(57)【要約】【課題】血液脳関門の破綻を抑制する物質の提供。【解決手段】クロロゲン酸類又はその塩を有効成分とするＣｌａｕｄｉｎ−５発現促進剤。クロロゲン酸類又はその塩を有効成分とする脳内ＨＭＧＢ１発現抑制剤。クロロゲン酸類又はその塩を有効成分とする血液脳関門保護剤。クロロゲン酸類又はその塩を有効成分とする血液脳関門の機能低下の予防又は改善剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
クロロゲン酸類又はその塩を有効成分とする、Ｃｌａｕｄｉｎ−５発現促進剤。
【請求項２】
クロロゲン酸類又はその塩を有効成分とする、脳内ＨＭＧＢ１発現抑制剤。
【請求項３】
クロロゲン酸類又はその塩を有効成分とする、血液脳関門保護剤。
【請求項４】
クロロゲン酸類又はその塩を有効成分とする、血液脳関門の機能低下の予防又は改善剤。
【請求項５】
経口剤である、請求項１〜４のいずれか１項記載の剤。
【請求項６】
クロロゲン酸類又はその塩を有効成分とする、Ｃｌａｕｄｉｎ−５発現促進用食品組成物。
【請求項７】
クロロゲン酸類又はその塩を有効成分とする、脳内ＨＭＧＢ１発現抑制用食品組成物。
【請求項８】
クロロゲン酸類又はその塩を有効成分とする、血液脳関門保護用食品組成物。
【請求項９】
クロロゲン酸類又はその塩を有効成分とする、血液脳関門の機能低下の予防又は改善用食品組成物。 
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、血液脳関門保護剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
血液脳関門（Ｂｌｏｏｄ−Ｂｒａｉｎ  Ｂａｒｒｉｅｒ：ＢＢＢ）は、循環血液と脳内の間の自由な物質交換を制限する機構である。ＢＢＢは、循環血液に存在する有害物質から脳を守り、脳の恒常性維持に貢献している。ＢＢＢの本体は脳毛細血管の内皮細胞であり、ここには、タイトジャンクションによって結合した内皮細胞の周囲にペリサイト、アストロサイトの２種類の細胞及び２枚の基底膜が存在している。ＢＢＢを構築しているタイトジャンクションは、Ｃｌａｕｄｉｎ、Ｏｃｃｌｕｄｉｎ、ｊｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ａｄｈｅｓｉｏｎ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ（ＪＡＭ）などの膜貫通型タンパク質や、ＺＯ−１，２，３、Ａｃｔｉｎなどの細胞質内に存在するタンパク質で構成されており、ジッパー構造とも呼ばれている。これらの構造によって、ＢＢＢは、細胞間隙への物質の移動を制限することができる。ＢＢＢが破綻、すなわちＢＢＢの透過性が増大すると、血管内の有害物質が脳内に漏出し、脳組織が傷害されることで、脳の血管障害、炎症、神経障害等の様々な疾患や障害をもたらす。したがって、ＢＢＢを破綻から保護することは、それら疾患や障害の予防又は改善にとって有効である。
【０００３】
ＢＢＢを構成するタイトジャンクションタンパク質のなかで、Ｃｌａｕｄｉｎは、タイトジャンクション構造に最も重要であると考えられている。ＢＢＢでは、ｃｌａｕｄｉｎファミリーのなかでもＣｌａｕｄｉｎ−５が主に発現している。Ｃｌａｕｄｉｎ−５は脊椎動物においては血管内皮細胞に高く発現し、脳内では主に脳毛細血管内皮細胞に発現していることが報告されている（非特許文献１）。脳血管内皮細胞を用いたＢＢＢモデルにおいて、Ｃｌａｕｄｉｎ−５をｓｉＲＮＡで欠失させるとＢＢＢの透過性が増加すること（非特許文献２）、Ｃｌａｕｄｉｎ−５ノックアウトマウスにおけるＢＢＢ透過性の増大や致死性（非特許文献３）が報告されている。以上のことから、ＢＢＢにおけるＣｌａｕｄｉｎ−５の減少はＢＢＢの破綻を招き、ＢＢＢにおけるＣｌａｕｄｉｎ−５の発現を増加させることでＢＢＢを保護できると考えられる。
【０００４】
またＢＢＢの破綻の原因の一つとして、ＨＭＧＢ１（Ｈｉｇｈ  Ｍｏｂｉｌｉｔｙ  Ｇｒｏｕｐ  Ｂｏｘ  １）の発現増加が報告されている。ＨＭＧＢ１は、主に細胞の核内に存在してクロマチンの構造の安定化、又は遺伝子の転写反応に関与するタンパク質として同定されており、さらに細胞質や細胞外において免疫や炎症を制御する役割を担っている（非特許文献４）。ｉｎ  ｖｉｔｒｏ血液脳関門モデルを用いた実験系において、ＨＭＧＢ１で血管内皮細胞を処置することでＢＢＢの透過性は増大したが、ＨＭＧＢ１とともに抗ＨＭＧＢ１抗体を用いることでＢＢＢ透過性の増大は抑制したことが報告されている（非特許文献５）。また、ＨＭＧＢ１処置によりＢＢＢを構成している内皮細胞やペリサイト、アストロサイトの形態が変化し、透過性が増大したことが報告されている（非特許文献６）。実際に、抗ＨＭＧＢ１抗体は外傷性脳損傷による脳浮腫を抑制することができることが報告されており、そのメカニズムとして抗ＨＭＧＢ１抗体がＢＢＢ破綻を抑制したためであると考察されている（非特許文献７）。以上のことから、ＢＢＢにおけるＨＭＧＢ１の増加はＢＢＢの破綻につながり、ＢＢＢにおけるＨＭＧＢ１の発現を抑制することでＢＢＢを保護できると考えられる。
【０００５】
これまでにＢＢＢに着目した薬剤として、メトホルミン又はブホルミンを有効成分とする、血液脳関門機能を強化することにより疾患を予防、抑制又は改善する医薬（特許文献１）、プロスタサイクリン受容体アゴニスト又はプロスタサイクリン産生促進物質を含有する血管透過性亢進抑制剤（特許文献２）、及びプロサイモシンα又はその部分ペプチドを有効成分として含む血液脳関門障害を伴う疾患の治療剤（特許文献３）が開示されている。しかし、これらはＣｌａｕｄｉｎ−５の発現や活性の増加や、ＨＭＧＢ１の発現や活性の抑制を意図するものではない。
【０００６】
クロロゲン酸類は、コーヒーポリフェノール（ｃｏｆｆｅｅ  ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌ：ＣＰＰ）の１種であり、主にキナ酸にフェノール基が様々な位置で結合したモノ及びジエステルである。また、クロロゲン酸類については、これまでげっ歯類の末梢において抗酸化作用、抗不安作用、抗炎症作用、鎮痛作用、解熱作用を有すること、ならびに中枢神経系においてアミロイドβ誘導毒性及び酸化ストレスから神経細胞を保護する作用を有することが報告されている（特許文献４）。しかしながら、これまでにクロロゲン酸類の血液脳関門への影響に関する報告はない。マウスの腹腔から採取したマクロファージをリポ多糖（Lipopolysaccharide：LPS）で刺激をするとＨＭＧＢ１の発現が上昇するが、クロロゲン酸類で処置するとその上昇が抑制されることが報告されている（非特許文献８）。一方で、マクロファージは脳内にはほとんど存在しておらず、かつクロロゲン酸類がＢＢＢを通過して脳内に移行することもこれまで報告されていないことから、経口摂取したクロロゲン酸類が脳内のＨＭＧＢ１発現を抑制するかは未だ不明である。また、クロロゲン酸類の経口摂取が体内のＣｌａｕｄｉｎ−５の発現を上昇させることもこれまで報告されていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特開２０１５−７８２２５号公報
【特許文献２】特開２０１５−１３４７３２号公報
【特許文献３】再表２０１３−１２２１１６号公報
【特許文献４】特表２０１３−５４３８５６号公報
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】BMC Cancer, 2006, 6:186
【非特許文献２】Journal of Cerebral Blood Flow & Metabolism, 2012, 32:860-873
【非特許文献３】Journal of Cell Biology, 2003, 161(3):653-660
【非特許文献４】PNAS, 2013, 110(51):20699-20704
【非特許文献５】Journal of Neuroinflammation, 2016, 13:194
【非特許文献６】Stroke, 2011, 42:1420-1428
【非特許文献７】Yakugaku zasshi, 2014, 134(6):701-705
【非特許文献８】Molecular medicine, 2012, 18:1437-1448
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明は、Ｃｌａｕｄｉｎ−５の発現を促進、又は脳内のＨＭＧＢ１の発現を抑制して、血液脳関門の破綻を抑制する物質を提供する。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは、クロロゲン酸類が、Ｃｌａｕｄｉｎ−５の発現を促進すること、脳内のＨＭＧＢ１の発現を抑制すること、及びそれによって血液脳関門を破綻から保護することができることを見出した。
