(57)【要約】      （修正有）【課題】細胞に対する測定可能な作用をもつ被検体を同定するためのハイスループットスクリーニング（ＨＴＳ）方法の提供。さらに、大麻抽出物又はその画分、カンナビノイド−タイプの成分、非カンナビノイド−タイプの成分、及びそのいずれかの組合わせからなる群から選択される被検体を同定するための手段及び方法の提供。【解決手段】下記の工程を含むＨＴＳ方法：（ａ）複数の細胞試料を含むアレイを用意する；（ｂ）試験すべき少なくとも１つの被検体を用意する；（ｃ）細胞試料を被検体と接触させる；そして（ｄ）細胞に対する測定可能な作用の指標となる信号を検出し、その際、対照試料に対比して細胞試料について測定した信号の経時変化はその細胞試料に対するその被検体の測定可能な作用の指標となる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞に対する測定可能な作用をもつ被検体を同定するためのハイスループットスクリーニング（ＨＴＳ）方法であって、下記の工程を含む方法：
ａ．複数の細胞試料を含むアレイを用意する；
ｂ．試験すべき少なくとも１つの被検体を用意する；
ｃ．細胞試料を被検体と接触させる；そして
ｄ．細胞に対する測定可能な作用の指標となる信号を検出し、その際、対照試料に対比して細胞試料について測定した信号の経時変化はその細胞試料に対するその被検体の測定可能な作用の指標となる。
【請求項２】
被検体が、カンナビノイド−タイプ、カンナビノイド誘導体、大麻抽出物またはその画分、非カンナビノイド−タイプの成分、生成物、化合物、分子または物質、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
細胞に対する測定可能な作用が、生理学的、遺伝学的、生化学的、構造的なもの、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
細胞に対する測定可能な作用が、抗増殖性、再生性、抗炎症性、抗有糸分裂性、分化性、抗転移性、抗血管新生性、アポトーシス性、細胞毒性、細胞変性性、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
細胞に対する測定可能な作用が、増殖、移動、吸光、接着、アポトーシス、壊死、オートファジー、細胞毒性、細胞サイズ、運動性、細胞周期、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される生物学的パラメーターに対する作用である、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
癌細胞が、乳癌、卵巣癌、結腸／直腸癌、前立腺癌、メラノーマ、頭頸部癌、膵臓癌、骨肉腫、胃癌、神経膠腫、神経膠芽細胞腫、神経芽細胞腫、白血病、腺癌、副腎癌、肛門癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌、脳／ＣＮＳ癌、子宮頚癌、子宮内膜癌、食道癌、眼癌、胃腸癌、腎癌、白血病、肝癌、肺癌、リンパ腫、多発性骨髄腫、鼻腔癌および副鼻腔癌、鼻咽頭癌、非ホジキンリンパ腫、口腔癌、口腔咽頭癌、骨肉腫、卵巣癌、膵臓癌、陰茎癌、下垂体癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺癌、肉腫、皮膚癌、小腸癌、胃癌、睾丸癌、胸腺癌、甲状腺癌、子宮肉腫、膣癌および外陰癌、ならびにそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
細胞試料が、異種移植細胞、同種移植細胞、細胞系、生検細胞、およびその組合わせからなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
細胞系が、中枢神経系、骨、前立腺、胃、尿路、卵巣、造血およびリンパ系組織、腎臓、甲状腺、皮膚、軟組織、唾液腺、卵巣、肺、胸膜、肝臓、子宮内膜、膵臓、乳腺、上気道消化管、大腸、自律神経節、食道、胆管、小腸、自律神経節、ならびにそのいずれかの組合わせからなる群から選択される癌細胞系である、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
細胞試料が、ヒト細胞系、動物細胞系および異種移植細胞からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
細胞試料が、癌細胞、幹細胞、神経細胞、心筋細胞、体細胞、生殖細胞、正常細胞、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
信号が、光、発光、蛍光、免疫、細胞数、放射性同位体、非放射性同位体、電気、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
細胞に対する測定可能な作用が、ＡＬＫ遺伝子、アルファ−フェトプロテイン（ＡＦＰ）、ベータ−２−ミクログロブリン（Ｂ２Ｍ）、ベータ−ヒト絨毛性ゴナドトロピン（Ｂｅｔａ−ｈＣＧ）、ＢＣＲ−ＡＢＬ融合遺伝子、ＢＲＡＦ変異Ｖ６００Ｅ、ＣＡ１５−３／ＣＡ２７．２９、ＣＡ１９−９、ＣＡ−１２５、カルシトニン、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ＣＤ２０、クロモグラニンＡ（ＣｇＡ）、染色体３、７、１７および９ｐ２１、サイトケラチンフラグメント２１−１、ＥＧＦＲ変異、エストロゲン受容体（ＥＲ）／プロゲステロン受容体（ＰＲ）、フィブリン／フィブリノーゲン、ＨＥ４、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、免疫グロブリン、ＫＩＴ、ＫＲＡＳ変異、乳酸デヒドロゲナーゼ、核マトリックスプロテイン２２、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、サイログロブリン、ウロキナーゼプラスミノーゲンアクチベーター（ｕＰＡ）、プラスミノーゲンアクチベーターインヒビター（ＰＡＩ−１）、５−プロテインシグネチャー（Ｏｖａ１）、２１−遺伝子シグネチャー（Ｏｎｃｏｔｙｐｅ  ＤＸ）、７０−遺伝子シグネチャー（Ｍａｍｍａｐｒｉｎｔ）、ならびにそのいずれかの組合わせからなる群から選択される癌マーカーの発現レベルに対する作用である、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
被検体が大麻から抽出され；大麻がカンナビス・サティバ(Cannabis sativa)、インド
大麻(Cannabis indica)、カンナビス・ルデラリス(Cannabis ruderalis)、およびそのい
ずれかの組合わせからなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
カンナビノイド−タイプが、カンナビゲロール（ＣＢＧ）タイプ、カンナビクロメン（ＣＢＣ）タイプ、カンナビジオール（ＣＢＤ）タイプ、△９−テトラヒドロカンナビノール（ＴＨＣ）タイプ、△８−ＴＨＣタイプ、カンナビシクロール（ＣＢＬ）タイプ、カンナビエルソイン（ＣＢＥ）タイプ、カンナビノール（ＣＢＮ）タイプおよびカンナビノジオール（ＣＢＮＤ）タイプ、カンナビトリオール（ＣＢＴ）タイプ、種々のタイプのカンナビノイド、ならびにそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、請求項２に記載の方法。
【請求項１５】
カンナビノイド−タイプが、さらにテトラヒドロカンナビジオール（ＴＨＣ）またはその誘導体、カンナビジオール（ＣＢＤ）またはその誘導体、ＣＢＧ（カンナビゲロール）、ＣＢＣ（カンナビクロメン）、ＣＢＬ（カンナビシクロール）、ＣＢＶ（カンナビバリン）、ＴＨＣＶ（テトラヒドロカンナビバリン）、ＣＢＤＶ（カンナビジバリン）、ＣＢＣＶ（カンナビクロメバリン）、ＣＢＧＶ（カンナビゲロバリン）、ＣＢＧＭ（カンナビゲロール  モノメチルエーテル）、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
ＴＨＣまたはその誘導体が、ＴＨＣ、ＴＨＣＶ、ＴＨＣＡ、ＴＨＣＶＡ、デルタ−９−テトラヒドロカンナビノール（△９−ＴＨＣ）およびデルタ−８−テトラヒドロカンナビノール（△８−ＴＨＣ）、ならびにそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
カンナビジオール（ＣＢＤ）またはその誘導体が、ＣＢＤ、ＣＢＤＶ、ＣＢＤＡおよびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１８】
非カンナビノイド−タイプの成分、生成物、化合物、分子または物質が、テルペノイド、炭化水素、大麻由来の精油、窒素含有化合物、炭水化物、フラボノイド、脂肪酸、アミノ酸、タンパク質、糖タンパク質、酵素、糖類および関連化合物、非カンナビノイドフェノール類、単純アルコール類、アルデヒド類、ケトン類、酸、エステル類、ラクトン類、
ステロイド類、テルペン類、フィトステロール類、たとえばカンペステロール、エルゴステロール、Ｅ−シトステロールおよびスティグマステロール、ビタミン類、たとえばビタミンＡおよびビタミンＫ、色素、たとえばカロテンおよびキサントフィル類、元素、たとえばＮａ、Ｋ、Ｃａ、Ｍｇ、Ｆｅ、Ｃｕ、Ｍｎ、ＺｎおよびＨｇ、ならびにそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、請求項２に記載の方法。
【請求項１９】
被検体が、ヒトおよび動物の身体からなる群から選択される供給源に由来するもの、植物から抽出されたもの、合成されたもの、ならびにそのいずれかの組合わせである、請求項１に記載の方法。
【請求項２０】
ＨＴＳが、マイクロタイタープレート、自動コロニーピッカー、ｕＨＴＳまたはウルトラ−ハイスループットスクリーニング、ＨＴＳ薬物探索のための３Ｄ腫瘍スフェロイド分析法、Ｃｅｌｉｇｏイメージングサイトメーター、オートメーションシステム、高貯蔵容量および高速アクセス用のアッセイプレート貯蔵のためのカルーセルシステム、統合ロボットシステム、読出しまたは検出、データ収集プロセス、ならびにそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項２１】
被検体が、別個に投与された一般的な抗腫瘍または抗炎症療法薬により付与される作用と比較して、細胞に対する測定可能な作用に関する相乗作用を付与する、請求項１に記載の方法。
【請求項２２】
被検体が、別個に投与された一般的な抗腫瘍または抗炎症療法薬により付与される作用と比較して、抗腫瘍または抗炎症活性に関する禁忌作用を付与する、請求項１に記載の方法。
【請求項２３】
細胞に対する測定可能な作用をもつ被検体を同定するためのハイスループットスクリーニング（ＨＴＳ）システムであって、下記のものを含むシステム：
ａ．複数の細胞試料を含むアレイ；
ｂ．試験すべき少なくとも１つの被検体；および
ｃ．細胞に対する測定可能な作用の指標となる信号を検出するための手段；その際、対照試料に対比して細胞試料について測定した信号の経時変化はその細胞試料に対するその被検体の測定可能な作用の指標となる。
【請求項２４】
被検体が、カンナビノイド−タイプ、カンナビノイド誘導体、大麻抽出物またはその画分、非カンナビノイド−タイプの成分、生成物、化合物、分子または物質、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、請求項２３に記載のシステム。
【請求項２５】
細胞に対する測定可能な作用が、生理学的、遺伝学的、生化学的、構造的なもの、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、請求項２３に記載のシステム。
【請求項２６】
細胞に対する測定可能な作用が、抗増殖性、再生性、抗炎症性、抗有糸分裂性、分化性、抗転移性、抗血管新生性、アポトーシス性、細胞毒性、細胞変性性、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、請求項２３に記載のシステム。
【請求項２７】
細胞に対する測定可能な作用が、増殖、移動、吸光、接着、アポトーシス、壊死、オートファジー、細胞毒性、細胞サイズ、運動性、細胞周期、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される生物学的パラメーターに対する作用である、請求項２３に記載のシステム。
【請求項２８】
癌細胞が、乳癌、卵巣癌、結腸／直腸癌、前立腺癌、メラノーマ、頭頸部癌、膵臓癌、
骨肉腫、胃癌、神経膠腫、神経膠芽細胞腫、神経芽細胞腫、白血病、腺癌、副腎癌、肛門癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌、脳／ＣＮＳ癌、子宮頚癌、子宮内膜癌、食道癌、眼癌、胃腸癌、腎癌、白血病、肝癌、肺癌、リンパ腫、多発性骨髄腫、鼻腔癌および副鼻腔癌、鼻咽頭癌、非ホジキンリンパ腫、口腔癌、口腔咽頭癌、骨肉腫、卵巣癌、膵臓癌、陰茎癌、下垂体癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺癌、肉腫、皮膚癌、小腸癌、胃癌、睾丸癌、胸腺癌、甲状腺癌、子宮肉腫、膣癌および外陰癌、ならびにそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、請求項２３に記載のシステム。
【請求項２９】
細胞試料が、異種移植細胞、同種移植細胞、細胞系、生検細胞、およびその組合わせからなる群から選択される、請求項２３に記載のシステム。
【請求項３０】
細胞系が、中枢神経系、骨、前立腺、胃、尿路、卵巣、造血およびリンパ系組織、腎臓、甲状腺、皮膚、軟組織、唾液腺、卵巣、肺、胸膜、肝臓、子宮内膜、膵臓、乳腺、上気道消化管、大腸、自律神経節、食道、胆管、小腸、自律神経節、ならびにそのいずれかの組合わせからなる群から選択される癌細胞系である、請求項２９に記載のシステム。
【請求項３１】
細胞試料が、ヒト細胞系、動物細胞系および異種移植細胞からなる群から選択される、請求項２３に記載のシステム。
【請求項３２】
細胞試料が、癌細胞、幹細胞、神経細胞、心筋細胞、体細胞、生殖細胞、正常細胞、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、請求項２３に記載のシステム。
【請求項３３】
信号が、光、発光、蛍光、免疫、細胞数、放射性同位体、非放射性同位体、電気、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、請求項２３に記載のシステム。
【請求項３４】
細胞に対する測定可能な作用が、ＡＬＫ遺伝子、アルファ−フェトプロテイン（ＡＦＰ）、ベータ−２−ミクログロブリン（Ｂ２Ｍ）、ベータ−ヒト絨毛性ゴナドトロピン（Ｂｅｔａ−ｈＣＧ）、ＢＣＲ−ＡＢＬ融合遺伝子、ＢＲＡＦ変異Ｖ６００Ｅ、ＣＡ１５−３／ＣＡ２７．２９、ＣＡ１９−９、ＣＡ−１２５、カルシトニン、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ＣＤ２０、クロモグラニンＡ（ＣｇＡ）、染色体３、７、１７および９ｐ２１、サイトケラチンフラグメント２１−１、ＥＧＦＲ変異、エストロゲン受容体（ＥＲ）／プロゲステロン受容体（ＰＲ）、フィブリン／フィブリノーゲン、ＨＥ４、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、免疫グロブリン、ＫＩＴ、ＫＲＡＳ変異、乳酸デヒドロゲナーゼ、核マトリックスプロテイン２２、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、サイログロブリン、ウロキナーゼプラスミノーゲンアクチベーター（ｕＰＡ）、プラスミノーゲンアクチベーターインヒビター（ＰＡＩ−１）、５−プロテインシグネチャー（Ｏｖａ１）、２１−遺伝子シグネチャー（Ｏｎｃｏｔｙｐｅ  ＤＸ）、７０−遺伝子シグネチャー（Ｍａｍｍａｐｒｉｎｔ）、ならびにそのいずれかの組合わせからなる群から選択される癌マーカーの発現レベルに対する作用である、請求項２３に記載のシステム。
【請求項３５】
被検体が大麻から抽出され；大麻がカンナビス・サティバ(Cannabis sativa)、インド
大麻(Cannabis indica)、カンナビス・ルデラリス(Cannabis ruderalis)、およびそのい
ずれかの組合わせからなる群から選択される、請求項２３に記載のシステム。
【請求項３６】
カンナビノイド−タイプが、カンナビゲロール（ＣＢＧ）タイプ、カンナビクロメン（ＣＢＣ）タイプ、カンナビジオール（ＣＢＤ）タイプ、△９−テトラヒドロカンナビノール（ＴＨＣ）タイプ、△８−ＴＨＣタイプ、カンナビシクロール（ＣＢＬ）タイプ、カンナビエルソイン（ＣＢＥ）タイプ、カンナビノール（ＣＢＮ）タイプおよびカンナビノジオール（ＣＢＮＤ）タイプ、カンナビトリオール（ＣＢＴ）タイプ、種々のタイプのカンナビノイド、ならびにそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、請求項２４に
記載のシステム。
【請求項３７】
カンナビノイド−タイプが、さらにテトラヒドロカンナビジオール（ＴＨＣ）またはその誘導体、カンナビジオール（ＣＢＤ）またはその誘導体、ＣＢＧ（カンナビゲロール）、ＣＢＣ（カンナビクロメン）、ＣＢＬ（カンナビシクロール）、ＣＢＶ（カンナビバリン）、ＴＨＣＶ（テトラヒドロカンナビバリン）、ＣＢＤＶ（カンナビジバリン）、ＣＢＣＶ（カンナビクロメバリン）、ＣＢＧＶ（カンナビゲロバリン）、ＣＢＧＭ（カンナビゲロール  モノメチルエーテル）、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、請求項３６に記載のシステム。
【請求項３８】
ＴＨＣまたはその誘導体が、ＴＨＣ、ＴＨＣＶ、ＴＨＣＡ、ＴＨＣＶＡ、デルタ−９−テトラヒドロカンナビノール（△９−ＴＨＣ）およびデルタ−８−テトラヒドロカンナビノール（△８−ＴＨＣ）、ならびにそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、請求項３７に記載のシステム。
【請求項３９】
カンナビジオール（ＣＢＤ）またはその誘導体が、ＣＢＤ、ＣＢＤＶ、ＣＢＤＡおよびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、請求項３７に記載のシステム。
【請求項４０】
非カンナビノイド−タイプの成分、生成物、化合物、分子または物質が、テルペノイド、炭化水素、大麻由来の精油、窒素含有化合物、炭水化物、フラボノイド、脂肪酸、アミノ酸、タンパク質、糖タンパク質、酵素、糖類および関連化合物、非カンナビノイドフェノール類、単純アルコール類、アルデヒド類、ケトン類、酸、エステル類、ラクトン類、ステロイド類、テルペン類、フィトステロール類、たとえばカンペステロール、エルゴステロール、Ｅ−シトステロールおよびスティグマステロール、ビタミン類、たとえばビタミンＡおよびビタミンＫ、色素、たとえばカロテンおよびキサントフィル類、元素、たとえばＮａ、Ｋ、Ｃａ、Ｍｇ、Ｆｅ、Ｃｕ、Ｍｎ、ＺｎおよびＨｇ、ならびにそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、請求項２４に記載のシステム。
【請求項４１】
被検体が、ヒトおよび動物の身体からなる群から選択される供給源に由来するもの、植物から抽出されたもの、合成されたもの、ならびにそのいずれかの組合わせである、請求項２３に記載のシステム。
【請求項４２】
ＨＴＳが、マイクロタイタープレート、自動コロニーピッカー、ｕＨＴＳまたはウルトラ−ハイスループットスクリーニング、ＨＴＳ薬物探索のための３Ｄ腫瘍スフェロイド分析法、Ｃｅｌｉｇｏイメージングサイトメーター、オートメーションシステム、高貯蔵容量および高速アクセス用のアッセイプレート貯蔵のためのカルーセルシステム、統合ロボットシステム、読出しまたは検出、データ収集プロセス、ならびにそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、請求項２３に記載のシステム。
【請求項４３】
被検体が、別個に投与された一般的な抗腫瘍または抗炎症療法薬により付与される作用と比較して、細胞に対する測定可能な作用に関する相乗作用を付与する、請求項２３に記載のシステム。
【請求項４４】
被検体が、別個に投与された一般的な抗腫瘍または抗炎症療法薬により付与される作用と比較して、抗腫瘍または抗炎症活性に関する禁忌作用を付与する、請求項２３に記載のシステム。
【請求項４５】
１以上のコンピューターにより実装された場合、細胞に対する測定可能な作用の指標となる信号に関するデータを処理することにより、事前選択した細胞試料についての１以上の被検体の細胞に対する測定可能な作用に関するデータをその１以上のコンピューターに
提示させる指示を含み、その際、対照試料に対比して細胞試料について測定した信号の経時変化はその細胞試料に対するその被検体の測定可能な作用の指標となる、非一過性コンピューター可読媒体。
【請求項４６】
癌タイプの疾患または炎症性疾患の処置に使用するための、請求項１に記載の方法に従って選択した療法有効量の被検体を含む組成物または本質的に療法有効量の被検体を含む抽出物であって、抗腫瘍活性もしくは抗炎症活性またはその相乗作用を有する組成物。
【請求項４７】
被検体が、カンナビノイド−タイプ、カンナビノイド誘導体、大麻抽出物またはその画分、非カンナビノイド−タイプの成分、生成物、化合物、分子または物質、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、請求項４６に記載の組成物。
【請求項４８】
大麻由来の１以上の遺伝子マーカーを同定する方法であって、その１以上の遺伝子マーカーが請求項１に記載の方法により指示される細胞に対する測定可能な作用と相関し、その方法が信号を大麻ＤＮＡ配列データと相関付ける追加工程を含む方法。
【請求項４９】
大麻由来の１以上の遺伝子マーカーであって、請求項１に記載の方法により指示される細胞に対する測定可能な作用と相関し、さらにその信号が大麻ＤＮＡ配列データと相関する、１以上の遺伝子マーカー。
【請求項５０】
