(57)【要約】【課題】再分散性に優れる磁性粒子であって、かつ、該粒子を用いた診断等の際に高いＳ／Ｎ比を示す磁性粒子を提供すること。【解決手段】芳香族系モノマーに由来する構造単位（Ａ）を、重合体を構成する全構造単位に対して２０〜８０質量％含む重合体を少なくとも表面に有し、比表面積Ｓと球状相当比表面積Ｓｇとの比Ｓ／Ｓｇが６．０以下である、磁性粒子。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
芳香族系モノマーに由来する構造単位（Ａ）を、重合体を構成する全構造単位に対して２０〜８０質量％含む重合体を少なくとも表面に有し、
比表面積Ｓと球状相当比表面積Ｓｇとの比Ｓ／Ｓｇが６．０以下である、
磁性粒子。
【請求項２】
前記芳香族系モノマーが、芳香族ビニルモノマーである、請求項１に記載の磁性粒子。
【請求項３】
前記芳香族ビニルモノマーがジビニルベンゼンである、請求項２に記載の磁性粒子。
【請求項４】
前記重合体がさらに、プローブと化学結合可能な官能基を有する構造単位（Ｂ）を、重合体を構成する全構造単位に対して１５〜７０質量％含有する、請求項１〜３のいずれか１つに記載の磁性粒子。
【請求項５】
前記構造単位（Ｂ）が式（１）で表される、請求項４に記載の磁性粒子。
【化１】
2019082356.tif 000013
〔式（１）中、
Ｒ1は、水素原子またはメチル基を示し、
Ｒ2は、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−＊、−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＲ4−＊（Ｒ4は、水素原子またはメチル基を示し、＊は、式（１）中のＲ3と結合する位置を示す）またはフェニレン基を示し、
Ｒ2が−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−＊である場合、Ｒ3は、水素原子またはプローブと化学結合可能な官能基を有する有機基を示し、Ｒ2が−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＲ4−＊またはフェニレン基である場合、Ｒ3は、プローブと化学結合可能な官能基を有する有機基を示す。〕
【請求項６】
前記構造単位（Ｂ）が式（２）で表される、請求項４または５に記載の磁性粒子。
【化２】
2019082356.tif 000014
〔式（２）中、
Ｒ1は、水素原子またはメチル基を示し、
Ｒ5は、炭素数２〜６の直鎖または分岐のアルキレン基を示し、
Ｒ6は、炭素数２〜６のアルキレン基、シクロヘキシレン基またはフェニレン基を示す。〕
【請求項７】
前記構造単位（Ｂ）が、２−（メタ）アクリロイロキシエチルコハク酸、２−（メタ）アクリロイロキシエチルフタル酸、２−（メタ）アクリロイロキシエチルヘキサヒドロフタル酸、２−（メタ）アクリロイロキシプロピルコハク酸、２−（メタ）アクリロイロキシプロピルフタル酸、および、２−（メタ）アクリロイロキシプロピルヘキサヒドロフタル酸からなる群より選ばれる少なくとも１つに由来する、請求項４〜６のいずれか１つに記載の磁性粒子。
【請求項８】
前記重合体がさらに、弱親水性モノマーに由来する構造単位（Ｃ）を、重合体を構成する全構造単位に対して１０〜６０質量％含有する、請求項１〜７のいずれか１つに記載の磁性粒子。
【請求項９】
前記構造単位（Ｃ）が構造単位（Ｃ−１）および（Ｃ−２）から選ばれる１種または２種以上である、請求項８に記載の磁性粒子。
（Ｃ−１）重合させてホモポリマーとし自由水を共存させた場合に中間水を保持するモノアクリレートモノマーまたは該ホモポリマーの側鎖と同一構造を有するモノメタクリレートモノマーに由来する構造単位
（Ｃ−２）式（３）で表されるモノ（メタ）アクリレートモノマーに由来する構造単位
【化３】
2019082356.tif 000015
〔式（３）中、
Ｒ7は、水素原子またはメチル基を示し、
Ｒ8は、炭化水素基を示す。〕
【請求項１０】
前記構造単位（Ｃ）として構造単位（Ｃ−１）を含む、請求項９に記載の磁性粒子。
【請求項１１】
構造単位（Ｃ−１）が式（４）または（５）に由来する構造単位である、請求項９または１０に記載の磁性粒子。
【化４】
2019082356.tif 000016
〔式（４）中、
Ｒ9は、水素原子またはメチル基を示し、
Ｒ10は、炭素数１〜３のアルカンジイル基を示し、
Ｒ11は、炭素数１〜３のアルキル基を示し、
ｎは、１〜５の整数を示す。〕
【化５】
2019082356.tif 000017
〔式（５）中、
Ｒ12は、水素原子またはメチル基を示し、
ｍは、１または２を示す。〕
【請求項１２】
前記磁性粒子の数平均粒径が５ｎｍ〜２０μｍである、請求項１〜１１のいずれか１つに記載の磁性粒子。
【請求項１３】
前記磁性粒子の数平均粒径の変動係数（ＣＶ値）が２０％以下である、請求項１〜１２のいずれか１つに記載の磁性粒子。
【請求項１４】
前記磁性粒子の平均円形度が０．９６５〜１．０００である、請求項１〜１３のいずれか１つに記載の磁性粒子。
【請求項１５】
前記磁性粒子がプローブを結合する官能基を有し、該磁性粒子中のプローブを結合する官能基密度が１〜２００μｍｏｌ／ｇである、請求項１〜１４のいずれか１つに記載の磁性粒子。
【請求項１６】
前記磁性粒子がコアシェル構造を有し、該シェルが前記重合体を主成分とする、請求項１〜１５のいずれか１つに記載の磁性粒子。
【請求項１７】
前記シェルの厚みが０．０１〜０．３μｍである、請求項１６に記載の磁性粒子。
【請求項１８】
前記磁性粒子の表面に磁性体が露出していない、請求項１〜１７のいずれか１つに記載の磁性粒子。
【請求項１９】
請求項１〜１８のいずれか１つに記載の磁性粒子にプローブが結合した、磁性粒子。
【請求項２０】
体外診断薬用または生体関連物質検出用である、請求項１〜１９のいずれか１つに記載の磁性粒子。
【請求項２１】
請求項１〜２０のいずれか１つに記載の磁性粒子を用いて試料中の標的物質を検出または分離する工程を含む、検出・分離方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、磁性粒子および検出・分離方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、磁性粒子は、抗原と抗体との免疫反応、ＤＮＡ同士またはＤＮＡとＲＮＡとのハイブリダイゼーションにおいて優れた反応場を提供できることから、特に診断薬や医薬品研究用などへの応用が活発になっている。
例えば、診断薬への応用の一例としては、抗体または抗原等の第一の検査用プローブが担体上に固定化される。サンプル中の検査対象物質は、第一の検査用プローブを介して担体上に捕捉された後、第二の検査用プローブと反応する。第二の検査用プローブが蛍光物質や酵素で標識等されていれば、蛍光や酵素反応等によって検出を行うことができる。
【０００３】
免疫診断薬は、本発明の診断薬用磁性粒子の用途の一つである。本発明の磁性粒子を免疫診断薬に用いる場合、外部磁場の印加に速やかに応答して凝集する特性と、粒子同士が再分散する特性との両方を有することが望ましい。
【０００４】
外部磁場の印加によって凝集する特性は、診断薬用磁性粒子および診断薬用磁性粒子に特異的に結合した成分のみを回収し、不要な成分を除去するために必要である。
【０００５】
また、粒子が再分散する特性は、例えば発光を測定するため、分散媒（例えば水）中に磁性粒子を均一に分散させたり、または磁性粒子を外部磁場により凝集させ、不要な成分を除去した後に磁性粒子を分散させたりするのに必要である。
【０００６】
これまで診断薬用磁性粒子の性能向上のアプローチとしては、表面にカルボキシ基等の親水性の官能基を導入し、タンパク質や核酸等の生体関連物質の非特異的吸着を減らすことで、ノイズを減らし、検出感度を良くするというものであった（特許文献１）。
【０００７】
また、粒子を多孔質にすることによって、タンパク質の結合量を増加させることができるが、その一方で免疫測定において高感度を実現するには、平滑な粒子と比較すると、より多くのタンパク質結合量が必要であった（特許文献２）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特許第４９８５９１６号公報
【特許文献２】特開２００７−９５９０３号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
前記特許文献に記載の磁性粒子等の従来の磁性粒子は、集磁した後、分散させる際の分散性（以下「再分散性」ともいう。）が悪く、該磁性粒子を用いた診断等の際にシグナルのバラつきが起こりやすく、シグナル／ノイズ（Ｓ／Ｎ）比の点で改良の余地があった。
本発明は前記課題に鑑みてなされたものであり、再分散性に優れる磁性粒子であって、かつ、該粒子を用いた診断等の際に高いＳ／Ｎ比を示す磁性粒子を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者は、前記課題を解決すべく鋭意検討した結果、下記構成例によれば、前記課題を解決できることを見出し、本発明を完成するに至った。
