(57)【要約】      （修正有）【課題】内臓過敏を処置または防止する１以上の細菌株を含む組成物の提供。【解決手段】Ｂｌａｕｔｉａ属の細菌株を含む組成物。内臓過敏が、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）、クローン病、潰瘍性結腸炎、機能性消化不良または乳児疝痛に関連する、前記組成物。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
内臓過敏を処置または防止する方法における使用のための、Ｂｌａｕｔｉａ属の細菌株を含む組成物。
【請求項２】
前記内臓過敏が、ＩＢＳ、クローン病、潰瘍性結腸炎、機能性消化不良または乳児疝痛に関連する、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記内臓過敏が、ＩＢＳ、クローン病、潰瘍性結腸炎または機能性消化不良に関連する、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
ＩＢＳ、クローン病、潰瘍性結腸炎、機能性消化不良または乳児疝痛と診断された対象において内臓過敏を処置または防止する際に使用するためのものである、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
ＩＢＳ、クローン病、潰瘍性結腸炎または機能性消化不良と診断された対象において内臓過敏を処置または防止する際に使用するためのものである、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
内臓過敏の処置または防止において、硫酸塩還元細菌（ＳＲＢ）による胃腸管への定着を低減する際の使用のためのものである、請求項１〜５のいずれかに記載の組成物。
【請求項７】
内臓過敏の処置または防止において、胃腸管におけるＨ２Ｓレベルを低下させる、またはＨ２Ｓレベルの上昇を防止する際の使用のためのものである、請求項１〜６のいずれかに記載の組成物。
【請求項８】
胃腸管、特に結腸または直腸の疼痛を伴う膨張に苦しむ患者において内臓過敏を処置または防止する際の使用のためのものである、請求項１〜７のいずれかに記載の組成物。
【請求項９】
前記細菌株が、Ｂｌａｕｔｉａ  ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａの細菌株である、請求項１〜８のいずれかに記載の組成物。
【請求項１０】
前記細菌株が、Ｂｌａｕｔｉａ  ｓｔｅｒｃｏｒｉｓの細菌株である、請求項１〜８のいずれかに記載の組成物。
【請求項１１】
前記細菌株が、Ｂｌａｕｔｉａ  ｗｅｘｌｅｒａｅの細菌株である、請求項１〜８のいずれかに記載の組成物。
【請求項１２】
前記細菌株が、Ｂｌａｕｔｉａ  ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａの細菌株の１６ｓ  ｒＲＮＡ配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％または９９．９％同一である１６ｓ  ｒＲＮＡ配列を有する、請求項１〜８のいずれかに記載の組成物。
【請求項１３】
前記細菌株が、配列番号５と少なくとも９７％、９８％、９９％、９９．５％もしくは９９．９％同一である１６ｓ  ｒＲＮＡ配列を有する、または配列番号５の１６ｓ  ｒＲＮＡ配列を有する、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】
前記細菌株が、Ｂｌａｕｔｉａ  ｓｔｅｒｃｏｒｉｓの細菌株の１６ｓ  ｒＲＮＡ配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％または９９．９％同一である１６ｓ  ｒＲＮＡ配列を有する、請求項１〜８のいずれかに記載の組成物。
【請求項１５】
前記細菌株が、Ｂｌａｕｔｉａ  ｗｅｘｌｅｒａｅ の細菌株の１６ｓ  ｒＲＮＡ配列
と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％または９９．９％同一である１６ｓ  ｒＲＮＡ配列を有する、請求項１〜８のいずれかに記載の組成物。
【請求項１６】
ＩＢＳと診断された対象において内臓過敏を処置または防止する方法における使用のための、Ｂｌａｕｔｉａ  ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ種の細菌株を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１７】
内臓過敏の処置または防止において、硫酸塩還元細菌（ＳＲＢ）による胃腸管への定着を低減する、胃腸管におけるＨ２Ｓレベルを低下させる、またはＨ２Ｓレベルの上昇を防止する際の使用のための、Ｂｌａｕｔｉａ  ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ種の細菌株を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１８】
ＩＢＳと診断された対象において内臓過敏を処置または防止する方法における使用のための、Ｂｌａｕｔｉａ  ｓｔｅｒｃｏｒｉｓ種の細菌株を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１９】
内臓過敏の処置または防止において、硫酸塩還元細菌（ＳＲＢ）による胃腸管への定着を低減する、胃腸管におけるＨ２Ｓレベルを低下させる、またはＨ２Ｓレベルの上昇を防止する際の使用のための、Ｂｌａｕｔｉａ  ｓｔｅｒｃｏｒｉｓ種の細菌株を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項２０】
ＩＢＳと診断された対象において内臓過敏を処置または防止する方法における使用のための、Ｂｌａｕｔｉａ  ｗｅｘｌｅｒａｅ種の細菌株を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項２１】
内臓過敏の処置または防止において、硫酸塩還元細菌（ＳＲＢ）による胃腸管への定着を低減する、胃腸管におけるＨ２Ｓレベルを低下させる、またはＨ２Ｓレベルの上昇を防止する際の使用のための、Ｂｌａｕｔｉａ  ｗｅｘｌｅｒａｅ種の細菌株を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項２２】
経口投与用である、請求項１〜２１のいずれかに記載の組成物。
【請求項２３】
１以上の薬学的に許容可能な賦形剤または担体を含む、請求項１〜２２のいずれかに記載の組成物。
【請求項２４】
前記細菌株が、凍結乾燥されている、請求項１〜２３のいずれかに記載の組成物。
【請求項２５】
前記細菌株が、生存可能である、請求項１〜２４のいずれかに記載の組成物。
【請求項２６】
Ｂｌａｕｔｉａ属の単一株を含む、請求項１〜２５のいずれかに記載の組成物。
【請求項２７】
Ｂｌａｕｔｉａ属の細菌株を微生物共同体の部分として含む、請求項１〜２６のいずれかに記載の組成物。
【請求項２８】
請求項１〜２７のいずれかに記載の使用のための、請求項１〜２７のいずれかに記載の組成物を含む食品。
【請求項２９】
請求項１〜２７のいずれかに記載の使用のための、請求項１〜２７のいずれかに記載の組成物を含むワクチン組成物。
【請求項３０】
内臓過敏を処置または防止する方法であって、Ｂｌａｕｔｉａ属の細菌株を含む組成物を、それを必要とする患者に投与することを含む、前記方法。
【請求項３１】
Ｂｌａｕｔｉａが、Ｂｌａｕｔｉａ  ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａである、請求項３０に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
この発明は、哺乳動物の消化管から単離された細菌株を含む組成物、及び疾患の処置におけるかかる組成物の使用の分野にある。
【背景技術】
【０００２】
ヒトの腸は、子宮内では無菌と考えられているが、出生直後に様々な母体及び環境微生物に曝される。その後、微生物の定着及び遷移の動的期間が生じ、これは、分娩様式、環境、食事及び宿主遺伝子型などの因子によって影響され、これらの因子の全てが、特に若年期において、腸内微生物叢の組成に影響を及ぼす。その後、微生物叢は安定して成人様になる［１］。ヒト腸内微生物叢は、２つの主要な細菌分類（門）：Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｔｅｓ及びＦｉｒｍｉｃｕｔｅｓ；が存在度レベルにおいて多数派を占める１５００を超える種々のファイロタイプを含有する［２］及び［３］。ヒト腸の細菌定着から生じる成功裏の共生関係は、広範な代謝的、構造的、保護的及び他の有益な機能を生じさせてきた。定着した腸の代謝活性の向上は、さもなければ難消化性の食事成分が副生成物の放出と共に分解されて宿主に重要な栄養源及びさらなる健康効果をもたらすということを確実にする。同様に、腸内微生物叢の免疫学的重要性は、よく認識されており、共生細菌の導入後に機能的に再構成される損なわれた免疫系を有する無菌動物において実証されている［４、５、６］。
【０００３】
微生物叢組成の劇的な変化は、胃腸障害、例えば、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）において記録されてきた。例えば、ＣｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍクラスターＸＩＶａ及びＣｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍクラスターＸＩ（Ｆ．ｐｒａｕｓｎｉｔｚｉｉ）細菌のレベルは、ＩＢＤ患者において低減されているが、Ｅ．Ｃｏｌｉの数は増加しており、腸内の共生生物と病原性共生生物とのバランスのシフトを示唆している［７、８、９、１０及び１１］。
【０００４】
ある特定の細菌株が動物の腸において有し得る潜在的なプラス効果の認識において、種々の株が、種々の疾患の処置における使用のために提案されてきた（例えば、［１２］、［１３］、［１４］、［１５］を参照されたい）。大部分のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ及びＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ株を含めた多くの株が、種々の腸障害を処置する際の使用のために提案されてきた（レビューには［１６］を参照されたい）。また、Ｂｌａｕｔｉａ属の株が、消化生態系の微生物バランスを調節する際の使用のために提案されてきた（ＷＯ０１／８５１８７）。しかし、種々の細菌株と種々の疾患との間の関係、ならびに、特定の細菌株の、腸に対する、全身レベルでの、及びいずれか特定のタイプの疾患に対しての正確な効果は、あまり特徴付けられていない。
【０００５】
腸細菌を使用した新規の治療を開発することができるように特徴付けられる腸細菌の潜在的効果が必要とされている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】［１２］ＷＯ２０１３／０５０７９２
【特許文献２】［１３］ＷＯ０３／０４６５８０
【特許文献３】［１４］ＷＯ２０１３／００８０３９
【特許文献４】［１５］ＷＯ２０１４／１６７３３８
【特許文献５】ＷＯ０１／８５１８７
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】［１］Ｓｐｏｒ  ｅｔ  ａｌ．（２０１１）  Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．９（４）：２７９−９０．
【非特許文献２】［２］Ｅｃｋｂｕｒｇ  ｅｔ  ａｌ．（２００５）  Ｓｃｉｅｎｃｅ．１０；３０８（５７２８）：１６３５−８．
【非特許文献３】［３］Ｔａｐ  ｅｔ  ａｌ．（２００９），Ｅｎｖｉｒｏｎ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，１１（１０）：２５７４−８４．
【非特許文献４】［４］Ｍａｃｐｈｅｒｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）  Ｍｉｃｒｏｂｅｓ  Ｉｎｆｅｃｔ．３（１２）：１０２１−３５
【非特許文献５】［５］Ｍａｃｐｈｅｒｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）  Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ．５９（１２）：２０８８−９６．
【非特許文献６】［６］Ｍａｚｍａｎｉａｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００５）  Ｃｅｌｌ  １５；１２２（１）：１０７−１８．
【非特許文献７】［７］Ｆｒａｎｋ  ｅｔ  ａｌ．（２００７）  ＰＮＡＳ  １０４（３４）：１３７８０−５．
【非特許文献８】［８］Ｓｃａｎｌａｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００６）  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．４４（１１）：３９８０−８．
【非特許文献９】［９］Ｋａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（２０１０）  Ｉｎｆｌａｍｍ  Ｂｏｗｅｌ  Ｄｉｓ．１６（１２）：２０３４−４２．
【非特許文献１０】［１０］Ｍａｃｈｉｅｌｓ  ｅｔ  ａｌ．（２０１３）  Ｇｕｔ．６３（８）：１２７５−８３．
【非特許文献１１】［１１］Ｌｏｐｅｔｕｓｏ  ｅｔ  ａｌ．（２０１３），Ｇｕｔ  Ｐａｔｈｏｇｅｎｓ，５：２３
【非特許文献１２】［１６］Ｌｅｅ  ａｎｄ  Ｌｅｅ（２０１４）  Ｗｏｒｌｄ  Ｊ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．２０（２７）：８８８６−８８９７．
【発明の概要】
【０００８】
本発明者らは、内臓過敏を処置及び防止するための新規の治療を開発した。特に、本発明者らは、Ｂｌａｕｔｉａ属由来の細菌株が内臓過敏を低減させるのに有効であり得るということを確認した。実施例において記載されているように、Ｂｌａｕｔｉａ  ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａを含む組成物の経口投与は、内臓過敏及び過敏性腸症候群（ＩＢＳ）のラットモデルにおいて内臓過敏を低減させ得る。そのため、第１実施形態において、本発明は、内臓過敏を処置または防止する方法における使用のための、Ｂｌａｕｔｉａ属の細菌株を含む組成物を提供する。
【０００９】
