(57)【要約】【課題】  生体試料中の微量の糖異性体を迅速かつ簡便に分析し、疾患や細胞分化等のバイオマーカー探索に役立てるため、従来では困難であった糖異性体の質量分析法を可能にすることである。【解決手段】  有機ボロン酸が糖の１、２−ジオール又は、１、３−ジオールもしくは立体的に近いジオールと可逆的に結合する性質を利用して、糖と有機ボロン酸の会合体を形成し、その会合体のプリカーサーイオンのＭＳｎ（ｎ≧２）解析を行い、糖異性体に特異的なイオンを生成して構造情報を得ることができる。この手法により、糖結合位置、結合様式の情報を取得することを見出した。【選択図】  図１
2019002903.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
１、２−ジオールまたは、１、３−ジオールもしくは立体的に近いジオールと水溶液中で可逆的に結合する有機ボロン酸又はその誘導体を糖又は糖誘導体と結合させて、その会合体のＭＳｎ（ｎ≧２）解析を行い、糖異性体を識別することを特徴とする質量分析法。
【請求項２】
前記糖が複合糖質中の糖である請求項１に記載の質量分析法。
【請求項３】
前記複合糖質がオリゴ糖、糖ペプチド、または糖脂質である請求項２に記載の質量分析法。
【請求項４】
前記糖異性体が糖の鏡像異性体である請求項１に記載の質量分析法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、糖異性体の識別、同定の質量分析法に関する。詳細には、糖が結合した複合糖質（糖ペプチド、糖脂質を含む）を、有機ボロン酸又はその誘導体と中性から塩基性条件下で簡便かつ効率的に結合させる事により、目的の複合糖質−有機ボロン酸の会合体を質量分析計（特に、ＥＳＩ−ＭＳ）で検出し、ＭＳｎ解析を行う事により、有機ボロン酸を含む糖鎖異性体の特徴的なフラグメントを得る事によって、複合糖質上の糖の異性体を識別する方法、及びその方法により見出された有機ボロン酸に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、測定装置の高感度化並びに高性能化に伴い、生体中に微量に存在する複合糖質が発見されており、これらの複合糖質の機能の解明が盛んに行われている。しかしながら、糖には、立体異性体が数多く存在している為、糖構造を同定するには、糖の構成（グルコース、ガラクトース、マンノース等）とその結合部位（１、２、３、４、６位等）と結合様式（α、β）を明らかにする必要がある。従来法では、糖鎖構造を同定する場合、化合物を単離精製し、完全メチル化を行った後に完全分解や部分分解を行い、ＧＣ−ＭＳ分析を行う事により、その構成糖と結合部位を同定する。糖鎖の結合様式は、ＮＭＲで同定するという事が出来るが、従来の糖鎖構造の同定には、非常に煩雑な工程と試料の量がｍｇ以上、必要になる。試料の量が少ない場合には、糖鎖を蛍光化合物で標識化（２−アミノベンズアミド（ＡＢ）化、２−アミノピリジン（ＡＰ）化等）して、検出感度を上げて、構造が既知の糖鎖標識化合物のＨＰＬＣプロファイルや基質特異性の高い糖関連タンパク質（レクチン、糖加水分解酵素、糖転移酵素等）を利用した後のＨＰＬＣプロファイルを比較する事によって、糖鎖構造を同定する手法もあるが、当てはまる既知の糖鎖がない場合、利用できる糖関連タンパク質がない場合は、同定できない。近年、質量分析装置の発達により、複合糖質を高感度に検出でき、ＭＳ／ＭＳ、ＭＳｎ等測定により糖鎖の配列や結合部位等は識別できるようになってはいるが、同じ分子量を持つ糖鎖異性体の糖の構成、結合部位、結合様式を質量分析計で識別する事は困難である。
【０００３】
水溶液中において、可逆的に１、２−ジオール又は、１、３−ジオールもしくは立体的に近いジオールと結合する有機ボロン酸又はその誘導体の性質を利用してボロン酸アフィニティーカラムによる糖鎖の抽出や糖（糖鎖）認識センサーの開発、タンパク質の細胞内輸送の研究が行われている（非特許文献１、２、３）。
【０００４】
近年、糖鎖異性体の分析の手段として、イオンモビリティーマススペクトロメトリー（ＩＭＳ）が注目されている（非特許文献４，５）。ＩＭＳは、イオンの立体構造の解析に広く使われており、イオンが電場を帯びたガスセル内を移動する際に、イオンと中性ガス分子が衝突する事により決定される移動度に応じて分離する装置である。ＩＭＳによる糖異性体の分析は、糖の立体構造による分離が特徴である為、立体構造の差が小さい物では糖異性体の識別は難しい。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２０１５−０７８９７２
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Ｂｉｅ  Ｚ，  Ｃｈｅｎ  Ｙ，  ｅｔ  ａｌ．  Ａｎｇｅｗ．  Ｃｈｅｍ．  Ｉｎｔ．  Ｅｄ．  Ｅｎｇｌ，  ５４，  １０２１１−１０２１５，  ２０１５
【非特許文献２】Ｊａｍｅｓ  Ｔｏｎｙ  Ｄ，  Ｓａｎｄａｎａｙａｋｅ  ＫＲＡ  Ｓａｍａｎｋｕｍａｒａ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ．  Ａｍ．  Ｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．，  １１７，  ８９８２−８９８７，  １９９５
【非特許文献３】Ｅｌｌｉｓ  ＧＡ，  Ｐａｌｔｅ  ＭＪ，  Ｒａｉｎｅｓ  ＲＴ．  Ｊ．  Ａｍ．  Ｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．，  １３４，  ３６３１−３６３４，  ２０１２
【非特許文献４】Ｈｏｆｍａｎｎ  Ｊ，  Ｈａｈｍ  ＨＳ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｎａｔｕｒｅ，  ５２６，  ２４１−２４４，  ２０１５
【非特許文献５】Ｙａｎｇ  Ｈ，  Ｓｈｉ  Ｌ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｓｃｉ．  Ｒｅｐ．，  ６，  ２８０７９，  ２０１６
【非特許文献６】Ｋｕｒｏｇｏｃｈｉ  Ｍ，  Ｊｕｎｋｏ  Ａ．  Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，  １９，  ９９４４−９９６１，  ２０１４
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
生体試料中の微量の複合糖質の糖の糖異性体を質量分析法によって、迅速かつ簡便に分析する事ができれば、疾患や細胞分化等のバイオマーカー探索に役立つ事が出来る。
従って、本発明の目的は、複合糖質の質量分析法において糖異性体を簡便に同定する方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者は、糖ペプチドを質量分析計で分析する研究の中で、正電荷よりも負電荷でＭＳ／ＭＳ解析を行った場合、糖部分のフラグメントイオンが顕著に検出する事が出来、糖の構造解析が行える事を見出している。（特許文献１、非特許文献６）
【０００９】
これらの知見と有機ボロン酸が糖の１、２−ジオール又は、１、３−ジオールもしくは立体的に近いジオールと結合する性質を利用して、構成糖と結合部位と結合様式の異なる糖異性体の分析において有機ボロン酸−糖の会合体をタンデム質量分析法（ＭＳｎ法）に供する事により、糖異性体を簡便かつ高感度に識別できる事を見いだし、本発明を完成するに到った。
【００１０】
