(57)【要約】      （修正有）【課題】ウイルス感染及び細菌感染の一体検出のための方法及び装置を提供する。【解決手段】組み合わされたポイントオブケア診断装置は、ウイルス感染及び細菌感染の迅速な区別に効果的に役立てるために、ウイルス感染のマーカーと細菌感染のマーカーとを検査する。二峰性の方法及び装置は、感染がウイルス性及び／又は細菌性であるかどうかを判定する。デュアルユーズの２つのストリップのサンプル分析装置は、ＭｘＡ及び低レベルのＣ反応性タンパク質を検出するための第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップ８１５と、高レベルのＣ反応性タンパク質を検出するための第２の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップ８２５とを含む。サンプルはフィンガースティックの血液サンプルである。【選択図】図８Ａ
2019164143.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
感染が細菌性及び／又はウイルス性であるかどうかを判定する方法であって、該方法は：
ａ）サンプルを採取する工程；
ｂ）サンプルをサンプル分析装置に移す工程であって、該サンプル分析装置が：
ｉ）サンプル圧縮機であって：
Ａ）第１のレベルのＣ反応性タンパク質に特異的な少なくとも１つの第１の試薬とＭｘＡに特異的な少なくとも第２の試薬とを含む第１の試薬領域であって、サンプルが第１の試薬と接触すると、第１のレベルのＣ反応性タンパク質がサンプルに存在する場合に第１の標識化した複合体が形成され、サンプルが第２の試薬と接触すると、ＭｘＡがサンプルに存在する場合に第２の標識化した複合体が形成される、第１の試薬領域；及び
Ｂ）第２のレベルのＣ反応性タンパク質に特異的な少なくとも１つの第３の試薬を含む第２の試薬領域であって、第３の試薬は、第１の試薬によって検出された第１のレベルのＣ反応性タンパク質より高い第２のレベルのＣ反応性タンパク質を検出するだけであり、サンプルが第３の試薬と接触すると、第２のレベルのＣ反応性タンパク質がサンプルに存在する場合に第３の標識化した複合体が形成される、第２の試薬領域
を含むサンプル圧縮機；
ｉｉ）第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップであって：
Ａ）第１の検出領域であって、第１の標識化した複合体に結合する第１の結合パートナーと、第２の標識化した複合体に結合する第２の結合パートナーとを含む、第１の検出領域；及び
Ｂ）側方流動クロマトグラフィ検査ストリップ上の第１の検出領域の上流に位置する第１の分岐領域であって、第１の分岐領域は、第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップ上で側方流動を阻止する、第１の分岐領域
を含む第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップ；及び
ｉｉｉ）第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップへの側方流動方向と平行な、第２の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップであって：
Ａ）第３の標識化した複合体に結合する第３の結合パートナーを含む第２の検出領域；及び
Ｂ）第２の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップ上の第２の検出領域の上流に位置する第２の分岐領域であって、該分岐領域は、第２の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップ上で側方流動を阻止する、第２の分岐領域
を含む第２の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップ；
ｉｖ）第１のサンプル適用領域であって、サンプルはサンプル分析装置の上に置かれ、第１のサンプル適用領域は、ｉ）検出領域の上流にある第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップの上、及び、ｉｉ）サンプル圧縮機の第１の試薬領域の上から成る群から選択された場所に位置する、第１のサンプル適用領域；及び
ｖ）第２のサンプル適用領域であって、サンプルはサンプル分析装置の上に置かれ、第２のサンプル適用領域は、ｉ）検出領域の上流にある第２の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップの上、及び、ｉｉ）サンプル圧縮機の第２の試薬領域の上から成る群から選択された場所に位置する、第２のサンプル適用領域
を含み；
ここで、サンプル圧縮機は、第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップ、及び第２の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップとは異なる面にあり；
ここで、サンプル圧縮機の第１の試薬領域は、第１の分岐領域にわたり橋を作成し、サンプル圧縮機の第２の試薬領域は、第２の分岐領域にわたり橋を作成し、これらの橋は、サンプル圧縮機上に流れを分岐し、第１の分岐領域と第２の分岐領域の端部にある第１のクロマトグラフィ検査ストリップと第２のクロマトグラフィ検査ストリップに流れを戻す、工程；及び
ｃ）第１のレベルのＣ反応性タンパク質、ＭｘＡ、及び第２のレベルのＣ反応性タンパク質の存在のためサンプルを分析する工程
を含む、感染が細菌性及び／又はウイルス性であるかどうかを判定する方法
【請求項２】
サンプル分析装置は更に、サンプル圧縮機の第１の試薬領域と第２の試薬領域の各々の上に位置する第１の対照結合パートナーと、第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップと第２の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップの各々の対照領域に固定される第２の対照結合パートナーとを含み、第１の対照結合パートナーは、第２の対照結合パートナーの結合パートナーである、ことを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項３】
第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップの検出領域中の第１のレベルのＣ反応性タンパク質に対して陽性の結果を得るための閾値濃度は、Ｃ反応性タンパク質のおよそ６−１５ｍｇ／Ｌの血清相当物に等しいか、又はそれよりも高い、ことを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項４】
第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップの検出領域中の第１のレベルのＣ反応性タンパク質に対して陽性の結果を得るための閾値濃度は、Ｃ反応性タンパク質のおよそ１０ｍｇ／Ｌの血清相当物に等しいか、又はそれよりも高い、ことを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項５】
第２の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップの検出領域中の第２のレベルのＣ反応性タンパク質に対して陽性の結果を得るための閾値濃度は、およそ６０−１００ｍｇ／Ｌの血清相当物に等しいか、又はそれよりも高い、ことを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項６】
第２の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップの検出領域中の第２のレベルのＣ反応性タンパク質に対して陽性の結果を得るための閾値濃度は、およそ８０ｍｇ／Ｌの血清相当物に等しいか、又はそれよりも高い、ことを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項７】
第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップの検出領域中のＭｘＡに対して陽性の結果を得るための閾値濃度は、およそ４０ｎｇ／ｍｌに等しいか、又はそれよりも高い、ことを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項８】
第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップの検出領域中のＭｘＡに対して陽性の結果を得るための閾値濃度は、およそ１５−２５０ｎｇ／ｍｌに等しいか、又はそれよりも高い、ことを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項９】
第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップの検出領域中の第１のレベルのＣ反応性タンパク質に対して陽性の結果を得るための第１の閾値濃度は、Ｃ反応性タンパク質のおよそ６−１５ｍｇ／Ｌの血清相当物に等しいか又はそれよりも高く、第２の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップの検出領域中の第２のレベルのＣ反応性タンパク質に対して陽性の結果を得るための第２の閾値濃度は、およそ６０−１００ｍｇ／Ｌの血清相当物に等しいか又はそれよりも高く、第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップの検出領域中のＭｘＡに対して陽性の結果を得るための第３の閾値濃度は、およそ１５−２５０ｎｇ／ｍｌに等しいか又はそれよりも高い、ことを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップの検出領域中の第１のレベルのＣ反応性タンパク質に対して陽性の結果を得るための第１の閾値濃度は、Ｃ反応性タンパク質のおよそ１０ｍｇ／Ｌの血清相当物に等しいか又はそれよりも高く、第２の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップの検出領域中の第２のレベルのＣ反応性タンパク質に対して陽性の結果を得るための第２の閾値濃度は、およそ８０ｍｇ／Ｌの血清相当物に等しいか又はそれよりも高く、第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップの検出領域中のＭｘＡに対して陽性の結果を得るための第３の閾値濃度は、およそ４０ｎｇ／ｍｌに等しいか又はそれよりも高い、ことを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記工程ｃ）は、
ｉ）サンプル分析装置上のサンプルを溶出するサブ工程；及び
ｉｉ）検出領域からの結果を視覚的に判定するサブ工程
を含む、ことを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
ＭｘＡの存在は、第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップの検出領域に位置する第１の検査ラインによって表示され、第１のレベルのＣＲＰの存在は、第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップの検出領域に位置する第２の検査ラインによって表示される、ことを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
第１の検査ラインは陽性の際に第１の色を表示し、第２の検査ラインは陽性の際に第１の色とは異なる第２の色を表示する、ことを特徴とする請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
第１の検査ラインと第２の検査ラインの両方は、サンプル分析装置上の同じ空間内に位置し、それにより、第３の色は、第１の検査ラインと第２の検査ラインの両方が陽性の際に形成される、ことを特徴とする請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
第１の検査ラインは、第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップ上の第２の検査ラインから空間的に分離される、ことを特徴とする請求項１２に記載の方法。
【請求項１６】
サンプルは血液サンプルである、ことを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
サンプルは白血球を含む、ことを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項１８】
サンプルにおける分析物を検知するための側方流動装置であって、該装置は：
ａ）サンプル圧縮機であって：
ｉ）第１のレベルのＣ反応性タンパク質に特異的な少なくとも１つの第１の試薬とＭｘＡに特異的な少なくとも第２の試薬とを含む第１の試薬領域であって、サンプルが第１の試薬と接触すると、第１のレベルのＣ反応性タンパク質がサンプルに存在する場合に第１の標識化した複合体が形成され、サンプルが第２の試薬と接触すると、ＭｘＡがサンプルに存在する場合に第２の標識化した複合体が形成される、第１の試薬領域；及び
ｉｉ）第２のレベルのＣ反応性タンパク質に特異的な少なくとも１つの第３の試薬を含む第２の試薬領域であって、第３の試薬は、第２の試薬によって検出された第１のレベルのＣ反応性タンパク質より高い第２のレベルのＣ反応性タンパク質を検出するだけであり、サンプルが第３の試薬と接触すると、第２のレベルのＣ反応性タンパク質がサンプルに存在する場合に第３の標識化した複合体が形成される、第２の試薬領域
を含む、サンプル圧縮機；
ｂ）第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップであって：
ｉ）第１の検出領域であって、第１の標識化した複合体に結合する第１の結合パートナーと、第２の標識化した複合体に結合する第２の結合パートナーとを含む、第１の検出領域；及び
ｉｉ）側方流動クロマトグラフィ検査ストリップ上の第１の検出領域の上流に位置する第１の分岐領域であって、第１の分岐領域は、第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップ上で側方流動を阻止する、第１の分岐領域
を含む、第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップ；及び
ｃ）第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップへの側方流動方向と平行な、第２の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップであって：
ｉ）第３の標識化した複合体に結合する第３の結合パートナーを含む第２の検出領域；及び
ｉｉ）側方流動クロマトグラフィ検査ストリップ上の第１の検出領域の上流に位置する第２の分岐領域であって、第２の分岐領域は、第２の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップ上で側方流動を阻止する、第２の分岐領域
を含む、第２の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップ；及び
ｄ）第１のサンプル適用領域であって、サンプルはサンプル分析装置の上に置かれ、第１のサンプル適用領域は、ｉ）検出領域の上流にある第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップの上、及び、ｉｉ）サンプル圧縮機の第１の試薬領域の上から成る群から選択された場所に位置する、第１のサンプル適用領域；及び
ｅ）第２のサンプル適用領域であって、サンプルはサンプル分析装置の上に置かれ、第２のサンプル適用領域は、ｉ）検出領域の上流にある第２の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップの上、及び、ｉｉ）サンプル圧縮機の第２の試薬領域の上から成る群から選択された場所に位置する、第２のサンプル適用領域
を含み；
ここで、サンプル圧縮機は、第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップ、及び第２の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップとは異なる面にあり；
ここで、サンプル圧縮機の第１の試薬領域は、第１の分岐領域にわたり橋を作成し、サンプル圧縮機の第２の試薬領域は、第２の分岐領域にわたり橋を作成し、これらの橋は、サンプル圧縮機上に流れを分岐し、第１の分岐領域と第２の分岐領域の端部にある第１のクロマトグラフィ検査ストリップと第２のクロマトグラフィ検査ストリップに流れを戻す
ことを特徴とする、サンプルにおける分析物を検知するための側方流動装置。
【請求項１９】
前記装置は更に、サンプル圧縮機の第１の試薬領域と第２の試薬領域の各々の上に位置する第１の対照結合パートナーと、第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップと第２の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップの各々の対照領域に固定される第２の対照結合パートナーとを含み、第１の対照結合パートナーは、第２の対照結合パートナーの結合パートナーである、ことを特徴とする請求項１８に記載の装置。
【請求項２０】
第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップの第１の検出領域中の第１のレベルのＣ反応性タンパク質に対して陽性の結果を得るための閾値濃度は、Ｃ反応性タンパク質のおよそ６−１５ｍｇ／Ｌの血清相当物に等しいか、又はそれよりも高い、ことを特徴とする請求項１８に記載の装置。
【請求項２１】
第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップの第１の検出領域中の第１のレベルのＣ反応性タンパク質に対して陽性の結果を得るための閾値濃度は、Ｃ反応性タンパク質のおよそ１０ｍｇ／Ｌの血清相当物に等しいか、又はそれよりも高い、ことを特徴とする請求項１８に記載の装置。
【請求項２２】
第２の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップの第２の検出領域中の第２のレベルのＣ反応性タンパク質に対して陽性の結果を得るための閾値濃度は、およそ６０−１００ｍｇ／Ｌの血清相当物に等しいか、又はそれよりも高い、ことを特徴とする請求項１８に記載の装置。
【請求項２３】
第２の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップの第２の検出領域中の第２のレベルのＣ反応性タンパク質に対して陽性の結果を得るための閾値濃度は、およそ８０ｍｇ／Ｌの血清相当物に等しいか、又はそれよりも高い、ことを特徴とする請求項１８に記載の装置。
【請求項２４】
第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップの第１の検出領域中のＭｘＡに対して陽性の結果を得るための閾値濃度は、およそ４０ｎｇ／ｍｌに等しいか、又はそれよりも高い、ことを特徴とする請求項１８に記載の装置。
【請求項２５】
第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップの第１の検出領域中のＭｘＡに対して陽性の結果を得るための閾値濃度は、およそ１５−２５０ｎｇ／ｍｌに等しいか、又はそれよりも高い、ことを特徴とする請求項１８に記載の装置。
【請求項２６】
第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップの第１の検出領域中の第１のレベルのＣ反応性タンパク質に対して陽性の結果を得るための第１の閾値濃度は、Ｃ反応性タンパク質の６−１５ｍｇ／Ｌの血清相当物に等しいか又はそれよりも高く、第２の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップの第２の検出領域中の第２のレベルのＣ反応性タンパク質に対して陽性の結果を得るための第２の閾値濃度は、およそ６０−１００ｍｇ／Ｌの血清相当物に等しいか又はそれよりも高く、第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップの第１の検出領域中のＭｘＡに対して陽性の結果を得るための第３の閾値濃度は、およそ１５−２５０ｎｇ／ｍｌに等しいか又はそれよりも高い、ことを特徴とする請求項１８に記載の装置。
【請求項２７】
第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップの第１の検出領域中の第１のレベルのＣ反応性タンパク質に対して陽性の結果を得るための第１の閾値濃度は、Ｃ反応性タンパク質のおよそ１０ｍｇ／Ｌの血清相当物に等しいか又はそれよりも高く、第２の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップの第２の検出領域中の第２のレベルのＣ反応性タンパク質に対して陽性の結果を得るための第２の閾値濃度は、およそ８０ｍｇ／Ｌの血清相当物に等しいか又はそれよりも高く、第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップの第１の検出領域中のＭｘＡに対して陽性の結果を得るための第３の閾値濃度は、およそ４０ｎｇ／ｍｌに等しいか又はそれよりも高い、ことを特徴とする請求項１８に記載の装置。
【請求項２８】
第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップの第１の検出領域は、サンプル中のＭｘＡに対して陽性の結果を検出するための第１の検査ラインと、サンプル中の第１のレベルのＣＲＰに対して陽性の結果を検出するための第２の検査ラインとを含む、ことを特徴とする請求項１８に記載の装置。
【請求項２９】
第１の検査ラインは陽性の際に第１の色を表示し、第２の検査ラインは陽性の際に第１の色とは異なる第２の色を表示する、ことを特徴とする請求項２８に記載の装置。
【請求項３０】
第１の検査ラインと第２の検査ラインの両方は、第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップ上の同じ空間内に位置し、それにより、第３の色は、第１の検査ラインと第２の検査ラインの両方が陽性の際に形成される、ことを特徴とする請求項２９に記載の装置。
【請求項３１】
第１の検査ラインは、第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップ上の第２の検査ラインから空間的に分離される、ことを特徴とする請求項２８に記載の装置。
【請求項３２】
第１の検出領域と第２の検出領域は各々、デバイスが作動する際に肉眼で見ることが可能な対照ラインを含む、ことを特徴とする請求項１８に記載の装置。
【請求項３３】
第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップは更に、第１試薬領域の、第２試薬領域の、及び第１の検出領域の上流にある第１のサンプル適用領域を含み、第１の検出領域は第１の試薬領域と第２の試薬領域の下流にある、ことを特徴とする請求項１８に記載の装置。
【請求項３４】
第２の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップは更に、第３の試薬領域及び第２の検出領域の上流にある第２のサンプル適用領域を含み、第２の検出領域は第３の試薬領域の下流にある、ことを特徴とする請求項１８に記載の装置。
【請求項３５】
第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップは更に、少なくとも１つの溶解剤を含む溶解領域を含み、溶解剤は、第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップ上でサンプルと接触する、ことを特徴とする請求項１８に記載の装置。
