(57)【要約】      （修正有）【課題】アレルギー疾患の治療において、抗ヒスタミン剤を用いる従来の治療法に伴う眠気の発生等の副作用を生じることがない、新規抗アレルギー剤の提供。【解決手段】月桃を低温かつ減圧条件下で乾留し、前記乾留により生じた留出分を除去することにより得られる乾留残渣を含む、抗アレルギー剤。前記乾留は温度条件が２０〜６０℃であり、かつ圧力条件がゲージ圧で−８８ｋＰａ以下であることが好ましい。前記抗アレルギー剤は、花粉を抗原とするアレルギーの予防、治療又は緩和に有用である。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
月桃を低温かつ減圧条件下で乾留し、前記乾留により生じた留出分を除去することにより得られる乾留残渣を含む、抗アレルギー剤。
【請求項２】
前記乾留の温度条件が２０〜６０℃であり、かつ圧力条件がゲージ圧で−８８ｋＰａ以下である、請求項１に記載の抗アレルギー剤。
【請求項３】
前記抗アレルギー剤が、花粉を抗原とするアレルギーを予防、治療又は緩和するものである、請求項１又は２に記載の抗アレルギー剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗アレルギー剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
我が国全人口の約２人に１人が、何らかのアレルギー疾患に罹患しているとされている（厚生労働省：リウマチ・アレルギー対策委員会報告書（平成２３年））。とりわけ、花粉やハウスダスト等の外来性抗原を原因とするＩ型アレルギーは、その抗原が身近であるため罹患者が多い疾患である。
【０００３】
Ｉ型アレルギーは、即時型アレルギーやアナフィラキシー型アレルギーとも言われ、ＩｇＥ等を抗体とし、花粉やハウスダスト等の外来性抗原を主な抗原とした反応である。具体的には、例えば、ＩｇＥ抗体が、皮膚や鼻粘膜等の粘膜に存在するマスト細胞に結合した状態で、前記のような外来性抗原と出会うことにより、マスト細胞からヒスタミン等の伝達物質が放出され、アレルギー反応が引き起こされる。
【０００４】
アレルギー反応が前記のようなメカニズムで発生するため、アレルギー疾患を予防、治療及び緩和等するために、ジフェンヒドラミン等の抗ヒスタミン剤が使用されてきた。しかしながら、抗ヒスタミン剤は、極度の眠気を発生させる等の副作用を有している。従って、このような副作用の生じない抗アレルギー剤が求められてきた。
【０００５】
このような副作用を生じない抗アレルギー剤として、天然由来の成分を含む抗アレルギー剤が注目されている。特許文献１及び特許文献２は、このような天然由来の抗アレルギー剤を開示している。特許文献１は、スギから抽出した油を含む、スギ花粉症の予防・治療薬を開示している。特許文献２は、花粉荷、又は花粉荷の溶媒抽出物を含む抗ヒスタミン剤を開示している。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開２００２−２３４８４６号公報
【特許文献２】特開２０１０−２３５５２４号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、上記のような状況に鑑みて、天然由来の抗アレルギー剤を得ることを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らが鋭意検討を重ねた結果、特定植物の処理物を用いることにより、前記目的が達成できることを見出し、本発明に至った。
すなわち本発明は、
［１］月桃を低温かつ減圧条件下で乾留し、前記乾留により生じた留出分を除去することにより得られる乾留残渣を含む、抗アレルギー剤、
