(57)【要約】【課題】タンパク質製剤の提供。【解決手段】本開示は、様々な温度を通して、長期間にわたって安定している固体タンパク質製剤を提供する。本開示はまた、これらの製剤を製造及び使用する方法を提供する。一実施形態では、本発明は、安定剤、糖アルコール、糖、及び界面活性剤を含む固体タンパク質製剤を提供する。別の実施形態では、本発明は、ダルベポエチンアルファ、ヒスチジン、マンニトール、スクロース、及びポリソルベート−８０を含む固体タンパク質製剤を提供する。【選択図】図１
2019203018.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
本明細書に記載の発明。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、参照によって本明細書に組み込まれる２０１４年６月２６日出願の米国特許仮出願第６２／０１７，５６０号の利益を主張する。
【０００２】
本発明の分野は、タンパク質製剤に関する組成物及び方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
治療用タンパク質薬物は、環境及び他の外部影響に対して不安定かつ易損性であり得、それらの活性を低減する変化につながる可能性がある。治療用タンパク質を配合する試みは往々にして、患者に不快感をもたらす製剤（例えば、低ｐＨ製剤）につながり得る。
【０００４】
一部の事例では、治療用タンパク質製剤は、追加のタンパク質をその製剤に添加することによって安定化される。例えば、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）が、安定剤として使用されている。しかしながら、医薬製品に追加のタンパク質を添加することは、不利な免疫応答またはウイルス汚染のリスクを含む様々な理由により理想的ではない。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
したがって、様々な温度での長期安定性を提供し、注射に関連する疼痛を最小限にするタンパク質製剤が必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
発明の概要
一実施形態では、本発明は、安定剤、糖アルコール、糖、及び界面活性剤を含む固体タンパク質製剤を提供する。別の実施形態では、本発明は、ダルベポエチンアルファ、ヒスチジン、マンニトール、スクロース、及びポリソルベート−８０を含む固体タンパク質製剤を提供する。別の実施形態では、本発明は、グルタミン酸ナトリウム、マンニトール、スクロース、及びポリソルベート２０を含む固体タンパク質製剤を提供する。別の実施形態では、本発明は、ヒスチジン、マンニトール、スクロース、及びポリソルベート２０を含む固体タンパク質製剤を提供する。さらなる一実施形態では、本発明は、固体タンパク質製剤を調製する方法であって、ａ）上記タンパク質を凍結乾燥緩衝液で希釈すること；及びｂ）上記希釈タンパク質を凍結乾燥させることを含む方法を提供する。別の実施形態では、本発明は、固体タンパク質製剤及び再構成用緩衝液を含むキットを提供する。
【図面の簡単な説明】
【０００７】
【図１】３７℃での、ポリソルベート−８０を含まない場合（Ａ）及び含む場合（Ｂ）の抗体９Ｇ８Ａの検出を使用しての、Ａｒａｎｅｓｐの変性の比較結果を示すグラフである。
【図２】４５℃での、ポリソルベート−８０を含む抗体９Ｇ８Ａの検出を使用しての、Ａｒａｎｅｓｐの変性の比較結果を示すグラフである。
【図３】３７℃及び４５℃での、液体製剤と比較しての、凍結乾燥製剤中にポリソルベート−８０を含まないＡｒａｎｅｓｐ（登録商標）のＳＥＣによるメインピーク％の比較結果を示すグラフである。
【図４】４５℃での２４ヶ月目に、４％ソルビトールで再構成したポリソルベート−８０不含の試料のＳＥＣ−ＨＰＬＣの重ね合わせを示すグラフである。（Ａ）試料の重ね合わせを拡大して示しており、（Ｂ）試料の重ね合わせを拡大せずに示している。
【図５】４５℃での、凍結乾燥製剤の中にポリソルベート−８０を含まないＡｒａｎｅｓｐ（登録商標）のＳＥＣによるメインピーク％の比較結果を示すグラフである。
【図６】４５℃での、凍結乾燥製剤の中にポリソルベート−８０を含むＡｒａｎｅｓｐ（登録商標）のＳＥＣによるメインピーク％の比較結果を示すグラフである。
【図７】４５℃での、凍結乾燥製剤及び液体製剤の中にポリソルベート−８０を含む場合及び含まない場合のＡｒａｎｅｓｐ（登録商標）のｐＨの比較結果を示すグラフである。
【図８】４℃での最高２４ヶ月間にわたる貯蔵後のＡｒａｎｅｓｐ酸化％の比較結果を示すグラフである。
【図９】２９℃での最高２４ヶ月間にわたる貯蔵後の液体及び凍結製剤におけるＡｒａｎｅｓｐの酸化％の比較結果を示すグラフであって、Ｐ６２Ｎ５００及びＰ６２Ｎ５００Ｔは液体製剤であり、他の試料は、凍結乾燥製剤である。
【図１０】２９℃での貯蔵後のみの凍結製剤におけるＡｒａｎｅｓｐの酸化％の比較結果を示すグラフである。
【図１１】３７℃での最高２４ヶ月間にわたる貯蔵後の液体及び凍結製剤におけるＡｒａｎｅｓｐの酸化％の比較結果を示すグラフであって、Ｐ６２Ｎ５００及びＰ６２Ｎ５００Ｔは、液体製剤であり、残りは、凍結乾燥製剤である。
【図１２】３７℃での貯蔵後のみの凍結製剤におけるＡｒａｎｅｓｐの酸化％の比較結果を示すグラフである。
【図１３】４５℃での最高２４ヶ月間にわたる貯蔵後の液体及び凍結製剤におけるＡｒａｎｅｓｐの酸化％の比較結果を示すグラフであって、Ｐ６２Ｎ５００及びＰ６２Ｎ５００Ｔは、液体製剤であり、残りの試料は、凍結乾燥製剤である。
【図１４】３７℃での最高２４ヶ月にわたる貯蔵後のみの凍結製剤におけるＡｒａｎｅｓｐの酸化％の比較結果を示すグラフである。
【図１５】２４ヶ月にわたって４５℃で貯蔵した後の、非還元逆相ＨＰＬＣによる分解及び短縮種についての、Ａｒａｎｅｓｐ液体製剤の間で、凍結乾燥され、かつ４％ソルビトール中で再構成された３種におけるポリソルベート−８０を含まないＡｒａｎｅｓｐ（５００μｇ／ｍＬ）の比較結果を示すグラフである。
【図１６】２４ヶ月にわたって３７℃で貯蔵した後の、非還元逆相ＨＰＬＣによる分解及び短縮種についての、Ａｒａｎｅｓｐ液体製剤の間で、凍結乾燥され、かつ４％ソルビトール中で再構成された３種におけるポリソルベート−８０を含まないＡｒａｎｅｓｐの比較結果を示すグラフである。
【図１７】４℃での、ポリソルベート８０を含有しない試料のＳＥＣ−ＨＰＬＣメインピーク％結果を示すグラフである。
【図１８】４℃での、ポリソルベート８０を含有する試料のＳＥＣ−ＨＰＬＣメインピーク％結果を示すグラフである。
【図１９】２９℃での、ポリソルベート８０を含有しない試料のＳＥＣ−ＨＰＬＣメインピーク％結果を示すグラフである。
【図２０】図２０Ａは、２９℃での、ポリソルベート８０を含有する試料のＳＥＣ−ＨＰＬＣメインピーク％結果を示すグラフである。図２０Ｂは、２９℃での、ポリソルベート８０を含有しない試料のＳＥＣ−ＨＰＬＣメインピーク％結果を示すグラフである。
【図２１】３７℃での、ポリソルベート８０を含有する試料のＳＥＣ−ＨＰＬＣメインピーク％結果を示すグラフである。
【図２２】ＣＺ及びガラスバイアルの間での、異なる温度でのＡｒａｎｅｓｐ（登録商標）９Ｇ８Ａ結果の比較結果を示すグラフである。ＣＺコンテナは、比較的高温（２５℃、３７℃、４５℃）で、より高い変性を示した。
【図２３】異なる温度での、３種の異なる再構成用希釈液を含む２種の異なるコンテナ中のＡｒａｎｅｓｐ（登録商標）のＳＥＣによるＨＭＷ％の比較結果を示すグラフである。
【図２４】異なる温度での、３種の異なる再構成用希釈液を含む２種の異なるコンテナ中のＡｒａｎｅｓｐ（登録商標）のＳＥＣによるメインピーク％の比較結果を示すグラフである。
【図２５】異なる温度でのタンパク質試料結果１ｍＬ当たりのＨＩＡＣ粒子カウントの結果を示すグラフである。
【図２６】凍結乾燥試料の目視観測結果を示す図である。１２ヶ月目に、試料は、４℃でのＣＺバイアル中で、少量の凍結乾燥ケーキを示した。青色のキャップを備えたバイアルは、タンパク質試料を含有する。緑色のキャップを備えたバイアルは、プラセボ試料を含有する。
【図２７】異なる温度でのＡｒａｎｅｓｐ（登録商標）濃度（μｇ／ｍＬ）の比較結果を示すグラフである。
【図２８】２種の異なるコンテナ（ＣＺ及びガラスバイアル）中、４種の異なる温度（４℃、２９℃、３７℃、及び４５℃）で貯蔵した後のＡｒａｎｅｓｐの酸化％の比較結果を示すグラフである。
【図２９】２種の異なるコンテナ中、４種の異なる温度で１２ヶ月にわたって貯蔵した後の、非還元逆相ＨＰＬＣによるＡｒａｎｅｓｐの短縮種の比較結果を示すグラフである。
【図３０】２種の異なるコンテナ（ＣＺ及びガラスバイアル）中、４種の異なる温度（４℃、２９℃、３７℃、及び４５℃）でのＡｒａｎｅｓｐのｐＨの比較結果を示すグラフである。
【図３１】２種の異なるコンテナ（ＣＺ及びガラスバイアル）中、４種の異なる温度（４℃、２９℃、３７℃、及び４５℃）でのＡｒａｎｅｓｐの重量オスモル濃度の比較結果を示すグラフである。
【図３２】２種の異なる凍結乾燥製剤の１００μｇ／ｍＬ及び５００μｇ／ｍＬ試料での、４℃及び３７℃での１２週間までの試料のＳＥＣによる低分子量％分析の結果を示すグラフである。
【図３３】２種の異なる凍結乾燥製剤の１００μｇ／ｍＬ及び５００μｇ／ｍＬ試料での、４℃及び３７℃での１２週間までの試料のＳＥＣによる高分子量％分析の結果を示すグラフである。
【図３４】２種の異なる凍結乾燥製剤の１００μｇ／ｍＬ及び５００μｇ／ｍＬ試料での、４℃及び３７℃での１２週間までのＳＥＣによる試料分析のメインピーク％の結果を示すグラフである。
【図３５】２種の異なる凍結乾燥製剤の１００μｇ／ｍＬ及び５００μｇ／ｍＬ試料での、４℃及び３７℃での１２週間までの試料のＣＥ−ＳＤＳによる重鎖％分析の結果を示すグラフである。
【図３６】２種の異なる凍結乾燥製剤の１００μｇ／ｍＬ及び５００μｇ／ｍＬ試料での、４℃及び３７℃での１２週間までの試料のＣＥ−ＳＤＳによる軽鎖％分析の結果を示すグラフである。
【図３７】２種の異なる凍結乾燥製剤の１００μｇ／ｍＬ及び５００μｇ／ｍＬ試料での、４℃及び３７℃での１２週間までの試料のＣＥ−ＳＤＳによる非グリコシル化重鎖％分析の結果を示すグラフである。
【図３８】２種の異なる凍結乾燥製剤であるＨ＝ヒスチジン製剤、Ｇ＝グルタマート製剤の５００μｇ／ｍＬ試料での、７週間にわたって４℃及び３７℃で貯蔵した後のＣＥ−ＳＤＳによるＥＰＯ  ｍＡｂの電気泳動図の結果を示す図である。
【図３９】ＧＭＳＴ及びＨＭＳＴ緩衝液中の凍結前試料のＤＳＣスキャンの結果を示すグラフである。黒色＝０．１ｍｇ／ｍＬ抗ＥＰＯ  ｍＡｂ  ８Ｃ１０−ＧＭＳＴ、赤色＝０．１ｍｇ／ｍＬ抗ＥＰＯ  ｍＡｂ  ８Ｃ１０−ＨＭＳＴ、緑色＝０．５ｍｇ／ｍＬ抗ＥＰＯ  ｍＡｂ  ８Ｃ１０−ＧＭＳＴ、及び青色＝０．５ｍｇ／ｍＬ抗ＥＰＯ  ｍＡｂ  ８Ｃ１０−ＨＭＳＴ。０．１ｍｇ／ｍＬ試料のシグナルを、０．５ｍｇ／ｍＬに対して正規化した（同じ正規化を、０．１ｍｇ／ｍＬ試料のすべてについて使用した）。
【図４０】異なる条件下での０．１ｍｇ／ｍＬ抗ＥＰＯ  ｍＡｂ  ８Ｃ１０−ＧＭＳＴ試料のＤＳＣスキャンの結果を示すグラフである。黒色＝凍結前、赤色＝凍結（Ｔ＝０）、緑色＝凍結（４℃でＴ＝７週間）、青色＝凍結（３７℃でＴ＝７週間）、青緑色＝凍結（４℃でＴ＝１２週間）、及び暗黄色＝凍結（３７℃でＴ＝１２週間）。
【図４１】異なる条件下での０．１ｍｇ／ｍＬ抗ＥＰＯ  ｍＡｂ  ８Ｃ１０−ＨＭＳＴ試料のＤＳＣスキャンの結果を示すグラフである。黒色＝凍結前、赤色＝凍結（Ｔ＝０）、緑色＝凍結（４℃でＴ＝７週間）、青色＝凍結（３７℃でＴ＝７週間）。
【図４２】異なる条件下での０．５ｍｇ／ｍＬ抗ＥＰＯ  ｍＡｂ  ８Ｃ１０−ＧＭＳＴ試料のＤＳＣスキャンの結果を示すグラフである。黒色＝凍結前、赤色＝凍結（Ｔ＝０）、緑色＝凍結（４℃でＴ＝７週間）、青色＝凍結（３７℃でＴ＝７週間）、青緑色＝凍結（４℃でＴ＝１２週間）、及び暗黄色＝凍結（３７℃でＴ＝１２週間）。
【図４３】異なる条件下での０．５ｍｇ／ｍＬ抗ＥＰＯ  ｍＡｂ  ８Ｃ１０−ＨＭＳＴ試料のＤＳＣスキャンの結果を示すグラフである。黒色＝凍結前、赤色＝凍結（Ｔ＝０）、緑色＝凍結（４℃でＴ＝７週間）、青色＝凍結（３７℃でＴ＝７週間）。
【図４４】Ｔ＝０での抗ＥＰＯ  ｍＡｂ試料のサイズ分布分析の結果を示すグラフである（１０倍に拡大）。
【図４５】抗ＥＰＯ  ｍＡｂ試料のＡＵＣ分析の結果を示すグラフである。グルタミン酸塩緩衝液は上のパネルであり、ヒスチジン緩衝液は下のパネルである；４℃は青色で示され、３７℃は赤色で示されている。凍結前試料は、すべてのグラフにおいてＴ＝０である。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
本発明の詳細な説明
本発明は、タンパク質製剤に関する。本発明はさらに、タンパク質製剤に関する組成物、キット、及び方法を提供する。
【０００９】
定義
本明細書において別段に定義されていない限り、本発明に関連して使用する科学用語及び技術用語は、当業者が一般に理解する意味を有することとする。さらに、文脈によって別段に必要とされない限り、単数形の用語は、複数形を含むこととし、複数形の用語は、単数形の用語を含むこととする。一般に、本明細書に記載の細胞及び組織培養、分子生物学、免疫学、微生物学、遺伝子及びタンパク質及び核酸化学及びハイブリッド形成に関連して使用する命名法、ならびにそれらの技術は、当技術分野かつ周知で、一般に使用されているものである。本発明の方法及び技術を一般に、当技術分野で周知であり、別段に示さない限り、本明細書を通じて引用及び論述する様々な一般的及びより具体的な参照文献において記載されているとおりの従来の方法に従って行う。例えば、参照によって本明細書に組み込まれるＳａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、２ｄ  ｅｄ．、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．（１９８９）、及びＡｕｓｕｂｅｌら、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ
Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ  （１９９２）、及びＨａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．（１９９０）を参照されたい。酵素反応及び精製技術を、当技術分野で一般に達成されるか、または本明細書において記載のとおりに、製造者の仕様に従って行う。本明細書に記載の分析化学、合成有機化学、ならびに医学及び薬学化学に関連して使用する専門用語、ならびにそれらの実験室手順及び技術は、周知であり、当技術分野で一般に使用されるものである。化学合成、化学分析、医薬品、製剤、及び送達、及び患者の処置について、標準的な技術を使用することができる。
【００１０】
次の用語は、別段に示さない限り、次の意味を有すると理解されたい：
【００１１】
「糖タンパク質」は、オリゴ糖をポリペプチド側鎖に共有結合的に結合させているタンパク質である。
【００１２】
「免疫グロブリン」は、四量体分子である。天然に存在する免疫グロブリンでは、各四量体は、ポリペプチド鎖の２つの同一の対から構成され、各対は、１本の「軽」鎖（約２５ｋＤａ）及び１本の「重」鎖（約５０〜７０ｋＤａ）を有する。各鎖のアミノ末端部分は、抗原認識を主に担う約１００〜１１０またはそれ以上のアミノ酸の可変領域を含む。各鎖のカルボキシ末端部分は、エフェクター機能を主に担う定常領域を規定している。ヒト軽鎖は、カッパ及びラムダ軽鎖として分類される。重鎖は、ミュー、デルタ、ガンマ、アルファ、またはイプシロンとして分類され、それぞれＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、及びＩｇＥとして、抗体のアイソタイプを規定している。軽鎖及び重鎖内で、可変領域及び定常領域は、約１２以上のアミノ酸の「Ｊ」領域によって結合されており、重鎖はまた、約１０超のアミノ酸の「Ｄ」領域を含む。一般には、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｃｈ．７（Ｐａｕｌ，Ｗ．，ｅｄ，２ｎｄ  ｅｄ．，Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎ．Ｙ．（１９８９））を参照されたい（あらゆる目的についてその全体が参照によって本明細書に組み込まれる）。各軽鎖／重鎖対の可変領域は、インタクトな免疫グロブリンが２つの結合部位を有するように抗体結合部位を形成している。
【００１３】
「抗体」は、インタクトな免疫グロブリン、または別段の指定がない限り、特異的な結合についてインタクトな抗体に匹敵するその抗原結合部分を指す。抗原結合部分を、組換えＤＮＡ技術によって、またはインタクトな抗体の酵素的もしくは化学的切断によって生成してもよい。抗原結合部分には、特に、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ドメイン抗体（ｄＡｂｓ）、相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む断片、一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）、キメラ抗体、二重特異性抗体、三重特異性抗体、四重特異性抗体、及びポリペプチドへの特異的な抗原結合をもたらすために十分な免疫グロブリンの少なくとも一部を含有するポリペプチドが含まれる。
【００１４】
抗体の断片または類似体は、当業者であれば、当技術分野で周知の技術を使用して容易に調製することができ、そのような断片または類似体が、本発明の製剤と共に使用するために企図される。
【００１５】
製剤
本発明は、タンパク質製剤、及び特に、安定な固体タンパク質製剤に関する。本発明の特定の態様が、様々な環境条件（例えば、広い温度範囲）において貯蔵及び使用することができるタンパク質製剤を対象としている場合、本発明は、様々なこれらの環境条件においてタンパク質の安定性を維持するような製剤を提供する。本発明において記述する具体的な製剤成分に加えて、本発明の製剤は、製剤の所望の特徴に不利な影響を及ぼさないことを条件として、１種または複数種の他の薬学的に許容される担体、添加剤、または安定剤、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ、Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０）において記載されているものをさらに含んでよい。
【００１６】
ある種の実施形態では、製剤は、安定剤としてアミノ酸を含む。本発明において使用するために企図されるアミノ酸安定剤の非限定的な例は、ヒスチジン、トリプトファン、メチオニン、ロイシン、フェニルアラニン、セリン、グルタミン酸、アルギニン、またはリシンである。具体的な一実施形態では、アミノ酸安定剤は、ヒスチジンである。本発明の製剤中のアミノ酸安定剤の濃度は、所望の特性に応じて、固体化される前に０．１ｍＭ〜１００ｍＭの範囲であり得る。一実施形態では、製剤は、追加の安定化タンパク質（例えば、アルブミン）を含まない。
【００１７】
一実施形態では、ヒスチジンの濃度は、０．１ｍＭ〜１００ｍＭである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、０．１ｍＭ〜５０ｍＭである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、０．１ｍＭ〜４０ｍＭである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、０．１ｍＭ〜３０ｍＭである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、０．１ｍＭ〜２０ｍＭである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、０．１ｍＭ〜１５ｍＭである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、０．１ｍＭ〜１０ｍＭである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、０．１ｍＭ〜５ｍＭである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、０．１ｍＭ〜１ｍＭである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、１ｍＭ〜１００ｍＭである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、１ｍＭ〜５０ｍＭである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、１ｍＭ〜４０ｍＭである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、１ｍＭ〜３０ｍＭである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、１ｍＭ〜２０ｍＭである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、１ｍＭ〜１５ｍＭである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、１ｍＭ〜１０ｍＭである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、５ｍＭ〜５０ｍＭである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、５ｍＭ〜２５ｍＭである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、５ｍＭ〜１５ｍＭである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、０．１ｍＭである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、０．５ｍＭである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、１ｍＭである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、２ｍＭである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、３ｍＭである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、４ｍＭである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、５ｍＭである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、６ｍＭである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、７ｍＭである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、８ｍＭである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、９ｍＭである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、１０ｍＭである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、１１ｍＭである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、１２ｍＭである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、１３ｍＭである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、１４ｍＭである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、１５ｍＭである。
