(57)【要約】      （修正有）【課題】腸内フローラ改善機能用およびIII型コラーゲン生成促進用ゼリー食品の提供。【解決手段】卵殻膜含有粉末および／または加水分解卵殻膜成分を有効成分として含む、III型コラーゲン生成促進用ゼリー食品。【効果】該ゼリー食品は、III型コラーゲン遺伝子の発現促進によるIII型コラーゲンの生成促進機能や腸内フローラ改善機能を有し、美味しくて手軽に喫食できる優れた機能性ゼリー食品となる。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
卵殻膜含有粉末および／または加水分解卵殻膜成分を有効成分として含む、III型コラーゲン生成促進用ゼリー食品。
【請求項２】
卵殻膜含有粉末を有効成分として含む場合、腸内フローラ改善用が付加される、請求項１に記載のIII型コラーゲン生成促進用ゼリー食品。
【請求項３】
卵殻膜含有粉末が、体積平均粒子径が６μｍ以下、または体積最大粒子径が２０μｍ以下の卵殻膜含有微粉末である、請求項１または２に記載のIII型コラーゲン生成促進用ゼリー食品。
【請求項４】
加水分解卵殻膜成分が加水分解卵殻膜粉末である、請求項１に記載のIII型コラーゲン生成促進用ゼリー食品。
【請求項５】
卵殻膜含有粉末１０〜９０重量部および加水分解卵殻膜成分９０〜１０重量部を有効成分として含む場合、腸内フローラ改善用が付加される、請求項１に記載のIII型コラーゲン生成促進用ゼリー食品。
【請求項６】
III型コラーゲン生成促進が、細胞でのIII型コラーゲン遺伝子の発現を促進させることによる、請求項１ないし５のいずれかに記載のIII型コラーゲン生成促進用ゼリー食品。
【請求項７】
腸内フローラ改善が、腸内において、吸収されずに腸内に残った成分が腸内細菌の多様性を増加させ、かつ病原性細菌の数を減少させることによる、請求項２または５に記載のIII型コラーゲン生成促進用ゼリー食品。
【請求項８】
スマートパック包装またはスティック状包装容器で個別包装されている、請求項１ないし７のいずれかに記載のIII型コラーゲン生成促進用ゼリー食品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、卵殻膜含有粉末を有効成分として含む腸内フローラ改善用およびIII型コラーゲン生成促進用ゼリー食品に関する。また、加水分解卵殻膜成分を有効成分として含むIII型コラーゲン生成促進用ゼリー食品に関する。さらに、卵殻膜含有粉末と加水分解卵殻膜成分を有効成分として含む、腸内フローラ改善用およびIII型コラーゲン生成促進用ゼリー食品に関する
【背景技術】
【０００２】
卵殻膜は、鶏卵などの鳥類の卵の卵殻の内側にある膜で、内外２枚からなり、外卵殻膜は卵殻内面に密着し、内卵殻膜は卵白を包んでおり、抗菌性を有し、発生中の胚を感染から保護している。卵殻膜は、Ｉ型、Ｖ型およびＸ型コラーゲン、グルコサミン、デスモシンおよびヒアルロン酸を主成分とした強靭な繊維性のタンパク質等からなる網目状の構造を有し、これらのタンパク質はシステインを含むものが多く、酸、アルカリ、プロテアーゼに対して比較的安定で、水に不溶性である。以前は食品産業の廃棄物として利用されていなかったが、皮膚の再生を促進する効果や美肌効果が発見されてから、化粧品や栄養剤としての開発が進められ、実用化されている。
【０００３】
たとえば、卵殻膜成分の消化吸収効率を高めるために、体積平均粒子径が６μｍ以下または体積最大粒子径が２０μｍ（８００メッシュ）以下となるように、卵殻膜粉末をジェットミルを用いて粉砕し微粉末化する（特許文献１）ことが提案された。また、不溶性の卵殻膜を水に可溶性にするため、タンパク質を加水分解した加水分解卵殻膜を、取扱性、保存安定性の向上のために乾燥粉末化すること（特許文献２）、さらに、アルカリ性である加水分解卵殻膜粉末をｐＨ３〜６にして、保存安定性、安全性を高めること（特許文献３）が提案されている。
【０００４】
一方、ゼリー食品は、様々なバリエーションの食品を指し、水分の多い「とろっ」とした食感のものから特定の形状を保持することができる程度に硬いものまで比較的広範囲の性状を示す食品が含まれている。例えば、コラーゲンに富んだ動物質の素材を煮込んだ肉汁や魚汁が冷えてゼラチンの作用で煮こごりとなったもの、または果汁やワインなどに砂糖などの甘味を加え、ゲル化剤を添加して固めて成形したものが含まれ、その原料としては種々の食品材料が使用され、様々な性状あるいは味覚、食感を呈するゼリー食品が製造されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２０１３−２１６６５２号公報
