．，Ｂｅｎｎｅｔ，Ｋ．Ｌ．ら．（２００９
）．Ａｎ  ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ  ｐｒｏｔｅｏｍｉｃ−ｇｅｎｏｍｉｃ  ｓｃｒｅｅｎ
ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｓ  ＡＩＭ２  ａｓ  ａ  ｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ  ＤＮＡ  ｓｅ
ｎｓｏｒ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｉｎｆｌａｍｍａｓｏｍｅ．Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１０
，２６６−２７２．
Ｃｈａｎ，Ｃ．，Ｐａｕｌ，Ｒ．，Ｓａｍｏｒａｙ，Ｄ．，Ａｍｉｏｔ，Ｎ．Ｃ．，Ｇｉ
ｅｓｅ，Ｂ．，Ｊｅｎａｌ，Ｕ．及びＳｃｈｉｒｍｅｒ，Ｔ．（２００４）．Ｓｔｒｕｃ
ｔｕｒａｌ  ｂａｓｉｓ  ｏｆ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ａｎｄ  ａｌｌｏｓｔｅｒｉｃ  ｃ
ｏｎｔｒｏｌ  ｏｆ  ｄｉｇｕａｎｙｌａｔｅ  ｃｙｃｌａｓｅ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．
Ａｃａｄ．Ｓｃｉｓ．ＵＳＡ．１０１，１７０８４−１７０８９．
Ｄａｖｉｅｓ，Ｂ．Ｗ．，Ｂｏｇａｒｄ，Ｒ．Ｗ．，Ｙｏｕｎｇ，Ｔ．Ｓ．，及びＭｅｋ
ａｌａｎｏｓ，Ｊ．Ｊ．（２０１２）．Ｃｏｏｒｄｉｎａｔｅｄ  ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ
ｏｆ  ａｃｃｅｓｓｏｒｙ  ｇｅｎｅｔｉｃ  ｅｌｅｍｅｎｔｓ  ｐｒｏｄｕｃｅｓ  
ｃｙｃｌｉｃ  ｄｉ−ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ｆｏｒ  Ｖ．ｃｈｏｌｅｒａｅ  ｖｉｒ
ｕｌｅｎｃｅ．Ｃｅｌｌ，１４９，３５８−３７０．
Ｄｏｎｏｖａｎ，Ｊ．，Ｄｕｆｎｅｒ，Ｍ．，及びＫｏｒｅｎｎｙｋｈ，Ａ．（２０１３
）．Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  ｂａｓｉｓ  ｆｏｒ  ｃｙｔｏｓｏｌｉｃ  ｄｏｕｂｌｅ−
ｓｔｒａｎｄｅｄ  ＲＮＡ  ｓｕｒｖｅｉｌｌａｎｃｅ  ｂｙ  ｈｕｍａｎ  ｏｌｉｇｏ
ａｄｅｎｙｌａｔｅ  ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ  １．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃ
ｉ．ＵＳＡ，１１０，１６５２−１６５７．
Ｅｇｌｉ，Ｍ．，Ｇｅｓｓｎｅｒ，Ｒ．Ｖ．，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｌ．Ｄ．，Ｑｕｉｇｌ
ｅｙ，Ｇ．Ｊ．，ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｍａｒｅｌ，Ｇ．Ａ．，ｖａｎ  Ｂｏｏｍ，Ｊ．Ｈ．
，Ｒｉｃｈ，Ａ．，及びＦｒｅｄｅｒｉｃｋ，Ｃ．Ａ．（１９９０）．Ａｔｏｍｉｃ−ｒ
ｅｓｏｌｕｔｉｏｎ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ  ｓｙｎ
ｔｈａｓｅ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒ  ｃｙｃｌｉｃ  ｄｉｇｕａｎｙｌｉｃ  ａｃｉｄ．Ｐ
ｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８７，３２３５−３２３９．
Ｅｍｓｌｅｙ，Ｐ．，Ｌｏｈｋａｍｐ，Ｂ．，Ｓｃｏｔｔ，Ｗ．Ｇ．，及びＣｏｗｔａｎ
，Ｋ．（２０１０）．Ｆｅａｔｕｒｅｓ  ａｎｄ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｃｏ
ｏｔ．Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．Ｄ  Ｂｉｏｌ．Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．６
６，４８６−５０１．
Ｆｅｒｎａｎｄｅｓ−Ａｌｎｅｍｒｉ，Ｔ．，Ｙｕ，Ｊ．Ｗ．，Ｄａｔｔａ，Ｐ．，Ｗｕ
，Ｊ．，及びＡｌｎｅｍｒｉ，Ｅ．Ｓ．（２００９）．ＡＩＭ２  ａｃｔｉｖａｔｅｓ  
ｔｈｅ  ｉｎｆｌａｍｍａｓｏｍｅ  ａｎｄ  ｃｅｌｌ  ｄｅａｔｈ  ｉｎ  ｒｅｓｐｏ
ｎｓｅ  ｔｏ  ｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ  ＤＮＡ．Ｎａｔｕｒｅ，４５８，５０９−５１
３．
Ｇａｆｆｎｅｙ，Ｂ．Ｌ．，及びＪｏｎｅｓ，Ｒ．Ａ．（２０１２）．Ｏｎｅ−ｆｌａｓ
ｋ  ｓｙｎｔｈｅｓｅｓ  ｏｆ  ｃｙｃｌｉｃ  ｄｉｇｕａｎｏｓｉｎｅ  ｍｏｎｏｐｈ
ｏｓｐｈａｔｅ  （ｃ−ｄｉ−ＧＭＰ）．Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  
Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１４，１４．１８．１１−１４．１８
．１７．
Ｇａｆｆｎｅｙ，Ｂ．Ｌ．，Ｖｅｌｉａｔｈ，Ｅ．，Ｚｈａｏ，Ｊ．，及びＪｏｎｅｓ，
Ｒ．Ａ．（２０１０）．Ｏｎｅ−ｆｌａｓｋ  ｓｙｎｔｈｅｓｅｓ  ｏｆ  ｃ−ｄｉ−Ｇ
ＭＰ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ［Ｒｐ，Ｒｐ］  ａｎｄ  ［Ｒｐ，Ｓｐ］  ｔｈｉｏｐｈｏｓｐ
ｈａｔｅ  ａｎａｌｏｇｕｅｓ．Ｏｒｇ．Ｌｅｔｔ．１２，３２６９−３２７１．
Ｈａｒｔｍａｎｎ，Ｒ．，Ｊｕｓｔｅｓｅｎ，Ｊ．，Ｓａｒｋａｒ，Ｓ．Ｎ．，Ｓｅｎ，
Ｇ．Ｃ．，及びＹｅｅ，Ｖ．Ｃ．（２００３）．Ｃｒｙｓｔａｌ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  
ｏｆ  ｔｈｅ  ２’−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｎｄ  ｄｏｕｂｌｅ−ｓｔｒａｎｄｅｄ  Ｒ
ＮＡ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ａｎｔｉｖｉｒａ
ｌ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ２’−５’−ｏｌｉｇｏａｄｅｎｙｌａｔｅ  ｓｙｎｔｈｅｔａｓ
ｅ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ，１２，１１７３−１１８５．
Ｈｉｇａｓｈｉｄａ，Ｈ．，Ｈｏｓｓａｉｎ，Ｋ．Ｚ．，Ｔａｋａｈａｇｉ，Ｈ．，及び
Ｎｏｄａ，Ｍ．（２００２）．Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ａｄｅｎｙｌｙｌ  ｃｙ
ｃｌａｓｅ  ｂｙ  ｓｅｐａｒａｔｉｎｇ  ｃｙｃｌｉｃ  ＡＭＰ  ｏｎ  ｓｉｌｉｃａ
ｇｅｌ  ｔｈｉｎ−ｌａｙｅｒ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ．Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃ
ｈｅｍ．３０８，１０６−１１１．
Ｈｏｒｎｕｎｇ，Ｖ．，Ａｂｌａｓｓｅｒ，Ａ．，Ｃｈａｒｒｅｌ−Ｄｅｎｎｉｓ，Ｍ．
，Ｂａｕｅｒｎｆｅｉｎｄ，Ｆ．，Ｈｏｒｖａｔｈ，Ｇ．，Ｃａｆｆｒｅｙ，Ｄ．Ｒ．，
Ｌａｔｚ，Ｅ．，及びＦｉｔｚｇｅｒａｌｄ，Ｋ．Ａ．（２００９）．ＡＩＭ２  ｒｅｃ
ｏｇｎｉｚｅｓ  ｃｙｔｏｓｏｌｉｃ  ｄｓＤＮＡ  ａｎｄ  ｆｏｒｍｓ  ａ  ｃａｓｐ
