(57)【要約】【課題】低体温に有用な低体温予防又は改善剤の提供。【解決手段】ツクリタケの圧搾物又は抽出物を有効成分とする低体温予防又は改善剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ツクリタケの圧搾物又は抽出物を有効成分とする低体温予防又は改善剤。
【請求項２】
ツクリタケの圧搾物又は抽出物を有効成分とする低体温予防又は改善用食品。
【請求項３】
ツクリタケの圧搾物が、ツクリタケの子実体を圧搾して得られる圧搾物である、請求項１記載の剤又は請求項２記載の食品。
【請求項４】
ツクリタケの圧搾物が、圧搾物の乾燥物換算で１日あたり３〜１５ｇ／体重６０Ｋｇ投与又は摂取される、請求項１〜３のいずれか１項記載の剤又は食品。
【請求項５】
ツクリタケの圧搾物又は抽出物が、マンニトールを０．１〜５０質量％含有する、請求項１〜３のいずれか１項記載の剤又は食品。
【請求項６】
マンニトールを有効成分とする低体温予防又は改善剤。
【請求項７】
マンニトールを有効成分とする低体温予防又は改善用食品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、低体温予防又は改善剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
ヒトの体温の平均は概ね３６．５℃であり、これは体内の酵素が最も活性化されて機能する温度である。
しかしながら、近年、平熱が０．５〜１．５℃低下する低体温のヒトが増加している。その原因は、ミネラル・ビタミン、タンパク質の不足、運動不足、過度のストレスによる血行不良・自律神経の乱れ等が考えられている。また、ヒトの平熱は乳児で最も高く、年齢が上がるにつれて徐々に低下する。青年期に体温の低下は止まるが、高齢者になると再び体温が低下し、平熱は若い時よりも凡そ０．２℃前後低い傾向がみられる。その一因として、熱産生を担う褐色脂肪組織の機能低下が関わっていると考えられている。
【０００３】
斯かる低体温は、免疫力の低下、基礎代謝の低下、体内酵素活性の低下を招き、カゼなどの感染症にかかりやすくなり、花粉症などのアレルギー症状が出やすくなる。また、血行不良・リンパの流れや新陳代謝力の低下、自律神経のバランスの崩れを引き起こす。したがって、低体温では、内蔵の機能低下に伴う諸症状、下痢や脱水症状、手足の冷え、肩こり、頭痛、腰痛、腹痛、生理痛、不眠、睡眠の質の低下、疲労感、活動量の低下といった症状がしばしば現れる。
【０００４】
一方、ツクリタケ（学名：Ａｇａｒｉｃｕｓ  ｂｉｓｐｏｒｕｓ）は、イネ科植物などの草本類の枯れ草を分解する腐植分解菌であり、マッシュルームとして広く食用利用されており、その主要成分は、蛋白質や食物繊維、糖アルコール（マンニトール）等である。マッシュルームの抽出物には、ロイコトリエン遊離抑制作用を有し、抗アレルギー剤として使用できること（特許文献１）、脂肪細胞分化促進作用があること（特許文献２）等が報告されている。また、きのこ類の水性抽出物には、神経成長因子ＮＧＦを増強する作用が報告されている（特許文献３）。また、マッシュルーム凍結乾燥物を摂取した場合に、空間認識力が改善されることが報告されている（非特許文献１）。
【０００５】
しかしながら、ツクリタケやマンニトールに体温上昇作用があることは知られていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開平１１−２１７３３６号公報
【特許文献２】特開２００９−２６３３４４号公報
【特許文献３】特許第４４１０５５５号公報
