(57)【要約】【課題】本発明の一態様は、ホルモン療法によらない、新規の子宮内膜症または子宮腺筋症の処置用医薬、および新規の子宮内膜症または子宮腺筋症の処置用医薬のスクリーニング方法を提供することを目的とする。【解決手段】ＭｙＤ８８−ＩＲＡＫ４シグナル伝達経路阻害剤を含む子宮内膜症または子宮腺筋症の処置用医薬、およびＭｙＤ８８−ＩＲＡＫ４シグナル伝達経路の活性化状態を指標とした子宮内膜症または子宮腺筋症の処置用医薬をスクリーニングするための方法を提供する。【選択図】図４
2019043949.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ミエロイド分化一次応答因子８８（ＭｙＤ８８）−インターロイキン１受容体関連キナーゼ４（ＩＲＡＫ４）シグナル伝達経路阻害剤を含むことを特徴とする、子宮内膜症または子宮腺筋症の処置用医薬。
【請求項２】
上記ＭｙＤ８８−ＩＲＡＫ４シグナル伝達経路阻害剤が、ＭｙＤ８８阻害剤、ＩＲＡＫ４阻害剤およびＴＲＡＦ６阻害剤からなる群より選択される少なくとも１つであることを特徴とする、請求項１に記載の医薬。
【請求項３】
上記ＩＲＡＫ４阻害剤が、Ｎ−［３−アミノカルボニル−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−２−（２−メチル−４−ピリジニル）−４−オキサゾールカルボキシアミドヒドロクロリドであることを特徴とする、請求項２に記載の医薬。
【請求項４】
以下の工程：
（ａ）試験物質と、細胞とを接触させる接触工程、および
（ｂ）ＭｙＤ８８−ＩＲＡＫ４シグナル伝達経路の活性化状態を評価する評価工程
を含むことを特徴とする、子宮内膜症または子宮腺筋症の処置用医薬をスクリーニングするための方法。
【請求項５】
上記（ｂ）の評価工程が、ＩＲＡＫ４の活性化状態、ＪＮＫの活性化状態、ｐ３８の活性化状態および炎症性サイトカインの発現量からなる群より選択される少なくとも１つを評価することを含むことを特徴とする、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
上記細胞が、子宮内膜様病変に由来する細胞または子宮内膜上皮細胞株であることを特徴とする、請求項４または５に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、子宮内膜症または子宮腺筋症の処置用医薬、および子宮内膜症または子宮腺筋症の処置用医薬のスクリーニング方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
子宮内膜症は、子宮内膜様組織が本来の正常な位置とは異なる位置に生じる疾患であり、月経痛や不妊を主症状とするエストロゲン依存性の疾患である。子宮内膜症は、全世界の生殖年齢女性の約１０％（国内では、２００〜４００万人）が罹患していると想定され、女性のリプロダクティブ・ヘルスを損なう疾患として注目されている。
【０００３】
治療法としては、これまでに、経口避妊薬による偽妊娠療法（ホルモン療法）や、子宮全摘術などの根治手術が行われている（非特許文献１および２）。しかし、いずれの治療法も、妊娠を望む患者には用いられないことから、子宮内膜症は、根本的治療法が存在しない「アンメットメディカルニーズがある疾患」の最たるものの１つである。
【０００４】
また、子宮内膜症の中でも、特に、ＤＩＥ（deeply infiltrating endometriosis）と呼ばれる深部子宮内膜症やチョコレート嚢胞は、広範囲に渡る腹腔内癒着を形成する。そのため、薬物治療の奏効例が乏しく、異所性子宮内膜切除と共に子宮全摘出術が行われることから、子宮内膜症は、挙児希望の婦人にとって深刻な問題となっている。
【０００５】
一方、子宮腺筋症は、子宮筋層に子宮内膜に類似した病変が侵入・増殖する疾患である。子宮内膜症と組織学的類似性を有する疾患で、月経困難症、下腹部痛、腰痛、不妊、過多月経などを主症状とするエストロゲン依存性の疾患である。治療法も、子宮内膜症と同様、経口避妊薬による偽妊娠療法（ホルモン療法）や、子宮全摘術などの根治手術が行われている。
【０００６】
従来、子宮内膜症の発症には、炎症性サイトカイン（ＴＮＦ−α等）が関与することが報告されていた（非特許文献１および２）。しかし、その詳細な作用機序については不明な点が多く、臨床上有効な炎症性サイトカインを標的とした子宮内膜症治療技術は、現時点で全く報告されていない。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Mohamed A. Bedaiwy et al., Ferti Steril, 107(3), 555-565, 2017
【非特許文献２】Linda C. Giudice, The New England Journal of Medicine, 362:25,2389-2398, 2010
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
上記のような事情に鑑み、本発明の一態様は、ホルモン療法によらない、新規の子宮内膜症または子宮腺筋症の処置用医薬、および新規の子宮内膜症または子宮腺筋症の処置用医薬のスクリーニング方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本願の発明者は、上記目的を達成するために鋭意検討を重ねた結果、（１）子宮内膜様病変の形成にミエロイド分化一次応答因子８８（myeloid differentiation primary response 88（以下、「ＭｙＤ８８」と称する。））−インターロイキン１受容体関連キナーゼ４（interleukin 1 receptor associated kinase 4（以下、「ＩＲＡＫ４」と称する。））シグナル伝達経路が関与していること、（２）ＭｙＤ８８−ＩＲＡＫ４シグナル伝達経路を阻害することにより、子宮内膜様病変の形成が抑制されること、および（３）ＭｙＤ８８−ＩＲＡＫ４シグナル伝達経路の分子は、抗アポトーシス因子として、子宮内膜様病変の異所性生着および増殖に作用すること、を初めて見出し、本発明を完成するに至った。すなわち、本発明の一実施形態は以下の構成を包含する。
【００１０】
〔１〕ＭｙＤ８８−ＩＲＡＫ４シグナル伝達経路阻害剤を含むことを特徴とする、子宮内膜症または子宮腺筋症の処置用医薬。
