(57)【要約】      （修正有）【課題】固形がんにおける血管密度を減少させることによる、中皮腫等の固形がんを治療するための医薬、及び治療方法の提供。【解決手段】線維芽細胞増殖因子受容体１（ＦＧＦＲ１）細胞外ドメイン（ＥＣＤ）及び／又はＦＧＦＲ１、ＥＣＤ融合分子を含む医薬、及び該医薬を投与することを含む固形がんの治療方法、又はＦＧＦＲ１、ＥＣＤ及び／又はＦＧＦＲ１、ＥＣＤ融合分子と少なくとも１種の抗血管新生剤を投与することを含む固形がんの治療方法。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＶＥＧＦレベルと比較してより高いＦＧＦ２レベルを有し、ＶＥＧＦレベルと比較してより高いＦＧＦ２レベルが、線維芽細胞増殖因子受容体１（ＦＧＦＲ１）細胞外ドメイン（ＥＣＤ）又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子に対するがんの治療反応性の指標であるがんを対象において治療する方法であって、対象に治療有効量のＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子を投与することを含む、方法。
【請求項２】
対象におけるがんを治療する方法において、
対象に治療有効量の線維芽細胞増殖因子受容体１（ＦＧＦＲ１）細胞外ドメイン（ＥＣＤ）又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子を投与することを含み、
ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子の投与前に、がんの細胞の少なくとも一部がＶＥＧＦレベルと比較してより高いＦＧＦ２レベルを有していると判定されており、
がんにおけるＶＥＧＦレベルと比較してより高いＦＧＦ２レベルが、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子に対するがんの治療反応性の指標である、方法。
【請求項３】
線維芽細胞増殖因子受容体１（ＦＧＦＲ１）細胞外ドメイン（ＥＣＤ）又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子での治療から恩恵を受けうる対象を特定する方法であって、対象から得られた試料中のＦＧＦ２及びＶＥＧＦのレベルを決定することを含み、試料中におけるＶＥＧＦレベルと比較してより高いＦＧＦ２レベルが、対象が線維芽細胞増殖因子受容体１（ＦＧＦＲ１）細胞外ドメイン（ＥＣＤ）又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子での治療から恩恵を受けうることを示す、方法。
【請求項４】
ＦＧＦ２レベルがＦＧＦ２ ｍＲＮＡレベルである、請求項１から３の何れか一項に記載の方法。
【請求項５】
ＶＥＧＦレベルがＶＥＧＦ ｍＲＮＡレベルである、請求項１から４の何れか一項に記載の方法。
【請求項６】
ｍＲＮＡレベルが定量的ＲＴ−ＰＣＲによって決定される、請求項４又は請求項５に記載の方法。
【請求項７】
ＦＧＦ２レベルがＦＧＦ２タンパク質レベルである、請求項１から３の何れか一項に記載の方法。
【請求項８】
ＶＥＧＦレベルがＶＥＧＦタンパク質レベルである、請求項１から３及び７の何れか一項に記載の方法。
【請求項９】
タンパク質レベルが免疫組織化学によって決定される、請求項７又は請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
ＶＥＧＦレベルに対するＦＧＦ２レベルの比が１より大きい、請求項１から９の何れか一項に記載の方法。
【請求項１１】
がんが単剤療法としてのＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＲ１ ＥＣＤ融合分子に対して反応性である、請求項１から１０の何れか一項に記載の方法。
【請求項１２】
対象に単剤療法としてＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＲ１ ＥＣＤ融合分子が投与される、請求項１から１１の何れか一項に記載の方法。
【請求項１３】
がんが、腎がん（腎細胞がん等）、肝がん（肝細胞がん等）、肺がん、結腸がん、肝がん、乳がん、胃がん、卵巣がん、子宮内膜がん、食道がん、頭頸部がん、神経膠芽腫、中皮腫、及び前立腺がんから選択される、請求項１から１２の何れか一項に記載の方法。
【請求項１４】
ＶＥＧＦレベルと比較してより低いＦＧＦ２レベルを有するがんを対象において治療する方法であって、対象に治療有効量のＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子と治療有効量の少なくとも１種の抗血管新生剤を投与することを含む、方法。
【請求項１５】
対象におけるがんを治療する方法において、
対象に治療有効量の線維芽細胞増殖因子受容体１（ＦＧＦＲ１）細胞外ドメイン（ＥＣＤ）又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子と少なくとも１種の抗血管新生剤を投与することを含み、
ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子と少なくとも１種の抗血管新生剤の投与前に、がんの細胞の少なくとも一部がＶＥＧＦレベルと比較してより低いＦＧＦ２レベルを有していると判定されている、方法。
【請求項１６】
線維芽細胞増殖因子受容体１（ＦＧＦＲ１）細胞外ドメイン（ＥＣＤ）又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子と少なくとも１種の抗血管新生剤での治療から恩恵を受けうる対象を特定する方法であって、対象から得られた試料中のＦＧＦ２及びＶＥＧＦのレベルを決定することを含み、試料中におけるＶＥＧＦレベルと比較してより低いＦＧＦ２レベルが、対象が線維芽細胞増殖因子受容体１（ＦＧＦＲ１）細胞外ドメイン（ＥＣＤ）又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子と少なくとも１種の抗血管新生剤での治療から恩恵を受けうることを示す、方法。
【請求項１７】
ＦＧＦ２レベルがＦＧＦ２ ｍＲＮＡレベルである、請求項１４から１６の何れか一項に記載の方法。
【請求項１８】
ＶＥＧＦレベルがＶＥＧＦ ｍＲＮＡレベルである、請求項１４から１７の何れか一項に記載の方法。
【請求項１９】
ｍＲＮＡレベルが定量的ＲＴ−ＰＣＲによって決定される、請求項１７又は１８に記載の方法。
【請求項２０】
ＦＧＦ２レベルがＦＧＦ２タンパク質レベルである、請求項１４から１６の何れか一項に記載の方法。
【請求項２１】
ＶＥＧＦレベルがＶＥＧＦタンパク質レベルである、請求項１４から１６及び２０の何れか一項に記載の方法。
【請求項２２】
タンパク質レベルが免疫組織化学によって決定される、請求項２０又は請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
ＶＥＧＦレベルに対するＦＧＦ２レベルの比が１未満である、請求項１４から２２の何れか一項に記載の方法。
【請求項２４】
抗血管新生剤がＶＥＧＦアンタゴニストである、請求項１４から２３の何れか一項に記載の方法。
【請求項２５】
ＶＥＧＦアンタゴニストが、パゾパニブ、ベバシズマブ、アキシチニブ、アフリベルセプト、ソラフェニブ、又はスニチニブから選択される、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
固形がんにおける血管密度を減少させる方法において、固形がんの対象にＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子を投与することを含む、方法。
【請求項２７】
固形がんがＶＥＧＦレベルと比較してより高いＦＧＦ２レベルを有している、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
ＦＧＦ２レベルがＦＧＦ２ ｍＲＮＡレベルである、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
ＶＥＧＦレベルがＶＥＧＦ ｍＲＮＡレベルである、請求項２７又は請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
ｍＲＮＡレベルが定量的ＲＴ−ＰＣＲによって決定される、請求項２８又は請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
ＦＧＦ２レベルがＦＧＦ２タンパク質レベルである、請求項２７に記載の方法。
【請求項３２】
ＶＥＧＦレベルがＶＥＧＦタンパク質レベルである、請求項２７又は請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
タンパク質レベルが免疫組織化学によって決定される、請求項３１又は請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
ＶＥＧＦレベルに対するＦＧＦ２レベルの比が１より大きい、請求項２７から３３の何れか一項に記載の方法。
【請求項３５】
がんが、腎がん（腎細胞がん等）、肝がん（肝細胞がん等）、肺がん、結腸がん、肝がん、乳がん、胃がん、卵巣がん、子宮内膜がん、食道がん、頭頸部がん、神経膠芽腫、中皮腫、及び前立腺がんから選択される、請求項１４から３４の何れか一項に記載の方法。
【請求項３６】
中皮腫を治療する方法において、中皮腫の対象にＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子と、パクリタキセル、カルボプラチン、ドセタキセル、ペメトレキセド、及びシスプラチンから選択される少なくとも１種の治療剤を投与することを含む、方法。
【請求項３７】
ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子、パクリタキセル及びカルボプラチンを投与することを含む、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子とドセタキセルを投与することを含む、請求項３６に記載の方法。
【請求項３９】
ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子、ペメトレキセド、及びシスプラチンを投与することを含む、請求項３６に記載の方法。
【請求項４０】
ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子と少なくとも１種の治療剤の投与が中皮腫における血管密度を減少させる、請求項３６から３９の何れか一項に記載の方法。
【請求項４１】
中皮腫が、参照試料又は細胞中のＦＧＦ２レベルと比較して高いレベルのＦＧＦ２を有している、請求項３６から４０の何れか一項に記載の方法。
【請求項４２】
中皮腫が、ＶＥＧＦレベルと比較して高いレベルのＦＧＦ２を有している、請求項３６から４１の何れか一項に記載の方法。
【請求項４３】
ＦＧＦ２レベルがＦＧＦ２ ｍＲＮＡレベルである、請求項４１又は請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
ＶＥＧＦレベルがＶＥＧＦ ｍＲＮＡレベルである、請求項４２又は請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
ｍＲＮＡレベルが定量的ＲＴ−ＰＣＲによって決定される、請求項４３又は請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
ＦＧＦ２レベルがＦＧＦ２タンパク質レベルである、請求項４１又は請求項４２に記載の方法。
【請求項４７】
ＶＥＧＦレベルがＶＥＧＦタンパク質レベルである、請求項４２又は請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
タンパク質レベルが免疫組織化学によって決定される、請求項４６又は請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
ＶＥＧＦレベルに対するＦＧＦ２レベルの比が１より大きい、請求項４２から４８の何れか一項に記載の方法。
【請求項５０】
対象が、パゾパニブ、ベバシズマブ、アキシチニブ、アフリベルセプト、ソラフェニブ、及びスニチニブから選択される少なくとも１種の治療剤で以前に治療されている、請求項１から４９の何れか一項に記載の方法。
【請求項５１】
対象がＶＥＧＦ耐性がん又はパゾパニブ耐性がんに罹患している、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
ＦＧＦＲ１ ＥＣＤを投与することを含む、請求項１から５１の何れか一項に記載の方法。
【請求項５３】
ＦＧＦＲ１ ＥＣＤが、配列番号：１から４より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子を投与することを含む、請求項１から５２の何れか一項に記載の方法。
【請求項５５】
ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子が、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤと融合パートナーを含み、該融合パートナーがＦｃである、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子が、配列番号：５及び配列番号：６から選択される配列を含む、請求項５５に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
可溶型の線維芽細胞増殖因子受容体１（ＦＧＦＲ１）は、インビトロ及びインビボで腫瘍細胞の増殖を阻害することが示されている。例えば、米国特許第７６７８８９０号を参照のこと。抗がん治療の有効性は、場合によっては、標的とされるがんの遺伝子構造に依存する。
【発明の概要】
【０００２】
幾つかの実施態様では、ＶＥＧＦレベルと比較してより高いＦＧＦ２レベルを有するがんを治療する方法が提供される。幾つかの実施態様では、ＶＥＧＦレベルと比較してより高いＦＧＦ２レベルが、線維芽細胞増殖因子受容体１（ＦＧＦＲ１）細胞外ドメイン（ＥＣＤ）又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子に対するがんの治療反応性の指標である。幾つかの実施態様では、該方法は、対象に治療有効量のＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子を投与することを含む。他の実施態様では、がんの治療方法において使用されるＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子が提供され、該がんは対象においてＶＥＧＦレベルと比較してより高いＦＧＦ２レベルを有していることを特徴とする。更なる実施態様では、がんの治療方法に使用される医薬の製造におけるＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子の使用が提供され、該がんは対象においてＶＥＧＦレベルと比較してより高いＦＧＦ２レベルを有していることを特徴とする。幾つかの実施態様では、方法は、対象に治療有効量のＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子と治療有効量の少なくとも１種の抗血管新生剤を投与することを含む。幾つかの実施態様では、抗血管新生剤はＶＥＧＦアンタゴニストである。幾つかの実施態様では、ＶＥＧＦアンタゴニストはパゾパニブ、ベバシズマブ、アキシチニブ、アフリベルセプト、ソラフェニブ、又はスニチニブから選択される。
【０００３】
幾つかの実施態様では、対象に治療有効量の線維芽細胞増殖因子受容体１（ＦＧＦＲ１）細胞外ドメイン（ＥＣＤ）又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子を投与することを含む、対象におけるがんを治療する方法が提供される。幾つかの実施態様では、方法は、治療有効量のＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子と治療有効量の少なくとも１種の抗血管新生剤を対象に投与することを含む。幾つかの実施態様では、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子の投与前に、がんの細胞の少なくとも一部がＶＥＧＦレベルと比較してより高いレベルのＦＧＦ２を有していると判定されている。幾つかの実施態様では、がん試料の細胞の少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、又は少なくとも９０％が、ＶＥＧＦレベルと比較してより高いレベルのＦＧＦ２を有していると判定されている。幾つかの実施態様では、がんにおけるＶＥＧＦレベルと比較してより高いＦＧＦ２レベルは、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子に対するがんの治療反応性の指標である。
【０００４】
幾つかの実施態様では、線維芽細胞増殖因子受容体１（ＦＧＦＲ１）細胞外ドメイン（ＥＣＤ）又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子での治療から恩恵を受けうる対象を特定する方法が提供される。幾つかの実施態様では、該方法は、対象から得られた試料中のＦＧＦ２及びＶＥＧＦのレベルを決定することを含み、試料中におけるＶＥＧＦレベルと比較してより高いＦＧＦ２レベルが、対象が線維芽細胞増殖因子受容体１（ＦＧＦＲ１）細胞外ドメイン（ＥＣＤ）又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子での治療から恩恵を受けうることを示す。
【０００５】
幾つかの実施態様では、線維芽細胞増殖因子受容体１（ＦＧＦＲ１）細胞外ドメイン（ＥＣＤ）又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子に対するがんの対象の反応性を予測する方法が提供される。幾つかの実施態様では、該方法は、対象から得られた試料中のＦＧＦ２及びＶＥＧＦのレベルを決定することを含み、試料中におけるＶＥＧＦレベルと比較してより高いＦＧＦ２レベルが、がんが線維芽細胞増殖因子受容体１（ＦＧＦＲ１）細胞外ドメイン（ＥＣＤ）又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子に反応することが予測されることを示す。
【０００６】
幾つかの実施態様では、ＦＧＦ２レベルはＦＧＦ２ ｍＲＮＡレベルである。幾つかの実施態様では、ＶＥＧＦレベルはＶＥＧＦ ｍＲＮＡレベルである。幾つかの実施態様では、ｍＲＮＡレベルは定量的ＲＴ−ＰＣＲによって決定される。幾つかの実施態様では、ｍＲＮＡレベルは、定量的ＲＴ−ＰＣＲ、マイクロアレイ、デジタルＰＣＴ、ＲＮＡ−Ｓｅｑ、リボヌクレアーゼプロテクションアッセイ（ＲＰＡ）、ノーザンブロット法、及びインサイツハイブリダイゼーション（ＩＳＨ）から選択される方法によって決定される。
【０００７】
幾つかの実施態様では、ＦＧＦ２レベルはＦＧＦ２タンパク質レベルである。幾つかの実施態様では、ＶＥＧＦレベルはＶＥＧＦタンパク質レベルである。幾つかの実施態様では、タンパク質レベルは免疫組織化学によって決定される。幾つかの実施態様では、タンパク質レベルは、免疫組織化学、ＥＬＩＳＡ、質量分析法、逆相プロテインアレイ（ＲＰＰＡ）、抗体アレイ、ナノ−イムノアッセイ、ウェスタンブロット法、及びキャピラリープロテイン分析アッセイから選択される方法によって決定される。
【０００８】
幾つかの実施態様では、ＶＥＧＦレベルに対するＦＧＦ２レベルの比は１より大きい。幾つかの実施態様では、ＶＥＧＦレベルに対するＦＧＦ２レベルの比は１．１より大きい。幾つかの実施態様では、ＶＥＧＦレベルに対するＦＧＦ２レベルの比は１．２より大きい。幾つかの実施態様では、ＶＥＧＦレベルに対するＦＧＦ２レベルの比は１．３より大きい。幾つかの実施態様では、ＶＥＧＦレベルに対するＦＧＦ２レベルの比は１．４より大きい。幾つかの実施態様では、ＶＥＧＦレベルに対するＦＧＦ２レベルの比は１．５より大きい。
【０００９】
幾つかの実施態様では、がんは単剤療法としてのＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＲ１ ＥＣＤ融合分子に反応性である。幾つかの実施態様では、対象に単剤療法としてＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＲ１ ＥＣＤ融合分子が投与される。
【００１０】
幾つかの実施態様では、がんは、腎がん（腎細胞がん等）、肝がん（肝細胞がん等）、肺がん、結腸がん、肝がん、乳がん、胃がん、卵巣がん、子宮内膜がん、食道がん、頭頸部がん、神経膠芽腫、中皮腫、及び前立腺がんから選択される。幾つかの実施態様では、がんは消化管間質腫瘍である。
【００１１】
幾つかの実施態様では、対象においてＶＥＧＦレベルと比較してより低いＦＧＦ２レベルを有するがんを治療する方法が提供される。幾つかの実施態様では、該方法はがんの対象にＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子と少なくとも１種の抗血管新生剤を投与することを含む。幾つかの実施態様では、方法は、治療有効量のＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子と治療有効量の少なくとも１種の抗血管新生剤を対象に投与することを含む。幾つかの実施態様では、抗血管新生剤はＶＥＧＦアンタゴニストである。幾つかの実施態様では、ＶＥＧＦアンタゴニストは、パゾパニブ、ベバシズマブ、アキシチニブ、アフリベルセプト、ソラフェニブ、又はスニチニブから選択される。
【００１２】
幾つかの実施態様では、治療有効量の線維芽細胞増殖因子受容体１（ＦＧＦＲ１）細胞外ドメイン（ＥＣＤ）又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子と治療有効量の少なくとも１種の抗血管新生剤を対象に投与することを含む、対象におけるがんを治療する方法が提供される。幾つかの実施態様では、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子と少なくとも１種の抗血管新生剤の投与前に、がんの細胞の少なくとも一部がＶＥＧＦレベルと比較してより低いＦＧＦ２レベルを有していると判定されている。幾つかの実施態様では、がん試料の細胞少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、又は少なくとも９０％が、ＶＥＧＦレベルと比較してより低いＦＧＦ２レベルを有していると判定されている。幾つかの実施態様では、がんの対象にＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子と少なくとも１種の抗血管新生剤を投与することを含む、ＶＥＧＦレベルと比較してより低いＦＧＦ２レベルのがんを治療する方法が提供される。
【００１３】
幾つかの実施態様では、線維芽細胞増殖因子受容体１（ＦＧＦＲ１）細胞外ドメイン（ＥＣＤ）又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子と少なくとも１種の抗血管新生剤での治療から恩恵を受けうる対象を特定する方法が提供される。幾つかの実施態様では、該方法は、対象から得られた試料中のＦＧＦ２及びＶＥＧＦのレベルを決定することを含み、試料中におけるＶＥＧＦレベルと比較してより低いＦＧＦ２レベルが、対象が線維芽細胞増殖因子受容体１（ＦＧＦＲ１）細胞外ドメイン（ＥＣＤ）又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子と少なくとも１種の抗血管新生剤での治療から恩恵を受けうることを示す。
【００１４】
幾つかの実施態様では、線維芽細胞増殖因子受容体１（ＦＧＦＲ１）細胞外ドメイン（ＥＣＤ）又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子と少なくとも１種の抗血管新生剤に対するがんの対象の反応性を予測する方法が提供される。幾つかの実施態様では、該方法は、対象から得られた試料中のＦＧＦ２及びＶＥＧＦのレベルを決定することを含み、試料中におけるＶＥＧＦレベルと比較してより低いＦＧＦ２レベルが、がんが、線維芽細胞増殖因子受容体１（ＦＧＦＲ１）細胞外ドメイン（ＥＣＤ）又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子と少なくとも１種の抗血管新生剤での治療に反応すると予測されることを示す。
【００１５】
幾つかの実施態様では、ＦＧＦ２レベルはＦＧＦ２ ｍＲＮＡレベルである。幾つかの実施態様では、ＶＥＧＦレベルはＶＥＧＦ ｍＲＮＡレベルである。幾つかの実施態様では、ｍＲＮＡレベルは定量的ＲＴ−ＰＣＲによって決定される。幾つかの実施態様では、ｍＲＮＡレベルは、定量的ＲＴ−ＰＣＲ、マイクロアレイ、デジタルＰＣＴ、ＲＮＡ−Ｓｅｑ、リボヌクレアーゼプロテクションアッセイ（ＲＰＡ）、ノーザンブロット法、及びインサイツハイブリダイゼーション（ＩＳＨ）から選択される方法によって決定される。
【００１６】
幾つかの実施態様では、ＦＧＦ２レベルはＦＧＦ２タンパク質レベルである。幾つかの実施態様では、ＶＥＧＦレベルはＶＥＧＦタンパク質レベルである。幾つかの実施態様では、タンパク質レベルは免疫組織化学によって決定される。幾つかの実施態様では、タンパク質レベルは、免疫組織化学、ＥＬＩＳＡ、質量分析法、逆相プロテインアレイ（ＲＰＰＡ）、抗体アレイ、ナノ−イムノアッセイ、ウェスタンブロット法、及びキャピラリープロテイン分析アッセイから選択される方法によって決定される。
【００１７】
幾つかの実施態様では、ＶＥＧＦレベルに対するＦＧＦ２レベルの比は１未満である。幾つかの実施態様では、ＶＥＧＦレベルに対するＦＧＦ２レベルの比は０．９未満である。幾つかの実施態様では、ＶＥＧＦレベルに対するＦＧＦ２レベルの比は０．８未満である。幾つかの実施態様では、ＶＥＧＦレベルに対するＦＧＦ２レベルの比は０．７未満である。幾つかの実施態様では、ＶＥＧＦレベルに対するＦＧＦ２レベルの比は０．６未満である。
【００１８】
幾つかの実施態様では、がんは、腎がん（腎細胞がん等）、肝がん（肝細胞がん等）、肺がん、結腸がん、肝がん、乳がん、胃がん、卵巣がん、子宮内膜がん、食道がん、頭頸部がん、神経膠芽腫、中皮腫、及び前立腺がんから選択される。幾つかの実施態様では、がんは消化管間質腫瘍である。幾つかの実施態様では、がんは腎がん（腎細胞がん等）、肝がん（肝細胞がん等）、及び中皮腫から選択される。幾つかの実施態様では、がんは腎細胞がんである。幾つかの実施態様では、がんは肝細胞がんである。幾つかの実施態様では、がんは中皮腫である。
【００１９】
幾つかの実施態様では、腎細胞がん（ＲＣＣ）を治療する方法が提供される。幾つかの実施態様では、該方法は、線維芽細胞増殖因子受容体１（ＦＧＦＲ１）細胞外ドメイン（ＥＣＤ）又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子とＶＥＧＦアンタゴニストをＲＣＣの対象に投与することを含む。幾つかの実施態様では、該方法は、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子と、アキシチニブ、パゾパニブ、及びソラフェニブから選択されるＶＥＧＦアンタゴニストとをＲＣＣの対象に投与することを含む。
【００２０】
幾つかの実施態様では、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子をがんの対象に投与することを含む、がんを治療する方法が提供され、ここで、対象はパゾパニブ、ベバシズマブ、アキシチニブ、アフリベルセプト、ソラフェニブ、及びスニチニブから選択される少なくとも１種の治療剤で以前に治療されている。幾つかの実施態様では、対象はパゾパニブで以前に治療されている。幾つかの実施態様では、対象のがんは、パゾパニブ治療中又は治療後にパゾパニブ耐性になっている。幾つかの実施態様では、パゾパニブ耐性がんの対象にＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子を投与することを含む、パゾパニブ耐性がんを治療する方法が提供される。幾つかの実施態様では、該方法は、パゾパニブとＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子を投与することを含む。
【００２１】
幾つかの実施態様では、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子とアキシチニブをがんの対象に投与することを含む、がんを治療する方法が提供され、ここで、対象は、パゾパニブ、ベバシズマブ、アキシチニブ、アフリベルセプト、ソラフェニブ、及びスニチニブから選択される少なくとも１種の治療剤で以前に治療されている。幾つかのそのような実施態様では、少なくとも１種の治療剤はパゾパニブ、アキシチニブ、及びソラフェニブから選択される。幾つかのそのような実施態様では、少なくとも１種の治療剤はパゾパニブである。幾つかの実施態様では、がんは、腎がん（腎細胞がん等）、肝がん（肝細胞がん等）、神経膠芽腫、及び中皮腫から選択される。
【００２２】
幾つかの実施態様では、ＶＥＧＦ耐性がんを治療する方法が提供される。幾つかの実施態様では、方法は、ＶＥＧＦ耐性がんの対象にＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子を投与することを含む。幾つかの実施態様では、ＶＥＧＦ耐性がんは、高ＦＧＦ２発現及び／又は１より大きいＦＧＦ２／ＶＥＧＦ比を伴うがんである。幾つかの実施態様では、ＶＥＧＦ耐性がんは腎がん（腎細胞がん等）、肝がん（肝細胞がん等）、神経膠芽腫、及び中皮腫から選択される。
【００２３】
幾つかの実施態様では、固形がんにおける血管密度を減少させる方法が提供される。幾つかの実施態様では、固形がんにおける血管密度を減少させる方法が提供され、ここで、がんはＶＥＧＦレベルと比較してより高いＦＧＦ２レベルを有している。幾つかの実施態様では、ＶＥＧＦ耐性固形がんにおける血管密度を減少させる方法が提供される。幾つかの実施態様では、固形がんにおける血管密度を減少させる方法は、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子をがんの対象に投与することを含む。幾つかの実施態様では、血管密度は全腫瘍試料において測定される。幾つかの実施態様では、がんは、腎がん（腎細胞がん等）、肝がん（肝細胞がん等）、肺がん、結腸がん、肝がん、乳がん、胃がん、卵巣がん、子宮内膜がん、食道がん、頭頸部がん、神経膠芽腫、中皮腫、及び前立腺がんから選択される。幾つかの実施態様では、がんは、腎がん（腎細胞がん等）、肝がん（肝細胞がん等）、神経膠芽腫、及び中皮腫から選択される。幾つかの実施態様では、がんは腎細胞がんである。幾つかの実施態様では、がんは肝細胞がんである。幾つかの実施態様では、がんは中皮腫である。
【００２４】
幾つかの実施態様では、中皮腫の対象に、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子と、パクリタキセル、カルボプラチン、ドセタキセル、ペメトレキセド、及びシスプラチンから選択される少なくとも１種の治療剤とを投与することを含む、中皮腫を治療する方法が提供される。幾つかの実施態様では、該方法は、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子、パクリタキセル及びカルボプラチンを投与することを含む。幾つかの実施態様では、該方法は、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子とドセタキセルを投与することを含む。幾つかの実施態様では、該方法は、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子、ペメトレキセド、及びシスプラチンを投与することを含む。幾つかの実施態様では、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子と少なくとも１種の治療剤の投与は、中皮腫における血管密度を減少させる。幾つかの実施態様では、中皮腫は高レベルのＦＧＦ２を有する。幾つかの実施態様では、中皮腫はＶＥＧＦレベルと比較してより高いＦＧＦ２レベルを有する。幾つかの実施態様では、ＶＥＧＦレベルに対するＦＧＦ２レベルの比は１より大きい。
【００２５】
ここに記載の方法の何れかにおいて、本方法はＦＧＦＲ１ ＥＣＤを投与することを含みうる。幾つかの実施態様では、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤは配列番号：１から４から選択されるアミノ酸配列を含む。
【００２６】
ここに記載の方法の何れかにおいて、本方法はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子を投与することを含みうる。幾つかの実施態様では、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子は、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤと融合パートナーを含み、融合パートナーはＦｃである。幾つかの実施態様では、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子は、配列番号：５及び配列番号：６から選択される配列を含む。