本発明の構成例は以下の通りである。
【００１１】
＜１＞  芳香族系モノマーに由来する構造単位（Ａ）を、重合体を構成する全構造単位に対して２０〜８０質量％含む重合体を少なくとも表面に有し、
比表面積Ｓと球状相当比表面積Ｓｇとの比Ｓ／Ｓｇが６．０以下である、
磁性粒子。
【００１２】
＜２＞  前記芳香族系モノマーが、芳香族ビニルモノマーである、＜１＞に記載の磁性粒子。
＜３＞  前記芳香族ビニルモノマーがジビニルベンゼンである、＜２＞に記載の磁性粒子。
【００１３】
＜４＞  前記重合体がさらに、プローブと化学結合可能な官能基を有する構造単位（Ｂ）を、重合体を構成する全構造単位に対して１５〜７０質量％含有する、＜１＞〜＜３＞のいずれかに記載の磁性粒子。
＜５＞  前記構造単位（Ｂ）が式（１）で表される、＜４＞に記載の磁性粒子。
【００１４】
【化１】
2019082356.tif 000002
〔式（１）中、
Ｒ1は、水素原子またはメチル基を示し、
Ｒ2は、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−＊、−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＲ4−＊（Ｒ4は、水素原子またはメチル基を示し、＊は、式（１）中のＲ3と結合する位置を示す）またはフェニレン基を示し、
Ｒ2が−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−＊である場合、Ｒ3は、水素原子またはプローブと化学結合可能な官能基を有する有機基を示し、Ｒ2が−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＲ4−＊またはフェニレン基である場合、Ｒ3は、プローブと化学結合可能な官能基を有する有機基を示す。〕
【００１５】
＜６＞  前記構造単位（Ｂ）が式（２）で表される、＜４＞または＜５＞に記載の磁性粒子。
【００１６】
【化２】
2019082356.tif 000003
〔式（２）中、
Ｒ1は、水素原子またはメチル基を示し、
Ｒ5は、炭素数２〜６の直鎖または分岐のアルキレン基を示し、
Ｒ6は、炭素数２〜６のアルキレン基、シクロヘキシレン基またはフェニレン基を示す。〕
【００１７】
＜７＞  前記構造単位（Ｂ）が、２−（メタ）アクリロイロキシエチルコハク酸、２−（メタ）アクリロイロキシエチルフタル酸、２−（メタ）アクリロイロキシエチルヘキサヒドロフタル酸、２−（メタ）アクリロイロキシプロピルコハク酸、２−（メタ）アクリロイロキシプロピルフタル酸、および、２−（メタ）アクリロイロキシプロピルヘキサヒドロフタル酸からなる群より選ばれる少なくとも１つに由来する、＜４＞〜＜６＞のいずれかに記載の磁性粒子。
【００１８】
＜８＞  前記重合体がさらに、弱親水性モノマーに由来する構造単位（Ｃ）を、重合体を構成する全構造単位に対して１０〜６０質量％含有する、＜１＞〜＜７＞のいずれかに記載の磁性粒子。
【００１９】
＜９＞  前記構造単位（Ｃ）が構造単位（Ｃ−１）および（Ｃ−２）から選ばれる１種または２種以上である、＜８＞に記載の磁性粒子。
（Ｃ−１）重合させてホモポリマーとし自由水を共存させた場合に中間水を保持するモノアクリレートモノマーまたは該ホモポリマーの側鎖と同一構造を有するモノメタクリレートモノマーに由来する構造単位
（Ｃ−２）式（３）で表されるモノ（メタ）アクリレートモノマーに由来する構造単位
【００２０】
【化３】
2019082356.tif 000004
〔式（３）中、
Ｒ7は、水素原子またはメチル基を示し、
Ｒ8は、炭化水素基を示す。〕
【００２１】
＜１０＞  前記構造単位（Ｃ）として構造単位（Ｃ−１）を含む、＜９＞に記載の磁性粒子。
＜１１＞  構造単位（Ｃ−１）が式（４）または（５）に由来する構造単位である、＜９＞または＜１０＞に記載の磁性粒子。
【００２２】
【化４】
2019082356.tif 000005
〔式（４）中、
Ｒ9は、水素原子またはメチル基を示し、
Ｒ10は、炭素数１〜３のアルカンジイル基を示し、
Ｒ11は、炭素数１〜３のアルキル基を示し、
ｎは、１〜５の整数を示す。〕
【００２３】
【化５】
2019082356.tif 000006
〔式（５）中、
Ｒ12は、水素原子またはメチル基を示し、
ｍは、１または２を示す。〕
【００２４】
＜１２＞  前記磁性粒子の数平均粒径が５ｎｍ〜２０μｍである、＜１＞〜＜１１＞のいずれかに記載の磁性粒子。
＜１３＞  前記磁性粒子の数平均粒径の変動係数（ＣＶ値）が２０％以下である、＜１＞〜＜１２＞のいずれかに記載の磁性粒子。
＜１４＞  前記磁性粒子の平均円形度が０．９６５〜１．０００である、＜１＞〜＜１３＞のいずれかに記載の磁性粒子。
【００２５】
＜１５＞  前記磁性粒子がプローブを結合する官能基を有し、該磁性粒子中のプローブを結合する官能基密度が１〜２００μｍｏｌ／ｇである、＜１＞〜＜１４＞のいずれかに記載の磁性粒子。
【００２６】
＜１６＞  前記磁性粒子がコアシェル構造を有し、該シェルが前記重合体を主成分とする、＜１＞〜＜１５＞のいずれかに記載の磁性粒子。
＜１７＞  前記シェルの厚みが０．０１〜０．３μｍである、＜１６＞に記載の磁性粒子。
【００２７】
＜１８＞  前記磁性粒子の表面に磁性体が露出していない、＜１＞〜＜１７＞のいずれかに記載の磁性粒子。
【００２８】
＜１９＞  ＜１＞〜＜１８＞のいずれかに記載の磁性粒子にプローブが結合した、磁性粒子。
【００２９】
＜２０＞  体外診断薬用または生体関連物質検出用である、＜１＞〜＜１９＞のいずれかに記載の磁性粒子。
＜２１＞  ＜１＞〜＜２０＞のいずれかに記載の磁性粒子を用いて試料中の標的物質を検出または分離する工程を含む、検出・分離方法。
【発明の効果】
【００３０】
本発明によれば、再分散性に優れる磁性粒子であって、かつ、該粒子をＣＬＥＩＡ等の診断方法に用いた場合に高いＳ／Ｎ比を示す磁性粒子を得ることができる。
以上のことから、本発明に係る磁性粒子を用いることで、化学発光酵素免疫測定（ＣＬＥＩＡ）等の診断方法の際に、Ｓ／Ｎ比が向上し、検査対象物質を検出する際の感度が向上するため、本発明に係る磁性粒子は、ＣＬＥＩＡ等の診断方法に効果的である。
【発明を実施するための形態】
【００３１】
以下、本発明に係る好適な実施形態について詳細に説明する。なお、本発明は、以下に記載された実施形態のみに限定されるものではなく、本発明の要旨を変更しない範囲において実施される各種の変形例も含むものとして理解されるべきである。なお、本明細書において、数値範囲を表す「Ａ〜Ｂ」等の記載は、「Ａ以上、Ｂ以下」と同義であり、ＡおよびＢをその数値範囲内に含む。
【００３２】
≪磁性粒子≫
本発明に係る磁性粒子（以下「本粒子」ともいう。）は、芳香族系モノマーに由来する構造単位（Ａ）を、重合体を構成する全構造単位に対して２０〜８０質量％含む重合体を少なくとも表面に有し、比表面積Ｓと球状相当比表面積Ｓｇとの比Ｓ／Ｓｇが６．０以下であることを特徴とする。
本粒子は、所定量の前記構造単位（Ａ）を有し、Ｓ／Ｓｇが前記範囲にあるため、一旦集磁した後、分散させる際の分散性に優れ、本粒子を用いることで、ＣＬＥＩＡ等の診断方法におけるＳ／Ｎ比を向上させることができる。
【００３３】
本粒子がこのような効果を奏する理由は必ずしも明らかではないが、以下の理由が考えられる。
すなわち、所定量の前記構造単位（Ａ）を有することで、該粒子表面が硬くなり、集磁した際に、粒子が変形し難く、密に詰まりにくくなるため、放磁した際に再分散性が良好になると考えられる。また、Ｓ／Ｓｇが前記範囲にあるということは、粒子表面が平滑であるということになり、本粒子上に、抗体や抗原等の第一の検査用プローブが固定化され、該プローブと抗原や抗体等の第二の検査用プローブ等が反応する際に、第一の検査用プローブと第二の検査用プローブとが接触しやすくなるため、ＣＬＥＩＡ等の診断方法におけるＳ／Ｎ比を向上させることができると考えられる。
【００３４】
＜重合体＞
本粒子は、前記構造単位（Ａ）を含む重合体を少なくとも表面に有する。本粒子は、該重合体を含むシェルを表面に有する粒子であることが好ましい。
本粒子に含まれる重合体は、１種単独でもよく、２種以上でもよい。
【００３５】
・構造単位（Ａ）
前記重合体は、芳香族系モノマーに由来する構造単位（Ａ）を有する。
前記重合体が構造単位（Ａ）を有することで、本粒子表面が硬くなり、再分散性に優れる粒子が得られ、また、抗体や抗原等の第一の検査用プローブが本粒子表面に固定化される際に、該プローブの配向性が向上し、該プローブと抗原や抗体等の第二の検査用プローブ等とが反応する際に、第一の検査用プローブと第二の検査用プローブとが接触しやすくなるため、ＣＬＥＩＡ等の診断方法におけるＳ／Ｎ比を向上させることができると考えられる。