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Nutr Res. 2015 Dec;35(12):1079-84.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、低体温の改善に有用な低体温改善剤を提供することに関する。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、低体温の改善に有用な天然素材を探索したところ、ツクリタケの圧搾物又はマンニトールを動物に継続摂取した場合に、低体温が改善できることを見出した。
【００１０】
すなわち、本発明は、以下の１）〜４）に係るものである。
１）ツクリタケの圧搾物又は抽出物を有効成分とする低体温予防又は改善剤。
２）ツクリタケの圧搾物又は抽出物を有効成分とする低体温予防又は改善用食品。
３）マンニトールを有効成分とする低体温予防又は改善剤。
４）マンニトールを有効成分とする低体温予防又は改善用食品。
【発明の効果】
【００１１】
本発明の低体温予防又は改善剤は、低体温状態、例えば加齢に伴う低体温に対して体温低下抑制効果を発揮する。したがって、低体温に起因して生じる免疫力の低下、基礎代謝の低下、血行不良・リンパの流れや新陳代謝力の低下、自律神経のバランスの崩れ等の予防又は改善に有用である。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】加齢に伴った深部体温の経時的変化を示すグラフ。
【図２】若齢マウスに対するツクリタケ圧搾物継続摂取後の深部体温を示すグラフ。
【図３】老齢マウスに対するツクリタケ圧搾物継続摂取後の深部体温を示すグラフ。
【図４】ツクリタケ圧搾物摂取後の深部体温の推移を示すグラフ。
【図５】マンニトール摂取後の深部体温の推移を示すグラフ。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本明細書において、「ツクリタケ」とは、ハラタケ科（Ａｇａｒｉｃａｃｅａｅ）ハラタケ属（Ａｇａｒｉｃｕｓ）に属するＡｇａｒｉｃｕｓ  ｂｉｓｐｏｒｕｓを指し、わが国では、「マッシュルーム」とも称される。
【００１４】
ツクリタケは、ホワイト種、オフホワイト種、クリーム種、ブラウン種、Ａｇａｒｉｃｕｓ ｂｉｔｏｒｑｕｉｓ種等の品種が知られているが、本発明においては、当該品種は特に限定されることはなく、いずれも好ましく使用することができる。
【００１５】
本発明において、ツクリタケの使用部位は特に限定されることはなく、傘又は柄、子実体、菌糸体、菌核等の何れでもよいが、子実体を用いるのが好ましい。
【００１６】
ツクリタケの圧搾物としては、ツクリタケを圧搾することにより得られる圧搾汁（搾汁）が挙げられる。圧搾物の製造は特に限定されないが、例えばツクリタケを粗切し、スロージューサー等の圧搾機を用いて圧搾することにより行うことができる。
【００１７】
ツクリタケの抽出物としては、ツクリタケの子実体をそのまま、その破砕物、粉砕物、若しくは上記の圧搾物から抽出した抽出物が挙げられる。
抽出のための溶媒には、極性溶媒、非極性溶媒のいずれをも使用することができる。溶媒の具体例としては、例えば、水；１価、２価又は多価のアルコール類；アセトン、メチルエチルケトン等のケトン類；酢酸メチル、酢酸エチル等のエステル類；ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン等の鎖状又は環状のエーテル類；ポリエチレングリコール等のポリエーテル類；ヘキサン等の飽和又は不飽和の炭化水素類；ベンゼン、トルエン等の芳香族炭化水素類；ジクロロメタン、クロロホルム、ジクロロエタン、四塩化炭素等のハロゲン化炭化水素類；ピリジン類；ジメチルスルホキシド；アセトニトリル；二酸化炭素、超臨界二酸化炭素；油脂、ワックス、その他のオイル類；ならびにこれらの混合物が挙げられる。好適には、水、アルコール類及びその水溶液が挙げられ、アルコール類としてはメタノール、エタノール、１，３−ブチレングリコール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール、イソブタノール、ｓｅｃ−ブタノール、ｔ−ブタノール等が挙げられ、好ましくはエタノールである。
