(57)【要約】      （修正有）【課題】脂質代謝異常症等の治療に有用な新規ペルオキソーム増殖剤応答性受容体（ＰＰＡＲα）転写活性化剤の提供。【解決手段】式（１）で表される１Ｈ−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン誘導体。2019006680.tif 000030［Ｒ１はＨ、ハロゲン、アルキル、ハロゲン化アルキル、アルコキシ、無置換／置換のフェニル、無置換／置換のフェノキシ又は無置換／置換のベンジルオキシ；Ｒ２は直鎖／分岐状のアルキル基又は環状アルキル；Ｒ３は直鎖／分岐状のアルキル；Ｒ４はカルボキシ、エトキシカルボニル又は直鎖／分岐状のα位にアルキルを有するプロピオン酸基；ＸはＣ又はＮ］【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の一般式（１）で表される１Ｈ−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン誘導体、もしくはその塩またはそれらの溶媒和物もしくはそれらの水和物を有効成分として含むＰＰＡＲα転写活性化剤。
2019006680.tif 000028
［式中、Ｒ１は水素原子、ハロゲン原子、炭素数１から１０の直鎖状または分岐状アルキル基、炭素数１から１０の直鎖状または分岐状ハロゲン化アルキル基、炭素数１から１０の直鎖状または分岐状アルコキシ基、無置換または置換基を有するフェニル基、無置換または置換基を有するフェノキシ基、無置換または置換基を有するベンジルオキシ基、Ｒ２は炭素数１から１０の直鎖状または分岐状アルキル基または環状アルキル基、Ｒ３は炭素数１から１０の直鎖状または分岐状アルキル基、Ｒ４はカルボキシ基、エトキシカルボニル基、α位に炭素数１から１０の直鎖状または分岐状アルキル基を有するプロピオン酸基、Ｘは炭素原子または窒素原子を表す。］
【請求項２】
Ｒ４が４−カルボキシ基である請求項１に記載のＰＰＡＲα転写活性化剤。
【請求項３】
Ｒ１が水素原子、ハロゲン原子、メチル基、トリフルオロメチル基またはベンジルオキシ基のいずれかである請求項１または２に記載のＰＰＡＲα転写活性化剤。
【請求項４】
Ｒ２がメチル基、イソプロピル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、１−（エチル）プロピル基のいずれかである請求項１ないし３のいずれかに記載のＰＰＡＲα転写活性化剤。
【請求項５】
Ｒ３がメチル基、エチル基、シクロプロピル基またはイソプロピル基のいずれかである請求項１ないし４のいずれかに記載のＰＰＡＲα転写活性化剤。
【請求項６】
一般式（１）で表される化合物が、１−（４−フルオロフェニル）−３−イソプロピル−６−メチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−４−カルボン酸、６−シクロプロピル−１−（４−フルオロフェニル）−３−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−４−カルボン酸、１−（４−シクロフェニル）−３−イソプロピル−６−メチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−４−カルボン酸、１−（３−クロロフェニル）−３−イソプロピル−６−メチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−４−カルボン酸、１−（４−ブロモフェニル）−３−イソプロピル−６−メチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−４−カルボン酸、１−（４−ヨードフェニル）−３−イソプロピル−６−メチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−４−カルボン酸、３−イソプロピル−６−メチル−１−（４−メチルフェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−４−カルボン酸、１−（４−クロロフェニル）−６−エチル−３−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−４−カルボン酸、１−（４−クロロフェニル）−６−シクロプロピル−３−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−４−カルボン酸、１−（３−クロロフェニル）−６−エチル−３−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−４−カルボン酸、１−（３−クロロフェニル）−６−シクロプロピル−３−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−４−カルボン酸、１−（４−ブロモフェニル）−６−エチル−３−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−４−カルボン酸、１−（４−ブロモフェニル）−６−シクロプロピル−３−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−４−カルボン酸、６−エチル−１−（４−ヨードフェニル）−３−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−４−カルボン酸からなるグループより選択されるものである、請求項１に記載のＰＰＡＲα転写活性化剤。
【請求項７】
請求項１ないし６のいずれかに記載のＰＰＡＲα転写活性化剤を含有する医薬。
【請求項８】
脂質異常症、糖尿病、肥満症、高血圧症、動脈硬化症、肝疾患、狭心症、心筋梗塞、炎症性疾患、がんまたは皮膚疾患である請求項７に記載の医薬。
【請求項９】
下記の一般式（１）で表される１Ｈ−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン誘導体、もしくはその塩またはそれらの溶媒和物もしくはそれらの水和物。
【化１】
2019006680.tif 000029
［式中、Ｒ１は水素原子、ハロゲン原子、炭素数１から１０の直鎖状または分岐状アルキル基、炭素数１から１０の直鎖状または分岐状ハロゲン化アルキル基、炭素数１から１０の直鎖状または分岐状アルコキシ基、無置換または置換基を有するフェニル基、無置換または置換基を有するフェノキシ基、無置換または置換基を有するベンジルオキシ基、Ｒ２は炭素数１から１０の直鎖状または分岐状アルキル基または環状アルキル基、Ｒ３は炭素数１から１０の直鎖状または分岐状アルキル基、Ｒ４はカルボキシ基、エトキシカルボニル基、α位に炭素数１から１０の直鎖状または分岐状アルキル基を有するプロピオン酸基、Ｘは炭素原子または窒素原子を表す。ただし、Ｘが炭素、Ｒ４が４−カルボキシ基、Ｒ１が４−フッ素、Ｒ２がイソプロピル基およびＲ３がメチル基もしくはシクロプロピル基、Ｘが炭素、Ｒ４が４−カルボキシ基、Ｒ１が４−フッ素、Ｒ２がシクロプロピル基およびＲ３がイソプロピル基もしくはシクロプロピル基、Ｘが炭素、Ｒ４が４−カルボキシ基、Ｒ１が４−フッ素、Ｒ２がメチル基およびＲ３がシクロプロピル基、ならびに、Ｘが炭素、Ｒ４が４−カルボキシ基、Ｒ１が水素、Ｒ２およびＲ３がメチル基である場合を除く。］
【請求項１０】
Ｒ４が４−カルボキシ基である請求項９に記載の１Ｈ−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン誘導体、もしくはその塩またはそれらの溶媒和物もしくはそれらの水和物。
【請求項１１】
Ｒ１が水素原子、ハロゲン原子、メチル基、トリフルオロメチル基またはベンジルオキシ基のいずれかである請求項９または１０に記載の１Ｈ−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン誘導体、もしくはその塩またはそれらの溶媒和物もしくはそれらの水和物。