〔２〕上記ＭｙＤ８８−ＩＲＡＫ４シグナル伝達経路阻害剤が、ＭｙＤ８８阻害剤、ＩＲＡＫ４阻害剤およびＴＲＡＦ６阻害剤からなる群より選択される少なくとも１つであることを特徴とする、〔１〕に記載の医薬。
〔３〕上記ＩＲＡＫ４阻害剤が、Ｎ−［３−アミノカルボニル−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−２−（２−メチル−４−ピリジニル）−４−オキサゾールカルボキシアミドヒドロクロリドであることを特徴とする、〔２〕に記載の医薬。
〔４〕以下の工程：
（ａ）試験物質と、細胞とを接触させる接触工程、および
（ｂ）ＭｙＤ８８−ＩＲＡＫ４シグナル伝達経路の活性化状態を評価する評価工程
を含むことを特徴とする、子宮内膜症または子宮腺筋症の処置用医薬をスクリーニングするための方法。
〔５〕上記（ｂ）の評価工程が、ＩＲＡＫ４の活性化状態、ＪＮＫの活性化状態、ｐ３８の活性化状態および炎症性サイトカインの発現量からなる群より選択される少なくとも１つを評価することを含むことを特徴とする、〔４〕に記載の方法。
〔６〕上記細胞が、子宮内膜様病変に由来する細胞または子宮内膜上皮細胞株であることを特徴とする、〔４〕または〔５〕に記載の方法。
【発明の効果】
【００１１】
本発明の一態様における医薬は、細胞内におけるＭｙＤ８８−ＩＲＡＫ４シグナル伝達経路を阻害することにより、子宮内膜症または子宮腺筋症を処置し得るという効果を奏する。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】図１（ａ）は、子宮内膜症モデル動物の作製手順の概要を示す図である。図１（ｂ）および（ｃ）は、子宮内膜症モデル動物における子宮内膜様病変の肉眼的所見を示す図である。
【図２】図２は、野生型マウスを用いて作製した子宮内膜症モデル動物の子宮内膜様病変の上皮細胞において、免疫染色を行った結果を示す図である。図２（ａ）は、未処理で染色したものを示し、図２（ｂ）は、抗エストロゲン受容体β抗体で染色したものを示し、図２（ｃ）は、Ｈｅｍａｔｏｘｙｌｉｎで染色したものを示す。図２（ｄ）は、図２（ｂ）と図２（ｃ）とを重ね合わせたものである。
【図３】図３（ａ）は、ＩＬ１Ｒ欠損マウスを用いて作製した子宮内膜症モデル動物において、子宮内膜様病変の体積を測定した結果を示す図である。図３（ｂ）は、ＭｙＤ８８欠損マウスを用いて作製した子宮内膜症モデル動物において、子宮内膜様病変の体積を測定した結果を示す図である。
【図４】図４（ａ）は、野生型マウスを用いて作製した子宮内膜症モデル動物において、抗ＩＬ１Ｒ１抗体の投与後の子宮内膜様病変の体積を測定した結果を示す図である。図４（ｂ）は、野生型マウスを用いて作製した子宮内膜症モデル動物において、ＩＲＡＫ４阻害剤の投与後の子宮内膜様病変の体積を測定した結果を示す図である。
【図５】図５（ａ）は、野生型マウスを用いて作製した子宮内膜症モデル動物において、子宮内膜様嚢胞の肉眼的所見を示す図である。図５（ｂ）は、野生型マウスを用いて作製した子宮内膜症モデル動物において、ＩＲＡＫ４阻害剤の投与後の子宮内膜様嚢胞の肉眼的所見を示す図である。図５（ｃ）は、ＭｙＤ８８欠損マウスを用いて作製した子宮内膜症モデル動物において、子宮内膜様嚢胞の肉眼的所見を示す図である。
【図６】図６（ａ）は、ＩＲＡＫ４阻害剤を用いた子宮内膜様病変（嚢胞様病変）への影響を検討するに際し、ＩＲＡＫ４阻害剤の投与方法の一例を示す図である（後述する実施例４の＜ＩＲＡＫ４阻害剤-2＞に相当）。図６（ｂ）は、野生型マウスを用いて作製した子宮内膜症モデル動物において、ＩＲＡＫ４阻害剤の投与後の子宮内膜様病変の体積を測定した結果を示す図である。図６（ｃ）は、野生型マウスを用いて作製した子宮内膜症モデル動物において、子宮内膜様嚢胞の肉眼的所見を示す図（野生型マウスと題した図）、および野生型マウスを用いて作製した子宮内膜症モデル動物において、ＩＲＡＫ４阻害剤の投与後の子宮内膜様嚢胞の肉眼的所見を示す図（ＩＲＡＫ４阻害剤投与マウスと題した図）である。
【図７】図７（ａ）は、野生型マウスを用いて作製した子宮内膜症モデル動物およびＭｙＤ８８欠損マウスを用いて作製した子宮内膜症モデル動物において、抗Ｋｉ−６７抗体を用いて免疫染色を行った結果を示す図である。図７（ｂ）は、野生型マウスを用いて作製した子宮内膜症モデル動物およびＭｙＤ８８欠損マウスを用いて作製した子宮内膜症モデル動物において、抗ｃｌｅａｖｅｄ  ｃａｓｐａｓｅ  ８抗体を用いて免疫染色を行った結果を示す図である。
【図８】図８（ａ）は、野生型マウスおよびＭｙＤ８８欠損マウスを用いて作製した子宮内膜症モデル動物において、Ｋｉ−６７陽性率を示す図である。図８（ｂ）は、野生型マウスおよびＭｙＤ８８欠損マウスを用いて作製した子宮内膜症モデル動物において、ｃａｓｐａｓｅ  ８陽性率を示す図である。
【図９】図９は、ＭｙＤ８８−ＩＲＡＫ４シグナル伝達経路に関連する子宮内膜症または子宮腺筋症の処置用医薬の標的分子および想定される処置戦略を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
以下、本発明の実施の形態の一例について詳細に説明するが、本発明は、これらに限定されない。
【００１４】
本明細書において特記しない限り、数値範囲を表す「Ａ〜Ｂ」は、「Ａ以上、Ｂ以下」を意味する。
【００１５】
本明細書において「遺伝子」とは、ヌクレオチドの重合体を意図し、「ポリヌクレオチド」、「核酸」または「核酸分子」と同義で使用される。遺伝子は、ＤＮＡの形態（例えば、ｃＤＮＡもしくはゲノムＤＮＡ）でも存在しうるし、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）の形態でも存在しうる。ＤＮＡまたはＲＮＡは、二本鎖であっても、一本鎖であってもよい。一本鎖ＤＮＡまたはＲＮＡは、コード鎖（センス鎖）であっても、非コード鎖（アンチセンス鎖）であってもよい。遺伝子は化学的に合成してもよい。また、本明細書において「ポリヌクレオチド」と記載した場合、ＤＮＡであってもよいし、ＲＮＡであってもよい。
【００１６】
本明細書において「タンパク質」は、「ペプチド」または「ポリペプチド」と同義で使用される。
【００１７】
〔１．子宮内膜症または子宮腺筋症の処置用医薬〕
