(57)【要約】      （修正有）【課題】血中中性脂肪低減作用及び肝臓中性脂肪低減作用を有する脂質代謝改善剤の提供。【解決手段】リグナンとイソフラボンを有効成分とする血中中性脂肪低減作用と及び肝臓中性脂肪低減作用を有する脂質代謝改善剤。リグナンがアマニ由来リグナンであり、イソフラボンが大豆由来イソフラボンである脂質代謝改善剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
リグナンとイソフラボンを有効成分として含有する、血中中性脂肪低減作用と及び肝臓中性脂肪低減作用を有する脂質代謝改善剤。
【請求項２】
リグナンがアマニ由来リグナンである、請求項１に記載の脂質代謝改善剤。
【請求項３】
イソフラボンが大豆由来イソフラボンである、請求項１又は２に記載の脂質代謝改善剤。
【請求項４】
請求項１に記載の脂質代謝改善剤を含む、飲食品。
【請求項５】
請求項１に記載の脂質代謝改善剤を含む、生活習慣病の予防、緩和、または治療のための医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はリグナン及びイソフラボンを有効成分とする、血中中性脂肪低減作用及び肝臓中性脂肪低減作用を有する脂質代謝改善剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
メタボリックシンドロームの診断基準として、血中の中性脂肪（トリグリセリド）の値が挙げられる。血中中性脂肪は高TG血症のような脂質異常症の診断基準ともなっており、動脈硬化リスクを大幅に高める要因として知られている（非特許文献１）。
また、内臓脂肪型肥満も同様にメタボリックシンドロームの診断基準として知られており、生活習慣病のリスクを判断する上で重要な指針となっている。肝臓中の過剰な脂肪蓄積が高インスリン血症に代表される耐糖能の低下につながり、心血管疾患等の発症リスクを高めることが知られている。特に近年、単純な脂肪肝とは異なる非アルコール性脂肪肝炎（NASH）などの病態の知見が蓄積されてきたこともあり、肝臓中の脂質代謝を改善するための対策が重要視されている（非特許文献２）。
肝臓中の脂質低減効果があるとされる物質を哺乳動物に経口摂取させた際に、血中の中性脂肪値が上昇することが知られている（非特許文献３）。これは投与した成分の効果により、肝臓から血中への中性脂肪分泌が誘発されるために起きる現象とされている。血中中性脂肪及び肝臓中性脂肪はどちらも生活習慣病発症リスクに影響する因子であり、血中中性脂肪が上昇するという問題を放置して肝臓中性脂肪の低減効果のみを追求することは、健康を増進することを目的とする栄養補助食品としては好ましくないと思われる。このため、肝臓中性脂肪を低減すると同時に血中中性脂肪をも低減する効果を持つ物質、及び当該効果をもたらす技術の開発が望まれている。
リグナンは植物に含まれている化合物群の一種であり、エストロゲン様作用を示すことから植物エストロゲンとも呼ばれる。リグナンは他にも抗がん作用、抗酸化作用、脂質代謝改善作用などを示すことが知られており（非特許文献４）、その健康機能への多大な効用が着目されている。
亜麻科植物の種子であるアマニはリグナン供給源として最も知られている植物であり、アマニリグナンとしてセコイソラリシレジノールグルコシド（以下、ＳＤＧ）が多量に含まれている他、マタイレシノール、ピノレシノール、イソラレシレジノール及びこれらの配糖体などが少量含まれている。（非特許文献５）
一方、代表的な植物エストロゲンとして知られるイソフラボンについても多くの生理作用が報告されており、特に大豆由来のイソフラボンについてはダイゼイン、ゲニステイン及びこれらの配糖体が多量に含まれていることが知られている。（非特許文献６）
