(57)【要約】【課題】内因性遺伝子座において、非ヒトＩＬ−１５遺伝子配列の、ヒトＩＬ−１５遺伝子配列もしくはヒト化ＩＬ−１５遺伝子配列での置換を含む遺伝子改変を含む、非ヒト動物を提供する。【解決手段】ヒト化ＩＬ−１５遺伝子座を含む遺伝子改変された非ヒト生物；ヒト化ＩＬ−１５遺伝子が１種またはそれより多くの内因性非ヒト調節エレメントの制御下にあるヒト化ＩＬ−１５遺伝子を含む非ヒト生物；内因性非ヒトＩＬ−１５遺伝子座においてヒト化ＩＬ−１５遺伝子を含む非ヒト生物；非ヒト生物の生殖細胞系列を通じて伝えられ得る内因性ヒト化ＩＬ−１５遺伝子座を含む非ヒト生物；改変された内因性ＩＬ−１５遺伝子座からヒトＩＬ−１５を発現し、発現されたＩＬ−１５が完全にもしくは部分的にヒトである、非ヒト動物が提供される。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
明細書に記載の発明。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（分野）
生殖細胞系列の中にヒト化内因性非ヒトＩＬ−１５遺伝子座を含む、非ヒト動物。生殖細胞系列の中に内因性非ヒト調節エレメントの制御下のヒト化ＩＬ−１５コード配列を含む、非ヒト動物。内因性遺伝子座において、非ヒトＩＬ−１５遺伝子配列の、ヒトＩＬ−１５遺伝子配列もしくはヒト化ＩＬ−１５遺伝子配列での置換を含む遺伝子改変を含む、非ヒト動物（例えば、哺乳動物、例えば、マウス、ラット、およびハムスターのような齧歯類）。内因性の改変された非ヒトＩＬ−１５遺伝子座からヒトＩＬ−１５もしくはヒト化ＩＬ−１５を発現する、齧歯類および他の非ヒト動物。非ヒトＩＬ−１５プロモーターおよび／もしくは調節配列の制御下でヒトＩＬ−１５もしくはヒト化ＩＬ−１５を発現する、非ヒト動物。
【０００２】
（配列表の援用）
ＡＳＣＩＩテキストファイルの配列表（名称：３１０１３＿ＳＥＱ．ｔｘｔ（９ＫＢ）、２０１４年１０月１４日作成、ＥＦＳ−Ｗｅｂを介して米国特許商標庁に提出）は、本明細書に参考として援用される。
【背景技術】
【０００３】
（背景）
ヒトＩＬ−１５配列を含む導入遺伝子が無作為に挿入されたトランスジェニックマウスは、当該分野で公知である。しかし、無作為に組み込まれた導入遺伝子からヒトＩＬ−１５を発現するトランスジェニックマウスは、１点もしくはもう１つの点で最適ではない。例えば、ヒトＩＬ−１５に関してトランスジェニックであるマウスの大部分は、免疫細胞機能の異常調節におそらく起因する、リンパ球（例えば、Ｔ細胞）を含むある種の細胞の異常なレベルおよび／もしくは比を示す。このようなマウスはまた、おそらく最終的には上記トランスジェニックＩＬ−１５の異常調節に起因して、多種多様な病態を示す。このような異常調節は、例えば、内因性制御エレメントの非存在、および／もしくは内因性ＩＬ−１５遺伝子座から離れているヒトＩＬ−１５配列の配置から生じ得る。
【０００４】
ヒトＩＬ−１５コード配列が内因性非ヒトＩＬ−１５遺伝子座にあり、そして／または内因性非ヒトＩＬ−１５エレメント（例えば、上流および／もしくは下流の非コード領域）の調節性の制御下にある、ヒトＩＬ−１５コード配列を含む非ヒト動物は、当該分野で未だに必要である。内因性非ヒト調節エレメントの制御下でヒトＩＬ−１５を発現する非ヒト動物は、当該分野で必要である。非ヒト動物において生理学的に適切な様式でヒトＩＬ−１５を発現する非ヒト動物は、当該分野で必要である。ヒトＩＬ−１５を発現する非ヒト動物であって、リンパ球集団において（例えば、Ｔ細胞集団において）顕著な異常を欠いている非ヒト動物は、当該分野で必要である。ヒトＩＬ−１５もしくはヒト化ＩＬ−１５を発現し、ヒトＩＬ−１５に関してトランスジェニックである非ヒト動物によって示される病態のうちの１またはそれより多くを欠いている非ヒト動物もまた、当該分野で必要である。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
（要旨）
種々の局面および実施形態において、ヒト化ＩＬ−１５遺伝子座を含む遺伝子改変された非ヒト生物が提供される。ヒト化ＩＬ−１５遺伝子が１種またはそれより多くの内因性非ヒト調節エレメントの制御下にあるヒト化ＩＬ−１５遺伝子を含む非ヒト生物が提供される。内因性非ヒトＩＬ−１５遺伝子座においてヒト化ＩＬ−１５遺伝子を含む非ヒト生物が提供される。非ヒト生物の生殖細胞系列を通じて伝えられ得る内因性ヒト化ＩＬ−１５遺伝子座を含む非ヒト生物が提供される。改変された内因性ＩＬ−１５遺伝子座からヒトＩＬ−１５を発現し、発現されたＩＬ−１５が完全にもしくは部分的にヒトである、非ヒト動物、例えば、哺乳動物（例えば、齧歯類、例えば、マウスもしくはラット）が提供される。
【０００６】
非ヒトＩＬ−１５調節性制御によって調節されるヒトＩＬ−１５ゲノム配列を含む、遺伝子改変された非ヒト動物、胚、細胞、組織、および核酸が提供される。上記非ヒト動物は、ヒト化ＩＬ−１５タンパク質、もしくは完全ヒトＩＬ−１５タンパク質（例えば、完全ヒト成熟ＩＬ−１５タンパク質）を発現し、当該分野で公知のトランスジェニックヒトＩＬ−１５非ヒト動物の病態のうちの１またはそれより多くを示さない。種々の実施形態において、上記非ヒト動物は、哺乳動物、例えば、齧歯類、例えば、マウス、ラット、ハムスターなどである。具体的実施形態において、上記哺乳動物は、齧歯類である；別の具体的実施形態において、上記齧歯類は、マウスもしくはラットである。
【０００７】
内因性非ヒトＩＬ−１５遺伝子座においてヒトＩＬ−１５ゲノム配列を含む遺伝子改変された非ヒト動物、胚、細胞、組織、および核酸が提供される。上記非ヒト動物は、ヒト化ＩＬ−１５タンパク質、もしくは完全ヒトＩＬ−１５タンパク質（例えば、完全ヒト成熟ＩＬ−１５タンパク質）を、上記改変された内因性ＩＬ−１５遺伝子座の１種またはそれより多くの内因性非ヒト調節配列によって調節される改変された内因性非ヒト遺伝子座から発現し、当該分野で公知のトランスジェニックヒトＩＬ−１５非ヒト動物の病態のうちの１またはそれより多くを示さない。種々の実施形態において、上記非ヒト動物は、哺乳動物、例えば、齧歯類、例えば、マウス、ラット、ハムスターなどである。具体的実施形態において、上記哺乳動物は齧歯類である；別の具体的実施形態において、上記齧歯類はマウスもしくはラットである。
【０００８】
種々の実施形態および局面において、上記非ヒト動物は、改変されたＩＬ−１５遺伝子座が生殖細胞系列を通じて伝えられ得、ここで上記改変された内因性ＩＬ−１５遺伝子座が、内因性ＩＬ−１５遺伝子座の少なくとも成熟タンパク質コード領域のヒト化を含むように、上記非ヒト動物のゲノムの中に改変されたＩＬ−１５遺伝子座を含む。種々の実施形態において、上記非ヒト動物は、哺乳動物である。種々の実施形態において、上記哺乳動物は、齧歯類であり、上記齧歯類は、改変されたＩＬ−１５遺伝子座に関してヘテロ接合性もしくはホモ接合性である。種々の実施形態において、上記齧歯類は、マウスおよびラットから選択される。種々の実施形態において、上記マウスおよびラットは、上記改変されたＩＬ−１５遺伝子座に関してホモ接合性であり、内因性の完全マウスもしくは完全ラットＩＬ−１５タンパク質を発現できず、上記マウスおよびラットは、成熟ヒトＩＬ−１５タンパク質を発現する。
【０００９】
一実施形態において、第１の内因性野生型ＩＬ−１５対立遺伝子、および第２の内因性ＩＬ−１５対立遺伝子のヒト化を含む非ヒト動物が提供される。
【００１０】
一実施形態において、第１の内因性ＩＬ−１５対立遺伝子の欠如および第２の内因性ＩＬ−１５対立遺伝子のヒト化を含む非ヒト動物が提供される。
【００１１】
一実施形態において、機能的内因性ＩＬ−１５対立遺伝子の欠如を含み、かつ内因性非ヒト調節エレメントの制御下のヒト化ＩＬ−１５対立遺伝子の少なくとも１コピーを含む非ヒト動物が提供される。一実施形態において、ヒト化ＩＬ−１５対立遺伝子の上記少なくとも１コピーは、内因性ＩＬ−１５遺伝子座にある。
【００１２】
種々の実施形態および局面において、上記ヒト化は、上記内因性非ヒトＩＬ−１５遺伝子座において１個またはそれより多くのエキソンおよび／もしくはイントロンのヒト化である。種々の実施形態および局面において、内因性非ヒト５’非翻訳領域および内因性非ヒト３’非翻訳領域のうちの一方もしくは両方が上記改変された非ヒト動物の中で保持される、改変されたＩＬ−１５遺伝子座を有する非ヒト動物が提供される。
【００１３】
一実施形態において、上記内因性非ヒトＩＬ−１５遺伝子座のヒト化は、少なくとも１個のヒトＩＬ−１５タンパク質コードエキソンを含むヒトＩＬ−１５遺伝子座のゲノムフラグメントであるコード領域（もしくはそのフラグメント）に伴うヒト化である。
【００１４】
一実施形態において、上記内因性非ヒトＩＬ−１５遺伝子座のヒト化は、各ヒトＩＬ−１５タンパク質コードエキソンを含むが、非ヒトＩＬ−１５タンパク質コードエキソンを含まないヒトＩＬ−１５遺伝子座のゲノムフラグメントであるコード領域に伴うヒト化である。
【００１５】
一実施形態において、上記ヒトゲノムフラグメントを含むＩＬ−１５遺伝子座は、成熟である場合に、完全ヒトであるＩＬ−１５タンパク質の発現を生じる。一実施形態において、上記内因性非ヒトＩＬ−１５遺伝子座のヒト化は、上記非ヒト動物におけるプロセシングの際に、上記ヒト化遺伝子座によって生成される成熟ＩＬ−１５タンパク質が完全にヒトであるようにされる、ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードするｃＤＮＡに伴うヒト化である。
【００１６】
一局面において、全体的にもしくは部分的にヒト化された内因性ＩＬ−１５遺伝子座であって、ヒト化ＩＬ−１５遺伝子座が内因性非ヒト調節エレメントの制御下にあるヒト化ＩＬ−１５コード遺伝子を含む内因性ＩＬ−１５遺伝子座を含む、遺伝子改変された非ヒト動物が提供される。一実施形態において、上記内因性非ヒト調節エレメントは、上記ヒト化ＩＬ−１５遺伝子のうちの第１のタンパク質コード領域もしくはエキソンの上流に（ＩＬ−１５遺伝子の転写方向に対して）全ての内因性ＩＬ−１５調節エレメントを含む。一実施形態において、上記内因性非ヒト調節エレメントは、上記ヒト化ＩＬ−１５遺伝子上の最後のタンパク質コード領域もしくはエキソンの下流に（ＩＬ−１５遺伝子の転写方向に対して）全ての内因性ＩＬ−１５調節エレメントを含む。一実施形態において、上記ヒト化ＩＬ−１５コード遺伝子は、ヒト３’ＵＴＲを含む。
【００１７】
一局面において、内因性齧歯類ＩＬ−１５ゲノム配列の内因性齧歯類ＩＬ−１５遺伝子座において、ヒトＩＬ−１５ゲノム配列での置換を含む遺伝子改変された齧歯類が提供される。一実施形態において、上記遺伝子改変は、上記非ヒト動物の生殖細胞系列にある。
【００１８】
一実施形態において、上記遺伝子改変された齧歯類は、上記ヒトＩＬ−１５ゲノム配列の上流に（上記ＩＬ−１５遺伝子の転写方向に対して）第１の齧歯類調節配列および上記ヒトＩＬ−１５ゲノム配列の下流に第２の齧歯類調節配列を含む。一実施形態において、上記第１の齧歯類調節配列は、齧歯類プロモーターおよび／もしくはエンハンサーを含み、上記第２の齧歯類調節配列は、３’−ＵＴＲを含む。
【００１９】
一局面において、ヒトＩＬ−１５タンパク質もしくはヒト化ＩＬ−１５タンパク質を発現する遺伝子改変された非ヒト動物が提供される。
【００２０】
一局面において、改変された遺伝子座を形成するために、内因性マウスＩＬ−１５ゲノム配列（もしくはそのフラグメント）の内因性マウスＩＬ−１５遺伝子座において、ヒトＩＬ−１５ゲノム配列（もしくはそのフラグメント）での置換を含み、ここで上記ヒトＩＬ−１５ゲノム配列が少なくとも１個のヒトタンパク質コードエキソンを含む、遺伝子改変されたマウスが提供される。
【００２１】
一実施形態において、上記置換は、ヒトＩＬ−１５の少なくとも２個のタンパク質コードエキソンを含むヒトゲノムフラグメントを含む。一実施形態において、上記置換は、ヒトＩＬ−１５の少なくとも３個のタンパク質コードエキソンを含むヒトゲノムフラグメントを含む。一実施形態において、上記置換は、ヒトＩＬ−１５の少なくとも４個のタンパク質コードエキソンを含むヒトゲノムフラグメントを含む。一実施形態において、上記置換は、ヒトＩＬ−１５のタンパク質コードエキソン３、４、５および６を含むヒトゲノムフラグメントを含む。一実施形態において、上記置換は、上記置換のヒトエキソンが上記ヒトＩＬ−１５遺伝子の最も下流の（上記ＩＬ−１５遺伝子の転写方向に対して）４個のタンパク質コードエキソンからなる、全てよりは少ないヒトＩＬ−１５エキソンを含む。一実施形態において、上記置換は、ヒトＩＬ−１５の４個以下のタンパク質コードエキソンを含むヒトゲノムフラグメントから本質的になる；一実施形態において、上記置換はさらに、その最も５’側のヒトエキソンの上流にあるヒトイントロン配列およびヒト終止コドンの下流にかつヒト３’ＵＴＲの下流にあるヒト非タンパク質コード配列から本質的になる。
【００２２】
一局面において、ヒト化ＩＬ−１５遺伝子座を含み、ここで上記ヒト化ＩＬ−１５遺伝子座が非タンパク質コードマウスエキソンを含み、各（成熟）タンパク質コードマウスエキソンが（成熟）タンパク質コードヒトエキソンで置換されている、遺伝子改変されたマウスが提供される。一実施形態において、上記ヒト化ＩＬ−１５遺伝子座は、成熟（すなわち、非プレタンパク質）マウスＩＬ−１５タンパク質配列をコードするマウスゲノムフラグメントの、成熟（すなわち、非プレタンパク質）ヒトＩＬ−１５タンパク質配列をコードするヒトゲノムフラグメントでの置換を含む。