【請求項３６】
第２の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップは更に、少なくとも１つの溶解剤を含む溶解領域を含み、溶解剤は、第２の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップ上でサンプルと接触する、ことを特徴とする請求項１８に記載の装置。
【請求項３７】
第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップは更に、第１の試薬領域と第２の試薬領域の下流にあり、且つ第１の検出領域の上流にある第１のサンプル適用領域を含む、ことを特徴とする請求項１８に記載の装置。
【請求項３８】
第２の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップは更に、第３の試薬領域の下流にあり、且つ第２の検出領域の上流にある第２のサンプル適用領域を含む、ことを特徴とする請求項１８に記載の装置。
【請求項３９】
サンプルは血液サンプルである、ことを特徴とする請求項１８に記載の装置。
【請求項４０】
サンプルは白血球を含む、ことを特徴とする請求項１８に記載の装置。
【請求項４１】
感染が細菌性及び／又はウイルス性であるかどうかを判定する方法であって、該方法は：
ａ）サンプルを採取する工程；
ｂ）サンプルをサンプル分析装置に移す工程であって、該サンプル分析装置は：
ｉ）第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップであって：
第１のレベルのＣ反応性タンパク質に特異的な少なくとも１つの第１の試薬を含む第１の試薬領域であって、サンプルが第１の試薬に接触すると、第１のレベルのＣ反応性タンパク質がサンプルに存在する場合に第１の標識化した複合体が形成される、第１の試薬領域；
ＭｘＡに特異的な少なくとも１つの第２の試薬を含む第２の試薬領域であって、サンプルが第２の試薬に接触すると、ＭｘＡがサンプルに存在する場合に第２の標識化した複合体が形成される、第２の試薬領域；及び
第１の標識化した複合体に結合する第１の結合パートナーと第２の標識化した複合体に結合する第２の結合パートナーとを含む検出領域
を含む、第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップ；及び
ｉｉ）第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップへの側方流動方向と平行な、第２の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップであって：
少なくとも１つの第３の試薬領域であって：
第２のレベルのＣ反応性タンパク質に特異的な少なくとも１つの第３の試薬であって、第３の試薬は、第１の試薬によって検出された第１のレベルのＣ反応性タンパク質より高い第２のレベルのＣ反応性タンパク質を検出するだけであり、サンプルが第３の試薬と接触すると、第２のレベルのＣ反応性タンパク質がサンプルに存在する場合に第３の標識化した複合体が形成される、少なくとも１つの第３の試薬；及び
第３の標識化した複合体に結合する第３の結合パートナーを含む検出領域
を含む少なくとも１つの第３の試薬領域
を含む第２の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップ；及び
ｃ）第１のレベルのＣ反応性タンパク質、ＭｘＡ、及び第２のレベルのＣ反応性タンパク質の存在のためサンプルを分析する工程
を含む、感染が細菌性及び／又はウイルス性であるかどうかを判定する方法。
【請求項４２】
第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップの検出領域中の第１のレベルのＣ反応性タンパク質に対して陽性の結果を得るための閾値濃度は、Ｃ反応性タンパク質のおよそ６−１５ｍｇ／Ｌの血清相当物に等しいか、又はそれよりも高い、ことを特徴とする請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップの検出領域中の第１のレベルのＣ反応性タンパク質に対して陽性の結果を得るための閾値濃度は、Ｃ反応性タンパク質のおよそ１０ｍｇ／Ｌの血清相当物に等しいか、又はそれよりも高い、ことを特徴とする請求項４１に記載の方法。
【請求項４４】
第２の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップの検出領域中の第２のレベルのＣ反応性タンパク質に対して陽性の結果を得るための閾値濃度は、およそ６０−１００ｍｇ／Ｌの血清相当物に等しいか、又はそれよりも高い、ことを特徴とする請求項４１に記載の方法。
【請求項４５】
第２の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップの検出領域中の第２のレベルのＣ反応性タンパク質に対して陽性の結果を得るための閾値濃度は、およそ８０ｍｇ／Ｌの血清相当物に等しいか、又はそれよりも高い、ことを特徴とする請求項４１に記載の方法。
【請求項４６】
第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップの検出領域中のＭｘＡに対して陽性の結果を得るための閾値濃度は、およそ４０ｎｇ／ｍｌに等しいか、又はそれよりも高い、ことを特徴とする請求項４１に記載の方法。
【請求項４７】
第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップの第１の検出領域中のＭｘＡに対して陽性の結果を得るための閾値濃度は、およそ１５−２５０ｎｇ／ｍｌに等しいか、又はそれよりも高い、ことを特徴とする請求項４１に記載の方法。
【請求項４８】
第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップの検出領域中の第１のレベルのＣ反応性タンパク質に対して陽性の結果を得るための第１の閾値濃度は、Ｃ反応性タンパク質のおよそ６−１５ｍｇ／Ｌの血清相当物に等しいか又はそれよりも高く、第２の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップの検出領域中の第２のレベルのＣ反応性タンパク質に対して陽性の結果を得るための第２の閾値濃度は、およそ６０−１００ｍｇ／Ｌの血清相当物に等しいか又はそれよりも高く、第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップの検出領域中のＭｘＡに対して陽性の結果を得るための第３の閾値濃度は、およそ１５−２５０ｎｇ／ｍｌに等しいか又はそれよりも高い、ことを特徴とする請求項４１に記載の方法。
【請求項４９】
第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップの検出領域中の第１のレベルのＣ反応性タンパク質に対して陽性の結果を得るための第１の閾値濃度は、Ｃ反応性タンパク質のおよそ１０ｍｇ／Ｌの血清相当物に等しいか又はそれよりも高く、第２の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップの検出領域中の第２のレベルのＣ反応性タンパク質に対して陽性の結果を得るための第２の閾値濃度は、およそ８０ｍｇ／Ｌの血清相当物に等しいか又はそれよりも高く、第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップの検出領域中のＭｘＡに対して陽性の結果を得るための第３の閾値濃度は、およそ４０ｎｇ／ｍｌに等しいか又はそれよりも高い、ことを特徴とする請求項４１に記載の方法。
【請求項５０】
前記工程ｃ）は、
ｉ）サンプル分析装置上のサンプルを溶出するサブ工程；及び
ｉｉ）検出領域からの結果を視覚的に判定するサブ工程
を含む、ことを特徴とする請求項４１に記載の方法。
【請求項５１】
ＭｘＡの存在は、第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップの検出領域に位置する第１の検査ラインによって表示され、第１のレベルのＣＲＰの存在は、第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップの検出領域に位置する第２の検査ラインによって表示される、ことを特徴とする請求項４１に記載の方法。
【請求項５２】
第１の検査ラインは陽性の際に第１の色を表示し、第２の検査ラインは陽性の際に第１の色とは異なる第２の色を表示する、ことを特徴とする請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
第１の検査ラインと第２の検査ラインの両方は、サンプル分析装置上の同じ空間内に位置し、それにより、第３の色は、第１の検査ラインと第２の検査ラインの両方が陽性の際に形成される、ことを特徴とする請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
第１の検査ラインは、第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップ上の第２の検査ラインから空間的に分離される、ことを特徴とする請求項５１に記載の方法。
【請求項５５】
サンプルは血液サンプルである、ことを特徴とする請求項４１に記載の方法。
【請求項５６】
サンプルは白血球を含む、ことを特徴とする請求項４１に記載の方法。
【請求項５７】
サンプルにおける細菌マーカー及び／又はウイルスマーカーの検出のための装置であって、該装置は：
ａ）第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップであって：
第１のレベルのＣ反応性タンパク質に特異的な少なくとも１つの第１の試薬を含む第１の試薬領域であって、サンプルが第１の試薬に接触すると、第１のレベルのＣ反応性タンパク質がサンプルに存在する場合に第１の標識化した複合体が形成される、第１の試薬領域；
ＭｘＡに特異的な少なくとも１つの第２の試薬を含む第２の試薬領域であって、サンプルが第２の試薬に接触すると、ＭｘＡがサンプルに存在する場合に第２の標識化した複合体が形成される、第２の試薬領域；及び
第１の標識化した複合体に結合する第１の結合パートナーと第２の標識化した複合体に結合する第２の結合パートナーとを含む第１の検出領域
を含む、第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップ；及び
ｂ）第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップへの側方流動方向と平行な、第２の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップであって：
第２のレベルのＣ反応性タンパク質に特異的な少なくとも１つの第３の試薬を含む少なくとも１つの第３の試薬領域であって、第３の試薬は、第１の試薬によって検出された第１のレベルのＣ反応性タンパク質より高い第２のレベルのＣ反応性タンパク質を検出するだけであり、サンプルが第３の試薬と接触すると、第２のレベルのＣ反応性タンパク質がサンプルに存在する場合に第３の標識化した複合体が形成される、少なくとも１つの第３の試薬領域；及び
第３の標識化した複合体に結合する第３の結合パートナーを含む第２の検出領域
を含む、第２の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップ
を含む、サンプルにおける細菌マーカー及び／又はウイルスマーカーの検出のための装置。
【請求項５８】
第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップの第１の検出領域中の第１のレベルのＣ反応性タンパク質に対して陽性の結果を得るための閾値濃度は、Ｃ反応性タンパク質のおよそ６−１５ｍｇ／Ｌの血清相当物に等しいか、又はそれよりも高い、ことを特徴とする請求項５７に記載の装置。
【請求項５９】
第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップの第１の検出領域中の第１のレベルのＣ反応性タンパク質に対して陽性の結果を得るための閾値濃度は、Ｃ反応性タンパク質のおよそ１０ｍｇ／Ｌの血清相当物に等しいか、又はそれよりも高い、ことを特徴とする請求項５７に記載の装置。
【請求項６０】
第２の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップの第２の検出領域中の第２のレベルのＣ反応性タンパク質に対して陽性の結果を得るための閾値濃度は、およそ６０−１００ｍｇ／Ｌの血清相当物に等しいか、又はそれよりも高い、ことを特徴とする請求項５７に記載の装置。
【請求項６１】
第２の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップの第２の検出領域中の第２のレベルのＣ反応性タンパク質に対して陽性の結果を得るための閾値濃度は、およそ８０ｍｇ／Ｌの血清相当物に等しいか、又はそれよりも高い、ことを特徴とする請求項５７に記載の装置。
【請求項６２】
第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップの第１の検出領域中のＭｘＡに対して陽性の結果を得るための閾値濃度は、およそ４０ｎｇ／ｍｌに等しいか、又はそれよりも高い、ことを特徴とする請求項５７に記載の装置。
【請求項６３】
第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップの第１の検出領域中のＭｘＡに対して陽性の結果を得るための閾値濃度は、およそ１５−２５０ｎｇ／ｍｌに等しいか、又はそれよりも高い、ことを特徴とする請求項５７に記載の装置。
【請求項６４】
第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップの第１の検出領域中の第１のレベルのＣ反応性タンパク質に対して陽性の結果を得るための第１の閾値濃度は、Ｃ反応性タンパク質のおよそ６−１５ｍｇ／Ｌの血清相当物に等しいか又はそれよりも高く、第２の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップの第２の検出領域中の第２のレベルのＣ反応性タンパク質に対して陽性の結果を得るための第２の閾値濃度は、およそ６０−１００ｍｇ／Ｌの血清相当物に等しいか又はそれよりも高く、第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップの第１の検出領域中のＭｘＡに対して陽性の結果を得るための第３の閾値濃度は、およそ１５−２５０ｎｇ／ｍｌに等しいか又はそれよりも高い、ことを特徴とする請求項５７に記載の装置。
【請求項６５】
第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップの第１の検出領域中の第１のレベルのＣ反応性タンパク質に対して陽性の結果を得るための第１の閾値濃度は、Ｃ反応性タンパク質のおよそ１０ｍｇ／Ｌの血清相当物に等しいか又はそれよりも高く、第２の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップの第２の検出領域中の第２のレベルのＣ反応性タンパク質に対して陽性の結果を得るための第２の閾値濃度は、およそ８０ｍｇ／Ｌの血清相当物に等しいか又はそれよりも高く、第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップの第１の検出領域中のＭｘＡに対して陽性の結果を得るための第３の閾値濃度は、およそ４０ｎｇ／ｍｌに等しいか又はそれよりも高い、ことを特徴とする請求項５７に記載の装置。
【請求項６６】
第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップの第１の検出領域は、サンプル中のＭｘＡに対して陽性の結果を検出するための第１の検査ラインと、サンプル中の第１のレベルのＣＲＰに対して陽性の結果を検出するための第２の検査ラインとを含む、ことを特徴とする請求項５７に記載の装置。
【請求項６７】
第１の検査ラインは陽性の際に第１の色を表示し、第２の検査ラインは陽性の際に第１の色とは異なる第２の色を表示する、ことを特徴とする請求項６６に記載の装置。
【請求項６８】
第１の検査ラインと第２の検査ラインの両方は、第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップ上の同じ空間内に位置し、それにより、第３の色は、第１の検査ラインと第２の検査ラインの両方が陽性の際に形成される、ことを特徴とする請求項６７に記載の装置。
【請求項６９】
第１の検査ラインは、第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップ上の第２の検査ラインから空間的に分離される、ことを特徴とする請求項６６に記載の装置。
【請求項７０】
第１の検出領域と第２の検出領域は各々、デバイスが作動する際に肉眼で見ることが可能な対照ラインを含む、ことを特徴とする請求項５７に記載の装置。
【請求項７１】
第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップは更に、第１試薬領域の、第２試薬領域の、及び第１の検出領域の上流にある第１のサンプル適用領域を含み、第１の検出領域は第１の試薬領域と第２の試薬領域の下流にある、ことを特徴とする請求項５７に記載の装置。
【請求項７２】
第２の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップは更に、第３の試薬領域及び第２の検出領域の上流にある第２のサンプル適用領域を含み、第２の検出領域は第３の試薬領域の下流にある、ことを特徴とする請求項５７に記載の装置。
【請求項７３】
第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップは更に、少なくとも１つの溶解剤を含む溶解領域を含み、溶解剤は、第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップ上でサンプルと接触する、ことを特徴とする請求項５７に記載の装置。
【請求項７４】
第２の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップは更に、少なくとも１つの溶解剤を含む溶解領域を含み、溶解剤は、第２の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップ上でサンプルと接触する、ことを特徴とする請求項５７に記載の装置。
【請求項７５】
第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップは更に、第１の試薬領と第２の試薬領域の下流にあり、且つ第１の検出領域の上流にある第１のサンプル適用領域を含む、ことを特徴とする請求項５７に記載の装置。
【請求項７６】
第２の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップは更に、第３の試薬領域の下流にあり、且つ第２の検出領域の上流にある第２のサンプル適用領域を含む、ことを特徴とする請求項５７に記載の装置。
【請求項７７】
サンプルは血液サンプルである、ことを特徴とする請求項５７に記載の装置。
【請求項７８】
サンプルは白血球を含む、ことを特徴とする請求項５７に記載の装置。
【請求項７９】
サンプルにおけるＭｘＡタンパク質とＣ反応性タンパク質を検出する方法であって、該方法は：
ａ）第１の標識に結合したＭｘＡタンパク質に対する抗体と、第１の標識と異なる第２の標識に結合したＣ反応性タンパク質に対する抗体との混合物に、サンプルを加える工程；
ｂ）ＭｘＡタンパク質に対する抗体が凝集したかを判定することによりＭｘＡタンパク質の存在を検出する工程；及び
ｃ）Ｃ反応性タンパク質に対する抗体が凝集したかを判定することによりＣ反応性タンパク質の存在を検出する工程
を含む、サンプルにおけるＭｘＡタンパク質とＣ反応性タンパク質を検出する方法。
【請求項８０】
前記工程ａ）の前に、
ｄ）第１の標識に、ＭｘＡタンパク質に対する抗体を結合させる工程；
ｅ）第２の標識に、Ｃ反応性タンパク質に対する抗体を結合させる工程
を更に含む、請求項７９に記載の方法。
【請求項８１】
未知のウイルス感染の存在を検出する方法であって、該方法は：
ａ）サンプルを採取する工程；
ｂ）サンプルを、サンプル分析装置のサンプル適用領域に移す工程であって、該サンプル分析装置は：
ｉ）ナノミセルの内部に標識を含むシアル酸ナノミセルを含む結合領域；及び
ｉｉ）シアル酸同族体ナノ粒子を含むサンプル適用領域から横方向で下流にある検出領域
を含む、工程；
ｃ）検出領域における陽性の結果に関してサンプルを分析する工程
を含む、未知のウイルス感染の存在を検出する方法。
【請求項８２】
特異的なウイルス感染の存在を検出する方法であって、該方法は：
ａ）サンプルを採取する工程；
ｂ）サンプルを、サンプル分析装置のサンプル適用領域に移す工程であって、該サンプル分析装置は：
ｉ）ウイルス感染を引き起こす特異的なウイルスの結合パートナーと標識とを含むナノミセル、及び、ナノミセルの内部に標識を含むシアル酸同族体ナノミセルから成る群から選択された分子を含む接合領域；及び
ｉｉ）サンプル適用領域から横方向で下流にある検出領域であって、サンプル適用領域は、ウイルス感染を引き起こすウイルスに対して特異的なナノ粒子を含む、検出領域
を含む、工程
ｃ）検出領域における陽性の結果に関してサンプルを分析する工程
を含む、特異的なウイルス感染の存在を検出する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
＜関連出願への参照＞
本出願は、以下の係属中の特許出願：２０１３年３月７日出願の米国特許出願第１３／７８８，６１６号、表題「ＭＵＬＴＩＰＬＡＮＡＲ  ＬＡＴＥＲＡＬ  ＦＬＯＷ  ＡＳＳＡＹ  ＷＩＴＨ  ＤＩＶＥＲＴＩＮＧ  ＺＯＮＥ」；２０１３年３月８日出願の米国特許出願第１３／７９０，１２５号、表題「ＭＥＴＨＯＤ  ＡＮＤ  ＤＥＶＩＣＥ  ＦＯＲ  ＣＯＭＢＩＮＥＤ  ＤＥＴＥＣＴＩＯＮ  ＯＦ  ＶＩＲＡＬ  ＡＮＤ  ＢＡＣＴＥＲＩＡＬ  ＩＮＦＥＣＴＩＯＮＳ」；２０１３年３月８日出願の米国特許出願第１３／７９０，１６０号、表題「ＭＥＴＨＯＤ  ＡＮＤ  ＤＥＶＩＣＥ  ＦＯＲ  ＣＯＭＢＩＮＥＤ  ＤＥＴＥＣＴＩＯＮ  ＯＦ  ＶＩＲＡＬ  ＡＮＤ  ＢＡＣＴＥＲＩＡＬ  ＩＮＦＥＣＴＩＯＮＳ」からの優先権を主張するものである。
【背景技術】
【０００２】
＜発明の分野＞
本発明は側方流動イムノアッセイの分野に属する。より具体的に、本発明は、ウイルス感染と細菌感染を迅速に検出する、側方流動イムノアッセイに属する。
【０００３】
＜関連技術の詳細＞
発熱は、幼児期に家庭医療及び小児科施設の双方の応急手当センターを訪れる一般的な原因である。最も一般的に、これは、呼吸器感染症又は胃腸炎のいずれかに関係する。小児期における発熱の高い発生率と不必要な抗生物質の慎重な投与とが、ウイルス感染及び／又は細菌感染を示すバイオマーカーのための迅速なスクリーニング検査を開発する理由である。
【０００４】
ウイルス感染を細菌感染と区別することが困難なときが頻繁にある。これは特に、自分の症状を言語化できない幼い子どもや、検査診断の利用が高額且つ時間を消費し、結果を得るまでに数日を要する外来診療の場において真実である。最近になって、多くの新しい診断マーカーが知られてきた。このようなマーカーの幾つかは、ウイルス感染を細菌感染と区別するのに大いに有望である。２つのこのようなタンパク質は、ＭｘＡとＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）を含む。ほとんどの呼吸器感染は咽頭炎に関し、咽頭炎の４０％はウイルスによって引き起こされ、２５−５０％はＡ群β溶血性連鎖球菌によって引き起こされる。少ないほうの原因は、急性細気管支炎と肺炎である。
【０００５】
重篤な市中肺炎は約６０％のケースで細菌感染によって引き起こされ、患者の約１０％が集中治療室（ＩＣＵ）への入院を必要とする。残りの３０％は、呼吸系ウイルスに関係する。
