(57)【要約】      （修正有）【課題】アンドロゲン除去療法随伴症状の治療に使用する化合物の製造方法及び治療方法の提供。【解決手段】式Ｉまたはその薬学的に受容可能な塩の有効量を、かかる治療を必要としている患者に投与することを含む、アンドロゲン除去療法により誘導された続発性性腺機能低下症の結果としての症状の治療方法。2019089795.tif 000028【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
（Ｓ）−（７−シアノ−４−ピリジン−２−イルメチル−１，２，３，４−テトラヒド
ロ−シクロペンタ［ｂ］インドール−２−イル）−カルバミン酸イソプロピルエステル、
またはその薬学的に受容可能な塩の有効量を、かかる治療を必要としている患者に投与す
ることを含む、アンドロゲン除去療法により誘導された続発性性腺機能低下症の結果とし
ての症状の治療方法。
【請求項２】
前記症状が、骨量、骨強度、筋肉量、または筋力の低下である、請求項１に記載の方法
。
【請求項３】
前記症状が、性欲の減退及びホットフラッシュである、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
療法における、（Ｓ）−（７−シアノ−４−ピリジン−２−イルメチル−１，２，３，
４−テトラヒドロ−シクロペンタ［ｂ］インドール−２−イル）−カルバミン酸イソプロ
ピルエステル、またはその薬学的に受容可能な塩の使用。
【請求項５】
アンドロゲン除去療法により誘導された続発性性腺機能低下症の結果としての症状の治
療における、（Ｓ）−（７−シアノ−４−ピリジン−２−イルメチル−１，２，３，４−
テトラヒドロ−シクロペンタ［ｂ］インドール−２−イル）−カルバミン酸イソプロピル
エステルの化合物、またはその薬学的に受容可能な塩の使用。
【請求項６】
前記症状が、骨量、骨強度、筋肉量、または筋力の低下である、請求項５に記載の使用
。
【請求項７】
前記症状が、性欲の減退及びホットフラッシュである、請求項５に記載の使用。
【請求項８】
アンドロゲン除去療法により誘導された続発性性腺機能低下症の結果としての症状を治
療するための医薬の製造のための、（Ｓ）−（７−シアノ−４−ピリジン−２−イルメチ
ル−１，２，３，４−テトラヒドロ−シクロペンタ［ｂ］インドール−２−イル）−カル
バミン酸イソプロピルエステルの化合物、またはその薬学的に受容可能な塩の使用。
【請求項９】
前記症状が、骨量、骨強度、筋肉量、または筋力の低下である、請求項８に記載の使用
。
【請求項１０】
前記症状が、性欲の減退及びホットフラッシュである、請求項８に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、（Ｓ）−（７−シアノ−４−ピリジン−２−イルメチル−１，２，３，４−
テトラヒドロ−シクロペンタ［ｂ］インドール−２−イル）−カルバミン酸イソプロピル
エステル、またはその薬学的に受容可能な塩を用いたアンドロゲン除去療法随伴症状の治
療に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
本発明は、アンドロゲン除去療法に随伴する症状の治療に関する分野にある。アンドロ
ゲン除去療法（ＡＤＴ：Ａｎｄｒｏｇｅｎ  Ｄｅｐｒｉｖａｔｉｏｎ  Ｔｈｅｒａｐｙ）
またはアンドロゲン抑制療法は、癌の根絶に焦点を当てた他の治療選択と併せて、前立腺
癌の攻撃性を低下させるために用いられている普遍的な療法である。ＡＤＴが行われる間
、アンドロゲン値または男性ホルモン値は身体内で低下し、前立腺癌細胞にまで届かない
。たとえばテストステロン及びジヒドロテストステロン（ＤＨＴ：ｄｉｈｙｄｒｏｔｅｓ
ｔｏｓｔｅｒｏｎｅ）などのアンドロゲンは、前立腺癌細胞の増殖を刺激する。しかし、
前立腺癌は、アンドロゲン値が低い場合には、よりゆっくりと増殖し、または縮小さえし
得ることが見いだされた。米国において、前立腺癌の患者のおよそ３分の１が、その疾患
治療の間のあるポイントで、ＡＤＴを受けていると試算されている。
【０００３】
たとえば精巣摘除術または去勢手術、たとえばロイプロリド（米国では、Lupron（登録
商標）、Eligard（登録商標）として販売されている）、ゴセレリン（米国では、Zoladex
（登録商標）として販売されている）、トリプトレリン（米国では、Trelstar（登録商標
）として販売されている。）、及びヒストレリン（米国では、Vantas（登録商標）として
販売されている）などの黄体形成ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ）アナログ、ならびに
たとえばデガレリクス（米国では、Firmagon（登録商標）として販売されている）及びア
ビラテロン（米国では、Zytiga（登録商標）として販売されている）などのＬＨＲＨアン
タゴニストなど、アンドロゲン値を低下させるために利用し得る数種の治療選択がある。
【０００４】
進行性前立腺癌の男性のほとんどは、ＡＤＴに対し良好に反応する。ＡＤＴは、通常、
転移性前立腺癌の第一選択がＧｎＲＨアゴニスト／アンタゴニストまたは化学的去勢であ
る場合で、臨床病期に基づき、前立腺被膜を超えて前立腺癌が広がったとき（Ｔ３疾患）
に適応される。
【０００５】
生活の質に有害な作用をもたらし得るホルモン療法に伴う潜在的副作用があり、患者が
ＡＤＴ療法を中断するというリスクが上昇する。たとえば副作用は、ホルモンのテストス
テロン及びエストロゲンのレベルの変化により、性欲の減退または消失、勃起障害、男性
性器の縮小、ホットフラッシュ、骨粗鬆症、貧血、筋肉量の減少、筋力の低下、体脂肪の
増加、及び体重の増加を誘導し得る。ＡＤＴに随伴する副作用に対する最新の治療法は、
当分野に公知である。たとえば、US2009/0143344（ホットフラッシュ−５ＨＴ２Ａまたは
Ｄ２Ｒアンタゴニスト)、US2007/0281977(ホットフラッシュ−ムスカリン受容体アンタゴ
ニスト)、US2008/0080143（骨粗鬆症、骨折、ＢＭＤの消失、ホットフラッシュ、女性化
乳房、脱毛−トリミフェン（ｔｏｒｉｍｉｆｅｎｅ））を参照のこと。しかし、ＡＤＴの
特定の副作用を減じることができる別の療法に対するニーズが当分野には依然として存在
する。事実、近年まで、医学的去勢の有害作用を最小化させる試みで、ＡＤＴに反応性の
患者に治療を中止させ、再発または進行性疾患の兆候が表れた際にＡＤＴを再開させるこ
とによる、間欠的アンドロゲン除去（ＩＡＤ：ｉｎｔｅｒｍｉｔｔｅｎｔ  ａｎｄｒｏｇ
ｅｎ  ｄｅｐｒｉｖａｔｉｏｎ）が推奨されていた。しかし、継続的ＡＤＴとＩＡＤに無
作為に割り当てられた１７４９名の患者の、追跡期間中央値が９．８年の試験は、ＩＡＤ
よりも継続的ＡＤＴが優れていることを明らかにした。ＡＤＴの副作用に対する忍容性を
改善させるための治療は、コンプライアンスを改善させ、患者のより良い転帰をもたらす
であろう。
【０００６】
選択的アンドロゲン受容体モジュレーター（ＳＡＲＭ：Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ａｎｄｒ
ｏｇｅｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｍｏｄｕｌａｔｏｒ）は、アンドロゲン性組織において分
化型活性プロファイルを示すことが判明している。特に、かかる剤は、好ましくは、たと
えば筋肉または骨などの同化組織においてはアンドロゲンアゴニスト活性を示し、一方で
たとえば前立腺または精嚢などの他のアンドロゲン性組織においては部分的アゴニストの
み、またはアンタゴニストでさえある。従って、アンドロゲン受容体（ＡＲ）モジュレー
ターの使用は、前立腺癌患者のＡＤＴ症状を軽減し得る。
【図面の簡単な説明】
【０００７】
【図１】実施例１が、８週間の精巣摘除術を受けたラットにおいて、８週間の治療後の精嚢重量の有意な増量をもたらさなかったこと、及びラットがアンドロゲン性刺激のすべてに対し、高い反応性であったことを図示する。
【０００８】
【図２】実施例１が、８週間の精巣摘除術を受けたラットにおいて、８週間の治療後、腰椎骨梁ミネラル密度（ＬＶ−ＴＢＭＤ：ｌｕｍｂａｒ  ｖｅｒｔｅｂｒａ  ｔｒａｂｅｃｕｌａｒ  ｂｏｎｅ  ｍｉｎｅｒａｌ  ｄｅｎｓｉｔｙ）の有意な増量をもたらしたこと、及び腰椎骨梁ミネラル含有量（ＬＶ−ＴＢＭＣ：ｌｕｍｂａｒ  ｖｅｒｔｅｂｒａ  ｔｒａｂｅｃｕｌａｒ  ｂｏｎｅ  ｍｉｎｅｒａｌ  ｃｏｎｔｅｎｔ）及び断面積（ＬＶ−ＴＡ）における増加の傾向を示したことを図示する。
【０００９】
【図３】エナント酸テストステロン（ＴＥ）（１ｍｇ／ＫＧ−日）と様々な投与量の実施例１との併用は、体重（ｇ）に対し標準化された精嚢湿重量（ｍｇ）を低下させる傾向を示唆するものであり、この傾向はＴＥ単独で誘導されることを図示する。
【００１０】
【図４】ＳＤラットに対し、実施例１と１ｍｇ／Ｋｇ  ＴＥの併用治療を行ったところ、体重（ｇ）に対し標準化された前立腺湿重量（ｍｇ）において用量依存性の低下が生じたことを図示する。
【００１１】
【図５】様々な投与量の実施例１とＴＥ（１ｍｇ／Ｋｇ−日）の併用は、体重（ｇ）に対して標準化された精嚢湿重量（ｍｇ）を低下させる傾向を示唆するものであり、この傾向はＴＥ単独で誘導されることを図示する。
【００１２】
【図６】ＳＤラットに対し、実施例１と１ｍｇ／Ｋｇ  ＴＥの併用治療を行ったところ、体重（ｇ）に対し標準化された前立腺湿重量（ｍｇ）において用量依存性の低下が生じたことを図示する。
【００１３】
【図７】健康なヒトボランティアに対する実施例１の投与後の、腓腹筋束（腓腹筋領域）での末梢骨コンピューター断層撮影法に基づいた画像解析により測定された腓腹筋領域における増加を図示する。
【００１４】
【図８】健康なヒトボランティアに対する実施例１の投与後の、ＤＥＸＡにより測定された全身除脂肪筋肉量における増加を図示する。ダネット検定（ｐ＜０．０５）を使用したところ、０ｍｇのプラセボ投与と比較し、５ｍｇの投与レベルでの男性における効果（青いバー）は統計学的に有意である。
【００１５】
【図９】プラセボと比較し、いずれの時点、またはいずれの実施例１の投与量でも、前立腺特異抗原（ＳＰＡ）の基準値からの統計学的変化は無かったことを図示する。
【００１６】
【図１０】性腺機能の正常な健康なヒトボランティアに対する実施例１の投与後の、血清テストステロン値の低下を図示する。治療後の低下は、比較的高い血清テストステロン値であった男性においてより顕著である。右側の表は、５ｍｇの投与量での、Ｐｈ１ａ試験後の曝露評価を反映している。
【００１７】
【図１１】性腺機能の正常な健康なヒトボランティアに対する実施例１の投与後の、骨同化のバイオマーカーである１型プロコラーゲンのＮ末端プロペプチド（Ｐ１ＮＰ：Ｎ−ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｐｒｏｐｅｐｔｉｄｅ  ｏｆ  ｐｒｏｃｏｌｌａｇｅｎ  ｔｙｐｅ  １）に対する、正の曝露−反応の相関性を図示する。
【発明の概要】
【００１８】
（Ｓ）−（７−シアノ−４−ピリジン−２−イルメチル−１，２，３，４−テトラヒド
ロ−シクロペンタ［ｂ］インドール−２−イル）−カルバミン酸イソプロピルエステル、