【００２３】
一局面において、配列番号５と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％同一であるか、または同一である配列を含む、遺伝子改変されたマウスが提供される。
【００２４】
一局面において、配列番号５と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％同一であるか、または同一である配列を含み；ここでマウスが本明細書で記載されるとおりマウスＩＬ−１５タンパク質の内因性配列コードエキソン３〜６を欠いており、上記マウスが内因性マウスＩＬ−１５遺伝子座において、本明細書で記載されるようにヒトＩＬ−１５のエキソン３、４、５、および６をコードする核酸配列を含む、遺伝子改変されたマウスが提供される。
【００２５】
一局面において、ヒトＩＬ−１５タンパク質もしくはヒト化ＩＬ−１５タンパク質を、成熟ヒトＩＬ−１５タンパク質中のアミノ酸をコードする少なくとも１個のヒトＩＬ−１５エキソンを含むように改変されている内因性マウスＩＬ−１５遺伝子座から発現する、遺伝子改変された齧歯類が提供される。一実施形態において、上記内因性齧歯類ＩＬ−１５遺伝子座は、成熟ヒトＩＬ−１５タンパク質中のアミノ酸をコードする少なくとも２個のヒトＩＬ−１５エキソンを含む。一実施形態において、上記内因性齧歯類ＩＬ−１５遺伝子座は、成熟ヒトＩＬ−１５タンパク質中のアミノ酸をコードする少なくとも３個のヒトＩＬ−１５エキソンを含む。一実施形態において、上記内因性齧歯類ＩＬ−１５遺伝子座は、成熟ヒトＩＬ−１５タンパク質中のアミノ酸をコードする少なくとも４個のヒトＩＬ−１５エキソンを含む。一実施形態において、上記内因性齧歯類は、成熟ヒトＩＬ−１５タンパク質中のアミノ酸をコードするヒトＩＬ−１５のエキソン３、エキソン４、エキソン５およびエキソン６を含む。一実施形態において、上記内因性齧歯類ＩＬ−１５遺伝子座は、成熟ヒトＩＬ−１５タンパク質中のアミノ酸をコードする全てのヒト核酸配列を含む。
【００２６】
一実施形態において、上記ヒト化は、ヒトＩＬ−１５  ３’ＵＴＲを含む。一実施形態において、上記齧歯類遺伝子座は、成熟ＩＬ−１５タンパク質のアミノ酸をコードしない少なくとも１個のエキソンまたは成熟ＩＬ−１５タンパク質のアミノ酸をコードしないヌクレオチド配列を含む少なくとも１個のエキソンを含む。一実施形態において、上記齧歯類遺伝子座は、成熟ＩＬ−１５タンパク質のアミノ酸をコードしない少なくとも２個のエキソンを含む。一実施形態において、上記齧歯類遺伝子座は、成熟ＩＬ−１５タンパク質のアミノ酸をコードしない少なくとも３個のエキソンを含む。一実施形態において、上記齧歯類遺伝子座は、成熟ＩＬ−１５タンパク質のアミノ酸をコードしない４個のエキソンを含む。
【００２７】
一局面において、ヒト化ＩＬ−１５タンパク質を発現する遺伝子改変された齧歯類であって、ここで上記齧歯類のリンパ球集団が、年齢を合わせた野生型マウスにおけるＴ細胞の集団と数がほぼ同じであるそのＴ細胞集団によって特徴付けられる、遺伝子改変された齧歯類が提供される。一実施形態において、上記改変された齧歯類は、年齢を合わせた野生型マウスにおいて成熟Ｔ細胞の集団と数がほぼ同じである成熟Ｔ細胞の集団によって特徴付けられる。
【００２８】
一局面において、ヒト化ＩＬ−１５タンパク質を発現する遺伝子改変された齧歯類であって、ここで齧歯類のリンパ球集団が、年齢を合わせた野生型マウスにおけるＴ細胞の集団と数がほぼ同じであるＴ細胞の集団によって特徴付けられる、遺伝子改変された齧歯類が提供される。一実施形態において、上記改変された齧歯類は、年齢を合わせた野生型マウスにおける成熟Ｔ細胞の集団と数がほぼ同じである成熟Ｔ細胞の集団を示す。一実施形態において、上記改変された齧歯類は、年齢を合わせた野生型マウスにおける末梢Ｔ細胞の集団と数がほぼ同じである末梢Ｔ細胞の集団を示す。一実施形態において、上記成熟ヒト化ＩＬ−１５タンパク質は、成熟ヒトＩＬ−１５タンパク質と同一である。
【００２９】
一局面において、ヒト化ＩＬ−１５タンパク質を発現する遺伝子改変された齧歯類であって、ここで齧歯類のリンパ球集団が、年齢を合わせた野生型マウスのＴ細胞集団におけるＣＤ４：ＣＤ８比とほぼ同じであるＣＤ４：ＣＤ８比を示すＴ細胞集団によって特徴付けられる、遺伝子改変された齧歯類が提供される。一実施形態において、上記ヒト化ＩＬ−１５タンパク質は、ヒトＩＬ−１５タンパク質と同一である。
【００３０】
一局面において、ヒト化ＩＬ−１５タンパク質を発現する遺伝子改変された齧歯類であって、ここで齧歯類のリンパ球集団が、年齢を合わせた野生型マウスのナチュラルキラー（ＮＫ）細胞集団とサイズがほぼ同じであるＮＫ細胞集団によって特徴付けられる、遺伝子改変された齧歯類が提供される。一実施形態において、上記ヒト化ＩＬ−１５タンパク質は、ヒトＩＬ−１５タンパク質と同一である。
【００３１】
一局面において、ヒトＩＬ−１５タンパク質もしくはヒト化ＩＬ−１５タンパク質を発現する遺伝子改変された齧歯類であって、ここで齧歯類のリンパ球集団が、年齢を合わせた野生型マウスにおけるＴ細胞集団およびＮＫ細胞集団とサイズが各々ほぼ同じであるＴ細胞集団およびＮＫ細胞集団によって特徴づけられる、遺伝子改変された齧歯類が提供される。
【００３２】
一局面において、ヒト化ＩＬ−１５タンパク質を発現する遺伝子改変された齧歯類であって、ここで齧歯類が自発的腸炎症を発生させない、遺伝子改変された齧歯類が提供される。一実施形態において、上記齧歯類は、年齢を合わせた野生型齧歯類とせいぜい同程度にしか、腸炎症を発生させる傾向を示さない。
【００３３】
一局面において、ヒト化ＩＬ−１５タンパク質を発現する遺伝子改変された齧歯類であって、ここで齧歯類が十二指腸空腸領域において自発的炎症を発生させない、遺伝子改変された齧歯類が提供される。一実施形態において、上記齧歯類は、年齢を合わせた野生型齧歯類とせいぜい同程度にしか、十二指腸空腸領域において炎症を発生させる傾向を示さない。
【００３４】
一局面において、ヒト化ＩＬ−１５タンパク質を発現する遺伝子改変された齧歯類であって、ここで齧歯類が年齢を合わせた野生型齧歯類より高度の腸上皮の破壊を示さない、遺伝子改変された齧歯類が提供される。
【００３５】
一局面において、ヒト化ＩＬ−１５タンパク質を発現する遺伝子改変された齧歯類であって、ここで齧歯類が年齢を合わせた野生型齧歯類より高い割合もしくは頻度でセリアック病を示さない、遺伝子改変された齧歯類が提供される。
【００３６】
一局面において、ヒト化ＩＬ−１５タンパク質を発現する遺伝子改変された齧歯類であって、ここで齧歯類が年齢を合わせた野生型齧歯類より高い食餌誘発性肥満症への抵抗性を示さず、より高いインスリン感受性を示さない、遺伝子改変された齧歯類が提供される。
【００３７】
一局面において、ヒト化ＩＬ−１５タンパク質を発現する遺伝子改変された齧歯類であって、ここで齧歯類が病原体への感染の際に、年齢を合わせた野生型齧歯類と同様に、リポポリサッカリド誘発性致死性肝損傷に対して感受性がない、遺伝子改変された齧歯類が提供される。
【００３８】
一局面において、ヒト化ＩＬ−１５タンパク質を発現する遺伝子改変された齧歯類であって、ここで齧歯類が年齢を合わせた野生型齧歯類より高い割合もしくは頻度で乾癬性病変を発生させない、遺伝子改変された齧歯類が提供される。
【００３９】
一局面において、ヒト化ＩＬ−１５タンパク質を発現する遺伝子改変された齧歯類であって、ここで齧歯類が年齢を合わせた野生型齧歯類より高い割合もしくは頻度で関節炎を発生させない、遺伝子改変された齧歯類が提供される。
【００４０】
一局面において、ヒト化ＩＬ−１５タンパク質を発現する遺伝子改変された齧歯類であって、ここで齧歯類が年齢を合わせた野生型齧歯類より高い割合もしくは頻度で関節のリンパ球浸潤を発生させない、遺伝子改変された齧歯類が提供される。
【００４１】
一局面において、ヒト化ＩＬ−１５タンパク質を発現する遺伝子改変された齧歯類であって、ここで齧歯類が年齢を合わせた野生型コントロール齧歯類より高い割合で炎症性滑膜炎を発生させない、遺伝子改変された齧歯類が提供される。
【００４２】
一局面において、ヒトＩＬ−１５タンパク質もしくはヒト化ＩＬ−１５タンパク質を発現する遺伝子改変された齧歯類であって、ここで上記齧歯類は、年齢を合わせた野生型齧歯類のモノより高い割合もしくは頻度で１もしくはそれより多くの病態を発生させず、ここで上記１もしくはそれより多くの病態は、関節炎、関節のリンパ球浸潤、炎症性滑膜炎、乾癬性病変、病原体関連リポポリサッカリド誘発性致死性肝損傷、インスリン抵抗性、食餌誘発性肥満症への抵抗性、自発的腸炎症、十二指腸空腸領域における自発的炎症、腸上皮の破壊、セリアック病、およびこれらの組み合わせからなる群より選択される、遺伝子改変された齧歯類が提供される。
【００４３】
一局面において、ヒトＩＬ−１５タンパク質もしくはヒト化ＩＬ−１５タンパク質を発現する遺伝子改変された齧歯類であって、ここで上記齧歯類は、年齢を合わせた野生型齧歯類のものより高い割合もしくは頻度で２もしくはそれより多くの病態を発生させず、ここで上記２もしくはそれより多くの病態は、関節炎、関節のリンパ球浸潤、炎症性滑膜炎、乾癬性病変、病原体関連リポポリサッカリド誘発性致死性肝損傷、インスリン抵抗性、食餌誘発性肥満症への抵抗性、自発的腸炎症、十二指腸空腸領域における自発的炎症、腸上皮の破壊、およびセリアック病からなる群より選択される、遺伝子改変された齧歯類が提供される。
【００４４】
一局面において、ヒトＩＬ−１５タンパク質もしくはヒト化ＩＬ−１５タンパク質を発現する遺伝子改変された齧歯類であって、ここで齧歯類が年齢を合わせた野生型齧歯類のものより高い割合もしくは頻度で３もしくはそれより多くの病態を発生させず、ここで上記３もしくはそれより多くの病態は、関節炎、関節のリンパ球浸潤、炎症性滑膜炎、乾癬性病変、病原体関連リポポリサッカリド誘発性致死性肝損傷、インスリン抵抗性、食餌誘発性肥満症への抵抗性、自発的腸炎症、十二指腸空腸領域における自発的炎症、腸上皮の破壊、およびセリアック病からなる群より選択される、遺伝子改変された齧歯類が提供される。
【００４５】
一局面において、ヒトＩＬ−１５タンパク質もしくはヒト化ＩＬ−１５タンパク質を発現する遺伝子改変された齧歯類であって、ここで齧歯類が年齢を合わせた野生型齧歯類のものより高い割合もしくは頻度で４もしくはそれより多くの病態を発生させず、ここで上記４もしくはそれより多くの病態は、関節炎、関節のリンパ球浸潤、炎症性滑膜炎、乾癬性病変、病原体関連リポポリサッカリド誘発性致死性肝損傷、インスリン抵抗性、食餌誘発性肥満症への抵抗性、自発的腸炎症、十二指腸空腸領域における自発的炎症、腸上皮の破壊、およびセリアック病からなる群より選択される、遺伝子改変された齧歯類が提供される。
【００４６】
一局面において、ヒトＩＬ−１５タンパク質もしくはヒト化ＩＬ−１５タンパク質を発現する遺伝子改変された齧歯類であって、ここで齧歯類が年齢を合わせた野生型齧歯類のものより高い割合もしくは頻度で５もしくはそれより多くの病態を発生させず、ここで上記５もしくはそれより多くの病態は、関節炎、関節のリンパ球浸潤、炎症性滑膜炎、乾癬性病変、病原体関連リポポリサッカリド誘発性致死性肝損傷、インスリン抵抗性、食餌誘発性肥満症への抵抗性、自発的腸炎症、十二指腸空腸領域における自発的炎症、腸上皮の破壊、およびセリアック病からなる群より選択される、遺伝子改変された齧歯類が提供される。
【００４７】
一局面において、ヒトＩＬ−１５タンパク質もしくはヒト化ＩＬ−１５タンパク質を発現する遺伝子改変された齧歯類であって、ここで齧歯類が年齢を合わせた野生型齧歯類のものより高い割合もしくは頻度で６もしくはそれより多くの病態を発生させず、ここで上記６もしくはそれより多くの病態は、関節炎、関節のリンパ球浸潤、炎症性滑膜炎、乾癬性病変、病原体関連リポポリサッカリド誘発性致死性肝損傷、インスリン抵抗性、食餌誘発性肥満症への抵抗性、自発的腸炎症、十二指腸空腸領域における自発的炎症、腸上皮の破壊、およびセリアック病からなる群より選択される、遺伝子改変された齧歯類が提供される。
【００４８】
一局面において、内因性ＩＬ−１５遺伝子座のヒト化を含む遺伝子改変された非ヒト動物であって、ここで動物が部分的にもしくは完全にヒトの成熟ＩＬ−１５タンパク質を発現し、上記部分的にもしくは完全にヒトの成熟ＩＬ−１５タンパク質は、年齢を合わせた野生型動物における内因性ＩＬ−１５タンパク質と匹敵するレベルで、かつ同じ組織において発現される、遺伝子改変された非ヒト動物が提供される。
【００４９】
一局面において、大きな標的化ベクター（ＬＴＶＥＣ）が提供され、上記ベクターは、内因性非ヒトＩＬ−１５遺伝子座に対する相同性アームを含み、ここで上記ＬＴＶＥＣは、上記相同性アームの間に配置された、ヒトＩＬ−１５遺伝子のタンパク質コードエキソンを含む連続ヒトゲノムフラグメントを含む。一実施形態において、上記連続ヒトゲノムフラグメントは、ヒトＩＬ−１５遺伝子座の非タンパク質コードエキソンを含まない。一実施形態において、上記連続ヒトゲノムフラグメントは、ＩＬ−１５遺伝子のヒト３’ＵＴＲをさらに含む。
【００５０】
一局面において、転写方向に対して５’から３’に向かって、マウスＩＬ−１５  ５’非コード配列に相同な核酸配列と、ヒトＩＬ−１５タンパク質コードエキソンを含むが、上記ヒトＩＬ−１５タンパク質−コード配列に対して上流にヒト調節配列を含まないヒトゲノムフラグメントと、マウスＩＬ−１５  ３’非コード配列に相同な核酸配列とを含む、核酸（例えば、ＤＮＡ）構築物が提供される。一実施形態において、上記ヒトゲノムフラグメントは、ヒトＩＬ−１５  ３’ＵＴＲをさらに含む。
