(57)【要約】      （修正有）【課題】試薬の劣化が少ないエンドトキシン検出キットを提供する。【解決手段】エンドトキシンを検出するセンサー１０と、センサー１０を収容する容器７０と、を有し、センサー１０は、基材と、電極部および端子部を有する導体層と、試薬と、を有し、電極部および上記試薬は、中空構造の内部領域にあり、センサー１０は、電極部側の端部が、容器７０の底面側に位置する、エンドトキシン検出キット。【選択図】図１
2019052921.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
エンドトキシンを検出するセンサーと、前記センサーを収容する容器と、を有し、
前記センサーは、基材と、電極部および端子部を有する導体層と、試薬と、を有し、
前記電極部および前記試薬は、中空構造の内部領域にあり、
前記センサーは、前記電極部側の端部が、前記容器の底面側に位置する、エンドトキシン検出キット。
【請求項２】
前記容器は、底面に、前記センサーにおける前記試薬と同じ試薬を有する、請求項１に記載のエンドトキシン検出キット。
【請求項３】
前記センサーは、カバー層と、前記カバー層および前記基材の間に位置するスペーサーとを有し、
前記内部領域は、前記基材、前記カバー層および前記スペーサーに囲まれた領域である、請求項１または請求項２に記載のエンドトキシン検出キット。
【請求項４】
複数の前記センサーを有する、請求項１から請求項３までのいずれかの請求項に記載のエンドトキシン検出キット。
【請求項５】
前記容器内で、前記センサーを保持する保持部材を有する、請求項１から請求項４までのいずれかの請求項に記載のエンドトキシン検出キット。
【請求項６】
前記保持部材は、前記センサーの長手方向が前記容器の高さ方向に対して平行となるように、前記センサーを保持する、請求項５までのいずれかの請求項に記載のエンドトキシン検出キット。
【請求項７】
前記保持部材は、複数の前記センサーの長手方向が前記容器の高さ方向に対して平行となるように、前記複数のセンサーを保持する、請求項５に記載のエンドトキシン検出キット。
【請求項８】
前記試薬が、凍結状態または凍結乾燥状態である、請求項１から請求項７までのいずれかの請求項に記載のエンドトキシン検出キット。
【請求項９】
前記試薬は、Ｃ因子と、酸化還元物質が結合したペプチド化合物とを含有する、請求項１から請求項８までのいずれかの請求項に記載のエンドトキシン検出キット。
【請求項１０】
基材と、電極部および端子部を有する導体層とを有し、前記電極部は中空構造の内部領域にあるセンサー形成用部材を準備する準備工程と、
前記センサー形成用部材の前記電極部側の端部を、第一容器部材の底面に存在する試薬形成用溶液に接触させることにより、前記内部領域に前記試薬形成用溶液を導入する導入工程と、
前記内部領域に導入された前記試薬形成用溶液を固定化する固定化工程と、
前記導入工程後に、前記第一容器部材を第二容器部材により密閉する密閉工程と、
を有する、エンドトキシン検出キットの製造方法。
【請求項１１】
前記導入工程は、毛細管現象により、前記内部領域に前記試薬形成用溶液を導入する工程である、請求項１０に記載のエンドトキシン検出キットの製造方法。
【請求項１２】
前記固定化工程は、前記内部領域に導入された前記試薬形成用溶液を凍結により固定化する工程である、請求項１０または請求項１１に記載のエンドトキシン検出キットの製造方法。
【請求項１３】
前記固定化工程は、前記内部領域に導入された前記試薬形成用溶液を凍結乾燥により固定化する工程である、請求項１０または請求項１１に記載のエンドトキシン検出キットの製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示は、エンドトキシン検出キットに関する。
【背景技術】
【０００２】
エンドトキシンはグラム陰性菌の細胞壁に存在する物質であり、発熱性等の種々の生物活性を有している。そのため、例えば透析液、注射薬、移植組織片、人工授精の受精卵の培養溶液等の医薬品や医療用具がエンドトキシン等の微生物夾雑物で汚染された場合、極微量でも重篤な結果を招くことがあり、これらのエンドトキシン等の微生物夾雑物の汚染量は厳密に管理されなければならない。しかしながら、エンドトキシン等の微生物夾雑物は環境中に普遍的に存在し、さらに耐熱性を有するために加熱除去が困難であり、混入防止管理は非常に難しい。
【０００３】
エンドトキシンの検出試験には定性試験および定量試験があり、定性試験としてはゲル化法、定量試験としては比濁法、比色法、蛍光法が一般に知られている。また、エンドトキシン濃度を電気化学的に定量する方法が知られている。例えば特許文献１には、エンドトキシン等の化学物質を高感度に定量することを目的とした電極チップ、および、それを用いた化学物質の定量方法が開示されている。また、特許文献２には、従来に比べて簡便かつ高感度に定量することを目的としたエンドトキシン濃度測定方法が開示されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２０１５−１９０９３９号公報
【特許文献２】特開２０１６−１５１４８２号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
例えば、特許文献１には、試薬の固定化方法として、ディスペンサーを用いた方法、インクジェット法等が挙げられている。しかしながら、これらの方法では、エンドトキシン検出センサーが完成するまでに多くの時間を要するため、試薬が劣化やすい。
【０００６】
本開示は、上記実情の鑑みてなされたものであり、試薬の劣化が少ないエンドトキシン検出キットを提供することを主目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本開示においては、エンドトキシンを検出するセンサーと、上記センサーを収容する容器と、を有し、上記センサーは、基材と、電極部および端子部を有する導体層と、試薬と、を有し、上記電極部および上記試薬は、中空構造の内部領域にあり、上記センサーは、上記電極部側の端部が、上記容器の底面側に位置する、エンドトキシン検出キットを提供する。
【０００８】
また、本開示においては、基材と、電極部および端子部を有する導体層とを有し、上記電極部は中空構造の内部領域にあるセンサー形成用部材を準備する準備工程と、上記センサー形成用部材の上記電極部側の端部を、第一容器部材の底面に存在する試薬形成用溶液に接触させることにより、上記内部領域に上記試薬形成用溶液を導入する導入工程と、上記内部領域に導入された上記試薬形成用溶液を固定化する固定化工程と、上記導入工程後に、上記第一容器部材を第二容器部材により密閉する密閉工程と、を有する、エンドトキシン検出キットの製造方法を提供する。
