(57)【要約】【課題】デュシェンヌ型筋ジストロフィーの治療における抗−ＦＬＴ−１抗体の提供。【解決手段】本発明は、特に、筋ジストロフィー、特にデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）の治療のための方法及び組成物を提供する。ある実施形態においては、本発明の方法は、激しさ、重症度又は頻度においてＤＭＤの症状又は特徴の少なくとも１種を減少させ、又は発症を遅延させるように、ＤＭＤを患っているか、ＤＭＤに感受性の高い個体に、有効量の抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントを投与することを含む。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
本明細書に記載の発明。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願のクロスリファレンス
本出願は、２０１３年１月２８に出願された米国仮出願第６１／７５７，５７１号の利益を主張し、その内容全体を引用により本明細書に組み込む。
【背景技術】
【０００２】
デュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）は、３，６００人の男児に約１人を襲うＸ連鎖性の劣性の筋ジストロフィーであり、これは筋変性及び最終的な死をもたらす。この疾患は、細胞膜のジストログリカン複合体（ＤＧＣ）の構造的安定性を付与する、筋組織内の重要な構造的成分であるタンパク質、ジストロフィンをコードする、ヒトＸ染色体上に位置するジストロフィン遺伝子の変異により起こる。ジストロフィンは、細胞質内アクチンフィラメントネットワークと細胞外マトリクスとを連結させ、筋線維に物理的強度を付与する。したがって、ジストロフィンの変化又は欠如は、筋線維膜機能の異常をもたらす。男女とも、前記変異を保有し得るが、女の子は、男の子に見られるような疾患の典型的な臨床徴候を示すことはまれである。
【０００３】
現在までに、ＤＭＤの治療法は知られていない。遺伝子治療及び副腎皮質ホルモン剤の投与等のいくつかの治療手段が研究されてきた。これらの治療法の一部は、特定の症状を遅らせる可能性があるが、ＤＭＤ患者に対する満足な治療選択肢は現在のところ存在しない。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明は、筋ジストロフィー、特に、デュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）および／またはベッカー型筋ジストロフィーを治療するための改善された方法および組成物を特に提供する。以下の実施例に記載するように、本発明は、部分的には、抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントが、ＶＥＧＦ及び他のリガンドがＦｌｔ−１受容体と結合するのを阻害し、それによってＶＥＧＦ受容体に結合するのに利用されるＶＥＧＦ及び／又は他のリガンドの量を増大させ得るという発見に基づく。ＤＭＤの症状における構造的及び機能的改善が増大する。実際に、実施例に示すように、本発明者らは、抗−Ｆｌｔ−１抗体の投与により、ＤＭＤの動物モデルにおいて、筋肉の病理、並びに筋肉の機能の程度が向上することを証明した。したがって、本発明は、安全かつ効果的な、ＤＭＤを治療するための抗体をベースとする治療法を提供する。
【０００５】
ある実施形態においては、本発明は、激しさ、重症度又は頻度においてデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）の症状又は特徴の少なくとも１種を減少させ、又は発症を遅延させるように、ＤＭＤを患っているか、ＤＭＤに感受性の高い個体に、有効量の抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントを投与することを含む、ＤＭＤの治療方法を提供する。
【０００６】
ある実施形態においては、抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントは非経口的に投与される。ある実施形態においては、非経口投与は、静脈内、皮内、くも膜下、吸入、経皮（局所）、眼内、筋肉内、皮下、及び／又は経粘膜投与から選択される。
【０００７】
ある実施形態においては、抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントは経口的に投与される。
【０００８】
ある実施形態においては、抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントは、横紋筋（例えば、骨格筋、心筋）から選択される１種以上の標的組織に送達される。ある実施形態においては、抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントは心臓に送達される。ある実施形態においては、抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントは骨格筋に送達される。ある実施形態においては、抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントは表１から選択される１種以上の骨格筋に送達される。ある実施形態においては、横紋筋（例えば、骨格筋）は、三頭筋、前頸骨筋、ヒラメ筋、腓腹筋、二頭筋、僧帽筋、三角筋、四頭筋、横隔膜からなる群から選択される。
【０００９】
ある実施形態においては、三頭筋、前頸骨筋、ヒラメ筋、腓腹筋、二頭筋、僧帽筋、三角筋、四頭筋、横隔膜からなる群から選択される。
【００１０】
ある実施形態においては、抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントは、２ヶ月に１回、１ヶ月に１回、３週間に１回、２週間に１回、１週間に１回、毎日又は不定の間隔で投与される。
【００１１】
ある実施形態においては、抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントの投与は、筋再生、線維化の減少、筋力の増大、安定性の増大、柔軟性の増大、可動範囲の増大、体力の増大、疲労の減少、血流量の増大、認識力の向上、肺機能の改善、及び／又は炎症の阻害をもたらす。
【００１２】
ある実施形態においては、抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントの投与は、ＤＭＤの症状の少なくとも１種の激しさ、重症度、又は頻度を減少させ、又は発症を遅延させる。ある実施形態においては、抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントの投与は、筋消耗、筋力低下、筋肉の脆弱性、筋肉肥大、筋の仮性肥大、関節性拘縮、骨格奇形、心筋症、嚥下障害、大腸及び膀胱の機能障害、筋虚血、認知障害、行動機能障害、社会化障害、脊柱側弯症、及び呼吸機能障害からなる群から選択される少なくとも１種のＤＭＤの症状の激しさ、重症度又は頻度を減少させ、又は発症を遅延させる。
【００１３】
ある実施形態においては、本発明は、ＶＥＧＦのＦｌｔ−１受容体への結合を阻害する能力によって特徴づけられる抗体又はその抗原結合フラグメントを提供する。
【００１４】
ある実施形態においては、抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントは、表面プラズモン共鳴（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ）結合アッセイにおいて、１０−９Ｍより大きい、１０−１０Ｍより大きい、０．５×１０−１０Ｍより大きい、１０−１１Ｍより大きい、０．５×１０−１１Ｍより大きい、１０−１２Ｍより大きい、０．５×１０−１２Ｍより大きい親和力でヒトＦｌｔ−１と結合する能力により特徴づけられる。
【００１５】
ある実施形態においては、抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントは、ヒトＦｌｔ−１との競合アッセイにおいて、１００ｐＭ未満、１０ｐＭ未満、又は１ｐＭ未満のＩＣ５０により特徴づけられる。ある実施形態においては、抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントは、競合アッセイにおいて、ヒトＦｌｔ−１に対するＶＥＧＦの結合阻害に対し、１００ｐＭ未満、１０ｐＭ未満、又は１ｐＭ未満のＩＣ５０で特徴づけられる。ある実施形態においては、抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントは、競合アッセイにおいて、ヒトＦｌｔ−１に対するＰＬＧＦの結合阻害に対し、１００ｐＭ未満、１０ｐＭ未満、又は１ｐＭ未満のＩＣ５０で特徴づけられる。
【００１６】
ある実施形態においては、抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＶＥＧＦＲ２（Ｆｌｋ−１）及び／又はＶＥＧＦＲ３（Ｆｌｔ−４）と結合しない。
【００１７】
ある実施形態においては、抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントは、マウス又はサルのＦｌｔ−１と結合する。ある実施形態においては、抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントは、マウス又はサルのＦｌｔ−１と結合しない。
【００１８】
ある実施形態においては、抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ）２、Ｆａｂ’、Ｆａｂ、ＳｃＦｖｓ、二重特異性抗体、三重特異性抗体、及び四重特異性抗体からなる群から選択される。
【００１９】
ある実施形態においては、抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントはＩｇＧである。ある実施形態においては、抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントはＩｇＧ１である。
【００２０】
ある実施形態においては、抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントはモノクローナル抗体であり、特定の実施形態においてはヒト化モノクローナル抗体である。ある実施形態においては、ヒト化モノクローナル抗体はヒトＦｃ領域を含む。ある実施形態においては、抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントは、抗体のインビボにおける半減期を長くするように、Ｆｃ領域とＦｃＲｎ受容体との結合親和性を向上させる１以上の変異を含む。ある実施形態においては、Ｆｃ領域は、ヒトＩｇＧ１のＴｈｒ２５０、Ｍｅｔ２５２、Ｓｅｒ２５４、Ｔｈｒ２５６、Ｔｈｒ３０７、Ｇｌｕ３８０、Ｍｅｔ４２８、Ｈｉｓ４３３、及び／又はＡｓｎ４３４に対応する１以上の位置で１以上の変異を含む。
【００２１】
ある実施形態においては、本発明は、抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントと、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を提供する。
【００２２】
本明細書で用いられる場合、「約」及び「おおよそ」という用語は、同様のものとして用いられる。約／おおよそとともに、又はなしで本明細書において使用されるあらゆる数字は、関連技術分野における当業者によって認識される、あらゆる正常な変動を包含することを意味する。
【００２３】