また、前記重合体が構造単位（Ａ）を有することで、シェルの厚みが薄くても、該シェルは十分に磁性体表面を覆うことができ、真球に近い表面平滑性に優れる磁性粒子を容易に得ることができる。
前記重合体に含まれる構造単位（Ａ）は、１種単独でもよく、２種以上でもよい。
【００３６】
前記芳香族系モノマーとしては、芳香環を有していれば特に制限されないが、スチレン、α−メチルスチレン、３−メチルスチレン、４−メチルスチレン、ｔ−ブチルスチレン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−ｐ−アミノエチルスチレン、２，４−ジメチルスチレン、Ｎ，Ｎ−ジエチル−ｐ−アミノエチルスチレン、２，４−ジエチルスチレン、ビニルナフタレン、ビニルアントラセン、ハロゲン化スチレン、ベンジル（メタ）アクリレート、ナフチル（メタ）アクリレート、フェノキシエチル（メタ）アクリレート、フェノキシブチル（メタ）アクリレート、２−（１−ナフチルオキシ）エチル（メタ）アクリレート、２−（２−ナフチルオキシ）エチル（メタ）アクリレート、６−（１−ナフチルオキシ）ヘキシル（メタ）アクリレート、６−（２−ナフチルオキシ）ヘキシル（メタ）アクリレート、８−（１−ナフチルオキシ）オクチル（メタ）アクリレート、８−（２−ナフチルオキシ）オクチル（メタ）アクリレート、４−ビニル安息香酸、４−エテニルフェノール、４−アミノスチレンなどの単官能モノマー；ジビニルベンゼン、ジビニルナフタレン、ジアリルフタレートおよびその異性体、トリビニルベンゼン、ジビニルトルエン、ジビニルキシレン、ジビニルビフェニル、ビス（ビニルフェニル）メタン、ビス（ビニルフェニル）エタン、ビス（ビニルフェニル）プロパン、ビス（ビニルフェニル）ブタンなどの架橋性（多官能）モノマー等が挙げられる。
前記芳香族系モノマーとしては、磁性体表面を完全に覆いやすく、磁性体が露出していない粒子を容易に得ることができる等の点から、架橋性モノマーを含むことが好ましく、ジビニルベンゼンおよびジビニルナフタレンがより好ましい。
【００３７】
前記構造単位（Ａ）の含有量は、より再分散性および表面平滑性に優れる磁性粒子が得られる等の点から、重合体を構成する全構造単位に対して、２０〜８０質量％、好ましくは２２〜６５質量％、より好ましくは２４〜５０質量％である。
構造単位（Ａ）の含有量は、前記重合体を合成する際に用いるモノマー全量に対する該構造単位（Ａ）となるモノマーの使用量から算出することができる。
【００３８】
・構造単位（Ｂ）
前記重合体は、プローブと化学結合可能な官能基を有する構造単位（Ｂ）を含むことが好ましい。このような構造単位（Ｂ）を前記重合体が有することで、得られる磁性粒子は、診断薬や医薬品研究用などに容易に用いることができる。
前記重合体に含まれる構造単位（Ｂ）は、１種単独でもよく、２種以上でもよい。
【００３９】
構造単位（Ｂ）としては、前記構造単位（Ａ）がプローブと化学結合可能な官能基を有していてもよいが、前記構造単位（Ａ）以外の構造単位であることが好ましい。
【００４０】
前記プローブと化学結合可能な官能基としては、抗原や抗体などのプローブを共有結合により結合可能な基であることが好ましく、所望の用途に応じて適宜選択すればよいが、例えば、カルボキシ基、カルボン酸塩基、水酸基、エポキシ基、アミノ基、トリエチルアンモニウム基、ジメチルアミノ基、スルホン酸基が挙げられる。
【００４１】
構造単位（Ｂ）としては、本粒子を用いたＣＬＥＩＡ等の診断方法において、より高感度で標的物質を検出することができる等の点から、下記式（１）で表される構造単位が好ましい。
【００４２】
【化６】
2019082356.tif 000007
〔式（１）中、Ｒ1は、水素原子またはメチル基を示し、Ｒ2は、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−＊、−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＲ4−＊（Ｒ4は、水素原子またはメチル基を示し、＊は、式（１）中のＲ3と結合する位置を示す）またはフェニレン基を示し、Ｒ2が−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−＊である場合、Ｒ3は、水素原子またはプローブと化学結合可能な官能基を有する有機基を示し、Ｒ2が−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＲ4−＊またはフェニレン基である場合、Ｒ3は、プローブと化学結合可能な官能基を有する有機基を示す。〕
【００４３】
前記プローブと化学結合可能な官能基を有する有機基としては、前述のプローブと化学結合可能な官能基自体や、−Ｒ20−Ｒ21等が挙げられる。ここで、Ｒ20は、炭素数１〜１２の炭化水素基、好ましくは炭素数１〜８の炭化水素基、または、これらの炭化水素基の一部が酸素原子、窒素原子、硫黄原子、リン原子およびハロゲン原子からなる群より選ばれる少なくとも１つの原子で置換された基であり、Ｒ21は、前述のプローブと化学結合可能な官能基である。
【００４４】
前記プローブと化学結合可能な官能基としては、カルボキシ基およびカルボン酸塩基が好ましい。
カルボキシ基やカルボン酸塩基を有する構造単位（Ｂ）としては、下記モノマーに由来する構造単位が挙げられる。
カルボキシ基を有するモノマーの具体例としては、（メタ）アクリル酸、クロトン酸、α−クロルアクリル酸、けい皮酸等の不飽和モノカルボン酸類；マレイン酸、無水マレイン酸、フマル酸、イタコン酸、無水イタコン酸、シトラコン酸、無水シトラコン酸、メサコン酸等の不飽和ジカルボン酸（無水物）類；３価以上の不飽和多価カルボン酸（無水物）類；２−（メタ）アクリロイロキシエチルコハク酸、２−（メタ）アクリロイロキシエチルフタル酸、２−（メタ）アクリロイロキシエチルヘキサヒドロフタル酸、２−（メタ）アクリロイロキシプロピルコハク酸、２−（メタ）アクリロイロキシプロピルフタル酸、２−（メタ）アクリロイロキシプロピルヘキサヒドロフタル酸、ω−カルボキシポリカプロラクトンモノ（メタ）アクリレートが挙げられる。
前記カルボン酸塩基を有するモノマーの具体例としては、前記カルボキシ基を有するモノマーのカルボキシ基の水素イオンが、ナトリウムイオン、カリウムイオン、アンモニウムイオンなどの陽イオンで置換された基を有するモノマーが挙げられる。
【００４５】
前記構造単位（Ｂ）としては、本粒子を用いたＣＬＥＩＡ等の診断方法において、より高感度で標的物質を検出することができ、また、タンパク質等のプローブが結合しやすい粒子を容易に得ることができる等の点から、下記式（２）で表される構造単位が好ましい。
【００４６】
【化７】
2019082356.tif 000008
〔式（２）中、Ｒ1は、水素原子またはメチル基を示し、Ｒ5は、炭素数２〜６の直鎖または分岐のアルキレン基を示し、Ｒ6は、炭素数２〜６のアルキレン基、シクロヘキシレン基またはフェニレン基を示す。〕
【００４７】
構造単位（Ｂ）は、本粒子を用いたＣＬＥＩＡ等の診断方法において、より高感度で標的物質を検出することができる等の点から、２−（メタ）アクリロイロキシエチルコハク酸、２−（メタ）アクリロイロキシエチルフタル酸、２−（メタ）アクリロイロキシエチルヘキサヒドロフタル酸、２−（メタ）アクリロイロキシプロピルコハク酸、２−（メタ）アクリロイロキシプロピルフタル酸、および、２−（メタ）アクリロイロキシプロピルヘキサヒドロフタル酸からなる群より選ばれる少なくとも１つに由来する構造単位であることが特に好ましい。
【００４８】
構造単位（Ｂ）の含有量は、本粒子を用いたＣＬＥＩＡ等の診断方法において、より高感度で標的物質を検出することができる等の点から、プローブを結合する官能基密度が下記範囲となる量が好ましく、重合体を構成する全構造単位に対して、好ましくは１０〜７０質量％、より好ましくは１５〜７０質量％、特に好ましくは２２〜６０質量％である。前記の数値の範囲内であると、プローブが十分に結合し、かつプローブの活性が落ちにくい。
構造単位（Ｂ）の含有量は、前記重合体を合成する際に用いるモノマー全量に対する該構造単位（Ｂ）となるモノマーの使用量から算出することができる。
なお、前記構造単位（Ａ）がプローブと化学結合可能な官能基を有している場合には、前記重合体は、構造単位（Ｂ）を有しているというが、該構造単位の含有量は、構造単位（Ａ）の量としてカウントする。
【００４９】
・構造単位（Ｃ）
前記重合体は、前記構造単位（Ａ）および（Ｂ）以外の、弱親水性モノマーに由来する構造単位（Ｃ）を含むことが好ましい。このような構造単位（Ｃ）を前記重合体が有することで、本粒子へのプローブの非特異的な結合を抑制することができ、本粒子を用いたＣＬＥＩＡ等の診断方法において、より高感度で標的物質を検出することができる。
前記重合体に含まれる構造単位（Ｃ）は、１種単独でもよく、２種以上でもよい。
【００５０】
前記弱親水性モノマーとしては、２５℃の水１００ｇへの溶解度が１〜１０ｇであるモノマーのことをいう。
【００５１】