すなわち、本発明は、複合糖質と有機ボロン酸誘導体を会合させ、複合糖質の糖部分の異性体識別を質量分析法により分析する方法であって、当該有機ボロン酸誘導体を下記一般式（１）で示されるボロン酸もしくは、下記一般式（２）で示されるボリン酸と糖を反応させ、生成されたボロン酸エステル誘導体が負電荷を帯びており、その負イオンをタンデム質量分析法（ＭＳｎ法）に供する事により、糖異性体中の水酸基の立体構造を反映したボロン酸エステル誘導体のフラグメントイオンを簡便に抽出する特徴を有する分析手法に存ずる。（図１）
【化１】
2019002903.tif 000003
【化２】
2019002903.tif 000004
【発明の効果】
【００１１】
本発明の方法により従来、困難であった以下のことが可能となる。
１．生体試料からの複合糖質の糖構造の同定。
２．複合糖質の糖異性体の同定。
そして、これらはいずれも疾患関連マーカーの探索に新たな手法を提供するものである。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】有機ボロン酸と糖鎖の会合体を利用した糖異性体の分析の概略を示す図である。
【図２】イソマルトースと各種有機ボロン酸（ａ：３−ピリジンボロン酸、ｂ：１−ナフタレンボロン酸、ｃ：２−（４−モルフォリニルメチル）フェニルボロン酸、ｄ：２−（ヒドロキシメチル）フェニルボロン酸環状モノエステル）の混合液のインヒュージョン測定によるＮｅｇａｔｉｖｅ  ｍｏｄｅのＥＳＩ−ＭＳスペクトル。
【図３】イソマルトースと各種有機ボロン酸（ａ：３−ピリジンボロン酸、ｂ：１−ナフタレンボロン酸、ｃ：２−（４−モルフォリニルメチル）フェニルボロン酸、ｄ：２−（ヒドロキシメチル）フェニルボロン酸環状モノエステル）の会合体の構造（４、６位に結合したモデル）と分子量。
【図４】イソマルトースと各種有機ボロン酸（ａ：３−ピリジンボロン酸、ｂ：１−ナフタレンボロン酸、ｃ：２−（４−モルフォリニルメチル）フェニルボロン酸、ｄ：２−（ヒドロキシメチル）フェニルボロン酸環状モノエステル）の会合体のＭＳ／ＭＳスペクトル。
【図５】イソマルトースと各種有機ボロン酸（ａ：３−ピリジンボロン酸、ｂ：１−ナフタレンボロン酸、ｃ：２−（４−モルフォリニルメチル）フェニルボロン酸）の会合体のＭＳ３スペクトルと有機ボロン酸の構造と分子量。
【図６】イソマルトース、ゲンチオビオース、メリビオース、アロラクトースと１−ナフタレンボロン酸の会合体のＭＳ３スペクトル。
【図７】イソマルトース、ゲンチオビオース、メリビオース、アロラクトースのＭＳ／ＭＳスペクトルとフラグメントイオンの帰属。
【図８】マルトース、セロビオース、ラクトースと１−ナフタレンボロン酸の会合体のＭＳ３スペクトル。
【図９】マルトース、セロビオース、ラクトースのＭＳ／ＭＳスペクトルとフラグメントイオンの帰属。
【図１０】ニゲロース、ラミナリビオース、コジビオース、ソホロースと１−ナフタレンボロン酸の会合体のＭＳ３スペクトル。
【図１１】ニゲロース、ラミナリビオース、コジビオース、ソホロースのＭＳ／ＭＳスペクトルとフラグメントイオンの帰属。
【図１２】糖ペプチド（ａ：ＧＮ１ａ−ｐｅｐｔｉｄｅ，ｂ：ＧＮ１ｂ−ｐｅｐｔｉｄｅ）と２−（ヒドロキシメチル）フェニルボロン酸環状モノエステルの会合体の混合液のインヒュージョン測定によるＮｅｇａｔｉｖｅ  ｍｏｄｅのＥＳＩ−ＭＳスペクトルと糖ペプチドの構造と分子量。
【図１３】糖ペプチド（ａ：ＧＮ１ａ−ｐｅｐｔｉｄｅ，ｂ：ＧＮ１ｂ−ｐｅｐｔｉｄｅ）と２−（ヒドロキシメチル）フェニルボロン酸環状モノエステルの会合体のＭＳ／ＭＳスペクトル。
【図１４】糖ペプチド（ａ：ＧＮ１ａ−ｐｅｐｔｉｄｅ，ｂ：ＧＮ１ｂ−ｐｅｐｔｉｄｅ）と２−（ヒドロキシメチル）フェニルボロン酸環状モノエステルの会合体のＭＳ３スペクトル。
【図１５ａ】トレハロース（ａ）、コジビオース（ｂ）、ニゲロース（ｃ）、マルトース（ｄ）、イソマルトース（ｅ）と２−（ヒドロキシメチル）フェニルボロン酸環状モノエステルの会合体のＭＳ２スペクトル。
【図１５ｂ】ソホロース（ｆ）、ラミナリビオース（ｇ）、セロビオース（ｈ）、ゲンチオビオース（ｉ）と２−（ヒドロキシメチル）フェニルボロン酸環状モノエステルの会合体のＭＳ２スペクトル。
【図１６】各種有機ボロン酸と有機ボリン酸の化学構造と略称。
【図１７】フェニルボロン酸（Ｂ１２２）とイソマルトースの混合溶液のフローインジェクション測定によるＭＳスペクトル。
【図１８】有機ボロン酸（Ｂ１４７−２ＣＮ，Ｂ１７２）、有機ボリン酸（Ｂ１３３，Ｂ１５２）と各種糖鎖の見かけの結合定数（縦軸：見かけの結合定数（Ｍ−１））。
【図１９】各種配糖体（Ｔｒｏｘｅｒｕｔｉｎ，Ｄｉｏｓｍｉｎ，Ｈｅｓｐｅｒｉｄｉｎ，Ｎｅｏｈｅｓｐｅｒｉｄｉｎ，Ｎａｒｉｇｉｎ）の［Ｍ−Ｈ］−イオンのＭＳ／ＭＳスペクトル。
【図２０】各種配糖体（Ｔｒｏｘｅｒｕｔｉｎ，Ｄｉｏｓｍｉｎ，Ｈｅｓｐｅｒｉｄｉｎ，Ｎｅｏｈｅｓｐｅｒｉｄｉｎ，Ｎａｒｉｇｉｎ）とベンズオキサボロール（Ｂ１３３）の会合体イオンのＭＳ／ＭＳスペクトル。
【図２１】各種配糖体（Ｔｒｏｘｅｒｕｔｉｎ，Ｄｉｏｓｍｉｎ，Ｈｅｓｐｅｒｉｄｉｎ，Ｎｅｏｈｅｓｐｅｒｉｄｉｎ，Ｎａｒｉｇｉｎ）と１−ナフチルボロン酸（Ｂ１７２）の会合体イオンのＭＳ／ＭＳスペクトル。
【図２２】各種配糖体（Ｔｒｏｘｅｒｕｔｉｎ，Ｄｉｏｓｍｉｎ，Ｈｅｓｐｅｒｉｄｉｎ，Ｎｅｏｈｅｓｐｅｒｉｄｉｎ，Ｎａｒｉｇｉｎ）とベンズオキサボロール（Ｂ１３３）の会合体イオンのＭＳ３スペクトル。
【図２３】各種配糖体（Ｔｒｏｘｅｒｕｔｉｎ，Ｄｉｏｓｍｉｎ，Ｈｅｓｐｅｒｉｄｉｎ，Ｎｅｏｈｅｓｐｅｒｉｄｉｎ，Ｎａｒｉｇｉｎ）と１−ナフチルボロン酸（Ｂ１７２）の会合体イオンのＭＳ３スペクトル。
【図２４ａ】各種糖（Ｄ−Ｇｌｕｃｏｓｅ、Ｌ−Ｇｌｕｃｏｓｅ、Ｄ−Ｇａｌａｃｔｏｓｅ、Ｌ−Ｇａｌａｃｔｏｓｅ、Ｄ−Ｍａｎｎｏｓｅ、Ｌ−Ｍａｎｎｏｓｅ、Ｄ−Ｆｒｕｃｔｏｓｅ、Ｌ−Ｆｒｕｃｔｏｓｅ、Ｄ−Ａｌｌｏｓｅ、ｍｙｏ−Ｉｎｏｓｉｔｏｌ）とベンズオキサボロール（Ｂ１３３）の会合体イオンのＭＳ／ＭＳスペクトル。
【図２４ｂ】各種糖（Ｌ−Ｆｕｃｏｓｅ、Ｄ−Ｆｕｃｏｓｅ、Ｄ−Ｒｉｂｏｓｅ、Ｌ−Ｒｉｂｏｓｅ、Ｄ−Ｐｓｉｃｏｓｅ、Ｌ−Ｐｓｉｃｏｓｅ、Ｄ−Ｘｙｌｏｓｅ、Ｌ−Ｘｙｌｏｓｅ、Ｄ−Ａｒａｂｉｎｏｓｅ、Ｌ−Ａｒａｂｉｎｏｓｅ）とベンズオキサボロール（Ｂ１３３）の会合体イオンのＭＳ／ＭＳスペクトル。
【図２５ａ】各種糖（Ｄ−Ｇｌｕｃｏｓｅ、Ｌ−Ｇｌｕｃｏｓｅ、Ｄ−Ｇａｌａｃｔｏｓｅ、Ｌ−Ｇａｌａｃｔｏｓｅ、Ｄ−Ｍａｎｎｏｓｅ、Ｌ−Ｍａｎｎｏｓｅ、Ｄ−Ｆｒｕｃｔｏｓｅ、Ｌ−Ｆｒｕｃｔｏｓｅ、Ｄ−Ａｌｌｏｓｅ、ｍｙｏ−Ｉｎｏｓｉｔｏｌ）と２−シアノフェニルボロン酸（Ｂ１４７−２ＣＮ）の会合体イオンのＭＳ／ＭＳスペクトル。
【図２５ｂ】各種糖（Ｌ−Ｆｕｃｏｓｅ、Ｄ−Ｆｕｃｏｓｅ、Ｄ−Ｒｉｂｏｓｅ、Ｌ−Ｒｉｂｏｓｅ、Ｄ−Ｐｓｉｃｏｓｅ、Ｌ−Ｐｓｉｃｏｓｅ、Ｄ−Ｘｙｌｏｓｅ、Ｌ−Ｘｙｌｏｓｅ、Ｄ−Ａｒａｂｉｎｏｓｅ、Ｌ−Ａｒａｂｉｎｏｓｅ）と２−シアノフェニルボロン酸（Ｂ１４７−２ＣＮ）の会合体イオンのＭＳ／ＭＳスペクトル。
【図２６】各種糖（Ｄ−Ｇｌｕｃｏｓｅ、Ｌ−Ｇｌｕｃｏｓｅ、Ｄ−Ｇａｌａｃｔｏｓｅ、Ｌ−Ｇａｌａｃｔｏｓｅ、Ｄ−Ｍａｎｎｏｓｅ、Ｌ−Ｍａｎｎｏｓｅ、Ｄ−Ｆｒｕｃｔｏｓｅ、Ｌ−Ｆｒｕｃｔｏｓｅ、Ｌ−Ｆｕｃｏｓｅ、Ｄ−Ｆｕｃｏｓｅ、Ｄ−Ｒｉｂｏｓｅ、Ｌ−Ｒｉｂｏｓｅ、Ｄ−Ｐｓｉｃｏｓｅ、Ｌ−Ｐｓｉｃｏｓｅ、Ｄ−Ｘｙｌｏｓｅ、Ｌ−Ｘｙｌｏｓｅ、Ｄ−Ａｒａｂｉｎｏｓｅ、Ｌ−Ａｒａｂｉｎｏｓｅ）とキラル化合物である有機ボロン酸（Ｄ−ＢＰＡとＬ−ＢＰＡ）の会合体イオンのＭＳ／ＭＳスペクトル。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本発明は、１、２−ジオールまたは、１、３−ジオールもしくは立体的に近いジオールと水溶液中で可逆的に結合する有機ボロン酸又はその誘導体を糖と結合させて、その会合体のＭＳｎ（ｎ≧２）解析を行い、糖異性体を識別することを特徴とする質量分析法である。
