(57)【要約】【課題】皮膚美白効果を発揮する新規な物質を見出し、これを美白用組成物に応用すること。【解決手段】本発明は、ＴＮＦＳＦ１４タンパク質及びこれをコードするポリヌクレオチドを含む新規な美白用組成物、キット及びこれを利用する方法を提供して、美白分野に関連した市場拡張及び産業発展に寄与することができる。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＴＮＦＳＦ１４（ｔｕｍｏｒ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ  ｆａｃｔｏｒ  ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ  ｍｅｍｂｅｒ  １４）タンパク質、これと９０％以上のアミノ酸配列相同性を有するタンパク質、及び前記タンパク質をコードするポリヌクレオチドのうちの一つ以上を含む、皮膚美白用組成物。
【請求項２】
前記ＴＮＦＳＦ１４タンパク質は、配列番号１で表されるアミノ酸配列からなるものである、請求項１に記載の皮膚美白用組成物。
【請求項３】
前記ポリヌクレオチドは、ＴＮＦＳＦ１４遺伝子のｍＲＮＡである、請求項１に記載の皮膚美白用組成物。
【請求項４】
当該組成物は、メラニン生成を抑制するものである、請求項１に記載の皮膚美白用組成物。
【請求項５】
前記美白は、しみ、そばかす、黒色点、母斑、黒色腫、紫外線による色素沈着、薬物による色素沈着、炎症後色素沈着、及び皮膚炎から発生する色素沈着からなる群より選択される一つ以上を改善又は緩和するものである、請求項１に記載の皮膚美白用組成物。
【請求項６】
前記ＴＮＦＳＦ１４タンパク質の含量は、当該組成物の総重量に対し０．００００１質量％〜１０質量％である、請求項１に記載の皮膚美白用組成物。
【請求項７】
前記ＴＮＦＳＦ１４タンパク質の投与量は、０．００００１ｍｇ／ｋｇ／日〜２０ｍｇ／ｋｇ／日である、請求項１に記載の皮膚美白用組成物。
【請求項８】
前記組成物の投与経路は経皮である、請求項１に記載の皮膚美白用組成物。
【請求項９】
前記ポリヌクレオチドは、ベクターに含まれて投与されるものである、請求項１に記載の皮膚美白用組成物。
【請求項１０】
当該皮膚美白用組成物は化粧料組成物である、請求項１〜９のいずれか一項に記載の皮膚美白用組成物。
【請求項１１】
ＴＮＦＳＦ１４（ｔｕｍｏｒ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ  ｆａｃｔｏｒ  ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ  ｍｅｍｂｅｒ  １４）タンパク質、これと９０％以上のアミノ酸配列相同性を有するタンパク質、及び前記タンパク質をコードするポリヌクレオチドのうちの一つ以上を含む、体毛色調節用組成物。
【請求項１２】
前記色調節は、灰色化、白化、褐化、赤化、及び黄化からなる群より選択された一つ以上である、請求項１１に記載の体毛色調節用組成物。
【請求項１３】
請求項１１又は１２に記載の組成物を体毛に処理する段階を含む、美容目的の体毛色調節方法。
【請求項１４】
細胞に試験物質を処理する段階；及び
前記段階の後、細胞内のＴＮＦＳＦ１４（ｔｕｍｏｒ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ  ｆａｃｔｏｒ  ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ  ｍｅｍｂｅｒ  １４）タンパク質又はこれをコードするポリヌクレオチドの発現量の変動の有無を確認する段階を含む、皮膚美白効能物質のスクリーニング方法。
【請求項１５】
前記試験物質の処理後に発現されたＴＮＦＳＦ１４（ｔｕｍｏｒ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ  ｆａｃｔｏｒ  ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ  ｍｅｍｂｅｒ  １４）タンパク質又はこれをコードするポリヌクレオチドが処理前の発現量に比べて多い場合、前記試験物質を皮膚美白効能物質と判断する段階を更に含む、請求項１４に記載の皮膚美白効能物質のスクリーニング方法。
【請求項１６】
個体からＴＮＦＳＦ１４（ｔｕｍｏｒ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ  ｆａｃｔｏｒ  ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ  ｍｅｍｂｅｒ  １４）タンパク質又はこれをコードするポリヌクレオチドの発現量を確認する段階を含む、皮膚状態診断のために必要な情報を提供する方法。
【請求項１７】
前記皮膚状態はメラニンに関連した皮膚状態である、請求項１６に記載の皮膚状態診断のために必要な情報を提供する方法。
【請求項１８】
前記発現量の確認は、メラニンを形成させる特定の刺激が加えられる前と後におけるＴＮＦＳＦ１４（ｔｕｍｏｒ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ  ｆａｃｔｏｒ  ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ  ｍｅｍｂｅｒ  １４）タンパク質又はこれをコードするポリヌクレオチドの発現程度を比較することである、請求項１６に記載の皮膚状態診断のために必要な情報を提供する方法。
【請求項１９】
前記皮膚状態診断は、皮膚全体又は特定の皮膚部位でメラニン沈着が増加又は減少して皮膚黒化又は白化が進行する可能性がある皮膚と判定することである、 請求項１６に記載の皮膚状態診断のために必要な情報を提供する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本明細書は、ＴＮＦＳＦ１４タンパク質を含む美白用組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
メラニン（ｍｅｌａｎｉｎ）は、黒い色素とタンパク質の複合体形態を有するフェノール類の生体高分子物質であって、りんご、じゃがいも、バナナの切断面が空気中に曝されるときに生じる褐変又は動物の外被羽毛、皮膚、頭、眼などから観察される。メラニンが過剰産生すると皮膚に沈着してしみやそばかすなどができることから、皮膚美白などに直結し、更には、メラニンによって皮膚老化も促進し皮膚癌が誘発されることもある。
【０００３】
紫外線、炎症、ホルモンなどによってメラニン細胞刺激ホルモン（ｍｅｌａｎｏｃｙｔｅ  ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ  ｈｏｒｍｏｎｅ、ＭＳＨ）が分泌され、ＭＳＨは受容体と反応してメラニン細胞内にｃＡＭＰを向上させてメラニンを合成し、合成されたメラニンはメラニン細胞の外部に分泌して紫外線などから皮膚を保護する役割をするようになる。メラニンの合成は、主にα−ＭＳＨによって調節され、メラニンの合成に関与するタンパク質としては、ＭＩＴＦ、ＴＹＲ、ＴＲＰ１、ＴＲＰ２などが知られている。