好ましい実施形態において、本発明は、クローン病、潰瘍性結腸炎、機能性消化不良または、より好ましくは、ＩＢＳと診断された対象において内臓過敏を処置または防止する方法における使用のための、Ｂｌａｕｔｉａ属の細菌株を含む組成物を提供する。他の好ましい実施形態において、本発明は、クローン病、潰瘍性結腸炎、機能性消化不良、乳児疝痛または、より好ましくは、ＩＢＳと診断された対象において内臓過敏を処置または防止する方法における使用のための、Ｂｌａｕｔｉａ属の細菌株を含む組成物を提供する。
【００１０】
さらに好ましい実施形態において、本発明は、腹部における、好ましくは胃腸管における、最も好ましくは下部胃腸管における内臓過敏を処置または防止する際の使用のための、Ｂｌａｕｔｉａ属の細菌株を含む組成物を提供する。さらなる実施形態において、本発明の組成物は、盲腸、結腸または直腸において内臓過敏を処置または防止する際の使用のためのものである。
【００１１】
本発明の好ましい実施形態において、組成物における細菌株は、Ｂｌａｕｔｉａ  ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａのものである。近縁の株、例えば、Ｂｌａｕｔｉａ  ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａの細菌株の１６ｓ  ｒＲＮＡ配列と少なくとも９５％
、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％または９９．９％同一である１６ｓ  ｒＲＮＡ配列を有する細菌株が使用されてもよい。好ましくは、細菌株は、配列番号５と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％または９９．９％同一である１６ｓ  ｒＲＮＡ配列を有する。最も好ましくは、組成物における細菌株は、受託番号ＤＳＭ１０５０７／１４２９４で寄託されているＢｌａｕｔｉａ  ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ株である。
【００１２】
本発明のさらなる実施形態において、組成物における細菌株は、Ｂｌａｕｔｉａ  ｓｔｅｒｃｏｒｉｓのものである。近縁の株、例えばＢｌａｕｔｉａ  ｓｔｅｒｃｏｒｉｓの細菌株の１６ｓ  ｒＲＮＡ配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％または９９．９％同一である１６ｓ  ｒＲＮＡ配列を有する細菌株が使用されてもよい。好ましくは、細菌株は、配列番号１または３と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％または９９．９％同一である１６ｓ  ｒＲＮＡ配列を有する。好ましくは、配列同一性は、配列番号３に対するものである。好ましくは、本発明において使用される細菌株は、配列番号３によって表される１６ｓ  ｒＲＮＡ配列を有する。
【００１３】
本発明のさらなる実施形態において、組成物における細菌株は、Ｂｌａｕｔｉａ  ｗｅｘｌｅｒａｅのものである。近縁の株、例えば、Ｂｌａｕｔｉａ  ｗｅｘｌｅｒａｅの細菌株の１６ｓ  ｒＲＮＡ配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％または９９．９％同一である１６ｓ  ｒＲＮＡ配列を有する細菌株が使用されてもよい。好ましくは、細菌株は、配列番号２または４と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％または９９．９％同一である１６ｓ  ｒＲＮＡ配列を有する。好ましくは、配列同一性は、配列番号４に対するものである。好ましくは、本発明において使用される細菌株は、配列番号４によって表される１６ｓ  ｒＲＮＡ配列を有する。
【００１４】
ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、経口投与用である。本発明の株の経口投与は、内臓過敏を処置するのに有効であり得る。また、経口投与は、患者及び施術者にとって便利であり、腸への送達及び／または腸への部分もしくは全体定着を可能にする。
【００１５】
ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、１以上の薬学的に許容可能な賦形剤または担体を含む。
【００１６】
ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、凍結乾燥されている細菌株を含む。凍結乾燥は、細菌の送達を可能にする安定な組成物を調製するのに有効かつ便利な技術であり、実施例において有効な組成物を提供することが示されている。
【００１７】
ある特定の実施形態において、本発明は、上記に記載されている組成物を含む食品を提供する。
【００１８】
ある特定の実施形態において、本発明は、上記に記載されている組成物を含むワクチン組成物を提供する。
【００１９】
さらに、本発明は、内臓過敏を処置または防止する方法であって、Ｂｌａｕｔｉａ属の細菌株を含む組成物を投与することを含む上記方法を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】ＢＨ集団のｑＰＣＲによる測定であり、ＢＨ凍結乾燥物が与えられた動物の１４及び２８日目のＢＨの増加を示している。
【図２】膨張への動物の応答に対するＢＨ培養物及び凍結乾燥物の影響であり、ＢＨ組成物が与えられた動物に関する濃度の低減を示している。
【図３】微生物叢に対するＢＨ培養物の影響であり、１日量のＢＨ培養物が与えられたラットにおけるＳＲＢの１ｌｏｇの減少を示している。
【図４】微生物叢に対するＢＨ凍結乾燥物の影響。
【図５】微生物叢発酵−短鎖脂肪酸に対するＢＨ凍結乾燥物の影響であり、ＢＨで処置したラットの酢酸産生を示している。
【図６】微生物叢発酵−硫化物に対するＢＨ凍結乾燥物の影響であり、硫化物産生の減少を示している。
【図７】膨張への動物の応答に対するＢＨ凍結乾燥物の影響。ラットＭＩＨ  ＩＢＳ＋ＢＨ：ＣＲＤ試験。
【図８】膨張への動物の応答に対するＢＨ凍結乾燥物の影響。ラットＭＩＨ  ＩＢＳ＋ＢＨ：全データ−ＣＲＤ試験。
【図９】硫化物に対するＢＨ凍結乾燥物の影響。ラットＭＩＨ  ＩＢＳ＋ＢＨ：硫化物濃度（ｍｇ／Ｌ）。図９ａは、ＢＨ凍結乾燥物または対照溶液による処置後の各ラットについての盲腸の硫化物濃度を示す。図９ｂは、ＢＨ凍結乾燥物または対照溶液による処置後のＩＢＳ−微生物叢関連ラットにおいて測定された盲腸の硫化物濃度の平均＋／−標準偏差を示す。
【図１０】硫化物に対するＢＨ凍結乾燥物の影響。ラットＭＩＨ  ＩＢＳ＋ＢＨ：全データ−硫化物濃度（ｍｇ／Ｌ）。図１０ａは、ＢＨ凍結乾燥物または対照溶液による処置後の各ラットについての盲腸の硫化物濃度を示す。図１０ｂは、ＢＨ凍結乾燥物または対照溶液による処置後のＩＢＳ−微生物叢関連ラットにおいて測定された盲腸の硫化物濃度の平均＋／−標準偏差を示す。
【図１１】異なる濃度の細菌種が与えられた健常なＨＩＭラットの糞便サンプルにおけるＢ．ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａのＨＩＭラット−ＲＴ−ＰＣＲ定量での投与研究。
【図１２】健常なＨＩＭラットへの経口投与（１０９／日）後のＢ．ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａの通過時間。
【図１３】１４日間投与後（Ｂ．ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａを１０１０／日／ラットで投与）の健常なＨＩＭラット（ＲＴ−ＰＣＲ定量）の糞便及び盲腸サンプルにおいて見られるＢ．ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａレベルの比較。
【図１４】健常なＨＩＭラットの盲腸内容物における短鎖脂肪酸産生（ＲＭＮ  １Ｈ）に対するＢ．ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ（１０１０／日で１４日間）の効果。
【図１５】ＩＢＳ−ＨＩＭラットにおける微生物集団に対するＢ．ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ投与の影響。
【図１６】Ｂ．ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａで処置した（１０１０／日で１４日間）ＩＢＳ−ＨＩＭラットにおける硫化物産生。対照ラットは処置しなかった。
【図１７】第一相臨床試験の投与期間（１〜１６日目）の間の患者の症状の変化。
【図１８】第一相臨床試験のウオッシュアウト期間の間の患者の症状の変化。
【図１９】Ｂ．ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ（ＢｌａｕｔｉＸ）を含む組成物で２８日間処置したまたは処置していないＩＢＳ−ＨＭＡラットの糞便サンプルにおけるＢ．ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ集団のｑＰＣＲ評価。
【図２０】Ｂ．ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ（ＢｌａｕｔｉＸ）で２８日間処置したまたは処置していないＩＢＳ−ＨＭＡラットにおける、及び非処置の健常なＨＭＡラットにおける結腸直腸膨張への腹部の応答。
【図２１】対照溶液と比較したＢ．ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ（ＢｌａｕｔｉＸ）投与後のＩＢＳ  ＨＭＡ−ラット糞便サンプルにおける細菌の計数。
【図２２】Ｂ．ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ（Ｂｌａｕｔｉｘ）で２８日間処置したまたは処置していないＩＢＳ  ＨＭＡラットの盲腸サンプルにおける硫化物濃度。
【図２３】Ｂ．ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ（Ｂｌａｕｔｉｘ）で２８日間処置したまたは処置していないＩＢＳ−ＨＭＡラットの盲腸サンプルにおける短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）濃度。図２３ａは、全ＳＣＦＡの濃度を示す。図２３ｂは、酢酸、プロピオン酸及び酪酸の濃度を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
細菌株
本発明の組成物は、Ｂｌａｕｔｉａ属の細菌株を含む。実施例は、この属の細菌が、内臓過敏を処置または防止するのに有用であることを実証している。好ましい細菌株は、Ｂｌａｕｔｉａ  ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ、Ｂｌａｕｔｉａ  ｓｔｅｒｃｏｒｉｓ及びＢｌａｕｔｉａ  ｗｅｘｌｅｒａｅ種のものである。本発明で使用される他の好ましい細菌株は、Ｂｌａｕｔｉａ  ｐｒｏｄｕｃｔａ、Ｂｌａｕｔｉａ  ｃｏｃｃｏｉｄｅｓ及びＢｌａｕｔｉａ  ｈａｎｓｅｎｉｉである。
【００２２】
本発明で使用されるＢｌａｕｔｉａ株の例として、Ｂｌａｕｔｉａ  ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ、Ｂ．ｓｔｅｒｃｏｒｉｓ、Ｂ．ｆａｅｃｉｓ、Ｂ．ｃｏｃｃｏｉｄｅｓ、Ｂ．ｇｌｕｃｅｒａｓｅａ、Ｂ．ｈａｎｓｅｎｉｉ、Ｂ．ｌｕｔｉ、Ｂ．ｐｒｏｄｕｃｔａ、Ｂ．ｓｃｈｉｎｋｉｉ及びＢ．ｗｅｘｌｅｒａｅが挙げられる。Ｂｌａｕｔｉａ種は、球形または楕円形のいずれであってもよいグラム反応陽性の非運動性細菌であり、全てが、グルコース発酵の主な最終産物として酢酸を産生する偏性嫌気性菌である［１７］。Ｂｌａｕｔｉａは、ヒト腸から単離されてよいが、Ｂ．ｐｒｏｄｕｃｔａは、敗血症サンプルから単離されたものである。
【００２３】
Ｂｌａｕｔｉａ  ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ（Ｒｕｍｉｎｏｃｏｃｃｕｓ  ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃｕｓとしてこれまでに知られている）は、哺乳動物の腸から単離されており、偏性嫌気性であり、また、Ｈ２／ＣＯ２を、ヒトの栄養及び健康に重要であり得る酢酸塩に代謝する。Ｂｌａｕｔｉａ  ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａのタイプの株は、Ｓ５ａ３３＝ＤＳＭ１０５０７＝ＪＣＭ１４６５６である。Ｂｌａｕｔｉａ  ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ株Ｓ５ａ３６の１６Ｓ  ｒＲＮＡ遺伝子配列のＧｅｎＢａｎｋ受託番号は、Ｘ９５６２４．１である（配列番号５として本明細書に開示されている）。この例示的なＢｌａｕｔｉａ  ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ株は、［１７］及び［１８］に記載されている。Ｓ５ａ３３株及びＳ５ａ３６株は、健常な対象の糞便サンプルから単離した株の２つのサブクローンに相当する。これらは、同一の形態、生理機能及び代謝を示し、同一の１６Ｓ  ｒＲＮＡ配列を有している。そのため、いくつかの実施形態において、本発明で使用されるＢｌａｕｔｉａ  ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａは、配列番号５の１６Ｓ  ｒＲＮＡ配列を有する。
【００２４】
受託番号ＤＳＭ１０５０７で、また、受託番号ＤＳＭ１４２９４でも寄託されているＢｌａｕｔｉａ  ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ細菌を実施例において試験した。該細菌は、本明細書において株ＢＨとも称される。株ＢＨを、１９９６年１月に受託番号ＤＳＭ１０５０７で「Ｒｕｍｉｎｏｃｏｃｃｕｓ  ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃｕｓ」として、また、２００１年５月１０日には「Ｓ５ａ３３」として受託番号ＤＳＭ１４２９４でもＤｅｕｔｓｃｈｅ  Ｓａｍｍｌｕｎｇ  ｖｏｎ  Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ［Ｇｅｒｍａｎ  Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ］（Ｍａｓｃｈｅｒｏｄｅｒ  Ｗｅｇ  １ｂ，３８１２４  Ｂｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）に寄託した。寄託者は、ＩＮＲＡ  Ｌａｂｏｒａｔｏｉｒｅ  ｄｅ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｅ  ＣＲ  ｄｅ  Ｃｌｅｒｍｏｎｔ−Ｆｅｒｒａｎｄ／Ｔｈｅｉｘ  ６３１２２
Ｓａｉｎｔ  Ｇｅｎｅｓ  Ｃｈａｍｐａｎｅｌｌｅ，Ｆｒａｎｃｅである。寄託物の所
