(57)【要約】【課題】トール様受容体４（ＴＬＲ４）リガンドおよび他のバイオマーカーのレベルの上昇と関連した障害を診断および処置するための方法および組成物を提供すること。【解決手段】本発明は、中和抗ＴＬＲ４抗体を含めた、ＴＬＲ４シグナル伝達を妨害し、または別段にアンタゴナイズする作用物質を使用して、ＴＬＲ４リガンドおよび他のバイオマーカーのレベルの上昇と関連する障害の症状を処置し、その進行を遅延させ、またはそれを別段に寛解させる方法にも関する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
本明細書に記載の発明。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、２０１３年１０月２２日に出願された米国仮出願第６１／８９４，０４２号に対する利益を主張する。この出願の内容全体が、本明細書によって参考として援用される。
【０００２】
発明の分野
本発明は一般に、トール様受容体４（ＴＬＲ４）リガンドおよび他のバイオマーカーのレベルの上昇と関連した障害を診断および処置するための方法および組成物に関する。本発明は、中和抗ＴＬＲ４抗体を含めた、ＴＬＲ−４シグナル伝達を妨害し、または別段にアンタゴナイズする作用物質を使用してＴＬＲ４リガンドおよび他のバイオマーカーのレベルが上昇した患者における障害の症状を処置し、その進行を遅延させ、またはそれを別段に寛解させる方法にも関する。
【背景技術】
【０００３】
発明の背景
Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ中に最初に発見されたトール受容体は、タンパク質の細胞外部分中のロイシンリッチリピート（ＬＲＲ）、および１つまたは２つのシステインリッチドメインを有するＩ型膜貫通タンパク質である。Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａトール受容体の哺乳動物同族体は、「トール様受容体」（ＴＬＲ）として公知である。ＴＬＲは、微生物粒子を認識し、これらの微生物粒子の源に対する免疫細胞を活性化することによって先天性免疫において役割を果たす。ヒトでは、１１のトール様受容体、ＴＬＲ１〜１１が同定されており、これらの細胞内ドメインのＩＬ−１受容体の細胞内ドメインとの相同性によって、かつ細胞外ロイシンリッチリピートの存在によって特徴付けられる。異なるタイプのＴＬＲが、異なるタイプの微生物粒子によって活性化される。例えば、ＴＬＲ４は主に、リポ多糖（ＬＰＳ）によって活性化される。ＴＬＲ４は、アクセサリータンパク質、骨髄分化タンパク質−２（ＭＤ−２）と関連していることが示された。このタンパク質は、ＴＬＲ４と直接相互作用することが見出されており、ＭＤ−２は、ＴＬＲ４の翻訳後修飾を可能にし、かつ細胞表面へのその輸送を促進する能力を有する。ＴＬＲ４およびＭＤ−２は、細胞表面上で複合体を形成する。
【０００４】
ＴＬＲ４は、いくつかの障害に関与しており、抗ＴＬＲ４剤（ａｎｔｉ−ＴＬＲ４  ａｇｅｎｔ）が治療剤として開発されている。すべての患者が現在のスタンダードオブケア療法に応答するわけではない。したがって、特定の処置、例えば、特定の抗ＴＬＲ４療法を用いた処置の有望な候補である患者を同定するのに使用するための組成物および方法の必要性が存在する。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本明細書に提供される組成物および方法は、障害を罹患している患者集団であって、患者は、１種または複数のＴＬＲ４リガンドまたは他のＴＬＲ４関連バイオマーカーのレベルが上昇している、患者集団を同定し、または別段に洗練させるのに有用である。これらの患者は、単独で、またはＴＬＲ４／ＭＤ−２複合体としてのアクセサリータンパク質ＭＤ−２という状況で、ＴＬＲ４シグナル伝達を妨害し、または別段にアンタゴナイズし、ＴＬＲ４の少なくとも１つの生物活性を中和する作用物質（例えば、抗体または他のポリペプチドベース治療薬、ペプチドベース治療薬、低分子阻害剤、核酸ベース治療薬、およびこれらの誘導体）を用いた処置の適当な候補として同定される。
【０００６】
障害を罹患している、または罹患していると疑われる一部の患者では、流体および他の生体試料は、上昇したレベルのＴＬＲ４リガンドおよび他のバイオマーカーを含有する。これらのＴＬＲ４リガンドおよび他のバイオマーカーは、炎症促進性サイトカインを産生するように細胞を刺激する。しかし、ＴＬＲ４シグナル伝達を妨害し、阻害し、低減し、または別段にアンタゴナイズする抗ＴＬＲ４アンタゴニスト、例えば、中和抗ＴＬＲ４抗体または他のポリペプチドベース治療薬、ペプチドベース治療薬、低分子阻害剤、核酸ベース治療薬、およびこれらの誘導体を使用すると、１種または複数のＴＬＲ４リガンドおよび／または他のバイオマーカーの発現のレベルの上昇を呈する患者に由来する試料中でこの刺激が遮断されることが本明細書で示されている。したがって、本組成物および方法は、１種もしくは複数のＴＬＲ４リガンドおよび／または他のバイオマーカーの発現のレベルの上昇を呈する患者に、抗ＴＬＲ４アンタゴニスト、例えば、中和抗ＴＬＲ４抗体、または他のポリペプチドベース治療薬、ペプチドベース治療薬、低分子阻害剤、核酸ベース治療薬、およびこれらの誘導体を投与することによって、ＴＬＲ４シグナル伝達、異常な、例えば、上昇したＴＬＲ４リガンド発現および／もしくは活性、異常な炎症促進性サイトカイン産生、ならびに／またはこれらの組合せに依存し、それによって推進され、それと関連し、またはそれによって別段にインパクトを与えられる障害の症状を、処置し、その進行を遅延させ、またはそれを別段に寛解させるのに有用である。抗ＴＬＲ４アンタゴニスト、例えば、本明細書に記載のものなどの中和抗ＴＬＲ４抗体を用いた処置の有望な適当な候補である患者は、１種または複数のＴＬＲ４リガンドまたは他のバイオマーカーのレベルを検出することによって同定される。一部の実施形態では、１種または複数のＴＬＲ４リガンドまたは他のバイオマーカーのレベルが上昇していない患者は、依然として、本明細書に記載の中和抗ＴＬＲ４抗体のいずれかを含む抗ＴＬＲ４アンタゴニスト、または他のポリペプチドベース治療薬、ペプチドベース治療薬、低分子阻害剤、核酸ベース治療薬、およびこれらの誘導体で処置され得る。
【０００７】
有望な候補を同定するこれらの方法で使用するのに適したＴＬＲ４リガンドおよび他のバイオマーカーとしては、抗シトルリン化タンパク質抗体（ＡＣＰＡ）、シトルリン化タンパク質、免疫複合体中のシトルリン化タンパク質、例えば、ＩｇＧタンパク質（ｃＦｂ−ＩＣ）またはＩｇＥタンパク質を含む免疫複合体中のシトルリン化フィブリノーゲン（ｃＦｂ）、ＨＭＧＢ１、Ｓ１００Ａ８／Ａ９、テネイシンＣ、ＬＰＳ、熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）、フィブロネクチン、ヒアルロナン、Ｄｅｒ  Ｐ２、呼吸器合胞体ウイルスＦ（ＲＳＶ）Ｆタンパク質、界面活性剤Ａ、コクサッキーウイルス（Ｃｏｘｓａｋｉｅｖｉｒｕｓ）Ｂ４（ＣＳＶ  Ｂ４）、ＣＸＣＬ１０、レジスチン、フェチュインＡ、飽和脂肪酸（ＳＦＡ）、バイグリカン、修飾低密度リポタンパク質（ｍＬＤＬ）、終末糖化最終産物（ＡＧＥ）、およびこれらの組合せがある。一部の実施形態では、シトルリン化タンパク質は、シトルリン化フィブリノーゲン、シトルリン化フィブリン、シトルリン化ビメンチン、シトルリン化ヒストン（例えば、シトルリン化ヒストン２ｂ）、シトルリン化エノラーゼまたはシトルリン化ケモカイン（例えば、シトルリン化ＣＸＣＬ１０）である。一部の実施形態では、ＴＬＲ４リガンドおよび／または他のバイオマーカーの組合せが検出され、例えば、少なくとも２種のＴＬＲ４リガンドおよび／もしくは他のバイオマーカーが検出され、少なくとも３種のＴＬＲ４リガンドおよび／もしくは他のバイオマーカーが検出され、少なくとも４種のＴＬＲ４リガンドおよび／もしくは他のバイオマーカーが検出され、少なくとも５種のＴＬＲ４リガンドおよび／もしくは他のバイオマーカーが検出され、少なくとも６種のＴＬＲ４リガンドおよび／もしくは他のバイオマーカーが検出され、少なくとも８種のＴＬＲ４リガンドおよび／もしくは他のバイオマーカーが検出され、少なくとも９種のＴＬＲ４リガンドおよび／もしくは他のバイオマーカーが検出され、または少なくとも１０種もしくはそれ超のＴＬＲ４リガンドおよび／もしくは他のバイオマーカーが検出される。
【０００８】
一部の実施形態では、ＴＬＲ４リガンドまたは他のバイオマーカーは、Ｓ１００Ａ８／Ａ９である。一部の実施形態では、ＴＬＲ４リガンドまたは他のバイオマーカーは、ｃＦｂ−ＩＣである。一部の実施形態では、ＴＬＲ４リガンドまたは他のバイオマーカーは、ＡＣＰＡである。一部の実施形態では、ＴＬＲ４リガンドまたは他のバイオマーカーは、ＨＭＧＢ１である。一部の実施形態では、ＴＬＲ４リガンドまたは他のバイオマーカーは、Ｓ１００Ａ８／Ａ９とＨＭＧＢ１との組合せである。一部の実施形態では、ＴＬＲ４リガンドまたは他のバイオマーカーは、Ｓ１００Ａ８／Ａ９とｃＦｂ−ＩＣとの組合せである。一部の実施形態では、ＴＬＲ４リガンドまたは他のバイオマーカーは、Ｓ１００Ａ８／Ａ９とＡＣＰＡとの組合せである。一部の実施形態では、ＴＬＲ４リガンドまたは他のバイオマーカーは、ＡＣＰＡとｃＦｂ−ＩＣとの組合せである。一部の実施形態では、ＴＬＲ４リガンドまたは他のバイオマーカーは、ＡＣＰＡとＨＭＧＢ１との組合せである。一部の実施形態では、ＴＬＲ４リガンドまたは他のバイオマーカーは、ＨＭＧＢ１とｃＦｂ−ＩＣとの組合せである。一部の実施形態では、ＴＬＲ４リガンドまたは他のバイオマーカーは、Ｓ１００Ａ８／Ａ９、ＡＣＰＡ、およびＨＭＧＢ１の組合せである。一部の実施形態では、ＴＬＲ４リガンドまたは他のバイオマーカーは、Ｓ１００Ａ８／Ａ９、ＡＣＰＡ、およびｃＦｂ−ＩＣの組合せである。一部の実施形態では、ＴＬＲ４リガンドまたは他のバイオマーカーは、Ｓ１００Ａ８／Ａ９、ｃＦｂ−ＩＣ、およびＨＭＧＢ１の組合せである。一部の実施形態では、ＴＬＲ４リガンドまたは他のバイオマーカーは、ＡＣＰＡ、ＨＭＧＢ１、およびｃＦｂ−ＩＣの組合せである。一部の実施形態では、ＴＬＲ４リガンドまたは他のバイオマーカーは、Ｓ１００Ａ８／Ａ９、ｃＦｂ−ＩＣ、ＡＣＰＡ、およびＨＭＧＢ１の組合せである。
【０００９】
一部の実施形態では、ＴＬＲ４リガンドまたは他のバイオマーカーは、抗ＴＬＲ４剤、例えば、ＮＩ−０１０１などの抗ＴＬＲ４  ｍＡｂへの曝露に対する単球応答の予測因子である。一部の実施形態では、抗ＴＬＲ４処置に対する単球応答の予測因子は、Ｓ１００Ａ８／Ａ９である。一部の実施形態では、抗ＴＬＲ４処置に対する単球応答の予測因子は、ＡＣＰＡである。一部の実施形態では、抗ＴＬＲ４処置に対する単球応答の予測因子は、ＨＭＧＢ１である。一部の実施形態では、抗ＴＬＲ４処置に対する単球応答の予測因子は、ｃＦｂ−ＩＣである。
【００１０】
一部の実施形態では、ＴＬＲ４リガンドまたは他のバイオマーカーは、抗ＴＬＲ４剤、例えば、ＮＩ−０１０１などの抗ＴＬＲ４  ｍＡｂへの曝露に対する線維芽細胞応答の予測因子である。一部の実施形態では、抗ＴＬＲ４処置に対する線維芽細胞応答の予測因子は、ｃＦｂ−ＩＣである。
【００１１】
一部の実施形態では、ＴＬＲ４リガンドまたは他のバイオマーカーは、抗ＴＬＲ４剤、例えば、ＮＩ−０１０１などの抗ＴＬＲ４  ｍＡｂへの曝露に対する単球および線維芽細胞応答の予測因子である。一部の実施形態では、単球および線維芽細胞応答の予測因子は、ＡＣＰＡである。一部の実施形態では、単球および線維芽細胞応答の予測因子は、ｃＦｂ−ＩＣである。一部の実施形態では、単球および線維芽細胞応答の予測因子は、Ｓ１００Ａ８／Ａ９である。一部の実施形態では、単球および線維芽細胞応答の予測因子は、ＨＭＧＢ１である。一部の実施形態では、単球および線維芽細胞応答の予測因子は、Ｓ１００Ａ８／Ａ９とＨＭＧＢ１との組合せである。一部の実施形態では、単球および線維芽細胞応答の予測因子は、Ｓ１００Ａ８／Ａ９とｃＦｂ−ＩＣとの組合せである。一部の実施形態では、単球および線維芽細胞応答の予測因子は、Ｓ１００Ａ８／Ａ９とＡＣＰＡとの組合せである。一部の実施形態では、単球および線維芽細胞応答の予測因子は、ＡＣＰＡとｃＦｂ−ＩＣとの組合せである。一部の実施形態では、単球および線維芽細胞応答の予測因子は、ＡＣＰＡとＨＭＧＢ１との組合せである。一部の実施形態では、単球および線維芽細胞応答の予測因子は、ＨＭＧＢ１とｃＦｂ−ＩＣとの組合せである。一部の実施形態では、単球および線維芽細胞応答の予測因子は、Ｓ１００Ａ８／Ａ９、ＡＣＰＡ、およびＨＭＧＢ１の組合せである。一部の実施形態では、単球および線維芽細胞応答の予測因子は、Ｓ１００Ａ８／Ａ９、ＡＣＰＡ、およびｃＦｂ−ＩＣの組合せである。一部の実施形態では、単球および線維芽細胞応答の予測因子は、Ｓ１００Ａ８／Ａ９、ｃＦｂ−ＩＣ、およびＨＭＧＢ１の組合せである。一部の実施形態では、単球および線維芽細胞応答の予測因子は、ＡＣＰＡ、ＨＭＧＢ１、およびｃＦｂ−ＩＣの組合せである。一部の実施形態では、単球および線維芽細胞応答の予測因子は、Ｓ１００Ａ８／Ａ９、ｃＦｂ−ＩＣ、ＡＣＰＡ、およびＨＭＧＢ１の組合せである。
【００１２】
これらのマーカーの１種または複数のレベルが上昇している患者は、１種または複数の抗ＴＬＲ４アンタゴニスト、例えば、本明明細書に記載の中和抗ＴＬＲ４抗体を用いた療法の適当な候補として同定される。本明細書において、語句「発現のレベルの上昇」は、障害を罹患していない、もしくは障害を罹患していると疑われていない患者に由来する試料、または他の対照試料中のＴＬＲ４リガンドまたは他のバイオマーカーの発現のベースラインレベルより大きい発現のレベルを指す。非限定的な例として、いくつかのＴＬＲ４リガンドのベースラインレベルを図２Ａ〜２Ｅに示す。例えば、ＡＣＰＡ発現のベースラインレベルは、約２０００Ｕｌ／ｍｌ未満、例えば、約１５００Ｕｌ／ｍｌ未満、約１０００Ｕｌ／ｍｌ未満、および／または約７５０Ｕｌ／ｍｌ未満である（図２Ａ、表１）。ｃＦｂ−ＩＣのベースラインレベルは、例えば、標準ＥＬＩＳＡ（５０μＬ／ウェルのＰＢＳ中の１μｇ／ｍＬのマウス抗ヒトシトルリン化フィブリノーゲン（ｃＦｂ）抗体、３Ｄ１、（抗ｃＦｂ、クローン３Ｄ１、＃ＡＭ３２００４ＰＵ−Ｎ、Ａｃｒｉｓ）でプレートをコーティングし；ＲＡ患者に由来する１／１０に希釈した（ＰＢＳ中）滑液試料５０μＬを添加し；ＰＢＳ中１／１００００、すべてのウェル中５０μＬ／ウェル、その後５０μＬ／ウェルのＴＭＢで、抗ヒトＩｇＧ−Ｆｃ−ＨＲＰ（ＳＩＧＭＡ、＃Ａ０１７０）との結合を検出する）を使用して測定した場合、１．５もしくはそれ未満のＯＤ  ４５０ｎｍの読み、例えば、１．０もしくはそれ未満のＯＤ  ４５０ｎｍの読み、および／または、０．５もしくはそれ未満のＯＤ  ４５０ｎｍの読みである（図２Ｂ、表１）。ＨＭＧＢ１のベースラインレベルは、約１００ｎｇ／ｍｌ未満、例えば、約７５ｎｇ／ｍｌ未満、約５０ｎｇ／ｍｌ未満、および／または、約２５ｎｇ／ｍｌ未満である（図２Ｃ、表１）。Ｓ１００Ａ８／Ａ９のベースラインレベルは、約５００ｎｇ／ｍｌ未満、例えば、約４００ｎｇ／ｍｌ未満、約３００ｎｇ／ｍｌ未満、約２００ｎｇ／ｍｌ未満、および／または約１００ｎｇ／ｍｌ未満である（図２Ｄ、表１）。テネイシンＣのベースラインレベルは、約１００ｎｇ／ｍｌ未満、例えば、約７５ｎｇ／ｍｌ未満、約５０ｎｇ／ｍｌ未満、約２５ｎｇ／ｍｌ未満、および／または約１０ｎｇ／ｍｌ未満である（図２Ｃ、表１）。一部の実施形態では、ＴＬＲ４リガンドまたは他のバイオマーカーの発現のレベルの上昇は、有意なレベルの上昇である。
【００１３】
これらのマーカーの１種または複数のある特定の検出レベルを有する患者は、各マーカーのカットオフレベルと比較したマーカーの検出レベルに基づいて、「レスポンダー」または「非レスポンダー」として同定される。非限定的な例として、いくつかのＴＬＲ４リガンドのカットオフレベルを実施例５に示す。例えば、滑液試料中の単球応答スコアについて３８７ｎｇ／ｍｌ超またはそれに等しいＳ１００Ａ８／Ａ９の検出レベルを有する患者は、中和抗ＴＬＲ４抗体、例えば、ＮＩ−０１０１などの抗ＴＬＲ４療法を用いた処置に対する「レスポンダー」として同定され、一方、滑液試料中の単球応答スコアについて３８７ｎｇ／ｍｌ未満のＳ１００Ａ８／Ａ９の検出レベルを有する患者は、抗ＴＬＲ４療法を用いた処置に対する「非レスポンダー」として同定される。滑液試料中の単球応答スコアについて１０００Ｕｌ／ｍｌ超またはそれに等しいＡＣＰＡの検出レベルを有する患者は、中和抗ＴＬＲ４抗体、例えば、ＮＩ−０１０１などの抗ＴＬＲ４療法を用いた処置に対する「レスポンダー」として同定され、一方、滑液試料中の単球応答スコアについて１０００Ｕｌ／ｍｌ未満のＡＣＰＡの検出レベルを有する患者は、抗ＴＬＲ４療法を用いた処置に対する「非レスポンダー」として同定される。滑液試料中の単球応答スコアについて５０ｎｇ／ｍｌ超またはそれに等しいＨＭＧＢ１の検出レベルを有する患者は、中和抗ＴＬＲ４抗体、例えば、ＮＩ−０１０１などの抗ＴＬＲ４療法を用いた処置に対する「レスポンダー」として同定され、一方、滑液試料中の単球応答スコアについて５０ｎｇ／ｍｌ未満のＨＭＧＢ１の検出レベルを有する患者は、抗ＴＬＲ４療法を用いた処置に対する「非レスポンダー」として同定される。滑液試料中の単球応答スコアについて１．２超またはそれに等しい検出ｃＦｂ−ＩＣのＯＤ  ４５０ｎｍの読みを有する患者は、中和抗ＴＬＲ４抗体、例えば、ＮＩ−０１０１などの抗ＴＬＲ４療法を用いた処置に対する「レスポンダー」として同定され、一方、滑液試料中の単球応答スコアについて１．２未満の検出ｃＦｂ−ＩＣのＯＤ  ４５０ｎｍの読みを有する患者は、抗ＴＬＲ４療法を用いた処置に対する「非レスポンダー」として同定される。
【００１４】
滑液試料中の線維芽細胞応答スコアについて１．２超またはそれに等しい検出ｃＦｂ−ＩＣのＯＤ  ４５０ｎｍの読みを有する患者は、中和抗ＴＬＲ４抗体、例えば、ＮＩ−０１０１などの抗ＴＬＲ４療法を用いた処置に対する「レスポンダー」として同定され、一方、滑液試料中の線維芽細胞応答スコアについて１．２未満の検出ｃＦｂ−ＩＣのＯＤ  ４５０ｎｍの読みを有する患者は、抗ＴＬＲ４療法を用いた処置に対する「非レスポンダー」として同定される。滑液試料中の線維芽細胞応答スコアについて１０００Ｕｌ／ｍｌ超またはそれに等しいＡＣＰＡの検出レベルを有する患者は、中和抗ＴＬＲ４抗体、例えば、ＮＩ−０１０１などの抗ＴＬＲ４療法を用いた処置に対する「レスポンダー」として同定され、一方、滑液試料中の線維芽細胞応答スコアについて１０００Ｕｌ／ｍｌ未満のＡＣＰＡの検出レベルを有する患者は、抗ＴＬＲ４療法を用いた処置に対する「非レスポンダー」として同定される。
【００１５】
滑液試料中の組み合わせた単球および線維芽細胞応答スコア（ｃＭＦＲＳ）について０．５５超またはそれに等しい検出ｃＦｂ−ＩＣのＯＤ  ４５０ｎｍの読みを有する患者は、中和抗ＴＬＲ４抗体、例えば、ＮＩ−０１０１などの抗ＴＬＲ４療法を用いた処置に対する「レスポンダー」として同定され、一方、滑液試料中のｃＭＦＲＳについて０．５５未満の検出ｃＦｂ−ＩＣのＯＤ  ４５０ｎｍの読みを有する患者は、抗ＴＬＲ４療法を用いた処置に対する「非レスポンダー」として同定される。滑液試料中のｃＭＦＲＳについて３３０Ｕｌ／ｍｌ超またはそれに等しいＡＣＰＡの検出レベルを有する患者は、中和抗ＴＬＲ４抗体、例えば、ＮＩ−０１０１などの抗ＴＬＲ４療法を用いた処置に対する「レスポンダー」として同定され、一方、滑液試料中のｃＭＦＲＳについて３３０Ｕｌ／ｍｌ未満のＡＣＰＡの検出レベルを有する患者は、抗ＴＬＲ４療法を用いた処置に対する「非レスポンダー」として同定される。滑液試料中のｃＭＦＲＳについて４５ｎｇ／ｍｌ超またはそれに等しいＨＭＧＢ１の検出レベルを有する患者は、中和抗ＴＬＲ４抗体、例えば、ＮＩ−０１０１などの抗ＴＬＲ４療法を用いた処置に対する「レスポンダー」として同定され、一方、滑液試料中のｃＭＦＲＳについて４５ｎｇ／ｍｌ未満のＨＭＧＢ１の検出レベルを有する患者は、抗ＴＬＲ４療法を用いた処置に対する「非レスポンダー」として同定される。滑液試料中のｃＭＦＲＳについて３８７ｎｇ／ｍｌ超またはそれに等しいＳ１００８Ａ８／Ａ９の検出レベルを有する患者は、中和抗ＴＬＲ４抗体、例えば、ＮＩ−０１０１などの抗ＴＬＲ４療法を用いた処置に対する「レスポンダー」として同定され、一方、滑液試料中のｃＭＦＲＳについて３８７ｎｇ／ｍｌ未満のＳ１００８Ａ８／Ａ９の検出レベルを有する患者は、抗ＴＬＲ４療法を用いた処置に対する「非レスポンダー」として同定される。
【００１６】
滑液試料中の組み合わせた単球および線維芽細胞応答スコア（ｃＭＦＲＳ）について０．５５超またはそれに等しい検出ｃＦｂ−ＩＣのＯＤ  ４５０ｎｍの読み、および滑液試料中のｃＭＦＲＳについて３８７ｎｇ／ｍｌ超またはそれに等しいＳ１００８Ａ８／Ａ９の検出レベルを有する患者は、中和抗ＴＬＲ４抗体、例えば、ＮＩ−０１０１などの抗ＴＬＲ４療法を用いた処置に対する「レスポンダー」として同定され、一方、滑液試料中のｃＭＦＲＳについて０．５５未満の検出ｃＦｂ−ＩＣのＯＤ  ４５０ｎｍの読み、滑液試料中のｃＭＦＲＳについて３８７ｎｇ／ｍｌ未満のＳ１００８Ａ８／Ａ９の検出レベルを有する患者は、抗ＴＬＲ４療法を用いた処置に対する「非レスポンダー」として同定される。
【００１７】
試料は、例えば、血液または血液コンポーネント、例えば、血清、血漿である。一部の実施形態では、試料は、尿である。一部の実施形態では、流体は、滑液である。一部の実施形態では、流体は、気管支肺胞液である。一部の実施形態では、流体は、脳脊髄液である。一部の実施形態では、流体は、唾液である。
【００１８】
これらのＴＬＲ４リガンドおよび／またはバイオマーカーの１種または複数のレベルを検出することに加えて、抗ＴＬＲ４アンタゴニストを用いた処置に適した患者は、患者集団を同定し、または別段に洗練することについてバイオマーカーの感受性および特異性を改善することになるいくつかの追加の生物学的および臨床パラメータのいずれかを評価することによって同定することもできる。代わりに、これらの追加の生物学的および臨床パラメータを、抗ＴＬＲ４アンタゴニストまたは他の適当な療法を用いた処置の適当な候補である患者を同定するための手段として単独で使用することができる。これらの生物学的および臨床パラメータは、非限定的な例として、以下のうちのいずれかを含む：リウマチ因子レベル、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）レベル、血球数、血液細胞亜集団上のＴＬＲ４受容体の存在、ＴＬＲ４多型、ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）多型、ペプチジルアルギニンデイミナーゼ（ＰＡＤ）酵素およびＰＡＤ酵素多型、Ｆｃγ受容体ＩＩａ（ＦｃγＩＩａ）多型、ＭＤ−２レベル、可溶性ＣＤ１４レベル、ベースラインの患者の人口統計データ（例えば、ボディーマスインデックス（ＢＭＩ）、性別、年齢など）、ならびに／または患者の医療歴（例えば、診断時の障害評価スケジュール（ＤＡＳ２８）、処置開始時のＤＡＳ２８、疾患の継続時間、疾患開始時の年齢、ＤＡＳ２８、米国リウマチ学会（ＡＣＲ）、および／もしくは欧州リウマチ学会議（ＥＵＬＡＲ）応答基準に基づく先の処置に対する応答など）。
【００１９】
本発明の組成物および方法を用いて有用である障害には、異常なＴＬＲ４／ＭＤ−２活性化および／または異常なＴＬＲ４リガンド活性（例えば、炎症促進性サイトカイン産生の異常な刺激、例えば、ＩＬ−６、ＴＮＦαおよび／またはＩＬ−８産生の異常な刺激など）を伴った異常な、例えば、上昇したＴＬＲ４発現および／または活性の任意の障害が含まれる。例えば、いくつかのＴＬＲ４リガンドは、様々な障害と関連していると考えられている。非限定的な例として、ＬＰＳは、敗血症、急性肺傷害、および／またはＲＡなどの障害と関連していることが公知であり；テネイシンＣは、関節炎、肝虚血再潅流および／または心虚血再潅流などの障害と関連していることが公知であり；ＨＭＧＢ１は、ＲＡ、骨関節炎（ＯＡ）、虚血／再潅流、１型糖尿病、膵島移植、ループス、および／または敗血症などの障害と関連していることが公知であり；Ｓ１００Ａ８／Ａ９は、ＲＡ、ＯＡ、若年性特発性関節炎（ＪＩＡ）、糖尿病、移植片拒絶、ループス、アテローム性動脈硬化症、敗血症、および／またはがんなどの障害と関連していることが公知であり；シトルリン化フィブリノーゲンは、ＲＡおよびアテローム性動脈硬化症などの障害と関連していることが公知であり；ＡＣＰＡは、ＲＡ、乾癬性関節炎、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、シェーグレン症候群、アルツハイマー病、および／またはアテローム性動脈硬化症などの障害と関連していることが公知である。
【００２０】
非限定的な例としては、本明細書に提供される方法および組成物は、自己免疫および／または炎症性障害などの障害を診断および／または処置するのに適している。適当な自己免疫および／または炎症性障害としては、非限定的な例として、異常なＴＬＲ４シグナル伝達に関連した自己免疫および／または炎症性障害、異常な、例えば、上昇したＴＬＲ４リガンド発現および／または活性に関連した自己免疫および／または炎症性障害、異常な炎症促進性サイトカイン産生に関連した自己免疫および／または炎症性障害、ならびにこれらの組合せがある。
【００２１】
一部の実施形態では、障害は、非限定的な例としてＲＡ、骨関節炎（ＯＡ）、乾癬性関節炎、または若年性特発性関節炎（ＪＩＡ）を含めた関節炎状態である。一部の実施形態では、障害は、関節リウマチ（ＲＡ）である。一部の実施形態では、障害は、がんである。一部の実施形態では、障害は、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）である。一部の実施形態では、障害は、アテローム性動脈硬化症である。一部の実施形態では、障害は、非限定的な例として、肝臓および／または心臓の虚血／再潅流を含めた虚血再潅流と関連している。一部の実施形態では、障害は、敗血症である。一部の実施形態では、障害は、急性肺傷害である。一部の実施形態では、障害は、１型糖尿病である。一部の実施形態では、障害は、膵島移植と関連している。一部の実施形態では、障害は、ループスである。一部の実施形態では、障害は、移植片拒絶、または細胞、組織、および／もしくは臓器移植と関連した他の障害と関連している。一部の実施形態では、障害は、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）である。一部の実施形態では、障害は、シェーグレン症候群である。一部の実施形態では、障害は、アルツハイマー病である。
【００２２】
患者が１種または複数のＴＬＲ４リガンドまたは他のバイオマーカーのレベルが上昇していると同定された後、次いで彼らは、抗ＴＬＲ４アンタゴニストで処置される。例えば、抗ＴＬＲ４アンタゴニストは、中和抗ＴＬＲ４抗体またはその免疫学的に活性な（例えば、抗原結合性の）断片である。適当な中和抗ＴＬＲ４抗体としては、本明細書に記載の抗ＴＬＲ４抗体、およびＦｃ受容体（ＦｃＲ）に対する親和性が増大した、かつ／またはＦｃＲとの相互作用によって細胞表面結合に対する結合活性が増大した他の抗体のいずれかがある。