前記構造単位（Ｃ）としては、下記構造単位（Ｃ−１）および下記構造単位（Ｃ−２）が挙げられる。これらの中では、本粒子へのプローブの非特異的な結合を抑制することができ、本粒子を用いたＣＬＥＩＡ等の診断方法において、より高感度で標的物質を検出することができる等の点から、構造単位（Ｃ−１）が好ましい。具体的には、前記重合体が構造単位（Ｃ−１）を有すると、検体中に含まれるタンパク質などの表面に存在する水和水を破壊することを防ぎ、その結果、タンパク質などの変性を防ぐことができる。これにより、非特異吸着を少なくすることができる。
【００５２】
構造単位（Ｃ−１）は、重合させてホモポリマーとし自由水を共存させた場合に中間水を保持するモノアクリレートモノマーまたは該ホモポリマーの側鎖と同一構造を有するモノメタクリレートモノマー（以下「モノマー（Ｃ−１）」ともいう。）に由来する構造単位である。モノマー（Ｃ−１）としては、前記モノアクリレートモノマーが好ましい。
【００５３】
本発明において、「重合させてホモポリマーとし自由水を共存させた場合に中間水を保持する」とは、示差走査熱量計（ＤＳＣ）による示差走査熱量分析によって得られるＤＳＣ曲線において、昇温過程で−１０℃未満に水の結晶化による発熱ピークが観測されるポリマーのことをいう。すなわち、「中間水」とは、示差走査熱量分析によって得られるＤＳＣ曲線において、昇温過程で、−１０℃未満で結晶化による発熱ピークとして観測される水をいう。ここで、「昇温過程」とは、示差走査熱量分析において、磁性粒子を−１００℃以下まで冷却したのちの昇温過程をいう。また、「自由水」とは、示差走査熱量分析によって得られるＤＳＣ曲線において、昇温過程で０℃付近の融点（吸熱ピーク）として観測される水をいう。
【００５４】
モノマー（Ｃ−１）は、本粒子を用いたＣＬＥＩＡ等の診断方法において、より高感度で標的物質を検出することができる等の点から、下記式（４）または（５）で表される化合物であることが好ましく、下記式（５）で表される化合物であることがより好ましい。
【００５５】
【化８】
2019082356.tif 000009
〔式（４）中、Ｒ9は、水素原子またはメチル基を示し、Ｒ10は独立に、炭素数１〜３のアルカンジイル基を示し、Ｒ11は、炭素数１〜３のアルキル基を示し、ｎは、１〜５の整数を示し、好ましくは１〜３の整数である。〕
【００５６】
【化９】
2019082356.tif 000010
〔式（５）中、Ｒ12は、水素原子またはメチル基を示し、ｍは、１または２を示し、好ましくは１である。〕
【００５７】
モノマー（Ｃ−１）としては、好ましくは、メトキシエチル（メタ）アクリレート、テトラヒドロフルフリル（メタ）アクリレート、ジ（エチレングリコール）メチルエーテル（メタ）アクリレート、ジ（エチレングリコール）エチルエーテル（メタ）アクリレート、トリ（エチレングリコール）メチルエーテル（メタ）アクリレート、トリ（エチレングリコール）エチルエーテル（メタ）アクリレート等が挙げられ、これらの中でも、タンパク質の非特異吸着をより抑制できる等の点から、テトラヒドロフルフリル（メタ）アクリレートがさらに好ましい。
【００５８】
構造単位（Ｃ−２）は、下記式（３）で表されるモノ（メタ）アクリレートモノマーに由来する構造単位である。
【００５９】
【化１０】
2019082356.tif 000011
〔式（３）中、Ｒ7は、水素原子またはメチル基を示し、Ｒ8は、炭化水素基を示す。〕
【００６０】
Ｒ8における炭化水素基としては、好ましくは炭素数１〜３０の炭化水素基、より好ましくは炭素数１〜２４の炭化水素基が挙げられる。
【００６１】
式（３）で表されるモノマーとしては、（メタ）アクリル酸メチル、（メタ）アクリル酸エチル、（メタ）アクリル酸プロピル、（メタ）アクリル酸ブチル、（メタ）アクリル酸２−エチルヘキシル、（メタ）アクリル酸ステアリル、（メタ）アクリル酸ラウリル、シクロヘキシル（メタ）アクリレート等が挙げられる。
【００６２】
構造単位（Ｃ）の含有量は、本粒子を用いたＣＬＥＩＡ等の診断方法において、より高感度で標的物質を検出することができる等の点から、重合体を構成する全構造単位に対して、好ましくは１０〜６０質量％、より好ましくは２０〜４０質量％である。
構造単位（Ｃ）の含有量は、前記重合体を合成する際に用いるモノマー全量に対する該構造単位（Ｃ）となるモノマーの使用量から算出することができる。
【００６３】
・その他の構造単位
前記重合体は、前記構造単位（Ａ）〜（Ｃ）以外のその他の構造単位を有していてもよい。
該その他の構造単位としては、特に制限されないが、例えば、下記モノマーに由来する構造単位が挙げられる。
該モノマーとしては、酢酸ビニル、プロピオン酸ビニルなどのビニルエステル類、アクリロニトリルなどの不飽和ニトリル、エチレングリコールジ（メタ）アクリレート、トリメチロールプロパントリアクリレート、ジペンタエリスリトールヘキサアクリレートなどの多官能（メタ）アクリレート等が挙げられる。
これらの中でも、より容易に本粒子の表面の磁性体の露出を抑制できる等の点から、多官能（メタ）アクリレートを用いることが好ましい。
【００６４】
前記その他の構造単位の含有量は、重合体を構成する全構造単位に対して、好ましくは０〜３０質量％、より好ましくは０〜２０質量％である。
その他の構造単位の含有量は、前記重合体を合成する際に用いるモノマー全量に対する該その他の構造単位となるモノマーの使用量から算出することができる。
【００６５】
前記重合体は、従来公知の方法で合成すればよく、例えば、前記構造単位を誘導するモノマーと、必要に応じて副原料（重合開始剤、乳化剤、分散剤、界面活性剤、電解質、架橋剤、分子量調節剤など）とを含む液体中で重合を行うことにより合成することができる。
【００６６】
＜磁性粒子の構造、物性等＞
本粒子は、前記重合体が、その表面に存在すれば構造等は特に限定されないが、（Ｉ）前記重合体の連続相中に磁性体が分散している粒子、（ＩＩ）シリカ等の非磁性体の連続相中に磁性体が分散している粒子をコアとし、前記重合体を含む層をシェルとする粒子、（ＩＩＩ）磁性体またはその２次凝集体をコアとし、前記重合体を含む層をシェルとする粒子、（ＩＶ）ポリマーやシリカ等の非磁性体からなる核粒子と、該核粒子の表面に存在する磁性体またはその２次凝集体を含む磁性体層とを有する母粒子をコアとし、前記重合体を含む層をシェルとする粒子等が挙げられる。これらの中では、優れた磁気応答性を有し、粒径を均一に制御できる等の点で、（ＩＶ）の粒子が好ましい。
以下、（ＩＶ）の粒子について説明する。
【００６７】
〈核粒子〉
前記核粒子は、基本的に非磁性物質であり、有機物質および無機物質のいずれも使用可能であり、本粒子の使用目的等によって適宜選択することができるが、本粒子を調製する際の調製容易性の観点からポリマーなどの有機物質からなる粒子が好ましい。
前記ポリマーとしては、ビニル系ポリマーが好ましく、より好ましくは、架橋ポリスチレン、架橋アクリレート、架橋ポリメチルメタクリレートである。これらポリマーは、カルボキシ基などの官能基が導入されていてもよい。
このような核粒子は、従来公知の方法、例えば、特公昭５７−２４３６９号公報、特開昭６１−２１５６０２号公報、特開昭６１−２１５６０３号公報、特開昭６１−２１５６０４号公報に記載の方法によって製造することができる。
【００６８】
前記核粒子の平均粒径は、磁気分離性に優れ、重力沈降が起こりにくく、反応場を均一できる等の点から、好ましくは０．１〜１０μｍ、さらに好ましくは０．２〜５μｍ、特に好ましくは０．３〜２μｍである。
なお、核粒子の平均粒径は、電気的検知帯法として知られるコールター原理を用いて計測した数平均粒径である。
【００６９】
〈磁性体〉
前記磁性体は磁性材料であれば特に制限されないが、酸化鉄系の物質が代表的であり、ＭＦｅ2Ｏ4（Ｍ＝Ｃｏ、Ｎｉ、Ｍｇ、Ｃｕ、Ｍｎ、ＺｎまたはＬｉ0.5Ｆｅ0.5等）で表されるフェライト、Ｆｅ3Ｏ4で表されるマグネタイト、γ−Ｆｅ2Ｏ3等が挙げられる。特に、飽和磁化が高く、かつ残留磁化が低い磁気材料としてγ−Ｆｅ2Ｏ3、Ｆｅ3Ｏ4が好ましい。
【００７０】
前記磁性体としては、集磁性、磁気分離性能により優れる磁性粒子が得られる等の点から、残留磁気がない超常磁性を有する材料が好ましい。超常磁性を有する磁性体としては特に限定されず、例えば、四三酸化鉄（Ｆｅ3Ｏ4）、γ−三二酸化鉄（γ−Ｆｅ2Ｏ3）等の各種フェライト類などの超常磁性金属酸化物が挙げられる。
【００７１】
前記磁性体の形状は特に制限されないが、磁性体微粒子であることが好ましく、該磁性体微粒子の粒径は、磁性体の有する特性を十分に発揮でき、特に、磁気分離性能に優れる本粒子が得られる等の点から、好ましくは５〜２５ｎｍであり、より好ましくは５〜２０ｎｍであり、さらに好ましくは８〜１５ｎｍである。
該粒径は、電子顕微鏡写真中の無作意に選択した１００個の粒子の粒子径の平均値である。
【００７２】
前記磁性体は、表面が疎水化処理された粒子であることが好ましい。
