(57)【要約】【課題】単一リポソーム調製物ベースの治療の制限を克服する製剤化および送達方法を開発すること。【解決手段】本発明は、薬物または他の剤を被験体に送達するための多脂質組成物の使用に関する。本発明の方法は、治療リポソームおよび攻撃剤を含む個別の脂質組成物を投与することを含む。治療リポソームは、治療剤および／または他の剤（例えば、診断剤）を含有するリポソーム成分である。攻撃剤は、治療リポソームからのカーゴの放出を増加させることができる誘発剤を含有する脂質ナノ粒子（リポソーム、ミセル、またはこれらの混合物）である。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
図面に記載の発明。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願への相互参照）
本出願は、２０１１年１０月３１日に出願された米国仮特許出願第６１／５５３，７８６号の優先権を主張し、この米国仮特許出願第６１／５５３，７８６号の全内容が、本明細書において参考として援用される。
【０００２】
（政府支援の研究開発下でなされた発明に対する権利に関する陳述）
適用なし。
【０００３】
（コンパクトディスクで提出した「配列表」、表、またはコンピュータプログラムリストの付録への参照）
該当なし
【背景技術】
【０００４】
（発明の背景）
リポソームは有効な薬物送達ビヒクルとして使用することができ、市販されているリポソーム製品は、癌を含む疾患を処置するために開発されてきた（Ｂａｒｅｎｈｏｌｚ，Ｙ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．ｉｎ  Ｃｏｌｌｏｉｄ＆Ｉｎｔｅｒｆａｃｅ  Ｓｃｉ．６（１）：６６−７７（２００１））。リポソームは、外部の水性環境から内部水相を隔てる少なくとも１つのリン脂質二重層を含むベシクルである。リポソームは、脂質二重層中の疎水性カーゴおよび／または水性コア中の親水性カーゴの両方を有することができる。リポソームのサイズは、通常、５０〜２５０ｎｍの範囲内であり、癌組織の血管透過性および滞留性亢進効果（ＥＰＲ効果）によって化学療法剤を固形腫瘍部位に標的化送達するのに特に適切である（Ｍａｅｄａ，Ｈら、Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ．６５（１−２）：２７１（２０００））。ＥＰＲによる腫瘍部位での薬物含有リポソームの選択的蓄積は、薬物を局在化して、薬物の有効性を向上させ、正常な細胞または組織に対する薬物毒性を減少させる手段を提供する。例えば、ＦＤＡによって承認されているドキソルビシン含有リポソーム製品であるＤｏｘｉｌ（商標）は、遊離薬物と比較して減少した毒性を有することが示されている（Ｍａｒｔｉｎ，Ｆ．Ｊら、“Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  ａｎｔｉｔｕｍｏｒ  ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｏｆ  ＤＯＸＩＬ．”  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ．Ｅｄ．Ｄ．Ｄ．Ｌａｓｉｃ．  Ａｍｓｔｅｒｄａｍ：Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，１９９８，ｐｐ  ６３５−６８８）。
【０００５】
しかしながら、リポソーム薬物送達ビヒクルの利点は、リポソームの代謝および体からの排出、ならびに全身への分布および送達による一定レベルの固有毒性および副作用を含む欠点によって制限されている。特に、リポソーム薬物の放出速度の最適化は、ｉｎ  ｖｉｖｏ半減期と放出との間で難しいバランスを取る行為である。一般に、漏れやすいリポソームは封入薬物をより利用可能にするが、遊離薬物と同様に多くの毒性リスクを引き起こす。一方、シスプラチン調製物（ＳＰＩ−０７７）で示されているように（Ｋｉｍ，Ｅ．Ｓら、Ｌｕｎｇ  Ｃａｎｃｅｒ．３４（３）：４２７−４３２（２００１））、漏れにくいリポソームは毒性を減少させ得るが、有効性のための所望の薬物放出を提供することができない。したがって、リポソーム薬物製品の開発および投与において有効性および安全性のバランスを取ることは、重要な課題を構成する。
【０００６】
したがって、単一リポソーム調製物ベースの治療の制限を克服する製剤化および送達方法を開発することの必要性がある。本発明は、薬物の安全性および有効性を改善する手段を提供して、このおよび他の必要性に対応する。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Ｂａｒｅｎｈｏｌｚ，Ｙ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．ｉｎ  Ｃｏｌｌｏｉｄ＆Ｉｎｔｅｒｆａｃｅ  Ｓｃｉ．６（１）：６６−７７（２００１）
【非特許文献２】Ｍａｅｄａ，Ｈら、Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ．６５（１−２）：２７１（２０００）
【非特許文献３】Ｍａｒｔｉｎ，Ｆ．Ｊら、“Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  ａｎｔｉｔｕｍｏｒ  ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｏｆ  ＤＯＸＩＬ．”  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ．Ｅｄ．Ｄ．Ｄ．Ｌａｓｉｃ．  Ａｍｓｔｅｒｄａｍ：Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，１９９８，ｐｐ  ６３５−６８８
【非特許文献４】Ｋｉｍ，Ｅ．Ｓら、Ｌｕｎｇ  Ｃａｎｃｅｒ．３４（３）：４２７−４３２（２００１）
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００８】
（発明の簡単な要旨）
一態様では、本発明は、治療剤を被験体に送達するための方法であって、
ａ）治療剤を含むリポソームを前記被験体に投与すること；および
ｂ）誘発剤を含む脂質ナノ粒子を前記被験体に投与すること
を含み、
それにより、前記脂質ナノ粒子を投与した後の前記リポソームからの前記治療剤の放出を、前記脂質ナノ粒子を投与しない場合の前記リポソームからの前記治療剤の放出と比較して増加させる方法を提供する。
【０００９】
第２の態様では、本発明は、治療剤を被験体に送達するためのキットであって、
ａ）治療剤を含有するリポソームを含む第１の組成物；および
ｂ）非イオン性誘発剤を含有する脂質ナノ粒子を含む第２の組成物
を含み、
前記被験体への投与前は、前記第１および第２の組成物が個別に保管されているキットを提供する。
本発明は、例えば、以下を提供する。
（項目１）
治療剤を被験体に送達するための方法であって、
ａ）治療剤を含むリポソームを前記被験体に投与する工程；および
ｂ）非イオン性誘発剤を含む脂質ナノ粒子を前記被験体に投与する工程
を含み、
それにより、前記脂質ナノ粒子を投与した後の前記リポソームからの前記治療剤の放出を、前記脂質ナノ粒子を投与しない場合の前記リポソームからの前記治療剤の放出と比べて増加させる、方法。
（項目２）
前記リポソームが、リン脂質、ステロイド、およびカチオン性脂質からなる群より選択される１つもしくは複数の脂質を含む、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記リン脂質が、ホスファチジルコリン（ｐｈｏｐｈａｔｉｄｙｌｃｈｏｌｉｎｅ）、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、およびホスファチジン酸から選択される、項目２に記載の方法。
（項目４）
前記ホスファチジルコリンがＤＳＰＣである、項目３に記載の方法。
（項目５）
前記ホスファチジルグリセロールがＤＳＰＧである、項目３に記載の方法。
（項目６）
前記ホスファチジルエタノールアミンがＤＳＰＥ−ＰＥＧ（２０００）である、項目３に記載の方法。
（項目７）
前記ステロイドがコレステロールである、項目２に記載の方法。
（項目８）
前記脂質ナノ粒子が、第２のリポソーム、ミセル、およびこれらの混合物からなる群より選択される、項目１に記載の方法。
（項目９）
前記脂質ナノ粒子が第２のリポソームである、項目８に記載の方法。
（項目１０）
前記第２のリポソームが、リン脂質、ステロイド、およびカチオン性脂質からなる群より選択される１つもしくは複数の脂質を含む、項目９に記載の方法。
（項目１１）
前記リン脂質が、ホスファチジルコリン（ｐｈｏｐｈａｔｉｄｙｌｃｈｏｌｉｎｅ）、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、およびホスファチジン酸から選択される、項目１０に記載の方法。
（項目１２）
前記ホスファチジルコリンがＤＰＰＣである、項目１１に記載の方法。
（項目１３）
前記ステロイドがコレステロールである、項目１０に記載の方法。
（項目１４）
前記カチオン性脂質がＤＯＴＡＰである、項目１０に記載の方法。
（項目１５）
前記非イオン性誘発剤がＴＰＧＳである、項目１に記載の方法。
（項目１６）
前記リポソームが、４０〜８０モル％のＤＳＰＣ、５〜５０モル％のコレステロール、０〜３０モル％のＤＳＰＧ、および０〜１０モル％のＤＳＰＥ−ＰＥＧ（２０００）を含む、項目１に記載の方法。
（項目１７）
前記脂質ナノ粒子が、４０〜７０モル％のＤＰＰＣ、５〜２０モル％のコレステロール、０〜２０モル％のＤＯＴＡＰ、および２０〜４０モル％のＴＰＧＳを含む第２のリポソームである、項目１に記載の方法。
（項目１８）
前記治療剤が、シスプラチン、オキサリプラチン、カルボプラチン、ゲムシタビン、５−フルオロウラシル、ドキソルビシン、およびタキサンから選択される、前記項目のいずれかに記載の方法。
（項目１９）
前記治療剤が、シスプラチンおよびオキサリプラチンからなる群より選択される、項目１８に記載の方法。
（項目２０）
腹腔内注射によって、前記第１のリポソームおよび前記脂質ナノ粒子を送達する、前記項目のいずれかに記載の方法。
（項目２１）
前記被験体がヒトである、前記項目のいずれかに記載の方法。
（項目２２）
前記リポソームの投与後に、前記脂質ナノ粒子を前記被験体に投与する、前記項目のいずれかに記載の方法。
（項目２３）
前記リポソームが前記被験体内の標的部位に蓄積した後に、前記脂質ナノ粒子を前記被験体に投与する、項目２２に記載の方法。
（項目２４）
治療剤を被験体に送達するためのキットであって、
ａ）治療剤を含有するリポソームを含む第１の組成物；および
ｂ）非イオン性誘発剤を含有する脂質ナノ粒子を含む第２の組成物
を含み、
前記被験体への投与前は、前記第１および第２の組成物が個別に保管されている、キット。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】図１は、（ａ）ｐＨ＝５．０および（ｂ）ｐＨ＝７．４における、攻撃リポソーム４４６０−０７５によって誘発される治療リポソームからのオキサリプラチンの放出を示す。
【００１１】
【図２】図２は、（ａ）ｐＨ＝７．４および（ｂ）ｐＨ＝５における、様々な量の攻撃リポソーム４４６０−０７５によって誘発される治療リポソームからのシスプラチンの放出を示す。
【００１２】
【図３】図３は、ｐＨ＝７．４における、攻撃リポソームパートＢ（４４６０−０７５）を加えることによる治療リポソームパートＡ（４４６０−０９０）からの５−カルボキシフルオレセイン（５−ＣＦ）の放出を示す。
【００１３】
【図４】図４は、リポソームパートＢ（４４６０−０７５）と混合することによるリポソームパートＡ（４４６０−０７７）からの５−ＣＦの放出を示す。
【００１４】
【図５】図５は、ｐＨ＝７．４における、リポソームパートＢ（４４６０−０７５）と混合することによるリポソームパートＡ（４３８６−１４３）からの５−ＣＦの放出を示す。
【００１５】
【図６】図６は、ｐＨ＝７．４における、リポソームパートＢ（４４６０−０８４）と混合することによるリポソームパートＡ（４４６０−０９０）からの５−ＣＦの放出を示す。
【００１６】
【図７】図７は、ｐＨ＝７．４における、リポソームパートＢ（４４６０−０８４）と混合することによるリポソームパートＡ（４４６０−０７７）からの５−ＣＦの放出を示す。
【００１７】
【図８】図８は、ｐＨ＝７．４における、リポソームパートＢ（４３８４−０８６）と混合することによるリポソームパートＡ（４４６０−０９０）からの５−ＣＦの放出を示す。
【００１８】
【図９】図９は、ｐＨ＝７．４における、リポソームパートＢ（４３８４−０８６）と混合することによるリポソームパートＡ（４４６０−０７７）からの５−ＣＦの放出を示す。
【００１９】
【図１０】図１０は、ｐＨ＝５．０における、リポソームパートＢ（４４６０−０７５）と混合することによるリポソームパートＡ（４４６０−０９０）からの５−ＣＦの放出を示す。
【００２０】
【図１１】図１１は、ｐＨ＝７．４およびｐＨ＝５．０における、攻撃リポソーム４４６０−１０４を加えることによるリポソーム（ＮＬＩＣＯＶ００３Ｆ−０２）からのオキサリプラチンの放出を示す。
【００２１】
