(57)【要約】      （修正有）【課題】培養基（菌床）の主原料として、コーヒーの抽出滓を使用したハナビラタケとマイタケの人工栽培方法の提供。【解決手段】（１）培養基として、コーヒーの抽出滓を用いることを特徴とするハナビラタケの栽培方法。（２）培養基として、コーヒーの抽出滓を用いることを特徴とするマイタケの栽培方法。（３）ハナビラタケ、及びマイタケの収量（収穫量）を上げる目的でコーヒーの抽出滓を用いるハナビラタケの栽培方法。（４）シスタチオニン、サルコシン、オルニチンの含有量を高める目的でコーヒーの抽出滓を用いるハナビラタケの栽培方法。（５）活性酸素吸収能力を高める目的で培養基として、コーヒーの抽出滓を用いるハナビラタケの栽培方法。【選択図】図５
2019118278.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
培養基として、コーヒーの抽出滓を用いることを特徴とするハナビラタケの栽培方法。
【請求項２】
培養基として、コーヒーの抽出滓を用いることを特徴とするマイタケの栽培方法。
【請求項３】
ハナビラタケの収量（収穫量）を上げる目的でコーヒーの抽出滓を用いる請求項1に記載するハナビラタケの栽培方法。
【請求項４】
マイタケの収量（収穫量）を上げる目的でコーヒーの抽出滓を用いる請求項２に記載するマイタケの栽培方法。
【請求項５】
シスタチオニンの含有量を高める目的でコーヒーの抽出滓を用いる請求項１に記載するハナビラタケの栽培方法。
【請求項６】
サルコシンを生成させる目的でコーヒーの抽出滓を用いる請求項１に記載するハナビラタケの栽培方法。
【請求項７】
オルニチンの含有量を高める目的でコーヒーの抽出滓を用いる請求項１に記載するハナビラタケの栽培方法。
【請求項８】
活性酸素吸収能力を高める目的で培養基として、コーヒーの抽出滓を用いる請求項１に記載するハナビラタケの栽培方法。
【請求項９】
食用期限（消費期限）を延長させる目的で培養基として、コーヒーの抽出滓を用いる請求項１に記載するハナビラタケの栽培方法。
【請求項１０】
食用期限（消費期限）を延長させる目的で培養基として、コーヒーの抽出滓を用いる請求項２に記載するマイタケの栽培方法。
【請求項１１】
遊離アミノ酸含有量を増加させる目的で培養基として、コーヒーの抽出滓を用いる請求項１に記載するハナビラタケの栽培方法。
【請求項１２】
請求項１，３，５〜９，１１記載のいずれかの栽培方法により栽培され、風味的においしくしかも抗酸化作用の強いハナビラタケ。
【請求項１３】
培養基がコーヒー抽出滓を２０%以上含有する請求項１，３，５〜９，１１のいずれかに記載するハナビラタケの栽培方法。
【請求項１４】
培養基がコーヒー抽出滓を２０%以上含有する請求項２，４，１０のいずれかに記載するマイタケの栽培方法。
【請求項１５】
子実体中の非標準アミノ酸量と総アミノ酸量含有量が、下記の（Ａ）及び（Ｂ）の割合で含まれることを特徴とするハナビラタケ。
（Ａ）非標準アミノ酸≧（９０ｍｇ／１００ｇ）
（Ｂ）非標準アミノ酸量：総アミノ酸量≧０．３３
【請求項１６】
子実体中のシスタチオニン含有量が、４５ｍｇ／１００ｇ以上である請求項１５に記載するハナビラタケ。
【請求項１７】
培養基として、コーヒーの抽出滓を用いて栽培したハナビラタケの乾燥物、又は抽出物を含有することを特徴とする機能性食品の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願発明は、培養基（菌床）の主原料として、コーヒーの抽出滓を使用するハナビラタケ（Sparassis crispa）、及びマイタケ（Grifola frondosa）の栽培方法に関する。