磁性体表面の疎水化処理方法は特に限定されないが、例えば、磁性体と親和性の高い部分と疎水性の部分とを分子内に有する疎水性物質を、磁性体に接触させて結合させる方法が挙げられる。該方法としては、より具体的には、市販の油性磁性流体から粒子を得、該粒子を乾燥させる方法等が挙げられる。
【００７３】
前記疎水性物質としては、例えば、シランカップリング剤に代表されるシラン化合物、脂肪酸、脂肪酸石鹸に代表される界面活性剤を挙げることができる。これらの中でも、ＲＣＯＯＨ（ここでＲは炭化水素基）で表される脂肪酸が好ましい。該脂肪酸の炭素数は特に限定されないが、６以上３０以下が好ましく、１０以上２４以下が特に好ましい。具体的には、ペラルゴン酸、カプリン酸、ウンデシル酸、ラウリン酸、トリデシル酸、ミリスチン酸、ペンタデシル酸、パルミチン酸、ヘプタデシル酸、ステアリン酸、ノナデカン酸、アラキン酸、ベヘン酸、リグノセリン酸、セロチン酸、ヘプタコサン酸、モンタン酸、メリシン酸等の飽和脂肪酸、ウンデシレン酸、オレイン酸、エライジン酸、セトレイン酸、エルカ酸、ブラシジン酸、ソルビン酸、リノール酸、リノレン酸、アラキドン酸等の不飽和脂肪酸などが挙げられる。
前記疎水性物質としては、これら脂肪酸の塩類も使用できる。
【００７４】
前記磁性体の使用量は、母粒子や磁性体の粒径等により適宜変化させればよく、特に制限されないが、複数の磁性体が核粒子表面の全体を被覆するような量で使用することが好ましく、核粒子表面に存在する磁性体層の厚さが略均一な厚さとなるような量で使用することが好ましく、該磁性体層の厚さが、磁性体微粒子の粒径と同程度〜磁性体微粒子の粒径の２倍程度となるような量で使用することがより好ましい。
【００７５】
〈母粒子〉
核粒子の表面に前記磁性体層が形成された母粒子の製造方法としては特に制限されないが、例えば、非磁性体である有機ポリマー粒子などの核粒子と磁性体とをドライブレンドして、物理的な力を外部から加えることにより双方の粒子を複合化させる方法が挙げられる。
物理的な力をかける方法としては、例えば、乳鉢、自動乳鉢、ボールミル、ブレード加圧式粉体圧縮法、メカノフュージョン法のようなメカノケミカル効果を利用する方法や、ジェットミル、ハイブリダイザーなどの高速気流中での衝撃を利用する方法が挙げられる。効率よくかつ強固に複合化を実施するには、物理吸着力が強いことが望ましい。その方法としては、例えば、撹拌翼付き容器中で撹拌翼の周速度が、好ましくは１５ｍ／秒以上、より好ましくは３０ｍ／秒以上、さらに好ましくは４０〜１５０ｍ／秒で撹拌することが挙げられる。撹拌翼の周速度が１５ｍ／秒より低いと、核粒子の表面に磁性体を十分に吸着させることができない場合がある。なお、撹拌翼の周速度の上限については、特に制限はないが、使用する装置、エネルギー効率等の点から決定すればよい。
【００７６】
前記効果を奏する本粒子を容易に得ることができる等の点から、前記母粒子も、下記本粒子と同程度のＳ／Ｓｇを有していることが好ましい。
【００７７】
〈シェル〉
前記シェルは、例えば前述の方法で調製される母粒子の存在下で、前記構造単位を誘導するモノマーと、必要に応じて副原料（重合開始剤、乳化剤、分散剤、界面活性剤、電解質、架橋剤、分子量調節剤など）とが添加された液体中で重合を行なうことにより形成することができる。
【００７８】
なお、前記構造単位（Ｂ）を有する重合体を含むシェルは、前記モノマーとして、プローブと化学結合可能な官能基を有するモノマーを用いることが好ましいが、特開２００７−２６２１１３号公報に記載のように、シェルを形成する際の反応によってプローブと化学結合可能な官能基を生じさせる方法、シェルを形成した後にプローブと化学結合可能な官能基を導入する方法で形成してもよい。
【００７９】
前記シェルは、シェルの厚みが薄くても、該シェルが完全に、きれいに母粒子を覆うことができ、真球に近い表面平滑性に優れる粒子を容易に得ることができる等の点から、前記重合体を主成分とする層であることが好ましく、該シェル全体に対する前記重合体の含有量は、好ましくは８０〜１００質量％であり、より好ましくは９０〜１００質量％である。
【００８０】
前記シェルは、本粒子の性能が長期にわたって維持され、集磁性、再分散性に優れる磁性粒子が得られる等の点から、本粒子の表面に磁性体が露出しないように、母粒子を被覆することが好ましい。
【００８１】
前記シェルの厚みは特に制限されないが、本粒子の表面に磁性体が露出しないような厚みであることが好ましく、前記重合体によれば、シェルの厚みが薄くても、該シェルが完全に、きれいに母粒子を覆うことができ、また、シェルの厚みが薄いことで、集磁のスピードが速くなる等の点から、好ましくは０．０１〜０．３μｍ、より好ましくは０．０２〜０．２μｍである。なおシェルの厚みｄ（μｍ）は下記式により計算される。
ｄ＝（Ｒ−ｒ）／２（Ｒ：磁性粒子の粒径（μｍ）、ｒ：母粒子の粒径（μｍ））
【００８２】
本粒子は、その表面に磁性体が露出していないことが好ましい。磁性体が露出していると、生化学物質等の非特異的な吸着が増え、分離物質の純度が低下しやすい傾向にあり、酸などの添加で、超常磁性微粒子が溶解する場合がある。
【００８３】
本粒子の表面に磁性体が露出している度合を測定する方法として、通常の酵素免疫反応で使用されている基質の一つであり、鉄と敏感に反応するオルトフェニレンジアミン（ＯＰＤ）を使用することができる。ＯＰＤは酵素免疫アッセイの基質であるため、本粒子の表面に露出した磁性体の影響を、より実際のアッセイ系に近い形で確認することができる。
【００８４】
該測定方法としては、具体的には、（ａ）磁性粒子１ｍｇ、（ｂ）オルトフェニレンジアミン二塩酸塩７．８ｍｇ、（ｃ）３０％過酸化水素水４．５μＬ、および、（ｄ）０．１Ｍリン酸ナトリウム水溶液（ｐＨ５）１．５ｍＬを混合し、２５℃で３０分間撹拌して得られる磁性粒子分散液上清の４５０ｎｍにおける吸光度によって評価できる。
磁性体が露出していると、鉄の還元作用により過酸化水素が還元され、それに伴いオルトフェニレンジアミンが二量化し、２，３−ジアミノフェナジンへと変化する。２，３−ジアミノフェナジンは４９２ｎｍ付近に吸収極大をもつため、この付近の吸光度を測定することで磁性体露出の程度を数値化できる。
【００８５】
吸光度測定は、例えば、反応上清３００μＬを取り出し、マイクロプレートリーダー（型名：Ｍｏｄｅｌ４５０、バイオラッド（ＢＩＯ−ＲＡＤ）社製）によって実施する。このようにして得られる吸光度としては、好ましくは１．５以下、より好ましくは１．２以下、特に好ましくは１．０以下である。
吸光度が１．５以上であると、本粒子表面における磁性体の露出が多すぎ、非特異的な吸着の増大につながる場合がある。
【００８６】
〈Ｓ／Ｓｇ〉
本粒子は、比表面積Ｓと球状相当比表面積Ｓｇの比Ｓ／Ｓｇが、６．０以下、好ましくは４．０以下、より好ましくは１．５以下であり、その下限は小さいことが好ましく特に制限されないが、例えば、１．０である。
Ｓ／Ｓｇが前記範囲にあると、粒子の平滑性が増加するため、本粒子を用いたＣＬＥＩＡ等の診断方法において、検査用プローブや発光基質が粒子の表面にアクセスしやすく、結合しやすいためにシグナルが高くなる。また粒子に結合しなかった検査用プローブや発光基質に対する洗浄性が良好となり、ノイズが低くなる。これらの結果として、Ｓ／Ｎが高くなり、より高感度で標的物質を検出することができる。
前記構造単位（Ａ）を含む重合体を用いることで、また、前記シェルの厚みを薄くするなどにより、Ｓ／Ｓｇが前記範囲にある本粒子を得ることができる。
前記Ｓ／Ｓｇは、具体的には下記実施例に記載の方法で測定することができる。
【００８７】
〈プローブを結合する官能基密度〉
本粒子は、プローブを結合する官能基密度が、該粒子（Ａ）１ｇに対し、好ましくは１〜２００μｍｏｌ、より好ましくは２〜９０μｍｏｌ、特に好ましくは５〜３０μｍｏｌである。
プローブを結合する官能基密度が前記範囲にあると、再分散性に優れ、該粒子を用いることで、ＣＬＥＩＡ等の診断方法において、特出する高感度を発現することができる。
プローブを結合する官能基密度は、該官能基がカルボキシ基である場合には、下記実施例における表面荷電量の測定と同様の方法で測定できる。
【００８８】
〈数平均粒径〉
本粒子の数平均粒径は、好ましくは５ｎｍ〜２０μｍ、より好ましくは１００ｎｍ〜１５μｍ、特に好ましくは２００ｎｍ〜１０μｍである。
数平均粒径は、電気的検知帯法として知られるコールター原理により求めることができる。
数平均粒径が前記範囲にあると、単位体積当たりのプローブの結合量が多い本粒子を容易に得ることができ、得られる本粒子を用いることで、ＣＬＥＩＡ等の診断方法における感度が良好になる。粒径が前記範囲の下限を下回る場合、遠心分離、磁気分離などを用いた分離に長時間を要しやすく、水などの洗浄溶媒と磁性粒子との分離が不十分になる傾向にあるため、目的外の分子（例えば、タンパクや核酸等の生体関連物質）の除去が不十分になり、充分な精製ができない場合がある。一方、粒径が前記範囲の上限を上回ると、比表面積が小さくなり、プローブの結合量が少なくなる結果、感度が低くなる場合がある。
【００８９】
〈ＣＶ値〉
