(57)【要約】【課題】局所免疫刺激及び全身免疫刺激の組み合わせによる癌の免疫療法を提供すること。【解決手段】癌の免疫療法のための組成物及び方法を本明細書で提供する。前記方法は、ウイルス性抗原及び／または癌特異的腫瘍抗原（複数可）をコードする組み換え発現ベクターによる全身ワクチン接種により、活性化ＣＤ８  Ｔ細胞を誘発することを、ＴＬＲアゴニストを標準的な用法、または改変した用法で用いて局所（例えば、腫瘍内）免疫刺激を行い、Ｔ細胞を腫瘍に動員する局所での炎症性及び先天性免疫応答を誘発させることと組み合わせる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
明細書に記載の発明。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
配列表に関する記載
本出願に関連する配列表は紙の複写の代わりにテキストフォーマットで提供され、参考として本明細書に組み込まれる。配列表を含有するテキストファイルの名前は、４８３５７＿ＳｅｑＬｉｓｔｉｎｇ．ｔｘｔである。このテキストファイルは１６０，３２４バイトであり、２０１５年２月１２日に作成され、ＥＦＳ−Ｗｅｂを通して電子的に提出されている。
【背景技術】
【０００２】
技術分野
本開示は一般に、局所免疫刺激及び全身免疫刺激の組み合わせによる癌の免疫療法を向上させる方法に関する。
【０００３】
関連技術の記載
宿主の免疫系は、病原微生物への防御応答を速やかかつ特異的に開始し、悪性腫瘍の除去にも寄与する手段を提供する。免疫応答は通常、抗原に特異的な抗体が分化Ｂリンパ球により産生される体液性応答、及び、様々な種類のＴリンパ球が種々のメカニズムにより抗原を排除する細胞性応答を含むと説明されてきた。例えば、特異的抗原を認識可能なＣＤ４（ＣＤ４＋とも称される）ヘルパーＴ細胞は、サイトカイン等の可溶性メディエーターを放出することで応答して、免疫系の更なる細胞を動員して免疫応答に関与し得る。ＣＤ８（ＣＤ８＋とも呼ばれる）細胞障害性Ｔ細胞もまた、特異的抗原を認識することが可能であり、抗原を有する細胞または粒子に結合し、これを破壊または損傷し得る。特に、細胞障害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）応答を含む細胞性免疫応答は、腫瘍細胞及びウイルスが感染した細胞の除去に重要である可能性がある。
【０００４】
癌は広範の病気を含み、世界中でおよそ４人に１人が罹患している。ＣＴＬ応答は、効果的な癌ワクチンの重要な特徴であり、効果的なＣＤ４  Ｔ細胞の補助はまた、産生ＣＤ８  Ｔ細胞の活性化に重要な役割を果たし、臨床的利点をもたらす可能性が高い。自己樹状細胞（ＤＣ）ベースのワクチンであるＳｉｐｕｌｅｕｃｅｌ−Ｔ（ＰＲＯＶＥＮＧＥ（登録商標））が近年、転移性、去勢抵抗性前立腺癌の治療に対してはＦＤＡにより認可されたが、本治療による生残の効果はさほど長くない４．１ヶ月であり、改善の必要性が著しく残ったままである（例えば、Ｋａｎｔｏｆｆ，ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３６３（５）：４１１（２０１０）を参照）。ポックスウイルスベクターベースのワクチンであるＰｒｏｓｔＶａｃ（登録商標）ＶＦもまた、第二相試験での著しい生残の効果を示す（例えば、Ｋａｎｔｏｆｆ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．２８（７）：１０９９（２０１０）を参照）。Ｓｉｐｕｌｅｕｃｅｌ−Ｔ及びＰｒｏｓｔＶａｃ（登録商標）ＶＦ等の活性免疫療法は通常、去勢抵抗性疾患に対する、現在の標準治療を含む化学療法レジメンよりも許容性が高い（例えば、Ｐｅｔｒｙｌａｋ，ｅｔ  ａｌ．，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３５１（１５）：１５１３（２００４）；Ｓｙｌｗｅｓｔｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２０２（５）：６７３（２００５）を参照）。これらの臨床的成功は、免疫応答を癌環境において利用し、患者のアウトカムの向上及び生残の延長をもたらすことができることを実証している。
【０００５】
多くの外来（即ち、非自己）抗原は免疫原性が不十分であり、抗原への満足した免疫応答をもたらすには、アジュバントの投与が必要である。アジュバントはまた、免疫応答を体液性応答または細胞性応答に偏らせるために使用することもでき、ある特定のアジュバントを使用して、抗体応答を特定の抗体アイソタイプに偏らせるか、または細胞応答を特定のＴ細胞サブセットに偏らせることもできる。免疫原に対する免疫応答の誘発または向上ための、アジュバント、及び／またはアジュバントの送達方法の選択は、治療用及び予防用ワクチン開発の重要な側面であり得る。
【０００６】
外科治療の後、その段階に応じて、筋層非浸潤性膀胱癌（ＮＭＩＢＣ）を、通常６週間の過程の後、１年間の維持療法として、膀胱内に繰り返し注入されるカルメット・ゲラン桿菌（ＢＣＧ）ワクチンを使用する免疫療法により制御することができる。この状況でのＢＣＧワクチンの適用は第１選択療法であり、通常、最も歴史があり、現在まで最も成功してきた免疫療法として認識されている（Ｇａｎｄｈ，Ｎ．Ｍ．，ｅｔ．ａｌ．，ＢＪＵ  Ｉｎｔ．，Ａｕｇ；１１２（３）：２８８−９７（２０１３））。
【０００７】
ＢＣＧの抗腫瘍効果は完全には理解されていないが、尿路上皮または膀胱癌細胞の感染、並びに非特異的炎症性及び特異的抗腫瘍応答の両方の誘発を伴う（Ｋａｗａｉ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｃｉ．，Ｊａｎ；１０４（１）：２２−７（２０１３））。ＢＣＧ治療において潜在的な役割を有する免疫系細胞サブセットとしては、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋リンパ球、ナチュラルキラー細胞、顆粒球、マクロファージ、並びに樹状細胞が挙げられる。膀胱癌細胞は、これらの細胞による、ＴＲＡＩＬ（腫瘍壊死因子関連アポトーシス誘導リガンド）等の可溶性因子の分泌による、及び、ある程度までは、ＢＣＧの直接作用による直接的細胞殺作用で殺される（Ｒｅｄｅｌｍａｎ−Ｓｉｄｉ  Ｇ．，ＥＴ  ＡＬ．，Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｕｒｏｌ．，Ｆｅｂ  ４．［印刷前の電子出版］（２０１４））。この状況、例えば膀胱癌の治療におけるＢＣＧの使用において、ＢＣＧはＴＬＲアゴニストとして機能するという点に留意すべきである。特に、ＴＬＲ２及びＴＬＲ４は、ＢＣＧに対する宿主免疫応答の異なる側面を制御するようである（Ｊ  Ｌｅｕｋｏｃ  Ｂｉｏｌ．２００３；７４：２７７−８６を参照）。
【０００８】
現在のＢＣＧ治療の大きな制限は、多数の患者における応答の欠如である。例えば、研究したエンドポイントによっては、患者の最大５０％が応答せず、癌が筋肉侵襲性疾患に進行していることが示されている。更に、初期に治療に応答した患者の約３分の１は、腫瘍の再発を示す（Ｓｙｌｖｅｓｔｅｒ，Ｒ．Ｊ．，Ｉｎｔ  Ｊ  Ｕｒｏｌ．，Ｆｅｂ；１８（２）：１１３−２０（２０１１））。近年の研究は、ＢＣＧ治療後に再発を伴う患者は、上部尿路または尿道前立腺部での尿路上皮癌を発症する場合があり、この疾患はＢＣＧでは治療できないことを示した（Ｇｉａｎｎａｒｉｎｉ，Ｇ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ  Ｕｒｏｌ．Ｏｃｔ  ９．［印刷前の電子出版］２０１３））。また、予め存在する、ＢＣＧに対するＴ細胞免疫を測定できない患者（以前のＢＣＧ免疫付与、またはマイコバクテリアへの自然曝露による）では、再発を生じない生残割合が低い（Ｂｉｏｔ，Ｃ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉ  Ｔｒａｎｓｌ  Ｍｅｄ．，Ｊｕｎ  ６；４（１３７）：１３７ｒａ７２（２０１２））。最後に、ＢＣＧ免疫療法は、ＢＣＧの局所または全身感染の結果生じる、重篤な副作用を有する可能性がある（Ｍｉｙａｚａｋｉ，Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊｐｎ  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ．，Ａｕｇ；４３（８）：８２７−３４（２０１３））。
【０００９】
現在のＢＣＧ治療を向上させるため、幾つかの研究が現在平行して進められている。例えば、古典的なＢＣＧを、Ｔｈ１型サイトカインを発現する遺伝子組み換えしたＢＣＧ、または複製能力のないＢＣＧで置き換えることにより、効能を向上することができるか、または副作用を低減することができる（Ｋａｗａｉ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｃｉ．，Ｊａｎ；１０４（１）：２２−７（２０１３））。別の例は、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）の小分子アゴニストを使用して、膀胱内での先天性免疫応答を刺激することである（Ｆａｌｋｅ，Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｕｒｏｌ．，Ｊｕｎ；１８９（６）：２０７７−８２（２０１３））。最後に、ウイルスベクター（例えばアデノウイルス系）を使用して、ウイルスにより誘発された癌細胞での「免疫原性細胞死」を誘導し、ＧＭ−ＣＳＦ等の更なる免疫刺激性因子を発現させる（Ｂｕｒｋｅ，Ｊ．，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｒｅｖ．；２１（２−３）：９９−１０２（２０１０））。しかし、上記戦略はいずれも、現在まで初期段階の臨床試験の先まで進行しておらず、膀胱癌の良い症状発現前モデルの不在下においては、その潜在的有効性を予測することは困難である。
【００１０】
近年の研究は、膀胱癌は、ヒトヘルペスウイルス８としても知られているカポジ肉腫関連ヘルペスウイルス（ＫＳＨＶ）、ＫＳＨＶと関係していることを示唆している。特に、ＫＳＨＶ  ＤＮＡは患者の５５％で検出された（Ｍ．Ｐａｒａｄｚｉｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｕｍｏｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，２０１４，３５（１），ｐｐ  ５６７−５７２）。更に一般的には、世界中の全てのヒトの癌の約１２％は、発癌性ウイルス感染により引き起こされている（例えば、Ｍｅｓｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４，Ｃｅｌｌ  Ｈｏｓｔ  ＆  Ｍｉｃｒｏｂｅ  １５：２６６−２８２；Ｂｏｕｖａｒｄ，Ｖ．，ｅｔ  ａｌ．（２００９）．Ｌａｎｃｅｔ  Ｏｎｃｏｌ．１０，３２１−３２２；Ｂｏｙｌｅ，Ｐ．，ａｎｄ  Ｌｅｖｉｎ，Ｂ．（２００８）．Ｗｏｒｌｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｐｏｒｔ  ２００８．（Ｌｙｏｎ：Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｇｅｎｃｙ  ｆｏｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ｏｎ  Ｃａｎｃｅｒ  ａｎｄ  Ｗｏｒｌｄ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ  Ｐｒｅｓｓ）；ｄｅ  Ｍａｒｔｅｌ，Ｃ．，ｅｔ  ａｌ．，（２０１２）．Ｌａｎｃｅｔ  Ｏｎｃｏｌ．１３，６０７−６１５を参照）。
本発明は、ウイルス誘発性癌を含む癌の免疫治療法を提供する。これら、及び他の利点は本開示で提供する。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】Ｋａｎｔｏｆｆ，ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３６３（５）：４１１（２０１０）
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本開示は、局所免疫刺激及び全身免疫刺激の組み合わせによる、ウイルス誘発性癌等の癌の免疫療法を向上させるための組成物及び方法を提供する。本開示の一実施形態において、ａ）対象において、免疫原に特異的な免疫応答を誘発することであって、該対象に、組み換え発現ベクターを含むベクター粒子を含む第１組成物を投与することを含み、該組み換え発現ベクターは該免疫原をコードするポリヌクレオチドを含み、かつ、該ポリヌクレオチドは少なくとも１つの制御発現配列に作用可能に結合している、誘発すること、並びにｂ）該対象に、薬学的に好適なアジュバントを含む第２組成物を局所投与することであって、該第２組成物は免疫原を含まないか、実質的に欠き、該第１組成物及び該第２組成物はそれぞれ、薬学的に好適な賦形剤を更に含み、該第１組成物及び該第２組成物は、同時または逐次的に投与される、局所投与することを含む癌の治療方法を提供する。ある特定の実施形態において、第２組成物の投与は、ＣＤ８  Ｔ細胞を投与の局所部位に動員可能な１つ以上のサイトカインの発現を誘発する。
【００１３】
別の実施形態において、第１組成物及び第２組成物が逐次的に投与され、かつ、第１組成物が第１部位において対象に投与され、第２組成物が第２部位において対象に投与され、該第１部位及び該第２部位は異なる、上述の方法を提供する。更に別の実施形態において、第１組成物が第１経路を経由して第１部位に投与され、第２組成物が第２経路を経由して第２部位に投与される、上述の方法を提供する。
【００１４】
本開示の別の実施形態において、第１経路及び第２経路が異なり、それぞれが非経口、経腸、経口、筋肉内、皮内、皮下、腫瘍内、リンパ節内、傍リンパ節内（ｐｅｒｉｎｏｄａｌ）、経鼻、経皮、吸入、粘膜、膀胱内及び局所から選択される、上述の方法を提供する。別の実施形態において、第１経路は筋肉内、皮内または皮下であり、第２経路は膀胱内、腫瘍内またはリンパ節内である。
【００１５】
更に別の実施形態において、第２組成物の投与の前に第１組成物が投与される、上述の方法を提供する。別の実施形態において、第１組成物の投与の前に第２組成物が投与される、上述の方法を提供する。別の実施形態において、第１組成物及び第２組成物は、同時に、ただし異なる部位に投与される。更に別の実施形態では、第１組成物及び／または第２組成物が２、３、４、５、６、７、８、９または１０回投与される、上述の方法を提供する。
【００１６】
本開示の別の実施形態において、組み換え発現ベクターが、レトロウイルスベクターゲノム、レンチウイルスベクターゲノム、ポックスウイルスベクターゲノム、ワクシニアウイルスベクターゲノム、アデノウイルスベクターゲノム、アデノウイルス随伴ウイルスベクターゲノム、ヘルペルウイルスベクターゲノム、アルファウイルスベクターゲノム、プラスミドＤＮＡ及びＲＮＡから選択される、上述の方法を提供する。別の実施形態において、ベクター粒子は、レンチウイルスベクターゲノムを含むレンチウイルスベクター粒子；ポックスウイルスベクターゲノムを含むポックスウイルスベクター粒子；ワクシニアウイルスベクターゲノムを含むワクシニアウイルスベクター粒子；アデノウイルスベクターゲノムを含むアデノウイルスベクター粒子；アデノウイルス随伴ウイルスベクターゲノムを含むアデノウイルス随伴ウイルスベクター粒子；ヘルペスウイルスベクターゲノムを含むヘルペスウイルスベクター粒子；または、アルファウイルスベクターゲノムを含むアルファウイルスベクター粒子である。更に別の実施形態において、ベクター粒子はレンチウイルスベクター粒子であり、レンチウイルスベクターゲノムを含む。更に別の実施形態において、レンチウイルスベクター粒子は更に、配列番号１と比較して少なくとも１つのアミノ酸の変更を有するシンドビスウイルスＥ２糖タンパク質を含むエンベロープを含み、残基１６０は欠失しているか、またはグルタミン酸以外のアミノ酸であり、Ｅ２糖タンパク質は、シンドビスウイルスＥ３タンパク質を有する融合タンパク質の一部ではない。
【００１７】
別の実施形態において、ベクター粒子が組み換え発現ベクターを抗原提示細胞に送達する、上述の方法を提供する。一実施形態では、抗原提示細胞は樹状細胞である。
【００１８】
更に別の実施形態において、免疫原が発癌性ウイルスからのウイルス性抗原である、上述の方法を提供する。代表的な発癌性ウイルスとしては、ＥＢＶ、ＨＰＶ、ＨＢＶ、ＨＣＶ、ＨＴＬＶ、及びＫＳＨＶが挙げられるが、これらに限定されない。本明細書で使用可能な、発癌性ウイルスからの代表的なウイルス性抗原としては、ＥＢＶ：ＥＢＮＡ−１、ＬＭＰ−１、ＬＭＰ−２Ａ；ＨＰＶ：Ｅ６、Ｅ７、Ｅ５；ＨＢＶ：ＨＢｘ；ＨＣＶ：Ｃｏｒｅ、ＮＳ３、Ｎｓ５Ａ；ＨＴＬＶ：Ｔａｘ、ＨＢＺ；ＫＳＨＶ：ｖＦＬＩＰ、ＬＡＮＡ、ｖＧＰＣＲ、ｖＩＲＦ−１が挙げられるが、これらに限定されない。
【００１９】
別の実施形態において、免疫原は腫瘍関連抗原である。別の実施形態において、腫瘍関連抗原は、ｐ５３、Ｒａｓ、ｃ−Ｍｙｃ、Ａ−Ｒａｆ、Ｂ−Ｒａｆ、Ｃ−Ｒａｆ、サイクリン依存性キナーゼ、ＣＴＡ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＬＡＧＥ−１、ＭＡＧＥ−Ａ１、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＭＡＧＥ−Ａ４、ＭＡＧＥ−Ａ１０、ＣＴ７、ＣＴ１０、ＧＡＧＥ、ＰＲＡＭＥ；ＢＡＧＥ；ＲＡＧＥ、ＳＡＧＥ、ＨＡＧＥ、ＭＰＨＯＳＰＨ１、ＤＥＰＤＣ１、ＩＭＰ３及びＭＡＧＥ−Ａ、ＢＫ  Ｔ抗原、ＭＡＧＥ−Ａ２、ＭＡＧＥ−Ａ６、ＭＡＧＥ−Ａ１２、ＭＡＲＴ−１、ＤＡＭ−６、−１０、ＧＡＧＥ−１、−２、−８、ＧＡＧＥ−３、−４、−５、−６、−７Ｂ、ＮＡ８８−Ａ、ＭＣ１Ｒ、Ｇｐ１００、ＰＳＡ、ＰＳＭ、チロシナーゼ、ＴＲＰ−１、ＴＲＰ−２、ＡＲＴ−４、ＣＡＭＥＬ、ＣＥＡ、Ｃｙｐ−Ｂ、ｈＴＥＲＴ、ｈＴＲＴ、ｉＣＥ、ＭＵＣ１、ＭＵＣ２、ホスホイノシチド３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）、ＴＲＫ受容体、ＰＲＡＭＥ、Ｐ１５、ＲＵ１、ＲＵ２、ＳＡＲＴ−１、ＳＡＲＴ−３、ウィルムス腫瘍抗原（ＷＴ１）、ＡＦＰ、β−カテニン／ｍ、カスパーゼ−８／ｍ、ＣＥＡ、ＣＤＫ−４／ｍ、ＥＬＦ２Ｍ、ＧｎＴ−Ｖ、Ｇ２５０、ＨＳＰ７０−２Ｍ、ＨＳＴ−２、ＫＩＡＡ０２０５、ＭＵＭ−１、ＭＵＭ−２、ＭＵＭ−３、ミオシン／ｍ、ＲＡＧＥ、ＳＡＲＴ−２、ＴＲＰ−２／ＩＮＴ２、７０７−ＡＰ、アネキシンＩＩ、ＣＤＣ２７／ｍ、ＴＰＩ／ｍｂｃｒ−ａｂｌ、ＢＣＲ−ＡＢＬ、インターフェロン制御因子４（ＩＲＦ４）、ＥＴＶ６／ＡＭＬ、ＬＤＬＲ／ＦＵＴ、Ｐｍｌ／ＲＡＲα、腫瘍関連カルシウムシグナル伝達物質１（ＴＡＣＳＴＤ１）ＴＡＣＳＴＤ２、受容体型チロシンキナーゼ、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、血小板由来成長因子受容体（ＰＤＧＦＲ）、血管内皮成長因子受容体（ＶＥＧＦＲ）、細胞質チロシンキナーゼ、ｓｒｃ−ファミリー、ｓｙｋ−ＺＡＰ７０、インテグリン結合キナーゼ（ＩＬＫ）、シグナル伝達兼転写活性化因子ＳＴＡＴ３、ＳＴＡＴ５、及びＳＴＡＴ６、低酸素誘導因子（ＨＩＦ−１α及びＨＩＦ−２α）、核因子κＢ（ＮＦ−κＢ）、ノッチ受容体（ノッチ１〜４）、ｃ−Ｍｅｔ、ラパマイシンの哺乳類標的（ｍＴＯＲ）、ＷＮＴ、細胞外シグナル調節キナーゼ（ＥＲＫ）、ＰＭＳＡ、ＰＲ−３、ＭＤＭ２、メソテリン、腎細胞癌−５Ｔ４、ＳＭ２２−アルファ、カルボニックアンヒドラーゼＩ（ＣＡＩ）及びＩＸ（ＣＡＩＸ）、ＳＴＥＡＤ、ＴＥＬ／ＡＭＬ１、ＧＤ２、プロテイナーゼ３、ｈＴＥＲＴ、肉腫転座切断点（ｓａｒｃｏｍａ  ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ  ｂｒｅａｋｐｏｉｎｔ）、ＥｐｈＡ２、ＭＬ−ＩＡＰ、ＥｐＣＡＭ、ＥＲＧ（ＴＭＰＲＳＳ２  ＥＴＳ融合遺伝子）、ＮＡ１７、ＰＡＸ３、ＡＬＫ、アンドロゲン受容体、サイクリンＢ１、ポリシアル酸、ＭＹＣＮ、ＲｈｏＣ、ＧＤ３、フコシルＧＭ１、メソテリン、ＰＳＣＡ、ｓＬｅ、ＰＬＡＣ１、ＧＭ３、ＢＯＲＩＳ、Ｔｎ、ＧＬｏｂｏＨ、ＮＹ−ＢＲ−１、ＲＧｓ５、ＳＡＲＴ３、ＳＴｎ、ＰＡＸ５、ＯＹ−ＴＥＳ１、精子タンパク質１７、ＬＣＫ、ＨＭＷＭＡＡ、ＡＫＡＰ−４、ＳＳＸ２、ＸＡＧＥ  １、Ｂ７Ｈ３、レグマイン（ｌｅｇｕｍａｉｎ）、ＴＩＥ２、Ｐａｇｅ４、��ＡＤ−ＣＴ−１、ＦＡＰ、ＭＡＤ−ＣＴ−２、並びにｆｏｓ関連抗原１から選択される。
【００２０】
別の実施形態では、本明細書において、腫瘍関連抗原が膀胱癌抗原から選択される方法を提供する。一実施形態では、膀胱癌抗原は、ＣＴＡ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＬＡＧＥ−１，ＭＡＧＥ−Ａ１、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＭＡＧＥ−Ａ４、ＭＡＧＥ−Ａ１０、ＣＴ７、ＣＴ１０、ＧＡＧＥ、ＰＲＡＭＥ；ＢＡＧＥ；ＲＡＧＥ、ＳＡＧＥ、ＨＡＧＥ、ＭＰＨＯＳＰＨ１、ＤＥＰＤＣ１、ＩＭＰ３及びＭＡＧＥ−Ａ、並びにＢＫ  Ｔ抗原から選択される。
【００２１】
本開示の更に別の実施形態において、誘発した免疫応答が細胞障害性Ｔリンパ球免疫応答を含む、上述の方法を提供する。ある種の実施形態において、本明細書で記載する、誘発した免疫応答が、抗原特異的ＣＤ４及び／もしくはＣＤ８  Ｔ細胞、エフェクタ−メモリーＴ細胞（ＴＥＭ）、セントラルメモリーＴ細胞（ＴＣＭ）、並びに／または組織常在型メモリーＴ細胞（ＴＲＭ）を含む方法を提供する。本明細書において提供する方法のある種の実施形態において、これらの細胞の集団の１つ以上が、対象の局所部位（例えば粘膜、腫瘍内、リンパ節内）に動員される。別の実施形態において、誘発された免疫応答は、免疫原特異的抗体の産生を含む、上述の方法を提供する。
【００２２】
更に別の実施形態において、アジュバントが無毒性リピドＡ関連アジュバントである、上述の方法を提供する。一実施形態では、無毒性リピドＡ関連アジュバントはグルコピラノシルリピドＡ（ＧＬＡ）である。別の実施形態において、ＧＬＡは安定した水中油型エマルション中で配合される。更に別の実施形態において、ＧＬＡは式
【化１】
2019203013.tif 000002
を有する（式中、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５及びＲ６はＣ１１〜Ｃ２０アルキルであり、Ｒ２及びＲ４はＣ１２〜Ｃ２０アルキルである。更に別の実施形態では、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５及びＲ６はウンデシルに相当し、Ｒ２及びＲ４はトリデシルに相当する）。
【００２３】
本明細書における方法のある種の実施形態において、本方法は更に、ＢＣＧを含む組成物を投与することを含む。本開示の別の実施形態において、アジュバント組成物が更にＢＣＧを含む方法を提供する。
【００２４】
別の実施形態において、第１組成物が更にアジュバントを含む、上述の方法を提供する。
【００２５】
更に別の実施形態では、ａ）ウイルス誘発性癌に関連する免疫原（例えば、癌に関連するウイルス由来のウイルス性抗原）に特異的な免疫応答を対象において誘発することであって、該対象に組み換え発現ベクターを含むレンチベクター粒子を含む第１組成物を投与することを含み、該組み換え発現ベクターは該免疫原をコードするポリヌクレオチドを含み、該ポリヌクレオチドは少なくとも１つの制御発現配列に作用可能に結合しており、該レンチウイルスベクター粒子は、配列番号１と比較して少なくとも１つのアミノ酸の変更を有するシンドビスウイルスＥ２糖タンパク質を含むエンベロープを更に含み、残基１６０は欠失しているか、またはグルタミン酸以外のアミノ酸であり、かつ、Ｅ２糖タンパク質はシンドビスウイルスＥ３タンパク質を有する融合タンパク質の一部でない、誘発すること、並びに、ｂ）該対象に、薬学的に好適なアジュバントを含む第２組成物を投与することを含む、ＣＤ８  Ｔ細胞を腫瘍に動員可能な１つ以上のサイトカインの発現を誘発することであって、該アジュバントは、安定した水中油型エマルション内で配合された無毒性リピドＡ関連アジュバントであるグルコピラノシルリピドＡ（ＧＬＡ）である、誘発すること、を含む、ウイルス誘発性癌の治療方法を提供する。ここで、該ＧＬＡは式
【化２】
2019203013.tif 000003
を有し、式中、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５及びＲ６はウンデシルに相当し、Ｒ２及びＲ４はトリデシルに相当し、サイトカインはＣｘｃｌ９、Ｃｘｃｌ１０、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＭＣＰ−１、ＴＮＦａ、ＩＦＮｃ及びＩＰ−１０からなる群から選択され、ウイルス誘発性癌に関係する免疫原は、ＥＢＮＡ−１、ＬＭＰ−１、ＬＭＰ−２Ａ；Ｅ６、Ｅ７、Ｅ５；ＨＢｘ；ＨＣＶ  Ｃｏｒｅ、ＮＳ３、Ｎｓ５Ａ；Ｔａｘ、ＨＢＺ；ｖＦＬＩＰ、ＬＡＮＡ、ｖＧＰＣＲ、ｖＩＲＦ−１から選択されるウイルス性抗原であり、該第１組成物及び該第２組成物はそれぞれ、薬学的に好適な賦形剤を更に含み、該第１組成物及び第２組成物は同時または逐次的に投与され、該第１組成物は筋肉内、皮内または皮下投与され、かつ該第２組成物は腫瘍内または膀胱内投与され、該第２組成物は所望により、ＢＣＧを含む。
【００２６】
本開示の別の実施形態において、前述、または本明細書に記載される方法のいずれか１つに従った第１組成物及び第２組成物を含むキットを提供する。
【００２７】
本発明の別の態様は、ａ）対象において、発癌性ウイルス抗原に特異的な免疫応答を誘発することであって、該対象に組み換え発現ベクターを含むベクター粒子を含む第１組成物を投与することを含み、該組み換え発現ベクターは、該発癌性ウイルス抗原をコードするポリヌクレオチドを含み、かつ該ポリヌクレオチドは、少なくとも１つの制御発現配列に作用可能に結合している、誘発すること；並びに、ｂ）該対象に、薬学的に好適なアジュバントを含む第２組成物を局所部位で投与することであって、該第１組成物及び該第２組成物はそれぞれ、薬学的に好適な賦形剤を更に含み、かつ該第１組成物及び該第２組成物は、同時または逐次的に投与される、投与することを含む、発癌性ウイルスにより誘発される癌の治療方法を提供する。一実施形態では、局所部位における第２組成物の投与は、Ｔ細胞を投与の局所部位に動員可能な１つ以上のサイトカインの発現を誘発する。ある種の実施形態において、Ｔ細胞は抗原特異的Ｔ細胞、例えば、抗原特異的ＣＤ４及び／もしくはＣＤ８  Ｔ細胞、エフェクタ−メモリーＴ細胞（ＴＥＭ）、セントラルメモリーＴ細胞（ＴＣＭ）、並びに／または組織常在型メモリーＴ細胞（ＴＲＭ）である。本方法の一実施形態では、局所投与の局所部位は、腫瘍内、リンパ節内、膀胱内または粘膜である。別の実施形態において、発現ベクターは更に、腫瘍関連抗原をコードするポリヌクレオチドを含む。更なる実施形態において、第２組成物は腫瘍関連抗原を更に含む。
【００２８】
本発明の１つの特定の態様は、対象におけるウイルス誘発性癌の治療方法であって、ａ）該発癌性ウイルスに由来する抗原に特異的な免疫応答を対象において誘発することであって、該対象に、ベクター粒子を含む第１組成物を投与することを含み、該ベクター粒子は組み換え発現ベクターを含み、該組み換え発現ベクターは、該発癌性ウイルスに由来する抗原をコードするポリヌクレオチドを含み、かつ該ポリヌクレオチドが、少なくとも１つの制御発現配列に作用可能に結合している、誘発すること；並びに、ｂ）薬学的に好適なアジュバントを含む第２組成物を該対象に腫瘍内投与することであって、該第１組成物及び該第２組成物はそれぞれ、薬学的に好適な賦形剤を更に含み、該第１組成物及び該第２組成物は同時または逐次的に投与される、投与することを含む、治療方法を提供する。一実施形態では、第２組成物の腫瘍内投与は、Ｔ細胞、特に抗原特異的Ｔ細胞（例えばＣＤ４及び／もしくはＣＤ８  Ｔ細胞、エフェクターメモリーＴ細胞（ＴＥＭ）、セントラルメモリーＴ細胞（ＴＣＭ）、並びに／または組織常在型メモリーＴ細胞（ＴＲＭ））を腫瘍に動員可能な１つ以上のサイトカインまたはケモカインの発現を誘発する。
【００２９】
本発明の別の態様は、ａ）癌関連抗原に特異的な免疫応答を対象において誘発することであって、該対象に、ベクター粒子を含む第１組成物を投与することを含み、該ベクター粒子は組み換え発現ベクターを含み、該組み換え発現ベクターは該癌関連抗原をコードするポリヌクレオチドを含み、かつ該ポリヌクレオチドが、少なくとも１つの制御発現配列に作用可能に結合している、誘発すること；並びに、ｂ）該対象に、薬学的に好適なアジュバントを含む第２組成物を腫瘍内投与することであって、該第１組成物及び該第２組成物はそれぞれ、薬学的に好適な賦形剤を更に含み、該第１組成物及び該第２組成物は、同時または逐次的に投与される、投与すること、を含む、癌の治療方法を提供する。
【００３０】
オンコウイルス誘発性癌を含む癌の治療方法のある種の実施形態において、第１組成物及び／または第２組成物は２、３、４、５、６、７、８、９または１０回投与される。他の実施形態において、組み換え発現ベクターはレトロウイルスベクターゲノム、レンチウイルスベクターゲノム、ポックスウイルスベクターゲノム、ワクシニアウイルスベクターゲノム、アデノウイルスベクターゲノム、アデノウイルス随伴ウイルスベクターゲノム、ヘルペルウイルスベクターゲノム、アルファウイルスベクターゲノム、プラスミドＤＮＡ及びＲＮＡから選択される。本明細書の方法のまた更なる実施形態において、ベクター粒子は、レトロウイルスベクターゲノムを含むレトロウイルスベクター；レンチウイルスベクターゲノムを含むレンチウイルスベクター粒子；ポックスウイルスベクターゲノムを含むポックスウイルスベクター粒子；ワクシニアウイルスベクターゲノムを含むワクシニアウイルスベクター粒子；アデノウイルスベクターゲノムを含むアデノウイルスベクター粒子；アデノウイルス随伴ウイルスベクターゲノムを含むアデノウイルス随伴ウイルスベクター粒子；ヘルペスウイルスベクターゲノムを含むヘルペスウイルスベクター粒子；または、アルファウイルスベクターゲノムを含むアルファウイルスベクター粒子である。一実施形態では、ベクター粒子はレンチウイルスベクター粒子であり、レンチウイルスベクターゲノムを含む。１つの特定の実施形態では、レンチウイルスベクター粒子は更に、配列番号１と比較して少なくとも１つのアミノ酸の変更を有するシンドビスウイルスＥ２糖タンパク質を含むエンベロープを含み、残基１６０は欠失しているか、またはグルタミン酸以外のアミノ酸であり、Ｅ２糖タンパク質は、シンドビスウイルスＥ３タンパク質を有する融合タンパク質の一部ではない。本明細書の方法の別の実施形態において、ベクター粒子は組み換え発現ベクターを樹状細胞に送達する。本明細書記載の方法のある種の実施形態において、免疫原は腫瘍関連抗原であり、ＣＴＡ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＬＡＧＥ−１、ＭＡＧＥ−Ａ１、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＭＡＧＥ−Ａ４、ＭＡＧＥ−Ａ１０、ＣＴ７、ＣＴ１０、ＧＡＧＥ、ＰＲＡＭＥ；ＢＡＧＥ；ＲＡＧＥ、ＳＡＧＥ、ＨＡＧＥ、ＭＰＨＯＳＰＨ１、ＤＥＰＤＣ１、ＩＭＰ３及びＭＡＧＥ−Ａ、並びにＢＫ  Ｔ抗原、ｐ５３、Ｒａｓ、ｃ−Ｍｙｃ、Ａ−Ｒａｆ、Ｂ−Ｒａｆ、Ｃ−Ｒａｆ、サイクリン依存性キナーゼ、ＭＡＧＥ−Ａ２、ＭＡＧＥ−Ａ６、ＭＡＧＥ−Ａ１０、ＭＡＧＥ−Ａ１２、ＭＡＲＴ−１、ＢＡＧＥ、ＤＡＭ−６、−１０、ＧＡＧＥ−１、−２、−８、ＧＡＧＥ−３、−４、−５、−６、−７Ｂ、ＮＡ８８−Ａ、ＭＡＲＴ−１、ＭＣ１Ｒ、Ｇｐ１００、ＰＳＡ、ＰＳＭ、チロシナーゼ、ＴＲＰ−１、ＴＲＰ−２、ＡＲＴ−４、ＣＡＭＥＬ、ＣＥＡ、Ｃｙｐ−Ｂ、ｈＴＥＲＴ、ｈＴＲＴ、ｉＣＥ、ＭＵＣ１、ＭＵＣ２、ホスホイノシチド３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）、ＴＲＫ受容体、ＰＲＡＭＥ、Ｐ１５、ＲＵ１、ＲＵ２、ＳＡＲＴ−１、ＳＡＲＴ−３、ウィルムス腫瘍抗原（ＷＴ１）、ＡＦＰ、β−カテニン／ｍ、カスパーゼ−８／ｍ、ＣＥＡ、ＣＤＫ−４／ｍ、ＥＬＦ２Ｍ、ＧｎＴ−Ｖ、Ｇ２５０、ＨＳＰ７０−２Ｍ、ＨＳＴ−２��ＫＩＡＡ０２０５、ＭＵＭ−１、ＭＵＭ−２、ＭＵＭ−３、ミオシン／ｍ、ＲＡＧＥ、ＳＡＲＴ−２、ＴＲＰ−２／ＩＮＴ２、７０７−ＡＰ、アネキシンＩＩ、ＣＤＣ２７／ｍ、ＴＰＩ／ｍｂｃｒ−ａｂｌ、ＢＣＲ−ＡＢＬ、インターフェロン制御因子４（ＩＲＦ４）、ＥＴＶ６／ＡＭＬ、ＬＤＬＲ／ＦＵＴ、Ｐｍｌ／ＲＡＲα、腫瘍関連カルシウムシグナル伝達物質１（ＴＡＣＳＴＤ１）ＴＡＣＳＴＤ２、受容体型チロシンキナーゼ、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、血小板由来成長因子受容体（ＰＤＧＦＲ）、血管内皮成長因子受容体（ＶＥＧＦＲ）、細胞質チロシンキナーゼ、ｓｒｃ−ファミリー、ｓｙｋ−ＺＡＰ７０、インテグリン結合キナーゼ（ＩＬＫ）、シグナル伝達兼転写活性化因子ＳＴＡＴ３、ＳＴＡＴ５、及びＳＴＡＴ６、低酸素誘導因子（ＨＩＦ−１α及びＨＩＦ−２α）、核因子κＢ（ＮＦ−κＢ）、ノッチ受容体（ノッチ１〜４）、ｃ−Ｍｅｔ、ラパマイシンの哺乳類標的（ｍＴＯＲ）、ＷＮＴ、細胞外シグナル調節キナーゼ（ＥＲＫ）、ＰＭＳＡ、ＰＲ−３、ＭＤＭ２、メソテリン、腎細胞癌−５Ｔ４、ＳＭ２２−アルファ、カルボニックアンヒドラーゼＩ（ＣＡＩ）及びＩＸ（ＣＡＩＸ）、ＳＴＥＡＤ、ＴＥＬ／ＡＭＬ１、ＧＤ２、プロテイナーゼ３、ｈＴＥＲＴ、肉腫転座切断点、ＥｐｈＡ２、ＭＬ−ＩＡＰ、ＥｐＣＡＭ、ＥＲＧ（ＴＭＰＲＳＳ２  ＥＴＳ融合遺伝子）、ＮＡ１７、ＰＡＸ３、ＡＬＫ、アンドロゲン受容体、サイクリンＢ１、ポリシアル酸、ＭＹＣＮ、ＲｈｏＣ、ＧＤ３、フコシルＧＭ１、メソテリン、ＰＳＣＡ、ｓＬｅ、ＰＬＡＣ１、ＧＭ３、ＢＯＲＩＳ、Ｔｎ、ＧＬｏｂｏＨ、ＮＹ−ＢＲ−１、ＲＧｓ５、ＳＡＲＴ３、ＳＴｎ、ＰＡＸ５、ＯＹ−ＴＥＳ１、精子タンパク質１７、ＬＣＫ、ＨＭＷＭＡＡ、ＡＫＡＰ−４、ＳＳＸ２、ＸＡＧＥ  １、Ｂ７Ｈ３、レグマイン、ＴＩＥ２、Ｐａｇｅ４、ＭＡＤ−ＣＴ−１、ＦＡＰ、ＭＡＤ−ＣＴ−２、並びにｆｏｓ関連抗原１から選択されてよい。
【００３１】
本明細書記載の方法の別の実施形態において、膀胱癌抗原は、ＣＴＡ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＬＡＧＥ−１，ＭＡＧＥ−Ａ１、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＭＡＧＥ−Ａ４、ＭＡＧＥ−Ａ１０、ＣＴ７、ＣＴ１０、ＧＡＧＥ、ＰＲＡＭＥ；ＢＡＧＥ；ＲＡＧＥ、ＳＡＧＥ、ＨＡＧＥ、ＭＰＨＯＳＰＨ１、ＤＥＰＤＣ１、ＩＭＰ３及びＭＡＧＥ−Ａ、並びにＢＫ  Ｔ抗原から選択される。
【００３２】
癌を治療するための、本明細書記載の方法の一実施形態では、誘発された免疫応答は、細胞障害性Ｔリンパ球の免疫応答、または免疫原特異的抗体の産生を含む。
【００３３】
癌を治療するための、本明細書記載の方法のある種の実施形態において、アジュバントは無毒性リピドＡ関連アジュバントである。特に、無毒性リピドＡ関連アジュバントはグルコピラノシルリピドＡ（ＧＬＡ）である。ある種の実施形態において、ＧＬＡは安定した水中油型エマルション中で形成される。一実施形態では、ＧＬＡは式
【化３】
2019203013.tif 000004
を有する（式中、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５及びＲ６はＣ１１〜Ｃ２０アルキルであり、Ｒ２及びＲ４はＣ１２〜Ｃ２０アルキルである）。別の実施形態において、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５及びＲ６はウンデシルに相当し、Ｒ２及びＲ４はトリデシルに相当する。
【００３４】
本開示の別の態様は、ａ）腫瘍を有する対象に、組み換え発現ベクターを含むベクター粒子を含む第１組成物を投与することであって、該組み換え発現ベクターは癌関連抗原をコードするポリヌクレオチドを含み、かつ該ポリヌクレオチドが少なくとも１つの制御発現配列に作用可能に結合しているため、該対象における該癌関連抗原に対して免疫応答を誘発する、投与すること；並びにｂ）該対象に、ＴＬＲ４アゴニストを含む第２組成物を腫瘍内または腫瘍周辺投与することであって、該組成物は抗原を含まず、該第１組成物及び該第２組成物はそれぞれ、薬学的に好適な賦形剤を更に含み、かつ、該第１組成物及び該第２組成物は、同時または逐次的に投与されることで、該腫瘍微小環境においてＴ細胞を増加させる、投与すること、を含む、腫瘍微小環境においてＴ細胞を増加させる方法を提供する。ある種の実施形態において、ベクター粒子は、レンチウイルスベクターゲノムを含むレンチウイルスベクター粒子；ポックスウイルスベクターゲノムを含むポックスウイルスベクター粒子；ワクシニアウイルスベクターゲノムを含むワクシニアウイルスベクター粒子；アデノウイルスベクターゲノムを含むアデノウイルスベクター粒子；アデノウイルス随伴ウイルスベクターゲノムを含むアデノウイルス随伴ウイルスベクター粒子；ヘルペスウイルスベクターゲノムを含むヘルペスウイルスベクター粒子；または、アルファウイルスベクターゲノムを含むアルファウイルスベクター粒子である。別の実施形態において、ベクター粒子はレンチウイルスベクター粒子であり、レンチウイルスベクターゲノムを含む。更なる実施形態において、レンチウイルスベクター粒子は更に、配列番号１と比較して少なくとも１つのアミノ酸の変更を有するシンドビスウイルスＥ２糖タンパク質を含むエンベロープを含み、残基１６０は欠失しているか、またはグルタミン酸以外のアミノ酸であり、Ｅ２糖タンパク質は、シンドビスウイルスＥ３タンパク質を有する融合タンパク質の一部ではなく、かつ幾つかの実施形態では、樹状細胞に組み換え発現ベクターを送達する。本方法の幾つかの実施形態では、ＴＬＲ４アゴニストは、本明細書に記載されるＧＬＡ等の無毒性リピドＡ関連アジュバントであり、安定した水中油型エマルション中で配合可能である。
特定の態様では、例えば以下の項目が提供される：
（項目１）
ａ）ベクター粒子を含む第１組成物であって、前記ベクター粒子は組み換え発現ベクターを含み、前記組み換え発現ベクターは癌関連抗原をコードするポリヌクレオチドを含み、かつ前記ポリヌクレオチドが少なくとも１つの制御発現配列に作用可能に結合していることで、前記対象における前記癌関連抗原に対する免疫応答を誘発する、前記第１組成物；及び
ｂ）ＴＬＲ４アゴニストを含む第２組成物であって、前記第２組成物は抗原を含まない、前記第２組成物
を含む組成物であって、
前記第１組成物及び前記第２組成物はそれぞれ、薬学的に好適な賦形剤を更に含み、癌の治療方法での使用に関して、前記第１組成物は前記対象に全身投与され、前記第２組成物は前記対象に腫瘍内、腫瘍周辺、リンパ節内または膀胱内投与され、前記第１組成物及び前記第２組成物は、同時または逐次的に投与される、
前記組成物。
（項目２）
前記癌関連抗原は、ＣＴＡ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＬＡＧＥ−１、ＭＡＧＥ−Ａ１、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＭＡＧＥ−Ａ４、ＭＡＧＥ−Ａ１０、ＣＴ７、ＣＴ１０、ＧＡＧＥ、ＰＲＡＭＥ；ＢＡＧＥ；ＲＡＧＥ、ＳＡＧＥ、ＨＡＧＥ、ＭＰＨＯＳＰＨ１、ＤＥＰＤＣ１、ＩＭＰ３、ＭＡＧＥ−Ａ、ＢＫ  Ｔ抗原、ｐ５３、Ｒａｓ、ｃ−Ｍｙｃ、Ａ−Ｒａｆ、Ｂ−Ｒａｆ、Ｃ−Ｒａｆ、サイクリン依存性キナーゼ、ＭＡＧＥ−Ａ１、ＭＡＧＥ−Ａ２、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＭＡＧＥ−Ａ４、ＭＡＧＥ−Ａ６、ＭＡＧＥ−Ａ１０、ＭＡＧＥ−Ａ１２、ＭＡＲＴ−１、ＢＡＧＥ、ＤＡＭ−６、−１０、ＧＡＧＥ−１、−２、−８、ＧＡＧＥ−３、−４、−５、−６、−７Ｂ、ＮＡ８８−Ａ、ＭＡＲＴ−１、ＭＣ１Ｒ、Ｇｐ１００、ＰＳＡ、ＰＳＭ、チロシナーゼ、ＴＲＰ−１、ＴＲＰ−２、ＡＲＴ−４、ＣＡＭＥＬ、ＣＥＡ、Ｃｙｐ−Ｂ、ｈＴＥＲＴ、ｈＴＲＴ、ｉＣＥ、ＭＵＣ１、ＭＵＣ２、ホスホイノシチド３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）、ＴＲＫ受容体、ＰＲＡＭＥ、Ｐ１５、ＲＵ１、ＲＵ２、ＳＡＲＴ−１、ＳＡＲＴ−３、ウィルムス腫瘍抗原（ＷＴ１）、ＡＦＰ、β−カテニン／ｍ、カスパーゼ−８／ｍ、ＣＥＡ、ＣＤＫ−４／ｍ、ＥＬＦ２Ｍ、ＧｎＴ−Ｖ、Ｇ２５０、ＨＳＰ７０−２Ｍ、ＨＳＴ−２、ＫＩＡＡ０２０５、ＭＵＭ−１、ＭＵＭ−２、ＭＵＭ−３、ミオシン／ｍ、ＲＡＧＥ、ＳＡＲＴ−２、ＴＲＰ−２／ＩＮＴ２、７０７−ＡＰ、アネキシンＩＩ、ＣＤＣ２７／ｍ、ＴＰＩ／ｍｂｃｒ−ａｂｌ、ＢＣＲ−ＡＢＬ、インターフェロン制御因子４（ＩＲＦ４）、ＥＴＶ６／ＡＭＬ、ＬＤＬＲ／ＦＵＴ、Ｐｍｌ／ＲＡＲα、腫瘍関連カルシウムシグナル伝達物質１（ＴＡＣＳＴＤ１）ＴＡＣＳＴＤ２、受容体型チロシンキナーゼ、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、血小板由来成長因子受容体（ＰＤＧＦＲ）、血管内皮成長因子受容体（ＶＥＧＦＲ）、細胞質チロシンキナーゼ、ｓｒｃ−ファミリー、ｓｙｋ−ＺＡＰ７０、インテグリン結合キナーゼ（ＩＬＫ）、シグナル伝達兼転写活性化因子ＳＴＡＴ３、ＳＴＡＴ５、及びＳＴＡＴ６、低酸素誘導因子（ＨＩＦ−１α及びＨＩＦ−２α）、核因子κＢ（ＮＦ−κＢ）、ノッチ受容体（ノッチ１〜４）、ｃ−Ｍｅｔ、ラパマイシンの哺乳類標的（ｍＴＯＲ）、ＷＮＴ、細胞外シグナル調節キナーゼ（ＥＲＫ）、ＰＭＳＡ、ＰＲ−３、ＭＤＭ２、メソテリン、腎細胞癌−５Ｔ４、ＳＭ２２−アルファ、カルボニックアンヒドラーゼＩ（ＣＡＩ）及びＩＸ（ＣＡＩＸ）、ＳＴＥＡＤ、ＴＥＬ／ＡＭＬ１、ＧＤ２、プロテイナーゼ３、ｈＴＥＲＴ、肉腫転座切断点、ＥｐｈＡ２、ＭＬ−ＩＡＰ、ＥｐＣＡＭ、ＥＲＧ（ＴＭＰＲＳＳ２  ＥＴＳ融合遺伝子）、ＮＡ１７、ＰＡＸ３、ＡＬＫ、アンドロゲン受容体、サイクリンＢ１、ポリシアル酸、ＭＹＣＮ、ＲｈｏＣ、ＧＤ３、フコシルＧＭ１、メソテリン、ＰＳＣＡ、ｓＬｅ、ＰＬＡＣ１、ＧＭ３、ＢＯＲＩＳ、Ｔｎ、ＧＬｏｂｏＨ、ＮＹ−ＢＲ−１、ＲＧｓ５、ＳＡＲＴ３、ＳＴｎ、ＰＡＸ５、ＯＹ−ＴＥＳ１、精子タンパク質１７、ＬＣＫ、ＨＭＷＭＡＡ、ＡＫＡＰ−４、ＳＳＸ２、ＸＡＧＥ  １、Ｂ７Ｈ３、レグマイン（ｌｅｇｕｍａｉｎ）、ＴＩＥ２、Ｐａｇｅ４、ＭＡＤ−ＣＴ−１、ＦＡＰ、ＭＡＤ−ＣＴ−２、及びｆｏｓ関連抗原１から選択される、項目１に記載の組成物。
（項目３）
前記第１組成物は、筋肉内、皮内または皮下からなる群から選択される第１経路により全身投与される、項目１〜２のいずれか一項に記載の組成物。
（項目４）
前記ＴＬＲ４アゴニストは無毒性リピドＡ関連アジュバントである、項目１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
（項目５）
前記無毒性リピドＡ関連アジュバントはグルコピラノシルリピドＡ（ＧＬＡ）である、項目４に記載の組成物。
（項目６）
ＧＬＡは安定した水中油型エマルション中に配合される、項目５に記載の組成物。
（項目７）
前記ＧＬＡは、式
（Ｉ）
【化１４】
2019203013.tif 000005
であって、
式中、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５及びＲ６はＣ１１〜Ｃ２０アルキルであり、Ｒ２及びＲ４はＣ１２〜Ｃ２０アルキルである、前記式を有する、項目４〜５のいずれか一項に記載の組成物。
（項目８）
Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５及びＲ６はウンデシルに相当し、Ｒ２及びＲ４はトリデシルに相当する、項目７に記載の組成物。
（項目９）
前記ＧＬＡは、式
（ＩＩ）
【化１５】
2019203013.tif 000006
であって、
式中、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、Ｌ４、Ｌ５、及びＬ６は同一または異なっており、−Ｏ−、−ＮＨ−、及び−（ＣＨ２）−から独立して選択され、Ｌ７、Ｌ８、Ｌ９及びＬ１０は同一または異なっており、かつ、任意の場所が存在していなくても、または−Ｃ（＝Ｏ）−であってもよく、Ｙ１は酸性官能基であり、Ｙ２及びＹ３は同一または異なっており、−ＯＨ、−ＳＨ、及び酸性官能基からそれぞれ独立して選択され、Ｙ４は−ＯＨまたは−ＳＨであり、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５及びＲ６は同一または異なっており、Ｃ８〜Ｃ１３アルキルからなる群からそれぞれ独立して選択され、Ｒ２及びＲ４は同一または異なっており、Ｃ６〜Ｃ１１アルキルからなる群からそれぞれ独立して選択される、前記式を有するか、または薬剤として許容されるその塩である、項目４〜５のいずれか一項に記載の組成物。
（項目１０）
前記第１組成物は前記第２組成物の投与前に投与される、項目１〜９のいずれか一項に記載の組成物。
（項目１１）
前記第１組成物及び／または前記第２組成物は２、３、４、５、６、７、８、９または１０回投与される、項目１〜９のいずれか一項に記載の組成物。
（項目１２）
前記組み換え発現ベクターはレトロウイルスベクターゲノム、レンチウイルスベクターゲノム、ポックスウイルスベクターゲノム、ワクシニアウイルスベクターゲノム、アデノウイルスベクターゲノム、アデノウイルス随伴ウイルスベクターゲノム、ヘルペルウイルスベクターゲノム、アルファウイルスベクターゲノム、プラスミドＤＮＡ及びＲＮＡから選択される、項目１〜９のいずれか一項に記載の組成物。
（項目１３）
前記ベクター粒子は、前記レンチウイルスベクターゲノムを含むレンチウイルスベクター粒子；前記ポックスウイルスベクターゲノムを含むポックスウイルスベクター粒子；前記ワクシニアウイルスベクターゲノムを含むワクシニアウイルスベクター粒子；前記アデノウイルスベクターゲノムを含むアデノウイルスベクター粒子；前記アデノウイルス随伴ウイルスベクターゲノムを含むアデノウイルス随伴ウイルスベクター粒子；前記ヘルペスウイルスベクターゲノムを含むヘルペスウイルスベクター粒子；または、前記アルファウイルスベクターゲノムを含むアルファウイルスベクター粒子である、項目１２に記載の組成物。
（項目１４）
前記ベクター粒子は前記レンチウイルスベクター粒子であり、前記レンチウイルスベクターゲノムを含む、項目１３に記載の組成物。
（項目１５）
前記レンチウイルスベクター粒子は、配列番号１と比較して少なくとも１つのアミノ酸の変更を有するシンドビスウイルスＥ２糖タンパク質を含むエンベロープを更に含み、残基１６０は欠失しているか、またはグルタミン酸以外のアミノ酸であり、Ｅ２糖タンパク質は、シンドビスウイルスＥ３タンパク質を有する融合タンパク質の一部ではない、項目１３または１４に記載の組成物。
（項目１６）
前記レンチウイルスベクター粒子は前記組み換え発現ベクターを樹状細胞に送達する、項目１５に記載の組成物。
（項目１７）
前記癌はウイルス誘発性癌である、先行項目のいずれか一項に記載の組成物。
（項目１８）
前記癌関連抗原は、前記発癌性ウイルスに由来する抗原である、項目１７に記載の組成物。
（項目１９）
前記第２組成物は、チェックポイント阻害剤、サイトカイン、クロロキン、ＡＤＣＣを増加させる抗体、共刺激シグナルを促進する抗体、抗ＣＤ４０抗体からなる群から選択される治療薬を含む組成物と組み合わされて投与される、項目１〜１８のいずれか一項に記載の組成物。
（項目２０）
前記第１組成物がアジュバントを更に含む、先行項目のいずれか一項に記載の組成物。
（項目２１）
ポリペプチドと組み合わせたアジュバントを含むブースト組成物を投与することを更に含み、前記ポリペプチドは前記癌関連抗原、またはその免疫原性断片を含む、先行項目のいずれか一項に記載の組成物。
（項目２２）
前記誘発した免疫応答は細胞障害性Ｔリンパ球免疫応答を含む、先行項目のいずれか一項に記載の組成物。
（項目２３）
前記第２組成物を投与することは、投与部位におけるＣＤ８＋Ｔ細胞の増大の誘発を含む、先行項目のいずれか一項に記載の組成物。
（項目２４）
先行項目のいずれか一項に従った、第１組成物及び第２組成物を含むキット。
（項目２５）
ａ）レンチウイルスベクター粒子を含む第１組成物であって、前記レンチウイルスベクター粒子は組み換え発現ベクターを含み、前記組み換え発現ベクターは癌に関連する免疫原をコードするポリヌクレオチドを含み、前記ポリヌクレオチドは少なくとも１つの制御発現配列に作用可能に結合しており、前記レンチウイルスベクター粒子が、配列番号１と比較して少なくとも１つのアミノ酸の変更を有するシンドビスウイルスＥ２糖タンパク質を含むエンベロープを更に含み、残基１６０は欠失しているか、またはグルタミン酸以外のアミノ酸であり、Ｅ２糖タンパク質はシンドビスウイルスＥ３タンパク質を有する融合タンパク質の一部ではない、前記第１組成物；並びに、
ｂ）ＴＬＲ４アゴニストを含む第２組成物であって、前記第２組成物は免疫原を含まず、前記ＴＬＲ４アゴニストは、安定した水中油型エマルション中で配合されたグルコピラノシルリピドＡ（ＧＬＡ）であり、前記ＧＬＡは式