有者は、譲渡により４Ｄ  Ｐｈａｒｍａ  Ｐｌｃに移った。
【００２５】
Ｂｌａｕｔｉａ  ｓｔｅｒｃｏｒｉｓ株ＧＡＭ６−１Ｔの１６Ｓ  ｒＲＮＡ遺伝子配列のＧｅｎＢａｎｋ受託番号はＨＭ６２６１７７である（本明細書において配列番号１と開示されている）。例示的なＢｌａｕｔｉａ  ｓｔｅｒｃｏｒｉｓ株は、［１９］に記載されている。Ｂｌａｕｔｉａ  ｗｅｘｌｅｒａｅのタイプの株は、ＷＡＬ１４５０７＝ＡＴＣＣ  ＢＡＡ−１５６４＝ＤＳＭ１９８５０である［１７］。Ｂｌａｕｔｉａ  ｗｅｘｌｅｒａｅ株ＷＡＬ１４５０７Ｔの１６Ｓ  ｒＲＮＡ遺伝子配列のＧｅｎＢａｎｋ受託番号はＥＦ０３６４６７である（本明細書において配列番号２と開示されている）。この例示的なＢｌａｕｔｉａ  ｗｅｘｌｅｒａｅ株は、［１７］に記載されている。
【００２６】
好ましいＢｌａｕｔｉａ  ｓｔｅｒｃｏｒｉｓ株は、本明細書において株８３０とも称されている、受託番号ＮＣＩＭＢ４２３８１で寄託されている株である。８３０株の１６Ｓ  ｒＲＮＡ配列は、配列番号３において付与されている。株８３０を、「Ｂｌａｕｔｉａ  ｓｔｅｒｃｏｒｉｓ８３０」として２０１５年３月１２日にＧＴ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ  Ｌｔｄ．（Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎ  Ｂｕｉｌｄｉｎｇ，Ａｂｅｒｄｅｅｎ，ＡＢ２５  ２ＺＳ，Ｓｃｏｔｌａｎｄ）によって国際寄託当局ＮＣＩＭＢ，Ｌｔｄ．（Ｆｅｒｇｕｓｏｎ  Ｂｕｉｌｄｉｎｇ，Ａｂｅｒｄｅｅｎ，ＡＢ２１
９ＹＡ，Ｓｃｏｔｌａｎｄ）に寄託し、受託番号ＮＣＩＭＢ４２３８１が割り当てられた。ＧＴ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ  Ｌｔｄ．は、その後、その名称を４Ｄ  Ｐｈａｒｍａ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌｉｍｉｔｅｄに変更した。
【００２７】
好ましいＢｌａｕｔｉａ  ｗｅｘｌｅｒａｅ株は、本明細書において株ＭＲＸ００８とも称されている、受託番号ＮＣＩＭＢ４２４８６で寄託されている株である。ＭＲＸ００８株の１６Ｓ  ｒＲＮＡ配列は、配列番号４において付与されている。株ＭＲＸ００８を、「Ｂｌａｑｕｔｉａ／Ｒｕｍｉｎｏｃｏｃｃｕｓ  ＭＲｘ０００８」として２０１５年１１月１６日に４Ｄ  Ｐｈａｒｍａ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌｔｄ．（Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎ  Ｂｕｉｌｄｉｎｇ，Ａｂｅｒｄｅｅｎ，ＡＢ２５  ２ＺＳ，Ｓｃｏｔｌａｎｄ）によって国際寄託当局ＮＣＩＭＢ、Ｌｔｄ．（Ｆｅｒｇｕｓｏｎ  Ｂｕｉｌｄｉｎｇ，Ａｂｅｒｄｅｅｎ，ＡＢ２１  ９ＹＡ，Ｓｃｏｔｌａｎｄ）に寄託し、受託番号ＮＣＩＭＢ４２４８６が割り当てられた。
【００２８】
実施例において試験されている株と近縁の細菌株もまた、内臓過敏を処置または防止するのに有効であると期待される。ある特定の実施形態において、本発明において使用される細菌株は、Ｂｌａｕｔｉａ  ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａの細菌株の１６ｓ  ｒＲＮＡ配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％または９９．９％同一である１６ｓ  ｒＲＮＡ配列を有する。好ましくは、本発明において使用される細菌株は、配列番号５と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％または９９．９％同一である１６ｓ  ｒＲＮＡ配列を有する。
【００２９】
ある特定の実施形態において、本発明において使用される細菌株は、Ｂｌａｕｔｉａ  ｓｔｅｒｃｏｒｉｓの細菌株の１６ｓ  ｒＲＮＡ配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％または９９．９％同一である１６ｓ  ｒＲＮＡ配列を有する。好ましくは、本発明において使用される細菌株は、配列番号１または配列番号３と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％または９９．９％同一である１６ｓ  ｒＲＮＡ配列を有する。好ましくは、配列同一性は、配列番号３に対するものである。好ましくは、本発明において使用される細菌株は、配列番号３によって表される１６ｓ  ｒＲＮＡ配列を有する。ある特定の実施形態において、本発明において使用される細菌株は、Ｂｌａｕｔｉａ  ｗｅｘｌｅｒａｅの細菌株の１６ｓ  ｒＲＮＡ配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％または９９．９％同一
である１６ｓ  ｒＲＮＡ配列を有する。好ましくは、本発明において使用される細菌株は、配列番号２または配列番号４と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％または９９．９％同一である１６ｓ  ｒＲＮＡ配列を有する。好ましくは、配列同一性は、配列番号４に対するものである。好ましくは、本発明において使用される細菌株は、配列番号４によって表される１６ｓ  ｒＲＮＡ配列を有する。
【００３０】
受託番号ＤＳＭ１０５０７／１４２９４で寄託されている細菌のバイオタイプである、または受託番号ＮＣＩＭＢ４２３８１及びＮＣＩＭＢ４２４８６で寄託されている細菌のバイオタイプである細菌株もまた、内臓過敏を処置または防止するのに効果的であることが期待されている。バイオタイプは、同じまたは非常に類似する生理的及び生化学的特徴を有する近縁の株である。
【００３１】
受託番号ＤＳＭ１０５０７／１４２９４、ＮＣＩＭＢ４２３８１またはＮＣＩＭＢ４２４８６で寄託されている細菌のバイオタイプであり、本発明での使用に好適である株は、受託番号ＤＳＭ１０５０７／１４２９４、ＮＣＩＭＢ４２３８１またはＮＣＩＭＢ４２４８６で寄託されている細菌の他のヌクレオチド配列をシークエンスすることによって同定されてよい。例えば、実質的に全ゲノムがシークエンスされてよく、本発明で使用するバイオタイプ株は、その全ゲノムの少なくとも８０％にわたって（例えば、少なくとも８５％、９０％、９５％もしくは９９％にわたって、またはその全ゲノムにわたって）少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％または９９．９％の配列同一性を有していてよい。例えば、いくつかの実施形態において、バイオタイプ株は、そのゲノムの少なくとも９８％にわたって少なくとも９８％の配列同一性、またはそのゲノムの９９％にわたって少なくとも９９％の配列同一性を有する。バイオタイプ株を同定するのに使用される他の好適な配列は、ｈｓｐ６０または反復配列、例えば、ＢＯＸ、ＥＲＩＣ、（ＧＴＧ）５、もしくはＲＥＰまたは［２０］を含んでいてよい。バイオタイプ株は、受託番号ＤＳＭ１０５０７／１４２９４、ＮＣＩＭＢ４２３８１またはＮＣＩＭＢ４２４８６で寄託されている細菌の対応する配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％または９９．９％の配列同一性を有する配列を有していてよい。いくつかの実施形態において、バイオタイプ株は、ＤＳＭ１０５０７／１４２９４として寄託されているＢｌａｕｔｉａ  ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ株の対応する配列と少なくとも９７％、９８％、９９％、９９．５％または９９．９％の配列同一性を有する配列を有しており、配列番号５と少なくとも９９％同一である（例えば、少なくとも９９．５％または少なくとも９９．９％同一である）１６Ｓ  ｒＲＮＡ配列を含む。いくつかの実施形態において、バイオタイプ株は、ＤＳＭ１０５０７／１４２９４として寄託されているＢｌａｕｔｉａ  ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ株の対応する配列と少なくとも９７％、９８％、９９％、９９．５％または９９．９％の配列同一性を有する配列を有し、配列番号５の１６Ｓ  ｒＲＮＡ配列を有する。
【００３２】
代替的には、受託番号ＤＳＭ１０５０７／１４２９４、ＮＣＩＭＢ４２３８１またはＮＣＩＭＢ４２４８６で寄託されている細菌のバイオタイプでありかつ本発明での使用に好適である株は、受託番号ＤＳＭ１０５０７／１４２９４の寄託物、受託番号ＮＣＩＭＢ４２３８１の寄託物、または受託番号ＮＣＩＭＢ４２４８６の寄託物、ならびに制限断片分析及び／またはＰＣＲ分析を使用することによって、例えば、蛍光増幅断片長多型分析（ＦＡＦＬＰ）及び反復ＤＮＡ要素（ｒｅｐ）−ＰＣＲ指紋検査、またはタンパク質プロファイリング、または部分１６Ｓもしくは２３ｓ  ｒＤＮＡシークエンシングを使用することによって同定されてよい。好ましい実施形態において、かかる技術は、他のＢｌａｕｔｉａ  ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ、Ｂｌａｕｔｉａ  ｓｔｅｒｃｏｒｉｓまたはＢｌａｕｔｉａ  ｗｅｘｌｅｒａｅ株を同定するのに使用されてよい。
【００３３】
ある特定の実施形態において、受託番号ＤＳＭ１０５０７／１４２９４、ＮＣＩＭＢ４
２３８１またはＮＣＩＭＢ４２４８６で寄託されている細菌のバイオタイプでありかつ本発明での使用に好適である株は、増幅リボソームＤＮＡ制限分析（ＡＲＤＲＡ）によって分析されるとき、例えば、Ｓａｕ３ＡＩ制限酵素（例示的な方法及びガイダンスについては、例えば［２１］を参照されたい）を使用するとき、受託番号ＤＳＭ１０５０７／１４２９４、ＮＣＩＭＢ４２３８１またはＮＣＩＭＢ４２４８６で寄託されている細菌と同じパターンを付与する株である。代替的には、バイオタイプ株は、受託番号ＤＳＭ１０５０７／１４２９４、ＮＣＩＭＢ４２３８１またはＮＣＩＭＢ４２４８６で寄託されている細菌と同じ炭水化物発酵パターンを有する株として同定される。
【００３４】
本発明の組成物及び方法において有用である他のＢｌａｕｔｉａ株、例えば、受託番号ＤＳＭ１０５０７／１４２９４、ＮＣＩＭＢ４２３８１またはＮＣＩＭＢ４２４８６で寄託されている細菌のバイオタイプは、実施例において記載されているアッセイを含め、いずれの適切な方法またはストラテジーを使用して同定されてもよい。例えば、本発明で使用される株は、細菌を培養してラットに投与し、膨張アッセイ（distension assay）において試験することによって同定されてよい。特に、受託番号ＤＳＭ１０５０７／１４２９４、ＮＣＩＭＢ４２３８１またはＮＣＩＭＢ４２４８６で寄託されている細菌と同様の成長パターン、代謝型及び／または表面抗原を有する細菌株は、本発明において有用であり得る。有用な株は、ＤＳＭ１０５０７／１４２９４、ＮＣＩＭＢ４２３８１またはＮＣＩＭＢ４２４８６株に匹敵する微生物叢調節活性を有する。特に、バイオタイプ株は、実施例において示されている効果に匹敵する、内臓過敏モデルに対する効果を引き出し、これは、実施例において記載されている培養及び投与プロトコルを使用することによって同定されてよい。
【００３５】
本発明の特に好ましい株は、受託番号ＤＳＭ１０５０７／１４２９４で寄託されているＢｌａｕｔｉａ  ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ株である。これは、実施例において試験されて、疾患を処置するのに効果的であることが示される例示的なＢＨ株である。そのため、本発明は、特に、本明細書に記載されている疾患の治療に使用される、受託番号ＤＳＭ１０５０７／１４２９４で寄託されているＢｌａｕｔｉａ  ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ株またはその誘導体の細胞、例えば単離細胞を提供する。
【００３６】
受託番号ＤＳＭ１０５０７／１４２９４、ＮＣＩＭＢ４２３８１またはＮＣＩＭＢ４２４８６で寄託されている株の誘導体は、娘株（子孫）、またはオリジナルから培養された（サブクローニングされた）株であってよい。本発明の株の誘導体は、生物活性を取り除くことなく、例えば、遺伝子レベルで修飾されてよい。特に、本発明の誘導体株は、治療的に活性である。誘導体株は、オリジナルのＤＳＭ１０５０７／１４２９４、ＮＣＩＭＢ４２３８１またはＮＣＩＭＢ４２４８６株と匹敵する微生物叢調節活性を有する。特に、誘導体株は、実施例において示されている効果と匹敵する、内臓過敏モデルに対しての効果を引き出し、これは、実施例において記載されている培養及び投与プロトコルを使用することによって同定されてよい。ＤＳＭ１０５０７／１４２９４株の誘導体は、概して、ＤＳＭ１０５０７／１４２９４株のバイオタイプである。ＮＣＩＭＢ４２３８１株の誘導体は、概して、ＮＣＩＭＢ４２３８１株のバイオタイプである。ＮＣＩＭＢ４２４８６株の誘導体は、概して、ＮＣＩＭＢ４２４８６株のバイオタイプである。
【００３７】
受託番号ＤＳＭ１０５０７／１４２９４で寄託されているＢｌａｕｔｉａ  ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ株の細胞への言及は、受託番号ＤＳＭ１０５０７／１４２９４で寄託されている株と同じ安全及び治療効能特性を有するいずれの細胞も包含し、かかる細胞は本発明によって包含される。受託番号ＮＣＩＭＢ４２３８１で寄託されているＢｌａｕｔｉａ  ｓｔｅｒｃｏｒｉｓ株の細胞への言及は、受託番号ＮＣＩＭＢ４２３８１で寄託されている株と同じ安全及び治療効能特性を有するいずれの細胞も包含し、かかる細胞は本発明によって包含される。受託番号ＮＣＩＭＢ４２４８６で寄託されているＢｌａ
ｕｔｉａ  ｗｅｘｌｅｒａｅ株の細胞への言及は、受託番号ＮＣＩＭＢ４２４８６で寄託されている株と同じ安全及び治療効能特性を有するいずれの細胞も包含し、かかる細胞は本発明によって包含される。
【００３８】
好ましい実施形態において、本発明の組成物における細菌株は生存可能であり、腸に部分的または全体的に定着することが可能である。
【００３９】
治療的使用
好ましい実施形態において、本発明の組成物は、内臓過敏を処置する際の使用のためのものである。内臓過敏は、胸部、骨盤内、または腹部臓器（器官）の侵害受容器の活性化から結果として生じる、腹部領域に位置する、主観的に疼痛を伴う知覚によって特徴付けられる特定のタイプの疼痛である。内臓過敏は、概して拡散し、局所化が困難であるため、概してより鋭くかつより局所化している体性痛とは対照をなしている。また、内臓過敏は、体性痛とは違って、具体的な構造的病変とは概して関連しない。内臓侵害受容器は、皮膚及び大部分の他の非内臓侵害受容器とは本質的に異なる［２２］。
【００４０】