本発明の他の特徴、目的及び利点は、以下の詳細な説明において明らかである。しかし、本発明の実施形態を示す詳細な説明は単に例示であり、限定的でないことを理解すべきである。本発明の範囲内の様々な変形及び修飾は、詳細な説明から当業者に明らかになるであろう。
例えば、本発明は、以下の項目を提供する：
（項目１）
激しさ、重症度又は頻度においてデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）の症状又は特徴の少なくとも１種を減少させ、又は発症を遅延させるように、ＤＭＤを患っているか、ＤＭＤに感受性の高い個体に、有効量の抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントを投与することを含む、ＤＭＤの治療方法。
（項目２）
上記抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントが、表面プラズモン共鳴結合アッセイにおいて１０−９Ｍより大きい親和力でヒトＦｌｔ−１と結合する能力で特徴づけられる、項目１に記載の方法。
（項目３）
上記抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントが、表面プラズモン共鳴結合アッセイにおいてヒトＦｌｔ−１に対して１０−１０Ｍより大きい結合親和性を有する、項目１又は２に記載の方法。
（項目４）
上記抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントが、表面プラズモン共鳴結合アッセイにおいてヒトＦｌｔ−１に対して１０−１２Ｍより大きい結合親和性を有する、項目１〜３のいずれか１項に記載の方法。
（項目５）
上記抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントが、ヒトＦｌｔ−１との競合アッセイにおいて、１００ｐＭ未満のＩＣ５０で特徴づけられる、項目１〜４のいずれか１項に記載の方法。
（項目６）
上記抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントが、ヒトＦｌｔ−１との競合アッセイにおいて、１０ｐＭ未満のＩＣ５０で特徴づけられる、項目１〜５のいずれか１項に記載の方法。
（項目７）
上記抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントが、ヒトＦｌｔ−１との競合アッセイにおいて、１ｐＭ未満のＩＣ５０で特徴づけられる、項目１〜６のいずれか１項に記載の方法。
（項目８）
上記競合アッセイが、ヒトＦｌｔ−１に対するＶＥＧＦの結合の阻害である、項目５〜７のいずれか１項に記載の方法。
（項目９）
上記競合アッセイが、ヒトＦｌｔ−１に対するＰＬＧＦの結合の阻害である、項目５〜７のいずれか１項に記載の方法。
（項目１０）
上記抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントが、ＶＥＧＦＲ２及び／又はＶＥＧＦＲ３と結合しない、項目１〜９のいずれか１項に記載の方法。
（項目１１）
上記抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントが、マウス又はサルのＦｌｔ−１と結合しない、項目１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
（項目１２）
上記抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントが、マウス及び／又はサルのＦｌｔ−１と結合する、項目１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
（項目１３）
上記抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントが、ＩｇＧ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ）２、Ｆａｂ’、Ｆａｂ、ＳｃＦｖｓ、二重特異性抗体、三重特異性抗体、及び四重特異性抗体からなる群から選択される、項目１〜１２のいずれか１項に記載の方法。（項目１４）
上記抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントがＩｇＧである、項目１３に記載の方法。
（項目１５）
上記抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントがＩｇＧ１である、項目１４に記載の方法。
（項目１６）
上記抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントがモノクローナル抗体である、項目１４又は１５に記載の方法。
（項目１７）
上記モノクローナル抗体がヒト化モノクローナル抗体である、項目１６に記載の方法。
（項目１８）
上記ヒト化モノクローナル抗体が、ヒトＦｃ領域を含む、項目１７に記載の方法。
（項目１９）
上記Ｆｃ領域が、上記抗体のインビボにおける半減期を長くするように、Ｆｃ領域とＦｃＲｎ受容体との結合親和性を向上させる１以上の変異を含む、項目１８に記載の方法。
（項目２０）
上記Ｆｃ領域が、ヒトＩｇＧ１のＴｈｒ２５０、Ｍｅｔ２５２、Ｓｅｒ２５４、Ｔｈｒ２５６、Ｔｈｒ３０７、Ｇｌｕ３８０、Ｍｅｔ４２８、Ｈｉｓ４３３、及び／又はＡｓｎ４３４に対応する１以上の位置で１以上の変異を含む、項目１９に記載の方法。
（項目２１）
上記抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントが非経口的に投与される、項目１〜２０のいずれか１項に記載の方法。
（項目２２）
上記非経口投与が、静脈内、皮内、くも膜下、吸入、経皮（局所）、眼内、筋肉内、皮下、及び／又は経粘膜投与から選択される、項目２１に記載の方法。
（項目２３）
上記非経口投与が静脈内投与である、項目２２に記載の方法。
（項目２４）
上記非経口投与が皮下投与である、項目２２に記載の方法。
（項目２５）
上記抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントが経口的に投与される、項目１〜２０のいずれか１項に記載の方法。
（項目２６）
上記抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントが、２ヶ月に１回、１ヶ月に１回、３週間に１回、２週間に１回、１週間に１回、毎日又は不定の間隔で投与される、項目１〜２５のいずれか１項に記載の方法。
（項目２７）
上記抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントが、表１から選択される１種以上の骨格筋に送達される、項目１〜２６のいずれか１項に記載の方法。
（項目２８）
上記抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントが、横隔膜、三頭筋、ヒラメ筋、前頸骨筋、腓腹筋、長指伸筋、腹直筋、及び／又は四頭筋から選択される１種以上の標的組織に送達される、項目１〜２７のいずれか１項に記載の方法。
（項目２９）
上記抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントが横隔膜に送達される、項目１〜２８のいずれか１項に記載の方法。
（項目３０）
上記抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントが心臓に送達される、項目１〜２９のいずれか１項に記載の方法。
（項目３１）
上記抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントの投与が、筋再生、線維化の減少、安定性の増大、筋力の増大、柔軟性の増大、可動範囲の増大、体力の増大、疲労の減少、血流量の増大、認識力の向上、肺機能の改善、及び／又は炎症の阻害をもたらす、項目１〜３０のいずれか１項に記載の方法。
（項目３２）
上記ＤＭＤの少なくとも１種の症状又は特徴が、筋消耗、筋力低下、筋肉の脆弱性、筋肉肥大、筋の仮性肥大、関節性拘縮、骨格奇形、心筋症、嚥下障害、大腸及び膀胱の機能障害、筋虚血、認知障害、行動機能障害、社会化障害、脊柱側弯症、及び呼吸機能障害からなる群から選択される、項目１〜３１のいずれか１項に記載の方法。
（項目３３）
表面プラズモン共鳴結合アッセイにおいて、ヒトＦｌｔ−１に対して１０−９Ｍより大きい結合親和性を有する、抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメント。
（項目３４）
表面プラズモン共鳴結合アッセイにおいて、ヒトＦｌｔ−１に対して１０−１０Ｍより大きい結合親和性を有する、項目３３に記載の抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメント。
（項目３５）
表面プラズモン共鳴結合アッセイにおいて、ヒトＦｌｔ−１に対して１０−１２Ｍより大きい結合親和性を有する、項目３３に記載の抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメント。
（項目３６）
上記抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントが、競合アッセイにおいて、ヒトＦｌｔ−１に対するＶＥＧＦ及び／又はＰＬＧＦの結合阻害に対し、１００ｐＭ未満のＩＣ５０で更に特徴づけられる、項目３３〜３５のいずれか１項に記載の抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメント。
（項目３７）
ＩＣ５０が１０ｐＭ未満である、項目３６に記載の抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメント。
（項目３８）
ＩＣ５０が１ｐＭ未満である、項目３６に記載の抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメント。
（項目３９）
上記抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントがＶＥＧＦＲ２及び／又はＶＥＧＦＲ３と結合しない、項目３３〜３８のいずれか１項に記載の抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメント。
（項目４０）
上記抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントが、マウス又はサルのＦｌｔ−１と結合しない、項目３３〜３９のいずれか１項に記載の抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメント。
（項目４１）
上記抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントが、マウス及び／又はサルのＦｌｔ−１と結合する、項目３３〜３９のいずれか１項に記載の抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメント。
（項目４２）
項目３３〜４１のいずれか１項に記載の抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントと、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物。
【図面の簡単な説明】
【００２４】
【図１】図１は、可溶性ヒトＦｌｔ−１抗原で免疫したマウスの抗−可溶性ヒトＦｌｔ−１抗血清の力価を示す例示的な結果を示す。抗−ｓＦｌｔ−１血清力価は、５つの別々のＢａｌｂ／ｃマウスの投与２０日後から示されている。
【図２】図２は、ＥＬＩＳＡにおける、ヒト可溶性Ｆｌｔ−１とのモノクローナル抗体の競合的結合を示す例示的結果を示す。ヒトＦｌｔ−１に結合するＶＥＧＦについてのハイブリドーマ上清の競合ＥＬＩＳＡを示す。陰性コントロール（精製ポリクローナルマウスＩｇＧ）は、ヒトＦｌｔ−１とはなんら競合を示さないが、融合産物０１Ａ０４及び陽性コントロールの市販の抗体Ａｂｃａｍ５６３００は競合的なバインダーである。
