(57)【要約】【課題】核酸クロマトグラフィー検査を行うにあたり、ストリップへの展開時における検体溶液の揮発やストリップへの接触が生じることによるコンタミネーション、及び検査器具の廃棄によるコンタミネーションを防止することに加え、ＰＣＲチューブなどの容器の開封時に、検体溶液が飛散することによるコンタミネーションも好適に防ぐ。【解決手段】ストリップＳを保持し、検体溶液が収容された容器１００の開口部に嵌合されて、容器１００の開口部を封止しつつ、ストリップＳの先端部を検体溶液に接触させて核酸クロマトグラフィー検査を行う検査器具１に、ストリップＳの先端部側を包囲可能な筒状に形成され、かつ、先端開口端部に穿孔部６１を有する穿孔体６を備える。【選択図】  図３
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
標的核酸を検出するためのプローブが固定化された検出領域を有する遺伝子検査用のストリップを保持し、検体である核酸を含む検体溶液が収容された容器の開口部に嵌合されて、前記容器の開口部を封止しつつ、前記ストリップの先端部を前記検体溶液に接触させて核酸クロマトグラフィー検査を行う核酸クロマトグラフィー検査器具であって、
前記ストリップの先端部側を包囲可能な筒状に形成され、かつ、先端開口端部に穿孔部を有する穿孔体を備えることを特徴とする核酸クロマトグラフィー検査器具。
【請求項２】
前記穿孔部は、前記先端開口端部の開口端縁によって形成されている請求項１に記載の核酸クロマトグラフィー検査器具。
【請求項３】
前記ストリップを挿入可能な中空筒状部を含む本体部を備え、
前記穿孔体が、前記本体部とは別部材として、前記本体部に着脱可能に設けられた請求項１又は２に記載の核酸クロマトグラフィー検査器具。
【請求項４】
前記穿孔体が、前記本体部の開口端部内に押し込まれて装着されるとともに、
前記本体部の開口端部の内周側に、前記穿孔体の押し込み量を規定する段部が形成された請求項３に記載の核酸クロマトグラフィー検査器具。
【請求項５】
前記容器の開口部を封止した際に、前記穿孔体の先端開口部側の外周面が、前記容器の内面に密着可能とした請求項１〜４のいずれか一項に記載の核酸クロマトグラフィー検査器具。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれか一項に記載の核酸クロマトグラフィー検査器具と、
標的核酸を検出するためのプローブが固定化された検出領域を有する遺伝子検査用のストリップと、
少なくとも、一又は二以上のプライマーセットからなるプライマーミックスを含むＰＣＲ用反応試薬と、クロマトグラフィー展開液と、標識用色素を含む染色液と
を含むことを特徴とする核酸クロマトグラフィー検査用キット。
【請求項７】
前記クロマトグラフィー展開液の成分と前記染色液の成分とが、前記ストリップの先端部側に固着されている請求項６に記載の核酸クロマトグラフィー検査用キット。
【請求項８】
請求項１〜５のいずれか一項に記載の核酸クロマトグラフィー検査器具の使用方法であって、
ＰＣＲを行って得られた標的核酸を含む反応液が収容され、シール部材によって開口部が密封された容器に対し、
前記標的核酸を検出するためのプローブが固定化された検出領域を有し、クロマトグラフィー展開液の成分と、標識用色素を含む染色液の成分とが、先端部側に固着された遺伝子検査用のストリップを保持した前記核酸クロマトグラフィー検査器具が備える前記穿孔体により前記シール部材を開封しながら、前記核酸クロマトグラフィー検査器具を前記容器の開口部に嵌合させることによって、前記容器の開口部を封止しつつ、前記ストリップの先端部を前記反応液に接触させ、
前記反応液を前記ストリップに展開させて、前記ストリップに固定化された前記プローブと結合した前記反応液中の前記標的核酸を前記標識用色素により検出し、
前記核酸クロマトグラフィー検査器具が前記容器に嵌合した状態で、前記核酸クロマトグラフィー検査器具、前記ストリップ及び前記容器を廃棄することを特徴とする核酸クロマトグラフィー検査器具の使用方法。
【請求項９】
請求項１〜５のいずれか一項に記載の核酸クロマトグラフィー検査器具の使用方法であって、
ＰＣＲを行って得られた標的核酸と、クロマトグラフィー展開液と、標識用色素を含む染色液とを含む反応液が収容され、シール部材によって開口部が密封された容器に対し、
前記標的核酸を検出するためのプローブが固定化された検出領域を有する遺伝子検査用のストリップを保持した前記核酸クロマトグラフィー検査器具が備える穿孔体により前記シール部材を開封しながら、前記核酸クロマトグラフィー検査器具を前記容器の開口部に嵌合させることによって、前記ストリップの先端部を前記反応液に接触させ、
前記反応液を前記ストリップに展開させて、前記ストリップに固定化された前記プローブと結合した前記反応液中の前記標的核酸を前記標識用色素により検出し、
前記核酸クロマトグラフィー検査器具が前記容器に嵌合した状態で、前記核酸クロマトグラフィー検査器具、前記ストリップ及び前記容器を廃棄することを特徴とする核酸クロマトグラフィー検査器具の使用方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、核酸クロマトグラフィー技術に関し、特に、プローブが固定化された遺伝子検査用のストリップを用いて標的核酸を検出する核酸クロマトグラフィー検査器具、核酸クロマトグラフィー検査キット、及び核酸クロマトグラフィー検査器具の使用方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
核酸クロマト法を行うにあたっては、一般的に、プローブが固定化された遺伝子検査用のストリップを用いて、標的核酸をストリップに固定化されたプローブにハイブリダイズ（相補的に結合）させることによって、検出が行われている。