【図１２】図１２は、（ａ）ｐＨ＝５．０および（ｂ）ｐＨ＝７．４における、攻撃リポソーム（４４６０−１０４）を加えることによる治療リポソーム（ＮＬＩ４４８１１０１）からのシスプラチンの放出を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
（発明の詳細な説明）
Ｉ．概要
本発明は、薬物または他の剤を被験体に送達するための多脂質組成物の使用に関する。本発明の方法は、治療リポソームおよび攻撃剤を含む個別の脂質組成物を投与することを含む。治療リポソームは、治療剤および／または他の剤（例えば、診断剤）を含有するリポソーム成分である。攻撃剤は、治療リポソームからのカーゴの放出を増加させることができる誘発剤を含有する脂質ナノ粒子（リポソーム、ミセル、またはこれらの混合物）である。本文脈では、用語「攻撃剤」および「誘発剤を含有する脂質ナノ粒子」は、互換的に使用される。いくつかの実施形態では、治療リポソームおよび攻撃剤は、まとめて「デュアルソーム（ｄｕａｌｓｏｍｅ）」と称される。２つの成分を個別に保管することができ、治療リポソームのカーゴを制御送達するために、治療リポソームの投与後に攻撃剤を投与することができる。本発明の方法は、２つの工程：１）治療リポソームを投与すること、および２）攻撃剤を投与して、治療リポソームからの薬物の放出を、攻撃剤の非存在下における放出と比べて増加させることを含む。本発明の方法は、治療リポソームが被験体内の標的部位に到達する前に、剤が治療リポソームから早期に放出されるのを防止することができる。前記方法は、単一リポソーム調製物を薬物送達に使用することの現状のジレンマを克服し、したがって、治療有効性および安全性ならびに患者コンプライアンスを改善する。
【００２３】
ＩＩ．定義
本明細書において使用される場合、用語「送達」および「送達すること」は、本発明の方法を使用して、治療剤を被験体に運搬することを指す。送達は、被験体内の特定の位置、例えば、特定の種類の組織、器官または細胞に限局したものでもよい。
【００２４】
本明細書において使用される場合、用語「治療剤」は、有効量で存在する場合、それを必要とする被験体に所望の治療効果を生じさせる化合物または分子を指す。本発明は、本明細書においてさらに記載されるように、広範囲にわたる治療剤、ならびにリポソーム組成物と併せたこれらの使用を意図する。
【００２５】
本明細書において使用される場合、用語「被験体」は、寿命の任意の段階における任意の哺乳動物、特にヒトを指す。
【００２６】
本明細書において使用される場合、用語「投与する」、「投与された」、または「投与すること」は、本発明のリポソーム組成物を投与する方法を指す。本発明のリポソーム組成物は、局所投与、非経口投与、静脈内投与、皮内投与、筋肉内投与、結腸投与、直腸投与、または腹腔内投与を含む様々な方法で投与することができる。リポソーム組成物は、組成物または製剤の一部として投与することもできる。
【００２７】
本明細書において使用される場合、用語「リポソーム」は、脂質二重層によって囲まれた任意の区画を包含する。リポソームという用語は、単一の脂質二重層から構成される単層ベシクルであって、一般に、約２０〜約４００ｎｍの範囲の直径を有する単層ベシクルを含む。リポソームはまた、一般に、１〜１０μｍの範囲内の直径を有する多層的なものでもよい。いくつかの実施形態では、リポソームとしては、多層ベシクル（ＭＬＶ）、大型単層ベシクル（ＬＵＶ）、および小型単層ベシクル（ＳＵＶ）を挙げることができる。
【００２８】
本明細書において使用される場合、用語「ミセル」は、脂質などの両親媒性分子が、疎水性内部および親水性外部を有する粒子を形成するようにアセンブルした凝集体を指す。ミセルは、一般に、１００ｎｍ未満の直径を有する球状のアセンブリであるが、ミセルの直径の範囲および様々なミセルの形状、例えば、円板状ミセルが、当技術分野において公知である。
【００２９】
本明細書において使用される場合、用語「非イオン性誘発剤」は、アニオン性官能基およびカチオン性官能基を含む荷電官能基を持たない物質であって、被験体に投与すると、本発明の治療リポソームからの薬物カーゴの放出の増加を引き起こす物質を指す。非イオン性誘発剤の例としては、ＴＰＧＳおよびステアリン酸ポリオキシエチレン４０が挙げられる。
【００３０】
本明細書において使用される場合、用語「蓄積した」は、投与後に被験体内の所定の部位に集積したリポソームであって、被験体内で全身循環することを止めたリポソームを指す。いくつかの場合、蓄積は、バイオマーカーを認識するリガンドを含むリポソームによって、特定のバイオマーカーが標的部位に結合することによるものでもよい。いくつかの場合、リポソームの蓄積は、癌組織などのある特定の組織の血管透過性および滞留性亢進特性（ｔｈｅ  ｅｎｈａｎｃｅｄ  ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ  ａｎｄ  ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ）によるものでもよい。試験被験体のコンパートメント解析、または非侵襲技術、例えば、単光子放射型コンピュータ断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）、陽電子放出断層撮影法（ＰＥＴ）または核磁気共鳴イメージング（ＮＭＲ／ＭＲＩ）などの任意の適切な手段によって、リポソームの蓄積を評価してもよい。しかしながら、当業者であれば、被験体内における蓄積を直接測定することなく、標的部位における十分な蓄積を可能にするように、リポソームを特定の被験体に投与するタイミングを計画することができる。
【００３１】
本明細書において使用される場合、用語「標的部位」は、リポソームの蓄積および活性剤の送達が望まれる位置を指す。いくつかの場合、標的部位は、特定の組織または細胞であり得、特定の病態に関連し得る。
【００３２】
本明細書において使用される場合、用語「接触」は、第１のリポソームを不安定化させるか、または、封入された剤を第１のリポソームから別の方法で放出させるために、第１のリポソームと第２のリポソームとを相互作用させることを指す。
【００３３】
本明細書において使用される場合、用語「放出」は、リポソーム内の活性剤がリポソームコアまたは脂質二重層から外部環境に移動することを指す。
【００３４】
本明細書において使用される場合、用語「脂質」は脂質分子を指し、以下に詳細に記載されるように、脂肪、ワックス、ステロイド、コレステロール、脂溶性ビタミン、モノグリセリド、ジグリセリド、リン脂質、スフィンゴ脂質、糖脂質、カチオン性脂質またはアニオン性脂質、および誘導体化脂質などを挙げることができる。脂質は、ミセル、単層、および二重層膜を形成することができる。脂質は、リポソームに自己アセンブリすることができる。
【００３５】
本明細書において使用される場合、用語「モル百分率」および「ｍｏｌ％」は、リポソームの所定の脂質または界面活性剤成分のモル数を、すべての脂質または界面活性剤成分の総モル数で除したものを指す。特に明記しない限り、リポソームの脂質または界面活性剤成分のｍｏｌ％を計算する場合、活性剤、希釈剤または他の成分の量は含めない。
【００３６】
本明細書において使用される場合、用語「キット」は、本発明の方法を用いるのに必要な２つもしくは２つより多くの構成要素のセットを指す。キットは、限定されないが、本発明のリポソーム、試薬、緩衝剤、容器および／または装置を含むことができる。
【００３７】
本明細書において使用される場合、語句「個別に保管された」は、第１のリポソーム集団が別のリポソーム集団に接触するのを防止するリポソームの保存様式を指す。
【００３８】
ＩＩＩ．本発明の実施形態
一態様では、本発明は、治療剤を被験体に送達するための方法を提供する。前記方法は、ａ）治療剤を含むリポソームを前記被験体に投与すること；およびｂ）非イオン性誘発剤を含む脂質ナノ粒子を前記被験体に投与することを含み、それにより、前記誘発剤を投与した後の前記リポソームからの前記治療剤の放出を、前記誘発剤を投与しない場合の前記リポソームからの前記治療剤の放出と比較して増加させる。治療剤を含むリポソームは、「治療リポソーム」と称される。
【００３９】
本発明のリポソームは、少なくとも１つの脂質二重層によって囲まれた水性区画を含む。親水性頭部基を含む脂質が水中で分散すると、それらは、ラメラと称される二重層膜を自然発生的に形成することができる。ラメラは、脂質分子の２枚の単層シートから構成されており、その非極性（疎水性）表面は互いに向かい合っており、その極性（親水性）表面は水性媒体に面している。リポソームという用語は、単一の脂質二重層から構成される単層ベシクルであって、一般に、約２０〜約４００ｎｍ、約５０〜約３００ｎｍ、または約１００〜２００ｎｍの範囲内の直径を有する単層ベシクルを含む。リポソームはまた、一般に、あらゆる場所で２〜何百もの同一中心の脂質二重層が水相の層と交互に重なった、１〜１０μｍの範囲内の直径を有する多層的なものでもよい。いくつかの実施形態では、リポソームとしては、多層ベシクル（ＭＬＶ）、大型単層ベシクル（ＬＵＶ）、および小型単層ベシクル（ＳＵＶ）を挙げることができる。リポソームの脂質は、カチオン性、両イオン性、中性もしくはアニオン性、またはこれらの任意の混合物であり得る。
【００４０】
脂質ナノ粒子は、本発明の方法では「攻撃剤」を構成する。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子は、リポソーム、ミセル、またはこれらの混合物から選択される。ナノ粒子は、非イオン性界面活性剤であり得る非イオン性誘発剤を含有する。本発明の方法に使用するのに適切な非界面活性剤（ｎｏｎ−ｓｕｒｆａｃｔａｎｔｓ）の例としては、限定されないが、エトキシ化アルキルフェノール、エトキシ化脂肪エステル、ソルビタン誘導体、およびトコフェロール誘導体などが挙げられる。
【００４１】
被験体への攻撃剤の投与は、治療リポソームからの治療剤の放出を増加させるのに十分な任意の時点で行うことができる。いくつかの実施形態では、治療リポソームの投与後に、攻撃剤を被験体に投与する。攻撃剤の投与は、例えば、治療リポソームを投与した数分後または数時間後に行うことができる。いくつかの実施形態では、治療リポソームが被験体内の所望の標的部位に蓄積した後に（典型的には、投与後約７２時間以内に）、攻撃剤を被験体に投与する。試験被験体のコンパートメント解析、または非侵襲技術、例えば、単光子放射型コンピュータ断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）、陽電子放出断層撮影法（ＰＥＴ）または核磁気共鳴イメージング（ＮＭＲ／ＭＲＩ）などの任意の適切な手段によって、標的部位におけるリポソームの蓄積を評価してもよい。下記診断剤は、例えば、リポソームの蓄積を評価するために、治療リポソーム内への組み込みについて選択してもよい。しかしながら、当業者であれば、被験体内での蓄積を直接測定することなく、標的部位における治療リポソームの十分な蓄積を可能にするように、特定の被験体への投与のタイミングを決定することができることを認識するであろう。
【００４２】
いくつかの実施形態では、治療剤の放出は、攻撃剤が治療リポソームに接触すると誘起される。攻撃剤を任意の量で投与することによって、リポソームから放出される治療剤の量を、攻撃剤の非存在下と比較して増加させることができる。いくつかの実施形態では、攻撃剤の投与は、リポソームからの治療剤の放出を、攻撃剤なしでリポソームを投与するのと比較して少なくとも３倍増加させる。いくつかの実施形態では、攻撃剤の投与は、リポソームからの治療剤の放出を、攻撃剤なしでリポソームを投与するのと比較して少なくとも１０倍増加させる。いくつかの実施形態では、攻撃剤の投与は、リポソームからの治療剤の放出を、攻撃剤なしでリポソームを投与するのと比較して少なくとも２５倍増加させる。
【００４３】
本発明では、被験体は、任意の哺乳動物であり得る。いくつかの実施形態では、被験体は、ヒトである。いくつかの実施形態では、腹腔内注射によって、リポソームおよび脂質ナノ粒子を送達する。当業者であれば、他の投与様式が本発明で有用であり得ることを認識するであろう。
【００４４】
リポソームおよび脂質ナノ粒子
本発明のリポソームおよび脂質ナノ粒子は、上記のように、カチオン性脂質、両イオン性脂質、中性脂質、またはアニオン性脂質を含む任意の適切な脂質を含有することができる。適切な脂質としては、脂肪、ワックス、ステロイド、コレステロール、脂溶性ビタミン、モノグリセリド、ジグリセリド、リン脂質、スフィンゴ脂質、糖脂質、カチオン性脂質またはアニオン性脂質、および誘導体化脂質などを挙げることができる。
【００４５】