【特許文献２】特許第５１７９８４７号明細書
【特許文献３】特開２０１６−９８２０６号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、手軽にどこででも必要な量を喫食することができるゼリー食品であり、III型コラーゲンの生成促進機能に加えて腸内フローラの改善機能を有するゼリー食品を提供することを課題とする。そして、このIII型コラーゲンの生成促進機能が、細胞でのIII型コラーゲン遺伝子の発現を促進させることによるゼリー食品を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
卵殻膜または加水分解卵殻膜は、美肌化、皮膚再生、育毛発毛促進、脱毛防止などの作用の他に、肩凝りの解消、食欲増進、疲労回復等の日常的な健康増進、健康維持に有効であるとされている。本発明者らは、加水分解卵殻膜がほぼ１００％消化され、血液中に吸収されるのに対して、卵殻膜含有粉末、微粉末は、約５４％が消化吸収されずに腸内に残り、その残った成分が腸内細菌のうちの悪玉菌の増殖を防止し、腸内フローラを改善することを見出した。
【０００８】
また、卵殻膜含有粉末または微粉末は約４６％消化吸収されるので、細胞のIII型コラーゲン遺伝子の発現を促進することもできる。本発明者らは、卵殻膜含有成分のIII型コラーゲンの生成促進機能が、細胞でのIII型コラーゲン遺伝子の発現を促進させるものであることを見出した。卵殻膜含有粉末または微粉末は、腸内フローラの改善機能とIII型コラーゲンの生成機能という、健康と美容上求められている効果を同時にもたらすものである。また、ゼリー食品に添加するため、ゼリー食品中の他の健康成分、美容成分と相まって健康用、美容用ゼリー食品としてし、有効に手軽に喫食することができる。
【０００９】
また、加水分解卵殻膜成分は１００％消化吸収されるため、卵殻膜含有粉末よりIII型コラーゲンの生成促進機能にすぐれている。そして、卵殻膜含有粉末または微粉末と加水分解卵殻膜成分とを併用することにより、腸内フローラ改善機能とIII型コラーゲンの生成促進機能とが相乗的に作用して、腸内フローラの改善による免疫機能の向上、癌等の成人病の予防に加えて、III型コラーゲンの生成促進による血管、肺、肝臓、皮膚の組織の強化により老化防止効果が増強され、健康状態もさらに改善および／または良好に維持できるゼリー食品を完成するに至った。
【００１０】
本発明は,以下の技術的事項から構成される。
（１）卵殻膜含有粉末および／または加水分解卵殻膜成分を有効成分として含む、III型コラーゲン生成促進用ゼリー食品。
（２）卵殻膜含有粉末を有効成分として含む場合、腸内フローラ改善用が付加される、上記（１）に記載のIII型コラーゲン生成促進用ゼリー食品。
（３）卵殻膜含有粉末が、体積平均粒子径が６μｍ以下、または体積最大粒子径が２０μｍ以下の卵殻膜含有微粉末である、上記（１）または（２）に記載のIII型コラーゲン生成促進用ゼリー食品。
（４）加水分解卵殻膜成分が加水分解卵殻膜粉末である、上記（１）に記載のIII型コラーゲン生成促進用ゼリー食品。
（５）卵殻膜含有粉末１０〜９０重量部および加水分解卵殻膜成分９０〜１０重量部を有効成分として含む場合、腸内フローラ改善用が付加される、上記（１）に記載のIII型コラーゲン生成促進用ゼリー食品。
（６）III型コラーゲン生成促進が、細胞でのIII型コラーゲン遺伝子の発現を促進させることによる、上記（１）ないし（５）のいずれかに記載のIII型コラーゲン生成促進用ゼリー食品。
（７）腸内フローラ改善が、腸内において、吸収されずに腸内に残った成分が腸内細菌の多様性を増加させ、かつ病原性細菌の数を減少させることによる、上記（２）または（５）に記載のIII型コラーゲン生成促進用ゼリー食品。
（８）スマートパック包装またはスティック状包装容器で個別包装されている、上記（１）ないし（７）のいずれかに記載のIII型コラーゲン生成促進用ゼリー食品。
