(57)【要約】【課題】９−アミノアントラセン又はその誘導体の１０位の位置に置換基を導入した化合物及びその製造方法を提供する。【解決手段】下記式（１）で表される化合物（式（１）中、Ｒ１は置換されていてもよい炭素数１〜２０のアルキル基又は置換されていてもよいアリール基を表し、Ｒ２はそれぞれ独立に水素原子、ハロゲン原子又は置換されていてもよい炭素数１〜６のアルキル基を表す。［化１］2019006698.tif 000030【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（１）で表される化合物。
【化１】
2019006698.tif 000024
［式（１）中、Ｒ１は置換されていてもよい炭素数１〜２０のアルキル基又は置換されていてもよいアリール基を表し、Ｒ２はそれぞれ独立に水素原子、ハロゲン原子又は置換されていてもよい炭素数１〜６のアルキル基を表す。］
【請求項２】
前記式（１）中のＲ２が全て水素原子である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
請求項１又は２に記載の化合物を有効成分として含有する酸素検出剤。
【請求項４】
下記式（１）で表される化合物の製造方法であって、
下記式（２）で表される化合物に、ＣＨ（ＯＲ３）３（ここで、Ｒ３はそれぞれ独立に炭素数１〜６の直鎖状又は分枝鎖状アルキル基を表す。）で表される化合物を反応させて、下記式（３）で表される化合物を得る工程１と、
工程１で得られた、下記式（３）で表される化合物に、Ｒ１Ｍ（ここで、Ｒ１は下記式（１）における定義に同じであり、ＭはＭｇＢｒ、ＭｇＩ又はＬｉを表す。）で表される化合物を反応させ、次いで濃塩酸を反応させて、下記式（４）で表される化合物を得る工程２と、
工程２で得られた、下記式（４）で表される化合物に濃硝酸を反応させ、次いで濃塩酸を反応させ、次いで中和させて下記式（５）で表される化合物を得る工程３と、
工程３で得られた、下記式（５）で表される化合物にＳｎＣｌ２を反応させ、次いで塩基性条件に調整することにより、下記式（１）で表される化合物を得る工程４と、を備える、製造方法。
【化２】
2019006698.tif 000025
［式（１）中、Ｒ１は置換されていてもよい炭素数１〜２０のアルキル基又は置換されていてもよいアリール基を表し、Ｒ２はそれぞれ独立に水素原子、ハロゲン原子又は置換されていてもよい炭素数１〜６のアルキル基を表す。］
【化３】
2019006698.tif 000026
［式（２）中、Ｒ２の定義は前記式（１）における定義に同じである。］
【化４】
2019006698.tif 000027
［式（３）中、Ｒ２の定義は前記式（１）における定義に同じであり、Ｒ３はそれぞれ独立に炭素数１〜６の直鎖状又は分枝鎖状アルキル基を表す。］
【化５】
2019006698.tif 000028
［式（４）中、Ｒ１及びＲ２の定義は前記式（１）における定義に同じである。］
【化６】
2019006698.tif 000029
［式（５）中、Ｒ１及びＲ２の定義は前記式（１）における定義に同じである。］
【請求項５】
前記式（１）〜（５）中のＲ２が全て水素原子である、請求項４に記載の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、９−アミノアントラセン誘導体及びその使用に関する。より具体的には、９−アミノアントラセン誘導体、酸素検出剤及び９−アミノアントラセン誘導体の製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
９−アミノアントラセン（以下、「９ＡＡ」という場合がある。）は下記式（Ｆ１）で表される化合物であり、波長約４４０ｎｍの励起光を照射すると、波長約５１０ｎｍの蛍光を発する蛍光化合物である（例えば、特許文献１を参照）。
【０００３】
【化１】
2019006698.tif 000002
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特許第６０８９３２４号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