本栽培方法により、ハナビラタケ及びマイタケの収穫量を一段と増すことができると共に、更にハナビラタケに関しては、健康効果が期待される機能性成分の含有量を高める栽培方法を提供することを目的とする。
【背景技術】
【０００２】
キノコの栽培用の培地には、主原料として通常オガクズが用いられているが、２０１１年の震災以降は放射性物質のセシウムを吸収しやすい（移行係数が高い）キノコ類は培地原料（オガクズなど）としてのセシウム含有量の低減化が重要な課題となっている。また、最近ではオガクズの供給が逼迫していること、及び森林資源保護の観点から、オガクズの代替原料として、現在産業廃棄物として大量に発生するコーヒーの抽出滓が脚光を浴び、種々のキノコの栽培に利用する試みがなされている。
しかし、ハナビラタケ及びマイタケの栽培に関しては、実際にコーヒー滓を使用した栽培例は知られていない。
【０００３】
ハナビラタケ（Sparassis crispa）は、担子菌門ハラタケ綱タマチョレイタケ目に属し、ハナビラタケ科のハナビラタケ属に分類されるキノコである。
ハナビラタケはカラマツに生える非常に希少なキノコであり、純白の色合いを持ち、歯ごたえが良い食用キノコである。人工培地での栽培は提案されているが、より安定的かつ収量の高い栽培法が求められている（特許４２３０３０９号）。
ハナビラタケにはβ−グルカンが多く含まれ、その抗がん効果が期待されている。また、神経伝達物質産生促進作用があることから痴呆症の予防、パーキンソン病予防、記憶力改善等の効果が期待できる（特許５０５２７７２号）。
このようにハナビラタケはおいしさと健康機能を兼ね備えたキノコであり、今後の市場拡大が期待されている。
【０００４】
マイタケ（舞茸、学名：Grifola frondosa）は、担子菌門トンビマイタケ科のキノコであり、初秋ごろ、深山のミズナラ、ブナなどの広葉樹の古木に発生する極めて美味な食用菌であり、古来より「幻のきのこ」として珍重されてきた。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特許第４２３０３０９号
【特許文献２】特許第５０５２７７２号
【特許文献３】特許第２７２７４３１号
【特許文献４】特表２００５−５０５５９９
【特許文献５】特開２０１２−６０９７４
【特許文献６】ＷＯ２０１１／０９６３３０
【特許文献７】ＷＯ２００７／０１３６６２パンフレット
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】日本生物学的精神医学雑誌２５（２）：１０９−１１２，２０１４
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明を完成するに至った経緯は下記のとおりである。
（Ａ）ハナビラタケについて
（１）発明者らは、オガクズの代わりに、コーヒー滓を培地に使用して収穫されるハナビラタケは、下記の有用な特性を有するという新たな知見を得た。
（イ）収穫量が飛躍的に上がること。
（ロ）遊離アミノ酸量が増加すること。
（ハ）機能性・有用成分として健康効果が注目されているシスタチオニン、サルコシン、及びオルニチンが特異的に増加すること。
（ニ）活性酸素吸収能力（ＯＲＡＣ）、及び抗酸化力が高まること。
（ホ）腐敗しにくい（消費期限を延ばせる）こと。
（ヘ）一定の割合の（非標準アミノ酸）／（総アミノ酸）においてキノコの質（おいしさ）が高まること。
（Ｂ）マイタケについて
