(57)【要約】【課題】Ｐ．ａｃｎｅｓに対して安定的な生育促進効果を与え、皮膚においてＰ．ａｃｎｅｓの存在比率を高める皮膚常在菌叢改善剤を提供する。【解決手段】（ａ）グリセロール又はその誘導体及び（ｂ）シスチン又はその塩を有効成分とする皮膚常在菌叢改善剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）グリセロール又はその誘導体及び（ｂ）シスチン又はその塩を有効成分とする皮膚常在菌叢改善剤。
【請求項２】
プロピオニバクテリウム・アクネスの存在比率を高めるものである請求項１記載の皮膚常在菌叢改善剤。
【請求項３】
スタフィロコッカス・キャピティスの存在比率を下げ、プロピオニバクテリウム・アクネスの存在比率を高めるものである請求項１記載の皮膚常在菌叢改善剤。
【請求項４】
皮膚が頭皮である請求項１〜３のいずれか１項記載の皮膚常在菌叢改善剤。
【請求項５】
（ａ）がグリセロールである請求項１〜４のいずれか１項記載の皮膚常在菌叢改善剤。
【請求項６】
抗フケ剤である請求項１〜５のいずれか１項記載の皮膚常在菌叢改善剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、皮膚常在菌叢を正常化する皮膚常在菌叢改善剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、皮膚常在菌の菌叢解析及び、常在菌の機能に着目し、その機能を高める技術が開発されている。頭皮常在菌叢については、フケ症患者において皮膚常在菌であるプロピオニバクテリウム・アクネス（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｃｎｅｓ、以下「Ｐ．ａｃｎｅｓ」と略す。）の存在比率が下がり、スタフィロコッカス・キャピティス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｃａｐｉｔｉｓ、以下「Ｓ．ｃａｐｉｔｉｓ」と略す。）の存在比率が上がることが報告されており（非特許文献１）、両常在菌の比率がフケ症の判定にも用いられている（特許文献１）。これより、フケ症患者においてＰ．ａｃｎｅｓの存在比率を上げることが有用であると考えられる。
【０００３】
また、Ｐ．ａｃｎｅｓは皮脂を分解することにより遊離脂肪酸を産出し、皮膚のｐＨを低く保つことで日和見感染菌の増殖を抑えると考えられている（非特許文献２、３）。近年では、グリセロールを資化することで、プロピオン酸などの短鎖脂肪酸を放出し、黄色ブドウ球菌の生育を抑制することも知られている（非特許文献４）。
【０００４】
一方、非特許文献５では、Ｐ．ａｃｎｅｓに対し生育促進効果を有する物質として、Ｌ−システインが開示されているが、同文献ではシステインの安定性は低く、容易に酸化されてシスチンになると、その効果は喪失されることも言及されている。他方、オレイン酸トリグリセリド及びＬ−システインを含んだ皮膚常在菌増殖剤が開発されているが、その効果は十分とは言えない（特許文献２）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２０１６−２２０６３４号公報
【特許文献２】国際公開第９５／１６４３１号
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Xu Z et al., Sci Rep.,doi: 10.1038/srep24877, 2016.
【非特許文献２】Elias PM et al., Semin Immunopathol., 29(1), 3-14, 2007.
【非特許文献３】Marples RR et al., J Invest Dermatol., 56(2), 127-131, 1971.
【非特許文献４】Shu M et al., PloS One, 8 (2) , e55380, 2013.