本粒子の数平均粒径の変動係数（ＣＶ値）は、本粒子を用いたＣＬＥＩＡ等の診断方法において、より高感度で標的物質を検出することができる等の点から、好ましくは２０％以下、より好ましくは１５％以下である。
ＣＶ値が前記範囲にあることで、免疫測定を行った際のばらつきが小さくなる。
【００９０】
〈平均円形度〉
本粒子の平均円形度は、好ましくは０．９６５〜１．０００、より好ましくは０．９７５〜１．０００、特に好ましくは０．９８５〜１．０００である。
平均円形度が０．９６５未満であると、粒子の形状が不均質であるため、免疫診断において測定のばらつきが大きくなる場合がある。
該平均円形度は、具体的には、フロー式粒子像分析装置（シスメックス（株）製「ＦＰＩＡ−３０００」）を用いて、粒子２０００個の各々の円形度を測定した時の、測定された２０００個の円形度の平均値である。
なお、円形度は光学的に粒子を検知して測定した周囲長を投影面積の等しい相当円の周囲長で除した値である。
【００９１】
＜プローブが結合した磁性粒子＞
本粒子は、所望の用途に応じて、プローブが結合した粒子であってもよい。
磁性粒子にプローブを結合させる方法としては特に制限されず、物理吸着法または化学結合法を挙げることができるが、プローブをしっかり磁性粒子に結合させることができる等の点から、プローブを化学的に結合させることが好ましい。この方法としては、例えば、磁性粒子表面のプローブと化学結合可能な官能基と該官能基と反応するプローブ中の基とを反応させる方法、カルボジイミド等の縮合剤を使用する方法が挙げられる。
【００９２】
〈プローブ〉
前記プローブとしては特に制限されないが、特異的結合性を有する物質であることが好ましく、例えば、抗原、抗体、（ストレプト）アビジン、プロテインＡ、プロテインＧ、酵素、ホルモン等のタンパク質、ＤＮＡ・ＲＮＡ等の核酸、脂質、生理活性糖鎖化合物、各種のアフィニティー用タグ捕捉物質、ビオチン等の補酵素、特定の生理活性作用を有する（または、特定の生理活性作用を有する可能性がある）化学物質等が挙げられる。
【００９３】
診断薬用の本粒子には、プローブとして主に、抗原または抗体が使用される。この場合、抗原または抗体としては、検出したい物質または検出したい物質と反応する物質であれば特に制限されないが、例えば、アンチプラスミン検査用抗アンチプラスミン抗体、Ｄダイマー検査用抗Ｄダイマー抗体、ＦＤＰ検査用抗ＦＤＰ抗体、ｔＰＡ検査用抗ｔＰＡ抗体、ＴＡＴ検査用抗ＴＡＴ複合体抗体、ＦＰＡ検査用抗ＦＰＡ抗体等の凝固・線溶関連検査用抗原または抗体；ＢＦＰ検査用抗ＢＦＰ抗体、ＣＥＡ検査用抗ＣＥＡ抗体、ＡＦＰ検査用抗ＡＦＰ抗体、フェリチン検査用抗フェリチン抗体、ＣＡ１９−９検査用抗ＣＡ１９−９抗体等の腫瘍関連検査用抗原または抗体；アポリポタンパク検査用抗アポリポタンパク抗体、β２−ミクログロブリン検査用抗β２−ミクログロブリン抗体、α１−ミクログロブリン検査用抗α１−ミクログロブリン抗体、免疫グロブリン検査用抗免疫グロブリン抗体、ＣＲＰ検査用抗ＣＲＰ抗体等の血清蛋白関連検査用抗原または抗体；ＨＣＧ検査用抗ＨＣＧ抗体等の内分泌機能検査用抗原または抗体；ＨＢｓ抗原検査用抗ＨＢｓ抗体、ＨＢｓ抗体検査用ＨＢｓ抗原、ＨＣＶ抗体検査用ＨＣＶ抗原、ＨＩＶ−１抗体用ＨＩＶ−１抗原、ＨＩＶ−２抗体検査用ＨＩＶ−２抗原、ＨＴＬＶ−１検査用ＨＴＬＶ−１抗原、マイコプラズマ症検査用マイコプラズマ抗原、トキソプラズマ検査用トキソプラズマ抗原、ＡＳＯ検査用ストレプトリジンＯ抗原等の感染症関連検査用抗原または抗体；抗ＤＮＡ抗体検査用ＤＮＡ抗原、ＲＦ検査用熱変成ヒトＩｇＧ等自己免疫関連検査用抗原または抗体；ジゴキシン検査用抗ジゴキシン抗体、リドカイン検査用抗リドカイン抗体等の薬物分析用抗原または抗体が挙げられる。
前記抗体としては、ポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体のどちらを用いてもかまわない。
【００９４】
また、アフィニティー担体用の本粒子には、プローブとして主に、プロテインＡ、プロテインＧ、酵素、ホルモン等のタンパク質、ＤＮＡ・ＲＮＡ等の核酸、脂質、または生理活性糖鎖化合物等が使用される。
【００９５】
さらに、創薬用の本粒子には、プローブとして、解析対象の化学物質（被解析化学物質；プローブ分子に該当する）を用い、タンパク質等との特異的相互作用を用いて当該相互作用を解析および／または測定することによって、被解析化学物質と特異的に相互作用するタンパク質等（ターゲット分子に該当する）を選別、精製することにより解析対象化学物質を解析することなどによって、創薬研究が可能である。
【００９６】
プローブとしては、プローブを含む試料に含まれたものを用いてもよい。該試料はそのまま本方法に用いてもよいし、プローブを分離するなどの前処理をして本方法に用いてもよい。
【００９７】
＜用途＞
本粒子は、例えば、バイオ工学、診断および製薬の分野で保持体、担体または媒体として好適に用いることができ、具体的には、抗原、抗体、生体分子、核酸その他等の標的物質を分離および/または検知する手段として好適に用いることができる。
このような用途では、プローブが結合していない磁性粒子をそのまま用いてもよいし、プローブが結合した磁性粒子を用いてもよい。
【００９８】
より具体的には、本粒子にタンパク質等の抗原または抗体を結合し、測定対象である抗体または抗原との抗原抗体反応により、測定対象を定量・定性してもよく；本粒子に抗体を結合し、抗原であるウイルス・細菌・細胞・ホルモン・ダイオキシン類等の化学物質、などを結合して回収・濃縮してもよく；本粒子にＤＮＡなどの核酸アナログを結合して、核酸のハイブリダイゼーションを利用した核酸の回収・検出をしたり、核酸に結合するタンパク質や色素等の化学物質を回収・検出してもよく；本粒子にアビジンまたはビオチンを結合してビオチンまたはアビジンを有する分子を回収して検出してもよく；本粒子に抗体や抗原を結合し、比色法や化学発光を利用して酵素免疫測定をしてもよい。
【００９９】
また、従来の、９６穴プレート等を担体として用いていた診断項目については、本粒子を用いることによって、磁性を利用した自動分析機に置き換えて使用できる。診断の対象となる物質としては、生体由来のタンパク質、黄体形成ホルモン、甲状腺刺激ホルモンなどのホルモン；各種ガン細胞；前立腺特異マーカー、膀胱ガンマーカーなどのガンのマーカーとなるタンパク質；Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、単純ヘルペスウイルスなどのウイルス；淋菌、ＭＲＳＡなどの細菌；カンジダ、クリプトコックス等の真菌；トキソプラズマ等の原虫・寄生虫；これらウイルス・細菌・真菌・原虫・寄生虫などの構成要素であるタンパク質や核酸；ダイオキシン類等の環境汚染物質；抗生物質や抗てんかん剤など医薬品等の化学物質；等が挙げられる。
【０１００】
本粒子は、診断薬として使用することができる。該診断薬は、本粒子を含むが、本粒子の他に、従来公知の成分を含んでいてもよい。該本粒子は、プローブが結合した磁性粒子であってもよく、プローブが結合していない磁性粒子であってもよいが、通常、前述のように、プローブとして抗原または抗体等が結合した磁性粒子を含む。
【０１０１】
≪検出・分離方法≫
本発明に係る、検出・分離方法は、本粒子を用いて試料中の標的物質を検出または分離する工程を含み、該検出・分離方法を用いることで、診断することができる。
これらの方法では、本粒子を用いるため、特出する高感度で検出、分離・診断をすることができる。
【０１０２】
分離方法の一例としては、本粒子表面の官能基と標的物質とを反応させた後、集磁し、洗浄することで、標的物質以外を除去分離する方法、プローブが結合した本粒子と標的物質とを反応させた後、集磁し、洗浄することで、標的物質以外を除去分離する方法が挙げられる。
【０１０３】
検出方法の一例としては、プローブが結合した本粒子と、該プローブと特異的に結合する標的物質とを反応させ、必要により、集磁、洗浄を経た後、蛍光や酵素反応等によって標的物質の検出を行う方法が挙げられる。
【０１０４】
これらの検出・分離方法の際には、非特異反応の低減、本粒子の分散性向上、抗体等のプローブの変性を抑制でき、よりＣＬＥＩＡ等の診断方法におけるＳ／Ｎ比を向上させることができる等の点から、ブロッキング剤を結合させる工程を含むことが好ましい。
ブロッキング剤としては一般に、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、スキムミルク、ゼラチン、カゼイン、合成ポリマー等が用いられる。
ブロッキング剤を結合させる方法は、用いる粒子やブロッキング剤により、適宜選択すればよく、従来公知の方法で行えばよい。
【０１０５】
診断方法の一例としては、標的物質の検出の有無により診断する方法が挙げられる。
【実施例】
【０１０６】
以下、実施例を挙げて本発明を詳細に説明するが、本発明はこれら実施例に限定されない。
【０１０７】
［粒径、ＣＶ値および平均円形度の測定］
