(57)【要約】【課題】優れた美白作用を有し、安全性の高い美白剤、優れた抗老化作用を有し、安全性の高い抗老化剤、並びに優れた美白作用及び抗老化作用の少なくともいずれかを有し、安全性の高い化粧料の提供。【解決手段】日本あざみ菜と赤・青大葉高菜との交配種の抽出物を含有する美白剤又は抗老化剤、並びに前記美白剤及び抗老化剤からなる群から選択される少なくとも１種を含有する化粧料である。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
日本あざみ菜と赤・青大葉高菜との交配種の抽出物を含有することを特徴とする美白剤。
【請求項２】
チロシナーゼ活性阻害作用及びメラニン産生抑制作用の少なくともいずれかを有する請求項１に記載の美白剤。
【請求項３】
日本あざみ菜と赤・青大葉高菜との交配種の抽出物を含有することを特徴とする抗老化剤。
【請求項４】
表皮角化細胞増殖促進作用及びＡＴＰ産生促進作用の少なくともいずれかを有する請求項３に記載の抗老化剤。
【請求項５】
請求項１から２のいずれかに記載の美白剤及び請求項３から４のいずれかに記載の抗老化剤からなる群から選択される少なくとも１種を含有することを特徴とする化粧料。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、美白剤及び抗老化剤、並びに化粧料に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来、皮膚色素沈着症、シミ、ソバカス等の予防、治療又は改善には、ハイドロキノン等の化学合成品を有効成分とする美白剤を外用する処置が行われてきた。しかしながら、ハイドロキノン等の化学合成品は、皮膚刺激、アレルギー等の副作用のおそれがある。そこで、安全性の高い天然原料を有効成分とする美白剤の開発が望まれており、チロシナーゼ活性阻害作用を有するものとしては、例えば、ヤナギタデ抽出物（例えば、特許文献１参照）等が知られている。また、メラニン産生抑制作用を有するものとしては、例えば、サウスウレア（Ｓａｕｓｓｕｒｅａ）属植物からの抽出物（例えば、特許文献２参照）等が知られている。
【０００３】
表皮は、外部刺激を緩和し、水分等の体内成分の逸失を制御する働きをしており、最下層である基底層から始まって、有棘層、顆粒層、角質層へと連なる４層構造から構成されている。各層に存在する大部分の細胞は、基底層から分化した角化細胞である。基底層で分裂、増殖した角化細胞は、有棘層、顆粒層を通過しながら分化し角質細胞となって、強固な架橋結合をもったケラチン蛋白線維で構成された角質層を構成し、最終的には垢として角質層から脱落する。この角質層は、皮膚の最外殻に存在しており、外界からの刺激に対する物理的なバリアとしての役割を果たしている。皮膚ではこのバリア機能を持たせるため、角化細胞が基底層で産生されてから垢となって剥がれ落ちるまでのサイクル（角化）を通常４週間の周期で繰り返し、表皮の新陳代謝を行っている。
【０００４】
ところが、皮膚において紫外線、著しい空気の乾燥、過度の皮膚洗浄、喫煙等の外的因子の影響を受けたり、加齢が進んだりすると、表皮細胞の活動や増殖能が低下し、それに伴い表皮のターンオーバー速度が遅延するため、表皮の菲薄化や角質層肥厚などの分化不全が引き起こされる。その結果、皮膚の保湿機能や弾力性が低下し、角質の異常剥離が起こり、また皮膚が老化してシワ、くすみ、きめの消失、弾力性の低下等の変化が生じる。皮膚のターンオーバーを促進するためには、例えば、角化細胞の増殖を促進することが考えられる。従来、表皮角化細胞増殖促進作用を有するものとして、土貝母抽出物（例えば、特許文献３参照）等が知られている。
【０００５】
また、細胞の増殖を促進するためには、細胞分裂に必要なエネルギーを細胞に補給することが重要である。生体のエネルギー物質としては、ＡＴＰが挙げられ、このＡＴＰの産生量を上げることにより、細胞内のエネルギー代謝が促進され、細胞増殖につながると考えられる。しかし、上記のように、機能の低下した細胞や老化した細胞では、エネルギー物質であるＡＴＰ量が正常細胞より減少することが報告されている（例えば、特許文献４参照）。
【０００６】
そのため、細胞におけるＡＴＰの産生を促進することができれば、その細胞を活性化して細胞分裂を促し、その細胞の増殖能を回復することができると考えられる。特に、皮膚の細胞においてＡＴＰの産生を促進することは、皮膚のターンオーバーを促進し、肌の新陳代謝機能を回復させ、シワ、くすみ、きめの消失等の皮膚の老化を予防・改善する上で重要である。従来、ＡＴＰ産生促進作用を有するものとして、グリコーゲン（例えば、特許文献４参照）、ウコン等の天然物からの抽出物（例えば、特許文献５参照）等が知られている。
【０００７】
