(57)【要約】【課題】  抗原に対する免疫応答を調節（誘導、促進または抑制を含む）するための新規なシステムを提供すること。【解決手段】  本発明は、とりわけ、ナノ粒子組成物、提供されるナノ粒子組成物の投与方法、および提供されるナノ粒子組成物の形成方法を提供する。提供されるナノ粒子組成物には、複数のナノ粒子がふくまれ、それらの各々が、内腔および外表面を画定するナノ粒子構造に配置された生分解性または生体適合性ポリマー、ならびに内腔内に封入された親水性細胞成分の調製物および疎水性細胞成分の調製物の１つまたはそれ以上から構成される。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
それぞれがナノ粒子構造を取っている生分解性または生体適合性ポリマーからなり、その外表面が粗製の疎水性細菌抽出物を含む調製物でコーティングされている、複数のナノ粒子；および
対象に投与された際に可溶性抗原抽出物が免疫系成分から隠されるように該ナノ粒子構造に封入された可溶性抗原抽出物
を含む、ナノ粒子組成物。
【請求項２】
複数のナノ粒子がそれぞれ、１つまたはそれ以上の親水性細胞成分を含む調製物をさらに含む、請求項１に記載のナノ粒子組成物。
【請求項３】
調製物が粗製の親水性細胞抽出物を含む、請求項２に記載のナノ粒子組成物。
【請求項４】
粗製の親水性細胞抽出物が水性細胞抽出物を含むか、またはそれからなる、請求項３に記載のナノ粒子組成物。
【請求項５】
細胞抽出物が微生物抽出物である、請求項４に記載のナノ粒子組成物。
【請求項６】
複数のナノ粒子がそれぞれ第二の抗原をさらに含み、ナノ粒子組成物が対象に投与された際に該第二の抗原が免疫系成分から隠されるように、該第二の抗原が任意にナノ粒子構造に封入されている、請求項１から５のいずれか一項に記載のナノ粒子組成物。
【請求項７】
抗原が、アレルギー性抗原、アナフィラキシー抗原、感染性抗原、自己抗原、疾患関連抗原、食物抗原、微生物抗原、ウイルス抗原、腫瘍抗原および環境抗原からなる群より選択される、請求項１から６のいずれか一項に記載のナノ粒子組成物。
【請求項８】
生分解性または生体適合性ポリマーが、ポリ（乳酸−コ−グリコール酸）である、請求項１から７のいずれか一項に記載のナノ粒子組成物。
【請求項９】
粗製の疎水性細菌抽出物を含む調製物が、免疫原性成分としての細胞成分を天然の微生物細胞中に見出される量と比してその絶対量または相対量含む、請求項１から８のいずれか一項に記載のナノ粒子組成物。
【請求項１０】
抗原が、生物学的起源の粗製の可溶性抽出物として提供される、請求項１から９のいずれか一項に記載のナノ粒子組成物。
【請求項１１】
組成物が医薬組成物である、請求項１から１０のいずれか一項に記載のナノ粒子組成物。
【請求項１２】
アレルギー、感染症および癌の少なくとも１つに罹患している対象の処置のための、請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
静脈内、皮内、経皮、経口、皮下、および／または経粘膜投与される、請求項１１または１２に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
抗原を含む親水性調製物を提供し；
生分解性または生体適合性ポリマーを提供し；
親水性調製物と生分解性または生体適合性ポリマーを合わせて、該ポリマーおよび該調製物を含むナノ粒子を形成させ；そして
粗製の疎水性細菌抽出物で該ナノ粒子をコーティングすること
を含む、ナノ粒子組成物の製造方法。
【請求項１５】
ナノ粒子組成物が抗原をさらに含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
抗原が、アレルギー性抗原、アナフィラキシー抗原、感染性抗原、自己抗原、疾患関連抗原、食物抗原、微生物抗原、ウイルス抗原、腫瘍抗原および環境抗原からなる群より選択される、請求項１４または１５に記載の方法。
【請求項１７】
該複数のナノ粒子がそれぞれ、任意にナノ粒子構造によって封入された第二の抗原をさらに含み、それにより、ナノ粒子組成物が対象に投与されたとき、該抗原が免疫系成分から隠される、請求項１４から１６のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
背景
多くの医学的利益は、免疫系が望ましい方法で抗原に応答するように誘導すること、例えば抗原に対する（例えば、アレルギー性抗原もしくは自己抗原に対する）耐性を獲得させるか、または抗原（例えば、疾患関連抗原）を拒絶するように学習させることができれば、実現され得る。身体は、多種多様な抗原、外来性抗原（例えば、アレルゲン、感染性抗原など）であると、内在性抗原（例えば、自己抗原、ある種の疾患関連抗原など）であるとに関わりなく応答することができる。全身的薬物療法、抗原の注射、抗体療法などを含む多様なアプローチが、この課題を満たすために適用されてきた。しかしながら、さらに改善されたアプローチが必要とされ続けている。
【発明の概要】
【０００２】
概要
本発明は、抗原に対する免疫応答を調節（誘導、促進または抑制を含む）するための新規なシステムを提供する。特に、いくつかの態様において、本発明は、微生物成分および／または抗原物質（そのいずれかまたは両方が、比較的粗製形態（例えば、比較的粗製抽出物として）利用可能である）と共に、特定のナノ粒子システムの特徴を組み合わせた技術を提供する。あるいは、または加えて、１種またはそれ以上の微生物成分および／または抗原物質は、組み換え体であり得る。
【０００３】
とりわけ、本発明は、微生物システムの親水性および疎水性成分が、異なる役割を果たし、かつ／または免疫応答に対して異なる効果を有するという考察を提供する。本発明のいくつかの態様において、そのような構成要素は、互いに分離され、免疫応答を調節する組成物においてナノ粒子成分と共に利用される。
【０００４】
本発明はまた、必要に応じて主に疎水性または主に親水性細胞成分を含む比較的粗製の微生物細胞調製物が、免疫応答を調節するためのナノ粒子成分との組み合わせに有用であるという考察を提供する。本発明は、特に、特定のナノ粒子技術をかかる比較的粗製の微生物細胞調製物と組み合わせることが、驚くほど有用な免疫調節性ナノ粒子組成物の開発を可能にするという認識を含む。いくつかの態様において、かかる組成物は、進化の過程で発達した微生物細胞材料の属性を利用できる。本発明は、そのような進化が、個々の単離された成分の組み合わせを試みることによって規定するか、または再構成することが困難である特定の所望の属性を微生物細胞に付与する個々の成分の組み合わせを形成してきたという認識を包含する。さらに、本発明は、本質的に、本発明の組成物に予想外の望ましい特性を提供しながら、比較的粗製の調製物の使用を簡素化し、製造技術に関連する費用を低減させることが理解される。
【０００５】
いくつかの態様において、本発明は、組み換え微生物成分（例えば、ＣｐＧ）および／または組み換え抗原物質の使用を包含する。いくつかの態様において、組み換え核酸および／またはタンパク質の使用は、毒性または他の有害事象の危険が低いことが望まれ得る。いくつかの態様において、組み換え核酸および／またはタンパク質の使用は、組み換え生産が、大量の特定の核酸および／またはタンパク質を製造および使用するのを容易にし得る点で、有益であり得る。
【０００６】
あるいは、または加えて、いくつかの態様において、本発明は、ポリマーナノ粒子および比較的粗い抗原調製物を含むナノ粒子組成物を提供する。
【０００７】
さらに、いくつかの態様において、本発明は、粘膜送達のために剤形化されたナノ粒子組成物を提供する。
【０００８】
いくつかの態様において、提供される組成物は、例えば、ナノ粒子からの封入された材料の制御された放出および／または調節可能な放出、要すれば、それらが放出されるまで関連する免疫系成分から隠されるような、ナノ粒子内への抗原の封入などのような、さらなる有益な属性を示す。さらに、本発明は、種々の構成要素の容易な組み合わせを提供し、それ故に、例えば、ナノ粒子の標的化局在および／または複数の抗原に対する応答（例えば、アレルゲンに対するアレルギー性応答、疾患関連および／または感染性抗原に対する治療応答、ならびに／または自己アレルゲンに対する不適切な応答）の同時調節を促進する。
【０００９】
本発明は、とりわけ、ナノ粒子組成物、提供されるナノ粒子組成物の投与方法、および提供されるナノ粒子組成物の形成方法を提供する。いくつかの態様において、提供されるナノ粒子組成物には、複数のナノ粒子がふくまれ、それらの各々が、内腔および外表面を画定するナノ粒子構造に配置された生分解性または生体適合性ポリマー、ならびに内腔内に封入された親水性細胞成分の調製物から構成される。いくつかの態様において、提供されるナノ粒子組成物は、複数のナノ粒子を含み、それらの各々が、内腔および外表面を画定するナノ粒子構造に配置された生分解性または生体適合性ポリマー、ならびに外表面と結合された疎水性細胞成分の調製物から構成される。いくつかの態様において、提供されるナノ粒子組成物は、複数のナノ粒子を含み、それらの各々が、内腔および外表面を画定するナノ粒子構造に配置された生分解性または生体適合性ポリマー、ならびに内腔内に封入された親水性細胞成分の調製物および外表面に結合された疎水性細胞成分の調製物から構成される。いくつかの態様において、生分解性または生体適合性ポリマーは、ポリ（乳−コ−グリコール酸）である。
【００１０】
いくつかの態様において、親水性細胞成分の調製物は、細胞調製物の親水性抽出物であるか、またはそれを含む。いくつかの態様において、親水性抽出物は、細胞調製物の水性抽出物を含むか、またはそれから構成される。いくつかの態様において、疎水性細胞成分の調製物は、細胞調製物の疎水性抽出物を含むか、またはそれから構成される。
【００１１】
いくつかの態様において、提供される組成物は、１つまたはそれ以上の抗原を含む。いくつかの態様において、抗原は、アレルギー性抗原であるか、またはそれを含む。いくつかの態様において、該抗原は、アナフィラキシー抗原であるか、またはそれを含む。いくつかの態様において、該抗原は、感染性抗原であるか、またはそれを含む。いくつかの態様において、感染性抗原は、病原体の１つまたはそれ以上のさらなる成分と共に提供される。いくつかの態様において、抗原は、自己抗原であるか、またはそれを含む。いくつかの態様において、抗原は、疾患関連抗原であるか、またはそれを含む。いくつかの態様において、抗原は、部分的または全体的に内腔内に封入される。いくつかの態様において、抗原は、部分的または全体的に外表面と結合している。いくつかの態様において、抗原は、それぞれが組成物全体に分散されるように、ナノ粒子と混合される。
【００１２】
いくつかの態様において、抗原または病原体は、食物抗原、微生物抗原、ウイルス抗原、腫瘍抗原、および環境抗原からなる群より選択される。いくつかの態様において、提供される組成物は、第一および第二抗原を含み、第一抗原は、部分的または全体的にナノ粒子内腔内に封入されており、第二抗原は、部分的または全体的にナノ粒子の外表面と結合している。
【００１３】
いくつかの態様において、少なくとも１つの親水性細胞成分および疎水性細胞成分が、微生物の細胞調製物から提供される。いくつかの態様において、少なくとも１つの親水性細胞成分および疎水性細胞成分が、腫瘍細胞細胞調製物から提供される。
【００１４】
図面の簡単な説明
共に図面を構成する以下の図面の説明は、例示を目的としたものであり、限定することを意図しない。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】図１：ナノ粒子の表面に付着した疎水性細胞成分を有するナノ粒子の製造を説明するいくつかの態様による例示的フローチャートを示す。細胞を溶解し、疎水性および親水性細胞成分を分離させる。疎水性細胞成分を、ポリマーおよび有機溶媒と組み合わせる。疎水性細胞成分＋ポリマー＋有機溶媒混合物を水（または水溶液）に添加し、次いで、溶媒を蒸発させる。ナノ粒子を遠心により単離する。得られたナノ粒子は、ナノ粒子の表面に結合した疎水性細胞成分を含む。
【図２】図２：ナノ粒子内に封入された親水性細胞成分を有するナノ粒子の製造を説明するいくつかの態様による例示的フローチャートを示す。細胞を溶解し、疎水性および親水性細胞成分を分離させる。親水性細胞成分を水溶液に添加する。ポリマーおよび有機溶媒を共にまたは別個に合わせる。親水性細胞成分の水溶液を、該ポリマーおよび有機溶媒溶液（Ｗ／Ｏエマルジョン）に添加する。Ｗ／Ｏエマルジョンを、水（または水溶液）に添加し（Ｗ／Ｏ／Ｗエマルジョン）、その後、溶媒を蒸発させる。得られたナノ粒子を遠心により単離し、それは封入された親水性細胞溶解物を含む。
【図３】図３：ナノ粒子内に封入された親水性細胞成分およびナノ粒子の表面に結合された疎水性細胞成分を有するナノ粒子の製造を説明する、いくつかの態様による例示的フローチャートを示す。細胞を溶解し、疎水性および親水性細胞成分を分離する。親水性細胞成分を水溶液に添加する。疎水性細胞成分を、ポリマーおよび有機溶媒と組み合わせる。親水性細胞成分の水溶液を、疎水性細胞成分＋ポリマー＋有機溶媒（Ｗ／Ｏエマルジョン）に添加する。Ｗ／Ｏエマルジョンを、水（または水溶液）に添加し（Ｗ／Ｏ／Ｗエマルジョン）、その後、溶媒を蒸発させる。得られたナノ粒子を遠心により単離し、それは封入された親水性細胞溶解物およびナノ粒子の表面に結合した疎水性細胞溶解物を含む。
【図４】図４：１つまたはそれ以上の抗原抽出物およびナノ粒子内に封入された親水性細胞成分およびナノ粒子の表面に付着した疎水性細胞成分を有するナノ粒子の製造を説明する、いくつかの態様による例示的フローチャートを示す。細胞を溶解し、疎水性および親水性細胞成分を分離する。親水性細胞成分を水溶液に添加し、可溶性抗原抽出物と合わせる。疎水性細胞成分をＰＶＡ水溶液と合わせる。ポリマーおよび有機溶媒を共にまたは別個に合わせる。親水性細胞成分の水溶液を、ポリマー＋有機溶媒に添加する（Ｗ／Ｏエマルジョン；第一エマルジョン）。Ｗ／Ｏエマルジョンを、疎水性細胞成分のＰＶＡ水溶液と合わせ（第二エマルジョン）、その後、溶媒を蒸発させる。得られたナノ粒子を遠心により単離し、それは封入された抗原抽出物、封入された親水性細胞成分、およびナノ粒子の表面に結合した疎水性細胞成分を含む。
【図５】図５：第１１週での脱感作処理の開始１日前（処理前）および第１４、１８、２２、２６および３０週での各食物経口負荷（ＯＦＣ）の１日前の、ピーナッツ特異的ＩｇＥの血清濃度の平均±標準誤差（ＳＥＭ）を示す例示的結果を示す。“薬剤処理”は、ＣｐＧコーティングされた、ＰＬＧＡ（ポリ（乳酸−コ−グリコール酸））封入されたピーナッツ抽出物ナノ粒子で処理したマウスを示す。“ビークル処理”は、対照で処理したマウスを示す。“未処理”は、いずれの処理も受けていないマウスを示す。
【００１６】
【図６】図６：第１１週での脱感作処理の開始１日前（処理前）および第１４、１８、２２、２６および３０週でのＯＦＣの１日前の、ピーナッツ特異的ＩｇＧ２ａの血清濃度の平均±ＳＥＭを示す例示的結果を示す。“薬剤処理”は、ＣｐＧコーティングされた、ＰＬＧＡ封入されたピーナッツ抽出物ナノ粒子で処理したマウスを示す。“ビークル処理”は、対照で処理したマウスを示す。“未処理”は、いずれの処理も受けていないマウスを示す。
