(57)【要約】      （修正有）【課題】腎損傷に罹患しているかまたは疑われる被験体における治療レジメンのモニタリング、診断、予後および確定のための方法および組成物を提供する。【解決手段】被検体から得られる体液試料（尿又は血漿）中の抗ロイコプロテイナーゼを検出する検定を使用し、腎臓状態との相関は、検定結果（単数または複数）を、被験体の危険度層化、診断、予後、病期分類、分類およびモニタリングのうちの１つ以上と相関させることを包含し得る。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
被験体における将来的急性腎不全（ＡＲＦ）の可能性の決定方法であって、
前記被験体から得られる尿又は血漿試料に関して、抗ロイコプロテイナーゼを検出するよう設計された検定を実施して、抗ロイコプロテイナーゼの測定濃度である検定結果を提供すること；ならびに
前記検定結果を、前記被験体の将来的急性腎不全の可能性と相関させること
を包含し、ここで前記相関させることは、
（ｉ）前記測定濃度又はそれに由来する数値を受信者動作特性（ＲＯＣ）解析を用いて決定した閾値と比較するステップであって、前記閾値は、被験体集団を前記測定濃度又はそれに由来する数値が前記閾値を上回る第一のコホートと、前記測定濃度又はそれに由来する数値が前記閾値を下回る第二のコホートに分けるために選択され、ここで第一のコホートは第二のコホートより急性腎不全に罹患するより高い危険性があることを特徴とするステップ、および
（ｉｉ）前記測定濃度又はそれに由来する数値が前記閾値を上回る場合に、将来の急性腎不全を蒙る可能性増大を前記被験体に割り当てるステップ、または、前記測定濃度又はそれに由来する数値が前記閾値を下回る場合に、将来の急性腎不全を蒙る可能性低減を前記被験体に割り当てるステップ、を包含し、
ここで将来的急性腎不全の可能性とは、前記尿又は血漿試料が前記被験体から得られる時点から４８時間以内に急性腎不全が起こり得るということである、
方法。
【請求項２】
腎前性、内因性腎性、または腎後性ＡＲＦに関する１つ以上の既知の危険因子の前記被験体における先在性に基づいた将来的急性腎不全の可能性の決定のために前記被験体が選択される請求項１に記載の方法。
【請求項３】
うっ血性心不全、子癇前症、子癇、真性糖尿病、高血圧症、冠動脈疾患、タンパク尿、腎機能不全、正常範囲を下回る糸球体濾過率、肝硬変、正常範囲を上回る血清クレアチニン、敗血症、腎機能に対する損傷、腎機能低減またはＡＲＦのうちの１つ以上の現存する診断に基づいた、あるいは大血管手術、冠動脈バイパス術または他の心臓手術を受けることまたは受けたことがあることに基づいた、あるいはＮＳＡＩＤ、シクロスポリン、タクロリムス、アミノグリコシド、フォスカルネット、エチレングリコール、ヘモグロビン、ミオグロビン、イフォスファミド、重金属、メトトレキセート、放射線不透過性造影剤またはストレプトゾトシンへの曝露に基づいた将来的急性腎不全の可能性の決定のために前記被験体が選択される請求項１に記載の方法。
【請求項４】
請求項１に記載の方法における、将来的急性腎損傷の可能性を決定するための、抗ロイコプロテイナーゼの腎損傷マーカーとしての使用。
【請求項５】
前記被験体に割り当てられる将来的急性腎不全の可能性が、前記尿又は血漿試料が前記被験体から得られる時点の４８時間以内に当該事象が起こり得るという可能性である請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記被験体に割り当てられる将来的急性腎不全の可能性が、前記尿又は血漿試料が前記被験体から得られる時点の２４時間以内に当該事象が起こり得るという可能性である請求項１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願との相互引照
本発明は、米国特許仮出願第６１／１１５，０４４号（２００８年１１月１５日出願）；米国特許仮出願第６１／１０７，２９０号（２００８年１０月２１日出願）；米国特許仮出願第６１／１１３，１０２号（２００８年１１月１０日出願）；米国特許仮出願第６１／１０７，３０１号（２００８年１０月２１日出願）；米国特許仮出願第６１／１１５，０４７号（２００８年１１月１５日出願）；米国特許仮出願第６１／１１５，０５１号（２００８年１１月１５日出願）；米国特許仮出願第６１／１１３，０４５号（２００８年１１月１０日出願）；米国特許仮出願第６１／１１５，０５７号（２００８年１１月１５日出願）；米国特許仮出願第６１／１１７，１６７号（２００８年１１月２２日出願）；米国特許仮出願第６１／１１７，１５７号（２００８年１１月２２日出願）；米国特許仮出願第６１／１１７，１４６号（２００８年１１月２２日出願）；米国特許仮出願第６１／１０７，２８１号（２００８年１０月２１日出願）；米国特許仮出願第６１／１１５，０２２号（２００８年１１月１４日出願）；米国特許出願第６１／１１７，１５４号（２００８年１１月２２日出願）；米国特許仮出願第６１／１１７，１５２号（２００８年１１月２２日出願）；米国特許仮出願第６１／１１５，０１９号（２００８年１１月１４日出願）；米国特許仮出願第６１／１１５，０１７号（２００８年１１月１４日出願）；米国特許仮出願第６１／１１３，０２１号（２００８年１１月１０日出願）；米国特許仮出願第６１／１１３，０５６号（２００８年１１月１０日出願）；米国特許仮出願第６１／１０７，２９７号（２００８年１０月２１日出願）；米国特許仮出願第６１／１１５，０４５号（２００８年１１月１５日出願）および米国特許仮出願第６１／１０７，３０４号（２００８年１０月２１日出願）；米国特許仮出願第６１／１１３，０５０号（２００８年１１月１０日出願）；米国特許仮出願第６１／１１５，０４８号（２００８年１１月１５日出願）；米国特許仮出願第６１／１１３，０９６号（２００８年１１月１０日出願）；米国特許出願第６１／１１７，１４０号（２００８年１１月２２日出願）；米国特許出願第６１／１１７，１７２号（２００８年１１月２２日出願）；米国特許仮出願第６１／１１３，０８３号（２００８年１１月１０日出願）；および米国特許仮出願第６１／１１７，１４１号（２００８年１１月２２日出願）；からの優先権を主張する（これらは各々、全ての表、図および特許請求の範囲を含めたその記載内容が、参照により本明細書中で援用される）。
【発明の背景】
【０００２】
本発明の背景の以下の考察は、読者が本発明を理解するのを助けるためにのみ提供され、本発明より以前の技術を記載または構成することは許容されない。
【０００３】
腎臓は、身体からの水および溶質排出に関与する。その機能としては、酸−塩基平衡の維持、電解質濃度の調節、血液容積の制御、および血圧の調節が挙げられる。このようなものとして、損傷および／または疾患による腎機能の損失は、実質的罹患率および死亡率を生じる。腎損傷の詳細な考察は、Harrison’s Principles of Internal Medicine, 17th Ed., McGraw Hill, New York, pages 1741-1830（この記載内容は参照により本明細書中で援用される）で提供されている。腎疾患および／または損傷は、急性または慢性であり得る。急性および慢性腎疾患は、以下のように記載されている（Current Medical Diagnosis & Treatment 2008, 47th Ed, McGraw Hill, New York, pages 785-815（この記載内容は参照により本明細書中で援用される）から）:「急性腎不全は数時間〜数日に亘る腎機能の悪化であり、血中の窒素廃棄物（例えば尿素窒素）およびクレアチニンの保持を生じる。これらの物質の保持はアゾ血症と呼ばれる。慢性腎不全（慢性腎疾患）は、数ヶ月〜数年にわたる腎機能の異常損失に起因する」。
【０００４】
急性腎不全（ＡＲＦ、急性腎損傷またはＡＫＩとしても知られている）は、糸球体濾過における突然の（典型的には、約４８時間〜１週間以内に検出される）低減である。濾過能力のこの損失は、通常は腎臓により排出される窒素廃棄物（尿素およびクレアチニン）および非窒素廃棄物の保持、尿排出量の低減、またはその両方を生じる。ＡＲＦは、入院の約５％、心臓肺バイパス手術の４〜１５％、および集中治療室入院の３０％までを悪化させる、と報告されている。ＡＲＦは、因果関係において腎前性、内因性腎性または腎後性として分類され得る。内因性腎疾患は、さらに、糸球体、尿細管、間質性および血管性異常に分けられ得る。ＡＲＦの主因は、Merck Manual, 17th ed., Chapter 222（この記載内容は参照により本明細書中で援用される）から適合される以下の表中に記載されている：
【表１】
2019023641.tif 000002
【０００５】
虚血性ＡＲＦの場合、疾患の経過は、４つの期に分けられ得る。数時間〜数日持続する開始期の間、腎還流低減は損傷に徐々に発展する。糸球体限外濾過は低減し、濾液の流量は尿細管内の破砕片のために低減され、損傷上皮を通した濾液の漏出が起こる。腎損傷は、この時期の間、腎臓の再還流により媒介され得る。開始期の後には、持続される虚血性損傷および炎症を特徴とし、内皮細胞損害および血管うっ血を伴い得る伸展期が来る。１〜２週間持続する維持期の間、腎細胞損傷が起こり、糸球体濾過および尿排出量が最小に達する。腎上皮細胞が修復され、ＧＦＲが漸次回復する回復期が、その次に来る。これにもかかわらず、ＡＲＦを有する被験体の生存率は約６０％という低さであり得る。
【０００６】
放射線造影剤（造影剤とも呼ばれる）および他の腎毒素、例えばシクロスポリン、抗生物質、例えばアミノグリコシド、および抗癌薬、例えばシスプラチンにより引き起こされる急性腎損傷は、数日〜約１週間の期間に亘って症状発現する。造影剤腎症（ＣＩＮ、これは、放射線造影剤により引き起こされるＡＫＩである）は、腎内血管狭窄（虚血性損傷に導く）により、ならびに尿細管上皮細胞に対して直接的に有毒である活性酸素種の発生から引き起こされると考えられる。ＣＩＮは慣行に従って、血中尿素窒素および血清クレアチニンの急性（２４〜４８時間以内に開始する）であるが、しかし可逆的な（ピークは３〜５日、１週間以内に消散）上昇として存在する。
【０００７】
ＡＫＩを限定し、検出するための一般に報告された判定基準は、血清クレアチニンの突然の（典型的には、約２〜７日以内、または入院期間内）上昇である。ＡＫＩを限定し、検出するための血清クレアチニン上昇の使用は十分に確立されているが、しかし血清クレアチニン上昇の大きさおよびＡＫＩを限定するためにそれが測定される時間は、出版物間でかなり異なる。伝統的に、１００％、２００％といったような血清クレアチニンのかなり大きな増大、２ｍｇ／ｄＬを上回る値への少なくとも１００％の増大、およびその他の定義を用いて、ＡＫＩを限定した。しかしながら、近年の傾向は、より小さなクレアチニン上昇を用いてＡＫＩを限定することに傾いてきた。血清クレアチニン上昇、ＡＫＩおよび関連健康危険度との間の関係は、Praught and Shlipak, Curr Opin Nephrol Hypertens 14: 265-270, 2005およびChertow et al., J Am Soc Nephrol 16: 3365-3370, 2005（これらの記載内容は参照により本明細書中で援用される）で検討されている。これらの出版物に記載されているように、急性悪性化腎機能（ＡＫＩ）および死亡危険度増大ならびにその他の有害結果は、目下、血清クレアチニンの極小さな増大と関連することが知られている。これらの増大は、相対（パーセント）値または公称値として確定され得る。損傷前値から２０％という小さい血清クレアチニンの相対的増大は、急性悪性化腎機能（ＡＫＩ）および健康危険度増大を示すと報告されているが、しかし、ＡＫＩおよび健康危険度増大を限定するためにより一般的に報告されている値は、少なくとも２５％という相対的増大である。０．３ｍｇ／ｄＬ、０．２ｍｇ／ｄＬという小さい公称増大値、または０．１ｍｇ／ｄＬという値でさえ、悪性化腎機能および死亡危険度増大を示すことが報告されている。血清クレアチニンがこれらの閾値に上がる種々の時間、例えば２日、３日、７日からの範囲の期間、あるいは患者が病院または集中治療室にいる時間として限定される種々の期間を用いて、ＡＫＩが限定されてきた。これらの試験は、悪性化腎機能またはＡＫＩに関して特定の閾値血清クレアチニン上昇（または上昇のための期間）は認められず、むしろ、血清クレアチニン上昇の大きさの増大に伴って危険度の継続的増大が認められる、ということを示す。
【０００８】
一試験（Lassnigg et al., J Am Soc Nephrol 15: 1597-1605, 2004）（この記載内容は参照により本明細書中で援用される）は、血清クレアチニンにおける増大および低減の両方を調べた。心臓手術後に−０．１〜−０．３ｍｇ／ｄＬという血清クレアチニンの軽度の低下を示す患者は、最低死亡率を有した。血清クレアチニンのより大きな低下（−０．４ｍｇ／ｄＬ以上）または血清クレアチニンの任意の増大を示す患者は、より高い死亡率を有した。これらの知見により、（手術の４８時間以内の小クレアチニン変化により検出されるような）腎機能の非常に微細な変化でさえ、患者の結果に重篤な影響を及ぼす、とこの著者は結論づけた。臨床試験において、ならびに臨床的実行において、ＡＫＩを限定するために血清クレアチニンを用いるための統一分類系に関するコンセンサスに到達しようと努力して、Bellomo et al., Crit Care. 8(4): R204-12, 2004（この記載内容は参照により本明細書中で援用される）は、ＡＫＩ患者を層化するための以下の分類を提案しており：
「危険」：血清クレアチニンがベースラインから１．５倍に増大した。または６時間の間の＜０．５ｍｌ／体重１ｋｇ／時間の尿産生；
「損傷」：血清クレアチニンがベースラインから２．０倍に増大した。または１２時間の間の＜０．５ｍｌ／体重１ｋｇ／時間の尿産生；
「不全」：血清クレアチニンがベースラインから３．０倍に増大した。またはクレアチニン＞３５５μｍｏｌ／ｌ（＞４４の上昇を伴う）、または２４時間の間の０．３ｍｌ／ｋｇ／時より低い尿排出、または少なくとも１２時間の間の無尿；
そして以下の２つの臨床結果を包含した：
「損失」：４週間より長い間の腎代替療法の持続的必要性。
「ＥＳＲＤ」：末期腎疾患−３ヶ月より長い間の透析の必要性。
これらの判定基準はＲＩＦＬＥ判定基準と呼ばれ、これは、腎状態を分類するための有用な臨床的ツールを提供する。Kellum, Crit. Care Med. 36: S141-45, 2008およびRicci et al., Kidney Int. 73, 538-546（これらの記載内容は参照により本明細書中で援用される）で考察されたように、ＲＩＦＬＥ判定基準は、多数の試験で認められたＡＫＩについての一様な定義を提供する。
【０００９】
さらに近年、Mehta et al., Crit. Care 11: R31 (doi: 10.1186.cc5713),2007（この記載内容は参照により本明細書中で援用される）は、ＡＫＩ患者を層化するために、ＲＩＦＬＥから修正された以下の同様の分類を提案している：
「段階Ｉ」：０．３ｍｇ／ｄＬ以上の血清クレアチニンの増大（≧２６．４μｍｏｌ／Ｌ）またはベースラインから１５０％（１．５倍）以上への増大。あるいは６時間より長い間の０．５ｍＬ／ｋｇ／時間未満の尿排出；
「段階ＩＩ」：ベースラインから２００％（＞２倍）より大きい血清クレアチニンの増大。あるいは１２時間より長い間の０．５ｍＬ／ｋｇ／時間未満の尿排出；
「段階ＩＩＩ」：ベースラインから３００％（＞３倍）より大きい血清クレアチニンの増大。あるいは血清クレアチニン≧３５４μｍｏｌ／Ｌ（少なくとも４４μｍｏｌ／Ｌの急性増大を伴う）。あるいは２４時間の間の０．３ｍｌ／ｋｇ／時未満の尿排出、または１２時間の間の無尿。
【００１０】
ＣＩＮコンセンサス作業パネル（McCollough et al., Rev Cardiovasc Med. 2006; 7(4): 177-197；この記載内容は参照により本明細書中で援用される）は、２５％の血清クレアチニン上昇を用いて造影剤腎症（ＡＫＩの一型である）を限定する。種々の群はＡＫＩを検出するために血清クレアチニンを用いるわずかに異なる判定基準を提案するが、しかしコンセンサスは、例えば０．３ｍｇ／ｄＬまたは２５％という血清クレアチニンの小変化はＡＫＩ（悪性化腎機能）を検出するのに十分であるということ、ならびに血清クレアチニン変化の大きさはＡＫＩ重症度および死亡率危険度の一指標であるというものである。
【００１１】
数日間に亘る血清クレアチニンの連続測定はＡＫＩを検出し、診断する許容可能な一方法であり、ＡＫＩ患者を評価するための最も重要なツールの１つと考えられるが、しかし血清クレアチニンは一般的に、ＡＫＩ患者の診断、査定およびモニタリングにおけるいくつかの制限を有すると考えられる。ＡＫＩの診断に役立つとみなされる値（例えば、０．３ｍｇ／ｄＬまたは２５％上昇）に血清クレアチニンが上昇する時間は、用いられる定義によって、４８時間以上であり得る。ＡＫＩにおける細胞性損傷は数時間の期間に亘って起こり得るため、４８時間以上で検出される血清クレアチニン上昇は損傷の後期指標であり得るし、したがって、血清クレアチニンに頼ることは、ＡＫＩの診断を遅らせ得る。さらに、血清クレアチニンは、腎機能が急速に変わりつつあるＡＫＩの最急性期中の正確な腎臓状態および治療の必要性についての良好な指標ではない。ＡＫＩを有する患者の中には、完全に回復する患者もいるし、（短期間または長期間の）透析を必要とする患者もいるし、他の有害結果、例えば死、大きな悪性心臓事象および慢性腎疾患を有する患者もいる。血清クレアチニンは濾過率のマーカーであるため、それは、ＡＫＩの原因（腎前性、内因性腎性、腎後性閉塞、アテローム塞栓性等）間、あるいは内因性腎疾患（例えば、尿細管、糸球体または間質性で始まる）における損傷の部類または位置を識別しない。尿排出量は、同様に限定される。これらの事柄についての知識は、ＡＫＩを有する患者を管理し、治療するに際して、生命維持のための重要性を有し得る。
【００１２】
これらの制限は、特に早期のおよび無症状段階において、しかし、腎臓の回復および修復が起こり得る後期段階においても、ＡＫＩを検出し、査定するためのより良好な方法の必要性を強調している。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
被験体における腎機能を評価するための方法および組成物を提供することは、本発明の一目的である。本明細書中に記載されるように、細胞質型アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ、可溶性腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリー成員５、可溶性ＣＤ４０リガンド、可溶性Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフケモカイン１６、Ｓ１００−Ａ１２、エオタキシン、可溶性Ｅ−セレクチン、フィブロネクチン、顆粒球コロニー刺激因子、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、ヘパリン結合増殖因子２、可溶性肝細胞増殖因子受容体、インターロイキン−１受容体アンタゴニスト、インターロイキン−１ベータ、インターロイキン−１０、インターロイキン−１５、インターロイキン−３、ミエロペルオキシダーゼ、ニドゲン−１、可溶性酸化型低密度リポタンパク質受容体１、パパリシン−１、可溶性Ｐ−セレクチン糖タンパク質リガンド１、抗ロイコプロテイナーゼ、可溶性キットリガンド、メタロプロテイナーゼ１の組織阻害物質、メタロプロテイナーゼ２の組織阻害物質、可溶性腫瘍壊死因子、可溶性血管細胞接着分子１および血管内皮細胞増殖因子Ａ（集合的に、「腎損傷マーカー」として本明細書中で言及され、そして独立して、「腎損傷マーカー」として言及される）からなる群から選択される１つ以上のマーカーの測定は、腎機能に対する損傷、腎機能低減、および／または急性腎不全（急性腎損傷とも呼ばれる）に罹患しているか、または罹患する危険がある被験体における診断、予後、危険度層化、病期分類、モニタリング、分類、ならびにさらなる診断および治療レジメンの確定のために用いられ得る。
【００１４】
これらの腎損傷マーカーは、危険度層化のために（すなわち、腎機能に対する将来的損傷、腎機能低減への将来的進行、ＡＲＦへの将来的進行、腎機能における将来的改善等の危険がある被験体を同定するために）；存在する疾患の診断のために（すなわち、腎機能に対する損傷を蒙っている被験体、腎機能低減に進行している被験体、ＡＲＦに進行している被験体等を同定するために）；腎機能の悪化または改善に関してモニタリングするために；ならびに将来的医療結果、例えば腎機能の改善または悪化、死亡率危険度の低減または増大、被験体が腎代替療法（すなわち、血液透析、腹膜透析、血液濾過および／または腎臓移植）を必要とする危険度の低減または増大、被験体が腎機能に対する損傷から回復する危険度の低減または増大、被験体がＡＲＦから回復する危険度の低減または増大、被験体が末期腎疾患に進行する危険度の低減または増大、被験体が慢性腎不全に進行する危険度の低減または増大、被験体が移植腎の拒絶を蒙る危険度の低減または増大等を予測するために、独立して、または複数の腎損傷マーカーを含むパネルで、用いられ得る。
【００１５】
第一の態様において、本発明は、被験体における腎臓状態を評価するための方法に関する。これらの方法は、被験体から得られる体液試料中の本発明の１つ以上の腎損傷マーカーを検出するよう設計される検定方法を実施することを包含する。検定結果（単数または複数）、例えば細胞質型アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ、可溶性腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリー成員５、可溶性ＣＤ４０リガンド、可溶性Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフケモカイン１６、Ｓ１００−Ａ１２、エオタキシン、可溶性Ｅ−セレクチン、フィブロネクチン、顆粒球コロニー刺激因子、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、ヘパリン結合増殖因子２、可溶性肝細胞増殖因子受容体、インターロイキン−１受容体アンタゴニスト、インターロイキン−１ベータ、インターロイキン−１０、インターロイキン−１５、インターロイキン−３、ミエロペルオキシダーゼ、ニドゲン−１、可溶性酸化型低密度リポタンパク質受容体１、パパリシン−１、可溶性Ｐ−セレクチン糖タンパク質リガンド１、抗ロイコプロテイナーゼ、可溶性キットリガンド、メタロプロテイナーゼ１の組織阻害物質、メタロプロテイナーゼ２の組織阻害物質、可溶性腫瘍壊死因子、可溶性血管細胞接着分子１および血管内皮細胞増殖因子Ａからなる群から選択される１つ以上のマーカーの測定濃度は、次に、被験体の腎臓状態と相関される。腎臓状態とのこの相関は、検定結果（単数または複数）を、本明細書中に記載されるような被験体の危険度層化、診断、予後、病期分類、分類およびモニタリングのうちの１つ以上と相関させることを包含し得る。したがって、本発明は、腎損傷の評価のために本発明の１つ以上の腎損傷マーカーを利用する。
【００１６】
ある実施形態では、本明細書中に記載される腎臓状態を評価するための方法は、被験体の危険度層化のための方法；すなわち、腎臓状態における１つ以上の将来的変化の尤度を前記被験体に割り当てることである。これらの実施形態では、検定結果（単数または複数）は、１つ以上のこのような将来的変化と相関される。以下は、好ましい危険度層化実施形態である。
【００１７】
好ましい危険度層化実施形態では、これらの方法は、腎臓機能に対する将来的損傷に関して被験体の危険度を確定することを包含し、検定結果（単数または複数）は腎臓機能に対するこのような将来的損傷の尤度と相関される。例えば、測定濃度（単数または複数）は、各々、閾値と比較され得る。「正方向」腎損傷マーカーに関しては、測定濃度が閾値を下回る場合に割り当てられる尤度に比して、測定濃度が閾値を上回る場合に、腎機能に対する将来的損傷を蒙る尤度増大が被験体に割り当てられる。「負方向」腎損傷マーカーに関しては、測定濃度が閾値を上回る場合に割り当てられる尤度に比して、測定濃度が閾値を下回る場合に、腎機能に対する将来的損傷を蒙る尤度増大が被験体に割り当てられる。
【００１８】
他の好ましい危険度層化実施形態では、これらの方法は、腎臓機能低減に関して被験体の危険度を確定することを包含し、検定結果（単数または複数）はこのような腎臓機能低減の尤度と相関される。例えば、測定濃度は、各々、閾値と比較され得る。「正方向」腎損傷マーカーに関しては、測定濃度が閾値を下回る場合に割り当てられる尤度に比して、測定濃度が閾値を上回る場合に、腎機能の将来的低減を蒙る尤度増大が被験体に割り当てられる。「負方向」腎損傷マーカーに関しては、測定濃度が閾値を上回る場合に割り当てられる尤度に比して、測定濃度が閾値を下回る場合に、腎機能の将来的低減の尤度増大が被験体に割り当てられる。
【００１９】
さらなる他の好ましい危険度層化実施形態では、これらの方法は、腎臓機能における将来的改善に関して被験体の尤度を確定することを包含し、検定結果（単数または複数）は腎臓機能におけるこのような将来的改善の尤度と相関される。例えば、測定濃度（単数または複数）は、各々、閾値と比較され得る。「正方向」腎損傷マーカーに関しては、測定濃度が閾値を上回る場合に割り当てられる尤度に比して、測定濃度が閾値を下回る場合に、腎機能における将来的改善の尤度増大が被験体に割り当てられる。「負方向」腎損傷マーカーに関しては、測定濃度が閾値を下回る場合に割り当てられる尤度に比して、測定濃度が閾値を上回る場合に、腎機能における将来的改善の尤度増大が被験体に割り当てられる。
【００２０】
さらなる他の好ましい危険度層化実施形態では、これらの方法は、ＡＲＦへの進行に関して被験体の危険度を確定することを包含し、結果（単数または複数）は、ＡＲＦへのこのような進行の尤度と相関される。例えば、測定濃度（単数または複数）は、各々、閾値と比較され得る。「正方向」腎損傷マーカーに関しては、測定濃度が閾値を下回る場合に割り当てられる尤度に比して、測定濃度が閾値を上回る場合に、ＡＲＦへの進行の尤度増大が被験体に割り当てられる。「負方向」腎損傷マーカーに関しては、測定濃度が閾値を上回る場合に割り当てられる尤度に比して、測定濃度が閾値を下回る場合に、ＡＲＦへの進行の尤度増大が被験体に割り当てられる。
【００２１】
他の好ましい危険度層化実施形態では、これらの方法は、被験体の結果危険度を確定することを包含し、検定結果（単数または複数）は、被験体が蒙る腎損傷に関連する臨床結果の発生の尤度と相関される。例えば、測定濃度（単数または複数）は、各々、閾値と比較され得る。「正方向」腎損傷マーカーに関しては、測定濃度が閾値を下回る場合に割り当てられる尤度に比して、測定濃度が閾値を上回る場合に、急性腎損傷、ＡＫＩの悪化段階への進行、死亡率、腎代替療法の要請、腎毒素の離脱の要請、末期腎疾患、心不全、卒中、心筋梗塞、慢性腎疾患への進行等のうちの１つ以上の尤度増大が被験体に割り当てられる。「負方向」腎損傷マーカーに関しては、測定濃度が閾値を上回る場合に割り当てられる尤度に比して、測定濃度が閾値を下回る場合に、急性腎損傷、ＡＫＩの悪化段階への進行、死亡率、腎代替療法の要請、腎毒素の離脱の要請、末期腎疾患、心不全、卒中、心筋梗塞、慢性腎疾患への進行等のうちの１つ以上の尤度増大が被験体に割り当てられる。
【００２２】
このような危険度層化実施形態では、好ましくは、割り当てられる尤度または危険度は、体液試料が前記被験体から得られる時点の１８０日以内に当該事象が多少生じると思われる、というものである。特に好ましい実施形態では、割り当てられる尤度または危険度は、１８ヶ月、１２０日、９０日、６０日、４５日、３０日、２１日、１４日、７日、５日、９６時間、７２時間、４８時間、３６時間、２４時間、１２時間またはそれ未満といったような短期間以内に生じる当該事象に関する。体液試料が被験体から得られる時点の０時間での危険度は、現在状態の診断と等価である。
