(57)【要約】【課題】  好気性細菌を用いた球状の炭酸マンガン微粒子の製造方法を提供すること。【解決手段】  ２価のマンガン塩を含む寒天培地で特定の好気性細菌を培養することを特徴とする球状の炭酸マンガン微粒子の製造方法を提供する。【選択図】  図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
２価のマンガン塩を含む寒天培地で、Ｅｎｓｉｆｅｒ属細菌、Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属細菌、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ属細菌及びＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ属細菌からなる群より選択される好気性細菌を培養することを特徴とする、球状の炭酸マンガン微粒子の製造方法。
【請求項２】
好気性細菌が、Ｅｎｓｉｆｅｒ  ａｄｈａｅｒｅｎｓ  ＪＣＭ２１１０５、Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｅｓｔａｃｅｕｍ  ＪＣＭ１３５３、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｐｒｏｔｅｇｅｎｓ  ＤＳＭ１９０９５及びＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｃｙａｎｅｏｆｕｓｃａｔｕｓ  ＪＣＭ４３６４からなる群より選択される好気性細菌である、請求項１に記載の製造方法。
【請求項３】
２価のマンガン塩が、塩化マンガン（ＩＩ）、酢酸マンガン（ＩＩ）及びこれらの水和物からなる群より選択される、請求項１又は２に記載の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、細菌を用いた球状の炭酸マンガン微粒子の製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
球状の粒子径のそろった炭酸マンガン微粒子は、流動性に優れ、高充填密度を可能にするため、リチウムイオン二次電池の陽極活性物質の材料等として有用であり、特許文献１及び特許文献２には、その化学的手法による製造方法が開示されている。しかしながら、このような化学的手法では、水質汚濁による環境への悪影響が懸念されるアンモニア又はアンモニウム塩を含有する溶液を使用する必要がある。
【０００３】
これまでに、炭酸マンガン微粒子が金属還元細菌により嫌気環境下で形成されることが非特許文献１及び非特許文献２で開示されているが、形成された炭酸マンガン微粒子は球状ではなく菱面体又は立方体であった。非特許文献３では、好気性の好塩性細菌Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｍａｕｒａにより炭酸マンガンが形成されることが開示されているが、ドロマイト（ＣａＭｇ（ＣＯ３）２）等との混合物として形成されるため炭酸マンガンのみを得ることは困難であり、その形状は不明であった。したがって、これまでに細菌を用いた球状の炭酸マンガン微粒子の製造方法は知られていなかった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２０００−１９１３２７号公報
【特許文献２】国際公開第２０１６／０２１０６７号
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Ｒｏｈ  ｅｔ  ａｌ．Ａｐｐｌｉｅｄ  ａｎｄ  Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，２００２年，６８巻，６０１３−６０２０頁．
【非特許文献２】Ｊｉａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．ＣｈｅｍＳｕｓＣｈｅｍ，２０１５年，８巻，１５８−１６３．
【非特許文献３】Ｒｉｖａｄｅｎｅｙｒａ  ｅｔ  ａｌ．Ｅｘｔｒｅｍｏｐｈｉｌｅｓ，２０１７年，２１巻，１０４９−１０５６頁．
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、好気性細菌を用いた球状の炭酸マンガン微粒子の製造方法を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者は鋭意検討した結果、２価のマンガン塩を含む寒天培地で特定の好気性細菌を培養することにより球状の炭酸マンガン微粒子が形成されることを見出し、本発明を完成させるに至った。
【０００８】
すなわち、本発明は以下の通りである。
［１］２価のマンガン塩を含む寒天培地で、Ｅｎｓｉｆｅｒ属細菌、Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属細菌、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ属細菌及びＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ属細菌からなる群より選択される好気性細菌を培養することを特徴とする、球状の炭酸マンガン微粒子の製造方法。
［２］好気性細菌が、Ｅｎｓｉｆｅｒ  ａｄｈａｅｒｅｎｓ  ＪＣＭ２１１０５、Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｅｓｔａｃｅｕｍ  ＪＣＭ１３５３、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｐｒｏｔｅｇｅｎｓ  ＤＳＭ１９０９５及びＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｃｙａｎｅｏｆｕｓｃａｔｕｓ  ＪＣＭ４３６４からなる群より選択される好気性細菌である、前記［１］に記載の製造方法。
［３］２価のマンガン塩が、塩化マンガン（ＩＩ）、酢酸マンガン（ＩＩ）及びこれらの水和物からなる群より選択される、前記［１］又は［２］に記載の製造方法。
【発明の効果】
【０００９】
本発明によって、水質汚濁による環境への悪影響が懸念されるアンモニア又はアンモニウム化合物を含有する溶液を使用せずに、温和な好気環境下で簡便に実施可能な、好気性細菌を用いた球状の炭酸マンガン微粒子の製造方法が提供される。本発明によって製造される球状の炭酸マンガン微粒子はリチウムイオン二次電池の陽極活性物質の材料、触媒活性を有する酸化マンガンの材料、フェライトの材料、顔料等に有用である。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】実施例１で得られた球状の炭酸マンガン微粒子の低真空走査電子顕微鏡像