【請求項１２】
Ｒ２がメチル基、イソプロピル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、１−（エチル）プロピル基のいずれかである請求項９ないし１１のいずれかに記載の１Ｈ−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン誘導体、もしくはその塩またはそれらの溶媒和物もしくはそれらの水和物。
【請求項１３】
Ｒ３がメチル基、エチル基、シクロプロピル基またはイソプロピル基のいずれかである請求項９ないし１２のいずれかに記載の１Ｈ−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン誘導体、もしくはその塩またはそれらの溶媒和物もしくはそれらの水和物。
【請求項１４】
一般式（１）で表される化合物が、１−（４−シクロフェニル）−３−イソプロピル−６−メチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−４−カルボン酸、１−（３−クロロフェニル）−３−イソプロピル−６−メチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−４−カルボン酸、１−（４−ブロモフェニル）−３−イソプロピル−６−メチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−４−カルボン酸、１−（４−ヨードフェニル）−３−イソプロピル−６−メチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−４−カルボン酸、３−イソプロピル−６−メチル−１−（４−メチルフェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−４−カルボン酸、１−（４−クロロフェニル）−６−エチル−３−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−４−カルボン酸、１−（４−クロロフェニル）−６−シクロプロピル−３−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−４−カルボン酸、１−（３−クロロフェニル）−６−エチル−３−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−４−カルボン酸、１−（３−クロロフェニル）−６−シクロプロピル−３−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−４−カルボン酸、１−（４−ブロモフェニル）−６−エチル−３−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−４−カルボン酸、１−（４−ブロモフェニル）−６−シクロプロピル−３−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−４−カルボン酸、６−エチル−１−（４−ヨードフェニル）−３−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−４−カルボン酸からなるグループより選択されるものである、請求項９に記載の１Ｈ−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン誘導体、もしくはその塩またはそれらの溶媒和物もしくはそれらの水和物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ペルオキシソーム増殖剤応答性受容体（ＰＰＡＲα）を選択的に活性化する化合物を含有する医薬、疾患の治療および／または予防方法、並びに、ＰＰＡＲαを選択的に活性化する新規化合物に関する。
【背景技術】
【０００２】
脂質異常症患者においては、低密度リポタンパク質コレステロール（LDL-C）およびトリグリセリド（TG）のレベルが上昇し、高密度リポタンパク質コレステロール（HDL-C）が低下するといった特徴がみられる。そして、このような高LDL-C、高TG、低HDL-C状態は、メタボリックシンドロームや糖尿病の患者においても多く、さらには、心疾患や脳血管障害などの重篤な疾患の危険因子とされており、その改善が重要な課題とされている。
【０００３】
ペルオキシソーム増殖剤応答性受容体（Peroxisome proliferator-activated receptor：ＰＰＡＲ、以下ＰＰＡＲとする）は、核内受容体スーパーファミリーに属するリガンド依存性の転写因子であり、標的遺伝子の転写をリガンド依存的に誘導する。すなわち、リガンドがＰＰＡＲに結合すると、ＰＰＡＲは標的遺伝子のプロモーター領域に存在するＰＰＡＲ応答配列に結合し、標的遺伝子の転写が誘導される。
細胞内において、ＰＰＡＲはレチノイドＸレセプター（ＲＸＲ）とヘテロ二量体を形成する。このヘテロ二量体がＰＰＡＲ応答配列として知られるＤＮＡ配列に結合して、各種遺伝子の転写を活性化する。また、ＰＰＡＲ／ＲＸＲヘテロ二量体は、ＤＲＩＰ−２０５やＳＲＣ−１などの活性化補助因子を取り込んで、標的遺伝子にコードされるｍＲＮＡの発現レベルを調節する。これまでに組織分布を異にする３種類のサブタイプ（α型、β／δ型、γ型）がヒトをはじめとする様々な動物種で同定されている。
これらサブタイプうち、ＰＰＡＲαは、脂肪酸の異化能の高い肝臓、腎臓、心臓および筋肉等に分布しており、特に肝臓において高い発現が認められる。ＰＰＡＲαによって標的遺伝子の転写が誘導されると、血中中性脂肪の低下、ＨＤＬコレステロールの増加、体重の減少、血管新生の促進等が誘起されることから（非特許文献１）、脂質異常症の治療薬の開発、さらには、ＰＰＡＲαとの関連性が報告されている炎症性疾患（非特許文献２）、がん（非特許文献３）、皮膚疾患（皮膚の炎症やバリア機能低下など）（非特許文献４）などの治療薬の開発を目的として、ＰＰＡＲαを活性化する化合物の探索が精力的に行われている。
【０００４】
これまでに脂質異常症の治療薬として汎用されているフィブラート系薬剤は、ＰＰＡＲαを活性化し、脂肪酸の代謝や細胞内輸送を制御する遺伝子産物（例えばアシルCoＡ合成酵素、脂肪酸結合タンパク質やリポ蛋白リパーゼ）およびコレステロールや中性脂質の代謝に関連するアポリポ蛋白質遺伝子産物の発現を正または負に制御している。その結果、フィブラート系薬剤の投与により、体内のTGおよび超低密度リポタンパク質（VLDL）の合成が低下し、また、血管内皮のリポタンパクリパーゼ（LPL）活性が上昇して、脂肪の分解が促進される。
フィブラート系薬剤として、フェノフィブラート（リパンチル（登録商標））、ベザフィブラート（ベザトールSR（登録商標）、ベザリップ（登録商標））、ゲムフィブロジル（ロピッド（登録商標））等の薬剤（非特許文献５）が知られているが、これらフィブラート系薬剤に関しては、副作用、特に肝機能障害を伴うことがあるため（非特許文献６）、その使用には十分に注意が必要とされている。
しかしながら、ＰＰＡＲαアゴニストが脂質異常症に伴う様々な現象の改善に重要な役割を果たしていることは事実であり、従来のフィブラート系薬剤のように広範な作用を示すものではなく、よりＰＰＡＲα選択的に作用する治療薬の開発が重要となっている。
近年、ＰＰＡＲαに選択的にその活性化を行う化合物が報告されており、その治療薬としての効果に期待が寄せられている（特許文献１〜４）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】WO2006/033891
【特許文献２】WO2006/049232
【特許文献３】WO2008/006043
【特許文献４】WO2009/047240
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Fruchartら, Cardiovascular Diabetology, 12:82 2013
