(57)【要約】【課題】カリケアマイシン誘導体を合成するための中間体および方法を提供すること。【解決手段】本発明は、式Ｉの中間体、ならびにカリケアマイシン誘導体を合成および精製する方法に関する。【化１】2019089847.tif 000074【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
式ＶＩのカリケアマイシン誘導体
【化２５】
2019089847.tif 000060
［式中、Ｊは
【化２６】
2019089847.tif 000061
Ｒ５は、−ＣＨ３、−Ｃ２Ｈ５または−ＣＨ（ＣＨ３）２であり、
Ｘは、ヨウ素または臭素原子であり、
Ｒ５’は、水素または基ＲＣＯであり、ここで、Ｒは、水素、１から１０個の炭素原子の分枝状もしくは非分枝状アルキル、２から１０個の炭素原子のアルキレン、６から１１個の炭素原子のアリール、（Ｃ６〜Ｃ１１）アリール−アルキル（Ｃ１〜Ｃ５）基、またはヘテロアリールもしくはヘテロアリール−アルキル（Ｃ１〜Ｃ５）基｛ここで、ヘテロアリールは、２−もしくは３−フリル、２−もしくは３−チエニル、２−もしくは３−（Ｎ−メチルピロリル）、２−、３−もしくは４−ピリジニル、２−、４−もしくは５−（Ｎ−メチルイミダゾリル）、２−、４−もしくは５−オキサゾリル、２−、３−、５−もしくは６−ピリミジニル、２−、３−、４−、５−、６−、７−もしくは８−キノリル、または１−、３−、４−、５−、６−、７−もしくは８−イソキノリルとして定義され、すべてのアリールおよびヘテロアリール基は、１つまたは複数のヒドロキシ、アミノ、カルボキシ、ハロ、ニトロ、（Ｃ１〜Ｃ３）アルコキシ、または１から５個の炭素原子のチオアルコキシによって置換されていてもよい｝であり、
Ｒ６およびＲ７は、Ｈおよび
【化２７】
2019089847.tif 000062
からそれぞれ独立に選択され、
Ｒ８およびＲ９は、水素ならびに直鎖および分枝鎖Ｃ１〜Ｃ８アルキルからそれぞれ独立に選択され、ここで、Ｒ８およびＲ９について、各前記アルキルは、−ＮＨ２、−ＮＨＲ１１、−ＮＲ１１Ｒ１３、−ＯＲ１１、−ＯＨまたは−ＳＲ１１によって独立に置換されていてもよく、ここで、各Ｒ１１および各Ｒ１３は、直鎖および分枝鎖Ｃ１〜Ｃ５アルキルから独立に選択され、
ｒは、整数０または１であり、
Ｇは、酸素または硫黄であり、
Ｚ１は、Ｈまたは直鎖もしくは分枝鎖Ｃ１〜Ｃ５アルキルであり、
Ａｒは、直鎖もしくは分枝鎖Ｃ１〜Ｃ６アルキル、−ＯＲ１４、−ＳＲ１４、ハロゲン、ニトロ、−ＣＯＯＲ１４、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＲ１４、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＯＯＲ１４、−Ｓ（ＣＨ２）ｎＣＯＯＲ１４、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨＲ１４および−Ｓ（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨＲ１４から独立に選択される１、２もしくは３つの基で置換されていてもよい１，２−、１，３−もしくは１，４−フェニレンであるか、またはＡｒは、直鎖もしくは分枝鎖Ｃ１〜Ｃ６アルキル、−ＯＲ１４、−ＳＲ１４、ハロゲン、ニトロ、−ＣＯＯＲ１４、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＲ１４、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＯＯＲ１４、−Ｓ（ＣＨ２）ｎＣＯＯＲ１４、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨＲ１４および−Ｓ（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨＲ１４から独立に選択される１、２、３もしくは４つの基で置換されていてもよい１，２−、１，３−、１，４−、１，５−、１，６−、１，７−、１，８−、２，３−、２，６−もしくは２，７−ナフチリデンであり、
ここで、各Ｒ１４は、（Ｃ１〜Ｃ５）アルキルから独立に選択され、各Ｒ１４は、−ＯＨ、−（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルおよび−Ｓ（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルから選択される１または２つの基で独立に置換されていてもよく、
各ｎは、０、１、２、３、４および５から独立に選択される整数であり、
Ｗは、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（＝Ｏ）−および−ＮＲ１５−から選択され、ここで、Ｒ１５は（Ｃ１〜Ｃ５）アルキルであり、Ｒ１５は、−ＯＨ、−（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルおよび−Ｓ（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルから選択される１または２つの基で置換されていてもよく、
Ｙは、直鎖もしくは分枝鎖（Ｃ１〜Ｃ６）アルキレン基または直鎖もしくは分枝鎖（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニレン基であり、
Ｚは、
【化２８】
2019089847.tif 000063
からなる群から選択される］
を合成する方法であって、
式Ｖのリンカー中間体
【化２９】
2019089847.tif 000064
を、メチルトリスルフィド化合物ＣＨ３−Ｓ−Ｓ−Ｓ−Ｊと、カルボジイミドの存在下で反応させ、それにより、式ＶＩのカリケアマイシン誘導体を合成するステップを含む方法。
【請求項２】
メチルトリスルフィド化合物ＣＨ３−Ｓ−Ｓ−Ｓ−Ｊがオゾガマイシンである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
得られた式ＶＩのカリケアマイシン誘導体を、イノツズマブおよびゲムツズマブから選択されるモノクローナル抗体とコンジュゲートさせるステップをさらに含む、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
式ＶＩのカリケアマイシン誘導体
【化３０】
2019089847.tif 000065
［式中、Ｊは
【化３１】
2019089847.tif 000066
Ｒ５は、−ＣＨ３、−Ｃ２Ｈ５または−ＣＨ（ＣＨ３）２であり、
Ｘは、ヨウ素または臭素原子であり、
Ｒ５’は、水素または基ＲＣＯであり、ここで、Ｒは、水素、１から１０個の炭素原子の分枝状もしくは非分枝状アルキル、２から１０個の炭素原子のアルキレン、６から１１個の炭素原子のアリール、（Ｃ６〜Ｃ１１）アリール−アルキル（Ｃ１〜Ｃ５）基、またはヘテロアリールもしくはヘテロアリール−アルキル（Ｃ１〜Ｃ５）基｛ここで、ヘテロアリールは、２−もしくは３−フリル、２−もしくは３−チエニル、２−もしくは３−（Ｎ−メチルピロリル）、２−、３−もしくは４−ピリジニル、２−、４−もしくは５−（Ｎ−メチルイミダゾリル）、２−、４−もしくは５−オキサゾリル、２−、３−、５−もしくは６−ピリミジニル、２−、３−、４−、５−、６−、７−もしくは８−キノリル、または１−、３−、４−、５−、６−、７−もしくは８−イソキノリルとして定義され、すべてのアリールおよびヘテロアリール基は、１つまたは複数のヒドロキシ、アミノ、カルボキシ、ハロ、ニトロ、（Ｃ１〜Ｃ３）アルコキシ、または１から５個の炭素原子のチオアルコキシによって置換されていてもよい｝であり、
Ｒ６およびＲ７は、Ｈおよび
【化３２】
2019089847.tif 000067
からそれぞれ独立に選択され、
Ｒ８およびＲ９は、水素ならびに直鎖および分枝鎖Ｃ１〜Ｃ８アルキルからそれぞれ独立に選択され、ここで、Ｒ８およびＲ９について、各前記アルキルは、−ＮＨ２、−ＮＨＲ１１、−ＮＲ１１Ｒ１３、−ＯＲ１１、−ＯＨまたは−ＳＲ１１によって独立に置換されていてもよく、ここで、各Ｒ１１および各Ｒ１３は、直鎖および分枝鎖Ｃ１〜Ｃ５アルキルから独立に選択され、
ｒは、整数０または１であり、
Ｇは、酸素または硫黄であり、
Ｚ１は、Ｈまたは直鎖もしくは分枝鎖Ｃ１〜Ｃ５アルキルであり、
Ａｒは、直鎖もしくは分枝鎖Ｃ１〜Ｃ６アルキル、−ＯＲ１４、−ＳＲ１４、ハロゲン、ニトロ、−ＣＯＯＲ１４、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＲ１４、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＯＯＲ１４、−Ｓ（ＣＨ２）ｎＣＯＯＲ１４、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨＲ１４および−Ｓ（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨＲ１４から独立に選択される１、２もしくは３つの基で置換されていてもよい１，２−、１，３−もしくは１，４−フェニレンであるか、またはＡｒは、直鎖もしくは分枝鎖Ｃ１〜Ｃ６アルキル、−ＯＲ１４、−ＳＲ１４、ハロゲン、ニトロ、−ＣＯＯＲ１４、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＲ１４、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＯＯＲ１４、−Ｓ（ＣＨ２）ｎＣＯＯＲ１４、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨＲ１４および−Ｓ（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨＲ１４から独立に選択される１、２、３もしくは４つの基で置換されていてもよい１，２−、１，３−、１，４−、１，５−、１，６−、１，７−、１，８−、２，３−、２，６−もしくは２，７−ナフチリデンであり、
ここで、各Ｒ１４は、（Ｃ１〜Ｃ５）アルキルから独立に選択され、各Ｒ１４は、−ＯＨ、−（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルおよび−Ｓ（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルから選択される１または２つの基で独立に置換されていてもよく、
各ｎは、０、１、２、３、４および５から独立に選択される整数であり、
Ｗは、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（＝Ｏ）−および−ＮＲ１５−から選択され、ここで、Ｒ１５は（Ｃ１〜Ｃ５）アルキルであり、Ｒ１５は、−ＯＨ、−（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルおよび−Ｓ（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルから選択される１または２つの基で置換されていてもよく、
Ｙは、直鎖もしくは分枝鎖（Ｃ１〜Ｃ６）アルキレン基または直鎖もしくは分枝鎖（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニレン基であり、
Ｚは、
【化３３】
2019089847.tif 000068
からなる群から選択される］
を精製する方法であって、
式ＶＩのカリケアマイシン誘導体を、逆相高速液体クロマトグラフィー精製プロトコールに供するステップを含む方法。
【請求項５】
逆相高速液体クロマトグラフィー精製プロトコールが、水性および有機混合物を含む相による溶離を含み、相が、約４から約６までのｐＨ範囲である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
逆相精製プロトコールによって生じた式ＶＩのカリケアマイシン誘導体が、その後、固相抽出プロトコールに供される、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
Ｊがオゾガマイシン部分である、請求項５または６に記載の方法。
【請求項８】
そのようにして精製された式ＶＩのカリケアマイシン誘導体を、イノツズマブおよびゲムツズマブから選択されるモノクローナル抗体とコンジュゲートさせるステップをさらに含む、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
式ＩＩの化合物
【化３４】
2019089847.tif 000069
［式中、Ｒ１２は、直鎖および分枝鎖Ｃ１〜Ｃ８アルキルから選択され、
各Ｒ１０は、水素、Ｒ１２および−ＯＲ１２から独立に選択され、
Ｒ８およびＲ９は、水素ならびに直鎖および分枝鎖Ｃ１〜Ｃ８アルキルからそれぞれ独立に選択され、ここで、Ｒ８およびＲ９について、各前記アルキルは、−ＮＨ２、−ＮＨＲ１１、−ＮＲ１１Ｒ１３、−ＯＲ１１、−ＯＨまたは−ＳＲ１１によって独立に置換されていてもよく、ここで、各Ｒ１１および各Ｒ１３は、直鎖および分枝鎖Ｃ１〜Ｃ５アルキルから独立に選択され、
ｒは、０および１から選択される整数であり、
Ｇは、酸素または硫黄である］
を合成する方法であって、
式ＶＩＩの化合物
【化３５】
2019089847.tif 000070
［式中、Ｒ１６は−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨもしくは−Ｃ（＝Ｖ）ＳＨであり、ここで、Ｖは酸素もしくは硫黄であるか、またはＲ１６は−ＮＨ２である］
を、式ＩＸのアゾール活性化剤
【化３６】
2019089847.tif 000071
［式中、Ｖ’は酸素または硫黄であり、
Ｅは、
【化３７】
2019089847.tif 000072
であり、ここで、ｍは、整数０、１、２または３であり、ｑは、整数０、１または２であり、ｐは、整数０、１、２、３または４であり、Ｅに結合している各Ｒ１７は、直鎖および分枝鎖（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基から独立に選択される］
で、有機溶媒中で処理して、式ＶＩＩＩの化合物
【化３８】
2019089847.tif 000073
［式中、Ｒ１６が−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨである場合、ｒは０であり、Ｇは酸素であり、Ｒ１６が−Ｃ（＝Ｖ）ＳＨである場合、ｒは０であり、ＧはＶであり、Ｒ１６が−ＮＨ２である場合、ｒは１であり、ＧはＶ’である］
を形成し、続いて、式ＶＩＩＩの化合物をヒドラジンと合わせ、それにより、式ＩＩの化合物を形成するステップを含む方法。
【請求項１０】
