(57)【要約】      （修正有）【課題】癌患者から特異的に発見されるルテリアル変異体を腫瘍マーカーおよび癌治療のためのターゲットとし、癌の予防または治療に使用可能な抗癌剤のスクリーニング方法の提供。【解決手段】（ａ）患者または正常人から既に排出された体液からルテリアル変異体（ｍｕｔａｎｔ  ｌｕｔｅｒｉａｌ）または正常ルテリアルを分離する段階と、（ｂ）前記分離したルテリアル変異体に抗癌剤または癌予防剤候補物質を処理する段階と、（ｃ）候補物質処理前の対照群と比較して、ルテリアル変異体のサイズを減少させるか、形態を変化させるか、または運動性を増加させる候補物質を抗癌剤として、または候補物質処理前の対照群と比較して、ルテリアルのサイズ増加を抑制させるか、形態変化を最小化するか、または運動性を維持させる候補物質を癌予防物質として選別する段階と、を含む抗癌剤または癌予防剤スクリーニング方法。【選択図】図３６
2019023643.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）患者から既に排出された体液からルテリアル変異体を分離する段階と、
（ｂ）前記分離したルテリアル変異体に抗癌剤候補物質を処理する段階と、
（ｃ）候補物質処理前の対照群と比較して、ルテリアル変異体のサイズを減少させるか、
形態を変化させるか、または運動性を増加させる候補物質を抗癌剤として選別する段階と
、を含む抗癌剤スクリーニング方法。
【請求項２】
（ａ）正常人から既に排出された体液から正常なルテリアルを分離する段階と、
（ｂ）癌予防候補物質の存在下で前記分離した正常なルテリアルを培養する段階と、
（ｃ）候補物質処理前の対照群と比較して、ルテリアルのサイズの増加を抑制させるか、
形態変化を最小化するか、または運動性を維持させる候補物質を癌予防物質として選別す
る段階と、を含む癌予防剤スクリーニング方法。
【請求項３】
（ａ）段階の既に排出された体液は血液、唾液、リンパ管、精液、膣液、母乳、初乳、
臍帯血、脳細胞、脊髄及び骨髄からなる群より選択されることを特徴とする請求項１また
は２に記載のスクリーニング方法。
【請求項４】
前記（ｂ）段階の候補物質は天然抽出物、食品または植物由来ルテリオン、ＲＮＡｉ、
アプタマー、および化合物からなる群より選択される一つ以上であることを特徴とする請
求項１または２に記載のスクリーニング方法。
【請求項５】
前記植物由来ルテリオンは漆皮、レンギョウ、白茯苓、トウキおよびキウイフルーツか
らなる群より選択される一つ以上の薬用植物であることを特徴とする請求項４に記載のス
クリーニング方法。
【請求項６】
前記植物由来ルテリオンは長径または短径が５０〜５００ｎｍであることを特徴とする
請求項４に記載のスクリーニング方法。
【請求項７】
前記（ｃ）段階は、候補物質処理前の対照群と比較して、鞭毛型、微小管型、マス型、
ロッド型または複合型を有するルテリアル変異体が８０％以下に減少するか、あるいはル
テリアル変異体が円形または楕円形のルテリアルに回復する場合に、抗癌剤候補物質を抗
癌剤として選別することを含む請求項１に記載のスクリーニング方法。
【請求項８】
前記（ｃ）段階は、候補物質処理１時間経過後、ルテリアル変異体の直径が、候補物質
処理前のルテリアル変異体直径の７０％以下に減少する場合に、抗癌剤候補物質を抗癌剤
として選別することを含む請求項１に記載のスクリーニング方法。
【請求項９】
候補物質処理１時間経過後に、ルテリアル変異体の直径が、候補物質処理前のルテリア
ル変異体の長径及び短径の７０％以下に減少する場合に、抗癌剤候補物質を抗癌剤として
選別することを特徴とする請求項８に記載のスクリーニング方法。
【請求項１０】
前記（ｃ）段階は候補物質処理前の対照群と比較して、ナノトラッキング速度が１２ｎ
ｍ／ｓｅｃ以上に回復される場合に、抗癌剤候補物質を抗癌剤として選別することを含む
請求項１に記載のスクリーニング方法。
【請求項１１】
前記（ｃ）段階は、候補物質処理前の対照群と比較して、ナノトラッキング速度が１０
０〜５００ｎｍ／ｓｅｃに回復される場合に、抗癌剤候補物質を抗癌剤として選別するこ
とを特徴とする請求項１０に記載のスクリーニング方法。
【請求項１２】
前記（ｃ）段階は、候補物質処理前の対照群と比較して、電気泳動移動度が３０％以上
増加する場合に、抗癌剤候補物質を抗癌剤として選別することを含む請求項１に記載のス
クリーニング方法。
【請求項１３】
前記（ｃ）段階は、ルテリアルをローダミン１２３（Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ１２３）、ミ
トトラッカー（Ｍｉｔｏ‐ｔｒａｃｋｅｒ）、アクリジンオレンジ（Ａｃｒｉｄｉｎｅ  
Ｏｒａｎｇｅ）、ＤＡＰＩおよびヤヌスグリーンＢ（Ｊａｎｕｓ  ｇｒｅｅｎ  Ｂ）から
なる群から選択される１以上の染料で染色し、その変化を顕微鏡で観察することを含む請
求項１または２に記載のスクリーニング方法。
【請求項１４】
前記ルテリアルを暗視野顕微鏡（Ｄａｒｋ  ｆｉｅｌｄ  ｍｉｃｒｏ‐ｓｃｏｐｅ；Ｕ
ｌｔｒａ  ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ）、ラマン分光計（Ｒａｍａｎ  ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔ
ｅｒ）、Ｌｅｉｃａ、ＡＦＭ（Ａｔｏｍｉｃ  Ｆｏｒｃｅ  Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ）、Ｍ
ＦＭ（Ｍａｇｎｅｔｉｃ  ｆｏｒｃｅ  ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ）、ＳＴＭ（Ｓｃａｎｎｉ
ｎｇ  ｔｕｎｎｅｌｉｎｇ  ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ）、ＣＬＳＭ（Ｃｏｎｆｏｃａｌ  Ｌ
ａｓｅｒ  Ｓｃａｎｎｉｎｇ  Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ）、ＮＳＯＭ（Ｎｅａｒ‐ｆｉｅｌ
ｄ  ｓｃａｎｎｉｎｇ  ｏｐｔｉｃａｌ  ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ）、ＳＥＭ（Ｓｃａｎｎ
ｉｎｇ  Ｅｌｅｃｔｒｏｎ  Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ）またはＴＥＭ（Ｔｒａｎｓｍｉｓｓ
ｉｏｎ  Ｅｌｅｃｔｒｏｎ  Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ）で観察することを特徴とする請求項
１３に記載のスクリーニング方法。
【請求項１５】
前記ルテリアルを暗視野顕微鏡（Ｄａｒｋ  ｆｉｅｌｄ  ｍｉｃｒｏ‐ｓｃｏｐｅ；Ｕ
ｌｔｒａ  ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ）、ラマン分光計（Ｒａｍａｎ  ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔ
ｅｒ）、Ｌｅｉｃａ、ＡＦＭ（Ａｔｏｍｉｃ  Ｆｏｒｃｅ  Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ）、Ｍ
ＦＭ（Ｍａｇｎｅｔｉｃ  ｆｏｒｃｅ  ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ）、ＳＴＭ（Ｓｃａｎｎｉ
ｎｇ  ｔｕｎｎｅｌｉｎｇ  ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ）、ＣＬＳＭ（Ｃｏｎｆｏｃａｌ  Ｌ
ａｓｅｒ  Ｓｃａｎｎｉｎｇ  Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ）、ＮＳＯＭ（Ｎｅａｒ‐ｆｉｅｌ
ｄ  ｓｃａｎｎｉｎｇ  ｏｐｔｉｃａｌ  ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ）、ＳＥＭ（Ｓｃａｎｎ
ｉｎｇ  Ｅｌｅｃｔｒｏｎ  Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ）またはＴＥＭ（Ｔｒａｎｓｍｉｓｓ
ｉｏｎ  Ｅｌｅｃｔｒｏｎ  Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ）で観察することを特徴とする請求項
１４に記載のスクリーニング方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ルテリアルの形態特性を用いた抗癌剤スクリーニング方法に関し、具体的に
は、ルテリアル変異体またはルテリアルに抗癌剤または癌予防剤候補物質処理前の対照群
と比較して、ルテリアル変異体のサイズ、形態または運動性の変化を誘導、またはルテリ
アルのサイズ、形態または運動性の変化を抑制する候補物質を抗癌剤または癌予防剤とし
て選別する段階を含む抗癌剤または癌予防剤スクリーニング方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
癌は、人類の健康を脅す最大の疾病の一つであり、細胞が一連の突然変異過程を経て、
無制限的且つ非調節的な方式で増殖し発生する疾病である。癌と関連する様々な生化学的
メカニズムが明らかになり、癌に対する改善した検出方法、集団スクリーニング（ｍａｓ
ｓ  ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ）および過去十数年間にわたる治療剤と治療方法の発達により、