具体的には、検査対象の試料からゲノムＤＮＡを抽出して、ＰＣＲ（polymerase chain reaction）法などにより標的核酸を増幅し、得られた増幅産物を含む反応液に遺伝子検査用ストリップを接触させて、増幅産物をストリップに展開させ、増幅産物をストリップ上に固定化されたプローブとハイブリダイズさせて、プローブとハイブリダイズした増幅産物に結合する標識用色素を目視で確認することによって、標的核酸の検出を行う。
【０００３】
このとき、抽出したゲノムＤＮＡをＰＣＲ反応試薬とともにＰＣＲチューブに入れてＰＣＲを行った後、標識用色素を含むクロマトグラフィー展開液をＰＣＲチューブに混合して、増幅産物の着色が行われていた。そして、このＰＣＲチューブ内の反応液（検体である核酸を含む検体溶液）に遺伝子検査用ストリップを接触させて、反応液を毛細管現象によってストリップに展開させ、ストリップに固定化されたプローブにハイブリダイズした増幅産物により示される着色されたラインを確認することが行われていた。
【０００４】
このような核酸クロマト法は、例えば、特許文献１に記載の検体検査用具を用いて行うことができる。すなわち、このような検体検査用具（遺伝子検査用ストリップなど）を用いれば、一般に小型で逆円錐形状であるＰＣＲチューブに挿入する場合でも適用することが可能とされている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２０１０−１４５０７号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
このような検体検査用具をＰＣＲチューブに挿入して、核酸クロマト法を行う場合、増幅産物のストリップへの展開が、開放系で行われることから、コンタミネーションの虞があるという問題があった。
【０００７】
具体的には次の４つのコンタミネーションリスクが考えられ、手指、他の検体、実験器具、作業服、環境などのコンタミネーションが発生すると実験結果に悪影響を与える可能性がある。
（１）ＰＣＲチューブの開封時に、検体溶液が飛散する場合
（２）ストリップへの展開時に、検体溶液の揮発によって飛散する場合
（３）ストリップへの展開時に、手指や他のストリップへの接触が生じる場合
（４）検査終了後に、廃棄した検査器具から飛散する場合
【０００８】
ここで、コンタミネーションを抑制するための技術として、本出願人は、先に、特願２０１７−１６３１５３において、核酸クロマトグラフィー検査器具を提案した。この検査器具によれば、ストリップの大部分を検査器具で覆うことができ、またストリップを内蔵した検査器具がＰＣＲチューブに嵌合された状態で試験が行われるため、ストリップへの展開時のコンタミネーション、すなわち、前述の（２）、（３）のコンタミネーションリスクを好適に防ぐことが可能となった。さらに、この検査器具によれば、検査終了後には、検査器具とＰＣＲチューブが嵌合された閉鎖系のまま検査器具を廃棄することができるため、前述の（４）に記載のコンタミネーションリスクも好適に防ぐことが可能である。
【０００９】
しかしながら、前述の（１）のコンタミネーションリスクに対しては、ＰＣＲチューブの蓋を開放するのに先立って、遠心機などによって蓋の裏側やＰＣＲチューブの上方内壁についた溶液を振り落として底部に沈降させるといった手法が用いられていたものの、ＰＣＲチューブの蓋を手で開封する際の衝撃によるコンタミネーションが懸念され、さらなる改善が求められていた。
【００１０】
そこで、本発明者らは、鋭意研究して、前述した４つのコンタミネーションリスクの全て、特に、前述の（１）のコンタミネーションリスクに好適に対応することができる核酸クロマトグラフィー検査器具、核酸クロマトグラフィー検査キット、及び核酸クロマトグラフィー検査器具を開発することに成功し、本発明を完成させた。
【００１１】
すなわち、本発明は、ストリップへの展開時における検体溶液の揮発やストリップへの接触が生じることによるコンタミネーション及び検査器具の廃棄によるコンタミネーションを防止することに加え、ＰＣＲチューブなどの容器の開封時に、検体溶液が飛散することによるコンタミネーションも好適に防ぐことが可能な核酸クロマトグラフィー検査器具、核酸クロマトグラフィー検査キット、及び核酸クロマトグラフィー検査器具の使用方法の提供を目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明に係る核酸クロマトグラフィー検査器具は、標的核酸を検出するためのプローブが固定化された検出領域を有する遺伝子検査用のストリップを保持し、検体である核酸を含む検体溶液が収容された容器の開口部に嵌合されて、前記容器の開口部を封止しつつ、前記ストリップの先端部を前記検体溶液に接触させて核酸クロマトグラフィー検査を行う核酸クロマトグラフィー検査器具であって、前記ストリップの先端部側を包囲可能な筒状に形成され、かつ、先端開口端部に穿孔部を有する穿孔体を備える構成としてある。
【００１３】
また、本発明に係る核酸クロマトグラフィー検査キットは、上記核酸クロマトグラフィー検査器具と、標的核酸を検出するためのプローブが固定化された検出領域を有する遺伝子検査用のストリップと、少なくとも、一又は二以上のプライマーセットからなるプライマーミックスを含むＰＣＲ用反応試薬と、クロマトグラフィー展開液と、標識用色素を含む染色液とを含む構成としてある。
【００１４】