しかしながら、より優れた美白作用又は抗老化作用を有し、かつ安全性が高く、美白剤、抗老化剤又は化粧料の有効成分として用いることができる物質に対する要望は依然として強く、その速やかな開発が求められているのが現状である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特開２００４−０８３４８８号公報
【特許文献２】特開２００２−２０１１２２号公報
【特許文献３】特開２００６−０５６８５４号公報
【特許文献４】特開２００３−３２１３７３号公報
【特許文献５】特開２００９−２５６２７２号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明は、前記従来における諸問題を解決し、以下の目的を達成することを課題とする。即ち、本発明は、優れた美白作用を有し、安全性の高い美白剤を提供することを目的とする。
また、本発明は、優れた抗老化作用を有し、安全性の高い抗老化剤を提供することを目的とする。
また、本発明は、優れた美白作用及び抗老化作用の少なくともいずれかを有し、安全性の高い化粧料を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
前記課題を解決するために本発明者らが鋭意検討を重ねた結果、日本あざみ菜と赤・青大葉高菜との交配種の抽出物が、優れた美白作用及び抗老化作用を有することを知見し、本発明を完成したものである。
【００１１】
本発明は、本発明者らの前記知見に基づくものであり、前記課題を解決するための手段としては、以下の通りである。即ち、
＜１＞  日本あざみ菜と赤・青大葉高菜との交配種の抽出物を含有することを特徴とする美白剤である。
＜２＞  チロシナーゼ活性阻害作用及びメラニン産生抑制作用の少なくともいずれかを有する前記＜１＞に記載の美白剤である。
＜３＞  日本あざみ菜と赤・青大葉高菜との交配種の抽出物を含有することを特徴とする抗老化剤である。
＜４＞  表皮角化細胞増殖促進作用及びＡＴＰ産生促進作用の少なくともいずれかを有する前記＜３＞に記載の抗老化剤である。
＜５＞  前記＜１＞から＜２＞のいずれかに記載の美白剤及び前記＜３＞から＜４＞のいずれかに記載の抗老化剤からなる群から選択される少なくとも１種を含有することを特徴とする化粧料である。
【発明の効果】
【００１２】
本発明の美白剤によると、従来における前記諸問題を解決し、優れた美白作用を有し、安全性の高い美白剤を提供することができる。
本発明の抗老化剤によると、従来における前記諸問題を解決し、優れた抗老化作用を有し、安全性の高い抗老化剤を提供することができる。
本発明の化粧料によると、従来における前記諸問題を解決し、優れた美白作用及び抗老化作用の少なくともいずれかを有し、安全性の高い化粧料を提供することができる。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
（美白剤及び抗老化剤）
本発明の美白剤及び抗老化剤は、日本あざみ菜と赤・青大葉高菜との交配種の抽出物を含有し、更に必要に応じてその他の成分を含有してなる。
【００１４】
前記美白剤は、チロシナーゼ活性阻害作用及びメラニン産生抑制作用の少なくともいずれかを有する。
【００１５】
前記抗老化剤は、表皮角化細胞増殖促進作用及びＡＴＰ産生促進作用の少なくともいずれかを有する。
【００１６】
前記日本あざみ菜と赤・青大葉高菜との交配種の抽出物が含有する、チロシナーゼ活性阻害作用、メラニン産生抑制作用、表皮角化細胞増殖促進作用及びＡＴＰ産生促進作用の少なくともいずれかを発揮する物質の詳細については不明であるが、前記日本あざみ菜と赤・青大葉高菜との交配種の抽出物がこのような優れた作用を有し、美白剤及び抗老化剤として有用であることは、従来は全く知られておらず、本発明者らによる新たな知見である。
【００１７】
＜日本あざみ菜と赤・青大葉高菜との交配種の抽出物＞
前記日本あざみ菜と赤・青大葉高菜との交配種は、アブラナ科の植物であり、広島県尾道市因島で栽培されている。
日本あざみ菜と赤・青大葉高菜との交配種は新品種であり、品種名「千齢三」（ちよみ、チヨミ）として、平成２９年６月２６日に種苗法に基づく品種登録の出願済である（品種登録出願の番号第３２２５６号）。また、日本あざみ菜と赤・青大葉高菜との交配種は、「シマフリル」（登録商標）で商標登録されている（商標登録第５２４２９８８号）。
日本あざみ菜と赤・青大葉高菜との交配種は、母親として「日本あざみ菜」と父親として「赤・青大葉高菜」とを交配して育成された植物である。