９ＡＡを産業応用するうえで、９ＡＡの誘導体を作製し、より目的に適した特性を有する化合物を利用することが考えられる。しかしながら、従来、９ＡＡの１０位の位置に置換基を導入することは困難であった。そこで、本発明は、９ＡＡ又はその誘導体の１０位の位置に置換基を導入した化合物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は以下の通りである。
［１］下記式（１）で表される化合物。
【化２】
2019006698.tif 000003
［式（１）中、Ｒ１は置換されていてもよい炭素数１〜２０のアルキル基又は置換されていてもよいアリール基を表し、Ｒ２はそれぞれ独立に水素原子、ハロゲン原子又は置換されていてもよい炭素数１〜６のアルキル基を表す。］
［２］前記式（１）中のＲ２が全て水素原子である、［１］に記載の化合物。
［３］［１］又は［２］に記載の化合物を有効成分として含有する酸素検出剤。
［４］下記式（１）で表される化合物の製造方法であって、下記式（２）で表される化合物に、ＣＨ（ＯＲ３）３（ここで、Ｒ３はそれぞれ独立に炭素数１〜６の直鎖状又は分枝鎖状アルキル基を表す。）で表される化合物を反応させて、下記式（３）で表される化合物を得る工程１と、工程１で得られた、下記式（３）で表される化合物に、Ｒ１Ｍ（ここで、Ｒ１は下記式（１）における定義に同じであり、ＭはＭｇＢｒ、ＭｇＩ又はＬｉを表す。）で表される化合物を反応させ、次いで濃塩酸を反応させて、下記式（４）で表される化合物を得る工程２と、工程２で得られた、下記式（４）で表される化合物に濃硝酸を反応させ、次いで濃塩酸を反応させ、次いで中和させて下記式（５）で表される化合物を得る工程３と、工程３で得られた、下記式（５）で表される化合物にＳｎＣｌ２を反応させ、次いで塩基性条件に調整することにより、下記式（１）で表される化合物を得る工程４と、を備える、製造方法。
【化３】
2019006698.tif 000004
［式（１）中、Ｒ１は置換されていてもよい炭素数１〜２０のアルキル基又は置換されていてもよいアリール基を表し、Ｒ２はそれぞれ独立に水素原子、ハロゲン原子又は置換されていてもよい炭素数１〜６のアルキル基を表す。］
【化４】
2019006698.tif 000005
［式（２）中、Ｒ２の定義は前記式（１）における定義に同じである。］
【化５】
2019006698.tif 000006
［式（３）中、Ｒ２の定義は前記式（１）における定義に同じであり、Ｒ３はそれぞれ独立に炭素数１〜６の直鎖状又は分枝鎖状アルキル基を表す。］
【化６】
2019006698.tif 000007
［式（４）中、Ｒ１及びＲ２の定義は前記式（１）における定義に同じである。］
【化７】
2019006698.tif 000008
［式（５）中、Ｒ１及びＲ２の定義は前記式（１）における定義に同じである。］
［５］前記式（１）〜（５）中のＲ２が全て水素原子である、［４］に記載の製造方法。
【発明の効果】
【０００７】
本発明によれば、９ＡＡ又はその誘導体の１０位の位置に置換基を導入した化合物を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１】実験例３において、９ＡＡ及びメシチル９ＡＡの蛍光を観察した結果を示す写真である。
【図２】実験例４において、メシチル９ＡＡの吸収スペクトルの測定結果を示すグラフである。
【図３】実験例４において、メシチル９ＡＡの蛍光スペクトルの測定結果を示すグラフである。
【図４】（ａ）及び（ｂ）は、実験例５において、ＣＯＳ７細胞を９ＡＡで染色した結果を示す顕微鏡写真である。（ａ）は明視野観察画像であり、（ｂ）は蛍光観察画像である。
【図５】（ａ）及び（ｂ）は、実験例５において、ＨｅＬａ細胞をメシチル９ＡＡで染色した結果を示す顕微鏡写真である。（ａ）は明視野観察画像であり、（ｂ）は蛍光観察画像である。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
［化合物］
１実施形態において本発明は、下記式（１）で表される化合物を提供する。
【００１０】
【化８】
2019006698.tif 000009
［式（１）中、Ｒ１は置換されていてもよい炭素数１〜２０のアルキル基又は置換されていてもよいアリール基を表し、Ｒ２はそれぞれ独立に水素原子、ハロゲン原子又は置換されていてもよい炭素数１〜６のアルキル基を表す。］