アゾール活性化剤が、カルボニルジイミダゾール、チオカルボニルジイミダゾール、カルボニルビス−ピラゾール［ここで、各ピラゾールは、１から３つまでの（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基で置換されていてもよい］、カルボニルビス−１，２，３−トリアゾール、カルボニルビス−ベンゾトリアゾールおよびカルボニルビス−１，２，４−トリアゾールから選択される、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
ｒが０であり、Ｇが酸素である、請求項９または１０に記載の方法。
【請求項１２】
式ＶＩＩの化合物中のＲ１６が−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨである、請求項９または１０に記載の方法。
【請求項１３】
ヒドラジンが、無水ヒドラジン、ヒドラジン一水和物、ヒドラジンの水溶液、またはヒドラジンのテトラヒドロフラン溶液である、請求項９または１０に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、カリケアマイシン誘導体の合成に関する。本発明はまた、カリケアマイシン誘導体を調製するため、およびカリケアマイシンをモノクローナル抗体等の生体高分子とコンジュゲートさせるために有用な中間体およびリンカー分子にも関する。
【背景技術】
【０００２】
ＭＹＬＯＴＡＲＧ（登録商標）（ゲムツズマブオゾガマイシン）は、酸加水分解性リンカーによってカリケアマイシンと結合しているＣＤ３３に対するモノクローナル抗体からなる。市販製品は、最初の抗体標的化学療法剤として販売され、高齢患者における急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）の治療用に承認された。イノツズマブオゾガマイシンは、現在ある特定の種のがんの治療のための臨床試験中のカリケアマイシン結合ＣＤ２２抗体である。
【０００３】
カリケアマイシン、またはＬＬ−Ｅ３３２８８複合体と総称される抗菌および抗腫瘍剤の強力なファミリーは、米国特許第４，９７０，１９８号において開示されている。米国特許第５，０５３，３９４号は、メチルトリスルフィド抗菌および抗腫瘍剤も開示している。米国特許第４，９７０，１９８号および米国特許第５，０５３，３９４号におけるこれらの化合物は、適切なチオールと反応してジスルフィドを形成し、一方でそれと同時に、ヒドラジドまたは同様の求核試薬等の官能基を導入することができるメチルトリスルフィド基を含有する。このカリケアマイシンとの反応の例は、米国特許第５，０５３，３９４号において記されている。米国特許第５，７７０，７０１号は、ＬＬ−Ｅ３３２８８複合体のジスルフィド化合物の標的化形態を調製するためのプロセスを対象としている。リンカー、４−（４−アセチル−フェノキシ）ブタン酸は、Ｎ−アセチルガンマカリケアマイシンジメチルヒドラジド化合物と縮合されて、カルボン酸−ヒドラゾンを生じさせ、これをさらにＮ−ヒドロキシスクシンイミドで処理して、選択された生体高分子とのコンジュゲートの準備が整っているＯＳｕエステル（Ｎ−スクシンイミジルオキシ）を得る。
【０００４】
米国特許第８，２７３，８６２号は、リンカー中間体分子（その中では「トリリンカー活性化エステル（ｔｒｉｌｉｎｋｅｒ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｅｓｔｅｒｓ）」または「三官能性リンカー中間体」と称されている）を構築するための合成方法について記述している。これらのリンカー中間体は、カリケアマイシンとコンジュゲートさせて、カリケアマイシン誘導体を調製することができ、これは次いでモノクローナル抗体等の生体高分子とさらにコンジュゲートさせることができる。リンカー中間体の調製につながるステップにおいて、米国特許第８，２７３，８６２号において記述されている合成方法は、メルカプト化合物（その中では「化合物２」）、例えば３−メチル−３−メルカプトブタン酸ヒドラジドを、中間体として使用する。
【０００５】
ＷＯ２００８／１４７７６５は、３−メチル−３−メルカプトブタン酸ヒドラジド等のメルカプト含有中間体を合成するための方法について記述しており、これは、前段落において記述した通りのリンカー中間体およびカリケアマイシン誘導体を調製する上で有用である。ＷＯ２００８／１４７７６５は、代替として、「ＤＭＨリンカー」としての３−メチル−３−メルカプトブタン酸ヒドラジドに言及している。ＷＯ２００８／１４７７６５は、３−メチル−３−メルカプトブタン酸ヒドラジドが、カリケアマイシンをモノクローナル抗体と結合させて、例えばゲムツズマブオゾガマイシンまたはイノツズマブオゾガマイシンを作製する目的のための好ましいメルカプト含有Ｎ−アシルヒドラジンであることを指摘している。
【０００６】
ＷＯ２００８／１４７７６５において、３−メチル−３−メルカプトブタン酸ヒドラジドは、酸性条件下、化合物ｐ−メトキシベンジルチオエーテルヒドラジドからベンジル保護基を除去することによって調製される。ｐ−メトキシベンジルチオエーテルヒドラジドを取得するために、ＷＯ２００８／１３７７６５は、最初にｐ−メトキシベンジルチオエーテル酸を塩化オキサリルと塩化メチレン中で反応させて、ｐ−メトキシベンジルチオエーテル酸塩化物を形成することを教示している。次いで、ｐ−メトキシベンジルチオエーテル酸塩化物を、無水ヒドラジンおよび塩化メチレンの混合物に添加して、ｐ−メトキシベンジルチオエーテルヒドラジドを取得する。しかしながら、ＷＯ２００８／１４７７６５において記述されている通り、２つの反応物質ｐ−メチルオキシベンジルチオエーテル酸およびｐ−メトキシベンジルチオエーテル酸塩化物は、それら自体が一緒になって、望ましくない副産物、ビス−メトキシベンジルチオエーテルヒドラジドを発生させ、より低い収率および品質をもたらす。さらに、ＷＯ２００８／１４７７６５において記述されている通り、酸塩化物分子ｐ−メトキシベンジルチオエーテル酸塩化物の反応性不安定な性質により、無水ヒドラジンおよび低温、例えば−７０℃を用いなくてはならない。
【０００７】
カリケアマイシン誘導体の調製における別の態様は、カリケアマイシンをリンカー分子と化学的に接続することを伴う。米国特許第８，２７３，８６２号において、カリケアマイシンをリンカー中間体とコンジュゲートさせるために、カリケアマイシンと「トリリンカー活性化エステル」（または「三官能性リンカー中間体」）との間の最終反応が行われる。構造的に、カリケアマイシンは、それらの誘導体化において使用される上記で説明した通りのトリスルフィド部分を含有し、カリケアマイシンのトリスルフィド部分とトリリンカー活性化エステルとの間のこの反応の化学は、良好な収率および純度を実現する上で重要である。カリケアマイシン誘導体のための以前使用された硫黄交換反応は、複合反応混合物、多数の副産物および低収率をもたらした。
【０００８】
最後に、カリケアマイシン誘導体は、その形成後に精製されることになる。米国特許第８，２７３，８６２号のプロセスは、順相クロマトグラフィーステップを含むカリケアマイシン誘導体の精製を伴う。米国特許第８，２７３，８６２号において記述されている精製プロセスにおける順相クロマトグラフィーステップは、塩化メチレンを溶媒として使用し、上述の通り、種々の最低レベルを上回る塩化メチレンへの暴露は、潜在的健康被害を及ぼすと考えられている。したがって、塩化メチレンを包含する順相クロマトグラフィーを使用する場合、塩化メチレンへの暴露を限定するための予防策をとらなくてはならない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】米国特許第４，９７０，１９８号
【特許文献２】米国特許第５，０５３，３９４号
【特許文献３】米国特許第５，７７０，７０１号
【特許文献４】米国特許第８，２７３，８６２号
【特許文献５】ＷＯ２００８／１４７７６５
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明は、カリケアマイシン抗腫瘍性抗生物質をモノクローナル抗体等の生体高分子とコンジュゲートさせるのに有用なリンカー中間体を合成および精製するための新たな中間体および方法を提供する。本発明はさらに、カリケアマイシン誘導体であって、リンカーと共有結合しているカリケアマイシンを含む誘導体を合成するための新たな方法を提供する。そのようにして調製されたカリケアマイシン誘導体は、モノクローナル抗体等の生体高分子とコンジュゲートさせて、抗体−薬物コンジュゲートを作製することができる。本発明の中間体および合成方法は、例えば、ゲムツズマブオゾガマイシン（ＭＹＬＯＴＡＲＧ（登録商標））またはイノツズマブオゾガマイシンを製造するためのカリケアマイシン誘導体を調製するために使用され得る。
【００１１】
本発明は、これらの従前のプロセスに関連する問題のいくつかを克服する、カリケアマイシン誘導体を合成および精製するための従前のプロセスに対する改善を提供する。
【００１２】
上記で説明した通り、ＷＯ２００８／１３７７６５は、最初に中間体ｐ−メトキシベンジルチオエーテル酸を塩化オキサリルと塩化メチレン中で反応させて、カリケアマイシン誘導体を合成するために有用なｐ−メトキシベンジルチオエーテル酸塩化物中間体を形成することを教示している。ＷＯ２００８／１４７７６５においては、次いで、ｐ−メトキシベンジルチオエーテル酸塩化物中間体を、無水ヒドラジンおよび塩化メチレンの混合物に添加して、ｐ−メトキシベンジルチオエーテルヒドラジド中間体を取得する。しかしながら、ＷＯ２００８／１４７７６５において記述されている通り、２つの反応物質ｐ−メチルオキシベンジルチオエーテル酸およびｐ−メトキシベンジルチオエーテル酸塩化物は、それら自体が一緒になって、望ましくない副産物、ビス−メトキシベンジルチオエーテルヒドラジドを発生させ、より低い収率および品質をもたらす。本発明は、中間体としてのｐ−メトキシベンジルチオエーテル酸塩化物の使用を完全に回避することにより、このビス−メトキシベンジルチオエーテルヒドラジド副産物の問題をすべて解決する。酸塩化物中間体ｐ−メトキシベンジルチオエーテル酸塩化物を完全に回避することにより、主題発明は現在さらに、無水ヒドラジンと同じ特殊な取り扱い手順を必要としないヒドラジンの水和形態の使用を可能にし、新たな方法は、低温という厄介な要件も回避する。最後に、ｐ−メトキシベンジルチオエーテル酸塩化物は本発明において避けられているため、塩化メチレンおよびそれとともに用いられる安全対策を使用する必要はない。
【００１３】
本発明はまた、米国特許第８，２７３，８６２号において記述されているプロセス等の従前のプロセスと比較して、カリケアマイシンとリンカー中間体との間の反応の収率も改善する。本発明は、カルボジイミドを反応に包含することにより、得られるカリケアマイシン誘導体の収率を改善する。
【００１４】
本明細書において記述されている通り、カリケアマイシン誘導体を精製するための新たな方法であって、カリケアマイシン誘導体上の２つの水に不安定な基（ヒドラゾンおよびＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステル）の存在にもかかわらず、逆相高速液体クロマトグラフィー（ＲＰ−ＨＰＬＣ）の使用を伴う方法を達成できることも発見された。それにより、本発明は、米国特許第８，２７３，８６２号において記述されている通り、順相クロマトグラフィーを使用して、例えば塩化メチレンを使用して、カリケアマイシン誘導体を精製することに関連する上記で言及した問題を克服する。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
本発明は、式Ｉの化合物
【００１６】
【化１】
2019089847.tif 000002
［式中、Ｒ１２は、直鎖および分枝鎖Ｃ１〜Ｃ８アルキルから選択され、
各Ｒ１０は、水素、Ｒ１２および−ＯＲ１２から独立に選択され、
Ｒ８およびＲ９は、水素ならびに直鎖および分枝鎖Ｃ１〜Ｃ８アルキルからそれぞれ独立に選択され、ここで、Ｒ８およびＲ９について、各前記アルキルは、−ＮＨ２、−ＮＨＲ１１、−ＮＲ１１Ｒ１３、−ＯＲ１１、−ＯＨまたは−ＳＲ１１によって独立に置換されていてもよく、ここで、各Ｒ１１および各Ｒ１３は、直鎖および分枝鎖Ｃ１〜Ｃ５アルキルから独立に選択され、
ｒは、０および１から選択される整数であり、
Ｇは、酸素または硫黄であり、
Ｚ１は、Ｈまたは直鎖もしくは分枝鎖Ｃ１〜Ｃ５アルキルであり、
Ａｒは、直鎖もしくは分枝鎖Ｃ１〜Ｃ６アルキル、−ＯＲ１４、−ＳＲ１４、ハロゲン、ニトロ、−ＣＯＯＲ１４、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＲ１４、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＯＯＲ１４、−Ｓ（ＣＨ２）ｎＣＯＯＲ１４、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨＲ１４および−Ｓ（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨＲ１４から独立に選択される１、２もしくは３つの基で置換されていてもよい１，２−、１，３−もしくは１，４−フェニレンであるか、またはＡｒは、直鎖もしくは分枝鎖Ｃ１〜Ｃ６アルキル、−ＯＲ１４、−ＳＲ１４、ハロゲン、ニトロ、−ＣＯＯＲ１４、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＲ１４、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＯＯＲ１４、−Ｓ（ＣＨ２）ｎＣＯＯＲ１４、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨＲ１４および−Ｓ（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨＲ１４から独立に選択される１、２、３もしくは４つの基で置換されていてもよい１，２−、１，３−、１，４−、１，５−、１，６−、１，７−、１，８−、２，３−、２，６−もしくは２，７−ナフチリデンであり、
ここで、各Ｒ１４は、（Ｃ１〜Ｃ５）アルキルから独立に選択され、各Ｒ１４は、−ＯＨ、−（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルおよび−Ｓ（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルから選択される１または２つの基で独立に置換されていてもよく、
各ｎは、０、１、２、３、４および５から独立に選択される整数であり、
Ｗは、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（＝Ｏ）−および−ＮＲ１５−から選択され、ここで、Ｒ１５は（Ｃ１〜Ｃ５）アルキルであり、Ｒ１５は、−ＯＨ、−（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルおよび−Ｓ（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルから選択される１または２つの基で置換されていてもよく、