【００２３】
一部の実施形態では、ＴＬＲ４に結合する抗体またはその免疫学的に活性な断片は、ＧＧＹＳＷＨ（配列番号１）のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９２％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ超同一であるアミノ酸配列を含む可変重鎖相補性決定領域１（ＶＨ  ＣＤＲ１）；ＹＩＨＹＳＧＹＴＤＦＮＰＳＬＫＴ（配列番号２）のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９２％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ超同一であるアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２領域；およびＫＤＰＳＤＡＦＰＹ（配列番号３）のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９２％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ超同一であるアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３領域；ＲＡＳＱＳＩＳＤＨＬＨ（配列番号４）のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９２％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ超同一であるアミノ酸配列を含む可変軽鎖相補性決定領域１（ＶＬ  ＣＤＲ１）領域；ＹＡＳＨＡＩＳ（配列番号５）のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９２％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ超同一であるアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２領域；およびＱＱＧＨＳＦＰＬＴ（配列番号６）のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９２％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ超同一であるアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３領域を含む。一部の実施形態では、ＴＬＲ４に結合する抗体またはその免疫学的に活性な断片は、重鎖可変アミノ酸配列
【化１】
2019048895.tif 000002
と少なくとも９０％、９２％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ超同一であるアミノ酸配列、および軽鎖可変アミノ酸配列
【化２】
2019048895.tif 000003
と少なくとも９０％、９２％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ超同一であるアミノ酸配列をさらに含む。一部の実施形態では、ＴＬＲ４に結合する抗体またはその免疫学的に活性な断片は、重鎖アミノ酸配列
【化３】
2019048895.tif 000004
と少なくとも９０％、９２％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ超同一であるアミノ酸配列、および軽鎖アミノ酸配列
【化４】
2019048895.tif 000005
と少なくとも９０％、９２％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ超同一であるアミノ酸配列をさらに含む。
【００２４】
一部の実施形態では、抗ＴＬＲ４抗体またはその免疫学的に活性な断片は、２００５年６月１４日に出願され、ＷＯ２００７１１１０６７８として公開されたＰＣＴ／ＩＢ２００５／００４２０６に記載の抗体であり、またはそれに由来し、これらの文献の内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれている。
【００２５】
一部の実施形態では、抗ＴＬＲ４抗体またはその免疫学的に活性な断片は、２００８年５月１４日に出願され、ＷＯ２００９／１０１４７９として公開されたＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＩＢ２００８／００３９７８に記載の抗体であり、またはそれに由来し、これらの文献の内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれている。
【００２６】
一部の実施形態では、抗ＴＬＲ４抗体またはその免疫学的に活性な断片は、例えば、Ｓｈｉｍａｚｕら、Ｊ．  Ｅｘｐ．  Ｍｅｄ．、１８９巻：１７７７〜１７８２頁（１９９９年）；Ｎｉｊｈｕｉｓら、Ｃｌｉｎ  Ｄｉａｇ．  Ｌａｂ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１０巻（４号）：５５８〜６３頁（２００３年）；およびＰｉｖａｒｃｓｉら、Ｉｎｔｌ．  Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍ．、１５巻（６号）：７２１〜７３０頁（２００３年）に記載されているＨＴＡ１２５として公知の抗ＴＬＲ４抗体であり、またはそれに由来し、これらの文献のそれぞれの内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれている。
【００２７】
一部の実施形態では、抗ＴＬＲ４抗体またはその免疫学的に活性な断片は、ドメイン抗体、例えば、２００９年５月１５日に出願され、ＷＯ２００９／１３８４８として公開されたＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＥＰ２００９／０５５９２６に記載のＴＬＲ４に結合するドメイン抗体などであり、またはそれに由来し、これらの文献の内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれている。
【００２８】
一部の実施形態では、抗ＴＬＲ４抗体またはその免疫学的に活性な断片は、細胞表面上で発現されるヒトおよび／またはカニクイザルＴＬＲ４／ＭＤ−２受容体を認識するモノクローナル抗体であり、またはそれに由来する。抗体は、ＴＬＲ４リガンド、例えば、ＬＰＳ、または本明細書に記載の任意の他のＴＬＲ４リガンドによって誘導される受容体活性化および後続の細胞内シグナル伝達を遮断、例えば、中和することができる。本発明の抗体は、ヒトおよびカニクイザルＴＬＲ４／ＭＤ−２受容体複合体に結合し、かつＭＤ−２の存在とは独立にＴＬＲ４にも結合する抗体を含む。
【００２９】
一部の実施形態では、抗ＴＬＲ４抗体またはその免疫学的に活性な断片は、細胞表面上に発現されるヒトおよび／またはカニクイザルＴＬＲ４／ＭＤ−２受容体を介して、例えば、ＬＰＳによって誘導される受容体活性化および後続の細胞内シグナル伝達を遮断することによって、シグナル伝達を妨害し、または別段にアンタゴナイズする。これらの実施形態の例示的なモノクローナル抗体としては、１Ａ１、１Ａ６、１Ｂ１２、１Ｃ７、１Ｃ１０、１Ｃ１２、１Ｄ１０、１Ｅ１１、１Ｅ１１  Ｎ１０３Ｄ、１Ｇ１２、１Ｅ１１．Ｃ１、１Ｅ１１．Ｃ２、１Ｅ１１．Ｃ３、１Ｅ１１．Ｃ４、１Ｅ１１．Ｃ５、１Ｅ１１．Ｃ６、１Ｅ１１．Ｅ１、１Ｅ１１．Ｅ２、１Ｅ１１．Ｅ３、１Ｅ１１．Ｅ４、１Ｅ１１．Ｅ５、１Ｅ１１．Ｃ２Ｅ１、１Ｅ１１．Ｃ２Ｅ３、１Ｅ１１．Ｃ２Ｅ４、および１Ｅ１１．Ｃ２Ｅ５がある。
【００３０】
これらの抗体は、異なる特異性を有する。一部の抗体は、ヒトおよびカニクイザルＴＬＲ４の両方、ならびに／またはヒトおよびカニクイザルＴＬＲ４／ＭＤ−２受容体複合体の両方に対する特異性を示し、これらは、ＬＰＳを介して受容体活性化および後続の細胞内シグナル伝達を阻害することが示された。例えば、１Ｃ１２、１Ｅ１１、１Ｅ１１  Ｎ１０３Ｄ、１Ｅ１１．Ｃ１、１Ｅ１１．Ｃ２、１Ｅ１１．Ｃ３、１Ｅ１１．Ｃ４、１Ｅ１１．Ｃ５、１Ｅ１１．Ｃ６、１Ｅ１１．Ｃ２Ｅ１、１Ｅ１１．Ｃ２Ｅ２、１Ｅ１１．Ｃ２Ｅ３、１Ｅ１１．Ｃ２Ｅ４、および１Ｅ１１．Ｃ２Ｅ５は、ヒトまたはカニクイザルＭＤ−２の存在とは独立にヒトおよびカニクイザルＴＬＲ４の両方に結合する。１Ａ１、１Ａ６、１Ｂ１２、１Ｃ７、１Ｃ１０、１Ｄ１０、および１Ｇ１２は、カニクイザルＭＤ−２の存在とは独立にカニクイザルＴＬＲ４のみに結合する。１Ｅ１１．Ｅ１、１Ｅ１１．Ｅ２、１Ｅ１１．Ｅ３、１Ｅ１１．Ｅ４、および１Ｅ１１．Ｅ５は、ヒトＭＤ−２の存在とは独立にヒトＴＬＲ４のみに結合する。
【００３１】
本発明のヒト化抗体は、本明細書に示したアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含有する。本発明のヒト化抗体は、本明細書に示したアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含有する。
【００３２】
３つの重鎖ＣＤＲは、Ｇ（Ｆ／Ｙ）ＰＩ（Ｒ／Ｇ／Ｗ）（Ｙ／Ｆ／Ｇ）ＧＹＳ（配列番号１４）、ＧＹＳＩＴＧＧＹＳ（配列番号１５）；ＧＦＰＩＲＹＧＹＳ（配列番号１６）；ＧＹＰＩＲＦＧＹＳ（配列番号１７）；ＧＹＰＩＲＨＧＹＳ（配列番号１８）；ＧＦＰＩＧＱＧＹＳ（配列番号１９）；ＧＹＰＩＷＧＧＹＳ（配列番号２０）およびＧＹＰＩＧＧＧＹＳ（配列番号２１）からなる群から選択される可変重鎖相補性決定領域１（ＶＨ  ＣＤＲ１、ＣＤＲＨ１とも本明細書で呼ばれる）アミノ酸配列、ＩＨＹＳＧＹＴ（配列番号２２）の可変重鎖相補性決定領域２（ＶＨ  ＣＤＲ２、ＣＤＲＨ２とも本明細書で呼ばれる）アミノ酸配列；ならびにＡＲＫＤＳＧ（Ｎ／Ｑ／Ｄ／Ｅ）Ｘ１Ｘ２ＰＹ（配列番号２３）（式中、Ｘ１およびＸ２は、それぞれ独立して任意の疎水性アミノ酸である）、ＡＲＫＤＳＧＮＹＦＰＹ（配列番号２４）；ＡＲＫＤＳＧＲＬＬＰＹ（配列番号２５）；ＡＲＫＤＳＧＫＷＬＰＹ（配列番号２６）；ＡＲＫＤＳＧＨＬＭＰＹ（配列番号２７）；ＡＲＫＤＳＧＨＮＹＰＹ（配列番号２８）；ＡＲＫＤＳＧＫＮＦＰＹ（配列番号２９）；ＡＲＫＤＳＧＱＬＦＰＹ（配列番号３０）；ＡＲＫＤＳＧＨＮＬＰＹ（配列番号３１）；ＡＲＫＤＳＧＤＹＦＰＹ（配列番号３２）およびＡＲＫＤＳＧＲＹＷＰＹ（配列番号３３）からなる群から選択される可変重鎖相補性決定領域３（ＶＨ  ＣＤＲ３、ＣＤＲＨ３とも本明細書で呼ばれる）アミノ酸配列と少なくとも９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％、またはそれ超同一であるアミノ酸配列を含む。３つの軽鎖ＣＤＲは、ＱＳＩＳＤＨ（配列番号３４）の可変軽鎖相補性決定領域１（ＶＬ  ＣＤＲ１、ＣＤＲＬ１とも本明細書で呼ばれる）アミノ酸配列；ＹＡＳ（配列番号３５）の可変軽鎖相補性決定領域２（ＶＬ  ＣＤＲ２、ＣＤＲＬ２とも本明細書で呼ばれる）アミノ酸配列；ならびにＱＱＧ（Ｙ／Ｎ）（Ｄ／Ｅ）（Ｆ／Ｙ）ＰＸＴ（配列番号３６）（式中、Ｘは、任意の疎水性アミノ酸である）、ＱＱＧＨＳＦＰＬＴ（配列番号６）；ＱＱＧＮＤＦＰＶＴ（配列番号３７）；ＱＱＧＹＤＥＰＦＴ（配列番号３８）；ＱＱＧＹＤＦＰＦＴ（配列番号３９）；ＱＱＧＹＤＹＰＦＴ（配列番号４０）およびＱＱＧＹＥＦＰＦＴ（配列番号４１）からなる群から選択される可変軽鎖相補性決定領域３（ＶＬ  ＣＤＲ３、ＣＤＲＬ３とも本明細書で呼ばれる）アミノ酸配列と少なくとも９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％、またはそれ超同一であるアミノ酸配列を含む。抗体は、ヒトおよびカニクイザルＴＬＲ４／ＭＤ−２複合体、ヒトおよびカニクイザルＭＤ−２と複合体形成していない場合のヒトおよびカニクイザルＴＬＲ４、ヒトＴＬＲ４／ＭＤ−２複合体、ヒトＭＤ−２と複合体形成していない場合のヒトＴＬＲ４、カニクイザルＴＬＲ４／ＭＤ−２複合体、またはカニクイザルＭＤ−２と複合形成していない場合のカニクイザルＴＬＲ４に結合する。
【００３３】
本発明の抗ＴＬＲ４抗体は、本明細書に示したアミノ酸配列と少なくとも９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％、またはそれ超同一である重鎖可変アミノ酸配列、および／または本明細書に示したアミノ酸配列と少なくとも９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％、もしくはそれ超同一である軽鎖可変アミノ酸を含む抗体も含む。
【００３４】
一部の実施形態では、本明細書に記載の抗ＴＬＲ４抗体は、例えば、Ｆｃ領域またはそのＦｃＲ結合性断片内で少なくとも１つの特異的アミノ酸置換も含み（例えば、ＩｇＧ定常ドメイン内でアミノ酸置換を有するポリペプチド）、その結果、修飾抗体は、未改変抗体（ｕｎａｌｔｅｒｅｄ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）と比較して抗原への結合を保持しながら抗原依存性エフェクター機能の改変を誘発する。例えば、改変抗体（ａｌｔｅｒｅｄ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）は、炎症促進性メディエーター放出の防止を誘発する。好適な実施形態では、改変抗体は、ヒトであり、ＩｇＧ１アイソタイプのものである。
【００３５】
本発明の抗ＴＬＲ４抗体は、抗体のＦｃ部分の定常領域内の少なくとも１つのアミノ酸残基が修飾された改変抗体を含む。例えば、Ｆｃ部分のＣＨ２ドメイン中の少なくとも１つのアミノ酸は、異なる残基、すなわち、アミノ酸置換によって置き換えられている。本明細書に記載の改変抗体では、残基３２５、３２６、および３２８に対応するアミノ酸残基の１つまたは複数は、未改変抗体と比較して異なる残基で置換されている。ガンマ重鎖中の残基の番号付けは、ＥＵインデックスのものである（Ｅｄｅｌｍａｎ，  Ｇ．Ｍ．ら、１９６９年；Ｋａｂａｔ，  Ｅ，  Ａ．、Ｔ．Ｔ．  Ｗｕ、Ｈ．  Ｍ．  Ｐｅｒｒｙ、Ｋ．  Ｓ．  Ｇｏｔｔｅｓｍａｎ、およびＣ．  Ｆｏｅｌｌｅｒ．、１９９１年、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、５版、米国保健社会福祉省、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ、ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ｎ．  ９１−３２４２を参照）。好適な実施形態では、ガンマ重鎖定常領域のＥＵアミノ酸３２５位は、セリンで置換されており、ガンマ重鎖定常領域のＥＵアミノ酸３２８位は、フェニルアラニンで置換されており、その結果、改変されたヒトＩｇＧ１抗体のガンマ重鎖定常領域のＥＵ３２５〜３２８位は、アミノ酸配列ＳＫＡＦ（配列番号１３７）を含む。
【００３６】
本発明は、異常なＴＬＲ４／ＭＤ−２活性化、異常なＴＬＲ４シグナル伝達、異常な、例えば、上昇したＴＬＲ４リガンド発現および／もしくは活性、異常な炎症促進性サイトカイン産生、およびこれらの組合せに関連した病理を処置もしくは防止し、またはこのような病理に関連した症状を軽減する方法であって、中和抗ＴＬＲ４剤、例えば、中和抗ＴＬＲ４抗体を用いた療法に適した患者を同定し、作用物質、例えば、本発明のモノクローナル抗体（例えば、マウスモノクローナルまたはヒト化モノクローナル抗体）をこのような処置または防止が望まれる対象に投与することによって処置もしくは防止、または軽減する方法も提供する。処置される対象は、例えば、ヒトである。モノクローナル抗体は、病理に関連した症状を処置、防止、または軽減するのに十分な量で投与される。対象における病理を処置または防止するのに十分なモノクローナル抗体の量は、例えば、１種または複数の炎症促進性サイトカイン（例えば、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＴＮＦα）のＴＬＲ４リガンド誘導産生を低減するのに十分である量である。本明細書において、用語「低減された」は、本発明のモノクローナル抗体の存在下での炎症促進性サイトカインの産生の減少を指し、産生は、例えば、局所的な炎症促進性サイトカイン産生（例えば、炎症組織の部位における）または全身性の炎症促進性サイトカイン産生である。炎症促進性サイトカインのＴＬＲ４リガンド誘導産生は、本発明のモノクローナル抗体の存在下での炎症促進性サイトカイン産生のレベルが、炎症促進性サイトカイン産生の対照レベル（すなわち、モノクローナル抗体の非存在下での炎症促進性サイトカイン産生のレベル）より５％、１０％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９９％、または１００％超またはそれに等しく低いとき減少している。炎症促進性サイトカイン産生のレベルが測定される。当業者は、炎症促進性サイトカイン産生のレベルを、例えば、本明細書に記載の方法および市販のＥＬＩＳＡキットを含めた様々なアッセイを使用して測定することができることを察知するであろう。
【００３７】
本発明による医薬組成物は、本発明の抗ＴＬＲ４抗体および担体を含むことができる。これらの医薬組成物は、キット、例えば、診断キットなどの中に含めることができる。
【００３８】
本発明は、本明細書に提供される方法のいずれかを実践するためのキットも提供する。例えば、一部の実施形態では、キットは、１種または複数のＴＬＲ４リガンドまたは他のバイオマーカーに特異的な検出試薬、および検出試薬を検出するための手段を含む。
本発明は、例えば、以下の項目を提供する。
（項目１）
障害の症状を軽減する方法であって、対象に由来する生体試料中の１種もしくは複数のＴＬＲ４リガンドまたは１種もしくは複数の他のバイオマーカーのレベルを検出する工程と、前記１種もしくは複数のＴＬＲ４リガンドまたは前記１種もしくは複数のバイオマーカーの前記検出レベルを発現の対照レベルと比較する工程と、前記検出レベルが上昇している場合、抗ＴＬＲ４アンタゴニストを、前記対象に前記障害の前記症状を軽減するのに十分な量で投与する工程とを含む、方法。
（項目２）
前記１種もしくは複数のＴＬＲ４リガンドまたは前記１種もしくは複数のバイオマーカーが、抗シトルリン化タンパク質抗体（ＡＣＰＡ）、シトルリン化タンパク質、ＨＭＧＢ１、Ｓ１００Ａ８／Ａ９、テネイシンＣ、およびこれらの組合せからなる群から選択される、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記シトルリン化タンパク質が、シトルリン化フィブリノーゲン、シトルリン化フィブリン、シトルリン化ビメンチン、シトルリン化ヒストン、シトルリン化エノラーゼ、またはシトルリン化ケモカインである、項目２に記載の方法。
（項目４）
前記シトルリン化ヒストンが、シトルリン化ヒストン２ｂである、項目３に記載の方法。
（項目５）
前記シトルリン化ケモカインが、シトルリン化ＣＸＣＬ１０である、項目３に記載の方法。
（項目６）
前記シトルリン化タンパク質が、免疫複合体中にある、項目２に記載の方法。
（項目７）
免疫複合体中の前記シトルリン化タンパク質が、ＩｇＧタンパク質を含む免疫複合体中のシトルリン化フィブリノーゲン（ｃＦｂ）（ｃＦｂ−ＩＣ）である、項目６に記載の方法。
（項目８）
前記生体試料が、血液であるか、または血液に由来する、項目１に記載の方法。
（項目９）
前記生体試料が、尿であるか、または尿に由来する、項目１に記載の方法。
（項目１０）
前記生体試料が、滑液であるか、または滑液に由来する、項目１に記載の方法。
（項目１１）
前記抗ＴＬＲ４アンタゴニストが、抗ＴＬＲ４抗体またはその免疫学的に活性な断片である、項目１に記載の方法。
（項目１２）
前記抗ＴＬＲ４抗体またはその免疫学的に活性な断片が、ＧＧＹＳＷＨ（配列番号１）の可変重鎖相補性決定領域１（ＶＨ  ＣＤＲ１）アミノ酸配列；ＹＩＨＹＳＧＹＴＤＦＮＰＳＬＫＴ（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２領域；ＫＤＰＳＤＡＦＰＹ（配列番号３）のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３領域；ＲＡＳＱＳＩＳＤＨＬＨ（配列番号４）のアミノ酸配列を含む可変軽鎖相補性決定領域１（ＶＬ  ＣＤＲ１）領域；ＹＡＳＨＡＩＳ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２領域；およびＱＱＧＨＳＦＰＬＴ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３領域を含む、項目１１に記載の方法。
（項目１３）
前記抗ＴＬＲ４抗体またはその免疫学的に活性な断片が、重鎖可変アミノ酸配列ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＤＴＬＳＬＴＣＡＶＳＧＹＳＩＴＧＧＹＳＷＨＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＭＧＹＩＨＹＳＧＹＴＤＦＮＰＳＬＫＴＲＩＴＩＳＲＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＶＤＴＡＶＹＹＣＡＲＫＤＰＳＤＡＦＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７）、および軽鎖可変アミノ酸配列ＥＩＶＬＴＱＳＰＤＦＱＳＶＴＰＫＥＫＶＴＩＴＣＲＡＳＱＳＩＳＤＨＬＨＷＹＱＱＫＰＤＱＳＰＫＬＬＩＫＹＡＳＨＡＩＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＮＳＬＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＧＨＳＦＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号８）を含む、項目１２に記載の方法。
（項目１４）
前記抗ＴＬＲ４抗体またはその免疫学的に活性な断片が、重鎖アミノ酸配列ＭＧＷＳＷＩＦＬＦＬＬＳＧＴＡＧＶＨＣＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＤＴＬＳＬＴＣＡＶＳＧＹＳＩＴＧＧＹＳＷＨＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＭＧＹＩＨＹＳＧＹＴＤＦＮＰＳＬＫＴＲＩＴＩＳＲＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＶＤＴＡＶＹＹＣＡＲＫＤＰＳＤＡＦＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＳＫＡＦＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号９）、および軽鎖アミノ酸配列ＭＥＷＳＷＶＦＬＦＦＬＳＶＴＴＧＶＨＳＥＩＶＬＴＱＳＰＤＦＱＳＶＴＰＫＥＫＶＴＩＴＣＲＡＳＱＳＩＳＤＨＬＨＷＹＱＱＫＰＤＱＳＰＫＬＬＩＫＹＡＳＨＡＩＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＮＳＬＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＧＨＳＦＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号１０）を含む、項目１３に記載の方法。
（項目１５）
前記対象がヒトである、項目１に記載の方法。
（項目１６）
前記障害が、自己免疫障害または炎症性障害である、項目１に記載の方法。
（項目１７）
前記障害が、異常なＴＬＲ４シグナル伝達、上昇したＴＬＲ４リガンド発現または活性、異常な炎症促進性サイトカイン産生、およびこれらの組合せと関連している、項目１に記載の方法。
（項目１８）
前記障害が関節リウマチ（ＲＡ）である、項目１に記載の方法。
（項目１９）
前記障害がアテローム性動脈硬化症である、項目１に記載の方法。
（項目２０）
前記障害が、臓器または組織の移植と関連している項目１に記載の方法。
（項目２１）
前記障害が、急性肺傷害と関連している、項目１に記載の方法。
（項目２２）
前記障害が、虚血／再潅流傷害と関連している、項目１に記載の方法。
【図面の簡単な説明】
【００３９】
【図１】図１は、免疫複合体形成したシトルリン化フィブリノーゲン（ｃＦｂ−ＩＣ）、ならびにＴＬＲ４、およびＦｃガンマ受容体からの部分的な寄与に依存する作用機序によるヒト血液由来マクロファージ（ＨＢＤＭ）の活性化を表す一連のグラフである。パネルＡに実証したように、ｃＦｂは、ＨＢＤＭによる炎症促進性サイトカイン、ＴＮＦαの分泌を誘導しない一方、ウサギ抗フィブリノーゲンポリクローナル抗体（Ｒｂ  α  Ｆｂ  ｐＡｂ）を含む免疫複合体として提示される場合、ｃＦｂ−ＩＣは、活性化している。ＨＢＤＭ、ｃＦｂ−ＩＣ、および抗ヒトＴＬＲ４  ｍＡｂ（例えば、ＮＩ−０１０１）の存在下で、活性化ポテンシャルは、有意に遮断される。ＨＢＤＭ、ｃＦｂ−ＩＣ、および抗ヒトＦｃＲＩＩ  ｍＡｂの存在下で、部分的なインペアメントが観察される。両ｍＡｂをＨＢＤＭおよびｃＦｂ−ＩＣに添加する場合、抗ヒトＴＬＲ４  ｍＡｂ（例えば、ＮＩ−０１０１）のものに対する追加の阻害は観察されない。ｈｉｇＧ１は、アイソタイプ対照としてＨＢＤＭおよびｃＦｂ−ＩＣとともに使用される。パネルＢに実証したように、刺激および遮断のこれらの結果は、免疫複合体の源が関節リウマチ患者の血清に由来する精製ヒトＩｇＧである場合、繰り返される。スチューデントｔ検定を実施した。＊  ｐ＜０．０５、＊＊  ｐ＜０．０１、＊＊＊  ｐ＜０．００１、ｎｓ：有意でない。
【００４０】
【図２】図２は、健康な対象の滑液（Ｎ滑液）または関節リウマチを有する患者の滑液（ＲＡ滑液）中に含有される抗シトルリン化タンパク質抗体および異なるＴＬＲ４リガンドのレベルの例を表す一連のグラフである。パネルＡ、抗シトルリン化タンパク質抗体（ＡＣＰＡ）；パネルＢ、シトルリン化フィブリノーゲンを含有する免疫複合体（ｃＦｂ−ＩＣ）；パネルＣ、高移動度グループタンパク質Ｂ１（ＨＭＧＢ１）；パネルＤ、Ｓ１００Ａ８／Ａ９；パネルＥ、テネイシンＣ。
【００４１】