［２］前記乾留の温度条件が２０〜６０℃であり、かつ圧力条件がゲージ圧で−８８ｋＰａ以下である、［１］に記載の抗アレルギー剤、並びに
［３］前記抗アレルギー剤が、花粉を抗原とするアレルギーを予防、治療又は緩和するものである、［１］又は［２］に記載の抗アレルギー剤、
に関する。
【発明の効果】
【０００９】
本発明により、抗アレルギー作用に優れた天然由来の抗アレルギー剤を得ることができる。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】マウスのくしゃみ及び鼻掻き行動の回数を表すグラフ
【図２】脾臓細胞試料中におけるＩｇＥ濃度を表すグラフ
【図３】脾臓細胞試料中におけるＩＬ−２濃度を表すグラフ
【図４】脾臓細胞試料中におけるＩＬ−１２濃度を表すグラフ
【図５】脾臓細胞試料中におけるＩＦＮ−γ濃度を表すグラフ
【図６】脾臓細胞試料中におけるＩＬ−４濃度を表すグラフ
【図７】脾臓細胞試料中におけるＩＬ−５濃度を表すグラフ
【発明を実施するための形態】
【００１１】
前記の通り、本発明は、月桃を低温かつ減圧条件下において乾留（以下、「低温かつ減圧条件下における乾留」を「低温減圧乾留」とする）し、前記乾留により生じた留出分を除去することにより得られる乾留残渣を含む抗アレルギー剤に関する。以下に、本発明の抗アレルギー剤について、詳細に説明する。
【００１２】
１．月桃
本発明の抗アレルギー剤の原料となる月桃（学名：Alpinia zerumbet）は、ショウガ科（Zingiberaceae）に属する植物である。本発明における月桃の使用部位に特に制限はなく、根及び根茎等の地下部、並びに茎、樹皮、幹、葉、花及び果実等の地上部であってもよく、これらの２以上を組み合わせて使用しても良い。
【００１３】
月桃を低温減圧乾留する際に、特に前処理等は必要ない。ただし、低温減圧乾留の効率を上げることや、あらかじめ不要な成分を除去すること等を目的として、月桃に対して粉砕処理、切断処理、乾燥処理、抽出処理、焙煎処理、超音波処理、凍結処理、加熱処理、酵素処理及び発酵処理等の前処理を施しても良い。
【００１４】
なお、月桃に含まれる水分量をあらかじめ制御するため、月桃に対して乾燥処理を施しても良い。乾燥処理を施す場合の月桃の水分量について特に制限はないが、例えば、水分含有量を９０質量％以下とすることが好ましい。水分含有量を前記数値以下とすることにより、低温減圧乾留操作をよりスムーズに進めることにより操作時間をより短縮できる。
【００１５】
２．低温減圧乾留操作
本発明の抗アレルギー剤は、月桃を低温減圧乾留して得られる乾留残渣を含む。低温減圧乾留操作は、例えば、減圧機構を備えた槽状の乾留装置を用いて行われる。具体的には、低温減圧乾留操作は、月桃を乾留装置の槽に投入し、槽を蓋で密閉し、槽の内部を減圧することにより行われる。低温減圧乾留操作においては、必要に応じて、槽を加熱若しくは冷却し及び／又は槽内部の月桃を攪拌しても良い。低温減圧乾留操作により生じた留出分は、槽又は槽の蓋に設けられた配管等を通じて槽の外に除去される。留出分が除去された後、槽の内部に残った乾留残渣を抗アレルギー剤に使用する。
【００１６】
低温減圧乾留操作を行う際の温度条件は、低温であることを条件として、特に制限されない。この場合低温とは、例えば、２０〜９０℃の温度を意味する。しかしながら、温度条件を、例えば、好ましくは２０〜６０℃、より好ましくは２５〜５５℃、さらに好ましくは３０〜５０℃とすることが好ましい。温度条件を前記数値範囲内とすることにより、操作後に得られる乾留残渣の有する抗アレルギー作用を著しく損なうことなく、より高い効率で低温減圧乾留操作を行うことができる。尚、前記低温減圧乾留操作を行う際の温度条件は、全て乾留装置の槽内温度（月桃を入れた槽の内部温度）を意味する。槽内温度は直接測定してもよいし、槽への加熱温度及び減圧後の槽内圧力等を元にして計算しても良い。