【発明の効果】
【０００９】
本開示においては、試薬の劣化が少ないエンドトキシン検出キットを提供することができるという効果を奏する。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】本開示のエンドトキシン検出キットの一例を示す概略断面図である。
【図２】図１におけるセンサー１０を説明する概略平面図である。
【図３】図１におけるセンサー１０を説明する概略断面図である。
【図４】本開示のエンドトキシン検出キットを示す模式図である。
【図５】本開示における中空構造を例示する概略断面図である。
【図６】本開示における保持部材を例示する模式図である。
【図７】本開示における保持部材を例示する模式図である。
【図８】本開示における保持部材を例示する概略平面図である。
【図９】本開示のエンドトキシン検出キットを例示する概略断面図である。
【図１０】本開示のエンドトキシン検出キットを例示する概略断面図である。
【図１１】多段階の遊離反応により、ペプチド化合物から酸化還元物質が遊離する現象を例示する模式図である。
【図１２】多段階の遊離反応により、ペプチド化合物から酸化還元物質が遊離する現象を例示する模式図である。
【図１３】本開示のエンドトキシン検出キットの製造方法の一例を示す概略断面図である。
【図１４】本開示におけるセンサー形成用部材の製造方法の一例を示す概略断面図である。
【図１５】従来の試薬固定化方法を説明する概略平面図である。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
以下、本開示のエンドトキシン検出キット、および、エンドトキシン検出キットの製造方法について、詳細に説明する。
【００１２】
Ａ．エンドトキシン検出キット
本開示のエンドトキシン検出キットについて図面を参照して説明する。なお、以下に示す各図は、模式的に示したものである。そのため、各部の大きさ、形状は理解を容易にするために、適宜誇張している。また、各図において、部材の断面を示すハッチングを適宜省略する。本明細書中に記載する各部材の寸法等の数値および材料名は、実施形態としての一例であり、これに限定されず、適宜選択して使用できる。本明細書において、形状および幾何学的条件を特定する用語、例えば平行や直交、垂直等の用語については、厳密に意味するところに加え、実質的に同じ状態も含まれる。
【００１３】
図１は、本開示のエンドトキシン検出キットの一例を示す概略断面図である。図１に示すエンドトキシン検出キット１００は、エンドトキシンを検出するセンサー１０と、センサー１０を収容し、第一容器部材７１および第二容器部材７２を有する容器７０と、を備える。
【００１４】
図２は、図１におけるセンサー１０を説明する概略平面図である。図２（ａ）は図１におけるセンサー１０に該当し、図２（ｂ）は図２（ａ）からカバー層４を省略した図面に該当し、図２（ｃ）は図２（ｂ）からスペーサー３を省略した図面に該当する。なお、図２では、便宜上、試薬５の記載を省略する。また、図３は、図１におけるセンサー１０を説明する概略断面図である。図３（ａ）は図２（ａ）のＡ−Ａ断面図に該当し、図３（ｂ）は図２（ａ）のＢ−Ｂ断面図に該当する。
【００１５】
図２および図３に示すセンサー１０は、基材１と、電極部２ａ、端子部２ｂおよび配線部２ｃを有する導体層２と、スペーサー３と、カバー層４とを有する。また、特に図３に示すように、センサー１０は、基材１、スペーサー３およびカバー層４に囲まれた中空構造を有し、その内部領域Ｘに、電極部２ａおよび試薬（図示せず）がある。また、図３に示す中空構造は、電極部２ａよりも端部側に開口部Ｙ１を有し、電極部２ａよりも中央側に開口部Ｙ２を有する。開口部Ｙ１のサイズ、例えば、スペーサー３の形状および高さにより調整可能である。また、開口部Ｙ２は、例えば、カバー層４の開口部である。
【００１６】
図４（ａ）は、図１におけるカバー層４の記載を省略した図面であり、センサー１０の表面には、カバー層４ではなく、スペーサー３が示されている。また、図４（ｂ）は図４（ａ）のＢ−Ｂ断面図に該当し、カバー層４を省略せずに示している。図４に示すように、センサー１０は、電極部２ａ側の端部が容器７０の底面側に位置し、端子部２ｂ側の端部が容器７０の頂面側に位置している。「電極部側の端部」とは、電極部までの距離が短い側の端部をいう。「端子部側の端部」とは、端子部までの距離が短い側の端部をいい、通常、電極部側の端部と対向する端部である。上記端部は、長手方向における端部（長手方向端部）であってもよく、短手方向における端部（短手方向端部）であってもよい。
【００１７】
また、図４（ａ）では、容器７０の底面に、センサー１０における試薬５と同じ試薬５が存在する。このような状態は、例えば、中空構造の内部領域に試薬形成用溶液を導入した場合に得られる状態である。また、中空構造の開口部Ｙ１（センサーの端部側に位置する開口部）において、センサーの内側の試薬と、センサーの外側の試薬とが、物理的に連続していることが好ましい。物理的に連続していることは、例えば、エンドトキシン検出キットの断面画像を測定することで確認できる。
【００１８】
本開示によれば、中空構造の内部領域に試薬を有し、容器に対して所定の位置にあるセンサーを備えることにより、試薬の劣化が少ないエンドトキシン検出キットとすることができる。
【００１９】
上述したように、特許文献１には、試薬の固定化方法として、ディスペンサーを用いた方法、インクジェット法等が挙げられている。この場合、例えば図１５に示すように、電極部２ａが露出した状態で、試薬形成用溶液５ａを、ディスペンサーを用いて塗工し、乾燥させることにより、試薬５が得られる。通常は、その後に、スペーサー、カバー層等の他の部材を形成するため、試薬形成用溶液を塗工してから、センサーが完成するまでに多くの時間を要する。また、例えば、完成したセンサーを密閉保存する場合には、さらに多くの時間を要する。その間に試薬が劣化しやすい。
【００２０】
これに対して、本開示のエンドトキシン検出キットは、例えば、中空構造を有するセンサー形成用部材に試薬形成用溶液を導入することにより、得ることができる。内部領域は、例えば、基材、カバー層およびスペーサーに囲まれた領域であり、内部領域に試薬形成用溶液を導入させた後に、スペーサー、カバー層等の他の部材を形成する必要がない。そのため、迅速にセンサーを完成させることができ、試薬の劣化を抑制できるという利点がある。
【００２１】