適切なリン脂質としては、限定されないが、ホスファチジルコリン（ＰＣ）、ホスファチジン酸（ＰＡ）、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、ホスファチジルグリセロール（ＰＧ）、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、およびホスファチジルイノシトール（ＰＩ）、ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、ジオレオイルホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ）、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ジミリストイルホスファチジルグリセロール（ＤＭＰＧ）、ジステアロイルホスファチジルグリセロール（ＤＳＰＧ）、ジオレオイルホスファチジルグリセロール（ＤＯＰＧ）、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール（ＤＰＰＧ）、ジミリストイルホスファチジルセリン（ＤＭＰＳ）、ジステアロイルホスファチジルセリン（ＤＳＰＳ）、ジオレオイルホスファチジルセリン（ＤＯＰＳ）、ジパルミトイルホスファチジルセリン（ＤＰＰＳ）、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、パルミトイルオレオイルホスファチジルコリン（ＰＯＰＣ）、パルミトイルオレオイル−ホスファチジルエタノールアミン（ＰＯＰＥ）、およびジオレオイル−ホスファチジルエタノールアミン４−（Ｎ−マレイミドメチル）−シクロヘキサン−１−カルボキシラート（ＤＯＰＥ−ｍａｌ）、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＰＰＥ）、ジミリストイルホスホエタノールアミン（ＤＭＰＥ）、ジステアロイル−ホスファチジル−エタノールアミン（ＤＳＰＥ）、１６−Ｏ−モノメチルＰＥ、１６−Ｏ−ジメチルＰＥ、１８−１−トランスＰＥ、１−ステアロイル−２−オレオイル−ホスファチジルエタノールアミン（ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｅｔｈａｎｏｌａｍｉｎｅ）（ＳＯＰＥ）、１，２−ジエライドイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ｐｈｏｐｈｏｅｔｈａｎｏｌａｍｉｎｅ）（トランスＤＯＰＥ）、およびカルジオリピンが挙げられる。脂質抽出物、例えば、卵ＰＣ、心臓抽出物、脳抽出物、肝臓抽出物、およびダイズＰＣも本発明で有用である。いくつかの実施形態では、ダイズＰＣとしては、ヒドロダイズＰＣ（Ｈｙｄｒｏ  Ｓｏｙ  ＰＣ）（ＨＳＰＣ）を挙げることができる。ある特定の実施形態では、脂質としては、ＰＥＧ化脂質などの誘導体化脂質を挙げることができる。誘導体化脂質としては、例えば、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ２０００、コレステロール−ＰＥＧ２０００、ＤＳＰＥ−ポリグリセロール、または当技術分野において一般に公知の他の誘導体を挙げることができる。
【００４６】
本発明のリポソームおよび脂質ナノ粒子は、縮合四環式ゴナン環系（ｆｕｓｅｄ，ｔｅｔｒａｃｙｃｌｉｃ  ｇｏｎａｎｅ  ｒｉｎｇ  ｓｙｓｔｅｍ）の存在を特徴とするステロイドを含有してもよい。ステロイドの例としては、限定されないが、コレステロール、コール酸、プロゲステロン、コルチゾン、アルドステロン、エストラジオール、テストステロン、デヒドロエピアンドロステロンが挙げられる。合成ステロイドおよびこの誘導体もまた、本発明で使用することが意図される。
【００４７】
カチオン性脂質は、生理学的条件下で正荷電官能基を含有する。カチオン性脂質としては、限定されないが、Ｎ，Ｎ−ジオレイル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＤＡＣ）、Ｎ，Ｎ−ジステアリル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウムブロミド（ＤＤＡＢ）、Ｎ−（１−（２，３−ジオレオイルオキシ）プロピル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＡＰ）、Ｎ−（１−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＭＡ）、Ｎ−［１−（２，３，−ジテトラデシルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−ヒドロキシエチルアンモニウムブロミド（ＤＭＲＩＥ）、Ｎ−［１−（２，３，ジオレイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−ヒドロキシエチルアンモニウムブロミド（ＤＯＲＩＥ）、３β−［Ｎ−（Ｎ’，Ｎ’−ジメチルアミノエタン）カルバモイル］コレステロール（ＤＣ−Ｃｈｏｌ）、ジメチルジオクタデシルアンモニウム（ＤＤＡＢ）およびＮ，Ｎ−ジメチル−２，３−ジオレイルオキシ）プロピルアミン（ＤＯＤＭＡ）が挙げられる。
【００４８】
いくつかの実施形態では、治療リポソームは、リン脂質、ステロイドおよび／またはカチオン性脂質であり得る１つもしくは複数の脂質を含む。いくつかの実施形態では、リン脂質は、ホスファチジルコリン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、またはホスファチジン酸である。いくつかの実施形態では、ホスファチジルコリンは、ＤＳＰＣである。いくつかの実施形態では、ホスファチジルグリセロールは、ＤＳＰＧである。いくつかの実施形態では、ホスファチジルエタノールアミンは、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ（２０００）である。いくつかの実施形態では、ステロイドは、コレステロールである。
【００４９】
上記のように、「攻撃剤」を構成する脂質ナノ粒子は、第２のリポソーム、ミセル、またはこれらの混合物からなる群より選択される。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子は、第２のリポソームである。第２のリポソームは、「攻撃リポソーム」と称される。いくつかの実施形態では、攻撃リポソームは、リン脂質、ステロイドおよびカチオン性脂質からなる群より選択される１つもしくは複数の脂質を含む。いくつかの実施形態では、リン脂質は、ホスファチジルコリン（ｐｈｏｐｈａｔｉｄｙｌｃｈｏｌｉｎｅ）、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、またはホスファチジン酸である。いくつかの実施形態では、ホスファチジルコリンは、ＤＰＰＣである。いくつかの実施形態では、ステロイドは、コレステロールである。いくつかの実施形態では、カチオン性脂質は、ＤＯＴＡＰである。いくつかの実施形態では、非イオン性誘発剤は、ＴＰＧＳである。
【００５０】
脂質の任意の適切な組み合わせを、本発明のリポソームおよび脂質ナノ粒子を提供するのに使用することができる。脂質組成物は、特性、例えば、漏出速度、安定性、粒子サイズ、ゼータ電位、タンパク質結合性、ｉｎ  ｖｉｖｏ循環、および／または組織もしくは器官での蓄積に影響を与えるように調整することができる。例えば、ＤＳＰＣおよび／またはコレステロールは、リポソームからの漏出を減少させるのに使用することができる。ＤＳＰＧおよび／またはＤＯＴＡＰなどの負または正に荷電した脂質は、リポソームまたは脂質ナノ粒子の表面電荷に影響を与えるように含めることができる。いくつかの実施形態では、脂質組成物は、約１０種類もしくは約１０種類未満の脂質、または約５種類もしくは約５種類未満の脂質、または約３種類もしくは約３種類未満の脂質を含むことができる。いくつかの実施形態では、存在する特定の種類の脂質のモル百分率（ｍｏｌ％）は、典型的には、リポソームまたは脂質ナノ粒子中に存在する総脂質の約０％〜約１０％、約１０％〜約３０％、約３０％〜約５０％、約５０％〜約７０％、約７０％〜約９０％、約９０％〜１００％を含む。いくつかの実施形態では、治療リポソームは、４０〜８０ｍｏｌ％のＤＳＰＣ、５〜５０ｍｏｌ％のコレステロール、０〜３０ｍｏｌ％のＤＳＰＧ、および０〜１０ｍｏｌ％のＤＳＰＥ−ＰＥＧ（２０００）を含む。いくつかの実施形態では、攻撃リポソームは、４０〜７０ｍｏｌ％のＤＰＰＣ、５〜２０ｍｏｌ％のコレステロール、０〜２０ｍｏｌ％のＤＯＴＡＰ、および２０〜４０ｍｏｌ％のＴＰＧＳを含む。
【００５１】
本発明の脂質ナノ粒子は、非イオン性界面活性剤を含む界面活性剤を含有することができ、これらのいくつかは誘発剤として作用して、治療リポソームのカーゴの放出を促進することができる。非イオン性界面活性剤の例としては、限定されないが、エトキシ化アルキルフェノール、エトキシ化脂肪エステル、ソルビタン誘導体、およびトコフェロール誘導体が挙げられる。本発明で使用することが意図される界面活性剤としては、Ｄ−α−トコフェロールポリエチレングリコールスクシネート（ＴＰＧＳ）が挙げられ、様々なポリエチレングリコールサイズを有するものが利用可能である。いくつかの実施形態では、ＴＰＧＳのポリエチレングリコールの分子量範囲は、４００〜５０００である。さらに他の実施形態では、ＴＰＧＳのポリエチレングリコールの分子量範囲は、８００〜２０００である。さらなる他の実施形態では、ＴＰＧＳのポリエチレングリコールの分子量範囲は、８００〜１５００である。１つの特に有用なＴＰＧＳは、Ｄ−α−トコフェロールポリエチレングリコールスクシネートの総分子量が約１５４３であるＴＰＧＳ（１０００）である。本明細書において使用される場合、用語「ＴＰＧＳ」は、異なるサイズ／重量が与えられない限り、ＴＰＧＳ（１０００）を指す。他の有用な非イオン性界面活性剤としては、ポリエチレングリコールｐ−（１，１，３，３−テトラメチルブチル）−フェニルエーテル、ポリオキシエチレン（２）イソオクチルフェニルエーテル、ポリオキシエチレン（１５０）ジノニルフェニルエーテル、ドデカン酸２，３−ジヒドロキシプロピルエステル、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレート、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノパルミテート、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノステアレート、およびポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエートなどが挙げられる。
【００５２】
当業者であれば、所定の用途により必要とされる場合、脂質組成を調整して、リポソームの放出特性または他の特徴を調節してもよいことを認識するであろう。
【００５３】
治療剤
本発明の治療リポソームは、ナノ担体中の、ナノ担体上のまたはナノ担体周囲のあらゆる場所に存在する１つもしくは複数の治療剤を含む。例えば、治療剤は、リポソームの脂質二重層内に包埋されているか、リポソームの水性コア内に封入されているか、またはリポソームの外部に係留されている。本発明に使用される治療剤（一種または複数種）としては、被験体における状態を処置することを目的とする任意の剤を挙げることができる。一般に、限定されないが、Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ（Ｕ．Ｓ．Ｐ．），Ｇｏｏｄｍａｎ  ａｎｄ  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，１０ｔｈＥｄ．，ＭｃＧｒａｗ  Ｈｉｌｌ，２００１；Ｋａｔｚｕｎｇ，Ｅｄ．，Ｂａｓｉｃ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ／Ａｐｐｌｅｔｏｎ＆Ｌａｎｇｅ，８ｔｈｅｄ．，Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ  ２１，２０００；Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓ  Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ（Ｔｈｏｍｓｏｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ；および／またはＴｈｅ  Ｍｅｒｃｋ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｙ，１８ｔｈｅｄ．，２００６，Ｂｅｅｒｓ  ａｎｄ  Ｂｅｒｋｏｗ，Ｅｄｓ．，Ｍｅｒｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐ；または、動物の場合には、Ｔｈｅ  Ｍｅｒｃｋ  Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，９ｔｈｅｄ．，Ｋａｈｎ  Ｅｄ．，Ｍｅｒｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐ，２００５（これらの文献はすべて、参照により本明細書に組み込まれる）に列挙されている剤を含む、当技術分野において公知の任意の治療剤を使用することができる。
【００５４】
治療剤は、処置されることが所望される疾患の種類に応じて選択することができる。例えば、ある特定の種類のがんまたは腫瘍、例えば、癌、肉腫、白血病、リンパ腫、骨髄腫、および中枢神経系がん、ならびに固形腫瘍および混合腫瘍は、同じまたは場合により異なる治療剤の投与を伴い得る。ある特定の実施形態では、被験体におけるがん状態を処置するかまたは該がん状態に影響を与えるように治療剤を送達することができ、治療剤としては、化学療法剤、例えば、アルキル化剤、代謝拮抗剤、アントラサイクリン、アルカロイド、トポイソメラーゼ阻害剤、および他の抗がん剤を挙げることができる。いくつかの実施形態では、上記剤としては、アンチセンス剤、マイクロＲＮＡ剤、ｓｉＲＮＡ剤および／またはｓｈＲＮＡ剤を挙げることができる。