【図３】図３は、可溶性ヒトＦｌｔ−１と結合する例示的なモノクローナル抗体を示す。ヒトｓＦｌｔ−１抗原に対するハイブリドーマクローン０１Ａ０４−０２Ｂ１０サブクローン由来の精製ＩｇＧの直接結合ＥＬＩＳＡを示す。読み取った吸光度及び顕微鏡的形態に基づき、サブクローン０１Ａ０４−０２Ｂ１０−０２Ｇ０７を、更なるスケールアップ及び特徴づけのために選択した。
【図４】図４は、表面プラズモン共鳴（ＢＩＡＣＯＲＥ）アッセイによる、可溶性ヒトＦｌｔ−１に結合するモノクローナル抗体を示す例示的な結果を示す。固定化されたヒトｓＦｌｔ−１抗原と結合するハイブリドーマクローン０１Ａ０４（サブクローン０２Ｂ１０−０２Ｇ０７）ＩｇＧについての表面プラズモン共鳴センソグラムを示す。
【図５】図５は、イヌ（サル）のＦｌｔ−１と結合するモノクローナル抗体の交差反応性を示す例示的な結果を示す。ヒト及びカニクイザルのＦｌｔ−１を過剰発現する株化細胞に対する、ハイブリドーマクローン０１Ａ０４（サブクローン０２Ｂ１０−０２Ｇ０７）由来の精製ＩｇＧの結合を示す。暗色のヒストグラムはアイソタイプコントロール抗体を示す。明るいヒストグラムは、モノクローナル抗体０１Ａ０４−０２Ｂ１０−０２Ｇ７を示す。
【図６】図６は、ＥＬＩＳＡにおける、ヒト可溶性Ｆｌｔ−１とのモノクローナル抗体の競合的結合を示す例示的な結果を示す。市販の標準品に対するモノクローナル抗体０１Ａ０４（サブクローン０２Ｂ１０−０２Ｇ０７）のＶＥＧＦ：ｓＦｌｔ−１  ＩＣ５０の測定を示す。値は、ヒトＦｌｔ−１において結合しているＶＥＧＦに対するそれぞれのＩｇＧの競合ＥＬＩＳＡを実施することにより得た。陰性コントロール（精製ポリクローナルマウスＩｇＧ）は、ヒトＦｌｔ−１に対してなんら競合を示さないが、モノクローナル抗体０１Ａ０４、及びＡｂｃａｍから市販されている抗−ｓＦｌｔ−１抗体（カタログ番号５６３００）は、ＶＥＧＦ結合部位に対して競合する。モノクローナル抗体０１Ａ０４は、市販の標準品よりも、より強力なアンタゴニストである。０１Ａ０４に対するＩＣ５０は２．３ｐＭであった。ＡＢｃａｍ５６３００に対するＩＣ５０は６５ｐＭであった。
【図７】図７は、細胞を用いたアッセイにおける、ｓＦｌｔ−１に対するＶＥＧＦ結合の抗−Ｆｌｔ−１モノクローナル抗体による阻害を示す例示的な結果を示す。一次ＨＵＶＥＣを、組換型ヒト可溶性Ｆｌｔ−１（１５倍モル当量、３６ｎＭ）及びモノクローナル抗体０１Ａ０４（サブクローン０２Ｂ１０−０２Ｇ０７）の存在下又は非存在下に、組換え型ヒトＶＥＧＦ（１００ｎｇ／ｍＬ、２．４ｎＭ）で処理した。ＶＥＧＦ  Ｒ２の細胞質側末端のリン酸化により測定する通り、０１Ａ０４の添加により、ＶＥＧＦがＨＵＶＥＣの活性化を誘導するのが回避される。モノクローナル抗体０１Ａ０４単独では受容体リン酸化に影響を及ぼさないが、コントロールのＩｇＧは、ＶＥＧＦ及び可溶性Ｆｌｔ−１の存在下にシグナル伝達を回避することができない。
【図８】図８は、抗−Ｆｌｔ−１抗体の投与により、筋肉の病理組織が改善することを示す例示的な顕微鏡写真である。抗−ｓＦｌｔ−１モノクローナル抗体による処置後のｍｄｘマウスにおける筋肉の病理の改善が示されている。動物を、ｓＦｌｔ−１に対する市販のモノクローナル抗体（Ａｎｇｉｏ  Ｐｒｏｔｅｏｍｉｅ、クローンＡＰ−ＭＡＢ０７０２）、又はコントロールとしてのＰＢＳで処理した。上の列は、横隔膜筋肉のエバンスブルー染色を示す。２番目の列は、血管を定量化するための横隔膜筋のＣＤ３１染色を示す。３番目の列は、横隔膜筋のＨ＋Ｅ染色を示す。１番下の列は、線維症を定量化するための横隔膜筋のワンギーソン染色を示す。
【図９】図９は、マウスに抗Ｆｌｔ−１抗体を投与することにより、筋肉組織が改善することを示す組織病理学的マーカーの定量を示す例示的結果を示す。図８に示す組織病理の定量データを示す。エバンスブルー陽性線維（上のパネル）、ＣＤ３１＋血管（２番目のパネル）、及び中心に位置する核（３番目のパネル）の数を、４倍及び１０倍の倍率により手動で数えた。線維化された部分の全面積は、画像解析ソフトウェアを用いて定量した（一番下のパネル）。対応のないスチューデントｔ−検定により、＊＝ｐ＜０．０５。
【図１０】図１０は、マウスに抗Ｆｌｔ−１抗体を投与することにより、筋肉組織が改善することを示す組織病理学的マーカーの定量を示す例示的結果を示す。図８に示す組織病理の定量データを示す。上のパネル：上のパネル：抗−Ｆｌｔ１モノクローナル抗体による処置後の、横隔膜内の中心に位置する核（ＣＬＮ）を有する線維の減少。ＣＬＮを有する線維は、４倍及び１０倍の倍率により手動で数えた。下のパネル：抗−Ｆｌｔ１モノクローナル抗体による処置後に、横隔膜内の線維の大きさがわずかに大きく変わった。線維の直径は、４倍及び１０倍の倍率により手動で測定した。対応のないスチューデントｔ−検定により、＊＝ｐ＜０．０５。
【図１１】図１１は、筋機能におけるＦｌｔ−１抗体のインビボでの効力を示す例示的な結果を示す。Ｆｌｔ−１抗体をｍｄｘマウスに投与することにより、ＰＢＳを投与したコントロールのｍｄｘマウスと比較し、グリップ試験（上のパネル）及びトレッドミル試験（下のパネル）における性能が改善された。動物の握力は、各試験を３０分離し、動物あたり３回無関係に測定した。全トレッドミル距離は、動物あたり３回測定した。
【図１２】図１２は、血清中の遊離型可溶性Ｆｌｔ１のインビボでの減少を示す例示的な結果を示す。Ｆｌｔ−１抗体をｍｄｘマウスに投与することにより、コントロールのアイソタイプ抗体に比較し、血中の可溶性Ｆｌｔ１の濃度の非常に顕著な減少が引き起こされた。動物は、４週齢で開始し、２０ｍｇ／ｋｇで週に２回、４週間投与された。剖検において、バイオマーカーの分析のために血液を集めた。アイソタイプに対し、＊＊＊ｐ＜０．００１。
【図１３】図１３は、血清中のＶＥＧＦ濃度のインビボにおける上昇を示す例示的な結果を示す。Ｆｌｔ−１抗体をｍｄｘマウスに投与することにより、コントロールのアイソタイプ抗体に比較し、血中の遊離のＶＥＧＦの濃度の非常に顕著な上昇が引き起こされた。動物は、４週齢で開始し、２０ｍｇ／ｋｇで週に２回、４週間投与された。剖検において、バイオマーカーの分析のために血液を集めた。アイソタイプに対し、＊＊＊ｐ＝０．００６３。
【図１４】図１４は、横隔膜筋における、インビボでの血管形成の増加を示す例示的な結果を示す。Ｆｌｔ−１抗体をｍｄｘマウスに投与することにより、コントロールのアイソタイプ抗体と比較し、横隔膜筋における、ＣＤ３１染色によって例証されるように、内皮細胞増殖の顕著な増加が引き起こされた。動物は、４週齢で開始し、２０ｍｇ／ｋｇで週に２回、４週間投与された。剖検において、組織病理検査のために組織を保存した。内皮細胞マーカーのＣＤ３１の染色が示されている。抗−Ｆｌｔ−１モノクローナル抗体による処置後に、内皮細胞数の統計的に有意な上昇があった（ｐ＜０．０５）。データは、自動化定量画像処理ソフトウェアを用いて解析した。試料は、調査者に知らされていなかった。
【発明を実施するための形態】
【００２５】
本発明を、より容易に理解するため、最初に特定の用語を以下に定義する。以下の用語及び他の用語の更なる定義は、明細書全体にわたって記載されている。
【００２６】
動物：本明細書で用いられる場合、「動物」という用語は、動物界のあらゆるメンバーを意味する。ある実施形態においては、「動物」は、あらゆる成長段階のヒトを意味する。ある実施形態においては、「動物」は、あらゆる成長段階のヒト以外の動物を意味する。特定の実施形態においては、ヒト以外の動物はほ乳動物（例えば、げっ歯類、マウス、ラット、ウサギ、サル、イヌ、ネコ、ヒツジ、ウシ、霊長類、及び／又はブタ）である。ある実施形態においては、動物としては、ほ乳動物、鳥類、は虫類、両生類、魚類、昆虫、及び／又は寄生虫が挙げられる。ある実施形態においては、動物は形質転換動物、遺伝子操作された動物、及び／又はクローンであってもよい。
【００２７】
抗体：本明細書で用いられる場合、「抗体」という用語は、天然であるか、全て若しくは一部が合成的に製造される、あらゆる免疫グロブリンを意味する。特異的結合能力を維持しているそれらの全ての誘導体も、この用語に含まれる。この用語は、免疫グロブリン結合ドメインに対して同種又はほとんど同種である結合ドメインを有するあらゆるタンパク質を包含する。このようなタンパク質は天然源であっても、一部又は全てが合成して製造されていてもよい。抗体は、モノクローナル又はポリクローナルであってもよい。抗体は、ヒトのクラスのいずれか、すなわち、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ及びＩｇＥを含む、あらゆるクラスの免疫グロブリンのメンバーであってもよい。特定の実施形態にお
いては、抗体はＩｇＧ免疫グロブリンクラスのメンバーであってもよい。本明細書で用いられる場合、「抗体断片」又は「抗体の特徴的部分」という用語は互換的に使用され、全長よりも短い抗体のあらゆる誘導体を意味する。通常は、抗体フラグメントは、全長の抗体の特異的結合能力の少なくとも重要な部分を保持している。抗体フラグメントの例としては、限定されないが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ、Ｆｖ、ｄｓＦｖ二重特異性抗体、及びＦｄフラグメントが挙げられる。抗体フラグメントは任意の方法により製造することができる。例えば、抗体フラグメントは、完全な抗体の断片化によって酵素的又は化学的に製造することができ、及び／又は抗体の一部分の配列をコードする遺伝子から組換えにより製造することができる。代わりに、又は追加的に、抗体フラグメントは、全体的に又は部分的に合成的に製造することができる。抗体フラグメントは、単鎖抗体フラグメントを含んでいてもよい。代わりに、又は追加的に、抗体フラグメントは、例えばジスルフィド結合によってお互いに連結している多数の鎖を含んでいてもよい。抗体フラグメントは、多分子性複合体を含んでいてもよい。機能的抗体フラグメントは、通常、少なくとも約５０個のアミノ酸を含み、より通常は少なくとも約２００個のアミノ酸を含む。ある実施形態においては、抗体はヒトの抗体であってもよい。ある実施形態においては、抗体はヒト化抗体であってもよい。
【００２８】
抗原結合フラグメント：本明細書で用いられる場合、「抗原結合フラグメント」という用語は、抗原と接触して結合する免疫グロブリン分子の部分（すなわち、Ｆｌｔ−１）を意味する。
【００２９】
おおよそ又は約：本明細書で用いられる場合、興味のある１以上の値に適用される「おおよそ」又は「約」という用語は、抗原結合フラグメント」という用語は、基準値と類似する値を意味する。特定の実施形態においては、「おおよそ」又は「約」という用語は、特に示さない限り、又は文脈から明らかでない限り、示された基準値の一方の方向に２５％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％の範囲内（それより大きいか、それ未満）に入る値の範囲を意味する（このような数が、可能な値の１００％を超えない限り）。
【００３０】
生物学的活性：本明細書で用いられる場合、「生物学的活性」という表現は、生体系、特に生物において活性を有するあらゆる薬剤の特徴を意味する。例えば、生物に投与された時、その生物において生物学的効果を有する薬剤は、生物学的活性であると考えられる。特定の実施形態においては、ペプチドが生物学的活性である場合、ペプチドの少なくとも１種の生物学的活性を有するペプチドの部分は、通常、「生物学的活性」部分と呼ばれる。特定の実施形態においては、ペプチドは本質的に生物的活性を有しないが、１種以上のＶＥＧＦリガンドの結合を阻害するペプチドは生物学的活性であると考えられる。
【００３１】