Ｙは、直鎖もしくは分枝鎖（Ｃ１〜Ｃ６）アルキレン基または直鎖もしくは分枝鎖（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニレン基である］
を提供する。
【００１７】
式Ｉの化合物は、リンカー中間体およびそのようなリンカー中間体を含むカリケアマイシン誘導体を合成するための中間体として有用であり、該カリケアマイシン誘導体を、今度はモノクローナル抗体等の生体高分子とコンジュゲートさせることができる。
【００１８】
本発明の一実施形態において、式Ｉの化合物中の各Ｒ１０は水素である。別の実施形態において、式Ｉの化合物中の各Ｒ１０は水素であり、Ｒ１２はメチルである。
【００１９】
本発明の別の実施形態において、式Ｉの化合物は、構造
【００２０】
【化２】
2019089847.tif 000003
を有する化合物である。
【００２１】
本発明の別の実施形態において、式Ｉの化合物中のＲ８およびＲ９はいずれもメチルであり、ｒは０であり、Ｇは酸素であり、Ｚ１はメチルであり、Ａｒは１，４−フェニレンであり、Ｗは−Ｏ−であり、Ｙは−（ＣＨ２）３−である。
【００２２】
本発明の別の実施形態において、式Ｉの化合物中のＲ８およびＲ９はいずれもメチルである。
【００２３】
本発明の別の実施形態において、式Ｉの化合物中のｒは０である。本発明の別の実施形態において、式Ｉの化合物中のｒは０であり、Ｇは酸素である。本発明の別の実施形態において、式Ｉの化合物中のｒは０であり、Ｇは硫黄である。
【００２４】
本発明はまた、式Ｉの前述の化合物を合成するための方法も提供し、これは、リンカー中間体および前記リンカー中間体基を含むカリケアマイシン誘導体を合成するための中間体として前述の通り有用である。一実施形態において、本発明は、式Ｉの化合物
【００２５】
【化３】
2019089847.tif 000004
［式中、Ｒ１２は、直鎖および分枝鎖Ｃ１〜Ｃ８アルキルから選択され、
各Ｒ１０は、水素、Ｒ１２および−ＯＲ１２から独立に選択され、
Ｒ８およびＲ９は、水素ならびに直鎖および分枝鎖Ｃ１〜Ｃ８アルキルからそれぞれ独立に選択され、ここで、Ｒ８およびＲ９について、各前記アルキルは、−ＮＨ２、−ＮＨＲ１１、−ＮＲ１１Ｒ１３、−ＯＲ１１、−ＯＨまたは−ＳＲ１１によって独立に置換されていてもよく、ここで、各Ｒ１１および各Ｒ１３は、直鎖および分枝鎖Ｃ１〜Ｃ５アルキルから独立に選択され、
ｒは、０および１から選択される整数であり、
Ｇは、酸素または硫黄であり、
Ｚ１は、Ｈまたは直鎖もしくは分枝鎖Ｃ１〜Ｃ５アルキルであり、
Ａｒは、直鎖もしくは分枝鎖Ｃ１〜Ｃ６アルキル、−ＯＲ１４、−ＳＲ１４、ハロゲン、ニトロ、−ＣＯＯＲ１４、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＲ１４、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＯＯＲ１４、−Ｓ（ＣＨ２）ｎＣＯＯＲ１４、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨＲ１４および−Ｓ（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨＲ１４から独立に選択される１、２もしくは３つの基で置換されていてもよい１，２−、１，３−もしくは１，４−フェニレンであるか、またはＡｒは、直鎖もしくは分枝鎖Ｃ１〜Ｃ６アルキル、−ＯＲ１４、−ＳＲ１４、ハロゲン、ニトロ、−ＣＯＯＲ１４、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＲ１４、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＯＯＲ１４、−Ｓ（ＣＨ２）ｎＣＯＯＲ１４、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨＲ１４および−Ｓ（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨＲ１４から独立に選択される１、２、３もしくは４つの基で置換されていてもよい１，２−、１，３−、１，４−、１，５−、１，６−、１，７−、１，８−、２，３−、２，６−もしくは２，７−ナフチリデンであり、
ここで、各Ｒ１４は、（Ｃ１〜Ｃ５）アルキルから独立に選択され、各Ｒ１４は、−ＯＨ、−（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルおよび−Ｓ（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルから選択される１または２つの基で独立に置換されていてもよく、
各ｎは、０、１、２、３、４および５から独立に選択される整数であり、
Ｗは、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（＝Ｏ）−および−ＮＲ１５−から選択され、ここで、Ｒ１５は（Ｃ１〜Ｃ５）アルキルであり、Ｒ１５は、−ＯＨ、−（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルおよび−Ｓ（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルから選択される１または２つの基で置換されていてもよく、Ｙは、直鎖もしくは分枝鎖（Ｃ１〜Ｃ６）アルキレン基または直鎖もしくは分枝鎖（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニレン基である］
を合成するための方法であって、
式ＩＩの化合物
【００２６】
【化４】
2019089847.tif 000005
［式中、Ｒ１０、Ｒ１２、Ｒ８、Ｒ９、ｒおよびＧは、上記で定義した通りである］を、式ＩＩＩの化合物
【００２７】
【化５】
2019089847.tif 000006
［式中、Ｚ１、Ａｒ、ＷおよびＹは、上記で定義した通りである］と反応させるステップを含む方法を提供する。式Ｉの化合物を合成する方法の一実施形態において、ｒは０であり、Ｇは酸素であり、Ｚ１はメチルであり、Ａｒは１，４−フェニレンであり、Ｗは−Ｏ−であり、Ｙは−（ＣＨ２）３−である。式Ｉの化合物を合成する方法の別の実施形態において、Ｒ８およびＲ９はメチルである。式Ｉの化合物を合成する方法の別の実施形態において、各Ｒ１０は水素である。式Ｉの化合物を合成する方法の別の実施形態において、各Ｒ１０は水素であり、Ｒ１２はメチルである。
【００２８】
式Ｉの化合物を合成するための本発明の別の実施形態において、式ＩＩの化合物中のＲ８およびＲ９はいずれもメチルである。
【００２９】
式Ｉの化合物を合成するための本発明の別の実施形態において、式ＩＩの化合物中のｒは０である。式Ｉの化合物を合成するための本発明の別の実施形態において、式ＩＩの化合物中のｒは０であり、Ｇは酸素である。式Ｉの化合物を合成するための本発明の別の実施形態において、式ＩＩの化合物中のｒは０であり、Ｇは硫黄である。
【００３０】
本発明はまた、式ＩＩの化合物
【００３１】
【化６】
2019089847.tif 000007
［式中、Ｒ１２は、直鎖および分枝鎖Ｃ１〜Ｃ８アルキルから選択され、
各Ｒ１０は、水素、Ｒ１２および−ＯＲ１２から独立に選択され、
Ｒ８およびＲ９は、水素ならびに直鎖および分枝鎖Ｃ１〜Ｃ８アルキルからそれぞれ独立に選択され、ここで、Ｒ８およびＲ９について、各前記アルキルは、−ＮＨ２、−ＮＨＲ１１、−ＮＲ１１Ｒ１３、−ＯＲ１１、−ＯＨまたは−ＳＲ１１によって独立に置換されていてもよく、ここで、各Ｒ１１および各Ｒ１３は、直鎖および分枝鎖Ｃ１〜Ｃ５アルキルから独立に選択され、
ｒは、０および１から選択される整数であり、
Ｇは、酸素または硫黄である］
を合成する方法であって、
式ＶＩＩの化合物
【００３２】
【化７】
2019089847.tif 000008
［式中、Ｒ１６は−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨもしくは−Ｃ（＝Ｖ）ＳＨであり、ここで、Ｖは酸素もしくは硫黄であるか、またはＲ１６は−ＮＨ２である］
を、式ＩＸのアゾール活性化剤
【００３３】
【化８】
2019089847.tif 000009
［式中、Ｖ’は酸素または硫黄であり、
Ｅは、
【００３４】
【化９】
2019089847.tif 000010
であり、ここで、ｍは、整数０、１、２または３であり、ｑは、整数０、１または２であり、ｐは、整数０、１、２、３または４であり、Ｅに結合している各Ｒ１７は、直鎖および分枝鎖（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基から独立に選択される］
で、有機溶媒中で処理して、式ＶＩＩＩの化合物
【００３５】
【化１０】
2019089847.tif 000011
［式中、Ｒ１６が−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨである場合、ｒは０であり、Ｇは酸素であり、Ｒ１６が−Ｃ（＝Ｖ）ＳＨである場合、ｒは０であり、ＧはＶであり、Ｒ１６が−ＮＨ２である場合、ｒは１であり、ＧはＶ’である］
を形成し、続いて式ＶＩＩＩの化合物をヒドラジンと合わせ、それにより、式ＩＩの化合物を形成するステップを含む方法も提供する。式ＩＩの化合物は、リンカー中間体および前記リンカー中間体基を含むカリケアマイシン誘導体を合成するための中間体として有用であり、該カリケアマイシン誘導体を、今度はモノクローナル抗体等の生体高分子とコンジュゲートさせることができる。
【００３６】
アゾール活性化剤は、式ＶＩＩの化合物と反応した場合に式ＶＩＩＩの化合物［式中、Ｅは上述した通りである］を生じさせる、所与の式ＩＸの任意のアゾール含有化合物である。主題発明において使用され得るアゾール活性化剤の例は、カルボニルジイミダゾール、チオカルボニルジイミダゾール、カルボニルビス−ピラゾール［ここで、各ピラゾールは、１から３つまでの（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基で置換されていてもよい］、カルボニルビス−１，２，３−トリアゾール、カルボニルビス−ベンゾトリアゾールおよびカルボニルビス−１，２，４−トリアゾールを包含する。好ましくは、アゾール活性化剤はカルボニルジイミダゾールである。
【００３７】
式ＶＩＩＩの化合物は、ヒドラジンと合わせる前に単離されてもよい。一実施形態において、式ＶＩＩＩの化合物は、ヒドラジンと合わせる前に単離されない。別の実施形態において、式ＶＩＩＩの化合物は、ヒドラジンと合わせる前に単離される。
【００３８】
好ましくは、Ｒ１６は−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨであり、アゾール活性化剤はカルボニルジイミダゾールである。
【００３９】
式ＩＩの化合物を作製するための本方法の一実施形態において、式ＩＩの化合物中、ｒは０であり、Ｇは酸素である。式ＩＩの化合物を作製するための本方法の別の実施形態において、式ＩＩの化合物中、ｒは０であり、Ｇは酸素であり、式ＶＩＩの化合物中のＲ１６は−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨである。式ＩＩの化合物を作製するための方法のさらなる実施形態において、式ＩＩの化合物中、ｒは０であり、Ｇは酸素であり、式ＶＩＩ中のＲ１６は−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨであり、アゾール活性化剤はカルボニルジイミダゾールである。
【００４０】
式ＩＩの化合物を作製するための本方法の別の実施形態において、式ＶＩＩＩの化合物は、構造：
【００４１】
【化１１】
2019089847.tif 000012
を有する。式ＩＩの化合物を作製するための方法のさらなる実施形態において、式ＶＩＩＩの化合物は、構造：
【００４２】
【化１２】
2019089847.tif 000013
を有し、アゾール活性化剤はカルボニルジイミダゾールである。
【００４３】
式ＩＩの化合物を合成するための本発明の別の実施形態において、式ＶＩＩの化合物中のＲ８およびＲ９はいずれもメチルである。
【００４４】
式ＩＩの化合物を合成するための本発明の別の実施形態において、式ＶＩＩの化合物は、−Ｃ（＝Ｖ）ＳＨであるＲ１６および酸素または硫黄であるＶを含む。式ＶＩＩの化合物が、−Ｃ（＝Ｖ）ＳＨであるＲ１６および酸素であるＶを含む場合、そのような式ＶＩＩの化合物は、Ｒ１６が−（Ｃ＝Ｓ）ＯＨであること以外は同じ式ＶＩＩの化合物である互変異性形態で存在し得ることを理解されたい。式ＶＩＩの化合物が、−Ｃ（＝Ｏ）ＳＨであるＲ１６およびＲ１６が−Ｃ（＝Ｓ）ＯＨであるその互変異性体を含む場合、得られる式ＩＩの生成化合物は、酸素であるＧを含む。
【００４５】
式ＩＩの化合物を合成するための本発明の別の実施形態において、式ＶＩＩの化合物は、−ＮＨ２であるＲ１６を含む。式ＩＩの化合物を合成する方法における式ＶＩＩの化合物が、−ＮＨ２であるＲ１６を含む場合、該方法によって生じる式ＩＩの化合物中のｒは１である。式ＩＩの化合物を合成するための方法の別の実施形態において、方法が、式ＶＩＩの化合物［式中、Ｒ１６は−ＮＨ２である］および式ＩＸの化合物［式中、Ｖ’は酸素である］を含み、前記方法によって生じる式ＩＩの化合物は、１であるｒおよびＶ’（すなわち酸素）であるＧを含む。式ＩＩの化合物を合成するための方法の別の実施形態において、方法は、式ＶＩＩの化合物［式中、Ｒ１６は−ＮＨ２である］および式ＩＸの化合物［式中、Ｖ’は硫黄である］を含み、前記方法によって生じる式ＩＩの化合物は、１であるｒおよびＶ’（すなわち硫黄）であるＧを含む。
【００４６】
式ＩＩの化合物を合成するための方法の別の実施形態において、方法は、式ＩＸのアゾール活性化剤［式中、Ｖ’は酸素である］を含む。式ＩＩの化合物を合成するための方法の別の実施形態において、方法は、式ＩＸのアゾール活性化剤［式中、Ｖ’は硫黄である］を含む。
【００４７】
式ＩＩの化合物を合成する方法の別の実施形態において、ヒドラジンは無水ヒドラジンである。式ＩＩの化合物を合成する方法の別の実施形態において、ヒドラジンはヒドラジン一水和物である。別の実施形態において、ヒドラジンはヒドラジンの水溶液である。別の実施形態において、ヒドラジンはヒドラジンのテトラヒドロフラン溶液である。
【００４８】
上記で説明した通り、式Ｉの化合物は、リンカー中間体および前記リンカー中間体基を含むカリケアマイシン誘導体を合成するための中間体として有用である。したがって、主題発明は、式ＩＶの化合物を合成するための方法を提供し、これは、リンカー中間体および前記リンカー中間体基を含むカリケアマイシン誘導体を合成するための中間体としても有用である。一実施形態において、主題発明は、式ＩＶの化合物
【００４９】