【００１８】
一実施形態では、ヒスチジンの濃度は、約０．１ｍＭ〜約１００ｍＭである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、約０．１ｍＭ〜約５０ｍＭである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、約０．１ｍＭ〜約４０ｍＭである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、約０．１ｍＭ〜約３０ｍＭである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、約０．１ｍＭ〜約２０ｍＭである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、約０．１ｍＭ〜約１５ｍＭである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、約０．１ｍＭ〜約１０ｍＭである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、約０．１ｍＭ〜約５ｍＭである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、約０．１ｍＭ〜約１ｍＭである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、約１ｍＭ〜約１００ｍＭである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、約１ｍＭ〜約５０ｍＭである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、約１ｍＭ〜約４０ｍＭである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、約１ｍＭ〜約３０ｍＭである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、約１ｍＭ〜約２０ｍＭである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、約１ｍＭ〜約１５ｍＭである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、約１ｍＭ〜約１０ｍＭである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、約５ｍＭ〜約５０ｍＭである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、約５ｍＭ〜約２５ｍＭである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、約５ｍＭ〜約１５ｍＭである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、約０．１ｍＭである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、約０．５ｍＭである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、約１ｍＭである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、約２ｍＭである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、約３ｍＭである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、約４ｍＭである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、約５ｍＭである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、約６ｍＭである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、約７ｍＭである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、約８ｍＭである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、約９ｍＭである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、約１０ｍＭである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、約１１ｍＭである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、約１２ｍＭである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、約１３ｍＭである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、約１４ｍＭである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、約１５ｍＭである。
【００１９】
さらなる実施形態では、製剤は、アミノ酸ではない緩衝剤を含んでよい。具体的な一実施形態では、アミノ酸ではない緩衝剤は、コハク酸ナトリウムである。本発明の製剤中のアミノ酸ではない緩衝剤の濃度は、所望の特性に応じて、固体化される前に０．１ｍＭ〜１００ｍＭｍＭの範囲であり得る。
【００２０】
一実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、０．１ｍＭ〜１００ｍＭである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、０．１ｍＭ〜５０ｍＭである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、０．１ｍＭ〜４０ｍＭである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、０．１ｍＭ〜３０ｍＭである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、０．１ｍＭ〜２０ｍＭである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、０．１ｍＭ〜１５ｍＭである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、０．１ｍＭ〜１０ｍＭである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、０．１ｍＭ〜５ｍＭである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、０．１ｍＭ〜１ｍＭである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、１ｍＭ〜１００ｍＭである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、１ｍＭ〜５０ｍＭである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、１ｍＭ〜４０ｍＭである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、１ｍＭ〜３０ｍＭである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、１ｍＭ〜２０ｍＭである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、１ｍＭ〜１５ｍＭである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、１ｍＭ〜１０ｍＭである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、５ｍＭ〜５０ｍＭである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、５ｍＭ〜２５ｍＭである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、５ｍＭ〜１５ｍＭである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、０．１ｍＭである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、０．５ｍＭである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、１ｍＭである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、２ｍＭである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、３ｍＭである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、４ｍＭである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、５ｍＭである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、６ｍＭである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、７ｍＭである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、８ｍＭである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、９ｍＭである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、１０ｍＭである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、１１ｍＭである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、１２ｍＭである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、１３ｍＭである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、１４ｍＭである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、１５ｍＭである。
【００２１】
一実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、約０．１ｍＭ〜約１００ｍＭである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、約０．１ｍＭ〜約５０ｍＭである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、約０．１ｍＭ〜約４０ｍＭである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、約０．１ｍＭ〜約３０ｍＭである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、約０．１ｍＭ〜約２０ｍＭである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、約０．１ｍＭ〜約１５ｍＭである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、約０．１ｍＭ〜約１０ｍＭである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、約０．１ｍＭ〜約５ｍＭである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、約０．１ｍＭ〜約１ｍＭである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、約１ｍＭ〜約１００ｍＭである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、約１ｍＭ〜約５０ｍＭである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、約１ｍＭ〜約４０ｍＭである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、約１ｍＭ〜約３０ｍＭである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、約１ｍＭ〜約２０ｍＭである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、約１ｍＭ〜約１５ｍＭである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、約１ｍＭ〜約１０ｍＭである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、約５ｍＭ〜約５０ｍＭである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、約５ｍＭ〜約２５ｍＭである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、約５ｍＭ〜約１５ｍＭである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、約０．１ｍＭである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、約０．５ｍＭである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、約１ｍＭである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、約２ｍＭである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、約３ｍＭである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、約４ｍＭである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、約５ｍＭである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、約６ｍＭである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、約７ｍＭである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、約８ｍＭである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、約９ｍＭである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、約１０ｍＭである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、約１１ｍＭである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、約１２ｍＭである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、約１３ｍＭである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、約１４ｍＭである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、約１５ｍＭである。
【００２２】
さらなる実施形態では、緩衝剤は、グルタミン酸ナトリウムである。グルタミン酸ナトリウムの濃度は、所望の特性に応じて、固体化される前に０．１ｍＭ〜１００ｍＭｍＭの範囲であってよい。
【００２３】
一実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、０．１ｍＭ〜１００ｍＭである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、０．１ｍＭ〜５０ｍＭである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、０．１ｍＭ〜４０ｍＭである。別の実施形態では、
グルタミン酸ナトリウムの濃度は、０．１ｍＭ〜３０ｍＭである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、０．１ｍＭ〜２０ｍＭである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、０．１ｍＭ〜１５ｍＭである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、０．１ｍＭ〜１０ｍＭである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、０．１ｍＭ〜５ｍＭである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、０．１ｍＭ〜１ｍＭである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、１ｍＭ〜１００ｍＭである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、１ｍＭ〜５０ｍＭである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、１ｍＭ〜４０ｍＭである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、１ｍＭ〜３０ｍＭである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、１ｍＭ〜２０ｍＭである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、１ｍＭ〜１５ｍＭである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、１ｍＭ〜１０ｍＭである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、５ｍＭ〜５０ｍＭである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、５ｍＭ〜２５ｍＭである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、５ｍＭ〜１５ｍＭである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、０．１ｍＭである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、０．５ｍＭである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、１ｍＭである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、２ｍＭである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、３ｍＭである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、４ｍＭである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、５ｍＭである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、６ｍＭである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、７ｍＭである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、８ｍＭである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、９ｍＭである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、１０ｍＭである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、１１ｍＭである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、１２ｍＭである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、１３ｍＭである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、１４ｍＭである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、１５ｍＭである。
【００２４】