【非特許文献５】Nielsen PA et al., J Clin Microbiol., 17 (2) , 276-289, 1983.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、Ｐ．ａｃｎｅｓに対して安定的な生育促進効果を有し、皮膚においてＰ．ａｃｎｅｓの存在比率を高める皮膚常在菌叢改善剤を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは斯かる課題に鑑み検討した結果、予想外にも安定性の高いシスチンをグリセロール誘導体等と併用した場合に、Ｐ．ａｃｎｅｓの生育が促進され、また、Ｓ．ｃａｐｉｔｉｓとＰ．ａｃｎｅｓが共存する環境において、Ｓ．ｃａｐｉｔｉｓの生育を抑制し、Ｐ．ａｃｎｅｓの存在比率を高め、皮膚常在菌叢の改善に有用であることを見出した。
【０００９】
すなわち、本発明は、（ａ）グリセロール又はその誘導体及び（ｂ）シスチン又はその塩を有効成分とする皮膚常在菌叢改善剤、に係るものである。
【発明の効果】
【００１０】
本発明の皮膚常在菌叢改善剤は、Ｓ．ｃａｐｉｔｉｓの生育を抑制し、Ｐ．ａｃｎｅｓの存在比率を高めることが可能である。したがって、皮膚、特に頭皮の常在菌叢の改善に有効であり、フケの予防又は改善に有用である。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
本発明の（ａ）で示されるグリセロールの誘導体としては、（ｂ）のシスチン又はその塩との併用において、（ｂ）成分の単独使用に比較し、より高いＰ．ａｃｎｅｓの生育促進効果が得られるものであれば特に限定されない。
【００１２】
グリセロールの誘導体としては、ポリグリセロール、又はグリセロール若しくはポリグリセロールの１以上の水酸基がアシル化されたアシル誘導体又はアルキル化されたアルキル誘導体が好適に挙げられる。
ポリグリセロールとしては、グリセロールが３〜６個分子結合した直鎖のポリグリセロールが好適に挙げられる。
アシル誘導体を構成するアシル基としてはラウロイル、ミリストイル、パルミトイル、パルミトオレオイル、ステアロイル、オレオイル、リノレオイル等を挙げることができ、複数のアシル基は同一であっても異なっていてもよい。
グリセロールのアシル誘導体としては、モノアシルグリセロール、ジアシルグリセロール、トリアシルグリセロール（例えば、シア脂、オリーブ油、マカデミアナッツ油、メドフォーム油、ヒマシ油、紅花油、ヒマワリ油、アボカド油、キャノーラ油、キョウニン油等の植物油、合成トリアシルグリセロール）の何れでも良い。
【００１３】
アルキル誘導体を構成するアルキル基としては、例えば、メチル基、エチル基、イソプロピル基、tert-ブチル基等を挙げることができ、複数のアルキル基は同一であっても異なっていてもよい。
【００１４】
（ａ）で示されるグリセロール又はその誘導体としては、好ましくはグリセロールであり、例えば、Ｇｌｙｃｅｒｏｌ，２０％  Ｓｔｅｒｉｌｅ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（ＡＭＲＥＳＣＯ，  ＬＣＣ）を使用することができる。
【００１５】
（ｂ）で示されるシスチンとしては、Ｌ−体、Ｄ−体、ＤＬ−体、ｍｅｓｏ−体のいずれも使用できる。これらのうち、天然に多く存在し、入手が容易である点でＬ−体が好ましい。