【図２】実施例１で得られた球状の炭酸マンガン微粒子のＸ線回折パターン
【図３】実施例２で得られた球状の炭酸マンガン微粒子の低真空走査電子顕微鏡像
【図４】実施例２で得られた球状の炭酸マンガン微粒子のＸ線回折パターン
【図５】実施例３で得られた球状の炭酸マンガン微粒子の低真空走査電子顕微鏡像
【図６】実施例３で得られた球状の炭酸マンガン微粒子のＸ線回折パターン
【図７】実施例４で得られた球状の炭酸マンガン微粒子の低真空走査電子顕微鏡像
【図８】実施例４で得られた球状の炭酸マンガン微粒子のＸ線回折パターン
【発明を実施するための形態】
【００１１】
本発明の製造方法に用いる２価のマンガン塩を含む寒天培地（以下、本発明のマンガン含有寒天培地と称する。）について説明する。
【００１２】
本発明のマンガン含有寒天培地の２価のマンガン塩は、水に溶解して２価のマンガンイオンを生成するものであればよく、特に限定するものではないが、具体例としては、塩化マンガン（ＩＩ）、酢酸マンガン（ＩＩ）及び硫酸マンガン（ＩＩ）が挙げられる。また、これら２価のマンガン塩は水和物であってもよい。ただし、硫酸マンガン（ＩＩ）は加熱により分解し、硫黄酸化物を含む有害ガスを生じる恐れがあるため、塩化マンガン（ＩＩ）又は酢酸マンガン（ＩＩ）が好ましい。本発明のマンガン含有寒天培地の２価のマンガン塩の濃度は、好気性細菌を培養することにより球状の炭酸マンガン微粒子が良好に産生される点で０．２ｍＭから２００ｍＭの範囲であることが好ましい。この範囲内で、培養する好気性細菌の増殖と球状の炭酸マンガン微粒子の産生を指標にして濃度を最適化することがさらに好ましい。
【００１３】
本発明のマンガン含有寒天培地は、２価のマンガン塩以外に好気性細菌の増殖に必要な炭素源、窒素源、無機塩供給源などの栄養成分を含む。該栄養成分としては、培養しようとする好気性細菌の生育に適する成分であれば特に限定されないが、一般的な栄養培地成分、例えばペプトン、酵母エキス、グルコース、無機塩等が用いられる。
【００１４】
本発明のマンガン含有寒天培地は、培地を固化するためのゲル化剤として寒天を含む。含まれる寒天の濃度は、好気性細菌がコロニーを形成できる程度の固形性を保つ濃度であれば特に限定されないが、例えば、０．８％（ｗ／ｖ）から２．０％（ｗ／ｖ）の範囲で寒天を培地に添加することができる。
【００１５】
本発明のマンガン含有寒天培地は、水を用いて調製するが、水由来の不純物の混入を防ぐ観点からイオン交換水、蒸留水などの純水を用いることが好ましい。
【００１６】
本発明のマンガン含有寒天培地は、目的としないカビ又は酵母の増殖を防ぐために必要であれば抗真菌剤（アンホテリシンＢ、フルコナゾール、イトラコナゾール、ボリコナゾール、シクロヘキシミド等）を含有させてもよい。
【００１７】
本発明のマンガン含有寒天培地のｐＨは培養しようとする好気性細菌の生育に適する範囲であれば特に限定されない。
【００１８】
本発明のマンガン含有寒天培地の具体的な例として、表１、２及び３に示した寒天培地ＡからＪの組成をもつものを挙げることができる。
【００１９】
【表１】
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【００２０】
【表２】
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【００２１】
【表３】
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【００２２】
本発明のマンガン含有寒天培地は、例えば、オートクレーブ等を用いてその組成物を加熱滅菌した後、寒天が固まる前にシャーレなどの容器に流し込み、固化させて平板培地として作製することができる。
【００２３】
次に、本発明の製造方法において用いることができる好気性細菌（以下、本発明の好気性細菌と称する。）について説明する。
【００２４】
本発明の好気性細菌は、本発明のマンガン含有寒天培地で培養することにより、球状の炭酸マンガン微粒子を形成する好気性細菌である。該好気性細菌とは、呼吸に酸素を使う真正細菌（バクテリア）のことである。
【００２５】
本発明の好気性細菌は、Ｅｎｓｉｆｅｒ属細菌、Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属細菌、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ属細菌、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ属細菌からなる群より選択される好気性細菌である。Ｅｎｓｉｆｅｒ属細菌の具体例としては、Ｅｎｓｉｆｅｒ  ａｄｈａｅｒｅｎｓを挙げることができる。Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属細菌の具体例としては、Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｅｓｔａｃｅｕｍを挙げることができる。Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ属細菌の具体例としては、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｐｒｏｔｅｇｅｎｓを挙げることができる。Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ属細菌の具体例としては、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｃｙａｎｅｏｆｕｓｃａｔｕｓを挙げることができる。これらの好気性細菌は、国立研究開発法人  理化学研究所  バイオリソースセンター  微生物材料開発室やＬｅｉｂｎｉｚ−Ｉｎｓｔｉｔｕｔ  ＤＳＭＺ−Ｄｅｕｔｓｃｈｅ  Ｓａｍｍｌｕｎｇ  ｖｏｎ  Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ  ｕｎｄ  Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ  ＧｍｂＨ（ドイツ）などのカルチャーコレクションから入手することができる。好ましい具体例としては、Ｅｎｓｉｆｅｒ  ａｄｈａｅｒｅｎｓ  ＪＣＭ２１１０５、Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｅｓｔａｃｅｕｍ  ＪＣＭ１３５３、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｐｒｏｔｅｇｅｎｓ  ＤＳＭ１９０９５及びＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｃｙａｎｅｏｆｕｓｃａｔｕｓ  ＪＣＭ４３６４を挙げることができる。