一実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、約０．１ｍＭ〜約１００ｍＭである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、約０．１ｍＭ〜約５０ｍＭである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、約０．１ｍＭ〜約４０ｍＭである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、約０．１ｍＭ〜約３０ｍＭである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、約０．１ｍＭ〜約２０ｍＭである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、約０．１ｍＭ〜約１５ｍＭである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、約０．１ｍＭ〜約１０ｍＭである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、約０．１ｍＭ〜約５ｍＭである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、約０．１ｍＭ〜約１ｍＭである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、約１ｍＭ〜約１００ｍＭである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、約１ｍＭ〜約５０ｍＭである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、約１ｍＭ〜約４０ｍＭである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、約１ｍＭ〜約３０ｍＭである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、約１ｍＭ〜約２０ｍＭである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、約１ｍＭ〜約１５ｍＭである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、約１ｍＭ〜約１０ｍＭである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、約５ｍＭ〜約５０ｍＭである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、約５ｍＭ〜約２５ｍＭである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、約５ｍＭ〜約１５ｍＭである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、約０．１ｍＭである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、約０．５ｍＭである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、約１ｍＭである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、約２ｍＭである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、約３ｍＭである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、約４ｍＭである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、約５ｍＭである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、約６ｍＭである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、約７ｍＭである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、約８ｍＭである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、約９ｍＭである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、約１０ｍＭである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、約１１ｍＭである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、約１２ｍＭである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、約１３ｍＭである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、約１４ｍＭである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、約１５ｍＭである。
【００２５】
さらなる実施形態では、製剤は、無機塩または有機塩を含んでよい。ある種の実施形態では、これらの塩は、タンパク質製剤中で緩衝剤として機能する。無機塩の非限定的な例には、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、リン酸ナトリウム、リン酸カリウム、及び炭酸水素ナトリウムが含まれる。有機塩の非限定的な例には、クエン酸ナトリウム、クエン酸カリウム、及び酢酸ナトリウムが含まれる。具体的な一実施形態では、無機塩は、リン酸ナトリウムである。本発明の製剤中の無機塩または有機塩の濃度は、所望の特性に応じて、固体化される前に０．１ｍＭ〜１００ｍＭｍＭの範囲であり得る。
【００２６】
一実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、０．１ｍＭ〜１００ｍＭである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、０．１ｍＭ〜５０ｍＭである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、０．１ｍＭ〜４０ｍＭである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、０．１ｍＭ〜３０ｍＭである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、０．１ｍＭ〜２０ｍＭである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、０．１ｍＭ〜１５ｍＭである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、０．１ｍＭ〜１０ｍＭである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、０．１ｍＭ〜５ｍＭである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、０．１ｍＭ〜１ｍＭである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、１ｍＭ〜１００ｍＭである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、１ｍＭ〜５０ｍＭである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、１ｍＭ〜４０ｍＭである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、１ｍＭ〜３０ｍＭである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、１ｍＭ〜２０ｍＭである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、１ｍＭ〜１５ｍＭである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、１ｍＭ〜１０ｍＭである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、５ｍＭ〜５０ｍＭである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、５ｍＭ〜２５ｍＭである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、５ｍＭ〜１５ｍＭである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、０．１ｍＭである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、０．５ｍＭである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、１ｍＭである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、２ｍＭである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、３ｍＭである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、４ｍＭである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、５ｍＭである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、６ｍＭである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、７ｍＭである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、８ｍＭである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、９ｍＭである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、１０ｍＭである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、１１ｍＭである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、１２ｍＭである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、１３ｍＭである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、１４ｍＭである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、１５ｍＭである。
【００２７】
一実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、約０．１ｍＭ〜約１００ｍＭである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、約０．１ｍＭ〜約５０ｍＭである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、約０．１ｍＭ〜約４０ｍＭである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、約０．１ｍＭ〜約３０ｍＭである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、約０．１ｍＭ〜約２０ｍＭである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、約０．１ｍＭ〜約１５ｍＭである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、約０．１ｍＭ〜約１０ｍＭである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、約０．１ｍＭ〜約５ｍＭである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、約０．１ｍＭ〜約１ｍＭである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、約１ｍＭ〜約１００ｍＭである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、約１ｍＭ〜約５０ｍＭである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、約１ｍＭ〜約４０ｍＭである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、約１ｍＭ〜約３０ｍＭである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、約１ｍＭ〜約２０ｍＭである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、約１ｍＭ〜約１５ｍＭである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、約１ｍＭ〜約１０ｍＭである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、約５ｍＭ〜約５０ｍＭである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、約５ｍＭ〜約２５ｍＭである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、約５ｍＭ〜約１５ｍＭである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、約０．１ｍＭである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、約０．５ｍＭである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、約１ｍＭである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、約２ｍＭである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、約３ｍＭである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、約４ｍＭである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、約５ｍＭである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、約６ｍＭである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、約７ｍＭである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、約８ｍＭである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、約９ｍＭである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、約１０ｍＭである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、約１１ｍＭである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、約１２ｍＭである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、約１３ｍＭである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、約１４ｍＭである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、約１５ｍＭである。
【００２８】
ある種の実施形態では、タンパク質製剤は、糖アルコールを含む。本発明において使用するために企図される糖アルコールの非限定的な例は、マンニトール、キシリトール、ソルビトール、マルチトール、ラクチトール、グリセロール、エリトリトール、またはアラビトールである。具体的な一実施形態では、糖アルコールは、マンニトールである。本発明の製剤中の糖アルコールの濃度は、所望の特性に応じて、固体化される前に０．１％〜１０％ｍＭの範囲であり得る。
【００２９】
一実施形態では、マンニトールの濃度は、約０．１％〜約１０％である。別の実施形態では、マンニトールの濃度は、約１％〜１０％である。別の実施形態では、マンニトールの濃度は、約１％〜約５％である。別の実施形態では、マンニトールの濃度は、約１％〜約３％である。別の実施形態では、マンニトールの濃度は、約３％〜約５％である。別の実施形態では、マンニトールの濃度は、約５％〜約１０％である。別の実施形態では、マンニトールの濃度は、約０．１％である。別の実施形態では、マンニトールの濃度は、約０．３％である。別の実施形態では、マンニトールの濃度は、約０．５％である。別の実施形態では、マンニトールの濃度は、約１％である。別の実施形態では、マンニトールの濃度は、約２％である。別の実施形態では、マンニトールの濃度は、約３％である。別の実施形態では、マンニトールの濃度は、約４％である。別の実施形態では、マンニトールの濃度は、約５％である。別の実施形態では、マンニトールの濃度は、約６％である。別の実施形態では、マンニトールの濃度は、約７％である。別の実施形態では、マンニトールの濃度は、約８％である。別の実施形態では、マンニトールの濃度は、約９％である。別の実施形態では、マンニトールの濃度は、約１０％である。
【００３０】
一実施形態では、マンニトールの濃度は、０．１％〜１０％である。一実施形態では、マンニトールの濃度は、１％〜１０％である。別の実施形態では、マンニトールの濃度は、１％〜５％である。別の実施形態では、マンニトールの濃度は、１％〜３％である。別の実施形態では、マンニトールの濃度は、３％〜５％である。別の実施形態では、マンニトールの濃度は、５％〜１０％である。別の実施形態では、マンニトールの濃度は、０．１％である。別の実施形態では、マンニトールの濃度は、０．３％である。別の実施形態では、マンニトールの濃度は、０．５％である。別の実施形態では、マンニトールの濃度は、１％である。別の実施形態では、マンニトールの濃度は、２％である。別の実施形態では、マンニトールの濃度は、３％である。別の実施形態では、マンニトールの濃度は、４％である。別の実施形態では、マンニトールの濃度は、５％である。別の実施形態では、マンニトールの濃度は、６％である。別の実施形態では、マンニトールの濃度は、７％である。別の実施形態では、マンニトールの濃度は、８％である。別の実施形態では、マンニトールの濃度は、９％である。別の実施形態では、マンニトールの濃度は、１０％である。
【００３１】
ある種の実施形態では、製剤は、糖を含む。糖の非限定的な例は、スクロース、マルトース、ラクトース、グルコース、フルクトース、ガラクトース、マンノース、アラビノース、キシロース、リボース、ラムノース、トレハロース、ソルボース、メレチトース、ラフィノース、チオグルコース、チオマンノース、チオフルクトース、オクタ−Ｏ−アセチル−チオトレハロース、チオスクロース、またはチオマルトースである。具体的な一実施形態では、糖は、スクロースである。本発明の製剤中の糖の濃度は、所望の特性に応じて、固体化される前に０．０５％〜１０％ｍＭの範囲であり得る。
【００３２】
一実施形態では、スクロースの濃度は、約０．０５％〜約１０％である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、約０．５％〜約５％である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、約１％〜約５％である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、約１％〜約１０％である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、約１％〜約５％である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、約１％〜約３％である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、約３％〜約５％である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、約５％〜約１０％である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、約０．０５％である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、約０．１％である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、約０．３％である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、約０．５％である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、約０．７％である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、約１％である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、約２％である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、約３％である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、約４％である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、約５％である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、約６％である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、約７％である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、約８％である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、約９％である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、約１０％である。