【００２７】
一実施態様では、本発明は、対象におけるがんの治療のための、治療有効量のＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子の使用を提供し、ここで、前記がんはＶＥＧＦレベルと比較してより高いＦＧＦ２レベルを有し、ＶＥＧＦレベルと比較してより高いＦＧＦ２レベルが、線維芽細胞増殖因子受容体１（ＦＧＦＲ１）細胞外ドメイン（ＥＣＤ）又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子に対するがんによる治療反応性の指標である。
【００２８】
他の実施態様では、本発明は、対象におけるがんの治療のための、治療有効量の線維芽細胞増殖因子受容体１（ＦＧＦＲ１）細胞外ドメイン（ＥＣＤ）又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子の使用を提供し、ここで、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子の投与前に、がんの細胞の少なくとも一部がＶＥＧＦレベルと比較してより高いレベルのＦＧＦ２を有していると判定されており、ＶＥＧＦレベルと比較してより高いＦＧＦ２レベルが、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子に対するがんによる治療反応性の指標である。
【００２９】
他の実施態様では、本発明は、対象におけるがんの治療のための医薬の製造における線維芽細胞増殖因子受容体１（ＦＧＦＲ１）細胞外ドメイン（ＥＣＤ）又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子の使用を提供し、前記がんはＶＥＧＦレベルと比較してより高いＦＧＦ２レベルを有し、ＶＥＧＦレベルと比較してより高いＦＧＦ２レベルが、線維芽細胞増殖因子受容体１（ＦＧＦＲ１）細胞外ドメイン（ＥＣＤ）又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子に対するがんによる治療反応性の指標である。
【００３０】
他の実施態様では、本発明は、対象におけるがんの治療のための医薬の製造における線維芽細胞増殖因子受容体１（ＦＧＦＲ１）細胞外ドメイン（ＥＣＤ）又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子の使用を提供し、ここで、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子の投与前に、がんの細胞の少なくとも一部がＶＥＧＦレベルと比較してより高いレベルのＦＧＦ２を有していると判定されており、ＶＥＧＦレベルと比較してより高いＦＧＦ２レベルが、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子に対するがんによる治療反応性の指標である。
【００３１】
一実施態様では、本発明は、対象におけるがんの治療のための、治療有効量のＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子と治療有効量の少なくとも１種の抗血管新生剤の使用を提供し、ここで、前記がんはＶＥＧＦレベルと比較してより低いＦＧＦ２レベルを有し、ＶＥＧＦレベルと比較してより低いＦＧＦ２レベルが、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子と少なくとも１種の抗血管新生剤に対するがんによる治療反応性の指標である。
【００３２】
他の実施態様では、本発明は、対象におけるがんの治療のための、治療有効量の線維芽細胞増殖因子受容体１（ＦＧＦＲ１）細胞外ドメイン（ＥＣＤ）又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子と少なくとも１種の抗血管新生剤の使用を提供し、ここで、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子と少なくとも１種の抗血管新生剤の投与前に、がんの細胞の少なくとも一部がＶＥＧＦレベルと比較してより低いＦＧＦ２レベルを有すると判定されており、がんにおけるＶＥＧＦレベルと比較してより低いＦＧＦ２レベルが、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子と少なくとも１種の抗血管新生剤に対するがんによる治療反応性の指標である。
【００３３】
他の実施態様では、本発明は、対象におけるがんの治療のための医薬の製造における線維芽細胞増殖因子受容体１（ＦＧＦＲ１）細胞外ドメイン（ＥＣＤ）又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子と抗血管新生剤の使用を提供し、ここで、前記がんはＶＥＧＦレベルと比較してより低いＦＧＦ２レベルを有し、ＶＥＧＦレベルと比較してより低いＦＧＦ２レベルが、線維芽細胞増殖因子受容体１（ＦＧＦＲ１）細胞外ドメイン（ＥＣＤ）又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子と抗血管新生剤に対するがんによる治療反応性の指標である。
【００３４】
他の実施態様では、本発明は、対象におけるがんの治療のための医薬の製造における線維芽細胞増殖因子受容体１（ＦＧＦＲ１）細胞外ドメイン（ＥＣＤ）又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子と抗血管新生剤の使用を提供し、ここで、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子と抗血管新生剤の投与前に、がんの細胞の少なくとも一部がＶＥＧＦレベルと比較してより低いＦＧＦ２レベルを有すると判定されており、がんにおけるＶＥＧＦレベルと比較してより低いＦＧＦ２レベルが、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子と抗血管新生剤に対するがんによる治療反応性の指標である。
【００３５】
本発明の一実施態様では、固形がんにおける血管密度を減少させる方法における使用のためのＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子が提供される。この実施態様の一側面では、前記固形がんはＶＥＧＦレベルと比較してより高いＦＧＦ２レベルを有している。
【００３６】
本発明の一実施態様では、固形がんにおける血管密度を減少させる方法において使用される医薬の製造におけるＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子の使用が提供される。この実施態様の一側面では、前記固形がんはＶＥＧＦレベルと比較してより高いＦＧＦ２レベルを有している。
【００３７】
本発明の更なる実施態様では、中皮腫の治療に使用するためのＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子と、パクリタキセル、カルボプラチン、ドセタキセル、ペメトレキセド及びシスプラチンから選択される少なくとも１種の治療剤が提供される。この実施態様の一側面では、前記治療はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子、パクリタキセル及びカルボプラチンの使用を含む。この実施態様の一側面では、前記治療はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子及びドセタキセルの使用を含む。この実施態様の一側面では、前記治療はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子、ペメトレキセド、及びシスプラチンの使用を含む。これらの側面の何れにおいても、ＦＧＦＲ１又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子と少なくとも１種の治療剤の投与は前記中皮腫において血管密度を減少させる。
【００３８】
本発明の更なる実施態様では、中皮腫の治療に使用するための医薬の製造における、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子と、パクリタキセル、カルボプラチン、ドセタキセル、ペムトレキセド及びシスプラチンから選択される少なくとも１種の治療剤の使用が提供される。この実施態様の一側面では、前記医薬はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子、パクリタキセル及びカルボプラチンを含む。この実施態様の一側面では、前記医薬はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子とドセタキセルを含む。この実施態様の一側面では、前記医薬はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子、ペメトレキセド、及びシスプラチンを含む。これらの側面の何れにおいても、前記医薬の投与は前記中皮腫において血管密度を減少させる。
【００３９】
これらの実施態様の何れの側面においても、ＦＧＦ２レベル又はＶＥＧＦレベルはｍＲＮＡレベルでありうる。この側面の一特徴では、ｍＲＮＡレベルは定量的ＲＴ−ＰＣＲにより決定されうる。
【００４０】
更に、これらの実施態様の何れの側面においても、ＦＧＦ２レベル又はＶＥＧＦレベルはタンパク質レベルでありうる。この側面の一特徴では、タンパク質レベルは免疫組織化学によって決定されうる。
【００４１】
これらの実施態様の何れかの側面において、抗血管新生剤はＶＥＧＦアンタゴニストである。この側面の更なる特徴では、ＶＥＧＦアンタゴニストはパゾパニブ、ベバシズマブ、アキシチニブ、アフリベルセプト、ソラフェニブ、又はスニチニブから選択される。
【００４２】
これらの実施態様の何れかの側面において、がんは、腎がん（腎細胞がん等）、肝がん（肝細胞がん等）、肺がん、結腸がん、肝がん、乳がん、胃がん、卵巣がん、子宮内膜がん、食道がん、頭頸部がん、神経膠芽腫、及び前立腺がんから選択される。
【００４３】
これらの実施態様の何れかの側面において、がんの治療に使用される組成物又はがんの治療に使用される医薬はＦＧＦＲ１ ＥＣＤを含有する。この側面の一特徴では、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤは配列番号：１から４から選択されるアミノ酸配列を含む。
【００４４】
これらの実施態様の何れかの側面において、がんの治療に使用される組成物又はがんの治療に使用される医薬はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子を含有する。この側面の一特徴では、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子は、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤと融合パートナーを含み、融合パートナーはＦｃである。この側面の更なる一特徴では、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子は、配列番号：５及び配列番号：６から選択される配列を含む。
【００４５】
これら幾つかの実施態様の何れの側面においても、「細胞の少なくとも一部」は、がん試料の細胞の少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、又は少なくとも９０％である。
【００４６】
幾つかの実施態様では、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子は、１．４２ｍＬ／ｍｇ*ｃｍの比吸光度を使用して計算して、約０．５ｍｇ／ｋｇ体重から約３０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の量、例えば、約８から約１６ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の量である。表１を参照のこと。幾つかの実施態様では、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子の治療有効量は、約８ｍｇ／ｋｇ体重の用量である。幾つかの実施態様では、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子の治療有効量は、約１６ｍｇ／ｋｇ体重の用量である。幾つかの実施態様では、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子の治療有効量は、約２０ｍｇ／ｋｇ体重の用量である。幾つかの実施態様では、投与量は、週２回、毎週、隔週、毎週と隔週の間の頻度、３週毎、４週毎、又は毎月、投与されうる。
【００４７】
所定の実施態様では、がんは、前立腺がん、乳がん、結腸直腸がん、胃がん、肺がん、脳がん、卵巣がん、子宮内膜がん、食道がん、頭頸部がん、咽頭がん、肝がん、腎がん（renal cancer（kidney cancer））、神経膠芽腫、又は膵がんである。所定の実施態様では、がんは乳がん、食道がん、腎がん、頭頸部がん、又は肺がんである。 所定の実施態様では、がんは肺がんである。幾つかの実施態様では、肺がんは非小細胞肺がんである。幾つかの実施態様では、肺がんは小細胞肺がんである。幾つかの実施態様では、肺がんは扁平上皮がんである。幾つかの実施態様では、がんは頭頸部がんである。幾つかの実施態様では、頭頸部がんは頭頸部の扁平上皮がんである。幾つかの実施態様では、がんは腎がん（腎細胞がん等）、肝がん（肝細胞がん等）、及び中皮腫から選択される。幾つかの実施態様では、がんは腎細胞がんである。幾つかの実施態様では、がんは肝細胞がんである。幾つかの実施態様では、がんは中皮腫である。
【００４８】
ここに記載される何れの実施態様又はそれらの何れの組合せも、ここに記載される発明の任意のあらゆる方法に適用される。
【図面の簡単な説明】
【００４９】
【図１】図１Ａ−Ｃは、実施例２に記載される、ＡＣＨＮ細胞を移植し、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ（「ＦＰ−１０３９」）、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ（「ＦＰ−１０３９」）及びパゾパニブ、又はアルブミンで処置したマウスにおける様々な時点での平均腫瘍体積を示す。
【図２】図２Ａ−Ｃは、実施例３に記載される、７８６−０細胞を移植し、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ（「ＦＰ−１０３９」）、パゾパニブ、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ（「ＦＰ−１０３９」）及びパゾパニブ、又はアルブミンで処置したマウスにおける様々な時点での平均腫瘍体積を示す。
【図３】図３Ａ−Ｃは、実施例４に記載される、Ａ４９８細胞を移植し、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ（「ＦＰ−１０３９」）、パゾパニブ、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ（「ＦＰ−１０３９」）及びパゾパニブ、又はアルブミンで処置したマウスにおける様々な時点での平均腫瘍体積を示す。
【図４】図４Ａ−Ｂは、実施例５に記載される、Ｃａｋｉ−２細胞を移植し、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ（「ＦＰ−１０３９」）、パゾパニブ、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ（「ＦＰ−１０３９」）及びパゾパニブ、又はアルブミンで処置したマウスにおける様々な時点での平均腫瘍体積を示す。
【図５】図５Ａ−Ｃは、実施例６に記載される、ＳＫ−Ｈｅｐ−１細胞を移植し、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ（「ＦＰ−１０３９」）、パゾパニブ、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ（「ＦＰ−１０３９」）及びパゾパニブ、又はアルブミンで処置したマウスにおける様々な時点での平均腫瘍体積を示す。
【図６】図６Ａ−Ｃは、実施例７に記載される、（Ａ）ＨｅｐＧ２細胞、（Ｂ）Ｈｕｈ７細胞、及び（Ｃ）Ｈｅｐ３Ｂ細胞を移植し、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ（「ＦＰ−１０３９」）又はアルブミン又はビヒクルで処置したマウスにおける様々な時点での平均腫瘍体積を示す。
【図７Ａ−Ｂ】図７Ａ−Ｂは、実施例８に記載される、ＳＫ−Ｈｅｐ−１細胞を移植し、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ（「ＦＰ−１０３９」）、ソラフェニブ、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ（「ＦＰ−１０３９」）及びソラフェニブ、又はアルブミンで処置したマウスにおける（Ａ）様々な時点での平均腫瘍体積及び（Ｂ）最終腫瘍体積を示す。
【図７Ｃ】図７Ｃは、実施例８に記載される、ＳＫ−Ｈｅｐ−１細胞を移植し、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ（「ＦＰ−１０３９」）、ソラフェニブ、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ（「ＦＰ−１０３９」）及びソラフェニブ、又はアルブミンで処置したマウスにおける最終腫瘍重量を示す。
【図８】図８Ａ−Ｂは、実施例９に記載される、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ応答者及び非応答者の異種移植片における、（Ａ）ＦＧＦ２ ｍＲＮＡ（ＧＵＳＢに対して正規化）及び（Ｂ）ＦＧＦ２タンパク質の発現（総タンパク質量に対して正規化）を示す。
【図９】図９Ａ−Ｂは、実施例９に記載される、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ応答者及び非応答者の異種移植片における、（Ａ）ＶＥＧＦＡ ｍＲＮＡ（ＧＵＳＢに対して正規化）及び（Ｂ）ＶＥＧＦＡタンパク質の発現（総タンパク質量に対して正規化）を示す。
【図１０】実施例１１に記載される、ＮＣＩ−Ｈ２２６細胞を移植し、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃで処置したマウスにおける、様々な時点での平均腫瘍体積を示す。
【図１１】実施例１１に記載される、ＭＳＴＯ−２１１Ｈ細胞を移植し、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃで処置したマウスにおける、免疫組織化学によって決定された血管面積を示す。
【図１２】図１２Ａ−Ｃは、実施例１１に記載される、ＮＣＩ−Ｈ２２６細胞を移植し、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃで処置したマウスにおける、免疫組織化学によって決定された血管面積を示す。
【図１３】図１３Ａ−Ｂは、実施例１２に記載される、ＨＬＦ細胞を移植し、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ（「ＦＰ−１０３９」）、ソラフェニブ、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ（「ＦＰ−１０３９」）及びソラフェニブ、又はアルブミンで処置したマウスにおける（Ａ）様々な時点での平均腫瘍体積、及び（Ｂ）最終腫瘍体積を示す。
【図１４】図１４Ａ−Ｂは、実施例４に記載される、（Ａ）８９日目のパゾパニブ処置Ａ４９８異種移植モデルマウスにおける腫瘍サイズに対する、Ａ４９８細胞を移植し、８９日目に始めてパゾパニブ単独又はパゾパニブ及びＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ（「ＦＰ−１０３９」）で処置したマウスにおける腫瘍サイズのパーセント；及び（Ｂ）１１０日目における腫瘍サイズのパーセントを示す。
【発明を実施するための形態】
【００５０】
詳細な説明
ここで使用される項目の見出しは、構成上の目的のために過ぎず、記載される主題を限定すると解釈されるべきではない。
【００５１】
定義
別途定義されない限り、本発明に関連して使用される科学用語及び技術用語は、当業者によって一般的に理解される意味を有するものとする。更に、文脈上別途要求されない限り、単数形の用語は複数形を含み、複数形の用語は単数形を含むものとする。
【００５２】
組換えＤＮＡ、オリゴヌクレオチド合成、組織培養及び形質転換（例えば、電気穿孔、リポフェクション）、酵素反応、並びに精製技術に関連して使用される所定の技術は、当該技術分野において既知である。多くのそのような技術及び手順は、とりわけ、例えば、 Sambrook等 Molecular Cloning: A Laboratory Manual (第2版, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1989)）に記載されている。更に、化学合成、化学分析、医薬品、処方、及び送達、並びに患者の治療に関する所定の技術も当該技術分野において既知である。
【００５３】
この出願において、別途記載のない限り、「又は」の使用は「及び／又は」を意味する。複数項従属請求項の文脈において、「又は」の使用は、一項を越える先行する独立又は従属請求項を選択的にのみ引用する。また、「要素」又は「成分」等の用語は、特に別途指定のない限り、一ユニットを含む要素及び成分と、一を越えるサブユニットを含む要素及び成分の双方を包含する。
【００５４】
ここで使用される場合、全ての数字は、近似値であり、測定誤差及び有効数字の丸めを考慮して変動しうる。所定の測定された量の前の「約」の使用は、試料の不純物、測定誤差、人為的ミス、及び統計的変動、並びに有効数字の丸めによる変動を含む。
【００５５】
本開示に従って用いられる場合、別途指定のない限り、次の用語は次の意味を有すると理解されなければならない。
【００５６】
「核酸分子」及び「ポリヌクレオチド」という用語は、互換的に使用できて、ヌクレオチドのポリマーを指す。そのようなヌクレオチドのポリマーは、天然及び／又は非天然のヌクレオチドを含んでもよく、限定されないが、ＤＮＡ、ＲＮＡ、及びＰＮＡを含む。「核酸配列」は、核酸分子又はポリヌクレオチドを含むヌクレオチドの直鎖配列を指す。
【００５７】
「ポリペプチド」及び「タンパク質」という用語は互換的に使用されて、アミノ酸残基のポリマーを指し、最小長に限定されない。そのようなアミノ酸残基のポリマーは、天然又は非天然のアミノ酸残基を含んでもよく、限定されないが、ペプチド、オリゴペプチド、アミノ酸残基の二量体、三量体、及び多量体を含む。完全長タンパク質及びその断片の双方が該定義に包含される。該用語はまたポリペプチドの発現後修飾、例えば、グリコシル化、シアリル化、アセチル化、リン酸化等も含む。更に、本発明の目的のために、「ポリペプチド」は、タンパク質が所望の活性を維持する限り、天然配列に対する修飾、例えば、欠失、付加、及び置換（通常、本質的に保存的である）を含むタンパク質を指す。これらの修飾は、部位特異的変異誘発のように計画的であってもよく、又はタンパク質を産生する宿主の変異もしくはＰＣＲ増幅に起因するエラーのように偶発的であってもよい。ポリペプチドが特定のアミノ酸配列「からなる」場合、それは翻訳後修飾、例えば、グリコシル化及びシアリル化等をなおも含みうる。
【００５８】
「ＦＧＦＲ１細胞外ドメイン」（「ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ」）という用語は、完全長ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ断片、及びＦＧＦＲ１ ＥＣＤ変異体を含む。ここで使用される場合、「ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ」という用語は、シグナルペプチドを伴うか又は伴わない、細胞内及び膜貫通ドメインを欠くＦＧＦＲ１ポリペプチドを指す。幾つかの実施態様では、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤは、配列番号：１及び２から選択されるアミノ酸配列を有するヒト完全長ＦＧＦＲ１ ＥＣＤである。ここで使用される「完全長ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ」という用語は、細胞外ドメインの最後のアミノ酸まで延びるＦＧＦＲ１ ＥＣＤを意味し、Ｎ末端シグナルペプチドを含んでも又は含まなくてもよい。ここで定義される場合、完全長ＦＧＦＲ１ ＥＣＤの最後のアミノ酸は３５３位にある。従って、ヒト完全長ＦＧＦＲ１ ＥＣＤは、配列番号：２（成熟型）又は配列番号：１（シグナルペプチドを伴う）に対応するアミノ酸配列からなりうる。ここで使用される場合、「ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ断片」という用語は、完全長ＥＣＤのＮ及び／又はＣ末端から一又は複数の残基が欠失された、ＦＧＦ−２に結合する能力を保持するＦＧＦＲ１ ＥＣＤを指す。ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ断片は、Ｎ末端シグナルペプチドを含んでも又は含まなくてもよい。幾つかの実施態様では、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ断片は、配列番号：４（成熟型）又は配列番号：３（シグナルペプチドを伴う）に対応するアミノ酸配列を有するヒトＦＧＦＲ１ ＥＣＤ断片である。
【００５９】
ここで使用される場合、「ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ変異体」という用語は、アミノ酸付加、欠失、及び置換を含み、ＦＧＦ−２に結合可能なままであるＦＧＦＲ１ ＥＣＤを指す。そのような変異体は、親ＦＧＦＲ１ ＥＣＤと少なくとも９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一でありうる。２つのポリペプチドの％同一性は、類似性を決定するためのデフォルト設定でＢｅｓｔｆｉｔプログラムを使用して、２つのポリペプチドのアミノ酸配列を比較することによって決定される類似度スコアによって測定することができる。Ｂｅｓｔｆｉｔは、Ｓｍｉｔｈ及びＷａｔｅｒｍａｎのＡｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍａｔｈｅｍａｔｉｃｓ ２：４８２−４８９（１９８１）の局所相同性アルゴリズムを使用して、２つの配列間の最良の類似セグメントを見つけ出す。幾つかの実施態様では、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ変異体は、配列番号：４の配列と少なくとも９５％同一である。
【００６０】
ＦＧＦＲ１ ＥＣＤポリペプチドの参照アミノ酸配列と、少なくとも、例えば９５％同一であるアミノ酸配列を有するポリペプチドは、参照ポリペプチドの各１００個のアミノ酸当たり最高５つのアミノ酸変化を含みうることを除いて、ポリペプチドのアミノ酸配列が参照配列と同一であるものである。換言すると、参照アミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を有するポリペプチドを得るためには、参照配列中のアミノ酸残基の５％までが欠失していても、もしくは別のアミノ酸で置換されてもよいか、又は参照配列中の全アミノ酸残基の５％までの数のアミノ酸が参照配列に挿入されてもよい。これらの参照配列の変化は、参照アミノ酸配列のＮもしくはＣ末端の位置、あるいは参照配列中の残基間に個々に散在するか、又は参照配列中の一又は複数の近接グループとして散在する、これらの末端の位置の間のどこでも起こってもよい。
【００６１】
実際、何れか特定のポリペプチドが、例えば、配列表に記載される核酸配列によってコードされたアミノ酸配列又はポリペプチド配列と、少なくとも７０％、８０％、９０％、又は９５％同一であるかどうかは、Ｂｅｓｔｆｉｔプログラム等の既知のコンピュータプログラムを使用して常套的に決定することができる。特定の配列が、本発明による参照配列と例えば９５％同一であるかどうかを決定するためにＢｅｓｔｆｉｔ又は他の配列アライメントプログラムを使用する場合、当然、参照アミノ酸配列の全長にわたって同一性のパーセンテージが算出され、参照配列中のアミノ酸残基の合計数の５％までの相同性におけるギャップが許容されるようにパラメータが設定される。
【００６２】
ここで使用される場合、「ｈＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３５３」及び「ｈＦＧＦＲ１．３５３」という用語は、配列番号：１（シグナルペプチドを伴う）又は配列番号：２（シグナルペプチドを伴わない、成熟型）に対応する完全長ヒトＦＧＦＲ１ ＥＣＤを指すために互換的に使用されうる。
【００６３】
ここで使用される場合、「ｈＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９」及び「ｈＦＧＦＲ１．３３９」という用語は、配列番号：３（シグナルペプチドを伴う）又は配列番号：４（シグナルペプチドを伴わない、成熟型）に対応するヒトＦＧＦＲ１ ＥＣＤを指すために互換的に使用されうる。
【００６４】
更なるｈＦＧＦＲ１ ＥＣＤは、例えばその全体があらゆる目的のためにここに出典明示により援用される米国特許第７６７８８９０号に記載される。
【００６５】
「ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子」という用語は、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤと、一又は複数の「融合パートナー」とを含む分子を指す。幾つかの実施態様では、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤと融合パートナーとは共有結合（「融合」）している。融合パートナーもポリペプチド（「融合パートナーポリペプチド」）である場合、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ及び融合パートナーポリペプチドは、連続するアミノ酸配列の一部であってもよく、融合パートナーポリペプチドは、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤのＮ末端又はＣ末端の何れかに結合していてもよい。そのような場合、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ及び融合パートナーポリペプチドは、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ及び融合パートナーポリペプチドの双方をコードするコード配列から単一ポリペプチドとして翻訳されうる（「ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合タンパク質」）。幾つかの実施態様では、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤと融合パートナーとは、例えば、ペプチド結合以外の化学結合等の他の手段によって共有結合される。ポリペプチドを他の分子（例えば、融合パートナー）に共有結合させる多くの既知の方法が使用されうる。他の実施態様では、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤと融合パートナーとは、少なくとも一つのアミノ酸又は化学部分から構成される「リンカー」を介して融合されうる。
【００６６】
幾つかの実施態様では、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤポリペプチドと融合パートナーとは、非共有的に連結される。幾つかのそのような実施態様では、それらは、例えば、結合対を使用して連結されうる。例示的な結合対は、限定されないが、ビオチン及びアビジン又はストレプトアビジン、抗体及びその抗原等を含む。
【００６７】
例示的な融合パートナーは、限定されないが、免疫グロブリンＦｃドメイン、アルブミン、及びポリエチレングリコールを含む。幾つかの例示的なＦｃドメインのアミノ酸配列を配列番号：８から１０に示す。幾つかの実施態様では、Ｆｃと融合したＦＧＦＲ１ ＥＣＤは、「ｈＦＧＦＲ１ ＥＣＤ−Ｆｃ」と称される。幾つかの実施態様では、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ１ Ｆｃ、ＩｇＧ２ Ｆｃ、ＩｇＧ３ Ｆｃ、及びＩｇＧ４ Ｆｃから選択される。