【図７】図７：第１４および１８週でのＯＦＣ後の個々および平均のアナフィラキシー症状スコアを示す例示的結果を示す（＊＝Ｐ＜０．０５；ＮＣ＝負荷なし）。“薬剤処理”は、ＣｐＧ−コーティングされた、ＰＬＧＡ封入されたピーナッツ抽出物ナノ粒子（２００μｇ  ピーナッツタンパク質および１．８３５μｇ  ＣｐＧ−ビオチン）で処理したマウスを示す。“ビークル処理”は、対照で処理したマウスを示す。“未処理”は、いずれの処理も受けていないマウスを示す。
【図８】図８：第２２および２６週でのＯＦＣ後の個々および平均のアナフィラキシー症状スコアを示す例示的結果を示す（＊＝Ｐ＜０．０５；ＮＣ＝負荷なし）。“薬剤処理”は、ＣｐＧコーティングされた、ＰＬＧＡ封入されたピーナッツ抽出物ナノ粒子（２００μｇ  ピーナッツタンパク質および１．８３５μｇ  ＣｐＧ−ビオチン）で処理したマウスを示す。“ビークル処理”は、対照で処理したマウスを示す。“未処理”は、いずれの処理も受けていないマウスを示す。
【図９】図９：第３０週でのＯＦＣ後の個々および平均のアナフィラキシー症状スコアを示す例示的結果を示す（＊＝Ｐ＜０．０５）。“薬剤処理”は、ＣｐＧコーティングされた、ＰＬＧＡ封入されたピーナッツ抽出物ナノ粒子（２００μｇ  ピーナッツタンパク質および１．８３５μｇ  ＣｐＧ−ビオチン）で処理したマウスを示す。“ビークル処理”は、対照で処理したマウスを示す。“未処理”は、いずれの処理も受けていないマウスを示す。
【図１０】図１０：第１４および１８週でのＯＦＣ後の個々および平均の体温を示す例示的結果を示す（＊＝Ｐ＜０．０５）。“薬剤処理”は、ＣｐＧコーティングされた、ＰＬＧＡ封入されたピーナッツ抽出物ナノ粒子（２００μｇ  ピーナッツタンパク質および１．８３５μｇ  ＣｐＧ−ビオチン）で処理したマウスを示す。“ビークル処理”は、対照で処理したマウスを示す。“未処理”は、いずれの処理も受けていないマウスを示す。
【図１１】図１１：第２２および２６週でのＯＦＣ後の個々および平均の体温を示す例示的結果を示す（＊＝Ｐ＜０．０５）。“薬剤処理”は、ＣｐＧコーティングされた、ＰＬＧＡ封入されたピーナッツ抽出物ナノ粒子（２００μｇ  ピーナッツタンパク質および１．８３５μｇ  ＣｐＧ−ビオチン）で処理したマウスを示す。“ビークル処理”は、対照で処理したマウスを示す。“未処理”は、いずれの処理も受けていないマウスを示す。
【００１７】
【図１２】図１２：第３０週でのＯＦＣ後の個々および平均の体温を示す例示的結果を示す（＊＝Ｐ＜０．０５）。“薬剤処理”は、ＣｐＧコーティングされた、ＰＬＧＡ封入されたピーナッツ抽出物ナノ粒子（２００μｇ  ピーナッツタンパク質および１．８３５μｇ  ＣｐＧ−ビオチン）で処理したマウスを示す。“ビークル処理”は、対照で処理したマウスを示す。“未処理”は、いずれの処理も受けていないマウスを示す。
【図１３】図１３：第１４および１８週でのＯＦＣ後の個々および平均の血漿ヒスタミンレベルを示す例示的結果を示す（＊＊＊＝Ｐ＜０．００１）。“薬剤処理”は、ＣｐＧコーティングされた、ＰＬＧＡ封入されたピーナッツ抽出物ナノ粒子（２００μｇ  ピーナッツタンパク質および１．８３５μｇ  ＣｐＧ−ビオチン）で処理したマウスを示す。“ビークル処理”は、対照で処理したマウスを示す。“未処理”は、いずれの処理も受けていないマウスを示す。
【図１４】図１４：第２２および２６週でのＯＦＣ後の個々および平均の血漿ヒスタミンレベルを示す例示的結果を示す（＊＝Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１）。“薬剤処理”は、ＣｐＧコーティングされた、ＰＬＧＡ封入されたピーナッツ抽出物ナノ粒子（２００μｇ  ピーナッツタンパク質および１．８３５μｇ  ＣｐＧ−ビオチン）で処理したマウスを示す。“ビークル処理”は、対照で処理したマウスを示す。“未処理”は、いずれの処理も受けていないマウスを示す。
【図１５】図１５：第３０週でのＯＦＣ後の個々および平均の血漿ヒスタミンレベルを示す例示的結果を示す（＊＝Ｐ＜０．０５）。“薬剤処理”は、ＣｐＧコーティングされた、ＰＬＧＡ封入されたピーナッツ抽出物ナノ粒子（２００μｇ  ピーナッツタンパク質および１．８３５μｇ  ＣｐＧ−ビオチン）で処理したマウスを示す。“ビークル処理”は、対照で処理したマウスを示す。“未処理”は、いずれの処理も受けていないマウスを示す。
【図１６】図１６：粗ピーナッツ抽出物とインキュベートしたＯＦＣ後の（第３０週）脾臓細胞培養物におけるサイトカインレベルの平均±ＳＥＭを示す例示的結果を示す（＊＊＊＝Ｐ＜０．００１  ビークル  対  薬剤）。“薬剤処理”は、ＣｐＧコーティングされた、ＰＬＧＡ封入されたピーナッツ抽出物で処理したマウスを示す。“ビークル処理”は、対照で処理したマウスを示す。“未処理”は、いずれの処理も受けていないマウスを示す。パネルＡは、インターロイキン−４（ＩＬ−４）レベルの平均±ＳＥＭを示す例示的結果を示す。パネルＢは、インターロイキン−１０（ＩＬ−１０）レベルの平均±ＳＥＭを示す例示的結果を示す。パネルＣは、インターフェロン（ＩＦＮ）−γレベルの平均±ＳＥＭを示す例示的結果を示す。パネルＤは、インターロイキン−５（ＩＬ−５）レベルの平均±ＳＥＭを示す例示的結果を示す。パネルＥは、インターロイキン−１３（ＩＬ−１３）レベルの平均±ＳＥＭを示す例示的結果を示す。パネルＦは、トランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ）−βレベルの平均±ＳＥＭを示す例示的結果を示す。
【００１８】
【図１７】図１７：コナヒョウヒダニ (D. farinae)および／またはヤケヒョウヒダニ(D. pteronyssinus)粉末のダニ抽出物および大腸菌水性抽出物を封入する大腸菌有機抽出物でコーティングされたポリ（乳−コ−グリコール酸）−（ＰＬＧＡ−）ナノ粒子の製造、投与および加水分解のいくつかの態様による例示的概略図を示す。
【図１８】図１８：提供されるナノ粒子の模擬胃液（ＳＧＦ）における人工胃液消化および／または人工腸液（ＳＩＦ）における人工腸内消化の影響を試験するためのプロトコルの代表的なフロー図を示す。
【図１９】図１９：ＳＧＦ中で最大４時間消化された、提供された大腸菌ＤＮＡおよびＯＶＡを封入した大腸菌有機抽出物（ＯＥＥ）でコーティングされたナノ粒子（“ＯＥＥ／ＤＮＡ＋ＯＶＡ”とも言う）のウェスタンブロットの例を示す。
【図２０】図２０：ＳＩＦ中で最大１２時間消化された、提供されたＯＥＥ／ＤＮＡ＋ＯＶＡナノ粒子のウェスタンブロットの例を示す。
【図２１】図２１：ＳＧＦ中で４時間消化後、ＳＩＦ中で最大１２時間消化された、提供されたＯＥＥ／ＤＮＡ＋ＯＶＡナノ粒子のウェスタンブロットの例を示す。
【図２２】図２２：Ａ）１種もしくはそれ以上の抗原または提供されたナノ粒子またはナノ粒子組成物と共にインキュベート後の、抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞増殖、Ｂ）１種もしくはそれ以上の抗原または提供されたナノ粒子またはナノ粒子組成物と共にインキュベート後の、ＣＤ８＋Ｔ細胞による抗原特異的ＩＬ−２生産、および、Ｃ）１種もしくはそれ以上の抗原または提供されたナノ粒子またはナノ粒子組成物と共にインキュベート後の、ＣＤ８＋Ｔ細胞による抗原特異的ＩＦＮγ生産、のグラフの例を示す。
【図２３】図２３：Ａ）１種もしくはそれ以上の抗原または提供されたナノ粒子またはナノ粒子組成物と共にインキュベート後の、抗原特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖、およびＢ）１種もしくはそれ以上の抗原または提供されたナノ粒子またはナノ粒子組成物と共にインキュベート後の、ＣＤ４＋Ｔ細胞による抗原特異的ＩＦＮγ生産、のグラフの例を示す。
【００１９】
【図２４】図２４：Ａ）オボアルブミン（ＯＶＡ）、大腸菌ＤＮＡおよびＯＶＡを含むナノ粒子、大腸菌細胞培養物（ＯＥＥ）の有機抽出物でコーティングされ、大腸菌ＤＮＡおよびＯＶＡを含むナノ粒子、またはＯＶＡを含む死大腸菌と共にインキュベート後の、樹状細胞によるＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−６、およびＴＮＦαサイトカイン生産；および、Ｂ）オボアルブミン（ＯＶＡ）、大腸菌ＤＮＡおよびＯＶＡを含むナノ粒子、ＯＥＥでコーティングされ、大腸菌ＤＮＡおよびＯＶＡを含むナノ粒子、またはＯＶＡを含む死大腸菌と共にインキュベート後の、ＣＤ４＋Ｔ細胞によるＩＬ−１０、ＩＬ−１３、ＩＬ−５、およびＩＦＮγ  サイトカイン生産、の例示図を示す。
【図２５】図２５：可溶性ＯＶＡ（パネルＡ、ＢおよびＣ）またはＯＥＥでコーティングされた大腸菌ＤＮＡおよびＯＶＡを含むナノ粒子（パネルＤ、ＥおよびＦ）の、それぞれ１、４または８時間後のマウス樹状細胞（ＤＣ）への取り込みの例示的共焦点顕微鏡画像を示す。提供されたナノ粒子中に投与された抗原は、早ければ投与後１時間でＤＣ内部に観察され（可溶性ＯＶＡ群ではいずれも観察されず）、顕著に高レベルの抗原が、可溶性ＯＶＡの単独投与と比較して、提供されたナノ粒子の投与の８時間後にＤＣにて見出された。
【図２６】図２６：可溶性ＯＶＡ（パネルＡ、ＢおよびＣ）またはＯＥＥでコーティングされた大腸菌ＤＮＡおよびＯＶＡを含むナノ粒子（パネルＤ、ＥおよびＦ）の、それぞれ２４時間、７２時間、または１週間後のマウスＤＣへの取り込みの例示的共焦点顕微鏡画像を示す。同レベルの抗原が両方の群の２４時間後（パネルＡおよびＤ）に見られるが、可溶性抗原は、７２時間では除去され（パネルＢおよびＥ）、１週間後の、提供されたナノ粒子中に封入された抗原のみで観察可能であった（パネルＣおよびＦ）。
【図２７】図２７：可溶性ＯＶＡ、ＯＶＡを含むナノ粒子、またはＯＥＥでコーティングされ、大腸菌ＤＮＡおよびＯＶＡを含むナノ粒子、のいずれかの投与後の、ヌードマウスの頚部、鼠径および腸間膜リンパ節における抗原提示の例示図を示す。
【図２８】図２８：標識したＯＶＡの相対蛍光を通して測定されるとおり（臓器質量により正規化）、可溶性ＯＶＡ、ＯＶＡを含むナノ粒子、またはＯＥＥでコーティングされ、大腸菌ＤＮＡおよびＯＶＡを含むナノ粒子、のいずれかに暴露した後のマウスの脾臓中の抗原の相対量の例示図を示す。提供されたナノ粒子内部へのＯＶＡの封入は、Ａ）相対蛍光、およびＢ）全体の蛍光％の両方により示される通り、脾臓における抗原の有意に高い蓄積をもたらす。＊ｐ＜０．０５、＊＊＊ｐ＜０．０１。
【図２９】図２９：ＰＢＳまたはＯＥＥでコーティングされた大腸菌ＤＮＡおよびＯＶＡを含むナノ粒子のいずれかで処理されたマウスの、Ａ）脾臓、Ｂ）鼠径リンパ節、Ｃ）腸間膜リンパ節、またはＤ）頚部リンパ節におけるＣＤ４＋Ｔ細胞増殖の例示図を示す。全ての試験した領域において、提供されたナノ粒子で処理したマウスは、顕著に高レベルの抗原特異的なＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を示した。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
定義
本明細書中、文脈から明らかでない限り、（ｉ）用語“ａ”は、“少なくとも１つ”を意味すると理解されてよく、（ｉｉ）用語“または”は、“および／または”を意味すると理解されてよく、（ｉｉｉ）用語“を含む”および“包含する”は、記載される複数の成分または工程を、それら自体または１つもしくはそれ以上の付加的成分もしくは工程と共に示されるかどうかによらず、包含すると理解されてよく、そして（ｉｖ）用語“約”および“およそ”は、当業者に理解され得る標準的な変更を可能にするためであると理解されてよく、そして（ｖ）範囲が記載される場合、終点が包含される。
【００２１】
投与：本明細書で用いる用語“投与”は、対象への組成物の投与を意味する。投与は、任意の適当な経路で行われ得る。例えば、いくつかの態様において、投与は、経気管投与（気管支注入を含む）、口腔内投与、経腸投与、皮内投与（interdermal）、動脈内投与、皮内投与（intradermal）、胃内投与、髄内投与、筋肉内投与、鼻腔内投与、腹腔内投与、髄腔内投与、静脈内投与、脳室内投与、経粘膜投与、経鼻投与、経口投与、直腸投与、皮下投与、舌下投与、局所投与、経気管投与（気管内注入によるものを含む）、経皮投与、経膣投与および硝子体内投与を含み得る。
【００２２】
アレルゲン：本明細書で用いる用語“アレルゲン”は、アレルギー反応を誘発する抗原を意味する。いくつかの態様において、アレルゲンは、ポリペプチドであるか、またはそれを含む。いくつかの態様において、アレルゲンは、小分子であるか、またはそれを含む。いくつかの態様において、アレルゲンは、食物アレルゲン、薬物アレルゲン、環境アレルゲン、昆虫毒、動物アレルゲン、およびラテラックスからなる群より選択される。
【００２３】
アレルギー反応：本明細書で用いる語彙“アレルギー反応”は、当業者に理解される意味を有し、抗原に対するＩｇＥが介在する免疫応答を意味する。抗原がＩｇＥ抗体を誘導するとき、それらは、好塩基球および脂肪細胞の表面上のＩｇＥ受容体に結合し得る。その後、抗原への暴露は、表面に結合した抗アレルゲンＩｇＥのような架橋を誘発し、細胞内貯蔵からのヒスタミンの放出が誘発される。このヒスタミン放出は、アレルギー反応を誘発する。通常、アレルギー反応は、皮膚（例えば、じんま疹（uticana）、血管性浮腫、掻痒）、呼吸器（例えば、喘鳴、咳、喉頭浮腫、鼻汁、涙目／眼のかゆみ）、消化管（例えば、嘔吐、腹痛、下痢）、および／または心血管系（例えば、全身反応が起こるとき）の反応の１またはそれ以上を伴う。本発明の目的に関して、喘息反応は、アレルギー反応の一形態であると考えられている。いくつかの態様において、アレルギー反応は、軽度；軽度反応の典型的な症状としては、例えば、頭部（とりわけ、首や顔より上部）の掻痒、鼻づまり、発疹、涙目、赤目、およびそれらの組み合わせが含まれる。いくつかの態様において、アレルギー反応は、重篤な、かつ／または生命を脅かす。いくつかの態様において、重篤なアレルギー反応の症状（例えば、アナフィラキシー反応）は、腹痛、腹部呼吸音（通常、甲高い呼吸音）、不安症、胸の不快感または圧迫感、咳、下痢、呼吸困難、嚥下困難、めまいやふらつき、顔面紅潮または赤み、悪心または嘔吐、動悸、顔、眼または舌の腫れ、意識喪失、喘鳴、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される。いくつかの態様において、アレルギー反応は、アナフィラキシー反応である。
【００２４】