【図３】図３は、ＲＡを有する患者から単離された滑膜線維芽細胞に対する異なる関節リウマチ滑液（ＲＡＳＦ）の活性化プロファイルおよびＴＬＲ４に対する刺激の依存性の例を表す一連のグラフである。パネルＡは、炎症促進性サイトカイン、ＩＬ−６を産生するようにＲＡ滑膜線維芽細胞を確かに刺激するＲＡＳＦ（患者＃１に由来；ＲＡＳＦ１）を表す。この刺激は、抗ヒトＴＬＲ４  ｍＡｂ（例えば、ＮＩ−０１０１）の存在によって有意に遮断される。対照的に、パネルＢは、ＲＡ滑膜線維芽細胞からのＩＬ−６産生を刺激することができないＲＡＳＦ試料（患者＃２に由来；ＲＡＳＦ２）を表し、抗ＴＬＲ４  ｍＡｂは、この状況において効果を有さない。ｈｉｇＧ１がアイソタイプ対照として使用されている。スチューデントｔ検定を実施した。＊＊＊  ｐ＜０．００１、ｎｓ：有意でない。
【００４２】
【図４ＡＢＣＤ】図４は、ＲＡを有する患者から単離されたヒト単球に対する異なる関節リウマチ滑液（ＲＡＳＦ）の活性化プロファイルおよびＴＬＲ４に対する刺激の依存性の例を表す一連のグラフである。パネルＡ、Ｂ、およびＣは、ＲＡ患者から単離されたヒト単球からのそれぞれ炎症促進性サイトカインＩＬ−６、ＩＬ８、およびＴＮＦαの産生を刺激するＲＡＳＦ試料（患者＃３に由来；ＲＡＳＦ３）の能力を表す。この刺激は、抗ヒトＴＬＲ４  ｍＡｂ（例えば、ＮＩ−０１０１）の存在によって有意に遮断される。対照的に、パネルＤ、Ｅ、およびＦは、ＲＡ患者から単離されたヒト単球からのＩＬ−６、ＩＬ８、およびＴＮＦαの産生を刺激することができないＲＡＳＦ試料（患者＃４に由来；ＲＡＳＦ４）を表し、抗ＴＬＲ４  ｍＡｂは、この状況において効果を有さない。ｈＩｇＧ１がアイソタイプ対照として使用されている。スチューデントｔ検定を実施した。＊  ｐ＜０．０５、＊＊  ｐ＜０．０１、＊＊＊  ｐ＜０．００１、ｎｓ：有意でない。
【図４ＥＦ】図４は、ＲＡを有する患者から単離されたヒト単球に対する異なる関節リウマチ滑液（ＲＡＳＦ）の活性化プロファイルおよびＴＬＲ４に対する刺激の依存性の例を表す一連のグラフである。パネルＡ、Ｂ、およびＣは、ＲＡ患者から単離されたヒト単球からのそれぞれ炎症促進性サイトカインＩＬ−６、ＩＬ８、およびＴＮＦαの産生を刺激するＲＡＳＦ試料（患者＃３に由来；ＲＡＳＦ３）の能力を表す。この刺激は、抗ヒトＴＬＲ４  ｍＡｂ（例えば、ＮＩ−０１０１）の存在によって有意に遮断される。対照的に、パネルＤ、Ｅ、およびＦは、ＲＡ患者から単離されたヒト単球からのＩＬ−６、ＩＬ８、およびＴＮＦαの産生を刺激することができないＲＡＳＦ試料（患者＃４に由来；ＲＡＳＦ４）を表し、抗ＴＬＲ４  ｍＡｂは、この状況において効果を有さない。ｈＩｇＧ１がアイソタイプ対照として使用されている。スチューデントｔ検定を実施した。＊  ｐ＜０．０５、＊＊  ｐ＜０．０１、＊＊＊  ｐ＜０．００１、ｎｓ：有意でない。
【００４３】
【図５Ａ】図５は、関節リウマチ滑液（ＲＡＳＦ）中の抗シトルリン化タンパク質抗体（ＡＣＰＡ）またはＴＬＲ４リガンドの発現レベルと、抗ヒトＴＬＲ４  ｍＡｂによって阻害される細胞刺激の能力との相関を表す一連のグラフである。ＴＬＲ４リガンドは、シトルリン化フィブリノーゲンを含有する免疫複合体（ｃＦｂ−ＩＣ）、高移動度グループタンパク質Ｂ１（ＨＭＧＢ１）、Ｓ１００Ａ８／Ａ９、およびテネイシンＣを含む。細胞型は、ＲＡ患者の滑膜線維芽細胞（Ａ）およびＲＡ患者の単球（Ｂ）を含む。スチューデントｔ検定を実施した。＊  ｐ＜０．０５、＊＊  ｐ＜０．０１、＊＊＊  ｐ＜０．００ｌ、ｎｓ：有意でない。
【図５Ｂ】図５は、関節リウマチ滑液（ＲＡＳＦ）中の抗シトルリン化タンパク質抗体（ＡＣＰＡ）またはＴＬＲ４リガンドの発現レベルと、抗ヒトＴＬＲ４  ｍＡｂによって阻害される細胞刺激の能力との相関を表す一連のグラフである。ＴＬＲ４リガンドは、シトルリン化フィブリノーゲンを含有する免疫複合体（ｃＦｂ−ＩＣ）、高移動度グループタンパク質Ｂ１（ＨＭＧＢ１）、Ｓ１００Ａ８／Ａ９、およびテネイシンＣを含む。細胞型は、ＲＡ患者の滑膜線維芽細胞（Ａ）およびＲＡ患者の単球（Ｂ）を含む。スチューデントｔ検定を実施した。＊  ｐ＜０．０５、＊＊  ｐ＜０．０１、＊＊＊  ｐ＜０．００ｌ、ｎｓ：有意でない。
【００４４】
【図６Ａ】図６Ａおよび６Ｂは、単球（図６Ａ）または線維芽細胞（図６Ｂ）における抗ヒトＴＬＲ４  ｍＡｂ、ＮＩ−０１０１を用いた処置に対する細胞応答スコアによるマーカーレベルを例示する一連のグラフである。細胞応答スコア：０、１、または２の細胞ドナーが関節リウマチ滑液（ＲＡＳＦ）刺激に応答し、ＮＩ−０１０１を用いた処置によって阻害された。
【図６Ｂ】図６Ａおよび６Ｂは、単球（図６Ａ）または線維芽細胞（図６Ｂ）における抗ヒトＴＬＲ４  ｍＡｂ、ＮＩ−０１０１を用いた処置に対する細胞応答スコアによるマーカーレベルを例示する一連のグラフである。細胞応答スコア：０、１、または２の細胞ドナーが関節リウマチ滑液（ＲＡＳＦ）刺激に応答し、ＮＩ−０１０１を用いた処置によって阻害された。
【００４５】
【図７】図７は、抗ヒトＴＬＲ  ｍＡｂ、ＮＩ−０１０１を用いた処置に対する組み合わせた単球および線維芽細胞応答スコア（ｃＭＦＲＳ）によるマーカーレベルを例示するグラフである。生物学的応答スコア：０、１、２、３、または４の細胞ドナーが関節リウマチ滑液（ＲＡＳＦ）刺激に応答し、ＮＩ−０１０１を用いた処置によって阻害された。
【００４６】
【図８】図８は、ＡＣＰＡ／ｃＦｂ−ＩＣおよびＳ１００Ａ８／Ａ９／ＨＭＧＢ１が、試験したＲＡＳＦ試料における相関の傾向を示す独立したタンデムを形成することを例示するグラフである。
【００４７】
【図９】図９は、Ｓ１００Ａ８／Ａ９およびｃＦｂ−ＩＣの組合せが、抗ヒトＴＬＲ  ｍＡｂ、ＮＩ−０１０１を用いた処置に対する組み合わせた単球および線維芽細胞応答スコア（ｃＭＦＲＳ）の予測因子であることを例示するグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００４８】
本明細書に提供される組成物および方法は、障害を罹患している患者集団であって、患者は、１種または複数のＴＬＲ４リガンドまたは他のバイオマーカーのレベルが上昇している、患者集団を同定し、または別段に洗練させるのに有用である。これらの患者は、単独で、またはＴＬＲ４／ＭＤ−２複合体としてのアクセサリータンパク質ＭＤ−２という状況で、ＴＬＲ４シグナル伝達を妨害し、または別段にアンタゴナイズし、ＴＬＲ４の少なくとも１つの生物活性を中和する作用物質（例えば、抗体または他のポリペプチドベース治療薬、ペプチドベース治療薬、低分子阻害剤、核酸ベース治療薬、およびこれら誘導体）を用いた処置の適当な候補として同定される。
【００４９】
障害を罹患している、または罹患していると疑われる一部の患者では、流体および他の生体試料は、上昇したレベルのＴＬＲ４リガンドおよび他のバイオマーカーを含有する。これらのＴＬＲ４リガンドおよび他のバイオマーカーは、炎症促進性サイトカインを産生するように細胞を刺激する。しかし、ＴＬＲ４シグナル伝達を妨害し、または別段にアンタゴナイズする抗ＴＬＲ４アンタゴニスト、例えば、中和抗ＴＬＲ４抗体または他の抗ＴＬＲ４剤を使用すると、１種または複数のＴＬＲ４リガンドおよび／または他のバイオマーカーの発現のレベルの上昇を呈する患者においてこの刺激が遮断されることが本明細書で示されている。したがって、本組成物および方法は、１種もしくは複数のＴＬＲ４リガンドおよび／またはバイオマーカーの発現のレベルの上昇を呈する患者に、抗ＴＬＲ４アンタゴニスト、例えば、中和抗ＴＬＲ４抗体、または他のポリペプチドベース治療薬、ペプチドベース治療薬、低分子阻害剤、核酸ベース治療薬、およびこれらの誘導体を投与することによって、ＴＬＲ４シグナル伝達、異常な、例えば、上昇したＴＬＲ４リガンド発現および／もしくは活性、異常な炎症促進性サイトカイン産生、ならびに／またはこれらの組合せに依存し、それによって推進され、またはそれと別段に関連する障害の症状を、処置し、その進行を遅延させ、またはそれを別段に寛解させるのに有用である。抗ＴＬＲ４アンタゴニスト、例えば、本明細書に記載のものなどの中和抗ＴＬＲ４抗体を用いた処置の有望な適当な候補である患者は、１種または複数のＴＬＲ４リガンドまたは他のバイオマーカーのレベルを検出することによって同定される。
【００５０】
以前の研究では、免疫複合体中のシトルリン化フィブリノーゲン（ｃＦｂ）（ｃＦｂ−ＩＣ）は、炎症促進性サイトカインの分泌を刺激し、この刺激は、抗ＴＬＲ４アンタゴニストによって阻害することができることが実証された。Ｓｏｋｏｌｏｖｅら、「Ｉｍｍｕｎｅ  Ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ  Ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  Ｃｉｔｒｕｌｌｉｎａｔｅｄ  Ｆｉｂｒｉｎｏｇｅｎ  Ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｅ  Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ  ｖｉａ  Ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ４  ａｎｄ  Ｆｃγ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ」、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ、６３巻、１号、２０１１年１月、５３〜６２頁を参照。同様の研究が、ＮＩ−０１０１と呼ばれる本明細書に記載の抗ＴＬＲ４抗体を使用して実行された（図１）。ヒト血液由来マクロファージ（ＨＢＤＭ）は、免疫複合体形成したシトルリン化フィブリノーゲン（ｃＦｂ−ＩＣ）、ならびにＴＬＲ４、およびＦｃガンマ受容体からの部分的な寄与に依存する作用機序によって活性化された。図１Ａに示したように、ｃＦｂは、ＨＢＤＭによる炎症促進性サイトカイン、ＴＮＦαの分泌を誘導しなかった一方、ウサギ抗フィブリノーゲンポリクローナル抗体（Ｒｂ  α  Ｆｂ  ｐＡｂ）を含む免疫複合体として提示される場合、ｃＦｂ−ＩＣは、活性化していた。ＨＢＤＭ、ｃＦｂ−ＩＣ、および抗ヒトＴＬＲ４  ｍＡｂ（例えば、ＮＩ−０１０１）の存在下で、活性化ポテンシャルは、有意に遮断された。ＨＢＤＭ、ｃＦｂ−ＩＣ、および抗ヒトＦｃＲＩＩ  ｍＡｂの存在下で、部分的なインペアメントが観察された。両ｍＡｂをＨＢＤＭおよびｃＦｂ−ＩＣに添加する場合、抗ヒトＴＬＲ４  ｍＡｂ（例えば、ＮＩ−０１０１）のものに対する追加の阻害は観察されなかった。
【００５１】
本明細書に提供される研究は、抗ＴＬＲ４アンタゴニストを用いた処置の有望な候補である患者を同定するのに使用することができる追加のＴＬＲ４リガンドおよび他のバイオマーカーを判定することによって、これらの最初の研究における知見を踏まえ、拡張する。
【００５２】
有望な候補を同定することにおいて使用するのに適したＴＬＲ４リガンドおよび他のバイオマーカーとしては、抗シトルリン化タンパク質抗体（ＡＣＰＡ）、シトルリン化タンパク質、免疫複合体中のシトルリン化タンパク質、例えば、ＩｇＧタンパク質（ｃＦｂ−ＩＣ）またはＩｇＥタンパク質を含む免疫複合体中のシトルリン化フィブリノーゲン（ｃＦｂ）、ＨＭＧＢ１、Ｓ１００Ａ８／Ａ９、テネイシンＣ、ＬＰＳ、熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）、フィブロネクチン、ヒアルロナン、Ｄｅｒ  Ｐ２、呼吸器合胞体ウイルスＦ（ＲＳＶ）Ｆタンパク質、界面活性剤Ａ、コクサッキーウイルスＢ４（ＣＳＶ  Ｂ４）、ＣＸＣＬ１０、レジスチン、フェチュインＡ、飽和脂肪酸（ＳＦＡ）、バイグリカン、修飾低密度リポタンパク質（ｍＬＤＬ）、終末糖化最終産物（ＡＧＥ）、およびこれらの組合せがある。一部の実施形態では、シトルリン化タンパク質は、シトルリン化フィブリノーゲン、シトルリン化フィブリン、シトルリン化ビメンチン、シトルリン化ヒストン（例えば、シトルリン化ヒストン２ｂ）、シトルリン化エノラーゼまたはシトルリン化ケモカイン（例えば、シトルリン化ＣＸＣＬ１０）である。これらのＴＬＲ４リガンドおよび／またはバイオマーカーの１種または複数のレベルを検出することに加えて、抗ＴＬＲ４アンタゴニストを用いた処置に適した患者は、患者集団を同定し、または別段に洗練することについてバイオマーカーの感受性および特異性を改善することになるいくつかの追加の生物学的および臨床パラメータのいずれかを評価することによって同定することもできる。代わりに、これらの追加の生物学的および臨床パラメータを、抗ＴＬＲ４アンタゴニストまたは他の適当な療法を用いた処置の適当な候補である患者を同定するための手段として単独で使用することができる。これらの生物学的および臨床パラメータは、非限定的な例として、以下のうちのいずれかを含む：リウマチ因子レベル、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）レベル、血球数、血液細胞亜集団上のＴＬＲ４受容体の存在、ＴＬＲ４多型、ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）多型、ペプチジルアルギニンデイミナーゼ（ＰＡＤ）酵素およびＰＡＤ酵素多型、Ｆｃγ受容体ＩＩａ（ＦｃγＩＩａ）多型、ＭＤ−２レベル、可溶性ＣＤ１４レベル、ベースラインの患者の人口統計データ（例えば、ボディーマスインデックス（ＢＭＩ）、性別、年齢など）、ならびに／または患者の医療歴（例えば、診断時の障害評価スケジュール（ＤＡＳ２８）、処置開始時のＤＡＳ２８、疾患の継続時間、疾患開始時の年齢、ＤＡＳ２８、米国リウマチ学会（ＡＣＲ）、および／もしくは欧州リウマチ学会議（ＥＵＬＡＲ）応答基準に基づく先の処置に対する応答など）。一部の実施形態では、ＴＬＲ４リガンド、他のバイオマーカー、および／または追加の生物学的／臨床パラメータの組合せが検出され、例えば、少なくとも２種のＴＬＲ４リガンド、他のバイオマーカー、および／もしくは追加の生物学的／臨床パラメータが検出され、少なくとも３種のＴＬＲ４リガンド、他のバイオマーカー、および／もしくは追加の生物学的／臨床パラメータが検出され、少なくとも４種のＴＬＲ４リガンド、他のバイオマーカー、および／もしくは追加の���物学的／臨床パラメータが検出され、少なくとも５種のＴＬＲ４リガンド、他のバイオマーカー、および／もしくは追加の生物学的／臨床パラメータが検出され、少なくとも６種のＴＬＲ４リガンド、他のバイオマーカー、および／もしくは追加の生物学的／臨床パラメータが検出され、少なくとも７種のＴＬＲ４リガンド、他のバイオマーカー、および／もしくは追加の生物学的／臨床パラメータが検出され、少なくとも８種のＴＬＲ４リガンド、他のバイオマーカー、および／もしくは追加の生物学的／臨床パラメータが検出され、少なくとも９種のＴＬＲ４リガンド、他のバイオマーカー、および／もしくは追加の生物学的／臨床パラメータが検出され、または少なくとも１０種のＴＬＲ４リガンド、他のバイオマーカー、および／もしくは追加の生物学的／臨床パラメータまたはそれ超が検出される。
【００５３】
一部の実施形態では、ＴＬＲ４リガンドまたは他のバイオマーカーは、Ｓ１００Ａ８／Ａ９である。一部の実施形態では、ＴＬＲ４リガンドまたは他のバイオマーカーは、ｃＦｂ−ＩＣである。一部の実施形態では、ＴＬＲ４リガンドまたは他のバイオマーカーは、ＡＣＰＡである。一部の実施形態では、ＴＬＲ４リガンドまたは他のバイオマーカーは、ＨＭＧＢ１である。一部の実施形態では、ＴＬＲ４リガンドまたは他のバイオマーカーは、Ｓ１００Ａ８／Ａ９とＨＭＧＢ１との組合せである。一部の実施形態では、ＴＬＲ４リガンドまたは他のバイオマーカーは、Ｓ１００Ａ８／Ａ９とｃＦｂ−ＩＣとの組合せである。一部の実施形態では、ＴＬＲ４リガンドまたは他のバイオマーカーは、Ｓ１００Ａ８／Ａ９とＡＣＰＡとの組合せである。一部の実施形態では、ＴＬＲ４リガンドまたは他のバイオマーカーは、ＡＣＰＡとｃＦｂ−ＩＣとの組合せである。一部の実施形態では、ＴＬＲ４リガンドまたは他のバイオマーカーは、ＡＣＰＡとＨＭＧＢ１との組合せである。一部の実施形態では、ＴＬＲ４リガンドまたは他のバイオマーカーは、ＨＭＧＢ１とｃＦｂ−ＩＣとの組合せである。一部の実施形態では、ＴＬＲ４リガンドまたは他のバイオマーカーは、Ｓ１００Ａ８／Ａ９、ＡＣＰＡ、およびＨＭＧＢ１の組合せである。一部の実施形態では、ＴＬＲ４リガンドまたは他のバイオマーカーは、Ｓ１００Ａ８／Ａ９、ＡＣＰＡ、およびｃＦｂ−ＩＣの組合せである。一部の実施形態では、ＴＬＲ４リガンドまたは他のバイオマーカーは、Ｓ１００Ａ８／Ａ９、ｃＦｂ−ＩＣ、およびＨＭＧＢ１の組合せである。一部の実施形態では、ＴＬＲ４リガンドまたは他のバイオマーカーは、ＡＣＰＡ、ＨＭＧＢ１、およびｃＦｂ−ＩＣの組合せである。一部の実施形態では、ＴＬＲ４リガンドまたは他のバイオマーカーは、Ｓ１００Ａ８／Ａ９、ｃＦｂ−ＩＣ、ＡＣＰＡ、およびＨＭＧＢ１の組合せである。
【００５４】
一部の実施形態では、ＴＬＲ４リガンドまたは他のバイオマーカーは、抗ＴＬＲ４剤、例えば、ＮＩ−０１０１などの抗ＴＬＲ４  ｍＡｂへの曝露に対する単球応答の予測因子である。一部の実施形態では、抗ＴＬＲ４処置に対する単球応答の予測因子は、Ｓ１００Ａ８／Ａ９である。一部の実施形態では、抗ＴＬＲ４処置に対する単球応答の予測因子は、ＡＣＰＡである。一部の実施形態では、抗ＴＬＲ４処置に対する単球応答の予測因子は、ＨＭＧＢ１である。一部の実施形態では、抗ＴＬＲ４処置に対する単球応答の予測因子は、ｃＦｂ−ＩＣである。
【００５５】
一部の実施形態では、ＴＬＲ４リガンドまたは他のバイオマーカーは、抗ＴＬＲ４剤、例えば、ＮＩ−０１０１などの抗ＴＬＲ４  ｍＡｂへの曝露に対する線維芽細胞応答の予測因子である。一部の実施形態では、抗ＴＬＲ４処置に対する線維芽細胞応答の予測因子は、ｃＦｂ−ＩＣである。
【００５６】
一部の実施形態では、ＴＬＲ４リガンドまたは他のバイオマーカーは、抗ＴＬＲ４剤、例えば、ＮＩ−０１０１などの抗ＴＬＲ４  ｍＡｂへの曝露に対する単球および線維芽細胞応答の予測因子である。一部の実施形態では、単球および線維芽細胞応答の予測因子は、ＡＣＰＡである。一部の実施形態では、単球および線維芽細胞応答の予測因子は、ｃＦｂ−ＩＣである。一部の実施形態では、単球および線維芽細胞応答の予測因子は、Ｓ１００Ａ８／Ａ９である。一部の実施形態では、単球および線維芽細胞応答の予測因子は、ＨＭＧＢ１である。一部の実施形態では、単球および線維芽細胞応答の予測因子は、Ｓ１００Ａ８／Ａ９とＨＭＧＢ１との組合せである。一部の実施形態では、単球および線維芽細胞応答の予測因子は、ＡＣＰＡとｃＦｂ−ＩＣとの組合せである。一部の実施形態では、単球および線維芽細胞応答の予測因子は、Ｓ１００Ａ８／Ａ９とｃＦｂ−ＩＣとの組合せである。一部の実施形態では、単球および線維芽細胞応答の予測因子は、Ｓ１００Ａ８／Ａ９とＡＣＰＡとの組合せである。一部の実施形態では、単球および線維芽細胞応答の予測因子は、ＡＣＰＡとｃＦｂ−ＩＣとの組合せである。一部の実施形態では、単球および線維芽細胞応答の予測因子は、ＡＣＰＡとＨＭＧＢ１との組合せである。一部の実施形態では、単球および線維芽細胞応答の予測因子は、ＨＭＧＢ１とｃＦｂ−ＩＣとの組合せである。一部の実施形態では、単球および線維芽細胞応答の予測因子は、Ｓ１００Ａ８／Ａ９、ＡＣＰＡ、およびＨＭＧＢ１の組合せである。一部の実施形態では、単球および線維芽細胞応答の予測因子は、Ｓ１００Ａ８／Ａ９、ＡＣＰＡ、およびｃＦｂ−ＩＣの組合せである。一部の実施形態では、単球および線維芽細胞応答の予測因子は、Ｓ１００Ａ８／Ａ９、ｃＦｂ−ＩＣ、およびＨＭＧＢ１の組合せである。一部の実施形態では、単球および線維芽細胞応答の予測因子は、ＡＣＰＡ、ＨＭＧＢ１、およびｃＦｂ−ＩＣの組合せである。一部の実施形態では、単球および線維芽細胞応答の予測因子は、Ｓ１００Ａ８／Ａ９、ｃＦｂ−ＩＣ、ＡＣＰＡ、およびＨＭＧＢ１の組合せである。
【００５７】
本明細書に提供される研究は、ＴＬＲ４活性、例えば、ＴＬＲ４媒介シグナル伝達を中和する作用物質は、障害を罹患している、またはそのリスクのある患者に由来する試料中の活性化細胞による炎症促進性サイトカイン産生を実質的または完全に遮断するのに有効であることを実証する。本明細書に提供される研究は、例えば、Ｆｃ活性を中和する作用物質、例えば抗ＣＤ３２抗体を使用することによるＦｃ領域のみの標的化は、障害を罹患している、またはそのリスクのある患者中の活性化細胞による炎症促進性サイトカイン産生を部分的に遮断するのに有効であることも実証する。抗ＴＬＲ４アンタゴニストは、抗ＴＬＲ４の存在下での活性化細胞による炎症促進性サイトカイン産生のレベルが、抗ＴＬＲ４アンタゴニストとの相互作用、例えば、結合の非存在下での活性化細胞による炎症促進性サイトカイン産生のレベルと比較して、少なくとも９５％、例えば９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％減少する場合、活性化細胞による炎症促進性サイトカイン産生を完全に遮断すると見なされる。抗ＴＬＲ４アンタゴニストは、抗ＴＬＲ４の存在下での活性化細胞による炎症促進性サイトカイン産生のレベルが、抗ＴＬＲ４アンタゴニストとの相互作用、例えば、結合の非存在下での活性化細胞による炎症促進性サイトカイン産生のレベルと比較して、少なくとも５０％、例えば、５５％、６０％、７５％、８０％、８５％、または９０％減少する場合、活性化細胞による炎症促進性サイトカイン産生を部分的に遮断すると見なされる。例えば、抗Ｆｃ剤（ａｎｔｉ−Ｆｃ  ａｇｅｎｔ）の使用によるＦｃ領域のみの標的化は、Ｆｃ領域のみを標的化した後の活性化細胞による炎症促進性サイトカイン産生のレベルが、Ｆｃ領域のみの標的化の非存在下、例えば、抗Ｆｃ剤との相互作用、例えば、結合の非存在下での活性化細胞による炎症促進性サイトカイン産生のレベルと比較して、９５％未満、例えば、１０％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７５％、８０％、８５％、または９０％減少する場合、活性化細胞による炎症促進性サイトカイン産生を部分的に遮断すると見なされる。
【００５８】
本発明の組成物および方法を用いて有用である障害には、異常なＴＬＲ４／ＭＤ−２活性化および／または異常なＴＬＲ４リガンド活性（例えば、炎症促進性サイトカイン産生の異常な刺激、例えば、ＩＬ−６、ＴＮＦαおよび／またはＩＬ−８産生の異常な刺激など）を伴った異常な、例えば、上昇したＴＬＲ４発現および／または活性の任意の障害が含まれる。例えば、いくつかのＴＬＲ４リガンドは、様々な障害と関連していると考えられている。
【００５９】
非限定的な例として、ＬＰＳは、敗血症、急性肺傷害、および／またはＲＡなどの障害と関連していることが公知である（例えば、Ｏｐａｌ，  Ｓ．Ｍ．、２００７年、Ｔｈｅ
ｈｏｓｔ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｔｏ  ｅｎｄｏｔｏｘｉｎ，  ａｎｔｉｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ  ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ，  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｓｅｖｅｒｅ  ｓｅｐｓｉｓ．、Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．  Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ．、２９７巻：３６５〜３７７頁；Ｗａｈａｍａａ，  Ｈ．ら、Ｈｉｇｈ  ｍｏｂｉｌｉｔｙ  ｇｒｏｕｐ  ｂｏｘ  ｐｒｏｔｅｉｎ  １  ｉｎ  ｃｏｍｐｌｅｘ  ｗｉｔｈ  ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ  ｏｒ  ＩＬ−１  ｐｒｏｍｏｔｅｓ  ａｎ
ｉｎｃｒｅａｓｅｄ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ  ｉｎ  ｓｙｎｏｖｉａｌ  ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ．、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｅｓ．  Ｔｈｅｒ．、１３巻：Ｒ１３６頁を参照）。
【００６０】
非限定的な例として、テネイシンＣは、関節炎、肝虚血再潅流および／または心虚血再潅流などの障害と関連していることが公知である（例えば、Ｋｕｒｉｙａｍａ，  Ｎ．ら，２０１１年、Ｔｅｎａｓｃｉｎ−ｃ：  Ａ  ｎｏｖｅｌ  ｍｅｄｉａｔｏｒ  ｏｆ  ｈｅｐａｔｉｃ  ｉｓｃｈｅｍｉａ  ａｎｄ  ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ  ｉｎｊｕｒｙ．、Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ；Ｍｉｄｗｏｏｄ，  Ｋ．ら、２００９年、Ｔｅｎａｓｃｉｎ−Ｃ
ｉｓ  ａｎ  ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ  ａｃｔｉｖａｔｏｒ  ｏｆ  Ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ
ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ４  ｔｈａｔ  ｉｓ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  ｆｏｒ  ｍａｉｎｔａｉｎｉｎｇ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ｉｎ  ａｒｔｈｒｉｔｉｃ  ｊｏｉｎｔ  ｄｉｓｅａｓｅ．、Ｎａｔ．  Ｍｅｄ．、１５巻：７７４〜７８０頁；Ｔａｋｉ，  Ｊ．ら、２０１０年、Ｄｙｎａｍｉｃ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｔｅｎａｓｃｉｎ−Ｃ  ａｆｔｅｒ  ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ  ｉｓｃｈｅｍｉａ  ａｎｄ  ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ：  ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ｂｙ  １２５Ｉ−ａｎｔｉ−ｔｅｎａｓｃｉｎ−Ｃ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｉｍａｇｉｎｇ．、Ｊ．  Ｎｕｃｌ．  Ｍｅｄ．、５１巻：１１１６〜１１２２頁を参照）。
【００６１】