【００５１】
一局面において、転写の方向に対して５’から３’に向かって、第１のマウスＩＬ−１５タンパク質コードエキソンの上流にマウスＩＬ−１５遺伝子配列に相同な領域を含む核酸配列と、ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードするが、上記ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードする配列の上流にヒト調節配列を含まないヒトゲノムフラグメントと、マウスＩＬ−１５  ３’非コード配列に相同な核酸配列とを含む、核酸（例えば、ＤＮＡ）構築物が提供される。一実施形態において、上記ヒトゲノムフラグメントは、ヒトＩＬ−１５  ３’ＵＴＲをさらに含む。
【００５２】
一局面において、遺伝子改変された非ヒト細胞が提供され、ここで上記非ヒト細胞は、内因性非ヒトＩＬ−１５遺伝子座において、非ヒトＩＬ−１５をコードする遺伝子配列の、ヒトＩＬ−１５をコードするヒトゲノム配列での置換を含む。
【００５３】
一実施形態において、上記ヒトゲノム配列は、上記ヒトＩＬ−１５遺伝子のうちの全てのタンパク質コードエキソンにまたがる連続ヒト核酸配列を含む。
【００５４】
一実施形態において、上記遺伝子改変された齧歯類は、上記内因性非ヒトＩＬ−１５遺伝子座において非ヒトＩＬ−１５プロモーターを含む。
【００５５】
一実施形態において、上記遺伝子改変された非ヒト動物は、全ての齧歯類非タンパク質コードエキソンおよび上記齧歯類ＩＬ−１５遺伝子の第１のタンパク質コードエキソンの上流にある調節領域を含む。
【００５６】
一実施形態において、上記細胞は、多能性細胞、人工多能性細胞、全能性細胞、ＥＳ細胞、体細胞、および卵子から選択される。
【００５７】
一実施形態において、上記細胞は、ヒトＩＬ−１５タンパク質を発現する。
【００５８】
一実施形態において、上記非ヒト動物は、哺乳動物である。一実施形態において、上記哺乳動物は、齧歯類である。一実施形態において、上記齧歯類は、マウスおよびラットから選択される。
【００５９】
一局面において、非ヒト胚が提供され、ここで上記胚は、内因性非ヒトＩＬ−１５遺伝子座において、内因性非ヒトＩＬ−１５コード核酸配列の、ヒトＩＬ−１５コード核酸配列での置換を含む、少なくとも１種の非ヒトドナー細胞（例えば、ＥＳ細胞、多能性細胞、全能性細胞など）を含む。一実施形態において、上記ドナー細胞は、非ヒトＥＳ細胞であり、上記胚は、前桑実胚（ｐｒｅ−ｍｏｒｕｌａ）、桑実胚、もしくは胚盤胞である宿主非ヒト動物胚である。
【００６０】
一実施形態において、上記非ヒト胚は、ラット胚であり、上記少なくとも１種の非ヒトドナー細胞は、ラット細胞である。一実施形態において、上記非ヒトＥＳ細胞は、ラットＥＳ細胞であり、上記宿主胚は、ラット胚である。
【００６１】
一実施形態において、上記非ヒト胚は、マウス胚であり、上記少なくとも１種の非ヒトドナー細胞は、マウス細胞である。一実施形態において、上記非ヒトＥＳ細胞は、マウスＥＳ細胞であり、上記宿主胚は、マウス胚である。
【００６２】
一局面において、内因性齧歯類ＩＬ−１５遺伝子座においてヒト化ＩＬ−１５遺伝子を含む齧歯類組織が提供される。一実施形態において、上記組織は、上皮組織、皮膚組織、および筋組織から選択される。
【００６３】
一局面において、ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードする核酸（例えば、ＤＮＡ）配列を含む遺伝子改変された齧歯類であって、ここで齧歯類が齧歯類ＩＬ−１５を発現せず、ここで上記齧歯類は、野生型齧歯類のＮＫ細胞集団とほぼ同じサイズであるＮＫ細胞集団を示す、遺伝子改変された齧歯類が提供される。一実施形態において、上記齧歯類はラットである。一実施形態において、上記齧歯類はマウスである。
【００６４】
一実施形態において、上記齧歯類は、年齢を合わせた野生型齧歯類の末梢Ｔ細胞集団とほぼ同じサイズである末梢Ｔ細胞集団を示す。
【００６５】
一局面において、ヒトＩＬ−１５タンパク質もしくはヒト化ＩＬ−１５タンパク質を発現する非ヒト動物を作製するための方法が提供され、上記方法は、非ヒト動物を本明細書に記載されるとおりに遺伝子改変して、非ヒト動物においてヒトＩＬ−１５タンパク質もしくはヒト化ＩＬ−１５タンパク質をコードする核酸配列（例えば、ＤＮＡ）を含む核酸配列を形成する工程を包含し、ここで上記核酸配列は、内因性非ヒト上流および下流調節エレメントの制御下にある。
【００６６】
いくつかの実施形態において、上記非ヒト動物は、内因性ＩＬ−１５ゲノム配列（もしくはそのフラグメント）を、内因性ＩＬ−１５遺伝子座において、ヒトＩＬ−１５ゲノム配列（もしくはそのフラグメント）で置換して、改変された遺伝子座を形成することによって遺伝子改変され、ここで上記ヒトＩＬ−１５ゲノム配列は、少なくとも１個のヒトタンパク質コードエキソンを含む。一実施形態において、上記置換は、ヒトＩＬ−１５の少なくとも２個のタンパク質コードエキソンを含むヒトゲノムフラグメントを含む。一実施形態において、上記置換は、ヒトＩＬ−１５の少なくとも３個のタンパク質コードエキソンを含むヒトゲノムフラグメントを含む。一実施形態において、上記置換は、ヒトＩＬ−１５の少なくとも４個のタンパク質コードエキソンを含むヒトゲノムフラグメントを含む。具体的実施形態において、上記置換は、ヒトＩＬ−１５のタンパク質コードエキソン３、４、５および６を含むヒトゲノムフラグメントを含む。一実施形態において、上記置換は、ヒト終始コドンの下流に非ヒトタンパク質コード配列（例えば、ヒト３’ＵＴＲ）をさらに含む。
【００６７】
一実施形態において、上記非ヒト動物は、多能性細胞もしくは全能性細胞（例えば、ＥＳ細胞）から作製される。一実施形態において、上記非ヒト動物は、上記ヒト化ＩＬ−１５遺伝子を（必要に応じて、上流および／もしくは下流の内因性非ヒト調節配列とともに）含む核酸構築物が前核注入（ｐｒｏｎｕｃｌｅａｒ  ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）によって導入される核注入工程を使用して作製される。一実施形態において、上記核酸構築物は、ヒトＩＬ−１５のタンパク質コードエキソン３、４、５および６を含むヒトゲノムフラグメントを含む。一実施形態において、上記核酸構築物は、ヒト終止コドンの下流にヒト非タンパク質コード配列（例えば、ヒト３’ＵＴＲ）をさらに含む。一実施形態において、上記非ヒト動物は、ヒトＩＬ−１５遺伝子もしくはヒト化ＩＬ−１５遺伝子、ならびに（必要に応じて）上流および／もしくは下流の非ヒトＩＬ−１５調節エレメントで遺伝子改変された非ヒト線維芽細胞を使用して作製される。
【００６８】
一局面において、ヒトＩＬ−１５のアンタゴニストである薬剤を同定するための方法が提供され、上記方法は、ある薬剤を、本明細書で記載されるとおりの遺伝子改変された齧歯類に投与する工程、上記齧歯類におけるヒトＩＬ−１５媒介性機能に対する上記薬剤の効果を決定する工程、および上記薬剤が上記遺伝子改変された齧歯類においてヒトＩＬ−１５の機能と拮抗する場合、上記薬剤をＩＬ−１５アンタゴニストとして同定する工程を包含する。
【００６９】
一実施形態において、上記薬剤は、ＩＬ−１５と結合する免疫グロブリン可変ドメインを含む。一実施形態において、上記薬剤は、ヒトＩＬ−１５と特異的に結合するが、齧歯類ＩＬ−１５と特異的に結合しない。一実施形態において、上記薬剤は、抗体である。
【００７０】
一局面において、ある薬剤がＩＬ−１５媒介性リンパ球発生を低減させるか否かを決定するための方法が提供され、上記方法は、本明細書で記載されるとおりの遺伝子改変された齧歯類にＩＬ−１５アンタゴニストを一定期間にわたって投与する工程、投与後に１もしくはそれより多くの時点で上記齧歯類のリンパ球数を測定する工程、および上記ＩＬ−１５アンタゴニストが上記リンパ球集団を低減させるか否かを決定する工程を包含する。
【００７１】
一局面において、ある薬剤が組織もしくは関節のＩＬ−１５媒介性リンパ球浸潤を低減するか否かを決定するための方法が提供され、上記方法は、本明細書で記載されるとおりの遺伝子改変された齧歯類にＩＬ−１５アンタゴニストを一定期間にわたって投与する工程、投与後に１もしくはそれより多くの時点で上記組織もしくは関節のリンパ球浸潤を測定する工程、および上記ＩＬ−１５アンタゴニストが上記組織もしくは関節のリンパ球浸潤を低減させるか否かを決定する工程を包含する。
【００７２】
一局面において、ある薬剤がＩＬ−１５媒介性関節炎進行を低減するか否かを決定するための方法が提供され、上記方法は、誘発性関節炎をさらに含む、本明細書で記載されるとおりの遺伝子改変された齧歯類に、ＩＬ−１５アンタゴニストを一定期間にわたって投与する工程、関節炎進行を測定する工程、および上記ＩＬ−１５アンタゴニストが上記齧歯類における関節炎進行に影響を及ぼすか否かを決定する工程を包含する。
【００７３】
本願の特定の態様において、例えば以下の項目が提供される：
（項目Ａ１）
遺伝子改変されたマウスであって、該マウスのゲノムは、内因性マウスＩＬ−１５遺伝子座において、ヒト化ＩＬ−１５遺伝子を形成するために、成熟マウスＩＬ−１５ポリペプチドをコードするマウスＩＬ−１５エキソン配列を含むマウスゲノムフラグメントの、ヒトＩＬ−１５エキソン３〜６を含みかつ成熟ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするヒトゲノムセグメントでの置換を含み、ここで該ヒト化ＩＬ−１５遺伝子は、該内因性マウスＩＬ−１５遺伝子座において内因性マウスＩＬ−１５上流調節エレメントの制御下にある、遺伝子改変されたマウス。
（項目Ａ２）
前記ヒトゲノムセグメント中の前記ヒトＩＬ−１５エキソンは、ヒトＩＬ−１５のエキソン３、エキソン４、エキソン５およびエキソン６からなる、項目Ａ１に記載の遺伝子改変されたマウス。
（項目Ａ３）
前記ヒト化ＩＬ−１５コード遺伝子は、配列番号４のアミノ酸配列を含むタンパク質をコードする、項目Ａ１に記載の遺伝子改変されたマウス。
（項目Ａ４）
前記ヒトゲノムセグメントは、ヒトＩＬ−１５遺伝子座において、ヒトＩＬ−１５  ３’−ＵＴＲの下流に存在するヒト核酸をさらに含む、項目Ａ１に記載の遺伝子改変されたマウス。
（項目Ａ５）
遺伝子改変されたマウスを作製する方法であって、該方法は、内因性マウスＩＬ−１５遺伝子座において成熟マウスＩＬ−１５ポリペプチドをコードするマウスＩＬ−１５エキソン配列を含むマウスゲノムフラグメントを、ヒトＩＬ−１５エキソン３〜６を含みかつ成熟ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするヒトゲノムセグメントで置換して、ヒト化ＩＬ−１５遺伝子を形成する工程によって、マウスのゲノムを改変する工程を包含し、ここで該ヒト化ＩＬ−１５遺伝子は、該内因性マウスＩＬ−１５遺伝子座において内因性マウスＩＬ−１５上流調節エレメントの制御下にある、方法。
（項目Ａ６）
前記ヒトゲノムセグメント中の前記ヒトＩＬ−１５エキソンは、ヒトＩＬ−１５のエキソン３、エキソン４、エキソン５およびエキソン６からなる、項目Ａ５に記載の方法。
（項目Ａ７）
前記ヒトゲノムセグメントは、ヒトＩＬ−１５遺伝子座において、ヒトＩＬ−１５  ３’−ＵＴＲの下流に存在するヒト核酸をさらに含む、項目Ａ５に記載の方法。
（項目Ａ８）
前記ヒト化ＩＬ−１５コード遺伝子は、配列番号４のアミノ酸配列を含むタンパク質をコードする、項目Ａ５に記載の方法。
（項目Ａ９）
遺伝子改変されたマウスであって、該マウスのゲノムは、ヒト化ＩＬ−１５遺伝子を含み、ここで該ヒト化ＩＬ−１５遺伝子は、マウスＩＬ−１５のエキソン１〜２と、ヒトＩＬ−１５のエキソン３〜６を含むヒトゲノムセグメントとを含み、ここで該ヒト化ＩＬ−１５遺伝子は、内因性マウスＩＬ−１５遺伝子座に由来するマウスＩＬ−１５上流調節エレメントの制御下にあり、該ヒト化ＩＬ−１５遺伝子は、成熟ヒトＩＬ−１５ポリペプチド配列を含むタンパク質をコードする、遺伝子改変されたマウス。
（項目Ａ１０）
前記ヒトゲノムセグメント中の前記ヒトＩＬ−１５エキソンは、ヒトＩＬ−１５のエキソン３、エキソン４、エキソン５およびエキソン６からなる、項目Ａ９に記載の遺伝子改変されたマウス。
（項目Ａ１１）
前記ヒト化ＩＬ−１５コード遺伝子は、配列番号４のアミノ酸配列を含むタンパク質をコードする、項目Ａ９に記載の遺伝子改変されたマウス。
（項目Ａ１２）
前記ヒトゲノムセグメントは、ヒトＩＬ−１５遺伝子座において、ヒトＩＬ−１５  ３’−ＵＴＲの下流に存在するヒト核酸をさらに含む、項目Ａ９に記載の遺伝子改変されたマウス。
（項目Ａ１３）
前記ヒト化ＩＬ−１５遺伝子は、内因性ＩＬ−１５遺伝子座以外である、前記マウスのゲノム中の位置にある、項目Ａ９に記載の遺伝子改変されたマウス。
（項目Ａ１４）
遺伝子改変されたマウスを作製する方法であって、該方法は、マウスのゲノムの中に、マウスＩＬ−１５のエキソン１〜２を含むマウスゲノムセグメントと、ヒトＩＬ−１５のエキソン３〜６を含むヒトゲノムセグメントとを含むヒト化ＩＬ−１５遺伝子を導入する工程を包含し、ここで該ヒト化ＩＬ−１５遺伝子は、内因性マウスＩＬ−１５遺伝子座に由来するマウスＩＬ−１５上流調節エレメントの制御下にあり、該ヒト化ＩＬ−１５遺伝子は、成熟ヒトＩＬ−１５ポリペプチド配列を含むタンパク質をコードする、方法。
（項目Ａ１５）
