(57)【要約】【課題】皮膚の水分蒸散量抑制作用に優れる皮膚の水分蒸散量抑制組成物を提供する。【解決手段】本発明の皮膚の水分蒸散量抑制組成物は、ローヤルゼリーにタンパク質分解酵素処理を施した酵素処理ローヤルゼリーを有効成分とし、経口摂取されることを特徴とする。前記タンパク質分解酵素は、バチルス・サブティリス由来のエンド型中性プロテアーゼであってもよい。また、一日当たりの投与量が、ローヤルゼリー由来のタンパク質を基準として１００ｍｇ〜２０００ｍｇであってもよい。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ローヤルゼリーにタンパク質分解酵素処理を施した酵素処理ローヤルゼリーを有効成分とし、経口摂取される皮膚の水分蒸散量抑制組成物。
【請求項２】
前記タンパク質分解酵素は、バチルス・サブティリス由来のエンド型中性プロテアーゼである請求項１に記載の水分蒸散量抑制組成物。
【請求項３】
一日当たりの投与量が、ローヤルゼリー由来のタンパク質を基準として１００ｍｇ〜２０００ｍｇである請求項１又は２に記載の水分蒸散量抑制組成物。
【請求項４】
皮膚のバリア機能改善組成物として用いられる請求項１〜３のいずれか一項に記載の水分蒸散量抑制組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、酵素処理ローヤルゼリーを有効成分とし、経口摂取される皮膚の水分蒸散量抑制組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
一般に、ローヤルゼリーは、働き蜂の下咽頭腺及び大顎腺から分泌される乳白色のクリーム様物質で、特有のタンパク質、脂肪酸及びミネラル等が含有されていることが知られている。ローヤルゼリーは、血圧降下作用、抗腫瘍作用、血清コレステロール低下作用、抗菌作用、放射線及び化学療法剤の副作用軽減作用、慢性疾患に対する作用等の種々の生理作用を有していることが知られている。したがって、従来よりローヤルゼリーは、栄養価の高い健康食品のみならず、医薬品、化粧料等の用途にも用いられてきた。
【０００３】
また、近年、例えば特許文献１に開示されるように、ローヤルゼリーエキス抽出後の抽出溶媒に不溶性の画分に対して、中性プロテアーゼを作用させることにより、抗酸化作用の向上効果等の生体に有用な作用の向上効果が見出されるようになった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２００９−２９７７２号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明の目的とするところは、皮膚の水分蒸散量抑制作用に優れる皮膚の水分蒸散量抑制組成物を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、酵素処理ローヤルゼリーが優れた皮膚の水分蒸散量抑制作用を発揮することを見出したことに基づくものである。
上記目的を達成するために、本発明の一態様では、ローヤルゼリーにタンパク質分解酵素処理を施した酵素処理ローヤルゼリーを有効成分とし、経口摂取される皮膚の水分蒸散量抑制組成物が提供される。前記タンパク質分解酵素は、バチルス・サブティリス由来のエンド型中性プロテアーゼであってもよい。一日当たりの投与量が、ローヤルゼリー由来のタンパク質を基準として１００ｍｇ〜２０００ｍｇであってもよい。皮膚のバリア機能改善組成物として用いられてもよい。
【発明の効果】
【０００７】
本発明によれば、優れた皮膚の水分蒸散量抑制作用を発揮することができる。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
以下、本発明の水分蒸散量抑制組成物を具体化した一実施形態を説明する。以下、ローヤルゼリーをＲＪと略記する。