【００１１】
したがって、本発明は、クロロゲン酸類又はその塩を有効成分とする、Ｃｌａｕｄｉｎ−５発現促進剤を提供する。
また本発明は、クロロゲン酸類又はその塩を有効成分とする、脳内ＨＭＧＢ１発現抑制剤を提供する。
また本発明は、クロロゲン酸類又はその塩を有効成分とする、血液脳関門保護剤を提供する。
また本発明は、クロロゲン酸類又はその塩を有効成分とする、血液脳関門の機能低下の予防又は改善剤を提供する。
また本発明は、クロロゲン酸類又はその塩を有効成分とする、血液脳関門の破綻に起因する疾患又は状態の予防又は改善剤を提供する。
【発明の効果】
【００１２】
本発明によれば、Ｃｌａｕｄｉｎ−５の発現を促進すること、及び脳内のＨＭＧＢ１の発現を抑制することができる。また本発明によれば、Ｃｌａｕｄｉｎ−５の発現促進又は脳内ＨＭＧＢ１の発現抑制を介して、血液脳関門を保護し、又はその破綻を効果的に抑制することができる。本発明は、血液脳関門の保護、及び血液脳関門の破綻に起因する種々の状態又は疾患の予防又は改善に有効である。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
血液脳関門（Ｂｌｏｏｄ−Ｂｒａｉｎ  Ｂａｒｒｉｅｒ：ＢＢＢ）が破綻すると、血管内の有害物質が脳内に漏出し、それによって脳組織が傷害されることで、様々な疾患や障害が引き起こされる。ＢＢＢ破綻により生じる疾患や障害としては、例えば、血中アルブミンやナトリウムの脳浸潤による脳出血又は脳血管障害；白血球の脳浸潤による脳症（白質脳症など）；炎症性サイトカインの脳内移行による自己免疫性中枢神経疾患（視神経脊髄炎、急性散在性脳脊髄炎、炎症性脱髄性多発神経炎など）；ウイルスやアレルギー物質の脳内移行による脳感染症又はアナフィラキシー；薬物の脳内移行の増大による振戦や異常行動といった薬物有害事象の発生；その他有害物質の脳内移行による脳・脊髄外傷、及びそれによる振戦、せん妄、異常行動、眠気、意識障害、強迫性障害等の発生、などが挙げられる（例えば、特許文献１、Cell, 2015, 163(5):1064-1078、Nat Med, 2013, 19(12):1584-1596、Neuron, 2008, 57(2):178-201を参照）。
【００１４】
Ｃｌａｕｄｉｎ−５は、タイトジャンクションの構築に関与する膜貫通型タンパク質である。ＢＢＢでは、ｃｌａｕｄｉｎファミリーのうちＣｌａｕｄｉｎ−５が主に発現している。ＢＢＢのタイトジャンクションを構成するタンパク質のなかで、Ｃｌａｕｄｉｎは最も重要であると考えられている。Ｃｌａｕｄｉｎ−５を欠失させるとＢＢＢの透過性が増加すること（非特許文献２）、Ｃｌａｕｄｉｎ−５ノックアウトマウスにおけるＢＢＢ透過性の増大や致死性（非特許文献３）が報告されている。したがって、Ｃｌａｕｄｉｎ−５の発現減少はＢＢＢの破綻を招き、一方Ｃｌａｕｄｉｎ−５の発現増加は、ＢＢＢのタイトジャンクションを強化し、ＢＢＢを保護する。
【００１５】
ＨＭＧＢ１（Ｈｉｇｈ  Ｍｏｂｉｌｉｔｙ  Ｇｒｏｕｐ  Ｂｏｘ  １）は、様々な細胞の核内に存在するタンパク質で、クロマチンの構造の安定化、又は遺伝子の転写反応に役割を担うタンパク質として同定された。また近年では、ＨＭＧＢ１について、一部が細胞質内にも存在すること、炎症応答や感染に際しては細胞外にまで放出され、炎症性サイトカインとして機能し、炎症応答を促進すること、及び細胞外から取りこまれた核酸の認識やオートファジーの誘導に関与していることが明らかとなっている（非特許文献４）。また、ＢＢＢにおけるＨＭＧＢ１の増加はＢＢＢを構成する脳血管内皮細胞、アストロサイト、ペリサイトの構造を変化させ、ＢＢＢの透過性の増大をもたらすことから（非特許文献５〜６）、ＨＭＧＢ１は血液脳関門破綻関連因子であると考えられている。したがって、ＨＭＧＢ１の増加は、ＢＢＢの破綻を促進し、それに起因する上述したような様々な疾患又は状態を引き起こす。
【００１６】
クロロゲン酸類は、後述の実施例に示すとおり、脳内におけるＣｌａｕｄｉｎ−５の発現を促進し、ＨＭＧＢ１の発現を抑制する作用を有する。これまで、クロロゲン酸類がＣｌａｕｄｉｎ−５に対して作用するという報告はなかった。またこれまで、経口摂取されたクロロゲン酸類がＢＢＢで保護された脳内にあるＨＭＧＢ１に対して作用するという報告はなかった。Ｃｌａｕｄｉｎ−５の発現を促進すれば、脳を囲むＢＢＢを強化することができる。また脳内のＨＭＧＢ１の発現を抑制すれば、脳を囲むＢＢＢに対するＨＭＧＢ１の作用を抑制することができる。したがって、クロロゲン酸類は、Ｃｌａｕｄｉｎ−５発現促進、脳内のＨＭＧＢ１発現抑制、ＢＢＢの保護、ＢＢＢの機能低下の予防又は改善、及びＢＢＢの破綻に起因する疾患又は状態の予防又は改善のために有効である。
【００１７】
本明細書において、「Ｃｌａｕｄｉｎ−５」とは、配列番号１で表されるアミノ酸配列と９５％以上配列同一なアミノ酸配列からなるヒトＣｌａｕｄｉｎ−５、又はそのホモログをいい、それらの代表的な例としては、Ｇｅｎｅ  ＩＤ：７１２２で表されるヒトＣｌａｕｄｉｎ−５（配列番号１）、及びＧｅｎｅ  ＩＤ：１２７４１で表されるマウスＣｌａｕｄｉｎ−５（配列番号２）が挙げられる。これら「Ｃｌａｕｄｉｎ−５」は、ＢＢＢタイトジャンクションを構成する膜タンパク質であり、その発現増加はＢＢＢタイトジャンクションを強化し、ＢＢＢの保護に働く。
【００１８】
本明細書において、「Ｃｌａｕｄｉｎ−５発現」とは、血管内皮細胞におけるＣｌａｕｄｉｎ−５の発現をいい、好ましくは脳毛細血管の内皮細胞におけるＣｌａｕｄｉｎ−５発現をいい、より好ましくは大脳皮質又は海馬を囲むＢＢＢの血管内皮細胞におけるＣｌａｕｄｉｎ−５の発現をいう。
【００１９】
本明細書において、「ＨＭＧＢ１」とは、配列番号３で表されるアミノ酸配列と９５％以上配列同一なアミノ酸配列からなるヒトＨＭＧＢ１、又はそのホモログをいい、それらの代表的な例としては、Ｇｅｎｅ  ＩＤ：３１４６で表されるヒトＨＭＧＢ１（配列番号３）、及びＧｅｎｅ  ＩＤ：１５２８９で表されるマウスＨＭＧＢ１（配列番号４）が挙げられる。これら「ＨＭＧＢ１」は、細胞の核内に存在し、その発現増加はＢＢＢの透過性の増大をもたらす。
【００２０】
本明細書において、「脳内ＨＭＧＢ１発現」とは、ＢＢＢに保護された脳組織の細胞、好ましくは大脳皮質の細胞におけるＨＭＧＢ１の発現をいう。
【００２１】
本明細書において、「血液脳関門（ＢＢＢ）の保護」とは、ＢＢＢを破綻から保護することをいう。ＢＢＢが破綻すると、ＢＢＢの透過性が増大して、これまでＢＢＢにより脳への侵入を遮られていた血管内の有害物質が脳内に漏出する。したがって、ＢＢＢの破綻は、ＢＢＢの機能低下をもたらす。
【００２２】
本明細書において、「血液脳関門（ＢＢＢ）破綻に起因する疾患又は状態」とは、ＢＢＢの破綻によりそのバリア機能が障害されることに起因して生じる疾患又は状態をいい、その例としては、脳内出血、脳血管障害、視神経脊髄炎、白質脳症、急性散在性脳脊髄炎、炎症性脱髄性多発神経炎、脳感染症、アナフィラキシー、脳腫瘍、脳・脊髄外傷、振戦、せん妄、異常行動、眠気、意識障害、強迫性障害等が挙げられる。
【００２３】
本明細書において、「血液脳関門（ＢＢＢ）破綻に起因する疾患又は状態の予防又は改善」とは、好ましくは、脳内出血、脳血管障害、視神経脊髄炎、白質脳症、急性散在性脳脊髄炎、炎症性脱髄性多発神経炎、脳感染症、アナフィラキシー、脳腫瘍、脳・脊髄外傷、振戦、せん妄、異常行動、眠気、意識障害、及び強迫性障害からなる群より選択される１種以上の疾患又は状態の予防又は改善をいう。
【００２４】
本明細書において、「予防」とは、個体における疾患、症状もしくは状態の発症の防止、抑制又は遅延、あるいは個体の疾患、症状もしくは状態の発症の危険性を低下させることをいう。また本明細書において、「改善」とは、疾患、症状もしくは状態の好転、疾患、症状もしくは状態の悪化の防止、抑制又は遅延、あるいは疾患、症状もしくは状態の進行の逆転、防止、抑制又は遅延をいう。
【００２５】
本明細書において、「非治療的」とは、医療行為を含まない概念、すなわち人間を手術、治療又は診断する方法を含まない概念、より具体的には医師又は医師の指示を受けた者が人間に対して手術、治療又は診断を実施する方法を含まない概念である。
【００２６】
本発明で用いられるクロロゲン酸類の例としては、３−カフェオイルキナ酸（３−ＣＱＡ）、４−カフェオイルキナ酸（４−ＣＱＡ）及び５−カフェオイルキナ酸（５−ＣＱＡ）を含むモノカフェオイルキナ酸；３−フェルロイルキナ酸（３−ＦＱＡ）、４−フェルロイルキナ酸（４−ＦＱＡ）及び５−フェルロイルキナ酸（５−ＦＱＡ）を含むモノフェルロイルキナ酸；ならびに、３，４−ジカフェオイルキナ酸（３，４−ｄｉＣＱＡ）、３，５−ジカフェオイルキナ酸（３，５−ｄｉＣＱＡ）及び４，５−ジカフェオイルキナ酸（４，５−ｄｉＣＱＡ）を含むジカフェオイルキナ酸、が挙げられる。本発明で用いるクロロゲン酸類は、上記に挙げた化合物のいずれか１種又は２種以上の組み合わせであり得る。