日本あざみ菜と赤・青大葉高菜との交配種の葉は緑色で光沢が中、裂片が極多、葉肉の辛味が僅な生食向きの品種である。草姿は開であり、分げつ性及び茎の肥大性は無である。葉数は中、葉形は短楕円、葉長はかなり短く、葉緑の切れ込みは深裂、裂片の多少は極多、鋸歯の多少はやや多い。葉色は緑、葉面の着色は無く、葉面の毛じは無く、葉緑の波打ちは多く、葉柄・中助の形は半円形、幅は狭、葉柄の長さは短である。根の肥大性は無く、早晩性は早く、球根性は無く、葉肉の辛味は僅である。
日本あざみ菜と赤・青大葉高菜との交配種は、葉菜として栽培され、葉茎は油炒め、おひたし、漬物、天ぷら、サラダなどに利用されている。
【００１８】
前記日本あざみ菜と赤・青大葉高菜との交配種の抽出部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、葉部、茎部等の全草、花部、根部、又はこれらの混合物などが挙げられる。これらの中でも、地上部が好ましい。
前記日本あざみ菜と赤・青大葉高菜との交配種の抽出部位の調製方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、各部位を乾燥させた後、そのまま又は粗砕機を用い粉砕して溶媒抽出に供することにより得ることができる。前記乾燥は、天日で行ってもよいし、通常使用されている乾燥機を用いて行ってもよい。
【００１９】
前記日本あざみ菜と赤・青大葉高菜との交配種の抽出物は、植物の抽出に一般に用いられる方法により容易に得ることができる。前記日本あざみ菜と赤・青大葉高菜との交配種の抽出物としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、抽出液の希釈液、濃縮液、抽出液の乾燥物、粗精製物、精製物などが挙げられる。
【００２０】
前記日本あざみ菜と赤・青大葉高菜との交配種の抽出方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、抽出溶媒を満たした処理槽に抽出原料である前記日本あざみ菜と赤・青大葉高菜との交配種の前記抽出部位を投入し、必要に応じて適宜撹拌しながら可溶性成分を溶出した後、濾過して抽出残渣を除くことにより抽出液を得る方法などが挙げられる。
また、ヘキサン等の非極性溶媒によって脱脂等の前処理を施してから抽出原料として使用してもよい。脱脂等の前処理を行うことにより、極性溶媒による抽出処理を効率よく行うことができる。
【００２１】
前記日本あざみ菜と赤・青大葉高菜との交配種の抽出条件（抽出時間及び抽出温度）、抽出溶媒及びその使用量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。
【００２２】
前記抽出溶媒としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、水、親水性溶媒、又はこれらの混合溶媒などが挙げられる。
【００２３】
前記水としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水などが挙げられる。
【００２４】
前記親水性溶媒としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１〜５の低級アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の炭素数２〜５の多価アルコールなどが挙げられる。
【００２５】
前記混合溶媒としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、低級アルコールを使用する場合は、水１０質量部に対して１質量部〜９０質量部、低級脂肪族ケトンを使用する場合は、水１０質量部に対して１質量部〜４０質量部、多価アルコールを使用する場合は、水１０質量部に対して１質量部〜９０質量部添加することが好ましい。
【００２６】
前記日本あざみ菜と赤・青大葉高菜との交配種の抽出溶媒は、室温乃至溶媒の沸点以下の温度で用いることが好ましい。
これらの中でも、水（例えば、１０℃〜３０℃水）や、水とエタノールとの混合溶媒（例えば、４０質量％〜８０質量％エタノール水溶液）を用いて抽出することが、好ましい。
【００２７】
得られた前記日本あざみ菜と赤・青大葉高菜との交配種の抽出物は、前記日本あざみ菜と赤・青大葉高菜との交配種の抽出物の希釈物、濃縮物、乾燥物、粗精製物、精製物などを得るために、常法に従って希釈、濃縮、乾燥、精製などの処理を施してもよい。
前記日本あざみ菜と赤・青大葉高菜との交配種の抽出物の精製方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、液−液分配抽出、各種クロマトグラフィー、膜分離などの精製方法が挙げられる。
【００２８】
