(57)【要約】【課題】正常ヒト歯肉線維芽細胞における優れたＩ型コラーゲン産生促進作用を有し、安全性の高い正常ヒト歯肉線維芽細胞におけるＩ型コラーゲン産生促進剤及び正常ヒト歯肉線維芽細胞における優れたＩ型コラーゲン産生促進作用を有し、安全性の高い口腔用剤の提供。【解決手段】グリチルリチン酸ジカリウム、クコ抽出物、オウゴン抽出物、カンゾウ抽出物、ニンドウ抽出物、ローヤルゼリー抽出物、オトギリソウ抽出物、ソウハクヒ抽出物及び甜茶抽出物からなる群から選択される少なくとも１種を含有する正常ヒト歯肉線維芽細胞におけるＩ型コラーゲン産生促進剤及び前記正常ヒト歯肉線維芽細胞におけるＩ型コラーゲン産生促進剤を含有する口腔用剤である。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
グリチルリチン酸ジカリウム、クコ抽出物、オウゴン抽出物、カンゾウ抽出物、ニンドウ抽出物、ローヤルゼリー抽出物、オトギリソウ抽出物、ソウハクヒ抽出物及び甜茶抽出物からなる群から選択される少なくとも１種を含有することを特徴とする正常ヒト歯肉線維芽細胞におけるＩ型コラーゲン産生促進剤。
【請求項２】
請求項１に記載の正常ヒト歯肉線維芽細胞におけるＩ型コラーゲン産生促進剤を含有することを特徴とする口腔用剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、正常ヒト歯肉線維芽細胞におけるＩ型コラーゲン産生促進剤及び口腔用剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
歯肉は、歯を支える周囲組織である歯周組織の１つであり、歯の歯根を囲んでいる。歯肉は、外界に接している上皮組織と、上皮組織の下の真皮組織の２層からなる。歯肉は、その約６０％がコラーゲンであると言われており、歯茎の弾力や結びつきを担っている。
【０００３】
前記真皮組織には、歯肉線維芽細胞が存在し、該細胞は、Ｉ型コラーゲンを産生することが知られている。また、この歯肉線維芽細胞におけるＩ型コラーゲンの産生は、加齢や歯周病原因菌が出す毒素などにより、低下してしまうことも知られている。
そのため、歯周組織の健康状態を良好なものとするためには、歯肉線維芽細胞におけるＩ型コラーゲンの産生を促進することが考えられる。
【０００４】
これまでに、歯肉の維持・改善を行う医薬用途組成物として、アスタキサンチン及び／又はアスタキサンチンの脂肪酸エステルを有効成分とし、歯肉細胞のアポトーシスを抑制・防止する組成物が提案されている（例えば、特許文献１参照）。
しかしながら、前記提案は、歯肉線維芽細胞におけるＩ型コラーゲンの産生を促進するものではない。
【０００５】
したがって、正常ヒト歯肉線維芽細胞における優れたＩ型コラーゲン産生促進作用を有する安全性の高い物質について、速やかな開発が強く求められているのが現状である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開２０１５−１１０５２６号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、前記従来における諸問題を解決し、以下の目的を達成することを課題とする。即ち、本発明は、正常ヒト歯肉線維芽細胞における優れたＩ型コラーゲン産生促進作用を有し、安全性の高い正常ヒト歯肉線維芽細胞におけるＩ型コラーゲン産生促進剤を提供することを目的とする。
また、本発明は、正常ヒト歯肉線維芽細胞における優れたＩ型コラーゲン産生促進作用を有し、安全性の高い口腔用剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
前記課題を解決するために本発明者が鋭意検討を重ねた結果、グリチルリチン酸ジカリウム、クコ抽出物、オウゴン抽出物、カンゾウ抽出物、ニンドウ抽出物、ローヤルゼリー抽出物、オトギリソウ抽出物、ソウハクヒ抽出物及び甜茶抽出物からなる群から選択される少なくとも１種が、正常ヒト歯肉線維芽細胞における優れたＩ型コラーゲン産生促進作用を有することを知見し、本発明を完成したものである。
【０００９】
本発明は、本発明者の前記知見に基づくものであり、前記課題を解決するための手段としては、以下の通りである。即ち、
＜１＞  グリチルリチン酸ジカリウム、クコ抽出物、オウゴン抽出物、カンゾウ抽出物、ニンドウ抽出物、ローヤルゼリー抽出物、オトギリソウ抽出物、ソウハクヒ抽出物及び甜茶抽出物からなる群から選択される少なくとも１種を含有することを特徴とする正常ヒト歯肉線維芽細胞におけるＩ型コラーゲン産生促進剤である。
＜２＞  前記＜１＞に記載の正常ヒト歯肉線維芽細胞におけるＩ型コラーゲン産生促進剤を含有することを特徴とする口腔用剤である。
【発明の効果】
【００１０】
本発明の正常ヒト歯肉線維芽細胞におけるＩ型コラーゲン産生促進剤によると、従来における前記諸問題を解決し、正常ヒト歯肉線維芽細胞における優れたＩ型コラーゲン産生促進作用を有し、安全性の高い正常ヒト歯肉線維芽細胞におけるＩ型コラーゲン産生促進剤を提供することができる。