【００２３】
好ましい危険度層化実施形態では、被験体は、腎前性、内因性腎性、または腎後性ＡＲＦに関する１つ以上の既知の危険因子の前記被験体における先在性に基づいた危険度層化に関して選択される。例えば、大血管手術、冠動脈バイパス術または他の心臓手術を受けているかまたは受けたことがある被験体；先在性うっ血性心不全、子癇前症、子癇、真性糖尿病、高血圧症、冠動脈疾患、タンパク尿、腎機能不全、正常範囲を下回る糸球体濾過率、肝硬変、正常範囲を上回る血清クレアチニンまたは敗血症を有する被験体；あるいはＮＳＡＩＤ、シクロスポリン、タクロリムス、アミノグリコシド、フォスカルネット、エチレングリコール、ヘモグロビン、ミオグロビン、イフォスファミド、重金属、メトトレキセート、放射線不透過性造影剤またはストレプトゾトシンに曝露された被験体は全て、本明細書中に記載される方法に従って危険度をモニタリングするための好ましい被験体である。このリストは、限定的であるよう意図されない。この文脈における「先在性」とは、体液試料が被験体から得られる時点で危険因子が存在することを意味する。特に好ましい実施形態では、腎機能に対する損傷、腎機能低減またはＡＲＦの現存する診断に基づいて、被験体は危険度層化に関して選択される。
【００２４】
他の実施形態では、本明細書中に記載される腎臓状態を評価するための方法は、被験体における腎損傷を診断するための方法である；すなわち、被験体が腎機能に対する損傷、腎機能低減またはＡＲＦに罹患しているか、いないかを査定することである。これらの実施形態では、検定結果（単数または複数）、例えば、細胞質型アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ、可溶性腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリー成員５、可溶性ＣＤ４０リガンド、可溶性Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフケモカイン１６、Ｓ１００−Ａ１２、エオタキシン、可溶性Ｅ−セレクチン、フィブロネクチン、顆粒球コロニー刺激因子、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、ヘパリン結合増殖因子２、可溶性肝細胞増殖因子受容体、インターロイキン−１受容体アンタゴニスト、インターロイキン−１ベータ、インターロイキン−１０、インターロイキン−１５、インターロイキン−３、ミエロペルオキシダーゼ、ニドゲン−１、可溶性酸化型低密度リポタンパク質受容体１、パパリシン−１、可溶性Ｐ−セレクチン糖タンパク質リガンド１、抗ロイコプロテイナーゼ、可溶性キットリガンド、メタロプロテイナーゼ１の組織阻害物質、メタロプロテイナーゼ２の組織阻害物質、可溶性腫瘍壊死因子、可溶性血管細胞接着分子１および血管内皮細胞増殖因子Ａからなる群から選択される１つ以上のマーカーの測定濃度は、腎臓状態における変化の発生または非発生と相関される。以下は、好ましい診断実施形態である。
【００２５】
好ましい診断実施形態では、これらの方法は、腎臓機能に対する損傷の発生または非発生を診断することを包含し、検定結果（単数または複数）はこのような損傷の発生または非発生と相関される。例えば、測定濃度（単数または複数）の各々は、閾値と比較され得る。正方向マーカーに関しては、（測定濃度が閾値を下回る場合に割り当てられる尤度に比して）測定濃度が閾値を上回る場合に、腎機能に対する損傷の発生の尤度増大が被験体に割り当てられる；代替的には、（測定濃度が閾値を上回る場合に割り当てられる尤度に比して）測定濃度が閾値を下回る場合に、腎機能に対する損傷の非発生の尤度増大が被験体に割り当てられ得る。負方向マーカーに関しては、（測定濃度が閾値を上回る場合に割り当てられる尤度に比して）測定濃度が閾値を下回る場合に、腎機能に対する損傷の発生の尤度増大が被験体に割り当てられる；代替的には、（測定濃度が閾値を下回る場合に割り当てられる尤度に比して）測定濃度が閾値を上回る場合に、腎機能に対する損傷の非発生の尤度増大が被験体に割り当てられ得る。
【００２６】
他の好ましい診断実施形態では、これらの方法は、腎臓機能低減の発生または非発生を診断することを包含し、検定結果（単数または複数）は腎機能低減を引き起こす損傷の発生または非発生と相関される。例えば、測定濃度（単数または複数）の各々は、閾値と比較され得る。正方向マーカーに関しては、（測定濃度が閾値を下回る場合に割り当てられる尤度に比して）測定濃度が閾値を上回る場合に、腎機能低減を引き起こす損傷の発生の尤度増大が被験体に割り当てられる；代替的には、（測定濃度が閾値を上回る場合に割り当てられる尤度に比して）測定濃度が閾値を下回る場合に、腎機能低減を引き起こす損傷の非発生の尤度増大が被験体に割り当てられ得る。負方向マーカーに関しては、（測定濃度が閾値を上回る場合に割り当てられる尤度に比して）測定濃度が閾値を下回る場合に、腎機能低減を引き起こす損傷の発生の尤度増大が被験体に割り当てられる；代替的には、（測定濃度が閾値を下回る場合に割り当てられる尤度に比して）測定濃度が閾値を上回る場合に、腎機能低減を引き起こす損傷の非発生の尤度増大が被験体に割り当てられ得る。
【００２７】
さらに他の好ましい診断実施形態では、これらの方法は、ＡＲＦの発生または非発生を診断することを包含し、検定結果（単数または複数）はＡＲＦを引き起こす損傷の発生または非発生と相関される。例えば、測定濃度（単数または複数）の各々は、閾値と比較され得る。正方向マーカーに関しては、（測定濃度が閾値を下回る場合に割り当てられる尤度に比して）測定濃度が閾値を上回る場合に、ＡＲＦの発生の尤度増大が被験体に割り当てられる；代替的には、（測定濃度が閾値を上回る場合に割り当てられる尤度に比して）測定濃度が閾値を下回る場合に、ＡＲＦの非発生の尤度増大が被験体に割り当てられ得る。負方向マーカーに関しては、（測定濃度が閾値を上回る場合に割り当てられる尤度に比して）測定濃度が閾値を下回る場合に、ＡＲＦの発生の尤度増大が被験体に割り当てられる；代替的には、（測定濃度が閾値を下回る場合に割り当てられる尤度に比して）測定濃度が閾値を上回る場合に、ＡＲＦの非発生の尤度増大が被験体に割り当てられ得る。
【００２８】
さらに他の好ましい診断実施形態では、これらの方法は、腎代替療法を必要としていると被験体を診断することを包含し、検定結果（単数または複数）は腎代替療法に対する必要性と相関される。例えば、測定濃度（単数または複数）の各々は、閾値と比較され得る。正方向マーカーに関しては、（測定濃度が閾値を下回る場合に割り当てられる尤度に比して）測定濃度が閾値を上回る場合に、腎代替療法に対する必要性を生じる損傷の発生の尤度増大が被験体に割り当てられる；代替的には、（測定濃度が閾値を上回る場合に割り当てられる尤度に比して）測定濃度が閾値を下回る場合に、腎代替療法の必要性を生じる損傷の非発生の尤度増大が被験体に割り当てられ得る。負方向マーカーに関しては、（測定濃度が閾値を上回る場合に割り当てられる尤度に比して）測定濃度が閾値を下回る場合に、腎代替療法に対する必要性を生じる損傷の発生の尤度増大が被験体に割り当てられる；代替的には、（測定濃度が閾値を下回る場合に割り当てられる尤度に比して）測定濃度が閾値を上回る場合に、腎代替療法に対する必要性を生じる損傷の非発生の尤度増大が被験体に割り当てられ得る。
【００２９】
さらに他の好ましい診断実施形態では、これらの方法は、腎移植を必要としていると被験体を診断することを包含し、検定結果（単数または複数）は腎移植に対する必要性と相関される。例えば、測定濃度（単数または複数）の各々は、閾値と比較され得る。正方向マーカーに関しては、（測定濃度が閾値を下回る場合に割り当てられる尤度に比して）測定濃度が閾値を上回る場合に、腎移植に対する必要性を生じる損傷の発生の尤度増大が被験体に割り当てられる；代替的には、（測定濃度が閾値を上回る場合に割り当てられる尤度に比して）測定濃度が閾値を下回る場合に、腎移植の必要性を生じる損傷の非発生の尤度増大が被験体に割り当てられ得る。負方向マーカーに関しては、（測定濃度が閾値を上回る場合に割り当てられる尤度に比して）測定濃度が閾値を下回る場合に、腎移植に対する必要性を生じる損傷の発生の尤度増大が被験体に割り当てられる；代替的には、（測定濃度が閾値を下回る場合に割り当てられる尤度に比して）測定濃度が閾値を上回る場合に、腎移植に対する必要性を生じる損傷の非発生の尤度増大が被験体に割り当てられ得る。
【００３０】
さらに他の実施形態では、本明細書中に記載される腎臓状態を評価するための方法は、被験体における腎損傷をモニタリングするための方法である；すなわち、腎機能に対する損傷、腎機能低減、またはＡＲＦに罹患している被験体において腎機能が改善されつつあるか悪化しつつあるかを査定することである。これらの実施形態では、検定結果（単数または複数）、例えば細胞質型アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ、可溶性腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリー成員５、可溶性ＣＤ４０リガンド、可溶性Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフケモカイン１６、Ｓ１００−Ａ１２、エオタキシン、可溶性Ｅ−セレクチン、フィブロネクチン、顆粒球コロニー刺激因子、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、ヘパリン結合増殖因子２、可溶性肝細胞増殖因子受容体、インターロイキン−１受容体アンタゴニスト、インターロイキン−１ベータ、インターロイキン−１０、インターロイキン−１５、インターロイキン−３、ミエロペルオキシダーゼ、ニドゲン−１、可溶性酸化型低密度リポタンパク質受容体１、パパリシン−１、可溶性Ｐ−セレクチン糖タンパク質リガンド１、抗ロイコプロテイナーゼ、可溶性キットリガンド、メタロプロテイナーゼ１の組織阻害物質、メタロプロテイナーゼ２の組織阻害物質、可溶性腫瘍壊死因子、可溶性血管細胞接着分子１および血管内皮細胞増殖因子Ａからなる群から選択される１つ以上のマーカーの測定濃度は、腎臓状態における変化の発生または非発生と相関される。以下は、好ましいモニタリング実施形態である。
【００３１】
好ましいモニタリング実施形態では、これらの方法は、腎臓機能に対する損傷を蒙っている被験体における腎臓状態をモニタリングすることを包含し、検定結果（単数または複数）は被験体における腎臓状態の変化の発生または非発生と相関される。例えば、測定濃度（単数または複数）は、閾値と比較され得る。正方向マーカーに関しては、測定濃度が閾値を上回る場合に、腎機能の悪化が被験体に割り当てられ得る；代替的には、測定濃度が閾値を下回る場合に、腎機能の改善が被験体に割り当てられ得る。負方向マーカーに関しては、測定濃度が閾値を下回る場合に、腎機能の悪化が被験体に割り当てられ得る；代替的には、測定濃度が閾値を上回る場合に、腎機能の改善が被験体に割り当てられ得る。
【００３２】
他の好ましいモニタリング実施形態では、これらの方法は、腎臓機能低減を蒙っている被験体における腎臓状態をモニタリングすることを包含し、検定結果（単数または複数）は被験体における腎臓状態の変化の発生または非発生と相関される。例えば、測定濃度（単数または複数）は、閾値と比較され得る。正方向マーカーに関しては、測定濃度が閾値を上回る場合に、腎機能の悪化が被験体に割り当てられ得る；代替的には、測定濃度が閾値を下回る場合に、腎機能の改善が被験体に割り当てられ得る。負方向マーカーに関しては、測定濃度が閾値を下回る場合に、腎機能の悪化が被験体に割り当てられ得る；代替的には、測定濃度が閾値を上回る場合に、腎機能の改善が被験体に割り当てられ得る。
【００３３】
さらに他の好ましいモニタリング実施形態では、これらの方法は、急性腎不全に罹患している被験体における腎臓状態をモニタリングすることを包含し、検定結果（単数または複数）は被験体における腎臓状態の変化の発生または非発生と相関される。例えば、測定濃度（単数または複数）は、閾値と比較され得る。正方向マーカーに関しては、測定濃度が閾値を上回る場合に、腎機能の悪化が被験体に割り当てられ得る；代替的には、測定濃度が閾値を下回る場合に、腎機能の改善が被験体に割り当てられ得る。負方向マーカーに関しては、測定濃度が閾値を下回る場合に、腎機能の悪化が被験体に割り当てられ得る；代替的には、測定濃度が閾値を上回る場合に、腎機能の改善が被験体に割り当てられ得る。
【００３４】
他の付加的な好ましいモニタリング実施形態では、これらの方法は、腎前性、内因性腎性、または腎後性ＡＲＦに関する１つ以上の既知の危険因子の先在性のために、腎機能に対する損傷の危険がある被験体における腎臓状態をモニタリングすることを包含し、検定結果（単数または複数）は被験体における腎臓状態の変化の発生または非発生と相関される。例えば、測定濃度（単数または複数）は、閾値と比較され得る。正方向マーカーに関しては、測定濃度が閾値を上回る場合に、腎機能の悪化が被験体に割り当てられ得る；代替的には、測定濃度が閾値を下回る場合に、腎機能の改善が被験体に割り当てられ得る。負方向マーカーに関しては、測定濃度が閾値を下回る場合に、腎機能の悪化が被験体に割り当てられ得る；代替的には、測定濃度が閾値を上回る場合に、腎機能の改善が被験体に割り当てられ得る。
【００３５】
さらに他の実施形態では、本明細書中に記載される腎臓状態を評価するための方法は、被験体における腎損傷を分類するための方法である；すなわち、被験体における腎損傷が腎前性、内因性腎性または腎後性であるか否かを確定すること；および／またはこれらのクラスを、急性尿細管損傷、急性糸球体腎炎、急性尿細管間質性腎炎、急性血管腎症または浸潤性疾患のようなサブクラスにさらに細分すること；および／または被験体が特定のＲＩＦＬＥ段階に進行する尤度を割り当てることである。これらの実施形態では、検定結果（単数または複数）、例えば細胞質型アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ、可溶性腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリー成員５、可溶性ＣＤ４０リガンド、可溶性Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフケモカイン１６、Ｓ１００−Ａ１２、エオタキシン、可溶性Ｅ−セレクチン、フィブロネクチン、顆粒球コロニー刺激因子、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、ヘパリン結合増殖因子２、可溶性肝細胞増殖因子受容体、インターロイキン−１受容体アンタゴニスト、インターロイキン−１ベータ、インターロイキン−１０、インターロイキン−１５、インターロイキン−３、ミエロペルオキシダーゼ、ニドゲン−１、可溶性酸化型低密度リポタンパク質受容体１、パパリシン−１、可溶性Ｐ−セレクチン糖タンパク質リガンド１、抗ロイコプロテイナーゼ、可溶性キットリガンド、メタロプロテイナーゼ１の組織阻害物質、メタロプロテイナーゼ２の組織阻害物質、可溶性腫瘍壊死因子、可溶性血管細胞接着分子１および血管内皮細胞増殖因子Ａからなる群から選択される１つ以上のマーカーの測定濃度は、特定のクラスおよび／またはサブクラスと相関される。以下は、好ましい分類実施形態である。
【００３６】
好ましい分類実施形態では、これらの方法は、被験体における腎損傷が腎前性、内因性腎性または腎後性であるか否かを確定すること；および／またはこれらのクラスを、急性尿細管損傷、急性糸球体腎炎、急性尿細管間質性腎炎、急性血管腎症または浸潤性疾患のようなサブクラスにさらに細分すること；および／または被験体が特定のＲＩＦＬＥ段階に進行する尤度を割り当てることを包含し、検定結果（単数または複数）は、被験体に対する損傷分類と相関される。例えば、測定濃度は閾値と比較され、測定濃度が閾値を上回る場合には、特定の分類が割り当てられる；代替的には、測定濃度が閾値を下回る場合には、異なる分類が被験体に割り当てられ得る。
【００３７】
これらの方法に用いるための所望の閾値に達するよう、種々の方法が当業者に用いられ得る。例えば閾値は、正常被験体で測定される腎損傷マーカーの７５ｔｈ、８５ｔｈ、９０ｔｈ、９５ｔｈまたは９９ｔｈ百分位数を表す濃度を選択することにより、このような正常被験体の一集団から決定され得る。あるいは、閾値は、被験体の「罹患」集団、例えば損傷を蒙っているかまたは損傷に関する素因（例えば、ＡＲＦまたは何らかの他の臨床的結果、例えば死亡、透析、腎移植など）を有する被験体の集団から、このような被験体で測定される腎損傷マーカーの７５ｔｈ、８５ｔｈ、９０ｔｈ、９５ｔｈまたは９９ｔｈ百分位数を表す濃度を選択することにより、決定され得る。別の代替法では、閾値は、同一被験体における腎損傷マーカーの事前の測定から決定され得る；すなわち、被験体における腎損傷マーカーのレベルの一時的変化を用いて、危険度を被験体に割り当て得る。
【００３８】
しかしながら、前記の考察は、本発明の腎損傷マーカーが対応する個々の閾値と比較されなければならない、ということを暗示するよう意図されない。検定結果を組合せるための方法は、多変量ロジスティック回帰、対数線形モデル、ニューラルネットワーク解析、ｎ−ｏｆ−ｍ解析、決定木分析、マーカーの算定比率などの使用を包含し得る。このリストは、限定的であることを意味しない。これらの方法では、個々のマーカーを組合せることにより決定される複合体結果は、それがそれ自体マーカーであるよう処理され得る；すなわち、閾値は、個々のマーカーに関して本明細書中に記載されるように複合体結果に関して決定され得るし、この閾値と比較される個々の患者に関する複合体結果に関して決定され得る。
【００３９】
２つの集団を識別する特定試験の能力は、ＲＯＣ解析を用いて確立され得る。例えば、腎臓状態における１つ以上の将来的変化を受け易い「第一」亜集団、ならびにそれをそのように受け易くはない「第二」亜集団から確立されるＲＯＣ曲線（複数）は一ＲＯＣ曲線を算定するために用いられ、その曲線下面積は試験の質の測定値を提供する。好ましくは、本明細書中に記載される試験は、０．５より大きい、好ましくは少なくとも０．６、さらに好ましくは０．７、さらに好ましくは少なくとも０．８、さらに好ましくは少なくとも０．９、最も好ましくは少なくとも０．９５のＲＯＣ曲線面積を提供する。
【００４０】
ある態様において、１つ以上の腎損傷マーカーまたはこのようなマーカーの複合体の測定濃度は、連続変数として処理され得る。例えば、任意の特定の濃度は、被験体に関する腎機能の将来的低減、損傷の発生、分類などの対応する確率に変換され得る。さらに別の代替方法では、「第一」亜集団（例えば、腎臓状態、損傷の発生、分類などの１つ以上の将来的変化を受け易い）、ならびにそのように受け易くはない「第二」亜集団のような「ｂｉｎ」に被験体の集団を分ける場合に、許容可能レベルの特異度および敏感度を、閾値が提供し得る。閾値は、試験精度の以下の測定値のうちの１つ以上によりこの第一および第二集団を分けるよう選択される：
１より大きい、好ましくは少なくとも約２以上または約０．５以下、さらに好ましくは少なくとも約３以上または約０．３３以下、さらに好ましくは少なくとも約４以上または約０．２５以下、さらに好ましくは少なくとも約５以上または約０．２以下、最も好ましくは少なくとも約１０以上または約０．１以下のオッズ比；
０．５より大きい、好ましくは少なくとも約０．６、さらに好ましくは少なくとも約０．７、さらに好ましくは少なくとも約０．８、さらに好ましくは少なくとも約０．９、最も好ましくは少なくとも約０．９５の特異度であり、対応する敏感度は、０．２より大きく、好ましくは約０．３より大きく、さらに好ましくは約０．４より大きく、さらに好ましくは少なくとも約０．５、さらに好ましくは約０．６、さらに好ましくは約０．７より大きく、さらに好ましくは約０．８より大きく、さらに好ましくは約０．９より大きく、最も好ましくは約０．９５より大きい；
０．５より大きい、好ましくは少なくとも約０．６、さらに好ましくは少なくとも約０．７、さらに好ましくは少なくとも約０．８、さらに好ましくは少なくとも約０．９、最も好ましくは少なくとも約０．９５の敏感度度であり、対応する特異度は、０．２より大きく、好ましくは約０．３より大きく、さらに好ましくは約０．４より大きく、さらに好ましくは少なくとも約０．５、さらに好ましくは約０．６、さらに好ましくは約０．７より大きく、さらに好ましくは約０．８より大きく、さらに好ましくは約０．９より大きく、最も好ましくは約０．９５より大きい；
少なくとも約７５％の敏感度であり、少なくとも約７５％の特異度と組合される；
１より大きい、少なくとも約２、さらに好ましくは少なくとも約３、さらに好ましくは少なくとも約５、最も好ましくは少なくとも約１０の陽性尤度比（敏感度／（１−特異度）として算定される）；あるいは
１未満、約０．５以下、さらに好ましくは約０．３以下、最も好ましくは約０．１以下の陰性尤度比（（１−敏感度）／特異度として算定される）。
上記の測定値のいずれかについての文脈中の「約」という用語は、所定の測定値の＋／−５％を指す。
【００４１】
被験体における腎臓状態を査定するためには、多重閾値も用いられ得る。例えば、腎臓状態、損傷の発生、分類などにおける１つ以上の将来的変化を受け易い「第一」亜集団、ならびにそのように受け易くはない「第二」亜集団は、単一群に併合され得る。次いで、この群は、３つ以上の等しい部分に細分される（細分の数によって、三分位数、四分位数、五分位数など）。オッズ比は、それらが入る細分画に基づいて被験体に割り当てられる。三分位数を考えると、最低または最高三分位数は、他の細分の比較のための参照として用いられ得る。この参照細分は、オッズ比１を与えられる。第二の三分位数は、その第一の三分位数に比例するオッズ比を割り当てられる。すなわち、第二の三分位数における誰かは、第一の三分位数における誰かと比較した場合に腎臓状態の１つ以上の将来的変化を３倍以上蒙ると思われる。第三の三分位数も、その第一の三分位数に比例するオッズ比を割り当てられる。
【００４２】
ある実施形態では、検定方法は、イムノアッセイである。このような検定に用いるための抗体は、当該全長腎損傷マーカーを特異的に結合し、それと「関連づけ」られる１つ以上のポリペプチドも結合し得る（その用語は本明細書中で後で定義される）。多数のイムノアッセイフォーマットが、当業者に知られている。好ましい体液試料は、尿、血液、血清、唾液、涙液および血漿からなる群から選択される。
【００４３】
前記方法のステップは、本明細書中に記載される方法における単離に腎損傷マーカー検定結果（単数または複数）が用いられるということを意味すると解釈されるべきでない。むしろ、付加的変数または他の臨床的指数が、本明細書中に記載される方法に含まれ得る。例えば、危険度層化法、診断法、分類法およびモニタリング法などは、人口学的情報（例えば、体重、性別、年齢、人種）、病歴（例えば、家族歴、外科手術の種類、先在性疾患、例えば動脈瘤、うっ血性心不全、子癇前症、子癇、真性糖尿病、高血圧症、冠動脈疾患、タンパク尿、腎機能不全または敗血症、ＮＳＡＩＤ、シクロスポリン、タクロリムス、アミノグリコシド、フォスカルネット、エチレングリコール、ヘモグロビン、ミオグロビン、イフォスファミド、重金属、メトトレキセート、放射線不透過性造影剤またはストレプトゾトシンのような毒素曝露の型）、臨床的変数（例えば、血圧、温度、呼吸数）、危険度スコア（ＡＰＡＣＨＥスコア、ＰＲＥＤＩＣＴスコア、ＵＡ／ＮＳＴＥＭＩに関するＴＩＭＩ危険度スコア、フラミンガム危険度スコア）、糸球体濾過率、概算糸球体濾過率、尿産生率、血清または血漿クレアチニン濃度、尿クレアチニン濃度、ナトリウム排泄分画、尿ナトリウム濃度、尿クレアチニン対血清または血漿クレアチニン比、尿比重、尿オスモル濃度、尿中尿素窒素対血漿尿素窒素比、血漿ＢＵＮ対クレアチニン比、尿ナトリウム／（尿クレアチニン／血漿クレアチニン）として算定される腎不全指数、血清または血漿好中球ゼラチナーゼ（ＮＧＡＬ）濃度、尿ＮＧＡＬ濃度、血清または血漿シスタチンＣ濃度、血清または血漿心臓トロポニン濃度、血清または血漿ＢＮＰの濃度、血清または血漿ＮＴプロＢＮＰ濃度、ならびに血清または血漿プロＢＮＰ濃度からなる群から選択される被験体に関して測定された１つ以上の変数と、検定結果（単数または複数）を組合せ得る。１つ以上の腎損傷マーカー検定結果（単数または複数）と組合せられ得る腎機能の他の測定法は、本明細書中で後に、ならびにHarrison’s Principles of Internal Medicine, 17th Ed., McGraw Hill, New York, pages 1741-1830およびCurrent Medical Diagnosis & Treatment 2008, 47th Ed, McGraw Hill, New York, pages 785-815（これらの記載内容は各々、参照により本明細書中で援用される）に記載されている。
【００４４】
１つ以上のマーカーが測定される場合、個々のマーカーは同時に得られる試料中で測定され得るし、あるいは異なる（例えば、より早いまたはより遅い）時点で得られた試料から決定され得る。個々のマーカーは、同一のまたは異なる体液試料に関しても測定され得る。例えば、ある腎損傷マーカーは血清または血漿試料中で測定され得るし、別の腎損傷マーカーは尿試料中で測定され得る。さらに、尤度の割当は、個々の腎損傷マーカー検定結果を、１つ以上の付加的変数における一過性変化と組合せ得る。
【００４５】
種々の関連態様において、本発明は、本明細書中に記載される方法を実施するための装置およびキットにも関する。適切なキットは、記載された腎損傷マーカーのうちの少なくとも１つに関する検定を実施するために十分な試薬を、記載閾値比較を実施するための使用説明書と一緒に包含する。
【００４６】
ある実施形態では、このような検定を実施するための試薬は検定装置で提供され、このような検定装置は、このようなキットに包含され得る。好ましい試薬は、１つ以上の固相抗体を含み、固相抗体は、固体支持体に結合される意図されたバイオマーカー標的（単数または複数）を検出する抗体を含み得る。サンドイッチイムノアッセイの場合、このような試薬は１つ以上の検出可能的に標識された抗体も含み、検出可能的標識抗体は、検出可能な標識と結合される意図されたバイオマーカー標的（単数または複数）を検出する抗体を含み得る。検定装置の一部として提供され得る付加的な任意の素子は、本明細書中で後述される。
【００４７】
検出可能な標識としては、それ自体検出可能である分子（例えば、蛍光部分、電気化学的標識、ｅｃｌ（電気化学的発光）標識、金属キレート、コロイド金属粒子など）、ならびに検出可能な反応生成物の産生により（例えば、酵素、例えばホースラディッシュペルオキシダーゼ、アルカリ性ホスファターゼなど）、あるいはそれ自体検出可能であり得る特異的結合分子の使用により（例えば、二次抗体、ビオチン、ジゴキシゲニン、マルトース、オリゴヒスチジン、２，４−ジニトロベンゼン、フェニルアルセネート、ｓｓＤＮＡ、ｄｓＤＮＡなどと結合する標識化抗体）、間接的に検出され得る分子が挙げられ得る。
【００４８】
シグナル発生素子からのシグナルの生成は、当該技術分野で周知の種々の光学的、音響学的および電気化学的方法を用いて実施され得る。検出モードの例としては、蛍光、放射化学的検出、反射率、吸光度、電流測定、電気伝導力、インピーダンス、干渉測定、偏光解析などが挙げられる。これらの方法のうちのあるものでは、固相抗体は、シグナルの生成のために変換器（例えば、回析格子、電気化学センサーなど）に連結されるが、一方、他のものでは、シグナルは、固相抗体から空間的に離れている変換器により生成される（例えば、励起光源および光学検出器を用いる蛍光計）。このリストは、限定的であるよう意図されない。抗体ベースのバイオセンサーは、標識化分子の必要性を任意に排除する分析物の存在または量を決定するためにも用いられ得る。