また、本発明に係る核酸クロマトグラフィー検査器具の使用方法は、上記核酸クロマトグラフィー検査器具の使用方法であって、ＰＣＲを行って得られた標的核酸を含む反応液が収容され、シール部材によって開口部が密封された容器に対し、前記標的核酸を検出するためのプローブが固定化された検出領域を有し、クロマトグラフィー展開液の成分と、標識用色素を含む染色液の成分とが、先端部側に固着された遺伝子検査用のストリップを保持した前記核酸クロマトグラフィー検査器具が備える前記穿孔体により前記シール部材を開封しながら、前記核酸クロマトグラフィー検査器具を前記容器の開口部に嵌合させることによって、前記容器の開口部を封止しつつ、前記ストリップの先端部を前記反応液に接触させ、前記反応液を前記ストリップに展開させて、前記ストリップに固定化された前記プローブと結合した前記反応液中の前記標的核酸を前記標識用色素により検出し、前記核酸クロマトグラフィー検査器具が前記容器に嵌合した状態で、前記核酸クロマトグラフィー検査器具、前記ストリップ及び前記容器を廃棄する方法としてある。
【００１５】
また、本発明に係る核酸クロマトグラフィー検査器具の使用方法は、上記核酸クロマトグラフィー検査器具の使用方法であって、ＰＣＲを行って得られた標的核酸と、クロマトグラフィー展開液と、標識用色素を含む染色液とを含む反応液が収容され、シール部材によって開口部が密封された容器に対し、前記標的核酸を検出するためのプローブが固定化された検出領域を有する遺伝子検査用のストリップを保持した前記核酸クロマトグラフィー検査器具が備える穿孔体により前記シール部材を開封しながら、前記核酸クロマトグラフィー検査器具を前記容器の開口部に嵌合させることによって、前記ストリップの先端部を前記反応液に接触させ、前記反応液を前記ストリップに展開させて、前記ストリップに固定化された前記プローブと結合した前記反応液中の前記標的核酸を前記標識用色素により検出し、前記核酸クロマトグラフィー検査器具が前記容器に嵌合した状態で、前記核酸クロマトグラフィー検査器具、前記ストリップ及び前記容器を廃棄する方法とすることもできる。
【発明の効果】
【００１６】
本発明によれば、核酸クロマトグラフィー検査を行うにあたり、ストリップへの展開時における検体溶液の揮発やストリップへの接触が生じることによるコンタミネーション及び検査器具の廃棄によるコンタミネーションを防止することに加え、ＰＣＲチューブなどの容器の開封時に、検体溶液が飛散する場合のコンタミネーションも好適に防ぐことができる。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】本発明の実施形態に係る核酸クロマトグラフィー検査器具を斜視して示す説明図である。
【図２】図１（ｃ）のＡ−Ａ断面図である。
【図３】本発明の実施形態に係る核酸クロマトグラフィー検査器具を容器の開口部に嵌合させる前後の状態を示す説明図である。
【図４】図３（ｂ）の要部を示す縦断面図である。
【図５】本発明の実施形態に係る核酸クロマトグラフィー検査器具が備える穿孔体の例を示す説明図である。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
以下、本発明の核酸クロマトグラフィー検査器具、核酸クロマトグラフィー検査キット、及び核酸クロマトグラフィー検査器具の使用方法の好ましい実施形態について、図面を参照して説明する。
【００１９】
［核酸クロマトグラフィー検査器具］
まず、本発明の実施形態に係る核酸クロマトグラフィー検査器具について説明する。
【００２０】
本発明に係る核酸クロマトグラフィー検査器具は、標的核酸を検出するためのプローブが固定化された検出領域Ｓ２を有する遺伝子検査用のストリップＳを保持し、検体である核酸を含む検体溶液（例えば、ＰＣＲ反応液など）が収容された容器（例えば、ＰＣＲチューブなど）１００の開口部に嵌合されて、かかる容器１００の開口部を封止しつつ、ストリップＳの先端部を検体溶液に接触させて核酸クロマトグラフィー検査を行うためのものである。
【００２１】
遺伝子検査用のストリップＳとしては、ＰＣＲ反応液などの検体溶液を染み込ませることによって展開が開始される展開開始領域Ｓ１と、一又は二以上のプローブがライン状に固定化された検出領域Ｓ２と、吸水を促す吸水促進領域Ｓ３とが、この順に先端部側から連続して形成されたものを用いることができるが、かかるストリップＳの詳細については後述する。
【００２２】
本発明の実施形態として図示する検査器具１は、ストリップＳを挿入可能な中空筒状部４を含む本体部２を備えており、保持するストリップＳの先端部側が、本体部２の下端側の開口端部から所定の長さで突出するように形成されている（図２参照）。
なお、本発明にあっては、検査時の姿勢（図３参照）を想定して、上下左右及び縦横の方向を規定するものとする。
【００２３】
本実施形態において、本体部２は、その中空筒状部４に挿入されたストリップＳを保持するストリップ保持部３を有しており、ストリップ保持部３には、ヒンジ部５０を介して本体部２に接続された蓋部５が設けられている。そして、ヒンジ部５０を軸に回動させて蓋部５を閉じることによって、中空筒状部４の内部にストリップＳを挿入するための挿入部４ａが閉鎖され、このとき、蓋部５側に形成された嵌合爪５ａが、本体部２側に形成された嵌合切り欠き部３ａに嵌入して、これらが互いに嵌合することによって、蓋部５が閉じられた状態に維持できるようにしている。
なお、図１（ａ）及び図１（ｂ）は、蓋部５が開いた状態を示しており、図１（ｃ）は、蓋部５が閉じられた状態を示している。
【００２４】
また、ストリップ保持部３には、ストリップＳを位置決めされた状態で保持するための溝Ｇが形成されている。かかる溝Ｇは、ストリップＳの横幅とほぼ等しい溝幅とされ、ストリップＳの上端縁を溝Ｇの末端部に突き当てることによって（図１（ｂ）及び図２参照）、ストリップＳの先端部側が、本体部２の下端側の開口端部から所定の長さで突出するように、ストリップＳの位置決めがなされるように形成することができる。一方、蓋部５側には、蓋部５を閉じたときに溝Ｇに対向する位置に、ストリップＳを押さえて固定する押さえ部５１が形成されている。