【化１３】
2019089847.tif 000014
［式中、Ｒ８およびＲ９は、水素ならびに直鎖および分枝鎖Ｃ１〜Ｃ８アルキルからそれぞれ独立に選択され、ここで、Ｒ８およびＲ９について、各前記アルキルは、−ＮＨ２、−ＮＨＲ１１、−ＮＲ１１Ｒ１３、−ＯＲ１１、−ＯＨまたは−ＳＲ１１によって独立に置換されていてもよく、ここで、各Ｒ１１および各Ｒ１３は、直鎖および分枝鎖Ｃ１〜Ｃ５アルキルから独立に選択され、
ｒは、０および１から選択される整数であり、
Ｇは、酸素または硫黄であり、
Ｚ１は、Ｈまたは直鎖もしくは分枝鎖Ｃ１〜Ｃ５アルキルであり、
Ａｒは、直鎖もしくは分枝鎖Ｃ１〜Ｃ６アルキル、−ＯＲ１４、−ＳＲ１４、ハロゲン、ニトロ、−ＣＯＯＲ１４、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＲ１４、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＯＯＲ１４、−Ｓ（ＣＨ２）ｎＣＯＯＲ１４、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨＲ１４および−Ｓ（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨＲ１４から独立に選択される１、２もしくは３つの基で置換されていてもよい１，２−、１，３−もしくは１，４−フェニレンであるか、またはＡｒは、直鎖もしくは分枝鎖Ｃ１〜Ｃ６アルキル、−ＯＲ１４、−ＳＲ１４、ハロゲン、ニトロ、−ＣＯＯＲ１４、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＲ１４、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＯＯＲ１４、−Ｓ（ＣＨ２）ｎＣＯＯＲ１４、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨＲ１４および−Ｓ（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨＲ１４から独立に選択される１、２、３もしくは４つの基で置換されていてもよい１，２−、１，３−、１，４−、１，５−、１，６−、１，７−、１，８−、２，３−、２，６−もしくは２，７−ナフチリデンであり、
ここで、各Ｒ１４は、（Ｃ１〜Ｃ５）アルキルから独立に選択され、各Ｒ１４は、−ＯＨ、−（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルおよび−Ｓ（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルから選択される１または２つの基で独立に置換されていてもよく、
各ｎは、０、１、２、３、４および５から独立に選択される整数であり、
Ｗは、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（＝Ｏ）−および−ＮＲ１５−から選択され、ここで、Ｒ１５は（Ｃ１〜Ｃ５）アルキルであり、Ｒ１５は、−ＯＨ、−（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルおよび−Ｓ（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルから選択される１または２つの基で置換されていてもよく、Ｙは、直鎖もしくは分枝鎖（Ｃ１〜Ｃ６）アルキレン基または直鎖もしくは分枝鎖（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニレン基である］
を合成するための方法であって、
式Ｉの化合物
【００５０】
【化１４】
2019089847.tif 000015
［式中、Ｒ１２は、直鎖および分枝鎖Ｃ１〜Ｃ８アルキルから選択され、
各Ｒ１０は、水素、Ｒ１２および−ＯＲ１２から独立に選択され、
Ｒ８、Ｒ９、ｒ、Ｇ、Ｚ１、Ａｒ、ＷおよびＹは、定義した通りである］
を、強酸で処理して、式ＩＶの化合物を含む混合物を形成するステップを含む方法を提供する。式ＩＶの化合物を合成するための方法において使用される強酸は、当業者によって決定され得るが、実際には、硫黄原子から置換フェニル−メチレン基を除去するであろう任意の酸が、式ＩＶの化合物をもたらす。一実施形態において、式ＩＶの化合物を合成するための本発明の方法において使用される強酸は、トリフルオロ酢酸、硫酸、トリフル酸、ＨＣｌ、ＨＢｒ、ＨＩから選択される。式ＩＶの化合物を合成するための方法の一実施形態において、Ｒ８およびＲ９はメチルであり、ｒは０であり、Ｇは酸素であり、Ｚ１はメチルであり、Ａｒは１，４−フェニレンであり、Ｗは−Ｏ−であり、Ｙは−（ＣＨ２）３−である。式ＩＶの化合物を合成する方法の別の実施形態において、各Ｒ１０は水素である。式ＩＶの化合物を合成する方法の別の実施形態において、各Ｒ１０は水素であり、Ｒ１２はメチルである。
【００５１】
式ＩＶの化合物を合成するための本発明の別の実施形態において、式Ｉの化合物中のＲ８およびＲ９はいずれもメチルである。
【００５２】
式ＩＶの化合物を合成するための本発明の別の実施形態において、式Ｉの化合物中のｒは０である。式ＩＶの化合物を合成するための本発明の別の実施形態において、式Ｉの化合物中のｒは０であり、Ｇは酸素である。式ＩＶの化合物を合成するための本発明の別の実施形態において、式Ｉの化合物中のｒは０であり、Ｇは硫黄である。
【００５３】
本発明はまた、式Ｉの中間体および式ＩＶの中間体を使用して、式Ｖのリンカー中間体を合成するための方法も提供する。本発明は、一実施形態において、式Ｖのリンカー中間体
【００５４】
【化１５】
2019089847.tif 000016
［式中、Ｒ８およびＲ９は、水素ならびに直鎖および分枝鎖Ｃ１〜Ｃ８アルキルからそれぞれ独立に選択され、ここで、Ｒ８およびＲ９について、各前記アルキルは、−ＮＨ２、−ＮＨＲ１１、−ＮＲ１１Ｒ１３、−ＯＲ１１、−ＯＨまたは−ＳＲ１１によって独立に置換されていてもよく、ここで、各Ｒ１１および各Ｒ１３は、直鎖および分枝鎖Ｃ１〜Ｃ５アルキルから独立に選択され、
ｒは、０および１から選択される整数であり、
Ｇは、酸素または硫黄であり、
Ｚ１は、Ｈまたは直鎖もしくは分枝鎖Ｃ１〜Ｃ５アルキルであり、
Ａｒは、直鎖もしくは分枝鎖Ｃ１〜Ｃ６アルキル、−ＯＲ１４、−ＳＲ１４、ハロゲン、ニトロ、−ＣＯＯＲ１４、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＲ１４、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＯＯＲ１４、−Ｓ（ＣＨ２）ｎＣＯＯＲ１４、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨＲ１４および−Ｓ（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨＲ１４から独立に選択される１、２もしくは３つの基で置換されていてもよい１，２−、１，３−もしくは１，４−フェニレンであるか、またはＡｒは、直鎖もしくは分枝鎖Ｃ１〜Ｃ６アルキル、−ＯＲ１４、−ＳＲ１４、ハロゲン、ニトロ、−ＣＯＯＲ１４、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＲ１４、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＯＯＲ１４、−Ｓ（ＣＨ２）ｎＣＯＯＲ１４、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨＲ１４および−Ｓ（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨＲ１４から独立に選択される１、２、３もしくは４つの基で置換されていてもよい１，２−、１，３−、１，４−、１，５−、１，６−、１，７−、１，８−、２，３−、２，６−もしくは２，７−ナフチリデンであり、
ここで、各Ｒ１４は、（Ｃ１〜Ｃ５）アルキルから独立に選択され、各Ｒ１４は、−ＯＨ、−（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルおよび−Ｓ（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルから選択される１または２つの基で独立に置換されていてもよく、
各ｎは、０、１、２、３、４および５から独立に選択される整数であり、
Ｗは、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（＝Ｏ）−および−ＮＲ１５−から選択され、ここで、Ｒ１５は（Ｃ１〜Ｃ５）アルキルであり、Ｒ１５は、−ＯＨ、−（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルおよび−Ｓ（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルから選択される１または２つの基で置換されていてもよく、
Ｙは、直鎖もしくは分枝鎖（Ｃ１〜Ｃ６）アルキレン基または直鎖もしくは分枝鎖（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニレン基であり、
Ｚは、
【００５５】
【化１６】
2019089847.tif 000017
からなる群から選択される］
を合成するための方法であって、
ａ）式Ｉの化合物
【００５６】
【化１７】
2019089847.tif 000018
［式中、Ｒ１２は、直鎖および分枝鎖Ｃ１〜Ｃ８アルキルから選択され、各Ｒ１０は、水素、Ｒ１２および−ＯＲ１２から独立に選択される］
を、強酸で処理して、式ＩＶの化合物
【００５７】
【化１８】
2019089847.tif 000019
を含む混合物を形成するステップと、
ｂ）式ＩＶの化合物を、化合物ＺＨと反応させて、
それにより、式Ｖのリンカー中間体を合成するステップとを含む方法を提供する。式Ｖのリンカー中間体を合成する方法の一実施形態において、強酸は、トリフルオロ酢酸または硫酸である。
【００５８】
式Ｖのリンカー中間体を合成するための本発明の別の実施形態において、式Ｉの化合物中のＲ８およびＲ９はいずれもメチルである。
【００５９】
式Ｖのリンカー中間体を合成するための本発明の別の実施形態において、式Ｉの化合物中のｒは０である。式Ｖのリンカー中間体を合成するための本発明の別の実施形態において、式Ｉの化合物中のｒは０であり、Ｇは酸素である。式Ｖのリンカー中間体を合成するための本発明の別の実施形態において、式Ｉの化合物中のｒは０であり、Ｇは硫黄である。
【００６０】
式Ｖのリンカー中間体を合成する方法の別の実施形態において、ＺＨは
【００６１】
【化１９】
2019089847.tif 000020
である。
【００６２】
式Ｖのリンカー中間体を合成する方法の別の実施形態において、リンカー中間体は、構造
【００６３】
【化２０】
2019089847.tif 000021
を有する化合物である。
【００６４】
式Ｖのリンカー中間体を合成する方法の別の実施形態において、該方法において使用される式Ｉの化合物は、式ＩＩの化合物
【００６５】
【化２１】
2019089847.tif 000022
を、式ＩＩＩの化合物
【００６６】
【化２２】
2019089847.tif 000023
と反応させることによって取得される。
【００６７】
説明した通り、リンカー中間体は、前記リンカー中間体基を含むカリケアマイシン誘導体を調製するために有用である。カリケアマイシン誘導体を、今度はモノクローナル抗体等の生体高分子とコンジュゲートさせることができる。したがって、本明細書において記述されている式Ｉの化合物および合成の方法は、そのようなカリケアマイシン誘導体を作製するために有用である。故に、本発明は、式ＶＩのカリケアマイシン誘導体
【００６８】
【化２３】
2019089847.tif 000024
［式中、Ｊは
【００６９】
【化２４】
2019089847.tif 000025
Ｒ５は、−ＣＨ３、−Ｃ２Ｈ５または−ＣＨ（ＣＨ３）２であり、
Ｘは、ヨウ素または臭素原子であり、
Ｒ５’は、水素または基ＲＣＯであり、ここで、Ｒは、水素、１から１０個の炭素原子の分枝状もしくは非分枝状アルキル、２から１０個の炭素原子のアルキレン、６から１１個の炭素原子のアリール、（Ｃ６〜Ｃ１１）アリール−アルキル（Ｃ１〜Ｃ５）基、またはヘテロアリールもしくはヘテロアリール−アルキル（Ｃ１〜Ｃ５）基｛ここで、ヘテロアリールは、２−もしくは３−フリル、２−もしくは３−チエニル、２−もしくは３−（Ｎ−メチルピロリル）、２−、３−もしくは４−ピリジニル、２−、４−もしくは５−（Ｎ−メチルイミダゾリル）、２−、４−もしくは５−オキサゾリル、２−、３−、５−もしくは６−ピリミジニル、２−、３−、４−、５−、６−、７−もしくは８−キノリル、または１−、３−、４−、５−、６−、７−もしくは８−イソキノリルとして定義され、すべてのアリールおよびヘテロアリール基は、１つまたは複数のヒドロキシ、アミノ、カルボキシ、ハロ、ニトロ、（Ｃ１〜Ｃ３）アルコキシ、または１から５個の炭素原子のチオアルコキシによって置換されていてもよい｝であり、
Ｒ６およびＲ７は、Ｈおよび
【００７０】
【化２５】
2019089847.tif 000026
からそれぞれ独立に選択され、
Ｒ８およびＲ９は、水素ならびに直鎖および分枝鎖Ｃ１〜Ｃ８アルキルからそれぞれ独立に選択され、ここで、Ｒ８およびＲ９について、各前記アルキルは、−ＮＨ２、−ＮＨＲ１１、−ＮＲ１１Ｒ１３、−ＯＲ１１、−ＯＨまたは−ＳＲ１１によって独立に置換されていてもよく、ここで、各Ｒ１１および各Ｒ１３は、直鎖および分枝鎖Ｃ１〜Ｃ５アルキルから独立に選択され、
ｒは、整数０または１であり、
Ｇは、酸素または硫黄であり、
Ｚ１は、Ｈまたは直鎖もしくは分枝鎖Ｃ１〜Ｃ５アルキルであり、
Ａｒは、直鎖もしくは分枝鎖Ｃ１〜Ｃ６アルキル、−ＯＲ１４、−ＳＲ１４、ハロゲン、ニトロ、−ＣＯＯＲ１４、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＲ１４、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＯＯＲ１４、−Ｓ（ＣＨ２）ｎＣＯＯＲ１４、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨＲ１４および−Ｓ（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨＲ１４から独立に選択される１、２もしくは３つの基で置換されていてもよい１，２−、１，３−もしくは１，４−フェニレンであるか、またはＡｒは、直鎖もしくは分枝鎖Ｃ１〜Ｃ６アルキル、−ＯＲ１４、−ＳＲ１４、ハロゲン、ニトロ、−ＣＯＯＲ１４、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＲ１４、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＯＯＲ１４、−Ｓ（ＣＨ２）ｎＣＯＯＲ１４、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨＲ１４および−Ｓ（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨＲ１４から独立に選択される１、２、３もしくは４つの基で置換されていてもよい１，２−、１，３−、１，４−、１，５−、１，６−、１，７−、１，８−、２，３−、２，６−もしくは２，７−ナフチリデンであり、