【非特許文献２】Zandbergenら, Biochimica et Biophysica Act 1771:972-982 2007
【非特許文献３】Petersら, Nature Reviews Cancer 12:181-195 2012
【非特許文献４】Michalikら, Biochimica et Biophysica Act 1771:991-998 2007
【非特許文献５】Barbierら, Trends in Endocrinology and Metabolism, 15:324-330 2004
【非特許文献６】伊藤ら、ＴＤＭ研究  23:32-39 2006
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
上記事情に鑑み、本発明者らは、脂質代謝異常症などの治療薬の開発を目的として、新たなＰＰＡＲαの転写活性化剤（ＰＰＡＲαアゴニストを含む剤）の開発を解決課題とした。
すなわち、本発明は、ＰＰＡＲαを選択的に活性化する転写活性化剤、該ＰＰＡＲα転写活性化剤を含有する医薬、脂質異常症などの疾患等の治療および／または予防方法の提供を目的とする。
さらに、本発明は、ＰＰＡＲαを選択的に活性化する新規化合物（新規な選択的ＰＰＡＲαアゴニスト）の提供を目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、上記課題を解決すべく、鋭意研究を行ったところ、ＰＰＡＲαに選択的なアゴニスト活性を有する、１Ｈ−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン誘導体を見出し、本発明を完成させた。
すなわち、本発明は、下記の一般式（１）で表される１Ｈ−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン誘導体、もしくはその塩またはそれらの溶媒和物もしくはそれらの水和物である。
【化１】
2019006680.tif 000002
［式中、Ｒ１は水素原子、ハロゲン原子、炭素数１から１０の直鎖状または分岐状アルキル基、炭素数１から１０の直鎖状または分岐状ハロゲン化アルキル基、炭素数１から１０の直鎖状または分岐状アルコキシ基、無置換または置換基を有するフェニル基、無置換または置換基を有するフェノキシ基、無置換または置換基を有するベンジルオキシ基、Ｒ２は炭素数１から１０の直鎖状または分岐状アルキル基または環状アルキル基、Ｒ３は炭素数１から１０の直鎖状または分岐状アルキル基、Ｒ４はカルボキシ基、エトキシカルボニル基、α位に炭素数１から１０の直鎖状または分岐状アルキル基を有するプロピオン酸基、Ｘは炭素原子または窒素原子を表す。ただし、Ｘが炭素、Ｒ４が４−カルボキシ基、Ｒ１が４−フッ素、Ｒ２がイソプロピル基およびＲ３がメチル基もしくはシクロプロピル基、Ｘが炭素、Ｒ４が４−カルボキシ基、Ｒ１が４−フッ素、Ｒ２がシクロプロピル基およびＲ３がイソプロピル基もしくはシクロプロピル基、Ｘが炭素、Ｒ４が４−カルボキシ基、Ｒ１が４−フッ素、Ｒ２がメチル基およびＲ３がシクロプロピル基、ならびに、Ｘが炭素、Ｒ４が４−カルボキシ基、Ｒ１が水素、Ｒ２およびＲ３がメチル基である場合を除く。］
【０００９】
さらに、本発明は、下記の一般式（１）で表される１Ｈ−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン誘導体、もしくはその塩またはそれらの溶媒和物もしくはそれらの水和物を有効成分として含むＰＰＡＲα転写活性化剤である。
【化２】
2019006680.tif 000003
［式中、Ｒ１は水素原子、ハロゲン原子、炭素数１から１０の直鎖状または分岐状アルキル基、炭素数１から１０の直鎖状または分岐状ハロゲン化アルキル基、炭素数１から１０の直鎖状または分岐状アルコキシ基、無置換または置換基を有するフェニル基、無置換または置換基を有するフェノキシ基、無置換または置換基を有するベンジルオキシ基、Ｒ２は炭素数１から１０の直鎖状または分岐状アルキル基または環状アルキル基、Ｒ３は炭素数１から１０の直鎖状または分岐状アルキル基、Ｒ４はカルボキシ基、エトキシカルボニル基、α位に炭素数１から１０の直鎖状または分岐状アルキル基を有するプロピオン酸基、Ｘは炭素原子または窒素原子を表す］
【００１０】
また、本発明は、上記一般式（１）で表される１Ｈ−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン誘導体もしくはその塩またはそれらの溶媒和物もしくは水和物を有効成分として含む医薬（治療または予防剤）もしくは医薬組成物、あるいは、上記ＰＰＡＲα転写活性化剤を含む医薬（治療または予防剤）もしくは医薬組成物である。
【発明の効果】
【００１１】
本発明に係る１Ｈ−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン誘導体は、ＰＰＡＲαを選択的に活性化することができる。従って、本発明に係る１Ｈ−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン誘導体を含有するＰＰＡＲα転写活性化剤または医薬は、例えば、脂質異常症、糖尿病、肥満症、高血圧症、動脈硬化症、肝疾患（アルコール性または非アルコール性脂肪性肝炎などの脂肪肝疾患など）、狭心症、心筋梗塞などメタボリック症候群と関連する疾患、炎症性疾患、がん、皮膚疾患（皮膚の炎症やバリア機能低下など）などの予防または治療のために使用することができる。
【００１２】
さらに、本発明により、ＰＰＡＲαを選択的に活性化する、新規１Ｈ−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン誘導体が提供される。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】本発明にかかる化合物（実施例１の化合物）のＰＰＡＲ選択性について検討した結果である。
【図２】本発明にかかる化合物（実施例１９および実施例２０の化合物）が、ＰＰＡＲα標的遺伝子（PDK4）のmRNA発現量に与える影響について調べた結果である。
【図３】脂質異常症モデルラットを用いて、本発明にかかる化合物（実施例２０の化合物）が血清ＴＧ（トリグリセライド）値に与える影響について調べた結果である。  Normalは、水道法水質基準に適合した水を自由摂取させ、陰性対照として0.5 w/v%メチルセルロース（MC）溶液を投与したものである。その他の群はいずれも10 w/v%フルクトース水を与えた脂質異常症モデルであり、Controrlは陰性対照として0.5 w/v%MC溶液を、Fenofibrateは陽性対照としてフェノフィブラートを0.5 w/v%MC溶液に懸濁した懸濁液を投与した結果を示す。また、Pre-treatmentは、化合物で処理する前の測定値で、Post-treatmentは、化合物で処理した後の測定値である。
【図４】脂質異常症モデルラットを用いて、本発明にかかる化合物（実施例２０の化合物）が血液パラメーター（HDL-C、LDL-C、AST、ALT、UNおよびCK）に与える影響について調べた結果である。NormalとControlは図３の説明に同じ。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
本発明の第１の実施形態は、上記一般式（１）で表される１Ｈ−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン誘導体、もしくはその塩またはそれらの溶媒和物もしくはそれらの水和物である。
【００１５】
さらに、本発明の第２の実施形態は、上記一般式（１）で表される１Ｈ−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン誘導体、もしくはその塩またはそれらの溶媒和物もしくはそれらの水和物を有効成分として含むＰＰＡＲα転写活性化剤、または、上記一般式（１）で表される１Ｈ−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン誘導体もしくはその塩またはそれらの溶媒和物もしくは水和物を有効成分として含む医薬（治療または予防剤）もしくは医薬組成物、あるいは、当該ＰＰＡＲα転写活性化剤を含む医薬（治療または予防剤）もしくは医薬組成物である。