アレルギー：本明細書で用いる用語“アレルギー”は、特定の抗原に対するＩｇＥが介在する免疫応答により特徴付けられる病状を意味する。いくつかの態様において、抗原は、多くのまたはほとんどの個体においてＩｇＥが介在する免疫応答を誘発しないものである。いくつかの態様において、用語“アレルギー”は、同じ抗原に同程度暴露されたときに個々の種のメンバーに典型的に観察される免疫応答よりも、個体が特定の抗原に暴露されたときに、より顕著なＩｇＥが介在する免疫応答を有するような状況を意味するのに使用される。従って、“アレルギー”に罹患しているか、または“アレルギー”を起こしやすい個体は、１種以上のアレルゲンに暴露されたとき、アレルギー反応を経験するか、またはアレルギー反応を経験する危険性のある個体である。いくつかの態様において、アレルギーの症状としては、例えば、個体がアレルギーを有する、その血液または血清中の、必要に応じて特定の閾値を上回るアレルゲン（複数可）と反応性のＩｇＥ抗体の存在が含まれる。いくつかの態様において、アレルギー症状としては、抗原の調製物が、個体の皮膚下に皮下注射されるとき、対照のホイール／フレア(wheel／flare)よりも大きいホイール／フレアの発生が含まれる。いくつかの態様において、個体は、問題の特定のアレルゲンに対するアレルギー反応を起こしたことがなく、アレルギーを起こしやすいと考えることができる。例えば、個体が、関連するアレルゲン（例えば、同じ起源からのもの、または共通のアレルギーが一般的であるもの）に対してアレルギー反応を生じた場合、特に個体がアナフィラキシー反応を生じた場合、個体は、該関連するアレルゲンに対してアレルギー（および／または、アレルギー性反応またはアナフィラキシー反応）を起こしやすいと考えられ得る。同様に、個体の家族のうち誰かが特定のアレルゲンに反応する場合は、個体は、そのアレルゲンに対してアレルギー（および／または、アレルギーおよび／またはアナフィラキシー反応）を起こしやすいと考えられ得る。
【００２５】
アロ抗原：本明細書で用いる用語“アロ抗原”は、アロ抗原認識および／または移植片拒絶に関連する抗原（例えば、拒絶免疫応答が向けられる抗原）を意味する。一般的に、アロ抗原は、特定の種の一個体（例えば、ドナー個体）由来の組織内または組織上に存在するが、種の別の個体（例えば、ドナー個体とは遺伝的に異なる、レシピエント個体）由来の組織内または組織上には存在しない物質であり、すなわち、ドナー個体由来の組織のレシピエント個体への移植は、拒絶免疫応答の危険性および／または拒絶免疫応答をもたらす。一般的に、抗原は、例えば、小分子、核酸、ポリペプチド、炭水化物、脂質などのような化学物質であっても、またはそれらを含んでいてもよい。いくつかの態様において、アロ抗原は、ポリペプチドであるか、またはそれを含む。多様なポリペプチドは、それらがアロ抗原として作用し得るように、そのアミノ酸配列が、個体間および同種の個体間で変化することが、当技術分野で知られている。
【００２６】
アロ抗原認識：本明細書で用いる用語“アロ抗原認識”は、典型的に、同種の別の個体（すなわち、例えばレシピエント個体と遺伝的に異なるドナー）から組織移植を受ける個体（すなわち、レシピエント）の免疫系により開始される免疫応答を意味し、ここで、免疫応答とは、移植された組織上のアロ抗原を認識することを含む。典型的に、アロ抗原認識は、アロ抗原のＴ細胞を伴う。多くの態様において、Ｔ細胞は、アロ抗原ペプチド、例えば、その配列が、ドナー個体とレシピエント個体の間で異なる多形遺伝子によってコードされるペプチドを認識する。
【００２７】
アミノ酸：本明細書で用いる用語“アミノ酸”は、その最も広い意味において、例えば、１つ以上のペプチド結合の形成が介在する、ポリペプチド鎖に組み込むことのできる任意の化合物および／または物質を意味する。いくつかの態様において、アミノ酸は、一般構造式Ｈ２Ｎ−Ｃ（Ｈ）（Ｒ）−ＣＯＯＨを有する。いくつかの態様において、アミノ酸は、天然に存在するアミノ酸である。いくつかの態様において、アミノ酸は合成アミノ酸である。いくつかの態様において、アミノ酸はＤ−アミノ酸である。いくつかの態様において、アミノ酸はＬ−アミノ酸である。“標準アミノ酸”とは、天然に存在するペプチドで通常見られる２０種の標準Ｌ−アミノ酸の何れかを意味する。“非標準アミノ酸”とは、それが合成製造されるか、または天然源から得られるかどうかに関わらず、標準アミノ酸以外のアミノ酸を意味する。いくつかの態様において、ポリペプチド中のカルボキシ末端および／またはアミノ末端のアミノ酸を含むアミノ酸は、上記の一般的構造に比べて構造的修飾を含み得る。例えば、いくつかの態様において、アミノ酸は、一般的な構成と比較してメチル化、アミド化、アセチル化、および／または置換により修飾され得る。いくつかの態様において、そのような修飾は、例えば、他の同一の修飾されていないアミノ酸を含むポリペプチドと比較して、修飾アミノ酸を含むポリペプチドの循環半減期を変化させることができる。いくつかの態様において、そのような修飾は、他の同一の修飾されていないアミノ酸を含むポリペプチドと比較して、修飾アミノ酸を含むポリペプチドの関連する活性を顕著に変化させない。文脈から明らかであるように、いくつかの態様において、用語“アミノ酸”は、遊離アミノ酸を意味するのに用いられる。いくつかの態様において、それは、ポリペプチドのアミノ酸残基を意味するのみ用いられる。
【００２８】
アナフィラキシー抗原：本明細書で用いる語句“アナフィラキシー抗原”は、その自然な状態で、通常の条件下で見出されたとき、アレルギー性個体において認識されてアナフィラキシー反応の危険性を提示する抗原（例えば、アレルゲン）を意味する。例えば、本発明の目的について、花粉および動物の鱗屑または排泄物（例えば、唾液、尿）は、アナフィラキシー抗原であるとはみなされない。一方、特定の食物抗原、昆虫抗原、薬物、およびゴム（例えば、ラテックス）抗原は、一般的に、アナフィラキシー抗原であるとみなされる。アナフィラキシー抗原の例としては、それらに対する反応が、死亡リスクを生ずるほど重症であるもの（例えば、ナッツ、種子、および魚）である。
【００２９】
アナフィラキシー反応：本明細書で用いる語彙“アナフィラキシー反応”（例えば、“アナフィラキシー”）は、複数の標的臓器、例えば、気道、皮膚、消化管、および心血管系における病理学的応答によって特徴づけられる、アレルゲンに対する重度の全身アレルギー反応を意味する。上記の通り、アナフィラキシー反応のような重症のアレルギー反応の症状は、典型的に、アレルゲンへの暴露後数分以内に迅速に発症し、例えば、腹痛、腹部呼吸音（通常、甲高い呼吸音）、不安症、胸の不快感または圧迫感、咳、下痢、呼吸困難、嚥下困難、めまいやふらつき、顔面紅潮または赤み、悪心または嘔吐、動悸、顔、眼または舌の腫れ、意識喪失、喘鳴、およびそれらの組み合わせを含み得る。アナフィラキシーの特定の兆候は、例えば、心拍リズムの異常（不整脈）、肺内部の液体貯留（肺浮腫）、蕁麻疹、低血圧、精神錯乱、頻脈、酸欠による蒼白または（例えば、ショックから）血色が悪い皮膚、気道を塞ぐほど重症であり得る喉の腫れ（血管性浮腫）、眼および／または顔面の腫れ、脱力感、喘鳴を含み得る。最も重症のアナフィラキシー反応は、意識喪失および／または死亡をもたらし得る。
【００３０】
動物：本明細書で用いる用語“動物”は、動物界の何れかのメンバーを意味する。いくつかの態様において、“動物”とは、任意の発生段階でのヒトを意味する。いくつかの態様において、“動物”とは、任意の発生段階での非ヒト動物を意味する。いくつかの態様において、非ヒト動物は哺乳動物（例えば、げっ歯動物、マウス、ラット、ウサギ、サル、イヌ、ネコ、ヒツジ、ウシ、霊長動物および／またはブタ）である。いくつかの態様において、動物は、哺乳動物、鳥類、爬虫類、両生類、魚類、および／または昆虫を含むが、これらに限定されない。いくつかの態様において、動物は、形質転換動物、遺伝子操作された動物、および／またはクローンであり得る。
【００３１】
抗原：本明細書で用いる用語“抗原”は、（ｉ）免疫応答を誘発する物質、および／または（ｉｉ）Ｔ細胞受容体（例えば、ＭＨＣ分子により提示されるとき）または抗体（例えば、Ｂ細胞により産生される）に結合する物質を意味する。いくつかの態様において、抗原は、体液性応答（例えば、抗原特異的抗体の産生を含む）を誘発し、いくつかの態様において、細胞応答（例えば、その受容体が抗原と特異的に相互作用するＴ細胞を含む）を誘発する。一般的に、抗原は、例えば、小分子、核酸、ポリペプチド、炭水化物、脂質などの化学物質であってもよいか、またはそれらを含んでいてよい。いくつかの態様において、抗原は、ポリペプチドであるか、またはそれを含む。当業者は、一般的に、抗原が、単離された形態または純粋な形態で提供され得るか、あるいは、粗製形態（例えば、細胞抽出物のような抽出物中の他の物質と共に、または他の抗原含有源の比較的粗製の調製物）で提供され得ることを理解し得る。いくつかの態様において、本発明により利用される抗原は、粗製形態で提供される。いくつかの態様において、抗原は、組み換え抗原である。
【００３２】
抗原提示細胞：本明細書で用いる語句“抗原提示細胞”または“ＡＰＣ”は、当技術分野で通常理解される意味を有し、抗原を処理し、Ｔ細胞に抗原を提示する細胞を意味する。抗原細胞の例としては、樹状細胞、マクロファージおよび特定の活性化された上皮細胞が含まれる。
【００３３】
およそ：本明細書で用いる用語“およそ”および“約”は、当業者に理解され得るような通常の統計的変動を含むことが意図される。特定の態様において、用語“およそ”または“約”は、他に特記しない限り、または文脈から他に明らかでない限り、記載される基準値のどちらの方向にも（より大きいか、または小さい）２５％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％またはそれ以下の範囲内にある値を意味する（数値が、可能な値の１００％を超える場合を除く）。
【００３４】
関連して：ある物の存在、レベルおよび／または形態が他のもののそれと関連付けられる場合、該用語が本明細書で用いられる通り、２つの事象または要素が、別のものと“関連して”いる。例えば、その特定の要素の存在、レベルおよび／または形態が、疾患、障害、または病状の発症および／またはその感受性と相関する場合（例えば、適切な母集団の観点から）、特定の要素（例えば、ポリペプチド）は、特定の疾患、障害、または病状と関連があると考えられる。いくつかの態様において、２つ以上の要素が、それらが互いに物理的に近接したままであるように、直接的または間接的に相互作用するとき、それらは、互いに“関連”している。
【００３５】
自己抗原：本明細書で用いる用語“自己抗原”は、その個体の免疫系により認識される、個体により産生された抗原を意味するために用いられる。いくつかの態様において、自己抗原は、個体の免疫系による認識が、自己免疫疾患、障害または病状と関連している抗原である。一般的に、自己抗原は、例えば、小分子、核酸、ポリペプチド、炭水化物、脂質などのような任意の化学物質であっても、またはそれを含んでもよい。ある態様において、自己抗原は、ポリペプチドであるか、またはそれを含む。当業者は、自己抗原として作用し得る、とりわけ、自己免疫疾患、障害および／または病状に関連する免疫応答において認識されるポリペプチドを含む多様な物質をよく知っている。
【００３６】
生体適合性：本明細書で用いる用語“生体適合性”は、例えば、インビボにおいて、組織と接触しておかれたとき、かかる生体組織に重大な害を引き起こさない物質を意味する。特定の態様において、物質は、それらが細胞に毒性でない場合、“生体適合性”である。特定の態様において、物質は、インビトロでのそれらの細胞への添加が、２０％以下または２０％程度の細胞死であり、かつ／またはそれらのインビボ投与が、顕著な炎症もしくは他の副作用を誘発しない場合、“生体適合性”である。
【００３７】
生分解性：本明細書で用いる用語“生分解性”は、細胞に導入したとき、細胞が再利用し得るか、または細胞に顕著に有害な効果を及ぼすことなく排泄される成分に、（例えば、細胞機序により、例えば、酵素分解、加水分解、および／またはそれらの組み合わせにより）分解される物質を意味する。特定の態様において、生分解性物質の分解によって生成された成分は、生体適合性であり、それ故に、インビボで重大な炎症および／または他の副作用を誘導しない。いくつかの態様において、生分解性高分子材料は、それらの成分である単量体に分解される。いくつかの態様において、生分解性物質（例えば、生分解性高分子材料を含む）の分解は、エステル結合の加水分解を伴う。あるいは、または加えて、いくつかの態様において、生分解性物質（例えば、生分解性高分子材料を含む）の分解は、ウレタン結合の切断を伴う。生分解性ポリマーの例としては、例えば、ポリ（ヒドロキシル酸）、ポリ（乳酸）（ＰＬＡ）、ポリ（グリコール酸）（ＰＧＡ）、ポリ（乳酸−コ−グリコール酸）（ＰＬＧＡ）、およびＰＥＧとのコポリマー、ポリ無水物、ポリ（オルト）エステル、ポリエステル、ポリウレタン、ポリ（酪酸）、ポリ（吉草酸）、ポリ（カプロラクトン）、ポリ（ヒドロキシアルカノエート）、ポリ（ラクチド−コ−カプロラクトン）、それらの混合物ならびにコポリマーを含むが、これらに限定されない、乳酸およびグリコール酸のようなヒドロキシ酸のポリマーが含まれる。多くの天然に存在するポリマーは、生分解性でもあり、例えば、アルブミン、コラーゲン、ゼラチンおよびプロラミン、例えばゼインのようなタンパク質、ならびにアルギン酸、セルロース誘導体およびポリヒドロキシアルカノエート、例えばポリヒドロキシブチレートのような多糖類、それらの混合物ならびにコポリマーを含む。当業者は、かかるポリマーが、（例えば、当技術分野で公知のように、特定の化学基の置換または付加のみが異なる、実質的に同一の構造の親ポリマーに関連する）その生体適合性および／または生分解性誘導体であるとき、認識し得るか、または決定することができる。
【００３８】
生物学的活性物質：本明細書で用いる語句“生物学的活性物質”は、生物学的システム（例えば、（例えば、単離された、培養された、組織中の、生物中等の）細胞）において活性を有する物質を意味する。例えば、生物に投与されたとき、該生物に生物学的効果を有する物質は、生物学的に活性であると考えられる。当業者には、多くの場合、生物学的活性物質の一部のみまたは断片が、活性の存在に必要とされる（例えば、必要かつ十分である）ことが理解され得る。このような状況下では、その部分または断片は、“生物学的に活性な”部分または断片であると考えられる。
【００３９】
細胞溶解物：本明細書で用いる用語“細胞溶解物(cellular lysate)または(cell lysate)”は、１個またはそれ以上の破壊された細胞（すなわち、膜が破壊されている細胞）の内容物を含む液体を意味する。いくつかの態様において、細胞溶解物は、親水性および疎水性細胞成分の両方を含む。いくつかの態様において、細胞溶解物は、植物細胞、微生物（例えば、細菌または真菌）細胞、動物細胞（例えば、哺乳動物細胞）、ヒト細胞、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される１個またはそれ以上の細胞の溶解物である。いくつかの態様において、細胞溶解物は、癌細胞のような１個またはそれ以上の異常細胞の溶解物である。いくつかの態様において、細胞溶解物は、“最初の”溶解物を生成する細胞を破壊した後、ほとんど、または全く精製が行われないという点で粗溶解物である。いくつかの態様において、１またはそれ以上の単離または精製工程が、最初の溶解物に対して行われる。しかしながら、用語“溶解物”は、複数の細胞成分を含み、任意の個々の成分の純粋な調製物ではない調製物を意味する。