【発明の効果】
【００１１】
ヒトの腸内には、数百種の腸内細菌が約１００兆個以上バランスよく生息しており、善玉菌、悪玉菌、および日和見菌が腸内において互いにバランスを保ちながら、一種の生態系（腸内フローラ）を形成している。この腸内フローラのバランスが崩れると、悪玉菌の増加等による腸内に有害な物質が蓄積されて、便秘、下痢症状、免疫機能の低下のみならず、血液中に吸収された有害物質により、心臓、肝臓および腎臓に負担を与え、老化を促進したり、癌の原因にもなることが知られている。
【００１２】
卵殻膜含有微粉末は、ラットを用いた実験で約５４％が消化吸収されずに腸内に残り、その残った成分が腸内細菌のうちの悪玉菌の増殖を防止し、腸内フローラを改善することが見出された。
また、卵殻膜含有微粉末は、約４６％が消化吸収され、加水分解卵殻膜成分はほぼ１００％が消化吸収され、血液中に取り込まれた卵殻膜成分によりIII型コラーゲン遺伝子の発現が促進され、皮膚におけるIII型コラーゲンの生成を促進するだけでなく、血管でもIII型コラーゲンの生成を促進して血管全体の弾性を増すことができる。
【００１３】
さらに、卵殻膜含有粉末または微粉末と加水分解卵殻膜成分を併用すると、卵殻膜含有粉末または微粉末の有する腸内フローラ改善機能およびIII型コラーゲンの生成促進機能と、加水分解卵殻膜成分の有するIII型コラーゲンの生成促進機能とが相乗的に作用して、血管、肺、肝臓、皮膚等におけるIII型コラーゲンの生成の促進と、腸内フローラの改善により美肌効果や老化防止効果が増強され、健康状態を改善および／または良好に維持することができる。
さらに、これらの有効成分を、スマートパック包装やスティック状包装容器で個別包装すれば手軽にしかも必要量が喫食できるゼリー食品となり、ゼリー食品中の他の成分と共に優れた機能性ゼリー食品を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】ＤＳＳで大腸炎を誘発したマウスに、卵殻膜含有微粉末サプリメントを摂取させた後の細菌メタゲノム解析の結果：腸内細菌プロファイル
【図２】ＤＳＳで大腸炎を誘発したマウスに、卵殻膜含有微粉末サプリメントを摂取させた後の細菌メタゲノム解析の結果：腸内細菌種の豊富さ
【図３】ＤＳＳで大腸炎を誘発したマウスに、卵殻膜含有微粉末サプリメントを摂取させた後の細菌メタゲノム解析の結果：腸内細菌の存在比
【図４】マウスを用いた加水分解卵殻膜粉末サプリメントの経口摂取実験による１７日後の結果。リアルタイムＰＣＲによるIII型コラーゲン遺伝子の皮膚における発現量を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
ヒトの腸内には、数百種の腸内細菌が約１００兆個以上バランスよく生息しており、例えば乳酸菌、ビフィズス菌のような有用菌（善玉菌）、例えば大腸菌、クロストリジウム菌のような有害菌（悪玉菌）、および日和見菌が腸内において互いにバランスを保ちながら、一種の生態系（腸内フローラ）を形成している。この腸内フローラのバランスが、老化、ストレス、疾病、環境変化、食生活の変化により崩れると、悪玉菌の増加等により腸内に有害な物質が蓄積されて、便秘、下痢症状、免疫機能の低下のみならず、血液中に吸収された有害物質により、心臓、肝臓および腎臓に負担を与え、様々な病気の原因にもなることが知られている。
【００１６】
本発明の腸内フローラ改善用およびIII型コラーゲン生成促進用ゼリーは、卵殻膜含有粉末を有効成分とするものであり、この有効成分は、ラットを用いた実験では、摂取した卵殻膜含有微粉末の４６％が消化吸収され、残りは吸収されずに腸内に残った。この残った成分が腸内細菌の多様性を増加させ、かつ大腸菌のような病原性細菌の数を減少させ、腸内フローラを改善できることを、実施例１で示す。
【００１７】
本発明で使用される卵殻膜は、陸生の卵生動物すべての卵、特に鳥類の卵の卵殻の内側にある膜であればいずれも使用できる。特に鶏卵の卵殻膜が、入手の容易性、コストの点から好ましい。
本発明で使用される卵殻膜含有粉末は、少なくとも卵殻膜を含む粉末であれば特に制限はなく、粉末とは粒子サイズにかかわらず、あらゆる粉体をいう。剥離された卵殻膜または卵殻に卵殻膜が付着した状態の原料を使用して、公知のいずれの方法で粉末化してもよい。また、市販の卵殻膜含有粉末を用いてもよい。