【００２７】
Ｃｌａｕｄｉｎ−５発現促進又はＨＭＧＢ１発現抑制の観点からは、本発明で用いられるクロロゲン酸類は、好ましくは３−ＣＱＡ、４−ＣＱＡ、５−ＣＱＡからなる群より選択される１種以上のモノカフェオイルキナ酸を含み、より好ましくは５−ＣＱＡを含む。好適には、本発明で用いられるクロロゲン酸類中における５−ＣＱＡの含量は、その全量中、１５質量％以上が好ましく、２５質量％以上がより好ましく、３５質量％以上がさらに好ましい。
【００２８】
クロロゲン酸類は、これを含有する天然物、特に植物から抽出することもでき、化学合成により工業的に製造することもできる。クロロゲン酸類には、立体異性体が存在し、本発明では、それらの純粋な立体異性体又はそれらの立体異性体の混合物を用いることができる。
【００２９】
好ましくは、本発明で用いるクロロゲン酸類は、それらを含有する植物から抽出することができる。クロロゲン酸類を含有する植物の例としては、コーヒー、キャベツ、レタス、アーチチョーク、トマト、ナス、ジャガイモ、ニンジン、リンゴ、ナシ、プラム、モモ、アプリコット、チェリー、ヒマワリ、モロヘイヤ、カンショ、南天の葉、ブルーベリー、小麦、シモン葉、マツ科植物の球果、マツ科植物の種子殻、ウメの果実、フキタンポポ、ブドウ科植物などが挙げられる。
【００３０】
より好ましくは、クロロゲン酸類は、コーヒー生豆、焙煎コーヒー豆、南天の葉、リンゴ未熟果、ヒマワリ種等より抽出することができる。なかでも、クロロゲン酸類含量等の点から、コーヒー生豆、焙煎コーヒー豆などのコーヒー豆が、本発明で好ましく用いられる。例えば、アカネ科コーヒー（Coffee arabica LINNE）の種子より、温時アスコルビン酸、クエン酸酸性水溶液又は熱水で抽出した後、必要に応じてろ過、活性炭及びイオン交換樹脂処理することでクロロゲン酸類を含む生コーヒー豆抽出物を調製することができる。あるいは焙煎コーヒー豆からクロロゲン酸類を含む抽出物を調製しても良い。該コーヒー豆としては、中焙煎コーヒー豆（Ｌ値：１６．８を超え２４．２以下）、浅焙煎コーヒー豆（Ｌ値：２４．２を超え３０．２以下）、微焙煎コーヒー豆（Ｌ値：３０．２を超える）、及び生コーヒー豆が好ましく、生コーヒー豆がより好ましいが、深焙煎コーヒー豆（Ｌ値：１６．８以下）を使用することもできる。本明細書において「Ｌ値」とは、黒をＬ値０とし、また白をＬ値１００として、焙煎コーヒー豆の明度を色差計で測定したものである。又は、本発明では、市販の生コーヒー豆抽出物、リンゴ抽出物、ヒマワリ種抽出物を、クロロゲン酸類原料として用いることができる。
【００３１】
本発明で用いられるコーヒー豆抽出物は、カフェイン含量が低いことが好ましい。該コーヒー豆抽出物におけるカフェインとクロロゲン酸類との質量比（カフェイン／クロロゲン酸類）は、風味の観点から、０．０５以下が好ましく、０．０３以下がより好ましく、０．０２以下がさらに好ましく、０．００５以下がさらに好ましく、０．００３以下がさらに好ましく、０．００１以下がさらに好ましい。なお、カフェイン／クロロゲン酸類の比の下限は特に限定されず、０であってもよい。
【００３２】
本発明で用いられるコーヒー豆抽出物の好ましい例としては、カフェインとクロロゲン酸類との質量比（カフェイン／クロロゲン酸類）が０．０２以下、かつクロロゲン酸類全量中の５−ＣＱＡの含量（５−ＣＱＡ／全クロロゲン酸類）が３５質量％以上の生コーヒー豆抽出物が挙げられる。より好ましい例としては、（カフェイン／クロロゲン酸類）が０．００１以下、かつ（５−ＣＱＡ／全クロロゲン酸類）が３５質量％以上の生コーヒー豆抽出物が挙げられる。 
【００３３】
クロロゲン酸類は、塩にすることにより水溶性を向上させ、生理学的有効性を増大させることができる。本発明で用いられるクロロゲン酸類の塩としては、薬学的に許容される塩が好ましい。このような塩形成用の塩基物質としては、例えば、水酸化リチウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等のアルカリ金属の水酸化物；水酸化マグネシウム、水酸化カルシウム等のアルカリ土類金属の水酸化物；水酸化アンモニウム等の無機塩基；アルギニン、リジン、ヒスチジン、オルニチン等の塩基性アミノ酸；モノエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン等の有機塩基が用いられるが、このうち、アルカリ金属又はアルカリ土類金属の水酸化物が好ましい。好ましいクロロゲン酸類の塩の例としては、ナトリウム、カリウム等のアルカリ金属塩、マグネシウム、カルシウム等のアルカリ土類金属塩、モノエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン等の有機アミン塩、アルギニン、リジン、ヒスチジン、オルニチン等の塩基性アミノ酸塩が挙げられる。これらのクロロゲン酸類の塩は、上述したクロロゲン酸類を含有する植物から抽出することができる。
【００３４】
本発明において、クロロゲン酸類又はその塩は、それらを含む植物抽出物の形態で使用することができる。該植物抽出物としては、上述した植物の抽出物の他、市販のクロロゲン酸類含有製剤を使用してもよく、例えば、フレーバーホルダーＲＣ（長谷川香料（株））、生コーヒー豆エキスＰ（オリザ油化社製）、スベトール（Ｎｕｒｅｘ Ｉｎｃ.製）、ＯＸＣＨ１００（東洋発酵社製）等が挙げられる。
【００３５】
一態様において、本発明は、クロロゲン酸類又はその塩を有効成分とする、Ｃｌａｕｄｉｎ−５発現促進剤を提供する。また本発明は、クロロゲン酸類又はその塩を有効成分とする、脳内ＨＭＧＢ１発現抑制剤を提供する。また本発明は、クロロゲン酸類又はその塩を有効成分とする、血液脳関門保護剤を提供する。また本発明は、クロロゲン酸類又はその塩を有効成分とする、血液脳関門の機能低下の予防又は改善剤を提供する。また本発明は、クロロゲン酸類又はその塩を有効成分とする、血液脳関門の破綻に起因する疾患又は状態の予防又は改善剤を提供する。
別の態様において、本発明は、Ｃｌａｕｄｉｎ−５発現促進剤、脳内ＨＭＧＢ１発現抑制剤、血液脳関門保護剤、血液脳関門の機能低下の予防又は改善剤、あるいは血液脳関門の破綻に起因する疾患又は状態の予防又は改善剤の製造のための、クロロゲン酸類又はその塩の使用を提供する。
一実施形態において、当該剤は、クロロゲン酸類又はその塩から本質的に構成され得る。別の一実施形態において、当該剤は、少なくともクロロゲン酸類又はその塩を含有する組成物であり得る。当該組成物の例としては、後述する医薬品、医薬部外品、食品などが挙げられる。
【００３６】
また別の態様において、本発明は、Ｃｌａｕｄｉｎ−５発現促進、脳内ＨＭＧＢ１発現抑制、血液脳関門保護、血液脳関門の機能低下の予防又は改善、あるいは血液脳関門の破綻に起因する疾患又は状態の予防又は改善のための、クロロゲン酸類又はその塩の使用を提供する。
さらに別の態様において、本発明は、Ｃｌａｕｄｉｎ−５発現促進、脳内ＨＭＧＢ１発現抑制、血液脳関門保護、血液脳関門の機能低下の予防又は改善、あるいは血液脳関門の破綻に起因する疾患又は状態の予防又は改善に使用するための、クロロゲン酸類又はその塩を提供する。
【００３７】
当該本発明による使用は、治療的使用であっても非治療的使用であってもよい。治療的使用の例としては、上述したＢＢＢの破綻に起因する疾患又は状態の治療又は改善を必要とする者に対する使用が挙げられる。非治療的使用とは、健常者を含む、医師にＢＢＢ破綻に起因する疾患又は状態を有すると診断されていないが、ＢＢＢ破綻に起因する疾患又は状態を予防したい者、例えば高齢者等に対する使用が挙げられる。
【００３８】
本発明において、クロロゲン酸類又はその塩は、ヒト及び非ヒト動物のいずれに対しても使用することができる。非ヒト動物としては、非ヒト哺乳動物、鳥類などが挙げられ、非ヒト哺乳動物としては、例えば、類人猿、その他霊長類、マウス、ラット、ハムスター、イヌ、ネコ、及びコンパニオン動物などが挙げられる。
【００３９】
本発明において、クロロゲン酸類又はその塩は、医薬品、医薬部外品又は食品（非ヒト動物用食品を含む）等に対して、Ｃｌａｕｄｉｎ−５発現促進、脳内ＨＭＧＢ１発現抑制、ＢＢＢ保護、ＢＢＢの機能低下の予防又は改善、あるいはＢＢＢの破綻に起因する疾患又は状態の予防又は改善の機能を付与するための有効成分として使用することができる。
【００４０】