ここで、各Ｒ１４は、（Ｃ１〜Ｃ５）アルキルから独立に選択され、各Ｒ１４は、−ＯＨ、−（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルおよび−Ｓ（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルから選択される１または２つの基で独立に置換されていてもよく、
各ｎは、０、１、２、３、４および５から独立に選択される整数であり、
Ｗは、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（＝Ｏ）−および−ＮＲ１５−から選択され、ここで、Ｒ１５は（Ｃ１〜Ｃ５）アルキルであり、Ｒ１５は、−ＯＨ、−（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルおよび−Ｓ（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルから選択される１または２つの基で置換されていてもよく、
Ｙは、直鎖もしくは分枝鎖（Ｃ１〜Ｃ６）アルキレン基または直鎖もしくは分枝鎖（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニレン基であり、
Ｚは、
【００７１】
【化２６】
2019089847.tif 000027
からなる群から選択される］
を合成する方法であって、
ａ）式Ｉの化合物
【００７２】
【化２７】
2019089847.tif 000028
［式中、Ｒ１２は、直鎖および分枝鎖Ｃ１〜Ｃ８アルキルから選択され、
各Ｒ１０は、水素、Ｒ１２および−ＯＲ１２から独立に選択される］
を、強酸で処理して、式ＩＶの化合物
【００７３】
【化２８】
2019089847.tif 000029
を含む混合物を形成するステップと、
ｂ）式ＩＶの化合物を、化合物ＺＨと反応させて、
式Ｖのリンカー中間体
【００７４】
【化２９】
2019089847.tif 000030
を形成するステップと、
ｃ）ステップ（ｂ）によって生じた式Ｖのリンカー中間体を、メチルトリスルフィド化合物ＣＨ３−Ｓ−Ｓ−Ｓ−Ｊと反応させ、
それにより、式ＶＩのカリケアマイシン誘導体を合成するステップとを含む方法を提供する。式ＶＩのカリケアマイシン誘導体を合成する方法の一実施形態において、強酸は、硫酸またはトリフルオロ酢酸である。式ＶＩのカリケアマイシン誘導体を合成する方法の別の実施形態において、Ｒ８およびＲ９はメチルであり、ｒは０であり、Ｇは酸素であり、Ｚ１はメチルであり、Ａｒは１，４−フェニレンであり、Ｗは−Ｏ−であり、Ｙは−（ＣＨ２）３−である。カリケアマイシン誘導体式ＶＩを合成する方法の別の実施形態において、各Ｒ１０は水素である。式ＶＩのカリケアマイシン誘導体を合成する方法の別の実施形態において、各Ｒ１０は水素であり、Ｒ１２はメチルである。
【００７５】
式ＶＩのカリケアマイシン誘導体を合成するための本発明の別の実施形態において、式Ｉの化合物中のＲ８およびＲ９はいずれもメチルである。
【００７６】
式ＶＩのカリケアマイシン誘導体を合成するための本発明の別の実施形態において、式Ｉの化合物中のｒは０である。式ＶＩのカリケアマイシン誘導体を合成するための本発明の別の実施形態において、式Ｉの化合物中のｒは０であり、Ｇは酸素である。式ＶＩのカリケアマイシン誘導体を合成するための本発明の別の実施形態において、式Ｉの化合物中のｒは０であり、Ｇは硫黄である。
【００７７】
式ＶＩのカリケアマイシン誘導体を合成する方法の別の実施形態において、式Ｉの化合物は、式ＩＩの化合物
【００７８】
【化３０】
2019089847.tif 000031
を、式ＩＩＩの化合物
【００７９】
【化３１】
2019089847.tif 000032
と反応させることによって取得される。
【００８０】
式ＶＩのカリケアマイシン誘導体を合成する方法の別の実施形態において、Ｒ６およびＲ７の一方は水素であり、Ｒ６およびＲ７の他方は
【００８１】
【化３２】
2019089847.tif 000033
である。
【００８２】
本発明の式Ｉの中間体および合成の方法の一実施形態において、Ｚ１はメチルである。本発明の中間体および合成の方法の別の実施形態において、ｒは０であり、Ｇは酸素である。本発明の中間体および合成の方法の別の実施形態において、Ｚ１はメチルであり、ｒは０であり、Ｇは酸素である。
【００８３】
本発明の合成の方法の別の実施形態において、Ｊは、オゾガマイシン部分である。
【００８４】
本発明の合成の方法の別の実施形態において、式ＶＩのカリケアマイシン誘導体は、構造
【００８５】
【化３３】
2019089847.tif 000034
を有する。
【００８６】
本発明の方法によって合成される式ＶＩのカリケアマイシン誘導体を、生体高分子と、例えばモノクローナル抗体とコンジュゲートさせることができる。本発明の方法によって合成される式ＶＩのカリケアマイシン誘導体を、例えば、モノクローナル抗ＣＤ２２抗体イノツズマブ（ある特定のがん細胞の表面上に発現するＣＤ２２抗原と特異的に結合している抗体）と、または抗ＣＤ３３抗体ゲムツズマブ（ある特定のがん細胞の表面上に発現する抗ＣＤ３３抗原を特異的に標的化する抗体）とコンジュゲートさせることができる。本発明の方法によって合成される式ＶＩのカリケアマイシン誘導体は、モノクローナル抗体とコンジュゲートしている場合、一実施形態において、構造：
【００８７】
【化３４】
2019089847.tif 000035
［式中、Ａｂはモノクローナル抗体である］を有する。モノクローナル抗体Ａｂの例は、ゲムツズマブおよびイノツズマブを包含するがこれらに限定されない。
【００８８】
本明細書において使用される用語は、概して、本発明の文脈内で、および各用語が使用されている具体的な文脈において、当技術分野におけるそれらの普通の意味を有する。
【００８９】
用語「カリケアマイシン誘導体」は、本明細書において使用される場合、別段の指示がない限り、式ＣＨ３−Ｓ−Ｓ−Ｓ−Ｊの化合物の誘導体［式中、Ｊは、本明細書において定義されている通りである］を指し、該誘導体は、リンカー中間体基：
【００９０】
【化３５】
2019089847.tif 000036
［式中、Ｒ８、Ｒ９、ｒ、Ｇ、Ｚ１、Ａｒ、Ｗ、ＹおよびＺは、本明細書において定義されている通りである］と結合しているカリケアマイシン部分−Ｓ−Ｓ−Ｊを含む。カリケアマイシン誘導体を、−Ｃ（＝Ｏ）Ｚ部分を含有する末端で、モノクローナル抗体等の生体高分子とさらにコンジュゲート（すなわち共有結合）させることができる。式ＣＨ３−Ｓ−Ｓ−Ｓ−Ｊの化合物の例は、例えば、米国特許第４，９７０，１９８号および米国特許第５，０５３，３９４号において記述されており、これらはいずれも、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。化合物ＣＨ３−Ｓ−Ｓ−Ｓ−Ｊの例は、カリケアマイシンオゾガマイシンである。
【００９１】
用語「リンカー中間体」は、本明細書において使用される場合、別段の指示がない限り、その一端で式ＣＨ３−Ｓ−Ｓ−Ｓ−Ｊの分子と共有結合することができ、他端（−Ｃ（＝Ｏ）Ｚ末端）にモノクローナル抗体等の生体高分子と共有結合することができる官能基を有する、本明細書において記述されている式Ｖの単離された分子を指す。単離されたリンカー中間体は、カリケアマイシン誘導体、およびモノクローナル抗体等の生体高分子と結合しているカリケアマイシンを作製するための成分として有用である。
【００９２】
別段の指示がない限り、用語「アルキル」は、それ自体がまたは別の用語の一部として、指示されている数の炭素原子を有する直鎖または分枝状の飽和または不飽和炭化水素を指す（例えば、「Ｃ１〜Ｃ８」アルキルは、１から８個までの炭素原子を有するアルキル基を指す）。炭素原子の数が指示されていない場合、アルキル基は、１から８個までの炭素原子を有する（不飽和でない限り、この場合、アルキル基は２から８個までの炭素原子を有することになる）。代表的な直鎖Ｃ１〜Ｃ８アルキルは、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｎ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル、ｎ−ヘプチルおよびｎ−オクチルを包含するがこれらに限定されず、一方、分枝状Ｃ１〜Ｃ８アルキルは、−イソプロピル、−ｓｅｃ−ブチル、−イソブチル、−ｔｅｒｔ−ブチル、−イソペンチルおよび−２−メチルブチルを包含するがこれらに限定されず、不飽和Ｃ２〜Ｃ８アルキルは、ビニル、アリル、１−ブテニル、２−ブテニル、イソブチレニル、１−ペンテニル、２−ペンテニル、３−メチル−１−ブテニル、２−メチル−２−ブテニル、２，３−ジメチル−２−ブテニル、１−ヘキシル、２−ヘキシル、３−ヘキシル、アセチレニル、プロピニル、１−ブチニル、２−ブチニル、１−ペンチニル、２−ペンチニルおよび３−メチル−１−ブチニルを包含するがこれらに限定されない。
【００９３】
別段の指示がない限り、「アルキレン」は、それ自体がまたは別の用語の一部として、親アルカンの同じまたは２個の異なる炭素原子からの２個の水素原子の除去によって誘導される２つの一価ラジカル中心を有する、定められた数の炭素原子の飽和分枝鎖または直鎖または環状炭化水素ラジカルを指す。一実施形態において、「アルキレン」は、２つの一価ラジカル中心を有する、定められた数の炭素原子の飽和分枝鎖または直鎖アルキレンラジカルを指す。典型的なアルキレンラジカルは、メチレン（−ＣＨ２−）、１，２−エチレン−ＣＨ２ＣＨ２−）、１，３−プロピレン（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）、１，４−ブチレン（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）等を包含するがこれらに限定されない。用語「アルケニレン」は、定められた数の炭素原子のものであるが、二重結合によって接続された少なくとも２個の炭素原子を有する分枝鎖または直鎖または環状炭化水素ラジカルを指し、ここで、該ラジカルは、親アルカンの２個の異なる炭素原子からの２個の水素原子の除去によって誘導される２つの一価ラジカル中心を有する。一実施形態において、「アルケニレン」は、定められた数の炭素原子のものであるが、二重結合によって接続された少なくとも２個の炭素原子を有する分枝鎖または直鎖ラジカルを指し、ここで、該ラジカルは、２つの一価ラジカル中心を有する。アルケニレンラジカルの例は、−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ−および−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ＝ＣＨを包含するがこれらに限定されない。
【００９４】
別段の指示がない限り、「アリール」は、それ自体がまたは別の用語の一部として、親芳香族環系の１個または複数の炭素原子のそれぞれからの１個の水素原子の除去によって誘導される、６〜２０個、好ましくは６〜１４個の炭素原子の炭素環式芳香族炭化水素ラジカルを意味する。典型的なアリール基は、ベンゼン、ナフタレン、アントラセン、ビフェニル等から誘導されるラジカルを包含するがこれらに限定されない。指示されていれば、本明細書におけるアリール基は置換されていてもよい。用語「アリーレン」は、本明細書において定義されている通りのアリール基から誘導される二価のラジカルを指す。
【００９５】
「ハロゲン」は、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素原子を指す。
【００９６】
本発明はまた、式ＶＩのカリケアマイシン誘導体
【００９７】
【化３６】
2019089847.tif 000037
［式中、Ｊは
【００９８】
【化３７】
2019089847.tif 000038
Ｒ５は、−ＣＨ３、−Ｃ２Ｈ５または−ＣＨ（ＣＨ３）２であり、
Ｘは、ヨウ素または臭素原子であり、
Ｒ５’は、水素または基ＲＣＯであり、ここで、Ｒは、水素、１から１０個の炭素原子の分枝状もしくは非分枝状アルキル、２から１０個の炭素原子のアルキレン、６から１１個の炭素原子のアリール、（Ｃ６〜Ｃ１１）アリール−アルキル（Ｃ１〜Ｃ５）基、またはヘテロアリールもしくはヘテロアリール−アルキル（Ｃ１〜Ｃ５）基｛ここで、ヘテロアリールは、２−もしくは３−フリル、２−もしくは３−チエニル、２−もしくは３−（Ｎ−メチルピロリル）、２−、３−もしくは４−ピリジニル、２−、４−もしくは５−（Ｎ−メチルイミダゾリル）、２−、４−もしくは５−オキサゾリル、２−、３−、５−もしくは６−ピリミジニル、２−、３−、４−、５−、６−、７−もしくは８−キノリル、または１−、３−、４−、５−、６−、７−もしくは８−イソキノリルとして定義され、すべてのアリールおよびヘテロアリール基は、１つまたは複数のヒドロキシ、アミノ、カルボキシ、ハロ、ニトロ、（Ｃ１〜Ｃ３）アルコキシ、または１から５個の炭素原子のチオアルコキシによって置換されていてもよい｝であり、
Ｒ６およびＲ７は、Ｈおよび
【００９９】
【化３８】
2019089847.tif 000039
からそれぞれ独立に選択され、
Ｒ８およびＲ９は、水素ならびに直鎖および分枝鎖Ｃ１〜Ｃ８アルキルからそれぞれ独立に選択され、ここで、Ｒ８およびＲ９について、各前記アルキルは、−ＮＨ２、−ＮＨＲ１１、−ＮＲ１１Ｒ１３、−ＯＲ１１、−ＯＨまたは−ＳＲ１１によって独立に置換されていてもよく、ここで、各Ｒ１１および各Ｒ１３は、直鎖および分枝鎖Ｃ１〜Ｃ５アルキルから独立に選択され、
ｒは、整数０または１であり、
Ｇは、酸素または硫黄であり、
Ｚ１は、Ｈまたは直鎖もしくは分枝鎖Ｃ１〜Ｃ５アルキルであり、