ａｓｅ−１−ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ  ｉｎｆｌａｍｍａｓｏｍｅ  ｗｉｔｈ  ＡＳＣ．Ｎ
ａｔｕｒｅ，４５８，５１４−５１８．
Ｈｏｒｎｕｎｇ，Ｖ．，及びＬａｔｚ，Ｅ．（２０１０）．Ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ
ＤＮＡ  ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ．Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１０，１２３−
１３０．
Ｈｕａｎｇ，Ｙ．Ｈ．，Ｌｉｕ，Ｘ．Ｙ．，Ｄｕ，Ｘ．Ｘ．，Ｊｉａｎｇ，Ｚ．Ｆ．，及
びＳｕ，Ｘ．Ｄ．（２０１２）．Ｔｈｅ  ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  ｂａｓｉｓ  ｆｏｒ  
ｔｈｅ  ｓｅｎｓｉｎｇ  ａｎｄ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｏｆ  ｃｙｃｌｉｃ  ｄｉ−ＧＭＰ
ｂｙ  ＳＴＩＮＧ．Ｎａｔ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９，７２８−７３０
．
Ｈｕｆｆｍａｎ，Ｊ．Ｌ．及びＢｒｅｎｎａｎ，Ｒ．Ｇ．（２００２）．Ｐｒｏｋａｒｙ
ｏｔｉｃ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｓ：ｍｏｒｅ  ｔｈａｎ  
ｊｕｓｔ  ｔｈｅ  ｈｅｌｉｘ−ｔｕｒｎ−ｈｅｌｉｘ  ｍｏｔｉｆ．１２，９８−１０
６．
Ｉｓｈｉｋａｗａ，Ｈ．，及びＢａｒｂｅｒ，Ｇ．Ｎ．（２００８）．ＳＴＩＮＧ  ｉｓ
ａｎ  ｅｎｄｏｐｌａｓｍｉｃ  ｒｅｔｉｃｕｌｕｍ  ａｄａｐｔｏｒ  ｔｈａｔ  ｆ
ａｃｉｌｉｔａｔｅｓ  ｉｎｎａｔｅ  ｉｍｍｕｎｅ  ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ．Ｎａｔｕ
ｒｅ，４５５，６７４−６７８．
Ｊｉｎ，Ｌ．，Ｗａｔｅｒｍａｎ，Ｐ．Ｍ．，Ｊｏｎｓｃｈｅｒ，Ｋ．Ｒ．，Ｓｈｏｒｔ
，Ｃ．Ｍ．，Ｒｅｉｓｄｏｒｐｈ，Ｎ．Ａ．，及びＣａｍｂｉｅｒ，Ｊ．Ｃ．（２００８
）．ＭＰＹＳ，  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｔｅｔｒａｓｐａｎｎｅｒ，  ｉ
ｓ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｍａｊｏｒ  ｈｉｓｔｏｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉ
ｔｙ  ｃｏｍｐｌｅｘ  ｃｌａｓｓ  ＩＩ  ａｎｄ  ｍｅｄｉａｔｅｓ  ｔｒａｎｓｄｕ
ｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｐｏｐｔｏｔｉｃ  ｓｉｇｎａｌｓ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ
．２８，５０１４−５０２６．
Ｊｉｎ，Ｔ．，Ｐｅｒｒｙ，Ａ．，Ｊｉａｎｇ，Ｊ．，Ｓｍｉｔｈ，Ｐ．，Ｃｕｒｒｙ，
Ｊ．Ａ．，Ｕｎｔｅｒｈｏｌｚｎｅｒ，Ｌ．，Ｊｉａｎｇ，Ｚ．，Ｈｏｒｖａｔｈ，Ｇ．
，Ｒａｔｈｉｎａｍ，Ｖ．Ａ．，Ｊｏｈｎｓｔｏｎｅ，Ｒ．Ｗ．，ら．（２０１２）．Ｓ
ｔｒｕｃｔｕｒｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＨＩＮ  ｄｏｍａｉｎ：ＤＮＡ  ｃｏｍｐｌｅｘｅ
ｓ  ｒｅｖｅａｌ  ｌｉｇａｎｄ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ａｎｄ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｍ
ｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＡＩＭ２  ｉｎｆｌａｍｍａｓｏｍｅ  ａｎｄ  Ｉ
ＦＩ１６  ｒｅｃｅｐｔｏｒ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，３６，５６１−５７１．
Ｋｅａｔｉｎｇ，Ｓ．Ｅ．，Ｂａｒａｎ，Ｍ．，及びＢｏｗｉｅ，Ａ．Ｇ．（２０１１）
．Ｃｙｔｏｓｏｌｉｃ  ＤＮＡ  ｓｅｎｓｏｒｓ  ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ  ｔｙｐｅ  Ｉ
ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ．Ｔｒｅｎｄｓ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．３２，
５７４−５８１．
Ｋｅｒｕｒ，Ｎ．，Ｖｅｅｔｔｉｌ，Ｍ．Ｖ．，Ｓｈａｒｍａ−Ｗａｌｉａ，Ｎ．，Ｂｏ
ｔｔｅｒｏ，Ｖ．，Ｓａｄａｇｏｐａｎ，Ｓ．，Ｏｔａｇｅｒｉ，Ｐ．，及びＣｈａｎｄ
ｒａｎ，Ｂ．（２０１１）．ＩＦＩ１６  ａｃｔｓ  ａｓ  ａ  ｎｕｃｌｅａｒ  ｐａｔ
ｈｏｇｅｎ  ｓｅｎｓｏｒ  ｔｏ  ｉｎｄｕｃｅ  ｔｈｅ  ｉｎｆｌａｍｍａｓｏｍｅ  
ｉｎ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｔｏ  Ｋａｐｏｓｉ  Ｓａｒｃｏｍａ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ
ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．  Ｃｅｌｌ  Ｈｏｓｔ  Ｍｉｃｒｏｂ
ｅ，９，３６３−３７５．
Ｋｏｄｙｍ，Ｒ．，Ｋｏｄｙｍ，Ｅ．，及びＳｔｏｒｙ，Ｍ．Ｄ．（２００９）．２’−
５’−Ｏｌｉｇｏａｄｅｎｙｌａｔｅ  ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ  ｉｓ  ａｃｔｉｖａｔｅ
ｄ  ｂｙ  ａ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ＲＮＡ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｍｏｔｉｆ．Ｂｉｏｃｈ
ｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．３８８，３１７−３２２．
Ｋｒａｓｔｅｖａ，Ｐ．Ｖ．，Ｇｉｇｌｉｏ，Ｋ．Ｍ．，及びＳｏｎｄｅｒｍａｎｎ，Ｈ
．（２０１２）．Ｓｅｎｓｉｎｇ  ｔｈｅ  ｍｅｓｓｅｎｇｅｒ：  ｔｈｅ  ｄｉｖｅｒ
ｓｅ  ｗａｙｓ  ｔｈａｔ  ｂａｃｔｅｒｉａ  ｓｉｇｎａｌ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｃ−ｄ
ｉ−ＧＭＰ．Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉ．２１，９２９−９４８．
Ｋｕｂｏｔａ，Ｋ．，Ｎａｋａｈａｒａ，Ｋ．，Ｏｈｔｓｕｋａ，Ｔ．，Ｙｏｓｈｉｄａ
，Ｓ．，Ｋａｗａｇｕｃｈｉ，Ｊ．，Ｆｕｊｉｔａ，Ｙ．，Ｏｚｅｋｉ，Ｙ．，Ｈａｒａ
，Ａ．，Ｙｏｓｈｉｍｕｒａ，Ｃ．，Ｆｕｒｕｋａｗａ，Ｈ．ら．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａ
ｔｉｏｎ  ｏｆ  ２’−ｐｈｏｐｈｏｄｉｅｓｔｅｒａｓｅ，  ｗｈｉｃｈ  ｐｌａｙｓ
ａ  ｒｏｌｅ  ｉｎ  ２−５Ａ  ｓｙｓｔｅｍ  ｒｅｕｌａｔｅｄ  ｂｙ  ｉｎｔｅｒ
ｆｅｒｏｎ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ，２７９，３７８３２−３７８４１．