【００２６】
本発明の好気性細菌の代謝の影響によって、本発明のマンガン含有寒天培地中で球状の炭酸マンガン微粒子が形成される。そのため、本発明の好気性細菌と類似の代謝を有する好気性細菌であれば、本発明のマンガン含有寒天培地中で球状の炭酸マンガン微粒子の形成が起こる。
【００２７】
続いて、本発明の球状の炭酸マンガン微粒子の製造方法について説明する。
【００２８】
本発明の球状の炭酸マンガン微粒子の製造方法は、本発明のマンガン含有寒天培地に本発明の好気性細菌を接種し、これを培養することで球状の炭酸マンガン微粒子を形成させ、培養後の培養物から球状の炭酸マンガン微粒子を回収して製造する方法である。
【００２９】
本発明のマンガン含有寒天培地に本発明の好気性細菌を接種する方法は、特に限定されないが、例えば、白金耳、滅菌綿棒等で本発明の好気性細菌の菌体又は滅菌水などで調製した菌体懸濁液を取り出し培地表面へ画線塗抹する方法、本発明の好気性細菌の菌体懸濁液を培地表面に少量添加してコンラージ棒等で培地表面に広げて塗抹する方法等を挙げることができる。
【００３０】
本発明の好気性細菌を培養する方法として、好気的な環境下での静置培養を挙げることができる。静置培養する場合、培養温度は、使用する本発明の好気性細菌の生育に適する温度であればよく、例えば、好気性細菌がＥｎｓｉｆｅｒ  ａｄｈａｅｒｅｎｓであれば２０℃〜３７℃の範囲、Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｅｓｔａｃｅｕｍであれば２０℃〜３０℃の範囲、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｐｒｏｔｅｇｅｎｓであれば４℃〜３６℃の範囲、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｃｙａｎｅｏｆｕｓｃａｔｕｓであれば２０℃〜３０℃の範囲から適宜選ばれた温度で培養を行うことができる。培養の時間は、球状の炭酸マンガン微粒子の形成に適した時間であれば特に限定されず、球状の炭酸マンガン微粒子の形成を指標にして最適化すればよい。
【００３１】
培養後の培養物から球状の炭酸マンガン微粒子を回収する方法については特に限定はないが、例えば、寒天が溶解する温度以上に培養物を加熱して溶液状にし、そこから球状の炭酸マンガン微粒子を沈殿物等として分離し、回収する方法が挙げられる。また、球状の炭酸マンガン微粒子を効率的に回収するために、培養後の培養物から不要な菌体を溶菌又は除去する操作を球状の炭酸マンガン微粒子の回収前に行ってもよい。培養後の培養物から不要な菌体を溶菌させる方法としては、例えば、不要な菌体に対してリゾチームなどの溶菌酵素を作用させた後、ドデシル硫酸ナトリウムなどの界面活性剤処理を行い溶菌させる方法が挙げられる。培養後の培養物から不要な菌体を除去する方法としては、例えば、培養物（寒天培地上）の菌体をコンラージ棒やスクレーパーのようなもので物理的に取り除く方法、流水で洗い流し取り除く方法等が挙げられる。他には、以下のメンブレンフィルターを用いた菌体除去方法を例示できる。
【００３２】
メンブレンフィルターを用いた菌体除去方法［以下の（ａ）から（ｃ）］
（ａ）メンブレンフィルターは、親水性で細菌の細胞を通さない０．５μｍ以下の孔径のものを使用する。メンブレンフィルターの具体例としては、セルロースアセテートメンブレンフィルター、セルロース混合エステルメンブレンフィルター、再生セルロースメンブレンフィルター、ナイロンメンブレンフィルター、親水性ＰＶＤＦメンブレンフィルター等が挙げられる。
【００３３】
本発明のマンガン含有寒天培地を作製する際に、滅菌済みのメンブレンフィルターを表面に設置する。具体的には、オートクレーブを用いて本発明のマンガン含有寒天培地の組成物を加熱滅菌した後、寒天が固化する前にシャーレなどの容器に流し込み、寒天が固化する前に滅菌済みのメンブレンフィルターを浮かべ、その後、固化させて平板培地とする。
（ｂ）本発明のマンガン含有寒天培地の表面に設置したメンブレンフィルター上に本発明の好気性細菌を接種し、これを培養することで球状の炭酸マンガン微粒子を産生する。
（ｃ）表面に菌体が存在するメンブレンフィルターを除去することで、培養後の培養物から不要な菌体を除去する。
【００３４】
次に、本発明によって製造される球状の炭酸マンガン微粒子について説明する。
【００３５】
本発明によって製造される球状の炭酸マンガン微粒子は、ロードクロサイトであり、粒径は１００μｍ以下である。本発明によって製造される球状の炭酸マンガン微粒子の表面には細かなおうとつが存在する。
【００３６】
本発明でいう球状とは、たまの形、たまの様な俯瞰的に見て表面に角がない形のことであり、割球（受精卵が二細胞期から胞胚期まで卵割を繰り返して生じた細胞）の様ないびつな形状も含む。
【実施例】
【００３７】
以下、本発明の実施の形態について、実施例を用いて詳細に説明するが、本実施例は本発明の一形態を説明するためのものであり、本発明を限定するものではない。
【００３８】
実施例１
（１）寒天培地の作製
寒天培地Ａ（表１）を６００ｍＬ調製し、オートクレーブ（１２１℃、２０分間）滅菌後に滅菌済プラスチックシャーレ（径×高さ：９０ｍｍ×２０ｍｍ）２０枚に分注して固化させた。
（２）Ｅｎｓｉｆｅｒ  ａｄｈａｅｒｅｎｓによる球状の炭酸マンガン微粒子の産生
好気性細菌として、国立研究開発法人  理化学研究所  バイオリソースセンター  微生物材料開発室から分譲されたＥｎｓｉｆｅｒ  ａｄｈａｅｒｅｎｓ  ＪＣＭ２１１０５を使用し、２０枚の寒天培地Ａに白金耳を用いて全面に画線塗抹することで接種して好気環境下の２８℃で７日間静置培養を行った。
【００３９】
光学顕微鏡（ＢＨ−２、オリンパス）（観察倍率：１００倍）を用いてＥｎｓｉｆｅｒ  ａｄｈａｅｒｅｎｓ  ＪＣＭ２１１０５を接種した寒天培地Ａの観察を行った結果、培養開始から４日後以降に球状の炭酸マンガン微粒子がコロニー部分及びその周囲の寒天培地Ａ中に産生されることが観察された。
（３）球状の炭酸マンガン微粒子の回収
７日間の培養後にＥｎｓｉｆｅｒ  ａｄｈａｅｒｅｎｓ  ＪＣＭ２１１０５を接種した寒天培地Ａから球状の炭酸マンガン微粒子の回収を下記の方法により行った。
【００４０】