１以上の遺伝子マーカーが、ゲノム遺伝子座におけるバリエーション、変異または変化、一塩基多型（ＳＮＰ）、ミニサテライト、ＲＦＬＰ（制限酵素断片長多型）、ＳＳＬＰ（単純配列長多型）、ＡＦＬＰ（増幅断片長多型）、ＲＡＰＤ（多型ＤＮＡのランダム増幅）、ＶＮＴＲ（可変数タンデムリピート）、ＳＳＲ（単純配列リピート）、マイクロサテライト多型、ＳＴＲ（ショートタンデムリピート）、ＳＦＰ（シングルフィーチャー多型）、ＤＡｒＴ（ダイバーシティーアレイテクノロジー）、ＲＡＤマーカー（制限部位関連ＤＮＡマーカー）ヌクレオチドの変化、ｉｎｄｅｌ、欠失、重複、逆位および／または挿入、ならびにそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、請求項４８および４９に記載の遺伝子マーカー。
【請求項５１】
被検体のデータベースであって、請求項１に記載の工程を実装することにより規定された、細胞に対する測定可能な作用と相関する被検体に関するデータを含むデータベース。
【請求項５２】
大麻抽出物またはその画分、カンナビノイド−タイプの成分、非カンナビノイド−タイプの成分、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される被検体を同定するためのハイスループットスクリーニング（ＨＴＳ）方法であって、その被検体がインビトロで細胞毒性または抗増殖活性または抗有糸分裂活性または細胞増殖阻害活性を示すものである、下記の工程を含む方法：
ａ．複数の癌細胞試料を含むアレイを用意する；
ｂ．試験すべき被検体を用意する；その被検体は大麻抽出物またはその画分、カンナビノイド−タイプの成分、非カンナビノイド−タイプの成分、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される；
ｃ．癌細胞試料を被検体と接触させる；
ｄ．インビトロでの細胞毒性または抗増殖活性または抗有糸分裂活性または細胞増殖阻害活性の指標となる信号を検出し、その際、対照試料に対比して癌細胞試料について測定した信号の経時変化はその癌細胞試料に対するその被検体のインビトロでの細胞毒性または抗増殖活性または抗有糸分裂活性または細胞増殖阻害活性の指標となる。
【請求項５３】
大麻抽出物またはその画分、カンナビノイド−タイプの成分、非カンナビノイド−タイプの成分、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される被検体を同定するた
めのハイスループットスクリーニング（ＨＴＳ）方法であって、その被検体が抗腫瘍活性を示し、その方法が請求項５２に記載の工程を含み、さらに下記の工程を含む方法：
ａ．その癌細胞試料に由来する異種移植癌細胞を実験動物に移植する；
ｂ．実験動物を、請求項５２に記載の方法により同定した大麻抽出物またはその画分、カンナビノイド−タイプの成分、非カンナビノイド−タイプの成分、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される被検体で処理する；そして
ｃ．その実験動物の腫瘍増殖をモニタリングする。
【請求項５４】
実験動物が、ヌードマウスである、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
疾患と相関する細胞に対する測定可能な作用をもつ植物性被検体を同定するために有用なプロトコルであって、下記の工程を含むプロトコル：
ａ．被検体のパラメーター、細胞のパラメーター、請求項１に記載の細胞に対する測定可能な作用をもつ被検体を同定するためのハイスループットスクリーニング（ＨＴＳ）結果のデータ、臨床または前臨床データ、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択されるデータを含む入力データを用意する；
ｂ．そのデータを処理する；そして
ｃ．疾患と相関する細胞に対する被検体の測定可能な作用およびそのいずれかの組合わせに関する出力データを電子ディスプレイに表示する。
【請求項５６】
データ処理が、相関付ける、正規化する、較正する、因子分析する、計算する、統計解析する、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される工程を含む、請求項５５に記載のプロトコル。
【請求項５７】
被検体パラメーターが、被検体供給源、被検体加工、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、請求項５５に記載のプロトコル。
【請求項５８】
植物性被検体供給源パラメーターが、供給源の株、供給源の遺伝子型、供給源の表現型、供給源の生育条件、供給源の収穫条件、供給源の栄養状態、供給源の部分または器官、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、請求項５７に記載のプロトコル。
【請求項５９】
供給源の部分または器官が、根、幹、葉、花、種子、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、請求項５８に記載のプロトコル。
【請求項６０】
植物性被検体加工パラメーターが、キュアリング、乾燥、抽出プロセス、脱カルボキシル、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、請求項５７に記載のプロトコル。
【請求項６１】
抽出プロセスが、ブタン、ＣＯ２勾配、エタノール、ドライアイス、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、請求項６０に記載のプロトコル。
【請求項６２】
細胞パラメーターが、細胞供給源、細胞処理、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、請求項５５に記載のプロトコル。
【請求項６３】
細胞供給源が、生検細胞、細胞系、異種移植細胞、変異した細胞または分子、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、請求項６２に記載のプロトコル。
【請求項６４】
細胞処理が、細胞培地処理、血清処理、細胞希釈、細胞周期、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、請求項６２に記載のプロトコル。
【請求項６５】
細胞に対する測定可能な作用が、増殖、アポトーシス、移動、再生、分化、血管新生、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、請求項５５に記載のプロトコル。
【請求項６６】
臨床または前臨床データが、対象へのその被検体の投与経路、投与量、放出形態、癌マーカーレベル、腫瘍サイズモニタリング、転移モニタリング、生存率、１以上の尺度に従って評価したクオリティ・オブ・ライフ、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、請求項５５に記載のプロトコル。
【請求項６７】
投与経路が、舌下、経口、静脈内、局所、皮下、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、請求項６６に記載のプロトコル。
【請求項６８】
放出形態が、徐放、制御放出、持続放出、即時または迅速放出、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、請求項６６に記載のプロトコル。
【請求項６９】
癌マーカーが、ＡＬＫ遺伝子、アルファ−フェトプロテイン（ＡＦＰ）、ベータ−２−ミクログロブリン（Ｂ２Ｍ）、ベータ−ヒト絨毛性ゴナドトロピン（Ｂｅｔａ−ｈＣＧ）、ＢＣＲ−ＡＢＬ融合遺伝子、ＢＲＡＦ変異Ｖ６００Ｅ、ＣＡ１５−３／ＣＡ２７．２９、ＣＡ１９−９、ＣＡ−１２５、カルシトニン、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ＣＤ２０、クロモグラニンＡ（ＣｇＡ）、染色体３、７、１７および９ｐ２１、サイトケラチンフラグメント２１−１、ＥＧＦＲ変異、エストロゲン受容体（ＥＲ）／プロゲステロン受容体（ＰＲ）、フィブリン／フィブリノーゲン、ＨＥ４、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、免疫グロブリン、ＫＩＴ、ＫＲＡＳ変異、乳酸デヒドロゲナーゼ、核マトリックスプロテイン２２、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、サイログロブリン、ウロキナーゼプラスミノーゲンアクチベーター（ｕＰＡ）、プラスミノーゲンアクチベーターインヒビター（ＰＡＩ−１）、５−プロテインシグネチャー（Ｏｖａ１）、２１−遺伝子シグネチャー（Ｏｎｃｏｔｙｐｅ  ＤＸ）、７０−遺伝子シグネチャー（Ｍａｍｍａｐｒｉｎｔ）、ならびにそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、請求項６６に記載のプロトコル。
【請求項７０】
クオリティ・オブ・ライフを評価するための１以上の尺度が、疼痛尺度、クオリティ・オブ・ライフ尺度、癌療法の機能評価尺度、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、請求項６６に記載のプロトコル。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示は、癌細胞のハイスループットスクリーニングのための新規な手段および方法に関する。より具体的には、本発明は細胞に対する測定可能な作用をもつ被検体を同定するためのハイスループットスクリーニング（ＨＴＳ）方法およびそのシステムに関係する。
【背景技術】
【０００２】
カンナビノイドには、植物性カンナビノイド(phytocannabinoid)、内因性の内在性カンナビノイド(endocannabinoid)、および合成カンナビノイドが含まれる。６０を超える植
物性カンナビノイドが大麻植物内に同定されている。カンナビノイドは、それらの薬理活性を内在性カンナビノイドシグナル伝達経路の２つのＧタンパク質共役型受容体(G-protein coupled receptor)（ＧＰＣＲ）であるカンナビノイド受容体タイプ１(カンナビノイ
ド受容体タイプ 1)（ＣＢ１）およびタイプ２（ＣＢ２）により誘発する。これらの受容
体は、４４％のアミノ酸同一性、およびカンナビノイドに対して異なるけれどもなお類似する結合プロファイルを共有する。ＣＢ１受容体は、主に中枢および末梢神経系にみられ、神経の興奮性および伝達物質放出を抑制し、低体温、鎮静、陶酔、および精神状態変化をもたらす。ＣＢ２受容体はより高レベルで末梢神経系、胃腸系および免疫組織にみられる。
【０００３】
多発性硬化症、神経因性疼痛、癌、アテローム性硬化症、発作、心筋梗塞、高血圧症、緑内障、肥満症／メタボリックシンドローム、および骨粗鬆症は、カンナビノイド経路における変化が立証されている疾患のうちの幾つかである。これらの疾患は多因子性であることが認められているので、発現および薬理学的カンナビノイド受容体結合のバリエーションを利用して療法効果を誘導することができた。多数の成分は相乗作用を誘導する可能性があるので、したがって一定の植物抽出物は単一の合成化合物より良好にこの療法効果を達成する可能性がある。
【０００４】
カンナビノイドは癌の処置用としてはまだ承認されていないが、それらの抗腫瘍作用は３０年以上前から知られていた。カンナビノイドが抗癌活性をもつ可能性があるという証拠がある。これは１９７０年代に肺腺癌モデルにおいて認められ、その後の研究によりインビトロおよびインビボで神経膠芽細胞腫、乳癌、前立腺癌、甲状腺癌、結腸癌、皮膚癌、膵臓癌、白血病およびリンパ腫の癌細胞モデルにおける腫瘍増殖阻害が立証された。この抗腫瘍作用が起きる厳密な機序は、増殖性細胞のシグナル伝達経路の抑制、血管新生および細胞移動の阻害、ならびにアポトーシスの誘発および／またはオートファジーの誘発が関係している可能性がある。
【０００５】
種々の悪性および非悪性疾患状態で内在性カンナビノイド系が変化する可能性があるという所見により支持されたカンナビノイドの抗腫瘍効果および作用機序を評価するために、広範な癌細胞およびマウス腫瘍モデルが用いられた。有意レベルのカンナビノイド受容体が、前立腺癌、乳癌、白血病、メラノーマ、および甲状腺癌の細胞系、ならびに結腸直腸癌および肝細胞癌の組織検体にみられる。特に重要なのは、前立腺癌細胞系においてＣＢ１およびＣＢ２の両方の発現が正常な前立腺細胞と比較して上昇しているという事実である。同様に、リンパ腫および乳癌の組織、ならびに幾つかの派生細胞系においてＣＢ１およびＣＢ２が過剰発現している。
【０００６】
単離の次に、合成薬物にされるかまたは精製されて合成薬物にされる単離化合物は、それらの植物性供給源よりはるかに毒性が大きいと報告されている。それらは、より急速に開始し、より大きな強さをもち、より短期間持続する作用を生じる。それらはそれらが由
来する植物の望ましい作用を再現できないと報告されている。
【０００７】
化学療法は、疾患を存続または増強させない状態を体内に作り出すことにより疾患を治癒する試みの一例である。しかし、この療法は不自然であり、毒性が高く、したがって有害である。
【０００８】
癌は致死的疾患であるので、人々は苛酷な副作用を進んで受けるが、療法の効力と毒性の間に生物学的関連性はない。
個別化医療(Personalized Medicine)（ＰＭ）は、個々の患者に合わせて療法をカスタ
マイゼーションすることを提案する新しいアプローチである。２００種類を超える癌が知られており、あるグループの人々のために１つの治療法を見出すことはヒト間の遺伝子多様性によりほぼ不可能である。
【０００９】
以上のことからみて、特に植物抽出物を用いて癌などの多因子疾患を治療するための新規療法戦略に対する以前から求められていたアンメットニーズが依然としてある。
【発明の概要】
【００１０】
したがって本発明の目的の１つは、細胞に対する測定可能な作用をもつ被検体を同定するためのハイスループットスクリーニング（ＨＴＳ）方法であって、下記の工程を含む方法を開示することである：（ａ）複数の細胞試料を含むアレイを用意する；（ｂ）試験すべき少なくとも１つの被検体を用意する；（ｃ）細胞試料を被検体と接触させる；そして（ｄ）細胞に対する測定可能な作用の指標となる信号を検出し、その際、対照試料に対比して細胞試料について測定した信号の経時変化はその細胞試料に対するその被検体の測定可能な作用の指標となる。
【００１１】
本発明の他の目的は、被検体が、カンナビノイド−タイプ、カンナビノイド誘導体、大麻抽出物またはその画分、非カンナビノイド−タイプの成分、生成物、化合物、分子または物質、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、前記に定めた方法を開示することである。
【００１２】
本発明のさらなる目的は、細胞に対する測定可能な作用が、生理学的、遺伝学的、生化学的、構造的なもの、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、前記のいずれかに定めた方法を開示することである。
【００１３】
本発明のさらなる目的は、細胞に対する測定可能な作用が、抗増殖性、再生性、抗炎症性、抗有糸分裂性、分化性、抗転移性、抗血管新生性、アポトーシス性、細胞毒性、細胞変性性、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、前記のいずれかに定めた方法を開示することである。
【００１４】
本発明のさらなる目的は、細胞に対する測定可能な作用が、増殖、移動、吸光、接着、アポトーシス、壊死、オートファジー、細胞毒性、細胞サイズ、運動性、細胞周期、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される生物学的パラメーターに対する作用である、前記のいずれかに定めた方法を開示することである。
【００１５】
本発明のさらなる目的は、癌細胞が、乳癌、卵巣癌、結腸／直腸癌、前立腺癌、メラノーマ、頭頸部癌、膵臓癌、骨肉腫、胃癌、神経膠腫、神経膠芽細胞腫、神経芽細胞腫、白血病、腺癌、副腎癌、肛門癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌、脳／ＣＮＳ癌、子宮頚癌、子宮内膜癌、食道癌、眼癌、胃腸癌、腎癌、白血病、肝癌、肺癌、リンパ腫、多発性骨髄腫、鼻腔癌および副鼻腔癌、鼻咽頭癌、非ホジキンリンパ腫、口腔癌、口腔咽頭癌、骨肉腫、卵巣癌、膵臓癌、陰茎癌、下垂体癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺癌、肉腫、皮膚癌、小腸癌、胃癌、睾丸癌、胸腺癌、甲状腺癌、子宮肉腫、膣癌および外陰癌、ならびにそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、前記のいずれかに定めた方法を開示することである。
【００１６】
本発明のさらなる目的は、細胞試料が、異種移植細胞、同種移植細胞、細胞系、生検細胞、およびその組合わせからなる群から選択される、前記のいずれかに定めた方法を開示することである。
【００１７】
本発明のさらなる目的は、細胞系が、中枢神経系、骨、前立腺、胃、尿路、卵巣、造血およびリンパ系組織、腎臓、甲状腺、皮膚、軟組織、唾液腺、卵巣、肺、胸膜、肝臓、子宮内膜、膵臓、乳腺、上気道消化管、大腸、自律神経節、食道、胆管、小腸、自律神経節、ならびにそのいずれかの組合わせからなる群から選択される癌細胞系である、前記のいずれかに定めた方法を開示することである。
【００１８】
本発明のさらなる目的は、細胞試料が、ヒト細胞系、動物細胞系および異種移植細胞からなる群から選択される、前記のいずれかに定めた方法を開示することである。
本発明のさらなる目的は、細胞試料が、癌細胞、幹細胞、神経細胞、心筋細胞、体細胞、生殖細胞、正常細胞、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、前記のいずれかに定めた方法を開示することである。
【００１９】
本発明のさらなる目的は、信号が、光、発光、蛍光、免疫、細胞数、放射性同位体、非放射性同位体、電気、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、前記のいずれかに定めた方法を開示することである。
【００２０】
本発明のさらなる目的は、細胞に対する測定可能な作用が、ＡＬＫ遺伝子、アルファ−フェトプロテイン(Alpha-feto protein)（ＡＦＰ）、ベータ−２−ミクログロブリン(Beta-2-microglobulin)（Ｂ２Ｍ）、ベータ−ヒト絨毛性ゴナドトロピン(Beta-human chorionic gonadotropin)（Ｂｅｔａ−ｈＣＧ）、ＢＣＲ−ＡＢＬ融合遺伝子、ＢＲＡＦ変異Ｖ６００Ｅ、ＣＡ１５−３／ＣＡ２７．２９、ＣＡ１９−９、ＣＡ−１２５、カルシトニン、癌胎児性抗原(Carcinoembryonic antigen)（ＣＥＡ）、ＣＤ２０、クロモグラニンＡ(Chromogranin A)（ＣｇＡ）、染色体３、７、１７および９ｐ２１、サイトケラチンフラグメント２１−１、ＥＧＦＲ変異、エストロゲン受容体(Estrogen receptor)（ＥＲ）／プロゲステロン受容体(progesterone receptor)（ＰＲ）、フィブリン／フィブリノーゲン、ＨＥ４、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、免疫グロブリン、ＫＩＴ、ＫＲＡＳ変異、乳酸デヒドロゲナーゼ、核マトリックスプロテイン２２、前立腺特異的抗原(Prostate-specific antigen)（ＰＳＡ）、サイログロブリン、ウロキナーゼプラスミノーゲンアクチベーター(Urokinase plasminogen activator)（ｕＰＡ）、プラスミノーゲンアクチベーターインヒビター(plasminogen activator inhibitor)（ＰＡＩ−１）、５−プロテインシグネチャー（Ｏｖａ１）、２１−遺伝子シグネチャー（Ｏｎｃｏｔｙｐｅ  ＤＸ）、７０−遺伝子シグネチャー（Ｍａｍｍａｐｒｉｎｔ）、ならびにそのいずれかの組合わせからなる群から選択される癌マーカーの発現レベルに対する作用である、前記のいずれかに定めた方法を開示することである。
【００２１】
本発明のさらなる目的は、被検体が大麻から抽出され；大麻がカンナビス・サティバ(Cannabis sativa)、インド大麻(Cannabis indica)、カンナビス・ルデラリス(Cannabis ruderalis)、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、前記のいずれかに定めた方法を開示することである。
【００２２】
本発明のさらなる目的は、カンナビノイド−タイプが、カンナビゲロール(Cannabigerol)（ＣＢＧ）タイプ、カンナビクロメン(Cannabichromene)（ＣＢＣ）タイプ、カンナビジオール(Cannabidiol)（ＣＢＤ）タイプ、△９−テトラヒドロカンナビノール(△9 -Tetrahydrocannabinol)（ＴＨＣ）タイプ、△８−ＴＨＣタイプ、カンナビシクロール(Cannabicyclol)（ＣＢＬ）タイプ、カンナビエルソイン(Cannabielsoin)（ＣＢＥ）タイプ、カンナビノール(Cannabinol)（ＣＢＮ）タイプおよびカンナビノジオール(Cannabinodiol)（ＣＢＮＤ）タイプ、カンナビトリオール(Cannabitriol)（ＣＢＴ）タイプ、種々のタイプのカンナビノイド、ならびにそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、前記のいずれかに定めた方法を開示することである。
【００２３】
本発明のさらなる目的は、カンナビノイド−タイプが、さらにテトラヒドロカンナビジオール（ＴＨＣ）またはその誘導体、カンナビジオール（ＣＢＤ）またはその誘導体、ＣＢＧ（カンナビゲロール）、ＣＢＣ（カンナビクロメン）、ＣＢＬ（カンナビシクロール）、ＣＢＶ（カンナビバリン(Cannabivarin)）、ＴＨＣＶ（テトラヒドロカンナビバリン(Tetrahydrocannabivarin)）、ＣＢＤＶ（カンナビジバリン(Cannabidivarin)）、ＣＢＣＶ（カンナビクロメバリン(Cannabichromevarin)）、ＣＢＧＶ（カンナビゲロバリン(Cannabigerovarin)）、ＣＢＧＭ（カンナビゲロール  モノメチルエーテル(Cannabigerol Monomethyl Ether)）、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、前記のいずれかに定めた方法を開示することである。