Ｋｕｌｓｈｉｎａ，Ｎ．，Ｂａｉｒｄ，Ｎ．Ｊ．，及びＦｅｒｒｅ−Ｄ’Ａｍａｒｅ，Ａ
．Ｒ．（２００９）．Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｂａｃｔｅｒｉａｌ  ｓ
ｅｃｏｎｄ  ｍｅｓｓｅｎｇｅｒ  ｃｙｃｌｉｃ  ｄｉｇｕａｎｙｌａｔｅ  ｂｙ  ｉｔ
ｓ  ｃｏｇｎａｔｅ  ｒｉｂｏｓｗｉｔｃｈ．Ｎａｔ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ
．１６，１２１２−１２１７．
Ｌｅｅ，Ｅ．Ｒ．，Ｂａｋｅｒ，Ｊ．Ｌ．，Ｗｅｉｎｂｅｒｇ，Ｚ．，Ｓｕｄａｒｓａｎ
，Ｎ．，及びＢｒｅａｋｅｒ，Ｒ．Ｒ．（２０１０）．Ａｎ  ａｌｌｏｓｔｅｒｉｃ  ｓ
ｅｌｆ−ｓｐｌｉｃｉｎｇ  ｒｉｂｏｚｙｍｅ  ｔｒｉｇｇｅｒｅｄ  ｂｙ  ａ  ｂａｃ
ｔｅｒｉａｌ  ｓｅｃｏｎｄ  ｍｅｓｓｅｎｇｅｒ．Ｓｃｉｅｎｃｅ，３２９，８４５−
８４８．
Ｌｕｎｄｅ，Ｂ．Ｍ．，Ｍｏｏｒｅ，Ｃ．及びＶａｒａｎｉ，Ｇ．（２００７）．ＲＮＡ
−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ：  ｍｏｄｕｌａｒ  ｄｅｓｉｇｎ  ｆｏｒ  ｅｆ
ｆｉｃｉｅｎｔ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ．Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．８
，４７９−４９０．
ＭｃＣｏｙ，Ａ．Ｊ．，Ｇｒｏｓｓｅ−Ｋｕｎｓｔｌｅｖｅ，Ｒ．Ｗ．，Ａｄａｍｓ，Ｐ
．Ｄ．，Ｗｉｎｎ，Ｍ．Ｄ．，Ｓｔｏｒｏｎｉ，Ｌ．Ｃ．，及びＲｅａｄ，Ｒ．Ｊ．（２
００７）．Ｐｈａｓｅｒ  ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｉｃ  ｓｏｆｔｗａｒｅ．Ｊ．
Ａｐｐｌ．Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．４０，６５８−６７４．
Ｏ’Ｎｅｉｌｌ，Ｌ．Ａ．（２０１３）．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．  Ｓｅｎｓｉｎｇ  ｔ
ｈｅ  ｄａｒｋ  ｓｉｄｅ  ｏｆ  ＤＮＡ．Ｓｃｉｅｎｃｅ，３３９，７６３−７６４．
Ｏｔｗｉｎｏｗｓｋｉ，Ｚ．，及びＭｉｎｏｒ，Ｗ．（１９９７）．Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎ
ｇ  ｏｆ  Ｘ−ｒａｙ  Ｄｉｆｆｒａｃｔｉｏｎ  Ｄａｔａ  Ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ  ｉｎ
Ｏｓｃｉｌｌａｔｉｏｎ  Ｍｏｄｅ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，
２７６，３０７−３２６．
Ｏｕｙａｎｇ，Ｓ．，Ｓｏｎｇ，Ｘ．，Ｗａｎｇ，Ｙ．，Ｒｕ，Ｈ．，Ｓｈａｗ，Ｎ．，
Ｊｉａｎｇ，Ｙ．，Ｎｉｕ，Ｆ．，Ｚｈｕ，Ｙ．，Ｑｉｕ，Ｗ．，Ｐａｒｖａｔｉｙａｒ
，Ｋ．，ら．（２０１２）．  Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｔｈｅ
ＳＴＩＮＧ  ａｄａｐｔｏｒ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｒｅｖｅａｌｓ  ａ  ｈｙｄｒｏｐｈ
ｏｂｉｃ  ｄｉｍｅｒ  ｉｎｔｅｒｆａｃｅ  ａｎｄ  ｍｏｄｅ  ｏｆ  ｃｙｃｌｉｃ  
ｄｉ−ＧＭＰ  ｂｉｎｄｉｎｇ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，３６，１０７３−１０８６．
Ｒｏｍｌｉｎｇ，Ｕ．，Ｇａｌｐｅｒｉｎ，Ｍ．Ｙ．，及びＧｏｍｅｌｓｋｙ，Ｍ．（２
０１３）．Ｃｙｃｌｉｃ  ｄｉ−ＧＭＰ：  ｔｈｅ  Ｆｉｒｓｔ  ２５  Ｙｅａｒｓ  ｏ
ｆ  ａ  Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  Ｂａｃｔｅｒｉａｌ  Ｓｅｃｏｎｄ  Ｍｅｓｓｅｎｇｅｒ
．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｒｅｖ．７７，１−５２．
Ｒｏｓｓ，Ｐ．，Ｗｅｉｎｈｏｕｓｅ，Ｈ．，Ａｌｏｎｉ，Ｙ．，Ｍｉｃｈａｅｌｉ，Ｄ
．，  Ｗｅｉｎｂｅｒｇｅｒ−Ｏｈａｎａ，Ｐ．，Ｍａｙｅｒ，Ｒ．，Ｂｒａｕｎ，Ｓ．
，ｄｅ  Ｖｒｏｏｍ，Ｅ．，ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｍａｒｅｌ，Ｇ．Ａ．，ｖａｎ  Ｂｏｏｍ
，Ｊ．Ｈ．，ら．（１９８７）．Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ  ｓ
ｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｉｎ  Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｘｙｌｉｎｕｍ  ｂｙ  ｃｙｃｌｉ
ｃ  ｄｉｇｕａｎｙｌｉｃ  ａｃｉｄ．Ｎａｔｕｒｅ，３２５，２７９−２８１．
Ｓａｄｌｅｒ，Ａ．Ｊ．，及びＷｉｌｌｉａｍｓ，Ｂ．Ｒ．（２００８）．Ｉｎｔｅｒｆ
ｅｒｏｎ−ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ  ａｎｔｉｖｉｒａｌ  ｅｆｆｅｃｔｏｒｓ．Ｎａｔ．Ｒ
ｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．８，５５９−５６８．
Ｓｃｈｉｒｍｅｒ，Ｔ．，及びＪｅｎａｌ，Ｕ．（２００９）．Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  
ａｎｄ  ｍｅｃｈａｎｉｓｔｉｃ  ｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔｓ  ｏｆ  ｃ−ｄｉ−ＧＭＰ
ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ．Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．７，７２４−７３５．
Ｓｈｕ，Ｃ．，Ｙｉ，Ｇ．，Ｗａｔｔｓ，Ｔ．，Ｋａｏ，Ｃ．Ｃ．，及びＬｉ，Ｐ．（２
０１２）．Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｏｆ  ＳＴＩＮＧ  ｂｏｕｎｄ  ｔｏ  ｃｙｃｌｉｃ  
ｄｉ−ＧＭＰ  ｒｅｖｅａｌｓ  ｔｈｅ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍ  ｏｆ  ｃｙｃｌｉｃ  ｄ
ｉｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ  ｂｙ  ｔｈｅ  ｉｍｍｕｎｅ  ｓｙ
ｓｔｅｍ．Ｎａｔ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９，７２２−７２４．
Ｓｍｉｔｈ，Ｋ．Ｄ．，Ｌｉｐｃｈｏｃｋ，Ｓ．Ｖ．，Ａｍｅｓ，Ｔ．Ｄ．，Ｗａｎｇ，
Ｊ．，Ｂｒｅａｋｅｒ，Ｒ．Ｒ．，及びＳｔｒｏｂｅｌ，Ｓ．Ａ．（２００９）．Ｓｔｒ
ｕｃｔｕｒａｌ  ｂａｓｉｓ  ｏｆ  ｌｉｇａｎｄ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｂｙ  ａ  ｃ−ｄ
ｉ−ＧＭＰ  ｒｉｂｏｓｗｉｔｃｈ．Ｎａｔ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１６，
１２１８−１２２３．
Ｓｕｄａｒｓａｎ，Ｎ．，Ｌｅｅ，Ｅ．Ｒ．，Ｗｅｉｎｂｅｒｇ，Ｚ．，Ｍｏｙ，Ｒ．Ｈ
．，Ｋｉｍ，Ｊ．Ｎ．，Ｌｉｎｋ，Ｋ．Ｈ．，及びＢｒｅａｋｅｒ，Ｒ．Ｒ．（２００８