また、例えば図１５に示すように、電極部２ａが露出した状態で、試薬形成用溶液５ａを、ディスペンサーを用いて塗工する場合、環境中に存在するエンドトキシンによるコンタミネーションが生じる場合がある。これに対して、本開示のエンドトキシン検出キットは、例えば、中空構造の内部領域に試薬形成用溶液を導入することにより得ることができる。試薬形成用溶液は内部領域に即座に導入され、その後、試薬形成用溶液を即座に固定化することが可能である。そのため、環境中に存在するエンドトキシンによるコンタミネーションが生じることを抑制できるという利点がある。
【００２２】
また、例えば図１５に示すように、試薬形成用溶液５ａを、ディスペンサーを用いて塗工し、複数のセンサーを製造する場合、試薬の品質のバラつきが大きくなりやすい。具体的に、最初に試薬形成用溶液５ａを塗工して形成した試薬と、最後に試薬形成用溶液５ａを塗工して形成した試薬とは、温度状態、水分蒸発量が異なりやすく、試薬の品質（試薬の劣化の程度）のバラつきが大きくなりやすい。これに対して、本開示のエンドトキシン検出キットは、例えば、複数のセンサーを一括して製造することができる。そのため、試薬の品質のバラつきが小さいという利点がある。
以下、本開示のエンドトキシン検出キットについて、さらに詳細に説明する。
【００２３】
１．センサー
本開示におけるセンサーは、エンドトキシンを検出するセンサーであり、基材と、電極部および端子部を有する導体層と、試薬と、を有する。さらに、電極部および試薬は、中空構造の内部領域にある。
【００２４】
中空構造は、通常、センサーの各部材の形状および配置により形成される構造である。中空構造を構成する部材は、特に限定されないが、例えば、基材、導体層、スペーサー、カバー層、絶縁層が挙げられ、中でも、基材、スペーサー、カバー層が好ましい。すなわち、中空構造の内部領域は、基材、カバー層およびスペーサーに囲まれた領域であることが好ましい。
【００２５】
中空構造の内部領域の形状は、特に限定されないが、毛細管現象が生じる形状であることが好ましい。内部領域の形状としては、例えば直方体が挙げられる。ここで、図３に示すように、内部領域Ｘの幅をＷとし、高さをＨとし、奥行をＤとする。
【００２６】
内部領域Ｘの幅Ｗは、例えば１００μｍ以上であり、１ｍｍ以上であってもよい。幅Ｗが小さすぎると、試薬形成用溶液が通過しにくい可能性がある。一方、内部領域Ｘの幅Ｗは、例えば１０ｍｍ以下であり、２ｍｍ以下であってもよい。幅Ｗが大きすぎると、毛細管現象が生じにくい可能性がある。
【００２７】
内部領域Ｘの高さＨは、例えば２５μｍ以上であり、２００μｍ以上であってもよい。高さＨが低すぎると、試薬形成用溶液が通過しにくい可能性がある。一方、内部領域Ｘの高さＨは、例えば１ｍｍ以下であり、５００μｍ以下であってもよい。高さＨが高すぎると、毛細管現象が生じにくい可能性がある。
【００２８】
内部領域Ｘの奥行Ｄは、例えば３ｍｍ以上であり、１０ｍｍ以上であってもよい。奥行Ｄが小さすぎると、電極部の形成が困難になる可能性がある。一方、内部領域Ｘの奥行Ｄは、例えば３０ｍｍ以下であり、２０ｍｍ以下であってもよい。奥行Ｄが大きすぎると、試薬形成用溶液が十分に浸透しない可能性がある。
【００２９】
中空構造は、通常、二以上の開口部を有する。開口部の開口形状は、特に限定されず、任意の形状を採用できるが、例えば、矩形、円形、楕円形が挙げられる。開口部のサイズは、特に限定されない。また、中空構造の開口部は、検体を投入する投入口であってもよい。また、例えば図３（ｂ）示すように、センサー１０の端部側に位置する開口部をＹ１とし、Ｙ１よりもセンサー１０の中央側にある開口部をＹ２とする。
【００３０】
開口部Ｙ１は、例えば図３（ｂ）示すように、センサー１０の側面にあることが好ましい。試薬形成用溶液を中空構造の内部領域に導入しやすいからである。一方、開口部Ｙ２は、開口部Ｙ１よりもセンサーの中央側に位置する開口部である。開口部Ｙ２は、例えば図３（ｂ）示すように、カバー層４の開口部であることが好ましい。検体を中空構造に保持しやすいからである。
【００３１】
また、センサー１０は、例えば図５に示すように、カバー層４において開口部Ｙ２よりも端部側の位置に開口部Ｙ３を有していてもよい。開口部Ｙ３を設けることで、例えば、中空構造の内部領域に試薬形成用溶液を導入しやくなる。また、図５に示すように、センサー１０の側面から開口部Ｙ３までの距離をＬとした場合、距離Ｌは、例えば、１００μｍ以上、１ｍｍ以下である。
【００３２】
（１）基材
本開示における基材は、導体層を支持する部材である。基材は、少なくとも導体層側の面が絶縁性を有することが好ましい。基材の材料としては、例えば、有機材料および無機材料が挙げられる。有機材料の一例としては、樹脂が挙げられる。また、樹脂としては、例えば、ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）、ポリエチレンナフタレート（ＰＥＮ）等のポリエステル、ポリジメチルシロキサン（ＰＤＭＳ）等のシリコーン樹脂、アクリル樹脂、エポキシ樹脂が挙げられる。一方、無機材料としては、例えば、ガラス、シリコンが挙げられる。
【００３３】
基材の平面視形状は、特に限定されず、任意の形状を採用できるが、例えば、矩形、円形、楕円形が挙げられる。また、基材の厚さは、エンドトキシン検出キットの用途に応じて適宜設定できる。
【００３４】
基材の導体層側の表面は、表面処理または修飾処理されていてもよい。表面処理または修飾処理を行うことで、例えば、導体層との密着性向上を図ることができる。表面処理としては、例えば、コロナ処理、ＵＶ処理、防曇処理が挙げられる。修飾処理としては、例えば、スルホン酸基を有する材料のコーティングによる修飾処理が挙げられる。
【００３５】
（２）導体層
本開示における導体層は、少なくとも電極部および端子部を有する層である。電極部および端子部は、電気的に接続されており、両者は、直接接続されていてもよく、配線部を介して電気的に接続されていてもよい。
【００３６】
電極部は、エンドトキシンと試薬との反応による電流値を測定する部材である。電極部としては、一般的な電気化学測定に用いられる電極を用いることができる。電極部の材料としては、例えば、Ａｕ、Ｐｔ、Ａｇ、Ｐｄ、Ｎｉ等の安定な金属元素を有する金属材料、グラッシーカーボン、カーボンペースト、グラファイト、ダイヤモンドライクカーボン等の炭素材料が挙げられる。
【００３７】
導体層は、一または二以上の電極部を有する。複数の電極部の組み合わせとしては、例えば、作用極および対極の組み合わせ（２電極方式）、作用極、対極および参照極の組み合わせ（３電極方式）、２つの作用極、対極および参照極の組み合わせ（４電極方式）が挙げられる。作用極となる電極部の平面視形状は、特に限定されないが、例えば、矩形、櫛形が挙げられる。電極部の形成方法としては、例えば、フォトリソグラフィ法、マスク蒸着法、スクリーン印刷法、グラビア印刷法、フレキソ印刷法、インクジェット法が挙げられる。