得られた前記日本あざみ菜と赤・青大葉高菜との交配種の抽出物は、そのままでも前記美白剤及び前記抗老化剤のいずれかとして使用することができるが、利用しやすい点で、前記濃縮液、前記乾燥物が好ましい。前記乾燥物を得るに当たって、吸湿性を改善するためにデキストリン、シクロデキストリンなどのキャリアーを加えてもよい。
【００２９】
前記日本あざみ菜と赤・青大葉高菜との交配種の抽出物の美白剤及び抗老化剤における含有量としては、特に制限はなく、前記抽出物の生理活性等によって適宜調整することができる。前記美白剤及び抗老化剤は、前記日本あざみ菜と赤・青大葉高菜との交配種の抽出物のみからなるものであってもよい。
【００３０】
＜その他の成分＞
前記その他の成分としては、特に制限はなく、前記美白剤及び抗老化剤の利用形態に応じて適宜選択することができる。例えば、賦形剤、防湿剤、防腐剤、強化剤、増粘剤、乳化剤、酸化防止剤、甘味料、酸味料、調味料、着色料、香料、美白剤、保湿剤、油性成分、紫外線吸収剤、界面活性剤、アルコール類、粉末成分、色剤、水性成分、水、皮膚栄養剤等が挙げられる。これらは、１種単独で使用してもよいし、２種以上を併用してもよい。
前記その他の成分の含有量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。
【００３１】
＜用途＞
本発明の美白剤及び抗老化剤の用途としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、医薬品、医薬部外品、化粧品などが挙げられる。
【００３２】
本発明の美白剤及び抗老化剤は、ヒトに対して好適に適用されるものであるが、それぞれの作用効果が奏される限り、ヒト以外の動物（例えば、マウス、ラット、ハムスター、イヌ、ネコ、ウシ、ブタ、サルなど）に対して適用することもできる。
【００３３】
また、本発明の美白剤及び抗老化剤は、美白作用や抗老化作用の作用機構に関する研究のための試薬としても用いることができる。
【００３４】
（化粧料）
前記化粧料は、本発明の美白剤及び抗老化剤からなる群から選択される少なくとも１種を含有し、更に必要に応じてその他の成分を含有してなる。
【００３５】
前記美白剤及び抗老化剤からなる群から選択される少なくとも１種の化粧料における含有量としては、特に制限はなく、前記日本あざみ菜と赤・青大葉高菜との交配種の抽出物の生理活性等によって適宜調整することができるが、前記抽出物に換算して、０．０００１質量％〜２０質量％が好ましく、０．０００１質量％〜１０質量％がより好ましい。前記化粧料は、前記美白剤及び抗老化剤からなる群から選択される少なくとも１種のみからなるものであってもよい。
【００３６】
前記化粧料におけるその他の成分としては、特に制限はなく、通常の化粧料の製造に用いられる主剤、助剤又はその他の成分の中から目的に応じて適宜選択することができ、例えば、収斂剤、殺菌・抗菌剤、美白剤、紫外線吸収剤、保湿剤、細胞賦活剤、消炎・抗アレルギー剤、抗酸化・活性酸素除去剤、油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、界面活性剤、香料などが挙げられる。これらは、１種単独で使用してもよいし、２種以上を併用してもよい。
前記その他の成分の含有量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。
【００３７】
本発明の化粧料は、日常的に使用することが可能であり、有効成分である日本あざみ菜と赤・青大葉高菜との交配種の抽出物の働きによって、美白作用や抗老化作用をはじめとする様々な生理活性作用を極めて効果的に発揮させることができるので、美白用途及び抗老化用途の少なくともいずれかの用途などに好適に用いることができる。
【００３８】
前記化粧料の種類としては、特に制限はなく、皮膚化粧料や頭皮化粧料などの化粧料の用途に応じて適宜選択することができ、例えば、軟膏、クリーム、乳液、美容液、ローション、パック、ファンデーション、ボディーソープ、ヘアトニック、ヘアローション、シャンプー、リンス、コンディショナーなどが挙げられる。
【００３９】
本発明の化粧料は、ヒトに対して好適に適用されるものであるが、それぞれの作用効果が奏される限り、ヒト以外の動物（例えば、マウス、ラット、ハムスター、イヌ、ネコ、ウシ、ブタ、サルなど）に対して適用することもできる。
【実施例】
【００４０】
以下、本発明の製造例及び試験例を説明するが、本発明は、これらの製造例及び試験例に何ら限定されるものではない。
以下においては、「日本あざみ菜と赤・青大葉高菜との交配種」を品種名である「チヨミ（千齢三）」と称する。
【００４１】
（製造例１）
−チヨミの地上部の５０質量％エタノール抽出物の製造−