）．Ｒｉｂｏｓｗｉｔｃｈｅｓ  ｉｎ  ｅｕｂａｃｔｅｒｉａ  ｓｅｎｓｅ  ｔｈｅ  ｓ
ｅｃｏｎｄ  ｍｅｓｓｅｎｇｅｒ  ｃｙｃｌｉｃ  ｄｉ−ＧＭＰ．Ｓｃｉｅｎｃｅ，３２
１，４１１−４１３．
Ｓｕｎ，Ｌ．，Ｗｕ，Ｊ．，Ｄｕ，Ｆ．，Ｃｈｅｎ，Ｘ．，及びＣｈｅｎ，Ｚ．Ｊ．（２
０１３）．Ｃｙｃｌｉｃ  ＧＭＰ−ＡＭＰ  ｓｙｎｔｈａｓｅ  ｉｓ  ａ  ｃｙｔｏｓｏ
ｌｉｃ  ＤＮＡ  ｓｅｎｓｏｒ  ｔｈａｔ  ａｃｔｉｖａｔｅｓ  ｔｈｅ  ｔｙｐｅ  Ｉ
ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  ｐａｔｈｗａｙ．Ｓｃｉｅｎｃｅ，３３９，７８６−７９１．
Ｓｕｎ，Ｗ．，Ｌｉ，Ｙ．，Ｃｈｅｎ，Ｌ．，Ｃｈｅｎ，Ｈ．，Ｙｏｕ，Ｆ．，Ｚｈｏｕ
，  Ｘ．，Ｚｈｏｕ，Ｙ．，Ｚｈａｉ，Ｚ．，Ｃｈｅｎ，Ｄ．，及びＪｉａｎｇ，Ｚ．（
２００９）．ＥＲＩＳ，ａｎ  ｅｎｄｏｐｌａｓｍｉｃ  ｒｅｔｉｃｕｌｕｍ  ＩＦＮ  
ｓｔｉｍｕｌａｔｏｒ，  ａｃｔｉｖａｔｅｓ  ｉｎｎａｔｅ  ｉｍｍｕｎｅ  ｓｉｇｎ
ａｌｉｎｇ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｄｉｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａ
ｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０６，８６５３−８６５８．
Ｔａｋａｏｋａ，Ａ．，Ｗａｎｇ，Ｚ．，Ｃｈｏｉ，Ｍ．Ｋ．，Ｙａｎａｉ，Ｈ．，Ｎｅ
ｇｉｓｈｉ，Ｈ．，Ｂａｎ，Ｔ．，Ｌｕ，Ｙ．，Ｍｉｙａｇｉｓｈｉ，Ｍ．，Ｋｏｄａｍ
ａ，Ｔ．，Ｈｏｎｄａ，Ｋ．，ら．（２００７）．ＤＡＩ  （ＤＬＭ−１／ＺＢＰ１）  
ｉｓ  ａ  ｃｙｔｏｓｏｌｉｃ  ＤＮＡ  ｓｅｎｓｏｒ  ａｎｄ  ａｎ  ａｃｔｉｖａｔ
ｏｒ  ｏｆ  ｉｎｎａｔｅ  ｉｍｍｕｎｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ．Ｎａｔｕｒｅ，４４８，
５０１−５０５．
Ｕｎｔｅｒｈｏｌｚｎｅｒ，Ｌ．，Ｋｅａｔｉｎｇ，Ｓ．Ｅ．，Ｂａｒａｎ，Ｍ．，Ｈｏ
ｒａｎ，Ｋ．Ａ．，Ｊｅｎｓｅｎ，Ｓ．Ｂ．，Ｓｈａｒｍａ，Ｓ．，Ｓｉｒｏｉｓ，Ｃ．
Ｍ．，Ｊｉｎ，Ｔ．，Ｌａｔｚ，Ｅ．，Ｘｉａｏ，Ｔ．Ｓ．，ら．（２０１０）．ＩＦＩ
１６  ｉｓ  ａｎ  ｉｎｎａｔｅ  ｉｍｍｕｎｅ  ｓｅｎｓｏｒ  ｆｏｒ  ｉｎｔｒａｃ
ｅｌｌｕｌａｒ  ＤＮＡ．Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１，９９７−１００４．
Ｗｏｌｋｏｗｉｃｚ，Ｕ．Ｍ．，及びＣｏｏｋ，Ａ．Ｇ．（２０１２）．ＮＦ４５  ｄｉ
ｍｅｒｉｚｅｓ  ｗｉｔｈ  ＮＦ９０，  Ｚｆｒ  ａｎｄ  ＳＰＮＲ  ｖｉａ  ａ  ｃｏ
ｎｓｅｒｖｅｄ  ｄｏｍａｉｎ  ｔｈａｔ  ｈａｓ  ａ  ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｙｌｔｒａ
ｎｓｆｅｒａｓｅ  ｆｏｌｄ．  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．４０，９３５６
−９３６８．
Ｗｏｏｄｗａｒｄ，Ｊ．Ｊ．，Ｉａｖａｒｏｎｅ，Ａ．Ｔ．，及びＰｏｒｔｎｏｙ，Ｄ．
Ａ．（２０１０）．ｃ−ｄｉ−ＡＭＰ  Ｓｅｃｒｅｔｅｄ  ｂｙ  Ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕ
ｌａｒ  Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ  Ａｃｔｉｖａｔｅｓ  ａ  Ｈ
ｏｓｔ  Ｔｙｐｅ  Ｉ  Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅ．Ｓｃｉｅｎｃｅ，（
Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ  ３２８，１７０３-１７０５．
Ｗｕ，Ｊ．，Ｓｕｎ，Ｌ．，Ｃｈｅｎ，Ｘ．，Ｄｕ，Ｆ．，Ｓｈｉ，Ｈ．，Ｃｈｅｎ，Ｃ
．，及びＣｈｅｎ，Ｚ．Ｊ．（２０１３）．Ｃｙｃｌｉｃ  ＧＭＰ−ＡＭＰ  ｉｓ  ａｎ
ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ  ｓｅｃｏｎｄ  ｍｅｓｓｅｎｇｅｒ  ｉｎ  ｉｎｎａｔｅ  ｉ
ｍｍｕｎｅ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｂｙ  ｃｙｔｏｓｏｌｉｃ  ＤＮＡ．Ｓｃｉｅｎｃｅ
，３３９，  ８２６−８３０．
Ｙａｎｇ，Ｐ．，Ａｎ，Ｈ．，Ｌｉｕ，Ｘ．，Ｗｅｎ，Ｍ．，Ｚｈｅｎｇ，Ｙ．，Ｒｕｉ
，Ｙ．，及びＣａｏ，Ｘ．（２０１０）．Ｔｈｅ  ｃｙｔｏｓｏｌｉｃ  ｎｕｃｌｅｉｃ
ａｃｉｄ  ｓｅｎｓｏｒ  ＬＲＲＦＩＰ１  ｍｅｄｉａｔｅｓ  ｔｈｅ  ｐｒｏｄｕｃ
ｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｙｐｅ  Ｉ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  ｖｉａ  ａ  ｂｅｔａ−ｃａｔ
ｅｎｉｎ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｐａｔｈｗａｙ．Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１，４８
７−４９４．
Ｙｉｎ，Ｑ．，Ｔｉａｎ，Ｙ．，Ｋａｂａｌｅｅｓｗａｒａｎ，Ｖ．，Ｊｉａｎｇ，Ｘ．
，Ｔｕ，Ｄ．，Ｅｃｋ，Ｍ．Ｊ．，Ｃｈｅｎ，Ｚ．Ｊ．，及びＷｕ，Ｈ．（２０１２）．
Ｃｙｃｌｉｃ  ｄｉ−ＧＭＰ  ｓｅｎｓｉｎｇ  ｖｉａ  ｔｈｅ  ｉｎｎａｔｅ  ｉｍｍ
ｕｎｅ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ＳＴＩＮＧ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ，４６，
７３５−７４５．
Ｚｈａｎｇ，Ｚ．，Ｙｕａｎ，Ｂ．，Ｂａｏ，Ｍ．，Ｌｕ，Ｎ．，Ｋｉｍ，Ｔ．，及びＬ
ｉｕ，Ｙ．Ｊ．（２０１１）．Ｔｈｅ  ｈｅｌｉｃａｓｅ  ＤＤＸ４１  ｓｅｎｓｅｓ  
ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ＤＮＡ  ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｂｙ  ｔｈｅ  ａｄａｐｔｏ
ｒ  ＳＴＩＮＧ  ｉｎ  ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  ｃｅｌｌｓ．Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１
２，９５９−９６５．
Ｚｈｏｎｇ，Ｂ．，Ｙａｎｇ，Ｙ．，Ｌｉ，Ｓ．，Ｗａｎｇ，Ｙ．Ｙ．，Ｌｉ，Ｙ．，Ｄ
ｉａｏ，Ｆ．，Ｌｅｉ，Ｃ．，Ｈｅ，Ｘ．，Ｚｈａｎｇ，Ｌ．，Ｔｉｅｎ，Ｐ．，ら．（
２００８）．Ｔｈｅ  ａｄａｐｔｏｒ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ＭＩＴＡ  ｌｉｎｋｓ  ｖｉｒ
ｕｓ−ｓｅｎｓｉｎｇ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｔｏ  ＩＲＦ３  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉ
ｏｎ  ｆａｃｔｏｒ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，２９，５３８−５５０
．
【０３１１】
均等物及び範囲
当業者はわずかな日常的な実験を用いて、本明細書で記載される本発明に係る特定の実