内臓過敏は、腹部において概して経験されるが、全ての腹部疼痛が内臓過敏であるというわけではない。対照的に、腹部疼痛には多くの潜在的原因があり、腹部疼痛は、体性痛、関連痛または内臓痛である場合がある。腹部において、体性痛は、炎症器官が原因である場合があり、概して鋭い痛みであり局所化されている。腹部疼痛は、身体（皮膚及び筋肉）過敏症の状態である線維筋痛が原因である場合がある。関連痛は、罹病器官から遠位の皮膚部位において感じられる。
【００４１】
内臓過敏は、多くの場合、機能性消化不良及び過敏性腸症候群（ＩＢＳ）と関連する。しかし、機能性消化不良及びＩＢＳに関連する全ての疼痛が内臓過敏であるというわけではない。実際、ＩＢＳを罹っている多くの患者もまた、様々な身体症状を、腹部領域（背痛、胸焼け）及び非腹部領域（腸から体部位的に遠位の体領域における偏頭痛、性交疼痛、筋肉痛）において示す［２３］。
【００４２】
いくつかの実施形態において、疾患または状態の病因は、腸に影響する。いくつかの実施形態において、疾患または状態の病因は、腸に影響しない。いくつかの実施形態において、疾患または状態の病因は、腸において局所化されていない。いくつかの実施形態において、処置または防止は、腸以外の部位で生じる。いくつかの実施形態において、処置または防止は、腸において、また、腸以外の部位においても生じる。ある特定の実施形態において、疾患または状態は全身性である。
【００４３】
内臓過敏は、内臓痛としても知られており、これら２つの用語は、本明細書において互換的に使用される。
【００４４】
実施例において実証されているように、本発明の細菌組成物は、内臓過敏を低減するのに有効であり得る。特に、本発明の細菌組成物は、多くの患者に影響する内臓過敏の兆候である結腸直腸膨張に対する応答を低減することができる。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、腹部における、好ましくは胃腸管における、最も好ましくは下部胃腸管における内臓過敏を処置または防止する際の使用のためのものである。さらなる実施形態において、本発明の組成物は、盲腸、結腸または直腸において内臓過敏を処置または防止する際の使用のためのものである。
【００４５】
好ましい実施形態において、本発明の組成物は、クローン病、潰瘍性結腸炎、機能性消化不良、乳児疝痛または、より好ましくは、ＩＢＳに関連する内臓過敏を処置または防止する際の使用のためのものである。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、クロ
ーン病、潰瘍性結腸炎、機能性消化不良、乳児疝痛、または、より好ましくは、ＩＢＳと診断された対象において内臓過敏を処置または防止する際の使用のためのものである。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、クローン病、潰瘍性結腸炎、機能性消化不良、乳児疝痛、または、より好ましくは、ＩＢＳの処置において内臓過敏を処置または防止する際の使用のためのものである。
【００４６】
好ましい実施形態において、本発明の組成物は、クローン病、潰瘍性結腸炎、機能性消化不良または、より好ましくは、ＩＢＳに関連する内臓過敏を処置または防止する際の使用のためのものである。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、クローン病、潰瘍性結腸炎、機能性消化不良または、より好ましくは、ＩＢＳと診断された対象において内臓過敏の処置または防止における使用のためのものである。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、クローン病、潰瘍性結腸炎、機能性消化不良または、より好ましくは、ＩＢＳの処置において内臓過敏を処置または防止する際の使用のためのものである。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、胃腸管、特に結腸または直腸の疼痛を伴う膨張に苦しむ患者において内臓過敏を処置する際の使用のためのものである。
【００４７】
ＩＢＳ及び他の腸状態に関連する不快感及び苦痛のある特定の態様は、胃腸管におけるガスの過剰生成及びこれらの蓄積されたガスのかさ体積が原因である場合がある。種々のガスの体積が増加することで、例えば、腹部膨満を結果として生じさせる場合がある。実施例において示されているように、本発明の細菌組成物は、ＩＢＳ及び他の腸状態の特定の態様−内臓過敏を処置するのに有効であり得る。いずれの理論にも拘束されることを望まないが、内臓過敏に対する本発明の細菌組成物の観察される効果は、特定のガス−Ｈ２Ｓに対する細菌の効果、及び腸においてＨ２Ｓを合成する硫酸塩還元細菌（ＳＲＢ）に対する効果に関連し得る。Ｈ２Ｓは、疼痛シグナル伝達分子として重要な役割を有し得、また、実施例において観察される内臓過敏に対する本発明の組成物の効果は、ガス体積に関係するいずれの膨満効果からも独立して疼痛シグナル伝達に影響することによって内臓過敏に寄与し得る、腸におけるＨ２Ｓの産生を低減することに関係し得る。実施例は、本発明の細菌組成物が、ＳＲＢを低減しかつＨ２Ｓを低減するのに有効であり得ることを実証している。いくつかの実施形態において、本発明の細菌組成物は、盲腸においてＳＲＢを低減しかつ／またはＨ２Ｓを低減する。ＳＲＢは、エネルギーの発生に硫酸還元を使用する嫌気性細菌であり、ＳＲＢの例として、Ｄｅｓｕｌｆｏｖｉｂｒｉｏ属、特に、最も豊富な種であるＤｅｓｕｌｆｏｖｉｂｒｉｏ  ｐｉｇｅｒ属のメンバー、また、Ｄｅｓｕｌｆｏｂａｃｔｅｒ、Ｄｅｓｕｌｆｏｂｕｌｂｕｓ及びＤｅｓｕｌｆｏｔｏｍａｃｕｌｕｍ属のメンバーも挙げられる。
【００４８】
ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、内臓過敏の処置においてＳＲＢによる胃腸管への定着を低減する際の使用のためのものである。かかる実施形態において、組成物は、好ましくは細菌培養物の形態であってよい。かかる実施形態において、組成物は、好ましくは凍結乾燥物であってよい。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、内臓過敏の処置において胃腸管におけるＨ２Ｓレベルを低下させるまたはＨ２Ｓレベルの上昇を防止する際の使用のためのものである。かかる実施形態において、組成物は、好ましくは凍結乾燥物であってよい。
【００４９】
ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、内臓過敏の処置においてＳＲＢによる胃腸管への定着、群生及び／または集団レベルを低減する際の使用のためのものである。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、内臓過敏の処置においてＳＲＢによる盲腸への定着、群生及び／または集団レベルを低減する際の使用のためのものである。
【００５０】
好ましい実施形態において、本発明の組成物は、ＩＢＳに関連する内臓過敏の処置において、ＳＲＢによる胃腸管への定着を低減する、Ｈ２Ｓレベルを低下させる、またはＨ２
Ｓレベルの上昇を防止する際の使用のためのものである。さらなる実施形態において、本発明の組成物は、クローン病、潰瘍性結腸炎、機能性消化不良または乳児疝痛に関連する内臓過敏の処置において、例えば、クローン病、潰瘍性結腸炎または機能性消化不良に関連する内臓過敏の処置において、ＳＲＢによる胃腸管への定着を低減する、Ｈ２Ｓレベルを低下させる、またはＨ２Ｓレベルの上昇を防止する際の使用のためのものである。
【００５１】
好ましい実施形態において、本発明の組成物は、ＩＢＳに関連する内臓過敏の処置において、ＳＲＢによる胃腸管への定着、群生及び／もしくは集団レベルを低減する、Ｈ２Ｓレベルを低下させる、またはＨ２Ｓレベルの上昇を防止する際の使用のためのものである。さらなる実施形態において、本発明の組成物は、クローン病、潰瘍性結腸炎、機能性消化不良または乳児疝痛に関連する内臓過敏の処置において、例えば、クローン病、潰瘍性結腸炎または機能性消化不良に関連する内臓過敏の処置において、ＳＲＢによる胃腸管への定着、群生及び／もしくは集団レベルを低減する、Ｈ２Ｓレベルを低下させる、またはＨ２Ｓレベルの上昇を防止する際の使用のためのものである。
【００５２】
好ましい実施形態において、本発明の組成物は、腹部における、好ましくは胃腸管における、より好ましくは下部胃腸管における、盲腸における、結腸における、または直腸における内臓過敏の処置において、ＳＲＢによる胃腸管への定着を低減する、Ｈ２Ｓレベルを低下させる、またはＨ２Ｓレベルの上昇を防止する際の使用のためのものである。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、腹部における、好ましくは胃腸管における、より好ましくは下部胃腸管における、盲腸における、結腸における、または直腸における内臓過敏の処置において、ＳＲＢによる胃腸管への定着、群生及び／もしくは集団レベルを低減する、Ｈ２Ｓレベルを低下させる、またはＨ２Ｓレベルの上昇を防止する際の使用のためのものである。
【００５３】
ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、ＳＲＢによる胃腸管への定着を処置する、防止するまたは低減する方法における使用のためのものである。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、ＳＲＢによる胃腸管への定着、群生及び／または集団レベルを処置する、防止するまたは低減する方法における使用のためのものである。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、胃腸管におけるＨ２Ｓレベルを低下させるまたはＨ２Ｓレベルの上昇を防止する方法における使用のためのものである。
【００５４】
ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、例えば、健常な対象、または健常な対象の集団と比較したとき、胃腸管におけるＳＲＢ及び／またはＨ２Ｓのレベルの増加を示すまたは示すことが予期される患者を処置する際の使用のためのものである。
【００５５】
ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、抗生物質処置を受けているもしくは受けた、または細菌性胃腸炎に罹患しているもしくは罹患していた対象において内臓過敏を防止する際の使用のためのものである。抗生物質処置及び細菌性胃腸炎は、内臓過敏より前に起こる場合がありかつ本発明の組成物によって防止される場合がある腸内微生物叢の変化に関連する。本発明の組成物は、抗生物質処置と同時に投与されてよい。
【００５６】
好ましい実施形態において、本発明の組成物による処置は、内臓過敏の低減、ＳＲＢによる定着の低減、及び／またはＨ２Ｓレベルの低減を結果として生じさせる。
【００５７】
内臓過敏の処置または防止とは、例えば、症状の重篤度の軽減、または患者にとって問題である増悪の頻度もしくは誘因の範囲の低減を称してよい。例えば、いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、重篤な内臓過敏を処置または防止する際の使用のためのものである。いくつかの実施形態において、重篤な内臓過敏を有する対象は、クローン病、潰瘍性結腸炎、機能性消化不良、乳児疝痛、または、より好ましくは、ＩＢＳと診断さ
れた対象である。いくつかの実施形態において、重篤な内臓過敏を有する対象は、クローン病、潰瘍性結腸炎、機能性消化不良または、より好ましくは、ＩＢＳと診断された対象である。
【００５８】
投与の形態
好ましくは、本発明の組成物は、本発明の細菌株による腸への送達及び／または腸への部分もしくは全体定着を可能にするために胃腸管に投与されるべきである。概して、本発明の組成物は、経口で投与されるが、これらは、経直腸的に、鼻腔内に、または頬側もしくは舌下経路を介して投与されてよい。
【００５９】
ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、フォームとして、スプレーまたはゲルとして投与されてよい。
【００６０】
ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、坐薬、例えば肛門坐薬として、例えば、カカオ脂（ココアバター）、合成硬質脂肪（例えば、坐剤用基材、ウィテップゾール）、グリセロ−ゼラチン、ポリエチレングリコール、または石鹸グリセリン組成物の形態で投与されてよい。
【００６１】
ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、チューブ、例えば、鼻腔栄養チューブ、経口胃チューブ、胃チューブ、経空腸チューブ（Ｊチューブ）、経皮的内視鏡下胃瘻造設術（ＰＥＧ）、またはポート、例えば胃、空腸及び他の好適なアクセスポートへのアクセスを付与する胸壁ポートを介して胃腸管に投与される。
【００６２】
本発明の組成物は、一度で投与されてよく、または処置レジメンの部分として逐次的に投与されてよい。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、連日投与されるべきである。実施例は、連日投与が、内臓過敏のラットモデルにおいて成功裏に定着及び臨床的利益を付与することを実証している。
【００６３】
実施例はまた、ＢＨ投与は、腸への永久定着を結果として生じない場合があり、そのため、長期にわたる定期的投与が、より大きな治療的利益を付与する場合があることも実証している。そのため、実施例は、連日投与に従った、結腸への本発明の細菌株の成功裏の送達を示している。
【００６４】
したがって、ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、例えば毎日、２日おきに、または週１回、長期にわたって、例えば少なくとも１週間、２週間、１ヶ月間、２ヶ月間、６ヶ月間、または１年間定期的に投与される。
【００６５】
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、７日間、１４日間、１６日間、２１日間もしくは２８日間、または７日、１４日、１６日、２１日もしくは２８日以下の間投与される。例えば、いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、１６日間投与される。
【００６６】
本発明のある特定の実施形態において、本発明による処置は、患者の腸内微生物叢のアセスメントによって達成される。処置は、本発明の株の送達及び／またはそれによる部分的もしくは全体的定着が達成されず、その結果、効能が観察されないことになるとき、繰り返されてよく、あるいは、処置は、送達及び／または部分的もしくは全体的定着が成功裏でありかつ効能が観察されるときに中止されてよい。
【００６７】
ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、妊娠した動物、例えば、哺乳動物、例えば、ヒトに、その子宮内の胎児及び／または生まれた後の小児において内臓過敏が発