（１）発明者らは、オガクズの代わりに、コーヒー滓を培地に使用して収穫されるマイタケは、下記の有用な特性を有するという新たな知見を得た。
（イ）収穫量が飛躍的に上がること。
（ロ）腐敗しにくい（消費期限を延ばせる）こと。
【０００８】
前記ハナビラタケ中に生産される健康効果が期待される機能性成分について説明すると次のとおりである。
（イ）シスタチオニンは、ホモシステインとセリンよりなるペプチドである。シスタチオニンには生体内ラジカル消去能があり抗潰瘍剤としての利用が提案されている（特許２７２７４３１号）。
また、シスタチオニンには感染症予防、筋肉減少予防等の効能があることが知られている（特表２００５−５０５５９９）。
（ロ）サルコシンはグリシンの合成における中間体ないしは副産物である。
サルコシンについてはシワ改善作用（ＷＯ２００７／０１３６６２  パンフレット）や美白作用（ＷＯ２０１１／０９６３３０）があることが知られており、美容効果が注目されている機能性成分である。
さらに、最近では統合失調症の新規治療薬としてサルコシンが脚光を浴びている（日本生物学的精神医学雑誌２５（２）：１０９−１１２，２０１４）。
（ハ）オルニチンは成長ホルモンの分泌を促すことが知られており、また、オルニチン回路の成分としてアンモニアの解毒に関わると共に、ポリアミンの前駆体となる。
また、オルニチン回路を活性化させて肝機能障害に伴う高アンモニア血症を改善したり、免疫増強作用を示したりすることも知られている。
従って、オルニチン含有量の高い食品素材を開発することは、非常に意義のあることである。
（ニ）抗酸化力は活性酸素を取り除く強さの指標であるが、これが高いとアンチエージング効果が期待できる。
【０００９】
一方、コーヒーの抽出滓は、焙煎したコーヒー豆を粉砕し、熱水又は水を加えてコーヒーを抽出した後の残渣を言うが、近年パック入りコーヒー飲料（缶コーヒー、ペットボットル入りコーヒー、紙容器入りコーヒー等）の生産量の増加に伴い、莫大な量が発生し、産業廃棄物として環境に多大の負荷をかけている。
しかし、前記コーヒー滓は、元々は食品であるため、これを使用してキノコを栽培するのは、安全・安心の両面から非常に好ましい。
そのため、コーヒー抽出滓のキノコ用培地への応用が試みられているが、ハナビラタケ、及びマイタケに関しては、単なるアイデアとしては存在しても、実際に栽培された記録は存在しない。
更に、コーヒー滓を使用して、キノコ中の機能成分を増加させる試みは、マンネンタケの培養によりガノデリン酸の製造した試み以外には見つからない（特開２０１２−６０９７４）。
本願発明は、以上の状況を踏まえて、コーヒーの抽出滓の有効利用を図るものである。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
従って、本願発明は、下記の請求項１〜請求項１７により構成されている。
＜請求項１＞  培養基として、コーヒーの抽出滓を用いることを特徴とするハナビラタケの栽培方法。
＜請求項２＞  培養基として、コーヒーの抽出滓を用いることを特徴とするマイタケの栽培方法。
＜請求項３＞  ハナビラタケの収量（収穫量）を上げる目的でコーヒーの抽出滓を用いる請求項1に記載するハナビラタケの栽培方法。
＜請求項４＞  マイタケの収量（収穫量）を上げる目的でコーヒーの抽出滓を用いる請求項２に記載するマイタケの栽培方法。
＜請求項５＞  シスタチオニンの含有量を高める目的でコーヒーの抽出滓を用いる請求項1に記載するハナビラタケの栽培方法。
＜請求項６＞  サルコシンを生成させる目的でコーヒーの抽出滓を用いる請求項1に記載するハナビラタケの栽培方法。