【図面の簡単な説明】
【００４９】
【図１】図１−１〜６６はコホート１（ＲＩＦＬＥ段階０を超える進行を示さなかった患者）に関して収集された尿試料中の、ならびにコホート２において段階Ｒ、ＩまたはＦに達する０時間前、２４時間前および４８時間前に被験体から収集された尿試料中のマーカーレベルの比較のために、実施例６に従って決定されたデータ表を示す。表は、種々のマーカーに関する種々の閾値（カットオフ）レベルでの記述統計、ＡＵＣ分析、ならびに敏感度、特異度およびオッズ比算定を示す。
【図２】図２−１〜７３はコホート１（ＲＩＦＬＥ段階０またはＲを超える進行を示さなかった患者）に関して収集された尿試料中の、ならびにコホート２において段階ＩまたはＦに達する０時間前、２４時間前および４８時間前に被験体から収集された尿試料中のマーカーレベルの比較のために、実施例７に従って決定されたデータ表を示す。表は、種々のマーカーに関する種々の閾値（カットオフ）レベルでの記述統計、ＡＵＣ分析、ならびに敏感度、特異度およびオッズ比算定を示す。
【図３】図３−１〜２１はコホート１（ＲＩＦＬＥ段階Ｒに達したが、それを超える進行を示さなかった患者）に関して収集された尿試料中の、ならびにコホート２において段階ＩまたはＦに達する０時間前、２４時間前および４８時間前に被験体から収集された尿試料中のマーカーレベルの比較のために、実施例８に従って決定されたデータ表を示す。表は、種々のマーカーに関する種々の閾値（カットオフ）レベルでの記述統計、ＡＵＣ分析、ならびに敏感度、特異度およびオッズ比算定を示す。
【図４】図４−１〜６５はコホート１（ＲＩＦＬＥ段階０を超える進行を示さなかった患者）に関して収集された尿試料中の、ならびにコホート２において段階Ｆに達する０時間前、２４時間前および４８時間前に被験体から収集された尿試料中のマーカーレベルの比較のために、実施例９に従って決定されたデータ表を示す。表は、種々のマーカーに関する種々の閾値（カットオフ）レベルでの記述統計、ＡＵＣ分析、ならびに敏感度、特異度およびオッズ比算定を示す。
【図５】図５−１〜８４はコホート１（ＲＩＦＬＥ段階０を超える進行を示さなかった患者）に関して収集された血漿試料中の、ならびにコホート２において段階Ｒ、ＩまたはＦに達する０時間前、２４時間前および４８時間前に被験体から収集された血漿試料中のマーカーレベルの比較のために、実施例６に従って決定されたデータ表を示す。表は、種々のマーカーに関する種々の閾値（カットオフ）レベルでの記述統計、ＡＵＣ分析、ならびに敏感度、特異度およびオッズ比算定を示す。
【図６】図６−１〜７１はコホート１（ＲＩＦＬＥ段階０またはＲを超える進行を示さなかった患者）に関して収集された血漿試料中の、ならびにコホート２において段階ＩまたはＦに達する０時間前、２４時間前および４８時間前に被験体から収集された血漿試料中のマーカーレベルの比較のために、実施例７に従って決定されたデータ表を示す。表は、種々のマーカーに関する種々の閾値（カットオフ）レベルでの記述統計、ＡＵＣ分析、ならびに敏感度、特異度およびオッズ比算定を示す。
【図７】図７−１〜２２はコホート１（ＲＩＦＬＥ段階Ｒに達したが、それを超える進行を示さなかった患者）に関して収集された血漿試料中の、ならびにコホート２において段階ＩまたはＦに達する０時間前、２４時間前および４８時間前に被験体から収集された血漿試料中のマーカーレベルの比較のために、実施例８に従って決定されたデータ表を示す。表は、種々のマーカーに関する種々の閾値（カットオフ）レベルでの記述統計、ＡＵＣ分析、ならびに敏感度、特異度およびオッズ比算定を示す。
【図８】図８−１〜４２はコホート１（ＲＩＦＬＥ段階０を超える進行を示さなかった患者）に関して収集された血漿試料中の、ならびにコホート２において段階Ｆに達する０時間前、２４時間前および４８時間前に被験体から収集された血漿試料中のマーカーレベルの比較のために、実施例９に従って決定されたデータ表を示す。表は、種々のマーカーに関する種々の閾値（カットオフ）レベルでの記述統計、ＡＵＣ分析、ならびに敏感度、特異度およびオッズ比算定を示す。
【発明を実施するための形態】
【００５０】
本発明は、１つ以上の腎損傷マーカーの測定による、腎機能に対する損傷、腎機能低減、および／または急性腎不全に罹患しているか、または罹患する危険がある被験体における診断、示差的診断、危険度層化、モニタリング、分類、および治療レジメンの決定のための方法および組成物に関する。種々の実施形態では、細胞質型アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ、可溶性腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリー成員５、可溶性ＣＤ４０リガンド、可溶性Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフケモカイン１６、Ｓ１００−Ａ１２、エオタキシン、可溶性Ｅ−セレクチン、フィブロネクチン、顆粒球コロニー刺激因子、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、ヘパリン結合増殖因子２、可溶性肝細胞増殖因子受容体、インターロイキン−１受容体アンタゴニスト、インターロイキン−１ベータ、インターロイキン−１０、インターロイキン−１５、インターロイキン−３、ミエロペルオキシダーゼ、ニドゲン−１、可溶性酸化型低密度リポタンパク質受容体１、パパリシン−１、可溶性Ｐ−セレクチン糖タンパク質リガンド１、抗ロイコプロテイナーゼ、可溶性キットリガンド、メタロプロテイナーゼ１の組織阻害物質、メタロプロテイナーゼ２の組織阻害物質、可溶性腫瘍壊死因子、可溶性血管細胞接着分子１および血管内皮細胞増殖因子Ａからなる群から選択される１つ以上のマーカー、あるいはそれに関連した１つ以上のマーカーの測定濃度が、被験体の腎臓状態と相関される。
【００５１】
この文書の目的のために、以下の定義が適用される：
本明細書中で用いる場合、「腎機能に対する損傷」は、腎臓機能の測定値の突然の（１４日以内、好ましくは７日以内、さらに好ましくは７２時間以内、さらに好ましくは約４８時間以内の）測定可能な低減である。このような損傷は、例えば糸球体濾過率または概算ＧＦＲの低下、尿排出量の低減、血清クレアチニンの増加、血清シスタチンＣの増加、腎臓代替療法の要請などにより確認され得る。「腎機能における改善」は、腎機能の測定値の突然の（１４日以内、好ましくは７日以内、さらに好ましくは７２時間以内、さらに好ましくは約４８時間以内の）測定可能な増加である。ＧＦＲを測定するおよび／または概算するための好ましい方法は、本明細書中に後述される。
本明細書中で用いる場合、「腎機能低減」は、０．１ｍｇ／ｄＬ以上（≧８．８μｍｏｌ／Ｌ）の血清クレアチニンの絶対的増加、２０％以上（基線の１．２倍）の血清クレアチニンの増加％、または尿排出量の低減（０．５ｍｌ／ｋｇ／時間の実証された乏尿）により確認される腎機能の突然の（１４日以内、好ましくは７日以内、さらに好ましくは７２時間以内、さらに好ましくは約４８時間以内の）低減である。
本明細書中で用いる場合、「急性腎不全」または「ＡＲＦ」は、０．３ｍｇ／ｄＬ以上（≧２６．４μｍｏｌ／ｌ）の血清クレアチニンの絶対的増加、５０％以上（基線の１．５倍）の血清クレアチニンの増加％、または尿排出量の低減（少なくとも６時間の間の０．５ｍｌ／ｋｇ／時間の実証された乏尿）により確認される腎機能の突然の（１４日以内、好ましくは７日以内、さらに好ましくは７２時間以内、さらに好ましくは約４８時間以内の）低減である。この用語は、「急性腎損傷」または「ＡＫＩ」と同義である。
【００５２】
これに関しては、イムノアッセイから得られるシグナルは、１つ以上の抗体と標的生体分子（すなわち分析物）、ならびに抗体が結合する必要なエピトープ（単数または複数）を含有するポリペプチド間で形成される複合体の直接的結果である、と当業者は理解するであろう。このような検定は全長バイオマーカーを検出し得るし、検定結果は、当該バイオマーカーの濃度として表され、検定からのシグナルは実際に、試料中に存在するこのような「免疫反応性」ポリペプチド全ての結果である。バイオマーカーの発現は、イムノアッセイ以外の手段、例えばタンパク質測定（例えばドットブロット、ウエスタンブロット、クロマトグラフィー法、質量分光分析など）ならびに核酸測定（ｍＲＮＡ定量）によっても確定され得る。このリストは限定的であるよう意図されない。
【００５３】
本明細書中で用いる場合、「細胞質型アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ」という用語は、細胞質型アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ前駆体由来の生物学的試料中に存在する１つ以上のポリペプチドを指す（Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ  Ｐ１７１７４（配列番号１））。
【表２】
2019023641.tif 000003
【００５４】
以下のドメインが、細胞質型アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼにおいて同定されている：
残基    長さ            ドメインＩＤ
1         1             イニシエーター・メチオニン
2-413     412           細胞質型アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ
【００５５】
本明細書中で用いる場合、「腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリー成員５」という用語は、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリー成員５前駆体由来の生物学的試料中に存在する１つ以上のポリペプチドを指す（Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ  Ｐ２５９４２（配列番号２））。
【表３】
2019023641.tif 000004
【００５６】
最も好ましくは、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリー成員５検定は、１つ以上の可溶型の腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリー成員５を検出する。腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリー成員５は、大型細胞外ドメインを有する一回膜貫型タイプＩ膜タンパク質であって、このほとんどまたは全部が、膜貫通ドメインの全部または一部を欠く代替的スプライシング事象により、あるいは膜結合型のタンパク質分解により生成された可溶型の腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリー成員５中に存在する。イムノアッセイの場合、この細胞外ドメイン内のエピトープと結合する１つ以上の抗体を用いて、これらの可溶型（単数または複数）を検出し得る。以下のドメインが、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリー成員５において同定されている：
残基            長さ            ドメインＩＤ
1-20            20              シグナル配列     
21-277          257             腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリー成員５
21-193          173             細胞外
194-215         22              膜貫通   
216-27          62              細胞質
【００５７】
さらに、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリー成員５の一代替的スプライス型が既知である。この型は、本発明の目的のための腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリー成員５とみなされ、この代替的スプライス型の可溶型は、本発明の目的のための可溶性腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリー成員５とみなされる。
【００５８】
本明細書中で用いる場合、「ＣＤ４０リガンド」という用語は、ＣＤ４０リガンド前駆体由来の生物学的試料中に存在する１つ以上のポリペプチドを指す（Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ  Ｐ２９９６５（配列番号３））。
【表４】
2019023641.tif 000005
【００５９】
最も好ましくは、ＣＤ４０リガンド検定は、１つ以上の可溶型のＣＤ４０リガンドを検出する。ＣＤ４０リガンドは、大型細胞外ドメインを有する一回膜貫型タイプＩＩ膜タンパク質であって、このほとんどまたは全部が、膜貫通ドメインの全部または一部を欠く代替的スプライシング事象により、あるいは膜結合型のタンパク質分解により生成された可溶型のＣＤ４０リガンド中に存在する。イムノアッセイの場合、この細胞外ドメイン内のエピトープと結合する１つ以上の抗体を用いて、これらの可溶型（単数または複数）を検出し得る。以下のドメインが、ＣＤ４０リガンドにおいて同定されている：
残基            長さ            ドメインＩＤ
1-261           261             ＣＤ４０リガンド、膜結合型
113-261         149             ＣＤ４０リガンド、可溶型
47-261          215             細胞外
23-46           24              アンカーシグナル
1-22            22              細胞質
112-113         2               切断部位
【００６０】
本明細書中で用いる場合、「Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフケモカイン１６」という用語は、Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフケモカイン１６前駆体由来の生物学的試料中に存在する１つ以上のポリペプチドを指す（Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ  Ｑ９Ｈ２Ａ７（配列番号４））。
【表５】
2019023641.tif 000006
【００６１】
最も好ましくは、Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフケモカイン１６検定は、１つ以上の可溶型のＣ−Ｘ−モチーフケモカイン１６を検出する。Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフケモカイン１６は、大型細胞外ドメインを有する一回膜貫型タイプＩ膜タンパク質であって、このほとんどまたは全部が、膜貫通ドメインの全部または一部を欠く代替的スプライシング事象により、あるいは膜結合型のタンパク質分解により生成された可溶型のＣ−Ｘ−Ｃモチーフケモカイン１６中に存在する。イムノアッセイの場合、この細胞外ドメイン内のエピトープと結合する１つ以上の抗体を用いて、これらの可溶型（単数または複数）を検出し得る。以下のドメインが、Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフケモカイン１６において同定されている：
残基            長さ            ドメインＩＤ
1-29            29              シグナル配列
30-254          225             Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフケモカイン１６
30-205          176             細胞外
206-226         21              膜貫通
227-254         28              細胞質
【００６２】
本明細書中で用いる場合、「タンパク質Ｓ１００−Ａ１２」という用語は、タンパク質Ｓ１００−Ａ１２前駆体由来の生物学的試料中に存在する１つ以上のポリペプチドを指す（Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ  Ｐ８０５１１（配列番号５））。
【表６】
2019023641.tif 000007
【００６３】
以下のドメインが、タンパク質Ｓ１００−Ａ１２において同定されている：
残基    長さ            ドメインＩＤ
1       1               イニシエーター・メチオニン
2-92    91              タンパク質Ｓ１００−Ａ１２
【００６４】
本明細書中で用いる場合、「エオタキシン」という用語は、エオタキシン前駆体由来の生物学的試料中に存在する１つ以上のポリペプチドを指す（Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ  Ｐ５１６７１（配列番号６））。
【表７】
2019023641.tif 000008
【００６５】
以下のドメインが、エオタキシンにおいて同定されている：
残基    長さ            ドメインＩＤ
1-23    23              シグナルペプチド
24-97   74              エオタキシン
【００６６】
本明細書中で用いる場合、「Ｅ−セレクチン」という用語は、Ｅ−セレクチン前駆体由来の生物学的試料中に存在する１つ以上のポリペプチドを指す（Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ  Ｐ１６５８１（配列番号７））。
【表８】
2019023641.tif 000009
【００６７】
最も好ましくは、Ｅ−セレクチン検定は、１つ以上の可溶型のＥ−セレクチンを検出する。Ｅ−セレクチンは、大型細胞外ドメインを有する一回膜貫型タイプＩ膜タンパク質であって、このほとんどまたは全部が、膜貫通ドメインの全部または一部を欠く代替的スプライシング事象により、あるいは膜結合型のタンパク質分解により生成された可溶型のＥ−セレクチン中に存在する。イムノアッセイの場合、この細胞外ドメイン内のエピトープと結合する１つ以上の抗体を用いて、これらの可溶型（単数または複数）を検出し得る。以下のドメインが、Ｅ−セレクチンにおいて同定されている：
残基            長さ            ドメインＩＤ
1-21            21              シグナル配列
22-610          589             Ｅ−セレクチン
22-556          535             細胞外
557-578         22              膜貫通
579-610         32              細胞質
【００６８】
本明細書中で用いる場合、「フィブロネクチン」という用語は、フィブロネクチン前駆体由来の生物学的試料中に存在する１つ以上のポリペプチドを指す（Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ  Ｐ０２７５１（配列番号８））。
【表９】
2019023641.tif 000010
2019023641.tif 000011
【００６９】
以下のドメインが、フィブロネクチンにおいて同定されている：
残基            長さ            ドメインＩＤ
1-31            31              シグナルペプチド
32-2386         2355            フィブロネクチン
【００７０】
フィブロネクチンの少なくとも１４の他のアイソフォームが知られており、本発明の目的のための「フィブロネクチン」とみなされる。
【００７１】
本明細書中で用いる場合、「顆粒球コロニー刺激因子」という用語は、顆粒球コロニー刺激因子前駆体由来の生物学的試料中に存在する１つ以上のポリペプチドを指す（Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ  Ｐ０９９１９（配列番号９））。
【表１０】
2019023641.tif 000012
【００７２】
以下のドメインが、顆粒球コロニー刺激因子において同定されている：
残基    長さ            ドメインＩＤ
1-29    29              シグナルペプチド
30-207  178             顆粒球コロニー刺激因子
【００７３】
本明細書中で用いる場合、「顆粒球マクロファージコロニー刺激因子」という用語は、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子前駆体由来の生物学的試料中に存在する１つ以上のポリペプチドを指す（Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ  Ｐ０４１４１（配列番号１０））。
【表１１】
2019023641.tif 000013
【００７４】
以下のドメインが、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子において同定されている：
残基    長さ            ドメインＩＤ
1-17    17              シグナルペプチド
18-144  127             顆粒球マクロファージコロニー刺激因子
【００７５】
本明細書中で用いる場合、「ヘパリン結合増殖因子２」という用語は、ヘパリン結合増殖因子２前駆体由来の生物学的試料中に存在する１つ以上のポリペプチドを指す（Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ  Ｐ０９０３８（配列番号１１））。
【表１２】
2019023641.tif 000014
【００７６】
以下のドメインが、ヘパリン結合増殖因子２において同定されている：
残基    長さ            ドメインＩＤ
1-9     9               プロペプチド
10-155  146             ヘパリン結合増殖因子２
【００７７】
本明細書中で用いる場合、「肝細胞増殖因子受容体」という用語は、肝細胞増殖因子受容体前駆体由来の生物学的試料中に存在する１つ以上のポリペプチドを指す（Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ  Ｐ０８５８１（配列番号１２））。
【表１３】
2019023641.tif 000015
【００７８】
最も好ましくは、肝細胞増殖因子受容体検定は、１つ以上の可溶型の肝細胞増殖因子受容体を検出する。肝細胞増殖因子受容体は、大型細胞外ドメインを有する一回膜貫型タイプＩ膜タンパク質であって、このほとんどまたは全部が、膜貫通ドメインの全部または一部を欠く代替的スプライシング事象により、あるいは膜結合型のタンパク質分解により生成された可溶型の肝細胞増殖因子受容体中に存在する。イムノアッセイの場合、この細胞外ドメイン内のエピトープと結合する１つ以上の抗体を用いて、これらの可溶型（単数または複数）を検出し得る。以下のドメインが、肝細胞増殖因子受容体において同定されている：
残基            長さ            ドメインＩＤ
1-24            24              シグナル配列
25-1390         1366            肝細胞増殖因子受容体
25-932          908             細胞外
933-955         23              膜貫通
956-1390        435             細胞質
【００７９】
本明細書中で用いる場合、「インターロイキン−１受容体アンタゴニストタンパク質」という用語は、インターロイキン−１受容体アンタゴニストタンパク質前駆体由来の生物学的試料中に存在する１つ以上のポリペプチドを指す（Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ  Ｐ１８５１０（配列番号１３））。
【表１４】
2019023641.tif 000016
【００８０】
以下のドメインが、インターロイキン−１受容体アンタゴニストタンパク質において同定されている：
残基    長さ            ドメインＩＤ
1-25    25              シグナルペプチド
26-177  152             インターロイキン−１受容体アンタゴニストタンパク質
【００８１】
さらに、インターロイキン−１受容体アンタゴニストタンパク質の３つの変異体アイソフォームが知られている。アイソフォーム２は残基１〜２１をＭＡＬに置き換える；アイソフォーム３は残基１〜２１をＭＡＬＡＤＬＹＥＥＧＧＧＧＧＧＥＧＥＤＮＡＤＳＫに置き換える（配列番号２）；そしてアイソフォーム４は残基１〜３４を欠く。
【００８２】
本明細書中で用いる場合、「インターロイキン−１ベータ」という用語は、インターロイキン−１ベータ前駆体由来の生物学的試料中に存在する１つ以上のポリペプチドを指す（Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ  Ｐ０１５８４（配列番号１４））。
【表１５】
2019023641.tif 000017
【００８３】
以下のドメインが、インターロイキン−１ベータにおいて同定されている：
残基    長さ            ドメインＩＤ
1-116   116             プロペプチド
117-269 153             インターロイキン−１ベータ
【００８４】
本明細書中で用いる場合、「インターロイキン−１０」という用語は、インターロイキン−１０前駆体由来の生物学的試料中に存在する１つ以上のポリペプチドを指す（Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ  Ｐ２２３０１（配列番号１５））。
【表１６】
2019023641.tif 000018
【００８５】
以下のドメインが、インターロイキン−１０において同定されている：
残基    長さ            ドメインＩＤ
1-18    18              シグナルペプチド
19-178  160             インターロイキン−１０
【００８６】
本明細書中で用いる場合、「インターロイキン−１５」という用語は、インターロイキン−１５前駆体由来の生物学的試料中に存在する１つ以上のポリペプチドを指す（Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ  Ｐ４０９３３（配列番号１６））。
【表１７】
2019023641.tif 000019
【００８７】
以下のドメインが、インターロイキン−１５において同定されている：
残基    長さ            ドメインＩＤ