本発明の一実施形態において、ＭｙＤ８８−ＩＲＡＫ４シグナル伝達経路阻害剤を含むことを特徴とする、子宮内膜症または子宮腺筋症の処置用医薬を提供する（本明細書において、適宜「本発明の医薬」と呼ぶ。）。
【００１８】
本願の発明者は、炎症性サイトカインと子宮内膜症との関連を詳細に検討した結果、以下の知見を得ることに成功した。
・ＭｙＤ８８−ＩＲＡＫ４シグナル伝達経路が子宮内膜症の発症に関与していること。
・ＭｙＤ８８−ＩＲＡＫ４シグナル伝達経路を阻害することにより、子宮内膜様病変の形成が抑制されること。
・ＭｙＤ８８−ＩＲＡＫ４シグナル伝達経路の分子は、抗アポトーシス因子として、子宮内膜様病変の異所性生着および増殖に作用すること。
【００１９】
また、本願の発明者は、さらに詳細な解析を行う中で、ＭｙＤ８８欠損マウスが、野生型マウスと比較して、妊娠率、出生胎児数、出生後の体重変化等に違いはなく、かつ、妊娠動物の早産および流産が認められないことを見出した。
【００２０】
したがって、ＭｙＤ８８−ＩＲＡＫ４シグナル伝達経路阻害剤を含むことを特徴とする本発明の医薬は、挙児希望の子宮内膜症または子宮腺筋症の患者に対して、ホルモン療法によらない、新規の有効な治療方法を提供することができる。
【００２１】
本明細書において「ＭｙＤ８８−ＩＲＡＫ４シグナル伝達経路阻害剤」は、ＭｙＤ８８−ＩＲＡＫ４シグナル伝達経路に関与する任意の分子を阻害し得る薬剤を意味し、そのような機能を有する薬剤である限り、本発明の一実施形態におけるＭｙＤ８８−ＩＲＡＫ４シグナル伝達経路阻害剤の範囲に包含される。
【００２２】
一般に、ＭｙＤ８８−ＩＲＡＫ４シグナル伝達経路は、ＩＬ−１（例えば、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β）等に応答して活性化され、最終的に炎症性サイトカインの産生を担うシグナル伝達経路である。簡潔には、サイトカインであるＩＬ−１等がその受容体であるＩＬ−１Ｒに結合すると、ＭｙＤ８８を介してＩＲＡＫ４がＩＬ−１Ｒにリクルートされる。活性化されたＩＲＡＫ４は、次いでＩＲＡＫ１およびＴＲＡＦ６を活性化し、その後ＮＦκＢが活性化され、炎症性サイトカインの産生を促進する（例えば、Matsushita K, and Yoshimoto T. Interleukin-33: A multifunctional alarmin that promotes both health and disease. Cytokine Frontiers: Regulation of Immune Responses in Health and Disease, (Yoshimoto Takayuki & Yoshimoto Tomohiro. eds.), Springer, New York. 267-99, 2014.を参照）。
【００２３】
ＭｙＤ８８−ＩＲＡＫ４シグナル伝達経路に関与する上記の各タンパク質について、以下で説明する。
【００２４】
本明細書において「ＭｙＤ８８」は、ヒトでは、全長３１７アミノ酸残基から構成されるペプチドであり、ＮＣＢＩの受託番号ＮＰ＿００１１６６０３８で示される（マウスでは、２９６アミノ酸残基、受託番号ＮＰ＿０３４９８１）。ＭｙＤ８８は、細胞質内アダプタータンパク質であり、自然型および獲得型免疫応答に関与する。ＭｙＤ８８は、ＩＬ−１シグナル伝達経路およびＴｏｌｌ様受容体（「ＴＬＲ」とも称される。）シグナル伝達経路において、重要なシグナルトランスデューサーとして機能する。
【００２５】
本明細書において「ＩＲＡＫ４」は、ヒトでは、全長４６０アミノ酸残基から構成されるペプチドであり、ＮＣＢＩの受託番号ＮＰ＿００１３３８２７４で示される（マウスでは、４５９アミノ酸残基、受託番号ＮＰ＿０８４２０２）。ＩＲＡＫ４は、Ｔｏｌｌ様受容体シグナル伝達経路およびＴ細胞受容体（「ＴＣＲ」とも称される。）シグナル伝達経路の両方において、ＮＦκＢを活性化するタンパク質であり、多くの自然型免疫応答において重要である。
【００２６】
本明細書において「ＩＬ−１α」（別名、「インターロイキン１α」とも称される。）は、ヒトでは、全長２７１アミノ酸残基から構成されるペプチドであり、ＮＣＢＩの受託番号ＮＰ＿０００５６６で示される（マウスでは、２７０アミノ酸残基、受託番号ＮＰ＿０３４６８４）。ＩＬ−１αは、ＩＬ−１サイトカインファミリーのメンバーであり、種々の免疫応答、炎症反応、造血等に関与する。
【００２７】
本明細書において「ＩＬ−１β」（別名、「インターロイキン１β」とも称される。）は、ヒトでは、全長２６９アミノ酸残基から構成されるペプチドであり、ＮＣＢＩの受託番号ＮＰ＿０００５６７で示される（マウスでは、２６９アミノ酸残基、受託番号ＮＰ＿０３２３８７）。ＩＬ−１βは、ＩＬ−１サイトカインファミリーのメンバーであり、種々の免疫応答、炎症反応、造血等に関与する。
【００２８】
本明細書において「ＩＬ−１Ｒ」（別名、「インターロイキン１受容体」とも称される。）は、ヒトでは、全長５６９アミノ酸残基から構成されるペプチドであり、ＮＣＢＩの受託番号ＮＰ＿００１３０７９１１、ＸＰ＿０１１５０９４１６で示される（マウスでは、５７６アミノ酸残基、受託番号ＮＰ＿０３２３８８、ＸＰ＿９８４９５９）。ＩＬ−１Ｒは、ＩＬ−１α、ＩＬ−１βおよびＩＬ−１受容体アンタゴニストの受容体であり、多くのサイトカイン誘導免疫および炎症反応に関与する。
【００２９】
本明細書において「ＩＲＡＫ１」（別名、「インターロイキン１受容体関連キナーゼ１」とも称される。）は、ヒトでは、全長７１２アミノ酸残基から構成されるペプチドであり、ＮＣＢＩの受託番号ＮＰ＿００１５６０で示される（マウスでは、７５０アミノ酸残基、受託番号ＮＰ＿００１１７１４４４）。ＩＲＡＫ１は、刺激されるとＩＬ−１Ｒと結合する、セリン／スレオニンキナーゼであり、ＩＬ−１により誘導されるＮＦκＢの発現上昇に部分的に関与している。
【００３０】
本明細書において「ＴＲＡＦ６」（別名、「ＴＮＦ受容体関連因子６」とも称される。）は、ヒトでは、全長５２２アミノ酸残基から構成されるペプチドであり、ＮＣＢＩの受託番号ＮＰ＿００４６１１で示される（マウスでは、５３０アミノ酸残基、受託番号ＮＰ＿００１２９０２０２、ＸＰ＿００６４９９２１９）。ＴＲＡＦ６は、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーおよびＴｏｌｌ／ＩＬ−１ファミリーのメンバーからのシグナル伝達を仲介し、ＩＲＡＫ１／ＩＲＡＫ４を含む種々のタンパク質キナーゼと相互作用する。ＴＲＡＦ６は、また、炎症誘発性サイトカインに応答して、ＩＫＫを活性化するシグナルトランスデューサーとして機能する。ＴＲＡＦ６は、さらに、Ｓｍａｄ非依存的なＪＮＫおよびｐ３８の活性化に必要である。