施形態に対する多数の均等物を認識するであろうし、突き止めることができるであろう。
本発明の範囲は上記の説明に限定されるようには意図されるものではなく、むしろ添付の
請求項で述べられる通りである。
【０３１２】
請求項では、たとえば、「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」のような冠詞は、反対に示さ
れないまたは文脈から明らかではない限り、１または複数を意味し得る。群の１以上のメ
ンバー間での「または」を含む請求項または説明は、反対に示されないまたは文脈から明
らかではない限り、群のメンバーの１、１を超える、またはすべてが存在するならば、所
与の産物または工程にて満たされる、採用される、またはさもなければそれに関連すると
見なされる。本発明は、群の正確に１つのメンバーが所与の産物または工程にて存在する
、採用される、またはさもなければそれに関連する実施形態を含む。本発明は、１を超え
るまたはすべての群のメンバーが所与の産物または工程にて存在する、採用される、また
はさもなければそれに関連する実施形態を含む。
【０３１３】
用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は開放的であり、追加の要素または工程の包含
を許容するが要求しないことが意図される。用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」が本
明細書で使用される場合、用語「から成る（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｏｆ）」も包含され
、開示される。
【０３１４】
範囲が与えられる場合、端点が含まれる。さらに、特に示されないまたは文脈及び当業
者の理解から明らかではない限り、範囲として表現される値は本発明の異なる実施形態に
て言及される範囲の範囲内での任意の特定の値または部分的な範囲を仮定することができ
、文脈が明瞭に指示しない限り、範囲の下限の単位の小数第１位まで仮定することができ
ることが理解されるべきである。
【０３１５】
加えて、従来技術の範囲に入る本発明の特定に実施形態は請求項の１以上から明白に除
外され得ることが理解されるべきである。そのような実施形態は当業者に既知であると思
われるので、それらは除外が本明細書で明白に言及されていなくても除外され得る。本発
明の組成物の特定の実施形態（たとえば、核酸またはそれによってコードされるタンパク
質；任意の製造方法；任意の使用方法等）は、従来技術の存在に関係しようとすまいと、
任意の理由で１以上の請求項から除外することができる。
【０３１６】
引用されたすべての情報源、たとえば、参考文献、出版物、データベース、データベー
スの実体及び本明細書で引用された技術は、引用にて明白に言及されていなくても参照に
よって本出願に組み入れられる。引用された情報源と本出願の矛盾した発言の場合、本出
願における発言が制御すべきである。
【０３１７】
節及び表の見出しは限定することを意図するものではない。
【０３１８】
本発明の好ましい実施形態によれば、例えば、以下が提供される。
（項１）
以下の特徴：
Ａ−−−−−Ｌ−−−−−Ｂ
を含む構造を有するｃＧＡＳの調節因子であって、
式中、
ＡはｃＧＡＳのアデノシン結合部位に適合する部分でありまたはそれを含み；
ＢはｃＧＡＳのグアノシン結合部位に適合する部分でありまたはそれを含み；
Ｌは、ＡとＢが適当な相互作用を採用してｃＧＡＳを結合するのを可能にする方法でＡと
Ｂを連結するリンカー部分である、前記調節因子。
（項２）
化合物が
【化２３】
2019137692.tif 000033
または薬学上許容可能なその塩以外であるという条件で、
式Ｉの化合物または薬学上許容可能なその塩：
【化２４】
2019137692.tif 000034
（式中
環Ａは、
【化２５】
2019137692.tif 000035
から成る群から選択され；
環Ｂは、
【化２６】
2019137692.tif 000036
から成る群から選択され；
Ｘ１及びＸ２はそれぞれ独立して−ＣＲ−または−Ｎ−であり；
Ｘ３は−Ｃ（Ｒ）２−、−Ｏ−、または−ＮＲ−であり；
Ｘａ及びＸｂは独立して−Ｃ（Ｒ）２−、−Ｃ（Ｒ）＝Ｃ（Ｒ）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−
Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、または−Ｎ（Ｒ）−であり；
Ｘａ１及びＸｂ１は独立して−Ｃ（Ｒ）−または−Ｎ−であり；
Ｘｃ及びＸｄは、存在する場合、独立して任意で置換された酸素、任意で置換されたイオ
ウ、置換された窒素原子、ＢＨ３、または任意で置換されたＣ１−１２脂肪族であり；
Ｘｅ及びＸｆはそれぞれ独立して−Ｏ−、−Ｓ−、または−Ｎ（Ｒ）−であり；
Ｗはそれぞれ独立してＰまたはＳであり；
Ｒ１及びＲ２はそれぞれ独立して水素、ハロゲン、−ＮＯ２、−ＣＮ、−ＯＲａ、−ＳＲ
、−Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−ＣＯ２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２
Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ）
２、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝
ＮＲ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（＝ＮＲ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ＝ＮＯＲ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（
Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２Ｒ、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、
及び任意で置換されたＣ１−１２脂肪族またはＣ１−４アルコキシ−Ｃ１−４アルキルから成る群から選択され；
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ１０、及びＲ１１はそれぞれ独立して水素、ハロゲン
、−ＮＯ２、−ＣＮ、−ＯＲ、−ＳＲ、−Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−ＣＯ２Ｒ、−Ｃ
（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｃ
（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ
（Ｒ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＮＲ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（＝ＮＲ）Ｎ（Ｒ）２、−
Ｃ＝ＮＯＲ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）
ＳＯ２Ｒ、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、または、Ｃ１−１２脂肪族、フェニル、３−７員環の飽和または部分不飽和の単環式炭素環、７−１０員環の飽和または部分不飽和の二環式炭素環、３−７員環の飽和または部分不飽和の、窒素、酸素またはイオウから独立して選択される１−２のヘテロ原子を有する複素環、７−１０員環の飽和または部分不飽和の、窒素、酸素またはイオウから独立して選択される１−３のヘテロ原子を有する二環式複素環、及び窒素、酸素またはイオウから独立して選択される１−３のヘテロ原子を有する５−６員環のヘテロアリール環から選択される任意で置換された基から成る群から選択され；