チヨミの地上部の粗粉砕物１００ｇを５０質量％エタノール水溶液１，０００ｇに投入し、８５℃浴中で２時間、加熱抽出を行った。その後、ろ過し、得られたろ液を濃縮、乾燥して製造例１のチヨミの地上部の５０質量％エタノール抽出物を得た。なお、得られたチヨミの地上部の５０質量％エタノール抽出物の抽出率は、３１．３％であった。
【００４２】
（試験例１：チロシナーゼ活性阻害作用試験）
製造例１で得られたチヨミの抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法により、チロシナーゼ活性阻害作用を試験した。
【００４３】
４８ウェルプレートに、Ｍｃｌｌｖａｉｎｅ緩衝液（ｐＨ６．８）０．２ｍＬ、０．３ｍｇ／ｍＬチロシン溶液０．０６ｍＬ、２５％ＤＭＳＯ溶液に溶解した被験試料（試料濃度は下記表１を参照）０．１８ｍＬを加え、３７℃で１０分間静置した。これに、８００ｕｎｉｔｓ／ｍＬチロシナーゼ溶液０．０２ｍＬを加え、引き続き３７℃で１５分間反応させた。反応終了後、波長４７５ｎｍにおける吸光度を測定した。
また、ブランクとして、酵素溶液を添加しない場合についても同様の操作及び吸光度の測定を行った。さらに、コントロールとして、試料溶液を添加せずに蒸留水を添加した場合についても同様の測定を行った。得られた測定結果から、下記式１によりチロシナーゼ活性阻害率（％）を算出した。結果を表１に示す。
＜式１＞
チロシナーゼ活性阻害率（％）＝｛１−（Ａ−Ｂ）／（Ｃ−Ｄ）｝×１００
式１中のＡ〜Ｄは、それぞれ以下を表す。
Ａ：被験試料添加・酵素添加での波長４７５ｎｍにおける吸光度
Ｂ：被験試料添加・酵素無添加での波長４７５ｎｍにおける吸光度
Ｃ：試料無添加・酵素添加での波長４７５ｎｍにおける吸光度
Ｄ：試料無添加・酵素無添加での波長４７５ｎｍにおける吸光度
【００４４】
【表１】
2019178103.tif 000002
【００４５】
表１の結果から、チヨミの抽出物は、優れたチロシナーゼ活性阻害作用を有することが確認された。
【００４６】
（試験例２：Ｂ１６メラノーマ細胞に対するメラニン産生抑制作用試験）
製造例１で得られたチヨミの抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法により、Ｂ１６メラノーマ細胞に対するメラニン産生抑制作用を試験した。
【００４７】
Ｂ１６メラノーマ細胞を、１０体積％ＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭを用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を１０体積％ＦＢＳ及び１ｍｍｏｌ／Ｌテオフィリン含有ダルベッコＭＥＭで２４．０×１０４細胞／ｍＬの濃度に希釈した後、４８ウェルプレートに１ウェル当たり３００μＬずつ播種し、６時間培養した。培養終了後、１０体積％ＦＢＳ及び１ｍｍｏｌ／Ｌテオフィリン含有ダルベッコＭＥＭで溶解した被験試料（試料濃度は下記表２を参照）を各ウェルに３００μＬ添加し、４日間培養した。培養終了後、各ウェルから培地を取り除き、２ｍｏｌ／Ｌ  ＮａＯＨ溶液２００μＬを添加して超音波破砕器により細胞を破壊し、波長４７５ｎｍにおける吸光度を測定した。測定した吸光度の値から、合成メラニンを用いて作成した検量線をもとにメラニン量を算出した。
また、細胞生存率の測定のため、同様に培養後、４００μＬのＰＢＳ（−）で洗浄し、終濃度０．０５ｍｇ／ｍＬで１０体積％ＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭに溶解したニュートラルレッドを各ウェルに２００μＬ添加した。２．５時間培養した後、ニュートラルレッド溶液を捨て、エタノール・酢酸溶液（エタノール：酢酸：水＝５０：１：４９、体積比）を各ウェルに２００μＬ添加し、色素を抽出した。抽出後、波長５４０ｎｍにおける吸光度を測定した。
空試験として、１０体積％ＦＢＳ及び１ｍｍｏｌ／Ｌテオフィリン含有ダルベッコＭＥＭのみで培養した細胞を同様の方法で試験した。得られた測定結果から、下記式２−１及び２−２によりメラニン産生抑制率（％）及び細胞生存率（％）を算出した。結果を表２に示す。
＜式２−１＞
メラニン産生抑制率（％）＝｛１−（Ｂ／Ｄ）／（Ａ／Ｃ）｝×１００
＜式２−２＞
細胞生存率（％）＝（Ｄ／Ｃ）×１００
式２−１及び２−２中のＡ〜Ｄは、それぞれ以下を表す。
Ａ：被験試料無添加におけるメラニン量
Ｂ：被験試料添加におけるメラニン量
Ｃ：被験試料無添加での５４０ｎｍにおける吸光度
Ｄ：被験試料添加での５４０ｎｍにおける吸光度
【００４８】
【表２】
2019178103.tif 000003
【００４９】
表２の結果から、チヨミの抽出物は、優れたメラニン産生抑制作用を有することが確認された。
【００５０】
（試験例３：表皮角化細胞増殖促進作用試験）
