(57)【要約】      （修正有）【課題】個々の患者に対して、抗アレルギー剤による効果が期待できるか否か予測可能なマーカーの提供。【解決手段】Treg細胞、Th1細胞、Th2細胞、好酸球及び好酸球塩基性蛋白（ECP）より選ばれる１種以上の生体物質からなる、乳酸菌を有効成分として含有する抗アレルギー剤の感受性判定マーカー。前記乳酸菌は、ラクトバチルス属乳酸菌好ましくはラクトバチルス・プランタラムであってよく、前記抗アレルギー剤は、アレルギー性鼻炎治療剤であってよい感受性判定マーカー。好ましくは、前記生体試料が血液である、感受性判定方法。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
Treg細胞、Th1細胞、Th2細胞、好酸球及び好酸球塩基性蛋白（ECP）よりなる群から選ばれる１種以上の生体物質からなる、乳酸菌を有効成分として含有する抗アレルギー剤の感受性判定マーカー。
【請求項２】
乳酸菌が、ラクトバチルス属乳酸菌である請求項１記載の感受性判定マーカー。
【請求項３】
乳酸菌が、ラクトバチルス・プランタラムである請求項１記載の感受性判定マーカー。
【請求項４】
抗アレルギー剤が、アレルギー性鼻炎治療剤である請求項１〜３のいずれかの項記載の感受性判定マーカー。
【請求項５】
被検者の抗アレルギー剤に対する感受性を判定する方法であって、
被検者の生体試料中の生体物質を測定する測定工程、および
測定工程で得られた結果に基づいて、被検者の抗アレルギー剤に対する感受性を判定する判定工程、を含み、
抗アレルギー剤が、乳酸菌を有効成分として含有するものであり、
生体物質が、Treg細胞、Th1細胞、Th2細胞、好酸球及び好酸球塩基性蛋白（ECP）よりなる群から選ばれる１種以上である、
抗アレルギー剤の感受性判定方法。
【請求項６】
乳酸菌が、ラクトバチルス属乳酸菌である請求項５記載の感受性判定方法。
【請求項７】
乳酸菌が、ラクトバチルス・プランタラムである請求項５記載の感受性判定方法。
【請求項８】
生体試料が血液である請求項５〜７のいずれかの項記載の抗アレルギーの感受性判定方法。
【請求項９】
測定工程において、測定する生体物質がTreg細胞、Th2細胞、好酸球及び好酸球塩基性蛋白（ECP）よりなる群から選ばれる１種以上であって、Treg細胞比率、Th2細胞比率、好酸球数又は好酸球塩基性蛋白（ECP）濃度が所定の閾値より高い場合に、判定工程において、被検者が抗アレルギー剤に対して高感受性群であると判定する、請求項５〜８のいずれかの項記載の感受性判定方法。
【請求項１０】
測定工程において、測定する生体物質がTh1細胞又はTh1細胞及びTh2細胞であって、Th1細胞比率又はTh2細胞数に対するTh1細胞数の比（Th1／Th2）が所定の閾値より低い場合に、判定工程において、被検者が抗アレルギー剤に対して高感受性群であると判定する、請求項５〜８のいずれかの項記載の感受性判定方法。
【請求項１１】
Treg細胞、Th1細胞、Th2細胞、好酸球及び好酸球塩基性蛋白（ECP）よりなる群から選ばれる１種以上の生体物質を測定するための試薬を含む、乳酸菌を有効成分として含有する抗アレルギー剤の感受性判定キット。
【請求項１２】
乳酸菌が、ラクトバチルス属乳酸菌である請求項１１記載の感受性判定キット。
【請求項１３】
乳酸菌が、ラクトバチルス・プランタラムである請求項１１記載の感受性判定キット。
【請求項１４】
Treg細胞、Th1細胞、Th2細胞、好酸球及び好酸球塩基性蛋白（ECP）よりなる群から選ばれる１種以上の生体物質に基づくパラメーターを指標とする、乳酸菌を有効成分として含有する抗アレルギー剤の感受性亢進剤のスクリーニング方法。
【請求項１５】
乳酸菌が、ラクトバチルス属乳酸菌である請求項１４記載のスクリーニング方法。
【請求項１６】
乳酸菌が、ラクトバチルス・プランタラムである請求項１４記載のスクリーニング方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、乳酸菌を有効成分とする抗アレルギー剤に対する被検者の感受性を判定する方法に関する。また本発明は、当該方法に利用される感受性判定マーカー及び感受性判定キットに関する。
【背景技術】
【０００２】