＜請求項７＞  オルニチンの含有量を高める目的でコーヒーの抽出滓を用いる請求項1に記載するハナビラタケの栽培方法。
＜請求項８＞  活性酸素吸収能力を高める目的で培養基として、コーヒーの抽出滓を用いる請求項１に記載するハナビラタケの栽培方法。
＜請求項９＞  食用期限（消費期限）を延長させる目的で培養基として、コーヒーの抽出滓を用いる請求項１に記載するハナビラタケの栽培方法。
＜請求項１０＞  食用期限（消費期限）を延長させる目的で培養基として、コーヒーの抽出滓を用いる請求項２に記載するマイタケの栽培方法。
＜請求項１１＞  遊離アミノ酸含有量を増加させる目的で培養基として、コーヒーの抽出滓を用いる請求項１に記載するハナビラタケの栽培方法。
＜請求項１２＞  請求項１，３，５〜９，１１記載のいずれかの栽培方法により栽培され、風味的においしくしかも抗酸化作用の強いハナビラタケ。
＜請求項１３＞  培養基がコーヒー抽出滓を２０％以上含有する請求項１，３，５〜９，１１のいずれかに記載するハナビラタケの栽培方法。
＜請求項１４＞  培養基がコーヒー抽出滓を２０%以上含有する請求項２，４，１０のいずれかに記載するマイタケの栽培方法。
＜請求項１５＞  子実体中の非標準アミノ酸量と総アミノ酸量含有量が、下記の（Ａ）及び（Ｂ）の割合で含まれることを特徴とするハナビラタケ。
（Ａ）非標準アミノ酸≧（９０ｍｇ／１００ｇ）
（Ｂ）非標準アミノ酸量：総アミノ酸量≧０．３３
＜請求項１６＞  子実体中のシスタチオニン含有量が、４５ｍｇ／１００ｇ以上である請求項１５に記載するハナビラタケ。
＜請求項１７＞  培養基として、コーヒーの抽出滓を用いて栽培したハナビラタケの乾燥物、又は抽出物を含有することを特徴とする機能性食品の製造方法。
【００１１】
本願発明を以上のように構成する理由は、下記のとおりである。
（１）大量に発生するコーヒー抽出滓を、有効に利用できること。
（２）従来の人工栽培に比較して、コーヒー抽出滓を使用すると、収穫量を増すことができるとともに、消費期限を延長できること。
（３）ハナビラタケについては、コーヒー抽出滓を使用すると遊離アミノ酸が増加するので風味の良い子実体が得られること。
（４）ハナビラタケについては、コーヒー抽出滓を使用すると健康に関与する機能性成分（シスタチオニン、サルコシン及びオルニチン）を生成させ又は増やせること。
（５）ハナビラタケについては、コーヒー抽出滓を使用すると抗酸化力が高まること。
（６）コーヒー抽出滓に由来するキノコ中の機能性成分の増加に注目した試みは少ないこと。
【発明の効果】
【００１２】
本発明によれば、産業廃棄物であるコーヒーの抽出滓を利用して、ハナビラタケ、及びマイタケの子実体を効率よく栽培できると共に消費期限を延長さることができ、特にハナビラタケにおいては、健康効果が注目されている種々の機能性成分を生成させ抗酸化力を高めることができるという効果を有する。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】コーヒー抽出滓５０％添加区のマイタケの菌床断面（右）と、コントロール区のマイタケ（左）の菌床断面を示す画像である。
【図２】コーヒー抽出滓５０％添加区のマイタケの発生状況を示す画像である。
【図３】コーヒー抽出滓５０％添加区のハナビラタケの菌床断面を示す画像である。
【図４】コーヒー抽出滓５０％添加区のマイタケ（右：傘色の黒系が濃い）と、コントロール区のマイタケ（左：傘色の黒系が薄い）の発生個体を示す画像である。
【図５】コーヒー抽出滓５０％添加区のハナビラタケ（右）と、コントロール区のハナビラタケ（左）の発生状況を示す画像である。