症するのを防止するために投与されてよい。
【００６８】
本発明の組成物は、内臓過敏または内臓過敏に関連する疾患もしくは状態と診断された、あるいは内臓過敏のリスクがあると同定された患者に投与されてよい。組成物は、健常な患者における内臓過敏の発症を防止するための予防対策として投与されてもよい。
【００６９】
本発明の組成物は、異常な腸内微生物叢を有すると同定されている患者に投与されてよい。例えば、患者は、Ｂｌａｕｔｉａ、特にＢｌａｕｔｉａ  ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ、Ｂｌａｕｔｉａ  ｓｔｅｒｃｏｒｉｓまたはＢｌａｕｔｉａ  ｗｅｘｌｅｒａｅによる定着が低減されているか、または該定着がないかであり得る。
【００７０】
本発明の組成物は、食品、例えば栄養補助食品として投与されてよい。
【００７１】
概して、本発明の組成物は、ヒトの処置のためのものであるが、単胃哺乳動物、例えば、家禽、ブタ、ネコ、イヌ、ウマまたはウサギを含めた動物を処置するのに使用されてよい。本発明の組成物は、動物の成長及びパフォーマンスを向上させるのに有用である場合がある。動物に投与されるとき、経口胃管栄養法が使用されてよい。
【００７２】
いくつかの実施形態において、組成物が投与されるべき対象は、ヒト成人である。いくつかの実施形態において、組成物が投与されるべき対象は、ヒト乳児である。
【００７３】
組成物
概して、本発明の組成物は、細菌を含む。本発明の好ましい実施形態において、組成物は、凍結乾燥形態で調合される。例えば、本発明の組成物は、本発明の細菌株を含む顆粒またはゼラチンカプセル、例えば、硬質ゼラチンカプセルを含んでいてよい。
【００７４】
好ましくは、本発明の組成物は、凍結乾燥されている細菌を含む。細菌の凍結乾燥は、確立された手順であり、関連のガイダンスは、例えば、参照文献［２４、２５、２６］において入手可能である。実施例は、凍結乾燥物組成物が特に有効であることを実証している。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、凍結乾燥されている細菌を含んでおり、ＩＢＳに関連する内臓過敏の処置のためのもの、好ましくはＩＢＳに関連する内臓過敏の処置においてＨ２Ｓレベルを低下させるまたはＨ２Ｓレベルの上昇を防止するためのものである。さらに好ましい実施形態において、本発明の組成物は、凍結乾燥されている細菌を含んでおり、ＩＢＳに関連する内臓過敏の処置のためのもの、好ましくは内臓過敏の処置においてＳＲＢによる胃腸管への定着を低減させる際の使用のためのものである。さらに好ましい実施形態において、本発明の組成物は、凍結乾燥されている細菌を含んでおり、ＩＢＳに関連する内臓過敏の処置のためのもの、好ましくは、内臓過敏の処置においてＳＲＢによる胃腸管への定着、群生及び／または集団レベルを低減する際の使用のためのものである。
【００７５】
代替的には、本発明の組成物は、生きている、活性な細菌培養物を含んでいてよい。実施例は、本発明の細菌の培養物が治療的に有効であることを実証している。
【００７６】
いくつかの実施形態において、本発明の組成物における細菌株は、不活性化されていない、例えば、熱不活性化されていない。いくつかの実施形態において、本発明の組成物における細菌株は、殺傷されていない、例えば、熱殺傷されていない。いくつかの実施形態において、本発明の組成物における細菌株は、弱毒化されていない、例えば、熱弱毒化されていない。例えば、いくつかの実施形態において、本発明の組成物における細菌株は、殺傷されていない、不活性化されていない及び／または弱毒化されていない。例えば、いくつかの実施形態において、本発明の組成物における細菌株は、生きている。例えば、い
くつかの実施形態において、本発明の組成物における細菌株は、生存可能である。例えば、いくつかの実施形態において、本発明の組成物における細菌株は、腸に部分的または全体的に定着することが可能である。例えば、いくつかの実施形態において、本発明の組成物における細菌株は生存可能であり、腸に部分的または全体的に定着することが可能である。
【００７７】
いくつかの実施形態において、組成物は、生きている細菌株と殺傷されている細菌株との混合物を含む。
【００７８】
好ましい実施形態において、本発明の組成物は、腸への細菌株の送達を可能にするようにカプセル化されている。カプセル化は、目標箇所に送達するまで、例えばｐＨの変化によって引き起こされる場合がある化学的または物理的刺激、例えば圧力、酵素活性または物理的崩壊による破断を通しての劣化から組成物を保護する。いずれの適切なカプセル化方法が使用されてもよい。例示的なカプセル化技術として、多孔質マトリクス内への取り込み、固体担体表面への付着または吸着、凝集によるまたは架橋剤を用いた自己会合、及び微多孔膜またはマイクロカプセルの後の機械的拘束が挙げられる。本発明の組成物を調製するのに有用であり得るカプセル化についてのガイダンスは、例えば、参照文献［２７］［２８］において入手可能である。
【００７９】
組成物は、経口で投与されてよく、錠剤、カプセルまたは粉末の形態であってよい。カプセル化された製品が好ましい、なぜなら、Ｂｌａｕｔｉａが嫌気性生物であるからである。他の成分（例えばビタミンＣなど）が、生体内での送達及び／または部分的もしくは全体的定着ならびに生存を改善するように脱酸素剤及びプレバイオティック基質として含まれていてよい。代替的には、本発明のプロバイオティック組成物は、食品もしくは栄養製品、例えばミルクもしくはホエイベースの発酵乳製品として、または医薬製品として経口で投与されてよい。
【００８０】
組成物は、プロバイオティックとして調合されてよい。
【００８１】
本発明の組成物は、治療有効量の本発明の細菌株を含む。治療有効量の細菌株は、患者への有益な効果を発揮するのに十分である。治療有効量の細菌株は、患者の腸への送達及び／または部分的もしくは全体的定着を結果として生じさせるのに十分であり得る。
【００８２】
例えばヒト成人への細菌の好適な１日量は、約１×１０３〜約１×１０１１個のコロニー形成単位（ＣＦＵ）；例えば、約１×１０７〜約１×１０１０ＣＦＵ；別の例において、約１×１０６〜約１×１０１０ＣＦＵ；別の例において、約１×１０７〜約１×１０１１ＣＦＵ；別の例において、約１×１０８〜約１×１０１０ＣＦＵ；別の例において、約１×１０８〜約１×１０１１ＣＦＵであってよい。
【００８３】
ある特定の実施形態において、細菌の用量は、少なくとも１０９細胞／日、例えば少なくとも１０１０、少なくとも１０１１、または少なくとも１０１２細胞／日である。
【００８４】
ある特定の実施形態において、組成物は、組成物の重量に対して約１×１０６〜約１×１０１１ＣＦＵ／ｇ；例えば約１×１０８〜約１×１０１０ＣＦＵ／ｇの量で細菌株を含有する。用量は、例えば、１ｇ、３ｇ、５ｇ及び１０ｇであってよい。
【００８５】
典型的には、プロバイオティック、例えば本発明の組成物は、少なくとも１の好適なプレバイオティック化合物と任意選択的に組み合わされる。プレバイオティック化合物は、通常、上部消化管において分解または吸収されない、非消化性炭水化物、例えば、オリゴ−もしくは多糖、または糖アルコールである。公知のプレバイオティクスとして、市販品
、例えば、インスリン及びトランスガラクト−オリゴ糖が挙げられる。
【００８６】
ある特定の実施形態において、本発明のプロバイオティック組成物は、組成物の合計重量に対して約１〜約３０重量％（例えば、５〜２０重量％）の量でプレバイオティック化合物を含む。炭水化物は：フラクト−オリゴ糖（またはＦＯＳ）、短鎖フラクト−オリゴ糖、インスリン、イソマルト−オリゴ糖、ペクチン、キシロ−オリゴ糖（またはＸＯＳ）、キトサン−オリゴ糖（またはＣＯＳ）、β−グルカン、アラビアガム変性及び耐性デンプン（arable gum modified and resistant starches）、ポリデキストロース、Ｄ−タガトース、アカシアファイバ、イナゴマメ、オート麦、ならびにシトラスファイバ；からなる群から選択されてよい。一態様において、プレバイオティクスは短鎖フラクト−オリゴ糖（簡潔のために、以下本明細書においてＦＯＳｓ−ｃ．ｃと示す）であり；該ＦＯＳｓ−ｃ．ｃ．は、テンサイ糖の転換によって一般に得られ、３のグルコース分子が結合しているサッカロース分子を含んでいる消化性炭水化物ではない。
【００８７】
本発明の組成物は、薬学的に許容可能な賦形剤または担体を含んでいてよい。かかる好適な賦形剤の例は、参照文献［２９］において見出され得る。治療的使用のための許容可能な担体または希釈剤は、薬剤分野において周知されており、例えば参照文献［３０］において記載されている。好適な担体の例として、ラクトース、デンプン、グルコース、メチルセルロース、ステアリン酸マグネシウム、マンニトール、ソルビトールなどが挙げられる。好適な希釈剤の例として、エタノール、グリセロール及び水が挙げられる。医薬担体、賦形剤または希釈剤の選択は、意図する投与経路及び標準の薬務に関して選択され得る。医薬組成物は、上記担体、賦形剤または希釈剤として、またはこれに加えて、いずれの好適な結合剤（複数可）、潤滑剤（複数可）、懸濁剤（複数可）、コーティング剤（複数可）、可溶化剤（複数可）を含んでいてもよい。好適な結合剤の例として、デンプン、ゼラチン、天然糖、例えばグルコース、無水ラクトース、自由流動ラクトース、β−ラクトース、コーンシロップ、天然及び合成ガム、例えばアカシア、トラガカントまたはアルギン酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロースならびにポリエチレングリコールが挙げられる。好適な潤滑剤の例として、オレイン酸ナトリウム、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウムなどが挙げられる。防腐剤、安定剤、染料、及びさらなる香味剤が医薬組成物において付与されていてよい。防腐剤の例として、安息香酸ナトリウム、ソルビン酸、システイン、及びｐ−ヒドロキシ安息香酸のエステルが挙げられ、例えば、いくつかの実施形態において、防腐剤は、安息香酸ナトリウム、ソルビン酸、及びｐ−ヒドロキシ安息香酸のエステルから選択される。酸化防止剤及び懸濁剤が使用されてもよい。好適な担体のさらなる例は、サッカロースである。防腐剤のさらなる例は、システインである。
【００８８】
本発明の組成物は、食品として調合されてよい。例えば、食品は、例えば栄養補助食品において、本発明の治療効果に加えて、栄養的利益を付与してよい。同様に、食品は、本発明の組成物の風味を向上するように、または組成物を、医薬組成物よりもむしろ、一般食料とより類似することによって、消費するのにより魅力的であるようにするように調合されてよい。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、ミルクベースの製品として調合される。用語「ミルクベースの製品」は、変動する脂肪分を有する、いずれの液体または半固体のミルク−またはホエイベースの製品も意味する。ミルクベースの製品は、例えば、ウシのミルク、ヤギのミルク、ヒツジのミルク、スキムミルク、ホールミルク、いずれの処理もしていない粉ミルク及びホエイからの還元ミルク、または加工品、例えばヨーグルト、凝固したミルク、カード、酸乳、酸全乳、バターミルク及び他の酸乳製品であり得る。別の重要な群として、ミルク飲料、例えばホエイ飲料、発酵乳、コンデンスミルク、乳幼児ミルク；フレーバーミルク、アイスクリーム；ミルク含有食品、例えば、スイーツが挙げられる。
【００８９】
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、Ｂｌａｕｔｉａ属の１以上の細菌株を含み、いずれの他の属からの細菌も含有せず、または、ほんの僅少なもしくは生物学的に関連のない量の別の属からの細菌を含む。
【００９０】
ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、単一の細菌株または種を含有し、いずれの他の細菌株または種も含有しない。かかる組成物は、ほんの僅少なまたは生物学的に関連のない量の他の細菌株または種を含んでいてよい。かかる組成物は、他の種の生物を実質的に含まない培養物であってよい。いくつかの実施形態において、かかる組成物は、他の種の生物を実質的に含まない凍結乾燥物であってよい。
【００９１】
ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、Ｂｌａｕｔｉａ属の１以上の細菌株、例えば、Ｂｌａｕｔｉａ  ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａを含み、かついずれの他の細菌属も含有せず、またはほんの僅少なもしくは生物学的に関連のない量の別の属からの細菌を含む。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、単一のＢｌａｕｔｉａ種、例えば、Ｂｌａｕｔｉａ  ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａを含み、かついずれの他の細菌種も含有せず、またはほんの僅少なもしくは生物学的に関連のない量の別の種からの細菌を含む。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、Ｂｌａｕｔｉａ、例えば、Ｂｌａｕｔｉａ  ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａの単一株を含み、かついずれの他の細菌株もしくは種も含有せず、またはほんの僅少なまたは生物学的に関連のない量の別の株または種からの細菌を含む。
【００９２】