本発明の口腔用剤によると、従来における前記諸問題を解決し、正常ヒト歯肉線維芽細胞における優れたＩ型コラーゲン産生促進作用を有し、安全性の高い口腔用剤を提供することができる。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
（正常ヒト歯肉線維芽細胞におけるＩ型コラーゲン産生促進剤）
本発明の正常ヒト歯肉線維芽細胞におけるＩ型コラーゲン産生促進剤は、グリチルリチン酸ジカリウム、クコ抽出物、オウゴン抽出物、カンゾウ抽出物、ニンドウ抽出物、ローヤルゼリー抽出物、オトギリソウ抽出物、ソウハクヒ抽出物及び甜茶抽出物からなる群から選択される少なくとも１種を含有し、更に必要に応じてその他の成分を含有してなる。
【００１２】
前記グリチルリチン酸ジカリウム、クコ抽出物、オウゴン抽出物、カンゾウ抽出物、ニンドウ抽出物、ローヤルゼリー抽出物、オトギリソウ抽出物、ソウハクヒ抽出物及び甜茶抽出物が、正常ヒト歯肉線維芽細胞における優れたＩ型コラーゲン産生促進作用を有し、正常ヒト歯肉線維芽細胞におけるＩ型コラーゲン産生促進剤として有用であることは、従来は全く知られておらず、本発明者らによる新たな知見である。
【００１３】
前記グリチルリチン酸ジカリウム、クコ抽出物、オウゴン抽出物、カンゾウ抽出物、ニンドウ抽出物、ローヤルゼリー抽出物、オトギリソウ抽出物、ソウハクヒ抽出物及び甜茶抽出物は、１種単独で使用してもよいし、２種以上を併用してもよい。
【００１４】
＜グリチルリチン酸ジカリウム＞
グリチルリチン酸ジカリウムは、Ｃ４２Ｈ６０Ｋ２Ｏ１６で表される分子量８９９．１の化合物である。
グリチルリチン酸ジカリウムは、化学合成により調製したものを使用してもよいし、市販品を使用してもよい。
前記化学合成の方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、グリチルリチン酸と、水酸化カリウム（ＫＯＨ）などとを反応させる方法などが挙げられる。
【００１５】
前記グリチルリチン酸を入手する方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、市販品を用いる方法、グリチルリチン酸を含有する植物抽出物から単離及び精製の少なくともいずれかの方法により得る方法などが挙げられる。
【００１６】
前記グリチルリチン酸を含有する植物抽出物は、グリチルリチン酸を含有する植物を抽出原料として得られる抽出液、当該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、当該抽出液を乾燥して得られる乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物のいずれであってもよい。
前記グリチルリチン酸を含有する植物抽出物は、植物の抽出に一般に用いられている方法によって得ることができる。グリチルリチン酸を含有する植物としては、例えば、カンゾウなどが挙げられる。
【００１７】
＜クコ抽出物＞
クコ（学名：Ｌｙｃｉｕｍ ｃｈｉｎｅｎｓｅ又はＬｙｃｉｕｍ ｂａｒｂａｒｕｍ）は、ナス科クコ属に属する植物で東アジアに広く分布しており、これらの地域から容易に入手することができる。
【００１８】
前記クコ抽出物は、抽出原料として使用する部位から調製したものを使用してもよいし、市販品を使用してもよい。
前記クコの抽出部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、葉部が好ましい。
前記クコ抽出物の調製方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、後述する天然物の抽出物の調製方法などにより、調製することができる。
【００１９】
＜オウゴン抽出物＞
オウゴン（生薬名）は、中国北部から東北部、モンゴル等に分布しているシソ科タツナミソウ属に属する多年草であるコガネバナ（学名：Ｓｃｕｔｅｌｌａｒｉａ ｂａｉｃａｌｅｎｓｉｓ  Ｇｅｏｒｇｉ）の根部であり、これらの地域から容易に入手することができる。オウゴンは、従来、健胃薬、抗アレルギー剤等として使用されている。
【００２０】
前記オウゴン抽出物は、コガネバナの根部から調製したものを使用してもよいし、市販品を使用してもよい。
前記オウゴン抽出物の調製方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、後述する天然物の抽出物の調製方法などにより、調製することができる。
【００２１】
＜カンゾウ抽出物＞
カンゾウ（甘草）は、マメ科グリチルリーザ（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ）属に属する多年生草本であり、古代より薬用又は甘味料の原料として利用されている。前記カンゾウには、グリチルリーザ・グラブラ（Ｇｌｙｃｈｙｒｒｈｉｚａ ｇｌａｂｒａ）、グリチルリーザ・インフラータ（Ｇｌｙｃｈｙｒｒｈｉｚａ ｉｎｆｌａｔａ）、グリチルリーザ・ウラレンシス（Ｇｌｙｃｈｙｒｒｈｉｚａ ｕｒａｌｅｎｓｉｓ）、グリチルリーザ・アスペラ（Ｇｌｙｃｈｙｒｒｈｉｚａ ａｓｐｅｒａ）、グリチルリーザ・ユーリカルパ（Ｇｌｙｃｈｙｒｒｈｉｚａ ｅｕｒｙｃａｒｐａ）、グリチルリーザ・パリディフロラ（Ｇｌｙｃｈｙｒｒｈｉｚａ ｐａｌｌｉｄｉｆｌｏｒａ）、グリチルリーザ・ユンナネンシス（Ｇｌｙｃｈｙｒｒｈｉｚａ ｙｕｎｎａｎｅｎｓｉｓ）、グリチルリーザ・レピドタ（Ｇｌｙｃｈｙｒｒｈｉｚａ ｌｅｐｉｄｏｔａ）、グリチルリーザ・エキナタ（Ｇｌｙｃｈｙｒｒｈｉｚａ ｅｃｈｉｎａｔａ）、グリチルリーザ・アカンソカルパ（Ｇｌｙｃｈｙｒｒｈｉｚａ ａｃａｎｔｈｏｃａｒｐａ）など、様々な種類のものがある。