【００６８】
ここで使用される場合、「ｈＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ」、「ｈＦＧＦＲ１．３３９−Ｆｃ」、及び「ＦＰ−１０３９」という用語は、配列番号：６（シグナルペプチドを伴わない、成熟型）及び配列番号：５（シグナルペプチドを伴う）から選択されるアミノ酸配列を指すために互換的に使用されうる。ｈＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃで治療されうる非限定的な例示的がんは、限定されないが、肺がん、結腸がん、乳がん、胃がん、頭頸部がん、前立腺がん、子宮内膜がん、肉腫、小細胞肺がん、卵巣がん、カポジ肉腫、ホジキン病、白血病、非ホジキンリンパ腫、神経芽細胞腫（脳がん）、横紋筋肉腫、ウイルムス腫瘍、急性リンパ芽球性白血病、急性リンパ芽球性白血病、膀胱がん、精巣がん、リンパ腫、胚細胞性腫瘍、結腸と直腸のがん、消化管がん、消化管間質腫瘍、甲状腺がん、多発性骨髄腫、膵がん、中皮腫、悪性胸膜中皮腫、血液／リンパ腺がん、悪性腹膜中皮腫、食道がん、腎細胞がん、多形神経膠芽腫、及び肝がんを含む。
【００６９】
「シグナルペプチド」という用語は、哺乳動物細胞からのポリペプチドの分泌を促進する、ポリペプチドのＮ末端に位置するアミノ酸残基の配列を指す。シグナルペプチドは、哺乳動物細胞からポリペプチドを排出する際に切断され得、成熟タンパク質を形成する。シグナルペプチドは、天然又は合成であってもよく、それらが付着するタンパク質に対して異種又は相同であってもよい。例示的なシグナルペプチドは、限定されないが、ＦＧＦＲ１シグナルペプチド、例えば、配列番号：７のアミノ酸配列等を含む。例示的なシグナルペプチドはまた異種タンパク質由来のシグナルペプチドも含む。「シグナル配列」は、シグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を指す。幾つかの実施態様では、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤはシグナルペプチドを欠く。幾つかの実施態様では、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤは、天然ＦＧＦＲ１シグナルペプチド又は異種シグナルペプチドでありうる少なくとも一つのシグナルペプチドを含む。
【００７０】
「ベクター」という用語は、宿主細胞中で増殖されうる一又は複数のクローン化ポリヌクレオチドを含むように操作されうるポリヌクレオチドを記述するために使用される。ベクターは、次の要素の一又は複数を含みうる：複製起点、対象とするポリペプチドの発現を調節する一又は複数の制御配列（例えば、プロモーター及び／又はエンハンサー等）、及び／又は一又は複数の選択可能なマーカー遺伝子（例えば、抗生物質耐性遺伝子、及び比色分析法で使用されうる遺伝子、例えばβ−ガラクトシダーゼ）。「発現ベクター」という用語は、宿主細胞において対象とするポリペプチドを発現させるために使用されるベクターを指す。
【００７１】
「宿主細胞」は、ベクター又は単離ポリヌクレオチドのレシピエントとなり得るか、又はレシピエントとなった細胞を指す。宿主細胞は、原核細胞又は真核細胞でありうる。例示的な真核細胞は、哺乳動物細胞、例えば、霊長類又は非霊長類動物細胞；真菌細胞；植物細胞；及び昆虫細胞等を含む。例示的な哺乳動物細胞は、限定されないが、２９３及びＣＨＯ細胞、並びにそれらの誘導体、例えば、それぞれ２９３−６Ｅ及びＤＧ４４を含む。
【００７２】
ここで使用される「単離された」という用語は、天然に典型的に見出される成分の少なくとも一部から分離されている分子を指す。例えば、それが産生された細胞の成分の少なくとも一部から分離されている場合、ポリペプチドは「単離されている」と称される。発現後に細胞によってポリペプチドが分泌される場合、それを産生した細胞からポリペプチドを含む上清を物理的に分離することは、ポリペプチドの「単離」であると考えられる。同様に、ポリヌクレオチドが、天然に典型的に見出される、より大きなポリヌクレオチド（例えば、ＤＮＡポリヌクレオチドの場合、ゲノムＤＮＡ又はミトコンドリアＤＮＡ）の一部ではない場合、又はそれが産生された細胞の成分の少なくとも一部から分離される場合、例えば、ＲＮＡポリヌクレオチドの場合、ポリヌクレオチドは、「単離された」と称される。よって、宿主細胞中のベクターに含まれるＤＮＡポリヌクレオチドは、そのポリヌクレオチドが天然においてそのベクター中に見出されない限り、「単離された」と称されうる。
【００７３】
「抗悪性腫瘍組成物」という用語は、少なくとも一種の活性な治療剤、例えば「抗がん剤」を含む、がんの治療に有用な組成物を指す。治療剤（抗がん剤）の例は、限定されないが、例えば、化学療法剤、増殖抑制剤、細胞傷害性薬剤、放射線療法に使用される薬剤、抗血管新生剤、アポトーシス剤、抗チューブリン剤、及びがんを治療するための他の薬剤、例えば、抗ＶＥＧＦ抗体（例えば、ベバシズマブ、ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標））、抗ＨＥＲ−２抗体（例えば、トラスツズマブ、ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））、抗ＣＤ２０抗体（例えば、リツキシマブ、ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標））、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）アンタゴニスト（例えば、チロシンキナーゼ阻害剤）、ＨＥＲ１／ＥＧＦＲ阻害剤（例えば、エルロチニブ、ＴＡＲＣＥＶＡ（登録商標））、血小板由来増殖因子阻害剤（例えば、ＧＬＥＥＶＥＣ（登録商標）、イマチニブメシレート））、ＣＯＸ−２阻害剤（例えば、セレコキシブ）、インターフェロン、サイトカイン、次の標的ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、ＥｒｂＢ４、ＰＤＧＦＲ−β、ＢｌｙＳ、ＡＰＲＩＬ、ＢＣＭＡ又はＶＥＧＦ受容体、ＴＲＡＩＬ／Ａｐｏ２の一又は複数に結合するアンタゴニスト（例えば、中和抗体）、並びに他の生理活性及び有機化学薬剤等を含む。これらの組合せもまた本発明に含まれる。
【００７４】
「化学療法剤」は、がんの治療に有用な化学化合物を指す。化学療法剤の例は、アルキル化剤、例えば、チオテパ及びシクロスホスファミド（ＣＹＴＯＸＡＮ（登録商標））；スルホン酸アルキル、例えば、ブスルファン、インプロスルファン及びピポスルファン；アジリジン、例えば、ベンゾドーパ、カルボコン、メツレドーパ、及びウレドーパ；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホラミド及びトリメチロメラミンを含むエチレンイミン並びにメチルアメラミン（methylamelamines）；アセトゲニン（特に、ブラタシン及びブラタシノン）；Δ−９−テトラヒドロカンナビノール（ドロナビノール、ＭＡＲＩＮＯＬ（登録商標））；βラパコン；ラパコール；コルヒチン；ベツリン酸；カンプトテシン（合成アナログトポテカン（ＨＹＣＡＭＴＩＮ（登録商標））、ＣＰＴ−１１（イリノテカン、ＣＡＭＰＴＯＳＡＲ（登録商標））、アセチルカンプトテシン、スコポレクチン、及び９−アミノカンプトテシン）；ブリオスタチン；カリスタチン；ＣＣ−１０６５（そのアドゼレシン、カルゼルシン及びビセレシン合成アナログを含む）；ポドフィロトキシン；ポドフィリン酸；テニポシド；クリプトフィシン（特に、クリプトフィシン１及びクリプトフィシン８）；ドラスタチン；デュオカルマイシン（合成アナログのＫＷ−２１８９及びＣＢ１−ＴＭ１を含む）；エリュテロビン；パンクラチスタチン；サルコジクチイン；スポンギスタチン；ナイトロジェンマスタード、例えば、クロランブシル、クロルナファジン、クロロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩、メルファラン、ノベンビチン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタード；ニトロソウレア、例えば、カルムスチン、クロロゾトシン、ホテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、及びラニムスチン；抗生物質、例えば、エンジイン抗生物質（例えば、カリケアマイシン、特に、カリケアマイシンγ１Ｉ及びカリケアマイシンωＩ１（例えば、Nicolaou等, Angew. Chem Intl. Ed. Engl., 33: 183-186 (1994)を参照）；ＣＤＰ３２３、経口α−４インテグリン阻害剤；ダイネマイシンＡを含むダイネマイシン；エスペラミシン；並びにネオカルジノスタチン発色団及び関連する色素タンパク質エンジイン抗生物質発色団）、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、オースラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン、カルミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、ドキソルビシン（ＡＤＲＩＡＭＹＣＩＮ（登録商標）、モルホリノ−ドキソルビシン、シアノモルホリノ−ドキソルビシン、２−ピロリノ−ドキソルビシン、ドキソルビシンＨＣｌリポソーム注射剤（ＤＯＸＩＬ（登録商標））、リポソームドキソルビシンＴＬＣ Ｄ−９９（ＭＹＯＣＥＴ（登録商標）、ペグ化リポソームドキソルビシン（ＣＡＥＬＹＸ（登録商標））、及びデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシンＣ等のマイトマイシン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポルフィロマイシン、ピューロマイシン、クエラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン；抗代謝物、例えば、メトトレキセート、ゲムシタビン（ＧＥＭＺＡＲ（登録商標））、ペメトレキセド（ＡＬＩＭＴＡ（登録商標））；テガフール（ＵＦＴＯＲＡＬ（登録商標））、カペシタビン（ＸＥＬＯＤＡ（登録商標））、エポチロン、及び５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）；葉酸アナログ、例えば、デノプテリン、メトトレキセート、プテロプテリン、トリメトレキセート；プリンアナログ、例えば、フルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン；ピリミジンアナログ、例えば、アンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン；アンドロゲン、例えば、カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン；抗副腎物質、例えば、アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタン；葉酸補充薬、例えば、フォリン酸；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン；ベストラブシル；ビサントレン；エダトラキセート；デフォファミン；デメコルシン；ジアジコン；エルフォルニチン；エリプチニウム酢酸塩；エポチロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダミン；メイタンシノイド、例えば、メイタンシン及びアンサマイトシン；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダモール；ニトラエリン；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ロソキサントロン；２−エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ（登録商標）多糖複合体（JHS Natural Products, Eugene, OR）；ラゾキサン；リゾキシン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジコン；２，２'，２'−トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（特に、Ｔ−２毒素、ベラクリンＡ、ロリジンＡ及びアングイジン）；ウレタン；ビンデシン（ＥＬＤＩＳＩＮＥ（登録商標）、ＦＩＬＤＥＳＩＮ（登録商標））；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン；アラビノシド（「Ａｒａ−Ｃ」）；チオテパ；タキソイド、例えば、パクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（登録商標））、パクリタキセルのアルブミン操作ナノ粒子製剤（ＡＢＲＡＸＡＮＥTM）、及びドセタキセル（例えば、ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標））；クロランブシル；６−チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキセート；白金剤、例えば、シスプラチン、オキサリプラチン（例えば、ＥＬＯＸＡＴＩＮ（登録商標））、及びカルボプラチン；ビンブラスチン（ＶＥＬＢＡＮ（登録商標））、ビンクリスチン（ＯＮＣＯＶＩＮ（登録商標））、ビンデシン（ＥＬＤＩＳＩＮＥ（登録商標）、ＦＩＬＤＥＳＩＮ（登録商標））、及びビノレルビン（ＮＡＶＥＬＢＩＮＥ（登録商標））を含む、チューブリン重合による微小管形成を防止するビンカ；エトポシド（ＶＰ−１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ロイコボリン；ノバントロン；エダトレキセート；ダウノマイシン；アミノプテリン；イバンドロネート；トポイソメラーゼ阻害剤のＲＦＳ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；ベキサロテン（ＴＡＲＧＲＥＴＩＮ（登録商標））を含むレチノイド、例えばレチノイン酸；ビスホスホネート、例えば、クロドロネート（例えば、ＢＯＮＥＦＯＳ（登録商標）又はＯＳＴＡＣ（登録商標））、エチドロネート（ＤＩＤＲＯＣＡＬ（登録商標））、ＮＥ−５８０９５、ゾレドロン酸／ゾレドロネート（ＺＯＭＥＴＡ（登録商標））、アレンドロネート（ＦＯＳＡＭＡＸ（登録商標））、パミドロネート（ＡＲＥＤＩＡ（登録商標））、チルドロネート（ＳＫＥＬＩＤ（登録商標））、又はリセドロネート（ＡＣＴＯＮＥＬ（登録商標））；トロキサシタビン（１，３−ジオキソランヌクレオシドシトシンアナログ）；アンチセンスオリゴヌクレオチド、特に、異常な細胞増殖に関与するシグナル伝達経路における遺伝子の発現を阻害するもの、例えば、ＰＫＣ−α、Ｒａｆ、Ｈ−Ｒａｓ、及び上皮増殖因子受容体（ＥＧＦ−Ｒ）；ワクチン、例えば、ＴＨＥＲＡＴＯＰＥ（登録商標）ワクチン及び遺伝子治療ワクチン、例えばＡＬＬＯＶＥＣＴＩＮ（登録商標）ワクチン、ＬＥＵＶＥＣＴＩＮ（登録商標）ワクチン、及びＶＡＸＩＤ（登録商標）ワクチン；トポイソメラーゼ１阻害剤（例えば、ＬＵＲＴＯＴＥＣＡＮ（登録商標））；ｒｍＲＨ（例えば、ＡＢＡＲＥＬＩＸ（登録商標））；ＢＡＹ４３９００６（ソラフェニブ、ＮＥＸＡＶＡＲ（登録商標）、Ｂａｙｅｒ）；ＳＵ−１１２４８（スニチニブ、ＳＵＴＥＮＴ（登録商標）、Ｐｆｉｚｅｒ）；ペリホシン、ＣＯＸ−２阻害剤（例えば、セレコキシブ又はエトリコキシブ）、プロテオソーム阻害剤（例えば、ＰＳ３４１）；ボルテゾミブ（ＶＥＬＣＡＤＥ（登録商標））；ＣＣＩ−７７９；ティピファニブ（Ｒ１１５７７）；オラフェニブ、ＡＢＴ５１０；Ｂｃｌ−２阻害剤、例えば、オブリメルセンナトリウム（ＧＥＮＡＳＥＮＳＥ（登録商標））；ピクサントロン；ＥＧＦＲ阻害剤（以下の定義を参照）；チロシンキナーゼ阻害剤（以下の定義を参照）；セリン−スレオニンキナーゼ阻害剤、例えば、ラパマイシン（シロリムス、ＲＡＰＡＭＵＮＥ（登録商標））；ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤、例えば、ロナファルニブ（ＳＣＨ６６３６、ＳＡＲＡＳＡＲTM）；及び上記の何れかの薬学的に許容される塩、酸、又は誘導体；並びにＣＨＯＰ（シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、及びプレドニゾロンの併用療法の略称）及びＦＯＬＦＯＸ（５−ＦＵ及びロイコボリンと組合せたオキサリプラチン（ＥＬＯＸＡＴＩＮ（登録商標））を用いた治療レジメンの略称）等の、上記のうちの２つ以上の組合せを含む。
【００７５】
ここで定義される化学療法剤は、がんの増殖を促進する可能性のあるホルモンの影響を、調節し、低下させ、遮断し、又は阻害するように作用する「抗ホルモン剤」又は「内分泌治療薬」を含む。これらは、それら自体がホルモンであってもよく、限定されないが、タモキシフェン（ＮＯＬＶＡＤＥＸ（登録商標））、４−ヒドロキシタモキシフェン、トレミフェン（ＦＡＲＥＳＴＯＮ（登録商標））、イドキシフェン、ドロロキシフェン、ラロキシフェン（ＥＶＩＳＴＡ（登録商標））、トリオキシフェン、ケオキシフェン、及びＳＥＲＭ３等の選択的エストロゲン受容体調節薬（ＳＥＲＭ）を含む、混合アゴニスト／アンタゴニストプロファイルを持つ抗エストロゲン剤；アゴニスト特性を有しない純粋な抗エストロゲン、例えば、フルベストラント（ＦＡＳＬＯＤＥＸ（登録商標））、及びＥＭ８００（このような薬剤は、エストロゲン受容体（ＥＲ）の二量体化を遮断し、ＤＮＡ結合を阻害し、ＥＲ代謝回転を増加させ、かつ／又はＥＲレベルを抑制しうる）；アロマターゼ阻害剤（ホルメスタン及びエキセメスタン（ＡＲＯＭＡＳＩＮ（登録商標））等のステロイドアロマターゼ阻害剤、並びに例えば、アナストロゾール（ＡＲＩＭＩＤＥＸ（登録商標））、レトロゾール（ＦＥＭＡＲＡ（登録商標））及びアミノグルテチミ等の非ステロイド性アロマターゼ阻害剤、並びにボロゾール（ＲＩＶＩＳＯＲ（登録商標））、メゲストロール酢酸塩（ＭＥＧＡＳＥ（登録商標））、ファドロゾール、及び４（５）−イミダゾール等の他のアロマターゼ阻害剤を含む）；リュープロリド（ＬＵＰＲＯＮ（登録商標）及びＥＬＩＧＡＲＤ（登録商標））、ゴセレリン、ブセレリン、及びトリプトレリンを含む、黄体形成ホルモン放出ホルモンアゴニスト；プロゲスチン、例えば、メゲストロール酢酸塩及びメドロキシプロゲステロン酢酸塩、エストロゲン、例えば、ジエチルスチルベストロール及びプレマリン、並びにアンドロゲン／レチノイド、例えば、フルオキシメステロン、全てのトランス−レチノイン酸及びフェンレチニドを含む、性ステロイド；オナプリストン；抗プロゲステロン；エストロゲン受容体ダウンレギュレーター（ＥＲＤ）；抗アンドロゲン、例えば、フルタミド、ニルタミド及びビカルタミド；並びに上記の何れかの薬学的に許容される塩、酸、又は誘導体；並びに上記の２つ以上の組合せを含む。
【００７６】
「血管新生因子又は血管新生剤」は、例えば、血管新生、内皮細胞増殖、血管の安定性、及び／又は脈管形成等を促進する、血管の発生を刺激する増殖因子を指す。例えば、血管新生因子は、限定されないが、例えば、ＶＥＧＦ及びＶＥＧＦファミリーのメンバー（ＶＥＧＦ−Ｂ、ＶＥＧＦ−Ｃ及びＶＥＧＦ−Ｄ）、ＰｌＧＦ、ＰＤＧＦファミリー、線維芽細胞増殖因子ファミリー（ＦＧＦ）、ＴＩＥリガンド（アンジオポエチン）、エフリン、デルタ様リガンド４（ＤＬＬ４）、ｄｅｌ−１、線維芽細胞増殖因子：酸性（ａＦＧＦ）及び塩基性（ｂＦＧＦ）、フォリスタチン、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）／分散因子（ＳＦ）、インターロイキン−８（ＩＬ−８）、レプチン、ミッドカイン、ニューロピリン、胎盤増殖因子、血小板由来内皮細胞増殖因子（ＰＤ−ＥＣＧＦ）、血小板由来増殖因子、特にＰＤＧＦ−ＢＢ又はＰＤＧＦＲ−β、プレイオトロフィン（ＰＴＮ）、プログラニュリン、プロリフェリン、形質転換増殖因子−α（ＴＧＦ−α）、形質転換増殖因子−β（ＴＧＦ−β）、腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）等を含む。また、創傷治癒を加速させる因子、例えば、成長ホルモン、インスリン様増殖因子−Ｉ（ＩＧＦ−Ｉ）、ＶＩＧＦ、上皮増殖因子（ＥＧＦ）、ＣＴＧＦ及びそのファミリーのメンバー、並びにＴＧＦ−α及びＴＧＦ−βも含まれる。例えば、Klagsbrun及びD'Amore (1991) Annu. Rev. Physiol. 53:217-39；Streit及びDetmar (2003) Oncogene 22:3172-3179；Ferrara及びAlitalo (1999) Nature Medicine 5(12):1359-1364；Tonini等 (2003) Oncogene 22:6549-6556（例えば、既知の血管新生因子を列挙する表１）；及び Sato (2003) Int. J. Clin. Oncol. 8:200-206を参照のこと。
【００７７】
「抗血管新生剤」又は「血管新生阻害剤」は、血管新生、脈管形成、又は望ましくない血管透過性を直接的又は間接的の何れかで阻害する、低分子量物質、ポリヌクレオチド（例えば、阻害性ＲＮＡ（ＲＮＡｉ又はｓｉＲＮＡ）を含む）、ポリペプチド、単離されたタンパク質、組換えタンパク質、抗体、又はそれらのコンジュゲートもしくは融合タンパク質を指す。抗血管新生剤は、血管新生因子又はその受容体に結合し、その血管新生活性を遮断する薬剤を含むことが理解されなければならない。例えば、抗血管新生剤は、例えば、上に定義したような血管新生剤に対する抗体又は他のアンタゴニストであり、例えば、ＶＥＧＦに結合する融合タンパク質、例えば、ＺＡＬＴＲＡＰTM（アフリベルセプト）、ＶＥＧＦに対する抗体、例えば、ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標）（ベバシズマブ）、又はＶＥＧＦ受容体（例えば、ＫＤＲ受容体もしくはＦｌｔ−１受容体）に対する抗体、抗ＰＤＧＦＲ阻害剤、例えば、ＧＬＥＥＶＥＣ（登録商標）（メシル酸イマチニブ）、ＶＥＧＦ受容体シグナル伝達を遮断する小分子（例えば、ＰＴＫ７８７／ＺＫ２２８４、ＳＵ６６６８、ＳＵＴＥＮＴ（登録商標）／ＳＵ１１２４８（リンゴ酸スニチニブ）、ＡＭＧ７０６、又は例えば、国際特許出願国際公開第２００４／１１３３０４号に記載されるもの）である。抗血管新生剤はまた天然の血管新生阻害剤、例えば、アンジオスタチン、エンドスタチン等も含む。例えば、 Klagsbrun及びD'Amore (1991) Annu. Rev. Physiol. 53:217-39；Streit及びDetmar (2003) Oncogene 22:3172-3179（例えば、悪性黒色腫の抗血管新生療法剤を列挙する表３）；Ferrara及びAlitalo (1999) Nature Medicine 5(12):1359-1364；Tonini等(2003) Oncogene 22:6549-6556（例えば、既知の抗血管新生因子を列挙する表２）；及びSato (2003) Int. J. Clin. dOncol. 8:200-206（例えば、臨床試験で使用される抗血管新生剤を列挙する表１）を参照のこと。
【００７８】
ここで使用される「ＶＥＧＦ」又は「ＶＥＧＦＡ」という用語は、１６５−アミノ酸ヒト血管内皮細胞増殖因子及び関連する１２１−、１８９−、及び２０６−アミノ酸ヒト血管内皮細胞増殖因子を指し、その天然に生じる対立遺伝子及びそのプロセシング型と共にLeung等 (1989) Science 246:1306、及びHouck等(1991) Mol. Endocrin, 5:1806に記載されている。「ＶＥＧＦ」という用語はまたマウス、ラット又は霊長類等の非ヒト種由来のＶＥＧＦも指す。特定の種に由来するＶＥＧＦは、例えばヒトＶＥＧＦはｈＶＥＧＦ、マウスＶＥＧＦはｍＶＥＧＦ等の用語によって示されることもしばしばある。「ＶＥＧＦ」という用語はまた１６５−アミノ酸のヒト血管内皮細胞増殖因子のアミノ酸８から１０９又は１から１０９を含むポリペプチドの切断型を指すためにも使用される。何れかのそのような形態のＶＥＧＦへの言及は、例えば、「ＶＥＧＦ（８−１０９）」、「ＶＥＧＦ（１−１０９）」、「ＶＥＧＦＡ１０９」、又は「ＶＥＧＦ１６５」によって本出願では特定されうる。「切断型」の天然ＶＥＧＦのアミノ酸位置は、天然ＶＥＧＦ配列において示されるように番号付けされる。例えば、切断型天然ＶＥＧＦのアミノ酸位置１７（メチオニン）は、天然ＶＥＧＦの位置１７（メチオニン）でもある。切断型天然ＶＥＧＦは、ＫＤＲ及びＦｌｔ−１受容体に対して天然ＶＥＧＦに匹敵する結合親和性を有する。
【００７９】
「ＶＥＧＦアンタゴニスト」は、限定されないが、一又は複数のＶＥＧＦ受容体に対するその結合を含む、ＶＥＧＦの活性を中和し、遮断し、阻害し、抑止し、低減し、又は妨害することができる分子を指す。ＶＥＧＦアンタゴニストは、限定されないが、抗ＶＥＧＦ抗体及びその抗原結合断片、ＶＥＧＦに特異的に結合し、それによって一又は複数の受容体に対するその結合を封鎖する受容体分子及び誘導体、抗ＶＥＧＦ受容体抗体、ＶＥＧＦ受容体アンタゴニスト、例えば、ＶＥＧＦＲチロシンキナーゼの小分子阻害剤（例えば、パゾパニブ）、及びＶＥＧＦに結合するイムノアドヘシン、例えば、ＶＥＧＦトラップ（例えば、アフリベルセプト）を含む。ここで使用される「ＶＥＧＦアンタゴニスト」という用語は、特に、ＶＥＧＦに結合してＶＥＧＦの活性を中和し、遮断し、阻害し、抑止し、低減し、又は妨害することができる、抗体、抗体断片、他の結合ポリペプチド、ペプチド、及び非ペプチド小分子を含む分子を含む。従って、「ＶＥＧＦ活性」という用語は、特に、ＶＥＧＦによって媒介されるＶＥＧＦの生物活性を含む。
【００８０】
ここで使用される「ＶＥＧＦトラップ」という用語は、ＶＥＧＦに結合してＶＥＧＦの活性を中和し、遮断し、阻害し、抑止し、低減し、又は妨害することができるタンパク質、例えば、融合分子を意味する。ＶＥＧＦトラップの一例はアフリベルセプトである。
【００８１】
「抗ＶＥＧＦ抗体」又は「ＶＥＧＦに結合する抗体」という用語は、該抗体がＶＥＧＦの標的化において診断及び／又は治療剤として有用であるように十分な親和性と特異性を伴ってＶＥＧＦに結合できる抗体を意味する。抗ＶＥＧＦ中和抗体は、ヌードマウスにおいて様々なヒト腫瘍細胞株の増殖を抑制し（Kim等, Nature 362:841-844 (1993)；Warren等, J. Clin. Invest. 95:1789-1797 (1995)；Borgstrom等, Cancer Res. 56:4032-4039 (1996)；Melnyk等, Cancer Res. 56:921-924 (1996)）、また虚血性網膜疾患のモデルにおいて眼内血管新生を阻害する。Adamis等, Arch. Ophthalmol. 114:66-71 (1996)。例えば、抗ＶＥＧＦ抗体は、ＶＥＧＦ活性が関与する疾患又は状態の標的化及び妨害における治療剤として使用することができる。例えば、米国特許第６５８２９５９号、同第６７０３０２０号；国際公開第９８／４５３３２号；同第９６／３００４６号；同第９４／１０２０２号、同第２００５／０４４８５３号；欧州特許第０６６６８６８Ｂ１号；米国特許出願公開第２００３０２０６８９９号、同第２００３０１９０３１７号、同第２００３０２０３４０９号、同第２００５０１１２１２６号、同第２００５０１８６２０８号、及び同第２００５０１１２１２６号；Popkov等, Journal of Immunological Methods 288:149-164 (2004)；及び国際公開第２００５０１２３５９号を参照のこと。選択される抗体は、通常ＶＥＧＦに対して十分に強力な結合親和性を有する。例えば、抗体は、１００ｎＭ〜１ｐＭのＫｄ値でｈＶＥＧＦに結合しうる。抗体親和性は、例えば、表面プラズモン共鳴法に基づくアッセイ（ＰＣＴ出願公開第２００５／０１２３５９号に記載されるようなＢＩＡｃｏｒｅアッセイ等）、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）、及び競合アッセイ（例えば、ＲＩＡ）によって決定されうる。抗体は、例えば、治療薬としてのその有効性を評価するために、他の生物活性アッセイに供されうる。そのようなアッセイは、当該技術分野において知られており、標的抗原及び意図される抗体の用途に依存する。例として、ＨＵＶＥＣ抑制アッセイ、腫瘍細胞増殖抑制アッセイ（例えば、国際公開第８９／０６６９２号に記載されるもの）、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）及び補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）アッセイ（米国特許第５５００３６２号）、及びアゴニスト活性又は造血アッセイ（国際公開第９５／２７０６２号を参照）が挙げられる。抗ＶＥＧＦ抗体は、通常、ＶＥＧＦ−Ｂ、ＶＥＧＦ−Ｃ、ＶＥＧＦ−Ｄ又はＶＥＧＦ−Ｅ等の他のＶＥＧＦ相同体にも、ＰｌＧＦ、ＰＤＧＦ又はｂＦＧＦ等の他の増殖因子にも結合しない。
【００８２】
一実施態様では、抗ＶＥＧＦ抗体は、ハイブリドーマＡＴＣＣ ＨＢ１０７０９によって産生されるモノクローナル抗ＶＥＧＦ抗体Ａ４．６．１と同じエピトープに結合するモノクローナル抗体；限定されないが、「ｒｈｕＭＡｂ ＶＥＧＦ」又は「ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標）」としても知られる「ベバシズマブ」として既知の抗体を含む、組換え型ヒト化抗ＶＥＧＦモノクローナル抗体（Presta等 (1997) Cancer Res. 57:4593-4599を参照のこと）を含む。ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標）は、現在市販されている。ベバシズマブを用いて治療されうる非限定的な例示的がんは、非小細胞肺がん、結腸直腸がん、乳がん、腎がん、卵巣がん、多形神経膠芽腫、小児骨肉腫、胃がん及び膵がんを含む。ベバシズマブは、その受容体に対するヒトＶＥＧＦの結合を遮断するマウス抗体Ａ．４．６．１に由来する、変異ヒトＩｇＧ１フレームワーク領域及び抗原結合相補性決定領域を含む。ベバシズマブと他のヒト化抗ＶＥＧＦ抗体は、米国特許第６８８４８７９号及び同第７１６９９０１号に更に記載される。更なる抗ＶＥＧＦ抗体は、ＰＣＴ出願公開第２００５／０１２３５９号及び同第２００９／０７３１６０号；米国特許第７０６０２６９号、同第６５８２９５９号、同第６７０３０２０号；同第６０５４２９７号；国際公開第９８／４５３３２号；同第９６／３００４６号；同第９４／１０２０２号；欧州特許第０６６６８６８Ｂ１号；米国特許出願公開第２００６００９３６０号、同第２００５０１８６２０８号、同第２００３０２０６８９９号、同第２００３０１９０３１７号、同第２００３０２０３４０９号、及び同第２００５０１１２１２６；及びPopkov等, Journal of Immunological Methods 288:149-164 (2004)に記載されている。
【００８３】
ここで使用される場合、「ＶＥＧＦ耐性腫瘍」及び「ＶＥＧＦ耐性がん」は、参照試料、細胞、又は組織よりも高いレベルのＦＧＦ２を伴う腫瘍又はがんを意味する。幾つかの実施態様では、ＶＥＧＦ耐性腫瘍は、ＶＥＧＦのレベルと比較してより高いレベルのＦＧＦ２を有する。幾つかの実施態様では、ＶＥＧＦ耐性腫瘍試料におけるＶＥＧＦレベルに対するＦＧＦ２レベルの比は１より大きい。幾つかの実施態様では、ＶＥＧＦ耐性腫瘍を持つ対象は、パゾパニブ、ベバシズマブ、アキシチニブ、アフリベルセプト、ソラフェニブ、及びスニチニブから選択される少なくとも１種の治療剤で以前に治療されている。
【００８４】
ここで使用される場合、「パゾパニブ耐性腫瘍」及び「パゾパニブ耐性がん」は、初期にはパゾパニブに反応したが、もはや反応しないか少ない程度に反応する腫瘍又はがんを意味する。幾つかの実施態様では、パゾパニブ耐性腫瘍又はがんは、パゾパニブの存在下で、もはや退縮しないか又は進行さえする。
【００８５】
「対象」及び「患者」という用語は、哺乳動物を指すためにここでは互換的に使用される。幾つかの実施態様では、対象又は患者はヒトである。他の実施態様では、限定されないが、げっ歯類、サル、ネコ、イヌ、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、哺乳類実験動物、哺乳類家畜、哺乳類競技動物、及び哺乳類ペットを含む、他の哺乳動物を治療する方法もまた提供される。
【００８６】
ここで使用される「試料」又は「患者試料」という用語は、例えば、物理的、生化学的、化学的、及び／又は生理学的な特徴に基づいて特徴付けられ及び／又は特定される、細胞実体及び／又は他の分子実体を含む興味ある対象から得られるか又は対象に由来する組成物を指す。例えば、「疾患試料」という句及びその変形は、特徴付けられる細胞実体及び／又は分子実体を含むことが予測されるか又は分かっている、興味ある対象から得られる任意の試料を指す。「組織又は細胞試料」とは、対象又は患者の組織から得られた類似する細胞の集合を意味する。組織又は細胞試料の供給源は、新鮮な、凍結された、及び／又は保存された、臓器もしくは組織試料又は生検組織又は吸引液由来の固形組織；血液又は任意の血液成分；大脳脊髄液、羊水、腹水、又は間質液等の体液；対象の妊娠又は発達における任意の時期からの細胞であってもよい。組織試料はまた初代又は培養細胞又は細胞株であってもよい。任意選択的に、組織又は細胞試料は、疾患組織／臓器から得られる。組織試料は、保存料、抗凝血剤、緩衝液、固定液、栄養剤、抗生物質等の、本来の組織には自然に混合されない化合物を含みうる。