【００２４】
本発明のさらなる目的は、ＴＨＣまたはその誘導体が、ＴＨＣ、ＴＨＣＶ、ＴＨＣＡ、ＴＨＣＶＡ、デルタ−９−テトラヒドロカンナビノール（△９−ＴＨＣ）およびデルタ−８−テトラヒドロカンナビノール（△８−ＴＨＣ）、ならびにそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、前記のいずれかに定めた方法を開示することである。
【００２５】
本発明のさらなる目的は、カンナビジオール（ＣＢＤ）またはその誘導体が、ＣＢＤ、ＣＢＤＶ、ＣＢＤＡおよびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、前記のいずれかに定めた方法を開示することである。
【００２６】
本発明のさらなる目的は、非カンナビノイド−タイプの成分、生成物、化合物、分子または物質が、テルペノイド、炭化水素、大麻由来の精油、窒素含有化合物、炭水化物、フラボノイド、脂肪酸、アミノ酸、タンパク質、糖タンパク質、酵素、糖類および関連化合物、非カンナビノイドフェノール類、単純アルコール類、アルデヒド類、ケトン類、酸、エステル類、ラクトン類、ステロイド類、テルペン類、フィトステロール類、たとえばカンペステロール、エルゴステロール、Ｅ−シトステロールおよびスティグマステロール、ビタミン類、たとえばビタミンＡおよびビタミンＫ、色素、たとえばカロテンおよびキサントフィル類、元素、たとえばＮａ、Ｋ、Ｃａ、Ｍｇ、Ｆｅ、Ｃｕ、Ｍｎ、ＺｎおよびＨｇ、ならびにそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、前記のいずれかに定めた方法を開示することである。
【００２７】
本発明のさらなる目的は、被検体が、ヒトおよび動物の身体からなる群から選択される供給源に由来するもの、植物から抽出されたもの、合成されたもの、ならびにそのいずれかの組合わせである、前記のいずれかに定めた方法を開示することである。
【００２８】
本発明のさらなる目的は、ＨＴＳが、マイクロタイタープレート、自動コロニーピッカー(automatic colony picker)、ｕＨＴＳまたはウルトラ−ハイスループットスクリーニング(ultra-high-throughput screening)、ＨＴＳ薬物探索のための３Ｄ腫瘍スフェロイド(tumor spheroid)分析法、Ｃｅｌｉｇｏイメージングサイトメーター(Celigo Imaging Cytometer)、オートメーションシステム、高貯蔵容量および高速アクセス用のアッセイプレート貯蔵のためのカルーセルシステム(carousel system)、統合ロボットシステム(integrated robot system)、読出しまたは検出、データ収集プロセス、ならびにそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、前記のいずれかに定めた方法を開示することである。
【００２９】
本発明のさらなる目的は、被検体が、別個に投与された一般的な抗腫瘍または抗炎症療法薬により付与される作用と比較して、細胞に対する測定可能な作用に関する相乗作用を付与する、前記のいずれかに定めた方法を開示することである。
【００３０】
本発明のさらなる目的は、被検体が、別個に投与された一般的な抗腫瘍または抗炎症療法薬により付与される作用と比較して、抗腫瘍または抗炎症活性に関する禁忌作用を付与する、前記のいずれかに定めた方法を開示することである。
【００３１】
本発明のさらなる目的は、細胞に対する測定可能な作用をもつ被検体を同定するためのハイスループットスクリーニング（ＨＴＳ）システムであって、下記のものを含むシステムを開示することである：（ａ）複数の細胞試料を含むアレイ；（ｂ）試験すべき少なくとも１つの被検体；および（ｃ）細胞に対する測定可能な作用の指標となる信号を検出するための手段；その際、対照試料に対比して細胞試料について測定した信号の経時変化はその細胞試料に対するその被検体の測定可能な作用の指標となる。
【００３２】
本発明のさらなる目的は、被検体が、カンナビノイド−タイプ、カンナビノイド誘導体、大麻抽出物またはその画分、非カンナビノイド−タイプの成分、生成物、化合物、分子または物質、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、前記に定めたシステムを開示することである。
【００３３】
本発明のさらなる目的は、細胞に対する測定可能な作用が、生理学的、遺伝学的、生化学的、構造的なもの、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、前記のいずれかに定めたシステムを開示することである。
【００３４】
本発明のさらなる目的は、細胞に対する測定可能な作用が、抗増殖性、再生性、抗炎症性、抗有糸分裂性、分化性、抗転移性、抗血管新生性、アポトーシス性、細胞毒性、細胞変性性、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、前記のいずれかに定めたシステムを開示することである。
【００３５】
本発明のさらなる目的は、細胞に対する測定可能な作用が、増殖、移動、吸光、接着、アポトーシス、壊死、オートファジー、細胞毒性、細胞サイズ、運動性、細胞周期、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される生物学的パラメーターに対する作用である、前記のいずれかに定めたシステムを開示することである。
【００３６】
本発明のさらなる目的は、癌細胞が、乳癌、卵巣癌、結腸／直腸癌、前立腺癌、メラノーマ、頭頸部癌、膵臓癌、骨肉腫、胃癌、神経膠腫、神経膠芽細胞腫、神経芽細胞腫、白血病、腺癌、副腎癌、肛門癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌、脳／ＣＮＳ癌、子宮頚癌、子宮内膜癌、食道癌、眼癌、胃腸癌、腎癌、白血病、肝癌、肺癌、リンパ腫、多発性骨髄腫、鼻腔癌および副鼻腔癌、鼻咽頭癌、非ホジキンリンパ腫、口腔癌、口腔咽頭癌、骨肉腫、卵巣癌、膵臓癌、陰茎癌、下垂体癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺癌、肉腫、皮膚癌、小腸癌、胃癌、睾丸癌、胸腺癌、甲状腺癌、子宮肉腫、膣癌および外陰癌、ならびにそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、前記のいずれかに定めたシステムを開示することである。
【００３７】
本発明のさらなる目的は、細胞試料が、異種移植細胞、同種移植細胞、細胞系、生検細胞、およびその組合わせからなる群から選択される、前記のいずれかに定めたシステムを開示することである。
【００３８】
本発明のさらなる目的は、細胞系が、中枢神経系、骨、前立腺、胃、尿路、卵巣、造血およびリンパ系組織、腎臓、甲状腺、皮膚、軟組織、唾液腺、卵巣、肺、胸膜、肝臓、子宮内膜、膵臓、乳腺、上気道消化管、大腸、自律神経節、食道、胆管、小腸、自律神経節、ならびにそのいずれかの組合わせからなる群から選択される癌細胞系である、前記のいずれかに定めたシステムを開示することである。
【００３９】
本発明のさらなる目的は、細胞試料が、ヒト細胞系、動物細胞系および異種移植細胞からなる群から選択される、前記のいずれかに定めたシステムを開示することである。
本発明のさらなる目的は、細胞試料が、癌細胞、幹細胞、神経細胞、心筋細胞、体細胞、生殖細胞、正常細胞、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、前記のいずれかに定めたシステムを開示することである。
【００４０】
本発明のさらなる目的は、信号が、光、発光、蛍光、免疫、細胞数、放射性同位体、非放射性同位体、電気、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、前記のいずれかに定めたシステムを開示することである。
【００４１】
本発明のさらなる目的は、細胞に対する測定可能な作用が、ＡＬＫ遺伝子、アルファ−フェトプロテイン（ＡＦＰ）、ベータ−２−ミクログロブリン（Ｂ２Ｍ）、ベータ−ヒト絨毛性ゴナドトロピン（Ｂｅｔａ−ｈＣＧ）、ＢＣＲ−ＡＢＬ融合遺伝子、ＢＲＡＦ変異Ｖ６００Ｅ、ＣＡ１５−３／ＣＡ２７．２９、ＣＡ１９−９、ＣＡ−１２５、カルシトニン、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ＣＤ２０、クロモグラニンＡ（ＣｇＡ）、染色体３、７、１７および９ｐ２１、サイトケラチンフラグメント２１−１、ＥＧＦＲ変異、エストロゲン受容体（ＥＲ）／プロゲステロン受容体（ＰＲ）、フィブリン／フィブリノーゲン、ＨＥ４、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、免疫グロブリン、ＫＩＴ、ＫＲＡＳ変異、乳酸デヒドロゲナーゼ、核マトリックスプロテイン２２、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、サイログロブリン、ウロキナーゼプラスミノーゲンアクチベーター（ｕＰＡ）、プラスミノーゲンアクチベーターインヒビター（ＰＡＩ−１）、５−プロテインシグネチャー（Ｏｖａ１）、２１−遺伝子シグネチャー（Ｏｎｃｏｔｙｐｅ  ＤＸ）、７０−遺伝子シグネチャー（Ｍａｍｍａｐｒｉｎｔ）、ならびにそのいずれかの組合わせからなる群から選択される癌マーカーの発現レベルに対する作用である、前記のいずれかに定めたシステムを開示することである。
【００４２】
本発明のさらなる目的は、被検体が大麻から抽出され；大麻がカンナビス・サティバ、インド大麻、カンナビス・ルデラリス、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、前記のいずれかに定めたシステムを開示することである。
【００４３】
本発明のさらなる目的は、カンナビノイド−タイプが、カンナビゲロール（ＣＢＧ）タイプ、カンナビクロメン（ＣＢＣ）タイプ、カンナビジオール（ＣＢＤ）タイプ、△９−テトラヒドロカンナビノール（ＴＨＣ）タイプ、△８−ＴＨＣタイプ、カンナビシクロール（ＣＢＬ）タイプ、カンナビエルソイン（ＣＢＥ）タイプ、カンナビノール（ＣＢＮ）タイプおよびカンナビノジオール（ＣＢＮＤ）タイプ、カンナビトリオール（ＣＢＴ）タイプ、種々のタイプのカンナビノイド、ならびにそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、前記のいずれかに定めたシステムを開示することである。
【００４４】
本発明のさらなる目的は、カンナビノイド−タイプが、さらにテトラヒドロカンナビジオール（ＴＨＣ）またはその誘導体、カンナビジオール（ＣＢＤ）またはその誘導体、ＣＢＧ（カンナビゲロール）、ＣＢＣ（カンナビクロメン）、ＣＢＬ（カンナビシクロール）、ＣＢＶ（カンナビバリン）、ＴＨＣＶ（テトラヒドロカンナビバリン）、ＣＢＤＶ（カンナビジバリン）、ＣＢＣＶ（カンナビクロメバリン）、ＣＢＧＶ（カンナビゲロバリン）、ＣＢＧＭ（カンナビゲロール  モノメチルエーテル）、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、前記のいずれかに定めたシステムを開示することである。
【００４５】
本発明のさらなる目的は、ＴＨＣまたはその誘導体が、ＴＨＣ、ＴＨＣＶ、ＴＨＣＡ、ＴＨＣＶＡ、デルタ−９−テトラヒドロカンナビノール（△９−ＴＨＣ）およびデルタ−８−テトラヒドロカンナビノール（△８−ＴＨＣ）、ならびにそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、前記のいずれかに定めたシステムを開示することである。
【００４６】
本発明のさらなる目的は、カンナビジオール（ＣＢＤ）またはその誘導体が、ＣＢＤ、ＣＢＤＶ、ＣＢＤＡおよびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、前記のいずれかに定めたシステムを開示することである。
【００４７】
本発明のさらなる目的は、非カンナビノイド−タイプの成分、生成物、化合物、分子または物質が、テルペノイド、炭化水素、大麻由来の精油、窒素含有化合物、炭水化物、フラボノイド、脂肪酸、アミノ酸、タンパク質、糖タンパク質、酵素、糖類および関連化合物、非カンナビノイドフェノール類、単純アルコール類、アルデヒド類、ケトン類、酸、エステル類、ラクトン類、ステロイド類、テルペン類、フィトステロール類、たとえばカンペステロール、エルゴステロール、Ｅ−シトステロールおよびスティグマステロール、ビタミン類、たとえばビタミンＡおよびビタミンＫ、色素、たとえばカロテンおよびキサントフィル類、元素、たとえばＮａ、Ｋ、Ｃａ、Ｍｇ、Ｆｅ、Ｃｕ、Ｍｎ、ＺｎおよびＨｇ、ならびにそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、前記のいずれかに定めたシステムを開示することである。
【００４８】
本発明のさらなる目的は、被検体が、ヒトおよび動物の身体からなる群から選択される供給源に由来するもの、植物から抽出されたもの、合成されたもの、ならびにそのいずれかの組合わせである、前記のいずれかに定めたシステムを開示することである。
【００４９】
本発明のさらなる目的は、ＨＴＳが、マイクロタイタープレート、自動コロニーピッカー、ｕＨＴＳまたはウルトラ−ハイスループットスクリーニング、ＨＴＳ薬物探索のための３Ｄ腫瘍スフェロイド分析法、Ｃｅｌｉｇｏイメージングサイトメーター、オートメーションシステム、高貯蔵容量および高速アクセス用のアッセイプレート貯蔵のためのカルーセルシステム、統合ロボットシステム、読出しまたは検出、データ収集プロセス、ならびにそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、前記のいずれかに定めたシステムを開示することである。
【００５０】
本発明のさらなる目的は、被検体が、別個に投与された一般的な抗腫瘍または抗炎症療法薬により付与される作用と比較して、細胞に対する測定可能な作用に関する相乗作用を付与する、前記のいずれかに定めたシステムを開示することである。
【００５１】
本発明のさらなる目的は、被検体が、別個に投与された一般的な抗腫瘍または抗炎症療法薬により付与される作用と比較して、抗腫瘍または抗炎症活性に関する禁忌作用を付与する、前記のいずれかに定めたシステムを開示することである。
【００５２】
本発明のさらなる目的は、１以上のコンピューターにより実装された場合、細胞に対する測定可能な作用の指標となる信号に関するデータを処理することにより、事前選択した細胞試料についての１以上の被検体の細胞に対する測定可能な作用に関するデータをその１以上のコンピューターに提示させる指示を含み、その際、対照試料に対比して細胞試料について測定した信号の経時変化はその細胞試料に対するその被検体の測定可能な作用の指標となる、非一過性コンピューター可読媒体を開示することである。
【００５３】
本発明のさらなる目的は、癌タイプの疾患または炎症性疾患の処置に使用するための、請求項１に記載の方法に従って選択した療法有効量の被検体を含む組成物または本質的に療法有効量の被検体を含む抽出物であって、抗腫瘍活性もしくは抗炎症活性またはその相乗作用を有する組成物を開示することである。
【００５４】
本発明のさらなる目的は、被検体が、カンナビノイド−タイプ、カンナビノイド誘導体、大麻抽出物またはその画分、非カンナビノイド−タイプの成分、生成物、化合物、分子または物質、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、前記に定めた組成物を開示することである。
【００５５】
本発明のさらなる目的は、大麻由来の１以上の遺伝子マーカーを同定する方法であって、その１以上の遺伝子マーカーが前記のいずれかに定めた方法により指示される細胞に対する測定可能な作用と相関し、その方法が信号を大麻ＤＮＡ配列データと相関付ける追加工程を含む方法を開示することである。
【００５６】
本発明のさらなる目的は、大麻由来の１以上の遺伝子マーカーであって、前記のいずれかに定めた方法により指示される細胞に対する測定可能な作用と相関し、さらにその信号が大麻ＤＮＡ配列データと相関する、１以上の遺伝子マーカーを開示することである。
【００５７】
本発明のさらなる目的は、１以上の遺伝子マーカーが、ゲノム遺伝子座におけるバリエーション、変異または変化、一塩基多型(single nucleotide polymorphism)（ＳＮＰ）、ミニサテライト、ＲＦＬＰ（制限酵素断片長多型(Restriction fragment length polymorphism)）、ＳＳＬＰ（単純配列長多型(Simple sequence length polymorphism)）、ＡＦＬＰ（増幅断片長多型(Amplified fragment length polymorphism)）、ＲＡＰＤ（多型ＤＮＡのランダム増幅(Random amplification of polymorphic DNA)）、ＶＮＴＲ（可変数タンデムリピート(Variable number tandem repeat)）、ＳＳＲ（単純配列リピート(Simple sequence repeat)）、マイクロサテライト多型、ＳＴＲ（ショートタンデムリピート(Short tandem repeat)）、ＳＦＰ（シングルフィーチャー多型(Single feature polymorphism)）、ＤＡｒＴ（ダイバーシティーアレイテクノロジー(Diversity Arrays Technology)）、ＲＡＤマーカー（制限部位関連ＤＮＡマーカー(Restriction site associated DNA marker)）ヌクレオチドの変化、ｉｎｄｅｌ（挿入および欠失）、欠失、重複、逆位(inversion)および／または挿入、ならびにそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、前記のいずれかに定めた遺伝子マーカーを開示することである。
【００５８】
本発明のさらなる目的は、被検体のデータベースであって、前記のいずれかに記載の工程を実装することにより規定された、細胞に対する測定可能な作用と相関する被検体に関するデータを含むデータベースを開示することである。
【００５９】
本発明のさらなる目的は、大麻抽出物またはその画分、カンナビノイド−タイプの成分、非カンナビノイド−タイプの成分、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される被検体を同定するためのハイスループットスクリーニング（ＨＴＳ）システムであって、その被検体がインビトロで細胞毒性または抗増殖活性または抗有糸分裂活性または細胞増殖阻害活性を示すものであるシステムを開示することである。そのシステムは下記のものを含む：（ａ）複数の癌細胞試料を含むアレイ；（ｂ）試験すべき少なくとも１つの被検体；その被検体は大麻抽出物またはその画分、カンナビノイド−タイプの成分、非カンナビノイド−タイプの成分、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される；ならびに（ｃ）細胞に対するインビトロでの細胞毒性または抗増殖活性または抗有糸分裂活性または細胞増殖阻害活性の指標となる信号を検出するための手段；その際、対照試料に対比して癌細胞試料について測定した信号の経時変化はその癌細胞試料に対するその被検体のインビトロでの細胞毒性または抗増殖活性または抗有糸分裂活性または細胞増
殖阻害活性の指標となる。
【００６０】
本発明のさらなる目的は、大麻抽出物またはその画分、カンナビノイド−タイプの成分、非カンナビノイド−タイプの成分、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される被検体を同定するためのハイスループットスクリーニング（ＨＴＳ）方法であって、その被検体がインビトロで細胞毒性または抗増殖活性または抗有糸分裂活性または細胞増殖阻害活性を示すものである方法を開示することである。前記方法は下記の工程を含む：（ａ）複数の癌細胞試料を含むアレイを用意する；（ｂ）試験すべき被検体を用意する；その被検体は大麻抽出物またはその画分、カンナビノイド−タイプの成分、非カンナビノイド−タイプの成分、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される；（ｃ）癌細胞試料を被検体と接触させる；そして（ｄ）インビトロでの細胞毒性または抗増殖活性または抗有糸分裂活性または細胞増殖阻害活性の指標となる信号を検出し、その際、対照試料に対比して癌細胞試料について測定した信号の経時変化はその癌細胞試料に対するその被検体のインビトロでの細胞毒性または抗増殖活性または抗有糸分裂活性または細胞増殖阻害活性の指標となる。
【００６１】
本発明のさらなる目的は、大麻抽出物またはその画分、カンナビノイド−タイプの成分、非カンナビノイド−タイプの成分、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される被検体を同定するためのハイスループットスクリーニング（ＨＴＳ）方法であって、その被検体が抗腫瘍活性を示し、その方法が前記のいずれかに定めた方法の工程を含み、さらに下記の工程を含む方法を開示することである：（ａ）その癌細胞試料に由来する異種移植癌細胞を実験動物に移植する；（ｂ）実験動物を、前記のいずれかに定めた方法により同定した大麻抽出物またはその画分、カンナビノイド−タイプの成分、非カンナビノイド−タイプの成分、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される被検体で処理する；そして（ｃ）その実験動物の腫瘍増殖をモニタリングする。
【００６２】
本発明のさらなる目的は、実験動物が、ヌードマウスである、前記のいずれかに定めた方法を開示することである。