【００３８】
端子部は、エンドトキシン濃度を測定する測定装置と電気的に接続される部材である。端子部の材料としては、上述した電極部の材料と同様の材料を用いることができるが、中でも金属材料が好ましい。導電性が高いからである。なお、端子部の材料は、電極部の材料と同じであってもよく、異なっていてもよい。また、端子部は、電極部と同時に形成してもよく、電極部とは別に形成してもよい。また、エンドトキシン濃度を測定する測定装置としては、一般的な電気化学測定に用いられる装置を用いることができ、例えば、ポテンショスタット、電流増幅器が挙げられる。
【００３９】
配線部は、電極部および端子部を電気的に接続する部材である。配線部の材料としては、上述した電極部の材料と同様の材料を用いることができるが、中でも金属材料が好ましい。導電性が高いからである。なお、配線部の材料は、電極部の材料と同じであってもよく、異なっていてもよい。また、端子部は、電極部と同時に形成してもよく、電極部とは別に形成してもよい。
【００４０】
（３）試薬
本開示における試薬は、エンドトキシンと反応する試薬である。試薬とエンドトキシンとが反応することにより、エンドトキシン濃度が、電気化学的に定量可能となる。試薬は、通常、電極部とともに中空構造の内部領域にある。試薬は、内部領域の少なくとも一部の領域に存在すればよいが、内部領域のより多くの領域に存在することが好ましい。また、試薬は、内部領域において、電極部の近傍にあることが好ましく、電極部と接触していることがより好ましい。
【００４１】
試薬は、固体状態であることが好ましい。固体状態としては、例えば、乾燥状態、凍結状態、凍結乾燥状態が挙げられる。乾燥状態とは、常温において固体を維持できる状態をいう。凍結状態とは、冷凍保存時（例えば０℃以下での保存時）には固体であるものの、２５℃において固体を維持できず、液体となる状態をいう。また、凍結乾燥状態とは、いわゆるフリーズドライの状態をいう。試薬は、多孔質構造を有していてもよく、非多孔質構造を有していてもよい。多孔質構造は、非多孔質構造よりも表面積が大きいため、試薬および検体を速やかに混合することができる。冷凍乾燥状態の試薬は、通常、多孔質構造を有する。
【００４２】
試薬の具体例については、後述する「５．試薬」で詳細に説明する。また、エンドトキシンの検出メカニズムの具体例については、後述する「６．エンドトキシンの検出メカニズム」で詳細に説明する。
【００４３】
（４）スペーサー
センサーは、スペーサーを有していてもよい。例えば、基材およびカバー層の間にスペーサーを設けることで、中空構造を形成することができる。スペーサーの材料としては、例えば、ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）、ポリエチレンナフタレート（ＰＥＮ）等のポリエステル、塩化ビニル、ポリスチレン（ＰＳ）、ポリプロピレン（ＰＰ）等の樹脂が挙げられる。また、上記樹脂は、光硬化性樹脂、熱硬化性樹脂等の硬化性樹脂であってもよい。スペーサーの平面視形状は、特に限定されないが、例えば、所望の中空構造を得ることが可能な形状であることが好ましい。
【００４４】
スペーサーの形成方法としては、例えば、印刷法により所望形状の硬化性樹脂層を形成し、その後、硬化性樹脂層を光または熱により硬化し、所望形状のスペーサーを形成する方法が挙げられる。また、光硬化性樹脂を用いる場合には、例えば、導体層を有する基材を準備し、基材の導体層側の面に光硬化性樹脂を塗工し、フォトリソグラフィ法により、所望形状のスペーサーを形成する方法が挙げられる。また、スペーサーの形成方法として、所望形状の樹脂シートを、接着層を介して、基材に貼付ける方法を用いてもよい。
【００４５】
（５）カバー層
センサーは、カバー層を有していてもよい。カバー層の材料としては、例えば、樹脂、セラミック、ガラス、半導体、金属が挙げられる。上記樹脂としては、例えば、ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）、ポリエチレンナフタレート（ＰＥＮ）等のポリエステル、塩化ビニル、ポリスチレン（ＰＳ）、ポリプロピレン（ＰＰ）が挙げられる。また、カバー層は、透明であってもよく、不透明であってもよいが、前者が好ましい。センサーの使用時に検体の導入を目視することができるからである。
【００４６】
カバー層の平面視形状は、特に限定されないが、例えば、所望の中空構造を得ることが可能な形状であることが好ましい。また、カバー層は、必要に応じて、開口部を有していてもよい。カバー層の形成方法としては、例えば、カバー層形成用部材を、接着層を介して、スペーサー等に貼付ける方法が挙げられる。
【００４７】
（６）絶縁層
センサーは、導体層の配線部を覆う絶縁層を有していてもよい。絶縁層を設けることにより、配線部の酸化を抑制するとともに、ショートを防止することができる。絶縁層の材料としては、例えば、ポリイミド等の樹脂が挙げられる。また、上記樹脂は、光硬化性樹脂、熱硬化性樹脂等の硬化性樹脂であってもよい。絶縁層の平面視形状は、特に限定されないが、例えば、配線部を全長に亘って覆う形状であることが好ましい。
【００４８】
絶縁層の形成方法としては、例えば、フォトリソグラフィ法、スクリーン印刷法、グラビア印刷法、フレキソ印刷法、インクジェット法が挙げられる。
【００４９】
３．容器
本開示において、センサーは容器の内部に収容される。容器は、密閉および開封が可能な容器であることが好ましい。容器は、例えば、第一容器部材および第二容器部材を有することが好ましい。第一容器部材は、例えば、センサーを収容可能な収容部材であることが好ましい。第一容器部材の材料としては、例えば、ガラスが挙げられる。一方、第二容器部材は、例えば、蓋部材であることが好ましい。第二容器部材の材料としては、例えば、ゴム等の樹脂、ガラスが挙げられる。
【００５０】
容器の形状は、特に限定されないが、例えば、円柱、四角柱等の柱状構造が挙げられる。容器の体積は、特に限定されないが、例えば、０．４ｃｍ３以上、１５０ｃm３以下である。
【００５１】
４．エンドトキシン検出キット
本開示のエンドトキシン検出キットは、センサーの電極部側の端部が、容器の底面側に位置する。例えば図４に示すように、センサー１０の電極部２ａ側の端部は、容器７０の底面に接していてもよい。また、図示しないが、センサー１０の電極部２ａ側の端部と、容器７０の底面とは接触していなくてもよい。その場合、センサー１０の電極部２ａ側の端部と、容器７０の底面との間に、試薬５が存在することが好ましい。一方、センサーの端子部の端部は、例えば、容器の頂面側に位置することが好ましい。
【００５２】