【０００４】
ＴＮＦＳＦ１４（ｔｕｍｏｒ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ  ｆａｃｔｏｒ  ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ  ｍｅｍｂｅｒ  １４）タンパク質は、ＴＮＦＲＳＦ１４（ｔｕｍｏｒ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ  ｆａｃｔｏｒ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ  １４）に対する配位子である。該タンパク質は、リンパ球細胞の活性に対する補助刺激要因として作用したり、ヘルペスウイルス感染を抑制する機能をしたりもする。また、Ｔ細胞の増殖を刺激し且つ腫瘍細胞のアポトーシス（ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）を起こしたりするとも知られている。
【０００５】
しかし、ＴＮＦＳＦ１４タンパク質が美白効果又はメラニン生成に関与するという研究はまだ知られていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】韓国登録特許第１０−１７３５５６４号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、一側面において、皮膚美白効果を発揮する新規な物質を見出し、これを美白用組成物に応用するための目的を有する。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明は、一側面において、ＴＮＦＳＦ１４（ｔｕｍｏｒ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ  ｆａｃｔｏｒ  ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ  ｍｅｍｂｅｒ  １４）タンパク質、これと９０％以上のアミノ酸配列相同性を有するタンパク質、及び前記タンパク質をコードするポリヌクレオチドのうちの一つ以上を含む皮膚美白用組成物を提供する。
【０００９】
本発明は、他の側面において、ＴＮＦＳＦ１４タンパク質の発現を増進させる物質を含む皮膚美白用組成物を提供する。
【００１０】
本発明は、他の側面において、ＴＮＦＳＦ１４タンパク質、これと９０％以上のアミノ酸配列相同性を有するタンパク質、及び前記タンパク質をコードするポリヌクレオチドのうちの一つ以上を含む体毛色調節用組成物を提供する。
【００１１】
他の側面において、本発明は、前記組成物を体毛に処理する段階を含む美容目的の体毛色調節方法を提供する。
【００１２】
また他の側面において、本発明は、細胞に試験物質を処理する段階；及び前記段階の後、細胞内のＴＮＦＳＦ１４タンパク質又はこれをコードするポリヌクレオチドの発現量の変動の有無を確認する段階を含む、皮膚美白効能物質のスクリーニング方法を提供する。
【００１３】
また他の側面において、本発明は、試験物質の処理前と後におけるＴＮＦＳＦ１４タンパク質又はこれをコードするポリヌクレオチドの相対的発現程度を示す測定部を含む、皮膚美白効能物質スクリーニングのためのキットを提供する。
【００１４】
また他の側面において、本発明は、個体からＴＮＦＳＦ１４タンパク質又はこれをコードするポリヌクレオチドの発現量を確認する段階を含む、皮膚状態診断のために必要な情報を提供する方法を提供する。
【発明の効果】
【００１５】
本発明は、一側面において、ＴＮＦＳＦ１４タンパク質、これと９０％以上のアミノ酸配列相同性を有するタンパク質、及び前記タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含む新規な美白用組成物、及びこれを用いる方法を提供することで、美白分野に関連した市場拡張及び産業発展に寄与することができるはずである。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】メラノサイトにＴＮＦＳＦ１４タンパク質を処理した場合の色の変化に関する結果を示す。
【図２】メラノサイトにＴＮＦＳＦ１４タンパク質を処理した群と処理していない群のメラニン生成量を比較したグラフである。
【図３】ＴＮＦＳＦ１４タンパク質を濃度毎に異ならせて処理したときのメラニン生成量を相対的に比較した結果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
以下、本明細書を詳しく説明する。
【００１８】
本明細書において「皮膚」とは、動物の体表を覆う組織を意味し、顔又はボディーなどの体表を覆う組織だけではなく、頭皮と毛髪を含む最広義の概念である。
【００１９】
本明細書において「ＴＮＦＳＦ１４」は、腫瘍壊死因子リガンドスーパーファミリーメンバー１４（ｔｕｍｏｒ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ  ｆａｃｔｏｒ  ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ  ｍｅｍｂｅｒ  １４）のことを言い、ＬＩＧＨＴ（ｌｙｍｐｈｏｔｏｘｉｎｓ、ｅｘｈｉｂｉｔｓ  ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ、ａｎｄ  ｃｏｍｐｅｔｅｓ  ｗｉｔｈ  ＨＳＶ  ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄ  ｆｏｒ  ＨＶＥＭ、ａ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ｂｙ  Ｔ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ）と記載されることもある。
【００２０】
本明細書において「組換えタンパク質」は、遺伝子組換えタンパク質とも言い、一つ以上のポリヌクレオチド又は遺伝子を組換え技術によって処理した後、これを通じてコードして作ったタンパク質を指し示す。
【００２１】
ＴＮＦＳＦ１４タンパク質は、腫瘍壊死因子受容体と関連があり、一般に、腫瘍関連研究や炎症関連研究の対象になっていたタンパク質である。しかし、ＴＮＦＳＦ１４タンパク質及びこれに関連した遺伝子などが皮膚に関連した効果、特に美白及び体毛色の調節に関する効果を示すか否かについては一切知られていなかった。
【００２２】
本明細書は、ＴＮＦＳＦ１４タンパク質、これと９０％以上のアミノ酸配列相同性を有するタンパク質、及び前記タンパク質をコードするポリヌクレオチドがメラノサイトのメラニン生成を抑制することを実験的に究明して、前記タンパク質及びポリヌクレオチドを美白用組成物、体毛色調節用組成物、体毛色調節方法、皮膚美白効能物質のスクリーニング方法、皮膚美白効能物質スクリーニングのためのキット、皮膚状態診断方法又はこのために必要な情報を提供する方法などに用いることができることを立証した。