【化１６】
2019203013.tif 000007
であって、
式中、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５及びＲ６はウンデシルに相当し、Ｒ２及びＲ４はトリデシルに相当する、式を有する、前記第２組成物
を含む組成物であって、
前記第１組成物及び前記第２組成物はそれぞれ、薬学的に好適な賦形剤を更に含み、
対象における癌の治療方法に関し、前記第１組成物は筋肉内、皮内または皮下投与され、前記対象において、前記癌に関連する前記免疫原に特異的な免疫応答を誘発し、前記第２組成物は腫瘍内または腫瘍周辺投与され、前記第１組成物または第２組成物は同時または逐次的に投与される、
前記組成物。
（項目２６）
ａ）ｉ．癌関連抗原に特異的な抗原特異的Ｔ細胞であって、前記抗原特異的Ｔ細胞はｅｘ  ｖｉｖｏで増殖されている、前記抗原特異的Ｔ細胞、
ｉｉ．前記癌関連抗原を認識するキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように遺伝子組み換えされたＴ細胞、または
ｉｉｉ．ＭＨＣとの関係において、前記癌関連抗原を認識する特異的キメラＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現するように遺伝子組み換えされたＴ細胞、
を含む第１組成物、及び、
ｂ）薬学的に好適なアジュバントを含む第２組成物であって、前記第２組成物が免疫原を含まない、前記第２組成物、
を含む組成物であって、
前記第１組成物及び前記第２組成物はそれぞれ、薬学的に好適な賦形剤を更に含み、
対象における癌の治療方法での使用に関し、前記第１組成物は前記対象に全身投与され、前記第２組成物は腫瘍内投与され、前記第１組成物及び前記第２組成物は、同時または逐次的に投与される、
前記組成物。
（項目２７）
前記アジュバントは無毒性リピドＡ関連アジュバントである、項目２６に記載の組成物。
（項目２８）
前記アジュバントはグルコピラノシルリピドＡ（ＧＬＡ）である、項目２６に記載の組成物。
（項目２９）
ＧＬＡは安定した水中油型エマルション中に配合される、項目２８に記載の組成物。
（項目３０）
前記ＧＬＡは、式
【化１７】
2019203013.tif 000008
であって、
式中、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５及びＲ６はＣ１１〜Ｃ２０アルキルであり、Ｒ２及びＲ４はＣ１２〜Ｃ２０アルキルである、前記式を有する、項目２８または２９に記載の組成物。
（項目３１）
Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５及びＲ６はウンデシルに相当し、Ｒ２及びＲ４はトリデシルに相当する、項目３０に記載の組成物。
（項目３２）
ａ）ベクター粒子を含む第１組成物であって、前記ベクター粒子は組み換え発現ベクターを含み、前記組み換え発現ベクターは癌関連抗原をコードするポリヌクレオチドを含み、前記ポリヌクレオチドは少なくとも１つの制御発現配列に作用可能に結合している、前記第１組成物、及び、
ｂ）ＴＬＲ４アゴニストを含む第２組成物であって、前記組成物は抗原を含まない、前記第２組成物
を含む組成物であって、
前記第１組成物及び前記第２組成物はそれぞれ、薬学的に好適な賦形剤を更に含み、対象の腫瘍微小環境においてＴ細胞を増大させる方法での使用において、前記第１組成物は全身投与されるため、前記対象における前記癌関連抗原に対して免疫応答を誘発し、前記第２組成物は前記対象に腫瘍内または腫瘍周辺投与され、前記第１組成物及び第２組成物は同時または逐次的に投与されることで、前記腫瘍微小環境においてＴ細胞を増加させる、
前記組成物。
（項目３３）
前記ベクター粒子は、前記レンチウイルスベクターゲノムを含むレンチウイルスベクター粒子；前記ポックスウイルスベクターゲノムを含むポックスウイルスベクター粒子；前記ワクシニアウイルスベクターゲノムを含むワクシニアウイルスベクター粒子；前記アデノウイルスベクターゲノムを含むアデノウイルスベクター粒子；前記アデノウイルス随伴ウイルスベクターゲノムを含むアデノウイルス随伴ウイルスベクター粒子；前記ヘルペスウイルスベクターゲノムを含むヘルペスウイルスベクター粒子；または、前記アルファウイルスベクターゲノムを含むアルファウイルスベクター粒子である、項目［００３７３］に記載の組成物。
（項目３４）
前記ベクター粒子は前記レンチウイルスベクター粒子であり、前記レンチウイルスベクターゲノムを含む、項目３３に記載の組成物。
（項目３５）
前記レンチウイルスベクター粒子は、配列番号１と比較して少なくとも１つのアミノ酸の変更を有するシンドビスウイルスＥ２糖タンパク質を含むエンベロープを更に含み、残基１６０は欠失しているか、またはグルタミン酸以外のアミノ酸であり、Ｅ２糖タンパク質は、シンドビスウイルスＥ３タンパク質を有する融合タンパク質の一部ではない、項目３３または３４に記載の組成物。
（項目３６）
前記レンチウイルスベクター粒子は前記組み換え発現ベクターを樹状細胞に送達する、項目３５に記載の組成物。
（項目３７）
前記ＴＬＲ４アゴニストは無毒性リピドＡ関連アジュバントである、項目［００３７３］に記載の組成物。
（項目３８）
前記ＴＬＲ４アゴニストはグルコピラノシルリピドＡ（ＧＬＡ）である、項目［００３７３］に記載の組成物。
（項目３９）
前記ＧＬＡは安定した水中油型エマルション中で形成される、項目３８に記載の組成物。
（項目４０）
前記ＧＬＡは、式
【化１８】
2019203013.tif 000009
であって、
式中、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５及びＲ６はＣ１１〜Ｃ２０アルキルであり、Ｒ２及びＲ４はＣ１２〜Ｃ２０アルキルである、前記式を有する、項目３８または３９に記載の組成物。
（項目４１）
Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５及びＲ６はウンデシルに相当し、Ｒ２及びＲ４はトリデシルに相当する、項目４０に記載の組成物。
【図面の簡単な説明】
【００３５】
【図１Ａ】プライム−プル免疫付与戦略。Ｃ５７ＢＬ／６マウス（１群あたり５匹のマウス）を、０日目にＢ１６Ｆ１０−ＯＶＡ細胞で播種した。腫瘍播種の１０日後に、腫瘍を有するマウスを、尾部の付け根にてＶＰ０２／ＯＶＡまたはＶＰ０２／ＧＦＰ（対照ベクター）により免疫付与した。腫瘍播種の２１日後に、免疫化マウスにＧＬＡ／ＳＥを腫瘍内投与した。腫瘍を、ＧＬＡ／ＳＥ投与の直前（Ｄ＋０）、１日後（Ｄ＋１）、または２日後（Ｄ＋２）に回収した。回収した細胞をフローサイトメトリー分析のために染色した。図１（Ａ）  分析した時点での代表的なドットのプロット。赤色のゲートはＯＶＡ特異的ＣＤ３ε＋  ＣＤ８α＋細胞を含む。図１（Ｂ）  分析した時点での、ＯＶＡ特異的ＣＤ３ε＋  ＣＤ８α＋細胞の平均パーセント。
【図１Ｂ】プライム−プル免疫付与戦略。Ｃ５７ＢＬ／６マウス（１群あたり５匹のマウス）を、０日目にＢ１６Ｆ１０−ＯＶＡ細胞で播種した。腫瘍播種の１０日後に、腫瘍を有するマウスを、尾部の付け根にてＶＰ０２／ＯＶＡまたはＶＰ０２／ＧＦＰ（対照ベクター）により免疫付与した。腫瘍播種の２１日後に、免疫化マウスにＧＬＡ／ＳＥを腫瘍内投与した。腫瘍を、ＧＬＡ／ＳＥ投与の直前（Ｄ＋０）、１日後（Ｄ＋１）、または２日後（Ｄ＋２）に回収した。回収した細胞をフローサイトメトリー分析のために染色した。図１（Ａ）  分析した時点での代表的なドットのプロット。赤色のゲートはＯＶＡ特異的ＣＤ３ε＋  ＣＤ８α＋細胞を含む。図１（Ｂ）  分析した時点での、ＯＶＡ特異的ＣＤ３ε＋  ＣＤ８α＋細胞の平均パーセント。
【図２Ａ】プライム−プル免疫付与戦略による、リンパ球の腫瘍への動員。０日目に、Ｃ５７ＢＬ／６マウス（１群あたり５匹のマウス）に、脇腹から１×１０５個のＢ１６Ｆ１０−ＯＶＡ細胞を皮下投与して播種した。腫瘍播種の７日後、腫瘍を有するマウスを、尻尾の付け根にてＶＰ０２／ＯＶＡまたはＶＰ０２／ＧＦＰ（対照ベクター）により免疫付与した。腫瘍チャレンジ後の７日目（Ｄ７）または１４日目（Ｄ１４）に開始して、免疫化マウスに、３〜４日毎に、ＧＬＡ  ５μｇ／２％  ＳＥを腫瘍内投与した。１８日目に、腫瘍を回収した。腫瘍浸潤リンパ球を、Ｈｉｓｔｏｐａｑｕｅ（登録商標）−１０８３の１：１クッションで単離し、フローサイトメトリー分析のために、ＭＨＣ−Ｉ／ＳＩＩＮＦＥＫＬペンタマー、ＣＤ３、ＣＤ８、ＣＤ４、ＣＤ２５、及びＦＯＸＰ３抗体で染色した。図２（Ａ）  ゲーティング戦略に対する代表的なドットプロットを群平均％と共に示す。図２（Ｂ）  ペンタマー＋細胞％、及び制御性Ｔ細胞％に関する散乱プロットを各群に関して示す。エラーバーは平均±ＳＥＭを示す。
【図２Ｂ】プライム−プル免疫付与戦略による、リンパ球の腫瘍への動員。０日目に、Ｃ５７ＢＬ／６マウス（１群あたり５匹のマウス）に、脇腹から１×１０５個のＢ１６Ｆ１０−ＯＶＡ細胞を皮下投与して播種した。腫瘍播種の７日後、腫瘍を有するマウスを、尻尾の付け根にてＶＰ０２／ＯＶＡまたはＶＰ０２／ＧＦＰ（対照ベクター）により免疫付与した。腫瘍チャレンジ後の７日目（Ｄ７）または１４日目（Ｄ１４）に開始して、免疫化マウスに、３〜４日毎に、ＧＬＡ  ５μｇ／２％  ＳＥを腫瘍内投与した。１８日目に、腫瘍を回収した。腫瘍浸潤リンパ球を、Ｈｉｓｔｏｐａｑｕｅ（登録商標）−１０８３の１：１クッションで単離し、フローサイトメトリー分析のために、ＭＨＣ−Ｉ／ＳＩＩＮＦＥＫＬペンタマー、ＣＤ３、ＣＤ８、ＣＤ４、ＣＤ２５、及びＦＯＸＰ３抗体で染色した。図２（Ａ）  ゲーティング戦略に対する代表的なドットプロットを群平均％と共に示す。図２（Ｂ）  ペンタマー＋細胞％、及び制御性Ｔ細胞％に関する散乱プロットを各群に関して示す。エラーバーは平均±ＳＥＭを示す。
【図３Ａ】プライム−プル免疫付与戦略の治療効果。図３（Ａ）  ０日目に、Ｃ５７ＢＬ／６マウス（１群あたり５匹のマウス）に、脇腹から１×１０５個のＢ１６Ｆ１０−ＯＶＡ細胞を皮下投与して播種した。腫瘍播種の７日後、腫瘍を有するマウスを、尻尾の付け根にてＶＰ０２／ＯＶＡまたはＶＰ０２／ＧＦＰ（対照ベクター）により免疫付与した。腫瘍チャレンジ後の７日目（Ｄ７）または１４日目（Ｄ１４）に開始して、免疫化マウスに、３〜４日毎に、ＧＬＡ  ５μｇ／２％  ＳＥを腫瘍内投与した。図３（Ｂ）  ０日目に、ＢＡＬＢ／ｃマウス（１群あたり５匹のマウス）に、脇腹から１×１０５個のＣＴ２６細胞を皮下投与して播種した。腫瘍播種の７日後に、腫瘍を有するマウスを、尻尾の付け根にてＶＰ０２／ＡＨ１Ａ５またはＶＰ０２／ＧＦＰ（対照ベクター）で免疫付与した。腫瘍チャレンジ後の７日目（Ｄ７）または１４日目（Ｄ１４）に開始して、免疫化マウスに、３〜４日毎に、ＧＬＡ  ５μｇ／２％  ＳＥを腫瘍内投与した。腫瘍の成長を、１週間に２、３回測定した。腫瘍の体積は、変形した楕円体の式：長さ×幅２×π／６に基づき計算した。エラーバーは平均±ＳＥＭを示す。
【図３Ｂ】プライム−プル免疫付与戦略の治療効果。図３（Ａ）  ０日目に、Ｃ５７ＢＬ／６マウス（１群あたり５匹のマウス）に、脇腹から１×１０５個のＢ１６Ｆ１０−ＯＶＡ細胞を皮下投与して播種した。腫瘍播種の７日後、腫瘍を有するマウスを、尻尾の付け根にてＶＰ０２／ＯＶＡまたはＶＰ０２／ＧＦＰ（対照ベクター）により免疫付与した。腫瘍チャレンジ後の７日目（Ｄ７）または１４日目（Ｄ１４）に開始して、免疫化マウスに、３〜４日毎に、ＧＬＡ  ５μｇ／２％  ＳＥを腫瘍内投与した。図３（Ｂ）  ０日目に、ＢＡＬＢ／ｃマウス（１群あたり５匹のマウス）に、脇腹から１×１０５個のＣＴ２６細胞を皮下投与して播種した。腫瘍播種の７日後に、腫瘍を有するマウスを、尻尾の付け根にてＶＰ０２／ＡＨ１Ａ５またはＶＰ０２／ＧＦＰ（対照ベクター）で免疫付与した。腫瘍チャレンジ後の７日目（Ｄ７）または１４日目（Ｄ１４）に開始して、免疫化マウスに、３〜４日毎に、ＧＬＡ  ５μｇ／２％  ＳＥを腫瘍内投与した。腫瘍の成長を、１週間に２、３回測定した。腫瘍の体積は、変形した楕円体の式：長さ×幅２×π／６に基づき計算した。エラーバーは平均±ＳＥＭを示す。
【発明を実施するための形態】
【００３６】
本発明はとりわけ、（ｉ）皮内、皮下または筋肉内に初回免疫としてとして適用される、１つ以上のウイルス関連抗原または癌関連抗原（または両方）を発現する樹状細胞標的レンチウイルスベクター粒子（ＬＶ）、（ｉｉ）抗原なしで、所望により繰り返し、腫瘍内または腫瘍周辺に単独で、または別の治療薬と組み合わせて適用される、合成ＴＬＲ４アゴニストグルコピラノシルリピドＡ（ＧＬＡ）（他の治療薬は、腫瘍内、腫瘍周辺のいずれかで、または別の経路で、ＧＬＡと組み合わせて投与される；例えば、免疫チェックポイント阻害または共刺激抗体、オートファジー阻害剤、放射線治療等）を含む、ウイルス誘発性癌等の癌の一体化免疫療法を提供する。
【００３７】
本発明は、ウイルス誘発性癌、例えばメルケル細胞癌（メルケルポリオーマウイルス；大型Ｔ抗原）、頭頸癌（ＨＰＶ；Ｅ６及びＥ７抗原）、子宮頚癌（ＨＰＶ；Ｅ６及びＥ７抗原）、肝癌（肝炎Ｂ−大型、中型及び小型Ｓ抗原；Ｃ型肝炎ウイルス）、鼻咽頭癌（ＥＢＶ；ＥＢ核抗原１（ＥＢＮＡ１）、潜在的膜タンパク質−１及び−２（ＬＭＰ−１）、ＬＭＰ−２）、カポジ肉腫（ＨＨＶ８）、並びにグリア芽腫（ヒトサイトメガロウイルス、ｐｐ６５、ＩＥ１、ｕｓ２８）を含む任意の癌環境に使用することができる。
【００３８】
理論に束縛されるものではないが、１つもしくは複数のウイルス性抗原、または１つもしくは複数の腫瘍抗原を発現する、ウイルスベクターを含む発現ベクターを、ＴＬＲ４アゴニスト、例えば本明細書で記載するＧＬＡの腫瘍内適用と組み合わせて、新規用途（プライム／プル）において使用することにより、腫瘍内または周辺でｃｘｃｌ９及びｃｘｃｌ１０を含むサイトカインの局所産生が行われ、このことは、全身または局所で誘発された腫瘍特異的細胞障害性Ｔ細胞を、癌の部位に向ける。再び、理論に束縛されるものではないが、このメカニズム、及びＧＬＡ等のＴＬＲ４アゴニストの免疫刺激効果（例えば、ＴＬＲ４受容体刺激による、樹状細胞による抗原提示の向上及び樹状細胞の成熟）を通して、ウイルス誘発性癌を含む癌の免疫療法の効果は、著しく向上する。
【００３９】
全身レンチベクタープライムを使用してＣＤ８  Ｔ細胞を誘発した後、Ｔｏｌｌ様受容体リガンドを腫瘍内投与して治療効果を高める、プライム−プルの最初の報告は、２０１３年にＸｉａｏらにより出版された（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ，２０１３  Ｊｕｎｅ  １；１９０（１１）：５８６６−５８７３）。これらの実験では、ＶＳＶ偽型レンチベクターを免疫付与に用い、Ｔｏｌｌ様受容体アゴニスト３（ポリＩ：Ｃ）及び９（ＣｐＧ）を腫瘍内投与（ｉ．ｔ．）した。発明者らは治療効果を観察したが、本開示とは異なり、ＴＬＲ３／９リガンドの腫瘍内投与は、レンチウイルスベクターのみの免疫付与と比較して、ＣＤ８及びＣＤ４  ＴＩＬの絶対数を低下させた（Ｘｉａｏらを参照、図２Ａ）。このことは、ＴＬＲ３／９リガンドの注射による抗腫瘍効果の向上は、ＣＤ８及びＣＤ４  ＴＩＬの数の増加によるものではなかったことを示している。したがって、当業者は、本研究に鑑みて、Ｔ細胞を腫瘍部位に動員するためにＴＬＲアゴニストを腫瘍内または局所投与するに至らなかった。
【００４０】
一態様では、ウイルス誘発性癌（膀胱癌、メルケル細胞癌、カポジ肉腫  バーキットリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、移植後リンパ増殖性疾患、鼻咽頭癌、子宮頚癌、頭頸癌、肝細胞癌、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫を含むがこれらに限定されない）に対する既存の治療法の満たされていないニーズを解決するために、本開示は、腫瘍にリダイレクトされる特異的抗ウイルスＣＤ８  Ｔ細胞応答を誘発する及び／または向上させるための組成物及び方法を提供する。この目的で、例えば組み換え発現ベクター（例えば、本明細書に記載した、特異的ウイルス性抗原を発現する樹状細胞標的レンチベクター）、もしくは幾つかの実施形態では、癌関連腫瘍抗原、または両方（即ち「免疫原」）、による免疫付与、その後、本明細書に記載したＴＬＲ４アゴニストのグルコピラノシルリピドＡ（ＧＬＡ）等のＴＬＲアゴニストによる、局所投与（例えば腫瘍内、リンパ節内、粘膜または膀胱内治療）。これは、ウイルス性抗原特異的ＣＤ８  Ｔ細胞の誘発、及びこれらのリダイレクション、または腫瘍への動員もしくはホーミングをもたらし、現在の免疫療法に優る治療効果をもたらす。これに関し、また理論に束縛されるものではないが、本明細書で記載したもの（例えばＨＰＶ−Ｅ６／Ｅ７）等の、腫瘍関連ウイルス性抗原は外来抗原であるため、内因性腫瘍関連抗原よりも免疫原性が高く、免疫療法の効果を増加させる。
【００４１】
ある種の実施形態において、（例えば膀胱癌に対する）局所投与は所望により、本明細書に記載したＢＣＧを含んでよく、ある種の実施形態において、抗原特異的ＣＤ８  Ｔ細胞応答は、膀胱の粘膜にリダイレクトされる。
【００４２】
したがって、本開示は、一実施形態において、「プライム−プル」免疫付与を提供し、ここでは、ＣＤ８  Ｔ細胞応答を誘発するために、例えば、特異的免疫原（例えば１つ以上の腫瘍関連抗原；ウイルスが癌に関連する発癌性ウイルスである１つ以上のウイルス性抗原）を発現する、組み換え発現ベクターを含む最初の「プライム」、またはある種の実施形態においては「プライム／ブースト」組成物に続いて、ＣＤ８  Ｔ細胞を腫瘍に動員するための、ＧＬＡ等のＴＬＲ４アゴニストを含む「プル」組成物が続く。上記の通り、腫瘍関連ウイルス性抗原は内因性腫瘍関連抗原よりも免疫原性が高く、免疫療法の効果を高める。しかし、ある種の実施形態において、免疫原は発癌性ウイルスに関係しない癌関連抗原であってよい。本開示の種々の実施形態に従うと、発現ベクター及びＴＬＲ４アゴニストは、本明細書に記載するように、種々の部位において、種々の経路を用いて複数回投与されてよい。プライム−プル免疫付与はまた、国際公開第２０１３／１７２９２７号にも記載されており、本明細書に参照として組み込まれる。
【００４３】
一実施形態において、本開示は一実施形態において、例えば、ＣＤ８  Ｔ細胞応答を含む免疫応答を誘発するために、膀胱癌に関連する特異的腫瘍抗体（複数可）または免疫源（複数可）を発現する組み換え発現ベクターを含む最初の「プライム」または「プライム／ブースト」組成物、及び、ＣＤ８  Ｔ細胞を含む抗原特異的Ｔ細胞を膀胱の粘膜に動員するための、ＢＣＧを含むかまたは含まないＧＬＡ等のＴＬＲ４アゴニストを含む「プル」組成物を提供する。本開示の種々の実施形態に従うと、発現ベクター及び（ＢＣＧを含むかまたは含まない）ＴＬＲアゴニストを、本明細書に記載するように、種々の部位にて、かつ種々の経路を用いて、複数回投与してよい。したがって、本開示は、膀胱で確立された癌に対する、一体化した第１選択免疫療法を提供する。
【００４４】
一実施形態では、本開示は、（ｉ）１つ以上の発癌性ウイルス抗原または免疫原（例えば、癌を含む、関係するウイルスからの１つ以上の抗原）を発現する、初回免疫として皮内、皮下または筋肉内で適用される樹状細胞標的レンチベクターワクチン、（ｉｉ）追加免疫として腫瘍内で適用される同一のワクチン、（ｉｉｉ）単独で、または幾つかの実施形態では、維持療法として発癌性ウイルス抗原または腫瘍関連抗原と組み合わせて腫瘍内で繰り返し適用し、全身または局所的にプライミングされた細胞障害性Ｔ細胞を腫瘍に向ける合成ＧＬＡを投与すること、を含む方法を提供する。
【００４５】
一実施形態では、本開示は、（ｉ）初回免疫として皮内、皮下または筋肉内で適用される、１つ以上の発癌性ウイルス抗原及び１つ以上の腫瘍関連抗原または免疫原を発現する、樹状細胞標的レンチベクター由来のワクチン、（ｉｉ）追加免疫として膀胱内で適用される同一のワクチン、（ｉｉｉ）維持療法として、単独または所望によりＢＣＧと組み合わせて粘膜、腫瘍内または膀胱内で繰り返し適用され、全身または局所的にプライミングされた細胞障害性Ｔ細胞を膀胱粘膜に向ける合成ＧＬＡを投与することを含む方法を提供する。かかる方法は、ウイルス誘発性癌の治療に用いられる。ある種の実施形態において、本明細書における方法を、膀胱癌の治療に用いる。
【００４６】
ＧＬＡの局所投与を用いることにより、Ｃｘｃｌ９及びＣｘｃｌ１０を含むがこれらに限定されないサイトカインの、腫瘍内での局所産生をもたらし、このことが、全身または局所的に誘発されたウイルス特異的細胞障害性Ｔ細胞または腫瘍特異的細胞障害性Ｔ細胞を、ウイルス性抗原が腫瘍細胞により発現される腫瘍に向かわせる。理論に束縛されるものではないが、ＧＬＡによるＴＬＲ４受容体の刺激のメカニズムにより、ウイルス誘発性癌の免疫療法の効果が著しく向上する。
【００４７】
本開示の別の態様では、「プライム」免疫応答は、免疫細胞を患者内に養子移入することにより達成されてよい。これに関し、細胞は対象から単離され、ｅｘ  ｖｉｖｏで改変し、後患者内に移入し直してもよい。好適な組成物、例えば、ＴＬＲ４アゴニスト（例えばＧＬＡ）、または本明細書に記載した他のアジュバント組成物の局所投与をその後使用し、養子移入した細胞を、腫瘍または投与の局所部位に「プル」する。免疫細胞は、当業者に既知の種々の方法でｅｘ  ｖｉｖｏで改変することができる。例えば、細胞を、種々の技術により増殖させ、抗原特異的またはポリクロナールＴ細胞を産生することができ（例えばＲｉｄｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．（１９９０）１２８：１８９−２０１；Ｒｉｄｄｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９９２）２５７：２３８−２４１；ＵＳ５，８２７，６４２；ＵＳ６，０４０，１７７；ＵＳ６，６９２，９６４；ＵＳ６，３５２，６９４を参照）；キメラ抗原受容体技術を使用した遺伝子組み換え（例えば米国特許第８，９０６，６８２号；同８，９１６，３８１号；同７，７４１，４６５号；同５，８４３，７２８号；同７，４４６，１９０号；同６，３９２，０１３号；ＷＯ２０１２／０７９０００を参照）；キメラＴＣＲ技術または他の遺伝子組み換え（例えばＵＳ８，７４１，８１４；ＵＳ２０１３０１８９３０９）がある。ある種の実施形態において、細胞は対象以外のドナーから単離してもよいし、または他の実施形態では、細胞は好適な細胞株、もしくは対象と適合するように改変された人工細胞に由来してもよい。
【００４８】
したがって、本開示の別の態様は、１）対象に、ｅｘ  ｖｉｖｏで増殖もしくは改変された腫瘍関連抗原特異的Ｔ細胞、腫瘍関連抗原を認識するように遺伝子組み換えされたＣＡＲ−Ｔ細胞、または、ＭＨＣとの関係において癌に関連するエピトープを認識する特異的キメラＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現するように遺伝子組み換えされたＴ細胞を含む第１組成物を投与すること、２）対象に、本明細書に記載した薬学的に好適なアジュバントを含む第２組成物を局所（例えば腫瘍内）投与して、養子移入した細胞を腫瘍にプルすることで、対象における癌を治療すること、による、対象における癌の治療方法を提供する。ある種の実施形態において、第２組成物の局所投与前に、本明細書に記載した発現ベクターを対象に投与することにより、養子移入した細胞をブーストし、養子移入（そしてその後、ブーストした）細胞を局所部位（例えば腫瘍）にプルしてよい。
【００４９】
癌
本明細書に記載されるプライム−プルレジメンは、種々の癌の治療に有用であり得る。一実施形態では、本明細書に記載の方法は、種々の充実性腫瘍、即ち癌、肉腫及びリンパ腫の治療に有用であり得る。ある種の実施形態において、癌は原発充実性腫瘍であり、特定の他の実施形態において、癌は転移性または二次性充実性腫瘍である。関連するある種の実施形態において、癌は、黒色腫、肺癌、子宮頸癌、卵巣癌、子宮癌、乳癌、肝臓癌、胃癌、大腸癌、前立腺癌、膵臓癌、腎臓癌、膀胱癌、脳腫瘍、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、腹膜偽性粘液腫、リンパ管内皮肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌、膵臓癌、扁平上皮細胞癌、基底細胞癌、腺癌、メルケル細胞癌、汗腺癌、脂腺癌、乳頭状癌、乳頭腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支原性癌、腎細胞癌、肝癌、胆管癌、絨毛癌、セミノーマ、胎児性癌、及びウィルムス腫瘍から選択される。関係するある種の他の実施形態において、癌細胞は、精巣腫瘍、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、膠腫、多形性膠芽腫、星状細胞腫、形質細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽頭腫、脳室上衣腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、乏突起神経膠腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、白血病、リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、ワルデンストレームマクログロブリン血症またはその他の癌から選択される癌に由来する。したがって、本明細書記載の方法は、「プライム−プル」免疫付与の投与を含む、癌の治療及び症状の緩和方法、並びに癌の転移の阻害方法を含み、ここで、第１の「プライム」、またはある種の実施形態においては「プライム／ブースト」組成物は、例えば、特異的免疫原（例えば１つ以上の腫瘍関連抗原）を発現する組み換え発現ベクターを含み、「プル」組成物は、免疫細胞を腫瘍に動員するための、ＧＬＡ等のＴＬＲアゴニストを含む。
【００５０】
ある種の実施形態において、本明細書に記載されるプライム−プルレジメンは癌の治療に有用であり、この癌は、腫瘍が特に免疫原性であり、かつ、腫瘍が、非限定的に黒色腫、メルケル細胞癌（ＭＣＣ）、子宮頚癌、頭頸癌、膀胱癌、肉腫及び食道癌となることが可能である。幾つかの実施形態では、免疫原性は、癌精巣抗原の変異不均質性及び／もしくは発現、並びに／またはウイルス性抗原の発現（例えば特異的抗原／ネオ抗原のワクチン接種アプローチ）に基づいて測定することができる。例えば、Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＣａｎｃｅｒＩｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｓ． ２０１４  Ｍａｙ；２（５）：４８０−６；及びＬａｗｒｅｎｃｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３  Ｎａｔｕｒｅ  ４９９：２１４−２１８を参照のこと。
【００５１】
特定の実施形態では、ウイルス誘発性癌は、本明細書記載の方法により治療または緩和されやすい。発癌性ウイルスにより誘発される多数の癌は、当技術分野において既知である。本明細書記載の方法により治療または緩和可能な代表的なウイルス誘発性癌としては、膀胱癌、メルケル細胞癌、カポジ肉腫、肝臓癌、バーキットリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、移植後リンパ増殖性疾患、鼻咽頭癌、子宮頚癌、頭頸癌、肝細胞癌、及び成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫が挙げられるが、これらに限定されない（例えばＭｅｓｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  Ｈｏｓｔ  ＆  Ｍｉｃｒｏｂｅ  １５：２６６−２８２を参照）。他の癌が、特定の既知及び未知のウイルスにより誘発されると判断され得る。発癌性ウイルスに誘発されない癌もまた、本明細書で記載されるプライム−プル法を用いて治療され得る。
【００５２】
膀胱癌
近年の研究は、膀胱癌は、ヒトヘルペスウイルス８としても知られているカポジ肉腫関連ヘルペスウイルス（ＫＳＨＶ）、ＫＳＨＶと関係していることを示唆している。特に、ＫＳＨＶ  ＤＮＡは患者の５５％で検出された（Ｍ．Ｐａｒａｄｚｉｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｕｍｏｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，２０１４，３５（１），ｐｐ  ５６７−５７２）。ＢＣＧは、サイトカインの放出、並びに好中球及びＴ細胞による浸潤により測定されるように、膀胱粘膜において強力な先天性反応及び炎症反応を誘発する。ヒトにおいては、ＢＣＧを膀胱内で適用することは、多数のプロ炎症性サイトカイン及びケモカイン、例えばＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１２、ＴＮＦ−α、ＩＦＮ−γ、及びＧＭ−ＣＳＦの誘導をもたらすことが示されている（Ｋｉｔａｍｕｒａ，Ｈ．，ａｎｄ  Ｔｓｕｋａｍｏｔｏ，Ｔ．，Ｃａｎｃｅｒｓ（３）：３０５５−３０７２（２０１１）、及びＡｇａｒｗａｌ，Ａ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｔｏｘｉｃｏｌ  ３２（２）：３８４−３５６（２０１０））。マウスにおいては、４回の毎週の点滴投与後すぐに、ＢＣＧは著しく、Ｔ−ヘルパー１型（Ｔｈ１）ケモカイン（Ｃｘｃｌ２、Ｃｘｃｌ９、Ｃｘｃｌ１０、Ｘｃｌ１）に対する遺伝子を上方制御し、Ｔｈ１／Ｔｈ２ケモカイン（ＲＡＮＴＥＳ、Ｃｃｌ６及びＣｃｌ７）、並びにＴｈ１極性化サイトカイン（ＩＬ−１β及びＴＮＦ−α）、並びにＦｃ−γ−Ｒ１及びｉＮＯＳに対する遺伝子の発現を増加させた。これらの遺伝子の大部分は、６週間後に高く発現したままであった（Ｓｅｏｗ，Ｓ．Ｗ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．２００８  Ｊｕｌ；１２４（３）：４１９−２７（２００８））。ＢＣＧを抗癌剤として使用する更なる開示は例えば、米国特許第５，７１２，１２３号に見出すことができ、本明細書に参照として組み込まれている。
【００５３】
ＧＬＡは、マウスＰＢＭＣの生体外において、強力なサイトカイン／ケモカイン応答を誘発し、これらには、ＴＨ１型Ｔ細胞（ＣＸＣＬ９及びＣＸＣＬ１０）並びに単核白血球（ＣＣＬ２、ＣＣＬ３）に対するケモカイン、並びにＭＣＰ−１、ＴＮＦα、ＩＦＮ−ｃ及びＩＰ−１０が挙げられる（Ｌａｍｂｅｒｔ，Ｓ．Ｌ．，ｅｔ  ａｌ．，ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ；７（１２）２０１２））。
【００５４】
組み換えタンパク質と共に粘膜に適用したＧＬＡは、局所及び全身の両方での特異的抗体反応、並びに特異的な全身の、特にＴｈ１７表現型のＣＤ４細胞、及び幾つかのＣＤ８細胞を誘発する（Ａｒｉａｓ，Ｍ．Ａ．，ｅｔ  ａｌ．，ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ．２０１２；７（７）：ｅ４１１４４（２０１２））。
【００５５】
腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）は、１９７８年には膀胱癌における独立した予後因子として確認されており、ＣＤ８  ＴＩＬは筋層浸潤性癌における生残を予測することが分かっている（Ｍｏｓｔｏｆｉ，Ｆ．Ｋ．，ａｎｄ  Ｓｅｓｔｅｒｈｅｎｎ，Ｉ．，Ｎａｔｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ  Ｍｏｎｏｇｒ；４９：１３３−１４１（１９７８）；Ｌｏｐｅｚ−Ｂｅｌｔｒａｎ，ａ．ｅｔ  ａｌ．，Ｕｒｏｌ  Ｉｎｔ；４４：２０５−２０９（１９８９）；Ｍｏｒｉｔａ，ｔ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ；３２：１９１−１９４（１９９０）；Ｉｋｅｍｏｔｏ，Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒ  Ｊ  Ｕｒｏｌ；６５：３３３−３３８（１９９０）；Ｌｉｐｐｏｎｅｎ，Ｐ．Ｋ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ；２９：６９−７５（１９９３）；及びＳｈａｒｍａ，Ｐ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ．，Ｍａｒ  ６；１０４（１０）：３９６７−７２（２００７））。重要なことに、ＣＤ４及びＣＤ８細胞は共に、ＢＣＧが仲立ちする抗腫瘍活性に不可欠であり、優勢なＴｈ１免疫応答は効果的なＢＣＧ両方と関係している一方で、Ｔｈ２応答は失敗と関係しているようである（Ｒａｔｌｉｆｆ，Ｔ．Ｌ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｕｒｏｌ；１５０：１０１８−２３（１９９３）；Ｒｉｅｍｅｎｓｂｅｒｇｅｒ，Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｉｍｍｕｎｏｌ；１２７：２０−６（２００２）；Ｓａｉｎｔ，ｆ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｕｒｏｌ；１６７：３６４−７（２００２）；ｄｅ  Ｒｅｉｊｋｅ，ｔ．Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｕｒｏｌ；１５５：４７７−８２（１９９６）；Ｎａｄｌｅｒ，Ｒ．，ｅｔ  ａｌ．，．Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｉｍｍｕｎｏｌ；１３１：２０６−１６（２００３），Ｌｕｏ，Ｙ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ；２１：１７−２６（２００３）；及びＢｏｃｋｈｏｌｔ，Ｎ．Ａ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｕｒｏｌ；１８７：２２２８−３５（２０１２））。樹状細胞（ＣＤ１α＋、ＣＤ１）もまた、移行膀胱癌で検出されているが、これらは従来の活性化マーカーを低量でのみ発現した（Ｔｒｏｙ，Ａ．Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｕｒｏｌ．，Ｊｕｎ；１６１（６）：１９６２−７（１９９９））。
【００５６】
癌精巣抗原（ＣＴＡ）であるＮＹ−ＥＳＯ−１、ＬＡＧＥ−１、ＭＡＧＥ−Ａ１、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＭＡＧＥ−Ａ４、ＭＡＧＥ−Ａ１０、ＣＴ７、ＣＴ１０及びＧＡＧＥは、膀胱癌により発現されることが見出されており、少なくとも１つのＣＴＡはサンプルの７７％で発現しており、２つのＣＴＡは腫瘍の６１％で発現している（Ｓｈａｒｍａ，Ｐ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎ．，Ｄｅｃ  １８；３：１９（２００３）；及びＳｈａｒｍａ，Ｐ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，Ｓｅｐ  １５；１２（１８）：５４４２−７（２００６））。重要なことに、腫瘍内ＣＤ８  Ｔ細胞の存在下で泌尿生殖器癌を患い、ＭＨＣクラスＩ抗原の発現及びＮＹ−ＥＳＯ−１の発現を有する６９名の患者の調査は、進行癌を患い、ＣＤ８  ＴＩＬの数が多い患者は、類似の段階の癌を患い、ＣＤ８  ＴＩＬが少ない患者よりも、病気を有しない生残が良好であり（Ｐ＜０．００１）、全体の生残も良好であった（Ｐ＝０．０１８）ことを示した（Ｓｈａｒｍａ，Ｐ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，Ｓｅｐ  １５；１２（１８）：５４４２−７（２００６））。
【００５７】
ＮＹ−ＥＳＯ−１を発現する膀胱癌を患う６名の患者のうち６名、及び６名の患者のうち１名がそれぞれ、ＧＭ−ＣＳＦ及びＢＣＧをアジュバント化した組み換えＮＹ−ＥＳＯ−１を用いる皮内免疫付与の際に、ＣＤ４及びＣＤ８応答を開始した（Ｓｈａｒｍａ，Ｐ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．，Ｎｏｖ−Ｄｅｃ；３１（９）：８４９−５７  ９２００８））。
【００５８】
マウスでは、抗原特異的ＣＤ８  Ｔ細胞を膀胱にホーミングし、腫瘍の退行をもたらす抗原特異的ＣＤ８  Ｔ細胞は、ＣｐＧをアジュバント化したペプチドを用いる、皮下及び経鼻免疫付与の両方により誘発されることができる（Ｄｏｍｉｎｇｏｓ−Ｐｅｒｅｉｒａ，Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｕｒｏｌ．，Ａｕｇ  １３，５３４７（１３）０５１２３−９（２０１３））。しかす、マウスでは、皮下免疫付与した後でケモカインＣＸＣＬ９及びＣＸＣＬ１０を生殖路の粘膜に局所適用することで、活性化ＣＤ８  Ｔ細胞の動員、及びこの解剖学的位置における、メモリーＴ細胞のプールの確立が得られたこともまた示されている。この種類の免疫付与について、用語「プライム−プル」は著者らにより作り出されている（Ｓｈｉｎ，Ｈ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，Ｎｏｖ  １５；４９１（７４２４）：４６３−７（２０１２））。したがって、免疫付与の経路を通したインプリンティング、及びケモカインの局所作用の両方が、活性化ＣＤ８  Ｔ細胞の膀胱粘膜への動員をもたらし得ることが示されている。
【００５９】
組み換え発現ベクター
一実施形態では、少なくとも１つの免疫原であって、該免疫原に対して免疫応答を誘発する免疫原をコードするポリヌクレオチド配列を含む組み換え発現ベクターを提供する。免疫原の効率的な転写及び翻訳を得るために、各ベクターでコードするポリヌクレオチド配列は、少なくとも１つの適切な発現制御配列（制御発現配列または機能（ｆｅａｔｕｒｅ））（例えばプロモーター、エンハンサー、リーダー）を含まなければならず、これらは、本明細書でより詳細に説明され、コードするポリヌクレオチド配列（複数可）に作用可能に結合している。したがって、これらの組み換え発現ベクターは、組み換え発現ベクターと共に形質転換、形質導入もしくはトランスフェクションされた、または、組み換え発現ベクターを含有するベクター粒子が導入された、任意の適切な宿主細胞において、免疫原の発現を指示するため、または、少なくとも２つの免疫原の同時発現を指示するために提供される。
【００６０】
本明細書で記載される組み換え発現ベクターは、１つ以上の免疫原（即ち少なくとも１つの、少なくとも２つの、少なくとも３つの免疫原等）をコードしてよく、これらの免疫原は本明細書の他の場所において更に詳細に記載されている。特定の実施形態では、発癌性ウイルス（例えばＥＢＶ、ＨＰＶ、ＨＢＶ、ＨＣＶ、ＨＴＬＶ、及びＫＳＨＶ）からの少なくとも１つ、２つ、もしくは３つまたはそれ以上の免疫原は、組み換え発現ベクターによりコードされてよい。代表的な免疫原は発癌性ウイルス抗原であり、ＥＢＶ：ＥＢＮＡ−１、ＬＭＰ−１、ＬＭＰ−２Ａ；ＨＰＶ：Ｅ６、Ｅ７、Ｅ５；ＨＢＶ：ＨＢｘ、大型、中型、小型Ｓ抗原；ＨＣＶ：Ｃｏｒｅ、ＮＳ３、Ｎｓ５Ａ；ＨＴＬＶ：Ｔａｘ、ＨＢＺ；ＫＳＨＶ：ｖＦＬＩＰ、ＬＡＮＡ、ｖＧＰＣＲ、ｖＩＲＦ−１；メルケルポリオーマウイルス：大型Ｔ抗原；ｈＣＭＶ：ｐｐ６５、ＩＥ１、ＵＳ２８が挙げられるがこれらに限定されない。別の特定の実施形態において、本明細書で記載される組み換え発現ベクターは、少なくとも１つ、２つ、３つ、またはそれ以上の腫瘍関連抗原をコードすることができる。これらの腫瘍関連抗原は、本明細書で更に詳細に記載されており、例えば、膀胱癌抗原、メルケル細胞癌抗原、腎細胞癌抗原、前立腺癌抗原（例えば前立腺酸性リン酸化酵素、前立腺特異的抗原、ＮＫＸ３．１及び前立腺特異的膜抗原）、中皮腫抗原、膵臓癌抗原、黒色腫抗原、乳癌抗原、結腸直腸癌抗原、肺癌抗原、卵巣癌抗原、または、本明細書で記載されており、当該技術分野における任意の癌もしくは腫瘍関連抗原からの腫瘍関連抗原であってよい。
【００６１】
組み換え発現ベクターを、本明細書で記載される任意の１つ以上の免疫原を発現させるために使用してよい。特定の実施形態では、組み換え発現ベクターは、所望の免疫応答（即ち、特異的体液性応答（即ちＢ細胞応答）及び／または特異的細胞が仲立ちする免疫応答の誘発であり、免疫原特異的ＣＴＬ応答を含んでよい）を誘発する適切な細胞（例えば抗原提示細胞、即ち、樹状細胞等の細胞表面にペプチド／ＭＨＣ複合体を提示する細胞）、または組織（例えばリンパ組織）に送達される。したがって、組み換え発現ベクターはまた、例えば、リンパ組織特異的転写制御因子（ＴＲＥ）、例えばＢリンパ球、Ｔリンパ球、または樹状細胞特異的ＴＲＥも含んでよい。リンパ組織特異的ＴＲＥは、当技術分野において既知である（例えば、Ｔｈｏｍｐｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２），Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１２，１０４３−１０５３；Ｔｏｄｄ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３），Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７７，１６６３−１６７４；Ｐｅｎｉｘ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３），Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７８，１４８３−１４９６を参照）。
【００６２】
特定の実施形態では、組み換え発現ベクターはプラスミドＤＮＡまたはコスミドＤＮＡである。本明細書に記載した免疫原をコードする１つ以上のポリヌクレオチドを含有するプラスミドＤＮＡまたはコスミドＤＮＡは、当該技術分野において周知の標準的な技術を用いて容易に構築される。ベクターは典型的にはプラスミド形態で構築することができ、次いで、パッケージング細胞株またはプロデューサー細胞株にトランスフェクションすることができる。プラスミドは一般に、細菌内でのプラスミドの複製に有用な配列を含む。かかるプラスミドは当該技術分野において周知である。更に、原核細胞の複製開始点を含むベクターはまた、発現が、薬剤耐性等の検出マーカーまたは選択マーカーを付与する遺伝子も含み得る。典型的な細菌薬剤耐性製品は、アンピシリンまたはテトラサイクリンへの耐性を付与するものである。正しいヌクレオチド配列がプラスミドに導入されたことを確認するための分析に関して、プラスミドを大腸菌内で複製して精製し、制限エンドヌクレアーゼ消化、及び／または従来の方法により決定したヌクレオチド配列により分析してよい。
【００６３】
他の特定の実施形態において、組み換え発現ベクターはウイルスベクターである。代表的な組み換え発現ウイルスベクターとしては、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、ポックスウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノウイルス随伴ウイルスベクター、ヘルペスウイルスベクター、及びアルファウイルスベクターが挙げられる。ウイルスベクターは生きていても、弱毒化しても、複製条件的または複製不能であってもよく、通常、非病原性（欠失）で、複製能力のあるウイルスベクターである。
【００６４】
例として、特定の実施形態では、ウイルスベクターがワクシニアウイルスベクターを含む場合、対象の免疫原をコードするポリヌクレオチドを、ワクシニアウイルスベクターゲノムの非必須部位（ｎｏｎ−ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  ｓｉｔｅ）に挿入してよい。かかる非必須部位は例えば、Ｐｅｒｋｕｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  １５２：２８５（１９８６）；Ｈｒｕｂｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８０：３４１１（１９８３）；Ｗｅｉｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．４６：５３０（１９８３））に記載されている。ワクシニアウイルスと共に用いるのに好適なプロモーターとしては、Ｐ７．５（例えば、Ｃｏｃｈｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．５４：３０（１９８５）を参照）；Ｐ１１（例えば、Ｂｅｒｔｈｏｌｅｔ，  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８２：２０９６（１９８５）を参照）；及びＣＡＥ−１（例えばＰａｔｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：９４３１（１９８８）を参照）が挙げられるが、これらに限定されない。非常に弱毒化したワクシニア株は、Ｌｉｓｔｅｒ、ヒトでの使用に一層許容され、特定のゲノム欠失を含むＮＹＶＡＣ（例えば、Ｇｕｅｒｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．８０：９８５−９８（２００６）；Ｔａｒｔａｇｌｉａ  ｅｔ  ａｌ．，ＡＩＤＳ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ  ８：１４４５−４７（１９９２）を参照）、またはＭＶＡ（例えば、Ｇｈｅｒａｄｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．８６：２９２５−３６（２００５）；Ｍａｙｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ３：６−１４（１９７５）を参照）が挙げられる。Ｈｕ  ｅｔ  ａｌ．（Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７５：１０３００−３０８  （２００１）、Ｙａｂａ様疾患ウイルスを癌治療用ベクターとして使用することを記載）；米国特許第５，６９８，５３０号及び同６，９９８，２５２号もまた参照のこと。例えば、米国特許第５，４４３，９６４号も参照のこと。また、米国特許第７，２４７，６１５号及び同７，３６８，１１６号も参照のこと。
【００６５】
ある種の実施形態において、アデノウイルスベクターまたはアデノウイルス随伴ウイルスベクターを、対象の免疫原を発現させるために使用してよい。幾つかのアデノウイルスベクター系、及びベクターの投与方法について説明されてきた（例えばＭｏｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７２：８３５８−６１（１９９８）；Ｎａｒｕｍｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ  Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９：９３６−４１（１９９８）；Ｍｅｒｃｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １０１：６１８８−９３（２００４）；米国特許第６，１４３，２９０号、同６，５９６，５３５号、同６，８５５，３１７号、同６，９３６，２５７号、同７，１２５，７１７号、同７，３７８，０８７号、同７，５５０，２９６号を参照）。
【００６６】
レトロウイルスベクターは、マウス白血病ウイルス（ＭｕＬＶ）、テナガザル白血病ウイルス（ＧａＬＶ）、同種指向性レトロウイルス、サル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、及び組み合わせに基づくものを含んでよい（例えば、Ｂｕｃｈｓｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６６：２７３１−３９（１９９２）；Ｊｏｈａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６６：１６３５−４０（１９９２）；Ｓｏｍｍｅｒｆｅｌｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  １７６：５８−５９（１９９０）；Ｗｉｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６３：２３７４−７８（１９８９）；Ｍｉｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６５：２２２０−２４（１９９１）；Ｍｉｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１０：４２３９（１９９０）；Ｋｏｌｂｅｒｇ，ＮＩＨ  Ｒｅｓ．４：４３  １９９２；Ｃｏｒｎｅｔｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．２：２１５（１９９１）を参照）。