あるいはカルバミン酸，Ｎ−［（２Ｓ）−７−シアノ，−１，２，３，４−テトラヒドロ
−４−（２−ピリジニルメチル）シクロペンタ［ｂ］インドール−２−イル］−，１−メ
チルエチルエステルとしても表されるＡＲモジュレーター化合物は、構造式Ｉにより表さ
れ、健康なボランティアにおいて、除脂肪筋肉量を増加させ、脂肪量を低下させることが
示されている。さらに、健康なボランティアにおいて、（Ｓ）−（７−シアノ−４−ピリ
ジン−２−イルメチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−シクロペンタ［ｂ］インドール
−２−イル）−カルバミン酸イソプロピルエステルを用いた１２週間の治療後、ヘマトク
リットにおける統計学的変化、または前立腺特異抗原（ＰＳＡ）における統計学的変化は
観察されなかった。さらには、（Ｓ）−（７−シアノ−４−ピリジン−２−イルメチル−
１，２，３，４−テトラヒドロ−シクロペンタ［ｂ］インドール−２−イル）−カルバミ
ン酸イソプロピルエステルを用いた精巣摘除ラットの治療は、精嚢湿重量の有意な増量を
示さなかった。
【化１】
2019089795.tif 000002
【００１９】
従って、本発明は、ＡＤＴにより誘導される続発性性腺機能低下症の結果としての症状
の治療法を提供するものであり、当該方法は、式Ｉの化合物の有効量を、かかる治療の必
要のある患者に対し投与することを含む。さらなる実施形態において、当該患者は、前立
腺癌の患者である。さらなる実施形態において、本発明は、ＡＤＴにより誘導される続発
性性腺機能低下症の結果としての骨量、骨強度、筋肉量、または筋力の低下を治療する方
法を提供する。他のさらなる実施形態において、本発明は、ＡＤＴにより誘導される続発
性性腺機能低下症の結果としての性欲の減退及びホットフラッシュを治療する方法を提供
する。
【００２０】
さらに、本発明は、その必要のある患者に対する療法における、特にＡＤＴの症状の治
療のための療法における、式Ｉの化合物、またはその薬学的に受容可能な塩の使用を提供
するものである。さらなる実施形態において、当該患者は、前立腺癌の患者である。さら
に本発明は、ＡＤＴにより誘導される続発性性腺機能低下症の結果としての症状の治療に
おける、式Ｉの化合物またはその薬学的に受容可能な塩の使用を提供する。さらには、本
発明は、前立腺癌患者に対するＡＤＴ症状の治療における、式Ｉの化合物またはその薬学
的に受容可能な塩の使用を提供する。さらなる実施形態において、本発明は、前立腺癌患
者に対するＡＤＴ症状の治療のための医薬の製造のための、本発明化合物またはその薬学
的に受容可能な塩の使用を提供する。さらなる実施形態において、本発明は、ＡＤＴによ
り誘導される続発性性腺機能低下症の結果としての症状の治療のための医薬の製造のため
の、本発明化合物またはその薬学的に受容可能な塩の使用を提供する。
【００２１】
さらに、本発明は、療法における、特にＡＤＴにより誘導される続発性性腺機能低下症
の結果としての骨量、骨強度、筋肉量、または筋力の低下の治療のための療法における、
式Ｉの化合物またはその薬学的に受容可能な塩の使用を提供する。さらに、本発明は、Ａ
ＤＴにより誘導される続発性性腺機能低下症の結果としての骨量、骨強度、筋肉量、また
は筋力の低下の治療における、式Ｉの化合物またはその薬学的に受容可能な塩の使用を提
供する。さらなる実施形態において、本発明は、ＡＤＴにより誘導される続発性性腺機能
低下症の結果としての骨量、骨強度、筋肉量、または筋力の低下の治療のための医薬の製
造のための、本発明化合物またはその薬学的に受容可能な塩の使用を提供する。
【００２２】
さらに、本発明は、療法における、特にＡＤＴにより誘導される続発性性腺機能低下症
の結果としての性欲の減退またはホットフラッシュの治療のための療法における、式Ｉの
化合物またはその薬学的に受容可能な塩の使用を提供する。さらに、本発明は、ＡＤＴに
より誘導される続発性性腺機能低下症の結果としての性欲の減退またはホットフラッシュ
の治療における、本発明化合物またはその薬学的に受容可能な塩の使用を提供する。さら
なる実施形態において、本発明は、ＡＤＴにより誘導される続発性性腺機能低下症の結果
としての性欲の減退またはホットフラッシュの治療のための医薬の製造のための、本発明
化合物またはその薬学的に受容可能な塩の使用を提供する。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
たとえば性腺機能低下症、骨量または骨密度の低下、及び筋肉量または筋力の低下など
の治療適用症に対する有用な治療剤としての、式Ｉのアンドロゲン受容体モジュレーター
化合物、ならびに当該化合物の作製方法及び使用方法は、２０１０年３月１８日に公開さ
れたUS-2010-0069404に列記されており、参照により本明細書に援用される。また、WO200
8/063867も参照のこと。式Ｉのアンドロゲン受容体（ＡＲ）モジュレーター化合物は、ア
ンドロゲン受容体の強力かつ選択的なモジュレーターである。
【００２４】
より具体的には、本発明は、前立腺癌患者に対する、ＡＤＴの症状を治療する方法を提
供するものであり、当該方法は、以下：
【化２】
2019089795.tif 000003
として構造的にあらわされる式Ｉの化合物またはその薬学的に受容可能な塩の有効量を、
かかる治療を必要としている患者に投与することを含む。
【００２５】
本明細書において用いられる場合、「患者」という用語は、ヒトを指す。
【００２６】
本明細書において用いられる場合、「治療すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」、「治療す
るための（ｔｏ  ｔｒｅａｔ）」、または「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」という用語は
、既存の症状、障害、状態もしくは疾患の進行または重篤度を抑えること、減速させるこ
と、止めること、低下させること、または反転させることを含む。
【００２７】
本明細書において用いられる場合、「Ｔ１〜Ｔ４」という用語は、どの程度まで癌が拡
散しているかを表すための米国癌合同委員会（ＡＪＣＣ：Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊｏｉｎｔ
Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｏｎ  Ｃａｎｃｅｒ）のＴＮＭ病期分類システムのＴカテゴリー
を指す。Ｔカテゴリーは、腫瘍の存在を示し、及び原発腫瘍の広がりを表現する。数値が
大きくなると、大きさ、広がり、または浸潤の程度が上昇したことを示す。癌のタイプご
とに、この数値での分類を行うための細目がある。前立腺癌に対しては、Ｔ１は、医師が
腫瘍に触れることができないこと、またはたとえば経直腸超音波などの画像解析で腫瘍を
視認できないことを示す。Ｔ２は、医師が直腸指診（ＤＲＥ）で癌に触れることができる
、またはたとえば経直腸超音波などの画像解析を用いた癌を視認できるが、前立腺内に留
まっていると思われることを示す。Ｔ３は、癌が増殖を開始し、前立腺の外側まで拡がっ
たこと、及び精嚢に浸潤し得たことを示す。Ｔ４は、癌が、たとえば尿道括約筋（排尿制
御を補助する筋肉）、直腸、膀胱及び／または骨盤壁などの前立腺に隣接する組織（精嚢
以外の組織）へと増殖したことを示す。
【００２８】
本明細書において用いられる場合、「有効な量」という用語は、患者への投与で、診断
された患者または治療中の患者に望ましい効果をもたらす式Ｉの化合物またはその薬学的
に受容可能な塩の量を指す。患者に対する有効量の決定において、限定されないが、患者
の大きさ、年齢、及び一般健康状態；関与する特定の疾患または障害；疾患または障害の
程度、または関与、または重篤度；個々の患者の反応性；投与される特定の化合物；投与
方法；投与される製剤の生体利用効率の特徴；選択される用法；併用薬の使用；及び他の
関連状況をはじめとする多くの因子が担当診断医により考慮される。
【００２９】
式Ｉの化合物及びその薬学的に受容可能な塩は、一般的に広範な用量域で有効である。
たとえば、個々の剤の１日当たりの用量は、通常、約１ｍｇ／日〜約１０００ｍｇ／日、
好ましくは約１ｍｇ／日〜約５００ｍｇ／日、約１ｍｇ／日〜約２５０ｍｇ／日、約１ｍ
ｇ／日〜約１００ｍｇ／日、１ｍｇ／日〜約７５ｍｇ／日、及び１ｍｇ／日〜約２５ｍｇ
／日の範囲内である。最も好ましくは、個々の剤の１日当たりの用量は、通常、約１ｍｇ
／日〜約５ｍｇ／日の範囲内である。最も好ましくは、式Ｉの化合物は、１日当たり１ｍ
ｇ、５ｍｇ、２５ｍｇ、及び７５ｍｇから選択される投薬量で用いられる。
【００３０】
式Ｉのアンドロゲン受容体モジュレーター化合物は、好ましくは、当該化合物が体内吸
収され利用されうる任意の経路により投与される医薬組成物として製剤化される。投与経
路は、当該薬剤の物理的特性ならびに患者及び介護者の利便性により制限され、何らかの
点で変化し得る。好ましくは、式Ｉのアンドロゲン受容体モジュレーター化合物は、経口
投与用、または静脈内投与もしくは皮下投与をはじめとする非経口投与用に製剤化される
。かかる医薬組成物及び同組成物の調製方法は、当分野に公知である（たとえば、Reming
ton: The Science and Practice of Pharmacy (D.B. Troy, Editor, 21st Edition, Lipp
incott, Williams & Wilkins, 2006を参照のこと）。
【００３１】
式Ｉの化合物は遊離塩基であることが好ましい。
【実施例】
【００３２】
調製及び実施例
以下の方法、調製物、及び実施例は、本発明をさらに解説するものであり、本発明化合
物の典型的な合成を提示するものである。試薬及び開始材料は、容易に入手可能であり、
または当分野の当業者により容易に合成され得る。この調製及び実施例は、解説を目的と
して記載されているものであり、限定ではなく、様々な改変が当分野の当業者により行わ
れ得ることを理解されたい。式Ｉの化合物またはその塩を調製するための記載される各経
路の特定の合成工程は、別の方法で組合せることもでき、または異なる手順の工程と組み
合わせることもできる。各工程の産物は、抽出、蒸着、沈殿、クロマトグラフィー、ろ過
、粉砕及び結晶化をはじめとする当分野に公知の標準的な方法により回収することができ
る。加えて、別段の記載がない限り、すべての置換基は、従前に定義されるとおりである
。
【００３３】
真逆の記載がない限り、本明細書に解説される化合物は、Accelrys（登録商標）Draw v
ersion 4.0 (Accelrys, Inc., San Diego, CA.)、IUPACNAME ACDLABS、またはChemDraw（
登録商標）Ultra 12.0を用いて命名され、番号付けされる。本発明化合物のＲ立体配置ま
たはＳ立体配置は、たとえばＸ線解析及びキラル−ＨＰＬＣ保持時間との相関などの標準
的な技術により決定され得る。個々の異性体、鏡像異性体及びジアステレオマーは、たと
えば選択的結晶化技術またはキラルクロマトグラフィー（たとえば、J. Jacques, et al.