当該医薬品（医薬部外品も含む）は、Ｃｌａｕｄｉｎ−５発現促進、脳内ＨＭＧＢ１発現抑制、ＢＢＢ保護、ＢＢＢの機能低下の予防又は改善、あるいはＢＢＢの破綻に起因する疾患又は状態の予防又は改善のための医薬品であり、クロロゲン酸類又はその塩を、当該機能のための有効成分として含有する。さらに、該医薬品は、該有効成分の機能が失われない限りにおいて、必要に応じて薬学的に許容される担体、又は他の有効成分、薬理成分等を含有していてもよい。
【００４１】
当該医薬品（医薬部外品も含む）の投与形態は、経口投与及び非経口投与の何れであってもよいが、経口投与が好ましい。該医薬品の剤形は、経口又は非経口的に投与可能な剤形であれば特に限定されず、例えば注射剤、坐剤、吸入剤、経皮吸収剤、各種外用剤、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、液剤、シロップ剤等の何れでもよく、また、このような種々の剤形の製剤は、クロロゲン酸類又はその塩を、薬学的に許容される担体（例えば賦形剤、結合剤、増量剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤、分散剤、緩衝剤、保存剤、嬌味剤、香料、被膜剤、希釈剤等）、他の薬効成分等と適宜組み合わせて、定法に従って調製することができる。
【００４２】
当該医薬品（医薬部外品も含む）におけるクロロゲン酸類又はその塩の含有量は、特に限定されないが、その全質量中、クロロゲン酸類換算で、好ましくは０．０１質量％以上、より好ましくは０．１質量％以上、さらに好ましくは０．５質量％以上、さらにより好ましくは１．０質量％以上、なお好ましくは１０質量％以上であり、かつ好ましくは９５質量％以下、より好ましくは８０質量％以下、さらに好ましくは６０質量％以下である。さらに、当該含有量の例として、全質量中、０．０１〜９５質量％、０．０１〜８０質量％、０．０１〜６０質量％、０．１〜９５質量％、０．１〜８０質量％、０．１〜６０質量％、０．５〜９５質量％、０．５〜８０質量％、０．５〜６０質量％、１．０〜９５質量％、１．０〜８０質量％、１．０〜６０質量％、１０〜９５質量％、１０〜８０質量％、及び１０〜６０質量％が挙げられる。
【００４３】
当該食品は、Ｃｌａｕｄｉｎ−５発現促進、脳内ＨＭＧＢ１発現抑制、ＢＢＢ保護、ＢＢＢの機能低下の予防又は改善、あるいはＢＢＢの破綻に起因する疾患又は状態の予防又は改善の機能を提供するための食品であり、クロロゲン酸類又はその塩を、当該機能のための有効成分として含有する。該食品には、Ｃｌａｕｄｉｎ−５発現促進、脳内ＨＭＧＢ１発現抑制、ＢＢＢ保護、ＢＢＢの機能低下の予防又は改善、あるいはＢＢＢの破綻に起因する疾患又は状態の予防又は改善をコンセプトとし、必要に応じてその旨を表示した病者用食品、及び栄養機能食品、特定保健用食品、機能性表示食品等の保健機能食品が包含される。
【００４４】
本発明により提供される食品は飲料を含む。したがって、当該食品を飲食品と言い換えることができる。当該食品の形態は、固形、半固形又は液状（例えば飲料）であり得る。該食品の例としては、パン類、麺類、飯類、クッキー等の菓子類、ゼリー類、乳製品、スープ類、冷凍食品、インスタント食品、でんぷん加工製品、加工魚肉製品、その他加工食品、調味料、栄養補助食品、及び茶飲料、コーヒー飲料、果実飲料、炭酸飲料、乳飲料、ゼリー状飲料、ニアウォーター等の飲料、ならびにそれらの原料が挙げられる。あるいは、該食品は、錠剤、カプセル、顆粒、粉末、液剤、シロップなどの経口投与製剤の形態を有するサプリメントであってもよい。
【００４５】
当該食品は、クロロゲン酸類又はその塩を、任意の食品材料又は食品に許容される添加物（例えば溶剤、軟化剤、油、乳化剤、防腐剤、香科、甘味料、安定剤、着色剤、紫外線吸収剤、酸化防止剤、保湿剤、増粘剤、固着剤、分散剤、湿潤剤等）と適宜組み合わせて、定法に従って調製することができる。
【００４６】
当該食品中における、クロロゲン酸類又はその塩の含有量は、特に限定されないが、その全質量中、クロロゲン酸類換算で、好ましくは０．０００１質量％以上、より好ましくは０．００１質量％以上、さらに好ましくは０．０１質量％以上、さらにより好ましくは０．１質量％以上、なお好ましくは０．５質量％以上、なお好ましくは１質量％以上であり、かつ好ましくは５０質量％以下、より好ましくは２０質量％以下、さらに好ましくは１０質量％以下である。さらに、当該含有量の例として、全質量中、０．０００１〜５０質量％、０．０００１〜２０質量％、０．０００１〜１０質量％、０．００１〜５０質量％、０．００１〜２０質量％、０．００１〜１０質量％、０．０１〜５０質量％、０．０１〜２０質量％、０．０１〜１０質量％、０．１〜５０質量％、０．１〜２０質量％、０．１〜１０質量％、０．５〜５０質量％、０．５〜２０質量％、０．５〜１０質量％、１〜５０質量％、１〜２０質量％、及び１〜１０質量％が挙げられる。
【００４７】
なお別の態様において、本発明は、対象のＣｌａｕｄｉｎ−５発現促進方法を提供する。また本発明は、対象の脳内ＨＭＧＢ１発現抑制方法を提供する。また本発明は、対象のＢＢＢ保護方法を提供する。また本発明は、対象のＢＢＢの機能低下の予防又は改善方法を提供する。また本発明は、対象のＢＢＢの破綻に起因する疾患又は状態の予防又は改善方法を提供する。当該方法は、対象に、クロロゲン酸類又はその塩を有効量で投与することを含む。当該方法は、治療的方法であっても非治療的方法であってもよい。
【００４８】
当該本発明の方法における対象としては、Ｃｌａｕｄｉｎ−５発現促進、脳内ＨＭＧＢ１発現抑制、ＢＢＢ保護、ＢＢＢの機能低下の予防又は改善、あるいはＢＢＢの破綻に起因する疾患又は状態の予防又は改善が所望されるか、それらを必要とする動物が挙げられる。動物としては、ＢＢＢを有する動物であれば特に限定されないが、上述したヒト及び非ヒト動物が挙げられ、より好ましくはヒトである。
【００４９】
当該本発明の方法における投与の有効量は、対象のＣｌａｕｄｉｎ−５発現促進又は脳内ＨＭＧＢ１発現抑制を達成できる量であり得る。好ましくは、有効量とは、投与群のＣｌａｕｄｉｎ−５発現又は脳内ＨＭＧＢ１発現を、未投与群と比べて統計的に有意に低下させることができる量である。本発明において、クロロゲン酸類又はその塩の投与量及び投与計画は、対象の種、体重、性別、年齢、状態、又はその他の要因に従って当業者により適宜決定されればよい。限定ではないが、本発明によるクロロゲン酸類又はその塩の投与量（クロロゲン酸類換算）は、例えば成人１人１日当たり、好ましくは１ｍｇ以上、より好ましくは５ｍｇ以上、さらに好ましくは１５ｍｇ以上であり、かつ好ましくは１０ｇ以下、より好ましくは５ｇ以下、さらに好ましくは１ｇ以下である。上記の用量を、例えば、１日に１回、２回又は３回以上に分け、数週間〜数ヶ月間継続して投与することが好ましい。また経口投与が好ましい。
【００５０】
本発明はまた、例示的実施形態として以下の物質、製造方法、用途、方法等を包含する。但し、本発明はこれらの実施形態に限定されない。
【００５１】
〔１〕クロロゲン酸類もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物を有効成分とする、Ｃｌａｕｄｉｎ−５発現促進剤。
〔２〕クロロゲン酸類もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物を有効成分とする、脳内ＨＭＧＢ１発現抑制剤。
〔３〕クロロゲン酸類もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物を有効成分とする、血液脳関門保護剤。
〔４〕クロロゲン酸類もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物を有効成分とする、血液脳関門の機能低下の予防又は改善剤。
〔５〕クロロゲン酸類もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物を有効成分とする、血液脳関門の破綻に起因する疾患又は状態の予防又は改善剤。
〔６〕好ましくは、前記血液脳関門の破綻に起因する疾患又は状態が、脳内出血、脳血管障害、視神経脊髄炎、白質脳症、急性散在性脳脊髄炎、炎症性脱髄性多発神経炎、脳感染症、アナフィラキシー、脳腫瘍、脳・脊髄外傷、振戦、せん妄、異常行動、眠気、意識障害、及び強迫性障害からなる群より選択される少なくとも１種である、〔５〕記載の剤。
〔７〕好ましくは、前記クロロゲン酸類が、３−カフェオイルキナ酸、４−カフェオイルキナ酸、５−カフェオイルキナ酸、３−フェルロイルキナ酸、４−フェルロイルキナ酸、５−フェルロイルキナ酸、３，４−ジカフェオイルキナ酸、３，５−ジカフェオイルキナ酸及び４，５−ジカフェオイルキナ酸からなる群より選択される少なくとも１種である、〔１〕〜〔６〕のいずれか１項記載の剤。