前記ヒト化ＩＬ−１５遺伝子は、内因性ＩＬ−１５遺伝子座以外である位置においてゲノムの中に組み込まれる、項目Ａ１４に記載の方法。
別段示されなければ、もしくは状況から明らかでなければ、２もしくはそれより多くの局面および／もしくは実施形態は組み合わせられ得る。
【図面の簡単な説明】
【００７４】
【図１】図１は、野生型マウスＩＬ−１５遺伝子遺伝子座（上）およびヒト化内因性マウスＩＬ−１５遺伝子座（下）の模式図（正確な縮尺ではない）を示す。白抜きの記号は、ヒト配列を示す；塗りつぶした記号は、マウス配列を示す；点描のものは、非翻訳領域を示す。マウスＩＬ−１５遺伝子の上流（図中で左方向）の非コードエキソンは示されない（そしてヒト化されなかった）。下の構築物は、ヒト化３’ＵＴＲ（点描の）および除去可能な薬物選択カセット（これは、ヒト化動物において必要に応じて除去される）を含むヒト化ＩＬ−１５遺伝子の実施形態を示す。
【００７５】
【図２】図２は、マウス配列とヒト配列との間の（上記ＩＬ−１５遺伝子の転写方向に対して）上流の接合部を示す核酸配列（配列番号１）である；示される配列は、大文字のマウス配列で始まり、小文字のＡｓｉｓＩ制限部位が続き、大文字のヒトＩＬ−１５核酸配列が続く。省略記号は、示される配列の上流および下流に配列が続いていることを示す。
【００７６】
【図３】図３は、大文字の下流のヒトＩＬ−１５コード配列および非コード配列（ヒト３’ＵＴＲには下線を付した）、続いて小文字のＸｈｏＩ部位、続いてｌｏｘ部位（大文字、下線）、続いて下流のｎｅｏ選択カセット（大文字）の配列（２．６ｋｂ下流に延びる）を示す核酸配列（配列番号２）の実施形態を示す。
【００７７】
【図４】図４は、ｎｅｏ選択カセット（大文字）の下流部分の間の接合部とｌｏｘ部位（大文字および下線）、続いてＮｈｅＩ部位（小文字）、続いてヒト化の下流のマウス配列（大文字）を示す核酸配列（配列番号３）である；２．６ｋｂは、上記選択カセットがさらに上流に延びていることを示す；省略記号は、配列が続いていることを示す。
【００７８】
【図５】図５は、マウスＩＬ−１５前駆タンパク質のタンパク質配列（上，「ｍＩＬ１５＿ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ」，配列番号４）；ハイブリッドマウス／ヒトＩＬ−１５前駆タンパク質（中，図１に示される遺伝子座のヒト化によって生成された「Ｒｅｇｎ＿Ｈｙｂｒｉｄ＿ｍ／ｈ」，配列番号５）；および公知のヒトＩＬ−１５アイソフォーム１プレプロタンパク質（下，「ｈＩＬ１５  ｉｓｏｆｏｒｍ  １」，配列番号６）のアラインメントを示す；図１に示されるとおりにヒト化から生じる接合部は、置換の最初のアミノ酸としてＣを示す垂直方向の矢印によって示される；成熟ｈＩＬ−１５タンパク質開始は、最初のアミノ酸Ｎで曲がった矢印によって示される。
【００７９】
【図６】図６は、ポリＩ：Ｃ注入したヘテロ接合性ｈＩＬ−１５マウスに由来する血清中で検出されたＩＬ−１５を示す。コントロールは、ポリＩ：Ｃ注入した野生型マウス由来の培養脾細胞中でｈＩＬ−１５が検出されなかったことを示す。
【００８０】
【図７】図７は、ヒトＩＬ−１５がＥＬＩＳＡアッセイにおいてマウスＩＬ−１５ともポリＩ：Ｃとも反応しないことを示す。マウスＩＬ−１５は、１０００ｐｇ／ｍＬであった。
【００８１】
【図８】図８は、未処置マウス、ポリＩ：Ｃ処置マウス、およびＬＰＳ処置マウスの７倍濃縮ＢＭ−ＤＣ上清を使用する、ヒトＩＬ−１５に関してヘテロ接合性のマウス由来のＢＭ−ＤＣを示す。
【００８２】
【図９】図９は、ヒトＩＬ−１５に関してヘテロ接合性のマウスに由来するＢＭ−ＤＣが、ヒトＩＬ−１５転写物を生成することを示す（ＲＴ−ＰＣＲデータ）。レーン１：未処置マウス；レーン２：ポリＩ：Ｃ処置マウス；レーン３：ＬＰＳのみ；レーン４：野生型未処置マウス；レーン５：野生型ポリＩ：Ｃ処置マウス；レーン６：野生型ＬＰＳ処置マウス；レーン７：ｃＤＮＡなしコントロール（水のみ）。
【００８３】
【図１０】図１０は、ＭＡＩＤ  ５２１８  ｈｅｔマウスが、ポリＩ：Ｃ注入の際に、ＭＡＩＤ  ５２１７  ｈｅｔマウスに匹敵するレベルでヒトＩＬ−１５を生成したことを示す。
【発明を実施するための形態】
【００８４】
（詳細な説明）
例えば、１種またはそれより多くの非ヒト配列の、１種またはそれより多くのヒト配列での置換などの、ヒト配列を含む改変された内因性ＩＬ−１５遺伝子座を含む遺伝子改変された非ヒト生物が提供される。上記生物は、一般に、上記改変を子孫へと、すなわち、生殖細胞系列伝達を通じて伝え得る。特に、遺伝子改変された非ヒト動物が提供される。
【００８５】
上記遺伝子改変された非ヒト動物は、マウス、ラット、ウサギ、ブタ、ウシ（例えば、雌牛、雄牛、スイギュウ）、シカ、ヒツジ、ヤギ、ニワトリ、ネコ、イヌ、フェレット、霊長類（例えば、マーモセット、アカゲザル）からなる群より選択され得る。適切な遺伝子改変可能なＥＳ細胞が容易に入手可能でない非ヒト動物に関しては、遺伝子改変を含む非ヒト動物を作製するために他の方法が使用される。このような方法は、例えば、非ＥＳ細胞ゲノム（例えば、線維芽細胞もしくは人工多能性細胞）を改変すること、および核移入を使用して、改変されたゲノムを適切な細胞（例えば、卵母細胞）に移入すること、および上記改変された細胞（例えば、上記改変された卵母細胞）を、胚を形成するために適した条件下で非ヒト動物の中で妊娠させることを包含する。
【００８６】
一局面において、上記非ヒト動物は、哺乳動物である。一局面において、上記非ヒト動物は、小型哺乳動物、例えば、ＤｉｐｏｄｏｉｄｅａもしくはＭｕｒｏｉｄｅａ上科の小型哺乳動物である。一実施形態において、上記遺伝子改変された動物は、齧歯類である。一実施形態において、上記齧歯類は、マウス、ラット、およびハムスターから選択される。一実施形態において、上記齧歯類は、Ｍｕｒｏｉｄｅａ上科から選択される。一実施形態において、上記遺伝子改変された動物は、以下から選択される科に由来する：Ｃａｌｏｍｙｓｃｉｄａｅ（例えば、マウス様ハムスター）、Ｃｒｉｃｅｔｉｄａｅ（例えば、ハムスター、新世界ラットおよび新世界マウス、ハタネズミ）、Ｍｕｒｉｄａｅ（真の（true）マウスおよび真のラット、アレチネズミ、トゲマウス、タテガミネズミ）、Ｎｅｓｏｍｙｉｄａｅ（キノボリネズミ（ｃｌｉｍｂｉｎｇ  ｍｉｃｅ）、イワマウス（ｒｏｃｋ
ｍｉｃｅ）、オネズミ（ｗｉｔｈ−ｔａｉｌｅｄ  ｒａｔ）、マダガスカルラットおよびマダガスカルマウス（Ｍａｌａｇａｓｙ  ｒａｔｓ  ａｎｄ  ｍｉｃｅ））、Ｐｌａｔａｃａｎｔｈｏｍｙｉｄａｅ（例えば、トゲヤマネ（spiny  dormice））、およびＳｐａｌａｃｉｄａｅ（例えば、デバネズミ、タケネズミ、およびモグラネズミ）。具体的実施形態において、上記遺伝子改変された齧歯類は、真のマウスもしくは真のラット（Ｍｕｒｉｄａｅ科）、アレチネズミ、トゲマウス、およびタテガミネズミから選択される。一実施形態において、上記遺伝子改変されたマウスは、Ｍｕｒｉｄａｅ科のメンバーに由来する。一実施形態において、上記動物は、齧歯類である。具体的実施形態において、上記齧歯類は、マウスおよびラットから選択される。一実施形態において、上記非ヒト動物は、マウスである。
【００８７】
具体的実施形態において、上記非ヒト動物は、以下から選択されるＣ５７ＢＬ系統のマウスである齧歯類である：Ｃ５７ＢＬ／Ａ、Ｃ５７ＢＬ／Ａｎ、Ｃ５７ＢＬ／ＧｒＦａ、Ｃ５７ＢＬ／ＫａＬｗＮ、Ｃ５７ＢＬ／６、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ、Ｃ５７ＢＬ／６ＢｙＪ、Ｃ５７ＢＬ／６ＮＪ、Ｃ５７ＢＬ／１０、Ｃ５７ＢＬ／１０ＳｃＳｎ、Ｃ５７ＢＬ／１０Ｃｒ、およびＣ５７ＢＬ／Ｏｌａ。別の実施形態において、上記マウスは、以下である系統からなる群より選択される１２９系統である：１２９Ｐ１、１２９Ｐ２、１２９Ｐ３、１２９Ｘ１、１２９Ｓ１（例えば、１２９Ｓ１／ＳＶ、１２９Ｓ１／ＳｖＩｍ）、１２９Ｓ２、１２９Ｓ４、１２９Ｓ５、１２９Ｓ９／ＳｖＥｖＨ、１２９Ｓ６（１２９／ＳｖＥｖＴａｃ）、１２９Ｓ７、１２９Ｓ８、１２９Ｔ１、１２９Ｔ２（例えば、Ｆｅｓｔｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９９）  Ｒｅｖｉｓｅｄ  ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ  ｆｏｒ
ｓｔｒａｉｎ  １２９  ｍｉｃｅ，  Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｇｅｎｏｍｅ  １０：８３６を参照のこと。Ａｕｅｒｂａｃｈ  ｅｔ  ａｌ．  （２０００）  Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ  ａｎｄ  Ｃｈｉｍｅｒａ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  １２９／ＳｖＥｖ−  ａｎｄ  Ｃ５７ＢＬ／６−Ｄｅｒｉｖｅｄ  Ｍｏｕｓｅ  Ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ  Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  Ｌｉｎｅｓもまた参照のこと）。具体的実施形態において、上記遺伝子改変されたマウスは、前述の１２９系統と前述のＣ５７ＢＬ／６系統との交配種（mix）である
。別の具体的実施形態において、上記マウスは、前述の１２９系統の交配種、または前述のＢＬ／６系統の交配種である。具体的実施形態において、上記交配の１２９系統は、１２９Ｓ６（１２９／ＳｖＥｖＴａｃ）系統である。別の実施形態において、上記マウスは、ＢＡＬＢ系統、例えば、ＢＡＬＢ／ｃ系統である。さらに別の実施形態において、上記マウスは、ＢＡＬＢ系統と別の前述の系統との交配である。さらに別の実施形態において、上記マウスは、ハイブリッド系（例えば、５０％  ＢＡＬＢ／ｃ  −  ５０％  １２９Ｓ４／Ｓｖ；もしくは５０％  Ｃ５７ＢＬ／６  −  ５０％  １２９；例えば、Ｆ１Ｈ４細胞、例えば、Ａｕｅｒｂａｃｈ  ｅｔ  ａｌ．  （２０００）を参照のこと）のマウスである。
【００８８】
一実施形態において、上記非ヒト動物はラットである。一実施形態において、上記ラットは、Ｗｉｓｔａｒラット、ＬＥＡ系統、Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙ系統、Ｆｉｓｃｈｅｒ系統、Ｆ３４４、Ｆ６、およびＤａｒｋ  Ａｇｏｕｔｉから選択される。一実施形態において、上記ラット系統は、Ｗｉｓｔａｒ、ＬＥＡ、Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙ、Ｆｉｓｃｈｅｒ、Ｆ３４４、Ｆ６、およびＤａｒｋ  Ａｇｏｕｔｉからなる群より選択される２種またはそれより多くの系統の交配である。
【００８９】
上記非ヒト動物は、ヒト化ＩＬ−１５マウスを作製する特定の目的に適した、１種またはそれより多くの他の遺伝子改変、および／もしくは他の改変を有し得る。例えば、異種移植片（例えば、ヒトのがんもしくは腫瘍）を維持するために適したマウスは、上記非ヒト動物の免疫系を全体的にもしくは部分的に損なう（compromise）か、不活性化するかまたは破壊する１種またはそれより多くの改変を含み得る。上記非ヒト動物の免疫系を損なうこと、不活性化すること、もしくは破壊することとしては、化学的手段（例えば、毒素を投与すること）、物理的手段（例えば、上記動物に放射線照射すること）、および／もしくは遺伝子改変（例えば、１種またはそれより多くの遺伝子をノックアウトすること）による、例えば、造血細胞および／もしくは免疫細胞の破壊が挙げられ得る。このようなマウスの非限定的例としては、例えば、ＮＯＤマウス、ＳＣＩＤマウス、ＮＯＮ／ＳＣＩＤマウス、ＩＬ２Ｒγノックアウトマウス、ＮＯＤ／ＳＣＩＤ／γｃｎｕｌｌマウス（例えば、Ｉｔｏ，  Ｍ．  ｅｔ  ａｌ．  （２００２）  ＮＯＤ／ＳＣＩＤ／γｃｎｕｌｌ
ｍｏｕｓｅ：  ａｎ  ｅｘｃｅｌｌｅｎｔ  ｒｅｃｉｐｉｅｎｔ  ｍｏｕｓｅ  ｍｏｄｅｌ  ｆｏｒ  ｅｎｇｒａｆｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｃｅｌｌｓ，  Ｂｌｏｏｄ
１００（９）：３１７５−３１８２を参照のこと）、ヌードマウス、ならびにＲａｇ１および／もしくはＲａｇ２ノックアウトマウスが挙げられ得る。これらマウスは、必要に応じて放射線照射され得るか、またはさもなければ１種またはそれより多くの免疫細胞タイプを破壊するように処置され得る。従って、種々の実施形態において、内因性非ヒトＩＬ−１５遺伝子座の少なくとも一部のヒト化を含み、かつ上記非ヒト動物の免疫系（または免疫系の１種またはそれより多くの細胞タイプ）を全体的にもしくは部分的に損なうか、不活性化するかもしくは破壊する改変をさらに含む、遺伝子改変されたマウスが提供される。一実施形態において、改変は、例えば、ＮＯＤマウス、ＳＣＩＤマウス、ＮＯＤ／ＳＣＩＤマウス、ＩＬ−２Ｒγノックアウトマウス、ＮＯＤ／ＳＣＩＤ／γｃｎｕｌｌマウス、ヌードマウス、Ｒａｇ１および／もしくはＲａｇ２ノックアウトマウス、ならびにこれらの組み合わせを生じる改変からなる群より選択される。具体的実施形態において、上記マウスは、全ての成熟ＩＬ−１５コード配列の、ヒト成熟ＩＬ−１５コード配列での置換を含む。
【００９０】