本発明のさらなる目的は、疾患と相関する細胞に対する測定可能な作用をもつ植物性被検体を同定するために有用なプロトコルを開示することである。そのプロトコルは下記の工程を含む：（ａ）被検体のパラメーター、細胞のパラメーター、請求項１に記載の細胞に対する測定可能な作用をもつ被検体を同定するためのハイスループットスクリーニング（ＨＴＳ）結果のデータ、臨床または前臨床データ、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択されるデータを含む入力データを用意する；（ｂ）そのデータを処理する；そして（ｃ）疾患と相関する細胞に対する被検体の測定可能な作用およびそのいずれかの組合わせに関する出力データを電子ディスプレイに表示する。
【００６３】
本発明のさらなる目的は、データ処理が、相関付ける、正規化する、較正する、因子分析する、計算する、統計解析する、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される工程を含む、前記に定めたプロトコルを開示することである。
【００６４】
本発明のさらなる目的は、被検体パラメーターが、被検体供給源、被検体加工、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、前記のいずれかに定めたプロトコルを開示することである。
【００６５】
本発明のさらなる目的は、植物性被検体供給源パラメーターが、供給源の株、供給源の遺伝子型、供給源の表現型、供給源の生育条件、供給源の収穫条件、供給源の栄養状態、供給源の部分または器官、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、前記のいずれかに定めたプロトコルを開示することである。
【００６６】
本発明のさらなる目的は、供給源の部分または器官が、根、幹、葉、花、種子、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、前記のいずれかに定めたプロトコルを開示することである。
【００６７】
本発明のさらなる目的は、植物性被検体加工パラメーターが、キュアリング、乾燥、抽出プロセス、脱カルボキシル、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、前記のいずれかに定めたプロトコルを開示することである。
【００６８】
本発明のさらなる目的は、抽出プロセスが、ブタン、ＣＯ２勾配、エタノール、ドライアイス、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、前記のいずれかに定めたプロトコルを開示することである。
【００６９】
本発明のさらなる目的は、細胞パラメーターが、細胞供給源、細胞処理、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、前記のいずれかに定めたプロトコルを開示することである。
【００７０】
本発明のさらなる目的は、細胞供給源が、生検細胞、細胞系、異種移植細胞、変異した細胞または分子、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、前記のいずれかに定めたプロトコルを開示することである。
【００７１】
本発明のさらなる目的は、細胞処理が、細胞培地処理、血清処理、細胞希釈、細胞周期、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、前記のいずれかに定めたプロトコルを開示することである。
【００７２】
本発明のさらなる目的は、細胞に対する測定可能な作用が、増殖、アポトーシス、移動、再生、分化、血管新生、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、前記のいずれかに定めたプロトコルを開示することである。
【００７３】
本発明のさらなる目的は、臨床または前臨床データが、対象へのその被検体の投与経路、投与量、放出形態、癌マーカーレベル、腫瘍サイズモニタリング、転移モニタリング、生存率、１以上の尺度に従って評価したクオリティ・オブ・ライフ、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、前記のいずれかに定めたプロトコルを開示することである。
【００７４】
本発明のさらなる目的は、投与経路が、舌下、経口、静脈内、局所、皮下、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、前記のいずれかに定めたプロトコルを開示することである。
【００７５】
本発明のさらなる目的は、放出形態が、徐放、制御放出、持続放出、即時または迅速放出、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、前記のいずれかに定めたプロトコルを開示することである。
【００７６】
本発明のさらなる目的は、癌マーカーが、ＡＬＫ遺伝子、アルファ−フェトプロテイン（ＡＦＰ）、ベータ−２−ミクログロブリン（Ｂ２Ｍ）、ベータ−ヒト絨毛性ゴナドトロピン（Ｂｅｔａ−ｈＣＧ）、ＢＣＲ−ＡＢＬ融合遺伝子、ＢＲＡＦ変異Ｖ６００Ｅ、ＣＡ１５−３／ＣＡ２７．２９、ＣＡ１９−９、ＣＡ−１２５、カルシトニン、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ＣＤ２０、クロモグラニンＡ（ＣｇＡ）、染色体３、７、１７および９ｐ２１、サイトケラチンフラグメント２１−１、ＥＧＦＲ変異、エストロゲン受容体（ＥＲ）／プロゲステロン受容体（ＰＲ）、フィブリン／フィブリノーゲン、ＨＥ４、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、免疫グロブリン、ＫＩＴ、ＫＲＡＳ変異、乳酸デヒドロゲナーゼ、核マトリック
スプロテイン２２、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、サイログロブリン、ウロキナーゼプラスミノーゲンアクチベーター（ｕＰＡ）、プラスミノーゲンアクチベーターインヒビター（ＰＡＩ−１）、５−プロテインシグネチャー（Ｏｖａ１）、２１−遺伝子シグネチャー（Ｏｎｃｏｔｙｐｅ  ＤＸ）、７０−遺伝子シグネチャー（Ｍａｍｍａｐｒｉｎｔ）、ならびにそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、前記のいずれかに定めたプロトコルを開示することである。
【００７７】
本発明のさらなる目的は、クオリティ・オブ・ライフを評価するための１以上の尺度が、疼痛尺度、クオリティ・オブ・ライフ尺度、癌療法の機能評価尺度、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、前記のいずれかに定めたプロトコルを開示することである。
【図面の簡単な説明】
【００７８】
図面と関連付けた以下の態様の記載を参照して、開示する主題の限定ではない代表的な態様を記載する。図面は一般に正確な尺度で示したものではなく、サイズはいずれも代表例であって必然的に限定ではない。対応または類似する構成要素を場合により同一の数字または文字により表示する。
【図１】図１は、カンナビノイド分析に関する試験報告書を提示する。
【図２】図２は、イメージングデバイスＩｍａｇｅＸｐｒｅｓｓ  ｍｉｃｒｏの写真である。
【図３Ａ】図３は、ＭｅｔａＸｐｒｅｓｓおよびＣｅｌｌ  Ｈｅａｌｔｈモジュールを用いて分析した細胞のイメージを提示する。図３Ａは、Ｈｏｅｃｈｓｔ  ３３３４２（青色）、ＹＯ−ＰＲＯ−１（緑色）およびＰＩ（赤色）をイメージする３種類のフィルターを提示する。
【図３Ｂ】図３Ｂは、Ｃｅｌｌ  Ｈｅａｌｔｈモジュールによる蛍光マーカーの強度に従った細胞のセグメンテーションを示す。
【図３Ｃ】図３Ｃは、各ウェルの後期アポトーシス細胞の測定を示すスクリーンディスプレイの例である。
【図４】図４は、選択された大麻抽出物で処理した種々の癌細胞系のイメージを対照と比較したものを提示する。
【図５】図５は、種々の大麻抽出物で処理した前立腺癌細胞系のイメージを対照と比較したものを提示する。
【図６】図６は、種々のＴＨＣ対ＣＢＤ比をもつ選択された大麻抽出物で処理した神経膠芽細胞腫細胞系のイメージを提示する。
【図７】図７は、３タイプのヒト癌細胞系に対する５種類の大麻抽出物の作用をグラフで提示する。
【図８】図８は、選択された大麻抽出物がＰＣ３前立腺癌細胞に及ぼす作用を示すイメージを提示する。
【図９】図９は、疾患と相関する細胞に対する測定可能な作用をもつ植物性被検体を同定するためのプロトコルを説明するスキームを提示する。
【発明を実施するための形態】
【００７９】
以下の好ましい態様の詳細な記述において、その一部をなす添付の図面を参照する；それらは本発明を実施できる具体的態様を図示したものである。本発明の範囲から逸脱することなく、他の態様を使用でき、構造変化をなしうることは理解される。本発明は特許請求の範囲の記載に従って、これらの具体的な詳細事項の一部または全部を含まずに実施できる。明確にするために、本発明が不必要に不明瞭にならないように当技術分野で既知の技術的事項は詳述しなかった。
【００８０】
本発明は、細胞に対する測定可能な作用をもつ被検体を同定するためのハイスループッ
トスクリーニング（ＨＴＳ）方法を提供する。前記方法は下記の工程を含む：（ａ）複数の細胞試料を含むアレイを用意する；（ｂ）試験すべき少なくとも１つの被検体を用意する；（ｃ）細胞試料を被検体と接触させる；そして（ｄ）細胞に対する測定可能な作用の指標となる信号を検出し、その際、対照試料に対比して細胞試料について測定した信号の経時変化はその細胞試料に対するその被検体の測定可能な作用の指標となる。
【００８１】
特定の側面によれば、本発明は、大麻抽出物またはその画分、カンナビノイド−タイプの成分、非カンナビノイド−タイプの成分、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される被検体を同定するためのハイスループットスクリーニング（ＨＴＳ）方法を提供する。被検体がインビトロで細胞毒性または抗増殖活性または抗有糸分裂活性または細胞増殖阻害活性を示すものがその範囲に含まれる。そのような方法は下記の工程を含む：（ａ）複数の癌細胞試料を含むアレイを用意する；（ｂ）試験すべき被検体を用意する；その被検体は大麻抽出物またはその画分、カンナビノイド−タイプの成分、非カンナビノイド−タイプの成分、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される；（ｂ）癌細胞試料を被検体と接触させる；（ｃ）インビトロでの細胞毒性または抗増殖活性または抗有糸分裂活性または細胞増殖阻害活性の指標となる信号を検出し、その際、対照試料に対比して癌細胞試料について測定した信号の経時変化はその癌細胞試料に対するその被検体のインビトロでの細胞毒性または抗増殖活性または抗有糸分裂活性または細胞増殖阻害活性の指標となる。
【００８２】
本明細書中で用いる用語“約”は、規定した量または尺度または数値の±２５％を表わす。
以下において用いる用語“ハイスループットスクリーニング”または“ＨＴＳ”は、特に生物学および化学の分野で用いる科学的実験のためのいずれかの方法を表わす。スクリーニング設備には、ロボット工学機器、データ処理および制御ソフトウェア、リキッドハンドリングデバイス(liquid handling device)、ならびに研究者が数百万の化学的、遺伝学的または薬理学的試験を迅速に実施できる高感度検出器の使用が含まれる。このプロセスにより、特定の生体分子経路を調節する有効な化合物もしくは被検体、抗体または遺伝子を迅速に同定できる。これらの実験の結果は、薬物設計のための、および生物学における特定の生化学的プロセスの相互作用または役割を理解するための出発点を提供する。
【００８３】
ここで自動操作はＨＴＳ手法の重要な要素であることが認められる。一般に、１以上のロボットからなる統合ロボットシステムが、試料および試薬の添加、混合、インキュベーション、および最後に読出しまたは検出のために、アッセイ−マイクロプレートをステーションからステーションへ輸送する。ＨＴＳシステムは通常は多数の試料を同時に調製、インキュベーションおよび分析し、データ収集プロセスをさらに加速することができる。用語ＨＴＳがさらに１日当たり１００，０００を超える化合物をスクリーニングするｕＨＴＳまたはウルトラ−ハイスループットスクリーニングに関係することはさらに本発明の範囲内である。
【００８４】
追加の方法またはＨＴＳ方法、たとえばＨＴＳ薬物探索のためのＣｅｌｉｇｏイメージングサイトメーターを用いる３Ｄ腫瘍スフェロイド分析法、オートメーションシステム、たとえば高貯蔵容量および高速アクセス用のアッセイプレート貯蔵のためのカルーセルシステム、ならびに他のいずれかのＨＴＳシステムまたは手法を本発明に用いることはさらに本発明の範囲内である。
【００８５】
以下において用いる用語“被検体”は、一般に分析操作において着目する成分、分子、物質、または化学的成分もしくは植物成分を表わす。分析法はその被検体の特性を測定するためにデザインされる。
【００８６】
用語“大麻(cannabis)”は、以下において３つの異なる種、カンナビス・サティバ(Cannabis sativa)、インド大麻(Cannabis indica)、カンナビス・ルデラリス(Cannabis ruderalis)を含む顕花植物の属を表わす。
【００８７】
大麻抽出物もしくは大麻濃縮物またはその画分を細胞に対する測定可能な作用をスクリーニングするための細胞試料に対する被検体として用いることは、本発明の範囲内である。そのような抽出物はカンナビノイド−タイプの化合物または画分、非カンナビノイド−タイプの化合物または画分、およびその組合わせを含有する可能性がある。
【００８８】
以下において用いる用語“非カンナビノイド”または“非カンナビノイド−タイプ”は、カンナビノイドではないいずれかの化合物または成分を表わす。
用語“カンナビノイド”は、以下において、細胞上のカンナビノイド受容体および他のシグナル伝達受容体またはタンパク質に作用する広範な化学物質のクラスであって、脳、心臓、肝臓、免疫系および肺において神経伝達物質放出を抑制または活性化するものを表わす。これらの受容体タンパク質には、内在性カンナビノイド（ヒトおよび動物の体内で自然に生成するもの）、植物性カンナビノイド（大麻および他の幾つかの植物中にみられるもの）、および合成カンナビノイド（化学的に製造されるもの）が含まれる。最も注目すべきカンナビノイドは植物性カンナビノイドである△９−テトラヒドロカンナビノール（ＴＨＣ）、すなわち大麻の主な向精神化合物である。カンナビジオール（ＣＢＤ）はこの植物のもうひとつの主要な成分であり、その植物樹脂の抽出物において最大４０％を占める。異なる作用を示す少なくとも８５の異なるカンナビノイドが大麻から単離されている。同定されたカンナビノイドの限定ではないリストを提示しているhttp://www.medicinalgenomics.com/wp-content/uploads/2011/12/Chemical-constituents-of-cannabis.pdf
をここに参照し、それの全体を本明細書に援用する。本発明は、すべてのカンナビノイド、たとえば下記のクラスまたはグループに属するカンナビノイドを含む：
・  カンナビゲロール（ＣＢＧ）タイプ：植物において形成される生物起源カンナビノイドであることが示されたＣＢＧおよびそれの前駆体であるカンナビゲロール酸（ＣＢＧＡ）を含む。プロピル側鎖アナログおよびモノメチルエーテル誘導体はこのグループの他のカンナビノイドである。
【００８９】
・  カンナビクロメン（ＣＢＣ）タイプ：５つのＣＢＣ−タイプ  カンナビノイド、主にＣ５−アナログとして存在するものが同定された。
・  カンナビジオール（ＣＢＤ）タイプ：Ｃ１〜Ｃ５側鎖をもつ７つのＣＢＤ−タイプ
カンナビノイドが記載されている。ＣＢＤおよびそれの対応する酸ＣＢＤＡが繊維タイプの大麻（工業用の麻）中に最も多量に存在するカンナビノイドである。ＣＢＤＡは最初に見出されたカンナビノイド酸であった。
【００９０】
・  △９−テトラヒドロカンナビノール（ＴＨＣ）タイプ：Ｃ１〜Ｃ５側鎖をもつ９つのＴＨＣ−タイプ  カンナビノイドが知られている。主要な生物起源前駆体はＴＨＣ酸Ａであり、一方、ＴＨＣ酸Ｂはこれよりはるかに少ない程度で存在する。ＴＨＣは向精神性の主な根源である；その酸類は精神活性ではない。ＴＨＣ（６ａ，１０ａ−ｔｒａｎｓ−６ａ，７，８，１０ａ−テトラヒドロ−６，６，９−トリメチル−３−ペンチル−６Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］ピラン−１−オール）もこのグループに含まれる。
【００９１】
・  △８−ＴＨＣタイプ：△８−ＴＨＣおよびそれの酸前駆体は、それぞれＴＨＣおよびＴＨＣ酸のアーチファクトであると考えられる。８，９二重結合位置は熱力学的に９，１０位置より安定である。△８−ＴＨＣはＴＨＣよりおおよそ２０％活性が低い。
【００９２】
・  カンナビシクロール（ＣＢＬ）タイプ：典型的な環Ａの代わりに５原子環およびＣ１−架橋を特徴とする３つのカンナビノイドが知られている：ＣＢＬ、それの酸前駆体、
およびＣ３側鎖アナログ。ＣＢＬはＣＢＣから熱により生成したアーチファクトであることが知られている。
【００９３】
・  カンナビエルソイン（ＣＢＥ）タイプ：ＣＢＤから形成されたアーチファクトである５つのＣＢＥ−タイプ  カンナビノイドには、ＣＢＥおよびそれの酸前駆体ＡおよびＢが含まれる。
【００９４】
・  カンナビノール（ＣＢＮ）およびカンナビノジオール（ＣＢＮＤ）タイプ：６つのＣＢＮ−タイプおよび２つのＣＢＮＤ−タイプ  カンナビノイドが知られている。環Ａが芳香族化しており、それらはそれぞれＴＨＣおよびＣＢＤの酸化アーチファクトである。大麻製品中のそれらの濃度は生育年数および貯蔵条件に依存する。
【００９５】
・  カンナビトリオール（ＣＢＴ）タイプ：９つのＣＢＴ−タイプ  カンナビノイドが同定され、それらは追加ＯＨ置換を特徴とする。ＣＢＴ自体は両異性体の形態およびラセミ体で存在し、これに対しＣＢＴＶの２つの異性体（９−ａ−および９−ｂ−ヒドロキシ）が同定された。ＣＢＤＡテトラヒドロカンナビトリオールエステル（９−ヒドロキシ基のエステル）は、報告された唯一の天然カンナビノイドのエステルである。
【００９６】
・  種々のタイプ：さまざまな異例の構造をもつ１１のカンナビノイド、たとえばフラン環をもつもの（デヒドロカンナビフラン、カンナビフラン）、カルボニル官能基をもつもの（カンナビクロマノン(cannabichromanon)、１０−オキソ−Ｇ−６ａ−テトラヒドロカンナビノール）、またはテトラヒドロキシ置換をもつもの（カンナビリプソール(cannabiripsol)）が知られている。
【００９７】
用語“カンナビノイド抽出物”は、以下において、大麻植物に由来するいずれかの抽出物または濃縮物であって、少なくとも１つのカンナビノイドを含有するものを表わす。カンナビノイドは、多数の既知の抽出法のいずれか１つ、たとえば非炭化水素抽出法および炭化水素抽出法を用いて大麻植物から抽出できる。
【００９８】
以下において用いる用語“カンナビノイド画分”は、分離または精製または分画プロセスにより処理した大麻抽出物を表わす。より具体的には、それはカンナビノイド−タイプの一部または要素を含有する精製または部分精製した大麻抽出物を表わす。別態様において、カンナビノイド画分は合成カンナビノイドを含有することができる。
【００９９】
用語“カンナビジオール”または“ＣＢＤ”は、以下において、大麻中に同定された少なくとも８５の有効カンナビノイドのうちの１つを表わす。カンナビジオールは主要な植物性カンナビノイドであり、植物抽出物の最大４０％を占める。ＣＢＤはテトラヒドロカンナビジオール（ＴＨＣ）より広範な医療用途をもつと考えられる。カンナビジオールはＣＢ１およびＣＢ２受容体に対してきわめて低い親和性をもつが、それらのアゴニストの間接的アンタゴニストとして作用する。ＣＢＤは、ＣＢ１受容体密度を高めることにより、または他のＣＢ１関連機序を介して、ＴＨＣの作用を増強することができる。それはＣＢ２受容体のインバースアゴニストでもある。ＣＢＤは抗増殖、プロアポトーシス作用をもち、かつ癌細胞の移動、接着および侵入を阻害する。用語ＣＢＤは、カンナビジバリン（ＣＢＤＶ）、すなわちカンナビジオール（ＣＢＤ）のホモログ、およびカンナビジオール酸（ＣＢＤＡ）をも表わす。
【０１００】
用語“テトラヒドロカンナビジオール”または“ＴＨＣ”は、以下において、大麻植物の主要な精神活性成分（またはカンナビノイド）を表わす。ＴＨＣはカンナビノイド受容体であるＣＢ１およびＣＢ２受容体において部分アゴニスト活性をもち、コルチゾールレベルを高めることが知られている。用語ＴＨＣがさらに、テトラヒドロカンナビバリン（
ＴＨＣＶまたはＴＨＶ）、すなわちテトラヒドロカンナビノール（ＴＨＣ）のホモログ、およびテトラヒドロカンナビノール酸（ＴＨＣＡ、２−ＣＯＯＨ−ＴＨＣ）、すなわちテトラヒドロカンナビノール（ＴＨＣ）の生合成前駆体を表わすことは、さらに本発明の範囲に含まれる。
【０１０１】
カンナビノール（ＣＢＮ）、カンナビクロメン（ＣＢＣ）、ＣＢＤ、カンナビゲロール（ＣＢＧ）およびＴＨＣの酸類（ＣＢＤＡ、ＣＢＧＡ、ＴＨＣＡ）およびプロピルホモログ（ＣＢＤＶ、ＣＢＧＶ、ＴＨＣＶ）、ならびにテトラヒドロカンナビバリン酸（ＴＨＣ−ＶおよびＴＨＣ−ＶＡ）も本発明の組成物または配合物の任意選択的活性成分（単数または複数）として含まれることを明記する。
【０１０２】
大麻抽出物またはその画分は、下記のものからなる群から選択される非カンナビノイド−タイプの成分を含む可能性がある：テルペノイド、炭化水素、大麻由来の精油、窒素含有化合物、炭水化物、フラボノイド、脂肪酸、非カンナビノイドフェノール類、単純アルコール類、アルデヒド類、ケトン類、酸、エステル類、ラクトン類、フィトステロール類、たとえばカンペステロール、エルゴステロール、Ｅ−シトステロールおよびスティグマステロール、ビタミンＫ、色素、たとえばカロテンおよびキサントフィル類、元素、たとえばＮａ、Ｋ、Ｃａ、Ｍｇ、Ｆｅ、Ｃｕ、Ｍｎ、ＺｎおよびＨｇ、ならびにそのいずれかの組合わせ。http://www.medicinalgenomics.com/wp-content/uploads/2011/12/Chemical-constituents-of-cannabis.pdfの文献が参照され、それの全体を本明細書に援用する。