【図６】「非標準アミノ酸量／総アミノ酸量」とＯＲＡＣの関係を示すグラフである。
【図７】シスタチオニンとＯＲＡＣの関係を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
以下、下記に記載する実施例により詳細に説明する。なお、本願発明において、キノコの発生試験は、株式会社ハイファ研究所保有の下記の菌株を使用した。
ハナビラタケ（Sparrasiss crispa）：Scr N301株
マイタケ（Grifola frondosa）：GF NA-01株
なお今回、特定のハナビラタケ、マイタケの菌株を用いたが、本発明に関する栽培においては一般的に栽培されているハナビラタケ、マイタケを排除するものではない。
【実施例１】
【００１５】
（１）ハナビラタケの栽培
（イ）冷蔵保存中のハナビラタケ菌を２５℃で一定時間放置した後、クリーンベンチ内にて無菌的な条件で、シャーレ内のＰＤＡ培地上に接種した。
接種後のシャーレは、２３℃のインキュベーター内において前培養を行った。
次に、オガクズ・米糠培地を１０００ｍｌボトル瓶（ポリプロピレン製）に充填し、殺菌した後、ハナビラタケ菌を接種し、２３℃でボトル全面に蔓延させた種菌を準備した。
（ロ）試験培地は以下のコントロール区とコーヒー滓添加区に調製して行った。
（ａ）コントロール区：カラマツオガクズを主体（支持体）に栄養素（フスマ・圧ペン麦）を添加，支持体：栄養素＝４：１
（ｂ）コーヒー滓添加区：（カラマツ５０％＋コーヒー滓５０％）の支持体に栄養素（フスマ・圧ペン麦）を添加，支持体：栄養素＝４：１
（ｃ）各試験区は５菌床を用いて行った。
（ｄ）前記（ａ）、（ｂ）の支持体に対する栄養素は同量に調製して試験した。
（ハ）前記各試験区を調製混合した後、２．５ｋｇ容ポリプロピレン袋（０．２μｍフィルター付）に充填し上部を密閉した。
この培地の殺菌は１２１℃で９０分間行い、放冷後に準備しておいたハナビラタケ種菌を無菌的に接種した。
（ニ）接種後の菌床は２０℃で一定期間（約５５日）の培養を行い、試験区毎に発生操作に移行した。
（ホ）発生後の子実体はハナビラ状の形状に生育した段階で収穫し、重量測定を行った後に各種分析（アミノ酸分析・抗酸化試験）のため凍結保管した。ただし、保存試験では収穫後の子実体の一部を１０℃で冷蔵保存し経過観察した。
【００１６】
（２）マイタケの栽培
（イ）冷蔵保存中のマイタケ菌を２５℃で一定時間放置した後、クリーンベンチ内にて無菌的な条件で、ジャーレ内のＰＤＡ培地上に接種した。
接種後のシャーレは、２３℃のインキュベーター内において前培養を行った。
次に、オガクズ・米糠培地を１０００ｍｌボトル瓶（ポリプロピレン製）に充填して殺菌した後、マイタケ菌を接種し、２３℃でボトル全面に蔓延させた種菌を準備した。
（ロ）試験培地は以下のコントロール区とコーヒー滓添加区に調製して行った。
（ａ）コントロール区  ：広葉樹オガクズを主体（支持体）に栄養素（フスマ・オカラ・ホミニフィード）を添加，支持体：栄養素＝４：１
（ｂ）コーヒー滓添加区：支持体（広葉樹オガクズ５０％＋コーヒー滓５０％）に栄養素（フスマ・オカラ・ホミニフィード）を添加，支持体：栄養素＝４：１
（ｃ）各試験区は５菌床を用いて行った。
（ｄ）前記（ａ）、（ｂ）の支持体に対する栄養素は同量に調製して試験した。
（ハ）各試験区を調製混合した後、２．５ｋｇ容ポリプロピレン袋（０．２μmフィルター付）に充填し上部を密閉した。
この培地の殺菌は１２１℃で９０分間行い、放冷後に準備しておいたマイタケ種菌を無菌的に接種した。