先進国では、花粉症、通年性アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎などのアレルギー疾患患者が増加傾向にある。日本でも、約１／３の人が何らかのアレルギー症状が現れた経験を持ち、約２３．４％の人が通年性アレルギー性鼻炎の有症者であるとされている。アレルギー疾患の患者においては、アレルギー症状に加えて、頭痛、不快感、不眠症、不満、不安などの症状も現れることがある。これらの症状は患者のQOLを低下させ、仕事や勉強の妨げとなるため、大きな社会問題となっている（非特許文献１，２）。アレルギー症状を軽減させるために抗アレルギー薬が服用されているが、一般に抗アレルギー薬は、抗ヒスタミン剤、ステロイド、免疫抑制剤などを含み、長期間にわたる服用に対してはその副作用が懸念される。
【０００３】
そこで近年、抗アレルギー効果を有する食品への関心が高まりつつある。乳酸菌や果汁の中には、アレルギー症状を緩和する効果を有するものも報告されており、例えば、ラクトバチルス・プランタラムなどの乳酸菌による果汁発酵物が、スギ花粉飛散に伴う症状悪化やQOL障害を緩和することが確認されている（非特許文献３，４及び特許文献１）。
【０００４】
しかし、このような抗アレルギー剤は、個々の患者によってアレルギー症状に対する緩和効果が得られる場合と得られない場合があり、また効果が得られたとしてもその程度に差異がある。抗アレルギー効果を有する食品は、日常的に継続摂取することで効果が発揮されるものであるため、予めその効果が期待できる患者（レスポンダー）と期待できない患者（ノンレスポンダー）とを判別できれば、患者の負担を軽減でき、治療方法の選択にあたっても有益である。そのため、個々の患者に対して、抗アレルギー剤の効果が期待できるか予測可能なマーカー及びその判定方法の開発が望まれている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Murota, H., Kitaba, S., Tani, M., Wataya-Kaneda, M., Azukizawa, H.,Tanemura, A., Umegaki, N., Terao, M., Kotobuki, Y. and Katayama,I., 2010. Impact of sedative and non-sedative antihistamines on the impaired productivity and quality of life in patients with pruritic skin diseases. Allergology International 59: 345‐354.
【非特許文献２】Neukirch, C., Liard, R., Bousquet, J. and Neukirch, F., 2000. Quality of life in allergic rhinitis and asthma. A population-based study of young adults. American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine 162: 1391‐1396.
【非特許文献３】Harima-Mizusawa, N., Iino, T., Onodera-Masuoka, N., Kato-Nagaoka, N., Kiyoshima-Shibata, J., Gomi, A., Shibahara-Sone, H., Kano, M.,Shida, K., Sakai, M., Miyazaki, K. and Ishikawa, F., 2014. Beneficial effects of citrus juice fermented with Lactobacillus plantarum YIT 0132 on Japanese Cedar Pollinosis. Bioscience of Microbiota, Food and Health 33: 147‐155.
【非特許文献４】Harima-Mizusawa, N., Kamachi, K., Kano, M., Nozaki, D., Uetake, T.,Yokomizo, Y., Nagino, T., Tanaka, A., Miyazaki, K. and Nakamura, S.,2016. Beneficial effects of citrus juice fermented with Lactobacillusplantarum YIT 0132 on atopic dermatitis: results of daily intake byadult patients in two open trials. Bioscience of Microbiota, Food and Health 35: 29‐39.