【００２５】
このような構成とすることで、蓋部５が開いた状態にあるときに、挿入部４ａから中空筒状部４の内部にストリップＳを挿入し、ストリップＳを溝Ｇ内で位置決めした後に、蓋部５を閉じることによって、押さえ部５１によって固定された状態で、ストリップＳを保持することができる。このとき、溝Ｇの周辺部と蓋部５とが面接触するように形成することで、蓋部５を閉じて挿入部４ａを閉鎖する際の密閉性を高めることができる。
【００２６】
また、ストリップ保持部３にストリップＳを保持するに際し、ストリップＳは、押さえ部５１によって押し付けられて溝Ｇの溝底面に密着する。このとき、ストリップＳの検出領域Ｓ２が溝Ｇに密着していると、検出領域Ｓ２に展開してきた検体溶液が、検出領域Ｓ２と溝Ｇとの界面に発現する毛細管現象によって、溝Ｇ側に浸み出して吸い上げられてしまい、標的核酸が検出できなくなってしまう虞がある。
【００２７】
したがって、ストリップＳは、本体部２に対して検出領域Ｓ２が非接触で保持されるようにするのが好ましい。このため、本実施形態では、ストリップ保持部３には、ストリップＳの吸水促進領域Ｓ３の一部又は全部が保持されるようにするとともに、ストリップＳが挿入される中空筒状部４の内径を適宜設計して、ストリップＳの検出領域Ｓ２が本体部２に接触しないようにしている（図２参照）。
【００２８】
また、本体部２の中空筒状部４は、ストリップ保持部３にストリップＳを保持した状態において、ストリップＳの検出領域Ｓ２に対して平行（略平行を含む）な平面部４０を備えているのが好ましい。このような構成とすることで、検査結果をより視認し易くすることができる。さらに、ＣＣＤカメラなどの撮影手段によってストリップＳの検出領域Ｓ２を自動的に撮影する場合には、その撮影をより確実に行うことが可能となる。
また、平面部４０において、ストリップＳの検出領域Ｓ２のラインの形成位置に対応する位置に、検査対象の微生物名などの説明を記載又は貼付等することにより表示させることも好ましい。このようにすれば、核酸クロマトグラフィー検査を一層容易に実施可能にすることができる。
【００２９】
本体部２は、全部透明であっても、一部が透明であってもよく、少なくとも本体部２の外部から、ストリップＳの検出領域Ｓ２に示される検査結果を視認可能であればよい。コストや成形の観点からは、全部透明であることが好ましい。
なお、「透明」には、無色透明の他、有色透明も含まれ、光を透過可能であることを意味する。
【００３０】
このような透明部材としては、例えば、ポリスチレン、ポリカーボネート、ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）、メチルメタクリレート（ＭＭＡ）などのアクリル樹脂、ポリエチレン、高密度ポリエチレン（ＨＤＰＥ）、ポリプロピレン、環状オレフィンなどのオレフィン系樹脂等を好適に用いることができる。これらのなかでも、本体部２とストリップＳとが接触する界面にＰＣＲ反応液などが浸み出してしまうのを抑制する上で、ＰＣＲ反応液などに対する濡れ性が低い無極性樹脂であるポリオレフィン系樹脂が好ましく、樹脂の硬さや成形性からポリプロピレンが特に好ましい。
【００３１】
また、本体部２の内面が曇り、検査結果が視認しづらくなることを防ぐために、本体部２の内面を、防曇処理を施したものとすることも好ましい。このような防曇処理は、本体部２又は本体部２の少なくとも内面を、防曇剤を含有する樹脂を用いて成形することにより行うことができる。また、本体部２の内面への紫外線硬化型防曇塗料の塗布や防曇処理フィルムの貼付等により行うこともできる。
【００３２】
防曇剤としては、例えば、グリセリンモノオレート，グリセリンラウレート，グリセリンカプレート，ジグリセリンオレート，ジグリセリンラウレート，トリグリセリンオレート等のグリセリン脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン脂肪アルコール、ポリエチレングリコールオレート，ポリエチレングリコールラウレート等のポリエチレングリコール脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステルなどが挙げられる。
【００３３】
防曇剤を添加するにあたり、その添加量は０．１〜５質量％であるのが好ましく、より好ましくは１．２〜２．４質量％である。防曇剤の添加量が０．１質量％に満たないと、防曇剤を添加したことによる改善効果が十分に得られない傾向がある。一方、防曇剤の添加量が５質量％を超えると、それ以上の改善効果が認められず、また、本体部２の透明性の低下や、ブリード量が多くなることによる金型清掃頻度の増加、ベント詰まりの発生につながり、連続成形性が低下する傾向がある。
【００３４】
本体部２の透明性を高めるには、透明核剤を添加するのも有効である。透明核剤としては、リン酸エステル金属塩、ピメリン酸金属塩、ロジン金属塩、ベンジリデンソルビトール、キナクリドン、シアニンブルー、タルクなどが挙げられる。
【００３５】
透明核剤を添加するにあたり、その添加量は０．１〜１０質量％であるのが好ましい。透明核剤の添加量が０．１質量％に満たないと、透明核剤を添加したことによる改善効果が十分に得られない傾向がある。一方、透明核剤の添加量が１０質量％を超えると、それ以上の改善効果が認められず、臭気を発したり、ブリードアウトして表面物性に悪影響を与えたりしてしまう傾向がある。
【００３６】
また、本体部２は、検査器具１をＰＣＲチューブなどの容器１００の開口部に嵌合させたときに、容器１００の開口部を封止するための封止部４１を有している。封止部４１は、本体部２の開口端部側に形成され、容器１００の開口部を封止した状態で、本体部２の開口端部から突出するストリップＳの先端部が、容器１００に収容されたＰＣＲ反応液などの検体溶液に接触するように形成することができる（図４参照）。