（ニ）接種後の菌床は２０℃で一定期間の培養（約５０日）を行い、試験区毎に発生操作に移行した。
発生後の子実体は、マイタケ様のハナビラ形状に生育した段階で収穫し、重量測定を行った後、各種分析のため凍結保管した。ただし、保存試験では収穫後の子実体の一部を１０℃で冷蔵保存し経過観察した。
【００１７】
（３）ハナビラタケの収穫量（重量）
（イ）栽培した５菌床の収穫量は、下記のとおりであった。
コントロール区  ：
（ａ）４８３ｇ，（ｂ）４５１ｇ，（ｃ）５２２ｇ，（ｄ）４２１ｇ，（ｅ）４９８ｇ
→平均値＝４７５ｇ
コーヒー滓添加区：
（ａ）５５３ｇ，（ｂ）５６１ｇ，（ｂ）４９７ｇ，（ｂ）５３７ｇ，（ｂ）５８６ｇ
→平均値＝５４７ｇ
（ロ）以上に示した収穫量の結果は、統計的にも有意差があり（Ｐ＜０．０５）、コーヒー滓がハナビラタケの収量を増加させるのに効果を有していることを示している（図５参照）。
【００１８】
（４）マイタケの収穫量（重量）
（イ）栽培した５菌床の収穫量は、下記のとおりであった。
コントロール区  ：
（ａ）４２６ｇ，（ｂ）４５６ｇ，（ｃ）５０１ｇ，（ｄ）４７４，（ｅ）５１８ｇ
平均値＝４７５ｇ
コーヒー滓添加区：
（ａ）６５７ｇ，（ｂ）６２８ｇ，（ｃ）５９３ｇ，（ｄ）６１５ｇ，（ｅ）６０３ｇ
平均値＝６１９ｇ
（ロ）以上に示した収穫量の結果は、統計的にも有意差があり（Ｐ＜０．００１）、コーヒー滓が、ハナビラタケの収量を増加させるのに格段の効果を有していることを示している。
【００１９】
（５）ハナビラタケ中の遊離アミノ酸類の分析
前記（１）で栽培した２種のハナビラタケについて、標準アミノ酸類、及び非標準アミノ酸類の分析をした。
標準アミノ酸類の分析結果を表１に、非標準アミノ酸類の分析結果を表２に示す。
なお、標準、及び非標準アミノ酸類の分析は、下記の方法によった。
＜分析方法＞
冷凍されているキノコの子実体サンプルを解凍し、そのままフードプロセッサーで粉砕した後、１０．０ｇをサンプリングした。これに７５%のエタノールを加えてホモジナイザーでホモジナイズした後、８０℃で２回還流抽出した。抽出液を回収後、減圧濃縮し、最終的に水でメスアップして１００ｍｌに定容した。
この溶液をフィルター濾過した後、クエン酸リチウム緩衝液で１０倍希釈し、アミノ酸分析機に５０μl注入し、全自動アミノ酸分析装置にて分析した。
【００２０】
【表１】
2019118278.tif 000003
【００２１】
【表２】
2019118278.tif 000004
【００２２】
表１及び表２の結果によれば、コントロール区に比較して、コーヒー抽出滓５０％添加区のハナビラタケは、遊離アミノ酸が顕著に増加しており、風味的に優れていることがわかる（請求項１２）。
【００２３】
表２の結果から、コントロール区に比較して、コーヒー抽出滓５０％添加区は、サルコシンが新たに生成され、シスタチオニン及びオルニチンについても顕著に増加していることがわかる。
【００２４】
（６）ハナビラタケ活性酸素吸収能力（ＯＲＡＣ）
前記（１）で栽培したコントロール区と、コーヒー滓添加区の２種のハナビラタケについて、活性酸素吸収能力（ＯＲＡＣ）を測定した。
コントロール区に比較して、コーヒー抽出滓５０％添加区は、活性酸素吸収能力（ＯＲＡＣ）が顕著に増加していることがわかる。結果を表３に示す。
なお、ＯＲＡＣの測定は下記の分析方法によった。
＜試験溶液の調製＞
５−７ｇの試料に５０％エタノールを加え、ホモジナイズしながら抽出し５０ｍｌに定容した。１０分間超音波処理後、３，０００ ｒ／ｍｉｎにて５分間遠心分離した。ろ紙Ｎｏ. １にてろ過した後、７５ｍｍｏｌ／Ｌリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）にて適宜希釈して試験溶液とした。