担体又は賦形剤：本明細書で用いられる場合、「担体」及び「賦形剤」という用語は、医薬製剤の調製に有用な、薬学的に許容される（例えば、ヒトに対する投与に対して安全かつ非毒性）担体又は賦形剤物質を意味する。例示的な賦形剤としては、滅菌水、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、ｐＨ緩衝溶液（例えば、リン酸緩衝食塩水）、滅菌食塩水、リンゲル液、又はブドウ糖溶液が挙げられる。
【００３２】
剤形：本明細書で用いられる場合、「剤形」及び「単位剤形」という用語は、治療すべき患者に対する治療用タンパク質（例えば、抗体）の物理的に別々の単位を意味する。各単位は、所望の治療効果を生ずるために計算された所定量の活性物質を含む。しかし、組成物の全用量は、健全な医学的判断の範囲で担当医によって決定されるであろう。
【００３３】
機能的等価物又は誘導体：本明細書で用いられる場合、「機能的等価物」又は「機能的誘
導体」は、アミノ酸配列の機能的誘導体との関連で、最初の配列の生物学的活性と実質的に同様の生物学的活性（機能的又は構造的）を保持する分子を意味する。機能的誘導体又は等価物は、天然の誘導体であってもよく、又は合成して調製してもよい。例示的な機能的誘導体としては、タンパク質の生物学的活性を保存しているという条件で、１以上のアミノ酸の置換、欠失又は負荷を有するアミノ酸配列が含まれる。置換されたアミノ酸の物理化学的性質と類似する物理化学的性質を有する置換アミノ酸が好ましい。好ましい類似の物理化学的性質としては、電荷、かさ高さ、疎水性、親水性等が挙げられる。
【００３４】
融合タンパク質：本明細書で用いられる場合、「融合タンパク質」又は「キメラタンパク質」という用語は、２種以上の元の別々のタンパク質又はその一部を結合することによって作製されたタンパク質を意味する。ある実施形態においては、各タンパク質間にリンカー又はスペーサーが存在する。
【００３５】
半減期：本明細書で用いられる場合、「半減期」という用語は、ある期間の最初に測定した値の半分にまで、タンパク質濃度又は活性等の量が低下するのに必要な時間である。
【００３６】
肥大：本明細書で用いられる場合、「肥大」という用語は、その構成細胞の拡大のために、器官又は組織の用量が増大することを意味する。
【００３７】
改善、増大又は減少：本明細書で用いられる場合、「改善」、「増大」又は「減少」という用語又は文法上の同義語は、本明細書に記載された治療の開始前の同一個体における測定、本明細書に記載された治療なしのコントロール対象（又は複数のコントロール対象）における測定のような、ベースライン値と比較した値を示す。「コントロール対象」は、対象が治療されているのと同様の病型で苦しんでおり、対象が治療されているのと同様の年齢の対象である。
【００３８】
インビトロ：本明細書で用いられる場合、「インビトロ」という用語は、多細胞生物内よりも、人工環境、例えば、試験管又は反応容器内、細胞培養において発生する現象を意味する。
【００３９】
インビボ：本明細書で用いられる場合、「インビボ」という用語は、ヒト及びヒト以外の動物のような多細胞生物内で発生する現象を意味する。細胞を用いたシステムとの関連で、この用語は、生細胞（例えば、インビトロシステムと対照的に）内で発生する現象を意味するものとして使用される場合がある。
【００４０】
リンカー：本明細書で用いられる場合、「リンカー」という用語は、融合タンパク質において、天然タンパク質中の特定位置に出現するもの以外のアミノ酸配列を意味し、一般的に、柔軟性であるよう、又は２つのタンパク質部分の間の構造物、例えばα−ヘリックスを間に置くよう意図される。リンカーは、スペーサーとも呼ばれる。リンカー又はスペーサーは、通常、それ自体で生物学的機能を有しない。
【００４１】
薬学的に許容：本明細書で用いられる場合、「薬学的に許容」という用語は、物質が、健全な医学的判断の範囲で、過剰の毒性、刺激、アレルギー反応、又は他の問題若しくは合併症なしで、ヒト及び動物の組織と接触させて使用するのに適しており、合理的な利益／危険比にふさわしいことを意味する。
【００４２】
ポリペプチド：本明細書で用いられる場合、「ポリペプチド」という用語は、ペプチド結合により互いに結合したアミノ酸の配列鎖を意味する。この用語は、任意の長さのアミノ酸鎖を意味するために使用されるが、当業者は、この用語が長い鎖に限定されず、ペプチド結合によって互いに結合した２個のアミノ酸を含む最小の鎖をも意味し得ることを理解
するであろう。当業者に公知なように、ポリペプチドは、加工及び／又は修飾することができる。
【００４３】
予防：本明細書で用いられる場合、「予防する」又は「予防」という用語は、疾患、障害及び／又は病態の発生と関連し、疾患、障害及び／又は病態の発症の危険性を低下させることを意味する。「危険性」の定義を参照されたい。
【００４４】
タンパク質：本明細書で用いられる場合、「タンパク質」という用語は、別々の単位として機能する１以上のポリペプチドを意味する。単一のポリペプチドが別々の機能単位であり、別々の機能単位を形成するために他のポリペプチドとの永続的又は一時的な物理的結合を必要としないなら、「ポリペプチド」及び「タンパク質」という用語は互換的に使用することができる。別々の機能単位が、お互いに物理的に結合する２以上のポリペプチドからなる場合、「タンパク質」という用語は、物理的に連結し、別々の単位として一緒に機能する複数のポリペプチドを意味する。
【００４５】
危険性：文脈から理解されるように、疾患、障害、及び／又は病態の「危険性」は、特定の個体が、疾患、障害、及び／又は病態（たとえば、ＤＭＤ）を発症する可能性を含む。ある実施態様においては、危険性は割合として表される。ある実施態様においては、危険性は、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０〜１００％である。ある実施態様においては、危険性は、参考試料又は参考試料群と関連する危険性に対する危険性として表される（たとえば、ＤＭＤ）。ある実施態様においては、参考試料または参考試料群は、特定の個体と比較できる個体由来である。ある実施態様においては、参考試料または参考試料群は、特定の個体と比較できる個体由来である。ある実施態様においては、相対的危険性は、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、又はそれ以上である。
【００４６】
横紋筋：本明細書で用いられる場合、「横紋筋」という用語は、顕微鏡を用い、随意調節すると、横紋の外観をもたらす細胞内収縮単位の規則的配列を有する多核筋組織を意味する。通常は、横紋筋は、心筋、骨格筋及び鰓弓筋であり得る。
【００４７】
平滑筋：本明細書で用いられる場合、「平滑筋」という用語は、単一及び複数の単位の筋肉等を含む、無意識に制御される横紋筋以外の筋肉を意味する。
【００４８】
対象：本明細書で用いられる場合、「対象」という用語は、ヒト又ヒト以外のあらゆる動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、イヌ、ネコ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ウマ又は霊長類）を意味する。ヒトには、出生前及び出生後の形態が含まれる。多くの実施態様においては、対象はヒトである。対象は、疾患の診断又は治療のための医療提供者に提示されるヒトを意味する患者であってもよい。本明細書で用いられる「対象」という用語は、「個体」又は「患者」と互換的に使用される。対象は、疾患又は障害に苦しんでいるか、感受性があるが、疾患又は障害の症状を示していても、示していなくてもよい。
【００４９】
実質的に：本明細書で用いられる場合、「実質的に」という用語は、目的の特質又は性質の全体又はほぼ全体の範囲又は程度を示す定性的状態を意味する。絶対的な結果を生物学的現象及び化学的現象が、完了に至る及び／又は完全な状態まで進行若しくは絶対的な結果が実現若しくは回避されることは、あるとしてもめったにない点を、生物学分野の当業者であれば理解できるであろう。したがって、本明細書で用いられる「実質的に」という用語は、多くの生物学的現象及び化学的現象に固有の完全性を欠く可能性について用いるものである。
【００５０】
実質的な相同：本明細書で用いられる場合、「実質的な相同」という表現は、アミノ酸又
は核酸配列同士の間の比較を意味する。当業者によって理解されるように、２つの配列は一般に、これらが、対応する位置において相同残基を含有する場合、「実質的に相同」であると考えられる。相同残基は同一残基である場合がある。又は、相同残基は、適切に同様の構造的及び／又は機能的特性を有する非同一残基である場合がある。例えば、当業者に周知であるように、ある特定のアミノ酸は、典型的には、「疎水性」若しくは「親水性」アミノ酸、及び／又は「極性」若しくは「非極性」側鎖を有すると分類される。１つのアミノ酸を同じ型の別のアミノ酸に置換することは、多くの場合「相同」置換と考えられる。
【００５１】
当技術分野で周知であるように、アミノ酸又は核酸配列は、市販のコンピュータープログラムにおいて利用可能なもの、例えば、ヌクレオチド配列用のＢＬＡＳＴＮ、並びにアミノ酸配列用のＢＬＡＳＴＰ、ギャップドＢＬＡＳＴ、及びＰＳＩ−ＢＬＡＳＴ等を含む様々なアルゴリズムのいずれかを使用して比較することができる。例示的なそのようなプログラムは、Ａｌｔｓｃｈｕｌら，ｂａｓｉｃ  ｌｏｃａｌ  ａｌｉｇｎｍｅｎｔ  ｓｅａｒｃｈ  ｔｏｏｌ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２１５（３）：４０３−４１０，１９９０；Ａｌｔｓｃｈｕｌら，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ；Ａｌｔｓｃｈｕｌら，”Ｇａｐｐｅｄ  ＢＬＡＳＴ  ａｎｄ  ＰＳＩ−ＢＬＡＳＴ：ａ  ｎｅｗ  ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｄａｔａｂａｓｅ  ｓｅａｒｃｈ  ｐｒｏｇｒａｍｓ”，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５：３３８９−３４０２，１９９７；Ｂａｘｅｖａｎｉｓら，Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  ｔｈｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｇｅｎｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，Ｗｉｌｅｙ，１９９８；並びにＭｉｓｅｎｅｒら，（編集），Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ（Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．１３２），Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，１９９９に記載されている。相同配列を同定することに加えて、前記プログラムは、典型的には、相同の程度の目安を提供する。ある実施形態においては、２つの配列は、少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又はそれ以上のこれらの対応する残基が、残基の関連したストレッチにわたって相同である場合、実質的に相同であると考えられる。ある実施形態においては、関連したストレッチは完全な配列である。ある実施形態においては、関連したストレッチは、少なくとも１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、４７５、５００、又はそれ以上の残基である。
【００５２】