【００８７】
ここで使用される「参照試料」、「参照細胞」、又は「参照組織」は、特定するために本発明の方法又は組成物が使用される疾患又は症状に罹患していないことが分かっているか又は考えられる供給源から得られた試料、細胞、又は組織を指す。幾つかの実施態様では、参照試料、参照細胞、又は参照組織は、本発明の組成物又は方法を使用して疾患又は症状が特定される同じ対象又は患者の健常な身体部分から得られる。幾つかの実施態様では、参照試料、参照細胞、又は参照組織は、本発明の組成物又は方法を使用して疾患又は症状が特定される対象又は患者ではない１人以上の個体の健常な身体部分から得られる。
【００８８】
ここで使用される「がん」及び「腫瘍」は、動物における任意の異常な細胞又は組織の成長又は増殖を指す互換的な用語である。ここで使用される場合、「がん」及び「腫瘍」という用語は、固形がん及び血液がん／リンパ腺がんを包含し、また悪性、前がん性、及び良性の増殖、例えば異形成等も包含する。がんの例として、限定されないが、細胞腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、及び白血病が挙げられる。このようながんのより特定の非限定的な例として、扁平上皮がん、小細胞肺がん、下垂体がん、食道がん、星状細胞腫、軟部肉腫、非小細胞肺がん、肺腺がん、肺扁平上皮がん、腹膜がん、肝細胞がん、消化管がん、消化管間質腫瘍、膵がん、神経膠芽腫、子宮頸がん、卵巣がん、肝がん、膀胱がん、肝細胞腫、乳がん、結腸がん、結腸直腸がん、胃がん、子宮内膜又は子宮がん、唾液腺がん、腎臓がん、腎がん、肝がん、前立腺がん、外陰がん、甲状腺がん、肝臓がん、脳がん、子宮内膜がん、精巣がん、胆管細胞がん、胆嚢がん、胃がん、黒色腫、中皮腫、及び様々な種類の頭頸部がんが挙げられる。
【００８９】
「ＶＥＧＦレベルと比較してより高いレベルのＦＧＦ２を伴う細胞」は、細胞中のＶＥＧＦ ｍＲＮＡ又はタンパク質のレベルよりもＦＧＦ２ ｍＲＮＡ又はタンパク質のレベルがより高い細胞を意味する。「ＶＥＧＦレベルと比較してより高いレベルのＦＧＦ２を伴うがん」は、細胞の少なくとも一部がＶＥＧＦ ｍＲＮＡ又はタンパク質レベルよりも高いレベルのＦＧＦ２ ｍＲＮＡ又はタンパク質を有するがんを意味する。幾つかの実施態様では、「細胞の少なくとも一部」はがん試料の細胞の少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、又は少なくとも９０％である。幾つかの実施態様では、ＶＥＧＦレベルと比較してより高いレベルのＦＧＦ２を伴う細胞又は細胞の少なくとも一部がＶＥＧＦレベルと比較してより高いレベルのＦＧＦ２を有するがんは、１より大きいＶＥＧＦに対するＦＧＦ２の比を有している。幾つかの実施態様では、ＶＥＧＦレベルと比較してより高いレベルのＦＧＦ２を伴う細胞又は細胞の少なくとも一部がＶＥＧＦレベルと比較してより高いレベルのＦＧＦ２を有するがんは、ＶＥＧＦよりも５％、７％、１０％、１２％、１５％、１７％、２０％、又は２５％多いＦＧＦ２を有する。幾つかの実施態様では、ＦＧＦ２及びＶＥＧＦのレベルはｍＲＮＡレベルである。幾つかのそのような実施態様では、レベルは、定量的ＲＴ−ＰＣＲ、マイクロアレイ、デジタルＰＣＴ、ＲＮＡ−Ｓｅｑ、リボヌクレアーゼプロテクションアッセイ（ＲＰＡ）、ノーザンブロット法、及びインサイツハイブリダイゼーション（ＩＳＨ）から選択される方法によって決定される。幾つかの実施態様では、レベルは定量的ＲＴ−ＰＣＲによって決定される。幾つかの実施態様では、レベルはマイクロアレイによって決定される。幾つかの実施態様では、ＦＧＦ２及びＶＥＧＦのレベルはタンパク質レベルである。幾つかのそのような実施態様では、レベルは、免疫組織化学、ＥＬＩＳＡ、質量分析法、逆相プロテインアレイ（ＲＰＰＡ）、抗体アレイ、ナノ−イムノアッセイ、ウェスタンブロット法、及びキャピラリープロテイン分析アッセイから選択される方法によって決定される。
【００９０】
「ＶＥＧＦレベルと比較してより低いレベルのＦＧＦ２を伴う細胞」は、細胞中のＶＥＧＦ ｍＲＮＡ又はタンパク質のレベルよりもＦＧＦ２ ｍＲＮＡ又はタンパク質のレベルがより低い細胞を意味する。「ＶＥＧＦレベルと比較してより低いレベルのＦＧＦ２を伴うがん」は、細胞の少なくとも一部がＶＥＧＦ ｍＲＮＡ又はタンパク質レベルよりも低いレベルのＦＧＦ２ ｍＲＮＡ又はタンパク質を有するがんを意味する。幾つかの実施態様では、がん試料の細胞の少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、又は少なくとも９０％が、ＶＥＧＦ ｍＲＮＡ又はタンパク質レベルと比較して低いレベルのＦＧＦ２ ｍＲＮＡ又はタンパク質を有する。幾つかの実施態様では、ＶＥＧＦレベルと比較してより低いレベルのＦＧＦ２を伴う細胞又は細胞の少なくとも一部がＶＥＧＦレベルと比較してより低いレベルのＦＧＦ２を有するがんは、１未満のＶＥＧＦに対するＦＧＦ２の比を有している。幾つかの実施態様では、ＶＥＧＦレベルと比較してより低いレベルのＦＧＦ２を伴う細胞又は細胞の少なくとも一部がＶＥＧＦレベルと比較してより低いレベルのＦＧＦ２を有するがんは、ＶＥＧＦよりも５％、７％、１０％、１２％、１５％、１７％、２０％、又は２５％少ないＦＧＦ２を有する。幾つかの実施態様では、ＦＧＦ２及びＶＥＧＦのレベルはｍＲＮＡレベルである。幾つかのそのような実施態様では、レベルは、定量的ＲＴ−ＰＣＲ、マイクロアレイ、デジタルＰＣＴ、ＲＮＡ−Ｓｅｑ、リボヌクレアーゼプロテクションアッセイ（ＲＰＡ）、ノーザンブロット法、及びインサイツハイブリダイゼーション（ＩＳＨ）から選択される方法によって決定される。幾つかの実施態様では、レベルは定量的ＲＴ−ＰＣＲによって決定される。幾つかの実施態様では、レベルはマイクロアレイによって決定される。幾つかの実施態様では、ＦＧＦ２及びＶＥＧＦのレベルはタンパク質レベルである。幾つかのそのような実施態様では、レベルは、免疫組織化学、ＥＬＩＳＡ、質量分析法、逆相プロテインアレイ（ＲＰＰＡ）、抗体アレイ、ナノ−イムノアッセイ、ウェスタンブロット法、及びキャピラリープロテイン分析アッセイから選択される方法によって決定される。幾つかの実施態様では、レベルは免疫組織化学によって決定される。
【００９１】
ここで使用される「治療」は、ヒトを含む哺乳動物の症状に対する治療薬の任意の投与又は適用を含み、例えば、退縮を引き起こすことによって、又は機能の損失、不足、もしくは欠陥を回復もしくは修復することによって、又は非効率的なプロセスを刺激することによって、症状もしくは症状の進行を阻害すること、症状もしくはその進行を阻害することもしくは遅延させること、その発達を停止すること、症状を部分的もしくは完全に軽減すること、又は症状を治癒することを含む。幾つかの実施態様では、「治療」は、治療される個体又は細胞の自然の経過を変更するための臨床的介入を指し、予防のために、又は臨床病理学的過程の間に行うことができる。望ましい治療の効果は、疾患の発生又は再発の予防、症状の緩和、疾患の任意の直接的又は間接的な病理学的帰結の低減、転移の予防、疾患進行の速度の減速、病態の回復又は緩和、及び寛解又は予後の改善を含む。
【００９２】
分子又は分子の組合せの「有効量」又は「治療有効量」は、単独で、又は他の治療薬と組合せて投与されたときに、対象の少なくともサブセットにおいて症状を治療し、及び／又は、腫瘍細胞の増殖を阻害するのに十分な量を意味する。所定の実施態様では、治療有効量は、投薬時と必要な期間の間、所望の治療又は予防的結果を達成するために有効な量を指す。本発明のＦＧＦＲ１融合タンパク質の治療有効量は、例えば、個体の病態、年齢、性別、及び体重、並びに個体においてＦＧＦＲ１融合タンパク質が所望の応答を誘発する能力等の要因に従って変化しうる。治療有効量はまた治療的に有益な効果が、ＦＧＦＲ１融合タンパク質の任意の毒性又は有害作用を上回る量である。がんの場合、薬物の有効量は、がん細胞の数を減少させ；腫瘍サイズを縮小させ；がん細胞の末梢器官への浸潤を阻害し（すなわち、ある程度まで遅らせ、典型的には停止する）；腫瘍転移を阻害し（すなわち、ある程度まで遅らせ、典型的には停止する）；腫瘍増殖をある程度まで阻害し；腫瘍の治療を可能にし、及び／又は疾患に伴う症状の一又は複数をある程度まで軽減しうる。薬物は、増殖を防ぎ及び／又は既存のがん細胞を死滅させうる範囲で、細胞増殖抑制性及び／又は細胞傷害性であってもよい。
【００９３】
「予防有効量」は、投与時と必要な期間の間、所望の予防的結果を達成するために有効な量を指す。必ずではないが典型的には、予防投与は、疾患の前又は早期段階で対象に用いられるため、予防有効量は治療有効量よりも少ない。
【００９４】
「阻害」又は「阻害する」という用語は、任意の表現型特性の減少もしくは停止、又はその特性の発生頻度、程度、もしくは可能性の減少もしくは停止を指す。非限定的な例示的阻害は、腫瘍増殖の阻害を含む。
【００９５】
治療剤の投与の恩恵又は治療剤の投与に対する反応の文脈においてここで使用される「恩恵」、「治療上の恩恵」、「反応性」、及び「治療反応性」という用語は、例えば、疾患進行のある程度の阻害（遅延及び完全な停止を含む）；疾患エピソード及び／もしくは症状数の減少；病巣サイズの縮小；疾患細胞の隣接する末梢器官及び／もしくは組織への浸潤の阻害（すなわち、低減、遅延、及び完全な停止）；疾患転移の阻害（すなわち、低減、遅延、及び完全な停止）；疾患病変の退縮又は消失を必ずではないがもたらしうる自己免疫応答の低下；疾患に関連する一又は複数の症状のある程度の軽減；治療後の無病期間の長さ、例えば、無増悪生存期間の増加；全生存期間の増加；より高い奏効率；及び／又は治療後の所与の時点での死亡率の減少等の様々なエンドポイントを評価することによって、測定することができる。
【００９６】
一又は複数の更なる治療剤と「組合せた」投与は、共投与（同時投与を含む）及び任意の順序の継続投与（すなわち、逐次投与）を含む。
【００９７】
「薬学的に許容される担体」は、対象に投与するための「薬学的組成物」を一緒に含む治療剤と共に使用される、当該技術分野において一般的である無毒性の固体、半固体、もしくは液体の増量剤、希釈剤、封入材料、製剤補助剤、又は担体を指す。薬学的に許容される担体は、用いられる投与量及び濃度ではレシピエントに非毒性であり、製剤の他の成分と適合性である。薬学的に許容される担体は、用いられる製剤に適している。例えば、治療剤が経口投与される場合、担体はゲルカプセルであってもよい。治療薬剤が皮下投与される場合、担体は、理想的には、皮膚に刺激性を示さず、注射部位反応を引き起こさない。
【００９８】
治療組成物及び方法
ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ及び／又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子を使用してがんを治療する方法
幾つかの実施態様では、本発明は、がん細胞の少なくとも一部がＶＥＧＦレベルと比較してより高いＦＧＦ２レベルを有するがんを治療する方法を提供する。幾つかの実施態様では、がん試料の細胞の少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、又は少なくとも９０％が、ＶＥＧＦ ｍＲＮＡ又はタンパク質レベルと比較して高いレベルのＦＧＦ２ ｍＲＮＡ又はタンパク質を有する。そのようながんは、幾つかの実施態様では、線維芽細胞増殖因子受容体１（ＦＧＦＲ１）細胞外ドメイン（ＥＣＤ）又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子を用いた治療に特に反応することが見出された。従って、幾つかの実施態様では、ＶＥＧＦレベルと比較してより高いＦＧＦ２レベルを有するがんを治療する方法は、治療有効量のＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子を対象に投与することを含む。幾つかの実施態様では、対象におけるがんの治療方法は、対象に治療有効量の線維芽細胞増殖因子受容体１（ＦＧＦＲ１）細胞外ドメイン（ＥＣＤ）又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子を投与することを含み、ここで、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子の投与前に、がんの細胞の少なくとも一部がＶＥＧＦレベルと比較してより高いレベルのＦＧＦ２を有していると判定されている。幾つかの実施態様では、がん試料の細胞の少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、又は少なくとも９０％が、ＶＥＧＦ ｍＲＮＡ又はタンパク質レベルと比較して高いレベルのＦＧＦ２ ｍＲＮＡ又はタンパク質を有していると判定されている。そのような方法において、がんにおけるＶＥＧＦレベルと比較して高いＦＧＦ２レベルが、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子に対するがんの治療反応性の指標である。幾つかの実施態様では、方法は、対象に治療有効量のＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子と治療有効量の少なくとも１種の抗血管新生剤を投与することを含む。幾つかの実施態様では、抗血管新生剤はＶＥＧＦアンタゴニストである。幾つかの実施態様では、ＶＥＧＦアンタゴニストは、パゾパニブ、ベバシズマブ、アキシチニブ、アフリベルセプト、ソラフェニブ、又はスニチニブから選択される。幾つかの実施態様では、ＶＥＧＦアンタゴニストは、パゾパニブ、ソラフェニブ、及びアキシチニブから選択される。
【００９９】
幾つかの実施態様では、本発明は、がん細胞の少なくとも一部がＶＥＧＦレベルと比較してより低いＦＧＦ２レベルを有するがんを治療する方法を提供する。幾つかの実施態様では、がん試料の細胞の少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、又は少なくとも９０％が、ＶＥＧＦ ｍＲＮＡ又はタンパク質レベルと比較して低いレベルのＦＧＦ２ ｍＲＮＡ又はタンパク質を有する。幾つかの実施態様では、レベルはｍＲＮＡレベルである。幾つかの実施態様では、レベルはタンパク質レベルである。幾つかの実施態様では、ＶＥＧＦレベルと比較して低いＦＧＦ２レベルを有するがんを治療する方法は、対象に治療有効量のＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子と治療有効量の少なくとも１種の抗血管新生剤を投与することを含む。幾つかの実施態様では、対象におけるがんの治療方法は、対象に治療有効量の線維芽細胞増殖因子受容体１（ＦＧＦＲ１）細胞外ドメイン（ＥＣＤ）又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子と治療有効量の少なくとも１種の抗血管新生剤を投与することを含み、ここで、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子と少なくとも１種の抗血管新生剤の投与前に、がんの細胞の少なくとも一部がＶＥＧＦレベルと比較してより低いレベルのＦＧＦ２を有していると判定されている。幾つかの実施態様では、がん試料の細胞の少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、又は少なくとも９０％が、ＶＥＧＦ ｍＲＮＡ又はタンパク質レベルと比較して低いレベルのＦＧＦ２ ｍＲＮＡ又はタンパク質を有していると判定されている。幾つかの実施態様では、抗血管新生剤はＶＥＧＦアンタゴニストである。幾つかの実施態様では、ＶＥＧＦアンタゴニストは、パゾパニブ、ベバシズマブ、アキシチニブ、アフリベルセプト、ソラフェニブ、又はスニチニブから選択される。幾つかの実施態様では、ＶＥＧＦアンタゴニストは、パゾパニブ、ソラフェニブ、及びアキシチニブから選択される。
【０１００】
幾つかの実施態様では、がんは、前立腺がん、乳がん、結腸直腸がん、胃がん、肺がん、脳がん、卵巣がん、子宮内膜がん、頭頸部がん、咽頭がん、肝がん、腎がん、神経膠芽腫、及び膵がんから選択される。所定の実施態様では、がんは乳がん、食道がん、及び肺がんから選択される。幾つかの実施態様では、がんは腎がん、例えば腎細胞がんである。幾つかの実施態様では、がんは肝がん、例えば肝細胞がんである。幾つかの実施態様では、がんは肺がんである。幾つかの実施態様では、肺がんは非小細胞肺がん及び小細胞肺がんから選択される。幾つかの実施態様では、肺がんは扁平上皮がんである。幾つかの実施態様では、がんは頭頸部がんである。幾つかの実施態様では、頭頸部がんは頭頸部の扁平上皮がんである。幾つかの実施態様では、がんは腎がん（腎細胞がん等）、肝がん（肝細胞がん等）、神経膠芽腫、及び中皮腫から選択される。幾つかの実施態様では、がんは腎細胞がんである。幾つかの実施態様では、がんは肝細胞がんである。幾つかの実施態様では、がんは中皮腫である。幾つかの実施態様では、がんは神経膠芽腫である。
【０１０１】
幾つかの実施態様では、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤは、配列番号：１から４から選択されるアミノ酸配列を有する。幾つかの実施態様では、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤは、配列番号：２及び４から選択されるアミノ酸配列を有する。幾つかの実施態様では、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子は、配列番号：５及び６から選択されるアミノ酸配列を有する。幾つかの実施態様では、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子は、配列番号：６のアミノ酸配列を有するＦＧＦＲ１ ＥＣＤ．３３９−Ｆｃである。
【０１０２】
幾つかの実施態様では、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子は、一又は複数の更なる抗がん治療と共に投与される。更なる抗がん治療の例として、限定されないが、手術、放射線療法（照射療法）、生物学的療法、免疫療法、及び化学療法、又はこれらの治療の組合せが挙げられる。また、細胞傷害性薬剤、抗血管新生剤及び抗増殖性薬剤を、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子と組合せて使用することができる。方法及び用途の何れかの所定の態様では、本発明は、治療有効量のＦＧＦＲ１ ＥＣＤ及び／又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子と一又は複数の化学療法剤とを対象に投与することにより、がんを治療することを提供する。幾つかの実施態様では、対象のがんは、以前に治療されていない。様々な化学療法剤が、本発明の併用治療の方法及び用途に使用されうる。考慮される化学療法剤の例示的かつ非限定的なリストは、ここで「定義」の項に提供されている。
【０１０３】
幾つかの実施態様では、本発明は、治療有効量のＦＧＦＲ１ ＥＣＤ及び／又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子と一又は複数の抗血管新生剤とを対象に投与することにより、がんを治療する方法を提供する。幾つかの実施態様では、本発明は、治療有効量のＦＧＦＲ１ ＥＣＤ及び／又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子と一又は複数のＶＥＧＦアンタゴニストとを対象に投与することにより、がんを治療することを提供する。幾つかの実施態様では、本発明は、治療有効量のＦＧＦＲ１ ＥＣＤ及び／又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子と一又は複数のＶＥＧＦアンタゴニストとを、一又は複数の化学療法剤と組合せて対象に投与することにより、がんを治療することを提供する。幾つかの実施態様では、一又は複数のＶＥＧＦアンタゴニストは、抗ＶＥＧＦ抗体及び／又はＶＥＧＦトラップである。幾つかの実施態様では、ＶＥＧＦアンタゴニストは、パゾパニブ、ベバシズマブ、アキシチニブ、アフリベルセプト、ソラフェニブ、又はスニチニブから選択される。幾つかの実施態様では、ＶＥＧＦアンタゴニストはパゾパニブ、ソラフェニブ、及びアキシチニブから選択される。
【０１０４】
幾つかの実施態様では、ドセタキセル、パクリタキセル、ビンクリスチン、カルボプラチン、シスプラチン、オキサリプラチン、ドキソルビシン、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、ロイコボリン、ペメトレキセド、ソラフェニブ、スニチニブ、アキシチニブ、パゾパニブ、エトポシド、トポテカン、ＶＥＧＦアンタゴニスト、抗ＶＥＧＦ抗体、ＶＥＧＦトラップ、アフリベルセプト、及びベバシズマブから選択される少なくとも１種の更なる治療剤と組み合わせてＦＧＦＲ１ ＥＣＤ及び／又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子を対象に投与することを含むがんを治療する方法が提供される。他の例では、ドセタキセル、パクリタキセル、ビンクリスチン、カルボプラチン、シスプラチン、オキサリプラチン、ドキソルビシン、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、ロイコボリン、ペメトレキセド、ソラフェニブ、スニチニブ、アキシチニブ、パゾパニブ、エトポシド、トポテカン、ＶＥＧＦアンタゴニスト、抗ＶＥＧＦ抗体、ＶＥＧＦトラップ、アフリベルセプト、及びベバシズマブから選択される少なくとも１種の更なる治療剤と組み合わせてＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃを対象に投与することを含むがんを治療する方法が提供される。幾つかの実施態様では、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃとドセタキセルを対象に投与することを含むがんを治療する方法が提供される。幾つかの実施態様では、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ、パクリタキセル、及びカルボプラチンを対象に投与することを含むがんを治療する方法が提供される。幾つかの実施態様では、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ、ペメトレキセド、及びシスプラチンを対象に投与することを含むがんを治療する方法が提供される。幾つかの実施態様では、がんは、肝がん（肝細胞がんを含む）、腎がん（腎細胞がんを含む）、神経膠芽腫、及び中皮腫から選択される。幾つかの実施態様では、がんは腎細胞がんである。幾つかの実施態様では、がんは肝細胞がんである。幾つかの実施態様では、がんは中皮腫である。幾つかの実施態様では、がんは神経膠芽腫である。
【０１０５】
幾つかの実施態様では、がんの対象にＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子を投与することを含むがんを治療する方法が提供され、ここで、対象は、パゾパニブ、ベバシズマブ、アキシチニブ、アフリベルセプト、ソラフェニブ、及びスニチニブから選択される少なくとも１種の治療剤で以前に治療されている。幾つかの実施態様では、対象は、アキシチニブ、パゾパニブ、及びソラフェニブから選択される少なくとも１種の治療剤で以前に治療されている。幾つかの実施態様では、対象はパゾパニブで以前に治療されている。幾つかの実施態様では、対象のがんはパゾパニブ治療中又は治療後にパゾパニブ耐性になっている。幾つかの実施態様では、パゾパニブ耐性がんの対象にＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子を投与することを含むパゾパニブ耐性がんを治療する方法が提供される。幾つかの実施態様では、該方法はパゾパニブとＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子を投与することを含む。
【０１０６】
幾つかのそのような実施態様では、対象はＶＥＧＦ耐性がんに罹患している。ＶＥＧＦ耐性がんは、幾つかの実施態様では、高レベルのＦＧＦ２を発現し、及び／又は１より大きいＦＧＦ２／ＶＥＧＦ比を有する。幾つかの実施態様では、ＶＥＧＦ耐性がんの対象は、パゾパニブ、ベバシズマブ、アキシチニブ、アフリベルセプト、ソラフェニブ、及びスニチニブから選択される少なくとも１種の治療剤で以前に治療されている。幾つかの実施態様では、少なくとも１種の治療剤は、パゾパニブとソラフェニブから選択される。幾つかの実施態様では、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子はアキシチニブと組み合わせて投与される。
【０１０７】
幾つかの実施態様では、対象は、該対象が単独で又は一又は複数の更なる薬剤との組合せで、ある薬剤での完全な又は部分的な一連の治療を受けた場合に、その薬剤で以前に治療されたと考えられる。幾つかのそのような実施態様では、対象はその薬剤又は薬剤の組合せに反応しなかった場合があり、あるいはその薬剤又は薬剤の組合せに初期には反応した場合があるが、薬剤又は薬剤の組合せに対する反応性が少なくなっているか又は非反応性になっている場合がある。反応性は、例えば治療されているがんの増殖及び／又は転移によって、決定されうる。
【０１０８】
幾つかの実施態様では、がん（ＶＥＧＦ耐性がんを含む）は、前立腺がん、乳がん、結腸直腸がん、胃がん、肺がん、脳がん、卵巣がん、子宮内膜がん、頭頸部がん、咽頭がん、肝がん、腎がん、神経膠芽腫、中皮腫、及び膵がんから選択される。幾つかの実施態様では、がん（ＶＥＧＦ耐性がんを含む）は腎がん、例えば腎細胞がんである。幾つかの実施態様では、がん（ＶＥＧＦ耐性がんを含む）は肝がん、例えば肝細胞がんである。幾つかの実施態様では、がん（ＶＥＧＦ耐性がんを含む）は中皮腫である。
【０１０９】
幾つかの実施態様では、がんの対象にＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子を投与することを含む、固形がんにおいて血管密度を減少させる方法が提供される。幾つかの実施態様では、固形がんにおいて血管密度を減少させる方法が提供され、ここで、がんはＶＥＧＦレベルと比較して高いＦＧＦ２レベルを有しており、該方法はがんの対象にＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子を投与することを含む。幾つかの実施態様では、がんの対象にＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子を投与することを含む、ＶＥＧＦ耐性固形がんにおいて血管密度を減少させる方法が提供される。幾つかの実施態様では、がんは腎がん（例えば腎細胞がん）、肝がん（例えば肝細胞がん）、肺がん、結腸がん、肝がん、乳がん、胃がん、卵巣がん、子宮内膜がん、食道がん、頭頸部がん、神経膠芽腫、中皮腫、及び前立腺がんから選択される。幾つかの実施態様では、がんは、腎がん（例えば腎細胞がん）、肝がん（例えば肝細胞がん）、神経膠芽腫、及び中皮腫から選択される。幾つかの実施態様では、がんは腎細胞がんである。幾つかの実施態様では、がんは肝細胞がんである。幾つかの実施態様では、がんは中皮腫である。
【０１１０】
幾つかの実施態様では、血管密度は当該分野の方法によって決定される。幾つかの実施態様では、血管密度は実施例１１に記載のように決定される。幾つかの実施態様では、血管密度は全腫瘍試料で決定される。
【０１１１】
ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ及び／又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子（例えば、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ）を含有する薬学的組成物が、特定の適応症のための治療有効量で投与される。治療有効量は、典型的には、治療される対象の体重、対象の身体的状態もしくは健康状態、治療される症状の広範さ、及び／又は治療される対象の年齢に依存する。一般に、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ及び／又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子（例えば、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ）は、１用量当たり約５０μｇ／ｋｇ体重から約１００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の量で投与されるべきである。任意選択的に、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ及び／又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子（例えば、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ）は、１用量当たり約１００μｇ／ｋｇ体重から約３０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の量で投与することができる。更に任意選択的に、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ及び／又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子（例えば、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ）は、比吸光度１．４２ｍＬ／ｍｇ*ｃｍを使用して計算して、１用量当たり約０．５ｍｇ／ｋｇ体重から約２０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の量で投与することができる。所定の実施態様では、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ及び／又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子（例えば、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ）は、比吸光度１．４２ｍＬ／ｍｇ*ｃｍを使用して計算して、約８ｍｇ／ｋｇ体重から約２０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の量で投与される。幾つかの実施態様では、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ及び／又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子（例えば、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ）は、約８ｍｇ／ｋｇ体重から約１６ｍｇ／ｋｇ体重（あるいは１．１１ｍＬ／ｍｇ*ｃｍの比吸光度を使用して計算した場合、約１０ｍｇ／ｋｇ体重から約２０ｍｇ／ｋｇ体重）の用量で投与される。幾つかの実施態様では、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ及び／又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子（例えば、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ）は、１．４２ｍＬ／ｍｇ*ｃｍの比吸光度を使用して計算して、約８ｍｇ／ｋｇ体重、約１０ｍｇ／ｋｇ体重、約１１ｍｇ／ｋｇ体重、約１２ｍｇ／ｋｇ体重、約１３ｍｇ／ｋｇ体重、約１４ｍｇ／ｋｇ体重、約１５ｍｇ／ｋｇ体重、約１６ｍｇ／ｋｇ体重、約１７ｍｇ／ｋｇ体重、約１８ｍｇ／ｋｇ体重、約１９ｍｇ／ｋｇ体重、又は約２０ｍｇ／ｋｇ体重の用量で投与される。幾つかの実施態様では、ＦＧＦＲ１融合タンパク質は、比吸光度１．１１ｍＬ／ｍｇ*ｃｍを使用して計算された約１０ｍｇ／ｋｇ体重の用量で投与される。他の実施態様では、ＦＧＦＲ１融合タンパク質は、比吸光度１．１１ｍＬ／ｍｇ*ｃｍを使用して計算された約２０ｍｇ／ｋｇ体重の用量で投与される。ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ及び／又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子はまた上記用量のうちの１つから別の用量の範囲で投与されてもよい。幾つかの実施態様では、投与量は、週２回、毎週、隔週、毎週と隔週の間の頻度で、３週毎、４週毎、又は毎月投与されてもよい。
【０１１２】
