(57)【要約】      （修正有）【課題】ラクトバチルス（Lactobacillus）又はラクトバチルスを含む組成物による骨疾患の治療、予防又は改善の使用の提供。【解決手段】骨疾患と診断された被験者を治療するための方法であって、前記骨疾患を患っている前記被験者を確認するステップと、ラクトバチルス・プランタルムＧＫＭ３及びラクトバチルス・パラカセイＧＫＳ６の少なくとも一方を含む組成物の有効量を前記被験者に投与するステップを含む方法。【効果】前記ラクトバチルス及び組成物は、血中カルシウム濃度、骨梁体積密度（ＢＶ／ＴＶ比）、骨梁幅（Ｔｂ．Ｔｈ）、骨梁数（Ｔｂ．Ｎ）及び骨密度（ＢＭＤ）を増加させ、骨梁の間隔（Ｔｂ．Ｓｐ）を減少させることができる。【選択図】図３
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
骨疾患と診断された被験者を治療するための方法であって、
前記骨疾患を患っている前記被験者を確認するステップと、
ラクトバチルス・プランタルムＧＫＭ３及びラクトバチルス・パラカセイＧＫＳ６の少なくとも一方を含む組成物の有効量を前記被験者に投与するステップであって、前記ラクトバチルス・プランタルムＧＫＭ３が、２０１７年８月２５日にＣＧＭＣＣ１４５６５の寄託番号で中国微生物菌種寄託管理委員会普通微生物センター（ＣＧＭＣＣ）に寄託され、前記ラクトバチルス・パラカセイＧＫＳ６が、２０１７年８月２５日にＣＧＭＣＣ１４５６６の寄託番号で中国微生物菌種寄託管理委員会普通微生物センター（ＣＧＭＣＣ）に寄託された前記ステップと、を含むことを特徴とする方法。
【請求項２】
前記骨疾患が骨粗鬆症、骨欠損、骨折、又はそれらの組み合わせである、ことを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記被験者が人間被験者である、ことを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記被験者が更年期障害の女性である、ことを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記組成物が医薬組成物である、ことを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記医薬組成物が薬学的に許容される担体を更に含む、ことを特徴とする請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記被験者が、1日1回投与、1日複数回投与、又は週1回投与を受ける、ことを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記組成物が経口投与に適した剤形である、ことを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記剤形が、液剤、懸濁剤、乳剤、散剤、錠剤、丸剤、シロップ剤、ロゼンジ剤、トローチ剤、チューインガム、スラリー剤、又はカプセル剤から選択される、ことを特徴とする請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記組成物が食品、栄養補助食品、又は栄養製品である、ことを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記食品が、飲料、ヨーグルト、ジュース、アイスクリーム、パン、ビスケット、シリアル、健康バー、又はスプレッドから選択される、ことを特徴とする請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記骨疾患を有する前記被験者は、血中カルシウム濃度、骨梁体積密度（ＢＶ／ＴＶ）、骨梁数（Ｔｂ．Ｎ）、骨梁幅（Ｔｂ．Ｔｈ）、骨梁の間隔（Ｔｂ．Ｓｐ）又はそれらの組み合わせである骨パラメータに従って確認され、
前記組成物は、前記骨パラメータを改善する、ことを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
骨疾患を予防、治療又は軽減する方法であって、
前記骨疾患を予防、治療又は軽減するための有効量の組成物を必要とする被験者に前記組成物を投与するステップであって、前記組成物は、ラクトバチルス・プランタルムＧＫＭ３及びラクトバチルス・パラカセイＧＫＳ６の少なくとも一方を含み、前記ラクトバチルス・プランタルムＧＫＭ３が、２０１７年８月２５日にＣＧＭＣＣ１４５６５の寄託番号で中国微生物菌種寄託管理委員会普通微生物センター（ＣＧＭＣＣ）に寄託され、前記ラクトバチルス・パラカセイＧＫＳ６が、２０１７年８月２５日にＣＧＭＣＣ１４５６６の寄託番号でＣＧＭＣＣに寄託された前記ステップと、を含むことを特徴とする方法。
【請求項１４】
前記骨疾患が骨粗鬆症、骨欠損、骨折、又はそれらの組み合わせである、ことを特徴とする請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記組成物が担体材料を含む、ことを特徴とする請求項１３に記載の方法。
【請求項１６】
前記担体材料が、オートミール粥、乳酸発酵食品、レジスタントスターチ、食物繊維、炭水化物、タンパク質、グリコシル化タンパク質、又は脂質から選択される、ことを特徴とする請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記組成物が、前記骨疾患の病理学的効果及び症状のうちの一方を軽減する、ことを特徴とする請求項１３に記載の方法。
【請求項１８】
前記骨疾患の病理学的効果及び症状のうちの一方が、骨欠損と血中カルシウム濃度の低下のうちの少なくとも一方である、ことを特徴とする請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記組成物が食用成分を更に含む、ことを特徴とする請求項１３に記載の方法。
【請求項２０】
骨疾患を予防、治療又は軽減するための血中カルシウム欠乏症を治療する方法であって、
前記骨疾患を予防、治療又は軽減するための有効量の組成物を必要とする被験者に前記組成物を投与するステップであって、前記組成物は、ラクトバチルス・プランタルムＧＫＭ３及びラクトバチルス・パラカセイＧＫＳ６の少なくとも一方と、薬学的に許容される担体と、を含み、
前記ラクトバチルス・プランタルムＧＫＭ３が、２０１７年８月２５日にＣＧＭＣＣ１４５６５の寄託番号で中国微生物菌種寄託管理委員会普通微生物センター（ＣＧＭＣＣ）に寄託され、前記ラクトバチルス・パラカセイＧＫＳ６が、２０１７年８月２５日にＣＧＭＣＣ１４５６６の寄託番号でＣＧＭＣＣに寄託された前記ステップと、を含むことを特徴とする方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願と優先権主張の相互参照