【００３３】
一実施形態では、スクロースの濃度は、０．０５％〜１０％である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、０．５％〜５％である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、１％〜５％である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、１％〜３％である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、３％〜５％である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、５％〜１０％である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、０．１％である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、０．３％である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、０．５％である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、０．７％である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、１％である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、２％である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、３％である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、４％である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、５％である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、６％である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、７％である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、８％である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、９％である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、１０％である。
【００３４】
ある種の実施形態では、製剤は、界面活性剤、すなわち、表面活性薬剤を含む。界面活性剤の非限定的な例は、ポリソルベート（例えば、ポリソルベート−８０、ポリソルベート−２０、ポリソルベート−２１、ポリソルベート−４０、ポリソルベート−６０、ポリソルベート−６５、ポリソルベート−８１、またはポリソルベート−８５、ポロキサマー（例えば、ポロキサマー１８８）、Ｔｒｉｔｏｎ、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、ラウレル硫酸ナトリウム、ナトリウムオクチルグリコシド、ラウリル−、ミリスチル−、リノレイル−、またはステアリル−スルホベタイン、ラウリル−、ミリスチル−、リノレイル−、またはステアリル−サルコシン、リノレイル−、ミリスチル−、または、セチル−ベタイン、ラウロアミドプロピル−、コカミドプロピル−、リノレアミドプロピル−、ミリスタミドプロピル−、パルミドプロピル−、またはイソステアラミドプロピル−ベタイン（例えば、ラウロアミドプロピル）、ミリスタミドプロピル−、パルミドプロピル−、またはイソステアラミドプロピル−ジメチルアミン；ナトリウムメチルココイル−、またはジナトリウムメチルオレイル−タウレート、ポリエチルグリコール、ポリプロピルグリコール、ならびにエチレン及びプロピレングリコールのコポリマー（例えば、Ｐｌｕｒｏｎｉｃｓ、ＰＦ６８など）である。具体的な一実施形態では、界面活性剤は、ポリソルベート−８０である。本発明の製剤中の界面活性剤の濃度は、所望の特性に応じて、固体化される前に０．０００１％〜０．１％の範囲であり得る。
【００３５】
一実施形態では、ポリソルベート８０の濃度は、約０．０００１％〜約０．１％である。別の実施形態では、ポリソルベート８０の濃度は、約０．００１％〜約０．５％である。別の実施形態では、ポリソルベート８０の濃度は、約０．００１％〜約０．１％である。別の実施形態では、ポリソルベート８０の濃度は、約０．００５％〜約０．１％である。別の実施形態では、ポリソルベート８０の濃度は、約０．００５％〜約０．０５％である。別の実施形態では、ポリソルベート８０の濃度は、約０．０１％〜約０．１％である。別の実施形態では、ポリソルベート８０の濃度は、約０．５％〜約０．１％である。別の実施形態では、ポリソルベート８０の濃度は、約０．００９％である。別の実施形態では、ポリソルベート８０の濃度は、約０．００８％である。別の実施形態では、ポリソルベート８０の濃度は、約０．００７％である。別の実施形態では、ポリソルベート８０の濃度は、約０．００６％である。別の実施形態では、ポリソルベート８０の濃度は、約０．００５％である。別の実施形態では、ポリソルベート８０の濃度は、約０．００４％である。別の実施形態では、ポリソルベート８０の濃度は、約０．００３％である。別の実施形態では、ポリソルベート８０の濃度は、約０．００２％である。別の実施形態では、ポリソルベート８０の濃度は、約０．００１％である。別の実施形態では、ポリソルベート８０の濃度は、約０．０１％である。別の実施形態では、ポリソルベート８０の濃度は、約０．０２％である。別の実施形態では、ポリソルベート８０の濃度は、約０．０３％である。別の実施形態では、ポリソルベート８０の濃度は、約０．０４％である。別の実施形態では、ポリソルベート８０の濃度は、約０．０５％である。別の実施形態では、ポリソルベート８０の濃度は、約０．０６％である。別の実施形態では、ポリソルベート８０の濃度は、約０．０７％である。別の実施形態では、ポリソルベート８０の濃度は、約０．０８％である。別の実施形態では、ポリソルベート８０の濃度は、約０．０９％である。別の実施形態では、ポリソルベート８０の濃度は、約０．１％である。別の実施形態では、ポリソルベート８０の濃度は、約０．５％である。
【００３６】
一実施形態では、ポリソルベート８０の濃度は、０．０００１％〜０．０１％である。別の実施形態では、ポリソルベート８０の濃度は、０．００１％〜０．５％である。別の実施形態では、ポリソルベート８０の濃度は、０．００１％〜０．１％である。別の実施形態では、ポリソルベート８０の濃度は、０．００５％〜０．１％である。別の実施形態では、ポリソルベート８０の濃度は、０．００５％〜０．０５％である。別の実施形態では、ポリソルベート８０の濃度は、０．０１％〜０．１％である。別の実施形態では、ポリソルベート８０の濃度は、０．５％〜０．１％である。別の実施形態では、ポリソルベート８０の濃度は、０．００９％である。別の実施形態では、ポリソルベート８０の濃度は、０．００８％である。別の実施形態では、ポリソルベート８０の濃度は、０．００７％である。別の実施形態では、ポリソルベート８０の濃度は、０．００６％である。別の実施形態では、ポリソルベート８０の濃度は、０．００５％である。別の実施形態では、ポリソルベート８０の濃度は、０．００４％である。別の実施形態では、ポリソルベート８０の濃度は、０．００３％である。別の実施形態では、ポリソルベート８０の濃度は、０．００２％である。別の実施形態では、ポリソルベート８０の濃度は、０．００１％である。別の実施形態では、ポリソルベート８０の濃度は、０．０１％である。別の実施形態では、ポリソルベート８０の濃度は、０．０２％である。別の実施形態では、ポリソルベート８０の濃度は、０．０３％である。別の実施形態では、ポリソルベート８０の濃度は、０．０４％である。別の実施形態では、ポリソルベート８０の濃度は、０．０５％である。別の実施形態では、ポリソルベート８０の濃度は、０．０６％である。別の実施形態では、ポリソルベート８０の濃度は、０．０７％である。別の実施形態では、ポリソルベート８０の濃度は、０．０８％である。別の実施形態では、ポリソルベート８０の濃度は、０．０９％である。別の実施形態では、ポリソルベート８０の濃度は、０．１％である。別の実施形態では、ポリソルベート８０の濃度は、０．５％である。
【００３７】
一実施形態では、ポリソルベート２０の濃度は、約０．０００１％〜約０．１％である。別の実施形態では、ポリソルベート２０の濃度は、約０．００１％〜約０．５％である。別の実施形態では、ポリソルベート２０の濃度は、約０．００１％〜約０．１％である。別の実施形態では、ポリソルベート２０の濃度は、約０．００５％〜約０．１％である。別の実施形態では、ポリソルベート２０の濃度は、約０．００５％〜約０．０５％である。別の実施形態では、ポリソルベート２０の濃度は、約０．０１％〜約０．１％である。別の実施形態では、ポリソルベート２０の濃度は、約０．５％〜約０．１％である。別の実施形態では、ポリソルベート２０の濃度は、約０．００９％である。別の実施形態では、ポリソルベート２０の濃度は、約０．００８％である。別の実施形態では、ポリソルベート２０の濃度は、約０．００７％である。別の実施形態では、ポリソルベート２０の濃度は、約０．００６％である。別の実施形態では、ポリソルベート２０の濃度は、約０．００５％である。別の実施形態では、ポリソルベート２０の濃度は、約０．００４％である。別の実施形態では、ポリソルベート２０の濃度は、約０．００３％である。別の実施形態では、ポリソルベート２０の濃度は、約０．００２％である。別の実施形態では、ポリソルベート２０の濃度は、約０．００１％である。別の実施形態では、ポリソルベート２０の濃度は、約０．０１％である。別の実施形態では、ポリソルベート２０の濃度は、約０．０２％である。別の実施形態では、ポリソルベート２０の濃度は、約０．０３％である。別の実施形態では、ポリソルベート２０の濃度は、約０．０４％である。別の実施形態では、ポリソルベート２０の濃度は、約０．０５％である。別の実施形態では、ポリソルベート２０の濃度は、約０．０６％である。別の実施形態では、ポリソルベート２０の濃度は、約０．０７％である。別の実施形態では、ポリソルベート２０の濃度は、約０．０８％である。別の実施形態では、ポリソルベート２０の濃度は、約０．０９％である。別の実施形態では、ポリソルベート２０の濃度は、約０．１％である。別の実施形態では、ポリソルベート２０の濃度は、約０．５％である。
【００３８】
一実施形態では、ポリソルベート２０の濃度は、０．０００１％〜０．０１％である。別の実施形態では、ポリソルベート２０の濃度は、０．００１％〜０．５％である。別の実施形態では、ポリソルベート２０の濃度は、０．００１％〜０．１％である。別の実施形態では、ポリソルベート２０の濃度は、０．００５％〜０．１％である。別の実施形態では、ポリソルベート２０の濃度は、０．００５％〜０．０５％である。別の実施形態では、ポリソルベート２０の濃度は、０．０１％〜０．１％である。別の実施形態では、ポリソルベート２０の濃度は、０．５％〜０．１％である。別の実施形態では、ポリソルベート２０の濃度は、０．００９％である。別の実施形態では、ポリソルベート２０の濃度は、０．００８％である。別の実施形態では、ポリソルベート２０の濃度は、０．００７％である。別の実施形態では、ポリソルベート２０の濃度は、０．００６％である。別の実施形態では、ポリソルベート２０の濃度は、０．００５％である。別の実施形態では、ポリソルベート２０の濃度は、０．００４％である。別の実施形態では、ポリソルベート２０の濃度は、０．００３％である。別の実施形態では、ポリソルベート２０の濃度は、０．００２％である。別の実施形態では、ポリソルベート２０の濃度は、０．００１％である。別の実施形態では、ポリソルベート２０の濃度は、０．０１％である。別の実施形態では、ポリソルベート２０の濃度は、０．０２％である。別の実施形態では、ポリソルベート２０の濃度は、０．０３％である。別の実施形態では、ポリソルベート２０の濃度は、０．０４％である。別の実施形態では、ポリソルベート２０の濃度は、０．０５％である。別の実施形態では、ポリソルベート２０の濃度は、０．０６％である。別の実施形態では、ポリソルベート２０の濃度は、０．０７％である。別の実施形態では、ポリソルベート２０の濃度は、０．０８％である。別の実施形態では、ポリソルベート２０の濃度は、０．０９％である。別の実施形態では、ポリソルベート２０の濃度は、０．１％である。別の実施形態では、ポリソルベート２０の濃度は、０．５％である。
【００３９】
一実施形態では、ｐＨは、固体化される前に約５．０〜約８．０である。別の実施形態では、ｐＨは、約４．０〜約１０．０である。別の実施形態では、ｐＨは、約５．０〜約７．０である。別の実施形態では、ｐＨは、約５．０〜約９．０である。別の実施形態では、ｐＨは、約６．０〜約９．０である。別の実施形態では、ｐＨは、約５．０である。別の実施形態では、ｐＨは、約５．５である。別の実施形態では、ｐＨは、約６．０である。別の実施形態では、ｐＨは、約６．５である。別の実施形態では、ｐＨは、約７．０である。別の実施形態では、ｐＨは、約７．５である。別の実施形態では、ｐＨは、約８．０である。別の実施形態では、ｐＨは、約８．５である。別の実施形態では、ｐＨは、約９．０である。別の実施形態では、ｐＨは、約９．５である。別の実施形態では、ｐＨは、約１０．０である。
【００４０】
一実施形態では、ｐＨは、固体化される前に６．０〜８．０である。別の実施形態では、ｐＨは、４．０〜１０．０である。別の実施形態では、ｐＨは、５．０〜７．０である。別の実施形態では、ｐＨは、５．０〜９．０である。別の実施形態では、ｐＨは、６．０〜９．０である。別の実施形態では、ｐＨは、５．０である。別の実施形態では、ｐＨは、５．１である。別の実施形態では、ｐＨは、５．２である。別の実施形態では、ｐＨは、５．３である。別の実施形態では、ｐＨは、５．４である。別の実施形態では、ｐＨは、５．５である。別の実施形態では、ｐＨは、５．６である。別の実施形態では、ｐＨは、５．７である。別の実施形態では、ｐＨは、５．８である。別の実施形態では、ｐＨは、５．９である。別の実施形態では、ｐＨは、６．０である。別の実施形態では、ｐＨは、６．１である。別の実施形態では、ｐＨは、６．２である。別の実施形態では、ｐＨは、６．３である。別の実施形態では、ｐＨは、６．４である。別の実施形態では、ｐＨは、６．５である。別の実施形態では、ｐＨは、６．６である。別の実施形態では、ｐＨは、６．７である。別の実施形態では、ｐＨは、６．８である。別の実施形態では、ｐＨは、６．９である。別の実施形態では、ｐＨは、７．０である。別の実施形態では、ｐＨは、７．５である。別の実施形態では、ｐＨは、８．０である。別の実施形態では、ｐＨは、８．５である。別の実施形態では、ｐＨは、９．０である。別の実施形態では、ｐＨは、９．５である。別の実施形態では、ｐＨは、１０．０である。
【００４１】
一実施形態では、タンパク質の濃度は、約０．０１ｍｇ／ｍｌ〜約１０ｍｇ／ｍｌである。一実施形態では、タンパク質の濃度は、約０．０１ｍｇ／ｍｌ〜約１ｍｇ／ｍｌである。一実施形態では、タンパク質の濃度は、固体化される前に約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約１００ｍｇ／ｍｌｍＭである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、約１ｍｇ／ｍｌ〜約１００ｍｇ／ｍｌである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、約１ｍｇ／ｍｌ〜約５０ｍｇ／ｍｌである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、約１ｍｇ／ｍｌ〜約２５ｍｇ／ｍｌである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、約１ｍｇ／ｍｌ〜約１０ｍｇ／ｍｌである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、約５ｍｇ／ｍｌ〜約５０ｍｇ／ｍｌである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、約５ｍｇ／ｍｌ〜約２５ｍｇ／ｍｌである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、約１０ｍｇ／ｍｌ〜約１００ｍｇ／ｍｌである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、約１０ｍｇ／ｍｌ〜約５０ｍｇ／ｍｌである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、約１０ｍｇ／ｍｌ〜約２５ｍｇ／ｍｌである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、約０．０１ｍｇ／ｍｌである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、約０．０５ｍｇ／ｍｌである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、約０．１ｍｇ／ｍｌである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、約０．２ｍｇ／ｍｌである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、約０．３ｍｇ／ｍｌである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、約０．４ｍｇ／ｍｌである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、約０．５ｍｇ／ｍｌである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、約１ｍｇ／ｍｌである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、約２ｍｇ／ｍｌである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、約３ｍｇ／ｍｌである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、約４ｍｇ／ｍｌである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、約５ｍｇ／ｍｌである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、約６ｍｇ／ｍｌである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、約７ｍｇ／ｍｌである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、約８ｍｇ／ｍｌである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、約９ｍｇ／ｍｌである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、約１０ｍｇ／ｍｌである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、約２０ｍｇ／ｍｌである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、約３０ｍｇ／ｍｌである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、約４０ｍｇ／ｍｌである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、約５０ｍｇ／ｍｌである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、約６０ｍｇ／ｍｌである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、約７０ｍｇ／ｍｌである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、約８０ｍｇ／ｍｌである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、約９０ｍｇ／ｍｌである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、約１００ｍｇ／ｍｌである。
【００４２】