非限定的な例として、ＨＭＧＢ１は、ＲＡ、骨関節炎（ＯＡ）、虚血再潅流、１型糖尿病、膵島移植、ループス、および／または敗血症などの障害と関連していることが公知である（例えば、Ｃｈｅｎ，  Ｊ．ら、２０１１年、Ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ４  ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  ｅａｒｌｙ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｄｕｒｉｎｇ  ｉｓｃｈｅｍｉｃ  ａｃｕｔｅ  ｋｉｄｎｅｙ  ｉｎｊｕｒｙ．、Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔ．、７９巻：２８８〜２９９頁；Ｗａｈａｍａａ，  Ｈ．ら、Ｈｉｇｈ  ｍｏｂｉｌｉｔｙ  ｇｒｏｕｐ  ｂｏｘ  ｐｒｏｔｅｉｎ  １  ｉｎ  ｃｏｍｐｌｅｘ  ｗｉｔｈ  ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ  ｏｒ  ＩＬ−１  ｐｒｏｍｏｔｅｓ  ａｎ  ｉｎｃｒｅａｓｅｄ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ  ｉｎ  ｓｙｎｏｖｉａｌ  ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ．、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｅｓ．  Ｔｈｅｒ．、１３巻：Ｒ１３６頁）；Ａｂｄｕｌａｈａｄ，  Ｄ．  Ａ．ら、２０１１年、Ｈｉｇｈ  ｍｏｂｉｌｉｔｙ  ｇｒｏｕｐ  ｂｏｘ  １  （ＨＭＧＢ１）  ａｎｄ  ａｎｔｉ−ＨＭＧＢ１  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ｒｅｌａｔｉｏｎ  ｔｏ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ  ｉｎ  ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｌｕｐｕｓ  ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ．、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｅｓ．  Ｔｈｅｒ．、１３巻：Ｒ７１頁；Ｃｈｅｎ，  Ｊ．ら、２０１１年、Ｅａｒｌｙ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  ６  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｂｙ  ｌｅｕｋｏｃｙｔｅｓ  ｄｕｒｉｎｇ  ｉｓｃｈｅｍｉｃ  ａｃｕｔｅ  ｋｉｄｎｅｙ  ｉｎｊｕｒｙ  ｉｓ  ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｂｙ  ＴＬＲ４．、Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔ．、８０巻：５０４〜５１５頁；Ｈｕａｎｇ，
Ｗ．ら、２０１０年、ＨＭＧＢ１，  ａ  ｐｏｔｅｎｔ  ｐｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ｉｎ  ｓｅｐｓｉｓ．、Ｃｙｔｏｋｉｎｅ、５１巻：１１９〜１２６頁；Ｊｉａｎｇ，  Ｗ．およびＤ．  Ｓ．  Ｐｉｓｅｔｓｋｙ、２００８年、Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｈｉｇｈ  ｍｏｂｉｌｉｔｙ  ｇｒｏｕｐ  ｐｒｏｔｅｉｎ  １  ｉｎ  ｔｈｅ  ｓｅｒａ  ｏｆ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ａｎｄ  ｍｉｃｅ  ｗｉｔｈ  ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｌｕｐｕｓ  ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ．、Ａｎｎ．  Ｒｈｅｕｍ．  Ｄｉｓ．、６７巻：７２７〜７２８頁；Ｌｉ，  Ｍ．ら、２０１２年、Ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ４  ｏｎ  ｂｅｔａ  ｃｅｌｌｓ  ｓｅｎｓｅｓ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｃｈａｎｇｅｓ  ｉｎ  ｈｉｇｈ−ｍｏｂｉｌｉｔｙ  ｇｒｏｕｐ  ｂｏｘ  １  ａｎｄ  ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｉｎｉｔｉａｔｉｏｎ  ｏｆ
ｔｙｐｅ  １  ｄｉａｂｅｔｅｓ．、Ｅｘｐ．  Ｍｏｌ．  Ｍｅｄ；Ｍａｔｓｕｏｋａ，  Ｎ．ら、２０１０年、Ｈｉｇｈ−ｍｏｂｉｌｉｔｙ  ｇｒｏｕｐ  ｂｏｘ  １  ｉｓ
ｉｎｖｏｌｖｅｄ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｉｎｉｔｉａｌ  ｅｖｅｎｔｓ  ｏｆ  ｅａｒｌｙ
ｌｏｓｓ  ｏｆ  ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｅｄ  ｉｓｌｅｔｓ  ｉｎ  ｍｉｃｅ．、Ｊ．
Ｃｌｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ、１２０巻：７３５〜７４３頁；Ｎｏｇｕｅｉｒａ−Ｍａｃｈａｄｏ，  Ｊ．  Ａ．ら、２０１１年、ＨＭＧＢ１，  ＴＬＲ  ａｎｄ  ＲＡＧＥ：  ａ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｔｒｉｐｏｄ  ｔｈａｔ  ｌｅａｄｓ  ｔｏ  ｄｉａｂｅｔｉｃ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ．、Ｅｘｐｅｒｔ．  Ｏｐｉｎ．  Ｔｈｅｒ．  Ｔａｒｇｅｔｓ．、１５巻：１０２３〜１０３５頁；Ｓｃｈｉｅｒｂｅｃｋ，  Ｈ．ら、２０１１年、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉ−ＨＭＧＢ１  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｗｏ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ｍｏｄｅｌｓ．、Ｍｏｌ．  Ｍｅｄ．、９月〜１０月；１７巻（９〜１０号）：１０３９〜４４頁、２０１１年６月７日電子出版；Ｕｒｂｏｎａｖｉｃｉｕｔｅ，  Ｖ．およびＲ．  Ｅ．  Ｖｏｌｌ．、２０１１年、Ｈｉｇｈ−ｍｏｂｉｌｉｔｙ  ｇｒｏｕｐ  ｂｏｘ  １  ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｓ  ａ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｍａｒｋｅｒ  ｏｆ  ｄｉｓｅａｓｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ａｎｄ  ｎｏｖｅｌ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｔａｒｇｅｔ  ｉｎ  ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｌｕｐｕｓ  ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ．、Ｊ．  Ｉｎｔｅｒｎ．
Ｍｅｄ．、２７０巻：３０９〜３１８頁；Ｗｕ，  Ｈ．ら、２０１０年、ＨＭＧＢ１  ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓ  ｔｏ  ｋｉｄｎｅｙ  ｉｓｃｈｅｍｉａ  ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ  ｉｎｊｕｒｙ．、Ｊ．  Ａｍ．  Ｓｏｃ．  Ｎｅｐｈｒｏｌ．、２１巻：１８７８〜１８９０頁を参照）。
【００６２】
非限定的な例として、Ｓ１００Ａ８／Ａ９は、ＲＡ、ＯＡ、若年性特発性関節炎（ＪＩＡ）、糖尿病、移植片拒絶、ループス、アテローム性動脈硬化症、敗血症、および／またはがんなどの障害と関連していることが公知である（例えば、Ａｒａｉ，  Ｋ．ら、２００８年、Ｓ１００Ａ８  ａｎｄ  Ｓ１００Ａ９  ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｓ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｐｏｏｒ  ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ  ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ  ｉｎ  ｉｎｖａｓｉｖｅ  ｄｕｃｔａｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｏｆ  ｔｈｅ
ｂｒｅａｓｔ．、Ｃｕｒｒ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔｓ．、８巻：２４３〜２５２頁；Ｂｏｕｍａ，  Ｇ．ら、２００４年、Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ  ｓｅｒｕｍ
ｌｅｖｅｌｓ  ｏｆ  ＭＲＰ−８１１４  ｉｎ  ｔｙｐｅ  １  ｄｉａｂｅｔｅｓ  ｉｎｄｕｃｅ  ａｎ  ｉｎｃｒｅａｓｅｄ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ＣＤ１１ｂ  ａｎｄ  ａｎ  ｅｎｈａｎｃｅｄ  ａｄｈｅｓｉｏｎ  ｏｆ  ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ  ｍｏｎｏｃｙｔｅｓ  ｔｏ  ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ．、Ｄｉａｂｅｔｅｓ、５３巻：１９７９〜１９８６頁；Ｆｒｏｓｃｈ，  Ｍ．ら、２００９年、Ｔｈｅ  ｍｙｅｌｏｉｄ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ８  ａｎｄ  １４  ｃｏｍｐｌｅｘ，  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｌｉｇａｎｄ  ｏｆ  ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ４，  ａｎｄ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１ｂｅｔａ  ｆｏｒｍ  ａ  ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ｆｅｅｄｂａｃｋ
ｍｅｃｈａｎｉｓｍ  ｉｎ  ｓｙｓｔｅｍｉｃ−ｏｎｓｅｔ  ｊｕｖｅｎｉｌｅ  ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ．、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．、６０巻：８８３〜８９１頁；Ｉｏｎｉｔａ，  Ｍ．  Ｇ．ら、２００９年、Ｈｉｇｈ  ｌｅｖｅｌｓ  ｏｆ  ｍｙｅｌｏｉｄ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  １４  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｔｉｃ  ｐｌａｑｕｅｓ  ｃｏｒｒｅｌａｔｅ  ｗｉｔｈ
ｔｈｅ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ  ｏｆ  ｒｕｐｔｕｒｅ−ｐｒｏｎｅ  ｌｅｓｉｏｎｓ．、Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ．  Ｔｈｒｏｍｂ．  Ｖａｓｅ．  Ｂｉｏｌ．、２９巻：１２２０〜１２２７頁；Ｊｕｎｇ，  Ｄ．  Ｙ．ら、２００８年、Ｃｏｍｂｉｎｅｄ  ｕｓｅ  ｏｆ  ｍｙｅｌｏｉｄ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ８１１４  ａｎｄ  ｐｒｏｃａｌｃｉｔｏｎｉｎ  ａｓ  ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  ｍａｒｋｅｒｓ  ｆｏｒ  ａｃｕｔｅ  ａｌｌｏｇｒａｆｔ  ｒｅｊｅｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｋｉｄｎｅｙ  ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ｒｅｃｉｐｉｅｎｔｓ．、Ｔｒａｎｓｐｌ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１８巻：３３８〜３４３頁；Ｋａｗａｉ，  Ｈ．ら、２０１１年、Ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ  ｉｍｐａｃｔ  ｏｆ  Ｓ１００Ａ９  ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ  ｃｅｌｌ  ｌｕｎｇ  ｃａｎｃｅｒ．、Ｔｕｍｏｕｒ．  Ｂｉｏｌ．、３２巻：６４１〜６４６頁；Ｌｏｓｅｒ，  Ｋ．ら、２０１０年、Ｔｈｅ  Ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ４  ｌｉｇａｎｄｓ  Ｍｒｐ８  ａｎｄ  Ｍｒｐ１４  ａｒｅ  ｃｒｕｃｉａｌ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ａｕｔｏｒｅａｃｔｉｖｅ  ＣＤ８＋  Ｔ  ｃｅｌｌｓ．、Ｎａｔ．  Ｍｅｄ．、１６巻：７１３〜７１７頁；Ｐｅｎｇ，  Ｗ．  Ｈ．ら、２０１１年、Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ  ｓｅｒｕｍ
ｍｙｅｌｏｉｄ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ８／１４  ｌｅｖｅｌ  ｉｓ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ  ｉｎ  ｔｙｐｅ  ２
ｄｉａｂｅｔｉｃ  ｐａｔｉｅｎｔｓ．、Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．  Ｄｉａｂｅｔｏｌ．、１０巻：４１頁；Ｓｃｈｕｌｚｅ  ｚｕｒ，  Ｗ．  Ａ．ら、２００４年、Ｍｙｅｌｏｉｄ  ｒｅｌａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ＭＲＰ８／ＭＲＰ１４  ｍａｙ  ｐｒｅｄｉｃｔ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｆｌａｒｅｓ  ｉｎ  ｊｕｖｅｎｉｌｅ  ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ．、Ｃｌｉｎ．  Ｅｘｐ．  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．、２２巻：３６８〜３７３頁；Ｓｏｙｆｏｏ，  Ｍ．  Ｓ．ら、２００９年、Ｐｈａｇｏｃｙｔｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｓ１００Ａ８／Ａ９  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｌｅｖｅｌｓ  ｄｕｒｉｎｇ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｅｘａｃｅｒｂａｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｌｕｐｕｓ  ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ．、Ｊ．  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．、３６巻：２１９０〜２１９４頁；Ｓｕｎａｈｏｒｉ，  Ｋ．ら、２００６年、Ｔｈｅ  Ｓ１００Ａ８／Ａ９  ｈｅｔｅｒｏｄｉｍｅｒ  ａｍｐｌｉｆｉｅｓ  ｐｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｂｙ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ  ｖｉａ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｎｕｃｌｅａｒ  ｆａｃｔｏｒ  ｋａｐｐａ  Ｂ  ａｎｄ  ｐ３８  ｍｉｔｏｇｅｎ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ
ｋｉｎａｓｅ  ｉｎ  ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ．、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｅｓ．  Ｔｈｅｒ．、８巻：Ｒ６９頁；ｖａｎ  Ｌｅｎｔ，  Ｐ．  Ｌ．ら、２０１０年、Ｓ１００Ａ８  ｃａｕｓｅｓ  ａ  ｓｈｉｆｔ  ｔｏｗａｒｄ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ａｃｔｉｖａｔｏｒｙ  Ｆｃｇａｍｍａ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｏｎ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ  ｖｉａ  ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ４  ａｎｄ
ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  Ｆｃｇａｍｍａ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｓｙｎｏｖｉｕｍ  ｄｕｒｉｎｇ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ．、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．、６２巻：３３５３〜３３６４頁；ｖａｎ  Ｚｏｅｌｅｎ，  Ｍ．  Ａ．ら、２００９年、Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｍｙｅｌｏｉｄ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ−１４  ｉｎ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｎｄ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｓｅｐｓｉｓ．、Ａｍ．  Ｊ．
Ｒｅｓｐｉｒ．  Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．、１８０巻：１０９８〜１１０６頁；Ｚｒｅｉｑａｔ，  Ｈ．ら、２０１０年、Ｓ１００Ａ８  ａｎｄ  Ｓ１００Ａ９  ｉｎ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ．、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｅｓ．  Ｔｈｅｒ．、１２巻：Ｒ１６頁を参照）。
【００６３】
非限定的な例として、シトルリン化フィブリノーゲンは、ＲＡおよびアテローム性動脈硬化症などの障害と関連していることが公知である（例えば、Ｋｕｈｎｓ，  Ｄ．  Ｂ．ら、２００７年、Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｍｏｎｏｃｙｔｅ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  （ＩＬ）−８  ｂｙ  ｆｉｂｒｉｎｏｇｅｎ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｔｈｅ
ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｐａｔｈｗａｙ．、Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ、３０巻：１７８〜１８８頁；Ｓｍｉｌｅｙ，  Ｓ．  Ｔ．ら、２００１年、Ｆｉｂｒｉｎｏｇｅｎ  ｓｔｉｍｕｌａｔｅｓ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ  ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ４．、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１６７巻：２８８７〜２８９４頁；Ｓｏｋｏｌｏｖｅ，  Ｊ．ら、２０１１年、Ｉｍｍｕｎｅ  ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ  ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ｃｉｔｒｕｌｌｉｎａｔｅｄ  ｆｉｂｒｉｎｏｇｅｎ  ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｅ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ  ｖｉａ  Ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ４  ａｎｄ  Ｆｃｇａｍｍａ
ｒｅｃｅｐｔｏｒ．、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．、６３巻：５３〜６２頁を参照）。
【００６４】
非限定的な例として、ＡＣＰＡは、ＲＡ、乾癬性関節炎、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、シェーグレン症候群、アルツハイマー病、および／またはアテローム性動脈硬化症などの障害と関連していることが公知である（例えば、Ｎｉｃｈｏｌａｓ  ＡＰ．、Ｄｕａｌ  ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｃｉｔｒｕｌｌｉｎａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｉｎ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ  ｄｉｓｅａｓｅｄ  ｆｒｏｎｔａｌ  ｃｏｒｔｅｘ．、Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  Ｌｅｔｔ．、２０１３年６月１７日；５４５巻：１０７〜１１頁、２０１３年５月３日電子出版、ＰｕｂＭｅｄ  ＰＭＩＤ：  ２３６４８３９０）；Ｇｉｌｅｓ  ＪＴら、Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｆｉｎｅ  ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ  ａｎｄ  ｒｅｐｅｒｔｏｉｒｅ  ｅｘｐａｎｓｉｏｎ  ｏｆ  ａｎｔｉｃｉｔｒｕｌｌｉｎａｔｅｄ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｗｉｔｈ
ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌ  ｌｕｎｇ  ｄｉｓｅａｓｅ．、Ａｎｎ  Ｒｈｅｕｍ  Ｄｉｓ．、２０１３年５月２８日（印刷前の電子出版）、ＰｕｂＭｅｄ  ＰＭＩＤ：  ２３７１６０７０）；Ｇ６ｍａｒａ  ＭＪ，  Ｈａｒｏ  Ｉ．、Ｃｉｔｒｕｌｌｉｎａｔｅｄ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ
ｉｎ  ｔｈｅ  ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ｏｆ  ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ．、Ｃｕｒｒ  Ｔｏｐ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ．、２０１３年；１３巻（６号）：７４３〜５１頁、ＰｕｂＭｅｄ  ＰＭＩＤ：２３５７４５２３）；Ｄａｌｍａｄｙ  Ｓら、Ｈｉｇｈｅｒ  ｌｅｖｅｌｓ  ｏｆ  ａｕｔｏａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｍｕｔａｔｅｄ  ｃｉｔｒｕｌｌｉｎａｔｅｄ  ｖｉｍｅｎｔｉｎ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｐｓｏｒｉａｔｉｃ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ｔｈａｎ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｐｓｏｒｉａｓｉｓ  ｖｕｌｇａｒｉｓ．、Ｃｌｉｎ  Ｄｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２０１３年；２０１３巻：４７４０２８頁、３月１８日、ＰｕｂＭｅｄ  ＰＭＩＤ：２３５７３１１１；ＰｕｂＭｅｄ  Ｃｅｎｔｒａｌ  ＰＭＣＩＤ：ＰＭＣ３６１４０２２）；Ｈｅｒｒｅｒａ−Ｅｓｐａｒｚａ  Ｒら、Ｐｏｓｔｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｓａｌｉｖａｒｙ
Ｇｌａｎｄｓ  ｏｆ  Ｓｊｏｇｒｅｎ’ｓ  Ｓｙｎｄｒｏｍｅ  Ｐａｔｉｅｎｔｓ．、Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  Ｄｉｓ．、２０１３年；２０１３巻：５４８０６４頁、２０１３年３月５日電子出版、ＰｕｂＭｅｄ  ＰＭＩＤ：２３５３３７１９；ＰｕｂＭｅｄ  Ｃｅｎｔｒａｌ  ＰＭＣＩＤ：ＰＭＣ３６０３１６１）；およびＣａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｇら、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｔｏ  ｃｉｔｒｕｌｌｉｎａｔｅｄ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ａｎｄ
