(57)【要約】【課題】本発明は、網目状シートの細胞培養用モジュールで培養した細胞を、モジュールから効率よく回収する方法を提供することを課題とする。【解決手段】本発明は、網目状シートを細胞培養基材として収納した細胞培養用モジュール内から培養した細胞を回収する方法であって、前記モジュール内の細胞に細胞剥離剤を接触させる工程、および前記モジュールの外側から直接あるいは間接的に接触させた振動発生装置により振動を与える工程、を含む細胞回収方法である。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
網目状シートを細胞培養基材として収納した細胞培養用モジュール内から培養した細胞を回収する方法であって、
ｉ）前記モジュール内の細胞に細胞剥離剤を接触させる工程、および
ｉｉ）前記モジュールの外側から直接あるいは間接的に接触させた振動発生装置により振動を与える工程、
を含む細胞回収方法。
【請求項２】
前記細胞剥離剤が、その一部にタンパク分解酵素を含む、請求項１に記載の細胞回収方法。
【請求項３】
前記振動発生装置による振動の大きさが２〜８０ｍ／ｓ２である、請求項１または２に記載の細胞回収方法。
【請求項４】
前記振動発生装置により振動を与える時間が１０秒〜３０分である、請求項１〜３のいずれかに記載の細胞回収方法。
【請求項５】
前記振動発生装置が振動モーターである、請求項１〜４のいずれかに記載の細胞回収方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、網目状シートを細胞培養基材として含む細胞培養モジュールにおいて、培養した接着性細胞を網目状シートから剥離、回収するための方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
再生医療・細胞移植治療に用いる細胞の製造、あるいはバイオ医薬品の製造において、細胞を低コストで効率よく培養することは高度の要求事項となっている。例えば、再生医療において体性幹細胞を用いる場合は、患者の脂肪組織や骨髄から採取した体性幹細胞（間葉系幹細胞）を必要な細胞数まで体外で増幅させて治療に用いるのが一般的であるが、多くの人がこうした治療を受けるようになるためには細胞の製造コストを現状よりも低く抑える必要がある。また、バイオ医薬品の例では、ヒト型モノクローナル抗体の医薬品は製造コストが高いため薬価が高く、そのため治療費は高額となり、患者及び国の医療費負担が大きいのが現状である。
【０００３】
こうした課題を解決するため、細胞を効率よく増殖させる様々な手法やデバイスが開発されてきた。例えば、人工透析に用いられるような透過性中空糸膜からなるモジュールを細胞培養に転用した形態のもの、あるいは平面フラスコを多層に重ねた形態のものなどが利用されている。
【０００４】
特許文献１には、細胞の増殖及び成長用の中空糸膜型バイオリアクターであって、細胞空間（中空糸膜中空部）および無細胞空間（中空糸膜外側）にそれぞれ異なる培地を循環するための液流回路を有するバイオリアクタシステムが開示されている。しかし、中空糸膜をモジュール化するには煩雑な工程を経る必要があり、簡便・低コスト化することは困難である。
【０００５】
また、多層型フラスコは培養面積に限界があり、多層化することによる重量増やスペース増が問題となっている。更に、細胞をビーズのような小さな粒子担体に接着させ、これを浮遊させて攪拌培養を行うことで接着細胞を浮遊細胞と同様に培養することが可能である。これを利用した高密度培養システムもあるが、攪拌される際に、細胞がダメージを受けたり、細胞回収時にビーズの破片が混入するなどの問題があり、これは特に細胞そのものを治療に使用する再生医療においては問題となる。
【０００６】
こうした問題を解決する方法として、網目状（メッシュ）シートを複数枚収納した細胞培養用モジュールを用いる細胞培養方法がある。網目状シートの細胞培養モジュールは、簡便に製造することが出来るうえ、効率よく高密度の細胞培養を行うことが可能である。
【０００７】
