(57)【要約】      （修正有）【課題】ＰＤＥ５阻害用医薬組成物及びＰＤＥ５阻害用食品組成物の提供。【解決手段】本発明はピログルタミン酸を有効成分として含有してなるＰＤＥ５阻害用医薬組成物及びＰＤＥ５阻害用食品組成物に関する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ピログルタミン酸を有効成分として含有してなるＰＤＥ５インヒビター。
【請求項２】
ピログルタミン酸を有効成分として含有してなるＰＤＥ５阻害用医薬組成物。
【請求項３】
ピログルタミン酸を有効成分として含有してなるＰＤＥ５阻害用食品組成物。
【請求項４】
「ＥＤの予防又は改善のために用いられる」旨の表示を付した請求項３記載のＰＤＥ５阻害用食品組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ：Phosphodiesterase）５のインヒビターに関する。
【背景技術】
【０００２】
ピログルタミン酸は、グルタミン酸のカルボキシル基とアミノ基が分子内縮合反応を起こしてラクタムを形成したアミノ酸である。
【０００３】
従来、下記特許文献１に示すように、このピログルタミン酸に相当するピロリドンカルボン酸が、一酸化窒素（ＮＯ：Nitric Oxid）の合成酵素（ＮＯＳ：Nitric Oxid Syntase）の産生促進作用を有することが知られている。
【０００４】
すなわち、下記引用文献１においては、ピログルタミン酸（ピロリドンカルボン酸）を有効成分として含有してなるＮＯＳ産生促進剤が開示されており、当該剤は、ｉＮＯＳとｃＮＯＳの二種類のＮＯＳの内、ｃＮＯＳの産生のみを促進して適度にＮＯを産生することが開示されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２００２−２２０３３５号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
上記特許文献１においては、既述のように、ピログルタミン酸を有効成分とするＮＯＳ産生促進剤がｃＮＯＳの産生のみを促進することが開示されており、加えて「ｃＮＯＳが生成する場合のようにＮＯ量が少ない場合はサイクリックＧＭＰ（ｃＧＭＰ）を介し、生体に対する種々の保護的作用、すなわち、血管拡張作用、血行改善、・・・勃起（生殖）、・・・などを担うと考えられている。」ことが開示されている（特許文献１：段落０００３）。
【０００７】
しかしながら、これはｃＧＭＰの作用として考え得るものを例示しているだけであり、上記特許文献１は、ピログルタミン酸を有効成分として含有するＮＯＳ産生促進剤がｃＮＯＳの産生のみを促進させる作用、ひいては適度のＮＯを産生する作用を開示しているのみである。
【０００８】
現に上記特許文献１の実施例においては、ＮＯの生成量やｃＮＯＳの発現量、目の隈改善効果（血管拡張作用、血行改善）についてのみが開示されており、ＮＯの生成量がどのくらいでｃＧＭＰを介した生体保護作用が有効となるのか、その生体保護作用の内のどの作用が有効となるのか、特に男性機能障害の改善については何らの開示も示唆もなされていない。
【０００９】
本発明は、男性機能障害の改善に着目し、ＮＯＳの産生により結果的に生成され得るｃＧＭＰを、逆に分解してしまうＰＤＥ５の働きを阻害する作用に着目するものである。
【００１０】
ここで、ＮＯＳ産生促進とＰＤＥ５阻害の作用機序の違いについて、図１を用いて説明する。図１の〔１〕に示すように、上記特許文献１のＮＯＳ産生促進剤はＮＯＳたる「ｃＮＯＳ」の酵素活性又は発現量を促進し、図１の〔２〕に示すように、該活性化又は増量した「ｃＮＯＳ」によって「アルギニン」を基質としたＮＯの産生を促進せんとするものである。
【００１１】
そして、産生されたＮＯは、図１の〔３〕に示すように、「グアニル酸シクラーゼ」を活性化し、該活性化された「グアニル酸シクラーゼ」は、図１の〔４〕に示すように、「ＧＴＰ（グアノシン三リン酸）」を基質とした「ｃＧＭＰ」の産生を促進することが知られている。