癌の診断および治療に対する展望が改善しているにもかかわらず、依然として癌に対する
根本的な治療方法は提示されておらず、特に、末期癌患者に対する治療は極めて制限され
ている。
【０００３】
様々な抗癌剤が開発され続けており、臨床に適用されてから抗癌治療の効果も高まって
いるが、依然として各種の癌の治療に対する反応率が十分でなく、相当な数の患者が、非
常に毒性の強い抗癌剤に露出されているにもかかわらず、症状の緩和または寿命延長の効
果は低い状態である。かかる現象を改善するためには、より優れた抗癌剤の開発およびこ
れを用いた標準治療法の研究が必須である。
【０００４】
かかる状況で、癌と関連する様々な生体内分子を同定し、これを標的として薬物をスク
リーニングすることで抗癌剤を開発する努力を傾注している。抗癌剤スクリーニングは、
抗癌剤開発の全体過程中に抗癌剤候補物質、例えば、合成化合物または天然物などの癌治
療活性および毒性を評価する過程である。
【０００５】
具体的に、抗癌剤スクリーニングは、癌細胞を培養しつつ各種の抗癌剤を処理した試料
と処理していない試料との間で癌細胞の死滅または増殖抑制を比較し、最も理想的な抗癌
剤を探し出すか効果がないと予測される抗癌剤を選別する過程であり、抗癌剤に露出した
癌細胞が死滅するか増殖が抑制される程度を測定する一連の過程を意味し得る。
【０００６】
従来、ｉｎ  ｖｉｖｏスクリーニング方法としては、腎被膜下移植法（ｓｕｂｒｅｎａ
ｌ  ｃａｐｓｕｌｅ  ａｓｓａｙ）が使用されてきたが、これは、患者の癌組織を摘出し
小さいサイズに切り取った後、マウスの腎被膜下に挿入し、抗癌剤を処理して移植された
腫瘍のサイズの変化を測定した方法である。ただし、マウスに投与する抗癌剤の容量と周
期に応じて発現される効果をスクリーニングする時間が長くて変換適用が難しいという問
題があるため、各種の抗癌剤をスクリーニングする場合、効率的ではないという欠点があ
る。
【０００７】
その他に、ｉｎ  ｖｉｔｒｏスクリーニング方法としては、癌組織から細胞を分離し、
抗癌剤を処理してから培養して、細胞の死滅または増殖抑制可否を測定する過程を経る。
【０００８】
これより得られた実験結果により適した抗癌剤としてスクリーニングされるためには、
抗癌剤による反応と実験結果を分析する過程が必要であり、腫瘍サイズの変化を観察する
か、細胞死滅率（または増殖抑制率）、ＩＣ５０、化学敏感度インデックス、抗癌剤反応
性データベースにおいて反応性の相対的分布を検討するなど、既に確立されたｉｎ  ｖｉ
ｔｒｏデータと比較することもある。
【０００９】
かかる過程を経て、効果があると予測される抗癌剤と、効果がないと予測される抗癌剤
とを区別することができ、これを繰り返し適用する過程を経て正確性を改善することがで
きる。
【００１０】
かかる背景下で、本発明者らは、患者から既に排出された体液内に存在する微細物質の
特性を観察することにより、疾病を診断および予測できることを見出し、これに関する内
容を２０１４年１月１４日付で特許出願している（ＰＣＴ／ＫＲ２０１４／００３９３）
。本発明者らは、前記微細物質を「ルテリアル（ｌｕｔｅｒｉａｌ）」と名付けた。
【００１１】
また、本発明者らは、患者または正常人から既に排出された体液内に存在する微細物質
であるルテリアルを効果的に分離できる方法を開発し、分離したルテリアルの特性を明ら
かにした内容を２０１４年５月９日付で特許出願している（ＰＣＴ／ＫＲ２０１４／００
４１９７）。
【００１２】
「ルテリアル（ｌｕｔｅｒｉａｌ）」とは、すべての動物に存在する生存因子（ｌｉｖ
ｉｎｇ  ｏｒｇａｎｉｓｍ）であり、ウイルスと類似の程度から約８００ｎｍまで（正常
フィッション段階５０〜８００ｎｍ／非正常フュージョン段階８００ｎｍ以上）のサイズ
を有する微細物質を本発明者らが名付けたものである。
【００１３】
ルテリアルは、ＤＮＡとＲＮＡの両方を含んでおり、付着性と運動性を有する点でエキ
ソソーム（ｅｘｏｓｏｍｅ）や微小胞（ｍｉｃｒｏｖｅｓｉｃｌｅ）とは区別される（図
１）。ヒトを含む動物の場合には、血液、唾液、リンパ管、精液、膣液、母乳（特に、初
乳）、臍帯血、脳細胞、脊髄、骨髄に存在し、「ルテリアル」と称される。なお、植物に
存在するルテリアル類似物質は、「ルテリオン（Ｌｕｔｅｒｉｏｎ）」と称され、血液な
どの体液から発見されるルテリアルの起源は、植物由来ルテリオンであると推定される（
図２）。
【００１４】
ルテリアルは、（１）原核細胞と真核細胞の中間段階の融合特性を有する細胞類似体で
あり、（２）血液、精液、腸液、唾液、細胞液などの体液に存在し、（３）免疫蛍光試験
において、ヤヌスグリーンＢ（Ｊａｎｕｓ  ｇｒｅｅｎ  Ｂ）、アクリジンオレンジ（Ａ
ｃｒｉｄｉｎｅ  Ｏｒａｎｇｅ）、およびローダミン１２３（Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ１２３
）に陽性の発色反応を示し、（４）最適状態（ｐＨ７．２〜７．４）では、ベータ‐プロ
テオバクテリアとガンマ‐プロテオバクテリア由来遺伝子の発現特性を示し、３０〜８０
０ｎｍのサイズを有し、（５）酸性化状態ではベータ‐プロテオバクテリアとガンマ‐プ
ロテオバクテリア由来遺伝子だけでなく、真核細胞由来遺伝子の発現特性を示しており、
主に、Ｓｔｅｒｐｔｏｐｈｙｔａ遺伝子を発現し、４００ｎｍ以上から２０００ｎｍ以上
までサイズが大きくなり、（６）正常条件でＡＴＰ生成に関り、および（７）ミトコンド
リアとは相違し、エキソソームとは全く異なる細胞類似体である（ＰＣＴ／ＫＲ２０１４
／００４１９７）。
【００１５】
ルテリアルは、ヒトを含む動物の場合には、血液、唾液、リンパ管、精液、膣液、母乳
（特に、初乳）、臍帯血、脳細胞、脊髄、骨髄に存在する。その他、角がある動物の場合
には、角内にもルテリアルが存在する（ＰＣＴ／ＫＲ２０１４／００３９３）。
【００１６】
正常ルテリアルのサイズは、５０〜８００ｎｍであり、融合しルテリアル変異体を形成
して数十マイクロメータのサイズを有する。ルテリアルは、ｍＲＮＡとｍｉＲＮＡだけで
なく、ＤＮＡをも含む未成熟ミトコンドリア段階を称するものであり得る。ルテリアルは
、消化液で溶けず、血液に流入される特徴がある（ＰＣＴ／ＫＲ２０１４／００４１９７
）。
【００１７】
ルテリアルはまた、シグナリング、細胞分化、細胞死滅だけでなく、細胞サイクルおよ
び細胞成長の調節にも関係すると予想されるが、本発明者らは、その中でもルテリアルが
、癌の診断と密接な関係があることを見出した（ＰＣＴ／ＫＲ２０１４／００３９３）。
【００１８】
本発明者らは、かかるルテリアルまたはその変異体を用いて、抗癌剤候補物質のうちル
テリアルの正常状態の維持または非正常状態の抑制、減少または回復に影響を及ぼす物質
を選別することにより、癌の予防または治療剤をスクリーニングできることを確認し、本
発明を完成するに至った。
【発明の概要】
【００１９】
本発明の目的は、癌患者から特異的に発見されるルテリアル変異体を腫瘍マーカーおよ
び癌治療のためのターゲットとし、癌の予防または治療に使用可能な抗癌剤をスクリーニ
ングする方法を提供することにある。
【００２０】
本発明は、（ａ）患者から既に排出された体液からルテリアル変異体（ｍｕｔａｎｔ  
ｌｕｔｅｒｉａｌ）を分離する段階と、
（ｂ）前記分離したルテリアル変異体に抗癌剤候補物質を処理する段階と、
（ｃ）候補物質処理前の対照群と比較して、ルテリアル変異体のサイズを減少させるか、
形態を変化させるか、または運動性を増加させる候補物質を抗癌剤として選別する段階と
、を含む抗癌剤スクリーニング方法に関する。
【００２１】
本発明はまた、（ａ）正常人の既に排出された体液からルテリアルを分離する段階と、
（ｂ）癌予防候補物質の存在下で前記分離したルテリアルを培養する段階と、
（ｃ）候補物質処理前の対照群と比較して、ルテリアルのサイズの増加を抑制させるか、
形態変化を最小化するか、または運動性を維持させる候補物質を癌予防物質として選別す
る段階と、を含む癌予防剤スクリーニング方法に関する。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】正常ルテリアルを光学顕微鏡（ＳＲ‐ＧＳＤまたはＣＬＳＭ）または電子顕微鏡（ＳＥＭまたはＴＥＭ）で観察した結果を示す写真である。
【図２】ルテリアルのｌｉｆｅ  ｃｙｃｌｅを概略的に図示している図である。
【図３】ルテリアルと関連する癌発病のメカニズムを示す模式図である。
【図４】鞭毛型のルテリアルを暗視野顕微鏡で観察した写真である。
【図５】微小管型のルテリアルを暗視野顕微鏡で観察した写真である。
【図６】マス型のルテリアルを暗視野顕微鏡で観察した写真である。
【図７】ロッド型のルテリアルを暗視野顕微鏡で観察した写真である。
【図８】肺癌ステージ４患者由来のルテリアルを暗視野顕微鏡で撮影した写真を示す図である。
【図９】肺癌患者由来のルテリアルを暗視野顕微鏡で撮影した写真を示す図である。
【図１０】肺癌ステージ３ｂ患者由来のルテリアルを暗視野顕微鏡で撮影した写真を    示す図である。
【図１１】肺癌患者由来のルテリアルを暗視野顕微鏡で撮影した写真を示す図である。
【図１２】脳転移された非小細胞肺癌患者由来のルテリアルを暗視野顕微鏡で撮影した写真を示す図である。
【図１３】鎖骨上リンパ節、肝転移された肺癌（扁平上皮癌）患者由来のルテリアルを暗視野顕微鏡で撮影した写真を示す図である。
【図１４】骨転移された肺癌患者由来のルテリアルを暗視野顕微鏡で撮影した写真を示す図である。
【図１５】肺癌患者由来のルテリアルを暗視野顕微鏡で撮影した写真を示す図である。
【図１６】肺癌患者由来のルテリアルを暗視野顕微鏡で撮影した写真を示す図である。
【図１７】膵臓癌患者由来ルテリアルを暗視野顕微鏡で撮影した写真を示す図である。