【００２２】
前記カンゾウ抽出物は、抽出原料として使用する抽出部位から調製したものを使用してもよいし、市販品を使用してもよい。
前記抽出原料として用いるカンゾウの種類としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。
前記カンゾウの抽出部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、葉部、枝部、樹皮部、幹部、茎部、果実部、種子部、花部等の地上部、根部、根茎部又はこれらの部位の混合物などが挙げられる。これらの中でも、根部、葉部、根茎部が好ましい。
前記カンゾウ抽出物の調製方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、後述する天然物の抽出物の調製方法などにより、調製することができる。
【００２３】
＜ニンドウ抽出物＞
ニンドウ（学名：Ｌｏｎｉｃｅｒａ ｊａｐｏｎｉｃａ）は、スイカズラ科に属する植物で中国、朝鮮、日本各地で生育しており、これらの地域から容易に入手することができる。
【００２４】
前記ニンドウ抽出物は、抽出原料として使用する抽出部位から調製したものを使用してもよいし、市販品を使用してもよい。
前記ニンドウの抽出部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、花蕾部、葉部、枝部、種子、樹皮、根部、茎部又はこれらの部位の混合物などが挙げられる。これらの中でも、葉部、茎部が好ましい。
前記ニンドウ抽出物の調製方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、後述する天然物の抽出物の調製方法などにより、調製することができる。
【００２５】
＜ローヤルゼリー抽出物＞
ローヤルゼリーは、ヨーロッパ、アフリカ等に分布しているミツバチ科ミツバチ属に属するヨーロッパミツバチ（学名：Ａｐｉｓ ｍｅｌｉｆｅｒａ  Ｌ．，別名：セイヨウミツバチ）又はトウヨウミツバチ（学名：Ａｐｉｓ ｉｎｄｅｃａ  Ｒａｄｏｓｚｋｏｗｓｋｉ）のうちの若い働き蜂の咽頭腺からの分泌物であり、女王蜂となる幼虫や成虫となった女王蜂に給餌されるものである。
【００２６】
前ローヤルゼリー抽出物は、ローヤルゼリーから調製したものを使用してもよいし、市販品を使用してもよい。
前記ローヤルゼリー抽出物の調製方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、後述する天然物の抽出物の調製方法などにより、調製することができる。
【００２７】
＜オトギリソウ抽出物＞
オトギリソウ（Ｈｙｐｅｒｉｃｕｍ ｅｒｅｃｔｕｍ，Ｈｙｐｅｒｉｃｕｍ ｐｅｒｆｏｒａｔｕｍ）は、オトギリソウ科オトギリソウ属に属する多年生草本であって、本州、四国、九州等に自生しており、これらの地域から容易に入手することができる。
【００２８】
前記オトギリソウ抽出物は、抽出原料として使用する抽出部位から調製したものを使用してもよいし、市販品を使用してもよい。
前記オトギリソウの抽出部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、葉部、茎部、根部、花部、地上部又はこれらの部位の混合物などが挙げられる。これらの中でも、地上部、全草が好ましい。
前記オトギリソウ抽出物の調製方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、後述する天然物の抽出物の調製方法などにより、調製することができる。
【００２９】
＜ソウハクヒ抽出物＞
ソウハクヒ（生薬名）は、中国等に分布している落葉高木であるクワ科クワ属に属するマグワ（学名：Ｍｏｒｕｓ ａｌｂａ  Ｌ．）の根皮部であり、これらの地域から容易に入手することができる。ソウハクヒは、従来、消炎、利尿、解熱、鎮痛薬等として使用されている。
【００３０】
前記ソウハクヒ抽出物は、マグワの根皮部から調製したものを使用してもよいし、市販品を使用してもよい。
前記ソウハクヒ抽出物の調製方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、後述する天然物の抽出物の調製方法などにより、調製することができる。
【００３１】
＜甜茶抽出物＞
甜茶（Ｒｕｂｕｓ ｓｕａｖｉｓｓｉｍｕｓ）は、バラ科キイチゴ属に属する灌木であって、中国南部で自生しており、これらの地域から容易に入手することができる。甜茶抽出物は、従来、抗アレルギー剤等として用いられている。
【００３２】
前記甜茶抽出物は、抽出原料として使用する抽出部位から調製したものを使用してもよいし、市販品を使用してもよい。