【００１２】
他方、「ＰＤＥ５阻害作用」は、図１の〔Ａ〕に示すように、「ＰＤＥ５」の働き、つまり「ｃＧＭＰ」を「ＧＭＰ」に分解する働きを阻害して、平滑筋を有効に弛緩させて陰茎に血液流入を促し、最終的に男性機能障害を予防又は治療する。
【００１３】
上記のとおり、「ＮＯＳ産生促進作用」は、間接的に「ｃＧＭＰ」に作用するものであり、その過程で必要となる「アルギニン」や「ＧＴＰ」等の基質が足らない場合や、「ｃＧＭＰ」による平滑筋の弛緩が結果的に「ＰＤＥ５」の働きにより抑制される場合には、有効に平滑筋の弛緩がなされない。また、上記特許文献１が自ら開示するように、「ＮＯが多量に発生した場合には、活性酸素と反応して生体外来の微生物やガン細胞を攻撃する一方で、炎症や組織障害を起こすこと」が知られている。
これに対して、「ＰＤＥ５阻害作用」は直接的に「ｃＧＭＰ」に作用して有効に平滑筋の弛緩がなされるものである。
【００１４】
すなわち、「ＮＯＳ産生促進作用」は最終的に「ｃＧＭＰ」の産生促進を図るものであり、「ＰＤＥ５阻害作用」は最終的に「ｃＧＭＰ」の分解抑制を図るものであって、両者は相容れない作用であるものの、「ｃＧＭＰ」に関与する作用であることは共通する。
【００１５】
しかしながら、そもそも、ＰＤＥ５は陰茎海綿体や肺組織に偏在するものであり、ＰＤＥ５阻害作用は当然にＰＤＥ５が偏在する局所部分、特に陰茎海綿体に対して用いられるものであるのに対して、ＮＯＳ産生作用は身体全体に対する作用であり、両者は最終的な用途においては明確に区別がつくものである。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
本発明者は、鋭意研究の結果、ＰＤＥ５の働きを直接阻害する作用をピログルタミン酸が有していることを見出し、本発明を完成するに至ったものである。
【００１７】
すなわち、本発明は、ピログルタミン酸を有効成分として含有してなるＰＤＥ５インヒビター、ＰＤＥ５阻害用医薬組成物またはＰＤＥ５阻害用食品組成物に関する。
【発明の効果】
【００１８】
本発明のＰＤＥ５インヒビターは、ＰＤＥ５の働きによりｃＧＭＰが過度に分解される状態の予防および／または治療に貢献することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】ＮＯＳ産生促進作用とＰＤＥ５阻害作用との違いを示す説明図である。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
本発明は、ピログルタミン酸を有効成分として含有するＰＤＥ５インヒビターに関する。
【００２１】
ピログルタミン酸は、グルタミン酸のカルボキシル基とアミノ基が分子内縮合反応を起こしてラクタムを形成したアミノ酸であり、Ｄ体、Ｌ体およびラセミ体がある。好ましくは、Ｄ体のピログルタミン酸を単独でまたはＬ体のピログルタミン酸を単独で用いる。後記実施例にて示すように、Ｄ体のピログルタミン酸またはＬ体のピログルタミン酸を単独で用いる方が高効率でＰＤＥ５阻害を達成できるためである。
【００２２】
【化１】
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【００２３】
ＰＤＥ５は、既述の如く、ｃＧＭＰを加水分解する酵素であり、陰茎海綿体の血管平滑筋などに偏在する。ＰＤＥ５インヒビターは、ＰＤＥ５が偏在する部位においてｃＧＭＰの分解を抑え、当該局所の血流量を増大させ、男性機能障害（ＥＤ）の治療薬として有効であることが知られる。
【００２４】
また、本発明は、ピログルタミン酸を有効成分として含有する、ＰＤＥ５により仲介される状態の予防および／または治療のためのＰＤＥ５阻害用医薬組成物に関する。
【００２５】
ＰＤＥ５により仲介される状態としては、ＰＤＥ５が関与する状態であればよいが、特に男性機能障害があげられる。