【０００６】
全ての抗菌剤の約８０％はプライマリケアで処方され、このような抗菌剤の最大で８０％までが気道の適用のためのものである。気道感染は、一次医療において、咳の非常に最多の一般的な原因である。広域スペクトル抗生物質は、急性気管支炎を含む咳のために頻繁に処方され、このような処方箋の多くは、仮にあるとしても、患者にはごくわずかに有効なだけで、副作用を引き起こして、抗生物質に対する耐性を強化しかねない。医師に抗生物質を与えさせる要因は、細菌感染の適切な診断マーカーの欠如、患者の経過観察を行っていないことへの懸念、及び、時間的制約（ｔｉｍｅ  ｐｒｅｓｓｕｒｅ）を含む。
【０００７】
Ｍｘタンパク質は、高分子量のＧＴＰアーゼの上科のメンバーである。従って、これらのＧＴＰアーゼは、Ｉ型アルファ／ベータ又はＩＩ型インターフェロン（ＩＦＮ）によって上方制御される。ＭｘＧＴＰアーゼは、ＩＦＮアルファ／ベータ・インターフェロンでもっぱら発現されるが、ＩＦＮガンマ処理細胞では発現されない。Ｉ型インターフェロンは先天性免疫応答に重要な役割を果たし、免疫調節性の、抗増殖性の、及び抗ウイルス性の作用を有する。ヒトＭｘＡの７８ｋＤａタンパク質は、ＩＦＮ処理細胞の細胞質で蓄積するが、様々なウイルスの複製を阻害する。ＭｘＡタンパク質は、基礎濃度が低く、半減期が長く（２．３日）、且つ誘導が速いため、ウイルス感染のためのマーカーとしては、２’，５’−オリゴアデニル酸シンセターゼなどの他の誘導タンパク質を上回る特定の利点を提供することができる。ＭｘＡのｍＲＮＡは、ＩＦＮ誘導の１−２時間以内にＩＦＮで刺激した、分離した末梢血管の白血球細胞中で検出可能であり、ＭｘＡタンパク質はその後まもなく蓄積し始める。
【０００８】
諸研究によって、末梢血中でのＭｘＡタンパク質の発現は、ウイルス感染のための感受性マーカー、及び、特異的マーカーであることが分かっている。細菌感染群と比較して、ウイルス感染群でＭｘＡレベルが高いのは、ＭｘＡタンパク質がＩ型ＩＦＮによってもっぱら誘導され、ＩＦＮガンマ、ＩＬ−１、ＴＮＦ−アルファ、又は、細菌感染による他のサイトカインのいずれかによっては誘導されないという事実から説明することができる。血清のＩ型ＩＦＮレベルは、重度の細菌感染を患う患者においてさえ、正常限界内に残る。
【０００９】
同様に、ほとんどのウイルス感染は、急性の位相応答をあまり引き起こさないことが報告されており、低いＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）濃度が、ウイルス性由来の病気と細菌性病因の病気を区別するために使用されてきた。ＣＲＰの血漿濃度が刺激後に急速に増加し、半減期が短いために急速に減少することから、ＣＲＰは感染と炎症性疾患とを診断及び監視するのに非常に役に立つ道具であり得る。スカンジナビアにおいて、ポイントオブケアＣＲＰ検査は、一般診療における呼吸器感染症患者の日常的な評価の一部であり、その使用は費用効率が良いことが証明されている。一般診療において、ＣＲＰは細菌性疾患の診断において有用であり、及び、細菌感染とウイルス感染を区別するのにも有用であることが分かっている。しばしば、ＣＲＰの診断値は、赤血球沈降速度（ＥＳＲ）の診断値よりも優れていることが分かっており、白血球数（ＷＢＣ）の診断値と同等であるか、又は、それよりも優れている。
【００１０】
臨床的に、特定の全身性のウイルス感染と細菌感染を区別することは困難になりかねない。肺炎などの重篤な感染の場合、又は、誤った診断の結果が連鎖球菌性咽頭炎などの重篤な合併症につながりかねない場合、細菌の培養が通常は行われる。多くの場合、培養物を得るのは困難である。残念なことに、ウイルス培養は、結果を知る時間が著しく遅れてしまうために日常的には行われない。新しいウイルススクリーニングＰＣＲパネルは役に立つが、高価であり、ポイントオブケアで情報を提供できない。故に、ウイルス感染と細菌感染を区別することができる診断検査を容易に使用しやすくすることが依然として必要とされている。
【発明の概要】
【００１１】
本発明は、ウイルス感染と細菌感染を検出し且つ区別することができる、側方流動アッセイを提供する。組み合わされたポイントオブケア診断装置は、ウイルス感染及び細菌感染の迅速な区別に効果的に役立てるために、ウイルス感染のマーカーと細菌感染のマーカーとを検査する。１つの好ましい実施形態において、細菌マーカーはＣＲＰである。別の好ましい実施形態において、ウイルスマーカーはＭｘＡである。本発明の幾つかの実施形態において、装置に適用する前にサンプル中で細胞を溶解する必要はない。
【００１２】
１つの好ましい実施形態において、方法は、最初にサンプルを採取することにより、感染が細菌性及び／又はウイルス性であるかどうかを判定する。その後、サンプルは、デュアルユーズの２つのストリップのサンプル分析装置（ｄｕａｌ  ｕｓｅ  ｔｗｏ  ｓｔｒｉｐ  ｓａｍｐｌｅ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｄｅｖｉｃｅ）に移される。サンプル分析装置は、第１の試薬領域と第２の試薬領域を伴う、第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップを含む。第１の試薬領域は、低レベルのＣ反応性タンパク質に特異的な少なくとも１つの第１の試薬を含み、サンプルが第１の試薬に接触すると、低レベルのＣ反応性タンパク質がサンプルに存在する場合に第１の標識化した複合体が形成される。第２の試薬領域は、ＭｘＡに特異的な少なくとも１つの第２の試薬を含み、サンプルが第２の試薬に接触すると、ＭｘＡがサンプルに存在する場合に第２の標識化した複合体が形成される。第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップはまた、第１の標識化した複合体に結合する第１の結合パートナーと、第２の標識化した複合体に結合する第２の結合パートナーとを含む、第１の検出領域を含む。２つのストリップの側方流動アッセイ装置はまた、第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップへの側方流動方向と平行な、第２の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップを含む。第２の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップは、高レベルのＣ反応性タンパク質に特異的な少なくとも１つの第３の試薬を含む少なくとも１つの第３の試薬領域を含み、サンプルが第３の試薬に接触すると、高レベルのＣ反応性タンパク質がサンプルに存在する場合に第３の標識化した複合体が形成される。第２の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップ上の第３の試薬は、第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップ上の第２の試薬により検出されるＣ反応性タンパク質のレベルよりも高い、Ｃ反応性タンパク質のレベルを検出するのみである。第２の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップはまた、第３の標識化した複合体に結合する第３の結合パートナーを伴う第２の検出領域を含む。サンプルはまた、低レベルのＣ反応性タンパク質、ＭｘＡ、及び高レベルのＣ反応性タンパク質の存在のために分析される。
【００１３】
別の好ましい実施形態において、デュアルユーズの２つのストリップの側方流動アッセイ装置は、サンプル中の細菌マーカー及び／又はウイルスマーカーを検出する。前記装置は、第１の試薬領域と第２の試薬領域を伴う、第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップを含む。第１の試薬領域は、低レベルのＣ反応性タンパク質に特異的な少なくとも１つの第１の試薬を含み、サンプルが第１の試薬に接触すると、低レベルのＣ反応性タンパク質がサンプルに存在する場合に第１の標識化した複合体が形成される。第２の試薬領域は、ＭｘＡに特異的な少なくとも１つの第２の試薬を含み、サンプルが第２の試薬に接触すると、ＭｘＡがサンプルに存在する場合に第２の標識化した複合体が形成される。第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップはまた、第１の標識化した複合体に結合する第１の結合パートナーと、第２の標識化した複合体に結合する第２の結合パートナーとを含む、第１の検出領域を含む。２つのストリップの側方流動アッセイ装置はまた、第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップへの側方流動方向と平行な、第２の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップを含む。第２の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップは、高レベルのＣ反応性タンパク質に特異的な少なくとも１つの第３の試薬を含む少なくとも１つの第３の試薬領域を含み、サンプルが第３の試薬に接触すると、高レベルのＣ反応性タンパク質がサンプルに存在する場合に第３の標識化した複合体が形成される。第２の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップ上の第３の試薬は、第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップ上の第２の試薬により検出されるＣ反応性タンパク質のレベルよりも高い、Ｃ反応性タンパク質のレベルを検出するのみである。第２の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップはまた、第３の標識化した複合体に結合する第３の結合パートナーを伴う第２の検出領域を含む。
【００１４】
別の好ましい実施形態において、感染が細菌性及び／又はウイルス性であるかどうかを判定する方法は、サンプルを採取する工程を含む。その後、サンプルは、サンプル分析装置に移される。サンプル分析装置はサンプル圧縮機を含み、該圧縮機は、第１試薬領域と第２試薬領域とを備え、第１試薬領域は、低レベルのＣ反応性タンパク質に特異的な少なくとも１つの第１の試薬であって、サンプルが第１の試薬に接触すると、低レベルのＣ反応性タンパク質がサンプルに存在する場合に第１の標識化した複合体が形成される、少なくとも１つの第１の試薬と、ＭｘＡに特異的な少なくとも１つの第２の試薬であって、サンプルが第２の試薬に接触すると、ＭｘＡがサンプルに存在する場合に第２の標識化した複合体が形成される、少なくとも１つの第２の試薬とを含み、第２の試薬領域は、高レベルのＣ反応性タンパク質に特異的な少なくとも１つの第３の試薬を含み、第３の試薬は、第２の試薬によって検知されたＣ反応性タンパク質のレベルよりも高いＣ反応性タンパク質のレベルを検出するのみであり、サンプルが第３の試薬に接触すると、高レベルのＣ反応性タンパク質がサンプルに存在する場合に第３の標識化した複合体が形成される。前記装置はまた、第１の検出領域と第１の分岐領域とを含む第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップを含み、第１の検出領域は、第１の標識化した複合体に結合する第１の結合パートナーと、第２の標識化した複合体に結合する第２の結合パートナーとを含み、第１の分岐領域は、側方流動クロマトグラフィ検査ストリップ上の第１の検出領域の上流に位置する。第１の分岐領域は、第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップ上で側方流動を阻止する。前記装置はまた、第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップへの側方流動方向と平行な、第２の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップを含む。第２の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップは、第３の標識化した複合体に結合する第３の結合パートナーを含む第２の検出領域と、側方流動クロマトグラフィ検査ストリップ上の第１の検出領域の上流に位置する第２の分岐領域とを含む。第２の分岐領域は、第２の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップ上で側方流動を阻止する。前記装置はまた、サンプルがサンプル分析装置の上に置かれる第１のサンプル適用領域を含む。第１のサンプル適用領域は、次のものから成る群から選択された場所に位置する：ｉ）検出領域の上流にある第１の側方流動クロマトグラフィ検査スリップの上、及び、ｉｉ）サンプル圧縮機の第１の試薬領域の上。前記装置はまた、サンプルがサンプル分析装置の上に置かれる第２のサンプル適用領域を含む。第２のサンプル適用領域は、次のものから成る群から選択された場所に位置する：ｉ）検出領域の上流にある第２の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップの上、及び、ｉｉ）サンプル圧縮機の第２の試薬領域の上。サンプル圧縮機は、第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップ、及び第２の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップとは異なる面にある。サンプル圧縮機の第１の試薬領域は、第１の分岐領域にわたり橋（ｂｒｉｄｇｅ）を作成し、サンプル圧縮機の第２の試薬領域は、第２の分岐領域にわたり橋を作成し、これらの橋は、サンプル圧縮機上に流れを分岐し、第１の分岐領域と第２の分岐領域の端部にある第１のクロマトグラフィ検査ストリップと第２のクロマトグラフィ検査ストリップに流れを戻す。サンプルは、低レベルのＣ反応性タンパク質、ＭｘＡ、及び高レベルのＣ反応性タンパク質の存在のために分析される。
【００１５】
別の好ましい実施形態は、サンプルにおける分析物を検知するための側方流動装置である。該装置はサンプル圧縮機を含み、該圧縮機は、第１試薬領域と第２試薬領域とを備え、第１試薬領域は、低レベルのＣ反応性タンパク質に特異的な少なくとも１つの第１の試薬であって、サンプルが第１の試薬に接触すると、低レベルのＣ反応性タンパク質がサンプルに存在する場合に第１の標識化した複合体が形成される、少なくとも１つの第１の試薬と、ＭｘＡに特異的な少なくとも１つの第２の試薬であって、サンプルが第２の試薬に接触すると、ＭｘＡがサンプルに存在する場合に第２の標識化した複合体が形成される、少なくとも１つの第２の試薬とを含み、第２の試薬領域は、高レベルのＣ反応性タンパク質に特異的な少なくとも１つの第３の試薬を含み、ここで、第３の試薬は、第２の試薬によって検知されたＣ反応性タンパク質のレベルよりも高いＣ反応性タンパク質のレベルを検知するのみであり、サンプルが第３の試薬に接触すると、高レベルのＣ反応性タンパク質がサンプルに存在する場合に第３の標識化した複合体が形成される。前記装置はまた、第１の検出領域と第１の分岐領域とを含む第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップを含み、第１の検出領域は、第１の標識化した複合体に結合する第１の結合パートナーと、第２の標識化した複合体に結合する第２の結合パートナーとを含み、第１の分岐領域は、第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップ上の第１の検出領域の上流に位置する。第１の分岐領域は、第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップ上で側方流動を阻止する。前記装置はまた、第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップへの側方流動方向と平行な、第２の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップを含む。第２の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップは、第３の標識化した複合体に合する第３の結合パートナーを含む第２の検出領域と、側方流動クロマトグラフィ検査ストリップ上の第１の検出領域の上流に位置する第２分岐領域とを含む。第２の分岐領域は、第２の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップ上で側方流動を阻止する。前記装置はまた、サンプルがサンプル分析装置の上に置かれる第１のサンプル適用領域を含む。第１のサンプル適用領域は、次のものから成る群から選択された場所に位置する：ｉ）検出領域の上流にある第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップの上、及び、ｉｉ）サンプル圧縮機の第１の試薬領域の上。前記装置はまた、サンプルがサンプル分析装置の上に置かれる第２のサンプル適用領域を含む。第２のサンプル適用領域は、次のものから成る群から選択された場所に位置する：ｉ）検出領域の上流にある第２の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップの上、及び、ｉｉ）サンプル圧縮機の第２の試薬領域の上。サンプル圧縮機は、第１の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップ、及び第２の側方流動クロマトグラフィ検査ストリップとは異なる面にある。サンプル圧縮機の第１の試薬領域は、第１の分岐領域にわたり橋（ｂｒｉｄｇｅ）を作成し、サンプル圧縮機の第２の試薬領域は、第２の分岐領域にわたり橋を作成し、これらの橋は、サンプル圧縮機上に流れを分岐し、第１の分岐領域と第２の分岐領域の端部にある第１のクロマトグラフィ検査ストリップと第２のクロマトグラフィ検査ストリップに流れを戻す。
【００１６】
別の好ましい実施形態において、方法は、サンプルを採取してサンプル分析装置にサンプルを移すことにより、少なくとも１つの細胞外の分析物と、少なくとも１つの細胞内の分析物とを同時に検出する。サンプルはまた溶解され、細胞外の分析物と細胞内の分析物は、同じサンプル分析装置上で同時に検出される。１つの好ましい実施形態において、細胞外の分析物はＣ反応性タンパク質であり、細胞内の分析物はＭｘＡタンパク質である。
【００１７】
別の好ましい実施形態において、サンプルにおけるＭｘＡタンパク質とＣ反応性タンパク質を検出する方法は、第１の標識に結合したＭｘＡタンパク質に対する抗体と、第１の標識とは異なる第２の標識に結合したＣ反応性タンパク質に対する抗体との混合物にサンプルを加える工程、ＭｘＡタンパク質に対する抗体が蓄積したかどうかを判定することによりＭｘＡタンパク質の存在を検出する工程、及び、Ｃ反応性タンパク質に対する抗体が蓄積したかどうかを判定することによりＣ反応性タンパク質の存在を検出する工程を含む。
【００１８】
別の好ましい実施形態において、サンプルにおける未知のウイルス感染の存在を検出する方法は、最初にサンプルを採取する。その後、サンプルは、サンプル分析装置のサンプル適用領域に移される。サンプル分析装置は、ナノミセルの内部に標識を伴うシアル酸ナノミセルを含む結合領域と、シアル酸同族体ナノ粒子を含むサンプル適用領域から横方向で下流にある検出領域とを含む。サンプルは、検出領域における陽性の結果に関して分析される。
【００１９】
別の好ましい実施形態において、サンプルにおける未知のウイルス感染の存在を検出する方法は、最初にサンプルを採取する。その後、サンプルは、サンプル分析装置のサンプル適用領域に移される。サンプル分析装置は、次のものから成る群から選択された分子を備えた結合領域を含む：ウイルス感染を引き起こす特定のウイルスに対する結合パートナーと標識を含むナノミセル、及び、ナノミセルの内部にラベルを含むシアル酸同族体ナノミセル。サンプル分析装置はまた、ウイルス感染を引き起こすウイルスに対して特異的なナノ粒子を備える、サンプル適用領域から横方向で下流にある検出領域を含む。サンプルは、検出領域における陽性の結果に関して分析される。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】ウイルス感染と細菌感染を識別するための迅速なスクリーニング検査ウィンドウの目視検査結果とその結果の解釈を示す。
【図２】様々な色の検査ラインを備えた３つのカセットを示す。
【図３】ともに同じ色をしたライン検出器と、２つのラインが異なる超高感度のライン検出器との比較を示す。
【図４Ａ】本発明の実施形態において、ウイルスマーカーの存在に対応する検査ラインと、細菌マーカーの存在を検出する第２の別の検査ラインとを備えた装置を示す。
【図４Ｂ】本発明の別の実施形態において、ウイルスマーカーの存在に対応する検査ラインと、細菌マーカーの存在を検出する第２の別の検査ラインとを備えた装置を示す。
【図５Ａ】本発明の実施形態において、サンプル適用領域と試薬領域との間に位置する溶解領域を含む、サンプル分析装置を示す。
【図５Ｂ】本発明の実施形態において、サンプル適用領域に重なる溶解領域を含む、サンプル分析装置を示す。
【図５Ｃ】本発明の実施形態において、試薬領域に重なる溶解領域を含む、サンプル分析装置を示す。
【図５Ｄ】本発明の実施形態において、サンプル適用領域と試薬領域に重なる溶解領域を含む、サンプル分析装置を示す。
【図６Ａ】本発明の実施形態において、高ＣＲＰレベルなどの細菌マーカーの存在に対応する検査ラインを備えた装置を示す。
【図６Ｂ】本発明の別の実施形態において、高ＣＲＰレベルなどの細菌マーカーの存在に対応する検査ラインを備えた装置を示す。
【図７Ａ】本発明の実施形態において、サンプル適用領域と試薬領域との間に位置する溶解領域を含む、サンプル分析装置を示す。
【図７Ｂ】本発明の実施形態において、サンプル適用領域に重なる溶解領域を含む、サンプル分析装置を示す。
【図７Ｃ】本発明の実施形態において、試薬領域に重なる溶解領域を含む、サンプル分析装置を示す。
【図７Ｄ】本発明の実施形態において、サンプル適用領域と試薬領域に重なる溶解領域を含む、サンプル分析装置を示す。
【図８Ａ】本発明の実施形態において、デュアル検査ストリップを備える完全に開いたサンプル分析装置を示し、同様に、検査ストリップから分離される平面にあるサンプル圧縮機上の結合領域とサンプル適用領域を示す。
【図８Ｂ】閉じられたハウジングの一部を備えた図８Ａのサンプル分析装置を示すが、結合領域は、装置の左側で視認可能なままである。
【図８Ｃ】検査を開始した後の、図８Ａのサンプル分析装置を示す。
【図９Ａ】本発明の実施形態において、ＭｘＡとＣＲＰの両方に陰性の検査結果を示す。
【図９Ｂ】本発明の実施形態において、ＭｘＡに陽性の検査結果を示す。
【図９Ｃ】本発明の実施形態において、ＭｘＡに陽性の検査結果を示す。
【図９Ｄ】本発明の実施形態において、ＣＲＰに陽性の検査結果を示す。
【図９Ｅ】本発明の実施形態において、ＣＲＰに陽性の検査結果を示す。
【図９Ｆ】本発明の実施形態において、同時感染を示す、ＣＲＰとＭｘＡの両方に陽性の検査結果を示す。
【図１０Ａ】本発明の実施形態において、デュアル検査ストリップを備える完全に開いたサンプル分析装置を示し、及び、検査ストリップから分離される平面にあるサンプル圧縮機上の結合領域を示す。
【図１０Ｂ】閉じられたハウジングの一部を備えた図１０Ａのサンプル分析装置を示すが、結合領域は、装置の左側で視認可能なままである。
【図１０Ｃ】検査を開始した後の、図１０Ａのサンプル分析装置を示す。
【図１１】本発明の実施形態において、サンプル分析装置を使用するサンプル分析のためのキットを示す。
【図１２】本発明の別の実施形態において、デュアル検査ストリップを備えたサンプル分析装置を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