このような細胞培養モジュールを用いて高密度の細胞培養を実施する際の課題の一つは、培養増殖させた多量の細胞を効率よく回収することにある。培養基材（網目状シート）の表面で高密度に達した培養細胞は、自身が分泌した細胞外マトリックスなどにより強固に培養面に接着していることがある。このため培養した細胞を回収する際に用いるタンパク分解酵素液などの細胞剥離剤を使用するだけでは、所望のとおり細胞を回収できない結果となる。すなわち、網目状シートを収納した細胞培養モジュールを用いた細胞培養において、高密度状態で効率よく細胞培養を行うと同時に、増殖させた細胞を効率よく回収することが求められている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特表２００３−５１００６８号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明は、細胞培養基材である網目状シートの表面で培養された細胞を、網目状シートを収納した細胞培養モジュール（容器）内から効率よく回収する方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者は、上記課題を解決するために鋭意検討した結果、以下に示す手段により、上記課題を解決できることを見出し、本発明に到達した。
【００１１】
すなわち、本発明は、以下の構成からなる。
１．網目状シートを細胞培養基材として収納した細胞培養モジュール内から培養した細胞を回収する方法であって、
ｉ）前記モジュール内の細胞に細胞剥離剤を接触させる工程、および
ｉｉ）前記モジュールの外側から直接あるいは間接的に接触させた振動発生装置により振動を与える工程、
を含む細胞回収方法。
２．前記細胞剥離剤が、その一部にタンパク分解酵素を含む、１に記載の細胞回収方法。
３．前記振動発生装置による振動の大きさが２〜８０ｍ／ｓ２である、１または２に記載の細胞回収方法。
４．前記振動発生装置により振動を与える時間が１０秒〜３０分である、１〜３のいずれかに記載の細胞回収方法。
５．前記振動発生装置が振動モーターである、１〜４のいずれかに記載の細胞回収方法。
【発明の効果】
【００１２】
本発明により、細胞培養モジュール内の網目状シート上で培養された細胞を高効率に剥離、回収する方法を提供することが可能となる。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】網目状シートを用いた細胞培養モジュールの一例を示す模式図である。
【図２】本発明に使用する振動モーターの一例を示す模式図である。
【図３】細胞培養モジュールと振動モーターの関連を示す模式図（正面図）である。
【図４】細胞培養モジュールと振動モーターの関連を示す模式図（側面図）である。
【図５】細胞培養装置の一例を示す模式図である。
【図６】実施例および比較例の回収細胞数および細胞生存率を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
（網目状シート）
本発明において、網目状シートの素材は、細胞を網目状シート表面に保持できる構造をとることができるものであれば、特に限定されない。例えば、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリスチレン、ポリビニルアルコール、ポリメチルメタクリレート、ポリアクリロニトリル、フッ素系樹脂、ポリアミド、ポリエステル等の水不溶性の合成樹脂が好適に利用できる。また、綿、麻、竹、紙などの植物性線維、羊毛、絹などの動物性線維など、天然線維を用いることもできる。また、合成樹脂製線維と天然線維とを混紡してもよい。さらに、ガラス線維やカーボンでもよく、アルミナ（Ａｌ２Ｏ３）などのセラミックス系、さらにステンレス、鋼、アルミニウム、金、プラチナなどの金属も使用できる。また、これらの誘導体が主成分であっても良い。また、網目状シートはこれらの素材に化学的に修飾を加えたものであっても良く、例えば、親水化処理されていてもよい。親水化処理することにより、培養細胞の網目状シート表面への接着が容易になる。また、使用する細胞に応じて、網目状シートへの接着性向上のため、コラーゲンやフィブロネクチン等をコーティングしたものでも良い。
【００１５】