一実施形態において、上記マウスは、全ての成熟ＩＬ−１５コード配列の、ヒト成熟ＩＬ−１５コード配列での置換を含み、上記マウスは、ＮＯＤマウスである。一実施形態において、上記マウスは、全ての成熟ＩＬ−１５コード配列の、ヒト成熟ＩＬ−１５コード配列での置換を含み、上記マウスは、ＳＣＩＤマウスである。一実施形態において、上記マウスは、全ての成熟ＩＬ−１５コード配列の、ヒト成熟ＩＬ−１５コード配列での置換を含み、上記マウスは、ＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスである。一実施形態において、上記マウスは、全ての成熟ＩＬ−１５コード配列の、ヒト成熟ＩＬ−１５コード配列での置換を含み、上記マウスは、ＩＬ−２Ｒγノックアウトを含む。一実施形態において、上記マウスは、全ての成熟ＩＬ−１５コード配列の、ヒト成熟ＩＬ−１５コード配列での置換を含み、上記マウスは、ＮＯＤ／ＳＣＩＤ／γｃｎｕｌｌマウスである。一実施形態において、上記マウスは、全ての成熟ＩＬ−１５コード配列の、ヒト成熟ＩＬ−１５コード配列での置換を含み、上記マウスは、ヌードマウスである。一実施形態において、上記マウスは、全ての成熟ＩＬ−１５コード配列の、ヒト成熟ＩＬ−１５コード配列での置換を含み、上記マウスは、Ｒａｇ１および／もしくはＲａｇ２ノックアウトを含む。
【００９１】
内因性非ヒトＩＬ−１５遺伝子座の改変を含み、ここで上記改変が成熟ＩＬ−１５タンパク質の少なくとも一部をコードするヒト核酸配列を含む、遺伝子改変された非ヒト動物が提供される。本明細書で記載される改変を含む遺伝子改変された細胞（例えば、ＥＳ細胞、体細胞）も提供されるが、多くの局面および実施形態において、上記遺伝子改変された非ヒト動物は、上記動物の生殖細胞系列において内因性ＩＬ−１５遺伝子座の改変を含む。
【００９２】
非ヒトＩＬ−１５遺伝子配列の、ヒトＩＬ−１５遺伝子配列での置換を含む、遺伝子改変された非ヒト動物が提供される。種々の実施形態において、内因性非ヒトＩＬ−１５遺伝子座は、成熟ＩＬ−１５タンパク質の少なくとも１個のタンパク質コードエキソンをコードするヒト核酸配列を含むように、全体的にもしくは部分的に改変される。種々の実施形態において、上記ヒト配列は、ヒトゲノム配列、例えば、成熟ＩＬ−１５タンパク質の一部をコードする１個またはそれより多くのエキソンを含む連続ヒトゲノム配列、または例えば、成熟ＩＬ−１５タンパク質の一部をコードする少なくとも１個またはそれより多くのエキソンをコードするｃＤＮＡである。種々の実施形態において、成熟ヒトＩＬ−１５タンパク質中に出現するタンパク質配列をコードする全てのＩＬ−１５タンパク質コードエキソンは、ヒト化される。種々の実施形態において、上記ヒト化ＩＬ−１５遺伝子座は、上流の内因性調節配列（例えば、上記ヒト化の上流にある全ての内因性配列）の制御下にある。種々の実施形態において、上記ヒト化は、ヒト３’ＵＴＲを含む。
【００９３】
種々の実施形態において、上記非ヒト動物は、哺乳動物である。ある種の実施形態において、上記哺乳動物は、齧歯類である。内因性齧歯類ＩＬ−１５遺伝子座においてＩＬ−１５遺伝子のヒト化を含む齧歯類が提供される。内因性ＩＬ−１５遺伝子座において、内因性ＩＬ−１５遺伝子もしくはそのフラグメント（例えば、１個またはそれより多くのエキソンを含むフラグメント）の、ヒト化ＩＬ−１５遺伝子もしくはそのフラグメント（例えば、１個またはそれより多くのエキソンを含むフラグメント）での置換を含む齧歯類、例えば、マウスを作製するための方法が提供される。上記ヒト化遺伝子を含む細胞、組織、およびマウスが提供され、同様にヒトＩＬ−１５を内因性非ヒトＩＬ−１５遺伝子座から発現する細胞、組織、およびマウスが提供される。内因性齧歯類プロモーターの制御下にあるヒトＩＬ−１５タンパク質を発現する齧歯類もまた提供される。
【００９４】
ＩＬ−１５は、Ｔ細胞増殖を刺激し、胸腺発生およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞発生を支持するＩＬ−２非依存性Ｔ細胞増殖因子として発見された（Ｂｕｒｔｏｎ，  Ｊ．Ｄ．  ｔ  ａｌ．    （１９９４）  Ａ  ｌｙｍｐｈｏｋｉｎｅ，  ｐｒｏｖｉｓｉｏｎａｌｌｙ  ｄｅｓｉｇｎａｔｅｄ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  Ｔ  ａｎｄ  ｐｒｏｄｕｃｅｄ  ｂｙ  ａ  ｈｕｍａｎ  ａｄｕｌｔ  Ｔ−ｃｅｌｌ  ｌｅｕｋｅｍｉａ  ｌｉｎｅ，  ｓｔｉｍｕｌａｔｅｓ  Ｔ−ｃｅｌｌ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｌｙｍｐｈｏｋｉｎｅ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｋｉｌｌｅｒ  ｃｅｌｌｓ，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９１：４９３５−４９３９；  Ｇｒａｂｓｔｅｉｎ，  Ｋ．Ｈ．  ｅｔ  ａｌ．  （１９９４）
Ｃｌｏｎｉｎｇ  ｏｆ  ａ  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｔｈａｔ  Ｉｎｔｅｒａｃｔｓ  ｗｉｔｈ  ｔｈｅ  β  Ｃｈａｉｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−２  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６４：９６５−９６８）。ＩＬ−２およびＩＬ−１５は、レセプターサブユニットを共有する。しかし、免疫細胞集団の維持におけるＩＬ−１５の独立した重要性は明白である；ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒノックアウトマウスは、低ＣＤ８＋  Ｔ細胞、低記憶ＣＤ８＋  Ｔ細胞、および低ＮＫ細胞、ならびに他の細胞タイプを示す（Ｓｔｅｅｌ，  Ｊ．Ｃ．  ｅｔ  ａｌ．  （２０１２）  Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１５  ｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ｃａｎｃｅｒ，  Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  ３３（１）：３５−４１で総説される）。
【００９５】
ＩＬ−１５は、内皮細胞において発現されることが公知である；内皮細胞由来のＩＬ−１５は、Ｔ細胞の経内皮遊走を刺激する（Ｏｐｐｅｎｈｅｉｍｅｒ−Ｍａｒｋｓ，  Ｎ．
（１９９８）  Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  １５  ｉｓ  Ｐｒｏｄｕｃｅｄ  ｂｙ  Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  Ｃｅｌｌｓ  ａｎｄ  Ｉｎｃｒｅａｓｅｓ  ｔｈｅ  Ｔｒａｎｓｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｔ  Ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ
ａｎｄ  ｉｎ  ｔｈｅ  ＳＣＩＤ  Ｍｏｕｓｅ−Ｈｕｍａｎ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｍｏｄｅｌ  Ｉｎ  Ｖｉｖｏ，  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ．  １０１（６）：１２６１−１２７２を参照のこと）。従って、初期の研究は、炎症部位へのＴ細胞動員がＩＬ−１５によって媒介されるという見込みを確立した（同書）。この事実は重要である。なぜならＩＬ−１５の不適切な発言もしくは過剰発現が病的表現型（異常調節されたＩＬ−１５を発現するトランスジェニック非ヒト動物が直面する状況）を容易にもたらし得るからである。適切なＩＬ−１５調節は重要である。なぜならＩＬ−１５は、多くの炎症メディエーターの発現より先に起こる、炎症促進サイトカインカスケードの頂点にある炎症促進（pro-inflammatory）サイトカインであると考えられるからである（ＭｃＩｎｎｅｓ，  Ｉ．Ｂ．  ｅｔ  ａｌ．  （１９９７）  Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１５  ｍｅｄｉａｔｅｓ  Ｔ  ｃｅｌｌ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｕｍｏｒ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ  ｆａｃｔｏｒ−α  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ
ｉｎ  ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ，  Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄ．  ３：１８９−１９５（Ｗａｌｄｍａｎｎ，  Ｔ．Ａ．  （２００６）  Ｔｈｅ  ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−２  ａｎｄ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１５：  ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ｃａｎｃｅｒ  ｔｈｅｒａｐｙ  ａｎｄ  ｖａｃｃｉｎｅ  ｄｅｓｉｇｎ，  Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ６：５９５−６０１で引用））。
【００９６】
腸細胞特異的プロモーター（Ｔ３ｂプロモーター）の制御下でヒトＩＬ−１５を発現して、腸上皮細胞においてヒトＩＬ−１５を発現するトランスジェニックマウスは、十二指腸空腸領域における自発的炎症を発生させる（Ｙｏｋｏｙａｍａ，  Ｓ．  ｅｔ  ａｌ．
（２００８）  Ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｂｌｏｃｋａｄｅ  ｏｆ  ＩＬ−１５  ｒｅｖｅｒｓｅｓ  ｔｈｅ  ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｄａｍａｇｅ  ｉｎ  ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ  ｍｉｃｅ  ｔｈａｔ  ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓ  ＩＬ−１５  ｉｎ  ｅｎｔｅｒｏｃｙｔｅｓ，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  １０６（３７）１５８４９−１５８５４；  Ｏｈｔａ，  Ｎ．  ｅｔ  ａｌ．  （２００２）  ＩＬ−１５−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｃｅｌｌ  ｄｅａｔｈ−ｒｅｓｉｓｔａｎｔ  Ｔｈ１  ｔｙｐｅ  ＣＤ８  ａｌｐｈａ  ｂｅｔａ  ＋  ＮＫ１．１＋  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ｓｍａｌｌ  ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １６９：４６０−４６８）。Ｎｉｓｈｉｍｕｒａ，
Ｈ．  ｅｔ  ａｌ．  （２００５）  Ａ  ｎｏｖｅｌ  ａｕｔｏｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ
ｍｅｃｈａｎｉｓｍ  ｆｏｒ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＩＬ−１５  ｇｅｎｅ  ｂｙ  ｎｏｎｓｅｃｒｅｔａｂｌｅ  ｉｓｏｆｏｒｍ  ｏｆ  ＩＬ−１５  ｇｅｎｅｒａｔｅｄ  ｂｙ  ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ  ｓｐｌｉｃｉｎｇ，  ＦＡＳＥＢ  Ｊ．  １９：１９−２８（無作為に挿入されたｍＩＬ−１５遺伝子バリアントを有するトランスジェニックマウス）もまた参照のこと。
【００９７】
ＭＨＣクラスＩプロモーターの制御下のＩＬ−１５の分泌可能なアイソフォームに関してトランスジェニックなマウスが準備されたが、それらは、ＩＬ−１５を過剰発現する（Ｙａｊｉｍａ，  Ｔ．  ｅｔ  ａｌ．  （２００１）  Ｍｅｍｏｒｙ  ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ  ＣＤ８（＋）  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ＩＬ−１５  ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ  ｍｉｃｅ  ａｒｅ  ｉｎｖｏｌｖｅｄ  ｉｎ  ｅａｒｌｙ  ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  ａｇａｉｎｓｔ  ａ  ｐｒｉｍａｒｙ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ，  Ｅｕｒ．Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ３１（３）：７５７−７６６）。ＩＬ−１５の過剰発現は、セリアック病においてＩＬ−１５活性化細胞傷害性Ｔリンパ球による腸上皮の破壊と相関し（Ｙｏｋｏｙａｍａ，  Ｓ．  ｅｔ  ａｌ．．  （２０１１）  Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ  Ｍｉｃｅ  ｔｈａｔ  Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓ  Human  ＩＬ−１５  ｉｎ  Ｅｎｔｅｒｏｃｙｔｅｓ  Ｒｅｃａｐｉｔｕｌａｔｅ  Ｂｏｔｈ