, "Enantiomers, Racemates, and Resolutions", John Wiley and Sons, Inc., 1981、及
びE.L. Eliel and S.H. Wilen,” Stereochemistry of Organic Compounds”, Wiley-Int
erscience, 1994を参照のこと）などの方法により、式Ｉの化合物の合成における任意の
都合のよいポイントで、当分野の当業者により分離または分割されてもよい。「異性体１
」及び「異性体２」という記号はそれぞれ、キラルクロマトグラフィーから１番目、及び
２番目に溶出された化合物を指し、キラルクロマトグラフィーが合成の早い段階で開始さ
れた場合、この同じ記号は、以下の中間体及び実施例に適用される。さらに、以下のスキ
ームに記載されるある中間体は、１つ以上の窒素保護基を含有してもよい。実施される特
定の反応条件及び特定の変換様式に従い、各場合で様々な保護基が同じであっても、異な
っていてもよい。保護及び脱保護の条件は当業者に公知であり、文献（たとえば、“Gree
ne’s Protective Groups in Organic Synthesis”, Fourth Edition, by Peter G.M. Wu
ts and Theodora W. Greene, John Wiley and Sons, Inc. 2007を参照のこと）に記載さ
れている。
【００３４】
試薬及び開始材料は、当分野の当業者に容易に入手可能である。参照により本明細書に
援用される米国特許第７，９６８，５８７号には、（Ｓ）−（７−シアノ−４−ピリジン
−２−イルメチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−シクロペンタ［ｂ］インドール−２
−イル）−カルバミン酸イソプロピルエステルの合成が開示されている。
【００３５】
本明細書において用いられる場合、以下の用語は、以下に示される意味を有する：「Ａ
ＤＭＥ」とは、吸収、分布、代謝及び排泄を指す。「ＤＭＡＣ」とは、Ｎ，Ｎ−ジメチル
アセトアミドを指す。「ＤＭＦ」とは、ジメチルホルムアミドを指す。「ＥＣＧ」とは、
心電図を指す。「ＥＤＴＡ」とは、エチレンジアミン四酢酸を指す。「ｅｅ」とは、鏡像
体過剰率を指す。「ＥｔＯＡｃ」とは、酢酸エチルを指す。「ＥｔＯＨ」とは、エタノー
ルを指す。「ＨＯＡｃ」とは、酢酸を指す。「ＨＰＬＣ」とは、高速液体クロマトグラフ
ィーを指す。「ＬＣＭＳ」とは、液体クロマトグラフ質量分析を指す。「ＬＹ」とは、実
施例１を指す。 「ＭｅＯＨ」とは、メタノールを指す。「ｍｉｎ」とは、分を指す。「
ＭＳ」とは、質量分析を指す。「ＭＴＢＥ」とは、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテルを指
す。「ＮＯＡＥＬ」とは、無毒性量を指す。「Ｏｒｘ」とは、精巣摘除されたことを指す
。「ＳＥ」とは標準誤差を指す。「ＴＥ」とは、エナント酸テストステロンを指す。「Ｔ
ＦＡ」とは、トリフルオロ酢酸を指す。「ＴＨＦ」とは、テトラヒドロフランを指す。及
び「ＵＶ」とは紫外線を指す。
【００３６】
中間体１
（±）−２−（１，３−ジオキソ−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル）−１
，２，３，４−テトラヒドロ−シクロペンタ［ｂ］インドール−７−カルボニトリル
（±）−２−（３−オキソ−シクロペンチル）−イソインドール−１，３−ジオン（１
２．７ｇ、５５．３ｍｍｏｌ）及び４−シアノフェニルヒドラジン−ＨＣｌ（８．５３ｇ
、５０．３ｍｍｏｌ）を、ＨＯＡｃ（２００ｍＬ）及び４Ｎ  ＨＣｌジオキサン（５０ｍ
Ｌ）中で混合させる。機械的に攪拌させながら、反応物を９０℃まで１８時間加熱し、次
いで、さらに４Ｎ  ＨＣｌジオキサン（２０ｍＬ）を加える。反応物を１００℃まで１８
時間加熱する。反応混合物を水（６００ｍＬ）で希釈し、真空ろ過により黒色固形物を採
取する。固形物を、ＭｅＯＨ（２００ｍＬ）を用いてソニケートし、次いで回収し、真空
オーブン中で乾燥させ、１０．９４ｇ（６６％）の灰色−茶色固形物を得る。ＭＳ（ｍ／
ｚ）：３２８（Ｍ＋Ｈ）、３２６（Ｍ−Ｈ）。
【００３７】
中間体２
（±）−２−（１，３−ジオキソ−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル）−４
−ピリジン−２−イルメチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−シクロペンタ［ｂ］イン
ドール−７−カルボニトリル
【化３】
2019089795.tif 000004
２−（１，３−ジオキソ−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル）−１，２，
３，４−テトラヒドロ−シクロペンタ［ｂ］インドール−７−カルボニトリル（５ｇ、１
５．３ｍｍｏｌ）の混合物をＤＭＦ（２５ｍｌ）中で４０℃まで加熱する。炭酸セシウム
（１０．４ｇ、３２．４ｍｍｏｌ）及び２−ブロモメチルピリジンヒドロブロミド（４．
０５ｇ、１６ｍｍｏｌ）を加える。混合物を４０℃まで２４時間攪拌する。混合物に水（
２５０ｍＬ）を加え、１時間攪拌する。固形物をろ過し、回収した物質を真空下で乾燥さ
せる。ＥｔＯＨ（２５ｍＬ）に固形物を加え、３０分間還流させる。混合物を２２℃まで
冷却し、ろ過する。固形物を真空下で恒量まで乾燥させ、４．８ｇ（７５％）の表題化合
物を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：４１９（Ｍ＋Ｈ）。
【００３８】
中間体３
（±）−２−アミノ−４−ピリジン−２−イルメチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−
シクロペンタ［ｂ］インドール−７−カルボニトリル塩酸塩
【化４】
2019089795.tif 000005
２−（１，３−ジオキソ−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル）−４−ピリ
ジン−２−イルメチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−シクロペンタ［ｂ］インドール
−７−カルボニトリル（７７ｇ、１８４ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ（１．３Ｌ）及びＥｔＯＨ
（２３０ｍＬ）に加える。混合物を１０分間攪拌し、次いで、ヒドラジン一水和物（２０
ｍＬ、４００ｍｍｏｌ）を加える。混合物を２２℃で１６時間攪拌する。混合物をろ過し
、母液を蒸発させる。残留物をジクロロメタン（３００ｍＬ）に溶解させる。４Ｍ  ＨＣ
ｌのジオキサン溶液（５０ｍＬ）を加え、２時間混合物を攪拌する。ろ過し、単離された
固形物を真空下で恒量まで乾燥させ、５４ｇ（９０％）の表題化合物を得る。ＭＳ（ｍ／
ｚ）：２８９（Ｍ＋Ｈ）。
【００３９】
実施例１
（Ｓ）−（７−シアノ−４−ピリジン−２−イルメチル−１，２，３，４−テトラヒドロ
−シクロペンタ［ｂ］インドール−２−イル）−カルバミン酸イソプロピルエステル
【化５】
2019089795.tif 000006
【００４０】
工程１：（±）−（７−シアノ−４−ピリジン−２−イルメチル−１，２，３，４−テト
ラヒドロ−シクロペンタ［ｂ］インドール−２−イル）−カルバミン酸イソプロピルエス
テル
【化６】
2019089795.tif 000007
（±）−２−アミノ−４−ピリジン−２−イルメチル−１，２，３，４−テトラヒド
ロ−シクロペンタ［ｂ］インドール−７−カルボニトリル（２．３２ｇ、８．０５ｍｍｏ
ｌ）及びジイソプロピルエチルアミン（９．６５ｍｍｏｌ、１．６８ｍＬ）のジクロロメ
タン溶液（１０ｍＬ）に、クロロギ酸イソプロピル（８．８６ｍｍｏｌ、８．９ｍＬ）を
加え、室温で一晩攪拌する。酢酸エチルで希釈し、１０％  Ｋ２ＣＯ３溶液（２×）で洗
浄する。Ｎａ２ＳＯ４上で有機部分を乾燥させ、ろ過し、濃縮し、３．３ｇを得る。カラ
ムクロマトグラフィーにより精製し（０−１００％  酢酸エチル／ジクロロメタン）、２
．４８  ｇ（８２％）のラセミ産物を得る。ＬＣＭＳ  ３７５．２（Ｍ＋Ｈ）。
【００４１】
他の方法
（±）２−アミノ−４−ピリジン−２−イルメチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−
シクロペンタ［ｂ］インドール−７−カルボニトリル塩酸塩（３５ｇ、１０８ｍｍｏｌ）
を、ジクロロメタン（３５０ｍＬ）とピリジン（７０ｍＬ）の混合物に加える。窒素雰囲
気下で混合物を攪拌し、５℃まで冷却する。クロロギ酸イソプロピル（１Ｍのトルエン溶
液、１６２ｍＬ、１６２ｍｍｏｌ）を加える。氷槽を取り除き、混合物を２２℃で攪拌す
る。１６時間後、溶媒を蒸発させる。得られた残留物を水（３５０ｍＬ）に加え、２時間
攪拌する。ろ過し、回収した固形物を真空下、４５℃で乾燥させる。固形物を酢酸エチル
（４００ｍＬ）に加え、混合物を加熱して還流させる。次いで、２２℃まで冷却し、固形
物をろ過する。酢酸エチル（２００ｍＬ）に湿性固形物を加え、加熱し、３０分間還流す
る。１時間の間に混合物を２２℃まで冷却し、５分間の間に０〜５℃まで冷却する。混合
物をろ過し、真空下で単離された固形物を恒量まで乾燥させ、２３ｇ（６２％）の表題化
合物を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：  ３７４（Ｍ＋Ｈ）。
【００４２】
工程２：（Ｒ）−及び（Ｓ）−（７−シアノ−４−ピリジン−２−イルメチル−１，２，
３，４−テトラヒドロ−シクロペンタ［ｂ］インドール−２−ｙｌ）−カルバミン酸イソ
プロピルエステル
１００％ＥｔＯＨを用いて３７５ｍＬ／分、及び２５０ｎｍで溶出するＣｈｉｒａｌｐ
ａｋ  ＡＤカラム（８×３３ｃｍ）を用いた分取キラルクロマトグラフィーにより実施例
１の鏡像異性体を分離する。異性体１（Ｒ）：１．１４ｇ、９９．９％  ｅｅ（分析条件
：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ  ＡＤ−Ｈカラム、１００％  ＥｔＯＨ／０．２％ジメチルエチル
アミンで溶出；ＬＣＭＳ  ３７５．２（Ｍ＋Ｈ）。異性体２（Ｓ）：１．６７ｇ、９９．
４％  ｅｅ；ＬＣＭＳ  ３７５．２（Ｍ＋Ｈ）。
【００４３】
実施例１に対する別経路、異性体２：（Ｓ）−（７−シアノ−４−ピリジン−２−イルメ
チル−１，２，３，４−テトラヒドロ−シクロペンタ［ｂ］インドール−２−イル）−カ
ルバミン酸イソプロピルエステル
（Ｓ）−７−シアノ−１，２，３，４−テトラヒドロ−シクロペンタ［ｂ］インドール
−２−イル）−カルバミン酸イソプロピルエステル（１３ｇ、４１．３ｍｍｏｌ）をＤＭ
Ｆ（１００ｍＬ）に加え、溶液を４０℃まで温める。一度で炭酸セシウム（４２ｇ、１２
９ｍｍｏｌ）を加え、４０℃で３０分間、混合物を攪拌する。２−ブロモエチルピリジン
臭化水素酸塩２１ｇ、８３ｍｍｏｌ）を４時間かけて分割して添加する。混合物を４０℃
で１８時間、攪拌する。０℃〜５℃で混合物を冷却水（１Ｌ）に加え、３０分間、攪拌す
る。ろ過により固形物を単離し、真空下で恒量まで乾燥させる。ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡ
ｃ（７／３）で溶出させながら物質をシリカゲルパッドに通す。産物を含有する分画を１
つにまとめ、溶媒を蒸発させ、薄茶色の固形物を得る。酢酸エチルから再結晶化させ、１
５．３ｇ（７７％）の表題化合物を得る。ＬＣ／ＭＳ（ｍ／ｚ）３７５（Ｍ＋Ｈ）。
【００４４】
第二の別経路：
（ＨＰＬＣ条件−カラム：Ｚｏｒｂａｘ（登録商標）ＳＢ−Ｐｈｅｎｙｌ、Ｒａｐｉｄ
Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ、４．６×７５ｍｍ、３．５ミクロン；溶媒：１０％アセトニト
リル／０．０５％  ＴＦＡを有する９０％の水；２３０ｎｍのＵＶ）
【００４５】
工程１：（±）−（７−シアノ−１，２，３，４−テトラヒドロ−シクロペンタ［ｂ］イ
ンドール−２−イル）−カルバミン酸  ｔｅｒｔ−ブチルエステル
１２Ｌの３首丸底フラスコに、オーバーヘッドアジテーション、熱電温度計、添加漏斗
、窒素入口、及び冷却槽を備え付ける。フラスコに、（±）−２−（１，３−ジオキソ−
１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル）−１，２，３，４−テトラヒドロ−シク