実質的な同一性：本明細書で用いられる場合、「実質的な同一性」という表現は、アミノ酸又は核酸配列同士の間の比較を意味する。当業者によって理解されるように、２つの配列は一般に、これらが、対応する位置において同一の残基を含有する場合、「実質的に同一」であると考えられる。当技術分野で周知であるように、アミノ酸又は核酸配列は、市販のコンピュータープログラムにおいて利用可能なもの、例えば、ヌクレオチド配列用のＢＬＡＳＴＮ、並びにアミノ酸配列用のＢＬＡＳＴＰ、ギャップドＢＬＡＳＴ、およびＰＳＩ−ＢＬＡＳＴなどを含めた様々なアルゴリズムのいずれかを使用して比較することができる。例示的なそのようなプログラムは、Ａｌｔｓｃｈｕｌら，Ｂａｓｉｃ  ｌｏｃａｌ  ａｌｉｇｎｍｅｎｔ  ｓｅａｒｃｈ  ｔｏｏｌ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２１５（３）：４０３−４１０，１９９０；Ａｌｔｓｃｈｕｌら，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ；Ａｌｔｓｃｈｕｌら，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５：３３８９−３４０２，１９９７；Ｂａｘｅｖａｎｉｓら，Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  ｔｈｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｇｅｎｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，Ｗｉｌｅｙ，１９９８；並びにＭｉｓｅｎｅｒら，（
編集），Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ（Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．１３２），Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，１９９９に記載されている。同一配列を同定することに加えて、上述したプログラムは、典型的には、同一性の程度の目安を提供する。ある実施形態においては、２つの配列は、少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のこれらの対応する残基が、残基の関連したストレッチにわたって同一である場合、実質的に同一であるとみなされる。ある実施形態においては、関連したストレッチは完全な配列である。ある実施形態では、関連したストレッチは、少なくとも１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、４７５、５００、又はそれ以上の残基である。
【００５３】
患っている：疾患、障害及び／又は病態に「患っている」個体は、その疾患、障害及び／又は病態と診断されており、その疾患、障害及び／又は病態の１つ以上の症状を示す。
【００５４】
感受性が高い：疾患、障害及び／又は病態に「感受性が高い」個体は、その疾患、障害及び／又は病態と診断されていない。ある実施形態においては、疾患、障害及び／又は病態に感受性の高い個体は、その疾患、障害及び／又は病態の症状を示さないことがある。ある実施形態においては、疾患、障害、病態又は事象（例えば、ＤＭＤ）に感受性が高い個体は、以下の１以上によって特徴づけられる：（１）疾患、障害、及び／又は病態の発症と関連する遺伝子の変異；（２）疾患、障害、及び／又は病態の発症と関連する遺伝子多型；（３）疾患、障害、及び／又は病態と関連するタンパク質の発現及び／又は活性の上昇又は低下；（４）疾患、障害、病態、及び／又は事象の発症と関連する習慣及び／又は生活様式、（５）移植の経験、計画又は必要性。ある実施形態においては、疾患、障害、及び／又は病態に感受性が高い個体は、その疾患、障害、及び／又は病態を発症するであろう。ある実施形態においては、疾患、障害、及び／又は病態に感受性が高い個体は、その疾患、障害及び／又は病態を発症しないであろう。
【００５５】
標的組織：本明細書で用いられる場合、「標的組織」という用語は、ＤＭＤ等の治療すべき疾患に影響を及ぼされるあらゆる組織を意味する。ある実施形態においては、標的組織としては、疾患関連病理、症状又は特徴を示す組織が挙げられ、特徴としては、筋消耗、骨格奇形、心筋症、筋虚血、認知障害、及び呼吸機能障害が挙げられるが、これらに限定されない。
【００５６】
治療的有効量：本明細書で用いられる場合、治療薬の「治療的有効量」という用語は、疾患、障害、及び／又は病態を患っているか、感受性の高い対象に投与した場合に、その疾患、障害、及び／又は病態の治療、診断、予防、及び／又は発症の治験に十分な量を意味する。治療的有効量は、通常は少なくとも１つの単位用量を含む投与計画によって投与されることが当業者に認識されるであろう。
【００５７】
治療すること：本明細書で用いられる場合、「治療する」、「治療」又は「治療すること」という用語は、特定の疾患、障害、及び／又は病態の１以上の症状又は特徴を、部分的又は完全に軽減、改善、緩和、抑制、予防し、発症を遅延し、重症度を低下、及び／又は発生率を低下させることを意味する。治療は、疾患の徴候を示さない対象、及び／又は疾患の初期徴候のみを示す対象に、その疾患に関連する病理が発症する危険性を低下させるために投与することもできる。
【００５８】
（発明を実施するための形態）
本発明は、特に、治療として抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントをベースとする、デュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）及び／又はベッカー型筋ジストロフィーを含む筋ジストロフィーの治療のための方法及び組成物を提供する。ある実施形態においては、本発明は、激しさ、重症度又は頻度においてデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）の症状又は特徴の少なくとも１種を減少させ、又は発症を遅延させるように、ＤＭＤを患っているか、ＤＭＤに感受性の高い個体に、有効量の抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントを投与することを含む、ＤＭＤの治療方法を提供する。
【００５９】
本発明の種々の態様は以下の項で詳細に説明する。項の使用は、本発明を限定することを意図しない。各項は、本発明のあらゆる態様に適用することができる。本出願において、「又は」の使用は、特に明記しない限り、「及び／又は」を意味する。
【００６０】
デュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）
ＤＭＤは、全身の筋肉の進行性劣化及び喪失を特徴とする疾患である。本発明は、種々の筋組織において、筋肉の劣化を遅らせ、遅延し、又は予防し、筋肉を再生し、線維形成、炎症、並びにＤＭＤ及び他の筋ジストロフィーと関連する他の症状又は特徴を逆転し、排除し、遅延し、予防し、又は最小化するための方法及び組成物を提供することを意図する。
【００６１】
筋組織
動物には、主に２種の筋組織の型、すなわち横紋筋及び平滑筋がある。本明細書で用いられる場合、「横紋筋」という用語は、筋節の繰り返しを含む筋組織を意味する。横紋筋は、随意制御され、骨格筋に付着する傾向がある。横紋筋は、身体の自発的な動きを可能にし、四頭筋、腓腹筋、二頭筋、三頭筋、僧帽筋及び他の多くの筋肉を含む主要な筋肉群を含む。横紋筋が非常に長くなる傾向にあると、多数の横紋筋は独立して機能することができる。しかし、一部の横紋筋は、口、肛門、心臓及び食道上部を含む、骨格筋に付着していない。
【００６２】
一方、平滑筋は非常に異なる構造を有している。個々の骨格が付着した一連の長い筋肉よりも、平滑筋は、平滑筋間の機械的連結を有する連続シートに組織化される傾向にある。平滑筋は、管腔器官の壁の中に位置する場合があり、通常は随意制御されていない。特定の器官に結合した平滑筋は、同じ加重を支えると同時に収縮しなければならない。平滑筋は、少なくとも部分的に、移動、及び／又は姿勢若しくは圧力の変化によって起こる管腔器官の負荷の変化を処理する機能を有している。この二重の役割は、平滑筋だけでなく、それが荷重の持続に対する器官の大きさを維持するために持続的に収縮しなければならないことは、横紋筋のように収縮することがあってはならないことを意味する。平滑筋の例は、血管、細気管支、膀胱、及び直腸のような消化管に連結しているものである。
【００６３】
筋肉の強さは、筋肉細胞の数及び大きさ並びにそれらの解剖学上の配列に依存する。新たな筋腹線維の合成（肥厚）、及び／又はより多くの筋肉細胞の形成（過形成）のいずれかによって筋線維の太さを太くすると筋肉の力の発生能力が増大する。
【００６４】
筋肉は、部位又は機能によっても分類することができる。ある実施形態においては、Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントは、顔の１以上の筋肉、咀嚼のための１以上の筋肉、舌及び首の１以上の筋肉、胸部の１以上の筋肉、胸帯及び腕の１以上の筋肉、腕及び肩の１以上の筋肉、１以上の腹部及び背部前腕筋、手の１以上の筋肉、脊柱起立筋の１以上の筋肉、腰帯及び脚の１以上の筋肉、及び／又は前脚及び足の１以上の筋肉を標的とする。
【００６５】
ある実施形態においては、顔の筋肉としては、毛様体筋、虹彩拡張筋、虹彩括約筋等の眼
内筋肉；耳介筋、側頭頭頂筋、あぶみ骨筋、鼓膜張筋等の耳の筋肉；鼻根筋、鼻筋、鼻孔拡張筋、鼻中隔舌制筋、上唇鼻翼挙筋等の鼻の筋肉；口角挙筋、口角下制筋、口輪筋、頬筋、大頬骨筋及び小頬骨筋、広頸筋、上唇挙筋、下唇下制筋、笑筋、オトガイ筋、及び／又は皺眉筋等の口の筋肉が挙げられるが、これらに限定されない。
【００６６】
ある実施形態においては、咀嚼筋としては、咬筋、側頭筋、内側翼突筋、外側翼突筋が挙げられるが、これらに限定されない。ある実施形態においては、舌及び首の筋肉としては、頤舌筋、茎突舌筋、口蓋舌筋、舌滑舌筋、二腹筋、茎突舌骨筋、顎舌骨筋、オトガイ舌筋、肩甲舌骨筋、胸骨舌骨筋、胸骨甲状筋、甲状舌骨筋、胸鎖乳突筋、前斜角筋、中斜角筋、及び／又は後斜角筋が挙げられるが、これらに限定されない。
【００６７】
ある実施形態においては、胸部、胸及び腕の筋肉としては、鎖骨下筋、大胸筋、小胸筋、腹直筋、外腹斜筋、内腹斜筋、腹横筋、横隔膜、外肋間筋、内肋間筋、前鋸筋、僧帽筋、肩甲挙筋、大菱形筋、小菱形筋、広背筋、三角筋、肩甲下筋、棘上筋、棘下筋、大円筋、小円筋、及び／又は鳥口腕筋が挙げられるが、これらに限定されない。
【００６８】
ある実施形態においては、腕及び肩の筋肉としては、上腕二頭筋長頭、上腕二頭筋短頭、上腕三頭筋外側頭、上腕三頭筋内側頭、肘筋、円回内筋、回外筋、及び／又は上腕筋が挙げられるが、これらに限定されない。
【００６９】
ある実施形態においては、腹部及び背部前腕の筋肉としては、腕橈骨筋、橈側手根屈筋、尺側手根屈筋、長掌筋、尺側手根伸筋、長橈側手根伸筋、短橈側手根伸筋、長指伸筋、小指伸筋が挙げられるが、これらに限定されない。
【００７０】
ある実施形態においては、手の筋肉としては、母指球、短母指外転筋、短母指屈筋、母指対立筋、小指球、小指外転筋、短小指屈筋、小指対立筋、掌側骨間筋、背側骨間筋、及び／又は虫様筋等の手の内在筋が挙げられるが、これらに限定されない。
【００７１】
ある実施形態においては、脊柱起立筋の筋肉としては、頸部筋、頭棘筋、最長筋、及び／又は腸肋筋が挙げられるが、これらに限定されない。
【００７２】
ある実施形態においては、腰帯及び脚の筋肉としては、大腰筋、腸骨筋、大腿方形筋、長内転筋、短内転筋、大内転筋、薄筋、縫工筋；大腿直筋、外側広筋、内側広筋、中間広筋、腓腹筋、腓骨（腓骨筋）長筋、ひらめ筋、大殿筋、中殿筋、小殿筋、ハムストリング筋等の大腿四頭筋；大腿二頭筋；長頭筋、ハムストリング筋；大腿二頭筋；短頭筋、ハムストリング筋；半腱様筋、ハムストリング筋；半膜様筋、大腿筋膜張筋、恥骨筋、及び／又は前脛骨筋が挙げられるが、これらに限定されない。