【００４０】
特徴的な配列要素：本明細書で用いる語句“特徴的な配列要素”は、ポリマーの特徴的な部分を示す、そのポリマー（例えばポリペプチドまたは核酸）中に見出される配列要素を意味する。いくつかの態様において、特徴的な配列要素の存在は、ポリマーの特定の活性または特性の存在またはレベルと相関する。いくつかの態様において、特徴的な配列要素の存在（または、不存在）は、特定のポリマーこのようなポリマーの特定のファミリーまたは群のメンバー（または、メンバーではない）として、特定のポリマーを定義する。特徴的な配列要素は、典型的に、少なくとも２個の単量体（例えば、アミノ酸またはヌクレオチド）を含む。いくつかの態様において、特徴的な配列要素は、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０個、またはそれ以上の単量体（例えば、連続的に結合した単量体）を含む。いくつかの態様において、特徴的な配列要素は、その長さが配列要素を共有するポリマーにわたって変化していても、変化していなくてもよい、１以上のスペーサー領域により離れた部位に連続するモノマーの少なくとも第一および第二のストレッチを含む。
【００４１】
併用療法：本明細書で用いる用語“併用療法”は、対象が２以上の治療薬に同時に暴露される状況を意味する。いくつかの態様において、かかる薬剤は、同時に投与される。いくつかの態様において、かかる薬剤は、連続して投与される。いくつかの態様において、かかる薬剤は、重複レジメンで投与される。
【００４２】
〜に対応する：本明細書で用いる用語“〜に対応する”は、多くの場合、ポリペプチドにおけるアミノ酸残基または核酸におけるヌクレオチド残基のような、ポリマーにおける残基の位置／同一性を示すために用いられる。当業者は、単純化を目的として、かかるポリマー中の残基は、例えば、対照ポリマー中の１９０位の残基に“対応する”第一ポリマー中の残基が、実際に第一ポリマー中の１９０位の残基である必要はないが、対照ポリマー中の１９０位に見出される残基に対応するように、対照関連ポリマーに基づく標準的番号付けシステムを用いて指定されることを理解し得る。当業者は、１または複数の市販のアルゴリズム、とりわけ、ポリマー配列の比較のために設計されたアルゴリズムの使用といったものを含む、“対応する”アミノ酸を同定する方法を容易に理解する。
【００４３】
誘導体：本明細書で用いる用語“誘導体”は、１またはそれ上の工程で同じ構造の別の物質から製造または形成される構造的類似体を意味する。いくつかの態様において、誘導体は、第一の化学物質に構造的に関連し、理論的に第一の化学物質から誘導可能な、第二の化学物質を意味する。セルロース誘導体の例としては、セルロースエステル（例えば、有機および無機エステル）、セルロースエーテル（例えば、アルキル、ヒドロキシアルキルおよびカルボキシアルキルエーテル）、カルボキシメチルセルロースナトリウムおよびセルロースアセテートが含まれるが、これに限定されない。セルロース有機エステルの例としては、セルロースアセテート、セルローストリアセテート、セルロースプロピオネート、セルロースアセテートプロピオネートおよびセルロースアセテートブチレートが含まれるが、これに限定されない。セルロース無機エステルの例としては、ニトロセルロースおよび硫酸セルロースが含まれるが、これに限定されない。セルロースアルキルエーテルの例としては、メチルセルロース、エチルセルロースおよびエチルメチルセルロースが含まれるが、これに限定されない。セルロースヒドロキシアルキルエーテルの例としては、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシエチルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースおよびエチルヒドロキシエチルセルロースが含まれるが、これに限定されない。セルロースカルボキシアルキルエーテルの例としては、カルボキシメチルセルロースが含まれるが、これらに限定されない。
【００４４】
投与量形態：本明細書で用いる用語“投与量形態”は、対象に投与される治療薬の物理的に不連続な単位を意味する。各単位は、所定量の活性物質を含む。いくつかの態様において、かかる量は、適切な母集団に投与されたとき、所望の、または有益な結果と相関することが決定された投与レジメン（すなわち、治療的投与レジメン）による投与に適当な単位投与量（または、その全量）である。
【００４５】
投与レジメン：本明細書で用いる用語“投与レジメン”は、通常、時間を空けて対象に個別に投与される単位用量の（通常、２以上の）セットを意味する。いくつかの態様において、所定の治療薬は、１またはそれ以上の用量を含み得る、推奨される投与レジメンを有する。いくつかの態様において、投与レジメンは、同じ時間間隔で互いに分けて投与される複数の用量を含む。いくつかの態様において、投与レジメンは、複数の用量、および少なくとも２つの異なる時間点で分けて投与される個々の用量を含む。いくつかの態様において、投与レジメンは、適切な母集団に投与されたとき、所望の、または有益な結果と相関する（すなわち、治療的投与レジメンである）。
【００４６】
封入：本明細書で用いる用語“封入”は、別の物質に完全に覆われている物質を意味する。
【００４７】
発現：本明細書で用いる、核酸配列の“発現”は、以下の事象、（１）ＤＮＡ配列からのＲＮＡテンプレートの生産（例えば、転写により）；（２）ＲＮＡ転写のスプライシング（例えば、スプライシング、編集、５’−キャップ形成、および／または３’−末端形成による）；（３）ポリペプチドまたはタンパク質へのＲＮＡの翻訳；および／または、（４）ポリペプチドまたはタンパク質の翻訳後修飾、の１つまたはそれ以上を意味する。
【００４８】
機能性：本明細書で用いる用語“機能性”は、特定の特性および／または活性を示す物質の形態または断片を意味するために用いられる。
【００４９】
移植片拒絶：本明細書で用いる用語“移植片拒絶”は、レシピエント個体にドナー個体から移植された組織の拒絶反応を意味する。いくつかの態様において、移植片拒絶は同種移植片拒絶反応を意味し、ここで、ドナー個体およびレシピエント個体は、同種のものである。通常、同種移植片拒絶反応は、ドナー組織が、レシピエントの免疫系がそれに対して拒絶反応を起こすアロ抗原を担持するときに起こる。いくつかの態様において、移植片拒絶は、異種移植片拒絶を意味し、ここで、ドナーおよびレシピエントは、異なる種である。通常、異種移植片拒絶は、ドナー種組織が、レシピエント種の免疫系がそれに対して拒絶反応を起こす異種抗原を担持するとき起こる。
【００５０】
相同性：本明細書で用いる用語“相同性”は、ポリマー分子間、例えば、核酸分子間（例えば、ＤＮＡ分子および／またはＲＮＡ分子）、および／またはポリペプチド分子間の全体的な関連性を意味する。いくつかの態様において、ポリマー分子は、それらの配列が、少なくとも２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％同一であるとき、互いに“相同性”であると考えられる。いくつかの態様において、ポリマー分子は、それらの配列が、少なくとも２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または９９％類似（例えば、対応する位置に関連する化学的特性を有する残基を含む）であるとき、互いに“相同性”であると考えられる。例えば、当業者にはよく知られている通り、特定のアミノ酸は、一般的に、“疎水性”または“親水性”アミノ酸であるとして、かつ／または“極性”または“非極性”側鎖を有するとして、互いに類似であるとして分類される。あるアミノ酸の同じタイプの別のアミノ酸への置換は、多くの場合、“相同な”置換とみなされ得る。典型的なアミノ酸の分類は以下の通りにまとめられる。
【００５１】
【表１】
2019073525.tif 000002
【００５２】
【表２】
2019073525.tif 000003
【００５３】
当業者には理解され得る通り、残基が互いに異なる配列で“対応する”と考えられるとき、ある配列と別の配列との比較において所定の長さのギャップを許容することを含めてそれらの相同性の程度を決定するために配列の比較を可能にする種々のアルゴリズムが、利用可能である。２つの核酸配列間の相同性パーセントの計算は、例えば、最適な比較を目的として２つの配列を整列させることにより実行可能である（例えば、ギャップは、最適なアライメントのために第一および第二の核酸配列の一方または両方に導入されてよく、対応しない配列は、比較目的のために無視してよい）。特定の態様において、比較目的で整列された配列の長さは、対照配列の長さの、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または実質的に１００％である。その後、対応するヌクレオチド位置のヌクレオチドを比較する。第一配列における位置が、第二配列における対応する位置において同じヌクレオチドであるとき、該分子はその位置で同一である。第一配列における位置が、第二配列における対応する位置において類似するヌクレオチドであるとき、該分子はその位置で類似する。２つの配列間の相同性パーセントは、２つの配列の最適なアライメントのために導入される必要があるギャップの数、および各ギャップの長さを考慮して、該配列に共有される同一および類似の位置の数の関数である。２つのヌクレオチド配列間の同一性パーセントを決定するのに有用な代表的なアルゴリズムおよびコンピュータープログラムとしては、例えば、ＰＡＭ１２０重量残基表（weight residue table）、１２のギャップ長ペナルティ、および４のギャップペナルティを用いるＡＬＩＧＮプログラム（ｖｅｒｓｉｏｎ  ２．０）に組み込まれている、Meyers および Millerのアルゴリズム (CABIOS, 1989, 4: 11−17)が含まれる。あるいは、２つのヌクレオチド配列間の相同性パーセントは、例えば、ＮＷＳｇａｐｄｎａ．ＣＭＰマトリックスを用いるＧＣＧソフトウェアパッケージにおけるＧＡＰプログラムを用いて決定され得る。
【００５４】
ヒト：いくつかの態様において、ヒトは、胚、胎児、乳児、小児、青年、大人、または高齢者である。
【００５５】
親水性：本明細書で用いる用語“親水性”および／または“極性”は、水と容易に混合されるか、または水に容易に溶解する傾向を意味する。
【００５６】
疎水性：本明細書で用いる用語“疎水性”および／または“非極性”は、水と混じり合わず、水と結合しないか、または水に容易に溶解することができない傾向を意味する。
【００５７】
同一性：本明細書で用いる用語“同一性”は、ポリマー分子間、例えば、核酸分子（例えば、ＤＮＡ分子および／またはＲＮＡ分子）間、および／またはポリペプチド分子間の全体的な関連性を意味する。いくつかの態様において、ポリマー分子は、それらの配列が、少なくとも２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の同一性であるとき、互いに“実質的に同一”であるとみなされる。当業者には理解され得る通り、残基が互いに異なる配列で“対応する”と考えられるとき、ある配列と別の配列との比較において所定の長さのギャップを許容することを含めてそれらの相同性の程度を決定するために配列の比較を可能にする種々のアルゴリズムが、利用可能である。２つの核酸配列間の同一性パーセントの計算は、例えば、最適な比較を目的として２つの配列を整列させることにより実行可能である（例えば、ギャップは、最適なアライメントのために第一および第二の核酸配列の一方または両方に導入されてよく、対応しない配列は、比較目的のために無視してよい）。特定の態様において、比較目的で整列された配列の長さは、対照配列の長さの、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または実質的に１００％である。その後、対応するヌクレオチド位置のヌクレオチドを比較する。第一配列における位置が、第二配列における対応する位置において同じヌクレオチドであるとき、該分子はその位置で同一である。２つの配列間の同一性パーセントは、２つの配列の最適なアライメントのために導入される必要があるギャップの数、および各ギャップの長さを考慮して、該配列に共有される同一の位置の数の関数である。２つのヌクレオチド配列間の同一性パーセントを決定するのに有用な代表的なアルゴリズムおよびコンピュータープログラムとしては、例えば、ＰＡＭ１２０重量残基表（weight residue table）、１２のギャップ長ペナルティ、および４のギャップペナルティを用いるＡＬＩＧＮプログラム（ｖｅｒｓｉｏｎ  ２．０）に組み込まれている、Meyers および Millerのアルゴリズム (CABIOS, 1989, 4: 11−17)が含まれる。あるいは、２つのヌクレオチド配列間の同一性パーセントは、例えば、ＮＷＳｇａｐｄｎａ．ＣＭＰマトリックスを用いるＧＣＧソフトウェアパッケージにおけるＧＡＰプログラムを用いて決定され得る。
【００５８】
感染症：本明細書で用いる用語“感染症”は、宿主中で増殖する疾患を引き起こす生物によって引き起こされる疾患による宿主体の侵襲を意味する。感染症の症状は、疾患を引き起こす生物によって発生される毒素の作用から引き起こされ、かつ／または該生物および／またはそれらが産生する毒素に対する宿主組織の反応であり得る。
【００５９】
単離：本明細書で用いる用語“単離”は、（１）最初に生産するとき（天然において、および／または実験手順においてのいずれか）、それが関連していた成分の少なくとも一部から分離された物質および／または成分、ならびに／または（２）ヒトの手により作製、調製、および／または製造された物質および／または成分を意味する。単離された物質および／または成分は、それらが最初に関連していた他の成分から約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約９９％以上が分離され得る。いくつかの態様において、単離された物質は、約８０％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約９９％以上純粋である。本明細書で用いる場合、他の成分を実質的に含まないとき、物質は“純粋”である。いくつかの態様において、当業者に理解され得る通り、物質は、例えば、１種以上の担体または賦形剤（例えば、緩衝液、溶媒、水など）のような特定の他の成分と組み合わせた後に、依然として、“単離された”あるいは“純粋である”とみなされ得る。かかる態様において、該物質の単離割合または純度は、このような担体または賦形剤を含めることなく計算される。
【００６０】