【００３７】
例えば、検査器具１を容器１００の開口部に押し込んで嵌合させる場合、封止部４１は、その外周面を、容器１００の開口部の内周面と同一形状に形成するとともに、容器１００の開口部端縁に当接するなどして、その押し込み量を規定する押込量規定部４２を備えるように形成することができる（図３参照）。押込量規定部４２を備えることで、押し込みが浅い場合に生じる液漏れを防止できるとともに、ストリップＳの先端部を検体溶液に確実に接触させることができる。
【００３８】
本実施形態において、押込量規定部４２は、封止部４１の側面の二箇所に、略直方体形状の突出部として対称に形成されているが、これに限定されるものではなく、押し込み量を一定の値に設定できればその他の構成としてもよい。例えば、封止部４１の側面の三箇所以上に突出部として形成してもよく、また、封止部４１の周りを囲む一個の突出部として形成してもよい。
【００３９】
なお、本体部２の開口端部から突出させるストリップＳの先端部側の長さは、検査器具１を容器１００の開口部に押し込んだ際に、押込量規定部４２によって規定される押し込み量との関係から、ストリップＳの先端部が容器１００の底部に達することなく、かつ、容器１００内に収容された検体溶液に接触するように、容器１００の形状や、収容される検体溶液の量などを考慮して適宜設定することができる。
【００４０】
また、本実施形態において、検査器具１は、上述したような本体部２とともに、本体部２の開口端部から突出するストリップＳの先端部側を包囲可能な筒状に形成され、かつ、先端開口端部に穿孔部６１を有する穿孔体６を備えている。
【００４１】
検査器具１が、このような穿孔体６を備えることで、検査器具１をＰＣＲチューブなどの容器１００の開口部に押し込んで嵌合させる際に、本体部２の開口端部から突出するストリップＳの先端部側を保護しつつ、容器１００の開口部を密封するシール部材１０１を、穿孔部６１で穿つ（突き破る）ことによって開封することができる。したがって、本実施形態によれば、核酸クロマトグラフィー検査を行うにあたり、ＰＣＲチューブなどの容器１００を手で開封する必要がなくなり、前述の（１）のコンタミネーションリスク、すなわち、ＰＣＲチューブなどの容器１００の開封時に、検体溶液が飛散する場合のコンタミネーションも好適に防ぐことができる。
【００４２】
なお、図３（ａ）は、検査器具１を容器１００の開口部に嵌合させる前の状態、図３（ｂ）は、検査器具１を容器１００の開口部に嵌合させた後の状態を示しており、図４は、図３（ｂ）の鎖線で囲む部分の縦断面を示している。
【００４３】
容器１００の開口部を密封するシール部材１０１の詳細については後述するが、穿孔体６の穿孔部６１は、当該シール部材１０１を穿つことによって開封することができれば、その具体的な態様は限定されない。
【００４４】
例えば、図５（ａ）〜（ｃ）に示すように、穿孔体６の先端開口端部の開口端縁を鋭利な形状とするなどして、穿孔体６の先端開口端部の開口端縁によって、穿孔部６１が形成されるようにすることができる。穿孔体６の先端開口端部の開口端縁によって穿孔部６１を形成すれば、穿孔体６の先端開口端部が塞がれて、ストリップＳの先端部を検体溶液に接触させる妨げになるなどの不具合が生じないようにすることができる。
また、穿孔体６の先端開口端部を塞がない限り、例えば、図５（ｄ）に示すように、先端が尖った形状とされた穿孔部６１を、穿孔体６の先端開口端部の内周側に接続するように形成することもできる。さらに、穿孔部６１を別部材により形成して、これを穿孔体６の先端開口端部に取り付けるようにしてもよい。穿孔部６１を別部材により形成する場合には、金属刃とすることもできる。
なお、図５は、穿孔体６の各例を穿孔部６１側から斜視して示している。
【００４５】
また、本実施形態において、穿孔体６は、本体部２とは別部材として、本体部２に着脱可能に設けられるようにしている。このようにすることで、成形上の制限を少なくして、検査器具１の設計の自由度を高めることができるが、必要に応じて、本体部２と穿孔体６とを一体の部材として形成することもできる。
【００４６】
また、穿孔体６を本体部２に着脱可能とするにあたり、先端開口端部と反対側の端部が挿入部６２とされている。そして、この挿入部６２の外周面を、本体部２の開口端部の内周面と同一形状に形成して、挿入部６２を本体部２の開口端部内に押し込むことによって、穿孔体６が本体部２に装着されるようにすることができる。
【００４７】
このとき、穿孔体６が本体部２の開口端部内に必要以上に深く押し込まれて、穿孔体６の先端開口部からストリップＳの先端部がはみ出てしまうのは、容器１００を密封するシール部材１０１を開封する際に、ストリップＳの先端部側を保護する上で好ましくない。このため、本体部２の開口端部の内周側には、穿孔体６の挿入部６２の端縁に当接する段部４３を形成しておき、その押し込み量を規定できるようにするのが好ましい（図２参照）。
【００４８】
また、穿孔体６の形状は、容器１００の形状に応じて適宜設計することができる。例えば、容器１００として、図３に示すようなＰＣＲチューブを用いる場合には、ＰＣＲチューブの形状に応じて、先細り状に形成することができる。そして、容器１００の形状に応じて穿孔体６の形状を設計するにあたっては、検査器具１で容器１００の開口部を封止した際に、穿孔体６の先端開口部側の外周面が、容器１００の内面に密着可能となるようにするのが好ましい。
【００４９】
穿孔体６の先端開口部側の外周面が、容器１００の内面に密着する範囲は、容器１００に収容される検体溶液の量に応じて、穿孔体６と容器１００との間に形成される間隙に、検体溶液が回り込んでしまうのを防ぐことができるように適宜設定することができる（図４参照）。このようにすることで、検査器具１で容器１００の開口部を封止した状態における液漏れを、より確実に防止することができる。