本出願は、２０１８年４月２４日に台湾知的財産局に提出された台湾特許出願第１０７１１３９１７号の出願に基づく優先権を主張するものであり、その開示の全体は参考として本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本発明は、ラクトバチルスの使用に関し、特に骨疾患を治療、予防又は軽減するための食用組成物及び医薬組成物の調製におけるラクトバチルスの使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
人口の高齢化は世界的な現象であり、加齢に伴う病気が日々増加していることは、各国の政府や医療従事者の注目を集めている。加齢と関与している疾患の一つは、骨粗鬆症、骨欠損、骨折などの骨疾患である。
【０００４】
骨芽細胞、破骨細胞、及び骨細胞は骨リモデリングに関連している。骨芽細胞（骨形成細胞としても知られる）は、骨基質を合成するための単一の核を有する細胞である。破骨細胞は、骨の融解及び吸収を担当している多核巨細胞である。一般に、骨量密度（ＢＭＤ）は約３０〜３５歳でピークに達する。骨量密度は、年齢とともに減少している。特に、５０歳を過ぎると、１年につき０．５％から1％の割合で減少する。更年期中の平均骨量減少率は、年間約1％である。更年期障害の女性の約４０％は、骨粗鬆症を患っている可能性がある。閉経期の女性は、エストロゲンレベルが著しく低下し、破骨細胞の活性が増加するため、閉経期骨量が減少する傾向があり、頸椎圧迫骨折、又は股関節及び手首の骨折を引き起こす可能性がある。
【０００５】
骨リモデリングは、骨芽細胞（骨形成細胞）及び破骨細胞（骨吸収細胞）による連関した制御システムである。骨の形成と吸収のバランスが取れていると、骨の損失又は獲得がない。骨芽細胞による骨の形成速度が破骨細胞の活動よりも速い場合、骨がより長く、より広く、又はより密度の高い形態に発展する。一方、破骨細胞が骨芽細胞より過剰に活性化される場合は、骨量の減少を引き起こし、骨の中に隙間が大きく且つ緩くなり、最終的に全身性の骨量低下、骨微細構造の破壊及び骨折の危険性の増加と共に骨粗鬆症をもたらす。
【０００６】
骨粗鬆症の自覚症状はほとんどないが、骨折のリスクは増加している。骨粗鬆症性骨折は、健康な人は通常骨を折らない状況で起こり、脆弱性骨折とみなされる。
【０００７】
骨粗鬆症のリスクの高い群には、年寄り、閉経前又は閉経後の女性、より小さな体格の女性、甲状腺機能障害若しくは副甲状腺機能障害の人、又は骨粗鬆症の家族歴を有する人が含まれる。更に、個人的な要因（過度の飲酒、カフェインや炭酸飲料の過剰摂取、運動不足、カルシウムやビタミンＤの摂取不足、異常な食事による月経異常、喘息及びリウマチ性関節炎患者などのステロイド剤の長期使用など）も骨粗鬆症を患う危険性を増加させる。
【０００８】
現在の骨粗鬆症の治療薬は、骨リモデリングのメカニズムによって以下のようなカテゴリーに分類される。
【０００９】
１、抗骨吸収薬
抗骨吸収薬は、破骨細胞活性を阻害し、骨の吸収を減少させることができる。このカテゴリには、ビスフォスフォネート（bisphosphonate）、ＲＡＮＫＬモノクローナル抗体、及び選択的エストロゲン受容体モジュレーター（SERM）などが含まれる。その中、osamax（登録商標）とReosteo（登録商標）などの経口ビスフォスフォネート製剤の吸収効果は、食物の影響を受けやすい。Bonviva（登録商標）とAclasta（登録商標）などのビスフォスフォネート注射製剤は、嘔吐、食道炎、風邪、発熱、筋肉痛などの副作用を引き起こす可能性がある。又、ビスフォスフォネートの長期使用は、顎骨壊死又は骨折を引き起こす可能性がある。デノスマブ（Prolia（登録商標））などのＲＡＮＫＬモノクローナル抗体を骨粗鬆症患者に皮下注射し、オステオプロテゲリン（ＯＰＧ）のように作用させ、ＲＡＮＫＬモノクローナル抗体は、ＲＡＮＫＬと結合し破骨細胞の分化を妨げることによって骨量の減少を抑制できるが、低カルシウム血症、皮膚感染、顎骨壊死などの副作用のリスクもある。Evista（登録商標）を含むSERMは、エストロゲン受容体と選択的に競合し、骨内でアゴニスト（受容体刺激薬）として作用するが、乳房や子宮内膜でアンタゴニスト（拮抗薬）として作用する。しかし、SERMは、顔面紅潮、深部静脈血栓、冠状動脈塞栓症又は脳卒中の副作用の可能性があるので、心血管疾患患者に使用できない。
【００１０】
２、骨形成薬
組換えヒトの副甲状腺ホルモンは、骨芽細胞の活性を刺激して骨形成を達成することができる。市販のテリパラチド（Forteo（登録商標））は、治療後の骨量密度を著しく増加させることができるが、治療の１８ヶ月後に効果が減少し、一般的な副作用は悪心、頭痛、めまい、関節痛、下肢痙攣などを含む。
【００１１】
３、ハイブリッドメカニズムを有する薬
そのような薬物は、骨形成を刺激すること及び骨量減少を抑制することによって骨粗鬆症の治療に使用することができる。そのような薬物の例は、ラネル酸のストロンチウム（ＩＩ）塩であるストロンチウム・ラネレート（Protos（登録商標））である。カルシウム感受性受容体のアゴニストであるストロンチウム・ラネレートは、骨芽前駆細胞を骨芽細胞に分化誘導することによって骨形成を促進する。さらに、骨芽細胞から破骨細胞阻害因子の分泌を促進することによって、骨吸収を減少させる。しかしながら、ストロンチウム・ラネレートは、下痢、頭痛、皮膚炎、胃炎及び食道炎などの副作用を有し、静脈血栓症及び冠状動脈塞栓症を引き起こす可能性がある。
【００１２】
臨床試験では、２種類以上の骨粗鬆症治療薬を併用すると有効性が高まるという証拠はない。世界における骨粗鬆症の予防及び治療ガイドラインは、２つ以上の抗骨量減少剤、又は抗骨量減少剤と骨形成剤との組み合わせの使用を推奨していない。現在の骨粗鬆症治療薬には、多くの副作用があり、有意な効果をもたらすために１年以上の薬物治療が必要である。また、併用療法にも強力な実験データが欠けている。よって、骨粗鬆症と戦うための新しい製品を開発する必要がある。
【００１３】
骨疾患の別の例は、外傷、感染症（骨髄炎を含む）、腫瘍、又は様々な先天性疾患（口唇裂、口蓋裂、耳の欠陥及び鼻の欠陥など）に起因する骨の欠損である。些細な骨の欠損は、自然に治癒することができるが、大きな骨の欠損や小さな骨の欠損は完全に治癒するのが難しく、骨移植（自家骨移植、同種骨移植及び異種骨移植を含む）ならびに人工骨（骨セメント及びバイオセラミック骨を含む）及び組織工学用骨などの骨輸送治療などの外科的治療を必要とする。
【００１４】