本発明において、網目状シートの線径は、好ましくは１００μｍ〜２０００μｍ程度のものが利用され得る。線径は、網目状シートが適度な強度を保ち、かつ網目間の培養液等の物質の通過に大きな支障がない範囲であればよい。網目状シート上に細胞を播種し、細胞培養を行う場合は、網目状シートの線径は、細胞の増殖する面積、細胞密度や培地との接触度合い、培地の流れなどに影響することから、本発明のメリットを活かす要件となる。線径の測定は、例えば、網目状シートを網目が判別できる程度の倍率で撮影した画像をＩｍａｇｅＪ（ＮＩＨ製）、ＷＩＮＲＯＯＦ（三谷商事製）およびＮＩＳ  Ｅｌｅｍｅｎｔ  Ｄ３．００  ＳＰ６（ニコン製）等の画像解析ソフトを用いて行うことができる。
【００１６】
本発明において、網目状シートの目開きは、多少のばらつきがあっても構わないが出来るだけ一定であることが望ましい。目開きは、特に限定されるものではないが、細胞の増殖や培養液の流れを妨げない方が望ましく、１０μｍ〜１０００μｍ程度であることが好ましい。さらに、目開きは、培養に伴う各種生体成分の目詰まり等の影響も受ける可能性もあり、最適な設計は、これらの物質との相互作用を鑑みて実施されるべきものである。目開きの測定は、以下に示すような方法で行うことができる。例えば、網目状シートを網目が判別できる程度の倍率で撮影した画像を前記ＩｍａｇｅＪ、ＷＩＮＲＯＯＦ、ＮＩＳ  Ｅｌｅｍｅｎｔ  Ｄ３．００  ＳＰ６等の画像解析ソフトにより２値化処理を行う。画像解析ソフトにより算出される「Ａｖｅｒａｇｅ  Ｓｉｚｅ［ｐｉｘｅｌ２］」と、解析に用いた画像の縮尺情報［ｐｉｘｅｌ／μｍ］から、網目（空隙）部の平均面積［μｍ２］を求め、網目を正方形と仮定して、一辺の長さ［μｍ］を算出する。得られた一辺の長さを網目状シートの目開きとする。
【００１７】
（細胞培養モジュール）
本発明において、細胞培養モジュールは、モジュールケースに１枚または複数枚の網目状シートを螺旋および／または円筒形に巻回積層したものを収納することにより簡単に作製することができる。このような細胞培養モジュールは、容積あたりの培養面積を大きくすることができるため好ましい。また、培養操作も簡便化することが出来、効率よく細胞培養を実施することが出来る。例として、螺旋に巻いた網目状シートを筒状容器（モジュールケース）に入れた細胞培養モジュールの模式図を図１に示す。
【００１８】
図１は、２つの出入口を有するモジュールケース４に網目状シート２が螺旋に巻かれた状態で収納され、網目状シート２の両端部が樹脂３によりモジュールケース４に接着固定された形態となっている細胞培養モジュールを示している。この際、モジュール内に収納された網目状シートが互いに近すぎると、培養した細胞が内側または外側のシートにも接着してしまい回収し難くなることがある。そのため、互いに接触しない程度に間隙を設けた状態で固定されているのが好ましい。また、モジュール内部はポート５ａおよび５ｂを介して外部と連通する構造となっている。
【００１９】
細胞培養容器として前記細胞培養モジュールを用いることにより、細胞へ常に新鮮な培地（培養液）や必要なガス等を連続的または断続的に供給することができるため、シャーレや多段フラスコ等を用いた培養において必要な培地の交換作業等が不要となり、作業者の手間やコンタミのリスクを減らすことができる。
【００２０】
（培養の対象となる細胞）
本発明において、培養の対象となる細胞としては、接着性の動物細胞が好適である。細胞の由来は特に限定されず、ヒト、ブタ、イヌ、マウス等のいずれの動物由来のものも使用できる。また、接着性の動物細胞は、初代培養細胞及び株化細胞のいずれも対象とすることができる。また、表皮角化細胞、血管内皮細胞、線維芽細胞、肝細胞などのプライマリー細胞や、さらに胚性幹細胞、人工多能性幹細胞、間葉系幹細胞、脂肪前駆細胞、肝幹細胞などの幹細胞、前駆細胞でもよい。また、これらの細胞は、培養前に外来遺伝子が導入された細胞であってもよいし、抗体やリガンドなどの刺激因子などで予め刺激、加工された細胞であっても良い。
【００２１】
（細胞培養モジュールにおける細胞の培養）
前述の網目状シートを培養基材として収納した細胞培養モジュールを用いて細胞を培養する場合には、出入口の一方から細胞を懸濁した液をモジュール内に流入させることにより、細胞を播種することが出来る。一定時間静置し、細胞を網目状シート表面に接着させた後に、インキュベーター内に設置した細胞培養モジュールに、連続的あるいは断続的に培養液を送液することにより細胞を培養、増殖させることが出来る。培養液は、細胞に必要な養分や酸素・二酸化炭素などのガスを供給する役割を有する。培養に用いられる培養液は、培養細胞の種類に応じて決定され、当該細胞の培養液として通常用いられるものであればよい。