【図１８】肝転移された膵臓癌患者由来のルテリアルを暗視野顕微鏡で撮影した写真を示す図である。
【図１９】子宮転移された大腸癌患者由来ルテリアルを暗視野顕微鏡で撮影した写真を示す図である。
【図２０】肝、肺に転移された大腸癌患者由来ルテリアルを暗視野顕微鏡で撮影した写真を示す図である。
【図２１】肝、肺、脳に転移された大腸癌患者由来のルテリアルを暗視野顕微鏡で撮影した写真を示す図である。
【図２２】肝転移された大腸癌患者由来のルテリアルを暗視野顕微鏡で撮影した写真を示す図である。
【図２３】肺転移された肝癌患者由来のルテリアルを暗視野顕微鏡で撮影した写真を示す図である。
【図２４】肝血管肉腫（ａｎｇｉｏｓａｒｃｏｍａ  ｏｆ  ｌｉｖｅｒ）患者由来ルテリアルを共焦点レーザ走査型顕微鏡で撮影した写真を示す図である。
【図２５】胆嚢癌末期患者由来ルテリアルを暗視野顕微鏡で撮影した写真を示す図である。
【図２６】骨転移された前立腺癌患者由来のルテリアルを暗視野顕微鏡で撮影した写真を示す図である。
【図２７】前立腺癌患者由来のルテリアルを暗視野顕微鏡で撮影した写真を示す図である。
【図２８】乳癌ステージ３患者由来のルテリアルを暗視野顕微鏡で撮影した写真を示す図である。
【図２９】乳癌ステージ３ｂ患者由来のルテリアルを暗視野顕微鏡で撮影した写真を示す図である。
【図３０】甲状腺乳頭癌患者由来のルテリアルを暗視野顕微鏡で撮影した写真を示す図である。
【図３１】腎癌患者由来のルテリアルを暗視野顕微鏡で撮影した写真を示す図である。
【図３２】胃癌患者由来のルテリアルを暗視野顕微鏡で撮影した写真を示す図である。
【図３３】胃癌患者由来のルテリアルを暗視野顕微鏡で撮影した写真を示す図である。
【図３４】乳癌ステージ３ｂ患者由来のルテリアルを暗視野顕微鏡で撮影した写真を示す図である。
【図３５】正常人の血液のルテリアル（１段階）を暗視野顕微鏡で撮影した写真を示す図である。
【図３６】漆皮から分離されたルテリオン処理時のルテリアル変異体で示されるサイズ、形態の変化または運動性回復の効果を示す図であり、（ａ）候補物質処理前、（ｂ）候補物質処理後、３０分経過、および（ｃ）候補物質処理後、１時間経過の結果を示す。
【図３７】レンギョウから分離されたルテリオン処理時のルテリアル変異体で示されるサイズ、形態の変化または運動性回復の効果を示す図であり、（ａ）候補物質処理前、（ｂ）候補物質処理後、３０分経過、および（ｃ）候補物質処理後、１時間経過の結果を示す。
【図３８】白茯苓から分離されたルテリオン処理時のルテリアル変異体で示されるサイズ、形態の変化または運動性回復の効果を示す図であり、（ａ）候補物質処理前、（ｂ）候補物質処理後、３０分経過、および（ｃ）候補物質処理後、１時間経過の結果を示す。
【図３９】トウキから分離されたルテリオン処理時のルテリアル変異体で示されるサイズ、形態の変化または運動性回復の効果を示す図であり、（ａ）候補物質処理前、（ｂ）候補物質処理後、３０分経過、および（ｃ）候補物質処理後、１時間経過の結果を示す。
【図４０】キウイフルーツから分離されたルテリオン処理時のルテリアル変異体で示されるサイズ、形態の変化または運動性回復の効果を示す図であり、（ａ）候補物質処理前、（ｂ）候補物質処理後、３０分経過、および（ｃ）候補物質処理後、１時間経過の結果を示す。
【図４１】ＡｓＰＣ‐１（Ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅ）で漆皮由来ルテリオン（ａ）、レンギョウ由来ルテリオン（ｂ）、白茯苓由来ルテリオン（ｃ）、トウキ由来ルテリオン（ｄ）およびキウイフルーツ由来ルテリオン（ｅ）処理時の癌細胞株の増殖抑制を確認した結果を示す。
【図４２】Ａ５４９（Ｌｕｎｇ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅ）で漆皮由来ルテリオン（ａ）、レンギョウ由来ルテリオン（ｂ）、白茯苓由来ルテリオン（ｃ）、トウキ由来ルテリオン（ｄ）およびキウイフルーツ由来ルテリオン（ｅ）処理時の癌細胞株の増殖抑制を確認した結果を示す。
【図４３】ＢＴ‐２０（Ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅ）で漆皮由来ルテリオン（ａ）、レンギョウ由来ルテリオン（ｂ）、白茯苓由来ルテリオン（ｃ）、トウキ由来ルテリオン（ｄ）およびキウイフルーツ由来ルテリオン（ｅ）処理時の癌細胞株の増殖抑制を確認した結果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
他に定義されない限り、本明細書において使用されているすべての技術的および科学的
用語は、本発明が属する技術分野において熟練された専門家が通常理解しているものと同
一の意味を有する。一般的に、本明細書において使用されている命名法は、本技術分野に
おいて公知の通常使用されるものである。
【００２４】
本発明において使用されている用語「ルテリアル（Ｌｕｔｅｒｉａｌ）」および「ルテ
リオン（Ｌｕｔｅｒｉｏｎ）」は、それぞれ動物および植物に存在する生存因子（ｌｉｖ
ｉｎｇ  ｏｒｇａｎｉｓｍ）であり、ウイルスと類似の程度から約５００ｎｍまで（正常
フィッション段階５０〜５００ｎｍ／非正常フュージョン段階８００ｎｍ以上）のサイズ
を有する微細物質を本発明者らが名付けたものである。
【００２５】
前記ルテリアルおよびルテリオンは、ＤＮＡおよびＲＮＡを含んでおり、運動性と付着
性を有する点で、エキソソーム（ｅｘｏｓｏｍｅ）や微小胞（ｍｉｃｒｏｖｅｓｉｃｌｅ
）とは区別される。ミトコンドリアは、ヤヌスグリーンＢ（Ｊａｎｕｓ  ｇｒｅｅｎ  Ｂ
）および蛍光染色であるローダミン１２３（Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ１２３）、ミトトラッカ
（Ｍｉｔｏｔｒａｃｋｅｒ）、アクリジンオレンジ（Ａｃｒｉｄｉｎｅ  Ｏｒａｎｇｅ）
、およびＤＡＰＩにより発色が確認されるが、前記ルテリオンもミトコンドリアと同一の
染料により発色が確認され、ミトコンドリアと同様に二重膜を有する膜構造として内部ク
リステ（ｃｒｉｓｔａｅ）構造を完成していない状態の構造を有しており、ミトコンドリ
アと同一のレーザ波長範囲で観察される点で、「類似ミトコンドリア」、「ミトコンドリ
ア類似体」あるいは「ミトコンドリア前駆体（ｐｒｏｔｏ‐ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａ）
」とも称し得る。
【００２６】
ヒトを含む動物の場合には、血液、唾液、リンパ管、精液、膣液、母乳（特に、初乳）
、臍帯血、脳細胞、脊髄、骨髄に存在し、「ルテリアル」と称される。なお、植物に存在
する物質は、「ルテリオン」と称される。植物の場合には、特に、茎部分に多量存在する
。
【００２７】
正常ルテリアルおよびルテリオンのサイズは、５０〜２００ｎｍであり、変異ルテリア
ルおよび変異ルテリオンは、融合して変異体を形成し、数十マイクロメータサイズを有す
る。ルテリアルおよびルテリオンは、ｍＲＮＡとｍｉＲＮＡを含む（まれにＤＮＡも含む
）未成熟ミトコンドリア段階を称するものであってもよい。ルテリアルおよびルテリオン
は、消化液で溶けず、血液に流入される特徴があり、シグナリング、細胞分化、細胞死滅
だけでなく、細胞サイクルおよび細胞成長の調節にも関係すると予想されるが、本発明者
らは、その中でもルテリアルが、癌の診断に密接な関係があることを見出した（ＰＣＴ／
ＫＲ２０１４／００３９３）。
【００２８】
正常ルテリアルおよびルテリオンは、癌細胞の成長を防ぎ、細胞を健康な免疫系に戻す
役割をすると予想されるが、その役割は、遺伝子を正常化する可能性を有するＲＮＡｉ（
ＲＮＡ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ；ＲＮＡ干渉）により行われると推定される。
【００２９】
正常ルテリアルおよびルテリオンのうち、２００ｎｍ以下、例えば、５０〜１５０ｎｍ
のサイズを有するルテリアルは、癌細胞の成長を防ぎ、細胞を健康な免疫系に戻す役割を
すると予想され、その役割は、遺伝子を正常化する可能性を有するＲＮＡｉ（ＲＮＡ  ｉ
ｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ；ＲＮＡ干渉）により行われる。正常ルテリアルのＲＮＡ内に存
在する情報系が正常な軌道から離脱し異常疾患を誘発するタンパク質を生産するように指
示する場合、これを人為的に干渉して癌などの疾病の発生を抑制するように作用し、サイ
ズが２００〜５００ｎｍ以上に成熟した時には、エネルギー代謝にも関り、特定の波長を
照射した時に、反応発現として光エネルギー増幅の機能を果たし、葉緑体のように反応す
ることが確認される。これに対し、かかるルテリアルが正常な役割を行うことができない
場合には、恒常性およびＡＴＰ生産に決定的な障害を起こし、呼吸およびエネルギー代謝
の両方に疾病を起こし得る。
【００３０】
ルテリアルは、以下の特性を有することを確認した。
（ａ）正常の場合、赤血球より小さいサイズ（５０〜２００ｎｍ）の円形乃至楕円形であ
り、運動性がある。
（ｂ）核酸含有。
（ｃ）免疫化学蛍光染色時にミトコンドリアと類似の反応を示す。
（ｄ）フュージョン（ｆｕｓｉｏｎ）および／またはフィッション（ｆｉｓｓｉｏｎ）生
態様式を示す。
（ｅ）フュージョンがない場合には、サイズが３００ｎｍまで成熟し、ＤＮＡ含有類似ミ
トコンドリアに成熟し、ＳＥＭまたはＴＥＭ電子顕微鏡写真上でミトコンドリアと類似の
構造を示す。
（ｆ）フュージョンが発生した場合には、数千ｎｍまでサイズが大きくなる。
（ｇ）癌患者由来の場合、正常人由来よりサイズ（長径５００ｎｍ以上）が大きく、形態