【００１８】
本発明で使用される卵殻膜含有微粉末は、粉末のうち、体積最大粒子径および／または体積平均粒子径が概ね１００μｍより小さいものをいう。本願明細書において、粉末または微粉末の「体積平均粒子径」、「体積最大粒子径」は、レーザー回折式粒度分布測定機（株式会社セイシン製、ＬＭＳ−３０）を用いて測定した値を意味する。粒子径の測定に際しては、卵殻膜含有微粉末を界面活性剤を用いて水に分散させた測定試料を用いる。また、「体積平均粒子径」とは、粒度分布における小粒径側からの累積値が５０％における粒子径を意味する。
【００１９】
本発明で使用される卵殻膜含有微粉末として、特に体積平均粒子径が６μｍ以下、または体積最大粒子径が２０μｍ以下のものが、消化吸収効率の点から好ましい。市販の卵殻膜含有粉末等の卵殻膜含有原料を、ガス中で相互に衝突させるジェットミルを用いる微粉砕工程により製造することが好ましい。
【００２０】
本発明で使用される加水分解卵殻膜成分は、卵殻膜あるいは前述した卵殻膜含有粉末を、酸水溶液、アルカリ水溶液、アルカリ性有機溶媒溶液、およびタンパク質分解酵素含有液などのタンパク質の分解作用を有する液中で加水分解することによって得られる。水溶液、エキスとしても使用できるが、取扱性や保存安定性のため、噴霧乾燥、凍結乾燥等の乾燥手段により得られる粉末形態のものが好ましい。加水分解卵殻膜粉末としては、特にｐＨが３〜６である粉末が保存安定性、安全性の点から好ましい。
【００２１】
ヒトの皮膚は表面にある上皮層とその下の結合組織性の真皮層からなっており、真皮層を構成するタンパク質は主としてコラーゲンであり、他にエラスチン、アルブミン、グロブリン、ムチンよりなっている。真皮層を構成するコラーゲンは、主としてα１（Ｉ）型コラーゲンおよびα１(III）型コラーゲン（以下、「III型コラーゲン」という。）であり、Ｉ型コラーゲンは主として皮膚の構造維持、III型コラーゲンは主として皮膚の柔軟性の付与とそれぞれ異なる機能を果たしている。
【００２２】
皮膚におけるI型コラーゲンとIII型コラーゲンの割合は、加齢に伴って変化する。III型コラーゲンは胎児性コラーゲンとも呼ばれるように、胎児のときに最も多く、胎児の皮膚ではIII型コラーゲンの方が多いが、１０代から減りはじめ、そのまま減少していくので、皮膚におけるIII型コラーゲンの割合を増加することができれば、加齢による皮膚の老化を止め、皮膚をなめらかでしっとりさせることができる。また、III型コラーゲンは皮膚以外にも、血管、肺、肝臓等の結合組織中に含まれている。
【００２３】
卵殻膜含有微粉末は約４６％が消化吸収され、加水分解卵殻膜成分はほぼ１００％が消化吸収され、血液中に取り込まれた卵殻膜成分により、III型コラーゲン遺伝子の発現を促進して、皮膚におけるIII型コラーゲンの生成を促進するだけでなく、血管でもIII型コラーゲンの生成を促進して血管全体の弾性を増すことができ、肝臓でも線維化を抑制することができる。本発明で使用する卵殻膜成分含有粉末と加水分解卵殻膜成分のいずれも消化吸収されると、III型コラーゲンの生成を促進する機能を有するが、ほぼ１００％消化吸収される加水分解卵殻膜成分の方がその促進効果が高い。
【００２４】
また、卵殻膜成分含有粉末と加水分解卵殻膜成分を併用すると、III型コラーゲンの生成促進効果がさらに高められるだけでなく、腸内フローラの改善効果と相まって、相乗的に美肌化、老化防止効果が高められ、健康状態を改善および／または良好に維持できるゼリー食品を提供できる。卵殻膜含有微粉末を１０〜９０重量部に対して加水分解卵殻膜粉末を９０〜１０重量部配合することが好ましい。
【００２５】
本発明のゼリー食品は、溶液状又は懸濁状のものを寒天やゼラチンなどのゲル化剤を用いて半固体状にした食品をいう。
本発明のゼリー食品に含まれる卵殻膜含有粉末および／または加水分解卵殻膜粉末の含有量は、特に制限されないが、腸内フローラ改善効果とIII型コラーゲン生成促進効果が増強される含有量にする。例えばゼリー食品１食分に、１０〜２４０ｍｇ含有させることができるが、本発明の卵殻膜含有成分は、安全性が高く副作用の心配がないので、他の成分を適切に選択する限りにおいて、ゲル性状に支障を来さない範囲で含有させられる。
【００２６】