ロペンタ［ｂ］インドール−７−カルボニトリル（５００ｇ、１．５３モル）及びＴＨＦ
（５Ｌ）を満たす。得られたスラリーを大気温度で攪拌する。ヒドラジン一水和物（１８
５．６ｍＬ、３．８２モル）を、添加漏斗からゆっくりとした流れで１０分かけて加える
。得られた混合物を大気温度で一晩（約１８時間）攪拌する。冷水を槽に加え、添加漏斗
にジ−ｔ−ブチルジカーボネート（８７５．１ｇ、４．０１モル；従前に液体に溶かして
おく）を満たす。反応混合物に２時間かけて加え、ポットの温度を３０℃未満に維持する
。１５分後、ＨＰＬＣにより解析し、中間体アミンの完全な消費を確認する。反応混合物
を、ステンレススチールのテーブルトップフィルター中、ポリプロピレンパッド上でろ過
し、得られたろ過ケークを酢酸エチル（２ｘ１Ｌ）で洗浄する。ろ過物を真空下で濃縮し
、ＴＨＦのほとんどを除去する。得られた混合物（約１Ｌ）を、シリカゲル（４Ｋｇ  Ｋ
ｉｅｓｅｌｇｅｌ−６０）のプラグ上で、酢酸エチルで溶出しながら精製する。回収した
溶出物を真空下で暗色油状物まで濃縮する。ヘプタン（２Ｌ）と酢酸エチル（３５０ｍＬ
）を加え、大気温度で２時間、ロータリーエバポレーター上で内容物を遠心させる。槽に
氷を加え、得られたスラリーを５℃でさらに２時間、遠心させる。固形物をろ過し、９０
／１０ヘプタン／酢酸エチル（２×５００ｍＬ）でリンスし、３５℃で真空乾燥させる。
黄褐色の固形物として、９１．６％の収率で表題化合物を得る。
【００４６】
工程２：（±）−（７−シアノ−４−ピリジン−２−イルメチル−１，２，３，４−テト
ラヒドロ−シクロペンタ［ｂ］インドール−２−イル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル
エステル
２０Ｌの底に口のあるフラスコに、オーバーヘッドアジテーション、熱電温度計、及び
窒素入口を備え付ける。フラスコに、（±）−（７−シアノ−１，２，３，４−テトラヒ
ドロ−シクロペンタ［ｂ］インドール−２−イル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエス
テル（５００ｇ、１．６８モル）とジクロロメタン（５Ｌ）を満たす。攪拌を開始し、テ
トラｎ−ブチルアンモニウム重硫酸塩（５８．９ｇ、０．１６８ｍｏｌ）を加え、次いで
、２−（ブロモメチル）ピリジンヒドロブロミド（５１０．４ｇ、２．０２モル）を加え
る。脱イオン水（２Ｌ）を加え、次いで、５０％  ＮａＯＨ溶液（４４５．３ｍＬ、８．
４１モル）を加える。得られた混合物をしっかりと一晩（約２１時間）攪拌する。攪拌を
停止し、層を分離させ、水層（上層）を廃棄する。有機層を脱イオン水（３ｘ４Ｌ）で洗
浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、真空下で約５００ｍＬまで濃縮する。粗物質を、溶
離液として１：１の酢酸エチル／ヘプタンを用いて、シリカゲルプラグ（７Ｋｇ  Ｋｅｉ
ｓｅｌｇｅｌ  ６０）上で精製する。真空下で溶離物を濃縮し、オフホワイトの固形物と
して５６０グラムの表題化合物を得る。（８１．４％）。
【００４７】
工程３：異性体１、（Ｒ）−、及び異性体２、（Ｓ）−（７−シアノ−４−ピリジン−２
−イルメチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−シクロペンタ［ｂ］インドール−２−イ
ル）−カルバミン酸  ｔｅｒｔ−ブチルエステル
鏡像異性体を分析するために、以下の分析的キラルＨＰＬＣ法を用いる：４．６×１５
０ｍｍ  Ｃｈｉｒａｌｐａｋ  ＡＤ−Ｈカラム（Ｃｈｉｒａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅ
ｓ社）、２０：８０：０．２のアセトニトリル／３Ａグレードの変性エタノール／ジメチ
ルエチルアミン移動相、０．６ｍＬ／分の流速、ＵＶ検出＠２５５ｎｍ。鏡像異性体１は
４．０分で溶出し、鏡像異性体２は５．２分で溶出する。８％の不純物（２５５ｎｍ）は
３．６分で溶出する。（±）−（７−シアノ−４−ピリジン−２−イルメチル−１，２，
３，４−テトラヒドロ−シクロペンタ［ｂ］インドール−２−イル）−カルバミン酸ｔｅ
ｒｔ−ブチルエステル（５２８ｇ）を、分取キラルＨＰＬＣにより、以下の条件を用いて
精製する：８×３３ｃｍ  Ｃｈｉｒａｌｐａｋ  ＡＤカラム、分析的ＨＰＬＣと同じ移動
相、３７５ｍＬ／分の流速、ＵＶ検出は２７０ｎｍ。移動相中に試料１０８ｇを、最終濃
度７５ｍｇ／ｍＬで溶解させる。鏡像異性体１の分画を３．５〜５．５分の間に溶出させ
、及び鏡像異性体２の分画６〜１０分の間に溶出させながら、４．０ｇ／投入でロードす
る。溶媒消費量を低下させる各投入の直後に鏡像異性体２のプロファイルの部分的スタッ
キングを溶出させながら、最終実行時間を７．５分／投入で設定する。１：２：７のジク
ロロメタン／ヘプタン／メチルｔ−ブチルエーテル溶媒システムで溶出させながら、Ｍｅ
ｒｃｋ社の９３８５  ６０  Ａｎｇｓｔｒｏｍ  ２３０〜４００メッシュシリカゲルを用
いて、シリカプラグ上で残りの４２０ｇを精製する。１４０ｇ試料／プラグでの真空ろ過
で３．５ｋｇシリカパッドを用いる。ラセミ化合物は、５カラム体積後に出現し始める。
１００％メチルｔ−ブチルエーテル、次いで１００％アセトンを用いて、残りのラセミ化
合物をプラグから押し出す。この方法で、９８＋％の純度、総量で３５８．５ｇのラセミ
化合物を得る。この物質を上述のように分取キラルＨＰＬＣにより分割させる。２０８．
８ｇ（９９．９％  ｅｅ）の鏡像異性体１（Ｒ異性体）、１９７ｇ（９９．６％  ｅｅ）
の鏡像異性体２を得る。
【００４８】
工程４：（Ｓ）−２−アミノ−４−ピリジン−２−イルメチル−１，２，３，４−テトラ
ヒドロ−シクロペンタ［ｂ］インドール−７−カルボニトリル塩酸塩
３Ｌの３首丸底フラスコに、加熱マントル、エアー撹拌機、温度プローブ、窒素入口、
及び添加漏斗を備え付ける。フラスコに、（Ｓ）−（７−シアノ−４−ピリジン−２−イ
ルメチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−シクロペンタ［ｂ］インドール−２−イル）
−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（８５．０ｇ、０．２２モル）とＥｔＯＨ（８
５０ｍＬ）を満たす。濃ＨＣｌ（１８０ｍＬ、２．２０モル）を一度に加える。得られた
溶液を４５〜５０℃に加熱し、９０分間攪拌し、その後、ＨＰＬＣで分析し、開始材料が
完全に消費されたことを確認する。混合物をＢｕｃｈｉフラスコに移し、脱イオン水（５
９５ｍＬ）で希釈し、真空下で濃縮し、ＥｔＯＨを除去する。二度に分けてＥｔＯＡｃ（
２ｘ１７０ｍＬ）を加え、ＥｔＯＡｃと残留ＥｔＯＨの両方を取り除くために再度揮散さ
せる。水性濃縮物を５Ｌの反応フラスコに移し、１０〜１５℃まで冷却する。反応温度を
３０℃未満に維持しながら、溶液のｐＨを、５Ｍ  ＮａＯＨ（９５０ｍＬ）を滴下して加
えることにより１１〜１２まで調節する。得られた混合物を、ＣＨ２Ｃｌ２（１３００ｍ
Ｌ、８００ｍＬ）を用いて抽出する。混合ＣＨ２Ｃｌ２抽出物を脱イオン水（５００ｍＬ
）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、真空下で濃縮し、薄緑固形物として表題化合物
を得る（６５．０ｇ、１０３％）。
【００４９】
工程５：（Ｓ）−（７−シアノ−４−ピリジン−２−イルメチル−１，２，３，４−テト
ラヒドロ−シクロペンタ［ｂ］インドール−２−イル）−カルバミン酸イソプロピルエス
テル
【化７】
2019089795.tif 000008
２Ｌの反応フラスコに、冷却槽、エアー撹拌機、温度プローブ、及び添加漏斗を備え付
ける。フラスコに、（Ｓ）−２−アミノ−４−ピリジン−２−イルメチル−１，２，３，
４−テトラヒドロ−シクロペンタ［ｂ］インドール−７−カルボニトリル塩酸塩（６２．
８ｇ、０．２１８モル）、ＤＭＦ（１８８ｍＬ）及びトリエチルアミン（３３．４ｍＬ、
０．２４０モル）を満たす。得られた溶液を、氷／アセトン槽を用いて０℃まで冷却する
。温度を１０℃未満に維持しながら、クロロギ酸イソプロピル（２１８ｍＬ、０．２１８
モル、１Ｍのトルエン溶液）を、添加漏斗を介して滴下して添加する。添加が終了したら
、冷却槽を取り除き、混合物を大気温度まで温める。１時間後、反応が完了したことを確
認するためにＨＰＬＣにより分析し、混合物を脱イオン水（１２５６ｍＬ）及びＥｔＯＡ
ｃ（１８８４ｍＬ）の溶液に注ぐ。層を分離させ、有機層をろ過し、１：１の水：ブライ
ン溶液を用いて再度洗浄し、次いで、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させる。真空下、約１５体積
まで５５℃で濃縮させ、得られた物質を大気温度まで冷却し、白色沈殿物を得る。ヘプタ
ン（６２８ｍＬ）を添加し、２０分間攪拌する。混合物を約１５体積まで濃縮して戻す。
固形物をろ過し、ヘプタンで洗浄し、乾燥させ、フワフワした白色固形物（６８．９ｇ、
８４．５％）として表題化合物を得る。1H NMR (500 MHz, DMSO-d6), ・ 8.49 (dd, 1H),
7.86 (d, 1H, J = 1.5), 7.71-7.75 (m, 1H), 7.60 (d, 1H, J = 9.0), 7.57 (d, 1H, J
= 9.0), 7.36 (dd, 1H), 7.28-7.26 (m, 1H), 7.14 (d, 1H, J=7.5), 5.44 (s, 2 H), 4
.79-4.72 (m, 1H), 4.71-4.66 (m, 1H), 3.22-3.20 (m, 1H), 3.16-3.12 (m, 1 H), 2.73
-2.66 (m, 2 H), 1.16 (dd, 6 H)。
【００５０】
第三の別合成
工程１
【化８】
2019089795.tif 000009
【００５１】
（７−ブロモ−１，２，３，４−テトラヒドロ−シクロペンタ［ｂ］インド−２−イル
）−カルバミン酸イソプロピルエステル（Ｉ）を、Ｚｎ（ＣＮ）２、Ｚｎ（ＯＡｃ）２、
Ｚｎ、及びＰｄ（ｄｐｐｆ）２Ｃｌ２・ＣＨ２Ｃｌ２を用いて、ＤＭＡＣ中で処置し、（
７−シアノ−１，２，３，４−テトラヒドロ−シクロペンタ［ｂ］インドール−２−イル
−カルバミン酸イソプロピルエステル（ＩＩ）を得る。水を加え、技術グレードＩＩを沈
殿する。ＭＴＢＥとアセトンの混合物中で、中間体ＩＩを再溶解させ、得られたスラリー
をろ過し、無機成分を取り除く。ＩＩを含有するろ過物を、木炭、ＭｇＳＯ４、及びＦＬ
ＯＲＩＳＩＬ（商標）を用いて処置し、ヘプタン結晶化で、結晶固形物としてＩＩを単離
する。
【００５２】
工程２
【化９】
2019089795.tif 000010
中間体ＩＩと、２−ピコリル塩化物塩酸塩（ＩＩＩ）及びＫ２ＣＯ３を、ＤＭＡＣ中で
反応させ、技術グレード実施例１を得る。水を添加し、ろ過することにより技術グレード
実施例１を単離する。ＥｔＯＨから３回再結晶化を行い、実施例１を得る。
【００５３】
アッセイ、ｉｎ  ｖｉｖｏ試験、及び臨床試験
精巣摘除ラットアッセイ
総数で８６匹の未交尾のオスのＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（Ｈａｒｌａｎ  
Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙ  Ｉｎｃ）を用いる。１４匹のラットには偽（Ｓｈａｍ）
手術を行い、７２匹のラットは６か月齢で去勢する。ラットは、２２℃、１２時間の明／
暗サイクルで、食物（０．５％Ｃａと０．４％Ｐを補充したＴＤ  ８９２２２、Ｔｅｋｌ
ａｄ社、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）と水にはいつでもアクセスできる状態で飼育される。Ｏ
ｒｘラットは、２か月間、骨を取り除かせ、体重を計測し、以下の表１に詳述されるよう
に治療群に無作為に割り当てる。群１及び群２は、基準対照として一日目にと殺され、群
３及び群４の偽（Ｓｈａｍ）及びＯｒｘ対照は、ビヒクル（０．２５％  ＣＭＣ／Ｔｗｉ
ｎ８０）を投与される。群５は、ＰＴＨ（１〜３８）を注射としてｓｃ投与される。群６
〜１３は、強制経口投与によりＳＡＲＭを投与される。すべての治療は、２か月間、１日
に１回行われる。
【表１】
2019089795.tif 000011
【００５４】
動的な組織形態計測に関し、基準用を除くすべてのラットは、治療が開始された最初の