が不均一な変異ルテリアル発生。
（ｈ）エキソソームとは異なる光反応を示す。
【００３１】
さらに、以下の特性の一つ以上を有することを特徴とすることができる。
（ｉ）自己蛍光（ａｕｔｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ）を示す。
（ｊ）２００〜４００ｎｍサイズでＡＴＰを生産する。
（ｋ）付着性がある。
（ｌ）二重膜構造。
（ｍ）特定の条件で変異ルテリアルはｂｕｒｓｔｉｎｇされ、ｂｕｒｓｔｉｎｇ後にはｓ
ｔｅｍｎｅｓｓを有する。
（ｎ）ｐ５３遺伝子およびテロメア調節機能を有する。
（ｏ）ＣＤ３９またはＣＤ７３の表面抗原を有する。
【００３２】
これとは反対に、正常な役割を行うことができない癌患者由来ルテリアルは、サイズや
形態が様々であり、正常ルテリアルとは相違する生態および特性を示す（図２および図３
）。具体的には、正常ルテリアルの場合には、二重胞子（ｄｏｕｂｌｅ‐ｓｐｏｒｅ）を
形成した後、それ以上増殖しないが、癌患者や慢性疾病を有する患者の既に排出された体
液で発見される突然変異ルテリアルの場合には、幹細胞と同様に無限に増殖する特性を有
し、８００ｎｍ以上から２００μｍ（２００，０００ｎｍ）以上のサイズを有する。また
、ウイルスと同様に、赤血球、白血球、血小板などに浸入して生長するか、他のルテリア
ルと凝集する特性を示す（ＰＣＴ／ＫＲ２０１４／００３９３）。かかるルテリアルを正
常ルテリアルと区分するために、「変異ルテリアル」、「ルテリアル変異体」、「突然変
異ルテリアル」、「ミュータントルテリアル」、「Ｍｕｔａｎｔ  Ｌｕｔｅｒｉａｌ」と
称する。
【００３３】
一方、ヒトまたは動物の血液から由来したルテリアルの場合には、生体外では短い時間
内に溶解されて消滅するか形態が変化する特性があり、観察自体が難しく、非正常な環境
下で放置する場合には、２４時間内に正常ルテリアルも突然変異ルテリアルに変異し、疾
病の治療への利用に困難がある。
【００３４】
しかし、植物由来ルテリオンは、血液由来ルテリアルとは異なり、室温でも短い時間内
に溶解されるか消滅されず、長期間保管してもフュージョン（ｆｕｓｉｏｎ）されて突然
変異化しない特性がある。それだけでなく、患者の血液由来突然変異ルテリアルと反応し
てそれ以上フュージョン（ｆｕｓｓｉｏｎ）が発生しないようにその生長を抑制し、患者
の血液由来の成熟段階にあるルテリアルの成熟を抑制し、ルテリアルが突然変異するかフ
ュージョン（ｆｕｓｉｏｎ）して生長することを抑制することができる。
【００３５】
前記植物由来ルテリオンの特性は、ルテリオンのＲＮＡｉ機能によるものと予想される
ところ、かかるＲＮＡｉ機能を用いて特定の疾病を有する患者由来のルテリアルの突然変
異化または成熟を抑制するか予防することができ、最終的には、特定の疾病を治療するか
予防する物質として用いられることができると予想される。
【００３６】
本発明による段階（ａ）は、患者または正常人から既に排出された体液からルテリアル
変異体を分離する段階である。本発明において使用されている「患者から既に排出された
体液」は、血液、唾液、リンパ管、精液、膣液、母乳（初乳）、臍帯血、脳細胞、脊髄ま
たは骨髄であってもよく、これに制限されるものではない。
【００３７】
本発明による「癌」は、脳腫瘍、頭頸部腫瘍、乳癌、甲状腺癌、肺癌、胃癌、肝癌、膵
臓癌、小腸癌、大腸（直腸）癌、腎癌、前立腺癌、子宮頸癌、子宮内膜癌および卵巣癌か
らなる群から選択されることが好ましいが、これに限定されるものではない。
【００３８】
一つの方法として、癌患者から容易に取得可能な血液からルテリアルを分離することが
でき、血液に含まれたルテリアルは、例えば、下記の段階を経て分離することができる。
【００３９】
血液からルテリアルを分離する方法は、血液から血小板および血小板以上のサイズを有
する血液由来物質を分離する第１分離段階と、前記血小板および血小板以上のサイズを有
する血液由来物質を分離させた血液を遠心分離する第２分離段階と、前記遠心分離により
取得した上澄み液からルテリアルを分離する第３分離段階と、前記分離したルテリアルを
洗浄する段階と、を含むことができる。
【００４０】
より詳細には、前記第１分離段階は、患者から血液を採取し、０．８〜１．２μｍの空
隙を有するフィルタを通過させてフィルタリングされていない物質は分離する段階を含む
ことができる。前記第２分離段階は、１２００〜５０００ｒｐｍで５〜１０分間繰り返し
て遠心分離を行い、エキソソーム（ｅｘｏｓｏｍｅ）のような一般の微小胞を除去して上
澄み液を取得する段階を含むことができる。前記第３分離段階は、遠心分離により取得し
た上澄み液に赤外線を照射し、運動性を有して集まるルテリアル粒子をピペットを用いて
分離する段階を含むことができる。ルテリアルは、自己蛍光および運動性の特性を有する
ことから前記のように赤外線を照射した時に上澄み液からルテリアル粒子を確認すること
ができる。この際、暗視野顕微鏡または共焦点顕微鏡で動くルテリアル粒子を確認しなが
らピペットを使用して分離することができる。前記第３段階で分離されたルテリアルを５
０ｎｍの直径を有する空隙を備えるフィルタを通過させてフィルタリングされていない部
分のみＰＢＳで洗浄し、ルテリアルを取得することができる。ルテリアルは、長径約５０
ｎｍ以上のサイズを有するため、前記過程を経てルテリアル以外の血液由来微細物質を除
去することができる。前記過程により、長径５０〜８００ｎｍのルテリアルを取得するこ
とができ、これは、暗視野顕微鏡または共焦点顕微鏡で観察が可能である。前記取得した
ルテリアルは、それぞれ２００ｎｍ、４００ｎｍ、６００ｎｍ、８００ｎｍおよび１００
０ｎｍのフィルタを順に用いて、サイズに応じて、５０〜２００ｎｍ（発生期）／２００
〜４００ｎｍ（成熟期）／４００〜６００ｎｍ（分裂期）／６００〜８００ｎｍ（過分裂
期）／８００ｎｍ以上（変異体）に区分することができる。
【００４１】
他の方法として、血液に、ルテリアル表面抗原に特異的に結合する抗体が固定された粒
子を添加して、ルテリアルと粒子との結合を誘導し、粒子に結合したルテリアルを回収し
分離することもできる。この際、ルテリアル表面抗原は、ＣＤ３９またはＣＤ７３であり
、各抗原に特異的に結合する抗‐ＣＤ３９または抗‐ＣＤ７３抗体を磁性粒子に固定させ
、磁石を用いて（磁性を加えて）ルテリアルと結合した粒子のみを分離した後、ルテリア
ルを回収することにより、ルテリアルを取得することができる（韓国出願番号第１０‐２
０１５‐０００４２８７号）。
【００４２】
健康なヒト内の正常ルテリアルの場合には、単純に二重胞子（ｄｏｕｂｌｅ‐ｓｐｏｒ
ｅ）を形成（ｆｉｓｓｉｏｎ）するだけであるが、慢性疾病や癌患者内のルテリアル（変
異ルテリアル）の場合には、ルテリアル同士が融合（ｆｕｓｓｉｏｎ）または凝集（ｃｏ
ａｇｕｌａｔｉｏｎ）するか爆発（ｂｕｒｓｔｉｎｇ）して赤血球や癌細胞などの細胞に
も付着し、その形態およびサイズが正常ルテリアルとは異なり、非正常に巨大になる特徴
がある。変異ルテリアルは、付着性が高くて、前記のようなｃｙｃｌｅにより融合（ｆｕ
ｓｉｏｎ）がより加速化し、そのサイズとして長径および／または短径が約８００ｎｍ以
上と大きくなり、そのうちあるものなどは２００μｍ（２００，０００ｎｍ）以上のサイ
ズを有することもある。
【００４３】
前記（ｂ）は、患者から既に排出された体液から分離されたルテリアル変異体または正
常人から既に排出された体液から分離されたルテリアルに抗癌剤または癌予防剤候補物質
を処理する段階である。
【００４４】
一つの実施例において、前記候補物質は、ルテリアルの正常状態を維持または非正常状
態を抑制、減少または回復させる製剤の集合であってもよく、例えば、天然抽出物、食品
または植物由来ルテリオン、ＲＮＡｉ、アプタマおよび化合物からなる群から選択される
一つ以上であってもよく、これに限定されるものではない。
【００４５】
前記候補物質は、例えば、アレルゲン除去ウルシ（Ｒｈｕｓ  Ｖｅｒｎｉｃｉｆｌｕａ
Ｓｔｏｋｅｓ）抽出物またはアレルゲン除去ウルシ抽出物と様々な追加食品または薬用
植物由来抽出物の組み合わせであってもよく、より具体的には、前記候補物質は、アレル
ゲン除去ウルシ由来ルテリオンを含有する抽出物であってもよい。
【００４６】
前記アレルゲン除去ウルシ抽出物は、ウルシを採取し、ウルシを摂取する時に毒性によ
るアレルギーの生成を防止するために、酸素濃度が２５〜１００％（ｖ／ｖ）である状態
に大気圧より０．０１〜１気圧高く維持し、温度を２５〜１００℃に加熱処理することに
より取得されることができる。
【００４７】
また、アレルゲン除去ウルシ抽出物に加え、これとは異なる種類の食品または薬用植物
由来抽出物またはその分画物を公知の方法で取得し、アレルゲン除去ウルシ抽出物と同一
の割合で混合することができる。
【００４８】
一つの実施例において、前記候補物質は、ＲＮＡｉ（ｍｉＲＮＡまたはｓｉＲＮＡ）、
食品または植物由来ルテリオンまたはアプタマであってもよい。具体的には、癌細胞から
発現される特徴的ｍｉＲＮＡに対するＲＮＡｉ分子（アンチセンスｍｉＲＮＡまたはｓｉ
ＲＮＡ）であってもよい。食品または植物由来ルテリオンはＲＮＡｉ分子であり、長径お
よび／または短径５０〜５００ｎｍサイズのルテリオンに含まれてＲＮＡ干渉が起こり得
、例えば、アレルゲン除去ウルシ（Ｒｈｕｓ  Ｖｅｒｎｉｃｉｆｌｕａ  Ｓｔｏｋｅｓ）
のような食品または薬用植物由来ルテリアルに含まれたＲＮＡｉ分子であってもよい。
【００４９】
ｍｉＲＮＡは、２１〜２５ヌクレオチドの一本鎖（ｓｉｎｇｌｅ‐ｓｔｒａｎｄｅｄ）
ｎｏｎ‐ｃｏｄｉｎｇ  ＲＮＡ分子として真核生物の遺伝子発現を制御するものであり、
特定の遺伝子のｍＲＮＡ３´  ＵＴＲ（ｕｎｔｒａｎｓｌａｔｅｄ  ｒｅｇｉｏｎ）に結