【００２３】
本発明は、一側面において、ＴＮＦＳＦ１４（ｔｕｍｏｒ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ  ｆａｃｔｏｒ  ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ  ｍｅｍｂｅｒ  １４）タンパク質、これと９０％以上のアミノ酸配列相同性を有するタンパク質、及び前記タンパク質をコードするポリヌクレオチドのうちの一つ以上を含む皮膚美白用組成物に関する。
【００２４】
本明細書に開示された、アミノ酸配列相同性を有するタンパク質は、ＴＮＦＳＦ１４タンパク質と８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列相同性を有するタンパク質を含んでいてよい。また、本明細書に開示されたタンパク質は、配列番号１を含むタンパク質又はその断片と１個以上のアミノ酸、２個以上のアミノ酸、３個以上のアミノ酸、４個以上のアミノ酸、５個以上のアミノ酸、６個以上のアミノ酸又は７個以上のアミノ酸が変化したタンパク質を含んでいてよい。
【００２５】
本発明の一側面において、前記タンパク質は、標識物質とコンジュゲートされた形態で組成物に含まれていてよい。他の側面によれば、前記標識物質は、蛍光物質又は造影物質であってよい。本発明の他の側面において、前記蛍光物質は、ＦＩＴＣ（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ  ｉｓｏｔｈｉｏｃｙａｎａｔｅ）であってよい。
【００２６】
本発明の一側面において、アミノ酸変化は、ペプチド又はタンパク質の物理化学的特性を変更させる性質に属する。例えば、ペプチドの熱安定性を向上させ、基質特異性を変更させ、最適のｐＨを変化させるなどのアミノ酸変化が挙げられる。
【００２７】
本明細書において「アミノ酸」とは、自然的にペプチド又はタンパク質に統合される２２個の標準アミノ酸だけでなく、Ｄ−異性体及び変形されたアミノ酸を含む。これにより、本発明の一側面において、ペプチドは、Ｄ−アミノ酸を含むペプチドであってよい。一方、本発明の他の側面において、ペプチド又はタンパク質は、翻訳後修飾（ｐｏｓｔ-ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ）された非標準アミノ酸などを含んでいてよい。翻訳後修飾の例は、リン酸化（ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ）、グリコシル化（ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ）、アシル化（ａｃｙｌａｔｉｏｎ）（例えば、アセチル化（ａｃｅｔｙｌａｔｉｏｎ）、ミリストイル化（ｍｙｒｉｓｔｏｙｌａｔｉｏｎ）及びパルミトイル化（ｐａｌｍｉｔｏｙｌａｔｉｏｎ）を含む）、アルキル化（ａｌｋｙｌａｔｉｏｎ）、カルボキシル化（ｃａｒｂｏｘｙｌａｔｉｏｎ）、ヒドロキシル化（ｈｙｄｒｏｘｙｌａｔｉｏｎ）、グリコシル化反応（ｇｌｙｃａｔｉｏｎ）、ビオチン化（ｂｉｏｔｉｎｙｌａｔｉｏｎ）、ユビキチン化（ｕｂｉｑｕｉｔｉｎｙｌａｔｉｏｎ）、化学的性質の変化（例えば、β−除去脱イミド化、脱アミド化）及び構造的変化（例えば、二硫化物ブリッジの形成）を含む。また、ペプチドコンジュゲートを形成するための架橋剤（ｃｒｏｓｓｌｉｎｋｅｒ）との結合過程で起こる化学反応によって生じるアミノ酸の変化、例えば、アミノ基、カルボキシル基又は側鎖での変化のようなアミノ酸の変化を含む。
【００２８】
本明細書に開示されたタンパク質又はペプチドは、自然そのままの供給源から同定及び分離された野生型タンパク質又はペプチドであってよい。一方、本明細書に開示されたタンパク質又はペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列全体又はその断片に比べて一つ以上のアミノ酸が置換、欠失及び／又は挿入されたアミノ酸配列を含む、変異体であってよい。変異体においてのみならず、野生型タンパク質又は野生型ポリペプチドにおけるアミノ酸変化は、タンパク質の折りたたみ（ｆｏｌｄｉｎｇ）及び／又は活性に有意な影響を及ぼさない保存性アミノ酸置換を含む。保存性置換の例としては、塩基性アミノ酸（アルギニン、リシン及びヒスチジン）、酸性アミノ酸（グルタミン酸及びアスパラギン酸）、極性アミノ酸（グルタミン及びアスパラギン）、疎水性アミノ酸（ルシン、イソロイシン、バリン及びメチオニン）、芳香族アミノ酸（フェニルアラニン、トリプトファン及びチロシン）、及び小さいアミノ酸（グリシン、アラニン、セリン及びスレオニン）の群の範囲内にある。一般的に特異的活性を変更させないアミノ酸置換が本分野において公知となっている。最もよく生じる交換はＡｌａ／Ｓｅｒ、Ｖａｌ／Ｉｌｅ、Ａｓｐ／Ｇｌｕ、Ｔｈｒ／Ｓｅｒ、Ａｌａ／Ｇｌｙ、Ａｌａ／Ｔｈｒ、Ｓｅｒ／Ａｓｎ、Ａｌａ／Ｖａｌ、Ｓｅｒ／Ｇｌｙ、ＴＹＲ／Ｐｈｅ、Ａｌａ／Ｐｒｏ、Ｌｙｓ／Ａｒｇ、Ａｓｐ／Ａｓｎ、Ｌｅｕ／Ｉｌｅ、Ｌｅｕ／Ｖａｌ、Ａｌａ／Ｇｌｕ、及びＡｓｐ／Ｇｌｙ、そしてこれらと反対のものなどである。保存的置換の他の例は次の表のとおりである。
【００２９】
【表１】
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【００３０】
タンパク質又はペプチドの生物学的特性における実在的な変形は、（ａ）置換領域内のポリペプチド骨格の構造、例えば、シート又は螺旋立体構造を維持するうえでのこれらの効果、（ｂ）標的部位における前記分子の電荷又は疎水性を維持するうえでのこれらの効果、又は（ｃ）側鎖のバルクを維持するうえでのこれらの効果が相当異なる置換部を選択することで行われる。天然残基は、通常の側鎖特性を基準にして次のグループに分けられる：
（１）疎水性：ノルロイシン、ｍｅｔ、ａｌａ、ｖａｌ、ｌｅｕ、ｉｌｅ；
（２）中性親水性：ｃｙｓ、ｓｅｒ、ｔｈｒ；
（３）酸性：ａｓｐ、ｇｌｕ；
（４）塩基性：ａｓｎ、ｇｌｎ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、ａｒｇ；
（５）鎖配向に影響を及ぼす残基：ｇｌｙ、ｐｒｏ；及び
（６）芳香族：ＴＲＰ、ＴＹＲ、ｐｈｅ
【００３１】
非保存的置換は、これら部類のうちの一つの構成員をもう一つの部類に交換することでなされる。タンパク質又はペプチドの適当な立体構造を維持することと関連のない如何なるシステイン残基も一般的にセリンに置換されて前記分子の酸化的安定性を向上させ、異常な架橋結合を防止することができる。逆に言えば、システイン結合を前記タンパク質又はペプチドに加えてその安定性を向上させることができる。
【００３２】
タンパク質又はペプチドの他の類型のアミノ酸変異体は、抗体のグリコシル化パターンが変化されたものである。変化という意味は、ペプチドから発見された一つ以上の炭水化物残基の欠失及び（又は）タンパク質又はペプチド中に存在していない一つ以上のグリコシル化部位の付加を示す。
【００３３】