製造例１で得られたチヨミの抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法により、表皮角化細胞増殖促進作用を試験した。
【００５１】
正常ヒト新生児表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）を、正常ヒト表皮角化細胞用増殖培地（ＫＧＭ）を用いて培養した後、トリプシン処理にて細胞を回収した。回収した細胞を３．０×１０４細胞／ｍＬの濃度にＫＧＭ培地で希釈した後、コラーゲンコートした９６ウェルプレートに１ウェルあたり１００μＬずつ播種し、一晩培養した。培養終了後、ＫＧＭ培地に溶解した被験試料（試料濃度は下記表３を参照）を各ウェルに１００μＬ添加し、３日間培養した。なお、コントロールとして、試料無添加のＫＭＧ培地を用いて同様に培養した。
表皮角化細胞増殖促進作用は、ＭＴＴアッセイ法を用いて測定した。すなわち、３日間培養後、培地を除去し、終濃度０．４ｍｇ／ｍＬでＰＢＳ（−）緩衝液に溶解したＭＴＴを各ウェルに１００μＬずつ添加した。２時間培養した後に、細胞内に生成したブルーホルマザンを２−プロパノール１００μＬで抽出した。抽出後、波長５７０ｎｍにおける吸光度を測定した。同時に濁度として波長６５０ｎｍにおける吸光度を測定し、両者の差をもってブルーホルマザン生成量とした。得られた結果から、下記式３により表皮角化細胞増殖促進率（％）を算出した。結果を表３に示す。
＜式３＞
表皮角化細胞増殖促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
式３中のＡ〜Ｂは、それぞれ以下を表す。
Ａ：被験試料添加時の細胞でのブルーホルマザン生成量
Ｂ：試料無添加時の細胞でのブルーホルマザン生成量
【００５２】
【表３】
2019178103.tif 000004
【００５３】
表３の結果から、チヨミの抽出物は、優れた表皮角化細胞増殖促進作用を有することが確認された。
【００５４】
（試験例４：ＡＴＰ産生促進作用試験）
製造例１で得られたチヨミの抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法により、ＡＴＰ産生促進作用を試験した。
【００５５】
正常ヒト新生児表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）を、正常ヒト表皮角化細胞用増殖培地（ＫＧＭ）を用いて前培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を２．０×１０５細胞／ｍＬの濃度にＫＧＭ培地で希釈した後、コラーゲンコートした９６ウェルプレートに１ウェル当たり１００μＬずつ播種し、一晩培養した。培養終了後、培地を除去し、被験試料（試料濃度は下記表４を参照）を溶解したＫＧＭ培地を各ウェルに１００μＬ添加し、２時間培養した。なお、コントロールとして、試料無添加のＫＧＭ培地を用いて同様に培養した。
ＡＴＰ産生促進作用は、ホタルルシフェラーゼ発光法を用いて細胞内のＡＴＰ量を測定した。すなわち、２時間培養後、ＡＴＰ測定試薬（東洋ビーネット社製，商品名『「細胞の」ＡＴＰ測定試薬』）を各ウェルに１００μＬずつ添加し、ルシフェラーゼによる化学発光反応を行った。反応後、細胞内ＡＴＰ量に比例した化学発光量を、化学発光測定装置（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製，製品名：Ｖａｒｉｏｓｋａｎ  ＬＵＸ）を用いて測定した。得られた結果から、下記式４によりＡＴＰ産生促進率（％）を算出した。結果を表４に示す。
＜式４＞
ＡＴＰ産生促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
式４中のＡ〜Ｂは、それぞれ以下を表す。
Ａ：被験試料を添加した細胞での化学発光量
Ｂ：被験試料無添加の細胞での化学発光量
【００５６】
【表４】
2019178103.tif 000005
【００５７】
表４の結果から、チヨミの抽出物は、優れたＡＴＰ産生促進作用を有することが確認された。
【００５８】
（配合例１）
下記組成の乳液を常法により製造した。
・  チヨミの抽出物（製造例１）                                ０．０１ｇ
・  ホホバオイル                                              ４．００ｇ
・  １，３−ブチレングリコール                                ３．００ｇ
・  アルブチン                                                ３．００ｇ