合して遺伝子の翻訳過程を抑制すると知られている。実質的に動物で研究されたｍｉＲＮ
Ａは、特定の遺伝子のｍＲＮＡ濃度に影響を与えることなくタンパク質の発現量を減少さ
せる。ｍｉＲＮＡは、ＲＩＳＣ（ＲＮＡ‐ｉｎｄｕｃｅｄ  ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ  ｃｏｍ
ｐｌｅｘ）に連結され特定のｍＲＮＡに相補的に結合するが、ｍｉＲＮＡの中央部分はミ
スマッチ（ｍｉｓｍａｔｃｈ）に残っており、既存のｓｉＲＮＡとは異なり、ｍＲＮＡを
分解しない。しかし、かかる動物ｍｉＲＮＡとは異なり、食品または植物ｍｉＲＮＡは、
標的ｍＲＮＡと完全に一致しｍＲＮＡ分解を誘導することによりＲＮＡ干渉現象を誘導す
る。
【００５０】
ｓｉＲＮＡは、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）経路で、特に、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）に
より促進される配列特異的ＲＮＡ分解過程であるＲＮＡサイレンシングにおいて所定の役
割をする。ｓｉＲＮＡは、小型３´‐突出部（ｏｖｅｒｈａｎｇ）を有する二本鎖であり
、サイレンシングを誘導するより長いｄｓＲＮＡ前駆体から誘導される。これは、標的Ｒ
ＮＡの破壊を導くガイド（ｇｕｉｄｅ）として作用する。
【００５１】
食品または薬用植物由来ルテリオンは、血液から分離したルテリアルと類似の方法を用
いてルテリオン含有食品または植物抽出物または凝縮液から分離されたものを意味する。
「ルテリオン（Ｌｕｔｅｒｉｏｎ）」は、植物または食品に存在する生存因子（ｌｉｖｉ
ｎｇ  ｏｒｇａｎｉｓｍ）であり、ウイルスと類似の程度から約５００ｎｍまで（正常フ
ィッション段階５０〜５００ｎｍ／非正常フュージョン段階８００ｎｍ内外あるいはそれ
以上）のサイズを有する微細物質を本発明者らが名付けたものである。
【００５２】
前記ルテリオンは、ＤＮＡおよびＲＮＡを含んでおり、運動性と付着性を有する点でエ
キソソーム（ｅｘｏｓｏｍｅ）や微小胞（ｍｉｃｒｏｖｅｓｉｃｌｅ）とは区別される。
ミトコンドリアは、ヤヌスグリーンＢ（Ｊａｎｕｓ  ｇｒｅｅｎ  Ｂ）および蛍光染色で
あるローダミン１２３（Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ１２３）、ミトトラッカ（Ｍｉｔｏｔｒａｃ
ｋｅｒ）、およびＤＡＰＩにより発色が確認されるが、ミトコンドリアと同一の染料によ
り発色が確認されており、ミトコンドリアと同様に二重膜を有する膜構造として内部クリ
ステ（ｃｒｉｓｔａｅ）構造を完成していない状態の構造を有しており、ミトコンドリア
と同一のレーザ波長範囲で観察される点で、「類似ミトコンドリア」、「ミトコンドリア
類似体」あるいは「ミトコンドリア前駆体（ｐｒｏｔｏ‐ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａ）」
とも称し得る。
【００５３】
前記食品または植物由来ルテリオンは、血液由来ルテリアルとは異なり、室温でも短い
時間内に溶解されるか消滅されず、長期間保管してもフュージョン（ｆｕｓｉｏｎ）して
突然変異化しない特性がある。それだけでなく、患者の血液由来の突然変異したルテリア
ルと反応し、それ以上フュージョン（ｆｕｓｓｉｏｎ）が発生しないようにその生長を抑
制し、患者の血液由来の成熟段階にあるルテリアルの成熟を抑制してルテリアルが突然変
異するかフュージョン（ｆｕｓｉｏｎ）して生長することを抑制することができる。
【００５４】
前記食品または植物由来ルテリオンの特性は、ルテリオンのＲＮＡｉ機能によるものと
予想されるところ、かかるＲＮＡｉ機能を用いて特定の疾病を有する患者由来ルテリアル
の突然変異化または成熟を抑制するか予防することができ、最終的には、特定の疾病を治
療するか予防する物質として用いられることができる。
【００５５】
前記食品または植物由来ルテリオンは、その密度が１以下であり、脂肪および脂質より
高い密度を有し、タンパク質より低い密度を有することから、水蒸気蒸留法により植物か
ら分離することができるが、これに限定されるものではない。
【００５６】
例えば、前記食品または植物由来ルテリオンは、以下の段階を含み、分離することがで
きる。
【００５７】
（ａ）食品または植物に溶媒を添加し、５０〜９０℃で空気または酸素を用いて断続的
にバブリングさせるとともに振盪する段階；（ｂ）前記振盪により気化する水蒸気または
ガスを捕集した後、冷却させて凝縮液を取得する段階；（ｃ）０．８〜１．２μｍの空隙
を有するフィルタを用いて前記取得された凝縮液をフィルタリングする段階；（ｄ）前記
フィルタリングされた凝縮液を遠心分離する段階；（ｅ）前記遠心分離された上澄み液か
ら食品または植物由来ルテリオンを分離する段階（韓国出願番号第１０‐２０１５‐００
００１１９５号）。
【００５８】
場合に応じて、ルテリオンを含有する食品または植物抽出物にルテリオン表面抗原に特
異的に結合する抗体が固定された粒子を添加してルテリオンと粒子の結合を誘導し、粒子
に結合したルテリオンを回収して分離することもできる。この際、ルテリオン表面抗原は
、ＣＤ３９またはＣＤ７３であり、各抗原に特異的に結合する抗‐ＣＤ３９または抗‐Ｃ
Ｄ７３抗体を磁性粒子に固定し、磁石を用いて（磁性を加えて）ルテリオンと結合した粒
子のみを分離した後、ルテリオンを回収することにより、ルテリオンを取得することがで
きる（韓国出願番号第１０‐２０１５‐０００４２８８号）。
【００５９】
前記の段階を経てＩＲ光源に反応する運動性のある長径および／または短径が５０〜８
００ｎｍであるルテリオンを分離することができ、暗視野顕微鏡や共焦点顕微鏡により運
動性を観察することができる。
【００６０】
前記過程により取得した食品または植物由来のルテリオンは、暗視野顕微鏡または共焦
点顕微鏡で観察が可能であり、それぞれ２００ｎｍ、４００ｎｍ、６００ｎｍおよび８０
０ｎｍのフィルタを順に用いてサイズに応じて５０〜２００ｎｍ（発生期）／２００〜４
００ｎｍ（成熟期）／４００〜６００ｎｍ（分裂期）／６００〜８００ｎｍ（過分裂期）
に区分することができる。
【００６１】
前記のように分離した食品または植物由来ルテリオンは、以下の特性を有する。
【００６２】
（ａ）長径および／または短径が５０〜８００ｎｍである円形乃至楕円形であり、運動性
がある。
（ｂ）核酸含有。
（ｃ）免疫化学蛍光染色時にミトコンドリアと類似の反応を示す。
（ｄ）フュージョン（ｆｕｓｉｏｎ）および／またはフィッション（ｆｉｓｓｉｏｎ）生
態様式を示す。
（ｅ）フュージョンがない場合、サイズが５００ｎｍまで成熟し、ＤＮＡ含有類似ミトコ
ンドリアに成熟し、ＳＥＭまたはＴＥＭ電子顕微鏡写真上でミトコンドリアと類似の構造
を示す。
（ｆ）エキソソームとは異なる光反応を示す。
（ｇ）ＩＲ照射時にフィッション（ｆｉｓｓｉｏｎ）が発生する。
【００６３】
場合に応じて、前記ルテリオンは、以下の特性の一つ以上をさらに有することを特徴と
することができる。
【００６４】
（ｉ）自己蛍光（ａｕｔｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ）を示す。
（ｊ）長径および／または短径２００〜４００ｎｍのサイズでＡＴＰを生産する。
（ｋ）付着性がある。
（ｌ）血液由来ルテリアルと反応する時に、血液由来ルテリアルの融合（ｆｕｓｉｏｎ）
を抑制するかフィッション（ｆｉｓｓｉｏｎ）を促進する。
（ｊ）ＣＤ３９またはＣＤ７３の表面抗原を有する。
【００６５】
前記食品または植物由来ルテリオンを５０〜２００ｎｍ／２００〜４００ｎｍ／４００
〜６００ｎｍ／６００〜８００ｎｍの４種類に分類保管することができる。ルテリオンを
分離した後、容易に溶解されるか形態が変化する特徴があり、注意する必要であり、長期
保管時には短い時間内に零下８０℃以下で冷凍保管することが好ましい。短期保管時（ラ
イブ状態）には零上４℃内外が好ましく、食塩水溶液０．５％に浸漬して保管し、３０ｃ
ｍ距離内外で低温ＩＲを照射することが好ましい。短期保管時にはＰＢＳ溶液に保管する
ことができ、密閉保管として窒素充填パッキングすることもできる。場合に応じて、食品
または植物ルテリオンは、フラボノイドフィセチン、ブテインおよびスルフレチンからな
る群から選択される一つ以上の保存剤を含んで保管することができる。
【００６６】
場合に応じて、ルテリオンに水分を添加し、ＩＲ光線の照射下で１８〜３０℃で培養し
て植物ルテリオンを培養するか、長径および／または短径４００ｎｍ〜８００ｎｍの植物
由来ルテリオンに水分を添加し、ＩＲ光線の照射下で１８〜３０℃（好ましくは２０〜２
５℃）で培養（これにより、植物ルテリオンのフィッション（ｆｉｓｓｉｏｎ）誘導）す
ることができる。前記培養時に添加される水分は、食塩水またはＰＢＳ溶液であってもよ
く、これに制限されない。培養前の植物由来ルテリオンは、上述の分離方法により取得す
ることができ、そのサイズが長径および／または短径５０〜５００ｎｍのものを使用する
ことができる。前記本発明の培養方法により培養された植物由来ルテリオンの培養後、サ
イズは、長径および／または短径３００〜５００ｎｍであってもよい。この際、顕微鏡で
観察しながらルテリオンのサイズが長径および／または短径５００ｎｍを超えないように
することができ、培養が終了すると、サイズ別に分類して零下８０℃に冷却して保管する
か、窒素で充填して保管または零上で保管することができ、保管時に保存剤を添加するこ
とができる。
【００６７】
ルテリオンは、すべての植物に存在するため、制限されないが、好ましくは、表１〜４