前記甜茶の抽出部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、葉部、茎部、花部、果実部等の地上部、根部等の地下部又はこれらの部位の混合物などが挙げられる。これらの中でも、葉部が好ましい。
前記甜茶抽出物の調製方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、後述する天然物の抽出物の調製方法などにより、調製することができる。
【００３３】
−天然物の抽出物の調製方法−
上記したクコ抽出物、オウゴン抽出物、カンゾウ抽出物、ニンドウ抽出物、ローヤルゼリー抽出物、オトギリソウ抽出物、ソウハクヒ抽出物及び甜茶抽出物（以下、「各種天然物の抽出物」と称することがある。）は、植物の抽出に一般に用いられる方法を利用することによって、容易に得ることができる。なお、前記各種天然物の抽出物には、前各種天然物の抽出液、該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、該抽出液の乾燥物、又は、これらの粗精製物若しくは精製物のいずれもが含まれる。
【００３４】
前記各種天然物からの抽出物の調製方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、抽出原料を乾燥した後、そのまま又は粗砕機を用いて粉砕し、抽出溶媒による抽出に供することにより得ることができる。前記乾燥は、天日で行ってもよいし、通常使用される乾燥機を用いて行ってもよい。
また、ヘキサン等の非極性溶媒によって脱脂等の前処理を施してから抽出原料として使用してもよい。脱脂等の前処理を行うことにより、極性溶媒による抽出処理を効率よく行うことができる。
【００３５】
前記抽出溶媒としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、水、親水性有機溶媒、又はこれらの混合溶媒などが挙げられる。
【００３６】
前記抽出溶媒として使用し得る水としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水等の他、これらに各種処理を施したものが含まれる。水に施す処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、ろ過、イオン交換、浸透圧の調整、緩衝化等が含まれる。したがって、前記抽出溶媒として使用し得る水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等も含まれる。
【００３７】
前記植物の抽出溶媒として使用し得る親水性有機溶媒としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１〜５の低級アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の炭素数２〜５の多価アルコールなどが挙げられ、これら親水性有機溶媒と水との混合溶媒なども用いることができる。
【００３８】
前記水と前記親水性有機溶媒との混合溶媒を使用する場合の混合比としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、水と低級アルコールとの混合溶媒の場合は、水と低級アルコールとの混合比が、９：１〜１：９（容量比）であることが好ましく、８：２〜２：８（容量比）であることがさらに好ましい。また、水と低級脂肪族ケトンとの混合溶媒の場合は、水と低級脂肪族ケトンとの混合比が、９：１〜２：８（容量比）であることが好ましい。また、水と多価アルコールとの混合溶媒の場合は、水と多価アルコールとの混合比が５：５〜１：９（容量比）であることが好ましい。
【００３９】
前記抽出溶媒は、室温又は溶媒の沸点以下の温度で用いることが好ましい。
【００４０】
前記抽出の方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、抽出原料の５倍量〜１５倍量（質量比）の抽出溶媒に、抽出原料を浸漬し、常温又は還流加熱下で可溶性成分を抽出させた後、濾過して抽出残渣を除去し、抽出液を得て、次いで、前記抽出液から溶媒を留去し、ペースト状の濃縮物を得て、この濃縮物をさらに乾燥し、乾燥物とする方法などがあげられる。
前記抽出における条件としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。
【００４１】
なお、得られた前記各種天然物の抽出物は、前記各種天然物の抽出物の希釈物、濃縮物、乾燥物、粗精製物、精製物などを得るために、常法に従って希釈、濃縮、乾燥、精製などの処理を施してもよい。
また、得られた前記各種天然物の抽出物は、そのままでも前記正常ヒト歯肉線維芽細胞におけるＩ型コラーゲン産生促進剤として使用することができるが、利用しやすい点で、前記濃縮液、前記乾燥物が好ましい。前記乾燥物を得るに当たって、吸湿性を改善するためにデキストリン、シクロデキストリンなどのキャリアーを加えてもよい。
【００４２】