前記糖は、複合糖質中の糖であることが好ましい。また、前記複合糖質は、オリゴ糖、糖ペプチド、または糖脂質であることが好ましい。
【００１４】
（１）  質量分析法
「質量分析法」とは、マトリクス支援レーザー脱離イオン化（ＭＡＬＤＩ）法、レーザー脱離（ＬＤ）法、高速電子衝撃（ＦＡＢ）法、エレクトロスプレーイオン化（ＥＳＩ）法、大気圧化学（ＡＰＣＩ）法などのイオン化方法によって分子を含む試料をイオン化し、次いで、飛行時間法（タイムオブフライト法、ＴＯＦ法）、二重収束法、四重極集束法等を用いて、イオン化した分子を質量／電荷比（ｍ／ｚ）に従って分離し検出する方法である。
【００１５】
本発明においてイオン化法は限定されないが、好ましくは、ＥＳＩ法である。
糖、糖鎖、糖タンパク質、糖ペプチド、糖脂質などの分子は、分子量及び組成が同一の構造異性体が存在するので、有機ボロン酸による反応後、会合体のプリカーサーイオンのＭＳｎ（ｎ＝２）解析を行い、糖異性体に特異的なイオンを生成して構造情報を得ることができる。有機ボロン酸で結合した分子をＭＳｎ（ｎ≧２）解析する場合、糖鎖構造を含むフラグメントイオンを選択する事によって、糖鎖構造情報を得る事が出来、糖鎖結合位置、結合様式の情報を取得することができる。
本発明の質量分析法は、以上に記載されたＭＳｎ（ｎ≧２）解析を含む。
【００１６】
（２）  有機ボロン酸又はその誘導体
本発明で用いる有機ボロン酸又はその誘導体は、中性の水溶液又は塩基性の水溶液、もしくはその水溶液と有機溶媒の混合液中で１、２−ジオール又は、１、３−ジオールもしくは立体的に近いジオールと可逆的に結合するボロン酸を持つ化合物である。立体的に近いジオールとは、ボロン酸が架橋できる位置にある２つの水酸基であり、Ｂ−Ｏ結合が約１．４Åなので、空間的な距離として理論計算上約２．４Åの位置に存在する２つの水酸基を示す。例えば、ニゲロース（Ｇｌｃα１→３Ｇｌｃ）は様々な配座を取りうるので、還元末端側のＧｌｃの２位の水酸基と非還元末端側のＧｌｃの２位の水酸基が理論計算上約２．４Å以内の距離に存在する可能性がある。また、還元末端側のＧｌｃの４位の水酸基と非還元末端側のＧｌｃの４位の水酸基も理論計算上約２．４Å以内の距離に存在する可能性がある。具体的には、フェニルボロン酸（ｐｈｅｎｙｌｂｏｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）、１−ナフタレンボロン酸（１−Ｎａｐｈｔａｌｅｎｅｂｏｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）、２−ナフタレンボロン酸（２−Ｎａｐｈｔａｌｅｎｅｂｏｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）、２−［（２，２，６，６−Ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌ−１−ｐｉｐｅｒｉｄｙｌ）ｍｅｔｈｙｌ］ｂｅｎｚｅｎｅｂｏｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ、２−（４−ｍｏｒｐｈｏｌｉｎｙｌｍｅｔｈｙｌ）ｐｈｅｎｙｌｂｏｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ、２−（ヒドロキシメチル）フェニルボロン酸環状モノエステル（２−（Ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌ）ｐｈｅｎｙｌｂｏｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ  ｃｙｃｌｉｃ  ｍｏｎｏｅｓｔｅｒ）、３−ピリジンボロン酸（３−Ｐｙｒｉｄｙｌｂｏｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）、５−ピリミジルボロン酸（５−Ｐｙｒｉｍｉｄｙｌｂｏｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）、２−フリルボロン酸（２−Ｆｕｒｙｌｂｏｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）、ベンゾフラン−２−ボロン酸（Ｂｅｎｚｏｆｕｒａｎ２−ｂｏｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）、ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−ボロン酸（Ｂｅｎｚｏ［ｂ］ｔｈｉｏｐｈｅｎｅ−２−ｂｏｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）、２−Ａｍｉｎｏｐｙｒｉｍｉｄｉｎｅ−５−ｂｏｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ、３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニルボロン酸（３，５−Ｂｉｓ（ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｙｌ）ｐｈｅｎｙｌｂｏｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）、１Ｈ−Ｐｙｒａｚｏｌｅ−４−ｂｏｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ、などが挙げられる。
【００１７】
（３）  糖又は糖誘導体
糖は、単糖及び糖鎖を示す。単糖は、ポリヒドロキシル基を持ち、複数の不斉炭素を持つ化合物である。糖鎖は、構成成分が単糖で、その単糖間の結合様式、結合位置が立体的に制御されている化合物である。また、糖誘導体は糖の一部が他の官能基や他の原子に置き換わった化合物を示す。例えば、糖誘導体はアルデヒド基が還元されたキシリトールやエリスリトールのような糖アルコールやピラノース環の酸素原子が窒素原子に置き換わった１−デオキシノジリマイシンのようなイミノ糖を示す。
【００１８】
（４）  糖異性体
単糖は、その性質より構造異性体と立体異性体が数多く存在し、それらをすべて糖異性体と記す。例えば、Ｃ６Ｈ１２Ｏ６の化学式で示される単糖には、水酸基の立体配座が異なるジアステレオマーであるグルコース（Ｇｌｃ）、マンノース（Ｍａｎ）、ガラクトース（Ｇａｌ）、アロース（Ａｌｌ）、アルトロース（Ａｌｔ）、イドース（Ｉｄｏｓ）、タロース（Ｔａｌ）という立体異性体と置換基の立体配置が異なるフルクトース（Ｆｒｕｃ）、プシコース（Ｐｓｉ）、ソルボース（Ｓｏｒ）、タガトース（Ｔａｇ）である構造異性体が存在する。また、それぞれの化合物は鏡像異性体（エナンチオマー）と１位のヘミアセタールのエピマーであるα、βのアノマーの立体異性体が存在する。糖鎖は、構成成分の単糖の違い以外にも結合様式、結合位置が異なる異性体が存在し、それらを糖異性体もしくは糖鎖異性体と記す。
【００１９】