【００１７】
低温減圧乾留操作を行う際の槽内の圧力条件は、槽内が減圧されていることを条件として、特に制限されない。しかしながら、圧力条件を、ゲージ圧表記で表す場合には、例えば、好ましくは−８８ｋＰａ以下、より好ましくは−８８〜−１００ｋＰａ、さらに好ましくは−９６〜−１００ｋＰａとすることが好ましい。また、絶対圧表記で表す場合には、例えば、好ましくは１３．３ｋＰａ以下、より好ましくは１．３〜１３．３ｋＰａ、さらに好ましくは１．３〜５．３ｋＰａとすることが好ましい。圧力条件を上記数値範囲内とすることにより、乾留操作に過度な減圧条件を要しないため、低温減圧乾留操作で使用できる機器の選択の幅を必要以上に狭めることがなく、かつより高い効率で低温減圧乾留操作を行うことができる。
【００１８】
月桃に対する低温減圧乾留操作は、乾留後の月桃の水分含有量が０〜１０質量％、好ましくは０〜８質量％、より好ましくは０〜５質量％になるまで行うことが好ましい。低温減圧乾留操作の具体的な操作時間は、使用する月桃の部位や低温減圧乾留する月桃の量等に従って変更して良い。例えば、原料の仕込みや槽内の残渣の取り出しに要する時間、槽内の減圧に要する時間及び槽内を常圧に戻す時間を除き、２〜２４時間程度行って良い。
【００１９】
低温減圧乾留操作により生じた留出分は、前記の通り除去される。除去された留出分は廃棄しても良いし、別の用途、例えば、香料や化粧品等の原料として使用しても良い。
【００２０】
３．抗アレルギー剤
本発明の抗アレルギー剤は、前記のように得られた低温減圧乾留残渣を含む。前記低温減圧乾留残渣は、槽から得られた状態でそのまま抗アレルギー剤に添加しても良い。また、槽から得られた低温減圧乾留残渣を粉砕及び切断等の後処理を行い、当該後処理後の低温減圧乾留残渣を抗アレルギー剤に添加しても良い。さらに、槽から得られた低温減圧乾留残渣を溶媒で抽出し、当該得られた抽出物を抗アレルギー剤に添加しても良い。抽出する際には、化合物を抽出する際に使用されるいかなる溶媒も使用できる。しかしながら、人体への安全性を考慮して、エタノール等のアルコール、水及びこれらの混合溶媒を抽出溶媒として使用することがより好ましい。抽出方法や条件についても特に制限はなく、室温下における抽出、加熱条件下における抽出及び加圧条件下における抽出等により行うことができる。
【００２１】
本発明の抗アレルギー剤は、経口投与、経皮投与又は注射投与用であって良い。投与が容易であることから経口投与用であることがより好ましい。経口投与される抗アレルギー剤の剤型として、例えば、錠剤、丸剤、カプセル剤、散剤及び顆粒剤等の経口投与のための内服用固形剤、並びに水剤、懸濁剤、乳剤、シロップ剤及びエリキシル剤等の内服用液剤が挙げられる。
【００２２】
本発明の抗アレルギー剤は、前記低温減圧乾留残渣又はその抽出物のみを含んでも良いし、これらと医薬品において通常使用されている担体との混合物であっても良い。前記担体の例として、例えば、内服用固形剤においては、例えば、ラクトース、マンニトール、グルコース、非結晶セルロース及びデンプン等の賦形剤、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリビニルピロリドン及びメタケイ酸アルミン酸マグネシウム等の結合材、繊維素グリコール酸カルシウム等の崩壊剤、ステアリン酸マグネシウム等の滑沢剤、グルタミン酸及びアスパラギン酸等の溶解補助剤、並びに安定剤等が挙げられる。製剤化した後に、単一又は複数の層でコーティングしても良い。