所定の実施態様では、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ及び／又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子の投与量は、使用される比吸光度（ＥＣ）に依存して二通り計算することができる。比吸光度は、タンパク質のグリコシル化が考慮されているかどうかに依存して異なる。一実施態様では、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃのアミノ酸組成に基づく比吸光度は、例えば、１．４２ｍＬ／ｍｇ*ｃｍである。別の実施態様では、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃの糖鎖部分並びにアミノ酸部分を考慮した場合、比吸光度は、１．１１ｍＬ／ｍｇ*ｃｍである。表１に示されるように、１．１１ｍＬ／ｍｇ*ｃｍのＥＣを使用するＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃの用量の計算は、計算用量を２８％増加させる。２つの比吸光度を用いて計算される用量は異なるが、モル濃度、又は投与される薬物の実際の量は同一である。別途記載のない限り、ここで開示される用量は、それぞれ、グリコシル化を考慮に入れない比吸光度を使用して計算される。これらの投与量を、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃのグリコシル化を考慮に入れた比吸光度を用いて計算された投与量と如何に比較するかを表１に示す。表１から分かるように、ここで１．４２ｍＬ／ｍｇ*ｃｍのＥＣを使用する約８ｍｇ／ｋｇ（例えば７．８及び８．０）の投与量は、１．１１ｍＬ／ｍｇ*ｃｍのＥＣを使用して計算した場合の約１０ｍｇ／ｋｇ（例えば１０．０及び１０．２）の投与量に相当する。ここで１．４２ｍＬ／ｍｇ*ｃｍのＥＣを使用する約１６ｍｇ／ｋｇ（例えば１５．６及び１６．０ｍｇ／ｋｇ）の投与量は、１．１１ｍＬ／ｍｇ*ｃｍのＥＣを使用して計算した場合の約２０ｍｇ／ｋｇ（例えば２０．０及び２０．５）の投与量に相当する。上記「定義」の項目で述べたように、ここで提供される測定された数値は近似値であり、丸められた更なる有効数字を有する値を包含する。例えば、８ｍｇ／ｋｇは、７．６、７．８、８．０、８．２、８．４、及び８．４５等の有効桁数が２桁の値を包含し、これらの各々は８に丸められる。同様に、１６ｍｇ／ｋｇ等の値は、例えば、１５．６及び１６．０等の、１６に丸められる有効桁数が３桁の値を包含する。
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【０１１３】
ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子、及び／又は少なくとも１種の更なる治療剤を含有する薬学的組成物を、必要に応じて対象に投与することができる。所定の実施態様では、有効用量の治療用分子が、一又は複数回対象に投与される。様々な実施態様では、有効用量の治療用分子が、少なくとも２ヶ月に１回、少なくとも１ヶ月に１回、少なくとも１ヶ月に２回、週１回、週２回、又は週３回、対象に投与される。様々な実施態様では、有効用量の治療用分子が、少なくとも１週間、少なくとも１ヶ月間、少なくとも３ヶ月間、少なくとも６ヶ月間、又は少なくとも１年間、対象に投与される。
【０１１４】
所定の実施態様では、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子及び少なくとも１種の更なる治療剤の併用投与は、別々の製剤又は単一の薬学的製剤を用いた同時投与を含む共投与、並びに任意の順序の継続投与を含む。任意選択的に、両方の（又は全ての）活性薬剤が、同時にそれらの生物活性を発揮する時期が存在する。ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ及び／又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子（例えば、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ）と組合せて投与される治療剤の治療有効量は、医師又は獣医師の判断に委ねられる。投与量の投与及び調整は、治療される状態の最大管理を達成するために行われる。用量は、使用される治療剤の種類、治療を受ける特定の患者、疾患の段階、及び治療計画の所望の積極性等の要因に更に依存する。
【０１１５】
所定の実施態様では、患者はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ及び／又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子（例えばＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ）と抗血管新生剤の組合せで治療される。幾つかの実施態様では、抗血管新生剤はＶＥＧＦアンタゴニストである。幾つかの実施態様では、ＶＥＧＦアンタゴニストはＶＥＧＦトラップ（例えばアフリベルセプト）である。幾つかの実施態様では、ＶＥＧＦアンタゴニストはチロシンキナーゼ阻害剤（例えば、パゾパニブ、アキシチニブ、ソラフェニブ、又はスニチニブ）である。幾つかの実施態様では、ＶＥＧＦアンタゴニストは抗ＶＥＧＦ抗体である。幾つかの実施態様では、ＶＥＧＦ抗体はベバシズマブである。ベバシズマブの一例示的投薬量は約０．０５ｍｇ／ｋｇから約２０ｍｇ／ｋｇの範囲である。よって、約０．５ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇ、７．５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ又は１５ｍｇ／ｋｇの一又は複数回の用量（あるいはその任意の組合せ）が患者に投与されうる。そのような用量は、間欠的に、例えば毎週、隔週、又は３週毎に投与されうる。
【０１１６】
幾つかの実施態様では、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ及び／又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子（例えばＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ）は、他の治療剤、例えば化学療法剤又は抗血管新生剤と組合せて、治療剤の推奨され又は処方された投薬量及び／又は頻度で投与される。
【０１１７】
幾つかの実施態様では、更なる治療剤は、食品医薬品局等の治療処置の認可に責任のある機関によって承認された投与量で、又は製造者の推奨する投与量で投与される。
【０１１８】
投与経路及び担体
幾つかの実施態様では、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ及び／又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子は、静脈内及び／又は皮下投与されうる。幾つかの実施態様では、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ及び／又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子は、別の経路、例えば、動脈内、非経口、鼻腔内、筋肉内、心臓内、心室内、気管内、頬側、直腸内、腹腔内、皮内、局所的、経皮的、もしくはくも膜下腔内経路により、又はさもなければ移植もしくは吸入により、投与することができる。様々な実施態様では、少なくとも１種の更なる治療剤を、静脈内、動脈内、皮下、非経口、鼻腔内、筋肉内、心臓内、心室内、気管内、頬側、直腸内、腹腔内、皮内、局所的、経皮的、及びくも膜下腔内を含む様々な経路により、又はさもなければ移植もしくは吸入によりインビボで投与することができる。主題組成物の各々は、単独で、又は組合せて、錠剤、カプセル剤、散剤、粒剤、軟膏、溶剤、坐剤、浣腸剤、注射剤、吸入剤、及びエアロゾル剤等の、固体、半固形、液体、又は気体形態の調製物に処方することができる。
【０１１９】
様々な実施態様では、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子、及び／又は少なくとも１種の更なる治療剤を含有する組成物は、薬学的に許容される担体と共に製剤で提供され、多種多様な担体が当該技術分野において知られている（例えば、Gennaro, Remington: The Science and Practice of Pharmacy with Facts and Comparisons: Drugfacts Plus, 20版(2003)；Ansel等, Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, 7版, Lippencott Williams and Wilkins (2004)；Kibbe等, Handbook of Pharmaceutical Excipients, 3版, Pharmaceutical Press (2000)を参照のこと）。ビヒクル、アジュバント、担体、及び希釈剤を含む様々な薬学的に許容される担体が公的に利用可能である。更に、様々な薬学的に許容される補助物質、例えば、ｐＨ調整剤及び緩衝剤、浸透圧調整剤、安定剤、湿潤剤等も、公的に利用可能である。所定の非限定的な例示的担体は、生理食塩水、緩衝生理食塩水、デキストロース、水、グリセロール、エタノール、及びこれらの組合せを含む。幾つかの実施態様では、治療剤は、定義の項目において上に示したブランド名の薬として、又はジェネリック均等物として処方される。幾つかの実施態様では、ドセタキセルは、Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標）（Sanofi Aventis）、又はジェネリック均等物として処方される。
【０１２０】
様々な実施態様では、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子、及び／又は少なくとも１種の更なる治療剤を含有する組成物は、植物油もしくは他の油、合成脂肪族酸グリセリド、高級脂肪酸のエステル、又はプロピレングリコール等の水性又は非水性溶媒中に、それらを溶解させ、懸濁させ、又は乳化させることによって、あるいは所望の場合、可溶化剤、等張剤、懸濁剤、乳化剤、安定剤及び保存料等の一般的な添加物と共に、注射用に製剤化することができる。様々な実施態様では、組成物は、例えば、加圧された許容される噴霧剤、例えば、ジクロロジフルオロメタン、プロパン、窒素等を使用して、吸入用に製剤化されうる。組成物はまた、様々な実施態様では、生分解性又は非生分解性ポリマーを用いて徐放性マイクロカプセルに製剤化されうる。非限定的な例示的生分解性製剤は、ポリ乳酸−グリコール酸ポリマーを含む。非限定的な例示的非生分解性製剤は、ポリグリセリン脂肪酸エステルを含む。そのような製剤を作製する所定の方法は、例えば、欧州特許出願公開第１１２５５８４Ａ１号に記載されている。
【０１２１】
各々が一又は複数の用量のＦＧＦＲ１ ＥＣＤ、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子、及び／又は少なくとも１種の更なる治療剤を収容する一又は複数の容器を含む薬学的投薬パック（ドーセージパック）も提供される。所定の実施態様では、単位調剤（ユニットドーセージ）が提供され、該単位調剤は、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子、及び／又は少なくとも１種の更なる治療剤を、１種又は複数種の更なる薬剤と共にもしくはこれを伴わないで含有する、予め定まった量の組成物を含む。所定の実施態様では、そのような単位調剤は、単回使用の注射用プレフィルドシリンジで供給される。様々な実施態様では、単位調剤に含まれる組成物は、生理食塩水、ショ糖等、緩衝液、例えば、リン酸塩等を含み得、及び／又は安定した有効なｐＨ範囲内で製剤化されうる。あるいは、所定の実施態様では、組成物は、適切な液体、例えば滅菌水の添加によって再構成することができる凍結乾燥粉末として提供されてもよい。所定の実施態様では、組成物は、限定されないが、ショ糖及びアルギニンを含む、タンパク質凝集を阻害する１種又は複数種の物質を含有する。所定の実施態様では、本発明の組成物は、ヘパリン及び／又はプロテオグリカンを含有する。
【０１２２】
幾つかの実施態様では、投薬パックは、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ及び／又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子、及び／又は適切ならば少なくとも１種の抗血管新生剤を投与する前に、がんがＶＥＧＦレベルと比較してより高いＦＧＦ２レベルを有するかどうかを決定するための説明書、及び／又はがんがＶＥＧＦレベルと比較して低いＦＧＦ２レベルを有するかどうかを決定するための説明書を含む。幾つかのそのような実施態様では、説明書は、ＶＥＧＦレベルと比較してより高いＦＧＦ２レベルが、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ及び／又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子に対する治療反応性の指標であることを示す。
【０１２３】
ここで使用される「説明書」という用語は、限定されないが、ラベル、添付文書（パッケージ挿入物）、コンピュータ可読媒体（例えば、ディスケット、コンパクトディスク、又はＤＶＤ）等の電子形態で利用可能な説明書、インターネット等を経由して遠隔で利用可能な説明書を含む。投薬パックが、説明書へのアクセス、説明書へのリンク（例えば、ユニフォームリソースロケータ、つまりｕｒｌ）、又は説明書のコピーを入手するための他の機構（例えば、返信はがき、そこから説明書を要求することができる物理的住所、そこから説明書を要求することができる電子メールアドレス、説明書を入手するためにかけることができる電話番号等）を提供する場合、投薬パックは説明書を含むと考えられる。
【０１２４】
ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ及びＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子
非限定的な例示的ＦＧＦＲ１ ＥＣＤは、完全長ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ断片、及びＦＧＦＲ１ ＥＣＤ変異体を含む。ＦＧＦＲ１ ＥＣＤは、シグナルペプチドを含んでもよいか、又は欠いてもよい。例示的なＦＧＦＲ１ ＥＣＤは、限定されないが、配列番号：１、２、３、及び４から選択されるアミノ酸配列を有するＦＧＦＲ１ ＥＣＤを含む。
【０１２５】
非限定的な例示的ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ断片は、（シグナルペプチドを有しない成熟型の第１のアミノ酸から数えて）アミノ酸３３９で終端するヒトＦＧＦＲ１ ＥＣＤを含む。幾つかの実施態様では、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ断片は、（シグナルペプチドを有しない成熟型の第１のアミノ酸から数えて）アミノ酸３３９とアミノ酸３６０の間で終端する。例示的なＦＧＦＲ１ ＥＣＤ断片は、限定されないが、配列番号：３及び４から選択されるアミノ酸配列を有するＦＧＦＲ１ ＥＣＤ断片を含む。
【０１２６】
幾つかの実施態様では、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤは、配列番号：１から４から選択される配列を含む。幾つかの実施態様では、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤは、配列番号：１から４から選択される配列からなる。ＦＧＦＲ１ ＥＣＤが、配列番号：１から４から選択される配列「からなる」場合、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤは、グリコシル化及びシアリル化等の様々な翻訳後修飾を含んでも又は含まなくてもよい。換言すると、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤが特定のアミノ酸配列からなる場合、近接するアミノ酸配列中に更なるアミノ酸を含まないが、アミノ酸側鎖、Ｎ末端アミノ基、及び／又はＣ末端カルボキシ基に対する修飾を含みうる。
【０１２７】
幾つかの実施態様では、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子は、シグナルペプチドを含む。幾つかの実施態様では、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子は、シグナルペプチドを欠く。幾つかの実施態様では、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子のＦＧＦＲ１ ＥＣＤ部分は、配列番号：１から４から選択される配列を含む。幾つかの実施態様では、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子のＦＧＦＲ１ ＥＣＤ部分は、配列番号：１から４から選択される配列からなる。ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子のＦＧＦＲ１ ＥＣＤ部分が、配列番号：１から４から選択される配列「からなる」場合、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子のＦＧＦＲ１ ＥＣＤ部分は、グリコシル化及びシアリル化等の様々な翻訳後修飾を含んでも又は含まなくてもよい。換言すると、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子のＦＧＦＲ１ ＥＣＤ部分が特定のアミノ酸配列からなる場合、近接するアミノ酸配列中にＦＧＦＲ１由来の更なるアミノ酸を含まないが、アミノ酸側鎖、Ｎ末端アミノ基、及び／又はＣ末端カルボキシ基に対する修飾を含みうる。更に、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤは融合分子に結合しているため、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤのＮ末端及び／又はＣ末端に更なるアミノ酸が存在し得るが、それらのアミノ酸はＦＧＦＲ１配列に由来するものではなく、例えば、リンカー配列又は融合パートナー配列に由来しうる。
【０１２８】
幾つかの実施態様では、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子の融合パートナー部分は、Ｆｃ、アルブミン、及びポリエチレングリコールから選択される。非限定的な例示的融合パートナーはここで検討される。
【０１２９】
本発明者は、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ及び／又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子と少なくとも１種の抗血管新生剤の投与が、がん細胞の少なくとも一部がＶＥＧＦレベルと比較して低いＦＧＦ２レベルを有するがんにおいて、抗血管新生剤単独での治療よりも、より効果的であることを見出した。本発明者は、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ及び／又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子の投与が、がん細胞の少なくとも一部がＶＥＧＦレベルと比較してより高いＦＧＦ２レベルを有するがんにおいて効果的であることを更に見出した。幾つかの実施態様では、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ及び／又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子の投与は、単剤療法としてそのようながんにおいて効果的である。
【０１３０】
ＶＥＧＦレベルと比較して高いＦＧＦ２レベルを有するがんは、ＦＧＦ２レベルがＶＥＧＦレベルよりも高いけれども、幾つかの実施態様では、参照試料、細胞、又は組織と比較してＦＧＦ２とＶＥＧＦの双方が高いレベルである場合がある。ＶＥＧＦレベルと比較して低いＦＧＦ２レベルを有するがんは、ＦＧＦ２レベルがＶＥＧＦレベルよりも低いけれども、幾つかの実施態様では、参照試料、細胞、又は組織と比較してＦＧＦ２とＶＥＧＦの双方が高いレベルである場合がある。
【０１３１】
幾つかの実施態様では、ＶＥＧＦレベルと比較して高いＦＧＦ２レベルを有するがんでは、ＦＧＦ２レベルがＶＥＧＦレベルよりも高い限り、ＦＧＦ２レベルが参照細胞のＦＧＦ２レベルよりも高いか又は低い場合があり、ＶＥＧＦレベルが参照細胞のＶＥＧＦレベルよりも高いか又は低い場合がある。同様に、幾つかの実施態様では、ＶＥＧＦレベルと比較して低いＦＧＦ２レベルを有するがんでは、ＦＧＦ２レベルがＶＥＧＦレベルよりも低い限り、ＦＧＦ２レベルが参照細胞のＦＧＦ２レベルよりも高いか又は低い場合があり、ＶＥＧＦレベルが参照細胞のＶＥＧＦレベルよりも高いか又は低い場合がある。
【０１３２】
融合パートナー及びコンジュゲート
ここで検討されるように、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤは、少なくとも１つの融合パートナーと組み合わされてもよく、その結果としてＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子を生じる。これらの融合パートナーは、精製を促進し得、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子は、インビボ半減期の増加を示しうる。ＦＧＦＲ１ ＥＣＤの好適な融合パートナーは、例えば、水溶性ポリマー等のポリマー、免疫グロブリンの定常ドメイン；ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）の全部又は一部；フェチュインＡ；フェチュインＢ；ロイシンジッパードメイン；テトラネクチン三量体形成ドメイン；マンノース結合タンパク質（マンノース結合レクチンとしても知られる）、例えば、マンノース結合タンパク質１；及びここに記載され、また米国特許第６６８６１７９号に記載されているＦｃ領域を含む。非限定的な例示的ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子は、例えば、米国特許第７６７８８９０号に見出すことができる。
【０１３３】
ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子は、ポリアミノ酸又は分岐点アミノ酸をＦＧＦＲ１ ＥＣＤに付着させることによって調製することができる。例えば、ポリアミノ酸は、（融合分子によって達成される利点に加えて）ＦＧＦＲ１ ＥＣＤの循環半減期を延長する役割を果たす担体タンパク質であってもよい。本発明の治療目的のために、このようなポリアミノ酸は、理想的には、中和抗原反応又は他の有害な反応を有しないか又は生じないものであるべきである。そのようなポリアミノ酸は、血清アルブミン（ＨＳＡ等）、更なる抗体もしくはその一部、例えば、Ｆｃ領域、フェチュインＡ、フェチュインＢ、ロイシンジッパー核因子赤血球誘導体−２（ＮＦＥ２）、神経網膜ロイシンジッパー、テトラネクチン、又は他のポリアミノ酸、例えば、リジンから選択されうる。ここに記載されるように、ポリアミノ酸の付着位置は、Ｎ末端もしくはＣ末端、又はその間の他の場所であってもよく、選択された分子に化学リンカー部分を介して連結されてもよい。
【０１３４】
ポリマー
ポリマー、例えば、水溶性ポリマーは、生理学的環境において典型的に見出されるような水性環境において、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子の沈殿を減少させるための融合パートナーとして有用でありうる。本発明において用いられるポリマーは、治療用の生成物又は組成物の調製に薬学的に許容されるものである。
【０１３５】
好適な、臨床的に許容される水溶性ポリマーは、限定されないが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒド、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、モノメトキシ−ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリビニルピロリドン、ポリ−１，３−ジオキソラン、ポリ−１，３，６−トリオキサン、エチレン／無水マレインコポリマー、ポリ（β−アミノ酸）（ホモポリマー又はランダムコポリマーの何れか）、ポリ（ｎ−ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコールホモポリマー（ＰＰＧ）及び他のポリアルキレンオキシド、ポリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（ＰＯＧ）（例えば、グリセロール）及び他のポリオキシエチル化ポリオール、ポリオキシエチル化ソルビトール、又はポリオキシエチル化グルコース、コラン（colonic）酸又は他の炭水化物ポリマー、Ｆｉｃｏｌｌ、又はデキストラン、並びにこれらの混合物を含む。
【０１３６】
ここで使用される場合、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）は、他のタンパク質を誘導体化するために使用されてきた形態の何れか、例えば、モノ−（Ｃ１−Ｃ１０）アルコキシ−又はアリールオキシ−ポリエチレングリコール等を包含することが意図される。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、水中におけるその安定性のために、製造において利点を有しうる。
【０１３７】
ここで使用されるポリマー、例えば、水溶性ポリマーは、如何なる分子量であってもよく、分岐もしくは非分岐であってもよい。幾つかの実施態様では、ポリマーは、約２ｋＤａから約１００ｋＤａの平均分子量を有する（「約」という用語は、ポリマーの調製中に、ある分子は記載の分子量よりも多く計量され、ある分子は少なく計量されることを示す）。各ポリマーの平均分子量は、約５ｋＤａから約５０ｋＤａ、又は約１２ｋＤａから約２５ｋＤａであってもよい。一般に、分子量が高いほど、又は分岐が多いほど、ポリマー：タンパク質の比率が大きい。所望の治療プロファイル、例えば、持続放出の期間、もしある場合には、生物活性に及ぼす影響、取り扱い易さ、抗原性の程度又は欠如、及びＦＧＦＲ１ ＥＣＤに対するポリマーの他の既知の影響に依存して、他のサイズを用いることもできる。
【０１３８】
本発明において用いられるポリマーは、典型的には、ポリペプチドの機能的又は抗原性ドメインに与える影響を考慮してＦＧＦＲ１ ＥＣＤに付着される。一般に、化学的誘導体化は、タンパク質を活性化ポリマー分子と反応させるために使用される任意の好適な条件下で実施されうる。ポリマーを活性部分に連結するために使用されうる活性化基は、スルホン、マレイミド、スルフヒドリル、チオール、トリフレート、トレシレート、アジリジン、オキシラン、及び５−ピリジルを含む。
【０１３９】
本発明のポリマーは、典型的には、アミノ酸のアルファ（α）もしくはイプシロン（ε）アミノ基又は反応性チオール基が異種ポリペプチドに付着されるが、好適な反応条件下でポリマー基に付着するのに充分に反応性であるタンパク質の何れかの反応基にポリマー基が付着され得ることも考えられる。従って、ポリマーは、遊離アミノ基又はカルボキシル基等の反応基を介してＦＧＦＲ１ ＥＣＤに共有結合されうる。遊離アミノ基を有するアミノ酸残基は、リジン残基及びＮ末端アミノ酸残基を含みうる。遊離カルボキシル基を有する残基は、アスパラギン酸残基、グルタミン酸残基、及びＣ末端アミノ酸残基を含みうる。反応性チオール基を有するものはシステイン残基を含む。
【０１４０】
ポリマー、例えば、水溶性ポリマーでコンジュゲートされた融合分子を調製するための方法は、それぞれ一般的に、（ａ）ポリペプチドが一又は複数のポリマーに付着する条件下でＦＧＦＲ１ ＥＣＤをポリマーと反応させることと、（ｂ）反応生成物を得ることとを含む。各コンジュゲーションの反応条件は、当該分野で知られているもの又は後に開発されるものの何れかから選択されうるが、修飾されるべきタンパク質を不活性化させる温度、溶媒、及びｐＨレベル等の反応条件への曝露は回避するか又は制限するように選択されるべきである。一般に、反応に最適な反応条件は、既知のパラメータ及び所望の結果に基づいて臨機応変に決定される。例えば、ポリマー：ポリペプチドコンジュゲートの比率が大きいほど、コンジュゲート産物の割合が大きくなる。（過剰な未反応ポリペプチド又はポリマーが存在しない反応効率という点で）最適な比率は、例えば、所望の誘導体化の程度（例えば、モノ−、ジ−、トリ−等）、選択されるポリマーの分子量、ポリマーが分岐又は非分岐であるかどうか、及び使用される反応条件等の要因によって、決定されうる。ポリペプチドに対するポリマー（例えば、ＰＥＧ）の比率は、一般に１：１から１００：１の範囲である。一又は複数の精製コンジュゲートを、とりわけ、透析、塩析、限外濾過、イオン交換クロマトグラフィー、ゲル濾過クロマトグラフィー、及び電気泳動を含む標準的な精製技術によって、各混合物から調製することができる。
【０１４１】
Ｎ末端を化学修飾したＦＧＦＲ１ ＥＣＤが特に所望される場合がある。分子量、分岐等、反応混合物中のＦＧＦＲ１ ＥＣＤ分子に対するポリマーの割合、実施される反応の種類、及び選択されたＮ末端を化学修飾したＦＧＦＲ１ ＥＣＤを得る方法によって、ポリマーを選択することができる。Ｎ末端を化学修飾したＦＧＦＲ１ ＥＣＤ調製物を得る方法（必要ならば、他のモノ誘導体化部分からこの部分を分離する）は、化学修飾したタンパク質分子の集団からの、Ｎ末端を化学修飾したＦＧＦＲ１ ＥＣＤ材料の精製によるものであってもよい。
【０１４２】
選択的なＮ末端化学修飾は、特定のタンパク質における誘導体化に利用可能な異なる種類の第１級アミノ基の異なる反応性（リジン対Ｎ末端）を利用した還元的アルキル化によって達成することができる。適切な反応条件下で、カルボニル基含有ポリマーを用いて、Ｎ末端でのタンパク質の実質的に選択的な誘導体化が達成される。例えば、タンパク質のリジン残基のε−アミノ基とＮ末端残基のα−アミノ基との間のｐＫａの差を利用することを可能にするｐＨで反応を実施することによって、タンパク質のＮ末端にポリマーを選択的に付着させることができる。このような選択的誘導体化によって、タンパク質へのポリマーの付着が制御される：タンパク質のＮ末端でポリマーとのコンジュゲーションが優勢的に起こり、リジン側鎖アミノ基等の他の反応基の著しい修飾が起こらない。還元的アルキル化を用いると、ポリマーは、上述の種類のものであってもよく、タンパク質へのカップリングのために単一の反応性アルデヒドを有するべきである。単一の反応性アルデヒドを含むポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドもまた使用されうる。
【０１４３】
一実施態様では、本発明は、化学的に誘導体化したＦＧＦＲ１ ＥＣＤがモノ−又はポリ−（例えば、２〜４個の）ＰＥＧ部分を含むことを考慮する。ペグ化は、利用可能なペグ化反応の任意のものによって実施されうる。ペグ化したタンパク質産物を調製する方法は一般に（ａ）タンパク質が一又は複数のＰＥＧ基に付着する条件下で、ポリペプチドをポリエチレングリコール（ＰＥＧの反応性エステル又はアルデヒド誘導体等）と反応させることと、（ｂ）反応生成物を得ることとを含む。一般に、最適な反応条件は、既知のパラメータ及び所望の結果に基づいて臨機応変に決定される。
【０１４４】
当該技術分野において知られている多くのＰＥＧ付着方法が存在する。例えば、欧州特許出願公開第０４０１３８４号；Malik等, Exp. Hematol., 20:1028-1035 (1992)；Francis, Focus on Growth Factors, 3(2):4-10 (1992)；欧州特許出願公開第０１５４３１６号；欧州特許出願公開第０４０１３８４号；国際公開第９２／１６２２１号；国際公開第９５／３４３２６号；及びここで引用されるペグ化に関連する他の刊行物を参照のこと。
【０１４５】
ペグ化は、例えば、反応性ポリエチレングリコール分子とのアシル化反応又はアルキル化反応を介して実施されうる。従って、本発明に係るタンパク質産物は、アシル基又はアルキル基を介してＰＥＧ基を付着させたペグ化タンパク質を含む。このような産物は、モノペグ化又はポリペグ化（例えば、２〜６もしくは２〜５個のＰＥＧ基を含むもの）されてもよい。ＰＥＧ基は一般にアミノ酸のα−又はε−アミノ基でタンパク質に付着されるが、好適な反応条件下でＰＥＧ基に付着するのに充分に反応性であるタンパク質に付着した何れかのアミノ基にＰＥＧ基が付着されうることも考えられる。
【０１４６】