ｒｉｓｋ  ｏｆ  ｃｏｒｏｎａｒｙ  ｈｅａｒｔ  ｄｉｓｅａｓｅ．、Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ．、２０１３年５月；２２８巻（１号）：２４３〜６頁、２０１３年２月１８日電子出版、ＰｕｂＭｅｄ  ＰＭＩＤ：２３４７４１２５を参照）。
【００６５】
他の非限定的な例では、熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）、ＨＭＧＢ１、および／またはＳ１００Ａ８／Ａ９などのＴＬＲ４リガンドは、虚血／再潅流傷害（Ｉ／Ｒ傷害）と関連していると考えられている。非限定的な例として、ＨＭＧＢ１、Ｓ１００Ａ８／Ａ９、フィブロネクチン、シトルリン化フィブリノーゲン、および／またはテネイシンＣなどのＴＬＲ４リガンドは、関節炎と関連していると考えられている。非限定的な例として、熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）、ヒアルロナン、Ｄｅｒ  Ｐ２、呼吸器合胞体ウイルスＦ（ＲＳＶ）Ｆタンパク質、界面活性剤Ａ、および／またはＬＰＳなどのＴＬＲ４リガンドは、肺疾患と関連していると考えられている。非限定的な例として、コクサッキーウイルスＢ４（ＣＳＶ  Ｂ４）、ＣＸＣＬ１０、レジスチン、フェチュインＡ、飽和脂肪酸（ＳＦＡ）、ＨＭＧＢ１、および／またはＳ１００Ａ８／Ａ９などのＴＬＲ４リガンドは、糖尿病と関連していると考えられている。非限定的な例として、熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）、ヒアルロナン、Ｄｅｒ  Ｐ２、呼吸器合胞体ウイルスＦ（ＲＳＶ）Ｆタンパク質、界面活性剤Ａ、および／またはＬＰＳなどのＴＬＲ４リガンドは、肺疾患と関連している。非限定的な例として、ＨＭＧＢ１、Ｓ１００Ａ８／Ａ９バイグリカン、修飾低密度リポタンパク質（ｍＬＤＬ）、および／または終末糖化最終産物（ＡＧＥ）などのＴＬＲ４リガンドは、腎疾患と関連していると考えられている。
【００６６】
本発明の中和抗ＴＬＲ４抗体は、例えば、表２Ａに以下で示した重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）、表２Ｂに示した軽鎖ＣＤＲ、およびこれらの組合せを含む。
【表２Ａ−１】
2019048895.tif 000006
【表２Ａ−２】
2019048895.tif 000007
【表２Ｂ−１】
2019048895.tif 000008
【表２Ｂ−２】
2019048895.tif 000009
【００６７】
本発明のＴＬＲ４抗体は、例えば、以下に示した重鎖および軽鎖配列の組合せを有する抗体を含む。
【００６８】
例示的な本発明の抗体としては、例えば、２００５年６月１４日に出願され、ＷＯ２００７／１１０６７８として公開されたＰＣＴ／ＩＢ２００５／００４２０６に記載の抗ＴＬＲ４抗体、２００８年５月１４日に出願され、ＷＯ２００９／１０１４７９として公開されたＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＩＢ２００８／００３９７８に記載の抗ＴＬＲ４抗体、およびＨＴＡ１２５などの市販の抗体があり、これらの文献のそれぞれの内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれている。
【００６９】
例示的な本発明の抗体としては、例えば、ヒトＴＬＲ４／ＭＤ２複合体に結合し、ＭＤ−２の存在とは独立にＴＬＲ４にも結合する、「ｈｕ１５Ｃ１」とも本明細書および図面で呼ばれる、ＮＩ−０１０１と本明細書で呼ばれる抗体がある。Ｎｌ−０１０１（ｈｕ１５ｃ１）抗体の配列を、ＣＤＲ配列にＶＨおよびＶＬアミノ酸配列中で下線を引いて以下
に示す：
【化５】
2019048895.tif 000010
【化６】
2019048895.tif 000011
【化７】
2019048895.tif 000012
【化８】
2019048895.tif 000013
【００７０】
ＮＩ−０１０１（ｈｕ１５ｃ１）抗体は、配列ＧＧＹＳＷＨ（配列番号１）、ＹＩＨＹＳＧＹＴＤＦＮＰＳＬＫＴ（配列番号２）、およびＫＤＰＳＤＡＦＰＹ（配列番号３）を有するＶＨ  ＣＤＲ、ならびに配列ＲＡＳＱＳＩＳＤＨＬＨ（配列番号４）、ＹＡＳＨＡＩＳ（配列番号５）、およびＱＱＧＨＳＦＰＬＴ（配列番号６）を有するＶＬ  ＣＤＲを含む。
【００７１】
抗ＴＬＲ４／ＭＤ２抗体の重鎖可変（ＶＨ）および軽鎖可変（ＶＬ）領域のアミノ酸および核酸配列を以下に示す。Ｃｈｏｔｈｉａら、１９８９年、Ｅ．Ａ．  Ｋａｂａｔら、１９９１年によって定義された相補性決定領域（ＣＤＲ）を包含するアミノ酸は、以下で下線を引いた、イタリック体のテキストで強調されている（Ｃｈｏｔｈｉａ，  Ｃら、Ｎａｔｕｒｅ、３４２巻：８７７〜８８３頁（１９８９年）；Ｋａｂａｔ，  ＥＡら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｎｔｅｒｅｓｔ、５版、米国保健社会福祉省、米国政府印刷局（１９９１年）を参照）。
【００７２】
抗ＴＬＲ４抗体には、２００４年１２月１０日に出願された同時係属の米国出願１１／００９９３９、および２００４年６月１５日に出願された１１／１５１９１６、ならびに２００４年１２月１０日に出願されたＷＯ０５／０６５０１５、および２００４年６月１５日に出願されたＰＣＴ／ＵＳ２００５／０２０９３０に記載の抗体が含まれ、これらの文献のそれぞれは、その全体が参照により本明細書に組み込まれている。いくつかの例示的な抗体としては、１８Ｈ１０、１６０７、１５Ｃ１、および７Ｅ３とこれらの中で呼ばれる抗体がある。
【００７３】
抗ＴＬＲ４抗体には、２００４年６月１５日に出願された同時係属の米国出願１１／１５１９１６（米国特許公開第ＵＳ２００８−００５０３６６Ａ１号）、および２００４年６月１５日に出願されたＰＣＴ／ＩＢ２００５／００４２０６（ＰＣＴ公開第ＷＯ０７／１１０６７８号）に記載の抗体が含まれ、これらの文献のそれぞれは、その全体が参照により本明細書に組み込まれている。いくつかの例示的な抗体の配列を以下に示す。
【化９】
2019048895.tif 000014
【化１０】
2019048895.tif 000015
【化１１】
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【化１２】
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【化１３】
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【化１４】
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【化１５】
2019048895.tif 000020
【化１６】
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【化１７】
2019048895.tif 000022
【００７４】
抗ＴＬＲ４抗体には、２００８年５月１４日に出願されたＰＣＴ／ＩＢ２００８／００３９７８（ＰＣＴ公開第ＷＯ２００９／１０１４７９号）に記載の抗体が含まれ、この文献の内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれている。これらの抗ＴＬＲ４抗体は、ＣＤＲ３部分に１つまたは複数の突然変異を含むように修飾されている。いくつかの例示的な抗体の配列を以下に示す。
【化１８】
2019048895.tif 000023
【化１９】
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【化２０】
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【化２１】
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【化２２】
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【化２３】
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【化２４】
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【化２５】
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【化２６】
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【化２７】
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【化２８】
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【化２９】
2019048895.tif 000034
【００７５】
本発明の抗体は、ヒトおよび／もしくはカニクイザルＴＬＲ４、ならびに／またはヒトおよび／もしくはカニクイザルＴＬＲ４／ＭＤ−２複合体を介したシグナル伝達を妨害し、または別段にアンタゴナイズする。一部の実施形態では、抗体は、以下の配列を有するヒトおよび／またはカニクイザルＴＬＲ４上の１つまたは複数のアミノ酸残基を含むエピトープに結合する：
【化３０】
2019048895.tif 000035
【化３１】
2019048895.tif 000036
【００７６】
本発明の抗体は、ヒトおよび／もしくはカニクイザルＴＬＲ４、ならびに／またはヒトおよび／もしくはカニクイザルＴＬＲ４／ＭＤ−２複合体を介したシグナル伝達を妨害し、または別段にアンタゴナイズする。一部の実施形態では、抗体は、配列番号７６（ヒトＴＬＲ４）および／または配列番号７７（カニクイザルＴＬＲ４）の残基２８９から３７５の間でヒトおよび／またはカニクイザルＴＬＲ４上の１つまたは複数のアミノ酸残基を含むエピトープに結合する。例えば、ＴＬＲ４抗体は、配列番号７６（ヒト）および／または配列番号７７（カニクイザル）の残基３４９を含むエピトープに特異的に結合する。一部の実施形態では、エピトープは、追加の残基、例えば、配列番号７６（ヒト）および／または配列番号７７（カニクイザル）の少なくとも残基３２８および３２９；配列番号７６（ヒト）および／または配列番号７７（カニクイザル）の少なくとも残基３５１；ならびに配列番号７６（ヒト）および／または配列番号７７（カニクイザル）の少なくとも残基３６９〜３７１、ならびにこれらの任意の組合せからなる群から選択される残基も含む。
【００７７】
一部の実施形態では、本発明は、トール様受容体４（ＴＬＲ４）に特異的に結合する単離抗体であって、配列番号７６の少なくとも残基３４９を含むエピトープ、および配列番号７６の少なくとも残基３４９を含むエピトープに結合する、単離抗体を提供する。一部の実施形態では、抗体は、ＧＹＳＩＴＧＧＹＳ（配列番号１５）の可変重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲＨ１）アミノ酸配列；ＩＨＹＳＧＹＴ（配列番号２２）の可変重鎖相補性決定領域２（ＣＤＲＨ２）アミノ酸配列；およびＡＲＫＤＳＧ（Ｘ１）（Ｘ２）（Ｘ３）ＰＹ（配列番号１４）（式中、Ｘ１は、Ｎ、Ｑ、Ｄ、またはＥであり、Ｘ２は、任意の疎水性アミノ酸であり、Ｘ３は、任意の疎水性アミノ酸である）の可変重鎖相補性決定領域３（ＣＤＲＨ３）アミノ酸配列を含む３つの相補決定領域（ＣＤＲ）を有する重鎖；ならびにＱＳＩＳＤＨ（配列番号３４）の可変軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲＬ１）アミノ酸配列；ＹＡＳ（配列番号３５）の可変軽鎖相補性決定領域２（ＣＤＲＬ２）アミノ酸配列；およびＱＱＧＨＳＦＰＬＴ（配列番号６）の可変軽鎖相補性決定領域３（ＣＤＲＬ３）アミノ酸配列を含む３つのＣＤＲを有する軽鎖を含む。一部の実施形態では、エピトープは、配列番号７６および配列番号７６の少なくとも残基３２８および３２９をさらに含む。一部の実施形態では、エピトープは、配列番号７６および配列番号７６の少なくとも残基３５１をさらに含む。一部の実施形態では、エピトープは、配列番号７６および配列番号７６の残基３６９から３７１の間の１つまたは複数の残基をさらに含む。一部の実施形態では、エピトープは、配列番号７６および配列番号７６の少なくとも残基３６９〜３７１をさらに含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号７６および配列番号７６の少なくとも残基３２８、３２９、３４９、３５１、および３６９〜３７１を含むエピトープに特異的に結合する。一部の実施形態では、抗体は、ＥＵアミノ酸３２５位におけるガンマ重鎖定常領域内のアミノ酸置換およびＥＵアミノ酸３２８位におけるアミノ酸置換をさらに含む。一部の実施形態では、ＥＵアミノ酸３２５位で置換されているアミノ酸は、セリンであり、ＥＵアミノ酸３２８位で置換されているアミノ酸は、フェニルアラニンである。
【００７８】
例示的なＴＬＲ４モノクローナル抗体は、本明細書に記載の１Ｅ１１抗体である。以下に示したように、１Ｅ１１抗体は、配列番号７９に示した核酸配列によってコードされる重鎖可変領域（配列番号７８）、および配列番号８０に示した核酸配列によってコードされる軽鎖可変領域（配列番号８）を含む。
【化３２】
2019048895.tif 000037
【化３３】
2019048895.tif 000038
【化３４】
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【化３５】
2019048895.tif 000040
【００７９】
相補性決定領域（ＣＤＲ）を包含するアミノ酸は、Ｍ．Ｐ．  Ｌｅｆｒａｎｃによって定義された通りである（Ｌｅｆｒａｎｃ，  Ｍ．−Ｐ．、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｊ．  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、補遺４０、Ａｌ．Ｐ．ｌ−Ａ．１Ｐ．３７（２０００年）ＬＩＧＭ：２３０を参照）。１Ｅ１１抗体の重鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＧＹＳＩＴＧＧＹＳ（配列番号１５）；ＩＨＹＳＧＹＴ（配列番号２２）；およびＡＲＫＤＳＧＮＹＦＰＹ（配列番号２４）。１Ｅ１１抗体の軽鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＱＳＩＳＤＨ（配列番号３４）；ＹＡＳ（配列番号３５）；およびＱＱＧＨＳＦＰＬＴ（配列番号６）。
【００８０】
例示的なＴＬＲ４モノクローナル抗体は、本明細書に記載の１Ａ１抗体である。以下に示したように、１Ａ１抗体は、配列番号８１に示した核酸配列によってコードされる重鎖可変領域（配列番号８２）、および配列番号８０に示した核酸配列によってコードされる軽鎖可変領域（配列番号８）を含む。
【化３６】
2019048895.tif 000041
【化３７】
2019048895.tif 000042
【化３８】
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【化３９】
2019048895.tif 000044
【００８１】
相補性決定領域（ＣＤＲ）を包含するアミノ酸は、Ｍ．Ｐ．  Ｌｅｆｒａｎｃによって定義された通りである（Ｌｅｆｒａｎｃ，  Ｍ．−Ｐ．、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｊ．  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、補遺４０、Ａｌ．Ｐ．ｌ−Ａ．１Ｐ．３７（２０００年）ＬＩＧＭ：２３０を参照）。１Ａ１抗体の重鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＧＹＳＩＴＧＧＹＳ（配列番号１５）；ＩＨＹＳＧＹＴ（配列番号２２）；およびＡＲＫＤＳＧＲＬＬＰＹ（配列番号２５）。１Ａ１抗体の軽鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＱＳＩＳＤＨ（配列番号３４）；ＹＡＳ（配列番号３５）；およびＱＱＧＨＳＦＰＬＴ（配列番号６）。
【００８２】
例示的なＴＬＲ４モノクローナル抗体は、本明細書に記載の１Ａ６抗体である。以下に示したように、１Ａ６抗体は、配列番号８３に示した核酸配列によってコードされる重鎖可変領域（配列番号８４）、および配列番号８０に示した核酸配列によってコードされる軽鎖可変領域（配列番号８）を含む。
【化４０】
2019048895.tif 000045
【化４１】
2019048895.tif 000046
【化４２】
2019048895.tif 000047
【化４３】
2019048895.tif 000048
【００８３】
相補性決定領域（ＣＤＲ）を包含するアミノ酸は、Ｍ．Ｐ．  Ｌｅｆｒａｎｃによって定義された通りである（Ｌｅｆｒａｎｃ，  Ｍ．−Ｐ．、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｊ．  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、補遺４０、Ａｌ．Ｐ．ｌ−Ａ．ＩＰ．３７（２０００年）ＬＩＧＭ：２３０を参照）。１Ａ６抗体の重鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＧＹＳＩＴＧＧＹＳ（配列番号１５）；ＩＨＹＳＧＹＴ（配列番号２２）；およびＡＲＫＤＳＧＫＷＬＰＹ（配列番号２６）。１Ａ６抗体の軽鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＱＳＩＳＤＨ（配列番号３４）；ＹＡＳ（配列番号３５）；およびＱＱＧＨＳＦＰＬＴ（配列番号６）。
【００８４】
例示的なＴＬＲ４モノクローナル抗体は、本明細書に記載の１Ｂ１２抗体である。以下に示したように、１Ｂ１２抗体は、配列番号８５に示した核酸配列によってコードされる重鎖可変領域（配列番号８６）、および配列番号８０に示した核酸配列によってコードされる軽鎖可変領域（配列番号８）を含む。
【化４４】
2019048895.tif 000049
【化４５】
2019048895.tif 000050
【化４６】
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【化４７】
2019048895.tif 000052
【００８５】
相補性決定領域（ＣＤＲ）を包含するアミノ酸は、Ｍ．Ｐ．  Ｌｅｆｒａｎｃによって定義された通りである（Ｌｅｆｒａｎｃ，  Ｍ．−Ｐ．、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｊ．  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、補遺４０、Ａｌ．Ｐ．１−Ａ．１Ｐ．３７（２０００年）ＬＩＧＭ：２３０を参照）。１Ａ６抗体の重鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＧＹＳＩＴＧＧＹＳ（配列番号１５）；ＩＨＹＳＧＹＴ（配列番号２２）；およびＡＲＫＤＳＧＨＬＭＰＹ（配列番号２７）。１Ｂ１２抗体の軽鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＱＳＩＳＤＨ（配列番号３４）；ＹＡＳ（配列番号３５）；およびＱＱＧＨＳＦＰＬＴ（配列番号６）。
【００８６】
例示的なＴＬＲ４モノクローナル抗体は、本明細書に記載の１Ｃ７抗体である。以下に示したように、１Ｃ７抗体は、配列番号８７に示した核酸配列によってコードされる重鎖可変領域（配列番号８８）、および配列番号８０に示した核酸配列によってコードされる軽鎖可変領域（配列番号８）を含む。
【化４８】
2019048895.tif 000053
【化４９】
2019048895.tif 000054
【化５０】
2019048895.tif 000055
【化５１】
2019048895.tif 000056
【００８７】
相補性決定領域（ＣＤＲ）を包含するアミノ酸は、Ｍ．Ｐ．  Ｌｅｆｒａｎｃによって定義された通りである（Ｌｅｆｒａｎｃ，  Ｍ．−Ｐ．、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｊ．  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、補遺４０、Ａｌ．Ｐ．ｌ−Ａ．１Ｐ．３７（２０００年）ＬＩＧＭ：２３０を参照）。１Ｃ７抗体の重鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＧＹＳＩＴＧＧＹＳ（配列番号１５）；ＩＨＹＳＧＹＴ（配列番号２２）；およびＡＲＫＤＳＧＨＮＹＰＹ（配列番号２８）。１Ｃ７抗体の軽鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＱＳＩＳＤＨ（配列番号３４）；ＹＡＳ（配列番号３５）；およびＱＱＧＨＳＦＰＬＴ（配列番号６）。
【００８８】
例示的なＴＬＲ４モノクローナル抗体は、本明細書に記載の１Ｃ１０抗体である。以下に示したように、１Ｃ１０抗体は、配列番号８９に示した核酸配列によってコードされる重鎖可変領域（配列番号９０）、および配列番号８０に示した核酸配列によってコードされる軽鎖可変領域（配列番号８）を含む。
【化５２】
2019048895.tif 000057
【化５３】
2019048895.tif 000058
【化５４】
2019048895.tif 000059
【化５５】
2019048895.tif 000060
【００８９】
相補性決定領域（ＣＤＲ）を包含するアミノ酸は、Ｍ．Ｐ．  Ｌｅｆｒａｎｃによって定義された通りである（Ｌｅｆｒａｎｃ，  Ｍ．−Ｐ．、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｊ．  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、補遺４０、Ａｌ．Ｐ．ｌ−Ａ．１Ｐ．３７（２０００年）ＬＩＧＭ：２３０を参照）。１Ｃ１０抗体の重鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＧＹＳＩＴＧＧＹＳ（配列番号１５）；ＩＨＹＳＧＹＴ（配列番号２２）；およびＡＲＫＤＳＧＫＮＦＰＹ（配列番号２９）。１Ｃ１０抗体の軽鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＱＳＩＳＤＨ（配列番号３４）；ＹＡＳ（配列番号３５）；およびＱＱＧＨＳＦＰＬＴ（配列番号６）。
【００９０】
例示的なＴＬＲ４モノクローナル抗体は、本明細書に記載の１Ｃ１２抗体である。以下に示したように、１Ｃ１２抗体は、配列番号９１に示した核酸配列によってコードされる重鎖可変領域（配列番号９２）、および配列番号８０に示した核酸配列によってコードされる軽鎖可変領域（配列番号８）を含む。
【化５６】
2019048895.tif 000061
【化５７】
2019048895.tif 000062
【化５８】
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【化５９】
2019048895.tif 000064
【００９１】
相補性決定領域（ＣＤＲ）を包含するアミノ酸は、Ｍ．Ｐ．  Ｌｅｆｒａｎｃによって定義された通りである（Ｌｅｆｒａｎｃ，  Ｍ．−Ｐ．、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｊ．  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、補遺４０、Ａｌ．Ｐ．ｌ−Ａ．１Ｐ．３７（２０００年）ＬＩＧＭ：２３０を参照）。１Ｃ１２抗体の重鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＧＹＳＩＴＧＧＹＳ（配列番号１５）；ＩＨＹＳＧＹＴ（配列番号２２）；およびＡＲＫＤＳＧＱＬＦＰＹ（配列番号３０）。１Ｃ１２抗体の軽鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＱＳＩＳＤＨ（配列番号３４）；ＹＡＳ（配列番号３５）；およびＱＱＧＨＳＦＰＬＴ（配列番号６）。
【００９２】
例示的なＴＬＲ４モノクローナル抗体は、本明細書に記載の１Ｄ１０抗体である。以下に示したように、１Ｄ１０抗体は、配列番号９３に示した核酸配列によってコードされる重鎖可変領域（配列番号９４）、および配列番号８０に示した核酸配列によってコードされる軽鎖可変領域（配列番号８）を含む。
【化６０】
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【化６１】
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【化６２】
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【化６３】
2019048895.tif 000068
【００９３】
相補性決定領域（ＣＤＲ）を包含するアミノ酸は、Ｍ．Ｐ．  Ｌｅｆｒａｎｃによって定義された通りである（Ｌｅｆｒａｎｃ，  Ｍ．−Ｐ．、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｊ．  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、補遺４０、Ａｌ．Ｐ．ｌ−Ａ．ＩＰ．３７（２０００年）ＬＩＧＭ：２３０を参照）。１Ｄ１０抗体の重鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＧＹＳＩＴＧＧＹＳ（配列番号１５）；ＩＨＹＳＧＹＴ（配列番号２２）；およびＡＲＫＤＳＧＨＮＬＰＹ（配列番号３１）。１Ｄ１０抗体の軽鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＱＳＩＳＤＨ（配列番号３４）；ＹＡＳ（配列番号３５）；およびＱＱＧＨＳＦＰＬＴ（配列番号６）。
【００９４】
例示的なＴＬＲ４モノクローナル抗体は、本明細書に記載の１Ｅ１１  Ｎ１０３Ｄ抗体である。以下に示したように、１Ｅ１１  Ｎ１０３Ｄ抗体は、配列番号９５に示した核酸配列によってコードされる重鎖可変領域（配列番号９６）、および配列番号８０に示した核酸配列によってコードされる軽鎖可変領域（配列番号８）を含む。
【化６４】
2019048895.tif 000069
【化６５】