４８３の異なる同定可能な化学成分が大麻中に存在するのが知られていることは、さらに本発明の範囲内である。最も独特な特定クラスの化合物はカンナビノイド（６６種類が知られている）であり、それらは大麻植物にのにみ存在することが知られている。大麻植物の他の成分は下記のものである：窒素系化合物（２７種類が知られている）、アミノ酸（１８）、タンパク質（３）、糖タンパク質（６）、酵素（２）、糖類および関連化合物（３４）、炭化水素（５０）、単純アルコール類（７）、アルデヒド類（１３）、ケトン類（１３）、単純酸（２１）、脂肪酸（２２）、単純エステル（１２）、ラクトン類（１）、ステロイド類（１１）、テルペン類（１２０）、非カンナビノイドフェノール類（２５）、フラボノイド類（２１）、ビタミン類（１）［ビタミンＡ］、色素（２）、および元素（９）。http://medicalmarijuana.procon.org/view.answers.php?questionID=000636
の全体を本明細書に援用することはさらに本発明の範囲内である。
【０１０３】
用語“カンナビノイド受容体”は、以下において、Ｇタンパク質共役型受容体スーパーファミリーに属する細胞膜受容体のクラスを表わす。現在、ＣＢ１およびＣＢ２と呼ばれる２つの既知サブタイプのカンナビノイド受容体がある。ＣＢ１受容体は主に脳に発現するが、肺、肝臓および腎臓にも発現する。ＣＢ２受容体は主に免疫系、消化器系および造血細胞に発現する。
【０１０４】
本発明の方法およびシステムによりスクリーニングされる細胞系には下記に詳述される細胞リストが含まれる（ただし、それらに限定されない）ことはさらに本発明の範囲内である；http://www.broadinstitute.org/ccle/data/browseSamples?actionMethod=pages%2Fsearch%2FsearchResult.xhtml%3AbrowseSamplesBean.checkSkipFirstStep%28%29&conversationPropagation=begin；それの全体を本明細書に援用する。
【０１０５】
以下において用いる用語“クオリティ・オブ・ライフ尺度”は、処置後の患者のクオリティ・オブ・ライフを評価するための尺度を表わす。そのような尺度の限定ではない例には、疼痛尺度、たとえばフェイス・ペイン・スケール(Faces Pain Scale)、ウォン−ベーカー・フェイス・ペイン評価尺度(Wong-Baker FACES Pain Rating Scale)、カラー・アナログスケール(Coloured Analogue Scale)、視覚的アナログスケール(Visual Analog Scale)（ＶＡＳ）、語句数値評価スケール(Verbal Numerical Rating Scale)（ＶＮＲＳ）、語句記述スケール(Verbal Descriptor Scale)（ＶＤＳ）および簡易疼痛質問表(Brief Pain Inventory)；クオリティ・オブ・ライフ尺度(Quality of Life Scale)（ＱＯＬＳ）；癌療法の機能評価(functional assessment of cancer therapy)（ＦＡＣＴ）尺度、およびそのいずれかの組合わせが含まれる。
【０１０６】
用語“持続放出剤形”は、以下において、一定の薬物濃度を特定期間、最小の副作用で維持するための、所定の速度での薬物放出を表わす。これは、リポソームおよび薬物−ポリマーコンジュゲートを含めた多様な配合物により達成できる。持続放出の定義は、“持続”よりむしろ“制御放出”に近い。
【０１０７】
ある態様によれば、本発明は、新規な癌療法をスクリーニングするための、下記の側面のうち少なくとも１つを含む個別化医療(personalized medicine)（ＰＭ）ベースのシス
テムおよび方法を提供する：
１．カンナビノイド抽出物で処置した患者の生検試料に由来する細胞のハイスループットスクリーニング（ＨＴＳ）；
２．カンナビノイド画分で処置した患者の生検試料に由来する細胞のハイスループットスクリーニング（ＨＴＳ）；
３．カンナビノイド画分で処置した異種移植体（すなわち、ヒト癌細胞を注射したマウス）に由来する生検試料のハイスループットスクリーニング（ＨＴＳ）；
４．カンナビノイド抽出物で処置した異種移植体（すなわち、ヒト癌細胞を注射したマウス）に由来する生検試料のハイスループットスクリーニング（ＨＴＳ）；
５．カンナビノイド抽出物および一般的な化学療法で処置した患者の生検試料に由来する細胞のハイスループットスクリーニング（ＨＴＳ）；
６．特定の癌細胞系のハイスループットスクリーニング（ＨＴＳ）；
７．患者の生物学的データ（遺伝学／血液／神経学／行動／栄養）と生検試料についてのＨＴＳからのデータとの相関付け；
８．患者の臨床データとＨＴＳデータとの相関付け。
【０１０８】
したがって、本発明の目的の１つは無毒性のナチュラルな癌療法をスクリーニングするための方法およびシステムを提供することことである。
現在まで、製薬産業の一般的な考えは、全植物体の一部の単離体を使用すること、または合成することであり、それは医療専門家が使用する際に時には彼らの患者に望ましくない副作用を生じる。たとえば、癌の化学療法に用いられる最も強力な薬物は植物ニチニチソウ(Madagascar periwinkle)から単離された。それは乳癌およびリンパの癌に対して有
効な薬剤である。しかし、それの副作用は衰弱性かつ危険性のある可能性がある。したがって、植物からの有効分子の単離は誤算の可能性があることが注目される。ある場合には、植物抽出物またはその画分の望ましい特性に単一化合物が寄与しているのではない可能性がある。植物抽出物全体よりむしろ精製した化合物で疾患を処置する方が良いであろうという推定は誤解である可能性がある。
【０１０９】
特定の疾患および状態の処置に大麻由来の単離された化合物と対比して大麻植物抽出物全体の使用の方がより有効な可能性があることが示されたことをここに認める。単離された化合物またはその特定の組合わせを用いた場合には存在しないであろう相乗または相加作用が種々の大麻抽出物成分間にある可能性がある。
【０１１０】
さらなる側面によれば、理論によって拘束されたくはないが、抽出物の混合物内の有効分子の調和のとれた比率（生物学的機序）はヒト受容体との共進化(co-evolution)の結果である可能性がある。
【０１１１】
“有効比率の指向性進化(oriented evolution of active ratio)”に関するビッグデー
タの継続的走査および構築は、本発明によって実現されたさらなるアンメットニーズである。
【０１１２】
理論によって拘束されたくはないが、“健康”として経験される精神状態の均衡と“疾患”として経験されるそれの不均衡によって精神状態が我々の身体の生理的状態に影響を及ぼすことは十分に確立された見解である。今日の大部分の癌療法は、それらの療法有益性にかかわらず有害かつ有毒である。苛酷な疾患は苛酷な処置によって治癒されるという啓発的な考え方(cultural way of thinking)にこの現象が関連するというのは真実味がある。しかし、現実的には、癌患者は通常はわずかな痛みを伴う“病”人であり、それが耐えられない痛みを伴う“治療”患者になる。吐き気および体重減少が身体を著しく衰弱させ、生きる意志を取り去る。死が近いという悲観的予告は、衰弱した身体と併せて、再び健康になるために超えるべき高いバリヤーとなる。したがって、癌患者の情動状態に活力を与えることが生理的領域に転化される。本発明は、癌患者の精神状態と彼らの生理的状態の両方に対処する処置を提供することに関係する。カンナビノイドまたは大麻抽出物を特にそれらの細胞毒性または抗癌特性についてスクリーニングするけれども、望ましいのはそれらの“副作用”でもある；それらは癌関連悪液質および食欲不振症候群(Cancer Related Cachexia and Anorexia Syndrome)に対して有益であることが周知だからである。それらは疼痛軽減および抗うつ活性についても知られている。これらの療法有益性の組合わせにより、本発明は望ましくない副作用が最小限の有効な療法になる。
【０１１３】
カンナビノイド処理した癌細胞系および／または患者から得た腫瘍由来の細胞における細胞の壊死およびアポトーシスなどの生物学的プロセスについてのハイスクリーニング技術を用いて、好ましい天然カンナビノイドの組合わせを本発明において同定する。
【０１１４】
癌細胞を停止させることが見出された有効な抽出物をスクリーニングおよび提供して、所定の剤形または投与経路、たとえばカプセル剤、静脈内または経口で患者に投与することが、さらに本発明の範囲内である。
【０１１５】
さらなる側面によれば、癌患者を本発明の方法により同定した抽出物（すなわち、大麻抽出物またはその画分）で処置することは下記の療法展望において有益である：
−  患者の精神状態を高揚させる
−  有害な副作用がない
−  個体に合わせた有効性の高い抗癌化合物
−  患者をさらに化学療法または放射線で処置する場合、抽出物の抗癌特性に関係なく、食欲を改善し、吐き気を軽減する。
【０１１６】
本発明のさらなる側面によれば、癌および他の非悪性疾患におけるカンナビノイドの薬理学的重要性が本発明により解明される。
前記に開示した目的および側面に対処するために、本発明は、選択された被検体、たとえばカンナビノイドの比率または投与量と抗腫瘍活性との相関性を検出するための強固なハイスループットスクリーニング（ＨＴＳ）方法を提供する。一態様によれば、本発明は、患者または実験動物から得られたヒト癌細胞系腫瘍細胞の発展中のライブラリーを利用して、拡大された多様な大麻ベースの化合物を創出する。異なる組織系統の腫瘍細胞に対するこれらの化合物の生物学的活性の試験によって、有効性の高い療法データが作成される。
【０１１７】
標準化学療法と併用した状態または併用しない状態で有効なカンナビノイドまたは他の天然抽出物をスクリーニングするためにＨＴＳシステムを細胞系に適用することは、さらに本発明の範囲内である。
【０１１８】
患者の全体的処置に従って標準化学療法と併用して、有効なカンナビノイドまたはカンナビノイドの組合わせまたは他の天然抽出物をスクリーニングするためにＨＴＳシステムを患者由来の生検試料に適用することは、さらに本発明の範囲内である。
【０１１９】
カンナビノイドの比率またはテルペン類もしくは混合物もしくは抽出物の力価を予測するための学習アルゴリズムを本発明により開発することは、さらに本発明の範囲内である。
【０１２０】
他の態様において、腫瘍特異的な有効性の高い占有化合物のバンクを提供する。
さらなる側面によれば、進歩したナチュラルな療法の開発のために、着目するカンナビノイドまたは大麻抽出物もしくはその画分または他の被検体の作用を、癌細胞、幹細胞、神経細胞および心筋細胞について査定する。
【０１２１】
多様なタイプの癌に対して有効な療法活性に反映されるカンナビノイドの抗腫瘍活性を、本発明のシステムおよび方法により査定する。
特定のタイプの癌細胞に対する作用をもつ有効化合物、たとえばカンナビノイド−タイプの化合物、またはカンナビノイドの比率を同定するために、本発明は種々の大麻由来画分の抗腫瘍活性を試験するスクリーニング法（すなわち、ハイスループットスクリーニングまたはＨＴＳ）を提供する。抗腫瘍活性試験には下記のものが含まれる：抗増殖作用（細胞周期停止）、細胞毒性比色アッセイ、たとえばＸＴＴアッセイにより測定した生存性の低減および細胞死、アポトーシス、壊死、オートファジー、ならびに抗血管新生アッセイ、抗移動アッセイ、および抗転移アッセイ、ならびにカンナビノイドと現在臨床使用されている一般的な化学療法薬との相乗作用の可能性。
【０１２２】
一態様によれば、スクリーニングを実施するために、ＩｍａｇｅＸｐｒｅｓｓ  Ｍｉｃｒｏ  ＸＬＳ  Ｓｙｓｔｅｍを用いる。ＩｍａｇｅＸｐｒｅｓｓ  Ｍｉｃｒｏ  ＸＬＳ  Ｓｙｓｔｅｍは、固定細胞または生細胞試験の蛍光、透過光および位相差イメージングが可能な広視野自動顕微鏡である。この最先端システムはウェル当たりより少ないイメージを収集する能力をもつ。それは現在の業界標準より３倍大きな視野についてより短いイメージング時間をもつ。さらに、ＩｍａｇｅＸｐｒｅｓｓ  Ｍｉｃｒｏ  ＸＬＳ  Ｓｙｓｔｅｍは、ハイスループットスクリーニング（ＨＴＳ）を実施するために用いられるであろう低解像度、全ウェル、３色の細胞スコアリングアプリケーションにおいて＞１０００万細胞／時の細胞、または高解像度の２色アッセイにおいて＞１００万細胞／時の細胞を捕獲できる。このＨＴＳスクリーニングから、細胞サイズ、増殖、アポトーシスおよび移動のパラメーターが得られる。さらに、現在の研究は数種類の異なる腫瘍モデルにおいてカンナビノイドが選択的抗腫瘍活性を及ぼしたことを記載している。本発明は、下記を含めた多数のヒトおよびマウス癌細胞系を迅速かつ効果的にスクリーニングすることができる：乳癌、卵巣癌、結腸癌、前立腺癌、メラノーマ、頭頸部癌、膵臓癌、骨肉腫、胃癌、神経膠腫、神経膠芽細胞腫、神経芽細胞腫、白血病など。さらに、本発明の特定の側面において、化学療法処置および再発の後の同じ組織および／または同じ患者に由来する癌細胞、正常細胞、転移細胞および／または腫瘍細胞について被験化合物または被検体の作用を同時に試験することができる。
【０１２３】
したがって、細胞に対する測定可能な作用をもつ被検体を同定するためのハイスループットスクリーニング（ＨＴＳ）方法を提供することは本発明の範囲内である。前記方法は下記の工程を含む：（ａ）複数の細胞試料を含むアレイを用意する；（ｂ）試験すべき少なくとも１つの被検体を用意する；（ｃ）細胞試料を被検体と接触させる；そして（ｄ）細胞に対する測定可能な作用の指標となる信号を検出し、その際、対照試料に対比して細胞試料について測定した信号の経時変化はその細胞試料に対するその被検体の測定可能な作用の指標となる。
【０１２４】
被検体が、カンナビノイド−タイプ、カンナビノイド誘導体、大麻抽出物またはその画分、非カンナビノイド−タイプの成分、生成物、化合物、分子または物質、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、前記のいずれかに定める方法を開示することは、さらに本発明の範囲内である。
【０１２５】
細胞に対する測定可能な作用が、生理学的、遺伝学的、生化学的、構造的なもの、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、前記のいずれかに定める方法を開示することは、さらに本発明の範囲内である。
【０１２６】
細胞に対する測定可能な作用が、抗増殖性、再生性、抗炎症性、抗有糸分裂性、分化性、抗転移性、抗血管新生性、アポトーシス性、細胞毒性、細胞変性性、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、前記のいずれかに定めた方法を開示することは、さらに本発明の範囲内である。
【０１２７】
本発明のさらなる目的は、細胞に対する測定可能な作用が、増殖、移動、吸光、接着、アポトーシス、壊死、オートファジー、細胞毒性、細胞サイズ、運動性、細胞周期、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される生物学的パラメーターに対する作用である、前記のいずれかに定めた方法を開示することは、さらに本発明の範囲内である。
【０１２８】
癌細胞が、乳癌、卵巣癌、結腸／直腸癌、前立腺癌、メラノーマ、頭頸部癌、膵臓癌、骨肉腫、胃癌、神経膠腫、神経膠芽細胞腫、神経芽細胞腫、白血病、腺癌、副腎癌、肛門癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌、脳／ＣＮＳ癌、子宮頚癌、子宮内膜癌、食道癌、眼癌、胃腸癌、腎癌、白血病、肝癌、肺癌、リンパ腫、多発性骨髄腫、鼻腔癌および副鼻腔癌、鼻咽頭癌、非ホジキンリンパ腫、口腔癌、口腔咽頭癌、骨肉腫、卵巣癌、膵臓癌、陰茎癌、下垂体癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺癌、肉腫、皮膚癌、小腸癌、胃癌、睾丸癌、胸腺癌、甲状腺癌、子宮肉腫、膣癌および外陰癌、ならびにそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、前記のいずれかに定めた方法を開示することは、さらに本発明の範囲内である。
【０１２９】
細胞試料が、異種移植細胞、同種移植細胞、細胞系、生検細胞、およびその組合わせからなる群から選択される、前記のいずれかに定めた方法を開示することは、さらに本発明の範囲内である。
【０１３０】
細胞系が、中枢神経系、骨、前立腺、胃、尿路、卵巣、造血およびリンパ系組織、腎臓、甲状腺、皮膚、軟組織、唾液腺、卵巣、肺、胸膜、肝臓、子宮内膜、膵臓、乳腺、上気道消化管、大腸、自律神経節、食道、胆管、小腸、自律神経節、ならびにそのいずれかの組合わせからなる群から選択される癌細胞系である、前記のいずれかに定めた方法を開示することは、さらに本発明の範囲内である。
【０１３１】
細胞試料が、ヒト細胞系、動物細胞系および異種移植細胞からなる群から選択される、前記のいずれかに定めた方法を開示することは、さらに本発明の範囲内である。
細胞試料が、癌細胞、幹細胞、神経細胞、心筋細胞、体細胞、生殖細胞、正常細胞、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、前記のいずれかに定めた方法を開示することは、さらに本発明の範囲内である。
【０１３２】
信号が、光、発光、蛍光、免疫、細胞数、放射性同位体、非放射性同位体、電気、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、前記のいずれかに定めた方法を開示することは、さらに本発明の範囲内である。
【０１３３】
細胞に対する測定可能な作用が、ＡＬＫ遺伝子、アルファ−フェトプロテイン（ＡＦＰ）、ベータ−２−ミクログロブリン（Ｂ２Ｍ）、ベータ−ヒト絨毛性ゴナドトロピン（Ｂｅｔａ−ｈＣＧ）、ＢＣＲ−ＡＢＬ融合遺伝子、ＢＲＡＦ変異Ｖ６００Ｅ、ＣＡ１５−３／ＣＡ２７．２９、ＣＡ１９−９、ＣＡ−１２５、カルシトニン、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ＣＤ２０、クロモグラニンＡ（ＣｇＡ）、染色体３、７、１７および９ｐ２１、サイトケラチンフラグメント２１−１、ＥＧＦＲ変異、エストロゲン受容体（ＥＲ）／プロゲステロン受容体（ＰＲ）、フィブリン／フィブリノーゲン、ＨＥ４、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、免疫グロブリン、ＫＩＴ、ＫＲＡＳ変異、乳酸デヒドロゲナーゼ、核マトリックスプロテイン２２、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、サイログロブリン、ウロキナーゼプラスミノーゲンアクチベーター（ｕＰＡ）、プラスミノーゲンアクチベーターインヒビター（ＰＡＩ−１）、５−プロテインシグネチャー（Ｏｖａ１）、２１−遺伝子シグネチャー（Ｏｎｃｏｔｙｐｅ  ＤＸ）、７０−遺伝子シグネチャー（Ｍａｍｍａｐｒｉｎｔ）、ならびにそのいずれかの組合わせからなる群から選択される癌マーカーの発現レベルに対する作用である、前記のいずれかに定めた方法を開示することは、さらに本発明の範囲内である。
【０１３４】
被検体が大麻から抽出され；大麻がカンナビス・サティバ、インド大麻、カンナビス・ルデラリス、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、前記のいずれかに定めた方法を開示することは、さらに本発明の範囲内である。
【０１３５】
カンナビノイド−タイプが、カンナビゲロール（ＣＢＧ）タイプ、カンナビクロメン（ＣＢＣ）タイプ、カンナビジオール（ＣＢＤ）タイプ、△９−テトラヒドロカンナビノール（ＴＨＣ）タイプ、△８−ＴＨＣタイプ、カンナビシクロール（ＣＢＬ）タイプ、カンナビエルソイン（ＣＢＥ）タイプ、カンナビノール（ＣＢＮ）タイプおよびカンナビノジオール（ＣＢＮＤ）タイプ、カンナビトリオール（ＣＢＴ）タイプ、種々のタイプのカンナビノイド、ならびにそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、前記のいずれかに定めた方法を開示することは、さらに本発明の範囲内である。
【０１３６】
カンナビノイド−タイプが、さらにテトラヒドロカンナビジオール（ＴＨＣ）またはその誘導体、カンナビジオール（ＣＢＤ）またはその誘導体、ＣＢＧ（カンナビゲロール）、ＣＢＣ（カンナビクロメン）、ＣＢＬ（カンナビシクロール）、ＣＢＶ（カンナビバリン）、ＴＨＣＶ（テトラヒドロカンナビバリン）、ＣＢＤＶ（カンナビジバリン）、ＣＢＣＶ（カンナビクロメバリン）、ＣＢＧＶ（カンナビゲロバリン）、ＣＢＧＭ（カンナビゲロール  モノメチルエーテル）、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、前記のいずれかに定めた方法を開示することは、さらに本発明の範囲内である。
【０１３７】
ＴＨＣまたはその誘導体が、ＴＨＣ、ＴＨＣＶ、ＴＨＣＡ、ＴＨＣＶＡ、デルタ−９−テトラヒドロカンナビノール（△９−ＴＨＣ）およびデルタ−８−テトラヒドロカンナビノール（△８−ＴＨＣ）、ならびにそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、前記のいずれかに定めた方法を開示することは、さらに本発明の範囲内である。
【０１３８】
カンナビジオール（ＣＢＤ）またはその誘導体が、ＣＢＤ、ＣＢＤＶ、ＣＢＤＡおよびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、前記のいずれかに定めた方法を開示することは、さらに本発明の範囲内である。
【０１３９】