アシル化によるペグ化は、一般に、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）の活性エステル誘導体を、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤと反応させることを含む。アシル化反応の場合、選択されるポリマーは、典型的には単一の反応性エステル基を有する。任意の既知の又は後に発見される反応性ＰＥＧ分子を、ペグ化反応を実施するために使用することができる。適切な活性化ＰＥＧエステルの一例は、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）にエステル化したＰＥＧである。ここで使用される場合、アシル化は、限定されないが、治療用タンパク質と、ポリマー、例えば、ＰＥＧ：アミド、カルバメート、ウレタン等との間に次の種類の結合を含むことが考えられる（例えば、Chamow, Bioconjugate Chem., 5:133-140 (1994)を参照のこと）。反応条件は、現在知られている条件又は後に開発される条件の何れから選択されてもよいが、修飾されるべきポリペプチドを不活性化させる温度、溶媒、及びｐＨ等の条件は回避するべきである。
【０１４７】
アシル化によるペグ化は、一般にポリ−ペグ化タンパク質を生じる。連結する結合はアミドであってもよい。得られる生成物は、実質的に（例えば、＞９５％）モノ−、ジ−、又はトリ−ペグ化のみの場合がある。しかしながら、ペグ化の程度がより高い幾つかの種が、使用される特定の反応条件に応じた量で生成される場合がある。所望されるならば、更に精製されたペグ化種を、とりわけ、透析、塩析、限外濾過、イオン交換クロマトグラフィー、ゲル濾過クロマトグラフィー、及び電気泳動を含む標準的な精製技術によって、混合物（特に未反応種）から分離することができる。
【０１４８】
アルキル化によるペグ化は、一般に還元剤の存在下でＰＥＧの末端アルデヒド誘導体をポリペプチドと反応させることを含む。還元的アルキル化反応では、選択されるポリマーは、単一の反応性アルデヒド基を有するべきである。例示的な反応性ＰＥＧアルデヒドは、水に安定性であるポリエチレングリコールプロピオンアルデヒド、又はそのモノＣ１−Ｃ１０アルコキシもしくはアリールオキシ誘導体である（例えば、米国特許第５２５２７１４号を参照のこと）。
【０１４９】
マーカー
更に、本発明のＦＧＦＲ１ ＥＣＤは、融合ポリペプチドの精製を促進するペプチド等のマーカー配列に融合されうる。マーカーアミノ酸配列は、とりわけ、ｐＱＥベクター（Qiagen, Mississauga, Ontario, Canada）中に提供されるタグ等のヘキサヒスチジンペプチドであってもよく、これらの多くは市販されている。Gentz等, Proc. Natl. Acad. Sci. 86:821-824 (1989)に記載されるように、例えば、ヘキサヒスチジンは、融合タンパク質の簡便な精製をもたらす。精製に有用な別のペプチドタグである赤血球凝集素（ＨＡ）タグは、インフルエンザＨＡタンパク質由来のエピトープに対応する。（Wilson等, Cell 37:767 (1984)）。これらの上記融合体の何れも、ここに記載されるＦＧＦＲ１ ＥＣＤを使用して遺伝子操作されうる。
【０１５０】
オリゴマー化ドメイン融合パートナー
様々な実施態様では、オリゴマー化は、限定されないが、多価性、結合強度の増加、及び異なるドメインの組合せた機能を含む、幾つかの機能的利点を融合タンパク質に提供する。従って、幾つかの実施態様では、融合パートナーは、オリゴマー化ドメイン、例えば、二量体化ドメインを含む。例示的なオリゴマー化ドメインは、限定されないが、α−ヘリックスコイルドコイルドメインを含むコイルドコイルドメイン、コラーゲンドメイン、コラーゲン様ドメイン、及び所定の免疫グロブリンドメインを含む。例示的なコイルドコイルポリペプチド融合パートナーは、限定されないが、テトラネクチンコイルドコイルドメイン、軟骨オリゴマーマトリックスタンパク質のコイルドコイルドメイン、アンジオポエチンコイルドコイルドメイン、及びロイシンジッパードメインを含む。例示的なコラーゲン又はコラーゲン様オリゴマー化ドメインは、限定されないが、コラーゲン中に見出されるもの、マンノース結合レクチン、肺サーファクタントタンパク質Ａ及びＤ、アディポネクチン、フィコリン、コングルチニン、マクロファージスカベンジャー受容体、並びにエミリン（emilin）を含む。
【０１５１】
抗体Ｆｃ免疫グロブリンドメイン融合パートナー
融合パートナーとして使用されうる多くのＦｃドメインが、当該技術分野において知られている。幾つかの実施態様では、融合パートナーはＦｃ免疫グロブリンドメインである。Ｆｃ融合パートナーは、天然に生じる抗体に見出される野生型Ｆｃ、その変異体、又はその断片でありうる。非限定的な例示的Ｆｃ融合パートナーは、ヒトＩｇＧ、例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４の、ヒンジ並びにＣＨ２及びＣＨ３定常ドメインを含むＦｃを含む。更なる例示的Ｆｃ融合パートナーは、限定されないが、ヒトＩｇＡ及びＩｇＭを含む。幾つかの実施態様では、Ｆｃ融合パートナーは、例えば、ＩｇＧ１中にＣ２３７Ｓ変異を含む（例えば、配列番号：８を参照）。幾つかの実施態様では、Ｆｃ融合パートナーは、米国特許第６９００２９２号に記載されるように、Ｐ３３１Ｓ変異を有するヒトＩｇＧ２のヒンジ、ＣＨ２、及びＣＨ３ドメインを含む。所定の例示的なＦｃドメイン融合パートナーは、配列番号：８から１０に示される。
【０１５２】
アルブミン融合パートナー及びアルブミン結合分子融合パートナー
幾つかの実施態様では、融合パートナーはアルブミンである。例示的なアルブミンは、限定されないが、それらが融合されるポリペプチドの血清半減期又はバイオアベイラビリティを増加させることができるヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）及びＨＳＡの断片を含む。幾つかの実施態様では、融合パートナーは、アルブミン結合分子、例えば、アルブミンに結合するペプチド又はアルブミンに結合する脂質又は他の分子とコンジュゲートする分子である。幾つかの実施態様では、ＨＳＡを含む融合分子は、例えば米国特許第６６８６１７９号に記載されているようにして調製される。
【０１５３】
融合パートナーの例示的な付着
融合パートナーは、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤのＮ末端又はＣ末端に共有結合的に又は非共有結合的に付着させることができる。付着は、例えば、アミノ酸側鎖（例えば、システイン、リジン、セリン、又はスレオニンの側鎖等）を介して、Ｎ末端又はＣ末端以外のＦＧＦＲ１ ＥＣＤ内の場所でも起こりうる。
【０１５４】
共有結合的な付着又は非共有結合的な付着の何れかの実施態様では、融合パートナーとＦＧＦＲ１ ＥＣＤとの間にリンカーが含まれてもよい。そのようなリンカーは、少なくとも一つのアミノ酸又は化学部分から構成されうる。融合パートナーをＦＧＦＲ１ ＥＣＤに共有結合的に付着させる例示的な方法は、限定されないが、融合パートナとＦＧＦＲ１ ＥＣＤを単一のアミノ酸配列として翻訳すること、及び融合パートナーをＦＧＦＲ１ ＥＣＤに化学的に付着させることを含む。融合パートナーとＦＧＦＲ１ ＥＣＤが単一のアミノ酸配列として翻訳される場合、更なるアミノ酸が、融合パートナーとＦＧＦＲ１ ＥＣＤとの間にリンカーとして含まれてもよい。幾つかの実施態様では、融合パートナー及び／又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤの単一発現コンストラクトへのクローニングを促進するために、リンカーは、それをコードするポリヌクレオチド配列に基づいて選択される（例えば、特定の制限酵素部位を含むポリヌクレオチドが、融合パートナーをコードするポリヌクレオチドとＦＧＦＲ１ ＥＣＤをコードするポリヌクレオチドとの間に配されてもよく、制限酵素部位を含むポリヌクレオチドが、短いアミノ酸リンカー配列をコードする）。融合パートナーとＦＧＦＲ１ ＥＣＤとが、化学的手段によって共有結合的にカップリングされる場合、典型的には、カップリング反応の間に様々なサイズのリンカーが含まれてもよい。
【０１５５】
融合パートナーをＦＧＦＲ１ ＥＣＤに非共有結合的に付着させる例示的な方法は、限定されないが、結合対を介した付着を含む。例示的な結合対は、限定されないが、ビオチン及びアビジン又はストレプトアビジン、抗体及びその抗原等を含む。
【０１５６】
共翻訳修飾及び翻訳後修飾
本発明は、例えば、グリコシル化、アセチル化、リン酸化、アミド化、既知の保護基／ブロック基による誘導体化、タンパク質切断、又は抗体分子もしくは他の細胞リガンドへの結合によって、翻訳中又は翻訳後に差次的に修飾されるＦＧＦＲ１ ＥＣＤ及びＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子の投与を包含する。多くの化学的修飾の何れも、限定されないが、臭化シアン、トリプシン、キモトリプシン、パパイン、Ｖ８プロテアーゼによる特異的な化学的切断；ＮＡＢＨ４；アセチル化；ホルミル化；酸化；還元；及び／又はチュニカマイシンの存在下における代謝合成を含む知られた技術によって実施することができる。
【０１５７】
本発明に包含される更なる翻訳後修飾は、例えば、Ｎ結合又はＯ結合炭水化物鎖、Ｎ末端又はＣ末端終端のプロセシング、アミノ酸骨格への化学部分の付着、Ｎ結合又はＯ結合炭水化物鎖の化学修飾、及び原核生物宿主細胞の発現の結果としてのＮ末端メチオニン残基の付加又は欠失を含む。ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ及びＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子の様々な翻訳後修飾の非限定的な考察は、例えば米国特許第７６７８８９０号に見出すことができる。
【０１５８】
ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ及びＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子の発現と産生ベクター
ＦＧＦＲ１ ＥＣＤをコードするポリヌクレオチドを含むベクターが提供される。また、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子をコードするポリヌクレオチドを含むベクターも提供される。そのようなベクターは、限定されないが、ＤＮＡベクター、ファージベクター、ウイルスベクター、レトロウイルスベクター等を含む。
【０１５９】
幾つかの実施態様では、ＣＨＯ又はＣＨＯ由来細胞におけるポリペプチドの発現に最適化されているベクターが選択される。例示的なこのようなベクターは、例えば、Running Deer等, Biotechnol. Prog. 20:880-889 (2004)に記載されている。
【０１６０】
幾つかの実施態様では、ベクターは、ヒトを含む動物におけるＦＧＦＲ１ ＥＣＤ及び／又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子のインビボ発現のために選択される。幾つかのそのような実施態様では、ポリペプチドの発現は、組織特異的な様式で機能するプロモーターの制御下にある。例えば、肝臓特異的プロモーターは、例えば、ＰＣＴ国際公開第２００６／０７６２８８号に記載されている。様々な発現ベクターの非限定的な考察は、例えば米国特許第７６７８８９０号に見出すことができる。
【０１６１】
宿主細胞
様々な実施態様では、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子は、原核細胞、例えば、細菌細胞中で、又は真核細胞、例えば、真菌細胞、植物細胞、昆虫細胞、及び哺乳動物細胞中で発現させることができる。そのような発現は、例えば、当該技術分野において既知の手順に従って実施されうる。ポリペプチドを発現させるために使用することができる例示的な真核細胞は、限定されないが、ＣＯＳ７細胞を含むＣＯＳ細胞、２９３−６Ｅ細胞を含む２９３細胞、ＣＨＯ−Ｓ及びＤＧ４４細胞を含むＣＨＯ細胞、並びにＮＳＯ細胞を含む。幾つかの実施態様では、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子に対して所定の所望される翻訳後修飾を行う能力に基づいて、特定の真核生物宿主細胞が選択される。例えば、幾つかの実施態様では、ＣＨＯ細胞が、２９３細胞で産生される同じポリペプチドよりもより高いレベルのシアリル化を有するＦＧＦＲ１ ＥＣＤ及び／又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子を産生する。
【０１６２】
所望の宿主細胞への核酸の導入は、限定されないが、リン酸カルシウム形質移入、ＤＥＡＥ−デキストラン媒介形質移入、カチオン性脂質媒介形質移入、電気穿孔、形質導入、感染等を含む、当該技術分野において既知の任意の方法によって達成することができる。非限定的な例示的方法は、例えば、Sambrook等, Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 3版 Cold Spring Harbor Laboratory Press (2001)に記載されている。核酸は、当該技術分野において既知の方法に従って、所望の宿主細胞中に一過性に又は安定に形質移入することができる。宿主細胞及び宿主細胞中のポリペプチドの方法に関する非限定的な考察は、例えば米国特許第７６７８８９０号に見出すことができる。
【０１６３】
幾つかの実施態様では、ポリペプチドは、当該技術分野において既知の方法に従って、遺伝子操作されたか又はポリペプチドをコードする核酸分子を形質移入した動物においてインビボで産生させることができる。
【０１６４】
ＦＧＦＲ１ ＥＣＤポリペプチドの精製
ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子は、当該技術分野において既知の様々な方法によって精製することができる。そのような方法は、限定されないが、親和性マトリックス又は疎水性相互作用クロマトグラフィーの使用を含む。好適な親和性リガンドは、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又は融合パートナーの任意のリガンドを含む。ＦＧＦＲ１に結合する抗体の場合の好適な親和性リガンドは、限定されないが、ＦＧＦＲ１自体及びその断片を含む。更に、プロテインＡ、プロテインＧ、プロテインＡ／Ｇ、又は抗体親和性カラムを使用してＦｃ融合パートナーに結合させ、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子を精製することもできる。また、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤに対する抗体を使用してＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子を精製してもよい。疎水性相互作用クロマトグラフィー、例えば、ブチル又はフェニルカラムも、幾つかのポリペプチドを精製するのに好適である場合もある。ポリペプチドを精製する多くの方法が当該技術分野において知られている。ポリペプチドを精製する様々な方法の非限定的な考察は、例えば米国特許第７６７８８９０号に見出すことができる。
【０１６５】
ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ及び／又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子の恩恵を受ける患者を特定する方法
幾つかの実施態様では、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子の投与から恩恵を受けうるがんに罹患している患者を特定する方法が提供される。幾つかのそのような実施態様では、該方法は、対象から得られた試料中においてがん細胞の少なくとも一部がＶＥＧＦレベルと比較して高いレベルのＦＧＦ２を含むかどうかを決定することを含む。幾つかの実施態様では、がん試料の細胞の少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、又は少なくとも９０％が、ＶＥＧＦ ｍＲＮＡ又はタンパク質レベルと比較して高いＦＧＦ２ ｍＲＮＡ又はタンパク質レベルを有していると判定されている。幾つかの実施態様では、ＶＥＧＦレベルと比較して高いＦＧＦ２レベルは、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子に対するがんの治療反応性の指標である。幾つかの実施態様では、試料は、がんを有するか又は有することが疑われる患者から採取される。がん細胞の少なくとも一部におけるＶＥＧＦレベルと比較しての高いＦＧＦ２レベルの発見は、がんを有するか又は有することが疑われる患者が、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子療法の恩恵を受けうることを示す。幾つかの実施態様では、患者は、腎がん、肝がん、神経膠芽腫、又は中皮腫を有するか又は有することが疑われる。
【０１６６】
幾つかの実施態様では、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子と少なくとも１種の抗血管新生剤の投与から恩恵を受けうるがんに罹患している患者を特定する方法が提供される。幾つかのそのような実施態様では、該方法は、対象から得られた試料中においてがん細胞の少なくとも一部がＶＥＧＦレベルと比較して低いレベルのＦＧＦ２を含むかどうかを決定することを含む。幾つかの実施態様では、がん試料の細胞の少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、又は少なくとも９０％が、ＶＥＧＦ ｍＲＮＡ又はタンパク質レベルと比較して低いＦＧＦ２ ｍＲＮＡ又はタンパク質レベルを有していると判定されている。幾つかの実施態様では、試料は、がんを有するか又は有することが疑われる患者から採取される。がん細胞の少なくとも一部におけるＶＥＧＦレベルと比較しての低いＦＧＦ２レベルの発見は、がんを有するか又は有することが疑われる患者が、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子及び少なくとも１種の抗血管新生剤療法の恩恵を受けうることを示す。幾つかの実施態様では、患者は、腎がん、肝がん、神経膠芽腫、又は中皮腫を有するか又は有することが疑われる。
【０１６７】
幾つかの実施態様では、ＦＧＦ２レベル及び／又はＶＥＧＦレベルは、研究施設によって決定される。研究施設は、病院の研究室又は病院とは独立した研究室でありうる。幾つかの実施態様では、ＦＧＦ２レベル及び／又はＶＥＧＦレベルの決定後、決定の結果が医療従事者に伝えられる。幾つかの実施態様では、ＦＧＦ２レベルがＶＥＧＦレベルと比較され、比較の結果が医療従事者に伝えられる（例えば「ＶＥＧＦより高いＦＧＦ２」、「ＶＥＧＦより低いＦＧＦ２」、「ＦＧＦ２／ＶＥＧＦ＞１」、「ＦＧＦ２／ＶＥＧＦ＜１」等）。幾つかの実施態様では、患者がＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子療法の恩恵を受けるかどうか、又は該療法に反応を示すかどうかを判定する目的のために結果が伝えられる。幾つかの実施態様では、患者がＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子及び少なくとも１種の抗血管新生剤療法の恩恵を受けるかどうか、又は該療法に反応を示すかどうかを判定する目的のために結果が伝えられる。幾つかの実施態様では、医療従事者は、限定されないが、医師、看護師、病院の管理者及びスタッフ等を含む。
【０１６８】
タンパク質レベルを決定する任意の好適な方法が使用されうる。所定の実施態様では、試料中のタンパク質レベルは、免疫組織化学（「ＩＨＣ」）及び染色プロトコルを使用して検査される。組織片の免疫組織化学的染色は、試料中のタンパク質の存在を評価又は検出する信頼できる方法であることが示されている。免疫組織化学技術は、一般に発色法又は蛍光法によって、細胞抗原をインサイツでプローブし可視化するために抗体を利用する。
【０１６９】
組織試料は、一般的な方法によって固定され（すなわち保存され）うる（例えば、 "Manual of Histological Staining Method of the Armed Forces Institute of Pathology," 3版(1960) Lee G. Luna, HT (ASCP) 編者, The Blakston Division McGraw-Hill Book Company, New York; The Armed Forces Institute of Pathology Advanced Laboratory Methods in Histology and Pathology (1994) Ulreka V. Mikel, Editor, Armed Forces Institute of Pathology, American Registry of Pathology, Washington, D.C.を参照）。当業者は、固定液の選択が、試料を組織学的に染色する目的又は別の分析目的によって決定されることを理解するであろう。当業者はまた、固定の長さは、組織試料のサイズ及び使用される固定液に依存することも理解するであろう。例として、中性緩衝ホルマリン、Ｂｏｕｉｎ固定液又はパラホルムアルデヒドが試料を固定するために使用されうる。
【０１７０】
一般に、試料を最初に固定し、ついで、上昇アルコール系列で脱水し、組織試料が切断されうるようにパラフィン又は他の切片化媒体に浸潤させ、包埋する。あるいは、組織を切片化し、得られた切片を固定してもよい。例として、組織試料を一般的な方法によってパラフィンに包埋して処理してもよい（例えば、上掲の"Manual of Histological Staining Method of the Armed Forces Institute of Pathology"を参照）。使用されうるパラフィンの例は、限定されないが、Ｐａｒａｐｌａｓｔ、Ｂｒｏｌｏｉｄ、及びＴｉｓｓｕｅｍａｙを含む。組織試料を包埋してから、該試料をミクロトーム等により切片化することができる（例えば、上掲の"Manual of Histological Staining Method of the Armed Forces Institute of Pathology"を参照）。この手順の例として、切片は、約３ミクロンから約５ミクロンの範囲の厚みを有しうる。切片化してから、幾つかの標準的な方法により切片をスライドに付着させることができる。スライド接着剤の例は、限定されないが、シラン、ゼラチン、ポリ−Ｌ−リジン等を含む。例として、パラフィン包埋切片は、正電荷を帯びたスライド及び／又はポリ−Ｌ−リジンで被覆したスライドに付着させることができる。
【０１７１】
パラフィンが包埋材料として使用される場合、組織片は、一般に脱パラフィンして水に再水和させる。組織片は、幾つかの一般的な標準的方法によって脱パラフィンすることができる。例えば、キシレン及び段階的な下降アルコール系列が使用されうる（例えば上掲の"Manual of Histological Staining Method of the Armed Forces Institute of Pathology"を参照）。あるいは、Ｈｅｍｏ−Ｄｅ７（CMS, Houston, Tex.）等の市販の脱パラフィン化非有機剤が使用されてもよい。
【０１７２】
幾つかの実施態様では、試料の調製後、ＩＨＣを使用して組織片を分析することができる。ＩＨＣは、形態学的染色及び／又は蛍光インサイツハイブリダイゼーション等の更なる技術と組合せて実施されてもよい。直接アッセイ及び間接アッセイの２種の一般的なＩＨＣ法が利用可能である。第１のアッセイによると、標的抗原に対する抗体の結合が直接決定される。この直接アッセイは、抗体を更に相互作用させることなく可視化することができる蛍光タグ又は酵素標識一次抗体等の標識化試薬を使用する。典型的な間接アッセイでは、コンジュゲートしていない一次抗体が抗原に結合し、ついで、標識された二次抗体が一次抗体に結合する。二次抗体が酵素標識にコンジュゲートする場合、抗原の可視化をもたらすために発色性基質又は蛍光発生基質が加えられる。幾つかの二次抗体が一次抗体上の異なるエピトープと反応しうるため、シグナルの増幅が起こる。
【０１７３】
免疫組織化学に使用される一次及び／又は二次抗体は、典型的には、検出可能な部分で標識される。多数の標識が利用可能であり、一般に次のカテゴリーに分類することができる：（ａ）放射性同位体、例えば、３５Ｓ、１４Ｃ、１２５Ｉ、３Ｈ、及び１３１Ｉ。抗体は、例えば、Current Protocols in Immunology, Volumes 1 and 2, Coligen等編 Wiley-Interscience, New York, N.Y., Pubs. (1991)に記載される技術を使用して放射性同位体で標識することができ、放射性は、シンチレーション測定を使用して測定することができる。（ｂ）コロイド金粒子。（ｃ）限定されないが、希土類キレート（ユウロピウムキレート）、テキサスレッド、ローダミン、フルオレセイン、ダンシル、リサミン、ウンベリフェロン、フィコクリセリン、フィコシアニン、又は市販の蛍光団、例えば、ＳＰＥＣＴＲＵＭ ＯＲＡＮＧＥ７及びＳＰＥＣＴＲＵＭ ＧＲＥＥＮ７、並びに／又は上記のうちの何れか一又は複数の誘導体を含む、蛍光標識。蛍光標識は、例えば、上記のCurrent Protocols in Immunologyに開示される技術を用いて抗体にコンジュゲートさせることができる。蛍光は、蛍光光度計を使用して定量化することができる。（ｄ）様々な酵素基質標識が利用可能であり、米国特許第４２７５１４９号は、これらのうちの幾つかに関する考察を提供する。酵素は、一般に、様々な技術を使用して測定することができる、発色性基質の化学的変化を触媒する。例えば、酵素は、基質における色の変化を触媒することができ、それは、分光測光法で測定することができる。あるいは、酵素は、基質の蛍光又は化学発光を変化させることができる。蛍光の変化を定量化するための技術は上に記載されている。化学発光基質は、化学反応によって電気的に励起され、ついで、（例えば、ケミルミノメーターを用いて）測定することができる光を放出しうるか、又は蛍光受容体にエネルギーを付与する。酵素標識の例は、ルシフェラーゼ（例えば、ホタルルシフェラーゼ及び細菌ルシフェラーゼ；米国特許第４７３７４５６号）、ルシフェリン、２，３−ジヒドロフタラジンジオン、リンゴ酸脱水素酵素、ウレアーゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰＯ）等のペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、βガラクトシダーゼ、グルコアミラーゼ、リゾチーム、糖質酸化酵素（例えば、グルコースオキシダーゼ、ガラクトースオキシダーゼ、及びグルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ）、複素環式オキシダーゼ（例えば、ウリカーゼ及びキサンチンオキシダーゼ）、ラクトペルオキシダーゼ、ミクロペルオキシダーゼ等を含む。酵素を抗体にコンジュゲートさせる技術は、O'Sullivan等, Methods for the Preparation of Enzyme-Antibody Conjugates for use in Enzyme Immunoassay, in Methods in Enzym. (J. Langone及びH. Van Vunakis編), Academic press, New York, 73:147-166 (1981)に記載されている。
【０１７４】
酵素−基質の組合せの例は、例えば、（ｉ）色素前駆体（例えば、オルトフェニレンジアミン（ＯＰＤ）又は３，３'，５，５'−テトラメチルベンジジン塩酸塩（ＴＭＢ））を酸化する水素ペルオキシダーゼを基質とする西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰＯ）、（ｉｉ）パラ−ニトロフェニルリン酸を発色性基質とするアルカリホスファターゼ（ＡＰ）、及び（ｉｉｉ）発色性基質（例えば、ｐ−ニトロフェニル−β−Ｄ−ガラクトシダーゼ）又は蛍光発生基質（例えば、４−メチルウンベリフェリル−β−Ｄ−ガラクトシダーゼ）を有するβ−Ｄ−ガラクトシダーゼ（β−Ｄ−Ｇａｌ）を含む。
【０１７５】
多数の他の酵素−基質の組合せが当業者に利用可能である。これらの概説については、米国特許第４２７５１４９号及び同第４３１８９８０号を参照のこと。しばしば、標識は、抗体と間接的にコンジュゲートされる。当業者は、これを達成するための様々な技術を認識するであろう。例えば、抗体は、ビオチンとコンジュゲートさせることができ、上述した４つの広義のカテゴリーの標識の何れもアビジンとコンジュゲートさせることができるか、又はその逆もしかりである。ビオチンはアビジンに選択的に結合し、よって、この間接的な様式で標識を抗体とコンジュゲートさせることができる。あるいは、抗体と標識との間接的なコンジュゲーションを達成するために、抗体を小ハプテンとコンジュゲートさせ、上述の異なる種類の標識のうちの一つを抗ハプテン抗体とコンジュゲートさせる。このようにして、抗体と標識との間接的なコンジュゲーションを達成することができる。
【０１７６】
上で考察された試料調製手順とは別に、ＩＨＣの前、間、又は後の、更なる組織片の処理が望ましい場合がある。例えば、クエン酸緩衝液中で組織試料を加熱する等のエピトープ回収方法が実施されうる（例えば、Leong等 Appl. Immunohistochem. 4(3):201 (1996)を参照）。
【０１７７】
任意選択的なブロッキング工程の後、一次抗体が組織試料中の標的タンパク質抗原に結合するように、十分な時間及び好適な条件下で組織片を一次抗体に曝露する。これを達成するための適切な条件は、日常的実験により決定することができる。試料に対する抗体の結合の程度は、上で考察された検出可能な標識のうちの何れか一つを使用して決定される。幾つかの実施態様では、標識は、３，３'−ジアミノベンジジン発色体等の発色性基質の化学的変化を触媒する酵素標識（例えば、ＨＲＰＯ）である。一実施態様では、酵素標識は、一次抗体に特異的に結合する抗体にコンジュゲートされる（例えば、一次抗体はウサギポリクローナル抗体であり、二次抗体はヤギ抗ウサギ抗体である）。
【０１７８】
このようにして調製された検体を、マウントしてカバースリップで覆うことができる。ついで、例えば顕微鏡を使用してスライドの評価を行い、当該技術分野で日常的に使用される染色強度基準を用いてもよい。
【０１７９】
幾つかの実施態様では、ＩＨＣが使用される場合、細胞又は細胞の集合におけるＦＧＦ２及び／又はＶＥＧＦのレベルを決定するために段階的染色システムが使用される。例えば、幾つかの実施態様では、無染色（０）、１＋、２＋、及び３＋の４段階システムが使用され、１＋、２＋、及び３＋は、それぞれ増加する染色レベルを示す。幾つかの実施態様では、ＶＥＧＦと比較してより高レベルのＦＧＦ２は、ＦＧＦ２染色がＶＥＧＦ染色よりも高い層にあるときに見出される。幾つかの実施態様では、ＶＥＧＦと比較してより高レベルのＦＧＦ２は、ＦＧＦ２染色とＶＥＧＦ染色は同じ層にあるが、組織学者が腫瘍のより大きい面積がＶＥＧＦ染色よりもＦＧＦ２染色を有していると決定する場合に見出される。幾つかの実施態様では、ＶＥＧＦと比較してより低いＦＧＦ２レベルは、ＦＧＦ２染色がＶＥＧＦ染色よりも低い層にあるときに見出される。幾つかの実施態様では、ＶＥＧＦと比較してより低レベルのＦＧＦ２は、ＦＧＦ２染色とＶＥＧＦ染色は同じ層にあるが、組織学者が腫瘍のより大きい面積がＦＧＦ２染色よりもＶＥＧＦ染色を有していると決定する場合に見出される。当業者は、特定のＩＨＣアッセイ（特定の抗体を含む）、細胞型等に応じて、ＶＥＧＦと比較してより高い又はより低いレベルのＦＧＦ２を示す染色レベルを決定することができる。
【０１８０】
ｍＲＮＡレベルを決定する任意の好適な方法が使用されうる。細胞中のｍＲＮＡを評価するための方法は周知であり、例えば、相補的なＤＮＡプローブ（例えば標的ｍＲＮＡに特異的な標識リボプローブを使用するインサイツハイブリダイゼーション、ノーザンブロット法、及び関連する技術）を使用するハイブリダイゼーションアッセイ、並びに様々な核酸増幅アッセイ（例えば、ＦＧＦ２及び／又はＶＥＧＦに特異的な相補的プライマーを使用するＲＴ−ＰＣＲ、及び他の増幅型検出法、例えば、分岐ＤＮＡ、ＳＩＳＢＡ、ＴＭＡ等）を含む。
【０１８１】
哺乳動物からの組織又は細胞試料は、ノーザン、ドットブロット法、又はＰＣＲ分析を使用して、ｍＲＮＡについて簡便にアッセイされうる。例えば、定量ＰＣＲアッセイ等のＲＴ−ＰＣＲアッセイが、当該技術分野で周知である。幾つかの実施態様では、ｍＲＮＡの発現レベルは、リアルタイムｑＲＴ−ＰＣＲを使用して定量化されるレベルである。本発明の幾つかの実施態様では、生体試料中の標的ｍＲＮＡを検出するための方法は、少なくとも一つのプライマーを用いて、逆転写により試料からｃＤＮＡを生成することと、標的ポリヌクレオチドをセンス及びアンチセンスプライマーとして使用して、そのように生成されたｃＤＮＡを増幅し、その中の標的ｃＤＮＡを増幅することと、増幅された標的ｃＤＮＡの存在を検出することとを含む。更に、そのような方法は、生体試料中の標的ｍＲＮＡのレベルの決定を可能にする一又は複数の工程を含みうる（例えば、アクチンファミリーのメンバー等の「ハウスキーピング」遺伝子の比較コントロールｍＲＮＡ配列のレベルを同時に調べることによる）。任意選択的に、増幅された標的ｃＤＮＡの配列を決定することができる。