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、１を超える細菌株または種を含む。例えば、いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、同種内からの１を超える株（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０または４５を超える株）を含み、任意選択的に、いずれの他の種からの細菌も含有しない。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、同種内からの５０未満の株（例えば、４５、４０、３５、３０、２５、２０、１５、１２、１０、９、８、７、６、５、４または３未満の株）を含み、任意選択的に、いずれの他の種からの細菌も含有しない。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、同種内からの１〜４０、１〜３０、１〜２０、１〜１９、１〜１８、１〜１５、１〜１０、１〜９、１〜８、１〜７、１〜６、１〜５、１〜４、１〜３、１〜２、２〜５０、２〜４０、２〜３０、２〜２０、２〜１５、２〜１０、２〜５、６〜３０、６〜１５、１６〜２５、または３１〜５０株を含み、任意選択的に、いずれの他の種からの細菌も含有しない。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、同属内からの１を超える種（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１５、１７、２０、２３、２５、３０、３５または４０を超える種）を含み、任意選択的に、いずれの他の属からの細菌も含有しない。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、同属内からの５０未満の種（例えば、５０、４５、４０、３５、３０、２５、２０、１５、１２、１０、８、７、６、５、４または３未満の種）を含み、任意選択的に、いずれの他の属からの細菌も含有しない。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、同属内からの１〜５０、１〜４０、１〜３０、１〜２０、１〜１５、１〜１０、１〜９、１〜８、１〜７、１〜６、１〜５、１〜４、１〜３、１〜２、２〜５０、２〜４０、２〜３０、２〜２０、２〜１５、２〜１０、２〜５、６〜３０、６〜１５、１６〜２５、または３１〜５０種を含み、任意選択的に、いずれの他の属からの細菌も含有しない。本発明は、上記のいずれの組み合わせも含む。
【００９３】
いくつかの実施形態において、組成物は、微生物共同体を含む。例えば、いくつかの実施形態において、組成物は、微生物共同体の部分としてＢｌａｕｔｉａ細菌株を含む。例えば、いくつかの実施形態において、Ｂｌａｕｔｉａ細菌株は、腸において生体内で共生的に生きることができる、他の属からの１以上の（例えば、少なくとも２、３、４、５、１０、１５または２０の）他の細菌株において存在する。例えば、いくつかの実施形態に
おいて、組成物は、異なる属からの細菌株と組み合わせたＢｌａｕｔｉａ  ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａの細菌株を含む。いくつかの実施形態において、微生物共同体は、単一の生物、例えば、ヒトの糞便サンプルから得られた２以上の細菌株を含む。いくつかの実施形態において、微生物共同体は、本来は一緒には見られない。例えば、いくつかの実施形態において、微生物共同体は、少なくとも２の異なる生物の糞便サンプルから得られた細菌株を含む。いくつかの実施形態において、該２の異なる生物は、同種、例えば、２の異なるヒトからのものである。いくつかの実施形態において、該２の異なる生物は、ヒト乳児及びヒト成人である。いくつかの実施形態において、該２の異なる生物は、ヒト及び非ヒト哺乳動物である。
【００９４】
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、受託番号ＤＳＭ１０５０７／１４２９４で寄託されているＢｌａｕｔｉａ  ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ株と同じ安全及び治療効能特性を有するが、受託番号ＤＳＭ１０５０７／１４２９４で寄託されているＢｌａｕｔｉａ  ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ株ではない、またはＢｌａｕｔｉａ  ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａでもなくＢｌａｕｔｉａでもない細菌株をさらに含む。
【００９５】
本発明の組成物が１を超える細菌株、種または属を含むいくつかの実施形態において、個々の細菌株、種または属は、別々、同時または逐次投与用であってよい。例えば、組成物は、１を超える細菌株、種もしくは属の全てを含んでいてよく、または細菌株、種もしくは属は、別々に貯蔵されてよく、また、別々に、同時にもしくは逐次的に投与されてよい。いくつかの実施形態において、１を超える細菌株、種または属は、別々に貯蔵されているが、使用前に一緒に混合される。
【００９６】
いくつかの実施形態において、本発明において使用される細菌株は、ヒト成人の糞便から得られる。本発明の組成物が１を超える細菌株を含むいくつかの実施形態において、細菌株の全てがヒト成人の糞便から得られ、または、他の細菌株が存在するとき、ほんの僅少な量で存在する。細菌は、ヒト成人の糞便から得られ本発明の組成物において使用された後に培養されてよい。
【００９７】
いくつかの実施形態において、１以上のＢｌａｕｔｉａ細菌株は、本発明の組成物において唯一の治療的活性剤（複数可）である。いくつかの実施形態において、組成物における細菌株（複数可）は、本発明の組成物において唯一の治療的活性剤（複数可）である。
【００９８】
本発明による使用のための組成物は、販売承認を必要としてもしなくてもよい。
【００９９】
ある特定の実施形態において、本発明は、上記細菌株が凍結乾燥されている、上記医薬組成物を提供する。ある特定の実施形態において、本発明は、上記細菌株が噴霧乾燥されている、上記医薬組成物を提供する。ある特定の実施形態において、本発明は、細菌株が、凍結乾燥または噴霧乾燥されており、また、生きている、上記医薬組成物を提供する。ある特定の実施形態において、本発明は、細菌株が、凍結乾燥または噴霧乾燥されており、また、生存可能である、上記医薬組成物を提供する。ある特定の実施形態において、本発明は、細菌株が、凍結乾燥または噴霧乾燥されており、また、腸に部分的または全体的に定着することが可能である、上記医薬組成物を提供する。ある特定の実施形態において、本発明は、細菌株が、凍結乾燥または噴霧乾燥されており、また、生存可能でありかつ腸に部分的または全体的に定着することが可能である、上記医薬組成物を提供する。
【０１００】
いくつかの場合において、凍結乾燥または噴霧乾燥されている細菌株は、投与前に再構成される。いくつかの場合において、再構成は、本明細書に記載されている希釈剤の使用による。
【０１０１】
本発明の組成物は、薬学的に許容可能な賦形剤、希釈剤または担体を含んでいてよい。
【０１０２】
ある特定の実施形態において、本発明は、本発明の細菌株と；薬学的に許容可能な賦形剤、担体または希釈剤とを含む医薬組成物であって；細菌株が、障害の処置を必要とする対象に投与されるときに該処置に十分な量であり；該障害が、内臓過敏、例えば、クローン病、潰瘍性結腸炎、機能性消化不良、乳児疝痛または、より好ましくは、ＩＢＳに関連する内臓過敏である、上記医薬組成物を提供する。
【０１０３】
ある特定の実施形態において、本発明は、本発明の細菌株と；薬学的に許容可能な賦形剤、担体または希釈剤とを含む医薬組成物であって；細菌株が、障害の処置を必要とする対象に投与されるときに該処置に十分な量であり；該障害が、内臓過敏、例えば、クローン病、潰瘍性結腸炎、機能性消化不良または、より好ましくは、ＩＢＳに関連する内臓過敏である、上記医薬組成物を提供する。
【０１０４】
ある特定の実施形態において、本発明は、上記医薬組成物であって、細菌株の量が、組成物の重量に対してグラム当たり約１×１０３〜約１×１０１１個のコロニー形成単位である、上記医薬組成物を提供する。
【０１０５】
ある特定の実施形態において、本発明は、１ｇ、３ｇ、５ｇまたは１０ｇの用量で投与される、上記医薬組成物を提供する。
【０１０６】
ある特定の実施形態において、本発明は、経口、直腸、皮下、鼻、頬側、及び舌下からなる群から選択される方法によって投与される、上記医薬組成物を提供する。
【０１０７】
ある特定の実施形態において、本発明は、ラクトース、デンプン、グルコース、メチルセルロース、ステアリン酸マグネシウム、マンニトール及びソルビトールからなる群から選択される担体を含む上記医薬組成物を提供する。
【０１０８】
ある特定の実施形態において、本発明は、エタノール、グリセロール及び水からなる群から選択される希釈剤を含む上記医薬組成物を提供する。
【０１０９】
ある特定の実施形態において、本発明は、デンプン、ゼラチン、グルコース、無水ラクトース、自由流動ラクトース、β−ラクトース、コーンシロップ、アカシア、トラガカント、アルギン酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロース、ポリエチレングリコール、オレイン酸ナトリウム、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム及び塩化ナトリウムからなる群から選択される賦形剤を含む、上記医薬組成物を提供する。
【０１１０】
ある特定の実施形態において、本発明は、防腐剤、酸化防止剤及び安定剤の少なくとも１つをさらに含む、上記医薬組成物を提供する。
【０１１１】
ある特定の実施形態において、本発明は、安息香酸ナトリウム、ソルビン酸、及びｐ−ヒドロキシ安息香酸のエステルからなる群から選択される防腐剤を含む、上記医薬組成物を提供する。
【０１１２】
ある特定の実施形態において、本発明は、上記細菌株が凍結乾燥されている、上記医薬組成物を提供する。
【０１１３】
ある特定の実施形態において、本発明は、組成物が約４℃または約２５℃で密閉容器に
貯蔵されて容器が５０％の相対湿度を有する雰囲気に置かれているとき、コロニー形成単位で測定される細菌株の少なくとも８０％が、少なくとも約１ヶ月、３ヶ月、６ヶ月、１年、１．５年、２年、２．５年または３年の期間の後に残存している、上記医薬組成物を提供する。
【０１１４】
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、本明細書に記載されている組成物を含む密閉容器において付与される。いくつかの実施形態において、密閉容器は、サチェまたはボトルである。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、本明細書に記載されている組成物を含むシリンジにおいて付与される。
【０１１５】
本発明の組成物は、いくつかの実施形態において、医薬製剤として付与されてよい。例えば、組成物は、錠剤またはカプセルとして提供されてよい。いくつかの実施形態において、カプセルは、ゼラチンカプセル（「ｇｅｌ−ｃａｐ」）である。
【０１１６】
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、経口投与される。経口投与は、嚥下を含んでいてよく、その結果、化合物が、胃腸管に入ることになり、かつ／または頬側、舌側、もしくは舌下投与によって化合物が口から直接血流に入ることになる。
【０１１７】
経口投与に好適な医薬製剤として、固体プラグ、固体微粒子状物、半固体及び液体（多相及び分散系を含む）、例えば錠剤；多−またはナノ−粒子状物を含有する軟質または硬質カプセル、液体（例えば、水溶液）、エマルジョンまたは粉末；ロゼンジ（液体が充填されたものを含む）；咀嚼剤；ゲル；急速分散剤形；フィルム；膣坐剤；スプレー；ならびに頬側／粘膜接着パッチが挙げられる。
【０１１８】
いくつかの実施形態において、医薬製剤は、腸溶性製剤、すなわち、経口投与による腸への本発明の組成物の送達に好適である胃耐性製剤（例えば、胃のｐＨに耐性）である。腸溶性製剤は、組成物の細菌または別の成分が酸感受性である、例えば、胃条件下で分解しやすいとき、特に有用であり得る。
【０１１９】
いくつかの実施形態において、腸溶性製剤は、腸溶性コーティングを含む。いくつかの実施形態において、該製剤は、腸溶性コーティングされた剤形である。例えば、該製剤は、腸溶性コーティングされた錠剤または腸溶性コーティングされたカプセルなどであってよい。腸溶性コーティングは、経口送達のための従来の腸溶性コーティング、例えば、錠剤、カプセルなどのための従来のコーティングであってよい。該製剤は、フィルムコーティング、例えば、腸溶性ポリマー、例えば酸不溶性ポリマーの薄膜層を含んでいてよい。
【０１２０】
いくつかの実施形態において、腸溶性製剤は、本質的に腸溶性であり、例えば、腸溶性コーティングを必要とすることない胃耐性である。そのため、いくつかの実施形態において、該製剤は、腸溶性コーティングを含まない腸溶性製剤である。いくつかの実施形態において、該製剤は、熱ゲル化材料から作製されたカプセルである。いくつかの実施形態において、熱ゲル化材料は、セルロース系材料、例えばメチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロースまたはヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）である。いくつかの実施形態において、カプセルは、いずれのフィルム形成ポリマーも含有しないシェルを含む。いくつかの実施形態において、カプセルは、シェルを含み、該シェルは、ヒドロキシプロピルメチルセルロースを含み、いずれのフィルム形成ポリマーも含まない（例えば、［３１］を参照されたい）。いくつかの実施形態において、該製剤は、本質的に腸溶性のカプセル（例えば、Ｃａｐｓｕｇｅｌ製Ｖｃａｐｓ（登録商標））である。
【０１２１】
いくつかの実施形態において、該製剤は、軟質カプセルである。軟質カプセルは、カプセルシェルに存在する軟化剤、例えば、グリセロール、ソルビトール、マルチトール及び
ポリエチレングリコールなどの添加のおかげで、ある特定の弾性及び柔軟性を有し得るカプセルである。軟質カプセルは、例えば、ゼラチンまたはデンプンベースで製造され得る。ゼラチンベースの軟質カプセルは、種々の供給者から市販されている。例えば経口または経直腸などの投与方法に応じて、軟質カプセルは、種々の形状を有することができ、例えば、円形、楕円形、長方形または魚雷型であり得る。軟質カプセルは、従来のプロセス、例えば、Ｓｃｈｅｒｅｒプロセス、Ａｃｃｏｇｅｌプロセスまたは液滴もしくは発泡プロセスなどによって製造され得る。
【０１２２】
培養方法
本発明における使用のための細菌株は、例えば、参照文献［３２、３３、３４］に詳述されている標準の微生物学的技術を使用して培養され得る。
【０１２３】
培養に使用される固体または液体培地は、例えば、ＹＣＦＡ寒天またはＹＣＦＡ培地であってよい。ＹＣＦＡ培地として（１００ｍｌ当たりの近似値）：Ｃａｓｉｔｏｎｅ（１．０ｇ）、酵母エキス（０．２５ｇ）、ＮａＨＣＯ３（０．４ｇ）、システイン（０．１ｇ）、Ｋ２ＨＰＯ４（０．０４５ｇ）、ＫＨ２ＰＯ４（０．０４５ｇ）、ＮａＣｌ（０．０９ｇ）、（ＮＨ４）２ＳＯ４（０．０９ｇ）、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ（０．００９ｇ）、ＣａＣｌ２（０．００９ｇ）、レザズリン（０．１ｍｇ）、ヘミン（１ｍｇ）、ビオチン（１μｇ）、コバラミン（１μｇ）、ｐ−アミノ安息香酸（３μｇ）、葉酸（５μｇ）、及びピリドキサミン（１５μｇ）を挙げることができる。
【０１２４】
総則
本発明の実施は、別途示さない限り、当業者の範囲内の、化学、生化学、分子生物、免疫学及び薬理学の従来の方法を用いる。かかる技術は、文献において完全に説明されている。例えば、参照文献［３５］及び［３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２］などを参照されたい。
【０１２５】