前記担体の例として、例えば、内服用液剤においては、例えば、精製水、エタノール又はこれらの混合液等が希釈剤として用いられる。前記希釈剤は、必要に応じて、湿潤剤、懸濁化剤、乳化剤、甘味剤、風味剤、芳香剤、保存剤及び緩衝剤から選択される１又は２以上の成分を含んで良い。
【００２３】
また、本発明の抗アレルギー剤は、さらに、抗アレルギー作用を有する他の物質、例えば、抗ヒスタミン薬や、ほかの植物由来の成分等、例えば、ジャバラの処理物、例えば、ジャバラの乾燥粉末、ジャバラの抽出物又はジャバラを低温減圧乾留して得られる留出物若しくは残渣等も含んで良い。
【００２４】
本発明の抗アレルギー剤における月桃の低温減圧乾留残渣の含有量に特に制限はなく、例えば、月桃の低温減圧乾留残渣を抗アレルギー剤中に１〜１００質量％含んで良い。
【００２５】
本発明の抗アレルギー剤を人体に投与する場合に、その投与量は特に制限されない。例えば、低温減圧乾留残渣を含む抗アレルギー剤を投与する場合、低温減圧乾留残渣の質量として、好ましくは１０〜１０００ｍｇ（乾燥質量）／ｋｇ（体重）／日の量、より好ましくは１５〜９００ｍｇ（乾燥質量）／ｋｇ（体重）／日の量、さらに好ましくは２０〜８００ｍｇ（乾燥質量）／ｋｇ（体重）／日の量となることが好ましい。投与量を前記数値範囲とすることにより、より高い抗アレルギー効果を得ることができる。
【００２６】
本発明の抗アレルギー剤は、アレルギー疾患、例えば、Ｉ型アレルギーに対する予防、治療及び／又は緩和のために使用できる。Ｉ型アレルギーの例として、例えば、ハウスダスト、ダニ、花粉、真菌、トルエンジイソシアネート（ＴＤＩ）及び無水トリメリット酸（ＴＭＡ）等の外来性抗原を抗原とするアレルギー、例えば花粉を抗原とするアレルギーが挙げられる。
【００２７】
以下に、本発明を実施例に基づいてより詳細に説明する。なお、本発明の範囲はこれら実施例の内容に限定されるものではなく、特許請求の範囲に記載した事項の範囲内で様々な変更が可能であることは言うまでもない。
【実施例】
【００２８】
１．月桃の低温減圧乾留残渣の調製
月桃の葉部約３０ｋｇ（水分８０質量％）を、減圧機構を備えた槽状の乾留装置の槽内に投入して、攪拌しながら乾留した。前記乾留の温度条件は３５〜４０℃（加熱温度及び圧力から計算された槽内温度）の間であり、圧力条件は、ゲージ圧で−９８ｋＰａ、絶対圧で３．３ｋＰａであった。低温減圧乾留操作を、留出分を除去しつつ５時間（原料の仕込みや槽内の残渣の取り出しに要する時間、減圧に要する時間、及び常圧に戻す時間を除く）行った。低温減圧乾留操作後、槽内に残った低温減圧乾留残渣を回収した。得られた低温減圧乾留残渣の量は、８ｋｇ（水分含有量約２質量％）であった。
【００２９】
２．抗アレルギー剤の調製
前記得られた月桃の低温減圧乾留残渣を粉砕し、２００メッシュの篩を用いてふるい分けし、篩を通過した粉末（粒径７４μｍ以下の粒子）に精製水を加えることにより抗アレルギー剤（懸濁液）を調製した。前記懸濁液中に含まれる低温減圧乾留残渣の量は、１００ｍｇ／ｍｌであった。
【００３０】
３．スギ花粉抗原アレルギーモデルマウスの作出