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】国際公開第２０１１／１１５１１４号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、個々の患者に対して、抗アレルギー剤による効果が期待できるか否か予測可能なマーカー及び当該抗アレルギー剤に対する感受性の判定方法を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、乳酸菌を含有する抗アレルギー剤を摂取した被検者において、特定の細胞及びその産生物質とアレルギー症状の改善程度との間に相関が認められ、これをマーカーとすることで当該抗アレルギー剤に対する感受性を判定できることを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００９】
すなわち本発明は、Treg細胞、Th1細胞、Th2細胞、好酸球及び好酸球塩基性蛋白（ECP）よりなる群から選ばれる１種以上の生体物質からなる、乳酸菌を有効成分として含有する抗アレルギー剤の感受性判定マーカーである。
【００１０】
また本発明は、被検者の抗アレルギー剤に対する感受性を判定する方法であって、
被検者の生体試料中の生体物質を測定する測定工程、および
測定工程で得られた結果に基づいて、被検者の抗アレルギー剤に対する感受性を判定する判定工程、を含み、
抗アレルギー剤が、乳酸菌を有効成分として含有するものであり、
生体物質が、Treg細胞、Th1細胞、Th2細胞、好酸球及び好酸球塩基性蛋白（ECP）よりなる群から選ばれる１種以上である、
抗アレルギー剤の感受性判定方法である。
【００１１】
さらに本発明は、Treg細胞、Th1細胞、Th2細胞、好酸球及び好酸球塩基性蛋白（ECP）よりなる群から選ばれる１種以上の生体物質を測定するための試薬を含む、乳酸菌を有効成分として含有する抗アレルギー剤の感受性判定キットである。
【００１２】
また本発明は、Treg細胞、Th1細胞、Th2細胞、好酸球及び好酸球塩基性蛋白（ECP）よりなる群から選ばれる１種以上の生体物質に基づくパラメーターを指標とする、乳酸菌を有効成分として含有する抗アレルギー剤の感受性亢進剤のスクリーニング方法である。
【発明の効果】
【００１３】
本発明によれば、投与前に個々の患者の抗アレルギー剤に対する感受性を判定することができ、それにより、患者の負担を軽減し、治療効果を向上させることが可能となる。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】相関解析において、被験飲料群の好酸球数に対しくしゃみ症状Δ値（アンケート）をプロットしたグラフである。
【図２】相関解析において、被験飲料群のTh1／Th2比に対しSymptom ScoreΔ値（アンケート）をプロットしたグラフである。
【図３】層別解析において、Th2細胞比率の高値グループと低値グループを中央値0.80で層別し、くしゃみ症状Δ値（アンケート）及びSymptom ScroeΔ値（アンケート）について被験飲料（発酵果汁）群とプラセボ飲料群とで群間比較を行ったグラフである。
【図４】層別解析において、Th1／Th2比の高値グループと低値グループを中央値20.01で層別し、くしゃみ症状Δ値（医師問診）について被験飲料（発酵果汁）群とプラセボ飲料群とで群間比較を行ったグラフである。
【図５】層別解析において、Th1／Th2比の高値グループと低値グループを中央値20.01で層別し、くしゃみ症状Δ値（アンケート）及びSymptom ScroeΔ値（アンケート）について被験飲料（発酵果汁）群とプラセボ飲料群とで群間比較を行ったグラフである。
【図６】層別解析において、好酸球数の高値グループと低値グループを中央値190で層別し、くしゃみ症状Δ値（アンケート）について被験飲料（発酵果汁）群とプラセボ飲料群とで群間比較を行ったグラフである。