本発明は、ウイルス感染と細菌感染を区別することができる側方流動アッセイを提供する。特定の細菌感染又はウイルス感染に特有の分析物について検査する代わりに、本明細書に記載される側方流動アッセイは、一般的な無指定の細菌感染と一般的な無指定のウイルス感染に反応した宿主において明確に作られる、診断のマーカーについて検査する。診断マーカーは好ましくは、細菌由来又はウイルス由来の、無指定の及び／又は未知のマーカーである。好ましい実施形態において、診断マーカーは、無指定の及び／又は未知の細菌感染及び／又はウイルス感染に対する免疫応答のための特異的マーカーである。
【００２２】
組み合わされたポイントオブケア診断装置は、ウイルス感染と細菌感染の両方のマーカーを検査し、例えば、外来患者診療室で、又は、応急手当外来の間に、ウイルス感染と細菌感染とを迅速に区別するのに効果的に役立ち得る。この能力は、誤診とその後の抗生物質の過剰使用とを制限することによって、医療費を劇的に削減することができる。上記を実践することで、抗生物質アレルギー、有害な事象、及び抗生物質耐性を制限することができる。検査から結果がすぐに得られることで、患者が従事者の検査をまだ受けている間に診断を下すことも可能となる。好ましい実施形態において、検査結果は、装置にサンプルを適用して１０分後には得られ、好ましくは約１０分で読み取られる。高い陽性のサンプルにおいて、検査ラインは約１乃至５分以内に視認可能である。
【００２３】
本発明の好ましい実施形態において、本発明の側方流動イムノアッセイ装置は、サンプルを輸送する液体を含み、この液体は緩衝液でもよい。該装置は、サンプルが流れる毛細管の特徴を備えた１以上のフリース素材又は膜を包含するクロマトグラフィ検査ストリップを含む。検査ストリップのための幾つかの好ましい材料又は膜には、Ｄａｃｒｏｎ（登録商標）繊維などのポリエチレンテレフタラート（ＰＥＴ）繊維、ニトロセルロース、ポリエステル、ナイロン、酢酸セルロース、ポリプロピレン、ガラス繊維、及び、このような材料及び裏当て材（ｂａｃｋｉｎｇｓ）の組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。本発明の幾つかの実施形態において、サンプルを検査ストリップに適用する前に、任意の方法でサンプル中の細胞を溶解させるか、又はサンプルを処理する必要はない。
【００２４】
本発明の１つの好ましい方法は、感染が細菌性かウイルス性かどうかを判定するために、例えば、クロマトグラフィ検査ストリップなどのサンプル分析装置を用いる。この方法において、サンプルが採取され、クロマトグラフィ検査ストリップに移される。好ましい実施形態において、サンプルは白血球を含むサンプルである。検査ストリップは試薬領域を含む。試薬領域は、好ましくは、細菌マーカーに特異的な少なくとも１つの第１の試薬を含み、サンプル中に存在する細菌マーカーがこの第１の試薬に接触すると、第１の標識化した複合体が形成される。試薬領域は、好ましくは、ウイルスマーカーに特異的な少なくとも１つの第２の試薬も含み、サンプル中に存在するウイルスマーカーがこの第２の試薬に接触すると、第２の標識化した複合体が形成される。検出領域は、第１の標識化した複合体に結合する細菌マーカーの結合パートナーと、第２の標識化した複合体に結合するウイルスマーカーの結合パートナーを両方含む。サンプルはその後、ウイルスマーカー及び／又は細菌マーカーの存在について分析される。
【００２５】
本発明の装置の好ましい実施形態は、サンプル適用領域を含む。本装置は試薬領域も含み、該領域は細菌マーカーに特異的な少なくとも１つの第１の試薬を含み、サンプル中に存在する細菌マーカーが第１の試薬に接触すると、第１の標識化した複合体が形成され、該領域は、細菌マーカーに特異的な少なくとも１つの第２の試薬を含み、サンプル中に存在するウイルスマーカーが第２の試薬に接触すると、第２の標識化した複合体が形成される。装置上の検出領域は、第１の標識化した複合体と結合する細菌マーカーと、第２の標識化した複合体と結合するウイルスマーカーとを含む。使用可能な装置の一例は、クロマトグラフィ検査ストリップである。他の好ましい実施形態において、装置の領域の幾つかは１以上のクロマトグラフィ検査ストリップ上にあり、一方で他の領域（例えば、試薬領域、サンプル適用領域、及び／又は、対照結合パートナー）は、サンプル圧縮機上にあり、互いに離れ、及び、クロマトグラフィ検査ストリップとは異なる平面にある。
【００２６】
好ましい実施形態において、ウイルスマーカー又は細菌マーカーの存在は、肉眼で見える検査ラインによって示される。ウイルスマーカーの存在は、第１の検査ラインによって示され得、その一方で、細菌マーカーは第２の検査ラインによって示される。幾つかの実施形態において、第１の検査ラインは陽性の際に第１の色を表示し、第２の検査ラインは陽性の際に第１の色とは異なる第２の色を表示する。第１の検査ラインと第２の検査ラインの両方がサンプル分析装置上の同じ空間内に位置する実施形態において、第３の色は、第１の検査ラインと第２の検査ラインの両方が陽性の際に好ましくは形成される。他の実施形態において、２つの検査ラインは装置上で互いから空間的に離れている。
【００２７】
ウイルス感染と細菌感染は非常に伝染性であり、そして、全身性の抗生物質の過剰処方、及び抗生物質抵抗性の促進へと頻繁に通じる、兆候と症状における著しい重複のため、臨床的に区別するのが困難なものである。先進国において、急性呼吸器感染症は、医療相談の２０％、研究欠席（ａｂｓｅｎｃｅｓ  ｆｒｏｍ  ｗｏｒｋ）の３０％、及び全ての抗生物質処方の７５％を占める、罹患率の主要原因である。米国において、急性呼吸器感染症に関して毎年、およそ７６００万の医師の来院が存在する。感染に対する免疫応答を検出する能力は、ウイルスの病因及び／又は細菌の病因から結果として生じる感染を区別するための臨床診断能力を補助する。
【００２８】
１つの好ましい実施形態において、細菌マーカーはＣＲＰである。別の好ましい実施形態において、ウイルスマーカーはＭｘＡである。幾つかの好ましい実施形態において、検出領域は、装置が作動している際に、肉眼で見える対照ラインを同様に含む。
【００２９】
１つの好ましい実施形態において、ウイルス感染のためのマーカーはＭｘＡであり、細菌感染のためのマーカーはＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）である。高ＭｘＡタンパク質レベルは、全身性ウイルス感染と強く相関し、ＣＲＰの増加は細菌感染に多く関連する。本発明は、サンプル中のＭｘＡとＣＲＰとを識別するための、迅速な感染のスクリーニング検査を含む。ＭｘＡは白血球（ｌｅｕｋｏｃｉｔｅ、ｗｈｉｔｅ  ｂｌｏｏｄ  ｃｅｌｌｓ）中に存在する。したがって、サンプルは、白血球が利用可能な場所で、例えば、末梢血サンプル、鼻咽頭吸引物、涙、髄液、及び、中耳吸引物において、採取され得る。
【００３０】
ＣＲＰとＭｘＡを含有する単一の検査ストリップを伴う幾つかの好ましい実施形態において、陽性の結果を誘発するために必要とされるサンプル中のＣＲＰの閾値濃度は、およそ６−１５ｍｇ／Ｌである。他の好ましい実施形態において、陽性の結果を誘発するサンプル中のＭｘＡの閾値濃度は、およそ１５ナノグラム／ｍｌほどの低さでもよい；しかし、閾値濃度は、およそ２０ｎｇ／ｍｌ乃至およそ２５０ｎｇ／ｍｌまでの範囲よりも高いか、又はその範囲内にあってもよい。適用可能な場合、閾値濃度は、検査ストリップに適用されるサンプルの大きさ、同様に、その希釈度にも依存してもよい。
【００３１】
幾つかの実施形態において、本明細書に記載される装置及び方法は、辺縁の全血から直接ＭｘＡとＣＲＰの両方を、迅速に、視認可能に、定質的にインビトロで検知することを可能にする。１つの好ましい実施形態において、検査は、呼吸器疾患と一致する呼吸器症状、及び急性咽頭炎又は市中感染性肺炎の推定診断と共に、熱の発症の７日以内に存在する、１歳より高齢の患者における疑わしいウイルス感染及び／又は細菌感染に対する免疫応答を測定する。陰性の結果は必ずしも呼吸器感染症を妨げるものではなく、診断、処置、又は他の管理の決定に関する唯一の基準として使用されるべきでない。幾つかの実施形態において、追加の実験室検査（例えば、細菌培養及びウイルス培養、免疫蛍光、ウイルスポリメラーゼ連鎖反応、及びＸ線撮影法）と臨床像（ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ）の使用は、特異的な低度の呼吸器及び咽頭の病原菌が存在するかどうかを確認するために追加で使用されるのが好ましい。
【００３２】
加えて、誤った偽陽性又は偽陰性に通じる幾つかの疾病が存在する。これらは、限定されないが、サンプルを提供する患者による免疫抑制薬の現在の使用、サンプルを提供する患者による経口抗感染薬の現在の使用、サンプルを提供する患者によるインターフェロン療法（例えば、多発性硬化症、ＨＩＶ、ＨＢＶ、ＨＣＶのため）の現在の使用、及び、サンプルを提供する患者による過去３０日以内の生きたウイルスの免疫化を含む。レベルが治療により変動し得るため、偽陰性と偽陽性の両方が可能である。
【００３３】
好ましい実施形態において、装置及び方法は、外来患者診療室又は応急手当臨床における専門的使用を意図したものであり、他の臨床的（実験室又はＸ線写真術）及び疫学の情報と共に使用されねばならない。
【００３４】
好ましい実施形態において、デュアルユーズのデュアルクロマトグラフィ検査ストリップのアッセイは、結果の多重化したパターンを使用して、患者におけるウイルス感染及び／又は細菌感染に対する身体の免疫応答を検出する。１つの特異的な好ましい実施形態において、前記アッセイは、ミクソウイルス抵抗性Ａ（ＭｘＡ）、低レベルのＣ反応性タンパク質（「低」ＣＲＰ）、及び高レベルのＣ反応性タンパク質（「高」ＣＲＰ）を検査する。２つの検査ストリップが好ましくは使用される。幾つかの実施形態において、クロマトグラフィ検査ストリップとは異なる面にあるサンプル圧縮機も、使用される。第１の検査ストリップは、ＭｘＡと低レベルのＣ反応性タンパク質をアッセイし、第２の検査ストリップは、高レベルのＣ反応性タンパク質のアッセイである。第１の検査ストリップ及び／又はサンプル圧縮機は、ＭｘＡタンパク質と低レベルのＣ反応性タンパク質を検出するための試薬を含む。第２の検査ストリップ及び／又はサンプル圧縮機は、高レベルのＣ反応性タンパク質を検出するための試薬を含む。２つの検査ストリップは好ましくは、並行して実行され、各ストリップは好ましくは対照ラインも含む。対照試薬は好ましくは、検査ストリップ又はサンプル圧縮機上にある。これらの検査は、生物感染を検出し、それをウイルス、細菌、又はウイルスと細菌の同時感染として分類する。幾つかの好ましい実施形態において、デュアルユーズのデュアルクロマトグラフィ検査ストリップのアッセイは、発熱性の呼吸器疾患の患者からのサンプルを検出するために使用される。
【００３５】
２つの検査ストリップを伴う幾つかの好ましい実施形態において、第１の検査ストリップ上で、サンプル中のおよそ６−１５ｍｇ／Ｌ（血清カットオフ値）のＣＲＰ（「低」ＣＲＰレベル）の閾値濃度は、陽性の結果を誘発するために必要とされ、サンプル中の少なくとも１５ｎｇ／ｍｌのＭｘＡの閾値濃度は、陽性の結果を誘発するために必要とされる。他の好ましい実施形態において、ＭｘＡの閾値濃度は、陽性の結果を誘発するために、およそ１５ｎｇ／ｍｌ乃至およそ２５０ｎｇ／ｍｌの範囲にあってもよい。適用可能な場合、閾値濃度は、検査ストリップに適用されるサンプルの大きさ、同様に、その希釈度にも依存してもよい。１つの好ましい実施形態において、例えば血液サンプルからの細胞外の血清中の低ＣＲＰの閾値濃度は、血清カットオフ値に関して１０ｍｇ／Ｌと同等である、指穿刺カットオフ値に関して７ｍｇ／Ｌである。１つの好ましい実施形態において、例えば血液サンプルからの末梢血単核細胞中のＭｘＡの閾値濃度は、４０ｎｇ／ｍｌの静脈血カットオフ値と同等である、指穿刺カットオフ値に関して４０ｎｇ／ｍｌである。第２の検査ストリップ上で、サンプル中のおよそ６０−１００ｍｇ／ＬのＣＲＰ（「高」ＣＲＰレベル）の閾値濃度が、幾つかの好ましい実施形態において陽性の結果を誘発するために必要とされる。１つの特に好ましい実施形態において、第２の検査ストリップ上の高ＣＲＰの閾値濃度は、フィンガープリントのカットオフ値に関しておよそ８０ｍｇ／Ｌである。
【００３６】
他の実施形態において、ウイルス感染及び／又は細菌感染のための他のマーカーが使用されてもよい。例えば、宿主遺伝子のおよそ１２％が、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）感染後にそれらの発現を変更し、これら遺伝子の亜群が、悪性ＬＣＭＶ感染と非悪性ＬＣＭＶを区別することが可能となる。主要な転写の変化は、定量ＰＣＲとタンパク質研究とによって予備確認を与えられ、アレナウイルス性疾患のためのバイオマーカーとして潜在的に価値のある候補である。細菌感染のための他のマーカーには、プロカルシトニン、尿性トリプシンインヒビター（ｕＴｉ）、リポ多糖類、ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＥＳＲ、及び、白血球数の上昇（結合（ｂａｎｄ）の増加）、乳酸、トロポニン、血管内皮増殖因子、血小板由来増殖因子、コルチゾール、プロアドレノメデュリン、マクロファージ遊走阻止マーカー、活性化タンパク質Ｃ、ＣＤ４、８、１３、１４、又は６４、カスパーゼ、胎盤由来増殖因子、カルシトニン遺伝子関連ペプチド、高移動度群１、コペプチン、ナトリウム利尿ペプチド（ｎａｔｕｒｉｅｔｉｃ  ｐｅｐｔｉｄｅ）、リポ多糖結合タンパク質、腫瘍壊死因子α、循環血管内皮前駆細胞、補体３ａ、及び、骨髄系細胞（ｔｒｅｍ−１）上で発現した誘発受容体が挙げられるが、これらに限定されない。
【００３７】
１つの好ましい実施形態において、区別される感染は呼吸器感染である。他の実施形態において、細菌性又はウイルス性の他の感染の種類は、本発明のシステムを用いて区別される。幾つかの実施例には、脳炎、髄膜炎、胃腸炎、発熱性呼吸器疾患（気管支炎、咽頭炎、肺炎を含む）、副鼻腔炎、中耳炎、尿路感染、及び結膜炎が挙げられるが、これらに限定されない。
【００３８】
側方流動装置は既知のものであり、例えば、米国公開特許出願第２００５／０１７５９９２号及び同第２００７／００５９６８２号に記載されている。これらの出願の両方の内容は、参照により本明細書に組み込まれる。当該技術分野で知られている他の側方流動装置は、本発明のシステム及び方法とともに交互に使用することができる。
【００３９】
米国公開特許第２００７／００５９６８２号は、分析物と、１以上の妨害物質を包含可能なサンプルとを検出することを開示している。この公報は、クロマトグラフィ担体上で妨害物質を捕捉することによって妨害物質と分析物とを区別すること、妨害物質から分離された担体上の分析物を検出することを教示している。
【００４０】
米国公開特許出願第２００７／０１７５９９２号は、ヒトの体液サンプルが綿棒部材などの採取装置によって採取される場合に、ヒトの体液において標的（例えば、病原体及び／又はアレルギー関連成分など）を検出する方法を開示している。サンプルは綿棒部材からサンプル分析装置へと移され、その装置上で、標的の分析を免疫化学的手段又は酵素的手段によって行うことができる。検査結果は非常に短時間で表示することができ、ユーザーによって直接読み取られ得る。このことは、患者の訪問の間に結果を入手できるポイントオブケア検査を可能にする。この同時係属出願において開示される発明は、結膜炎の診断に特に有利である。
【００４１】
本発明の方法において、分析されるサンプルはクロマトグラフィ担体上に適用される。担体は、１つの単一のクロマトグラフィ材料で作ることができるか、又は好ましくは、同じ材料又は異なる材料から作られ且つ担体裏打ち材（ｃａｒｒｉｅｒ  ｂａｃｋｉｎｇ）上に固定される、様々な毛細管の活性物質で作ることができる。これらの材料は互いに密接に接触することによって輸送経路を形成し、この輸送経路に沿って、毛細管力によって運ばれる液体が、適用領域から試薬領域を通って、１以上の検出領域と任意で担体の他の端部にある廃棄領域へと流れる。他の実施形態において、液体は、サンプル適用領域に流れ込む前に試薬領域を通過する。特に好ましい実施形態において、担体はクロマトグラフィ検査ストリップである。他の好ましい実施形態において、サンプルは、クロマトグラフィ検査ストリップとは異なる面にあるサンプル圧縮機に適用され、その後、サンプル圧縮機によってクロマトグラフィ検査ストリップに移されてもよい。
【００４２】
幾つかの実施形態において、サンプルは、担体の適用領域をサンプルに浸すことによって担体に直接適用される。代替的に、サンプルの担体への適用は、乾燥したふき取り要素又は濡れたふき取り要素でサンプルを採取することによって行うことができ、サンプルは前記要素から、任意で湿潤後に、担体の適用領域に移され得る。通常は、ふき取り要素は無菌であり、乾燥しているか、又は、採取工程の前に流体によって事前に処理されてもよい。本発明に係るふき取り要素に適切な材料は、合成材料、織布、又は繊維ウェブを含んでもよい。そのようなふき取り要素の幾つかの例は、ドイツ特許ＤＥ４４３９４２９号と同ＤＥ１９６２２５０３号に記載され、それらは参照により本明細書に組み込まれる。他の実施形態において、サンプルは、ピペットなどの採取容器によって採取され、担体に直接移されてもよい。
【００４３】
検出方法の種類に依存して、様々な試薬が担体の試薬領域に存在し、幾つかの実施形態において、試薬領域は好ましくは、適用領域と検出領域との間に位置し、又は、他の実施形態において、好ましくは適用領域の前に位置する。また他の実施形態において、試薬は、検出領域を含む担体から離れたサンプル圧縮機上にあり、及び該担体とは異なる面にあってもよい。
【００４４】
サンドイッチ免疫測定法において、検出される各々の細菌マーカー及びウイルスマーカーに特異的な試薬領域中に、標識化した非固定化試薬を有するのが好ましい。故に、サンプル中に存在するウイルスマーカー又は細菌マーカーが、試薬領域中に存在する対応する標識化したウイルス試薬又は細菌試薬に触れると、標識化した複合体がマーカーと対応する標識化した試薬との間に形成される。標識化した複合体は、次に、検出領域内の検査ラインにて、固定化されたウイルス又は細菌マーカーの結合パートナーを備えた更なる複合体を形成することができる。競合イムノアッセイにおいて、試薬領域は、好ましくは、標識化した非固定化マーカーアナログを含み、該アナログは、検出領域内の固定化されたマーカー結合パートナーのためのマーカーと競合する。試薬領域及び検出領域中のマーカー結合パートナーは、好ましくは、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、又は、組み換え抗体、或いは、対応するマーカーに特異的に結合することができる抗体のフラグメントである。
【００４５】
好ましい実施形態において、本発明は、検査されるサンプル中に存在する妨害物質を減少させる。妨害物質、例えば、ヒトの抗マウス抗体（ＨＡＭＡ）は、試薬領域の標識化した非固定化された試薬と検出領域の固定化された結合パートナーとを備えた複合体を形成することもでき、故にイムノアッセイでは陽性の検査結果を示すため、担体は少なくとも１つの捕捉領域を更に備えることができる。各々の捕捉領域は、特定の妨害物質に特異的に結合する固定化された捕捉試薬を含み、これによって、捕捉領域中の妨害物質を固定化する。捕捉領域は空間によって検出領域から離されており、サンプルは担体の検出領域に到達する前に、試薬領域と捕捉領域上で移動し始めるため、本方法は、妨害物質を所望の分析物から分離することができる。好ましくは、捕捉領域は試薬領域と検出領域の間に位置する。しかしながら、捕捉領域は適用領域と試薬領域の間に配することもできる。
【００４６】
マーカーの検出は検出領域で達成され得る。結合分子は、検出領域内の免疫反応又は他の反応によって、標識化した複合体又は標識化したマーカーアナログを固定化することで、プロセス中に検出領域内で視認可能な検査ラインを構築する。好ましくは、標識は光学的に検出が可能な標識である。検査ラインにて複合体を形成することで、標識を集中させて固定化し、検査ラインが肉眼で見えるようになり、陽性の検査結果を示す。特に好ましいのは直接標識であり、より具体的には、肉眼でもっとも認識されやすい金標識が好ましい。付加的に、電子読み出し装置（例えば、測光トランスデューサー、音響トランスデューサー、インピーダンス変換器（ｉｍｐｅｄｉｍｅｔｒｉｃａｌ  ｔｒａｎｓｄｕｃｅｒ）、電位差変換器、及び／又は電流測定変換器に基づく）は、より正確な結果と分析物の半定量化を得るために使用することができる。他の標識は、ラテックス、フルオロフォア、又はホスホロフォア（ｐｈｏｓｐｈｏｒｏｐｈｏｒｅ）でもよい。
【００４７】
１つの実施形態において、視覚的に読み取られる側方流動イムノアッセイ検査の感度は、少量の蛍光染料又は蛍光ラテックスビーズ接合体を、最初の接合体材料に加えることによって高められる。可視スペクトル検査ラインが視認可能に存在すると、検査結果が観察され、記録される。しかしながら、明白に目に見える検査ラインを生じさせるものではない弱陽性の場合、ＵＶスペクトルなどの適切なスペクトルの光線が、検査ラインに投げかけられることによって、検査ラインにて視認可能な色を鮮やかにするために検査ラインで結合される蛍光ラテックスビーズを励起するとともに、該蛍光ラテックスビーズの蛍光を発する。
【００４８】
好ましい実施形態において、ウイルスマーカーの存在に対応する視認可能な検査ラインが細菌マーカーの存在に対応する検査ラインから分離するように、試薬が形成される。したがって、検出領域中の検査ラインの展開位置だけにより、サンプルが細菌マーカー又はウイルスマーカー（或いはその両方）を含んでいたかどうかをすぐに判定することができる。別の好ましい実施形態において、様々な色の検査ラインが展開されるように、試薬が選択されてもよい。即ち、ウイルスマーカーの存在は、細菌マーカーの存在によって展開したラインとは異なる色のラインを展開させることになる。例えば、ウイルスマーカーを認識する試薬に対応する標識は赤であり、一方で、細菌マーカーを認識する試薬に対応する標識は緑であってもよい。非固定化試薬に取り付けられ得る、異なるように色付けされた標識は、周知である。幾つかの実施例には、コロイド金、コロイドセレン、コロイド状炭素、ラテックスビーズ、常磁性ビーズ、蛍光標識及び化学発光標識、及び、それらの混合物が挙げられるが、これらに限定されない。
【００４９】
図４Ａ及び図４Ｂは、ウイルスマーカーの存在に対応する検査ライン（４０２）と、細菌マーカーの存在を検出する第２の別の検査ライン（４０３）とを備えた、クロマトグラフィ検査ストリップ（４００）を示す。サンプルは、クロマトグラフィ検査ストリップ（４００）の適用領域（４０１）に適用される。図４Ａに示されるように、サンプルはその後、少なくとも１つの標識化したウイルス結合パートナーと、少なくとも１つの標識化した細菌結合パートナーとを含む試薬領域（４６０）を通過し、該結合パートナーは、サンプル輸送液体（例えば、緩衝溶液）によって溶出され、その後、該サンプル輸送液体とともに移動することができる。代替的に、図４Ｂに示されるように、試薬領域中の標識化した結合パートナーがサンプル輸送液体によって溶出されてサンプルへと移動するように、試薬領域（４６０）はサンプル適用領域（４０１）の上流に位置する。標識化したウイルス結合パートナーは、対象のウイルスマーカーと特異的に結合することができ、検出領域内の別の特定の試薬又は結合パートナーと交互に特異的に結合することが可能な複合体を形成する。標識化した細菌結合パートナーは対象の細菌マーカーと特異的に結合することができることで、検出領域中の別の特定の試薬又は結合パートナーと交互に特異的に結合可能な複合体を形成する。これらの図には示されていないが、吸収パッドと、同様に、他に知られている側方流動イムノアッセイの構成要素（読み出される結果のための、廃棄領域、キャリア基材、ハウジング、及び、ハウジング内の開口部を含むが、これらに限定されない）は、これらの実施形態において、任意で検査ストリップ（４００）の構成要素であってもよい。
【００５０】
検査ストリップ（４００）は、例えば、検査ライン（４０２）などのウイルスマーカーの検出のための少なくとも１つの第１区域を含む検出領域（４０５）を更に含み、該区域は、ウイルスマーカーによって形成されたウイルス試薬複合体に相補的な固定化された特定の結合パートナーと、その標識化した結合パートナーとを含む。したがって、検査ライン（４０２）にて、検出領域結合パートナーは、結合されたウイルスマーカーとともに、試薬領域（４６０）から標識化したウイルス結合パートナーを捕捉する。標識化した結合パートナーによるウイルスマーカーのこの局在化によって、検査ライン（４０２）にて表示が生じる。検査ライン（４０２）にて、ウイルスマーカーの存在は、標識化した結合パートナーの蓄積に起因する検査ライン（４０２）の表示の、質的な及び／又は量的な読み出しによって判定される。