2019048895.tif 000070
【化６６】
2019048895.tif 000071
【化６７】
2019048895.tif 000072
【００９５】
相補性決定領域（ＣＤＲ）を包含するアミノ酸は、Ｍ．Ｐ．  Ｌｅｆｒａｎｃによって定義された通りである（Ｌｅｆｒａｎｃ，  Ｍ．−Ｐ．、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｊ．  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、補遺４０、Ａｌ．Ｐ．ｌ−Ａ．１Ｐ．３７（２０００年）ＬＩＧＭ：２３０を参照）。１Ｅ１１  Ｎ１０３Ｄ抗体の重鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＧＹＳＩＴＧＧＹＳ（配列番号１５）；ＩＨＹＳＧＹＴ（配列番号２２）；およびＡＲＫＤＳＧＤＹＦＰＹ（配列番号３２）。１Ｅ１１  Ｎ１０３Ｄ抗体の軽鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＱＳＩＳＤＨ（配列番号３４）；ＹＡＳ（配列番号３５）；およびＱＱＧＨＳＦＰＬＴ（配列番号６）。
【００９６】
例示的なＴＬＲ４モノクローナル抗体は、本明細書に記載の１Ｇ１２抗体である。以下に示したように、１０１２抗体は、配列番号９７に示した核酸配列によってコードされる重鎖可変領域（配列番号９８）、および配列番号８０に示した核酸配列によってコードされる軽鎖可変領域（配列番号８）を含む。
【化６８】
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【化６９】
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【化７０】
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【化７１】
2019048895.tif 000076
【００９７】
相補性決定領域（ＣＤＲ）を包含するアミノ酸は、Ｍ．Ｐ．  Ｌｅｆｒａｎｃによって定義された通りである（Ｌｅｆｒａｎｃ，  Ｍ．−Ｐ．、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｊ．  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、補遺４０、Ａｌ．Ｐ．１−Ａ．１Ｐ．３７（２０００年）ＬＩＧＭ：２３０を参照）。１０１２抗体の重鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＧＹＳＩＴＧＧＹＳ（配列番号１５）；ＩＨＹＳＧＹＴ（配列番号２２）；およびＡＲＫＤＳＧＲＹＷＰＹ（配列番号３３）。１Ｅ１１  Ｎ１０３Ｄ抗体の軽鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＱＳＩＳＤＨ（配列番号３４）；ＹＡＳ（配列番号３５）；およびＱＱＧＨＳＦＰＬＴ（配列番号６）。
【００９８】
例示的なＴＬＲ４モノクローナル抗体は、本明細書に記載の１Ｅ１１．Ｃ１抗体である。以下に示したように、１Ｅ１１．Ｃ１抗体は、配列番号９９に示した核酸配列によってコードされる重鎖可変領域（配列番号１００）、および配列番号８０に示した核酸配列によってコードされる軽鎖可変領域（配列番号８）を含む。
【化７２】
2019048895.tif 000077
【化７３】
2019048895.tif 000078
【化７４】
2019048895.tif 000079
【化７５】
2019048895.tif 000080
【００９９】
相補性決定領域（ＣＤＲ）を包含するアミノ酸は、Ｍ．Ｐ．  Ｌｅｆｒａｎｃによって定義された通りである（Ｌｅｆｒａｎｃ，  Ｍ．−Ｐ．、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｊ．  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、補遺４０、Ａｌ．Ｐ．ｌ−Ａ．ｌＰ．３７（２０００年）ＬＩＧＭ：２３０を参照）。１Ｅ１１．Ｃ１抗体の重鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＧＦＰＩＲＹＧＹＳ（配列番号１６）；ＩＨＹＳＧＹＴ（配列番号２２）；およびＡＲＫＤＳＧＮＹＦＰＹ（配列番号２４）。１Ｅ１１．Ｃ１抗体の軽鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＱＳＩＳＤＨ（配列番号３４）；ＹＡＳ（配列番号３５）；およびＱＱＧＨＳＦＰＬＴ（配列番号６）。
【０１００】
例示的なＴＬＲ４モノクローナル抗体は、本明細書に記載の１Ｅ１１．Ｃ２抗体である。以下に示したように、１Ｅ１１．Ｃ２抗体は、配列番号１０１に示した核酸配列によってコードされる重鎖可変領域（配列番号１０２）、および配列番号８に示した核酸配列によってコードされる軽鎖可変領域（配列番号８０）を含む。
【化７６】
2019048895.tif 000081
【化７７】
2019048895.tif 000082
【化７８】
2019048895.tif 000083
【化７９】
2019048895.tif 000084
【０１０１】
相補性決定領域（ＣＤＲ）を包含するアミノ酸は、Ｍ．Ｐ．  Ｌｅｆｒａｎｃによって定義された通りである（Ｌｅｆｒａｎｃ，  Ｍ．−Ｐ．、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｊ．  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、補遺４０、Ａｌ．Ｐ．ｌ−Ａ．１Ｐ．３７（２０００年）ＬＩＧＭ：２３０を参照）。１Ｅ１１．Ｃ２抗体の重鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＧＹＰＩＲＦＧＹＳ（配列番号１７）；ＩＨＹＳＧＹＴ（配列番号２２）；およびＡＲＫＤＳＧＮＹＦＰＹ（配列番号２４）。１Ｅ１１．Ｃ１抗体の軽鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＱＳＩＳＤＨ（配列番号３４）；ＹＡＳ（配列番号３５）；およびＱＱＧＨＳＦＰＬＴ（配列番号６）。
【０１０２】
例示的なＴＬＲ４モノクローナル抗体は、本明細書に記載の１Ｅ１１．Ｃ３抗体である。以下に示したように、１Ｅ１１．Ｃ３抗体は、配列番号１０３に示した核酸配列によってコードされる重鎖可変領域（配列番号１０４）、および配列番号８０に示した核酸配列によってコードされる軽鎖可変領域（配列番号８）を含む。
【化８０】
2019048895.tif 000085
【化８１】
2019048895.tif 000086
【化８２】
2019048895.tif 000087
【化８３】
2019048895.tif 000088
【０１０３】
相補性決定領域（ＣＤＲ）を包含するアミノ酸は、Ｍ．Ｐ．  Ｌｅｆｒａｎｃによって定義された通りである（Ｌｅｆｒａｎｃ，  Ｍ．−Ｐ．、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｊ．  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、補遺４０、Ａｌ．Ｐ．ｌ−Ａ．１Ｐ．３７（２０００年）ＬＩＧＭ：２３０を参照）。１Ｅ１１．Ｃ３抗体の重鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＧＹＰＩＲＨＧＹＳ（配列番号１８）；ＩＨＹＳＧＹＴ（配列番号２２）；およびＡＲＫＤＳＧＮＹＦＰＹ（配列番号２４）。１Ｅ１１．Ｃ１抗体の軽鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＱＳＩＳＤＨ（配列番号３４）；ＹＡＳ（配列番号３５）；およびＱＱＧＨＳＦＰＬＴ（配列番号６）。
【０１０４】
例示的なＴＬＲ４モノクローナル抗体は、本明細書に記載の１Ｅ１１．Ｃ４抗体である。以下に示したように、１Ｅ１１．Ｃ４抗体は、配列番号１０５に示した核酸配列によってコードされる重鎖可変領域（配列番号１０６）、および配列番号８０に示した核酸配列によってコードされる軽鎖可変領域（配列番号８）を含む。
【化８４】
2019048895.tif 000089
【化８５】
2019048895.tif 000090
【化８６】
2019048895.tif 000091
【化８７】
2019048895.tif 000092
【０１０５】
相補性決定領域（ＣＤＲ）を包含するアミノ酸は、Ｍ．Ｐ．  Ｌｅｆｒａｎｃによって定義された通りである（Ｌｅｆｒａｎｃ，  Ｍ．−Ｐ．、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｊ．  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、補遺４０、Ａｌ．Ｐ．ｌ−Ａ．１Ｐ．３７（２０００年）ＬＩＧＭ：２３０を参照）。１Ｅ１１．Ｃ４抗体の重鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＧＦＰＩＧＱＧＹＳ（配列番号１９）；ＩＨＹＳＧＹＴ（配列番号２２）；およびＡＲＫＤＳＧＮＹＦＰＹ（配列番号２４）。１Ｅ１１．Ｃ１抗体の軽鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＱＳＩＳＤＨ（配列番号３４）；ＹＡＳ（配列番号３５）；およびＱＱＧＨＳＦＰＬＴ（配列番号６）。
【０１０６】
例示的なＴＬＲ４モノクローナル抗体は、本明細書に記載の１Ｅ１１．Ｃ５抗体である。以下に示したように、１Ｅ１１．Ｃ５抗体は、配列番号１０７に示した核酸配列によってコードされる重鎖可変領域（配列番号１０８）、および配列番号８０に示した核酸配列によってコードされる軽鎖可変領域（配列番号８）を含む。
【化８８】
2019048895.tif 000093
【化８９】
2019048895.tif 000094
【化９０】
2019048895.tif 000095
【化９１】
2019048895.tif 000096
【０１０７】
相補性決定領域（ＣＤＲ）を包含するアミノ酸は、Ｍ．Ｐ．  Ｌｅｆｒａｎｃによって定義された通りである（Ｌｅｆｒａｎｃ，  Ｍ．−Ｐ．、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｊ．  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、補遺４０、Ａｌ．Ｐ．ｌ−Ａ．ＩＰ．３７（２０００年）ＬＩＧＭ：２３０を参照）。１Ｅ１１．Ｃ５抗体の重鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＧＹＰＩＷＧＧＹＳ（配列番号２０）；ＩＨＹＳＧＹＴ（配列番号２２）；およびＡＲＫＤＳＧＮＹＦＰＹ（配列番号２４）。１Ｅ１１．Ｃ１抗体の軽鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＱＳＩＳＤＨ（配列番号３４）；ＹＡＳ（配列番号３５）；およびＱＱＧＨＳＦＰＬＴ（配列番号６）。
【０１０８】
例示的なＴＬＲ４モノクローナル抗体は、本明細書に記載の１Ｅ１１．Ｃ６抗体である。以下に示したように、１Ｅ１１．Ｃ６抗体は、配列番号１０９に示した核酸配列によってコードされる重鎖可変領域（配列番号１１０）、および配列番号８０に示した核酸配列によってコードされる軽鎖可変領域（配列番号８）を含む。
【化９２】
2019048895.tif 000097
【化９３】
2019048895.tif 000098
【化９４】
2019048895.tif 000099
【化９５】
2019048895.tif 000100
【０１０９】
相補性決定領域（ＣＤＲ）を包含するアミノ酸は、Ｍ．Ｐ．  Ｌｅｆｒａｎｃによって定義された通りである（Ｌｅｆｒａｎｃ，  Ｍ．−Ｐ．、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｊ．  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、補遺４０、Ａｌ．Ｐ．１−Ａ．１Ｐ．３７（２０００年）ＬＩＧＭ：２３０を参照）。１Ｅ１１．Ｃ６抗体の重鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＧＹＰＩＧＧＧＹＳ（配列番号２１）；ＩＨＹＳＧＹＴ（配列番号２２）；およびＡＲＫＤＳＧＮＹＦＰＹ（配列番号２４）。１Ｅ１１．Ｃ１抗体の軽鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＱＳＩＳＤＨ（配列番号３４）；ＹＡＳ（配列番号３５）；およびＱＱＧＨＳＦＰＬＴ（配列番号６）。
【０１１０】
例示的なＴＬＲ４モノクローナル抗体は、本明細書に記載の１Ｅ１１．Ｅ１抗体である。以下に示すように、１Ｅ１１．Ｅ１抗体は、配列番号７７に示した核酸配列によってコードされる重鎖可変領域（配列番号７８）、および配列番号１１１に示した核酸配列によってコードされる軽鎖可変領域（配列番号１１２）を含む。
【化９６】
2019048895.tif 000101
【化９７】
2019048895.tif 000102
【化９８】
2019048895.tif 000103
【化９９】
2019048895.tif 000104
【０１１１】
相補性決定領域（ＣＤＲ）を包含するアミノ酸は、Ｍ．Ｐ．  Ｌｅｆｒａｎｃによって定義された通りである（Ｌｅｆｒａｎｃ，  Ｍ．−Ｐ．、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｊ．  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、補遺４０、Ａｌ．Ｐ．１−Ａ．１Ｐ．３７（２０００年）ＬＩＧＭ：２３０を参照）。１Ｅ１１．Ｅ１抗体の重鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＧＹＳＩＴＧＧＹＳ（配列番号１５）；ＩＨＹＳＧＹＴ（配列番号２２）；およびＡＲＫＤＳＧＮＹＦＰＹ（配列番号２４）。１Ｅ１１抗体の軽鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＱＳＩＳＤＨ（配列番号３４）；ＹＡＳ（配列番号３５）；およびＱＱＧＮＤＦＰＶＴ（配列番号３７）。
【０１１２】
例示的なＴＬＲ４モノクローナル抗体は、本明細書に記載の１Ｅ１１．Ｅ２抗体である。以下に示すように、１Ｅ１１．Ｅ２抗体は、配列番号７９に示した核酸配列によってコードされる重鎖可変領域（配列番号７８）、および配列番号１１３に示した核酸配列によってコードされる軽鎖可変領域（配列番号１１４）を含む。
【化１００】
2019048895.tif 000105
【化１０１】
2019048895.tif 000106
【化１０２】
2019048895.tif 000107
【化１０３】
2019048895.tif 000108
【０１１３】
相補性決定領域（ＣＤＲ）を包含するアミノ酸は、Ｍ．Ｐ．  Ｌｅｆｒａｎｃによって定義された通りである（Ｌｅｆｒａｎｃ，  Ｍ．−Ｐ．、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｊ．  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、補遺４０、Ａｌ．Ｐ．ｌ−Ａ．１Ｐ．３７（２０００年）ＬＩＧＭ：２３０を参照）。１Ｅ１１．Ｅ２抗体の重鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＧＹＳＩＴＧＧＹＳ（配列番号１５）；ＩＨＹＳＧＹＴ（配列番号２２）；およびＡＲＫＤＳＧＮＹＦＰＹ（配列番号２４）。１Ｅ１１抗体の軽鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＱＳＩＳＤＨ（配列番号３４）；ＹＡＳ（配列番号３５）；およびＱＱＧＹＤＥＰＦＴ（配列番号３８）。
【０１１４】
例示的なＴＬＲ４モノクローナル抗体は、本明細書に記載の１Ｅ１１．Ｅ３抗体である。以下に示すように、１Ｅ１１．Ｅ３抗体は、配列番号７９に示した核酸配列によってコードされる重鎖可変領域（配列番号７８）、および配列番号１１５に示した核酸配列によってコードされる軽鎖可変領域（配列番号１１６）を含む。
【化１０４】
2019048895.tif 000109
【化１０５】
2019048895.tif 000110
【化１０６】
2019048895.tif 000111
【化１０７】
2019048895.tif 000112
【０１１５】
相補性決定領域（ＣＤＲ）を包含するアミノ酸は、Ｍ．Ｐ．  Ｌｅｆｒａｎｃによって定義された通りである（Ｌｅｆｒａｎｃ，  Ｍ．−Ｐ．、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｊ．  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、補遺４０、Ａｌ．Ｐ．１−Ａ．１Ｐ．３７（２０００年）ＬＩＧＭ：２３０を参照）。１Ｅ１１．Ｅ３抗体の重鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＧＹＳＩＴＧＧＹＳ（配列番号１５）；ＩＨＹＳＧＹＴ（配列番号２２）；およびＡＲＫＤＳＧＮＹＦＰＹ（配列番号２４）。１Ｅ１１抗体の軽鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＱＳＩＳＤＨ（配列番号３４）；ＹＡＳ（配列番号３５）；およびＱＱＧＹＤＦＰＬＴ（配列番号３９）。
【０１１６】
例示的なＴＬＲ４モノクローナル抗体は、本明細書に記載の１Ｅ１１．Ｅ４抗体である。以下に示すように、１Ｅ１１．Ｅ４抗体は、配列番号７９に示した核酸配列によってコードされる重鎖可変領域（配列番号７９）、および配列番号１１７に示した核酸配列によってコードされる軽鎖可変領域（配列番号１１８）を含む。
【化１０８】
2019048895.tif 000113
【化１０９】
2019048895.tif 000114
【化１１０】
2019048895.tif 000115
【化１１１】
2019048895.tif 000116
【０１１７】
相補性決定領域（ＣＤＲ）を包含するアミノ酸は、Ｍ．Ｐ．  Ｌｅｆｒａｎｃによって定義された通りである（Ｌｅｆｒａｎｃ，  Ｍ．−Ｐ．、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｊ．  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、補遺４０、Ａｌ．Ｐ．１−Ａ．１Ｐ．３７（２０００年）ＬＩＧＭ：２３０を参照）。１Ｅ１１．Ｅ４抗体の重鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＧＹＳＩＴＧＧＹＳ（配列番号１５）；ＩＨＹＳＧＹＴ（配列番号２２）；およびＡＲＫＤＳＧＮＹＦＰＹ（配列番号２４）。１Ｅ１１抗体の軽鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＱＳＩＳＤＨ（配列番号３４）；ＹＡＳ（配列番号３５）；およびＱＱＧＹＤＹＰＬＴ（配列番号４０）。
【０１１８】
例示的なＴＬＲ４モノクローナル抗体は、本明細書に記載の１Ｅ１１．Ｅ５抗体である。以下に示すように、１Ｅ１１．Ｅ５抗体は、配列番号７９に示した核酸配列によってコードされる重鎖可変領域（配列番号７８）、および配列番号１１９に示した核酸配列によってコードされる軽鎖可変領域（配列番号１２０）を含む。
【化１１２】
2019048895.tif 000117
【化１１３】
2019048895.tif 000118
【化１１４】
2019048895.tif 000119
【化１１５】
2019048895.tif 000120
【０１１９】
相補性決定領域（ＣＤＲ）を包含するアミノ酸は、Ｍ．Ｐ．  Ｌｅｆｒａｎｃによって定義された通りである（Ｌｅｆｒａｎｃ，  Ｍ．−Ｐ．、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｊ．  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、補遺４０、Ａｌ．Ｐ．１−Ａ．１Ｐ．３７（２０００年）ＬＩＧＭ：２３０を参照）。１Ｅ１１．Ｅ５抗体の重鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＧＹＳＩＴＧＧＹＳ（配列番号１５）；ＩＨＹＳＧＹＴ（配列番号２２）；およびＡＲＫＤＳＧＮＹＦＰＹ（配列番号２４）。１Ｅ１１抗体の軽鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＱＳＩＳＤＨ（配列番号３４）；ＹＡＳ（配列番号３５）；およびＱＱＧＹＥＦＰＬＴ（配列番号４１）。
【０１２０】
例示的なＴＬＲ４モノクローナル抗体は、本明細書に記載の１Ｅ１１．Ｃ２Ｅ１抗体である。以下に示したように、１Ｅ１１．Ｃ２Ｅ１抗体は、配列番号１０１に示した核酸配列によってコードされる重鎖可変領域（配列番号１０２）、および配列番号１２１に示した核酸配列によってコードされる軽鎖可変領域（配列番号１２２）を含む。
【化１１６】
2019048895.tif 000121
【化１１７】
2019048895.tif 000122
【化１１８】
2019048895.tif 000123
【化１１９】
2019048895.tif 000124
【０１２１】
相補性決定領域（ＣＤＲ）を包含するアミノ酸は、Ｍ．Ｐ．  Ｌｅｆｒａｎｃによって定義された通りである（Ｌｅｆｒａｎｃ，  Ｍ．−Ｐ．、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｊ．  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、補遺４０、Ａｌ．Ｐ．１−Ａ．１Ｐ．３７（２０００年）ＬＩＧＭ：２３０を参照）。１Ｅ１１．Ｃ２Ｅ１抗体の重鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＧＹＰＩＲＦＧＹＳ（配列番号１７）；ＩＨＹＳＧＹＴ（配列番号２２）；およびＡＲＫＤＳＧＮＹＦＰＹ（配列番号２４）。１Ｅ１１抗体の軽鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＱＳＩＳＤＨ（配列番号３４）；ＹＡＳ（配列番号３５）；およびＱＱＧＮＤＦＰＶＴ（配列番号３７）。
【０１２２】
例示的なＴＬＲ４モノクローナル抗体は、本明細書に記載の１Ｅ１１．Ｃ２Ｅ３抗体である。以下に示したように、１Ｅ１１．Ｃ２Ｅ３抗体は、配列番号１０１に示した核酸配列によってコードされる重鎖可変領域（配列番号１０２）、および配列番号１２３に示した核酸配列によってコードされる軽鎖可変領域（配列番号１２４）を含む。
【化１２０】
2019048895.tif 000125
【化１２１】
2019048895.tif 000126
【化１２２】
2019048895.tif 000127
【化１２３】
2019048895.tif 000128
【０１２３】
相補性決定領域（ＣＤＲ）を包含するアミノ酸は、Ｍ．Ｐ．  Ｌｅｆｒａｎｃによって定義された通りである（Ｌｅｆｒａｎｃ，  Ｍ．−Ｐ．、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｊ．  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、補遺４０、Ａｌ．Ｐ．１−Ａ．１Ｐ．３７（２０００年）ＬＩＧＭ：２３０を参照）。１Ｅ１１．Ｃ２Ｅ３抗体の重鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＧＹＰＩＲＦＧＹＳ（配列番号１７）；ＩＨＹＳＧＹＴ（配列番号２２）；およびＡＲＫＤＳＧＮＹＦＰＹ（配列番号２４）。１Ｅ１１抗体の軽鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＱＳＩＳＤＨ（配列番号３４）；ＹＡＳ（配列番号３５）；およびＱＱＧＹＤＦＰＬＴ（配列番号３９）。
【０１２４】
例示的なＴＬＲ４モノクローナル抗体は、本明細書に記載の１Ｅ１１．Ｃ２Ｅ４抗体である。以下に示したように、１Ｅ１１．Ｃ２Ｅ４抗体は、配列番号１０１に示した核酸配列によってコードされる重鎖可変領域（配列番号１０２）、および配列番号１２５に示した核酸配列によってコードされる軽鎖可変領域（配列番号１２６）を含む。
【化１２４】
2019048895.tif 000129
【化１２５】
2019048895.tif 000130
【化１２６】
2019048895.tif 000131
【化１２７】
2019048895.tif 000132
【０１２５】
相補性決定領域（ＣＤＲ）を包含するアミノ酸は、Ｍ．Ｐ．  Ｌｅｆｒａｎｃによって定義された通りである（Ｌｅｆｒａｎｃ，  Ｍ．−Ｐ．、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｊ．  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、補遺４０、Ａｌ．Ｐ．１−Ａ．ｌ  Ｐ．３７（２０００年）ＬＩＧＭ：２３０を参照）。１Ｅ１１．Ｃ２Ｅ４抗体の重鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＧＹＰＩＲＦＧＹＳ（配列番号１７）；ＩＨＹＳＧＹＴ（配列番号２２）；およびＡＲＫＤＳＧＮＹＦＰＹ（配列番号２４）。１Ｅ１１抗体の軽鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＱＳＩＳＤＨ（配列番号３４）；ＹＡＳ（配列番号３５）；およびＱＱＧＹＤＹＰＬＴ（配列番号４０）。
【０１２６】
例示的なＴＬＲ４モノクローナル抗体は、本明細書に記載の１Ｅ１１．Ｃ２Ｅ５抗体である。以下に示したように、１Ｅ１１．Ｃ２Ｅ５抗体は、配列番号１０１に示した核酸配列によってコードされる重鎖可変領域（配列番号１０２）、および配列番号１２７に示した核酸配列によってコードされる軽鎖可変領域（配列番号１２８）を含む。
【化１２８】
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【化１２９】
2019048895.tif 000134
【化１３０】
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【化１３１】
2019048895.tif 000136
【０１２７】