非カンナビノイド−タイプの成分、生成物、化合物、分子または物質が、テルペノイド、炭化水素、大麻由来の精油、窒素含有化合物、炭水化物、フラボノイド、脂肪酸、アミノ酸、タンパク質、糖タンパク質、酵素、糖類および関連化合物、非カンナビノイドフェノール類、単純アルコール類、アルデヒド類、ケトン類、酸、エステル類、ラクトン類、ステロイド類、テルペン類、フィトステロール類、たとえばカンペステロール、エルゴステロール、Ｅ−シトステロールおよびスティグマステロール、ビタミン類、たとえばビタミンＡおよびビタミンＫ、色素、たとえばカロテンおよびキサントフィル類、元素、たとえばＮａ、Ｋ、Ｃａ、Ｍｇ、Ｆｅ、Ｃｕ、Ｍｎ、ＺｎおよびＨｇ、ならびにそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、前記のいずれかに定めた方法を開示することは、さらに本発明の範囲内である。
【０１４０】
被検体が、ヒトおよび動物の身体からなる群から選択される供給源に由来するもの、植物から抽出されたもの、合成されたもの、ならびにそのいずれかの組合わせである、前記のいずれかに定めた方法を開示することは、さらに本発明の範囲内である。
【０１４１】
ＨＴＳが、マイクロタイタープレート、自動コロニーピッカー、ｕＨＴＳまたはウルトラ−ハイスループットスクリーニング、ＨＴＳ薬物探索のための３Ｄ腫瘍スフェロイド分析法、Ｃｅｌｉｇｏイメージングサイトメーター、オートメーションシステム、高貯蔵容量および高速アクセス用のアッセイプレート貯蔵のためのカルーセルシステム、統合ロボットシステム、読出しまたは検出、データ収集プロセス、ならびにそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、前記のいずれかに定めた方法を開示することは、さらに本発明の範囲内である。
【０１４２】
被検体が、別個に投与された一般的な抗腫瘍または抗炎症療法薬により付与される作用と比較して、細胞に対する測定可能な作用に関する相乗作用を付与する、前記のいずれかに定めた方法を開示することは、さらに本発明の範囲内である。
【０１４３】
被検体が、別個に投与された一般的な抗腫瘍または抗炎症療法薬により付与される作用と比較して、抗腫瘍または抗炎症活性に関する禁忌作用を付与する、前記のいずれかに定めた方法を開示することは、さらに本発明の範囲内である。
【０１４４】
細胞に対する測定可能な作用をもつ被検体を同定するためのハイスループットスクリーニング（ＨＴＳ）システムを開示することは、さらに本発明の範囲内である。前記システムは下記のものを含む：（ａ）複数の細胞試料を含むアレイ；（ｂ）試験すべき少なくとも１つの被検体；および（ｃ）細胞に対する測定可能な作用の指標となる信号を検出するための手段；その際、対照試料に対比して細胞試料について測定した信号の経時変化はその細胞試料に対するその被検体の測定可能な作用の指標となる。
【０１４５】
１以上のコンピューターにより実装された場合、細胞に対する測定可能な作用の指標となる信号に関するデータを処理することにより、事前選択した細胞試料についての１以上の被検体の細胞に対する測定可能な作用に関するデータをその１以上のコンピューターに提示させる指示を含み、その際、対照試料に対比して細胞試料について測定した信号の経時変化はその細胞試料に対するその被検体の測定可能な作用の指標となる、非一過性コンピューター可読媒体を提供することは、さらに本発明の範囲内である。
【０１４６】
癌タイプの疾患または炎症性疾患の処置に使用するための、前記のいずれかに記載の方法により定めたものに従って選択した療法有効量の被検体を含む組成物または本質的に療法有効量の被検体を含む抽出物であって、抗腫瘍活性もしくは抗炎症活性またはその相乗作用を有する組成物を提供することは、さらに本発明の範囲内である。
【０１４７】
大麻由来の１以上の遺伝子マーカーを同定する方法であって、その１以上の遺伝子マーカーが前記のいずれかに定めた方法により指示される細胞に対する測定可能な作用と相関し、その方法が信号を大麻ＤＮＡ配列データと相関付ける追加工程を含む方法を提供することは、さらに本発明の範囲内である。
【０１４８】
大麻由来の１以上の遺伝子マーカーであって、前記のいずれかに定めた方法により指示
される細胞に対する測定可能な作用と相関し、さらにその信号が大麻ＤＮＡ配列データと相関する、１以上の遺伝子マーカーを提供することは、さらに本発明の範囲内である。
【０１４９】
１以上の遺伝子マーカーが、ゲノム遺伝子座におけるバリエーション、変異または変化、一塩基多型（ＳＮＰ）、ミニサテライト、ＲＦＬＰ（制限酵素断片長多型）、ＳＳＬＰ（単純配列長多型）、ＡＦＬＰ（増幅断片長多型）、ＲＡＰＤ（多型ＤＮＡのランダム増幅）、ＶＮＴＲ（可変数タンデムリピート）、ＳＳＲ（単純配列リピート）、マイクロサテライト多型、ＳＴＲ（ショートタンデムリピート）、ＳＦＰ（シングルフィーチャー多型）、ＤＡｒＴ（ダイバーシティーアレイテクノロジー）、ＲＡＤマーカー（制限部位関連ＤＮＡマーカー）ヌクレオチドの変化、ｉｎｄｅｌ、欠失、重複、逆位および／または挿入、ならびにそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、前記のいずれかに定めた方法を開示することは、さらに本発明の範囲内である。
【０１５０】
被検体のデータベースであって、前記のいずれかに記載の方法の工程を実装することにより規定された、細胞に対する測定可能な作用と相関する被検体に関するデータを含むデータベースを提供することは、さらに本発明の範囲内である。
【０１５１】
大麻抽出物またはその画分、カンナビノイド−タイプの成分、非カンナビノイド−タイプの成分、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される被検体を同定するためのハイスループットスクリーニング（ＨＴＳ）方法であって、その被検体がインビトロで細胞毒性または抗増殖活性または抗有糸分裂活性または細胞増殖阻害活性を示すものである方法を提供することは、さらに本発明の範囲内である。前記方法は下記の工程を含む：（ａ）複数の癌細胞試料を含むアレイを用意する；（ｂ）試験すべき被検体を用意する；その被検体は大麻抽出物またはその画分、カンナビノイド−タイプの成分、非カンナビノイド−タイプの成分、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される；（ｃ）癌細胞試料を被検体と接触させる；そして（ｄ）インビトロでの細胞毒性または抗増殖活性または抗有糸分裂活性または細胞増殖阻害活性の指標となる信号を検出し、その際、対照試料に対比して癌細胞試料について測定した信号の経時変化はその癌細胞試料に対するその被検体のインビトロでの細胞毒性または抗増殖活性または抗有糸分裂活性または細胞増殖阻害活性の指標となる。
【０１５２】
大麻抽出物またはその画分、カンナビノイド−タイプの成分、非カンナビノイド−タイプの成分、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される被検体を同定するためのハイスループットスクリーニング（ＨＴＳ）方法であって、その被検体が抗腫瘍活性を示し、その方法が前記のいずれかに定めた方法の工程を含み、さらに下記の工程を含む方法を提供することは、さらに本発明の範囲内である：（ａ）その癌細胞試料に由来する異種移植癌細胞を実験動物に移植する；（ｂ）実験動物を、前記のいずれかに定めた方法により同定した大麻抽出物またはその画分、カンナビノイド−タイプの成分、非カンナビノイド−タイプの成分、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される被検体で処理する；そして（ｃ）その実験動物の腫瘍増殖をモニタリングする。
【０１５３】
実験動物がヌードマウスである、前記のいずれかに定めた方法を開示することは、さらに本発明の範囲内である。
疾患と相関する細胞に対する測定可能な作用をもつ植物性被検体を同定するために有用なプロトコルを提供することは、さらに本発明の範囲内である。前記プロトコルは下記の工程を含む：（ａ）被検体のパラメーター、細胞のパラメーター、請求項１に記載の細胞に対する測定可能な作用をもつ被検体を同定するためのハイスループットスクリーニング（ＨＴＳ）結果のデータ、臨床または前臨床データ、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択されるデータを含む入力データを用意する；（ｂ）そのデータを処理する；そして（ｃ）疾患と相関する細胞に対する被検体の測定可能な作用およびそのいずれかの組合わせに関する出力データを電子ディスプレイに表示する。
【０１５４】
データ処理が、相関付ける、正規化する、較正する、因子分析する、計算する、統計解析する、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される工程を含む、前記に定めたプロトコルを開示することは、さらに本発明の範囲内である。
【０１５５】
被検体パラメーターが、被検体供給源、被検体加工、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、前記のいずれかに定めたプロトコルを開示することは、さらに本発明の範囲内である。
【０１５６】
植物性被検体供給源パラメーターが、供給源の株、供給源の遺伝子型、供給源の表現型、供給源の生育条件、供給源の収穫条件、供給源の栄養状態、供給源の部分または器官、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、前記のいずれかに定めたプロトコルを開示することは、さらに本発明の範囲内である。
【０１５７】
供給源の部分または器官が、根、幹、葉、花、種子、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、前記のいずれかに定めたプロトコルを開示することは、さらに本発明の範囲内である。
【０１５８】
植物性被検体加工パラメーターが、キュアリング、乾燥、抽出プロセス、脱カルボキシル、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、前記のいずれかに定めたプロトコルを開示することは、さらに本発明の範囲内である。
【０１５９】
抽出プロセスが、ブタン、ＣＯ２勾配、エタノール、ドライアイス、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、前記のいずれかに定めたプロトコルを開示することは、さらに本発明の範囲内である。
【０１６０】
細胞パラメーターが、細胞供給源、細胞処理、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、前記のいずれかに定めたプロトコルを開示することは、さらに本発明の範囲内である。
【０１６１】
細胞供給源が、生検細胞、細胞系、異種移植細胞、変異した細胞または分子、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、前記のいずれかに定めたプロトコルを開示することは、さらに本発明の範囲内である。
【０１６２】
細胞処理が、細胞培地処理、血清処理、細胞希釈、細胞周期、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、前記のいずれかに定めたプロトコルを開示することは、さらに本発明の範囲内である。
【０１６３】
細胞に対する測定可能な作用が、増殖、アポトーシス、移動、再生、分化、血管新生、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、前記のいずれかに定めたプロトコルを開示することは、さらに本発明の範囲内である。
【０１６４】
臨床または前臨床データが、対象へのその被検体の投与経路、投与量、放出形態、癌マーカーレベル、腫瘍サイズモニタリング、転移モニタリング、生存率、１以上の尺度に従って評価したクオリティ・オブ・ライフ、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、前記のいずれかに定めたプロトコルを開示することは、さらに本発明の範囲内である。
【０１６５】
投与経路が、舌下、経口、静脈内、局所、皮下、およびそのいずれかの組合わせからな
る群から選択される、前記のいずれかに定めたプロトコルを開示することは、さらに本発明の範囲内である。
【０１６６】
放出形態が、徐放、制御放出、持続放出、即時または迅速放出、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、前記のいずれかに定めたプロトコルを開示することは、さらに本発明の範囲内である。
【０１６７】
癌マーカーが、ＡＬＫ遺伝子、アルファ−フェトプロテイン（ＡＦＰ）、ベータ−２−ミクログロブリン（Ｂ２Ｍ）、ベータ−ヒト絨毛性ゴナドトロピン（Ｂｅｔａ−ｈＣＧ）、ＢＣＲ−ＡＢＬ融合遺伝子、ＢＲＡＦ変異Ｖ６００Ｅ、ＣＡ１５−３／ＣＡ２７．２９、ＣＡ１９−９、ＣＡ−１２５、カルシトニン、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ＣＤ２０、クロモグラニンＡ（ＣｇＡ）、染色体３、７、１７および９ｐ２１、サイトケラチンフラグメント２１−１、ＥＧＦＲ変異、エストロゲン受容体（ＥＲ）／プロゲステロン受容体（ＰＲ）、フィブリン／フィブリノーゲン、ＨＥ４、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、免疫グロブリン、ＫＩＴ、ＫＲＡＳ変異、乳酸デヒドロゲナーゼ、核マトリックスプロテイン２２、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、サイログロブリン、ウロキナーゼプラスミノーゲンアクチベーター（ｕＰＡ）、プラスミノーゲンアクチベーターインヒビター（ＰＡＩ−１）、５−プロテインシグネチャー（Ｏｖａ１）、２１−遺伝子シグネチャー（Ｏｎｃｏｔｙｐｅ  ＤＸ）、７０−遺伝子シグネチャー（Ｍａｍｍａｐｒｉｎｔ）、ならびにそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、前記のいずれかに定めたプロトコルを開示することは、さらに本発明の範囲内である。
【０１６８】
クオリティ・オブ・ライフを評価するための１以上の尺度が、疼痛尺度、クオリティ・オブ・ライフ尺度、癌療法の機能評価尺度、およびそのいずれかの組合わせからなる群から選択される、前記のいずれかに定めたプロトコルを開示することは、さらに本発明の範囲内である。
【０１６９】
本発明を理解し、それをどのようにして実施できるかを知るために、下記の例を参照して複数の好ましい態様を以下に記載する；それらは限定ではなく例示にすぎない。
【実施例】
【０１７０】
実施例１
大麻抽出のためのプロトコル
６つのカンナビス・サティバ(Cannabis sativa)株（すなわち、ＣＮＢ１、ＣＮＢ２、
ＣＮＢ３、ＣＮＢ４、ＣＮＢ６、ＣＮＢ８）をブタンに浸漬し、樹脂をパージして濃縮油から残留ブタンを排除した。
【０１７１】
抽出物中の１０のカンナビノイド（すなわち、ＣＢＤＡ、ＣＢＧＡ、ＣＢＧ、ＣＢＤ、ＴＨＣＶ、ＣＢＮ、ＴＨＣＡ、△９ＴＨＣ、△８ＴＨＣおよびＣＢＣ）の濃度をＨＰＬＣで評価した（参照：図１）。
【０１７２】
細胞系のための原液を調製するために、大麻抽出物をＤＭＳＯに溶解し（たとえば、約５０ｍｇ／ｍｌ）、使用するまで−２０℃に保持した。
実施例２
細胞系の調製のためのプロトコル
本発明に用いた細胞培養物の限定ではない例を以下に述べる：
ヒト癌細胞系の例：
・  ＭＤＡ−ＭＢ−２３１およびＭＣＦ−７乳癌細胞
・  Ｕ８７ＭＧおよびＵ１１８ＭＧ神経膠芽細胞腫細胞
・  ＰＣ３前立腺癌細胞
・  ＨＴ２９およびＳＷ４８０結腸癌細胞
・  ＡＧＳ胃腺癌細胞
・  ＭｉａＰａＣａ２膵臓癌細胞
ヒト非癌細胞系の例（対照）：
・  安定化した非腫瘍細胞系  ＨＤＦ（human dermal fibroblast、ヒト皮膚線維芽細
胞）
・  ＨａＣａｔ（ヒト角化細胞）
細胞系を増殖させるための手順を以下に述べる：
細胞系を３７℃で５％ＣＯ２を含有する加湿雰囲気に維持した。
【０１７３】
ＰＣ３およびＳＷ４８０以外のすべての細胞系をフェノールレッド含有最小必須培地（ＤＭＥＭ）（Ｓｉｇｍａ）中でルーティンに増殖させた。ＰＣ３およびＳＷ４８０をフェノールレッド含有ＲＰＭＩ−１６４０（Ｓｉｇｍａ）中で増殖させた。
【０１７４】
培地に１０％のウシ胎仔血清（ＦＢＳ）、１００Ｕ／ｍＬのペニシリン、１００μｇ／ｍＬのストレプトマイシンおよび１００ｍＭのＬ−グルタミンを補足した。
細胞生存性試験を以下に述べる：
細胞を曝露の３日前に収穫し、２４ウェル  マイクロプレート内へ播種した（約５０，０００〜２００，０００細胞／ウェル）。培地を０．５％のＦＢＳを含有するそれぞれの培地に交換し、ビヒクル（ＤＭＳＯ）または大麻抽出物（１〜１０μｇ／ｍｌ）を２４〜４８時間、培地に添加した；二重反復試験。
【０１７５】
カンナビノイド化合物が細胞生存性に及ぼす作用を、ハイコンテントスクリーニング分析(high-content screening analysis)を用いて測定した。たとえば、下記を区別するこ
とにより、同一ウェル内の細胞亜集団の分化を分析した：生細胞−対−壊死細胞、初期アポトーシス細胞および後期アポトーシス細胞。
【０１７６】
細胞をＩｍａｇｅＸｐｒｅｓｓ  ｍｉｃｒｏでイメージングし（参照：図２）、ＭｅｔａＸｐｒｅｓｓおよびＣｅｌｌ  Ｃｙｃｌｅモジュールを用いて分析した。
大麻抽出物が被験細胞系に及ぼす作用をスクリーニングするために用いたプローブの限定ではない例を以下に述べる：
所定の期間インキュベートした後、下記のうち少なくとも１つを含む蛍光プローブを含有するＰＢＳで細胞系培地を交換した：
・  Ｈｏｅｃｈｓｔ  ３３３４２，ＵＶ励起青色蛍光プローブ，アポトーシス細胞の凝縮クロマチンを染色し、生細胞の正常クロマチンをそれよりうす暗く染色する
・  ＹＯ−ＰＲＯ−１，アポトーシス細胞に進入できる緑色蛍光色素
・  ヨウ化プロピジウム(Propidium Iodide)（ＰＩ），アポトーシス細胞に進入できない赤色蛍光色素。
【０１７７】
これら３色素の同時使用から得られる染色パターンにより、フローサイトメトリーまたは蛍光顕微鏡による正常細胞、アポトーシス細胞および死細胞集団の区別が可能になることに注目する。
【０１７８】
ＭｅｔａＸｐｒｅｓｓおよびＣｅｌｌ  Ｈｅａｌｔｈモジュールを用いて分析した細胞のイメージを提示する図３について以下に述べる：図３Ａには、Ｈｏｅｃｈｓｔ  ３３３４２（青色）、ＹＯ−ＰＲＯ−１（緑色）およびＰＩ（赤色）をイメージする３種類のフィルターを提示する。図３Ｂには、Ｃｅｌｌ  Ｈｅａｌｔｈモジュールによる蛍光マーカーの強度に従った細胞のセグメンテーションにより下記の細胞亜集団が区別されることが示される：生存細胞（緑色）、初期アポトーシス細胞（青色）および後期アポトーシス細胞（ピンク）；透過光イメージに重ねたもの。図３Ｃは、各ウェルの後期アポトーシス細胞数の測定例を提示する。
【０１７９】
実施例３
インビトロでの癌細胞系に対する大麻抽出物の抗腫瘍活性
目的：
カンナビノイド比率および投与量と抗腫瘍活性との相関性を検出するための強力なハイスループットスクリーニング（ＨＴＳ）方法およびシステムを提供すること。この方法は、ヒト癌細胞系および／または生検細胞の発展中のライブラリーを、拡大した多様な大麻ベースの化合物または抽出物によりスクリーニングすることを含む。異なる組織系列の腫瘍細胞系または生検細胞に対する大麻抽出物、その画分および化合物の生物活性の試験によって有効性の高い療法データが作成されることが、本発明により立証される。他の側面において、標準的な化学療法と併用した状態または併用しない状態で有効なカンナビノイド、大麻画分または抽出物をスクリーニングするために、ＨＴＳシステムおよび方法を細胞系に適用する。他の態様において、患者の全般的処置に従って化学療法と併用したて、または併用しないで、最も有効なカンナビノイドまたは大麻抽出物もしくはその画分をスクリーニングするために、ＨＴＳシステムおよび方法を患者由来の生検試料に適用する。
【０１８０】
結果：
選択された大麻抽出物で処理した種々の癌細胞系のイメージを対照と比較したものを示す図４について以下に述べる。この実験では、２００，０００細胞／ウェルのＡＧＳ胃腺癌細胞、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１乳癌細胞およびＨａＣａｔヒト角化細胞を２４ウェル  マイクロプレートにプレーティングし、ビヒクル（ＤＭＳＯ）または２種類の株（すなわち、ＣＮＢ３およびＣＮＢ４）の大麻抽出物（１０μｇ／ｍｌ）で処理した。２４時間後にＩｍａｇｅＸｐｒｅｓｓ  ｍｉｃｒｏを用いて細胞をイメージングした。図４には、両方の大麻抽出物（すなわち、ＣＮＢ３およびＣＮＢ４）が癌細胞系においては細胞生存性を劇的に低減したが、正常なヒト角化細胞においては低減しなかったことが示される。この結果は、大麻抽出物の抗腫瘍活性の特異性および癌細胞の処理におけるそれらの有用性を示す。さらに、対照としてのビヒクル（すなわち、ＤＭＳＯ）による細胞系の処理は細胞生存性に影響を及ぼさなかったことが示される。
【０１８１】
種々の大麻抽出物で処理した前立腺癌細胞系のイメージを対照と比較したものを示す図５について以下に述べる。この実験では、ＰＣ３前立腺癌細胞を２４ウェル  マイクロプレートにプレーティングし、ビヒクル（ＤＭＳＯ）または大麻抽出物（１０μｇ／ｍｌ）で処理した。２４時間後にＩｍａｇｅＸｐｒｅｓｓ  ｍｉｃｒｏを用いて細胞をイメージングした。図５に示す結果は、種々の大麻抽出物がＰＣ３前立腺癌細胞に及ぼす作用を明瞭に立証する。この図では、ＣＮＢ１およびＣＮＢ２抽出物が前立腺細胞系に対して最も有効な作用を示す。
【０１８２】
種々のＴＨＣ対ＣＢＤ比を含む選択された大麻抽出物で処理した神経膠芽細胞腫細胞系のイメージを示す図６について以下に述べる。この試験では、１０，０００個のＵ８７ＭＧ神経膠芽細胞腫細胞を９６ウェル  マイクロプレートにプレーティングし、ビヒクル（ＤＭＳＯ）または大麻抽出物で処理した。抽出物を５μＭ  ＴＨＣに達するようにデレクテートした(delectated)ことを明記する。２４時間後にＩｍａｇｅＸｐｒｅｓｓ  ｍｉｃｒｏを用いて細胞をイメージングした。この結果から、ＣＢＤがＵ８７ＭＧ神経膠芽細胞腫細胞の生存性を低減するのに役割を果たすことが分かる。
【０１８３】