培養後の寒天培地Ａに対して、シャーレ一枚あたり１０ｍＬの５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ(ｐＨ８．０)と１００μＬの１０ｍｇ/ｍＬ  ｌｙｓｏｚｙｍｅ（太陽化学）を加え、コンラージ棒を用いて菌体を懸濁後、３７℃で１時間静置した。さらに、シャーレ一枚あたり１ｍＬの１０％（ｗ／ｖ）ドデシル硫酸ナトリウムを加え、コンラージ棒を用いて菌体を懸濁後、３７℃で１時間静置した。その後、爪楊枝を用いてシャーレ中の寒天培地を砕き、溶液とともに砕いた寒天培地Ａをコニカルビーカーに移した。該コニカルビーカーに寒天培地Ａの容積の約２倍量のイオン交換水を加え、オートクレーブ処理（１２１℃、２０分間）により滅菌と寒天の溶解を行った。オートクレーブ処理後、該コニカルビーカーの溶液が固化しない高温時に、球状の炭酸マンガン微粒子の沈殿を残して上清を捨てた。該コニカルビーカーにイオン交換水を入れて攪拌し、静置後上清を捨てることで球状の炭酸マンガン微粒子の沈殿を洗浄した。この洗浄操作をさらに２回行った。洗浄後、球状の炭酸マンガン微粒子の沈殿を少量のイオン交換水で懸濁し、その懸濁液を２ｍＬ容のマイクロチューブに移した。静置後、上清を捨てて−８０℃で凍結した。その後、凍結乾燥を行い、球状の炭酸マンガン微粒子を得た。
【００４１】
２０枚のＥｎｓｉｆｅｒ  ａｄｈａｅｒｅｎｓ  ＪＣＭ２１１０５を接種した寒天培地Ａから球状の炭酸マンガン微粒子を１９．５ｍｇ回収した。
（４）球状の炭酸マンガン微粒子の解析
低真空走査電子顕微鏡（Ｍｉｎｉｓｃｏｐｅ  ＴＭ−１０００、日立）を用いて球状の炭酸マンガン微粒子の観察を行った（図１）。球状の炭酸マンガン微粒子の表面には細かなおうとつが観察された。顕微鏡観察により計測した球状の炭酸マンガン微粒子の粒径は１０．１±２．８μｍ（ｎ＝２００）であった。
【００４２】
全自動水平型多目的Ｘ線回折装置（ＳｍａｒｔＬａｂ、リガク）を用いた粉末Ｘ線回折法により球状の炭酸マンガン微粒子の解析を行った。その結果、球状の炭酸マンガン微粒子はロードクロサイト（ＭｎＣＯ３）であると同定された（図２）。
【００４３】
実施例２
（１）寒天培地の作製
寒天培地Ａ（表１）を６００ｍＬ調製し、オートクレーブ（１２１℃、２０分間）滅菌後に滅菌済プラスチックシャーレ（径×高さ：９０ｍｍ×２０ｍｍ）２０枚に分注して固化させた。
（２）Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｅｓｔａｃｅｕｍによる球状の炭酸マンガン微粒子の産生
好気性細菌として、国立研究開発法人  理化学研究所  バイオリソースセンター  微生物材料開発室から分譲されたＭｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｅｓｔａｃｅｕｍ  ＪＣＭ１３５３を使用し、２０枚の寒天培地Ａに白金耳を用いて全面に画線塗抹することで接種して好気環境下の２８℃で７日間静置培養を行った。
【００４４】
光学顕微鏡（観察倍率：１００倍）を用いてＭｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｅｓｔａｃｅｕｍ  ＪＣＭ１３５３を接種した寒天培地Ａの観察を行った結果、培養開始から２日後以降に球状の炭酸マンガン微粒子がコロニー部分及びその周囲の寒天培地Ａ中に産生されることが観察された。
（３）球状の炭酸マンガン微粒子の回収
７日間の培養後にＭｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｅｓｔａｃｅｕｍ  ＪＣＭ１３５３を接種した寒天培地Ａから球状の炭酸マンガン微粒子の回収を実施例１の（３）に記載の方法と同様の方法により行った。
【００４５】
２０枚のＭｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｅｓｔａｃｅｕｍ  ＪＣＭ１３５３を接種した寒天培地Ａから球状の炭酸マンガン微粒子を７１．５ｍｇ回収した。
（４）球状の炭酸マンガン微粒子の解析
低真空走査電子顕微鏡を用いて球状の炭酸マンガン微粒子の観察を行った（図３）。球状の炭酸マンガン微粒子の表面には細かなおうとつが観察された。顕微鏡観察により計測した球状の炭酸マンガン微粒子の粒径は１２．３±４．３μｍ（ｎ＝２００）であった。
【００４６】
全自動水平型多目的Ｘ線回折装置を用いた粉末Ｘ線回折法により球状の炭酸マンガン微粒子の解析を行った。その結果、球状の炭酸マンガン微粒子はロードクロサイト（ＭｎＣＯ３）であると同定された（図４）。
【００４７】
実施例３
（１）寒天培地の作製
寒天培地Ｂ（表１）を６００ｍＬ調製し、オートクレーブ（１２１℃、２０分間）滅菌後にシャーレ２０枚に分注して固化させた。
（２）Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｐｒｏｔｅｇｅｎｓによる球状の炭酸マンガン微粒子の産生
好気性細菌として、Ｌｅｉｂｎｉｚ−Ｉｎｓｔｉｔｕｔ  ＤＳＭＺ−Ｄｅｕｔｓｃｈｅ  Ｓａｍｍｌｕｎｇ  ｖｏｎ  Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ  ｕｎｄ  Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ  ＧｍｂＨ（ドイツ）から分譲されたＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｐｒｏｔｅｇｅｎｓ  ＤＳＭ１９０９５を使用し、２０枚の寒天培地Ｂに白金耳を用いて全面に画線塗抹することで接種して好気環境下の２８℃で７日間静置培養を行った。
【００４８】
光学顕微鏡（観察倍率：１００倍）を用いてＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｐｒｏｔｅｇｅｎｓ  ＤＳＭ１９０９５を接種した寒天培地Ｂの観察を行った結果、培養開始から４日後以降に球状の炭酸マンガン微粒子がコロニー部分及びその周囲の寒天培地Ｂ中に産生されることが観察された。
（３）球状の炭酸マンガン微粒子の回収
７日間の培養後にＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｐｒｏｔｅｇｅｎｓ  ＤＳＭ１９０９５を接種した寒天培地Ｂから球状の炭酸マンガン微粒子の回収を実施例１の（３）に記載の方法と同様の方法により行った。
【００４９】
２０枚のＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｐｒｏｔｅｇｅｎｓ  ＤＳＭ１９０９５を接種した寒天培地Ｂから球状の炭酸マンガン微粒子を１５．２ｍｇ回収した。
（４）球状の炭酸マンガン微粒子の解析
低真空走査電子顕微鏡を用いて球状の炭酸マンガン微粒子の観察を行った（図５）。球状の炭酸マンガン微粒子の表面には細かなおうとつが観察された。顕微鏡観察により計測した球状の炭酸マンガン微粒子の粒径は１０．７±３．１μｍ（ｎ＝２００）であった。
【００５０】
全自動水平型多目的Ｘ線回折装置を用いた粉末Ｘ線回折法により球状の炭酸マンガン微粒子の解析を行った。その結果、球状の炭酸マンガン微粒子はロードクロサイト（ＭｎＣＯ３）であると同定された（図６）。
【００５１】
実施例４
（１）寒天培地の作製