【００６７】
更に特定の実施形態において、組み換え発現ベクターはウイルスベクターである。ある種の実施形態において、ウイルスベクターはレトロウイルスベクターであり、別の実施形態において、レトロウイルスベクターはレンチウイルスベクターである。当業者により理解されるように、ウイルスベクター（例えばレンチウイルスベクター）とは通常、ウイルスベクターゲノムを含むウイルスベクター粒子を意味する。例えば、レンチウイルスベクター粒子はレンチウイルスベクターゲノムを含んでよい。レンチウイルスベクターに関して、ベクターゲノムは、多数の好適で利用可能な、レンチウイルスゲノム系ベクターのいずれかに由来することができ、ヒト遺伝子治療用途のために識別されたものを含む（例えば、Ｐｆｅｉｆｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅｔ．２：１７７−２１１（２００１）を参照）。好適なレンチウイルスベクターゲノムとしては、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ−１）、ＨＩＶ−２、ネコ免疫不全ウイルス（ＦＩＶ）、ウマ感染性貧血ウイルス、サル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）、及びマエディ／ビスナウイルスに基づくものが挙げられる。レンチウイルスの所望の特徴は、分化細胞及び非分化細胞の両方に感染可能であることであるが、標的細胞は分化細胞である必要はなく、分化のために刺激される必要もない。通常、ゲノム及びエンベロープ糖タンパク質は、得られるウイルスベクター粒子が偽型となるように、異なるウイルスに基づく。ウイルスベクターの安全機能が、望ましく導入される。安全機能としては、本明細書で詳細に記載しているように、自己不活性化ＬＴＲ、及び組込の欠如が挙げられる。ある種の実施形態において、組込の欠如は、ベクターゲノムのエレメントにより付与され得るが、パッケージ系（例えば、ベクターゲノムの一部ではないが、トランスに供給される非官能性インテグラーゼタンパク質）のエレメントからもまた由来してよい。代表的なベクターは、パッケージングシグナル（ｐｓｉ）、Ｒｅｖ応答エレメント（ＲＲＥ）、スプライスドナー、スプライスアクセプター、所望によりセントラルポリプリン帯（ｃＰＰＴ）、及びＷＰＲＥエレメントを含有する。ある種の代表的実施形態では、ウイルスベクターゲノムは、レンチウイルスゲノム（例えばＨＩＶ−１ゲノムまたはＳＩＶゲノム）からの配列を含む。ウイルス性ゲノム構築物は、レンチウイルスの５’及び３’ＬＴＲからの配列を含んでよく、並びに特に、レンチウイルスの５’ＬＴＲからのＲ及びＵ５配列、並びにレンチウイルスからの不活性化、または自己不活性化３’ＬＴＲを含んでよい。ＬＴＲ配列は、任意の種の任意のレンチウイスからのＬＴＲ配列であってよい。例えば、これらはＨＩＶ、ＳＩＶ、ＦＩＶまたはＢＩＶからのＬＴＲ配列であってよい。通常は、ＬＴＲ配列はＨＩＶ  ＬＴＲ配列である。
【００６８】
ベクターゲノムは不活性化または自己不活性化３’ＬＴＲを含んでよい（例えば、Ｚｕｆｆｅｒｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７２：９８７３，１９９８；Ｍｉｙｏｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７２：８１５０，１９９８を参照のこと、共にそれら全体が組み込まれている）。自己不活性化ベクターは一般に３’長末端反復（ＬＴＲ）からのエンハンサー及びプロモーター配列の欠失を有し、これはベクターの組込の間に５’ＬＴＲ内に複製される。一例として、３’ＬＴＲのＵ３エレメントは、エンハンサー配列、ＴＡＴＡボックス、Ｓｐ１及びＮＦκ  Ｂ部位の欠失を含有する。自己不活性化３’ＬＴＲの結果として、侵入及び逆転写の後で生成されるプロウイルスは、不活性化５’ＬＴＲを含む。原理的説明は、ベクターゲノムの可動化のリスク、及び近くの細胞プロモーターにおけるＬＴＲの影響を低減することにより安全性を向上させることである。自己不活性化３’ＬＴＲは、当該技術分野において公知の任意の方法により構築可能である。
【００６９】
所望により、レンチウイルス５’ＬＴＲからのＵ３配列を、ウイルス性構築物中のプロモーター配列、例えば異種プロモーター配列で置き換えてよい。これは、パッケージング細胞株から回収したウイルスの力価を増大させることができる。エンハンサー配列もまた含んでよい。パッケージング細胞株内でのウイルスＲＮＡゲノムの発現を増加させる任意のエンハンサー／プロモーターの組み合わせを使用してよい。一実施例において、ＣＭＶエンハンサー／プロモーター配列を使用する（例えば米国特許第５，３８５，８３９号及び同５，１６８，０６２号を参照）。
【００７０】
ある種の実施形態において、レンチウイルスベクターを組込不能に構築することにより、挿入突然変異誘発のリスクを最小限に抑える。種々のアプローチに従い、非組込ベクターゲノムを産生することができる。これらのアプローチは、ｐｏｌ遺伝子が不活インテグラーゼによりタンパク質をコードするように、ｐｏｌ遺伝子のインテグラーゼ酵素成分に突然変異（複数可）を導入することを包含する。ベクターゲノムそのものを改変して、例えば結合部位の一方もしくは両方を突然変異もしくは欠失させることにより、または欠失もしくは改変により、３’ＬＴＲ近位ポリプリン帯（ＰＰＴ）を非機能的にすることにより、組込を防止することができる。更に、非遺伝子的アプローチが利用可能である。これらは、インテグラーゼの１つ以上の機能を阻害する薬理学的作用物質を含む。このアプローチは相互排他的ではない。すなわち、これらの１つ以上を同時に使用することができる。例えば、インテグラーゼ及び結合部位が共に非機能的であることができ、または、インテグラーゼ及びＰＰＴ部位が非機能的であることができ、または、結合部位及びＰＰＴ部位が非機能的であることができ、またはこれら全てが非機能的であることができる。
【００７１】
インテグラーゼは、平滑末端のウイルス性二本鎖ＤＮＡの切断、及び、その末端の、染色体標的部位の２つの鎖にある５’ホスフェートへの結合に関与する。インテグラーゼは３つの機能的ドメイン、亜鉛結合モチーフ（ＨＨＣＣ）を含有するＮ末端ドメイン；触媒コア及び保存ＤＤ３５Ｅモチーフ（ＨＩＶ−１内のＤ６４、Ｄ１１６、Ｅ１５２）を含有する、中央ドメインコア；及びＤＮＡ結合性能を有するＣ末端ドメインを有する。インテグラーゼに導入された点変異は、通常の機能を阻害するのに十分である。多くのインテグラーゼ突然変異が構築され、特性決定されている（例えば、Ｐｈｉｌｐｏｔｔ  ａｎｄ  Ｔｈｒａｓｈｅｒ，Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  １８：４８３，２００７；Ａｐｏｌｏｎｉａ，Ｔｈｅｓｉｓ  ｓｕｂｍｉｔｔｅｄ  ｔｏ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  Ｌｏｎｄｏｎ，Ａｐｒｉｌ  ２００９，ｐｐ，８２−９７；Ｅｎｇｅｌｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６９：２７２９，１９９５；Ｎｉｇｈｔｉｎｇａｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒａｐｙ，１３：１１２１，２００６を参照）。インテグラーゼタンパク質をコードする配列を、好ましくは、逆転写酵素活性または核の標的化を著しく損なうことなく、欠失または突然変異させてタンパク質を不活化させることにより、標的細胞ゲノム内へのプロウイルスの組み込みのみを防止することができる。許容される突然変異は、インテグラーゼ触媒、鎖の移動、ａｔｔ部位への結合、宿主染色体ＤＮＡへの結合、及び他の機能を低下させることができる。例えば、ＨＩＶまたはＳＩＶインテグラーゼの残基３５において、１つのアスパラギン酸をアスパラギンに置換することにより、ウイルス性ＤＮＡの組込を完全になくす。インテグラーゼの欠失は一般に、Ｃ末端ドメインに限定される。残基２３５〜２８８のコード配列の欠失は、有用な非機能的インテグラーゼをもたらす（例えば、Ｅｎｇｅｌｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６９：２７２９，１９９５を参照）。更なる例として、突然変異は作製することができ、例えば、Ａｓｐ６４（残基番号はＨＩＶ−１について与え、対応する、他のレンチウイルス、またはレトロウイルスからのインテグラーゼの残基番号は、当業者により容易に決定することができる）（例えばＤ６４Ｅ、Ｄ６４Ｖ）、Ａｓｐ１１６（例えばＤ１１６Ｎ）、Ａｓｎ１２０（例えばＮ１２０Ｋ）、Ｇｌｕ１５２、Ｇｌｎ１４８（例えばＱ１４８Ａ）、Ｌｙｓ１５６、Ｌｙｓ１５９、Ｔｒｐ２３５（例えばＷ２３５Ｅ）、Ｌｙｓ２６４（例えばＫ２６４Ｒ）、Ｌｙｓ２６６（例えばＫ２６６Ｒ）、Ｌｙｓ２７３（例えばＫ２７３Ｒ）である。他の突然変異を構築し、組込、導入遺伝子発現、及び他の所望のパラメーターについて試験することができる。これらの機能に関するアッセイが良く知られている。突然変異は、部位特異的突然変異誘発、及び核酸配列の化学合成を含む様々な技術のいずれかにより作製することができる。インテグラーゼで１つの突然変異を作製することができ、または２つ以上のこれらの突然変異を存在させることができる。例えば、インテグラーゼは２つのアミノ酸、３つのアミノ酸、４つのアミノ酸等にて突然変異を有してよい。
【００７２】
あるいは、またはインテグラーゼ変異体（複数可）の使用を組み合わせて、Ｕ３及びＵ５の結合部位（ａｔｔ）を突然変異させることもできる。インテグラーゼはこれらの部位に結合し、３’末端ジヌクレオチドが、ベクターゲノムの両端で切断される。ＣＡジヌクレオチドは陥凹３’末端に位置する。ＣＡはプロセシングに必要であり、ヌクレオチドの突然変異は、宿主染色体への組込をブロックする。ＣＡジヌクレオチドのＡは、組込に最も不可欠なヌクレオチドであり、ゲノムの両端で突然変異が行われることで、最良の結果が得られる（例えば、Ｂｒｏｗｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７３：９０１１（１９９９）を参照）。一実例において、各末端におけるＣＡがＴＧに変更される。別の実例において、各末端におけるＣＡが、一方の末端ではＴＧに、他方ではＧＴに変更される。別の実例において、各末端のＣＡが欠失される。別の実例において、ＣＡのＡが各末端で欠失される。
【００７３】
組込は、３’ＬＴＲ近くに位置するポリプリン帯（ＰＰＴ）の突然変異または欠失により阻害することも可能である（例えばＷＯ２００９／０７６５２４を参照）。ＰＰＴは、＋鎖ＤＮＡ合成におけるプライマー結合部位として機能することができる、約１５ヌクレオチドのポリプリン配列である。この例においては、ＰＰＴの突然変異または欠失は、逆転写プロセスを標的とする。特定のメカニズムにとらわれるものではないが、ＰＰＴの突然変異または欠失により、直鎖ＤＮＡの作製は著しく減少し、実質的に１−ＬＴＲ  ＤＮＡサークルのみが作製される。組込には直鎖二本鎖ＤＮＡベクターゲノムが必要であり、組込は実質的に、このゲノム無しでは行われない。本明細書で述べるように、ＰＰＴは突然変異により、または欠失により非機能的とすることができる。通常は、約１５ｎｔのＰＰＴ全体が欠失されるが、幾つかの実施形態では、１４ｎｔ、１３、ｎｔ、１２ｎｔ、１１ｎｔ、１０ｎｔ、９ｎｔ、８ｎｔ、７ｎｔ、６ｎｔ、５ｎｔ、４ｎｔ、３ｎｔ及び２ｎｔのより短い欠失が行われる。突然変異が行われる際、通常は、特にＰＰＴの５’ハーフにおいて複数の突然変異が行われる（例えば、ＭｃＷｉｌｌｉａｍｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７７：１１１５０，２００３を参照）が、最初の４つの塩基における単一及び二重突然変異も依然として、転写を低減する。ＰＰＴの３’末端で行われた突然変異は通常、より劇的な効果を有する（例えばＰｏｗｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７０：５２８８，１９９６を参照）。
【００７４】
ベクターゲノムを非組込型にするためのこれらの異なるアプローチは、個別に、または組み合わせて使用することができる。２つ以上のアプローチを使用して、重複するメカニズムによりフェイルセーフベクター（ｆａｉｌ−ｓａｆｅ  ｖｅｃｔｏｒ）を構築してよい。したがって、ＰＰＴ突然変異または欠失を、ａｔｔ部位での突然変異もしくは欠失、もしくはインテグラーゼ突然変異と組み合わせることが可能であり、または、ＰＰＴ突然変異もしくは欠失は、ａｔｔ部位での突然変異もしくは欠失、及びインテグラーゼ突然変異の両方と組み合わせることが可能である。同様に、ａｔｔ部位での突然変異または欠失、及びインテグラーゼ突然変異を互いに、またはＰＰＴ突然変異もしくは欠失と組み合わせてよい。
【００７５】
本明細書に記載されるように、レンチウイルスベクター構築物は、哺乳類細胞内での発現のためのプロモーターを含有する。本明細書で更に詳細に論じられるプロモーターとしては、例えば、ヒトユビキチンＣプロモーター（ＵｂｉＣ）、サイトメガロウイルス前初期プロモーター（ＣＭＶ）、及びラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）プロモーターが挙げられる。Ｕ３領域は、すぐ上流にＰＰＴ（ポリプリン帯）配列を含んでよい。ある種の実施形態において、（３’末端にある）少なくとも３つの異なるＵ３領域のいずれか１つが、レンチウイルスベクターに含まれてよい（配列番号２１〜２３を参照）。構築物はＵ３領域に欠失を含む。ＳＩＮ構築物はＵ３に約１３０ヌクレオチドの欠失を有し（例えば、Ｍｉｙｏｓｈｉ，ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７２：  ８１５０，１９９８；Ｙｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８３：３１９４，１９８６を参照）、この欠失はＴＡＴＡボックスが取り除かれているので、ＬＴＲプロモーター活性がなくなる。構築物７０３及び７０４における欠失は、レンチウイルスベクターからの発現を増大させる（例えば、Ｂａｙｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒａｐｙ  １６：１９６８，２００８を参照）。更に、構築物７０４は３’ＰＰＴの欠失を含み、この欠失はベクターの組込を低下させる（例えばＷＯ２００９／０７６５２４を参照）。米国特許出願第１２／８４２，６０９号、及び国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ１０／０４２８７０号もまた参照のこと（これらそれぞれの全体が参照として組み込まれる）。
【００７６】
制御発現配列
本明細書に記載されるように、組み換え発現ベクターは少なくとも１つの制御発現配列を含む。ある種の実施形態において、組み換え発現ベクターがウイルスベクターゲノムを含む場合、特定の標的細胞内で少なくとも１つの免疫原が発現することが望ましい。通常、例えば、レンチウイルスベクターにおいて、免疫原をコードするポリヌクレオチド配列は、５’ＬＴＲと３’ＬＴＲ配列との間に位置する。更に、コードヌクレオチド配列（複数可）は、他の遺伝子配列または調節配列または機能（ｆｅａｔｕｒｅ）、例えば、特定の方法で免疫原の発現を制御する、プロモーターまたはエンハンサーを含む転写調節配列と機能的な関係で作用可能に結合しているのが好ましい。ある特定の場合において、有用な転写制御配列は、時間的活性及び空間的活性の両方が大幅に制御された配列である。コードされたポリペプチドの発現を制御するために使用され得る発現制御因子は、当技術分野において既知であり、誘導性プロモーター、構成的プロモーター、分泌シグナル、エンハンサー、及び他の調節配列が挙げられるが、これらに限定されない。
【００７７】
免疫原、及び任意の他の発現可能配列をコードするポリヌクレオチドは通常、内部のプロモーター／エンハンサー調節配列と機能的関係にある。レンチウイルスベクター構築物に関して、「内部」プロモーター／エンハンサーは、ウイルスベクターの５’ＬＴＲ配列と３’ＬＴＲ配列の間に位置しており、対象のコードポリヌクレオチド配列に作用可能に結合しているものである。内部プロモーター／エンハンサーは、機能的関係にある遺伝子の発現を増大させることが知られている、任意のプロモーター、エンハンサー、またはプロモーター／エンハンサーの組み合わせであってよい。「機能的関係」及び「作用可能に結合した」とは、非限定的に、配列が、プロモーター及び／またはエンハンサーが適切な分子と接触した場合に対象の配列が発現されるように、プロモーター及び／またはエンハンサーに対して、正しい位置及び方向にあることを意味する。
【００７８】
内部プロモーター／エンハンサーの選択は、免疫原の所望の発現パターン、及び既知のプロモーター／エンハンサーの特定の性質に基づく。したがって、内部プロモーターは構成的に活性であってよい。使用可能な構成的プロモーターの非限定例としては、ユビキチンに対するプロモーター（例えば米国特許第５５１０４７４号；ＷＯ９８／３２８６９を参照）；ＣＭＶに対するプロモーター（例えば、Ｔｈｏｍｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８１：６５９，１９８４；米国特許第５１６８０６２号を参照）；βアクチンに対するプロモーター（Ｇｕｎｎｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．１９８９  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８４：４８３１−４８３５）；及びｐｇｋに対するプロモーター（例えば、Ａｄｒａ  ｅｔ  ａｌ．１９８７  Ｇｅｎｅ  ６０：６５−７４；Ｓｉｎｇｅｒ−Ｓａｍ  ｅｔ  ａｌ．１９８４  Ｇｅｎｅ  ３２：４０９−４１７；並びにＤｏｂｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．１９８２  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１０：２６３５−２６３７を参照）が挙げられる。
【００７９】
あるいは、プロモーターは組織特異的プロモーターであってよい。幾つかの実施形態では、プロモーターは標的細胞特異的プロモーターである。例えば、プロモーターは、樹状細胞により発現される任意の生成物に由来してよく、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１０３、ＴＬＲ、ＤＣ−ＳＩＧＮ、ＢＤＣＡ−３、ＤＥＣ−２０５、ＤＣＩＲ２、マンノース受容体、デクチン−１、Ｃｌｅｃ９Ａ、ＭＨＣクラスＩＩが挙げられる。更に、プロモーターは、免疫原の誘発性発現を可能にするように選択してよい。誘発性発現のための多数のシステムが当技術分野において既知であり、テトラサイクリン応答系、ラクトースオペレーター−リプレッサー系、及び、熱ショックを含む種々の環境的または生理学的変化に応答するプロモーター、金属イオン（例えばメタロチオネインプロモーター）、インターフェロン、低酸素、ステロイド（例えばプロゲステロンまたはグルココルチコイド受容体プロモーター）、放射線（例えばＶＥＧＦプロモーター）が挙げられる。プロモーターの組み合わせもまた使用して、免疫原をコードするポリヌクレオチド配列のそれぞれを望み通りに発現させてもよい。当業者は、対象の生命体または標的細胞におけるポリヌクレオチド配列の所望の発現パターンに基づきプロモーターを選択することが可能である。
【００８０】
ウイルスベクターゲノムを含む組み換え発現ベクターは、少なくとも１つのＲＮＡポリメラーゼＩＩまたはＩＩＩ応答性プロモーターを含んでよい。このプロモーターは対象のポリヌクレオチド配列に作用可能に結合することができ、終止配列にもまた結合可能である。更に、２つ以上のＲＮＡポリメラーゼＩＩまたはＩＩＩプロモーターを導入してよい。ＲＮＡポリメラーゼＩＩ及びＩＩＩプロモーターは、当業者に周知である。好適な範囲のＲＮＡポリメラーゼＩＩＩプロモーターは、例えば、Ｐａｕｌｅ  ａｎｄ  Ｗｈｉｔｅ，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，Ｖｏｌ．２８，ｐｐ  １２８３−１２９８（２０００）に見出すことができる。ＲＮＡポリメラーゼＩＩまたはＩＩＩプロモーターはまた、ＲＮＡポリメラーゼＩＩまたはＩＩＩに、下流のＲＮＡコード配列を転写するように指令可能な、任意の合成または組み換えＤＮＡ断片も含む。更に、ウイルスベクターゲノムの一部として使用される（１つまたは複数の）ＲＮＡポリメラーゼＩＩまたはＩＩＩ（Ｐｏｌ  ＩＩまたはＩＩＩ）プロモーターも誘発可能である。任意の好適な誘発可能Ｐｏｌ  ＩＩまたはＩＩＩプロモーターを、本明細書記載の方法と共に用いることができる。特に好適なＰｏｌ  ＩＩまたはＩＩＩプロモーターとしては、Ｏｈｋａｗａ  ａｎｄ  Ｔａｉｒａ，Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｖｏｌ．１１，ｐｐ  ５７７−５８５（２０００）及びＭｅｉｓｓｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｖｏｌ．２９，ｐｐ  １６７２−１６８２（２００１）で提供されている、テトラサイクリン応答性プロモーターが挙げられる。
【００８１】
対象のポリヌクレオチド配列の発現を増大させるために、内部エンハンサーが、ウイルスベクターゲノムを含む組み換え発現ベクター内にも存在してよい。例えば、ＣＭＶエンハンサー（例えば、Ｂｏｓｈａｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  ４１：５２１，１９８５を参照）を使用してよい。ウイルスゲノム（例えばＨＩＶ、ＣＭＶ）及び哺乳類ゲノムにおける多くのエンハンサーが同定され特性決定されている（例えばＧｅｎＢａｎｋ等の、一般に入手可能なデータベースを参照）。エンハンサーを異種プロモーターと組み合わせて使用することができる。当業者は、所望の発現パターンに基づいて適切なエンハンサーを選択することが可能である。
【００８２】
ウイルスベクターゲノムを含む組み換え発現ベクターを、特定の標的細胞を標的にして送達する場合、ベクターゲノムは通常、標的細胞により認識され、対象の配列に作用可能に結合しているプロモーター、ウイルス成分（ベクターがウイルスベクターである場合）、及び本明細書で論じる他の配列を含有する。プロモーターは、ＲＮＡポリメラーゼの結合、及び転写が行われることを可能にする核酸配列により形成される発現制御因子である。プロモーターは誘導性、構造的、時間的に活性、または組織特異的であってよい。誘導性プロモーターの活性は、生物的因子または非生物的因子の有無により誘発されてよい。作用可能に結合している遺伝子の発現が、生命体のある特定の成長段階、生命体の製造、または特定の組織においてオン・オフ可能であるため、誘導性プロモーターは、遺伝子組み換えにおいて有用なツールとなることができる。誘導性プロモーターは、化学的に制御されたプロモーター、及び物理的に制御されたプロモーターに分類することができる。典型的な化学的に制御されたプロモーターとしては、アルコール制御されたプロモーター（例えばアルコールデヒドロゲナーゼＩ（ａｌｃＡ）遺伝子プロモーター）、テトラサイクリン制御されたプロモーター（例えばテトラサイクリン応答性プロモーター）、ステロイド制御されたプロモーター（例えばラットグルココルチコイド受容体（ＧＲ）系プロモーター、ヒトエストロゲン受容体（ＥＲ）系プロモーター、ガエクジソン（ｍｏｔｈ  ｅｃｄｙｓｏｎｅ）受容体系レセプター、及びステロイド／レチノイド／甲状腺受容体スーパーファミリーに基づくプロモーター）、金属制御されたプロモーター（例えばメタロチオネイン遺伝子系プロモーター）、並びに病因関連プロモーター（例えばアラビドプシス及びトウモロコシ病原体関連（ＰＲ）タンパク質系プロモーター）が挙げられるが、これらに限定されない。典型的な物理的に制御されたプロモーターとしては、温度制御されたプロモーター（例えば熱ショックプロモーター）、及び光制御されたプロモーター（例えばダイズＳＳＵプロモーター）が挙げられるが、これらに限定されない。他の代表的なプロモーターは他の場所、例えば、米国特許商標庁のデータベースを検索することにより特定可能な、特許及び公開特許出願に記載されている。
【００８３】
当業者は、特定の状況に基づき適切なプロモーターを選択することができる。多くの異なるプロモーターが当該技術分野において周知であり、プロモーターをポリヌクレオチド配列と作用可能に結合させて発現させる方法についてもまた、同様である。ネイティブなプロモーター配列及び多くの異種プロモーターの両方を使用して、パッケージング細胞及び標的細胞における発現を指示することができる。一般的に、ネイティブなプロモーターと比較して、より多くの転写、及び所望のタンパク質のより高い収率を可能にすることから、異種プロモーターが通常使用される。
【００８４】
プロモーターは例えば、ポリオーマウイルス、鶏痘ウイルス、アデノウイルス、ウシ乳頭腫ウイルス、トリ肉腫ウイルス、サイトメガロウイルス、レトロウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、及びサルウイルス４０（ＳＶ４０）等の、ウイルスのゲノムから入手できる。プロモーターはまた、かかるプロモーターが標的細胞と適合性であれば、例えば、異種哺乳類プロモーター（例えば、アクチンプロモーターもしくは免疫グロブリンプロモーター、熱ショックプロモーター、または天然配列と通常関係するプロモーター）であってもよい。一実施形態では、プロモーターは、ウイルス発現系における天然のウイルス性プロモーターである。幾つかの実施形態では、プロモーターは樹状細胞特異的プロモーターである。樹状細胞特異的プロモーターは例えば、ＣＤ１１ｃプロモーターとすることができる。
【００８５】
転写は、エンハンサー配列をベクター（複数可）に挿入することにより増大されてもよい。エンハンサーは典型的に、通常、長さが１０〜３００ｂｐであり、転写を増大させるようにプロモーター上で作用するＤＮＡのシス作用エレメントである。現在、哺乳類遺伝子（グロビン、エラスターゼ、アルブミン、α−フェトプロテイン、及びインスリン）、並びに真核細胞ウイルスからの、多くのエンハンサー配列が知られている。例としては、複製起点の後期側のＳＶ４０エンハンサー（ｂｐ１００〜２７０）、サイトメガロウイルス初期プロモーターエンハンサー、複製起点の後期側のポリオーマエンハンサー、及びアデノウイルスエンハンサーが含まれる。エンハンサーは抗原特異的ポリヌクレオチド配列に対して５’または３’位にてスプライシングされベクターとなってよいが、プロモーターの５’位に位置するのが好ましい。
【００８６】
発現ベクターはまた、転写の終結、及びｍＲＮＡの安定化に必要な配列を含有してよい。これらの配列は多くの場合、真核細胞またはウイルスＤＮＡまたはｃＤＮＡの、５’、及び場合により３’の非翻訳領域に見出され、当該技術分野において周知である。
【００８７】
ウイルスベクターゲノムを含む組み換え発現構築物はまた、更なる遺伝因子を含有してよい。構築物中に含まれてよい因子の種類は、いかなる方法でも限定されず、特定の結果を得るために選択されてよい。例えば、標的細胞内の組み換え発現ベクターまたはウイルスゲノムの核内移行（ｎｕｃｌｅａｒ  ｅｎｔｒｙ）を容易にするシグナルを含んでよい。かかるシグナルの一例は、ＨＩＶ−１フラップシグナルである。標的細胞内のプロウイルス組込部位の特質決定を容易にする、更なる調節配列が含まれてよい。例えば、ｔＲＮＡアンバー抑圧遺伝子配列が構築物中に含まれてよい。例えばニワトリβ−グロビンからのインスレーター配列もまた、ウイルスゲノム構築物に含まれてよい。この因子は、メチル化効果、及びヘテロクロマチン化効果により、標的細胞内に組み込まれたプロウイルスのサイレンシングの可能性を低下させる。更に、インスレーターは、内部エンハンサー、プロモーター、及び外因性ポリヌクレオチド配列を、染色体の組込位置における、周囲のＤＮＡからの正の、または負の位置効果から保護し得る。更に、ベクターゲノムを含む組み換え構築物は、対象の遺伝子の発現を向上させるように設計された１つ以上の遺伝因子を含有してよい。例えば、ウッドチャック肝炎ウイルス応答因子（ＷＲＥ）が構築物内に配置されてよい（例えば、Ｚｕｆｆｅｒｅｙ  ｅｔ  ａｌ．１９９９．Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７４：３６６８−３６８１；Ｄｅｇｌｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０００．Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．１１：１７９−１９０を参照）。
【００８８】
組み換え発現ベクターがウイルスベクターゲノムである場合、ウイルスベクターゲノムは通常、ウイルスベクターゲノム構築物の作製のために、パッケージング細胞株またはプロデューサー細胞株内にトランスフェクションされ得るプラスミド形態で構築される。プラスミドは一般に、細菌内でのプラスミドの複製に有用な配列を含む。かかるプラスミドは当該技術分野において周知である。更に、原核細胞の複製開始点を含むベクターはまた、発現が、薬剤耐性等の検出マーカーまたは選択マーカーを付与する遺伝子も含み得る。典型的な細菌薬剤耐性製品は、アンピシリンまたはテトラサイクリンへの耐性を付与するものである。
【００８９】
ある特定の構成において、組み換え発現ベクターは、樹状細胞（ＤＣ）成熟／刺激因子をコードするポリヌクレオチド配列を含有する。代表的な刺激分子としては、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１、ＩＬ−２３、ＴＮＦα、Ｂ７．１、Ｂ７．２、４−１ＢＢ、ＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０Ｌ）、薬剤誘発性ＣＤ４０（ｉＣＤ４０）等が挙げられる。これらのポリヌクレオチドは通常、樹状細胞内においてコード配列の発現を指令する１つ以上の制御因子の制御下にある。樹状細胞の成熟は、好結果の免疫付与に寄与する（例えば、Ｂａｎｃｈｅｒｅａｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．５：２９６−３０６（２００５）；Ｓｃｈｕｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５：１３８−１４７（２００３）；Ｆｉｇｄｏｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．１０：４７５−４８０（２００４）を参照）。成熟により、ＤＣは、抗原補足に積極的に関与する細胞から、Ｔ細胞のプライミング専用の細胞に形質転換することが可能である。例えば、ＣＤ４ヘルパーＴ細胞上のＣＤ４０ＬによるＣＤ４０との関わりは、ＤＣ成熟のための決定的なシグナルであり、ＣＤ８＋  Ｔ細胞の強力な活性化をもたらす。かかる刺激分子はまた、成熟因子、または成熟刺激因子とも称される。
【００９０】
免疫チェックポイントは、癌において、機能的細胞免疫の活性化に対して著しい障壁を示し、また、ＣＴＬＡ４及びプログラム死１（ＰＤ−１）を含む、Ｔ細胞における阻害リガンドに特異的なアンタゴニスト抗体は、臨床的に評価されている標的作用物質の例である。慢性的感染症及び癌における、著しい耐性メカニズムは、多量のＰＤ−１を発現する抗原特異的Ｔ細胞の機能的消耗である。治療用の免疫付与の潜在能が、免疫チェックポイント制御の組み合わせにより著しく向上していることが示されているため、非限定例として、これは、免疫チェックポイントを阻害するための代替アプローチは、当業者により、プログラム細胞死（ＰＤ）リガンド１及び２（ＰＤ−Ｌ１／Ｌ２）の発現を阻害することと理解されることができる。阻害を達成するための１つの方法は、本明細書で記載されるもの等のＲＮＡ分子を発現することであり、この分子は、関係する１つ以上の分子をコードする、レンチウイルスベクターゲノム等のウイルスベクターゲノムで形質導入されたＤＣ内において、ＰＤ−Ｌ１／Ｌ２の発現を抑制する。ＤＣの成熟、または免疫チェックポイント等の特定の因子、例えばＰＤ−１リガンドの発現は、ＭＨＣ  ＩＩ等の表面マーカーの上方制御のフローサイトメトリー分析、及び発現したケモカイン及びサイトカインを、例えば本明細書で記載される技術及び方法を実施することによりプロファイリングすることで特質決定することができる。
【００９１】
別の実施形態において、本明細書で記載されるレンチウイルスベクター等の、本明細書で記載されるレトロウイルスベクターに関して、レンチウイルスベクターは免疫原をコードする核酸を含んでよく、同一、または別のレンチウイルスベクターは、チェックポイント阻害剤に結合し、この活性をブロックする一本鎖抗体（例えばｓｃＦｖ）をコードする核酸を含んでよい。別の実施形態において、樹状細胞を標的にする、本明細書で記載されるレンチウイルスベクターは、免疫原をコードする核酸を含んでよく、同一、または別のレンチウイルスベクターは、樹状細胞により発現される免疫チェックポイント分子の発現を下方制御するか、もしくは別様においては阻害する核酸を含んでよい。
【００９２】
ブロッキングまたは阻害のために標的化され得る、例示的な免疫チェックポイント分子としては、ＣＴＬＡ−４、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、４−１ＢＢＬ（ＣＤ１３７Ｌ）、ＰＤＬ１、ＰＤＬ２、ＰＤ１、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＨＶＥＭ、ＴＩＭ３、ＧＡＬ９、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、２Ｂ４（ＣＤ２ファミリーの分子に属し、ＮＫ、γδ、及びメモリーＣＤ８＋（αβ）Ｔ細胞上全てに発現する）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５とも称される）、並びにＣＧＥＮ−１５０４９が挙げられるが、これらに限定されない。免疫チェックポイント阻害剤としては、抗体、もしくはその抗原結合断片、または、ＣＴＬＡ−４、ＰＤＬ１、ＰＤＬ２、ＰＤ１、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＨＶＥＭ、ＴＩＭ３、ＧＡＬ９、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、２Ｂ４、ＣＤ１６０及びＣＧＥＮ−１５０４９の１つ以上に結合し、かつこれらの活性をブロックもしくは阻害する、他の結合タンパク質が挙げられる。例示的な免疫チェックポイント阻害剤としては、トレメリムマブ（ＣＴＬＡ−４遮断抗体）、抗ＯＸ４０、ＰＤ−Ｌ１モノクローナル抗体（抗Ｂ７−Ｈ１；ＭＥＤＩ４７３６）、イピリムマブ、ＭＫ−３４７５（ＰＤ−１遮断剤）、ニボルマブ（抗ＰＤ１抗体）、ＣＴ−０１１（抗ＰＤ１抗体）、ＢＹ５５モノクローナル抗体、ＡＭＰ２２４（抗ＰＤＬ１抗体）、ＢＭＳ−９３６５５９（抗ＰＤＬ１抗体）、ＭＰＬＤＬ３２８０Ａ（抗ＰＤＬ１抗体）、ＭＳＢ００１０７１８Ｃ（抗ＰＤＬ１抗体）、及びヤーボイ／イピリムマブ（抗ＣＴＬＡ−４チェックポイント阻害剤）が挙げられる。
【００９３】
検出可能な生成物、通常はタンパク質をコードする配列を含めることで、所望の免疫原を発現する細胞の同定を可能にすることができる。例えば、蛍光マーカータンパク質（例えば、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ））が、対象の（即ち、少なくとも１つの免疫原をコードする）ポリヌクレオチド配列と共に組み換え発現構築物内に組み込まれる。別の場合において、タンパク質は抗体により検出可能であってよいし、または、タンパク質は、検出可能な生成物を得るための基質上で作用する酵素であってもよいし、もしくはトランスフェクションされた、もしくは形質導入された標的細胞の選択を可能にする、例えば、ハイグロマイシン耐性などの薬剤耐性を付与することが可能なタンパク質生成物であってもよい。典型的な選択遺伝子は、真核細胞内での使用が好適な抗生物質もしくは他の毒素、例えば、当該技術分野において公知のものでもとりわけ、ネオマイシン、メトトレキサート、ブラストサイジンに耐性を付与するタンパク質をコードするか、または、栄養要求性不足（ａｕｘｏｔｒｏｐｈｉｃ  ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｉｅｓ）を補う、もしくは培地内から失われる重要な栄養素を補給する。選択マーカーは所望により、別々のプラスミドに存在することができ、同時トランスフェクションにより導入されることができる。
【００９４】
本明細書で記載されるベクター粒子に関して、免疫原をコードする２つ以上のポリヌクレオチド配列、及び、本明細書に記載したエンベロープ分子をコードする配列、または、パッケージング細胞内での所望のベクター粒子の産生に必要な、１つ以上のＤＣ成熟因子を含む、１つ以上のマルチシストロン発現ユニットを使用してよい。マルチシストロンベクターを使用することで、必要な核酸分子の総数が減少し、このため、複数のベクターゲノムからの協調発現に関連する、起こりうる課題を避けることができる。マルチシストロンベクターにおいては、発現する各種因子は、１つ以上のプロモーター（及び、必要に応じて他の発現制御因子）に作用可能に結合している。幾つかの構成においては、マルチシストロンベクターは、少なくとも１つの（即ち１つ以上の）対象の免疫原をコードする配列、レポーター生成物をコードする配列、及び、１つ以上のベクター粒子成分をコードする配列を含む。組み換え構築物が、免疫原をコードするポリヌクレオチドを含むある種の実施形態において、構築物は所望により、ＤＣ成熟因子をコードする。ある種の実施形態において、組み換え構築物は、発癌性ウイルス性抗原及び腫瘍関連抗原をコードするポリヌクレオチドを含む。ある種の他の実施形態において、マルチシストロンベクターは、免疫原のそれぞれをコードするポリヌクレオチド配列、ＤＣ成熟因子、及び所望により、発現ベクターがウイルス性発現ベクターである場合はウイルス成分を含む。
【００９５】
マルチシストロン発現ベクター内で発現する各エレメントは、例えば、内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）エレメントまたはウイルス性２Ａエレメントにより分離され、同一のプロモーターから種々のタンパク質の別々の発現を可能することができる。ＩＲＥＳエレメント及び２Ａエレメントは、当技術分野において既知である（例えば米国特許第４，９３７，１９０号、ｄｅ  Ｆｅｌｉｐｅ  ｅｔ  ａｌ．２００４．Ｔｒａｆｆｉｃ  ５：６１６−６２６を参照）。一実施形態では、口蹄疫ウイルス（ＦＭＤＶ）；ウマ鼻炎Ａウイルス（ＥＲＡＶ）；及びｔｈｏｓｅａ  ａｓｉｇｎａウイルス（ＴａＶ）からの２Ａ様配列（例えば、Ｓｚｙｍｃｚａｋ  ｅｔ  ａｌ．２００４  Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２２：５８９−５９４を参照）と結合した、フーリン切断部位配列（ＲＡＫＲ）（例えばＦａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．２００５  Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２３：５８４−５９０を参照）等のオリゴヌクレオチドを使用し、マルチシストロンベクター内で遺伝因子を分離する。特定のマルチシストロンベクターの有効性を、標準的なプロトコールを使用して、それぞれの遺伝子の発現を検出することにより、容易に試験することができる。
【００９６】
特定の実例においては、ウイルスベクターゲノムは、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサー／プロモーター配列；ＨＩＶ  ５’ＬＴＲからのＲ及びＵ５配列；パッケージング配列（ψ）；所望によりＨＩＶ−１フラップシグナル；内部エンハンサー；内部プロモーター；対象の遺伝子；ウッドチャック肝炎ウイルス応答性因子；ｔＲＮＡアンバー抑圧遺伝子配列；エンハンサー配列が欠失したＵ３因子；ニワトリβ−グロビンインスレーター；並びに、３’  ＨＩＶ  ＬＴＲのＲ及びＵ５配列を含む。幾つかの実例において、ベクターゲノムは、インタクトなレンチウイルス５’ＬＴＲ及び自己不活性化３’ＬＴＲを含む（例えば、Ｉｗａｋｕｍａ  ｅｔ  ａｌ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  １５：１２０，１９９９を参照）。
【００９７】
ベクターゲノムの構築は、非限定的に例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９年及び２００１年版；Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ）；Ｃｏｆｆｉｎ  ｅｔ  ａｌ．（Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ．Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．（１９９７））；及び「ＲＮＡ  Ｖｉｒｕｓｅｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ」（Ａｌａｎ  Ｊ．Ｃａｎｎ，Ｅｄ．，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，（２０００）、前述のそれぞれは、その全体が本明細書に参照として組み込まれる）に記載されているような、制限エンドヌクレアーゼ消化、ライゲーション、形質転換、プラスミド精製、及びＤＮＡ塩基配列決定法といった標準的な技術を含む、任意の好適な当該技術分野において既知の遺伝子工学技術を用いて達成することができる。
【００９８】
哺乳類細胞における一時的発現のために構築されたベクターを使用してもよい。一時的発現には、宿主細胞が発現ベクターの多数のコピーを蓄積することで、発現ベクター内で免疫原特異的ポリヌクレオチドによりコードされる多量のポリペプチドが合成されるように、宿主細胞内で効率的に複製可能な発現ベクターを使用することを伴う。Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，ｓｕｐｒａ，ｐｐ．１６．１７−１６．２２，１９８９を参照のこと。ポリペプチドの発現に適合させるのに好適な、他のベクター及び方法が当該技術分野において周知であり、特定の状況に容易に適合される。
【００９９】
本明細書において提供する教示、及び当該技術分野における知識を用いることで、当業者は、特定の発現系の有効性は、レポータータンパク質をコードするポリヌクレオチド配列を含むベクターによりパッケージング細胞をトランスフェクションし、好適な技術を用いた発現を測定、例えば緑色蛍光タンパク質コンジュゲートからの蛍光を測定することにより試験可能であることを理解するであろう。その他の好適なレポーター遺伝子が当該技術分野において周知である。
【０１００】
免疫原をコードするポリヌクレオチド配列を含む組み換え発現ベクターを、免疫原の産生のために使用してよい。組み換え発現ベクターは、少なくとも１つの制御発現配列、例えば免疫原をコードするポリヌクレオチドに作用可能に結合しているプロモーターまたはエンハンサーを含む。それぞれの発現ベクターを使用して、対応する免疫原の組み換え産生のために、適切な宿主細胞を形質転換、形質導入またはトランスフェクションしてよい。免疫原を産生するための好適な宿主細胞としては、原核生物、酵母菌並びに高等真核細胞（例えばＣＨＯ及びＣＯＳ）が挙げられる。タンパク質技術分野において既知の、かつ日常的に実践される、種々の単離方法（例えば濾過、膜分離精製法、クロマトグラフィー（親和性クロマトグラフィー、高圧液体クロマトグラフィーを含む）、及び分取電気泳動）のいずれか１つを使用して、それぞれの宿主細胞または宿主細胞培養液から免疫原をそれぞれ単離してよい。ある種の実施形態において、本明細書に記載されるように、単離免疫原を次いで、薬学的に好適な賦形剤と配合して免疫原性組成物を提供してよい。
【０１０１】
組み換えによりポリペプチドを作製する特定の方法は、通常周知であり日常的に用いられている。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，２ｎｄ  ｅｄ．，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８９；またＳａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，３ｒｄ  ｅｄ．，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，（２００１）も参照のこと）により、分子生物学的手順が説明されている。ＤＮＡ塩基配列決定は、Ｓａｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７４：５４６３（１９７７））、及びＡｍｅｒｓｈａｍ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ｐｌｃ配列決定ハンドブック（これらの改良を含む）に記載されているとおりに実施することができる。
【０１０２】
ベクター粒子
別の実施形態において、ベクター粒子を提供する。ベクター粒子は、少なくとも１つの免疫原をコードするポリヌクレオチド配列を含む、本明細書で記載される組み換え発現ベクターのいずれか１つを含む。ある種の他の実施形態において、ベクター粒子は、特異的な免疫応答を誘発する少なくとも１つの免疫原をコードするポリヌクレオチド配列を含む１つの組み換え発現ベクター（第１の組み換え発現ベクターとも称される）を含む、組み換え発現系を含む。本明細書においては、（本明細書に記載した）少なくとも１つの免疫原をコードするポリヌクレオチドを標的細胞に送達する方法もまた提供される。特定の実施形態では、標的細胞は、抗原提示細胞である免疫細胞である。より特定の実施形態では、本明細書に記載するように、標的細胞は樹状細胞である。かかる方法は、標的細胞を、ポリヌクレオチドを送達するビヒクルと接触させること（即ち、相互作用を可能にすること）を含む。特定の実施形態では、本明細書で詳述するように、ポリヌクレオチドの送達方法は、免疫原をコードするポリヌクレオチド配列を含有する組み換え発現ベクターを含むベクター粒子を、対象に投与することにより、細胞を接触させることを含む。ベクター粒子、組み換え発現ベクター、ポリヌクレオチド、及び免疫原を、本明細書で更に詳細に論ずる。
【０１０３】
樹状細胞（ＤＣ）は、免疫応答の開始及び制御に不可欠な抗原提示細胞である。ＤＣは２つの経路で成長することができる。１つ目の経路は単球から独立し、２つ目の経路は単球に由来する（Ｍｏ−ＤＣ）。血液単球は、ＧＭ−ＣＳＦ及びＩＬ−４による培養の際に、樹状形状、及び適応免疫を開始させる強い能力を獲得し（例えば、Ｂｅｎｄｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  １９６（２），１２１（１９９６）；Ｓａｌｌｕｓｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７９（４），１１０９（１９９４）を参照）、これはヒトのｉｎ  ｖｉｖｏを含む（例えば、Ｄｈｏｄａｐｋａｒ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ  １０４（２），１７３（１９９９）；Ｓｃｈｕｌｅｒ−Ｔｈｕｒｎｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６５（６），３４９２（２０００）を参照）。より効果的な免疫原特異的Ｔ細胞応答は、ベクター粒子ワクチン、特に、ｅｘ  ｖｉｖｏでの細胞操作を必要とすることなく、ｉｎ  ｖｉｖｏで免疫原を効果的に直接Ｍｏ−ＤＣに送達する、レンチウイルスベクター粒子系を使用することにより達成され得る。ヒトＭｏ−ＤＣは、多量の２つのＣ型レクチン受容体、マンノース受容体（ＭＭＲ）、及びＤＣ特異的細胞間接着分子−３−結合ノンインテグリン（ＤＣ−ＳＩＧＮ）を発現する。本明細書でより詳細に記載されるように、ＤＣ−ＳＩＧＮを標的にするように操作した組み換えレンチウイルスベクターを用いて、免疫原の発現を、Ｍｏ−ＤＣを標的としてよい。
【０１０４】