【００５５】
治療剤としては、限定されないが、アバスチン、ドキソルビシン、シスプラチン、オキサリプラチン、カルボプラチン、５−フルオロウラシル、ゲムシタビン（ｇｅｍｃｉｔｉｂｉｎｅ）、またはタキサン、例えば、パクリタキセルおよびドセタキセルを含む抗がん剤または細胞傷害剤を挙げることができる。さらなる抗がん剤としては、限定されないが、２０−ｅｐｉ−１，２５ジヒドロキシビタミンＤ３，４−イポメアノール、５−エチニルウラシル、９−ジヒドロタキソール、アビラテロン、アシビシン、アクラルビシン、アコダゾール塩酸塩、アクロニン、アシルフルベン、アデシペノール、アドゼレシン、アルデスロイキン、全ての−ｔｋアンタゴニスト、アルトレタミン、アンバムスチン、アンボマイシン、酢酸アメタントロン、アミドックス（ａｍｉｄｏｘ）、アミホスチン、アミノグルテチミド、アミノレブリン酸、アムルビシン、アムサクリン、アナグレリド、アナストロゾール、アンドログラホリド、新脈管形成阻害剤、アンタゴニストＤ、アンタゴニストＧ、アンタレリクス（ａｎｔａｒｅｌｉｘ）、アントラマイシン、；抗背側形態形成タンパク質−１（ａｎｔｉ−ｄｏｒｓａｌｉｚｉｎｇ  ｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｔｉｃ  ｐｒｏｔｅｉｎ−１）、抗エストロゲン剤、アンチネオプラストン、アンチセンスオリゴヌクレオチド、アフィディコリングリシネート、アポトーシス遺伝子モジュレーター、アポトーシス制御因子、アプリン酸、ＡＲＡ−ＣＤＰ−ＤＬ−ＰＴＢＡ、アルギニンデアミナーゼ、アスパラギナーゼ、アスペルリン、アスラクリン、アタメスタン、アトリムスチン、アキシナスタチン１、アキシナスタチン２、アキシナスタチン３、アザシチジン、アザセトロン、アザトキシン、アザチロシン、アゼテパ、アゾトマイシン、バッカチンＩＩＩ誘導体、バラノール、バチマスタット、ベンゾクロリン、ベンゾデパ、ベンゾイルスタウロスポリン、ベータラクタム誘導体、β−アレチン、ベタクラマイシンＢ、ベツリン酸、ＢＦＧＦ阻害剤、ビカルタミド、ビサントレン、ビサントレン塩酸塩、ビスアジリジニルスペルミン、ビスナフィド、ジメシル酸ビスナフィド、ビストラテンＡ、ビゼレシン、ブレオマイシン、硫酸ブレオマイシン、ＢＲＣ／ＡＢＬアンタゴニスト、ブレフレート、ブレキナルナトリウム、ブロピリミン、ブドチタン、ブスルファン、ブチオニンスルホキシイミン、カクチノマイシン、カルシポトリオール、カルホスチンＣ、カルステロン、カンプトテシン誘導体、カナリアポックスＩＬ−２、カペシタビン、カラセミド、カルベチマー、カルボプラチン、カルボキサミド−アミノ−トリアゾール、カルボキシアミドトリアゾール、カレストＭ３、カルムスチン、ｃａｍ７００、軟骨由来阻害因子、カルビシン塩酸塩、カルゼレシン、カゼインキナーゼ阻害剤、カスタノスペルミン、セクロピンＢ、セデフィンゴール、セトロレリクス、クロラムブシル、クロリン、クロロキノキサリンスルホンアミド、シカプロスト、シロレマイシン、シスプラチン、ｃｉｓ−ポルフィリン、クラドリビン、クロミフェン類似体、クロトリマゾール、コリスマイシンＡ、コリスマイシンＢ、コンブレタスタチンＡ４、コンブレタスタチン類似体、コナゲニン、クランベシジン８１６（ｃｒａｍｂｅｓｃｉｄｉｎ  ８１６）、クリスナトール、メシル酸クリスナトール、クリプトフィシン８、クリプトフィシンＡ誘導体、キュラシンＡ、シクロペンタアントラキノン、シクロホスファミド、シクロプラタム、シペマイシン、シタラビン、シタラビンオクホスフェート、細胞溶解因子、シトスタチン、ダカルバジン、ダクリキシマブ、ダクチノマイシン、ダウノルビシン塩酸塩、デシタビン、デヒドロジデムニンＢ、デスロレリン、デキシホスファミド、デキソルマプラチン、デクスラゾキサン、デクスベラパミル、デザグアニン、メシル酸デザグアニン、ジアジコン、ジデムニンＢ、ジドックス、ジエチルノルスペルミン、ジヒドロ−５−アザシチジン、ジオキサマイシン、ジフェニルスピロムスチン、ドセタキセル、ドコサノール、ドラセトロン、ドキシフルリジン、ドキソルビシン、ドキソルビシン塩酸塩、ドロロキシフェン、クエン酸ドロロキシフェン、プロピオン酸ドロモスタノロン、ドロナビノール、ズアゾマイシン（ｄｕａｚｏｍｙｃｉｎ）、デュオカルマイシンＳＡ、エブセレン、エコムスチン、エダトレキサート、エデルホシン、エドレコロマブ、エフロミチン、塩酸エフロミチン、エレメン、エルサミトルシン、エミテフール、エンロプラチン、エンプロメート、エピプロピジン、エピルビシン、エピルビシン塩酸塩、エプリステリド、エルブロゾール、赤血球遺伝子療法ベクターシステム、塩酸エソルビシン、エストラムスチン、エストラムスチン類似体、リン酸エストラムスチンナトリウム、エストロゲンアゴニスト、エストロゲンアンタゴニスト、エタニダゾール、エトポシド、リン酸エトポシド、エトプリン、エキセメスタン、ファドロゾール、塩酸ファドロゾール、ファザラビン、フェンレチニド、フィルグラスチム、フィナステリド、フラボピリドール、フレゼラスチン、フロクスウリジン、フルアステロン、フルダラビン、リン酸フルダラビン、塩酸フルオロダウノルニシン、フルオロウラシル、フルオロシタビン、ホルフェニメクス、フォルメスタン、ホスキドン、ホストリエシン、ホストリエシンナトリウム、ホテムスチン、ガドリニウムテキサフィリン、硝酸ガリウム、ガロシタビン、ガニレリクス、ゼラチナーゼ阻害剤、ゲムシタビン、塩酸ゲムシタビン、グルタチオン阻害剤、ヘプスルファム、ヘレグリン、ヘキサメチレンビスアセトアミド、ヒドロキシウレア、ヒペリシン、イバンドロン酸、イダルビシン、塩酸イダルビシン、イドキシフェン、イドラマントン、イホスファミド、イルモホシン、イロマスタット、イミダゾアクリドン、イミキモド、免疫賦活ペプチド、インスリン様増殖因子−１受容体阻害剤、インターフェロンアゴニスト、インターフェロンアルファ−２Ａ、インターフェロンアルファ−２Ｂ、インターフェロンアルファ−Ｎ１、インターフェロンアルファ−Ｎ３、インターフェロンベータ−ＩＡ、インターフェロンガンマ−ＩＢ、インターフェロン、インターロイキン、イオベングアン、ヨードドキソルビシン、イプロプラチン、イリノテカン、塩酸イリノテカン、イロプラクト、イルソグラジン、イソベンガゾール、イソホモハリコンドリンＢ、イタセトロン、ジャスプラキノリド、カハラリドＦ、ラメラリン−Ｎトリアセテート、ランレオチド、酢酸���ンレオチド、レイナマイシン、レノグラスチム、硫酸レンチナン、レプトルスタチン、レトロゾール、白血病抑制因子、白血球アルファインターフェロン、酢酸ロイプロリド、ロイプロリド／エストロゲン／プロゲステロン、リュープロレリン、レバミゾール、リアロゾール、塩酸リアロゾール、直鎖ポリアミン類似体、親油性二糖ペプチド、親油性白金化合物、リッソクリナミド７（ｌｉｓｓｏｃｌｉｎａｍｉｄｅ  ７）、ロバプラチン、ロンブリシン（ｌｏｍｂｒｉｃｉｎｅ）、ロメトレキソール、ロメトレキソールナトリウム、ロムスチン、ロニダミン、ロソキサントロン、塩酸ロソキサントロン、ロバスタチン、ロキソリビン、ルルトテカン（ｌｕｒｔｏｔｅｃａｎ）、ルテチウムテキサフィリン、リソフィリン、溶解性ペプチド、メイタンシン（ｍａｉｔａｎｓｉｎｅ）、マンノスタチンＡ、マリマスタット、マソプロコール、マスピン、マトリライシン阻害剤、マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤、メイタンシン、塩酸メクロレタミン、酢酸メゲストロール、酢酸メレンゲストロール、メルファラン、メノガリル、メルバロン、メルカプトプリン、メテレリン、メチオニナーゼ、メトトレキセート、メトトレキセートナトリウム、メトクロプラミド、メトプリン、メツレデパ、微細藻類プロテインキナーゼＣ阻害剤、ＭＩＦ阻害剤、ミフェプリストン、ミルテホシン、ミリモスチム、ミスマッチ二本鎖ＲＮＡ、ミチンドミド、ミトカルシン、ミトクロミン、ミトギリン、ミトグアゾン、ミトラクトール、ミトマルシン、マイトマイシン、マイトマイシン類似体、ミトナフィド、ミトスペル、ミトタン、マイトトキシン線維芽細胞増殖因子−サポリン、ミトキサントロン、塩酸ミトキサントロン、モファロテン、モルグラモスチム、モノクローナル抗体、ヒト絨毛性ゴナドトロピン、モノホスホリル脂質ａ／ミオバクテリウム細胞壁ＳＫ、モピダモール、多剤耐性遺伝子阻害剤、多発性腫瘍抑制因子１に基づく療法、マスタード抗がん剤、ミカペルオキシドＢ、マイコバクテリア細胞壁抽出物、ミコフェノール酸、ミリアポロン、ｎ−アセチルジナリン、ナファレリン、ナグレスチプ、ナロキソン／ペンタゾシン、ナパビン、ナフテルピン、ナルトグラスチム、ネダプラチン、ネモルビシン、ネリドロン酸、中性エンドペプチダーゼ、ニルタミド、ニサマイシン、一酸化窒素モジュレーター、窒素酸化物抗酸化剤、ニトルリン、ノコダゾール、ノガラマイシン、ｎ−置換ベンズアミド、０６−ベンジルグアニン、オクトレオチド、オキセノン、オリゴヌクレオチド、オナプリストン、オンダンセトロン、オラシン、経口サイトカイン誘導物質、オルマプラチン、オサテロン、オキサリプラチン、オキサウノマイシン、オキシスラン、パクリタキセル、パクリタキセル類似体、パクリタキセル誘導体、パラウアミン、パルミトイルリゾキシン、パミドロン酸、パナキシトリオール、パノミフェン、パラバクチン、パゼリプチン、ペグアスパラガーゼ、ペルデシン、ペリオマイシン、ペンタムスチン、ペントサンポリサルフェートナトリウム、ペントスタチン、ペントロゾール、硫酸ペプロマイシン、ペルフルブロン、ペルホスファミド、ペリリルアルコール、フェナジノマイシン、フェニルアセテート、ホスファター��阻害剤、ピシバニール、塩酸ピロカルピン、ピポブロマン、ピポスルファン、ピラルビシン、ピリトレキシム、塩酸ピロキサントロン、プラセチンＡ、プラセチンＢ、プラスミノーゲンアクチベーターインヒビター、白金錯体、白金化合物、白金−トリアミン錯体、プリカマイシン、プロメスタン、ポルフィマーナトリウム、ポルフィロマイシン、プレドニムスチン、塩酸プロカルバジン、プロピルビス−アクリドン、プロスタグランジンＪ２、前立腺癌抗アンドロゲン剤、プロテアソーム阻害剤、プロテインＡに基づく免疫モジュレーター、プロテインキナーゼＣ阻害剤、タンパク質チロシンホスファターゼ阻害剤、プリンヌクレオシドホスホリラーゼ阻害剤、ピューロマイシン、塩酸ピューロマイシン、プルプリン、ピラゾフリン、ピラゾロアクリジン、ピリドキシル化ヘモグロビンポリオキシエチレンコンジュゲート、ＲＡＦアンタゴニスト、ラルチトレキセド、ラモセトロン、ＲＡＳファルネシルタンパク質トランスフェラーゼ阻害剤、ＲＡＳ阻害剤、ＲＡＳ−ＧＡＰ阻害剤、脱メチル化レテリプチン、レニウムＲＥ１８６エチドロネート、リゾキシン、リボプリン、リボザイム、ＲＩＩレチナミド、ＲＮＡｉ、ログレチミド、ロヒツキン、ロムルチド、ロキニメクス、ルビギノンＢ１、ルボキシル、サフィンゴール、塩酸サフィンゴール、サイントピン、ｓａｒｃｎｕ、サルコフィトールＡ、サルグラモスチム、ＳＤＩ  １模倣体、セムスチン、老化由来阻害因子１（ｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅ  ｄｅｒｉｖｅｄ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  １）、センスオリゴヌクレオチド、シグナル伝達阻害剤、シグナル伝達モジュレーター、シムトラゼン、単鎖抗原結合タンパク質、シゾフィラン（ｓｉｚｏｆｕｒａｎ）、ソブゾキサン、ボロカプテイトナトリウム、フェニル酢酸ナトリウム、ソルベロール、ソマトメジン結合タンパク質、ソネルミン、スパルホス酸ナトリウム、スパルホス酸、スパルソマイシン、スピカマイシンＤ、塩酸スピロゲルマニウム、スピロムスチン、スピロプラチン、スプレノペンチン、スポンギスタチン１、スクアラミン、幹細胞阻害剤、幹細胞分裂阻害剤、スチピアミド、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ストロメライシン阻害剤、スルフィノシン、スロフェヌル、超活性血管作用性腸ペプチドアンタゴニスト、スラジスタ、スラミン、スワインソニン、合成グリコサミノグリカン、タリソマイシン、タリムスチン、タモキシフェンメチオ
ジド、タウロムスチン、タザロテン、テコガランナトリウム、テガフール、テルラピリリウム、テロメラーゼ阻害剤、塩酸テロキサントロン、テモポルフィン、テモゾロミド、テニポシド、テロキシロン、テストラクトン、テトラクロロデカオキシド、テトラゾミン、タリブラスチン、サリドマイド、チアミプリン、チオコラリン、チオグアニン、チオテパ、トロンボポエチン、トロンボポエチン模倣体、チマルファシン、サイモポエチン受容体アゴニスト、チモトリナン、甲状腺刺激ホルモン、チアゾフリン、スズエチルエチオプルプリン、チラパザミン、二塩化チタノセン、塩酸トポテカン、トプセンチン、トレミフェン、クエン酸トレミフェン、全能性幹細胞因子、翻訳阻害剤、酢酸トレストロン、トレチノイン、トリアセチルウリジン、トリシリビン、リン酸トリシリビン、トリメトレキセート、グルクロン酸トリメトレキセート、トリプトレリン、トロピセトロン、塩酸ツブロゾール、ツロステリド、チロシンキナーゼ阻害剤、チロホスチン（ｔｙｒｐｈｏｓｔｉｎ）、ＵＢＣ阻害剤、ウベニメクス、ウラシルマスタード、ウレデパ、尿生殖洞由来増殖阻害因子、ウロキナーゼ受容体アンタゴニスト、バプレオチド、バリオリンＢ、ベラレソール、ベラミン、ベルジン、ベルテポルフィン、硫酸ビンブラスチン、硫酸ビンクリスチン、ビンデシン、硫酸ビンデシン、硫酸ビネピジン、硫酸ビングリシネート、硫酸ビンロイロシン、ビノレルビン、酒石酸ビノレルビン、硫酸ビンロシジン、ビンキサルチン、硫酸ビンゾリジン、ビタキシン、ボロゾール、ザノテロン、ゼニプラチン、ジラスコルブ、ジノスタチン、ジノスタチンスチマラマー、またはゾルビシン塩酸塩を挙げることができる。