また、例えば図４に示すように、センサー１０の長手方向をＤＬとする。長手方向ＤＬは、容器７０の高さ方向に対して平行であることが好ましい。「容器の高さ方向」とは、容器を、容器の底面が最も低い位置となるように静置した場合における鉛直方向をいう。また、平行とは、長手方向ＤＬと、容器の高さ方向とのなす角が、３０°以下であることをいう。上記なす角は、１５°以下であってもよく、５°以下であってもよい。
【００５３】
本開示のエンドトキシン検出キットは、１つの容器内に、複数のセンサーを有することが好ましい。上述したように、試薬の品質のバラつきを小さくできるからである。１つの容器内に収納されるセンサーの数は、例えば、２以上であり、１２以上であってもよく、２４以上であってもよい。一方、１つの容器内に収納されるセンサーの数は、例えば、１２０以下であり、５０以下であってもよい。
【００５４】
本開示のエンドトキシン検出キットは、容器内でセンサーを保持する保持部材を有することが好ましい。保持部材を設けることで、例えば、内部領域に試薬形成用溶液を安定的に導入することができる。保持部材の材料としては、例えば、ゴム等の樹脂が挙げられる。また、保持部材は、センサーを保持するための開口部を有することが好ましい。保持部材の開口部の開口形状は、特に限定されず、任意の形状を採用できるが、例えば、矩形、円形、楕円形が挙げられる。
【００５５】
図６（ａ）は、本開示のエンドトキシン検出キットの一例を示す概略断面図であり、図６（ｂ）は、図６（ａ）における保持部材８０の概略平面図である。図６に示すように、本開示のエンドトキシン検出キット１００は、矩形の開口部８１を有する保持部材８０を有していてもよい。特に、保持部材８０は、センサー１０の長手方向ＤＬが容器７０の高さ方向に対して平行となるように、センサー１０を保持することが好ましい。
【００５６】
図７（ａ）は、本開示のエンドトキシン検出キットの一例を示す概略断面図であり、図７（ｂ）は、図７（ａ）における保持部材８０の概略平面図である。図７に示すように、本開示のエンドトキシン検出キット１００は、複数の開口部８１を有する保持部材８０を有していてもよい。複数の開口部８１の配置構造は、特に限定されないが、例えば図７（ｂ）に示すように、保持部材８０の中心領域から、放射状に複数の開口部８１が配置される構造が挙げられる。また、例えば図８に示すように、複数の開口部８１が格子状に配置される構造であってもよい。特に、保持部材８０は、複数のセンサー１０の長手方向ＤＬが容器７０の高さ方向に対して平行となるように、複数のセンサー１０を保持することが好ましい。
【００５７】
また、保持部材は、容器に固定されていてもよく、容器に固定されていなくてもよい。後者の場合、保持部材は、容器に対して着脱可能となる。保持部材が容器に対して着脱可能である場合、容器は、保持部材の位置を決める位置決め部材を有することが好ましい。位置決め部材としては、例えば、図９（ａ）に示すように、容器７０の内壁面に形成された突起部材８２が挙げられる。
【００５８】
一方、センサーは、通常、保持部材に対して着脱可能である。センサーは、保持部材に対する相対位置を決める位置決め部を有していてもよい。位置決め部としては、例えば、図９（ｂ）に示すように、保持部材８０の開口部（図示せず）と重複しない突起部１１が挙げられる。突起部１１が保持部材８０の開口部を通過できないことで、保持部材に対する相対位置が決まる。突起部８３は、例えば、基材、導体層（特に配線部）、スペーサー、カバー層および絶縁層の少なくとも一つの部材の一部であることが好ましい。
【００５９】
また、図１０に示すように、センサー１０は、取出用の開口部９０を有していてもよい。取出用の開口部９０を設けることにより、センサー１０を、容器７０から容易に取出すことができる。取出用の開口部９０の位置は、特に限定されないが、端子部２ｂと、センサー１０の端子部２ｂ側の端部との間であることが好ましい。取出用の開口部９０の開口形状は、特に限定されず、任意の形状を採用できるが、例えば、矩形、円形、楕円形が挙げられる。
【００６０】
本開示のエンドトキシン検出キットを用いて測定される検体としては、例えば、透析液、注射薬等の医薬品；医療用具；血液、唾液、汗、尿等の生体試料；環境検査の対象物が挙げられる。また、上記検体として、食品、化粧品、廃液、樹脂を用いてもよい。なお、上記検体は、固体、液体、気体のいずれであってもよいが、固体の場合は、緩衝液等の溶媒に溶解または分散させることが好ましい。
【００６１】
本開示のエンドトキシン検出キットは、例えば、３ＥＵ／Ｌ未満のエンドトキシンを検出可能であってもよく、２ＥＵ／Ｌ未満のエンドトキシンを検出可能であってもよく、１ＥＵ／Ｌ未満のエンドトキシンを検出可能であってもよい。
【００６２】
５．試薬
本開示における試薬は、エンドトキシンと反応する試薬である。試薬とエンドトキシンとが反応することにより、エンドトキシン濃度が、電気化学的に定量可能となる。試薬の一例としては、Ｃ因子と、酸化還元物質が結合したペプチド化合物とを含有する試薬が挙げられる。
【００６３】
上記Ｃ因子は、エンドトキシンにより活性型Ｃ因子を生成し、さらに活性型Ｃ因子により、ペプチド化合物から酸化還元物質を遊離させる遊離反応を生じさせることができる成分であることが好ましい。上記Ｃ因子としては、例えば、カブトガニの血球抽出成分等の生体由来成分から単離精製されたＣ因子、遺伝子組換え技術によって作製された組換えＣ因子が挙げられる。
【００６４】
本開示における試薬は、上記Ｃ因子に加えて、Ｂ因子および凝固酵素前駆体を含有する多段反応用組成物を含むことが好ましい。多段階の遊離反応により、ペプチド化合物から酸化還元物質を効率的に遊離させることができるからである。
【００６５】
多段反応用組成物としては、例えば、カブトガニの血球抽出成分により調製されたライセート試薬（Ｌｉｍｕｌｕｓ  Ａｍｅｂｏｃｙｔｅ  Ｌｙｓａｔｅ、ＬＡＬ）が挙げられる。また、多段反応用組成物は、Ｃ因子、Ｂ因子および凝固酵素前駆体の少なくとも一つが、カブトガニの血球抽出成分等の生体由来成分から単離精製された成分であることが好ましい。このような組成物を「ＬＡＬの同等物」として用いることができる。また、多段反応用組成物は、Ｃ因子、Ｂ因子および凝固酵素前駆体の少なくとも一つが、遺伝子組換え技術によって作製された成分（組換えＣ因子、組み換えＢ因子、組み換え凝固酵素前駆体）であってもよい。このような組成物も「ＬＡＬの同等物」として用いることができる。なお、ＬＡＬおよびＬＡＬ同等物を、ＬＡＬ系試薬と称する場合がある。
【００６６】