【００１６】
一般式（１）において、
Ｒ１は水素原子、ハロゲン原子、炭素数１から１０の直鎖状または分岐状アルキル基、炭素数１から１０の直鎖状または分岐状ハロゲン化アルキル基、炭素数１から１０の直鎖状または分岐状アルコキシ基、無置換または置換基を有するフェニル基、無置換または置換基を有するフェノキシ基、無置換または置換基を有するベンジルオキシ基であり、好ましくは、塩素原子、フッ素原子または臭素原子である。Ｒ１の位置は、好ましくは、４位、３位または２位、より好ましくは、４位または３位である。
Ｒ２は炭素数１から１０の直鎖状または分岐状アルキル基または環状アルキル基であり、好ましくは、メチル基、イソプロピル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、１−（エチル）プロピル基、より好ましくは、イソプロピル基、シクロプロピル基である。
Ｒ３は炭素数１から１０の直鎖状または分岐状アルキル基であり、好ましくは、メチル基、エチル基、シクロプロピル基またはイソプロピル基である。
Ｒ４はカルボキシ基、エトキシカルボニル基、α位に置換基を有するプロピオン酸基であり、好ましくは、カルボキシ基であり、特に好ましくは４−カルボキシ基である。
Ｘは炭素原子または窒素原子であり、好ましくは炭素原子である。
【００１７】
ただし、第１の実施形態から、Ｘが炭素、Ｒ４が４−カルボキシ基、Ｒ１が４−フッ素、Ｒ２がイソプロピル基およびＲ３がメチル基もしくはシクロプロピル基である化合物、Ｘが炭素、Ｒ４が４−カルボキシ基、Ｒ１が４−フッ素、Ｒ２がシクロプロピル基およびＲ３がイソプロピル基もしくはシクロプロピル基である化合物、Ｘが炭素、Ｒ４が４−カルボキシ基、Ｒ１が４−フッ素、Ｒ２がメチル基およびＲ３がシクロプロピル基である化合物、ならびに、Ｘが炭素、Ｒ４が４−カルボキシ基、Ｒ１が水素、Ｒ２およびＲ３がメチル基である化合物は除く。
【００１８】
一般式（１）で表される本発明の化合物の塩としては、薬学上許容される塩であればよく、例えば、酸性基が存在する場合には、リチウム、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム等のアルカリ金属およびアルカリ土類金属塩；アンモニア、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、ジシクロヘキシルアミン、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン、Ｎ，Ｎ−ビス（ヒドロキシエチル）ピペラジン、２−アミノ−２−メチル−１−プロパノール、エタノールアミン、Ｎ−メチルグルカミン、Ｌ−グルカミン等のアミンの塩；またはリジン、δ−ヒドロキシリジン、アルギニンなどの塩基性アミノ酸との塩などを挙げることができる。塩基性基が存在する場合には、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸等の鉱酸の塩；メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、パラトルエンスルホン酸、酢酸、プロピオン酸塩、酒石酸、フマル酸、マレイン酸、リンゴ酸、シュウ酸、コハク酸、クエン酸、安息香酸、マンデル酸、ケイ皮酸、乳酸、グリコール酸、グルクロン酸、アスコルビン酸、ニコチン酸、サリチル酸等の有機酸との塩；またはアスパラギン酸、グルタミン酸などの酸性アミノ酸との塩などを挙げることができる。
【００１９】
また、一般式（１）で表される１Ｈ−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン誘導体には、特に断らない限り、その互変異性体、鏡像異性体等の立体異性体も含まれる。すなわち、一般式（１）で表される１Ｈ−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン誘導体中に、１個または２個以上の不斉炭素が含まれる場合、不斉炭素の立体化学については、それぞれ独立して（Ｒ）体又は（Ｓ）体のいずれかをとることができ、該誘導体の鏡像異性体又はジアステレオ異性体などの立体異性体として存在することがある。
本発明のＰＰＡＲα転写活性化剤、医薬または医薬組成物の有効成分としては、純粋な形態の任意の立体異性体、立体異性体の任意の混合物、ラセミ体などを用いることが可能である。
【００２０】
一般式（１）で表される１Ｈ−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン誘導体としては、限定はしないが、例えば、次のものが挙げられる。
１−（４−フルオロフェニル）−３−イソプロピル−６−メチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−４−カルボン酸、
６−シクロプロピル−１−（４−フルオロフェニル）−３−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−４−カルボン酸、
１−（４−シクロフェニル）−３−イソプロピル−６−メチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−４−カルボン酸、
１−（３−クロロフェニル）−３−イソプロピル−６−メチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−４−カルボン酸、
１−（４−ブロモフェニル）−３−イソプロピル−６−メチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−４−カルボン酸、
１−（４−ヨードフェニル）−３−イソプロピル−６−メチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−４−カルボン酸、
３−イソプロピル−６−メチル−１−（４−メチルフェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−４−カルボン酸、
１−（４−クロロフェニル）−６−エチル−３−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−４−カルボン酸、
１−（４−クロロフェニル）−６−シクロプロピル−３−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−４−カルボン酸、
１−（３−クロロフェニル）−６−エチル−３−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−４−カルボン酸、
１−（３−クロロフェニル）−６−シクロプロピル−３−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−４−カルボン酸、
１−（４−ブロモフェニル）−６−エチル−３−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−４−カルボン酸、
１−（４−ブロモフェニル）−６−シクロプロピル−３−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−４−カルボン酸、
６−エチル−１−（４−ヨードフェニル）−３−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−４−カルボン酸、
【００２１】