寒天培地Ａ（表１）を６００ｍＬ調製し、オートクレーブ（１２１℃、２０分間）滅菌後に滅菌済プラスチックシャーレ（径×高さ：９０ｍｍ×２０ｍｍ）２０枚に分注して固化させた。
（２）Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｃｙａｎｅｏｆｕｓｃａｔｕｓによる球状の炭酸マンガン微粒子の産生
好気性細菌として、国立研究開発法人  理化学研究所  バイオリソースセンター  微生物材料開発室から分譲されたＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｃｙａｎｅｏｆｕｓｃａｔｕｓ  ＪＣＭ４３６４を使用し、２０枚の寒天培地Ａに白金耳を用いて全面に画線塗抹することで接種して好気環境下の２８℃で７日間静置培養を行った。
【００５２】
光学顕微鏡（観察倍率：１００倍）を用いてＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｃｙａｎｅｏｆｕｓｃａｔｕｓ  ＪＣＭ４３６４を接種した寒天培地Ａの観察を行った結果、培養開始から４日後以降に球状の炭酸マンガン微粒子がコロニー部分及びその周囲の寒天培地Ａ中に産生されることが観察された。
（３）球状の炭酸マンガン微粒子の回収
培養後にＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｃｙａｎｅｏｆｕｓｃａｔｕｓ  ＪＣＭ４３６４を接種した寒天培地Ａから球状の炭酸マンガン微粒子の回収を実施例１の（３）に記載の方法と同様の方法により行った。
【００５３】
２０枚のＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｃｙａｎｅｏｆｕｓｃａｔｕｓ  ＪＣＭ４３６４を接種した寒天培地Ａから球状の炭酸マンガン微粒子の回収を行ったが、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｃｙａｎｅｏｆｕｓｃａｔｕｓ  ＪＣＭ４３６４の菌体を除くことができず、球状の炭酸マンガン微粒子とともに菌体も回収された。そのため、球状の炭酸マンガン微粒子の回収量は測定しなかった。
（４）球状の炭酸マンガン微粒子の解析
低真空走査電子顕微鏡を用いて球状の炭酸マンガン微粒子の観察を行った（図７）。球状の炭酸マンガン微粒子の表面には細かなおうとつが観察された。顕微鏡観察により計測した球状の炭酸マンガン微粒子の粒径は１０．１±２．３μｍ（ｎ＝２００）であった。
【００５４】
全自動水平型多目的Ｘ線回折装置を用いた粉末Ｘ線回折法により球状の炭酸マンガン微粒子の解析を行った。その結果、球状の炭酸マンガン微粒子はロードクロサイト（ＭｎＣＯ３）であると同定された（図８）。
【００５５】
実施例５
寒天培地Ｃ（表１）を調製し、オートクレーブ（１２１℃、２０分間）滅菌後に滅菌済プラスチックシャーレに分注して固化させた。
【００５６】
Ｅｎｓｉｆｅｒ  ａｄｈａｅｒｅｎｓ  ＪＣＭ２１１０５、Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｅｓｔａｃｅｕｍ  ＪＣＭ１３５３及びＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｐｒｏｔｅｇｅｎｓ  ＤＳＭ１９０９５をそれぞれ寒天培地Ｃに白金耳を用いて全面に画線塗抹することで接種し、好気環境下の２８℃で７日間静置培養を行った。
【００５７】
培養後、寒天培地Ｃでの球状の炭酸マンガン微粒子の産生について光学顕微鏡（観察倍率：１００倍）を用いて観察した。その結果、寒天培地Ｃに接種したＥｎｓｉｆｅｒ  ａｄｈａｅｒｅｎｓ  ＪＣＭ２１１０５、Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｅｓｔａｃｅｕｍ  ＪＣＭ１３５３及びＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｐｒｏｔｅｇｅｎｓ  ＤＳＭ１９０９５はいずれもコロニー部分及びその周囲の寒天培地Ｃ中に球状の炭酸マンガン微粒子を産生した。
【００５８】
実施例６
寒天培地Ｄ（表１）を調製し、オートクレーブ（１２１℃、２０分間）滅菌後に滅菌済プラスチックシャーレに分注して固化させた。
【００５９】
Ｅｎｓｉｆｅｒ  ａｄｈａｅｒｅｎｓ  ＪＣＭ２１１０５、Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｅｓｔａｃｅｕｍ  ＪＣＭ１３５３、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｐｒｏｔｅｇｅｎｓ  ＤＳＭ１９０９５及びＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｃｙａｎｅｏｆｕｓｃａｔｕｓ  ＪＣＭ４３６４をそれぞれ寒天培地Ｄに白金耳を用いて全面に画線塗抹することで接種し、好気環境下の２８℃で７日間静置培養を行った。
【００６０】
培養後、寒天培地Ｄでの球状の炭酸マンガン微粒子の産生について光学顕微鏡（観察倍率：１００倍）を用いて観察した。その結果、寒天培地Ｄに接種したＥｎｓｉｆｅｒ  ａｄｈａｅｒｅｎｓ  ＪＣＭ２１１０５、Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｅｓｔａｃｅｕｍ  ＪＣＭ１３５３、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｐｒｏｔｅｇｅｎｓ  ＤＳＭ１９０９５及びＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｃｙａｎｅｏｆｕｓｃａｔｕｓ  ＪＣＭ４３６４はいずれもコロニー部分及びその周囲の寒天培地Ｄ中に球状の炭酸マンガン微粒子を産生した。
【００６１】
実施例７
寒天培地Ｅ（表１）を調製し、オートクレーブ（１２１℃、２０分間）滅菌後に滅菌済プラスチックシャーレに分注して固化させた。
【００６２】
Ｅｎｓｉｆｅｒ  ａｄｈａｅｒｅｎｓ  ＪＣＭ２１１０５及びＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｐｒｏｔｅｇｅｎｓ  ＤＳＭ１９０９５をそれぞれ寒天培地Ｅに白金耳を用いて全面に画線塗抹することで接種し、好気環境下の２８℃で７日間静置培養を行った。
【００６３】
培養後、寒天培地Ｅでの球状の炭酸マンガン微粒子の産生について光学顕微鏡（観察倍率：１００倍）を用いて観察した。その結果、寒天培地Ｅに接種したＥｎｓｉｆｅｒ  ａｄｈａｅｒｅｎｓ  ＪＣＭ２１１０５及びＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｐｒｏｔｅｇｅｎｓ  ＤＳＭ１９０９５はいずれもコロニー部分及びその周囲の寒天培地Ｅ中に球状の炭酸マンガン微粒子を産生した。