１００ μｇ／ｍＬ に調製した日本スギ花粉抗原（Ｃｒｙｊ１；林原産業）リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）溶液０．６ｍＬと、等量の水酸化アルミニウムゲル（和光純薬工業株式会社製）とを混合して混合液を得た。６週令の雌ＢＡＬＢ／ｃマウス（日本エスエルシー株式会社製）の腹腔内に、前記混合液を1匹あたり２００μL注射した。前記注射は、０、７、１４日目に行った。その後、２０日目に体重を測定し、平均体重が等しくなるように３群（ｎ＝６）に分けた（A：対照群、B：病態対照群、C：抗アレルギー剤投与群）。さらに、２１日目からB：病態対照群及びC：抗アレルギー剤投与群のマウスの鼻腔に、１ｍｇ／ｍＬに調製した精製スギ花粉抗原（Ｃｒｙｊ１）ＰＢＳ溶液をそれぞれ１０μLずつ毎日投与した。A:対照群には抗原を含まないＰＢＳを１０μL毎日投与した。また、同時に、C：抗アレルギー剤投与群に対して、５００ｍｇ／ｋｇ／日となるように（５ｍｌ／ｋｇ／日）前記抗アレルギー剤を毎日経口投与した。A:対照群とB：病態対照群には５ml／ｋｇ／日の水を毎日経口投与した。各群における投与の状況を以下の表にまとめてある。
【００３１】
【表１】
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【００３２】
４．スギ花粉抗原による鼻掻き行動の回数測定
３５日目の鼻腔内抗原投与後にマウスを新しい空のプラスチックケージに移して、１５分間の行動をビデオカメラで撮影した。撮影した映像を確認しながら、撮影開始から５分経過時点から１５分経過時点までの間、マウスがくしゃみ及び鼻を触る回数を測定した（１０分間の行動を観察）。くしゃみと鼻掻き行動の回数が以下の表２にまとめられており、表２の数値をグラフ化したものが図１に示されている。
【００３３】
【表２】
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【００３４】
B：病態対照群の回数が、Ａ：対照群の回数と比較して増えていた。この結果から、B：病態対照群のマウスの鼻腔が、花粉により刺激される状態にあったことがわかる。一方で、C：抗アレルギー剤投与群においては、くしゃみ及び鼻掻き行動の回数が、B：病態対照群と比較して低下した。前記低下の程度は、Ａ：対照群と比較して有意な差がない程度である。この結果から、C：抗アレルギー剤投与群においては、投与された抗アレルギー剤が、マウスの鼻腔に対する花粉からの刺激を抑えていたことがわかる。
【００３５】
５．脾臓細胞試料の作成
クリーンベンチ内において、シャーレに、１０％非働化Ｆｅｔａｌ Ｂｏｖｉｎｅ Ｓｅｒｕｍ(ＦＢＳ)、１００μＭ ２−メルカプトエタノール、１００Ｕ／ｍＬペニシリン、１００μｇ／ｍＬ硫酸ストレプトマイシンを含むＲＰＭＩ−１６４０液体培地 (和光純薬工業株式会社製)を培養液として２ｍｌ投入し、氷上で前記液体培地入りのシャーレを冷却した。くしゃみ及び鼻掻き行動の回数を確認した後、三種混合麻酔下でマウスを７０％エタノールで消毒し、脾臓を摘出した。摘出した脾臓を、前記シャーレ内の培養液に浸した。シャーレ内で脾臓を裁断した後、シリンジのピストン部を用いて細胞を押し出し、ピペットを用いて培養液内で懸濁した。シャーレを傾けて２〜３分間静置した後、脾臓細胞を懸濁させた培養液（以下、「細胞懸濁液」）を１ｍＬずつ２本の２ｍＬ容チューブにとり、チューブにとった細胞懸濁液を遠心分離 （２，５００ｒｐｍ、２分間、４℃） した。その上清液を除去した後、新しい前記培養液１ｍＬをそれぞれ新たに加え、沈殿した細胞を懸濁し、遠心分離（２，５００ｒｐｍ、２分間、４℃）し、上清液の除去を行った（洗浄操作）。前記洗浄操作を数回繰り返した後、上清液を除去し、新しい前記培養液１ｍＬをそれぞれ新たに加え、沈殿した細胞を懸濁し、新しい前記培養液を用いて細胞濃度を１×１０７ｃｅｌｌｓ／ｍＬに調製した。その細胞懸濁液を２４ｗｅｌｌ平板マイクロプレートの各ｗｅｌｌに１ｍＬずつ入れ、滅菌ＰＢＳに溶かしたＣｒｙｊ１溶液（５０μｇ／ｍＬ）を２０ μＬ添加し、３７℃、５% ＣＯ２に保持された２４時間暗条件の恒温器内で３日間培養した。３日後、培養後の培養液を遠心分離 （２，５００ｒｐｍ、２分間、４℃） し、その上清をＩｇＥ及びサイトカイン測定の試料とした。なお、A：対照群、B：病態対照群及びC：抗アレルギー剤投与群のそれぞれについて、前記Ｃｒｙｊ１溶液（５０μｇ／ｍＬ）を添加せずに培養したサンプルを調製して、これらサンプルについてもＩｇＥ濃度及びサイトカイン濃度を測定した。