日にキシレノール・オレンジ（９０ｍｇ／ｋｇ  ｓｃ）を投与される。すべてのラットは
、１４日目、１３日目、及びと殺の４日前、３日前に、カルセイン（１０ｍｇ／ｋｇ  ｓ
．ｃ）を投与される。
【００５５】
試料調製
ＰＴＨ（１〜３８）（Ｚｅｎｅｃａ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｂｉｏ
ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）参照番号  ＤＧ−１２−１４０７１、Ｂａｔｃｈ  １４０７１）：
２％不活化ラット血清を補充した酸性生理食塩水ビヒクル
実施例１：１％  ＣＭＣ／０．２５％  Ｔｗｅｅｎ８０  ０．５ｍｌ／ラット、体重に基
づく。
【００５６】
エンドポイント及び測定されたパラメーター
１．体重：適切に調節された量を投与する前、及び週に２回
２．ＮＭＲ：試験の開始時、及び終了時
３：筋肉：湿重量は、左腓腹筋、大腿四頭筋、ヒラメ筋、肛門挙筋、精嚢（ＳＶ）、前立
腺、及び心臓から得て、次いで、ＲＮＡまたは組織学的分析のために回収される。
４．最終血清試料はすべての動物から採取され、１ｘ１００μｌ（ＯＣＮ）、２ｘ１５０
（ＩＧＦ−１及び保存）、１ｘ３００μｌ（Ｃｈｅｍ１８）、２ｘ５００μｌ（１つはＢ
ＳＡＬＰ、及び保存）にて、−８０℃で保存される。
５．骨の採取：ＣＴ及び生体力学的試験のために１本の大腿骨及び腰椎骨を固定（５０／
５０のエタノール／生理食塩水中）し、ＰＡＬＰ／カルセイン解析のために１本の脛骨を
、骨端をはぎ取って採取（７０％エタノール中）し、他の脛骨は組織形態計測分析のため
に採取される（７０％エタノール）。
４．ＰＫ測定：採取する数日前、以下の時点で各投与量群（被験物質群のみ、ｎ＝３）の
３匹のラットを尾出血させ、およそ０．２ｍｌの血液をＥＤＴＡ試験管に採取する：０．
２５、０．５、１、２、３、４，８及び２４時間。試料は、血漿濃度解析のためにＡＤＭ
Ｅへと移送させる。
【表２】
2019089795.tif 000012
【００５７】
原則的に上述のプロトコールに従い、８週間、精巣摘除されたラットにおいて、８週間
の治療を行った後、精嚢重量に実施例１による有意な増加は生じず、すべてのアンドロゲ
ン性刺激に対し高度に反応性であった。
【表３】
2019089795.tif 000013
【００５８】
図２及び表３に示されるように、８週間、精巣摘除を受けたラットにおいて８週間の治
療を行った後、実施例１を用いて治療したところ、腰椎骨梁のミネラル密度（ＬＶ−ＴＢ
ＭＤ）の有意な増加が生じ、腰椎骨梁のミネラル含有量（ＬＶ−ＴＢＭＣ）、及び断面積
（ＬＶ−ＴＡ）において増加の傾向が示された。
【００５９】
ＴＥの存在下での実施例１の直接的なアンタゴニスト作用を探索するためのｉｎ  ｖｉｖ
ｏ試験
総数で３６匹のＯＲＸ、及び６匹の偽（Ｓｈａｍ）手術が行われたＷｉｓｔａｒのオス
ラットを用いる（８週齢で精巣摘除され、４週間、放置される）。ラットは、２２℃、１
２時間の明／暗サイクルで、食物（０．９５％Ｃａと０．６７％Ｐを補充したＴＤ  ５０
０１、Ｔｅｋｌａｄ社、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）と水にはいつでもアクセスできる状態で
飼育される。ラットは無作為化され、体重に基づき治療群（ｎ＝６）に配置される。ＴＥ
を除く全群に対する投与経路は経口である。ＴＥは皮下に投与される。毎日投与を行った
８週間の最後に、ラットを安楽死させ、体重を計測し、組織を採取する。肛門挙筋、前立
腺、及び精嚢が各動物から採取される。結果は、平均±ＳＥとしてプロットされる。
【表４】
2019089795.tif 000014
【００６０】
エナント酸テストステロン（１ｍｇ／Ｋｇ−日）と、様々な投与量の実施例１の組み合
わせから、体重（ｇｍ）に対して標準化された精嚢湿重量（ｍｇ）の減少傾向が示唆され
、図３及び表４に示されるように、それらはＴＥ単独で誘導されている。
【００６１】
精嚢湿重量の平均の比較
ダネット法を用いた対照との比較
対照群＝ｄ−ＯＲＸ＋ＴＥ、１ｍｇ／ｋｇ／日
|d|    アルファ
2.69715        0.05
【表５】
2019089795.tif 000015
【００６２】
正の値は、有意に異なる平均の対を示す。
【００６３】
図４及び表５に示されるように、ＳＤラットに対し、１ｍｇ／ＫｇのＴＥと共に実施例
１を共処置することにより、体重（ｇ）に対して標準化された前立腺の湿重量（ｍｇ）に
おいて、用量依存性の減少が生じた。
【００６４】
前立腺重量の平均の比較
ダネット法を用いた対照との比較
対照群＝ｄ−ＯＲＸ＋ＴＥ、１ｍｇ／ｋｇ／日
|d|    アルファ
2.69715        0.05
【表６】
2019089795.tif 000016
【００６５】
正の値は、ＴＥ単独群とは有意に異なる平均の対を示す。
【表７】
2019089795.tif 000017
【表８】
2019089795.tif 000018
【００６６】
合成テストステロンであるＲ１８８１と実施例１との比較から、ヒト前立腺癌細胞を用
いたｉｎ  ｖｉｔｒｏ実験で、実施例１はＲ１８８１よりもアンドロゲン性が低いことが
示される。対照的に、ヒトアンドロゲン受容体に対する生化学的結合アフィニティ（Ｋｉ
（ｎＭ））は、多少低下したのみである。
【００６７】
ラットにおける４週の経口毒性試験
この試験は、ラットにおける４週曝露後の実施例１の潜在毒性及び毒物動態（ｔｏｘｉ
ｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ）を評価するために行われる。１０匹のオスと１０匹のメスのＣＤ
（登録商標）［Ｃｒｌ：ＣＤ（登録商標）（ＳＤ）］ラットの３つの治療群に、１５、１
５０及び１５００ｍｇ／ｋｇ／日の各投与レベルで被験物質を投与する。１０匹／性別の
追加の１つの群は対照として用いて、５％ビタミンＥ  ＴＰＧＳ、１％ヒドロキシエチル
セルロース、０．０５％Ｄｏｗ  Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ａｎｔｉｆｏａｍ  １５１０−ＵＳを
逆浸透精製水に溶解させたビヒクルを投与する。被験物質またはビヒクルは、経口強制投
与により、連続した２８日間、１日に１度、１５ｍＬ／ｋｇの投与量で全群に投与される
。さらに、１８匹／性別／群の３群は毒物動態（ＴＫ）動物として用いられ、１５、１５
０及び１５００ｍｇ／ｋｇ／日の各投与レベルで、主要被験群と同じ方法及び同じ投与量
で、被験物質を投与される。３匹／性別の１つの追加の群は毒物動態の対照として用いら
れ、治療群と同じ方法、同じ投与量で、ビヒクルを投与される。
【００６８】
罹患率、死亡率、負傷、及び食物と水の利用可能度の観察は、すべての動物に対し１日
に２回行われる。臨床兆候の観察は、主要被験動物に対してのみ、週に１度行われる。体
重はすべての動物に対し週に１度測定、記録され、食物消費量は主要被験動物に対して週
に１度測定、記録される。検眼鏡検査は、予備試験ですべての動物に対し行われ、最終解
剖の前に主要被験動物に対してのみ行われる。臨床病理評価のための血液試料は、解剖時
にすべての主要被験動物から採取される。尿試料は、投与の最終日に採取される。被験物
質の血漿濃度測定のための血液試料は、１日目及び２８日目の指定された時点でＴＫ動物
から採取される。最後の血液採取の後、ＴＫ動物は安楽死され、死体はさらなる評価を行
うことなく破棄される。肝酵素誘導解析のための肝臓試料は、主要被験動物から最終解剖
で採取される。試験終了時、解剖検査が行われ、器官の重量が記録され、前立腺及び精嚢
組織は顕微鏡で検査される。追加の顕微鏡検査は、解剖時に最初の５匹のオスラット／群
からの左精巣で行われる。メスの卵巣、子宮頚付きの子宮、膣、及び乳腺は、標的器官で
あると決定される。
【００６９】
原則的に上述のプロトコールに従ったところ、全身曝露（ＡＵＣ０−２４時間）は大き
なばらつきがあり、曝露に伴いメスにおいてオスで観察されたものを超え、用量比例的で
はなく上昇した。投与の２８日後の肝ミクロソーム酵素誘導の証拠はなかった。
【００７０】
試験の間、予定外の死亡は無く、被験物質が関連した臨床兆候もなかった。体重及び食
物消費量は、対照と比較し、１５０ｍｇ／ｋｇ／日以上を投与されたメスの間で高かった
。これらの作用は、動物の健康全般に対し影響を与えず、有害であるとはみなされない。
オスにおいて、体重または食物消費量への明白な作用は無かった。
【００７１】
オス、メスのいずれにおいても、血液検査パラメーター、凝固検査パラメーター、また
は尿検査パラメーターに対し、被験物質関連作用は無く、及びオスにおいて、臨床化学パ
ラメーターに対する被験物質関連作用は無かった。メスにおける臨床化学パラメーターの
被験物質関連作用は、１５０及び１５００ｍｇ／ｋｇ／日の用量で、アルカリホスファタ
ーゼの増加（それぞれ、１．３３及び１．４５倍の増加）、１５０及び１５００ｍｇ／ｋ
ｇ／日の用量で、総タンパク質の低下（それぞれ、９％及び１０％の低下）、１５０及び
１５００ｍｇ／ｋｇ／日の用量で、アルブミンの低下（両用量で１２％の低下）、ならび
に１５００ｍｇ／ｋｇ／日のみでグロブリンの低下（対照と比較し１１％の低下）に限定
された。これらの変化は、最小度であり、有害であるとはみなされない。
【００７２】
オス、メスのいずれにおいても被験物質関連の肉眼的変化または器官重量変化は無く、
及びオスにおいて、被験物質関連の顕微鏡的変化は無かった。被験物質関連の顕微鏡的変
化は、１５ｍｇ／ｋｇ／日以上の投与レベルで、メスの乳腺及び卵巣において存在し、１
５０ｍｇ／ｋｇ／日以上の投与レベルで子宮（子宮頚付き）及び膣に存在していた。これ
ら顕微鏡的変化は、１５０ｍｇ／ｋｇ／日以上の投与レベルのメスラットにおける生殖周
期の用量関連性の長期化と一致しており、被験物質の薬理作用と関連しているとみなされ
るが、有害であるとはみなされない。
【００７３】
上記の結果に基づき、本試験のＮＯＡＥＬは、最も高い投与量である１５００ｍｇ／ｋ
ｇ／日であるとみなされる。１５００ｍｇ／ｋｇ／日のＮＯＡＥＬ投与量での平均定常状
態全身曝露（ＡＵＣ０−２４時間）は、オスで１０２３３７ｎｇ＊時／ｍＬ、メスで２１
６８５３ｎｇ＊時／ｍＬであった。
【００７４】
ラットにおける６か月経口毒性
本試験の目的は、Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットにおいて、２６週間連日の経口
強制投与後の実施例１の毒性を探索すること、及び毒物動態を決定すること、ならびに１
２週の回復期間後のすべての結果に対する可逆性を評価することである。治療動物は、５
％ビタミンＥ  ＴＰＧＳ、１％ヒドロキシエチルセルロース、０．０５％Ｄｏｗ  Ｃｏｒ
ｎｉｎｇ  Ａｎｔｉｆｏａｍ  １５１０−ＵＳの精製水に溶解した実施例１を、１５、１
５０、または１５００ｍｇ／ｋｇ／日の１日用量で経口強制投与により投与される。ビヒ
クル対照（主要試験では１５匹のラット／性別、回復試験では５匹のラット／性別）は、
５％ビタミンＥ  ＴＰＧＳ、１％ヒドロキシエチルセルロース、０．０５％Ｄｏｗ  Ｃｏ
ｒｎｉｎｇ  Ａｎｔｉｆｏａｍ  １５１０−ＵＳの精製水溶液を毎日、強制経口投与され
る。１５匹のオスと１５匹のメスを各治療主要試験群に割り当てる。回復試験に対し、５
匹のオスと５匹のメスを、ビヒクル対照群と１５０ｍｇ／ｋｇ／日の群に割り当てる。６
匹のラット／性別のビヒクル対照群、及び１２匹のラット／性別の実施例１治療群の追加
のサテライト群は、毒物動態に関し評価される。すべての投与は、１５ｍＬ／ｋｇの量で
与えられる。
【００７５】
連日の経口強制投与を行った後、実施例１に対する曝露はすべての投与量で大きなばら
つきがあった一方、非重複平均ＡＵＣ（０−２４時間）値は、最も低い投与量と最も高い
投与量の間で、特に９１日目と１８２日目で、オスとメスの両方で観察された。概略する
と、単回投与と反復投与の曝露（Ｃｍａｘ及びＡＵＣ（０−２４時間））は、オスとメス
の両方に関し、１５〜１５００ｍｇ／ｋｇ／日で比例的よりは小さく増加した。メスは、
すべての日でオスよりも高い暴露を示した。１日目、メスの曝露はオスの７倍まで高かっ
たが、この差は１８２日目で１〜３倍にまで低下した。反復投与後、実施例１の蓄積は、
１８２日目までいずれの投与群に対しても観察されなかった。
【００７６】
原則的に上述のプロトコールに従ったところ、試験の過程で実施例１の投与による死亡
は無かった。眼科検査、または尿検査パラメーターに対する化合物関連作用は無かった。
【００７７】