【００６４】
実施例８
寒天培地Ｆ（表１）を調製し、オートクレーブ（１２１℃、２０分間）滅菌後に滅菌済プラスチックシャーレに分注して固化させた。
【００６５】
Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｅｓｔａｃｅｕｍ  ＪＣＭ１３５３を寒天培地Ｆに白金耳を用いて全面に画線塗抹することで接種し、好気環境下の２８℃で７日間静置培養を行った。
【００６６】
培養後、寒天培地Ｆでの球状の炭酸マンガン微粒子の産生について光学顕微鏡（観察倍率：１００倍）を用いて観察した。その結果、寒天培地Ｆに接種したＭｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｅｓｔａｃｅｕｍ  ＪＣＭ１３５３はコロニー部分及びその周囲の寒天培地Ｆ中に球状の炭酸マンガン微粒子を産生した。
【００６７】
実施例９
寒天培地Ｇ（表２）を調製し、オートクレーブ（１２１℃、２０分間）滅菌後に滅菌済プラスチックシャーレに分注して固化させた。
【００６８】
Ｅｎｓｉｆｅｒ  ａｄｈａｅｒｅｎｓ  ＪＣＭ２１１０５、Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｅｓｔａｃｅｕｍ  ＪＣＭ１３５３、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｐｒｏｔｅｇｅｎｓ  ＤＳＭ１９０９５及びＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｃｙａｎｅｏｆｕｓｃａｔｕｓ  ＪＣＭ４３６４をそれぞれ寒天培地Ｇに白金耳を用いて全面に画線塗抹することで接種し、好気環境下の２８℃で７日間静置培養を行った。
【００６９】
培養後、寒天培地Ｇでの球状の炭酸マンガン微粒子の産生について光学顕微鏡（観察倍率：１００倍）を用いて観察した。その結果、寒天培地Ｇに接種したＥｎｓｉｆｅｒ  ａｄｈａｅｒｅｎｓ  ＪＣＭ２１１０５、Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｅｓｔａｃｅｕｍ  ＪＣＭ１３５３、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｐｒｏｔｅｇｅｎｓ  ＤＳＭ１９０９５及びＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｃｙａｎｅｏｆｕｓｃａｔｕｓ  ＪＣＭ４３６４はいずれもコロニー部分及びその周囲の寒天培地Ｇ中に球状の炭酸マンガン微粒子を産生した。
【００７０】
実施例１０
寒天培地Ｈ（表２）を調製し、オートクレーブ（１２１℃、２０分間）滅菌後に滅菌済プラスチックシャーレに分注して固化させた。
【００７１】
Ｅｎｓｉｆｅｒ  ａｄｈａｅｒｅｎｓ  ＪＣＭ２１１０５、Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｅｓｔａｃｅｕｍ  ＪＣＭ１３５３、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｐｒｏｔｅｇｅｎｓ  ＤＳＭ１９０９５及びＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｃｙａｎｅｏｆｕｓｃａｔｕｓ  ＪＣＭ４３６４をそれぞれ寒天培地Ｈに白金耳を用いて全面に画線塗抹することで接種し、好気環境下の２８℃で７日間静置培養を行った。
【００７２】
培養後、寒天培地Ｈでの球状の炭酸マンガン微粒子の産生について光学顕微鏡（観察倍率：１００倍）を用いて観察した。その結果、寒天培地Ｈに接種したＥｎｓｉｆｅｒ  ａｄｈａｅｒｅｎｓ  ＪＣＭ２１１０５、Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｅｓｔａｃｅｕｍ  ＪＣＭ１３５３、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｐｒｏｔｅｇｅｎｓ  ＤＳＭ１９０９５及びＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｃｙａｎｅｏｆｕｓｃａｔｕｓ  ＪＣＭ４３６４はいずれもコロニー部分及びその周囲の寒天培地Ｈ中に球状の炭酸マンガン微粒子を産生した。
【００７３】
実施例１１
寒天培地Ｉ（表３）を調製し、オートクレーブ（１２１℃、２０分間）滅菌後に滅菌済プラスチックシャーレに分注して固化させた。
【００７４】
Ｅｎｓｉｆｅｒ  ａｄｈａｅｒｅｎｓ  ＪＣＭ２１１０５及びＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｃｙａｎｅｏｆｕｓｃａｔｕｓ  ＪＣＭ４３６４をそれぞれ寒天培地Ｉに白金耳を用いて全面に画線塗抹することで接種し、好気環境下の２８℃で７日間静置培養を行った。
【００７５】
培養後、寒天培地Ｉでの球状の炭酸マンガン微粒子の産生について光学顕微鏡（観察倍率：１００倍）を用いて観察した。その結果、寒天培地Ｉに接種したＥｎｓｉｆｅｒ  ａｄｈａｅｒｅｎｓ  ＪＣＭ２１１０５及びＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｃｙａｎｅｏｆｕｓｃａｔｕｓ  ＪＣＭ４３６４はいずれもコロニー部分及びその周囲の寒天培地Ｉ中に球状の炭酸マンガン微粒子を産生した。
【００７６】
実施例１２
寒天培地Ｊ（表３）を調製し、オートクレーブ（１２１℃、２０分間）滅菌後に滅菌済プラスチックシャーレに分注して固化させた。
【００７７】
Ｅｎｓｉｆｅｒ  ａｄｈａｅｒｅｎｓ  ＪＣＭ２１１０５、Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｅｓｔａｃｅｕｍ  ＪＣＭ１３５３及びＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｃｙａｎｅｏｆｕｓｃａｔｕｓ  ＪＣＭ４３６４をそれぞれ寒天培地Ｊに白金耳を用いて全面に画線塗抹することで接種し、好気環境下の２８℃で７日間静置培養を行った。
【００７８】
培養後、寒天培地Ｊでの球状の炭酸マンガン微粒子の産生について光学顕微鏡（観察倍率：１００倍）を用いて観察した。その結果、寒天培地Ｊに接種したＥｎｓｉｆｅｒ  ａｄｈａｅｒｅｎｓ  ＪＣＭ２１１０５、Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｅｓｔａｃｅｕｍ  ＪＣＭ１３５３及びＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｃｙａｎｅｏｆｕｓｃａｔｕｓ  ＪＣＭ４３６４はいずれもコロニー部分及びその周囲の寒天培地Ｊ中に球状の炭酸マンガン微粒子を産生した。