Ｂ  ａｎｄ  Ｔ  Ｃｅｌｌ−Ｍｅｄｉａｔｅｄ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃ  Ｍａｎｉｆｅｓｔａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｅｌｉａｃ  Ｄｉｓｅａｓｅ，  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ３１：１０３８−１０４４）、これはおそらくＭＩＣＡ／Ｂのようなコグネートレセプターを含むＮＫＧ２Ｄ（ナチュラルキラーグループ２，メンバーＤ）媒介性プロセスによって腸細胞を標的とするＣＤ８＋  Ｔ細胞の増殖促進に起因する（同書，１０３９において）。局所発現されるＩＬ−１５がセリアック病の腸においてＴ細胞媒介性組織損傷を引き起こすは、これまでに明らかなようである（同書）。
【００９８】
筋組織中でおよび循環において（骨格筋プロモーターを使用して）ＩＬ−１５を過剰発現するように操作されているトランスジェニックマウスの少なくとも１つの研究は、ＩＬ−１５過剰発現が代謝に影響を及ぼすことを立証する；このようなマウスは、体脂肪を減らし、食餌誘発性脂肪症への抵抗性を提供するマイオカイン（ｍｙｏｋｉｎｅ）としてＩＬ−１５を使用するようである（Ｑｕｉｎｎ，  Ｌ．Ｓ．  ｅｔ  ａｌ．  （２００９）
Ｏｖｅｒｓｅｃｒｅｔｉｏｎ  ｏｆ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１５  ｆｒｏｍ  ｓｋｅｌｅｔａｌ  ｍｕｓｃｌｅ  ｒｅｄｕｃｅｓ  ａｄｉｐｏｓｉｔｙ，  Ａｍ．  Ｊ．  Ｐｈｙｓｉｏｌ．  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．  Ｍｅｔａｂ．  ２９６：Ｅ１９１−Ｅ２０２）。
【００９９】
ＩＬ−１５はまた、おそらく関節の異常なＴ細胞浸潤を介して関節リウマチに関わっていると考えられる（例えば、Ｆｅｈｎｉｎｇｅｒ  Ｔ．Ａ．  ａｎｄ  Ｃａｌｉｇｉｕｒｉ，  Ｍ．Ａ．  （２００１）  Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  １５：  ｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  ｒｅｌｅｖａｎｃｅ  ｔｏ  ｈｕｍａｎ  ｄｉｓｅａｓｅ，  Ｂｌｏｏｄ  ９７（１）：１４−３２において総説される）。サルコイドーシス患者はまた、ＩＬ−１５を発現する肺胞マクロファージを生じ、これは、肺におけるＴ細胞増殖を媒介し得る（同書，２３において）。ＩＬ−１５はまた、Ｔ細胞の増殖によって同種異系移植片の器官拒絶を媒介し得る（同書，２４において）。ＩＬ−１５はまた、成人Ｔ細胞白血病を有する患者においてＩＬ−１５媒介性経路の活性化に少なくとも一部基づいて、成人Ｔ細胞白血病（例えば、ＨＴＬＶ−１媒介性）に関わっている可能性がある（同書）。インビトロ研究からは、ＩＬ−１５がＨＩＶ複製を活性化し、これは、ヒトでも同様であり得ることが示唆される（同書，２５において）。
【０１００】
Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｂｏｖｉｓ  ｂａｃｉｌｌｕｓ  Ｃａｌｍｅｔｔｅ−Ｇｕｅｒｉｎに感染したＭＨＣクラスＩプロモーターによって駆動されてＩＬ−１５を発現するトランスジェニックマウスにおいて、ＩＬ−１５の過剰生成は、上記マウスをＬＰＳ誘発性致死性肝損傷に感受性にした（ＣＤ８＋  Ｔ細胞が上記マウスから枯渇されなかった場合には観察されなかった効果）（Ｙａｊｉｍａ，  Ｔ．  （２００４）  Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１５  Ｉｎｃｒｅａｓｅｓ  Ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ  ｔｏ  Ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ−Ｉｎｄｕｃｅｄ  Ｌｉｖｅｒ  Ｉｎｊｕｒｙ  ｉｎ  ＭＩｃｅ  Ｐｒｉｍｅｄ  ｗｉｔｈ  Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｂｏｖｉｓ  Ｂａｃｉｌｌｕｓ  Ｃａｌｍｅｔｔｅ−Ｇｕｅｒｉｎ，  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ７２（７）：３８５５−３８６２）。このことは、ＩＬ−１５過剰生成によって媒介される効果を示唆する。
【０１０１】
骨格筋プロモーターによって駆動されるＩＬ−１５を発現するトランスジェニックマウスは、より高いインスリン感受性および食餌誘発性肥満症への抵抗性を示し、脂肪酸代謝を促進するようであった（Ｑｕｉｎｎ，  Ｌ．Ｓ．  ｅｔ  ａｌ．  （２０１１）  Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１５  ｉｎ  ｍｉｃｅ  ｐｒｏｍｏｔｅｓ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｔｏ  ｄｉｅｔ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｏｂｅｓｉｔｙ，  ｉｎｃｒｅａｓｅｄ  ｉｎｓｕｌｉｎ  ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ，  ａｎｄ  ｍａｒｋｅｒｓ  ｏｆ  ｏｘｉｄａｔｉｖｅ  ｓｋｅｌｅｔａｌ  ｍｕｓｃｌｅ  ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ，  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ａｎｄ  Ｍｅｄｉａｔｏｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，  ３：２９−４２）。
【０１０２】
可溶性ＩＬ−１５Ｒαを含め、関節リウマチを制御するにあたって臨床的に有益であり得るマウスＩＬ−１５の選択的ブロックが研究されている（同書，２７において）。従って、生理学的に適切な様式においてを含めて、ヒトＩＬ−１５もしくはヒト化ＩＬ−１５を発現する非ヒト動物は、ヒトＩＬ−１５の選択的ブロックを評価もしくは同定するために有用である。ある評者によれば、「インビボブロック活性を有する効果的なヒトＩＬ−１５ブロック剤の開発は…このようなアプローチのクリニックへの迅速な移行（translation）を促進し得る」（同書，２７において）。従って、遺伝子改変された非ヒト動物（
例えば、ヒトＩＬ−１５遺伝子をそれらの生殖細胞系列において含む非ヒト動物であって、ここで上記非ヒト動物は、生理学的に適切な様式でヒトＩＬ−１５を発現する非ヒト動物）は、極めて有用である。
【０１０３】
ＩＬ−１５は、ＮＫ細胞発生および機能、ならびにＴ細胞ホメオスタシスに必要とされる多面発現性サイトカインである。それは、記憶ＣＤ８＋  Ｔ細胞区画にとって特に重要である。ＩＬ−１５は、樹状細胞およびマクロファージによって主に生成され、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒ複合体によってＮＫ細胞およびＴ細胞へとトランス呈示（ｔｒａｎｓｐｒｅｓｅｎｔ）される。ＩＬ−１５はまた、他のサイトカインの生成を誘発し、Ｔ細胞および他の炎症性細胞を動員および活性化し、ＮＫ細胞の発生および生存を促進し、脈管形成を促進する、炎症促進性サイトカインであることが公知である；そしてこれら特徴のうちの多くは、乾癬性病変の中で示される（Ｖｉｌｌａｄｓｅｎ，  Ｌ．Ｓ．  （２００３）  Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｓｏｒｉａｓｉｓ  ｕｐｏｎ  ｂｌｏｃｋａｄｅ  ｏｆ  ＩＬ−１５  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｉｎ  ａ  ｘｅｎｏｇｒａｆｔ  ｍｏｕｓｅ  ｍｏｄｅｌ，  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ．  １１２（１０）：１５７１−１５８０の中で総説および報告されている）。疾患処置のためにＩＬ−１５シグナル伝達を調節する方法の下で種々のストラテジーを用いて、ＩＬ−１５が炎症促進性サイトカインカスケードの頂点にあることが報告された（Ｗａｌｄｍａｎ  （２００６）  Ｔｈｅ  ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−２  ａｎｄ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１５：  ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ｃａｎｃｅｒ  ｔｈｅｒａｐｙ  ａｎｄ  ｖａｃｃｉｎｅ  ｄｅｓｉｇｎ，  Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｉｍｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，  ６：５９５−６０１において総説されている）。ＳＣＩＤマウスにおける乾癬の異種移植片マウスモデルにおいて、ＩＬ−１５Ｒ（もしくはＩＬ−１５）に対する抗体を使用するＩＬ−１５のブロックは、乾癬の重症度の低下を生じた（同書）。従って、生理学的に適切な様式でＩＬ−１５を発現する非ヒト動物は、ヒト疾患のモデル（免疫無防備状態のマウス、例えば、ＳＣＩＤマウスおよび他の免疫無防備状態のマウスでのモデルが挙げられるが、これらに限定されない）において有用である（例えば、十分に確立された有用性を有する）。従って、一実施形態において、内因性非ヒト調節エレメントの制御下のヒトＩＬ−１５遺伝子もしくはヒト化ＩＬ−１５遺伝子（例えば、齧歯類、例えば、マウスにおいてＩＬ−１５のコード遺伝子のヒト化）を含む齧歯類（例えば、マウス）が提供される。
【０１０４】
上記ＩＬ−１５遺伝子は、ヒト染色体４ｑ３１上およびマウス染色体８上に見出される。上記ヒト遺伝子は、８個のエキソン（７個のコード）を含み、ヒトおよびマウスの両方において２種のアイソフォームで存在するようである（例えば、Ｆｅｈｎｉｎｇｅｒ  Ｔ．Ａ．  ａｎｄ  Ｃａｌｉｇｉｕｒｉ，  Ｍ．Ａ．  （２００１）  Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  １５：  ｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  ｒｅｌｅｖａｎｃｅ  ｔｏ  ｈｕｍａｎ  ｄｉｓｅａｓｅ，  Ｂｌｏｏｄ  ９７（１）：１４−３２を参照のこと）。ＩＬ−１５のｍＲＮＡは、広く種々の組織および細胞タイプにおいて生成され、ヒトにおけるＩＬ−１５遺伝子の調節は、欠失するとＩＬ−１５プロモーター活性の劇的な増大を生じる上流領域によって負に調節されるようである（同書，１７において）。ＩＬ−１５の転写後調節を欠くトランスジェニックマウスは、致死的なリンパ性白血病を示す（同書）。ＩＬ−１５発現の調節は、非常に厳密なようであり、少なくとも、５’非翻訳領域ＡＵＧトリプレット、３’調節エレメント、および推定Ｃ末端領域調節部位によって媒介されるようである（ＭｃＩｎｎｅｓ，  Ｉ．Ｂ．  ａｎｄ  Ｇｒａｃｉｅ，  Ｊ．Ａ．  （２００４）  Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１５：  ａ  ｎｅｗ  ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ｔａｒｇｅｔ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｄｉｓｅａｓｅｓ，  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ４：３９２−３９７によって総説されている）。上記ヒトＩＬ−１５遺伝子は、９個のエキソンおよび８個のイントロンを有し、これは、ヒトに存在するがマウスには存在しないエキソン４ａを含むが、上記成熟ＩＬ−１５タンパク質は、エキソン５〜８によってのみコードされる（Ｂｕｄａｇｉａｎ，  Ｖ．  ｅｔ  ａｌ．  （２００６）  ＩＬ−１５／ＩＬ−１５  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｂｉｏｌｏｇｙ：  Ａ  ｇｕｉｄｅｄ  ｔｏｕｒ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ａｎ