【００１８】
上記アルコール類の水溶液におけるアルコールの濃度（２５℃における容量％）は、好ましくは３０容量％以上、より好ましくは５０容量％以上、さらに好ましくは７５容量％以上であり、且つ好ましくは９９．５容量％以下、より好ましくは９９容量％以下、さらに好ましくは９８容量％以下である。また、上記アルコール類の水溶液におけるアルコールの濃度は、好ましくは３０〜９９．５容量％、より好ましくは５０〜９９容量％、さらに好ましくは７５〜９８容量％である。好ましくは、３０〜９９．５容量％エタノール水溶液、より好ましくは５０〜９９容量％エタノール水溶液、さらに好ましくは７５〜９８容量％エタノール水溶液が挙げられる。
【００１９】
抽出における溶媒の使用量としては、ツクリタケ（乾燥質量換算）１ｇに対して１〜１００ｍＬが好ましい。抽出条件は、十分な抽出が行える条件であれば特に限定されないが、例えば、抽出時間は好ましくは１時間以上、より好ましくは３時間以上がより好ましく、他方、好ましくは２ヶ月以下、より好ましくは５週間以下、より好ましくは２週間以下である。抽出温度は０℃以上が好ましく、５℃以上がより好ましく、他方、溶媒沸点以下が好ましく、９０℃以下がより好ましい。通常、低温なら長時間、高温なら短時間の抽出を行う。
抽出手段は、特に限定されないが、例えば、固液抽出、液液抽出、浸漬、煎出、浸出、還流抽出、ソックスレー抽出、超音波抽出、マイクロ波抽出、攪拌等の通常の手段を用いることができる。
【００２０】
本発明のツクリタケの圧搾物又は抽出物は、例えば食品や医薬品上許容し得る規格に適合し、本発明の効果を発揮するものであれば粗精製物であってもよい。また、必要に応じて、液々分配、固液分配、濾過膜、活性炭、吸着樹脂、イオン交換樹脂、澱出し等の公知の技術によって不活性な夾雑物の除去、脱臭、脱色等の処理を施すことができる。
また、さらに公知の分離精製方法を適宜組み合わせてこれらの純度を高めてもよい。精製手段としては、有機溶剤沈殿、遠心分離、限界濾過膜、高速液体クロマトグラフやカラムクロマトグラフ等が挙げられる。
【００２１】
また、本発明のツクリタケの圧搾物又は抽出物は、そのまま用いてもよく、適宜な溶媒で希釈した希釈液として用いてもよく、あるいは濃縮エキスや乾燥粉末としたり、ペースト状に調製したものでもよい。また、凍結乾燥し、用時に、通常抽出に用いられる溶剤、例えば水、エタノール、水・エタノール混液等の溶剤で希釈して用いることもできる。また、リポソーム等のベシクルやマイクロカプセル等に内包させて用いることもできる。
【００２２】
また、ツクリタケには、マンニトール（特にＤ−マンニトール）が多く含有され、特に子実体には多く含有（乾燥重量１００ｇ当たり２０〜５０ｇ）されていることが知られており、したがって、本発明においては、ツクリタケの圧搾物又は抽出物に代えてマンニトール（Ｄ−マンニトール）を用いることもできる。マンニトールはマンノースの糖アルコールであり、マンニットとも呼ばれる。本発明において、マンニトールはツクリタケから抽出分離して得ることでもよく、また市販品を用いることでもよい。
また、本発明のツクリタケの圧搾物又は抽出物は、マンニトールを０．１〜５０質量％、好ましくは０．５〜４５質量％、より好ましくは１〜４０質量％含有するツクリタケの圧搾物又は抽出物であるのが好ましい。
【００２３】
後記実施例に示すように、ツクリタケの圧搾物又はマンニトールは、高脂肪食摂取による体温低下を抑制する。
したがって、ツクリタケの圧搾物若しくは抽出物、又はマンニトールは、低体温予防又は改善剤となり得、またこれを製造するために使用できる。