Ａｒは、直鎖もしくは分枝鎖Ｃ１〜Ｃ６アルキル、−ＯＲ１４、−ＳＲ１４、ハロゲン、ニトロ、−ＣＯＯＲ１４、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＲ１４、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＯＯＲ１４、−Ｓ（ＣＨ２）ｎＣＯＯＲ１４、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨＲ１４および−Ｓ（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨＲ１４から独立に選択される１、２もしくは３つの基で置換されていてもよい１，２−、１，３−もしくは１，４−フェニレンであるか、またはＡｒは、直鎖もしくは分枝鎖Ｃ１〜Ｃ６アルキル、−ＯＲ１４、−ＳＲ１４、ハロゲン、ニトロ、−ＣＯＯＲ１４、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＲ１４、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＯＯＲ１４、−Ｓ（ＣＨ２）ｎＣＯＯＲ１４、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨＲ１４および−Ｓ（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨＲ１４から独立に選択される１、２、３もしくは４つの基で置換されていてもよい１，２−、１，３−、１，４−、１，５−、１，６−、１，７−、１，８−、２，３−、２，６−もしくは２，７−ナフチリデンであり、
ここで、各Ｒ１４は、（Ｃ１〜Ｃ５）アルキルから独立に選択され、各Ｒ１４は、−ＯＨ、−（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルおよび−Ｓ（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルから選択される１または２つの基で独立に置換されていてもよく、
各ｎは、０、１、２、３、４および５から独立に選択される整数であり、
Ｗは、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（＝Ｏ）−および−ＮＲ１５−から選択され、ここで、Ｒ１５は（Ｃ１〜Ｃ５）アルキルであり、Ｒ１５は、−ＯＨ、−（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルおよび−Ｓ（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルから選択される１または２つの基で置換されていてもよく、
Ｙは、直鎖もしくは分枝鎖（Ｃ１〜Ｃ６）アルキレン基または直鎖もしくは分枝鎖（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニレン基であり、
Ｚは、
【０１００】
【化３９】
2019089847.tif 000040
からなる群から選択される］
を合成する方法であって、
式Ｖのリンカー中間体
【０１０１】
【化４０】
2019089847.tif 000041
を、メチルトリスルフィド化合物ＣＨ３−Ｓ−Ｓ−Ｓ−Ｊと、カルボジイミドの存在下で反応させ、それにより、式ＶＩのカリケアマイシン誘導体を合成するステップを含む方法も提供する。
【０１０２】
本発明はまた、式Ｘのカリケアマイシン誘導体
【０１０３】
【化４１】
2019089847.tif 000042
［式中、Ｊは
【０１０４】
【化４２】
2019089847.tif 000043
Ｒ５は、−ＣＨ３、−Ｃ２Ｈ５または−ＣＨ（ＣＨ３）２であり、
Ｘは、ヨウ素または臭素原子であり、
Ｒ５’は、水素または基ＲＣＯであり、ここで、Ｒは、水素、１から１０個の炭素原子の分枝状もしくは非分枝状アルキル、２から１０個の炭素原子のアルキレン、６から１１個の炭素原子のアリール、（Ｃ６〜Ｃ１１）アリール−アルキル（Ｃ１〜Ｃ５）基、またはヘテロアリールもしくはヘテロアリール−アルキル（Ｃ１〜Ｃ５）基｛ここで、ヘテロアリールは、２−もしくは３−フリル、２−もしくは３−チエニル、２−もしくは３−（Ｎ−メチルピロリル）、２−、３−もしくは４−ピリジニル、２−、４−もしくは５−（Ｎ−メチルイミダゾリル）、２−、４−もしくは５−オキサゾリル、２−、３−、５−もしくは６−ピリミジニル、２−、３−、４−、５−、６−、７−もしくは８−キノリル、または１−、３−、４−、５−、６−、７−もしくは８−イソキノリルとして定義され、すべてのアリールおよびヘテロアリール基は、１つまたは複数のヒドロキシ、アミノ、カルボキシ、ハロ、ニトロ、（Ｃ１〜Ｃ３）アルコキシ、または１から５個の炭素原子のチオアルコキシによって置換されていてもよい｝であり、
Ｒ６およびＲ７は、Ｈおよび
【０１０５】
【化４３】
2019089847.tif 000044
からそれぞれ独立に選択され、
Ｙ’は、直鎖もしくは分枝鎖（Ｃ１〜Ｃ１８）アルキレン基、直鎖もしくは分枝鎖（Ｃ２〜Ｃ１８）アルケニレン基、アリーレン基またはヘテロアリーレン基、アリーレン（Ｃ１〜Ｃ１８）アルキレン基、アリーレン（Ｃ２〜Ｃ１８）アルケニレン基、ヘテロアリーレン（Ｃ１〜Ｃ１８）アルキレン基またはヘテロアリーレン（Ｃ１〜Ｃ１８）アルケニレン基であり、ここで、前記ヘテロアリーレン基は、フリル、チエニル、Ｎ−メチルピロリル、ピリジニル、Ｎ−メチルイミダゾリル、オキサゾリル、ピリミジニル、キノリル、イソキノリル、Ｎ−メチルカルバゾイル、アミノクマリニルまたはフェナジニルから誘導される二価のラジカルであり、前記Ｙ’は、１から５個までの炭素原子のジアルキルアミノ、１から５個までの炭素原子のアルコキシ、ヒドロキシ、−ＳＨ、または１から５個までの炭素原子のアルキルチオによって置換されていてもよく、
Ｑは、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＮ＝、−Ｃ（＝Ｓ）ＮＨＮ＝、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨＮ＝、−ＮＨＣ（＝Ｓ）ＮＨＮ＝および−Ｏ−Ｎ＝から選択され、
Ｚ１は、Ｈまたは直鎖もしくは分枝鎖Ｃ１〜Ｃ５アルキルであり、
Ａｒは、直鎖もしくは分枝鎖Ｃ１〜Ｃ６アルキル、−ＯＲ１４、−ＳＲ１４、ハロゲン、ニトロ、−ＣＯＯＲ１４、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＲ１４、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＯＯＲ１４、−Ｓ（ＣＨ２）ｎＣＯＯＲ１４、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨＲ１４および−Ｓ（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨＲ１４から独立に選択される１、２もしくは３つの基で置換されていてもよい１，２−、１，３−もしくは１，４−フェニレンであるか、またはＡｒは、直鎖もしくは分枝鎖Ｃ１〜Ｃ６アルキル、−ＯＲ１４、−ＳＲ１４、ハロゲン、ニトロ、−ＣＯＯＲ１４、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＲ１４、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＯＯＲ１４、−Ｓ（ＣＨ２）ｎＣＯＯＲ１４、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨＲ１４および−Ｓ（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨＲ１４から独立に選択される１、２、３もしくは４つの基で置換されていてもよい１，２−、１，３−、１，４−、１，５−、１，６−、１，７−、１，８−、２，３−、２，６−もしくは２，７−ナフチリデンであり、
ここで、各Ｒ１４は、（Ｃ１〜Ｃ５）アルキルから独立に選択され、各Ｒ１４は、−ＯＨ、−（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルおよび−Ｓ（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルから選択される１または２つの基で独立に置換されていてもよく、
各ｎは、０、１、２、３、４および５から独立に選択される整数であり、
Ｗは、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（＝Ｏ）−および−ＮＲ１５−から選択され、ここで、Ｒ１５は（Ｃ１〜Ｃ５）アルキルであり、Ｒ１５は、−ＯＨ、−（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルおよび−Ｓ（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルから選択される１または２つの基で置換されていてもよく、
Ｙは、直鎖もしくは分枝鎖（Ｃ１〜Ｃ６）アルキレン基または直鎖もしくは分枝鎖（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニレン基であり、
Ｚは、
【０１０６】
【化４４】
2019089847.tif 000045
からなる群から選択される］
を合成する方法であって、
式ＸＩのリンカー中間体
【０１０７】
【化４５】
2019089847.tif 000046
を、メチルトリスルフィド化合物ＣＨ３−Ｓ−Ｓ−Ｓ−Ｊと、カルボジイミドの存在下で反応させ、それにより、式Ｘのカリケアマイシン誘導体を合成するステップを含む方法も提供する。
【０１０８】
カルボジイミドの存在下で式ＶＩまたは式Ｘのカリケアマイシン誘導体を合成するこの方法の一実施形態において、Ｒ６およびＲ７の一方は水素であり、Ｒ６およびＲ７の他方は
【０１０９】
【化４６】
2019089847.tif 000047
である。
【０１１０】
式ＶＩまたは式Ｘのカリケアマイシン誘導体を合成するための本発明の方法の別の実施形態において、メチルトリスルフィドは、式Ｖの（または事例によっては式ＸＩの）リンカー中間体との前記反応中、約３ｇ／Ｌの反応混合物よりも大きい初期濃度を有する。別の実施形態において、メチルトリスルフィド化合物は、式Ｖの（または事例によっては式ＸＩの）リンカー中間体との前記反応中、約１０ｇ／Ｌから１１０ｇ／Ｌの間の反応混合物の初期濃度を有する。
【０１１１】
式ＶＩまたは式Ｘのカリケアマイシン誘導体を合成するこの方法の別の実施形態において、カルボジイミドは１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミドである。式ＶＩまたは式Ｘのカリケアマイシン誘導体を合成するための本発明のこの方法におけるカルボジイミドは、カルボジイミド部分を含有する任意の分子であってよく、そのような分子は当技術分野において公知である。本発明において使用され得るカルボジイミドの例は、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）、Ｎ−シクロヘキシル（ｃｙｌｃｏｈｅｘｙｌ）−Ｎ’−（２−モルホリノエチル）カルボジイミド、Ｎ−シクロヘキシル−Ｎ’−［２−（４−メチルモルホリン−４−イウム−４−イル）エチル］カルボジイミドトシレート、Ｎ−シクロヘキシル−Ｎ’−［４−（ジエチルメチルアンモニオ）シクロヘキシル］カルボジイミドトシレート、Ｎ，Ｎ’−ビス（２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−イル）メチル］カルボジイミド、およびＮ−ベンジル−Ｎ’−イソプロピルカルボジイミドを包含するがこれらに限定されない。本発明の方法において用いるのに好適な他のカルボジイミドは、当業者によって解明され得る。
【０１１２】
本発明はまた、式ＶＩのカリケアマイシン誘導体または式Ｘのカリケアマイシン誘導体［ここで、式ＶＩおよび式Ｘは、以上で定義した通りである］を精製するための方法であって、式ＶＩのカリケアマイシン誘導体または式Ｘのカリケアマイシン誘導体を、逆相高速液体クロマトグラフィー（ＲＰ−ＨＰＬＣ）精製プロトコールに供するステップを含む方法も提供する。これらの化合物が２つの水に不安定な基、すなわちヒドラゾン基およびＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）エステル基を有し、各基はその加水分解のために異なるｐＨ依存性を有することを考慮すれば、逆相精製プロトコールが式ＶＩまたは式Ｘのカリケアマイシン誘導体分子を精製するために使用され得ることは、驚くべきことである。しかし、逆相精製を使用することは、先行技術において記述されている順相クロマトグラフィー精製（米国特許第８，２７３，８６２号参照）と比べて有利であり、これは、順相クロマトグラフィーが、塩化メチレンおよびメタノール等の毒性で環境に優しくない溶媒を使用するからである。逆相高速液体クロマトグラフィー（ＲＰ−ＨＰＬＣ）プロトコールは、反応混合物の成分を結合させるＣ−１８固定相の使用を要する。次いで、これらの成分は、存在する２つの加水分解性基の最適安定性のために、約４から約６までのｐＨ範囲内の水性および有機移動相からなる勾配を使用して、溶離および分離される。一実施形態において、勾配は、少なくとも２つの相を含む。別の実施形態において、勾配は、１、２、３、４または５つの相を含む。別の実施形態において、勾配は、２または３つの相を含む。別の実施形態において、勾配は、２つの相を含む。各相は、有機、水性、またはそれらの組合せであってよい。勾配は、水性品質から有機的品質の増大に向かい、時間の経過に伴って移動する。当技術分野において公知の水相は、主題発明において使用され得る。主題発明において使用され得る水相の例は、酢酸ナトリウム（ＮａＯＡｃ）、コハク酸ナトリウム、Ｎ−メチルモルホリン、クエン酸ナトリウムおよび２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸を包含するがこれらに限定されない。当技術分野において公知の有機相は、主題発明において使用され得る。主題発明において使用され得る有機相の例は、アセトニトリル、イソプロパノール、アセトン、ジメトキシエタンおよびＮ−メチル−２−ピロリドンを包含するがこれらに限定されない。前述の通り、相のいずれかは、水性および有機的品質の混合物、例えばＮａＯＡｃおよびアセトニトリルの混合物を含み得る。例えば、５５％の２０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ５および４５％のアセトニトリルからなる移動相は、本発明のＲＰ−ＨＰＬＣ精製に使用され得る水性／有機移動相である。さらなる例として、主題発明において有用な勾配の例は、５５％の２０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ５および４５％のアセトニトリルからなる第一の移動相、続いてアセトニトリルからなる第二の移動相を含む勾配である。
【０１１３】
ＲＰ−ＨＰＬＣプロトコールを含む、式ＶＩまたは式Ｘのカリケアマイシン誘導体を精製する方法の一実施形態において、式ＶＩまたは式Ｘのカリケアマイシン誘導体は、
【０１１４】
【化４７】
2019089847.tif 000048
から選択されるＺを含む。
【０１１５】
ＲＰ−ＨＰＬＣプロトコールを含む、式ＶＩまたは式Ｘのカリケアマイシン誘導体を精製する方法の別の実施形態において、式ＶＩまたは式Ｘのカリケアマイシン誘導体は、