酸化還元物質が結合したペプチド化合物は、酸化還元物質と、酸化還元物質が結合しているオリゴペプチドと、を有することが好ましい。また、オリゴペプチドは、一端に酸化還元物質が結合し、他端にオリゴペプチドの保護基が結合していることが好ましい。このようなペプチド化合物は、例えば、Ｘ−Ａ−Ｙで表すことができる。Ｘは保護基であり、Ａはオリゴペプチドであり、Ｙは酸化還元物質である。保護基は、特に限定されないが、例えば、ｔ−ブトキシカルボニル基（Ｂｏｃ）、ベンゾイル基、アセテート基が挙げられる。
【００６７】
一方、オリゴペプチドは、Ｃ因子に由来する作用によって酸化還元物質を遊離することができる化合物である。オリゴペプチドのアミノ酸数は、例えば、２以上であり、３以上であってもよい。一方、オリゴペプチドのアミノ酸数は、例えば、１０以下であり、５以下であってもよく、４以下であってもよい。
【００６８】
Ｃ因子の作用によって酸化還元物質を遊離可能なオリゴペプチドとしては、例えば、Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ、Ａｓｐ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ、Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ等のトリペプチドが挙げられる。
【００６９】
多段反応用組成物の作用によって酸化還元物質を遊離可能なオリゴペプチドとしては、例えば、Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ、Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ等のトリペプチドが挙げられる。また、上記トリペプチドの他の例としては、一般式：Ｒ１−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｙで表されるペプチド化合物における、Ｌ−アミノ酸を有するトリペプチド（Ｒ１−Ｇｌｙ−Ａｒｇ）が挙げられる。Ｒ１は、Ｎ−ブロックされたアミノ酸である。
【００７０】
多段反応用組成物の作用によって酸化還元物質を遊離可能なオリゴペプチドとしては、例えば、一般式：Ｒ２−Ａ１−Ａ２−Ａ３−Ａ４−Ｙで表されるペプチド化合物におけるテトラペプチドが挙げられる。Ｒ２は、水素、ブロックしている芳香族炭化水素またはアシル基であり、Ａ１は、Ｉｌｅ、ＶａｌまたはＬｅｕから選択されるＬ−アミノ酸またはＤ−アミノ酸であり、Ａ２はＧｌｕまたはＡｓｐであり、Ａ３はＡｌａまたはＣｙｓであり、Ａ４はＡｒｇである。
【００７１】
多段反応用組成物の作用によって酸化還元物質を遊離可能なオリゴペプチドとしては、例えば、具体的には、Ｂｏｃ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｙ、アセテート−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｙが挙げられる。
【００７２】
また、酸化還元物質は、Ｃ因子に由来する作用によってペプチド化合物から遊離することができ、さらに、特定の電位で酸化反応または還元反応を生じる化合物である。酸化還元物質の一例としては、下記のパラアミノフェノール（ｐＡＰ）が挙げられる。
【００７３】
【化１】
2019052921.tif 000003
【００７４】
酸化還元物質の他の例としては、色素が挙げられる。上記色素としては、例えば、２，４−ジニトロアニリン（ＤＮＡ）、ｐ−ニトロアニリン（ｐＮＡ）、７−メトキシクマリン−４−酢酸（ＭＣＡ）、Ｄａｎｓｙｌ色素が挙げられる。
【００７５】
酸化還元物質のさらに他の例としては、下記一般式（１）で表される化合物が挙げられる。なお、一般式（１）中、Ｒは、−Ｏ−ＣｎＨ２ｎ＋１または−Ｓ−ＣｎＨ２ｎ＋１であり、ｎは１から４までの整数である。
【００７６】
【化２】
2019052921.tif 000004
【００７７】
一般式（１）においては、Ｒが−Ｏ−ＣＨ３であることが好ましい。言い換えると、酸化還元物質は、パラメトキシアニリン（ｐＭＡ）であることが好ましい。一般式（１）におけるＲは、アルキル鎖が短い程、水溶性が高くなる。さらに、活性化したＣ因子または活性型凝固酵素が、ペプチド化合物に含まれるオリゴペプチドのペプチド配列を認識しやすくなる。
【００７８】
本開示においては、特に、酸化還元物質が、ｐＡＰまたはｐＭＡであることが好ましい。ペプチド化合物から遊離したｐＡＰと、ペプチド化合物に結合したｐＡＰとは、酸化還元電位が異なっており、その差が比較的大きい。そのため、ペプチド化合物から遊離したｐＡＰの酸化反応に由来する電流と、ペプチド化合物に結合したｐＡＰの酸化反応に由来する電流とを容易に分離して得ることができる。ｐＭＡでも同様の傾向が見られる。したがって、ｐＡＰまたはｐＭＡが結合したペプチド化合物を用いることにより、ペプチド化合物から遊離したｐＭＡまたはｐＡＰの濃度が極微量であっても、エンドトキシン濃度を高い精度で検出することができる。
【００７９】
本開示における試薬は、緩衝液成分を含むことが好ましい。試薬が緩衝液成分を含むことにより、測定感度を向上できる。また、緩衝液を別途添加する工程が不要となる。緩衝液成分は、緩衝液から水を乾燥除去した際に残る緩衝液の固形分である。なお、試薬が凍結状態にある場合には、試薬は、緩衝液成分に加えて、水成分を含有していてもよい。
【００８０】
緩衝液成分は、例えば、ｐＨ６．０以上９．０以下、なかでもｐＨ７．０以上８．５以下の緩衝液の成分であることが好ましい。これにより、酸化還元物質の遊離量を増加させることができるからである。緩衝液成分としては、例えば、Ｔｒｉｓ−Ａｃ緩衝液、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液、リン酸緩衝液、ＨＥＰＥＳ緩衝液、ＰＩＰＥＳ緩衝液の成分が挙げられる。
【００８１】
６．エンドトキシンの検出メカニズム
本開示におけるエンドトキシンの検出メカニズムについて、図１１および図１２を用いて例示する。図１１および図１２は、多段階の遊離反応により、ペプチド化合物から酸化還元物質が遊離する現象を例示する模式図である。なお、図１１は、酸化還元物質がパラアミノフェノール（ｐＡＰ）である場合を示し、図１２は、酸化還元物質がパラメトキシアニリン（ｐＭＡ）である場合を示している。
【００８２】
図１１および図１２に例示するように、多段階の遊離反応においては、エンドトキシンを含む検体をＣ因子に作用させることにより、Ｃ因子から活性型Ｃ因子を、Ｂ因子から活性型Ｂ因子を、凝固酵素前駆体から活性型凝固酵素を次々に発生させ、この活性型凝固酵素により、ｐＡＰまたはｐＭＡが結合したペプチド化合物から、それぞれｐＡＰまたはｐＭＡが遊離する。
【００８３】