【０１８２】
本発明の任意選択的な方法は、マイクロアレイ技術によって組織又は細胞試料中の標的ｍＲＮＡ等のｍＲＮＡを検査又は検出するプロトコルを含む。核酸マイクロアレイを使用して、試験及びコントロール組織試料からの試験及びコントロールｍＲＮＡ試料を逆転写し、標識してｃＤＮＡプローブを作製する。ついで、固体支持体に固定された核酸のアレイにプローブをハイブリダイズさせる。アレイは、アレイの各メンバーの配列及び位置が分かるように構成される。特定のアレイメンバーを有する標識プローブのハイブリダイゼーションは、プローブが由来する試料がその遺伝子を発現することを示す。疾患組織の差次的遺伝子発現分析は貴重な情報を提供しうる。マイクロアレイ技術は、核酸ハイブリダイゼーション技術及びコンピューティング技術を用いて、単一の実験において数千個の遺伝子のｍＲＮＡ発現プロファイルを評価する。（例えば、２００１年１０月１１日に公開された国際公開第０１／７５１６６を参照；（アレイの製造に関する考察については、例えば、米国特許第５７００６３７号、米国特許第５４４５９３４号及び米国特許第５８０７５２２号、Lockart, Nature Biotechnology, 14:1675-1680 (1996)；Cheung, V. G.等, Nature Genetics 21(Suppl):15-19 (1999)を参照）。ＤＮＡマイクロアレイは、ガラスもしくは他の基体上に直接合成され又はスポットされた遺伝子断片を含む小型アレイである。通常、数千個の遺伝子が単一のアレイ内に提示される。典型的なマイクロアレイ実験は次の工程を含む：１）試料から単離されたＲＮＡ由来の蛍光標識標的の調製、２）標識標的のマイクロアレイへのハイブリダイゼーション、３）アレイの洗浄、染色、及び走査、４）走査画像の解析、並びに５）遺伝子発現プロファイルの作成。現在、オリゴヌクレオチド（通常、２５塩基長〜７０塩基長）アレイと、ｃＤＮＡから調製されるＰＣＲ産物を含む遺伝子発現アレイの、２つの主な種類のＤＮＡマイクロアレイが用いられている。アレイを形成する際には、オリゴヌクレオチドを事前に作製して表面にスポットするか、又は表面上で直接合成する（インサイツ）ことができる。幾つかの実施態様では、ＤＮＡマイクロアレイは、一塩基多型（ＳＮＰ）マイクロアレイ、例えば、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ（登録商標）ＳＮＰ Ａｒｒａｙ６．０である。
【０１８３】
Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ ＧｅｎｅＣｈｉｐ（登録商標）システムは、ガラス表面上のオリゴヌクレオチドの直接合成によって製造されるアレイを含む市販のマイクロアレイシステムである。プローブ／遺伝子アレイ：オリゴヌクレオチド（通常、２５塩基長）が、半導体ベースのフォトリソグラフィー及び固相化学合成技術の組合せによって、ガラスウエハ上に直接合成される。各アレイは、最高で４０００００個の異なるオリゴを含み、各オリゴは数百万個のコピーで存在する。オリゴヌクレオチドプローブがアレイ上の既知の場所で合成されるので、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ Ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ Ｓｕｉｔｅソフトウェアによって、ハイブリダイゼーションパターン及びシグナル強度を遺伝子同一性及び相対発現レベルの観点で解釈することができる。各遺伝子は、一連の異なるオリゴヌクレオチドプローブによってアレイ上に提示される。各プローブ対は、完全にマッチしたオリゴヌクレオチド及びミスマッチしたオリゴヌクレオチドからなる。完全マッチプローブは、特定の遺伝子に正確に相補的な配列を有し、よって遺伝子の発現の尺度となる。ミスマッチプローブは、中心の塩基位置の単一の塩基置換によって完全マッチプローブとは異なり、標的遺伝子転写物の結合を妨げる。これは、バックグラウンド、及び完全マッチオリゴについて測定されるシグナルに寄与する非特異的なハイブリダイゼーションを決定するのに役立つ。Ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ Ｓｕｉｔｅソフトウェアは、ミスマッチプローブのハイブリダイゼーション強度を完全マッチプローブのそれらから差し引いて、各プローブセットの絶対的又は特異的強度値を決定する。プローブは、Ｇｅｎｂａｎｋ及び他のヌクレオチドリポジトリからの最新情報に基づいて選択される。配列は、遺伝子の３'末端の特有の領域を認識すると考えられる。ＧｅｎｅＣｈｉｐ Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ Ｏｖｅｎ（「回転式」オーブン）は、一度に最高６４個のアレイのハイブリダイゼーションを実施するために使用される。流体工学ステーションは、プローブアレイの洗浄及び染色を実施する。これは、完全に自動化されており、各モジュールが一つのプローブアレイを保持する４つのモジュールを含む。各モジュールは、プログラムされた流体工学プロトコルを使用して、Ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ Ｓｕｉｔｅソフトウェアによって独立して制御される。スキャナは、プローブアレイに結合した標識ｃＲＮＡによって放射される蛍光強度を測定する共焦点レーザー蛍光スキャナである。Ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ Ｓｕｉｔｅソフトウェアを備えたコンピュータワークステーションは、流体工学ステーション及びスキャナを制御する。Ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ Ｓｕｉｔｅソフトウェアは、プローブアレイに対して予めプログラムされたハイブリダイゼーション、洗浄、染色プロトコルを使用して、最高で８つの流体工学ステーションを制御することができる。このソフトウェアはまた、ハイブリダイゼーション強度データを獲得し、適切なアルゴリズムを使用してデータを各遺伝子の存在／非存在コールに変換する。最後に、該ソフトウェアは、比較分析によって実験間の遺伝子発現の変化を検出し、出力をテキストファイルにフォーマットし、これを更なるデータ分析のため��他のソフトウェアプログラムと共に用いることができる。
【０１８４】
幾つかの実施態様では、例えば定量的ＲＴ−ＰＣＲが使用される場合、閾値サイクル数がＦＧＦ２とＶＥＧＦの間で比較され、より低い閾値がより高いレベルの各ｍＲＮＡを示す。非限定的な例として、幾つかの実施態様では、ＦＧＦ２ ｍＲＮＡ及びＶＥＧＦ ｍＲＮＡレベルが分析され、ＦＧＦ２の閾値サイクル数（Ｃｔ）が２８であり、ＶＥＧＦのＣｔが３０であるならば、ＦＧＦ２がＶＥＧＦと比較して高いレベルにある。様々な実施態様では、同様の比較が、任意のタイプの定量的又は半定量的分析方法に対して実施されうる。
【０１８５】
幾つかの実施態様では、ＦＧＦ２レベルとＶＥＧＦレベルは双方とも比較前に正規化される。幾つかの実施態様では、そのような正規化は、レベルが同時に、及び／又は同じアッセイ反応において決定されない場合にＶＥＧＦレベルとのＦＧＦ２レベルの比較を可能にしうる。当業者は、アッセイに応じて、適切な正規化ｍＲＮＡ、タンパク質、又は他の因子を選択することができる。
【実施例】
【０１８６】
以下に検討される実施例は、純粋に本発明の例示であることを意図するものであって、決して本発明を限定するものであると見なされるべきではない。実施例は、以下の実験が、実施された全ての又は唯一の実験であることを表すことを意図しているものではない。上に提供された一般的説明に鑑みて、様々な他の実施態様が実施されうることが理解される。使用される数値（例えば、量、温度等）に関して正確さを確保するための努力がなされているが、ある程度の実験誤差及び偏差は考慮されるべきである。別途示されない限り、部は重量部であり、分子量は重量平均分子量であり、温度は摂氏であり、圧力は大気圧又はほぼ大気圧である。
【０１８７】
実施例１：がん細胞株中のＦＧＦ２及びＶＥＧＦレベル
ヒト肝細胞癌（ＨＣＣ）及び腎細胞がん（ＲＣＣ）細胞株中のＦＧＦ２及びＶＥＧＦの相対レベルを、Ｂｒｏａｄ−Ｎｏｖａｒｔｉｓ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ Ｌｉｎｅ Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ（ＣＣＬＥ；ｗｗｗ．ｂｒｏａｄｉｎｓｔｉｔｕｔｅ．ｏｒｇ／ｃｃｌｅ／ｈｏｍｅ）からのデータを使用して評価した。ＣＣＬＥは１０００以上のヒトがん細胞株のためのゲノム及びトランスクリプトームデータを提供する一般的に利用可能なデータベースである。遺伝子発現値は、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ Ｕ１３３プラス２．０マイクロアレイを実施することによって生成し、生のＡｆｆｙｍｅｔｒｉｘ ＣＥＬファイルを、Ｒｏｂｕｓｔ Ｍｕｌｔｉ−ａｒｒａｙ Ａｖｅｒａｇｅ（ＲＭＡ）を使用して各プローブセットについて単一の値に変換し、値を分位正規化を使用して正規化した。ＦＧＦ２では、調べられたがん細胞全てに対する平均発現値が６．０であり、５．４の中央値であった。腎がん細胞株は、８．４７の中央値で８．３６の平均ＦＧＦ２発現値を示した。インビボで増殖することが知られているＲＣＣ細胞株を調べて、ＡＣＨＮ及びＣａｋｉ−１を、それぞれ９．７９及び１０．６７の値の「高」ＦＧＦ２レベルを有しているとして選択した。ＲＣＣ細胞株Ｃａｋｉ−２及び７８６−０は８．２６と７．２０の値を有しており、よって「低い」ＦＧＦ２レベルを表すと考えられた。Ａ４９８は９．８５のＦＧＦ２発現値を有しており、これはこの組織型の平均値を上回っているが、この株はまたＶＥＧＦの高い発現を示し、＜１のＦＧＦ２／ＶＥＧＦ比を有していた（以下で検討）。肝がん細胞株については、ＦＧＦ２の発現の平均値と中央値はそれぞれ６．５３及び６．８１である。
【０１８８】
ＨＣＣ細胞株ＳＫ−Ｈｅｐ−１は９．４５のＦＧＦ２値を有し、従って「高」ＦＧＦ２レベルを有すると考えられた。
【０１８９】
ＶＥＧＦの相対発現値を同様にＣＣＬＥを使用して評価した。調べたがん細胞全体の平均ＶＥＧＦ値は８．１３で、８．０６の中央値であった。腎がん細胞株は、９．３８の中央値で９．２４の平均ＶＥＧＦ値であった。ＲＣＣ細胞株Ａ４９８及び７８６−０は、９．７７と９．３９のＶＥＧＦ値を有し、よって「高」ＶＥＧＦレベルを有すると考えられた。ＲＣＣ細胞株ＡＣＨＮ及びＣａｋｉ−１は、７．１９と７．５３のＶＥＧＦ値を有しており、従って「低い」ＶＥＧＦレベルを有すると考えられる。
【０１９０】
ＨＣＣ株は、８．１７の中央値で８．４０の平均ＶＥＧＦ値を示した。ＨＣＣ細胞株ＳＫ−Ｈｅｐ−１細胞は７．０３のＶＥＧＦ値を有し、従って、「低」ＶＥＧＦレベルを有すると考えられた。
【０１９１】
加えて、我々はこれらのＲＣＣ及びＨＣＣ細胞株におけるＶＥＧＦに対するＦＧＦ２の比を計算するためにＣＣＬＥ発現値を利用した。＞１のＦＧＦ２／ＶＥＧＦ比を有する細胞株はＲＣＣ株ＡＣＨＮ及びＣａｋｉ−１及びＨＣＣ細胞株ＳＫ−Ｈｅｐ−１を含む一方、１の値又は１の値未満の比を有する細胞株はＲＣＣ細胞株Ａ４９８、Ｃａｋｉ−２、及び７８６−０を含んでいた。
【０１９２】
表２及び３は、がん細胞株の各々におけるＦＧＦ２及びＶＥＧＦ ｍＲＮＡレベルと、ＦＧＦ２／ＶＥＧＦレベルの比を示す。表２の細胞株はヒト腎細胞がんに由来し、表３の細胞株はヒト肝細胞がんに由来する。
2019023193.tif 000003
2019023193.tif 000004
【０１９３】
細胞株を、＞１のＦＧＦ２／ＶＥＧＦ比を持つ細胞株（幾つかの実施態様では「高ＦＧＦ２、低いＶＥＧＦ」であると考えられる）と、＜１のＦＧＦ２／ＶＥＧＦ比を持つ細胞株）（幾つかの実施態様では「低ＦＧＦ２、高ＶＥＧＦ」と考えられる）の２つのグループに分けた。
【０１９４】
実施例２：ＡＣＨＮ異種移植モデルにおける単剤として及びパゾパニブとの組合わせでのＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃの投与
６週齢の雌ＣＢ１７ ＳＣＩＤマウスをＣｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Wilmington, MA）から購入し、研究開始前に１週間順化させた。ヒト腎明細胞がん（ＲＣＣ）細胞株ＡＣＨＮをＡＴＣＣから購入した（Manassas, VA；カタログ番号ＣＲＬ−１６１１）。細胞を、移植のために増やすために完全増殖培地中で３継代培養した。ＡＣＨＮ細胞を、イーグル最小必須培地（ＥＭＥＭ）中で培養した。培地に１０％の熱失活ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）及び抗生物質−抗真菌溶液を補充した。細胞を５％ＣＯ２を含む加湿雰囲気中で３７℃で増殖させた。
【０１９５】
培養細胞が８５〜９０％のコンフルエンスに達したとき、細胞を回収し、１ミリリットル当たり５×１０７細胞で、５０％マトリゲルを含む冷Ｃａ２＋及びＭｇ２＋非含有リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中に再懸濁させた。細胞を、５×１０６細胞／１００μｌ／マウスでマウスの右脇腹に皮下移植した。腫瘍増殖のために細胞を移植した後、マウスを週二回モニターした。ＡＣＨＮ腫瘍が、腫瘍サイズ（ｍｍ３）＝（幅（ｍｍ）×長さ（ｍｍ））２／２の式に従って、１００ｍｍ３の平均サイズに達したときに、マウスを選別し、無作為化（ｎ＝１０）し、処置を開始した。
【０１９６】
ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ（ＦＰ−１０３９）又はネガティブコントロールとしてのアルブミンを、１週間に２回腹腔内注射を介して１５ｍｇ／ｋｇで投与した。パゾパニブ（Ｖｏｔｒｉｅｎｔ（登録商標））を経口胃管栄養法によって毎日１００ｍｇ／ｋｇで投与し、ビヒクルをネガティブコントロールとした。腫瘍が１００ｍｍ３に達したとき、ＦＰ−１０３９処置を開始した；その後、ＦＰ−１０３９処置した腫瘍群の半分に、腫瘍がおよそ４５０ｍｍ３に達したときにパゾパニブ同時処置を開始した。治療開始の際、腫瘍サイズを各マウスにおいて週２回、測定した。各腫瘍の長さ及び幅は、ノギスを使用して測定し、上記の式に従って腫瘍サイズを計算した。皮下腫瘍体積が２０００ｍｍ３を超えたとき、又は腫瘍が過度に壊死性になったとき、マウスを安楽死させた。
【０１９７】
ＦＰ−１０３９及び／又はパゾパニブでの処置の結果の腫瘍体積の比較は、Ｐ＜０．０５ならば、統計的に有意であると判定された。Ｐ値を、計算された腫瘍体積の独立両側ｔ検定解析を使用して計算した。
【０１９８】
図１はこの実験の結果を示している。ＡＣＨＮ異種移植モデル（高ＦＧＦ２、低ＶＥＧＦ；ＦＧＦ２／ＶＥＧＦ＝１．３６；表２を参照）は、単剤療法としてＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ（「ＦＰ−１０３９」）に反応した。６３日目に始まるパゾパニブの投与は、腫瘍増殖の大きな阻害をもたらすようであった。図１Ａを参照のこと。図１Ｂに示されるように、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ（「ＦＰ−１０３９」）単独では６３日目に５１％の腫瘍増殖阻害（ｐ＜０．０００１）の結果となった。パゾパニブとＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ（「ＦＰ−１０３９）の組合わせでは、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ（「ＦＰ−１０３９」）単独の場合よりも大きな腫瘍増殖阻害をもたらすようであったが、その結果は統計的有意には達しなかった（ｐ＝０．０５５２）。図１Ｃを参照のこと。この分析は、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃは単独で、高ＦＧＦ２と低ＶＥＧＦ（比＝１．３６、表２を参照）を伴うＡＣＨＮ異種移植モデルにおいて腫瘍増殖を有意に減少させたことを証明している。
【０１９９】
実施例３：７８６−０異種移植モデルにおける単剤として及びパゾパニブとの組合わせでのＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃの投与
６週齢の雌ＣＢ１７ ＳＣＩＤマウスをＣｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Wilmington, MA）から購入し、研究開始前に１週間順化させた。ヒト腎明細胞がん（ＲＣＣ）細胞株７８６−０をＡＴＣＣから購入した（Manassas, VA；カタログ番号ＣＲＬ−１９３２）。細胞を、移植のために増やすために完全増殖培地中で３継代培養した。７８６−０を、１０％の熱失活ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）及び抗生物質−抗真菌溶液を補充したＲＰＭＩ−１６４０培地中で培養した。細胞を５％ＣＯ２を含む加湿雰囲気中で３７℃で増殖させた。
【０２００】
培養細胞が８５〜９０％のコンフルエンスに達したとき、細胞を回収し、１ミリリットル当たり５×１０７細胞で、５０％マトリゲルを含む冷Ｃａ２＋及びＭｇ２＋非含有リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中に再懸濁させた。細胞を、５×１０６細胞／１００μｌ／マウスでマウスの右脇腹に皮下移植した。腫瘍増殖のために細胞を移植した後、マウスを週二回モニターした。７８６−０腫瘍が、腫瘍サイズ（ｍｍ３）＝（幅（ｍｍ）×長さ（ｍｍ））２／２の式に従って、１００ｍｍ３の平均サイズに達したときに、マウスを選別し、無作為化（ｎ＝１０）し、処置を開始した。
【０２０１】
ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ（ＦＰ−１０３９）又はネガティブコントロールとしてのアルブミンを、１週間に２回腹腔内注射を介して１５ｍｇ／ｋｇで投与した。パゾパニブ（Ｖｏｔｒｉｅｎｔ（登録商標））を経口胃管栄養法によって毎日１００ｍｇ／ｋｇで投与し、ビヒクルをネガティブコントロールとした。ＦＰ−１０３９及びパゾパニブの投与は同時に開始した。治療開始の際、腫瘍サイズを各マウスにおいて週２回、測定した。各腫瘍の長さ及び幅は、ノギスを使用して測定し、上記の式に従って腫瘍サイズを計算した。皮下腫瘍体積が２０００ｍｍ３を超えたとき、又は腫瘍が過度に壊死性になったとき、マウスを安楽死させた。
【０２０２】
ＦＰ−１０３９及び／又はパゾパニブでの処置の結果の腫瘍体積の比較は、Ｐ＜０．０５ならば、統計的に有意であると判定された。Ｐ値は、計算された腫瘍体積の独立両側ｔ検定解析を使用して計算した。
【０２０３】
図２はこの実験の結果を示している。７８６−０異種移植モデル（低ＦＧＦ２、高ＶＥＧＦ；ＦＧＦ２／ＶＥＧＦ＝０．７７；表２を参照）は、単剤療法としてＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ（「ＦＰ−１０３９」）に反応しなかった。図２Ａ及び図２Ｂを参照のこと。対照的に、７８６−０異種移植モデルは単剤療法としてパゾパニブに反応した。図２Ａ−Ｃを参照のこと。驚いたことに、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ（「ＦＰ−１０３９」）とパゾパニブの併用は、パゾパニブ単独よりも大きな効果を示した（８６日目でｐ＝０．００４６及び９７日目でｐ＝０．００２２）。同上参照。この分析は、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃは単独で、低ＦＧＦ２と高ＶＥＧＦ（比＝０．７７、表２を参照）を伴う７８６−０異種移植モデルにおいて腫瘍増殖を阻害しなかったが、パゾパニブはそのモデルにおいて効果的であったことを証明している。しかしながら、パゾパニブと併用したＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃは、７８６−０異種移植モデルにおいてパゾパニブ単独よりも更に大きな腫瘍増殖阻害を示した。
【０２０４】
実施例４：Ａ４９８異種移植モデルにおける単剤として及びパゾパニブとの組合わせでのＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃの投与
６週齢の雌ＣＢ１７ ＳＣＩＤマウスをＣｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Wilmington, MA）から購入し、研究開始前に１週間順化させた。ヒト腎明細胞がん（ＲＣＣ）細胞株Ａ４９８をＡＴＣＣから購入した（Manassas, VA；カタログ番号ＨＴＢ−４４）。細胞を、移植のために増やすために完全増殖培地中で３継代培養した。Ａ４９８細胞を、１０％の熱失活ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）及び抗生物質−抗真菌溶液を補充したイーグル最小必須培地（ＥＭＥＭ）中で培養した。細胞を５％ＣＯ２を含む加湿雰囲気中で３７℃で増殖させた。
【０２０５】
培養細胞が８５〜９０％のコンフルエンスに達したとき、細胞を回収し、１ミリリットル当たり５×１０７細胞で、５０％マトリゲルを含む冷Ｃａ２＋及びＭｇ２＋非含有リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中に再懸濁させた。細胞を、５×１０６細胞／１００μｌ／マウスでマウスの右脇腹に皮下移植した。腫瘍増殖のために細胞を移植した後、マウスを週二回モニターした。Ａ４９８腫瘍が、腫瘍サイズ（ｍｍ３）＝（幅（ｍｍ）×長さ（ｍｍ））２／２の式に従って、１００ｍｍ３の平均サイズに達したときに、マウスを選別し、無作為化（ｎ＝１０）し、処置を開始した。
【０２０６】
ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ（ＦＰ−１０３９）又はネガティブコントロールとしてのアルブミンを、１週間に２回腹腔内注射を介して１５ｍｇ／ｋｇで投与した。パゾパニブ（Ｖｏｔｒｉｅｎｔ（登録商標））を経口胃管栄養法によって毎日１００ｍｇ／ｋｇで投与し、ビヒクルをネガティブコントロールとした。ＦＰ−１０３９及びパゾパニブの投与は同時に開始した。治療開始の際、腫瘍サイズを各マウスにおいて週２回、測定した。各腫瘍の長さ及び幅は、ノギスを使用して測定し、上記の式に従って腫瘍サイズを計算した。皮下腫瘍体積が２０００ｍｍ３を超えたとき、又は腫瘍が過度に壊死性になったとき、マウスを安楽死させた。８９日目（腫瘍細胞接種後）に、パゾパニブ処置腫瘍群（４１０ｍｍ３の平均腫瘍体積）を更なる処置と分析のために２つの群に分けた。一つの群は毎日パゾパニブ単独での処置を継続して受け、第２の群は、週２回のＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃの腹腔内注射に加えてパゾパニブ処置を毎日受けた。腫瘍は上記の方法に従って週２回、継続して測定した。
【０２０７】
ＦＰ−１０３９及び／又はパゾパニブでの処置の結果の腫瘍体積の比較は、Ｐ＜０．０５ならば、統計的に有意であると判定された。Ｐ値を、計算された腫瘍体積の独立両側ｔ検定解析を使用して計算した。
【０２０８】
図３は該実験の第一相の結果を示している。Ａ４９８異種移植モデル（低ＦＧＦ２、高ＶＥＧＦ；ＦＧＦ２／ＶＥＧＦ＝１．０１；表２を参照）は、単剤療法としてのＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ（「ＦＰ−１０３９」）に対して殆ど反応を示さなかった。図３Ａを参照のこと。対照的に、Ａ４９８異種移植モデルは単剤療法としてのパゾパニブに反応した。図３Ａ−Ｃを参照のこと。驚いたことに、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ（「ＦＰ−１０３９」）とパゾパニブの併用は、パゾパニブ単独よりも大きな効果を示した（５３日目でｐ＝０．００４５及び８１日目でｐ＝０．００１２）。同上参照。この分析は、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃは単独で、低ＦＧＦ２と高ＶＥＧＦ（比＝１．０１、表２を参照）を伴うＡ４９８異種移植モデルにおいて腫瘍増殖を阻害しなかったが、パゾパニブはそのモデルにおいて効果的であったことを証明している。しかしながら、パゾパニブと併用したＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃは、Ａ４９８異種移植モデルにおいてパゾパニブ単独よりも更に大きな腫瘍増殖阻害を示した。
【０２０９】
図１４は該実験の第２相の結果を示している。動物を再グループ分けした日（８９日目）に対する腫瘍体積パーセントをグラフにすることにより、腫瘍サイズの変化が示されている。図１４Ａを参照のこと。腫瘍体積パーセントは、腫瘍サイズ％＝１００×（体積（ｍｍ３）／８９日目の体積（ｍｍ３））との式を使用して各個々の動物に対して計算した。ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ（「ＦＰ−１０３９」）及び／又はパゾパニブでの処置の結果としての腫瘍サイズパーセントの比較は、Ｐ＜０．０５ならば統計的に有意であると判定された。Ｐ値は、腫瘍が測定された最終日（１１０日目）に計算された腫瘍サイズパーセントの独立両側ｔ検定解析を使用して計算した。図１４Ｂに示されるように、腫瘍がパゾパニブ処置に対して耐性になったマウスへのパゾパニブ＋ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃの投与は、継続されたパゾパニブ単独処置に対して腫瘍サイズの有意な減少をもたらした。
【０２１０】
実施例５：Ｃａｋｉ−２異種移植モデルにおける単剤として及びパゾパニブとの組合わせでのＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃの投与
６週齢の雌ＣＢ１７ ＳＣＩＤマウスをＣｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Wilmington, MA）から購入し、研究開始前に１週間順化させた。ヒト腎明細胞がん（ＲＣＣ）細胞株Ｃａｋｉ−２をＡＴＣＣから購入した（Manassas, VA；カタログ番号ＨＴＢ−４７）。細胞を、移植のために増やすために完全増殖培地中で３継代培養した。Ｃａｋｉ−２細胞を、１０％の熱失活ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）及び抗生物質−抗真菌溶液を補充したマッコイ５ａ変性培地中で培養した。細胞を５％ＣＯ２を含む加湿雰囲気中で３７℃で増殖させた。
【０２１１】
培養細胞が８５〜９０％のコンフルエンスに達したとき、細胞を回収し、１ミリリットル当たり５×１０７細胞で、５０％マトリゲルを含む冷Ｃａ２＋及びＭｇ２＋非含有リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中に再懸濁させた。細胞を、５×１０６細胞／１００μｌ／マウスでマウスの右脇腹に皮下移植した。腫瘍増殖のために細胞を移植した後、マウスを週二回モニターした。Ｃａｋｉ−２腫瘍について、腫瘍サイズ（ｍｍ３）＝（幅（ｍｍ）×長さ（ｍｍ））２／２の式に従って、腫瘍が２００ｍｍ３の平均サイズに達したときに処置を開始し、マウスを選別し、無作為化（ｎ＝１０）し、処置を開始した。
【０２１２】
ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ（ＦＰ−１０３９）又はネガティブコントロールとしてのアルブミンを、１週間に２回腹腔内注射を介して１５ｍｇ／ｋｇで投与した。パゾパニブ（Ｖｏｔｒｉｅｎｔ（登録商標））を経口胃管栄養法によって毎日１００ｍｇ／ｋｇで投与し、ビヒクルをネガティブコントロールとした。ＦＰ−１０３９及びパゾパニブの投与は同時に開始した。治療開始の際、腫瘍サイズを各マウスにおいて週２回、測定した。各腫瘍の長さ及び幅は、ノギスを使用して測定し、上記の式に従って腫瘍サイズを計算した。皮下腫瘍体積が２０００ｍｍ３を超えたとき、又は腫瘍が過度に壊死性になったとき、マウスを安楽死させた。
【０２１３】
ＦＰ−１０３９及び／又はパゾパニブでの処置の結果の腫瘍体積の比較は、Ｐ＜０．０５ならば、統計的に有意であると判定された。Ｐ値は、計算された腫瘍体積の独立両側ｔ検定解析を使用して計算した。
【０２１４】
図４はこの実験の結果を示している。Ｃａｋｉ−２異種移植モデル（低ＦＧＦ２、高ＶＥＧＦ；ＦＧＦ２／ＶＥＧＦ＝０．９６；表２を参照）は、単剤療法としてのＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ（「ＦＰ−１０３９」）に殆ど反応しなかった。図４Ａを参照のこと。対照的に、Ｃａｋｉ−２異種移植モデルは単剤療法としてのパゾパニブに強い反応を示した。図４Ａ及び４Ｂを参照のこと。この実験において、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ（「ＦＰ−１０３９」）とパゾパニブの併用は、単剤療法としてのパゾパニブと同様に効果的であった。同上参照。この分析は、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃは単独で、低ＦＧＦ２と高ＶＥＧＦ（比＝０．９６、表２を参照）を伴うＣａｋｉ−２異種移植モデルにおいて腫瘍増殖を阻害しなかったが、パゾパニブはそのモデルにおいて効果的であったことを証明している。パゾパニブと併用したＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃは、パゾパニブ単独と同様の阻害を示したが、これはパゾパニブに対するこのモデルの特定の感受性の反映であろう。医薬品評価研究センターに２００８年１２月１９日に提出されたパゾパニブに対する新薬承認申請のための薬理学／毒性学審査及び評価（ＮＤＡ）第２２−４６５号によれば、ＣＢ−１７ ＳＣＩＤマウスにおけるＣａｋｉ−２腫瘍異種移植片は、１０、３０、及び１００ｍｇ／ｋｇパゾパニブでそれぞれ９０％、７７％、及び９９％の腫瘍阻害を示している。
【０２１５】
実施例６：ＳＫ−Ｈｅｐ−１異種移植モデルにおける単剤として及びパゾパニブとの組合わせでのＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃの投与
６週齢の雌ＣＢ１７ ＳＣＩＤマウスをＣｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Wilmington, MA）から購入し、研究開始前に１週間順化させた。ヒト肝細胞がん（ＨＣＣ）細胞株ＳＫ−Ｈｅｐ−１をＡＴＣＣから購入した（カタログ番号ＨＴＢ−５２）。細胞を、移植のために増やすために完全増殖培地中で３継代培養した。ＳＫ−Ｈｅｐ−１細胞を、１０％の熱失活ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）及び抗生物質−抗真菌溶液を補充したイーグル最小必須培地（ＥＭＥＭ）中で培養した。細胞を５％ＣＯ２を含む加湿雰囲気中で３７℃で増殖させた。
【０２１６】
培養細胞が８５〜９０％のコンフルエンスに達したとき、細胞を回収し、１ミリリットル当たり５×１０７細胞で、５０％マトリゲルを含む冷Ｃａ２＋及びＭｇ２＋非含有リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中に再懸濁させた。細胞を、５×１０６細胞／１００μｌ／マウスでマウスの右脇腹に皮下移植した。腫瘍増殖のために細胞を移植した後、マウスを週二回モニターした。ＳＫ−Ｈｅｐ−１腫瘍が、腫瘍サイズ（ｍｍ３）＝（幅（ｍｍ）×長さ（ｍｍ））２／２の式に従って、１００ｍｍ３の平均サイズに達したときに、マウスを選別し、無作為化（ｎ＝１０）し、処置を開始した。
【０２１７】
ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ（ＦＰ−１０３９）又はネガティブコントロールとしてのアルブミンを、１週間に２回腹腔内注射を介して１５ｍｇ／ｋｇで投与した。パゾパニブ（Ｖｏｔｒｉｅｎｔ（登録商標））を経口胃管栄養法によって毎日１００ｍｇ／ｋｇで投与し、ビヒクルをネガティブコントロールとした。腫瘍が１００ｍｍ３のときＦＰ−１０３９処置を開始し；ついで、ＦＰ−１０３９処置腫瘍群の半分について、腫瘍がおよそ５５０ｍｍ３に達したとき、パソパニブ併用処置を開始した。治療開始の際、腫瘍サイズを各マウスにおいて週２回、測定した。各腫瘍の長さ及び幅は、ノギスを使用して測定し、上記の式に従って腫瘍サイズを計算した。皮下腫瘍体積が２０００ｍｍ３を超えたとき、又は腫瘍が過度に壊死性になったとき、マウスを安楽死させた。
【０２１８】
ＦＰ−１０３９及び／又はパゾパニブでの処置の結果の腫瘍体積の比較は、Ｐ＜０．０５ならば、統計的に有意であると判定された。Ｐ値は、計算された腫瘍体積の独立両側ｔ検定解析を使用して計算した。