ナノエマルジョン：エマルジョンは、従来、当技術分野において、“通常、コロイドサイズよりも大きい液滴の非混和性液体中に乳化剤の有無にかかわらず分散される液体からなるシステム”（Medline Plus Online Medical Dictionary, Merriam Webster (2005)）と定義されている。本明細書で用いる用語“ナノエマルジョン”は、少なくとも一部の液滴（または粒子）が、ナノメートルサイズの範囲の直径を有するエマルジョンを意味する。当業者に理解され得る通り、ナノエマルジョンは、液滴または粒子が、マイクロエマルジョンの液滴または粒子よりも千倍小さいことを特徴とする。
【００６１】
ナノ粒子：本明細書で用いる用語“ナノ粒子”は、１０００ナノメートル（ｎｍ）未満の直径を有する粒子を意味する。いくつかの態様において、ナノ粒子は、アメリカ国立科学財団によって定義されるように、３００ｎｍ未満の直径を有する。いくつかの態様において、ナノ粒子は、アメリカ国立衛生研究所によって定義されるように、１００ｎｍ未満の直径を有する。いくつかの態様において、ナノ粒子は、それらが、囲まれた区画を含み、典型的に、空間または区画を取り囲む（例えば、内腔を画定する）両親媒性の物質からなるミセル膜によってバルク溶液から分離される点で、ミセルである。いくつかの態様において、ミセル膜は、例えば、生体適合性および／または生分解性ポリマーのような、少なくとも１つのポリマーから構成される。
【００６２】
ナノ粒子組成物：本明細書で用いる用語“ナノ粒子組成物”は、少なくとも１個のナノ粒子および少なくとも１個のさらなる物質もしくは成分を含む組成物を意味する。いくつかの態様において、ナノ粒子組成物は、本明細書に記載のナノ粒子の実質的に均一な集積体を含む。
【００６３】
ナノ粒子膜：本明細書で用いる用語“ナノ粒子膜”は、ナノ粒子の外表面と周囲環境との間の境界または接触面(インターフェース)を意味する。いくつかの態様において、ナノ粒子膜は、外表面および境界の内腔を有する高分子膜を意味する。
【００６４】
核酸：本明細書で用いる用語“核酸”は、その最も広い意味において、オリゴヌクレオチド鎖に組み込まれるか、または組み込まれ得る任意の化合物および／または物質を意味する。いくつかの態様において、核酸は、ホスホジエステル結合によりオリゴヌクレオチド鎖に組み込まれるか、または組み込まれ得る化合物および／または物質である。文脈から明らかな通り、いくつかの態様において、“核酸”は、個々の核酸残基（例えば、ヌクレオチドおよび／またはヌクレオシド）を意味する。いくつかの態様において、“核酸”は、個々の核酸残基を含むオリゴヌクレオチド鎖を意味する。いくつかの態様において、“核酸”は、ＲＮＡであるか、またはそれを含む。いくつかの態様において、“核酸”は、ＤＮＡであるか、またはそれを含む。いくつかの態様において、核酸は、１個またはそれ以上の天然の核酸残基であるか、それを含むか、またはそれからなる。いくつかの態様において、核酸は、１個またはそれ以上の核酸類縁体であるか、またはそれを含むか、またはそれからなる。いくつかの態様において、核酸類縁体は、ホスホジエステル骨格を利用しないという点で核酸とは異なる。例えば、いくつかの態様において、核酸は、当技術分野で公知であり、骨格中にホスホジエステル結合の代わりにペプチド結合を有する、１個またはそれ以上の“ペプチド核酸”であるか、またはそれを含むか、またはそれからなり、これは、本発明の範囲内であるとみなされる。あるいは、または加えて、いくつかの態様において、核酸は、１つまたはそれ以上の、ホスホジエステル結合ではなく、ホスホロチオエートおよび／または５’−Ｎ−ホスホラミダイト結合を有する。いくつかの態様において、核酸は、１個またはそれ以上の天然ヌクレオシド（例えば、アデノシン、チミジン、グアノシン、シチジン、ウリジン、デオキシアデノシン、デオキシチミジン、デオキシグアノシン、およびデオキシシチジン）であるか、それを含むか、またはそれからなる。いくつかの態様において、核酸は、１個またはそれ以上のヌクレオシド類縁体（例えば、２−アミノアデノシン、２−チオチミジン、イノシン、ピロロ−ピリミジン、３−メチルアデノシン、５−メチルシチジン、Ｃ５−プロピニル−シチジン、Ｃ５−プロピニル−ウリジン、２−アミノアデノシン、Ｃ５−ブロモウリジン、Ｃ５−フルオロウリジン、Ｃ５−ヨードウリジン、Ｃ５−プロピニル−ウリジン、Ｃ５−プロピニル−シチジン、Ｃ５−メチルシチジン、２−アミノアデノシン、７−デアザアデノシン、７−デアザグアノシン、８−オキソアデノシン、８−オキソグアノシン、Ｏ（６）−メチルグアニン、２−チオシチジン、メチル化塩基、インターカレートされた塩基、およびそれらの組み合わせ）であるか、それを含むか、またはそれからなる。いくつかの態様において、核酸は、天然核酸のものと比較して、１個またはそれ以上の修飾糖（例えば、２’−フルオロリボース、リボース、２’−デオキシリボース、アラビノース、およびヘキソース）を含む。いくつかの態様において、核酸は、ＲＮＡまたはタンパク質のような機能性遺伝子産物をコードするヌクレオチド配列を有する。いくつかの態様において、核酸は、１個またはそれ以上のイントロンを含む。いくつかの態様において、核酸は、天然の供給源からの単離、相補的テンプレートに基づく重合による酵素的合成（インビボまたはインビトロ）、組み換え細胞もしくはシステムにおける再生産、および化学合成の１つまたはそれ以上により調製される。いくつかの態様において、核酸は、少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２０、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、４７５、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、１５００、２０００、２５００、３０００、３５００、４０００、４５００、５０００またはそれ以上の残基長である。
【００６５】
患者：本明細書で用いる用語“患者”または“対象”は、治療剤が投与される、ヒトまたは任意の非ヒト動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、イヌ、ネコ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ウマまたは霊長動物）を意味する。多くの態様において、患者はヒトである。いくつかの態様において、患者は、疾患、障害または病状の診断または処置のために医療提供者に示されているヒトである。いくつかの態様において、患者は、疾患、障害または病状の１つまたはそれ以上の症状または特徴を示す。いくつかの態様において、患者は、疾患、障害または病状の任意の症状または特徴を示さない。いくつかの態様において、患者は、疾患、障害、または病状にかかりやすいか、またはその危険性を有する１つまたはそれ以上の特性を有する者である。
【００６６】
薬学的に許容される：本明細書で用いる用語“薬学的に許容される”は、妥当な医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激性、アレルギー性応答、または他の問題もしくは合併症なく、合理的な利益／リスク比に見合っている、ヒトおよび／または動物の組織と接触させて使用するのに適している薬剤を意味する。
【００６７】
ポリペプチド：本明細書で用いる用語“ポリペプチド”は、一般的に、少なくとも３個のアミノ酸のポリマーの、当該技術分野で認識される意味を有する。いくつかの態様において、この用語は、例えば、自己抗原ポリペプチド、ニコチンアセチルコリン受容体ポリペプチド、アロ抗原ポリペプチド等のような、特定の機能性ポリペプチドクラスを意味するために用いられる。このようなクラスの各々について、本明細書は、該クラス内の公知の例示的ポリペプチドのアミノ酸配列のいくつかの例を提供する。いくつかの態様において、かかる公知のポリペプチドは、該クラスのための対照ポリペプチドである。かかる態様において、用語“ポリペプチド”は、関連する対照ポリペプチドと有意な配列相同性または同一性を示すクラスの任意のメンバーを意味する。多くの態様において、かかるメンバーはまた、対照ポリペプチドと顕著な活性を共有する。例えば、いくつかの態様において、ポリペプチドメンバーは、少なくとも約３０−４０％、多くの場合、約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上である、対照ポリペプチドとの配列相同性または同一性の全体的な程度を示し、かつ／または顕著に高い、多くの場合、９０％あるいは９５％、９６％、９７％、９８％または９９％以上の配列同一性を示す、少なくとも１つの領域（すなわち、特徴的な配列要素をしばしば含む、保存領域）を含む。そのような保存領域は、通常、少なくとも３〜４個の、多くの場合、２０個まで、またはそれ以上のアミノ酸を含む。いくつかの態様において、保存領域は、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５またはそれ以上の連続するアミノ酸の少なくとも１つのストレッチを含む。
【００６８】
タンパク質：本明細書で用いる用語“タンパク質”は、ポリペプチド（すなわち、ペプチド結合により互いに結合されている少なくとも２個のアミノ酸の列）を意味する。タンパク質は、アミノ酸以外の部分を含んでよく（例えば、糖タンパク質、プロテオグリカンなどであってよく）、および／または他の処理もしくは修飾をされていてもよい。当業者は、“タンパク質”は、細胞によって生産される完全なポリペプチド鎖であってよいか（シグナル配列の有無にかかわらず）、またはその特徴的部分であってよいことを理解し得る。当業者は、タンパク質が、例えば、１つまたはそれ以上のジスルフィド結合によって結合されているか、または他の手段により連結されている、２以上のポリペプチド鎖を含むことがあり得ることを理解し得る。ポリペプチドは、Ｌ−アミノ酸、Ｄ−アミノ酸、または両方を含んでいてよく、当技術分野で公知の種々のアミノ酸修飾体または類縁体の何れかを含んでいてよい。有用な修飾としては、例えば、末端のアセチル化、アミド化、メチル化などが含まれる。いくつかの態様において、タンパク質は、天然アミノ酸、非天然アミノ酸、合成アミノ酸、およびそれらの組み合わせを含んでいてよい。用語“ペプチド”は、一般的に、約１００未満のアミノ酸長、約５０未満のアミノ酸長、２０未満のアミノ酸長、または１０未満のアミノ酸長の長さを有するポリペプチドを意味するために使用される。いくつかの態様において、タンパク質は、抗体、抗体断片、その生物学的に活性な部分、および／またはその特徴的部分である。
【００６９】
難治性：本明細書で用いる用語“難治性”とは、臨床の医療従事者によって通常観察される通り、提供される組成物の投与後に予期される臨床効果が得られない対象を意味する。
【００７０】
小分子：本明細書で用いる用語“小分子”は、生物学的プロセスの酵素基質または調節因子として機能し得る低分子量有機化合物を意味する。一般的に、“小分子”は、約５キロダルトン（ｋＤ）未満のサイズの分子である。いくつかの態様において、提供されるナノ粒子は、１つまたはそれ以上の小分子をさらに含む。いくつかの態様において、小分子は、約４ｋＤ未満、約３ｋＤ未満、約２ｋＤ未満、または約１ｋＤ未満である。いくつかの態様において、小分子は、約８００ダルトン（Ｄ）未満、約６００Ｄ未満、約５００Ｄ未満、約４００Ｄ未満、約３００Ｄ未満、約２００Ｄ未満、または約１００Ｄ未満である。いくつかの態様において、小分子は、約２０００ｇ／ｍｏｌ未満、約１５００ｇ／ｍｏｌ未満、約１０００ｇ／ｍｏｌ未満、約８００ｇ／ｍｏｌ未満、または約５００ｇ／ｍｏｌ未満である。いくつかの態様において、１つまたはそれ以上の小分子は、ナノ粒子内に封入されている。いくつかの態様において、小分子は、非重合性である。いくつかの態様において、本発明では、小分子は、タンパク質、ポリペプチド、オリゴペプチド、ペプチド、ポリヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、多糖類、糖タンパク質、プロテオグリカンなどではない。いくつかの態様において、小分子は治療剤である。いくつかの態様において、小分子はアジュバントである。いくつかの態様において、小分子は薬剤である。
【００７１】
安定性：用語“安定性”は、本明細書で組成物に適用するとき、組成物が、長期間に亘ってその物理的構造の一面またはそれ以上の面（例えば、大きさの範囲および／または粒子の分布）を維持することを意味する。いくつかの態様において、安定なナノ粒子組成物とは、その平均粒子径、最大粒径、粒径の範囲、および／または粒径の分布（すなわち、指定されたサイズを超える、および／または指定されたサイズの範囲外の粒子の割合）が、特定の条件下で長期間維持されるものである。いくつかの態様において、安定な提供される組成物とは、その生物学的に関連する活性が、長期間維持されるものである。いくつかの態様において、期間は、少なくとも約１時間である。いくつかの態様において、期間は、約５時間、約１０時間、約１日、約１週間、約２週間、約１ヶ月、約２ヶ月、約３ヶ月、約４ヶ月、約５ヶ月、約６ヶ月、約８ヶ月、約１０ヶ月、約１２ヶ月、約２４ヶ月、約３６ヶ月、またはそれ以上の長期である。いくつかの態様において、期間は、約１日から約２４ヶ月、約２週間から約１２ヶ月、約２ヶ月から約５ヶ月などの範囲内である。例えば、ナノ粒子の集合物が、長期貯蔵、温度変化、および／またはｐＨ変化にさらされるとき、組成物中のナノ粒子の大部分は、定められた範囲内の直径を維持し、該ナノ粒子組成物は安定である。いくつかの態様において、安定な組成物は、周囲環境下で安定である。いくつかの態様において、安定な組成物は、生物学的条件下（すなわち、リン酸緩衝生理食塩水中、３７℃）で安定である。
【００７２】
対象：本明細書で用いる用語“対象”は、ヒトまたは非ヒト動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、イヌ、ネコ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ウマまたは霊長動物）を意味する。ヒトは、出生前および出生後が含まれる。多くの態様において、対象はヒトである。対象は疾患の診断または処置のために医療従事者に提示されるヒトを意味する患者であってよい。対象は、疾患または障害に罹患するか、または罹患しやすいが、該疾患または障害の症状を示さなくてもよい。
【００７３】
実質的に：本明細書で用いる用語“実質的に”は、目的の特徴または特性の完全な、またはほぼ完全な範囲または程度を示す定性的状態を意味する。生物学の技術分野の当業者は、生物学的および化学的現象が、完了まで進む、および／または完全に進むもしくは達成されることは極希であり、または絶対的結果を回避することを理解し得る。従って、用語“実質的に”は、多くの生物学的および化学的現象に固有の完全性が全くないことを示すために本明細書で用いられる。
【００７４】
罹患：疾患、障害、または病状に“罹患”している個体は、それを有すると診断され、および／または疾患、障害、または病状の１またはそれ以上の症状または特徴を示すか、もしくは示している。