【００３６】
６．ＩｇＥ濃度の測定
前記試料中におけるＩｇＥ濃度をレビスマウスＩｇＥ ＥＬＩＳＡキット（株式会社シバヤギ製）を用いて測定した。各群における脾臓中のＩｇＥの量が以下の表３にまとめられており、表３の数値をグラフ化したものが図２に示されている。なお、表３における「Ｃｒｙｊ１」の列は、脾臓細胞の培養時におけるスギ花粉抗原（Ｃｒｙｊ１）の添加の有無を表す列であり、「＋」はスギ花粉抗原（Ｃｒｙｊ１）の添加があったことを意味する（以下、特に言及しない限り他表においても同じ）。
【００３７】
【表３】
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【００３８】
Ａ：対照群の脾臓からはＩｇＥが検出されなかった。一方で、B：病態対照群の脾臓からはＩｇＥが検出された。したがって、B：病態対照群のマウスは花粉に対するアレルギーを発症していたことがわかる。これに対して、C：抗アレルギー剤投与群については、ＩｇＥの濃度がB：病態対照群の量と比較して有意に低下していた。これらの結果から、本発明の抗アレルギー剤が、スギ花粉に対するアレルギー反応を有意に低下させたことがわかる。
【００３９】
７．脾臓細胞におけるサイトカイン濃度の測定
前記試料中におけるサイトカインの濃度を測定した。サイトカイン濃度の測定は、Ｂｉｏ−Ｐｌｅｘキット（Ｔｈ１／Ｔｈ２）（Ｂｉｏ−Ｒａｄ社製）を用いた。濃度が測定されたサイトカインは、ＩＬ−２、ＩＬ−１２、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−４及びＩＬ−５である。これらサイトカイン濃度の測定結果が、表４に示されている。また、サイトカインごとの濃度をグラフ化したものが、図３〜７に示されている。
【００４０】
【表４】
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【００４１】
C：抗アレルギー剤投与群において、Ｔｈ１サイトカインであるＩＬ−２及びＩＦＮ−γ並びにＴｈ０細胞をＴｈ１細胞に分化誘導させるＩＬ−１２の産生量が、Ｂ：病態対照群と比較して優位に増加している。一方で、C：抗アレルギー剤投与群において、Ｔｈ２サイトカインであるＩＬ−４及びＩＬ−５の産生量が、Ｂ：病態対照群と比較して優位に変化していないか又は優位に減少している。これらの結果は、本発明の抗アレルギー剤が、Ｔｈ１サイトカインを活性化させる一方でＴｈ２サイトカインを抑制し、Ｔｈ１／Ｔｈ２のバランスをＴｈ１側に傾けさせることにより、アレルギー反応を抑制できたことを示している。従って、本発明の抗アレルギー剤が、スギ花粉に対するアレルギー反応を有意に低下させたことがわかる。
【００４２】
８．まとめ
上記実施例の結果から、本発明の抗アレルギー剤が、抗アレルギー作用を有することが明らかとなった。
【産業上の利用可能性】
【００４３】
本発明により、植物由来の抗アレルギー剤が得られる。植物由来の抗アレルギー剤は、従来からの抗ヒスタミン剤と比較して低い副作用が期待され、例えば、眠気を起こしにくい抗アレルギー剤が得られる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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