【００５０】
以上のような本実施形態によれば、検査器具１によって容器１００の開口部を封止して、検体溶液やストリップＳが外部から隔絶された状態で核酸クロマトグラフィー検査を行うことができるため、ストリップＳへの展開時における検体溶液の揮発やストリップＳへの接触が生じることによるコンタミネーションを防止することができる。さらに、検査終了後は、検査器具１によって容器１００の開口部を封止しまま廃棄することで、廃棄によるコンタミネーションを防止することができる。そして、これらに加え、ＰＣＲチューブなどの容器１００の開封時に、検体溶液が飛散する場合のコンタミネーションも好適に防ぐことができる。
【００５１】
［核酸クロマトグラフィー検査用キット］
本実施形態に係る核酸クロマトグラフィー検査用キットは、上述した核酸クロマトグラフィー検査器具１と、標的核酸を検出するためのプローブが固定化された検出領域Ｓ２を有する遺伝子検査用のストリップＳと、少なくとも、一又は二以上のプライマーセットからなるプライマーミックスを含むＰＣＲ用反応試薬と、クロマトグラフィー展開液と、標識用色素を含む染色液とを含むものとすることができる。標識用色素を含む染色液は、クロマトグラフィー展開液に混合されていてもよい。
かかるキットには、ＰＣＲを行うためのＰＣＲチューブなどの容器１００や、容器１００の開口部を密封するシール部材１０１などを含めることができるのはいうまでもない。
【００５２】
容器１００として、ＰＣＲチューブを用いる場合には、図３に示すものに限らず、複数のチューブが連結された多連式のチューブであってもよい。
【００５３】
シール部材１０１としては、例えば、容器１００の開口部にヒートシール可能なフィルム材などを用いることができ、アルミシール、プラスチックフィルムなどを例示することができる。このようなフィルム材の厚みは、検査器具１が備える穿孔体６によって穿つことができる程度の厚みとし、必要に応じて、レーザーなどを用いてハーフカット処理を施すことで、検査器具１が備える穿孔体６によって穿ち易くすることもできる。
穿孔部６１で穿たれて破断したシール部材１０１の断片は、容器１００内に引き込まれて、検査器具１の封止体４１と容器１００との間に挟まれた状態で、検査器具１が容器１００の開口部に嵌合されることになる。このとき、破断した断片を咬んで隙間が生じるなどして、検査器具１による容器１００の開口部の封止に支障を来たすことがないようにするには、シール部材１０１としては、十分に薄いフィルム材を用いて、これを容器１００の開口部にヒートシールするのが好ましいが、これに限定されない。検査器具１が備える穿孔体６により穿つことができ、かつ、検査器具１による容器１００の開口部の封止に支障を来たすことがなければ、シール部材１０１は、容器１００の開口部に嵌合可能な蓋状又は栓状の部材とすることもできる。
【００５４】
遺伝子検査用のストリップＳは、増幅産物を捕捉するためのプローブが固定化された細長の部材であり、液体が毛細管現象によって部材全体に浸透し、展開しやすいように形成される。このため、ストリップＳの部材としてはセルロースメンブランなどのセルロース等が好適に用いられる。また、ストリップＳに強度を持たせて取り扱いを容易にするために、その一方の面に樹脂シート（又はフィルム）を接着したものを用いても良い。
【００５５】
ストリップＳには、ＰＣＲ反応液を染み込ませることによって展開が開始される展開開始領域Ｓ１と、一又は二以上のプローブがライン状に固定化された検出領域Ｓ２と、吸水を促す吸水促進領域Ｓ３とが、この順に先端部側から連続して形成されている。
【００５６】
展開開始領域Ｓ１は、ＰＣＲ反応液を最初に染み込ませる部分である。展開開始領域Ｓ１は、検出領域Ｓ２に隣接して連続して形成されており、展開開始領域Ｓ１に染み込んだ液体は、毛細管現象によって検出領域Ｓ２へ展開する。
なお、ＰＣＲ反応液が収容された容器１００が浅底のものである場合などには、展開開始領域Ｓ１がストリップＳにおけるごく僅かな部分である場合もあり得る。
【００５７】
検出領域Ｓ２には、プローブが固定化された一又は二以上の領域（スポット）がストリップＳの短手方向にライン状に形成（スポッティング）されている。このプローブが固定化されたラインの数は、特に限定されず、例えば１〜１５個、好適には８〜１２個等のラインが形成されたものなどを用いることができる。
このようなライン状に固定化されたプローブにハイブリダイズした増幅産物に対して、例えば青色の標識用色素が結合すると、検出領域Ｓ２上において、青色のラインを目視によって検出できる。また、検出領域Ｓ２には、プローブが固定化されたラインの位置を明確に確認できるようにするために、その他の色のライン、例えば赤色のラインが、位置決めマーカーとして好適に配置される。標識用色素は、特に限定されないが、例えばアビジン・ビオチンシステムによるものを好適に用いることができる。
【００５８】
吸水促進領域Ｓ３は、展開開始領域Ｓ１と反対側の検出領域Ｓ２に隣接して連続して形成される。吸水促進領域Ｓ３は、例えば、ストリップＳ上に吸水パッドやセルロース等の吸水部材Ｓ３０を積層して構成でき、このような吸水部材Ｓ３０によってストリップＳに展開した水分の吸水を促進させることができる。また、このようにストリップＳに部材を積層して厚みを増加させた領域を形成することによって、ストリップＳをより取り扱い易くすることもできる。さらに、吸水促進領域Ｓ３は、吸湿性を有するものとすることもできる。このように、吸水促進領域Ｓ３を、吸湿性を有するものとすれば、本体部２とＰＣＲチューブなどの容器１００内に形成された密閉空間内の湿度を低減でき、本体部２の内面に結露が生じて観察ができなくなることを抑制することが可能となる。このような観点から、吸水促進領域Ｓ３に乾燥剤等の部材を積層することも好ましい。