【００７５】
罹患しやすさ：疾患、障害、または病状に“罹患しやすい”個体は、疾患、障害、または病状を発症する危険性がある。いくつかの態様において、疾患、障害、または病状に罹患しやすい個体は、疾患、障害、または病状の何れの症状も示さない。いくつかの態様において、疾患、障害または病状に罹患しやすい個体は、疾患、障害、および／または病状を有すると診断されていない。いくつかの態様において、疾患、障害、または病状に罹患しやすい個体は、疾患、障害、または病状の発せ要に関連する条件に暴露された個体である。いくつかの態様において、疾患、障害、および／または病状を発症するリスクは、集団に基づくリスク（例えば、アレルギーを有する個体の家族など）である。
【００７６】
症状が軽減される：本発明では、特定の疾患、障害または病状の１またはそれ以上の症状が、程度（例えば、強度（intensity）、重篤度など）および／または頻度が低減されるとき、“症状が軽減される”。明確にするために、特定の症状の発症の遅延は、その症状の頻度を低減させる一形態とみなされる。
【００７７】
治療薬：本明細書で用いる語句“治療薬”は、対象に投与されたとき、治療効果を有し、かつ／または所望の生物学的および／または薬理学的効果をもたらす薬剤を意味する。いくつかの態様において、薬剤は、関連する集団へのその投与が、該薬物を投与された特定の対象が、所望のまたは有益な治療結果を経験するかどうかに関わらず、該集団における所望のまたは有益な治療結果と統計的に相関している場合、治療薬であると考えられる。
【００７８】
治療的有効量：本明細書で用いる用語“治療的有効量”は、疾患、障害、および／または病状（例えば、アレルギー）を処置するために、治療的投与レジメンにより疾患、障害、および／または病状に罹患しているか、または罹患しやすい集団に対して投与されるとき、十分な量を意味する。いくつかの態様において、治療的有効量は、疾患、障害、および／または病状の１またはそれ以上の症状の発生および／または重症度を低減する量、および／またはそれらの発症を遅延する量である。当業者は、用語“治療的有効量”が、実際には、特定の個体において達成される成功裏の処置を必要としないことを理解し得る。むしろ、治療的有効量は、そのような処置を必要とする患者に投与されるとき、かなりの数の対象に特定の所望の薬理学的応答を提供する量であり得る。特定の対象が、実際には、“治療的有効量”に対して“難治性”であってもよいことが特に理解される。一例としては、難治性対象は、臨床効果が得られないような低バイオアベイラビリティを有し得る。いくつかの態様において、治療的有効量への言及は、１以上の特定の組織（例えば、疾患、障害または病状の影響を受けた組織）または体液（例えば、血液、唾液、血清、汗、涙、尿など）中で測定された量を基準とし得る。当業者は、いくつかの態様において、治療的に有効な薬剤が、処方され得る、および／または単回用量で投与され得ることを理解し得る。いくつかの態様において、治療的に有効な薬剤は、処方され得て、および／または、例えば、投与レジメンの一部として、複数の用量で投与され得る。
【００７９】
治療レジメン：本明細書で用いる用語“治療レジメン”は、関連する集団全体への投与が、所望の、または有益な治療結果と相関している投与レジメンを意味する。
【００８０】
処置：本明細書で用いる用語“処置”（また、“処置する”または“処置の”）は、特定の疾患、障害、および／または病状の１またはそれ以上の症状、特徴、および／または原因を、部分的または完全に軽減し、改善し、回復（relive）し、阻害し、発症を遅延させ、重篤度を軽減し、および／または頻度、発生率もしくは重症度を低減させる物質の投与を意味する。このような処置は、関連する疾患、障害および／または病状の兆候を示さない対象、および／または疾患、障害および／または病状の初期兆候のみを示す対象の処置であり得る。あるいは、またはさらに、かかる処置は、関連する疾患、障害および／または病状の１またはそれ以上の確立された徴候を示す対象の処置であり得る。いくつかの態様において、処置は、関連する疾患、障害および／または病状に罹患していると診断された対象の処置であり得る。いくつかの態様において、処置は、関連する疾患、障害、および／または病状の増加した発症リスクと統計学的に相関している１またはそれ以上の感受性因子を有することが知られている対象の処置であり得る。
【００８１】
均一：ナノ粒子組成物への言及において本明細書で用いる用語“均一”は、個々のナノ粒子が記載される範囲内の直径を有するようなナノ粒子組成物を意味する。例えば、いくつかの態様において、均一なナノ粒子組成物は、最小直径と最大直径との差が約３００ｎｍを超えないものである。いくつかの態様において、均一なナノ粒子組成物は、約１００ｎｍから約３００ｎｍの範囲内の直径を有するナノ粒子を含む。いくつかの態様において、均一なナノ粒子組成物は、約５００ｎｍ未満の平均粒子サイズを有するナノ粒子を含む。いくつかの態様において、均一なナノ粒子組成物は、約１００ｎｍから約５００ｎｍの範囲内の平均粒子サイズを有するナノ粒子を含む。いくつかの態様において、均一なナノ粒子組成物は、組成物内の粒子の大部分が、記載されるサイズ以下、または記載される範囲内の直径を有するものである。いくつかの態様において、大部分とは、組成物中の粒子の、５０％以上、６０％以上、７０％以上、７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上、９９．５％以上、９９．６％以上、９９．７％以上、９９．８％以上、９９．９％以上またはそれ以上である。
【００８２】
ある種の態様の詳細な説明
本発明は、一部には、所望の免疫調節組成物が、特定のナノ粒子の特徴を微生物細胞の細胞成分と共に組み合わせることにより調製され得るという驚くべき見識に基づく。本発明は、かかる免疫調節組成物が、親水性もしくは疎水性のいずれかの微生物細胞成分、または両方を含む調製物を用いて調製され得るという特定の見識を提供する。いくつかの特定の態様において、本発明は、所望の免疫調節組成物が、ナノ粒子内に親水性の微生物細胞成分を封入し、および／またはナノ粒子の外表面に疎水性の微生物細胞成分を結合させることにより調製され得るという見識を提供する。
【００８３】
ナノ粒子
本発明の有用なナノ粒子は、ナノ粒子が、内腔内側に結合し、外表面を有するミセルに組み立てられた少なくとも１つのポリマーから構成されるものを含む。いくつかの態様において、ナノ粒子は、ホモポリマー、ジブロック、トリブロックポリマー、マルチブロックコポリマー、線形ポリマー、デンドロン化ポリマー、ブランチポリマー、ランダムブロックなど、またはそれらの組み合わせである少なくとも１つのポリマーから構成されている。いくつかの態様において、ナノ粒子は、ポリマーの混合物(blend and／or mixture)から構成されている。
【００８４】
いくつかの態様において、ナノ粒子は、１つまたはそれ以上の生体適合性ポリマーおよび／または１つまたはそれ以上の生分解性ポリマーから構成されている。いくつかの態様において、ナノ粒子は、１つまたはそれ以上の合成ポリマー、またはその誘導体から構成されている。いくつかの態様において、ナノ粒子は、１つまたはそれ以上の天然ポリマー、またはその誘導体から構成されている。いくつかの態様において、ナノ粒子は、合成および天然ポリマー、またはそれらの誘導体の組み合わせから構成されている。
【００８５】
いくつかの態様において、ナノ粒子は、ポリ（ヒドロキシ酸）、例えば、ポリ（乳酸）、ポリ（グリコール酸）、ポリ（乳酸−コ−グリコール酸）、ポリ（乳酸−コ−グリコール酸）、およびポリ（乳酸−コ−グリコール酸）の誘導体、ＰＥＧ化ポリ（乳酸−コ−グリコール酸）、ポリ（ラクチド）、ポリ（グリコリド）、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）、ポリ（無水物）、ＰＥＧ化ポリ（無水物）、ポリ（オルトエステル）、ポリ（オルトエステル）の誘導体、ＰＥＧ化ポリ（オルトエステル）、ポリ（カプロラクトン）、ポリ（カプロラクトン）の誘導体、ＰＥＧ化ポリ（カプロラクトン）、ポリアミン（例えば、スペルミン、スペルミジン、ポリリシン、およびそれらの誘導体）、ＰＥＧ化ポリリシン、ポリアミド、ポリカーボネート、ポリ（プロピレンフマレート）、ポリアミド、ポリホスファゼン、ポリアミノ酸、ポリエーテル、ポリアセタール、ポリラクチド、ポリヒドロキシアルカノエート、ポリグリコリド、ポリケタール、ポリエステルアミド、ポリ（ジオキサノン）、ポリヒドロキシブチレート、ポリヒドロキシバレラート、ポリカーボネート、ポリオルトカーボネート、ポリ（ビニルピロリドン）、ポリシアノアクリレート、ポリアルキレンオキサレート、ポリアルキレンサクシネート、ポリ（リンゴ酸）、ポリ（メチルビニルエーテル）、ポリ（エチレンイミン）、ポリ（アクリル酸）、ポリ（マレイン無水物）、ポリ（エチレンイミン）、ポリ（エチレンイミン）の誘導体、ＰＥＧ化ポリ（エチレンイミン）、ポリ（アクリル酸）、ポリ（アクリル酸）の誘導体、ＰＥＧ化ポリ（アクリル酸）、ポリ（ウレタン）、ＰＥＧ化ポリ（ウレタン）、ポリ（ウレタン）の誘導体、ポリ（ラクチド）、ポリ（グリコリド）、ポリ（ヒドロキシ酸）、ポリエステル、ポリ（アリレート）、ポリエチレンおよびポリプロピレンのようなポリアルキレン類、ポリ（エチレングリコール）のようなポリアルキレングリコール類、ポリ（エチレンオキシド）のようなポリアルキレンオキシド類、ポリ（エチレンテレフタレート）のようなポリアルキレンエチレンテレフタレート類、ポリビニルアルコール類、ポリビニルエーテル類、ポリビニルエステル類、ポリ（塩化ビニル）のようなハロゲン化ポリビニル、ポリビニルピロリドン、ポリシロキサン、ポリ（塩化ビニル）、ポリ（酢酸ビニル）、ポリスチレン、ポリウレタンおよびそのコポリマー、誘導体化セルロース、例えばアルキルセルロース、ヒドロキシアルキルセルロース、セルロースエーテル、セルロースエステル、ニトロセルロース、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシ−プロピルメチルセルロース、ヒドロキシブチルメチルセルロース、酢酸セルロース、セルロースプロピオネート、セルロースアセテートブチレート、セルロースアセテートフタレート、カルボキシルエチルセルロース、セルローストリアセテート、および硫酸セルロースナトリウム塩（まとめて、“合成セルロース”とも言う）、アクリル酸のポリマー、メタクリル酸またはそのコポリマーまたはエステルを含むその誘導体、ポリ（メチルメタクリレート）、ポリ（エチルメタクリレート）、ポリ（ブチルメタクリレート）、ポリ（イソブチルメタクリレート）、ポリ（ヘキシルメタクリレート）、ポリ（イソデシルメタクリレート）、ポリ（ラウリルメタクリレート）、ポリ（フェニルメタクリレート）、ポリ（メチルアクリレート）、ポリ（イソプロピルアクリレート）、ポリ（イソブチルアクリレート）、およびポリ（オクタデシルアクリレート）（まとめて、“ポリアクリル酸”とも言う）、ポリ（酪酸）、ポリ（吉草酸）、およびポリ（ラクチド−コ−カプロラクトン）および／またはそれらの誘導体からなる群より選択される１つまたはそれ以上のポリマーから構成されている。
【００８６】
いくつかの態様において、ナノ粒子は、１つまたはそれ以上のアクリル系ポリマーから構成されている。特定の態様において、アクリルポリマーは、例えば、アクリル酸およびメタクリル酸コポリマー、メチルメタクリレートコポリマー、エトキシエチルメタクリレート、シアノエチルメタクリレート、アミノアルキルメタクリレートコポリマー、ポリ（アクリル酸）、ポリ（メタクリル酸）、メタクリル酸アルキルアミドコポリマー、ポリ（メチルメタクリレート）、ポリ（メタクリル酸無水物）、メタクリル酸メチル、ポリメタクリレート、ポリ（メチルメタクリレート）コポリマー、ポリアクリルアミド、アミノアルキルメタクリレートコポリマー、グリシジルメタクリレートコポリマー、ポリシアノアクリレート、および／またはそれらの組み合わせから構成されている。
【００８７】
いくつかの態様において、ナノ粒子は、１種またはそれ以上の天然ポリマーから構成される。天然ポリマーの例としては、タンパク質（例えば、アルブミン、コラーゲン、ゼラチン）、プロラミン（例えば、ゼイン）、多糖類（例えば、アルギン酸塩）、セルロース誘導体（例えば、ヒドロキシプロピルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、エチルセルロースおよびセルロースアセテート）、ポリヒドロキシアルカノエート（例えば、ポリヒドロキシブチレート）、および／またはそれらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。いくつかの態様において、天然ポリマーは、キトサンを含んでいても、またはそれから構成されてもよい。
【００８８】
いくつかの態様において、ナノ粒子は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）と共重合したポリ（ラクチド−コ−グリコリド）のような、１種またはそれ以上のポリマーから構成されている。特定の理論はともかく、ＰＥＧが外表面に露出するようにしたナノ粒子の配置は、おそらく、少なくとも部分的には、ＰＥＧの親水性のために、血液中のナノ粒子の安定性を増大させることができることが提案される。
【００８９】
いくつかの特定の態様において、ナノ粒子はＰＬＧＡから構成されている。
【００９０】
いくつかの特定の態様において、本発明の有用なナノ粒子は、米国特許第７，５３４，４４８号、米国特許第７，５３４，４４９号、米国特許第７，５５０，１５４号、ＵＳ２００９０２３９７８９Ａ１、ＵＳ２００９０２６９３９７Ａ１、ＵＳ２０１００１０４５０３Ａ１、ＵＳ２０１００１５１４３６Ａ１、ＵＳ２０１００２８４９６５Ａ１、ＷＯ２００６０８０９５１、ＷＯ２００８１１５６４１、ＷＯ２００８１０９３４７、ＷＯ２００９０９４２７３、ＷＯ２０１２１６７２６１およびＷＯ２０１３００３１５７の１つまたはそれ以上に記載されている。
【００９１】
一般的に、ナノ粒子は、１０００ナノメートル（ｎｍ）未満の直径（例えば、平均直径）を有する粒子であるか、またはそれを含む。いくつかの態様において、提供されるナノ粒子組成物は、ナノ粒子の集団を含む。いくつかの態様において、ナノ粒子の集団は、均一なサイズのナノ粒子を含む。いくつかの態様において、ナノ粒子の集団は、異なるサイズのナノ粒子を含む。いくつかの態様において、特定のサイズ分布が示される。多くの態様において、提供されるナノ粒子組成物は、下限と上限によって定義された範囲内のサイズ（例えば、平均サイズ）を有するナノ粒子を含む。いくつかの態様において、下限は、５ｎｍ、１０ｎｍ、１５ｎｍ、２０ｎｍ、２５ｎｍ、３０ｎｍ、３５ｎｍ、４０ｎｍ、４５ｎｍ、５０ｎｍ、５５ｎｍ、６０ｎｍ、６５ｎｍ、７０ｎｍ、７５ｎｍ、８０ｎｍ、８５ｎｍ、９０ｎｍ、９５ｎｍ、１００ｎｍ、１５０ｎｍ、２００ｎｍ、またはそれ以上である。いくつかの態様において、上限は、１０００ｎｍ、９５０ｎｍ、９００ｎｍ、８５０ｎｍ、８００ｎｍ、７５０ｎｍ、７００ｎｍ、６５０ｎｍ、６００ｎｍ、５５０ｎｍ、５００ｎｍ、４５０ｎｍ、４００ｎｍ、３５０ｎｍ、３００ｎｍ、２５０ｎｍまたはそれ以下である。いくつかの態様において、提供されるナノ粒子組成物は、細菌細胞サイズと同程度のサイズ（例えば、平均サイズ）を有するナノ粒子を含む。例えば、いくつかの態様において、提供されるナノ粒子組成物は、１００ｎｍから２０００ｎｍ、１００ｎｍから１０００ｎｍ、１００ｎｍから約５００ｎｍ、１００ｎｍから約３００ｎｍ、または１００ｎｍから約２００ｎｍの範囲のサイズ（例えば、平均サイズ）を有するナノ粒子を含む。