【００１１】
本実施形態の化合物は、９ＡＡ又はその誘導体の１０位の位置にＲ１で表される置換基を導入したものであり、新規化合物である。本実施形態の化合物は、後述する製造方法により容易に製造することができる。
【００１２】
本実施形態の化合物において、Ｒ１は嵩高い置換基であることが好ましい。従来、９ＡＡ又はその誘導体の１０位の位置に嵩高い置換基を導入することは特に困難であった。本明細書において、嵩高いとは、Ｒ１で表される基の分子量が概ね９０〜１０００であることを意味する。
【００１３】
実施例において後述するように、発明者らは、９ＡＡが経時的に蛍光波長を変化させるのに対し、本実施形態の化合物は蛍光波長を変化させない特性を有することを明らかにした。このため、本実施形態の化合物は、蛍光波長が変化しないことが求められる場合等に有用である。また、Ｒ１が嵩高い置換基であると、蛍光波長を変化させない特性を発現しやすい傾向にある。
【００１４】
本実施形態の化合物において、上記式（１）におけるＲ１は置換されていてもよい炭素数１〜２０のアルキル基であってもよいし、置換されていてもよいアリール基であってもよい。
【００１５】
炭素数１〜２０のアルキル基としては、例えば、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、ｎ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、ｎ−ヘキシル基等の直鎖状アルキル基；イソプロピル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ｔｅｒｔ−アミル基等の分枝鎖状のアルキル基；シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基等のシクロアルキル基；１−アダマンチル基、２−アダマンチル基、９−トリプチシル基等の嵩高いアルキル基等が挙げられる。
【００１６】
また、炭素数１〜２０のアルキル基の置換基としては、例えばハロゲン原子が挙げられる。ハロゲン原子としては、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素等が挙げられる。置換された炭素数１〜６のアルキル基としては、例えば、フルオロメチル基、トリフルオロメチル基、２，２，２−トリフルオロエチル基、クロロメチル基、トリクロロメチル基、ブロモメチル基、トリブロモメチル基等が挙げられる。
【００１７】
また、アリール基としては、例えば、フェニル基、２−メチルフェニル基、３−メチルフェニル基、４−メチルフェニル基、４−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル基、２，４，６−トリメチルフェニル基（メシチル基）、２，６−ジイソプロピルフェニル基、トリメチルフェニル基等が挙げられる。
【００１８】
また、アリール基の置換基としては、例えばハロゲン原子、炭素数１〜３のハロゲン化アルキル基等が挙げられる。ハロゲン原子としては、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素等が挙げられる。
【００１９】
置換されたアリール基としては、例えば、２−フルオロフェニル基、３−フルオロフェニル基、４−フルオロフェニル基、２，４−ジフルオロフェニル基、２，６−ジフルオロフェニル基、３，４−ジフルオロフェニル基、２，４，６−トリフルオロフェニル基、ペンタフルオロフェニル基、４−トリフルオロメチルフェニル基等、２−ブロモフェニル基、３−ブロモフェニル基、４−ブロモフェニル基、３，４−ジブロモフェニル基等が挙げられる。
【００２０】
本実施形態の化合物において、上記式（１）におけるＲ２は全て水素原子であってもよいし、１個又は複数のＲ２が、置換されていてもよい炭素数１〜６のアルキル基であってもよい。ここで、炭素数１〜６のアルキル基としては、例えば、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、ｎ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、ｎ−ヘキシル基等の直鎖状アルキル基；イソプロピル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ｔｅｒｔ−アミル基等の分枝鎖状のアルキル基；シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基等のシクロアルキル基等が挙げられる。