様々な種類の骨粗鬆症、骨欠損、骨折などにおいて、異なる薬物又は外科的治療を必要とすることを考慮すると、骨疾患を治療するための新規且つ進歩的な技術が至急必要になる。
【００１５】
以上のことから、本発明者らは、従来技術の欠点を有効に克服するために本発明を提供する。本発明の説明は以下の通りである。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１６】
本発明は、骨疾患を治療するための既存の薬物の欠陥を克服するための新規且つ進歩的な技術である。具体的には、本発明は、ラクトバチルス、その医薬組成物、又はその食用組成物を使用することによって骨疾患を予防、治療又は軽減する方法であって、前記ラクトバチルスの使用が被験者における血中カルシウム濃度の上昇に有効である。
【００１７】
本発明は、骨疾患を予防、治療又は軽減するための医薬組成物の製造におけるラクトバチルスの使用である。前記ラクトバチルスは、被験者の血中カルシウム濃度を増加させるのに効果的である。前記骨疾患は、骨粗鬆症、骨欠損及び骨折を含み得るが、これらに限定されない。
【００１８】
本発明は、骨疾患を予防、治療又は軽減するための食用組成物の調製におけるラクトバチルスの使用を更に開示する。前記ラクトバチルスは、被験者の血中カルシウム濃度を増加させるのに効果的である。
【００１９】
本発明は、骨疾患を予防、治療又は軽減するための方法を更に開示する。前記方法は、有効量の組成物を必要とする被験者に前記組成物を投与して前記骨疾患を予防、治療又は軽減する工程を含む。前記組成物は、ラクトバチルス・プランタルムＧＫＭ３及びラクトバチルス・パラカゼイＧＫＳ６のうちの少なくとも一つと、薬学的に許容される担体と、を含む。
【００２０】
一つの実施形態において、ラクトバチルスは、ラクトバチルス・プランタルム、ラクトバチルス・パラカゼイ、又はそれらの組み合わせである。一つの実施形態において、ラクトバチルスは、ラクトバチルス・プランタルムＧＫＭ３であり、ラクトバチルス・プランタルムＧＫＭ３が、２０１７年８月２５日にそれぞれＣＧＭＣＣ１４５６５及びＢＣＲＣ９１０７８７の寄託番号で中国微生物菌種寄託管理委員会普通微生物センター（ＣＧＭＣＣ）及び台湾食品工業発展研究所（ＦＩＲＤＩ）の生物資源保存研究センター（ＢＣＲＣ）に寄託された。一つの実施形態において、ラクトバチルスは、ラクトバチルス・パラカセイＧＫＳ６であり、ラクトバチルス・パラカセイＧＫＳ６は、２０１７年８月２５日にそれぞれＣＧＭＣＣ１４５６６及びＢＣＲＣ９１０７８８の寄託番号で中国微生物菌種寄託管理委員会普通微生物センター（ＣＧＭＣＣ）及び台湾食品工業発展研究所（ＦＩＲＤＩ）の生物資源保存研究センター（ＢＣＲＣ）に寄託された。
【００２１】
本発明は、骨疾患と診断された被験者を治療するための方法を更に開示する。前記方法は、この分野で公知の方法により前記骨疾患を患っている前記被験者を確認するステップと、ラクトバチルス・プランタルムＧＫＭ３及びラクトバチルス・パラカセイＧＫＳ６の少なくとも一方を含む組成物の有効量を前記被験者に投与するステップを含む。前記ラクトバチルス・プランタルムＧＫＭ３が、２０１７年８月２５日にＣＧＭＣＣ１４５６５の寄託番号で中国微生物菌種寄託管理委員会普通微生物センター（ＣＧＭＣＣ）に寄託され、前記ラクトバチルス・パラカセイＧＫＳ６が、２０１７年８月２５日にＣＧＭＣＣ１４５６６の寄託番号で中国微生物菌種寄託管理委員会普通微生物センター（ＣＧＭＣＣ）に寄託された。一つの実施形態において、前記骨疾患を有する前記被験者は、血中カルシウム濃度、骨梁体積密度（ＢＶ／ＴＶ）、骨梁数（Ｔｂ．Ｎ）、骨梁幅（Ｔｂ．Ｔｈ）、骨梁の間隔（Ｔｂ．Ｓｐ）又はそれらの組み合わせである骨パラメータに従って確認される。一つの実施形態において、前記組成物が、前記骨疾患の病理学的効果及び症状のうちの一方を軽減する。一つの実施形態において、前記骨疾患の病理学的効果及び症状のうちの一方が、骨折と血中カルシウム濃度の低下のうちの少なくとも一方である。
【００２２】
本発明は、骨疾患を予防、治療又は軽減するために血中カルシウム欠乏症（カルシウム欠乏症、低カルシウム血症など）を治療する方法を更に開示する。前記方法は、骨疾患を予防、治療又は軽減するための有効量の組成物を必要とする被験者に前記組成物を投与するステップを含む。前記組成物は、ラクトバチルス・プランタルムＧＫＭ３及びラクトバチルス・パラカセイＧＫＳ６の少なくとも一方と、薬学的に許容される担体と、を含む。
【００２３】
本発明によるラクトバチルス、その食用組成物及び医薬組成物はいずれも、骨疾患を治療するための市販の薬物と比較して、同等または類似の効果を達成することができる。骨疾患は、高齢、更年期障害、小さい体型、甲状腺又は副甲状腺機能不全、骨粗鬆症の病歴、過度の飲酒、カフェイン又は炭酸飲料の過剰摂取、運動不足、カルシウム及びビタミンＤの不十分な摂取、無理なダイエットによる月経異常、ステロイドの長期使用よって引き起こされる。本発明と比較することができる市販の薬物は、抗吸収薬（ビスホスホネート、ＲＡＮＫＬモノクローナル抗体及びＳＥＲＭなど）、骨形成薬（Forteo（登録商標）など）及び／又はハイブリッドメカニズムを有する薬を含むが、これらに限定されない。
【００２４】
本発明に係る実施形態において、本発明と比較される市販薬は、アレンドロネート（アレン）又はアレンドロン酸としても知られ、ピロリン酸の合成類似体であるFosamax（登録商標）である。Fosamax（登録商標）は、骨中のヒドロキシアパタイトに結合し、破骨細胞によって引き起こされる骨吸収の特異的阻害剤として作用することができ、特に閉経期女性の骨粗鬆症の治療に一般的に使用されている。
【００２５】
本明細書で使用される「血中カルシウム」という用語は、血中のカルシウムの濃度を指す。一般に、被験者のカルシウム摂取量が不十分な場合は、副甲状腺の調節により、骨からカルシウムが血中に放出されて血中カルシウム濃度が上昇して、被験者のカルシウムバランス及び生理学的作用が維持される。逆に、血中カルシウム濃度が高すぎると、過剰なカルシウムが骨に堆積するか、腎臓によって濾過され、尿を介して排泄される。
【００２６】
本明細書で使用される「骨粗鬆症」という用語は、骨量の減少及び骨のハニカム構造の穴の拡大によって引き起こし、骨折の危険性を高め、骨の衰弱を増加させる疾患を指す。
【００２７】
本明細書で使用される「骨欠損」という用語は、被験者の骨の構造的完全性が破壊される疾患を指す。一般的な骨欠損は、脛骨に発生する。本明細書で使用される「骨折疾患」という用語は、外力によって直接的又は間接的に引き起こされる骨の断片化又は変形を指す。
【００２８】