【００３１】
本明細書において「ＮＦκＢ」（別名、「核内因子κＢ」とも称される。）は、ヒトでは、全長６１９アミノ酸残基から構成されるペプチドであり、ＮＣＢＩの受託番号ＮＰ＿００２８９９で示される。なお、「ＮＦκＢ」は、ｐｒｏｔｏ−ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ｃ−Ｒｅｌ  ｉｓｏｆｏｒｍ  １、ｎｕｃｌｅａｒ  ｆａｃｔｏｒ  ＮＦ−ｋａｐｐａ−Ｂ  ｐ１０５  ｓｕｂｕｎｉｔ  ｉｓｏｆｏｒｍ  １、ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ｆａｔｃｏｔｒ  ｐ６５  ｉｓｏｆｏｒｍ  １（ＲｅｌＡ）、ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ｆａｔｃｏｔｒ  ＲｅｌＢ、ｎｕｃｌｅａｒ  ｆａｃｔｏｒ  ＮＦ−ｋａｐｐａ−Ｂ  ｐ１００  ｓｕｂｕｎｉｔ  ｉｓｏｆｏｒｍ  ａ等の種々の種類が存在するが、上記では、その一例として、ｐｒｏｔｏ−ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ｃ−Ｒｅｌ  ｉｓｏｆｏｒｍ  １について記載している。ｐｒｏｔｏ−ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ｃ−Ｒｅｌ  ｉｓｏｆｏｒｍ  １以外についても、本明細書の「ＮＦκＢ」に包含されることは言うまでもない。ＮＦκＢは、サイトカイン、フリーラジカル、紫外線放射、細菌産物、ウイルス産物のような種々の細胞内および細胞外刺激により活性化される転写因子である。活性化されたＮＦκＢは、核内へ移行し、種々の生物学的機能に関与する遺伝子の発現を刺激する。
【００３２】
本明細書において「炎症性サイトカイン」は、炎症反応を誘発する任意のタンパク質を意味する。本発明の一実施形態において、炎症性サイトカインとしては、例えば、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、ＩＬ−１８、ＴＮＦα、ＴＮＦβ等が挙げられる。
【００３３】
したがって、上記のＭｙＤ８８、ＩＲＡＫ４、ＩＲＡＫ１、ＴＲＡＦ６、ＮＦκＢ、炎症性サイトカインは、本発明の一実施形態におけるＭｙＤ８８−ＩＲＡＫ４シグナル伝達経路に関与する分子に包含される。
【００３４】
本発明の一実施形態において、ＭｙＤ８８−ＩＲＡＫ４シグナル伝達経路阻害剤としては、例えば、ＭｙＤ８８阻害剤、ＩＲＡＫ４阻害剤、ＩＲＡＫ１阻害剤、ＴＲＡＦ６阻害剤、ＮＦκＢ阻害剤等が挙げられ、好ましくは、ＭｙＤ８８阻害剤、ＩＲＡＫ４阻害剤、ＴＲＡＦ６阻害剤であり、より好ましくは、ＩＲＡＫ４阻害剤であり得る。
【００３５】
本発明の一実施形態において、ＭｙＤ８８−ＩＲＡＫ４シグナル伝達経路阻害剤は、特に限定されることなく、例えば、低分子化合物、ペプチド、抗体、ｓｉＲＮＡ等であり得る。
【００３６】
本発明の一実施形態において、ＭｙＤ８８阻害剤は、ＭｙＤ８８の機能を阻害し得る薬剤であれば特に限定されないが、例えば、アミノチアゾール系小分子化合物（ＴＪ−Ｍ２０１０）等が挙げられる。
【００３７】
本発明の一実施形態において、ＩＲＡＫ４阻害剤は、ＩＲＡＫ４の機能を阻害し得る薬剤であれば特に限定されないが、例えば、Ｎ−［３−アミノカルボニル−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−２−（２−メチル−４−ピリジニル）−４−オキサゾールカルボキシアミドヒドロクロリド（AS2444697、SIGMA製）、１−［［（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ）−３−エチル−４−フルオロ−５−オキソ−２−ピロリジニル］メトキシ］−７−メトキシ−６−イソキノリンカルボキシアミド（PF-06650833、Pfizer製）等が挙げられる。
【００３８】
なお、後述する実施例においては、ＭｙＤ８８−ＩＲＡＫ４シグナル伝達経路阻害剤の一例として、ＩＲＡＫ４阻害剤を用いた実験を行っている。また、阻害剤ではないものの、ＭｙＤ８８−ＩＲＡＫ４シグナル伝達経路阻害の一例として、ＭｙＤ８８遺伝子を欠損したＭｙＤ８８欠損マウスを用いた実験を行っている。実施例で示したものは、単なる例示に過ぎず、実施例で示したもの以外のＭｙＤ８８−ＩＲＡＫ４シグナル伝達経路阻害剤も、当然に、本発明の一実施形態におけるＭｙＤ８８−ＩＲＡＫ４シグナル伝達経路阻害剤の範囲に包含される。
【００３９】
本明細書において「子宮内膜症」は、子宮内膜様組織が本来の正常な位置とは異なる位置、すなわち、子宮腔内面以外の組織や臓器などに異所性に存在し、増生するために生じる病態を意味し、そのような病態であれば、特に限定されることなく、本発明の一実施形態における処置の対象となり得る。
【００４０】
本明細書において「子宮腺筋症」は、子宮内膜が子宮の筋層内にできる疾患であり、ＭＲＩの診断により子宮の一部に限定される部分性子宮腺筋症、子宮全体にひろがる全周性子宮腺筋症に分類される。「子宮腺筋症」は、上記の定義に含まれるような病態であれば、特に限定されることなく、本発明の一実施形態における処置の対象となり得る。
【００４１】
本明細書において「処置」とは、処置を必要とする対象に対して処置効果をもたらす行為を意味する。処置効果とは、予防効果および治療効果を包含する概念であり、例えば、以下の類型の効果であり得る。
（１）医薬を投与しなかった場合と比較して、疾患に係る１つ以上の症状の発症を防止する、またはリスクを低減する。
（２）医薬を投与しなかった場合と比較して、疾患に係る１つ以上の症状の再発を防止する、またはリスクを低減する。
（３）医薬を投与しなかった場合と比較して、疾患に係る１つ以上の症状の兆候が生じることを防止する、またはリスクを低減する。
（４）医薬を投与しなかった場合と比較して、疾患に係る１つ以上の症状の重症度を低減する。
（５）医薬を投与しなかった場合と比較して、疾患に係る１つ以上の症状の重症度の増加、または進行を防止する。