例えば、グルコースが２つ、４位の位置に結合した糖鎖には、Ｇｌｃβ１→４Ｇｌｃで表されるセロビオースとＧｌｃα１→４Ｇｌｃで表されるマルトースがあるが、これは同じ分子量を持つ糖鎖異性体である。また、構成される単糖が、ガラクトースとグルコースで４位の位置にβ結合で結合したＧａｌβ１→４Ｇｌｃで表されるラクトースも同じ分子量を持つ糖鎖異性体である。本発明では、複合糖質（糖アミノ酸、糖ペプチド、糖脂質等）中の糖鎖も対象とする。生物に通常、存在している糖鎖の組成には、ヘキソース（Ｈｅｘ）の立体異性体のグルコース、マンノース、ガラクトースとヘキソサミン（ＨｅｘＮＡｃ）の立体異性体であるＮ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、Ｎ−アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）がある。また、デオキシヘキソース（ｄＨｅｘ）であるフコースやＮ−アセチルノイラミン酸（ＮｅｕＡｃ）、Ｎ−グリコリルノイラミン酸（ＮｅｕＧｃ）と言われるシアル酸やグルクロン酸（ＧｌｃＡ）、イズロン酸（Ｉｄｏ）等と言った糖も存在する。
【実施例】
【００２０】
以下に本発明の実施例を挙けるが、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。
＜実施例１＞
イソマルトースの有機ボロン酸の会合体のＭＳ解析
最初に、イソマルトース（Ｇｌｃα１→６Ｇｌｃ）水溶液（２００ｍＭ，  ５μｌ）と各種有機ボロン酸−メタノール溶液（３−ピリジンボロン酸、１−ナフタレンボロン酸、２−（４−モルフォリニルメチル）フェニルボロン酸、２−（ヒドロキシメチル）フェニルボロン酸環状モノエステル，５００ｍＭ，  １０μｌ）と炭酸水素アンモニウム水溶液（１０００ｍＭ，  １０μＬ）を混ぜ合わせ、メタノール（１４０μＬ）、純水（１３５μＬ）を加えて、撹拌して室温に３０分間静置する（最終濃度３．３ｍＭイソマルトースと１６．７ｍＭ有機ボロン酸のメタノール水溶液）。その溶液は、シリンジポンプ（５μＬ／ｍｉｎ）でインヒュージョン測定を行い、ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ製ＥＳＩ−ＭＳ装置（ＶｅｌｏｓＰｒｏ）にてｎｅｇａｔｉｖｅ  ｍｏｄｅでＭＳ測定を行った。
【００２１】
その結果、図２で示されるようにイソマルトース（Ｅｘａｃｔ  ｍａｓｓ：３４２．１２）の［Ｍ−Ｈ］−イオン：３４１．２とそれぞれの有機ボロン酸の［Ｍ−Ｈ］−イオン：１２２．３，１７１．３，２２０．２とＭ−イオン：１３３．３、そして図３に示している有機ボロン酸とイソマルトースの会合体のＭ−イオン：４４６．２，４９５．２，５４４．２，４５７．２が観測された。図３で示している構造は、有機ボラン酸が非還元末端側の糖の４、６位に結合している会合体の一部分の構造を表している物であり、図１に示されるように有機ボロン酸は糖の３、４位並び、２、３位、１、２位にも結合していると考えられる。ボリン酸である２−（ヒドロキシメチル）フェニルボロン酸環状モノエステル以外の有機ボロン酸は、会合体から脱水した形のイオンも検出されている。
【００２２】
＜実施例２＞
イソマルトースの有機ボロン酸の会合体のＭＳｎ解析
上記で得られた有機ボロン酸とイソマルトースの会合体のＭ−イオン：４４６．２，４９５．２，５４４．２，４５７．２をプリカーサーイオンとしてＭＳ／ＭＳ（すなわちＭＳ２）測定を行った。 衝突誘起解離エネルギー（Ｃｏｌｌｉｓｉｏｎ−Ｉｎｄｕｃｅｄ  Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ（ＣＩＤ））＝３０で測定すると、ボリン酸である２−（ヒドロキシメチル）フェニルボロン酸環状モノエステル以外の有機ボロン酸は、親イオン（プリカーサーイオン）から水分子が解離したイオンであるｍ／ｚ＝４２８．１，４７７．１，５２６．１が顕著に観測された。ボリン酸である２−（ヒドロキシメチル）フェニルボロン酸環状モノエステルの会合体は、フラグメントが検出されている。
【００２３】
次に、上記で得られた親イオン（プリカーサーイオン）から水分子が解離したイオンであるｍ／ｚ＝４２８．１，４７７．１，５２６．１をプリカーサーイオンとしてＭＳ３測定を行った。ＣＩＤ＝４０で測定を行った。
【００２４】
このＭＳ３測定は、様々なフラグメントが観測されており、それぞれのスペクトル比較した結果、有機ボロン酸の質量差を反映したフラグメントが出ている事が判明した。３−ピリジンボロン酸に対して、ｍ／ｚ＝４１０．１，３９２．１，３６８．１，３３８．２，３０８．１，２８４．１，２６６．０，２４８．０，２３０．０のフラグメントイオンであり、１−ナフタレンボロン酸に対して、ｍ／ｚ＝４５９．１，４４１．１，４１７．１，３８７．２，３５７．１，３３３．１，３１５．１，２９７．１，２７９．０であり、２−（４−モルフォリニルメチル）フェニルボロン酸に対して、ｍ／ｚ＝５０８．１，４９０．１，４６６．１，４３６．２，４０６．１，３８２．１，３６４．１，３４６．１，３２８．１のフラグメントイオンである。これらのフラグメントは、糖鎖のジオールに有機ボロン酸が結合した状態のイオンである。一方、有機ボロン酸の質量差を反映しないフラグメント（ｍ／ｚ＝１７９．０，２２１．０，３０５．１等）は、ジオール情報を反映しないフラグメントである。
よって、分子量の異なる有機ボロン酸を用いる事によって、簡便に糖鎖のジオール情報を持つフラグメントの同定が可能である。
【００２５】
＜実施例３＞
イソマルトース（Ｇｌｃα１→６Ｇｌｃ）、ゲンチオビオース（Ｇｌｃβ１→６Ｇｌｃ）、メリビオース（Ｇａｌα１→６Ｇｌｃ）、アロラクトース（Ｇａｌβ１→６Ｇｌｃ）の１−ナフタレンボロン酸の会合体のＭＳｎ解析の比較
次に、イソマルトース、ゲンチオビオース、メリビオース、アロラクトースを用いて、上記の手順に従って、１−ナフタレンボロン酸との会合体のＭＳｎ解析を行い、ＭＳ３スペクトルを取得し、比較した。
【００２６】
その結果、図６が示すようにそれぞれのスペクトルから同じｍ／ｚ＝４５９．１，４４１．１，４１７．１，３８７．２，３５７．１，３３３．１，３１５．１，２９７．１，２７９．０の有機ボロン酸を含むフラグメントが得られている事が分かった。イソマルトースとゲンチオビオースのスペクトルを比較すると、ｍ／ｚ＝４５９．１，４４１．１，３１５．１，２９７．１，２７９．０は、ほぼ同じような強度を示しているが、ｍ／ｚ＝４１７．１，３８７．２，３５７．１，３３３．１の強度はゲンチオビオースの方が低い。また、メリビオースとアロラクトースを比較すると、ｍ／ｚ＝４５９．１，２７９．０は、ほぼ同じような強度を示しているが、ｍ／ｚ＝４１７．１，３８７．２，３５７．１，３３３．１，３１５．１，２９７．１の強度はアロラクトースの方が高く、ｍ／ｚ＝４４１．１，３３３．１の強度はアロラクトースの方が低かった。さらに、非還元末端の構成糖の異なるイソマルトースとメリビオースを比較すると、ｍ／ｚ＝４５９．１，３１５．１，２９７．１，２７９．０は、ほぼ同じような強度を示しているが、ｍ／ｚ＝４４１．１，４１７．１，３８７．２，３５７．１の強度はメリビオースの方が高く、ｍ／ｚ＝３３３．１の強度はメリビオースの方が低かった。そして、非還元末端の構成糖の異なるゲンチオビオースとアロラクトースを比較すると、ｍ／ｚ＝４５９．１，３３３．１，２９７．１，２７９．０は、ほぼ同じような強度を示しているが、ｍ／ｚ＝４１７．１，３８７．２，３５７．１，３１５．１の強度はアロラクトースの方が高く、ｍ／ｚ＝４４１．１の強度はアロラクトースの方が低かった。つまり、有機ボロン酸の会合体のＭＳｎ解析によって、イソマルトース、ゲンチオビオース、メリビオース、アロラクトースの識別が可能になった。
【００２７】
＜比較例１＞
イソマルトース（Ｇｌｃα１→６Ｇｌｃ）、ゲンチオビオース（Ｇｌｃβ１→６Ｇｌｃ）、メリビオース（Ｇａｌα１→６Ｇｌｃ）、アロラクトース（Ｇａｌβ１→６Ｇｌｃ）のＭＳ２解析の比較