〔８〕好ましくは、前記剤が医薬品又は医薬部外品であり、かつクロロゲン酸類を０．０１〜９５質量％、０．０１〜８０質量％、０．０１〜６０質量％、０．１〜９５質量％、０．１〜８０質量％、０．１〜６０質量％、０．５〜９５質量％、０．５〜８０質量％、０．５〜６０質量％、１．０〜９５質量％、１．０〜８０質量％、１．０〜６０質量％、１０〜９５質量％、１０〜８０質量％、又は１０〜６０質量％含有する、〔１〕〜〔７〕のいずれか１項記載の剤。
〔９〕好ましくは、前記剤が食品であり、かつクロロゲン酸類を０．０００１〜５０質量％、０．０００１〜２０質量％、０．０００１〜１０質量％、０．００１〜５０質量％、０．００１〜２０質量％、０．００１〜１０質量％、０．０１〜５０質量％、０．０１〜２０質量％、０．０１〜１０質量％、０．１〜５０質量％、０．１〜２０質量％、０．１〜１０質量％、０．５〜５０質量％、０．５〜２０質量％、０．５〜１０質量％、１〜５０質量％、１〜２０質量％、又は１〜１０質量％含有する、〔１〕〜〔７〕のいずれか１項記載の剤。
〔１０〕好ましくは経口剤である、〔１〕〜〔９〕のいずれか１項記載の剤。
〔１１〕前記植物抽出物が、好ましくはコーヒー豆抽出物であり、より好ましくは生コーヒー豆抽出物である、〔１〕〜〔１０〕のいずれか１項記載の剤。
〔１２〕前記生コーヒー豆抽出物が、
好ましくは、カフェインとクロロゲン酸類との質量比が０．０２以下、クロロゲン酸類全量中の５−カフェオイルキナ酸の含量が３５質量％以上の生コーヒー豆抽出物であり、
より好ましくは、カフェインとクロロゲン酸類との質量比が０．００１以下、クロロゲン酸類全量中の５−カフェオイルキナ酸の含量が３５質量％以上の生コーヒー豆抽出物である、
〔１１〕記載の剤。
【００５２】
〔１３〕Ｃｌａｕｄｉｎ−５発現促進剤の製造のための、クロロゲン酸類もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物の使用。
〔１４〕脳内ＨＭＧＢ１発現抑制剤の製造のための、クロロゲン酸類もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物の使用。
〔１５〕血液脳関門保護剤の製造のための、クロロゲン酸類もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物の使用。
〔１６〕血液脳関門の機能低下の予防又は改善剤の製造のための、クロロゲン酸類もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物の使用。
〔１７〕血液脳関門の破綻に起因する疾患又は状態の予防又は改善剤の製造のための、クロロゲン酸類もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物の使用。
〔１８〕好ましくは、前記Ｃｌａｕｄｉｎ−５発現促進剤が、血液脳関門の破綻に起因する疾患又は状態の予防又は改善を必要とする者におけるＣｌａｕｄｉｎ−５発現促進のために使用される、〔１３〕記載の使用。
〔１９〕好ましくは、前記脳内ＨＭＧＢ１発現抑制剤が、血液脳関門の破綻に起因する疾患又は状態の予防又は改善を必要とする者における脳内ＨＭＧＢ１発現抑制のために使用される、〔１４〕記載の使用。
〔２０〕好ましくは、前記血液脳関門保護剤が、血液脳関門の破綻に起因する疾患又は状態の予防又は改善を必要とする者における血液脳関門保護のために使用される、〔１５〕記載の使用。
〔２１〕好ましくは、前記血液脳関門の機能低下の予防又は改善剤が、血液脳関門の破綻に起因する疾患又は状態の予防又は改善を必要とする者における血液脳関門の機能低下の予防又は改善のために使用される、〔１６〕記載の使用。
〔２２〕好ましくは、前記血液脳関門の破綻に起因する疾患又は状態が、脳内出血、脳血管障害、視神経脊髄炎、白質脳症、急性散在性脳脊髄炎、炎症性脱髄性多発神経炎、脳感染症、アナフィラキシー、脳腫瘍、脳・脊髄外傷、振戦、せん妄、異常行動、眠気、意識障害、及び強迫性障害からなる群より選択される少なくとも１種である、〔１７〕〜〔２１〕のいずれか１項記載の使用。
〔２３〕好ましくは、前記クロロゲン酸類が、３−カフェオイルキナ酸、４−カフェオイルキナ酸、５−カフェオイルキナ酸、３−フェルロイルキナ酸、４−フェルロイルキナ酸、５−フェルロイルキナ酸、３，４−ジカフェオイルキナ酸、３，５−ジカフェオイルキナ酸及び４，５−ジカフェオイルキナ酸からなる群より選択される少なくとも１種である、〔１３〕〜〔２２〕のいずれか１項記載の使用。
〔２４〕好ましくは、前記剤が医薬品又は医薬部外品であり、かつクロロゲン酸類を０．０１〜９５質量％、０．０１〜８０質量％、０．０１〜６０質量％、０．１〜９５質量％、０．１〜８０質量％、０．１〜６０質量％、０．５〜９５質量％、０．５〜８０質量％、０．５〜６０質量％、１．０〜９５質量％、１．０〜８０質量％、１．０〜６０質量％、１０〜９５質量％、１０〜８０質量％、又は１０〜６０質量％含有する、〔１３〕〜〔２３〕のいずれか１項記載の使用。
〔２５〕好ましくは、前記剤が食品であり、かつクロロゲン酸類を０．０００１〜５０質量％、０．０００１〜２０質量％、０．０００１〜１０質量％、０．００１〜５０質量％、０．００１〜２０質量％、０．００１〜１０質量％、０．０１〜５０質量％、０．０１〜２０質量％、０．０１〜１０質量％、０．１〜５０質量％、０．１〜２０質量％、０．１〜１０質量％、０．５〜５０質量％、０．５〜２０質量％、０．５〜１０質量％、１〜５０質量％、１〜２０質量％、又は１〜１０質量％含有する、〔１３〕〜〔２３〕のいずれか１項記載の使用。
〔２６〕好ましくは、前記剤が経口剤である、〔１３〕〜〔２５〕のいずれか１項記載の使用。
〔２７〕前記植物抽出物が、好ましくはコーヒー豆抽出物であり、より好ましくは生コーヒー豆抽出物である、〔１３〕〜〔２６〕のいずれか１項記載の使用。
〔２８〕前記生コーヒー豆抽出物が、
好ましくは、カフェインとクロロゲン酸類との質量比が０．０２以下、クロロゲン酸類全量中の５−カフェオイルキナ酸の含量が３５質量％以上の生コーヒー豆抽出物であり、
より好ましくは、カフェインとクロロゲン酸類との質量比が０．００１以下、クロロゲン酸類全量中の５−カフェオイルキナ酸の含量が３５質量％以上の生コーヒー豆抽出物である、
〔２７〕記載の使用。
【００５３】
〔２９〕Ｃｌａｕｄｉｎ−５発現促進のための、クロロゲン酸類もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物の使用。
〔３０〕脳内ＨＭＧＢ１発現抑制のための、クロロゲン酸類もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物の使用。
〔３１〕血液脳関門保護のための、クロロゲン酸類もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物の使用。
〔３２〕血液脳関門の機能低下の予防又は改善のための、クロロゲン酸類もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物の使用。
〔３３〕血液脳関門の破綻に起因する疾患又は状態の予防又は改善のための、クロロゲン酸類もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物の使用。
〔３４〕好ましくは、前記クロロゲン酸類もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物が、血液脳関門の破綻に起因する疾患又は状態の予防又は改善を必要とする者におけるＣｌａｕｄｉｎ−５発現促進のために使用される、〔２９〕記載の使用。
〔３５〕好ましくは、前記クロロゲン酸類もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物が、血液脳関門の破綻に起因する疾患又は状態の予防又は改善を必要とする者における脳内ＨＭＧＢ１発現抑制のために使用される、〔３０〕記載の使用。
〔３６〕好ましくは、前記クロロゲン酸類もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物が、血液脳関門の破綻に起因する疾患又は状態の予防又は改善を必要とする者における血液脳関門保護のために使用される、〔３１〕記載の使用。
〔３７〕好ましくは、前記クロロゲン酸類もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物が、血液脳関門の破綻に起因する疾患又は状態の予防又は改善を必要とする者における血液脳関門の機能低下の予防又は改善のために使用される、〔３２〕記載の使用。
〔３８〕好ましくは、前記血液脳関門の破綻に起因する疾患又は状態が、脳内出血、脳血管障害、視神経脊髄炎、白質脳症、急性散在性脳脊髄炎、炎症性脱髄性多発神経炎、脳感染症、アナフィラキシー、脳腫瘍、脳・脊髄外傷、振戦、せん妄、異常行動、眠気、意識障害、及び強迫性障害からなる群より選択される少なくとも１種である、〔３３〕〜〔３７〕のいずれか１項記載の使用。