1-29    29              シグナルペプチド
30-48   19              プロペプチド
49-162  114             インターロイキン−１５
【００８８】
さらに、２つの変異体インターロイキン−１５アイソフォームが知られている。アイソフォーム２は残基１〜３７をＭＶＬＧＴＩＤＬＣＳに置き換える（配列番号１７）；アイソフォーム３は残基１〜２１をＭＤＦＱＶＱＩＦＳＦＬＬＩＳＡＳＶＩＭＳＲに置き換える（配列番号１８）。
【００８９】
本明細書中で用いる場合、「インターロイキン−３」という用語は、インターロイキン−３前駆体由来の生物学的試料中に存在する１つ以上のポリペプチドを指す（Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ  Ｐ０８７００（配列番号１９））。
【表１８】
2019023641.tif 000020
【００９０】
以下のドメインが、インターロイキン−３において同定されている：
残基    長さ            ドメインＩＤ
1-19    19              シグナルペプチド
20-152  133             インターロイキン−３
【００９１】
本明細書中で用いる場合、「ミエロペルオキシダーゼ」という用語は、ミエロペルオキシダーゼ前駆体由来の生物学的試料中に存在する１つ以上のポリペプチドを指す（Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ  Ｐ０５１６４（配列番号２０））。
【表１９】
2019023641.tif 000021
【００９２】
以下のドメインが、ミエロペルオキシダーゼにおいて同定されている：
残基    長さ            ドメインＩＤ
1-48    48              シグナルペプチド
49-745  697             ８９ｋＤａ  ミエロペルオキシダーゼ
49-164  116             プロペプチド
155-745 591             ８４ｋＤａ  ミエロペルオキシダーゼ
165-278 114             ミエロペルオキシダーゼ軽鎖
279-745 467             ミエロペルオキシダーゼ重鎖
【００９３】
本明細書中で用いる場合、「ニドゲン−１」という用語は、ニドゲン−１前駆体由来の生物学的試料中に存在する１つ以上のポリペプチドを指す（Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ  Ｐ１４５４３（配列番号２１））。
【表２０】
2019023641.tif 000022
【００９４】
以下のドメインが、ニドゲン−１において同定されている：
残基    長さ            ドメインＩＤ
1-28    28              シグナルペプチド
29-1247 1219            ニドゲン−１
【００９５】
本明細書中で用いる場合、「酸化型低密度リポタンパク質受容体１」という用語は、酸化型低密度リポタンパク質受容体１前駆体由来の生物学的試料中に存在する１つ以上のポリペプチドを指す（Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ  Ｐ７８３８０（配列番号２２））。
【表２１】
2019023641.tif 000023
【００９６】
最も好ましくは、酸化型低密度リポタンパク質受容体１検定は、１つ以上の可溶型の酸化型低密度リポタンパク質受容体１を検出する。酸化型低密度リポタンパク質受容体１は、大型細胞外ドメインを有する一回膜貫型タイプＩＩ膜タンパク質であって、このほとんどまたは全部が、膜貫通ドメインの全部または一部を欠く代替的スプライシング事象により、あるいは膜結合型のタンパク質分解により生成された可溶型の酸化型低密度リポタンパク質受容体１中に存在する。イムノアッセイの場合、この細胞外ドメイン内のエピトープと結合する１つ以上の抗体を用いて、これらの可溶型（単数または複数）を検出し得る。以下のドメインが、酸化型低密度リポタンパク質受容体１において同定されている：
残基    長さ            ドメインＩＤ
1-273     273           酸化型低密度リポタンパク質受容体１（膜結合型）
1-36      36            細胞質
37-57     21            膜アンカーシグナル
58-273    216           細胞外
【００９７】
本明細書中で用いる場合、「パパリシン−１」という用語は、パパリシン−１前駆体由来の生物学的試料中に存在する１つ以上のポリペプチドを指す（Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ  Ｑ１３２１９（配列番号２３））。
【表２２】
2019023641.tif 000024
2019023641.tif 000025
【００９８】
以下のドメインが、パパリシン−１において同定されている：
残基    長さ            ドメインＩＤ
1-22    22              シグナルペプチド
23-80   58              プロペプチド
155-745 591             ８４ｋＤａ  ミエロペルオキシダーゼ
81-1628 1548            パパリシン−１
【００９９】
本明細書中で用いる場合、「Ｐ−セレクチン糖タンパク質リガンド１」という用語は、Ｐ−セレクチン糖タンパク質リガンド１前駆体由来の生物学的試料中に存在する１つ以上のポリペプチドを指す（Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ  Ｑ１４２４２（配列番号２４））。
【表２３】
2019023641.tif 000026
【０１００】
最も好ましくは、Ｐ−セレクチン糖タンパク質リガンド１検定は、１つ以上の可溶型のＰ−セレクチン糖タンパク質リガンド１を検出する。Ｐ−セレクチン糖タンパク質リガンド１は、大型細胞外ドメインを有する一回膜貫型タイプＩ膜タンパク質であって、このほとんどまたは全部が、膜貫通ドメインの全部または一部を欠く代替的スプライシング事象により、あるいは膜結合型のタンパク質分解により生成された可溶型のＰ−セレクチン糖タンパク質リガンド１中に存在する。イムノアッセイの場合、この細胞外ドメイン内のエピトープと結合する１つ以上の抗体を用いて、これらの可溶型（単数または複数）を検出し得る。以下のドメインが、Ｐ−セレクチン糖タンパク質リガンド１において同定されている：
残基    長さ            ドメインＩＤ
1-17    17              シグナル配列
18-41   24              プロペプチド
42-412  371             Ｐ−セレクチン糖タンパク質リガンド１
18-320  303             細胞外
321-341 21              膜貫通
342-412 71              細胞質
【０１０１】
本明細書中で用いる場合、「抗ロイコプロテイナーゼ」という用語は、抗ロイコプロテイナーゼ前駆体由来の生物学的試料中に存在する１つ以上のポリペプチドを指す（Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ  Ｐ０３９７３（配列番号２５））。
【表２４】
2019023641.tif 000027
【０１０２】
以下のドメインが、抗ロイコプロテイナーゼにおいて同定されている：
残基    長さ            ドメインＩＤ
1-25    25              シグナル配列
26-132  107             抗ロイコプロテイナーゼ
【０１０３】
本明細書中で用いる場合、「キットリガンド」という用語は、キットリガンド前駆体由来の生物学的試料中に存在する１つ以上のポリペプチドを指す（Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ  Ｐ２１５８３（配列番号２６））。
【表２５】
2019023641.tif 000028
【０１０４】
さらに、可溶性スプライス変異体型のキットリガンドが記載されている（配列番号２７）：
【表２６】
2019023641.tif 000029
【０１０５】
最も好ましくは、キットリガンド検定は、１つ以上の可溶型のキットリガンドを検出する。キットリガンドは、大型細胞外ドメインを有する一回膜貫型タイプＩ膜タンパク質であって、このほとんどまたは全部が、膜貫通ドメインの全部または一部を欠く代替的スプライシング事象により、あるいは膜結合型のタンパク質分解により生成された可溶型のキットリガンド中に存在する。イムノアッセイの場合、この細胞外ドメイン内のエピトープと結合する１つ以上の抗体を用いて、これらの可溶型（単数または複数）を検出し得る。以下のドメインが、キットリガンドにおいて同定されている：
残基    長さ            ドメインＩＤ
1-25    25              シグナル配列
26-273  248             キットリガンド
26-214  189             細胞外
215-237 23              膜貫通
238-273 36              細胞質
【０１０６】
本明細書中で用いる場合、「メタロプロテイナーゼ阻害物質１」という用語は、メタロプロテイナーゼ阻害物質１前駆体由来の生物学的試料中に存在する１つ以上のポリペプチドを指す（Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ  Ｐ０１０３３（配列番号２８））。
【表２７】
2019023641.tif 000030
【０１０７】
以下のドメインが、メタロプロテイナーゼ阻害物質１において同定されている：
残基    長さ            ドメインＩＤ
1-18    23              シグナル配列
24-207  184             メタロプロテイナーゼ阻害物質１
【０１０８】
本明細書中で用いる場合、「メタロプロテイナーゼ阻害物質２」という用語は、メタロプロテイナーゼ阻害物質２前駆体由来の生物学的試料中に存在する１つ以上のポリペプチドを指す（Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ  Ｐ１６０３５（配列番号２９））。
【表２８】
2019023641.tif 000031
【０１０９】
以下のドメインが、メタロプロテイナーゼ阻害物質２において同定されている：
残基    長さ            ドメインＩＤ
1-26    26              シグナルペプチド
27-220  194             メタロプロテイナーゼ阻害物質２
【０１１０】
本明細書中で用いる場合、「腫瘍壊死因子」という用語は、腫瘍壊死因子前駆体由来の生物学的試料中に存在する１つ以上のポリペプチドを指す（Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ  Ｐ０１３７５（配列番号３０））。
【表２９】
2019023641.tif 000032
【０１１１】
最も好ましくは、腫瘍壊死因子検定は、１つ以上の可溶型の腫瘍壊死因子を検出する。腫瘍壊死因子は、大型細胞外ドメインを有する一回膜貫型タイプＩＩ膜タンパク質であって、このほとんどまたは全部が、膜貫通ドメインの全部または一部を欠く代替的スプライシング事象により、あるいは膜結合型のタンパク質分解により生成された可溶型の腫瘍壊死因子中に存在する。イムノアッセイの場合、この細胞外ドメイン内のエピトープと結合する１つ以上の抗体を用いて、これらの可溶型（単数または複数）を検出し得る。以下のドメインが、腫瘍壊死因子において同定されている：
残基    長さ            ドメインＩＤ
1-233   233             腫瘍壊死因子（膜型）
77-233  157             腫瘍壊死因子（可溶型）
36-56   35              アンカーシグナル
57-233  177             細胞外
1-35    35              細胞質
【０１１２】
本明細書中で用いる場合、「血管細胞接着分子１」という用語は、血管細胞接着分子１前駆体由来の生物学的試料中に存在する１つ以上のポリペプチドを指す（Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ  Ｐ１９３２０（配列番号３１））。
【表３０】
2019023641.tif 000033
【０１１３】
最も好ましくは、血管細胞接着分子１検定は、１つ以上の可溶型の血管細胞接着分子１を検出する。血管細胞接着分子１は、大型細胞外ドメインを有する一回膜貫型タイプＩ膜タンパク質であって、このほとんどまたは全部が、膜貫通ドメインの全部または一部を欠く代替的スプライシング事象により、あるいは膜結合型のタンパク質分解により生成された可溶型の血管細胞接着分子１中に存在する。イムノアッセイの場合、この細胞外ドメイン内のエピトープと結合する１つ以上の抗体を用いて、これらの可溶型（単数または複数）を検出し得る。以下のドメインが、血管細胞接着分子１において同定されている：
残基    長さ            ドメインＩＤ
1-24    24              シグナル配列
25-739  715             血管細胞接着分子１
25-698  674             細胞外
699-720 22              膜貫通
721-739 19              細胞質
【０１１４】
本明細書中で用いる場合、「血管内皮細胞増殖因子Ａ」という用語は、血管内皮細胞増殖因子Ａ前駆体由来の生物学的試料中に存在する１つ以上のポリペプチドを指す（Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ  Ｐ１５６９２（配列番号３２））。
【表３１】
2019023641.tif 000034
【０１１５】
以下のドメインが、血管内皮細胞増殖因子Ａにおいて同定されている：
残基    長さ            ドメインＩＤ
1-26    26              シグナルペプチド
27-232  483             血管内皮細胞増殖因子Ａ
【０１１６】
さらに、血管内皮細胞増殖因子Ａの９つの他の変異体型が知られており、本発明の目的のための血管内皮細胞増殖因子Ａとみなされる。これらは、ＶＥＧＦ１８９、ＶＥＧＦ１８３、ＶＥＧＦ１６５、ＶＥＧＦ１４８、ＶＥＧＦ１４５、ＶＥＧＦ１２１、ＶＥＧＦ１６５Ｂ、ＶＥＧＦ１２１ＢおよびＶＥＧＦ１１１である。
【０１１７】
本明細書中で用いる場合、分析物の「存在または量にシグナルを関連づける」という用語は、この解釈を表す。検定シグナルは、典型的には、既知濃度の当該分析物を用いて算定される標準曲線の使用により、分析物の存在または量に関連づけられる。この用語を本明細書中で用いる場合、生理学的に関連する濃度の分析物の存在または量を示す検出可能なシグナルを検定が生じ得るならば、検定は、分析物を「検出するよう設計」される。抗体エピトープは８アミノ酸のオーダーで存在するため、当該マーカーを検出するよう設計されたイムノアッセイは、検定に用いられる単数または複数の抗体と結合するために必要なエピトープ（単数または複数）をポリペプチドが含有する限り、マーカー配列に関連するポリペプチドも検出する。「関連マーカー」という用語は、バイオマーカー、例えば本明細書中に記載される腎損傷マーカーのうちの１つに関して本明細書中で用いる場合、特定のマーカーの１つ以上の断片、変異体などを、あるいはそれ自体マーカーの代用物として、または無関係なバイオマーカーとして検出され得るその生合成親物質を指す。この用語は、結合タンパク質、受容体、ヘパリン、脂質、糖などのような付加的種と複合体形成されるバイオマーカー前駆体から得られる生物学的試料中に存在する１つ以上のポリペプチドも指す。
【０１１８】
「正方向」マーカーという用語は、本明細書中で用いる場合、その疾患または症状に罹患していない被験体に比して、疾患または症状に罹患している被験体において増大されたと確定されるマーカーを指す。「負方向」マーカーという用語は、本明細書中で用いる場合、その疾患または症状に罹患していない被験体に比して、疾患または症状に罹患している被験体において低減されたと確定されるマーカーを指す。
【０１１９】
「被験体」という用語は、本明細書中で用いる場合、ヒトまたは非ヒト生物体を指す。したがって、本明細書中に記載される方法および組成物は、ヒトおよび獣医学的疾患の両方に適用可能である。さらに、被験体は好ましくは生きている生物体であるが、しかし本明細書中に記載される本発明は、同様に死後分析に用いられ得る。好ましい被験体はヒトであり、最も好ましくは「患者」であって、これは、本明細書中で用いる場合、疾患または症状のために医療を受けている生きたヒトを指す。これは、病変の徴候に関して検査されている限定疾病を有さないヒトを包含する。
【０１２０】
好ましくは、分析物は、試料中で測定される。このような試料は、被験体から得られるし、あるいは被験体に提供されるよう意図された生物学的物質から得られる。例えば、試料は、被験体中への考え得る移植に関して評価されている腎臓から得られ、分析物測定値は先在する損害に関して腎臓を評価するために用いられ得る。好ましい試料は、体液試料である。
【０１２１】
「体液試料」という用語は、本明細書中で用いる場合、当該被験体、例えば患者または移植ドナーの診断、予後、分類または評価の目的のために得られる体液の試料を指す。ある実施形態では、このような試料は、進行中の症状の結果、または症状に及ぼす治療レジメンの作用を確定する目的のために得られる。好ましい体液試料としては、血液、血清、血漿、脳脊髄液、尿、唾液、痰および胸水が挙げられる。さらに、ある体液試料は、分別または精製手順後、例えば血清または血漿構成成分への全血の分離後、より容易に分析される、と当業者は理解する。
【０１２２】
「診断」という用語は、本明細書中で用いる場合、患者が所定の疾患または症状に罹患しているか否かについての確率（「尤度」）を、当業者が概算し、および／または決定し得る方法を指す。本発明の場合、「診断」は、本発明の腎損傷マーカーに関する検定、もっとも好ましくはイムノアッセイの結果を、任意に他の臨床的特性と一緒に用いて、試料が得られ、検定された被験体に関する急性腎損傷またはＡＲＦの診断（すなわち、発生または非発生）に至ることを包含する。このような診断が「確定される」ということは、診断が１００％正確であることを意味するものではない。多数のバイオマーカーが、多数の症状を示す。熟練臨床医は、情報の真空状態にバイオマーカー結果を用いず、むしろ、試験結果が他の臨床指標と一緒に用いられて、診断に至る。したがって、予定診断閾値の一方の側における測定バイオマーカーレベルは、予定診断閾値の他方の側における測定レベルに比して、被験体における疾患の発生のより大きい尤度を示す。
【０１２３】
同様に、予後危険度は、所定の経過または結果が起きるであろう確率（「尤度」）を合図する。罹患率の確率増大（例えば、悪化しつつある腎機能、将来的ＡＲＦまたは死亡）と順次関連づけられる予後指標のレベルまたはレベルの変化は、患者における悪い結果の「尤度増大を示す」こととして言及される。
【０１２４】
マーカー検定
【０１２５】
概して、イムノアッセイは、当該バイオマーカーを含有するか、含有すると思われる試料を、バイオマーカーと特異的に結合する少なくとも１つの抗体と接触させることを包含する。次いで、試料中のポリペプチドと抗体との結合により形成される複合体の存在または量を示すシグナルが生成される。シグナルは、次に、試料中のバイオマーカーの存在または量と関連づけられる。バイオマーカーの検出および分析のための多数の方法および装置が当業者に周知である。例えば、米国特許第６，１４３，５７６号；第６，１１３，８５５号；第６，０１９，９４４号；第５，９８５、５７９号；第５，９４７，１２４号；第５，９３９，２７２号；第５，９２２，６１５号；第５，８８５，５２７号；第５，８５１、７７６号；第５，８２４，７９９号；第５，６７９，５２６号；第５，５２５，５２４号および第５，４８０，７９２号、ならびにThe Immunoassay Handbook, David Wild, ed. Stockton Press, New York, 1994（これらの記載内容は、全ての表、図面および特許請求の範囲を含めて、各々、参照により本明細書中で援用される）を参照されたい。
【０１２６】
当該技術分野で既知の検定装置および方法は、種々のサンドイッチ、競合または非競合検定フォーマットで標識化分子を利用して、当該バイオマーカーの存在または量と関連づけられるシグナルを生成し得る。適切な検定フォーマットとしては、クロマトグラフィー法、質量分光分析法およびタンパク質「ブロッティング」法も挙げられる。さらに、ある方法および装置、例えばバイオセンサーおよび光学的イムノアッセイを用いて、標識化分子を必要とせずに、分析物の存在または量を決定し得る。例えば、米国特許第５，６３１，１７１号および第５，９５５，３７７号（これらの記載内容は、全ての表、図面および特許請求の範囲を含めて、各々、参照により本明細書中で援用される）を参照されたい。ロボット機器、例えばベックマンＡＣＣＥＳＳ（登録商標）、アボットＡＸＳＹＭ（登録商標）、ロッシュＥＬＥＣＳＹＳ（登録商標）、デイド・ベーリングＳＴＲＡＴＵＳ（登録商標）システム（これらに限定されない）は、イムノアッセイを実施し得るイムノアッセイ分析器の１つである、ということも当業者は理解する。しかし、任意の適切なイムノアッセイ、例えば酵素結合イムノアッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、競合的結合検定などが利用され得る。
【０１２７】
抗体または他のポリペプチドは、検定に用いるために種々の固体支持体上で固定され得る。特異的結合成員を固定するために用いられ得る固相は、固相結合検定における固相として開発され、および／または用いられるものを包含する。適切な固相の例としては、膜フィルター、セルロースベースの紙、ビーズ（例えば、高分子、ラテックスおよび常磁性粒子）、ガラス、ケイ素ウエハー、マイクロ粒子、ナノ粒子、ＴｅｎｔａＧｅｌｓ、ＡｇｒｏＧｅｌｓ、ＰＥＧＡゲル、ＳＰＯＣＣゲルおよびマルチウェルプレートが挙げられる。検定ストリップは、固体支持体上のアレイ中の抗体または複数の抗体を被覆することにより調製され得る。次いで、このストリップは試験試料中に浸漬され、次に、洗浄および検出ステップを通して迅速に処理されて、測定可能なシグナル、例えば着色スポットを生成する。抗体または他のポリペプチドは、検定装置表面に直接接合することにより、または間接的に結合することにより、検定装置の特定帯域に結合され得る。後者の場合の一例では、抗体または他のポリペプチドは、粒子または他の固体支持体上に固定され、その固体支持体は装置表面に固定され得る。
【０１２８】
生物学的検定は検定のための方法を要し、結果の定量のための最も一般的な方法の１つは、試験されている生物学的系における構成成分の１つに対する親和性を有するタンパク質または核酸と検出可能な標識を接合することである。検出可能な標識としては、それ自体検出可能である分子（例えば、蛍光部分、電気化学的標識、金属キレートなど）、ならびに検出可能な反応生成物の産生により（例えば酵素、例えばホースラディッシュペルオキシダーゼ、アルカリ性ホスファターゼなど）、またはそれ自体検出可能であり得る特異的結合分子により（例えば、ビオチン、ジゴキシゲニン、マルトース、オリゴヒスチジン、２，４−ジニトロベンゼン、フェニルアルセネート、ｓｓＤＮＡ、ｄｓＤＮＡなど）間接的に検出され得る分子が挙げられる。
【０１２９】
固相および検出可能な標識接合体の調製は、しばしば、化学的架橋剤の使用を包含する。架橋試薬は、少なくとも２つの反応基を含有し、一般的にホモ官能性架橋剤（同一反応基を含有する）およびヘテロ官能性架橋剤（非同一反応基を含有する）に分けられる。アミン、スルフヒドリルを介して結合するかまたは非特異的に反応するホモ二官能性架橋剤は、多数の商業的供給元から入手可能である。マレイミド、アルキルおよびアリールハロゲン化物、アルファ−ハロアシルおよびピリジルジスルフィドは、チオール反応基である。マレイミド、アルキルおよびアリールハロゲン化物、ならびにアルファ−ハロアシルは、スルフヒドリルと反応して、チオールエーテル結合を形成するが、一方、ピリジルジスルフィドはスルフヒドリルと反応して、混合ジスルフィドを生成する。ピリジルジスルフィド生成物は、切断可能である。イミドエステルは、タンパク質−タンパク質架橋のためにも非常に有用である。各々が首尾よく接合するために異なる属性を併有する種々のヘテロ二官能性架橋剤は、市販されている。
【０１３０】
ある態様において、本発明は、記載された腎損傷マーカーの分析のためのキットを提供する。キットは、腎損傷マーカーを結合する少なくとも１つの抗体を含む少なくとも１つの試験試料の分析のための試薬を含む。キットは、本明細書中に記載される１つ以上の診断および／または予後相関を実施するための装置および使用説明書も包含し得る。好ましいキットは、サンドイッチ検定を実施するための抗体対、または分析物に関する競合検定を実施するための標識種を含む。好ましくは、抗体対は、固相と接合される第一抗体、ならびに検出可能な標識と接合される第二抗体を含み、この場合、第一および第二抗体の各々は腎損傷マーカーを結合する。最も好ましくは、抗体の各々はモノクローナル抗体である。キットの使用のための、ならびに相関を実施するための使用説明書はラベリングの形態であって、これは、その製造、輸送、販売または使用の間の任意の時点でキットに貼り付けられるか、そうでなければ添えられる任意の書かれたまたは記録されたものを指す。例えば、ラベリングという用語は、宣伝広告用リーフレットおよびパンフレット、包装材、使用説明書、オーディオまたはビデオカセット、コンピューターディスク、ならびにキット上に直接印刷された書き込みを包含する。
【０１３１】
抗体
【０１３２】
「抗体」という用語は、本明細書中で用いる場合、抗原またはエピトープを特異的に結合し得る単数または複数の免疫グロブリン遺伝子、あるいはその断片に由来するか、その後にモデル化されるか、または実質的にコードされるペプチドまたはポリペプチドを指す。例えば、Fundamental Immunology, 3rd Edition, W.E. Paul, ed., Raven Press, N.Y. (1993)；Wilson (1994; J. Immunol. Methods 175: 267-273)；Yarmush (1992) J. Biochem. Biophys. Methods 25: 85-97を参照されたい。抗体という用語は、抗原結合部分、すなわち、抗原を結合する能力を保持する「抗原結合部位」（例えば、断片、亜配列、相補性決定領域（ＣＤＲ））、例えば（ｉ）Ｆａｂ断片、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインからなる一価断片；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２断片、ヒンジ領域でジスルフィド架橋により連結された２つのＦａｂ断片を含む二価断片；（ｉｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片；（ｉｖ）抗体の単一アームのＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖ断片；（ｖ）ＶＨドメインからなるｄＡｂ断片（Ward et al., (1989) Nature 341: 544-546）；ならびに（ｖｉ）単離相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。一本鎖抗体も、参照により「抗体」という用語に含まれる。