実施例１が関連する臨床兆候は、治療されたメスにおいて用量依存性に記録され、油性
被毛の発現率の増加、及び薄被毛の発現率の低下が記録された。回復期間の最初の６週間
、従前に１５０ｍｇ／ｋｇ／日で治療されたメスにおいて、油性被毛が再び記録されたが
、１２週の回復期間後半では、これらの動物にはもはや確認されなかった。回復期間の終
了時、治療群のメスと対照群のメスで、薄被毛の発現率に差異は無かった。
【００７８】
実施例１で治療されたオスにおいて、すべての投与レベルで体重の低下が見られ、治療
期間の終了時、対照群のオスと比較し、−１２％にまで達した。メスにおいては真逆の傾
向がみられ、治療期間の終了時、同時対照群よりも治療群のメスは、体重は２２％高かっ
た。オスにおける変化は回復期間の終了時にもまだ記録されたが、メスでは記録されなか
った。
【００７９】
試験期間を通じて、対照群よりも、治療群のオスは食物消費量が低く、治療群のメスは
多くの場合で食物消費量が高かったことから、体重に対する治療関連作用との相関性があ
る。治療群のオスの食物消費量は回復期間中、対照群よりも低いまま維持されたが、１２
週間の最後には、その差の程度は無視できるほど小さくなった。回復期間中、対照群と比
較し、治療群のメスの食物消費量の差は無かった。
【００８０】
１５０ｍｇ／ｋｇ／日以上の用量での実施例１の投与は、メスにおいて、好中球数の増
加、絶対網状赤血球数の増加、アルカリホスファターゼの上昇、カリウムの上昇、及びグ
ロブリンの低下と関連していた。１５００ｍｇ／ｋｇ／日のオスにおいて、アスパラギン
酸アミノトランスフェラーゼ、アラニンアミノトランスフェラーゼ、ガンマグルタミルト
ランスフェラーゼ、アルカリホスファターゼ、及び総ビリルビンの上昇が認められた。す
べての投与レベルのメスにおいて、総タンパク質及びアルブミンの最小低下が観察された
。１２週の回復期間後、１５０ｍｇ／ｋｇ／日で投与されたラットにおいて、血液検査パ
ラメーター、臨床生化学検査パラメーター、及び尿検査パラメーターにおいて差は無かっ
たことから、これら結果の可逆性が示唆される。
【００８１】
実施例１を用いた治療に関連した所見は、主にオスとメスの生殖組織に関連しており、
概して、この分子の薬理作用によるものであった。有害所見は、精巣に限局され、すべて
の実施例１治療群において発生した。１５００ｍｇ／ｋｇ／日において、及び精巣病変が
あった１５または１５０ｍｇ／ｋｇ／日を投与された群、および個々のオスにおいて、精
巣及び精巣上体の重量の低下が確認された。実施例１の投与に関連したオス生殖組織の肉
眼的所見は、精巣及び精巣上体において観察された。柔らかく及び／または小さな精巣、
ならびに小さな精巣上体が、５０ｍｇ／ｋｇ／日以上を投与されたオス、及び１５ｍｇ／
ｋｇ／日を投与された１匹のオスに観察された。精巣における顕微鏡検査所見は、すべて
の投与レベルで見られ、退行性の性質であり、伸長精細胞の枯渇、間質細胞の萎縮、及び
精母細胞の単一細胞ネクローシスが含まれた。精巣の所見は、間質細胞レベルでのＬＨシ
グナル伝達の低下を生じさせる循環黄体形成ホルモン（ＬＨ）の低下と一致していた。さ
らに、循環ＬＨ値の低下は、精巣からのテストステロン分泌の低下をもたらし、それによ
って、輸精管レベルでのアンドロゲンシグナル伝達の低下がもたらされる。実施例１を用
いた治療はまた、１５０ｍｇ／ｋｇ／日以上を投与されたオスにおいて観察された前立腺
重量の低下とも相関していた。これらオスにおける生殖機能変化及び内分泌変化は、実施
例１の薬理作用と関連し得るが、４週試験ではこれまで特定されていなかった。実施例１
関連薬理作用と一致しているが、すべての投与レベルで見られた精巣における形態的所見
の程度に基づき、有害であるとみなされた。オスの生殖組織及びＬＨ及びテストステロン
に対する作用は、１２週の回復期間の終了時までに回復した。
【００８２】
実施例１の投与は、すべての投与レベルのメスにおいて、卵巣重量の低下及び肉眼的検
査での小卵巣と関連していた。下垂体重量の低下、及びＬＨ循環レベルの低下が、１５０
ｍｇ／ｋｇ／日を投与されたメスにおいて観察された。顕微鏡検査所見は、実施例１の投
与と関連し、メスの生殖組織に観察された。１５０ｍｇ／ｋｇ／日以上の投与レベルで子
宮及び膣において顕微鏡検査所見が観察された一方、すべての投与レベルで卵巣及び乳腺
の所見が観察された。メスの生殖組織で観察された顕微鏡検査所見、及び循環ＬＨレベル
の低下は、実施例１の薬理学的活性と関連した可能性があった。乳腺を含むメスの生殖組
織における所見は、４週反復投与毒性試験において従前に報告された結果と一致していた
。メスの生殖的変化は、生殖能力に影響を与える可能性があるが、動物の全般的な健康状
態には影響を与えない。メスの生殖組織及びＬＨに対する作用は、１２週の回復期間の終
了時までに回復した。
【００８３】
実施例１の投与は、すべての投与レベルでのメス、及び１５０ｍｇ／ｋｇ／日以上を投
与されたオスにおいて、胸腺重量の低下と関連していた。小胸腺の肉眼的所見が、１５０
０ｍｇ／ｋｇ／日を投与されたオスに観察された。実施例１の投与に関連したさらなる顕
微鏡検査所見は、１５０ｍｇ／ｋｇ／日以上の投与レベルで、肝臓、脾臓、胸腺（オス）
、及び皮膚（メス）に観察された。皮膚の顕微鏡検査所見は、すべての投与レベルで観察
された。これら変化のすべては、１２週の回復期間の終了時には消失した。実施例１の投
与に関連した他の顕微鏡検査所見、器官重量変化、及び肉眼的所見は無かった。
【００８４】
結論として、０、１５、１５０、及び１５００ｍｇ／ｋｇ／日の投与レベルで２６週間
、毎日の強制経口投与による実施例１の投与は、オス及びメスの生殖組織における形態変
化及びホルモン変化と関連しており、それらは多くの場合、この分子の薬理作用に起因す
るものであり、１５０ｍｇ／ｋｇ／日で従前に治療された動物において、１２週後には可
逆的であった。有害所見は精巣に限局され、すべての実施例１治療群で発生した。これら
退行性の精巣変化の程度に基づき、無有害作用量（ＮＯＡＥＬ：ｎｏ  ｏｂｓｅｒｖａｂ
ｌｅ  ａｄｖｅｒｓｅ  ｅｆｆｅｃｔ  ｌｅｖｅｌ）は、本試験において確立し得、１５
ｍｇ／ｋｇ／日未満であるとみなされる。
【００８５】
ラットにおける、オスの生殖能力及び毒物動態
本試験の目的は、交配期間の前、及び交配期間中にオスのラットを処置したことにより
生じる生殖プロセスにおける潜在的有害作用を決定することである。これには、オスにお
ける機能的生殖効果の特定を含む。さらに、実施例１の血漿レベルの毒物動態評価がサテ
ライト動物において行われる。
【００８６】
実施例１は、０、３、３０、及び１０００ｍｇ／ｋｇの投与量で、強制経口投与により
与えられる。オスのラット（２０匹／群）に、交配前の１０週、３週の交配期間の間、及
びその後の安楽死の前日まで、毎日治療を行う（総数で１００〜１０１回の投与）。メス
には治療を行わない。すべての動物は、瀕死状態及び死亡に関し、１日に２回観察される
。臨床観察はオスのラットに対して毎日記録され、体重及び食物消費量はオスに対して週
に２回記録される。すべてのオスは最終用量投与の１日後に安楽死される。すべてのオス
に対し行われる精子形成エンドポイント評価は、運動性及び形態及び精巣上体精子の濃度
を含む。すべてのオスの精巣、精巣上体、前立腺、及び精嚢／凝固腺／分泌液が重量測定
され、保持される。生き延びたオスの精巣、精巣上体、前立腺、精嚢及び凝固腺は顕微鏡
検査が行われる。交配の証拠がある各メスに対し、妊娠１５日目に腹式子宮摘出術が行わ
れる。さらに３匹、１８匹、１８匹、及び１８匹のオスが毒物動態フェーズに割り当てら
れ、それぞれ、０、３、３０、及び１０００ｍｇ／ｋｇの用量の化合物が与えられ、試験
０日目及び７０日目に用量投与が行われた後、適切な間隔で毒物動態評価のための試料採
取が行われる。
【００８７】
オスラットに対し実施例１の経口投与が毎日行われた後、Ｃｍａｘまでの時間は、０日
目で２〜８時間、７０日目で０．５〜２時間である。平均曝露（ＡＵＣ０−２４時間によ
り測定）は、３〜３０ｍｇ／ｋｇの間で、０日目及び７０日目にそれぞれおよそ７．８倍
と４．５倍まで増加したが、３０〜１０００ｍｇ／ｋｇ投与量の間ではほぼ変わらないま
まであったことから、曝露におけるプラトーは、３０ｍｇ／ｋｇ超であることが示唆され
る。曝露は多くの場合、単回投与と反復投与の間で類似している。
【００８８】
原則的に上述のプロトコールに従ったところ、毒物動態フェーズの３０ｍｇ／ｋｇ群の
１匹のオス、及び主要フェーズのビヒクル対照群の１匹のオスが、それぞれ試験２４日目
及び７０日目に死亡したことが判明した。１０００ｍｇ／ｋｇ群での死亡は無かったこと
から、３０ｍｇ／ｋｇでの死亡は化合物関連ではないとみなされた。日々の検証で、片方
の目、または両目の周囲の赤み（ｒｅｄ  ｍａｔｅｒｉａｌ）の発現率の上昇が、３０ｍ
ｇ／ｋｇ群の４匹のオス、及び１０００ｍｇ／ｋｇ群の３匹のオスに対し記録され、それ
ぞれ早ければ試験８日目及び２０日目に始まっていた。３、３０及び１０００ｍｇ／ｋｇ
群のオスに対し、毎日の検査、または用量投与のおよそ１時間後で、他の化合物関連の臨
床所見は記録されなかった。平均体重、体重増加、及び食物消費量は、すべての投与量レ
ベルで化合物投与により影響を受けなかった。
【００８９】
精巣、精巣上体（全体及び尾部）、前立腺、及び精嚢／凝固腺／付随する分泌液を含む
オス生殖器官の絶対重量及び相対重量の用量依存性の低下が、３０及び１０００ｍｇ／ｋ
ｇ群において記録された。間質性ライディッヒ細胞と生殖上皮の萎縮を特徴とする組織学
的変化に相当する器官重量の作用が精巣において観察された。両群における精巣上体中の
成熟精子群の低下、及び１０００ｍｇ／ｋｇ群において記録された副性腺中の分泌液の低
下と併せ、これらの所見は、ライディッヒ細胞によるアンドロゲン（テストステロン）合
成及び／もしくは分泌の下方制御、または標的器官におけるホルモン受容体の阻害による
下方制御と一致するとみなされた。１０００ｍｇ／ｋｇ群において、生殖器官で記録され
た効果は、生殖機能の低下と対応していた。３０及び１０００ｍｇ／ｋｇ群において、副
性腺（前立腺、精嚢、及び凝固腺）で記録された器官重量への効果は、化合物の薬理作用
に関連しているとみなされた。
【００９０】
精子形成エンドポイントに対する化合物関連作用は、１０００ｍｇ／ｋｇ群において記
録された。精巣上体重量の低下は、１０００ｍｇ／ｋｇ群において記録され、この群にお
ける平均精巣上体精子濃度の低下と対応していた。さらに、１０００ｍｇ／ｋｇで、頭部
が無いまたは頭部が鞭毛から離れた精子の数が多く、その結果として、化合物に関連した
正常形態精子の割合低下が観察された。これらの作用は、１０００ｍｇ／ｋｇ群のオスに
おいて、交配行動、受精、及び交尾指数の低下と関連した。さらに、ビヒクル対照群と比
較し、１０００ｍｇ／ｋｇ群において、交尾前の間隔の若干の長期化が観察された。３及
び３０ｍｇ／ｋｇ群における精子形成エンドポイント及び生殖行動は化合物投与により影
響を受けなかった。
【００９１】
３、３０、及び１０００ｍｇ／ｋｇの投与レベルでのオスへの化合物投与により胚の子
宮内生存は影響を受けなかった。
【００９２】
結論として、いずれの用量レベルでもオスの体重または食物消費量または有害化合物関
連臨床所見に対する効果は存在しなかった。オスの生殖組織及び精子形成パラメーターに
対する化合物関連有害作用は、３０及び１０００ｍｇ／ｋｇで発生した。オスの生殖器官
重量の低下は、１０００ｍｇ／ｋｇで発生し、精巣上体精子の濃度と形態に対する効果と
対応していた。さらに、顕微鏡検査での変化が、１０００ｍｇ／ｋｇで精巣、精巣上体、
前立腺、精嚢、及び凝固腺において観察され、それらはこの群における交配行動、受精、
及び交尾指数の低下と対応していた。多くの場合、群ベースでは繁殖行動の低下とオスの
生殖組織における組織学的変化は対応していたが、個々の動物ベースでの相関は必ずしも
明白ではなかった。３０ｍｇ／ｋｇ群において、生殖器官重量の低下と、精巣及び精巣上
体の形態変化は記録されなかった。３０ｍｇ／ｋｇでは生殖機能に対する対応作用が記録
されなかったことから、薬理作用シグナルは存在しているが、機能的生殖に影響を与える
までには大きくなかったことが示唆される。これらの所見に基づき、オスの生殖毒性及び
オスの全身毒性に対するＮＯＡＥＬは、３ｍｇ／ｋｇであった。３ｍｇ／ｋｇの投与レベ
ルは、試験７０日目の曝露（ＡＵＣ０−２４時間）値の１０，９５４ｎｇ・時／ｍＬに相
当する。
【００９３】
イヌにおける４週経口毒性試験
本試験は、イヌにおける、４週間の１日２回の経口カプセル投与を行った後の、選択的