【００５６】
いくつかの実施形態では、治療剤は、２つもしくは２つより多くの治療剤の投与を含む剤カクテルの一部であり得る。例えば、シスプラチンおよびオキサリプラチンの両方を有するリポソームを投与することができる。加えて、治療剤は、免疫刺激アジュバント、例えば、アルミニウムゲルもしくはアルミニウム塩のアジュバント（例えば、リン酸アルミニウムまたは水酸化アルミニウム）、リン酸カルシウム、エンドトキシン、およびトール様受容体アジュバントなどの前、それらの後、またはそれらとともに送達することができる。
【００５７】
本発明の治療剤は、治療用途に使用するための放射性核種も含むことができる。例えば、１１１Ｉｎなどのオージェ電子のエミッターを、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）または１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−四酢酸（ＤＯＴＡ）などのキレートと結合させて、処置に使用するべきリポソームに含めることができる。他の適切な放射性核種および／または放射性核種−キレートの結合としては、限定されないが、ベータ放射性核種（１７７Ｌｕ、１５３Ｓｍ、８８／９０Ｙ）とＤＯＴＡ、６４Ｃｕ−ＴＥＴＡ、１８８／１８６Ｒｅ（ＣＯ）３−ＩＤＡ；１８８／１８６Ｒｅ（ＣＯ）トリアミン（環状または直鎖状）、１８８／１８６Ｒｅ（ＣＯ）３−Ｅｎｐｙ２、および１８８／１８６Ｒｅ（ＣＯ）３−ＤＴＰＡを挙げることができる。
【００５８】
本発明のいくつかの実施形態では、治療剤は、シスプラチン、オキサリプラチン、カルボプラチン、ゲムシタビン、５−フルオロウラシル、ドキソルビシン、およびタキサンであり得る。いくつかの実施形態では、治療剤は、シスプラチンまたはオキサリプラチンである。
【００５９】
治療剤の充填は、例えば、以下の参考文献：ｄｅ  Ｖｉｌｌｉｅｒｓ，Ｍ．Ｍら、Ｅｄｓ．，Ｎａｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ（２００９）；Ｇｒｅｇｏｒｉａｄｉｓ，Ｇ．，Ｅｄ．，Ｌｉｐｏｓｏｍｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｅｎｔｒａｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ｄｒｕｇｓ  ａｎｄ  ｏｔｈｅｒ  ｍａｔｅｒｉａｌｓ  ｉｎｔｏ  ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ（２００６）に開示されている当技術分野において公知の様々な方法によって行うことができる。一部の実施形態では、１つまたは複数の治療剤をリポソームに充填することができる。リポソームの充填は、例えば、能動的または受動的に行うことができる。例えば、治療剤がリポソーム内に封入されるように、溶液中でのリポソームの自己組織化プロセスの間に治療剤を含めることができる。ある特定の実施形態では、治療剤は、リポソーム二重層に、または多重膜リポソームの複数の層内に包埋することもできる。代替の実施形態では、治療剤は、リポソームに能動的に充填することができる。例えば、治療剤を含有する溶液に対して二重層膜を透過性にするような条件（例えば、エレクトロポレーション）にリポソームを曝露し、それにより、治療剤がリポソームの内部体積に入ることを可能にすることができる。
【００６０】
診断剤
本発明の治療リポソームはまた、診断剤を含んでもよい。本発明に使用される診断剤は、例えば、以下の参考文献：Ａｒｍｓｔｒｏｎｇら、Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  Ｉｍａｇｉｎｇ，５ｔｈＥｄ．，Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ（２００４）；Ｔｏｒｃｈｉｌｉｎ，Ｖ．Ｐ．，Ｅｄ．，Ｔａｒｇｅｔｅｄ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ａｇｅｎｔｓ，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ（１９９５）；Ｖａｌｌａｂｈａｊｏｓｕｌａ，Ｓ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍａｇｉｎｇ：Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  ｆｏｒ  ＰＥＴ  ａｎｄ  ＳＰＥＣＴ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ（２００９）に示されている当技術分野において公知の任意の診断剤を挙げることができる。診断剤は、限定されないが、γ放射シグナル、放射性シグナル、エコー源性シグナル、光学シグナル、蛍光シグナル、吸収シグナル、磁気シグナル、または断層撮影シグナルを含む検出可能なシグナルを提供および／または増強する剤を含む様々な方法によって検出することができる。診断剤をイメージングするための技術としては、限定されないが、単光子放出コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）、磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）、光学的イメージング、ポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）、コンピュータ断層撮影（ＣＴ）、Ｘ線イメージング、およびγ線イメージングなどを挙げることができる。
【００６１】
いくつかの実施形態では、診断剤は、様々な画像診断技術に使用される金属イオンに結合するキレーターを含むことができる。例示的なキレーターとしては、限定されないが、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、［４−（１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカ−１−イル）メチル］安息香酸（ＣＰＴＡ）、シクロヘキサンジアミン四酢酸（ＣＤＴＡ）、エチレンビス（オキシエチレンニトリロ）四酢酸（ＥＧＴＡ）、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）、クエン酸、ヒドロキシエチルエチレンジアミン三酢酸（ＨＥＤＴＡ）、イミノ二酢酸（ＩＤＡ）、トリエチレンテトラアミン六酢酸（ＴＴＨＡ）、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−テトラ（メチレンホスホン酸）（ＤＯＴＰ）、１，４，８，１１−テトラアザシクロドデカン−１，４，８，１１−四酢酸（ＴＥＴＡ）、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−四酢酸（ＤＯＴＡ）、およびこれらの誘導体が挙げられる。
【００６２】
放射性同位体は、本明細書において記載される診断剤のいくつかに組み込むことができ、放射性同位体としては、γ線、ポジトロン、β粒子およびα粒子、ならびにＸ線を放出する放射性核種を挙げることができる。適切な放射性核種としては、限定されないが、２２５Ａｃ、７２Ａｓ、２１１Ａｔ、１１Ｂ、１２８Ｂａ、２１２Ｂｉ、７５Ｂｒ、７７Ｂｒ、１４Ｃ、１０９Ｃｄ、６２Ｃｕ、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、１８Ｆ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、３Ｈ、１２３Ｉ、１２５Ｉ、１３０Ｉ、１３１Ｉ、１１１Ｉｎ、１７７Ｌｕ、１３Ｎ、１５Ｏ、３２Ｐ、３３Ｐ、２１２Ｐｂ、１０３Ｐｄ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、４７Ｓｃ、１５３Ｓｍ、８９Ｓｒ、９９ｍＴｃ、８８Ｙおよび９０Ｙが挙げられる。ある特定の実施形態では、放射性作用物質としては、１１１Ｉｎ−ＤＴＰＡ、９９ｍＴｃ（ＣＯ）３−ＤＴＰＡ、９９ｍＴｃ（ＣＯ）３−ＥＮＰｙ２、６２／６４／６７Ｃｕ−ＴＥＴＡ、９９ｍＴｃ（ＣＯ）３−ＩＤＡ、および９９ｍＴｃ（ＣＯ）３トリアミン（環状または直鎖状）を挙げることができる。他の実施形態では、作用物質としては、１１１Ｉｎ、１７７Ｌｕ、１５３Ｓｍ、８８／９０Ｙ、６２／６４／６７Ｃｕ、または６７／６８Ｇａを含むＤＯＴＡおよびその種々の類似体を挙げることができる。いくつかの実施形態では、リポソームは、例えば、以下の参考文献：Ｐｈｉｌｌｉｐｓら、Ｗｉｌｅｙ  Ｉｎｔｅｒｄｉｓｃｉｐｌｉｎａｒｙ  Ｒｅｖｉｅｗｓ：Ｎａｎｏｍｅｄｉｃｉｎｅ  ａｎｄ  Ｎａｎｏｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１（１）：６９−８３（２００８）；Ｔｏｒｃｈｉｌｉｎ，Ｖ．Ｐ．＆Ｗｅｉｓｓｉｇ，Ｖ．，Ｅｄｓ．Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ  ２ｎｄ  Ｅｄ．：Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖ．Ｐｒｅｓｓ（２００３）；Ｅｌｂａｙｏｕｍｉ，Ｔ．Ａ．＆Ｔｏｒｃｈｉｌｉｎ，Ｖ．Ｐ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．Ｍｏｌ．Ｉｍａｇｉｎｇ  ３３：１１９６−１２０５（２００６）；Ｍｏｕｇｉｎ−Ｄｅｇｒａｅｆ，Ｍら、Ｉｎｔ’ｌ  Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ  ３４４：１１０−１１７（２００７）に示されているようなキレートに結合した脂質、例えばＤＴＰＡ−脂質を組み込むことによって放射標識することができる。
【００６３】
他の実施形態では、診断剤としては、光学剤、例えば、蛍光剤、リン光剤、および化学発光剤などを挙げることができる。多数の剤（例えば、色素、プローブ、標識、または指示薬）が当技術分野において公知であり、本発明に使用することができる。（例えば、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｔｈｅ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ−Ａ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ  Ｐｒｏｂｅｓ  ａｎｄ  Ｌａｂｅｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｔｅｎｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ（２００５）を参照のこと）。蛍光剤としては、様々な有機および／もしくは無機の低分子、または様々な蛍光タンパク質、およびこれらの誘導体を挙げることができる。例えば、蛍光剤としては、限定されないが、シアニン、フタロシアニン、ポルフィリン、インドシアニン、ローダミン、フェノキサジン、フェニルキサンテン、フェノチアジン、フェノセレナジン、フルオレセイン、ベンゾポルフィリン、スクアライン、ジピロロピリミドン、テトラセン、キノリン、ピラジン、コリン、クロコニウム、アクリドン、フェナントリジン、ローダミン、アクリジン、アントラキノン、カルコゲノピリリウム類似体、クロリン、ナフタロシアニン、メチン色素、インドレニウム色素、アゾ化合物、アズレン、アザアズレン、トリフェニルメタン色素、インドール、ベンゾインドール、インドカルボシアニン、ベンゾインドカルボシアニン、および４，４−ジフルオロ−４−ボラ−３ａ，４ａ−ジアザ−ｓ−インダセンの一般構造を有するＢＯＤＩＰＹ（商標）誘導体、ならびに／またはこれらの任意のコンジュゲートおよび／もしくは誘導体を挙げることができる。使用され得る他の剤としては、限定されないが、例えば、フルオレセイン、フルオレセイン−ポリアスパラギン酸コンジュゲート、フルオレセイン−ポリグルタミン酸コンジュゲート、フルオレセイン−ポリアルギニンコンジュゲート、インドシアニングリーン、インドシアニン−ドデカアスパラギン酸コンジュゲート、インドシアニン−ポリアスパラギン酸コンジュゲート、イソスルファンブルー、インドールジスルホネート、ベンゾインドールジスルホネート、ビス（エチルカルボキシメチル）インドシアニン、ビス（ペンチルカルボキシメチル）インドシアニン、ポリヒドロキシインドールスルホネート、ポリヒドロキシベンゾインドールスルホネート、リジッドヘテロ原子インドールスルホネート（ｒｉｇｉｄ  ｈｅｔｅｒｏａｔｏｍｉｃ  ｉｎｄｏｌｅ  ｓｕｌｆｏｎａｔｅ）、インドシアニンビスプロパン酸、インドシアニンビスヘキサン酸、３，６−ジシアノ−２，５−［（Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラキス（カルボキシメチル）アミノ］ピラジン、３，６−［（Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラキス（２−ヒドロキシエチル）アミノ］ピラジン−２，５−ジカルボン酸、３，６−ビス（Ｎ−アザテジノ）ピラジン−２，５−ジカルボン酸、３，６−ビス（Ｎ−モルホリノ）ピラジン−２，５−ジカルボン酸、３，６−ビス（Ｎ−ピペラジノ）ピラジン−２，５−ジカルボン酸、３，６−ビス（Ｎ−チオモルホリノ）ピラジン−２，５−ジカルボン酸、３，６−ビス（Ｎ−チオモルホリノ）ピラジン−２，５−ジカルボン酸Ｓ−オキシド、２，５−ジシアノ−３，６−ビス（Ｎ−チオモルホリノ）ピラジンＳ，Ｓ−ジオキシド、インドカルボシアニンテトラスルホネート、クロロインドカルボシアニン、および３，６−ジアミノピラジン−２，５−ジカルボン酸が挙げられる。