本明細書中のラクトバチルスを医薬組成物又は食用組成物として調製するプロセスにおいて、一つ以上の担体又は賦形剤、特に医薬上許容される担体又は賦形剤を添加することができる。担体又は賦形剤としては、酸化セリウム粉末の微粒子、スクロース脂肪酸エステル、結晶セルロース／カルボキシメチルセルロースナトリウム、モノリン酸カルシウム、デンプン（例えば、小麦デンプン、米デンプン、コーンスターチ、ポテトスターチ、デキストリン、シクロデキストリンなど）、糖類（例えば、ラクトース、グルコース、砂糖、還元マルトース、デンプンシロップ、オリゴフルクトース、乳化オリゴ糖など）、及び糖アルコール（例えば、ソルビトール、エリトリトール、キシリトール、ラクチトール、マンニトールなど）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００２９】
本明細書中のラクトバチルスを医薬組成物又は食用組成物として調製するプロセスにおいて、一つ以上の添加剤、特に医薬上許容される添加剤を添加することができる。添加剤としては、機能性成分、酸化防止剤、ゲル化剤、安定剤、粘着付与剤、防腐剤、着色剤、香味剤などが挙げられるが、これらに限定されない。機能性成分としては、様々なビタミン、パントテン酸、葉酸、ビオチン、亜鉛、カルシウム、マグネシウム、アミノ酸、オリゴ糖、プロポリス、ローヤルゼリー、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）、ドコサヘキセン酸（ＤＨＡ）、コエンザイムＱ１０、コンドロイチン、乳酸菌、ラクトフェリン、イソフラボン、プルーン、キチン、キトサン、及びグルコサミンなどが挙げられるが、これらに限定されない。香味剤としては、様々な果実風味を有するジュース抽出物、香料又はエッセンスが挙げられるが、これらに限定されない。
【００３０】
本明細書中のラクトバチルスを食用組成物として調製するプロセスにおいて、一つ以上の保護剤を添加することができる。保護剤としては、トレハロース、粉乳、ポリデキストロース、グルタミン酸ナトリウム、ピロリン酸、ビタミン及びアルギニンが挙げられるが、これらに限定されない。
【００３１】
食用組成物の種類としては、バクテリアパウダー、流動乳製品、濃縮乳、ヨーグルト、サワーミルク、フローズンヨーグルト、乳酸菌発酵飲料、粉乳、アイスクリーム、バター、チーズ、豆乳、発酵豆乳、野菜、ジュース、フルーツジュース、スポーツドリンク、デザート、ゼリー、キャンディー、離乳食、健康食品、動物飼料、栄養補助食品などが挙げられる。当業者は、調製される食用組成物の種類に応じて、法的規制に従って他の適切且つ一般的な添加剤を組成物に添加することができる。
【図面の簡単な説明】
【００３２】
本発明の上記の実施形態及び利点は、以下の詳細な説明及び添付の図面を検討した後に、当業者にはより容易に明らかになるであろう。
【図１】偽手術対照群、卵巣摘出対照群（ＯＶＸ＋ＣＭＣ群）、ＯＶＸ＋ＧＫＭ３群、ＯＶＸ＋ＧＫＳ６群、及びＯＶＸ＋アレン群における骨梁体積密度（％）を示す図である。
【図２】偽手術対照群、卵巣摘出対照群（ＯＶＸ＋ＣＭＣ群）、ＯＶＸ＋ＧＫＭ３群、ＯＶＸ＋ＧＫＳ６群、及びＯＶＸ＋アレン群における大腿骨の骨梁の骨梁幅（Ｔｂ．Ｔｈ）を示す図である。
【図３】偽手術対照群、卵巣摘出対照群（ＯＶＸ＋ＣＭＣ群）、ＯＶＸ＋ＧＫＭ３群、ＯＶＸ＋ＧＫＳ６群、及びＯＶＸ＋アレン群における大腿骨の骨梁の小柱数（Ｔｂ．Ｎ）を示す図である。
【図４】偽手術対照群、卵巣摘出対照群（ＯＶＸ＋ＣＭＣ群）、ＯＶＸ＋ＧＫＭ３群、ＯＶＸ＋ＧＫＳ６群、及びＯＶＸ＋アレン群における大腿骨の骨梁間隔（Ｔｂ．Ｓｐ）を示す図である。
【図５】偽手術対照群、卵巣摘出対照群（ＯＶＸ＋ＣＭＣ群）、ＯＶＸ＋ＧＫＭ３群、ＯＶＸ＋ＧＫＳ６群、及びＯＶＸ＋アレン群における大腿骨の骨密度（ＢＭＤ）を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００３３】
以下の詳細な説明を読むとき、本発明のすべての図を参照されたい。本発明のすべての図は、実施例を示すことによって本発明の異なる実施形態を示し、当業者が本発明を実施する方法を理解することを助ける。本実施例は、本発明の精神を実証するのに十分な実施態様を提供し、各実施態様は他の実施態様と矛盾せず、新規な実施態様はそれらの任意の組み合わせにより実施され得る。すなわち、本発明は、本明細書に開示されている実施形態に限定されるものではない。
【００３４】
本発明は、ラクトバチルス、その医薬組成物又はその食用組成物を用いることによって骨疾患の予防、治療又は軽減するための方法、ならびに骨疾患の予防、治療又は軽減のための医薬組成物又は食用組成物の調製におけるラクトバチルスの使用を開示する。前記ラクトバチルスは、被験者の血中カルシウム濃度を増加させるのに効果的である。
【００３５】
一つの実施形態において、ラクトバチルス属（Lactobacillus）の種類は、ラクトバチルス・プランタルム（L. plantarum）、ラクトバチルス・パラカセイ（L. paracasei）、ラクトバチルス・アシドフィルス（L. acidophilus）、ラクトバチラス‐ブレビス（L. brevis）、ラクトバチルスカゼイ（L. casei）、ラクトバシラス・デルブリュッキイ（L. delbrueckii）、ラクトバチルス・デルブルッキー・サブスピーシーズ・ブルガリカス（L. delbrueckii  subsp. delbrueckii）、ラクトバチルス・デルブルエッキー・サブスピーシーズ・ラクティス（L. delbrueckiii subsp. lactis）、ラクトバチルス・ラムノサス（L. rhamnosus）、ラクトバチルス・サリヴァリゥス（L. salivarius）、ラクトバチルス・ファーメンタム（L. fermentum）、ラクトバチルス・ガセリ（L. gasseri）、ラクトバチルス・ヘルベティカス（L. helveticus）、ラクトバチルス・ジョンソニー（L. johnsonii）、ラクトバシルス・ペントーサス（L. pentosus）及びラクトバチルス・ロイテリ（L. reuteri）を含むが、これに限定されない。
【００３６】
一つの実施形態において、ラクトバチルス・プランタルムの菌株としては、ラクトバチルス・プランタルムＧＫＭ３を含むが、これに限定されない。ラクトバチルス・プランタルムＧＫＭ３が、２０１７年８月２５日にそれぞれＣＧＭＣＣ１４５６５及びＢＣＲＣ９１０７８７の寄託番号で中国微生物菌種寄託管理委員会普通微生物センター（ＣＧＭＣＣ）及び台湾食品工業発展研究所（ＦＩＲＤＩ）の生物資源保存研究センター（ＢＣＲＣ）に寄託された。一つの実施形態において、ラクトバチルス・パラカセイの菌株としては、ラクトバチルス・パラカセイＧＫＳ６を含むが、これに限定されない。ラクトバチルス・パラカセイＧＫＳ６は、２０１７年８月２５日にそれぞれＣＧＭＣＣ１４５６６及びＢＣＲＣ９１０７８８の寄託番号で中国微生物菌種寄託管理委員会普通微生物センター（ＣＧＭＣＣ）及び台湾食品工業発展研究所（ＦＩＲＤＩ）の生物資源保存研究センター（ＢＣＲＣ）に寄託された。