本発明のゼリー食品に使用されるゲル化剤としては、ゼラチン、増粘多糖類であるジェランガム、カラギナン、キサンタンガム、ローカストビーンガム、グアーガム、ペクチン、寒天、アラビアガム、グルコマンナン、タラガム、プルラン、タマリンド種子多糖類、トラガントガム、カラヤガム、アルギン酸、アルギン酸ナトリウム、マクロホモプシスガムデキストリンや、コーンスターチ、タピオカ澱粉などの澱粉、から選択される少なくとも１種である。ゲル化剤のゼリー食品への添加量は、０．０１〜５．０％（Ｗ／Ｖ）、好ましくは０．０２〜３．０％（Ｗ／Ｖ）であり、最終ゼリー食品の硬さやテクスチャーに応じて、ゲル化剤の種類とその添加量を決定できる。
【００２７】
本発明のゼリー食品には、ゲル性状に支障を来さない範囲で、上記基本原料以外の他の原料を配合してもよい。例えば、糖類、有機酸、ビタミン類、アミノ酸、ミネラル、タンパク質、コラーゲンペプチド、果汁、香料、色素等が挙げられる。
これらの他の原料は、水等の溶媒に予め溶解、分散させて用いることで、上記基本原料と加熱下に速やかに混合溶解させることができる。
【００２８】
有機酸は食品に酸味の付与、または酸味の調整や味の調和のためだけでなく、保存、酸化防止、ｐＨ調整剤としての役割を有するものであり、通常０．１〜１重量％程度添加する。有機酸は、無水クエン酸、クエン酸、リンゴ酸、酒石酸、Ｄ−酒石酸、アスコルビン酸、コハク酸、マレイン酸、マロン酸、Ｌ−グルタミン酸塩酸塩、酢酸、乳酸及びアスパラギン酸から選択される。
【００２９】
また、酸味を抑え、喫食しやすくする観点から、微量の甘味料や香料が配合されていてもよい。このような甘味料としては、ブドウ糖、果糖、ショ糖、麦芽糖、乳糖、トレハロース、エリスリトール、キシリトール、ソルビトール、マルトデキストリン等の糖類や、アセスルファムカリウム、アスパルテーム、ステビア、スクラロース、ソウマチン等の高甘味度甘味料を用いることができ、これらは単独又は複数種を併用することができる。また、香料は特に限定されず、グレープフルーツ、アップル、ストロベリー、パイン、グレープ等の天然果汁、またはそれらの合成香料等を用いることができる。
【００３０】
ビタミン類は、ビタミンＡ、ビタミンＢ１、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２、ビタミンＣ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、ビタミンＦ、ビタミンＨ、ビタミンＫ、ビタミンＰ、パントテン酸、コリン、葉酸、イノシトール、ナイアシン、およびパラアミノ安息香酸（ＰＡＢＡ）から選択される少なくとも１種である。
アミノ酸は、アラニン、アルギニン、アスパラギン酸、アスパラギン、システイン、グルタミン酸、グルタミン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、およびバリン等から選択される少なくとも１種である。
【００３１】
ミネラルは、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、塩化マグネシウム、乳酸カルシウム、および乳酸ナトリウム等から選択される少なくとも１種である。上記タンパク質は、乳由来のたんぱく質であるホエイたんぱく質分離物（ＷＰＩ）、ホエイたんぱく質濃縮物（ＷＰＣ）、分離大豆たんぱく質（ＳＰＩ）、あるいはそれらの加水分解物等から選択される少なくとも１種である。
【００３２】
ゼリー食品の製造において、まず上記の各成分を、プロペラミキサー等の空気を巻き込まない撹拌又は混合手段を用いて起泡させないように混合することにより混合物を得る。各成分の添加の順序及び混合方法については特に制限されないが、混合物の調製は、例えば、下記のような工程（Ａ）及び（Ｂ）を含む方法で行われる。（Ａ）水にゲル化剤を溶解後加熱し、ゲル化剤水溶液を調製、（Ｂ）ゲル化剤水溶液を撹拌しながら、卵殻膜含有粉末および／または加水分解卵殻膜成分、またはそれらを添加した水溶液を添加する。糖類、有機酸、ビタミン類等は、工程（Ａ）と（Ｂ）の間又は工程（Ｂ）の後において添加される。混合物を得る工程は、ゲル化温度以上の高温（例えば６０℃以上、好ましくは７０℃以上、より好ましくは７５℃以上）で行う必要がある。
【００３３】