ｅｘｐａｎｄｉｎｇ  ｕｎｉｖｅｒｓｅ，  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ＆  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  １７：２５９−２８０において総説されている）。２種のＩＬ−１５アイソフォームを生成する２種の選択的にスプライスされたｍＲＮＡ生成物があり、これらは、シグナルペプチドの長さにおいてのみ異なり、これは、マウスおよびヒトの両方のタンパク質に関して当てはまる（例えば、同書を参照のこと）。図１（これは、マウスＩＬ−１５遺伝子座に関するヒト化ストラテジーを示す）は、（成熟タンパク質中には認められないエキソンを含めて）単純にするためにヒト化しなかった上流マウス配列を省略しており、示されるヒト化に関連するエキソンの再番号付けを示す。
【０１０５】
ＩＬ−１５は、多くの細胞タイプおよび組織（単球、マクロファージ、樹状細胞、ケラチノサイト、表皮細胞、線維芽細胞、ならびに神経、腎臓、胎盤、肺、心臓、および筋肉の上皮細胞が挙げられる）において発現される（Ｇｒａｂｓｔｅｉｎ，  Ｋ．Ｈ．  ｅｔ
ａｌ．  （１９９４）  Ｃｌｏｎｉｎｇ  ｏｆ  ａ  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｔｈａｔ  Ｉｎｔｅｒａｃｔｓ  ｗｉｔｈ  ｔｈｅ  β  Ｃｈａｉｎ  ｏｆ
ｔｈｅ  Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−２  ｒｅｃｅｐｔｏｒ，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６４：９６５−９６８）。
【０１０６】
マウスＩＬ−１５コード配列を、図１（これは、コードエキソンから遙か上流にある２個の非コードエキソン（これはヒト化しなかった）の記載を省略している）に示されるようにヒト化した。マウス配列の１２２９９ヌクレオチドをヒト配列の１２８９６ヌクレオチドで置換して、ＩＬ−１５遺伝子をヒト化した。
【０１０７】
一実施形態において、上記ヒト化ＩＬ−１５遺伝子座は、ヒトＩＬ−１５  ５’ＵＴＲを欠いている。一実施形態において、上記ヒト化ＩＬ−１５遺伝子座は、齧歯類５’ＵＴＲを含む。具体的実施形態において、上記齧歯類は、マウスであり、上記ヒト化ＩＬ−１５遺伝子座は、マウスＩＬ−１５  ５’ＵＴＲを含む。
【０１０８】
ヒトＩＬ−１５タンパク質もしくはヒト化ＩＬ−１５タンパク質を、例えば、生理学的に適切な様式で発現する齧歯類は、ヒトの疾患および障害に関する治療剤を開発することが挙げられるが、これに限定されない種々の用途を提供する。ＩＬ−１５アンタゴニスト（例えば、可溶性形態もしくはＩＬ−１５レセプター）は、動物モデルにおいてコラーゲン媒介性関節炎の発生を妨げ得る（Ｒｕｃｈａｔｚ，  Ｈ．  ｅｔ  ａｌ．，  （１９９８）  Ｓｏｌｕｂｌｅ  ＩＬ−１５  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  α−ｃｈａｉｎ  ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ  ｐｒｅｖｅｎｔｓ  ｍｕｒｉｎｅ  ｃｏｌｌａｇｅｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ：    ａ  ｒｏｌｅ  ｆｏｒ  ＩＬ−１５  ｉｎ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ａｎｔｉｇｅｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １６０：５６５４−５６６０を参照のこと）；抗ＩＬ−１５抗体は、乾癬および関節リウマチを含め、種々の疾患に対して効力を示した；関節炎の動物モデルにおいて、ＩＬ−１５レセプターアンタゴニストは、関節炎の発生および進行の両方を妨げ、ならびに関節のリンパ球浸潤を低減する（Ｆｅｒｒａｒｉ−Ｌａｃｒａｚ，  Ｓ．  ｅｔ  ａｌ．  （２００４）  Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ＩＬ−１５  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ−Ｂｅａｒｉｎｇ  Ｃｅｌｌｓ  ｗｉｔｈ  ａｎ  Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ  Ｍｕｔａｎｔ  ＩＬ−１５／Ｆｃ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｒｅｖｅｎｔｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ａｎｄ  Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  Ｍｕｒｉｎｅ  Ｃｏｌｌａｇｅｎ−Ｉｎｄｕｃｅｄ  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．．  １７３：５８１５−５８２６）；ＩＬ−１５媒介性シグナル伝達はまた、ＩＢＤ、ＳＬＥ、炎症性滑膜炎、糖尿病、および喘息に関わっていた（Ｂｕｄａｇｉａｎ，  Ｖ．  ｅｔ  ａｌ．  （２００６）  ＩＬ−１５／ＩＬ−１５  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｂｉｏｌｏｇｙ：  Ａ
ｇｕｉｄｅｄ  ｔｏｕｒ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ａｎ  ｅｘｐａｎｄｉｎｇ  ｕｎｉｖｅｒｓｅ，  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ＆  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  １７：２５９−２８０において総説されている）。
【０１０９】
ＩＬ−１５ノックアウトマウスでの研究から、ＩＬ−１５は、ある種の免疫細胞（特に、ＮＫ細胞）の発生にとって必要であることが確立されている（Ｌｏｄｏｌｃｅ，  Ｊ．Ｐ．  （２００２）  Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｌｙｍｐｈｏｉｄ  ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ  ｂｙ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１５，  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ＆  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｒｅｖｉｅｗｓ，  １３：４２９−４３９において総説されている）。実際、ＩＬ−１５ノックアウトマウスは、ＮＫおよびＣＤ８＋  Ｔ細胞の欠如におそらく起因して、ある種の病原体（例えば、ワクシニアウイルス）への曝露から長時間生き延びない（同書）。従って、ヒトＮＫ細胞機能に対するｈＩＬ−１５アンタゴニストの効果は、ヒト化ＩＬ−１５動物の重要な適用を代表する。
【０１１０】
種々の局面において、ヒトＩＬ−１５もしくはヒト化ＩＬ−１５を発現する遺伝子改変された動物であって、ヒトＩＬ−１５に対するアンタゴニストを試験するために有用である、遺伝子改変された動物が提供される。上記遺伝子改変された動物は、ヒト疾患の動物モデルをさらに含み得る。例えば、上記疾患は、遺伝的に（ノックインもしくはノックアウト）または別の方法で誘発される。種々の実施形態において、上記遺伝子改変された非ヒト動物は、損なわれた免疫系、例えば、ヒト異種移植片（例えば、ヒト固形腫瘍もしくは血液細胞腫瘍（例えば、リンパ球腫瘍、例えば、Ｂ細胞腫瘍もしくはＴ細胞腫瘍）を持続させる（sustain）かもしくは維持する（maintain）ように遺伝子改変された非ヒト動
物）をさらに含む。
【実施例】
【０１１１】
（実施例１：マウスＩＬ−１５遺伝子座のヒト化）
マウスＥＳ細胞を、ＶＥＬＯＣＩＧＥＮＥ（登録商標）遺伝子操作技術を使用して、内因性マウスＩＬ−１５遺伝子座において、マウスＩＬ−１５調節エレメントの制御下の、特定のマウスＩＬ−１５遺伝子配列を特定のヒトＩＬ−１５遺伝子配列で置換して、図１に示されるようにヒト化遺伝子座を生じるように改変した。図１は、マウス遺伝子の（ＩＬ−１５遺伝子の転写方向に対して）上流の５’非翻訳エキソンを示さない；図１のＥｘ１は、コードエキソンの上流にある小さな非翻訳領域（空（ｕｎｆｉｌｌｅｄ））を示す。図１の下のヒト化に示されるように、マウスコードエキソン１および２を保持したのに対して、マウスコードエキソン３〜６を、ヒトエキソン３〜６で置換した。下流末端において、ヒトエキソン６に続いて、終止コドンおよびヒト３’−ＵＴＲがあり、さらには、ヒト配列がヒト３’ＵＴＲの下流に見出される。選択目的で、選択カセット（Ｃｒｅによる除去のためにｌｏｘＰで挟んだ（floxed））を含めた。図１のヒト化遺伝子座は、完全にヒトである成熟ＩＬ−１５タンパク質を発現する。
【０１１２】
標的化構築物。    細菌相同組換え（ＢＨＲ）を行って、標準的ＢＨＲ技術（例えば、Ｖａｌｅｎｚｕｅｌａ  ｅｔ  ａｌ．  （２００３）  Ｈｉｇｈ−ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ
ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｍｏｕｓｅ  ｇｅｎｏｍｅ  ｃｏｕｐｌｅｄ
ｗｉｔｈ  ｈｉｇｈ−ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎａｌｙｓｉｓ，  Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．  ２１（６）：６５２−６５９を参照のこと）およびギャップ修復ＢＨＲを使用してマウスＩＬ−１５遺伝子座に標的化するために、ヒトＩＬ−１５遺伝子の配列を含む大きな標的化ベクター（ＬＴＶＥＣ）を構築する。ＰＣＲで生成した相同性ボックスを、クローニングしたカセットへとライゲーションすることによって直線状のフラグメントを生成し、続いて、ライゲーション生成物のゲル単離および標的細菌人工染色体（ＢＡＣ）を有するＢＨＲコンピテント細菌へのエレクトロポレーションを行う。マウスＢＡＣ  ＰＲＣＩ２３−２０３Ｐ７を、マウス配列の供給源として使用する；ヒトＢＡＣ  ＲＰ１１−１０３Ｂ１２を、ヒトＩＬ−１５遺伝子配列の供給源として使用する。選択工程の後に、正確に組換わったクローンを、新規接合部にまたがるＰＣＲによって、および制限分析によって同定する。相同性アームおよびヒトＩＬ−１５遺伝子配列を含む大きな標的化ベクター（ＬＴＶＥＣ）を作製した。マウスＥＳ細胞を、ＬＴＶＥＣ構築物でエレクトロポレーションし、選択培地上で増殖させ、ドナーＥＳ細胞として使用して、内因性マウスＩＬ−１５遺伝子座において、図１に示されるとおりにヒト配列での置換を含むヒト化ＩＬ−１５マウスを作製した。
【０１１３】
上記マウスＩＬ−１５遺伝子（マウス遺伝子ID（ｍｏｕｓｅ  ＧｅｎｅＩＤ）：  １０３０１４；  ＲｅｆＳｅｑ転写物（ＲｅｆＳｅｑ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔ）：  ＮＭ＿００８３５７．２；  アンサンブル（ｅｎｓｅｍｂｌｅ）ｅＩＤ：１６１６８）を、ＧＲＣＭ３８：  ｃｈ  ８：  ８２３３１１７３−８２３４３４７１  （マイナス鎖）のゲノム欠失座標（coordinate）；ＧＲＣｈ３７：  ｃｈ４：  １４２６４２９２４−１４２６５５８１９（プラス鎖）のゲノム置換座標を使用することによって改変する。マウス配列の１２２９９ヌクレオチドを、ヒト配列の１２８９９６ヌクレオチドで置換した。上記で記載されるとおりのマウスＩＬ−１５配列の置換は、図１において図示される。
【０１１４】
上記ヒト化ＩＬ−１５遺伝子を含むＬＴＶＥＣは、約１３ｋｂの上流マウス標的化アーム（ＭｌｕＩ部位と上流で隣接している）および２７ｋｂの下流のマウス標的化アーム（ＡｓｃＩ部位と下流で隣接している）を有した。上記ＬＴＶＥＣを、エレクトロポレーションのためにＭｌｕＩおよびＡｓｃＩで直線状にした。
【０１１５】
上記ＬＴＶＥＣの構築後、マウス／ヒト５’接合部、およびヒト／マウス３’接合部にまたがるＬＴＶＥＣのヌクレオチド配列を図２〜４に示す。
【０１１６】
ＥＳ細胞のエレクトロポレーション後に、天然対立遺伝子喪失アッセイ（例えば、Ｖａｌｅｎｚｕｅｌａ  ｅｔ  ａｌ．    （２００３）を参照のこと）を、標的化に起因する内因性ＩＬ−１５配列の喪失を検出するために行う。
【０１１７】
正確に標的化されたＥＳ細胞（ＭＡＩＤ  ５２１７）に一過性のＣｒｅ発現ベクターでさらにエレクトロポレーションを行って、Ｎｅｏ薬物選択カセットを除去した。得られたカセット欠失ＥＳ細胞を、ＭＡＩＤ  ５２１８と称した。
【０１１８】
（実施例２：ヒト化ＩＬ−１５マウス）