本発明の実施形態には、一般式（１）で示される新規１Ｈ−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン誘導体を含むＰＰＡＲαの転写活性化剤（ＰＰＡＲα標的遺伝子の転写を活性化（または誘導）する薬剤）が含まれる。本発明にかかるＰＰＡＲαの転写活性化剤は、ＰＰＡＲα転写活性の低下によって惹起される疾患の治療および／または予防のために使用することができる。
【００２２】
また、一般式（１）で表される１Ｈ−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン誘導体もしくはその塩またはそれらの溶媒和物もしくは水和物を有効成分として含む医薬（治療または予防剤）もしくは医薬組成物、あるいは、上記ＰＰＡＲα転写活性化剤を含む医薬（治療または予防剤）もしくは医薬組成物も本発明の実施形態である。本発明にかかる医薬または医薬組成物は、例えば、脂質異常症、糖尿病、肥満症、高血圧症、動脈硬化症、肝疾患（アルコール性または非アルコール性脂肪性肝炎などの脂肪肝疾患など）、狭心症、心筋梗塞などメタボリック症候群と関連する疾患、炎症性疾患、がん、皮膚疾患（皮膚の炎症やバリア機能低下など）などの予防および／または治療のために使用することができる。
【００２３】
本発明にかかるＰＰＡＲαの転写活性化剤および医薬は、有効成分である一般式（１）で表される１Ｈ−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン誘導体もしくはその塩またはそれらの溶媒和物もしくは水和物自体を投与してもよいが、一般的には、有効成分であるこれらの物質と１または２以上の製剤用添加物とを含む医薬組成物の形態で投与することが望ましい。
また、本発明にかかるＰＰＡＲαの転写活性化剤または医薬の有効成分として、一般式（１）で表される化合物のうち２種類以上を組み合わせて用いてもよい。上記医薬組成物には、メタボリック症候群と関連する疾患等の治療に有効な既知の成分を配合してもよい。
【００２４】
本発明にかかる医薬または医薬組成物の種類は特に限定されず、剤型としては、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、シロップ剤、懸濁剤、座剤、軟膏、クリーム剤、ゲル剤、貼付剤、吸入剤、注射剤等が挙げられる。これらの製剤は常法に従って調製される。なお、液体製剤にあっては、用時、水または他の適当な溶媒に溶解または懸濁するものであってもよい。また、錠剤、顆粒剤は周知の方法でコーティングしてもよい。注射剤の場合には、本発明の化合物を水に溶解させて調製されるが、必要に応じて生理食塩水あるいはブドウ糖溶液に溶解させてもよく、また、緩衝剤や保存剤を添加してもよい。
【００２５】
経口投与用または非経口投与用の製剤は、任意の製剤形態で提供される。製剤形態としては、例えば、顆粒剤、細粒剤、散剤、硬カプセル剤、軟カプセル剤、シロップ剤、乳剤、懸濁剤または液剤等の形態の経口投与用医薬または医薬組成物、静脈内投与用、筋肉内投与用、若しくは皮下投与用などの注射剤、点滴剤、経皮吸収剤、経粘膜吸収剤、点鼻剤、吸入剤、坐剤などの形態の非経口投与用医薬または医薬組成物として調製することができる。注射剤や点滴剤などは、凍結乾燥形態などの粉末状の剤形として調製し、用時に生理食塩水などの適宜の水性媒体に溶解して用いることもできる。
【００２６】
本発明にかかる医薬または医薬組成物の製造に用いられる製剤用添加物の種類、有効成分に対する製剤用添加物の割合、あるいは、医薬または医薬組成物の製造方法は、その形態に応じて当業者が適宜選択することが可能である。製剤用添加物としては無機または有機物質、あるいは、固体または液体の物質を用いることができ、一般的には、有効成分重量に対して１重量％から９０重量％の間で配合することができる。具体的には、製剤用添加物の例として乳糖、ブドウ糖、マンニット、デキストリン、シクロデキストリン、デンプン、蔗糖、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム、合成ケイ酸アルミニウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルデンプン、カルボキシメチルセルロースカルシウム、イオン交換樹脂、メチルセルロース、ゼラチン、アラビアゴム、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、軽質無水ケイ酸、ステアリン酸マグネシウム、タルク、トラガント、ベントナイト、ビーガム、酸化チタン、ソルビタン脂肪酸エステル、ラウリル硫酸ナトリウム、グリセリン、脂肪酸グリセリンエステル、精製ラノリン、グリセロゼラチン、ポリソルベート、マクロゴール、植物油、ロウ、流動パラフィン、白色ワセリン、フルオロカーボン、非イオン性界面活性剤、プロピレングルコール、水等が挙げられる。
【００２７】
経口投与用の固形製剤を製造するには、有効成分と賦形剤成分例えば乳糖、澱粉、結晶セルロース、乳酸カルシウム、無水ケイ酸などと混合して散剤とするか、さらに必要に応じて白糖、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリビニルピロリドンなどの結合剤、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウムなどの崩壊剤などを加えて湿式又は乾式造粒して顆粒剤とする。錠剤を製造するには、これらの散剤及び顆粒剤をそのまま、あるいは、ステアリン酸マグネシウム、タルクなどの滑沢剤を加えて打錠すればよい。これらの顆粒または錠剤はヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、メタクリル酸−メタクリル酸メチルポリマーなどの腸溶剤基剤で被覆して腸溶剤製剤、あるいはエチルセルロース、カルナウバロウ、硬化油などで被覆して持続性製剤とすることもできる。また、カプセル剤を製造するには、散剤又は顆粒剤を硬カプセルに充填するか、有効成分をそのまま、あるいは、グリセリン、ポリエチレングリコール、ゴマ油、オリーブ油などに溶解した後ゼラチン膜で被覆し軟カプセルとすることができる。
【００２８】
注射剤を製造するには、有効成分を必要に応じて塩酸、水酸化ナトリウム、乳糖、乳酸、ナトリウム、リン酸一水素ナトリウム、リン酸二水素ナトリウムなどのｐＨ調整剤、塩化ナトリウム、ブドウ糖などの等張化剤と共に注射用蒸留水に溶解し、無菌濾過してアンプルに充填するか、更にマンニトール、デキストリン、シクロデキストリン、ゼラチンなどを加えて真空凍結乾燥し、用事溶解型の注射剤としてもよい。また、有効成分にレチシン、ポリソルベート８０、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油などを加えて水中で乳化せしめ注射剤用乳剤とすることもできる。
【００２９】
直腸投与剤を製造するには、有効成分をカカオ脂、脂肪酸のトリ、ジおよびモノグリセリド、ポリエチレングリコールなどの座剤用基材と共に加湿して溶解し型に流し込んで冷却するか、有効成分をポリエチレングリコール、大豆油などに溶解した後、ゼラチン膜で被覆すればよい。
【００３０】
本発明にかかる医薬または医薬組成物の投与量および投与回数は特に限定されず、治療対象疾患の悪化・進展の防止および／または治療の目的、疾患の種類、患者の体重や年齢などの条件に応じて、医師の判断により適宜選択することが可能である。
一般的には、経口投与における成人一日あたりの投与量は０．０１〜１０００ｍｇ（有効成分重量）程度であり、一日１回または数回に分けて、あるいは数日ごとに投与することができる。注射剤として用いる場合には、成人に対して一日量０．００１〜１００ｍｇ（有効成分重量）を連続投与または間欠投与することが望ましい。
【００３１】