【０１３３】
本明細書中に記載されるイムノアッセイに用いられる抗体は、好ましくは、本発明の腎損傷マーカーと特異的に結合する。「特異的に結合する」という用語は、上記のように、抗体が結合するエピトープ（単数または複数）を表示する任意のポリペプチドと抗体が結合するため、抗体は専らその意図された標的と結合する、ということを示すよう意図されない。むしろ、抗体は、その意図される標的が、適切なエピトープ（単数または複数）を表示しない非標的分子に対するその親和力と比較した場合に、その意図される標的に対するその親和力が約５倍であるならば、「特異的に結合する」。好ましくは、抗体の親和力は、非標的分子に対するその親和力より、標的分子に対して少なくとも約５倍、好ましくは１０倍、さらに好ましくは２５倍、さらに好ましくは５０倍、最も好ましくは１００倍またはそれ以上である。好ましい実施形態では、好ましい抗体は、少なくとも約１０７Ｍ−１、好ましくは約１０８Ｍ−１〜約１０９Ｍ−１、約１０９Ｍ−１〜約１０１０Ｍ−１、または約１０１０Ｍ−１〜約１０１２Ｍ−１の親和力で結合する。
【０１３４】
親和力は、Ｋｄ＝ｋoff／ｋon（ｋoffは解離速度定数であり、Ｋonは会合速度定数であり、そしてＫｄは平衡定数である）として算定される。親和力は、種々の濃度（ｃ）での標識化リガンドの結合された分画（ｒ）を測定することにより、平衡で決定され得る。データは、スキャッチャードの式を用いてグラフに示される：ｒ／ｃ＝Ｋ（ｎ−ｒ）：式中、ｒ＝平衡での結合リガンドのモル数／受容体のモル数；ｃ＝平衡での遊離リガンド濃度；Ｋ＝平衡会合定数；およびｎ＝受容体分子当たりのリガンド結合部位の数。グラフ解析により、ｒ／ｃはＹ軸上にプロットされ、これに対してｒはＸ軸上にプロットされて、スキャッチャード・プロットを生じる。スキャッチャード解析による抗体親和力測定値は、当該技術分野でよく知られている。例えば、van Erp et al., J. Immunoassay 12: 425-43, 1991；Nelson and Griswold, Comput. Methods Programs Biomed. 27: 65-8, 1988を参照されたい。
【０１３５】
「エピトープ」という用語は、抗体との特異的結合を可能にする抗原決定基を指す。エピトープは、通常は、アミノ酸または糖側鎖のような分子の化学的に活性な表面基からなり、通常は、特定の三次元構造特性、ならびに比電荷特性を有する。立体配座および非立体配座エピトープは、前者との結合は変性溶媒の存在下で失われるが、後者の場合は失われない、という点で区別される。
【０１３６】
多数の出版物が、選択分析物との結合に関してポリペプチドのライブラリーを生成し、スクリーニングするためのファージ表示技法の使用を考察している。例えば、Cwirla et al., P. Natl. Acad. Sci. USA 87, 6378-82, 1990；Devlin et al., Science 249, 404-6, 1990, Scott and Smith, Science 249, 386-88, 1990；および米国特許第５，５７１，６９８号（Ladnerら）を参照されたい。ファージ表示法の基本概念は、スクリーニングされるべきポリペプチドをコードするＤＮＡとポリペプチドとの間の物理的会合の確立である。この物理的会合は、ポリペプチドをコードするファージゲノムを取り囲むキャプシドの一部としてポリペプチドを表示するファージ粒子により提供される。ポリペプチドとそれらの遺伝物質との間の物理的会合の確立は、異なるポリペプチドを保有する非常に多くのファージの同時質量スクリーニングを可能にする。標的に対する親和力を有するポリペプチドを表示するファージはその標的と結合し、これらのファージは、標的に対する親和力スクリーニングにより濃化される。これらのファージから表示されるポリペプチドの同一性は、それらのそれぞれのゲノムから決定され得る。これらの方法を用いて、所望の標的に対する結合親和力を有すると同定されたポリペプチドは、次に、慣用的手段により大量に合成され得る。例えば、米国特許第６，０５７，０９８号（この記載内容は各々、全ての表、図および特許請求の範囲を含めて、参照により本明細書中で援用される）を参照されたい。
【０１３７】
これらの方法により生成される抗体は、次に、当該精製ポリペプチドとの親和性および特異性に関して先ずスクリーニングし、所望により、その結果を、結合から除外されることが望ましいポリペプチドとの抗体の親和性および特異性と比較することにより選択され得る。スクリーニング手順は、微量滴定プレートの別個のウェル中での精製ポリペプチドの固定化を包含し得る。次に、潜在的抗体または抗体の群を含有する溶液は、それぞれの微量滴定ウェル中に入れられて、約３０分〜２時間、インキュベートされる。次いで、微量滴定ウェルは洗浄され、標識化第二抗体（例えば、産生される抗体がマウス抗体である場合、アルカリ性ホスファターゼと接合された抗マウス抗体）がウェルに付加されて、約３０分間インキュベートされ、次に洗浄される。基質がウェルに付加され、発色反応が出現すると、この場合は、固定化ポリペプチド（単数または複数）に対する抗体が存在する。
【０１３８】
そのように同定された抗体は、次いで、選択される検定計画において親和性および特異性に関してさらに分析され得る。標的タンパク質に関するイムノアッセイの開発に際して、精製標的タンパク質は、選択された抗体を用いてイムノアッセイの敏感度および特異度を判断する標準として作用する。種々の抗体の結合親和度は異なり得る；ある抗体対（例えば、サンドイッチ検定において）は互いに立体的に干渉し得るなどが生じるので、抗体の検定性能は、抗体の絶対親和性および特異性より重要な尺度であり得る。
検定相関
【０１３９】
「相関する」という用語は、バイオマーカーの使用に関して本明細書中で用いられる場合、患者におけるバイオマーカー（単数または複数）の存在または量を、所定の症状に罹患していることがしられているか、またはその危険があることが知られているヒトにおける；あるいは所定の症状を有さないことが知られているヒトにおける、その存在または量と比較することを指す。しばしば、これは、バイオマーカー濃度の形での検定結果を、疾患の発生または非発生あるいは何らかの将来的結果の尤度を示すために選択される予定閾値と比較するという形を取る。
【０１４０】
診断閾値を選択することは、とりわけ、疾患の確率についての考察、異なる試験閾値での真のおよび正しくない診断の分布、ならびに診断に基づいた治療の結果（または治療の失敗）の概算を包含する。例えば、非常に有効であり、低レベルの危険度を有する特定の療法を施すことを考える場合、臨床医は実質的な診断の不確実性を許容し得るため、試験はほとんど必要でない。他方で、治療選択肢が余り有効でなく、危険度がより高い場合、臨床医はしばしば、高度の診断的確実性を必要とする。したがって、費用／便益分析は、診断閾値の選択に関与する。
【０１４１】
適切な閾値は、種々の方法で決定され得る。例えば、心臓トロポニンを用いる急性心筋梗塞の診断に関する推奨される一診断閾値は、正常集団に認められる濃度の第９７．５百分位数である。別の方法は、同一患者からの連続試料を調べることであり、この場合、前の「基線」結果を用いて、バイオマーカーレベルの一時的変化に関してモニタリングする。
【０１４２】
決定閾値を選択するために、集団研究も用いられ得る。受信者動作特性（「ＲＯＣ」）は、レーダー画像の解析のために第二次大戦中に開発されたシグナル検出理論の分野から生じた。ＲＯＣ解析は、しばしば、「罹患」亜集団を「非罹患」亜集団と最良に区別し得る閾値を選択するために用いられる。この場合の擬陽性は、ヒトが陽性の評価を得たが、しかし実際には疾患を有さない場合に起こる。一方、擬陰性は、健常であることを示唆する陰性の評価を得たが、実際には疾患を有する場合に生じる。ＲＯＣ曲線を描くためには、決定閾値は絶えず変更されるので、真の陽性率（ＴＰＲ）および擬陽性率（ＦＰＲ）が決定される。ＴＰＲは敏感度と等価であり、ＦＰＲは１−特異度と等しいため、ＲＯＣグラフは、時として、敏感度対（１−特異度）プロットと呼ばれる。完全試験は１．０のＲＯＣ曲線下面積を有する；無作為試験は、０．５の面積を有する。閾値は、特異度および敏感度の許容可能なレベルを提供するよう選択される。
【０１４３】
この文脈では、「罹患」は、ある特性（疾患または症状の存在、あるいは何らかの結果の発生）を有する集団を指すよう意図され、「非罹患」は、その特性を欠く集団を指すよう意図される。単一決定閾値がこのような方法の最も簡単な適用である一方、多重決定閾値が用いられ得る。例えば、第一閾値より下では、疾患の非存在が相対的に高い信頼度で割り当てられ、第二閾値より上では、疾患の存在が相対的に高い信頼度で割り当てられ得る。２つの閾値間は、不確定であるとみなされ得る。これは、本質的にのみ、例として役立つよう意図される。
【０１４４】
閾値比較のほかに、検定結果を患者分類（疾患の発生または非発生、結果の尤度など）と相関するための他の方法としては、決定木、ルールセット、ベイズ法およびニューラルネットワーク法が挙げられる。これらの方法は、被験体が複数の分類のうちの一分類に属する程度を表す確率値を生じ得る。
【０１４５】
試験精度の測定は、Fischer et al., Intensive Care Med. 29: 1043-51, 2003に記載されたように得られ、所定のバイオマーカーの有効性を確定するために用いられ得る。これらの測定値としては、敏感度および特異度、予測値、尤度比、診断オッズ比、およびＲＯＣ曲線面積が挙げられる。ＲＯＣプロットの曲線下面積（「ＡＵＣ」）は、分類者が、無作為選択陽性例を無作為選択陰性例より高く位置づける確率と等しい。ＲＯＣ曲線下面積は、その群が連続データを有する場合に考えられる２つの群で得られるスコア間の中央値差に関して試験するマン・ホイットニーＵ検定と、あるいは順位についてのウィルコクソン検定と等価であると考えられ得る。
【０１４６】
上記のように、適切な試験は、これらの種々の測定値に関する以下の結果のうちの１つ以上を示し得る：特異度：０．５より大きい、好ましくは少なくとも０．６、さらに好ましくは少なくとも０．７、さらに好ましくは少なくとも０．８、さらに好ましくは少なくとも０．９、最も好ましくは少なくとも０．９５；対応する敏感度：０．２より大きく、好ましくは約０．３より大きく、さらに好ましくは０．４より大きく、さらに好ましくは少なくとも０．５、さらに好ましくは０．６、さらに好ましくは０．７より大きく、さらに好ましくは０．８より大きく、さらに好ましくは０．９より大きく、最も好ましくは０．９５より大きい；敏感度：０．５より大きい、好ましくは少なくとも０．６、さらに好ましくは少なくとも０．７、さらに好ましくは少なくとも０．８、さらに好ましくは少なくとも０．９、最も好ましくは少なくとも０．９５；対応する特異度：０．２より大きく、好ましくは０．３より大きく、さらに好ましくは０．４より大きく、さらに好ましくは少なくとも０．５、さらに好ましくは０．６、さらに好ましくは０．７より大きく、さらに好ましくは０．８より大きく、さらに好ましくは０．９より大きく、最も好ましくは０．９５より大きい；７５％敏感度を、少なくとも７５％の特異度と組合せる；ＲＯＣ曲線面積：０．５より大きい、好ましくは少なくとも０．６、さらに好ましくは０．７、さらに好ましくは少なくとも０．８、さらに好ましくは少なくとも０．９、最も好ましくは少なくとも０．９５；オッズ比：１でない、好ましくは少なくとも約２以上、または約０．５以下、さらに好ましくは少なくとも約３以上または約０．３３以下、さらに好ましくは少なくとも約４以上または約０．２５以下、さらに好ましくは少なくとも約５以上または約０．２以下、最も好ましくは少なくとも約１０以上または約０．１以下；陽性尤度比（敏感度／（１−特異度）として算定）：１より大きい、少なくとも２、さらに好ましくは少なくとも３、さらに好ましくは少なくとも５、最も好ましくは少なくとも１０；および／または陰性尤度比（（１−敏感度）／特異度として算定）１未満、０．５以下、さらに好ましくは０．３以下、最も好ましくは０．１以下。
【０１４７】
付加的臨床指標は、本発明の腎損傷マーカー検定結果（単数または複数）と組合され得る。これらは、腎臓状態と関連する他のバイオマーカーを含む。例としては以下のものが挙げられる（一般バイオマーカー名、その後にそのバイオマーカーまたはその親化合物に関するＳｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ登録番号を記す）：アクチン（Ｐ６８１３３）；アデノシンデアミナーゼ結合タンパク質（ＤＰＰ４、Ｐ２７４８７）；アルファ−１−酸糖タンパク質１（Ｐ０２７６３）；アルファ−１−マイクログロブリン（Ｐ０２７６０）；アルブミン（Ｐ０２７６８）；アンギオテンシノゲナーゼ（レニン、Ｐ００７９７）；アネキシンＡ２（Ｐ０７３５５）；ベータ−グルクロニダーゼ（Ｐ０８２３６）；Ｂ−２−マイクログロブリン（Ｐ６１６７９）；ベータ−ガラクトシダーゼ（Ｐ１６２７８）；ＢＭＰ−７（Ｐ１８０７５）；脳性ナトリウム利尿ペプチド（プロＢＮＰ、ＢＮＰ−３２、ＮＴプロＢＮＰ；Ｐ１６８６０）；カルシウム結合タンパク質ベータ（Ｓ１００−ベータ、Ｐ０４２７１）；炭酸脱水酵素（Ｑ１６７９０）；カゼインキナーゼ２（Ｐ６８４００）；カテプシンＢ（Ｐ０７８５８）；セルロプラスミン（Ｐ００４５０）；クラステリン（Ｐ１０９０９）；補体Ｃ３（Ｐ０１０２４）；富システインタンパク質（ＣＹＲ６１、Ｏ００６２２）；シトクロムＣ（Ｐ９９９９９）；上皮成長因子（ＥＧＦ、Ｐ０１１３３）；エンドセリン−１（Ｐ０５３０５）；エキソソーム・フェチュイン−Ａ（Ｐ０２７６５）；脂肪酸結合タンパク質、心臓（ＦＡＢＰ３、Ｐ０５４１３）；脂肪酸結合タンパク質、肝臓（Ｐ０７１４８）；フェリチン（軽鎖、Ｐ０２７９３；重鎖、Ｐ０２７９４）；フルクトース−１，６−ビホスファターゼ（Ｐ０９４６７）；ＧＲＯ−アルファ（ＣＸＣＬ１、（Ｐ０９３４１）；成長ホルモン（Ｐ０１２４１）；肝細胞増殖因子（Ｐ１４２１０）；インスリン様成長因子Ｉ（Ｐ０１３４３）；免疫グロブリンＧ；免疫グロブリン軽鎖（カッパおよびラムダ）；インターフェロン  ガンマ（Ｐ０１３０８）；ライソザイム（Ｐ６１６２６）；インターロイキン−１アルファ（Ｐ０１５８３）；インターロイキン−２（Ｐ６０５６８）；インターロイキン−４（Ｐ６０５６８）；インターロイキン−９（Ｐ１５２４８）；インターロイキン−１２ｐ４０（Ｐ２９４６０）；インターロイキン−１３（Ｐ３５２２５）；インターロイキン−１６（Ｑ１４００５）；Ｌ１細胞接着分子（Ｐ３２００４）；ラクテートデヒドロゲナーゼ（Ｐ００３３８）；ロイシンアミノペプチダーゼ（Ｐ２８８３８）；メプリンＡ−アルファサブユニット（Ｑ１６８１９）；メプリンＡ−ベータサブユニット（Ｑ１６８２０）；ミドカイン（Ｐ２１７４１）；ＭＩＰ２−アルファ（ＣＸＣＬ２、Ｐ１９８７５）；ＭＭＰ−２（Ｐ０８２５３）；ＭＭＰ−９（Ｐ１４７８０）；ネトリン−１（Ｏ９５６３１）；中性エンドペプチダーゼ（Ｐ０８４７３）；オステオポンチン（Ｐ１０４５１）；腎乳頭抗原１（ＲＰＡ１）；腎乳頭抗原２（ＲＰＡ２）；レチノール結合タンパク質（Ｐ０９４５５）；リボヌクレアーゼ；Ｓ１００カルシウム結合タンパク質Ａ６（Ｐ０６７０３）；血清アミロイドＰ成分（Ｐ０２７４３）；ナトリウム／水素���換体アイソフォーム（ＮＨＥ３、Ｐ４８７６４）；スペルミジン／スペルミンＮ１−アセチルトランスフェラーゼ（Ｐ２１６７３）；ＴＧＦ−ベータ１（Ｐ０１１３７）；トランスフェリン（Ｐ０２７８７）；トレフォイル因子３（ＴＦＦ３、Ｑ０７６５４）；トル様タンパク質４（Ｏ００２０６）；総タンパク質；尿細管間質性腎炎抗原（Ｑ９ＵＪＷ２）；ウロモデュリン（Ｔａｍｍ−Ｈｏｒｓｆａｌｌタンパク質、Ｐ０７９１１）。
【０１４８】
危険度層化のために、以下のものが、本発明の腎損傷マーカー検定結果（単数または複数）と組合され得る：アディポネクチン（Ｑ１５８４８）；アルカリ性ホスファターゼ（Ｐ０５１８６）；アミノペプチダーゼＮ（Ｐ１５１４４）；カルビンディンＤ２８ｋ（Ｐ０５９３７）；シスタチンＣ（Ｐ０１０３４）；８サブユニットのＦ１ＦＯ  ＡＴＰアーゼ（Ｐ０３９２８）；ガンマ−グルタミルトランスフェラーゼ（Ｐ１９４４０）；ＧＳＴａ（アルファ−グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ、Ｐ０８２６３）；ＧＳＴｐｉ（グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼＰ；ＧＳＴクラス−パイ；Ｐ０９２１１）；ＩＧＦＢＰ−１（Ｐ０８８３３）；ＩＧＦＢＰ−２（Ｐ１８０６５）；ＩＧＦＢＰ−６（Ｐ２４５９２）；内在性膜タンパク質１（Ｉｔｍ１、Ｐ４６９７７）；インターロイキン−６（Ｐ０５２３１）；インターロイキン−８（Ｐ１０１４５）；インターロイキン−１８（Ｑ１４１１６）；ＩＰ−１０（１０  ｋＤａインターフェロン−ガンマ誘導性タンパク質、Ｐ０２７７８）；ＩＲＰＲ（ＩＦＲＤ１、Ｏ００４５８）；イソバレリル−ＣｏＡデヒドロゲナーゼ（ＩＶＤ、Ｐ２６４４０）；Ｉ−ＴＡＣ／ＣＸＣＬ１１（Ｏ１４６２５）；ケラチン１９（Ｐ０８７２７）；Ｋｉｍ−１（Ａ型肝炎ウイルス細胞受容体１、Ｏ４３６５６）；Ｌ−アルギニン：グリシンアミジノトランスフェラーゼ（Ｐ５０４４０）；レプチン（Ｐ４１１５９）；リポカリン２（ＮＧＡＬ、Ｐ８０１８８）；ＭＣＰ−１（Ｐ１３５００）；ＭＩＧ（ガンマ−インターフェロン誘導性モノカインＱ０７３２５）；ＭＩＰ−１ａ（Ｐ１０１４７）；ＭＩＰ−３ａ（Ｐ７８５５６）；ＭＩＰ−１ベータ（Ｐ１３２３６）；ＭＩＰ−１ｄ（Ｑ１６６６３）；ＮＡＧ（Ｎ−アセチル−ベータ−Ｄ−グルコサミニダーゼ、Ｐ５４８０２）；有機イオン輸送体（ＯＣＴ２、Ｏ１５２４４）；オステオプロテゲリン（Ｏ１４７８８）；Ｐ８タンパク質（Ｏ６０３５６）；プラスミノーゲン活性化因子阻害剤１（ＰＡＩ−１、Ｐ０５１２１）；プロＡＮＰ（１−９８）（Ｐ０１１６０）；タンパク質ホスファターゼ１−ベータ（ＰＰＩ−ベータ、Ｐ６２１４０）；Ｒａｂ  ＧＤＩ−ベータ（Ｐ５０３９５）；腎カリクレイン（Ｑ８６Ｕ６１）；内在性膜タンパク質のＲＴ１．Ｂ−１（アルファ）鎖（Ｑ５Ｙ７Ａ８）；可溶性腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリー成員１Ａ（ｓＴＮＦＲ−Ｉ、Ｐ１９４３８）；可溶性腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリー成員１Ｂ（ｓＴＮＦＲ−ＩＩ、Ｐ２０３３３）；メタロプロテイナーゼ３の組織阻害剤（ＴＩＭＰ−３、Ｐ３５６２５）；ｕＰＡＲ（Ｑ０３４０５）。
【０１４９】
本発明の腎損傷マーカー検定結果（単数または複数）と組合され得る他の臨床的指標としては、人口学的情報（例えば、体重、性別、年齢、人種）、病歴（例えば、家族歴、外科手術の種類、先在性疾患、例えば動脈瘤、うっ血性心不全、子癇前症、子癇、真性糖尿病、高血圧症、冠動脈疾患、タンパク尿、腎機能不全または敗血症、毒素曝露の型（例えばＮＳＡＩＤ、シクロスポリン、タクロリムス、アミノグリコシド、フォスカルネット、エチレングリコール、ヘモグロビン、ミオグロビン、イフォスファミド、重金属、メトトレキセート、放射線不透過性造影剤またはストレプトゾトシン）、臨床的変数（例えば、血圧、温度、呼吸数）、危険度スコア（ＡＰＡＣＨＥスコア、ＰＲＥＤＩＣＴスコア、ＵＡ／ＮＳＴＥＭＩに関するＴＩＭＩ危険度スコア、フラミンガム危険度スコア）、尿総タンパク質測定値、糸球体濾過率、概算糸球体濾過率、尿産生率、血清または血漿クレアチニン濃度、腎乳頭抗原１（ＲＰＡ１）測定値；腎乳頭抗原２（ＲＰＡ２）測定値；尿クレアチニン濃度、ナトリウム排泄分画、尿ナトリウム濃度、尿クレアチニン対血清または血漿クレアチニン比、尿比重、尿オスモル濃度、尿中尿素窒素対血漿尿素窒素比、血漿ＢＵＮ対クレアチニン比、および／または尿ナトリウム／（尿クレアチニン／血漿クレアチニン）として算定される腎不全指数が挙げられる。腎損傷マーカー検定結果（単数または複数）と組合せられ得る腎機能の他の測定法は、本明細書中で後に、ならびにHarrison’s Principles of Internal Medicine, 17th Ed., McGraw Hill, New York, pages 1741-1830およびCurrent Medical Diagnosis & Treatment 2008, 47th Ed, McGraw Hill, New York, pages 785-815（これらの記載内容は各々、参照により本明細書中で援用される）に記載されている。
【０１５０】
このようにして検定結果／臨床指標を組合せることは、多変量ロジスティック回帰、対数線形モデル、ニューラルネットワーク解析、ｎ−ｏｆ−ｍ解析、決定木分析などの使用を包含し得る。このリストは、限定的であることを意味しない。
【０１５１】
急性腎不全の診断
【０１５２】
上記のように、「急性腎（または腎臓）損傷」および「急性腎（または腎臓）不全」という用語は、本明細書中で用いる場合、一部は、基線値からの血清クレアチニンの変化に関して定義される。ＡＲＦについてのほとんどの定義は、血清クレアチニン、およびしばしば尿排出量の使用を含めて、共通の要素を有する。この比較に用いるための腎機能の利用可能な基線測定なしに、患者は腎機能不全を呈し得る。このような事象においては、患者は最初は正常ＧＦＲを有したと推測することにより、基線血清クレアチニン値を概算し得る。糸球体濾過率（ＧＦＲ）は、腎臓糸球体毛細血管からボーマン嚢中に濾過される単位時間当たりの流体の容積である。糸球体濾過率（ＧＦＲ）は、血中定常レベルを有し、支障なく濾過されるが、しかし腎臓により再吸収も分泌もされない任意の化学物質を測定することにより算定され得る。ＧＦＲは、典型的には、ｍｌ／分の単位で表される：
【化１】
2019023641.tif 000035
【０１５３】
体表面積に対するＧＦＲを正規化することにより、約７５〜１００ｍｌ／分／１．７３ｍ２のＧＦＲが推定され得る。したがって測定される率は、血液の算定可能な容積から生じた尿中の物質の量である。
【０１５４】
糸球体濾過率（ＧＦＲまたはｅＧＦＲ）を算定するかまたは概算するために用いられるいくつかの異なる技法がある。しかしながら、臨床的実行に際しては、クレアチニンクリアランスを用いて、ＧＦＲを測定する。クレアチニンは、天然では、身体により産生される（クレアチニンは、筋肉中に見出されるクレアチンの代謝産物である）。それは糸球体により支障なく濾過されるが、しかしさらにまた、クレアチニンクリアランスが実際のＧＦＲを１０〜２０％過剰刺激するよう、極少量、腎尿細管により能動的に分泌される。この誤差は、クレアチニンクリアランスが測定される容易さを考慮すると、許容可能である。
【０１５５】
クレアチニンクリアランス（ＣＣｒ）は、クレアチニンの尿中濃度（ＵＣｒ）、尿流量（Ｖ）およびクレアチニンの血漿濃度（ＰＣｒ）に関する値が既知である場合、算定され得る。尿中濃度と尿流量の積はクレアチニンの排出率を生じるため、クレアチニンクリアランスは、その排出率（ＵＣｒ×Ｖ）をその血漿濃度で割った値である、とも言われる。これは一般に、数学的に以下のように表される：
【化２】
2019023641.tif 000036
【０１５６】
一般に、ある朝の空の膀胱から、翌朝の膀胱の内容物までの２４時間尿が収集され、次いで、比較血液試験が実行される：
【化３】
2019023641.tif 000037
【０１５７】
異なるサイズのヒトの間の結果の比較を可能にするために、ＣＣｒは、しばしば、体表面積（ＢＳＡ）に関して補正され、平均サイズの男性と比較してｍｌ／分／１．７３ｍ２で表される。ほとんどの成人が１．７（１．６〜１．９）に近いＢＳＡを有するが、非常に太っているかまたは痩せている患者は、彼等の実際のＢＳＡに関して補正されたＣＣｒを有するべきである：
【化４】
2019023641.tif 000038
【０１５８】
糸球体濾過率（ＧＦＲ）が下がると、クレアチニン分泌は増大され、したがって血清クレアチニンの上昇はより少なくなるため、クレアチニンクリアランス測定値の精度は（収集が完全である場合でも）限定される。したがって、クレアチニン排出量は、濾過負荷量より非常に大きく、ＧＦＲの潜在的に大きな（２倍差という大きさの）過剰刺激を生じる。しかしながら、臨床目的のために、腎機能が安定しているか、あるいは悪化しつつあるかまたはよくなっているかを確定することは重要である。これは、しばしば、血清クレアチニン単独をモニタリングすることにより確定される。クレアチニンクリアランスと同様に、血清クレアチニンは、ＡＲＦの非定常状態症状におけるＧＦＲを正確に反映するものではない。それにもかかわらず、基線からの血清クレアチニン変化は、ＧＦＲの変化を反映する。血清クレアチニンは、直ちに且つ容易に測定され、それは腎機能に特異的である。
【０１５９】
ｍＬ／ｋｇ／時間での尿排出量を決定する目的のためには、毎時間の尿収集および測定が適切である。例えば、累積２４時間排出量のみが利用可能であった、そして患者の体重が提供されない場合には、ＲＩＦＬＥ尿排出量判定基準の小修正が記載されている。例えば、Bagshaw et al., Nephrol. Dial. Transplant. 23: 1203-1210, 2008は、７０ｋｇの平均患者体重を推定し、患者は、以下の：＜３５ｍＬ／時間（危険）、＜２１ｍＬ／時間（損傷）または＜４ｍＬ／時間（不全）に基づいたＲＩＦＬＥ分類を割り当てられる。
【０１６０】
治療レジメンの選択
【０１６１】
一旦、診断が得られれば、臨床医は、診断に適合する治療レジメン、例えば腎代替療法を開始すること、腎臓に損害を与えることが知られている化合物の送達を中止すること、腎臓移植、腎臓に損害を与えることが知られている手法を遅延するかまたは回避すること、利尿剤投与を修正すること、目標指向療法を開始することなどを容易に選択し得る。本明細書中に記載される診断の方法に関して考察される多数の疾患のための適切な治療を、当業者は承知している。例えば、Merck Manual of Diagnosis and Therapy, 17th Ed. Merck Research Laboratories, Whitehouse Station, NJ, 1999を参照されたい。さらに、本明細書中に記載される方法および組成物は予後情報を提供するため、本発明のマーカーは治療の経過を監視するために用いられ得る。例えば、予後状態の改善または悪化は、特定の治療が有効であるかまたは有効でない、ということを示し得る。
【０１６２】
本発明は、目的を実行するよう良好に適合され、記述された目標および利点、ならびにそこに本来備わっているものを得る、と当業者は容易に理解する。本明細書中で提供される実施例は、好ましい実施形態を代表するものであり、例として役立つものであって、本発明の範囲を限定するものではない。
【０１６３】
実施例１：造影剤腎症試料収集
【０１６４】
この試料収集試験の目的は、血管内造影剤を受ける前および後に、患者から血漿および尿の試料、ならびに臨床データを収集することである。ヨウ化造影剤の血管内投与を含めた放射線写真／血管造影手法を受けている成人約２５０人が登録される。試験に登録されるためには、各患者は、以下の組み入れ規準の全てを満たし、以下の除外規準の何れも満たさないようでなければならない：
組み入れ規準
１８歳以上の男性および女性；
造影剤の血管内投与を含めて放射線写真／血管造影手法（例えば、ＣＴスキャンまたは冠動脈介入）を受けている；
造影剤投与後、少なくとも４８時間の入院が予期される；
試験参加に関するインフォームドコンセント書を提供し、全ての試験手順に同意することが出来るし、異存がない；
除外規準
腎移植レシピエント；
造影手順前に腎機能が急性悪化しつつある；