【０１１６】
【化４８】
2019089847.tif 000049
から選択されるＺを含む。
【０１１７】
ＲＰ−ＨＰＬＣプロトコールを含む、式ＶＩまたは式Ｘのカリケアマイシン誘導体を精製する方法の別の実施形態において、式ＶＩまたは式Ｘのカリケアマイシン誘導体は、
【０１１８】
【化４９】
2019089847.tif 000050
であるＺを含む。
【０１１９】
逆相精製の後、得られた精製したカリケアマイシン誘導体を、当技術分野において記述されている通り、例えば濃縮および分配によって単離してもよいし、または、精製したカリケアマイシン誘導体を、固相抽出（ＳＰＥ）プロトコールを使用することによって単離してもよい。固相抽出プロトコールは、ＲＰ−ＨＰＬＣ画分からの生成物単離のためのジクロロメタン分配に効率的な置きかえとして同定された。固相抽出において、生成物を、弱溶媒中でのローディングによって逆相樹脂と結合し、洗浄して緩衝塩（ＲＰ−ＨＰＬＣ精製で残ったもの）を除去し、次いでアセトニトリル等の有機溶媒で溶離して、塩を含まないまたは実質的に含まない濃縮生成物溶液を生じさせる。
【０１２０】
故に、式ＶＩまたは式Ｘのカリケアマイシン誘導体を合成するための本明細書において記述されている発明の方法のいずれかのさらなる実施形態は、合成された式ＶＩまたは式Ｘのカリケアマイシン誘導体を、逆相精製プロトコールに供することにより、精製するステップをさらに含む。本発明のさらなる実施形態において、逆相精製プロトコールによって生じた式ＶＩまたは式Ｘのカリケアマイシン誘導体を、その後、固相抽出プロトコールに供する。
【発明を実施するための形態】
【０１２１】
式Ｖのリンカー中間体を合成するための本発明の方法を、下記の反応スキームＩ〜ＩＶにおいて記述する。スキームＩ〜ＩＶ中の化学式において、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１２、Ｑ、Ａｒ、Ｗ、Ｙ、Ｚ１およびＺは、本明細書において上記で定義した通りである。
【０１２２】
【化５０】
2019089847.tif 000051
【０１２３】
スキームＩを参照すると、（４−アルコキシフェニル）メタンチオール１［式中、Ｒ１２は、本明細書において記述されている通りである］をセネシオ酸メチル２と反応させて、カルボン酸中間体化合物３を産出する。次いで、中間体３に、テトラヒドロフラン等の好適な有機溶媒およびカルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）等の本明細書において記述されている通りの式ＩＸのアゾール活性化剤を投入する。中間体３．５が取得される。この反応に続いて、３．５をヒドラジンと合わせる。ヒドラジン源は、ＷＯ２００８／１４７７６５において記述されているような無水ヒドラジンであってよいが、好ましくは、ヒドラジン源は、ヒドラジン一水和物等のヒドラジン水溶液である。この反応は、中間体化合物４を産出する。中間体化合物４［式中、Ｒ１２はメチルであり、各Ｒ１０は水素である］である化合物ｐ−メトキシベンジルチオエーテルヒドラジドは、ＷＯ２００８／１４７７６５において記述されており、その内容全体は参照により本明細書に組み込まれる。
【０１２４】
【化５１】
2019089847.tif 000052
【０１２５】
スキームＩＩにおいて、中間体４を、化合物５［式中、Ｚ１は、本明細書において記述されている通りである］、例えば４−（４−アシル−フェノキシ）ブタン酸と、不活性（換言すれば、非反応性）溶媒中で、場合により酸性触媒を用いて反応させて、中間体６を提供する。この反応において使用され得る不活性溶媒の例は、アルコール（例えば、メタノール）、エーテル、および酢酸エチル等のエステルを包含するがこれらに限定されない。当業者であれば、この反応に好適な不活性溶媒を決定することができる。酸性触媒も当業者によって決定することができ、酸性触媒の例は、酢酸を包含するがこれらに限定されない。
【０１２６】
【化５２】
2019089847.tif 000053
【０１２７】
スキームＩＩＩにおいて、中間体化合物６を脱保護して、化合物７を形成する。この反応において、化合物６に、メトキシベンゼンおよび強酸を場合により加熱下で、例えばトリフルオロ酢酸を加熱下で投入して、中間体化合物７を産出する。他の強酸、例えば硫酸をトリフルオロ酢酸の代わりに使用してよい。
【０１２８】
【化５３】
2019089847.tif 000054
【０１２９】
スキームＩＶにおいて、中間体７は化合物８に変換され、これは本明細書において記述されている式Ｖのリンカー中間体の実施形態である。中間体７は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる米国特許第８，２７３，８６２号等の当技術分野において記述されているように、８等のリンカー中間体に変換され得る。しかしながら、好ましくは、スキームＩＶにおいて描写されている通り、中間体７を、トリエチルアミン（ＴＥＡ）等の第三級アミン塩基と、および塩化トリメチルアセチル（ＰｉｖＣｌ）と、テトラヒドロフラン等の不活性溶媒の存在下で反応させる。その後、式ＺＨの化合物、例えばＮ−ヒドロキシスクシンイミドを導入して、リンカー中間体８を提供する。
【０１３０】
式Ｖのリンカー中間体（化合物８等）の合成の後、次いで、スキームＩＶの反応からのリンカー中間体および当技術分野において公知の、例えば米国特許第８，２７３，８６２号において記述されているような方法を使用して、式ＶＩのカリケアマイシン誘導体を合成する。例えば、式Ｖのリンカー中間体を、炭酸ナトリウムを包含するがこれに限定されないアルカリメタル炭酸塩と最初に反応させて、穏やかに加熱還流することにより、アセトニトリル中のリンカー中間体のナトリウム塩を形成することができる。リンカー中間体のナトリウム塩と、メチルトリスルフィドＣＨ３−Ｓ−Ｓ−Ｓ−Ｊとの、約−１５℃での、不活性有機溶媒、好ましくはアセトニトリル中でのさらなる反応により、式ＶＩのカリケアマイシン誘導体が得られる。アセトニトリル中、約０℃での反応が好ましい。有機塩基はアルカリ金属炭酸塩と置きかえてもよく、これは、好ましくは、アセトニトリル中、約０℃でのトリエチルアミンを包含する。
【０１３１】
代替として、式ＶＩのカリケアマイシン誘導体は、式Ｖのリンカー中間体から、カルボジイミドを含む本明細書において記述されている方法を使用することによる式ＣＨ３−Ｓ−Ｓ−Ｓ−Ｊの分子との反応によって、合成することができる。
【０１３２】
当技術分野において記述されている技術、例えば、いずれも参照によりその全体が本明細書に組み込まれる米国特許第５，０５３，３９４号および米国特許第５，７７０，７０１号において記述されている方法を使用して、式ＶＩのカリケアマイシン誘導体をモノクローナル抗体等の生体高分子とさらにコンジュゲートさせて、抗体−薬物コンジュゲート体を形成することができる。
【０１３３】
下記の実施例は、本発明のある特定の実施形態を例証するために提示するものであり、本発明の範囲を限定するものとして解釈すべきではない。当業者であれば、下記の実施例の特定の条件の公知の変形形態が使用され得ることを容易に理解するであろう。
【実施例】
【０１３４】
（実施例１）
３−（４−メトキシベンジルチオ）−３−メチルブタン酸
【０１３５】
【化５４】
2019089847.tif 000055
８５ｇの１および２５５ｍＬの２−メチルテトラヒドロフランを、反応器に２０〜２５℃で添加した。１２５．０５ｇの２を反応器に添加し、窒素流を撹拌溶液に１５〜２０分間吹き込んで発泡させることによって反応器を脱気した。フッ化テトラブチルアンモニウム（ＴＨＦ中１Ｍ、０．０５当量、３６．１ｍＬ）を反応器に添加し、反応物を２０〜３０℃で２時間維持した。
【０１３６】
２５５ｍＬの水中の塩化カルシウム二水和物（０．３５当量、２８．０６０ｇ）の溶液を添加した。２０分間撹拌した後、下部水相を除去した。上部有機層に、２５２ｍＬの水中の２５２ｍＬのメタノールおよび３当量のＮａＯＨを添加した。反応混合物を、中間体エステル（３）の完全消費が観察されるまで撹拌した。
【０１３７】
反応物を１５℃に冷却し、２−メチルテトラヒドロフラン（２５２ｍＬ）、続いて２５２ｍＬの水を添加した。反応物を１５〜３０℃の範囲内に維持しながら、濃ＨＣｌをゆっくり添加した（３．１当量、１８４ｍＬ）。下部水相を除去した。有機層を１Ｍ  ＨＣｌ（２５２ｍＬ）で洗浄し、ヘプタンを添加した（１９４０ｍＬ）。溶液を蒸留して、２−メチルテトラヒドロフランを除去した。得られたスラリーを１時間撹拌し、次いで濾過し、乾燥させた。母液を濃縮して、固体の第二収穫物を得た。
【０１３８】
表題化合物酸４の全収率は、１６２．５９ｇ（８８．５％）であった。1H NMR (CDCl3): δ (ppm) 1.5
(s, 6H), 2.3 (s, 2H), 3.6 (m, 5H), 6.7 (d, 2H), 7.6 (d, 2H).
【０１３９】
（実施例２）
３−（４−メトキシベンジルチオ）−３−メチルブタンヒドラジド
【０１４０】
【化５５】
2019089847.tif 000056
酸４（８１．６７ｇ、３２１ｍｍｏｌ）を、３７５ｍＬのＴＨＦ（テトラヒドロフラン）に添加した。ＣＤＩ（１．０５当量、５４．７ｇ）を３回に分けて投入し、反応物を２０℃で２．５時間撹拌した。別個の反応器内で、２００ｍＬのＴＨＦ中のヒドラジン一水和物（２．５当量、４０．１９ｇ）の溶液を調製した。内部温度を２０℃に保ちながら、中間体５の溶液をヒドラジン水和物溶液に添加した。添加が完了した後、反応物を１８時間撹拌し、次いで１００ｍＬに濃縮した。８５０ｍＬのＥｔＯＡｃ（酢酸エチル）を添加し、溶液を、５００ｍＬの水で３回、次いで２００ｍＬのブラインで洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、珪藻土に通して濾過し、ロータリーエバポレーターで濃縮して白色スラリーとした。３００ｍＬのヘプタンを添加し、２００ｍＬをロータリーエバポレーターで除去した。もう２００ｍＬのヘプタンを添加し、揮散させて濃厚な白色スラリーとした。混合物を濾過し、ヘプタンで洗浄し、乾燥させた。８３．１５ｇ（９６．５％）の表題化合物６が４から取得された。MS 269 (M+1), 121, 120.
【０１４１】
（実施例３）
４−（４−（１−（２−（３−（４−メトキシベンジルチオ）−３−メチルブタノイル）ヒドラゾノ）−エチル）フェノキシ）ブタン酸
【０１４２】
【化５６】
2019089847.tif 000057
６８ｇの６および５７．４３ｇの７を、６８０ｍＬのメタノール（ＭｅＯＨ）に添加した。６８ｍＬの酢酸（ＨＯＡｃ）を添加し、混合物を４５℃で３時間加熱し、２０℃に冷却し、１６時間保持した。スラリーを濾過し、メタノールで洗浄し、乾燥させた。ＥおよびＺ異性体の混合物としての１１２．６０ｇの表題化合物８が取得された。1H NMR (DMSO-d6): δ (ppm)
1.5 (m, 6H), 2.0 (m, 2H), 2.2 (m, 3H), 2.4 (m, 2H), 2.7 (s, 1.1H), 3.0 (s,
0.9H), 3.7 (m, 3H), 3.8 (m, 2H), 4.0 (m, 2H), 6.8 (m 2H), 6.9 (m, 2H), 7.3 (m,
2H), 7.7 (m, 2H), 10.2&10.3 (s, 1H), 12.1 (s, 1H).  LC-MS m/z 473
[M+H]+.
【０１４３】
（実施例４）
４−（４−（１−（２−（３−メルカプト−３−メチルブタノイル）ヒドラゾノ）エチル）−フェノキシ）ブタン酸
【０１４４】
【化５７】
2019089847.tif 000058
２９０．５ｇ（６１４．７ｍｍｏｌ）の８および１１６２ｍＬのアニソールを、反応器に２０〜２５℃で投入した。トリフルオロ酢酸（１１６２ｍＬ）を２分間かけて添加し、反応物を６５〜７０℃に２．５時間加熱した。反応物を４０℃に冷却した。ＴＦＡ（トリフルオロ酢酸）を真空蒸留し、２−メチルテトラヒドロフラン（２９０５ｍＬ）で置きかえた。蒸留を濃厚スラリーが観察されるまで続けた（スラリーの最終体積はおよそ２Ｌであった）。スラリーを１５℃に冷却し、濾過した。粗生成物をメタノール（１８３６．６ｍＬ）中で再スラリー化し、５５℃に加熱し、次いで２０℃に終夜冷却した。スラリーを濾過し、メタノールで洗浄し、乾燥させた。異性体のＥおよびＺ混合物としての１７１．８０ｇ（９３．５４％）の表題化合物９が８から取得された。1H NMR (DMSO-d6): δ (ppm)
1.5 (m, 6H), 2.0 (m, 2H), 2.2 (m, 3H), 2.4 (m, 2H), 2.7 (s, 1.1H), 3.0 (s,
0.9H), 3.3 (s 1H), 4.0 (m, 2H), 6.9 (m, 2H), 7.7 (m, 2H), 10.2&10.3 (s,
1H), 12.1 (s, 1H).
【０１４５】
（実施例５）
２，５−ジオキソピロリジン−１−イル４−（４−（１−（２−（３−メルカプト−３−メチルブタノイル）−ヒドラゾノ）エチル）フェノキシ）ブタノエート
【０１４６】
【化５８】
2019089847.tif 000059
反応器設定：２−Ｌジャケット形反応器、Ｔｒプローブ、窒素入口。
６０ｇ（１７０．３ｍｍｏｌ）を２４００ｍＬのＴＨＦに添加し、１０℃に冷却した。温度を１０〜２０℃の範囲内に維持しながら、トリエチルアミン（２当量、３４．４６ｇ）を添加し、次いで塩化トリメチルアセチル（１．１当量、２２．８１ｇ）を１０分間かけてゆっくり添加した。混合物を１０〜２０℃で３０分間撹拌した。Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（１．１当量、２１．９９ｇ）を反応器に添加し、２０〜２５℃で３０分間撹拌した。
【０１４７】
スラリーを濾過してＴＥＡ−ＨＣｌ塩を除去し、真空下で濃縮しておよそ８００ｍＬの体積とした。ヘキサン（７８０ｍＬ）をゆっくり添加して、生成物を結晶化した。スラリーを１．５時間撹拌し、次いで濾過し、ヘプタンで洗浄し、乾燥させた。７０．４ｇ（９２％収率）の表題化合物リンカー中間体１０が９から取得された。
【０１４８】
１４４ｇの１０を２１００ｍＬのＴＨＦに添加することにより、粗生成物を再結晶化させ、６０℃に加熱した。混合物を珪藻土に通して濾過し、２１００ｍＬのヘキサンをゆっくり添加し、２０℃に１．５時間かけて冷却した。スラリーを濾過し、冷ＴＨＦ／ヘキサン（１：１）、次いでヘキサンで洗浄し、乾燥させた。１２６ｇ（８７．５％回収）の表題化合物リンカー中間体１０が９から取得された。1H NMR (DMSO-d6): δ (ppm)
1.5 (m, 6H), 2.1 (m, 2H), 2.2 (m, 3H), 2.7 (s, 1.1H), 2.9 (M, 5H) 3.0 (s,
1.9H), 3.3 (s 1H), 4.3 (m, 2H), 7.0 (m, 2H), 7.5 (m, 2H), 10.2&10.3 (s,
1H).