【００２１】
また、炭素数１〜６のアルキル基の置換基としては、例えばハロゲン原子が挙げられる。ハロゲン原子としては、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素等が挙げられる。置換された炭素数１〜６のアルキル基としては、例えば、フルオロメチル基、トリフルオロメチル基、２，２，２−トリフルオロエチル基、クロロメチル基、トリクロロメチル基、ブロモメチル基、トリブロモメチル基等が挙げられる。
【００２２】
［酸素検出剤］
１実施形態において、本発明は、上記式（１）に記載の化合物を有効成分として含有する酸素検出剤を提供する。
【００２３】
実施例において後述するように、発明者らは、上記式（１）で表される化合物を、酸素検出剤の用途に使用できることを明らかにした。上記式（１）で表される化合物は、波長約４４０ｎｍの励起光を照射すると波長約５１０ｎｍの緑色蛍光を発する。なお、励起光としては、波長約４４０ｎｍの他にも波長約３６５ｎｍの光を用いることもできる。
【００２４】
しかしながら、上記式（１）で表される化合物は、酸素と反応すると蛍光を発しなくなる。この性質を利用することにより、本実施形態の酸素検出剤を環境中の酸素を検出する用途に用いることができる。
【００２５】
ところで、発明者らは、以前に、９ＡＡが酸素検出剤として利用できることを明らかにしている。９ＡＡも、上記式（１）で表される化合物と同様に、波長約３６５ｎｍ又は約４４０ｎｍの励起光を照射すると波長約５１０ｎｍの緑色蛍光を発するが、酸素と反応すると蛍光を発しなくなる。
【００２６】
しかしながら、実施例において後述するように、発明者らは、９ＡＡは経時的に蛍光波長を変化させることを見出した。具体的には、波長約５１０ｎｍの緑色蛍光から、波長約６２０ｎｍの赤色蛍光に蛍光波長が変化する。このため、酸素の検出を正しく行うことが困難な場合がある。
【００２７】
これに対し、実施例において後述するように、発明者らは、上記式（１）で表される化合物が、９ＡＡとは異なり蛍光波長を変化させない特性を有することを明らかにした。このため、上記式（１）で表される化合物は、９ＡＡを使用した場合よりも正確に酸素の存在を検出する必要がある場合、蛍光波長が変化しないことが求められる場合等に有用である。なお、発明者らは、９ＡＡが蛍光波長を変化させる理由として、９ＡＡが多量体を形成するためであると推測している。また、上記式（１）で表される化合物が蛍光波長を変化させない理由として、１０位の置換基Ｒ１の立体的効果により、上記式（１）で表される化合物同士の多量体化が抑制されるためであると推測している。
【００２８】
［化合物の製造方法］
１実施形態において、本発明は、上記式（１）で表される化合物の製造方法であって、下記式（２）で表される化合物に、ＣＨ（ＯＲ３）３（ここで、Ｒ３はそれぞれ独立に炭素数１〜６の直鎖状又は分枝鎖状アルキル基を表す。）で表される化合物を反応させて、下記式（３）で表される化合物を得る工程１と、工程１で得られた、下記式（３）で表される化合物に、Ｒ１Ｍ（ここで、Ｒ１は下記式（１）における定義に同じであり、ＭはＭｇＢｒ、ＭｇＩ又はＬｉを表す。）で表される化合物を反応させ、次いで濃塩酸を反応させて、下記式（４）で表される化合物を得る工程２と、工程２で得られた、下記式（４）で表される化合物に濃硝酸を反応させ、次いで濃塩酸を反応させ、次いで中和させて下記式（５）で表される化合物を得る工程３と、工程３で得られた、下記式（５）で表される化合物にＳｎＣｌ２を反応させ、次いで塩基性条件に調整することにより、上記式（１）で表される化合物を得る工程４と、を備える、製造方法を提供する。
【００２９】
【化９】
2019006698.tif 000010
［式（１）中、Ｒ１は置換されていてもよい炭素数１〜２０のアルキル基又は置換されていてもよいアリール基を表し、Ｒ２はそれぞれ独立に水素原子、ハロゲン原子又は置換されていてもよい炭素数１〜６のアルキル基を表す。］