タンパク質又はペプチドのグリコシル化は、典型的にＮ−結合された、又はＯ−結合されたものである。Ｎ−結合とは、炭水化物残基がアスパラギン残基の側鎖に付着したことをいう。トリペプチド配列アスパラギン−Ｘ−セリン及びアスパラギン−Ｘ−スレオニン（ここで、Ｘはプロリンを除く任意のアミノ酸）は、炭水化物残基をアスパラギン側鎖に酵素的に付着させるための認識配列である。したがって、これらのトリペプチド配列のうちの一つがポリペプチドに存在することで、潜在的なグリコシル化部位が生成される。Ｏ−結合されたグリコシル化は、糖Ｎ−アセチルガラクトサミン、ガラクトース又はキシロースのうちの一つをヒドロキシアミノ酸、最も通常的には、セリン又はスレオニンに付着させることを意味するが、５−ヒドロキシプロリン又は５−ヒドロキシリシンを用いていてもよい。
【００３４】
タンパク質又はペプチドへのグリコシル化部位の付加は、一つ以上の前記言及されたトリペプチド配列を含むようにアミノ酸配列を変化させることで便利に行われる（Ｎ−結合されたグリコシル化部位の場合）。このような変化は、一つ以上のセリン又はスレオニン残基を最初抗体の配列に付加するか、又はこれらの残基で置換することで行われていてもよい（Ｏ−結合されたグリコシル化部位の場合）。
【００３５】
一具現例として、前記ＴＮＦＳＦ１４タンパク質は、配列番号１で表されるアミノ酸配列からなるものであってよい。本発明の他の一側面において、配列番号１の配列を有するタンパク質、配列番号１の配列の断片であるペプチド、前記タンパク質又はペプチド配列と９０％以上の配列相同性を有するタンパク質又はペプチドは、合成し又は組換えして作ったものを含む。
【００３６】
他の具現例として、前記ポリヌクレオチドは、配列番号１で表されるアミノ酸配列をコードする塩基配列からなるものであってよい。
【００３７】
他の具現例として、前記ポリヌクレオチドは、ＴＮＦＳＦ１４遺伝子のｍＲＮＡであってよい。
【００３８】
他の具現例として、前記組成物は、メラニン生成を抑制し又はメラニンの発現を減少させるものであってよい。メラニン（ｍｅｌａｎｉｎ）は、動物の外皮羽毛、皮膚、頭、眼などから観察されるが、メラニンが過剰産生すると皮膚に沈着してしみ又はそばかすなどができ且つ皮膚老化も促進し、皮膚癌を誘発することもある。前記メラニンの過剰産生による疾患又は症状は、しみ、そばかす、老人性しみ、細かいほこり、表皮メラニン細胞性病変（Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  ｍｅｌａｎｏｃｙｔｉｃ  ｌｅｓｉｏｎ）、カフェオレ斑（Ｃａｆｅ'ｓ  ａｕ  ｌａｉｔ  ｍａｃｕｌｅｓ）、母斑、ベッカー母斑（Ｂｅｃｋｅｒ'ｓ  Ｎｅｖｕｓ）、扁平母斑（Ｎｅｖｕｓ  Ｓｐｉｌｕｓ）、黒子（Ｌｅｎｔｉｇｉｎｅｓ）、黒色点、真皮メラニン細胞性病変（Ｄｅｒｍａｌ  ｍｅｌａｎｏｃｙｔｉｃ  ｌｅｓｉｏｎｓ）、蒙古斑（Ｍｏｎｇｏｌｉａｎ  ｓｐｏｔ）、太田母斑（Ｎｅｖｕｓ  ｏｆ  Ｏｔａ）、遅発性両側性太田母斑様色素斑（Ａｃｑｕｉｒｅｄ  ｂｉｌａｔｅｒａｌ  ｎｅｖｕｓ  ｏｆ  Ｏｔａ−ｌｉｋｅ ｍａｃｕｌｅｓ）、伊藤母斑（Ｎｅｖｕｓ  ｏｆ  Ｉｔｏ）、青色母斑（Ｂｌｕｅ  ｎｅｖｕｓ）、メラニン形成細胞性母斑（Ｍｅｌａｎｏｃｙｔｉｃ  ｎｅｖｕｓ）、境界性母斑（Ｊｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｎｅｖｕｓ）、複合性母斑（Ｃｏｍｐｏｕｎｄ  ｎｅｖｕｓ）、真皮内母斑（Ｉｎｔｒａｄｅｒｍａｌ  ｎｅｖｕｓ）、暈状母斑（Ｈａｌｏ  ｎｅｖｕｓ）、先天性メラニン細胞性母斑（Ｃｏｎｇｅｎｉｔａｌ  ｎｅｖｏｃｙｔｉｃ  ｎｅｖｕｓ）、スピッツ母斑（Ｓｐｉｔｚ  ｎｅｖｕｓ）、異形成母斑（Ｄｙｓｐｌａｓｔｉｃ  ｎｅｖｕｓ）、黒色腫（Ｍｅｌａｎｏｍａ）、悪性黒字型黒色腫（Ｌｅｎｔｉｇｏ  ｍａｌｉｇｎａ  ｍｅｌａｎｏｍａ）、表在拡大型黒色腫（Ｓｕｐｅｒｆｉｃｉａｌ  ｓｐｒｅａｄｉｎｇ  ｍｅｌａｎｏｍａ）、末端性黒子性黒色腫（Ａｃｒａｌ  ｌｅｎｔｉｇｉｎｏｕｓ  ｍｅｌａｎｏｍａ）、結節型黒色腫（Ｎｏｄｕｌａｒ  ｍｅｌａｎｏｍａ）、色素性基底細胞癌（ｐｉｇｍｅｎｔ  ｂａｓａｌ  ｃｅｌｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、色素性皮膚線維腫（ｄｅｒｍａｔｏｆｉｂｒｏｍａｓ）、色素性類皮嚢胞（ｄｅｒｍｏｉｄ  ｃｙｓｔ）、色素性ケロイド（ｋｅｌｏｉｄ）、紫外線による色素沈着、薬物による色素沈着、炎症後色素沈着、及び皮膚炎から発生する色素沈着、及び色素性角化棘細胞腫（ｋｅｒａｔｏａｃａｎｔｈｏｍａｓ）からなる群より選択される一つ以上であると知られている。本発明の一側面に係るＴＮＦＳＦ１４タンパク質及びこれをコードするポリヌクレオチドは、細胞においてメラニン形成を抑制させることができるところ、メラニン生成を抑制させる場合、前記疾患又は症状を改善することができることから、本発明は、一側面において、前記疾患又は症状を改善することができるものである（実験例１参照）。
【００３９】
また他の具現例として、前記美白は、しみ、そばかす、黒色点、母斑、黒色腫、紫外線による色素沈着、薬物による色素沈着、炎症後色素沈着、及び皮膚炎から発生する色素沈着からなる群より選択される一つ以上を改善又は緩和するものであってよい。
【００４０】
また他の具現例として、前記タンパク質の含量は、前記組成物の総重量に対し０．００００１質量％〜１０質量％であってよい。一側面において、前記含量は、０．００００１質量％以上、０．００００５質量％以上、０．０００１質量％以上、０．０００５質量％以上、０．００１質量％以上、０．００５質量％以上、０．０１質量％以上、０．０５質量％以上、０．１質量％以上、０．５質量％以上、１質量％以上、３質量％以上、５質量％以上、又は８質量％以上であってよい。他の側面において、前記含量は、１０質量％以下、８質量％以下、５質量％以下、３質量％以下、２質量％以下、１質量％以下、０．５質量％以下、０．１質量％以下、０．０５質量％以下、０．０１質量％以下、０．００５質量％以下、０．００１質量％以下、０．０００５質量％以下、０．０００１質量％以下、０．００００５質量％以下、又は０．００００３質量％以下であってよい。
【００４１】
他の具現例として、前記タンパク質の投与量は、０．００００１ｍｇ／ｋｇ／日〜２０ｍｇ／ｋｇ／日であってよい。一側面において、前記投与量は、０．００００１ｍｇ／ｋｇ／日以上、０．００００５ｍｇ／ｋｇ／日以上、０．０００１ｍｇ／ｋｇ／日以上、０．０００５ｍｇ／ｋｇ／日以上、０．００１ｍｇ／ｋｇ／日以上、０．００５ｍｇ／ｋｇ／日以上、０．０１ｍｇ／ｋｇ／日以上、０．０５ｍｇ／ｋｇ／日以上、０．１ｍｇ／ｋｇ／日以上、０．５ｍｇ／ｋｇ／日以上、１ｍｇ／ｋｇ／日以上、３ｍｇ／ｋｇ／日以上、５ｍｇ／ｋｇ／日以上、８ｍｇ／ｋｇ／日以上、１０ｍｇ／ｋｇ／日以上、１４ｍｇ／ｋｇ／日以上、１６ｍｇ／ｋｇ／日以上、又は１８ｍｇ／ｋｇ／日以上であってよい。他の側面において、前記投与量は、２０ｍｇ／ｋｇ／日以下、１８ｍｇ／ｋｇ／日以下、１６ｍｇ／ｋｇ／日以下、１４ｍｇ／ｋｇ／日以下、１２ｍｇ／ｋｇ／日以下、１０ｍｇ／ｋｇ／日以下、８ｍｇ／ｋｇ／日以下、６ｍｇ／ｋｇ／日以下、４ｍｇ／ｋｇ／日以下、２ｍｇ／ｋｇ／日以下、１ｍｇ／ｋｇ／日以下、０．５ｍｇ／ｋｇ／日以下、０．１ｍｇ／ｋｇ／日以下、０．０５ｍｇ／ｋｇ／日以下、０．０１ｍｇ／ｋｇ／日以下、０．００５ｍｇ／ｋｇ／日以下、０．００１ｍｇ／ｋｇ／日以下、０．０００５ｍｇ／ｋｇ／日以下、０．０００１ｍｇ／ｋｇ／日以下、又は０．００００５ｍｇ／ｋｇ／日以下であってよい。前記成分の投与量決定は通常の技術者の水準内にあり、１日の投与量は投与しようとする対象の進行程度、発病時期、年齢、健康状態、合併症などの多様な要因によって変わり得る。