本発明にかかる医薬または医薬組成物は、植込錠およびマイクロカプセルに封入された送達システムなどの徐放性製剤として、体内から即時に除去されることを防ぎ得る担体を用いて調製することができる。そのような担体として、エチレンビニル酢酸塩、ポリ酸無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、およびポリ乳酸などの、生物分解性、生物適合性ポリマーを用いることができる。このような材料は、当業者によって容易に調製することができる。また、リポソームの懸濁液も薬学上許容される担体として使用することができる。リポソームは、限定はしないが、ホスファチジルコリン、コレステロールおよびＰＥＧ誘導ホスファチジルエタノール（ＰＥＧ−ＰＥ）を含む脂質組成物として、使用に適するサイズになるように、適当なポアサイズのフィルターを通して調製され、逆相蒸発法によって精製することができる。
【００３２】
本発明にかかる医薬または医薬組成物は、投与方法等の説明書と共にキットの形態で提供してもよい。キット中に含まれる薬剤は、医薬または医薬組成物の構成成分の活性を長期間有効に持続し、容器内側に吸着することなく、また、構成成分を変質することのない材質で製造された容器により供給される。例えば、封着されたガラスアンプルは、窒素ガスのような中性で不反応性を示すガスの存在下で封入されたバッファーなどを含んでもよい。
また、キットには使用説明書が添付されてもよい。本キットの使用説明は、紙などに印刷されたものであっても、ＣＤ−ＲＯＭ、ＤＶＤ−ＲＯＭなどの電磁的に読み取り可能な媒体に保存されて使用者に供給されてもよい。
【００３３】
さらに、本発明の他の実施形態は、ＰＰＡＲα転写活性剤またはこれを含有する医薬等を患者等に投与して、例えば、脂質異常症、糖尿病、肥満症、高血圧症、動脈硬化症、肝疾患、狭心症、心筋梗塞などメタボリック症候群と関連する疾患、炎症性疾患、がん、皮膚疾患（皮膚の炎症やバリア機能低下など）などを予防または治療する方法である。
ここで「治療」とは、疾患等に罹患した哺乳動物において、その病態の進行および悪化を阻止または緩和することを意味し、これによって該疾患の進行および悪化を阻止または緩和することを目的とする処置のことである。
また、「予防」とは、疾患等に罹患するおそれがある哺乳動物について、該疾患の発症または罹患を予め阻止することを意味し、これによって該疾患の諸症状等の発症を予め阻止することを目的とする処置のことである。
治療の対象となる「哺乳動物」は、哺乳類に分類される任意の動物を意味し、特に限定はしないが、例えば、ヒトの他、イヌ、ネコ、ウサギなどのペット動物、ウシ、ブタ、ヒツジ、ウマなどの家畜動物などのことである。特に好ましい「哺乳動物」は、ヒトである。
【００３４】
一般式（１）で表される化合物のうち、Ｒ１が水素原子、ハロゲン原子、炭素数１から１０の直鎖状または分岐状ハロゲン化アルキル基、炭素数１から１０の直鎖状または分岐状アルキル基、炭素数１から１０の直鎖状または分岐状アルコキシ基、無置換または置換基を有するフェニル基、無置換または置換基を有するフェノキシ基、無置換または置換基を有するベンジルオキシ基、Ｒ２が炭素数１から１０の直鎖状または分岐状アルキル基または環状アルキル基、Ｒ３が炭素数１から１０の直鎖状または分岐状アルキル基、Ｒ４が４位カルボキシ基、４位エトキシカルボニル基、Ｘは炭素原子または窒素原子で表される１Ｈ−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン誘導体化合物（１ａ）は、以下の方法により製造することができる(スキーム１)。
【化３】
2019006680.tif 000004
【００３５】
すなわち、一般式（１ａ）：
【化４】
2019006680.tif 000005
［式中、Ｒ１は水素原子、ハロゲン原子、炭素数１から１０の直鎖状または分岐状アルキル基、炭素数１から１０の直鎖状または分岐状ハロゲン化アルキル基、炭素数１から１０の直鎖状または分岐状アルコキシ基、無置換または置換基を有するフェニル基、無置換または置換基を有するフェノキシ基、無置換または置換基を有するベンジルオキシ基、Ｒ２は炭素数１から１０の直鎖状または分岐状アルキル基または環状アルキル基、Ｒ３は炭素数１から１０の直鎖状または分岐状アルキル基、Ｘは炭素原子または窒素原子を表す］
で表される化合物は、以下の：
【化５】
2019006680.tif 000006
［式中、Ｒ１およびＸは前記と同義である。］で表される化合物（Ａ）と、以下の：
【化６】
2019006680.tif 000007
［式中、Ｒ２は前記と同義である。］で表される化合物（Ｂ）を反応させ（第一工程）、得られた以下の：
【化７】
2019006680.tif 000008
［式中、Ｒ１、Ｒ２およびＸは前記と同義である。］で表される化合物（Ｃ）と、以下の：
【化８】
2019006680.tif 000009
［式中、Ｒ３は前記と同義である。］で表される化合物（Ｄ）を反応させ（第二工程）、得られた以下の：
【化９】
2019006680.tif 000010
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＸは前記と同義である。］で表される化合物（Ｅ）を加水分解する（第三工程）ことにより製造することができる。
【００３６】
第一工程の反応は、塩酸や酢酸、トルエン、キシレンおよび塩酸とエタノール、塩酸とプロパノールとの混合溶媒中で実施することができる。反応温度としては、１００℃から２００℃にて、好適には溶媒の沸騰温度にて実施する事ができる。反応時間は通常１〜４８時間、好ましくは１２〜２４時間である。
【００３７】
第二工程の反応は塩酸や酢酸、トルエン、キシレンおよび塩酸とエタノール、塩酸とプロパノールとの混合溶媒中で実施することができる。反応温度としては１００℃から２００℃にて、好適には溶媒の沸騰温度にて実施する事ができる。反応時間は通常１〜４８時間、好ましくは１２〜２４時間である。
【００３８】
第三工程の反応は、アルカリ性条件下で実施する事ができる。アルカリ性条件としては水酸化リチウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウムとエタノールまたはプロパノールとの混合溶媒中で実施することができる。反応温度としては０℃から１５０℃にて、好適には室温から溶媒の還流温度にて実施する事ができる。反応時間は通常１〜４８時間、好ましくは４〜２４時間である。
【００３９】
また、本発明の一般式（１）で表される化合物のうち、Ｒ１が水素原子、ハロゲン原子、炭素数１から１０の直鎖状または分岐状アルキル基、炭素数１から１０の直鎖状または分岐状ハロゲン化アルキル基、炭素数１から１０の直鎖状または分岐状アルコキシ基、無置換または置換基を有するフェニル基、無置換または置換基を有するフェノキシ基、無置換または置換基を有するベンジルオキシ基、Ｒ２が炭素数１から１０の直鎖状または分岐状アルキル基または環状アルキル基、Ｒ３が炭素数１から１０の直鎖状または分岐状アルキル基、Ｒ５がα位に炭素数１から１０の直鎖状または分岐状アルキル基を有するプロピオン酸基、Ｘが炭素で表される１Ｈ−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン誘導体化合物（１ｂ）は、以下の方法により製造することができる(スキーム２)。
【化１０】
2019006680.tif 000011
【００４０】
すなわち、下記一般式（１ｂ）：
【化１１】
2019006680.tif 000012
［式中、Ｒ１が水素原子、ハロゲン原子、炭素数１から１０の直鎖状または分岐状アルキル基、炭素数１から１０の直鎖状または分岐状ハロゲン化アルキル基、炭素数１から１０の直鎖状または分岐状アルコキシ基、無置換または置換基を有するフェニル基、無置換または置換基を有するフェノキシ基、無置換または置換基を有するベンジルオキシ基、Ｒ２が炭素数１から１０の直鎖状または分岐状アルキル基または環状アルキル基、Ｒ３が炭素数１から１０の直鎖状または分岐状アルキル基、Ｒ５がα位に炭素数１から１０の直鎖状または分岐状アルキル基を有するプロピオン酸基を表す］
で表される化合物は、以下の：
【化１２】
2019006680.tif 000013