【００３０】
【化１０】
2019006698.tif 000011
［式（２）中、Ｒ２の定義は上記式（１）における定義に同じである。］
【００３１】
【化１１】
2019006698.tif 000012
［式（３）中、Ｒ２の定義は上記式（１）における定義に同じであり、Ｒ３はそれぞれ独立に炭素数１〜６の直鎖状又は分枝鎖状アルキル基を表す。］
【００３２】
【化１２】
2019006698.tif 000013
［式（４）中、Ｒ１及びＲ２の定義は上記式（１）における定義に同じである。］
【００３３】
【化１３】
2019006698.tif 000014
［式（５）中、Ｒ１及びＲ２の定義は上記式（１）における定義に同じである。］
【００３４】
本実施形態の製造方法により、遷移金属を使わずに９ＡＡ又はその誘導体の１０位の位置に置換基を導入した化合物を簡便かつ低コストで製造することができる。
【００３５】
（工程１）
本工程において、上記式（２）で表される化合物に、ＣＨ（ＯＲ３）３（ここで、Ｒ３はそれぞれ独立に炭素数１〜６の直鎖状又は分枝鎖状アルキル基を表す。）で表される化合物を触媒量の硫酸存在下で反応させて、上記式（３）で表される化合物を得る。
【００３６】
ＣＨ（ＯＲ３）３で表される化合物において、Ｒ３としては、炭素数１〜６の直鎖状又は分枝鎖状アルキル基が挙げられる。より具体的には、例えば、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、ｎ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、ｎ−ヘキシル基等の直鎖状アルキル基；イソプロピル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ｔｅｒｔ−アミル基等の分枝鎖状のアルキル基等が挙げられる。
【００３７】
ＣＨ（ＯＲ３）３で表されるより具体的な化合物としては、オルトギ酸トリエチル、オルトギ酸トリメチル、オルトギ酸トリプロピル等が挙げられる。
【００３８】
（工程２）
本工程において、工程１で得られた、上記式（３）で表される化合物に、Ｒ１Ｍ（ここで、Ｒ１は上記式（１）における定義に同じであり、ＭはＭｇＢｒ、ＭｇＩ又はＬｉを表す。）で表される化合物を反応させ、次いで濃塩酸を反応させて、上記式（４）で表される化合物を得る。
【００３９】
Ｒ１Ｍで表される化合物の基Ｒ１が、最終的に９ＡＡ又はその誘導体の１０位の位置に導入される。Ｒ１Ｍで表されるより具体的な化合物としては、メシチルリチウム、２−フルオロフェニルリチウム、２−クロロフェニルリチウム、２−ブロモフェニルリチウム、２−ヨードフェニルリチウム、メシチルマグネシウムブロミド、メシチルマグネシウムヨージド、２−ブロモフェニルマグネシウムヨージド、２−ヨードフェニルマグネシウムヨージド等が挙げられる。
【００４０】
（工程３）
本工程において、工程２で得られた、上記式（４）で表される化合物に濃硝酸を約１時間反応させ、次いで濃塩酸を約１時間反応させ、次いで中和させて上記式（５）で表される化合物を得る。中和には、例えば、水酸化リチウム水溶液、水酸化ナトリウム水溶液、水酸化カリウム水溶液等を用いることができる。ここで得られた上記式（５）で表される化合物は、吸引ろ過により反応混合物から分離することができ、多量の水で精製することができる。次いで、真空下で乾燥させ、窒素雰囲気下で１日から１カ月間室温で保存することができる。
【００４１】
（工程４）
本工程において、工程３で得られた、上記式（５）で表される化合物にＳｎＣｌ２を反応させ、次いで塩基性条件に調整することにより、上記式（１）で表される化合物を得る。
【００４２】
アントラセンを出発物質として９ＡＡを合成する場合にも、本工程と似た反応を行う。しかしながら、９ＡＡを合成する場合には、ＳｎＣｌ２を反応させた後、酸性条件に調整する。
【００４３】