本発明のゼリー食品の容器は、密閉可能な容器であればその容器の種類に特に制限はなく、スクリュータイプ、プルトップタイプ、クリンプタイプ等、その容器が備える密閉構造で、容器に充填したゼリーの飲食出口が密閉可能か、あるいは、容器自体が開封可能とされていればよい。例えば、プラスチック容器、ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）容器、ボトル容器、アルミニウム容器、スチール容器などを例示できる。
特に、１回分の必要量だけ密封し、まとめて収納しても嵩張らないスマートパック包装やスティック状包装容器で個別包装することが望ましい。
【００３４】
スティック状包装容器は、食品用包装材として使用できるものであれば特に制限はなく、例えば、三方シール包装やピロー包装等の包装形態が挙げられる。三方シール包装とは、包装材を二つ折りして合わせた三方をシールして袋にする際に、折った縁がシールされていない包装形態である。また、ピロー包装とは、筒状の包装材を上下方向また水平方向に繰り出す過程で内容物を筒状の包装材内に挿入してその区切り部分をシールして袋にする包装形態である。シールには、包装材の加熱溶着によるヒートシールの形態を用いることができる。包装材の材質としては、アルミ、ナイロン素材やプラスチック類のポリエチレンやポリプロピレン等が挙げられる。また、携帯及び喫食の容易性等の観点から、その大きさは縦５〜１２ｃｍ、横１〜５ｃｍ、内容量１０〜５０ｇ程度であることが好ましい。
【００３５】
スマートパック包装はスタンドパックともいい、安定した自立形になるスタンド式パウチである。２枚の胴部シートの下端の間に、２つ折りした底部シートを挟み、この２つ折りした底部シートと、２枚の胴部シートの両側縁をシールし、さらに、底辺を弧状にシールすることにより、底部には底縁ができ、これによりパック本体は安定したスタンド形となる。このようなスタンドパック形パック本体には、その上方の開口部から充填し、開口部をシールする。
【００３６】
本発明のゼリー食品の容器への包装は、通常当業者が行う公知の方法により、調製されたゼリーを容器に充填することによって行われる。例えば、ゲル化剤を添加した液体に、卵殻膜含有粉末および／または加水分解卵殻膜成分を添加してから加熱溶解した基本原料に、必要に応じて、糖類、有機酸、ビタミン類、アミノ酸、ミネラル、タンパク質、コラーゲンペプチド、果汁、香料、色素等を添加して、加熱下に混合溶解し、溶融状態で容器に充填し冷却固化すればよい。スマートパック包装やスティック状包装容器の場合には、充填後ヒートシールにより容器の開口部を密封し、容器内で冷却固化させる。
【００３７】
以下に、本発明を実施例に基づいて詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例により限定されるものではない。
【実施例１】
【００３８】
[卵殻膜含有微粉末の腸内フローラ改善機能および腸炎改善機能]
（１）卵殻膜含有微粉末の製造
卵殻膜含有粉末サンプルとして、商品名「ＥＭパウダー３００」（キユーピー株式会社製）をジェットミルで微粉砕したものを用いた。ジェットミルとしては、シングルトラックジェットミル（株式会社セイシン製、ＦＳ−４）を用いて、風量：１．２ｍ３／ｍｉｎ、動力：１１ｋｗにて、体積最大粒子径が８００メッシュ（目開きで約２０μｍ）程度となるまで粉砕を実施した。レーザー回折式粒度分布測定機（株式会社セイシン製、ＬＭＳ−３０）を用いて粉砕後の粒径を測定したところ、体積最大粒子径は１９．６μｍ、体積平均粒子径は５．８μｍ（以下、「８００メッシュ微粉末」という。）であった。
【００３９】
（２）実験動物
７週齢のオスC57BL6/Jマウスを購入し３日間順応させた後、平均体重が等しくなるように３つの群（ｎ＝８）に分けた。７日間、対照AIN-93G基礎常用飼料（ＤＳＳ群）または８％の卵殻膜８００メッシュ微粉末を補強した飼料（Ｄ−ＥＳＭ８群）のどちらかを給餌した。その後９日間、両群に以前と同じ実験用飼料を与えながら、1.5％（W/V）のデキストラン硫酸ナトリウム（ＤＳＳ）（分子量40KDa；MP Biomedicals,Irvine,CA）を含む飲料水を与えて、大腸炎を誘発させた。通常の対照マウス（ＣＯＮ群）には、実験の全過程において、AIN-93G基礎常用飼料と通常の飲料水を与えた。