【００２６】
本発明に係る医薬組成物は、医薬品又は医薬部外品として使用することができる。これら医薬品又は医薬部外品は、例えば、散剤、錠剤、コーティング錠、糖衣錠、硬若しくは軟ゼラチンカプセル剤、液剤、乳濁剤、又は懸濁剤の形態で経口的に投与できる。その他、例えば、坐剤の形態で直腸的に；例えば、注射剤又は輸液の形態で；例えば軟膏、クリーム剤、ゲル剤、又は液剤の形態で局部的又は経皮的に；例えば、点眼液及び洗眼液の形態で眼局所的に；非経口的に投与することもできる。好ましくは経口投与である。
【００２７】
本発明の医薬組成物を錠剤、顆粒剤，カプセル剤の形態で用いる場合には、打錠加工助剤、顆粒加工助剤、カプセル加工助剤などが用いられ得る。
【００２８】
前記の打錠加工助剤は、本発明の効果を損なわない限り、特に制限されず、グラニュー糖、上白糖、粉糖、還元麦芽糖水飴粉末、乳糖、ブドウ糖、プルラン、エリスリトール、デンプン、デキストリンなどあらゆる糖類、結晶セルロース、アラビアガム、おからなどの食物繊維類、トウモロコシタンパク、リン酸カルシウムなどの食品カルシウム、食品エキス類、食品乾燥粉末類、天然果汁末類、ショ糖脂肪酸エステルなどの界面活性剤、粉末油脂類、グリセリン、脂肪酸エステルなどの油脂類、又はチュワブル錠（食べる錠剤）に使用する各種甘味料、各種酸味料、各種香料などの味付け素材、コーティング素材としてのシェラック、トウモロコシタンパク、酵母細胞壁、デンプン、還元麦芽糖水飴、シュガーレス糖衣、マルチトール、グリセリン、ソルビトール、ＨＰＭＣ、ＨＰＣなどが例示される。
【００２９】
前記の顆粒加工助剤は、本発明の効果を損なわない限り、特に制限されず、グラニュー糖、上白糖、粉糖、還元麦芽糖水飴粉末、乳糖、ブドウ糖、プルラン、エリスリトール、デンプン、デキストリンなどあらゆる糖類、結晶セルロース、アラビアガムなどの食物繊維類、トウモロコシタンパク、リン酸カルシウムなどの食品カルシウム、食品エキス類、食品乾燥粉末類、天然果汁末類などが例示される。
【００３０】
前記のカプセル加工助剤は、本発明の効果を損なわない限り、特に制限されずに、ハードカプセルタイプのカプセルを調製するための、グラニュー糖、上白糖、粉糖、還元麦芽糖水飴粉末、乳糖、ブドウ糖、プルラン、エリスリトール、デンプン、デキストリンなどあらゆる糖類、結晶セルロース、アラビアガムなどの食物繊維類、トウモロコシタンパク、リン酸カルシウムなどの食品カルシウム、食品エキス類、食品乾燥粉末類、天然果汁末類などが、ソフトカプセルタイプのカプセルを調製するための、食品油脂、ミツロウ、グリセリン脂肪酸エステルなどの内容物粘度調整剤などが、それぞれ例示される。
【００３１】
錠剤は、通常、打錠機を使用して調製され得るが、錠剤に味付け素材をブレンドしてチュワブル錠にしたり、錠剤表面を、自動コーティング機、噴霧顆粒機、又は手掛けパンを用いてコーティングしたりしてもよい。顆粒剤の成形には、噴霧顆粒機タイプ、練りだし（押し出し）タイプ、又は高速撹拌顆粒機タイプの各種顆粒機が使用され得る。カプセル剤の調製には、カプセル助剤を混合してカプセル充填機（ハードタイプおよびソフトタイプ）が使用され得る。
【００３２】
また、本発明は、ピログルタミン酸を有効成分として含有してなる、ＰＤＥ５により仲介される状態の予防および／または改善のためのＰＤＥ５阻害用食品組成物に関する。
【００３３】
本発明のＰＤＥ５阻害用食品組成物は、食品、飲料または動物用飼料として、例えば、健康食品、機能性食品、特定保健用食品、美容食品、又は栄養補助食品（サプリメント）として使用することができる。これら食品及び動物用飼料は、例えば、お茶及びジュースなどの飲料水；並びにアイスクリーム、ゼリー、あめ、チョコレート、及びチューインガムなどの形態であってもよい。また、液剤、粉剤、粒剤、カプセル剤、又は錠剤の形態であってもよい。
【００３４】
なお、本発明のＰＤＥ５阻害用食品組成物は、特に男性機能障害が気になるかたにすすめられる。