［式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は前記と同義である。］で表される化合物（１ａ’）を還元して（第四工程）得られる以下の：
【化１３】
2019006680.tif 000014
［式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は前記と同義である。］で表される化合物（Ｆ）を酸化させ（第五工程）、得られた以下の：
【化１４】
2019006680.tif 000015
［式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は前記と同義である。］で表される化合物（Ｇ）と、以下の：
【化１５】
2019006680.tif 000016
［式中、Ｒ５は前記と同義である。］で表される化合物（Ｈ）を反応させ（第六工程）、得られた以下の：
【化１６】
2019006680.tif 000017
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ５は前記と同義である。］で表される化合物（Ｉ）を還元し（第七工程）、得られた以下の：
【化１７】
2019006680.tif 000018
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ５は前記と同義である。］で表される化合物（Ｊ）を加水分解する（第八工程）ことにより製造することができる
【００４１】
第四工程の反応は、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、トルエン、キシレン中、還元剤としてリチウムアルミニウムヒドリド、水素化ジイソブチルアルミニウム、ボランーテトラヒドロフラン錯体を用いて実施することができる。反応温度としては−７０℃から２００℃にて、好適には０℃から溶媒の沸騰温度にて実施する事ができる。反応時間は通常１〜４８時間、好ましくは１２〜２４時間である。
【００４２】
第五工程の反応はジクロロメタンやクロロホルム、テトラヒドロフラン、トルエン中で、酸化剤としてピリジニウムクロロクロマート、ピリジニウムジクロマート、二酸化マンガン等の酸化剤を用いて実施することができる。反応温度としては０℃から２００℃にて、好適には室温から溶媒の沸騰温度にて実施する事ができる。反応時間は通常１〜４８時間、好ましくは１２〜２４時間である。
【００４３】
第六工程の反応はテトラヒドロフラン、トルエン、ジオキサン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド等の溶媒中、塩基としては例えば水素化ナトリウムのようなアルカリ金属水素化物、ブチルリチウムのような有機金属化合物、リチウムジイソプロピルアミドのような金属アミド、ナトリウムメトキシドやカリウム  ｔ−ブトキシドのような金属アルコキシドを用いる事ができる。反応温度としては−２０℃から１５０℃にて、好適には０℃から５０℃にて実施する事ができる。反応時間は通常１〜４８時間、好ましくは２〜２４時間である。
【００４４】
第七工程の反応は、パラジウム担持活性炭、白金担持活性炭、酸化白金、ロジウム担持アルミナ等の金属触媒存在下、エタノール、メタノール、テトラヒドロフラン、酢酸エチル、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド等の溶媒中水素圧１ｋｇｆ／ｃｍ２から５ｋｇｆ／ｃｍ２で実施する事ができる。反応温度としては０℃から１００℃にて、好適には室温から８０℃にて実施する事ができる。反応時間は通常１〜４８時間、好ましくは６〜２４時間である。
【００４５】
第八工程の反応は、アルカリ性条件下で行う事ができる。アルカリ性条件としては水酸化リチウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等が用いられる。反応温度としては０℃から８０℃にて、好適には室温から６０℃にて実施する事ができる。反応時間は通常１〜４８時間、好ましくは２〜２４時間である。
【００４６】
以下に実施例を示してさらに詳細に説明するが、本発明は実施例により何ら限定されるものではない。
【実施例】
【００４７】
〔実施例１〕（１−（４−クロロフェニル）−３−イソプロピル−６−メチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−４−カルボン酸
【化１８】
2019006680.tif 000019
【００４８】
１−（４−クロロフェニル）−３−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−５−アミンの合成
１０ｍＬ〜２０ｍＬ用バイオタージ性耐圧ガラス反応容器中に、４-フルオロフェニルヒドラジン・塩酸塩（１．００ｇ，６．１７ｍｍｏｌ）、４−メチル−３−オキソペンタンニトリル（１．００ｇ，９．００ｍｍｏｌ）、エタノール１０ｍＬおよび濃塩酸３ｍＬを仕込んだ。専用キャップで密閉後、超音波反応装置（バイオタージイニシエーター）を用いて、１６０℃にて５０分反応した。反応終了後反応液を１ｍｏｌ／Ｌ／水酸化ナトリウム水溶液１００ｍＬ中に注加し、酢酸エチル抽出（３×２０ｍＬ）した。  抽出液は飽和食塩水で洗浄後無水硫酸マグネシウム乾燥し、濃縮した。残留物はシリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製し（ｎ−ヘキサン／ＡｃＯＥｔ  ４：１  ｖ／ｖ）、黄色粉末状の目的化合物を０．９０ｇ、収率６２％で得た。
【００４９】
（１−（４−クロロフェニル）−３−イソプロピル−６−メチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−４−カルボン酸エチルエステルの合成
１０ｍＬ〜２０ｍＬ用バイオタージ性耐圧ガラス反応容器中に、１−（４−クロロフェニル）−３−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−５−アミン（０．９０ｇ，３．８２ｍｍｏｌ）、２，４−ジオキソペンタン酸エチルエステル（０．５４ｇ，３．４１ｍｍｏｌ）、酢酸１２ｍＬを仕込んだ。専用キャップで密閉後、超音波反応装置（バイオタージイニシエーター）を用いて、１６０℃にて５０分反応した。反応終了後反応液を１ｍｏｌ／Ｌ水酸化ナトリウム水溶液１００ｍＬ中に注加し、酢酸エチル抽出（３×２０ｍｌ）した。  抽出液は飽和食塩水で洗浄後無水硫酸マグネシウム乾燥し、濃縮した。残留物はシリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製し（ｎ−ヘキサン／ＡｃＯＥｔ  ９：１  ｖ／ｖ）、黄色油状の目的化合物を０．６０ｇ、収率４９％で得た。
【００５０】
（１−（４−クロロフェニル）−３−イソプロピル−６−メチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−４−カルボン酸の合成
１００ｍＬ用ナス型フラスコ中に、（１−（４−クロロフェニル）−３−イソプロピル−６−メチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−４−カルボン酸エチルエステル（０．６０ｇ，１．６８ｍｍｏｌ）、エタノール１０ｍＬおよび１ｍｏｌ／Ｌ水酸化ナトリウム水溶液５ｍＬを仕込んだ。混合物は一晩加熱還流した。反応終了後反応液を１／３程度まで濃縮し、残留液に氷冷攪拌下、濃塩酸を滴下して酸性とし、数分攪拌した。析出物を濾過、乾燥することにより、表題化合物を０．６０ｇ、収率１００％で得た。
１H-NMR (CDCl3, δ) 8.31, (2H, d, J=9.3Hz), 7.56, (1H, s), 7.47, (2H, d, J=9.0Hz), 3.86, (1H, sep, J=6.9Hz), 2.76, (3H, s), 1.42, (6H, d, J=6.9Hz).  mp. 270-271℃.  MS  330（M+H）+.