各磁性粒子の粒径は、固形分濃度が０．５％程度となるように水で希釈した検体について、シスメックス（株）製フロー式粒子像分析装置（型番  ＦＰＩＡ−３０００）を用いてトータルカウント２０００個にセットして求めた。また、数平均粒径の変動係数（ＣＶ値）も、ＣＶ＝（標準偏差／数平均粒径）に基づいて算出し、粒子２０００個の各々の円形度を測定した時の、測定された２０００個の円形度の平均値として平均円形度を算出した。
【０１０８】
［Ｓ／Ｓｇ］
加熱乾燥した磁性粒子について、全自動ガス蒸気吸着量測定装置（ユアサアイオニクス（株）製）オートソーブ−１を用い、アルゴンガス吸着による比表面積Ｓ（ｍ2／ｇ）を測定した。
【０１０９】
次いで、磁性粒子を約１０重量％含む水分散体の密度ρｄを５［ｍｌ］の比重ビンで測定した。また、この水分散液の固形分率ｆを、該水分散液を２００℃で５分間乾燥させた前後の重量変化から求め、ρｄおよびｆを用いて、下記式（Ａ）から磁性粒子の密度ρ（ｇ／ｍ3）を求めた。求めた磁性粒子の密度ρと前記粒径の測定で求めた磁性粒子の数平均粒径ｄ（ｍ）とから、下記式（Ｂ）に基づいて、磁性粒子の表面を平滑な完全球体とみなした場合の該粒子の球状相当比表面積Ｓｇ（ｍ2／ｇ）を求めた。
求めたＳとＳｇとから、「Ｓ／Ｓｇ」を算出した。結果を表１に示す。
１／ρｄ＝（ｆ／ρ）＋（（１−ｆ）／ρｗ）・・・・・（Ａ）
［式（Ａ）において、ρｗは水の密度である。］
Ｓｇ＝６／（ｄ・ρ）・・・・・（Ｂ）
【０１１０】
［表面荷電量の測定］
磁性粒子０．２ｇを、０．１質量％のＴｗｅｅｎ２０水溶液４０ｇに分散させ、そこに、０．１ｍｏｌ／Ｌ水酸化ナトリウム水溶液５００μＬを添加して粒子上に存在していたカルボキシ基を中和した。得られた粒子分散液に、電導度滴定装置（７９４  Ｂａｓｉｃ  Ｔｉｔｒｉｎｏ、Ｍｅｔｒｏｈｍ社製）により、電気伝導度を測定しながら０．０１ｍｏｌ／Ｌ硫酸を滴下し、電導度滴定曲線を求めた。該曲線から粒子上のＣＯＯＮａ基のプロトン化に消費された硫酸の量を算出し、使用した磁性粒子の重量で除することで、磁性粒子の表面荷電量（μｍｏｌ／ｇ）を算出した。結果を表１に示す。
【０１１１】
［磁性体露出度（ＯＰＤ添加後吸光度）の測定］
オルトフェニレンジアミン二塩酸塩７．８ｍｇ、３０質量％過酸化水素水４．５μＬ、および、０．１Ｍリン酸ナトリウム水溶液（ｐＨ５）１．５ｍＬを混合し、鉄検出溶液を調製した。ここに磁性粒子１ｍｇを添加し、２５℃で３０分間撹拌することにより、磁性粒子表面の磁性体（鉄）露出量に応じてオルトフェニレンジアミンを二量化させ、溶液を呈色させた。溶液を呈色後磁気分離し、上清３００μＬを取り出し、マイクロプレートリーダー（Ｍｏｄｅｌ４５０）を用いて、該上清の４５０ｎｍでの吸光度を測定することにより、磁性粒子表面における磁性体露出度を評価した。なお、吸光度が高いほど磁性体露出度が多いことを示す。
【０１１２】
［再分散性評価］
各実施例および比較例で得られた磁性粒子３ｍｇを、水３０μＬにそれぞれ分散させた。得られた水分散液をエッペンドルフチューブに投入し、磁気を用いて粒子を分離して上清を除去した。次いで、粒子をＭＥＳ緩衝液（１００ｍＭ、ｐＨ５．０）２７０μＬに分散させ、抗ＰＳＡ抗体３０μｇを加え、室温で１０分間インキュベートした。次いで、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（５ｍｇ／ｍＬ）３０μＬを加え、室温で１時間インキュベートした。ＴＢＳ−Ｔ（０．０５質量％Ｔｗｅｅｎ２０）緩衝液で３回洗浄し、抗体結合粒子を得た。得られた抗体結合粒子を３時間室温でインキュベートした。
インキュベートした抗体結合粒子のうち０．５ｍｇをＴＢＳ−Ｔ緩衝液１．５ｍＬに分散させて抗体結合粒子の分散液とし、該分散液をエッペンドルフチューブに投入した。チューブを磁性ビーズ分離用スタンド（Ｍａｇｉｃａｌ  Ｔｒａｐｐｅｒ、東洋紡（株）製）に取り付け、５分間程度静置すると、粒子がペレット状に集磁されたことを確認した。次いで、スタンドからチューブを取り外して粒子を磁気から解放し、１分間様子を確認し、以下の基準で評価した。結果を表１に示す。
＜評価基準＞
◎：ペレットがその場にとどまりながら、少しずつ崩壊していき、消失した。
○：ペレットがその場にとどまりながら、少しずつ崩壊していったが、ペレットは残存したままだった。
△：ペレットが少しずつ小さくなりながら、チューブ下部に落下した。
×：ペレットが完全に保持されたまま、チューブ下部に落下した。
【０１１３】
［化学発光免疫測定（ＣＬＥＩＡ）］
前記再分散性評価と同様にして抗体結合粒子の分散液を作製し、該抗体結合粒子の分散液３０μＬ（粒子３００μｇ相当）をエッペンドルフチューブに取り、ＴＢＳ−Ｔ緩衝液９７０μＬで希釈した。この希釈液５０μＬを９６ｗｅｌｌ白色プレート（ｃｏｒｎｉｎｇ社製）のウェル１およびウェル２にそれぞれ分注した。
続いて、ノイズ測定用として、ＢＳＡ／ＴＢＳ緩衝液（１質量％ＢＳＡ、１３７ｍｍｏｌ／Ｌ塩化ナトリウム、２．７ｍｍｏｌ／Ｌ塩化カリウム、２５ｍｍｏｌ／Ｌ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．４）１０μＬをウェル１に分注し、シグナル測定用として、ＢＳＡ／ＴＢＳ緩衝液１０μＬに溶解したＰＳＡ抗原０．０１ｎｇをウェル２に分注し、それぞれ３７℃で１０分間反応させた。
その後、磁気分離にて粒子を分離した後、９６ｗｅｌｌプレート用ウォッシャー（テカンジャパン（株）製、Ｈｙｄｒｏ  Ｆｌｅｘ）を用い、ＴＢＳ−Ｔ緩衝液で洗浄を行い、次いで、標識体液（ＡＬＰ（アルカリホスファターゼ）標識抗体液）５０μＬを分注し、３７℃で１０分間反応させた。反応後、磁気分離にて粒子を分離した後、９６ｗｅｌｌプレート用ウォッシャー（Ｈｙｄｒｏ  Ｆｌｅｘ）を用い、ＴＢＳ−Ｔ緩衝液で洗浄を行い、次いで、ＡＬＰの基質液（ルミパルス基質液：富士レビオ（株）製）を添加し、２５℃で５分間反応させ、発光強度をＡＲＶＯ  Ｘ５（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ社製）を用いて測定した。
ウェル１の化学発光量をノイズ（Ｎ）とし、ウェル２の化学発光量をシグナル（Ｓ）とした。さらに、シグナル（Ｓ）をノイズ（Ｎ）で割った値Ｓ／Ｎ比を算出した。結果を表１に示す。
【０１１４】
〔合成例１〕
油性磁性流体（「ＥＸＰシリーズ、ＥＭＧ」、（株）フェローテック製）にアセトンを加えて粒子を析出沈殿させた後、これを乾燥することにより、疎水化処理された表面を有するフェライト系の磁性体微粒子（平均一次粒子径：０．０１μｍ）を得た。
次いで、ポリアクリル系粒子（「ＭＸ−１５０」、綜研化学（株）製、数平均粒径：１．５μｍ）６１ｇおよび前記疎水化処理された磁性体微粒子６１ｇをミキサーでよく混合し、この混合物をハイブリダイゼーションシステムＮＨＳ−０型（（株）奈良機械製作所製）を使用して、羽根（撹拌翼）の周速度１００ｍ／秒（１６，２００ｒｐｍ）で５分間処理し、磁性体微粒子からなる磁性体層を表面に有する母粒子（数平均粒径：１．９μｍ）を得た。
【０１１５】
〔実施例１〕
ドデシル硫酸ナトリウム０．５０質量％水溶液２００ｇを５００ｍＬセパラブルフラスコに投入し、次いで、合成例１で得た母粒子１０ｇを加え、ホモジナイザーで分散させた後、６０℃に加熱し温度を保持した。
次に別の容器に、ドデシル硫酸ナトリウム０．５０質量％水溶液５０ｇ、ジビニルベンゼン（以下「ＤＶＢ」という。）５．０ｇ、２−メタクリロイルオキシエチルコハク酸（以下「ＳＡ」という。）４．０ｇ、テトラヒドロフルフリルメタクリレート（以下「ＴＨＦＭＡ」という。）３．０ｇ、および、ｔｅｒｔ−ブチル＝２−エチルペルオキシヘキサノアート（パーブチルＯ、日油（株）製）０．６０ｇを入れて分散させ、プレエマルジョンを得た。このプレエマルジョンを、６０℃に保持した前記５００ｍＬセパラブルフラスコに２時間かけて全量滴下した。滴下終了後、６０℃に保持し、３０分間撹拌した。次いで、セパラブルフラスコ中の粒子を、磁気を用いて分離した後、蒸留水を用いて繰り返し洗浄することで、磁性粒子を得た。得られた粒子の数平均粒径は２．０μｍであり、ＣＶ値は１１％、シェルの厚みは０．０５μｍであった。
【０１１６】
〔実施例２〕
プレエマルジョンを作製するための原料として、ＤＶＢ５．０ｇの代わりにスチレン（以下「ＳＴ」という。）５．０ｇを用いた以外は、実施例１と同様の操作を行った。得られた粒子の数平均粒径は２．１μｍであり、ＣＶ値は１２％、シェルの厚みは０．１μｍであった。
【０１１７】
〔実施例３〕
プレエマルジョンを作製するための原料として、ＤＶＢ５．０ｇの代わりに４−ビニル安息香酸５．０ｇを用いた以外は、実施例１と同様の操作を行った。得られた粒子の数平均粒径は２．１μｍであり、ＣＶ値は１１％、シェルの厚みは０．１μｍであった。
【０１１８】
〔実施例４〕
プレエマルジョンを作製するための原料として、ＴＨＦＭＡ３．０ｇの代わりにジ（エチレングリコール）メチルエーテルメタクリレート（以下「ＤＥＧＭＡ」という。）３．０ｇを用いた以外は、実施例１と同様の操作を行った。得られた粒子の数平均粒径は２．０μｍであり、ＣＶ値は１３％、シェルの厚みは０．０５μｍであった。