リグナン類及びイソフラボン類は植物体内では配糖体の形態で存在しており、これらを経口摂取すると腸内細菌の作用によりアグリコンが生成される。ＳＤＧの場合はエンテロラクトン及びエンテロジオ−ル、ダイゼインの場合はエクオールがそれぞれ特有の菌種のはたらきによって産生されることが開示されており、リグナン類及びイソフラボン類の生理活性はこれらのアグリコンの持つ作用であることが明らかになっている。（特許文献１、２）ただし腸内細菌叢の組成、活性には個人差があるため、リグナン類及びイソフラボン類を代謝できない人はその生理作用を十分に享受できないこと、特に大豆イソフラボンについては代謝能を持つ人が３０〜５０％に留まることも報告されている（特許文献２）。リグナン類及びイソフラボン類には、植物エストロゲンとみなされていること、腸内細菌の作用を受けて初めて生理活性を示すことなど、さまざまな共通点がある。
リグナン類及びイソフラボン類それぞれについて血中、肝臓中の脂質代謝を改善する効果を有することについても報告されているが（非特許文献７、８）、リグナン類及びイソフラボン類を明示的に組み合わせてその脂質代謝への効果について検討した例はない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】特開２０１５−２０４７８４
【特許文献２】国際公開２０１６/０９８１０３
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】動脈硬化性疾患予防ガイドライン２０１２、日本動脈硬化学会
【非特許文献２】ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨ診療ガイドライン２０１４、日本消化器病学会
【非特許文献３】高脂肪食摂取ラットにおけるガックの種衣凍結乾燥物の脂肪肝抑制作用、日本食品科学工学会誌、2016 63(1),44-50.
【非特許文献４】Flaxseed lignan lowers blood cholesterol and decreases liver disease risk factors in moderately hypercholesterolemic men. Nutr Res. 2010 Jul;30(7):441-6.
【非特許文献５】Isolation and characterization of the lignans, isolariciresinol and pinoresinol, in flaxseed meal. J Agric Food Chem. 1999 Aug;47(8):3173-80.
【非特許文献６】Plasma profiling of intact isoflavone metabolites by high-performance liquid chromatography and mass spectrometric identification of flavone glycosides daidzin and genistin in human plasma after administration of kinako. Drug Metab Dispos. 2008 Aug;36(8):1485-95.
【非特許文献７】Effects of the flaxseed lignans secoisolariciresinol diglucoside and its aglycone on serum and hepatic lipids in hyperlipidaemic rats. Br J Nutr. 2009 Aug;102(3):361-9.
【非特許文献８】Comparison of regulative functions between dietary soy isoflavones aglycone and glucoside on lipid metabolism in rats fed cholesterol. J Nutr Biochem. 2005 Apr;16(4):205-12.