＜操作条件＞
試料溶液あるいはＴｒｏｌｏｘ標準溶液（５〜８０μｍｏｌ）を９６穴マイクロプレートに２０μl入れ、フルオレセイン溶液（１１７ｍｍｏｌ／Ｌ）を２００μL加え、３７℃に１０分間以上インキュベートした後、ＡＡＰＨ溶液（４０ｍｍｏｌ／Ｌ）を６０μL加えてマイクロプレートリーダー（ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ Ｍ２ｅ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ製））にて蛍光強度を測定した。
マイクロプレート操作条件は以下の通りであった。Ｋｉｎｅｔｉｃ モードにて５分間隔で９０分間蛍光強度の経時変化を測定した。蛍光検出波長はＥｘ.４８５ｎｍ， Ｅｍ.５２０ｎｍで、蛍光検出方向はｂｏｔｔｏｍとした。蛍光強度を経時的に記録したグラフの曲線下面積（ＡＵＣ）を算出し、ブランクのＡＵＣを差し引いた値（ｎＡＵＣ）を求めた。Ｔｒｏｌｏｘ濃度５〜８０μｍｏｌ／Ｌの標準液の濃度を横軸に、ｎＡＵＣを縦軸にとった検量線を用いて希釈した試料のＯＲＡＣ値をＴｒｏｌｏｘ相当量（ＴＥ）として表した。
【００２５】
【表３】
2019118278.tif 000005
【００２６】
（７）日持ち向上試験：ハナビラタケ
収穫後１０℃の冷蔵庫で継時変化を確認した。
（イ）匂いの観察
【００２７】
【表４】
2019118278.tif 000006
【００２８】
（ロ）傷みの観察
【００２９】
【表５】
2019118278.tif 000007
【００３０】
（８）日持ち向上試験：マイタケ
収穫後１０℃の冷蔵庫で継時変化を確認した。
（イ）匂いの観察
【００３１】
【表６】
2019118278.tif 000008
【００３２】
傷みの観察
【００３３】
【表７】
2019118278.tif 000009
【００３４】
（９）ハナビラタケの官能試験
前記（１）（［００１５］）で栽培した２種類（通常栽培品及びコーヒー滓使用品）のハナビラタケについて、風味、及び食味について官能試験をした。
（イ）風味
ボランティア５名が、ハナビラタケの入ったビニール袋内を嗅いだ上で評価した。十分に確認できない場合はハナビラタケを手に取って確認し、５段階での評価を行った。
なお、風味試験の検体は、ビニール袋に新鮮なハナビラタケを入れ、常温にて１時間放置したものを使用した。
（ロ）食味
前記ハナビラタケを軽く湯掻いた後、ボランティア５名が、食した上で評価を行った。
食味については旨み・苦みの二種類を評価対象として５段階での評価を行った。
（ハ）風味についての官能試験結果を表８に示す。
食味について、旨味の官能試験結果を表９に、苦みの官能試験結果を表１０に示す。
【００３５】
【表８】
2019118278.tif 000010
【００３６】
【表９】
2019118278.tif 000011
【００３７】
【表１０】
2019118278.tif 000012
【００３８】
表８〜表１０の結果によれば、コーヒー滓を使用して栽培したハナビラタケは、風味がよく、食味としては苦みを抑え、旨みを増すことがわかる。
【実施例２】
【００３９】
（イ）冷蔵保存中のハナビラタケ菌を２５℃にて一定時間放置した後、クリーンベンチ内にて無菌的な条件で、ジャーレ内のPDA培地上に接種した。
接種後のシャーレは、２３℃のインキュベーター内において前培養を行った。次に、オガクズ・米糠培地を１０００ｍｌボトル瓶（ポリプロピレン製）に充填し、殺菌した後にハナビラタケ菌を接種し、２３℃でボトル全面に蔓延させた種菌を準備した。