用語「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ（含む）」は、「ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ（含む）」及び「ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ（からなる）」を包含し、例えば、組成物がＸを「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ（含む）」は、Ｘから排他的になってもよく、またはさらなる何か、例えば、Ｘ＋Ｙを含んでいてもよい。
【０１２６】
数値ｘに関係する用語「約」は、任意選択的であり、例えば、ｘ±１０％を意味する。
【０１２７】
語「実質的に」は、「完全に」を排除せず、例えば、Ｙを「実質的に含まない」組成物は、Ｙを完全に含まなくてよい。必要に応じて、語「実質的に」は、本発明の定義から省略されてよい。
【０１２８】
２つのヌクレオチド配列間の百分率の配列同一性への言及は、整列しているとき、ヌクレオチドの百分率が、２つの配列を比較したときに同じであることを意味する。このアラインメント及びパーセント相同性または配列同一性は、当該分野において公知のソフトウエアプログラム、例えば、参照文献［４３］のセクション７．７．１８に記載されているものを使用して決定され得る。好ましいアラインメントは、１２のギャップオープンペナルティ及び２のギャップエクステンションペナルティ、６２のＢＬＯＳＵＭマトリクスによるアフィンギャップ検索を使用してＳｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎ相同性検索アルゴリズムによって決定される。Ｓｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎ相同性検索アルゴリズムは、参照文献［４４］に開示されている。
【０１２９】
特に記述されていない限り、多数のステップを含むプロセスまたは方法は、方法の開始及び終了時にさらなるステップを含んでいてよく、またはさらなる介在するステップを含
んでいてよい。また、ステップは、適切な場合、代替の順序で、組み合わされ、省略され、または実施されてよい。
【０１３０】
本発明の種々の実施形態は本明細書に記載されている。各実施形態において特定されている特徴は、他の特定されている特徴と組み合わされて、さらなる実施形態を付与してよいことが認識される。特に、好適な、典型的なまたは好ましいとして本明細書において強調されている実施形態は、互いに組み合わされてよい（これらが互いに排他的であるときを除く）。
【実施例】
【０１３１】
本発明を実施するための形態
実施例１−内臓過敏のラットモデルにおける細菌接種の効能
概要
ラットに、内臓過敏を示すヒトＩＢＳ対象からの糞便微生物叢を接種した。次いで、ラットに、本発明による細菌株を含む組成物を投与し、次いで、膨張アッセイを使用して試験して、内臓過敏を測定した。本発明の組成物は、膨張に対するラットの応答を低減することが分かり、これは内臓過敏の低減を示唆した。
【０１３２】
株
Ｂｌａｕｔｉａ  ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ（ＢＨ）株ＤＳＭ１０５０７／１４２９４。
【０１３３】
組成物及び投与
ＢＨ培養物（１６Ｈ）または凍結乾燥物−経口胃管栄養法によって投与
対照溶液を経口胃管栄養法によって投与
【０１３４】
ラット
ＩＢＳ対象からのヒト腸微生物叢を接種した。
【０１３５】
研究デザイン
１４日目−ラットにＩＢＳ対象からのヒト腸微生物叢を接種した
０〜２８日目−ＢＨ培養物もしくは凍結乾燥物、または対照溶液を連日投薬
０、１４及び２８日目−糞便サンプル中のＢＨ集団のｑＰＣＲ
１４日目と２８日目との間−腹部内に電極を埋め込む操作（膨張アッセイ用）
２８日目−膨張アッセイ、盲腸サンプルを硫化物及び短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）分析用に収集し、選択培地における糞便サンプル中の微生物叢を計数した
【０１３６】
結果
図１は、対照溶液（ＩＢＳ）またはＢＨ凍結乾燥物（ＩＢＳ＋ＢＨ）を投与したラットからの糞便サンプル中のＢＨ集団のｑＰＣＲ分析の結果を表す。ＢＨ集団の増加は、ラットにＢＨ凍結乾燥物が与えられた１４及び２８日目に見られ、成功裏の定着が確認された。
【０１３７】
図２は、膨張アッセイの結果を表す。ラットを結腸直腸膨張に供し、１分当たりの収縮の数を内臓過敏の具体的尺度として記録した。本発明の組成物で処置したラットは、収縮の低減及び内臓過敏の低減を示した。
【０１３８】
図３及び４は、糞便サンプル中の微生物叢に対するＢＨ培養物及び凍結乾燥物の投与の効果について報告する。ＢＨ培養物の投与は、硫酸塩還元細菌（ＳＲＢ）の顕著な低減（１ｌｏｇ）を結果として生じさせた。
【０１３９】
図５は、盲腸サンプルにおける短鎖脂肪酸濃度で測定される微生物叢発酵に対するＢＨ凍結乾燥物の投与の影響について報告する。ＢＨ凍結乾燥物の投与は、酢酸産生の増加を結果として生じさせた。
【０１４０】
図６は、盲腸サンプルにおける硫化物濃度（Ｈ２Ｓ）で測定される微生物叢発酵に対するＢＨ凍結乾燥物の投与の影響について報告する。ＢＨの投与は、硫化物産生の減少を結果として生じさせた。
【０１４１】
結論
Ｂｌａｕｔｉａ  ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａを含む組成物の投与は、膨張アッセイを使用して測定される、成功裏の定着及び内臓過敏の顕著な低減をもたらした。この効果は、Ｂｌａｕｔｉａ  ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａを培養物として及び凍結乾燥物として投与したときに観察された。Ｂｌａｕｔｉａ  ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａの投与もまた、ＳＲＢ及び硫化物産生の低減が観察されつつも、微生物叢の構成及び発酵に顕著な効果があった。これらのデータは、Ｂｌａｕｔｉａ  ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａが、内臓過敏、特にＩＢＳに関連する内臓過敏を低減するのに有用であり得ることを示唆している。内臓過敏の低減は、観察されるＳＲＢ及び硫化物産生の低減と関連し得る。
【０１４２】
実施例２−内臓過敏のラットモデルにおける細菌凍結乾燥物の効能
実施例１の観察を、Ｂｌａｕｔｉａ  ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ（ＢＨ）株ＤＳＭ１０５０７／１４２９４の凍結乾燥物及びＩＢＳのラットモデルを使用してさらなる実験において確認した。図７及び８に示すように、ＢＨ凍結乾燥物の投与は、膨張に応答した腹部収縮の数の統計的に有意な低減を付与し、内臓過敏の低減を示唆した。図７において、１つのＩＢＳ対象からの糞便サンプルを使用してラットに接種した。図８において、３つのＩＢＳ対象からの糞便サンプルを使用してラットに接種し、これらのＩＢＳ対象の１つは、図７において使用したＩＢＳ対象と同じであった。さらに、図９及び１０に示すように、ＢＨ凍結乾燥物の投与は、硫化物の統計的に有意な低減を付与した。図９において、１つのＩＢＳ対象からの糞便サンプルを使用してラットに接種した。図１０において、３つのＩＢＳ対象からの糞便サンプルを使用してラットに接種し、これらのＩＢＳ対象の１つは、図９において使用したＩＢＳ対象と同じであった。
【０１４３】
実施例３−健常なラット対する細菌凍結乾燥物の効果
健常なＨＩＭラットに対するＢｌａｕｔｉａ  ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ（ＢＨ）株ＤＳＭ１０５０７／１４２９４の凍結乾燥物の投与の効果を研究した。結果を図１１〜１４に報告する。実験に関するさらなる詳細は図の説明において上記に付与している。図１１は、ラットにおけるＢＨの適切な用量が１０９細胞／日以上であることを示している。図１２は、これらの実験においてＢＨがラット消化管に永久には定着しなかったことを示している。図１３は、ＢＨが盲腸において主に見られることを示している。図１４は、ＢＨの投与が酢酸及び酪酸産生の増加を誘発することを示している。
【０１４４】
実施例４−内臓過敏のラットモデルにおける細菌凍結乾燥物の効能
ＩＢＳのラットモデルに対するＢｌａｕｔｉａ  ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ（ＢＨ）株ＤＳＭ１０５０７／１４２９４の凍結乾燥物の投与の効果をさらに調査した。無菌ラットにＣ−ＩＢＳ（便秘あり）またはＵ−ＩＢＳ（非亜型）患者からの糞便サンプルを接種した。実験の大部分を、内臓過敏（圧調節器によって測定したＶＨ）を示しているＩＢＳ患者からの糞便サンプルを用いて実施した。結果は図１５及び１６に報告されており、実験に関するさらなる詳細は図の説明において上記に付与している。図１５において、ＢＨ凍結乾燥物の投与が硫酸塩還元細菌の統計的に有意な低減を引き起こすことが確
認されている。予期されるように、ＢＨの増加もまた観察される。図１６は、ＢＨ投与が、ＩＢＳ  ＨＩＭラットによって産生されるＨ２Ｓの量の統計的に有意な減少を誘発したことを示している。腸内微生物叢による盲腸でのＨ２Ｓの過剰産生は、内臓過敏に関連する。
【０１４５】
実施例５−第一相臨床試験の際の患者の症状の変化
Ｂｌａｕｔｉａ  ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ（受託番号ＤＳＭ１０５０７及び受託番号ＤＳＭ１４２９４でも寄託されている株「Ｂｌａｕｔｉｘ」）を、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）を有するヒト患者に投与する第一相臨床試験を行った。患者にＢｌａｕｔｉｘを投与期間（１〜１６日目）に投与し、ウオッシュアウト期間が１９〜２３日目であった。Ｂｌａｕｔｉｘは、安全かつ耐容性良好の両方であることが分かった。４つの症状をモニタリングし、そのうちの１つが腹部疼痛であった。研究において、患者がこれらの症状の改善を経験したか、変化が無かったか、または悪化したかを記録した。Ｂｌａｕｔｉｘが投与された患者からの結果を、プラセボが投与された患者を使用して得たものと比較した。症状を３つの時点：研究の１日目、１５／１６日目、及び最後；でモニタニングした。結果を図１７及び１８に示す。
【０１４６】
１６日目の患者の報告されている症状を、１日目からのベースラインと比較したとき、Ｂｌａｕｔｉｘが与えられた１７のＩＢＳ患者の８２％において症状の改善が報告された（図１７）。その１つが腹部疼痛である症状の改善は、内臓過敏を処置または防止するためのＢｌａｕｔｉｘの使用をサポートする。とりわけ、患者３．０２、３．１７及び３．２４は、全てが研究の開始時には重篤な腹部疼痛を有していたが、１５／１６日目には、それぞれ、軽度の腹部疼痛、軽度の腹部疼痛及び腹部疼痛無しであった。
【０１４７】
プラセボが与えられた患者の５０％において症状の改善が報告された（図１７）。高いプラセボ応答率は、ＩＢＳ臨床研究において、確立された現象である。プラセボよりもかなり小さい改善を基準にしてＩＢＳを処置するＸｉｆａｘａｎが最近承認された［４５］。
【０１４８】
投薬完了時（１６日目）に存在する症状と比較した研究完了時（１９〜２３日目）の症状の悪化は、本明細書に提示されている教示を基準にして予期される。この症状の悪化は、第一相臨床試験において見られ：ＩＢＳ患者の４１％においてＢｌａｕｔｉｘ投薬の中止後に症状の悪化が報告された（図１８）。Ｂｌａｕｔｉｘ投薬の中止後の、その１つが腹部疼痛である症状の悪化もまた、そのため、内臓過敏を処置または防止する際のＢｌａｕｔｉｘの使用をサポートする。
【０１４９】
実施例６−ヒト細菌叢関連ラット（ＨＭＡラット）モデルにおいて研究した、内臓過敏に対するＢ．ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａの効能
概要
１６匹の無菌ラット群（対照群における８匹のラットと処置群における８匹のラットとを含む）にヒトＩＢＳ対象からの糞便微生物叢を接種した（ＩＢＳ−ＨＭＡラット）。３つの連続実験を３の異なるＩＢＳ患者からの糞便サンプルを使用して実施した。２つの他のラット群（ｎ＝１０）に、健常な対象（ｎ＝２対象；２つの健常なＨＭＡラット群）の糞便サンプルを内臓感受性対照として接種した。こうして、２４のＩＢＳ−微生物叢関連ラット（対照）、Ｂｌａｕｔｉｘで処置した２４のＩＢＳ微生物叢関連ラット、及び２０の健常な微生物叢関連ラットとした。ＩＢＳ−ＨＭＡラットの半分に、本発明によるＢ．ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａの細菌株を含む組成物を２８日間投与しながら、他の半分の動物には対照溶液を与えた。投与の２８日後、全てのＨＭＡラットを、結腸膨張アッセイを使用して試験し、内臓感受性を測定した。本発明の組成物は、膨張に対するＩＢＳ−ＨＭＡラットの応答を低減することが見出され、健常な−ＨＭＡラットにおいて観
察されたように正常な感度に達した内臓過敏の低減を示唆した。
【０１５０】
株
Ｂｌａｕｔｉａ  ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ（ＢＨ）株ＤＳＭ１０５０７Ｔ／１４２９４。
【０１５１】
組成物及び投与
ＢＨ凍結乾燥物を１０１０細菌／ｍｌの濃度で無菌鉱液に懸濁した。２ｍｌのこの懸濁液を経口胃管栄養法によって２８日間、ＩＢＳ−ＨＭＡラットごとに連日投与した。
【０１５２】
対照溶液は、ＩＢＳ−ＨＭＡラットの対照群に経口胃管栄養法によって連日投与した（２ｍｌ／ラット）無菌鉱液であった。
【０１５３】
ラット
無菌雌Ｆｉｓｈｅｒラット（１０週齢）にＩＢＳ対象（ＩＢＳ−ＨＭＡラット）からのヒト糞便微生物叢を接種した。１６匹のラットに同じヒト糞便接種材料を接種した。３つの連続実験を３つの異なるＩＢＳ対象からの糞便サンプルによって実施した。１０匹のラットのうちの２つの他の群に２の健常な対象（正常な感度の対照群）からの糞便サンプルを接種した。
【０１５４】
研究デザイン
１４日目−ヒト糞便微生物叢を無菌ラットに接種。
０〜２８日目−経口胃管栄養法によりＢＨ凍結乾燥物（アッセイ群）または対照溶液（対照群）を連日投薬
１４日目と２２日目との間−腹部内に電極を埋め込む操作（膨張アッセイ用）
２２〜２８日目−ラットを適応させて膨張試験に関連するストレスを回避する。
２８日目−膨張アッセイ、ならびに動物の安楽死により硫化物及び短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）分析用の盲腸サンプルを収集する。
０、１４及び２８日目−微生物の分析用の糞便サンプルの収集：ＢＨ集団及び他の片利共生微生物群の評価のためのｑＰＣＲ、ならびに選択培地及び偏性嫌気性方法を使用した微生物の機能群の計数。