【０１１９】
〔実施例５〕
プレエマルジョンを作製するための原料として、ＤＶＢ５．０ｇ、ＳＡ４．０ｇ、ＴＨＦＭＡ３．０ｇの代わりにＤＶＢ３．０ｇ、ＳＡ２．０ｇ、ＴＨＦＭＡ７．０ｇを用いた以外は、実施例１と同様の操作を行った。得られた粒子の数平均粒径は２．１μｍであり、ＣＶ値は１３％、シェルの厚みは０．１μｍであった。
【０１２０】
〔実施例６〕
プレエマルジョンを作製するための原料として、ＤＶＢ５．０ｇ、ＳＡ４．０ｇ、ＴＨＦＭＡ３．０ｇの代わりにＤＶＢ７．０ｇ、ＳＡ３．０ｇ、ＴＨＦＭＡ２．０ｇを用いた以外は、実施例１と同様の操作を行った。得られた粒子の数平均粒径は２．０μｍであり、ＣＶ値は１１％、シェルの厚みは０．０５μｍであった。
【０１２１】
〔実施例７〕
プレエマルジョンを作製するための原料として、ＤＶＢ５．０ｇ、ＳＡ４．０ｇ、ＴＨＦＭＡ３．０ｇの代わりにＤＶＢ９．０ｇ、ＳＡ３．０ｇを用いた以外は、実施例１と同様の操作を行った。得られた粒子の数平均粒径は２．０μｍであり、ＣＶ値は１０％、シェルの厚みは０．０５μｍであった。
【０１２２】
〔実施例８〕
ドデシル硫酸ナトリウム０．５重量％水溶液２００ｇを、５００ｍＬセパラブルフラスコに投入し、次いで、合成例１で得た母粒子１０ｇを投入し、ホモジナイザーで分散した後、６０℃に加熱した。
次に別の容器に、ドデシル硫酸ナトリウム０．５重量％水溶液１５ｇに、メタクリル酸シクロヘキシル（以下「ＣＨＭＡ」という。）３．０ｇ、ｔｅｒｔ−ドデカンチオール（以下「ＴＤＴ」という。）０．０１５ｇ、およびパーブチルＯ  ０．５ｇを入れて分散させたプレエマルジョンを、６０℃にコントロールした前記５００ｍＬセパラブルフラスコに２時間かけて滴下した（以上、シェル形成１段目）。
【０１２３】
次いで、得られた液体を室温まで冷却した後、そこに、ドデシル硫酸ナトリウム０．５重量％水溶液１５ｇに、パーブチルＯ  ０．６０ｇを入れて分散させたプレエマルジョンを投入して、室温で１５時間撹拌した。次いで、該室温で１５時間撹拌した液体に、ドデシル硫酸ナトリウム０．５重量％水溶液１５ｇに、ＤＶＢ５．０ｇ、ＳＡ４．０ｇおよびＴＨＦＭＡ３．０ｇを入れて分散させたプレエマルジョンを投入し、さらに室温で２時間撹拌した。ついで、８０℃に昇温し、さらに２時間重合を続けて反応を完了させた（以上、シェル形成２段目）。
【０１２４】
得られた磁性粒子の水分散体を磁気精製および重力沈降精製してから、固形分濃度１％の磁性粒子の水分散体を得た。
【０１２５】
この磁性粒子の水分散体から水を取り除くために、アセトン５００ｍＬを用いて該水分散体を２回洗浄した。次いで、該粒子をアセトン５００ｍＬに分散させて２時間撹拌することにより、アセトン（有機溶剤）に該粒子を接触させた。これにより、アセトンを用いて前記粒子から１段目と２段目のポリマー部の一部を溶出させることで多孔質の粒子を得た。その後、アセトン５００ｍＬで２回洗浄し、さらにアセトンを取り除くため水で洗浄した。得られた粒子の数平均粒径は２．３μｍであり、ＣＶ値は１５％、シェルの厚みは０．２μｍであった。
【０１２６】
〔実施例９〕
シェル形成１段目のプレエマルジョンを作製するための原料として、ＣＨＭＡ３．０ｇ、ＴＤＴ０．０１５ｇの代わりに、ＣＨＭＡ５．０ｇおよびＴＤＴ０．０３ｇを使用した以外は、実施例８と同様の操作を行った。得られた粒子の数平均粒径は２．３μｍであり、ＣＶ値は１７％、シェルの厚みは０．２５μｍであった。
【０１２７】
〔比較例１〕
プレエマルジョンを作製するための原料として、ＤＶＢ５．０ｇの代わりにジペンタエリスリトールヘキサアクリレート（以下「ＡＤＰＨ」という。）５．０ｇを用いた以外は、実施例１と同様の操作を行った。得られた粒子の数平均粒径は２．４μｍであり、ＣＶ値は１４％、シェルの厚みは０．２５μｍであった。
【０１２８】
〔比較例２〕
７５％ジ（３，５，５−トリメチルヘキサノイル）パーオキサイド溶液（日油（株）製「パーロイル３５５−７５（Ｓ）」）２質量部を１％ドデシル硫酸ナトリウム水溶液２０質量部に混合し、超音波分散機にて微細乳化した。これを数平均粒径０．７７μｍのポリスチレン粒子１３質量部および水４１質量部の入ったリアクターに入れ、２５℃で１２時間撹拌した。
別の容器にて、スチレン９６質量部およびジビニルベンゼン４質量部を、０．１％ドデシル硫酸ナトリウム水溶液４００質量部で乳化させた。得られた乳化液を前記リアクターに入れ、４０℃で２時間攪拌した後、７５℃に昇温して８時間重合した。次いで、室温まで冷却した後、遠心分離により粒子のみ取り出し、該粒子をさらに水洗し、乾燥および粉砕してコア粒子を得た。コア粒子の数平均粒径は１．５μｍであった。
【０１２９】
次に、油性磁性流体（商品名：「ＥＸＰシリーズ、ＥＭＧ」、（株）フェローテック製）にアセトンを加えて粒子を析出沈殿させた後、これを乾燥することにより、疎水化処理された表面を有するフェライト系の磁性体微粒子（平均一次粒子径：０．０１μｍ）を得た。
【０１３０】
次いで、前記コア粒子１５ｇおよび前記磁性体微粒子１５ｇをミキサーでよく混合し、この混合物をハイブリダイゼーションシステムＮＨＳ−０型（奈良機械製作所（株）製）を使用して、羽根（撹拌翼）の周速度１００ｍ／秒（１６２００ｒｐｍ）で５分間処理し、数平均粒径が２．０μｍの磁性体微粒子からなる磁性体層を表面に有する母粒子を得た。
【０１３１】
次に、ドデシル硫酸ナトリウム０．２５重量％およびノニオン性乳化剤（商品名：「エマルゲン１５０」、花王（株）製）０．２５重量％を含む水溶液（以下「分散剤水溶液」という。）３７５ｇを１Ｌセパラブルフラスコに投入し、次いで、前記磁性体層を有する母粒子１５ｇを投入し、ホモジナイザーで分散させた後、６０℃に加熱した。
別の容器に、分散剤水溶液１５０ｇ、メチルメタクリレート（以下「ＭＭＡ」という。）２７ｇ、トリメチロールプロパントリメタクリレート（以下「ＴＭＰ」という。）３ｇおよびジ（３，５，５−トリメチルヘキサノイル）パーオキサイド（日油（株）；パーロイル３５５）０．６ｇを入れて分散させたプレエマルジョンを、６０℃にコントロールした前記１Ｌセパラブルフラスコに１時間３０分かけて滴下した。滴下終了後、６０℃に保持し、１時間攪拌した。
得られた１時間撹拌後の１Ｌセパラブルフラスコに、分散剤水溶液７５ｇ、グリシジルメタクリレート（以下「ＧＭＡ」という。）１３．５ｇ、ＴＭＰ１．５ｇおよびパーロイル３５５  ０．３ｇを入れて分散させたプレエマルジョンを１時間３０分かけて滴下した。その後７５℃に昇温し、さらに２時間重合を続けて、反応を完了させた。続けて、反応を完了させた１Ｌセパラブルフラスコに１ｍｏｌ／Ｌ硫酸６０ｍｌを入れ、６０℃で６時間撹拌した。次いで、磁気を用いて得られたセパラブルフラスコ中の粒子を分離した後、蒸留水を用いて繰り返し洗浄した。以上により、２，３−ジヒドロキシプロピル基を有する磁性粒子を得た（以下「Ａ−１粒子」という。）。
【０１３２】
Ａ−１粒子を真空乾燥して得られた乾燥粒子１．０ｇを、１０ｍｌのピリジンで洗浄してから５ｍｌのピリジンに分散させた。そこに、２５ｍｌのピリジンに３ｇの無水コハク酸を溶解した溶液を加え、６０℃で２時間撹拌した。反応後、磁気を用いて粒子を分離し、アセトンで３回、続いて０．１Ｍ水酸化ナトリウム水溶液で３回、さらに蒸留水で４回洗浄して、カルボキシ基含有粒子を得た。このカルボキシ基含有粒子の数平均粒径は２．９μｍであり、ＣＶ値は１４％、シェルの厚みは０．４５μｍであった。
【０１３３】
〔比較例３〕
プレエマルジョンを作製するための原料として、ＤＶＢ５．０ｇ、ＳＡ４．０ｇ、ＴＨＦＭＡ３．０ｇの代わりに、ＤＶＢ１．０ｇ、ＳＡ３．０ｇ、ＴＨＦＭＡ８．０ｇを用いた以外は、実施例１と同様の操作を行った。得られた粒子の数平均粒径は２．３μｍであり、ＣＶ値は１５％、シェルの厚みは０．２μｍであった。
【０１３４】
〔比較例４〕
プレエマルジョンを作製するための原料として、ＤＶＢ５．０ｇ、ＳＡ４．０ｇ、ＴＨＦＭＡ３．０ｇの代わりに、ＤＶＢ２．０ｇ、ＳＡ３．０ｇ、ＴＨＦＭＡ７．０ｇを用いた以外は、実施例１と同様の操作を行った。得られた粒子の数平均粒径は２．２μｍであり、ＣＶ値は１３％、シェルの厚みは０．１５μｍであった。
【０１３５】
〔比較例５〕
プレエマルジョンを作製するための原料として、ＤＶＢ５．０ｇ、ＳＡ４．０ｇ、ＴＨＦＭＡ３．０ｇの代わりに、ＤＶＢ１０．０ｇ、ＳＡ２．０ｇを用いた以外は、実施例１と同様の操作を行った。得られた粒子の数平均粒径は２．０μｍであり、ＣＶ値は１０％、シェルの厚みは０．０５μｍであった。
【０１３６】
〔比較例６〕
シェル形成１段目のプレエマルジョンを作製するための原料として、ＣＨＭＡ３．０ｇ、ＴＤＴ０．０１５ｇの代わりに、ＣＨＭＡ６．７ｇおよびＴＤＴ０．０７ｇを使用した以外は、実施例８と同様の操作を行った。得られた粒子の数平均粒径は、２．５μｍであり、ＣＶ値は１８％、シェルの厚みは０．３μｍであった。
【０１３７】
【表１】
2019082356.tif 000012