なお、ストリップＳにおいて、吸水促進領域Ｓ３を省略することもできる。
【００５９】
ＰＣＲ用反応試薬としては、例えば、プライマーミックスの他、ＤＮＡポリメラーゼ、核酸合成基質、ＰＣＲバッファー等を含むものを好適に用いることができる。
クロマトグラフィー展開液としては、例えば、ＤＮＡ解離剤、尿素等を含むものを好適に用いることができる。染色液としては、標識用色素（着色ビーズ、例えばアビジン・ビオチンシステムによるものなど）、ブロッキング剤、界面活性剤、塩濃度調整バッファー等を含むものを好適に用いることができる。クロマトグラフィー展開液と染色液は、例えば、これらを乾燥させるなどして、その成分をストリップＳの先端部側に固着させておくこともできる。
【００６０】
［核酸クロマト法のプロトコル］
次に、本実施形態に係る核酸クロマトグラフィー検査器具に適用可能な核酸クロマト法のプロトコルについて説明するが、本発明は、当該プロトコルでの使用に限定されるものではない。
【００６１】
核酸クロマト法は、標的核酸が、遺伝子検査用のストリップ内を一定方向に移動（展開）することにより、ストリップにスポッティングされているプローブに補足されるとともに、プローブが固定化されたスポットにおいて標的核酸が濃縮されることで、その標的核酸に結合した標識用色素により目視できるレベルまでの発色を得て、標的核酸を検出するものである。
【００６２】
まず、標的核酸の増幅処理をＰＣＲ法などによって行う。これによって得られ得る増幅産物は、標的核酸からなる。
なお、標的核酸の増幅処理は、ＰＣＲ法に限定されるものではなく、リガーゼ連鎖反応、ＴＭＡ（Transcription Mediated Amplification）、ＮＡＳＢＡ（Nucleic Acid Sequence-Based Amplification）等のその他の方法により行うこともできる。
【００６３】
具体的には、検査対象生物のゲノムＤＮＡにおける標的核酸を増幅させるためのプライマーセットを含むＰＣＲ反応試薬をＰＣＲチューブへ注入する。プライマーセットとしては、一又は二以上のプライマーセットからなるプライマーミックスを用いることができ、複数の標的核酸を同時に増幅するマルチプレックスＰＣＲを行うこともできる。
【００６４】
ＰＣＲ反応試薬には、プライマーセットの他、核酸合成基質（例えば、ｄＮＴＰｍｉｘｔｕｒｅ（dCTP、dATP、dTTP、dGTP））、核酸合成酵素（例えば、ＥＸ  Ｔａｑ  ＨｏｔＳｔａｒｔ  ＤＮＡ  ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ）、緩衝液等が含まれる。
また、ＰＣＲ反応試薬をＰＣＲチューブへ注入する際に、クロマトグラフィー展開液と標識用色素を含む染色液を併せて添加する。クロマトグラフィー展開液と標識用色素を含む染色液は、これらの成分をストリップの先端部側に固着させておくことで、ＰＣＲ反応試薬への添加を省略してもよい。
【００６５】
そして、ＰＣＲチューブには、このようなＰＣＲ反応試薬と、生体試料から抽出されたゲノムＤＮＡ、及び残りの成分として水を含む溶液が注入され、この溶液がＰＣＲに使用する反応液として用いられる。これらを注入した後に、ＰＣＲチューブの開口部をシール部材で密封する。
【００６６】
ゲノムＤＮＡの抽出は、ＣＴＡＢ法（Cetyl  trimethyl  ammonium  bromide）による方法やＤＮＡ抽出装置を用いる方法など、一般的な手法により行うことができる。
また、ＰＣＲ装置としては、一般的なサーマルサイクラーなどを用いることができる。ＰＣＲ反応は、例えば以下のような反応条件で行うことができるが、適宜変更して実施可能であり、全体を１５〜３０分程度で行っても良い。
（ａ）９５℃  ２分、（ｂ）９５℃（ＤＮＡ変性工程）  １０秒、（ｃ）６０℃（アニーリング工程）  ２０秒、（ｄ）７２℃（ＤＮＡ合成工程）  ９０秒（（ｂ）〜（ｄ）を４０サイクル）。
【００６７】
次に、ＰＣＲによって得られた増幅産物（標的核酸）を含むＰＣＲ反応液を遺伝子検査用のストリップに展開させる。
ストリップにおける展開開始領域に対して、ＰＣＲ反応液を染み込ませると、ＰＣＲ反応液は、展開開始領域から検出領域へ展開する。そして、検出領域に固定化されたプローブと相補的な塩基配列を有する増幅産物がＰＣＲ反応液に含まれている場合、そのプローブと増幅産物がハイブリダイズする。
また、複数種類のプローブがストリップ上に個別にライン状に固定化され、各プローブにそれぞれハイブリダイズする増幅産物がマルチプレックスＰＣＲにより得られてＰＣＲ反応液に含まれている場合も同様に、それぞれ対応するプローブと増幅産物がハイブリダイズする。
【００６８】
また、増幅産物には標識用色素が結合されているため、プローブが固定化された位置に着色されたラインが現れる。
このように、ストリップ上の着色されたラインを確認することによって、標的核酸を検出することができる。
【００６９】
［核酸クロマトグラフィー検査器具の使用方法］
次に、本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査器具の使用方法について説明する。
【００７０】
まず、図１（ａ）に示すように、本体部２に穿孔体６が装着され、蓋部５が開いた状態にある検査器具１に対して、標的核酸を検出するためのプローブが固定化された検出領域を有するストリップＳを挿入部４ａから本体部２の中空筒状部４の内部に挿入する。次いで、図１（ｂ）に示すように、本体部２のストリップ保持部３に形成された溝Ｇの末端部に、ストリップＳの上端縁を突き当てて、ストリップＳを溝Ｇ内で位置決めする。そして、図１（ｃ）に示すように、蓋部５を閉じることによって、押さえ部５１によって固定された状態で、検査器具１にストリップＳを保持させる。