これに対し、発明者らは、上記式（１）で表される化合物の合成においては、上記式（５）で表される化合物にＳｎＣｌ２と濃塩酸を反応させても、すなわち、上記式（５）で表される化合物とＳｎＣｌ２を酸性条件下で反応させても、上記式（１）で表される化合物がほとんど得られないことを見出した。発明者らはまた、メタノール等の溶媒中で、上記式（５）で表される化合物をＳｎＣｌ２と還流することにより、上記式（５）で表される化合物のニトロ基を還元することができることを見出した。この反応は、例えば重クロロホルムを溶媒とした１Ｈ  ＮＭＲスペクトル測定により、上記式（５）で表される化合物の消失が確認できるまで行うとよい。この反応には約１〜２日間を要する。
【００４４】
上記式（５）で表される化合物が消失すると、還元された化合物が生成するが、その化合物はアンモニウム塩であり、重クロロホルムに不溶であり、反応に用いたＳｎＣｌ２を由来とするスズ化合物を含む。下記式（６）に、上記式（５）で表される化合物の還元により得られたアンモニウム塩を示す。
【００４５】
【化１４】
2019006698.tif 000015
［式（６）中、Ｒ１及びＲ２の定義は上記式（１）における定義に同じである。］
【００４６】
発明者らは、上記式（６）で表される化合物を塩基性条件に調整することにより、本工程における収率が格段に向上し、上記式（１）で表される化合物が得られることを見出した。塩基性条件への調整には、例えば、水酸化リチウム水溶液、水酸化ナトリウム水溶液、水酸化カリウム水溶液等を用いることができる。
【００４７】
本実施形態の製造方法において、上記式（１）〜（６）中におけるＲ２は全て水素原子であってもよいし、１個又は複数のＲ２が、置換されていてもよい炭素数１〜６のアルキル基であってもよい。ここで、置換されていてもよい炭素数１〜６のアルキル基としては、Ｒ２について上述したものと同様のものを用いることができる。
【実施例】
【００４８】
次に、実験例を示して本発明を更に詳細に説明するが、本発明は以下の実験例に限定されるものではない。
【００４９】
［実験例１］
（９−アミノ−１０−メシチルアントラセンの合成）
下記式（７）で表される化合物（アントロン）を出発物質として、下記式（８）で表される化合物を合成した。下記式（８）で表される化合物は、上記式（１）におけるＲ１が２，４，６−トリメチルフェニル基（メシチル基）であり、Ｒ２が全て水素原子である化合物である。以下、下記式（８）で表される化合物を「メシチル９ＡＡ」という場合がある。
【００５０】
【化１５】
2019006698.tif 000016
【００５１】
【化１６】
2019006698.tif 000017
【００５２】
（工程１）
具体的には、まず、アントロンにＣＨ（ＯＣＨ２ＣＨ３）３（オルトギ酸トリエチル）を硫酸存在下で反応させて、下記式（９）で表される化合物を得た。下記式（９）で表される化合物は、上記式（３）で表される化合物におけるＲ３がエチル基である化合物である。
【００５３】
【化１７】
2019006698.tif 000018
【００５４】
（工程２）
続いて、工程１で得られた、上記式（９）で表される化合物に、下記式（１０）で表される化合物（メシチルリチウム）を反応させ、次いで濃塩酸を反応させて、下記式（１１）で表される化合物を得た。下記式（１１）で表される化合物は、上記式（４）で表される化合物におけるＲ１がメシチル基であり、Ｒ２が全て水素原子である化合物である。
【００５５】
【化１８】
2019006698.tif 000019
【００５６】
【化１９】
2019006698.tif 000020
【００５７】
（工程３）
続いて、工程２で得られた、上記式（１１）で表される化合物に濃硝酸を反応させ、次いで濃塩酸を反応させ、次いで中和させて下記式（１２）で表される化合物を得た。下記式（１２）で表される化合物は、上記式（５）で表される化合物におけるＲ１がメシチル基であり、Ｒ２が全て水素原子である化合物である。
【００５８】
【化２０】
2019006698.tif 000021
【００５９】
（工程４）
続いて、工程３で得られた、上記式（１２）で表される化合物に、メタノール中でＳｎＣｌ２を反応させ、次いで塩基性条件に調整することにより、上記式（８）で表される化合物（メシチル９ＡＡ）を得た。
【００６０】