また、シスチンの塩としては、酸付加塩、金属塩、アンモニウム塩、有機アミン付加塩、アミノ酸付加塩等が挙げられる。
【００１６】
酸付加塩としては、塩酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩等の無機酸塩、酢酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、クエン酸塩、リンゴ酸塩、乳酸塩、α−ケトグルタル酸塩、グルコン酸塩、カプリル酸塩等の有機酸塩が挙げられる。
【００１７】
金属塩としては、アルカリ金属（カリウム、ナトリウム等）の塩、アルカリ土類金属（カルシウム、マグネシウム等）の塩、アルミニウム塩、亜鉛塩等が挙げられる。
アンモニウム塩としては、アンモニウム、テトラメチルアンモニウム等の塩が挙げられる。
有機アミン付加塩としては、例えばトリエチルアミン、メチルアミン、ジメチルアミン、シクロペンチルアミン、ベンジルアミン、フェネチルアミン、ピペリジン、モノエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン、リジン、アルギニン、Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン等の塩が挙げられる。
【００１８】
このうち、酸付加塩が好ましく、生産性の容易さから塩酸塩がより好ましく、安定性の点から二塩酸塩が更に好ましく、例えばＬ（−）−シスチン二塩酸塩（和光純薬工業（株）を使用することができる。
【００１９】
後記実施例に示すように、グリセロール又はその誘導体及びシスチン又はその塩の組み合わせは、Ｐ．ａｃｎｅｓに対して優れた生育促進効果を有し、Ｐ．ａｃｎｅｓとＳ．ｃａｐｉｔｉｓの混合培養において、フケの発症に関与するＳ．ｃａｐｉｔｉｓの生育を抑制し、Ｐ．ａｃｎｅｓの生育を促進する。
すなわち、（ａ）グリセロール又はその誘導体と、（ｂ）シスチン又はその塩の併用は、皮膚上のＰ．ａｃｎｅｓの存在比率を高める皮膚常在菌叢改善剤又は抗フケ剤として使用することができ、また、当該菌叢改善剤又は抗フケ剤を製造するために使用することができる。ここで、前者の「使用」には、ヒトもしくは非ヒト動物、又はそれらに由来する組織、器官、細胞における使用が包含され、また治療的使用であっても非治療的使用であってもよい。
【００２０】
斯かる皮膚常在菌叢改善剤及び抗フケ剤は、皮膚常在菌叢を正常化するため、フケを予防又は改善するための化粧品、医薬品、医薬部外品となり得、或いはこれらへ配合するための素材又は製剤となり得る。
【００２１】
本発明の皮膚常在菌叢改善剤において、「皮膚常在菌叢改善」とは、皮膚常在菌叢のバランスの崩れを予防又は正常化し、皮膚を健康に維持することを意味し、より具体的には、皮膚上のＰ．ａｃｎｅｓの存在比率を上げるように菌叢を改善すること、好ましくは同時に皮膚上のＳ．ｃａｐｉｔｉｓの存在比率を下げるように菌叢を改善することを意味する。また、皮膚としては頭皮が好ましい。
斯かるＳ．ｃａｐｉｔｉｓ及びＰ．ａｃｎｅｓの存在比率は、培養法を利用したｃｆｕ／ｍｌの算出、又は１６Ｓ  ｒＤＮＡ量を測定するｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ  ｒｅａｌ−ｔｉｍｅ  ＰＣＲ法等よって確認することができる。
【００２２】