（ロ）ハナビラタケを下記の（ａ）〜（ｆ）の試験培地を使用して栽培した。
（ａ）コーヒー滓使用例１：加圧抽出後のコーヒー滓使用
（ｂ）コーヒー滓使用例２：常圧抽出後のコーヒー滓使用（コーヒー臭弱）
（ｃ）コーヒー滓使用例３：常圧抽出後のコーヒー滓使用（コーヒー臭強）
前記（ａ）〜（ｃ）は、乾燥原料として、「カラマツ４０％＋コーヒー滓４０％」（支持体）、「フスマ１０％＋圧ペン麦１０％」（栄養素）を混合して調整した。
（ｄ）比較例１：カラマツ辺材部が主体
（ｅ）比較例２：カラマツ全体（心材部、辺材部、樹皮）を混合
（ｆ）比較例３：カラマツ心材部〜辺材部（樹皮を除く）
前記（ｄ）〜（ｆ）は、「カラマツ８０％」（支持体）、「フスマ１０％＋圧ペン麦１０％」（栄養素）を混合（支持体：栄養素＝４：１）して調整した。
（ハ）ハナビラタケ（ａ）〜（ｆ）区の栽培は５菌床を用い、前記［００１５］記載の方法に準じて行った。
（ニ）発生後の子実体はハナビラ状の形状に生育した段階で収穫した。
（ホ）収穫したハナビラタケの子実体について、実施例１と同様に、遊離標準アミノ酸、遊離非標準アミノ酸、活性酸素吸収能力（ORAC）を測定した。併せてキノコの質を専門パネルにより官能評価した。(○良好、 △ 普通、 ×劣る) 
測定結果を「アミノ酸量とキノコの質とORACの関係」として表１１、及び図５に示す。
【００４０】
【表１１】
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【００４１】
表１１と図6によれば、「非標準アミノ酸量／総アミノ酸量」が０．３２を超えると急激にＯＲＡＣ値が高まることがわかる。
ＯＲＡＣ値が１２４μｍｏｌ ＴＥ／ｇであることから主要な有効成分はシスタチオニンであることが分かった。
図７にハナビラタケ子実体中のシスタチオニン含有量とＯＲＡＣの関係を示す。シスタチオニンはＯＲＡＣ値と強い正の相関があり、ハナビラタケのシスタチオニン含有量が４５ｍｇ／１００ｇを超えるとＯＲＡＣ値が高まることが分かる（図７）。
ただし、必ずしもすべてのＯＲＡＣ値を説明できないので、抗酸化力と相関のあるサルコシン、オルニチン等も多く含まれることから、これらのアミノ酸も相乗的に抗酸化力の向上に寄与しているものと考えられる。
培地はこの範囲となるように適宜選択すれば良い。
抗酸化力発現に有効な非標準アミノ酸の中でも主要なシスタチオニンを多く含むタンパク質などの食品素材や植物残渣等を添加しても良い。
さらに、コーヒー滓２０％以上を含有する培地を使用するのが好ましい。
【実施例３】
【００４２】
実施例１、又は実施例２に記載したハナビラタケの培養方法により得られた子実体を乾燥し、微粉末状の機能性食品を得た。
【実施例４】
【００４３】
実施例１、又は実施例２に記載したハナビラタケの培養方法により得られた子実体を粉砕した。
前記粉砕物の熱水、又はエタノール抽出物を凍結乾燥して、微粉末状の機能性食品を得た。
【産業上の利用可能性】
【００４４】
本発明によれば、産業廃棄物であるコーヒーの抽出滓より、非常に効率よくハナビラタケ及びマイタケの子実体が生産できると共に、特にハナビラタケについては、健康に関与する機能性成分を生成させ、又は増加させることができるので、十分な産業上の利用可能性がある。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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