ＤＣ−ＳＩＧＮと選択的に結合する、組み換えシンドビスウイルス（ＳＩＮ）糖タンパク質からなる、ＤＣ−ＳＩＧＮ標的化エンベロープ（ＳＶＧｍｕ）が、記載の通り改変されている（本明細書の記載、並びに米国特許出願第１２／８４２，６０９号、及び国際特許出願公開第１０／０４２８７０号を参照）。レンチウイルスベクターは、マウスへの単回の免疫付与の後、高機能性ＣＤ８  Ｔ細胞免疫応答を誘発した（例えば、Ｄａｉ，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ（２００９）；Ｙａｎｇ，ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２６（３），３２６（２００８）を参照）。このプロトタイプは、２つの主な改変により著しく進歩した。本明細書で記載されるこのレンチウイルスベクターは、遍在するヘパラン硫酸受容体への結合を防止するように改変された（例えばＫｌｉｍｓｔｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７２（９），７３５７（１９９８）を参照）、ＤＣ−ＳＩＧＮ受容体を介して、皮膚ＤＣに感染することが知られているアルボウイルスである、ネイティブなＳＩＮに基づく糖タンパク質エンベロープ（ＳＩＮｖａｒ１と称される）を含む（例えば、Ｇａｒｄｎｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７４（２４），１１８４９（２０００）；Ｋｌｉｍｓｔｒａ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７７（２２），１２０２２（２００３）を参照）。ＳＩＮｖａｒ１エンベロープは、親ＳＶＧｍｕエンベロープと比較して、生産性の向上、及びｉｎ  ｖｉｖｏ機能の向上を付与する。ベクターはまた、ベクターを非機能的にする変異インテグラーゼ（ｐｏｌＤ６４Ｖ）（例えば、Ａｐｏｌｏｎｉａ，ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．１５（１１），１９４７（２００７）を参照）と、並びに、ＬＴＲのＵ３領域（ａｔｔまで）及び３’ＬＴＲポリプリン帯（ＰＰＴ）が欠失したベクター骨格の組み合わせにより重複して組込能力がない。したがって、無効化インテグラーゼに加えて、ベクター骨格の組成物が、完全長ベクターゲノムの転写を防止し（自己不活性化変異）、これにより、感染ＤＣ内で単一ＬＴＲ逆転写エピソームｄｓＤＮＡサークルが形成され、このサークルは、染色体組込用のテンプレートではない（例えば、Ｂａｙｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．１６（１２），１９６８（２００８）；Ｂｒｅｃｋｐｏｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．  Ｖｉｒｏｌ．（２０１０）；Ｍａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｏｌ．  Ｔｈｅｒ．１０（１）：１３９  （２００４）を参照）。親ＨＩＶゲノムの約７５％がＤＣ−ＮＩＬＶから取り除かれ、この部分には、Ｒｅｖを除く制御及びアクセサリータンパク質を全て含む。単回注射の後、ＤＣ−ＮＩＬＶは、大変強固な腫瘍抗原特異的ＣＤ８  Ｔ細胞応答を誘発する。レンチベクター免疫付与の潜在能は、部分的には少なくともＴＬＲ３及びＴＬＲ７パターン認識受容体の関与に依存している（例えば、Ｂｅｉｇｎｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．（２００９）；Ｂｒｅｃｋｐｏｔら（上記）を参照）。ＤＣ−ＮＩＬＶは、組込を行った対応物と同等の程度の免疫応答を誘発することが可能であり、相同プライムブーストレジメンで使用可能である。
【０１０５】
ある種の実施形態において、ベクター粒子はウイルスベクター粒子であり、他のある種の実施形態では、ベクター粒子は、例えばリステリア・モノサイトゲネス、サルモネラ属菌、ウシ型結核菌、大腸菌、赤痢属菌、及びエルシニア属菌等の細菌に由来する粒子である（例えば、Ｐａｔｅｒｓｏｎ，Ｓｅｍｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ（２０１０）２２：１８３；Ｌｏｅｓｓｎｅｒ，Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｌ．Ｔｈｅｒ．（２００４）４：１５７；Ｄａｕｄｅｌ，Ｅｘｐｅｒｔ  Ｒｅｖ．Ｖａｃｃｉｎｅｓ（２００７）６：９７を参照）。代表的なウイルスベクター粒子としては、レンチウイルスベクターゲノムを含むレンチウイルスベクター粒子；ポックスウイルスベクターゲノムを含むポックスウイルスベクター粒子；ワクシニアウイルスベクターゲノムを含むワクシニアウイルスベクター粒子；アデノウイルスベクターゲノムを含むアデノウイルスベクター粒子；アデノウイルス随伴ウイルスベクターを含むアデノウイルス随伴ウイルスベクター；ヘルペスウイルスベクターゲノムを含むヘルペスウイルスベクター粒子（例えば単純ヘルペスウイルスＩもしくはＩＩ）；またはアルファウイルスベクターゲノムを含むアルファウイルスベクター粒子が挙げられる。
【０１０６】
より特定の実施形態においては、ベクター粒子は、レンチウイルスベクターゲノムを含むレンチウイルスベクター粒子（上記で詳述）である。少なくとも１つの免疫原をＤＣにコードする配列を送達するために、レンチウイルスベクター粒子（レンチウイルス粒子であるビリオンとも称されて良い）を使用することで、細胞、特に樹状細胞（ＤＣ）を標的化する方法及び組成物を本明細書において提供する。レンチウイルスベクター粒子は、シンドビスウイルスＥ２に由来するエンベロープ糖タンパク質変異体、並びに、対象の配列を含むゲノム、及び所望により他の成分を含む組み換え発現構築物を含む。糖タンパク質変異体は、対照シンドビスウイルス株であるＨＲからの糖タンパク質と比較して、ヘパラン硫酸への結合の低下を示す。エンベロープ糖タンパク質は、レンチウイルスベクター粒子により樹状細胞の感染を容易にする。感染を「容易にする」とは、本明細書で使用する場合、形質導入を容易にすることと同一であり、エンベロープ糖タンパク質が単独で、または他の分子と共に作用して、偽型レトロウイルスまたはレンチウイルス粒子の、受容体が仲立ちすることによる標的細胞内への導入を促進または向上させる役割を意味する。
【０１０７】
一般に、レンチウイルスベクター粒子は、機能的ベクター粒子を作製するために必要な成分を一緒にコードする、１つ以上のプラスミドベクター、及び／または組込エレメントを含有する細胞株により作製される。これらのレンチウイルスベクター粒子は通常、複製能力がなく、即ち、感染は単一ラウンドしか可能でない。ほとんどの場合、プロデューサー細胞染色体内に安定的に組み込まれた複数のプラスミドベクター、または個々の発現カセットを利用して、レンチウイルスベクター粒子を作製する種々の遺伝子成分を分離する。しかし、レンチウイルス成分全てを有する単一のプラスミドベクターを使用することができる。一実例において、パッケージング細胞株に、ＬＴＲを含むウイルスベクターゲノム、シス作用パッケージング配列、並びに、対象の配列（即ち、１つの免疫原をコードする少なくとも１つのヌクレオチド配列）を含有する１つ以上のプラスミドがトランスフェクションされ、少なくとも１つのプラスミドはウイルス酵素及び構造成分（例えばｇａｇ及びｐｏｌ）をコードし、並びに、少なくとも１つのプラスミドがアルボウイルスエンベロープ糖タンパク質をコードする。ウイルス粒子は細胞膜から成長し、対象の配列を含有する、通常は２つのＲＮＡゲノムを含む芯、及び、樹状細胞を標的にするアルボウイルスエンベロープ糖タンパク質を含む。ある種の実施形態において、アルボウイルス糖タンパク質はシンドビスウイルスＥ２糖タンパク質であり、糖タンパク質は操作され、対照株ＨＲからのＥ２と比較して、ヘパラン硫酸への結合が低下している。これは通常、ＨＲ  Ｅ２糖タンパク質配列と比較して、少なくとも１つのアミノ酸の変更を伴う。同様に、Ｅ２糖タンパク質を操作して、樹状細胞への標的特異性を増加させてもよい。
【０１０８】
理論に束縛されるものではないが、ウイルス粒子が細胞表面に結合することで、エンドサイトーシスが誘発され、ウイルスをエンドソームに運び、膜融合を誘発し、ウイルスの芯を細胞基質に入れることが可能と考えられている。レンチウイルスベクター粒子の組込を利用するある種の実施形態に関して、逆転写を行い生成物を核に移動させた後、ウイルスのゲノムは標的細胞ゲノム内に組み込まれ、対象の配列が標的細胞のゲノム内に取り込まれる。しかし、挿入突然変異誘発の可能性を減らし、指定した免疫原（複数可）の一時的発現を促進するために、他の実施形態では非組込レンチウイルスベクター粒子（即ち、標的細胞ゲノムに組み込まれないもの）を利用するが、代わりに、対象の配列をエピソームから発現させる。いずれかの例において、感染ＤＣは次いで、対象の配列（例えば免疫原、及び所望により刺激分子）を発現する。次いで、免疫原を樹状細胞によりプロセシングしてＴ及びＢ細胞に提示し、抗原特異的免疫応答を生成することができる。上記の特異的経路は、樹状細胞が抗原特異的免疫応答を刺激することができる限り必要ない。
【０１０９】
予防または治療効果を付与するために、ウイルス粒子を対象に投与することができる。樹状細胞の感染、及び免疫原生成物の発現の後、免疫応答が生成物に対して生成される。
【０１１０】
ウイルスベクターエンベロープ
節足動物媒介ウイルス（アルボウイルス）は、蚊などの感染した節足動物ベクターにより、ヒト、ウマ、またはトリ等の宿主に伝播するウイルスである。アルボウイルスは更に、アルファウイルス及びフラビウイルスを含むウイルスのサブファミリーに分割され、これらは正極性の一本鎖ＲＮＡゲノム、及び糖タンパク質含有エンベロープを有する。例えば、デング熱ウイルス、黄熱ウイルス及びウエストナイルウイルスはフラビウイルスファミリーに属し、シンドビスウイルス、セムリキ森林ウイルス及びベネズエラウマ脳炎ウイルスは、アルファウイルスファミリーのメンバーである（例えば、Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６６，４９９２（１９９２）を参照）。シンドビスウイルスのエンベロープは、２つの膜貫通糖タンパク質を含む（例えば、Ｍｕｋｈｏｐａｄｈｙａｙ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．３，１３（２００５）を参照）。Ｅ１は融合を担うと考えられており、Ｅ２は細胞結合を担うと考えられている。シンドビスウイルスエンベロープ糖タンパク質は、オンコレトロウイルス及びレンチウイルスを含む、他のレトロウイルスを偽型化することが知られている。
【０１１１】
本明細書で論ずる通り、アルボウイルスエンベロープ糖タンパク質を使用して、レンチウイルス系ベクターゲノムを偽型化することができる。「偽型化」レンチウイルスとは、レンチウイルスゲノムとは異なるウイルスによりコードされた、１つ以上のエンベロープ糖タンパク質を有するレンチウイルス粒子である。エンベロープ糖タンパク質は、本明細書に記載するように改変、突然変異または操作されてよい。したがって、本明細書で記載されるレンチウイルスベクター粒子は、例えば、アルファウイルスまたはフラビウイルスエンベロープ糖タンパク質（例えば、改変、突然変異もしくは操作され得るＥ２糖タンパク質）といった、アルボウイルスエンベロープ糖タンパク質で偽型化したレンチウイルスを含む。レンチウイルスはまた、ＶＳＶ−Ｇ、インフルエンザウイルス、アレナウイルス、ラブドウイルス、オルトミクソウイルス、ＨＩＶ１、ＨＩＶ２、及びＳＩＶを含む、他のエンベロープにより偽型化されてもよい。
【０１１２】
シンドビスウイルス及び他のアルファウイルスのエンベロープは、ウイルス粒子膜の脂質二分子膜内に組み込まれ、通常は２つの糖タンパク質（Ｅ１及びＥ２）の複数のコピーを含む。各糖タンパク質は膜貫通領域を有し、Ｅ２は約３３残基の細胞質ドメインを有する一方で、Ｅ１の細胞質尾部は大変短い（約２残基）。Ｅ１及びＥ２の両方は、膜貫通領域内、またはその近くに結合したパルミチン酸を有する。Ｅ２は最初、フーリンまたは他のＣａ２＋依存性セリンプロテイナーゼによりＥ２、及びＥ３と称される小糖タンパク質へと切断される前駆体タンパク質として合成される。Ｅ２及びＥ１をコードする配列間に位置するのは、６Ｋと呼ばれるタンパク質をコードする配列である。Ｅ３及び６Ｋは、Ｅ２及びＥ１糖タンパク質をそれぞれ、膜内に移動させる役割を果たすシグナル配列である。シンドビスウイルスゲノムにおいて、シンドビスエンベロープタンパク質のコード領域は、Ｅ３、Ｅ２、６Ｋ及びＥ１をコードする配列を含む。本明細書で使用する場合、アルボウイルスウイルスの「エンベロープ」は、少なくともＥ２を含み、かつ、Ｅ１、６Ｋ及びＥ３もまた含んでよい。シンドビスウイルス（ＨＲ株）のエンベロープ糖タンパク質の代表的な配列は、配列番号１７として表される。他のアルボウイルスのエンベロープ糖タンパク質の配列は、ＧｅｎＢａｎｋ等の一般に入手可能なデータベースに見出すことができる。例えば、デングウイルス糖タンパク質をコードする配列は（ＧｅｎＢａｎｋ内でもとりわけ）受託番号ＧＱ２５２６７７．１、及びＮＣＢＩにおけるウイルスバリエーションデータベース（ＧｅｎＢａｎｋ受託及びウイルスバリエーションデータベースは、エンベロープ糖タンパク質配列用に参照として組み込まれている）に見出すことができ、ベネズエラウマ脳炎ウイルスエンベロープ糖タンパク質をコードする代表的な配列は、受託番号ＮＰ＿０４０８２４．１にある（エンベロープ糖タンパク質の配列に関して、参照として組み込まれている）。
【０１１３】
アルファウイルス、及び特にシンドビスウイルスに関して、今日まで、樹状細胞上の細胞受容体（複数可）は決定的に同定されていないが、１つの受容体はＤＣ−ＳＩＧＮであるようである（例えば、Ｋｌｉｍｓｔｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７７：１２０２２，２００３を参照）。用語「付着」「結合」「標的化」等は同じ意味で用いられ、シンドビスウイルスエンベロープ糖タンパク質と細胞成分との相互作用のメカニズムを示すことを意味するものではない。ＤＣ−ＳＩＧＮ（樹状細胞特異的ＩＣＡＭ−３（細胞内付着分子３）結合ノンインテグリン；ＣＤ２０９としてもまた知られている）は、物質の急速な結合とエンドサイトーシスが可能な、Ｃ型レクチン様受容体である（例えば、Ｇｅｉｊｔｅｎｂｅｅｋ  ｅｔ  ａｌ．Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２２：３３−５４，２００４を参照）。Ｅ２は、ＤＣ−ＳＩＧＮを通してウイルスを樹状細胞に標的化するようである。本明細書で示すように、ＤＣ−ＳＩＧＮを発現する細胞は、シンドビスウイルスＥ２で偽型化したウイルスベクター粒子により、ＤＣ−ＳＩＧＮを発現しない同質遺伝細胞よりも良好に（少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも６倍、少なくとも７倍、少なくとも８倍、少なくとも９倍、または少なくとも１０倍良好に）形質導入される。Ｅ２糖タンパク質がウイルス感染を容易にするメカニズムでは、場合によっては、ＤＣ−ＳＩＧＮへの直接結合により、または構造、もしくは他の幾つかのメカニズムの変更を引き起こすことで、ＤＣ−ＳＩＧＮが関与しているようである。実際のメカニズムに関係なく、Ｅ２による標的化は、ＤＣ−ＳＩＧＮを発現する細胞、即ち樹状細胞に対して好ましい。
【０１１４】
シンドビスウイルスはまた、ヘパラン硫酸を介して細胞に結合するようである（例えば、Ｋｌｉｍｓｔｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７２：７３５７，１９９８；Ｂｕｒｍｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７２：  ７３４９，１９９８を参照）。ヘパラン硫酸、及び他の細胞表面グリコサミノグリカンは最も多くの細胞型の表面で見出されるため、ヘパラン硫酸と、シンドビスエンベロープ糖タンパク質との相互作用を低減するのが望ましい。これは、シンドビスウイルスエンベロープのヘパラン硫酸への結合を減少させるか、もしくはシンドビスウイルスエンベロープの、樹状細胞への結合を増加させる（例えば結合活性を増加させる）ことにより、またはその両方により達成することができる。結果として、他の細胞型により発現され得る、かつ、エンベロープがＤＣ−ＳＩＧＮに特異的であっても生じる得る、他の分子への非特異的結合は減少し、特異性の増加が、望ましくない副作用（例えば、所望の免疫応答を低下させ得る副作用）、または他の細胞型の不適切な形質導入に関連する副作用を避けるように機能することができる。ＤＣ−ＳＩＧＮを発現する細胞の、相対的な特異的形質導入の利点に代えて、またはそれに加えて、シンドビスウイルスエンベロープＥ２糖タンパク質により偽型化したウイルス粒子は、ＶＳＶ−Ｇ等の糖タンパク質により偽型化したウイルス粒子に優る他の利点を付与し得る。かかる利点の例としては、補体が仲立ちする細胞溶解の減少、及び／または神経細胞標的化の減少が挙げられ、これらは共に、ＶＳＶ−Ｇ偽型化ウイルス粒子の投与と関係があると考えられている。
【０１１５】
種々の実例において、レンチウイルスベクター粒子は、ＤＣ−ＳＩＧＮを発現する細胞に特異的に結合し、ヘパラン硫酸への結合は低下、または無効化している。即ち、シンドビスウイルスエンベロープＥ２糖タンパク質を改変し、他の細胞型と比較して、ＤＣ−ＳＩＧＮを発現する樹状細胞にウイルスを優先的に向けるようにしてよい。かかるエンベロープ糖タンパク質は、ヘパリン硫酸を遍在的に発現する他の細胞型（例えば骨髄細胞またはリンパ系細胞）と比較して、樹状細胞、特にＤＣ−ＳＩＧＮを発現する樹状細胞に優先的に結合する。後述のように、この優先的な結合は、樹状細胞、特にＤＣ−ＳＩＧＮを発現する樹状細胞の優先的な感染を理想的にもたらす。とりわけ、構造研究、及び他の研究の分子モデリングから入手した情報に基づき、エンベロープタンパク質、特にＥ２及びＥ１糖タンパク質の変異体配列は、糖タンパク質がエンベロープタンパク質としてその機能を維持する一方、所望の結合特異性、結合活性、または結合度を有するように設計及び作製される。候補の変異体配列を各糖タンパク質について作製し、以下に記載した方法、または当該技術分野において公知の他の方法を用いてアッセイし、最も所望の特性を有するエンベロープ糖タンパク質を識別することができる。
【０１１６】
シンドビスＥ２のある特定の変異体配列は、配列番号１と比較して、残基１６０に少なくとも１つのアミノ酸改変を有する。残基１６０は欠失されているか、またはグルタミン酸以外のアミノ酸に改変されている。改変は、最も一般的には少なくとも１つのアミノ酸置換であるが、代わりに、１つ以上のアミノ酸の付加または欠失とすることもできる。任意の追加のアミノ酸は数が少なく、安全性を損ね得る抗原エピトープ（例えばヘマグルチニンタグ配列）を含まないことが好ましい。２つ以上の改変がある場合、それらは共に同一の種類（例えば置換）であるか、または異なる種類（例えば置換と欠失）とすることができる。複数の改変はタンパク質配列内で分散していても、連続して位置していてもよい。
【０１１７】
例として、変異体配列は、配列番号１のおよそ残基５０からおよそ残基１８０の領域内に、少なくとも１つのアミノ酸改変を含む。この領域内には、ヘパラン硫酸への結合に関与するアミノ酸が存在する。Ｅ２の正味の正電荷を減少させることにより、ヘパラン硫酸による静電相互作用を低下させて、ヘパラン硫酸への結合の減少をもたらすことができる。本領域内の候補となる正荷電アミノ酸としては、残基６３、７０、７６、８４、９７、１０４、１２９、１３１、１３３、１３９、１４８、１４９、１５９におけるリジン、及び残基６５、９２、１２８、１３７、１５７、１７０、１７２におけるアルギニンが挙げられる（例えば、Ｂｅａｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  ３４７：１８３−１９０，２００６を参照）（配列番号１を参照）。これらのアミノ酸の少なくとも幾つかは、Ｅ２のヘパラン硫酸への結合に直接関与している。正味の正電荷は、リジンもしくはアルギニンの欠失、または、リジンもしくはアルギニンを、中性もしくは負電荷のアミノ酸で置換することにより減少させることができる。例えば、これらのリジン及びアルギニンの１つ以上は、グルタミン酸またはアスパラギン酸で置換されていてもよい。ある種の実施形態は、リジン７０、７６、または１５９の、少なくとも１つの置換を有する。Ｅ２糖タンパク質の代表的なアミノ酸配列は、配列番号３（例えば残基６６〜４８８）、４（例えば残基６６〜４８８）、及び５（例えば残基６６〜４８６）に記載されている。Ｅ２がＥ３とのポリタンパク質として発現する場合には、天然Ｅ３／Ｅ２切断部位に隣接した位置にあるリジンは維持される。即ち、認識配列及び切断部位は改変されない。あるいは、ネイティブなエンドペプチダーゼ切断部位配列が、異なるエンドペプチダーゼに対する認識配列で置き換えられる。
【０１１８】
Ｅ２のある特定の変異体もまた、樹状細胞の結合に良い影響を与える方法で改変される。対照ＨＲ配列の残基１６０に見出されるグルタミン酸を改変することにより、樹状細胞への結合を改善することができる（例えば、Ｇａｒｄｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７４，１１８４９，２０００を参照）。残基１６０の欠失または残基１６０の置換といった改変は、ある特定の変異体で見出される。特定の変異体において、非荷電のアミノ酸でＧｌｕを置換し、別の変異体においては、非酸性アミノ酸でＧｌｕを置換する。通常、Ｇｌｕ１６０が、グリシン、アラニン、バリン、ロイシンまたはイソロイシンを含む小さな、または脂肪族アミノ酸の１つで置き換えられる。
【０１１９】
他の変異体は、２つ以上のアミノ酸改変を含む。通常、これらの変異体においては、改変の１つはＧｌｕ１６０であり、残りの改変（複数可）は、配列番号１のおよそ５０〜およそ１８０残基にわたる領域における、リジン及びアルギニンの１つ以上の変更である。ある特定の変異体は、Ｇｌｕ１６０の非酸性残基への変更または欠失、及び、リジン７０、リジン７６、もしくはリジン１５９の、非塩基性アミノ酸への１つ以上の変更を含む。幾つかの特異的変異体は、Ｇｌｕ１６０のＧｌｙへの、Ｌｙｓ７０のＧｌｕへの、及びＬｙｓ１５９のＧｌｕへの置換；Ｇｌｕ１６０のＧｌｙへの、Ｌｙｓ７０、７６、及び１５９のＧｌｕへの置換；Ｇｌｕ１６０の欠失及びＬｙｓ７０並びに１５９のＧｌｕへの置換；並びに、Ｇｌｕ１６０の欠失及びＬｙｓ７０、７６並びに１５９のＧｌｕへの置換を含む。本明細書で使用する位置の番号付けは、例えば、アミノ酸が欠失されるかまたは挿入される場合、番号付けをそれに応じて調節するように、配列番号１を参照して行われていると理解されている。例えば、残基１が存在しない場合、位置１６０は位置１５９を意味する。
【０１２０】
ある種の実施形態において、Ｅ２タンパク質は、少なくともＥ３と融合した、またはリーダー配列と融合したポリタンパク質として最初に発現する。リーダー配列がＥ３であるか他の配列であるかに関わらず、ウイルスエンベロープ内のＥ２は、Ｅ３、または他のリーダー配列を含んではならない。即ち、Ｅ２は、Ｅ３／Ｅ２融合タンパク質（即ち、ＳＶＧｍｕと称されるＥ３／Ｅ２融合タンパク質）でないことが好ましい。ある種の実施形態において、Ｅ２は、Ｅ３−Ｅ２−６Ｋ−Ｅ１ポリタンパク質の一部として発現する。シンドビスウイルスはポリタンパク質の一部としてＥ２を自然に発現し、Ｅ３／Ｅ２、Ｅ２／６Ｋ、及び６Ｋ／Ｅ１の結合領域は、エンドペプチダーゼにより認識され切断される配列を有する。通常、Ｅ３／Ｅ２結合は、残基６５と６６の間で、フーリンまたはフーリン様セリンエンドペプチダーゼにより切断される。フーリンは、２つのアミノ酸により分離される一対のアルギニン残基に特異性を有する。フーリンによるＥ３／Ｅ２切断を維持するために、残基６２〜６６（ＲＳＫＲＳ；配列番号２６）は、２つのアミノ酸分離を有する２つのアルギニン残基、及びセリン残基を維持しなければならない。あるいは、Ｅ３／Ｅ２フーリン切断配列、またはいずれかの他の切断配列の代わりに、異なる切断配列を使用することができる。認識及び切断部位は、非限定的に、アスパラギンエンドペプチダーゼ（例えばカテプシンＤ、キモシン、ＨＩＶプロテアーゼ）、システインエンドペプチダーゼ（ブロメライン、パパイン、カルパイン）、メタロエンドペプチダーゼ（例えばコラゲナーゼ、サーモリシン）、セリンエンドペプチダーゼ（例えばキモトリプシン、第ＩＸａ因子、第Ｘ因子、トロンビン、トリプシン）、ストレプトキナーゼを含むエンドペプチダーゼに組み込むことができる。これらの酵素に対する認識及び切断部位配列が良く知られている。
【０１２１】
既に述べたもの以外の、Ｅ２内のアミノ酸もまた改変してよい。通常、変異体Ｅ２配列は、参照Ｅ２配列に対して少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するか、または、少なくとも８２％、少なくとも８５％、少なくとも８７％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、もしくは少なくとも９８％の配列同一性を有してもよい。したがって、上記の突然変異（非限定的に、位置１６０での突然変異、または、およそ５０〜およそ１８０の残基にわたる領域（例えば７０、７６、及び／もしくは１５９）における、リジン及びアルギニンの１つ以上の突然変異を含む）のいずれかを有する、該変異Ｅ２糖タンパク質のいずれかは、参照Ｅ２配列（例えば、成熟Ｅ２糖タンパク質配列の配列番号１、３（例えば残基６６〜４８８）、４（例えば残基６６〜４８８）、または５（例えば残基６６〜４８６））のいずれかに少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有し得る。変異糖タンパク質は、Ｅ２を含むエンベロープを有するウイルス粒子により、樹状細胞の感染を容易にする能力等の、生物学的機能を示さなければならない。実験では、ウイルス構築、細胞表面への付着、及び感染といった種々の側面において重要な役割を有すると思われる、エンベロープ糖タンパク質の領域が特定された。変異体を作製する場合、以下の情報をガイドラインとして使用することができる。Ｅ２の細胞質尾部（およそ、残基４０８〜４１５）がウイルス構築に重要である（たとえば、Ｗｅｓｔ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．８０：４４５８−４４６８，２００６を参照；その全体が組み込まれる）。他の領域は二次構造の形成に関与しており（およそ、残基３３〜５３）、また、輸送及びタンパク質安定性に関与している（およそ、残基８６〜１１９）（例えば、Ｎａｖａｒａｔｍａｒａｊａｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．３６３：１２４−１４７，２００７を参照；その全体が組み込まれる）。変異体は、膜を貫通する、およそ残基３７０〜３８０にわたる領域の疎水性特質を保持してよい。変異体は、Ｎ結合グリコシル化部位残基ＮＩＴ（残基１９６〜１９８）、及びＮＦＴ（残基３１８〜３２０）の１つ、または両方を保持してよく、かつ、パルミトイル化された部位（Ｃ−３９６、Ｃ４１６及びＣ４１７）の１つ以上を保持してよい（例えば、Ｓｔｒａｕｓｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｒｅｖ．５８，４９１−５６２，１９９４；ｐｐ．４９９−５０９を参照、その全体が本明細書に参照として組み込まれる）。他方、Ｅ２の多くの領域を、有害な事象を起こすことなく改変してよい。例えば、Ｅ２内に、多くの異なる位置におけるトランスポゾンを挿入すると、依然として生存可能なウイルスがもたらされる（例えば、上記Ｎａｖａｒａｔｍａｒａｊａｈを参照）。
【０１２２】
ある種の実施形態において、タグペプチドを、Ｅ３、６Ｋ、またはＥ１タンパク質に組み込んでよい。幾つかの目的のために、タグをＥ２内に組み込んでよいが、タグをヒト患者への投与用の生成物で使用するのは望ましくない。短い配列（例えば５〜３０アミノ酸）であるタグペプチドを使用して、エンベロープ発現、及びそのウイルス粒子内での存在の検出を容易にすることができる。検出目的のために、タグ配列は通常、抗体または化学物質により検出可能であってよい。タグの別の使用法は、ウイルス粒子の精製を容易にすることである。タグ用の結合パートナーを含有する基質を使用して、ウイルスを吸収することができる。ウイルスの溶出は、タグを結合パートナーから取り除く部位の処理により達成することができるか、または、タグ配列が切断可能配列と結合している場合は、適切なエンドペプチダーゼによる処理で、ウイルスを都合よく放出することが可能となる。（例えば、ＱｉａＧＥＮ（登録商標）カタログ、第Ｘａ因子プロテアーゼ系を参照）。タグペプチドの除去は通常、動物対象でウイルス粒子を使用する場合の安全目的のために望ましい。タグが除去されない場合、タグに対して免疫応答が生じ得る。
【０１２３】
好適なタグとしては、とりわけ、抗体が市販されているＦＬＡＧ（ＤＹＫＤＤＤＤＫ）（配列番号３５）（米国特許第４，７０３，００４号、その全体が組み込まれている）、キチン結合タンパク質、マルトース結合タンパク質、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ、ポリ（Ｈｉｓ）（米国特許第４，５６９，７９４号、その全体が組み込まれている）、チオレドキシン、ＨＡ（ヘマグルチニン）タグが挙げられるが、これらに限定されない。ポリ（Ｈｉｓ）は、結合金属イオン（例えばニッケルまたはコバルト）を含有する親和性培地に吸着され、低ｐＨ培地により溶出することができる。
【０１２４】
ベクター粒子を評価して、樹状細胞を標的化するウイルスに組み込まれたエンベロープ糖タンパク質の特異性を測定してよい。例えば、骨髄細胞の混合種集団を、対象から入手し、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで培養することができる。あるいは、ＤＣ−ＳＩＧＮを発現する、または発現しない同質遺伝細胞系を入手し、使用することができる。組み換えウイルスを、骨髄細胞または同質遺伝細胞系の混合集団に投与することが可能であり、ウイルス内に組み込まれたレポーター遺伝子の発現を、培養細胞内でアッセイすることができる。ある種の実施形態では、限界希釈分析を用いることができる。この分析では、細胞の混合集団を別々のパートに分け、これらを別々に、ウイルスの量を減らして（例えば、各パートで２倍、５倍、１０倍少ないウイルスで）インキュベーションする。幾つかの実施形態では、混合細胞集団内の感染細胞の少なくとも約５０％、または少なくとも約６０％、７０％、８０％、もしくは９０％、または少なくとも約９５％が、ＤＣ−ＳＩＧＮを発現する樹状細胞である。ある種の実施形態において、感染した非樹状細胞（またはＤＣ−ＳＩＧＮを発現しない細胞）に対する感染樹状細胞の比は、少なくとも約２：１、少なくとも約３：１、少なくとも約４：１、少なくとも約５：１、少なくとも約６：１、少なくとも約７：１、少なくとも約８：１、少なくとも約９：１、少なくとも約１０：１、少なくとも約２０：１、少なくとも約３０：１、少なくとも約４０：１、少なくとも約５０：１、少なくとも約１００：１、少なくとも約２００：１、少なくとも約５００：１、少なくとも約１０００：１、少なくとも約５０００：１、少なくとも約１０，０００：１、またはそれ以上である。限界希釈に関して、入力ウイルスをより高希釈すると（即ち、入力ウイルスがより少量）、通常はより大きな選択性が確認される。
【０１２５】
偽型化ウイルス粒子の活性は、様々な技術のいずれかにより測定することができる。例えば、感染効率（ｉｎｆｅｃｔｉｖｉｔｙ  ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ）（ＩＵ、感染単位）を測定する好ましい方法は、ウイルス粒子を細胞に投与し、ベクターゲノム内でコードされた生成物の発現を測定することによるものである。アッセイ可能な任意の生成物を使用してよい。便利な生成物の一種類は、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）等の蛍光タンパク質である。使用可能な他の生成物としては、細胞表面に発現したタンパク質（例えば、抗体結合による検出）、酵素等が挙げられる。生成物が抗原であり、細胞が樹状細胞である場合、感染性／活性は、免疫応答を測定することにより評価可能である。更に、哺乳類での副作用を確認することが可能である。樹状細胞を特異的に標的化する能力はまた、例えば後述のように細胞内で直接試験することも可能である。
【０１２６】
ベクター粒子（本明細書で記載されるウイルス粒子を含む）もまた、調製し、その選択性、及び／または標的細胞膜の貫通を容易化する能力を試験することができる。非改変糖タンパク質を含むエンベロープを有するウイルス粒子を、比較用の対照として用いることができる。手短に言えば、エンベロープ糖タンパク質用の受容体を発現する細胞は、標準的な感染アッセイを用いることで、ウイルスにより感染する。所定の時間の後、例えば感染の４８時間後、細胞を収集し、ウイルスにより感染した細胞の百分率を、例えばフローサイトメトリーにより測定することができる。ウイルスにより感染した細胞の百分率を計算することにより、選択性を評点化することができる。同様に、変異エンベロープ糖タンパク質のウイルス力価への影響は、変異エンベロープを含むウイルスにより感染した細胞の百分率を、対応する野生型（非改変）エンベロープ糖タンパク質を含むウイルスにより感染した細胞の百分率で除することにより定量化可能である。特に好適な変異体は、選択性と感染力価の最良の組み合わせを有する。変異体を選択すれば、ウイルス濃度アッセイを実施し、これらのウイルスが、活性を損なうことなく濃縮されることが可能であることを確認してよい。ウイルス上清を収集し、超遠心分離により濃縮する。ウイルスの力価は、ウイルス原液を限界希釈し、エンベロープ糖タンパク質に対する受容体を発現する細胞を感染させて、上述のウイルスにより発現された生成物の発現を測定することにより決定することができる。
【０１２７】
レンチウイルスベクター粒子を標的細胞に導入することは、別の種類の活性評価である。ＢｌａＭ−Ｖｐｒ（β−ラクタマーゼＶｐｒ）融合タンパク質を使用して、ＨＩＶ−１ウイルス侵入を評価した。ＢｌａＭ、及びシンドビスウイルスエンベロープ（例えばＥ１、またはＥ２／Ｅ１融合タンパク質）の融合を使用して、エンベロープタンパク質が融合、及び標的細胞内への侵入を促進する効果を評価することができる。ウイルス粒子は例えば、パッケージング細胞を、ウイルス成分、ＢｌａＭ−Ｖｐｒ、及び対象の変異エンベロープ（及び、適切な場合親和性分子）を含む１つ以上のベクターにより一過性トランスフェクションすることにより調製してよい。得られるウイルスを使用して、結合遊離阻害剤（例えば抗体）の存在下または不存在下において特異的に結合する分子、標的分子（または親和性分子）を発現する細胞を感染させることができる。次いで、細胞をＣＯ２独立性媒体（ＣＯ２−ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｍｅｄｉｕｍ）で洗浄し、ＣＣＦ２染料（Ａｕｒｏｒａ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）をロードした。室温でのインキュベーションの後、切断反応を完了させるため、細胞をパラホルムアルデヒドで固定し、フローサイトメトリー及び顕微鏡検査法で分析することができる。青色細胞の存在は、ウイルスの細胞質への侵入を示す。遮断抗体が加えられた際には、青色細胞が少なくなると予想される（例えば、Ｃａｖｒｏｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０：１１５１−５４，２００２を参照）。
【０１２８】
侵入が低ｐＨに依存するかどうかを調査するため、及び、所望のｐＨ依存性を有するエンベロープ糖タンパク質を同定するため、ｐＨを変更する、ＮＨ４Ｃｌまたは他の化合物を感染ステップで添加することができる（ＮＨ４Ｃｌは、エンドソームの酸性区画を中和する）。ＮＨ４Ｃｌの場合、青色細胞が消失することは、ウイルスの侵入が低ｐＨ依存性であることを示す。更に、活性がｐＨ依存性であることを確認するために、リソソーム作用剤（例えば塩化アンモニウム、クロロキン、コンカナマイシン、バフィロマイシンＡ１、モネンシン、ナイジェリシン等）をインキュベーション緩衝液に加えてよい。これらの作用物質は、エンドソーム区画内のｐＨを高める（例えば、Ｄｒｏｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｂｉｏｌ．２００，１−８，１９９７を参照）。これらの作用物質の阻害効果は、ウイルス融合及び侵入におけるｐＨの役割を明らかにするであろう。異なる膜融合性分子を示すウイルス間での異なる侵入速度を比較してよく、最も好適なものを特定用途のために選択する。
【０１２９】
ＰＣＲ系の侵入アッセイを利用して、逆転写を監視し、ウイルス侵入の反応速度論の指標として、ウイルスＤＮＡ合成の速度を測定することができる。例えば、特定のエンベロープタンパク質分子を含むウイルス粒子を、２９３Ｔ細胞、ＤＣ、または、エンベロープタンパク質分子の好適な結合パートナー（受容体）を発現するように操作された、もしくは自然に発現する、任意の他の細胞等の標的細胞と共にインキュベーションする。ただちに、または（感染を生じさせるための）一定時間の経過後、結合していないウイルスを取り除き、細胞のアリコートをウイルス核酸について分析する。これらのアリコートからＤＮＡを抽出し、通常は、ＬＴＲ特異的プライマーでプライミングした半定量アッセイでの、増幅分析にかける。ＬＴＲ特異的ＤＮＡ生成物の外観は、ウイルス侵入が成功したことを示す。
【０１３０】
ウイルスベクター粒子によるウイルス感染の後、標的樹状細胞により免疫原を発現させる。ｅｘ  ｖｉｖｏで接触させる場合、標的樹状細胞を次に、例えば注射により患者に移し戻す。ここでは、樹状細胞は、所望の抗原に対する免疫応答を産生可能な免疫細胞と相互作用する。好ましい実施形態では、組み換えウイルスが患者に注射され、ここで、標的樹状細胞をｉｎ  ｓｉｔｕで形質導入する。次いで、樹状細胞は、治療されるべき病気または疾患に関係する特定の抗原を発現し、患者は、病気または疾患に対して効果的な免疫応答を開始することができる。
【０１３１】
ウイルスベクターゲノムは、２つ以上の免疫原をコードするポリヌクレオチド配列を含有してよく、標的樹状細胞の形質導入の際に、細胞に送達される各免疫原に対して免疫応答を産生する。幾つかの実施形態では、免疫原は単一の病気または疾患に関係する。他の実施形態では、免疫原は複数の病気または疾患に関係する。
【０１３２】
幾つかのベクター粒子において、ＤＣの成熟化を活性及び／または刺激するＤＣ成熟因子を、対象の免疫原をコードする配列と共に送達する。ある種の代替実施形態において、ＤＣは、ベクター粒子の送達前、送達と同時、または後に、ＤＣ成熟因子の送達により活性化される。ＤＣ成熟因子は、ベクター粒子の投与とは別々に提供されてもよい。
【０１３３】
本明細書に記載されるように、１つ以上の免疫調節またはＤＣ成熟因子は、ベクター粒子内に含有される１つ以上の配列によりコードされ、粒子が樹状細胞に侵入するかまたは感染した後に発現することが可能である。免疫調節因子をコードする配列は、パッケージング細胞株内で１つ以上の免疫原をコードするベクター粒子と共に同時トランスフェクションされる別々のベクター内にも提供されることができる。
【０１３４】
本明細書記載の方法を、対象における養子免疫療法に使用してよい。上述の通り、免疫応答が望まれる免疫原が同定される。所望の免疫原（複数可）をコードするポリヌクレオチドを入手し、ベクター粒子内にパッケージングしてよい。標的樹状細胞を患者から入手し、所望の免疫原をコードするポリヌクレオチドを含有するベクター粒子で形質導入する。次いで、樹状細胞を患者に移し戻す。
【０１３５】
ベクター粒子（例えば、本明細書で記載されるウイルスベクター粒子）をｉｎ  ｖｉｖｏで注射してよい。この場合、粒子がＤＣに感染し、対象の免疫原をコードするヌクレオチド配列を送達する。ウイルス粒子の量は、少なくとも３×１０６感染単位（ＩＵ）であり、少なくとも１×１０７ＩＵ、少なくとも３×１０７ＩＵ、少なくとも１×１０８ＩＵ、少なくとも３×１０８ＩＵ、少なくとも１×１０９ＩＵ、または少なくとも３×１０９ＩＵとすることができる。選択した間隔において、レシピエントのリンパ器官からのＤＣを使用して、例えば、マーカー（例えばＧＦＰまたはルシフェラーゼ）が、ベクター粒子に含まれる組み換え発現ベクターに存在するポリヌクレオチド配列により同時発現したかどうかを観察することにより、発現を測定してよい。ベクター粒子がレンチウイルスベクター粒子である場合、核酸監視技術、及び逆転写酵素（ＲＴ）活性の測定もまた使用して、ベクター粒子の生体内分布を分析することができる。末梢血単核球、リンパ節、脾臓からのＴ細胞、または悪性もしくは標的病原体で感染した組織のベクター粒子（レンチウイルスベクター粒子を含む）を処理したレシピエントを、抗原刺激応答の程度及び耐久性について測定してよい。ＤＣ以外の組織細胞（例えば上皮細胞及びリンパ系細胞）を、ｉｎ  ｖｉｖｏ遺伝子送達の特異性について分析してよい。
【０１３６】
アジュバント及びアジュバント組成物
本明細書記載の方法は、プライミングした免疫細胞を、投与の局所部位、特に腫瘍部位に「プル」する目的のアジュバントを含む少なくとも１つの組成物を、対象に投与することを含む。別の実施形態において、アジュバントを含む組成物は更に、免疫原、ある種の実施形態においては「プライム」の免疫原を含む。アジュバントを含むかかる組成物は免疫原を含まない場合があるため、ある種の実施形態においては、アジュバントを含む組成物は実質的に、免疫源を欠いている。ある種の実施形態において、アジュバントは、免疫原への免疫応答を高める（または向上させる、増大させる）（即ち、アジュバントの投与を欠いている得意的免疫応答の量と比較して、統計学的、生物学的、または臨床的に有意な方法で、免疫原に対する特異的な免疫応答の量を増加させる）。免疫応答の量を測定するための方法及び技術は本明細書で更に詳細に論じており、当該技術分野において日常的に実践される。
【０１３７】
本明細書に記載される方法において使用され得る代表的なアジュバントとしては、以下が挙げられるが、必ずしもこれらに限定されない。本明細書に記載される方法において使用され得るアジュバントとしては、免疫原（もしくは、免疫原含有細胞もしくは粒子）に対するＣＴＬ応答を向上させる、及び／またはメモリーＣＤ４  Ｔ細胞応答を向上させるのに有用であり得るアジュバントが挙げられる。ある種の実施形態において、本明細書の方法で使用するためのアジュバントは、サイトカイン応答を誘発し、Ｔ細胞、特に、抗原特異的Ｔ細胞を、局所投与部位に動員する。別の実施形態において、本明細書の方法で使用するためのアジュバントは、定性的形態の応答に悪影響を与え得る免疫原の構造的変化を引き起こすことなく、免疫原の応答を増大させる。好適なアジュバントとしては、アルミニウム塩（例えばミョウバン（硫酸アルミニウムカリウム））、または他のアルミニウム含有アジュバント；無毒性リピドＡ関連アジュバント（例えば、非限定的例としては無毒性モノホスホリルリピドＡ（例えば、Ｔｏｍａｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｒｅｓｐｏｎｓｅ  Ｍｏｄ．６：９９−１０７（１９８７）を参照）、本明細書で記載されるＧＬＡ）；３脱−Ｏ−アシル化モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）（例えば、英国特許出願第２２２０２１１号を参照）；南アメリカで発見されたＱｕｉｌｌａｊａ  ｓａｐｏｎａｒｉａ  Ｍｏｌｉｎａの木の樹皮から単離されたトリテルペングリコシドまたはサポニンを含む、ＱＳ２１及びＱｕｉｌＡ等のアジュバント（例えば、Ｋｅｎｓｉｌ  ｅｔ  ａｌ．，ｉｎ  Ｖａｃｃｉｎｅ  Ｄｅｓｉｇｎ：Ｔｈｅ  Ｓｕｂｕｎｉｔ  ａｎｄ  Ａｄｊｕｖａｎｔ  Ａｐｐｒｏａｃｈ（ｅｄｓ．Ｐｏｗｅｌｌ  ａｎｄ  Ｎｅｗｍａｎ，Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ，１９９５）；米国特許第５，０５７，５４０号を参照）が挙げられる。他の好適なアジュバントとしては、所望により、モノホスホリルリピドＡ等の免疫刺激剤と組み合わせた水中油型エマルション（スクアレンまたはピーナッツオイル等）が挙げられる（例えば、Ｓｔｏｕｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３３６，８６−９１（１９９７）を参照）。別の好適なアジュバントは、ＣｐＧである（Ｂｉｏｗｏｒｌｄ  Ｔｏｄａｙ，Ｎｏｖ．１５，１９９８）。他の好適なアジュバントとしては、Ｔｏｌｌ様受容体アゴニスト、及びアミノアルキルアミノグルコサミニド４−フォスフェート（ＡＧＰ）等のリピドＡ模倣物質が挙げられる（例えば、Ｂａｌｄｒｉｄｇｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｌ．Ｔｈｅｒ．，４（７）：１１２９−１１３８（２００４）に記載されているＲＣ５２７、及びＰｅｒｓｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，１０（１０）（ｓｕｐｐｌ．）：Ｓ３２−Ｓ３７（２００２）に記載されているＲＣ−５４４、を参照）。
【０１３８】
本明細書に記載されるように、好適なアジュバントはアルミニウム塩（例えば水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、硫酸アルミニウム）である。かかるアジュバントは、他の特異的免疫刺激剤、例えばＭＰＬまたは３−ＤＭＰ、ＱＳ２１、ポリマーまたはモノマーアミノ酸（例えばポリグルタミン酸またはポリリジン）と共に、またはこれらなしで用いることができる。好適なアジュバントの別部類は、水中油型エマルション配合物である（本明細書では安定した水中油型エマルションとも称される）。かかるアジュバントは所望により、他の特異的な免疫刺激剤、例えばムラミルペプチド（例えば、Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−スレオニル−Ｄ−イソグルタミン（ｔｈｒ−ＭＤＰ）、Ｎ−アセチル−ノルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミン（ｎｏｒ−ＭＤＰ）、Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミニル−Ｌ−アラニン−２（１’−２’ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ヒドロキシホスホリルオキシ）−エチルアミン（ＭＴＰ−ＰＥ）、Ｎ−アセチルグルコサミニル−Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−Ａｌ−Ｄ−イソグル−Ｌ−Ａｌａ−ジパルミトキシプロピルアミド（ＤＴＰ−ＤＰＰテラミド（商標））、または他の細菌細胞壁成分と共に用いることが可能である。水中油型エマルションは、（１）モデル１１０Ｙマイクロフルイダイザー（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ，Ｎｅｗｔｏｎ  Ｍａｓｓ．）等のマイクロフルイダイザーを使用してサブミクロン粒子にした、スクアレンを５％、Ｔｗｅｅｎ８０を０．５％、及びＳｐａｎ  ８５を０．５％含有（所望により、様々な量のＭＴＰ−ＰＥを含有）する、ＭＦ５９（ＷＯ９０／１４８３７）；（２）マイクロ流体化してサブミクロンエマルションにしたか、またはボルテックス処理で大きな粒径のエマルションを作製したかのいずれかの、スクアランを１０％、Ｔｗｅｅｎ８０を０．４％、プルロニックブロックポリマー  Ｌ１２１を５％、及びｔｈｒ−ＭＤＰを含有するＳＡＦ、並びに、（３）スクアレンを２％、Ｔｗｅｅｎ８０を０．２％、並びに、モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）、トレハロースジマイコレート（ＴＤＭ）、及び細胞壁骨格（ＣＷＳ）、好ましくはＭＰＬ＋ＣＷＳ（Ｄｅｔｏｘ（商標））からなる群からの、１つ以上の細菌細胞壁成分を含有するＲｉｂｉアジュバント系（ＲＡＳ）（Ｒｉｂｉ  Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍ，Ｈａｍｉｌｔｏｎ，ＭＴ）を含む。また、上述のように、好適なアジュバントとしては、サポニンアジュバント、例えばＳｔｉｍｕｌｏｎ（商標）（ＱＳ２１，Ａｑｕｉｌａ，Ｗｏｒｃｅｓｔｅｒ，Ｍａｓｓ．）、またはこれらから作製される粒子、例えばＩＳＣＯＭ（免疫刺激複合体）及びＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸが挙げられる。他のアジュバントとしては、完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）（非ヒトでの使用においては好適であるが、ヒトでの使用には好適でない）、及び不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）が挙げられる。他のアジュバントとしては、インターロイキン（ＩＬ−１、ＩＬ−２、及びＩＬ−１２）、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）、並びに腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）等のサイトカインが挙げられる。
【０１３９】
本明細書で記載される組成物中で使用してよい別のアジュバントは、化学式（Ｉ）により定義され、グルコピラノシルリピドＡ（ＧＬＡ）と称される：
【化４】
2019203013.tif 000010