〔３９〕好ましくは、前記クロロゲン酸類が、３−カフェオイルキナ酸、４−カフェオイルキナ酸、５−カフェオイルキナ酸、３−フェルロイルキナ酸、４−フェルロイルキナ酸、５−フェルロイルキナ酸、３，４−ジカフェオイルキナ酸、３，５−ジカフェオイルキナ酸及び４，５−ジカフェオイルキナ酸からなる群より選択される少なくとも１種である、〔２９〕〜〔３８〕のいずれか１項記載の使用。
〔４０〕好ましくは、前記クロロゲン酸類もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物が、該クロロゲン酸類を０．０１〜９５質量％、０．０１〜８０質量％、０．０１〜６０質量％、０．１〜９５質量％、０．１〜８０質量％、０．１〜６０質量％、０．５〜９５質量％、０．５〜８０質量％、０．５〜６０質量％、１．０〜９５質量％、１．０〜８０質量％、１．０〜６０質量％、１０〜９５質量％、１０〜８０質量％、又は１０〜６０質量％含有する医薬品又は医薬部外品の形態で使用される、〔２９〕〜〔３９〕のいずれか１項記載の使用。
〔４１〕好ましくは、前記クロロゲン酸類もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物が、該クロロゲン酸類を０．０００１〜５０質量％、０．０００１〜２０質量％、０．０００１〜１０質量％、０．００１〜５０質量％、０．００１〜２０質量％、０．００１〜１０質量％、０．０１〜５０質量％、０．０１〜２０質量％、０．０１〜１０質量％、０．１〜５０質量％、０．１〜２０質量％、０．１〜１０質量％、０．５〜５０質量％、０．５〜２０質量％、０．５〜１０質量％、１〜５０質量％、１〜２０質量％、又は１〜１０質量％含有する食品の形態で使用される、〔２９〕〜〔３９〕のいずれか１項記載の使用。
〔４２〕前記クロロゲン酸類もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物の成人１人１日当たりの投与量が、クロロゲン酸類換算で、好ましくは１ｍｇ以上、より好ましくは５ｍｇ以上、さらに好ましくは１５ｍｇ以上であり、かつ好ましくは１０ｇ以下、より好ましくは５ｇ以下、さらに好ましくは１ｇ以下である、〔２９〕〜〔４１〕のいずれか１項記載の使用。
〔４３〕好ましくは、前記クロロゲン酸類もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物が経口投与される、〔２９〕〜〔４２〕のいずれか１項記載の使用。
〔４４〕前記植物抽出物が、好ましくはコーヒー豆抽出物であり、より好ましくは生コーヒー豆抽出物である、〔２９〕〜〔４３〕のいずれか１項記載の使用。
〔４５〕前記生コーヒー豆抽出物が、
好ましくは、カフェインとクロロゲン酸類との質量比が０．０２以下、クロロゲン酸類全量中の５−カフェオイルキナ酸の含量が３５質量％以上の生コーヒー豆抽出物であり、
より好ましくは、カフェインとクロロゲン酸類との質量比が０．００１以下、クロロゲン酸類全量中の５−カフェオイルキナ酸の含量が３５質量％以上の生コーヒー豆抽出物である、
〔４４〕記載の使用。
【００５４】
〔４６〕Ｃｌａｕｄｉｎ−５発現促進に使用するための、クロロゲン酸類もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物。
〔４７〕脳内ＨＭＧＢ１発現抑制に使用するための、クロロゲン酸類もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物。
〔４８〕血液脳関門保護に使用するための、クロロゲン酸類もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物。
〔４９〕血液脳関門の機能低下の予防又は改善に使用するための、クロロゲン酸類もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物。
〔５０〕血液脳関門の破綻に起因する疾患又は状態の予防又は改善に使用するための、クロロゲン酸類もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物。
〔５１〕好ましくは、血液脳関門の破綻に起因する疾患又は状態の予防又は改善を必要とする者におけるＣｌａｕｄｉｎ−５発現促進のために使用される、〔４６〕記載のクロロゲン酸類もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物。
〔５２〕好ましくは、血液脳関門の破綻に起因する疾患又は状態の予防又は改善を必要とする者における脳内ＨＭＧＢ１発現抑制のために使用される、〔４７〕記載のクロロゲン酸類もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物。
〔５３〕好ましくは、血液脳関門の破綻に起因する疾患又は状態の予防又は改善を必要とする者における血液脳関門保護のために使用される、〔４８〕記載のクロロゲン酸類もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物。
〔５４〕好ましくは、血液脳関門の破綻に起因する疾患又は状態の予防又は改善を必要とする者における血液脳関門の機能低下の予防又は改善のために使用される、〔４９〕記載のクロロゲン酸類もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物。
〔５５〕好ましくは、前記血液脳関門の破綻に起因する疾患又は状態が、脳内出血、脳血管障害、視神経脊髄炎、白質脳症、急性散在性脳脊髄炎、炎症性脱髄性多発神経炎、脳感染症、アナフィラキシー、脳腫瘍、脳・脊髄外傷、振戦、せん妄、異常行動、眠気、意識障害、及び強迫性障害からなる群より選択される少なくとも１種である、〔５０〕〜〔５４〕のいずれか１項記載のクロロゲン酸類もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物。
〔５６〕好ましくは、前記クロロゲン酸類が、３−カフェオイルキナ酸、４−カフェオイルキナ酸、５−カフェオイルキナ酸、３−フェルロイルキナ酸、４−フェルロイルキナ酸、５−フェルロイルキナ酸、３，４−ジカフェオイルキナ酸、３，５−ジカフェオイルキナ酸及び４，５−ジカフェオイルキナ酸からなる群より選択される少なくとも１種である、〔４６〕〜〔５５〕のいずれか１項記載のクロロゲン酸類もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物。
〔５７〕好ましくは、前記クロロゲン酸類を０．０１〜９５質量％、０．０１〜８０質量％、０．０１〜６０質量％、０．１〜９５質量％、０．１〜８０質量％、０．１〜６０質量％、０．５〜９５質量％、０．５〜８０質量％、０．５〜６０質量％、１．０〜９５質量％、１．０〜８０質量％、１．０〜６０質量％、１０〜９５質量％、１０〜８０質量％、又は１０〜６０質量％含有する医薬品又は医薬部外品の形態で使用される、〔４６〕〜〔５６〕のいずれか１項記載のクロロゲン酸類もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物。
〔５８〕好ましくは、前記クロロゲン酸類を０．０００１〜５０質量％、０．０００１〜２０質量％、０．０００１〜１０質量％、０．００１〜５０質量％、０．００１〜２０質量％、０．００１〜１０質量％、０．０１〜５０質量％、０．０１〜２０質量％、０．０１〜１０質量％、０．１〜５０質量％、０．１〜２０質量％、０．１〜１０質量％、０．５〜５０質量％、０．５〜２０質量％、０．５〜１０質量％、１〜５０質量％、１〜２０質量％、又は１〜１０質量％含有する食品の形態で使用される、〔４６〕〜〔５６〕のいずれか１項記載のクロロゲン酸類もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物。
〔５９〕成人１人１日当たりの投与量が、クロロゲン酸類換算で、好ましくは１ｍｇ以上、より好ましくは５ｍｇ以上、さらに好ましくは１５ｍｇ以上であり、かつ好ましくは１０ｇ以下、より好ましくは５ｇ以下、さらに好ましくは１ｇ以下である、〔４６〕〜〔５８〕のいずれか１項記載のクロロゲン酸類もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物。
〔６０〕好ましくは経口投与される、〔４６〕〜〔５９〕のいずれか１項記載のクロロゲン酸類もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物。
〔６１〕前記植物抽出物が、好ましくはコーヒー豆抽出物であり、より好ましくは生コーヒー豆抽出物である、〔４６〕〜〔６０〕のいずれか１項記載のクロロゲン酸類もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物。