１Ｈ  ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ＝１．７１（６Ｈ，ｓ），２．４４（３Ｈ，ｓ），４．８９（２Ｈ，ｂｒｓ），７．０６（２Ｈ，ｓ），７．２９（２Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝８．４，６．６，１．２Ｈｚ），７．３９−７．４３（４Ｈ，ｍ），８．０４（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．４，１．２Ｈｚ）
ＭＳ（ＥＳＩ）：実測値  ｍ／ｚ  ３１２．１７４３、計算値（Ｃ２３Ｈ２１Ｎ＋Ｈ）  ｍ／ｚ  ３１１．１７４７
【００６１】
［実験例２］
（９−アミノ−１０−（２−ブロモフェニル）アントラセンの合成）
上記式（１０）で表される化合物の代わりに下記式（１３）で表される化合物（（２−ブロモフェニル）リチウム）を使用した以外は実験例１と同様にして、上記式（７）で表されるアントロンを出発物質として、下記式（１４）で表される化合物を合成した。下記式（１４）で表される化合物は、上記式（１）におけるＲ１が２−ブロモフェニル基（ｏ−ＢｒＣ６Ｈ４基）であり、Ｒ２が全て水素原子である化合物である。
【００６２】
【化２１】
2019006698.tif 000022
【００６３】
【化２２】
2019006698.tif 000023
【００６４】
１Ｈ  ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ＝４．９９（２Ｈ，ｂｒｓ），７．３５−７．３８（４Ｈ，ｍ），７．４０−７．４２（４Ｈ，ｍ），７．４６−７．５５（１Ｈ，ｍ），７．８３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．５，１．２Ｈｚ），８．０４（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．４，１．０Ｈｚ）
ＭＳ（ＥＳＩ）：実測値  ｍ／ｚ  ３４８．０３８３、計算値（Ｃ２０Ｈ１４ＢｒＮ＋Ｈ）  ｍ／ｚ  ３４８．０３８２
【００６５】
［実験例３］
（９ＡＡ及びメシチル９ＡＡの蛍光特性の検討）
シリカゲルＴＬＣ上で、ラウリン酸（ＬａｕＣＯ２Ｈ）、テトラデカノール（ＴｅｔＯＨ）、ラウリルアミン（ＬａｕＮＨ２）の存在下で、９ＡＡ及びメシチル９ＡＡ（Ｍｅｓ９ＡＡ）の蛍光を観察した。これらの溶媒の種類を変えることにより、異なる酸素条件にすることができる。特に、ラウリルアミン存在下は、ラウリルアミンが酸素と反応して酸素を消費することから、低酸素条件であることが知られている。
【００６６】
具体的には、シリカゲルＴＬＣ上に上記の各溶媒及び９ＡＡの混合物、又は上記の各溶媒及びメシチル９ＡＡの混合物を塗布し、５分後及び２４時間後に、３６５ｎｍの励起光を照射して蛍光を観察した。蛍光の観察にあたっては、フィルターを使用しなかった。これにより、蛍光波長の変化を肉眼で観察することができた。
【００６７】
図１は蛍光を観察した結果を示す写真である。その結果、時間の経過と共に９ＡＡの蛍光波長が変化したことが肉眼で観察された。より具体的には、９ＡＡの蛍光は、時間の経過と共に緑色から黄色に変化した。これは、９ＡＡの一部が赤色蛍光を発するように変化した結果であると考えられる。
【００６８】
一方、ラウリルアミン存在下のメシチル９ＡＡは、２４時間後においても５分後とほぼ同じ波長の蛍光を発することが明らかとなった。この結果は、９ＡＡが蛍光波長を変化させるのに対し、メシチル９ＡＡは蛍光波長を変化させないことを示す。
【００６９】
また、上述したように、ラウリルアミン存在下は低酸素条件であると考えられる。このため、ラウリルアミン以外の溶媒の存在下でメシチル９ＡＡの蛍光が消失したのは、メシチル９ＡＡが酸素と反応した結果であることが明らかとなった。
【００７０】
以上の結果から、メシチル９ＡＡを酸素検出剤として使用することができることが明らかとなった。また、メシチル９ＡＡは、蛍光波長を変化させない特性を有することが明らかとなった。
【００７１】
９ＡＡの蛍光波長が変化する理由として、９ＡＡが多量体化することが考えられる。これに対し、９ＡＡの１０位の位置に置換基が導入された９ＡＡ誘導体は多量体化しにくく、このため、蛍光波長が変化しないと考えられる。また、１０位の置換基が嵩高いほど多量体化しにくいことが期待されるため、１０位の置換基が嵩高い９ＡＡ誘導体は、蛍光波長がより変化しにくい傾向にあるといえる。