【０１４９】
（実施例６）
ブタン酸、３−［［（２Ｅ）−２−［（１Ｒ，４Ｚ，８Ｓ）−８−［［２−Ｏ−［４−（アセチルエチルアミノ）−２，４−ジデオキシ−３−Ｏ−メチル−ａ−Ｌ−ｔｈｒｅｏ−ペントピラノシル］−４，６−ジデオキシ−４−［［［２，６−ジデオキシ−４−Ｓ−［４−［（６−デオキシ−３−Ｏ−メチル−ａ−Ｌ−マンノピラノシル）オキシ］−３−ヨード−５，６−ジメトキシ−２−メチルベンゾイル］−４−チオ−β−Ｄ−リボ−ヘキソピラノシル］オキシ］アミノ］−β−Ｄ−グルコピラノシル］オキシ］−１−ヒドロキシ−１０−［（メトキシカルボニル）アミノ］−１１−オキソビシクロ［７．３．１］トリデカ−４，９−ジエン−２，６−ジイン−１３−イリデン］エチル］ジチオ］−３−メチル−，２−［（１Ｅ）−１−［４−［４−［（２，５−ジオキソ−１−ピロリジニル）オキシ］−４−オキソブトキシ］フェニル］エチリデン］ヒドラジドの調製
室温のアセトニトリル（１．０ｍＬ）中のＮ−アセチル−カリケアマイシン（５０ｍｇ、０．０３５ｍｍｏｌ）の溶液に、リンカー中間体ブタン酸、３−メルカプト−３−メチル−，２−［（Ｅ）−１−［４−［４−［（２，５−ジオキソ−１−ピロリジニル）−オキシ］−４−オキソブトキシ］フェニル］エチリデン］ヒドラジド（３１．９ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）を一度に、続いて１，（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド（６．７ｍｇ、０．０３５ｍｍｏｌ）、次いでトリエチルアミン（５．３ｍｇ、７．３μＬ、０．０５３ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物（スラリー）を１時間室温で撹拌し、その時点でこれは黄色溶液になった。誘導体標準物質に対する面積パーセントによって収率を決定した（６０％収率）。
質量スペクトル:
(M+Na) = 1801.4578
1H NMR:
1H NMR (CDCl3 + 5% CD3OD,
400 MHz): 8.69 (s, 1H, 18C-NH-N), 7.75 (d, J = 8.7 Hz, 2H, 22), 6.95 (d, J =
8.7 Hz, 2H, 23), 6.38 (br t, J = 7 Hz, 1H, 14), 6.23 (d, J = 1.5 Hz, 1H, 8),
5.90 (d, J = 9.5 Hz, 1H, 4), 5.80 (dd, J = 9.5, 1.5 Hz, 1H, 5), 5.72 (d, J =
1.5 Hz, 1H, 1D), 5.63 (br d, J = 2.2 Hz, 1H, 1E), 5.03 (dd, J = 11.5, 1.6 Hz,
1H, 1B), 4.70 (m, 1H, 5E), 4.61 (d, J = 7.8 Hz, 1H, 1A), 4.6 (m, 1H, 3E), 4.49
(m, 1H, 2D), 4.31 (m, 1H, 3B), 4.20 (m, 1H, 5D), 4.10 (m, 2H, 25), 4.07 (m, 1H,
5B), 4.03 (m, 1H, 3A), 3.91 (m, 1H, 15), 3.89 (s, 3H, 2C-OCH3), 3.84
(s, 3H, 3C-OCH3), 3.8 (m, 1H, 3D), 3.76 (m, 1H, 15), 3.75 (m, 1H,
4B), 3.65 (m, 1H, 5A), 3.63 (bs, 3H, 10-NHCOOCH3), 3.62 (m, 1H, 2A),
3.6 (m, 1H, 4D), 3.57 (s, 3H, 3D-OCH3), 3.4 (m, 1H, 5E), 3.37 (s,
3H, 3E-OCH3), 3.30 (m, 2H, 4E-N-CH2CH3), 3.12
(d, J = 17.6 Hz, 1H, 12), 3.0 (m, 1H, 4E), 2.85 (m, 2H, 27), 2.85 (bs, 4, 30),
2.72 (d, J = 17.6 Hz, 1H, 12), 2.5 (m, 2H, 17), 2.4 (m, 1H, 2E エカトリアル), 2.33 (m, 1H,
4A), 2.25 (m, 2H, 26), 2.18 (s, 3H, 19), 2.08 (s, 3H, 4E-N-COCH3),
2.0 (m, 1H, 2B), 1.8 (m, 1H, 2B), 1.50 (s, 3H, 16a), 1.44 (s, 3H, 16b), 1.42
(d, J = 6.2 Hz, 3H, 6B), 1.4 (m, 1H, 2E アキシャル), 1.31 (d, J = 6.1 Hz, 3H, 6A), 1.31 (d, J = 6.1 Hz, 3H, 6D), 1.19
(t, J = 7.2 Hz, 3H, 4E-N-CH2CH3).
【０１５０】
（実施例７）
ＥＤＣを使用しない、ブタン酸、３−［［（２Ｅ）−２−［（１Ｒ，４Ｚ，８Ｓ）−８−［［２−Ｏ−［４−（アセチルエチルアミノ）−２，４−ジデオキシ−３−Ｏ−メチル−ａ−Ｌ−ｔｈｒｅｏ−ペントピラノシル］−４，６−ジデオキシ−４−［［［２，６−ジデオキシ−４−Ｓ−［４−［（６−デオキシ−３−Ｏ−メチル−ａ−Ｌ−マンノピラノシル）オキシ］−３−ヨード−５，６−ジメトキシ−２−メチルベンゾイル］−４−チオ−β−Ｄ−リボ−ヘキソピラノシル］オキシ］アミノ］−β−Ｄ−グルコピラノシル］オキシ］−１−ヒドロキシ−１０−［（メトキシカルボニル）アミノ］−１１−オキソビシクロ［７．３．１］トリデカ−４，９−ジエン−２，６−ジイン−１３−イリデン］エチル］ジチオ］−３−メチル−，２−［（１Ｅ）−１−［４−［４−［（２，５−ジオキソ−１−ピロリジニル）オキシ］−４−オキソブトキシ］フェニル］エチリデン］ヒドラジドの調製
実施例６において例証されている本発明の方法との比較として、下記の反応を行った：室温のアセトニトリル（１．０ｍＬ）中のＮ−アセチル−カリケアマイシン（５０ｍｇ、０．０３５ｍｍｏｌ）の溶液に、リンカー中間体ブタン酸、３−メルカプト−３−メチル−，２−［（Ｅ）−１−［４−［４−［（２，５−ジオキソ−１−ピロリジニル）オキシ］−４−オキソブトキシ］フェニル］−エチリデン］−ヒドラジド（３１．９ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）を一度に、続いてトリエチルアミン（５．３ｍｇ、７．３ｕＬ、０．０５３ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物（スラリー）を１時間室温で撹拌し、その時点でこれは黄色溶液になった。誘導体標準物質に対する面積パーセントによって収率を決定した（３５％収率）。
質量スペクトル：
(M+Na) = 1801.4578
1H NMR:
1H NMR (CDCl3 + 5% CD3OD,
400 MHz): 8.69 (s, 1H, 18C-NH-N), 7.75 (d, J = 8.7 Hz, 2H, 22), 6.95 (d, J =
8.7 Hz, 2H, 23), 6.38 (br t, J = 7 Hz, 1H, 14), 6.23 (d, J = 1.5 Hz, 1H, 8),
5.90 (d, J = 9.5 Hz, 1H, 4), 5.80 (dd, J = 9.5, 1.5 Hz, 1H, 5), 5.72 (d, J =
1.5 Hz, 1H, 1D), 5.63 (br d, J = 2.2 Hz, 1H, 1E), 5.03 (dd, J = 11.5, 1.6 Hz,
1H, 1B), 4.70 (m, 1H, 5E), 4.61 (d, J = 7.8 Hz, 1H, 1A), 4.6 (m, 1H, 3E), 4.49
(m, 1H, 2D), 4.31 (m, 1H, 3B), 4.20 (m, 1H, 5D), 4.10 (m, 2H, 25), 4.07 (m, 1H,
5B), 4.03 (m, 1H, 3A), 3.91 (m, 1H, 15), 3.89 (s, 3H, 2C-OCH3), 3.84
(s, 3H, 3C-OCH3), 3.8 (m, 1H, 3D), 3.76 (m, 1H, 15), 3.75 (m, 1H,
4B), 3.65 (m, 1H, 5A), 3.63 (bs, 3H, 10-NHCOOCH3), 3.62 (m, 1H, 2A),
3.6 (m, 1H, 4D), 3.57 (s, 3H, 3D-OCH3), 3.4 (m, 1H, 5E), 3.37 (s,
3H, 3E-OCH3), 3.30 (m, 2H, 4E-N-CH2CH3), 3.12
(d, J = 17.6 Hz, 1H, 12), 3.0 (m, 1H, 4E), 2.85 (m, 2H, 27), 2.85 (bs, 4, 30),
2.72 (d, J = 17.6 Hz, 1H, 12), 2.5 (m, 2H, 17), 2.4 (m, 1H, 2E エカトリアル), 2.33 (m, 1H,
4A), 2.25 (m, 2H, 26), 2.18 (s, 3H, 19), 2.08 (s, 3H, 4E-N-COCH3),
2.0 (m, 1H, 2B), 1.8 (m, 1H, 2B), 1.50 (s, 3H, 16a), 1.44 (s, 3H, 16b), 1.42
(d, J = 6.2 Hz, 3H, 6B), 1.4 (m, 1H, 2E アキシャル), 1.31 (d, J = 6.1 Hz, 3H, 6A), 1.31 (d, J = 6.1 Hz, 3H, 6D), 1.19
(t, J = 7.2 Hz, 3H, 4E-N-CH2CH3).
【０１５１】
（実施例８）
ブタン酸、３−［［（２Ｅ）−２−［（１Ｒ，４Ｚ，８Ｓ）−８−［［２−Ｏ−［４−（アセチルエチルアミノ）−２，４−ジデオキシ−３−Ｏ−メチル−ａ−Ｌ−ｔｈｒｅｏ−ペントピラノシル］−４，６−ジデオキシ−４−［［［２，６−ジデオキシ−４−Ｓ−［４−［（６−デオキシ−３−Ｏ−メチル−ａ−Ｌ−マンノピラノシル）オキシ］−３−ヨード−５，６−ジメトキシ−２−メチルベンゾイル］−４−チオ−β−Ｄ−リボ−ヘキソピラノシル］オキシ］アミノ］−β−Ｄ−グルコピラノシル］オキシ］−１−ヒドロキシ−１０−［（メトキシカルボニル）アミノ］−１１−オキソビシクロ［７．３．１］トリデカ−４，９−ジエン−２，６−ジイン−１３−イリデン］エチル］ジチオ］−３−メチル−，２−［（１Ｅ）−１−［４−［４−［（２，５−ジオキソ−１−ピロリジニル）オキシ］−４−オキソブトキシ］フェニル］エチリデン］ヒドラジドの大規模調製、続いて精製。
４℃のアセトニトリル（９００ｍＬ）中のＮ−アセチル−カリケアマイシン（６０．２ｇ、４２．７ｍｍｏｌ）の溶液に、リンカー中間体ブタン酸、３−メルカプト−３−メチル−，２−［（Ｅ）−１−［４−［４−［（２，５−ジオキソ−１−ピロリジニル）オキシ］−４−オキソブトキシ］−フェニル］エチリデン］ヒドラジド（３８．４ｇ、８５．４ｍｍｏｌ）を一度に、続いて１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド（８．２ｇ、４２．７ｍｍｏｌ）を添加した。リンカーおよび１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミドを含有するボトルをアセトニトリル（３００ｍＬ）ですすぎ、反応混合物に添加した。次いで、トリエチルアミン（６．５ｇ、８．９ｍＬ、６４．１ｍｍｏｌ）を反応混合物に添加した。反応混合物（スラリー）を１時間４℃で撹拌し、その時点でこれは黄色溶液になった。反応混合物を、アセトニトリル（６００ｍＬ）および２０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ５．０（１２００ｍＬ）でさらに希釈し、移動相ＡおよびＢの勾配を使用する逆相ＨＰＬＣカラムによって精製した。（移動相Ａ：５５：４５（ｖ／ｖ）２０ｍＭ  ＮａＯＡｃ緩衝液ｐＨ５．０（ｐＨ４．５〜５．５）：アセトニトリル：移動相Ｂ：アセトニトリル。）所望の純度の画分をプールし、次いで固相抽出（ＳＰＥ）に供した。ＳＰＥにおいて、精製した画分をカラムにロードし、次いで水／アセトニトリル混合物で洗浄し、次いでアセトニトリルで溶離して、濃縮画分含有生成物を産出した。得られた画分を真空で濃縮し、酢酸エチルに溶かし、ヘキサンを添加することによって沈殿させた。固体を濾過し、乾燥させて、表題化合物を、ＨＰＬＣにより９６．９％純度の白色固体として提供した（４５．２ｇ、６０％収率）。
質量スペクトル:
(M+Na) = 1801.4578
1H NMR:
1H NMR (CDCl3 + 5% CD3OD,
400 MHz): 8.69 (s, 1H, 18C-NH-N), 7.75 (d, J = 8.7 Hz, 2H, 22), 6.95 (d, J =
8.7 Hz, 2H, 23), 6.38 (br t, J = 7 Hz, 1H, 14), 6.23 (d, J = 1.5 Hz, 1H, 8),
5.90 (d, J = 9.5 Hz, 1H, 4), 5.80 (dd, J = 9.5, 1.5 Hz, 1H, 5), 5.72 (d, J =
1.5 Hz, 1H, 1D), 5.63 (br d, J = 2.2 Hz, 1H, 1E), 5.03 (dd, J = 11.5, 1.6 Hz,
1H, 1B), 4.70 (m, 1H, 5E), 4.61 (d, J = 7.8 Hz, 1H, 1A), 4.6 (m, 1H, 3E), 4.49
(m, 1H, 2D), 4.31 (m, 1H, 3B), 4.20 (m, 1H, 5D), 4.10 (m, 2H, 25), 4.07 (m, 1H,
5B), 4.03 (m, 1H, 3A), 3.91 (m, 1H, 15), 3.89 (s, 3H, 2C-OCH3), 3.84
(s, 3H, 3C-OCH3), 3.8 (m, 1H, 3D), 3.76 (m, 1H, 15), 3.75 (m, 1H,
4B), 3.65 (m, 1H, 5A), 3.63 (bs, 3H, 10-NHCOOCH3), 3.62 (m, 1H, 2A),
3.6 (m, 1H, 4D), 3.57 (s, 3H, 3D-OCH3), 3.4 (m, 1H, 5E), 3.37 (s,
3H, 3E-OCH3), 3.30 (m, 2H, 4E-N-CH2CH3), 3.12
(d, J = 17.6 Hz, 1H, 12), 3.0 (m, 1H, 4E), 2.85 (m, 2H, 27), 2.85 (bs, 4, 30),
2.72 (d, J = 17.6 Hz, 1H, 12), 2.5 (m, 2H, 17), 2.4 (m, 1H, 2E エカトリアル), 2.33 (m, 1H,
4A), 2.25 (m, 2H, 26), 2.18 (s, 3H, 19), 2.08 (s, 3H, 4E-N-COCH3),
2.0 (m, 1H, 2B), 1.8 (m, 1H, 2B), 1.50 (s, 3H, 16a), 1.44 (s, 3H, 16b), 1.42
(d, J = 6.2 Hz, 3H, 6B), 1.4 (m, 1H, 2E アキシャル), 1.31 (d, J = 6.1 Hz, 3H, 6A), 1.31 (d, J = 6.1 Hz, 3H, 6D), 1.19
(t, J = 7.2 Hz, 3H, 4E-N-CH2CH3)