【００４２】
一具現例として、前記組成物の投与経路は、経皮、皮下、皮内、筋肉内、血管内、又は経口であってよいが、これらに制限されるものではなく、経皮投与が好ましい。
【００４３】
他の具現例として、前記ポリヌクレオチドは、ベクターに含まれて投与されるものであってよい。前記ベクターは、通常の技術者が用いることができ、且つ前記ポリヌクレオチドを含むことができるものであれば特に制限されることなく用いていてよい。
【００４４】
他の具現例として、前記美白用組成物は化粧料組成物であってよい。
【００４５】
本発明は、他の側面において、ＴＮＦＳＦ１４（ｔｕｍｏｒ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ  ｆａｃｔｏｒ  ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ  ｍｅｍｂｅｒ  １４）タンパク質の発現を増進させる物質を含む皮膚美白用組成物であってよい。ＴＮＦＳＦ１４タンパク質の発現を増進させる場合、ＴＮＦＳＦ１４タンパク質の増加された量によってメラノサイトのメラニン含量を減少させることから、ＴＮＦＳＦ１４タンパク質の発現を増進させる物質は、まさしく美白用組成物として使用できるはずだからである。
【００４６】
本発明は、他の側面において、ＴＮＦＳＦ１４（ｔｕｍｏｒ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ  ｆａｃｔｏｒ  ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ  ｍｅｍｂｅｒ  １４）タンパク質、これと９０％以上のアミノ酸配列相同性を有するタンパク質、及び前記タンパク質をコードするポリヌクレオチドのうちの一つ以上を含む体毛色調節用組成物であってよい。
【００４７】
一具現例として、前記体毛は、身体の毛はいずれも含むが、好ましくは、毛髪であってよい。
【００４８】
他の具現例として、前記色調節は、白化、灰色化、褐化、黄化、及び赤化からなる群より選択された一つ以上であってよい。
【００４９】
本発明は、また他の側面において、前記組成物及びマニュアルを含む美白用キットであってよい。
【００５０】
本発明は、また他の側面において、前記組成物及びマニュアルを含む体毛色調節用キットであってよい。
【００５１】
一側面上、本発明は、本発明の一側面に係る組成物を体毛に処理する段階を含む美容目的の体毛色調節方法であってよい。
【００５２】
他の側面において、本発明は、細胞に試験物質を処理する段階；及び
前記段階の後、細胞内のＴＮＦＳＦ１４（ｔｕｍｏｒ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ  ｆａｃｔｏｒ  ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ  ｍｅｍｂｅｒ  １４）タンパク質又はこれをコードするポリヌクレオチドの発現量の変動の有無を確認する段階を含む、皮膚美白効能物質のスクリーニング方法であってよい。
【００５３】
一具現例として、本発明は、前記試験物質の処理後に発現されたＴＮＦＳＦ１４タンパク質又はこれをコードするポリヌクレオチドが処理前の発現量に比べて多い場合、前記試験物質を皮膚美白効能物質と判断する段階を更に含む、皮膚美白効能物質のスクリーニング方法であってよい。
【００５４】
本発明は、他の側面において、試験物質の処理前と後におけるＴＮＦＳＦ１４（ｔｕｍｏｒ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ  ｆａｃｔｏｒ  ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ  ｍｅｍｂｅｒ  １４）タンパク質又はこれをコードするポリヌクレオチドの相対的発現程度を示す測定部を含む、皮膚美白効能物質スクリーニングのためのキットであってよい。
【００５５】
一具現例として、前記キットは、メラノサイト及び指示書を更に含みと、前記指示書には、前記皮膚美白効能物質のスクリーニング方法が記載されているものであってよい。
【００５６】
本発明は、また他の側面において、個体からＴＮＦＳＦ１４（ｔｕｍｏｒ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ  ｆａｃｔｏｒ  ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ  ｍｅｍｂｅｒ  １４）タンパク質又はこれをコードするポリヌクレオチドの発現量を確認する段階を含む、皮膚状態診断のために必要な情報を提供する方法であってよい。
【００５７】
一具現例として、前記皮膚状態は、メラニンに関連した皮膚状態であってよい。
【００５８】
本明細書において「メラニンに関連した皮膚状態」は、メラニン色素又はメラニン細胞と直接的又は間接的に関係のある皮膚状態を意味し、例えば、前記皮膚状態は、メラニンを形成させる刺激に対して敏感度が高い又は低い皮膚、今後メラニンが更に沈着する可能性又は抑制される可能性がある皮膚、メラニンに関連した皮膚疾患にかかる危険が高い又は低い皮膚、色が暗い又は明るい皮膚を含む。
【００５９】
本発明の一側面によれば、前記刺激は外因性刺激及び内因性刺激のうち一つ以上であってよい。
【００６０】
本発明の一具現例によれば、前記外因性刺激は、紫外線、物理的圧力、傷、重金属による刺激、化学物質による刺激、微生物による感染、及びストレスを含むものであってよい。
【００６１】
本発明の他の具現例によれば、前記内因性刺激は、体内酸化的ストレス変化、老化、炎症、ホルモン変化、肝臓を含む消化器官機能異常、遺伝子異常、代謝機能異常、栄養状態異常、ビタミン及び無機質の過不足を含むものであってよい。
【００６２】
他の具現例として、前記発現量の確認は、メラニンを形成させる特定の刺激が加えられる前と後におけるＴＮＦＳＦ１４タンパク質又はこれをコードするポリヌクレオチドの発現程度を比較することであってよい。
【００６３】
一具体例において、前記発現量の確認又は発現程度の比較は、公知の技術、例えば、免疫蛍光分析、ウエスタンブロット（ｗｅｓｔｅｒｎ  ｂｌｏｔ）、ドットブロット（ｄｏｔ  ｂｌｏｔ）、ＥＬＩＳＡ、ノーザンブロット（ｎｏｒｔｈｅｒｎ  ｂｌｏｔ）、ＰＣＲ、ＲＴ−ｑＰＣＲ、ＧＣ−ＭＳ、ＬＣ−ＭＳ、ＮＭＲなどから当業者が適宜選択してよく、これらに制限されるものではない。