（６）医薬を投与しなかった場合と比較して、疾患に係る１つ以上の症状の重症度の増加速度、または進行速度を低減する。
【００４２】
本発明の医薬は、薬学的に許容可能なキャリア、希釈剤、賦形剤等を含むことができる。予防または治療的使用のための薬学的に許容可能なキャリアまたは賦形剤は、薬学分野で周知であり、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．（Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ編、１９８５）に記載されている。薬学的に許容可能なキャリア、希釈剤、賦形剤の選択は、意図された投与経路および標準的薬学的慣行に従って、当業者によって容易に選択され得る。また、本発明の医薬は、任意の適切な結合剤、滑沢剤、懸濁剤、被覆剤または可溶化剤をさらに含み得る。
【００４３】
本発明の医薬は、任意の投与経路により投与される。本発明の医薬は、特に限定されないが、例えば、処置対象に対して、経口、粘膜、筋肉内、静脈内、皮下、眼内、膣内、腹腔内または経皮的に投与され得る。対象への負担の軽減の観点から、好ましくは、処置対象に対して経口投与される。本発明の医薬は、また、目的に応じて任意の剤型をとることもできる。さらに、本発明の医薬の処方は、疾患の重症度、有効成分、投与経路等に応じて、当業者により適宜設定され得る。
【００４４】
〔２．子宮内膜症または子宮腺筋症の処置用医薬のスクリーニング方法〕
本発明の一実施形態において、ＭｙＤ８８−ＩＲＡＫ４シグナル伝達経路の活性化状態を指標とすることを特徴とする、子宮内膜症または子宮腺筋症の処置用医薬をスクリーニングするための方法を提供する。
【００４５】
上述の通り、本願の発明者は、ＭｙＤ８８−ＩＲＡＫ４シグナル伝達経路を阻害することにより、子宮内膜様病変の形成が抑制されることを見出した。したがって、ＭｙＤ８８−ＩＲＡＫ４シグナル伝達経路の活性化状態を指標とすることにより、有効な子宮内膜症または子宮腺筋症の処置用医薬をスクリーニングすることができる。
【００４６】
本発明の一実施形態において、以下の工程を含むことを特徴とする、子宮内膜症または子宮腺筋症の処置用医薬をスクリーニングするための方法を提供する：
（ａ）試験物質と、細胞とを接触させる接触工程、および
（ｂ）ＭｙＤ８８−ＩＲＡＫ４シグナル伝達経路の活性化状態を評価する評価工程。
【００４７】
本発明の一実施形態において、試験物質としては、任意の物質が使用され得る。試験物質の種類は特に限定されず、例えば、天然物の抽出物中に存在する化合物、低分子合成化合物、合成ペプチド、抗体、アンチセンスＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ等が用いられる。
【００４８】
本発明の一実施形態において、スクリーニングに使用される試験物質は、化合物ライブラリー、ファージディスプレーライブラリー、コンビナトリアルライブラリー等に含まれる化合物であってよい。
【００４９】
本発明の一実施形態において、スクリーニングに使用される試験物質は、好ましくは、低分子化合物であり、より好ましくは、低分子化合物の化合物ライブラリーであり得る。化合物ライブラリーは、市販の化合物ライブラリーを用いてもよいし、当該技術分野における通常の方法により構築された化合物ライブラリーを用いてもよい。
【００５０】
本発明の一実施形態において、試験物質として使用される抗体、アンチセンスＲＮＡ、ｓｉＲＮＡおよびｍｉＲＮＡは、市販で入手されたものを用いてもよいし、当該技術分野における通常の方法により構築されたものを用いてもよい。当業者は、当該技術分野における通常の方法に基づいて、抗体、アンチセンスＲＮＡ、ｓｉＲＮＡおよびｍｉＲＮＡを作製することができる。
【００５１】
本発明の一実施形態において、スクリーニングに使用される細胞は、ＭＹＤ８８−ＩＲＡＫ４シグナル伝達経路の活性化状態を評価できる細胞であれば特に限定されない。本発明の一実施形態において、スクリーニングに使用される細胞としては、例えば、子宮内膜様病変に由来する細胞、子宮内膜上皮細胞株（例えば、１２Ｚ、Ｓｔ−Ｔ１ｂ、Ｔ  ＨＥＳＣｓ、ＨＥＣ−１−Ａ、ＲＬ９５−２）等が挙げられる。子宮内膜様病変に由来する細胞および子宮内膜上皮細胞株は、本発明の一実施形態における処置対象である子宮内膜症または子宮腺筋症に関連する細胞であることから、本発明の一実施形態におけるスクリーニングに使用される細胞として好ましい。
【００５２】
本発明の一実施形態において、子宮内膜様病変に由来する細胞は、子宮内膜症を患う患者から取得したものであってもよいし、人工的に作製した子宮内膜症のモデル動物から取得したものであってもよい。
【００５３】
本発明の一実施形態において、スクリーニングに使用される細胞が子宮内膜上皮細胞株である場合、これらの細胞は、市販により容易に入手できる。
【００５４】
本発明の一実施形態において、子宮内膜症のモデル動物は、例えば、実施例に記載の方法により作製され得る。
【００５５】
実施例に記載の方法は、基本的に従来の子宮内膜症のモデル動物の作製方法に準じているが、レシピエント動物に子宮片を移植する際に、移植用の子宮を抗生剤（例えば、アンピシリン）を含む溶液と共に移植する点が従来の方法と異なる。この違いにより、実施例に記載の方法により作製された子宮内膜症のモデル動物は、従来の方法で作製された子宮内膜症のモデル動物と比較して、子宮内膜用病変の発生効率が高まるという利点を有する。
【００５６】
本発明の一実施形態において、子宮内膜症のモデル動物の種類は、特に限定されず、例えば、哺乳動物であり、例えば、マウス、ラット、サル、イヌ等であり得る。
【００５７】
本明細書において「接触」とは、２以上の物質が物理的に触れる程度まで近接することを意味する。
【００５８】
本発明の一実施形態において、試験物質と細胞との接触は、細胞が培養されている容器に試験物質を添加することにより行われてもよく、試験物質を含む溶液中に細胞を添加することにより行われてもよい。試験物質と細胞との接触は、好ましくは、細胞が培養されている容器に試験物質を添加することにより行われる。
【００５９】
本発明の一実施形態において、試験物質と細胞との接触時間は、試験物質がＭＹＤ８８−ＩＲＡＫ４シグナル伝達経路を抑制する物質である場合に、ＭＹＤ８８−ＩＲＡＫ４シグナル伝達経路を抑制するのに十分な時間であれば特に限定されず、当業者により適宜設定され得る。