【非特許文献９】A rapid method of total lipid extraction and purification. Can J Biochem Physiol. 1959 Aug;37(8):911-7.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、血中中性脂肪低減作用及び肝臓中性脂肪低減作用を有する脂質代謝改善剤を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、リグナンとイソフラボンを含む組成物が、血中中性脂肪及び肝臓中性脂肪を同時に低減する効果を得られることを見出した。
すなわち本発明は以下の通りである。
［１］リグナンとイソフラボンを有効成分として含有する、血中中性脂肪低減作用及び肝臓中性脂肪低減作用を有する脂質代謝改善剤。
［２］リグナンがアマニ由来リグナンである、前記［１］に記載の脂質代謝改善剤。
［３］イソフラボンが大豆由来イソフラボンである前記［１］又は［２］に記載の脂質代謝改善剤。
［４］請求項１に記載の脂質代謝改善剤を含む、脂質代謝を改善するための飲食品。
［５］請求項１に記載の脂質代謝改善剤を含む、生活習慣病の予防、緩和、または治療のための医薬組成物。
【発明の効果】
【０００７】
本発明の脂質代謝改善剤により、血中中性脂肪及び肝臓中性脂肪を同時に抑制することが出来る。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
本発明の脂質代謝改善剤は、リグナンとイソフラボンを有効成分として含有する。
リグナンは植物に含まれている化合物群の一種であり、エストロゲン様作用を示したり抗酸化物質として働く植物エストロゲンの主要な分類の一つである。植物リグナンは、フェニルアラニンを出発物質とし、モノリグノールとして知られる置換ケイ皮アルコール（ケイ皮酸を参照）の二量化反応によって生成するジベンジルブタン骨格に由来するポリフェノール性物質である。リグナンは、高等植物、特に木本植物の材に多く分布する
リグナンを多く含む植物としてはアマニやゴマが知られており、例えばゴマ種子にはセサミン、ピノレシノール、マタイレシノール等を含み、アマニであればセコイソラリシレジノールグルコシド（ＳＤＧ）マタイレシノール、ピノレシノール、イソラレシレジノール等を含む。その他、穀物（ライムギ、コムギ、エンバク、オオムギ）やカボチャ種子、ダイズ、ブロッコリー、豆、チョウセンゴミシ果実のような一部の果実などがリグナンを含むことが知られている。
本発明において、リグナンはアマニ由来リグナンであることが好ましい。
【０００９】
イソフラボンはポリフェノールに分類され、イソフラボンを基本骨格とするフラボノイドである。ダイズ、クズなどのマメ科の植物に多く含まれている。
例えば大豆はダイジン、グリシチン、ゲニスチン及びそれらのマロニル化配糖体、アセチル化配糖体等を含み、クズはテクトリジン、テクトリゲニン等を含む。
本発明においてイソフラボンは大豆由来イソフラボンであることが好ましい。
【００１０】
本発明においてリグナン、イソフラボンはそれぞれ植物から公知の方法で抽出、精製して得ることができるほか、化学合成によって得ることもできる。またリグナン、イソフラボンはそれぞれは単独の成分または数種類の成分の混合物であっても良い。リグナン、イソフラボンはそれぞれ、植物の抽出物の形態で用いても良い。
【００１１】
植物の抽出物の形態で用いる場合には、原料として使用する植物に適した方法でリグナン、イソフラボンを得ることができる。また、得られるリグナン、イソフラボンそれぞれの成分の種類及びその構成比は原料として使用する植物に依存する。また、市販品も好適に利用することができる。
【００１２】
たとえば、アマニ由来リグナンとしては、亜麻の種子及び種子加工品から抽出・分離・精製等を経て得られたリグナン類、及びリグナン類を含むアマニ抽出物を対象とすることが出来る。具体的にはＳＤＧ、マタイレシノール、ピノレシノール、イソラレシレジノールのいずれか単体、もしくはそれらを任意の割合で含有する抽出物を用いることができる。利用できる市販品としては、ＳＤＧを４０％以上含有する粉末食品素材である「ニップンアマニリグナン」（日本製粉株式会社製）が挙げられるが、これに限定されるものでは無い。