また、ツクリタケの圧搾物若しくは抽出物、又はマンニトールは、低体温の予防又は改善のために使用することができる。ここで、当該使用は、ヒト若しくは非ヒト動物、又はそれらに由来する検体における使用であり得、また治療的使用であっても非治療的使用であってもよい。尚、「非治療的」とは、医療行為を含まない概念、すなわち人間を手術、治療又は診断する方法を含まない概念、より具体的には医師又は医師の指示を受けた者が人間に対して手術、治療又は診断を実施する方法を含まない概念である。
【００２４】
本発明において、「低体温」とは、深部体温が平熱より０．５℃以上低下することを意味し、「低体温の予防又は改善」とは、深部体温が低下し低体温となることを抑制すること、又は深部体温を上げて低体温を改善することを意味する。ここで、深部体温とは、体の深部（例えば、直腸、食道、心臓、脳等）の温度を意味し、通常は直腸温である。深部体温は、ヒトの場合、腋下温、口腔（舌下）温、皮膚温等から算出することができる。
低体温の原因は、高脂肪の過剰摂取、ミネラル・ビタミン、タンパク質の不足、運動不足、過度のストレスによる血行不良・自律神経の乱れ、加齢等が挙げられ特に限定されないが、本発明においては、高脂肪の過剰摂取及び加齢に伴って生じる低体温の予防又は改善に適する。
【００２５】
本発明の低体温予防又は改善剤は、体温低下の抑制や低体温の改善の効果を発揮する、ヒト若しくは動物用の医薬品、医薬部外品、食品となり、また当該医薬品、医薬部外品、食品に配合して使用される素材又は製剤となり得る。
なお、当該食品には、体温低下の予防、改善、又は向上効果をコンセプトとし、必要に応じてその旨を表示した食品、機能性表示食品、特定保健用食品、病者用食品、サプリメントが包含される。
【００２６】
本発明の低体温予防又は改善剤を医薬品として用いる場合、当該医薬品は任意の投与形態で投与され得る。投与形態としては、例えば錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、シロップ剤等による経口投与又は注射剤、坐剤、吸入薬、経皮吸収剤、外用剤等による非経口投与が挙げられるが、好ましい形態は経口投与である。
このような種々の剤型の医薬製剤は、本発明のツクリタケの圧搾物若しくは抽出物、又はマンニトールを単独で、又は他の薬学的に許容される賦形剤、結合剤、増量剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤、分散剤、緩衝剤、保存剤、嬌味剤、香料、被膜剤、担体、希釈剤等を適宜組み合わせて調製することができる。
【００２７】
本発明の低体温予防又は改善剤を食品として用いる場合、当該食品の形態は、パン類、ケーキ類、麺類、菓子類、ゼリー類、冷凍食品、アイスクリーム類、乳製品、飲料などの各種食品組成物の他、上述した経口投与製剤と同様の形態（錠剤、カプセル剤、シロップ等）が挙げられる。
種々の形態の食品を調製するには、本発明のツクリタケの圧搾物若しくは抽出物、又はマンニトールを単独で、又は他の食品材料や、溶剤、軟化剤、油、乳化剤、防腐剤、香科、安定剤、着色剤、酸化防止剤、保湿剤、増粘剤等を適宜組み合わせて用いることができる。
【００２８】
本発明の低体温予防又は改善剤におけるツクリタケの圧搾物若しくは抽出物、又はマンニトールの含有量（圧搾物又は抽出物においては、その乾燥物換算）は、好ましくは０．００１質量％以上、より好ましくは０．０１質量％以上、且つ好ましくは２０質量％以下、より好ましく１０質量％以下であり、より好ましく５質量％以下であり、また好ましくは０．００１〜２０質量％、より好ましくは０．０１〜１０質量％、より好ましくは０．０１〜５質量％である。
【００２９】
本発明の低体温予防又は改善剤の投与量は、対象者の状態、体重、性別、年齢又はその他の要因に従って変動し得るが、経口投与又は摂取の場合成人（体重６０Ｋｇ）１人当たり、ツクリタケの圧搾物（圧搾物の乾燥物換算）として、１日あたり、好ましくは３ｇ以上、より好ましくは５ｇ以上、より好ましくは７ｇ以上であり、且つ好ましくは１５ｇ以下、より好ましくは１２ｇ以下、より好ましくは１０ｇ以下である。また、１日あたり好ましくは３〜１５ｇ、より好ましくは５〜１２ｇ、より好ましくは７〜１０ｇである。