【０２１９】
図５はこの実験の結果を示している。ＳＫ−Ｈｅｐ−１異種移植モデル（高ＦＧＦ２、低ＶＥＧＦ；ＦＧＦ２／ＶＥＧＦ＝１．３４；表３を参照）は、単剤療法としてのＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ（「ＦＰ−１０３９」）に反応した。図５Ａ及び５Ｂを参照のこと。パゾパニブの添加は該実験において腫瘍増殖阻害を有意には増加させなかった。図５Ｃを参照のこと。この分析は、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃは単独で、高ＦＧＦ２と低ＶＥＧＦ（比＝１．３４、表３を参照）を伴うＳＫ−Ｈｅｐ−１異種移植モデルにおいて腫瘍増殖を阻害したことを証明している。
【０２２０】
実施例７：ＨｅｐＧ２、ＨｕＨ７、及びＨｅｐ３Ｂ異種移植モデルにおける単剤としてのＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃの投与
６週齢の雌ＣＢ１７ ＳＣＩＤマウスをＣｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Wilmington, MA）から購入し、研究開始前に１週間順化させた。ヒト肝細胞がん（ＨＣＣ）細胞株ＨｅｐＧ２及びＨｅｐ３ＢをＡＴＣＣ（Manassas, VA）から購入し、Ｈｕｈ７をＪＣＲＢ（Japanese Collection of Research Bioresources）から購入した。細胞を、移植のために増やすために完全増殖培地中で３継代培養した。ＨｅｐＧ２及びＨｅｐ３Ｂ細胞を、１０％のウシ胎仔血清（ＦＢＳ）、２ｍＭのＬ−グルタミン、及びペニシリン−ストレプトマイシン抗生物質溶液を補充したダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）中で培養した。Ｈｕｈ７細胞を、１０％のウシ胎仔血清（ＦＢＳ）及びペニシリン−ストレプトマイシン抗生物質溶液を補充したダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）中で培養した。細胞を、５％ＣＯ２を含む加湿雰囲気中で３７℃で増殖させた。
【０２２１】
培養細胞が８５〜９０％のコンフルエンスに達したとき、細胞を回収し、５０％マトリゲルを含む冷Ｃａ２＋及びＭｇ２＋非含有リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中に再懸濁させた。細胞を、ＨｅｐＧ２及びＨｅｐ３Ｂに対しては、５×１０６細胞／１００μｌ／マウスで、Ｈｕｈ７に対しては１×１０６細胞／１００μｌ／マウスで、マウスの右脇腹に皮下移植した。腫瘍増殖のために細胞を移植した後、マウスを週二回モニターした。
【０２２２】
ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ（ＦＰ−１０３９）又はネガティブコントロールとしてのアルブミンを、１週間に２回腹腔内注射を介して１５ｍｇ／ｋｇで投与した。Ｈｕｈ異種移植片に対しては、ビヒクルをネガティブコントロールとして使用した。ＨｅｐＧ２及びＨｅｐ３Ｂに対しては腫瘍細胞接種から１日後に投薬を開始した。Ｈｕｈ７腫瘍を９０ｍｍ３＋／−２０ｍｍ３に達するようにさせ、その時点で群に層別化し、投薬を開始した。治療開始の際、腫瘍サイズを各マウスにおいて週２回、測定した。各腫瘍の長さ及び幅は、ノギスを使用して測定し、腫瘍サイズを、腫瘍サイズ（ｍｍ３）＝（幅（ｍｍ）×長さ（ｍｍ））２／２の式に従って、計算した。皮下腫瘍体積がＨｅｐＧ２については５００ｍｍ３、Ｈｅｐ３Ｂについては６００ｍｍ３、又はＨｕｈについては２０００ｍｍ３を超えたとき、マウスを安楽死させた。
【０２２３】
ＦＰ−１０３９での処置の結果の腫瘍体積の比較は、Ｐ＜０．０５ならば、統計的に有意であると判定された。Ｐ値は、計算された腫瘍体積の独立両側ｔ検定解析を使用して計算した。
【０２２４】
図６はこの実験の結果を示している。それぞれ＜１のＦＧＦ２／ＶＥＧＦ比であるＨｅｐＧ２細胞、Ｈｅｐ３Ｂ細胞、又はＨｕｈ７細胞においてＦＰ−１０３９を使用する単剤効果はなかった。表３を参照のこと。
【０２２５】
実施例８：ＳＫ−Ｈｅｐ−１異種移植モデルにおける単剤として、及びソラフェニブとの組合わせでのＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃの投与
６週齢の雌ＣＢ１７ ＳＣＩＤマウスをＣｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Wilmington, MA）から購入し、研究開始前に１週間順化させた。ヒト肝細胞がん（ＨＣＣ）細胞株ＳＫ−Ｈｅｐ−１をＡＴＣＣから購入した（カタログ番号ＨＴＢ−５２）。細胞を、移植のために増やすために完全増殖培地中で３継代培養した。ＳＫ−Ｈｅｐ−１細胞を、１０％の熱失活ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）及び抗生物質−抗真菌溶液を補充したイーグル最小必須培地（ＥＭＥＭ）中で培養した。細胞を５％ＣＯ２を含む加湿雰囲気中で３７℃で増殖させた。
【０２２６】
培養細胞が８５〜９０％のコンフルエンスに達したとき、細胞を回収し、１ミリリットル当たり５×１０７細胞で、５０％マトリゲルを含む冷Ｃａ２＋及びＭｇ２＋非含有リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中に再懸濁させた。細胞を、５×１０６細胞／１００μｌ／マウスでマウスの右脇腹に皮下移植した。腫瘍増殖のために細胞を移植した後、マウスを週二回モニターした。ＳＫ−Ｈｅｐ−１腫瘍が、腫瘍サイズ（ｍｍ３）＝（幅（ｍｍ）×長さ（ｍｍ））２／２の式に従って、１００ｍｍ３の平均サイズに達したときに、マウスを選別し、無作為化（ｎ＝１０）し、処置を開始した。
【０２２７】
ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ（ＦＰ−１０３９）又はネガティブコントロールとしてのアルブミンを、１週間に２回腹腔内注射を介して１５ｍｇ／ｋｇで投与した。ソラフェニブ（Ｎｅｘａｖａｒ（登録商標））を、週５回、経口胃管栄養法によって毎日２０ｍｇ／ｋｇで投与した。動物に、ソラフェニブ処置のコントロールとしてビヒクル（１％のＤＭＳＯ／１９％の１：１クレモホール／エタノール／８０％水）を胃管栄養法によって毎日投与した。腫瘍が１００ｍｍ３に達したとき、ＦＰ−１０３９処置を開始した。治療開始の際、腫瘍サイズを各マウスにおいて週２回、測定した。各腫瘍の長さ及び幅は、ノギスを使用して測定し、上記の式に従って腫瘍サイズを計算した。皮下腫瘍体積が１０００ｍｍ３を超えたとき、腫瘍が過度に壊死性になったとき、又は動物の健康が損なわれたとき、マウスを安楽死させた。
【０２２８】
ＦＰ−１０３９及び／又はソラフェニブでの処置の結果の腫瘍体積の比較は、Ｐ＜０．０５ならば、統計的に有意であると判定された。Ｐ値を、腫瘍が測定された最終日の計算された腫瘍体積の独立両側ｔ検定解析を使用して計算した。
【０２２９】
図７はこの実験の結果を示している。ＳＫ−Ｈｅｐ−１異種移植片モデル（高ＦＧＦ２、低ＶＥＧＦ；ＦＧＦ２／ＶＥＧＦ＝１．３４；表３を参照）は、単剤療法としてのＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ（「ＦＰ−１０３９」）（６１日目でｐ＝０．００３６）に反応し、また単剤療法としてのソラフェニブ（６１日目でｐ＜０．０００１）にも反応した。図７Ａ、Ｂ、及びＣを参照のこと。ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃとソラフェニブの併用は、ソラフェニブ単独（６１日目でｐ＝０．０００４）又はＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ単独（ｐ＝０．００１）よりも腫瘍増殖阻害を有意に増大させた。同上参照。この分析は、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃは単独で、高ＦＧＦ２と低ＶＥＧＦを伴うＳＫ−Ｈｅｐ−１異種移植モデルにおいて腫瘍増殖を阻害し、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃとソラフェニブの併用は、ソラフェニブ又はＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ単独よりも腫瘍増殖阻害を有意に増加させる相加効果を有していたことを証明している。
【０２３０】
単剤としての、またソラフェニブと組合わせてのＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−ＦｃをＨｅｐＧ２異種移植モデルにおいても試験した。ＨｅｐＧ２細胞は０．５４の低ＦＧＦ２／ＶＥＧＦ比を有しており、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃは単剤として効果的ではなかった。実施例７を参照のこと。単剤としてのソラフェニブはＨｅｐＧ２異種移植モデルにおいて腫瘍増殖を阻害するが、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃとソラフェニブの組合せがソラフェニブ単独よりも効果的であることは見出せなかった。
【０２３１】
実施例９：ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃによる反応の予測因子
ＦＧＦリガンド、ＦＧＦ受容体、ＦＧＦ結合タンパク質、ＦＧＦシグナル伝達分子、及び一群の血管新生関連標的を含む遺伝子のパネルのＲＮＡ発現を、一組の３５個の腫瘍細胞株及び異種移植片においてｑＲＴ−ＰＣＲを使用して決定した。ＲＮＡｅａｓｙ（登録商標）ミニキット（Qiagen, Germany）を使用して、インビトロで増殖させた細胞株又はインビボで増殖させた腫瘍異種移植片からＲＮＡを抽出した。ＱｕａｎｔｉＴｅｃｔ Ｒｅｖｅｒｓｅ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ Ｋｉｔ（Qiagen, Germany）を使用したランダム六量体プライミング及び逆転写酵素によりｃＤＮＡを作製する前に、抽出したＲＮＡをＤＮＡｓｅ Ｉで処理した。ヒト及びマウスＲＮＡの発現は、ヒトＧＵＳＢコントロール参照ＱｕａｎｔｉＴｅｃｔ Ｐｒｉｍｅｒ Ａｓｓａｙ（Qiagen, Germany）を用いるＱｕａｎｔｉＴｅｃｔ Ｐｒｉｍｅｒ Ａｓｓａｙｓ（Qiagen, Germany）を使用して決定した。ＱｕａｎｔｉＴｅｃｔ ＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ ＰＣＲ Ｋｉｔ（Qiagen, Germany）を、リアルタイムｑＲＴ−ＰＣＲ及びＡＢＩ Ｐｒｉｓｍ ＶｉｉＡTM ７ Ｒｅａｌ−Ｔｉｍｅ ＰＣＲ Ｓｙｓｔｅｍ（Applied Biosystems, Foster City, CA）を用いてｍＲＮＡ発現レベルを定量化するために使用した。遺伝子発現の相対定量は、基準物質としてのヒトＧＵＳＢ及び市販のＲＮＡコントロール（Stratagene, La Jolla, CA）を使用して、比較Ｃｔ法に従って算出した。相対定量は、次の式に従って決定した：２−（ΔＣｔ ｓａｍｐｌｅ−ΔＣｔ ｃａｌｉｂｒａｔｏｒ）。
【０２３２】
この実験で使用された腫瘍細胞株及び異種移植片を表４に示す。また、マウス異種移植モデルにおけるＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃの投与計画、腫瘍増殖阻害率（ＴＧＩ（％））、及び腫瘍増殖阻害の統計的有意性（Ｐ値）、並びに細胞株においてＦＧＦＲ１遺伝子が増幅しているかどうかも表４に示す。
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【０２３３】
例示的な異種移植片実験は次の通りである。Ｃａｋｉ−１及びＭＳＴＯ−２１１Ｈの場合、ＳＣＩＤマウス（１群当たりＮ＝１０）の右側腹部に５００万個の細胞を皮下移植した。ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ又はアルブミンを表４に示される用量で週２回腹腔内投与した。腎細胞がん（ＲＣＣ）Ｃａｋｉ−１モデルにおいて、１０ｍｇ／ｋｇのＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃを週２回、６週間投与した結果、８１％（Ｐ＜０．００１）の腫瘍増殖阻害が生じた（ＴＧＩ）。ＭＳＴＯ−２１１Ｈ中皮腫モデルでは、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃの投与により腫瘍増殖が６４％（Ｐ＜０．０００１）減少した。対応する腫瘍において、曲線下面積（ＡＵＣ）分析によって評価したところ、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃは腫瘍体積を有意に減少させた。調べたモデルの１９／３５（５４％）に、２５〜９６％の範囲の阻害を伴う反応が観察された（表４を参照）。
【０２３４】
ＦＧＦリガンド、ＦＧＦ受容体、ＦＧＦ結合タンパク質及びＦＧＦシグナル伝達分子を含む遺伝子のパネルのＲＮＡ発現を、表４の所定の異種移植モデルにおいてｑＲＴ−ＰＣＲを使用して調べた。ついで、遺伝子発現をＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ応答と相関させて、抗腫瘍活性と正の相関及び負の相関を持ったＲＮＡ発現サインを決定した。
【０２３５】
図８は、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ応答者及び非応答者の異種移植片における、（Ａ）ＦＧＦ２ ｍＲＮＡ（ＧＵＳＢに対して正規化）及び（Ｂ）ＦＧＦ２タンパク質の発現を示す。ＦＧＦ２の発現（Ｐ＝０．０３５６９）はＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ応答と正の関連を示した。ＦＧＦ２はＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ応答者及び非応答者の異種移植片間で高い（２４７．７倍）ｍＲＮＡ遺伝子発現比を示した。ＦＧＦ２タンパク質レベルもまたＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ応答と相関していることが確認された。
【０２３６】
図９は、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ応答者及び非応答者の異種移植片における、（Ａ）ＶＥＧＦＡ ｍＲＮＡ（ＧＵＳＢに対して正規化）及び（Ｂ）ＶＥＧＦＡタンパク質の発現を示す。ＶＥＧＦＡの発現（Ｐ＝０．０４２）はＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ応答と負の関連を示した。ＶＥＧＦＡタンパク質レベルもまたＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ応答と負に相関していることが確認された（ｐ＝０．０３０３）。
【０２３７】
実施例１０：中皮腫細胞株中のＦＧＦ２及びＶＥＧＦレベル
ＦＧＦ２及びＶＥＧＦ ｍＲＮＡ発現レベルのデータはＣａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ Ｌｉｎｅ Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ（ＣＣＬＥ；ｗｗｗ．ｂｒｏａｄｉｎｓｔｉｔｕｔｅ．ｏｒｇ／ｃｃｌｅ／ｈｏｍｅ）から獲得し、１２種の中皮腫細胞株に対してコンパイルした。ＣＣＬＥ ｍＲＮＡデータは、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ Ｕ１３３＋２アレイを使用して引き出した。生のＡｆｆｙｍｅｔｒｉｘ ＣＥＬファイルを、Ｒｏｂｕｓｔ Ｍｕｌｔｉ−ａｒｒａｙ Ａｖｅｒａｇｅ（ＲＭＡ）を使用して各プローブセットについて単一の値に変換し、分位正規化を使用して正規化した。例えばIrizarry, R. A.等 Exploration, normalization, and summaries of high density oligonucleotide array probe level data. Biostatistics 4, 249-264, (2003)；Bolstad, B. M., Irizarry, R. A., Astrand, M.及びSpeed, T. P. A comparison of normalization methods for high density oligonucleotide array data based on variance and bias. Bioinformatics 19, 185-193, (2003)を参照のこと。各遺伝子に対する特異的プローブセットＩＤは次の通りである：ＦＧＦ２（２２４７＿ａｔ）；ＶＥＧＦ（７４２２＿ａｔ）。ＣＣＬＥでは、中皮腫細胞株は他のがん細胞株と比較して最も高いＦＧＦ２ ｍＲＮＡレベルの一つを有している。（データは示さず）更に、表５に示されるように、ＦＧＦ２ ｍＲＮＡレベルは、分析された１２種の中皮腫細胞株のうちの１１種においてＶＥＧＦレベルよりも高い。
2019023193.tif 000006
【０２３８】
実施例１１：中皮腫異種移植モデルにおけるＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃの投与
７週齢の雌ＳＣＩＤマウス（Taconic, Hudson, NY）にＮＣＩ−Ｈ２２６細胞（ＡＴＣＣ， Manassas, VA）を５×１０６細胞／マウスで皮下移植し、腫瘍を持ったマウスを、腫瘍が約１７６〜２７７ｍｍ３のサイズに達したときに４群（ｎ＝８／群）に無作為化した。マウスを、３通りの異なった濃度（１．０２４、５．１２又は２５．６ｍｇ／ｋｇ）のＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃで２９日間、１週間に３回（ｔ．ｉ．ｗ．）処置した。腫瘍サイズと体重を週２回測定した。
【０２３９】
図１０に示されるように、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃで処置されたマウスにおいて、２９日目に１．０２４ｍｇ／ｋｇ（１６．２％ＴＧＩ）、５．１２ｍｇ／ｋｇ（５６．８％ＴＧＩ）及び２５．６ｍｇ／ｋｇ（７７．８％ＴＧＩ）の腫瘍増殖阻害（ＴＧＩ）が観察された。
【０２４０】
５から６週齢の雌ＳＣＩＤマウスにＭＳＴＯ−２１１Ｈ細胞（ＡＴＣＣ， Manassas, VA）を５×１０６細胞／マウスで皮下移植し、腫瘍を持ったマウスを、腫瘍が約１５０〜２２５ｍｍ３のサイズに達したときに３群（ｎ＝１０／群）に無作為化した。マウスを、２通りの異なった濃度（５．１２又は２５．６ｍｇ／ｋｇ）のＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃで２９日間、１週間に３回（ｔ．ｉ．ｗ．）処置した。腫瘍サイズと体重を週２回測定した。
【０２４１】
図１１に示されるように、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃで処置されたマウスにおいて、２９日目に５．１２ｍｇ／ｋｇ（２０．３％ＴＧＩ）及び２５．６ｍｇ／ｋｇ（５０．１％ＴＧＩ）の腫瘍増殖阻害（ＴＧＩ）が観察された。
【０２４２】
ラット抗マウス汎内皮細胞抗原抗体（ＭＥＣＡ−３２；BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ）を使用する免疫組織化学（ＩＨＣ）染色を、ＮＣＩ−Ｈ２２６（中皮腫）異種移植研究の腫瘍について実施した。腫瘍を持ったマウスを、上に記載されたように、ビヒクル（０．９％の生理食塩水）か増大用量（１．０２４、５．１２、又は２５．６ｍｇ／ｋｇ）のＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃで２９日間、１週間に３回（ｔ．ｉ．ｗ．）処置した。腫瘍を３０日目に収集した。ＭＥＣＡ−３２ ＩＨＣ染色の定量化を、血管数／組織面積を測定することによって分析した。
【０２４３】
図１２に示されるように、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ処置での血管密度の用量依存性で統計的に有意な減少が、外側領域のデータ（Ａ）及び外側＋内側領域のデータセット（全腫瘍塊；Ｃ）を使用して観察された。この実験では内側領域のデータセット（Ｂ）では有意差は証明されなかった。
【０２４４】
ＩＨＣにより血管密度を測定する他の非限定的例示法は、ＣＤ３１／ＰＥＣＡＭ−１を認識する抗体を使用する。
【０２４５】
実施例１２：ＨＬＦ腫瘍異種移植モデルにおけるＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃの投与
６週齢の雌ＣＢ１７ ＳＣＩＤマウスをＣｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Wilmington, MA）から購入し、研究開始前に１週間順化させた。ヒト肝細胞がん（ＨＣＣ）細胞株ＨＬＦをＪＣＲＢから購入した（カタログ番号ＪＣＲＢ０４０５）。細胞を、移植のために増やすために完全増殖培地中で３継代培養した。ＨＬＦ細胞を、１０％のウシ胎仔血清（ＦＢＳ）及び抗生物質−抗真菌溶液を補充したダルベッコ変法イーグル培地（ＦＢＳ）中で培養した。細胞を５％ＣＯ２を含む加湿雰囲気中で３７℃で増殖させた。
【０２４６】
培養細胞が８５〜９０％のコンフルエンスに達したとき、細胞を回収し、１ミリリットル当たり２．５×１０７細胞で、５０％マトリゲルを含む冷Ｃａ２＋及びＭｇ２＋非含有リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中に再懸濁させた。細胞を、２．５×１０６細胞／１００μｌ／マウスでマウスの右脇腹に皮下移植した。腫瘍増殖のために細胞を移植した後、マウスを週二回モニターした。ＨＬＦ腫瘍が、腫瘍サイズ（ｍｍ３）＝（幅（ｍｍ）×長さ（ｍｍ））２／２の式に従って、１００ｍｍ３の平均サイズに達したときに、マウスを選別し、４処置群の一つに無作為化し、投薬を開始した。最初の腫瘍がおよそ２ヶ月でこの体積に達した。およそ１００ｍｍ３の体積に達したところで、腫瘍を持ったマウスがインビボ研究に継続して追加された（１群当たりｎ＝８〜９）。
【０２４７】
ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ又はネガティブコントロールとしてのアルブミンを、１週間に２回腹腔内注射を介して１５ｍｇ／ｋｇで投与した。ソラフェニブ（Ｎｅｘａｖａｒ（登録商標））を１週間に５回、経口胃管栄養法によって毎日２０ｍｇ／ｋｇで投与した。ソラフェニブ処置のコントロールとして、動物にビヒクル（１％のＤＭＳＯ／１９％の１：１クレモホール／エタノール／８０％水）を胃管栄養法によって毎日投与した。治療開始の際、腫瘍サイズを各マウスにおいて週２回、測定した。各腫瘍の長さ及び幅は、ノギスを使用して測定し、上記の式に従って腫瘍サイズを計算した。皮下腫瘍体積が１５００ｍｍ３を超えたとき、腫瘍が過度に壊死性になったとき、又は動物の健康が損なわれたとき、マウスを安楽死させた。
【０２４８】
ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ及び／又はソラフェニブでの処置の結果の腫瘍体積の比較は、Ｐ＜０．０５ならば、統計的に有意であると判定された。Ｐ値は、処置開始後２４日目の計算された腫瘍体積の独立両側ｔ検定解析を使用して計算した。
【０２４９】
図１３はこの実験の結果を示している。ＨＬＦ異種移植モデル（高ＦＧＦ２、低ＶＥＧＦ；ＦＧＦ２／ＶＥＧＦ＝１．２３；表３を参照）は、単剤療法としてのＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ（「ＦＰ−１０３９」）に反応し（２４日目でｐ＝０．０１７５）、単剤療法としてのソラフェニブにも反応した（２４日目でｐ＝０．００２０）。図１３Ａ及びＢを参照のこと。ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃとソラフェニブの併用は、ソラフェニブ単独よりも（ｐ＝０．０２８９）又はＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ単独よりも（ｐ＝０．００２６）腫瘍増殖阻害を有意に増加させた。同上参照。この分析は、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃは単独で、高ＦＧＦ２と低ＶＥＧＦを伴うＨＬＦ異種移植モデルにおいて腫瘍増殖を阻害し、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃとソラフェニブの併用は、ソラフェニブ単独よりも又はＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ単独よりも腫瘍増殖を有意に増加させたことを証明している。
【０２５０】
配列表
次の表はここで検討された所定の配列を列挙するものである。ＦＧＦＲ１配列は、別の記載がない限り、シグナルペプチドなしで示される。
2019023193.tif 000007
2019023193.tif 000008
【図１】
2019023193.tif 000009
【図２】
2019023193.tif 000010
【図３】
2019023193.tif 000011
【図４】
2019023193.tif 000012
【図５】
2019023193.tif 000013
【図６】
2019023193.tif 000014
【図７Ａ−Ｂ】
2019023193.tif 000015
【図７Ｃ】
2019023193.tif 000016
【図８】
2019023193.tif 000017
【図９】
2019023193.tif 000018
【図１０】
2019023193.tif 000019
【図１１】
2019023193.tif 000020
【図１２】
2019023193.tif 000021
【図１３】
2019023193.tif 000022
【図１４】
2019023193.tif 000023
【配列表】
2019023193000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成30年10月11日(2018.10.11)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
固形がんにおける血管密度を減少させるための医薬であって、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子を含む、医薬。
【請求項２】
固形がんが参照試料又は細胞におけるＦＧＦ２レベルと比較してより高いＦＧＦ２レベルを有している、請求項１に記載の医薬。
【請求項３】
固形がんがＶＥＧＦレベルと比較してより高いＦＧＦ２レベルを有している、請求項１に記載の医薬。
【請求項４】
ＦＧＦ２レベルがＦＧＦ２ ｍＲＮＡレベルである、請求項２又は３に記載の医薬。
【請求項５】
ＶＥＧＦレベルがＶＥＧＦ ｍＲＮＡレベルである、請求項３又は４に記載の医薬。
【請求項６】
ｍＲＮＡレベルが定量的ＲＴ−ＰＣＲによって決定される、請求項４又は５に記載の医薬。
【請求項７】
ＦＧＦ２レベルがＦＧＦ２タンパク質レベルである、請求項２又は３に記載の医薬。
【請求項８】
ＶＥＧＦレベルがＶＥＧＦタンパク質レベルである、請求項３又は７に記載の医薬。
【請求項９】
タンパク質レベルが免疫組織化学によって決定される、請求項７又は８に記載の医薬。
【請求項１０】
ＶＥＧＦレベルに対するＦＧＦ２レベルの比が１より大きい、請求項３に記載の医薬。
【請求項１１】
固形がんが、腎がん（腎細胞がん等）、肝がん（肝細胞がん等）、肺がん、結腸がん、肝がん、乳がん、胃がん、卵巣がん、子宮内膜がん、食道がん、頭頸部がん、神経膠芽腫、中皮腫、及び前立腺がんから選択される、請求項１から１０の何れか一項に記載の医薬。
【請求項１２】
固形がんが中皮腫である、請求項１１に記載の医薬。
【請求項１３】
中皮腫を治療するための医薬であって、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子と、パクリタキセル、カルボプラチン、ドセタキセル、ペメトレキセド、及びシスプラチンから選択される少なくとも１種の治療剤を含む、医薬。
【請求項１４】
中皮腫を治療するための医薬であって、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子と、パクリタキセル、カルボプラチン、ドセタキセル、ペメトレキセド、及びシスプラチンから選択される少なくとも１種の治療剤が組み合わせて投与される、請求項１３に記載の医薬。
【請求項１５】
治療剤がパクリタキセル及びカルボプラチンである、請求項１３又は１４に記載の医薬。
【請求項１６】
治療剤がドセタキセルである、請求項１３又は１４に記載の医薬。
【請求項１７】
治療剤がペメトレキセド、及びシスプラチンである、請求項１３又は１４に記載の医薬。
【請求項１８】
ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子と少なくとも１種の治療剤の投与が中皮腫における血管密度を減少させる、請求項１３から１７の何れか一項に記載の医薬。
【請求項１９】
中皮腫が、参照試料又は細胞中のＦＧＦ２レベルと比較して高いレベルのＦＧＦ２を有している、請求項１３から１８の何れか一項に記載の医薬。
【請求項２０】
中皮腫が、ＶＥＧＦレベルと比較して高いレベルのＦＧＦ２を有している、請求項１３から１９の何れか一項に記載の医薬。
【請求項２１】
ＦＧＦ２レベルがＦＧＦ２ ｍＲＮＡレベルである、請求項１９又は２０に記載の医薬。
【請求項２２】
ＶＥＧＦレベルがＶＥＧＦ ｍＲＮＡレベルである、請求項２０に記載の医薬。
【請求項２３】
ｍＲＮＡレベルが定量的ＲＴ−ＰＣＲによって決定される、請求項２１又は２２に記載の医薬。
【請求項２４】
ＦＧＦ２レベルがＦＧＦ２タンパク質レベルである、請求項１９又は２０に記載の医薬。
【請求項２５】
ＶＥＧＦレベルがＶＥＧＦタンパク質レベルである、請求項２０に記載の医薬。
【請求項２６】
タンパク質レベルが免疫組織化学によって決定される、請求項２４又は２５に記載の医薬。
【請求項２７】
ＶＥＧＦレベルに対するＦＧＦ２レベルの比が１より大きい、請求項２０に記載の医薬。
【請求項２８】
ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＥＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子が、０．５ｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇ、例えば、８ｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される、請求項１３から２７の何れか一項に記載の医薬。
【請求項２９】
ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ又はＥＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子が週１回投与される、請求項１３から２８の何れか一項に記載の医薬。
【請求項３０】
対象が、パゾパニブ、ベバシズマブ、アキシチニブ、アフリベルセプト、ソラフェニブ、及びスニチニブから選択される少なくとも１種の治療剤で以前に治療されている、請求項１から２９の何れか一項に記載の医薬。
【請求項３１】
対象がＶＥＧＦ耐性がん又はパゾパニブ耐性がんに罹患している、請求項３０に記載の医薬。
【請求項３２】
ＦＧＦＲ１ ＥＣＤを含む、請求項１から３１の何れか一項に記載の医薬。
【請求項３３】
ＦＧＦＲ１ ＥＣＤが、配列番号：１から４から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項３２に記載の医薬。
【請求項３４】
ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子を含む、請求項１から３１の何れか一項に記載の医薬。
【請求項３５】
ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子が、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤと融合パートナーを含み、該融合パートナーがＦｃである、請求項３４に記載の医薬。
【請求項３６】
ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ融合分子が、配列番号：５及び配列番号：６から選択される配列を含む、請求項３５に記載の医薬。
【請求項３７】
中皮腫が参照試料又は細胞におけるＦＧＦ２レベルと比較してより高いＦＧＦ２レベルを有し、かつ医薬が配列番号：６の配列を含むＦＧＦＲ１融合分子を含む、請求項３６に記載の医薬。
【外国語明細書】
2019023193000001.pdf