から選択される薬用植物を使用することができる。ルテリオンは、植物の茎側に多量分布
すると予想されるところ、茎部分からルテリオンを分離するのが好ましい。
【００６８】
【表１】
2019023643.tif 000003
【００６９】
【表２】
2019023643.tif 000004
【００７０】
【表３】
2019023643.tif 000005
【００７１】
【表４】
2019023643.tif 000006
【００７２】
また、アプタマは、古典的なワトソン‐クリック（Ｗａｔｓｏｎ‐Ｃｒｉｃｋ）塩基対
形成以外の相互作用により分子に対して高度の特異的結合親和度を示す核酸分子である。
アプタマは、選択された標的に特異的に結合して標的の活性を調整できるものであり、例
えば、アプタマ結合により標的の作用能力を遮断することができる。アプタマは、サイズ
が１０〜１５ｋＤａ（３０〜４５ヌクレオシド）であり、ナノモル以下の親和度でその標
的に結合し、密接に関連する標的に対して差別性を示す。
【００７３】
前記候補物質は、合成または天然化合物のライブラリから得ることができる。化合物の
ライブラリを得る方法は、当業界において公知となっており、Ｂｒａｎｄｏｎ  Ａｓｓｏ
ｃｉａｔｅｓ（Ｍｅｒｒｉｍａｃｋ、ＮＨ）およびＡｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ（
Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ、ＷＩ）から商業的に入手可能である。Ｂｉｏｔｉｃｓ（Ｓｕｓｓｅ
ｘ、ＵＫ）、Ｘｅｎｏｖａ（Ｓｌｏｕｇｈ、ＵＫ）、Ｈａｒｂｏｒ  Ｂｒａｎｃｈ  Ｏｃ
ｅａｎｇｒａｐｈｉｃｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（Ｆｔ．Ｐｉｅｒｃｅ，ＦＩａ．）、およ
びＰｈａｒｍａＭａｒ，Ｕ．Ｓ．Ａ。（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，Ｍａｓｓ．）を含む様々な
出処からバクテリア、真菌、食品または薬用植物、および動物抽出物形態の天然化合物ラ
イブラリが商業的に入手可能である。
【００７４】
前記（ｃ）は、候補物質処理前の対照群と比較して、ルテリアル変異体のサイズを減少
させるか、形態を変化させるか、または運動性を増加させる候補物質を抗癌剤として選別
する段階、または（ｃ）候補物質処理前の対照群と比較して、ルテリアルのサイズ増加を
抑制させるか、形態変化を最小化するか、または運動性を維持させる候補物質を癌予防物
質として選別する段階である。
【００７５】
正常状態のルテリアルは、二重胞子（ｄｏｕｂｌｅ‐ｓｐｏｒｅ）を形成した後、それ
以上増殖しないが（図３５）、癌に確定診断された患者の血液内で発見されるルテリアル
変異体は、幹細胞と同様に無限に増殖する特性を有し、８００ｎｍ以上から２００μｍ（
２００，０００ｎｍ）以上のサイズを有する。また、癌に確定診断された患者の血液内で
発見されるルテリアル変異体は、運動性が正常状態のルテリアルに比べて著しく低くなる
。かかるルテリアルの運動性は、ナノトラッキング速度により定量することができる。
【００７６】
一つの実施例において、候補物質処理前のルテリアル変異体対照群と比較して、ルテリ
アル変異体のサイズを減少させる候補物質を抗癌剤として選別することができる。前記段
階（ｃ）において、抗癌剤候補物質が存在しない状態で癌患者のルテリアル変異体は、変
形された群集形態を形成する現象に非正常融合を示し、サイズが正常ルテリアルに比べて
大きくなる。しかし、抗癌剤候補物質の存在により融合が抑制されてサイズが減少する場
合、抗癌剤として選択することができる。
【００７７】
前記段階（ｃ）において、抗癌剤候補物質が存在しない状態で癌患者由来ルテリアル変
異体は、例えば、長径および／または短径が約１０００ｎｍ以上であるサイズで３５００
ｎｍ以下、最大２００μｍのサイズを有するものであってもよい。しかし、候補物質処理
３０分以上、好ましくは、１時間以上後、候補物質処理前の対照群と比較して、２００〜
２，０００ｎｍのサイズに減少することができる。
【００７８】
また、ルテリアル変異体のサイズに関連し、候補物質処理３０分以上、好ましくは、１
時間以上後、候補物質処理前のルテリアル変異体の直径の約７０％以下、例えば、候補物
質処理前のルテリアル変異体の長径または短径の約１０〜７０％に減少すると、候補物質
を有効な抗癌剤として選別することができる。本出願の試験例１によると、抗癌剤候補物
質である漆皮、レンギョウ、白茯苓、トウキおよびキウイフルーツ由来ルテリオン処理１
時間後、各処理群において、ルテリアル変異体は、対照群に比べて候補物質処理前のルテ
リアル変異体の長径の１３〜６３％、候補物質処理前のルテリアル変異体の短径の１２〜
６７％に減少したことを確認した。
【００７９】
また一つの実施例において、候補物質処理前の対照群と比較して、ルテリアル変異体の
形態を変化させる候補物質を抗癌剤として選別することができる。
【００８０】
抗癌剤候補物質の存在により癌患者のルテリアルで観察される形態が変形される場合、
抗癌剤として選択することができるが、形態変形の減少は、鞭毛型、微小管型、マス型、
ロッド型または複合型を有するルテリアル変異体の数が減少するか、正常人のルテリアル
形態である円形または楕円形に回復することを意味することができる。例えば、抗癌剤候
補物質が存在していない対照群と比較して、３０分以上、好ましくは、１時間以上後、鞭
毛型（図４）、微小管型（図５）、マス型（図６）、ロッド型（図７）または複合型ルテ
リアルが８０％以下、好ましくは、５０％以下、より好ましくは、３０％以下に減少する
と、抗癌剤として選択することができる。この際、候補物質を処理して鞭毛型、微小管型
、マス型、ロッド型または複合型を有するルテリアル変異体の数が抗癌剤候補物質が存在
していない対照群と比較して、例えば、５〜８０％、好ましくは、１０〜５０％、より好
ましくは、１０〜３０％に存在した場合、抗癌剤として選択することができる。
【００８１】
前記鞭毛型のルテリアルが発見された腫瘍の疑いがある患者の場合、ほとんどの場合、
ステージ４癌診断を受けた患者から鞭毛型の腫瘍が発見される傾向が観察された。これに
対し、鞭毛型の形態変形を減少または緩和させるか、円形または楕円形に回復させるもの
としてスクリーニングされた治療剤は、ステージ４癌患者の治療に適する治療剤であり得
る。
【００８２】
前記マス型のルテリアルが発見された腫瘍の疑いがある患者の場合、肝、大腸、消化器
、男性の直腸、および／または女性の子宮に腫瘍が発見される傾向が観察された。これに
対し、マス型への形態変形を減少または緩和させるか、円形または楕円形に回復させるも
のとしてスクリーニングされた治療剤は、肝、大腸、消化器、男性の直腸および／または
女性の子宮癌に適する治療剤であり得る。
【００８３】
また、前記ロッド型のルテリアルが発見された腫瘍の疑いがある患者の場合、肺、膵臓
、甲状腺、骨、脳、男性の前立腺、女性の卵巣および／または乳に腫瘍が発見される傾向
が観察された。これに対し、ロッド型への形態変形を減少または緩和させるか、円形また
は楕円形に回復させるものとしてスクリーニングされた治療剤は、肺、膵臓、甲状腺、骨
、脳、男性の前立腺、女性の卵巣および／または乳癌に適する治療剤であり得る。
【００８４】
前記マス型とロッド型が複合された複合型のルテリアルが発見された腫瘍の疑いがある
患者の場合、ステージ４転移癌に診断された。これに対し、複合型への形態変形を減少ま
たは緩和させるか、円形または楕円形に回復させるものとしてスクリーニングされた治療
剤は、ステージ４転移癌の予防または治療に適するものであり得る。
【００８５】
他の実施例において、ルテリアル変異体では、運動性が減少してナノトラッキング速度
が１０ｎｍ／ｓｅｃ未満から０．５ｎｍ／ｓｅｃ乃至運動性のない０ｎｍ／ｓｅｃを示す
ことができる。しかし、候補物質処理３０分以上、好ましくは、１時間以上後、運動性低
下度の変化幅が減少または抑制されるか、ナノトラッキング速度が１２ｎｍ／ｓｅｃ以上
、例えば、５０ｎｍ／ｓｅｃ以上６００ｎｍ／ｓｅｃ以下、好ましくは、１００ｎｍ／ｓ
ｅｃ以上５００ｎｍ／ｓｅｃ以下に回復すると、有効な抗癌剤として選択することができ
る。
【００８６】
運動性と関連し、本発明では、電気泳動移動度を測定して候補物質処理時の運動性の変
化を確認することができる。本発明における「電気泳動移動度」とは、電気泳動による荷
電粒子の移動速度をその場所の電場の強度で除算して得た値であり、粒子の移動速度が高
いと、粒子の運動性が高いと決定することができる。
【００８７】
ルテリアル変異体では、運動性が減少して電気泳動移動度が０．５μｍ  ｃｍ／Ｖｓ未
満から運動性のない０μｍ  ｃｍ／Ｖｓであり得る。ルテリアル変異体の運動性と関連し
て候補物質処理３０分以上、好ましくは、１時間以上後、運動性が回復して候補物質処理
前のルテリアル変異体の対照群と比較して電気泳動移動度が３０％以上増加、例えば、３
０〜３００％増加すると、有効な抗癌剤として選択することができる。本出願の試験例１
によると、抗癌剤候補物質である漆皮、レンギョウ、白茯苓、トウキおよびキウイフルー
ツ由来ルテリオン処理１時間後、各処理群において、ルテリアル変異体は、対照群に比べ
て電気泳動移動度が３３〜２７０％増加したことを確認した。
【００８８】
本出願の発明者らは、サイズが１１００〜３１００ｎｍであり、運動性が極めて低いか
、運動性がない状態である癌患者由来ルテリアル変異体を用いて候補物質の投与に伴う変
化を確認することにより抗癌剤をスクリーニングした結果、候補物質処理１時間経過後、