式中、部位Ａ１及びＡ２は、水素、ホスフェート、及びリン酸塩からなる群から独立して選択される。ナトリウム及びカリウムが、リン酸塩の代表的な対イオンである。部位Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、及びＲ６は、Ｃ３〜Ｃ２３で表される、３〜２３個の炭素を有するヒドロカルビル基からなる群から独立して選択される。明確性を加えると、部位が複数の要素を有する特定の基「から独立して選択される」場合、第１部位に選択される要素が、第２部位に選ばれる要素の選択にいかなる方法においても影響を与えない、またはこれを制限しないと理解されるべきであると説明される。Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５及びＲ６が結合する炭素原子は非対称であるため、ＲまたはＳ立体化学のいずれかで存在してよい。一実施形態において、これらの炭素原子は全てＲ立体化学であるが、別の実施形態においては、これらの炭素原子は全て、Ｓ立体化学である。
【０１４０】
「ヒドロカルビル」とは、水素及び炭素で完全に形成される化学部位を意味する。炭素原子の配置は直鎖または分枝鎖、非環式または環状であってよく、隣接する炭素原子間の結合は、全てが単結合である、即ち飽和ヒドロカルビルを提供してもよく、または、隣接する任意の２つの炭素原子間に、二重もしくは三重結合が存在する、即ち、不飽和ヒドロカルビルを提供してもよく、ヒドロカルビル基中の炭素原子数は、３〜２４個である。ヒドロカルビルはアルキルであってよく、代表的な直鎖アルキルとしては、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｎ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル等が挙げられ、ウンデシル、ドデシル、トリデシル、テトラデシル、ペンタデシル、ヘキサデシル、ヘプタデシル、オクタデシル等を含む。一方、分枝鎖アルキルとしては、イソプロピル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、イソペンチル等が挙げられる。代表的な飽和環式ヒドロカルビルとしては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル等が挙げられ、不飽和環式ヒドロカルビルとしては、シクロペンテニル及びシクロヘキセニル等が挙げられる。不飽和ヒドロカルビルは、隣接する炭素原子間に少なくとも１つの二重または三重結合を含有する（ヒドロカルビルが非環式である場合はそれぞれ「アルケニル」または「アルキニル」と呼ばれ、ヒドロカルビルが少なくとも部分的に環式である場合は、それぞれシクロアルケニル及びシクロアルキニルと呼ばれる）。代表的な直鎖及び分枝鎖アルケニルとしては、エチレニル、プロピレニル、１−ブテニル、２−ブテニル、イソブチレニル、１−ペンテニル、２−ペンテニル、３−メチル−１−ブテニル、２−メチル−２−ブテニル、２，３−ジメチル−２−ブテニル等が挙げられる。一方で、代表的な直鎖及び分枝鎖アルキニルとしては、アセチレニル、プロピニル、１−ブチニル、２−ブチニル、１−ペンチニル、２−ペンチニル、３−メチル−１−ブチニル等が挙げられる。
【０１４１】
式（Ｉ）のアジュバントは、当該技術分野において公知の合成方法、例えば、ＰＣＴ国際公開第ＷＯ２００９／０３５５２８（参照により本明細書に組み込まれている）及び、ＷＯ２００９／０３５５２８に記載されている公報（これらの出版物のそれぞれもまた、参照により本明細書に組み込まれている）に開示されている合成方法論により入手してよい。ある種のアジュバントもまた、商業的に入手してよい。好ましいアジュバントは、Ａｖａｎｔｉ  Ｐｏｌａｒ  Ｌｉｐｉｄｓ，Ａｌａｂａｓｔｅｒ  ＡＬのカタログに記載されている製品番号６９９８００である（以下のＥ１０と合わせて、Ｅ１を参照）。
【０１４２】
本発明の各種実施形態では、アジュバントは式（Ｉ）の化学構造を有するが、部位Ａ１、Ａ２、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、及びＲ６は、これらの部位に関して前に提供した選択肢の部分集合から選択され、ここで、これらの部分集合は以下でＥ１、Ｅ２等により識別される。
【０１４３】
Ｅ１：  Ａ１はホスフェートまたはリン酸塩であり、Ａ２は水素である。
【０１４４】
Ｅ２：  Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５及びＲ６はＣ３〜Ｃ２１アルキルであり、Ｒ２及びＲ４はＣ５〜Ｃ２３ヒドロカルビルである。
【０１４５】
Ｅ３：  Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５及びＲ６はＣ５〜Ｃ１７アルキルであり、Ｒ２及びＲ４はＣ７〜Ｃ１９ヒドロカルビルである。
【０１４６】
Ｅ４：  Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５及びＲ６はＣ７〜Ｃ１５アルキルであり、Ｒ２及びＲ４はＣ９〜Ｃ１７ヒドロカルビルである。
【０１４７】
Ｅ５：  Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５及びＲ６はＣ９〜Ｃ１３アルキルであり、Ｒ２及びＲ４はＣ１１〜Ｃ１５ヒドロカルビルである。
【０１４８】
Ｅ６：  Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５及びＲ６はＣ９〜Ｃ１５アルキルであり、Ｒ２及びＲ４はＣ１１〜Ｃ１７ヒドロカルビルである。
【０１４９】
Ｅ７：  Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５及びＲ６はＣ７〜Ｃ１３アルキルであり、Ｒ２及びＲ４はＣ９〜Ｃ１５ヒドロカルビルである。
【０１５０】
Ｅ８：  Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５及びＲ６はＣ１１〜Ｃ２０アルキルであり、Ｒ２及びＲ４はＣ１２〜Ｃ２０ヒドロカルビルである。
【０１５１】
Ｅ９：  Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５及びＲ６はＣ１１アルキルであり、Ｒ２及びＲ４はＣ１３ヒドロカルビルである。
【０１５２】
Ｅ１０：  Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５及びＲ６はウンデシルであり、Ｒ２及びＲ４はトリデシルである。
【０１５３】
ある種の実施形態において、Ｅ１は、Ｅ２〜Ｅ１０のそれぞれと組み合わせてもよい。Ｅ２〜Ｅ９のヒドロカルビル基はアルキル基、好ましくは直鎖アルキル基であってよい。ある種の実施形態において、Ｅ１はＥ２〜Ｅ１０のそれぞれと組み合わせてよく、Ｅ２〜Ｅ９のそれぞれはアルキル基である。ある種の実施形態において、Ｅ１はＥ２〜Ｅ１０のそれぞれと組み合わせてよく、Ｅ２〜Ｅ９のそれぞれは直鎖アルキル基である。式（Ｉ）のアジュバントを、所望によりコアジュバントと共に医薬組成物内に配合してよい（それぞれは以下で論じる）。これに関し、ＧＬＡアジュバントに対する水性配合物（ＡＦ）、及び安定したエマルション配合物（ＳＥ）等の配合物（これらの配合物は式（Ｉ）のアジュバントのいずれに用いてもよい）を提供する、米国特許出願第２００８／０１３１４６６号を参照する。
【０１５４】
別の実施形態において、アジュバントは、ＰＣＴ国際公開第２０１０／１４１８６１号に記載されている、合成リピドＡ型アジュバント、であり、以下の化学式（ＩＩ）
【化５】
2019203013.tif 000011
であって、
式中、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、Ｌ４、Ｌ５、及びＬ６は同一または異なっており、−Ｏ−、−ＮＨ−、及び−（ＣＨ２）−から独立して選択され、Ｌ７、Ｌ８、Ｌ９及びＬ１０は同一または異なっており、かつ、任意の場所が存在していなくても、または−Ｃ（＝Ｏ）−であってもよく、Ｙ１は酸性官能基であり、Ｙ２及びＹ３は同一または異なっており、−ＯＨ、−ＳＨ、及び酸性官能基からそれぞれ独立して選択され、Ｙ４は−ＯＨまたは−ＳＨであり、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５及びＲ６は同一または異なっており、Ｃ８〜Ｃ１３アルキルからなる群からそれぞれ独立して選択され、Ｒ２及びＲ４は同一または異なっており、Ｃ６〜Ｃ１１アルキルからなる群からそれぞれ独立して選択される、該化学式から選択される構造を有するか、または薬剤として許容されるその塩である。
【０１５５】
所望により、以下、及び本明細書内により詳細に記載するとおり、２つ以上の異なるアジュバントを、同時に使用することができ、例えば、非限定例としては、アルミニウム塩とＭＰＬ、アルミニウム塩とＱＳ２１、ＭＰＬとＱＳ２１、及びアルミニウム塩、ＱＳ２１ならびにＭＰＬを合わせてがある。また、不完全フロイントアジュバントを、所望によりアルミニウム塩、ＱＳ２１及びＭＰＬのいずれかと組み合わせて、並びにこれら全てと組み合わせて、使用することができる（例えば、Ｃｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ３２，１７３−１８６（１９９８）を参照）。
【０１５６】
ある種の実施形態において、式（Ｉ）のアジュバントは、所望により上述のコアジュバント、または本明細書で記載される、もしくは当該技術分野において入手可能な任意の他のアジュバントと共に薬剤（またはアジュバント組成物）に配合されてよく、それぞれは以下で論じられる。これに関し、ＧＬＡアジュバントの水性配合物（ＡＦ）及び安定したエマルション配合物（ＳＥ）等の配合物を提供する米国特許出願公開第２００８／０１３１４６６号を参照し、これらの配合物を、式（Ｉ）のアジュバントのいずれかに対して使用してよい。
【０１５７】
本明細書にて提供される場合、式（Ｉ）のアジュバントを、第２のアジュバント（本明細書ではコアジュバントと称する）と組み合わせて使用してよい。３つの代表的実施形態において、コアジュバントは送達系であってよいか、または免疫賦活剤であってよいか、または送達系と免疫賦活剤の両方として機能する組成物であってよい（例えば、Ｏ’Ｈａｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．２１（９）：１５１９−３０（２００４）を参照）。コアジュバントは、Ｔｏｌｌ様受容体ファミリー生体分子のメンバーを介して作動する免疫賦活剤であってよい。例えば、コアジュバントは作用の主な形態に対して、ＴＬＲ４アゴニスト、またはＴＬＲ８アゴニスト、またはＴＬＲ９アゴニストのいずれかとして選択されてよい。あるいは、または補助的に、コアジュバントはそのキャリアの性質に対して選択されてよい。例えば、コアジュバントはエマルション、リポソーム、微小粒子、またはミョウバンであってよい。
【０１５８】
一実施形態では、コアジュバントはミョウバンであり、この用語は、リン酸アルミニウム（ＡｌＰＯ４）及び水酸化アルミニウムＡｌ（ＯＨ）３等のアルミニウム塩を意味する。ミョウバンをコアジュバントとして使用する場合、ミョウバンは、約１００〜１，０００μｇ、または２００〜８００μｇ、または３００〜７００μｇ、または４００〜６００μｇの料で投与量のワクチンに存在してよい。式（１）のアジュバントは通常、ミョウバンの量未満の量で存在し、種々の特定の実施形態においては、式（１）のアジュバントは、重量ベースで、ミョウバンの重量にたいして０．１〜１％、または１〜５％、または１〜１０％、または１〜１００％で存在する。
【０１５９】
１つの特定の実施形態では、アジュバントは、ワクチンを補助する性質を有するエマルションである。かかるエマルションとしては、水中油型エマルションが挙げられる。不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）は、かかるアジュバントの１つである。別の好適な水中油型エマルションはＭＦ−５９（商標）アジュバントであり、スクアレン、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（Ｔｗｅｅｎ（商標）８０界面活性剤としても知られている）、及びトリオレイン酸ソルビタンを含有する。スクアレンは、サメ肝油から通常入手される天然有機化合物であるが、アマランス種子、コメヌカ、小麦胚及びオリーブを含む植物源（主として植物油）からもまた入手可能である。他の好適なアジュバントはＭｏｎｔａｎｉｄｅ（商標）アジュバント（Ｓｅｐｐｉｃ  Ｉｎｃ．，Ｆａｉｒｆｉｅｌｄ  ＮＪ）であり、鉱油系アジュバントであるＭｏｎｔａｎｉｄｅ（商標）ＩＳＡ  ５０Ｖ；Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ（商標）ＩＳＡ  ２０６；及びＭｏｎｔａｎｉｄｅ（商標）ＩＭＳ  １３１２が挙げられる。鉱油がコアジュバント中に存在してよいが、一実施形態において、本発明のワクチン組成物の油成分（複数可）は全て、代謝可能な油である。
【０１６０】
本明細書記載の方法の実践において、コアジュバントとして使用してよい免疫賦活剤の例としては、ＭＰＬ（商標）；ＭＤＰ及び誘導体；オリゴヌクレオチド；二本鎖ＲＮＡ；代替の病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰＳ）；サポニン；小分子免疫増強因子（ＳＭＩＰ）；サイトカイン；及びケモカインが挙げられる。
【０１６１】
一実施形態では、コアジュバントはＭＰＬ（商標）アジュバントであり、これはＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅから市販されている（もともとは、Ｒｉｂｉ  ＩｍｍｕｎｏＣｈｅｍ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｉｎｃ．Ｈａｍｉｌｔｏｎ，ＭＴにより開発）。例えば、Ｕｌｒｉｃｈ  ａｎｄ  Ｍｙｅｒｓ，Ｃｈａｐｔｅｒ  ２１  ｆｒｏｍ  Ｖａｃｃｉｎｅ  Ｄｅｓｉｇｎ：Ｔｈｅ  Ｓｕｂｕｎｉｔ  ａｎｄ  Ａｄｊｕｖａｎｔ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｐｏｗｅｌｌ  ａｎｄ  Ｎｅｗｍａｎ，ｅｄｓ．Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９９５）を参照のこと。ＭＰＬ（商標）アジュバントに関連した、及び、本明細書に記載される組成物及び方法で使用するためのコアジュバントとしてもまた好適なアジュバントは、ＡＳ０２（商標）アジュバント及びＡＳ０４（商標）アジュバントである。ＡＳ０２（商標）アジュバントは、ＭＰＬ（商標）アジュバント、及びＱＳ−２１（商標）アジュバント（本明細書の他の場所で論じているサポニンアジュバント）を含有する水中油型エマルションである。ＡＳ０４（商標）アジュバントは、ＭＰＬ（商標）アジュバントとミョウバンを含有する。ＭＰＬ（商標）アジュバントは、サルモネラ菌ミネソタＲ５９５のリポ多糖体（ＬＰＳ）を、弱酸性及び塩基性加水分解し、続いて変性ＬＰＳを精製することで調製される。
【０１６２】
別の実施形態において、コアジュバントは、Ｑｕｉｌｌａｊａ  ｓａｐｏｎａｒｉａの木の種の樹皮に由来するもの、または変性サポニン等のサポニンである（例えば、米国特許第５，０５７，５４０号；同５，２７３，９６５号；同５，３５２，４４９号；同５，４４３，８２９号；及び同５，５６０，３９８号を参照）。Ａｎｔｉｇｅｎｉｃｓ，Ｉｎｃ．Ｌｅｘｉｎｇｔｏｎ，ＭＡにより販売されている製品のＱＳ−２１（商標）アジュバントは、式（１）のアジュバントと共に使用してもよい、代表的なサポニン含有コアジュバントである。サポニンに関連した代替のコアジュバントは、ＩＳＣＯＭ（商標）ファミリーのアジュバントであり、もともとはＩｓｃｏｔｅｃ（Ｓｗｅｄｅｎ）により開発され、通常、Ｑｕｉｌｌａｊａ  ｓａｐｏｎａｒｉａまたは合成類似体、コレステロール、及びリン脂質に由来するサポニンから形成され、全てがハニカム構造で形成されている。
【０１６３】
更に別の実施形態では、コアジュバントは、コアジュバントとして機能するサイトカインである（例えば、Ｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．２１（６）：１４３９−４９（１９９５）；Ｔａｙｌｏｒ，Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．６３（９）：３２４１−４４（１９９５）；及びＥｇｉｌｍｅｚ，Ｃｈａｐ．１４  ｉｎ  Ｖａｃｃｉｎｅ  Ａｄｊｕｖａｎｔｓ  ａｎｄ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．（２００７）を参照）。様々な実施形態において、サイトカインは例えば、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）（例えば、Ｃｈａｎｇｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ  ９（３）：２０７−１５（２００４）；Ｄｒａｎｏｆｆ，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．１８８：１４７−５４（２００２）；及び米国特許第５，６７９，３５６号を参照）；Ｉ型インターフェロン（例えばインターフェロンα（ＩＦＮ−α）もしくはインターフェロンβ（ＩＦＮ−β））もしくはＩＩ型インターフェロン（例えばインターフェロンγ（ＩＦＮ−γ））といったインターフェロン（例えば、Ｂｏｅｈｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５：７４９−９５（１９９７）；及びＴｈｅｏｆｉｌｏｐｏｕｌｏｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２３：３０７−３６（２００５）を参照）；特にインターロイキン−１α（ＩＬ−１α）、インターロイキン−１β（ＩＬ−１β）、インターロイキン−２（ＩＬ−２）（例えばＮｅｌｓｏｎ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７２（７）：３９８３−８８（２００４）を参照）、インターロイキン−４（ＩＬ−４）、インターロイキン−７（ＩＬ−７）、インターロイキン−１２（ＩＬ−１２）（例えば、Ｐｏｒｔｉｅｌｊｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．５２（３）：１３３−４４（２００３）；及びＴｒｉｎｃｈｉｅｒｉ，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３（２）：１３３−４６（２００３）を参照）、インターロイキン−１５（ＩＬ−１５）、インターロイキン−１８（ＩＬ−１８）を含むインターロイキン；胎児肝臓チロシンキナーゼ３リガンド（Ｆｌｔ３Ｌ）、または腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）であってよい。式（Ｉ）のアジュバントは、ワクチン抗原と組み合わせる前にサイトカインと同時配合してもよいし、または、抗原、式（Ｉ）のアジュバント及びサイトカインコアジュバントを別々に配合した後で組み合わせてもよい。
【０１６４】
ある種の実施形態において、本明細書において提供するように、本明細書で記載される式ＩまたはＩＩのアジュバントを、別の治療薬と組み合わせて使用してよい。一実施形態では、本明細書のアジュバント組成物を、特定の実施形態においては、腫瘍部位等の局所部位に、１つ以上の免疫チェックポイント阻害剤と組み合わせて投与する。免疫チェックポイントとは、自己寛容を維持し、免疫応答の持続及び規模を制御するのに重要な、免疫系の種々の阻害経路を意味する。腫瘍は、ある特定の免疫チェックポイント経路を、特に腫瘍抗原に特異的なＴ細胞に対する免疫耐性の主要なメカニズムとして使用する（例えば、Ｐａｒｄｏｌｌ，２０１２  Ｎａｔｕｒｅ  １２：２５２；Ｃｈｅｎ  ａｎｄ  Ｍｅｌｌｍａｎ  ２０１３  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ３９：１を参照）。本開示は、アジュバント組成物と組み合わせて、特に抗原なしで投与可能な免疫チェックポイント阻害剤を提供する。かかる併用療法は協力して、抗癌免疫応答を高めるように作用する。ある種のウイルスもまた、免疫チェックポイント経路を取り込む、発展したメカニズムを有する。したがって、ある種の実施形態において、かかる併用療法を使用して、抗ウイルス免疫応答を高めてよい。
【０１６５】
免疫チェックポイント阻害剤としては、統計学的、臨床的、または生物学的に有意な方法で、免疫系の阻害経路をブロックまたは阻害する任意の作用物質が挙げられる。かかる阻害剤としては、低分子阻害剤を挙げてもよいし、または、免疫チェックポイント受容体に結合してこれをブロックもしくは阻害する、抗体もしくはその抗原結合断片、または、免疫チェックポイント受容体リガンドに結合してこれをブロックもしくは阻害する抗体を含んでよい。ブロッキングまたは阻害のために標的化され得る、例示的な免疫チェックポイント分子としては、ＣＴＬＡ−４、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、４−１ＢＢＬ（ＣＤ１３７Ｌ）、ＰＤＬ１、ＰＤＬ２、ＰＤ１、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＨＶＥＭ、ＴＩＭ３、ＧＡＬ９、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、２Ｂ４（ＣＤ２ファミリーの分子に属し、ＮＫ、γδ、及びメモリーＣＤ８＋（αβ）Ｔ細胞上全てに発現する）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５とも称される）、並びにＣＧＥＮ−１５０４９が挙げられるが、これらに限定されない。免疫チェックポイント阻害剤としては、抗体、もしくはその抗原結合断片、または、ＣＴＬＡ−４、ＰＤＬ１、ＰＤＬ２、ＰＤ１、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＨＶＥＭ、ＴＩＭ３、ＧＡＬ９、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、２Ｂ４、ＣＤ１６０及びＣＧＥＮ−１５０４９の１つ以上に結合し、かつこれらの活性をブロックもしくは阻害する、他の結合タンパク質が挙げられる。例示的な免疫チェックポイント阻害剤としては、トレメリムマブ（ＣＴＬＡ−４遮断抗体）、抗ＯＸ４０、ＰＤ−Ｌ１モノクローナル抗体（抗Ｂ７−Ｈ１；ＭＥＤＩ４７３６）、ＭＫ−３４７５（ＰＤ−１遮断剤）、ニボルマブ（抗ＰＤ１抗体）、ＣＴ−０１１（抗ＰＤ１抗体）、ＢＹ５５モノクローナル抗体、ＡＭＰ２２４（抗ＰＤＬ１抗体）、ＢＭＳ−９３６５５９（抗ＰＤＬ１抗体）、ＭＰＬＤＬ３２８０Ａ（抗ＰＤＬ１抗体）、ＭＳＢ００１０７１８Ｃ（抗ＰＤＬ１抗体）、及びヤーボイ／イピリムマブ（抗ＣＴＬＡ−４チェックポイント阻害剤）が挙げられる。
【０１６６】
更なる実施形態において、本明細書のアジュバント組成物を、サイトカインと組み合わせて投与する。「サイトカイン」とは、ある細胞集団より放出される、別の細胞上で細胞内メディエーターとして作用するタンパク質に関する総称を意味する。かかるサイトカインの例としては、リンホカイン、モノカイン、及び従来のポリペプチドホルモンがある。サイトカインに含まれるものとしては、ヒト成長ホルモン、Ｎ−メチオニルヒト成長ホルモン及びウシ成長ホルモン等の成長ホルモン；副甲状腺ホルモン；チロキシン；インスリン；プロインスリン；リラキシン；プロリラキシン；卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）、及び黄体形成ホルモン（ＬＨ）等の糖タンパク質ホルモン；肝細胞増殖因子；線維芽細胞増殖因子；プロラクチン；胎盤性ラクトゲン；腫瘍壊死因子α及びβ；ミュラー管抑制因子；マウス性腺刺激ホルモン関連ペプチド；インヒビン；アクチビン；血管内皮成長因子；インテグリン；トロンボポエチン（ＴＰＯ）；ＮＧＦ−β等の神経成長因子；血小板増殖因子；ＴＧＦ−α及びＴＧＦ−β等のトランスホーミング増殖因子（ＴＧＦ）；インスリン様成長因子Ｉ及びＩＩ；エリスロポエチン（ＥＰＯ）；骨誘導因子；インターフェロンα、β及びγ等のインターフェロン；マクロファージＣＳＦ（Ｍ−ＣＳＦ）等のコロニー刺激因子（ＣＳＦ）；顆粒球マクロファージＣＳＦ（ＧＭ−ＣＳＦ）；並びに顆粒球ＣＳＦ（Ｇ−ＣＳＦ）；インターロイキン（ＩＬ）、例えばＩＬ−１、ＩＬ−１α、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、腫瘍壊死因子（例えばＴＮＦ−αまたはＴＮＦ−β）；並びに、ＬＩＦ及びｋｉｔリガンド（ＫＬ）を含む他のポリペプチド因子がある。本明細書で使用する場合、サイトカインという用語は、天然源または組み換え細胞培養液からのタンパク質、及び天然配列サイトカインの生物学的に活性な等価物を含む。
【０１６７】
ある種の実施形態において、本明細書に記載したアジュバントを含む組成物は、エンドソームの酸性化を防止し、腫瘍細胞により誘発される自食作用を阻害して、細胞増殖の加速、及び栄養分の不足を切り抜けさせるリソソーム作用剤である、クロロキンまたはヒドロキシクロロキンと組み合わせて投与してもよい。更に一般的には、本明細書に記載したアジュバントを含む組成物を、クロロキン、ミソニダゾール、メトロニダゾール、及び低酸素細胞毒素（例えばチラパザミン）等の自食作用阻害剤、放射線増感剤または化学増感剤として作用する治療薬と組み合わせて投与してよい。これに関し、クロロキンまたは他の放射線もしくは化学増感剤、もしくは自食作用阻害剤とのかかる組み合わせを、他の癌治療薬または放射線療法と更に組み合わせて使用することができる。
【０１６８】
別の実施形態において、本明細書に記載したアジュバントを含む組成物を、「免疫原性細胞死」と称される、免疫応答の同時活性化による腫瘍細胞の殺傷をもたらすことが既知の低分子剤（シクロホスファミド、ドキソルビシン、オキサリプラチン及びマイトキサントロン等）と組み合わせて投与してもよい。更に、パツピロン（ｐａｔｕｐｉｌｏｎｅ）（エポチロンＢ）、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）標的化モノクローナル抗体７Ａ７．２７、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤（例えばボリノスタット、ロミデプシン、パノビノスタット、ベリノスタット、及びエンチノスタット）、ｎ３−ポリ不飽和脂肪酸ドコサヘキサエン酸、更にはプロテアソーム阻害剤（例えばボルテゾミブ）、シコニン（Ｌｉｔｈｏｓｐｅｒｍｕｍ  ｅｒｙｔｈｒｏｒｈｉｚｏｎの根の主要成分）、及び腫瘍崩壊ウイルス（例えばＴＶｅｃ：（タリモゲンタヘルパレプベツ：ｔａｌｉｍｏｇｅｎｅ  ｌａｈｅｒｐａｒｅｐｖｅｃ））等の、腫瘍細胞の免疫原性を高めることが知られている作用物質との組み合わせ。他の実施形態では、本明細書に記載したアジュバントを含む組成物は、局所的または全身に投与してよい、ＤＮＡメチルトランスフェラーゼ阻害剤（例えばデシタビン、５−アザ−２’−デオキシシチジン）等のエピジェネティック治療薬と組み合わせて投与してよい。
【０１６９】
別の実施形態において、本明細書に記載したアジュバント組成物は、ＤＣによる、腫瘍のＡＤＣＣ取り込みを増加させる１つ以上の抗体と組み合わせて投与してよい。したがって、本発明は、ＧＬＡを含む組成物を、抗原提示細胞、及びその後の、腫瘍抗原の免疫系への提示による、腫瘍細胞の摂食を誘発するかまたは向上させる任意の分子、またはその断片と組み合わせることを企図する。これらの分子は、受容体（Ｆｃまたはマンノース受容体）結合を誘発し、例えば抗体、抗体様分子、多特異的多価分子及びポリマー等を抗原提示細胞に輸送する作用物質を含む。かかる分子は、ＧＬＡを含む組成物と共に腫瘍内投与されるか、異なる経路で投与されるかのいずれかであってよい。例えば、本明細書に記載した、ＧＬＡを含む組成物は、リツキシマブ、セツキシマブ、トラスツズマブ、キャンパス、パニツムマブ、オファツムマブ、ブレンツキシマブ、ペルツズマブ、アドトラスツズマブエムタンシン、オビヌツズマブ、抗ＨＥＲ１、ＨＥＲ２、もしくはＨＥＲ３抗体（例えばＭＥＨＤ７９４５Ａ；ＭＭ−１１１；ＭＭ−１５１；ＭＭ−１２１；ＡＭＧ８８８）、抗ＥＧＦＲ抗体（例えばニモツズマブ、ＡＢＴ−８０６）、または他の同様の抗体の腫瘍内注射と共に腫瘍内投与されてよい。内部移行を誘発可能なＦｃ受容体及び他の受容体と関与可能な任意の多価足場（例えば、受容体を関与させることができるＦｃ断片またはポリマーに結合した標的を結合可能なペプチド及び／またはタンパク質）を、本明細書で記載される併用療法で使用してよい。
【０１７０】
ある種の実施形態において、かかる抗体とアジュバントとの組み合わせを、更に、共刺激シグナルを（例えば、阻害経路をブロックすることにより）促進する抗体、例えば抗ＣＴＬＡ−４、または共刺激経路を活性化する抗体、例えば抗ＣＤ４０、抗ＣＤ２８、抗ＩＣＯＳ、抗ＯＸ４０、抗ＣＤ２７抗体等と組み合わせてもよい。
【０１７１】
アジュバントを含む組成物を、単独で、または、他の既知の癌治療、例えば放射線治療、免疫チェックポイント阻害剤、化学療法または他の癌治療剤、組織移植、免疫療法、ホルモン療法、光線力学的治療と組み合わせて投与してよい。組成物は、抗生物質と組み合わせて投与されてもよい。
【０１７２】
本明細書で記載される実施形態の組み合わせにおいて、本明細書で記載されるアジュバントと組み合わせて用いられる治療薬を別々の組成物として投与してもよいし、または、本明細書で記載されるアジュバントと同一の組成物中で投与してもよい。ある種の実施形態において、併用療法が同一部位において同時に投与されるが、異なる時間で（アジュバント組成物の前後）、かつある特定の場合には異なる部位で投与されてもよい。
【０１７３】
免疫原を含む組成物、または、免疫原をコードする組み換え発現ベクター、もしくはベクターを含むベクター粒子を含む組成物をパッケージングし、アジュバントを含有するものとは異なるバイアル瓶に供給する。各組成物と共に、適切なラベルを通常パッケージングして意図する治療用途を示す。アジュバント及び／または賦形剤の選択は、免疫原、組み換え発現ベクター、及び／またはベクター粒子の安定性；投与経路；投与スケジュール；並びに、免疫付与される種に対するアジュバントの有効性に依存する。ヒトへの投与に関し、製薬上許容できるアジュバントは、関係する規制機関により、ヒトへの投与が承認されているか、または承認可能であるものである。例えば、本明細書で論じられるように、及び、当該技術分野において公知であるとおり、完全フロイントアジュバントはヒトへの投与に適していない。
【０１７４】
本明細書に記載される方法において有用であるアジュバントは、アジュバントが投与される対象に対して生理学的または薬学的に好適なアジュバントである。アジュバント組成物は、少なくとも１つのアジュバント（即ち１つ以上のアジュバント）、及び所望により、少なくとも１つの生理学的または薬学的に好適な（または許容される）賦形剤を含む。医薬組成物での使用に関して当業者に知られている、任意の生理学的または薬学的に好適な賦形剤またはキャリア（即ち、有効成分の活性に干渉しない非毒性物質）を、本明細書で記載されるアジュバント組成物に用いてよい。代表的賦形剤としては、アジュバント成分（複数可）の安定性及び完全性を維持する希釈剤及びキャリアが挙げられる。治療のために使用する賦形剤は周知であり、例えばＲｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ（Ｇｅｎｎａｒｏ，２１ｓｔ  Ｅｄ．Ｍａｃｋ  Ｐｕｂ．Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ（２００５））に記載されており、本明細書でより詳細に記載されている。
【０１７５】
免疫原及び免疫原性組成物
これらの方法で使用してよい免疫原としては、特異的免疫応答の誘発が望ましい任意の免疫原が挙げられる。免疫原は、体液性応答（即ち、Ｂ細胞応答）もしくは細胞性応答（細胞障害性Ｔ細胞応答を含む）、または両方を誘発することが可能である。特に、本明細書の方法での使用が企図されている免疫原は、１つ以上の発癌性ウイルス抗原を含む。ある種の実施形態において、免疫原は、１つ以上の発癌性ウイルス抗原、及び１つ以上の腫瘍関連抗原を含む。ある種の実施形態において、１つ以上の発癌性ウイルス抗原を、プライム−プル免疫付与のための免疫原として使用する。別の実施形態において、１つ以上の発癌性ウイルス抗原はプライムでの免疫原であり、１つ以上の腫瘍関連抗原は、局所投与されるプル用の免疫原である。ある種の実施形態において、１つ以上の発癌性ウイルス抗原及び１つ以上の腫瘍関連抗原は、プライムでの免疫原として使用され、１つ以上の発癌性ウイルス抗原及び１つ以上の腫瘍関連抗原は、プル用に局所投与される免疫原として使用される。特定の実施形態では、アジュバント組成物（「プル」組成物）は免疫原を含まないか、実質的に欠いている。
【０１７６】
細胞性免疫反応は、ヘルパーＴ細胞応答（例えばＣＤ４  Ｔ細胞応答）、もしくは細胞障害性Ｔリンパ球応答（例えばＣＤ８  Ｔ細胞応答）、または両方を含み、この応答は、免疫原を産生または発現する、細胞（例えば腫瘍細胞、細菌細胞、ウイルス、寄生生物、もしくは真菌細胞）または感染粒子（例えばウイルス粒子）を破壊、または損傷し得る。体液性応答もしくは細胞性免疫反応、または両方が免疫付与した対象にとって有益である、癌の誘発と関係する発癌性ウイルスからの任意の抗原を、免疫原として使用することができる。発癌性ウイルス抗原は、当技術分野において既知である。抗原は、以前に発癌性ウイルスから同定された抗原であってもよく、または、当該技術分野において公知の任意の方法で同定されてよい。例えば、患者が患っている癌の種類と関係のある発癌性ウイルスからの抗原は既知であってもよく、または、当該技術分野において公知の種々の方法のいずれかにより、発癌性ウイルス、もしくは腫瘍そのものから同定されてもよい。１つ以上のかかる発癌性ウイルス抗原は、本明細書に記載したウイルス誘発性癌の免疫治療法にとって有用であり得る。代表的な発癌性ウイルスとしては、ＥＢＶ、ＨＰＶ、ＨＢＶ、ＨＣＶ、ＨＴＬＶ、及びＫＳＨＶが挙げられるが、これらに限定されない。本明細書で使用可能な、発癌性ウイルスからの代表的なウイルス性抗原としては、ＥＢＶ：ＥＢＮＡ−１、ＬＭＰ−１、ＬＭＰ−２Ａ；ＨＰＶ：Ｅ６、Ｅ７、Ｅ５；ＨＢＶ：ＨＢｘ；ＨＣＶ：Ｃｏｒｅ、ＮＳ３、Ｎｓ５Ａ；ＨＴＬＶ：Ｔａｘ、ＨＢＺ；ＫＳＨＶ：ｖＦＬＩＰ、ＬＡＮＡ、ｖＧＰＣＲ、ｖＩＲＦ−１が挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、組み換え発現ベクターを含む、本明細書で記載されるベクター粒子を使用して、これらの免疫原を抗原提示細胞、特に樹状細胞に送達してよい。
【０１７７】
ある種の実施形態において、免疫原は発癌性ウイルスからの抗原、及び腫瘍関連抗原を含む。癌、例えば膀胱癌もしくはメルケル細胞癌、または本明細書に記載した他のウイルス誘発性癌と関係のある抗原が、当該技術分野において周知である。かかる抗原は、癌に関係することが予め知られていてもよいし、または、当該技術分野において公知の任意の方法によって同定されてよい。例えば、患者が患っている癌の種類と関係のある抗原、例えば腫瘍関連抗原は既知であってもよいし、または、当該技術分野において公知の種々の方法のいずれかにより、腫瘍そのものから同定されてもよい。ある種の実施形態において、免疫原は癌細胞（即ち腫瘍細胞）に由来する腫瘍関連抗原（本明細書では腫瘍抗原とも呼ばれる）であり、１つ以上のかかる腫瘍抗原は、ウイルス誘発性癌の免疫治療法に有用であり得る。
【０１７８】
本明細書に記載した免疫原として有用であり得る、それ故に任意の癌（膀胱癌または他の泌尿生殖器癌を含む）として有用であり得る腫瘍抗原としては、腫瘍関連抗原の発現、例えばＨＥＲ−２／ｎｅｕの発現を特徴とする癌に由来する腫瘍抗原が挙げられる。免疫原として使用してよい腫瘍関連抗原としては、系統特異的腫瘍抗原、例えばメラノサイト黒色腫系統抗原であるＭＡＲＴ−１／Ｍｅｌａｎ−Ａ、ｇｐ１００、ｇｐ７５、ｍｄａ−７、チロシナーゼ及びチロシナーゼ関連タンパク質が挙げられる。例示的な腫瘍関連抗原としては、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＬＡＧＥ−１、ＣＴ７、ＣＴ１０、ＭＡＧＥ１、３、及びＭＡＧＥ４（もしくは、国際特許出願公開第ＷＯ９９／４０１８８号に開示されているもの等の、他のＭＡＧＥ抗原）、ＰＲＡＭＥ；ＢＡＧＥ；ＲＡＧＥ、Ｌａｇｅ（ＮＹ  ＥＳＯ  １としても知られている）；ＳＡＧＥ；及びＨＡＧＥ（例えば国際特許出願公開第ＷＯ９９／５３０６１号を参照）、またはＧＡＧＥ、ｐ５３、Ｒａｓ、ｃ−Ｍｙｃ、細胞質セリン／スレオニンキナーゼ（例えばＡ−Ｒａｆ、Ｂ−Ｒａｆ、及びＣ−Ｒａｆ、サイクリン依存性キナーゼ）、ＭＡＧＥ−Ａ１、ＭＡＧＥ−Ａ２、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＭＡＧＥ−Ａ４、ＭＡＧＥ−Ａ６、ＭＡＧＥ−Ａ１０、ＭＡＧＥ−Ａ１２、ＭＡＲＴ−１、ＢＡＧＥ、ＤＡＭ−６、−１０、ＧＡＧＥ−１、−２、−８、ＧＡＧＥ−３、−４、−５、−６、−７Ｂ、ＭＰＨＯＳＰＨ１（Ｍ期リンタンパク質−１）、ＤＥＰＤＣ１（ＤＥＰドメイン含有−１タンパク質）、デコリン、癌胎児性タンパク質ＩＭＰ３、ポリオーマウイルスＢＫ  Ｔ抗原、ＮＡ８８−Ａ、ＭＡＲＴ−１、ＭＣ１Ｒ、Ｇｐ１００、ＰＳＡ、ＰＳＭ、チロシナーゼ、ＴＲＰ−１、ＴＲＰ−２、ＡＲＴ−４、ＣＡＭＥＬ、ＣＥＡ、Ｃｙｐ−Ｂ、ｈＴＥＲＴ、ｈＴＲＴ、ｉＣＥ、ＭＵＣ１、ＭＵＣ２、ホスホイノシチド３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）、ＴＲＫ受容体、ＰＲＡＭＥ、Ｐ１５、ＲＵ１、ＲＵ２、ＳＡＲＴ−１、ＳＡＲＴ−３、ウィルムス腫瘍抗原（ＷＴ１）、ＡＦＰ、β−カテニン／ｍ、カスパーゼ−８／ｍ、ＣＥＡ、ＣＤＫ−４／ｍ、ＥＬＦ２Ｍ、ＧｎＴ−Ｖ、Ｇ２５０、ＨＳＰ７０−２Ｍ、ＨＳＴ−２、ＫＩＡＡ０２０５、ＭＵＭ−１、ＭＵＭ−２、ＭＵＭ−３、ミオシン／ｍ、ＲＡＧＥ、ＳＡＲＴ−２、ＴＲＰ−２／ＩＮＴ２、７０７−ＡＰ、アネキシンＩＩ、ＣＤＣ２７／ｍ、ＴＰＩ／ｍｂｃｒ−ａｂｌ、ＢＣＲ−ＡＢＬ、インターフェロン制御因子４（ＩＲＦ４）、ＥＴＶ６／ＡＭＬ、ＬＤＬＲ／ＦＵＴ、Ｐｍｌ／ＲＡＲα、腫瘍関連カルシウムシグナル伝達物質１（ＴＡＣＳＴＤ１）ＴＡＣＳＴＤ２、受容体型チロシンキナーゼ（例えば上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）（特に、ＥＧＦＲｖＩＩＩ）、血小板由来成長因子受容体（ＰＤＧＦＲ）、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦＲ））、細胞質チロシンキナーゼ（例えばｓｒｃ−ファミリー、ｓｙｋ−ＺＡＰ７０ファミリー）、インテグリン結合キナーゼ（ＩＬＫ）、シグナル伝達兼転写活性化因子ＳＴＡＴ３、ＳＴＡＴ５、及びＳＴＡＴ６、低酸素誘導因子（例えばＨＩＦ−１α及びＨＩＦ−２α）、核因子κＢ（ＮＦ−κＢ）、ノッチ受容体（例えばノッチ１〜４）、ｃ−Ｍｅｔ、ラパマイシンの哺乳類標的（ｍＴＯＲ）、ＷＮＴ、細胞外シグナル調節キナーゼ（ＥＲＫ）、及びこれらの調節サブユニット、ＰＭＳＡ、ＰＲ−３、ＭＤＭ２、メソテリン、腎細胞癌−５Ｔ４、ＳＭ２２−アルファ、カルボニックアンヒドラーゼＩ（ＣＡＩ）及びＩＸ（ＣＡＩＸ）（Ｇ２５０としても知られている）、ＳＴＥＡＤ、ＴＥＬ／ＡＭＬ１、ＧＤ２、プロテイナーゼ３、ｈＴＥＲＴ、肉腫転座切断点、ＥｐｈＡ２、ＭＬ−ＩＡＰ、ＥｐＣＡＭ、ＥＲＧ（ＴＭＰＲＳＳ２  ＥＴＳ融合遺伝子）、ＮＡ１７、ＰＡＸ３、ＡＬＫ、アンドロゲン受容体、サイクリンＢ１、ポリシアル酸、ＭＹＣＮ、ＲｈｏＣ、ＧＤ３、フコシルＧＭ１、メソテリン、ＰＳＣＡ、ｓＬｅ、ＰＬＡＣ１、ＧＭ３、ＢＯＲＩＳ、Ｔｎ、ＧＬｏｂｏＨ、ＮＹ−ＢＲ−１、ＲＧｓ５、ＳＡＲＴ３、ＳＴｎ、ＰＡＸ５、ＯＹ−ＴＥＳ１、精子タンパク質１７、ＬＣＫ、ＨＭＷＭＡＡ、ＡＫＡＰ−４、ＳＳＸ２、ＸＡＧＥ  １、Ｂ７Ｈ３、レグマイン、ＴＩＥ２、Ｐａｇｅ４、ＭＡＤ−ＣＴ−１、ＦＡＰ、ＭＡＤ−ＣＴ−２、ｆｏｓ関連抗原１、及びイディオタイプのいずれか１つ以上に由来するかまたはこれらを含む腫瘍抗原が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１７９】
代表的な腫瘍、または腫瘍細胞由来の膀胱癌抗原としては、癌精巣抗原（ＣＴＡ）、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＬＡＧＥ−１、ＭＡＧＥ−Ａ１、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＭＡＧＥ−Ａ４、ＭＡＧＥ−Ａ１０、ＣＴ７、ＣＴ１０、及びＧＡＧＥ；ＭＡＧＥ１、３、及びＭＡＧＥ４（もしくは、国際特許出願公開第ＷＯ９９／４０１８８号に開示されているもの等の、他のＭＡＧＥ抗原）、ＰＲＡＭＥ；ＢＡＧＥ；ＲＡＧＥ、Ｌａｇｅ（ＮＹ  ＥＳＯ  １としても知られている）；ＳＡＧＥ；及びＨＡＧＥ（例えば、国際特許出願公開ＷＯ第９９／５３０６１号を参照）、またはＧＡＧＥ（Ｒｏｂｂｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．８：６２８−３６（１９９６）；Ｖａｎ  ｄｅｎ  Ｅｙｎｄｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｌａｂ．Ｒｅｓ．２７：８１−８６（１９９７）；Ｖａｎ  ｄｅｎ  Ｅｙｎｄｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：６４８−９３（１９９７）；Ｃｏｒｒｅａｌｅ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．８９：２９３（１９９７）が挙げられる。更に、最近同定された、膀胱癌内で非常に発現し、患者内でＣＴＬ応答を誘発可能な癌タンパク質ＭＰＨＯＳＰＨ１（Ｍ期リンタンパク質−１）、及びＤＥＰＤＣ１（ＤＥＰドメイン含有−１タンパク質）（Ｏｂａｒａ，Ｗ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊｐｎ  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ．２０１２  Ｊｕｌ；４２（７）：５９１−６００）、及び、膀胱癌細胞の侵襲性が示唆されているデコリン（Ｅｌ  Ｂｅｈｉ，Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｍｏｌ  Ｍｅｄ．２０１３  Ｄｅｃ；５（１２）：１８３５−５１）。更に、癌胎児性タンパク質ＩＭＰ３及びＭＡＧＥ−Ａ（Ｘｙｌｉｎａｓ，Ｅ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｕｒｏｌ．２０１３  Ａｕｇ  ２８．ｐｉｉ：Ｓ００２２−５３４７（１３）０５２７５−０）並びにポリオ−マウイルスＢＫ  Ｔ抗原（Ａｌｅｘｉｅｖ，Ｂ．Ａ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｈｕｍ  Ｐａｔｈｏｌ．２０１３  Ｍａｙ；４４（５）：９０８−１７）。
【０１８０】
免疫原としてはまた、腫瘍細胞内で突然変異した遺伝子、または通常の細胞と比較して、腫瘍細胞内で異なるレベルで転写された遺伝子に由来するエピトープ領域またはエピトープペプチドを含む腫瘍抗原、例えばテロメラーゼ酵素、スルビビン、メソテリン、突然変異ＲＡＳ、ｂｃｒ／ａｂｌ再配列、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、変異または野生型ｐ５３、シトクロムＰ４５０  １Ｂ１、及び異常発現したイントロン配列（例えばＮ−アセチルグルコサミン転移酵素−Ｖ）；骨髄腫及びＢ細胞リンパ腫内で独自のイディオタイプを産生する免疫グロブリン遺伝子のクローン再配列；オンコウイルスプロセスに由来するエピトープ領域またはエピトープペプチドを含む腫瘍抗原（例えばヒトパピローマ・ウイルスタンパク質Ｅ６及びＥ７）；エプスタインバーウイルスタンパク質ＬＭＰ２；腫瘍選択的発現を有する非変異型癌胎児性タンパク質（例えば癌胎児性抗原及びαフェトプロテイン）も含まれる。Ｂｏｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２：３３７−６５（１９９４）；Ｒｅｎｋｖｉｓｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．５０：３−１５（２００１）もまた参照のこと。
【０１８１】
免疫原はまた、発癌性ウイルスタンパク質の、少なくとも１つの免疫原性断片を含むかまたはそれで構成される、発癌性ウイルス抗原も含む。
【０１８２】
免疫原性ポリペプチドの少なくとも１つの免疫原性断片を含むポリペプチドは、本明細書に記載したアジュバントと共に投与される、かつ／または本明細書で記載される組み換え発現ベクターによりコードされる免疫原として使用してよい。免疫原性断片は、少なくとも１つのＴ細胞エピトープ、または少なくとも１つのＢ細胞エピトープを含む。免疫原性断片は、少なくとも８、９、１０、１５、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００個、またはそれ以上の、免疫原性ポリペプチドの連続アミノ酸から構成されてよい。免疫原性断片は、直鎖エピトープを形成する十分な数の連続アミノ酸を含んでよいし、または、断片を、断片が由来する完全長ポリペプチドと同一（または十分に類似した）三次元構造にフォールディングし、（１つまたは複数の）非直線状エピトープ（当該技術分野においては立体構造エピトープとも称される）を提供することが可能な、十分な数の連続アミノ酸を含んでもよい。ポリペプチド断片の三次元構造は、結合能、及び完全長ポリペプチドに特異的に結合する抗体の結合量が、完全長ポリペプチドの断片と実質的に同一である場合、完全長ポリペプチドに十分に類似している。
【０１８３】
免疫原性断片が、完全長ポリペプチドに相当する構造にフォールディングされたかどうかを評価するためのアッセイとしては、例えば、タンパク質が、ネイティブなまたはフォールディングされていないエピトープに特異的なモノまたはポリクロナール抗体と反応する能力、他のリガンドを結合する機能の保持、及び、ポリペプチド断片の、プロテアーゼによる消化に対する感受性または耐性が挙げられる（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，３ｄ  ｅｄ．，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ（２００１）を参照）。エピトープ領域を識別するための更なる方法としては、Ｈｏｆｆｍｅｉｓｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２９：２７０−２８１（２００３）；Ｍａｅｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２５５：２７−４０（２００１）に記載されている方法が挙げられる。エピトープを識別するためのアッセイは本明細書で記載されており、当事者に既知であって、例えば、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｃｏｌｉｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．（Ｅｄｓ），Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ（１９９１）に記載されているものが挙げられる。
【０１８４】
対象の免疫原性領域、及び／または免疫原のエピトープの識別は、当業者により日常的に実践されている方法及び技術を使用して、当業者により、または、コンピューター分析及びコンピュータモデリングにより、実験的に容易に測定可能である。実験方法としては、例えば、タンパク質の特定の長さの連続アミノ酸を含むポリペプチド断片の合成、または、１つ以上のプロテアーゼを使用した断片の作製、及びその後、断片の免疫原性を、当該技術分野において日常的に実践されている、多数の結合アッセイまたはイムノアッセイ法のいずれか１つを用いた測定が挙げられる。断片に特異的に結合する抗体（ポリクロナール、モノクロナール、またはその抗原結合断片）の能力を測定するための代表的な方法としては、ＥＬＩＳＡ、ラジオイムノアッセイ、イムノブロット、競合結合アッセイ、蛍光標示式細胞分取器分析（ＦＡＣＳ）、及び表面プラズモン共鳴が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１８５】