【図７】層別解析において、ECP濃度の高値グループと低値グループを中央値5.7で層別し、くしゃみ症状Δ値（アンケート）及び痒み合計Δ値（アンケート）について被験飲料（発酵果汁）群とプラセボ飲料群とで群間比較を行ったグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
本発明の抗アレルギー剤に対する感受性判定マーカーは、Treg細胞、Th1細胞、Th2細胞、好酸球及び好酸球塩基性蛋白（ECP）よりなる群から選ばれる１種以上の生体物質である。
【００１６】
Treg細胞（制御性T細胞）は、免疫反応の抑制、免疫寛容や免疫系の恒常性の維持の役割を果たすT細胞のサブセットであり、アレルギー反応を抑制するために過剰な免疫応答を抑制するサイトカインの誘導を刺激する。
【００１７】
CD4陽性T細胞はサイトカイン産生パターンによりTh1細胞及びTh2細胞に分けられる。Th1細胞はIL‐2、IFN‐γ、TGF‐βなどを産生して細胞性免疫の応答に関与し、Th2細胞はIL‐4、IL‐5、IL‐6、IL‐10、IL‐13などを産生して液性免疫の誘導に関与する。
【００１８】
好酸球は顆粒球の１種であり、大型で好酸性の顆粒を持つ。寄生虫感染、アレルギー疾患などによる組織の炎症や免疫反応で産生が増加する。好酸球塩基性蛋白(Eosinophil Cationic Protein：ECP)は好酸球顆粒蛋白の1つであり、活性化された好酸球より放出される。
【００１９】
本発明において、感受性の判定対象となる抗アレルギー剤は乳酸菌を有効成分として含有するものである。乳酸菌は、抗アレルギー活性を有するものであれば特に限定されず、ラクトバチルス属、ストレプトコッカス属、ラクトコッカス属、ロイコノストック属、エンテロコッカス属、ペディオコッカス属、ビフィドバクテリウム属等の乳酸菌を使用することができる。具体的には、ラクトバチルス・アシドフィルス、ラクトバチルス・ブレビス、ラクトバチルス・カゼイ、ラクトバチルス・デルブリュッキイ、ラクトバチルス・ファーメンタム、ラクトバチルス・ヘルベティカス、ラクトバチルス・ケフィア、ラクトバチルス・パラカゼイ、ラクトバチルス・プランタラム、ラクトバチルス・ラムノーサス、ラクトバチルス・サリバリウス、ラクトバチルス・ペントーサス、ラクトバチルス・サケ、ストレプトコッカス・サーモフィルス、ラクトコッカス・ラクティス、ラクトコッカス・プランタラム、ラクトコッカス・ラフィノラクティス、ロイコノストック・ラクティス、ロイコノストック・メセンテロイデス、ビフィドバクテリウム・ブレーベ、ビフィドバクテリウム・ロンガム、ビフィドバクテリウム・ビフィダム、ビフィドバクテリウム・アニマーリス、ビフィドバクテリウム・ズイス、ビフィドバクテリウム・インファンティス、ビフィドバクテリウム・アドレセンティス、ビフィドバクテリウム・カテヌラータム、ビフィドバクテリウム・シュードカテヌラータム、ビフィドバクテリウム・ラクチス、ビフィドバクテリウム・グロボサム等が挙げられ、これらの１種又は２種以上を使用できる。これらの中でも、ラクトバチルス属に属する乳酸菌が好ましく、特にラクトバチルス・プランタラムが好ましく、具体的には、ラクトバチルス・プランタラム ＹＩＴ ０１３２（ＦＥＲＭ ＢＰ−１１３４９）、ラクトバチルス・プランタラム ＹＩＴ ０１４８（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１３５０）などが挙げられる。本発明における抗アレルギー剤はこれらの乳酸菌の菌体を含有すればよく、菌体としては死菌体であっても生菌であってもよい。またその形態としては、経口摂取できる形態であればよく、医薬品、飲食品等が含まれる。抗アレルギー剤に含まれる乳酸菌の含有量も特に限定されないが、例えば、飲料の場合には、乳酸菌の菌体濃度が1×10４〜1×10８CFU／100ｍｌ程度であればよい。
【００２０】