このとき、ストリップＳの先端部側は、本体部２の下端側の開口端部から突出するとともに、穿孔体６によって包囲された状態になっているが（図２参照）、穿孔体６は、ストリップＳを保持させてから本体部２に装着するようにしてもよい。
【００７１】
次に、上述したようにＰＣＲを行い、それによって得られた標的核酸を含むＰＣＲ反応液が収容され、シール部材１０１によって開口部が密封されたＰＣＲチューブ１００に対し、ストリップＳを保持した検査器具１が備える穿孔体６によりシール部材１０１を開封しながら、検査器具１をＰＣＲチューブ１００の開口部に嵌合させる（図３参照）。これにより、ＰＣＲチューブ１００の開口部を封止しつつ、ストリップＳの先端部をＰＣＲ反応液に接触させることができる(図４参照)。
【００７２】
なお、上述したプロトコルにおいて、ＰＣＲ反応試薬をＰＣＲチューブへ注入する際に、クロマトグラフィー展開液と標識用色素を含む染色液を併せて添加した場合、ＰＣＲチューブ１００には、ＰＣＲを行って得られた標的核酸とともに、クロマトグラフィー展開液と、標識用色素を含む染色液とを含む反応液が収容されている。一方、クロマトグラフィー展開液と標識用色素を含む染色液のＰＣＲ反応試薬への添加を省略した場合、ＰＣＲチューブ１００には、クロマトグラフィー展開液と、標識用色素が含まれていないため、この場合には、クロマトグラフィー展開液の成分と、標識用色素を含む染色液の成分とが、先端部側に固着されたストリップＳを検査器具１に保持させて、本実施形態を実施する。
【００７３】
このようにすることで、ＰＣＲチューブ１００の開封時に、反応液が飛散してコンタミネーションが生じることを抑制することが可能になる。さらに、検査器具１は、ＰＣＲチューブ１００の栓の役割を果たし、ＰＣＲチューブ１００内が密封された状態で、ＰＣＲ反応液をストリップＳに展開させることが可能になる。
【００７４】
これにより、ＰＣＲ反応液がストリップＳに展開して、標的核酸がストリップＳに固定化されている相補的な塩基配列を有するプローブとハイブリダイズし、標的核酸に結合した標識用色素を検出することにより、標的核酸を検出する。すなわち、標識用色素が結合した標的核酸が、プローブとハイブリダイズすることによって、プローブが固定化された位置に着色されたラインが現れる。このストリップ上の着色されたラインを目視又は撮影して確認することにより、標的核酸が検出される。
なお、検査器具１内に結露が生じてラインの観察がし難くなることを防止するために、インキュベータ内で検査を実施することも可能である。
【００７５】
そして、核酸クロマトグラフィー検査の実施後、検査器具１がＰＣＲチューブ１００に嵌合した状態で、これらを廃棄する。
【００７６】
このように、本実施形態に係る核酸クロマトグラフィー検査器具の使用方法によれば、核酸クロマトグラフィー検査を行うにあたり、ストリップＳへの展開時におけるＰＣＲ反応液の揮発やストリップＳへの接触が生じることによるコンタミネーションを防止でき、さらに、検査器具の廃棄によるコンタミネーションを防止することができる。そして、これらに加え、ＰＣＲチューブ１００の開封時に、ＰＣＲ反応液が飛散する場合のコンタミネーションを好適に防ぐこともできる。
【００７７】
以上、本発明について、好ましい実施形態を示して説明したが、本発明は、上記実施形態に限定されるものではなく、本発明の範囲で種々の変更実施が可能であることはいうまでもない。
【００７８】
例えば、前述した実施形態では、検査器具１が、ストリップＳを挿入可能な中空筒状部４を含む本体部２を備える例を示して説明したが、これに限定されない。検査器具１は、検査器具１によって容器１００の開口部を封止して、検体溶液やストリップＳが外部から隔絶された状態で核酸クロマトグラフィー検査を行うことができるように構成されるとともに、ストリップＳの先端部側を包囲可能な筒状に形成され、かつ、先端開口端部に穿孔部６１を有する穿孔体６を備えていれば、これ以外の具体的な形態は任意に変更できる。さらに、前述した実施形態の本体部２に代えて、本出願人が、先に、特願２０１７−１６３１５３において提案した「核酸クロマトグラフィー検査器具」を本体部２に適用して本発明を実施することもできる。
【産業上の利用可能性】
【００７９】
本発明は、核酸クロマトグラフィー検査を行うにあたり、容器の開封時に検体溶液が飛散する場合のコンタミネーション、ストリップへの展開時に検体溶液の揮発によって飛散する場合や、ストリップへの接触が生じる場合のコンタミネーション、廃棄した検査器具から飛散する場合のコンタミネーションを防止するために、好適に利用することが可能である。
【符号の説明】
【００８０】
１          検査器具
２          本体部
３          ストリップ保持部
４          中空筒状部
６          穿孔体
６１          穿孔部
４３          段部
１００          容器（ＰＣＲチューブ）
１０１          シール部材
Ｓ          ストリップ
Ｓ２          検出領域
【図１】
2019083706.tif 000003
【図２】
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【図３】
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【図４】
2019083706.tif 000006
【図５】
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