対象のポリペプチド、またはその免疫原性断片の三次元構造の測定は、免疫原性断片が、完全長ポリペプチドに見出されるアミノ酸の空間位置を保持しているかどうかを測定するための、定常的な方法論により測定してよい。例えば、Ｂｒａｄｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３０９：１８６８−１８７１（２００５）；Ｓｃｈｕｅｌｅｒ−Ｆｕｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３１０：６３８（２００５）；Ｄｉｅｔｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １０３：１２４４（２００６）；Ｄｏｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ４５０：１７６（２００７）；Ｑｉａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ４５０：２５９（２００７）を参照のこと。当該技術分野において入手可能なものとしてはまた、ソフトウエアツール、例えば、細胞膜を貫通することが知られている、またはそのように考えられているポリペプチドの、膜貫通部分及び膜トポロジーを予想するのに有用である、ＰＳＯＲＴまたはＰＳＯＲＴ  ＩＩ、及びＳｐｓｃａｎ（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｐａｃｋａｇｅ，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ）もある（例えば、Ｎａｋａｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．２４：３４−３６（１９９９）を参照）。
【０１８６】
上述の技術とは別に、またはこれらと組み合わせて、及び対象ポリペプチドの代表的なアミノ酸配列を考慮して、当業者は、ポリペプチドの潜在的なエピトープを識別することができる（例えば、Ｊａｍｅｓｏｎ  ａｎｄ  Ｗｏｌｆ，  Ｃｏｍｐｕｔ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｓｃｉ．４：１８１−８６（１９８８）を参照）。別の例として、Ｈｏｐｐ及びＷｏｏｄｓは親水性法について説明しており、この方法は、ポリペプチド領域の親水性と、その抗原性との密接な相関を実験的に立証していることに基づいている（例えば、Ｈｏｐｐ，Ｐｅｐｔ．Ｒｅｓ．６：１８３−９０（１９９３）；Ｈｏｆｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｍｅｄ．Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ａｃｔａ  ４６：８５５−６６（１９８７）を参照）。コンピュータープログラムもまた、Ｂ細胞またはＴ細胞エピトープの識別に利用可能である。ＥＰＩＰＬＯＴと呼ばれるＢＡＳＩＣプログラムは、１３の異なるスケールを使用して、柔軟性、親水性及び抗原性プロファイルを計算及びプロットすることにより、タンパク質の一次構造から、その中にあるＢ細胞抗原性部位を予測する（例えば、Ｍｅｎｅｎｄｅｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｏｍｐｕｔ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｓｃｉ．６：１０１−１０５（１９９０）を参照）。また、Ｖａｎ  Ｒｅｇｅｎｍｏｒｔｅｌ，Ｍｅｔｈｏｄｓ：ａ  ｃｏｍｐａｎｉｏｎ  ｔｏ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，９：４６５−４７２（１９９６）；Ｐｅｌｌｅｑｕｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｅｐｉｔｏｐｅ  ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎｓ  ｆｒｏｍ  ｔｈｅ  ｐｒｉｍａｒｙ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ，”Ｉｎ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  ａｎｔｉｇｅｎｓ：ａ  ｐｒａｃｔｉｃａｌ  ａｐｐｒｏａｃｈ（ｅｄ．Ｇ．Ｂ．Ｗｉｓｄｏｍ），ｐｐ．７−２５；Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ（１９９４）；Ｖａｎ  Ｒｅｇｅｎｍｏｒｔｅｌ，“Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｄｉｓｓｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ａｎｔｉｇｅｎｓ”Ｉｎ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｏｆ  ａｎｔｉｇｅｎｓ（ｅｄ．Ｍ．Ｈ．Ｖ．  Ｖａｎ  Ｒｅｇｅｎｍｏｒｔｅｌ），Ｖｏｌ．１，ｐｐ．１−２７．ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ（１９９２）等も参照のこと。
【０１８７】
免疫原のＴ細胞エピトープはまた、Ｒａｍｍｅｎｓｅｅら（Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ  ５０：２１３−２１９（１９９９））により開発されたアルゴリズムをベースにするペプチドモチーフ調査プログラムを使用して、Ｐａｒｋｅｒら（上述）により、または、Ｄｏｙｔｃｈｉｎｏｖａ  ａｎｄ  Ｆｌｏｗｅｒ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．８０（３）：２７０−９（２００２）；Ｂｌｙｔｈｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  １８：４３４−４３９（２００２）；Ｇｕａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ２：６３−６６（２００３）；Ｆｌｏｗｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  １：１６７−１７６（２００２）；Ｍａｌｌｉｏｓ，Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  １７：９４２−４８（２００１）；Ｓｃｈｉｒｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．２５７：１−１６（２００１）により説明されているもの等の方法を用いて識別してもよい。Ｔ細胞エピトープはまた、当該技術分野において公知のスクリーニングアッセイ、例えば、重複ペプチドのプールを用いて、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでＴ細胞を刺激し、細胞増殖を測定するアッセイ（増殖アッセイ）、及び／または細胞毒性殺傷を測定するアッセイ（ＣＴＬアッセイ）を使用して識別されてもよい。
【０１８８】
本明細書に記載される方法において免疫原として使用され得る、腫瘍または発癌性ウイルス抗原のエピトープ領域も、当該技術分野において説明されている。例えば、Ｌａｍｂ  ｅｔ  ａｌ．，Ｒｅｖ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．Ｍａｒ−Ａｐｒ：Ｓｕｐｐｌ  ２：ｓ４４３−４４７（１９８９）；Ｌａｍｂ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ．６：１２４５−４９（１９８７）；Ｌａｍｂ  ｅｔ  ａｌ．，Ｌｅｐｒ．Ｒｅｖ．Ｓｕｐｐｌ  ２：１３１−１３７（１９８６）；Ｍｅｈｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８３：７０１３−２７（１９８６）；Ｈｏｒｓｆａｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ  １２：２１１−１３（１９９１）；Ｒｏｔｈｂａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｔｏｐ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５５：１４３−５２（１９９０）；Ｓｉｎｇｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  １７：１２３６−３７（２００１）；ＤｅＧｒｏｏｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｖａｃｃｉｎｅ  １９：４３８５−９５（２００１）；ＤｅＬａｌｌａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６３：１７２５−２９（１９９９）；Ｃｏｃｈｌｏｖｉｕｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６５：４７３１−  ４１（２０００）；Ｃｏｎｓｏｇｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  １０１：１０３９−４４（２００３）；Ｒｏｂｅｒｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，ＡＩＤＳ  Ｒｅｓ．Ｈｕｍ．Ｒｅｔｒｏｖｉｒ．１２：５９３−６１０（１９９６）；Ｋｗｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２２：５８３−８８（２００１）；Ｎｏｖａｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６６：６６６５−７０（２００１）を参照のこと。
【０１８９】
抗原特異的Ｔ細胞系またはクローンが利用可能である特定の場合には、例えば腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、ウイルス特異的または細菌特異的細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）といった細胞を使用して特異的抗原により調製した標的細胞を用いて、関係のあるエピトープの存在をスクリーニングしてよい。かかる標的は、ＣＴＬによる細胞溶解のために標的細胞を感作させるのに使用される、無作為の、または選択された合成ペプチドライブラリーを使用して調製可能である。Ｔ細胞系またはクローンを利用可能な場合に関係するエピトープを識別するための別のアプローチは、組み換えＤＮＡ方法論を用いることである。ＣＴＬに感染しやすい標的からの遺伝子またはｃＤＮＡライブラリーをまず調製し、感染しにくい標的細胞にトランスフェクションする。これにより、ＣＴＬエピトープを含有するペプチドのタンパク質前駆体をコードする遺伝子の識別、及びクローニングが可能になる。本プロセスの第２のステップは、少なくとも１つのＣＴＬエピトープをコードする領域を狭めるために、関係するクローン遺伝子から短縮された遺伝子を調製することである。このステップは、遺伝子が大きすぎない場合に任意選択的である。第３のステップは、例えば、ＣＴＬに対して標的を感作させるために使用される、約１０〜２０個の長さのアミノ酸（５〜１０個の残基が重複している）の合成ペプチドを調製することである。（１つまたは複数の）ペプチドが関係するエピトープを含有することが示される場合、かつ所望する場合、より小さなペプチドを調製して、エピトープを含有する最小サイズのペプチドを構築してよい。これらのエピトープは通常、ＣＴＬエピトープについては９〜１０個の残基中、及び、ヘルパーＴリンパ球（ＨＴＬ）エピトープについては２０〜３０個以下の残基中に含有されるが、必ずしもそうではない。
【０１９０】
あるいは、エピトープは、特定の主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）分子により非共有結合しているペプチドの直接溶出、続いて、溶出したペプチド類のアミノ酸シーケンシングによって規定されてもよい（例えば、Ｅｎｇｅｌｈａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｊ．２０００  Ｍａｙ；６  Ｓｕｐｐｌ  ３：Ｓ２７２−８０を参照）。手短に言えば、溶出したペプチドを、ＨＰＬＣ等の精製法を用いて分離し、個々の画分を、ＣＴＬ細胞溶解に対して標的を感作する能力、または、ＨＴＬ内でサイトカイン分泌の増加を誘発する能力について試験する。画分がペプチドを含有していると同定された場合、これを更に精製し、配列分析に通す。ペプチド配列はまた、タンデム質量分析を用いて決定することもできる。次いで、合成ペプチドを調製し、ＣＴＬまたはＨＴＬに関して試験し、正しい配列及びペプチドが同定されたことを確認する。
【０１９１】
Ｔｈ応答を誘発する潜在能を有するペプチドモチーフについて調査するＴｓｉｔｅｓプログラム等のコンピューター分析を使用して、エピトープを同定してもよい（例えば、Ｒｏｔｈｂａｒｄ  ａｎｄ  Ｔａｙｌｏｒ，ＥＭＢＯ  Ｊ．７：９３−１００，１９８８；Ｄｅａｖｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３３：１４５−１５５，１９９６を参照）。マウス及びヒトクラスＩまたはクラスＩＩ  ＭＨＣに結合するのに好適なモチーフを有するＣＴＬペプチドを、ＢＩＭＡＳ（Ｐａｒｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５２：１６３，１９９４）、及び他のＨＬＡペプチド結合予測分析に従い同定してよい。手短に言えば、例えば微生物成分もしくは抗原、または腫瘍細胞成分もしくは腫瘍抗原からのタンパク質配列を、ＭＨＣ結合モチーフの存在について調査する。各ＭＨＣ対立遺伝子に存在するこれらの結合モチーフは、通常は９〜１０個の長さの残基であるＭＨＣクラスＩ結合ペプチドに対して、一般に２（または３）位、及び９（または１０）位に存在する、保存アミノ酸残基である。次いで、ＭＨＣ結合モチーフを有するこれらの配列を含む合成ペプチドを調製し、その後、かかるペプチドを、ＭＨＣ分子への結合能について試験する。ＭＨＣ結合アッセイは、多量の空の（占有されていない）ＭＨＣ分子を発現する細胞を使用する（細胞結合アッセイ）か、または精製ＭＨＣ分子を用いるかのいずれかにより、実施することができる。最後に、ＭＨＣ結合ペプチドを、ヒトリンパ球を使用してｉｎ  ｖｉｔｒｏで、またはＨＬＡトランスジェニック動物を使用してｉｎ  ｖｉｖｏで、ナイーブ個体でのＣＴＬ応答を誘発する能力について試験する。これらのＣＴＬを、ペプチド感作標的細胞、及び、自然に抗原を処理する標的（例えばウイルス感染細胞または腫瘍細胞）を使用して、試験する。免疫原性を更に確認するために、ＨＬＡ  Ａ２トランスジェニックマウスモデル、及び／または種々のｉｎ  ｖｉｔｒｏ刺激アッセイのいずれかを使用して、ペプチドを試験してよい。
【０１９２】
ある種の実施形態において、免疫原（即ち、発癌性ウイルス抗原または腫瘍関連抗原）は、既知であり、対応する免疫原に対して当該技術分野において入手可能なアミノ酸配列に、１つ以上のアミノ酸置換、挿入、または欠失を有するポリペプチド種を含む。アミノ酸の保存的置換は周知であり、ポリペプチド内で自然に生じてもよいし、または、ポリペプチドを組み換えにより作製する際に導入してよい。アミノ酸置換、欠失、及び付加を、周知であり、日常的に実践される突然変異誘発法を用いてポリペプチド内に導入してよい（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，３ｄ  ｅｄ．，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ  ２００１）を参照）。オリゴヌクレオチド指定部位特異的（または部分特異的）突然変異誘発の手順を用いて、所望の置換、欠失または挿入に従って変更した特定のコドンを有する、改変ポリヌクレオチドを提供してよい。免疫原の欠失または切断変異体もまた、所望の欠失に隣接する、便利な制限エンドヌクレアーゼ部位を用いて構築してよい。制限の後にはオーバハングを入れ、ＤＮＡを再びライゲーションしてよい。あるいは、ランダム突然変異誘発技術（例えばアラニンスキャニング突然変異誘発、エラープローン（ｅｒｒｏｒ  ｐｒｏｎｅ）ポリメラーゼ連鎖反応突然変異誘発、及びオリゴヌクレオチド指定突然変異誘発）を使用して、免疫原ポリペプチド変異体を調製してよい（例えば、上述のＳａｍｂｒｏｏｋを参照）。特定の免疫原の変異体（またはそのポリペプチド断片）は、当該技術分野において公知の代表的なアミノ酸配列のいずれかに、少なくとも８５％、９０％、９５％、または９９％のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチド免疫原を含む。
【０１９３】
これらのポリペプチド免疫原変異体は統計学的、臨床的、または生物学的に有意な方法で、対象における、免疫応答（例えば体液性応答（即ちＢ細胞応答））、細胞性応答（即ちＴ細胞応答（細胞障害性Ｔリンパ球応答を含む））、または体液性及び細胞性応答の両方を誘発する能力を維持する。多くの分子生物学、タンパク質発現、及びタンパク質単離技術、並びにポリペプチド内に突然変異を導入するための、ポリペプチド断片を調製するための、断片及び変異体を単離するための、並びに、それらを分析するための当該技術分野において日常的に実践される方法を考慮すると、免疫応答を誘発する所望の能力を有する、同一の免疫原ポリペプチド変異体及び断片を、速やかかつ過度な実験をすることなく作製することができる。
【０１９４】
当業者に既知の種々の基準は、ペプチドまたはポリペプチドの特定の位置で置換されているアミノ酸が保存的である（または類似している）かどうかを示している。例えば、類似のアミノ酸または保存的アミノ酸置換は、アミノ酸残基が、類似の側鎖を有するアミノ酸残基と置換されているものである。類似のアミノ酸は、以下のカテゴリーに含まれてよい：塩基性側鎖を有するアミノ酸（例えばリジン、アルギニン、ヒスチジン）；酸性側鎖を有するアミノ酸（例えばアスパラギン酸、グルタミン酸）；非荷電極性側鎖を有するアミノ酸（例えばグリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン、ヒスチジン）；非極性側鎖を有するアミノ酸（例えばアラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）；β分岐側鎖を有するアミノ酸（例えばスレオニン、バリン、イソロイシン）；及び芳香族側鎖を有するアミノ酸（例えばチロシン、フェニルアラニン、トリプトファン）。分類が一層難しいと考えられているプロリンは、脂肪族側鎖を有するアミノ酸（例えばロイシン、バリン、イソロイシン、及びアラニン）と性質を共有している。ある特定の状況において、グルタミン酸のグルタミンへの置換、またはアスパラギン酸のアスパラギンへの置換は、グルタミン及びアスパラギンが、それぞれグルタミン酸及びアスパラギン酸のアミド誘導体であるという点で、類似の置換と考えてよい。当該技術分野において理解されているように、２つのポリペプチドの「類似性」は、ポリペプチドのアミノ酸配列、及びその保存アミノ酸置換を、第２のポリペプチドの配列と（例えば、ＧＥＮＥＷＯＲＫＳ、Ａｌｉｇｎ、ＢＬＡＳＴアルゴリズム、または本明細書で記載され、当該技術分野において実践される他のアルゴリズムを用いて）比較することにより決定される。
【０１９５】
免疫原性断片に関して本明細書に記載されるように、それぞれの変異体が、変異体でないポリペプチドまたは断片に相当する構造にフォールディングされるかどうかを評価するアッセイとしては、例えば、タンパク質が、ネイティブなまたはフォールディングされていないエピトープに特異的なモノまたはポリクロナール抗体と反応する能力、リガンド結合機能の保持、及び、変異タンパク質の、プロテアーゼによる消化に対する感受性または耐性が挙げられる（上述のＳａｍｂｒｏｏｋを参照）。かかる変異体は、本明細書で記載される方法、または、当業者により日常的に実践されている、当該技術分野において公知の他の方法に従って同定、特性決定、及び／または作製することが可能である。
【０１９６】
本明細書記載の方法に従い対象に投与される免疫原性組成物は、少なくとも１つの薬学的（または生理学的）に好適な賦形剤を含んでよい。医薬組成物での使用に関して当業者に知られている、任意の生理学的または薬学的に好適な賦形剤またはキャリア（即ち、有効成分の活性に干渉しない非毒性物質）を、本明細書で記載される免疫原性組成物に使用してよい。代表的賦形剤としては、タンパク質の安定性及び完全性を維持する希釈剤及びキャリアが挙げられる。治療のために使用する賦形剤は周知であり、例えばＲｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ（Ｇｅｎｎａｒｏ，２１ｓｔ  Ｅｄ．Ｍａｃｋ  Ｐｕｂ．Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ（２００５））に記載されており、本明細書でより詳細に記載されている。
【０１９７】
癌を治療するための方法及び組成物
本明細書で記載される組成物のいずれかを、ヒトまたは動物の対象の治療方法に使用することができる。この方法は、組成物を、本明細書に記載した対象に投与することを含んでよい。
【０１９８】
一実施形態では、所望により１つ以上の他の抗原と組み合わせて、癌関連抗原に特異的な免疫応答を誘発することにより癌を治療する方法を、本明細書において提供する。特に、本明細書において提供する方法は、組み換え発現ベクターを含むベクター粒子を含む組成物を、必要な対象に投与することにより免疫原に特異的な免疫応答を誘発することを含み、この組み換え発現ベクターは免疫原をコードするポリヌクレオチド（本明細書では第１組成物または免疫原性組成物とも称される）を含み、ポリヌクレオチドは少なくとも１つの制御発現配列に作用可能に結合している。同時に、または逐次的に、抗原を実質的に欠いている、薬学的に好適なアジュバントを含む第２組成物（本明細書ではアジュバント組成物とも称される）を対象に投与する。ある種の実施形態において、薬学的に好適なアジュバントを含む第２組成物は免疫原を含んでもよい。通常、第１の「プライム」組成物は（例えば皮内、筋肉内、または皮下注射により）全身投与され、第２組成物（例えばアジュバント組成物）は、腫瘍内、腫瘍周辺、リンパ節内、傍リンパ節内、粘膜または膀胱内等、局所投与される。
【０１９９】
一実施形態では、所望により、癌が発癌性ウイルスに関連する腫瘍関連抗原を組み合わせた、発癌性ウイルス抗原に特異的な免疫応答を誘発することによりウイルス誘発性癌を治療する方法を、本明細書において提供する。特に、本明細書において提供する方法は、組み換え発現ベクターを含むベクター粒子を含む組成物を、必要な対象に投与することにより免疫原に特異的な免疫応答を誘発することを含み、この組み換え発現ベクターは免疫原をコードするポリヌクレオチド（本明細書では第１組成物または免疫原性組成物とも称される）を含み、ポリヌクレオチドは少なくとも１つの制御発現配列に作用可能に結合している。同時に、または逐次的に、薬学的に好適なアジュバントを含む第２組成物（本明細書ではアジュバント組成物とも称される）を対象に投与する。ある種の実施形態において、薬学的に好適なアジュバントを含む第２組成物は免疫原を含んでもよい。ある種の実施形態において、第１組成物は発癌性ウイルス抗原を含み、（例えば皮内、筋肉内、または皮下注射により）全身投与される。第２組成物（例えばアジュバント組成物）は、ある種の実施形態においては、腫瘍内または膀胱内等、局所投与され、所望により、本明細書に記載した発癌性ウイルス抗原、もしくは第１組成物中で投与される抗原、及び／または腫瘍関連抗原を含んでよい。
【０２００】
一実施形態では、組み換え発現ベクターを含むベクター粒子を含む組成物を、必要な対象に投与することにより免疫原に特異的な免疫応答を誘発することにより膀胱癌を治療する方法を本明細書において提供し、この組み換え発現ベクターは免疫原をコードするポリヌクレオチド（本明細書では第１組成物または免疫原性組成物とも称される）を含み、ポリヌクレオチドは少なくとも１つの制御発現配列に作用可能に結合している。同時に、または逐次的に、薬学的に好適なアジュバントを含む第２組成物（本明細書ではアジュバント組成物とも称される）を対象に投与する。
【０２０１】
本明細書に記載される方法において、アジュバント組成物は、本開示の種々の実施形態に従いＢＣＧを含んでもよいし、含んでいなくてもよい。アジュバント組成物は、アジュバントが免疫原に対する免疫応答を向上させるのに十分な時間及び方法で投与されてよい。すなわち、免疫原に特異的な免疫応答（即ち、体液性応答、細胞性応答、または体液性応答と細胞性応答の両方）の量が、アジュバントの不存在下で投与された場合の、免疫原に特異的な免疫応答の量と比較して、統計学的、臨床的、及び／または生物学的に有意な方法で、より大きい（または増加している）。抗原がアジュバントの不存在下で、検出可能な特異的免疫応答を誘発できないこれらの場合において、検出可能な特異的免疫応答が誘発されることは、免疫応答の向上を示す。他の実施形態では、アジュバント組成物は、アジュバントが、Ｔ細胞（例えば第１の免疫原性組成物の投与後に誘発されるＣＤ８  Ｔ細胞）を、局所投与部位（例えば膀胱の腫瘍または粘膜）に動員するのに十分な時間及び方法で投与される。
【０２０２】
本開示の種々の実施形態によると、第１の免疫原性組成物は、「プライミング」組成物、または所望により「プライム／ブースト」組成物として作用する（例えば、本明細書で有用なプライムブーストレジメンについて記載しているＷＯ２０１２／１４１９８４を参照）。第１の免疫原性組成物は、ベクター粒子及び／または組み換え発現ベクター、並びに、所望により本明細書で記載されるＴＬＲアゴニスト等のアジュバントを含む。本明細書に記載されるように、ベクター粒子／発現ベクター、及び所望によりアジュバントは、同一または異なった組成物であってよく、同一または異なる部位、時間、及び経路で投与されてよい。ある種の実施形態において、第２組成物、即ちアジュバント組成物は、アジュバント、及び所望によりＢＣＧを含む。種々の実施形態によれば、アジュバント及びＢＣＧは、同一または異なった組成物であってよく、同一または異なる部位、時間、及び経路で投与されてよい。ある種の実施形態において、第２組成物、即ちアジュバント組成物は、アジュバント、並びに所望によりＢＣＧ、及び／または腫瘍関連抗原、例えば膀胱癌に関連する抗原を含む。
【０２０３】
本明細書で記載されるプライム−プル免疫付与法、及び免疫原性組成物を使用して免疫応答を誘発することは、種々の異なるレジメンを使用して達成されてもよい。免疫付与レジメンの代表的な、非包括的一覧としては、
ａ）免疫原をコードし発現する発現ベクターを含む第１組成物；並びに／または
ｂ）免疫原をコードし発現する発現ベクター、及びアジュバントもまた含む第１組成物；
ｃ）ｅｘ  ｖｉｖｏで増殖され、キメラ抗原受容体により遺伝子組み換えされて、腫瘍関連抗原を認識する自己由来もしくは腫瘍抗原特異的Ｔ細胞（ＣＡＲ−Ｔ細胞）、または、遺伝子組み換えされ、ＭＨＣとの関係において、癌関連エピトープを認識する特異的なキメラＴ細胞受容体を発現するＴ細胞（ＣＡＲ−ＴＣＲ細胞）を含む第１組成物；
を投与することを含み、ａ）またはｂ）またはｃ）は、（互いに関して）任意の順で複数回投与され、かつ、以下の第２組成物と異なる、または同一の投与部位及び経路において、同時に、または逐次的に投与されてよい。
ｉ）免疫原を有しないアジュバントを含む組成物；
ｉｉ）ＢＣＧと共にアジュバントを含む組成物；
ｉｉｉ）免疫原と共にアジュバントを含む組成物；並びに／または
ｉｖ）免疫原及びＢＣＧと共にアジュバントを含む組成物。
【０２０４】
本明細書で記載される代表的なレジメンは「プライム−プル」レジメンと説明されているが、上で提供した組成物は、任意の順で複数回投与されてよく、また、異なる、または同一の投与部位及び経路にて同時に、逐次的に投与されてよいことが理解されるであろう。非限定的実施例として、本開示は、上記組成物ａ）またはｂ）またはｃ）のいずれかの「プライム」投与、所望により、上記組成物ａ）またはｂ）またはｃ）のいずれかの１つ以上の「ブースト」投与、及び、上記組成物ｉ）〜ｉｖ）の「プル」投与を企図する。プライム、ブースト及びプル投与／組成物は任意の順で複数回投与されてよく、また、異なる、または同一の投与部位及び経路にて同時に、逐次的に投与されてよい。ある種の実施形態において、「ブースト」組成物は、免疫原、特定の実施形態においては、免疫原をコードし発現する第１組成物（プライム）内での発現ベクターにより発現される同一の免疫原を組み合わせた、本明細書に記載したアジュバントを含む。
【０２０５】
ある種の実施形態において、本明細書記載の方法は、同一組成物中のアジュバント及び組み換え発現ベクターを投与することを含む。他の実施形態では、本明細書記載の方法は、２つの別の組成物中のアジュバント及び組み換え発現ベクターを、異なる時間、異なる部位、及び／または異なる投与経路のいずれかにより投与することを含む。ある種の実施形態において、対象の免疫原（複数可）をコードする組み換え発現ベクター、及びアジュバントを含むベクター粒子は、単一組成物中で組み合わされない。即ち、免疫原をコードする組み換え発現ベクターを含むベクター粒子を含む組成物（即ち免疫原性組成物）はアジュバントを欠いており、アジュバントを含む組成物は組み換え発現ベクターを欠いているか、または対象の免疫原をコードするベクターを含むベクター粒子を欠いている。本明細書記載の方法の他の特定の実施形態において、免疫原をコードするベクターを含む組成物、及びアジュバントを含む組成物が同時に（即ち、時を同じくして）投与される場合、各組成物は異なる部位に投与される。各組成物が異なる部位に投与される場合、各組成物は同一または異なる経路で投与されてよい。あるいは、各組成物は同一部位に異なる経路で投与されてよい。更なる実施形態では、同一組成物中のアジュバント及び組み換え発現ベクターが投与される。
【０２０６】
ある種の実施形態において、「プル」組成物（例えばＴＬＲ４アゴニストを含む組成物）は、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、またはそれ以上の局所部位に、同時または逐次的のいずれか（互いに同時にもしくは逐次的であるか、もしくは「プライム」投与に対して同時もしくは逐次的であるか、または両方）で投与されてよい。一例として、「プライム」投与により生み出された抗原特異的免疫応答は、好適なアジュバント（例えば本明細書で記載されるＧＬＡ等のＴＬＲ４アゴニスト）を含む組成物の局所（例えば腫瘍周囲または腫瘍内）投与により、原発腫瘍部位及び／または１つ以上の転移性腫瘍部位において、１つ以上の腫瘍に「プル」されることができる。更なる非限定的例としては、ある種の実施形態において、原発腫瘍部位は「プル」組成物の投与では到達不可能である場合があるが、１つ以上の転移性部位は到達可能であり得る。ある種の実施形態において、１つ以上の局所腫瘍部位での投与は、抗原特異的Ｔ細胞の、「プル」組成物が投与された腫瘍への浸潤を引き起こし、幾つかの実施形態においては、アブスコパル効果も観察され、これにより、１つの局所主要部位における投与が、離れた腫瘍部位でのＴ細胞の浸潤をも引き起こし、離れた腫瘍のサイズの低下を引き起こす。
【０２０７】
ある種の実施形態において、免疫原性「プライム」組成物（例えば、癌関連抗原をコードするレンチウイルスベクターを含み、所望により１つ以上の他の抗原を含む組成物；または、養子移入したＴ細胞、抗原特異的もしくは遺伝子組み換えしたＣＡＲ−Ｔ細胞を含む組成物）、及び「プル」アジュバント組成物（例えばＴＬＲ４アゴニストを含む組成物）を、対象に同時投与する。「プライム」及び「プル」組成物が同時投与される場合、組成物は互いに５〜１２０分以内に投与される。ある種の実施形態において、免疫原性組成物（「プライム」）は、アジュバント組成物（「プル」）の１時間以内に投与される。通常、同時投与は短時間内に行われるが、これは患者及び臨床職員にとって安全な許容できる投与のために適しているからである。プライム組成物が養子移入したＴ細胞を含む実施形態において、Ｔ細胞を含む組成物の投与は、一定の期間にわたってよく（例えば、Ｔ細胞の投入は１時間、２時間または３時間にわたってよい）、プル組成物の同時投与は、細胞の投入の完了後に続くが、通常、投入の５〜１２０分後以内であるか、または患者にとって安全であれば、熟練の臨床医により決定される。
【０２０８】
プライム及びプル組成物が同時投与される実施形態において、免疫原性組成物（プライム）はある経路（即ち第１経路）で投与されてよく、アジュバント組成物は第２の異なる経路で投与される。一実施形態では、プライム組成物は（例えば皮内、筋肉内または皮下注射により）全身投与され、プル組成物は局所（例えば腫瘍内、腫瘍周辺、リンパ節内、または膀胱内）投与される。第１及び第２経路が独立して選択される投与経路としては、局所、経口、経腸、鼻（即ち鼻腔内）、吸入、髄腔内、直腸、膣内、眼内、結膜下、舌下、皮内、経皮、または非経口的投与が挙げられ、皮下、経皮、静脈内、筋肉内、腫瘍内、リンパ節内、胸骨内、静脈洞内、膀胱内、管内（ｉｎｔｒａｍｅａｔａｌ）または尿道内注射または注入を含むが、これらに限定されない。更なるある種の特定の実施形態において、第１及び第２経路は異なり、それぞれ、非経口、経口、経腸、舌下、鼻腔内、筋肉内、皮内、皮下、腫瘍内、リンパ節内、経皮（ｐｅｒｃｕｔａｎｅｏｕｓ）、経皮（ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌ）、膀胱内及び局所から選択される。更に特定の実施形態において、第１及び第２経路は異なり、筋肉内、皮下、経皮、腫瘍内、リンパ節内、鼻孔内、膀胱内及び経口から選択される。更に別の実施形態において、第１の免疫原性組成物はアジュバントなしで皮内、筋肉内または皮下投与され、アジュバント組成物は、免疫原有りまたは無しで、癌の部位に局所（例えば腫瘍内または膀胱内）投与され、ある種の実施形態においては、ＢＣＧ有りまたは無しで、膀胱癌の治療等のために投与される。免疫原性及びアジュバント組成物は、当該技術分野において説明され、本明細書で更に詳細に論じられている異なる経路による送達のために適切に配合される。
【０２０９】
本明細書で記載される他の実施形態では、「プライム」免疫原性組成物及びアジュバント組成物が、それぞれ対象に同時投与される場合、組成物は対象の異なる部位にて投与されてよい。異なる部位は、互いに物理的に十分離れており、免疫原への免疫応答の誘発または向上を可能にする。各組成物が異なる部位に投与される場合、組成物は同一経路で投与されてもよく、異なる経路で投与されてもよい。例として、また説明を目的としてのみであるが、免疫原性組成物は対象の四肢（例えば腕）に皮下または筋肉内投与されてよく、アジュバント組成物は対象の異なる四肢（例えば脚）に、それぞれ皮下または筋肉内投与されてよい。更なる例として、同時経路ではあるが異なる部位での各組成物の同時投与は、免疫原性組成物の四肢（例えば腕または脚）への投与、及び、アジュバント組成物の、同じ種類の別の（即ち第２の）四肢への投与を含んでよい。他の特定の実施形態において、免疫原性組成物及びアジュバント組成物が同一部位で同時投与される場合、免疫原性及びアジュバント組成物のそれぞれの投与経路は異なり、それぞれ、経口、経腸、非経口、筋肉内、皮内、皮下、腫瘍内、リンパ節内、経皮、経皮、舌下、膀胱内及び局所から選択される。例として、一方の組成物は経口送達されて消化されてよく、第２組成物は舌下投与されてよい。別の例として、一方の組成物は部位で筋肉内投与されてよく、第２組成物は、およそ同一部位（例えば同一の腕または同一の脚）にて、皮下または経皮投与される。
【０２１０】
投与経路の選択は、送達される組成物、対象の年齢、及び対象の体重を含む多数の因子に依存するであろう。投与経路及び投与部位は通常、最も安全な方法で対象に送達される組成物中の有効成分の量が最大となるように選択される。免疫原性組成物及び／またはアジュバント組成物の筋肉内投与の典型的な部位としては、大腿前外側筋（ａｎｔｅｒｏｌａｔｅｒａｌ  ｔｈｉｇｈ  ｍｕｓｃｌｅ）及び三角筋が挙げられる。ヒトにおいては、三角筋での筋肉注射を、ワクチン技術分野の当業者が用いて、ワクチンを成人に、及び、ある特定の例においては子供及び１０代、並びに１〜２歳の幼児に送達する。大腿前外側筋内の外側広筋が、乳児（即ち、１歳未満）への筋肉注射で通常推奨され、より高齢の子供、及び成人での筋肉内送達部位でもあることができる。あるいは、ヒトにおける筋肉注射部位は腹側臀部（ｖｅｎｔｒｏｇｌｕｔｅａｌ）領域であってよい。当業者は、免疫原性組成物が背側臀部（ｄｏｒｓｏｇｌｕｔｅａｌ）部位、または臀部の上部外側四半部に送達される場合、ワクチンの最適下限送達が生じ得ることを理解している。
【０２１１】
例として、本明細書で記載されるアジュバント組成物の膀胱内投与は、組成物を、経口投与または静脈内注射するのではなく、膀胱内に（例えばカテーテルを通して）直接投与することを含む。この方法により与えられる組成物は、膀胱（粘膜）内の細胞に主に影響を及ぼす。尿路上皮層の浸透性は大変低く、点滴投与した薬液が尿により希釈され、排尿中に膀胱外に洗い流され得るため、アジュバント組成物の複数投与が必要であり得る。各種実施形態では、キトサン及びジメチルスルホキシド等の浸透促進剤を一時的に使用し、尿路上皮における強力な詰め込みを妨げ、リポソーム、ゼラチンナノ粒子、ポリマーナノ粒子等のナノキャリア及び磁気粒子を使用して、膀胱及び標的となる疾患細胞での局所作用物質の濃度を向上させることができる。他の実施形態では、尿路上皮細胞の内側に強力に付着する粘膜付着性生体材料を使用して、膀胱内作用物質キャリアを改善することで、キャリアが排尿中に洗い流されることを防ぐ。感温性ＰＥＧ−ＰＬＧＡ−ＰＥＧポリマー等のポリマーハイドロゲルを使用して、膀胱腔内へ作用物質を送達するためのｉｎ  ｓｉｔｕゲル化系が開発されている（ＧｕｈａＳａｒｋａｒ，Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｏｎｔｒｏｌ  Ｒｅｌｅａｓｅ．２０１０  Ｄｅｃ  １；１４８（２）：１４７−５９）。
【０２１２】
例として、免疫原性またはアジュバント組成物を皮下投与するための典型的な部位としては、大腿前外側筋の脂肪組織、または三頭筋の脂肪組織が挙げられる。ヒト乳児への組成物の皮下投与に関しては、大腿筋が好ましい部位である。経皮投与は、三角筋にて、または大腿前外側筋で行われてもよい。
【０２１３】
別の実施形態において、少なくとも１つの免疫原をコードするポリヌクレオチドを含む組み換え発現ベクターを含むベクター粒子を含む第１組成物、及びアジュバントを含む第２組成物を、同時に投与する。ある種の実施形態において、免疫原性組成物をアジュバント組成物の前に投与する（即ち、免疫原性組成物の投与後にアジュバント組成物を投与する）。他のある種の実施形態においては、アジュバント組成物を免疫原性組成物の投与前に投与する（即ち、アジュバント組成物の投与後に免疫原性組成物を投与する）。
【０２１４】
「プライム」組成物が養子移入したＴ細胞を含むある種の実施形態において、プライム組成物、及び好適な「プル」組成物（例えばＴＬＲ４アゴニスト（例えばＧＬＡ））、または本明細書に記載した他の組成物は、同時に投与されるか、または、逐次的に投与されてよい。養子移入した細胞の複数投与を、「プル」組成物の投与前に行ってよい。
【０２１５】
したがって、ある種の実施形態では、本開示は、１）対象に、ｅｘ  ｖｉｖｏで増殖もしくは改変された腫瘍関連抗原特異的Ｔ細胞、腫瘍関連抗原を認識するように遺伝子組み換えされたＣＡＲ−Ｔ細胞、または、ＭＨＣとの関係において癌に関連するエピトープを認識する特異的キメラＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現するように遺伝子組み換えされたＴ細胞を含む第１組成物を投与すること、２）本明細書に記載した薬学的に好適なアジュバントを含む第２組成物を対象に、同時または逐次的のいずれかにより、局所または腫瘍内投与して、養子移入した細胞を腫瘍にプルすることにより、対象における癌を治療することによる、対象の癌治療方法を提供する。ある種の実施形態において、第２組成物の局所投与前に、本明細書に記載した発現ベクターを対象に投与することにより、養子移入した細胞をブーストし、養子移入（そしてその後、ブーストした）細胞を局所部位（例えば腫瘍）にプルしてよい。
【０２１６】
免疫原性組成物及びアジュバント組成物が必要な対象にそれぞれ逐次投与される、本明細書で記載される実施形態において、各投与は数時間、または数日で分離される。アジュバント組成物が免疫原性組成物に逐次的に投与される場合、アジュバント組成物は、アジュバント組成物により投与部位に動員される免疫応答が検出可能であるような時間間隔で投与される。ある種の実施形態において、免疫原性組成物は、アジュバント組成物を投与する少なくとも１時間、少なくとも２時間、少なくとも３時間、少なくとも４時間、少なくとも５時間、少なくとも６時間、少なくとも７時間、少なくとも８時間、少なくとも９時間、少なくとも１０時間、または少なくとも１２時間、または少なくとも１８時間前に投与される。他の特定の実施形態において、免疫原性組成物は、アジュバント組成物を投与する少なくとも１日、少なくとも２日、少なくとも３日、少なくとも４日、少なくとも５日、少なくとも６日、または少なくとも７日前に投与される。他の実施形態では、免疫原性組成物は、アジュバント組成物を投与する１日〜３６日前の間に投与される。免疫原性組成物を、アジュバント組成物を投与する１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、または３６日前に投与してよい。更に他のある種の実施形態では、アジュバント組成物は免疫原性組成物の前に投与され、免疫原性組成物の投与の少なくとも１時間、少なくとも２時間、少なくとも３時間、少なくとも４時間、少なくとも５時間、少なくとも６時間、少なくとも７時間、少なくとも８時間、少なくとも９時間、少なくとも１０時間、または少なくとも１２時間、または少なくとも１８時間前に投与される。本明細書で記載される更に他の実施形態では、アジュバント組成物は免疫原性組成物の前に投与され、免疫原性組成物の投与の少なくとも１日、少なくとも２日、少なくとも３日、少なくとも４日、少なくとも５日、少なくとも６日、または少なくとも７日前に投与される。他の実施形態では、アジュバント組成物は、免疫原性組成物の投与の１〜３６日前に投与される。アジュバント組成物は、免疫原性組成物の投与の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、または３６日前に投与されてよい。各組成物の投与の最適な時間間隔は、当業者により、適切に設計された前臨床及び臨床治験により決定されてよい。最適な時間間隔は、対象の免疫原及び／または投与される特定のアジュバントに依存し得る。
【０２１７】
更にその他の実施形態では、免疫原性組成物及びアジュバント組成物はそれぞれ、必要な対象に２回以上（例えば２回、３回、または４回）、逐次的に投与される。特定の実施形態では、アジュバント組成物を免疫原性組成物と同じ回数投与してよい。更に別の実施形態では、アジュバント組成物を免疫原性組成物よりも少ない回数投与してよい。非限定的例として、免疫原性組成物が２回以上投与される場合、アジュバント組成物は、免疫原性組成物の投与前またはいずれか（即ち第２、第３または第４）の投与後ではなく、免疫原性組成物の第１投与の投与前または後のみに投与されてよい。更に別の特定の実施形態では、アジュバント組成物を免疫原性組成物の投与よりも多くの回数投与する。
【０２１８】
他の実施形態では、アジュバント組成物を、免疫原性組成物よりも少なくとも１回以上多く投与する。例えば、アジュバントは先天性（または非特異的）免疫応答を誘発可能であり、免疫原性組成物の投与前または後に十分な時間間隔で投与され、先天性免疫応答を誘発または刺激してよい。理論に束縛されるものではないが、この応答には、抗原特異的Ｔ細胞を投与部位に動員するサイトカイン及びケモカインの局所誘導を含む。次いで、アジュバント組成物を、免疫原性組成物の第１投与と同時に（同時投与は異なる部位でも、異なる経路であってもよい）、または逐次的に投与してもよい。
【０２１９】
アジュバント組成物及び免疫原性組成物が逐次的に投与される場合、組成物のそれぞれは同一経路により投与されてもよいし、または異なる経路により投与されてもよい。独立して選択され得る、アジュバント及び免疫原性組成物のそれぞれの送達のための投与経路としては、局所、経口、経腸、鼻（即ち鼻腔内）、吸入、髄腔内、直腸、膣内、眼内、結膜下、舌下、皮内、腫瘍内、腫瘍周囲、リンパ節内、傍リンパ節内、経皮または非経口的投与が挙げられ、皮下、経皮、静脈内、筋肉内、胸骨内、静脈洞内、管内または尿道内注射または注入を含むが、これらに限定されない。ある種の実施形態において、第１及び第２経路は異なり、それぞれ、非経口、経口、経腸、舌下、鼻孔内、筋肉内、皮内、腫瘍内、リンパ節内、皮下、経皮、経皮、及び局所から選択される。
【０２２０】
免疫原性組成物及びアジュバント組成物が同一経路で対象に投与される場合、組成物のそれぞれは、同一部位で対象に投与されてもよく、または異なる部位で対象に投与されてもよい。他の特定の実施形態において、アジュバント組成物及び免疫原性組成物が逐次的に投与される場合、各組成物は異なる経路で送達されてよい（ただし、十分に近接する部位は同一部位とみなす）。非限定的例として、免疫原性組成物は、対象の四肢（例えば腕（三角筋）または足（大腿筋））に筋肉内投与されてよく、免疫原性組成物の投与前または後に、アジュバント組成物が対象の四肢の同一部位（例えば、それぞれ同一の腕（三角筋）または同一の脚（大腿筋））に皮下投与される。第２の非限定的例として、アジュバント組成物は対象の四肢（例えば腕（三角筋）または脚（大腿筋））に筋肉内投与されてよく、アジュバント組成物の投与前または後に、免疫原性組成物が対象の四肢の同一部位（例えば、それぞれ同一の腕（三角筋）または同一の脚（大腿筋））に皮下投与されてよい。
【０２２１】
本明細書で論ずる通り、部位及び投与経路の選択は、免疫付与される対象の年齢、健康状態及び／もしくは大きさ；ベクターを含む組み換え発現ベクターまたはベクター粒子；組み換え発現ベクターによりコードされる免疫原（複数可）；並びに／またはアジュバントを含むが必ずしもこれらに限定されない因子に依存し得る。免疫原性組成物の投与により治療または予防される状態、病気または疾患、及び、所望の免疫応答の種類は、免疫原性及びアジュバント組成物の治療的及び／または予防的利点を最大化するための投与経路及び投与部位の決定において、当業者により考慮される更なる因子であり得る。
【０２２２】
免疫付与プロトコールまたはレジメンの過程において、免疫原に対する免疫応答の程度を監視してよい。したがって、対象にそれぞれ投与される免疫原性組成物及びアジュバント組成物の回数は、免疫原性組成物の各投与後の、免疫原に対する免疫応答の程度を監視することにより決定してよい。免疫応答を監視するための技術及び方法は、当該技術分野において日常的に実践されており、本明細書及び当該技術分野において記載されている。
【０２２３】
免疫応答
本明細書に記載されるように、免疫原に対する免疫応答を誘発する、また特定の実施形態においては、誘発した細胞を対象の部位（例えば腫瘍；感染の粘膜部位）に引きつける、または動員する方法を提供する。免疫応答に関与する免疫系の細胞は通常、免疫細胞と称され、リンパ球、及びアクセサリー細胞等の非リンパ系細胞を含む。リンパ球は外来抗原を特異的に認識し、これに特異的に応答する細胞であり、アクセサリー細胞は、ある種の抗原に特異的ではないが、免疫応答の認識及び活性化フェーズに関与する細胞である。例えば、単核食細胞（マクロファージ）、他の白血球（例えば顆粒球（好中球、好酸球、好塩基球を含む））、及び樹状細胞は、免疫応答の誘発時にアクセサリー細胞として機能する。外来抗原によるリンパ球の活性化は、抗原を除去するように機能する多数のエフェクター機構の誘導または誘発をもたらす。エフェクター機構に影響を及ぼす、またはエフェクター機構に関与する、単核食細胞等のアクセサリー細胞もまた、エフェクター細胞と呼ばれる。
【０２２４】
リンパ球の主な部類としては、Ｂリンパ球（Ｂ細胞）、Ｔリンパ球（Ｔ細胞）、及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が挙げられ、これらは大型の顆粒リンパ球である。Ｂ細胞は抗体の作製が可能である。Ｔリンパ球は、更にヘルパーＴ細胞（ＣＤ４＋（本明細書、及び当該技術分野においてはＣＤ４とも称される））、及び細胞溶解性または細胞障害性Ｔ細胞（ＣＤ８＋（本明細書及び当該技術分野においてはＣＤ８とも称される））に細分される。Ｔ細胞は、当該技術分野においては、抗原特異的ＣＤ４及び／もしくはＣＤ８  Ｔ細胞、エフェクタ−メモリーＴ細胞（ＴＥＭ）、セントラルメモリーＴ細胞（ＴＣＭ）、並びに／または組織常在型メモリーＴ細胞（ＴＲＭ）としても説明されている。ヘルパー細胞は、Ｔ細胞、並びにＢ細胞及びマクロファージを含む他の細胞の増殖及び分化を促進し、炎症性白血球を動員及び活性化するサイトカインを分泌する。制御性Ｔ細胞またはサプレッサーＴ細胞と呼ばれるＴ細胞の別の小群は、免疫系の活性化を積極的に抑制し、病理学的自己反応、即ち自己免疫疾患を予防する。
【０２２５】
免疫応答を誘発するための、本明細書記載の方法は、本明細書及び当該技術分野においてＢ細胞応答とも称される体液性応答を誘発し得るか、または、様々な種類のＴ細胞（即ちＴリンパ球）が関与する細胞性免疫反応を誘発し得る。体液性応答は、抗原（または免疫原）に特異的に結合する抗体の産生を含む。抗体は、形質細胞として知られている分化Ｂリンパ球により産生される。細胞性応答において、様々な種類のＴリンパ球は、多数の機構により抗原を取り除くように作用する。例えば、特異的抗原を認識可能なヘルパーＴ細胞は、サイトカイン等の可溶性メディエーターを放出することで応答し、免疫系の更なる細胞を動員して免疫応答に関与する。また、細胞障害性Ｔ細胞は抗原を特異的に認識することが可能であり、抗原を有する細胞または粒子に結合し、かつこれらを破壊または損傷することにより応答してよい。