既に述べたとおり、フケ症患者において皮膚常在菌であるＰ．ａｃｎｅｓの存在比率が下がり、Ｓ．ｃａｐｉｔｉｓの存在比率が上がることが報告されており（非特許文献１）、両常在菌の比率がフケ症の判定に用いられる（特許文献１）ことから、本発明の皮膚常在菌叢改善剤は、フケ発症の抑制及び／又はフケ症状を改善する抗フケ剤として使用可能である。
【００２３】
本発明の（ａ）成分及び（ｂ）成分を含む、上記化粧品、医薬品、医薬部外品等の各種製剤の形態は非経口投与の形態であるのが好ましく、外皮に使用される皮膚外用剤であるのがより好ましい。具体的には、軟膏、クリーム、乳液、溶液、ローション、ジェル、エアゾール、パッチ、テープ、スプレー等の形態で用いるのが好ましく、リーブオンタイプであるのがより好ましい。
当該皮膚外用剤は、皮膚常在菌への作用効果、すなわちＰ．ａｃｎｅｓへの生育促進効果から、Ｐ．ａｃｎｅｓが存在する外皮、特に頭皮に適用するものであるのが望ましい。
【００２４】
上記製剤は、それぞれ一般的な製造法により、本発明の（ａ）成分及び（ｂ）成分を、製剤上許容し得る担体、例えば、各種油剤、界面活性剤、ゲル化剤、防腐剤、酸化防止剤、溶剤、アルコール、水、キレート剤、増粘剤、紫外線吸収剤、乳化安定剤、ｐＨ調整剤、色素、香料等と共に混合、分散した後、所望の形態に加工することによって得ることができる。また、これらの製剤には、本発明の（ａ）成分及び（ｂ）成分の他、それぞれ化粧品、医薬部外品、医薬品等の製剤の種類に応じて、適宜、保湿剤、抗菌剤、清涼剤等の薬効成分を本発明の効果を妨害しない範囲で適宜配合することができる。
【００２５】
上記の製剤中における（ａ）グリセロール又はその誘導体の含有量は、Ｐ．ａｃｎｅｓに対する生育促進効果の点から、通常、製剤全量の０．１０（ｖ／ｖ）％以上、好ましくは０．１２５（ｖ／ｖ）％以上、より好ましくは０．５（ｖ／ｖ）％以上、さらに好ましくは１（ｖ／ｖ）％以上で、且つ１０（ｖ／ｖ）％以下、好ましくは８（ｖ／ｖ）％以下、より好ましく４（ｖ／ｖ）％以下、より好ましくは２（ｖ／ｖ）％以下であり、また０．１〜１０（ｖ／ｖ）％、好ましくは０．１２５〜８（ｖ／ｖ）％、より好ましくは０．５〜４．０（ｖ／ｖ）％、さらに好ましくは１．０〜２．０（ｖ／ｖ）％である。
【００２６】
また、（ｂ）シスチン又はその塩の含有量は、Ｐ．ａｃｎｅｓに対する生育促進効果の点から、シスチン二塩酸塩換算において製剤全量の０．０００１（ｗ／ｖ）％以上、好ましくは０．０００３（ｗ／ｖ）％以上、より好ましくは０．０００６（ｗ／ｖ）％以上、さらに好ましくは０．００１（ｗ／ｖ）％以上で、且つ０．０５（ｗ／ｖ）％以下、好ましく０．０２（ｗ／ｖ）％以下、より好ましくは０．０１（ｗ／ｖ）％以下、さらに好ましくは０．００５（ｗ／ｖ）％以下であり、また好ましくは０．０００１〜０．０５（ｗ／ｖ）％、好ましくは０．０００３〜０．０２（ｗ／ｖ）％、より好ましくは０．０００６〜０．０１（ｗ／ｖ）％、もっとも好ましくは０．００１〜０．００５（ｗ／ｖ）％である。
【００２７】
投与量は、対象者の状態、製剤形態、有効成分の含有量、その他の要因に従って変動し得るが、例えば皮膚外用剤の場合の塗布量は、皮膚表面１ｃｍ２当たり０．００００１ｍｇ以上、好ましくは０．００１ｍｇ以上、且つ１０ｍｇ以下、好ましくは０．１ｍｇ以下、また、０．００００１〜１０ｍｇ、好ましくは０．００１〜０．１ｍｇである。
また、当該製剤は、任意の投与計画に従って投与され得るが、１日１回〜数回に分け、数週間〜数カ月間継続して投与することが好ましい。