透析（急性または慢性）を既に受けているか、あるいは登録時に切迫した透析の必要性がある；
大きな外科手術（例えば、心肺バイパス術）、あるいは造影剤投与後４８時間以内のさらなる腎侵襲に関する有意の危険を伴う造影剤を用いた付加的画像処理手順を受けることが予期される；
事前の３０日以内の実験的療法を伴う介入的臨床試験に参加；
ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）または肝炎ウイルスによる既知の感染。
【０１６５】
初回造影剤投与直前（および任意の前手順補水後）、ＥＤＴＡ抗凝固血液試料（１０ｍＬ）および尿試料（１０ｍＬ）を、各患者から収集する。次に、指標造影手順中の最終造影剤投与後、４（±０．５）、８（±１）、２４（±２）、４８（±２）および７２（±２）時間目に、血液および尿試料を収集する。直接的静脈穿刺により、または他の利用可能な静脈接近手段、例えば現存する大腿鞘、中心静脈ライン、末梢静脈内ラインまたはヘップ・ロックにより、血液を収集する。これらの試験血液試料を臨床現場で血漿に処理して、凍結し、Astute Medical, Inc.,（San Diego, CA）に送る。試験尿試料を凍結し、Astute Medical, Inc.に送る。
【０１６６】
初回造影剤投与直前（任意の前手順補水後）、ならびに造影剤の最終投与後、４（±０．５）、８（±１）、２４（±２）、４８（±２）および７２（±２）時間目に（理想的には、試験試料が得られると同時に）、臨床現場で血清クレアチニンを査定する。さらに、付加的血清および尿クレアチニン測定値、透析の必要性、入院状態および悪臨床結果（死亡率を含む）に関して、３０日目にずっと、各患者の状態を評価する。
【０１６７】
造影剤投与前に、以下の査定に基づいた危険度を各患者に割り当てる：収縮期血圧＜８０ｍｍＨｇ＝５点；動脈内バルーンポンプ＝５点；うっ血性心不全（クラスＩＩＩ〜ＩＶまたは肺水腫の病歴）＝５点；年齢＞７５歳＝４点；ヘマトクリットレベル＜３９％（男性）、＜３５％（女性）＝３点；糖尿病＝３点；造影剤容積＝各１００ｍＬに関して１点；血清クレアチニンレベル＞１．５ｇ／ｄＬ＝４点または概算ＧＦＲ４０〜６０ｍＬ／分／１．７３ｍ２＝２点；２０〜４０ｍＬ／分／１．７３ｍ２＝４点；＜２０ｍＬ／分／１．７３ｍ２＝６点。割り当てられる危険度を以下に示す：ＣＩＮおよび透析に関する危険度：総得点５以下＝ＣＩＮの危険度  ７．５％、透析の危険度  ０．０４％；総得点６〜１０＝ＣＩＮの危険度  １４％、透析の危険度  ０．１２％；総得点１１〜１６＝ＣＩＮの危険度  ２６．１％、透析の危険度  １．０９％；総得点＞１６＝ＣＩＮの危険度  ５７．３％、透析の危険度  １２．８％。
【０１６８】
実施例２：心臓手術試料収集
【０１６９】
この試料収集試験の目的は、腎機能に対して潜在的に損害を与えることが知られている手法である心臓血管手術を受ける前および後に、患者から血漿および尿の試料、ならびに臨床データを収集することである。このような手術を受けている成人約９００人が登録される。試験に登録されるためには、各患者は、以下の組み入れ規準の全てを満たし、以下の除外規準の何れも満たさないようでなければならない：
組み入れ規準
１８歳以上の男性および女性；
心臓血管手術を受けている；
少なくとも２の腎代替危険スコアに関するトロント／オタワ予測危険度指標（Wijeysundera et al., JAMA 297: 1801-9, 2007）；ならびに
試験参加に関するインフォームドコンセント書を提供し、全ての試験手順に同意することが出来るし、異存がない；
除外規準
妊娠中；
事前の腎移植；
登録前に腎機能が急性悪化しつつある（ＲＩＦＬＥ判定基準の任意の部類）；
透析（急性または慢性）を既に受けているか、あるいは登録時に切迫した透析の必要性がある；
別の臨床試験に最近登録された、あるいはＡＫＩに関する薬剤注入または療法的介入を含めた心臓手術の７日以内に別の臨床試験に登録される予定がある；
ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）または肝炎ウイルスによる既知の感染。
【０１７０】
初回切開前３時間以内（および任意の前手順補水後）に、ＥＤＴＡ抗凝固血液試料（１０ｍＬ）、全血（３ｍＬ）および尿試料（３５ｍＬ）を、各患者から収集する。次に、当該手順後、３（±０．５）、６（±０．５）、１２（±１）、２４（±２）および４８（±２）時間目に、次いで、被験者が依然として入院している場合には３〜７日目に毎日、血液および尿試料を収集する。直接的静脈穿刺により、または他の利用可能な静脈接近手段、例えば現存する大腿鞘、中心静脈ライン、末梢静脈内ラインまたはヘップ・ロックにより、血液を収集する。これらの試験血液試料を、凍結し、Astute Medical, Inc.,（San Diego, CA）に送る。試験尿試料を凍結し、Astute Medical, Inc.に送る。
【０１７１】
実施例３：急性疾病被験者試料収集
【０１７２】
この試験の目的は、急性疾病患者から試料を収集することである。少なくとも４８時間、ＩＣＵにいることが予期される成人約９００人が登録される。試験に登録されるためには、各患者は、以下の組み入れ規準の全てを満たし、以下の除外規準の何れも満たさないようでなければならない：
組み入れ規準
１８歳以上の男性および女性；
試験集団１：以下のうちの少なくとも１つを有する約３００人の患者：
ショック（ＳＢＰ＜９０ｍｍＨｇ、および／またはＭＡＰ＞６０ｍｍＨｇを保持するための昇圧補助の必要性、および／または少なくとも４０ｍｍＨｇのＳＢＰの実証された低下）；および
敗血症；
試験集団２：以下のうちの少なくとも１つを有する約３００人の患者：
登録の２４時間以内のコンピューター化医師向けオーダーエントリー（ＣＰＯＥ）でオーダーされるＩＶ抗生物質；
登録２４時間以内の造影剤曝露；
急性非代償性心不全を伴う腹腔内圧増大；および
ＩＣＵ入院のための主な理由としての、ならびに登録後４８時間ＩＣＵに入院させられると思われる重症外傷；
試験集団３：急性腎損傷に対する既知の危険因子（例えば、敗血症、低血圧／ショック（ショック＝収縮期ＢＰ＜９０ｍｍＨｇ、および／またはＭＡＰ＞６０ｍｍＨｇを保持するための昇圧補助の必要性、および／またはＳＢＰ＞４０ｍｍＨｇの実証された低下）、大きな外傷、出血または大手術）を有する急性期医療（ＩＣＵまたはＥＤ）により入院させられると予期される；および／または登録後少なくとも２４時間、ＩＣＵに入院させられると予期される約３００人の患者。
除外規準
妊娠中；
施設に収容された個体；
事前の腎移植；
登録前に腎機能の既知の急性悪化中（例えば、ＲＩＦＬＥ判定基準の任意の部類）；
登録前５日以内に透析（急性または慢性）を受けたか、あるいは登録時に切迫した透析の必要性がある；
ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）または肝炎ウイルスによる既知の感染；
上記の組み入れ規準  ＳＢＰ＜９０ｍｍＨｇのみを満たし、担当医師または主要研究者の見解ではショックを有さない。
【０１７３】
インフォームドコンセントを提示後、ＥＤＴＡ抗凝固血液試料（１０ｍＬ）および尿試料（２５〜３０ｍＬ）を、各患者から収集する。次に、造影剤投与（適用可能な場合）後、４（±０．５）および８（±１）時間目に；登録後、１２（±１）、２４（±２）および４８（±２）時間目に、その後、被験者が入院している間は７日〜１４日までに毎日、血液および尿試料を収集する。直接的静脈穿刺により、または他の利用可能な静脈接近手段、例えば現存する大腿鞘、中心静脈ライン、末梢静脈内ラインまたはヘップ・ロックにより、血液を収集する。これらの試験血液試料を臨床現場で処理して血漿にして、凍結し、Astute Medical, Inc.,（San Diego, CA）に送る。試験尿試料を凍結し、Astute Medical, Inc.に送る。
【０１７４】
実施例４．イムノアッセイフォーマット
【０１７５】
標準サンドイッチ酵素イムノアッセイ技法を用いて、分析物を測定する。分析物を結合する第一抗体を、９６ウェルポリスチレン微量プレートのウェル中に固定する。分析物標準および試験試料を適切なウェル中にピペット分取して、存在する任意の分析物を固定化抗体により結合する。任意の非結合物質を洗い落とした後、分析物を結合するホースラディッシュペルオキシダーゼ接合第二抗体をウェルに付加し、それにより分析物（存在する場合）および第一抗体とのサンドイッチ複合体を形成する。洗浄して任意の非結合抗体−酵素試薬を除去後、テトラメチルベンジジンおよび過酸化水素を含む基質溶液をウェルに付加する。試料中に存在する分析物の量に比例して、発色する。発色が停止したら、色の強度を５４０ｎｍまたは５７０ｎｍで測定する。分析物標準から決定される標準曲線との比較により、分析物濃度を試験試料に割り当てる。
【０１７６】
以下の例では、濃度は次のように表される：細胞質型アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ  μｇ／ｍＬ、可溶性腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリー成員５（「ＣＤ４０」）  ｎｇ／ｍＬ、可溶性ＣＤ４０リガンド  ｎｇ／ｍＬ、可溶性Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフケモカイン１６  ｎｇ／ｍＬ、Ｓ１００−Ａ１２（「ＥＮ−ＲＡＧＥ」）  ｎｇ／ｍＬ、エオタキシン  ｐｇ／ｍＬ、可溶性Ｅ−セレクチン  ｎｇ／ｍＬ、フィブロネクチン  ｎｇ／ｍＬ、顆粒球コロニー刺激因子  ｐｇ／ｍＬ、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子  ｐｇ／ｍＬ、ヘパリン結合増殖因子２  ｐｇ／ｍＬ、可溶性肝細胞増殖因子受容体  ｐｇ／ｍＬ、インターロイキン−１受容体アンタゴニスト  ｐｇ／ｍＬ、インターロイキン−１ベータ  ｐｇ／ｍＬ、インターロイキン−１０  ｐｇ／ｍＬ、インターロイキン−１５  ｎｇ／ｍＬ、インターロイキン−３  ｎｇ／ｍＬ、ミエロペルオキシダーゼ  ｎｇ／ｍＬ、ニドゲン−１  ｐｇ／ｍＬ、可溶性酸化型低密度リポタンパク質受容体１  ｎｇ／ｍＬ、パパリシン−１  ｍＩＵ／ｍＬ、可溶性Ｐ−セレクチン糖タンパク質リガンド１  Ｕ／ｍＬ、抗ロイコプロテイナーゼ（「分泌型白血球ペプチダーゼ阻害物質」）  ｐｇ／ｍＬ、可溶性キットリガンド（「幹細胞因子」）  ｐｇ／ｍＬ、メタロプロテイナーゼ１の組織阻害物質  ｎｇ／ｍＬ、メタロプロテイナーゼ２の組織阻害物質  ｐｇ／ｍＬ、可溶性腫瘍壊死因子  ｐｇ／ｍＬ、可溶性血管細胞接着分子１  ｎｇ／ｍＬおよび血管内皮細胞増殖因子Ａ  ｐｇ／ｍＬ。
【０１７７】
実施例５．外見上健常なドナーおよび慢性疾患患者試料
【０１７８】
既知の慢性または急性疾患を有さないドナー（「外見上健常なドナー」）からのヒト尿試料を、２つの売主から購入した（Golden West Biologicals, Inc., 27625 Commerce Center Dr., Temecula, CAおよびVirginia Medical Research, Inc., 915 First Colonial Rd., Virginia Beach, VA 23454）。尿試料は出荷され、−２０℃より低い温度で凍結保存された。売主は、個々のドナーに関する人口学的情報、例えば性別、人種（黒人／白人）、喫煙状態および年齢を提供した。
【０１７９】
種々の慢性疾患、例えばうっ血性心不全、冠動脈疾患、慢性腎疾患、慢性閉塞性肺疾患、真性糖尿病および高血圧症を有するドナー（「慢性疾患患者」）からのヒト尿試料を、Virginia Medical Research, Inc., 915 First Colonial Rd., Virginia Beach, VA 23454から購入した。尿試料は出荷され、−２０℃より低い温度で凍結保存された。売主は、年齢、性別、人種（黒人／白人）、喫煙状態およびアルコール使用量、身長、体重、慢性疾患（単数または複数）診断、最新投薬および過去の外科手術を含めた個々のドナーに関する症例報告書を提供した。
【０１８０】
実施例６．ＲＩＦＬＥ段階０での患者における腎臓状態を評価するための腎損傷マーカー
【０１８１】
集中治療室（ＩＣＵ）からの患者を、腎臓状態により、ＲＩＦＬＥ規準によって決定した場合の登録の７日以内に到達される最大段階に従って、非損傷（０）、損傷の危険（Ｒ）、損傷（Ｉ）および不全（Ｆ）として分類した。
【０１８２】
２つのコホートを、（コホート１）段階０を超えて進行しなかった患者、および（コホート２）１０日以内に段階Ｒ、ＩまたはＦに達した患者、と定義した。ＩＣＵでの患者内に起こる正常マーカー変動に取り組み、それによりＡＫＩ状態をモニタリングするための有用性を査定するために、コホート１に関して収集した尿試料で、マーカーレベルを測定した。コホート２において段階Ｒ、ＩまたはＦに達する０時間前、２４時間前および４８時間前に被験者から収集した尿試料で、マーカー濃度を測定した。下記の表中で、「前最大段階」時点は、＋／−１２時間である３つの群に入れられた特定の患者がそのコホートに関して定義された最低疾患段階に達する時点に比して、試料が収集される時点を表す。例えば、この実施例（０対Ｒ、Ｉ、Ｆ）に関しては２４時間前は、段階Ｒ（またはＲに試料がない場合はＩ、またはＲまたはＩに試料がない場合はＦ）に達する２４時間前（＋／−１２時間）を意味する。
【０１８３】
市販の検定試薬を用いて、標準イムノアッセイ法により、各マーカーを測定した。受信者動作特性（ＲＯＣ）曲線を各マーカーに関して生成し、各ＲＯＣ曲線下面積（ＡＵＣ）を決定した。コホート２の患者も、血清クレアチニン測定値（ｓＣｒ）に基づいている、尿排出量（ＵＯ）に基づいている、あるいは血清クレアチニン測定値または尿排出量のいずれかに基づいているといったような段階Ｒ、ＩまたはＦに対する裁定のための理由に従って、分類した。すなわち、血清クレアチニン測定値単独に基づいて段階Ｒ、ＩまたはＦに裁定された患者に関して、段階０コホートは、尿排出量に基づいて段階Ｒ、ＩまたはＦに裁定された患者を含んだ可能性がある；尿排出量単独に基づいて段階Ｒ、ＩまたはＦに裁定された患者に関して、段階０コホートは、血清クレアチニン測定値に基づいて段階Ｒ、ＩまたはＦに裁定された患者を含んだ可能性がある；ならびに血清クレアチニン測定値または尿排出量に基づいて段階Ｒ、ＩまたはＦに裁定された患者に関して、段階０コホートは、血清クレアチニン測定値および尿排出量の両方に関する段階０の患者のみを含有する。さらにまた、血清クレアチニン測定値または尿排出量に基づいて段階Ｒ、ＩまたはＦに裁定された患者に関しては、最も重症のＲＩＦＬＥ段階を生じる裁定方法を用いた。
【０１８４】
ＲＯＣ解析を用いて、コホート１（ＲＩＦＬＥ０のままである被験者）をコホート２（ＲＩＦＬＥ  Ｒ、ＩまたはＦに進行している被験者）と識別する能力を決定した。ＳＥはＡＵＣの標準誤差であり、ｎは試料または個々の患者（「ｐｔｓ」）の数である。Hanley, J.A., and McNeil, B.J., The meaning and use of the area under a receiver operating characteristic (ROC) curve. Radiology (1982) 143: 29-36に記載されたように標準誤差を算定した；ｐ値を両側Ｚ検定で算定した。ＡＵＣ＜０．５は、比較のための負方向マーカーを示し、ＡＵＣ＞０．５は比較のための正方向マーカーを示す。
【０１８５】
種々の閾値（または「カットオフ」）濃度を選択し、コホート１をコホート２と区別するための関連敏感度および特異度を決定した。ＯＲは、特定のカットオフ濃度に関して算定されるオッズ比であり、９５％ＣＩはオッズ比に関する信頼区間である。
【０１８６】
本発明の種々のマーカーに関するこれら３つの分析の結果を、図１に示す。
【０１８７】
実施例７．ＲＩＦＬＥ段階０およびＲでの患者における腎臓状態を評価するための腎損傷マーカー
【０１８８】
実施例６に記載したとおりに患者を分類し、分析した。しかしながら、段階Ｒに達したが、しかし段階ＩまたはＦに進行しなかった患者を、コホート１における非損傷段階０からの患者とともに分類した。この実施例におけるコホート２は、段階ＩまたはＦに進行した患者のみを含んだ。尿試料中のマーカー濃度は、コホート１に関して含まれた。段階ＩまたはＦ到達の０、２４および４８時間以内に収集した尿試料中のマーカー濃度を、コホート２に関して包含した。
【０１８９】
ＲＯＣ解析を用いて、コホート１（ＲＩＦＬＥ０またはＲのままである被験者）をコホート２（ＲＩＦＬＥ  ＩまたはＦに進行している被験者）と識別する能力を決定した。
【０１９０】
種々の閾値（または「カットオフ」）濃度を選択し、コホート１をコホート２と区別するための関連敏感度および特異度を決定した。ＯＲは、特定のカットオフ濃度に関して算定されるオッズ比であり、９５％ＣＩはオッズ比に関する信頼区間である。
【０１９１】
本発明の種々のマーカーに関するこれら３つの分析の結果を、図２に示す。
【０１９２】
実施例８．段階Ｒから段階ＩおよびＦに進行している患者における腎臓状態を評価するための腎損傷マーカー
【０１９３】
実施例６に記載したとおりに患者を分類し、分析したが、しかし段階Ｒに達した患者のみをこの実施例に包含した。コホート１は、段階Ｒに達したがしかし１０日以内に段階ＩまたはＦに進行しなかった患者を含有し、コホート２は、段階ＩまたはＦに進行した患者のみを含んだ。段階Ｒ到達の１２時間以内に収集した尿試料中のマーカー濃度を、コホート１および２の両方に関する分析に包含した。
【０１９４】
ＲＯＣ解析を用いて、コホート１（ＲＩＦＬＥ  Ｒのままである被験者）をコホート２（ＲＩＦＬＥ  ＩまたはＦに進行している被験者）と識別する能力を決定した。
【０１９５】
種々の閾値（または「カットオフ」）濃度を選択し、コホート１をコホート２と区別するための関連敏感度および特異度を決定した。ＯＲは、特定のカットオフ濃度に関して算定されるオッズ比であり、９５％ＣＩはオッズ比に関する信頼区間である。
【０１９６】
本発明の種々のマーカーに関するこれら３つの分析の結果を、図３に示す。
【０１９７】
実施例９．ＲＩＦＬＥ段階０での患者における腎臓状態を評価するための腎損傷マーカー
【０１９８】
実施例６に記載したとおりに患者を分類し、分析した。しかしながら、段階ＲまたはＩに達したが、しかし段階Ｆに進行しなかった患者を、分析から除外した。非損傷段階０からの患者は、コホート１に含まれる。この実施例におけるコホート２は、段階Ｆに進行した患者のみを含んだ。尿試料中の最大マーカー濃度は、コホート１における各患者に関して含まれた。段階Ｆ到達の０、２４および４８時間以内に収集した尿試料中の最大マーカー濃度を、コホート２における各患者に関して包含した。
【０１９９】
ＲＯＣ解析を用いて、コホート１（ＲＩＦＬＥ０またはＲのままである被験者）をコホート２（ＲＩＦＬＥ  ＩまたはＦに進行している被験者）と識別する能力を決定した。
【０２００】
種々の閾値（または「カットオフ」）濃度を選択し、コホート１をコホート２と区別するための関連敏感度および特異度を決定した。ＯＲは、特定のカットオフ濃度に関して算定されるオッズ比であり、９５％ＣＩはオッズ比に関する信頼区間である。
【０２０１】
本発明の種々のマーカーに関するこれら３つの分析の結果を、図４に示す。
【０２０２】
実施例１０．ＲＩＦＬＥ段階０での患者における腎臓状態を評価するための腎損傷マーカー
【０２０３】
集中治療室（ＩＣＵ）からの患者を、腎臓状態により、ＲＩＦＬＥ規準によって決定した場合の登録の７日以内に到達される最大段階に従って、非損傷（０）、損傷の危険（Ｒ）、損傷（Ｉ）および不全（Ｆ）として分類した。
【０２０４】
２つのコホートを、（コホート１）段階０を超えて進行しなかった患者、および（コホート２）１０日以内に段階Ｒ、ＩまたはＦに達した患者、と定義した。ＩＣＵでの患者内に起こる正常マーカー変動に取り組み、それによりＡＫＩ状態をモニタリングするための有用性を査定するために、コホート１に関して収集した血液試料の血漿成分で、マーカーレベルを測定した。コホート２において段階Ｒ、ＩまたはＦに達する０時間前、２４時間前および４８時間前に被験者から収集した血液試料の血漿成分で、マーカー濃度を測定した。下記の表中で、「前最大段階」時点は、＋／−１２時間である３つの群に入れられた特定の患者がそのコホートに関して定義された最低疾患段階に達する時点に比して、試料が収集される時点を表す。例えば、この実施例（０対Ｒ、Ｉ、Ｆ）に関しては２４時間前は、段階Ｒ（またはＲに試料がない場合はＩ、またはＲまたはＩに試料がない場合はＦ）に達する２４時間前（＋／−１２時間）を意味する。
【０２０５】
市販の検定試薬を用いて、標準イムノアッセイ法により、各マーカーを測定した。受信者動作特性（ＲＯＣ）曲線を各マーカーに関して生成し、各ＲＯＣ曲線下面積（ＡＵＣ）を決定した。コホート２の患者も、血清クレアチニン測定値（ｓＣｒ）に基づいている、尿排出量（ＵＯ）に基づいている、あるいは血清クレアチニン測定値または尿排出量のいずれかに基づいているといったような段階Ｒ、ＩまたはＦに対する裁定のための理由に従って、分類した。すなわち、血清クレアチニン測定値単独に基づいて段階Ｒ、ＩまたはＦに裁定された患者に関して、段階０コホートは、尿排出量に基づいて段階Ｒ、ＩまたはＦに裁定された患者を含んだ可能性がある；尿排出量単独に基づいて段階Ｒ、ＩまたはＦに裁定された患者に関して、段階０コホートは、血清クレアチニン測定値に基づいて段階Ｒ、ＩまたはＦに裁定された患者を含んだ可能性がある；ならびに血清クレアチニン測定値または尿排出量に基づいて段階Ｒ、ＩまたはＦに裁定された患者に関して、段階０コホートは、血清クレアチニン測定値および尿排出量の両方に関する段階０の患者のみを含有する。さらにまた、血清クレアチニン測定値または尿排出量に基づいて段階Ｒ、ＩまたはＦに裁定された患者に関しては、最も重症のＲＩＦＬＥ段階を生じる裁定方法を用いた。
【０２０６】
ＲＯＣ解析を用いて、コホート１（ＲＩＦＬＥ０のままである被験者）をコホート２（ＲＩＦＬＥ  Ｒ、ＩまたはＦに進行している被験者）と識別する能力を決定した。ＳＥはＡＵＣの標準誤差であり、ｎは試料または個々の患者（「ｐｔｓ」）の数である。Hanley, J.A., and McNeil, B.J., The meaning and use of the area under a receiver operating characteristic (ROC) curve. Radiology (1982) 143: 29-36に記載されたように標準誤差を算定した；ｐ値を両側Ｚ検定で算定した。ＡＵＣ＜０．５は、比較のための負方向マーカーを示し、ＡＵＣ＞０．５は比較のための正方向マーカーを示す。
【０２０７】
種々の閾値（または「カットオフ」）濃度を選択し、コホート１をコホート２と区別するための関連敏感度および特異度を決定した。ＯＲは、特定のカットオフ濃度に関して算定されるオッズ比であり、９５％ＣＩはオッズ比に関する信頼区間である。
【０２０８】
本発明の種々のマーカーに関するこれら３つの分析の結果を、図５に示す。
【０２０９】
実施例１１．ＲＩＦＬＥ段階０およびＲでの患者における腎臓状態を評価するための腎損傷マーカー
【０２１０】
実施例１０に記載したとおりに患者を分類し、分析した。しかしながら、段階Ｒに達したが、しかし段階ＩまたはＦに進行しなかった患者を、コホート１における非損傷段階０からの患者とともに分類した。この実施例におけるコホート２は、段階ＩまたはＦに進行した患者のみを含んだ。血液試料の血漿成分中のマーカー濃度は、コホート１に関して含まれた。段階ＩまたはＦ到達の０、２４および４８時間以内に収集した血液試料の血漿成分中のマーカー濃度を、コホート２に関して包含した。
【０２１１】
ＲＯＣ解析を用いて、コホート１（ＲＩＦＬＥ０またはＲのままである被験者）をコホート２（ＲＩＦＬＥ  ＩまたはＦに進行している被験者）と識別する能力を決定した。
【０２１２】
種々の閾値（または「カットオフ」）濃度を選択し、コホート１をコホート２と区別するための関連敏感度および特異度を決定した。ＯＲは、特定のカットオフ濃度に関して算定されるオッズ比であり、９５％ＣＩはオッズ比に関する信頼区間である。
【０２１３】
本発明の種々のマーカーに関するこれら３つの分析の結果を、図６に示す。
【０２１４】
実施例１２．段階Ｒから段階ＩおよびＦに進行している患者における腎臓状態を評価するための腎損傷マーカー
【０２１５】
実施例１０に記載したとおりに患者を分類し、分析したが、しかし段階Ｒに達した患者のみをこの実施例に包含した。コホート１は、段階Ｒに達したがしかし１０日以内に段階ＩまたはＦに進行しなかった患者を含有し、コホート２は、段階ＩまたはＦに進行した患者のみを含んだ。段階Ｒ到達の１２時間以内に収集した血液試料の血漿成分中のマーカー濃度を、コホート１および２の両方に関する分析に包含した。
【０２１６】
ＲＯＣ解析を用いて、コホート１（ＲＩＦＬＥ  Ｒのままである被験者）をコホート２（ＲＩＦＬＥ  ＩまたはＦに進行している被験者）と識別する能力を決定した。
【０２１７】
種々の閾値（または「カットオフ」）濃度を選択し、コホート１をコホート２と区別するための関連敏感度および特異度を決定した。ＯＲは、特定のカットオフ濃度に関して算定されるオッズ比であり、９５％ＣＩはオッズ比に関する信頼区間である。
【０２１８】
本発明の種々のマーカーに関するこれら３つの分析の結果を、図７に示す。
【０２１９】
実施例１３．ＲＩＦＬＥ段階０での患者における腎臓状態を評価するための腎損傷マーカー
【０２２０】
実施例１０に記載したとおりに患者を分類し、分析した。しかしながら、段階ＲまたはＩに達したが、しかし段階Ｆに進行しなかった患者を、分析から除外した。非損傷段階０からの患者は、コホート１に含まれる。この実施例におけるコホート２は、段階Ｆに進行した患者のみを含んだ。血液試料の血清成分中の最大マーカー濃度は、コホート１における各患者から含まれた。段階Ｆ到達の０、２４および４８時間以内に収集した血液試料の血漿成分中の最大マーカー濃度を、コホート２における各患者から包含した。
【０２２１】
ＲＯＣ解析を用いて、コホート１（ＲＩＦＬＥ０またはＲのままである被験者）をコホート２（ＲＩＦＬＥ  ＩまたはＦに進行している被験者）と識別する能力を決定した。
【０２２２】
種々の閾値（または「カットオフ」）濃度を選択し、コホート１をコホート２と区別するための関連敏感度および特異度を決定した。ＯＲは、特定のカットオフ濃度に関して算定されるオッズ比であり、９５％ＣＩはオッズ比に関する信頼区間である。
【０２２３】
本発明の種々のマーカーに関するこれら３つの分析の結果を、図８に示す。
【０２２４】
当業者がそれを作製し、使用するのに十分詳細に本発明を記述し、例示してきたが、本発明の精神および範囲を逸脱しない限り、種々の代替物、修正および改善は明白であろう。本明細書中に提供された実施例は好ましい実施形態を代表するものであり、例として役立つものであって、本発明の範囲を限定するものではない。その修正および他の用途を、当業者は考えつくであろう。これらの修正は、本発明の精神に含まれており、特許請求の範囲により定義される。
【０２２５】
本発明の範囲および精神を逸脱しない限り、本明細書中に開示された本発明に対して種々の置換および修正がなされ得ることは、当業者には容易に明らかになるであろう。
【０２２６】
本明細書中に記述された特許および出版物は全て、本発明が関連する当該技術分野の当業者のレベルを示している。特許および出版物は全て、各々の個々の出版物が具体的に且つ独立して参照により援用されるべきであるのと同程度に、参照により本明細書中で援用される。
【０２２７】