【００６４】
例えば、前記発現量の確認又は発現程度の比較は、メラニン細胞を採取し、又は細胞を分離することなく個体から直接ＴＮＦＳＦ１４タンパク質又はこれをコードするポリヌクレオチドの発現程度を測定して比較することであってよい。前記採取又は測定は、当業者において周知の如何なる方法にて行われてもよい。
【００６５】
本発明のまた他の具現例によれば、前記ＴＮＦＳＦ１４タンパク質又はこれをコードするポリヌクレオチドの発現量の確認又は発現程度の比較は、特定の二つの時点で、一個体の皮膚全体又は特定の皮膚部位におけるＴＮＦＳＦ１４タンパク質又はこれをコードするポリヌクレオチドの発現量又は発現程度を比較することであってよい。例えば、皮膚全体又は特定の皮膚部位からメラニン細胞を採取し、又は細胞を分離することなく個体から直接ＴＮＦＳＦ１４タンパク質又はこれをコードするポリヌクレオチドの発現量又は発現程度を測定して比較することであってよい。前記採取又は測定は、当業界において周知の如何なる方法にて行ってもよい。
【００６６】
また他の具現例として、前記皮膚状態診断は、皮膚全体又は特定の皮膚部位でメラニン沈着が増加又は減少して皮膚黒化又は白化が進行する可能性がある皮膚と判定することであってよい。本明細書において「皮膚黒化」は、種々の原因又は刺激が発生したり消えたりして皮膚全体又は特定の部位の皮膚が暗いか、黒く変わる現象を含む。また、本明細書において「皮膚白化」は、種々の原因又は刺激が発生したり消えたりして皮膚全体又は特定の部位の皮膚が明るいか、白く変わる現象を含む。
【００６７】
本発明の他の側面によれば、前記皮膚状態診断は、ＴＮＦＳＦ１４タンパク質又はこれをコードするポリヌクレオチドが発現された程度に応じて皮膚の黒化又は白化可能性に関する等級を判定することであってよい。
【００６８】
一具現例によれば、前記等級は、所定の数の個体から入手した皮膚試料から得たＴＮＦＳＦ１４タンパク質又はこれをコードするポリヌクレオチドの発現程度に関する資料に基づいて定めた基準値、及びこれに基づいて区間を分けて定めた等級であってよい。
【００６９】
前記組成物が薬学組成物である場合、薬学組成物は、保存剤、防腐剤、安定化剤、水和剤又は乳化促進剤、浸透圧調節のための塩及び／又は緩衝剤などの薬剤学的補助剤、並びにその他治療的に有用な物質を更に含有していてよく、通常的な方法によって多様な経口投与剤又は非経口投与剤の形態で剤形化していてよい。
【００７０】
前記組成物の投与経路が経口投与である場合、例えば、錠剤、丸剤、硬質及び軟質カプセル剤、液剤、懸濁剤、乳化剤、シロップ剤、粉剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、ペレット剤などの剤形を取っていてよく、これらの剤形は、有効成分の他、界面活性剤、希釈剤（例：ラクトース、デキストロース、スクロース、マンニトール、ソルビトール、セルロース及びグリシン）、滑沢剤（例：シリカ、タルク、ステアリン酸及びそのマグネシウム又はカルシウム塩、並びにポリエチレングリコール）を含有していてよい。錠剤は、更に、マグネシウムアルミニウムシリケート、澱粉ペースト、ゼラチン、トラガカンス、メチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース及びポリビニルピロリジンといった結合剤を含有していてよく、場合によって、澱粉、寒天、アルギン酸又はそのナトリウム塩といった崩解剤、吸収剤、着色剤、香味剤、及び甘味料などの薬剤学的添加剤を含有していてよい。前記錠剤は、通常の混合、顆粒化又はコーティング方法によって製造されていてよい。
【００７１】
また、前記組成物の投与経路が非経口である場合、非経口投与形態としては、経皮投与型剤形であってよく、例えば、注射剤、点滴剤、軟膏、ローション、ゲル、クリーム、スプレー、懸濁剤、乳剤、坐剤、パッチなどの剤形であってよいが、これらに限定されるものではない。
【００７２】
前記薬学組成物は、非経口、直腸、局所、経皮、皮下などに投与されていてよい。
【００７３】
前記薬学組成物は皮膚外用剤であってよく、前記皮膚外用剤とは、外皮に塗布されるものであればいずれも含み得る組成物の総称であって、多様な剤形の医薬品又は医薬部外品がこれに含まれ得る。
【００７４】
本発明のまた他の側面によれば、前記組成物は化粧料組成物である皮膚美白用組成物であってよい。
【００７５】
前記化粧料組成物には、機能性添加物及び一般的な化粧料組成物に含まれる成分が更に含まれていてよい。前記機能性添加物としては、水溶性ビタミン、脂溶性ビタミン、高分子ペプチド、高分子多糖、スフィンゴ脂質及び海草エキスからなる群より選択された成分を含んでいてよい。その他含まれる配合成分としては、油脂成分、保湿剤、エモリエント剤、界面活性剤、有機及び無機顔料、有機粉体、紫外線吸収剤、防腐剤、殺菌剤、酸化防止剤、植物抽出物、ｐＨ調整剤、アルコール、色素、香料、血行促進剤、冷感剤、制汗剤、精製水などが挙げられる。
【００７６】
前記化粧料組成物は、その剤形が特に限定されず、目的とするところに応じて適宜選択されればよい。例えば、スキンローション、スキンソフナー、スキントナー、アストリンゼント、ローション、ミルクローション、モイスチャーローション、栄養ローション、マッサージクリーム、栄養クリーム、モイスチャークリーム、ハンドクリーム、ファウンデーション、エッセンス、栄養エッセンス、パック、石鹸、クレンジングフォーム、クレジングローション、クレンジングクリーム、ボディーローション、及びボディークレンザーからなる群より選択されたいずれか一つ以上の剤形で製造されていてよいが、これらに制限されるものではない。
【００７７】
本発明の一側面に係る剤形がペースト、クリーム、又はゲルである場合は、担体成分として、動物繊維、植物繊維、ワックス、パラフィン、澱粉、トラガカント、セルロース誘導体、ポリエチレングリコール、シリコン、ベントナイト、シリカ、タルク、又は酸化亜鉛などが用いられていてよい。
【００７８】
本発明の一側面に係る剤形がパウダー又はスプレーである場合は、担体成分として、ラクトース、タルク、シリカ、水酸化アルミニウム、ケイ酸カルシウム、又はポリアミドパウダーが用いられていてよく、特にスプレーである場合は、更に、クロロフルオロハイドロカーボン、プロパン／ブタン、又はジメチルエーテルのような推進剤を含んでいてよい。
【００７９】
本発明の一側面に係る剤形が溶液又は乳濁液である場合は、担体成分として、溶媒、溶媒和剤、又は乳濁化剤が用いられ、例えば、水、エタノール、イソプロパノール、エチルカーボネート、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１,３−ブチルグリコールオイル、グリセロール脂肪族エステル、ポリエチレングリコール、又はソルビタンの脂肪酸エステルがある。
【００８０】
本発明の一側面に係る剤形が懸濁液である場合は、担体成分として、水、エタノール、又はプロピレングリコールのような液状希釈剤、エトキシル化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトールエステル、及びポリオキシエチレンソルビタンエステルのような懸濁剤、微結晶性セルロース、アルミニウムメタヒドロキシド、ベントナイト、寒天、又はトラガカントなどが用いられていてよい。