一実施形態では、タンパク質の濃度は、０．０１ｍｇ／ｍｌ〜１０ｍｇ／ｍｌである。一実施形態では、タンパク質の濃度は、０．０１ｍｇ／ｍｌ〜１ｍｇ／ｍｌである。一実施形態では、タンパク質の濃度は、固体化される前に０．１ｍｇ／ｍｌ〜１００ｍｇ／ｍｌｍＭである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、１ｍｇ／ｍｌ〜１００ｍｇ／ｍｌである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、１ｍｇ／ｍｌ〜５０ｍｇ／ｍｌである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、１ｍｇ／ｍｌ〜２５ｍｇ／ｍｌである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、１ｍｇ／ｍｌ〜１０ｍｇ／ｍｌである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、５ｍｇ／ｍｌ〜５０ｍｇ／ｍｌである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、５ｍｇ／ｍｌ〜２５ｍｇ／ｍｌである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、１０ｍｇ／ｍｌ〜１００ｍｇ／ｍｌである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、１０ｍｇ／ｍｌ〜５０ｍｇ／ｍｌである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、１０ｍｇ／ｍｌ〜２５ｍｇ／ｍｌである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、０．０１ｍｇ／ｍｌである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、０．０５ｍｇ／ｍｌである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、０．１ｍｇ／ｍｌである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、０．２ｍｇ／ｍｌである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、０．３ｍｇ／ｍｌである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、０．４ｍｇ／ｍｌである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、０．５ｍｇ／ｍｌである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、１ｍｇ／ｍｌである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、２ｍｇ／ｍｌである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、３ｍｇ／ｍｌである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、４ｍｇ／ｍｌである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、５ｍｇ／ｍｌである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、６ｍｇ／ｍｌである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、７ｍｇ／ｍｌである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、８ｍｇ／ｍｌである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、９ｍｇ／ｍｌである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、１０ｍｇ／ｍｌである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、２０ｍｇ／ｍｌである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、３０ｍｇ／ｍｌである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、４０ｍｇ／ｍｌである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、５０ｍｇ／ｍｌである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、６０ｍｇ／ｍｌである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、７０ｍｇ／ｍｌである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、８０ｍｇ／ｍｌである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、９０ｍｇ／ｍｌである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、１００ｍｇ／ｍｌである。
【００４３】
固体タンパク質製剤は、これらだけに限定されないが、液体状態で出発し、続いて、液体が除去される（すなわち、水和タンパク質溶液から脱水タンパク質溶液へと進行する）タンパク質製剤を包含する。これを達成する方法の非限定的な例には、凍結乾燥（またフリーズドライまたはクリオデシケーションとも呼ばれる）または噴霧乾燥が含まれる。凍結乾燥では、物質は、急速凍結され、固相から気相への液体の昇華が生じる真空条件下で脱水される。噴霧乾燥は、熱風での急速な乾燥によって、液体またはスラリーから乾燥粉末を生成する方法である。凍結乾燥及び噴霧乾燥のプロセスは、当技術分野で周知であり、所望の結果を生じさせるために容易に最適化することができる。Ｌｙｏｐｈｉｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ａｓｐｅｃｔｓ，Ｈｅｎｒｙ  Ｒ．  Ｃｏｓｔａｎｔｉｎｏ（Ｅｄｉｔｏｒ），Ｍｉｃｈａｅｌ  Ｊ．  Ｐｉｋａｌ（Ｅｄｉｔｏｒ）；Ｌｙｏｐｈｉｌｉｚａｔｉｏｎ：Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｂａｓｉｃ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ，Ｔｈｏｍａｓ  Ａ．Ｊｅｎｎｉｎｇｓ，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，１９９９；及びＦｒｅｅｚｅ−Ｄｒｙｉｎｇ／Ｌｙｏｐｈｉｌｉｚａｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ＆  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｓｅｃｏｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ：Ｒｅｖｉｓｅｄ  Ａｎｄ  Ｅｘｐａｎｄｅｄ（Ｄｒｕｇｓ  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ），Ｌｏｕｉｓ  Ｒｅｙ（Ｅｄｉｔｏｒ），Ｊｏａｎ  Ｃ．Ｍａｙ（Ｅｄｉｔｏｒ），ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ  ２００４も参照されたい。一実施形態では、固体タンパク質製剤を凍結乾燥させる。別の実施形態では、固体タンパク質製剤を噴霧乾燥させる。本開示を通じて、「固体化される前に」との言及が存在し得るが、これは、上記のとおりに液体が除去される前の液体状態のタンパク質製剤を意味する。
【００４４】
本発明の一態様は、安定していて、かつ様々な異なる温度を通じて長期間にわたってそれらの安定性を維持するタンパク質製剤（固体及び液体の両方）を提供することである。この特性は、これらだけに限定されないが、広範囲の様々な臨床設定における貯蔵の容易さを含む様々な異なる理由により、有用である。
【００４５】
一実施形態では、固体タンパク質製剤は、４℃〜４５℃で少なくとも１ヶ月間にわたって安定している。一実施形態では、固体タンパク質製剤は、４℃〜４５℃で少なくとも２ヶ月間にわたって安定している。一実施形態では、固体タンパク質製剤は、４℃〜４５℃で少なくとも３ヶ月間にわたって安定している。一実施形態では、固体タンパク質製剤は、４℃〜４５℃で少なくとも４ヶ月間にわたって安定している。一実施形態では、固体タンパク質製剤は、４℃〜４５℃で少なくとも５ヶ月間にわたって安定している。一実施形態では、固体タンパク質製剤は、４℃〜４５℃で少なくとも６ヶ月間にわたって安定している。一実施形態では、固体タンパク質製剤は、４℃〜４５℃で少なくとも１２ヶ月間にわたって安定している。一実施形態では、固体タンパク質製剤は、４℃〜４５℃で少なくとも１８ヶ月間にわたって安定している。一実施形態では、固体タンパク質製剤は、４℃〜４５℃で少なくとも２４ヶ月間にわたって安定している。一実施形態では、固体タンパク質製剤は、４℃〜４５℃で少なくとも３６ヶ月間にわたって安定している。一実施形態では、固体タンパク質製剤は、４℃〜４５℃で少なくとも４８ヶ月間にわたって安定している。一実施形態では、固体タンパク質製剤は、４℃〜４５℃で少なくとも６０ヶ月間にわたって安定している。
【００４６】
一実施形態では、固体タンパク質製剤は、約４℃〜約４５℃で少なくとも約１ヶ月間にわたって安定している。一実施形態では、固体タンパク質製剤は、約４℃〜約４５℃で少なくとも約２ヶ月間にわたって安定している。一実施形態では、固体タンパク質製剤は、約４℃〜約４５℃で少なくとも約３ヶ月間にわたって安定している。一実施形態では、固体タンパク質製剤は、約４℃〜約４５℃で少なくとも約４ヶ月間にわたって安定している。一実施形態では、固体タンパク質製剤は、約４℃〜約４５℃で少なくとも約５ヶ月間にわたって安定している。一実施形態では、固体タンパク質製剤は、約４℃〜約４５℃で少なくとも約６ヶ月間にわたって安定している。一実施形態では、固体タンパク質製剤は、約４℃〜約４５℃で少なくとも約１２ヶ月間にわたって安定している。一実施形態では、固体タンパク質製剤は、約４℃〜約４５℃で少なくとも約１８ヶ月間にわたって安定している。一実施形態では、固体タンパク質製剤は、約４℃〜約４５℃で少なくとも約２４ヶ月間にわたって安定している。一実施形態では、固体タンパク質製剤は、約４℃〜約４５℃で少なくとも約３６ヶ月間にわたって安定している。一実施形態では、固体タンパク質製剤は、約４℃〜約４５℃で少なくとも約４８ヶ月間にわたって安定している。一実施形態では、固体タンパク質製剤は、約４℃〜約４５℃で少なくとも約６０ヶ月間にわたって安定している。
【００４７】
一実施形態では、固体タンパク質製剤は、約４℃、約２９℃、約３７℃、及び／または約４５℃で少なくとも約１ヶ月間にわたって安定している。さらなる一実施形態では、固体タンパク質製剤は、約４℃、約２９℃、約３７℃、及び／または約４５℃で少なくとも約２ヶ月間にわたって安定している。さらなる一実施形態では、固体タンパク質製剤は、約４℃、約２９℃、約３７℃、及び／または約４５℃で少なくとも約３ヶ月間にわたって安定している。さらなる一実施形態では、固体タンパク質製剤は、少なくとも約４℃、約２９℃、約３７℃、及び／または約４５℃で約４ヶ月間にわたって安定している。さらなる一実施形態では、固体タンパク質製剤は、約４℃、約２９℃、約３７℃、及び／または約４５℃で少なくとも約５ヶ月間にわたって安定している。さらなる一実施形態では、固体タンパク質製剤は、約４℃、約２９℃、約３７℃、及び／または約４５℃で少なくとも約６ヶ月間にわたって安定している。さらなる一実施形態では、固体タンパク質製剤は、約４℃、約２９℃、約３７℃、及び／または約４５℃で少なくとも約１２ヶ月間にわたって安定している。さらなる一実施形態では、固体タンパク質製剤は、約４℃、約２９℃、約３７℃、及び／または約４５℃で少なくとも約１８ヶ月間にわたって安定している。さらなる一実施形態では、固体タンパク質製剤は、約４℃、約２９℃、約３７℃、及び／または約４５℃で少なくとも約２４ヶ月間にわたって安定している。さらなる一実施形態では、固体タンパク質製剤は、約４℃、約２９℃、約３７℃、及び／または約４５℃で少なくとも約３６ヶ月間にわたって安定している。さらなる一実施形態では、固体タンパク質製剤は、約４℃、約２９℃、約３７℃、及び／または約４５℃で少なくとも約４８ヶ月間にわたって安定している。さらなる一実施形態では、固体タンパク質製剤は、約４℃、約２９℃、約３７℃、及び／または約４５℃で少なくとも約６０ヶ月間にわたって安定している。
【００４８】
またさらなる一実施形態では、固体タンパク質製剤は、液体で再構成される。一実施形態では、固体タンパク質製剤は、水で再構成される。別の実施形態では、固体タンパク質製剤は、ソルビトール及び塩化ナトリウムを含む再構成用溶液で再構成される。ある種の実施形態では、ソルビトールの濃度は、４％であり、塩化ナトリウムの濃度は、０．７％であり、ｐＨは、７である。さらなる実施形態では、固体タンパク質製剤は、ベンジルアルコールをさらに含む再構成用溶液で再構成される。具体的な一実施形態では、ベンジルアルコールの濃度は、１％である。さらなる実施形態では、固体タンパク質製剤を再構成するために使用される液体は、無菌である。
【００４９】
具体的な一実施形態では、本発明は、固体化される前に、ｐＨ７で、Ａｒａｎｅｓｐ（０．５〜５ｍｇ／ｍｌ）、１０ｍＭヒスチジン、２％マンニトール、０．５％スクロース、０．００５％ポリソルベート−８０からなるか、それらから本質的になるか、またはそれらを含む固体タンパク質製剤を提供する。
【００５０】
具体的な一実施形態では、本発明は、固体化される前に、ｐＨ７で、Ａｒａｎｅｓｐ（２ｍｇ／ｍｌ）、１０ｍＭヒスチジン、２％マンニトール、０．５％スクロース、０．００５％ポリソルベート−８０からなるか、それらから本質的になるか、またはそれらを含む固体タンパク質製剤を提供する。
【００５１】
具体的な一実施形態では、本発明は、固体化される前に、ｐＨ７で、Ａｒａｎｅｓｐ（０．５〜５ｍｇ／ｍｌ）、１０ｍＭヒスチジン、２％マンニトール、０．５％スクロース、０．００５％ポリソルベート−８０からなるか、それらから本質的になるか、またはそれらを含む固体タンパク質製剤を提供する。
【００５２】
具体的な一実施形態では、本発明は、固体化される前に、ｐＨ６で、Ａｒａｎｅｓｐ（０．５〜５ｍｇ／ｍｌ）、１０ｍＭリン酸ナトリウム、４．５％マンニトール、０．５％スクロース、０．００５％ポリソルベート−８０からなるか、それらから本質的になるか、またはそれらを含む固体タンパク質製剤を提供する。
【００５３】
具体的な一実施形態では、本発明は、固体化される前に、ｐＨ７で、Ａｒａｎｅｓｐ（０．５〜５ｍｇ／ｍｌ）、１０ｍＭリン酸ナトリウム、２％マンニトール、０．５％スクロース、０．００５％ポリソルベート−８０からなるか、それらから本質的になるか、またはそれらを含む固体タンパク質製剤を提供する。
【００５４】
具体的な一実施形態では、本発明は、固体化される前に、ｐＨ７で、Ａｒａｎｅｓｐ（０．５〜５ｍｇ／ｍｌ）、１０ｍＭコハク酸ナトリウム、２％マンニトール、０．５％スクロース、０．００５％ポリソルベート−８０からなるか、それらから本質的になるか、またはそれらを含む固体タンパク質製剤を提供する。
【００５５】
具体的な一実施形態では、本発明は、固体化される前に、ｐＨ６で、Ａｒａｎｅｓｐ（０．５〜５ｍｇ／ｍｌ）、１０ｍＭコハク酸ナトリウム、４．５％マンニトール、０．５％スクロース、０．００５％ポリソルベート−８０からなるか、それらから本質的になるか、またはそれらを含む固体タンパク質製剤を提供する。
【００５６】
具体的な一実施形態では、本発明は、固体化される前に、ｐＨ６．２で、Ａｒａｎｅｓｐ（０．５〜５ｍｇ／ｍｌ）、２０ｍＭリン酸ナトリウム、１４０ｍＭ  ＮａＣｌ、０．００５％ポリソルベート−８０からなるか、それらから本質的になるか、またはそれらを含む固体タンパク質製剤を提供する。
【００５７】
具体的な一実施形態では、本発明は、固体化される前に、ｐＨ７で、Ａｒａｎｅｓｐ（０．５〜５ｍｇ／ｍｌ）、１０ｍＭヒスチジン、２％マンニトール、０．５％スクロースからなるか、それらから本質的になるか、またはそれらを含む固体タンパク質製剤を提供する。
【００５８】
具体的な一実施形態では、本発明は、固体化される前に、ｐＨ７で、Ａｒａｎｅｓｐ（２ｍｇ／ｍｌ）、１０ｍＭヒスチジン、２％マンニトール、０．５％スクロースからなるか、それらから本質的になるか、またはそれらを含む固体タンパク質製剤を提供する。
【００５９】
具体的な一実施形態では、本発明は、固体化される前に、ｐＨ７で、Ａｒａｎｅｓｐ（０．５〜５ｍｇ／ｍｌ）、１０ｍＭヒスチジン、２％マンニトール、０．５％スクロースからなるか、それらから本質的になるか、またはそれらを含む固体タンパク質製剤を提供する。
【００６０】
具体的な一実施形態では、本発明は、固体化される前に、ｐＨ６で、Ａｒａｎｅｓｐ（０．５〜５ｍｇ／ｍｌ）、１０ｍＭリン酸ナトリウム、４．５％マンニトール、０．５％スクロースからなるか、それらから本質的になるか、またはそれらを含む固体タンパク質製剤を提供する。
【００６１】
具体的な一実施形態では、本発明は、固体化される前に、ｐＨ７で、Ａｒａｎｅｓｐ（０．５〜５ｍｇ／ｍｌ）、１０ｍＭリン酸ナトリウム、２％マンニトール、０．５％スクロースからなるか、それらから本質的になるか、またはそれらを含む固体タンパク質製剤を提供する。
【００６２】
具体的な一実施形態では、本発明は、固体化される前に、ｐＨ７で、Ａｒａｎｅｓｐ（０．５〜５ｍｇ／ｍｌ）、１０ｍＭコハク酸ナトリウム、２％マンニトール、０．５％スクロースからなるか、それらから本質的になるか、またはそれらを含む固体タンパク質製剤を提供する。
【００６３】
具体的な一実施形態では、本発明は、固体化される前に、ｐＨ６で、Ａｒａｎｅｓｐ（０．５〜５ｍｇ／ｍｌ）、１０ｍＭコハク酸ナトリウム、４．５％マンニトール、０．５％スクロースからなるか、それらから本質的になるか、またはそれらを含む固体タンパク質製剤を提供する。
【００６４】
具体的な一実施形態では、本発明は、固体化される前に、ｐＨ６．２で、Ａｒａｎｅｓｐ（０．５〜５ｍｇ／ｍｌ）、２０ｍＭリン酸ナトリウム、１４０ｍＭ  ＮａＣｌからなるか、それらから本質的になるか、またはそれらを含む固体タンパク質製剤を提供する。
【００６５】
別の実施形態では、本発明は、安定な固体タンパク質製剤を調製する方法であって、ａ）上記タンパク質を凍結乾燥緩衝液で希釈すること；及びｂ）固体化する前に、上記希釈タンパク質を凍結乾燥させることを含む方法を提供する。
【００６６】
ある種の実施形態では、本発明の製剤は、糖タンパク質を含む。一実施形態では、タンパク質は、エリスロポイエチンである。別の実施形態では、タンパク質は、エリスロポイエチンの類似体である。さらなる一実施形態では、タンパク質は、ダルベポエチンアルファである。またさらなる一実施形態では、タンパク質は、抗体である。また別の実施形態では、タンパク質は、モノクローナル抗体またはポリクローナル抗体である。
【００６７】
エリスロポイエチンは、赤血球への赤血球前駆細胞の成熟に関係する糖タンパク質ホルモンである。これは、循環における赤血球のレベルの調節において必須である。天然に存在するエリスロポイエチンは、胎生期の間に肝臓によって、かつ成人の腎臓によって産生され、血液中を循環し、骨髄において赤血球の産生を刺激する。貧血は、ほとんど常に、腎臓からのエリスロポイエチンの産生の低下による腎不全の結果である。エリスロポイエチンをコードする遺伝子で形質転換された宿主細胞からのタンパク質産生物の発現を伴う遺伝子操作技術によって産生された組換えエリスロポイエチンは、慢性腎不全から生じた貧血の処置において使用すると、有効であることが見出されている。
【００６８】
エリスロポイエチンをコードする遺伝子の特定、クローニング、及び発現は、米国特許第４，７０３，００８号において記載されている。組換えエリスロポイエチンプラスミドを含有する哺乳動物細胞の成長を支持した細胞培地からの組換えエリスロポイエチンの精製の記載は、例えば、米国特許第４，６６７，０１６号に含まれる。組換えプラスミド上にエリスロポイエチン遺伝子を含有する哺乳動物細胞宿主からの、生物学的に活性な組換えエリスロポイエチンの発現及び回収は、治療適用に適した利用可能な量のエリスロポイエチンをもたらしている。エリスロポイエチンのいくつかの種でのポリヌクレオチド及びポリペプチド配列が公知である。
【００６９】
現在、数種の組換えヒトエリスロポイエチン医薬品が市販されている（例えば、Ｅｐｏｇｅｎ（登録商標）；エポエチンアルファ）。エポエチンアルファに加えて、他のエポエチンが開発されている（例えば、エポエチンベータ、デルタ、オメガ、ゼータ）。本発明の内容では、「エリスロポイエチン」または「組換えヒトエリスロポイエチン」という用語を使用する場合、エリスロポイエチンのすべての形態が包含されることが意図されている。
【００７０】
ヒトエリスロポイエチンの類似体を含む特定の製剤も、本発明に包含される。ある種の実施形態では、「ヒトエリスロポイエチンの類似体」という語句は、ヒトエリスロポイエチンのアミノ酸配列において１つまたは複数の変化を伴い、シアル酸結合のための部位の数が増大しているエリスロポイエチンを指す。非限定的な一例は、ヒトエリスロポイエチンのハイパーグリコシル化類似体であるダルベポエチンアルファ（Ａｒａｎｅｓｐ（登録商標））である。これらの類似体においてグリコシル化のために付加された部位は、ヒトエリスロポイエチンよりも多数の炭水化物鎖、及び高いシアル酸含有率をもたらし得る。少なくとも１つの、グリコシル化のための部位の再編成を含むアミノ酸配列を含むエリスロポイエチン類似体も提供されている。エリスロポイエチンのカルボキシ末端への１個または複数個のアミノ酸の付加を含み、その付加が少なくとも１つのグリコシル化部位を提供している類似体も包含される。類似体は、グリコシル化に利用可能である部位を増大または変更するアミノ酸残基の付加、欠失、または置換を有する特定部位の変異誘発によって生成することができる。そのような類似体は、ヒトエリスロポイエチンよりも多数の炭水化物鎖を有してよい。加えて、例えば、米国特許第７，２１７，６８９を参照されたい。
【００７１】
別の態様では、本発明は、ヒトエリスロポイエチンに特異的に結合する抗体、抗体断片、抗体誘導体、抗体変異タンパク質、及び抗体変異体を含む製剤を提供する。
【００７２】
抗体は、当技術分野で公知の任意の定常領域を含み得る。軽鎖定常領域は、例えば、カッパ型またはラムダ型軽鎖定常領域、例えば、ヒトカッパ型またはラムダ型軽鎖定常領域であり得る。重鎖定常領域は、例えば、アルファ型、デルタ型、イプシロン型、ガンマ型、またはミュー型重鎖定常領域、例えば、ヒトアルファ型、デルタ型、イプシロン型、ガンマ型、またはニュー型重鎖定常領域であり得る。一実施形態では、軽鎖または重鎖定常領域は、天然に存在する定常領域の断片、誘導体、変異体、または変異タンパク質である。
【００７３】
一実施形態では、抗体はさらに、定常軽鎖カッパもしくはラムダドメイン、またはこれらの断片を含む。軽鎖定常領域及びそれらをコードするポリヌクレオチドの配列は、当技術分野で周知である。別の実施形態では、さらに重鎖定常ドメイン、またはその断片、例えば、ＩｇＧ１またはＩｇＧ２重鎖定常領域を含み、そのような配列は、当技術分野で周知である。
【００７４】
抗体には、所望のアイソタイプ（例えば、ＩｇＡ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＥ、及びＩｇＤ）を有するもの、さらには、そのＦａｂまたはＦ（ａｂ’）２断片が含まれる。さらに、ＩｇＧ４が望ましいならば、Ｂｌｏｏｍら、１９９７、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ６：４０７（参照によって本明細書に組み込まれる）において記載されているとおり、点突然変異をヒンジ領域に導入して、ＩｇＧ４抗体における異質性をもたらし得るＨ鎖内ジスルフィド結合を形成する傾向を緩和することが望ましいこともある。
【００７５】