ルテリアル変異体の直径が、候補物質処理前のルテリアル変異体直径の７０％以下に減少
し、サイズが減少するか、ナノトラッキング速度が１００ｎｍ／ｓｅｃ以上に回復、電気
泳動移動度が３０％以上増加し、運動性が回復すると、候補物質を抗癌剤として選別する
ことができることを示している。
【００８９】
癌予防剤のスクリーニングは、（ｃ）候補物質処理前の対照群と比較して、ルテリアル
のサイズ増加を抑制させるか、形態変化を最小化するか、または運動性を維持させる候補
物質を癌予防物質として選別する段階を含む。
【００９０】
癌予防剤をスクリーニングする場合、前記段階（ｃ）は、癌予防剤候補物質を処理した
群で正常人由来ルテリアルの融合が、例えば、３０分以上、好ましくは１時間以上の間に
観察されず、サイズが維持されるか、正常人由来ルテリアルの長径または短径が癌予防剤
候補物質処理前の正常人由来ルテリアルの１０％以上増加しない場合、候補物質を癌予防
物質として選別することができる。
【００９１】
また、癌予防剤候補物質を処理した群で３０分以上、好ましくは、１時間以上の間に正
常人由来ルテリアルが円形または楕円形に維持、すなわち、１００％のルテリアルが円形
または楕円形、若しくは鞭毛型、微小管型、マス型、ロッド型または複合型ルテリアルへ
の形態変化を最小化、すなわち鞭毛型、微小管型、マス型、ロッド型または複合型ルテリ
アルに形態が変化したルテリアルが２０％以下である場合、候補物質を癌予防物質として
選別することができる。
【００９２】
さらに、癌予防剤候補物質を処理した群で３０分以上、好ましくは、１時間以上の間に
運動性が維持、すなわちナノトラッキング速度１００ｎｍ／ｓｅｃ以上に維持されている
と、候補物質を癌予防剤として選別することができる。
【００９３】
場合に応じて、明らかな癌予防剤スクリーニングのために、化学的または物理的処理に
より、ルテリアルに融合（ｆｕｓｉｏｎ）のような変形を誘導（ｎｅｇａｔｉｖｅ  ｃｏ
ｎｔｒｏｌ）するか、変異誘発条件、例えば、３６℃、湿度５０％以上の条件で変異ルテ
リアルを培養した後、候補物質を処理してルテリアルのサイズ、形態または運動性の変化
が小さいか減少すると観察される場合の候補物質を癌予防剤として選別することができる
。
【００９４】
例えば、リゾレシチン（ｌｙｓｏｌｅｃｉｔｈｉｎ）やポリエチレングリコール６００
０（ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎ  ｇｌｙｃｏｌ  ６０００）のような細胞融合誘導物質を処
理してルテリアルの融合を誘導した後、癌予防剤候補物質の存在下で培養して、ルテリア
ルのサイズ増加、形態変形または運動性低下度のような変化を減少させるか抑制させる場
合の候補物質を癌予防物質として選別することができる。
【００９５】
前記候補物質によるルテリアルのサイズ、形態または運動性の変化可否は、例えば、ロ
ーダミン１２３（Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ１２３）、ミトトラッカ（Ｍｉｔｏ‐ｔｒａｃｋｅ
ｒ）、アクリジンオレンジ（Ａｃｒｉｄｉｎｅ  Ｏｒａｎｇｅ）、ＤＡＰＩおよびヤヌス
グリーンＢ（Ｊａｎｕｓ  ｇｒｅｅｎ  Ｂ）からなる群から選択される１以上の染料で染
色し、発色が確認されるルテリアルを顕微鏡で撮影することにより確認することができる
。
【００９６】
前記ルテリアルの融合抑制、サイズ、形態または運動性の変化可否の確認に使用される
顕微鏡は、蛍光発色を確認できる顕微鏡であれば特に制限されず、当業者が通常使用する
暗視野顕微鏡（Ｄａｒｋ  ｆｉｅｌｄ  ｍｉｃｒｏ‐ｓｃｏｐｅ；Ｕｌｔｒａ  ｍｉｃｒ
ｏｓｃｏｐｅ）、ラマン分光計（Ｒａｍａｎ  ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒ、５３２ｎｍの
波長使用）、Ｌｅｉｃａ、ＡＦＭ（Ａｔｏｍｉｃ  Ｆｏｒｃｅ  Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ）
、ＭＦＭ（Ｍａｇｎｅｔｉｃ  ｆｏｒｃｅ  ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ）、ＳＴＭ（Ｓｃａｎ
ｎｉｎｇ  ｔｕｎｎｅｌｉｎｇ  ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ）、ＣＬＳＭ（Ｃｏｎｆｏｃａｌ
Ｌａｓｅｒ  Ｓｃａｎｎｉｎｇ  Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ）、ＮＳＯＭ（Ｎｅａｒ‐ｆｉ
ｅｌｄ  ｓｃａｎｎｉｎｇ  ｏｐｔｉｃａｌ  ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ）、ＳＥＭ（Ｓｃａ
ｎｎｉｎｇ  Ｅｌｅｃｔｒｏｎ  Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ）またはＴＥＭ（Ｔｒａｎｓｍｉ
ｓｓｉｏｎ  Ｅｌｅｃｔｒｏｎ  Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ）などにより確認することができ
る。
【００９７】
［実施例］
以下、実施例により本発明をより詳細に説明する。これら実施例は、単に本発明を例示
するためのものであって、本発明の範囲がこれら実施例により制限されると解釈しないこ
とは、当業界において通常の知識を有する者にとって自明であろう。
【００９８】
実施例１：ルテリアルの分離
表５のように、（１）肺癌患者、（２）膵臓癌患者、（３）大腸癌患者、（４）肝癌患
者、（５）前立腺癌患者、（６）乳癌患者、（７）甲状腺乳頭癌患者、（８）腎癌患者、
（９）白血病患者、（１０）末期癌（胃癌、大腸癌、胆嚢癌）患者および（１１）ステー
ジ４転移癌（肺癌、前立腺癌、乳癌）に確定診断された患者の血液からルテリアルを取得
した。癌に確定診断された患者から１次的に血液分離後、遠心分離して血液内物質をダウ
ンさせ、５〜１０分間放置した後、上澄み液をピペットで分離した後、血液１００〜２０
０μｌに５μｌのＣＤ３９抗体‐強磁性ナノ粒子またはＣＤ７３抗体‐強磁性ナノ粒子を
添加して３０分間結合させた後、磁石分離器に１〜２分間放置してルテリアル‐磁性ナノ
粒子を集め、上澄み液を捨て洗浄した。その後、ルテリアルと結合した強磁性ナノ粒子に
０．０３３ｗｔ％のＢＳＡ（Ｂｏｖｉｎｅ  Ｓｅｒｕｍ  Ａｌｂｕｍｉｎ）／ＰＢＳ緩衝
溶液を加え、２５℃で１時間インキュベーティングさせた後、磁石を用いてＢＳＡが吸着
された強磁性ナノ粒子のみを分離し、ＢＳＡが吸着された強磁性ナノ粒子にまた一定量の
ＰＢＳを加えてインキュベーティングにより脱着させてルテリアルを分離した。分離した
ルテリアルは、ＦＰ‐６４０分光蛍光計（ｓｐｅｃｔｒｏｆｌｕｏｒｏｍｅｔｅｒ）（Ｊ
ＡＳＣＯ）により２８０ｎｍで標準検量線法を用いて定量分析した（放出スリット：０．
５ｎｍ、吸収スリット：０．５ｎｍ）。共焦点レーザ走査型顕微鏡を用いて癌患者由来サ
イズが１，０００〜３，２００ｎｍであるルテリアル変異体を取得した。
【００９９】
【表５】
2019023643.tif 000007
【０１００】
実施例２：候補物質の取得
薬用植物である漆皮、レンギョウ、白茯苓、トウキおよびキウイフルーツそれぞれ１０
０ｇに２０〜３０倍サイズ、すなわち、２〜３リットル容器のサイズに合わせて切断し容
器に入れ、植物の５〜８倍である５００〜８００ｇ（好ましくは、植物の６倍、すなわち
、６００ｇ）の蒸留水を容器に投入した後、８０℃で約８時間程度煎出して熱水抽出した
。１００〜２００μｌの熱水抽出物にＣＤ３９抗体‐強磁性ナノ粒子またはＣＤ７３抗体
‐強磁性ナノ粒子を添加して３０分間結合させた後、磁石分離器に１〜２分間放置してル
テリオン‐磁性ナノ粒子を集めて上澄み液を捨て洗浄した。その後、ルテリオンと結合し
た強磁性ナノ粒子に０．０３３ｗｔ％のＢＳＡ（Ｂｏｖｉｎｅ  Ｓｅｒｕｍ  Ａｌｂｕｍ
ｉｎ）／ＰＢＳ緩衝溶液を加え、２５℃で１時間インキュベーティングさせた後、磁石を
用いてＢＳＡが吸着された強磁性ナノ粒子のみを分離し、ＢＳＡが吸着された強磁性ナノ
粒子にまた一定量のＰＢＳを加えてインキュベーティングにより脱着させ、漆皮、レンギ
ョウ、白茯苓、トウキおよびキウイフルーツそれぞれで由来したルテリオンを分離した。
【０１０１】
かかる過程によって長径５０〜５００ｎｍのルテリオンを取得することができ、これは
、暗視野顕微鏡または共焦点顕微鏡で観察確認が可能であった。前記と同一の方法で表１
〜４に記載の薬用植物からルテリオンを取得することができる。
【０１０２】
試験例１：抗癌剤スクリーニング
実施例２においてＰＢＳ溶液中に含まれた漆皮、レンギョウ、白茯苓、トウキおよびキ
ウイフルーツ由来ルテリオンそれぞれを実施例１から分離されたルテリアル変異体に処理
した。レンギョウ、白茯苓、トウキおよびキウイフルーツ由来ルテリオンを１、５、１０
、５０、１００および５００μｇ／ｍｌの濃度で処理（５０μｇ／ｍｌの場合、約７×１
０８個／ｍｌのルテリオンを含む）しており、漆皮由来ルテリオンを追加希釈して０．１
，０．５、１、５、１０および５０μｇ／ｍｌの濃度で処理（５μｇ／ｍｌの場合、約７
×１０７個／ｍｌのルテリオンを含む）した。
【０１０３】
ＰＢＳ中に３０℃、ｐＨ７．３の条件で３０分および１時間経過した後、サイズおよび
運動性の変化を確認した。ルテリアル変異体のサイズ変化は、共焦点レーザ走査型顕微鏡
を用いてルテリアル変異体の直径変化を撮影して確認しており、運動性の変化は、米国３
ｉ社製のナノトラッキングでルテリアル変異体中心にトラッキングを設定し、ナノトラッ
キングを作動させてルテリアル変異体の移動とともにリアルタイム移動軌跡を表記して１