前記グリチルリチン酸ジカリウム、クコ抽出物、オウゴン抽出物、カンゾウ抽出物、ニンドウ抽出物、ローヤルゼリー抽出物、オトギリソウ抽出物、ソウハクヒ抽出物及び甜茶抽出物からなる群から選択される少なくとも１種の前記正常ヒト歯肉線維芽細胞におけるＩ型コラーゲン産生促進剤における含有量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。
【００４３】
＜その他の成分＞
前記その他の成分としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、賦形剤、防湿剤、防腐剤、強化剤、増粘剤、乳化剤、酸化防止剤、甘味料、酸味料、調味料、着色料、香料、美白剤、保湿剤、油性成分、紫外線吸収剤、界面活性剤、アルコール類、粉末成分、色剤、水性成分、水、皮膚栄養剤などが挙げられる。
前記その他の成分の前記正常ヒト歯肉線維芽細胞におけるＩ型コラーゲン産生促進剤における含有量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。
【００４４】
前記グリチルリチン酸ジカリウム、クコ抽出物、オウゴン抽出物、カンゾウ抽出物、ニンドウ抽出物、ローヤルゼリー抽出物、オトギリソウ抽出物、ソウハクヒ抽出物及び甜茶抽出物は、正常ヒト歯肉線維芽細胞における優れたＩ型コラーゲン産生促進作用を有しているため、正常ヒト歯肉線維芽細胞におけるＩ型コラーゲン産生促進剤の有効成分として用いることができる。
【００４５】
＜用途＞
本発明の正常ヒト歯肉線維芽細胞におけるＩ型コラーゲン産生促進剤の用途としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、後述する口腔用剤などとして好適に用いることができ、その含有量、用法及び剤型としては、その使用目的に応じて適宜選択することができる。
【００４６】
（口腔用剤）
本発明の口腔用剤は、本発明の正常ヒト歯肉線維芽細胞におけるＩ型コラーゲン産生促進剤を含有し、更に必要に応じてその他の成分を含有してなる。
【００４７】
前記口腔用剤における前記正常ヒト歯肉線維芽細胞におけるＩ型コラーゲン産生促進剤の含有量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。前記口腔用剤は、前記正常ヒト歯肉線維芽細胞におけるＩ型コラーゲン産生促進剤のみからなるものであってもよい。
【００４８】
前記口腔用剤におけるその他の成分としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、通常の口腔用剤の製造に用いられる主剤、助剤又はその他の成分を併用することができ、より具体的には、リン酸水素カルシウム、炭酸カルシウム、不溶性メタリン酸ナトリウム、アルミノシリケート、無水ケイ酸、レジン等の研磨剤；長鎖アルキル硫酸ナトリウム、ラウリルスルホ酢酸ナトリウム、ラウリルジエタノールアマイド、ショ糖脂肪酸エステル等の界面活性剤；カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）、ヒドロキシエチルセルロース、アルギン酸塩、カラゲナン、アラビアガム、ポリビニルアルコール等の粘結剤；ポリエチレングリコール、ソルビトール、グリセリン、プロピレングリコール等の粘稠剤；サッカリン、ステビオサイド類、グリチルリチン酸、ソーマチン等の甘味剤；デヒドロ酢酸、デヒドロ酢酸ナトリウム等の防腐剤；メントール、カルボン、オイゲノール、アネトール、ハッカ油、スペアミント油、ペパーミント油、ユーカリ油、ジンジャー油、アニス油等の香料；各種色素等などが挙げられる。これらは、１種単独で使用してもよいし、２種以上を併用してもよい。
前記口腔用剤におけるその他の成分の含有量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。
【００４９】
本発明の口腔用剤は、正常ヒト歯肉線維芽細胞における優れたＩ型コラーゲン産生促進を有するため、例えば、歯周組織におけるコラーゲンの再生の促進用途などに好適に用いることができる。
【００５０】
前記口腔用剤の形態としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、歯磨き、マウスウォッシュ、トローチ、歯肉マッサージクリーム、うがい剤、口中清涼剤などが挙げられる。
【００５１】
本発明の正常ヒト歯肉線維芽細胞におけるＩ型コラーゲン産生促進剤及び口腔用剤は、ヒトに対して好適に適用されるものであるが、それぞれの作用効果が奏される限り、ヒト以外の動物に対して適用することもできる。
【実施例】
【００５２】
以下、本発明の製造例及び試験例を説明するが、本発明は、これらの製造例及び試験例に何ら限定されるものではない。
【００５３】
後述の試験例１−１及び１−２に用いた素材は、以下のとおりである。
（１）  グリチルリチン酸ジカリウム（外原規グリチルリチン酸ジカリウム、丸善製薬株式会社製）
（２）  オウゴン抽出物（オウゴン抽出液ＢＧ−ＬＣ（抽出原料：コガネバナ（根部）、抽出溶媒：５０容量％１，３−ブチレングリコール）、丸善製薬株式会社製）
（３）  カンゾウ抽出物（カンゾウ抽出液（抽出原料：カンゾウ（根部）、抽出溶媒：水）、丸善製薬株式会社製）