また、ツクリタケの抽出物（抽出物の乾燥物換算）として、１日あたり、好ましくは３ｇ以上、より好ましくは４ｇ以上であり、より好ましくは５ｇ以上であり、且つ好ましくは１５ｇ以下、より好ましくは１２ｇ以下、より好ましくは１０ｇ以下である。また、１日あたり好ましくは３〜１５ｇ、より好ましくは４〜１２ｇ、より好ましくは５〜１０ｇである。
マンニトールとして、１日あたり、好ましくは１ｇ以上、より好ましくは１．５ｇ以上であり、より好ましくは２ｇ以上であり、且つ好ましくは５ｇ以下、より好ましくは４ｇ以下、より好ましくは３ｇ以下である。また、１日あたり好ましくは１〜５ｇ、より好ましくは１．５〜４ｇ、より好ましくは２〜３ｇである。
【００３０】
また、本発明の低体温予防又は改善剤の投与対象者としては、深部体温が３６℃以下のヒトが好ましい。
【実施例】
【００３１】
実施例１  深部体温の加齢性変化
（１）動物および飼育方法
Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ雄性マウス（日本クレア（株））を４週齢で搬入後（室温２３℃，湿度５５±１０％，明期；７：００〜１９：００）、自由摂餌、自由飲水下で飼育した。餌はＣＥ−２（日本クレア（株））で１週間馴化を行った後、通常食（Ｄ１２４５０Ｋ，Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｄｉｅｔｓ，Ｉｎｃ）、又は高脂肪食（Ｄ１２４５１，Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｄｉｅｔｓ，Ｉｎｃ）で９５週間飼育した。５週齢より毎週、マウス直腸へプローブを挿入し、体温（直腸温）を計測した。
【００３２】
（２）体温（直腸温）測定
５週齢より毎週、マウス直腸へプローブ（ＲＥＴ−３（１９×０．７ｍｍシャフト径），Ｐｈｙｓｉｔｅｍｐ社製）を挿入し、体温（直腸温）を計測した。直腸温測定はデジタル直腸温度計（ＮＳ−ＴＣ１０，Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ社製）を用いた。実験動物ハンドブック（養賢堂、１９８３年発行）に従い、無麻酔下でマウスを保定後、プローブの先端をマウス直腸に０．５〜１ｃｍ挿入し，１５〜３０秒間計測した。
【００３３】
（３）統計解析
解析結果は平均値（Ａｖｅ．）±標準誤差（ＳＥ）で示した。統計解析には２−ｗａｙ
ＡＮＯＶＡ  ｆｏｌｌｏｗｅｄ  ｂｙ  Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ’ｓ  ｐｏｓｔ  ｈｏｃ検定を用い、Ｐ値が０．０５以下の場合においては統計学的に有意差ありと判定した。
【００３４】
（４）結果
加齢に伴って体温の低下が観察され、特に高脂肪食摂取群では通常食群と比較して、急速な体温低下が認められた（図１）。
【００３５】
製造例１  ツクリタケ圧搾物の調製
ツクリタケ（Ａｇａｒｉｃｕｓ  ｂｉｓｐｏｒｕｓ）の子実体１１．３ｋｇ、室温条件下で、スロージューサー（商品名：Ｈｕｒｏｍスロージューサー  ＨＵ−４００）にて圧搾抽出を行った。得られた圧搾物を凍結乾燥して、圧搾物粉末３０８．２ｇを得た（マンニトール含有量：３２ｗｔ％）。
得られたツクリタケ圧搾物の成分組成は食品成分分析センターにて測定した（表１）。
【００３６】
【表１】
2019218324.tif 000002
【００３７】
製造例２  ツクリタケ含有動物用飼料の調製
本試験に用いた試験食（粉末飼料）中の餌組成を表２に示す。通常食は５％コーン油と６６．５％α化ポテト澱粉、高脂肪食は３０％脂質（２５％コーン油＋５％ラード）＋１３％ショ糖とし、それ以外の成分（カゼイン、セルロース、ミネラル、ビタミン）は通常食と高脂肪食で同一量とした。製造例１で得られたツクリタケ圧搾物は各栄養組成を考慮し、高脂肪食と同等の栄養組成・カロリーとなるように成分を置き換える形で混合した。試験食中のコーン油、ラード、カゼイン、セルロース、ＡＩＮ７６ミネラル混合、ＡＩＮ７６ビタミン混合、α化ポテト澱粉はオリエンタル酵母工業（株）社製、ショ糖は和光純薬（株）製スクロース細粒（特級）を使用した。