【００６０】
本発明の一実施形態において、試験物質と細胞とを接触させる際の温度も特に限定されることなく、当業者により適宜設定され得る。
【００６１】
本発明の一実施形態において、ＭＹＤ８８−ＩＲＡＫ４シグナル伝達経路の活性化状態を評価することは、ＭＹＤ８８−ＩＲＡＫ４シグナル伝達経路の活性化状態を評価できる指標に基づく評価であれば特に限定されない。
【００６２】
本発明の一実施形態において、ＭＹＤ８８−ＩＲＡＫ４シグナル伝達経路の活性化状態を評価することは、ＩＲＡＫ４の活性化状態、ＪＮＫの活性化状態、ｐ３８の活性化状態および炎症性サイトカインの発現量からなる群より選択される少なくとも一つを評価することであり得る。
【００６３】
本発明の一実施形態において、ＩＲＡＫ４の活性化状態、ＪＮＫの活性化状態およびｐ３８の活性化状態は、例えば、各タンパク質のリン酸化を検出および評価することにより決定され得る。
【００６４】
本発明の一実施形態において、上記リン酸化または発現量の検出方法としては、当該技術分野で使用される任意の方法が使用され得る。リン酸化の検出方法としては、例えば、イムノブロット、フローサイトメトリー等が挙げられる。また、発現量の検出方法としては、例えば、イムノブロット、ＲＴ−ＰＣＲ、フローサイトメトリー、ＥＬＩＳＡ等が挙げられる。
【００６５】
本発明の一実施形態において、ＩＲＡＫ４は、〔１．子宮内膜症または子宮腺筋症の処置用医薬〕の項において記載した通りである。
【００６６】
本発明の一実施形態において、検出の対象となるＩＲＡＫ４のリン酸化部位は、リン酸化によりＩＲＡＫ４が活性化され、脱リン酸化によりＩＲＡＫ４が不活性化される部位であれば特に限定されない。
【００６７】
本明細書において「ＪＮＫ」は、ヒトでは、全長４２７アミノ酸残基から構成されるペプチドであり、ＮＣＢＩの受託番号ＮＰ＿００１３１０２５７で示される（マウスでは、４２７アミノ酸残基、受託番号ＮＰ＿００１２９７３８２、ＸＰ＿００６５１９０９４）。ＪＮＫは、ＭＡＰキナーゼファミリーのメンバーであり、ＭＹＤ８８−ＩＲＡＫ４シグナル伝達経路が抑制されると、その下流に位置するＪＮＫのリン酸化が減少することから、ＪＮＫのリン酸化を検出および評価することにより、ＭＹＤ８８−ＩＲＡＫ４シグナル伝達経路の活性化状態を評価することができる。本発明の一実施形態において、検出の対象となるＪＮＫのリン酸化部位は、リン酸化によりＪＮＫが活性化され、脱リン酸化によりＪＮＫが不活性化される部位であれば特に限定されない。
【００６８】
本明細書において「ｐ３８」は、ヒトでは、全長３６０アミノ酸残基から構成されるペプチドであり、ＮＣＢＩの受託番号ＮＰ＿００１３０６で示される（マウスでは、３６０アミノ酸残基、受託番号ＮＰ＿０３６０８１）。なお、「ｐ３８」は、ｐ３８αアイソフォーム１、ｐ３８αアイソフォーム２、ｐ３８β、ｐ３８γの４種類が存在するが、上記では、その一例として、ｐ３８αアイソフォーム１について記載している。ｐ３８αアイソフォーム１以外についても、本明細書の「ｐ３８」に包含されることは言うまでもない。ｐ３８は、ＭＡＰキナーゼファミリーのメンバーであり、ＭＹＤ８８−ＩＲＡＫ４シグナル伝達経路が抑制されると、その下流に位置するｐ３８のリン酸化が減少することから、ｐ３８のリン酸化を検出および評価することにより、ＭＹＤ８８−ＩＲＡＫ４シグナル伝達経路の活性化状態を評価することができる。本発明の一実施形態において、検出の対象となるｐ３８のリン酸化部位は、リン酸化によりｐ３８が活性化され、脱リン酸化によりｐ３８が不活性化される部位であれば特に限定されない。
【００６９】
本発明の一実施形態において、上記リン酸化部位の検出は、特定のリン酸化部位の検出であってもよいし、不特定のリン酸化部位の検出であってもよい。また、上記リン酸化部位の検出は、１つのリン酸化部位の検出であってもよいし、複数のリン酸化部位の検出であってもよい。
【００７０】
本発明の一実施形態において、炎症性サイトカインは、〔１．子宮内膜症または子宮腺筋症の処置用医薬〕の項において記載した通りである。ＭＹＤ８８−ＩＲＡＫ４シグナル伝達経路が抑制されると、その下流に位置する炎症性サイトカインの発現量が低下することから、炎症性サイトカイン発現量を評価することにより、ＭＹＤ８８−ＩＲＡＫ４シグナル伝達経路の活性化状態を評価することができる。
【００７１】
本発明の一実施形態において、子宮内膜症または子宮腺筋症の処置用医薬のスクリーニングは、子宮内膜様病変に由来する細胞または子宮内膜上皮細胞株をＩＬ−１（例えば、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β）で刺激し、当該刺激により生じた細胞内シグナル伝達に関与する分子の機能を阻害する試験物質を探索することにより行われ得る。
【００７２】
本発明の一実施形態において、ＭＹＤ８８−ＩＲＡＫ４シグナル伝達経路の活性化状態の評価は、特に限定されないが、例えば、以下のような方法により行われ得る：
・試験物質と細胞とを接触させた場合に、試験物質と細胞とを接触させていないときと比較して、ＩＲＡＫ４のリン酸化の減少、ＪＮＫのリン酸化の減少、ｐ３８のリン酸化の減少および炎症性サイトカインの発現量の低下のうちの少なくとも一つが検出された場合に、上記試験物質が子宮内膜症または子宮腺筋症の処置用医薬であると評価する。
【００７３】
本明細書中の記載に基づけば、当業者は、本発明の医薬の別の形態（例えば、キット）や、本発明の医薬を用いて疾患を処置（予防および／または治療）する方法、本発明のスクリーニング方法により同定された物質（医薬）を用いて疾患を処置（予防および／または治療）する方法等もまた本発明の範囲内であることを、容易に理解する。
【００７４】
本発明は上述した各実施形態に限定されるものではなく、請求項に示した範囲で種々の変更が可能であり、異なる実施形態にそれぞれ開示された技術的手段を適宜組み合わせて得られる実施形態についても本発明の技術的範囲に含まれる。
【実施例】
【００７５】
本発明について理解を深めるために、以下に参考例および実施例を示して、本発明をより具体的に説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではないことはいうまでもない。参考例および実施例に記載の実験は、兵庫医科大学動物実験委員会の承認を得て行われた（承認番号：16-087）。