【００２２】
細胞培養における培養液、特に細胞培養モジュール内を流れる培養液の流速については、厳密に制御することが好ましい。培養液は連続的に流しても良いし断続的に流しても良いが、流速が遅すぎると、細胞への栄養供給が十分になされず、細胞が増殖しにくくなる。逆に、流速が速すぎても細胞周囲の環境変化が激しくなるため、細胞が周りの環境に馴染めず増殖しにくくなる。したがって、細胞培養モジュール内を流れる培養液の流速は、細胞増殖度合いや環境に応じて調整することが好ましい。細胞増殖度合いを調べる方法は特に限定されないが、培養液中のグルコースや乳酸塩の濃度等の測定結果をもとに行うことが出来る。
【００２３】
（細胞の回収  −プロテアーゼ処理−）
網目状シートを用いて培養した細胞を回収するための手段を例を挙げて説明する。例えば、網目状シート表面において細胞を培養した場合には、培養液の灌流を停止した後、モジュール内の培養液を除去するため、二価陽イオンフリーのリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）を一定時間灌流させ、培養液を充分ＰＢＳに置換する。次に、ＰＢＳを除去し、トリプシン等のプロテアーゼをモジュール内へ充填し、一定時間インキュベートして培養細胞を網目状シート表面から剥離させた後、培養液などをモジュール内へ流入させることにより、細胞を回収することが出来る。プロテアーゼの濃度は、細胞数にもよるが、０．１〜０．５重量％が好ましい。また、プロテアーゼ処理の温度は３４〜３９℃が好ましく、処理時間は３０秒〜３０分が好ましい。
【００２４】
（細胞の回収  −振動発生装置−）
前記処理と同時または前記処理の後、細胞培養モジュールに接触させた振動発生装置を駆動させてモジュールに振動を与えることにより、培養細胞を網目状シート表面から剥離させる。その後、培養液などをモジュール内へ流入、排出させ、網目状シート表面から剥離した細胞を培養液とともに回収することが出来る。
【００２５】
本発明において、振動発生装置は、自ら振動を発生する装置であれば、特に限定されない。例えば、モーター軸に偏芯したおもりを付けて回転させることにより振動を発生させるタイプ、磁界中でコイルに電流を流すことにより起こる力を利用して振動を発生させるタイプ（スピーカータイプ）、ピストンを油圧や空気圧によって駆動して振動を発生させるタイプ等の振動発生装置を使用することが出来る。中でも、モーター軸に偏芯したおもりを付けて回転させることにより振動を発生させるタイプ（以降、振動モーターともいう）が、小型化や費用面を考慮すると好ましい。振動モーターは、携帯電話機、ゲーム機などに幅広く用いられている。内部の回転方式の違いから、円筒型（シリンダー型）、円盤型のものなどがあるが、本発明に使用するものは、何れの形態をとるものでも構わない。使用する振動モーターの振動の大きさ（振動量）は、細胞培養モジュールに対し、細胞剥離に適した振動を伝えることが出来れば特に限定されないが、振動量が２〜８０ｍ／ｓ２のものが適している。また、振動モーターは、所望の振動量のものを一つだけ使用しても良いし、複数個を同時に使用することで振動量を確保しても良い。但し、複数個の振動モーターを同時に使用する場合は、互いに振動を打ち消し合わないよう、空間的配置やモーターの振動数などを考慮する必要がある。細胞培養モジュールに振動を与える時間は、１０秒〜３０分程度が好ましい。振動時間が短すぎると、膜表面から細胞が十分剥離せず、振動時間が長すぎると、細胞がダメージを受ける可能性がある。図２に、振動モーターの例となる模式図を示す。
【００２６】
図３、４に、細胞培養モジュールに振動モーターを取り付ける際の一例を示す。振動モーター１３はハウジング１４に収納された状態で支持部材に取り付けられている。支持部材１５ａ、１５ｂは、それらの間にモジュールを把持できるように接続バネ１６が接続固定されている。ハウジングおよび支持部材は、振動を吸収、防振するものでなければ、硬質のものであっても、エラストマーのような軟質のものであってもよい。支持部材１５ａおよび１５ｂの間に細胞培養モジュールを図に示されるように挟み込み、所定時間、所定の振動量を与えればよい。
【実施例】
【００２７】