〔６２〕前記生コーヒー豆抽出物が、
好ましくは、カフェインとクロロゲン酸類との質量比が０．０２以下、クロロゲン酸類全量中の５−カフェオイルキナ酸の含量が３５質量％以上の生コーヒー豆抽出物であり、
より好ましくは、カフェインとクロロゲン酸類との質量比が０．００１以下、クロロゲン酸類全量中の５−カフェオイルキナ酸の含量が３５質量％以上の生コーヒー豆抽出物である、
〔６１〕記載のクロロゲン酸類もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物。
【００５５】
〔６３〕Ｃｌａｕｄｉｎ−５発現促進方法であって、それを必要とする対象にクロロゲン酸類もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物を有効量で投与することを含む、方法。
〔６４〕脳内ＨＭＧＢ１発現抑制方法であって、それを必要とする対象にクロロゲン酸類もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物を有効量で投与することを含む、方法。
〔６５〕血液脳関門保護方法であって、それを必要とする対象にクロロゲン酸類もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物を有効量で投与することを含む、方法。
〔６６〕血液脳関門の機能低下の予防又は改善方法であって、それを必要とする対象にクロロゲン酸類もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物を有効量で投与することを含む、方法。
〔６７〕血液脳関門の破綻に起因する疾患又は状態の予防又は改善方法であって、それを必要とする対象にクロロゲン酸類もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物を有効量で投与することを含む、方法。
〔６８〕好ましくは、前記血液脳関門の破綻に起因する疾患又は状態が、脳内出血、脳血管障害、視神経脊髄炎、白質脳症、急性散在性脳脊髄炎、炎症性脱髄性多発神経炎、脳感染症、アナフィラキシー、脳腫瘍、脳・脊髄外傷、振戦、せん妄、異常行動、眠気、意識障害、及び強迫性障害からなる群より選択される少なくとも１種である、〔６７〕記載の方法。
〔６９〕好ましくは、前記クロロゲン酸類が、３−カフェオイルキナ酸、４−カフェオイルキナ酸、５−カフェオイルキナ酸、３−フェルロイルキナ酸、４−フェルロイルキナ酸、５−フェルロイルキナ酸、３，４−ジカフェオイルキナ酸、３，５−ジカフェオイルキナ酸及び４，５−ジカフェオイルキナ酸からなる群より選択される少なくとも１種である、〔６３〕〜〔６８〕のいずれか１項記載の方法。
〔７０〕好ましくは、前記クロロゲン酸類又はその塩もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物が、該クロロゲン酸類を０．０１〜９５質量％、０．０１〜８０質量％、０．０１〜６０質量％、０．１〜９５質量％、０．１〜８０質量％、０．１〜６０質量％、０．５〜９５質量％、０．５〜８０質量％、０．５〜６０質量％、１．０〜９５質量％、１．０〜８０質量％、１．０〜６０質量％、１０〜９５質量％、１０〜８０質量％、又は１０〜６０質量％含有する医薬品又は医薬部外品の形態で投与される、〔６３〕〜〔６９〕のいずれか１項記載の方法。
〔７１〕好ましくは、前記クロロゲン酸類又はその塩もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物が、該クロロゲン酸類を０．０００１〜５０質量％、０．０００１〜２０質量％、０．０００１〜１０質量％、０．００１〜５０質量％、０．００１〜２０質量％、０．００１〜１０質量％、０．０１〜５０質量％、０．０１〜２０質量％、０．０１〜１０質量％、０．１〜５０質量％、０．１〜２０質量％、０．１〜１０質量％、０．５〜５０質量％、０．５〜２０質量％、０．５〜１０質量％、１〜５０質量％、１〜２０質量％、又は１〜１０質量％含有する食品の形態で投与される、〔６３〕〜〔６９〕のいずれか１項記載の方法。
〔７２〕前記有効量が、成人１人１日当たり、クロロゲン酸類換算で、好ましくは１ｍｇ以上、より好ましくは５ｍｇ以上、さらに好ましくは１５ｍｇ以上であり、かつ好ましくは１０ｇ以下、より好ましくは５ｇ以下、さらに好ましくは１ｇ以下である、〔６３〕〜〔７１〕のいずれか１項記載の方法。
〔７３〕好ましくは前記投与が経口投与である、〔６３〕〜〔７２〕のいずれか１項記載の方法。
〔７４〕前記植物抽出物が、好ましくはコーヒー豆抽出物であり、より好ましくは生コーヒー豆抽出物である、〔６３〕〜〔７３〕のいずれか１項記載の方法。
〔７５〕前記生コーヒー豆抽出物が、
好ましくは、カフェインとクロロゲン酸類との質量比が０．０２以下、クロロゲン酸類全量中の５−カフェオイルキナ酸の含量が３５質量％以上の生コーヒー豆抽出物であり、
より好ましくは、カフェインとクロロゲン酸類との質量比が０．００１以下、クロロゲン酸類全量中の５−カフェオイルキナ酸の含量が３５質量％以上の生コーヒー豆抽出物である、
〔７４〕記載の方法。
【実施例】
【００５６】
以下、実施例に基づき本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。
【００５７】
製造例１  クロロゲン酸類含有組成物の調製
１）ロブスタ種のコーヒー生豆を熱水にて抽出し、得られた抽出液をスプレードライにて乾燥し、粗クロロゲン酸類含有組成物を得た。該粗クロロゲン酸類含有組成物の組成は、クロロゲン酸類３２．３質量％、カフェイン９．８質量％、質量比（カフェイン／クロロゲン類）が０．３０３、質量比（（Ｋ＋Ｎａ）／クロロゲン酸類）が０．２４であった。
２）該粗クロロゲン酸類含有組成物１８９ｇを、エタノール濃度５２．４質量％のエタノール水溶液７５６ｇ、酸性白土（ミズカエース＃６００、水澤化学社製）９４．５ｇ、ろ過助剤（ソルカフロック、新日鉱プロキュアメント社製）１０．７ｇと混合することにより、クロロゲン酸類含有スラリー１０５１ｇを得た。該クロロゲン酸類含有スラリーのｐＨは５．７であった。
３）該クロロゲン酸類含有スラリー１０５１ｇと、続いてエタノール濃度５２．４質量％のエタノール水溶液１８９ｇを、プレコート剤として珪藻土を堆積させた２号濾紙にてろ過し、ろ過液１０５４ｇを回収した。
４）次いで、活性炭（白鷺ＷＨ２Ｃ、日本エンバイロケミカルズ社製）を１３２ｍＬ充填したカラムと、Ｈ形カチオン交換樹脂（ＳＫ１ＢＨ、三菱化学社製）を１０５ｍＬ充填したカラムとを連結し、これに、該ろ過液１０１９ｇを通液し、続いてエタノール濃度５２．４質量％のエタノール水溶液２３１ｇを通液して、溶出したカラム処理液１０７２ｇを回収した。ろ過液中のクロロゲン酸類含量に対する活性炭の使用量は、０．８１質量倍（ｇ／ｇ）であった。イオン交換樹脂の使用量は、粗クロロゲン酸類含有組成物中の固形分含量に対して０．７４（ｍＬ／ｇ）であった。
５）該カラム処理液１０３８ｇを、０．２μｍメンブランフィルターにてろ過した後、ロータリーエバポレーターにてエタノールを留去して、クロロゲン酸類含有液２２５ｇを得た。該クロロゲン酸類含有液の組成は、クロロゲン酸類２２．６質量％、カフェイン０．２９質量％、質量比（カフェイン／クロロゲン酸類）が０．０１３、エタノール０質量％で、かつそのｐＨは３．１であった。
６）該クロロゲン酸類含有液を蒸留水にて希釈し、クロロゲン酸類濃度を３質量％に調整した。得られた希釈液１０ｇを遠心管に取り、３０００ｒｐｍ、１５℃、６０分間遠心分離し、上清を凍結乾燥処理して、クロロゲン酸類含有精製コーヒーポリフェノール（ＣＰＰ）を得た。該ＣＰＰ中におけるクロロゲン酸類とカフェインとの質量比は上記５）と同様であった。また該ＣＰＰ中、クロロゲン酸類全量中の５−カフェオイルキナ酸（５−ＣＱＡ）の含量は４５．６質量％であり、モノカフェオイルキナ酸及びモノフェルロイルキナ酸（３−ＣＱＡ、４−ＣＱＡ、５−ＣＱＡ、３−ＦＱＡ、４−ＦＱＡ及び５−ＦＱＡ）の合計量中における５−ＣＱＡの含量は３６．９質量％であった。該ＣＰＰ中のクロロゲン酸類の組成比を表１に示す。
【００５８】
【表１】
2019178129.tif 000002
【００５９】
試験例１  健常マウスでのクロロゲン酸類によるＨＭＧＢ１発現抑制
（動物）
試験にはＣ５７ＢＬ／６Ｊマウス（雄、８週齢）（日本クレア）を用いた。マウスは室温２２±２℃、湿度５５±１０％、照明１２時間サイクル（７：００ａ．ｍ．〜７：００ｐ．ｍ．）で飼育し、餌及び水は自由摂取とした。
【００６０】
（方法）
試験期間中、動物を（I）対照食群、（II）クロロゲン酸類０．５％食群、及び（III）クロロゲン酸類１％食群の３群に分け、それぞれに一ヶ月間継続的に以下の餌を与えた。