【００６４】
当業者であれば、使用される特定の光学剤が、励起に使用される波長、皮膚組織下の深さ、当技術分野において一般に周知の他の要因に依存し得ることを認識する。例えば、光学剤についての最適な吸収極大または、励起極大は、使用される剤に応じて変化し得るが、一般に、本発明の光学剤は、電磁スペクトルの紫外（ＵＶ）、可視、または赤外（ＩＲ）範囲の光を吸収するか、またはこれらの光によって励起される。イメージングについては、近ＩＲで吸収および放出する色素（約７００〜９００ｎｍ、例えば、インドシアニン）が好ましい。内視鏡的方法を使用する局所視覚化については、可視範囲で吸収する任意の色素が適切である。
【００６５】
いくつかの実施形態では、本発明のプロセスにおいて使用される非イオン化放射線は、約３５０ｎｍ〜約１２００ｎｍの波長の範囲であり得る。例示的な一実施形態では、蛍光剤は、電磁スペクトルの可視部分の青色範囲の波長（約４３０ｎｍ〜約５００ｎｍ）を有する光によって励起することができ、電磁スペクトルの可視部分の緑色範囲の波長（約５２０ｎｍ〜約５６５ｎｍ）で発光する。例えば、フルオレセイン色素は、約４８８ｎｍの波長を有する光で励起することができ、約５２０ｎｍの発光波長を有する。別の例として、３，６−ジアミノピラジン−２，５−ジカルボン酸は、約４７０ｎｍの波長を有する光で励起することができ、約５３２ｎｍの波長で蛍光を発する。別の実施形態では、光学剤の励起波長および発光波長は、電磁スペクトルの近赤外範囲に入り得る。例えば、インドシアニングリーンなどのインドシアニン色素は、約７８０ｎｍの波長を有する光で励起することができ、約８３０ｎｍの発光波長を有する。
【００６６】
さらに他の実施形態では、診断剤は、限定されないが、例えば、ヨウ素に基づくＸ線造影剤、超常磁性酸化鉄（ＳＰＩＯ）、およびガドリニウムまたはマンガンの錯体などを含む当技術分野において一般に周知の磁気共鳴（ＭＲ）造影剤およびＸ線造影剤を含むことができる。（例えば、Ａｒｍｓｔｒｏｎｇら、Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  Ｉｍａｇｉｎｇ，５ｔｈＥｄ．，Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ（２００４）を参照のこと）。いくつかの実施形態では、診断剤は、磁気共鳴（ＭＲ）イメージング剤を含むことができる。例示的な磁気共鳴剤としては、限定されないが、常磁性剤、および超常磁性剤などが挙げられる。例示的な常磁性剤としては、限定されないが、ガドペンテト酸、ガドテル酸、ガドジアミド、ガドリニウム、ガドテリドール、マンガホジピル、ガドベルセタミド、クエン酸第二鉄アンモニウム、ガドベン酸、ガドブトロール、またはガドキセト酸を挙げることができる。超常磁性剤としては、限定されないが、超常磁性酸化鉄およびフェリステンを挙げることができる。ある特定の実施形態では、診断剤は、例えば、以下の参考文献：Ｈ．Ｓ  Ｔｈｏｍｓｅｎ，Ｒ．Ｎ．Ｍｕｌｌｅｒ  ａｎｄ  Ｒ．Ｆ．Ｍａｔｔｒｅｙ，Ｅｄｓ．，Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｃｏｎｔｒａｓｔ  Ｍｅｄｉａ，（Ｂｅｒｌｉｎ：Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，１９９９）；Ｐ．Ｄａｗｓｏｎ，Ｄ．Ｃｏｓｇｒｏｖｅ  ａｎｄ  Ｒ．Ｇｒａｉｎｇｅｒ，Ｅｄｓ．，Ｔｅｘｔｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒａｓｔ  Ｍｅｄｉａ（ＩＳＩＳ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｍｅｄｉａ  １９９９）；Ｔｏｒｃｈｉｌｉｎ，Ｖ．Ｐ．，Ｃｕｒｒ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．１：１８３−２１５（２０００）；Ｂｏｇｄａｎｏｖ，Ａ．Ａら、Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌ．Ｒｅｖ．３７：２７９−２９３（１９９９）；Ｓａｃｈｓｅ，Ａら、Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ  Ｒａｄｉｏｌｏｇｙ  ３２（１）：４４−５０（１９９７）に提供されているＸ線造影剤を挙げることができる。Ｘ線造影剤の例としては、限定されないが、イオパミドール、イオメプロール、イオヘキソール、イオペントール、イオプロミド、イオシミド、イオベルソール、イオトロラン、イオタスル、イオジキサノール、イオデシモール、イオグルカミド、イオグルニド、イオグラミド、イオサルコール、イオキシラン、イオパミロン、メトリザミド、イオビトリドール、およびイオシメノールが挙げられる。ある特定の実施形態では、Ｘ線造影剤としては、イオパミドール、イオメプロール、イオプロミド、イオヘキソール、イオペントール、イオベルソール、イオビトリドール、イオジキサノール、イオトロラン、およびイオシメノールを挙げることができる。
【００６７】
上記治療剤と同じように、診断剤は、例えば、リポソーム内に包埋または封入されることを含む様々な方法で治療リポソームに付随させることができる。同様に、診断剤の充填を、例えば、以下の参考文献：ｄｅ  Ｖｉｌｌｉｅｒｓ，Ｍ．Ｍら、Ｅｄｓ．，Ｎａｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ（２００９）；Ｇｒｅｇｏｒｉａｄｉｓ，Ｇ．，Ｅｄ．，Ｌｉｐｏｓｏｍｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｅｎｔｒａｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ｄｒｕｇｓ  ａｎｄ  ｏｔｈｅｒ  ｍａｔｅｒｉａｌｓ  ｉｎｔｏ  ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ（２００６）に開示されている当技術分野において公知の様々な方法によって行うことができる。
【００６８】
製剤化および投与
いくつかの実施形態では、本発明は、リポソーム組成物および生理学的に（すなわち、薬学的に）許容され得る担体を含むことができる。本明細書において使用される場合、用語「担体」は、治療剤などの薬物用の希釈剤またはビヒクルとして使用される典型的には不活性の物質を指す。この用語は、組成物に凝集性の品質を付与する典型的には不活性の物質も包含する。典型的には、生理学的に許容され得る担体は、液体形態で存在する。液体担体の例としては、生理食塩水、リン酸塩緩衝液、規定緩衝食塩水（１３５〜１５０ｍＭのＮａＣｌ）、水、緩衝水、０．４％食塩水、０．３％グリシン、および安定性の増強を提供する糖タンパク質（例えば、アルブミン、リポタンパク質、グロブリンなど）などが挙げられる。生理学的に許容され得る担体は、投与される特定の組成物によって、ならびに組成物を投与するのに使用される特定の方法によって部分的には決定されるので、本発明の医薬組成物の多種多様な適切な製剤が存在する（例えばＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１７ｔｈ  ｅｄ．，１９８９を参照のこと）。
【００６９】
本発明の組成物は、慣例的な周知の滅菌技術によって滅菌してもよいか、あるいは、滅菌条件下で生産されてもよい。水溶液は、使用のためにパッケージに入れられてもよく、無菌条件下でろ過され、凍結乾燥されてもよく、その凍結乾燥調製物は、投与前に滅菌水溶液と合わされる。組成物は、生理的条件に近づけるために、必要に応じて薬学的に許容され得る補助物質、例えば、ｐＨ調整剤および緩衝剤、張性調整剤、および湿潤剤など、例えば、酢酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、モノラウリン酸ソルビタン、およびオレイン酸トリエタノールアミンを含有することができる。凍結乾燥リポソーム組成物用の安定剤などの糖も、組成物を安定化させるために含めることができる。
【００７０】
選択されたリポソーム組成物は、単独でまたは他の適切な成分と組み合わせて、吸入によって投与されるエアロゾル製剤（すなわち、これらは、「噴霧する」ことができる）にすることができる。エアロゾル製剤は、加圧された許容され得る噴霧剤、例えば、ジクロロジフルオロメタン、プロパン、および窒素などの中に入れることができる。
【００７１】
直腸投与に適切な製剤としては、例えば、坐剤基剤とともに有効量の、パッケージに入れられたリポソーム組成物を含む坐剤が挙げられる。適切な坐剤基剤としては、天然または合成のトリグリセリドまたはパラフィン炭化水素が挙げられる。加えて、選択されたリポソーム組成物と、例えば、液体トリグリセリド、ポリエチレングリコール、およびパラフィン炭化水素を含む基剤との組み合わせを含有するゼラチン直腸カプセルを使用することも可能である。
【００７２】
例えば、関節内（関節中）経路、静脈内経路、筋肉内経路、腫瘍内経路、皮内経路、腹腔内経路、ならびに皮下経路などによる非経口投与に適切な製剤は、抗酸化剤、緩衝剤、静菌剤、および意図されたレシピエントの血液と製剤とを等浸透圧にする溶質を含有することができる水性および非水性の等張性滅菌注射液剤、ならびに懸濁化剤、可溶化剤、増粘剤、安定剤、および保存剤を含むことができる水性および非水性滅菌懸濁液を包含する。注射液剤および懸濁液は、滅菌粉末、顆粒、および錠剤からも調製することができる。本発明の実施において、組成物は、例えば、静脈内注入によって、局所投与、腹腔内投与、嚢内投与、または髄腔内投与することができる。非経口投与および静脈内投与は、好ましい投与方法である。リポソーム組成物の製剤は、単位用量または複数回用量の密閉容器、例えば、アンプルおよびバイアルで提供され得る。
【００７３】
医薬調製物は、好ましくは、単位剤形である。このような形態では、調製物は、適切な量の活性成分、例えば、リポソーム組成物を含有する単位用量にさらに小分けされる。単位剤形は、パッケージに入れられた調製物であってよく、パッケージは、別個の量の調製物を含有する。組成物は、所望により、他の適合性治療剤も含有することができる。
【００７４】
癌を処置するための治療用途において、本発明の医薬組成物に用いられる治療剤および／または診断剤を含むリポソーム組成物は、一日当たり約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約１０００ｍｇ／ｋｇの初期投与量で投与することができる。約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約５００ｍｇ／ｋｇ、または約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約２００ｍｇ／ｋｇ、または約１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ、または約１０ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇの一日量範囲を使用することができる。しかしながら、投与量は、患者の要求事項、処置される状態の重症度、および使用されるリポソーム組成物に応じて変更することができる。例えば、投与量は、特定の患者において診断された癌の種類および期を考慮して経験的に決定することができる。患者に投与される用量は、本発明との関連において、経時的に患者における有益な治療応答に影響を与えるのに十分であるべきである。用量のサイズはまた、特定の患者における特定のリポソーム組成物の投与に付随する、あらゆる有害な副作用の存在、性質、および程度によって決定される。特定の状況に対して適切な投与量を決定することは、従事者の技量の範囲内である。一般に、処置は、リポソーム組成物の最適用量未満のより少ない投与量で開始される。その後、投与量を、状況下で最適の効果に到達するまで、少しずつ増加させる。便宜上、所望により、総一日投与量を分割して、１日の間に一部ずつ投与することができる。
【００７５】
標的化剤