上記化粧品、医薬品又は医薬部外品の適用の対象としては、それを必要としていれば特に限定されないが、皮膚常在菌叢のバランスの崩れを予防又は正常化し、皮膚を健康に維持すること望むヒト、フケの予防又は改善を望むヒトが好ましい。
【００２８】
上述した実施形態に関し、本発明においてはさらに以下の態様が開示される。
＜１＞（ａ）グリセロール又はその誘導体及び（ｂ）シスチン又はその塩を有効成分とする皮膚常在菌叢改善剤。
＜２＞皮膚常在菌叢改善剤の製造のための（ａ）グリセロール又はその誘導体及び（ｂ）シスチン又はその塩の組み合わせの使用。
＜３＞皮膚常在菌叢改善に使用するための（ａ）グリセロール又はその誘導体及び（ｂ）シスチン又はその塩の組み合わせ。
＜４＞（ａ）グリセロール又はその誘導体及び（ｂ）シスチン又はその塩を対象に投与することを含む、皮膚常在菌叢改善方法。
＜５＞＜１＞〜＜４＞において、皮膚常在菌叢改善はプロピオニバクテリウム・アクネスの存在比率を高めるものである。
＜６＞＜１＞〜＜４＞において、皮膚常在菌叢改善はスタフィロコッカス・キャピティスの存在比率を下げ、プロピオニバクテリウム・アクネスの存在比率を高めるものである。
＜７＞＜１＞〜＜６＞において、皮膚は好ましくは頭皮である。
＜８＞＜１＞〜＜６＞において、（ａ）は好ましくはグリセロールである。
＜９＞＜１＞〜＜６＞において、皮膚常在菌叢改善はフケの予防又は改善である。
＜１０＞＜１＞〜＜９＞において、グリセロール又はその誘導体の濃度は０．１０（ｖ／ｖ）％以上、好ましくは０．１２５（ｖ／ｖ）％以上、より好ましくは０．５（ｖ／ｖ）％以上、さらに好ましくは１（ｖ／ｖ）％以上で、且つ１０（ｖ／ｖ）％以下、好ましくは８（ｖ／ｖ）％以下、より好ましく４（ｖ／ｖ）％以下、より好ましくは２（ｖ／ｖ）％以下であり、また０．１〜１０（ｖ／ｖ）％、好ましくは０．１２５〜８（ｖ／ｖ）％、より好ましくは０．５〜４．０（ｖ／ｖ）％、さらに好ましくは１．０〜２．０（ｖ／ｖ）％であり、シスチン又はその塩の濃度はシスチン二塩酸塩換算において０．０００１（ｗ／ｖ）％以上、好ましくは０．０００３（ｗ／ｖ）％以上、より好ましくは０．０００６（ｗ／ｖ）％以上、さらに好ましくは０．００１（ｗ／ｖ）％以上で、且つ０．０５（ｗ／ｖ）％以下、好ましく０．０２（ｗ／ｖ）％以下、より好ましくは０．０１（ｗ／ｖ）％以下、さらに好ましくは０．００５（ｗ／ｖ）％以下であり、また好ましくは０．０００１〜０．０５（ｗ／ｖ）％、好ましくは０．０００３〜０．０２（ｗ／ｖ）％、より好ましくは０．０００６〜０．０１（ｗ／ｖ）％、もっとも好ましくは０．００１〜０．００５（ｗ／ｖ）％である。
【実施例】
【００２９】
＜材料及び条件＞
菌株：Ｐ．ａｃｎｅｓ：ＡＴＣＣ１１８２８
Ｓ．ｃａｐｉｔｉｓ：ＡＴＣＣ２７８４０
培地：ＬＢ培地「ダイゴ」（日本製薬（株））
培養条件：３７℃、静置
微好気条件：アネロパック・微好気（三菱ガス化学（株））
嫌気条件：アネロパック・嫌気（三菱ガス化学（株））
成分：（ａ）グリセロール「Ｇｌｙｃｅｒｏｌ，２０％Ｓｔｅｒｉｌｅ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（ＡＭＲＥＳＣＯ，  ＬＣＣ）」
（ｂ）シスチン二塩酸塩「Ｌ（−）−シスチン二塩酸塩（和光純薬工業（株））」
（ｃ）トリアシルグリセロール「オリーブ油  （和光純薬工業（株））」
ディスポーザル白金耳：白金耳はWATSON社製のディスポループ 10μ
【００３０】