【００３７】
医薬組成物又は食用組成物において、ラクトバチルス属の一つ又は複数の種又は株があり得る。例えば、以下の実施例に記載されるように、ラクトバチルス・プランタルム株ＧＫＭ３は医薬組成物又は食用組成物に使用される。或いは、ラクトバチルス・パラカセイ株ＧＫＳ６は、医薬組成物又は食用組成物に使用される。或いは、ＧＫＭ３株及びＧＫＳ６株の両方が医薬組成物又は食用組成物に使用される。
【００３８】
一つの実施形態において、医薬組成物又は食用組成物は、被験者の血中カルシウム濃度、骨梁体積密度（試験サンプル全体の骨体積（ＢＶ）／総体積（ＴＶ）、ＢＶ／ＴＶ）、骨梁幅（Ｔｂ．Ｔｈ）、骨梁数（Ｔｂ．Ｎ）及び骨密度（ＢＭＤ）を有意に増加させる。更に、医薬組成物又は食用組成物は、骨梁の間隔（Ｔｂ．Ｓｐ）を有意に減少させる。一つの実施形態において、骨疾患は、骨粗鬆症、骨欠損及び骨折を含むが、これらに限定されない。
【００３９】
一つの実施形態において、食用組成物は、細菌粉末、流動乳製品、濃縮乳、ヨーグルト、サワーミルク、フローズンヨーグルト、乳酸菌発酵飲料、粉乳、アイスクリーム、バター、チーズ、豆乳、発酵豆乳、野菜ジュース、フルーツジュース、スポーツドリンク、デザート、ゼリー、キャンディー、離乳食、健康食品、動物飼料及び栄養補助食品を含むが、これらに限定されない。
【００４０】
試験物質の供給源
本発明の実施形態において使用されるラクトバチルス・プランタルムＧＫＭ３（寄託番号ＢＣＲＣ９１０７８７）及びラクトバチルス・パラカゼイＧＫＳ６（寄託番号ＢＣＲＣ９１０７８８）は、台湾食品工業発展研究所（ＦＩＲＤＩ）の生物資源保存研究センター（ＢＣＲＣ）から購入される。当業者は、ラクトバチルス・プランタルム、ラクトバチルス・パラカゼイ及びそれらの亜種株を得ることができ、例えばＢＣＲＣ番号１００６９、１０３５７、１２３２７などのラクトバチルス・プランタルム株及びＢＣＲＣ番号１０３５８、１４６２８、１７００５などのラクトバチルス・パラカゼイである。
【００４１】
試験物質の発酵
ＧＫＭ３とＧＫＳ６株の培養方法は、台湾特許第Ｉ６３６１３３号（出願第１０６１３６１３４号及び２０１７年１０月２０日に出願した）及び台湾特許第Ｉ６５１４１２号（出願第１０６１３７７７３号及び２０１７年１１月１日に出願した）に開示されている。ＧＫＭ３及びＧＫＳ６株の培地に使用される炭素源は、グルコース、スクロース、ラクトース、フルクトース、マンノース、ソルビトール、グリセリン、糖蜜又はそれらの組み合わせを含み得るが、これらに限定されない。培地の上記成分の量は、適宜調整することができる。一つの実施形態において、炭素源は、スクロースである。ＧＫＭ３及びＧＫＳ６株の培地に使用される窒素源は、大豆タンパク質、酵母エキス、牛肉エキス、カゼイン粉末、ホエータンパク質粉末、加水分解魚タンパク質、植物抽出物タンパク質又はそれらの組み合わせを含み得るが、これらに限定されない。また、培地の上記成分の量は、適宜調整することができる。一つの実施形態において、窒素源は酵母エキスである。培地の総重量に対する炭素源及び窒素源の量は、培養結果に影響を及ぼし、それぞれ１〜１０重量％（ｗｔ％）の範囲内である。一つの実施形態において、炭素源の量又は窒素源の量のいずれかは、培地の全重量に対して３重量％〜７重量％である。一つの実施形態において、培地は、培地の総重量に対して、それぞれ１重量％〜１０重量％の量でスクロース及び酵母エキスを含有する。一つの実施形態において、培地は、培地の総重量に対して、それぞれ３重量％〜７重量％の量でスクロース及び酵母エキスを含有する。一つの実施形態において、培地は、培地の総重量に対して、１重量％〜１０重量％又は３重量％〜７重量％の量で、スクロース及び酵母エキスのうちの一つだけを含有する。
【００４２】
ＧＫＭ３及びＧＫＳ６株は、３２℃〜４２℃の培養温度で、固体培地又は液体培地で培養することができる。一つの実施形態において、培養温度は３５℃〜４０℃に設定される。一つの実施形態において、培養温度は３７℃である。ＧＫＭ３及びＧＫＳ６株を液体培地で培養する場合には、培養容器又は発酵槽の回転数を５ｒｐｍ〜５０ｒｐｍに設定することができ、ＧＫＭ３及びＧＫＳ６株が液体培地中で均一に分布する。培養容器又は発酵槽内の気体は、液体培地に適切に溶け込む。一つの実施形態において、回転速度は１０ｒｐｍ〜３５ｒｐｍの範囲内、又は２０ｒｐｍである。
【００４３】
上記の培地及び培養条件によれば、バッチ発酵におけるＧＫＭ３株の最大生存細胞は４.６×１０９コロニー形成単位（ＣＦＵ）／ｍＬであり、バッチ発酵におけるＧＫＳ６株の最大生存細胞は１.３×１０１０ ＣＦＵ／ｍＬである。
【００４４】
培養された株ＧＫＭ３及びＧＫＳ６は凍結乾燥技術により脱水し、細菌粉末として保存することができる。凍結乾燥プロセス中に添加されて食用組成物を製造する保護剤は、トレハロース、粉乳、ポリデキストロース、グルタミン酸ナトリウム、ピロリン酸塩、ビタミン、アルギニン又はそれらの組み合わせを含むが、これらに限定されない。培地の上記成分の量は適宜調整することができる。
【００４５】
あるいは、従来の製薬技術に従って、凍結乾燥株ＧＫＭ３及びＧＫＳ６を製薬上許容される担体、賦形剤、希釈剤、アジュバント、ビヒクル、分散剤、コーティング、抗菌剤又は抗真菌剤と組み合わせ、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、ピル、タブレット、粉末、乳化剤、懸濁液、分散剤、溶媒などとして調製してもよい。このことから、ＧＫＭ３及びＧＫＳ６株は、細菌粉末、食用組成物又は医薬組成物として調製することができる。
【００４６】
試験物質の調製
本発明における動物実験は、マウス体重１ｋｇあたり１０ｍｇ〜２０００ｍｇのＧＫＭ３及びＧＫＳ６粉末を供給することによって行うことができる。しかしながら、マウス体重１ｋｇあたり２０００ｍｇ以上又は１０ｍｇ未満のＧＫＭ３及びＧＫＳ６粉末の用量も本発明の範囲内である。マウス以外の被験者について、ＧＫＭ３又はＧＫＳ６粉末、それらの医薬組成物又は食用組成物を摂取している時、１０〜２０００ｍｇ／ｋｇの被験者体重に従って投与量を適度に調整することができる。
【００４７】