有機ボロン酸を混入せずに、糖鎖溶液を調製し、インヒュージョン測定で［Ｍ−Ｈ］−イオン：３４１．２をプリカーサーイオンとしてＣＩＤ＝３０でＭＳ／ＭＳ（すなわちＭＳ２）測定を行った。
【００２８】
その結果、図７が示すようにそれぞれのスペクトルから同じｍ／ｚ＝３２３．０（Ｂ２イオン），３１１．０，３０５．１，２８１．０（０，２Ａ２イオン），２５０．９（０，３Ａ２イオン），２２１．０（０，４Ａ２イオン），１７９．１（Ｃ１イオン），１６１．１（Ｂ１イオン），１４３．２のフラグメントが得られている事が分かった。また、これらのフラグメントの強度もイソマルトース、ゲンチオビオース、メリビオース、アロラクトースでほぼ差がない事が分かった。つまり、通常のＭＳｎ解析では、これらの糖鎖異性体の識別は不可能である。
【００２９】
＜実施例４＞
マルトース（Ｇｌｃα１→４Ｇｌｃ）、セロビオース（Ｇｌｃβ１→４Ｇｌｃ）、ラクトース（Ｇａｌβ１→４Ｇｌｃ）の１−ナフタレンボロン酸の会合体のＭＳｎ解析の比較
次に、マルトース、セロビオース、ラクトースを用いて、上記の手順に従って、１−ナフタレンボロン酸との会合体のＭＳｎ解析を行い、ＭＳ３スペクトルを取得し、比較した。
【００３０】
その結果、図８が示すようにそれぞれのスペクトルから同じｍ／ｚ＝４５９．１，４４１．１，４１７．１，３９９．１，３８１．２，３５７．１，３３３．１，３１５．１，２９７．０，２７９．０，２５５．１の有機ボロン酸を含むフラグメントが得られている事が分かった。マルトースとセロビオースのスペクトルを比較すると、ｍ／ｚ＝３１５．１，２９７．１，２７９．０，２５５．１は、ほぼ同じような強度を示しているが、ｍ／ｚ＝４５９．１，４４１．１，４１７．１，３９９．１，３８１．２，３５７．１，３３３．１の強度はセロビオースの方が低い。また、セロビオースとラクトースを比較すると、ｍ／ｚ＝４５９．１，４４１．１，４１７．１，３８１．２，３１５．１，２５５．１は、ほぼ同じような強度を示しているが、ｍ／ｚ＝３９９．１，３５７．１の強度はラクトースの方が高く、ｍ／ｚ＝３３３．１，２９７．０，２７９．０の強度はラクトースの方が低かった。つまり、マルトース、セロビオース、ラクトースは、有機ボロン酸との会合体のＭＳｎ解析によって、識別が可能になった。
【００３１】
＜比較例２＞
マルトース（Ｇｌｃα１→４Ｇｌｃ）、セロビオース（Ｇｌｃβ１→４Ｇｌｃ）、ラクトース（Ｇａｌβ１→４Ｇｌｃ）のＭＳ２解析の比較
有機ボロン酸を混入せずに、糖鎖溶液を調製し、インヒュージョン測定で［Ｍ−Ｈ］−イオン：３４１．２をプリカーサーイオンとしてＣＩＤ＝３０でＭＳ／ＭＳ（すなわちＭＳ２）測定を行った。
【００３２】
その結果、図９が示すようにそれぞれのスペクトルから同じｍ／ｚ＝３２３．０（Ｂ２イオン），３０５．０，２８１．０（０，４Ａ２イオン），２６３．０，２５１．０（１，４Ａ２イオン），２２１．０（２，４Ａ２イオン），１７９．１（Ｃ１イオン），１６１．１（Ｂ１イオン），１４３．０のフラグメントが得られている事が分かった。また、これらのフラグメントの強度もマルトース、セロビオース、ラクトースでほぼ差がない事が分かった。つまり、通常のＭＳｎ解析では、これらの糖鎖異性体の識別は不可能である。
【００３３】
＜実施例５＞
ニゲロース（Ｇｌｃα１→３Ｇｌｃ）、ラミナリビオース（Ｇｌｃβ１→３Ｇｌｃ）、コジビオース（Ｇｌｃα１→２Ｇｌｃ）、ソホロース（Ｇｌｃβ１→２Ｇｌｃ）の１−ナフタレンボロン酸の会合体のＭＳｎ解析の比較
次に、ニゲロース、ラミナリビオース、コジビオース、ソホロースを用いて、上記の手順に従って、１−ナフタレンボロン酸との会合体のＭＳｎ解析を行い、ＭＳ３スペクトルを取得し、比較した。
【００３４】
その結果、図１０が示すようにニゲロース、ラミナリビオースのスペクトルから同じｍ／ｚ＝４５９．１，４４１．１，３９９．１，３３３．１，３１５．１，２９７．１，２７９．０，２６７．１，２５５．１，２３７．１の有機ボロン酸を含むフラグメントが得られている事が分かった。また、コジビオース、ソホロースのスペクトルから同じｍ／ｚ＝４５９．１，４４１．１，４１７．１，３９９．１，３８１．１，３５７．１，３１５．１，２９７．１，２７９．０，２５５．１の有機ボロン酸を含むフラグメントが得られている事が分かった。ニゲロース、ラミナリビオースのスペクトルを比較すると、ｍ／ｚ＝２７９．０，２６７．１，２５５．１，２３７．１は、ほぼ同じような強度を示しているが、ｍ／ｚ＝４５９．１，４４１．１，３９９．１，３３３．１，２９７．１の強度はラミナリビオースの方が低い。また、コジビオースとソホロースを比較すると、ｍ／ｚ＝３４５９．１，３１５．１，２９７．１，２７９．０，２５５．１は、ほぼ同じような強度を示しているが、ｍ／ｚ＝４４１．１，４１７．１，３９９．１，３８１．１，３５７．１の強度はソホロースの方が低かった。つまり、ニゲロース、ラミナリビオース、コジビオース、ソホロースは、有機ボロン酸との会合体のＭＳｎ解析によって、識別が可能になった。
【００３５】
＜比較例３＞
ニゲロース（Ｇｌｃα１→３Ｇｌｃ）、ラミナリビオース（Ｇｌｃβ１→３Ｇｌｃ）、コジビオース（Ｇｌｃα１→２Ｇｌｃ）、ソホロース（Ｇｌｃβ１→２Ｇｌｃ）のＭＳ２解析の比較
有機ボロン酸を混入せずに、糖鎖溶液を調製し、インヒュージョン測定で［Ｍ−Ｈ］−イオン：３４１．２をプリカーサーイオンとしてＣＩＤ＝３０でＭＳ／ＭＳ（すなわちＭＳ２）測定を行った。
【００３６】
その結果、図１１が示すようにニゲロース、ラミナリビオースのスペクトルから同じｍ／ｚ＝３２３．０（Ｂ２イオン），２８１．０（０，４Ａ２イオン），２５１．０（１，４Ａ２イオン），２３３．０，２０９．０，１７９．１（Ｃ１イオン），１６１．１（Ｂ１イオン），１４３．１のフラグメントが得られている事が分かった。また、コジビオース、ソホロースのスペクトルから同じｍ／ｚ＝３２３．０（Ｂ２イオン），３１１．０，２８１．０（０，４Ａ２イオン），２６３．０，２２１．０（０，２Ａ２イオン），１７９．１（Ｃ１イオン），１６１．１（Ｂ１イオン）のフラグメントが得られている事が分かった。ニゲロース、ラミナリビオースのフラグメントの強度もほぼ差がなく、通常のＭＳｎ解析では、糖鎖異性体の識別は不可能である。しかしながら、コジビオース、ソホロースのフラグメントの強度は、ｍ／ｚ＝２６３．０，２２１．０において差があり、識別が可能であった。
【００３７】
＜実施例６＞
ＧＮ１ａ−ｐｅｐｔｉｄｅとＧＮ１ｂ−ｐｅｐｔｉｄｅの有機ボロン酸の会合体のＭＳｎ解析
最初に、ＧＮ１ａ−ｐｅｐｔｉｄｅ水溶液（Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ａｌａ−（Ｍａｎα（１→３）［ＧｌｃＮＡｃβ（１→２）Ｍａｎα（１→６）］Ｍａｎβ（１→４）ＧｌｃＮＡｃβ（１→４）ＧｌｃＮＡｃβ１→）Ａｓｎ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ）、又はＧＮ１ｂ−ｐｅｐｔｉｄｅ水溶液（Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ａｌａ−（ＧｌｃＮＡｃβ（１→２）Ｍａｎα（１→３）［Ｍａｎα（１→６）］Ｍａｎβ（１→４）ＧｌｃＮＡｃβ（１→４）ＧｌｃＮＡｃβ１→）Ａｓｎ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ）（３ｍＭ，  ５μｌ）と２−（ヒドロキシメチル）フェニルボロン酸環状モノエステル−メタノール溶液（５００ｍＭ，  １０μｌ）と炭酸水素アンモニウム水溶液（１０００ｍＭ，  １０μＬ）を混ぜ合わせ、メタノール（１４０μＬ）、純水（１３５μＬ）を加えて、撹拌して室温に３０分間静置する（最終濃度５０μＭ糖ペプチドと１６．７ｍＭ有機ボロン酸のメタノール水溶液）。その溶液は、シリンジポンプ（５μＬ／ｍｉｎ）でインヒュージョン測定を行い、ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ製ＥＳＩ−ＭＳ装置（ＶｅｌｏｓＰｒｏ）にてｎｅｇａｔｉｖｅ  ｍｏｄｅでＭＳ測定を行った。