遊離反応後の混合物を用いて、エンドトキシン濃度を電気化学的に定量する。具体的には、遊離反応後の混合物には、ペプチド化合物から遊離したｐＡＰまたはｐＭＡが存在しており、特定の電位においてｐＡＰまたはｐＭＡの酸化反応が生じる。この酸化反応に由来する電流値と、ｐＡＰまたはｐＭＡの濃度、すなわち、エンドトキシン濃度と、の間には相関が成り立ち、この相関を利用して、エンドトキシン濃度を定量する。
【００８４】
電極電位が酸化電位以上になると、ｐＡＰの場合には、下記式（２）のスキームに従って電子を放出し、酸化され、ｐＭＰの場合には、下記式（３）のスキームに従って電子を放出し、酸化される。
【００８５】
【化３】
2019052921.tif 000005
【００８６】
【化４】
2019052921.tif 000006
【００８７】
このときに、ｐＡＰまたはｐＭＡから放出され作用極が受け取る電子が電流として観察される。電気化学反応により測定される電流値は、ｐＡＰまたはｐＭＡの濃度に比例する。一方、エンドトキシン濃度と、多段階反応の進行とにも相関があるため、エンドトキシン濃度と、ｐＡＰまたはｐＭＡの濃度とにも相関が生じる。したがって、エンドトキシン濃度および電流値の相関を示した検量線を予め作成することにより、電流値から、エンドトキシン濃度を定量することができる。
【００８８】
また、比色法のように、試料の吸光度によりエンドトキシン濃度を定量する方法では、測定用の光を所定の光路長透過させる必要があることから、一定以上の溶液量の試料が必要となる。これに対して、電気化学反応を用いた場合、電極表面での反応の検出が可能であるため、微量の検体でもエンドトキシン濃度を定量することができる。また、一般的に試薬は高価であるが、電気化学反応を用いた場合、試薬の使用量を大幅に節減することができる。また、電気化学反応を用いてエンドトキシン濃度を定量する方法は、比色法とは異なり、試料の吸光度を利用しないため、透明性の低い検体も測定対象にでき、実用性が極めて高い。
【００８９】
Ｂ．エンドトキシン検出キットの製造方法
図１３は、本開示のエンドトキシン検出キットの製造方法の一例を示す概略断面図である。なお、図１３では、便宜上、カバー層４の記載を省略しており、センサー形成用部材１０ａの表面には、カバー層４ではなく、スペーサー３が示されている。
【００９０】
まず、図１３（ａ）に示すように、センサー形成用部材１０ａを準備する（準備工程）。次に、図１３（ｂ）に示すように、センサー形成用部材１０ａの電極部２ａ側の端部を、第一容器部材７１の底面に存在する試薬形成用溶液５ａに接触させる。なお、試薬形成用溶液５ａは、エンドトキシンと反応する試薬を得るための溶液である。その結果、図１３（ｃ）に示すように、例えば毛細管現象により内部領域Ｘに試薬形成用溶液５ａが導入される（導入工程）。試薬形成用溶液５ａの導入後、第一容器部材７１の底面に試薬形成用溶液５ａが残留することが好ましい。内部領域Ｘに導入される試薬形成用溶液５ａの量が不足することを抑制できるからである。次に、図１３（ｄ）に示すように、第一容器部材７１に第二容器部材７２を半密閉状態（一部が開封された状態）で取付け、内部領域に導入された試薬形成用溶液５ａを、例えば凍結乾燥により固定化する（固定化工程）。次に、図１３（ｅ）に示すように、第一容器部材７１を第二容器部材７２により完全に密閉する（密閉工程）。さらに、必要に応じて、アルミシールで密閉する。これにより、エンドトキシン検出キット１００が得られる。
【００９１】
本開示によれば、中空構造を有するセンサー形成用部材を用い、中空構造の内部領域に試薬形成用溶液を導入することにより、試薬の劣化が少ないエンドトキシン検出キットを得ることができる。
【００９２】
１．準備工程
準備工程は、基材と、電極部および端子部を有する導体層とを有し、上記電極部は中空構造の内部領域にあるセンサー形成用部材を準備する工程である。センサー形成用部材は、試薬を有しないこと以外は、上述したセンサーと同じ構成を有することが好ましい。センサー形成用部材は、自ら製造して準備してもよく、他者から購入して準備してもよい。
【００９３】
図１４は、本開示におけるセンサー形成用部材の製造方法の一例を示す概略断面図である。まず、基材１を準備する（図１４（ａ））。次に、基材１の一方の面側に、電極部２ａ、端子部２ｂおよび配線部２ｃを有する導体層を形成する（図１４（ｂ））。次に、所定の中空構造Ｘが形成されるように、スペーサー３およびカバー層４を形成する（図１４（ｃ）、（ｄ））。これにより、センサー形成用部材１０ａが得られる。
【００９４】
２．導入工程
導入工程は、上記センサー形成用部材の上記電極部側の端部を、第一容器部材の底面に存在する試薬形成用溶液に接触させることにより、上記内部領域に上記試薬形成用溶液を導入する工程である。
【００９５】
試薬形成用溶液は、エンドトキシンと反応する試薬を含有する溶液である。試薬の詳細については、上述した通りである。試薬形成用溶液は、試薬と、試薬を溶解または分散させる溶媒とを含有する。上記溶媒としては、例えば、上述した緩衝液が挙げられる。
【００９６】
本開示においては、毛細管現象により、試薬形成用溶液を内部領域に導入することが好ましい。言い換えると、センサー形成用部材の中空構造は、毛細管現象が生じる構造であることが好ましい。試薬形成用溶液の量が少なくとも、効果的に試薬形成用溶液を内部領域に導入できるからである。一方、試薬形成用溶液を多量に用いる場合、センサー形成用部材の中空構造は、毛細管現象が生じる構造でなくてもよい。第一容器部材の底面に存在する試薬形成用溶液の液面の高さと、内部領域に導入された試薬形成用溶液の液面の高さとは、通常、一致するからである。なお、毛細管現象を利用した場合には、第一容器部材の底面に存在する試薬形成用溶液の液面よりも、内部領域に導入された試薬形成用溶液の液面が高くなる。
【００９７】
導入工程においては、試薬形成用溶液を、複数のセンサーの内部領域に同時に導入することが好ましい。試薬の品質のバラつきが小さいエンドトキシン検出キットを得ることができるからである。また、保持部材が容器に対して着脱可能である場合、保持部材に複数のセンサー形成用部材を配置し、その後、複数のセンサー形成用部材の電極部側の端部を、同時に、第一容器部材の底面に存在する試薬形成用溶液に接触させてもよい。試薬の品質のバラつきがより小さいエンドトキシン検出キットを得ることができる。
【００９８】
本開示においては、試薬形成用溶液を内部領域に導入した後、第一容器部材の底面に試薬形成用溶液が残留することが好ましい。内部領域に導入される試薬形成用溶液の量が不足することを抑制できるからである。
【００９９】
３．固定化工程
固定化工程は、上記内部領域に導入された上記試薬形成用溶液を固定化する工程である。試薬形成用溶液を固定化する方法は、特に限定されないが、例えば、凍結および乾燥が挙げられる。