【００５１】
検出領域（４０５）は、例えば、検査ライン（４０３）などの、細菌マーカーの検出のための少なくとも１つの第２区域も含み、該区域は、細菌マーカーによって形成された細菌試薬複合体に相補的な、固定化された特定の結合パートナーと、その標識化した結合パートナーとを含む。したがって、検査ライン（４０３）にて、検出領域結合パートナーは、結合された細菌マーカーとともに、試薬領域（４６０）から標識化した細菌結合パートナーを捕捉する。標識化した結合パートナーによる細菌マーカーのこの局在化によって、検査ライン（４０３）にて表示が生じる。検査ライン（４０３）にて、細菌マーカーの存在は、標識化した結合パートナーの蓄積に起因する検査ライン（４０３）の表示の、質的な及び／又は量的な読み出しによって判定される。検査ライン（４０２）が図中の流れ（４０８）の方向に対して検査ライン（４０３）の上流にある一方で、代替的な実施形態では、検査ライン（４０３）は検査ライン（４０２）の上流にある。また他の実施形態において、検査ライン（４０２）と（４０３）は、検査ストリップ上の同じ位置に位置する。
【００５２】
任意に、検出領域（４０５）は、対照ライン（４０４）と同様に、他のウイルスマーカー及び／又は細菌マーカーを検出するための更なる検査ラインを含むことができる。対照ライン（４０４）は、標識化した特異的な結合パートナーがどのウイルスマーカー又は細菌マーカーも結合させていないかもしれないにもかかわらず、アッセイの長さにわたって移動したことを示しており、したがって、アッセイの適切な操作を確認している。図４Ａ乃至４Ｂに示されるように、対照ライン（４０４）は、好ましくは、検査領域（４０２）と（４０３）の下流にある。しかしながら、他の実施形態において、対照ライン（４０４）は、検査領域（４０２）と（４０３）の何れか又は両方の上流に位置してもよい。
【００５３】
好ましい実施形態において、対照ライン（４０４）は、検査で用いられている溶出培地の成分又は他の組成物と結合する抗体又は他の組み換えタンパク質を含む。核酸が標的である実施形態において、対照ライン（４０４）は、好ましくは、標的核酸のための結合パートナーとして用いられる標識化した核酸に相補的な核酸を含む。
【００５４】
ウイルスおよび細菌のマーカーの各々に対する図面において、１つの検査ラインのみが示されるが、ウイルスおよび細菌のマーカーの両方またはいずれかに対する複数の検査ラインが、本発明の精神内で使用されてもよい。複数の細菌の及び／又はウイルスの標的がある幾つかの実施形態では、各標的の存在は、好ましくは、別々の検査ライン（４０２）または（４０３）に対応する。他の実施形態では、細菌マーカーおよびウイルスマーカーの両方は、単一の検査ライン上で検出される。これら実施形態では、同じ検査ライン上の細菌マーカーおよびウイルスマーカーの両方の存在は、細菌マーカーまたはウイルスマーカーのいずれかの存在とは異なる特徴を有する。例えば、同じ検査ライン上の細菌マーカーおよびウイルスマーカーの両方の存在は、細菌マーカーまたはウイルスマーカーのいずれか単独の存在とは異なる色によって視覚的に示され得る。
【００５５】
ウイルス感染（インフルエンザ様症状および＞１００．５°Ｆの熱）の症状を示す患者の新鮮な全血サンプルを、どれほどのレベルの血中のＭｘＡが、本明細書に記載される側方流動検査によって検出され得るかを測定するために検査した。これらの実験で使用される側方流動アッセイは、細菌マーカーの存在に対する第２検査ラインなしで、上に記載される図４Ｂで示される装置と類似する構成を有していた。より具体的には、検査ストリップは、サンプル適用領域の上流に試薬領域を含んだ。試薬領域は、コロイド金で標識化されたＭｘＡ（協和発酵キリン株式会社、東京、日本）に対する可動性の（ｍｏｂｉｌｉｚａｂｌｅ）抗体を含んだ。検査ストリップはまた、検出領域に検査ラインを含んだ。検査ラインは、ＭｘＡ（協和発酵キリン株式会社、東京、日本）に対する固定化抗体を含んだ。検出領域での対照ラインは、青色ラテックスビーズで標識化された可動性のニワトリＩｇＹに結合する、（追加の安定効果のための）ウサギ抗ニワトリ抗体＋ウサギＩｇを含んだ。
【００５６】
全血サンプルを、抗凝血薬としてのＥＤＴＡで採取した。これらの検査では、血液サンプル中のＭｘＡタンパク質の量を、ＭｘＡタンパク質ＥＬＩＳＡ試験キット（協和発酵キリン株式会社、東京、日本）を使用して測定した。血液を、検査ストリップに適用される前に、キットに提供される溶解液によって１：１０に溶解した。溶解した血液の１００μｌを、ＥＬＩＳＡ試験で試験した。溶解した血液の１０μｌを、ＭｘＡの側方流動検査でサンプルとして使用した。
【００５７】
溶解した血液サンプルを、検査ストリップの適用領域に適用した。試薬中の標識化したＭｘＡ抗体を、サンプル輸送液体によって溶出し、血液サンプルに移動させた。検査ラインでは、固定化ＭｘＡ抗体が、ＭｘＡに結合した試薬領域から任意の標識化ＭｘＡ抗体を捕捉した。ＭｘＡの、その標識化抗体によるこの局在化によって、十分な濃度のＭｘＡがあった場合に、検査ラインで赤色の視覚表示が生じた。
【００５８】
【表１】
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【００５９】
表１は、検査命令につき実行されたＭｘＡ ＥＬＩＳＡキット基準を示す。表１に示されるように、２４ｎｇ／ｍｌのＭｘＡ濃度は、側方流動検査で陽性の結果をもたらした。キット標準を、標準曲線を生成するために使用し、そこからＭｘＡ濃度を測定した。
【００６０】
表２は、ウイルス感染（インフルエンザ様症状および＞１００．５°Ｆの熱）の症状を示す患者の臨床的な新鮮な全血サンプルの結果を示す。
【００６１】
【表２】
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【００６２】
サンプル中のＭｘＡ濃度を測定するために、ＯＤ（光学密度）値を、キットの標準からの標準曲線と組み合わせて使用した。濃度（ｎｇ／ｍｌ）の列は、溶解剤で希釈された濃度であった。濃度×希釈（ｌＯ×）（ｎｇ／ｍｌ）の列は、全血サンプル中の有効濃度であった。表で示されるように、側方流動検査は、サンプルＣおよびＦ中のＭｘＡに対して陽性の結果をもたらし、それぞれ、サンプル中で、およそ１０５ｎｇ／ｍｌのＭｘＡおよびおよそ２２ｎｇ／ｍｌのＭｘＡを有した。
【００６３】
表３は、テネシー血液バンクからの正常な個体から凍結された全血サンプルの結果を示す。血液サンプルはどれも、識別可能な量のＭｘＡを有しておらず、すべてが側方流動検査で陰性であった。
【００６４】
【表３】
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【００６５】
表４は、ウイルス感染（インフルエンザ様症状および＞１００．５°Ｆの熱）の明らかな症状を示す患者のＢｉｏＲｅｃｌａｍａｔｉｏｎ （ＢｉｏＲｅｃｌａｍａｔｉｏｎ， Ｈｉｃｋｓｖｉｌｌｅ， ＮＹ）からの新たに凍結された全血サンプルを示す。これらの患者は誰も、およそ８ｎｇ／ｍｌより高いＭｘＡレベルに対応するＯＤを有していなかった。これらのサンプルはすべて、側方流動検査で陰性であった。
【００６６】
【表４】
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【００６７】
これらの検査の結果は、本明細書に記載される側方流動検査が、１０μｌサンプル（１：１０に希釈した）中に少なくともおよそ２０ｎｇ／ｍｌもの低ＭｘＡレベルを検出することができることを示している。
【００６８】
ウイルスと細菌の感染を識別するための迅速なスクリーニングテストの一例を、図１に示す。上で議論されるように、ＭｘＡは、ウイルス感染に対する診断マーカーであり、一方でＣＲＰは、細菌感染に対する診断マーカーである。本例では、青色ライン（図のＡ−Ｄにおける「対照ライン」）は、対照を表わす。緑色ラインは、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）レベル＞１５ｍｇ／Ｌであることを表わす（図のＡ−Ｄにおける「ＣＲＰ検査」）。赤色ラインは、ＭｘＡレベル＞２０ｎｇ／ｍｌであることを表わす（図のＡ−Ｄにおける「ＭｘＡ検査」）。ＣＲＰタンパク質に対する陰性の結果を有する、ＭｘＡタンパク質に対する陽性の結果は、ウイルス感染のみを示す（視覚検査結果Ａ）。ＭｘＡタンパク質に対する陰性の結果を有する、（ＣＲＰ）に対する陽性の結果は、細菌感染のみを示す（視覚検査結果Ｂ）。ＭｘＡおよびＣＲＰの両方に対する陽性の結果は、同時感染（細菌およびウイルスの両方による感染）を示す（視覚検査結果Ｃ）。ＭｘＡおよびＣＲＰの両方に対する陰性の結果によって、細菌またはウイルスの感染は示されていない（視覚検査結果Ｄ）。特定色のラインが本例で議論されているが、ウイルスまたは細菌のマーカーを示す、他の色、または検査ストリップ上の異なる位置での同じ色は、本発明の精神内にある。
【００６９】
異なる色のラインの開発が利用されるときに、そのラインは、空間によって分離されてもされなくてもよい。後者の例では、両方のマーカーが存在するときに見られる色が、個々のマーカーが存在するときに見られる色とは異なるように、標識が選択される。例えば、ウイルスマーカーの存在は、赤色ラインによって示されてもよく、細菌マーカーの存在は、青色ラインによって示されてもよく、および両方の存在は、紫色ライン（赤色と青色の組み合わせ）によって示されてもよい。
【００７０】
急性感染症と慢性感染症を識別するための二色の使用は、図２に示される。第１カセットでは、ＩｇＭ抗体のみが存在し、これは急性感染症を示す。このカセットでは、検査ラインは赤色である。第２カセットでは、免疫グロブリンがＩｇＧであるため、検査ラインは青色である。第３カセットは、ＩｇＭ抗体およびＩｇＧ抗体の両方が存在する、中間の事例を示す。結果的に、検査ラインは紫色である。本例は、ＩｇＭおよびＩｇＧに対して検査するように示されているが、同じ概念が、感染に対するウイルスおよび細菌のマーカーの両方を検出する単一のラインを用いて代替的に使用される。
【００７１】
別の好ましい実施形態では、検査ストリップはまた、検査ストリップの機能性を示す対照部分（ｃｏｎｔｒｏｌ ｓｅｃｔｉｏｎ）を含んでもよい。図１は、対照ラインを示す。図２は、すべての３つのカセットに対して対照部分がある例を示す。対照部分は、存在する場合、装置が作動しているというシグナルをユーザーに伝えるように設計され得る。例えば、対照部分は、試薬領域から標識化した試薬に結合する試薬（例えば、抗体）を含み得る。１つの好ましい実施形態では、ウサギ抗ニワトリは、対照ラインとして使用され、標識、例えば、青色ラテックスビーズに結合したニワトリＩｇＹは、対照の結合体（ｃｏｎｔｒｏｌ ｃｏｎｊｕｇａｔｅ）である。代替的に、対照部分は、湿らされたときに、色変化または色形成をもたらす無水試薬、例えば、水性のサンプルによって湿らされたときに青色になる無水硫酸銅を含む。さらなる代替案として、対照部分は、試薬領域からの超過の標識化された試薬と反応する、固定化されたウイルスおよび細菌のマーカーを含み得る。対照部分は、検出領域から上流にまたは下流に位置し得る。陽性対照の指標は、サンプルが検査装置を介して必要とされる距離に浸透したことをユーザーに伝えている。
【００７２】
図３は、２枚の検査ストリップ、「アデノ（Ａｄｅｎｏ）１」と「アデノＨＳ」を比較し、両方とも対照ラインを含む。アデノ１では、対照ライン（各カセット上の上部のライン）および検査ライン（各カセット上の上部のライン）の両方は赤色である。アデノＨＳでは、対照ラインは青色であり、検査ラインは赤色である。対照ラインが検査ラインとは異なる色である実施形態では、２本のラインを識別し、検査が機能していることを確かめることはより容易である。
【００７３】
幾つかの好ましい実施形態では、本発明の装置および方法は、ウイルスおよび細菌の感染を識別するのに有用である溶解領域を含む。これらの実施形態では、採取されたサンプルは、サンプル分析装置への採取および移動の前に溶解されない。これによって、分析のためにサンプルを採取且つ準備するために必要とされる工程の数が減少される。溶解剤がアッセイ効率を向上させる１つの状況は、ＭｘＡの存在をアッセイする際にある。本明細書で議論されるように、このタンパク質の存在は、熱のある子供において細菌およびウイルスの感染を識別するのに助けとなり得る。溶解剤として１％乃至６％の重量／体積のＣＨＡＰＳと０．５％乃至２％の重量／体積のＮＰ４０の組み合わせを使用する、インサイツでの溶解は、新鮮な又は凍結した全血中のＭｘＡの検出を向上させる。
【００７４】
溶解剤を利用する実施形態では、サンプル充填（ｓａｍｐｌｅ ｌｏａｄｉｎｇ）後に、輸送液体（緩衝液）によって移動するサンプルは、溶解剤に遭遇する。溶解剤は、好ましくは、検査ストリップ上へと予め充填され、輸送液体によって溶出される。いくつかの好ましい実施形態では、溶解剤は、検査ストリップへと乾燥させられる。代替的に、溶解剤は、冷凍乾燥または凍結乾燥によって予め乾燥させられ得、その後、検査ストリップへと予め充填され得る。他の実施形態では、溶解剤は、検査ストリップ上で吸収され得る、吸着され得るか、組み込まれ得るか、または捕捉され得る。最初に乾燥した溶解剤は、好ましくは、サンプル適用領域と試薬領域との間で局在化される。試薬領域がサンプル適用領域の上流にある実施形態では、溶解領域は、サンプル適用領域の下流にある。溶解剤は、好ましくは、サンプル輸送液体中で可溶性であり、サンプル輸送液体との接触で、可溶化および活性化される。その後、サンプル輸送液体は、溶液または懸濁液中の溶解剤および懸濁液中のサンプル成分の両方を含有している。その後、懸濁液中で溶解剤にさらされている、サンプル中のあらゆる溶解感受性の成分は、それら自体がインサイツで溶解される。その後、泳動用（ｒｕｎｎｉｎｇ）緩衝液は、あらゆる溶解感受性の成分を含む分析物を、検出領域に運ぶ。
【００７５】
溶解剤が予め充填および乾燥される位置は、必要に応じて様々であり得る。サンプルが溶解剤と相互作用しなければならない時間を最大限にするために、および検出領域に達する溶解剤の量を最小限にするために、乾燥されたか、吸収されたか、吸着されたか、組み込まれたか、または捕捉された溶解剤は、サンプル適用領域に、またはそのちょうど下流に位置され得る。あるいは、溶解生成物が試薬領域に達する前に移動しなければならない距離を最小限にするために、乾燥した溶解剤は、試薬領域により接近して位置され得る。
他の実施形態では、溶解剤は、泳動用緩衝液に含まれてもよい。
【００７６】
検査ストリップ上に予め充填された溶解剤の濃度は、好ましくは、０．００１％から５％重量／体積の間である。予め充填された体積は、溶解剤がどこで予め充填されるかに依存する。適正範囲は、サンプルコレクターのフリース（ｓａｍｐｌｅ ｃｏｌｌｅｃｔｏｒ ｆｌｅｅｃｅ）（サンプル適用領域）に予め充填されたときに、１乃至１０マイクロリットル、あるいは吸収パッドまたは検査ストリップ内の他の位置に予め充填されたときに、５乃至５０マイクロリットルである。理想的には、予め充填された量は、サンプルコレクターのフリースに予め充填されたおよそ３マイクロリットル、または吸収パッドまたは検査ストリップ内の他の位置に予め充填されたおよそ１０マイクロリットルであるべきである。
【００７７】
特定の溶解環境および溶解剤の選択、ウイルスおよび細菌のマーカーおよびアッセイに依存する。ｐＨおよびイオン強度は、溶解環境の鍵となる。溶解剤によって設定されたｐＨに関して、４．０未満のｐＨは、物質、特にタンパク質を沈殿させる傾向がある。およそ１０．０を超える、より高いｐＨは、タンパク質および細胞壁などの物質を溶解する傾向がある。それ故、およそ１０．０以上のｐＨは、多くの用途に好ましい。代替的に、より低いｐＨは、核酸標的に好ましいかもしれない。
【００７８】
溶解剤によって設定されたイオン強度に関して、高いイオン強度および低いイオン強度の両方が、溶解に使用され得る。例えば、より低いイオン強度（低張性）は、赤血球を分解する傾向がある。例えば、水は、単独で赤血球を溶解することができる。より高いイオン強度環境が、特定の細胞壁および細胞膜を破裂させるために使用され得る。
【００７９】
特定の溶解剤に関して、それらは、グループ化され、それらの以下の特性に基づいて選択され得る：塩、両性およびカチオン性の薬剤、イオン性および非イオン性の界面活性剤。塩（塩化アンモニウム（ＮＨ４Ｃ１）は、赤血球を溶解する。限定されないが、高濃度の塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）および塩化カリウム（ＫＣｌ）を含む、他の塩は、特定の細胞壁および細胞膜を破裂させ得る。他の溶解剤は、限定されないが、Ｌｙｓｏ ＰＣ、ＣＨＡＰＳ、およびＺｗｉｔｔｅｒｇｅｎｔを含む、両性薬剤である。代替的に、限定されないが、Ｃ１６ ＴＡＢおよび塩化ベンザルコニウムを含む、カチオン性薬剤は、溶解剤として使用され得る。イオン性および非イオン性の界面活性剤の両方は、しばしば、リポタンパク質および糖タンパク質などの、細胞壁または細胞膜の成分を破壊または溶解するために使用される。一般的なイオン性界面活性剤は、限定されないが、ＳＤＳ、コール酸塩、およびデオキシコール酸塩を含む。イオン性界面活性剤は、優れた可溶化剤である。抗体は、０．１％以下のＳＤＳ中でそれらの活性を保持する。一般的な非イオン性界面活性剤は、限定されないが、オクチルグルコシド、ジギトニン、Ｃ１２Ｅ８、ルブロール、トリトンＸ−１００、ノニデット（Ｎｏｎｉｏｄｅｔ）Ｐ−４０、トゥイーン２０、およびトウィーン８０を含む。非イオン性界面活性剤および軽度のイオン性界面活性剤は、より弱い変性剤であり、しばしば、ウイルス表面タンパク質などの膜タンパク質を可溶性にするために使用される。追加の溶解剤は、限定されないが、尿素および酵素を含む。異なる溶解剤の組み合わせが、溶解環境を最適化するために使用されてもよい。
【００８０】
界面活性剤は、一般に、湿潤剤であり、液体の表面張力を低下させる。これによって、その後、液体間の界面張力を低下させることによる、より容易な展着が可能となる。そのため、界面活性剤は、抗原と抗体またはリガンドと受容体の自然な結合を妨害することができる。その濃度は、それ故、溶解剤の各クラスに応じて実験的に選択される。一旦溶解が生じると、所望の結合反応が妨害されないことが重要である。一般に、０．００１％の溶解剤濃度が、下限と考えられ、上限はおよそ１％である。溶解剤の組み合わせが使用されるときに、相加効果または相乗効果がある。これは、およそ０．００１％乃至１％から実行する濃度の使用範囲を拡張している。最終的に、トゥイーン２０の５％の濃度で、幾つかの望ましくない非特異的結合が予防され得る。すべての場合において、個々の検査ストリップのすべての位置上に予め充填された溶解剤の総量は、免疫検出に対する障壁を溶解して、検査ストリップの実際の操作を可能にするのに十分な量でなければならない。
【００８１】
溶解剤自体は、あらゆる他のアッセイ検出器または指標の薬剤を妨害すべきではなく、アッセイの実際の操作を防ぐ程度まで、あらゆる他のアッセイの相互作用および反応を妨害しない。溶解剤は、ポイントオブケア検査での検査ストリップの使用前に、製造、分配および保管を可能にするのに十分な貯蔵寿命を有しているべきである。
【００８２】
ＭｘＡがウイルスマーカーである好ましい実施形態において、溶解剤として１％乃至６％の重量／体積のＣＨＡＰＳと０．５％乃至２％の重量／体積のＮのＰ４０の組み合わせを使用する、インサイツでの溶解が、好ましくは使用される。より具体的な例として、１５０ｍＭの塩化ナトリウム、０．１％のＢＳＡ、および０．１％のアジ化ナトリウムとともに、５％のＣＨＡＰＳおよび２％のＮＰ−４０を含有している、２マイクロリットルの１００ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ８．０）（すべてのパーセンテージが重量／体積）が、検査ストリップの溶解領域上で乾燥させられる。
【００８３】
好ましい実施形態では、図５Ａから図５Ｄに示されるように、サンプルは、クロマトグラフィの検査ストリップ（２００）上の適用領域（２０１）に適用される。サンプルは溶解領域（２５０）を通過し、ここで、溶解剤は、好ましくは、検査ストリップ上に予め充填され、輸送液体によって溶出される。溶解剤は、インサイツでサンプル中のあらゆる溶解感受性の成分を溶解する。
【００８４】
クロマトグラフィの検査ストリップは、サンプル適用領域（２０１）、溶解剤を含む溶解領域（２５０）、およびサンプル輸送液体（例えば緩衝液）によって溶出され、その後それと遊走することができる、ウイルスマーカーに結合する少なくとも１つの標識化された結合パートナーおよび細菌マーカーに結合する少なくとも１つの標識化された結合パートナーを含む試薬領域（２６０）、を含む。試薬領域（２６０）は、これらの図においてサンプル適用領域の下流に示されるが、代替的な実施形態において、試薬領域（２６０）は、サンプルが溶解領域に達して、効果的に溶解された後のある時点で、試薬がサンプルに遭遇する限り、サンプル適用領域（図４Ｂを参照）の上流にあり得る。標識化された結合パートナーは、対象のウイルスまたは細菌のマーカーに特異的に結合することができ、次に検出領域で別の具体的な試薬または結合パートナーに結合することができる複合体を形成する。これらの図に示されていないが、吸収パッド、さらに、限定されないが、読み出される結果のための、廃棄領域、キャリア基材、ハウジング、およびハウジングにおける開口部を含む、他の既知の側方流動の免疫学的アッセイの構成要素は、随意に、これらの実施形態において、検査ストリップ（２００）の構成要素でもあり得る。
【００８５】
好ましい実施形態では、溶解剤は、サンプル適用領域（２０１）と試薬領域（２６０）との間の溶解領域（２５０）で局在化される。溶解剤は、好ましくは、サンプル輸送液体中で可溶性または混和性であり、溶解剤は、サンプル輸送液体との接触で可溶化および活性化される。その後、サンプル輸送液体は、溶液または懸濁液中に溶解剤および懸濁液中にサンプル成分の両方を含む。その後、懸濁液中で溶解剤にさらされている、サンプル中のあらゆる溶解感受性の成分は、それら自体がインサイツで溶解される。その後、泳動用緩衝液は、あらゆる溶解のない成分を含むサンプルを検出領域（２０５）に運ぶ。
【００８６】
溶解領域（２５０）は、好ましくは、図５Ａで示されるように、サンプル適用領域（２０１）と試薬領域（２６０）との間に位置する。他の実施形態では、溶解領域（２５０）は、図５Ｂ、５Ｃ、および５Ｄで示されるように、それぞれ、サンプル適用領域（２０１）、試薬領域（２６０）、またはサンプル適用領域（２０１）および試薬領域（２６０）の両方に重なる。図が概要であり、寸法が合わせられていないことに留意。（図５Ｂから図５Ｄに示されるような）異なる領域間の重なりの量は、非常に変わり易い。
【００８７】
検査ストリップ（２００）はまた、細菌マーカーおよびその標識化された結合パートナーによって形成された細菌の結合体に相補的である、固定化された特異的結合パートナーを含む、少なくとも１つの細菌マーカーの検出のための第１部分、例えば検査ライン（２０３）を含む、検出領域（２０５）を含む。したがって、検査ライン（２０３）では、検出領域を結合するパートナーは、細菌の標識化された結合パートナーを、試薬領域（２６０）から、その結合された細菌マーカーに沿って捕捉する。その標識化された結合パートナーによる細菌マーカーのこの局在化は、検査ライン（２０３）での表示を生じさせる。
検査ライン（２０３）では、細菌マーカーの存在は、標識化された結合パートナーの蓄積から結果として生じる、検査ライン（２０３）の表示の質的及び／又は量的な読み出しによって測定される。
【００８８】