また抗アレルギー剤の治療・予防対象となるアレルギー疾患としては、例えば、アトピー性皮膚炎、食物アレルギー、アレルギー性喘息、通年性アレルギー性鼻炎、花粉症などの季節性アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎、蕁麻疹等を挙げることができ、これらの中でも通年性アレルギー性鼻炎、季節性アレルギー性鼻炎などの患者に対し好適に用いられる。またこれらの疾患に基づくアレルギー症状としては、喘息、くしゃみ、鼻汁、鼻閉、鼻、目、皮膚などの痒み、湿疹、皮膚の異常、気管支の異常等が挙げられ、これらの中でもくしゃみ、鼻汁、鼻閉などの鼻症状や、痒みなどの症状改善の判定に好適に用いられる。
【００２１】
本発明の抗アレルギー剤に対する感受性判定方法は、上記感受性判定マーカーであるTreg細胞、Th1細胞、Th2細胞、好酸球及び好酸球塩基性蛋白（ECP）などの生体物質に基づくパラメーターを用いて判定するものであり、まず測定工程において、被検者の生体試料中に含まれるこれらの生体物質を分析・測定する。生体試料としては、例えば、血液、血清、血漿、リンパ液、鼻洗浄液、皮膚組織採取物などが挙げられる。
【００２２】
上記生体物質の分析・測定は、常法に従って行うことができる。例えば、生体物質のうち、Treg細胞、Th1細胞、Th2細胞、好酸球などの細胞は、フローサイトメトリー法により分析でき、それぞれの細胞に特徴的なサブセットに対する抗体を用いて同定される。Th1細胞及びTh2細胞は、細胞外への分泌を抑制した状態でリンパ球を刺激してサイトカイン産生を促し、抗サイトカイン抗体を反応させフローサイトメーターで検出・定量することができる。これらの生体物質に基づくパラメーターとしては特に制限されず、それぞれの生体物質の個数、濃度、比などが含まれ、具体的には、Th1細胞比率、Th2細胞比率、Th1／Th2比、Treg細胞比率、好酸球数などが例示される。Th1細胞比率は、ヘルパーT細胞（CD4陽性T細胞）数に対するTh1細胞（IFN‐γ陽性、IL‐4陰性）数の比率（％）、Th2細胞比率は、ヘルパーT細胞（CD4陽性T細胞）数に対するTh2細胞（IFN-γ陰性、IL-4陽性）数の比率（％）として求められる。Th1／Th2比は、Th1細胞数／Th2細胞数（％）として求められる。Treg細胞比率は、ヘルパーT細胞（CD4陽性T細胞）数に対するTreg細胞（CD４陽性、CD25陽性、Foxp3陽性）数の比率として求められる。好酸球塩基性蛋白（ECP）の血清中の濃度（μg/L）は、酵素免疫測定（ＥＬＩＳＡ）法、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）法、免疫クロマトグラフィー法、蛍光ビーズマイクロアレイ法等により測定できる。
【００２３】
本発明の方法において、生体物質に基づくパラメーターとして、Treg細胞比率、Th2細胞比率、好酸球数又は好酸球塩基性蛋白（ECP）濃度を用いる場合には、測定工程においてこれらの値を測定し、その値が所定の閾値より高い場合に、判定工程において、当該被験者が抗アレルギー剤に対して高感受性群であると判定することができる。一方、これらの値が閾値より低い場合に、判定工程において、被験者が抗アレルギー剤に対して低感受性群であると判定できる。
【００２４】
生体物質に基づくパラメーターとしてTh1細胞比率またはTh1／Th2比を用いる場合には、測定工程において測定したこれらの値が所定の閾値より低い場合に、判定工程において、被験者が抗アレルギー剤に対して高感受性群であると判定できる。一方、これらの値が所定の閾値より高い場合に、判定工程において被験者が抗アレルギー剤に対し低感受性群であると判定できる。なお、基準となる所定の閾値は特に限定されず、種々の生体試料についてのデータの蓄積により経験的に設定することができる。閾値としては、後記実施例に示す通り、複数の被験者の血液パラメーターの初期値の中央値を用いることができ、Th2細胞比率の閾値として0.80、Th1／Th2比の閾値として20.01、好酸球数の閾値として190、ECP濃度の閾値として5.7を例示することができるが、これらに限定されない。
【００２５】