５種類の大麻抽出物が３タイプのヒト癌細胞系に及ぼす作用をグラフで提示する図７について以下に述べる。より具体的には、この実験においてＭＣＦ−７、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１（乳癌）およびＰＣ３（前立腺癌）細胞を２４ウェル  マイクロプレートにプレーティングし、対照としてのビヒクル（ＤＭＳＯ）、または大麻抽出物（１０μｇ／ｍｌ）で処理した。処理の２４時間後に、細胞をＨｏｅｃｈｓｔ  ３３３４２で染色し、ＩｍａｇｅＸｐｒｅｓｓ  ｍｉｃｒｏを用いてイメージングし、ＭｅｔａＸｐｒｅｓｓを用いて分析した。この結果から、大麻抽出物は癌細胞の生存性に対して有効な作用をもつことが分かる。この結果はさらに、種々のタイプの癌の細胞系に対する種々の被験大麻抽出物の特異性を立証する。
【０１８４】
前記の結果は、癌細胞に対してインビトロ細胞毒性をもち、正常細胞に対しては細胞毒性が最小である大麻抽出物またはその画分をスクリーニングおよび選択するために、本発明のシステムおよび方法を使用できることを明瞭に立証する。この方法でスクリーニングした大麻抽出物またはその画分を、有効な抗腫瘍活性についてさらに調べることができる。
【０１８５】
本発明のＨＴＳ方法およびシステムは大麻植物または他の植物抽出物の有効な抗腫瘍作用を区別できたことが明らかに示される。種々の株が正常細胞に対しては作用することなく種々の癌細胞系に対して多様なアポトーシス作用を引き起こすことが示される。
【０１８６】
前記の抗腫瘍効力をもつ抽出物を新規な抗癌組成物および療法の基礎として使用できることは明らかである。そのような組成物は、癌に対して現在利用可能な処置に下記の側面で著しい改善をもたらす：
・  本発明は、特定の腫瘍に対して有効な作用をもつ大麻株、カンナビノイド比率および／または植物遺伝子についてデータを提供する
・  それらを化学療法と共に、または化学療法なしで、処置計画の一部として疾患の種々の病期に患者に投与できる
・  大麻抽出物は純粋に天然のものであるので、それらを規制手続きなしで患者に投与できる
・  患者由来の生検試料を、特に記載したものと同じ手順で走査し、個別化医療計画において重要な構成要素として使用できる
・  有効なカンナビノイド比率の提示を、一般的な抗腫瘍薬と併用して、または併用しないで、特定タイプの癌の処置のための新規な植物性または合成薬物の開発に使用できる
・  有効化合物および細胞におけるそれらの結合受容体の分析により、生物学的機序を解明することができる。
【０１８７】
実施例４
腫瘍異種移植細胞に対する大麻抽出物の抗腫瘍活性の査定
この例では、特定の化合物または被検体（たとえば大麻抽出物，参照：実施例３）による処理の結果としてインビトロで細胞に対する測定可能な作用、たとえばアポトーシスおよび／または壊死作用を示した癌細胞系を、実験動物、たとえばマウスに移植する。移植されたマウスを次いで、ヒトにおける癌に対する選択された被検体の作用をより良く評価するための手段として化学療法処置を伴って、または伴なわないで、選択された被検体（たとえば、抽出物または化合物もしくは化合物組合わせ）で処理する。
【０１８８】
異種移植細胞腫瘍アッセイ例示プロトコルを参照する(https://www.mcdb.ucla.edu/Research/Arispe/Protocols/Xenograft_Tumor_Assay.pdfの全体を本明細書に援用する）。このプロトコルの改変は本発明の範囲に含まれることを明記する。
【０１８９】
１）注射用の細胞数（すなわち、５×１０６）を決定して、トリプシン処理を必要とするプレート数を決定する（通常は１００％コンフルエント状態の１００ｍｍ２のプレートにより５×１０６細胞／注射で少なくとも２回の注射量が得られるであろう）
２）カウントすべき数のプレートをすべて同時にトリプシン処理する
３）脱着した細胞を５０ｍｌのコニカルに採集し、８００ｒｐｍで４分間、遠心する
４）上清を除去し、カウントのために２５ｍｌのＳＦＭに再懸濁する
５）３つの１００μｌアリコートを３つの個別のエッペンドルフに取り出し、４００μｌのＳＦＭを添加することにより各１００μｌを１：５希釈し、十分に混合する
６）カウントのために５０μｌの１：５希釈液を取り出し、３つの希釈液それぞれをカウントし、３つの数を平均する
７）次式を用いて細胞の濃度を細胞数／ｍｌで決定する：
平均カウント×１０，０００×希釈係数（５）＝細胞数／ｍｌ
８）下記により、注射すべき体積当たりの注射用細胞の最終濃度（すなわち、５×１０６細胞／１００μｌの注射）を達成するのに必要な追加すべき体積を決定する：まず、細胞の濃度を掛けることにより２５ｍｌの懸濁液中の総細胞数を決定する（細胞数／ｍｌ×２５＝総細胞数）。次いで次式を用いる：
総細胞数／ｘ体積＝５×１０６／１００μｌ，ｘ＝希望する最終濃度（すなわち、５×１０６細胞／１００μｌ）を達成するために細胞のペレットを再懸濁する体積、について解く
９）５０ｍｌのコニカルを８００ｒｐｍで４分間、遠心する
１０）上清を廃棄し、工程＃８から予め決定した体積にペレットを再懸濁する
１１）動物施設へ行く前に組織培養フード内でそれぞれの注射液／マウスを１ｍｌの注射器に吸引する。それぞれ１００μｌを収容した個別の注射器を氷に乗せる（この工程により、再懸濁後の細胞が沈降して細胞の濃度が変化する可能性が最小限に抑えられる）
１２）注射直前に各マウスをイソフルラン吸入で麻酔する。マウスが呼吸抑制のため死ぬので、過剰麻酔しないように注意する。ちょうど良い量はマウスがちょうど動きを止め始めた時であり、マウスを麻酔薬供給源からはずし、純粋な空気を数秒間呼吸させ、次いで注射に際してマウスの鼻を５０ｍｌコニカルの開口の間近に置く
１３）注射する。
【０１９０】
選択された大麻抽出物がＰＣ３前立腺癌細胞に及ぼす作用を示す図８について以下に述べる。この実験では、第１段階でＰＣ３前立腺癌細胞を２４ウェル  マイクロプレートにプレーティングし、ビヒクル（ＤＭＳＯ）または選択された大麻抽出物（１０μｇ／ｍｌ）で処理した。２４時間後にＩｍａｇｅＸｐｒｅｓｓ  ｍｉｃｒｏを用いて細胞をイメージングした。次の段階で、異種移植細胞を得るためにＰＣ３細胞をヌードマウスに移植した。移植したマウスを選択された大麻抽出物（すなわち、ＣＮＢ１、ＣＮＢ２、ＣＮＢ３およびＣＮＢ４）で処理した。図８のイメージから、マウスをＣＮＢ１で処理すると腫瘍サイズが縮小し、一方、ＣＮＢ４による処理は腫瘍に対して何ら作用をもたなかったことが分かる。
【０１９１】
実施例５
選択された大麻抽出物またはその画分の抗腫瘍活性を同定するためのスキーム
疾患と相関する細胞に対する測定可能な作用をもつ植物性被検体を同定するためのプロトコルを説明するスキームを提示する図９について以下に述べる。この図において、細胞系（Ｍ）および／または生検細胞（Ｌ）に対して植物抽出物（Ｆ）の生物活性をそれらの生物活性についてインビトロでスクリーニングする（Ｇ）。被検体のパラメーターに関するデータ（Ａ，Ｂ）、被験細胞のパラメーター、細胞に対する測定可能な作用をもつ被検体を同定するためのハイスループットスクリーニング（ＨＴＳ）結果のデータ（Ｃ，Ｅ）、臨床または前臨床データ（Ｄ）、およびそのいずれかの組合わせを含めて、すべてのプロセスレベルおよびパラメーターから受信したデータをビッグデータアルゴリズム（Ｎ）により処理し、組織化する。有益な抽出物を分析して有効化合物を新規ＩＮＤとしてリストする（Ｈ）か、あるいはナチュラルな処置として患者に直接投与する（Ｉ）。症例研究および臨床試験からのデータ（Ｊ，Ｋ）は、特定の疾病または癌または変異をターゲットとする抽出物および植物性被検体の発展中のバンクを形成する。
【０１９２】
選択された植物性の抽出物または被検体の抗腫瘍活性の評価のために本発明に用いたパラメーターの幾つかを提示する表１について以下に述べる。
【０１９３】
【表１】
2019103508.tif 000002
【０１９４】
実施例６
選択された植物抽出物または他のいずれかの被検体の抗腫瘍活性を評価するために本発明に使用できる癌マーカーの限定ではない例について以下に述べる。
【０１９５】
ＡＬＫ遺伝子再構成
・  癌タイプ：非小細胞肺癌および未分化大細胞型リンパ腫
・  分析する組織：腫瘍
・  使用方法：処置および予後の判定を補助する
アルファ−フェトプロテイン（ＡＦＰ）
・  癌タイプ：肝癌および胚細胞腫瘍
・  分析する組織：血液
・  使用方法：肝癌の診断および処置に対する応答の追跡を補助する；胚細胞腫瘍の病期、予後、および処置に対する応答を査定する
ベータ−２−ミクログロブリン（Ｂ２Ｍ）
・  癌タイプ：多発性骨髄腫、慢性リンパ球性白血病、およびあるリンパ腫
・  分析する組織：血液、尿、または脳脊髄液
・  使用方法：予後を判定し、処置に対する応答を追跡する
ベータ−ヒト絨毛性ゴナドトロピン（Ｂｅｔａ−ｈＣＧ）
・  癌タイプ：絨毛癌および睾丸癌
・  分析する組織：尿および血液
・  使用方法：病期、予後、および処置に対する応答を査定する
ＢＣＲ−ＡＢＬ融合遺伝子
・  癌タイプ：慢性骨髄性白血病
・  分析する組織：血液および／または骨髄
・  使用方法：診断を確認し、疾患状態をモニタリングする
ＢＲＡＦ変異Ｖ６００Ｅ
・  癌タイプ：皮膚メラノーマおよび結腸直腸癌
・  分析する組織：腫瘍
・  使用方法：標的療法に対する応答を予測する
ＣＡ１５−３／ＣＡ２７．２９
・  癌タイプ：乳癌
・  分析する組織：血液
・  使用方法：処置が作動しているかどうか、あるいは疾患が再発したかどうかを査定する
ＣＡ１９−９
・  癌タイプ：膵臓癌、胆嚢癌、胆管癌、および胃癌
・  分析する組織：血液
・  使用方法：処置が作動しているかどうかを査定する
ＣＡ−１２５
・  癌タイプ：卵巣癌
・  分析する組織：血液
・  使用方法：診断、処置に対する応答の査定および再発の評価を補助する
カルシトニン
・  癌タイプ：甲状腺髄様癌
・  分析する組織：血液
・  使用方法：診断を補助し、処置が作動しているかどうかを検査し、再発を査定する
癌胎児性抗原（ＣＥＡ）
・  癌タイプ：結腸直腸癌および乳癌
・  分析する組織：血液
・  使用方法：結腸直腸癌が拡散したかどうかを検査する；乳癌の再発を探査し、処置に対する応答を査定する
ＣＤ２０
・  癌タイプ：非ホジキンリンパ腫
・  分析する組織：血液
・  使用方法：標的療法による処置が適切かどうかを判定する
クロモグラニンＡ（ＣｇＡ）
・  癌タイプ：神経内分泌腫瘍
・  分析する組織：血液
・  使用方法：診断、処置に対する応答の査定および再発の評価を補助する
染色体３、７、１７および９ｐ２１
・  癌タイプ：膀胱癌
・  分析する組織：尿
・  使用方法：腫瘍再発のモニタリングを補助する
サイトケラチンフラグメント２１−１
・  癌タイプ：肺癌
・  分析する組織：血液
・  使用方法：再発のモニタリングを補助する
ＥＧＦＲ変異分析
・  癌タイプ：非小細胞肺癌
・  分析する組織：腫瘍
・  使用方法：処置および予後の判定を補助する
エストロゲン受容体（ＥＲ）／プロゲステロン受容体（ＰＲ）
・  癌タイプ：乳癌
・  分析する組織：腫瘍
・  使用方法：ホルモン療法（たとえば、タモキシフェン(tamoxifen)）による処置が
適切かどうかを判定する
フィブリン／フィブリノーゲン
・  癌タイプ：膀胱癌
・  分析する組織：尿
・  使用方法：進行および処置に対する応答をモニタリングする
ＨＥ４
・  癌タイプ：卵巣癌
・  分析する組織：血液
・  使用方法：疾患進行を査定し、再発をモニタリングする
ＨＥＲ２／ｎｅｕ
・  癌タイプ：乳癌、胃癌、および食道癌
・  分析する組織：腫瘍
・  使用方法：トラスツズマブ(trastuzumab)による処置が適切かどうかを判定する
免疫グロブリン
・  癌タイプ：多発性骨髄腫およびワルデンストレームマクログロブリン血症(Waldenstroem's macroglobulinemia)
・  分析する組織：血液および尿
・  使用方法：疾患の診断、処置に対する応答の査定および再発の探査を補助する
ＫＩＴ
・  癌タイプ：胃腸間質性腫瘍および粘膜メラノーマ
・  分析する組織：腫瘍
・  使用方法：診断および処置決定を補助する
ＫＲＡＳ変異分析
・  癌タイプ：結腸直腸癌および非小細胞肺癌
・  分析する組織：腫瘍
・  使用方法：特定のタイプの標的療法による処置が適切かどうかを判定する
乳酸デヒドロゲナーゼ
・  癌タイプ：胚細胞腫瘍
・  分析する組織：血液
・  使用方法：病期、予後、および処置に対する応答を査定する
核マトリックスプロテイン２２
・  癌タイプ：膀胱癌
・  分析する組織：尿
・  使用方法：処置に対する応答をモニタリングする
前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）
・  癌タイプ：前立腺癌
・  分析する組織：血液
・  使用方法：診断、処置に対する応答の査定および再発の探査を補助する
サイログロブリン
・  癌タイプ：甲状腺癌
・  分析する組織：腫瘍
・  使用方法：処置に対する応答を評価し、再発を探査する
ウロキナーゼプラスミノーゲンアクチベーター（ｕＰＡ）およびプラスミノーゲンアクチベーターインヒビター（ＰＡＩ−１）
・  癌タイプ：乳癌
・  分析する組織：腫瘍
・  使用方法：癌の攻撃性を判定し、処置をガイドする
５−プロテインシグネチャー（Ｏｖａ１）
・  癌タイプ：卵巣癌
・  分析する組織：血液
・  使用方法：卵巣癌の疑いについて外科処置前に骨盤（腔）内腫瘤（pelvic mass）
を査定する
２１−遺伝子シグネチャー（Ｏｎｃｏｔｙｐｅ  ＤＸ）
・  癌タイプ：乳癌
・  分析する組織：腫瘍
・  使用方法：再発のリスクを評価する
７０−遺伝子シグネチャー（Ｍａｍｍａｐｒｉｎｔ）
・  癌タイプ：乳癌
・  分析する組織：腫瘍
・  使用方法：再発のリスクを評価する
【図１】
2019103508.tif 000003
【図２】
2019103508.tif 000004
【図３Ａ】
2019103508.tif 000005
【図３Ｂ】
2019103508.tif 000006
【図３Ｃ】
2019103508.tif 000007
【図４】
2019103508.tif 000008
【図５】
2019103508.tif 000009
【図６】
2019103508.tif 000010
【図７】
2019103508.tif 000011
【図８】
2019103508.tif 000012
【図９】
2019103508.tif 000013
【手続補正書】
【提出日】平成31年4月24日(2019.4.24)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７７】
本発明のさらなる目的は、クオリティ・オブ・ライフを評価するための１以上の尺度が、疼痛尺度、クオリティ・オブ・ライフ尺度、癌療法の機能評価尺度、およびそのいずれかの組合せからなる群から選択される、前記のいずれかに定めたプロトコルを開示することである。
本願は以下の発明を包含する。
［項目１］  細胞に対する測定可能な作用をもつ被検体を同定するためのハイスループットスクリーニング（ＨＴＳ）方法であって、下記の工程を含む方法：
ａ．複数の細胞試料を含むアレイを用意する；
ｂ．試験すべき少なくとも１つの被検体を用意する；
ｃ．細胞試料を被検体と接触させる；そして
ｄ．細胞に対する測定可能な作用の指標となる信号を検出し、その際、対照試料に対比して細胞試料について測定した信号の経時変化はその細胞試料に対するその被検体の測定可能な作用の指標となる。
［項目２］  被検体が、カンナビノイド−タイプ、カンナビノイド誘導体、大麻抽出物またはその画分、非カンナビノイド−タイプの成分、生成物、化合物、分子または物質、およびそのいずれかの組合せからなる群から選択される、項目１に記載の方法。
［項目３］  細胞に対する測定可能な作用が、生理学的、遺伝学的、生化学的、構造的なもの、およびそのいずれかの組合せからなる群から選択される、項目１に記載の方法。
［項目４］  細胞に対する測定可能な作用が、抗増殖性、再生性、抗炎症性、抗有糸分裂性、分化性、抗転移性、抗血管新生性、アポトーシス性、細胞毒性、細胞変性性、およびそのいずれかの組合せからなる群から選択される、項目１に記載の方法。
［項目５］  細胞に対する測定可能な作用が、増殖、移動、吸光、接着、アポトーシス、壊死、オートファジー、細胞毒性、細胞サイズ、運動性、細胞周期、およびそのいずれかの組合せからなる群から選択される生物学的パラメーターに対する作用である、項目１に記載の方法。
［項目６］  癌細胞が、乳癌、卵巣癌、結腸／直腸癌、前立腺癌、メラノーマ、頭頸部癌、膵臓癌、骨肉腫、胃癌、神経膠腫、神経膠芽細胞腫、神経芽細胞腫、白血病、腺癌、副腎癌、肛門癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌、脳／ＣＮＳ癌、子宮頚癌、子宮内膜癌、食道癌、眼癌、胃腸癌、腎癌、白血病、肝癌、肺癌、リンパ腫、多発性骨髄腫、鼻腔癌および副鼻腔癌、鼻咽頭癌、非ホジキンリンパ腫、口腔癌、口腔咽頭癌、骨肉腫、卵巣癌、膵臓癌、陰茎癌、下垂体癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺癌、肉腫、皮膚癌、小腸癌、胃癌、睾丸癌、胸腺癌、甲状腺癌、子宮肉腫、膣癌および外陰癌、ならびにそのいずれかの組合せからなる群から選択される、項目１に記載の方法。
［項目７］  細胞試料が、異種移植細胞、同種移植細胞、細胞系、生検細胞、およびその組合せからなる群から選択される、項目１に記載の方法。
［項目８］  細胞系が、中枢神経系、骨、前立腺、胃、尿路、卵巣、造血およびリンパ系組織、腎臓、甲状腺、皮膚、軟組織、唾液腺、卵巣、肺、胸膜、肝臓、子宮内膜、膵臓、乳腺、上気道消化管、大腸、自律神経節、食道、胆管、小腸、自律神経節、ならびにそのいずれかの組合せからなる群から選択される癌細胞系である、項目１に記載の方法。
［項目９］  細胞試料が、ヒト細胞系、動物細胞系および異種移植細胞からなる群から選択される、項目１に記載の方法。
［項目１０］  細胞試料が、癌細胞、幹細胞、神経細胞、心筋細胞、体細胞、生殖細胞、正常細胞、およびそのいずれかの組合せからなる群から選択される、項目１に記載の方法。
［項目１１］  信号が、光、発光、蛍光、免疫、細胞数、放射性同位体、非放射性同位体、電気、およびそのいずれかの組合せからなる群から選択される、項目１に記載の方法。
［項目１２］  細胞に対する測定可能な作用が、ＡＬＫ遺伝子、アルファ−フェトプロテイン（ＡＦＰ）、ベータ−２−ミクログロブリン（Ｂ２Ｍ）、ベータ−ヒト絨毛性ゴナドトロピン（Ｂｅｔａ−ｈＣＧ）、ＢＣＲ−ＡＢＬ融合遺伝子、ＢＲＡＦ変異Ｖ６００Ｅ、ＣＡ１５−３／ＣＡ２７．２９、ＣＡ１９−９、ＣＡ−１２５、カルシトニン、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ＣＤ２０、クロモグラニンＡ（ＣｇＡ）、染色体３、７、１７および９ｐ２１、サイトケラチンフラグメント２１−１、ＥＧＦＲ変異、エストロゲン受容体（ＥＲ）／プロゲステロン受容体（ＰＲ）、フィブリン／フィブリノーゲン、ＨＥ４、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、免疫グロブリン、ＫＩＴ、ＫＲＡＳ変異、乳酸デヒドロゲナーゼ、核マトリックスプロテイン２２、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、サイログロブリン、ウロキナーゼプラスミノーゲンアクチベーター（ｕＰＡ）、プラスミノーゲンアクチベーターインヒビター（ＰＡＩ−１）、５−プロテインシグネチャー（Ｏｖａ１）、２１−遺伝子シグネチャー（Ｏｎｃｏｔｙｐｅ  ＤＸ）、７０−遺伝子シグネチャー（Ｍａｍｍａｐｒｉｎｔ）、ならびにそのいずれかの組合せからなる群から選択される癌マーカーの発現レベルに対する作用である、項目１に記載の方法。
［項目１３］  被検体が大麻から抽出され；大麻がカンナビス・サティバ(Cannabis sativa)、インド大麻(Cannabis indica)、カンナビス・ルデラリス(Cannabis ruderalis)、およびそのいずれかの組合せからなる群から選択される、項目１に記載の方法。
［項目１４］  カンナビノイド−タイプが、カンナビゲロール（ＣＢＧ）タイプ、カンナビクロメン（ＣＢＣ）タイプ、カンナビジオール（ＣＢＤ）タイプ、△９−テトラヒドロカンナビノール（ＴＨＣ）タイプ、△８−ＴＨＣタイプ、カンナビシクロール（ＣＢＬ）タイプ、カンナビエルソイン（ＣＢＥ）タイプ、カンナビノール（ＣＢＮ）タイプおよびカンナビノジオール（ＣＢＮＤ）タイプ、カンナビトリオール（ＣＢＴ）タイプ、種々のタイプのカンナビノイド、ならびにそのいずれかの組合せからなる群から選択される、項目２に記載の方法。
［項目１５］  カンナビノイド−タイプが、さらにテトラヒドロカンナビジオール（ＴＨＣ）またはその誘導体、カンナビジオール（ＣＢＤ）またはその誘導体、ＣＢＧ（カンナビゲロール）、ＣＢＣ（カンナビクロメン）、ＣＢＬ（カンナビシクロール）、ＣＢＶ（カンナビバリン）、ＴＨＣＶ（テトラヒドロカンナビバリン）、ＣＢＤＶ（カンナビジバリン）、ＣＢＣＶ（カンナビクロメバリン）、ＣＢＧＶ（カンナビゲロバリン）、ＣＢＧＭ（カンナビゲロール  モノメチルエーテル）、およびそのいずれかの組合せからなる群から選択される、項目１４に記載の方法。
［項目１６］  ＴＨＣまたはその誘導体が、ＴＨＣ、ＴＨＣＶ、ＴＨＣＡ、ＴＨＣＶＡ、デルタ−９−テトラヒドロカンナビノール（△９−ＴＨＣ）およびデルタ−８−テトラヒドロカンナビノール（△８−ＴＨＣ）、ならびにそのいずれかの組合せからなる群から選択される、項目１５に記載の方法。
［項目１７］  カンナビジオール（ＣＢＤ）またはその誘導体が、ＣＢＤ、ＣＢＤＶ、ＣＢＤＡおよびそのいずれかの組合せからなる群から選択される、項目１５に記載の方法。
［項目１８］  非カンナビノイド−タイプの成分、生成物、化合物、分子または物質が、テルペノイド、炭化水素、大麻由来の精油、窒素含有化合物、炭水化物、フラボノイド、脂肪酸、アミノ酸、タンパク質、糖タンパク質、酵素、糖類および関連化合物、非カンナビノイドフェノール類、単純アルコール類、アルデヒド類、ケトン類、酸、エステル類、ラクトン類、ステロイド類、テルペン類、フィトステロール類、たとえばカンペステロール、エルゴステロール、Ｅ−シトステロールおよびスティグマステロール、ビタミン類、たとえばビタミンＡおよびビタミンＫ、色素、たとえばカロテンおよびキサントフィル類、元素、たとえばＮａ、Ｋ、Ｃａ、Ｍｇ、Ｆｅ、Ｃｕ、Ｍｎ、ＺｎおよびＨｇ、ならびにそのいずれかの組合せからなる群から選択される、項目２に記載の方法。