この実施形態において、ＧＫＭ３又はＧＫＳ６粉末はそれぞれ、０.５％（ｗ／ｖ）のカルボキシメチルセルロース（CMC）溶液で濃度２０５ｍｇ／ｍＬの懸濁液として調製した。溶媒群はｍ０.５％（ｗ/ｖ）のＣＭＣ溶液を使用した。陽性対照群は、抗骨粗鬆症薬アレンドロネート（アレン）を０．５％（ｗ／ｖ）のＣＭＣ溶液で０．２５ｍｇ／ｍＬ懸濁液として調製した。マウスに、体重１０ｇあたり０．１ｍＬのＧＫＭ３懸濁液、ＧＫＳ６懸濁液、０．５％（ｗ／ｖ）のＣＭＣ溶液又はアレン懸濁液を経口投与した。
【００４８】
実験動物とモデル
骨代謝はエストロゲンと密接に関連しているので、両側卵巣摘出術によるマウスを閉経後の骨粗鬆症動物モデルとして使用する。マウスは両側卵巣摘出後１〜２週間の回復期間が経ってから、異なる治療群に無作為に割り当てられる。
【００４９】
本実施形態において、８週齢のＩＣＲ雌雄マウスをBioLASCO Taiwan Co., Ltd.から購入し、９週齢の時点で卵巣摘出術（ＯＶＸ）を行った。実験群及び陽性対照群のマウスは麻酔を受け、両側の卵巣が背中を通して摘出された。対照群として使用された偽手術群において、ＩＣＲマウスの背中は切開されたが、その卵巣は摘出されなかった。マウスを犠牲にするとき、卵巣組織を調べ、卵巣の除去が成功したかどうかを確認した。卵巣摘出に失敗したマウスはその後の解析には使用しなかった。
【００５０】
ＩＣＲ雌マウスを偽手術対照群と四つの卵巣摘出群（卵巣摘出術（ＯＶＸ））に分けた。四つの卵巣摘出群は、溶媒群（ＯＶＸ＋ＣＭＣ群）、陽性対照群（ＯＶＸ＋アレン群、２．５ｍｇアレン／ｋｇマウス体重の投与量）、ＧＫＭ３治療群（ＯＶＸ＋ＧＫＭ３群、２０５ｍｇ ＧＫＭ３／ｋｇマウス体重の投与量）及びＧＫＳ６治療群（ＯＶＸ＋ＧＫＳ６群、２０５ｍｇ ＧＫＳ６／ｋｇマウス体重の投与量）を含む。ＧＫＭ３治療群とＧＫＳ６治療群は手術後４日目から２８日目まで、経口投与法により1日1回試験物質を与えた。陽性対照群には２８日まで週３回アレンドロネートを与えた。その後マウスを麻酔し、腹腔内脳静脈サンプリングのために犠牲にし、各大腿骨を分析のために取り出した。
【００５１】
骨組織分析
ＩＣＲマウスの右大腿骨遠位部のコンピュータ断層撮影画像を、マイクロコンピュータ断層撮影（ｍｉｃｒｏ−ＣＴ）スキャナー（SkyScan 1076、Kontizh、Belgium）により１８μｍの解像度で得て、骨梁体積密度（骨体積（ＢＶ）／総体積（ＴＶ）、ＢＶ／ＴＶ）、骨梁幅（Ｔｂ．Ｔｈ）、骨梁数（Ｔｂ．Ｎ）及び骨梁の間隔（Ｔｂ．Ｓｐ）を得るためにソフトウェアにより分析した。 分析した位置は、成長板の下の１００片の領域を含み、皮質骨を除くように選択した。骨密度分析は、同じ領域に適用されるが、皮質骨を含む。
【００５２】
骨密度解析
骨密度（質量／体積）は、ｍｉｃｒｏ−ＣＴによって測定された。測定前に、マウスを麻酔し、腹臥位に固定し、次いで二重エネルギーＸ線吸光光度法（ＤＸＡ）を用いて検査部位を走査した。ＤＸＡスキャナーは２本のＸ線ビームを生成し、各ビームから骨を通過するＸ線の量を測定した。二つのビーム間の差に基づいて、骨質量、骨体積及び骨密度（骨塩量（ＢＭＤ）とも呼ばれる）が決定される。
【００５３】
統計方法
実験で得られたデータは、一元配置分散分析（one-way ANOVA）及びダンカンの多重範囲検定で解析された。全てのデータは、平均値±SDとして表す。比較の後、上記の群を統計的に分析し、群間の統計的に有意な差を表すためにマークによって記した（＊はｐ＜０．０５を表す）。
【００５４】
実験結果
１、血中カルシウム濃度
カルシウムの吸収が低下し、血中カルシウム濃度が不足すると、副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）が破骨細胞を刺激して骨を破壊し、血中にカルシウムを放出することから、骨密度の増加や維持に繋がっていない。逆に、カルシウム濃度が上昇すると、血液中のカルシトニンは骨格を刺激して血漿からカルシウムを除去し、骨として堆積させる。これは骨密度の増加又は維持に役立つ。カルシウム欠乏症として一般に知られている低カルシウム血症は、血中のカルシウム濃度が低い時に起こす。長期的なカルシウム欠乏症は骨粗鬆症を引き起こす可能性がある。
【００５５】
表１と表２に示されるように、ＧＫＭ３及びＧＫＳ６株を与えたマウスにおける血中カルシウム濃度及びカルシウム／クレアチニンの比は、対照群における血中カルシウム濃度及びカルシウム／クレアチニンの比より有意に高い（ｐ＜０．０５）が、クレアチニン濃度に有意差がない。血清カルシウム及びカルシウム／クレアチニン比の増加は、試験サンプルがカルシウム吸収を助長していることを示すことが報告された（Yang et al., Calcified Tissue International and Musculoskeletal Research, 1994, 55(5): 335-341.）。従って、表１と２の結果、本発明のＧＫＭ３及び／又はＧＫＳ６株、それらの細菌粉末、食用組成物又は医薬組成物はカルシウムの吸収を助長する。
【００５６】
【表１】
2019214548.tif 000003
【００５７】
【表２】
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【００５８】
２、骨梁体積密度
ＩＣＲマウスを卵巣摘出術後３２日目に犠牲にし、大腿骨の様々なパラメーターについて分析した。表３と図１に示すように、卵巣摘出対照群（ＯＶＸ＋ＣＭＣ）マウスの右大腿骨の骨梁体積密度は、偽手術対照群の骨梁体積密度よりも有意に小さいが、一方、ＯＶＸ＋ＧＫＭ３群又はＯＶＸ＋ＧＫＳ６群のマウスの右大腿骨の骨梁体積密度は、ＯＶＸ＋ＣＭＣ群の骨梁体積密度よりも有意に高く（ｐ＜０．０５）、ＯＶＸ＋アレン群に近い。この結果は、本発明に係るＧＫＭ３株及び／又はＧＫＳ６株、それらの細菌粉末、食用組成物又は医薬組成物の摂取が、被験者の骨梁の骨梁体積密度を改善するのに効果的であることを示している。
【００５９】
【表３】
2019214548.tif 000005
【００６０】
３、大腿骨の骨梁幅（Ｔｂ．Ｔｈ）
表４と図２に示すように、卵巣摘出対照群（ＯＶＸ＋ＣＭＣ）のマウスの右大腿骨のＴｂ．Ｔｈは、偽手術対照群のＴｂ．Ｔｈよりも有意に小さいが、一方、ＯＶＸ＋ＧＫＭ３群又はＯＶＸ＋ＧＫＳ６群のマウスのＴｂ．Ｔｈは、ＯＶＸ＋ＣＭＣ群よりも有意に高く（ｐ ＜０．０５）、ＯＶＸ＋アレン群に近い。この結果は、本発明に係るＧＫＭ３株及び／又はＧＫＳ６株、それらの細菌粉末、食用組成物又は医薬組成物の摂取が、被験者における大腿骨のＴｂ．Ｔｈを改善するのに効果的であることを示している。
【００６１】
【表４】
2019214548.tif 000006
【００６２】
４、大腿骨の骨梁数（Ｔｂ．Ｎ）