【００８１】
本発明の一側面に係る剤形が界面活性剤含有クレンジングである場合は、担体成分として、脂肪族アルコールスルフェート、脂肪族アルコールエーテルスルフェート、スルホサクシネートモノエステル、イセチオン酸、イミダゾリウム誘導体、メチルタウレート、サルコシネート、脂肪酸アミドエーテルスルフェート、アルキルアミドベタイン、脂肪族アルコール、脂肪酸グリセリド、脂肪酸ジエタノールアミド、植物性油、ラノリン誘導体、又はエトキシル化グリセロール脂肪酸エステルなどが用いられていてよい。
【００８２】
本発明の他の側面によれば、前記組成物は食品又は健康食品組成物である皮膚美白用組成物であってよい。
【００８３】
前記食品又は健康食品組成物は、液状又は固体状態の剤形であってよく、例えば、各種の食品類、飲料、ガム、茶、ビタミン複合剤、健康機能食品類、健康補助食品類などがあり、粉末、顆粒、錠剤、カプセル又は飲料の形態で使用されていてよい。各剤形の食品組成物は、有効成分の他、当該分野において通常的に用いられる成分を剤形又は使用目的に応じて当業者が困難なく適宜選定して配合していてもよく、他の原料と同時に適用した場合に相乗効果が奏されることがある。
【００８４】
本明細書に開示された有効成分の他に含有し得る液体成分には特に制限点がなく、通常の飲料と同様に種々の香味剤又は天然炭水化物などを追加成分として含んでいてよい。前記天然炭水化物の例としては、葡萄糖、果糖などの単糖類、マルトース、スクロースなどの二糖類及びデキストリン、シクロデキストリンなどの通常的な糖及びキシリトール、ソルビトール、エリスリトールなどの糖アルコールなどがある。前記香味剤としては、天然香味剤(ソーマチン、ステビア抽出物(例えば、レバウディオサイドＡ、グリチルリチンなど))及び合成香味剤(例えば、サッカリン、アスパルテームなど)を有利に使用していてよい。前記天然炭水化物の割合は、本明細書に開示された組成物１００ｍｌ当たり又は１００ｇ当たり一般的に約１〜２０ｇ、一側面において、約５〜１２ｇであってよい。
【００８５】
前記食品組成物は、一側面において、多様な栄養剤、ビタミン、鉱物(電解質)、合成風味剤及び天然風味剤などの風味剤、着色剤及び増進剤(チーズ、チョコレートなど)、ペクト酸及びその塩、アルギン酸及びその塩、有機酸、保護性コロイド増粘剤、ｐＨ調節剤、安定化剤、防腐剤、グリセリン、アルコール、炭酸飲料に使用される炭酸化剤などを含んでいてよい。他の側面において、天然果物ジュース及び野菜飲料の製造のための果肉を含んでいてよい。これらの成分は、独立的に又は組み合わせて使用していてよい。前記添加剤の割合は種々であってよいが、本明細書に開示された組成物１００重量部当たり０．００１〜約２０重量部の範囲で選択されるのが一般的である。
【００８６】
皮膚色素沈着とＴＮＦＳＦ１４タンパク質又はこれをコードするポリヌクレオチドとの関係については現在まで知られたところがないが、本発明は、一側面において、かかる関係を究明したものである。本発明は、このような関係を用いて皮膚美白効能を発揮する物質をスクリーニングする方法を見出した。また、このような点を応用して、ＴＮＦＳＦ１４タンパク質又はこれをコードするポリヌクレオチドの発現程度を確認することができる、又は示すことができる測定部を含むキットの製作が可能である。さらには、ＴＮＦＳＦ１４タンパク質又はこれをコードするポリヌクレオチドの発現程度を確認して、メラニンに関連した皮膚状態を評価し又は診断するうえで必要な情報を提供することができるものである。
【００８７】
以下、実施例、実験例を通じて、本発明の一側面に係る構成及び効果をより具体的に説明する。なお、下記の例は、本発明についての理解を助けるために例示の目的のみにて提供されたものであるに過ぎず、本発明の範疇及び範囲がそれらによって制限されるものではない。
【００８８】
［実施例１］実験材料の準備
ＴＮＦＳＦ１４（ｔｕｍｏｒ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ  ｆａｃｔｏｒ  ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ  ｍｅｍｂｅｒ  １４）はリガンド遺伝子であって、当該遺伝子がコードするタンパク質に関する実験は組換えタンパク質（ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ｐｒｏｔｅｉｎ）で実施する場合が一般的である。本発明の一側面に係る用途及び効果を確認するために、ＴＮＦＳＦ１４の組換えタンパク質を入手した。
【００８９】
具体的に、Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ社（６１４  ＭｃＫｉｎｌｅｙ  Ｐｌａｃｅ  ＮＥ、Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ＭＮ  ５５４１３、ＵＳ）から組換え体ＴＮＦＳＦ１４タンパク質（ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ｈｕｍａｎ  ＬＩＧＨＴ／ＴＮＦＳＦ１４  ｐｒｏｔｅｉｎ）を購買した（カタログ番号６６４−ＬＩ、Ｇｅｎｂａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．  O４３５５７）。
【００９０】
組換え体ＴＮＦＳＦ１４タンパク質のアミノ酸配列は次のとおりである。
配列番号１：
MEESVVRPSVFVVDGQTDIPFTRLGRSHRRQSCSVARVGLGLLLLLMGAGLAVQGWFLLQLHWRLGEMVTRLPDGPAGSWEQLIQERRSHEVNPAAHLTGANSSLTGSGGPLLWETQLGLAFLRGLSYHDGALVVTKAGYYYIYSKVQLGGVGCPLGLASTITHGLYKRTPRYPEELELLVSQQSPCGRATSSSRVWWDSSFLGGVVHLEAGEKVVVRVLDERLVRLRDGTRSYFGAFMV
【００９１】
ＴＮＦＳＦ１４遺伝子の塩基配列（又はｍＲＮＡ塩基配列）は、前記配列番号１のアミノ酸配列に対応する塩基からなり、下記の配列番号２（又はＧｅｎｂａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  ｎｕｍｂｅｒ  ＮＭ＿００３８０７）の塩基配列（表２Ａ及び表２Ｂ）のとおりである。
【００９２】
【表２Ａ】
2019006775.tif 000004
【００９３】
【表２Ｂ】
2019006775.tif 000005
【００９４】