［項目１９］  被検体が、ヒトおよび動物の身体からなる群から選択される供給源に由来するもの、植物から抽出されたもの、合成されたもの、ならびにそのいずれかの組合せである、項目１に記載の方法。
［項目２０］  ＨＴＳが、マイクロタイタープレート、自動コロニーピッカー、ｕＨＴＳまたはウルトラ−ハイスループットスクリーニング、ＨＴＳ薬物探索のための３Ｄ腫瘍スフェロイド分析法、Ｃｅｌｉｇｏイメージングサイトメーター、オートメーションシステム、高貯蔵容量および高速アクセス用のアッセイプレート貯蔵のためのカルーセルシステム、統合ロボットシステム、読出しまたは検出、データ収集プロセス、ならびにそのいずれかの組合せからなる群から選択される、項目１に記載の方法。
［項目２１］  被検体が、別個に投与された一般的な抗腫瘍または抗炎症療法薬により付与される作用と比較して、細胞に対する測定可能な作用に関する相乗作用を付与する、項目１に記載の方法。
［項目２２］  被検体が、別個に投与された一般的な抗腫瘍または抗炎症療法薬により付与される作用と比較して、抗腫瘍または抗炎症活性に関する禁忌作用を付与する、項目１に記載の方法。
［項目２３］  細胞に対する測定可能な作用をもつ被検体を同定するためのハイスループットスクリーニング（ＨＴＳ）システムであって、下記のものを含むシステム：
ａ．複数の細胞試料を含むアレイ；
ｂ．試験すべき少なくとも１つの被検体；および
ｃ．細胞に対する測定可能な作用の指標となる信号を検出するための手段；その際、対照試料に対比して細胞試料について測定した信号の経時変化はその細胞試料に対するその被検体の測定可能な作用の指標となる。
［項目２４］  被検体が、カンナビノイド−タイプ、カンナビノイド誘導体、大麻抽出物またはその画分、非カンナビノイド−タイプの成分、生成物、化合物、分子または物質、およびそのいずれかの組合せからなる群から選択される、項目２３に記載のシステム。
［項目２５］  細胞に対する測定可能な作用が、生理学的、遺伝学的、生化学的、構造的なもの、およびそのいずれかの組合せからなる群から選択される、項目２３に記載のシステム。
［項目２６］  細胞に対する測定可能な作用が、抗増殖性、再生性、抗炎症性、抗有糸分裂性、分化性、抗転移性、抗血管新生性、アポトーシス性、細胞毒性、細胞変性性、およびそのいずれかの組合せからなる群から選択される、項目２３に記載のシステム。
［項目２７］  細胞に対する測定可能な作用が、増殖、移動、吸光、接着、アポトーシス、壊死、オートファジー、細胞毒性、細胞サイズ、運動性、細胞周期、およびそのいずれかの組合せからなる群から選択される生物学的パラメーターに対する作用である、項目２３に記載のシステム。
［項目２８］  癌細胞が、乳癌、卵巣癌、結腸／直腸癌、前立腺癌、メラノーマ、頭頸部癌、膵臓癌、骨肉腫、胃癌、神経膠腫、神経膠芽細胞腫、神経芽細胞腫、白血病、腺癌、副腎癌、肛門癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌、脳／ＣＮＳ癌、子宮頚癌、子宮内膜癌、食道癌、眼癌、胃腸癌、腎癌、白血病、肝癌、肺癌、リンパ腫、多発性骨髄腫、鼻腔癌および副鼻腔癌、鼻咽頭癌、非ホジキンリンパ腫、口腔癌、口腔咽頭癌、骨肉腫、卵巣癌、膵臓癌、陰茎癌、下垂体癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺癌、肉腫、皮膚癌、小腸癌、胃癌、睾丸癌、胸腺癌、甲状腺癌、子宮肉腫、膣癌および外陰癌、ならびにそのいずれかの組合せからなる群から選択される、項目２３に記載のシステム。
［項目２９］  細胞試料が、異種移植細胞、同種移植細胞、細胞系、生検細胞、およびその組合せからなる群から選択される、項目２３に記載のシステム。
［項目３０］  細胞系が、中枢神経系、骨、前立腺、胃、尿路、卵巣、造血およびリンパ系組織、腎臓、甲状腺、皮膚、軟組織、唾液腺、卵巣、肺、胸膜、肝臓、子宮内膜、膵臓、乳腺、上気道消化管、大腸、自律神経節、食道、胆管、小腸、自律神経節、ならびにそのいずれかの組合せからなる群から選択される癌細胞系である、項目２９に記載のシステム。
［項目３１］  細胞試料が、ヒト細胞系、動物細胞系および異種移植細胞からなる群から選択される、項目２３に記載のシステム。
［項目３２］  細胞試料が、癌細胞、幹細胞、神経細胞、心筋細胞、体細胞、生殖細胞、正常細胞、およびそのいずれかの組合せからなる群から選択される、項目２３に記載のシステム。
［項目３３］  信号が、光、発光、蛍光、免疫、細胞数、放射性同位体、非放射性同位体、電気、およびそのいずれかの組合せからなる群から選択される、項目２３に記載のシステム。
［項目３４］  細胞に対する測定可能な作用が、ＡＬＫ遺伝子、アルファ−フェトプロテイン（ＡＦＰ）、ベータ−２−ミクログロブリン（Ｂ２Ｍ）、ベータ−ヒト絨毛性ゴナドトロピン（Ｂｅｔａ−ｈＣＧ）、ＢＣＲ−ＡＢＬ融合遺伝子、ＢＲＡＦ変異Ｖ６００Ｅ、ＣＡ１５−３／ＣＡ２７．２９、ＣＡ１９−９、ＣＡ−１２５、カルシトニン、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ＣＤ２０、クロモグラニンＡ（ＣｇＡ）、染色体３、７、１７および９ｐ２１、サイトケラチンフラグメント２１−１、ＥＧＦＲ変異、エストロゲン受容体（ＥＲ）／プロゲステロン受容体（ＰＲ）、フィブリン／フィブリノーゲン、ＨＥ４、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、免疫グロブリン、ＫＩＴ、ＫＲＡＳ変異、乳酸デヒドロゲナーゼ、核マトリックスプロテイン２２、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、サイログロブリン、ウロキナーゼプラスミノーゲンアクチベーター（ｕＰＡ）、プラスミノーゲンアクチベーターインヒビター（ＰＡＩ−１）、５−プロテインシグネチャー（Ｏｖａ１）、２１−遺伝子シグネチャー（Ｏｎｃｏｔｙｐｅ  ＤＸ）、７０−遺伝子シグネチャー（Ｍａｍｍａｐｒｉｎｔ）、ならびにそのいずれかの組合せからなる群から選択される癌マーカーの発現レベルに対する作用である、項目２３に記載のシステム。
［項目３５］  被検体が大麻から抽出され；大麻がカンナビス・サティバ(Cannabis sativa)、インド大麻(Cannabis indica)、カンナビス・ルデラリス(Cannabis ruderalis)、およびそのいずれかの組合せからなる群から選択される、項目２３に記載のシステム。
［項目３６］  カンナビノイド−タイプが、カンナビゲロール（ＣＢＧ）タイプ、カンナビクロメン（ＣＢＣ）タイプ、カンナビジオール（ＣＢＤ）タイプ、△９−テトラヒドロカンナビノール（ＴＨＣ）タイプ、△８−ＴＨＣタイプ、カンナビシクロール（ＣＢＬ）タイプ、カンナビエルソイン（ＣＢＥ）タイプ、カンナビノール（ＣＢＮ）タイプおよびカンナビノジオール（ＣＢＮＤ）タイプ、カンナビトリオール（ＣＢＴ）タイプ、種々のタイプのカンナビノイド、ならびにそのいずれかの組合せからなる群から選択される、項目２４に記載のシステム。
［項目３７］  カンナビノイド−タイプが、さらにテトラヒドロカンナビジオール（ＴＨＣ）またはその誘導体、カンナビジオール（ＣＢＤ）またはその誘導体、ＣＢＧ（カンナビゲロール）、ＣＢＣ（カンナビクロメン）、ＣＢＬ（カンナビシクロール）、ＣＢＶ（カンナビバリン）、ＴＨＣＶ（テトラヒドロカンナビバリン）、ＣＢＤＶ（カンナビジバリン）、ＣＢＣＶ（カンナビクロメバリン）、ＣＢＧＶ（カンナビゲロバリン）、ＣＢＧＭ（カンナビゲロール  モノメチルエーテル）、およびそのいずれかの組合せからなる群から選択される、項目３６に記載のシステム。
［項目３８］  ＴＨＣまたはその誘導体が、ＴＨＣ、ＴＨＣＶ、ＴＨＣＡ、ＴＨＣＶＡ、デルタ−９−テトラヒドロカンナビノール（△９−ＴＨＣ）およびデルタ−８−テトラヒドロカンナビノール（△８−ＴＨＣ）、ならびにそのいずれかの組合せからなる群から選択される、項目３７に記載のシステム。
［項目３９］  カンナビジオール（ＣＢＤ）またはその誘導体が、ＣＢＤ、ＣＢＤＶ、ＣＢＤＡおよびそのいずれかの組合せからなる群から選択される、項目３７に記載のシステム。
［項目４０］  非カンナビノイド−タイプの成分、生成物、化合物、分子または物質が、テルペノイド、炭化水素、大麻由来の精油、窒素含有化合物、炭水化物、フラボノイド、脂肪酸、アミノ酸、タンパク質、糖タンパク質、酵素、糖類および関連化合物、非カンナビノイドフェノール類、単純アルコール類、アルデヒド類、ケトン類、酸、エステル類、ラクトン類、ステロイド類、テルペン類、フィトステロール類、たとえばカンペステロール、エルゴステロール、Ｅ−シトステロールおよびスティグマステロール、ビタミン類、たとえばビタミンＡおよびビタミンＫ、色素、たとえばカロテンおよびキサントフィル類、元素、たとえばＮａ、Ｋ、Ｃａ、Ｍｇ、Ｆｅ、Ｃｕ、Ｍｎ、ＺｎおよびＨｇ、ならびにそのいずれかの組合せからなる群から選択される、項目２４に記載のシステム。
［項目４１］  被検体が、ヒトおよび動物の身体からなる群から選択される供給源に由来するもの、植物から抽出されたもの、合成されたもの、ならびにそのいずれかの組合せである、項目２３に記載のシステム。
［項目４２］  ＨＴＳが、マイクロタイタープレート、自動コロニーピッカー、ｕＨＴＳまたはウルトラ−ハイスループットスクリーニング、ＨＴＳ薬物探索のための３Ｄ腫瘍スフェロイド分析法、Ｃｅｌｉｇｏイメージングサイトメーター、オートメーションシステム、高貯蔵容量および高速アクセス用のアッセイプレート貯蔵のためのカルーセルシステム、統合ロボットシステム、読出しまたは検出、データ収集プロセス、ならびにそのいずれかの組合せからなる群から選択される、項目２３に記載のシステム。
［項目４３］  被検体が、別個に投与された一般的な抗腫瘍または抗炎症療法薬により付与される作用と比較して、細胞に対する測定可能な作用に関する相乗作用を付与する、項目２３に記載のシステム。
［項目４４］  被検体が、別個に投与された一般的な抗腫瘍または抗炎症療法薬により付与される作用と比較して、抗腫瘍または抗炎症活性に関する禁忌作用を付与する、項目２３に記載のシステム。
［項目４５］  １以上のコンピューターにより実装された場合、細胞に対する測定可能な作用の指標となる信号に関するデータを処理することにより、事前選択した細胞試料についての１以上の被検体の細胞に対する測定可能な作用に関するデータをその１以上のコンピューターに提示させる指示を含み、その際、対照試料に対比して細胞試料について測定した信号の経時変化はその細胞試料に対するその被検体の測定可能な作用の指標となる、非一過性コンピューター可読媒体。
［項目４６］  癌タイプの疾患または炎症性疾患の処置に使用するための、項目１に記載の方法に従って選択した療法有効量の被検体を含む組成物または本質的に療法有効量の被検体を含む抽出物であって、抗腫瘍活性もしくは抗炎症活性またはその相乗作用を有する組成物。
［項目４７］  被検体が、カンナビノイド−タイプ、カンナビノイド誘導体、大麻抽出物またはその画分、非カンナビノイド−タイプの成分、生成物、化合物、分子または物質、およびそのいずれかの組合せからなる群から選択される、項目４６に記載の組成物。
［項目４８］  大麻由来の１以上の遺伝子マーカーを同定する方法であって、その１以上の遺伝子マーカーが項目１に記載の方法により指示される細胞に対する測定可能な作用と相関し、その方法が信号を大麻ＤＮＡ配列データと相関付ける追加工程を含む方法。
［項目４９］
大麻由来の１以上の遺伝子マーカーであって、項目１に記載の方法により指示される細胞に対する測定可能な作用と相関し、さらにその信号が大麻ＤＮＡ配列データと相関する、１以上の遺伝子マーカー。
［項目５０］  １以上の遺伝子マーカーが、ゲノム遺伝子座におけるバリエーション、変異または変化、一塩基多型（ＳＮＰ）、ミニサテライト、ＲＦＬＰ（制限酵素断片長多型）、ＳＳＬＰ（単純配列長多型）、ＡＦＬＰ（増幅断片長多型）、ＲＡＰＤ（多型ＤＮＡのランダム増幅）、ＶＮＴＲ（可変数タンデムリピート）、ＳＳＲ（単純配列リピート）、マイクロサテライト多型、ＳＴＲ（ショートタンデムリピート）、ＳＦＰ（シングルフィーチャー多型）、ＤＡｒＴ（ダイバーシティーアレイテクノロジー）、ＲＡＤマーカー（制限部位関連ＤＮＡマーカー）ヌクレオチドの変化、ｉｎｄｅｌ、欠失、重複、逆位および／または挿入、ならびにそのいずれかの組合せからなる群から選択される、項目４８および４９に記載の遺伝子マーカー。
［項目５１］  被検体のデータベースであって、項目１に記載の工程を実装することにより規定された、細胞に対する測定可能な作用と相関する被検体に関するデータを含むデータベース。
［項目５２］  大麻抽出物またはその画分、カンナビノイド−タイプの成分、非カンナビノイド−タイプの成分、およびそのいずれかの組合せからなる群から選択される被検体を同定するためのハイスループットスクリーニング（ＨＴＳ）方法であって、その被検体がインビトロで細胞毒性または抗増殖活性または抗有糸分裂活性または細胞増殖阻害活性を示すものである、下記の工程を含む方法：
ａ．複数の癌細胞試料を含むアレイを用意する；
ｂ．試験すべき被検体を用意する；その被検体は大麻抽出物またはその画分、カンナビノイド−タイプの成分、非カンナビノイド−タイプの成分、およびそのいずれかの組合せからなる群から選択される；
ｃ．癌細胞試料を被検体と接触させる；
ｄ．インビトロでの細胞毒性または抗増殖活性または抗有糸分裂活性または細胞増殖阻害活性の指標となる信号を検出し、その際、対照試料に対比して癌細胞試料について測定した信号の経時変化はその癌細胞試料に対するその被検体のインビトロでの細胞毒性または抗増殖活性または抗有糸分裂活性または細胞増殖阻害活性の指標となる。
［項目５３］  大麻抽出物またはその画分、カンナビノイド−タイプの成分、非カンナビノイド−タイプの成分、およびそのいずれかの組合せからなる群から選択される被検体を同定するためのハイスループットスクリーニング（ＨＴＳ）方法であって、その被検体が抗腫瘍活性を示し、その方法が項目５２に記載の工程を含み、さらに下記の工程を含む方法：
ａ．その癌細胞試料に由来する異種移植癌細胞を実験動物に移植する；
ｂ．実験動物を、項目５２に記載の方法により同定した大麻抽出物またはその画分、カンナビノイド−タイプの成分、非カンナビノイド−タイプの成分、およびそのいずれかの組合せからなる群から選択される被検体で処理する；そして
ｃ．その実験動物の腫瘍増殖をモニタリングする。
［項目５４］  実験動物が、ヌードマウスである、項目５３に記載の方法。
［項目５５］  疾患と相関する細胞に対する測定可能な作用をもつ植物性被検体を同定するために有用なプロトコルであって、下記の工程を含むプロトコル：
ａ．被検体のパラメーター、細胞のパラメーター、項目１に記載の細胞に対する測定可能な作用をもつ被検体を同定するためのハイスループットスクリーニング（ＨＴＳ）結果のデータ、臨床または前臨床データ、およびそのいずれかの組合せからなる群から選択されるデータを含む入力データを用意する；
ｂ．そのデータを処理する；そして
ｃ．疾患と相関する細胞に対する被検体の測定可能な作用およびそのいずれかの組合せに関する出力データを電子ディスプレイに表示する。
［項目５６］  データ処理が、相関付ける、正規化する、較正する、因子分析する、計算する、統計解析する、およびそのいずれかの組合せからなる群から選択される工程を含む、項目５５に記載のプロトコル。
［項目５７］  被検体パラメーターが、被検体供給源、被検体加工、およびそのいずれかの組合せからなる群から選択される、項目５５に記載のプロトコル。
［項目５８］  植物性被検体供給源パラメーターが、供給源の株、供給源の遺伝子型、供給源の表現型、供給源の生育条件、供給源の収穫条件、供給源の栄養状態、供給源の部分または器官、およびそのいずれかの組合せからなる群から選択される、項目５７に記載のプロトコル。
［項目５９］  供給源の部分または器官が、根、幹、葉、花、種子、およびそのいずれかの組合せからなる群から選択される、項目５８に記載のプロトコル。
［項目６０］  植物性被検体加工パラメーターが、キュアリング、乾燥、抽出プロセス、脱カルボキシル、およびそのいずれかの組合せからなる群から選択される、項目５７に記載のプロトコル。
［項目６１］  抽出プロセスが、ブタン、ＣＯ２勾配、エタノール、ドライアイス、およびそのいずれかの組合せからなる群から選択される、項目６０に記載のプロトコル。
［項目６２］  細胞パラメーターが、細胞供給源、細胞処理、およびそのいずれかの組合せからなる群から選択される、項目５５に記載のプロトコル。
［項目６３］  細胞供給源が、生検細胞、細胞系、異種移植細胞、変異した細胞または分子、およびそのいずれかの組合せからなる群から選択される、項目６２に記載のプロトコル。
［項目６４］  細胞処理が、細胞培地処理、血清処理、細胞希釈、細胞周期、およびそのいずれかの組合せからなる群から選択される、項目６２に記載のプロトコル。
［項目６５］  細胞に対する測定可能な作用が、増殖、アポトーシス、移動、再生、分化、血管新生、およびそのいずれかの組合せからなる群から選択される、項目５５に記載のプロトコル。
［項目６６］  臨床または前臨床データが、対象へのその被検体の投与経路、投与量、放出形態、癌マーカーレベル、腫瘍サイズモニタリング、転移モニタリング、生存率、１以上の尺度に従って評価したクオリティ・オブ・ライフ、およびそのいずれかの組合せからなる群から選択される、項目５５に記載のプロトコル。
［項目６７］  投与経路が、舌下、経口、静脈内、局所、皮下、およびそのいずれかの組合せからなる群から選択される、項目６６に記載のプロトコル。
［項目６８］  放出形態が、徐放、制御放出、持続放出、即時または迅速放出、およびそのいずれかの組合せからなる群から選択される、項目６６に記載のプロトコル。
［項目６９］  癌マーカーが、ＡＬＫ遺伝子、アルファ−フェトプロテイン（ＡＦＰ）、ベータ−２−ミクログロブリン（Ｂ２Ｍ）、ベータ−ヒト絨毛性ゴナドトロピン（Ｂｅｔａ−ｈＣＧ）、ＢＣＲ−ＡＢＬ融合遺伝子、ＢＲＡＦ変異Ｖ６００Ｅ、ＣＡ１５−３／ＣＡ２７．２９、ＣＡ１９−９、ＣＡ−１２５、カルシトニン、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ＣＤ２０、クロモグラニンＡ（ＣｇＡ）、染色体３、７、１７および９ｐ２１、サイトケラチンフラグメント２１−１、ＥＧＦＲ変異、エストロゲン受容体（ＥＲ）／プロゲステロン受容体（ＰＲ）、フィブリン／フィブリノーゲン、ＨＥ４、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、免疫グロブリン、ＫＩＴ、ＫＲＡＳ変異、乳酸デヒドロゲナーゼ、核マトリックスプロテイン２２、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、サイログロブリン、ウロキナーゼプラスミノーゲンアクチベーター（ｕＰＡ）、プラスミノーゲンアクチベーターインヒビター（ＰＡＩ−１）、５−プロテインシグネチャー（Ｏｖａ１）、２１−遺伝子シグネチャー（Ｏｎｃｏｔｙｐｅ  ＤＸ）、７０−遺伝子シグネチャー（Ｍａｍｍａｐｒｉｎｔ）、ならびにそのいずれかの組合せからなる群から選択される、項目６６に記載のプロトコル。
［項目７０］  クオリティ・オブ・ライフを評価するための１以上の尺度が、疼痛尺度、クオリティ・オブ・ライフ尺度、癌療法の機能評価尺度、およびそのいずれかの組合せからなる群から選択される、項目６６に記載のプロトコル。
【手続補正２】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
がんタイプの疾患または炎症性疾患を治療するための抗腫瘍活性または抗炎症活性を有する組成物であって、療法有効量の、カンナビノイド−タイプ、カンナビノイド誘導体、大麻抽出物またはその画分から成る群より選択される被検体を含み、被検体はハイスループットスクリーニング（ＨＴＳ）によって選択される、前記組成物。
【請求項２】
被検体が、ＨＴＳにおける複数の細胞試料を含むアレイ中の細胞試料と接触すると、細胞試料に対する測定可能な作用の指標となる信号に影響を及ぼすことを特徴とし、対照試料に対比して細胞試料について測定した信号の経時変化は、その細胞試料に対するその被検体の測定可能な作用の指標となる、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
ＨＴＳが、細胞に対する測定可能な作用を有する被検体を同定するためのものであり、下記の工程：
（ａ）  複数の細胞試料を含むアレイを用意し；
（ｂ）  試験すべき少なくとも１つの被検体を用意し；
（ｃ）  細胞試料を被検体と接触させ；そして
（ｄ）  細胞に対する測定可能な作用の指標となる信号を検出する、
ことを含み、ここで、対照試料に対比して細胞試料について測定した信号の経時変化は、その細胞試料に対するその被検体の測定可能な作用の指標となる、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
被検体が、カンナビス・サティバ（Cannabis sativa）、インド大麻（Cannabis indica）、カンナビス・ルデラリス（Cannabis ruderalis）、およびそれらの組合せから成る群より選択される大麻から抽出される、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
被検体が、ヒトおよび動物の身体から成る群より選択される供給源に由来するもの、植物から抽出されたもの、合成されたもの、またはそれらの組合せである、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
被検体が、別個に投与された一般的な抗腫瘍または抗炎症療法薬により付与される作用と比較して、細胞に対する測定可能な作用に関する相乗作用を付与する、請求項１に記載の組成物。
【請求項７】
被検体が、別個に投与された一般的な抗腫瘍または抗炎症療法薬により付与される作用と比較して、抗腫瘍または抗炎症活性に関する禁忌作用を付与する、請求項１に記載の組成物。
【外国語明細書】
2019103508000001.pdf