Ｒ８及びＲ９は存在する場合、それぞれ独立して水素、ハロゲン、−ＮＯ２、−ＣＮ、−
ＯＲａ、−ＳＲ、−Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−ＣＯ２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−
Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−
ＳＯ２Ｎ（Ｒ）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｎ（Ｒ）２、−
Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＮＲ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（＝ＮＲ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ＝ＮＯＲ、−Ｎ（Ｒ
）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２Ｒ、−ＯＣ（Ｏ
）Ｎ（Ｒ）２、及び任意で置換されたＣ１−１２脂肪族から成る群から選択され；
Ｒはそれぞれ独立して、水素若しくは、Ｃ１−６脂肪族、フェニル、３−７員環の飽和または部分不飽和の炭素環式環、３−７員環の飽和または部分不飽和の、窒素、酸素またはイオウから独立して選択される１−２のヘテロ原子を有する単環式複素環、及び窒素、酸素またはイオウから独立して選択される１−３のヘテロ原子を有する５−６員環のヘテロアリール環から成る群から選択される任意で置換された基から成る群から選択され；または
同じ窒素上の２つのＲ基はその介在原子と一緒になって、窒素、酸素またはイオウから独
立して選択される１−４のヘテロ原子を有する任意で置換された３−７員環の飽和または
部分不飽和の環、またはヘテロアリール環を形成し；並びに  
Ｒａは酸素保護基またはＲである）。
（項３）
化合物が、
【化２７】
2019137692.tif 000037
以外であるという条件で
式ＩＩの化合物または薬学上許容可能なその塩：
【化２８】
2019137692.tif 000038
（式中、
環Ａは、
【化２９】
2019137692.tif 000039
から成る群から選択され；
環Ｂは、
【化３０】
2019137692.tif 000040
から成る群から選択され；
Ｘ１及びＸ２はそれぞれ独立して−ＣＲ−または−Ｎ−であり；
Ｘ３は−Ｃ（Ｒ）２−、−Ｏ−、または−ＮＲ−であり；
Ｘａ及びＸｂは独立して−Ｃ（Ｒ）２−、−Ｃ（Ｒ）＝Ｃ（Ｒ）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−
Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、または−Ｎ（Ｒ）−であり；
Ｘａ１及びＸｂ１は独立して−Ｃ（Ｒ）−または−Ｎ−であり；
Ｘｃ及びＸｄは、存在する場合、独立して任意で置換された酸素、任意で置換されたイオ
ウ、置換された窒素原子、ＢＨ３、または任意で置換されたＣ１−１２脂肪族であり；
Ｘｅ及びＸｆはそれぞれ独立して−Ｏ−、−Ｓ−、または−Ｎ（Ｒ）−であり；
Ｗはそれぞれ独立してＰまたはＳであり；
Ｒ１及びＲ２はそれぞれ独立して水素、ハロゲン、−ＮＯ２、−ＣＮ、−ＯＲａ、−ＳＲ
、−Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−ＣＯ２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２
Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ）
２、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝
ＮＲ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（＝ＮＲ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ＝ＮＯＲ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（
Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２Ｒ、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、
及び任意で置換されたＣ１−１２脂肪族またはＣ１−４アルコキシ−Ｃ１−４アルキルから成る群から選択され；
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ１０、及びＲ１１はそれぞれ独立して水素、ハロゲン
、−ＮＯ２、−ＣＮ、−ＯＲ、−ＳＲ、−Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−ＣＯ２Ｒ、−Ｃ
（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｃ
（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ
（Ｒ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＮＲ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（＝ＮＲ）Ｎ（Ｒ）２、−
Ｃ＝ＮＯＲ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）
ＳＯ２Ｒ、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、または、Ｃ１−１２脂肪族、フェニル、３−７員環の飽和または部分不飽和の単環式炭素環、７−１０員環の飽和または部分不飽和の二環式炭素環、３−７員環の飽和または部分不飽和の、窒素、酸素またはイオウから独立して選択される１−２のヘテロ原子を有する複素環、７−１０員環の飽和または部分不飽和の、窒素、酸素またはイオウから独立して選択される１−３のヘテロ原子を有する二環式複素環、及び窒素、酸素またはイオウから独立して選択される１−３のヘテロ原子を有する５−６員環のヘテロアリール環から選択される任意で置換された基から成る群から選択され；
Ｒ８及びＲ９は存在する場合、それぞれ独立して水素、ハロゲン、−ＮＯ２、−ＣＮ、−
ＯＲａ、−ＳＲ、−Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−ＣＯ２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−
Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−
ＳＯ２Ｎ（Ｒ）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｎ（Ｒ）２、−
Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＮＲ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（＝ＮＲ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ＝ＮＯＲ、−Ｎ（Ｒ
）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２Ｒ、−ＯＣ（Ｏ
）Ｎ（Ｒ）２、及び任意で置換されたＣ１−１２脂肪族から成る群から選択され；