ヒト化ＩＬ−１５マウスの作製。    ヒト化ＩＬ−１５遺伝子座を含むドナーマウスＥＳ細胞（例えば、ＭＡＩＤ  ５２１７もしくはＭＡＩＤ  ５２１８）を、ＶＥＬＯＣＩＭＯＵＳＥ（登録商標）法によって初期ステージマウス胚へ導入する（Ｐｏｕｅｙｍｉｒｏｕ  ｅｔ  ａｌ．  （２００７）  Ｆ０  ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｍｉｃｅ  ｆｕｌｌｙ
ｄｅｒｉｖｅｄ  ｆｒｏｍ  ｇｅｎｅ−ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ  ｓｔｅｍ  ｃｅｌｌｓ  ａｌｌｏｗｉｎｇ  ｉｍｍｅｄｉａｔｅ  ｐｈｅｎｏｔｙｐｉｃ  ａｎａｌｙｓｅｓ，  Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ２５：９１−９９）。ヘテロ接合性マウスを得、そしてヒト化ＩＬ−１５に対してホモ接合体を得るために、ヘテロ接合体を交配する。
【０１１９】
（実施例３：ヒト化ＩＬ−１５マウスの表現型決定）
マウス。    マウスは、野生型（ＷＴ）  ８〜１０週齢Ｂａｌｂ／ｃ雌もしくは齢を合わせたＭＡＩＤ  ５２１７（ヒトＩＬ−１５遺伝子に関してヘテロ接合性）雌のいずれかであった。あるいは、マウスは、野生型（ＷＴ）または齢を合わせたＭＡＩＤ  ５２１７もしくはＭＡＩＤ  ５２１８（両方ともヒトＩＬ−１５遺伝子に関してヘテロ接合性）マウスのいずれかであった。
【０１２０】
インビボでのポリＩ：Ｃ注入。    ＷＴ  Ｂａｌｂ／ｃもしくはＭＡＩＤ  ５２１７  ｈｅｔに、５０μｇ  ポリＩ：Ｃ（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ；  Ｃａｔ  ＃ｔｌｒｌ−ｐｉｃ）を尾静脈（ＩＶ注射）を介して注入した。２４時間後、マウスを屠殺し、心臓穿刺によって採血し、血清を単離した。脾臓もまた採取し、７０μＭメッシュフィルタを通して脾臓を機械的に破壊し、続いて、ＡＣＫ溶解緩衝液（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）処理して、赤血球（ＲＢＣ）を溶解させることによって脾細胞を調製した。単離された脾細胞を、さらなる刺激のために培養した（以下を参照のこと）。血清を、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  ヒトＩＬ−１５  ＱＵＡＮＴＩＫＩＮＥＴＭキットを使用してヒトＩＬ−１５に関して分析した。ＷＴもしくはＭＡＩＤ  ５２１８  ｈｅｔマウスに、５０μｇ  ポリＩ：Ｃ（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ；  Ｃａｔ  ＃ｔｌｒｌ−ｐｉｃ）をＩＰによって注入した。マウスを翌日に心臓穿刺によって採血し、血清を、ＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  ＱＵＡＮＴＩＫＩＮＥＴＭ  ＥＬＩＳＡキット）によってヒトＩＬ−１５に関して分析した。
【０１２１】
骨髄由来樹状細胞（ＢＭ−ＤＣ）調製。    骨髄を、注入しなかったマウスの脛骨から洗い出し、ＲＢＣをＡＣＫ溶解緩衝液で溶解した。細胞を、ＲＰＭＩ完全（ＨＥＰＥＳ、ゲンタマイシン、ピルビン酸ナトリウム、Ｌ−グルタミン、および非必須アミノ酸を含む）＋１０％  ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）で洗浄し、計数した。３ｍＬ／ウェルのＲＰＭＩ完全＋１０％  ＦＢＳ＋５０ｎｇ／ｍＬ  マウスＧＭ−ＣＳＦ＋５０ｎｇ／ｍＬ  マウスＩＬ−４を含む６ウェルプレートの中で、１ウェルあたり２×１０６個の細胞を培養した。３７０C／５％  ＣＯ２で細胞を培養し、新鮮なＧＭ−ＣＳＦ／ＩＬ−４を培養の２日目
および４日目に与えた。培養の５日目に、接着していないＢＭ−ＤＣを培養物から採取し、それぞれの培養培地をとっておいた（馴化培地）。
【０１２２】
脾細胞培養。    脾臓をそれぞれのマウスから採取し、７０μＭメッシュフィルタに通して脾臓を機械的に破壊し、続いてＡＣＫ溶解緩衝液（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）処理してＲＢＣを溶解することによって脾細胞を調製した。単離された脾細胞を、４８ウェルプレートの中で、２×１０６／ｍＬ  脾細胞で、１ｍＬのＲＰＭＩ完全＋１０％  ＦＢＳ中で培養した。細胞を１０μｇ／ｍＬ  ポリＩ：Ｃで処理したか、１０μｇ／ｍＬ  ＰＭＡで処理したか、または未処理のままにした。細胞をそのようにして一晩培養し、翌日に上清を採取し、３ｋｄ分子量カットオフ（ＭＷＣＯ）のＡｍｉｃｏｎ  ２ｍＬフィルタを使用して８倍濃縮した。濃縮した上清を、Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ  ヒトＩＬ−１５  ＱＵＡＮＴＩＫＩＮＥＴＭキットを使用してヒトＩＬ−１５に関して分析した。
【０１２３】
ＢＭ−ＤＣ培養。    ２×１０６／ｍＬ  ＢＭ−ＤＣを、２４ウェルプレートにおいて、０．５ｍＬの新鮮なＲＰＭＩ完全＋１０％  ＦＢＳおよび０．５ｍＬの馴化培地中でプレートした。細胞を、２５μｇ／ｍＬ  ポリＩ：Ｃで処理したか、１μｇ／ｍＬ  ＬＰＳで処理したか、または未処理のままにした。全ての条件を、二連で行った。細胞をそのようにして３６時間培養し、次いで、その上清を採取した。上清を、３ｋｄ  ＭＷＣＯのＡｍｉｃｏｎ  ２ｍＬフィルタを使用して７倍濃縮した。濃縮した上清中のヒトＩＬ−１５レベルを、Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ  ヒトＩＬ−１５  ＱＵＡＮＴＩＫＩＮＥＴＭキットを使用して分析した。ヒトＩＬ−１５転写物レベルをＲＴ−ＰＣＲ分析するために、ＲＮＡｅａｓｙＴＭミニプレップキット（Ｑｉａｇｅｎ製）によってＲＮＡを細胞から単離した。
【０１２４】
ＥＬＩＳＡ。    Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ  ヒトＩＬ−１５  ＱＵＡＮＴＩＫＩＮＥＴＭキットを使用して、血清および濃縮脾細胞もしくはＢＭ−ＤＣ上清中のヒトＩＬ−１５を測定した。キットを、製造業者の説明書に従って使用した。さらなるコントロールを行って、このキットを特異性（マウスではなくヒトのＩＬ−１５のみを検出する）について検証し、このキットがポリＩ：Ｃに反応しないことを確認した。従って、１０００ｐｇ／ｍＬのマウスＩＬ−１５（注記：ヒトＩＬ−１５に関する最高標準物質は、２５０ｐｇ／ｍＬである）、ならびに２５μｇ／ｍＬおよび１２．５μｇ／ｍＬのポリＩ：Ｃのみを、ＥＬＩＳＡに流した。上記キットは、ヒトＩＬ−１５に対して特異的に反応する（マウスＩＬ−１５の検出はない）ことがわかり、ポリＩ：Ｃには反応しなかった。
【０１２５】
ＲＴ−ＰＣＲ。    約２００ｎｇの単離されたＲＮＡから、ＲＴ−ＰＣＲ用ＳＵＰＥＲＳＣＲＩＰＴＴＭ  ＩＩＩ第１鎖合成システムキット（ＳＵＰＥＲＳＣＲＩＰＴＴＭ  III  First-Strand  Synthesis  System  for  RT-PCR  kit;Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使
用して製造業者の説明書に従ってｃＤＮＡを調製した。特異的ヒトＩＬ−１５転写物を、Ｔａｑｍａｎ  ＤＮＡポリメラーゼと以下のプライマーとを使用して増幅した：ｈＩＬ−１５順方向プライマー：ｇｔａａｒａａｇｔｇ  ａｔｔｔｇａａａａａ  ａａｔｔｇａａｇａｔ（配列番号７）；ｈＩＬ−１５逆方向プライマー：ｔａｃａａａａｃｔｃ  ｔｇｃａａａａａｔｔ  ｃｔｔｔａａｔａｔ（配列番号８）。ＰＣＲ反応を、以下を４０サイクルで行った：９４０Cで１５秒間変性、６０℃で３０秒間アニーリング、７２℃で伸長、
次いで反応を４℃で維持した。転写物を、Ｐｒｏｍｅｇａ  ６ｘローディング色素を使用して１％  アガロースゲルで泳動した。
【０１２６】
結果。    ヒトＩＬ−１５は、ポリＩ：Ｃ注入ＭＡＩＤ  ５２１７  ｈｅｔの血清中で観察されたが、ポリＩ：Ｃを注入した齢／性別を合わせたＷＴ  Ｂａｌｂ／ｃマウスでは観察されなかった（図６；および図１０，右パネル）。同様に、ヒトＩＬ−１５は、ポリＩ：Ｃを注入したＭＡＩＤ  ５２１８  ｈｅｔの血清中で観察されたが、ポリＩ：Ｃを注入した齢／性別を合わせたＷＴマウスでは観察されなかった（図１０，左パネル）。ＭＡＩＤ  ５２１８において生成されたＩＬ−１５のレベルは、ＭＡＩＤ  ５２１７に匹敵した（図１０）。ＭＡＩＤ  ５２１７由来のＰＭＡで刺激した脾細胞は、低レベルのヒトＩＬ−１５をインビトロで分泌する（ＷＴマウス由来の脾細胞では何も観察されない）。
【０１２７】
さらに、ＭＡＩＤ  ５２１７  ｈｅｔ由来のＢＭ−ＤＣは、ポリＩ：Ｃ（ＴＬＲ３アゴニスト）およびＬＰＳ（ＴＬＲ４アゴニスト）でインビトロ刺激されると、ヒトＩＬ−１５分泌を、ならびに有意な規定レベルを示す。ＲＴ−ＰＣＲ分析は、ＭＡＩＤ  ５２１７
ｈｅｔマウス由来のＢＭ−ＤＣにおいてのみ特異的ヒトＩＬ−１５転写物を示した。
【０１２８】
全体として、上記データは、ＭＡＩＤ  ５２１７  ｈｅｔおよびＭＡＩＤ  ５２１８  ｈｅｔがヒトＩＬ−１５を発現することを示す。
【０１２９】
（実施例４：ヒトＩＬ−１５に関してホモ接合性のマウス）
ヘテロ接合性のマウスを交配し、次いで、上記のように遺伝子型決定する。ホモ接合性ｈＩＬ−１５マウスは、同系交配によって維持される。
【０１３０】
（項目１）
改変された内因性ＩＬ−１５遺伝子座を含む非ヒト動物であって、ここで該改変された遺伝子座は、少なくとも１個のヒトＩＬ−１５エキソンを含むヒト核酸配列、ならびに野生型非ヒト上流調節領域および野生型非ヒト下流調節領域を含む非ヒトＩＬ−１５ゲノム配列を含む、非ヒト動物。
（項目２）
少なくとも３個のヒトＩＬ−１５エキソンを含むヒト核酸配列を含む、項目１に記載の非ヒト動物。
（項目３）
少なくとも４個のヒトＩＬ−１５エキソンを含むヒト核酸配列を含む、項目１に記載の非ヒト動物。
（項目４）
前記少なくとも４個のヒトＩＬ−１５エキソンは、ヒトＩＬ−１５のエキソン３、エキソン４、エキソン５およびエキソン６を含む、項目３に記載の非ヒト動物。
（項目５）
前記改変された内因性ＩＬ−１５遺伝子座は、ヒトＩＬ−１５タンパク質と少なくとも９５％同一であるＩＬ−１５タンパク質を生成するＩＬ−１５コード配列を含む、項目１に記載の非ヒト動物。
（項目６）
齧歯類である、項目１に記載の非ヒト動物。
（項目７）
マウスおよびラットから選択される、項目６に記載の齧歯類。
（項目８）
改変されたＩＬ−１５遺伝子座を含む非ヒト動物であって、ここで該改変された遺伝子座は、少なくとも１個のヒトＩＬ−１５エキソンを含むヒト核酸配列、ならびに野生型非ヒト上流調節領域および野生型非ヒト下流調節領域を含む、非ヒト動物。
（項目９）
少なくとも３個のヒトＩＬ−１５エキソンを含むヒト核酸配列を含む、項目８に記載の非ヒト動物。
（項目１０）
少なくとも４個のヒトＩＬ−１５エキソンを含むヒト核酸配列を含む、項目８に記載の非ヒト動物。
（項目１１）
前記少なくとも４個のヒトＩＬ−１５エキソンは、ヒトＩＬ−１５のエキソン３、エキソン４、エキソン５およびエキソン６を含む、項目１０に記載の非ヒト動物。
（項目１２）
前記改変されたＩＬ−１５遺伝子座は、ヒトＩＬ−１５タンパク質と少なくとも９５％同一であるＩＬ−１５タンパク質をコードするＩＬ−１５コード配列を含む、項目８に記載の非ヒト動物。
（項目１３）
齧歯類である、項目８に記載の非ヒト動物。
（項目１４）
マウスおよびラットから選択される、項目１３に記載の齧歯類。
（項目１５）
前記改変されたＩＬ−１５遺伝子座は、内因性ＩＬ−１５遺伝子座以外である、前記動物のゲノム中の位置にある、項目８に記載の非ヒト動物。
（項目１６）
遺伝子改変された非ヒト動物を作製する方法であって、該方法は、内因性非ヒトＩＬ−１５ゲノムＤＮＡを少なくとも１個のヒトＩＬ−１５エキソンを含むヒトＤＮＡで置換して、改変されたＩＬ−１５遺伝子座を形成する工程を包含し、ここで該改変されたＩＬ−１５遺伝子座は、野生型非ヒト上流調節領域および野生型非ヒト下流調節領域を含む、方法。
（項目１７）
前記ヒトＤＮＡは、ヒトＩＬ−１５のエキソン３、エキソン４、エキソン５およびエキソン６を含む、項目１６に記載の方法。
（項目１８）
前記ヒトＤＮＡは、ヒトＩＬ−１５  ３’−ＵＴＲをさらに含む、項目１７に記載の方法。
（項目１９）
前記改変されたＩＬ−１５遺伝子座は、ヒトＩＬ−１５タンパク質と少なくとも９５％同一であるＩＬ−１５タンパク質をコードするＩＬ−１５コード配列を含む、項目１６に記載の方法。
（項目２０）
前記非ヒト動物は齧歯類である、項目１６に記載の方法。
（項目２１）
前記齧歯類は、マウスおよびラットから選択される、項目２０に記載の方法。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
2019216750.tif 000008
【図８】
2019216750.tif 000009
【図９】
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【図１０】
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【配列表】
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