「抗体」という用語は、定義のセクションにおいて広範に記載したとおり、インタクトな抗体、またはその抗原結合断片を指す。抗体は、完全抗体分子（ポリクローナル、モノクローナル、キメラ、ヒト化、または全長重鎖及び／もしくは軽鎖を有するヒトバージョンを含む）を含んでよいか、またはその抗原結合断片を含む。抗体断片には、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆｖ、Ｆｃ、及びＦｄ断片が含まれ、それらを、単一ドメイン抗体、一本鎖抗体、マキシボディ、ミニボディ、細胞内抗体、二重特異性抗体、三重特異性抗体、四重特異性抗体、ｖ−ＮＡＲ、及びビス−ｓｃＦｖに組み込むことができる（例えば、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ  ａｎｄ  Ｈｕｄｓｏｎ、２００５、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、２３、９、１１２６〜１１３６を参照されたい）。フィブロネクチンポリペプチドモノボディを含む、米国特許第６，７０３，１９９号において開示されているものなどの抗体ポリペプチドも含まれる。他の抗体ポリペプチドは、米国特許出願公開第２００５／０２３８６４６号において開示されており、それらは単鎖ポリペプチドである。
【００７６】
本発明は、安定なタンパク質製剤を提供する。安定な（安定している）という用語は、特定の非限定的な実施形態では、タンパク質の構造及び活性に関する。ある種の実施形態では、安定な（安定している）は、タンパク質が適正なアミノ酸配列及び配座構造を維持していることを意味する。これをアッセイするための方法の非限定的な例には、抗体結合アッセイまたはゲル電気泳動が含まれる。
【００７７】
ある種の実施形態では、安定性の一態様は、貯蔵期間にわたって測定される酸化パーセントである。タンパク質は酸化するにつれて、他の特性の中でも、活性を喪失し得る。一実施形態では、本発明の製剤中のタンパク質は、約５％〜約１０％の酸化パーセントを有する。別の実施形態では、本発明の製剤中のタンパク質は、約１０％未満の酸化パーセントを有する。別の実施形態では、本発明の製剤中のタンパク質は、約５％未満の酸化パーセントを有する。一実施形態では、本発明の製剤中のタンパク質は、５％〜１０％の酸化パーセントを有する。別の実施形態では、本発明の製剤中のタンパク質は、１０％未満の酸化パーセントを有する。別の実施形態では、本発明の製剤中のタンパク質は、５％未満の酸化パーセントを有する。
【００７８】
またさらなる実施形態では、安定な（安定している）は、製剤中に存在するタンパク質が生物学的作用を有し、かつ維持していることを意味する。非限定的な例には、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの細胞系に対するタンパク質の作用を測定するバイオアッセイ、またはｉｎ  ｖｉｖｏでの動物に対するタンパク質の作用を測定するバイオアッセイが含まれる。
【００７９】
本発明のタンパク質製剤は、患者に、適応及び組成物に適切な様々な経路を通じて投与することができる。本発明のタンパク質製剤は、これらだけに限定されないが、非経口投与を含む任意の適切な技術によって投与してよい。注射するならば、製剤を、例えば、関節内、静脈内、筋肉内、病変内、腹腔内、または皮下経路を介して、大量注射、または連続注入によって投与することができる。
【００８０】
投薬量及び投与頻度は、投与経路、使用される特定のタンパク質、治療を受ける疾患の性質及び重症度、その状態が急性か、または慢性か、ならびに対象の体格及び全身状態などの因子に従って、様々であってよい。関連技術において公知の手順によって、例えば、用量漸増研究を含んでよい治験において、適切な投薬量を決定することができる、
【００８１】
本発明の製剤中の１種または複数種のタンパク質、及び本明細書において論述した状態のいずれかの処置において使用するためのラベルまたは他の取扱説明書を含む、医師及び／または対象が使用するためのキットを提供する。一実施形態では、キットは、本発明の凍結乾燥製剤中の１種または複数種のタンパク質の無菌製剤、及び別になっている無菌再構成用溶液を含み、これらは、１つまたは複数のバイアル中にあってよい。
【００８２】
本発明を記載してきたが、次の実施例は、実例として提示するものであって、限定ではない。
【実施例】
【００８３】
実施例１
１．  目的
この研究の目的は、取扱い及び貯蔵において利点を有する室温安定なＡｒａｎｅｓｐ（登録商標）製剤を開発する実行可能性を調査することであった。現行の市販製剤は、２〜８℃で貯蔵される液体製剤である。凍結乾燥製剤は、再構成する必要があり、２ステップ手順を伴う注射剤であるので、市場において好ましい製剤ではない。再構成及び注射プロセスの両方をシームレスな単一ステップに組み合わせることによって、液体プレフィルドシリンジとして凍結乾燥製剤を送達する簡便な方法を提供するデバイスであるＬｙｏＴｉｐ（登録商標）以来、凍結乾燥製剤を、３ｃｃガラスバイアル中の室温安定な製剤で、長期貯蔵性研究について調査してきた。
【００８４】
２．  実験の概要
Ａｒａｎｅｓｐ（登録商標）バルクを透析することによって、Ａｒａｎｅｓｐ（登録商標）（２ｍｇ／ｍＬ）を凍結乾燥製剤の５種中に配合し、貯蔵性を２０ｍＭリン酸ナトリウム、１４０ｍＭ塩化ナトリウム、ｐＨ６．２中の液体製剤と比較した。透析試料（０．２５ｍＬ）を、ガラス製３ｃｃバイアルに充填し、凍結乾燥させた。凍結乾燥試料を貯蔵性のために、４℃、２９℃、３７℃、及び４５℃で２４ヶ月にわたって貯蔵した。各時点で、試料を３種の再構成用溶液１ｍＬ（Ｐ４５ＭＳｕ６及びＳ４５ＭＳｕ６では水を使用し、Ｐ２ＭＳｕ７、Ｓ２ＭＳｕ７、及びＨ２ＭＳｕ７では４％ソルビトール及び０．７％塩化ナトリウムを使用した）で再構成して、５００μｇ／ｍＬの最終濃度にした。再構成試料を、ＳＥＣ−ＨＰＬＣ（サイズ排除ＨＰＬＣ）、抗体９Ｇ８Ａ（相対タンパク質アンフォールディングをモニター）、ｐＨ、酸化％、ＲＰ−ＨＰＬＣ（不純物及び短縮物）、肉眼では見えない粒子、濃度、及び重量オスモル濃度について分析した。
【００８５】
３．  物質及び装置
次の物質を使用した。Ａｒａｎｅｓｐバルク物質（２ｍｇ／ｍＬ）、ポリソルベート８０、ガラス製３ｃｃバイアル、凍結乾燥用のＤａｉｋｙｏロングストッパー。次の６種の配合緩衝液を調製した。
Ｐ２ＭＳｕ７：１０ｍＭリン酸ナトリウム、２％マンニトール、０．５％スクロース、ｐＨ７（Ｌｏｔ＃２９０７０９０４−１１）
Ｓ２ＭＳｕ７：１０ｍＭコハク酸ナトリウム、２％マンニトール、０．５％スクロース、ｐＨ７（Ｌｏｔ＃２９０７０９０４−２１）
Ｈ２ＭＳｕ７：１０ｍＭヒスチジン、２％マンニトール、０．５％スクロース、ｐＨ７（Ｌｏｔ＃２９０７０９０４−１９）
Ｐ４５ＭＳｕ６：１０ｍＭリン酸ナトリウム、４．５％マンニトール、０．５％スクロース、ｐＨ６（Ｌｏｔ＃２９０７０６２７−１８）
Ｓ４５ＭＳｕ６：１０ｍＭコハク酸ナトリウム、４．５％マンニトール、０．５％スクロース、ｐＨ６（Ｌｏｔ＃２９０７０６２７−１９）
Ｐ６２Ｎ：２０ｍＭリン酸ナトリウム、１４０ｍＭ  ＮａＣｌ、ｐＨ６．２
使用する追加の装置には、Ｓｌｉｄｅ−Ａ  Ｌｙｓｅｒ透析カセット（Ｐｉｅｒｃｅ）、Ｃｏｒｎｉｎｇフィルター（０．２２μｍ）、２日間にわたって試料を透析するための冷蔵室が含まれ、Ｖｉｒｔｉｓ凍結乾燥機を凍結乾燥のために使用した。
【００８６】
４．  試料の調製手順
４．１．  試料の調製
Ｓｌｉｄｅ−Ａ  Ｌｙｓｅｒ透析カセットを使用して、冷蔵室（２〜８℃）内で、２日間にわたって、Ａｒａｎｅｓｐ（登録商標）（２ｍｇ／ｍＬ）を５種の配合緩衝液中に透析した。緩衝液を室温でｐＨ及び重量オスモル濃度についてチェックし、その後、試料を透析した。透析の後に、試料の濃度をＡ２８０によってチェックした。試料を、０．００５％ポリソルベート−８０を用いて、及びポリソルベート−８０を用いずに調製した。１０％（ｗ／ｖ）ポリソルベート−８０ストック溶液を試料に添加して、０．００５％にすることによって、ポリソルベート−８０を含む試料を調製した。１０％ポリソルベート−８０溶液を、２．５ｇのポリソルベート−８０を秤量し、各緩衝液２５ｍＬで溶かして作製した。無菌フード内でＣｏｒｎｉｎｇフィルター（０．２２μｍ）を使用して、試料を濾過した。濾過試料及びプラセボ（０．２５ｍＬ）を３ｃｃガラスバイアルに充填し、Ｖｉｒｔｉｓ凍結乾燥機を使用して、凍結乾燥サイクルに掛けた（表１）。ポリソルベート−８０をバルクに添加して０．００５％にすることによって、２０ｍＭリン酸ナトリウム、１４０ｍＭ塩化ナトリウム、０．００５％ポリソルベート−８０、ｐＨ６．２中の液体試料を調製した。液体対照試料、凍結乾燥試料、及びプラセボを貯蔵性のために４℃、２９℃、３７℃、及び４５℃で２４ヶ月にわたって貯蔵した。各時点で、試料を３種の再構成用溶液１ｍＬ（水をＰ４５ＭＳｕ６及びＳ４５ＭＳｕ６では使用し、４％ソルビトール及び０．７％塩化ナトリウムをＰ２ＭＳｕ７、Ｓ２ＭＳｕ７、及びＨ２ＭＳｕ７では使用した）で再構成して、５００μｇ／ｍＬの最終濃度にした。０．００５％ポリソルベート−８０を含む試料（０．２５ｍＬ）を、個々の再構成用緩衝液１ｍＬで再構成した場合、試料は、再構成用緩衝液１ｍＬで希釈したので、ポリソルベート−８０  ０．００１２５％を含有した。再構成された試料を、ＳＥＣ−ＨＰＬＣ（サイズ排除ＨＰＬＣ）、９Ｇ８Ａ（相対タンパク質アンフォールディングをモニター）、ｐＨ、酸化％、及び非還元ＲＰ−ＨＰＬＣ（不純物及び短縮物）について分析した。
試料リスト、時点、及び温度を付記１に示す。
【００８７】
４．２．  凍結乾燥手順：
試料バイアルを、凍結乾燥機の事前冷却しておいた（４℃）シェルフに装填した。試料を、凍結、一次乾燥、及び二次乾燥からなる３ステップに掛けた。初めに、試料を６０分間にわたって４℃で保持し、次いで、１８０分かけて４℃から−５０℃に冷却した。−４５℃で６０分間にわたって保持した後に、シェルフ温度を７０分かけて−１２℃に上昇させた。次いで、−１２℃で３６０分間にわたって保持した後に、温度を再び７０分かけて−５０℃に低下させた。試料を６０分間にわたって−５０℃にした。一次乾燥のために、シェルフ温度を−１０℃に４０分間にわたって上昇させ、チャンバー真空を５０ｍＴｏｒｒに維持して１５００分間にわたって保持した。二次乾燥のために、シェルフ温度を３５０分かけて２５℃に上昇させ、７２０分間にわたって保持した。次いで、温度を１４０分間にわたって５℃に低下させた。すべてのサイクルが終了した後に、乾燥チャンバー内部で、バイアルにストッパーを設置した。
【表１−１】
2019203018.tif 000003
【表１−２】
2019203018.tif 000004
【００８８】
５．  分析方法
５．１．  ９Ｇ８Ａ法
５．１．１．  ９Ｇ８Ａ法１
Ｂｉｏｖｅｒｉｓ機器を使用して、１２ヶ月まで、アッセイを分析した。系列希釈法を使用して、試料を、希釈液（ＰＢＳ中の１％ＢＳＡ及び０．１％ＰＳ−８０）で０．４μｇ／ｍＬに希釈した。希釈液を用いて、標準曲線希釈も調製した。各試料１０μＬを、９６ウェルプレートに４連で装填した。次いで、プレートを室温、暗所で１時間にわたってインキュベートした。ＴＡＧ標識９Ｇ８Ａ抗体５０μＬ（希釈液３ｍＬ当たり９Ｇ８Ａ５μＬ）を各ウェルに添加し、プレートをさらに１時間インキュベートした。ビオチン−ヤギポリクローナル抗体５０μＬ（希釈液３ｍＬ当たりビオチン−ヤギ５μＬ）をウェルに添加し、さらに１時間インキュベートした。ストレプトアビジンビーズ２５μＬをウェルに添加し、３０分間にわたってインキュベートした。最後に、１倍ＰＢＳ１１５μＬをウェルに添加した。Ｂｉｏｖｅｒｉｓ  Ｍ−８分析器を使用して、プレートを分析した。ＥＣＬ（酵素−化学−発光（Ｅｎｚｙｍａｔｉｃ−ｃｈｅｍｏ−ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ））値が報告され、ＥＣＬ値が、相対変性パーセントに変換された。
【００８９】
５．１．２．  ９Ｇ８Ａ法２
ＢｉｏＶｅｒｉｓ社が計器をサポートすることができなかったので、本発明者らが、手動による方法を開発しなければならなかった。１８ヶ月目からは、新たな９Ｇ８Ａ法を使用して、試料を分析した。希釈した９Ｇ８Ａ抗体溶液（１００μＬ）を、分析セットに必要なウェルのそれぞれに添加した。プレートを１時間にわたって室温でインキュベートした。次いで、プレートを希釈液（ＰＢＳ中の１％ＢＳＡ及び０．１％ＰＳ−８０）で３回洗浄し、洗浄の間に、乾燥ブロットした。希釈した標準、対照、または試料１００μＬをウェルのそれぞれに移した。１時間のインキュベーションの後に、液体をプレートからデカンテーションし、３回洗浄した。二次抗体溶液を添加し、さらに１時間インキュベートした。液体をプレートからデカンテーションし、再び洗浄した。ＨＲＰ１００μＬをウェルのそれぞれに添加し、さらに３０分間にわたってインキュベートした。液体をプレートからデカンテーションし、希釈液で３回洗浄した。調製した基質試薬１００μＬを各ウェルに添加し、プレートを、分析のためのプレートリーダーに入れた。
【００９０】
５．２．  サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥ−ＨＰＬＣ）
サイズ排除クロマトグラフィーを、安定性指示アッセイとして使用した。Ｃｈｒｏｍｅｌｅｏｎソフトウェアを備えたＡｇｉｌｅｎｔ  １１００  ＨＰＬＣシステムで、分離を行った。この方法は、ガードカラム（ＴＳＫｇｅｌ  Ｇｕａｒｄ  Ｃｏｌｕｍｎ  ＳＷＸＬ  ６．０ｍｍ×４．０ｃｍ）に沿って連続して取り付けられている２つのカラム（ＴｏｓｏＨａａｓ  ＴＳＫ  ｇｅｌ  Ｇ３０００ＳＷｘｌ，７．８ｍｍ×３００ｍｍ）を使用した。タンパク質１０μｇをカラムに装填し、０．５ｍＬ／分の流速で、２０ｍＭリン酸ナトリウム、１４０ｍＭ塩化ナトリウム、ｐＨ６．２からなる移動相を用いて定組成で溶離した。２１５ｎｍ及び２８０ｎｍでのＵＶ検出を使用して、タンパク質をモニターした。クロマトグラムにおける総面積カウントに対するピーク面積パーセントを、高分子量種（ＨＭＷ）及び低分子量種（ＬＭＷ）の量を定量するために使用した。
【００９１】
５．３．  酸化パーセント
変性ペプチドマップ分析を介して、メチオニン５４酸化検出を行った。試料からの糖の除去は、遠心分離（２５℃で２０分間にわたって１２０００ｒｐｍ）を介しての濾過（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｍｉｃｒｏｃｏｎ  Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌ  Ｆｉｌｔｅｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  Ｕｌｔｒａｃｅｌ  ＹＭ−１０）を必要とした。トリプシン消化のために、試料体積を水で元の濃度に戻した。試料を希釈緩衝液（２０ｍＭリン酸ナトリウム、１４０ｍＭ塩化ナトリウム、０．００５％ポリソルベート８０、ｐＨ６．２）で２０μｇ／ｍＬに希釈した。消化緩衝液（５００ｍＭトリス−ＨＣｌ中の１０ｍＭメチオニン、ｐＨ８）を、消化緩衝液と全体積との比１：１０で添加した。次いで、トリプシン（１ｍｇ／ｍＬ）を、トリプシンと最終タンパク質濃度との比１：５（μｇで）で添加した。試料を２９℃で１５時間にわたってインキュベートし、次いで、２５％ＴＦＡ１０μＬでクエンチした。
【００９２】
酸化検出は、逆相クロマトグラフィー分析を使用し、その際、Ｃ８カラム（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｄｅｖｅｌｏｓｉｌ  ５ｕ  ３００Ｃ８−ＨＧ  ３００Ａ  １５０×２．０ｍｍ）に装填した試料２μｇ（１００μＬ）を、２ｍＬ／分の流速でステップ勾配を使用して分離した。（４０％アセトニトリル及び０．１％ＴＦＡからなる移動相Ａを５分間にわたって流した。次に、４６％アセトニトリル及び０．１％ＴＦＡからなる移動相Ｂを０．１５分で０％〜１００％に傾斜させ、１５分間にわたって流した。最後に、移動相Ａを１０分間にわたって流した）。カラム温度を５５℃に設定した。クロマトグラフィー分析を、イオン定量のためのＴｈｅｒｍｏ  ＬＣＱ  Ｄｅｃａ質量分析計に連結されたＢｅｃｋｍａｎ  ＨＰＬＣ  Ｇｏｌｄシステムで行った。ピーク検出は、２１４ｎｍ（ＵＶ）においてであり、質量分光分析（シングルイオンモード）は、選択されたｍ／ｚ：１２６４（非酸化）、１２７２（酸化）、１３４２（部分非酸化）、及び１３５０（部分酸化）でのズームスキャンを使用した。データを酸化％として報告した。
【００９３】
５．４．  非還元逆相
この技術を用いると、分解生成物が容易に検出されるので、非還元逆相高速液体クロマトグラフィー（ＮＲＲＰ−ＨＰＬＣ）を使用して、タンパク質含有率及び純度を決定した。非還元逆相（ＮＲＲＰ）ＨＰＬＣを使用して、全長エリスロポイエチンモノマーからの短縮種を分離した。Ｓｈｉｍａｄｚｕ高速液体クロマトグラフィーで、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｊｕｐｉｔｅｒ  ５μｍ、３００Ａ、Ｃ４結合相シリカカラム（１５０×４．６ｍｍ）を使用して、測定を行った。移動相Ａは、水中の０．０６５１％トリフルオロ酢酸（ｖ／ｖ）であり、移動相Ｂは、９０％アセトニトリル中の０．０６５１％トリフルオロ酢酸であった。試料を、２１５ｎｍでの検出で、１．０ｍＬ／分の流速で１３５分で２０％Ｂから１００％Ｂへの勾配システムによって分析した。クロマトグラムの重ね合わせを使用して、分解種または短縮種の検出を比較した。
【００９４】
５．５．  ｐＨ
Ｍｅｔｔｌｅｒ  Ｔｏｌｅｄｏ  ＭＰ２００ｐＨメーターを使用して、ｐＨについて、試料をモニターした。機器を、ｐＨ４及びｐＨ７標準緩衝液を使用して較正した。
【００９５】
５．６．  重量オスモル濃度
重量オスモル濃度データを使用して、再構成用緩衝液のパーセンテージを決定した。重量オスモル濃度を、Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｉｎｃ製Ｍｉｃｒｏ  Ｏｓｍｏｍｅｔｅｒ、モデル３３０で測定した。２９０ｍＯｓｍ標準を、基準として使用した。
【００９６】
６．  結果及び考察
６．１．  ９Ｇ８Ａ
９Ｇ８Ａ抗体結合アッセイ（Ｅｌｌｉｏｔｔ、Ｃｈａｎｇら、１９９６、Ｅｌｌｉｏｔｔ、Ｌｏｒｅｎｚｉｎｉら、１９９６）を使用して、生成物試料の配座異性相似性を評価した。９Ｇ８Ａモノクローナル抗体は、天然及び変性Ａｒａｎｅｓｐの両方において、アミノ酸１３〜１７からなる線状エピトープであるＥＲＹＬＬを認識する。これらのアミノ酸は、Ａｒａｎｅｓｐの配座異性変化、またはその変性の後にさらに露出して、９Ｇ８Ａ結合の増大をもたらす。データを、ダルベポエチンアルファ標準の反応性に対する、試料の反応性の比としてプロットした。１の値は、試料及び標準の間で反応性の差がないことを示している。
【００９７】
ポリソルベート−８０をまない場合（Ａ）または含む場合（Ｂ）の凍結乾燥製剤は、３７℃での２４ヶ月の貯蔵までは、液体製剤よりも安定していることを示した。液体製剤Ｐ６２Ｎは、より高温では、より高い相対変性を示した（図１）。
【００９８】
６．２．  サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）による凝集検出
Ｐ４５ＭＳｕ６中の試料を除いて、Ａｒａｎｅｓｐ凍結乾燥製剤の大部分は、より高温（３７℃及び４５℃）で、２４ヶ月の貯蔵まで液体製剤よりも高い安定性を実証した（図３）。加えて、変性は、温度と共に増大する。
【００９９】
この研究において使用したＳＥ−ＨＰＬＣ法は、ポリソルベートピークをＨＭＷ種から分離しない。したがって、ポリソルベート−８０不含試料と比較して、ポリソルベート含有試料では、ＨＭＷ種％のわずかな増加が観察されている（図３及び６）。４℃及び２９℃で、凍結乾燥製剤の間で有意な差はなかったが、しかしながら、Ｐ４５ＭＳｕ６Ｔは、３７℃及び４５℃で、他の凍結乾燥製剤と比較して、高い変性を有することが観察された（図５及び６）。Ｈ２ＭＳｕ７が、他の製剤よりも安定していたことが観察されている（図４）。Ｈ２ＭＳｕ７製剤中の試料は、４５℃で２４ヶ月貯蔵した後の重ね合わせにおいて、最小の二量体ピーク（矢印）を示した。加えて、ソルビトールまたは塩化ナトリウムで再構成された試料の間で、有意な差はなかった。
【０１００】
６．３．  ｐＨ測定
２４ヶ月の貯蔵では、すべての温度（４℃、２９℃、３７℃、及び４５℃）において、製剤の大部分で１０％未満の変化があった。
【０１０１】
６．４．  酸化パーセント
メチオニンは、Ａｒａｎｅｓｐの５４位にあり、酸化しやすい。ＬＣ／ＭＳ分析によって定量したのは、トリプシン消化試料のこの酸化である。示されているデータは、酸化％である。
【０１０２】
４℃での２４ヶ月の貯蔵の後に、すべての凍結乾燥製剤は、液体製剤以下の酸化を示した（図８）。さらに、３種の再構成用緩衝液の間で、差は観察されなかった。ポリソルベート−８０の添加は、凍結乾燥製剤の安定性に対して有意な作用を示さなかった。
【０１０３】
高温（２９℃、３７℃、及び４５℃）での最高２４ヶ月にわたる貯蔵で、すべての凍結乾燥製剤が、３種の再構成タイプすべてについて、液体製剤よりも有意に低い酸化レベルを示すこととなったが、酸化は、温度が上昇するにつれて上昇した（図９〜１１）。しかしながら、ポリソルベート凍結乾燥製剤を含まないヒスチジンは、他の凍結乾燥製剤すべてと比較すると、１２ヶ月まで、有意に高い酸化を有した。塩化ナトリウム及びソルビトール再構成用緩衝液の間で、差は観察されなかった。２種の追加の凍結乾燥製剤、ポリソルベート及びリン酸塩を含むヒスチジンも、４５℃で最高２４ヶ月にわたって貯蔵した場合、高い酸化を示した（しかし、リン酸塩製剤は、水再構成での結果を示した）。最後に、ポリソルベート含有液体製剤は、ポリソルベート不含液体製剤よりも高い酸化を示したが、それらの凍結乾燥製剤において、有意な差は観察されなかった。
【０１０４】
６．５．  非還元逆相ＨＰＬＣによる分解及び短縮種の検出
非還元逆相ＨＰＬＣを使用して、分解及び短縮種を検出する。２４ヶ月にわたって４５℃で貯蔵した後のＡｒａｎｅｓｐ（登録商標）の非還元逆相クロマトグラフィーからのクロマトグラムの重ね合わせが図１２において示されている。図１３は、２４ヶ月にわたって３７℃で貯蔵した後のクロマトグラムの重ね合わせを示している。３種の凍結乾燥試料は、２４ヶ月にわたって４℃、２９℃、３７℃、及び４５℃で貯蔵した後に、２種の異なる再構成用希釈液で、いずれの分解または短縮種も示さなかった。しかしながら、液体製剤試料は、両方の温度で多くが分解した。液体製剤中の試料のメインピークは、４５℃でほぼ減少した。
【０１０５】
７．  結論
Ａｒａｎｅｓｐの凍結乾燥製剤を、室温から４５℃まで、及び２４ヶ月で安定性について評価した。得られたデータは、凝集、短縮、アンフォールディング種、及び酸化などの評価された計数値において有意な変化がないことを示唆している。比較的少量のマンニトール２％を含有する製剤は、４．５％マンニトール製剤と比較して、良好な安定性プロファイルを示した。この実行可能性から得られたデータは、Ａｒａｎｅｓｐ凍結乾燥製剤が、室温から少なくとも４５℃までにおいて、かつ少なくとも２４ヶ月目に安定していることを示唆している。