【００３５】
本発明に係るＰＤＥ５インヒビター、ＰＤＥ５阻害用医薬組成物、ＰＤＥ５阻害用食品組成物の摂取量は、特に制限されないが、剤型、ならびに使用者若しくは患者などの摂取者又は摂取動物の年齢、体重及び症状に応じて適宜選択することができる。たとえば、有効成分量として１日あたり摂取者又は摂取動物の体重６０ｋｇにつき約０．０１ｍｇ〜約１００ｇ、好ましくは約０．２ｍｇ〜約５ｇを経口摂取することが、好ましい。
摂取期間は、摂取者又は摂取動物の年齢、症状に応じて任意に定めることができる。
【実施例】
【００３６】
次に、本発明を実施例によりさらに詳細に説明するが、本発明はその要旨を超えない限り以下の実施例に限定されるものではない。
【００３７】
ホスホジエステラーゼアッセイ
ピログルタミン酸のＰＤＥ５阻害活性を評価するため、蛍光偏光法によるＰＤＥ５阻害アッセイを実施した。アッセイには、ＩＭＡＰ（商標）アッセイキット（モレキュラーデバイス社製、カタログ番号Ｒ８１２７）を使用した。評価はすべて二重検定で実施した。ナノ粒子上に固定した金属配位錯体によるリン酸塩の高親和性結合にもとづいて、アッセイした。ＩＭＡＰ結合試薬は、ホスホジエステラーゼによりｃＧＭＰから生じたヌクレオチド一リン酸のリン酸基と複合体を形成する。蛍光偏光の検出により、結合すると、リン酸含有分子の分子運動速度に変化が生じ、結果として基質にラベルした蛍光の偏光が増大する。
【００３８】
（試薬の調製）
１）基質溶液
２．５ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、２ｍＭ  ＭｇＣｌ２、０．０１％  ＮａＮ３、０．０２％  ＢＳＡを含むＩＭＡＰ反応緩衝液中でフルオレセイン標識ｃＧＭＰ（１００ｎＭ）を調製した。
２）酵素溶液
バキュロウイルスを用いて昆虫細胞で発現・精製させたヒトＰＤＥ５触媒ドメインをＩＭＡＰ反応緩衝液中に調製した。
３）ＩＭＡＰ結合溶液
ＩＭＡＰ結合試薬をＩＭＡＰ反応緩衝液中で調製した。
【００３９】
（被験化合物溶液の調製）
被験化合物をジメチルスルホキシドに溶解した。
（試験方法及び測定方法）
１）９６ウェルブラックプレートに被験化合物溶液、基質溶液、酵素溶液を１ウェルあたり各１０μＬずつ添加した（ジメチルスルホキシドの最終濃度は３％）。
２）遮光かつ３７℃で４０分間インキュベートした。
３）ＩＭＡＰ結合溶液を１ウェルあたり６０μＬずつ添加した。
４）マルチラベルリーダー（パーキンエルマ一社製、Ｖｉｃｔｏｒ３）で各ウェルの４８５ｎｍ／５３０ｎｍ  ｅｘ／ｅｍで蛍光偏光を測定した。
５）被験化合物に代えてジメチルスルホキシドを添加し、他は前記と同じ操作を実施して、その結果をコントロールとした。
６）酵素溶液に代えてＩＭＡＰ反応緩衝液を添加し、他は前記と同じ操作を実施して、その結果をバックグラウンドとした。
【００４０】
（ＰＤＥ５阻害率の計算式）
ＰＤＥ５限害率（％）は下記の式により算出した。結果は二重検定の平均とした。
ＰＤＥ５阻害率（％）＝｛１−（被験化合物の蛍光偏光値−バックグラウンドの蛍光偏光値）／（コントロールの蛍光偏光値−バックグラウンドの蛍光偏光値）｝×１００
【００４１】
（ＩＣ５０値の計算）
統計解析ソフトＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍを用いてデータ解析した。５０％阻害濃度（ＩＣ５０）値は、０．００１〜１００ｍｇ／ｍＬの化合物濃度の存在下で酵素活性を測定し、その後、蛍光偏光値に対する化合物濃度をプロットした用量反応曲線から求めた。
【００４２】
（評価結果）
Ｌ−ピログルタミン酸のＩＣ５０は１００μｇ／ｍＬであった。
Ｄ−ピログルタミン酸のＩＣ５０は１１６μｇ／ｍＬであった。
Ｌ−ピログルタミン酸の２．０ｍｇ／ｍＬでの阻害率は７２．５％であった。
Ｄ−ピログルタミン酸の２．０ｍｇ／ｍＬでの限害率は７９．０％であった。