【００３８】
【表２】
2019218324.tif 000003
【００３９】
製造例３  Ｄ−マンニトール含有動物用飼料の調製
Ｄ−マンニトール（花王株式会社製）を用いて、下記表３に示す組成の試験食（粉末飼料）を調製した。
【表３】
2019218324.tif 000004
【００４０】
実施例２  高脂肪食摂取若齢マウスに対するツクリタケの体温低下抑制作用
（１）動物および飼育方法
Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ雄性マウス（日本クレア（株））を７週齢で搬入後（室温２３℃，湿度５５±１０％，明期；７：００〜１９：００）、自由摂餌、自由飲水下で飼育した。８週齢時の体重および８−９週齢にかけての体重の伸びを考慮して群分けを行い、１０週齢より試験食給餌を開始した。試験食として、３０％の脂質を含む高脂肪食（対照群）、又は２０％ツクリタケ圧搾物を含む３０％高脂肪食（ツクリタケ摂取群）をそれぞれ１６週間給餌した。試験開始１２週間後（２２週齢）に深部体温を計測した。
【００４１】
（２）試験食
上記製造例２の表２に記載した組成比の粉末飼料を用いた。飼育期間中、摂食量は週３回測定した。
【００４２】
（３）深部体温測定
直腸温測定はデジタル直腸温度計（ＮＳ−ＴＣ１０，Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ社製）を用いた。実験動物ハンドブック（養賢堂、１９８３年発行）に従い、無麻酔下でマウスを保定後、プローブ（ＲＥＴ−３（１９×０．７ｍｍシャフト径），Ｐｈｙｓｉｔｅｍｐ社製）の先端をマウス直腸に０．５〜１ｃｍ挿入し，１５〜３０秒間計測した。
【００４３】
（４）統計解析
得られた数値は平均±標準誤差で示し、有意差検定はGraphpad prism 6を用いて、多重比較検定であるDunnett’s testを用いて比較を行い、有意差水準を５％とした。
【００４４】
（５）結果
深部体温は対照群と比較してツクリタケ摂取群で高く推移し、２２週齢時において有意に高値を示した（図２）。
【００４５】
実施例３  高脂肪食摂取老齢マウスに対するツクリタケの低体温改善作用
（１）動物および飼育方法
Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ雄性マウス（日本クレア（株））を４週齢で搬入後（室温２３℃，湿度５５±１０％，明期；７：００〜１９：００）、自由摂餌、自由飲水下で飼育した。餌は高脂肪食（Ｄ１２４５１，Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｄｉｅｔｓ，Ｉｎｃ）で５７週間（６１週齢まで）飼育を行った後、各群の体重、および深部体温が同等になるように群分けした。試験食として、３０％の脂質を含む高脂肪食（対照群）、又は２０％ツクリタケ圧搾物を含む３０％高脂肪食（ツクリタケ摂取群）をそれぞれ１９週間（８０週齢）給餌した。なお、飼育期間中は自由摂食、自由摂水とした。試験開始前（４５週齢及び５５週齢）、試験開始１０週間後（７０週齢）、１５週間後（７５週齢）、及び２０週間後（８０週齢）に深部体温を計測した。
【００４６】
（２）試験食
上記製造例２の表２に記載した組成比の粉末飼料を用いた。飼育期間中、摂食量は週３回測定した。
【００４７】
（３）深部体温測定
実施例２の（３）記載の深部体温測定方法により測定した。
【００４８】
（４）統計解析
得られた数値は平均±標準誤差で示し、有意差検定はGraphpad prism 6を用いて、多重比較検定であるDunnett’s testを用いて比較を行い、有意差水準を５％とした。