本発明において、判定精度向上の観点から、生体物質に基づくパラメーターとして、Treg細胞比率、Th2細胞比率、好酸球塩基性蛋白（ECP）濃度、Th1／Th2比、好酸球数を用いることが好ましい。さらに、判定精度がより向上することから、生体物質に基づくパラメーターを２種以上組み合わせて用いることが好ましく、判定精度が顕著に向上することから、組み合わせるパラメーターの一方としてTreg細胞比率、好酸球数又はECP濃度を用いることが好ましく、好酸球数又はECP濃度を用いると特に鼻汁症状改善に対する精度が向上し、Treg細胞比率を用いると特に鼻閉症状改善に対する精度が向上する。このような組み合わせの中でも、特にTreg細胞比率と好酸球数とを組み合わせると鼻汁症状改善に対する精度が向上し、Treg細胞比率とECP濃度 とを組み合わせると広範な症状に関し判定精度が向上する。ここで、判定精度の向上とは、より具体的には、高感受性群と低感受性群の２群間有意差検定（Wilcoxon順位和検定）の結果において、ｐ値がより小さくなることを意味する。
【００２６】
以上のようにして、抗アレルギー剤の摂取前に、予め被験者の生体試料から上記生体物質に基づくパラメーターの値を測定し、当該被検者の抗アレルギー剤に対する感受性を判定することができる。そのため、長期間にわたる継続的な摂取が必要とされる患者の負担軽減及び治療効果の最適化を図ることができる。
【００２７】
本発明は、上記感受性判定方法を行うためのキットを含む。当該キットには、測定対象であるＴ細胞のサブセット、サイトカイン又はECPに対する抗体など、上記感受性判定マーカーである生体物質を検出・定量するための試薬が含まれる。
【００２８】
また本発明には、Treg細胞、Th1細胞、Th2細胞、好酸球及び好酸球塩基性蛋白（ECP）よりなる群から選ばれる１種以上の生体物質に基づくパラメーターを指標とする、乳酸菌を有効成分として含有する抗アレルギー剤の感受性亢進剤のスクリーニング方法が含まれる。生体物質に基づくパラメーターとして、Treg細胞比率、Th2細胞比率、好酸球数及び好酸球塩基性蛋白（ECP）濃度を増加させる物質は感受性を亢進させる物質である。一方、Th1細胞比率、Th1／Th2比を低下させる物質は感受性を亢進させる物質である。これらのパラメーターを指標として、抗アレルギー剤に対する感受性を亢進し得る物質をスクリーニングできる。
【００２９】
以下に、本発明を実施例によって詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されない。
【実施例】
【００３０】
実施例１
通院治療中の通年性アレルギー性鼻炎患者を対象とし、ラクトバチルス・プランタラム YIT 0132（FERM BP-11349）を用いて下記製法により調製された被験飲料またはプラセボ飲料を8週間継続飲用させる二重盲検プラセボ対照並行群間比較試験を実施した（被験飲料群16名、プラセボ飲料群16名）。各被験者には、下記の評価方法に従って、飲用前１週間及び飲用期間中、毎日自覚症状を記録してもらい、その結果に基づきSymptom score（鼻炎症状の総合評価）を求めた。また飲用前と飲用8週後に、下記方法に従って、医師の問診による鼻症状の評価及び血液パラメーターの測定を行った。被験飲用群の各症状Δ値（飲用後症状スコア−飲用前症状スコア）と飲用前の血液パラメーター（初期値）を相関解析し、各症状スコアのΔ値と相関する血液パラメーターを抽出した。次に抽出された血液パラメーターの初期値の全被験者の中央値をもとに低値グループと高値グループに層別し、各症状スコアΔ値について被験飲料群内の比較および被験飲料群とプラセボ飲料群で群間比較した。
【００３１】
（被験飲料の調製）
温州みかん果汁（南海果工社製）に定常状態になるまで培養したラクトバチルス・プランタラムYIT0132菌液を接種し、37℃で48時間培養した後、90℃で5分間加熱殺菌し被験飲料を調製した。プラセボ飲料は、未発酵の温州みかん果汁を用い、風味及び外観上被験飲料と区別がつかないように調製した。被験飲料中のラクトバチルス・プランタラムYIT0132の細胞数は、DAPI測定法により6×1010個／100mlであった。