【００７６】
（参考例１）子宮内膜症モデル動物の作製
以下の方法により子宮内膜症モデル動物を作製し（図１（ａ））、子宮内膜様病変を評価した。
【００７７】
＜卵巣摘出術＞
６週齢雌性マウスにイソフルランの吸入麻酔（イソフルラン濃度：３．０％、ａｉｒ流量：３００〜４００周囲で維持麻酔）導入後、マウス下腹部正中やや左側に小切開を加えた。次いで、開腹孔から左右の子宮を順番に引き出し、子宮先端に付着している卵巣を摘出した。卵巣摘出後、切開部を３−０モノクリル糸で縫合した。
【００７８】
＜エストロゲン投与法＞
本方法では、１０ｍｇ／ｍｌのエストラジオール吉草酸エステル注射液プロギノン（登録商標）・デポ−筋注１Ａ（富士製薬製）を使用した。３ｍｌのＣｏｒｎ  ｏｉｌ（032-17016、Wako製）に１．５μｌのプロギノン・デポ−筋注１Ａを溶解（濃度５μｇ／ｍｌ）後、０．５μg／１００μl／／ｂｏｄｙで、マウス後頸部皮下に２２Ｇ注射針で皮下注射を２週間（１回／週）行った。本方法は、ドナーマウスおよびレシピエントマウスの両方に行った。
【００７９】
＜子宮片移植法＞
エストロゲン投与の２週間後に、ドナーマウスを頸椎脱臼させ、開腹後、子宮を摘出した。このとき、エストロゲン投与により子宮は肥大していた。シャーレ上で移植用の子宮重量を４０ｍｇに統一して、切断した。なお、重量は、移植用の子宮をチューブに入れて測定した。
【００８０】
次いで、移植用の子宮を、２５ｍｌ  広口丸底スピッツ（2362-025、IWAKI製）に、抗生剤アンピシリンを溶解したＰＢＳ  ４００μｌと共に入れ（以下の、＜抗生剤投与法＞を参照のこと。）、クーパーで２ｍｍ角のシート状に細かく細砕した。細砕後、子宮片を、２.５ｍｌのシリンジで吸引した。
【００８１】
卵巣摘出術と同様の方法で吸入麻酔したレシピエントマウスの腹部正中を小切開した。その後、シリンジ内の子宮片（子宮組織）を腹腔内に散布し、切開部を３−０モノクリルで縫合した。
【００８２】
＜抗生剤投与法＞
５ｇのアンピシリン（SIGMA製）を１ｍｇ／ｍｌとなるようにＰＢＳに溶解した。溶解後、アンピシリン溶液を０．２２μｍのフィルターを用いて滅菌した。滅菌後のアンピシリン溶液４００μｌを用いて子宮の細砕を行った。
【００８３】
＜病態評価方法＞
子宮片を移植後、レシピエントマウスにエストロゲンをさらに２週間（１回／週）、皮下注射にて投与した。２週間後、レシピエントマウスを頸椎脱臼させ、開腹した。腹腔内に形成された子宮内膜様病変を可能な限り傷つけないように摘出し、重量および体積を測定した。
【００８４】
なお、子宮内膜様病変の体積は、Ｖ＝４／３πｂ（２乗）Ａ（ｂ：短半径、Ａ：長半径）にて算出した（Ricci AG, Olivares CN, Bilotas MA, Meresman GF, Baranao RI. Effect of vascular endothelial growth factor inhibition on endometrial implant development in a murine model of endometriosis. Reprod.Sci.2011;18:614-622）。
【００８５】
（実施例１）子宮内膜様病変の肉眼的所見
参考例１の方法により、子宮内膜症モデル動物の作製を行った。得られた子宮内膜症モデル動物の子宮内膜様病変の肉眼的所見を、図１（ｂ）および（ｃ）に示す。
【００８６】
子宮内膜症モデル動物では、直径１０〜２５ｍｍ大の嚢胞状の子宮内膜症様病巣が数個（４〜６個）形成された（図１（ｂ））。また、嚢胞状の子宮内膜症様病巣では、血管新生を伴う腸管または腹膜との癒着が生じていた（図１（ｂ））。
【００８７】
さらに、子宮内膜症モデル動物では、高頻度で、チョコレート嚢胞様病巣の内部に血液が滞留した黒色嚢胞が認められた（図１（ｃ））。
【００８８】
（実施例２）子宮内膜様病変（嚢胞様病変）の検討
参考例１の方法により作製した子宮内膜症モデル動物の子宮内膜様病変（嚢胞様病変）が、移植した子宮片による異所性増殖であることを確認する目的で、子宮内膜様病変（嚢胞様病変）の上皮細胞を抗エストロゲン受容体β抗体で免疫染色した。
【００８９】
その結果、子宮内膜様病変（嚢胞様病変）の上皮細胞は、エストロゲン受容体βが強陽性であることが確認された（図２）。
【００９０】
（実施例３）遺伝子欠損マウスを用いた子宮内膜様病変への影響の検討
参考例１の方法により、子宮内膜症モデル動物を、ＩＬ−１受容体（ＩＬ−１Ｒ）欠損マウスおよびＭｙＤ８８欠損マウス（ＭｙＤ８８は、ＩＬ−１／ＩＬ−１Ｒの下流に位置する細胞内シグナル伝達分子）を用いて、各々作製した。
【００９１】
各遺伝子欠損マウスのドナー子宮片を、同じ遺伝子欠損を持つレシピエントマウスに移植し、移植後２週間目に子宮内膜様病変（嚢胞様病変）の体積を測定した。対照として、野生型マウス（Ｃ５７ＢＬ／６およびＢＡＬＢ／ｃマウス）を用いて、子宮内膜症モデル動物を作製し、子宮内膜様病変を形成させた。なお、子宮内膜様病変（嚢胞様病変）の体積は、上記の＜病態評価方法＞に記載の式に基づき算出した。
【００９２】
その結果、ＩＬ−１Ｒ欠損マウスおよびＭｙＤ８８欠損マウスでは、対照マウスと比較して、子宮内膜様病変（嚢胞様病変）の形成が著しく抑制された（図３）。
【００９３】
（実施例４）ＩＬ−１シグナル伝達経路阻害剤を用いた子宮内膜様病変（嚢胞様病変）への影響の検討
参考例１の方法により、野生型ＢＡＬＢ／ｃマウスを用いて、子宮内膜症モデル動物の作製を行った。レシピエントマウスへのドナー子宮片の移植前または移植後に、以下の阻害剤を投与し、子宮内膜様病変（嚢胞様病変）形成への影響を検討した。
【００９４】
＜抗ＩＬ−１Ｒ１抗体＞
１ｍｇ／ｍｌに調製したラット抗マウスＩＬ−１Ｒ１抗体（クローン：35F5、BD Biosciences製）の溶液２５０μｌを、子宮片移植前日、子宮片移後４日目および８日目の計３回、腹腔内投与した（１日１回の投与）。１回の抗ＩＬ−１Ｒ１抗体の投与量は、２５０μｇ／２５０μｌ／ｂｏｄｙであった。対照群は、Ｒａｔ  ＩｇＧ１ｉｓｏｔｙｐｅ  ｃｏｎｔｒｏｌ抗体を、２５０μｇ／２５０μｌ／ｂｏｄｙの投与量で、腹腔内投与した。
【００９５】
その結果、抗ＩＬ−１Ｒ１抗体の投与により、子宮内膜様病変（嚢胞様病変）の形成が著しく抑制された（図４（ａ））。