いくつかの場合、標的部位におけるリポソームの蓄積は、癌組織などのある特定の組織の血管透過性および滞留性亢進特性によるものでもよい。このような形での蓄積は、部分的には、リポソームのサイズに起因することが多く、特別な標的化官能基を必要としなくてもよい。他の場合、本発明のリポソームはまた、標的化剤を含むことができる。一般に、本発明の標的化剤は、器官、組織、細胞、細胞外マトリックス、または細胞内領域に関連する標的などの、対象とする任意の標的と結合することができる。ある特定の実施形態では、標的は、癌状態などの特定の病態に関連し得る。いくつかの実施形態では、標的化成分は、受容体などの唯一の標的に特異的であり得る。適切な標的としては、限定されないが、ＤＮＡ、ＲＮＡなどの核酸、またはこれらの修飾誘導体を挙げることができる。適切な標的としては、限定されないが、タンパク質、例えば、細胞外タンパク質、受容体、細胞表面受容体、腫瘍マーカー、膜貫通タンパク質、酵素、または抗体も挙げることができる。適切な標的としては、例えば、細胞表面に存在し得る単糖、二糖、または多糖などの炭水化物を挙げることができる。
【００７６】
ある特定の実施形態では、標的化剤としては、標的リガンド（例えば、ＲＧＤ含有ペプチド）、標的リガンドの低分子模倣体（例えば、ペプチド模倣リガンド）、または特定の標的に特異的な抗体もしくは抗体断片を挙げることができる。いくつかの実施形態では、標的化剤としては、葉酸誘導体、Ｂ−１２誘導体、インテグリンＲＧＤペプチド、ＮＧＲ誘導体、および、ソマトスタチン誘導体またはソマトスタチン受容体に結合するペプチド（例えば、オクトレオチドおよびオクトレオテート）などをさらに挙げることができる。本発明の標的化剤としては、アプタマーも挙げることができる。アプタマーは、対象とする標的と会合または結合するように設計され得る。アプタマーは、例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ、および／またはペプチドから構成され得、アプタマーの特定の側面は、当技術分野において周知である。（例えば、Ｋｌｕｓｓｍａｎ，Ｓ．，Ｅｄ．，Ｔｈｅ  Ａｐｔａｍｅｒ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ，Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ（２００６）；Ｎｉｓｓｅｎｂａｕｍ，Ｅ．Ｔ．，Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．２６（８）：４４２−４４９（２００８）を参照のこと）。
【００７７】
活性剤を投与するためのキット
別の態様では、本発明はまた、病態を処置するために、リポソームおよび脂質ナノ粒子を被験体に投与するためのキットを提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、治療剤を被験体に送達するためのキットであって、ａ）治療剤を含有するリポソームを含む第１の組成物；およびｂ）非イオン性誘発剤を含有する脂質ナノ粒子を含む第２の組成物を含み、前記被験体への投与前は前記第１および第２の組成物が個別に保管されているキットを提供する。
【００７８】
このようなキットは、典型的には、癌状態などの病態を処置するのに必要な２つもしくは２つより多くの構成要素を含む。構成要素としては、本発明の脂質組成物、試薬、緩衝剤、容器、および／または装置を挙げることができる。リポソームおよび脂質ナノ粒子を凍結乾燥形態にして、次いで投与前に再構成することができる。ある特定の実施形態では、本発明のキットは、患者の病態を処置するのに使用される１つもしくは複数の構成要素を含むことができるパッケージングアセンブリを含むことができる。例えば、パッケージングアセンブリは、本明細書において記載される治療リポソームおよび攻撃剤を収容する個別の容器を含むことができる。個別の容器は、患者への投与前に組成物と混合することができる他の賦形剤または剤を含むことができる。いくつかの実施形態では、医師は、特定の患者に必要な処置または診断に応じて、ある特定の構成要素および／またはパッケージングアセンブリを選択および適合させることができる。
【実施例】
【００７９】
ＩＶ．実施例
表Ａの実施例によって本発明の実施を例示するが、これらによって限定されることを意図するものではない。これらの実施例により、別の方法では放出特性が低い治療リポソームからのカーゴの放出を誘発するために攻撃リポソームを使用することができることが、ｉｎ  ｖｉｔｒｏではっきりと実証されている。実施例１、２および１１〜１２では、治療リポソームは、シスプラチンまたはオキサリプラチンを含む細胞毒性剤を含有する。実施例３〜１０では、治療リポソーム組成物中のマーカーとして、５−カルボキシフルオレセイン（５−ＣＦ）を使用する。これらのサンプルの特徴を以下の表Ａに要約する。実施例１〜５および１０は、ステルス官能基を有するかまたは有さない様々な治療リポソーム組成物（パートＡ）の放出を誘発および／または増強するために、同じ攻撃リポソーム（パートＢ）を使用することを示す。実施例６〜９は、攻撃リポソームにおける誘発剤の重要な役割を示す。実施例８および９では、攻撃リポソームの表面電荷は、本質的には中性である。
【表Ａ】
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【００８０】
実施例１
オキサリプラチンを含有する治療リポソーム（ＮＬＩＣＯＶ００３Ｆ−０２）および攻撃リポソーム（４４６０−０７５  ＤＰＰＣ／Ｃｈｏｌ／ＤＯＴＡＰ／ＴＰＧＳ）の組成を表１に示す。治療リポソーム（Ｎｏｒｔｈｅｒｎ  Ｌｉｐｉｄ  Ｉｎｃ．）は、２．９ｍｇ／ｍＬのオキサリプラチンおよび７１．８ｍｇ／ｍＬの総脂質を含有していた。攻撃リポソームは、以下の工程によって調製した。
１．すべての脂質を計量して丸底フラスコに入れた。
２．３：１（ｖ／ｖ）クロロホルム／メタノールをフラスコに加えて、すべての脂質を溶解させた；脂質濃度は、約２．５重量％であった。
３．４０℃でロータリーエバポレータを使用して脂質混合物から溶媒を除去し、ロータリーエバポレータによって４０℃で０．５時間真空にして、残った溶媒を除去した。
４．ハウスバキューム下、室温で一晩乾燥し続けて、微量溶媒を除去した。
５．リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）１×溶液（０．００６７Ｍ）をフラスコ底部周辺の乾燥脂質薄膜に添加し、分散物を７０℃で１時間撹拌した。
６．約２００ｐｓｉの圧力下、１０ｍＬエクストルーダにて、７０℃で、二重パックした２００ｎｍポリカーボネート膜に通して、脂質分散物（多層ベシクル分散物）を５回押し出した。
７．約３００ｐｓｉの圧力下、７０℃で、二重パックした１００ｎｍポリカーボネート膜に通して、押し出しを１０回継続した。
８．押し出したリポソームサンプルを収集し、Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ  Ｎａｎｏ  ＺＳを使用して粒径およびゼータ電位を測定した。
【００８１】
ＰＢＳ１×（ｐＨ＝７．４および５．０）溶液中で、一定分量の攻撃リポソームを治療リポソームと混合することによって、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおけるＮＬＩＣＯＶ００３Ｆ−０２からのオキサリプラチンの放出を行った。第１のサンプルを室温で直ぐに（３分未満以内に）収集し、オキサリプラチンの放出を測定するために調製した。サンプルを１６５００ｒｐｍで５分間、Ａｍｉｃｏｎ  ５０Ｋ  ＭＷＣＯ遠心フィルタに通してろ過することによって、放出を測定した。リポソームを含まない水相中に放出されたオキサリプラチンをＩＣＰ−ＯＥＳによって分析した。即時のサンプルを採取した後、続いて、混合物を３７℃で４８時間インキュベートした。続いて、オキサリプラチンの放出を分析するために、１時間、６時間、２４時間および４８時間の時点で、サンプルを収集した。結果を表１および２に示す。表２に示されており、図１にプロットされているデータは、等量の攻撃リポソーム（４４６０−０７５）を加えることによって、治療リポソーム（ＮＬＩＣＯＶ００３Ｆ−０２）の全放出が、０時間の時点の約５％から６時間で約４０％に増加したことを示している。この結果はまた、両方のｐＨ条件において、一定量の攻撃リポソームによって、治療リポソーム内容物の全放出が増加することを示している。治療リポソームは、１０ｍｏｌ％のコレステロールを含有する非ステルス荷電リポソームである。攻撃リポソームは逆帯電しており、３２ｍｏｌ％のＴＰＧＳを含有する。
【表１】
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【表２】
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【００８２】
実施例２
この実施例では、異なる量の攻撃リポソームを加えると、治療リポソームからのシスプラチンが増強することを例示する。２．５ｍｇ／ｍＬのシスプラチンおよび７７．５ｍｇ／ｍＬの総脂質（ＮＬＩＣＯＶ００ＡＲ−０２，Ｎｏｒｔｈｅｒｎ  Ｌｉｐｉｄｓ  Ｉｎｃ．）を含有する治療リポソームを、受動的なローディング手順によって調製した。ＤＰＰＣ、コレステロール、ＤＯＴＡＰ、およびＴＰＧＳ（４４６０−０７５）からなる攻撃リポソームは、実施例１に記載したように調製した。
【００８３】
ＰＢＳ１×（ｐＨ＝７．４および５．０）溶液中で、一定分量の攻撃リポソーム（４４６０−０７５）を治療リポソームに加えることによって、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおけるＮＬＩＣＯＶ００ＡＲ−０２からのシスプラチンの放出を行った。サンプルを室温で直ぐに、ならびに３７℃でインキュベートした１時間後、６時間後、２４時間後および４８時間後に収集した。サンプルを１６５００ｒｐｍで５分間、Ａｍｉｃｏｎ  ５０Ｋ  ＭＷＣＯ遠心フィルタに通してろ過した。リポソームを含まない水相中に放出されたシスプラチンをＩＣＰ−ＯＥＳによって分析した。結果を表３および４に示す。表４に示されているデータをプロットし、図２に示した。この結果は、等量の攻撃リポソームによって、４８時間の時点における治療リポソーム（ＮＬＩＣＯＶ００ＡＲ−０２）の全放出が、攻撃リポソームなしの場合の約１％から約２７％に増加したことを示している。この結果はまた、両方のｐＨ条件において、攻撃リポソームの量が増加するにつれて、治療リポソームの全放出が増加したことを示している。この実施例では、治療リポソームは、１０ｍｏｌ％のコレステロールを含有する非ステルス荷電リポソームであった。攻撃リポソームは逆帯電しており、３２ｍｏｌ％のＴＰＧＳを含有していた。
【表３】
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【表４】
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【００８４】
実施例３
この実施例では、攻撃リポソーム（パートＢ、４４６０−０７５）は、表５に示されているように、ＤＰＰＣ、コレステロール、ＤＯＴＡＰ、およびＴＰＧＳから構成されていた；調製方法は、実施例１に記載したのと同じであった。治療リポソーム（パートＡ、４４６０−０９０）は、マーカーとして５−カルボキシフルオレセイン（５−ＣＦ）を含有していた。５−ＣＦを含有するリポソームは、下記のように、受動的なローディング手順によって作製した。
１．脂質成分を計量して丸底フラスコに入れた。
２．３：１（ｖ／ｖ）クロロホルム／メタノールを加えて、すべての脂質を溶解させた；濃度は、約２．５重量％であった。
３．４０℃でロータリーエバポレータを使用して脂質混合物から溶媒を除去し、ロータリーエバポレータによって４０℃で０．５時間真空にして、残った溶媒を除去した。
４．ハウスバキューム（ｈｏｕｓｅ  ｖａｃｕｕｍ）を使用して、室温で一晩乾燥し続けて、微量溶媒を除去した。
５．リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）１×溶液（０．００６７Ｍ）をフラスコ底部周辺の乾燥脂質薄膜に添加し、得られた分散物を７０℃で１時間撹拌した。この工程では、５−カルボキシフルオレセイン（５−ＣＦ）を２．０ｍｇ／ｍＬの濃度でＰＢＳに添加した。分散物のｐＨ値を７．１に調整した。
６．約２００ｐｓｉの圧力下、１０ｍＬエクストルーダによって、７０℃で、二重パックした２００ｎｍポリカーボネート膜に通して、脂質ベシクル分散物を５回押し出した。
７．約３００ｐｓｉの圧力下、７０℃で、二重パックした１００ｎｍポリカーボネート膜に通して、押し出しを１０回継続した。
８．最終リポソーム調製物を透析用の３．０〜１２．０ｍＬの２０，０００ＭＷＣＯカセットに注入した。
９．１０００ｍＬのＰＢＳ１×溶液に対して、リポソーム調製物を２４時間透析した。
１０．１０００ｍＬの新鮮なＰＢＳ１×緩衝液を用いて、透析をさらに２回繰り返した。１１．透析したリポソームを収集し、Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ  Ｎａｎｏ  ＺＳを使用して粒径およびゼータ電位を測定した。
【００８５】