実施例１  Ｐ．ａｃｎｅｓに対する生育促進効果
ＧＡＭ寒天培地上で培養（嫌気状態、３７℃、４８ｈ）したＰ．ａｃｎｅｓをディスポーザル白金耳を用いて回収し、滅菌生理食塩水に懸濁（滅菌生理食塩水５ｍＬに対し、１白金耳）し、吸光光度計（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ  Ｊａｐａｎ社製バイオスペクトロメーター）を用いてＯＤ６００を測定した。初期ＯＤ６００＝０．０２になるように、２００μＬのＬＢ培地が入った９６  ｗｅｌｌ  Ｕ底マイクロプレート（ＩＷＡＫＩ）に植菌し、成分（ｂ）シスチン二塩酸塩及び（ｃ）トリアシルグリセロール、又は成分（ａ）グリセロール及び（ｂ）シスチン二塩酸塩を各種濃度となるように添加した。微好気条件で３７℃、４８ｈ培養後、マイクロプレートリーダーｉｎｆｉｔｅ  Ｍ２００（テカン（株））を用いて６００ｎｍにおける吸光度を測定した。この結果を表１、２及び３に示す。
【００３１】
表１、２及び３よりシスチン二塩酸塩及びトリアシルグリセロール、又はシスチン二塩酸塩及びグリセロールを組み合せることによりＰ．ａｃｎｅｓに対する生育促進効果が認められた。シスチン二塩酸及びグリセロールの組み合わせにおいて、特に高いＰ．ａｃｎｅｓの生育促進効果が認められた。
【００３２】
【表１】
2019043898.tif 000002
【００３３】
【表２】
2019043898.tif 000003
【００３４】
【表３】
2019043898.tif 000004
【００３５】
実施例２  Ｐ．ａｃｎｅｓとＳ．ｃａｐｉｔｉｓの混合培養における菌数変化
Ｐ．ａｃｎｅｓとＳ．ｃａｐｉｔｉｓをそれぞれ１０７ｃｆｕ／ｍＬ（ＯＤ６００で換算）となるよう、ＬＢ培地に植菌し、成分（ａ）グリセロール又は（ｃ）トリアシルグリセロールを１ｖ／ｖ％、及び成分（ｂ）シスチン二塩酸塩を０．００２５ｗ／ｖ％となるように培地に添加した。ここで、成分（ａ）又は（ｃ）、及び（ｂ）を添加していない条件の培地をコントロールとした。微好気条件で４８ｈ培養後、培養液１００μＬをそれぞれ５μｇ／ｍｌムピロシン添加ＧＡＭ寒天培地（Ｐ．ａｃｎｅｓ選択培地）もしくは、卵黄加マンニット食塩寒天生培地（日本ＢＤ）（Ｓ．ｃａｐｉｔｉｓ選択培地）に植菌した。ＧＡＭ培地は嫌気状態（アネロパック・嫌気）で、３７℃、４８ｈ培養し、卵黄加マンニット食塩寒天生培地は好気状態で３７℃、２４ｈ培養した後のコロニーをカウントした。得られたコロニー数からそれぞれのｃｆｕ／ｍＬを算出した。この結果を表４に示す。また一例として、シスチン二塩酸塩及びグリセロールを添加した場合の全菌数におけるそれぞれの菌数の存在比率（％）を非添加の場合と比較して、表５に示す。
表４から、いずれの添加系においてもＳ．ｃａｐｉｔｉｓの生育が抑制され、Ｐ．ａｃｎｅｓの生育が促進された。また、表５から、グリセロール及びシスチン二塩酸塩を組み合わせることにより、Ｐ．ａｃｎｅｓの存在比率が顕著に高くなることが判明した。
以上の結果から、グリセロール又はトリアシルグリセロール、及びシスチン又はその塩との併用は、皮膚常在菌叢の改善に効果のあることが認められた。特にＳ．ｃａｐｉｔｉｓの生育が抑制され、Ｐ．ａｃｎｅｓの生育が促進されることより、フケ症の予防又は改善に有用であると考えられる。
【００３６】
【表４】
2019043898.tif 000005
【００３７】
【表５】
2019043898.tif 000006