・  ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）          ２．５０ｇ
・  オリーブオイル                                            ２．００ｇ
・  スクワラン                                                ２．００ｇ
・  セタノール                                                ２．００ｇ
・  モノステアリン酸グリセリル                                ２．００ｇ
・  オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．Ｏ．）    ２．００ｇ
・  パラオキシ安息香酸メチル                                  ０．１５ｇ
・  グリチルレチン酸ステアリル                                ０．１０ｇ
・  黄杞エキス                                                ０．１０ｇ
・  グリチルリチン酸ジカリウム                                ０．１０ｇ
・  イチョウ葉エキス                                          ０．１０ｇ
・  コンキオリン                                              ０．１０ｇ
・  オウバクエキス                                            ０．１０ｇ
・  カミツレエキス                                            ０．１０ｇ
・  香料                                                      ０．０５ｇ
・  精製水                                  残部（全量を１００ｇとする）
【００５９】
（配合例２）
下記組成のクリームを常法により製造した。
・  チヨミの抽出物（製造例１）                                  ０．０５ｇ
・  クジンエキス                                                ０．１ｇ
・  オウゴンエキス                                              ０．１ｇ
・  流動パラフィン                                              ５．０ｇ
・  サラシミツロウ                                              ４．０ｇ
・  スクワラン                                                １０．０ｇ
・  セタノール                                                  ３．０ｇ
・  ラノリン                                                    ２．０ｇ
・  ステアリン酸                                                １．０ｇ
・  オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．Ｏ．）      １．５ｇ
・  モノステアリン酸グリセリル                                  ３．０ｇ
・  油溶性甘草エキス                                            ０．１ｇ
・  １，３−ブチレングリコール                                  ６．０ｇ
・  パラオキシ安息香酸メチル                                    １．５ｇ
・  香料                                                        ０．１ｇ
・  精製水                                    残部（全量を１００ｇとする）
【００６０】
（配合例３）
下記組成の美容液を常法により製造した。
・  チヨミの抽出物（製造例１）                                  ０．０１ｇ