相補性決定領域（ＣＤＲ）を包含するアミノ酸は、Ｍ．Ｐ．  Ｌｅｆｒａｎｃによって定義された通りである（Ｌｅｆｒａｎｃ，  Ｍ．−Ｐ．、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｊ．  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、補遺４０、Ａｌ．Ｐ．ｌ−Ａ．ＩＰ．３７（２０００年）ＬＩＧＭ：２３０を参照）。１Ｅ１１．Ｃ２Ｅ５抗体の重鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＧＹＰＩＲＦＧＹＳ（配列番号１７）；ＩＨＹＳＧＹＴ（配列番号２２）；およびＡＲＫＤＳＧＮＹＦＰＹ（配列番号２４）。１Ｅ１１抗体の軽鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＱＳＩＳＤＨ（配列番号３４）；ＹＡＳ（配列番号３５）；およびＱＱＧＹＥＦＰＬＴ（配列番号４１）。
【０１２８】
一部の実施形態では、ＴＬＲ４抗体は、ＩｇＧアイソタイプでフォーマットされている。一部の実施形態では、ＴＬＲ４抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプでフォーマットされている。
【０１２９】
例示的なＩｇＧ１でフォーマットされた抗体は、以下に示すように、配列番号１３０の重鎖配列および配列番号１３２の軽鎖配列を含むＩｇＧ１でフォーマットされた１Ｅ１１抗体である：
【化１３２】
2019048895.tif 000137
【化１３３】
2019048895.tif 000138
【化１３４】
2019048895.tif 000139
【化１３５】
2019048895.tif 000140
【０１３０】
例示的なＩｇＧ１でフォーマットされた抗体は、以下に示すように、配列番号１３４の重鎖配列および配列番号１３６の軽鎖配列を含むＩｇＧ１でフォーマットされた１Ｅ１１．Ｃ１１抗体である：
【化１３６】
2019048895.tif 000141
【化１３７】
2019048895.tif 000142
【化１３８】
2019048895.tif 000143
【化１３９】
2019048895.tif 000144
【０１３１】
一部の実施形態では、本発明のＴＬＲ４抗体は、ヒトおよび／またはカニクイザルＴＬＲ４／ＭＤ−２複合体に特異的に結合し、この抗体は、配列番号７６（ヒト）および配列番号７７（カニクイザル）の残基３２５から３７４の間でヒトおよび／またはカニクイザルＴＬＲ４上に１つまたは複数のアミノ酸残基を含むエピトープに結合する。代わりに、モノクローナル抗体は、１Ａ１、１Ａ６、１Ｂ１２、１Ｃ７、１Ｃ１０、１Ｃ１２、１Ｄ１０、１Ｅ１１、１Ｅ１１  Ｎ１０３Ｄ、１Ｇ１２、１Ｅ１１．Ｃ１、１Ｅ１１．Ｃ２、１Ｅ１１．Ｃ３、１Ｅ１１．Ｃ４、１Ｅ１１．Ｃ５、１Ｅ１１．Ｃ６、１Ｅ１１．Ｅ１、１Ｅ１１．Ｅ２、１Ｅ１１．Ｅ３、１Ｅ１１．Ｅ４、１Ｅ１１．Ｅ５、１Ｅ１１．Ｃ２Ｅ１、１Ｅ１１．Ｃ２Ｅ３、１Ｅ１１．Ｃ２Ｅ４、および１Ｅ１１．Ｃ２Ｅ５と同じエピトープに結合する抗体である。
【０１３２】
本発明の抗ＴＬＲ４抗体は、抗体のＦｃ部分のＣＨ２ドメイン中で少なくともＥＵ３２５位のアミノ酸残基および少なくともＥＵ３２８位のアミノ酸残基が修飾されている改変抗体を含む。例えば、少なくともＥＵ３２５位のアミノ酸残基がセリンで置換されており、少なくともＥＵ３２８位のアミノ酸残基がフェニルアラニンで置換されている。
【０１３３】
修飾されたＦｃ部分を有するこれらの抗ＴＬＲ４抗体は、未改変抗体と比較して、修正されたエフェクター機能、例えば、修正されたＦｃ受容体活性を誘発する。例えば、ヒトＦｃ受容体は、ＣＤ３２Ａである。一部の実施形態では、これらの抗ＴＬＲ４抗体は、未改変抗体と比較して、ＣＤ３２Ａへのライゲーションに続く炎症促進性メディエーター放出の防止を誘発する。したがって、これらの抗ＴＬＲ４抗体は、標的抗原に結合する能力を保持しながら炎症促進性メディエーター放出の防止などの修正されたＦｃ受容体活性を誘発する。一部の実施形態では、これらの抗ＴＬＲ４抗体は、中和抗体であり、抗ＴＬＲ４抗体は、標的抗原の１つまたは複数の生物活性を中和する能力を保持しながら修正されたＦｃ受容体活性を誘発する。
【０１３４】
例えば、本発明の抗ＴＬＲ４抗体は、ヒトＴＬＲ４／ＭＤ−２受容体複合体に結合するモノクローナル抗体を含む。この受容体複合体は、リポ多糖（ＬＰＳ）、グラム陰性菌の外膜の主要コンポーネントによって活性化される。本発明の抗ＴＬＲ４抗体は、ＬＰＳを介した受容体活性化および後続の細胞内シグナル伝達を阻害する。したがって抗ＴＬＲ４抗体は、ＴＬＲ４／ＭＤ−２受容体複合体の活性化を中和する。特に、本発明は、細胞表面上に発現されるＴＬＲ４／ＭＤ−２受容体複合体を認識する抗ＴＬＲ４抗体を提供する。これらの抗ＴＬＲ４抗体は、ＬＰＳで誘導される、および他のＴＬＲ４リガンドで誘導される炎症促進性サイトカイン（例えば、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＴＮＦα）産生を遮断する。さらに、本発明のいくつかの抗ＴＬＲ４抗体はまた、ＭＤ−２と複合体形成していないとき、ＴＬＲ４を認識する。改変抗体は、例えば、ヒト化抗体である。
【０１３５】
定義：
別段の定義のない限り、本発明に関連して使用される科学用語および技術用語は、当業者が一般に理解する意味を有するものとする。さらに、脈絡による別段の要求のない限り、単数形の用語は、複数存在することを含むものとし、複数形の用語は、単数形を含むものとする。一般に、本明細書に記載の細胞および組織培養、分子生物学、ならびにタンパク質およびオリゴまたはポリヌクレオチド化学、ならびにハイブリダイゼーションに関連して利用される命名法、ならびにこれらの技法は、当技術分野で周知であり、一般に使用されるものである。標準技法が、組換えＤＮＡ、オリゴヌクレオチド合成、ならびに組織培養および変換について使用される（例えば、電気穿孔、リポフェクション）。酵素反応および精製技法は、製造者の仕様に従って、または当技術分野で一般に達成されるように、もしくは本明細書に記載するように実施される。上記の技法および手順は一般に、当技術分野で周知の従来法に従って、かつ本明細書全体にわたって引用され、論じられている様々な一般的でより具体的な参考文献に記載されているように実施される。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（２版、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．（１９８９年））を参照。本明細書に記載の分析化学、合成有機化学、ならびに薬化学および製薬化学に関連して利用される命名法、ならびにこれらの実験室手順および技法は、当技術分野で周知であり、一般に使用されるものである。標準技法が、化学合成、化学分析、医薬調製、製剤、および送達、および患者の処置について使用される。
【０１３６】
抗ＴＬＲ４抗体の使用
本発明による治療エンティティの投与は、改善された移行、送達、寛容性などをもたらすために製剤中に組み込まれる適当な担体、賦形剤、および他の作用物質とともに施されることになることが察知されるであろう。多数の適切な製剤を、すべての薬剤師に公知の処方集：Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１５版、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ（１９７５年））、特にその中のＢｌａｕｇ、Ｓｅｙｍｏｕｒによる８７章に見つけることができる。これらの製剤としては、例えば、粉末、ペースト、軟膏、ゼリー、ワックス、油、脂質、脂質（カチオン性またはアニオン性）含有ベシクル（Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ（商標）など）、ＤＮＡコンジュゲート、無水吸収ペースト、水中油型および油中水型エマルジョン、エマルジョンカルボワックス（様々な分子量のポリエチレングリコール）、半固体ゲル、ならびにカルボワックスを含有する半固体混合物がある。上記混合物のいずれも、本発明による処置および療法において適切であり得、ただし、製剤中の活性成分は、製剤によって不活化されず、製剤は、生理学的に適合性であり、投与経路に対して耐容可能である。薬剤師に周知の製剤、賦形剤、および担体に関する追加の情報について、Ｂａｌｄｒｉｃｋ  Ｐ．、「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ｅｘｃｉｐｉｅｎｔ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ：  ｔｈｅ  ｎｅｅｄ  ｆｏｒ  ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ  ｇｕｉｄａｎｃｅ．」、Ｒｅｇｕｌ．  Ｔｏｘｉｃｏｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、３２巻（２号）：２１０〜８頁（２０００年）、Ｗａｎｇ  Ｗ．、「Ｌｙｏｐｈｉｌｉｚａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ｓｏｌｉｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ．」、Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｐｈａｒｍ．、２０３巻（１〜２号）：１〜６０頁（２０００年）、Ｃｈａｒｍａｎ  ＷＮ、「Ｌｉｐｉｄｓ，  ｌｉｐｏｐｈｉｌｉｃ  ｄｒｕｇｓ，  ａｎｄ  ｏｒａｌ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ−  ｓｏｍｅ  ｅｍｅｒｇｉｎｇ
ｃｏｎｃｅｐｔｓ．」、Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ．、８９巻（８号）：９６７〜７８頁（２０００年）、Ｐｏｗｅｌｌら、「Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ  ｏｆ  ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ  ｆｏｒ  ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ」、ＰＤＡ  Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ  Ｔｅｃｈｎｏｌ．、５２巻：２３８〜３１１頁（１９９８年）、およびその中の引用も参照。
【０１３７】
本発明の抗ＴＬＲ４抗体を含む本発明の治療用製剤は、免疫関連障害に関連した症状を処置または軽減するのに使用される。本発明は、免疫関連障害に関連した症状を処置または軽減する方法も提供する。治療レジメンは、標準方法を使用して、対象、例えば、免疫関連障害を罹患している（またはそれを発症するリスクのある）ヒト患者を同定することによって実施される。例えば、本発明の抗ＴＬＲ４抗体は、自己免疫疾患および／または炎症性障害の処置において有用な治療ツールである。ある特定の実施形態では、ＴＬＲシグナル伝達を調節する、例えば、阻害、中和、または妨害する抗ＴＬＲ４抗体の使用が、自己免疫疾患および／または炎症性障害を処置するのに企図されている。
【０１３８】
自己免疫疾患としては、例えば、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ、これは、自己免疫要素を有するウイルス性疾患である）、円形脱毛症、強直性脊椎炎、抗リン脂質抗体症候群、自己免疫性アジソン病、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性内耳疾患（ＡＩＥＤ）、自己免疫性リンパ増殖性症候群（ＡＬＰＳ）、自己免疫性血小板減少性紫斑病（ＡＴＰ）、ベーチェット病、心筋症、セリアックスプルー−疱疹状皮膚炎（ｃｅｌｉａｃ  ｓｐｒｕｅ−ｄｅｒｍａｔｉｔｉｓ  ｈｅｐｅｔｉｆｏｒｍｉｓ）；慢性疲労免疫不全症候群（ＣＦＩＤＳ）、慢性炎症性脱髄性多発性神経障害（ＣＩＰＤ）、瘢痕性類天疱瘡（ｃｉｃａｔｒｉｃｉａｌ  ｐｅｍｐｈｉｇｏｌｄ）、寒冷凝集素病、クレスト症候群、クローン病、ドゴー病、皮膚筋炎−若年性円板状ループス、本態性混合型クリオグロブリン血症、線維筋痛症−線維筋炎、グレーブス病、ギランバレー症候群、橋本甲状腺炎、特発性肺線維症、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、ＩｇＡ腎症、インスリン依存性真性糖尿病、若年性慢性関節炎（スティル病）、若年性関節リウマチ、メニエール病、混合性結合組織病、多発性硬化症、重症筋無力症、悪性貧血（ｐｅｒｎａｃｉｏｕｓ
ａｎｅｍｉａ）、結節性多発性動脈炎、多発性軟骨炎、多腺症候群、リウマチ性多発性筋痛、多発性筋炎および皮膚筋炎、原発性無ガンマグロブリン血症、原発性胆汁性肝硬変、乾癬、乾癬性関節炎、レイノー現象、ライター症候群、リウマチ熱、関節リウマチ、サルコイドーシス、強皮症（進行性全身性硬化症（ＰＳＳ）、全身性硬化症（ＳＳ）としても公知）、シェーグレン症候群、スティッフマン症候群、全身性エリテマトーデス、高安動脈炎、側頭動脈炎／巨細胞性動脈炎、潰瘍性大腸炎、ブドウ膜炎、白斑、ならびにウェジナー肉芽腫症がある。
【０１３９】
炎症性障害としては、例えば、慢性および急性炎症性障害がある。炎症性障害の例としては、アルツハイマー病、喘息、アトピー性アレルギー、アレルギー、アテローム性動脈硬化症、気管支喘息、湿疹、糸球体腎炎、移植片対宿主疾患、溶血性貧血、骨関節炎、敗血症、脳卒中、組織および臓器の移植、血管炎、糖尿病性網膜症、ならびに人工呼吸器誘導肺傷害がある。
【０１４０】
例えば、抗ＴＬＲ４抗体は、微生物産物（例えば、ＬＰＳ）によって誘導される急性炎症および敗血症、ならびにこの急性炎症から生じる増悪、例えば、慢性閉塞性肺疾患および喘息などの処置において有用である（その全体が参照により本明細書に組み込まれているＯ’Ｎｅｉｌｌ、Ｃｕｒｒ．  Ｏｐｉｎ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、３巻：３９６〜４０３頁（２００３年）を参照）。このような抗体は、神経変性自己免疫疾患を処置するのにも有用である（その全体が参照により本明細書に組み込まれているＬｅｈｎａｒｄｔら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ、１００巻：８５１４〜８５１９頁（２００３年））。
【０１４１】
さらに、本発明の抗体は、ひいてはＴＬＲ４の誘因となる内因性可溶性「ストレス」要因を誘導するストレス、例えば、細胞ストレスによって引き起こされる、例えば、骨関節炎などの疾患の処置における治療試薬としても有用である。内因性可溶性ストレス要因としては、例えば、Ｈｓｐ６０（Ｏｈａｓｈｉら、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１６４巻：５５８〜５６１頁（２０００年）を参照）、およびフィブロネクチン（Ｏｋａｍｕｒａら、Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．、２７６巻：１０２２９〜１０２３３頁（２００１年）を参照、およびヘパリン硫酸、ヒアルロナン、ｇｐ９６［３デフェンシン−２またはサーファクタントタンパク質Ａ（例えば、Ｊｏｈｎｓｏｎら、Ｃｒｉｔ．  Ｒｅｖ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２３巻（１〜２号）：１５〜４４頁（２００３年）を参照、これらのそれぞれは、その全体が参照により本明細書に組み込まれている）がある。本発明の抗体は、例えば、レスピレーター、人工呼吸器、および他の呼吸アシストデバイスに置かれた対象および患者に関連している細胞ストレスなどのストレスに関連した様々な障害の処置においても有用である。例えば、本発明の抗体は、呼吸関連肺傷害（「ＶＡＬＩ」）とも呼ばれる人工呼吸器誘導肺傷害（「ＶＩＬＩ」）の処置において有用である。
【０１４２】
ＴＬＲ４機能の阻害が有益となり得る他の疾患範囲としては、例えば、慢性炎症（例えば、アレルギー状態および喘息に関連した慢性炎症）、自己免疫疾患（例えば、炎症性腸障害）、ならびにアテローム性動脈硬化症がある（その全体が参照により本明細書に組み込まれている、Ｏ’Ｎｅｉｌｌ、Ｃｕｒｒ．  Ｏｐｉｎ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、３巻：３９６〜４０３頁（２００３年）を参照）。
【０１４３】
これらの免疫関連障害に関連した症状としては、例えば、炎症、発熱、全身倦怠感、発熱、しばしば炎症範囲に局在的な疼痛、急速な脈拍数、関節の疼痛または痛み（関節痛）、急速な呼吸または他の異常な呼吸パターン、悪寒、混乱、失見当識、激越、眩暈、咳、呼吸困難、肺感染、心不全、呼吸不全、浮腫、体重増加、粘液膿性再発、悪液質、喘鳴、頭痛、および腹部症状、例えば、腹痛、下痢症、または便秘などがある。
【０１４４】
処置の有効性は、特定の免疫関連障害を診断または処置するための任意の公知の方法と共同して判定される。免疫関連障害の１つまたは複数の症状の軽減は、抗体が臨床的利益を付与することを示す。
【０１４５】
ポリクローナル、モノクローナル、ヒト化、および完全ヒト抗体を含めた本発明の抗体は、治療剤として使用され得る。このような作用物質は一般に、対象における所与の標的の異常な発現または活性化と関連した疾患または病理を処置または防止するのに使用されることになる。抗体調製物、好ましくはその標的抗原に対して高特異性および高親和性を有するものは、対象に投与され、一般に、その標的との結合に起因して効果を有することになる。抗体を投与すると、標的のシグナル伝達機能が阻止または阻害または妨害され得る。抗体を投与すると、標的の、それが天然に結合する内因性リガンドとの結合が阻止または阻害または妨害され得る。例えば、抗体は、標的に結合し、ＴＬＲ４リガンド誘導炎症促進性サイトカイン産生を中和する。
【０１４６】
本発明の抗体の治療有効量は一般に、治療目的を実現するのに必要とされる量に関する。上述したように、これは、抗体と、ある特定の場合では標的の機能を妨害するその標的抗原との結合相互作用であり得る。投与されるのに要求される量はさらに、抗体のその特異的抗原に対する結合親和性に依存することになり、投与される抗体が、それが投与される他の対象の自由体積から枯渇される速度にも依存することになる。本発明の抗体または抗体断片の治療上有効な投薬の一般的な範囲は、非限定的な例として、約０．１ｍｇ／体重１ｋｇ〜約５０ｍｇ／体重１ｋｇであり得る。一般的な投薬頻度は、例えば、１日２回〜１週間に１回の範囲となり得る。
【０１４７】
本発明の抗体またはこれらの断片は、医薬組成物の形態で様々な疾患および障害を処置するために投与することができる。このような組成物の調製に関わる原理および考慮事項、ならびにコンポーネントの選択におけるガイダンスは、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  Ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、１９版（Ａｌｆｏｎｓｏ  Ｒ．  Ｇｅｎｎａｒｏら、編者）Ｍａｃｋ  Ｐｕｂ．  Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ、Ｐａ．：１９９５年；Ｄｒｕｇ  Ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ  Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ：  Ｃｏｎｃｅｐｔｓ，  Ｐｏｓｓｉｂｉｌｉｔｉｅｓ，  Ｌｉｍｉｔａｔｉｏｎｓ，  Ａｎｄ  Ｔｒｅｎｄｓ、Ｈａｒｗｏｏｄ  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、Ｌａｎｇｈｏｒｎｅ、Ｐａ．、１９９４年；およびＰｅｐｔｉｄｅ  Ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ（Ａｄｖａｎｃｅｓ  Ｉｎ  Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ
Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、４巻）、１９９１年、Ｍ．  Ｄｅｋｋｅｒ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋに提供されている。
【０１４８】
医薬組成物は、投与のための指示書と一緒に容器、パック、またはディスペンサーに含めることができる。
【０１４９】
製剤は、処置されている特定の適応症のために必要に応じて１種を超える活性化合物、例えば、抗ＴＬＲ４アンタゴニスト、好ましくは、互いに悪影響しない相補的な活性を有するものも含有することができる。代替としてまたは追加的に、組成物は、その機能を増強する作用物質、例えば、細胞傷害性剤、サイトカイン、化学療法剤、または増殖阻害剤などを含むことができる。このような分子は、意図される目的に有効である量で、組合せで適切に存在する。
【０１５０】
一実施形態では、活性化合物、例えば、抗ＴＬＲ４アンタゴニストは、組合せ療法で、すなわち、病理学的な状態または障害、例えば、様々な形態のがん、自己免疫障害、および炎症疾患などを処置するのに有用である１種または複数の追加の作用物質と組み合わせて投与される。この脈絡における用語「組合せで」は、作用物質が実質的に同時期に、同時的または逐次的に与えられることを意味する。逐次的に投与される場合、第２の化合物の投与の開始時に、２種の化合物の第１のものは、好ましくは、処置の部位で有効濃度にて依然として検出可能である。
【０１５１】
例えば、組合せ療法は、以下により詳細に記載するように、１種または複数の追加の治療剤、例えば、１種または複数のサイトカインおよび増殖因子阻害剤、免疫抑制剤、抗炎症剤、代謝阻害剤、酵素阻害剤、および／または細胞傷害性もしくは細胞増殖抑制剤と同時製剤化および／または同時投与される本発明の１種または複数の中和抗ＴＬＲ４抗体を含むことができる。このような組合せ療法は、有利なことには、より低い投与量の投与される治療剤を利用し、したがって、様々な単剤療法に関連した可能性がある毒性または合併症を回避する場合がある。
【０１５２】
本発明の中和抗ＴＬＲ４抗体と組み合わせて使用される好適な治療剤は、炎症応答における異なる段階で妨害する作用物質である。一実施形態では、本明細書に記載の１種または複数の中和抗ＴＬＲ４抗体は、１種または複数の追加の作用物質、例えば、他のサイトカインまたは増殖因子アンタゴニスト（例えば、可溶性受容体、ペプチド阻害剤、低分子、リガンド融合物）；あるいは他の標的に結合する抗体またはこれらの抗原結合性断片（例えば、他のサイトカインもしくは増殖因子、これらの受容体、または他の細胞表面分子に結合する抗体）；および抗炎症性サイトカインまたはこれらのアゴニストなどと同時製剤化および／または同時投与され得る。
【０１５３】
抗体断片が使用される場合、標的タンパク質の結合性ドメインに特異的に結合する最小の阻害断片、および／またはＴＬＲ４シグナル伝達を妨害し、もしくは別段にアンタゴナイズする最小の阻害断片が好適である。例えば、抗体の可変領域の配列に基づいて、標的タンパク質配列に結合する能力を保持するペプチド分子を設計することができる。このようなペプチドは、化学的に合成し、かつ／または組換えＤＮＡ技術によって生成することができる（例えば、Ｍａｒａｓｃｏら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．
ＵＳＡ、９０巻：７８８９〜７８９３頁（１９９３年）を参照）。製剤は、処置されている特定の適応症のために必要に応じて１種を超える活性化合物、好ましくは、互いに悪影響しない相補的な活性を有するものも含有することができる。代替としてまたは追加的に、組成物は、その機能を増強する作用物質、例えば、細胞傷害性剤、サイトカイン、化学療法剤、または増殖阻害剤などを含むことができる。このような分子は、意図される目的に有効である量で、組合せで適切に存在する。
【０１５４】
ＴＬＲ４リガンドおよび他のバイオマーカーのレベルは、様々な標準的な検出技法のいずれかを使用して検出している。試料中の所与の標的（またはそのタンパク質断片）の存在を検出するのに検出剤を使用することができる。一部の実施形態では、検出剤は、検出可能標識を含有する。一部の実施形態では、検出剤は、抗体（もしくはその断片）またはプローブである。一部の実施形態では、作用物質またはプローブは、標識されている。用語「標識された」は、プローブまたは抗体に関して、プローブまたは抗体への検出可能な物質のカップリング（すなわち、物理的連結）によるプローブまたは抗体の直接標識、および直接標識されている別の試薬との反応性によるプローブまたは抗体の間接標識を包含するように意図されている。間接標識の例としては、蛍光標識二次抗体を使用する一次抗体の検出、およびＤＮＡプローブが蛍光標識ストレプトアビジンで検出され得るようなビオチンを用いたＤＮＡプローブの末端標識がある。
【０１５５】
用語「生体試料」は、対象から単離された組織、細胞、および生体液、ならびに対象内に存在する組織、細胞、および流体を含むように意図されている。したがって、血液、および血清、血漿、またはリンパを含めた血液の画分またはコンポーネントが、用語「生体試料」の使用の範囲内に含まれる。体液は、それらに限らないが、例えば、血液、血漿、血清、滑液、尿、痰、脊髄液、脳脊髄液、胸膜液、気道、腸管、および尿生殖路の流体、唾液、臓器内系流体、腹水、腫瘍嚢胞液、羊水、ならびにこれらの組合せを含めた、対象の体のどこか、好ましくは末梢位置から単離された流体であり得る。生体試料には、前述の流体のすべての実験的に分離された画分も含まれる。生体試料には、均質化された固体材料、例えば、糞便、組織、および生検試料などを含有する溶液または混合物も含まれる。本発明の検出法は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏで生体試料中の被分析ｍＲＮＡ、タンパク質、またはゲノムＤＮＡを検出するのに使用することができる。例えば、被分析ｍＲＮＡを検出するためのｉｎ  ｖｉｔｒｏ技法としては、ノーザンハイブリダイゼーションおよびｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーションがある。被分析タンパク質を検出するためのｉｎ  ｖｉｔｒｏ技法としては、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ウエスタンブロット、免疫沈降、および免疫蛍光がある。被分析ゲノムＤＮＡを検出するためのｉｎ  ｖｉｔｒｏ技法としては、サザンハイブリダイゼーションがある。イムノアッセイを行うための手順は、例えば、「ＥＬＩＳＡ：  Ｔｈｅｏｒｙ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ：  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ」、４２巻、Ｊ．  Ｒ．  Ｃｒｏｗｔｈｅｒ（編）、Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ、Ｔｏｔｏｗａ、ＮＪ、１９９５年；「Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ」、Ｅ．  ＤｉａｍａｎｄｉｓおよびＴ．  Ｃｈｒｉｓｔｏｐｏｕｌｕｓ、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｉｎｃ．、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ、１９９６年；ならびに「Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ａｎｄ  Ｔｈｅｏｒｙ  ｏｆ