【００７２】
［実験例４］
（メシチル９ＡＡの蛍光特性の検討）
窒素雰囲気下のメシチル９ＡＡ及び酸素を反応させた後のメシチル９ＡＡの吸収スペクトルをそれぞれ測定した。
【００７３】
図２は、メシチル９ＡＡの吸収スペクトルの測定結果を示すグラフである。その結果、窒素雰囲気下における吸収スペクトルと、酸素を反応させた後の吸収スペクトルには、ほとんど違いが認められないことが明らかとなった。
【００７４】
この結果は、メシチル９ＡＡと酸素との反応において、メシチル９ＡＡの基底状態が変化しなかったことを示す。このことから、メシチル９ＡＡと酸素との反応は平衡反応であることが明らかとなった。
【００７５】
続いて、窒素雰囲気下のメシチル９ＡＡ及び酸素を反応させた後のメシチル９ＡＡに３２０ｎｍの励起光を照射し、蛍光スペクトルをそれぞれ測定した。
【００７６】
図３は、メシチル９ＡＡの蛍光スペクトルの測定結果を示すグラフである。その結果、窒素雰囲気下でメシチル９ＡＡに３２０ｎｍの励起光を照射すると、５１２ｎｍの緑色蛍光を発することが観察された。一方、酸素を反応させた後のメシチル９ＡＡでは、５１２ｎｍの緑色蛍光の強度の減少が観察された。また、メシチル９ＡＡでは、緑色蛍光から赤色蛍光への蛍光波長の変化は起こらないことが明らかとなった。
【００７７】
［実験例５］
（９ＡＡ及びメシチル９ＡＡを用いた動物細胞の染色）
アフリカミドリザル腎臓由来の細胞株であるＣＯＳ７生細胞、及び、ラット副腎褐色細胞腫由来の細胞株であるＰＣ１２細胞を、それぞれ９ＡＡで染色し、蛍光顕微鏡で観察した。
【００７８】
具体的には、まず、生細胞の培地を除去し、リン酸緩衝液（ＰＢＳ）を添加した。続いて、上記のＰＢＳ中に、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解した９ＡＡを添加し、２分間静置した。その後、ＰＢＳを除去し、新しいＰＢＳを添加して、蛍光顕微鏡で観察した。
【００７９】
図４（ａ）及び（ｂ）は、９ＡＡによるＣＯＳ７生細胞の染色結果を示す顕微鏡写真である。図４（ａ）は明視野観察画像であり、図４（ｂ）は蛍光観察画像である。その結果、９ＡＡによりＣＯＳ７生細胞の細胞膜が染色され緑色蛍光を発する様子が観察された。また、９ＡＡの蛍光は、数分間の観察中に緑色から黄色に変化した。これは、９ＡＡが多量体化した結果であると考えられた。また、ＰＣ１２細胞を用いた場合においても、ＣＯＳ７細胞と同様の結果が得られた。
【００８０】
続いて、ヒト子宮頸部癌細胞株であるＨｅＬａ生細胞をメシチル９ＡＡで染色し、蛍光顕微鏡で観察した。具体的には、まず、生細胞の培地を除去し、ＰＢＳを添加した。続いて、上記のＰＢＳ中に、ＤＭＳＯに溶解したメシチル９ＡＡを添加し、２分間静置した。また、同時に、Ｈｏｅｃｈｉｓｔ３３３４２により核を染色した。その後、ＰＢＳを除去し、新しいＰＢＳを添加して、蛍光顕微鏡で観察した。
【００８１】
図５（ａ）及び（ｂ）は、メシチル９ＡＡによるＨｅＬａ生細胞の染色結果を示す顕微鏡写真である。図５（ａ）は明視野観察画像であり、図５（ｂ）は蛍光観察画像である。その結果、メシチル９ＡＡによりＨｅＬａ生細胞の細胞膜が染色され、緑色蛍光を発する様子が観察された。メシチル９ＡＡにより細胞膜が染色されたことは、Ｈｏｅｃｈｉｓｔ３３３４２により、細胞の核が青色に染色されたことからも確認された。また、メシチル９ＡＡにより、ＨｅＬａ生細胞の細胞膜が２分以内に染色されたことが明らかとなった。
【００８２】
また、メシチル９ＡＡの蛍光は、数分間の観察中に緑色から他の色に変化することなく消失した。これは、メシチル９ＡＡは多量体化しなかったため蛍光波長が変化せず、また、試料中の酸素と反応して蛍光が消失した結果であると考えられた。
【産業上の利用可能性】
【００８３】
本発明により、９ＡＡ又はその誘導体の１０位の位置に置換基を導入した化合物を提供することができる。また、９ＡＡ又はその誘導体の１０位の位置に置換基を導入した化合物は、例えば生細胞の染色に用いることができる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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