【０１０６】
付記１．
標題：ＬｙｏＴｉｐを用いて室温安定な凍結乾燥Ａｒａｎｅｓｐ製剤を開発する実行可能性
目的：ＬｙｏＴｉｐ用のＮＥＳＰ凍結乾燥製剤を開発及び最適化するために、各製剤０．２５ｍＬ（２ｍｇ／ｍＬ）を凍結乾燥させ、４種の温度での安定性研究のために整えた。この試料を、再構成用溶液１ｍＬで希釈し、５００μｇ／ｍＬにする。
温度及び貯蔵条件：４℃、２９℃、３７℃、４５℃
間隔：０、１、３、６、１２、１８、２４ヶ月
緩衝剤：コハク酸ナトリウム、リン酸ナトリウム、ヒスチジン
配合濃度：出発濃度：約２ｍｇ／ｍＬ、再構成試料濃度：約５００μｇ／ｍＬ
ポリソルベート濃度：０．００５％
ＡＲＡＮＥＳＰ：濃度：２ｍｇ／ｍＬ
バイアル：３ｃｃバイアルタイプ、バイアルを洗浄し、滅菌した。
ストッパー：凍結乾燥ストッパー
試料調製：
【０１０７】
１．  様々な緩衝液：
１．  Ｐ２ＭＳｕ７：１０ｍＭリン酸ナトリウム、２％マンニトール、０．５％スクロース、ｐＨ７〜１１）
２．  Ｓ２ＭＳｕ７：１０ｍＭコハク酸ナトリウム、２％マンニトール、０．５％スクロース、ｐＨ７
３．  Ｈ２ＭＳｕ７：１０ｍＭヒスチジン、２％マンニトール、０．５％スクロース、ｐＨ７
４．  Ｐ４５ＭＳｕ６：１０ｍＭリン酸ナトリウム、４．５％マンニトール、０．５％スクロース、ｐＨ６
５．  Ｓ４５ＭＳｕ６：１０ｍＭコハク酸ナトリウム、４．５％マンニトール、０．５％スクロース、ｐＨ６
【０１０８】
２．  凍結乾燥製剤：
透析するためにＳｌｉｄｅ−Ａ  Ｌｙｓｅｒを使用して、Ａｒａｎｅｓｐバルク（１製剤当たり１００ｍＬ）を冷蔵室内で、２日間にわたって配合緩衝液中に透析した。透析の後に、濃度をＵＶ−Ｖｉｓによって測定した。
【０１０９】
３．  試料調製：
各試料に、水中の１０％ポリソルベート溶液を添加して、０．００５％ポリソルベート製剤にする。各試料を、無菌フード内で、０．２２μｍシリンジフィルターを使用して濾過した。
ａ．  ポリソルベートを含まない試料
試料０．２５ｍＬを３ｃｃバイアルに充填し、凍結乾燥ストッパーを凍結乾燥試料のために使用する。Ｐ６２Ｎ５００試料を、対照のための液体溶液として残すこととする。
【表１−３】
2019203018.tif 000005
ｂ．  ポリソルベートを含む試料
【表１−４】
2019203018.tif 000006
試料０．２５ｍＬを３ｃｃバイアルに充填し、凍結乾燥ストッパーを凍結乾燥試料のために使用する。Ｐ６２Ｎ５００試料を、対照のための液体溶液として残すこととする。
ｃ．  ポリソルベートを含まないプラセボ
【表１−５】
2019203018.tif 000007
ｄ．  ポリソルベートを含むプラセボ
【表１−６】
2019203018.tif 000008
４．  試料の明細
【表１−７】
2019203018.tif 000009
【表１−８】
2019203018.tif 000010
【表１−９】
2019203018.tif 000011
５．  分析のための試料の構成：各時点で、次の溶液１ｍＬで試料を再構成した
ａ．  Ｐ４５ＭＳｕ６及びＳ４５ＭＳｕ６では水
Ｐ２ＭＳｕ７、Ｓ２ＭＳｕ７、及びＨ２ＭＳｕ７では、次の溶液を使用
ｂ．  ３％ソルビトール：１ｍＬ
ｃ．  ０．４５％塩化ナトリウム：１ｍＬ
分析及び時点：
試料バイアル１つ当たり１ｍＬ
【表１−１０】
2019203018.tif 000012
【０１１０】
分析方法：
Ｃ４  Ｊｕｐｉｔｅｒカラム３００Ａ；２５０×４．６ｍｍ；Ｓ．／Ｎｏ．：２０２３９４、バッチ番号５２６７−４
移動相；Ａ−水中の０．０６５％ＴＦＡ、Ｂ−９５％アセトニトリル中の０．０６５％ＴＦＡ、
実行時間：１４５分、流速０．７５ｍｌ／分、
検出：２１５ｎｍ、２３０ｎｍ、２８０ｎｍ
勾配：２０％Ｂ（５分）；２０％〜７０％Ｂ（１００分）；洗浄及び平衡化（４０分）
試料装填：３μｇ
ＳＥＣ  ＨＰＬＣ：
カラム：２つのＴＳＫ  Ｇ３０００ｓｗｘｌカラム、定組成で流速０．５ｍＬ／分、実行時間８０分、緩衝液１００ｍＭリン酸ナトリウム、０．５Ｍ塩化ナトリウム（ｐＨ６．９）
検出：２１５ｎｍ、２３０ｎｍ、２８０ｎｍ、緩衝液注入：１００μＬ、
ＨＳＡ及びＴｗｅｅｎ試料：３μｇ。
総面積及び総面積に対するメインピーク％について２１５ｎｍで報告
【０１１１】
１時点当たりの試料リスト
【表１−１１】
2019203018.tif 000013
【表１−１２】
2019203018.tif 000014
【表１−１３】
2019203018.tif 000015
【表１−１４】
2019203018.tif 000016
【表１−１５】
2019203018.tif 000017
【０１１２】
実施例２
１．  目的
Ａｒａｎｅｓｐ凍結乾燥製剤を上記実施例１から選択したが、ＬｙｏＴｉｐ（登録商標）が、Ｃｒｙｓｔａｌ  Ｚｅｎｉｔｈプラスチック材料から作製されているので、ガラスバイアルに対しするＣＺプラスチック製バイアル（Ｄｉａｋｙｏ  Ｃｒｙｓｔａｌ  Ｚｅｎｉｔｈ）の適合性研究を必要とした。この研究では、Ａｒａｎｅｓｐ（登録商標）貯蔵性の作用及びＡｒａｎｅｓｐ（登録商標）無刺痛（ｓｔｉｎｇ  ｆｒｅｅ）製剤の可能性に向けて、ガラスバイアルに対するコンテナ（Ｄａｉｋｙｏ  Ｃｒｙｓｔａｌ  Ｚｅｎｉｔｈ）の適合性を行った。無刺痛製剤では、ｐＨ７．０で０．７％塩化ナトリウムを含む１％ベンジルアルコール溶液を、凍結乾燥試料を再構成するために使用した。
【０１１３】
２．  実験の概要
Ａｒａｎｅｓｐ配合緩衝液（２０ｍＭリン酸ナトリウム、１４０ｍＭ塩化ナトリウム、ｐＨ６．２）の透析によって、Ａｒａｎｅｓｐ（登録商標）（１．８４ｍｇ／ｍＬ）を、１０ｍＭヒスチジン、２％マンニトール、０．５％スクロース、０．００５％ポリソルベート８０、ｐＨ７中に配合した。透析試料（０．２５ｍＬ）を、２ｃｃ  Ｃｒｙｓｔａｌ
Ｚｅｎｉｔｈバイアル及び３ｃｃガラスバイアルに充填し、凍結乾燥させた。凍結乾燥試料を、貯蔵性のために４℃、２９℃、３７℃、及び４５℃で１２ヶ月にわたって貯蔵した。各時点で、試料を、３種の再構成用溶液１ｍＬ（０．７０％ＮａＣｌ、ｐＨ７；０．７０％ＮａＣｌ＋１％ベンジルアルコール、ｐＨ７．０；０．００４％ＰＳ−８０を含む０．７０％ＮａＣｌ、ｐＨ７）で再構成して、５００μｇ／ｍＬの最終濃度にした。再構成試料を、ＳＥ−ＨＰＬＣ（サイズ排除ＨＰＬＣ）、９Ｇ８Ａ（相対タンパク質アンフォールディングをモニター）、ｐＨ、酸化％、ＲＰ−ＨＰＬＣ（不純物及び短縮物）、肉眼では見えない粒子、濃度、ならびに重量オスモル濃度によって分析した。
【０１１４】
３．  物質及び装置
３．１．  Ａｒａｎｅｓｐバルク（１．８４ｍｇ／ｍＬ）
３．２．  ポリソルベート−８０
３．３．  ブローバックガラス製３ｃｃバイアル（１型ガラスＥＰ）
３．４．  Ｄｉａｋｙｏ  Ｃｒｙｓｔａｌ  Ｚｅｎｉｔｈバイアル（Ｗｅｓｔ．Ｄａｉｋｙｏ製のＤＳ  ＣＺ  バイアル２ｍＬ  １３ｍｍ、凍結乾燥用のロングストッパーをストッパーのために使用した。）
３．５．  １０ｍＭヒスチジン、２％マンニトール、０．５％スクロース、ｐＨ７（Ｈ２ＭＳｕ７）
３．６．  Ｓｌｉｄｅ−Ａ  Ｌｙｓｅｒ透析カセットは、Ｐｉｅｒｃｅから入手した。
３．７．  Ｃｏｒｎｉｎｇフィルター（０．２２μｍ）を濾過のために使用した。
３．８．  試料を冷蔵室内で２日間にわたって透析した。
３．９．  Ｖｉｒｔｉｓ凍結乾燥機を凍結乾燥のために使用した。
【０１１５】
４．  試料調製手順
Ｓｌｉｄｅ−Ａ  Ｌｙｓｅｒ透析カセットを使用して、冷蔵室（２〜８℃）内で２日間にわたるＡｒａｎｅｓｐ配合緩衝液（２０ｍＭリン酸ナトリウム、１４０ｍＭ塩化ナトリウム、ｐＨ６．２）の透析によって、Ａｒａｎｅｓｐ（登録商標）（１．８４ｍｇ／ｍＬ）を、１０ｍＭヒスチジン、２％マンニトール、０．５％スクロース、０．００５％ポリソルベート８０、ｐＨ７中に配合した。透析の前に、緩衝液を、室温でｐＨ及び重量オスモル濃度についてチェックした。透析の後に、試料の濃度をチェックした。ポリソルベート−８０  １％（ｗ／ｖ）ストック溶液を試料に添加して、０．００５％にした。ポリソルベート８０  ０．２５ｇをＨＭ２ＭＳｕ７緩衝液２５ｍＬに添加することによって、１％ポリソルベート−８０溶液を作製した。無菌フード内で、Ｃｏｒｎｉｎｇフィルター（０．２２μｍ）を使用して、試料を濾過した。濾過試料（０．２５ｍＬ）を２つの異なる種類のバイアル（Ｃｒｙｓｔａｌ  Ｚｅｎｉｔｈ及びガラスバイアル）に充填し、Ｖｉｒｔｉｓ凍結乾燥機を使用して、ビルディング８内で、凍結乾燥サイクルに掛けた（表２）。プラセボ及びタンパク質含有製剤０．２５ｍＬを凍結乾燥させ、貯蔵性のために、４℃、２９℃、３７℃、及び４５℃で１２ヶ月にわたって貯蔵した。各時点で、試料を３種の再構成用溶液１ｍＬ（０．７０％ＮａＣｌ、ｐＨ７；０．７０％ＮａＣｌ＋１％ベンジルアルコール、ｐＨ７．０；０．００４％ＰＳ−８０を含む０．７０％ＮａＣｌ、ｐＨ７）で再構成して、５００μｇ／ｍＬの最終濃度にした。再構成試料を、ＳＥＣ−ＨＰＬＣ（サイズ排除ＨＰＬＣ）、９Ｇ８Ａ（相対タンパク質アンフォールディングをモニター）、ｐＨ、酸化％、非還元ＲＰ−ＨＰＬＣ（不純物及び短縮物）、肉眼では見えない粒子、濃度、及び重量オスモル濃度について分析した。試料リスト、時点、及び温度を付記１及び２において示す。
【表２−１】
2019203018.tif 000018
【表２−２】
2019203018.tif 000019
【０１１６】
５．  分析方法
５．１．  ９Ｇ８Ａ法
必要ならば、試料を、１倍ＰＢＳ、１％ＢＳＡ、０．１％ポリソルベート−８０緩衝液中で、０．３４から４．２μｇ／ｍＬに希釈し、９６ウェルプレートに分配した。ＴＡＧ（ＢｉｏＶｅｒｉｓ）標識９Ｇ８Ａ（２μｇ／ｍＬ）抗ｒＨｕＥＰＯ抗体５０μＬを添加し、試料をプレート振盪機上で１時間にわたって室温でインキュベートした。次いで、アフィニティー精製されたビオチン化ウサギ抗ｒＨｕＥＰＯ抗体５０μＬ（ストック濃度０．５μｇ／ｍＬ）を添加し、試料を、プレート振盪機上で１時間にわたって室温でインキュベートした。次に、１倍リン酸緩衝溶液（ＰＢＳ）、１％ウシ血清アルブミン、及び０．１％ポリソルベート−８０中で０．６μｇ／ｍＬに希釈されたストレプトアビジンコーティングされたビーズ２５μＬ（ストック濃度、０．５６６μｇ／ｍＬ）を添加し、試料を、振盪機プレート上で３０分間にわたって室温でインキュベートした。プレートをＭ８分析器（ＩＧＥＮ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ）に移し、製造者指示書に従って、化学発光シグナルを測定した。化学発光シグナルを、試料とＡｒａｎｅｓｐバルク標準との比に変換し、相対反応性として報告したが、その際、１は、標準に等しく、値＞１は、タンパク質変性を示す。
【０１１７】
５．２．  サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥ−ＨＰＬＣ）
サイズ排除クロマトグラフィーを、安定性指示アッセイとして使用した。Ｃｈｒｏｍｅｌｅｏｎソフトウェアを備えたＡｇｉｌｅｎｔ  １１００  ＨＰＬＣシステムで、分離を行った。この方法は、ガードカラム（ＴＳＫｇｅｌ  Ｇｕａｒｄ  Ｃｏｌｕｍｎ  ＳＷＸＬ  ６．０ｍｍ×４．０ｃｍ）に沿って連続して取り付けられている２つのカラム（ＴｏｓｏＨａａｓ  ＴＳＫ  ｇｅｌ  Ｇ３０００ＳＷｘｌ、７．８ｍｍ×３００ｍｍ）を使用した。タンパク質１０μｇをカラムに装填し、０．５ｍＬ／分の流速で、２０ｍＭリン酸ナトリウム、１４０ｍＭ塩化ナトリウム、ｐＨ６．２からなる移動相を用いて定組成で溶離した。２１５ｎｍ及び２８０ｎｍでのＵＶ検出を使用して、タンパク質をモニターした。クロマトグラムにおける総面積カウントに対するピーク面積パーセントを、高分子量種（ＨＭＷ）及び低分子量種（ＬＭＷ）の量を定量するために使用した。
【０１１８】
５．３．  濃度
タンパク質濃度を、Ａｇｉｌｅｎｔ  ＵＶ／Ｖｉｓ分光光度計モデル８４５３システムを使用するＵＶ／ＶＩＳ分光法によって、Ｃｈｅｍｓｔａｔｉｏｎソフトウェアを使用して決定した。１ｃｍ路長を有するキュベット中で、０．９８の吸光係数でベールの法則を使用して、２８０ｎｍでの吸収を決定した。
【０１１９】
５．４．  ＨＩＡＣを用いての、肉眼では見えない粒子の分析
肉眼では見えない粒子のカウントを、２〜２５μｍ範囲で、ＨＩＡＣによってモニターした。分析の前に、キャップを空けたまま、試料を１時間にわたって真空下で脱気した。各試料について４回、０．２ｍＬ測定を行い、試料の測定前に、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ水を使用して、システムをブランクにした。初回の実行は廃棄し、最後の３回を平均して、１ミリリットル当たりの累積カウントを得た。ＵＳＰガイドラインのもとで、２、５、７．５、１０、１５、２０、及び２５μｍの粒子サイズをモニターした。
【０１２０】
５．５．  酸化％
トリプシンによる試料の消化、続く、質量分析検出を伴う逆相クロマトグラフィー（ＲＰ−ＨＰＬＣ／ＭＳ）を含む酸化検出アッセイを行った。ＬＣ／ＭＳ酸化アッセイを使用して、酸化メチオニン５４のパーセンテージを決定した。すべての試料の溶液を、２０ｍＭリン酸ナトリウム、１４０ｍＭ塩化ナトリウム、０．００５％ポリソルベート８０、ｐＨ６．２中の０．０２ｍｇ／ｍＬ試料５００μｌまたは１０μｇで調製した。次いで、０．５Ｍトリス−ＨＣｌ、１０ｍＭメチオニン（ｐＨ８．０）５０μｌを試料に添加した。トリプシン（１ｍｇ／ｍｌを２μｌ）を試料に添加し、終夜２９℃でインキュベートした。試料を２５％ＴＦＡ１０μｌでクエンチした。ＬＣＱ  Ｄｅｃａ質量分析計（Ｐｒｏｍａｓｓｅｏｕｓ）に連結しているＢｅｃｋｍａｎ  ＨＰＬＣ  Ｓｙｓｔｅｍ  Ｇｏｌｄ（Ｏｓｉｒｉｓ、Ｓｙｓｔｅｍ  ＩＤ  ＃４０８７７４）を使用して、試料の分析を達成した。移動相として４２％アセトニトリル、０．１％ＴＦＡを用いる定組成法、Ｚｏｒｂａｘ  ３００ＳＢ−Ｃ８カラム（１５０×２．１ｍｍ、５μｍ、３００オングストローム、Ｐａｒｔ  Ｎｕｍｂｅｒ：８８３７５０−９０６）を６０℃の温度で使用して、流速は０．２０ｍｌ／分であった。検出は、ＵＶで２１５及び２８０ｎｍで行い、選択されたｍ／ｚ：１２６４（非酸化）、１２７２（酸化）、１３４２（部分非酸化）、及び１３５０（部分酸化）でのズームスキャンを使用した。具体的なペプチドピークの比を使用して、酸化生成物のパーセンテージを評価した。
【０１２１】
５．６．  非還元逆相
非還元逆相高速液体クロマトグラフィー（ＮＲＲＰ−ＨＰＬＣ）を使用して、タンパク質含有率及び純度を決定したが、それというのも、この技術を使用すると、分解生成物が容易に検出されるためである。非還元逆相（ＮＲＲＰ）ＨＰＬＣを、全長エリスロポイエチンモノマーから短縮種を分離するために使用した。Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｊｕｐｉｔｅｒ  ５μｍ、３００Ａ、Ｃ４結合相シリカカラム（１５０×４．６ｍｍ、００Ｆ−４１６７−Ｅ０）を使用するＳｈｉｍａｄｚｕ高性能液体クロマトグラフィーグラフで、測定を行った。移動相Ａは、水中の０．０６５１％トリフルオロ酢酸（ｖ／ｖ）であり、移動相Ｂは、９０％アセトニトリル中の０．０６５１％トリフルオロ酢酸であった。１．０ｍＬ／分の流速で１３５分で２０％Ｂから１００％Ｂへの勾配システムによって、２１５ｎｍでの検出で、試料を分析した。クロマトグラムの重ね合わせを使用して、分解または短縮種の検出を比較した。
【０１２２】
５．７．  ｐＨ測定
Ｍｅｔｔｌｅｒ  Ｔｏｌｅｄｏ  ＭＰ２００  ｐＨメーターを使用して、ｐＨについて試料をモニターした。ｐＨ４及びｐＨ７の標準緩衝液を使用して、機器を較正した。
【０１２３】
５．８．  重量オスモル濃度決定
Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｉｎｃ製Ｍｉｃｒｏ  Ｏｓｍｏｍｅｔｅｒ、モデル３３０を用いて、重量オスモル濃度を測定した。２９０ｍＯｓｍ標準を参照として使用した。
【０１２４】
６．  結果及び考察
６．１．  ９Ｇ８Ａ
９Ｇ８Ａ抗体結合アッセイを使用して、製品試料の配座異性相似性を評価した（Ｅｌｌｉｏｔｔ，Ｃｈａｎｇら、１９９６、Ｅｌｌｉｏｔｔ，Ｌｏｒｅｎｚｉｎｉら、１９９６）。９Ｇ８Ａモノクローナル抗体は、天然及び変性Ａｒａｎｅｓｐの両方において、アミノ酸１３〜１７からなる線状エピトープであるＥＲＹＬＬを認識する。これらのアミノ酸は、Ａｒａｎｅｓｐの配座異性変化、またはその変性の後にさらに露出して、９Ｇ８Ａ結合の増大をもたらす。データを、ダルベポエチンアルファ標準の反応性に対する、試料の反応性の比としてプロットした。１の値は、試料及び標準の間で反応性の差がないことを示す。
【０１２５】
ベンジルアルコール及びポリソルベート−８０を含む異なる再構成希釈液を比較した場合、有意な差はなかった。しかしながら、ガラスバイアル中の試料と比較した場合、Ｃｒｙｓｔａｌ  Ｚｅｎｉｔｈ（ＣＺ）バイアル中の試料では比較的高い温度で、相対変性においてわずかな増大があった。結果を図２２においてまとめる。
【０１２６】
６．２．  サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）による凝集物の検出
最高３７℃では、ベンジルアルコール及びポリソルベート−８０を含む３種の異なる再構成希釈液を比較した場合、Ａｒａｎｅｓｐ（登録商標）において、ＨＭＷ種％に有意な差はなかった（図２３）。しかしながら、Ｃｒｙｓｔａｌ  Ｚｅｎｉｔｈ（ＣＺ）バイアル中の試料と比較した場合、４５℃では、ガラスバイアル中の試料で高分子量種のわずかな増大があった（図２３）。ＣＺバイアル中のＡｒａｎｅｓｐ（登録商標）は、４５℃で、ガラスバイアル中の試料よりも高いメインピーク％を示した（図２４）。
【０１２７】
６．３．  肉眼では見えない粒子の分析、
ガラス及びｃｚバイアル中の試料の間で、粒子カウントにおける傾向は観察されなかった。粒子カウントは、４種の温度すべてで、タンパク質及びプラセボ試料の両方において、１０μｍ及び２５μｍ粒子について、ＵＳＰガイドライン未満にとどまった（図２５）。ＵＳＰガイドラインは、≧１０μｍの粒子では、コンテナ１つ当たり≦６，０００粒子であり、≧２５μｍの粒子では、コンテナ１つ当たり≦６００粒子である。
【０１２８】
６．４．  外観検査
４℃で１２ヶ月にわたって貯蔵したＣＺバイアル中の試料は、ＣＺバイアル中のタンパク質及びプラセボの両方について、凍結乾燥ケーキが溶けたことを示した（図２６）。これは、水分がＣＺバイアルに浸透することを示している。
【０１２９】
６．５．  濃度測定
試料をＣＺバイアル中、４℃で１２ヶ月間にわたって貯蔵した後に、タンパク質濃度がわずかに低下した。しかしながら、他の温度及び時点では、試料及びコンテナの間で、タンパク質濃度に差はなかった。
【０１３０】
６．６．  酸化％
４種の異なる温度（４℃、２９℃、３７℃、及び４５℃）で１２ヶ月にわたって貯蔵されたＡｒａｎｅｓｐでの酸化％を図２８に示す。２９℃、３７℃、及び４５℃で、ガラスバイアル中の試料と比較すると、ＣＺバイアル中の試料では、急速な酸化速度が観察された。１２ヶ月のインキュベーションの後に、２９℃の貯蔵温度では、ＣＺバイアル中の試料は、約２５％の酸化を示したが、ガラスバイアル中の試料は、約５％の酸化を示した。より高温の貯蔵では、差はより有意である。４種の温度（４℃、２９℃、３７℃、及び４５℃）について、１２ヶ月までの貯蔵で、３種の再構成用緩衝液（０．７％塩化ナトリウム、１％ベンジルアルコール、または０．００４％ポリソルベート−８０）の間で、差はなかった。
【０１３１】
６．７．  非還元逆相ＨＰＬＣによる分解及び短縮種の検出
非還元逆相ＨＰＬＣを使用して、分解及び短縮種を検出した。４種の異なる温度で１２ヶ月にわたって貯蔵した後のＡｒａｎｅｓｐ（登録商標）の非還元逆相クロマトグラフィーからのクロマトグラムの重ね合わせを図２９において示している。ＣＺバイアル中、またはガラスバイアル中の凍結乾燥試料は、３種の異なる再構成希釈液で、４℃、２９℃、３７℃、及び４５℃で１２ヶ月にわたって貯蔵した後に、分解または短縮種のいずれも示さなかった。
【０１３２】
６．８．  ｐＨ測定
貯蔵期間にわたって、かつ４種の異なる温度で、当初ｐＨは変化しなかった（図３０）。
【０１３３】
６．９．  重量オスモル濃度測定
ベンジルアルコールで再構成した試料は、４種の温度すべてについて、他の試料よりも高い重量オスモル濃度を示す。異なるコンテナナ中の試料の間で、差はなかった。４℃試料に異常値があったが、傾向はなかった。結果を図３１においてまとめる。
【０１３４】
７．  結論
本発明者らは、室温で少なくとも２年間にわたって貯蔵することができ、無刺痛であり得るＡｒａｎｅｓｐの有望な再配合を調査した。
Ａｒａｎｅｓｐ凍結乾燥製剤（１０ｍＭヒスチジン、２％マンニトール、０．５％スクロース、０．００５％ポリソルベート８０、ｐＨ７）及び３種の再構成用緩衝液（０．７％塩化ナトリウム、１％ベンジルアルコール、０．００４％ポリソルベート−８０）を使用して、ガラスバイアルに対して、Ｄａｉｋｙｏ  Ｃｒｙｓｔａｌ  Ｚｅｎｉｔｈ（ＣＺ）バイアルにおけるＡｒａｎｅｓｐ安定性について先行コンテナ比較研究を行った。ＳＥ−ＨＰＬＣ、酸化％、ｐＨ、ＲＰ−ＨＰＬＣ、及び９Ｇ８Ａイムノアッセイを使用して、物理的及び化学的分解をモニターした。結果は、９Ｇ８Ａ（アンフォールディング）、肉眼では見えない粒子、ＲＰ−ＨＰＬＣ（短縮物）、及びＳＥ−ＨＰＬＣ（凝集）分析に基づき、再構成用緩衝液（０．７％塩化ナトリウム、１％ベンジルアルコール、０．００４％ポリソルベート−８０）、及び異なるコンテナ（ＣＺ及びガラスバイアル）の間で、差を示していない。しかしながら、ガラスバイアル中の試料と比較して、ＣＺバイアル中の試料について、ケーキ構造の減少及びより高いパーセントの酸化が観察された。これは、ＣＺバイアルが、水分及び酸素の浸透を受けやすいことを示した。この研究は、１％ベンジルアルコールを無刺痛目的のために、再構成用緩衝液として使用することができることを示した。また、室温で少なくとも２年間にわたって貯蔵することができるｐＨ７の凍結乾燥Ａｒａｎｅｓｐ製剤は、刺痛作用を軽減し得る。
【０１３５】
８．  付記
【表２−３】
2019203018.tif 000020
【表２−４】
2019203018.tif 000021
【表２−５】
2019203018.tif 000022
【０１３６】
付記２．時点及び期日
【表２−６】
2019203018.tif 000023
【０１３７】
実施例３
概要
抗ＥＰＯモノクローナル抗体の凍結乾燥製剤を室温安定な製剤のために開発した。２種の凍結乾燥製剤及び２種の濃度（１００ｕｇ／ｍＬ、５００ｕｇ／ｍＬ）を調査した。
１．  ＧＭＳＴ：１０ｍＭグルタミン酸Ｎａ（グルタミン酸から）、４％マンニトール、２％スクロース、０．０１％ポリソルベート２０、ｐＨ５．２
２．  ＨＭＳＴ：１０ｍＭヒスチジン、４％マンニトール、２％スクロース、０．０１％ポリソルベート２０、ｐＨ６．０