本実施形態の水分蒸散量抑制組成物の有効成分である酵素処理ＲＪは、生ＲＪ及び乾燥ＲＪ（生ＲＪを凍結乾燥処理等により乾燥させて粉末化したもの）から選ばれる少なくとも一種が原料として用いられる。本実施形態において使用される生ＲＪ及び乾燥ＲＪの産地は、特に限定されず、例えば中国、台湾、日本等のアジア諸国、ヨーロッパ諸国、北アメリカ諸国、ブラジル等の南アメリカ諸国、及びニュージーランド、オーストラリア等のオセアニア諸国が挙げられる。生ＲＪ又は乾燥ＲＪのうち、取り扱い性の観点より、乾燥ＲＪが好ましい。
【０００９】
なお、原料は、生ＲＪ及び乾燥ＲＪから選ばれる少なくとも一種から抽出溶媒を用いて得られる不溶性の分画を原料として使用してもよい。かかる不溶性の画分には、主としてＲＪ由来のタンパク質が高含有されている。抽出溶媒としては、親水性有機溶媒又は含水親水性有機溶媒が使用される。親水性有機溶媒としては、例えばエタノール、メタノール、ブタノール及びプロパノール等の低級アルコール類、クロロホルム等のハロゲン化炭化水素類が挙げられる。これらの親水性有機溶媒を単独で使用してもよく、２種以上を組み合わせて使用してもよい。含水親水性有機溶媒として例えば含水エタノールが使用される場合、抽出溶媒中におけるエタノールの濃度は、５０〜９９容量％が好ましく、８０〜９９容量％がより好ましく、９０〜９９容量％が最も好ましい。これらの抽出溶媒の添加量は、抽出効率の点から、生ＲＪ及び乾燥ＲＪから選ばれる少なくとも一種を１重量部に対して１〜１０重量部が好ましく、２〜８重量部がより好ましく、３〜６重量部が最も好ましい。これらの抽出溶媒は、生ＲＪ及び乾燥ＲＪから選ばれる少なくとも一種とともに混合及び撹拌される。抽出の温度は、溶媒の揮発を防ぐ点から、１０〜４０℃が好ましく、２０〜３０℃がより好ましい。抽出の時間は、収率の点から、１〜２４時間が好ましく、１．５〜１２時間がより好ましく、２〜６時間がさらに好ましい。得られた抽出物は、溶媒に可溶性の画分と沈殿物からなる不溶性の画分から構成される。これらの可溶性画分と不溶性画分は、公知の方法、例えば濾過処理、遠心分離を用いることにより、容易に分離することができる。
【００１０】
上述した原料の中で、デセン酸をはじめとするＲＪに特有の脂肪酸、そのエステルからなる脂質等の全ての成分が含有されている生ＲＪ及び乾燥ＲＪが好ましく用いられる。また、上述した原料は、１種のみを使用してもよく、２種以上を組み合わせて使用してもよい。
【００１１】
酵素処理ＲＪは、上述した原料をタンパク質分解酵素を用いて酵素処理することにより得られる。タンパク質分解酵素としては、至適ｐＨを中性付近（好ましくはｐＨ５．０〜８．５、より好ましくはｐＨ６．５〜７．５）に有する中性プロテアーゼを使用することが好ましい。中性プロテアーゼには、ペプチドの末端から加水分解するエキソ型プロテアーゼとペプチドの途中から分解するエンド型プロテアーゼとが存在するが、いずれのプロテアーゼも使用することができる。
【００１２】
中性プロテアーゼとして、具体的には、バチルス・サブティリス由来の中性プロテアーゼ、バチルス・ステアロサーモフィルス（バチルス・サーモプロテオライティクス・ロッコ）由来の中性プロテアーゼであるサーモリシン、アスペルギルス・オリザエ由来の中性プロテアーゼ等を挙げることができる。これらの中で、ＲＪの酵素処理による皮膚の水分蒸散量抑制作用の向上効果に優れる観点からバチルス・サブティリスのエンド型中性プロテアーゼが好ましい。なお、ＲＪ中のタンパク質がバチルス・サブティリスのエンド型中性プロテアーゼにより酵素処理された場合、酵素処理ＲＪは少なくともＩｌｅ−Ｔｙｒ（ＩＹ）、Ｖａｌ−Ｔｙｒ（ＶＹ）、Ｉｌｅ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ（ＩＶＹ）、Ｔｙｒ−Ｔｙｒ（ＹＹ）、及びＡｌａ−Ｌｅｕ（ＡＬ）の各種ペプチドを含有している。
【００１３】