実験に使用するメラノサイトは、市中で容易に入手可能な細胞を使用した。本発明の一側面に係る実験では、ｌｉｆｅ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社から購買した色素沈着が普通水準のメラノサイト（Ｈｕｍａｎ  Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  Ｍｅｌａｎｏｃｙｔｅｓ、ｎｅｏｎａｔａｌ、ｍｏｄｅｒａｔｅｌｙ  ｐｉｇｍｅｎｔｅｄ  ｄｏｎｏｒ、ＨＥＭｎ−ＭＰ又はＭＣ−ＭＰ）と色素沈着が微弱な水準のメラノサイト（Ｈｕｍａｎ  Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  Ｍｅｌａｎｏｃｙｔｅｓ、ｎｅｏｎａｔａｌ、ｌｉｇｈｔｌｙ  ｐｉｇｍｅｎｔｅｄ  ｄｏｎｏｒ、ＨＥＭｎ−ＬＰ又はＭＣ−ＬＰ）を使用した。
【００９５】
メラノサイトを培養するための培養培地（ｃｕｌｔｕｒｅ  ｍｅｄｉｕｍ）は、ＬＯＮＺＡ社（ＵＳ）のＭＧＭ−４  ＢｕｌｌｅｔＫｉｔ（製品番号ＣＣ−３２４９）を購買して使用した。
【００９６】
［実験例１］メラニン生成量の測定
ＭＧＭ−４  ＢｕｌｌｅｔＫｉｔを利用して色素沈着が普通のものと微弱なものの二種類のメラノサイトをそれぞれ培養した後、組換えＴＮＦＳＦ１４タンパク質（ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ＴＮＦＳＦ１４  ｐｒｏｔｅｉｎ）をそれぞれ処理した。
【００９７】
具体的に、培養されたそれぞれのメラノサイトの細胞密度（ｃｏｎｆｌｕｅｎｃｙ）が７０％であるとき、組換えＴＮＦＳＦ１４タンパク質（ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ＴＮＦＳＦ１４  ｐｒｏｔｅｉｎ）２５ｎｇ／ｍｌ（培地１ｍｌ当たり２５ｎｇ）を処理してから、４日後、前記各細胞をＰＢＳ緩衝液５ｍｌを利用して２回洗浄（ｗａｓｈｉｎｇ）した。その後、ＰＢＳ緩衝液１ｍｌを入れてからスクレイパー（ｓｃｒaｐｅｒ）を利用して細胞を全て掻き集めた。次いで、１３０００ｒｐｍで５分間遠心分離（ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉｏｎ）して細胞ペレット（ｃｅｌｌ  ｐｅｌｌｅｔ）を作った。その後、該細胞ペレットの色を観察して色素形成程度を比較した。
【００９８】
また、前記細胞ペレットを２００μｌ体積の１Ｎ  ＮａＯＨに溶かした後、４５０ｎｍ吸光度で測定してメラニンの量を測定した。
【００９９】
その結果、図１〜図３の結果が示された。図１中の左上段の「ｃｏｎ」は色素沈着が普通のメラノサイト（ＭＣ−ＭＰ）に何も処理していない対照群を意味し、右上段の「ｃｏｎ」は色素沈着が微弱なメラノサイト（ＭＣ−ＬＰ）に何も処理していない対照群を意味する。左上段の「ＬＩＧＨＴ」は、色素沈着が普通のメラノサイト（ＭＣ−ＭＰ）にＴＮＦＳＦ１４タンパク質を処理した群を意味し、右上段の「ＬＩＧＨＴ」は色素沈着が微弱なメラノサイト（ＭＣ−ＬＰ）にＴＮＦＳＦ１４タンパク質を処理した群を意味する。図２は、色素沈着が普通のメラノサイト（ＭＣ−ＭＰ）のメラニン含量を１としたときの、他の実験群のメラニン含量を相対的に評価したグラフである。
【０１００】
すなわち、二種類のメラノサイトともに、ＴＮＦＳＦ１４タンパク質（すなわち、ＬＩＧＨＴ）を処理した後のメラニンの生成量が約５０％ほど減少しており、少ない量でも非常に有効にメラニン生成を抑制することができることを確認した。また、このような結果は、ＴＮＦＳＦ１４タンパク質の含量が２５ｎｇ／ｍｌの場合でも類似であることを確認した（図３。ＴＮＦＳＦ１４タンパク質の含量が１０〜５０ｎｇ／ｍｌの場合に類似した結果が出るはずであることが分かる）。ＴＮＦＳＦ１４タンパク質は、ＴＮＦＳＦ１４遺伝子によってコードされるものであるので、ＴＮＦＳＦ１４遺伝子の量を増やしたり発現を増進させたりする場合、同様にメラニン生成を有効に抑制させる可能性があることを確認したことでもある。
【０１０１】
［剤形例１］柔軟化粧水（スキンローション）
ＴＮＦＳＦ１４タンパク質３．０質量％、Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸マグネシウム塩１．００質量％、水溶性コラーゲン（１％水溶液）１．００質量％、クエン酸ナトリウム０．１０質量％、クエン酸０．０５質量％、甘草エキス０．２０質量％、１，３−ブチレングリコール３．００質量％、精製水として残量を用いて柔軟化粧水（スキンローション）を製造した。
【０１０２】
［剤形例２］クリーム
ＴＮＦＳＦ１４タンパク質３．００質量％、ポリエチレングリコールモノステアレート２．００質量％、自己乳化型モノステアリン酸グリセリン５．００質量％、プロピレングリコール４．００質量％、スクアレン６．００質量％、トリ２−エチルヘキサングリセリル６．００質量％、スフィンゴ糖脂質１．００質量％、１，３−ブチレングリコール７．００質量％、蜜蝋５．００質量％、精製水として残量を用いてクリーム型製剤を製造した。
【０１０３】
［剤形例３］パック
ＴＮＦＳＦ１４タンパク質３．００質量％、ポリビニルアルコール１３．００質量％、Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸マグネシウム塩１．００質量％、ラウロイルヒドロキシプロリン１．００質量％、水溶性コラーゲン（１％水溶液）２．００質量％、１，３−ブチレングリコール３．００質量％、エタノール５．００質量％、精製水として残量を用いてパックを製造した。
【０１０４】
［剤形例４］健康食品
下記の表３に表した組成に従い、通常の方法にて健康食品を製造した。
【０１０５】
【表３】
2019006775.tif 000006
【０１０６】
前記ビタミン及び無機質混合物の組成比は、比較的に健康食品に適合した成分を例にして混合組成したが、その配合比を任意に変形実施しても構わなく、通常の健康食品の製造方法にて前記の成分を混合した後、通常の方法にて健康食品の組成物の製造に用いてよい。
【０１０７】
［剤形例５］健康飲料
下記の表４に表した組成に従い、通常の方法にて健康飲料を製造した。
【０１０８】
【表４】
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【０１０９】
前記表４のように総体積９００ｍｌとなるように残量の精製水を添加して、通常の健康飲料の製造方法に従い、前記成分を混合してから、約１時間、８５℃で撹拌加熱した後、作られた溶液をろ過し、滅菌された２リットルの容器に入れて、密封滅菌した後、冷蔵保管して、健康飲料を製造した。
【０１１０】
以上、本発明内容の特定の部分について詳細に記述したが、当業界の通常の知識を有する者にとってこうした具体的な記述は、単に好ましい実施態様であるに過ぎず、これにより本発明の範囲が制限されるものでない点は明白である。したがって、本発明の実質的な範囲は、特許請求の範囲とそれらの等価物によって定義されると言える。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【配列表】
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【外国語明細書】
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