Ｒはそれぞれ独立して、水素若しくは、Ｃ１−６脂肪族、フェニル、３−７員環の飽和または部分不飽和の炭素環式環、３−７員環の飽和または部分不飽和の、窒素、酸素またはイオウから独立して選択される１−２のヘテロ原子を有する単環複素環、及び窒素、酸素またはイオウから独立して選択される１−３のヘテロ原子を有する５−６員環のヘテロアリール環から成る群から選択される任意で置換された基から成る群から選択され；
または：
同じ窒素上の２つのＲ基はその介在原子と一緒になって、窒素、酸素またはイオウから独
立して選択される１−４のヘテロ原子を有する任意で置換された３−７員環の飽和または
部分不飽和の環、またはヘテロアリール環を形成し；並びに  
Ｒａは酸素保護基またはＲである）。
（項４）
環Ａが
【化３１】
2019137692.tif 000041
である上記項のいずれか１項に記載の化合物。
（項５）
環Ａが、
【化３２】
2019137692.tif 000042
である上記項のいずれか１項に記載の化合物。
（項６）
環Ａが
【化３３】
2019137692.tif 000043
である上記項のいずれか１項に記載の化合物。
（項７）
環Ｂが
【化３４】
2019137692.tif 000044
である上記項のいずれか１項に記載の化合物。
（項８）
環Ｂが
【化３５】
2019137692.tif 000045
である上記項のいずれか１項に記載の化合物。
（項９）
各Ｘ１が−Ｎ−である上記項のいずれか１項に記載の化合物。
（項１０）
各Ｘ２が−Ｎ−である上記項のいずれか１項に記載の化合物。
（項１１）
Ｘ３が−ＮＲ−である上記項のいずれか１項に記載の化合物。
（項１２）
Ｘａが−Ｏ−である上記項のいずれか１項に記載の化合物。
（項１３）
Ｘｂが−Ｏ−である上記項のいずれか１項に記載の化合物。
（項１４）
Ｘａ１及びＸｂ１が−Ｃ（Ｒ）−である上記項のいずれか１項に記載の化合物。
（項１５）
Ｘｃ及びＸｄが双方とも酸素である上記項のいずれか１項に記載の化合物。
（項１６）
Ｘｅ及びＸｆが双方とも酸素である上記項のいずれか１項に記載の化合物。
（項１７）
Ｒ１が、水素、ハロゲン、−ＯＲａ、−ＳＲ、−Ｎ（Ｒ）２、及び任意で置換されたＣ
１−１２脂肪族またはＣ１−４アルコキシ−Ｃ１−４アルキルから成る群から選択される上記項のいずれか１項に記載の化合物。
（項１８）
Ｒ１が−ＯＨである上記項１７に記載の化合物。
（項１９）
Ｒ２が、水素、ハロゲン、−ＯＲａ、−ＳＲ、−Ｎ（Ｒ）２、及び任意で置換されたＣ
１−１２脂肪族またはＣ１−４アルコキシ−Ｃ１−４アルキルから成る群から選択される上記項のいずれか１項に記載の化合物。
（項２０）
Ｒ２が−ＯＨである上記項１９に記載の化合物。
（項２１）
ＲａがＲである上記項１７または１９に記載の化合物。
（項２２）
Ｒ３、Ｒ５及びＲ７がそれぞれ独立して水素、ハロゲン及び任意で置換されたＣ１−６
脂肪族から成る群から選択される上記項のいずれか１項に記載の化合物。
（項２３）
Ｒ３、Ｒ５及びＲ７がそれぞれ水素である上記項２２に記載の化合物。
（項２４）
Ｒ４及びＲ６がそれぞれ独立して水素、ハロゲン及び−Ｎ（Ｒ）２から成る群から選択
される上記項のいずれか１項に記載の化合物。
（項２５）
Ｒ４及びＲ６がそれぞれ−ＮＨ２である上記項２４に記載の化合物。
（項２６）
Ｒ８及びＲ９が水素である上記項のいずれか１項に記載の化合物。
（項２７）
Ｒ１０及びＲ１１が水素である上記項のいずれか１項に記載の化合物。
（項２８）
ＷがＰである上記項のいずれか１項に記載の化合物。
（項２９）
Ｒが水素である上記項のいずれか１項に記載の化合物。
（項３０）
化合物が式Ｉ−ａのもの
【化３６】
2019137692.tif 000046
である上記項１、２または４〜２９のいずれか１項に記載の化合物。
（項３１）
化合物が、式ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ、ＶＩ、ＶＩＩ、ＶＩＩＩ、またはＩＸのもの
【化３７】
2019137692.tif 000047
【化３８】
2019137692.tif 000048
または薬学上許容可能なその塩である上記項１、２または４〜２９のいずれか１項に記載
の化合物。
（項３２）
化合物が式ＩＩ−ａのもの
【化３９】
2019137692.tif 000049
または薬学上許容可能なその塩である上記項１または３〜２９のいずれか１項に記載の化
合物。
（項３３）
化合物が、式Ｘ、ＸＩ、ＸＩＩ、ＸＩＩＩ、ＸＩＶ、ＸＶ、またはＸＶＩのもの
【化４０】
2019137692.tif 000050
【化４１】
2019137692.tif 000051
【化４２】
2019137692.tif 000052
または薬学上許容可能なその塩である上記項１または３〜２９のいずれか１項に記載の化
合物。
（項３４）
化合物
【化４３】
2019137692.tif 000053
または薬学上許容可能なその塩。
（項３５）
化合物が、
【化４４】
2019137692.tif 000054
または薬学上許容可能なその塩である上記項３４に記載の化合物。
（項３６）
化合物
【化４５】
2019137692.tif 000055
または薬学上許容可能なその塩。
（項３７）
化合物が、
【化４６】
2019137692.tif 000056
または薬学上許容可能なその塩である上記項３６に記載の化合物。
（項３８）
単離された形態における上記項３４〜３７のいずれか１項に記載の化合物。
（項３９）
精製された形態における上記項３８に記載の化合物。
（項４０）
上記項１〜３９のいずれか１項に記載の化合物及び薬学上許容可能なキャリアを含む医
薬組成物。
（項４１）
免疫性の疾患、障害または状態の治療方法または予防方法であって、それを必要とする
対象に上記項１〜３９のいずれか１項に記載の化合物または上記項４０に記載の医薬組成
物を投与することを含む、前記方法。
（項４２）
免疫性の疾患、障害または状態が自己免疫性の疾患、障害または状態である上記項４１
に記載の方法。
（項４３）
免疫性の疾患、障害または状態が、全身性エリテマトーデス、シェーグレン症候群、及
びエカルディ・グティエール症候群から成る群から選択される上記項４１または４２に記
載の方法。
（項４４）
免疫性の疾患、障害または状態が炎症を特徴とする上記項４１に記載の方法。
（項４５）
免疫性の疾患、障害または状態がｃＧＡＳの活性化が原因で生じる、それによって持続
されるまたはそれに関連する上記項４１に記載の方法。
（項４６）
免疫性の疾患、障害または状態がＳＴＩＮＧの活性化が原因で生じる、それによって持
続されるまたはそれに関連する上記項４１に記載の方法。
（項４７）
化合物の投与がｃＧＡＳ活性の低下を生じる上記項４１に記載の方法。
（項４８）
化合物の投与がＳＴＩＮＧ活性の低下を生じる上記項４１に記載の方法。
（項４９）
化合物が化学合成によって調製される上記項４１〜４８のいずれか１項に記載の方法。
（項５０）
ｃＧＡＳの阻害方法であって、上記項１〜３９のいずれか１項に記載の化合物にｃＧＡ
Ｓを接触させることを含む、前記方法。
（項５１）
ＳＴＩＮＧの阻害方法であって、上記項１〜３９のいずれか１項に記載の化合物にＳＴ
ＩＮＧを接触させることを含む、前記方法。
（項５２）
ｃＧＡＳ調節因子の設計方法または特徴付け方法であって、
（ａ）少なくとも１つの潜在的な相互作用部位を含むｃＧＡＳ結晶の画像を提供する工程
と；
（ｂ）潜在的なｃＧＡＳ調節因子の構造要素である少なくとも１つの部分を画像にてドッ
キングさせる工程と；
（ｃ）潜在的な部分／相互作用部位の相互作用の１以上の特徴を評価する工程とを
含む、前記方法。
（項５３）
少なくとも１つの潜在的な相互作用部位には、Ｓｅｒ１９９、Ｓｅｒ４２０、Ｌｙｓ４
０２、Ｇｌｕ２１１、Ａｓｐ２１３、Ａｓｐ３０７、Ｔｙｒ４２１、Ａｒｇ３６４及びそ
れらの組み合わせから成る群から選択される部位が含まれる上記項５２に記載の方法。
（項５４）
少なくとも１つの潜在的な相互作用部位には、Ｔｙｒ４２１、Ｔｈｒ１９７、Ｓｅｒ３
６６、Ｓｅｒ３６８、Ａｒｇ３６４及びそれらの組み合わせから成る群から選択される部