ＲＪの酵素処理は、原料ＲＪを所定量の水又は緩衝液に、溶解又は分散させた酵素反応液が用いられる。酵素反応液のｐＨは、使用する酵素の至適ｐＨ付近に調整するのが好ましい。中性プロテアーゼを使用する場合、酵素処理液のｐＨは好ましくは５．０〜８．５、より好ましくは６．５〜７．５、さらに好ましくは６．８〜７．２に調整される。酵素反応液は、粘度上昇を十分に抑え、酵素処理を迅速に進行させる観点、及び次の乾燥処理を効率的に行う観点から、原料の質量に対して好ましくは１〜１０倍量、より好ましくは１．５〜６倍量の水又は緩衝液が使用される。酵素処理の時間は、反応温度、酵素の力価等により適宜設定されるが、効果の発現を高める観点及び経済性の観点から、好ましくは０．１〜２４時間、より好ましくは０．５〜１６時間である。なお、このタンパク質分解酵素処理は、酵素処理後に酵素反応液を直ちに７５〜１００℃で５〜６０分間加熱して前記プロテアーゼを失活させることが望ましい。
【００１４】
得られた酵素反応液は、取り扱い性向上の観点から乾燥処理されることが好ましい。乾燥処理は、常法を用いることができ、例えば真空凍結乾燥機等を用いて酵素反応液を凍結乾燥することにより実施される。この乾燥工程を行うことにより、粉末状の酵素処理ＲＪが得られる。
【００１５】
本実施形態の水分蒸散量抑制組成物は、経口投与により、優れた皮膚の水分蒸散量抑制作用を発揮する。水分蒸散量は、より具体的には、経表皮水分の蒸散量を示し、体内から角層を通して揮散する水分量を示す。また、水分蒸散量は、皮膚のバリア機能の指標として用いられている。したがって、本実施形態の水分蒸散量抑制組成物は、例えば皮膚のバリア機能改善組成物として好ましく適用することができる。皮膚バリア機能は、体内の水分の蒸散を防いで、体内からの水分の喪失を防止するとともに、外部からの異物の進入を防止する機能である。本実施形態の水分蒸散量抑制組成物は、様々な要因により、角層のバリア機能が低下した場合に好ましく適用される。
【００１６】
さらには、角層の機能が低下することにより生ずる乾燥性敏感肌の改善剤、乾皮症の治療剤、及び皮脂欠乏性湿疹の治療剤、又はそれらの発症の予防剤として好適に適用される。本実施形態の水分蒸散量抑制組成物の具体的な適用形態としては、経口剤として、上記の作用効果を得ることを目的とした飲食品に好ましく適用される。また、服用される医薬品等に適用してもよい。
【００１７】
本実施形態の水分蒸散量抑制組成物を飲食品に適用する場合、種々の食品素材又は飲料品素材に添加することによって使用することができる。飲食品の形態としては、特に限定されず、液状、粉末状、ゲル状、固形状等のいずれであってもよく、また剤形としては、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、ドリンク剤等のいずれであってもよい。その中でも、吸湿性が抑えられ、保存安定性が良好なカプセル剤であることが好ましい。前記飲食品としては、その他の成分としてゲル化剤含有食品、糖類、香料、甘味料、油脂、基材、賦形剤、食品添加剤、副素材、増量剤等を適宜配合してもよい。
【００１８】
本実施形態の水分蒸散量抑制組成物を医薬品として使用する場合は、上述したように、服用（経口摂取）により投与することができる。剤形としては、投与方法に応じ公知の剤形を適宜採用することができる。例えば、液剤、散剤、粉剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、丸剤等が挙げられる。また、添加剤として賦形剤、基剤、乳化剤、溶剤、安定剤等を配合してもよい。
【００１９】