【００１３】
またたとえば、大豆由来イソフラボンについて、大豆の種子及び種子加工品から抽出・分離・精製等を経て得られたイソフラボン類、及びイソフラボン類を含む大豆抽出物を対象とする。具体的にはダイジン、グリシチン、ゲニスチン、及びその有機酸塩（マロン酸、酢酸など）である物質のいずれか単体、もしくはそれらを任意の割合で含有する抽出物を用いることができる。例えば、ダイジン１０.１％、グリシチン６.１％、ゲニスチン０.６％、マロニルダイゼイン１７.２％、マロニルグリシチン７.６％、マロニルゲニスチン３.５％、酢酸ダイゼイン０.４％、酢酸グリシチン０.２％を含有する粉末食品素材である「ソヤフラボンＨＧ」（不二製油株式会社製）が挙げられるが、これに限定されるものでは無い。
【００１４】
本発明の脂質代謝改善剤の摂取量は、摂取する患者等の年齢、性別、症状の程度、摂取形態によって異なるが、リグナン成分に換算して成人では１日あたり好ましくは２０mg／ｋｇ以上であり、より好ましくは１００mg／ｋｇ以上である。また特に摂取量の上限はないが、５００ｍｇ/ｋｇを超えると製品コストの観点から好ましくない。イソフラボン成分に換算して、成人では１日あたり好ましくは２０ｍｇ／ｋｇ以上であり、より好ましくは３０ｍｇ／ｋｇ以上である。
【００１５】
本発明の脂質代謝改善剤における、リグナンとイソフラボンの混合比率は好ましくは９０:１０〜１０:９０（w/w）の範囲であり、より好ましくは、７０：３０〜３０：７０、さらに好ましくは６０：４０〜４０：６０，最も好ましくは５５：４５〜４５：５５（ｗ/ｗ）である。
【００１６】
本発明の脂質代謝改善剤は、血中中性脂肪低減作用と肝臓中性脂肪低減作用を有する。ここで、血中中性脂肪低減作用とは非投与群と比較して血中中性脂肪を低減させる効果を言い、肝臓中性脂肪低減作用とは、非投与群と比較して肝臓中性脂肪を低減させる効果を言う。
【００１７】
血中中性脂肪は血中のトリグリセライドを言い、グリセロール-３-リン酸オキシダーゼ法等の一般的な方法で測定することが出来る。肝臓中性脂肪は、肝臓中に含まれるトリグリセライドを言い、Bligh and Dyer法、グリセロール-３-リン酸オキシダーゼ法等の一般的な方法で測定することが出来る。
【００１８】
血中中性脂肪及び肝臓中性脂肪はどちらも生活習慣病リスクに影響する因子であり、本発明の脂質代謝改善剤により、肝臓中性脂肪を低減させることに伴う血中の中性脂肪値の上昇がなく、むしろ低減させることが出来るので、肥満症、内臓脂肪蓄積、高脂血症、糖尿病、高血圧症、肝臓疾患、心疾患などの生活習慣病の予防、緩和、または治療に有効である。
【００１９】
本発明の脂質代謝改善剤は、組成物の態様でもよく、助剤とともに任意の形態に製剤化して、経口投与または非経口投与が可能な医薬品とすることができる。例えば、経口用の剤形としては、錠剤、口腔内速崩壊錠、カプセル、顆粒、細粒などの固形投薬形態、シロップ及び懸濁液のような液体投薬形態とすることができる。非経口の剤形としては、注射剤等の形態で投与される。なお、医薬品には医薬部外品も含まれる。
【００２０】
固形投薬形態とする場合、一般製剤の製造に用いられる種々の添加剤を適当量含んでいてもよい。このような添加剤として、例えば賦形剤、結合剤、酸味料、発泡剤、人工甘味料、香料、滑沢剤、着色剤、安定化剤、ｐＨ調整剤、界面活性剤などが挙げられる。
【００２１】
液体投薬形態とする場合、本発明の脂質代謝改善剤は必要に応じてｐＨ調整剤、緩衝剤、溶解剤、懸濁剤等、等張化剤、安定化剤、防腐剤などの存在下、常法により製剤化することができる。
【００２２】