【００７３】
ある実施形態においては、前脚及び足の筋肉としては、長指伸筋、長母趾伸筋、短腓骨筋、足底筋、後脛骨筋、長母趾屈筋、短趾伸筋、短母趾伸筋、母趾外転筋、短母趾屈筋、小指外転筋、短小指屈筋、小指対立筋、短趾伸筋、足の虫様筋、足底方形筋、又は屈筋補助器官、短趾屈筋、背側骨間筋、及び／又は底側骨間筋が挙げられるが、これらに限定されない。
【００７４】
例示的な筋肉の標的を表１に要約する。
【表１−１】
2019023230.tif 000002
【表１−２】
2019023230.tif 000003
【００７５】
筋ジストロフィーは、筋肉の変性を起こし、衰弱及び運動障害をもたらす一群の遺伝性疾患である。筋ジストロフィーの主要な特徴は、それが本来進行性であることである。筋ジストロフィーとしては、デュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）、ベッカー型筋ジストロフィー、エメリ・ドレフュス型筋ジストロフィー、顔面、肩甲、上腕筋ジストロフィー、肢帯型筋ジストロフィー、先天性筋緊張性ジストロフィー１型を含む筋ジストロフィー１型及び２型が挙げられるが、これらに限定されない。一部又は全ての筋肉が影響を受けるかにより、筋ジストロフィーの型により症状は変化し得る。筋ジストロフィーの具体的な症状としては、筋肉の運動技能の発達の遅延、１以上の筋肉群の使用の困難、嚥下、会話または食事の困難、流涎、眼瞼下垂、頻繁な落下、成人における筋肉または筋肉群
の強度の喪失、筋肉の大きさの減少、身体運動の衰弱または変化による歩行の問題、及び／又は認知障害若しくは行動障害／知的障害が挙げられる。
【００７６】
筋ジストロフィーの治療法は知られていないが、対症療法及び病態修飾療法の両者を含む、いくつかの支持療法が用いられている。副腎皮質ホルモン剤、ＡＣＥ阻害剤、アンギオテンシン受容体遮断薬、物理療法、矯正装置、車いす、又はＡＤＬ及び肺機能用の他の援助医療機器が、筋ジストロフィーにおいて通常に使用されている。筋緊張性ジストロフィーにおける心不整脈により突然死を予防するために心臓ペースメーカーが使用されている。筋緊張（筋肉が弛緩できないこと）の症状を改善する抗緊張薬はメキシレチンを含み、あるケースにおいてはフェニトイン、プロカインアミド及びキニーネを含む。
【００７７】
デュシェンヌ型筋ジストロフィー
デュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）は、Ｘ連鎖性の劣性の筋ジストロフィーであり、これは筋変性及び最終的な死をもたらす。ＤＭＤは、近位筋の脆弱性、歩行異常、腓腹筋（ふくらはぎ）の肥大、及びクレアチニンキナーゼの上昇で特徴づけられる。多くのＤＭＤの患者は、症状／徴候が通常明らかになる５歳くらいに診断される。疾患に冒された個体は通常、１０〜１３歳で歩行停止し、心肺機能障害のために、２０代前半から後半に死亡する。
【００７８】
障害ＤＭＤは、細胞膜のジストログリカン複合体（ＤＧＣ）の構造的安定性を付与する、筋組織内の重要な構造的成分であるタンパク質、ジストロフィンをコードする、ヒトＸ染色体上に位置するジストロフィン遺伝子の変異により起こる。ジストロフィンは、細胞質内アクチンフィラメントネットワークと細胞外マトリクスとを連結させ、筋線維に物理的強度を付与する。したがって、ジストロフィンの変化又は欠如は、筋線維膜機能の異常をもたらす。男女とも、前記変異を保有し得るが、女の子は、疾患の典型的な臨床徴候を示すことはまれである。
【００７９】
ＤＭＤの主な症状は、通常は、最初に特に腰、骨盤領域、大腿部、肩及びふくらはぎの筋肉に影響を及ぼし、自発的な筋肉の筋消耗に関連する筋力低下である。筋力低下は、腕、首及びその他の領域にも起こる。ふくらはぎが肥大する場合がある。徴候及び症状は、通常は６歳までに現れ、乳児期と同じくらい早く現れることがある。他の身体症状としては、自立方向能力の遅延、歩行、足踏み又はランニングの進行的な困難、並びに歩行能力の最終的な喪失（通常は１２歳まで）；頻繁な落下；疲労；運動技能（ランニング、跳躍、ジャンプ）の困難；腰椎前彎の増大；股関節屈筋の短縮；アキレス腱及びハムストリング筋の機能障害；脂肪及び結合組織による筋組織の置換によって起こる舌及びふくらはぎ筋の仮性肥大（肥大）；神経行動学上の異常（例えば、ＡＤＨＤ）の危険性の増大；学習障害（失読症）；特定の認知機能（特に、短期間の言語記憶）の非進行的脆弱性；骨格変形（ある場合には脊柱側湾症を含む）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００８０】
Ｆｌｔ−１受容体
血管内皮増殖因子受容体１としても知られているＦｌｔ−１受容体は、ＦＬＴ１遺伝子によりコードされる受容体である。シグナル伝達糖タンパク質の血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）ファミリーは、胚形成及び生後の成長の際に脈管形成の強力なプロモータとして機能する。特に、ＶＥＧＦ−ＡリガンドのＶＥＧＦ受容体との結合は、血管透過性を促進し、内皮細胞遊走、増殖及び生存をもたらし、新たに形成された内皮細胞は新たな脈管構造の基本的構造をもたらすことがわかっている。脈管形成のための主要なＶＥＧＦシグナル伝達分子、ＶＥＧＦ−Ａは、ＶＥＧＦ受容体−１（Ｆｌｔ−１としても知られているＶＥＧＦＲ−１）及びＶＥＧＦ受容体−２（Ｆｌｋ−１としても知られているＶＥＧＦＲ−２）を介したシグナル伝達を介在する。可溶型のＦｌｔ−１（ｓＦｌｔ−１）も存在するが、細胞内シグナル伝達ドメインを欠如しており、そのため、ＶＥＧＦ−Ａ又はそれに結合す
る他のリガンドを捕捉することにより、制御能力のみを果たすと考えられている。細胞内シグナル伝達経路と関連していない、ｓＦｌｔ−１及びＦｌｔ−１を含む他の分子は、「おとり受容体」と呼ばれる。Ｆｌｔ−１及びＦｌｋ−１受容体は、細胞外ＶＥＧＦ−Ａ結合ドメイン及び細胞内チロシンキナーゼドメインを含み、両者は、血管芽細胞及び内皮細胞系における発生段階及び組織再生の際に発現することがわかっている。Ｆｌｔ−１は、Ｆｌｋ−１と比較し、ＶＥＧＦ−Ａに対し、約１０倍高い結合親和性（Ｋｄ、約２〜１０ｐＭ）を有しているが、チロシンキナーゼドメインに対しては親和性が小さく、これは、Ｆｌｔ−１に対するＶＥＧＦ−Ａの結合に続く脈管形成シグナル伝達が、Ｆｌｋ−１シグナル伝達よりも比較的弱いことを示している。このように、同型接合体Ｆｌｔ−１遺伝子ノックアウトマウスは、内細胞の過剰生産及び血管破壊のため、胎生期に死亡する。反対に、同種接合体Ｆｌｋ−１遺伝子ノックアウトマウスは、胚形成の際のｙｏｌｋ−ｓａｃ血島形成の欠如のため、組織化された血管発生の欠如によって死亡する。Ｆｌｔ−１及びＦｌｋ−１受容体は、いずれも正常な発生に必要であるが、ＶＥＧＦ−Ａ濃縮における選択的増大は、Ｆｌｋ−１受容体に対する強固な結合を可能にし、毛細血管密度を増大し、筋再形成を促進し、線維形成及び炎症を減少し、種々の筋組織におけるＤＭＤ及び他の筋ジストロフィーと関連する症状及び特徴を軽減するプロ血管形成効果を誘導する。
【００８１】
本明細書で用いられる場合、「Ｆｌｔ−１受容体」という用語は、可溶性及び膜関連Ｆｌｔ−１受容体、又はその機能性フラグメントを意味する。
【００８２】
抗−Ｆｌｔ−１抗体
本明細書で用いられる場合、「抗−Ｆｌｔ−１抗体」という用語は、Ｆｌｔ−１受容体（例えば、可溶性又は膜関連Ｆｌｔ−１受容体）と結合する、あらゆる抗体又は抗原結合フラグメントを意味する。ある実施形態においては、Ｆｌｔ−１受容体と高い親和性で結合する抗Ｆｌｔ−１抗体が産生される。理論に拘束されるものではないが、Ｆｌｔ−１受容体と結合する抗−Ｆｌｔ−１抗体は、１以上の内生リガンドがＦｌｔ−１と結合するのを阻害し、それによって、Ｆｌｋ−１受容体等の他のＶＥＧＦ受容体と関連する多くのリガンドが利用可能になる。ある実施形態においては、Ｆｌｔ−１受容体と結合する抗体は、他のＶＥＧＦ受容体と結合し得るＶＥＧＦの量を増大させる。ある実施形態においては、Ｆｌｔ−１受容体と結合する抗体は、他のＶＥＧＦ受容体と結合し得る胎盤成長因子（ＰＬＧＦ）の量を増大させる。
【００８３】
ある実施形態においては、抗Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントは、約１０−９Ｍより大きい、約１０−１０Ｍより大きい、約０．５×１０−１０Ｍより大きい、約１０−１１Ｍより大きい、約０．５×１０−１１Ｍより大きい、約１０−１２Ｍより大きい、または約０．５×１０−１２Ｍより大きい親和力で、ヒトＦｌｔ−１と結合する。Ｆｌｔ−１抗体の親和力は、例えば表面プラズモン共鳴アッセイ、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥアッセイで測定することができる。
【００８４】
ある実施形態においては、抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントは、ヒトＦｌｔ−１との競合アッセイにおいて、１００ｐＭ未満、１０ｐＭ未満、又は１ｐＭ未満のＩＣ５０により特徴づけられる。
【００８５】
ある実施形態においては、抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントは、Ｆｌｔ−１受容体において、ＶＥＧＦの結合及び／又は活性を阻害する。ある実施形態においては、抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントは、競合アッセイにおいて、ヒトＦｌｔ−１に対するＶＥＧＦの結合阻害に対し、１００ｐＭ未満、１０ｐＭ未満、又は１ｐＭ未満のＩＣ５０で特徴づけられる。
【００８６】
ある実施形態においては、抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントは、Ｆｌｔ
−１受容体において、ＰＬＧＦの結合及び／又は活性を阻害する。ある実施形態においては、抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントは、競合アッセイにおいて、ヒトＦｌｔ−１に対するＰＬＧＦの結合阻害に対し、１００ｐＭ未満、１０ｐＭ未満、又は１ｐＭ未満のＩＣ５０で特徴づけられる。
【００８７】
ある実施形態においては、抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントは、Ｆｌｔ−１と選択的に結合し、他のＶＥＧＦ受容体とは最小の結合を示し、又は認識できるほど結合しない。ある実施形態においては、抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＶＥＧＦＲ２（Ｆｌｋ−１）及び／又はＶＥＧＦＲ３（Ｆｌｔ−４）とは最小の結合を示し、又は認識できるほど結合しない。
【００８８】
ある実施形態においては、抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントは、ヒトＦｌｔ−１と選択的に結合し、他のほ乳動物のＦｌｔ−１受容体とは最小の結合を示し、又は認識できるほどに結合しない（例えば、１０−７Ｍ又は１０−６Ｍ未満の結合親和力）。ある実施形態においては、抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントは、ヒトＦｌｔ−１と選択的に結合し、サルのＦｌｔ−１とは結合しない。ある実施形態においては、抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントは、ヒトＦｌｔ−１と選択的に結合し、マウスのＦｌｔ−１とは結合しない。
【００８９】
ある実施形態においては、抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントは、ヒトＦｌｔ−１及びサルのＦｌｔ−１と結合する。ある実施形態においては、抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントは、ヒトＦｌｔ−１及びマウスのＦｌｔ−１と結合する。