検出領域（２０５）はまた、ウイルスマーカーおよびその標識化された結合パートナーによって形成されたウイルスの結合体に相補的である、固定化された特異的結合パートナーを含む、少なくとも１つのウイルスマーカーの検出のための第２部分、例えば検査ライン（２０２）を含む。したがって、検査ライン（２０２）では、検出領域を結合するパートナーは、ウイルスの標識化された結合パートナーを、試薬領域（２６０）から、その結合されたウイルスマーカーに沿って捕捉する。その標識化された結合パートナーによるウイルスマーカーのこの局在化は、検査ライン（２０２）での表示を生じさせる。検査ライン（２０２）では、ウイルスマーカーの存在は、標識化された結合パートナーの蓄積から結果として生じる、検査ライン（２０２）の表示の質的及び／又は量的な読み出しによって測定される。検査ライン（２０３）は、図面において流れ方向（２０８）に対する検査ライン（２０２）の上流にあり、一方で、代替的な実施形態において、検査ライン（２０２）は、検査ライン（２０３）の上流にある。さらに他の実施形態では、検査ライン（２０２）および（２０３）は、検査ストリップ上の同じ位置に位置付けられる。
【００８９】
随意に、検出領域（２０５）は、他の細菌及び／又はウイルスのマーカーを検出するための更なる対照ライン（２０４）に加えて、検査ラインも含み得る。対照ライン（２０４）は、標識化された特異的結合パートナーが、マーカーに結合しなくても、アッセイの期間にわたって移動し、それ故、アッセイの適切な操作を確証したことを示している。図５Ａから図５Ｄに示されるように、対照領域（２０４）は、好ましくは、検査ライン（２０３）および（２０２）の下流にある。しかしながら、他の実施形態では、対照領域（２０４）は、検査ライン（２０３）および（２０２）のいずれか又はその両方の上流に位置し得る。
【００９０】
好ましい実施形態では、対照ライン（２０４）は、検査で使用されている溶出培地または他の組成物の成分に結合する抗体または他の組換え型タンパク質を含む。核酸が標的である実施形態では、対照ライン（２０４）は、好ましくは、標的核酸のための結合パートナーとして使用されている標識化された核酸に相補的な、核酸を含む。
【００９１】
１つの検査ラインだけが図面で示されているが、複数の検査ラインが、本発明の精神内にある。複数の標的がある幾つかの実施形態では、各標的の存在は、好ましくは、別々の検査ライン（２０２）に対応する。複数の標的がある他の実施形態では、複数の標的の存在は、１つを超える標的の存在が、単一の標的の存在とは異なる特性を有する検査ラインと同じ検査ライン上で示され得る。例えば、同じ検査ライン上の複数の標的の存在は、標的単独の各々の存在とは異なる色によって、視覚的に示され得る。
【００９２】
他の実施形態では、泳動用緩衝液自体において１つ以上の軽度の溶解剤を有することは可能である。これらの実施形態では、下流となる試薬領域に対する悪影響はなく、サンプルは、試薬領域の上流または下流のいずれかに存在することができる。泳動用緩衝液中の溶解酵素は、その基質を「標的とする」ことができ、それを切断して、細胞膜または細胞壁を開くことができる。例として、ペニシリンは、感受性の細菌において切除することができるか又は「孔を開ける（ｐｕｎｃｈ ａ ｈｏｌｅ）」ことができる。他の実施形態では、溶解剤は、サンプル採取物質（ｓａｍｐｌｅ ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｍａｔｅｒｉａｌ）に適用され、その後、試薬領域は、サンプル適用領域の上流にあり得る。
【００９３】
例として、１つ以上の溶解剤は、側方流動ストリップのサンプル適用領域上に乾燥させられる。ストリップごとに基づいて、溶解剤は、１５０ｍＭの塩化ナトリウム、０．１％のＢＳＡ、および０．１％のアジ化ナトリウムとともに、５％のＣＨＡＰＳおよび２％のＮＰ−４０を含有している、およそ２マイクロリットルの１００ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ８．０）（すべてのパーセンテージが重量／体積）で作られる。その後、最大１０マイクロリットルの全血は、サンプル適用領域に加えられ、インサイツで溶解される。ＭｘＡタンパク質は、白血球の内部から放出され、ビジュアルタグ（コロイド金または可視性のラテックスビーズ）上でＭｘＡモノクローナル抗体と反応する。この複合体は、トリトンＸ−１００を含有している泳動用緩衝液により横断し（ｔｒａｖｅｒｓｅｓ ｗｉｔｈ）、ニトロセルロース膜の検査ラインに固定化されたＭｘＡモノクローナル抗体によって捕捉される。検査ラインでのこの結合は、視覚表示を生じさせる。
【００９４】
二峰性のデュアル検査ストリップ（Ｂｉｍｏｄａｌ Ｄｕａｌ Ｔｅｓｔ ｓｔｒｉｐｓ）を用いるサンプル分析装置
ＭｘＡは、ウイルス感染の存在下で高められる（ｅｌｅｖａｔｅｄ）が、特定のタイプのウイルスに特異的ではない、インターフェロンアルファ／ベータ細胞の誘導体である。末梢血中のＭｘＡタンパク質発現は、ウイルス感染に対する感受性および特定のマーカーである。
【００９５】
ＭｘＡは、広範囲のウイルスの複製を阻害する。ＭｘＡは、低い基礎濃度［５０ｎｇ／ｍｌ］未満および速い誘発［１−２時間］を有する。それは、１６時間でピークに達し、高まったインターフェロンの存在下で高い状態を維持する。ＭｘＡはまた、インターフェロネミア（ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎｅｍｉａ）の存在下で、長い半減期［２．３日］および一定の力価を有する。ウイルス感染は、ＣＲＰレベルの適度な増加を有するだけで、ＭｘＡレベルを高める。
【００９６】
ＥＬＩＳＡを使用する１つの予期される臨床試験（Ｔｏｗｂｉｎ Ｈ ｅｔ ａｌ． Ｊ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ Ｒｅｓ １９９２； １２：６７−７４、引用によって本明細書に組み込まれる）において、試験には、８７人の正常な健康な成人が登録された。ＭｘＡレベルは、成人の６６％において＜５ｎｇ／ｍｌ、成人の２９％において５−５０ｎｇ／ｍｌ、および成人の５％において５０ｎｇ／ｍｌ以上であると測定された。
【００９７】
ＥＬＩＳＡを使用する別の予期される臨床試験（Ｃｈｉｅｕｘ Ｖ ｅｔ ａｌ， Ｊ Ｖｉｒｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ １９９８；７０： １８３−１９１、引用によって本明細書に組み込まれる）には、１７４人の子供が登録された。これらの子供たちのうち４５人は、急性発熱（呼吸器感染症及び／又は胃腸炎）を有しており、３０の年齢が一致した対照がいた。ＭｘＡ値は、３０の年齢が一致した対照において７ｎｇ／ｍｌ±７ｎｇ／ｍｌの±だった。ＭｘＡ値は、１３の確認された細菌感染において６ｎｇ／ｍｌ±１０ｎｇ／ｍｌであった。
【００９８】
ＥＬＩＳＡを使用する別の予期される臨床試験には、６０人の患者が登録された（Ｋａｗａｍｕｒａ Ｍ ｅｔ ａｌ． Ｊ Ｃｌｉｎ Ｌａｂ Ａｎａｌ ２０１２；２６： １７４−１８３、引用によって本明細書に組み込まれる）。患者のうちの４２人は、急性発熱（呼吸器感染症及び／又は胃腸炎）を有しており、１８の年齢が一致した対照がいた。中間のＭｘＡ値は、３１の確認されたウイルス感染において１１０．０ｎｇ／ｍｌであった。中間のＭｘＡ値は、１１の確認された細菌感染において１０．６ｎｇ／ｍｌであった。中間のＭｘＡ値は、１８の年齢が一致した対照において２．０ｎｇ／ｍｌであった。ＥＬＩＳＡ試験は、ウイルス感染と細菌感染を識別するために、８７．１％の感受性および９０．９％の特異性を有していたが、この決定を下すためにＭｘＡ値を試験しただけであった。ウイルス感染を有する患者を、１００％の感受性および特異性を有する健康な対照とはっきり区別した。３６．７ｎｇ／ｍｌのＭｘＡのカットオフを、この研究においてＥＬＩＳＡによってウイルス感染を測定するために使用した。
【００９９】
ＥＬＩＳＡを使用する別の予期される臨床試験には、１７４人の子供が登録された（Ｎａｋａｂａｙａｓｈｉ Ｍ ｅｔ ａｌ， Ｐｅｄｉａｔｒ Ｒｅｓ ２００６；６０：７７０−７７４、引用によって本明細書に組み込まれる、再較正されたＥＬＩＳＡ標準のために訂正されたデータ）。子供のうちの１２２人は、急性発熱（呼吸器感染症及び／又は胃腸炎）を有しており、５２の年齢が一致した対照がいた。平均のＭｘＡ値は、９５の確認されたウイルス感染において１２３．７ｎｇ／ｍｌ±８３．０ｎｇ／ｍｌであった。平均のＭｘＡ値は、２７の確認された細菌感染において１２．３ｎｇ／ｍｌ±１０．０ｎｇ／ｍｌであった。平均のＭｘＡ値は、５２の年齢が一致した対照において１４．５ｎｇ／ｍｌ±１１．０ｎｇ／ｍｌであった。試験は、ウイルス感染を正確に識別するために、９２．６％の特異性および１３．１の陽性の尤度比を示した。３６．７ｎｇ／ｍｌのＭｘＡのカットオフを、この研究においてＥＬＩＳＡによってウイルス感染を測定するために使用した。
【０１００】
ＥＬＩＳＡ試験でのカットオフは、人工的であり、陽性と陰性を区別するために選ばれる。それ故、このカットオフから１０％のＣＶを定期的に割り当てることが好ましい。医療検査の時点で、１００％の人が、＞４０ｎｇ／ｍｌで検査ラインを目で確かめることができるが、より低いレベルで陽性の結果を確かめることができるのは数人であった。
【０１０１】
ＣＲＰは、細菌感染の存在下で高まるが、特定のタイプの細菌には特異的ではない。ＣＲＰは、急性炎症の存在に対する非特異的な指標であり、細菌感染の存在下で高められる。ＣＲＰは、肝臓によって合成された急性期タンパク質である。ＩＬ−６は、ＣＲＰ産生の主要なメディエータである。細菌感染は、著しいＣＲＰ上昇の強力な刺激である。抗生物質治療後に、ＣＲＰレベルは急速に低下する。細菌感染は、ＣＲＰレベルを劇的に高めるが、ＭｘＡレベルは低いままである。細菌感染は、数時間以内に生じる血清ＣＲＰレベルの著しい上昇を有するＣＲＰの強力な刺激である。ＣＲＰレベルは、刺激後の４−６時間以内に高まり、３６時間後にピークに達する。ＣＲＰの血清濃度は、通常、３ｍｇ／Ｌ未満である。重度の感染または炎症により、ＣＲＰは、５００ｍｇ／Ｌを超えて上昇する。
【０１０２】
肺炎は、血清ＣＲＰレベルを高めた（＞１０ｍｇ／Ｌ）。血清ＣＲＰレベルは、重度の肺炎に対して、典型的に１００ｍｇ／Ｌ以上である。肺炎球菌性菌血症を有する患者の３２％は、６０ｍｇ／Ｌ未満の血清ＣＲＰを有した。血清ＣＲＰは、通常、ウイルス感染において１０ｍｇ／Ｌを超えて高まることはない。侵襲性のアデノウイルスおよびインフルエンザは、ＣＲＰを１０−８０ｍｇ／Ｌまで高め得る。非常に希ではあるが、ＣＲＰレベルは、ウイルス感染において６０ｍｇ／Ｌを超える。
【０１０３】
細菌性疾患に対するカットオフとして使用される、血清ＣＲＰに対する単一の値を注目した、１０の研究のメタ分析（Ａｏｕｉｆｉ ｅｔ ａｌ， Ｃｒｉｔ ｃａｒｅ Ｍｅｄ． ２０００， ２８：３１７１−６； Ｈａｔｈｅｒｉｌｌ ｅｔ ａｌ， Ａｒｃｈ Ｄｉｓ Ｃｈｉｌｄ １９９９： ８１ ： ４１７−２１； Ｍｕｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ， Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ． ２０００， ２８： ９７７−８３； Ｐｅｎｅｌ ｅｔ ａｌ， Ｒｅｖ Ｍｅｄ Ｉｎｔｅｒｎｅ ２００１ ：２２： ７０６−７１４； Ｒｏｔｈｅｎｂｅｒｇｅｒ ｅｔ ａｌ， Ｃｌｉｎ Ｃｈｅｍ Ｌａｂ Ｍｅｄ， １９９９， ３７： ２７５−９； Ｓｃｈｗａｒｚ ｅｔ ａｌ， Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ ２０００， ２８： １８２８−３２； Ｓｅｌｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ， Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ ２０００， ２８： ２７９３−８； Ｓｕｐｒｉｎ ｅｔ ａｌ， Ｉｎｔｅｎｓｉｖｅ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ ２０００， ２６： １２３２−８； Ｕｇａｒｔｅ ｅｔ ａｌ， Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ １９９９， ２７： ４９８−５０４； Ｖｉａｌｌｏｎ ｅｔ ａｌ， Ｉｎｔｅｎｓｉｖｅ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ ２０００， ２６： １０８２−８、すべては引用によって本明細書に組み込まれる）は、結果的に二峰性の結果をもたらした。研究の３つ（Ａｏｕｉｆｉ ｅｔ ａｌ， Ｃｒｉｔ ｃａｒｅ Ｍｅｄ． ２０００， ２８：３１７１−６； Ｐｅｎｅｌ ｅｔ ａｌ， Ｒｅｖ Ｍｅｄ Ｉｎｔｅｒｎｅ ２００１：２２： ７０６−７１４； Ｓｃｈｗａｒｚ ｅｔ ａｌ， Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ ２０００， ２８： １８２８−３２）が、ＣＲＰカットオフ値を、６−１５ｍｇ／Ｌに設定するように推奨した一方で、他の７つの研究（Ｈａｔｈｅｒｉｌｌ ｅｔ ａｌ， Ａｒｃｈ Ｄｉｓ Ｃｈｉｌｄ １９９９： ８１ ： ４１７−２１； Ｍｕｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ， Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ． ２０００， ２８： ９７７−８３； Ｒｏｔｈｅｎｂｅｒｇｅｒ ｅｔ ａｌ， Ｃｌｉｎ Ｃｈｅｍ Ｌａｂ Ｍｅｄ， １９９９， ３７： ２７５−９； Ｓｅｌｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ， Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ ２０００， ２８： ２７９３−８； Ｓｕｐｒｉｎ ｅｔ ａｌ， Ｉｎｔｅｎｓｉｖｅ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ ２０００， ２６： １２３２−８； Ｕｇａｒｔｅ ｅｔ ａｌ， Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ １９９９， ２７： ４９８−５０４； Ｖｉａｌｌｏｎ ｅｔ ａｌ， Ｉｎｔｅｎｓｉｖｅ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ ２０００， ２６： １０８２−８）は、６０−１００ｍｇ／Ｌのカットオフを推奨した。
【０１０４】
孤立して、ＭｘＡまたはＣＲＰ単独は、ウイルスおよび細菌の感染の両方の識別に感受性も特異性もない。ＣＲＰの低いカットオフ値は、細菌感染の検出に高い感受性および低い特異性を示す。ＣＲＰの高いカットオフ値は、細菌感染の検出に低い感受性および高い特異性を示す。ＭｘＡは、ウイルス感染の特定に特異的であるが、細菌感染には感受性はない。低ＣＲＰ、高ＣＲＰ、およびＭｘＡの医療的判断のポイントを反映したカットオフレベルを含む結果の多重化したパターンは共に、ウイルス及び／又は細菌の感染に対する免疫反応を特定する、感受性の及び特異的な方法を提供する。
【０１０５】
多重化した側方流動免疫学的アッセイの１つの好ましい実施形態では、検査結果のフィンガースティックの血液パターンは、およそ１０ｍｇ／Ｌの低ＣＲＰレベルのカットオフに対する血清相当物、およそ８０ｍｇ／Ｌの高ＣＲＰレベルのカットオフに対する血清相当物、およびおよそ４０ｎｇ／ｍｌのＭｘＡカットオフを有する、陽性の結果を示している。これらの好ましい値を、表５に示す。
【０１０６】
【表５】
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【０１０７】
検査の特異性は、意図した用途の制限によってさらに高められる。例えば、好ましい実施形態では、特定年齢の患者集団のみが検査され（好ましくは１歳以上）、及び／又は交絡因子につながり得る特定の基礎症状を有する患者が検査されないことが好ましい。
【０１０８】
表６に示されるように、迅速な、ポイントオブケアのＭｘＡ免疫学的アッセイを開発し、発熱性呼吸器疾患を有する患者からの２５の末梢血サンプル中のＭｘＡ ＥＬＩＳＡと比較した。表７は、ＥＬＩＳＡ試験での最も低い量のＭｘＡから最も高い量のＭｘＡからの同じデータを分類している。
【０１０９】
ＭｘＡ ＥＬＩＳＡのカットオフ値は、３６．７ｎｇ／ｍｌ（＋／−１０％ＣＶ＝３３ｎｇ／ｍｌから４０／５ｎｇ／ｍｌ）であった。患者１９は、たとえＥＬＩＳＡの結果が４０ｎｇ／ｍｌよりかなり低くても（１５ｎｇ／ｍｌ）、ＭｘＡの迅速なポイントオブケア検査において陽性の結果を有した。しかしながら、ＭｘＡ免疫学的アッセイは、１００％（９／９）の感受性および９４％（１５／１６）の特異性を実証した。
【０１１０】
【表６】
2019164143.tif 000008
【０１１１】
【表７】
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【０１１２】
迅速な、ポイントオブケアの低ＣＲＰレベルおよび高ＣＲＰレベルの免疫学的アッセイを開発し、発熱性呼吸器疾患を有する患者からの２５の末梢血サンプル中のＣＲＰ ＥＬＩＳＡと比較した。これらの患者は、表６および表７においてＭｘＡに関して検査した患者と同じ患者である。結果を表８に示す。
【０１１３】
【表８】
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【０１１４】
患者番号６および８は、たとえＥＬＩＳＡの結果が８０ｍｇ／Ｌ未満であっても、陽性のＣＲＰの結果を示した。患者２３は、ＥＬＩＳＡの結果がたとえ８０ｍｇ／Ｌであっても、陰性の結果を示した。患者番号９は、たとえその患者に対するＥＬＩＳＡの結果が１０ｍｇ／Ｌを超えていても、陰性の低ＣＲＰの検査結果を示した。しかし、全体として、ＣＲＰ値は、両方のカットオフ値でＣＲＰ ＥＬＩＳＡと十分に相互関連があった。
【０１１５】
ＭｘＡおよびＣＲＰ ＥＬＩＳＡを使用して、ＲＰＳは、高まったＭｘＡおよびＣＲＰの存在または欠如に対する２５の健康で、正常な血液バンクサンプルを分析した。血漿中の平均ＣＲＰ濃度は、１．６ｍｇ／Ｌであることが示された。ＣＲＰ濃度は、０．１乃至３．７ｍｇ／Ｌの範囲であることが示された。結果を表９に示す。
【０１１６】
【表９】
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【０１１７】
二峰性のデュアル検査ストリップが、ヒトにおいて細菌感染とウイルス感染を識別するために使用され得るが、動物のための獣医学的な適用にも使用されてもよい。ＣＲＰが種によって異なるため、種間にＣＲＰに対する共通の抗体はない。それ故、獣医学的検査は、検査されている特定の種に特異的なＣＲＰを含む必要がある。ＭｘＡは、種間でよく保存されており、そのため、獣医学的検査でヒトＭｘＡを使用することが可能である。しかしながら、特定の種に対するＭｘＡが、特異性をさらに増加させるために代替的に使用され得る。本明細書に記載される二峰性のデュアル検査ストリップを使用する獣医学的検査が、限定されないが、猫、イヌ、ウサギ、ブタ、ヒツジ、馬、雌ウシ、サル、チンパンジー、ヒヒ、およびオランウータンを含む、特定の種のために開発され得る。
【０１１８】
ＭｘＡおよび低ＣＲＰによる検査ストリップが、任意の構成、例えば、図４Ａ、図４Ｂ、または図５Ａ乃至図５Ｄで示される構成によって作られ、ここでＭｘＡは検出されているウイルスマーカーであり、比較的低レベルのＣＲＰは検出されている細菌マーカーである。他の実施形態では、ＭｘＡの検査ラインおよびＣＲＰの検査ラインは、検査ストリップ上で重なり得るか、または同じ位置にあり得る。これらの実施形態では、同じ検査ライン上の低ＣＲＰおよびＭｘＡの存在は、細菌マーカーまたはウイルスマーカーのいずれか単独の存在とは異なる特徴を有する。例えば、同じ検査ライン上の低ＣＲＰおよびＭｘＡの両方の存在は、ＭｘＡまたは低ＣＲＰのいずれか単独の存在とは異なる色によって視覚的に示され得る。これらの実施形態では、ＭｘＡに対する陽性の結果は、低ＣＲＰに対する陽性の結果とは異なる色または表示を与え、その結果、アッセイを読む人は、ＭｘＡに対する完全に陰性の結果、ＭｘＡに対する陽性の結果、低ＣＲＰに対する陽性の結果、およびＭｘＡおよび低ＣＲＰの両方に対する陽性の結果を識別することができるだろう。例えば、ＭｘＡに対する陽性の結果は、赤色の検査ラインを結果としてもたらし、低ＣＲＰに対す陽性の結果は、青色の検査ラインを結果としてもたらし得る。そのため、サンプルがＭｘＡおよび低ＣＲＰの両方に対して陽性であるときに、その検査ラインは目に見えて紫色である。
【０１１９】
高レベルのＣＲＰを検出する側方流動アッセイ装置に対する幾つかの実施形態を、図６Ａ−図６Ｂおよび図７Ａ−７Ｄに示す。これらの構成は、ウイルスマーカーに対する検査ラインのない、図４Ａ−図４Ｂおよび図５Ａ−図５Ｄで示される構成に類似しており、検査ストリップ（６００）、（７００）の同じ構成要素に対して、同じ参照符号を使用する。
【０１２０】
図６Ａおよび図６Ｂは、高レベルのＣＲＰなどの細菌マーカーの存在を検出する検査ライン（６２３）を有するクロマトグラフィの検査ストリップ（６００）を示す。サンプルは、クロマトグラフィの検査ストリップ（６００）の適用領域（４０１）に適用される。その後、図６Ａで示されるように、サンプルは、サンプル輸送液体（例えば緩衝液）によって溶出され、その後、それと遊走することができる、少なくとも１つの標識化された細菌結合パートナーを含む試薬領域（６６０）を通過する。代替的に、図６Ｂで示されるように、試薬領域における標識化された結合パートナーが、サンプル輸送液体によって溶出されて、サンプルに移動するように、試薬領域（６６０）は、サンプル適用領域（４０１）の上流に位置する。標識化された細菌結合パートナーは、対象の細菌マーカー、例えば、高レベルのＣＲＰに特異的に結合することができ、次に、検出領域で別の特異的な試薬または結合パートナーに特異的に結合することができる、複合体を形成する。これらの図面に示されていないが、吸収パッド、さらに、限定されないが、読み出される結果のための、廃棄領域、キャリア基材、ハウジング、およびハウジングにおける開口部を含む、他の既知の側方流動の免疫学的アッセイの構成要素は、随意に、これらの実施形態において、検査ストリップ（６００）の構成要素でもあり得る。
【０１２１】
検査ストリップ（６００）はまた、細菌マーカーおよびその標識化された結合パートナーによって形成された細菌の試薬結合体に相補的である、固定化された特異的結合パートナーを含む、細菌マーカーの検出のための部分、例えば検査ライン（６２３）を含む、検出領域（６０５）を含む。したがって、検査ライン（６２３）では、検出領域を結合するパートナーは、標識化された細菌結合パートナーを、試薬領域（６６０）から、その結合された細菌マーカーに沿って捕捉する。その標識化された結合パートナーによる細菌マーカーのこの局在化は、検査ライン（６２３）での表示を生じさせる。検査ライン（６２３）では、細菌マーカーの存在は、標識化された結合パートナーの蓄積から結果として生じる、検査ライン（６２３）の表示の質的及び／又は量的な読み出しによって測定される。
【０１２２】
随意に、検出領域（６０５）は、他の細菌及び／又はウイルスのマーカーを検出するための更なる検査ラインに加えて、対照ラインも含み得る。対照ライン（４０４）は、標識化された特異的結合パートナーが、細菌マーカーに結合しなくても、アッセイの期間にわたって移動し、それ故、アッセイの適切な操作を確証したことを示している。図６Ａから図６Ｂで示されるように、対照領域（４０４）は、好ましくは、検査ライン（６２３）の下流にある。しかしながら、他の実施形態では、対照領域（４０４）は、検査ライン（６２３）の上流に位置し得る。
【０１２３】
好ましい実施形態では、対照ライン（４０４）は、検査で使用されている溶出培地または他の組成物の成分に結合する抗体または他の組換え型タンパク質を含む。核酸が標的である実施形態では、対照ライン（４０４）は、好ましくは、標的核酸のための結合パートナーとして使用されている標識化された核酸に相補的な、核酸を含む。
【０１２４】
高ＣＲＰレベルなどの細菌マーカーに対して検査するための他の好ましい実施形態では、図７Ａから図７Ｄで示されるように、サンプルは溶解領域（２５０）を通過し、ここで、溶解剤は、好ましくは、検査ストリップ上に予め充填され、輸送液体によって溶出される。溶解剤は、インサイツでサンプル中のあらゆる溶解感受性の成分を溶解する。
【０１２５】