秒当たりの速度を計算することによりナノトラッキング速度を測定した。また、Ｍａｌｖ
ｅｒｎ  ＺｅｔａＳｉｚｅｒ  Ｎａｎｏ  ＺＳＰ装備を用いてルテリアル変異体をセル（
Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  Ｄｉｐ  Ｃｅｌｌ：ＺＥＮ１００２）に入れ、電極２個を浸漬させ
た後、荷電された粒子が反対電荷の電極側に移動する電気泳動移動度（ｅｌｅｃｔｒｏｐ
ｈｏｒｅｔｉｃ  ｍｏｂｉｌｉｔｙ）の値を測定した。
【０１０４】
表６のように、漆皮（ルテリオンサイズ：長径×短径：４００ｎｍ×３５０ｎｍ）、レ
ンギョウ（４００ｎｍ×３７０ｎｍ）、白茯苓（４５０ｎｍ×３００ｎｍ）、トウキ（４
００ｎｍ×３００ｎｍ）およびキウイフルーツ（４２０ｎｍ×３３０ｎｍ）由来ルテリオ
ンそれぞれ投与前のルテリアル変異体（対照群）と比較して、漆皮、レンギョウ、白茯苓
、トウキおよびキウイフルーツ由来ルテリオンそれぞれ投与後、癌患者由来ルテリアル変
異体のサイズが減少し、運動性が回復したことを確認した。
【０１０５】
【表６】
2019023643.tif 000008
【０１０６】
その結果をそれぞれ図３６〜図４０に示しており、図３６〜図４０によると、漆皮、レ
ンギョウ、白茯苓、トウキおよびキウイフルーツ由来ルテリオンそれぞれを処理していな
い癌患者由来のルテリアル変異体対照群（図３６〜図４０の（ａ））では、ｉ）約１，１
００〜３，１００ｎｍのサイズおよびｉｉ）約０〜１０ｎｍ／ｓｅｃのナノトラッキング
速度、約０〜０．５μｍ  ｃｍ／Ｖｓの電気泳動移動度が示されることを確認した。
【０１０７】
しかし、漆皮、レンギョウ、白茯苓、トウキおよびキウイフルーツ由来ルテリオンそれ
ぞれを処理した群（３０分経過後：図３６〜図４０の（ｂ）および１時間経過後：図３６
〜図４０の（ｃ））において１時間経過後、ルテリアル変異体のサイズが著しく減少し、
一部は、正常状態のルテリアル（約８００ｎｍ以下）にサイズが減少したことを確認した
。
【０１０８】
漆皮由来ルテリオンを処理した群（図３６（ｃ））では、１時間経過後、ルテリアル変
異体（対照群）の長径の約２８％に減少、ルテリアル変異体の短径の約２２％に減少し、
レンギョウ由来ルテリオンを処理した群（図３７（ｃ））では、１時間経過後、ルテリア
ル変異体（対照群）の長径の約６３％に減少、ルテリアル変異体の短径の約６７％に減少
し、白茯苓由来ルテリオンを処理した群（図３８（ｃ））では、１時間経過後、ルテリア
ル変異体（対照群）の長径の約５７％に減少、ルテリアル変異体の短径の約３８％に減少
し、トウキ由来ルテリオンを処理した群（図３９（ｃ））では、１時間経過後、ルテリア
ル変異体（対照群）の長径の約１３％に減少、ルテリアル変異体の短径の約１２％に減少
し、キウイフルーツ由来ルテリオンを処理した群（図４０（ｃ））では、１時間経過後、
ルテリアル変異体（対照群）の長径の約２７％に減少、ルテリアル変異体の短径の約３０
％に減少したことを確認した。
【０１０９】
運動性と関連し、ナノトラッキング速度は、ルテリアル変異体において１０ｎｍ／ｓｅ
ｃ未満であったが、漆皮、レンギョウ、白茯苓、トウキおよびキウイフルーツ由来ルテリ
オンそれぞれを処理した群において約１００〜５００ｎｍ／ｓｅｃの運動性を回復したこ
とを確認した。
【０１１０】
また、電気泳動移動度の測定結果、ルテリアル変異体において約０〜０．５μｍ  ｃｍ
／Ｖｓ未満の電気泳動移動度が測定されたが、漆皮、レンギョウ、白茯苓、トウキおよび
キウイフルーツ由来ルテリオンそれぞれを処理した群で運動性が回復され、漆皮由来ルテ
リオン処理群では、電気泳動移動度が約０．７３μｍ  ｃｍ／Ｖｓと、ルテリアル変異体
（対照群）に比べて約４６％増加し、レンギョウ由来ルテリオン処理群では、約０．４μ
ｍ  ｃｍ／Ｖｓと、ルテリアル変異体（対照群）に比べて約３３％増加し、白茯苓由来ル
テリオン処理群では、約０．３１μｍ  ｃｍ／Ｖｓと、ルテリアル変異体（対照群）に比
べて約２１０％増加したことを確認することができ、トウキ由来ルテリオン処理群では、
約０．３７μｍ  ｃｍ／Ｖｓと、ルテリアル変異体（対照群）に比べて約２７０％増加し
たことを確認することができ、キウイフルーツ由来ルテリオン処理群では、約０．８６μ
ｍ  ｃｍ／Ｖｓと、ルテリアル変異体（対照群）に比べて約７２％増加したことを確認す
ることができる。
【０１１１】
つまり、薬用植物である漆皮、レンギョウ、白茯苓、トウキおよびキウイフルーツ由来
ルテリオンそれぞれを処理したルテリアルにおいて、対照群に比べて凝集を減少させ、サ
イズを減少させ、形態変化を制御するだけでなく、癌患者から発見されるルテリアル運動
性の低下を回復させることができることを確認することができる。したがって、薬用植物
である漆皮、レンギョウ、白茯苓、トウキおよびキウイフルーツ由来ルテリオンそれぞれ
を抗癌剤として選別した。
【０１１２】
試験例２：選別された候補物質のｉｎ  ｖｉｔｒｏ癌細胞株ｖｉａｂｉｌｉｔｙの測定
試験例１で抗癌効果があると確認された漆皮、レンギョウ、白茯苓、トウキおよびキウ
イフルーツ由来ルテリオンそれぞれに対する癌細胞株の増殖抑制効果を確認した。韓国細
胞株銀行（ＫＣＬＢ）から提供された癌細胞株ＡｓＰＣ‐１（Ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  ｃ
ａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅ）、Ａ５４９（Ｌｕｎｇ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌ  ｌ
ｉｎｅ）およびＢＴ‐２０（Ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅ）それぞ
れを使用しており、１０％のウシ胎児血清を含むＲＰＭI１６４０とＤＭＥＭ培地を使用
して培養した。
【０１１３】
各細胞株を成長速度に応じて濃度を異にして９６‐ｗｅｌｌ  ｐｌａｔｅにｓｅｅｄｉ
ｎｇした後、１６〜２４時間３７℃で培養した後、実施例２で分離された漆皮、レンギョ
ウ、白茯苓、トウキおよびキウイフルーツ由来ルテリオンを５種の濃度で段階的に処理し
た。
【０１１４】
７２時間後に各ウェル（ｗｅｌｌ）に１５μｌのＭＴＴ染色溶液（Ｐｒｏｍｅｇａ）を
入れた後、３７℃で４時間放置した後、水溶化溶液／停止溶液混合物を一つのｗｅｌｌ当
たり１００μｌずつ処理して３７℃で一晩中放置した。各ウェルに１５０μｌのＤＭＳＯ
を添加した後、５９０ｎｍの波長でマイクロプレートリーダー（Ｂｉｏ‐ｒａｄ、米国）
を使用して、各細胞株の細胞生存力を測定した。
【０１１５】
その結果、図４１〜図４３に示されているように、漆皮、レンギョウ、白茯苓、トウキ
およびキウイフルーツ由来ルテリオンそれぞれは、濃度依存的にＡｓＰＣ‐１（Ｐａｎｃ
ｒｅａｔｉｃ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅ）、Ａ５４９（Ｌｕｎｇ  ｃａｎｃｅ
ｒ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅ）およびＢＴ‐２０（Ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌ  
ｌｉｎｅ）癌細胞株それぞれの生存力の減少、すなわち、癌細胞株それぞれの増殖を有意
に抑制させることを確認することができた。
【０１１６】
以上、本発明における内容について詳細に記述したところ、当業界における通常の知識
を有する者にとってかかる具体的な記述は、単に好ましい実施様態であって、これにより
本発明の範囲が制限されるものではないことは明らかであろう。したがって、本発明の実
質的な範囲は、添付の請求項とそれらの等価物により定義されると言える。
【産業上の利用可能性】
【０１１７】
本発明者により新規確認された癌患者から分離されたルテリアル変異体をベースとし、
抗癌剤または癌予防剤をスクリーニングすることができる方法を提供することにより、抗
癌剤または癌予防剤候補物質の処理時に示されるルテリアル変異体のサイズ、形態または
運動性の変化や、正常ルテリアルの正常状態維持可否を観察し、抗癌剤または癌予防剤を
比較的短時間で容易にスクリーニングすることができる。
【図１】
2019023643.tif 000009
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
2019023643.tif 000023
【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
2019023643.tif 000037
【図３０】
2019023643.tif 000038
【図３１】
2019023643.tif 000039
【図３２】
2019023643.tif 000040
【図３３】
2019023643.tif 000041
【図３４】
2019023643.tif 000042
【図３５】
2019023643.tif 000043
【図３６】
2019023643.tif 000044
【図３７】
2019023643.tif 000045
【図３８】
2019023643.tif 000046
【図３９】
2019023643.tif 000047
【図４０】
2019023643.tif 000048
【図４１】
2019023643.tif 000049
【図４２】
2019023643.tif 000050
【図４３】
2019023643.tif 000051
【外国語明細書】
2019023643000001.pdf