表５と図３に示すように、卵巣摘出対照群（ＯＶＸ＋ＣＭＣ）のマウスの右大腿骨のＴｂ．Ｎは、偽手術対照群のＴｂ．Ｎよりも有意に小さいが、一方、ＯＶＸ＋ＧＫＭ３群又はＯＶＸ＋ＧＫＳ６群のマウスのＴｂ．Ｎは、ＯＶＸ＋ＣＭＣ群よりも有意に高く（ｐ ＜０．０５）、ＯＶＸ＋アレン群に近い。この結果は、本発明に係るＧＫＭ３株及び／又はＧＫＳ６株、それらの細菌粉末、食用組成物又は医薬組成物の摂取が、被験者における大腿骨のＴｂ．Ｎを改善するのに効果的であることを示している。
【００６３】
【表５】
2019214548.tif 000007
【００６４】
５、大腿骨の骨梁間隔（Ｔｂ．Ｓｐ）
表６と図４に示すように、卵巣摘出対照群（ＯＶＸ＋ＣＭＣ）のマウスの右大腿骨のＴｂ．Ｓｐは、偽手術対照群のＴｂ．Ｓｐよりも有意に高いが、一方、ＯＶＸ＋ＧＫＭ３群又はＯＶＸ＋ＧＫＳ６群のマウスのＴｂ．Ｓｐは、ＯＶＸ＋ＣＭＣ群よりも有意に低い（ｐ ＜０．０５）。この結果は、本発明に係るＧＫＭ３株及び／又はＧＫＳ６株、それらの細菌粉末、食用組成物又は医薬組成物の摂取が、被験者における大腿骨のＴｂ．Ｓｐを改善する又は低下させるのに効果的であることを示している。
【００６５】
【表６】
2019214548.tif 000008
【００６６】
６、大腿骨密度（ＢＭＤ）
表７と図５に示されるように、卵巣摘出対照群（ＯＶＸ＋ＣＭＣ）のマウスの右大腿骨のＢＭＤは、偽手術対照群のＢＭＤよりも有意に小さいが、一方、ＯＶＸ＋ＧＫＭ３群又はＯＶＸ＋ＧＫＳ６群のマウスのＢＭＤは、ＯＶＸ＋ＣＭＣ群よりも有意に高く（ｐ ＜０．０５）、ＯＶＸ＋アレン群に近い。この結果は、本発明に係るＧＫＭ３株及び／又はＧＫＳ６株、それらの細菌粉末、食用組成物又は医薬組成物の摂取が、被験者における大腿骨のＢＭＤを改善するのに効果的であることを示している。
【００６７】
【表７】
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【００６８】
以上のことから、本発明におけるラクトバチルス及びラクトバチルスを含む組成物は、被験者の血中カルシウム濃度及びカルシウム／クレアチニン比を有意に上昇させることができ、被験者のカルシウム吸収に有利である。更に、本発明におけるラクトバチルスを含む組成物を与えた卵巣摘出マウスは、骨梁体積密度（ＢＶ／ＴＶ）、Ｔｂ．Ｔｈ、Ｔｂ．Ｎ及びＢＭＤを有意に増加し、大腿骨のＴｂ．Ｓｐを有意に減少する。従って、本発明に係るラクトバチルス、その医薬組成物及びその食用組成物は、血液中のカルシウム濃度を上昇させることによって、骨疾患、特に骨粗鬆症を予防、治療又は軽減するために使用することができる。
【００６９】
本発明においては、マウスにＧＫＭ３株又はＧＫＳ６株を与えた後、血液中のカルシウム濃度が有意に上昇し、これにより骨への過剰なカルシウムの沈着が促進される。従って、骨カルシウム沈着が増加しているため、被験体の骨疾患が治療又は軽減され、骨疾患、特に骨粗鬆症に罹患する危険性が減少され得る。
【００７０】
上記の実験において、マウス及び卵巣摘出マウスを、エストロゲン分泌によって影響を受ける骨粗鬆症のモデルとして使用した。マウスは、ヒトと高度の相同性を共有するため、最も一般的に使用されている哺乳動物モデル生物である。この分野における多数の実験及び結果から、げっ歯類（マウス）についての結果が哺乳動物などの他の脊椎動物に適用できることが既に証明された。従って、本発明における特許請求される範囲は、霊長類、げっ歯類などを含む哺乳動物を含む脊椎動物を含む。霊長類は、ヒト、オランウータン、マーモセット、サルなどを含み、げっ歯類は、ラット、マウス、モルモットなどを含む。更に、骨粗鬆症の適用範囲は、エストロゲン分泌に罹患している女性に限定されない。本発明におけるラクトバチルス及びラクトバチルスを含む組成物は、骨疾患を患っている又は骨疾患を患っている危険性がある男性にも使用することができる。
【００７１】
他の実施例
１、骨疾患と診断された被験者を治療するための方法であって、
前記骨疾患を患っている前記被験者を確認するステップと、
ラクトバチルス・プランタルムＧＫＭ３及びラクトバチルス・パラカセイＧＫＳ６の少なくとも一方を含む組成物の有効量を前記被験者に投与するステップであって、前記ラクトバチルス・プランタルムＧＫＭ３が、２０１７年８月２５日にＣＧＭＣＣ１４５６５の寄託番号で中国微生物菌種寄託管理委員会普通微生物センター（ＣＧＭＣＣ）に寄託され、前記ラクトバチルス・パラカセイＧＫＳ６が、２０１７年８月２５日にＣＧＭＣＣ１４５６６の寄託番号で中国微生物菌種寄託管理委員会普通微生物センター（ＣＧＭＣＣ）に寄託された前記ステップと、を含むことを特徴とする方法。
２、前記骨疾患が骨粗鬆症、骨欠損、骨折、又はそれらの組み合わせである、ことを特徴とする実施例１に記載の方法。
３、前記被験者が人間被験者である、ことを特徴とする実施例１〜２に記載の方法。
４、前記被験者が更年期障害の女性である、ことを特徴とする実施例１〜３のいずれかに記載の方法。
５、前記組成物が医薬組成物である、ことを特徴とする実施例１〜４のいずれかに記載の方法。
６、前記医薬組成物が薬学的に許容される担体を更に含む、ことを特徴とする実施例５のいずれかに記載の方法。
７、前記被験者が、1日1回投与、1日複数回投与、又は週1回投与を受ける、ことを特徴とする実施例１〜６のいずれかに記載の方法。
８、前記組成物が経口投与に適した剤形である、ことを特徴とする実施例１〜７のいずれかに記載の方法。
９、前記剤形が、液剤、懸濁剤、乳剤、散剤、錠剤、丸剤、シロップ剤、ロゼンジ剤、トローチ剤、チューインガム、スラリー剤、又はカプセル剤から選択される、ことを特徴とする実施例１〜８のいずれかに記載の方法。
１０、前記組成物が食品、栄養補助食品、又は栄養製品である、ことを特徴とする実施例１〜９のいずれかに記載の方法。
１１、前記食品が、飲料、ヨーグルト、ジュース、アイスクリーム、パン、ビスケット、シリアル、健康バー、又はスプレッドから選択される、ことを特徴とする実施例１０に記載の方法。
１２、前記骨疾患を有する前記被験者は、血中カルシウム濃度、骨梁体積密度（ＢＶ／ＴＶ）、骨梁数（Ｔｂ．Ｎ）、骨梁幅（Ｔｂ．Ｔｈ）、骨梁の間隔（Ｔｂ．Ｓｐ）又はそれらの組み合わせである骨パラメータに従って確認され、
前記組成物は、前記骨パラメータを改善する、ことを特徴とする実施例１〜１１のいずれかに記載の方法。
１３、骨疾患を予防、治療又は軽減する方法であって、
前記骨疾患を予防、治療又は軽減するための有効量の組成物を必要とする被験者に前記組成物を投与するステップであって、前記組成物は、ラクトバチルス・プランタルムＧＫＭ３及びラクトバチルス・パラカセイＧＫＳ６の少なくとも一方を含み、前記ラクトバチルス・プランタルムＧＫＭ３が、２０１７年８月２５日にＣＧＭＣＣ１４５６５の寄託番号で中国微生物菌種寄託管理委員会普通微生物センター（ＣＧＭＣＣ）に寄託され、前記ラクトバチルス・パラカセイＧＫＳ６が、２０１７年８月２５日にＣＧＭＣＣ１４５６６の寄託番号でＣＧＭＣＣに寄託された前記ステップと、を含むことを特徴とする方法。