【００７９】
実施例１３
セルロースアセテートメンブレンフィルター（孔径０．４５μｍ）をオートクレーブ（１２１℃、２０分間）滅菌した。
【００８０】
寒天培地Ａ（表１）を調製し、オートクレーブ（１２１℃、２０分間）滅菌後に滅菌済プラスチックシャーレに分注し、寒天培地Ａが固化する前に滅菌済みのセルロースアセテートメンブレンフィルターを浮かべ、その後、固化させた。
【００８１】
Ｅｎｓｉｆｅｒ  ａｄｈａｅｒｅｎｓ  ＪＣＭ２１１０５を寒天培地Ａの表面に設置したセルロースアセテートメンブレンフィルター上に白金耳を用いて画線塗抹することで接種し、好気環境下の２８℃で７日間静置培養を行った。
【００８２】
培養後、表面に菌体が存在するセルロースアセテートメンブレンフィルターを除去することで、培養後の培養物から不要な菌体を除去した。
【００８３】
寒天培地Ａのセルロースアセテートメンブレンフィルターを除去した部分について光学顕微鏡（観察倍率：１００倍）を用いて観察した結果、培地中に産生された球状の炭酸マンガン微粒子が認められた。一方、菌体は観察されなかった。
【００８４】
爪楊枝を用いて寒天培地Ａのセルロースアセテートメンブレンフィルターを除去した部分の一部（約０．３ｇ）を切り出し、１．５ｍＬ容のマイクロチューブに移した。これに９００μＬのイオン交換水を添加して、９５℃で２０分加熱して寒天を溶解させ、沈殿物として球状の炭酸マンガン微粒子を回収した。
【００８５】
実施例１４
セルロースアセテートメンブレンフィルター（孔径０．４５μｍ）をオートクレーブ（１２１℃、２０分間）滅菌した。
【００８６】
寒天培地Ａ（表１）を調製し、オートクレーブ（１２１℃、２０分間）滅菌後に滅菌済プラスチックシャーレに分注し、寒天培地Ａが固化する前に滅菌済みのセルロースアセテートメンブレンフィルターを浮かべ、その後、固化させた。
【００８７】
Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｅｓｔａｃｅｕｍ  ＪＣＭ１３５３を寒天培地Ａの表面に設置したセルロースアセテートメンブレンフィルター上に白金耳を用いて画線塗抹することで接種し、好気環境下の２８℃で７日間静置培養を行った。
【００８８】
培養後、表面に菌体が存在するセルロースアセテートメンブレンフィルターを除去することで、培養後の培養物から不要な菌体を除去した。
【００８９】
寒天培地Ａのセルロースアセテートメンブレンフィルターを除去した部分について光学顕微鏡（観察倍率：１００倍）を用いて観察した結果、培地中に産生された球状の炭酸マンガン微粒子が認められた。一方、菌体は観察されなかった。
【００９０】
爪楊枝を用いて寒天培地Ａのセルロースアセテートメンブレンフィルターを除去した部分の一部（約０．３ｇ）を切り出し、１．５ｍＬ容のマイクロチューブに移した。これに９００μＬのイオン交換水を添加して、９５℃で２０分加熱して寒天を溶解させ、沈殿物として球状の炭酸マンガン微粒子を回収した。
【００９１】
実施例１５
セルロースアセテートメンブレンフィルター（孔径０．４５μｍ）をオートクレーブ（１２１℃、２０分間）滅菌した。
【００９２】
寒天培地Ｂ（表１）を調製し、オートクレーブ（１２１℃、２０分間）滅菌後に滅菌済プラスチックシャーレに分注し、寒天培地Ｂが固化する前に滅菌済みのセルロースアセテートメンブレンフィルターを浮かべ、その後、固化させた。
【００９３】
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｐｒｏｔｅｇｅｎｓ  ＤＳＭ１９０９５を寒天培地Ｂの表面に設置したセルロースアセテートメンブレンフィルター上に白金耳を用いて画線塗抹することで接種し、好気環境下の２８℃で７日間静置培養を行った。
【００９４】
培養後、表面に菌体が存在するセルロースアセテートメンブレンフィルターを除去することで、培養後の培養物から不要な菌体を除去した。
【００９５】
寒天培地Ｂのセルロースアセテートメンブレンフィルターを除去した部分について光学顕微鏡（観察倍率：１００倍）を用いて観察した結果、培地中に産生された球状の炭酸マンガン微粒子が認められた。一方、菌体は観察されなかった。
【００９６】
爪楊枝を用いて寒天培地Ｂのセルロースアセテートメンブレンフィルターを除去した部分の一部（約０．３ｇ）を切り出し、１．５ｍＬ容のマイクロチューブに移した。これに９００μＬのイオン交換水を添加して、９５℃で２０分加熱して寒天を溶解させ、沈殿物として球状の炭酸マンガン微粒子を回収した。
【００９７】
実施例１６
（１）寒天培地の作製
寒天培地Ａ（表１）を３００ｍＬ調製し、オートクレーブ（１２１℃、２０分間）滅菌後に滅菌済プラスチックシャーレ（径×高さ：９０ｍｍ×２０ｍｍ）１０枚に分注して固化させた。
（２）Ｅｎｓｉｆｅｒ  ａｄｈａｅｒｅｎｓによる球状の炭酸マンガン微粒子の産生
Ｒ２Ａ  ａｇａｒ（ＢＤ  Ｄｉｆｃｏ）を用いて２８℃で２日間培養したＥｎｓｉｆｅｒ  ａｄｈａｅｒｅｎｓ  ＪＣＭ２１１０５の菌体を滅菌イオン交換水で懸濁し、菌体懸濁液（０．５マクファーランドに調整）を作製した。この菌体懸濁液を滅菌綿棒で１０枚の寒天培地Ａに全面に塗抹することで接種し、好気環境下の２８℃で５日間静置培養を行った。
（３）球状の炭酸マンガン微粒子の回収
５日間の培養後にＥｎｓｉｆｅｒ  ａｄｈａｅｒｅｎｓ  ＪＣＭ２１１０５を接種した寒天培地Ａから球状の炭酸マンガン微粒子の回収を下記の方法により行った。
【００９８】
培養後の寒天培地Ａに対して、シャーレ一枚あたり３ｍＬのイオン交換水を添加し、コンラージ棒を用いて菌体を懸濁後、懸濁液を除去した。この操作をさらに２度行い、培養後の寒天培地Ａから菌体を除去した。その後、薬さじを用いてシャーレ中の寒天培地を砕き、砕いた寒天培地Ａをコニカルビーカーに移した。該コニカルビーカーに寒天培地Ａの容積の約２倍量のイオン交換水を加え、オートクレーブ処理（１２１℃、２０分間）により滅菌と寒天の溶解を行った。オートクレーブ処理後、該コニカルビーカーの溶液が固化しない高温時に、球状の炭酸マンガン微粒子の沈殿を残して上清を捨てた。球状の炭酸マンガン微粒子の沈殿を少量のイオン交換水で懸濁し、この懸濁液を２ｍＬ容のマイクロチューブに移した。この懸濁液に対して、アルミブロック恒温槽を用いて１００℃で１０分間の加熱処理を行い、遠心機を用いたスピンダウン操作の後、球状の炭酸マンガン微粒子の沈殿を残して上清を捨てた。続いて、少量のイオン交換水でこの球状の炭酸マンガン微粒子の沈殿を懸濁し、１００℃で１０分間の加熱処理を行い、遠心機を用いたスピンダウン操作の後、球状の炭酸マンガン微粒子の沈殿を残して上清を捨てた。得られた球状の炭酸マンガン微粒子の沈殿は、−８０℃で凍結後、凍結乾燥を行なった。その結果、１０枚のＥｎｓｉｆｅｒ  ａｄｈａｅｒｅｎｓ  ＪＣＭ２１１０５を接種した寒天培地Ａから球状の炭酸マンガン微粒子を３８．９ｍｇ回収した。