【００５１】
〔実施例２〜４１〕
実施例１と同様の方法により、下記の一般式（１ｃ）の化合物に関し、表１〜表４に示す実施例化合物を合成した（なお、PPAR-HM番号はデータ整理上使用した番号である）。
【化１９】
2019006680.tif 000020
【表１】
2019006680.tif 000021
【表２】
2019006680.tif 000022
【表３】
2019006680.tif 000023
【表４】
2019006680.tif 000024
【００５２】
〔実験例〕
〔実験例１〕本発明の化合物のＰＰＡＲαアゴニスト活性の測定（GAL4-chimera systemを用いたルシフェラーゼアッセイ）
チャコール・デキストラン処理したウシ血清10%を含むダルベッコ改変イーグル培地(10% charcoal/dextran treated FBS-DMEM)にて培養したヒト肝ガン由来HepG2細胞を、96 well plateに1 wellあたり3×104 cells/110 μLになるように播種した。
16-24時間培養後に無血清培地OPTI-MEM I（Life Technologies）に交換し、酵母の転写因子GAL4のDNA結合領域とヒトPPARαのリガンド結合領域との融合タンパク質を発現する受容体プラスミドpBIND-hPPARα（およびpBIND-hPPARδ、pBIND-hPPARγ） vector（Promega）10 ng、および、そのレポータープラスミド4×UAS-tk-luc vector 100 ngをLipofect AMINETM 2000試薬（Life Technologies）にてトランスフェクションした。
24時間培養後に、10% charcoal/dextran treated FBS-DMEM中で試験化合物（1μM）を添加し、さらに24時間培養した後にルシフェラーゼアッセイを行った。
アッセイにはDual-Luciferase（登録商標）Reporter Assay System（Promega）試薬を使用し、キットに添付の説明書に従いルミノメーターを用いてルシフェラーゼ活性を測定した。測定結果を表５〜表７に示す。なお、実施例化合物４２、４３および４４は、Vitas-M社から購入した。
【表５】
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【表６】
2019006680.tif 000026
【表７】
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【００５３】
表５〜表７に示すように、本発明の化合物は、ＰＰＡＲαに対する転写活性化活性（アゴニスト活性）を有する。これらの化合物の転写活性化作用の強さは、同様の方法で測定した既知のＰＰＡＲαアゴニストであり、脂質異常症治療薬として臨床使用されている治療薬、フェノフィブラートと比較しても、同等以上の値を示しており、良好なＰＰＡＲαアゴニストである。
また、本発明に係る化合物のＰＰＡＲ選択性について、実施例１の化合物を例にして検討したところ、図１に示すように、ＰＰＡＲαに対する選択的転写活性化活性（アゴニスト活性）を有することが明かになった。
【００５４】
〔実験例２〕本発明の化合物のＰＰＡＲα制御下遺伝子発現亢進活性の測定（Real time PCR法を用いた遺伝子の発現解析）
チャコール・デキストラン処理したウシ血清10%を含むダルベッコ改変イーグル培地（10% charcoal/dextran treated FBS-DMEM）にて培養したヒト肝ガン由来HepG2細胞を、6 well plateに1 wellあたり5×105 cells/2.5 mLになるように播種した。16-20時間培養後に試験化合物を添加し、さらに48時間培養した後に細胞を回収した。
細胞からのRNA抽出には、QuickGene RNA cultured cell HC kit S (RC-S2)(KURABO)を用い、キットに添付の説明書に従いRNAを抽出した。抽出したtotal RNA 2 μgを用いて、SuperScriptIIITM RT (Life Technologies)キットに添付の説明書に従いcDNAを合成した。合成したcDNA 25 ngを用いて、QuantiTect（登録商標）SYBR（登録商標）Green PCR kit (QIAGEN)に添付の説明書に従い、Real time PCRを行い遺伝子の発現を解析した。
【００５５】
Real time PCR法に用いたプライマー、および増幅される配列の長さを以下に示す。なお、TBPは補正用として用いた。
PDK4:102 bp
fw;TTCCAGACCAACCAATTCACA（配列番号１）
rv;CCTGGTGTTCAACTGTTGCC（配列番号２）
PPARα:121 bp
fw;CTATCATTTGCTGTGGAGATCG（配列番号３）
rv;AAGATATCGTCCGGGTGGTT（配列番号４）
TBP:172 bp
fw;AGCCAAGAGTGAAGAACAGTCC（配列番号５）
rv;AAATTGTTGGTGGGTGAGCA（配列番号６）
図２に示すように、本発明にかかる化合物（実施例１９および実施例２０の化合物）は、ＰＰＡＲα標的遺伝子（PDK4） のmRNA発現量を増加させた。このことより、本発明の化合物は、遺伝子発現レベルにおいても、ＰＰＡＲαアゴニストである。
【００５６】
〔実験例３〕本発明にかかる化合物の脂質低下作用の測定
オスのCrl:CD(SD)ラット（日本チャールス・リバー）は、固形飼料（オリエンタル酵母工業）を与えて飼育した。4週齢のラットに10 w/v%フルクトース水を、給水瓶を用いて自由に摂取させ、2週間飼育することで脂質異常症モデルラットとした。
6週齢の脂質異常症モデルラットに、0.5 w/v%メチルセルロース溶液に懸濁した試験化合物（実施例２０の化合物）（0, 1, 3および10 mg/kg）および対照化合物であるフェノフィブラート（30 mg/kg）を一日一回14日間連続で経口投与した。なお、試験化合物の投与期間中も、10 w/v%フルクトース水を自由摂取させた。
最終投与一日後に麻酔下で腹大動脈から採血し、室温で20-60分間静置後、遠心分離により血清を得た。血清中のトリグリセライド値（GPO・HMMPS法、グリセリン消去法）、アスパラギン酸トランスアミナーゼ値（JSCC標準化対応）、アラニントランスアミナーゼ値（JSCC標準化対応）、クレアチンキナーゼ値（JSCC標準化対応）、尿素窒素値（ウレアーゼ・GIDH法）、HDLコレステロール値（選択消去法）、LDLコレステロール値（選択消去法）は自動分析装置JCA-BM6070（日本電子）を用いて測定した。
図３に示すように、フルクトース負荷によりラットの血清TG値の上昇を確認することができた。また、本発明にかかる化合物（実施例２０の化合物）を3 mg/kg以上で投与した時に、ラット血清TG値の低下作用が認められた。また、その低下作用の程度はfenofibrateを30 mg/kgで投与した場合のラット血清TG低下作用と同程度であった。
このことより、本発明の化合物は、脂質異常症の改善作用を有する。
【００５７】
また、図４に示すように、本発明の化合物（実施例２０）は、フルクトース負荷によるラットの血液パラメーターに変動を与えることが確認された。即ち、本発明化合物の投与により血清HDL-C（HDLコレステロール）は減少傾向を認めたが、その程度はfenofibrateより軽微であった。また、本発明化合物（実施例２１）、fenofibrateともにAST（アスパラギン酸アミノ基転移酵素）、ALT（アラニンアミノ基転移酵素）およびUN（尿素窒素）には影響を及ぼさなかった。一方、本発明化合物投与によりCK（クレアチンキナーゼ）が減少し、その作用はfenofibrateと同程度であった。このことにおいても、本発明の化合物は、脂質異常症の改善作用を有する。
【産業上の利用可能性】
【００５８】
本発明にかかる化合物は、ＰＰＡＲα転写を活性化するものである。従って、これらの化合物を有効成分として含有する医薬は、脂質異常等の疾患の治療または予防に効果を発揮することが期待される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【配列表】
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