【０１５５】
結果
図１９は、対照溶液またはＢＨ凍結乾燥物が与えられたＩＢＳ−ＨＭＡラットからの糞便サンプルのＢ．ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ集団のｑＰＣＲ分析の結果を表す。ＢＨ凍結乾燥物が与えられたラットにおいて投与期間の最後（２８日目）にＢＨ集団の有意な増加が観察され、結腸におけるＢＨの成功裏の送達を確認した。
【０１５６】
図２０は、膨張アッセイの結果を表す。ラットを結腸直腸膨張に供し、５分当たりの収縮の数を内臓過敏の具体的尺度として記録した。本発明の組成物で処置したＩＢＳ−ＨＭＡラットは、収縮の低減を示し、内臓過敏の低減を反映していた。Ｂ．ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ処置後、ＩＢＳ−ＨＭＡラットは、健常なＨＭＡラットにおいて測定したものと比較して正常な内臓感受性を示した。
【０１５７】
図２１は、ＩＢＳ患者において影響されることが以前に見出されている、糞便微生物叢からのいくつかの微生物群に対するＢ．ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａの投与の効果について報告する。ＢＨの投与は、硫酸塩還元細菌（ＳＲＢ）の有意な低減を結果として生じさせた。
【０１５８】
図２２は、ＩＢＳ−ＨＭＡラットの盲腸サンプルにおける硫化物（Ｈ２Ｓ）濃度に対す
るＢＨの投与の影響について報告する。ＢＨの投与は、硫化物産生の有意な減少を結果として生じさせた。図２２におけるデータは図１０におけるものと同じであるが、スケールは異なる。
【０１５９】
図２３は、ＩＢＳ−ＨＭＡラットの盲腸サンプルにおける主な発酵代謝産物である短鎖脂肪酸に対するＢＨの投与の影響について報告する。ＢＨの投与は、酢酸塩濃度の有意な増加及び酪酸塩濃度の有意な増加を結果として生じさせた（図２３ｂ）。
【０１６０】
結論
Ｂｌａｕｔｉａ  ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａを含む組成物の投与は、膨張アッセイを使用して測定される内臓過敏の有意な低減をもたらした。処置後、ＩＢＳ−ＨＭＡラットの内臓感受性は、健常な−ＨＭＡラットにおいて測定したものと同様であることが見出された。Ｂ．ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａを含む組成物の投与は、正常なものへのＩＢＳ−ＨＭＡ動物の内臓感受性を復元することができる。Ｂｌａｕｔｉａ  ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａの投与もまた、微生物叢の構成及び発酵に対する有意な効果があり、ＳＲＢ及び硫化物産生の重要な低減を特に誘発した。これらのデータは、Ｂｌａｕｔｉａ  ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａが、内臓過敏、特にＩＢＳに関連する内臓過敏を低減するのに有用であり得ることを示唆している。内臓過敏の低減は、観察されるＳＲＢ及び硫化物産生の低減と関連し得る。
【０１６１】
実施例７−安定性試験
本明細書に記載されている少なくとも１つの細菌株を含有する本明細書に記載されている組成物を、２５℃または４℃の密閉容器に貯蔵し、該容器を３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、９０％または９５％の相対湿度を有する雰囲気に置く。１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、６ヶ月、１年、１．５年、２年、２．５年または３年後、標準のプロトコルによって決定されるコロニー形成単位で測定したとき、細菌株の少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％または９０％が残存する。
【０１６２】
配列
配列番号１（Ｂｌａｕｔｉａ  ｓｔｅｒｃｏｒｉｓ株ＧＡＭ６−１  １６ＳリボソームＲＮＡ遺伝子、部分配列−ＨＭ６２６１７７）
2019048857.tif 000002
【０１６３】
配列番号２（Ｂｌａｕｔｉａ  ｗｅｘｌｅｒａｅ株ＷＡＬ１４５０７  １６ＳリボソームＲＮＡ遺伝子、部分配列−ＥＦ０３６４６７）
2019048857.tif 000003
【０１６４】
配列番号３（Ｂｌａｕｔｉａ  ｓｔｅｒｃｏｒｉｓ株８３０に関するコンセンサス１６Ｓ  ｒＲＮＡ配列）
2019048857.tif 000004
2019048857.tif 000005
【０１６５】
配列番号４（Ｂｌａｕｔｉａ  ｗｅｘｌｅｒａｅ株ＭＲＸ００８に関するコンセンサス１６Ｓ  ｒＲＮＡ配列）
2019048857.tif 000006
【０１６６】
配列番号５（Ｂｌａｕｔｉａ  ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ株Ｓ５ａ３６  １６ＳリボソームＲＮＡ遺伝子、部分配列−Ｘ９５６２４．１）
2019048857.tif 000007
2019048857.tif 000008
【０１６７】
参照文献
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［１８］Ｂｅｒｎａｌｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９６）  Ａｒｃｈ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１６６（３），１７６−１８３．
［１９］Ｐａｒｋ  ｅｔ  ａｌ．（２０１２）  Ｉｎｔ  Ｊ  Ｓｙｓｔ  Ｅｖｏｌ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．６２（Ｐｔ  ４）：７７６−９．
［２０］Ｍａｓｃｏ  ｅｔ  ａｌ．（２００３）  Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，２６：５５７−５６３．
［２１］Ｓｒｕｔｋｏｖａ  ｅｔ  ａｌ．（２０１１）  Ｊ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，８７（１）：１０−６．
［２２］Ｒｏｂｉｎｓｏｎ  ａｎｄ  Ｇｅｂｈａｒｔ（２００８）  Ｍｏｌ  Ｉｎｔｅｒｖ，８（５）：２４２−２５３．
［２３］Ｚｈｏｕ  ｅｔ  ａｌ．（２０１０）  Ｐａｉｎ．１４８（３）：４５４−４６１．
［２４］Ｍｉｙａｍｏｔｏ−Ｓｈｉｎｏｈａｒａ  ｅｔ  ａｌ．（２００８）  Ｊ．Ｇｅｎ．Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．，５４，９−２４．
［２５］Ｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｆｒｅｅｚｅ−Ｄｒｙｉｎｇ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，ｅｄ．ｂｙ  Ｄａｙ  ａｎｄ  ＭｃＬｅｌｌａｎ，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ．
［２６］Ｌｅｓｌｉｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）  Ａｐｐｌ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．６１，３５９２−３５９７．
［２７］Ｍｉｔｒｏｐｏｕｌｏｕ  ｅｔ  ａｌ．（２０１３）  Ｊ  Ｎｕｔｒ  Ｍｅｔａｂ．（２０１３）  ７１６８６１．
［２８］Ｋａｉｌａｓａｐａｔｈｙ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）  Ｃｕｒｒ  Ｉｓｓｕｅｓ  Ｉｎｔｅｓｔ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．３（２）：３９−４８．
［２９］Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，（１９９４），Ｅｄｉｔｅｄ  ｂｙ  Ａ  Ｗａｄｅ  ａｎｄ  ＰＪ  Ｗｅｌｌｅｒ
［３０］Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．（Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ  ｅｄｉｔ．１９８５）
［３１］ＵＳ  ２０１６／００６７１８８
［３２］Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｍｅｄｉａ，Ｆｏｕｒｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ（２０１０）  Ｒｏｎａｌｄ  Ａｔｌａｓ，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ．
［３３］Ｍａｉｎｔａｉｎｉｎｇ  Ｃｕｌｔｕｒｅｓ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｉｎｄｕｓｔｒｙ（１９９６）  Ｊｅｎｎｉｅ  Ｃ．Ｈｕｎｔｅｒ−Ｃｅｖｅｒａ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ
［３４］Ｓｔｒｏｂｅｌ（２００９）  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．５８１：２４７−６１．
［３５］Ｇｅｎｎａｒｏ（２０００）  Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ．２０ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，ＩＳＢＮ：０６８３３０６４７２．
［３６］Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ：Ａｎ  Ｉｎｔｅｎｓｉｖｅ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｃｏｕｒｓｅ，（Ｒｅａｍ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，１９９８，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ）．
［３７］Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ｓ．Ｃｏｌｏｗｉｃｋ  ａｎｄ
Ｎ．Ｋａｐｌａｎ，ｅｄｓ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）
［３８］Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌｓ．Ｉ−ＩＶ（Ｄ．Ｍ．Ｗｅｉｒ  ａｎｄ  Ｃ．Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ，ｅｄｓ，１９８６，Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ）［３９］Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，３ｒｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｃｏｌｄ
Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ）．
［４０］Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｓｕｒｆａｃｅ  ａｎｄ  Ｃｏｌｌｏｉｄａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（Ｂｉｒｄｉ，Ｋ．Ｓ．ｅｄ．，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，１９９７）
［４１］Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ）（２００２）  Ｓｈｏｒｔ  ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｂｉｏｌｏｇｙ，５ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ）．
［４２］ＰＣＲ（Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  Ｓｅｒｉｅｓ），２ｎｄ  ｅｄ．（Ｎｅｗｔｏｎ  ＆  Ｇｒａｈａｍ  ｅｄｓ．，１９９７，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｖｅｒｌａｇ）
［４３］Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，１９８７）  Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ  ３０
［４４］Ｓｍｉｔｈ  ＆  Ｗａｔｅｒｍａｎ（１９８１）  Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２−４８９．
［４５］ＸＩＦＡＸＡＮ−  ｒｉｆａｘｉｍｉｎ  ｔａｂｌｅｔ，Ｓａｌｉｘ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．−  ＦＤＡ  Ｈｉｇｈｌｉｇｈｔｓ  ｏｆ  Ｐｒｅｓｃｒｉｂｉｎｇ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ，Ｒｅｖｉｓｅｄ  Ｎｏｖｅｍｂｅｒ  ２０１５
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９−１】
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【図９−２】
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【図１０−１】
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【図１０−２】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３−１】
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【図２３−２】
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【配列表】
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