Ｅｎｚｙｍｅ  Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙｓ」、Ｐ．  Ｔｉｊｓｓｅｎ、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、Ａｍｓｔｅｒｄａｍ、１９８５年に記載されている。さらに、被分析タンパク質を検出するためのｉｎ  ｖｉｖｏ技法には、対象中に標識された抗被分析タンパク質抗体を導入することが含まれる。例えば、抗体を放射性マーカーで標識することができ、対象中のその存在および位置を標準的なイメージング技法によって検出することができる。
【０１５６】
医薬組成物
本発明の抗体または可溶性キメラポリペプチド（「活性化合物」とも本明細書で呼ばれる）、ならびにこれらの誘導体、断片、類似体、および同族体を、投与に適した医薬組成物中に組み込むことができる。このような組成物は典型的には、抗体または可溶性キメラポリペプチド、および薬学的に許容される担体を含む。本明細書において、用語「薬学的に許容される担体」は、薬剤投与に適合するありとあらゆる溶媒、分散媒、コーティング、抗菌および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤などを含むように意図されている。適当な担体は、参照により本明細書に組み込まれている、当分野で標準的な参考書であるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓの最新版に記載されている。このような担体または希釈剤の好適な例としては、それらに限らないが、水、生理食塩水、リンガー液、デキストロース溶液、および５％ヒト血清アルブミンがある。リポソーム、および固定油などの非水性ビヒクルも使用され得る。薬学的活性物質のためにこのような媒体および作用物質を使用することは、当技術分野で周知である。任意の慣例的な媒体または作用物質が活性化合物と不適合である場合を除いて、組成物中でのこれらの使用は、企図されている。補充的な活性化合物も組成物中に組み込むことができる。
【０１５７】
本発明の医薬組成物は、その意図された投与経路に適合するように製剤化される。投与経路の例としては、非経口、例えば、静脈内、皮内、皮下、経口（例えば、吸入）、経皮（すなわち、局所）、経粘膜、および直腸投与がある。非経口、皮内、または皮下用途に使用される溶液または懸濁液として、以下のコンポーネントを挙げることができる：滅菌希釈剤、例えば、注射用水、食塩液、固定油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール、または他の合成溶媒など；抗菌剤、例えば、ベンジルアルコールまたはメチルパラベンなど；抗酸化剤、例えば、アスコルビン酸または亜硫酸水素ナトリウムなど；エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）などのキレート化剤；緩衝液、例えば、酢酸塩、クエン酸塩、またはリン酸塩など、および張性を調整するための作用物質、例えば、塩化ナトリウムまたはデキストロースなど。ｐＨは、酸または塩基、例えば、塩酸または水酸化ナトリウムなどで調整することができる。非経口調製物は、ガラスまたはプラスチック製のアンプル、使い捨てシリンジ、または複数回用量バイアル中に密閉することができる。
【０１５８】
注射使用に適した医薬組成物は、滅菌水溶液（水溶性である場合）または分散液、および滅菌注射用溶液または分散液を即席で調製するための滅菌粉末を含む。静脈内投与について、適当な担体としては、生理食塩水、静菌水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ（商標）（ＢＡＳＦ、Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ、Ｎ．Ｊ．）、またはリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）がある。すべての場合において、組成物は、滅菌状態でなければならず、容易なシリンジ通過性（ｓｙｒｉｎｇｅａｂｉｌｉｔｙ）が存在する程度に流動的であるべきである。これは、製造および貯蔵の条件下で安定でなければならず、細菌および真菌などの微生物の汚染作用に対して保全されていなければならない。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコールなど）、ならびに適当なこれらの混合物を含有する溶媒または分散媒であり得る。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングを使用することによって、分散液の場合において要求される粒径を維持することによって、かつ界面活性剤を使用することによって維持することができる。微生物の作用の防止は、様々な抗菌および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサールなどによって実現することができる。多くの場合では、組成物中に等張剤、例えば、糖、マンニトール（ｍａｎｉｔｏｌ）、ソルビトールなどの多価アルコール、塩化ナトリウムを含むことが好ましいことになる。注射用組成物の持続的吸収は、組成物中に吸収を遅延させる作用物質、例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンを含めることによってもたらすことができる。
【０１５９】
滅菌注射用溶液は、必要に応じて上記に列挙した成分のうちの１種または組合せとともに、適切な溶媒中に必要量で活性化合物を組み込み、その後濾過滅菌することによって調製することができる。一般に、分散液は、基本分散媒および上記に列挙したものからの要求される他の成分を含有する滅菌ビヒクル中に活性化合物を組み込むことによって調製される。滅菌注射用溶液を調製するための滅菌粉末の場合では、調製の方法は、真空乾燥および凍結乾燥であり、それにより活性成分と任意の追加の所望の成分の粉末が、これらの以前に滅菌濾過した溶液から生じる。
【０１６０】
経口組成物は一般に、不活性な希釈剤または食用担体を含む。これらは、ゼラチンカプセル中に密閉し、または圧縮して錠剤にすることができる。経口治療投与の目的のために、活性化合物を賦形剤とともに組み込み、錠剤、トローチ、またはカプセルの形態で使用することができる。経口組成物は、洗口液として使用するための流体担体を使用して調製することもでき、この場合、流体担体中の化合物は、経口的に施用され、グチュグチュされ、喀痰され、または飲み込まれる。薬学的に適合性の結合剤、および／またはアジュバント材料を、組成物の一部として含めることができる。錠剤、ピル、カプセル、トローチなどは、以下の成分、または同様の特質の化合物のいずれかを含有することができる：結合剤、例えば、微結晶性セルロース、トラガカントガム、もしくはゼラチンなど；賦形剤、例えば、デンプンもしくはラクトースなど、崩壊剤、例えば、アルギン酸、プリモゲル、もしくはコーンスターチなど；潤滑剤、例えば、ステアリン酸マグネシウムもしくはステロテスなど；コロイド二酸化ケイ素などの流動促進剤；甘味剤、例えば、スクロースもしくはサッカリンなど；または香味剤、例えば、ペパーミント、サリチル酸メチル、もしくはオレンジ香味料など。
【０１６１】
吸入による投与について、化合物は、適当な噴霧剤、例えば、二酸化炭素などのガスを含有する加圧容器もしくはディスペンサー、または噴霧器からのエアロゾルスプレーの形態で送達される。
【０１６２】
全身投与はまた、経粘膜または経皮手段によるものであり得る。経粘膜または経皮投与について、透過させられる障壁に適切な浸透剤が製剤中に使用される。このような浸透剤は、当技術分野で一般に公知であり、これらとしては、例えば、経粘膜投与について、界面活性剤、胆汁塩、およびフシジン酸誘導体がある。経粘膜投与は、鼻腔用スプレー剤または坐剤を使用することによって達成することができる。経皮投与について、活性化合物は、当技術分野で一般に公知である軟膏剤、膏薬、ゲル剤、またはクリーム剤に製剤化される。
【０１６３】
化合物は、坐剤（例えば、慣例的な坐剤ベース、例えば、カカオバターおよび他のグリセリドなどを用いて）、または直腸送達用停留浣腸の形態でも調製することができる。
【０１６４】
一実施形態では、活性化合物は、インプラントおよびマイクロカプセル化送達系を含めた制御放出製剤など、体からの急速な排除から化合物を保護する担体とともに調製される。生分解性、生体適合性ポリマー、例えば、エチレンビニルアセテート、ポリアンヒドリド、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、およびポリ乳酸などを使用することができる。このような製剤を調製するための方法は、当業者に明らかとなる。材料は、Ａｌｚａ  ＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎおよびＮｏｖａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃから商業的に得ることもできる。リポソーム懸濁液（ウイルス抗原に対するモノクローナル抗体を含む感染細胞を標的にしたリポソームを含めて）も、薬学的に許容される担体として使用することができる。これらは、当業者に公知の方法に従って、例えば、米国特許第４，５２２，８１１号に記載されているように調製することができる。
【０１６５】
投与の容易さおよび投与量の均一性のために投与量単位形態で経口または非経口組成物を製剤化することが特に有利である。投与量単位形態は、本明細書において、処置される対象にとって単位投与量として適した物理的に別々の単位を指し、各単位は、要求される薬学的担体と共同して所望の治療効果を生じさせるように計算された所定量の活性化合物を含有する。本発明の投与量単位形態の仕様は、活性化合物のユニークな特性、および実現される特定の治療効果、および個体を処置するためにこのような活性化合物を調合する技術分野において固有の制限事項によって指示され、これらに直接依存する。
【０１６６】
医薬組成物は、投与のための指示書と一緒に、容器、パック、またはディスペンサー内に含めることができる。
【０１６７】
本発明を、以下の実施例においてさらに記載する。これらは、特許請求の範囲に記載の本発明の範囲を限定しない。
【実施例】
【０１６８】
（実施例１）
材料および方法
シトルリン化フィブリノーゲンを含有する免疫複合体（ｃＦｂ−ＩＣ）によって刺激されるＴＬＲ４活性化の遮断：２つの方法を、免疫複合体を調製するのに使用した。第１の方法では、ウサギポリクローナル抗体を使用して免疫複合体を調製した。簡単に言えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでシトルリン化抗原（フィブリノーゲン）を蒔き、一晩インキュベートし、次いで洗浄およびブロックした後、５０μｇ／ｍｌのポリクローナルウサギ抗フィブリノーゲン抗体（Ｄａｋｏ）とともに、３７℃で２時間インキュベートし、その後洗浄した。次いで、抗ＴＬＲ４アンタゴニスト、例えば、ＮＩ−０１０１抗体、または抗ＦｃγＲＩＩ抗体、または妥当なアイソタイプ対照抗体で事前処置した５０，０００のヒト単球由来マクロファージをプレートに添加した。最後に、１６時間インキュベートした後、上清を回収し、炎症促進性サイトカイン、例えば、ＴＮＦαを、ＥＬＩＳＡによって測定した。
【０１６９】
第２の方法では、関節リウマチ（ＲＡ）患者から単離したＩｇＧを使用して免疫複合体を調製した。簡単に言えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでシトルリン化抗原（フィブリノーゲン）を蒔き、一晩インキュベートし、次いで洗浄およびブロックした後、ヒトＲＡ−ＩｇＧ（１ｍｇ／ｍｌ）とともに、３７℃で２時間インキュベートし、その後洗浄した。次いで、抗ＴＬＲ４アンタゴニスト、例えば、ＮＩ−０１０１抗体、抗ＦｃγＲＩＩ抗体、または妥当なアイソタイプ対照抗体で事前処置した５０，０００のヒト単球由来マクロファージをプレートに添加した。最後に、１６時間インキュベートした後、上清を回収し、炎症促進性サイトカイン、例えば、ＴＮＦαを、ＥＬＩＳＡによって測定した。
【０１７０】
シトルリン化フィブリノーゲンを含有する免疫複合体（ＩＣ−ｃＦｂ）のレベルの測定：標準ＥＬＩＳＡ技法を使用して、関節リウマチ（ＲＡ）を有する患者に由来する滑液試料中のシトルリン化フィブリノーゲンを含有する免疫複合体（ＩＣ−ｃＦｂ）のレベルを判定した。簡単に言えば、マウス抗ヒトシトルリン化フィブリノーゲン（ｃＦｂ）抗体、３Ｄ１、（抗ｃＦｂ、クローン３Ｄｌ、Ａｃｒｉｓ製＃ＡＭ３２００４ＰＵ−Ｎ）を蒔き、一晩インキュベートし、洗浄およびブロックした後、三つ組のウェル中でＲＡ患者に由来する滑液試料とともにインキュベートした。抗ヒト−ＩｇＧ−Ｆｃ−ＨＲＰ（ＳＩＧＭＡ、＃Ａ０１７０）を使用して免疫複合体を検出した。
【０１７１】
ＲＡ患者に由来する滑液を用いたＲＡ患者に由来する滑膜線維芽細胞の刺激：ＲＡ線維芽細胞を蒔き、２日間インキュベートした後、上清を取り出し、新鮮な培地を添加した。ＮＩ−０１０１またはアイソタイプ対照（培地中６０μｇ／ｍＬ、４０μＬ／ウェル）を処置ウェルについて添加し、等体積の培地を未処置の対照ウェルに添加した。３０分間インキュベートした後、ＲＡ患者に由来する滑液を各ウェルに添加し、最終的なアッセイミックス中２．５％の濃度にした（７．５％滑液の４０μＬ／ウェル）。陽性対照として、ＬＰＳを添加して１０ｎｇ／ｍＬにした（３０ｎｇ／ｍＬのＬＰＳの４０μＬ／ウェル）。２４時間インキュベートした後、上清を収集し、炎症促進性サイトカイン、例えば、インターロイキン−６（ＩＬ−６）をＥＬＩＳＡによって検出した。
【０１７２】
ＲＡ患者に由来する滑液を用いたＲＡ患者の末梢血に由来する単球の刺激：ＣＤ１４＋単球を、ＭＡＣＳビーズを使用してＲＡ患者の末梢血から精製し、新鮮培地を用いて１．２５×１０６細胞／ｍＬに調整した。次いで単球を蒔き、処置ウェルに、ＮＩ−０１０１またはアイソタイプ対照（培地中６０μｇ／ｍＬ、４０μＬ／ウェル）を処置ウェルについて添加し、等体積の培地を未処置の対照ウェルに添加した。３０分間インキュベートした後、ＲＡ患者に由来する希釈滑液を添加し、最終的なアッセイミックス中２０％、１０％、５％、または２．５％の濃度にした。陽性対照として、ＬＰＳを添加して、三つ組ウェル中で１０ｎｇ／ｍＬにした（３０ｎｇ／ｍＬのＬＰＳの４０μＬ／ウェル）。２４時間インキュベートした後、上清を収集し、炎症促進性サイトカイン、例えば、インターロイキン−６（ＩＬ−６）、ＴＮＦα、ＩＬ−１β、ＧＭ−ＣＳＦ、および／またはＩＬ−８を、Ｌｕｍｉｎｅｘアッセイによって検出した。
（実施例２）
患者試料中のＴＬＲ４リガンドのレベルが上昇すると、細胞が刺激されて炎症促進性サイトカインが産生される
【０１７３】
健康な対象の滑液（Ｎ滑液）または関節リウマチを有する患者の滑液（ＲＡ滑液）中に含まれる抗シトルリン化タンパク質抗体（ＡＣＰＡ）、ならびに異なるＴＬＲ４リガンド（ｃＦｂ−ＩＣ、ＨＭＧＢ１、Ｓ１００Ａ８／Ａ９、およびテネイシンＣ）のレベルを検出した（図２Ａ〜２Ｅ）。ＡＣＰＡおよびＴＬＲ４リガンドのレベルの上昇を、ＲＡを有する患者に由来する試料中で検出した。
（実施例３）
抗ＴＬＲ４アンタゴニストを使用すると、炎症促進性サイトカインの産生が阻害される
【０１７４】
ＲＡを有する患者から単離された滑膜線維芽細胞に対する異なる関節リウマチ滑液（ＲＡＳＦ）の活性化プロファイル、およびこれらの試料中のＴＬＲ４に対する刺激の依存性を測定および分析した。図３Ａに示したように、患者＃１に由来するＲＡＳＦ（ＲＡＳＦ１）は、ＲＡ滑膜線維芽細胞を刺激して炎症促進性サイトカイン、ＩＬ−６を産生することが判明した。この刺激は、抗ヒトＴＬＲ４  ｍＡｂ（例えば、ＮＩ−０１０１）の存在によって有意に遮断された。対照的に、図３Ｂは、患者＃２に由来するＲＡＳＦ試料（ＲＡＳＦ２）は、ＲＡ滑膜線維芽細胞からのＩＬ−６産生を刺激することができず、抗ＴＬＲ４  ｍＡｂは、この状況において効果を有さなかったことを実証する。したがって、炎症促進性サイトカインの産生を刺激する患者試料の能力を、特定の患者が中和抗ＴＬＲ４抗体、例えば、ＮＩ−０１０１などの抗ＴＬＲ４アンタゴニストを用いた処置に適している可能性が高いという指標として使用することができる。
【０１７５】
同様の研究を実行して、ＲＡを有する患者から単離されたヒト単球に対する異なる関節リウマチ滑液（ＲＡＳＦ）の活性化プロファイル、およびＴＬＲ４に対する刺激の依存性を検出および分析した（図４）。図４Ａ、４Ｂ、および４Ｃは、ＲＡ患者から単離されたヒト単球からの炎症促進性サイトカイン、それぞれ、ＩＬ−６、ＩＬ８、およびＴＮＦαの産生を刺激する患者＃３に由来するＲＡＳＦ試料（ＲＡＳＦ３）の能力を表す。この刺激は、抗ヒトＴＬＲ４  ｍＡｂ（例えば、ＮＩ−０１０１）の存在によって有意に遮断された。対照的に、図４Ｄ、４Ｅ、および４Ｆは、ＲＡ患者から単離されたヒト単球からのＩＬ−６、ＩＬ８、およびＴＮＦαの産生を刺激することができなかった患者＃４に由来するＲＡＳＦ試料（ＲＡＳＦ４）を表し、抗ＴＬＲ４  ｍＡｂは、この状況において効果を有さなかった。やはり、これらの研究は、炎症促進性サイトカインの産生を刺激する患者試料の能力を、特定の患者が中和抗ＴＬＲ４抗体、例えば、ＮＩ−０１０１などの抗ＴＬＲ４アンタゴニストを用いた処置に適している可能性が高いという指標として使用することができることを実証する。
（実施例４）
ＴＬＲ４リガンドおよび他のマーカーの発現レベルと、抗ＴＬＲ４アンタゴニストによって阻害される細胞刺激の能力との相関
【０１７６】
図５は、関節リウマチ滑液（ＲＡＳＦ）中の抗シトルリン化タンパク質抗体（ＡＣＰＡ）またはＴＬＲ４リガンドの発現レベルと、抗ヒトＴＬＲ４  ｍＡｂによって阻害される細胞刺激の能力との相関を表す一連のグラフである。ＴＬＲ４リガンドは、シトルリン化フィブリノーゲンを含有する免疫複合体（ｃＦｂ−ＩＣ）、高移動度グループタンパク質Ｂ１（ＨＭＧＢ１）、Ｓ１００Ａ８／Ａ９、およびテネイシンＣを含む。細胞型は、ＲＡ患者の滑膜線維芽細胞（Ａ）およびＲＡ患者の単球（Ｂ）を含む。
【０１７７】
表１は、１４の患者の関節リウマチ滑液（ＲＡＳＦ）中の抗シトルリン化タンパク質抗体（ＡＣＰＡ）、シトルリン化フィブリノーゲンを含有する免疫複合体（ｃＦｂ−ＩＣ）、高移動度グループタンパク質Ｂ１（ＨＭＧＢ１）、Ｓ１００Ａ８／Ａ９、およびテネイシンＣのレベル、ならびにサイトカイン産生を誘導するＲＡＳＦの能力を、ＲＡ血中単球およびＲＡ滑膜線維芽細胞を用いた抗ヒトＴＬＲ４  ｍＡｂ、例えば、ＮＩ−０１０１）処置によって遮断される能力とともに要約し、それと相関させるものである。
【表１】
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【０１７８】
表１で使用した陰影は、以下の自由裁量による閾値を使用してＡＣＰＡおよびＴＬＲ４リガンドについて陽性のＲＡＳＦ試料を表す：ＡＣＰＡ（＞２０００Ｕｌ／ｍｌ）、ｃＦｂ−Ｉｃ（＞１．５  ＯＤ）、ＨＭＧＢ１（＞１００ｎｇ／ｍｌ）、Ｓ１００（＞５００ｎｍｇ／ｍｌ）、およびテネイシンＣ（＞１００ｎｇ／ｍｌ）
（実施例５）
ＴＬＲ４リガンドおよび他のバイオマーカーの統計分析
【０１７９】
再帰分割および回帰ツリー（ｒｐａｒｔ）アルゴリズムを使用して最適な閾値を見出すことによってこれらのスコアによりデータを分類した。各ツリーのパフォーマンスをその混同行列の検査によって評価した。複数の解が利用可能であったとき、最低の複雑性を有するツリー、すなわち、最小数のノードおよびスプリットを有するものを選択した。３つの繰り返しの平均をバイオマーカー値として使用した。
【０１８０】
抗ＴＬＲ４抗体ＮＩ−０１０１を用いた処置に対する単球または線維芽細胞の応答スコアの最良の個々の分類子を分析した。単球について、ＡＣＰＡ、ｃＦｂ−ＩＣ、ＨＭＧＢ１、およびＳ１００Ａ８／Ａ９を含めたいくつかのマーカーが単球応答スコアの良好な予測因子であることが判明し、Ｓ１００Ａ８／Ａ９が最良の個々の分類子であった。滑液中に検出されるＳ１００Ａ８／Ａ９のレベルを３８７ｎｇ／ｍｌに設定した場合、このマーカーは、８０％の精度でＮＩ−０１０１処置に対する非レスポンダーの１００％、および８９％の精度でレスポンダーの１００％を予測した。試験した試料では、同定された対象の３６％（５のうち４）は、３８７超またはそれに等しい単球中で検出されるＳ１００Ａ８／Ａ９のレベルを有しておらず、対象の６４％（８／９）が、３８７超またはそれに等しい滑液中で検出されるＳ１００Ａ８／Ａ９のレベルを確かに有していた。
【０１８１】
線維芽細胞について、ｃＦｂ−ＩＣが線維芽細胞応答の最良の個々の予測因子であることが判明した。滑液中で検出されるｃＦｂ−ＩＣのレベル（ＯＤ  ４５０ｎｍの読み）を１．２に設定した場合、このマーカーは、９０％の精度でＮＩ−１０１処置に対する非レスポンダーの１００％、および１００％の精度でレスポンダーの８０％を予測する。試験した試料では、同定された対象の７３％（１１のうち１０）は、１．２超またはそれに等しい線維芽細胞中で検出されるｃＦｂ−ＩＣのレベルを有しておらず、対象の２７％（４／４）が、１．２超またはそれに等しい滑液中で検出されるｃＦｂ−ＩＣのレベルを確かに有していた。
【０１８２】
ＮＩ−０１０１を用いた処置に応答した組み合わせた単球および線維芽細胞応答スコア（ｃＭＦＲＳ）によるマーカーレベルを、図７に示したように評価した。
【０１８３】
さらなる評価により、マーカーＡＣＰＡおよびｃＦｂ−ＩＣは、ＲＡＳＦ試料中で相関の傾向を示し、同様に、マーカーＳ１００Ａ８／Ａ９およびＨＭＧＢ１は、ＲＡＳＦ試料中で相関の傾向を実証することを同定した（図８）。これらの２つのタンデムは、互いに独立していることが判明した。
【０１８４】
マーカーＡＣＰＡ、ｃＦｂ−ＩＣ、ＨＭＧＢ１、およびＳ１００Ａ８／Ａ９は、抗ヒトＴＬＲ  ｍＡｂ、ＮＩ−０１０１を用いた処置に対する組み合わせた単球および線維芽細胞応答スコア（ｃＭＦＲＳ）について、それぞれ個々に良好な予測因子であることも判明した。ＡＣＰＡ、ｃＦｂ−ＩＣ、およびＨＭＧＢ１のそれぞれは、同一の予測力を呈することが判明し、この場合各マーカーは、１００％の精度でＮＩ−０１０１処置に対する非レスポンダーの７５％、および９１％の精度でレスポンダーの１００％を予測することが判明した。特に、試験した試料では、同定された対象の２１％（３のうち３）は、３３０Ｕｌ／ｍｌ超またはそれに等しい滑液中で検出されるＡＣＰＡのレベルを有しておらず、対象の７９％（１０１１１）が、３３０Ｕｌ／ｍｌ超またはそれに等しい滑液中で検出されるＡＣＰＡのレベルを確かに有していた。試験した試料では、同定された対象の２１％（３のうち３）は、０．５５超またはそれに等しい滑液中で検出されるｃＦｂ−ＩＣのレベルを有しておらず、対象の７９％（１０１１１）が、０．５５（ＯＤ  ４５０ｎｍの読み）超またはそれに等しい滑液中で検出されるｃＦｂ−ＩＣのレベルを確かに有していた。試験した試料では、同定された対象の２１％（３のうち３）は、４５ｎｇ／ｍｌ超またはそれに等しい滑液中で検出されるＨＭＧＢ１のレベルを有しておらず、対象の７９％（１０／１１）が、４５超またはそれに等しい滑液中で検出されるＨＭＧＢ１のレベルを確かに有していた。
【０１８５】
Ｓ１００Ａ８／Ａ９およびｃＦｂ−ＩＣの組合せが、抗ヒトＴＬＲ  ｍＡｂ、ＮＩ−０１０１を用いた処置に対する組み合わせた単球および線維芽細胞応答スコア（ｃＭＦＲＳ）を予測するための最良の分類子をもたらした。滑液中で検出されるＳ１００Ａ８／Ａ９のレベルは、３８７ｎｇ／ｍｌ超またはそれに等しいことが判明し、滑液中で検出されるｃＦｂ−ＩＣのレベルは、１．２（ＯＤ  ４５０ｎｍの読み）超またはそれに等しいことが判明した場合、マーカーのこの組合せは、８０％の精度でＮＩ−０１０１処置に対する非レスポンダーの１００％、および１００％の精度でレスポンダーの９０％を予測することが判明した（図９）。それぞれ個々のマーカー、Ｓ１００Ａ８／Ａ９およびｃＦｂ−ＩＣは、ｃＭＦＲＳの良好な予測因子であるが、２つの組合せは、最良の予測因子である。
【０１８６】
マーカーの他の組合せは単球および線維芽細胞応答の適当な予測因子である。例えば、単球および線維芽細胞応答の予測因子は、（ｉ）Ｓ１００Ａ８／Ａ９およびＨＭＧＢ１；（ｉｉ）Ｓ１００Ａ８／Ａ９およびｃＦｂ−ＩＣ；（ｉｉｉ）Ｓ１００Ａ８／Ａ９およびＡＣＰＡ；（ｉｖ）ＡＣＰＡおよびｃＦｂ−ＩＣ；（ｖ）ＡＣＰＡおよびＨＭＧＢ１；（ｖｉ）ＨＭＧＢ１およびｃＦｂ−ＩＣ；（ｖｉｉ）Ｓ１００Ａ８／Ａ９、ＡＣＰＡ、およびＨＭＧＢ１；（ｖｉｉｉ）Ｓ１００Ａ８／Ａ９、ＡＣＰＡ、およびｃＦｂ−ＩＣ；（ｉｘ）Ｓ１００Ａ８／Ａ９、ｃＦｂ−ＩＣ、およびＨＭＧＢ１；（ｘ）ＡＣＰＡ、ＨＭＧＢ１、およびｃＦｂ−ＩＣ；ならびに（ｘｉ）Ｓ１００Ａ８／Ａ９、ｃＦｂ−ＩＣ、ＡＣＰＡ、およびＨＭＧＢ１からなる群から選択される組合せである。
他の実施形態
【０１８７】
本発明をその詳細な説明と併せて記載してきたが、上記の記載は、添付の特許請求の範囲の範囲によって定義される本発明の範囲を例示するように意図され、それを限定するように意図されていない。他の態様、利点、および改良は、以下の特許請求の範囲の範囲内である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４ＡＢＣＤ】
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【図４ＥＦ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【配列表】
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【外国語明細書】
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