位が含まれる上記項５２または５３に記載の方法。
（項５５）
少なくとも１つの潜在的な相互作用部位には、Ｔｙｒ４２１、Ａｓｐ２１３、Ａｓｐ３
０７、Ａｒｇ３６４及びそれらの組み合わせから成る群から選択される部位が含まれる上記項５２、５３または５４に記載の方法。
（項５６）
少なくとも１つの潜在的な相互作用部位にはＡｒｇ１６１が含まれる上記項５２に記載
の方法。
（項５７）
調節因子が、上記項１〜３９のいずれか１項に記載の化合物である上記項５２〜５５の
いずれか１項に記載の方法。
（項５８）
１以上の特徴には、部分と潜在的な相互作用部位との間の空間的な分離；潜在的な部分
と相互作用部位の相互作用のエネルギー、及び／またはそれらの組み合わせから成る群か
ら選択される少なくとも１つの特徴が含まれる上記項５２〜５７のいずれか１項に記載の
方法。
（項５９）
ｃＧＡＳ結晶の画像とドッキングさせた部分を含む潜在的なｃＧＡＳ調節因子の画像を
提供する工程をさらに含む上記項５２〜５７のいずれか１項に記載の方法。
（項６０）
結合した既知の調節因子、基質または産物を含むｃＧＡＳ結晶のそれと画像を比較する
工程をさらに含む上記項５９に記載の方法。
（項６１）
ｃＧＡＳ結晶の構造または配位が組み込まれる及び／または表示されるコンピュータま
たはコンピュータで読み取り可能な媒体を含むシステム。
（項６２）
ｃＧＡＳ調節因子の設計方法及び／または特徴付け方法であって、
（ｉ）ｃＧＡＳ調節因子の１以上の構造的特徴を評価するために上記項５１に記載のシス
テムを使用する工程と
（ｉｉ）ｃＧＡＳ調節因子を特徴付けるために１以上の試験管内の、生体内のまたは細胞
に基づくアッセイを行う工程とを含む、前記方法。
（項６３）
ｃＧＡＳ調節因子と既知のｃＧＡＳの調節因子、基質または産物との間での競合実験を
行う工程をさらに含む上記項５２〜６０または６２のいずれか１項に記載の方法。
（項６４）
方法がさらに、阻害剤の三次元形状を定義する工程を含む上記項６３に記載の方法。
（項６５）
表１、２、３、４、５、６または７のいずれか１つの構造配位によって特徴付けられる
三次元構造を有する結合ポケットで結合することを特徴とするｃＧＡＳの阻害剤。
（項６６）
設計されたｃＧＡＳ阻害剤であって、表１、２、３、４、５、６または７のいずれか１
つの結晶学的配位を含み、前記結晶学的配位が表１、２、３、４、５、６または７に係る
アミノ酸の主鎖原子から約１．５Å以下のほぼ二乗平方根偏差の範囲内にある、前記阻害
剤。
（項６７）
ｃＧＡＳ阻害剤の設計または特徴付けを行うために一連の情報を含有し、ディスプレイ
ユニットを含むユーザーインターフェースを有するコンピュータシステムであって、前記
一連の情報が
（ｉ）ｃＧＡＳタンパク質を結合することが知られる部分へのｃＧＡＳタンパク質の結合
に関する情報を入力するための論理回路と；
（ｉｉ）ｃＧＡＳタンパク質を結合することが知られる部分へのｃＧＡＳタンパク質の結
合に基づいて候補ｃＧＡＳ阻害剤を設計するための論理回路と；
（ｉｉｉ）候補ｃＧＡＳ阻害剤へのｃＧＡＳタンパク質の結合に関する情報を判定するた
めの論理回路と；
（ｉｖ）工程（ｉｉｉ）での判定に基づいて候補ｃＧＡＳ阻害剤のｃＧＡＳ阻害特性に関
する結論を出すための論理回路とを含む、前記コンピュータシステム。
（項６８）
ディスプレイユニットを含むユーザーインターフェースを有する一般目的のコンピュー
タについて一連の情報を含有するコンピュータで読み取り可能な保存媒体であって、前記
一連の情報が
（ｉ）ｃＧＡＳタンパク質を結合することが知られる化学物質へのｃＧＡＳタンパク質の
結合に関する情報を入力するための論理回路と；
（ｉｉ）ｃＧＡＳタンパク質を結合することが知られる化学物質へのｃＧＡＳタンパク質
の結合に基づいて候補ｃＧＡＳ阻害剤を設計するための論理回路と；
（ｉｉｉ）候補ｃＧＡＳ阻害剤へのｃＧＡＳタンパク質の結合に関する情報を判定するた
めの論理回路と；
（ｉｖ）工程（ｉｉｉ）での判定に基づいて候補ｃＧＡＳ阻害剤のｃＧＡＳ阻害特性に関
する結論を出すための論理回路とを含む、前記コンピュータで読み取り可能な保存媒体。
（項６９）
ディスプレイユニットを含むユーザーインターフェースを有する一般目的のコンピュー
タについて一連の情報を含むコンピュータ間でインターネットを通じて伝播する電子シグ
ナルまたは搬送波であって、前記一連の情報がディスプレイユニットを含むユーザーイン
ターフェースを有する一般目的のコンピュータについて一連の情報を含有するコンピュー
タで読み取り可能な保存媒体を含み、前記一連の情報が、
（ｉ）ｃＧＡＳタンパク質を結合することが知られる化学物質へのｃＧＡＳタンパク質の
結合に関する情報を入力するための論理回路と；
（ｉｉ）ｃＧＡＳタンパク質を結合することが知られる化学物質へのｃＧＡＳタンパク質
の結合に基づいて候補ｃＧＡＳ阻害剤を設計するための論理回路と；
（ｉｉｉ）候補ｃＧＡＳ阻害剤へのｃＧＡＳタンパク質の結合に関する情報を判定するた
めの論理回路と；
（ｉｖ）工程（ｉｉｉ）での判定に基づいて候補ｃＧＡＳ阻害剤のｃＧＡＳ阻害特性に関
する結論を出すための論理回路とを含む、前記電子シグナルまたは搬送波。
（項７０）
ｃＧＡＳポリペプチドの活性の調節方法であって、前記方法が、上記項５２に記載のｃ
ＧＡＳ調節因子にｃＧＡＳポリペプチドを接触させることを含み、調節剤がｃＧＡＳの既
知の調節因子、基質または産物ではない、前記方法。
（項７１）
調節剤が上記項１〜３９のいずれか１項に記載の化合物である上記項７０に記載の方法
。
（項７２）
ｃＧＡＳポリペプチドを含むまたはｃＧＡＳポリペプチドから成る結晶組成物または結
晶可能な組成物。
（項７３）
上記項７２に記載の組成物の作製方法。
（項７４）
上記項７２に記載の組成物の使用方法。
（項７５）
対象におけるインターフェロンのレベルの低下方法であって、前記対象をｃＧＡＳのア
ンタゴニストに接触させることを含む、前記方法。
（項７６）
前記アンタゴニストが、分子のｃＧＡＭＰファミリーの異性体の類似体、模倣体または
変異体である上記項７５に記載の方法。
（項７７）
個体にてサイトカインの特性を変える方法であって、分子のｃＧＡＭＰファミリーの異
性体の類似体、模倣体または変異体であるｃＧＡＳのアンタゴニストに前記個体を接触さ
せることを含む、前記方法。
（項７８）
１以上のｃＧＡＭＰ化合物と任意で１以上のｃＧＡＳ分子を含むキット。
【図１】
2019137692.tif 000069
【図２】
2019137692.tif 000070
【図３】
2019137692.tif 000071
【図４】
2019137692.tif 000072
【図５】
2019137692.tif 000073
【図６】
2019137692.tif 000074
【図７】
2019137692.tif 000075
【図Ｓ１Ａ】
2019137692.tif 000076
【図Ｓ１Ｂ】
2019137692.tif 000077
【図Ｓ１Ｃ】
2019137692.tif 000078
【図Ｓ２】
2019137692.tif 000079
【図Ｓ３】
2019137692.tif 000080
【図Ｓ４】
2019137692.tif 000081
【図Ｓ５】
2019137692.tif 000082
【図Ｓ６】
2019137692.tif 000083
【図Ｓ７Ａ】
2019137692.tif 000084
【図Ｓ７Ｂ】
2019137692.tif 000085
【図Ｓ８−１】
2019137692.tif 000086
【図Ｓ８−２】
2019137692.tif 000087
【図Ｓ９−１】
2019137692.tif 000088
【図Ｓ９−２】
2019137692.tif 000089
【図Ｓ１０】
2019137692.tif 000090
【図Ｓ１１】
2019137692.tif 000091
【配列表】
2019137692000001.app
【外国語明細書】
2019137692000001.pdf