【０２２６】
宿主または対象における免疫応答は、本明細書で記載され、当業者が精通している任意の数の、周知の免疫学的方法により測定されてよい。本明細書に記載されるように、免疫応答の存在及び程度を測定するための方法及び技術としては、例えば、蛍光共鳴エネルギー移動、蛍光偏光、時間分解蛍光共鳴エネルギー移動、シンチレーション近接アッセイ、レポーター遺伝子アッセイ、蛍光クエンチ酵素基質、色素体酵素基質及び電気化学発光、イムノアッセイ（例えば酵素結合免疫吸着法（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ、免疫ブロット法、免疫組織化学等）、表面プラズモン共鳴、レポーター遺伝子を使うもの等の細胞系アッセイ、並びに機能アッセイ（例えば、免疫機能及び免疫応答性を測定するアッセイ）が挙げられる。
【０２２７】
かかるアッセイとしては、可溶性抗体、可溶性メディエーター、例えばサイトカイン（例えばＩＦＮ−γ、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−６、ＩＬ−２３、ＴＮＦ−α及びＴＧＦ−β）、リンホカイン、ケモカイン、ホルモン、成長因子等、並びに他の可溶性小ペプチド、炭水化物、ヌクレオチド及び／または脂質メディエーターの存在及び量の、ｉｎ  ｖｉｖｏまたはｉｎ  ｖｉｔｒｏ測定が挙げられるが、これらに限定される必要はない。イムノアッセイには、免疫系細胞の、変化した機能的または構造的性質（例えば細胞増殖、変化した運動性、特別な活性（例えば特異的遺伝子の発現または細胞溶解性挙動）の誘発）を測定することによる、細胞活性化状態の変化の測定；細胞の成熟（例えば、刺激に応答した樹状細胞の成熟）；Ｔｈ１応答及びＴｈ２応答の関係の変化；表面抗原の発現プロファイルの変化、またはアポトーシスの開始（プログラム細胞死）を含む、免疫系細胞による細胞分化も含まれる。他の方法もまた、細胞表面マーカーの測定に利用可能であり、これにより、非限定的に、抗原特異的ＣＤ４及び／もしくはＣＤ８  Ｔ細胞、エフェクタ−メモリーＴ細胞（ＴＥＭ）、セントラルメモリーＴ細胞（ＴＣＭ）、並びに／または組織常在型メモリーＴ細胞（ＴＲＭ）を含む、免疫細胞の種々の集団を識別する。これら、及び類似の分析を実施する手順は、例えば、Ｌｅｆｋｏｖｉｔｓ（Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍａｎｕａｌ：Ｔｈｅ  Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｓｏｕｒｃｅｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，１９９８）に見出すことができる。Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ；Ｗｅｉｒ，Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ（１９８６）；Ｍｉｓｈｅｌｌ  ａｎｄ  Ｓｈｉｇｉｉ（ｅｄｓ．）Ｓｅｌｅｃｔｅｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｆｒｅｅｍａｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ（１９７９）；Ｇｒｅｅｎ  ａｎｄ  Ｒｅｅｄ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８１：１３０９（１９９８）（及びこれらで引用されている参考文献）もまた参照のこと。
【０２２８】
対象の免疫原に特異的に結合する抗体の存在及び／または量の測定は、ＥＬＩＳＡ、免疫沈降、免疫ブロット法、対向流免疫電気泳動、ラジオイムノアッセイ、ドットブロットアッセイ、阻害または競合アッセイ等を含むがこれらに限定されない、当該技術分野において日常的に実践される幾つかのイムノアッセイのいずれか１つを使用して測定してもよい（例えば、米国特許第４，３７６，１１０号及び同４，４８６，５３０号；Ｈａｒｌｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（１９８８）を参照）。イムノアッセイを実施して、免疫原に特異的に結合する抗体のクラス及びアイソタイプもまた測定してよい。免疫原に特異的に結合し、免疫付与した対象において抗体特異的免疫応答を検出するためのイムノアッセイにおいて対照として使用され得る抗体（ポリクロナール及び／もしくはモノクロナール、またはこれらの抗原結合断片）は通常、当業者に既知の様々な技術のいずれかにより調製されてよい。例えば、Ｈａｒｌｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（１９８８）；Ｐｅｔｅｒｓｏｎ，ＩＬＡＲ  Ｊ．４６：３１４−１９（２００５）；（Ｋｏｈｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５−９７（１９７６）；Ｋｏｈｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６：５１１−１９（１９７５）；Ｃｏｌｉｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１：２．５．１−２．６．７（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ  １９９１）；米国特許第４，９０２，６１４号，同４，５４３，４３９号及び同４，４１１，９９３号；Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ：Ａ  Ｎｅｗ  Ｄｉｍｅｎｓｉｏｎ  ｉｎ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｎａｌｙｓｅｓ，Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ，Ｋｅｎｎｅｔｔ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．）（１９８０）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ（ｅｄｓ．），Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ（１９８８）を参照；例えば、Ｂｒａｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｌａｎｔａ  Ｍｅｄ．７０：９８６−９２（２００４）；Ｐａｓｑｕａｌｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １０１：２５７−５９（２００４）もまた参照のこと。免疫原もしくはその免疫原性断片、または免疫原もしくはその免疫原性断片を有する細胞もしくは粒子を、ポリクロナール抗体またはモノクローナル抗体のいずれかを産生するための、動物の免疫付与に使用してよい。
【０２２９】
サイトカインの量は、例えばＥＬＩＳＡ、ＥＬＩＳＰＯＴ、細胞内サイトカイン染色、及びフローサイトメトリー、並びにこれらの組み合わせ（例えば細胞内サイトカイン染色及びフローサイトメトリー）を含む、本明細書で記載され、当該技術分野において実践されている方法に従い測定してよい。免疫応答の抗原特異的誘発及び刺激により生じる免疫細胞増殖及びクローン増殖は、脾臓細胞または末梢血からの細胞、アフェレーシスサンプル、リンパ節等のリンパ球を単離し、細胞を抗原により刺激し、例えばトリチウム標識チミジンの組込、または非放射性アッセイ（例えばＭＴＴアッセイ等）により、細胞表面マーカー、サイトカイン産生、細胞増殖及び／または細胞生存能を測定することにより測定してよい。本明細書で記載される免疫原の、Ｔｈ１免疫応答とＴｈ２免疫応答とのバランスにおける効果は、例えば、Ｔｈ１サイトカイン（例えばＩＦＮ−γ、ＩＬ−１２、ＩＬ−２、及びＴＮＦ−β）、及び２型サイトカイン（例えばＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、及びＩＬ−１３）の量を測定することにより調査してよい。
【０２３０】
抗原特異的Ｔ細胞応答の量、例えばＣＴＬ免疫応答の量及び／またはメモリーＣＤ４  Ｔ細胞応答の量は、本明細書で記載され、当該技術分野において日常的に実践されている多数の免疫学的方法のいずれか１つにより測定してよい。ＣＴＬ免疫応答の量は、本明細書で記載される組成物、ベクター、またはベクター粒子のいずれか１つの投与前に測定してよく、次いで、メモリーＣＤ４  Ｔ細胞を助ける組成物、ベクター、またはベクター粒子の１つ以上の投与後に、適切な時点及び／または位置でのＣＴＬ免疫応答の量との比較に用いてよい。ＣＴＬ活性を測定するための細胞毒性アッセイは、当該技術分野において日常的に実践される幾つかの技術及び方法のいずれか１つを用いて実施してよい（例えば、Ｈｅｎｋａｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，「Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ｔ−Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ」  ｉｎ  Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｐａｕｌ（ｅｄ．）（２００３  Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ）、１１２７〜５０ページ、及びこの中で引用される参考文献を参照）。
【０２３１】
例えば、免疫原をコードするポリヌクレオチドを含有するベクター粒子を含むプライム組成物、及びアジュバント組成物を含むプル組成物を本明細書記載の方法に従い投与した場合、特にアジュバントを含むプル組成物の投与部位において、ＣＴＬ免疫応答の量、またはＣＤ８＋  Ｔ細胞応答の量が向上する（改善される）。例えば、細胞内サイトカイン染色；ＥＬＩＳＰＯＴ；または両組成物の投与の１〜４週間後での、Ｌｕｍｉｎｅｘによる可溶性サイトカイン分泌の測定等の機能的Ｔ細胞アッセイにより測定した場合、５０％の改善が観察され得る。これに関し、改善は、一般に、本明細書に記載したアジュバントを含む組成物の投与を欠いているといった、適切な対照と比較したものである。
【０２３２】
特定の実施形態では、局所的浸潤抗原特異的Ｔ細胞の２〜５０倍の増加が、本明細書記載の方法の後で観察される。ある種の実施形態において、局所浸潤（例えば腫瘍浸潤）抗原特異的Ｔ細胞の２〜４０倍の増加、２〜３０倍の増加、２〜２０倍の増加、２〜１０倍の増加、３〜８倍の増加、４〜７倍の増加、または５〜６倍の増加が観察される。通常、局所浸潤抗原特異的Ｔ細胞の増加は、「プル」投与を欠いている局所浸潤抗原特異的Ｔ細胞の数と比較した、または適切な対照投与と比較したものである。通常、本明細書の方法は、アジュバントの投与を欠いている適切な対照と比較して、局所浸潤抗原特異的Ｔ細胞の、統計学的、生物学的、及び／または臨床的に有意な増加を提供する。
【０２３３】
本明細書で使用する場合、抗体が、その免疫原または免疫原性断片と検出可能なレベル、好ましくは、約１０４Ｍ−１以上、または約１０５Ｍ−１以上、または約１０６Ｍ−１以上、または約１０７Ｍ−１以上、または約１０８Ｍ−１以上の親和定数（Ｋａ）にて反応する場合、結合パートナーまたは抗体は、対照の免疫原に対して「免疫特異的」、「特異的」、または「特異的に結合する」と言われる。同種抗原に対する抗体の親和性は一般に解離定数（ＫＤ）で表され、抗体は、１０−４Ｍ以下、１０−５Ｍ以下、１０−６Ｍ以下、１０−７Ｍ以下、または１０−８Ｍ以下のＫＤで結合する場合、対象の免疫原に特異的に結合する。
【０２３４】
結合パートナーまたは抗体の親和性は、従来技術、例えば、Ｓｃａｔｃｈａｒｄら（Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ５１：６６０（１９４９））により説明されているもの、及び表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ；  ＢＩＡｃｏｒｅ（商標），Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）を使用して容易に測定することができる。表面プラズモン共鳴に関して、標的分子は固相に不動化され、フローセルに沿って移動する移動相中の結合パートナー（またはリガンド）に曝露される。不動化標的に結合しているリガンドが現れると、局部的な屈折率が変化し、ＳＰＲ角の変化をもたらす。これは、反射光の強度の変化を検出することにより、リアルタイムで監視することができる。ＳＰＲシグナルの変化率を分析し、結合反応の会合及び解離段階での見かけの速度定数を得ることができる。これらの値の比により、見かけの平衡定数（親和性）が得られる（例えば、Ｗｏｌｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５３：２５６０−２５６５（１９９３）を参照）。
【０２３５】
少なくとも１つの免疫原をコードするポリヌクレオチドを含む組み換え発現ベクターを含有するベクター粒子を含む組成物、及び本明細書記載の方法に従ったアジュバントを含む組成物を受けた対象における、免疫原に対する免疫応答の存在及び量を測定するために、対象から生体サンプルを入手してよい。本明細書で使用する場合、「生体サンプル」とは（血清またはプラズマが調製される）血液サンプル、アフェレーシスサンプル、生検材料、体液（例えば胃液（ｌｕｎｇ  ｌａｖａｇｅ）、腹水、粘膜洗浄液、滑液）、骨髄、リンパ節、外植組織、臓器培養物、または対象もしくは生物源からの、任意の他の組織もしくは細胞調製物であってよい。
【０２３６】
免疫応答を測定するための、本明細書で記載される全てのイムノアッセイ及び方法に関して、当業者は、これらの方法を実践する際に、どの対照が好適に含まれるかを容易に認識及び理解もするであろう。反応成分を相互作用させるのに十分な、反応成分の濃度、緩衝液、温度及び期間は、本明細書で記載され、かつ当業者が精通している方法に従い測定及び／または調整されることができる。
【０２３７】
使用方法及び組成物
抗原が同定され、免疫応答を誘発するための免疫原として選択されると、所望の免疫原をコードするポリヌクレオチド配列が同定及び選択される。次いで、ポリヌクレオチド配列を含む組み換え発現ベクター、またはベクターを含むベクター粒子を、少なくとも１つの薬学的に好適な賦形剤またはキャリアと共に、免疫原性組成物に配合する。本明細書に記載されるように、アジュバントは少なくとも１つの薬学的に好適な賦形剤またはキャリアと共に配合される。免疫原性組成物及びアジュバント組成物は共に、免疫原及びアジュバントにとって、並びに投与経路（または方法）に対して、それぞれ好適な方法で配合される。
【０２３８】
本明細書に記載されるように、少なくとも１つの免疫原または免疫原性組成物が、効果的な免疫応答を誘発するのに十分な量で、必要な対象に投与される。この免疫応答は、効果的な体液性応答及び／または効果的な（細胞障害性Ｔ細胞応答を誘発し得る）細胞性免疫反応であってよい。理論に束縛されるものではないが、本明細書に記載したように、対象に投与されるアジュバントまたはアジュバント組成物は、ＣＤ８  Ｔ細胞の（例えば、腫瘍部位もしくは膀胱等の投与局所部位）への動員、及び／または少なくとも１つの免疫原に対する免疫応答を向上もしくは改善するサイトカイン（例えばＣｘｃｌ９、Ｃｘｃｌ１０、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＭＣＰ−１、ＴＮＦα、ＩＦＮｃ及びＩＰ−１０）の発現を含む。
【０２３９】
免疫原性組成物、アジュバント組成物、組み換え発現ベクター及びベクター粒子はそれゆえ、病気もしくは疾患、例えば癌、特にウイルス誘発性癌の予防（即ち、病気もしくは疾患の発生もしくは再発の可能性の減少）方法、及び／またはこれらの治療方法において有用であり得る。免疫原は、特定の癌細胞の１つ以上により発現されると考えられているかまたは知られている、発癌性ウイルス抗原または腫瘍関連抗原である。
【０２４０】
本発明は、本明細書で記載されるプライム−プル投与レジメンにより癌を予防、緩和または治療する方法を提供し、本方法は、免疫原（例えば１つ以上の癌関連抗原）を発現する組み換え発現ベクターを含む第１のプライム組成物の投与、続いて、抗原の不存在下にて（しかし、所望により１つ以上の腫瘍関連抗原と共に）、癌または腫瘍部位に局所的（例えば腫瘍内、腫瘍周辺、リンパ節内、傍リンパ節内、粘膜、膀胱内）に投与される、ＴＬＲ４アゴニスト（例えばＧＬＡ）を含むプル組成物の投与を含む。
【０２４１】
ある種の実施形態において、本明細書記載の方法は、癌の予防、緩和または治療に有用であり、癌は、本明細書に記載したＴＬＲ４アゴニストを含むプル組成物の腫瘍内または周辺のいずれかに接近可能であり、直接注射が可能な１つ以上の腫瘍を含む。ある種の実施形態において、癌は充実性腫瘍を含む。幾つかの実施形態では、充実性腫瘍は癌、肉腫またはリンパ腫である。これに関し、リンパ腫は通常液性腫瘍と考えられるが、接近可能な「充実性」腫瘍は、リンパ節内で形成され得るため、本明細書で記載されるプライム−プルレジメンを使用して治療することができる。
【０２４２】
本発明は、本明細書で記載されるプライム−プル投与レジメンによりウイルス誘発性癌を予防、緩和または治療する方法を提供し、本方法は、免疫原（例えば、ウイルスが癌に関連する発癌性ウイルスである１つ以上のウイルス性抗原）を発現する組み換え発現ベクターを含む第１のプライム組成物を投与すること、続いて、ＴＬＲ４アゴニスト（例えばＧＬＡ）を含むプル組成物を、所望により１つ以上のウイルス性抗原及び／または１つ以上の腫瘍関連抗原と共に投与することを含み、これらは癌または腫瘍の部位に局所（例えば腫瘍内、粘膜、膀胱内）投与される。本明細書記載の方法で治療または緩和することができる代表的なウイルス誘発性癌としては、膀胱癌、メルケル細胞癌、カポジ肉腫、肝癌、グリア芽腫、バーキットリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、移植後リンパ増殖性疾患、鼻咽頭癌、子宮頚癌、頭頸癌、肝細胞癌、及び成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２４３】
ある種の実施形態において、本明細書で記載されるプライム−プル投与レジメンは、１つ以上の他の治療薬と組み合わせて投与される。したがって、ある種の実施形態においては、１つ以上の他の治療薬（例えば他の抗癌剤、または他の緩和もしくは補助療法）と組み合わせた、本開示のＧＬＡを含む組成物の投与もまた企図される。ある種の実施形態において、かかる治療薬は、本明細書に記載した特定の癌の標準的な治療として当該技術分野において許容され得る。企図される代表的な治療薬としては、サイトカイン、成長因子、ステロイド、ＮＳＡＩＤ、ＤＭＡＲＤ、抗炎症剤、免疫チェックポイント阻害剤、化学療法、放射線療法、または他の活性及び補助剤が挙げられる。
【０２４４】
一実施形態では、本明細書記載の方法は、１つ以上の化学療法剤を含む、１つ以上の癌治療薬と組み合わせて使用される。癌治療薬の例としては、チオテパ及びシクロホスファミド（ＣＹＴＯＸＡＮ（商標））等のアルキル化剤；ブスルファン、インプロスルファン及びピポスルファン等のアルキルスルホネート；ベンゾドーパ、カルボコン、メツレドーパ、及びウレドーパ等のアジリジン；アルトレートアミン（ａｌｔｒｅｔａｍｉｎｅ）、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホルアミド、トリエチレンチオホスホラミド及びトリメチロロメラミン（ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｏｌｏｍｅｌａｍｉｎｅ）を含むエチレンイミン及びメチラメラミン；クロラムブシル、クロルナファジン、コロホスファミド（ｃｈｏｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩、メルファラン、ノベンビチン、フェネステリン、プレドニマスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタード等のナイトロジェンマスタード；カルマスティン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、ラニムスチン等のニトロソウレア；アクラシノマイシン、アクチノマイシン、アントラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カリケアマイシン、カラビシン、カルミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、ドキソルビシン、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシン、マイコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン（ｐｏｔｆｉｒｏｍｙｃｉｎ）、ピューロマイシン、ケラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン等の抗生物質；メトトレキサート及び５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）等の代謝拮抗薬；デノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキセート等の葉酸類似体；フルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン等のプリン類似体；アンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジネン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクシウリジン、５−ＦＵ等のピリミジン類似体；カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン等のアンドロゲン；アミノグルテチミド、マイトテイン、トリロスタン等の抗副腎剤；フロリン酸（ｆｒｏｌｉｎｉｃ  ａｃｉｄ）等の葉酸補充剤；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；アムサクリン；ベストラブシル；ビサントレン；エダトレキサート；デフォファミン；デメコルチン；ジアジクオン；エフロルニチン；エリプチニウムアセテート；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダミン；ミトグアゾン；マイトキサントロン；モピダモール；ニトラクリン；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ポドフィリン酸；２−エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ（登録商標）；ラゾキサン；シゾフィラン���スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジクオン；２，２’，２’’−トリクロロトリエチルアミン；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン；アラビノシド（「Ａｒａ−Ｃ」）；シクロホスファミド；チオテパ；タキソイド、例えばパクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（登録商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，Ｎ．Ｊ．）及びドセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）、Ｒｈｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎｃ  Ｒｏｒｅｒ，Ａｎｔｏｎｙ，Ｆｒａｎｃｅ）；クロラムブシル；ゲムシタビン；６−チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；シスプラチン及びカルボプラチン等の白金類似体；ビンブラスチン；トラスツズマブ、ドセタキセル、白金；エトポシド（ＶＰ−１６）；イホスファミド；マイトマイシンＣ；マイトキサントロン；ビンクリスチン；ビノレルビン；ナベルビン；ノバントロン；テニポシド；ダウノマイシン；アミノプテリン；ゼローダ；イバンドロネート；ＣＰＴ−１１；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ  ２０００；ジフルオロメチルオミチン（ＤＭＦＯ）；レチノイン酸誘導体、例えばＴａｒｇｒｅｔｉｎ（商標）（ベキサロテン）、Ｐａｎｒｅｔｉｎ（商標）（アリトレチノイン）；ＯＮＴＡＫ（商標）（デニロイキンディフィティトクス（ｄｅｎｉｌｅｕｋｉｎ  ｄｉｆｔｉｔｏｘ））；エスペラミシン；カペシタビン；並びに上述のいずれかの製薬上許容できる塩、酸または誘導体が挙げられる。本定義に含まれるものとしては、腫瘍でのホルモン作用を調節または阻害するように作用する抗ホルモン剤、例えば抗エストロゲン剤（例えばタモキシフェン、ラロキシフェン、アロマターゼ阻害４（５）イミダゾール、４−ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、ＬＹ１１７０１８、オナプリストン及びトレミフェン（フェアストン））；並びに抗アンドロゲン剤（例えばフルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、ロイプロリド及びゴセレリン）；並びに上述のいずれかの製薬上許容できる塩、酸または誘導体もある。更なる癌治療薬としては、ソラフェニブ、並びに他のキナーゼ阻害剤、例えばアファチニブ、アキシチニブ、ベバシズマブ、セツキシマブ、クリゾチニブ、ダサチニブ、エルロチニブ、フォスタマチニブ（ｆｏｓｔａｍａｔｉｎｉｂ）、ゲフィチニブ、イマチニブ、ラパチニブ、レンバチニブ、ムブリチニブ（ｍｕｂｒｉｔｉｎｉｂ）、ニロチニブ、パニツムマブ、パゾパニブ、ペガプタニブ（ｐｅｇａｐｔａｎｉｂ）、ラニビズマブ、ルキソリチニブ、トラスツズマブ、バンデタニブ、ベムラフェニブ、及びスニチニブ；シロリムス（ラパマイシン）、エベロリムス並びに他のｍＴＯＲ阻害剤が挙げられる。
【０２４５】
別の実施形態において、本明細書の方法を、別の免疫刺激剤と組み合わせて投与する。かかる免疫刺激剤としては、Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニン−Ｄ−イソグルタミン（ＭＤＰ）、グルカン、ＩＬ−１２、ＧＭ−ＣＳＦ、インターフェロン−γ及び抗ＣＤ４０抗体、または、共刺激経路に結合し、これを活性化する他の抗体（例えばＣＤ２８、ＩＣＯＳ、ＯＸ４０、ＣＤ２７等）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２４６】
一実施形態では、本明細書の方法を、１つ以上の免疫チェックポイント阻害剤と組み合わせて使用する。免疫チェックポイントとは、自己寛容を維持し、免疫応答の持続及び規模を制御するのに重要な、免疫系の種々の阻害経路を意味する。腫瘍は、ある特定の免疫チェックポイント経路を、特に腫瘍抗原に特異的なＴ細胞に対する免疫耐性の主要なメカニズムとして使用する（例えば、Ｐａｒｄｏｌｌ，２０１２  Ｎａｔｕｒｅ  １２：２５２；Ｃｈｅｎ  ａｎｄ  Ｍｅｌｌｍａｎ  ２０１３  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ３９：１を参照）。本開示は、抗原を有しないＧＬＡ組成物と組み合わせて投与可能な免疫チェックポイント阻害剤を提供する。かかる併用療法は協力して、抗癌免疫応答を高めるように作用する。ある種のウイルスもまた、免疫チェックポイント経路を取り込む、発展したメカニズムを有する。したがって、ある種の実施形態において、かかる併用療法を使用して、抗ウイルス免疫応答を高めてよい。
【０２４７】
免疫チェックポイント阻害剤としては、統計学的、臨床的、または生物学的に適切な方法で、免疫系の阻害経路をブロックまたは阻害する任意の作用物質が挙げられる。かかる阻害剤としては、低分子阻害剤を挙げてもよいし、または、免疫チェックポイント受容体に結合してこれをブロックもしくは阻害する、抗体もしくはその抗原結合断片、または、免疫チェックポイント受容体リガンドに結合してこれをブロックもしくは阻害する抗体を含んでよい。ブロッキングまたは阻害のために標的化され得る、例示的な免疫チェックポイント分子としては、ＣＴＬＡ−４、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、４−１ＢＢＬ（ＣＤ１３７Ｌ）、ＰＤＬ１、ＰＤＬ２、ＰＤ１、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＨＶＥＭ、ＴＩＭ３、ＧＡＬ９、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、２Ｂ４（ＣＤ２ファミリーの分子に属し、ＮＫ、γδ、及びメモリーＣＤ８＋（αβ）Ｔ細胞上全てに発現する）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５とも称される）、並びにＣＧＥＮ−１５０４９が挙げられるが、これらに限定されない。免疫チェックポイント阻害剤としては、抗体、もしくはその抗原結合断片、または、ＣＴＬＡ−４、ＰＤＬ１、ＰＤＬ２、ＰＤ１、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＨＶＥＭ、ＴＩＭ３、ＧＡＬ９、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、２Ｂ４、ＣＤ１６０及びＣＧＥＮ−１５０４９の１つ以上に結合し、かつこれらの活性をブロックもしくは阻害する、他の結合タンパク質が挙げられる。例示的な免疫チェックポイント阻害剤としては、トレメリムマブ（ＣＴＬＡ−４遮断抗体）、抗ＯＸ４０、ＰＤ−Ｌ１モノクローナル抗体（抗Ｂ７−Ｈ１；ＭＥＤＩ４７３６）、ＭＫ−３４７５（ＰＤ−１遮断剤）、ニボルマブ（抗ＰＤ１抗体）、ＣＴ−０１１（抗ＰＤ１抗体）、ＢＹ５５モノクローナル抗体、ＡＭＰ２２４（抗ＰＤＬ１抗体）、ＢＭＳ−９３６５５９（抗ＰＤＬ１抗体）、ＭＰＬＤＬ３２８０Ａ（抗ＰＤＬ１抗体）、ＭＳＢ００１０７１８Ｃ（抗ＰＤＬ１抗体）、及びヤーボイ／イピリムマブ（抗ＣＴＬＡ−４チェックポイント阻害剤）が挙げられる。
【０２４８】
更なる実施形態において、本明細書のプライム−プル投与を、他のＴＬＲ４アゴニスト、またはＴＬＲ８アゴニスト、またはＴＬＲ９アゴニストと組み合わせて使用する。かかるアゴニストは、ペプチドグリカン、ｐｏｌｙＩ：Ｃ、ＣｐＧ、３Ｍ００３、フラジェリン、並びに真核細胞リボソーム伸長及び開始因子４ａのリーシュマニア類似体（ＬｅＩＦ）から選択してよい。
【０２４９】
更なる実施形態において、本明細書のプライム−プル投与レジメンを、他の１つ以上のサイトカインと組み合わせて使用する。「サイトカイン」とは、ある細胞集団より放出される、別の細胞上で細胞内メディエーターとして作用するタンパク質に関する総称を意味する。かかるサイトカインの例としては、リンホカイン、モノカイン、及び従来のポリペプチドホルモンがある。サイトカインに含まれるものとしては、ヒト成長ホルモン、Ｎ−メチオニルヒト成長ホルモン及びウシ成長ホルモン等の成長ホルモン；副甲状腺ホルモン；チロキシン；インスリン；プロインスリン；リラキシン；プロリラキシン；卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）、及び黄体形成ホルモン（ＬＨ）等の糖タンパク質ホルモン；肝細胞増殖因子；線維芽細胞増殖因子；プロラクチン；胎盤性ラクトゲン；腫瘍壊死因子α及びβ；ミュラー管抑制因子；マウス性腺刺激ホルモン関連ペプチド；インヒビン；アクチビン；血管内皮成長因子；インテグリン；トロンボポエチン（ＴＰＯ）；ＮＧＦ−β等の神経成長因子；血小板増殖因子；ＴＧＦ−α及びＴＧＦ−β等のトランスホーミング増殖因子（ＴＧＦ）；インスリン様成長因子Ｉ及びＩＩ；エリスロポエチン（ＥＰＯ）；骨誘導因子；インターフェロンα、β及びγ等のインターフェロン；マクロファージＣＳＦ（Ｍ−ＣＳＦ）等のコロニー刺激因子（ＣＳＦ）；顆粒球マクロファージＣＳＦ（ＧＭ−ＣＳＦ）；並びに顆粒球ＣＳＦ（Ｇ−ＣＳＦ）；インターロイキン（ＩＬ）、例えばＩＬ−１、ＩＬ−１α、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、腫瘍壊死因子（例えばＴＮＦ−αまたはＴＮＦ−β）；並びに、ＬＩＦ及びｋｉｔリガンド（ＫＬ）を含む他のポリペプチド因子がある。本明細書で使用する場合、サイトカインという用語は、天然源または組み換え細胞培養液からのタンパク質、及び天然配列サイトカインの生物学的に活性な等価物を含む。
【０２５０】
ある種の実施形態において、本明細書のプライム−プル投与法を、エンドソームの酸性化を防ぎ、腫瘍細胞により誘発される自食作用を阻害し、細胞増殖の加速、及び栄養分の不足を切り抜けさせるリソソーム作用剤であるクロロキンと組み合わせて使用する。更に一般的には、本明細書に記載したＧＬＡを含む組成物を、クロロキン、ミソニダゾール、メトロニダゾール、及び低酸素細胞毒素（例えばチラパザミン）等の自食作用阻害剤、放射線増感剤または化学増感剤として作用する治療薬と組み合わせて投与してよい。これに関し、クロロキン、または他の放射線もしくは化学増感剤、もしくは自食作用阻害剤のＧＬＡとのかかる組み合わせを、他の癌治療薬または放射線療法と更に組み合わせて使用することができる。
【０２５１】
別の実施形態において、本明細書のプライム−プル投与法を、「免疫原性細胞死」と呼ばれる、免疫応答の付随活性化による腫瘍細胞の殺傷をもたらすことが知られている、シクロホスファミド、ドキソルビシン、オキサリプラチン及びマイトキサントロン等の他の小分子剤と組み合わせて使用する。更に、パツピロン（ｐａｔｕｐｉｌｏｎｅ）（エポチロンＢ）、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）標的化モノクローナル抗体７Ａ７．２７、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤（例えばボリノスタット、ロミデプシン、パノビノスタット、ベリノスタット、及びエンチノスタット）、ｎ３−ポリ不飽和脂肪酸ドコサヘキサエン酸、更にはプロテアソーム阻害剤（例えばボルテゾミブ）、シコニン（Ｌｉｔｈｏｓｐｅｒｍｕｍ  ｅｒｙｔｈｒｏｒｈｉｚｏｎの根の主要成分）、及び腫瘍崩壊ウイルス（例えばＴＶｅｃ：（タリモゲンタヘルパレプベツ：ｔａｌｉｍｏｇｅｎｅ  ｌａｈｅｒｐａｒｅｐｖｅｃ））等の、腫瘍細胞の免疫原性を高めることが知られている作用物質との組み合わせ。他の実施形態では、本明細書に記載したＧＬＡを含む組成物は、局所的または全身に投与してよい、ＤＮＡメチルトランスフェラーゼ阻害剤（例えばデシタビン、５−アザ−２’−デオキシシチジン）等のエピジェネティック治療薬と組み合わせて投与してよい。
【０２５２】
別の実施形態において、本明細書のプライム−プル投与法を、ＤＣによる腫瘍のＡＤＣＣ取り込みを増加させる他の１つ以上の抗体と組み合わせて使用する。したがって、本発明は、ＧＬＡを含む組成物を、抗原提示細胞、及びその後の、腫瘍抗原の免疫系への提示による、腫瘍細胞の摂食を誘発するかまたは向上させる任意の分子、またはその断片と組み合わせることを企図する。これらの分子は、受容体（Ｆｃまたはマンノース受容体）結合を誘発し、例えば抗体、抗体様分子、多特異的多価分子及びポリマー等を抗原提示細胞に輸送する作用物質を含む。かかる分子は、ＧＬＡを含む組成物と共に腫瘍内投与されるか、異なる経路で投与されるかのいずれかであってよい。例えば、本明細書に記載した、ＧＬＡを含む組成物は、リツキシマブ、セツキシマブ、トラスツズマブ、キャンパス、パニツムマブ、オファツムマブ、ブレンツキシマブ、ペルツズマブ、アドトラスツズマブエムタンシン、オビヌツズマブ、抗ＨＥＲ１、ＨＥＲ２、もしくはＨＥＲ３抗体（例えばＭＥＨＤ７９４５Ａ；ＭＭ−１１１；ＭＭ−１５１；ＭＭ−１２１；ＡＭＧ８８８）、抗ＥＧＦＲ抗体（例えばニモツズマブ、ＡＢＴ−８０６）、または他の同様の抗体の腫瘍内注射と共に腫瘍内投与されてよい。内部移行を誘発可能なＦｃ受容体及び他の受容体と関与可能な任意の多価足場（例えば、例えば、受容体を関与させることができるＦｃ断片またはポリマーに結合した標的を結合可能なペプチド及び／またはタンパク質）を、本明細書で記載される併用療法で使用してよい。
【０２５３】
ある種の実施形態において、本明細書のプライム−プル投与法を、（例えば阻害経路をブロックすることにより）共刺激シグナルを促進する他の抗体（例えば抗ＣＴＬＡ−４）、または共刺激経路を活性化する他の抗体（例えば抗ＣＤ４０、抗ＣＤ２８、抗ＩＣＯＳ、抗ＯＸ４０、抗ＣＤ２７抗体等）と組み合わせて使用する。
【０２５４】
本明細書のプライム−プル投与法は、単独、または他の既知の癌治療、例えば放射線治療、免疫チェックポイント阻害剤、化学療法または他の癌治療剤、組織移植、免疫療法、ホルモン療法、光線力学的治療と組み合わせて使用してよい。組成物は、抗生物質と組み合わせて投与されてもよい。
【０２５５】
医学当業者により理解されるように、用語「治療する」及び「治療」は、対象（即ち患者）の病気、疾患または状態の医学的管理を意味する（例えばＳｔｅｄｍａｎ’ｓ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙを参照）。一般に、適切な用量及び治療レジメンは、治療的及び／または予防的利点をもたらすのに十分な量の免疫原及びアジュバントを提供する。治療的及び／または予防的利点としては、例えば、治療的処置及び予防的（ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ）または予防的（ｐｒｅｖｅｎｔａｔｉｖｅ）手段の両方での、改善した臨床的アウトカムが挙げられ、ここでは、対象は望ましくない生理学的変化または疾患を予防もしくは減速もしくは遅延（減少）させるか、またはかかる病気もしくは疾患の拡大もしくは重症度を予防もしくは減速もしくは遅延（減少）させようとしている。対象を治療することにより得られる利益または所望の臨床結果としては、治療される病気もしくは疾患から生じる、もしくはこれらに関連する症状の軽減、減少、もしくは緩和；症状の発生の減少；生活の質の改善；病気を有しない状態がより長くなること（即ち、病気の診断に基づく、対象が症状を示す可能性もしくは傾向の低下）；病気の規模の縮小；病気の安定（即ち悪化しない）状態；病気の進行の遅延または減速；病状の緩和もしくは軽減；及び検出可能もしくは不可能な（部分的もしくは全体的）寛解；並びに／または全体的な生残が挙げられるが、これらに限定されない。「治療」は、対象が治療を受けない場合の生存予想と比較しての、生存の延長を意味することもできる。治療が必要な対象としては、病気または疾患を既に有するもの、及び病気もしくは疾患を有する傾向にあるか、またはこれらの進行のリスクを有する対象が挙げられる。予防的治療が必要な対象としては、病状または疾患を予防（即ち、病気または疾患の発生または再発の可能性を低下）されなければならない対象が挙げられる。
【０２５６】
組み換え発現ベクター及びベクター粒子は、薬学的または生理学的に許容できる、または好適な賦形剤またはキャリアで対象に投与されてよい。製薬上許容できる賦形剤は、本明細書で更に詳細に説明され、ヒトまたは非ヒト哺乳類対象を含む非ヒト対象への投与に好適である、生物学的に適合性のあるビヒクル、例えば生理食塩水である。治療的有効量は、治療したヒトまたは非ヒト動物において、医学的に望ましい結果をもたらす（即ち、十分な量の免疫原が発現して、統計学的、生物学的、及び／または有意な方法で、免疫源に対して特異的な免疫応答（体液及び／または細胞障害性Ｔ細胞応答を含む細胞性応答）を誘発または向上させる）ことが可能なポリヌクレオチドの量を提供する。医学分野では周知のように、任意の一患者への用量は、患者のサイズ、身体表面積、年齢、投与される特定の化合物、性別、時間及び投与経路、総体的な健康、並びに、同時に投与される他の作用物質を含む多くの因子に依存する。用量は変化するが、組み換え発現ベクターを含むベクター粒子を投与するための好ましい用量は、ベクターポリヌクレオチド分子の約１０６〜１０１２コピーをもたらすのに十分なものである。
【０２５７】
本明細書で記載される免疫原性及びアジュバント組成物を含む医薬組成物を、医学当業者により決定される、病気を治療（または予防）するのに適切な方法で投与してよい。好適な用量、及び好適な期間、及び投与の頻度は、患者の状態、患者の病気の種類及び重症度、有効成分の特定の形態、並びに投与方法等の因子により決定される。一般に、適切な用量及び治療レジメンは、治療及び／または予防効果（臨床的アウトカムの改善、例えばより頻繁な完全寛解もしくは部分的寛解、または病気を有しない、及び／もしくは全体的な生残が長くなること、または症状の重症度の減少を含む、本明細書に記載したもの等）をもたらすのに十分な量の組成物（複数可）を提供する。予防的使用に関して、用量は、病気または疾患に関連する病気を予防、開始を遅延、またはその重症度を低下させるの十分でなければならない。
【０２５８】
一般に、用量内に存在する、または用量内に存在するコードポリヌクレオチドによりｉｎ  ｓｉｔｕで作製される、本明細書に記載した融合ポリペプチドを含む免疫原の量は、宿主１ｋｇあたり約０．０１μｇ〜約１０００μｇの範囲である。効果的治療を提供するのに十分な、最小限の用量を用いることが通常好ましい。患者は通常、治療または予防される状態に対して好適なアッセイを使用して、治療または予防効果を監視されるが、このアッセイは当業者によく知られており、本明細書で記載されている。液体形態で投与される場合、好適な用量サイズは患者のサイズにより異なるが、通常、１０〜６０ｋｇの対象に対して、約１ｍＬ〜約５００ｍＬ（１ｋｇあたり約０．０１μｇ〜約１０００μｇを含む）の範囲である。最適の用量は通常、実験モデル及び／または臨床試験を用いて測定してよい。最適用量は、対象の体格、体重、または血液体積に依存し得る。本明細書に記載されるように、適切な用量は、患者（例えばヒト）の条件、即ち病気の段階、総体的な健康状態、並びに年齢、性別、及び体重、並びに医学当業者によく知られている他の因子に依存してもよい。
【０２５９】
医薬組成物は、例えば、皮下、経皮、静脈内、筋肉内、胸骨内、静脈洞内、管内、または尿道内注射または注入を含む、局所、経口、経腸、鼻（即ち鼻腔内）、吸入、髄腔内、直腸、膣内、眼内、結膜下、舌下、皮内、リンパ節内、腫瘍内、経皮、または非経口的投与を含む、任意の適切な投与方法のために配合されてよい。投与方法は、本明細書で更に詳細に記載されている。
【０２６０】
非経口的投与に関して、キャリアは水、生理食塩水、アルコール、脂肪、ワックス、または緩衝液を含むのが好ましい。経口投与の場合、該賦形剤、または固体賦形剤、またはキャリアのいずれか、例えば、マンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、滑石、セルロース、カオリン、グリセリン、デンプンデキストリン、アルギン酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロース、エチルセルロース、グルコース、スクロース、及び／または炭酸マグネシウムを使用してよい。
【０２６１】
免疫原性組成物、組み換えベクター構築物またはベクター粒子を含む及び組成物は、有効量の免疫原を提供する任意の経路により送達するために配合してよい。かかる投与方法は、送達または注射による経口投与を含み、液体の形態であってもよい。液体医薬組成物としては例えば、以下の１つ以上を挙げてよい：滅菌希釈剤、例えば注射用水、食塩水（好ましくは生理食塩水）、リンゲル溶液、等張性塩化ナトリウム、溶液もしくは懸濁媒として機能し得る不揮発性油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール、または他の溶媒；抗菌剤；酸化防止剤；キレート剤；張度調節用緩衝剤及び作用物質、例えば塩化ナトリウムまたはデキストロース。非経口用調製物は、ガラスまたはプラスチック製のアンプル、使い捨てシリンジ、または複数投与バイアル瓶内に封入することができる。生理食塩水を使用するのが好ましく、注射可能な医薬組成物は、滅菌されているのが好ましい。
【０２６２】
本明細書で記載される組み換え発現ベクター等の核酸分子を含む医薬組成物に関して、核酸分子は当業者に既知の種々の送達系のいずれかの中に存在してよく、核酸、並びに、例えば本明細書において提供するベクター粒子及び組み換え発現構築物といった、細菌、ウイルス及び哺乳類発現系を含む。ポリヌクレオチド（例えばＤＮＡ）をかかる発現系に導入する技術は、当業者によく知られている。他のある種の実施形態においては、ＤＮＡは、例えばＵｌｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５９：１７４５−４９，１９９３に記載され、Ｃｏｈｅｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５９：１６９１−１６９２，１９９３に確認されるように、「裸」であってもよい。裸のＤＮＡの取り込みは、生分解性ビーズをＤＮＡ上にコーディングすることにより増加させることができ、これにより細胞内にＤＮＡが効率的に輸送される。
【０２６３】
核酸分子は、当該技術分野で説明されている幾つかの方法のいずれか１つに従い、細胞内に送達することができる（例えば、Ａｋｈｔａｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏ．２：１３９（１９９２）；  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ  ｆｏｒ  Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，ｅｄ．Ａｋｈｔａｒ，１９９５，Ｍａｕｒｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｍｅｍｂｒ．Ｂｉｏｌ．１６：１２９−４０（１９９９）；Ｈｏｆｌａｎｄ  ａｎｄ  Ｈｕａｎｇ，Ｈａｎｄｂ．Ｅｘｐ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１３７：１６５−９２（１９９９）；Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，ＡＣＳ  Ｓｙｍｐ．Ｓｅｒ．７５２：１８４−９２（２０００）；米国特許第６，３９５，７１３号；国際特許出願公開第ＷＯ９４／０２５９５号；Ｓｅｌｂｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ８７：８５３−５９（２０００）；Ｓｅｌｂｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｕｍｏｕｒ  Ｂｉｏｌ．２３：１０３−１２（２００２）；米国特許出願第２００１／０００７６６６号、及び同２００３／０７７８２９号を参照）。当業者に既知のかかる送達法としては、リポソーム内での封入、イオントフォレシス、または例えば生分解性ポリマー；ヒドロゲル；シクロデキストリン等の他のビヒクルへの導入（例えば、Ｇｏｎｚａｌｅｚ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ．  Ｃｈｅｍ．  １０：１０６８−７４  （１９９９）；  Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，国際出願公開第ＷＯ０３／４７５１８号及び同ＷＯ０３／４６１８５号）；ポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）（ＰＬＧＡ）及びＰＬＣＡ微粒子（ペプチド及びポリペプチド、並びに他の物質の送達にも有用である）（例えば、米国特許第６，４４７，７９６号；米国特許出願公開第２００２／１３０４３０号を参照）；生分解性ナノカプセル、並びに生体接着性微粒子、またはタンパク質ベクター（国際特許出願公開第００／５３７２２号）を参照）が挙げられるが、これらに限定されない。別の実施形態において、核酸分子は、ポリエチレンイミン及びその誘導体、例えば、ポリエチレンイミン−ポリエチレングリコール−Ｎ−アセチルガラクトースアミン（ＰＥＩ−ＰＥＧ−ＧＡＬ）、またはポリエチレンイミン−ポリエチレングリコール−トリ−Ｎ−アセチルガラクトースアミン（ＰＥＩ−ＰＥＧ−ｔｒｉＧＡＬ）誘導体と共に配合されるか、または複合体を形成することもできる（例えば米国特許出願公開第２００３／００７７８２９号も参照のこと）。
【０２６４】