本実施形態の水分蒸散量抑制組成物を飲食品等として適用する場合、一日当たりの投与量は特に限定されない。優れた水分蒸散量抑制作用の発現の観点から、ローヤルゼリー由来のタンパク質（酵素処理により生じたペプチドも含む）を基準として好ましくは１００ｍｇ〜２０００ｍｇ、より好ましくは２００ｍｇ〜１０００ｍｇとなる投与量である。生ＲＪ及び乾燥ＲＪをそのまま原料として使用した場合、一日当たりの投与量は組成物の乾燥質量として好ましくは２００ｍｇ〜５０００ｍｇ、より好ましくは５００ｍｇ〜２０００ｍｇである。
【００２０】
本実施形態の水分蒸散量抑制組成物によれば、以下のような効果を得ることができる。
（１）本実施形態の水分蒸散量抑制組成物は、ＲＪにタンパク質分解酵素処理を施した酵素処理ＲＪを有効成分とした。したがって、経口摂取されることにより優れた皮膚の水分蒸散量抑制作用を発揮することができる。
【００２１】
なお、上記実施形態は以下のように変更してもよい。
・上記実施形態の水分蒸散量抑制組成物には、有効成分である酵素処理ＲＪが高濃度に含まれるものが好ましい。より具体的には、水分蒸散量抑制組成物中における酵素処理ＲＪの含有量は、組成物の剤型が固形状の場合、１０質量％以上であることが好ましく、２０質量％以上がより好ましく、３０質量％以上がさらに好ましい。組成物の剤型が水溶液等の液状の場合、溶液中に粉末状の酵素処理ＲＪとして０．５質量％以上であることが好ましく、１質量％以上がより好ましく、２質量％以上がさらに好ましい。
【００２２】
・上記実施形態における水分蒸散量抑制組成物の有効成分は、好ましくは酵素反応液を乾燥させた粉末状の剤型が適用される。しかしながら、タンパク質分解処理後の酵素反応液を乾燥処理することなく、液状の剤型としてそのまま適用してもよい。
【００２３】
・上記実施形態の水分蒸散量抑制組成物を飲食品として適用する場合、飲食品の用途としては、特に限定されず、いわゆる一般食品、健康食品、機能性食品、栄養補助食品、サプリメント、特定保健用食品、機能性表示食品等として適用することができる。
【００２４】
・上記実施形態における水分蒸散量抑制組成物は、ヒトに対して適用することができるのみならず、ペット、家畜等の飼養動物に対して適用してもよい。
【実施例】
【００２５】
以下に試験例を挙げ、前記実施形態をさらに具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
（酵素処理ＲＪの調製）
中国産生ＲＪ１２．７ｋｇに水３１．９ｋｇを加えて攪拌し、ＲＪ希釈液を調製した。次に、前記ＲＪ希釈液に、バチルス・サブティリス由来のエンド型中性プロテアーゼ（天野エンザイム社製プロテアーゼＮ）を４４．６ｇ添加し、至適ｐＨである７．０に調整した後、５０℃で４時間反応させた。反応終了後、８０℃で２０分間加熱することにより酵素失活工程を行い、次いで凍結乾燥にて乾燥工程を行うことにより粉末状の酵素処理ＲＪを調製した。
【００２６】
（被験食品の摂取）
実施例１の被験食品は、上記のように得られた酵素処理ＲＪを１粒あたり２５０ｍｇ含有するハードカプセルとして構成した。１日摂取量（４粒あたり）の栄養成分及び組成を表１に示す。比較例１のプラセボ食品は、酵素処理ＲＪの代替成分として澱粉を含有し、その他の添加剤は実施例１と同一組成とした。また、いずれの食品とも栄養成分はほぼ同等とし、外観上の区別はできないようにした。
【００２７】
【表１】
2019214516.tif 000002
摂取者は、実施例１の群が１６名、比較例１の群が１７名とした。摂取方法は、１日２回（朝・晩）、１回２粒（計４粒）、粉末状の酵素処理ＲＪの含有量として１０００ｍｇ（ローヤルゼリー由来ペプチド３００ｍｇ、ローヤルゼリー由来１０−ヒドロキシ−２−(Ｅ)−デセン酸を３５ｍｇ含有）を摂取した。摂取期間は、８週間とした。摂取前及び８週間経過後において、経表皮水分蒸散量及び皮膚水分量をそれぞれ下記に示す方法により測定した。
【００２８】
（経表皮水分蒸散量）