【００９０】
ある実施形態においては、抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ）２、Ｆａｂ’、Ｆａｂ、ＳｃＦｖｓ、二重特異性抗体、三重特異性抗体、及び四重特異性抗体からなる群から選択される。
【００９１】
ある実施形態においては、抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントはＩｇＧである。ある実施形態においては、抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントはＩｇＧ１である。
【００９２】
ある実施形態においては、抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントはＦｃＲｎ受容体と結合する。非限定的例としては、適切なＦｃ領域は、ＩｇＧ等の免疫グロブリンサブクラスに由来する。ある実施形態においては、適切なＦｃ領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４に由来する。特に適切なＦｃ領域としては、ヒト又はヒト化抗体に由来するものが挙げられる。
【００９３】
ＦｃドメインとＦｃＲｎ受容体との結合の向上は、血清半減期の延長をもたらす。したがって、ある実施形態においては、適切なＦｃ領域は、ＦｃＲｎとの結合を向上させる１以上のアミノ酸変異を含む。Ｆｃ領域内でＦｃＲｎとの結合を向上させる効果を有する種々の変異は当該技術分野で公知であり、本発明を実施するために適用することができる。ある実施形態においては、適切なＦｃ領域は、ヒトＩｇＧ１のＴｈｒ２５０、Ｍｅｔ２５２、Ｓｅｒ２５４、Ｔｈｒ２５６、Ｔｈｒ３０７、Ｇｌｕ３８０、Ｍｅｔ４２８、Ｈｉｓ４３３、及び／又はＡｓｎ４３４に対応する１以上の位置で１以上の変異を含む。
【００９４】
ある実施形態においては、抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントは、スペーサーを含み、及び／又は他の物と連結している。ある実施形態において、リンカー又はスペーサーは、ＧＡＰＧＧＧＧＧＡＡＡＡＡＧＧＧＧＧＧＡＰ（配列番号１）（ＧＡＧリンカー）と少なくとも５０％（例えば、少なくとも５５％、６０％、６５％、７０％、７５
％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％）同一である。ある実施形態においては、リンカー又はスペーサーは、ＧＡＰＧＧＧＧＧＡＡＡＡＡＧＧＧＧＧＧＡＰＧＧＧＧＧＡＡＡＡＡＧＧＧＧＧＧＡＰ（配列番号２）（ＧＡＧ２リンカー）と少なくとも５０％（例えば、少なくとも５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％）同一である。ある実施形態においては、リンカー又はスペーサーは、ＧＡＰＧＧＧＧＧＡＡＡＡＡＧＧＧＧＧＧＡＰＧＧＧＧＧＡＡＡＡＡＧＧＧＧＧＧＡＰＧＧＧＧＧＡＡＡＡＡＧＧＧＧＧＧＡＰ（配列番号３）（ＧＡＧ３リンカー）と少なくとも５０％（例えば、少なくとも５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％）同一である。
【００９５】
抗−Ｆｌｔ−１抗体及びその抗原結合フラグメントの産生
本発明にとって適切な、組換え型抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントは、任意の利用可能な手段によって産生することができる。例えば、組換え型抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントは、抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントをコードする核酸を発現するように遺伝子操作された宿主細胞系を利用することによって組換えにより産生することができる。
【００９６】
抗体を組換えにより産生する場合、任意の発現系を使用することができる。いくつかの例として記載するが、公知の発現系、例えば、卵、バキュロウイルス、植物、酵母又はほ乳動物細胞が挙げられる。
【００９７】
ある実施形態においては、本発明にとって適切な組換え型抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントは、ほ乳動物細胞内で産生される。本発明で使用することができるほ乳動物細胞の非限定的な例としては、ＢＡＬＢ／ｃマウス骨髄腫細胞（ＮＳＯ／ｌ、ＥＣＡＣＣ  Ｎｏ：８５１１０５０３）；ヒト網膜芽腫（ＰＥＲ．Ｃ６，ＣｒｕＣｅｌｌ，Ｌｅｉｄｅｎ，Ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）；ＳＶ４０により形質転換されたサル腎臓株化細胞ＣＶ１（ＣＯＳ−７、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １６５１）が挙げられる。
【００９８】
ある実施形態においては、本発明は、ヒト細胞から産生された、組換え型抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントが提供される。ある実施形態においては、本発明は、ＣＨＯ細胞から産生される抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントが提供される。
【００９９】
医薬組成物及び投与
本発明は、更に、抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントと、薬学的に許容される担体又は賦形剤とを含む医薬組成物を提供する。
【０１００】
適切な薬学的に許容される担体としては、水、塩溶液（例えば、ＮａＣｌ）、生理食塩水、食塩緩衝液、アルコール類、グリセロール、エタノール、アラビアゴム、植物油、ベンジルアルコール、ポリエチレングリコール、ゼラチン、乳糖、アミロース又はデンプン等の炭水化物、マンニトール、ショ糖又はその他の糖類、デキストロース、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ケイ酸、粘着性パラフィン、香油、脂肪酸エステル、ヒドロキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドン等、並びにそれらの混合物が挙げられるが、それらに限定されない。医薬製剤は、所望であれば、活性化合物と有毒な反応をせず、それらの活性を妨げない助剤（例えば、滑沢剤、防腐剤、安定化剤、湿潤剤、乳化剤、浸透圧に影響を与える塩、緩衝液、着色剤、香料及び／又は芳香剤等）と混合してもよい。好ましい実施形態においては、静脈投与に適した水溶性担体が使用される。
【０１０１】
適切な医薬組成物又は薬剤は、所望であれば、微量の湿潤剤若しくは乳化剤、又はｐＨ緩
衝剤を含んでいてもよい。組成物は液剤、懸濁剤、エマルション、錠剤、丸剤、カプセル剤、持続性製剤又は粉末であってもよい。組成物は、トリグリセリド等の従来のバインダー又は担体を用いて座剤として製剤化することができる。経口用製剤は、医薬品グレードのマンニトール、乳糖、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウム等の標準的な担体を含んでいてもよい。
【０１０２】
医薬組成物又は薬剤は、ヒトへの投与に適合する医薬組成物としての通常の手段に従って製造することができる。例えば、ある実施形態においては、静脈投与用組成物は、通常は、無菌の等張水性緩衝液中の溶液である。必要であれば、組成物は、注射部位において痛みを緩和するために溶解補助剤及び局所麻酔剤を含んでいてもよい。一般的に、成分は、例えば、活性剤の量を示すアンプル又はサシェ等の密封容器内に、凍結乾燥粉末又は無水濃縮物として、単位投与形態で別個に又は一緒に供給される。点滴により組成物が投与される場合、組成物は、無菌の医薬品グレードの水、食塩水、又はブドウ糖／水を含む点滴ボトルを用いて分注することができる。注射により組成物が投与される場合、投与前に成分を混合するように注射用無菌水又は食塩水のアンプルを提供することができる。
【０１０３】
投与経路
本明細書に記載される抗Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメント（又は本明細書に記載される抗Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントを含む組成物又は薬剤）は、任意の適切な経路で投与される。ある実施形態においては、抗Ｆｌｔ−１抗体、又はその抗原結合フラグメント、又はそれらを含む医薬組成物は非経口的に投与される。非経口投与は、静脈内、皮内、くも膜下、吸入、経皮（局所）、眼内、筋肉内、皮下、筋肉内及び／又は経粘膜投与であってもよい。ある実施形態においては、抗Ｆｌｔ−１抗体、又はその抗原結合フラグメント、又はそれらを含む医薬組成物は皮下投与される。本明細書で用いられる場合、「皮下組織」という用語は、皮膚の真下のゆるい、不規則な結合組織の層として定義される。例えば、皮下投与は、大腿部、腹腔部、臀部、又は肩甲骨が挙げられるが、これらに限定されない領域に組成物を投与することによって実施することができる。ある実施形態においては、抗Ｆｌｔ−１抗体、又はその抗原結合フラグメント、又はそれらを含む医薬組成物は静脈投与される。ある実施形態においては、抗Ｆｌｔ−１抗体、又はその抗原結合フラグメント、又はそれらを含む医薬組成物は、経口投与される。所望であれば、複数の経路を同時に使用することができる。
【０１０４】
ある実施形態においては、投与は個体において局所的効果のみをもたらすが、他の実施形態においては、投与は個体の複数の部分にわたる効果、例えば全身効果をもたらす。一般的に、投与は、抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントは、腎臓、肝臓、脳、脊髄、腸管、眼、肺、脾臓、心臓、横紋筋及び平滑筋が挙げられるが、これらに限定されない１以上の標的組織への送達をもたらす。
【０１０５】
ある実施形態においては、横紋筋は、三頭筋、前脛骨筋、ひらめ筋、腓腹筋、及び横隔膜からなる群から選択される。
【０１０６】
ある実施形態においては、平滑筋は、からなる群から選択される。
【０１０７】
剤形及び投与計画
ある実施形態においては、組成物は、治療的有効量で、及び／又は特定の所望の結果（例えば、デュシェンヌ型筋ジストロフィー等の筋ジストロフィーを治療し、又は危険性を低下させる）と相関する投与計画に従って投与される。
【０１０８】
特定の用量又は量は、本発明に従って、例えば、所望の結果の性質及び／又は程度、特に
投与経路及び／又は投与のタイミング、及び／又は１以上の特徴（例えば、体重、年齢、個体の業歴、遺伝的特徴、ライフスタイルパラメータ、心臓欠陥の重症度及び／又は心臓欠陥の危険性のレベル等、又はそれらの組み合わせ）に依存して変化し得る。このような用量又は量は、当業者によって決定することができる。ある実施形態においては、適切な用量又は量は、標準的な臨床技術に従って決定される。代わりに、又は追加的に、ある実施形態においては、適切な用量又は量は、投与すべき所望又は最適な用量範囲又は量を確認するのに役立つ、１以上のインビトロ又はインビボアッセイの使用により決定される。
【０１０９】
種々の実施形態においては、抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントは、治療的有効量で投与される。一般的に、治療的有効量は、対象に有意義な利益（例えば、原因となる疾患又は病態の治療、調節、治癒、予防及び／又は改善）を達成するのに十分である。特定のある実施形態においては、投与すべき適切な用量又は量は、インビトロ又は動物モデル試験系から得られる用量反応曲線から推定される。
【０１１０】