ＤＬ−ピログルタミン酸の２．０ｍｇ／ｍＬでの阻害率は６６．９％であった。
【００４３】
（アッセイの妥当性の確認）
ＰＤＥ５阻害剤として知られるシルデナフィルを参照被験化合物として、他は本願化合物と同じ操作を実施して得られたＩＣ５０値８．５９ｎＭは許容できる範囲であり、アッセイの妥当性が示された。
【００４４】
Ｌ−ピログルタミン酸、Ｄ−ピログルタミン酸およびＤＬ−ピログルタミン酸は、いずれも優れたＰＤＥ５阻害作用を有することがわかった。ただし、評価結果から、Ｌ−ピログルタミン酸またはＤ−ピログルタミン酸を単独で有効成分として含有するのが望ましいことがわかった。
【図１】
2019218315.tif 000003
【手続補正書】
【提出日】平成30年10月24日(2018.10.24)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ピログルタミン酸を有効成分として含有してなるＰＤＥ５阻害用医薬組成物（ただし、生体内一酸化窒素合成酵素産生促進用医薬組成物として使用するものを除く）。
【請求項２】
ピログルタミン酸を有効成分として含有してなるＰＤＥ５阻害用食品組成物（ただし、生体内一酸化窒素合成酵素産生促進用食品組成物として使用するものを除く）。
【請求項３】
「ＥＤの予防又は改善のために用いられる」旨の表示を付した請求項２記載のＰＤＥ５阻害用食品組成物。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００１】
本発明は、ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ：Phosphodiesterase）５阻害用の医薬組成物及び食品組成物に関する。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１７】
すなわち、本発明は、ピログルタミン酸を有効成分として含有してなるＰＤＥ５阻害用医薬組成物またはＰＤＥ５阻害用食品組成物に関する。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１８】
本発明のＰＤＥ５阻害用医薬組成物及びＰＤＥ５阻害用食品組成物は、ＰＤＥ５の働きによりｃＧＭＰが過度に分解される状態の予防および／または治療に貢献することができる。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２０】
本発明は、ピログルタミン酸を有効成分として含有するＰＤＥ５阻害用医薬組成物及びＰＤＥ５阻害用食品組成物に関する。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２３】
ＰＤＥ５は、既述の如く、ｃＧＭＰを加水分解する酵素であり、陰茎海綿体の血管平滑筋などに偏在する。ＰＤＥ５阻害用医薬組成物は、ＰＤＥ５が偏在する部位においてｃＧＭＰの分解を抑え、当該局所の血流量を増大させ、男性機能障害（ＥＤ）の治療薬として有効であることが知られる。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２４】
本発明は、ピログルタミン酸を有効成分として含有する、ＰＤＥ５により仲介される状態の予防および／または治療のためのＰＤＥ５阻害用医薬組成物に関する。
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３５】
本発明に係るＰＤＥ５阻害用医薬組成物、ＰＤＥ５阻害用食品組成物の摂取量は、特に制限されないが、剤型、ならびに使用者若しくは患者などの摂取者又は摂取動物の年齢、体重及び症状に応じて適宜選択することができる。たとえば、有効成分量として１日あたり摂取者又は摂取動物の体重６０ｋｇにつき約０．０１ｍｇ〜約１００ｇ、好ましくは約０．２ｍｇ〜約５ｇを経口摂取することが、好ましい。
摂取期間は、摂取者又は摂取動物の年齢、症状に応じて任意に定めることができる。