【００３８】
その結果、図１２で示されるようにＧＮ１ａ−ｐｅｐｔｉｄｅもしくはＧＮ１ｂ−ｐｅｐｔｉｄｅ（Ｅｘａｃｔ  ｍａｓｓ：１７５４．７９）の［Ｍ−２Ｈ］２−イオン：８７６．７と有機ボロン酸とＧＮ１ａ−ｐｅｐｔｉｄｅもしくはＧＮ１ｂ−ｐｅｐｔｉｄｅの会合体の［Ｍ−Ｈ］２−イオン：９３４．６が観測された。上記で得られた有機ボロン酸と糖ペプチドの会合体の［Ｍ−Ｈ］２−イオン：９３４．６をプリカーサーイオンとしてＭＳ／ＭＳ（すなわちＭＳ２）測定を行った。ＣＩＤ＝３０で測定すると、図１３で示されるように糖鎖の２，４Ａ５断片に２−（ヒドロキシメチル）フェニルボロン酸環状モノエステルが会合したＭ−イオン：１０６７．４と糖鎖の０，２Ｘ１断片にペプチド鎖が付いた［Ｍ−Ｈ］−イオン：７４１．４と他のフラグメントイオンが観測された。次に、糖鎖の２，４Ａ５断片に２−（ヒドロキシメチル）フェニルボロン酸環状モノエステルが会合したＭ−イオン：１０６７．４をプリカーサーイオンとしてＨＣＤ＝２５でＭＳ３測定を行った。
【００３９】
図１４で示されるようにＧＮ１ａ−ｐｅｐｔｉｄｅとＧＮ１ｂ−ｐｅｐｔｉｄｅのＭＳ３スペクトルを比較すると、ほぼ同じｍ／ｚの様々なフラグメントが観測されているが、フラグメントの強度がｍ／ｚ＝９０５．４，４２４．３では、ＧＮ１ａ−ｐｅｐｔｉｄｅが高く、ｍ／ｚ＝８６４．３，７０２．３，３７８．１では、ＧＮ１ｂ−ｐｅｐｔｉｄｅが高かった。つまり、糖ペプチドと有機ボラン酸の会合体のＭＳｎ測定によって、糖ペプチド上の糖鎖異性体の識別は可能である。
【００４０】
＜実施例７＞
トレハロース（Ｇｌｃα１→α１Ｇｌｃ）、コジビオース（Ｇｌｃα１→２Ｇｌｃ）、ニゲロース（Ｇｌｃα１→３Ｇｌｃ）、マルトース（Ｇｌｃα１→４Ｇｌｃ）、イソマルトース（Ｇｌｃα１→６Ｇｌｃ）、ソホロース（Ｇｌｃβ１→２Ｇｌｃ）、ラミナリビオース（Ｇｌｃβ１→３Ｇｌｃ）、セロビオース（Ｇｌｃβ１→４Ｇｌｃ）、ゲンチオビオース（Ｇｌｃβ１→６Ｇｌｃ）の２−（ヒドロキシメチル）フェニルボロン酸環状モノエステルの会合体のＭＳ２解析の比較
【００４１】
トレハロース、コジビオース、ニゲロース、マルトース、イソマルトース、ソホロース、ラミナリビオース、セロビオース、ゲンチオビオースを用いて、上記の手順に従って、２−（ヒドロキシメチル）フェニルボロン酸環状モノエステルとの会合体のＭＳ２解析を行い、ＭＳ２スペクトルを取得し、比較した。
【００４２】
その結果、図１５ａ、図１５ｂが示すようにスペクトルからｍ／ｚ＝４３９．１，３９７．１，３７９．１，３６７．１，３４９．１，３３１．１，２９５．１，２７７．１，２６３．１，２５９．１，２３５．１の有機ボロン酸を含むフラグメントが得られている事が分かった。それぞれのフラグメントイオンの強度を比較する事によって、結合位置並びに結合様式の異なる糖鎖異性体の識別が可能であった。
【００４３】
＜実施例８＞
イソマルトース（Ｇｌｃα１→６Ｇｌｃ）と各種有機ボロン酸、有機ボリン酸の会合体のフローインジェクション測定を用いたＭＳ解析による見かけの結合定数の比較
【００４４】
イソマルトース（Ｇｌｃα１→６Ｇｌｃ）水溶液（２００ｍＭ，  ３μｌ）と各種有機ボロン酸−メタノール溶液（５００ｍＭ，図１６に各種ボロン酸の構造と略称を示す、１０μｌ）と炭酸水素アンモニウム水溶液（１０００ｍＭ，  １５μＬ）を混ぜ合わせ、メタノール（１４０μＬ）、純水（１３２μＬ）を加えて、撹拌して室温に３０分間静置する（最終濃度２ｍＭイソマルトースと１６．７ｍＭ有機ボロン酸の５０％メタノール水溶液＋５０ｍＭ炭酸水素アンモニウム水溶液）。５０％アセトニトリル＋２０ｍＭギ酸アンモニウム水溶液を流速５０μｌ／ｍｉｎでスプレーニードルに導入してＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ製ＥＳＩ−ＭＳ装置（ＶｅｌｏｓＰｒｏ）でｎｅｇａｔｉｖｅ  ｍｏｄｅでＭＳ測定を行っている所へ、各種混合溶液（５μｌ）をオートサンプラーでインジェクトして、ＭＳスペクトルを得た。図１７にフェニルボロン酸（Ｂ１２２）の例を示すが、ＭＳスペクトルから有機ボロン酸、有機ボリン酸のモノマーイオン（単量体）（［Ｍ−Ｈ］−イオン）、ダイマーイオン（二量体）（［２Ｍ−Ｈ２Ｏ−Ｈ］−イオン）、トリマーイオン（三量体）（［３Ｍ−２Ｈ２Ｏ−Ｈ］−イオン）、糖イオン（３４１．１）と会合体イオン（［Ｍ＋３４１．１−２Ｈ２Ｏ］−イオン）のＭＳ強度を計測して、以下の化学反応式（ａ， ｂ， ｃ）から有機ボロン酸、有機ボリン酸とイソマルトースの見かけの結合定数（Ｋａｐｐ＝［Ｍ＋３４１．１−２Ｈ２Ｏ］−／［３４１．１］−／［Ｍ］と有機ボロン酸の自己会合の見かけの結合定数（Ｋａｐｐ＝［２Ｍ−Ｈ２Ｏ−Ｈ］−＊［３Ｍ−２Ｈ２Ｏ−Ｈ］−／［Ｍ］＾５）並びにイオン化の平衡定数（Ｋ＝［Ｍ−Ｈ］−／［Ｍ］）を算出した。
【００４５】
ａ）  ［３４１．１］−＋［Ｍ］⇔［Ｍ＋３４１．１−２Ｈ２Ｏ］−
ｂ） ５［Ｍ］⇔［２Ｍ−Ｈ２Ｏ−Ｈ］−＋［３Ｍ−２Ｈ２Ｏ−Ｈ］−
ｃ） ［Ｍ］⇔［Ｍ−Ｈ］−
【００４６】
その結果、表１に示すように有機ボロン酸、有機ボリン酸とイソマルトースの見かけの結合定数が算出され、それぞれの化合物群の性質（糖との結合定数、有機ボロン酸の自己会合定数、イオン化定数）が迅速に比較出来るようになった。そして、図１６に示す化合物から電子求引基（置換基にニトリル基やニトロ基を持つ化合物）がある有機ボロン酸が強く糖鎖と結合する傾向がある事が分かった。また、強い電子求引効果がある有機ボロン酸は、糖鎖の結合能も強いが、ボロン酸同士で自己会合能も強くなる事が分かった。効果的に糖鎖分析に適している物は、糖鎖に対する結合能は高いが、自己会合能が低い物である。有機ボリン酸は、自己会合のイオンが検出されないので、この点では有機ボロン酸よりも糖鎖分析に適していると考えられる。有機ボリン酸も電子求引基の効果でベンズオキサボロール（Ｂ１３３）よりも５−フルオロベンズオキサボロール（Ｂ１５２）の方が糖鎖との結合能が強い事が示されている。この電子求引効果により、２−シアノフェニルボロン酸（Ｂ１４７−２ＣＮ）はフェニルボロン酸（Ｂ１２２）と比較すると、イソマルトースとの結合は約８００倍向上し、自己会合能は約７０００倍向上している。また、５−フルオロベンズオキサボロール（Ｂ１５２）はベンズオキサボロール（Ｂ１３３）と比較すると、イソマルトースとの結合能は約１０倍向上していた。
【表１】
2019002903.tif 000005
【００４７】
＜実施例９＞
トレハロース（Ｇｌｃα１→α１Ｇｌｃ）、コジビオース（Ｇｌｃα１→２Ｇｌｃ）、ニゲロース（Ｇｌｃα１→３Ｇｌｃ）、マルトース（Ｇｌｃα１→４Ｇｌｃ）、イソマルトース（Ｇｌｃα１→６Ｇｌｃ）、ソホロース（Ｇｌｃβ１→２Ｇｌｃ）、ラミナリビオース（Ｇｌｃβ１→３Ｇｌｃ）、セロビオース（Ｇｌｃβ１→４Ｇｌｃ）、ゲンチオビオース（Ｇｌｃβ１→６Ｇｌｃ）、ラクトース（Ｇａｌβ１→４Ｇｌｃ）、メリビオース（Ｇａｌα１→６Ｇｌｃ）、アロラクトース（Ｇａｌβ１→６Ｇｌｃ）と有機ボロン酸（Ｂ１４７−２ＣＮ，  Ｂ１７２）、有機ボリン酸（Ｂ１３３、Ｂ１５２）の会合体のフローインジェクション測定を用いたＭＳ解析による見かけの結合定数の比較