【００９９】
実施例１７
（１）寒天培地の作製
寒天培地Ａ（表１）を３００ｍＬ調製し、オートクレーブ（１２１℃、２０分間）滅菌後に滅菌済プラスチックシャーレ（径×高さ：９０ｍｍ×２０ｍｍ）１０枚に分注して固化させた。
（２）Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｅｓｔａｃｅｕｍによる球状の炭酸マンガン微粒子の産生
Ｒ２Ａ  ａｇａｒ（ＢＤ  Ｄｉｆｃｏ）を用いて２８℃で２日間培養したＭｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｅｓｔａｃｅｕｍ  ＪＣＭ１３５３の菌体を滅菌イオン交換水で懸濁し、菌体懸濁液（０．５マクファーランドに調整）を作製した。この菌体懸濁液を滅菌綿棒で１０枚の寒天培地Ａに全面に塗抹することで接種し、好気環境下の２８℃で５日間静置培養を行った。
（３）球状の炭酸マンガン微粒子の回収
５日間の培養後にＭｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｅｓｔａｃｅｕｍ  ＪＣＭ１３５３を接種した寒天培地Ａから球状の炭酸マンガン微粒子の回収を実施例１６の（３）に記載の方法と同様の方法により行った。その結果、１０枚のＭｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｅｓｔａｃｅｕｍ  ＪＣＭ１３５３を接種した寒天培地Ａから球状の炭酸マンガン微粒子を４９．５ｍｇ回収した。
【０１００】
実施例１８
（１）寒天培地の作製
寒天培地Ｂ（表１）を３００ｍＬ調製し、オートクレーブ（１２１℃、２０分間）滅菌後に滅菌済プラスチックシャーレ（径×高さ：９０ｍｍ×２０ｍｍ）１０枚に分注して固化させた。
（２）Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｐｒｏｔｅｇｅｎｓによる球状の炭酸マンガン微粒子の産生
Ｒ２Ａ  ａｇａｒ（ＢＤ  Ｄｉｆｃｏ）を用いて２８℃で２日間培養したＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｐｒｏｔｅｇｅｎｓ  ＤＳＭ１９０９５の菌体を滅菌イオン交換水で懸濁し、菌体懸濁液（０．５マクファーランドに調整）を作製した。この菌体懸濁液を滅菌綿棒で１０枚の寒天培地Ｂに全面に塗抹することで接種し、好気環境下の２８℃で５日間静置培養を行った。
（３）球状の炭酸マンガン微粒子の回収
５日間の培養後にＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｐｒｏｔｅｇｅｎｓ  ＤＳＭ１９０９５を接種した寒天培地Ｂから球状の炭酸マンガン微粒子の回収を実施例１６の（３）に記載の方法と同様の方法により行った。その結果、１０枚のＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｐｒｏｔｅｇｅｎｓ  ＤＳＭ１９０９５を接種した寒天培地Ｂから球状の炭酸マンガン微粒子を５９．０ｍｇ回収した。
【０１０１】
実施例１９
（１）寒天培地の作製
寒天培地Ａ（表１）を３００ｍＬ調製し、オートクレーブ（１２１℃、２０分間）滅菌後に滅菌済プラスチックシャーレ（径×高さ：９０ｍｍ×２０ｍｍ）１０枚に分注して固化させた。
（２）Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｃｙａｎｅｏｆｕｓｃａｔｕｓによる球状の炭酸マンガン微粒子の産生
Ｒ２Ａ  ａｇａｒ（ＢＤ  Ｄｉｆｃｏ）を用いて２８℃で５日間培養したＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｃｙａｎｅｏｆｕｓｃａｔｕｓ  ＪＣＭ４３６４の菌体を滅菌イオン交換水で懸濁し、菌体懸濁液（０．５マクファーランドに調整）を作製した。この菌体懸濁液を滅菌綿棒で１０枚の寒天培地Ａに全面に塗抹することで接種し、好気環境下の２８℃で５日間静置培養を行った。
（３）球状の炭酸マンガン微粒子の回収
５日間の培養後にＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｃｙａｎｅｏｆｕｓｃａｔｕｓ  ＪＣＭ４３６４を接種した寒天培地Ａから球状の炭酸マンガン微粒子の回収を下記の方法により行った。
【０１０２】
培養後の寒天培地Ａに対して、シャーレ一枚あたり３ｍＬのイオン交換水を添加し、コンラージ棒を用いて菌体を懸濁後、この懸濁液を除去した。この操作をさらに２度行い、培養後の寒天培地Ａから菌体の一部を除去した。その後、薬さじを用いてシャーレ中の寒天培地を砕き、砕いた寒天培地Ａをコニカルビーカーに移した。該コニカルビーカーに寒天培地Ａの容積の約２倍量のイオン交換水を加え、オートクレーブ処理（１２１℃、２０分間）により滅菌と寒天の溶解を行った。オートクレーブ処理後、該コニカルビーカーの溶液が固化しない高温時に、球状の炭酸マンガン微粒子の沈殿を残して上清を捨てた。球状の炭酸マンガン微粒子の沈殿を少量のイオン交換水で懸濁し、それをエリエール  プロワイプ  ソフトワイパー  Ｓ２００（大王製紙）をろ紙の代わりに用いてろ過し、懸濁液から除去できていなかった菌体を除いた。このろ液を１０分間静置後、球状の炭酸マンガン微粒子の沈殿を残して上清を捨てた。この球状の炭酸マンガン微粒子の沈殿を少量のイオン交換水で懸濁し、この懸濁液を２ｍＬ容のマイクロチューブに移した。この懸濁液に対して、アルミブロック恒温槽を用いて１００℃で１０分間の加熱処理を行い、遠心機を用いたスピンダウン操作の後、球状の炭酸マンガン微粒子の沈殿を残して上清を捨てた。続いて、少量のイオン交換水でこの球状の炭酸マンガン微粒子の沈殿を懸濁し、１００℃で１０分間の加熱処理を行い、遠心機を用いたスピンダウン操作の後、球状の炭酸マンガン微粒子の沈殿を残して上清を捨てた。得られた球状の炭酸マンガン微粒子の沈殿は、−８０℃で凍結後、凍結乾燥を行なった。その結果、１０枚のＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｃｙａｎｅｏｆｕｓｃａｔｕｓ  ＪＣＭ４３６４を接種した寒天培地Ａから球状の炭酸マンガン微粒子を１６．７ｍｇ回収した。
【産業上の利用可能性】
【０１０３】
本発明によって製造される球状の炭酸マンガン微粒子はリチウムイオン二次電池の陽極活性物質製造の材料、触媒活性を有する酸化マンガン製造の材料、フェライト製造の材料、顔料等に有用である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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