クロマトグラフィの検査ストリップ（７００）は、サンプル適用領域（２０１）、溶解剤を含む溶解領域（２５０）、およびサンプル輸送液体（例えば緩衝液）によって溶出され、その後それと遊走することができる、細菌マーカー、例えば、高レベルのＣＲＰに結合する少なくとも１つの標識化された結合パートナーを含む試薬領域（２６０）、を含む。試薬領域（７６０）は、これらの図においてサンプル適用領域の下流に示されるが、代替的な実施形態において、試薬領域（７６０）は、サンプルが溶解領域に達して、効果的に溶解された後のある時点で、試薬がサンプルに遭遇する限り、サンプル適用領域（図６Ｂを参照）の上流にあり得る。標識化された結合パートナーは、対象の細菌マーカー、例えば、高レベルのＣＲＰに特異的に結合することができ、次に、検出領域で別の特異的な試薬または結合パートナーに特異的に結合することができる、複合体を形成する。これらの図面に示されていないが、吸収パッド、さらに、限定されないが、読み出される結果のための、廃棄領域、キャリア基材、ハウジング、およびハウジングにおける開口部を含む、他の既知の側方流動の免疫学的アッセイの構成要素は、随意に、これらの実施形態において、検査ストリップ（７００）の構成要素でもあり得る。
【０１２６】
好ましい実施形態では、溶解剤は、サンプル適用領域（２０１）と試薬領域（７６０）との間の溶解領域（２５０）で局在化される。溶解剤は、好ましくは、サンプル輸送液体中で可溶性または混和性であり、溶解剤は、サンプル輸送液体との接触で可溶化および活性化される。その後、サンプル輸送液体は、溶液または懸濁液中に溶解剤および懸濁液中にサンプル成分の両方を含む。その後、懸濁液中で溶解剤にさらされている、サンプル中のあらゆる溶解感受性の成分は、それら自体がインサイツで溶解される。その後、泳動用緩衝液は、あらゆる溶解のない成分を含むサンプルを検出領域（７０５）に運ぶ。
【０１２７】
溶解領域（２５０）は、好ましくは、図７Ａで示されるように、サンプル適用領域（２０１）と試薬領域（７６０）との間に位置する。他の実施形態では、溶解領域（２５０）は、図７Ｂ、７Ｃ、および７Ｄで示されるように、それぞれ、サンプル適用領域（２０１）、試薬領域（７６０）、またはサンプル適用領域（２０１）および試薬領域（２６０）の両方に重なる。図が概要であり、寸法が合わせられていないことに留意。（図７Ｂから図７Ｄに示されるような）異なる領域間の重なりの量は、非常に変わり易い。
【０１２８】
検査ストリップ（７００）はまた、細菌マーカーおよびその標識化された結合パートナーによって形成された細菌の結合体に相補的である、固定化された特異的結合パートナー、例えば、高レベルのＣＲＰに対する特異的結合パートナーを含む、少なくとも１つの細菌マーカーの検出のための部分、例えば検査ライン（７２３）を含む、検出領域（７０５）を含む。したがって、検査ライン（７２３）では、検出領域を結合するパートナーは、細菌の標識化された結合パートナーを、試薬領域（７６０）から、その結合された細菌マーカーに沿って捕捉する。その標識化された結合パートナーによる細菌マーカーのこの局在化は、検査ライン（７２３）での表示を生じさせる。検査ライン（７２３）では、細菌マーカーの存在は、標識化された結合パートナーの蓄積から結果として生じる、検査ライン（７２３）の表示の質的及び／又は量的な読み出しによって測定される。
【０１２９】
随意に、検出領域（７０５）は、他の細菌及び／又はウイルスのマーカーを検出するための更なる検査ラインに加えて、対照ライン（２０４）も含み得る。対照ライン（２０４）は、標識化された特異的結合パートナーが、マーカーに結合しなくても、アッセイの期間にわたって移動し、それ故、アッセイの適切な操作を確証したことを示している。図７Ａから図７Ｄで示されるように、対照領域（２０４）は、好ましくは、検査ライン（７２３）の下流にある。しかしながら、他の実施形態では、対照領域（２０４）は、検査ライン（７２３）の上流に位置し得る。
【０１３０】
好ましい実施形態では、対照ライン（２０４）は、検査で使用されている溶出培地または他の組成物の成分に結合する抗体または他の組換え型タンパク質を含む。核酸が標的である実施形態では、対照ライン（２０４）は、好ましくは、標的核酸のための結合パートナーとして使用されている標識化された核酸に相補的な、核酸を含む。
【０１３１】
二峰性のデュアル検査ストリップのサンプル分析装置のための１つの好ましい構成を、図８Ａから図８Ｃに示す。サンプル分析装置またはテストカード（ｔｅｓｔ ｃａｒｄ）（８００）は、２つの側面（８３６）、（８３７）および脊柱（ｓｐｉｎｅ）または蝶着部（８３１）を有する、閉鎖可能なハウジング（８３５）を含む。１つの好ましい実施形態では、テストカード（８００）は、２つの側面（８３６）、（８３７）が閉じられているときに、およそ１１．５ｃｍの長さ（Ｌ）×７ｃｍの幅（Ｗ）である。しかしながら、構成要素のすべてを収容する、あらゆるサイズのテストカード（８００）が使用されてよい。ハウジング（８３５）の第１側面（８３６）内に、２つの検査ストリップ（８１５）、（８２５）があり、その各々が、受信パッド（８４５）、分岐領域（８５０）、移動パッド（８５５）および検出領域（８０５）を含む。第１側面（８３６）はまた、吸収パッド（８４０）および好ましくは廃棄パッド（８６０）を含む。第１検査ストリップ（８１５）は、好ましくは、ＭｘＡの検査ライン（８０２）、低ＣＲＰの検査ライン（８０３）および対照ライン（８０４）を有する検出領域（８０５）を含む。第２検査ストリップ（８２５）は、好ましくは、高ＣＲＰの検査ライン（８２３）および対照ライン（８０４）を有する検出領域（８０５）を含む。検査ラインはすべて、ハウジング（８３５）が閉じているときに、ハウジング（８３５）の第２側面（８３７）上の窓（８６５）を介して視認することができる。吸収パッド（８４０）は、好ましくは、側方流動を始めるために、泳動用緩衝液が加えられる単一のパッドである。同様に、廃棄パッド（８６０）は、好ましくは、検査の終わりに過剰な泳動用緩衝液を採取する単一のパッドである。しかしながら、他の実施形態では、各ストリップは、別々の吸収パッド（８４０）及び／又は廃棄パッド（８６０）を有し得る。
【０１３２】
ハウジング（８３５）の第２側面（８３７）は、３つの別々の部分（８３８）、（８３９）および（８７０）を含む。中央の部分である、サンプル圧縮機またはフラップ（８７０）は、好ましくは、２つの結合領域（８７２）、（８７４）を含み、その各々は、少なくとも１つの分析物に対する標識化した結合パートナー、および標識化した対照を含む。ハウジングの第２側面（８３７）の下部部分（８３８）に窓（８４３）が位置付けられ、それによって、ハウジング（８３５）が閉じているときに、吸収パッド（８４０）に緩衝液が加えられ得る。検出領域（８０５）に対する視界窓（８６５）は、ハウジング（８３５）の第２側面（８３７）の上部部分（８３９）上にある。
【０１３３】
ハウジング（８３５）の第２側面（８３７）の上部部分（８３９）および下部部分（８３８）は各々、好ましくは、１つ以上の穴部（８９５）と対である少なくとも１つのノブ、ペグまたは突部（８７５）を含み、それによって、上部部分（８３９）および下部部分（８３８）は、ハウジング（８３５）の第１側面（８３６）上に容易に固定され得る。好ましい実施形態では、ハウジング（８３５）の第１側面（８３６）上の吸収パッド（８４０）に隣接する（ｆｌａｎｋｉｎｇ）２つの穴部（８９５）と対である、下部部分（８３８）上の２つのペグ（８７５）、およびハウジング（８３５）の第１側面（８３６）上の廃棄パッド（８６０）に隣接する２つの穴部（８９５）と対である、上部部分（８３９）上の２つのペグ（８７５）がある。他の実施形態では、穴部（８９５）は、ハウジング（８３５）の第２側面（８３７）上にあり、ペグ（８７５）は、ハウジング（８３５）の第１側面（８３６）上にある。さらに他の実施形態では、ハウジング（８３５）の第２側面（８３７）の上部部分（８３９）及び／又は下部部分（８３８）を、ハウジング（８３５）の第１側面（８３６）に固定するために、他の可逆的な固定機構が使用され得る。他の実施形態では、上部部分（８３９）および下部部分（８３８）は、使用前に、例えば接着剤を使用して、恒久的に閉じられる。
【０１３４】
ハウジングの第２側面（８３７）上の、サンプル圧縮機としても知られている、フラップ（８７０）は、２つの結合領域（８７２）、（８７４）および２つのサンプル適用領域（８７３）、（８７６）を含み、容易に開閉され得る。フラップ（８７０）はまた、好ましくは、１つ以上の穴部（８９５）と対である少なくとも１つのノブ、ペグまたは突部（８７５）を含み、それによって、サンプルがサンプル適用領域（８７３）、（８７６）に加えられた後、フラップ（８７０）は、ハウジング（８３５）の第１側面（８３６）上に、容易に正しく閉じられる。他の実施形態では、穴部（８９５）は、ハウジング（８３５）の第２側面（８３７）上にあり、ペグ（８７５）は、ハウジング（８３５）の第１側面（８３６）上にある。さらに他の実施形態では、フラップ（８７０）をハウジング（８３５）の第１側面（８３６）に固定するために、他の可逆的な固定機構が使用され得る。
【０１３５】
結合領域（８７２）、（８７４）およびサンプル適用領域（８７３）、（８７６）は、好ましくは、重なる。好ましい実施形態では、結合領域（８７２）、（８７４）は、サンプルの結合体およびサンプルの対照における色素によって色づけされ、サンプルは、フラップ（８７０）の色づけした部分に直接置かれる。１つの好ましい実施形態では、第１検査ストリップ（８１５）に使用される結合領域（８７２）は、赤色色素で標識化されるＭｘＡ結合パートナー、黒色色素で標識化される低ＣＲＰ結合パートナー、および青色色素で標識化される対照結合パートナーを含む。本実施形態では、結合領域（８７２）は、紫色がかったように現われる。もう一方の結合領域（８７４）は、黒色色素で標識化される高ＣＲＰ結合パートナー、および青色色素で標識化される対照結合パートナーを含む。本実施形態では、結合領域（８７４）は、青色がかったように現われる。
【０１３６】
分岐領域（８５０）は、好ましくは、側方流動を妨害する間隙または障壁を含み、泳動用緩衝液を、結合領域（８７２）、（８７４）およびサンプル適用領域（８７３）、（８７６）を含むフラップ（８７０）へと分岐する。
【０１３７】
操作中に、ハウジング（８３５）の第２側面（８３７）の上部部分（８３９）および下部部分（８３８）は、好ましくは、ペグ（８７５）を穴部（８９５）に固定することによって、使用前にしっかりと（ｓｎａｐ）閉じられる。サンプル分析装置、またはテストカード（８００）は、好ましくは、平面上に置かれる。フラップ（８７０）が既に開いていないときに、ユーザーは、サンプル適用領域（８７３）、（８７６）にアクセスするためにそれを開く。検査される血液サンプルは、患者から得られる。サンプルは、当該技術分野に既知の任意の処置によって得られ得る。好ましい実施形態では、血液の５μｌのサンプルが、サンプル適用領域（８７３）、（８７６）の各々に加えられ、その後、フラップ（８７０）が閉じられる。５μｌのサンプルの各々は、好ましくは、互いに別々に採取される。血液サンプルは、好ましくは、前処理なしで、装置（８００）に直接加えられる。
【０１３８】
サンプル圧縮機またはフラップ（８７０）が正確に閉じられていることを確かなものとするために、圧力は、好ましくは、ペグ（８７５）上のハウジング（８３５）に加えられて、ペグ（８７５）をしっかりと閉じる。検査を適切に行うために、フラップ（８７０）の上部は、ハウジング（８３５）の第２側面（８３７）の残りの上部と同一平面上にある（ｆｌｕｓｈ ｗｉｔｈ）必要がある。泳動用緩衝液が、吸収パッド（８４０）に加えられ、側方流動（８８５）を開始する。好ましい実施形態では、泳動用緩衝液は、血液サンプルを溶解し、サンプル中に細胞内ＭｘＡをさらすために、１つ以上の溶解剤、例えば洗浄剤を含む。泳動用緩衝液は、分岐領域（８５０）に達するときに、フラップ（８７０）へと分岐される。それは、結合領域（８７２）、（８７４）を通って移動し、対照の結合体と同様に、サンプル中のＭｘＡ結合パートナーとＭｘＡとの間、サンプル中の低ＣＲＰ結合パートナーと低レベルのＣＲＰとの間、およびサンプル中の高ＣＲＰ結合パートナーと高レベルのＣＲＰとの間で形成された、あらゆる複合体を採取する。
【０１３９】
結合領域（８７２）、（８７４）が、側方流動の検査ストリップ（８１５）、（８２５）上の分岐領域（８５０）をつなげる（ｂｒｉｄｇｅ）ため、ここで上に記載されるサンプル、結合体、および複合体を含む、泳動用緩衝液は、移動パッド（８５５）へと移動し、検査ストリップ（８１５）、（８２５）の各々の上の検出領域（８０５）に移動する。ＭｘＡがサンプル中に存在する場合、第１検査ストリップ（８１５）上のＭｘＡの検査ライン（８０２）は赤色になる。低い閾値レベルのＣＲＰがサンプル中に存在する場合、第１検査ストリップ（８１５）上の低ＣＲＰの検査ライン（８０３）は黒色になる。高い閾値レベルのＣＲＰがサンプル中に存在する場合、第２検査ストリップ（８２５）上の高ＣＲＰの検査ライン（８２３）は黒色になる。検査が正確に実行されると、両方の第１検査ストリップ（８１５）および第２検査ストリップ（８２５）の両方の上の対照ライン（８０４）は青色になる。好ましい実施形態では、検出のレベルは、ＭｘＡに対して４０ｎｇ／ｍｌ、第１検査ストリップ（８１５）上の低ＣＲＰに対して１０ｍｇ／Ｌ、および第２検査ストリップ（８２５）上の高ＣＲＰに対して８０ｍｇ／Ｌである。検査の結果は、およそ５−２０分後に、好ましくは約１０分以内に、視認できるはずである。
【０１４０】
対照結合パートナーが、検査ストリップ（８１５）、（８２５）のいずれかの上ではなく、サンプル圧縮機またはフラップ（８７０）上にあるため、この構成に対する真の手順制御（ｐｒｏｃｅｄｕｒａｌ ｃｏｎｔｒｏｌ）が存在する。フラップ（８７０）が適切に閉じられていない場合、検出領域（８０５）には何も現われず、これは、検査が不適当に実行されたことを示している。
【０１４１】
図９Ａから図９Ｆは、２枚の検査ストリップ（８１５）、（８２５）が並んだ、図８Ａから図８Ｃに示される装置（８００）を使用する検査結果を示し、ここで、第１検査ストリップ（８１５）は、ＭｘＡおよび低レベルのＣＲＰの両方の存在に対して検査し、第２検査ストリップ（８２５）は、高レベルのＣＲＰに対して検査する。
【０１４２】
図９Ａは、第１検査ストリップ（８１５）上のＭｘＡの検査ライン（８０２）での陰性の結果および低ＣＲＰの検査ライン（８０３）での陰性の結果、および第２検査ストリップ（８２５）上の高ＣＲＰの検査ライン（８２３）での陰性の結果を示す。より具体的には、側方流動アッセイ（８００）の検出領域（８０５）における可視性のラインは、２つの青色の対照ライン（８０４）だけである。この結果は、サンプルが、ウイルスおよび細菌の感染の両方に対して陰性であることを示している。
【０１４３】
図９Ｂおよび図９Ｃは、ウイルス感染に対して陽性である。図９Ｂでは、２つの青色の対照ライン（８０４）および赤色のＭｘＡライン（８０２）の存在は、ウイルス感染を示す。図８Ｃでは、２つの青色の対照ライン（８０４）および赤色のＭｘＡライン（８０２）の存在は、ウイルス感染を示す。図９Ｃにおいて黒色の低ＣＲＰライン（８０３）もあるため、細菌の同時感染の可能性があるが、高ＣＲＰライン（８２３）は存在しない。
【０１４４】
図９Ｄおよび図９Ｅは、細菌感染に対して陽性である。図９Ｄでは、２つの青色の対照ライン（８０４）および１つの黒色の低ＣＲＰライン（８０３）の存在は、細菌感染を示す。図９Ｅでは、２つの青色の対照ライン（８０４）、１つの黒色の低ＣＲＰライン（８０３）、および１つの黒色の高ＣＲＰライン（８２３）の存在もまた、細菌感染を示す。ＭｘＡラインは、図９Ｄおよび図９Ｅの両方において存在せず、これは、ウイルス感染が存在しないことを示している。
【０１４５】
図９Ｆは、同時感染（細菌およびウイルスの両方の感染）を示す。２の青色の対照ライン（８０４）、１つの赤色のＭｘＡライン（８０２、１つの黒色の低ＣＲＰライン（８０３）、および１つの黒色の高ＣＲＰライン（８２３）の存在は、ウイルスのおよび細菌の感染の両方の存在を示している。
【０１４６】
二峰性のデュアル検査ストリップのサンプル分析装置（１０００）のための別の好ましい構成は、図１０Ａから図１０Ｃに示される。この構成は、図８Ａから図８Ｃに示される構成（８００）に類似しているが、サンプル適用領域（１０７３）、（１０７６）は、分岐領域（８５０）の下流の、検査ストリップ（１０１５）、（１０２５）の各々の上に位置付けられる。サンプル分析装置またはテストカード（１０００）は、２つの側面（８３６）、（８３７）および脊柱または蝶着部（８３１）を有する閉鎖可能なハウジング（８３５）を含む。１つの好ましい実施形態では、テストカード（１０００）は、２つの側面（８３６）、（８３７）が閉じられているときに、およそ１１．５ｃｍの長さ（Ｌ）×７ｃｍの幅（Ｗ）である。しかしながら、構成要素のすべてを収容する、あらゆるサイズのテストカード（１０００）が使用されてよい。ハウジング（８３５）の第１側面（８３６）内に、２つの検査ストリップ（１０１５）、（１０２５）があり、その各々が、受信パッド（８４５）、分岐領域（８５０）、移動パッド（１０５５）および検出領域（８０５）を含む。第１側面（８３６）はまた、吸収パッド（８４０）および好ましくは廃棄パッド（８６０）を含む。第１検査ストリップ（１０１５）は、好ましくは、ＭｘＡの検査ライン（８０２）、低ＣＲＰの検査ライン（８０３）および対照ライン（８０４）を有する検出領域（８０５）を含む。第２検査ストリップ（１０２５）は、好ましくは、高ＣＲＰの検査ライン（８２３）および対照ライン（８０４）を有する検出領域（８０５）を含む。検査ラインはすべて、ハウジング（８３５）が閉じているときに、ハウジング（８３５）の第２側面（８３７）上の窓（８６５）を介して視認することができる。吸収パッド（８４０）は、好ましくは、側方流動を始めるために、泳動用緩衝液が加えられる単一のパッドである。同様に、廃棄パッド（８６０）は、好ましくは、検査の終わりに過剰な泳動用緩衝液を採取する単一のパッドである。しかしながら、他の実施形態では、各ストリップは、別々の吸収パッド（８４０）及び／又は廃棄パッド（８６０）を有し得る。
【０１４７】
ハウジング（８３５）の第２側面（８３７）は、３つの別々の部分（８３８）、（８３９）および（１０７０）を含む。中央の部分である、サンプル圧縮機またはフラップ（１０７０）は、好ましくは、２つの結合領域（８７２）、（８７４）を含み、その各々は、少なくとも１つの分析物に対する標識化した結合パートナー、および標識化した対照を含む。ハウジングの第２側面（８３７）の下部部分（８３８）に窓（８４３）が位置付けられ、それによって、ハウジング（８３５）が閉じているときに、緩衝液が加えられ得る。検出領域（８０５）に対する視界窓（８６５）は、ハウジング（８３５）の第２側面（８３７）の上部部分（８３９）上にある。
【０１４８】
ハウジング（８３５）の第２側面（８３７）の上部部分（８３９）および下部部分（８３８）は各々、好ましくは、１つ以上の穴部（８９５）と対である少なくとも１つのノブ、ペグまたは突部（８７５）を含み、それによって、上部部分（８３９）および下部部分（８３８）は、ハウジング（８３５）の第１側面（８３６）上に容易に固定され得る。好ましい実施形態では、ハウジング（８３５）の第１側面（８３６）上の吸収パッド（８４０）に隣接する２つの穴部（８９５）と対である、下部部分（８３８）上の２つのペグ（８７５）、およびハウジング（８３５）の第１側面（８３６）上の廃棄パッド（８６０）に隣接する２つの穴部（８９５）と対である、上部部分（８３９）上の２つのペグ（８７５）がある。他の実施形態では、穴部（８９５）は、ハウジング（８３５）の第２側面（８３７）上にあり、ペグ（８７５）は、ハウジング（８３５）の第１側面（８３６）上にある。さらに他の実施形態では、ハウジング（８３５）の第２側面（８３７）の上部部分（８３９）及び／又は下部部分（８３８）を、ハウジング（８３５）の第１側面（８３６）に固定するために、他の可逆的な固定機構が使用され得る。他の実施形態では、上部部分（８３９）および下部部分（８３８）は、使用前に、例えば接着剤を使用して、恒久的に閉じられる。
【０１４９】
ハウジングの第２側面（８３７）上のフラップ（１０７０）は、２つの結合領域（８７２）、（８７４）を含み、容易に開閉され得る。フラップ（１０７０）はまた、好ましくは、１つ以上の穴部（８９５）と対である少なくとも１つのノブ、ペグまたは突部（８７５）を含み、それによって、サンプルが検査ストリップ（１０１５）、（１０２５）上のサンプル適用領域（１０７３）、（１０７６）に加えられた後、フラップ（１０７０）は、ハウジング（８３５）の第１側面（８３６）上に、容易に正しく閉じられる。他の実施形態では、穴部（８９５）は、ハウジング（８３５）の第２側面（８３７）上にあり、ペグ（８７５）は、ハウジング（８３５）の第１側面（８３６）上にある。さらに他の実施形態では、フラップ（１０７０）をハウジング（８３５）の第１側面（８３６）に固定するために、他の可逆的な固定機構が使用され得る。
【０１５０】
好ましい実施形態では、結合領域（８７２）、（８７４）は、サンプルの結合体および対照の結合体における色素によって色づけされる。１つの好ましい実施形態では、第１検査ストリップ（１０１５）に使用される結合領域（８７２）は、赤色色素で標識化されるＭｘＡ結合パートナー、黒色色素で標識化される低ＣＲＰ結合パートナー、および青色色素で標識化される対照結合パートナーを含む。本実施形態では、結合領域（８７２）は、紫色がかったように現われる。もう一方の結合領域（８７４）は、黒色色素で標識化される高ＣＲＰ結合パートナー、および青色色素で標識化される対照結合パートナーを含む。本実施形態では、結合領域（８７４）は、青色がかったように現われる。
【０１５１】
好ましくは間隙または障壁を含む、分岐領域（８５０）は、側方流動を妨害し、泳動用緩衝液を、結合領域（８７２）、（８７４）を含むフラップ（１０７０）へと分岐する。
【０１５２】
操作中に、ハウジング（８３５）の第２側面（８３７）の上部部分（８３９）および下部部分（８３８）は、好ましくは、ペグ（８７５）を穴部（８９５）に固定することによって、使用前にしっかりと閉じられる。サンプル分析装置、またはテストカード（１０００）は、好ましくは、平面上に置かれる。フラップ（１０７０）が既に開いていないときに、ユーザーは、サンプル適用領域（１０７３）、（１０７６）にアクセスするためにそれを開く。サンプル適用領域（１０７３）、（１０７６）は、移動パッド（１０５５）の任意の部分に位置付けられ得る。検査される血液サンプルは、患者から得られる。サンプルは、当該技術分野に既知の任意の処置によって得られ得る。好ましい実施形態では、血液の５μｌのサンプルが、サンプル適用領域（１０７３）、（１０７６）の各々に加えられ、その後、フラップ（１０７０）が閉じられる。５μｌのサンプルの各々は、好ましくは、互いに別々に採取される。血液は、好ましくは、前処理なしで、装置（１０００）に直接加えられる。好ましい実施形態では、矢印（１００２）または（図１０Ａで示される）他の表示、例えば用語は「ここにサンプルを加える（ａｄｄ ｓａｍｐｌｅ ｈｅｒｅ）」は、検査ストリップ（１０１５）、（１０２５）上のサンプルをどこに置くべきかをユーザーに示している。
【０１５３】
フラップ（１０７０）が正確に閉じられていることを確かなものとするために、圧力は、好ましくは、ペグ（８７５）上のハウジング（８３５）に加えられて、ペグ（８７５）をしっかりと閉じる。検査を適切に行うために、フラップ（１０７０）の上部は、ハウジング（８３５）の第２側面（８３７）の残りの上部と同一平面上にある必要がある。泳動用緩衝液が、吸収パッド（８４０）に加えられ、側方流動（８８５）を開始する。好ましい実施形態では、泳動用緩衝液は、血液サンプルを溶解し、サンプル中に細胞内ＭｘＡをさらすために、１つ以上の溶解剤、例えば洗浄剤を含む。泳動用緩衝液は、分岐領域（８５０）に達するときに、フラップ（８７０）へと分岐される。それは、結合領域（８７２）、（８７４）を通って移動し、対照の結合体と同様に、ＭｘＡ結合パートナー、低ＣＲＰ結合パートナー、および高ＣＲＰ結合パートナーを採取する。
【０１５４】