以下、本発明の有効性を実施例を挙げて説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００２８】
（回収細胞数の測定）
細胞培養モジュールから回収した細胞懸濁液は、遠心分離操作により最終的に１ｍｌの培養液に懸濁した。この懸濁液とトリパンブルー染色液を１：１で混和した液を血球計算盤に添加し、顕微鏡下で細胞数の計測を行った。
１．血球計算盤およびカバーガラスの表面を７０％イソプロパノールで洗浄し、余分なイソプロパノールをふき取り風乾する。
２．注射用蒸留水でカバーガラスの側面を濡らし、血球計算盤に貼りつける。
３．細胞懸濁液をパスツールピペット等でよく撹拌後、すぐに血球計算盤に流し込み、溝の上まで満たす。
４．１〜３の操作を別の血球計算盤を使用して行う（２回測定し平均をとる）。
５．顕微鏡に血球計算盤を置き、グリッドラインに焦点を合わせる（１０×対物レンズ）。
６．カウンターを用いて１ｍｍ２エリアの細胞数を速やかに計測する。
※誤差が生じやすいので正確に数えるためには少なくとも１００〜５００細胞を計測する。
計算法：
Ｃ＝Ｎ×１０４
Ｃ：１ｍｌ当たりの細胞数
Ｎ：計測した細胞数の平均
１０４：１ｍｍ２に対する容量の変換値
全体の数＝Ｃ×Ｖ
Ｖ＝細胞を懸濁した液体の容量
【００２９】
（細胞生存率の測定）
トリパンブルーで染色されない細胞を生細胞、染色される細胞を死細胞と判定し、細胞の生存率を測定した。
【００３０】
［実施例１］
（メッシュシートの準備）
ポリプロピレン製の網目状シート（ハギテック社製、型番：ＰＰ３７６、線径１５３μｍ、開口率５０％、目開き３７６μｍ、厚み２８５μｍ）を、幅１４５ｍｍ、長さ８０ｍｍに切ったものを用意した。これを超純水で洗浄した後、０．０５％ウシコラーゲン溶液に２０分間浸し、その後、再び超純水ですすぎ、クリーンベンチ内で自然乾燥させた。
【００３１】
（細胞培養容器の作製）
細胞培養モジュールを以下のように作製した。
前述の網目状シートを螺旋状に巻き、直径１ｃｍ、長さ１０ｃｍの円筒状のポリカーボネート製モジュールケース内に収納し、網目状シートの両端を樹脂でモジュールケースに接着固定した。このようにして、図２に示すような形状の細胞培養用モジュールを作製した後、ガンマ線照射により滅菌処理を行った。
【００３２】
得られた細胞培養モジュールを用い、図５に示すような細胞培養装置を構成した。まず、培養液貯留容器６を注射用蒸留水容器に交換した後、ポンプ７を起動して細胞培養モジュールのプライミング処理を行った。プライミング処理を終了した後、注射用蒸留水容器をウシ胎児血清を１０％（ｖ／ｖ）添加したダルベッコ改変イーグル培地を入れた培養液貯留容器に交換し、細胞培養モジュール内の水を培養液に置換した。
【００３３】
（細胞培養実験）
前記培養液貯留容器６内の培養液に、プライマリーのヒト間葉系幹細胞（Ｃｅｌｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｉｎｃ．製）を懸濁し、ポンプ７を起動して細胞培養モジュール内に播種して２時間静置し、網目状シート表面に細胞を接着させた。細胞播種密度は２０００ｃｅｌｌｓ／ｃｍ２となるように調整した。培養液貯留容器６を培養液のみの容器に交換した後、培養液の流量を１５０μｌ／ｍｉｎとして灌流を開始した。本細胞培養実験は、ＣＯ２インキュベーター内で３７℃、７日間行った。
【００３４】
（細胞培養用モジュールからの細胞回収）
７日間培養後、培養液灌流を停止し、細胞培養用モジュール内にて増殖した細胞を回収した。即ち、培養液の灌流を停止した後、モジュール内部に存在する培養液を除去するため、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）を一定時間灌流させ、培養液を充分ＰＢＳに置換した。次に、ＰＢＳを除去し、０．２５％トリプシン溶液（ライフテクノロジーズ社製）を細胞培養用モジュール内へ静かに充填し、室温で１５分間インキュベートした。
この後、細胞培養モジュールに接触させた円盤型振動モーター（東京パーツ工業製、ＦＭ３４Ｆ）を振動量（加速度）１７ｍ／ｓ２で１５秒間駆動させ、細胞培養モジュールに振動を与えた。即ち、図３および図４に示すように、振動モーターを含む支持部材でモジュールを挟んで固定した後、振動モーターを駆動させモジュールに振動を与えた。その後、培養液を細胞培養モジュール内へ流し入れ、反対方向から培養液とともに流し出した細胞を回収した。回収した細胞について、総細胞数および生存率を計測した。