８％の卵殻膜８００メッシュ微粉末補強飼料は、カロリーとタンパク質バランスを維持するために、コーンスターチとカゼインで調節した。病気活性指数（disease activity index:DAI）は、マウスの体重、便の硬さ、血便の３つのスコアを用いて、ＤＳＳ水を与えた日以降毎日モニターした。
【００４０】
（３）盲腸の細菌メタゲノム解析
メタゲノムＤＮＡを、QIAamp Stool Minキット(Qiagen,Hilden,Germany)を用いて、マウスの盲腸の内容物から抽出した。16S  rRNA遺伝子の可変領域３と４を増幅するために、（５’−ＣＣＴＡＣＧＧＧＮＧＧＣＷＧＣＡＧ−３’）と（５’−ＣＡＧＧＡＣＴＡＣＨＶＧＧＧＴＡＴＣＴＡＡＴＣＣ−３’）のプライマーを用いて増幅した。増幅物の長さが２５０bp以上で平均qualityスコアが３０以上のＤＮＡ配列について配列決定した。
代表的な配列をGreengenes OTUデータベースにしたがって、Ribosomal Database Project(RDP)分類を用いて分類した。
セグメント細菌と数種の病原性細菌の変化を検出するために、定量的リアルタイムＰＣＲを行った。
【００４１】
（４）細菌メタゲノム解析の結果
細菌門レベルの解析によれば、３つの実験群（Ｄ−ＥＳＭ８、ＤＳＳ、ＣＯＮ）の間で、最も広く行き渡っている３つの細菌門の相対量が著しく異なっていた。図１に示すように、Bacteriodetesは、ＣＯＮ群での６７．０％から、ＤＳＳ群では３４．６％に減少し、Ｄ−ＥＳＭ８群では５５．２％に回復した。 Firmicutesは、ＣＯＮ群での２６．５％から、ＤＳＳ群では１３．７％に減少し、Ｄ−ＥＳＭ８群では１８．６％に回復した。 Proteobacteriaは、ＣＯＮ群での０．９％から、ＤＳＳ群では４０．２％に増加し、Ｄ−ＥＳＭ８群では８．０％に回復した。
次に、α多様性、β多様性の２つの分類を評価した。α多様性解析により、ＤＳＳ群のマウスは３つの群のうちで細菌種の豊富さが最も低かった（図２）。
ヒトにおける炎症性腸疾患やマウスにおけるＤＳＳ誘発大腸炎を含む疾病状態に相関して、腸内の細菌種が減少することから、この結果は予想どおりであったが、意外なことに、卵殻膜摂取により細菌種の豊富さはＣＯＮ群と同程度にまで回復した。
【００４２】
図３の上段に示すように、腸炎のマーカーおよびヒト炎症性腸疾患とマウス大腸炎の酸化ストレスのマーカーである増加したEnterobacteriaceaeは、ＣＯＮ群と比べて炎症性のＤＳＳ群（Proteobacteria門が全細菌の３９％）で極めて頻繁に検出された。反対に、Enterobacteriaceaeは、Ｄ−ＥＳＭ８群（約６％）では極めてまれに検出された。同様に、ＤＳＳ投与によりEnterococcaceaeの数が増加したが、卵殻膜微粉末の補給によってほぼ通常レベルまで下げられた。
短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）のような腸内細菌の代謝産物は大腸細胞の第一エネルギー源であり、宿主の遺伝子発現に直接影響を及ぼすことが考えられるので、ＳＣＦＡ産生菌の存在を評価した（図３の下段）。炎症性腸疾患で減少することが分かっているRuminococcaceae科やPorphyromonadaceae科などのＳＣＦＡ産生菌がＤＳＳ群では減少していたが、卵殻膜摂取により、これらは改善した。
【００４３】
（５）まとめ
上記（４）の結果から、卵殻膜成分含有微粉末の摂取により、腸内細菌の多様性を増加させるだけでなく、大腸菌のような病原性細菌の絶対数を減少させ、セグメント化された糸状菌の異常繁殖を抑制することが示された。
このように、卵殻膜含有微粉末の摂取により、腸内菌共生バランス失調症、腸内毒素症を改善し、腸内フローラを改善することが示された。
【実施例２】
【００４４】
[卵殻膜含有微粉末および加水分解卵殻膜粉末のIII型コラーゲン生成促進機能]
卵殻膜８００メッシュ微粉末と加水分解卵殻膜粉末のそれぞれを、１日１回、１７日間マウスに経口摂取させて、サプリメント経口摂取実験を行った。加水分解卵殻膜粉末としてｐＨが３〜６である加水分解卵殻膜粉末（特許文献３）を用いた。
【００４５】