【００３２】
（症状の評価）
［自覚症状（アンケート）］
ガイドライン（Okuda, M., 2005. Allergic rhinitis. Iyaku Journal Company Limited, Osaka, Japan.Okuda, M., 2010. Japanese guideline for the diagnosis and treatmentof allergic diseases. Kyowa Kikaku Company Limited, Tokyo, Japan. 2010）に従って、くしゃみ、鼻汁、鼻閉の各項目について鼻症状スコアとして０〜４の５段階でスコア化した。また鼻の痒み、目の痒み、皮膚の痒みについても同様にしてスコア化した。表１に各症状のスコア化方法を示す。Sympton Score（鼻炎症状の総合評価）は、「鼻アレルギー診療ガイドライン 2009年版」に従って求めた。痒み合計は、鼻の痒み、目の痒み、皮膚の痒みの合計スコアにより求めた。飲用前期間（１週間）の平均値を飲用前症状スコア、飲用期間８週間のうち５〜８週の平均値を飲用後症状スコアとした。
【００３３】
【表１】
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【００３４】
［医師問診］
飲用前及び飲用８週後に、くしゃみ、鼻汁、鼻閉、重症度の４つの項目について医師により０〜４の５段階で評価しスコア化し、それぞれ飲用前症状スコア、飲用後症状スコアとした。
【００３５】
（血液パラメーターの測定）
血液サンプルは、飲用前（初期値）及び飲用８週後に被験者の上腕血管から採取した。血清は常法に従って調製した。総血清IgE、好酸球塩基性蛋白（ECP）は蛍光酵素免疫測定法により測定した。好酸球数、Th1細胞比率、Th2細胞比率、Treg比率、Th1／Th2比はフローサイトメトリー（Sysmex XE-2100、シスメックス社製）により測定した。Th1細胞比率はヘルパーT細胞（CD4陽性T細胞）数に対するTh1細胞（IFN-γ陽性、IL-4陰性）数の比率、Th2細胞比率はヘルパーT細胞（CD4陽性T細胞）数に対するTh2細胞（IFN-γ陰性、IL-4陽性）数の比率、Th1／Th2比はTh2細胞数に対するTh1細胞数の比、Treg細胞比率はヘルパーT細胞（CD4陽性T細胞）数に対するTreg細胞（CD4陽性、CD25陽性、Foxp3陽性）数の比率として求めた。
【００３６】
相関解析の結果、各症状スコアのΔ値と負の相関（スピアマン順位相関係数r<‐0.4）を示した血液パラメーターとして、Treg細胞比率、Th2細胞比率、好酸球数、ECP濃度が抽出された。また、正の相関（r>0.4）を示した血液パラメーターとして、Th1/Th2比、Th1細胞比率が抽出された（図１，２参照）。相関係数（負および正）と症状スコアのΔ値の関係性より、負の相関を示した血液パラメーターは高値者、正の相関を示した血液パラメーターは低値者が被験飲料であるラクトバチルス・プランタラムYIT1032発酵果汁のレスポンダーであると判定される。なお、p値が0.1以下のものを“相関を示した血液パラメーター”として抽出した。一方、総血清IgEは、通年性アレルギー性鼻炎症状の発症に関わることが示唆されているが、感受性については相関が認められなかった。
【００３７】
層別解析（群内比較）の結果から、Treg細胞比率、Th2細胞比率、好酸球数、ECP濃度の初期値高値グループが初期値低値グループと比較して有意（p<0.05;Wilcoxon順位和検定）に改善されるあるいは改善傾向（p<0.1）を示した。また、Th1/Th2比、Th1細胞比率の初期値低値グループが初期値高値グループと比較して有意に改善されるあるいは改善傾向を示した。
【００３８】