（４）  ニンドウ抽出物（ニンドウ抽出液−Ｊ（抽出原料：ニンドウ（葉部）、抽出溶媒：９０容量％エタノール）、丸善製薬株式会社製）
（５）  ローヤルゼリー抽出物（ローヤルゼリー抽出液ＢＧ（抽出溶媒：５０容量％１，３−ブチレングリコール）、丸善製薬株式会社製）
（６）  オトギリソウ抽出物（オトギリソウ抽出液−Ｊ（抽出原料：セイヨウオトギリソウ（花部、葉部及び茎部）、抽出溶媒：９０容量％エタノール）、丸善製薬株式会社製）
（７）  ソウハクヒ抽出物（ソウハクヒ抽出液ＢＧ（抽出原料：マグワ（根皮部）、抽出溶媒：５０容量％１，３−ブチレングリコール）、丸善製薬株式会社製）
（８）  甜茶抽出物（甜茶抽出液ＢＧＷ（抽出原料：甜茶（葉部）、抽出溶媒：５０容量％１，３−ブチレングリコール）、丸善製薬株式会社製）
（９）  クコ抽出物（下記製造例１〜３参照）
【００５４】
（製造例１〜３）
−クコ抽出物の製造−
乾燥クコ葉２０ｇに１０倍量の溶媒（下記表１参照）を加え、２時間還流抽出を行った。減圧濾過した後、溶媒を除去し、各抽出物とした。収率を表１に併せて示す。
【００５５】
【表１】
2019043855.tif 000002
【００５６】
（試験例１−１）
＜ＮＨＧＦ細胞におけるＩ型コラーゲン産生促進作用試験＞
上記した各素材を被験試料として用い、下記の試験方法により、ＮＨＧＦ細胞におけるＩ型コラーゲン産生促進作用を試験した。
【００５７】
正常ヒト歯肉線維芽細胞（Ｎｏｒｍａｌ  Ｈｕｍａｎ  Ｇｉｎｇｉｖａｌ  Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ）を、正常ヒト線維芽細胞増殖用低血清培地（ＬＦＫ−ＬＳ１０３８）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を１．６×１０５細胞／ｍＬの濃度になるようにＬＦＫ−ＬＳ１０３８培地で希釈した後、９６ウェルプレートに１ウェル当たり１００μＬずつ播種し、１日間培養した。
培養終了後、正常ヒト線維芽細胞増殖用無血清培地（ＬＦＫ−ＬＳ１０１０）で溶解した被験試料（試料濃度は下記表２−１及び２−２を参照）を各ウェルに１００μＬ添加し、３日間培養した。なお、コントロールとして、試料無添加のＬＦＫ−ＬＳ１０１０培地を用いて同様に培養した。培養終了後、各ウェルの培地中のＩ型コラーゲン量をＥＬＩＳＡ法により測定した。測定結果から、下記式１によりＩ型コラーゲン産生促進率（％）を算出した。
結果を表２−１及び２−２の上段に示す。
＜式１＞
Ｉ型コラーゲン産生促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
式１中、「Ａ」は、「被験試料添加時のＩ型コラーゲン量」を表し、「Ｂ」は、「試料無添加時のＩ型コラーゲン量」を表す。
【００５８】
（試験例１−２）
＜ＮＢ１ＲＧＢ細胞におけるＩ型コラーゲン産生促進作用試験＞
上記した各素材を被験試料として用い、下記の試験方法により、ＮＢ１ＲＧＢ細胞におけるＩ型コラーゲン産生促進作用を試験した。
【００５９】
正常ヒト皮膚線維芽細胞（ＮＢ１ＲＧＢ細胞）を、１０％ＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭ培地を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を１．６×１０５細胞／ｍＬの濃度になるように上記培地で希釈した後、９６ウェルプレートに１ウェルあたり１００μＬずつ播種し、一晩培養した。
培養終了後、培地を除去し、０．２５％ＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭ培地に溶解した被験試料（試料濃度は下記表２−１及び２−２を参照）を各ウェルに１５０μＬ添加し、３日間培養した。なお、コントロールとして、試料無添加の０．２５％ＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭ培地を用いて同様に培養した。培養終了後、各ウェルの培地中のＩ型コラーゲン量をＥＬＩＳＡ法により測定した。測定結果から、下記式２によりＩ型コラーゲン産生促進率（％）を算出した。
結果を表２−１及び２−２の下段に示す。
＜式２＞
Ｉ型コラーゲン産生促進率（％）＝Ｃ／Ｄ×１００
式２中、「Ｃ」は、「被験試料添加時のＩ型コラーゲン量」を表し、「Ｄ」は、「試料無添加時のＩ型コラーゲン量」を表す。
【００６０】
【表２−１】
2019043855.tif 000003
【００６１】
【表２−２】
2019043855.tif 000004
【００６２】
表２−１及び２−２の結果から、正常ヒト皮膚線維芽細胞では、Ｉ型コラーゲン産生促進率は高くても１１４％程度であった。
一方、正常ヒト歯肉線維芽細胞におけるＩ型コラーゲン産生促進率は、同種及び同濃度の素材を用いた場合には、少なくとも正常ヒト皮膚線維芽細胞におけるＩ型コラーゲン産生促進率よりも高い結果となった。