リポソームパートＡをパートＢと混合し、Ｗａｔｅｒｓ２４７５多波長蛍光検出器（Ｓ／Ｎ６０８９７５４０６Ｍ）を備えるＡｇｉｌｅｎｔ１２００  ＨＰＬＣによって、リポソームを含まない水相への５−ＣＦの放出を測定した。カラムは、ＢＤＳ  Ｈｙｐｅｒｓｉｌ  Ｃ１８カラム（１５０ｍｍ×３．０μｍ，Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｓ／Ｎ：０９０８３８９Ｔ，Ｌｏｔ＃１０７７０）であった。移動相は、５０ｍＭ酢酸アンモニウムを含む５％（ｗｔ）のＩＰＡ／５％（ｗｔ）のＡＣＮ／９０％（ｗｔ）の水からなった。勾配は、適用しなかった。流量は、４０℃で０．８ｍＬ／分であった。注入量は、５．０μＬであった。実行時間を５分間に設定し、ＣＦ−５を約１．０分の時点で溶出した。蛍光検出については、励起波長４９２ｎｍおよび発光波長５１４ｎｍを使用した。検出器において、ＥＵＦＳを５０，０００に設定し、ゲインを１．０に設定した。ＰＢＳ１×中のＣＦ−５の外部標準を較正に使用した。直線較正範囲は０．０５μｇ／ｍＬ〜２．０μｇ／ｍＬであり、その結果、Ｒ２値は０．９９よりも大きかった。
【００８６】
表６に示されており、図３にプロットされている結果は、ｐＨ７．４のＰＢＳ１×中で、等量の攻撃リポソーム（４４６０−０７５）を加えることによって、４８時間の時点における治療リポソーム（４４６０−０９０）の全放出が、約４％から約１６％に増加したことを示している。この結果はまた、攻撃リポソームの初期量を増加させることによって、治療リポソームの放出が増加したことを示唆している。この実施例では、リポソームパートＡは、４０ｍｏｌ％のコレステロールを含有する非ステルス荷電リポソームであった。攻撃リポソームパートＢは逆帯電しており、ＴＰＧＳを含有していた。
【表５】
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【表６】
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【００８７】
実施例４
この実施例では、治療リポソームパートＡ（４４６０−０７７）は、マーカーとして５−ＣＦ（５−カルボキシフルオレセイン）を含有しており、脂質組成は、実施例１および２の治療リポソーム組成物と同じであった。攻撃リポソームであるパートＢの組成は、実施例１および２と同じであった（表７を参照のこと）。
【００８８】
表８に示されており、図４にプロットされている結果は、ｐＨ７．４のＰＢＳ１×中で、等量の攻撃リポソームパートＢ（４４６０−０７５）を加えることによって、４８時間の時点におけるリポソームパートＡ（４４６０−０７７）からの５−ＣＦの全放出が、約５％から約３２％に増加したことを示している。この結果はまた、リポソームパートＢの初期量が増加するにつれて、リポソームパートＡからの５−ＣＦの放出が増加したことを示している。これらの結果は、実施例１および２に記載した知見と一致している。この実施例では、リポソームパートＡは、１０ｍｏｌ％のコレステロールを含有する非ステルス荷電リポソームであった。攻撃リポソームパートＢは逆帯電しており、ＴＰＧＳを含有していた。
【表７】
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【表８】
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【００８９】
実施例５
この実施例では、実施例３および４のように、リポソームパートＡ（４３８６−１４３）を５−カルボキシフルオレセイン（５−ＣＦ）と共に内部水相にロードした。リポソームパートＡおよびＢ（４４６０−０７５）の組成を表９に示す。
【００９０】
表１０に示されており、図５にプロットされている結果は、ｐＨ７．４のＰＢＳ１×中で、等量の攻撃リポソームパートＢ（４４６０−０７５）を加えることによって、４８時間の時点におけるリポソームパートＡ（４３８６−１４３）からの５−ＣＦの全放出が、約２％から約２０％に増加したことを示している。この結果はまた、攻撃リポソームパートＢの初期量が増加するにつれて、リポソームパートＡの放出が増加したことを示している。この実施例では、治療リポソームは、４０ｍｏｌ％のコレステロールを含有するステルスリポソームであった。攻撃リポソームは逆帯電しており、ＴＰＧＳを含有していた。
【表９】
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【表１０】
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【００９１】
実施例６
この実施例では、リポソームパートＡおよびＢの組成を表１１に示す。治療リポソームパートＡ（４４６０−０９０）は、５−ＣＦを含有していた。攻撃リポソームであるパートＢ（４４６０−０８４）は、誘発剤ＴＰＧＳをその組成に含んでいなかったことに留意するべきである。表１２に示されており、図６にプロットされている結果は、ｐＨ７．４のＰＢＳ１×中で、攻撃リポソームパートＢ（４４６０−０８４）を加えることによって、リポソームパートＡ（４４６０−０９０）の全放出が、影響を受けなかったことを示している。この実施例では、治療リポソームは、４０ｍｏｌ％のコレステロールを含有する非ステルスリポソームであった。攻撃リポソームは逆帯電していたが、ＴＰＧＳを含んでいなかった。
【００９２】
この実施例は、リポソームパートＡの放出を誘発するために、ＴＰＧＳのような誘発剤が攻撃リポソームの組成に必要であることを明らかに例証している。ＴＰＧＳがない場合、本質的には、この実施例に示されているような放出の増強は観察されなかった。
【表１１】
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【表１２】
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【００９３】
実施例７
この実施例では、リポソームパートＡおよびＢの組成を表１３に示す。治療リポソームパートＡ（４４６０−０７７）は、５−ＣＦを含有していた。攻撃リポソームであるパートＢ（４４６０−０８４）は、誘発剤ＴＰＧＳをその組成に含有していなかったことに留意するべきである。表１４に示されており、図７にプロットされている結果は、ｐＨ７．４のＰＢＳ１×中で、攻撃リポソームパートＢ（４４６０−０８４）を加えることによって、リポソームパートＡ（４４６０−０７７）の全放出が、影響を受けなかったことを示している。この実施例では、治療リポソームは、１０ｍｏｌ％のコレステロールを含有する非ステルスリポソームであった。攻撃リポソームは逆帯電していたが、ＴＰＧＳを含んでいなかった。この実施例に示されているように、ＴＰＧＳがパートＢに含まれていない場合には、パートＡの放出の増強は観察されなかった。
【表１３】
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【表１４】
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【００９４】
実施例８
この実施例では、リポソームパートＡおよびＢの組成を表１５に示す。治療リポソームパートＡ（４４６０−０９０）は、実施例６と同じ５−ＣＦを含有していた。攻撃リポソーム（４３８４−０８６）は正に荷電した脂質ＤＯＴＡＰを含有していなかったが、３０ｍｏｌ％のＴＰＧＳを含有していた。表１６に示されており、図８にプロットされている結果は、ｐＨ７．４のＰＢＳ１×中で、等量の攻撃リポソームを加えることによって、４８時間の時点におけるリポソームパートＡ（４４６０−０９０）からの５−ＣＦの全放出が、約４％から約２０％に増加したことを示している。この結果はまた、攻撃リポソームの初期量を増加させることによって、治療リポソームからの５−ＣＦの放出が増加したことを示している。治療リポソームは、４０ｍｏｌ％のコレステロールレベルを含有するステルスリポソームであった。
【表１５】
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【表１６】
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【００９５】
実施例９
この実施例では、リポソームパートＡおよびＢの組成を表１７に示す。治療リポソームパートＡ（４４６０−０７７）は、実施例４と同じ５−ＣＦを含有していた。治療リポソームは、１０ｍｏｌ％のコレステロールを含有するステルスリポソームであった。攻撃リポソームパートＢ（４４６０−０８６）は、実施例５のように、３０モル％のＴＰＧＳをその組成に含有しており、荷電脂質ＤＯＴＡＰを含有していなかった。表１８に示されており、図９にプロットされている結果は、ｐＨ７．４のＰＢＳ１×中で、等量の攻撃リポ
ソーム（４３８４−０８６）を加えることによって、４８時間の時点におけるリポソーム（４４６０−０７７）からの５−ＣＦの全放出が、約５％から約３４％に増加したことを示している。この結果はまた、攻撃リポソームの初期量を増加させることによって、リポソーム（４４６０−０７７）からの５−ＣＦの放出が増加したことを示している
【表１７】
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【表１８】
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【００９６】
実施例１０
この実施例では、リポソームパートＡおよびＢの組成を表１９に示す。治療リポソームパートＡ（４４６０−０９０）は、実施例６のように５−ＣＦを含有していた。治療リポソームは、４０ｍｏｌ％のコレステロールを含有する非ステルスリポソームであった。攻撃リポソームパートＢ（４４６０−０７５）は、３２モル％のＴＰＧＳ、および攻撃リポソームに正電荷を与える１６モル％のＤＯＴＡＰを含有していた。表２０に示されており、図１０にプロットされている結果は、ｐＨ値を７．４から５．０に変化させた場合でさえも、攻撃リポソーム（４４６０−０７５）を加えることによって、治療リポソーム（４４６０−０９０）からの５−ＣＦの全放出が、約５％から約２６％に増加したことを示している。この結果は、攻撃リポソームの初期量を増加させることによって、リポソーム（４４６０−０９０）の全放出が増加したことを明確に示している。
【表１９】
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【表２０】
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【００９７】
実施例１１
この実施例では、リポソームパートＡおよびＢの組成を表２１に示す。治療リポソーム（ＮＬＩＣＯＶ００３Ｆ−０２）は、実施例１のようにオキサリプラチンを含有していた。治療リポソームは、１０ｍｏｌ％のコレステロールを含有する非ステルスリポソームであった。攻撃リポソーム（４４６０−１０４）は、３２ｍｏｌ％のＴＰＧＳ、および攻撃リポソームに正電荷を与える１６ｍｏｌ％のＤＯＴＡＰを含有していた。表２２に示されており、図１１にプロットされている結果は、ｐＨ７．４およびｐＨ５．０の両方でのＰＢＳ１×中で、２０％の攻撃リポソーム（４４６０−１０４）を加えることによって、４８時間の時点における治療リポソーム（ＣＯＶ００３Ｆ−０２）の全放出が、約５％から約２５％に増加したことを示している。
【表２１】
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【表２２】
2019023243.tif 000024
【００９８】
実施例１２
この実施例では、リポソームパートＡおよびＢの組成を表２３に示す。治療リポソーム（ＮＬＩ４４８１１０１）は、シスプラチンを含有していた。治療リポソームは、４０ｍｏｌ％のコレステロールを含むステルスリポソームであった。攻撃リポソーム（４４６０−１０４）は、３２ｍｏｌ％のＴＰＧＳ、および攻撃リポソームに正電荷を与える１６ｍｏｌ％のＤＯＴＡＰを含有していた。表２３に示されており、図１２にプロットされている結果は、ｐＨ７．４およびｐＨ５．０の両方でのＰＢＳ１×中で、攻撃リポソーム（４４６０−１０４）を加えることによって、４８時間後における治療リポソーム（ＮＬＩ４４８１１０１）の放出が、約１％から約５％に増加したことを示している。この結果はまた、攻撃リポソームの量を増加させることによって、治療リポソームからのシスプラチンの放出が増加したことを示している。治療リポソームは、４０ｍｏｌ％のコレステロールを含有するステルスリポソームであった。攻撃リポソームは逆帯電しており、３２ｍｏｌ％のＴＰＧＳを含有していた。
【表２３】
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【表２４】
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【００９９】
理解を明確にする目的で、例示および実施例によって上記本発明をいくらか詳細に説明したが、当業者であれば、添付の特許請求の範囲の範囲内で、ある特定の変更および修正を行ってもよいことを認識するであろう。加えて、本明細書において提供されている各参考文献は、各参考文献が参考として個々に組み込まれるのと同程度に、その全体が参考として援用される。本出願と本明細書において示されている参考文献との間に矛盾が存在す
る場合、本出願を優先するものとする。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【外国語明細書】
2019023243000001.pdf