【００４８】
トレハロース（Ｇｌｃα１→α１Ｇｌｃ）、コジビオース（Ｇｌｃα１→２Ｇｌｃ）、ニゲロース（Ｇｌｃα１→３Ｇｌｃ）、マルトース（Ｇｌｃα１→４Ｇｌｃ）、イソマルトース（Ｇｌｃα１→６Ｇｌｃ）、ソホロース（Ｇｌｃβ１→２Ｇｌｃ）、ラミナリビオース（Ｇｌｃβ１→３Ｇｌｃ）、セロビオース（Ｇｌｃβ１→４Ｇｌｃ）、ゲンチオビオース（Ｇｌｃβ１→６Ｇｌｃ）、ラクトース（Ｇａｌβ１→４Ｇｌｃ）、メリビオース（Ｇａｌα１→６Ｇｌｃ）、アロラクトース（Ｇａｌβ１→６Ｇｌｃ）の各種水溶液（２００ｍＭ，  ３μｌ）と各種有機ボロン酸−メタノール溶液（５００ｍＭ、Ｂ１４７−２ＣＮ、Ｂ１７２、Ｂ１３３、Ｂ１５２、１０μｌ）と炭酸水素アンモニウム水溶液（１０００ｍＭ，  １５μＬ）を混ぜ合わせ、メタノール（１４０μＬ）、純水（１３２μＬ）を加えて、撹拌して室温に３０分間静置する（最終濃度２ｍＭ糖鎖と１６．７ｍＭ有機ボロン酸の５０％メタノール水溶液＋５０ｍＭ炭酸水素アンモニウム水溶液）。５０％アセトニトリル＋２０ｍＭギ酸アンモニウム水溶液を流速５０μｌ／ｍｉｎでスプレーニードルに導入してＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ製ＥＳＩ−ＭＳ装置（ＶｅｌｏｓＰｒｏ）でｎｅｇａｔｉｖｅ  ｍｏｄｅでＭＳ測定を行っている所へ、各種混合溶液（５μｌ）をオートサンプラーでインジェクトして、ＭＳスペクトルを得た。次に、ＭＳスペクトルからその有機ボロン酸、有機ボリン酸のモノマーイオン（［Ｍ−Ｈ］−イオン）、ダイマーイオン（［２Ｍ−Ｈ２Ｏ−Ｈ］−イオン）、トリマーイオン（［３Ｍ−２Ｈ２Ｏ−Ｈ］−イオン）、糖イオン（３４１．１）と会合体イオン（［Ｍ＋３４１．１−２Ｈ２Ｏ］−イオン）のＭＳ強度を算出して、有機ボロン酸、有機ボリン酸と各種糖鎖の見かけの結合定数を導きだし、棒グラフを用いて各種糖鎖間の結合能を比較した。
【００４９】
その結果、図１８に示すように糖鎖の種類によって、結合定数が異なっている事が分かった。基本的に、有機ボロン酸と糖鎖の結合の強弱は、糖鎖の種類に依存しており、１−ナフチルボロン酸（Ｂ１７２）はメリビオース（Ｇａｌα１→６Ｇｌｃ）と強い結合能を示し、有機ボリン酸（Ｂ１３３、Ｂ１５２）はメリビオース（Ｇａｌα１→６Ｇｌｃ）とニゲロース（Ｇｌｃα１→３Ｇｌｃ）に対して強い結合能を示し、５−フルオロベンズオキサボロール（Ｂ１５２）はラミナリビオース（Ｇｌｃβ１→３Ｇｌｃ）の結合能も高い事が分かった。また、糖鎖とより強い結合能を示す２−シアノフェニルボロン酸（Ｂ１４７−２ＣＮ）は１−ナフチルボロン酸（Ｂ１７２）と比較すると他の糖鎖の結合能に比べてイソマルトース（Ｇｌｃα１→６Ｇｌｃ）と強い結合能を示す。
【００５０】
＜実施例１０＞
各種配糖体（Ｔｒｏｘｅｒｕｔｉｎ，Ｄｉｏｓｍｉｎ，Ｈｅｓｐｅｒｉｄｉｎ，Ｎｅｏｈｅｓｐｅｒｉｄｉｎ，Ｎａｒｉｇｉｎ）と有機ボロン酸（Ｂ１３３、Ｂ１７２）の会合体のフローインジェクション測定を用いたＭＳ解析
【００５１】
各種配糖体（Ｔｒｏｘｅｒｕｔｉｎ，Ｄｉｏｓｍｉｎ，Ｈｅｓｐｅｒｉｄｉｎ，Ｎｅｏｈｅｓｐｅｒｉｄｉｎ，Ｎａｒｉｇｉｎ）の水溶液（１００ｍＭ，  ３μｌ）と各種有機ボロン酸−メタノール溶液（５００ｍＭ、ベンズオキサボロール（Ｂ１３３）、１−ナフチルボロン酸（Ｂ１７２）、１０μｌ）と炭酸水素アンモニウム水溶液（１０００ｍＭ，  １５μＬ）を混ぜ合わせ、メタノール（１４０μＬ）、純水（１３２μＬ）を加えて、撹拌して室温に３０分間静置する（最終濃度１ｍＭ配糖体と１６．７ｍＭ有機ボロン酸の５０％メタノール水溶液＋５０ｍＭ炭酸水素アンモニウム水溶液）。５０％アセトニトリル＋２０ｍＭギ酸アンモニウム水溶液を流速５０μｌ／ｍｉｎでスプレーニードルに導入しているＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ製ＥＳＩ−ＭＳ装置（ＶｅｌｏｓＰｒｏ）を用いて、フローインジェクション測定でＭＳ分析を行った。
【００５２】
各種配糖体のＭＳ／ＭＳスペクトル（図１９）は、糖鎖部分のフラグメントイオンは検出されずに、アグリコン部分のフラグメントイオンが強く検出される。その為、通常のＭＳ／ＭＳ分析では配糖体の糖鎖部分の情報が抜き出す事が出来ない。
【００５３】
しかしながら、各種配糖体と有機ボロン酸（Ｂ１３３、Ｂ１７２）の会合体のＭＳ／ＭＳスペクトル（図２０、図２１）では、アグリコン部分のフラグメントイオンも検出されるが、糖鎖部分と有機ボロン酸（Ｂ１３３、Ｂ１７２）の会合体のフラグメントイオン（図１９に対して４２３．１、図２０に対して４４３．１）が検出されるようになった。Ｔｒｏｘｅｒｕｔｉｎ，Ｄｉｏｓｍｉｎ，Ｈｅｓｐｅｒｉｄｉｎは、糖鎖部分が同じであるβ−ルチノシド（Ｒｈａα１−６Ｇｌｃβ１−）を持ち、Ｎｅｏｈｅｓｐｅｒｉｄｉｎ，Ｎａｒｉｇｉｎは糖鎖部分が同じであるβ−ネオヘスペリドシド（Ｒｈａα１−２Ｇｌｃβ１−）を持つ配糖体である。β−ルチノシドとβ−ネオヘスペリドシドは、糖鎖の構成成分はラムノース（Ｒｈａ）とグルコース（Ｇｌｃ）と同じである為、分子量は同じであるが結合位置が異なる糖鎖異性体である。その為、Ｔｒｏｘｅｒｕｔｉｎ，Ｄｉｏｓｍｉｎ，Ｈｅｓｐｅｒｉｄｉｎ，Ｎｅｏｈｅｓｐｅｒｉｄｉｎ，Ｎａｒｉｇｉｎの有機ボロン酸の会合体のＭＳ／ＭＳ分析では、糖鎖部分と有機ボロン酸の会合体のフラグメントイオンはすべて同じ分子量のイオンとして観測される。
【００５４】
次に、得られた糖鎖部分のフラグメントと有機ボロン酸（Ｂ１３３、Ｂ１７２）の会合体イオン（図２０に対して４２３．１、図２１に対して４４３．１）を選択して、ＭＳ３分析を行った。
【００５５】
その結果、図２２、図２３に示すようにβ−ルチノシドを持つＴｒｏｘｅｒｕｔｉｎ，Ｄｉｏｓｍｉｎ，Ｈｅｓｐｅｒｉｄｉｎとβ−ネオヘスペリドシドを持つＮｅｏｈｅｓｐｅｒｉｄｉｎ，Ｎａｒｉｇｉｎの糖鎖フラグメントイオンプロファイル（主要なイオン（ｍ／ｚ）：Ｂ１３３に対して３６３，３５１，３２１，２７９，２６１，２１７，２０５，１７５、Ｂ１７２に対して３７１，３４１，２９９，２８１，２３７）は、糖鎖構造毎に区分できる。また、図２０、図２１、図２２、図２３の化学式に示されているように１−ナフチルボロン酸（Ｂ１７２）は、糖鎖の水酸基３つと結合してボランアニオンになり、ベンズオキサボロール（Ｂ１３３）は、糖鎖の水酸基２つと結合してボランアニオンになる為有機ボロン酸の結合箇所、パターンが異なってくる。その為、検出される糖鎖フラグメントイオンのプロファイル（個数、強度）も異なっている。
よって、有機ボロン酸を用いた糖鎖解析によって、異なるアグリコン部位を持つ配糖体の糖鎖構造を抽出する事が出来、その異性体構造を識別できる事が分かった。
【００５６】
＜実施例１１＞
Ｄ−グルコース（Ｄ−Ｇｌｕｃｏｓｅ）、Ｌ−グルコース（Ｌ−Ｇｌｕｃｏｓｅ）、Ｄ−ガラクトース（Ｄ−Ｇａｌａｃｔｏｓｅ）、Ｌ−ガラクトース（Ｌ−Ｇａｌａｃｔｏｓｅ）、Ｄ−マンノース（Ｄ−Ｍａｎｎｏｓｅ）、Ｌ−マンノース（Ｌ−Ｍａｎｎｏｓｅ）、Ｄ−フルクトース（Ｄ−Ｆｒｕｃｔｏｓｅ）、Ｌ−フルクトース（Ｌ−Ｆｒｕｃｔｏｓｅ）、Ｌ−フコース（Ｌ−Ｆｕｃｏｓｅ）、Ｄ−アロース（Ｄ−Ａｌｌｏｓｅ）、ｍｙｏ−イノシトール（ｍｙｏ−Ｉｎｏｓｉｔｏｌ）、Ｄ−フコース（Ｄ−Ｆｕｃｏｓｅ）、Ｄ−リボース（Ｄ−Ｒｉｂｏｓｅ）、Ｌ−リボース（Ｌ−Ｒｉｂｏｓｅ）、Ｄ−プシコース（Ｄ−Ｐｓｉｃｏｓｅ）、Ｌ−プシコース（Ｌ−Ｐｓｉｃｏｓｅ）、Ｄ−キシロース（Ｄ−Ｘｙｌｏｓｅ）、Ｌ−キシロース（Ｌ−Ｘｙｌｏｓｅ）、Ｄ−アラビノース（Ｄ−Ａｒａｂｉｎｏｓｅ）、Ｌ−アラビノース（Ｌ−Ａｒａｂｉｎｏｓｅ）と有機ボロン酸（Ｂ１４７−２ＣＮ）、有機ボリン酸（Ｂ１３３）の会合体のフローインジェクション測定を用いたＭＳ解析の比較