そのため、グリチルリチン酸ジカリウム、クコ抽出物、オウゴン抽出物、カンゾウ抽出物、ニンドウ抽出物、ローヤルゼリー抽出物、オトギリソウ抽出物、ソウハクヒ抽出物及び甜茶抽出物は、正常ヒト歯肉線維芽細胞特異的に優れたＩ型コラーゲン産生促進作用を示すことが確認され、これらの素材が、正常ヒト歯肉線維芽細胞におけるＩ型コラーゲン産生促進剤及び口腔用剤の有効成分として優れたものであると考えられた。
【００６３】
（配合例１）
常法により、下記組成のマウスウォッシュを製造した。
・  グリチルリチン酸ジカリウム              ０．２質量部
（外原規グリチルリチン酸ジカリウム、丸善製薬株式会社製）
・  第二リン酸カルシウム                  ４５．０質量部
・  カルボキシメチルセルロースナトリウム    １．０質量部
・  グリセリン                            ２０．０質量部
・  ラウリル硫酸ナトリウム                  ２．０質量部
・  香料                                    １．０質量部
・  精製水                                ３０．０質量部
【００６４】
（配合例２）
常法により、下記組成のマウスウォッシュを製造した。
・  オウゴン抽出物                          ０．２質量部
（オウゴン抽出液ＢＧ−ＬＣ、丸善製薬株式会社製）
・  第二リン酸カルシウム                  ４５．０質量部
・  カルボキシメチルセルロースナトリウム    １．０質量部
・  グリセリン                            ２０．０質量部
・  ラウリル硫酸ナトリウム                  ２．０質量部
・  香料                                    １．０質量部
・  精製水                                ３０．０質量部
【００６５】
（配合例３）
常法により、下記組成のマウスウォッシュを製造した。
・  カンゾウ抽出物                          ０．２質量部
（カンゾウ抽出液、丸善製薬株式会社製）
・  第二リン酸カルシウム                  ４５．０質量部
・  カルボキシメチルセルロースナトリウム    １．０質量部
・  グリセリン                            ２０．０質量部
・  ラウリル硫酸ナトリウム                  ２．０質量部
・  香料                                    １．０質量部
・  精製水                                ３０．０質量部
【００６６】
（配合例４）
常法により、下記組成のマウスウォッシュを製造した。
・  ニンドウ抽出物                          ０．２質量部
（ニンドウ抽出液−Ｊ、丸善製薬株式会社製）
・  第二リン酸カルシウム                  ４５．０質量部
・  カルボキシメチルセルロースナトリウム    １．０質量部
・  グリセリン                            ２０．０質量部
・  ラウリル硫酸ナトリウム                  ２．０質量部
・  香料                                    １．０質量部
・  精製水                                ３０．０質量部
【００６７】
（配合例５）
常法により、下記組成の練り歯磨きを製造した。
・  ローヤルゼリー抽出物                    ０．１質量部
（ローヤルゼリー抽出液ＢＧ、丸善製薬株式会社製）
・  炭酸カルシウム                        ３９．０質量部
・  ソルビトール                          ２２．０質量部
・  カルボキシメチルセルロース              １．１質量部
・  ラウリル硫酸ナトリウム                  １．３質量部
・  サッカリン                              ０．１質量部
・  香料                                    １．０質量部
・  塩酸クロルヘキシジン                    ０．０１質量部
・  精製水                                ３５．０質量部
【００６８】
（配合例６）
常法により、下記組成の練り歯磨きを製造した。
・  オトギリソウ抽出物                      ０．１質量部
（オトギリソウ抽出液−Ｊ、丸善製薬株式会社製）
・  炭酸カルシウム                        ３９．０質量部
・  ソルビトール                          ２２．０質量部
・  カルボキシメチルセルロース              １．１質量部
・  ラウリル硫酸ナトリウム                  １．３質量部
・  サッカリン                              ０．１質量部