【００４９】
（５）結果
対照群では加齢に伴った深部体温の低下が認められ、粉末の試験食摂取開始後、深部体温の低下は加速された。一方で、ツクリタケ摂取群では深部体温の低下が抑制され、摂取開始１５週間以降で、対照群と比較して有意に高値を示した（図３）。
【００５０】
実施例４  ツクリタケの食後体温上昇促進作用（単回摂餌試験）
（１）動物および飼育方法
Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ雄性マウス（日本クレア（株））を４週齢で搬入後（室温２３℃，湿度５５±１０％，明期；７：００〜１９：００）、自由摂餌、自由飲水下で飼育した。餌は高脂肪食（Ｄ１２４５１，Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｄｉｅｔｓ，Ｉｎｃ）で４２週間（４６週齢まで）飼育を行った後、各群の体重、および深部体温が同等になるように群分けした。飼育期間中は自由摂食、自由摂水とした。
【００５１】
（２）試験食
上記製造例２の表２に記載した組成比の粉末飼料を用いた。
【００５２】
（３）単回食餌試験
４６週齢時に１８時間以上絶食し、２００ｍｇの粉末試料（表２）を１時間、自由摂取させた。試験食摂取前、及び摂取１、２、３時間後にて深部体温を測定した。
【００５３】
（４）深部体温測定
実施例２の（３）記載の深部体温測定方法により測定した。
【００５４】
（５）統計解析
解析結果は平均値（Ａｖｅ．）±標準誤差（ＳＥ）で示した。統計解析には２−ｗａｙ  ＡＮＯＶＡ  ｆｏｌｌｏｗｅｄ  ｂｙ  Ｄｕｎｎｅｔｔ’ｓ  ｐｏｓｔ  ｈｏｃ検定を用い、Ｐ値が０．０５以下の場合においては統計学的に有意差ありと判定した。
【００５５】
（６）結果
摂餌後の深部体温は、対照群と比較してツクリタケ摂取群で有意に高値を示した（図４）。
【００５６】
実施例５  Ｄ−マンニトールの食後体温上昇促進作用（単回摂餌試験）
（１）動物および飼育方法
Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ雄性マウス（日本クレア（株））を７週齢で搬入後（室温２３℃，湿度５５±１０％，明期；７：００〜１９：００）、自由摂餌、自由飲水下で飼育した。
【００５７】
（２）試験食
上記製造例３の表３に記載した組成比の粉末飼料を用いた。
【００５８】
（３）単回食餌試験
１８週齢時に１８時間以上絶食し、粉末試料（表３）をカロリーが等しくなるように量り取り、３０分間の自由摂餌の間に高脂肪食（対照群）は２００ｍｇ、Ｄ−マンニトール食（マンニトール摂取群）は２１６ｍｇを摂取させた。なお、Ｄ−マンニトール由来のカロリーは０と換算した。試験食摂取前、及び摂取３０、６０、１２０、１８０分後にて深部体温を測定した。
【００５９】
（４）深部体温測定
実施例２の（３）記載の深部体温測定方法により測定した。
【００６０】
（５）統計解析
解析結果は平均値（Ａｖｅ．）±標準誤差（ＳＥ）で示した。統計解析には２−ｗａｙ  ＡＮＯＶＡ  ｆｏｌｌｏｗｅｄ  ｂｙ  Ｄｕｎｎｅｔｔ’ｓ  ｐｏｓｔ  ｈｏｃ検定を用い、Ｐ値が０．０５以下の場合においては統計学的に有意差ありと判定した。
【００６１】
（６）結果
摂餌後の深部体温は、対照群と比較してマンニトール摂取群で高く推移し、摂餌６０分および１２０分後において有意に高値を示した（図５）。
【図１】
2019218324.tif 000005
【図２】
2019218324.tif 000006
【図３】
2019218324.tif 000007
【図４】
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【図５】
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