結合領域（８７２）、（８７４）が、側方流動の検査ストリップ（１０１５）、（１０２５）上の分岐領域（８５０）をつなげるため、ここで結合体を含む、泳動用緩衝液は、移動パッド（１０５５）へと移動し、検査ストリップ（１０１５）、（１０２５）の各々の上の検出領域（８０５）に移動する。ＭｘＡがサンプル中に存在する場合、第１検査ストリップ（１０１５）上のＭｘＡの検査ライン（８０２）は赤色になる。低い閾値レベルのＣＲＰがサンプル中に存在する場合、第１検査ストリップ（１０１５）上の低ＣＲＰの検査ライン（８０３）は黒色になる。高い閾値レベルのＣＲＰがサンプル中に存在する場合、 第２検査ストリップ（１０２５）上の高ＣＲＰの検査ライン（８２３）は黒色になる。好ましい実施形態では、検出のレベルは、ＭｘＡに対して４０ｎｇ／ｍｌ、第１検査ストリップ（１０１５）上の低ＣＲＰに対して１０ｍｇ／Ｌ、および第２検査ストリップ（１０２５）上の高ＣＲＰに対して８０ｍｇ／Ｌである。検査の結果は、およそ５−２０分後に、好ましくは約１０分以内に、視認できるはずである。検査が正確に実行されると、第１検査ストリップ（８１５）および第２検査ストリップ（８２５）の両方の上の対照ライン（８０４）は青色になる。
【０１５５】
対照結合パートナーが、検査ストリップ（１０１５）、（１０２５）のいずれかの上ではなく、フラップ（１０７０）上にあるため、この構成に対する真の手順制御が存在する。フラップ（１０７０）が適切に閉じられていない場合、検出領域（８０５）には何も現われず、これは、検査が不適当に実行されたことを示している。
【０１５６】
代替的な実施形態では、サンプル適用領域（１０７３）、（１０７６）は、分岐領域（８５０）の前に、受信パッド（８４５）上に位置付けられる。本実施形態では、泳動用緩衝液は、サンプル適用領域（１０７３）、（１０７６）を通って移動し、その後、フラップ（１０７０）へと分岐される。
【０１５７】
図８Ａから図８Ｃおよび図１０Ａから図１０Ｃに示される構成の好ましい実施形態では、およそ１．２ｍｌ以上の泳動用緩衝液が、吸収パッド（８４０）に入れられる。分岐領域（８５０）が間隙である実施形態に１．０ｍｌ未満が加えられる場合、間隙がおよそ１．０ｍｌを保持するために、緩衝液は、間隙で止められる（ｇｅｔｓ ｓｔａｌｌｅｄ）。
【０１５８】
図１１に示されるように、１つの好ましい実施形態では、キット（１１００）は、サンプル分析装置（８００）、（１０００）、ランセット（１１０２）、１つ以上のピペット（１１０１）、および泳動用緩衝液（１１０３）を含む。ランセット（１１０２）は、皮膚に穴を開けるために使用され、１つ以上のピペット（１１０１）は、穴部位から血液を採取するために使用される。好ましい実施形態では、血液の５μｌは、第１ピペット（１１０１）から第１結合領域（８７２）に移され、血液の別の５μｌは、第２ピペット（１１０１）から移され、第２結合領域（８７４）に加えられる。図８Ａから図８Ｃおよび図１０Ａから図１０Ｃで記載されるように、フラップ（８７０）は閉じられ、泳動用緩衝液（１１０３）が吸収パッド（８４０）に加えられる。
【０１５９】
分岐領域（８５０）は、好ましくは、流れが生じる面における流れを阻止する少なくとも１つの特徴を含む。分岐領域は、障壁、間隙、溝、またはこれらの特徴の任意の組み合わせを含み得る。障壁は、好ましくは、液体の流れが同じ面において流れ続けることを防ぐ任意の材料で作られ得る、不透膜（または略不透な膜）である。障壁のための幾つかの材料は、限定されないが、不活性材料、半透過性材料、プラスチック、炭化水素、金属、疎水性材料、セファデックス、セファロース、アセテート、吸湿性材料（例えばＣａＣｌ２、ＣａＳ０４またはシリカゲル）、またはヒドロゲルを含む。間隙または溝は、流れを止めるのに十分な深さまで及ぶ側方流動の検査ストリップの面における任意の切れ目（ｂｒｅａｋ）である。１つの好ましい実施形態では、間隙は、好ましくは、少なくともおよそ０．１ｍｍの深さである。
【０１６０】
図８Ａから図８Ｃおよび図１０Ａから図１０Ｃにおける分岐領域（８５０）は、サンプル圧縮機／フラップ（８７０）、（１０７０）が装置の残りと接触させられるまで、流れを遅らせるか又は完全に止め、流体が流れることができる橋を作り出す。サンプル圧縮機（８７０）、（１０７０）は、橋として作用し、流れを異なる面へと再び配向する。流れは、サンプル圧縮機（８７０）、（１０７０）へと分岐される。これは、サンプル圧縮機（８７０）、（１０７０）上の試薬の採取を増加させる。例えば、結合体がサンプル圧縮機（８７０）、（１０７０）上にある実施形態では、結合体の採取は、分岐領域（８５０）を有する装置において増加する。サンプル適用領域（８７３）、（８７６）、（１０７３）、（１０７６）および結合体の両方が、サンプル圧縮機（８７０）、（１０７０）上にある実施形態では、サンプルおよび結合体の両方は、サンプル圧縮機（８７０）、（１０７０）へと分岐されるときに泳動用緩衝液に遭遇し、分析物がサンプルの中にある場合に泳動用緩衝液が分岐されて検査ストリップに戻される前に、（分析物のための第２結合パートナーがサンプル分析装置上のどこに位置付けられるかによって）１／２のサンドイッチまたは完全なサンドイッチが形成される。分岐領域（８５０）およびサンプル圧縮機（８７０）（１０７０）（１０７０）を有する実施形態では、速度が増加し、結合体とサンプルのより優れた相互作用が可能となり、およびより多くの結合体が流体に入れられるために、より一層の感受性が可能となる。これらの実施形態では、流体のすべてが、好ましくは、結合体と相互作用する。これは、流体のおよそ２０−３０％が結合体と相互作用する、再配向のない圧縮機の実施形態よりも著しい改善である。
【０１６１】
二峰性のデュアル検査ストリップのサンプル分析装置（１２００）のための別の好ましい構成を、図１２に示す。この構成は、ハウジング（１２３５）の第２部分（８３７）または分岐領域（８５０）のない、図８Ａから図８Ｃおよび図１０Ａから図１０Ｃに示される構成（８００）、（１０００）に類似している。代わりに、検査の構成要素のすべては、同じ面に位置し、流れは、吸収パッド（８４０）から廃棄パッド（８６０）に横方向に進む。本実施形態が、吸収パッド（８４０）への緩衝液の適用を促進する窓、サンプルを装置（１２００）に適用するための各サンプル適用領域（１２７３）、（１２７６）上に位置する窓、および検出領域（８０５）のための視界窓とを備える、ハウジングも含み得ることに留意されたい。１つの好ましい実施形態では、サンプル分析装置（１２００）は、およそ１１．５ｃｍの長さ（Ｌ）×７ｃｍの幅（Ｗ）である。しかしながら、構成要素のすべてを収容する、あらゆるサイズのテストカード（１２００）が使用されてよい。２つの検査ストリップ（１２１５）、（１２２５）があり、その各々が、受信パッド（８４５）、結合領域（１２７２）、（１２７４）、サンプル適用領域（１２７３）、（１２７６）を含む移動パッド（１２４０）、検出領域（８０５）、および廃棄パッド（８６０）、を含む。装置（１２００）はまた、好ましくは、吸収パッド（８４０）および廃棄パッド（８６０）を含む。結合領域（１２７２）、（１２７４）が、この図でサンプル適用領域（１２７３）、（１２７６）の上流に示されるが、他の実施形態において、結合領域（１２７２）、（１２７４）の１つまたは両方が、サンプル適用領域（１２７３）、（１２７６）に下流に位置する。第１検査ストリップ（１２１５）の検出領域（８０５）は、好ましくは、ＭｘＡ検査ライン（８０２）、低ＣＲＰ検査ライン（８０３）および対照ライン（８０４）を含む。第２検査ストリップ（１２２５）上の検出領域（８０５）もまた、好ましくは、高ＣＲＰ検査ライン（８２３）および対照ライン（８０４）を含む。吸収パッド（８４０）は、好ましくは、側方流動を始めるために、泳動用緩衝液が加えられる単一のパッドである。同様に、廃棄パッド（８６０）は、好ましくは、検査の終わりに過剰な泳動用緩衝液を採取する単一のパッドである。しかしながら、他の実施形態では、各ストリップは、別々の吸収パッド（８４０）及び／又は廃棄パッド（８６０）を有し得る。
【０１６２】
好ましい実施形態では、結合領域（１２７２）、（１２７４）は、サンプルの結合体および対照の結合体における色素によって色づけされる。１つの好ましい実施形態では、第１検査ストリップ（１２１５）に使用される結合領域（１２７２）は、赤色色素で標識化されるＭｘＡ結合パートナー、黒色色素で標識化される低ＣＲＰ結合パートナー、および青色色素で標識化される対照結合パートナーを含む。本実施形態では、結合領域（１２７２）は、紫色がかったように現われる。もう一方の結合領域（１２７４）は、黒色色素で標識化される高ＣＲＰ結合パートナー、および青色色素で標識化される対照結合パートナーを含む。本実施形態では、結合領域（１２７４）は、青色がかったように現われる。
【０１６３】
操作中に、検査される血液サンプルは、患者から得られる。サンプルは、当該技術分野に既知の任意の処置によって得られ得る。好ましい実施形態では、血液の５μｌのサンプルが、サンプル適用領域（１２７３）、（１２７６）の各々に加えられる。５μｌのサンプルの各々は、好ましくは、互いに別々に採取される。好ましい実施形態では、矢印（１００２）または（図１０Ａで示される）他の表示、例えば用語は「ここにサンプルを加える」は、検査ストリップ（１２１５）、（１２２５）上のサンプルをどこに置くべきかをユーザーに示している。
【０１６４】
血液は、好ましくは、前処理なしで、装置（１２００）に直接加えられる。泳動用緩衝液が、吸収パッド（８４０）に加えられ、側方流動（１２８５）を開始する。好ましい実施形態では、泳動用緩衝液は、血液サンプルを溶解し、サンプル中に細胞内ＭｘＡをさらすために、１つ以上の溶解剤、例えば洗浄剤を含む。それは、結合領域（１２７２）、（１２７４）を通って移動し、対照の結合体と同様に、ＭｘＡ結合パートナー、低ＣＲＰ結合パートナー、高ＣＲＰ結合パートナーを採取する。
【０１６５】
ここで結合体を含む、泳動用緩衝液は、サンプル適用領域（１２７３）、（１２７６）を含む、移動パッド（１２５５）へと移動し、検査ストリップ（１０１５）、（１０２５）の各々の上の検出領域（８０５）に移動する。ＭｘＡがサンプル中に存在する場合、第１検査ストリップ（１２１５）上のＭｘＡの検査ライン（８０２）は赤色になる。低い閾値レベルのＣＲＰがサンプル中に存在する場合、第１検査ストリップ（１２１５）上の低ＣＲＰの検査ライン（８０３）は黒色になる。高い閾値レベルのＣＲＰがサンプル中に存在する場合、 第２検査ストリップ（１２２５）上の高ＣＲＰの検査ライン（８２３）は黒色になる。好ましい実施形態では、検出のレベルは、ＭｘＡに対して４０ｎｇ／ｍｌ、第１検査ストリップ（１２１５）上の低ＣＲＰに対して１０ｍｇ／Ｌ、および第２検査ストリップ（１２２５）上の高ＣＲＰに対して８０ｍｇ／Ｌである。検査の結果は、およそ５−２０分後に、好ましくは約１０分以内に、視認できるはずである。検査が正確に実行されると、第１検査ストリップ（１２１５）および第２検査ストリップ（１２２５）の両方の上の対照ライン（８０４）は青色になる。
【０１６６】
代替的な実施形態では、サンプル適用領域（１２７３）、（１２７６）は、結合領域（１２７２）、（１２７４）の上流に位置付けられる。本実施形態では、泳動用緩衝液は、サンプル適用領域（１２７３）、（１２７６）を通って移動し、その後、結合領域（１２７２）、（１２７４）に移動する。さらに他の実施形態では、結合領域（１２７２）、（１２７４）は、サンプル適用領域（１２７３）、（１２７６）に重なる。さらに他の実施形態では、結合領域（１２７２）、（１２７４）、及び／又はサンプル適用領域（１２７３）、（１２７６）は、受信パッド（８４５）に位置付けられ得る。
【０１６７】
図４Ａから図８Ｃ、図１０Ａから図１０Ｃおよび１２で示される構成の好ましい実施形態では、対照は、ウサギ抗ニワトリであり、対照の結合体は、ニワトリＩｇＹに結合された青色ラテックスビーズである。他の好ましい実施形態では、少なくとも１つの溶解剤、好ましくは、泳動用緩衝液中の洗浄剤がある。
【０１６８】
細胞内タンパク質および細胞外タンパク質の同時検出
細胞外の分析物および細胞内の分析物がある。各々の検出は、しばしば、別々の事象である。内在化された分析物が外在化されて、検査で利用可能となるように、細胞を溶解することによって、細胞内の分析物は、抽出されなければならない。
【０１６９】
本明細書で開示される方法は、少なくとも１つの細胞外の分析物および少なくとも１つの細胞内の分析物を同時に検出する。「細胞内の」標的または分析物は、本実施形態に記載されるように、細胞の内部にあり、細胞内のもの（表面タンパク質、細胞壁、または内表面など）に接触しない、分析物である。「細胞外の」標的または分析物は、本実施形態に記載されるように、細胞外のものに接触しない、完全に細胞外の分析物である。例えば、細胞外の分析物は、細胞を含まない、血漿に存在する。細胞は、完全に取り除かれ得、細胞外の分析物は、それでも採取され得る。
【０１７０】
対照法的に、ウイルス粒子は、細胞外にいながら、細胞壁に付けられる。細胞内の結合画分および表面の結合画分を検出するために抗体のカクテルを混合することは、当該技術分野に周知である。しかし、本明細書に記載される方法は異なり、溶解された、細胞内の部分および分離された血清タンパク質を検出する。
【０１７１】
１つの好ましい実施形態では、細胞外の分析物はＣ反応性タンパク質であり、細胞内の分析物はＭｘＡタンパク質である。これは、ＣＲＰおよびＭｘＡの抗原の検出のための血清学的検査である。ＭｘＡは、白血球の内部の細胞内タンパク質である。ＣＲＰは、全血、血漿および血清に見られる細胞外タンパク質である。
【０１７２】
１つの好ましい方法では、Ｗａｔｍａｎ ＧＤのフィルターなどのグラスファイバーは、赤血球を物理的に捕捉する。特異的な赤血球結合性レクチン及び／又は抗体が、グラスファイバーのマトリックスおいて、赤血球に物理的に結合するために加えられる。白血球を溶解して、細胞内のＭｘＡを放出する、白血球溶解性の溶液は、グラスファイバーのフィルターに組み込まれ得る。
【０１７３】
幾つかの好ましい実施形態では、全血サンプルは、グラスファイバーのフィルターに加えられる。液体の血液は、白血球を溶解する、組み込まれた溶解剤を溶かす。側方流動の免疫クロマトグラフィは、泳動用緩衝液を加えることによって開始される。その後、泳動用緩衝液は、細胞外のＣＲＰおよび新たに放出された細胞内のＭｘＡに結合する適切な抗体の結合体を運ぶ。固定化された特異抗体がそれぞれの複合体を捕捉する検出領域へと、複合体全体が移動し、サンドイッチを形成される。異なる検査ラインが、ＭｘＡおよびＣＲＰを用いて形成される。これらの検査ラインは、ビジュアル、蛍光、リン光、化学発光、常磁性、またはこれらの任意の組み合わせであり得る。ＭｘＡおよびＣＲＰの検査ラインを識別するために、異なる色素が組み込まれ得る。本明細書に記載される側方流動アッセイおよび構成のいずれかが、ＭｘＡおよびＣＲＰまたは他の細胞内および細胞外の分析物を検出するために使用され得る。
【０１７４】
ＭｘＡおよびＣＲＰの凝集
幾つかの実施形態は、血中のＭｘＡおよびＣＲＰに対する簡単な凝集検査を含む。類似点として、本発明の発明者は、レンガ壁中のセメントが、レンガを一緒に保持する代わりに、レンガを別々に保持すると考えている。その根拠は、セメントが除去されると、レンガは、合体して、塊となって一緒に落ちる（ｆａｌｌ ｔｏｇｅｔｈｅｒ ｉｎｔｏ ａ ｈｅａｐ）からである。それ故、セメントが「不活性化される」または除去されると、個々のレンガは合体する。
【０１７５】
金の結合体およびラテックスビーズは、互いに反発するコロイド粒子であり、それ故、懸濁液に一緒に集められる。反発力が除去されるか、または個々のコロイド粒子がともに交差結合されると、それらは合体し、凝集した粒子を視覚化することができる。この自然な反発作用に打ち勝つ交差結合は、問題の抗原分析物の存在によって達成される。
【０１７６】
１つの好ましい実施形態では、ＭｘＡのモノクローナルのＫＭ１１２４及び／又はＫＭ１１３５が、赤色のコロイド金粒子に結合する。抗ＣＲＰモノクローナル抗体は、適切なサイズの緑色ラテックスビーズに結合される。ＭｘＡの存在下では、モノクローナル抗体ＫＭ１１２４及び／又はＫＭ１１３５が結合し、ＫＭ１１２４及び／又はＫＭ１１３５によって認識されたエピトープの多様性があるために、コロイド金の自然な交差結合は起こり、赤色のコロイド金粒子の凝集を確認できる。このプロセスは、抗原依存性であって、かなり急速であり、一般に１分または２分以内に生じる。同じ現象が、ＣＲＰ分析物の存在下で、適切なモノクローナル抗体でコーティングされた緑色のコロイド状のラテックスビーズとともに生じる。
【０１７７】
赤色の金粒子の凝集は、ＭｘＡの少なくとも閾値量がサンプルにあることを意味し、これはウイルス感染を示している。緑色のビーズの凝集は、ＣＲＰの少なくとも閾値量がサンプルにあることを意味し、これは細菌感染を示している。赤色の粒子および緑色の粒子の凝集は、同時感染、または不確定な結果の暗示を意味する。凝集の欠如は、サンプルがウイルスおよび細菌の感染に対して陰性であることを示す。
【０１７８】
１つの好ましい実施形態では、Ｃ反応タンパク質の閾値濃度は、およそ６−１５ｍｇ／ＬのＣ反応性タンパク質と等しいか又はそれより高く、ＭｘＡタンパク質の閾値濃度は、およそ１５−２５０ｎｇ／ｍｌの血清相当物と等しいか又はそれより高い。ＭｘＡが、細胞内のバイオマーカーであるため、血液サンプルは、好ましくは、白血球を溶解し、ＭｘＡ抗原を外在化するアッセイ中に溶解される。他の実施形態では、サンプルは、アッセイを行う前に溶解される。当該技術分野で既知の任意の免疫学的アッセイのフォーマットが、凝集アッセイに使用され得る。試薬が加えられ、その後、ユーザーは、試薬がサンプルの存在下で凝集するかどうかを観察する。
【０１７９】
ウイルスの診断におけるナノ粒子
ＭｘＡレベルは、かなり多数ではあるがすべてではないウイルス感染において高まる。感染中の高まったＭｘＡレベルに対する幾つかの例外は、Ｂ型肝炎、および恐らくＨＩＶおよびＣ型肝炎を含む慣性的なウイルス感染である。シアル酸は数多くのウイルス上に存在する。しかし、シアル酸は、コックスウイルスなどの少数のウイルス上にはない。
【０１８０】
上に記載されるＭｘＡ−ＣＲＰの組み合わせの検出器装置は、好ましくは、ウイルスおよび細菌の感染を区別するために、熱を有する人において使用される。シアル酸のナノ粒子検査は、好ましくは、慣性的なウイルス感染を含む、すべての他の疑われるウイルス感染（発熱を伴うまたは伴わない）で使用される。しかしながら、幾つかの好ましい実施形態では、シアル酸は、本明細書に記載される方法および装置においてＭｘＡに取って代わる。
【０１８１】
別の好ましい実施形態では、検査は、ＭｘＡ、ＣＲＰ、およびシアル酸同族体のナノ粒子を含む。
【０１８２】
１つの好ましい実施形態では、検査ラインは、特定のウイルスに特異的なナノ粒子である。幾つかの例は、限定されないが、鳥インフルエンザ、およびＨＩＶまたはＣ型肝炎などの慢性感染症を引き起こすウイルスを含む。結合体は、ａ）である、色素を中に有するウイルス特異的なナノミセル、またはｂ）色素を中に有するシアル酸同族体のナノミセルのいずれかである。
【０１８３】
例えば、Ｎａｎｏｖｉｒｉｃｉｄｅｓ，Ｉｎｃ．（Ｗｅｓｔ Ｈａｖｅｎ， Ｃｏｎｎｅｃｔｉｃｕｔ）には鳥インフルエンザに特異的なナノ粒子を所持している。そのナノ粒子は、検査ラインおよび鳥インフルエンザを検出するための結合体としてのシアル酸同族体のナノミセルで使用され得る。
【０１８４】
別の実施形態は、広域スペクトルのウイルス検出器を含む。本実施形態では、検査ラインは、すべてのウイルスを捕らえるシアル酸同族体のナノ粒子であり、結合体は、色素を中に有するシアル酸のナノミセルである。
【０１８５】
好ましい実施形態では、検査ラインは、ナノ粒子を含むナノミセルではなく、ナノ粒子で構成される。一方で結合体は、好ましくは、ミセル内に色素を占めるナノミセル（シャボン玉に類似している）である。ミセルの脂質部分は、ミセルの「スライミング（ｓｌｉｍｉｎｇ）」特性の要因である。
【０１８６】
シアル酸の実施形態は、図４−８および図１０−１２に示されるものを含む、本明細書に記載される、または当該技術分野に既知の検査ストリップ構成いずれか、あるいは当該技術分野に既知の他のアッセイ構成を使用し得る。
【０１８７】
したがって、本明細書に記載される本発明の実施形態が、本発明の原理の適用の例証にすぎないことを理解されたい。本明細書での例証される実施形態の詳細に対する参照は、請求項の範囲を限定するようには意図されておらず、それら自体は、本発明にとって不可欠であると考えられるこれらの特徴を詳述している。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図５Ｃ】
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【図５Ｄ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図７Ｃ】
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【図７Ｄ】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図８Ｃ】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図９Ｃ】
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【図９Ｄ】
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【図９Ｅ】
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【図９Ｆ】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１０Ｃ】
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【図１１】
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【図１２】
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【手続補正書】
【提出日】令和1年5月3日(2019.5.3)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
サンプルにおけるＭｘＡタンパク質とＣ反応性タンパク質を検出する方法であって、該方法は：
ａ）第１の標識に結合したＭｘＡタンパク質に対する抗体と、第１の標識と異なる第２の標識に結合したＣ反応性タンパク質に対する抗体との混合物に、サンプルを加える工程；
ｂ）ＭｘＡタンパク質に対する抗体が凝集したかを判定することによりＭｘＡタンパク質の存在を検出する工程；及び
ｃ）Ｃ反応性タンパク質に対する抗体が凝集したかを判定することによりＣ反応性タンパク質の存在を検出する工程
を含む、サンプルにおけるＭｘＡタンパク質とＣ反応性タンパク質を検出する方法。
【請求項２】
前記工程ａ）の前に、
ｄ）第１の標識に、ＭｘＡタンパク質に対する抗体を結合させる工程；
ｅ）第２の標識に、Ｃ反応性タンパク質に対する抗体を結合させる工程
を更に含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
未知のウイルス感染の存在を検出する方法であって、該方法は：
ａ）サンプルを採取する工程；
ｂ）サンプルを、サンプル分析装置のサンプル適用領域に移す工程であって、該サンプル分析装置は：
ｉ）ナノミセルの内部に標識を含むシアル酸ナノミセルを含む結合領域；及び
ｉｉ）シアル酸同族体ナノ粒子を含むサンプル適用領域から横方向で下流にある検出領域
を含む、工程；
ｃ）検出領域における陽性の結果に関してサンプルを分析する工程
を含む、未知のウイルス感染の存在を検出する方法。
【請求項４】
特異的なウイルス感染の存在を検出する方法であって、該方法は：
ａ）サンプルを採取する工程；
ｂ）サンプルを、サンプル分析装置のサンプル適用領域に移す工程であって、該サンプル分析装置は：
ｉ）ウイルス感染を引き起こす特異的なウイルスの結合パートナーと標識とを含むナノミセル、及び、ナノミセルの内部に標識を含むシアル酸同族体ナノミセルから成る群から選択された分子を含む接合領域；及び
ｉｉ）サンプル適用領域から横方向で下流にある検出領域であって、サンプル適用領域は、ウイルス感染を引き起こすウイルスに対して特異的なナノ粒子を含む、検出領域
を含む、工程
ｃ）検出領域における陽性の結果に関してサンプルを分析する工程
を含む、特異的なウイルス感染の存在を検出する方法。
【外国語明細書】
2019164143000001.pdf