【００９２】
いくつかの態様において、提供されるナノ粒子組成物は、約２０００ｎｍ以上、約１０００ｎｍ以上、約９００ｎｍ以上、約８００ｎｍ以上、約７００ｎｍ以上、約６００ｎｍ以上、約５００ｎｍ以上、約４００ｎｍ以上、または約３００ｎｍ以上の粒子を実質的に含まない。いくつかの態様において、提供されるナノ粒子組成物は、約２０００ｎｍ、約１０００ｎｍ、約９００ｎｍ、約８００ｎｍ、約７００ｎｍ、約６００ｎｍ、約５００ｎｍ、約４００ｎｍ、または約３００ｎｍ以上の粒子を、約５０％以下、約２５％以下、約１０％以下、約５％以下、または約１％以下で含む。
【００９３】
ナノ粒子−製造方法の例
別の面において、本発明は、ナノ粒子の製造方法を提供する。いくつかの態様において、例えば、ナノ粒子が１つまたはそれ以上の親水性細胞成分（複数可）および疎水性細胞成分（複数可）である態様において、提供されるナノ粒子の製造方法は、分離、結合、成形、エマルジョン化、溶融押出法、溶媒除去法、スプレー乾燥法、および／またはイオン性ゲル化工程、およびそれらの組み合わせの１つまたはそれ以上を含む。
【００９４】
成形
いくつかの態様において、提供されるナノ粒子は、当技術分野で利用可能な方法を用いて形成され得る。いくつかの態様において、提供されるナノ粒子および／またはナノ粒子組成物は、ナノ析出法、流体チャネルを用いるフローフォーカッシング、スプレー乾燥法、シングルおよびダブルエマルジョン溶媒蒸発、溶媒抽出、相分離、溶融マイクロカプセル化、ミリング、マイクロエマルジョン法、マイクロファブリケーション法、ナノファブリケーション法、犠牲層法、単純および複合コアセルベーション、ならびに当業者に周知の他の方法により調製され得る。いくつかの態様において、提供されるナノ粒子組成物は、水性および有機溶媒合成により調製される（例えば、Pellegrino et al., 2005, Small, 1:48; Murray et al., 2000, Ann. Rev. Mat. Sci., 30:545; and Trindade et al., 2001, Chem. Mat., 13:3843を参照のこと）。いくつかの態様において、提供されるナノ粒子組成物は、ナノ析出法またはスプレー乾燥法により調製される。粒子の調製に用いられる条件は、所望のサイズまたは特性（例えば、疎水性、親水性、外部形態、“粘着性”、形状など）の粒子を得るために変更され得る。一般的に、ナノ粒子の調製方法および／または用いる条件（例えば、溶媒、温度、濃度、空気流速など）は、粒子および／またはポリマーマトリックスの組成物と関連付けられた機能的要素（例えば、細胞溶解物成分）の同一性によって変えてよい。
【００９５】
いくつかの態様において、封入された薬物の送達のためのナノ粒子を作製するためのさらなる方法は、文献に記載されている（例えば、Doubrow, Ed., “Microcapsules and Nanoparticles in Medicine and Pharmacy,” CRC Press, Boca Raton, 1992; Mathiowitz et al., 1987, J. Control. Release, 5:13; Mathiowitz et al., 1987, Reactive Polymers, 6:275;および Mathiowitz et al., 1988, J. Appl. Polymer Sci., 35:755を参照のこと）。
【００９６】
製造方法−抗原を含むもの
いくつかの態様において、提供される方法は、抗原とナノ粒子を結合させる工程をさらに含む。好適な抗原および／または抗原抽出物は、本明細書に記載のものを含み得る。いくつかの態様において、抗原は病原体抗原である。いくつかの態様において、病原体抗原は、病原体の１つまたはそれ以上のさらなる成分を含んで提供される。いくつかの態様において、抗原は、そのままか、または粗製抗原もしくはアレルゲン性抽出物（例えば、塵ダニ抽出物または生のナッツ抽出物）の一部である。
【００９７】
いくつかの態様において、提供される方法は、抗原を、いくつか、または全ての抗原が、内腔内にカプセル化されるように、親水性および／または疎水性細胞成分のいずれか、または両方と結合させる工程をさらに含む。いくつかの態様において、１つまたはそれ以上の抗原は、いくつか、または全ての抗原が、内腔内にカプセル化されるように、親水性細胞成分と結合される。いくつかの態様において、１つまたはそれ以上の抗原は、いくつか、または全ての抗原が、内腔内にカプセル化されるように、疎水性細胞成分と結合される。
【００９８】
いくつかの態様のみのより詳細な例としては、ナノ粒子を形成するためのダブルエマルジョン、溶融カプセル化、溶媒除去、スプレー乾燥、およびイオン性ゲル化法のような特定の方法の使用が提供される。ナノ粒子を形成するための例示的方法は、Demento et al., “TLR9−Targeted Biodegradable Nanoparticlesas Immunization Vectors Protect Against West Nile Encephalitis”, 2010, J. Immunol. 185:2989−2997に見出すことができ、また、Demento et al., “Inflammasome−activating nanoparticles as modular systems for optimizing vaccine efficacy”, 2009, Vaccine 27(23): 3013−3021も参照のこと。
【００９９】
エマルジョン
いくつかの態様において、ポリマーを、塩化メチレンのような揮発性有機溶媒に溶解する。ペイロード（可溶性であるか、または微粒子として分散している）を該溶液に添加し、混合物を、ポリ（ビニルアルコール）のような界面活性剤を含む水溶液中に懸濁させる。得られたエマルジョンを、ほとんどの有機溶媒が蒸発するまで撹拌し、固体のナノ粒子を得る。得られたナノ粒子を水で洗浄し、凍結乾燥機中で一晩乾燥させる。その後、凍結乾燥させたナノ粒子を、後の使用のために−２０℃で貯蔵してよい。
【０１００】
いくつかの態様において、水中油中水型（Ｗ／Ｏ／Ｗ）エマルジョン法は、ナノ粒子の調製に使用され得る。いくつかの態様において、ナノ粒子は、１つまたはそれ以上の親水性細胞成分を含む。例えば、第一のエマルジョン（Ｗ／Ｏ）において、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中の水性細胞成分を、ＰＬＧＡを塩化メチレンに溶解した溶液中にボルテックスしながら添加する。次に、ポリマーおよび水性細胞溶解物の第一のエマルジョンを、第二のエマルジョン（Ｗ／Ｏ／Ｗ）中のＰＶＡに滴下する。各エマルジョン後、サンプルを氷上で３０秒間超音波処理する。その後、第二のエマルジョンを０．３％ＰＶＡに速やかに添加する。次に、この外相を一定の室温で３時間激しく撹拌して、塩化メチレンを蒸発させ、固体のナノ粒子を得る。粒子を遠心分離により集める。得られたナノ粒子を脱イオン水で洗浄し、急速冷凍し、凍結乾燥させて、その後の使用のために−２０℃で貯蔵する。
【０１０１】
いくつかの態様において、ナノ粒子は、１つまたはそれ以上の疎水性細胞成分を含む。疎水性細胞成分（複数可）を、初めに、第二のエマルジョンと合わせる。その後、ポリマー（水性細胞溶解物および／または抗原を含有または不含有）の第一のエマルジョンを、該第二のエマルジョン（Ｗ／Ｏ／Ｗ）に滴下する。
【０１０２】
いくつかの態様において、ナノ粒子は１つまたはそれ以上の封入された抗原（例えば、塵ダニまたはピーナッツのようなアレルゲン抽出物）をさらに含む。第一のエマルジョン（Ｗ／Ｏ）中、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中の濃縮抗原を、ＰＬＧＡを塩化メチレンに溶解した溶液中にボルテックスしながら添加する。いくつかの態様において、水性細胞溶解物を第一のエマルジョンと合わせる。その後、ポリマーおよび封入された物質を第二のエマルジョン（Ｗ／Ｏ／Ｗ）に滴下する。いくつかの態様において、第二のエマルジョンは、１つまたはそれ以上の疎水性細胞成分と組み合わされている。各エマルジョン後、サンプルを氷上で３０秒間超音波処理する。次に、第二のエマルジョンを０．３％ＰＶＡに迅速に添加する。その後、この外相を一定の室温で３時間激しく撹拌して、塩化メチレンを蒸発させ、固体のナノ粒子を得る。粒子を遠心分離により集める。得られたナノ粒子を脱イオン水で洗浄し、急速冷凍し、凍結乾燥させて、その後の使用のために−２０℃で貯蔵する。
【０１０３】
溶融マイクロカプセル化
この方法において、初めに、ポリマーを溶融し、その後、固体の粒子と混合する。混合物を非混和性溶媒（シリコンオイルなど）中に懸濁し、そして、撹拌しながら、例えば、ポリマーの融点より５℃高い温度まで加熱する。一旦、エマルジョンが安定化されると、それをポリマー粒子が固化するまで冷却する。得られたナノ粒子を石油エーテルでデカンテーションして洗浄して、流動性粉末を得る。０．５から１０００ミクロンのサイズのナノ粒子がこの方法により得られる。この技術を用いて調製したナノ粒子の外表面は、通常、滑らかで、高密度である。この手順は、ポリエステルおよびポリ無水物からなるナノ粒子を調製するために用いられる。いくつかの態様において、そのような方法は、１，０００−５０，０００の分子量を有するポリマーを用いることができる。
【０１０４】
溶媒除去
この技術は、主に、公知の方法により、ポリ無水物のために設計されている。いくつかの態様において、カプセル化されるべきペイロード（例えば、塵ダニまたはピーナッツのようなアレルゲン抽出物）を、塩化メチレンのような揮発性有機溶媒中の選択されたポリマーの溶液中に分散するか、または溶解する。この混合物を、有機油状物（シリコンオイルなど）中に撹拌することにより懸濁して、エマルジョンを形成する。溶媒蒸発とは異なり、この方法は、高融点および異なる分子量を有するポリマーからナノ粒子を作製するために用いられ得る。この技術を用いて製造されたナノ粒子の外部形態は、用いるポリマーの種類によって大きく変わる。
【０１０５】
スプレー乾燥
いくつかの態様において、この方法を用いて、ポリマーを有機溶媒中に溶解する。既知量のペイロード（例えば、塵ダニまたはピーナッツのようなアレルゲン抽出物）を、ポリマー溶液中に懸濁するか（不溶性抽出物）、または共溶解する。その後、溶液または分散液をスプレー乾燥させる。ミニ−スプレー乾燥機（Ｂｕｃｈｉ）用の典型的な処理パラメータは、以下の通りである。ポリマー濃度＝０．０４ｇ／ｍＬ、入り口温度＝−２４℃、出口温度＝１３−１５℃、アスピレーター設定＝１５、ポンプ設定＝１０ｍＬ／分、噴霧流速＝６００Ｎｌ／ｈｒ、およびノズル径＝０．５ｍｍ。
【０１０６】
イオン性ゲル化
いくつかの態様において、例えば、アルギン酸塩などのゲルタイプのポリマーからなるナノ粒子を含むものなどにおいて、従来のイオン性ゲル化技術を用いることができる。典型的には、初めに、ポリマー（複数可）を水溶液中に溶解し、硫酸バリウムまたはいくつかの生物活性物質と混合し、その後、いくつかの例では、液滴を断つために窒素ガス流を用いる、ナノドロップレット形成装置を通して押し出す。ゆっくりと撹拌する（およそ１００−１７０ＲＰＭ）イオン硬化浴が、形成するナノ液滴をキャッチするために押出装置の下に配置されている。ナノ粒子は、ゲル化が起こるのに十分な時間を可能にするために２０〜３０分間浴中でインキュベートされたままである。ナノ粒子のサイズは、種々のサイズの押出機を用いるか、または窒素ガスもしくはポリマー溶液の流量のいずれかを変化させることによって制御される。キトサンナノ粒子は、酸性溶液中でポリマーを溶解し、それをトリポリホスフェートと架橋することによって調製できる。カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）ナノ粒子は、酸性溶液中にポリマーを溶解し、鉛イオンを用いてナノ粒子を沈殿させることによって調製することができる。負に帯電したポリマー（例えば、アルギン酸塩、ＣＭＣ）の場合、異なる分子量の正に帯電したリガンド（例えば、ポリリシン、ポリエチレンイミン）をイオン結合させることができる。
【０１０７】
微生物細胞成分
本明細書に記載の通り、本発明は、親水性細胞成分の調製物および／または疎水性細胞成分の調製物が製造されて、かかる調製物の一方または両方がナノ粒子と結合されて、本発明のナノ粒子組成物を製造するように、溶解物のような微生物細胞調製物の親水性成分および親水性成分が互いに分離されているとき、特定の利点が達成されるという認識を包含する。
【０１０８】
いくつかの態様において、親水性細胞成分調製物および疎水性細胞成分調製物の１つまたはそれ以上は、微生物細胞溶解物から提供され得る。かかる態様において、親水性細胞成分は、微生物親水性細胞成分と称されてよく、疎水性細胞成分は、微生物疎水性細胞成分と称されてよい。特定の理論はともかく、微生物親水性細胞成分および／または微生物疎水性細胞成分の１つまたはそれ以上を含む本発明のいくつかの態様は、それらが、ヒトまたは動物の免疫反応を調節するか、または回避する能力に関係する微生物細胞の種々の進化した属性を利用するため、少なくとも部分的に、有用な免疫調節性ナノ粒子組成物の開発および／または製造を可能にする。本発明はまた、そのような進化した属性を特定のナノ粒子システムの種々の特徴、例えば、免疫系要素由来の抗原および／または細胞性親水性成分を隔離する能力（例えば、ナノ粒子の内腔内に封入することにより）、分解速度および／または局在を調節可能な能力、および／または標的化と関連するモジュール、アジュバントまたは他の表面成分を調節可能な能力と組み合わせることは、特に、有用な免疫調節組成物の開発および／または製造を可能にするという考察も含んでいる。
【０１０９】
本発明は、免疫調節組成物を提供する種々の先行技術の手法の問題点の原因を認識する。具体的には、本発明は、純粋な成分、特に、純粋なアジュバント成分の使用が、複数の成分の集合物、特に、かかる微生物細胞中に見出される絶対量および／または相対量を模倣するか、またはそれを含む集合物によって達成される特定の免疫学的効果を含むいくつかの利点を失うという認識を含む。いくつかの態様において、本発明は、単離された個々の微生物成分（例えば、特定のＣｐＧおよび／またはＬＰＳ分子）の使用は、複数の成分を含む抽出物を用いて達成され得る、可能な限り広範な、または有効な免疫応答を誘導するのを失敗する可能性があるという認識を含み、いくつかの態様において、天然に見出されるおよその相対量で複数の成分が存在する。