アンドロゲン受容体モジュレーター（ＳＡＲＭ）である実施例１の潜在毒性及び毒物動態
を評価するために行われる。３匹のオスと３匹のメスのビーグル犬の３つの治療群に、被
験物質を６、６０、または３００ｍｇ／ｋｇ／日の各投与レベルで投与する。３匹／性別
の追加の１つの群は対照として用いて、８０％ＰＥＧ  ３３５０／２０％ビタミンＥ  Ｔ
ＰＧＳ（Ｖ／Ｖ）のビヒクルを、経口カプセルを介して投与する。被験物質またはビヒク
ルは、連続した２８日間、１日に２回、１．５ｍＬ／ｋｇ／１回分の投与量で、経口カプ
セルを介して全群に投与される。
【００９４】
死亡率、罹患率、負傷、及び食物と水の利用可能度の観察は、すべての動物に対し１日
に２回行われる。詳細な臨床観察は、週に１度行われる。体重は、受領の翌日、無作為化
の前、及び試験期間中は週に１度、測定され、記録される。食物消費量は週に１度測定さ
れ、記録される。検眼鏡検査は、予備試験、及び最終解剖の前に行われる。身体検査は予
備試験で行われる。神経学的検査は１週目と４週目の間に行われる。ＥＣＧ検査は投与開
始前に２回、ならびに３日目及び２６日目の朝の被験物質投与後およそ２時間（±１５分
）で行われる。血液試料は予備試験で２回採取され、臨床病理学的評価のための血液試料
と尿試料は最終解剖の前にすべての動物から採取される。被験物質の血漿濃度測定のため
の血液試料は、１日目及び２８日目の指定された時点ですべての動物から採取される。毒
物動態パラメーターは、被験種における濃度−時間データから、被験物質に対し測定され
る。試験終了時、解剖検査が行われ、器官重量が記録され、精巣、精巣上体及び前立腺は
顕微鏡で検査される。実施例１がチトクロームＰ４５０を誘導する可能性については、凍
結肝臓試料を総チトクロームＰ４５０含有量に関し解析を行うことで決定される。
【００９５】
原則的に上述のプロトコールに従ったところ、対照動物の血漿試料すべてにおいて、実
施例１は計測不可能な濃度（１ｎｇ／ｍＬ未満）であったことが判明した。実施例１の血
漿濃度において、オスとメスの間に差は記録されなかったことから、曝露に対するジェン
ダー効果は無いことが示唆される。６及び６０ｍｇ／ｋｇ／日を投与された動物において
、実施例１の曝露は用量比例的よりも小さく増加し、３００ｍｇ／ｋｇ／日の血漿濃度と
６０ｍｇ／ｋｇ／日の血漿濃度は類似していたことから、６０ｍｇ／ｋｇ／日でプラトー
に達したと思われた。
【００９６】
イヌにおける５２週の毒性試験及び毒物動態試験
本試験の目的は、少なくとも５２週間、カプセルでイヌに毎日投与した場合の被験物質
である実施例１の毒性を評価し、及び毒物動態を決定することであり、ならびに１３週の
回復期間後の何らかの効果の可逆性、持続性、または遅延型の発生を評価することである
。
【００９７】
オス及びメスの純血種ビーグル犬を群に割り当て、０［１％（ｗ／ｖ）カルボキシメチ
ルセルロースナトリウム（低粘性／２５−５０ｃｐｓ）、０．５％（ｗ／ｖ）ラウリル硫
酸ナトリウム、及び０．０５％（ｖ／ｖ）Ｄｏｗ  Ｃｏｒｎｉｎｇ（登録商標）Ａｎｔｉ
ｆｏａｍ  １５１０−ＵＳの逆浸透水溶液］、３、１０、または１００ｍｇの実施例１／
体重ｋｇの１ｍＬ／ｋｇを含有する経口カプセルを介して、表９に従い投薬する。すべて
の動物が同じ数のカプセルを投与され、１群の動物は、ビヒクル対照物質のみを含有する
カプセルを投与される。１群及び４群から、性別当たり３匹の動物を回復動物と指定する
。
【表９】
2019089795.tif 000019
【００９８】
毒性評価は、死亡率、臨床兆候、体重及び体重変化、食物消費、眼科評価及び神経学的
評価、ＥＣＧ測定、ホルモン分析（テストステロン、プロゲステロン、黄体形成ホルモン
、及び卵胞刺激ホルモン）、精液評価（射精量及び精子の数、密度、形態、及び運動性）
、ならびに臨床病理及び解剖病理に基づいている。予備的代謝解析及び毒物動態評価のた
めに血液試料が採取される。
【００９９】
原則的に上述のプロトコールに従ったところ、実施例１の全身曝露は、３から１００ｍ
ｇ／ｋｇへの投与レベルの増加とともに増加した。平均Ｃｍａｘ及びＡＵＣ０−２４時間
の増加は、多くの場合、用量比例未満であった。毒物動態パラメーターにおいて、一貫性
のある性別に関連した差は観察されなかった。イヌにおいて、実施例１の蓄積は、実施例
１の反復投与が行われた後に観察された。
【０１００】
すべての動物が、予定のと殺時まで生存した。化合物関連の臨床兆候は、３ｍｇ／ｋｇ
超を投与された動物における流涙の観察の増加、及び３ｍｇ／ｋｇ超を投与されたメスに
おける発情周期の低下または消失であった。
【０１０１】
毒物動態的に重要な差異は、平均体重、体重増加、及び食物消費において記録されなか
った。眼科的異常または神経学的異常も発生しなかった。
【０１０２】
ＱＴ間隔及び補正ＱＴ（ＱＴｃ）間隔の延長が、１００ｍｇ／ｋｇを投与された両性別
において、投薬フェーズの３日目、８６日目、及び３５９日目の投与前ならびに投与２時
間後に記録された。すべての投薬フェーズ間隔にわたり、１００ｍｇ／ｋｇを投与された
両性別における平均ＱＴｃ間隔の増加の程度は、対照動物に対する平均値を超えて、１４
〜２１ミリ秒（６〜９％）の範囲であった。１００ｍｇ／ｋｇを投与された両性別の回復
フェーズの８８日目、または３もしくは１０ｍｇ／ｋｇを投与された動物の投薬フェーズ
の３日目、８６日目、もしくは３５９日目で、ＱＴまたはＱＴｃ間隔に対する化合物関連
の変化は記録されなかった。３、１０もしくは１００ｍｇ／ｋｇを投与された動物の投薬
フェーズの３日目、８６日目、または３５９日目で、または１００ｍｇ／ｋｇを投与され
た動物の回復フェーズの８８日目で、ＰＲ間隔、ＱＲＳ時間、ＲＲ間隔、または心拍数の
実施例１関連の変化は観察されなかった。心電図の定性的評価の間、実施例１に起因する
調律異常または定性的ＥＣＧ変化は無かった。
【０１０３】
すべての投与レベルのオスの投薬フェーズの間に、実施例１に関連した、用量依存性の
総精子数の低下が発生し、射精量の低下に起因していた。５２週目の評価時（投薬フェー
ズの３５５日目及び３６０日目）に、対照と比較し、３、１０、または１００ｍｇ／ｋｇ
を投与されたオスは、それぞれ、総精子数が５５％未満、５０％未満、及び９１％未満に
低下した。総精子数に対する作用は、回復フェーズの間に完全に回復した。平均精子密度
、運動性、または形態に対する実施例１関連効果は、いずれの群に対しても記録されなか
った。
【０１０４】
３ｍｇ／ｋｇ超を投与されたオス及びメスにおいて、ホルモン変化が記録された。この
変化は、被験物質の薬理作用と一致しており、顕微鏡的変化と相関していた。オスにおい
て、テストステロンの低下とＬＨの増加が観察された。メスにおけるＬＨの増加及びプロ
ゲステロンの低下は、無発情期と一致しており、顕微鏡検査で記録された黄体の減少と一
致していた。ホルモンレベルは回復フェーズの間に対照レベルにまで戻った。
【０１０５】
化合物関連臨床病理効果は、すべての投与レベルのオス及びメスで、極低度から中程度
のアラニンアミノトランスフェラーゼ活性の上昇（１００ｍｇ／ｋｇを投与されたメスが
最も影響を受けた）と、３または１０ｍｇ／ｋｇを投与されたオス及びメスで、極低度か
ら中程度のコレステロールの低下（３ｍｇ／ｋｇを投与された動物が最も影響を受けた）
に限定されていた。１００ｍｇ／ｋｇでのアラニンアミノトランスフェラーゼ活性に対す
る効果は、回復フェーズ後に可逆性を示した。３及び１０ｍｇ／ｋｇでのコレステロール
濃度に対する効果の可逆性は、これらの投与レベルの動物が回復フェーズに入っていなか
ったために、評価することができなかった。これら効果のいずれも、相関性のある顕微鏡
所見と関連していなかった。
【０１０６】
薬理学的に予想された化合物関連形態変化が、オス及びメスの生殖組織で記録された。
化合物関連であり、可逆性のある前立腺、精巣上体、及び肝臓／胆嚢の重量の低下はオス
で発生し、それらは、肝臓／胆嚢の変化を除き、顕微鏡所見と相関していた。前立腺にお
いて、３ｍｇ／ｋｇ超を投与されたオスは、可逆的な前立腺の腺上皮萎縮を有していた。
３ｍｇ／ｋｇ超を投与されたオスは、可逆的な精巣上体尾（部）の細管直径の低下を有し
ており、１００ｍｇ／ｋｇを投与されたオスは、可逆的な精巣上体細管上皮の萎縮を有し
ていた。３ｍｇ／ｋｇ超を投与されたメスは、卵巣において無発情周期段階を伴う黄体の
減少／消失を有していた。この変化は多くの場合、乳腺における小葉発達の欠落が付随し
、ならびに二次生殖組織の無発情期への反応が予測された：子宮、子宮頚、膣及び乳腺が
、段階的に適切な、長い無発情期に応じた萎縮の特徴を有していた。
【０１０７】
まとめると、これらメスにおける所見は、化合物が関連した正常な生殖周期の崩壊と一
致している。回復フェーズにおいて、１００ｍｇ／ｋｇを投与されたメスの３分の２が、
発情間期の生殖周期段階、及び乳房小葉発達を有していたことから、回復フェーズの間の
生殖周期の臨床的証拠は記録されなかったが、正常な周期活性に戻ったことが示唆される
。
【０１０８】
さらに、化合物関連の可逆的な顕微鏡所見が、副腎及び皮膚／皮下組織において観察さ
れた。副腎において、１０ｍｇ／ｋｇ超を投与されたオス、及び１００ｍｇ／ｋｇを投与
されたメスは、束状帯及び網状帯の空砲形成が低下した。皮膚においては、皮脂腺の空砲
形成の低下が、３ｍｇ／ｋｇ超を投与された動物において記録された。
【０１０９】
要約すると、３、１０、または１００ｍｇ／ｋｇの投与レベルで５２週間、カプセルに
よりイヌに対し実施例１を毎日投与しても、化合物関連の有害な所見は発生しなかった。
生殖機能における変化は、すべての実施例１治療群のオス（精子数及び射精量の減少）及
びメス（発情周期の低下／無発情周期）で発生し、顕微鏡所見と相関した。これら変化は
、動物の全般的な健康状態には影響を与えず、被験物質の薬理作用と一致しており、可逆
的である。従って、ＮＯＡＥＬは１００ｍｇ／ｋｇである。３６１日間の投与後、１００
ｍｇ／ｋｇの投与量は、オス及びメスにおいてそれぞれ、１４９６ｎｇ／ｍＬ及び１８８
５ｎｇ／ｍＬの平均Ｃｍａｘ値、ならびに２２５８２ｎｇ・時／ｍＬ及び３１５０５ｎｇ
・時／ｍＬのＡＵＣ０−２４時値に相当する。
【表１０】
2019089795.tif 000020
【０１１０】
１〜１２か月の期間、去勢されていないラットまたはイヌに対し実施例１を用いて治療
を行うことにより、前立腺の大きさに有意な低下が生じたことから、継時的な前立腺過形
成のアンドロゲン性リスクを増大させないことがさらに示唆される。
【０１１１】
ＴＥの存在下での、実施例１の任意の直接的アンタゴニスト作用を探索するためのｉｎ  
ｖｉｖｏ試験
総数で３６匹の精巣摘除された（ＯＲＸ）Ｗｉｓｔａｒオスラット、及び６匹の偽（ｓ
ｈａｍ）手術がなされたＷｉｓｔａｒオスラットを用いる（８週齢で精巣摘除が行われ、
４週間、放置される）。ラットは、２２℃、１２時間の明／暗サイクルで、食物（０．９
５％Ｃａと０．６７％Ｐを補充したＴＤ  ５００１、Ｔｅｋｌａｄ社、Ｍａｄｉｓｏｎ、
ＷＩ）と水にはいつでもアクセスできる状態で飼育される。ラットは無作為化され、体重
に基づき治療群（ｎ＝６）に配置される。ＴＥを除く全群に対する投与経路は経口である
。ＴＥは皮下に投与される。毎日投与を行った８週間の最後に、ラットを安楽死させ、体
重を計測し、組織を採取する。肛門挙筋、前立腺、及び精嚢が各動物から採取される。結
果は、平均±ＳＥとしてプロットされる。
【０１１２】
精嚢湿重量の平均の比較
ダネット法を用いた対照との比較
対照群＝ｄ−ＯＲＸ＋ＴＥ、１ｍｇ／ｋｇ／日
|d|    アルファ
2.69715        0.05
【表１１】
2019089795.tif 000021
【０１１３】
正の値は、有意に異なる平均の対を示す。
【０１１４】
エナント酸テストステロン（１ｍｇ／Ｋｇ−日）と、様々な投与量の実施例１の組み合
わせから、体重（ｇｍ）に対して標準化された精嚢湿重量（ｍｇ）の減少傾向が示唆され
、図５及び表１１に示されるように、それらはＴＥ単独で誘導されている。
【０１１５】
前立腺重量の平均の比較
ダネット法を用いた対照との比較
対照群＝ｄ−ＯＲＸ＋ＴＥ、１ｍｇ／ｋｇ／日
|d|    アルファ
2.69715        0.05
【表１２】
2019089795.tif 000022
【０１１６】
正の値は、ＴＥ単独群とは有意に異なる平均の対を示す。
【０１１７】
図６及び表１２に示されるように、ＳＤラットに対し、１ｍｇ／ＫｇのＴＥと共に実施
例１を共処置することにより、体重（ｇ）に対して標準化された前立腺の湿重量（ｍｇ）
において、用量依存性の減少が生じる。