ヒスチジン製剤中の試料は、ＳＥ−ＨＰＬＣ結果に基づき、グルタミン酸塩緩衝液中においてよりもわずかに高いメインピーク％を示した。総じて、２種の製剤からの試料は、３７℃での１２週間までのインキュベーション後に、凝集及び全体構造及び熱安定性において何ら有意な変化を示さなかった。
【０１３８】
材料、方法、及び装置
材料：
抗ＥＰＯ  ｍＡｂ  ８Ｃ１０（米国特許出願公開第２０１３０２９５１１３Ａ１号、出願番号第１３／８８８，７７７号を参照されたい）
配合緩衝液：
ＧＭＳＴ：１０ｍＭグルタミン酸Ｎａ（グルタミン酸から）、４％マンニトール、２％スクロース、０．０１％ポリソルベート２０、ｐＨ５．２
ＨＭＳＴ：１０ｍＭヒスチジン、４％マンニトール、２％スクロース、０．０１％ポリソルベート２０、ｐＨ６．０
【表３】
2019203018.tif 000024
方法：
サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）
サイズ排除（ＳＥＣ）法を使用して、モノマー及び高分子量種（ＨＭＷＳ）、例えば、二量体及び凝集をモニターした。この方法は、Ａｇｉｌｅｎｔ  １１００（Ｎａｍｅ：ＫＧＢ）ＨＰＬＣを使用して、ガードカラム（ＴＳＫｇｅｌ  Ｇｕａｒｄ  Ｃｏｌｕｍｎ  ＳＷＸＬ  ６．０ｍｍ×４．０ｃｍ）に沿って連続して取り付けられている２つのカラム（Ｔｏｓｏｈ  Ｇ３０００ＳＷｘｌ、７．８ｍｍ×３００ｍｍ）を使用した。流速は、５０ｍＭリン酸ナトリウム；３００ｍＭ塩化ナトリウム、ｐＨ６．８からなる移動相での定組成で、０．５ｍＬ／分であった。２１５ｎｍでのＵＶ検出を使用して、タンパク質の検出をモニターした。メインピーク％及びＨＭＷ（高分子量）ピーク％について、総面積カウントに対する面積カウントパーセントを利用した。
【０１３９】
還元ＣＥ−ＳＤＳ法
Ｂｅｃｋｍａｎ  ＳＤＳ−ＭＷキットと共に、１００×８００開口部及び裸の融解シリカを備えた２０ｃｍ（有効長さ）及び／３０ｃｍ（全長）で内径５０ｕｍのＢｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ  ＰＡ−８００（両面）を使用して、ＣＥ−ＳＤＳ法を行った。Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｋａｒａｔ  ３２ソフトウェアを使用して、データを収集した。Ｃｈｒｏｍｅｌｅｏｎを使用して、ピーク統合を行い、Ｅｘｃｅｌを使用して、補正面積に基づき純度％を計算した。３０Ｋ  ＭＷＣＯ  Ｎａｎｏｓｐｉｎを使用して、ＧＭＳＴ１００及びＨＭＳＴ１００の１００ｍｃｇ／ｍＬ試料１．０ｍＬ、ならびにＧＭＳＴ５００及びＨＭＳＴ５００の５００ｍｃｇ／ｍＬ試料２００ｕＬをそれぞれ濃縮して、４５ｕＬの最終体積にした。試料緩衝液５０ｕＬ及び２−メルカプトエタノール５ｕＬを添加し、７０℃で１０分間にわたって加熱し、次いで、ＣＥ−ＳＤＳアッセイのために、ＰＣＲ試料管に装填した。
【０１４０】
ＤＳＣ
参照及び試料セルの間での温度差を連続して測定し、出力ユニットに対して較正するＭｉｃｒｏＣａｌ  ＶＰ−Ｃａｐｉｌｌａｒｙ  ＤＳＣシステムでのＤＳＣによって、試料の熱安定性を評価した。このデータチャネルは、ＤＰシグナル、または参照及び試料セルの間での示差出力と呼ばれる。タンパク質分子のアンフォールディングは、ＤＳＣサーモグラム上で吸熱転移として現れ、熱転移（溶融）温度（Ｔｍ）によって特徴づけられ得る。試料を、６０℃／時間の加熱速度で４℃から１１０℃へと加熱した。走査前時間は１５分であり、フィルター期間は１０秒であった。ＤＳＣ実験において使用した濃度は、０．１及び０．５ｍｇ／ｍＬであった。データ分析を、ＭｉｃｒｏＣａｌ  Ｏｒｉｇｉｎ  ７ソフトウェアを使用して行った。
【０１４１】
分析用超遠心分離（ＡＵＣ）分析
Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ  ＰｒｏｔｅｏｍｅＬａｂ  ＸＬ−Ｉ機器によって、試料を分析した。分析前に抗ＥＰＯ  ｍＡｂ試料を４℃で貯蔵し、希釈せずに分析した。４５，０００ｒｐｍで、沈降速度実験を行い、２８０ｎｍでの吸光度を追跡した。石英窓を備えたダブルセクターセンターピースセルアセンブリ内で、実験を行った。２０℃で、スキャンの間に遅延を伴うことなく、各試料当たり１２０スキャンで、スキャンを収集した。「Ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ  ｃ（ｓ）  ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ」モデルを使用するＳｅｄｆｉｔ  ｖ１１．８を使用して、ＡＵＣ−ＳＶデータを分析した。ｃ（ｓ）分散分析でのパラメーターは：ｓ範囲２〜３０、分解２００、及び分析のためのデータ選択６．４〜６．８であった。非線形最小二乗適合中に、ＡＵＣ−ＳＶ分析において、摩擦比、時間不変ノイズ（ｔｉｍｅ  ｉｎｖａｒｉａｎｔ  ｎｏｉｓｅ）、及びメニスカス位置が浮上することを可能にした。ＡＵＣ−ＳＶ分布のために、次のパラメーター：部分比体積０．７３ｍＬ／ｇを使用し、Ｇｌｕ及びＨｉｓ緩衝液の両方の密度及び粘度は、１．０２１００ｇ／ｍＬ、及び０．０１２１０Ｐａであった。
【０１４２】
試料の調製法
試料を、２〜８℃で３日間にわたって、２種の配合緩衝液に対して透析した。試料の透析後に、Ａ２８０ｎｍを使用して、試料の濃度を測定した。２種の配合緩衝液で、試料を希釈または濃縮して、１００μｇ／ｍＬ及び５００μｇ／ｍＬにした。試料を０．２２μｍフィルターで濾過し、試料１ｍＬを３ｃｃバイアルに分取し、バイアルに栓をした。一部の試料を凍結前０時試験のために用いた。試料を、凍結乾燥プロセスに従って凍結乾燥させた。凍結乾燥の後に、各時点まで、試料を冷蔵室内で貯蔵した。各時点で、試料を水１ｍＬで再構成した。
【０１４３】
凍結乾燥手順
試料バイアルを、凍結乾燥機の「事前冷却」しておいた（４℃）シェルフに装填した。試料を、凍結、一次乾燥、及び二次乾燥からなる３ステップに掛けた。初めに、試料を３０分間にわたって４℃で保持し、１２３分かけて４℃から−４５℃に冷却し、４５℃で１８０分間にわたって保持した。−４５℃で１８０分間にわたって保持した後に、シェルフ温度を１５０分かけて−１２℃に上昇させた。次いで、−１２℃で２４０分間にわたって保持した後に、温度を再び１５０分かけて−４５℃に低下させた。試料を１２０分間にわたって−４５℃にした。一次乾燥のために、シェルフ温度を−１０℃に上昇させ、コンデンサー温度を−５０℃未満にした後に、チャンバー真空を１２０ｍＴｏｒｒに維持して２５時間にわたって保持した。二次乾燥のために、チャンバー圧力を１００ｍＴｏｒｒに低下させながら、シェルフ温度を２３４分かけて２５℃に上昇させた。その後、チャンバー圧力を１００ｍＴｏｒｒに維持しながら、シェルフ温度を１１時間にわたって２５℃にした。すべてのサイクルが終了した後に、乾燥チャンバー内部で、バイアルにストッパーを設置した。
【０１４４】
結果及び考察
サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）
凍結乾燥試料は両方とも、４℃及び３７℃貯蔵の両方について１２週間までの貯蔵で、低分子量種％（ＬＭＷ％）のわずかな増大を示した（図３２）。より高温（３７℃）での７週目のデータに基づき、ヒスチジン製剤中の試料は、１００μｇ／ｍＬについて、より低いＬＭＷ％を示した。高分子量種％（ＨＭＷ％）についても、ヒスチジン製剤は、より高温で、グルタミン酸塩製剤中の試料よりもわずかに少なく示した（図３３）。しかしながら、凍結乾燥の前後で、差はなかった。総じて、ヒスチジン製剤中の試料は、グルタミン酸塩製剤においてよりも高いメインピーク％を示した（図３４）。試料の利用性によって、１２週目には、ヒスチジン製剤を評価しなかった。
【０１４５】
毛細管電気泳動（ＣＥ−ＳＤＳ）による分解
この分析法を使用して、還元及び変性条件下で、重鎖（ＨＣ）、軽鎖（ＬＣ）、非グリコシル化ＨＣ（ＮＧＨＣ）、及び他のマイナーピーク種を分析する。還元ＣＥ−ＳＤＳは、還元及び変性条件下でのそれらの流体力学サイズにおける差に基づき、タンパク質を分離する。タンパク質種を、陰イオン性界面活性剤であるＳＤＳに結合させ、ＳＤＳゲル緩衝液を充填された裸の融解シリカ毛細管に界面動電的に注入する。電圧を毛細管を通して印加すると、その下で、ＳＤＳコーティングされたタンパク質が、親水性ポリマーベースの溶液中での泳動におけるそれらの差によって分離される。タンパク質は、ＵＶ検出ウィンドウを通過する際に、フォトダイオードアレイ（ＰＤＡ）検出器によって検出される。各成分の較正ピーク面積パーセントを決定することによって、純度を評価する。還元ＣＥ−ＳＤＳ法によると、重鎖％（図３５）、軽鎖％（図３６）、及び非グリコシル化重鎖％（図３７）について、製剤の間で有意な差はなかった。図３８において示されている重ね合わせた電気泳動図は、７週間目に試験された条件のすべてにおいて、観察される検出可能な分解種が存在しなかったことを実証した。
【０１４６】
示差走査熱分析（ＤＳＣ）による熱安定性
示差走査熱分析（ＤＳＣ）を使用して、２種の異なる緩衝液中の抗ＥＰＯ  ｍＡｂ試料を分析した。この技術を用いると、各試料の相対熱安定性を比較することができる。ＧＭＳＴ及びＨＭＳＴ緩衝液中の４種の凍結前試料のＤＳＣスキャンを図３９において示し、熱遷移温度を表３において列挙する。熱遷移温度測定の典型的な標準偏差は、±０．５℃以内であった。ＤＳＣデータは、凍結前試料の熱安定性は、両方の緩衝液中、及び両方の濃度で同様であったことを示唆した。異なる条件及び時点での各抗ＥＰＯ  ｍＡｂ試料のＤＳＣスキャンの比較を、図４０〜４３において示し、熱遷移温度も表４において列挙する。もう一度、ＤＳＣデータは、試料の熱安定性が、１２週間までにわたる時間で、両方の緩衝液中、ならびに両方の濃度及び温度で同様なままであったことを示唆した。７週間後に、各試料のＣＨ２ドメインが、０時でのものと比較して、比較的低温でアンフォールドすると考えられた。さらなる研究は、その差が、異なる時間に試料を分析することに起因し得るであろうことを示唆した。
【表４−１】
2019203018.tif 000025
【表４−２】
2019203018.tif 000026
【０１４７】
抗ＥＰＯ  ｍＡｂ中の凝集体の分析用超遠心分離（ＡＵＣ）分析
分析用超遠心分離沈降速度（ＡＵＣ−ＳＶ）法を使用して、抗ＥＰＯ  ｍＡｂ試料のサイズ分布を決定した。ＡＵＣ−ＳＶの主な利点は、実際の配合緩衝液中で分析が行われること、及びカラムマトリックスまたはフィルターに対する凝集体の損失についての懸念が存在しないことである。したがって、ＡＵＣ−ＳＶは、弱会合している可逆的高分子量種（ＨＭＷＳ）も検出することができる。ＡＵＣ−ＳＶは、共有結合及び非共有結合の両方の二量体以上の規模の凝集体を特性決定し、それらのサイズを決定し、かつ凝集体含有量を定量することができる。
【０１４８】
ＡＵＣ−ＳＶは、本質的に高い変動性がある技術である。標準的なＡＵＣ−ＳＶ分析を、０．５ｍｇ／ｍＬのタンパク質濃度で３連で行った。抗ＥＰＯ  ｍＡｂ試料の一部は、０．１ｍｇ／ｍＬでのみ利用可能であったが、０．５ｍｇ／ｍＬ未満の濃度での分析は、通常よりも高い変動性をもたらす。０．５ｍｇ／ｍＬで配合された試料は、少量でしか利用することができず、したがって、分析を、１つの複製のみで行った。Ｂｉａｃｏｒｅ分析後の残りは、０．５ｍｇ／ｍＬ試料の３つでのみ利用可能であり、これらを、２連で分析した。また、Ｔ＝１２週目のＧｌｕ試料のみが利用可能であった。
【０１４９】
抗ＥＰＯ  ｍＡｂ試料の高分解能沈降係数分布ｃ（ｓ）を、図４４において図示する。グラフの垂直軸は、濃度分布を示し、水平軸は、それらの沈降係数に基づき、種の分離を示す。比較的高い分子量の種の小さい画分をより良好に可視化するために、グラフは１０倍に拡大されている。分析試料はすべて、非常に類似した分布パターンを有し、複製測定のすべてにおいて検出されたメジャーなＨＭＷＳは二量体であり、少量の三量体が、一部の複製において検出された。Ｔ＝７週間及びＴ＝１２週間後のサイズ分布パターン（図示せず）は、図１３において図示されているＴ＝０週間のものと同様であった。痕跡量のＬＭＷＳ種が、多くの複製において検出された。
【０１５０】
ＡＵＣ−ＳＶ分析のすべての結果を、表５にまとめ、より容易に解釈するために、図４５においてグラフでも表す。データから分かり得るとおり、すべての試料におけるＨＭＷＳ含有率は、２〜５％の範囲内で変動し、方法のかなり高い変動性によって（理由は上記で論述した）、緩衝液組成物（Ｇｌｕ対Ｈｉｓ）またはタンパク質濃度（０．１対０．５ｍｇ／ｍＬ）の作用についての結論を引き出すことはできない。唯一の観察可能な作用は、Ｈｉｓ緩衝液試料におけるＬＭＷＳ含有率の上昇であり、凍結前試料は、０．１％未満の痕跡量のＬＭＷＳを含有し、これは、凍結後試料では、０．７±０．４％に上昇した。３７℃で１２週間後に、Ｇｌｕ緩衝液中のＨＭＷＳ含有率が上昇する指標（７．１％）も存在するが、残念なことに、対応するＨｉｓ−３７℃−１２週間試料は利用不可能であった。この実験セットからの推奨は、長期安定性に対する緩衝液組成物及びタンパク質濃度の可能な作用を観察するためには、かなり長期の実験（この実験よりも少なくとも数倍長い）を高温（３７℃）で行うことであろう。
【０１５１】
まとめると、７週間の実験の間、緩衝液組成物（Ｇｌｕ対Ｈｉｓ）またはタンパク質濃度（０．１対０．５ｍｇ／ｍＬ）の検出可能な作用は、ＡＵＣ−ＳＶによって観察されなかった。
【表５−１】
2019203018.tif 000027
【表５−２】
2019203018.tif 000028
【表５−３】
2019203018.tif 000029
【０１５２】
結論
結論として、ＳＥＣ、ＡＵＣ、還元ＣＥ−ＳＤＳ、及びＤＳＣを使用したところ、２種の凍結乾燥製剤は、４℃及び３７℃での少なくとも１２週間の貯蔵について、抗体安定性を維持した。
【０１５３】
本明細書において引用した各参照文献は、それが教示するものすべてについて、かつあらゆる目的について、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる。
【０１５４】
本発明は、本発明の個々の態様の単一の説明として意図されている本明細書に記載の具体的な実施形態によって範囲を限定されるものではなく、機能的に同等の方法及び成分は、発明である。実際に、本明細書に図示及び記載されているものに加えて、本発明の様々な変更形態が、上述の記載及び添付の図面から、当業者には明らかであろう。そのような変更形態は、添付の請求の範囲内に該当することが意図されている。
本発明の実施形態の例として、以下の項目が挙げられる。
（項目１）
安定剤、糖アルコール、糖、及び界面活性剤を含む固体タンパク質製剤であって、前記安定剤がヒスチジン、トリプトファン、メチオニン、ロイシン、フェニルアラニン、セリン、グルタミン酸、アルギニン、またはリシンからなる群から選択され；前記糖アルコールが、マンニトール、キシリトール、ソルビトール、マルチトール、ラクチトール、グリセロール、エリトリトール、またはアラビトールからなる群から選択され；前記糖が、スクロース、マルトース、ラクトース、グルコース、フルクトース、またはガラクトースからなる群から選択され；前記界面活性剤がポリソルベート−８０、ポリソルベート−２０、ポリソルベート−２１、ポリソルベート−４０、ポリソルベート−６０、ポリソルベート−６５、ポリソルベート−８１、またはポリソルベート−８５からなる群から選択される前記固体タンパク質製剤。
（項目２）
前記安定剤がヒスチジンである、項目１に記載の製剤。
（項目３）
ヒスチジンの濃度が、固体化される前に約０．１ｍＭ〜約１００ｍＭである、項目２に記載の製剤。
（項目４）
ヒスチジンの濃度が、固体化される前に約１０ｍＭである、項目３に記載の製剤。
（項目５）
前記糖アルコールがマンニトールである、項目１に記載の製剤。
（項目６）
マンニトールの濃度が、固体化される前に約０．１％〜約１０％である、項目５に記載の製剤。
（項目７）
マンニトールの濃度が、固体化される前に２％である、項目６に記載の製剤。
（項目８）
前記糖がスクロースである、項目１に記載の製剤。
（項目９）
スクロースの濃度が、固体化される前に約０．０５％〜約５％である、項目８に記載の製剤。
（項目１０）
スクロースの濃度が、固体化される前に０．５％である、項目９に記載の製剤。
（項目１１）
前記界面活性剤がポリソルベート−８０である、項目１に記載の製剤。
（項目１２）
ポリソルベート−８０の濃度が、固体化される前に約０．００１％〜約０．０１％である、項目１１に記載の製剤。
（項目１３）
ポリソルベート−８０の濃度が、固体化される前に０．００５％である、項目１２に記載の製剤。
（項目１４）
ｐＨが、固体化される前に約６．０〜約８．０である、項目１に記載の製剤。
（項目１５）
ｐＨが、固体化される前に７．０である、項目１４に記載の製剤。
（項目１６）
タンパク質の濃度が、固体化される前に約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約１００ｍｇ／ｍｌである、項目１に記載の製剤。
（項目１７）
タンパク質の濃度が、固体化される前に約２ｍｇ／ｍｌである、項目１６に記載の製剤。
（項目１８）
前記タンパク質が糖タンパク質である、項目１に記載の製剤。
（項目１９）
前記タンパク質がダルベポエチンアルファである、項目１８に記載の製剤。
（項目２０）
前記タンパク質が抗体である、項目１８のいずれかに記載の製剤。
（項目２１）
前記抗体がモノクローナル抗体である、項目２０に記載の製剤。
（項目２２）
前記抗体がポリクローナル抗体である、項目２０に記載の製剤。
（項目２３）
凍結乾燥されている、項目１に記載の製剤。
（項目２５）
液体で再構成される、項目２３に記載の製剤。
（項目２６）
ダルベポエチンアルファ、ヒスチジン、マンニトール、スクロース、ポリソルベート−８０を含む固体タンパク質製剤。
（項目２７）
固体化される前に、前記ヒスチジン濃度が１０ｍＭであり、前記マンニトール濃度が２％であり、前記スクロース濃度が０．５％であり、前記ポリソルベート−８０濃度が０．００５％である、項目２６に記載の製剤。
（項目２８）
前記タンパク質が安定している、項目１または２６に記載の製剤。
（項目２９）
前記タンパク質が、少なくとも１ヶ月間にわたって安定している、項目２８に記載の製剤。
（項目３０）
前記タンパク質が、少なくとも３ヶ月にわたって安定している、項目２８に記載の製剤。
（項目３１）
前記タンパク質が、少なくとも６ヶ月間にわたって安定している、項目２８に記載の製剤。
（項目３２）
前記タンパク質が少なくとも１２ヶ月間にわたって安定している、項目２８に記載の製剤。
（項目３３）
前記タンパク質が、少なくとも１８ヶ月間にわたって安定している、項目２８に記載の製剤。
（項目３４）
前記タンパク質が、少なくとも２４ヶ月間にわたって安定している、項目２８に記載の製剤。
（項目３５）
前記タンパク質が、約４〜４５℃で安定している、項目２８に記載の製剤。
（項目３６）
前記タンパク質が、約４℃で安定している、項目２８に記載の製剤。
（項目３７）
前記タンパク質が、約２９℃で安定している、項目２８に記載の製剤。
（項目３８）
前記タンパク質が、約３７℃で安定している、項目２８に記載の製剤。
（項目３９）
前記タンパク質が、約４５℃で安定している、項目２８に記載の製剤。
（項目４０）
前記タンパク質の酸化パーセントが、約５％〜約１０％である、項目１または２６に記載の製剤。
（項目４１）
前記タンパク質の酸化パーセントが、約１０％未満である、項目１または２６に記載の製剤。
（項目４２）
前記タンパク質の酸化パーセントが、約５％未満である、項目１または２６に記載の製剤。
（項目４３）
項目１または２６に記載の固体タンパク質製剤を調製する方法であって、
ａ）前記タンパク質を凍結乾燥緩衝液で希釈すること、及び
ｂ）前記希釈タンパク質を凍結乾燥させること
を含む前記方法。
（項目４４）
項目１または２６に記載の固体タンパク質製剤と、再構成用緩衝液とを含むキット。
（項目４５）
モノクローナル抗体、グルタミン酸ナトリウム、マンニトール、スクロース、及びポリソルベート２０を含む固体タンパク質製剤。
（項目４６）
モノクローナル抗体、ヒスチジン、マンニトール、スクロース、及びポリソルベート２０を含む固体タンパク質製剤。
（項目４７）
前記モノクローナル抗体の濃度が、固体化される前に約１００μｇ／ｍｌ〜約５００μｇ／ｍｌである、項目４５または４６に記載のタンパク質製剤。
（項目４８）
ｐＨが、固体化される前に約５．２である、項目４５に記載のタンパク質製剤。
（項目４９）
ｐＨが、固体化される前に約６．０である、項目４６に記載のタンパク質製剤。
（項目５０）
グルタミン酸ナトリウムの濃度が、固体化される前に約１０ｍＭである、項目４５に記載のタンパク質製剤。
（項目５１）
ヒスチジンの濃度が、固体化される前に約１０ｍＭである、項目４６に記載のタンパク質製剤。
（項目５２）
マンニトールの濃度が、固体化される前に約４％である、項目４５または４６に記載のタンパク質製剤。
（項目５３）
スクロースの濃度が、固体化される前に約２％である、項目４５または４６に記載のタンパク質製剤。
（項目５４）
ポリソルベート２０の濃度が、固体化される前に約０．０１％である、項目４５または４６に記載のタンパク質製剤。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６】
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【図３７】
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【図３８】
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【図３９】
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【図４０】
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【図４１】
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【図４２】
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【図４３】
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【図４４】
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【図４５】
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【外国語明細書】
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