本明細書中に例証的に記載された本発明は、本明細書中に具体的に開示されない任意の単数または複数の素子、単数または複数の制限を伴わずに適切に実行され得る。したがって、例えば本明細書中の各場合において、「〜を含む」、「本質的に〜からなる」および「〜からなる」という用語のいずれかを、他の２つの用語のいずれかと置き換え得る。用いられてきた用語および表現は、説明を有するが、しかし制限を有さない用語として用いられており、このような用語および表現の使用に際して、示され、記述された特徴の任意の等価物またはその一部の除外は意図されず、種々の修正が特許請求された本発明の範囲内で可能であると理解される。したがって、好ましい実施形態および任意の特徴により具体的に本発明を開示してきたが、開示された本明細書中の概念の修正および変更が当業者により用いられ得ると、ならびにこのような修正および変更は添付の特許請求の範囲により定義されるような本発明の範囲内であるとみなされると理解されるべきである。
【０２２８】
他の実施形態は、以下の特許請求の範囲内で記述される。
【図１−１】
2019023641.tif 000039
【図１−２】
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【図１−３】
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【図１−４】
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【図１−５】
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【図１−６】
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【図１−７】
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【図１−８】
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【図１−９】
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【図１−１０】
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【図１−１１】
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【図１−１２】
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【図１−１３】
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【図１−１４】
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【図１−１５】
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【図１−１６】
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【図１−１７】
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【図１−１８】
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【図１−１９】
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【図１−２０】
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【図１−２１】
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【図１−２２】
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【図１−２３】
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【図１−２４】
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【図１−２５】
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【図１−２６】
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【図１−２７】
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【図１−２８】
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【図１−２９】
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【図１−３０】
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【図１−３１】
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【図１−３２】
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【図１−３３】
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【図１−３４】
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【図１−３５】
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【図１−３６】
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【図１−３７】
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【図１−３８】
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【図１−３９】
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【図１−４０】
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【図１−４１】
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【図１−４２】
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【図１−４３】
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【図１−４４】
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【図１−４５】
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【図１−４６】
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【図１−４７】
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【図１−４８】
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【図１−４９】
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【図１−５０】
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【図１−５１】
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【図１−５２】
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【図１−５３】
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【図１−５４】
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【図１−５５】
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【図１−５６】
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【図１−５７】
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【図１−５８】
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【図１−５９】
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【図１−６０】
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【図１−６１】
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【図１−６２】
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【図１−６３】
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【図１−６４】
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【図１−６５】
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【図１−６６】
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【図２−１】
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【図２−２】
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【図２−３】
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【図２−４】
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【図２−５】
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【図２−６】
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【図２−７】
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【図２−８】
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【図２−９】
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【図２−１０】
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【図２−１１】
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【図２−１２】
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【図２−１３】
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【図２−１４】
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【図２−１５】
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【図２−１６】
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【図２−１７】
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【図２−１８】
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【図２−１９】
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【図２−２０】
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【図２−２１】
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【図２−２２】
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【図２−２３】
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【図２−２４】
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【図２−２５】
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【図２−２６】
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【図２−２７】
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【図２−２８】
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【図２−２９】
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【図２−３０】
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【図２−３１】
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【図２−３２】
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【図２−３３】
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【図２−３４】
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【図２−３５】
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【図２−３６】
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【図２−３７】
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【図２−３８】
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【図２−３９】
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【図２−４０】
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【図２−４１】
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【図２−４２】
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【図２−４３】
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【図２−４４】
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【図２−４５】
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【図２−４６】
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【図２−４７】
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【図２−４８】
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【図２−４９】
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【図２−５０】
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【図２−５１】
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【図２−５２】
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【図２−５３】
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【図２−５４】
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【図２−５５】
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【図２−５６】
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【図２−５７】
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【図２−５８】
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【図２−５９】
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【図２−６０】
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【図２−６１】
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【図２−６２】
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【図２−６３】
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【図２−６４】
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【図２−６５】
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【図２−６６】
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【図２−６７】
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【図２−６８】
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【図２−６９】
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【図２−７０】
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【図２−７１】
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【図２−７２】
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【図２−７３】
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【図３−１】
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【図３−２】
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【図３−３】
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【図３−４】
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【図３−５】
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【図３−６】
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【図３−７】
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【図３−８】
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【図３−９】
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【図３−１０】
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【図３−１１】
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【図３−１２】
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【図３−１３】
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【図３−１４】
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【図３−１５】
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【図３−１６】
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【図３−１７】
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【図３−１８】
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【図３−１９】
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【図３−２０】
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【図３−２１】
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【図４−１】
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【図４−２】
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【図４−３】
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【図４−４】
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【図４−５】
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【図４−６】
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【図４−７】
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【図４−８】
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【図４−９】
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【図４−１０】
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【図４−１１】
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【図４−１２】
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【図４−１３】
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【図４−１４】
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【図４−１５】
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【図４−１６】
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【図４−１７】
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【図４−１８】
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【図４−１９】
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【図４−２０】
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【図４−２１】
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【図４−２２】
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【図４−２３】
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【図４−２４】
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【図４−２５】
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【図４−２６】
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【図４−２７】
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【図４−２８】
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【図４−２９】
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【図４−３０】
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【図４−３１】
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【図４−３２】
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【図４−３３】
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【図４−３４】
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【図４−３５】
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【図４−３６】
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【図４−３７】
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【図４−３８】