【表１３】
2019089795.tif 000023
【０１１８】
合成テストステロンであるＲ１８８１と実施例１との比較から、ヒト前立腺癌細胞を用
いたｉｎ  ｖｉｔｒｏ実験で、実施例１はＲ１８８１よりもアンドロゲン性が低いことが
示される。対照的に、ヒトアンドロゲン受容体に対する生化学的結合アフィニティ（ｈＡ
ｒ：Ｋｉ（ｎＭ））は、多少低下したのみである。
【０１１９】
健康なボランティアにおける第Ｉａ相試験
この第Ｉ相試験は、無作為化、プラセボ対照、二重盲検、単回投与、不完全クロスオー
バー、用量漸増デザインであり、健康な男性と閉経後の女性からなる、３つの投与量コホ
ートで行われた。３０人の対象（コホート当たり１０人）が、各投与量コホートに無作為
に割り当てられる。
【０１２０】
両方の投与量期間中、対象は、臨床研究組織（ＣＲＵ：Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａ
ｒｃｈ  Ｕｎｉｔ）に一晩、入院する。対象は、１日目の朝食後に経口投与され、投与後
およそ２４時間、ＣＲＵに滞在する。各コホート内で、投与期間の間の休薬（ウォッシュ
アウト）期間は１４〜４５日の範囲である。試験終了の来院は、最終投与のおよそ５日後
に発生する、第２ピリオド。用量漸増の適切性は、漸増の各工程での安全性の測定値によ
り決定される。対象−治験責任医師の二重盲検クロスオーバーデザインが本試験に用いら
れ、すべての安全性と忍容性の測定に関する対象間のデータが提供される。本デザインは
、ＡＥの客観的評価を支援するものである。
【０１２１】
原則的に、上述のプロトコールに従った。不完全クロスオーバーデザインの結果として
、有意な安全性または忍容性のシグナルの検出を増強させるために対象のおよそ５０％が
実施例１の単回投与とプラセボ投与を受けた。対象のおよそ５０％が実施例１を２つの投
与レベルで受け、それにより、ＰＫパラメーター及び他のエンドポイントの用量依存性の
対象内解析が可能となった。治療期間の間の持ち越し効果（ｃａｒｒｙｏｖｅｒ  ｅｆｆ
ｅｃｔ）を最小化するために、最小で５日の投与間隔期間が選択された。
【０１２２】
本試験に対し予定された投与範囲は、実施例１が５〜１０００ｍｇの範囲であり、ラッ
トにおいて８０％の骨効果（中央骨幹量及び大腿骨頸部量の平均）を生じさせるために必
要とされる曝露が、ヒトにおいて必要とされる曝露と同じであるという仮定に基づき、ラ
ットにおけるｉｎ  ｖｉｖｏ有効性に基づいた。ヒトの非比例的な予測クリアランス（３
３Ｌ／時、９０％信頼区間[ＣＩ]：２４〜４６Ｌ／時）及び生体利用効率（４９％）に基
づき、ヒトにおけるかかる反応は、約７１ｍｇ／日の投与量で発生すると予測される（９
０％ＣＩ：２９〜３２１ｍｇ／日）。
【０１２３】
これらのデータから、図７に示されるように、健康なヒトボランティアへの実施例１の
投与後、腓腹筋束（腓腹筋領域）での末梢骨コンピューター断層撮影法に基づいた画像解
析により測定された腓腹筋領域における増加が示される。
【表１４】
2019089795.tif 000024
【表１５】
2019089795.tif 000025
【０１２４】
これらのデータから、ＤＥＸＡにより測定された、健康なヒトボランティアに対する実
施例１の投与後の全身除脂肪筋肉量における増加が示される。５ｍｇの投与レベルでの男
性における効果（青いバー）は、図８及び表１４及び表１５に示されるように、ダネット
検定（ｐ＜０．０５）を用いたところ、０ｍｇのプラセボ投与と比較し統計的に有意であ
る。
【表１６】
2019089795.tif 000026
【０１２５】
図９及び表１６に示されるように、これらの図のデータから、いずれの時点でも、また
は実施例１のいずれの投与量でも、プラセボと比較し、前立腺特異抗原（ＳＰＡ）値にお
ける基準値からの有意な変化はないことが示される。
【０１２６】
健康なボランティアの第Ｉｂ相試験
これは、健康な対象における、無作為化、プラセボ対照、対象及び治験責任医師の盲検
、反復投与、投与量漸増、並行群間比較の実施例１の第Ｉ相試験である。この試験は６つ
の治療群で行われ、対象は実施例１またはプラセボのいれかを４週間、毎日投与されるよ
う無作為に割り当てられた。安全性及び忍容性の評価は、各投与量漸増の前に行われる。
本試験の重要な組み入れ基準／除外基準は、対象が年齢３０〜８０歳の健康な男性または
健康な閉経後の女性であることが組み入れ基準であり、肥満度指数（ＢＭＩ：ｂｏｄｙ  
ｍａｓｓ  ｉｎｄｅｘ）が１８〜３２ｋｇ／ｍ２も組み入れ基準となる。
【０１２７】
対象は本試験に登録され、スクリーニング後に無作為化される。１日目及び２９日目に
対象は臨床研究組織（ＣＲＵ）に入院する。１、２、及び２８日目に、対象は、朝食後、
経口投与される。すべての安全性検査データは、朝食前と、一晩、少なくとも１２時間の
断食後に集められる。
【０１２８】
１日後、予定された手順、朝食及び投与（１日目の投与のおよそ２４時間後）が行われ
た後、２日目に対象は退院する。２８日目の後、対象は、予定された手順後（２８日目の
投与のおよそ２４時間後）、２９日目に退院する。
【０１２９】
これらのデータから、性腺機能が正常なヒトボランティアに対する実施例１の投与後の
血清テストステロン値の低下が示される。治療後の低下は、比較的高い血清テストステロ
ン値であった男性においてより顕著である。図１０に示される右側の表に、５ｍｇ投与で
のＰｈ１ａ試験後の曝露評価が反映されている。
【表１７】
2019089795.tif 000027
【０１３０】
図１１及び表１６に示されるように、これらのデータから、骨代謝のバイオマーカーで
あるプロコラーゲン１型のＮ末端プロペプチド（Ｐ１ＮＰ）に関する、性腺機能の正常な
ヒトボランティアに対する実施例１の投与後の正の曝露−反応関係が示される。
【図１】
2019089795.tif 000029
【図２】
2019089795.tif 000030
【図３】
2019089795.tif 000031
【図４】
2019089795.tif 000032
【図５】
2019089795.tif 000033
【図６】
2019089795.tif 000034
【図７】
2019089795.tif 000035
【図８】
2019089795.tif 000036
【図９】
2019089795.tif 000037
【図１０】
2019089795.tif 000038
【図１１】
2019089795.tif 000039
【手続補正書】
【提出日】平成31年2月21日(2019.2.21)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ
【化１】
2019089795.tif 000040
の化合物の製造方法であって、
Ｚｎ（ＣＮ）２を式ＩＩの化合物と反応させ、それにより式ＩＩＩの化合物を形成する工程と、
【化２】
2019089795.tif 000041
【化３】
2019089795.tif 000042
式ＩＩＩの化合物を式ＩＶの化合物と反応させることで式Ｉの化合物を形成する工程と
【化４】
2019089795.tif 000043
を含む、方法。
【請求項２】
式ＩＩの化合物のＺｎ（ＣＮ）２との反応が、下記１〜３：
１．式ＩＩの化合物を、Ｚｎ（ＣＮ）２、Ｚｎ（ＯＡｃ）２／Ｚｎ、ＤＭＡＣおよびＰｄ（ｄｐｐｆ）２Ｃｌ２・ＣＨ２Ｃｌ２を用いて反応させること、
２．水／アセトン／ＭＴＢＥ／木炭／ＭｇＳＯ４／ＦＬＯＲＩＳＩＬ（商標）／ＣＥＬＩＴＥ（商標）を用いて反応させること、ならびに
３．ヘプタン
にしたがって起こる、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
式ＩＩＩの化合物がヘプタン中で結晶化される、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
式ＩＩＩの化合物の式ＩＶの化合物との反応が、下記１〜４：
１．式ＩＩＩの化合物を、Ｋ２ＣＯ３、ＤＭＡＣ、ＨＣｌおよび式ＩＶの化合物を用いて反応させること、
２．Ｈ２Ｏを用いて反応させること、
３．木炭、ＭｇＳＯ４およびＣＥＬＩＴＥ（商標）を添加すること、ならびに
４．エタノールを添加すること
にしたがって起こる、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
式Ｉの化合物がエタノール中で結晶化される、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
実質的に純粋な形態の（Ｓ）−（７−シアノ−４−ピリジン−２−イルメチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−シクロペンタ［ｂ］インドール−２−イル）−カルバミン酸イソプロピルエステル、またはその薬学的に受容可能な塩を含む、剤形。
【請求項７】
カプセルから選択される、請求項６の剤形。
【請求項８】
技術グレード形態の（Ｓ）−（７−シアノ−４−ピリジン−２−イルメチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−シクロペンタ［ｂ］インドール−２−イル）−カルバミン酸イソプロピルエステル、またはその薬学的に受容可能な塩。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１３０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１３０】
図１１及び表１６に示されるように、これらのデータから、骨代謝のバイオマーカーであるプロコラーゲン１型のＮ末端プロペプチド（Ｐ１ＮＰ）に関する、性腺機能の正常なヒトボランティアに対する実施例１の投与後の正の曝露−反応関係が示される。
本発明は以下の態様を含む。
［１］
（Ｓ）−（７−シアノ−４−ピリジン−２−イルメチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−シクロペンタ［ｂ］インドール−２−イル）−カルバミン酸イソプロピルエステル、またはその薬学的に受容可能な塩の有効量を、かかる治療を必要としている患者に投与することを含む、アンドロゲン除去療法により誘導された続発性性腺機能低下症の結果としての症状の治療方法。
［２］
前記症状が、骨量、骨強度、筋肉量、または筋力の低下である、［１］に記載の方法。
［３］
前記症状が、性欲の減退及びホットフラッシュである、［１］に記載の方法。
［４］
療法における、（Ｓ）−（７−シアノ−４−ピリジン−２−イルメチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−シクロペンタ［ｂ］インドール−２−イル）−カルバミン酸イソプロピルエステル、またはその薬学的に受容可能な塩の使用。
［５］
アンドロゲン除去療法により誘導された続発性性腺機能低下症の結果としての症状の治療における、（Ｓ）−（７−シアノ−４−ピリジン−２−イルメチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−シクロペンタ［ｂ］インドール−２−イル）−カルバミン酸イソプロピルエステルの化合物、またはその薬学的に受容可能な塩の使用。
［６］
前記症状が、骨量、骨強度、筋肉量、または筋力の低下である、［５］に記載の使用。
［７］
前記症状が、性欲の減退及びホットフラッシュである、［５］に記載の使用。
［８］
アンドロゲン除去療法により誘導された続発性性腺機能低下症の結果としての症状を治療するための医薬の製造のための、（Ｓ）−（７−シアノ−４−ピリジン−２−イルメチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−シクロペンタ［ｂ］インドール−２−イル）−カルバミン酸イソプロピルエステルの化合物、またはその薬学的に受容可能な塩の使用。
［９］
前記症状が、骨量、骨強度、筋肉量、または筋力の低下である、［８］に記載の使用。
［１０］
前記症状が、性欲の減退及びホットフラッシュである、［８］に記載の使用。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５２】
工程２
【化９】
2019089795.tif 000044
中間体ＩＩと、２−ピコリル塩化物塩酸塩（ＩＩＩ）及びＫ２ＣＯ３を、ＤＭＡＣ中で反応させ、技術グレード実施例１を得る。水を添加し、ろ過することにより技術グレード実施例１を単離する。ＥｔＯＨから３回再結晶化を行い、実施例１を得る。
【外国語明細書】
2019089795000001.pdf