（I）対照食群：クロロゲン酸類非添加の餌（コーン油１０％、カゼイン２０％、セルロース４％、ミネラル３．５％、ビタミン１％、ポテトスターチ６１．５％）
（II）クロロゲン酸類０．５％食群：クロロゲン酸類を０．５質量％含む餌（コーン油１０％、カゼイン２０％、セルロース４％、ミネラル３．５％、ビタミン１％、ポテトスターチ６０．５％、製造例１で得たＣＰＰ（表１記載の組成でクロロゲン酸類含有）１％）
（III）クロロゲン酸類１％食群：クロロゲン酸類を１質量％含む餌（コーン油１０％、カゼイン２０％、セルロース４％、ミネラル３．５％、ビタミン１％、ポテトスターチ５９．５％、製造例１で得たＣＰＰ（表１記載の組成でクロロゲン酸類含有）２％）
【００６１】
試験期間終了後、動物をイソフルランによる深麻酔下にてヘパリン（５Ｕ／ｍＬ）含有ＰＢＳで灌流し、脳を摘出した。摘出した脳から大脳皮質を分離し、ＲＮＡ分解阻害液（ＲＮＡ  ｌａｔｅｒ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ，Ａｍｂｉｏｎ）に浸漬した後、ビーズホモジナイザーを用いて破砕し、ＲＮｅａｓｙ（登録商標）Ｐｌｕｓ  Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  Ｍｉｎｉ  ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ）にて総ＲＮＡを調製した。抽出した総ＲＮＡをＨｉｇｈ  Ｃａｐａｃｉｔｙ  ＲＮＡ−ｔｏ−ｃＤＮＡ  ｋｉｔ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて、添付のプロトコールに従って逆転写反応を行い、ｃＤＮＡ合成を行った。
【００６２】
得られたｃＤＮＡを鋳型に、ＴａｑＭａｎ（登録商標）Ｆａｓｔ  Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  ＰＣＲ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）及びＡＢＩ  Ｐｒｉｓｍ  ７７００（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて、定量的ＰＣＲを行った。定量的ＰＣＲに使用したＴａｑＭａｎ（登録商標）Ｇｅｎｅは、ＨＭＧＢ１：Ｍｍ００８４９８０５＿ｇＨ、ＧＡＰＤＨ：Ｍｍ９９９９９９１５＿ｇ１であった。ＨＭＧＢ１遺伝子の発現量は、ＧＡＰＤＨ（Ｇｌｙｃｅｒａｌｄｅｈｙｄｅ−３−Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  Ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ）遺伝子発現量で補正した。測定した発現量から、対照食群の平均値を１とする相対発現量を各群について求めた。
【００６３】
（結果）
結果を表２に示す。クロロゲン酸類を含む餌を摂取したクロロゲン酸類食群の大脳皮質では、血液脳関門破綻関連因子であるＨＭＧＢ１の発現が遺伝子レベルで抑制されていた。このＨＭＧＢ１の発現抑制レベルは、摂取した餌のクロロゲン酸類含量に依存していた。このことから、クロロゲン酸類が、脳内のＨＭＧＢ１発現を抑制し、血液脳関門を保護する作用を有することが示された。
【００６４】
【表２】
2019178129.tif 000003
【００６５】
試験例２  健常マウスでのクロロゲン酸類摂取によるＣｌａｕｄｉｎ−５発現上昇
（方法）
試験例１と同様の手順で、（I）対照食群、（II）クロロゲン酸類０．５％食群、及び（III）クロロゲン酸類１％食群のマウスをそれぞれ一ヶ月間飼育した後、マウスの大脳皮質及び海馬から総ＲＮＡを調製し、ｃＤＮＡを合成した。得られたｃＤＮＡを鋳型に、試験例１と同様の手順で定量的ＰＣＲを行った。定量的ＰＣＲに使用したＴａｑＭａｎ（登録商標）Ｇｅｎｅは、Ｃｌａｕｄｉｎ−５：Ｍｍ００７２７０１２＿ｓ１、ＧＡＰＤＨ：Ｍｍ９９９９９９１５＿ｇ１であった。Ｃｌａｕｄｉｎ−５遺伝子の発現量は、ＧＡＰＤＨ遺伝子発現量で補正した。測定した発現量から、対照食群の平均値を１とする相対発現量を各群について求めた。
【００６６】
（結果）
結果を表３に示す。クロロゲン酸類を含む餌を摂取したクロロゲン酸類食群の大脳皮質及び海馬では、血液脳関門のタイトジャンクションタンパク質であるＣｌａｕｄｉｎ−５の発現が遺伝子レベルで上昇した。このことから、クロロゲン酸類が、健常マウスの脳内のＣｌａｕｄｉｎ−５の発現を上昇させ、血液脳関門を保護する作用を有することが示された。
【００６７】
【表３】
2019178129.tif 000004
【００６８】
試験例３  老化促進モデルマウスでのクロロゲン酸類摂取によるＣｌａｕｄｉｎ−５発現上昇とＨＭＧＢ１発現抑制
（動物）
試験には老化促進モデルマウスＳＡＭＰ８（雄、１２週齢）及びその対照（正常老化）マウスＳＡＭＲ１（雄、１２週齢）（日本エスエルシー）を用いた。マウスは室温２２±２℃、湿度５５±１０％、照明１２時間サイクル（７：００ａ．ｍ．〜７：００ｐ．ｍ．）で飼育し、餌及び水は自由摂取とした。
【００６９】
（方法）
試験期間中、動物を（I）ＳＡＭＰ８対照食群、（II）ＳＡＭＰ８クロロゲン酸類１％食群、及び（III）ＳＡＭＰ８  ５−カフェオイルキナ酸０．８％食群、（IV）ＳＡＭＲ１対照食群の４群に分け、それぞれに一ヶ月間継続的に以下の餌を与えた。
（I）ＳＡＭＰ８対照食群、及び（IV）ＳＡＭＲ１対照食群：クロロゲン酸類非添加の餌（コーン油１０％、カゼイン２０％、セルロース４％、ミネラル３．５％、ビタミン１％、ポテトスターチ６１．５％）
（II）ＳＡＭＰ８クロロゲン酸類１％食群：クロロゲン酸類を１質量％含む餌（コーン油１０％、カゼイン２０％、セルロース４％、ミネラル３．５％、ビタミン１％、ポテトスターチ５９．５％、製造例１で得たＣＰＰ（表１記載の組成でクロロゲン酸類含有）２％）
（III）ＳＡＭＰ８  ５−カフェオイルキナ酸０．８％食群：クロロゲン酸類を０．８質量％含む餌（コーン油１０％、カゼイン２０％、セルロース４％、ミネラル３．５％、ビタミン１％、ポテトスターチ６０．７％、５−カフェオイルキナ酸（Ｃａｙｍａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ：品番７０９３０）０．８％）
【００７０】
試験期間終了後、試験例１と同様の手順で、マウスの大脳皮質及び海馬から総ＲＮＡを調製してｃＤＮＡを合成し、これを鋳型としてＨＭＧＢ１及びＣｌａｕｄｉｎ−５について定量的ＰＣＲを行った。定量的ＰＣＲに使用したＴａｑＭａｎ（登録商標）Ｇｅｎｅは、ＨＭＧＢ１：Ｍｍ００８４９８０５＿ｇＨ、Ｃｌａｕｄｉｎ−５：Ｍｍ００７２７０１２＿ｓ１、ＧＡＰＤＨ：Ｍｍ９９９９９９１５＿ｇ１であった。ＨＭＧＢ１とＣｌａｕｄｉｎ−５遺伝子の発現量は、ＧＡＰＤＨ遺伝子発現量で補正した。測定した発現量から、ＳＡＭＰ８対照食群の平均値を１とする相対発現量を各群について求めた。
【００７１】
（結果）
Ｃｌａｕｄｉｎ−５の発現量を表４に示す。対照食群マウスの大脳皮質におけるＣｌａｕｄｉｎ−５遺伝子発現量は、老化促進モデルマウスＳＡＭＰ８（I群）と比較して正常老化マウスＳＡＭＲ１（IV群）で有意に高値であった。また、クロロゲン酸類１％食群（II群）及び５−カフェオイルキナ酸０．８％食群（III群）の大脳皮質におけるＣｌａｕｄｉｎ−５遺伝子発現量は、ＳＡＭＰ８対照食群（I群）と比較して有意に高値であった。海馬においても、ＳＡＭＰ８クロロゲン酸類１％食群（II群）では、ＳＡＭＰ８対照食群（I群）と比較してＣｌａｕｄｉｎ−５の遺伝子発現量が有意に高値であった。これらの結果から、クロロゲン酸類が、Ｃｌａｕｄｉｎ−５の発現を促進することで老化によるＣｌａｕｄｉｎ−５の発現低下を抑制し、血液脳関門を保護する作用を有することが示された。
【００７２】
ＨＭＧＢ１の発現量を表５に示す。大脳皮質におけるＨＭＧＢ１の遺伝子発現量は、ＳＡＭＰ８対照食群（I群）と比較してＳＡＭＲ１対照食群（IV群）で有意に低かった。またＳＡＭＰ８クロロゲン酸類１％食群（II群）及びＳＡＭＰ８  ５−カフェオイルキナ酸０．８％食群（III群）では、ＳＡＭＰ８対照食群（I群）と比べてＨＭＧＢ１発現量の有意な低下又は低下傾向がみられた。これらの結果から、クロロゲン酸類は老化によるＨＭＧＢ１の遺伝子発現上昇を抑制し、血液脳関門を保護する作用を有することが示された。  
【００７３】
【表４】
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【表５】
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【配列表】
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