１４、前記骨疾患が骨粗鬆症、骨欠損、骨折、又はそれらの組み合わせである、ことを特徴とする実施例１３に記載の方法。
１５、前記組成物が担体材料を含む、ことを特徴とする実施例１３〜１４に記載の方法。
１６、前記担体材料が、オートミール粥、乳酸発酵食品、レジスタントスターチ、食物繊維、炭水化物、タンパク質、グリコシル化タンパク質、又は脂質から選択される、ことを特徴とする実施例１５に記載の方法。
１７、前記組成物が、前記骨疾患の病理学的効果及び症状のうちの一方を軽減する、ことを特徴とする実施例１３〜１６のいずれかに記載の方法。
１８、前記骨疾患の病理学的効果及び症状のうちの一方が、骨折と血中カルシウム濃度の低下のうちの少なくとも一方である、ことを特徴とする実施例１７に記載の方法。
１９、前記組成物が食用成分を更に含む、ことを特徴とする実施例１３〜１８のいずれかに記載の方法。
２０、骨疾患を予防、治療又は軽減するための血中カルシウム欠乏症を治療する方法であって、
前記骨疾患を予防、治療又は軽減するための有効量の組成物を必要とする被験者に前記組成物を投与するステップであって、前記組成物は、ラクトバチルス・プランタルムＧＫＭ３及びラクトバチルス・パラカセイＧＫＳ６の少なくとも一方と、薬学的に許容される担体と、を含み、
前記ラクトバチルス・プランタルムＧＫＭ３が、２０１７年８月２５日にＣＧＭＣＣ１４５６５の寄託番号で中国微生物菌種寄託管理委員会普通微生物センター（ＣＧＭＣＣ）に寄託され、前記ラクトバチルス・パラカセイＧＫＳ６が、２０１７年８月２５日にＣＧＭＣＣ１４５６６の寄託番号でＣＧＭＣＣに寄託された前記ステップと、を含むことを特徴とする方法。
【００７２】
以上、本発明を実施の形態を用いて説明したが、本発明の技術的範囲は上記実施の形態に記載の範囲には限定されない。上記実施の形態に、多様な変更または改良を加え得ることが当業者に明らかである。その様な変更または改良を加えた形態も本発明の技術的範囲に含まれ得ることが、特許請求の範囲の記載から明らかである。
【符号の説明】
【００７３】
なし
【図１】
2019214548.tif 000010
【図２】
2019214548.tif 000011
【図３】
2019214548.tif 000012
【図４】
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【図５】
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【手続補正書】
【提出日】令和1年8月27日(2019.8.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
骨疾患と診断された被験者を治療、予防又は軽減するための組成物であって、
前記組成物は、ラクトバチルス・プランタルムＧＫＭ３及びラクトバチルス・パラカセイＧＫＳ６の少なくとも一方を含み、前記ラクトバチルス・プランタルムＧＫＭ３が、２０１７年８月２５日にＣＧＭＣＣ１４５６５の寄託番号で中国微生物菌種寄託管理委員会普通微生物センター（ＣＧＭＣＣ）に寄託され、前記ラクトバチルス・パラカセイＧＫＳ６が、２０１７年８月２５日にＣＧＭＣＣ１４５６６の寄託番号で中国微生物菌種寄託管理委員会普通微生物センター（ＣＧＭＣＣ）に寄託されたことを特徴とする組成物。
【請求項２】
前記骨疾患が骨粗鬆症、骨欠損、骨折、又はそれらの組み合わせである、ことを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記被験者が人間被験者である、ことを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記被験者が更年期障害の女性である、ことを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
前記組成物が医薬組成物であり、前記医薬組成物が薬学的に許容される担体を更に含み、前記被験者が、1日1回投与、1日複数回投与、又は週1回投与を受け、前記組成物が経口投与に適した剤形であり、前記剤形が、液剤、懸濁剤、乳剤、散剤、錠剤、丸剤、シロップ剤、ロゼンジ剤、トローチ剤、チューインガム、スラリー剤、又はカプセル剤から選択される、ことを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
前記組成物が食品、栄養補助食品、又は栄養製品であり、前記食品が、飲料、ヨーグルト、ジュース、アイスクリーム、パン、ビスケット、シリアル、健康バー、又はスプレッドから選択される、ことを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項７】
前記骨疾患を有する前記被験者は、血中カルシウム濃度、骨梁体積密度（ＢＶ／ＴＶ）、骨梁数（Ｔｂ．Ｎ）、骨梁幅（Ｔｂ．Ｔｈ）、骨梁の間隔（Ｔｂ．Ｓｐ）又はそれらの組み合わせである骨パラメータに従って確認され、
前記組成物は、前記骨パラメータを改善する、ことを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項８】
骨疾患を予防、治療又は軽減するための血中カルシウム欠乏症を治療する組成物であって、
前記組成物は、ラクトバチルス・プランタルムＧＫＭ３及びラクトバチルス・パラカセイＧＫＳ６の少なくとも一方と、薬学的に許容される担体とを含み、前記ラクトバチルス・プランタルムＧＫＭ３が、２０１７年８月２５日にＣＧＭＣＣ１４５６５の寄託番号で中国微生物菌種寄託管理委員会普通微生物センター（ＣＧＭＣＣ）に寄託され、前記ラクトバチルス・パラカセイＧＫＳ６が、２０１７年８月２５日にＣＧＭＣＣ１４５６６の寄託番号でＣＧＭＣＣに寄託されたことを特徴とする組成物。
【請求項９】
前記骨疾患が骨粗鬆症、骨欠損、骨折、又はそれらの組み合わせであり、前記組成物が担体材料を含み、前記担体材料が、オートミール粥、乳酸発酵食品、レジスタントスターチ、食物繊維、炭水化物、タンパク質、グリコシル化タンパク質、又は脂質から選択される、ことを特徴とする請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
前記組成物が、前記骨疾患の病理学的効果及び症状のうちの一方を軽減し、前記骨疾患の病理学的効果及び症状のうちの一方が、骨欠損と血中カルシウム濃度の低下のうちの少なくとも一方であり、前記組成物が食用成分を更に含む、ことを特徴とする請求項８に記載の組成物。
【外国語明細書】
2019214548000001.pdf