テヴァメーター（Tewameter TM300、Courage-Khazaka社製）を用いて測定を行った。測定箇所は左顔、頬骨頭頂部とし、１秒毎、６０秒以上の連続測定を行い、終了前３０秒間の標準偏差最小値における平均値を採用し、標準偏差は５秒間（回）の値で算出した。また、同一の標準偏差がある場合は測定終了時に近い時間の値を採用した。
【００２９】
（皮膚水分量）
コルネオメーター（Corneometer CM825、Courage-Khazaka社製）を用いて測定を実施した。測定箇所は左顔、頬骨頭頂部、同一箇所を５回測定し、最上値・最下値を削除した３回測定値の平均を採用した。
【００３０】
経表皮水分蒸散量及び皮膚水分量の値をそれぞれ表２に示す。
各値は、平均値±標準誤差を示す。上段は測定値の推移、下段は変化量を示す。
摂取前との比較を対応のあるt検定で行った。*：p＜0.05、**：p＜0.01
各時点での群間比較を対応のないt検定で行った。#：p＜0.05
【００３１】
【表２】
2019214516.tif 000003
表２に示されるように、経表皮水分蒸散量（頬）について、実施例１の被験食品群は、経時比較において、摂取開始前に比較して摂取８週後で有意な減少が認められた。比較例１のプラセボ食品群は、摂取開始前と比較して有意な減少は認められなかった。摂取開始前との変化量では、プラセボ食品群に対して被験食品群で有意な差が認められた。酵素処理ＲＪの経口摂取により、バリア機能改善に効果があることが示唆された。
【００３２】
なお、皮膚水分量に関しては、摂取開始前に比べて摂取後の測定値ならびに変化量について有意に増加したが、プラセボ食品群との群間差は見いだせなかった。角層水分と経表皮水分蒸散量には相関が認められない報告もあり（日生気象会誌（2015）52:131-7）、今回実施した試験では、被験食品の水分蒸散量抑制作用により皮膚水分量の増加作用までは得られないことが示唆された。
【００３３】
次に、上記実施形態及び別例から把握できる技術的思想について、以下に追記する。（ａ）前記水分蒸散量抑制組成物を内包するカプセル。
【手続補正書】
【提出日】平成30年9月25日(2018.9.25)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ローヤルゼリーにタンパク質分解酵素処理としてバチルス・サブティリス由来のエンド型中性プロテアーゼを施した酵素処理ローヤルゼリーを有効成分とし、経口摂取される皮膚の水分蒸散量抑制用組成物。
【請求項２】
一日当たりの投与量が、ローヤルゼリー由来のタンパク質を基準として１００ｍｇ〜２０００ｍｇである請求項１に記載の水分蒸散量抑制用組成物。
【請求項３】
皮膚のバリア機能改善用組成物として用いられる請求項１又は２に記載の水分蒸散量抑制用組成物。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００１】
本発明は、酵素処理ローヤルゼリーを有効成分とし、経口摂取される皮膚の水分蒸散量抑制用組成物に関する。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００５】
本発明の目的とするところは、皮膚の水分蒸散量抑制作用に優れる皮膚の水分蒸散量抑制用組成物を提供することにある。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００６】
本発明は、酵素処理ローヤルゼリーが優れた皮膚の水分蒸散量抑制作用を発揮することを見出したことに基づくものである。
上記目的を達成するために、本発明の一態様では、ローヤルゼリーにタンパク質分解酵素処理としてバチルス・サブティリス由来のエンド型中性プロテアーゼを施した酵素処理ローヤルゼリーを有効成分とし、経口摂取される皮膚の水分蒸散量抑制用組成物が提供される。一日当たりの投与量が、ローヤルゼリー由来のタンパク質を基準として１００ｍｇ〜２０００ｍｇであってもよい。皮膚のバリア機能改善用組成物として用いられてもよい。