ある実施形態においては、提供される組成物は医薬製剤として提供される。ある実施形態においては、医薬組成物は、デュシェンヌ型筋ジストロフィー等の筋ジストロフィーの発生又は危険性の低下の達成と関連する投与計画に従った投与のための単位用量であるか、それを含む。
【０１１１】
ある実施形態においては、本明細書に記載される抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントを含む製剤は単一用量で投与される。ある実施形態においては、本明細書に記載される抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントを含む製剤は、一定の間隔で投与される。本明細書で用いられる場合、「間隔」での投与は、治療的有効量が定期的に投与されることを示す（１回投与と区別される）。間隔は、標準的な臨床技術により決定することができる。ある実施態様においては、本明細書に記載される抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントを含む製剤は、２ヶ月に１回、１ヶ月に１回、１ヶ月に２回、３週間に１回、２週間に１回、１週間に１回、１週間に２回、１週間に３回、１日１回、１日に２回、又は６時間毎に投与される。単一の個体についての投与間隔は一定の間隔である必要はなく、個々のニーズに応じて経時的に変えることができる。
【０１１２】
本明細書で用いられる場合、「２ヶ月に１回」という用語は、２ヶ月あたり１回の投与（すなわち、各２ヶ月に１回）を意味し；「１ヶ月に１回」という用語は、１ヶ月あたり１回の投与を意味し；「３週間に１回」という用語は、３週間あたり１回の投与（すなわち、各３週間に１回）を意味し；「２週間に１回」という用語は、２週間あたり１回の投与（すなわち、各２週間に１回）を意味し；「１週間に１回」という用語は、１週間あたり１回の投与を意味し；「毎日」という用語は、１日あたり１回の投与を意味する。
【０１１３】
ある実施形態においては、本明細書に記載される抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントは、規則的な間隔で無期限に投与される。ある実施形態においては、本明細書に記載される抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントは、規則的な間隔で所定期間投与される。
【０１１４】
ある実施形態においては、抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントは、少なくとも１種のＤＭＤの徴候又は症状の激しさ、重症度又は頻度を減少させ、その発生を遅延させる。ある実施形態においては、抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントの投与により、筋消耗、骨格奇形、心筋症、筋虚血、認知障害、及び呼吸機能障害からなる群から選択される少なくとも１種のＤＭＤの徴候又は症状の激しさ、重症度、又は頻度が減少し、その発症が遅延する。
【０１１５】
ある実施形態においては、抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントの投与によ
り、６分間歩行試験、定量的筋力試験、定期の運動能力試験により測定する臨床成績が改善する。Ｂｒｏｏｋｅ及びＶｉｇｎｏｓ手足機能スケール、肺機能試験（努力肺活量、１秒間の強制呼気量、最大呼気流量、最大呼気流速及び呼気圧）、健康関連の生活の質、膝及び肘の屈筋、肘の伸筋、肩の外転、握力、仰臥位から起き上がる時間、Ｎｏｒｔｈ  Ｓｔａｒｔ  Ａｍｂｕｌａｔｏｒｙ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ、定期の１０メートル歩行／走行、Ｅｇｅｎ−Ｋｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎスケール、Ｇｏｗｅｒｓスコア、Ｈａｍｍｅｒｓｍｉｔｈ運動機能、徒手筋力計、可動域、関節可動域測定、高炭酸症、乳幼児発達のＮａｙｌｅｙスケール、及び／又は介護人の負担スケール。
【０１１６】
併用療法
ある実施形態においては、抗−Ｆｌｔ−１抗体又はその抗原結合フラグメントは、筋ジストロフィーの治療のために現在使用されている１種以上の公知の治療薬（例えば、副腎皮質ホルモン剤）を組み合わせて投与される。ある実施形態においては、公知の治療薬は、その標準的又は承認済みの投与計画及び／又はスケジュールに従って投与される。ある実施形態においては、公知の治療薬は、その標準的又は承認済みの投与計画及び／又はスケジュールと比較し、変更した投与計画に従って投与される。ある実施形態においては、１以上の単位が量で変更され（例えば、減量又は増量）、及び／又は投薬が頻度で変更されている（例えば、単位用量間の１回以上の間隔が延長され、頻度が低くなり、又は間隔が短くなり、頻度が高くなっている）。
【実施例】
【０１１７】
実施例１．高親和性抗−Ｆｌｔ−１抗体の産生及び特徴づけ
抗体０１Ａ０４
抗体は、従来のマウスモノクローナル抗体の手順を用い、可溶性Ｆｌｔ−１に対して生成した。手短に言えば、Ｂａｌｂ／ｃマウスを、組換え型ヒト可溶性Ｆｌｔ−１（ＡＢＣＡＭから購入）を用いて免疫した。免疫後２０日に、ＥＬＩＳＡにより抗−ｓＦｌｔ−１産生について動物の力価を測定した（図１）。１匹のマウスが高い力価の反応を有していることがわかり、次いで、この動物を抗原で追加免疫し、５日後に屠殺した。この動物由来の脾臓及びリンパ節細胞をマウス骨髄腫パートナーと融合し、ハイブリドーマを産生させた。ハイブリドーマ上清を、ｓＦｌｔ−１抗原に対してスクリーニングし、陽性に反応するハイブリドーマを大量に産生し、ヒト及びマウス両者のｓＦｌｔ−１に対する結合、並びにＶＥＧＦ結合についてｓＦｌｔ−１と競合する能力について再アッセイした。ヒト及びマウス両者のｓＦｌｔ−１と結合し得る交差反応性のハイブリドーマはなかった。しかし、ヒトｓＦｌｔ−１反応性ハイブリドーマのうち、競合ＥＬＩＳＡによって、いくつかのｓＦｌｔ−１：ＶＥＧＦアンタゴニストを同定した（代表的な実験について図２を参照）。これらのうち、最も強力な融合パートナー０１Ａ０４を、単一細胞クローニングの第３ラウンドに供し、モノクローナル抗体０１Ａ０４を得た。ｓＦｌｔ−抗原（ＥＬＩＳＡ、ＢＩＡＣＯＲＥ及びＦＡＣｓ）に対する結合親和性；ｓＦｌｔ−１：ＶＥＧＦ競合ＥＬＩＳＡにおけるＩＣ５０；及び細胞を用いたアッセイにおける性能について、この抗体を更に特徴づけた。
【０１１８】
抗体０１Ａ０４の特徴づけ−結合
融合パートナー親のクローニングおよびサブクローニング後、０１Ａ０４親の複数のサブクローンが固定化した可溶性Ｆｌｔ−１に結合するのが示された（図３）。これらのサブクローンのうち、抗原結合、クローンの形態及び生存能力に基づき、大量生産及び細胞バンク用に、モノクローナル抗体０１Ａ０４−０２Ｂ１０−０２Ｇ０７を選択した。Ｆｌｔ−１抗原に対する０１Ａ０４−０２Ｂ１０−０２Ｇ０７の結合定数は、表面プラズモン共鳴法（ＢＩＯＣＯＲＥ、図４参照）により測定した。モノクローナル抗体０１Ａ０４−０２Ｂ１０−０２Ｇ０７は、ヒトｓＦｌｔ−１に対してサブナノモルで結合する。
【０１１９】
抗体０１Ａ０４の特徴付け−交差反応性
細胞で発現したＦｌｔ−１受容体に対する、モノクローナル抗体０１Ａ０４の結合を、ＦＡＣＳにより試験した。３つの形質転換細胞系を、ヒト、マウス又はカニクイザルＦｌｔ−１の発現について試験した。３種全ての細胞系に対する結合は、細胞を抗体と１時間インキュベートすることによって試験を行った。その後、細胞に対する抗体の結合を、抗−マウスＩｇＧ  ＰＥ抗体を用いて示した。結果を図５に示す。ＥＬＩＳＡ及びＢＩＡＣＯＲＥのデータは一致し、モノクローナル抗体０１Ａ０４はマウスＦｌｔ−１と結合しなかった。しかし、抗体は、細胞で発現したヒト及びカニクイザルＦｌｔ−１と結合した。
【０１２０】
抗体０１Ａ０４の特徴付け−競合
抗体の能力を評価するため、ラマのＦａｂｓ及びＩｇＧをスクリーニングするために構成した競合ＥＬＩＳＡ（ヒトｓＦｌｔ−１及びＶＥＧＦを使用）を用いた。１０〜０．０１μｇ／ｍＬの濃度範囲のＩｇＧについて試験を行った。モノクローナル抗体０１Ａ０４は、陰性コントロール（精製ポリクローナルマウスＩｇＧ）及び陽性コントロール（市販の抗−ｓＦｌｔ−１モノクローナル抗体Ａｂｃａｍ５６３００）の両者に対してアッセイした。最大阻害の半分の値（ＩＣ５０）を計算した。結果を図６に示す。
【０１２１】
抗体０１Ａ０４の特徴付け−細胞を用いたアッセイ
ヒト臍帯静脈内皮初代細胞（ＨＵＶＥＣｓ）を可溶性Ｆｌｔ−１及びモノクローナル抗体０１Ａ０４の存在下又は非存在下、ＶＥＧＦで刺激した。ＶＥＧＦが誘発する細胞の活性化は、ＶＥＧＦ  Ｒ２受容体のリン酸化状態を判定することによりアッセイした。可溶性Ｆｌｔ−１の存在下、ＶＥＧＦが誘発するＨＵＶＥＣ活性化は弱まる。モノクローナル抗体０１Ａ０４の添加は、可溶性Ｆｌｔ−１に拮抗することによる細胞活性化を回避する（図７）。
【０１２２】
実施例２．抗−Ｆｌｔ−１抗体のインビボにおける効力
ｍｄｘマウスへの抗−Ｆｌｔ−１抗体の投与
生後２１日に開始し、マウス（ｎ＝８）に抗−Ｆｌｔ−１抗体（０（ＰＢＳ）、０．１ｍｇ、又は０．５ｍｇ、静脈内）を注射した。抗−Ｆｌｔ−１抗体は、販売会社（Ａｎｇｉｏ  Ｐｒｏｔｅｏｍｉｅ、カタログ番号ＡＰ−ＭＡＢ０７０２）から得た。抗体は、公知のＦｌｔ−１：ＶＥＧＦアンタゴニストである。３日おきに、４８日目までマウスに注射した。５３日目に、インビボにおける効力を評価した。第２セットの実験においては、抗体の性能は、Ｆｌｔ−１と結合しない、アイソタイプ適合コントロール抗体に対して試験を行った。２８日目から５６日目まで、週に２回、２０ｍｇ／ｋｇの固定用量をマウスに注射した。５７日目に、インビボにおける効力を評価した。
【０１２３】
組織病理
０．５ｍｇ用量（静脈投与）での抗−Ｆｌｔ−１抗体を用いた治療は、媒体コントロールと対比し、ｍｄｘマウスにおいて筋病理を著しく改善した（図８、９及び１０）。特に、横隔膜筋肉内のエバンスブルー色素の蓄積が減少したので、筋線維の完全性が向上し（図８、上のパネル）；横隔膜筋内のワンギーソン染色により検出されるように、線維形成が減少し（図８、下のパネル）；横隔膜筋内のヘマトキシリン及びエオシン（Ｈ＋Ｅ）染色により検出されるように、筋壊死が減少した（図８、上から３番目のパネル）。筋線維の中央に位置する核（ＣＬＮ）は、ＤＭＤと関連する典型的な表現型である。抗体処理群ではＣＬＮが減少しており、これは、線維の代謝回転が減少し、筋肉線維の安定性が向上したことを示す（図１０）。抗体で処理された動物が横隔膜及び前脛骨筋でＣＤ３１＋血管数の増加を示すので、筋肉の健康状態が向上したことは、筋肉灌流の増加によって起こると仮定される（図８、２番目のパネル；図１４）。結果を、図９、１０及び１４に定量化する。更に、ＣＤ３１＋血管細胞の増殖は、内因性ＶＥＧＦアンタゴニストである可溶性Ｆｌｔ１の中和に起因し（図１２）、処理マウスの血流中の遊離ＶＥＧＦの上昇をもたらす（図１３）と仮定される。
【０１２４】
筋肉の機能
０．５ｍｇ用量の抗−Ｆｌｔ−１抗体による処理（静脈投与）は、握力試験においてマウスの筋肉の機能を著しく向上させ（図１、上のパネル）、トレッドミル試験の改善傾向を明瞭に示した（図１１、下のパネル）。
【０１２５】
均等物及び範囲
当業者は、ただのありふれた実験により本明細書で開示される特定の実施形態の多くの均等物を認識または解明することができる。本発明の範囲は上記明細書に限定されることを意図しておらず、範囲は添付の特許請求の範囲に明記される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【配列表】
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【外国語明細書】
2019023230000001.pdf