【００５７】
各種糖（Ｄ−Ｇｌｕｃｏｓｅ、Ｌ−Ｇｌｕｃｏｓｅ、Ｄ−Ｇａｌａｃｔｏｓｅ、Ｌ−Ｇａｌａｃｔｏｓｅ、Ｄ−Ｍａｎｎｏｓｅ、Ｌ−Ｍａｎｎｏｓｅ、Ｄ−Ｆｒｕｃｔｏｓｅ、Ｌ−Ｆｒｕｃｔｏｓｅ、Ｌ−Ｆｕｃｏｓｅ、Ｄ−Ａｌｌｏｓｅ、ｍｙｏ−Ｉｎｏｓｉｔｏｌ、Ｄ−Ｆｕｃｏｓｅ、Ｄ−Ｒｉｂｏｓｅ、Ｌ−Ｒｉｂｏｓｅ、Ｄ−Ｐｓｉｃｏｓｅ、Ｌ−Ｐｓｉｃｏｓｅ、Ｄ−Ｘｙｌｏｓｅ、Ｌ−Ｘｙｌｏｓｅ、Ｄ−Ａｒａｂｉｎｏｓｅ、Ｌ−Ａｒａｂｉｎｏｓｅ）の水溶液（２００ｍＭ，  ３μｌ）と各種有機ボロン酸−メタノール溶液（５００ｍＭ、ベンズオキサボロール（Ｂ１３３）、２−シアノフェニルボロン酸（Ｂ１４７−２ＣＮ）、１０μｌ）と炭酸水素アンモニウム水溶液（１０００ｍＭ，  １５μＬ）を混ぜ合わせ、メタノール（１４０μＬ）、純水（１３２μＬ）を加えて、撹拌して室温に３０分間静置する（最終濃度２ｍＭ単糖と１６．７ｍＭ有機ボロン酸の５０％メタノール水溶液＋５０ｍＭ炭酸水素アンモニウム水溶液）。５０％アセトニトリル＋２０ｍＭギ酸アンモニウム水溶液を流速５０μｌ／ｍｉｎでスプレーニードルに導入しているＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ製ＥＳＩ−ＭＳ装置（ＶｅｌｏｓＰｒｏ）を用いて、フローインジェクション測定でＭＳ分析を行った。
【００５８】
その結果、図２４ａ、図２４ｂ、図２５ａ、図２５ｂに示すように有機ボリン酸（Ｂ１３３）、有機ボロン酸（Ｂ１４７−２ＣＮ）の両方の会合体のＭＳ／ＭＳスペクトルから同じ分子量を示す糖異性体（Ｄ／Ｌ−Ｇｌｕｃｏｓｅ、Ｄ／Ｌ−Ｇａｌａｃｔｏｓｅ、Ｄ／Ｌ−Ｍａｎｎｏｓｅ、Ｄ／Ｌ−Ｆｒｕｃｔｏｓｅ、Ｄ−Ａｌｌｏｓｅ、ｍｙｏ−Ｉｎｏｓｉｔｏｌ、Ｄ／Ｌ−Ｐｓｉｃｏｓｅ）はフラグメントイオンのプロファイル（主要なイオン（ｍ／ｚ）：Ｂ１３３に対して２７７，２６５，２５９，２４７，２３５，２１７，２０５，１７５、Ｂ１４７−２ＣＮに対して２７２，２６０，２５４，２４２，２３０，２１８，２００）が異なっている事が分かった。これによって、水酸基の立体情報が異なる糖異性体もこの手法で識別可能である事が示唆された。しかしながら、鏡像異性体であるＤ−ＧｌｕｃｏｓｅとＬ−Ｇｌｕｃｏｓｅ、Ｄ−ＧａｌａｃｔｏｓｅとＬ−Ｇａｌａｃｔｏｓｅ、Ｄ−ＭａｎｎｏｓｅとＬ−Ｍａｎｎｏｓｅ、Ｄ−ＦｒｕｃｔｏｓｅとＬ−Ｆｒｕｃｔｏｓｅ、Ｄ−ＰｓｉｃｏｓｅとＬ−Ｐｓｉｃｏｓｅ、もしくはＤ−ＲｉｂｏｓｅとＬ−Ｒｉｂｏｓｅ、Ｄ−ＸｙｌｏｓｅとＬ−Ｘｙｌｏｓｅ、Ｄ−ＡｒａｂｉｎｏｓｅとＬ−Ａｒａｂｉｎｏｓｅのフラグメントイオンのプロファイルは同じであった。これは、鏡像異性体であるＤ体とＬ体は水酸基の立体的な配置情報が同じである為、今回、使用したアキラルな化合物である有機ボロン酸との結合において差が出なかったと推察される。また、図２４ａ、図２４ｂ、図２５ａ、図２５ｂの化学式に示されているように２−シアノフェニルボロン酸は、糖鎖の水酸基３つと結合してボランアニオンになり、ベンズオキサボロール（Ｂ１３３）は、糖鎖の水酸基２つと結合してボランアニオンになる為有機ボロン酸の結合箇所、パターンが異なってくる事が分かった。
【００５９】
＜実施例１２＞
Ｄ−グルコース（Ｄ−Ｇｌｕｃｏｓｅ）、Ｌ−グルコース（Ｌ−Ｇｌｕｃｏｓｅ）、Ｄ−ガラクトース（Ｄ−Ｇａｌａｃｔｏｓｅ）、Ｌ−ガラクトース（Ｌ−Ｇａｌａｃｔｏｓｅ）、Ｄ−マンノース（Ｄ−Ｍａｎｎｏｓｅ）、Ｌ−マンノース（Ｌ−Ｍａｎｎｏｓｅ）、Ｄ−フルクトース（Ｄ−Ｆｒｕｃｔｏｓｅ）、Ｌ−フルクトース（Ｌ−Ｆｒｕｃｔｏｓｅ）、Ｌ−フコース（Ｌ−Ｆｕｃｏｓｅ）、Ｄ−フコース（Ｄ−Ｆｕｃｏｓｅ）、Ｄ−リボース（Ｄ−Ｒｉｂｏｓｅ）、Ｌ−リボース（Ｌ−Ｒｉｂｏｓｅ）、Ｄ−プシコース（Ｄ−Ｐｓｉｃｏｓｅ）、Ｌ−プシコース（Ｌ−Ｐｓｉｃｏｓｅ）、Ｄ−キシロース（Ｄ−Ｘｙｌｏｓｅ）、Ｌ−キシロース（Ｌ−Ｘｙｌｏｓｅ）、Ｄ−アラビノース（Ｄ−Ａｒａｂｉｎｏｓｅ）、Ｌ−アラビノース（Ｌ−Ａｒａｂｉｎｏｓｅ）とキラル化合物である有機ボロン酸（Ｄ−ＢＰＡとＬ−ＢＰＡ）の会合体のフローインジェクション測定を用いたＭＳ解析の比較
【００６０】
各種糖（Ｄ−Ｇｌｕｃｏｓｅ、Ｌ−Ｇｌｕｃｏｓｅ、Ｄ−Ｇａｌａｃｔｏｓｅ、Ｌ−Ｇａｌａｃｔｏｓｅ、Ｄ−Ｍａｎｎｏｓｅ、Ｌ−Ｍａｎｎｏｓｅ、Ｄ−Ｆｒｕｃｔｏｓｅ、Ｌ−Ｆｒｕｃｔｏｓｅ、Ｌ−Ｆｕｃｏｓｅ、Ｄ−Ｆｕｃｏｓｅ、Ｄ−Ｒｉｂｏｓｅ、Ｌ−Ｒｉｂｏｓｅ、Ｄ−Ｐｓｉｃｏｓｅ、Ｌ−Ｐｓｉｃｏｓｅ、Ｄ−Ｘｙｌｏｓｅ、Ｌ−Ｘｙｌｏｓｅ、Ｄ−Ａｒａｂｉｎｏｓｅ、Ｌ−Ａｒａｂｉｎｏｓｅ）の水溶液（２００ｍＭ，  ３μｌ）と４−Ｂｏｒｏｎｏ−Ｄ−ｐｈｅｎｙｌａｌａｎｉｎｅ（Ｄ−ＢＰＡ）もしくは４−Ｂｏｒｏｎｏ−Ｌ−ｐｈｅｎｙｌａｌａｎｉｎｅ（Ｌ−ＢＰＡ）のメタノール溶液（５００ｍＭ、１０μｌ）と炭酸水素アンモニウム水溶液（１０００ｍＭ，  １５μＬ）を混ぜ合わせ、メタノール（１４０μＬ）、純水（１３２μＬ）を加えて、撹拌して室温に３０分間静置する（最終濃度２ｍＭ単糖と１６．７ｍＭの５０％メタノール水溶液＋５０ｍＭ炭酸水素アンモニウム水溶液）。５０％アセトニトリル＋２０ｍＭギ酸アンモニウム水溶液を流速５０μｌ／ｍｉｎでスプレーニードルに導入しているＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ製ＥＳＩ−ＭＳ装置（ＶｅｌｏｓＰｒｏ）を用いて、フローインジェクション測定でＭＳ分析を行った。
【００６１】
その結果、図２６に示すようにキラル化合物であるＤ−ＢＰＡもしくはＬ−ＢＰＡを用いる事で、アキラルなＢ１３３やＢ１４７で識別できなかった糖の鏡像異性体（Ｄ／Ｌ−Ｇｌｕｃｏｓｅ、Ｄ／Ｌ−Ｇａｌａｃｔｏｓｅ、Ｄ／Ｌ−Ｍａｎｎｏｓｅ、Ｄ／Ｌ−Ｆｒｕｃｔｏｓｅ、Ｄ／Ｌ−Ｐｓｉｃｏｓｅ、Ｄ／Ｌ−Ｆｕｃｏｓｅ、Ｄ／Ｌ−Ｒｉｂｏｓｅ、Ｄ／Ｌ−Ｘｙｌｏｓｅ、Ｄ／Ｌ−Ａｒａｂｉｎｏｓｅ）がフラグメントイオンのプロファイル（主要なイオン（ｍ／ｚ）：２５０，２８０，２９０，３０８，３２２，３３４，３５２）を比較する事によって、識別が可能になった。これによって、水酸基の立体、位置の配座情報が同じであるが、光学活性が異なる鏡像異性体もキラル化合物である有機ボロン酸を使用した手法で識別可能である事が示唆された。
【産業上の利用可能性】
【００６２】
本発明によって、従来では困難であった糖異性体の識別がより簡便になり、生体試料に存在する微小な新規糖の同定などに役立つ事が予想される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５ａ】
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【図１５ｂ】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４ａ】
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【図２４ｂ】
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【図２５ａ】
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【図２５ｂ】
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【図２６】
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