【０１００】
凍結による固定化は、試薬形成用溶液を冷却することにより凍結させ固定化する方法である。本開示においては、内部領域に導入された試薬形成用溶液を凍結により固定化してもよい。固定化された試薬は、通常、試薬の有効成分に加えて、緩衝液成分および水分を含有する。冷却温度および冷却時間は、試薬形成用溶液の種類および量に応じて適宜設定できる。
【０１０１】
乾燥による固定化は、試薬形成用溶液の溶媒を除去することにより固定化する方法である。本開示においては、内部領域に導入された試薬形成用溶液を乾燥により固定化してもよい。固定化された試薬は、通常、試薬の有効成分に加えて、緩衝液成分を含有する。乾燥は、大気圧下で行ってもよく、減圧下（特に真空）で行ってもよいが、後者が好ましい。環境中に存在するエンドトキシンによるコンタミネーションが生じることを抑制でき、乾燥時間も短いからである。なお、試薬の種類によっては、常温乾燥または加熱乾燥を行ってもよい。
【０１０２】
また、本開示においては、内部領域に導入された試薬形成用溶液を凍結乾燥により固定化してもよい。凍結乾燥では、通常、凍結した試料の水分を、減圧下で昇華させることにより乾燥する。凍結乾燥により固定化された試薬は、通常、試薬の有効成分に加えて、緩衝液成分を含有する。
【０１０３】
４．密閉工程
密閉工程は、上記導入工程後に、上記第一容器部材を第二容器部材により密閉する工程である。第一容器部材を第二容器部材により密閉する方法は、特に限定されず、第一容器部材に第二容器部材の接合部の形状に合わせて、適宜選択できる。また、密閉工程は、固定化工程の前であってもよく、固定化工程と同時であってもよく、固定化工程の後であってもよい。
【０１０４】
例えば、試薬形成用溶液を凍結により固定化する場合、密閉工程は、導入工程後の任意のタイミングで行うことができる。中でも、環境中に存在するエンドトキシンによるコンタミネーションを防止するという観点では、固定化工程の前、または、固定化工程と同時に、密閉工程を行うことが好ましい。
【０１０５】
また、例えば、試薬形成用溶液を凍結乾燥により固定化する場合、密閉工程は、通常、固定化工程の後に行われる。なお、環境中に存在するエンドトキシンによるコンタミネーションを防止するという観点では、第一容器部材に第二容器部材を半密閉状態（一部が開封された状態）で取付けた状態で凍結乾燥を行い、減圧乾燥後（固定化工程後）に、第一容器部材を第二容器部材により完全に密封することが好ましい。
【０１０６】
５．エンドトキシン検出キット
上述した製造方法により得られるエンドトキシン検出キットの詳細については、上記「Ａ．エンドトキシン検出キット」に記載した内容と同様であるので、ここでの記載は省略する。
【０１０７】
なお、本開示は、上記実施形態に限定されるものではない。上記実施形態は、例示であり、本開示の特許請求の範囲に記載された技術的思想と実質的に同一な構成を有し、同様な作用効果を奏するものは、いかなるものであっても本開示の技術的範囲に包含される。
【実施例】
【０１０８】
以下、本開示について、実施例を用いて、具体的に説明する。
【０１０９】
［実施例］
（センサー形成用部材の作製）
まず、厚さ２５０μｍのＰＥＴを準備した。次に、ＰＥＴの一方の面に、Ｐｄをターゲットとするスパッタリングを行い、Ｐｄ層を形成した。次に、Ｐｄ層上に、ポジ型の感光性レジスト層を形成し、フォトマスクを用いて露光し、その後、現像することで、レジストパターンを形成した。次に、レジストパターンから露出するＰｄ層をエッチングにより除去し、レジストパターンを剥離した。これにより、電極部、端子部および配線部を有する導体層を形成した。
【０１１０】
次に、ホットメルト層（厚さ２０μｍ）、ＰＥＴ層（厚さ２５０μｍ）およびホットメルト層（厚さ２０μｍ）をこの順に有する積層体を準備し、金型を使って打ち抜き加工を行った。これにより、スペーサー形成用部材を得た。次に、親水性フィルム（厚さ１００μｍ）に、φ１ｍｍの開口部（図３（ｂ）におけるＹ２に相当）を形成し、カバー層形成用部材を得た。
【０１１１】
次に、ＰＥＴの導体層側の面に、スペーサー形成用部材およびカバー層形成用部材を配置し、熱圧着により各部材を接合した。次に、得られた接合体を、金型を使ってチップ形状に打ち抜き加工し、センサー形成用部材を得た。なお、打ち抜き加工により、センサー側面の開口部（図３（ｂ）におけるＹ１に相当）を形成した。また、中空領域Ｘは、幅Ｗが１．５ｍｍであり、高さＨが２５０μｍであり、奥行Ｄが１９ｍｍであった。なお、Ｗ、Ｈ、Ｄは、図３（ｂ）における各長さに相当する。
【０１１２】
（エンドトキシン検出キットの作製）
東静容器製バイアル瓶セットＮｏ．４（バイアル瓶、ゴム栓、アルミシールのセット）を準備した。バイアル瓶に、生化学工業製ＥＳ−２４Ｓの１本に、付属緩衝液１８０μL、ＬＧＲ−ｐＡＰを２０μＬ挿入し、攪拌した。得られた液体４００μLをバイアル瓶に挿入した。次に、樹脂製の保持部材に、センサー形成用部材４個を配置し、バイアル瓶に挿入した。次に、バイアル瓶にゴム栓を半密閉状態で取付け、凍結乾燥により、試薬を固定化した。次に、バイアル瓶をゴム栓で完全に密閉し、さらにアルミシールで密閉し、エンドトキシン検出キットを得た。
【符号の説明】
【０１１３】
１  …  基材
２  …  導体層
２ａ  …電極部
２ｂ  …端子部
２ｃ  …配線部
３  …  スペーサー
４  …  カバー層
５  …  試薬
５ａ  …  試薬形成用溶液
１０  …  センサー
１０ａ  …  センサー形成用部材
７０  …  容器
７１  …  第一容器部材
７２  …  第二容器部材
８０  …  保持部材
８１  …  開口部
８２  …  位置決め部材
８３  …  位置決め部
１００  …  エンドトキシン検出キット
【図１】
2019052921.tif 000007
【図２】
2019052921.tif 000008
【図３】
2019052921.tif 000009
【図４】
2019052921.tif 000010
【図５】
2019052921.tif 000011
【図６】
2019052921.tif 000012
【図７】
2019052921.tif 000013
【図８】
2019052921.tif 000014
【図９】
2019052921.tif 000015
【図１０】
2019052921.tif 000016
【図１１】
2019052921.tif 000017
【図１２】
2019052921.tif 000018
【図１３】
2019052921.tif 000019
【図１４】
2019052921.tif 000020
【図１５】
2019052921.tif 000021