本発明の脂質代謝改善剤は、機能性食品、健康食品、特定保健用食品、栄養機能食品等の保健機能食品、特別用途食品（例えば、病者用食品）、健康補助食品、サプリメント等として調製されてもよい。サプリメントとして、例えば、一般的なサプリメントの製造に用いられる種々の添加剤とともに錠剤、丸状、カプセル（ハードカプセル、ソフトカプセル、マイクロカプセルを含む）状、粉末状、顆粒状、細粒状、トローチ状、液状（シロップ状、乳状、懸濁状を含む）等の形状とすることができる。
【００２３】
本発明の脂質代謝改善剤は、食品に配合することができる。配合可能な食品に特に限定はないが、例えば、飴、グミ、チューインガム等の菓子類；クッキー、クラッカー、ビスケット、チョコレート、プリン、ゼリー、スナック菓子、米菓、饅頭、羊羹などの菓子類；アイスクリーム、アイスキャンディー、シャーベット、ジェラート等の冷菓；ドーナツ、ケーキ、食パン、フランスパン、クロワッサン等のベーカリー食品；うどん、そば、中華めん、きしめん等の麺類；白飯、赤飯、ピラフ等の米飯類；カレー、シチュー、ドレッシング等のソース類；ハム、ソーセージ、かまぼこ、ちくわ、魚肉ソーセージ等の練り製品；天ぷら、コロッケ、ハンバーグなどの各種惣菜類；ジュース、お茶等の飲料等が挙げられる。
【実施例】
【００２４】
以下本発明を具体的に説明する為に実施例を示すが、本発明は以下の実施例のみに限定されるものではない。
【００２５】
試験例１  ヒト腸内細菌叢を有する高脂肪食マウスにおける、血中中性脂肪及び肝臓中性脂肪の検討
（方法）ＳＤＧからエンテロラクトン、及びダイゼインからエクオールの代謝が可能なヒトから採取された糞便を-８０℃保管し、うち１gを嫌気条件下で嫌気性希釈液を滅菌ホモジナイザーを用いてホモジナイズした懸濁液を腸内細菌叢懸濁液として用意した。
無菌アイソレーター内で飼育することで無菌状態とした１２週齢のＢＡＬＢ／ｃＡマウス（メス、２０匹）に上記の懸濁液を０.５ml経口投与し、ヒト腸内細菌叢を定着させたヒト型腸内菌叢マウスを作製した。このヒト型腸内菌叢マウスをアイソレーター内でγ線滅菌（５０ｋＧｙ）したCMFペレットを食餌として２１日間予備飼育することで、これらのヒト型腸内菌叢マウスにリグナン類及びイソフラボン類を代謝可能な腸内菌叢を定着させた。
予備飼育後、γ線滅菌ＨＦＤ-６０高脂肪ペレットに食餌を変更した後に以下の４群に分割した。
（１）コントロール群：飲水に通常の蒸留水を使用
（２）イソフラボン投与群：飲水に大豆由来イソフラボン（ソヤフラボンＨＧ）０.０９％水溶液を使用
（３）リグナン投与群：飲水にアマニ由来リグナン（ニップンアマニリグナン）０.０９％水溶液を使用
（４）イソフラボン+リグナン投与群：飲水にイソフラボン及びリグナン（ソヤフラボンHG及びニップンアマニリグナン）をそれぞれ０.０９％含む水溶液を使用
HFD-６０高脂肪ペレット摂食期間中にこれらの水溶液を自由飲水させ、１９日間アイソレーター内で飼育した。１９日間の総飲水量から計算した投与量は、１日当たり平均で（２）イソフラボン投与群で２２．７ｍｇ（３）リグナン投与群で２３．６ｍｇ（４）イソフラボン+リグナン投与群で各成分それぞれ２０．１ｍｇであった。全てのマウスを解剖し、血液及び肝臓をサンプリング後速やかに-８０℃保管した。血中中性脂肪濃度は「トリグリセライド  Ｅ−テストワコー」（グリセロール-３-リン酸オキシダーゼ法に準拠）を用いて測定し、肝臓中性脂肪量は肝臓総脂質をBligh and Dyer法（非特許文献９）によって抽出後、TritonX-100：イソプロパノール＝１０：９０となる溶液に溶解し、「ト  
【００２６】
（結果）
肝臓中性脂肪の測定結果を下記表１に、血中中性脂肪の測定結果を下記表２に示す。
【００２７】
【表１】
2019094306.tif 000002
【００２８】
【表２】
2019094306.tif 000003
【００２９】
上記の通り、（２）イソフラボン投与群や（３）リグナン投与群では肝臓中性脂肪を低減する効果はあるものの、血中中性脂肪が増加してしまったのに対し、（４）イソフラボン+リグナン投与群において、肝臓中性脂肪を低減し、かつ血中中性脂肪を低減する効果を示した。