【００３５】
［実施例２］
振動モーターとして、円筒型の振動モーター（シーアイ化成製、Ａ４Ａ−０５−ＷＴＢ−３）を用いて振動量（加速度）７ｍ／ｓ２、５分間駆動させた以外は、実施例１と同様にして細胞の回収を行った。
【００３６】
［実施例３］
実施例２と同様の振動モーターを用いて振動量３ｍ／ｓ２、２５分間駆動させた以外は、実施例１と同様にして細胞の回収を行った。
【００３７】
［実施例４］
実施例１と同様の振動モーターを用いて振動量１７ｍ／ｓ２、２５分間駆動させた以外は、実施例１と同様にして細胞の回収を行った。
【００３８】
［実施例５］
実施例１と同様の振動モーターを２台用いて、１台あたりの振動量１７ｍ／ｓ２、１５秒間駆動させた以外は、実施例１と同様にして細胞の回収を行った。
【００３９】
［比較例１］
実施例１と同様の網目状シートを収納した細胞培養モジュールを用い、実施例１と同様にして細胞培養実験を行った。７日間培養後、培養液灌流を停止し、モジュール内にて増殖した細胞を回収した。即ち、培養液の灌流を停止した後、モジュール内に存在する培養液を除去するため、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）を一定時間灌流させ、培養液をＰＢＳに置換した。次に、ＰＢＳを除去し、０．２５％トリプシン溶液（ライフテクノロジーズ社製）を細胞培養モジュール内へ静かに充填し、室温で１５分間インキュベートした。この後、振動を与える処理を行わずに、培養液を細胞培養モジュール内へ流し入れ、反対方向から培養液と共に流し出した細胞を回収した。
【００４０】
［比較例２］
実施例１と同様の網目状シートを収納した細胞培養モジュールを用い、実施例１と同様にして細胞培養実験を行った。７日間培養後、培養液灌流を停止し、モジュール内にて増殖した細胞を回収した。即ち、培養液の灌流を停止した後、モジュール内に存在する培養液を除去するため、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）を一定時間灌流させ、培養液をＰＢＳに置換した。次に、細胞剥離剤を接触させる処理を行わずに実施例１と同様の振動を与える処理を行った後、培養液を細胞培養モジュール内へ流し入れ、反対方向から培養液と共に流し出した細胞を回収した。
【００４１】
実施例１〜５、比較例１〜２の細胞培養実験をそれぞれ繰り返し８回行った。その細胞回収数および細胞生存率の測定結果を表１、表２および図６に示した。これらの結果より、実施例１〜５は、回収細胞数および細胞生存率において比較例よりも高値を示した。一方、比較例１は、細胞生存率は実施例と遜色ないが、回収細胞数は実施例のものより少ない結果となった。比較例２は、回収細胞数および細胞生存率のいずれも実施例に比べて低い結果となった。これらの結果から、細胞剥離剤と振動発生装置を併用することにより、培養細胞を高生存率かつ高効率に回収できることが示された。
【００４２】
【表１】
2019097478.tif 000002
【００４３】
【表２】
2019097478.tif 000003
【産業上の利用可能性】
【００４４】
本発明により、網目状シートを培養基材として用いた細胞培養モジュールにおいて培養された細胞を、モジュール内から高生存率かつ高回収率で回収する方法を提供することが可能となる。
【符号の説明】
【００４５】
１      細胞培養モジュール
２      網目状シート
３      接着樹脂
４      モジュールケース
５ａ、５ｂ      ポート
６      培養液貯留容器
７      ポンプ
８      廃液回収容器
１１      振動モーターのおもり
１２      振動モーター軸
１３      振動モーター本体
１４      振動モーターハウジング
１５ａ、１５ｂ      支持部材
１６      接続バネ
【図１】
2019097478.tif 000004
【図２】
2019097478.tif 000005
【図３】
2019097478.tif 000006
【図４】
2019097478.tif 000007
【図５】
2019097478.tif 000008
【図６】
2019097478.tif 000009