８週齢のヘアレスマウスに対して、加水分解卵殻膜粉末をMediGelに混合し、サプリメントとして１日１回、１７日間、動物の活動期に自主的に摂取させた。ヒト１日摂取量の１／２、１倍、２倍換算の量を与え（各々ｎ＝６）、また、卵殻膜８００メッシュ微粉末をヒト１日摂取量の１倍換算の量として同様に摂取させた（ｎ＝６）。対照として、サプリメントを与えないヘアレスマウスを用いた。１７日後のそれぞれのマウスの皮膚と肝臓におけるIII型コラーゲン遺伝子発現を定量的リアルタイムＰＣＲで調べた。
【００４６】
定量的リアルタイムＰＣＲ解析は、以下のように行った。
各マウスから背部皮膚および肝臓サンプルを採取し、液体窒素中で粉砕した。全皮膚組織または全肝臓組織のホモジナイス後、総ＲＮＡを単離し、商品名「Takara PrimeScript RT reagent kit」を用いてｃＤＮＡ合成を行った。リアルタイムＰＣＲ法は商品名「SYBR Premix Ex TaqTM II(Takara) on Thermal Cycler Dice Real Time System」(Takara)を用いて行った。プライマーとしてＣｏｌ３ａ１（III型コラーゲン）をコードする遺伝子の増幅用に設計されたプライマーを用いた。内部標準として、ハウスキーピング遺伝子であるグリセルアルデヒド−３−ホスフェートデヒドロゲナーゼ（ＧＡＰＤＨ）ｍＲＮＡを同様に増幅した。ＰＣＲサイクルは、最初の変性を９５℃で３０秒、４０サイクル（９５℃で５秒の変性、６０℃で１分のアニーリングおよび伸長反応）行った。
【００４７】
皮膚におけるIII型コラーゲン遺伝子の発現量を図４に示す。
経口で加水分解卵殻膜粉末を摂取したマウスの背部皮膚において、III型コラーゲンをコードする遺伝子の発現が量依存的に上昇する（ｐ＝０．０８）ことが示された。経口で卵殻膜８００メッシュ微粉末を摂取したマウスよりも効果的に、III型コラーゲンをコードする遺伝子の発現を上昇させた。
【００４８】
肝臓における、加水分解卵殻膜粉末を摂取したマウスのIII型コラーゲン遺伝子の発現量については、サプリメントとしてヒトが摂取する１倍換算の量を与えたマウスでは、対照群と変化がなかったが、２倍換算量を与えた場合に、III型コラーゲン遺伝子の発現が有意（ｐ＝０．００７）に上昇した。肝臓におけるIII型コラーゲン遺伝子の発現の上昇により、肝臓線維化抑制および血管の環境改善効果が期待される。
【実施例３】
【００４９】
[卵殻膜含有粉末を含有するゼリー食品の製造]
カラギーナン、ローカストビーンガム、キサンタンガム、グルコマンナンを１６：２５：２５：１０の重量比で含む市販のゲル化剤１８重量部を水１００重量部に添加し、泡立てないよう１０分間撹拌した後、８０℃に加熱してさらに３０分間撹拌し、ゲル化剤水溶液を調製した。ゲル化剤水溶液を撹拌しながら、卵殻膜含有粉末２．７重量部を添加した。このゲル化剤水溶液のｐＨを、クエン酸でｐＨ３．５〜４．２に調整し、香料、甘味料、消泡剤を添加して、撹拌した。このようにして得られた混合物を９０℃、５分間加熱溶解し、約８５℃で、上部開口部に縦３０ｍｍの長さの挟搾部を有する縦１３５ｍｍ×横６５ｍｍのスマートパック包装容器に充填し、上部開口部をシールして、内容量４０ｇのスマートパック包装ゼリー食品を製造した。
【産業上の利用可能性】
【００５０】
卵殻膜含有微粉末は、その残った成分が腸内細菌のうちの悪玉菌の増殖を防止し、腸内フローラを改善することがわかった。また、卵殻膜含有微粉末は、約４６％が消化吸収され、加水分解卵殻膜成分はほぼ１００％が消化吸収され、血液中に取り込まれた卵殻膜成分によりIII型コラーゲン遺伝子の発現が促進されることにより、皮膚におけるIII型コラーゲンの生成を促進されるだけでなく、血管でもIII型コラーゲンの生成を促進して血管全体の弾性を増すことができる。
これらの有効成分を、手軽にしかも必要量喫食できるゼリー食品に添加することにより、腸内フローラ改善機能およびIII型コラーゲンの生成促進機能の相乗効果により、美肌効果や老化防止効果が増強され、健康状態を改善および／または良好に維持することができる優れた機能性ゼリー食品を提供することができる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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