【００９６】
＜ＩＲＡＫ４阻害剤-1＞
ＩＬ−１／ＩＬ−１Ｒの下流に位置する細胞内シグナル伝達分子であるＩＲＡＫ４に対する阻害剤として、ＡＳ２４４４６９７（SIGMA製）を用いた。５ｍｇのＡＳ２４４４６９７（粉末）を１ｍｌのＤＭＳＯに溶解し、５ｍｇ／ｍｌとした後、滅菌水を加えて１２ｍｌに調製し、溶解した（濃度：４１７μｇ／ｍｌ）。子宮片移植の翌日から、１日２回、５日間連続で、２００μｌのＡＳ２４４４６９７溶解液をレシピエントマウスに経口投与した。１回の投与量は、８３μｇ／２００μｌ／ｂｏｄｙであった。対照群は、１ｍｌのＤＭＳＯに１１ｍｌの滅菌水を加えて１２ｍｌに調製し、溶解したものを、１回につき２００μｌ／ｂｏｄｙの投与量で経口投与した。
【００９７】
その結果、ＩＲＡＫ４阻害剤の投与により、子宮内膜様病変（嚢胞様病変）の形成が著しく抑制された（図４（ｂ））。
【００９８】
＜ＩＲＡＫ４阻害剤-2＞
ＩＬ−１／ＩＬ−１Ｒの下流に位置する細胞内シグナル伝達分子であるＩＲＡＫ４に対する阻害剤として、ＡＳ２４４４６９７（SIGMA製）を用いた。４０ｍｇのＡＳ２４４４６９７（粉末）を４ｍｌのＤＭＳＯに溶解し、１０ｍｇ／ｍｌとした後、１４３μｌずつ分注して−８０℃で使用時まで保管した。使用時には、滅菌水を１０５７μｌ加えて１２００μｌに調製した（濃度：１１９２μｇ／ｍｌ）。子宮片移植の２週間後から、１日２回、１４日間連続で、２００μｌのＡＳ２４４４６９７溶解液をレシピエントマウスに経口投与した。１回の投与量は、２３８μｇ／２００μｌ／ｂｏｄｙであった。対照群は、１４３μｌのＤＭＳＯに１０５７μｌの滅菌水を加えて１２００μｌに調製し、溶解したものを、１回につき２００μｌ／ｂｏｄｙの投与量で経口投与した（図６（ａ））。
【００９９】
その結果、ＩＲＡＫ４阻害剤の投与により、子宮内膜様病変（嚢胞様病変）の増大が有意に抑制された（図６（ｂ））。
【０１００】
（実施例５）子宮内膜様病変（嚢胞様病変）の肉眼的所見の検討
参考例１の方法により、子宮内膜症モデル動物を、野生型ＢＡＬＢ／ｃマウスおよびＭｙＤ８８欠損マウスを用いて作製した。野生型ＢＡＬＢ／ｃマウス由来の子宮内膜症モデル動物の一部について、上記の方法により、ＩＲＡＫ４阻害剤の投与を行った。野生型ＢＡＬＢ／ｃマウスを用いて作製した子宮内膜症モデル動物、ＩＲＡＫ４阻害剤を投与した野生型ＢＡＬＢ／ｃマウスを用いて作製した子宮内膜症モデル動物、およびＭｙＤ８８欠損マウスを用いて作製した子宮内膜症モデル動物の各々の子宮内膜様嚢胞の肉眼的所見を図５および図６（ｃ）に示す。
【０１０１】
その結果、ＩＲＡＫ４阻害剤投与マウス（ＩＲＡＫ４阻害剤を投与した野生型ＢＡＬＢ／ｃマウスを用いて作製した子宮内膜症モデル動物）およびＭｙＤ８８欠損マウス（ＭｙＤ８８欠損マウスを用いて作製した子宮内膜症モデル動物）では、野生型マウス（野生型ＢＡＬＢ／ｃマウスを用いて作製した子宮内膜症モデル動物）と比較して、子宮内膜様嚢胞の大きさと数が著しく減少していた。
【０１０２】
（実施例６）子宮内膜様病変を指標としたＭｙＤ８８の細胞増殖能およびアポトーシスへの影響の検討
参考例１の方法により、子宮内膜症モデル動物を、野生型ＢＡＬＢ／ｃマウスおよびＭｙＤ８８欠損マウスを用いて作製した。各々の子宮内膜症モデル動物の子宮内膜様病変について、細胞増殖能およびアポトーシスの程度を、それぞれ、抗Ｋｉ−６７抗体および抗ｃｌｅａｖｅｄ  ｃａｓｐａｓｅ  ８抗体を用いた免疫染色法により検討した。免疫染色法は、簡潔には、以下の通り行った。すなわち、４％ＰＦＡで固定後、パラフィンで包埋した子宮内膜症病変組織を薄切し、クエン酸バッファー（ｐＨ６．０）を用いて、１００℃で１０分間処理して抗原を賦活した。Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ−Ｂｌｏｃｋｉｎｇ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ（DAKO製）でブロッキング後、抗Ｋｉ６７抗体（Abcam製、SP6、ab16667、1/100希釈）を４℃で一晩反応させた。次いで、酵素標識２次抗体（DAKO製、EnvisionTM+ Dual Link System-HRP、K4063、原液）を室温で３０分間結合させた後、ＡＥＣ発色基質（DAKO製、K3461）にて染色した。同様の方法で、抗ｃｌｅａｖｅｄ  ｃａｓｐａｓｅ  ８抗体（Cell Signaling製、9469、1/500希釈）を４℃で一晩反応させた。
【０１０３】
その結果、ＭｙＤ８８欠損マウスの子宮内膜様病変では、野生型マウスと比較して、Ｋｉ−６７陽性細胞は著しく減少し、逆に、ｃｌｅａｖｅｄ  ｃａｓｐａｓｅ  ８陽性細胞は著しく増加していた（図７）。さらに、野生型ＢＡＬＢ／ｃマウスおよびＭｙＤ８８欠損マウスの子宮内膜様病変について、Ｋｉ−６７陽性率およびｃｌｅａｖｅｄ  ｃａｓｐａｓｅ  ８陽性率をグラフに表したところ、ＭｙＤ８８欠損マウスの子宮内膜様病変では、野生型マウスと比較して、Ｋｉ−６７陽性率は著しく減少し、逆に、ｃｌｅａｖｅｄ  ｃａｓｐａｓｅ  ８陽性率は著しく増加していた（図８）。
【０１０４】
以上の結果から、ＭｙＤ８８−ＩＲＡＫ４シグナル伝達経路に関与する分子は、抗アポトーシス因子として、子宮内膜様病変の異所性生着および増殖に作用すると推定される。
【０１０５】
（参考例２）ＭｙＤ８８−ＩＲＡＫ４シグナル伝達経路に関連する子宮内膜症または子宮腺筋症の処置用医薬の標的分子および想定される処置戦略
本発明の基礎となった知見に基づき、子宮内膜症または子宮腺筋症の処置戦略として、（１）ＭｙＤ８８−ＩＲＡＫ４シグナル伝達経路に関与する分子の阻害剤、（２）ＩＬ−１阻害剤、（３）ＩＬ−１Ｒ阻害剤、（４）ＩＬ−１合成阻害剤、の少なくとも４つの戦略が考えられる（図９）。
【産業上の利用可能性】
【０１０６】
本発明を用いれば、これまでには存在しなかった、ホルモン療法によらない新規の子宮内膜症または子宮腺筋症の処置用医薬、およびそのような医薬を探索するためのスクリーニング方法を提供できるため、医薬分野のさらなる発展に貢献し得る。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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