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【図４−３９】
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【図４−４０】
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【図４−４１】
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【図４−４２】
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【図４−４３】
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【図４−４４】
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【図４−４５】
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【図４−４６】
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【図４−４７】
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【図４−４８】
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【図４−４９】
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【図４−５０】
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【図４−５１】
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【図４−５２】
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【図４−５３】
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【図４−５４】
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【図４−５５】
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【図４−５６】
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【図４−５７】
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【図４−５８】
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【図４−５９】
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【図４−６０】
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【図４−６１】
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【図４−６２】
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【図４−６３】
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【図４−６４】
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【図４−６５】
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【図５−１】
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【図５−２】
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【図５−３】
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【図５−４】
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【図５−５】
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【図５−６】
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【図５−７】
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【図５−８】
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【図５−９】
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【図５−１０】
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【図５−１１】
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【図５−１２】
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【図５−１３】
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【図５−１４】
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【図５−１５】
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【図５−１６】
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【図５−１７】
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【図５−１８】
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【図５−１９】
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【図５−２０】
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【図５−２１】
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【図５−２２】
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【図５−２３】
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【図５−２４】
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【図５−２５】
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【図５−２６】
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【図５−２７】
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【図５−２８】
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【図５−２９】
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【図５−３０】
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【図５−３１】
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【図５−３２】
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【図５−３３】
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【図５−３７】
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【図５−３８】
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【図５−３９】
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【図５−４０】
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【図５−４１】
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【図５−４２】
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【図５−４３】
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【図５−４４】
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【図５−４６】
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【図５−４７】
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【図５−４８】
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【図５−４９】
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【図５−５０】
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【図５−６９】
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【図５−７０】
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【図５−７７】
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【図５−７９】
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【図５−８０】
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【図５−８１】
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【図５−８２】
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【図５−８３】
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【図５−８４】
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【図６−１】
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【図６−２】
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【図６−３】
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【図６−４】
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【図６−５】
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【図６−１７】
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【図６−１８】
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【図６−２０】
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【図６−３０】
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【図６−３１】
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【図６−３３】
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【図６−３４】
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【図６−３６】
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【図６−３７】
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【図６−４０】
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【図６−６８】
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【図６−６９】
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【図６−７０】
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【図６−７１】
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【図７−１】
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【図７−２】
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【図７−３】
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【図７−４】
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【図７−５】
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【図７−６】
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【図７−７】
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【図７−１０】
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【図７−１１】
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【図７−１３】
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【図７−１４】
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【図７−１５】
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【図７−１６】
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【図７−１７】
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【図７−１８】
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【図７−１９】
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【図７−２０】
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【図７−２１】
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【図７−２２】
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【図８−１】
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【図８−２】
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【図８−３】
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【図８−４】
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【図８−５−１】
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【図８−５−２】
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【図８−６−１】
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【図８−６−２】
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【図８−７】
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【図８−８】
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【図８−９−１】
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【図８−９−２】
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【図８−１０】
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【図８−１１】
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【図８−１２】
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【図８−１３】
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【図８−１４】
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【図８−１５】
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【図８−１６】
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【図８−１７−１】
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【図８−１７−２】
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【図８−１８】
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【図８−１９】
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【図８−２０】
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【図８−２１】
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【図８−２２−１】
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【図８−２２−２】
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【図８−２３】
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【図８−２４−１】
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【図８−２４−２】
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【図８−２５】
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【図８−２６−１】
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【図８−２６−２】
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【図８−２７】
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【図８−２８−１】
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【図８−２８−２】
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【図８−２９】
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【図８−３０−１】
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【図８−３０−２】
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【図８−３１−１】
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【図８−３１−２】
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【図８−３２】
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【図８−３３−１】
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【図８−３３−２】
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【図８−３４−１】
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【図８−３４−２】
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【図８−３５】
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【図８−３６】
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【図８−３７】
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【図８−３８−１】
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【図８−３８−２】
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【図８−３９】
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【図８−４０−１】
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【図８−４０−２】
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【図８−４１】
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【図８−４２】
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【手続補正書】
【提出日】平成30年9月13日(2018.9.13)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
被験体における将来的急性腎不全（ＡＲＦ）の可能性の決定方法であって、
前記被験体から得られる尿又は血漿試料に関して、メタロプロテイナーゼ１の組織阻害物質を検出するよう設計された検定を実施して、メタロプロテイナーゼ１の組織阻害物質の測定濃度である検定結果を提供すること；ならびに
前記検定結果を、前記被験体の将来的急性腎不全の可能性と相関させること
を包含し、ここで前記相関させることは、
（ｉ）前記測定濃度又はそれに由来する数値を受信者動作特性（ＲＯＣ）解析を用いて決定した閾値と比較するステップであって、前記閾値は、被験体集団を前記測定濃度又はそれに由来する数値が前記閾値を上回る第一のコホートと、前記測定濃度又はそれに由来する数値が前記閾値を下回る第二のコホートに分けるために選択され、ここで第一のコホートは第二のコホートより急性腎不全に罹患するより高い危険性があることを特徴とするステップ、および
（ｉｉ）前記測定濃度又はそれに由来する数値が前記閾値を上回る場合に、将来の急性腎不全を蒙る可能性増大を前記被験体に割り当てるステップ、または、前記測定濃度又はそれに由来する数値が前記閾値を下回る場合に、将来の急性腎不全を蒙る可能性低減を前記被験体に割り当てるステップ、を包含し、
ここで将来的急性腎不全の可能性とは、前記尿又は血漿試料が前記被験体から得られる時点から４８時間以内に急性腎不全が起こり得るということである、
方法。
【請求項２】
腎前性、内因性腎性、または腎後性ＡＲＦに関する１つ以上の既知の危険因子の前記被験体における先在性に基づいた将来的急性腎不全の可能性の決定のために前記被験体が選択される請求項１に記載の方法。
【請求項３】
うっ血性心不全、子癇前症、子癇、真性糖尿病、高血圧症、冠動脈疾患、タンパク尿、腎機能不全、正常範囲を下回る糸球体濾過率、肝硬変、正常範囲を上回る血清クレアチニン、敗血症、腎機能に対する損傷、腎機能低減またはＡＲＦのうちの１つ以上の現存する診断に基づいた、あるいは大血管手術、冠動脈バイパス術または他の心臓手術を受けることまたは受けたことがあることに基づいた、あるいはＮＳＡＩＤ、シクロスポリン、タクロリムス、アミノグリコシド、フォスカルネット、エチレングリコール、ヘモグロビン、ミオグロビン、イフォスファミド、重金属、メトトレキセート、放射線不透過性造影剤またはストレプトゾトシンへの曝露に基づいた将来的急性腎不全の可能性の決定のために前記被験体が選択される請求項１に記載の方法。
【請求項４】
請求項１に記載の方法における、将来的急性腎損傷の可能性を決定するための、メタロプロテイナーゼ１の組織阻害物質の腎損傷マーカーとしての使用。
【請求項５】
前記被験体に割り当てられる将来的急性腎不全の可能性が、前記尿又は血漿試料が前記被験体から得られる時点の４８時間以内に当該事象が起こり得るという可能性である請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記被験体に割り当てられる将来的急性腎不全の可能性が、前記尿又は血漿試料が前記被験体から得られる時点の２４時間以内に当該事象が起こり得るという可能性である請求項１に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
2019023641000001.app