本明細書記載の方法の特定の実施形態において、対象はヒトまたは非ヒト動物である。本明細書で記載される治療を必要とする対象は、本明細書で記載される病気、疾患もしくは状態の症状または続発症を示してもよく、または病気、疾患もしくは状態の進行のリスクを有していてもよい。治療可能な非ヒト動物としては、哺乳類、例えば非ヒト霊長類（例えばサル、チンパンジー、ゴリラ等）、齧歯類（例えばラット、マウス、アレチネズミ、ハムスター、フェレット、ウサギ）、ウサギ目の動物、ブタ（例えばブタ、ミニブタ）、ウマ、イヌ科動物、ネコ科動物、ウシ、並びに他の家畜及び動物園動物が挙げられる。
【０２６５】
本明細書にて提供される組成物は種々の形態、例えば固体、液体、粉末、水性、または凍結乾燥形態とすることができる。ウイルスベクター粒子及び細菌ベクター粒子、免疫原性組成物、並びに組み換え発現ベクターを含むベクター粒子を投与するための、好適な医薬品賦形剤及びキャリアの例は、当技術分野において既知である。かかる賦形剤、キャリア、及び／または添加剤は従来の方法により配合可能であり、好適な用量で対象に投与することができる。本明細書で記載される組成物内に含まれ得る、脂質、ヌクレアーゼ阻害剤、ポリマー、及びキレート剤等の安定化剤は、組成物及び組成物の成分の、体内での分解からの保護を補助することができる。
【０２６６】
本明細書において提供するウイルスベクター粒子及び細菌ベクター粒子、免疫原性組成物、アジュバント組成物、並びに組み換え発現ベクターを含むベクター粒子は、キットとしてパッケージングされることができる。キットは所望により、使用のための取扱説明書、デバイス、及び追加の試薬、並びに構成部品（例えばチューブ、容器（例えば方法を実施するためのバイアル瓶及びシリンジ））といった、１つ以上の構成要素を含むことができる。代表的なキットは、所望により、使用のための取扱説明書、対象内でベクター粒子、組み換え発現ベクター、免疫原を検出するためのデバイスもしくは試薬、及び、対象に組成物を投与するための装置を含むことができる。
【０２６７】
免疫原をコードするポリヌクレオチドを含むキットも、本明細書で検討される。かかるキットは、ウイルス含有成分をコードする少なくとも１つのプラスミド、及びシンドビスウイルスＥ２糖タンパク質変異体をコードするベクターを含んでもよい。幾つかのキットは、ウイルス含有成分をコードする少なくとも１つのプラスミド、シンドビスウイルスＥ２糖タンパク質変異体をコードするベクター、及び少なくとも１つのＤＣ成熟因子をコードするベクターを含有する。
【０２６８】
対象の配列をコードする（通常は抗原または免疫源をコードする）ウイルスベクター、及び所望により、ＤＣ成熟因子をコードするポリヌクレオチド配列を含むキットもまた、本明細書で企図される。幾つかのキットでは、キットは、ウイルス含有成分をコードする少なくとも１つのプラスミド、及びシンドビスウイルスＥ２糖タンパク質変異体をコードするベクターを含む。
【０２６９】
キットはまた、取扱説明書を含んでもよい。取扱説明書は通常、組成物を投与するための、対象の適切な状態、適切な投与量、及び適切な投与方法の決定法を含む、投与方法について記載している。取扱説明書はまた、治療期間における、対象を監視するための手引きを含むことができる。
【０２７０】
本明細書において提供するキットは、組み換え発現ベクターを含むベクター粒子を含む免疫原性組成物、及び／またはアジュバント組成物を対象に投与するための装置もまた含むことができる。薬剤またはワクチンを投与するための、当該技術分野において公知の種々の装置のいずれかを、本明細書において提供するキットに含めることができる。代表的なデバイスとしては、皮下注射針、静脈内注射針、カテーテル、無針注射デバイス、吸入器、及び液体散布器（例えば点眼器）が挙げられるが、これらに限定されない。通常、組成物を投与するための装置は、キットの有効成分と適合性である。例えば、高圧注射デバイス等の無針注射デバイスを、高圧注射により損傷を受けないベクター粒子、ポリヌクレオチド及びポリペプチドと共にキットに含めることができるが、通常、高圧注射により損傷を受け得るベクター粒子、ポリヌクレオチド及びポリペプチドを含むキットには含まれない。
【０２７１】
他の実施形態及び使用法は、本開示の見地から当業者に明らかとなるであろう。以下の実施例は種々の実施形態を単に例示するものとして提供され、本発明を制限するようにいかなる方法でも解釈してはならない。
【実施例】
【０２７２】
実施例１：ＣＤ８  Ｔ細胞の膀胱への動員
【０２７３】
マウスで研究を行い、皮下免疫付与により産生されたＣＤ８  Ｔ細胞が膀胱に動員されることが可能であることを示す。ＢＡＬＢ／Ｃマウスの群（適切な対照群を含む：群あたり５匹のマウス）を、最大３つの時点（例えば０週、２週、４週）で、本明細書に記載した組み換えレンチベクターを異なる用量（１０Ｅ８、１０Ｅ９、１０Ｅ１０）で尻尾の付け根から免疫付与する。最後の免疫付与の１週間後、確立した手順に従い、５〜８×１０Ｅ７  ＣＦＵ／ｍｇを含むＢＣＧ（ＴＩＣＥ株）１ｍｇ／ｍｌを用いて、１週間毎に６回の点滴をするか、または２％の安定したエマルションとして配合したＧＬＡ５μｇを１週間に２回のいずれかでマウスに点滴する。最後のＢＣＧ／ＧＬＡ点滴の１週間後、マウスを犠牲にし、膀胱を取り除く。確立した手順に従い、各膀胱から、組織学部位を調製して固定し、免疫細胞（例えばＮＫ細胞、樹状細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞等）を検出及び分類するための好適な抗体で染色する。加えて、確立した手順に従い、各膀胱の一部をコラゲナーゼ分解にさらし、磁気ビーズを用いてＴ細胞を単離し、ＮＹ−ＥＳＯ−１エピトープ特異的なＣＤ８  Ｔ細胞についてペンタマーで染色してフローサイトメトリーで分析する。
【０２７４】
マウス腫瘍細胞株ＭＢ−４９に基づく、確立した同所性マウス膀胱癌モデルを使用し、治療の免疫学的及び臨床的有効性を測定する（Ｄｕｒｅｋ  ２００２；ａｎｄ  Ｋａｎｇ，Ｍ．Ｒ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｓ．Ｅｘｐ．（６５），ｅ４２０７，（２０１２））。ＮＹ−ＥＳＯ−１をコードする、本明細書に記載した組み換えレンチベクターの導入を用いて、ＮＹ−ＥＳＯ−１を発現するＭＢ−４９の組み換えクローンを作製し、膀胱への植え込みの後で腫瘍成長速度を試験する。確立した腫瘍を有するマウスを、（１）で概説した治療に通し、腫瘍への臨床効果を、ｉｎ  ｖｉｖｏでの適切な方法（例えば超音波イメージング）、マウスの犠牲後の、所定の時点での形態測定、及び腫瘍浸潤リンパ球の分析により監視する（Ｗａｔｋｉｎｓ，Ｓ．Ｋ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｓ．Ｅｘｐ．（６４），ｅ３９５２，（２０１２））。
【０２７５】
実施例２：腫瘍内ＧＬＡ投与後のレンチウイルスベクターのプライミングは、抗原特異的ＣＤ８  Ｔ細胞を腫瘍に効果的に「プル」する
【０２７６】
本実施例は、ベクターワクチンでの免疫付与後にＧＬＡを腫瘍内投与することは、ベクター誘発性抗原特異的ＣＤ８  Ｔ細胞を腫瘍に「プル」することを示す。
【０２７７】
本研究では、０日目に、Ｃ５７ＢＬ／６マウス（群あたり５匹のマウス）を１×１０６個のＢ１６Ｆ１０−ＯＶＡ細胞を足蹠に皮下播種した。１０日目に、尾部の付け根から２×１０１０個のＶＰ０２／ＯＶＡ（または対照ベクター、ＶＰ０２／ＧＦＰ）のゲノムを投与してマウスを免疫付与した。２１日目に、マウスに５．０μｇのＧＬＡ／２％  ＳＥを腫瘍内投与した。腫瘍を回収し、フローサイトメトリーにより容易に、ＧＬＡ投与前（Ｄ＋０）、投与１日後（Ｄ＋１）、または投与２日後（Ｄ＋２）の腫瘍浸潤リンパ球を分析した。
【０２７８】
予想通り、対照ベクターＶＰ０２／ＧＦＰで免疫付与したマウスの腫瘍では、ＯＶＡ特異的ＣＤ８  Ｔ細胞は殆ど見られなかった（図１Ａ、上パネル）。０日目には、平均１．９％のＯＶＡ特異的ＣＤ８  Ｔ細胞がＶＰ０２／ＯＶＡで免疫付与したマウスの腫瘍内で発見されたが、このことは、ベクターによりプライミングされた幾つかのＣＤ８陽性抗原特異的細胞が腫瘍に浸潤したことを示す。ＧＬＡ投与の１日後及び２日後には、ＧＬＡ投与前の１．９％と比較して、それぞれ平均２．７％及び３．４％のＯＶＡ特異的ＣＤ８  Ｔ細胞が、ＶＰ０２／ＯＶＡで免疫付与したマウスの腫瘍で発見された（図１Ｂ）。このことは、ＧＬＡの腫瘍内投与が、ＣＤ８抗原特異的Ｔ細胞を腫瘍内へのプルをもたらしたことを示している。ＧＬＡ投与の４８時間以内に、未治療の腫瘍と比較して、治療した腫瘍のＡｇ特異的ＣＤ８  Ｔ細胞のパーセントは、平均７倍増加した（ｎ＝５）。非免疫付与マウスに対する、ベクターで免疫付与したマウスで見出されるＯＶＡ特異的ＣＤ８  Ｔ細胞の割合（％）は、ＧＬＡ投与の１日後及び２日後で１．８倍に増加した。
【０２７９】
上記のデータは、抗原特異的ＣＤ８  Ｔ細胞が全身で作製されると（「プライム」）、腫瘍部位でのアジュバントの局所投与がこれらのＣＤ８  Ｔ細胞を腫瘍に「プル」し、防御免疫を仲立ちしたことを示している。これらのデータは、「プライム−プル」の、癌免疫療法での有望なワクチン戦略としての使用を支持している。
【０２８０】
実施例３：プライム−プル戦略の治療効果の評価
【０２８１】
本実施例は、ベクターワクチンでの免疫付与後にＧＬＡを腫瘍内投与することは、ベクター誘発抗原特異的ＣＤ８  Ｔ細胞を腫瘍に「プル」することを示し、プライム−プル戦略の治療効果も更に示している。
【０２８２】
本研究では、０日目に、Ｃ５７ＢＬ／６またはＢａｌｂ／ｃメスマウス（群あたり５匹のマウス）に、それぞれ、１×１０５個のＢ１６Ｆ１０−ＯＶＡ細胞またはＣＴ２６細胞を、脇腹に皮下播種した。７日目には、尾部の付け根への投与により、マウスを、２×１０１０個の、ＶＰ０２／ＯＶＡ（Ｃ５７ＢＬ／６）もしくはＶＰ０２／ＡＨ１Ａ５（Ｂａｌｂ／Ｃ）（または対照ベクターのＶＰ０２／ＧＦＰ）のゲノムで免疫付与した。７日目または１４日目に開始して、マウスに３〜４日毎に、５．０μｇＧＬＡ／２％  ＳＥを腫瘍内投与した。１８日目（最終のＧＬＡ／ＳＥ治療の１日後）に、Ｂ１６Ｆ１０−ＯＶＡ腫瘍を回収し、フローサイトメトリーにより腫瘍浸潤リンパ球について分析した。
【０２８３】
対照ベクター（ＶＰ０２／ＧＦＰ）で免疫付与したマウスは、腫瘍を浸潤したリンパ球を１．８％有した（図２Ａ）。ＧＬＡ／ＳＥ単独では、リンパ球の浸潤パーセントが増加しなかった。ＶＰ０２／ＯＶＡ単独では、リンパ球の湿潤パーセントが３．２％に増加したが、ＶＰ０２／ＯＶＡ＋ＧＬＡ／ＳＥは、リンパ球の浸潤パーセントを更に７．５％まで増加させ、これは腫瘍浸潤リンパ球の基準を合計４倍超える増加であった。腫瘍内で見出されたリンパ球においては、ＶＰ０２／ＯＶＡ単独では、対照マウスの０．９％と比較して１６．６％のＯＶＡ特異的ＣＤ８  Ｔ細胞を産生したが、ＧＬＡ／ＳＥ単独では、対照マウスの９．７％と比較して、１４．７％の制御性Ｔ細胞を産生した。これらの発見は、ベクター生成抗原特異的ＣＤ８  Ｔ細胞が腫瘍に遊走され、抗原特異的プライムの不存在下で、ＧＬＡ／ＳＥが主に制御性Ｔ細胞を部位にプルしたことを示している。しかし、抗原特異的プライムの存在下において、ＧＬＡ／ＳＥは制御性Ｔ細胞を腫瘍にプルし続けたが、より多くの抗原特異的ＣＤ８  Ｔ細胞をも腫瘍にプルした（図２Ｂ）。
【０２８４】
Ｂ１６−ＯＶＡ及びＣＴ２６腫瘍モデルの両方において、プライム−プル戦略は、マウスにおいて最良の腫瘍制御を達成した（図３）。驚くべきことに、プライム−プル戦略は、少なくとも腫瘍播種の６０日後（実験は依然として継続）まで、ＣＴ２６モデルにおいて完全な退縮を達成した（図３Ｂ、中ヌキの菱形）。
【０２８５】
上記のデータは、抗原特異的ＣＤ８  Ｔ細胞が全身で作製されると（「プライム」）、腫瘍部位でのＴＬＲ４アゴニストの局所投与がこれらのＣＤ８  Ｔ細胞を腫瘍に「プル」し、腫瘍増殖に対して防御免疫を介在させたことを示している。これらのデータは、「プライム−プル」の、癌免疫療法での有望なワクチン戦略としての使用を支持している。
【０２８６】
実施例４：プライム−プル戦略の速度の調査
【０２８７】
プライム−プル戦略の速度を調査する研究が現在進行中である。本研究では、０日目に、Ｃ５７ＢＬ／６マウス（群あたりｎ＝５）を、１×１０５個のＢ１６ＯＶＡ細胞を、右脇腹に皮下で播種する。測定した腫瘍が４ｍｍ２を超えていれば（７日目）、尾部の付け根から、マウスをＶＰ０２／ＯＶＡまたは対照ビヒクルで一度免疫付与した。測定した腫瘍が４ｍｍ２を超えている（７日目）場合、または２１日目に、５μｇＧＬＡ／２％  ＳＥのみの腫瘍内投与を開始し、その後、研究終了まで３〜４日毎に継続した。２２日目、２３日目、及び２４日目に脾細胞及び腫瘍を回収し、どの時点（ＧＬＡ／ＳＥ投与の１日後、２日後または３日後）で腫瘍浸潤リンパ球の百分率が最大であったかを測定した。
【０２８８】
実施例５：基準の腫瘍浸潤リンパ球と比較した、ＧＬＡプルにより得られる腫瘍浸潤リンパ球の表現型の測定
【０２８９】
方法：腫瘍細胞をマウスに播種する。次いで、腫瘍を有するマウスにＶＰ０２／Ａを尾部の付け根から投与して免疫付与し、その後ＧＬＡを腫瘍内投与した。腫瘍を回収し、フローサイトメトリー、及びＧＬＡ投与後分析により腫瘍浸潤リンパ球の表現型について分析した。マーカーの表現型検査をペンタマー陽性細胞で行った一方、ペプチド再刺激を用いて、多分化能と応答バランスの表現型を評価した。
【０２９０】
実施例６：ＧＬＡプルが抗原特異的ＣＤ８  Ｔ細胞に特異的であるかどうかの測定
【０２９１】
方法：ＣＦＳＥで標識化した脾細胞を、非免疫付与またはＶＰ０２／ＯＶＡ免疫付与マウスから、Ｂ１６／ＯＶＡ腫瘍を播種したナイーブマウスに養子移入した後、ＧＬＡを腫瘍内投与する。腫瘍を回収し、ＧＬＡ投与後のフローサイトメトリーにより、抗原Ａ特異的腫瘍浸潤リンパ球について分析する。シグナルを増加させ、ＣＤ８及びＣＤ４細胞のプル効果を研究するため、ＯＴ−Ｉ（ＣＤ８）またはＯＴ−ＩＩ（ＣＤ４）マウスを免疫付与し、養子移入実験でのドナーとして使用する。
【０２９２】
実施例７：ＧＬＡプルが抗原依存性であるかどうかの評価
【０２９３】
方法：腫瘍細胞（抗原Ａを発現するかまたは発現しない）をマウスに播種する。次いで、腫瘍を有するマウスを、尾部の付け根からＶＰ０２／Ａ（抗原Ａ含有）を投与することで免疫付与する。次いで、免疫付与したマウスにＧＬＡを腫瘍内投与する。腫瘍を回収し、ＧＬＡ投与後のフローサイトメトリーにより、抗原Ａ特異的腫瘍浸潤リンパ球について分析する。
【０２９４】
実施例８：ＧＬＡプルの規模及び速度を監視する。
【０２９５】
方法：ＯＴ−Ｉ−ｌｕｃマウスは、ルシフェラーゼの存在下で発光するＯＶＡ特異的ＣＤ８  Ｔ細胞を有するトランスジェニックマウスである。それ故、これらのマウスはＶＰ０２／ＯＶＡで免疫付与してＯＶＡ特異的ＣＤ８  Ｔ細胞を生成する必要はないが、Ｔ細胞を活性化するために免疫付与は通常必要である。マウスに腫瘍細胞を播種した後ＶＰ０２／ＯＶＡで免疫付与し、その後、ＧＬＡを腫瘍内投与する。研究の対照群はＶＰ０２／ＩｒｒＡｇで偽プライミングする。マウスに腫瘍細胞を播種した後、ＧＬＡを腫瘍内投与する。腫瘍を有する動物をＩＶＩＳシステムでイメージングし、腫瘍内の生物発光シグナルを評価する。ＯＴ−Ｉ−ｌｕｃ  ＣＤ８  Ｔ細胞のみが生物発光特性を有するため、シグナルの規模が腫瘍内のＯＶＡ特異的ＣＤ８  Ｔ細胞数に直接関係する。速度研究に関しては、腫瘍播種は任意である。
【０２９６】
実施例９：プライム−プルのＴ細胞受容体レパートリーの多様性を、「プライム」のみ、「プル」のみ、または未治療のマウスと比較して調査する。
【０２９７】
方法：マウスに腫瘍細胞を播種する。次いで、腫瘍を有するマウスを（１）ＶＰ０２／Ａを尾部の付け根から投与して免疫付与した後、ＧＬＡを腫瘍内投与するか、または（２）ＶＰ０２／Ａで免疫付与だけするか、または（３）ＧＬＡを腫瘍内注射するだけで治療するか、または（４）未治療のままとする。腫瘍及び脾臓を回収し、ディープシーケンシングにより腫瘍浸潤リンパ球及び脾細胞のＴ細胞受容体分析により、これらを分析する。プライム−プルで治療したマウスは、脾臓リンパ球及びＴＩＬの両方で最大のクローン多様性を示すことが予想される。
【０２９８】
上記種々の実施形態を組み合わせて、更なる実施形態を提供することができる。本明細書で参照される、及び／または出願データシートに記載される全ての米国特許、米国特許出願広報、米国特許出願、外国特許、外国特許出願及び非特許公報は、それら全体が、本明細書に参考として組み込まれる。必要であれば、種々の特許、出願及び広報の概念を用いて実施形態の態様を変更し、また更なる実施形態を提供することができる。
【０２９９】
実施形態の例
１．  癌の治療方法であって、
ａ）ウイルスベクター粒子を含む第１組成物を対象に投与することであって、該ウイルスベクター粒子が組み換え発現ベクターを含むみ、該組み換え発現ベクターは癌関連抗原をコードするポリヌクレオチドを含み、かつ該ポリヌクレオチドが少なくとも１つの制御発現配列に作用可能に結合していることで、該対象における該癌関連抗原に対する免疫応答を誘発する、該投与すること；及び
ｂ）該対象に、薬学的に好適なアジュバントを含む第２組成物を局所投与することであって、該組成物は抗原を含まない、該投与すること；
を含み、
該第１組成物及び該第２組成物はそれぞれ、更に薬学的に好適な賦形剤を含み、該第１組成物及び第２組成物は同時または逐次的に投与される、該方法。
【０３００】
２．  該癌はウイルス誘発性癌である、実施形態１に記載の方法。
【０３０１】
３．  該癌関連抗原は、発癌性ウイルスに由来する抗原である、先行実施形態のいずれかに記載の方法。
【０３０２】
４．該第１組成物が第１経路により全身投与され、該第２組成物が第２経路により局所投与される、先行実施形態のいずれかに記載の方法。
【０３０３】
５．  該第１経路は筋肉内、皮内または皮下であり、該第２経路は腫瘍内、リンパ節内、粘膜または膀胱内である、先行実施形態のいずれかに記載の方法。
【０３０４】
６．  該薬学的に好適なアジュバントはＴＬＲ４アゴニストである、先行実施形態のいずれかに記載の方法。
【０３０５】
７．  該ＴＬＲ４アゴニストは無毒性リピドＡ関連アジュバントである、実施形態６に記載の方法。
【０３０６】
８．  該無毒性リピドＡ関連アジュバントはグルコピラノシルリピドＡ（ＧＬＡ）である、先行実施形態のいずれかに記載の方法。
【０３０７】
９．  ＧＬＡは安定した水中油型エマルション中に配合される、先行実施形態のいずれかに記載の方法。
【０３０８】
１０．  該ＧＬＡは式
（Ｉ）
【化６】
2019203013.tif 000012
であって、
式中、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５及びＲ６はＣ１１〜Ｃ２０アルキルであり、Ｒ２及びＲ４はＣ１２〜Ｃ２０アルキルである、該式を有する、先の実施形態のいずれか１つに記載の方法。
【０３０９】
１１．  Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５及びＲ６はウンデシルに相当し、Ｒ２及びＲ４はトリデシルに相当する、実施形態１０に記載の方法。
【０３１０】
１２．  該ＧＬＡは式
（ＩＩ）
【化７】
2019203013.tif 000013
であって、
Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、Ｌ４、Ｌ５、及びＬ６は同一または異なっており、−Ｏ−、−ＮＨ−、及び−（ＣＨ２）−から独立して選択され、Ｌ７、Ｌ８、Ｌ９及びＬ１０は同一または異なっており、かつ、任意の場所が存在していなくても、または−Ｃ（＝Ｏ）−であってもよく、Ｙ１は酸性官能基であり、Ｙ２及びＹ３は同一または異なっており、−ＯＨ、−ＳＨ、及び酸性官能基からそれぞれ独立して選択され、Ｙ４は−ＯＨまたは−ＳＨであり、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５及びＲ６は同一または異なっており、Ｃ８〜Ｃ１３アルキルからなる群からそれぞれ独立して選択され、Ｒ２及びＲ４は同一または異なっており、Ｃ６〜Ｃ１１アルキルからなる群からそれぞれ独立して選択される、該式を有するか、または薬剤として許容されるその塩である、先行実施形態のいずれかに記載の方法。
【０３１１】
１３．  該第１組成物は該第２組成物の投与前に投与される、先の実施形態のいずれか１つに記載の方法。
【０３１２】
１４．  該第１組成物及び／または該第２組成物は２、３、４、５、６、７、８、９または１０回投与される、先の実施形態のいずれか１つに記載の方法。
【０３１３】
１５．  該組み換え発現ベクターはレトロウイルスベクターゲノム、レンチウイルスベクターゲノム、ポックスウイルスベクターゲノム、ワクシニアウイルスベクターゲノム、アデノウイルスベクターゲノム、アデノウイルス随伴ウイルスベクターゲノム、ヘルペルウイルスベクターゲノム、アルファウイルスベクターゲノム、プラスミドＤＮＡ及びＲＮＡから選択される、先の実施形態のいずれか１つに記載の方法。
【０３１４】
１６．  該ウイルスベクター粒子は、該レンチウイルスベクターゲノムを含むレンチウイルスベクター粒子；該ポックスウイルスベクターゲノムを含むポックスウイルスベクター粒子；該ワクシニアウイルスベクターゲノムを含むワクシニアウイルスベクター粒子；該アデノウイルスベクターゲノムを含むアデノウイルスベクター粒子；該アデノウイルス随伴ウイルスベクターゲノムを含むアデノウイルス随伴ウイルスベクター粒子；該ヘルペスウイルスベクターゲノムを含むヘルペスウイルスベクター粒子；または、該アルファウイルスベクターゲノムを含むアルファウイルスベクター粒子である、先の実施形態のいずれか１つに記載の方法。
【０３１５】
１７．  該ウイルスベクター粒子は該レンチウイルスベクター粒子であり、該レンチウイルスベクターゲノムを含む、先の実施形態のいずれか１つに記載の方法。
【０３１６】
１８．  該レンチウイルスベクター粒子は、配列番号１と比較して少なくとも１つのアミノ酸の変更を有するシンドビスウイルスＥ２糖タンパク質を含むエンベロープを更に含み、残基１６０は欠失しているか、またはグルタミン酸以外のアミノ酸であり、Ｅ２糖タンパク質は、シンドビスウイルスＥ３タンパク質を有する融合タンパク質の一部ではない、先の実施形態に記載の方法。
【０３１７】
１９．  該ウイルスベクター粒子は該組み換え発現ベクターを樹状細胞に送達する、先の実施形態のいずれか１つに記載の方法。
【０３１８】
２０．  該癌関連抗原は、ｐ５３、Ｒａｓ、ｃ−Ｍｙｃ、Ａ−Ｒａｆ、Ｂ−Ｒａｆ、Ｃ−Ｒａｆ、サイクリン依存性キナーゼ、ＭＡＧＥ−Ａ１、ＭＡＧＥ−Ａ２、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＭＡＧＥ−Ａ４、ＭＡＧＥ−Ａ６、ＭＡＧＥ−Ａ１０、ＭＡＧＥ−Ａ１２、ＭＡＲＴ−１、ＢＡＧＥ、ＤＡＭ−６、−１０、ＧＡＧＥ−１、−２、−８、ＧＡＧＥ−３、−４、−５、−６、−７Ｂ、ＮＡ８８−Ａ、ＭＡＲＴ−１、ＭＣ１Ｒ、Ｇｐ１００、ＰＳＡ、ＰＳＭ、チロシナーゼ、ＴＲＰ−１、ＴＲＰ−２、ＡＲＴ−４、ＣＡＭＥＬ、ＣＥＡ、Ｃｙｐ−Ｂ、ｈＴＥＲＴ、ｈＴＲＴ、ｉＣＥ、ＭＵＣ１、ＭＵＣ２、ホスホイノシチド３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）、ＴＲＫ受容体、ＰＲＡＭＥ、Ｐ１５、ＲＵ１、ＲＵ２、ＳＡＲＴ−１、ＳＡＲＴ−３、ウィルムス腫瘍抗原（ＷＴ１）、ＡＦＰ、β−カテニン／ｍ、カスパーゼ−８／ｍ、ＣＥＡ、ＣＤＫ−４／ｍ、ＥＬＦ２Ｍ、ＧｎＴ−Ｖ、Ｇ２５０、ＨＳＰ７０−２Ｍ、ＨＳＴ−２、ＫＩＡＡ０２０５、ＭＵＭ−１、ＭＵＭ−２、ＭＵＭ−３、ミオシン／ｍ、ＲＡＧＥ、ＳＡＲＴ−２、ＴＲＰ−２／ＩＮＴ２、７０７−ＡＰ、アネキシンＩＩ、ＣＤＣ２７／ｍ、ＴＰＩ／ｍｂｃｒ−ａｂｌ、ＢＣＲ−ＡＢＬ、インターフェロン制御因子４（ＩＲＦ４）、ＥＴＶ６／ＡＭＬ、ＬＤＬＲ／ＦＵＴ、Ｐｍｌ／ＲＡＲα、腫瘍関連カルシウムシグナル伝達物質１（ＴＡＣＳＴＤ１）ＴＡＣＳＴＤ２、受容体型チロシンキナーゼ、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、血小板由来成長因子受容体（ＰＤＧＦＲ）、血管内皮成長因子受容体（ＶＥＧＦＲ）、細胞質チロシンキナーゼ、ｓｒｃ−ファミリー、ｓｙｋ−ＺＡＰ７０、インテグリン結合キナーゼ（ＩＬＫ）、シグナル伝達兼転写活性化因子ＳＴＡＴ３、ＳＴＡＴ５、及びＳＴＡＴ６、低酸素誘導因子（ＨＩＦ−１α及びＨＩＦ−２α）、核因子κＢ（ＮＦ−κＢ）、ノッチ受容体（ノッチ１〜４）、ｃ−Ｍｅｔ、ラパマイシンの哺乳類標的（ｍＴＯＲ）、ＷＮＴ、細胞外シグナル調節キナーゼ（ＥＲＫ）、ＰＭＳＡ、ＰＲ−３、ＭＤＭ２、メソテリン、腎細胞癌−５Ｔ４、ＳＭ２２−アルファ、カルボニックアンヒドラーゼＩ（ＣＡＩ）及びＩＸ（ＣＡＩＸ）、ＳＴＥＡＤ、ＴＥＬ／ＡＭＬ１、ＧＤ２、プロテイナーゼ３、ｈＴＥＲＴ、肉腫転座切断点、ＥｐｈＡ２、ＭＬ−ＩＡＰ、ＥｐＣＡＭ、ＥＲＧ（ＴＭＰＲＳＳ２  ＥＴＳ融合遺伝子）、ＮＡ１７、ＰＡＸ３、ＡＬＫ、アンドロゲン受容体、サイクリンＢ１、ポリシアル酸、ＭＹＣＮ、ＲｈｏＣ、ＧＤ３、フコシルＧＭ１、メソテリン、ＰＳＣＡ、ｓＬｅ、ＰＬＡＣ１、ＧＭ３、ＢＯＲＩＳ、Ｔｎ、ＧＬｏｂｏＨ、ＮＹ−ＢＲ−１、ＲＧｓ５、ＳＡＲＴ３、ＳＴｎ、ＰＡＸ５、ＯＹ−ＴＥＳ１、精子タンパク質１７、ＬＣＫ、ＨＭＷＭＡＡ、ＡＫＡＰ−４、ＳＳＸ２、ＸＡＧＥ  １、Ｂ７Ｈ３、レグマイン、ＴＩＥ２、Ｐａｇｅ４、ＭＡＤ−ＣＴ−１、ＦＡＰ、ＭＡＤ−ＣＴ−２、及びｆｏｓ関連抗原１から選択される、先の実施形態のいずれか１つに記載の方法。
【０３１９】
２１．  該癌関連抗原は、ＣＴＡ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＬＡＧＥ−１、ＭＡＧＥ−Ａ１、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＭＡＧＥ−Ａ４、ＭＡＧＥ−Ａ１０、ＣＴ７、ＣＴ１０、ＧＡＧＥ、ＰＲＡＭＥ；ＢＡＧＥ；ＲＡＧＥ、ＳＡＧＥ、ＨＡＧＥ、ＭＰＨＯＳＰＨ１、ＤＥＰＤＣ１、ＩＭＰ３、並びにＭＡＧＥ−Ａ及びＢＫ  Ｔ抗原、先の実施形態のいずれか１つに記載の方法。
【０３２０】
２２．  該癌は膀胱癌である、先の実施形態のいずれか１つに記載の方法。
【０３２１】
２３．  薬学的に好適なアジュバントを含む該第２組成物は、ＢＣＧを更に含む、先の実施形態のいずれか１つに記載の方法。
【０３２２】
２４．  該第２組成物は、チェックポイント阻害剤（例えば抗ＰＤ１、抗ＰＤＬ１、抗ＣＴＬＡ４等）、サイトカイン、クロロキン、ＡＤＣＣを増加させる抗体、共刺激シグナルを促進する抗体、または抗ＣＤ４０抗体からなる群から選択される１つ以上の治療薬を含む組成物と組み合わせて投与される、先の実施形態のいずれか１つに記載の方法。
【０３２３】
２５．  該第１組成物がアジュバントを更に含む、先の実施形態のいずれか１つに記載の方法。
【０３２４】
２６．  ポリペプチドと組み合わせたアジュバントを含むブースト組成物を投与することを更に含み、該ポリペプチドは該癌関連抗原、またはその免疫原性断片を含む、先の実施形態のいずれか１つに記載の方法。
【０３２５】
２７．  該誘発した免疫応答は細胞障害性Ｔリンパ球免疫応答を含む、先の実施形態のいずれか１つに記載の方法。
【０３２６】
２８．  該第２組成物の局所投与が、投与の局所部位にてＣＤ８＋  Ｔ細胞の増大を誘発させる、先の実施形態のいずれか１つに記載の方法。
【０３２７】
２９．  先行実施形態のいずれか１つに従った、第１組成物及び第２組成物を含むキット。
【０３２８】
３０．  癌の治療方法であって、
ａ）対象において、該癌に関連する免疫原に特異的な免疫応答を誘発することであって、該対象に、レンチウイルスベクター粒子を含む第１組成物を投与することを含み、該レンチウイルスベクター粒子は組み換え発現ベクターを含み、該組み換え発現ベクターは該免疫原をコードするポリヌクレオチドを含み、該ポリヌクレオチドは少なくとも１つの制御発現配列に作用可能に結合しており、該レンチウイルスベクター粒子は、配列番号１と比較して少なくとも１つのアミノ酸の変更を有するシンドビスウイルスＥ２糖タンパク質を含むエンベロープを更に含み、残基１６０は欠失しているか、またはグルタミン酸以外のアミノ酸であり、Ｅ２糖タンパク質はシンドビスウイルスＥ３タンパク質を有する融合タンパク質の一部ではない、該誘発すること；並びに、
ｂ）薬学的に好適なアジュバントを含む第２組成物を腫瘍内投与することであって、該第２組成物は免疫原を含まず、該アジュバントは、安定した水中油型エマルション内で配合されるグルコピラノシルリピドＡ（ＧＬＡ）である無毒性リピドＡ関連アジュバントであり、該ＧＬＡは式
【化８】
2019203013.tif 000014
であって、式中、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５及びＲ６はウンデシルに相当し、Ｒ２及びＲ４はトリデシルに相当する、該式を有する、該投与すること、を含み、
該癌と関連する該免疫原は、ＣＴＡ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＬＡＧＥ−１、ＭＡＧＥ−Ａ１、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＭＡＧＥ−Ａ４、ＭＡＧＥ−Ａ１０、ＣＴ７、ＣＴ１０、ＧＡＧＥ、ＰＲＡＭＥ；ＢＡＧＥ；ＲＡＧＥ、ＳＡＧＥ、ＨＡＧＥ、ＭＰＨＯＳＰＨ１、ＤＥＰＤＣ１、ＩＭＰ３及びＭＡＧＥ−Ａから選択され、
該第１組成物及び該第２組成物はそれぞれ、薬学的に好適な賦形剤を更に含み、該第１組成物及び第２組成物は同時または逐次的に投与され、該第１組成物は筋肉内、皮内または皮下投与される、該方法。
【０３２９】
３１．  対象における癌の治療方法であって、
ａ）該対象に、
ｉ．癌関連抗原に特異的な抗原特異的Ｔ細胞であって、前述の抗原特異的Ｔ細胞はｅｘ  ｖｉｖｏで増殖されている、該抗原特異的Ｔ細胞、
ｉｉ．該癌関連抗原を認識するキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように遺伝子組み換えされたＴ細胞、または
ｉｉｉ．ＭＨＣとの関係において、該癌関連抗原を認識する特異的キメラＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現するように遺伝子組み換えされたＴ細胞、
を含む第１組成物を投与すること、及び、
ｂ）該対象に、薬学的に好適なアジュバントを含む第２組成物を腫瘍内投与することであって、該第２組成物は抗原を含まないか、または所望により、先行実施形態のいずれかに記載されている癌関連抗原等の抗原を含む、該投与すること、
を含み、
該第１組成物及び該第２組成物はそれぞれ、更に薬学的に好適な賦形剤を含み、該第１組成物及び第２組成物は同時または逐次的に投与される、該方法。
【０３３０】
３２．  該アジュバントは無毒性リピドＡ関連アジュバントである、実施形態３１に記載の方法。
【０３３１】
３３．  該アジュバントはグルコピラノシルリピドＡ（ＧＬＡ）である、実施形態３１に記載の方法。
【０３３２】
３４．  ＧＬＡは安定した水中油型エマルション中に配合される、実施形態３３に記載の方法。
【０３３３】
３５．  該ＧＬＡは式
【化９】
2019203013.tif 000015
であって、
式中、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５及びＲ６はＣ１１〜Ｃ２０アルキルであり、Ｒ２及びＲ４はＣ１２〜Ｃ２０アルキルである、該式を有する、実施形態３３または実施形態３４に記載の方法。
【０３３４】
３６．  Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５及びＲ６はウンデシルに相当し、Ｒ２及びＲ４はトリデシルに相当する、実施形態３５に記載の方法。
【０３３５】
３７．
ａ）ウイルスベクター粒子を含む第１組成物であって、該ウイルスベクター粒子は組み換え発現ベクターを含み、該組み換え発現ベクターは癌関連抗原をコードするポリヌクレオチドを含み、かつ該ポリヌクレオチドは少なくとも１つの制御発現配列に作用可能に結合していることで、該対象における該癌関連抗原に対する免疫応答を誘発する、該第１組成物；及び
ｂ）薬学的に好適なアジュバントを含む第２組成物であって、該第２組成物は抗原を含まない、該第２組成物
を含む、組成物であって、
該第１組成物及び該第２組成物はそれぞれ、薬学的に好適な賦形剤を更に含み、癌の治療方法での使用に関し、該第１組成物は該対象に全身投与され、かつ、該第２組成物は該対象に局所投与され、該第１組成物及び該第２組成物は、同時または逐次的に投与される、該組成物。
【０３３６】
３８．  該癌はウイルス誘発性癌である、実施形態３７に記載の組成物。
【０３３７】
３９．  該癌関連抗原は、該発癌性ウイルスに由来する抗原である、実施形態３８に記載の組成物。
【０３３８】
４０．  該第１組成物が第１経路により全身投与され、該第２組成物が第２経路により局所投与される、実施形態３７に記載の組成物。
【０３３９】
４１．  該第１経路は筋肉内、皮内または皮下であり、該第２経路は腫瘍内、リンパ節内、粘膜または膀胱内である、実施形態４０に記載の組成物。
【０３４０】
４２．  該薬学的に好適なアジュバントはＴＬＲ４アゴニストである、実施形態３７に記載の組成物。
【０３４１】
４３．  該ＴＬＲ４アゴニストは無毒性リピドＡ関連アジュバントである、実施形態４２に記載の組成物。
【０３４２】
４４．  該無毒性リピドＡ関連アジュバントはグルコピラノシルリピドＡ（ＧＬＡ）である、実施形態４３に記載の組成物。
【０３４３】
４５．  ＧＬＡは安定した水中油型エマルション中に配合される、実施形態４４に記載の組成物。
【０３４４】
４６．  該ＧＬＡは式
（Ｉ）
【化１０】
2019203013.tif 000016
であって、
式中、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５及びＲ６はＣ１１〜Ｃ２０アルキルであり、Ｒ２及びＲ４はＣ１２〜Ｃ２０アルキルである、該式を有する、先行実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
【０３４５】
４７．  Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５及びＲ６はウンデシルに相当し、Ｒ２及びＲ４はトリデシルに相当する、実施形態４６に記載の組成物。
【０３４６】
４８．  該ＧＬＡは、式
（ＩＩ）
【化１１】
2019203013.tif 000017
であって、
式中、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、Ｌ４、Ｌ５、及びＬ６は同一または異なっており、−Ｏ−、−ＮＨ−、及び−（ＣＨ２）−から独立して選択され、Ｌ７、Ｌ８、Ｌ９及びＬ１０は同一または異なっており、かつ、任意の場所が存在していなくても、または−Ｃ（＝Ｏ）−であってもよく、Ｙ１は酸性官能基であり、Ｙ２及びＹ３は同一または異なっており、−ＯＨ、−ＳＨ、及び酸性官能基からそれぞれ独立して選択され、Ｙ４は−ＯＨまたは−ＳＨであり、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５及びＲ６は同一または異なっており、Ｃ８〜Ｃ１３アルキルからなる群からそれぞれ独立して選択され、Ｒ２及びＲ４は同一または異なっており、Ｃ６〜Ｃ１１アルキルからなる群からそれぞれ独立して選択される、該式を有するか、または薬剤として許容されるその塩である、実施形態４４〜４５のいずれか１つに記載されている組成物。
【０３４７】
４９．  該第１組成物は該第２組成物の投与前に投与される、実施形態３７〜４５のいずれか１つに記載の組成物。
【０３４８】
５０．  該第１組成物及び／または該第２組成物は２、３、４、５、６、７、８、９または１０回投与される、実施形態３７〜４５のいずれか１つに記載の組成物。
【０３４９】
５１．  該組み換え発現ベクターはレトロウイルスベクターゲノム、レンチウイルスベクターゲノム、ポックスウイルスベクターゲノム、ワクシニアウイルスベクターゲノム、アデノウイルスベクターゲノム、アデノウイルス随伴ウイルスベクターゲノム、ヘルペルウイルスベクターゲノム、アルファウイルスベクターゲノム、プラスミドＤＮＡ及びＲＮＡから選択される、先の実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
【０３５０】
５２．  該ウイルスベクター粒子は、該レンチウイルスベクターゲノムを含むレンチウイルスベクター粒子；該ポックスウイルスベクターゲノムを含むポックスウイルスベクター粒子；該ワクシニアウイルスベクターゲノムを含むワクシニアウイルスベクター粒子；該アデノウイルスベクターゲノムを含むアデノウイルスベクター粒子；該アデノウイルス随伴ウイルスベクターゲノムを含むアデノウイルス随伴ウイルスベクター粒子；該ヘルペスウイルスベクターゲノムを含むヘルペスウイルスベクター粒子；または、該アルファウイルスベクターゲノムを含むアルファウイルスベクター粒子である、先の実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
【０３５１】
５３．  該ウイルスベクター粒子は該レンチウイルスベクター粒子であり、該レンチウイルスベクターゲノムを含む、先の実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
【０３５２】
５４．  該レンチウイルスベクター粒子は、配列番号１と比較して少なくとも１つのアミノ酸の変更を有するシンドビスウイルスＥ２糖タンパク質を含むエンベロープを更に含み、残基１６０は欠失しているか、またはグルタミン酸以外のアミノ酸であり、Ｅ２糖タンパク質は、シンドビスウイルスＥ３タンパク質を有する融合タンパク質の一部ではない、先の実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
【０３５３】
５５．  該ウイルスベクター粒子は該組み換え発現ベクターを樹状細胞に送達する、先の実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
【０３５４】
５６．  該癌関連抗原は、ＣＴＡ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＬＡＧＥ−１、ＭＡＧＥ−Ａ１、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＭＡＧＥ−Ａ４、ＭＡＧＥ−Ａ１０、ＣＴ７、ＣＴ１０、ＧＡＧＥ、ＰＲＡＭＥ；ＢＡＧＥ；ＲＡＧＥ、ＳＡＧＥ、ＨＡＧＥ、ＭＰＨＯＳＰＨ１、ＤＥＰＤＣ１、ＩＭＰ３ＭＡＧＥ−Ａ、ＢＫ  Ｔ抗原、ｐ５３、Ｒａｓ、ｃ−Ｍｙｃ、Ａ−Ｒａｆ、Ｂ−Ｒａｆ、Ｃ−Ｒａｆ、サイクリン依存性キナーゼ、ＭＡＧＥ−Ａ１、ＭＡＧＥ−Ａ２、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＭＡＧＥ−Ａ４、ＭＡＧＥ−Ａ６、ＭＡＧＥ−Ａ１０、ＭＡＧＥ−Ａ１２、ＭＡＲＴ−１、ＢＡＧＥ、ＤＡＭ−６、−１０、ＧＡＧＥ−１、−２、−８、ＧＡＧＥ−３、−４、−５、−６、−７Ｂ、ＮＡ８８−Ａ、ＭＡＲＴ−１、ＭＣ１Ｒ、Ｇｐ１００、ＰＳＡ、ＰＳＭ、チロシナーゼ、ＴＲＰ−１、ＴＲＰ−２、ＡＲＴ−４、ＣＡＭＥＬ、ＣＥＡ、Ｃｙｐ−Ｂ、ｈＴＥＲＴ、ｈＴＲＴ、ｉＣＥ、ＭＵＣ１、ＭＵＣ２、ホスホイノシチド３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）、ＴＲＫ受容体、ＰＲＡＭＥ、Ｐ１５、ＲＵ１、ＲＵ２、ＳＡＲＴ−１、ＳＡＲＴ−３、ウィルムス腫瘍抗原（ＷＴ１）、ＡＦＰ、β−カテニン／ｍ、カスパーゼ−８／ｍ、ＣＥＡ、ＣＤＫ−４／ｍ、ＥＬＦ２Ｍ、ＧｎＴ−Ｖ、Ｇ２５０、ＨＳＰ７０−２Ｍ、ＨＳＴ−２、ＫＩＡＡ０２０５、ＭＵＭ−１、ＭＵＭ−２、ＭＵＭ−３、ミオシン／ｍ、ＲＡＧＥ、ＳＡＲＴ−２、ＴＲＰ−２／ＩＮＴ２、７０７−ＡＰ、アネキシンＩＩ、ＣＤＣ２７／ｍ、ＴＰＩ／ｍｂｃｒ−ａｂｌ、ＢＣＲ−ＡＢＬ、インターフェロン制御因子４（ＩＲＦ４）、ＥＴＶ６／ＡＭＬ、ＬＤＬＲ／ＦＵＴ、Ｐｍｌ／ＲＡＲα、腫瘍関連カルシウムシグナル伝達物質１（ＴＡＣＳＴＤ１）ＴＡＣＳＴＤ２、受容体型チロシンキナーゼ、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、血小板由来成長因子受容体（ＰＤＧＦＲ）、血管内皮成長因子受容体（ＶＥＧＦＲ）、細胞質チロシンキナーゼ、ｓｒｃ−ファミリー、ｓｙｋ−ＺＡＰ７０、インテグリン結合キナーゼ（ＩＬＫ）、シグナル伝達兼転写活性化因子ＳＴＡＴ３、ＳＴＡＴ５、及びＳＴＡＴ６、低酸素誘導因子（ＨＩＦ−１α及びＨＩＦ−２α）、核因子κＢ（ＮＦ−κＢ）、ノッチ受容体（ノッチ１〜４）、ｃ−Ｍｅｔ、ラパマイシンの哺乳類標的（ｍＴＯＲ）、ＷＮＴ、細胞外シグナル調節キナーゼ（ＥＲＫ）、ＰＭＳＡ、ＰＲ−３、ＭＤＭ２、メソテリン、腎細胞癌−５Ｔ４、ＳＭ２２−アルファ、カルボニックアンヒドラーゼＩ（ＣＡＩ）及びＩＸ（ＣＡＩＸ）、ＳＴＥＡＤ、ＴＥＬ／ＡＭＬ１、ＧＤ２、プロテイナーゼ３、ｈＴＥＲＴ、肉腫転座切断点、ＥｐｈＡ２、ＭＬ−ＩＡＰ、ＥｐＣＡＭ、ＥＲＧ（ＴＭＰＲＳＳ２  ＥＴＳ融合遺伝子）、ＮＡ１７、ＰＡＸ３、ＡＬＫ、アンドロゲン受容体、サイクリンＢ１、ポリシアル酸、ＭＹＣＮ、ＲｈｏＣ、ＧＤ３、フコシルＧＭ１、メソテリン、ＰＳＣＡ、ｓＬｅ、ＰＬＡＣ１、ＧＭ３、ＢＯＲＩＳ、Ｔｎ、ＧＬｏｂｏＨ、ＮＹ−ＢＲ−１、ＲＧｓ５、ＳＡＲＴ３、ＳＴｎ、ＰＡＸ５、ＯＹ−ＴＥＳ１、精子タンパク質１７、ＬＣＫ、ＨＭＷＭＡＡ、ＡＫＡＰ−４、ＳＳＸ２、ＸＡＧＥ  １、Ｂ７Ｈ３、レグマイン、ＴＩＥ２、Ｐａｇｅ４、ＭＡＤ−ＣＴ−１、ＦＡＰ、ＭＡＤ−ＣＴ−２、及びｆｏｓ関連抗原１か���選択される、先の実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
【０３５５】
５８．  該癌は膀胱癌である、先の実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
【０３５６】
５９．  薬学的に好適なアジュバントを含む該第２組成物は、ＢＣＧを更に含む、先の実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
【０３５７】
６０．  該第２組成物は、チェックポイント阻害剤、サイトカイン、クロロキン、ＡＤＣＣを増加させる抗体、共刺激シグナルを促進する抗体、抗ＣＤ４０抗体からなる群から選択される治療薬を含む組成物と組み合わされて投与される、先の実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
【０３５８】
６１．  該第１組成物がアジュバントを更に含む、先の実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
【０３５９】
６２．  ポリペプチドと組み合わせたアジュバントを含むブースト組成物を投与することを更に含み、該ポリペプチドは該癌関連抗原、またはその免疫原性断片を含む、先の実施形態のいずれか１つに記載の方法。
【０３６０】
６３．  該誘発した免疫応答は細胞障害性Ｔリンパ球免疫応答を含む、先の実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
【０３６１】
６４．  該第２組成物の局所投与が、投与の局所部位にてＣＤ８＋  Ｔ細胞の増大を誘発させる、先の実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
【０３６２】
６５．  先の実施形態のいずれか１つに記載の、第１組成物及び第２組成物を含むキット。
【０３６３】
６６．
ａ）レンチウイルスベクター粒子を含む第１組成物であって、該レンチウイルスベクター粒子は組み換え発現ベクターを含み、該組み換え発現ベクターは癌に関連する免疫原をコードするポリヌクレオチドを含み、該ポリヌクレオチドは少なくとも１つの制御発現配列に作用可能に結合しており、該レンチウイルスベクター粒子が、配列番号１と比較して少なくとも１つのアミノ酸の変更を有するシンドビスウイルスＥ２糖タンパク質を含むエンベロープを更に含み、残基１６０は欠失しているか、またはグルタミン酸以外のアミノ酸であり、Ｅ２糖タンパク質はシンドビスウイルスＥ３タンパク質を有する融合タンパク質の一部ではない、該第１組成物；並びに、
ｂ）薬学的に好適なアジュバントを含む第２組成物であって、該第２組成物は免疫原を含まず、該アジュバントは、安定した水中油型エマルション内で配合されるグルコピラノシルリピドＡ（ＧＬＡ）である無毒性リピドＡ関連アジュバントであり、該ＧＬＡは式
【化１２】
2019203013.tif 000018
であって、
式中、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５及びＲ６はウンデシルに相当し、Ｒ２及びＲ４はトリデシルに相当する、該式を有する、該第２組成物、
を含む、組成物であって、
癌に関連する該免疫原は、ＣＴＡ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＬＡＧＥ−１、ＭＡＧＥ−Ａ１、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＭＡＧＥ−Ａ４、ＭＡＧＥ−Ａ１０、ＣＴ７、ＣＴ１０、ＧＡＧＥ、ＰＲＡＭＥ；ＢＡＧＥ；ＲＡＧＥ、ＳＡＧＥ、ＨＡＧＥ、ＭＰＨＯＳＰＨ１、ＤＥＰＤＣ１、ＩＭＰ３及びＭＡＧＥ−Ａから選択され、
該第１組成物及び該第２組成物はそれぞれ、薬学的に好適な賦形剤を更に含み、対象における癌の治療方法に関して、該第１組成物は筋肉内、皮内または皮下投与され、該対象において、該癌に関連する該免疫原に特異的な免疫応答を誘発し、該第２組成物は腫瘍内投与され、該第１組成物及び該第２組成物は、同時または逐次的に投与される、該組成物。
【０３６４】
６７．
ａ）ｉ．癌関連抗原に特異的な自己由来もしくは異種抗原特異的Ｔ細胞であって、前述の抗原特異的Ｔ細胞はｅｘ  ｖｉｖｏで増殖されている、該細胞、
ｉｉ．該癌関連抗原を認識するようにキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように遺伝子組み換えされた、自己由来もしくは異種Ｔ細胞、または
ｉｉｉ．ＭＨＣとの関係において、該癌関連抗原を認識する特異的キメラＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現するように遺伝子組み換えされたＴ細胞、
を含む第１組成物、及び、
ｂ）薬学的に好適なアジュバントを含む第２組成物であって、該第２組成物が免疫原を含まない、該第２組成物、
を含む組成物であって、
該第１組成物及び該第２組成物はそれぞれ、薬学的に好適な賦形剤を更に含み、
対象における癌の治療方法での使用に関し、該第１組成物は該対象に全身投与され、該第２組成物は腫瘍内投与され、該第１組成物及び該第２組成物は、同時または逐次的に投与される、該組成物。
【０３６５】
６８．  該アジュバントは無毒性リピドＡ関連アジュバントである、先の実施形態のいずれか１つに記載の方法。
【０３６６】
６９．  該アジュバントはグルコピラノシルリピドＡ（ＧＬＡ）である、先の実施形態のいずれか１つに記載の方法。
【０３６７】
７０．  ＧＬＡは安定した水中油型エマルション中に配合される、先の実施形態のいずれか１つに記載の方法。
【０３６８】
７１．  該ＧＬＡは式
【化１３】
2019203013.tif 000019
であって、
式中、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５及びＲ６はＣ１１〜Ｃ２０アルキルであり、Ｒ２及びＲ４はＣ１２〜Ｃ２０アルキルである、該式を有する、先の実施形態のいずれか１つに記載の方法。
【０３６９】
７２．  Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５及びＲ６はウンデシルに相当し、Ｒ２及びＲ４はトリデシルに相当する、先の実施形態のいずれか１つに記載の方法。
【０３７０】
７３．
ａ）腫瘍を有する対象に、ベクター粒子を含む第１組成物を投与することであって、該ベクター粒子は組み換え発現ベクターを含み、該組み換え発現ベクターは癌関連抗原をコードするポリヌクレオチドを含み、かつ該ポリヌクレオチドが少なくとも１つの制御発現配列に作用可能に結合していることで、該対象における該癌関連抗原に対する免疫応答を誘発する、該投与すること；及び、
ｂ）ＴＬＲ４アゴニストを含む第２組成物を該対象に腫瘍内または腫瘍周辺投与することであって、該組成物は抗原を含まない、該投与すること、
を含む、腫瘍微小環境においてＴ細胞を増大させる方法であって、
該第１組成物及び該第２組成物はそれぞれ、薬学的に好適な賦形剤を更に含み、かつ、該第１組成物及び該第２組成物は、同時または逐次的に投与される
ことで、該腫瘍微小環境においてＴ細胞を増加させる、該方法。
【図１Ａ】
2019203013.tif 000020
【図１Ｂ】
2019203013.tif 000021
【図２Ａ】
2019203013.tif 000022
【図２Ｂ】
2019203013.tif 000023
【図３Ａ】
2019203013.tif 000024
【図３Ｂ】
2019203013.tif 000025
【配列表】
2019203013000001.app
【外国語明細書】
2019203013000001.pdf