・  カミツレエキス                                              ０．１ｇ
・  ニンジンエキス                                              ０．１ｇ
・  キサンタンガム                                              ０．３ｇ
・  ヒドロキシエチルセルロース                                  ０．１ｇ
・  カルボキシビニルポリマー                                    ０．１ｇ
・  １，３−ブチレングリコール                                  ４．０ｇ
・  グリチルリチン酸ジカリウム                                  ０．１ｇ
・  グリセリン                                                  ２．０ｇ
・  水酸化カリウム                                              ０．２５ｇ
・  香料                                                        ０．０１ｇ
・  防腐剤（パラオキシ安息香酸メチル）                          ０．１５ｇ
・  エタノール                                                  ２．０ｇ
・  精製水                                    残部（全量を１００ｇとする）
【００６１】
（配合例４）
下記組成のヘアトニックを常法により製造した。
・  チヨミの抽出物（製造例１）                                  ０．４ｇ
・  酢酸トコフェロール                                          適量
・  セファラチン                                                ０．００２ｇ
・  イソプロピルメチルフェノール                                ０．１ｇ
・  ヒアルロン酸ナトリウム                                      ０．１５ｇ
・  グリセリン                                                １５．０ｇ
・  エタノール                                                １５．０ｇ
・  香料                                                        適量
・  キレート剤（エデト酸ナトリウム）                            適量
・  防腐剤（ヒノキチオール）                                    適量
・  可溶化剤（ポリオキシエチレンセチルエーテル）                適量
・  精製水                                    残部（全量を１００ｇとする）
【００６２】
（配合例５）
下記組成のシャンプーを常法により製造した。
・  チヨミの抽出物（製造例１）                                  ０．５ｇ
・  マジョラム抽出物                                            １．０ｇ
・  ウメ果実部抽出物                                            ０．２ｇ
・  ヤシ油脂肪酸メチルタウリンナトリウム                      １０．０ｇ
・  ヤシ油脂肪酸アミドプロピルベタイン                        １０．０ｇ
・  ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸ナトリウム          ２０．０ｇ
・  ヤシ油脂肪酸ジエタノールアミド                              ４．０ｇ
・  プロピレングリコール                                        ２．０ｇ
・  香料                                                        適量
・  精製水                                    残部（全量を１００ｇとする）