・  香料                                    １．０質量部
・  塩酸クロルヘキシジン                    ０．０１質量部
・  精製水                                ３５．０質量部
【００６９】
（配合例７）
常法により、下記組成の練り歯磨きを製造した。
・  ソウハクヒ抽出物                        ０．１質量部
（ソウハクヒ抽出液ＢＧ、丸善製薬株式会社製）
・  炭酸カルシウム                        ３９．０質量部
・  ソルビトール                          ２２．０質量部
・  カルボキシメチルセルロース              １．１質量部
・  ラウリル硫酸ナトリウム                  １．３質量部
・  サッカリン                              ０．１質量部
・  香料                                    １．０質量部
・  塩酸クロルヘキシジン                    ０．０１質量部
・  精製水                                ３５．０質量部
【００７０】
（配合例８）
常法により、下記組成の練り歯磨きを製造した。
・  甜茶抽出物                              ０．１質量部
（甜茶抽出液ＢＧＷ、丸善製薬株式会社製）
・  炭酸カルシウム                        ３９．０質量部
・  ソルビトール                          ２２．０質量部
・  カルボキシメチルセルロース              １．１質量部
・  ラウリル硫酸ナトリウム                  １．３質量部
・  サッカリン                              ０．１質量部
・  香料                                    １．０質量部
・  塩酸クロルヘキシジン                    ０．０１質量部
・  精製水                                ３５．０質量部
【００７１】
（配合例９）
常法により、下記組成のマウスウォッシュを製造した。
・  クコ抽出物                              ０．２質量部
（製造例１のクコ葉熱水抽出物）
・  第二リン酸カルシウム                  ４５．０質量部
・  カルボキシメチルセルロースナトリウム    １．０質量部
・  グリセリン                            ２０．０質量部
・  ラウリル硫酸ナトリウム                  ２．０質量部
・  香料                                    １．０質量部
・  精製水                                ３０．０質量部
【００７２】
（配合例１０）
常法により、下記組成の練り歯磨きを製造した。
・  クコ抽出物                              ０．１質量部
（製造例２のクコ葉５０容量％エタノール抽出物）
・  炭酸カルシウム                        ３９．０質量部
・  ソルビトール                          ２２．０質量部
・  カルボキシメチルセルロース              １．１質量部
・  ラウリル硫酸ナトリウム                  １．３質量部
・  サッカリン                              ０．１質量部
・  香料                                    １．０質量部
・  塩酸クロルヘキシジン                    ０．０１質量部
・  精製水                                ３５．０質量部
【００７３】
（配合例１１）
常法により、下記組成の練り歯磨きを製造した。
・  クコ抽出物                              ０．１質量部
（製造例３のクコ葉８０容量％エタノール抽出物）
・  炭酸カルシウム                        ３９．０質量部
・  ソルビトール                          ２２．０質量部
・  カルボキシメチルセルロース              １．１質量部
・  ラウリル硫酸ナトリウム                  １．３質量部
・  サッカリン                              ０．１質量部
・  香料                                    １．０質量部
・  塩酸クロルヘキシジン                    ０．０１質量部
・  精製水                                ３５．０質量部