層別解析（群間比較）の結果から、Th2細胞比率および好酸球数の初期値高値グループでは、プラセボ飲料群（プラセボ群）と比較して、被験飲料群（発酵果汁群）でくしゃみ症状が有意（p<0.05;Wilcoxon順位和検定）に改善されることが示された。また、Th2細胞比率の初期値高値グループではSymptom score（鼻炎症状の総合評価）が、ECP濃度の初期値高値グループではくしゃみ、痒み合計が被験飲料群で改善傾向（p<0.1）であった。一方、Th1/Th2比の初期値低値グループでは、くしゃみ症状およびSymptom scoreが被験飲料群で有意に改善され、医師問診のくしゃみ症状が改善傾向を示した（図３〜７参照）。
【００３９】
なお、各症状の飲用前症状スコアは、被験飲料群の各血液パラメーターの初期値低値グループと初期値高値グループで同等であり、プラセボ飲料群の各血液パラメーターの初期値低値グループと初期値高値グループでも同等であった。すなわち、これらの各血液パラメーターは、一般に、アレルギー症状の発症に関わることが示唆されているものの、被験者のアレルギー症状の重症度（初期値）とは直接的に相関しないパラメーターであることを確認した。従って、本解析の結果は、アレルギー症状の軽重に関わらず、各血液パラメーターの初期値を所定の閾値と比較することのみにより、抗アレルギー剤に対する感受性が高精度に判定できるという新たな知見に基づくものである。
【００４０】
さらに血液パラメーターを組み合わせることでレスポンダー検出精度が向上するか検討した。好酸球数高値グループとそれ以外のグループにおいて、鼻汁症状スコアΔ値についてWillcoxon検定を行った（表２）。一方、好酸球数及びTreg細胞比率の双方が高値のグループとそれ以外のグループにおいても同様にしてWillcoxon検定を行った（表３）。
【００４１】
【表２】
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【００４２】
【表３】
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【００４３】
この結果から、好酸球数単独よりも、好酸球数とTreg細胞比率を組み合わせた方が、判定精度が向上することが示された。
【００４４】
ECP濃度高値グループとそれ以外のグループにおいて、鼻汁症状スコアΔ値についてWillcoxon検定を行った（表４）。一方、Treg細胞比率及びECP濃度の双方が高値のグループとそれ以外のグループにおいても同様にしてWillcoxon検定を行った（表５）。
【００４５】
【表４】
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【００４６】
【表５】
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【００４７】
この結果から、ECP濃度単独よりも、Treg細胞比率とECP濃度を組み合わせた方が、判定精度が向上することが示された。
【００４８】
Treg細胞比率高値グループとそれ以外のグループにおいて、鼻閉症状スコアΔ値についてWillcoxon検定を行った（表６）。一方、Treg細胞比率及びECP濃度の双方が高値のグループとそれ以外のグループにおいても同様にしてWillcoxon検定を行った（表７）。
【００４９】
【表６】
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【００５０】
【表７】
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【００５１】
この結果から、Treg細胞比率単独よりも、Treg細胞比率とECP濃度を組み合わせた方が、判定精度が向上することが示された。
【産業上の利用可能性】
【００５２】
本発明は、乳酸菌を有効成分とする抗アレルギー剤を摂取することで、アレルギー症状の緩和効果が期待できるか否かについて、その摂取前に判定する方法として利用可能である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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