【０１１０】
いくつかの態様において、本発明は、微生物抽出物−例えば、ナノ粒子組成物中に、またはそれに使用するための微生物細胞の親水性または疎水性抽出物を提供する。いくつかの態様において、かかる微生物抽出物は、それらが他の包含される成分と結合し、そして抽出物の製造時に除かれた成分とは結合しないように、化学的特徴を共有する微生物成分の集合物を含んでいてよい。いくつかの態様において、抽出物は、それらが細胞中に存在する時に匹敵する相対レベルで、少なくともいくつかの細胞成分を含んでいてよい。当業者は、特定の成分の存在および／またはレベルを決定し、そのように決定されたレベルを無傷の細胞において観察されるレベルと比較するために利用可能な種々の技術を知っているであろう。さらに、当業者は、合理的かつ予期される実験的変動を容易に理解し、それ故に、成分が、それらが細胞中に存在するときのレベルまたは濃度に合理的に匹敵する、抽出物の絶対的または相対的レベルまたは濃度で存在するかどうかを決定することができる。
【０１１１】
一般的に、微生物抽出物は、微生物細胞調製物から製造される。微生物細胞調製物は、所望のレベル（例えば、光学密度、濃度、コロニーサイズ、総タンパク質、総ＤＮＡ、およびコロニー形成単位）の細胞増殖を達成するのに十分な期間および条件下で微生物細胞を培養することにより製造される。いくつかの態様において、微生物細胞調製物は、無傷の細胞を含有し、そして要すれば、溶解した細胞を実質的に含まない。いくつかの態様において、微生物細胞調製物は、溶解した細胞を含み、要すれば、無傷の細胞を実質的に含まない。
【０１１２】
いくつかの態様において、本発明は、親水性微生物抽出物、例えば、親水性溶媒の溶液中に親水性細胞成分を分配するように、微生物細胞調製物を親水性溶媒と接触させることにより調製される抽出物を提供する。次いで、親水性溶媒を、例えば、沈殿させることができるか、疎水性溶媒中に可溶化できるか（要すれば、親水性溶媒と混和性ではない）、あるいは親水性溶媒から分離可能な、非可溶化成分から分離することができる。いくつかの態様において、親水性溶媒へ分配する親水性細胞成分には、例えば、かかる溶媒に混和性および／または可溶性の成分が含まれる。
【０１１３】
分離
種々の分離方法のいずれかが、疎水性細胞成分から親水性細胞成分を分離するために使用可能である。好適な方法の例としては、溶媒抽出、界面活性剤抽出、相分離が含まれる。
【０１１４】
親水性細胞抽出物の特定の態様に見出され得る親水性成分の例としては、細胞質成分；糖類を含む炭水化物；両親媒性分子（例えば、糖脂質および／またはリポタンパク質）；塩；可溶性タンパク質（すなわち、極性タンパク質）；核酸（例えば、ＤＮＡおよび／またはＲＮＡ）；および／またはそれらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。いくつかの態様において、親水性細胞抽出物には、断片化されたＤＮＡまたはＲＮＡが含まれる。いくつかの態様において、親水性細胞抽出物には、リポ多糖（ＬＰＳ）が含まれる。いくつかの態様において、親水性細胞抽出物には、１つまたはそれ以上のＣｐＧが含まれる。いくつかの態様において、親水性細胞抽出物は、膜脂質または膜タンパク質を実質的に含まない。
【０１１５】
いくつかの態様において、本発明は、疎水性微生物抽出物、例えば、疎水性溶媒の溶液中に疎水性細胞成分を分配するように、微生物細胞調製物を疎水性溶媒と接触させることにより調製される抽出物を提供する。次いで、疎水性溶媒を、例えば、沈殿させることができるか、親水性溶媒中に可溶化できるか（要すれば、疎水性溶媒と混和性ではない）、あるいは疎水性溶媒から分離可能な、非可溶化成分から分離することができる。いくつかの態様において、疎水性溶媒へ分配する疎水性細胞成分には、該溶媒に混和性および／または可溶性の成分が含まれる。いくつかの態様において、かかる疎水性細胞成分には、水および／または他の水性溶媒に非混和性および／または不溶性の成分が含まれる。
【０１１６】
疎水性細胞抽出物のいくつかの態様において見出され得る成分の例には、細胞膜成分；特定の糖タンパク質および／または糖脂質を含む特定の炭水化物；特定の糖タンパク質、膜貫通タンパク質、脂質アンカー型タンパク質（すなわち、非極性タンパク質）を含む特定のタンパク質；リン脂質、糖脂質、およびコレステロールを含む脂質；および／またはそれらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。いくつかの態様において、疎水性細胞抽出物には、リポ多糖（ＬＰＳ）が含まれる。いくつかの態様において、疎水性細胞抽出物は、専ら細胞質に見出される成分（例えば、親水性タンパク質、ＤＮＡ、およびＲＮＡ）を実質的に含まない。
【０１１７】
いくつかの態様において、親水性抽出物は、疎水性成分を実質的に含まない。いくつかの態様において、疎水性抽出物は、親水性成分を実質的に含まない。しかしながら、当業者には理解され得る通り、抽出調製物による細胞成分の分離は、多くの場合、完全ではない。すなわち、いくつかの態様において、少なくともいくつかの細胞成分は、親水性および疎水性抽出物中に実質的に均等に分配され得る。他の成分は、都合よく、１つまたは他の親水性および疎水性抽出物を排除することなく分配され得る。いくつかの態様において、例えば、特定の膜貫通タンパク質、糖脂質および／またはリポタンパク質、ＬＰＳなど、およびそれらの組み合わせのような両親媒性成分が、いくつかを例として挙げられる。
【０１１８】
本発明に用いるための微生物抽出物は、何れかの微生物細胞の抽出物、またはそれらの組み合わせから調製され得る。いくつかの態様において、微生物抽出物は、細菌、真菌、古細菌および／またはプロテスト（protest）細胞、またはそれらの組み合わせから調製される。
【０１１９】
いくつかの態様において、微生物抽出物は、アクチノマイセス属、エロモナス属、アナベナ属、アルスロバクター属、バチルス属、バクテロイデス属、ブデロビブリオ属、ボルデテラ属、ボレリア属、カンピロバクター属、カウロバクター属、クラミジア科、クロロビウム門、クロマチウム属、シトロバクター属、クロストリジウム属、コリネバクテリウム属、サイトファガ属、デイノコックス属、エンテロバクター属、大腸菌、フランシセラ属、ハロバクテリウム属、ヘリコバクター属、ヘモフィラス属、ヘモフィラスインフルエンザＢ型（ＨＩＢ）、ハイフォミクロビウム属、クレブシエラ属、ラクトコッカス属、レジオネラ属、レプトスピラ属（Leptspirosis）、リステリア属、Ａ、ＢおよびＣ群の髄膜炎菌（Meningococcus）、メタノバクテリウム、ミクロコッカス、モルガネラ属、マイコバクテリウム属、マイコプラズマ、ミクソコッカス、ナイセリア、ニトロバクター属、オシラトリア属、ペプトコッカス属、ロドスピリラム属、プレシオモナス、プロクロロン属、プロテウス属、プロビデンシア属、シュードモナス属、リケッチア属、サルモネラ属、セラチア属、シゲラ属、スピリルム属、スピロヘータ属スポロラクトバチルス属、ブドウ球菌属、レンサ球菌属、ストレプトマイセス属、スルフォロブス属、テルモプラズマ属、チオバシラス属、およびトレポネーマ（Treponema）、ビブリオ属、エルシニア属、およびそれらの組み合わせを含むが、これらに限定されない細菌細胞から調製され得る。いくつかの態様において、微生物抽出物は、大腸菌細胞から調製され得る。
【０１２０】
いくつかの態様において、微生物抽出物は、例えば、ブレタノマイセス・アノマラス、ブレタノマイセス・ブラキセレンシス、ブレタノマイセス・クラウセニ、ブレタノマイセス・クスタシアヌス、ブレタノマイセス・ランビカス、ブレタノマイセス・ナアデネンシス、ブレタノマイセス・ナナス、カンジダ・アルビカンス、カンジダ・ブランキィ、カンジダ・スルーフィ（slooffi）、デッケラインターメディア、ロイコスポリディウム・フリジダム（Leucosporidium frigidum）、ロドトルラルブラ、サッカロマイセス・セレビシエ、サッカロマイセス・パストリアヌス、サッカロマイセス・テルリス（telluris）、シゾサッカロミセス・ポンベ、スポリディオボラス・ジョンソニイ、外来ザリガニ（Sporidiobolus longiusculus）、スポリディオボラス・メタロセウス（Sporidiobolus metaroseus）、スポリディオボラス・パラロセウス（Sporidiobolus pararoseus）、スポリディオボラス・ルイネニエ、スポリディオボラス・サルモニコーラー、スポリディオボラス・ベロナエ、トリコスポロン・ベイジェリイ、トリコスポロン・クタネウム、およびそれらの組み合わせのような酵母細胞から調製され得る。いくつかの態様において、微生物抽出物は、出芽酵母から調製され得る。
【０１２１】
いくつかの態様において、微生物抽出物は、本発明の組成物が投与されるべき生物において病原性である１つまたはそれ以上の微生物細胞タイプから調製することができる。いくつかの態様において、微生物抽出物は、本発明の組成物が投与されるべき対象に自然にコロニーを形成する１つまたはそれ以上の微生物細胞タイプから調製することができる。。いくつかの態様において、微生物抽出物は、本発明の組成物が投与されるべき生物によって消費される食品中に存在する１つまたはそれ以上の微生物細胞タイプから調製することができる。
【０１２２】
特定の理論はともかく、いくつかの態様は、１つまたはそれ以上の物質への自然環境暴露を再現する能力において有益かつ／または望ましいかもしれない。例えば、いくつかの態様において、天然に存在する微生物抽出物成分の混合物の存在は、１種以上の毒性、病原体、抗原および／またはアレルゲンへの環境暴露を再現し得る。
【０１２３】
抗原
いくつかの態様において、提供されるナノ粒子および／またはナノ粒子組成物は、抗原をさらに含む。抗原は、ペプチド、タンパク質、多糖類、糖質、脂質、糖脂質、核酸またはそれらの組み合わせを含む種々の抗原であり得る。抗原は、ウイルス、細菌、寄生生物、植物、原生動物、真菌、癌細胞もしくは白血病細胞のような組織または形質転換細胞を含むが、これらに限定されない起源由来であってよく、また全細胞またはその免疫原性成分、例えば、細胞壁成分またはその分子成分であってよい。いくつかの態様において、１つまたはそれ以上の抗原を含む粗抽出物を用いることができる。
【０１２４】
いくつかの態様において、抗原は、病原体抗原である。いくつかの態様において、病原体抗原は、病原体の１つまたはそれ以上の付加的成分と共に提供される。いくつかの態様において、抗原または病原体は、アレルゲン、感染性抗原、疾患関連抗原（例えば、腫瘍関連抗原）、自己抗原、またはそれらの組み合わせからなる群より選択される。いくつかの態様において、抗原の一部または全ては、ナノ粒子の内腔内に封入されている。
【０１２５】
いくつかの態様において、好適な抗原は、当技術分野で知られており、商業系、政府系および技術系の供給源より利用可能である。いくつかの態様において、抗原は、全不活化または弱毒化された生物から提供され得る。いくつかの態様において、抗原は、ウイルス、寄生虫および細菌のような感染性生物から提供され得る。いくつかの態様において、抗原は、腫瘍細胞から提供され得る。いくつかの態様において、抗原は、腫瘍またはウイルスまたは細菌源に由来する、精製されたか、または部分的に精製されたポリペプチドであり得る。有効な抗原性ペプチド（例えば、免疫応答を誘発し得る最小のペプチド配列）を同定および選択するための例示的基準は、当技術分野において見出され得る。例えば、Apostolopoulos, et al.（Curr. Opin. Mol.Ther., 2:29−36 (2000)）は、抗原提示分子の三次元構造ならびにその抗原性ペプチドおよびＴ−細胞受容体の両方への相互作用の理解に基づいて、最小の抗原性ペプチド配列を同定するための戦略を記載する。Shastri,（Curr. Opin.免疫l., 8:271−7 (1996)）は、通常ＭＨＣ分子に結合している数千のペプチドからＴ細胞を活性化する働きをする数種（rare）のペプチドを区別する方法を記載している。抗原は、異種発現系においてポリペプチド抗原をコードするＤＮＡを発現させることにより生産される組み換えポリペプチドであり得る。抗原は、抗原性タンパク質の全部または一部をコードするＤＮＡであってよい。ＤＮＡは、プラスミドＤＮＡのようなベクターＤＮＡの形態であってよい。
【０１２６】
いくつかの態様において、抗原は、単一の抗原として提供され得るか、または組み合わせとして提供され得る。いくつかの態様において、抗原はまた、ポリペプチドまたは核酸の複合体として提供されてもよい。
【０１２７】
いくつかの態様において、抗原は、粗抽出物（例えば、全ピーナッツ抽出物）として提供される。いくつかの態様において、提供されるナノ粒子および／またはナノ粒子組成物は、１種またはそれ以上の粗抗原抽出物を含み得る。いくつかの態様において、粗抽出物は、提供されるナノ粒子組成物中の個々の抗原を使用することに有用かつ安価な代替手段であり得る。
【０１２８】
いくつかの態様において、提供されるナノ粒子および／またはナノ粒子組成物は、１種またはそれ以上のウイルス抗原を含み得る。一般的に、ウイルスは、以下の２または３つの部分から構成される：１）ＤＮＡまたはＲＮＡであり得る、ウイルスによって変わる遺伝物質、２）該遺伝物質を被覆し、保護する外被タンパク質、および、いくつかのウイルスにおいて、３）外被タンパク質を取り囲む脂質エンベロープ。いくつかの態様において、ウイルス抗原は、ウイルスのいずれかの成分から提供されてもよい。いくつかの態様において、ウイルス抗原は、以下のウイルスファミリーのいずれかのウイルスを含むが、これらに限定されないウイルスから単離されてもよい：アレナウイルス科、アルテリウイルス科、アストロウイルス科、バキュロウイルス科、バドナウイルス科、バルナウイルス科、ビルナウイルス科、ブロモウイルス科、ブニヤウイルス科、カリシウイルス科、カピロウイルス科、カーラウイルス科、カリモウィルス科、サーコウイルス科、クロステロウイルス科、コモウイルス科、コロナウイルス科（例えば、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）ウイルスのようなコロナウイルス）、コルチコウイルス科、シストウイルス科、デルタウイルス属、ダイアンソウイルス、エナモウイルス属、フィロウイルス科（例えば、マールブルグウイルスおよびエボラウイルス（例えば、ザイール、レストン、コートジボワール、またはスーダン株））、フラビウイルス科（例えば、Ｃ型肝炎ウイルス、デング熱ウイルス１型、デング熱ウイルス２型、デング熱ウイルス３型、およびデング熱ウイルス４型）、ヘパドナウイルス科、ヘルペスウイルス科（例えば、ヒトヘルペスウイルス１、３、４、５、および６型、ならびにサイトメガロウイルス）、ハイポウイルス属、イリドウイルス科、レヴィウイルス科、リポスリクスウイルス科、ミクロウイルス科、オルトミクソウイルス科（例えば、Ａ型、Ｂ型およびＣ型インフルエンザウイルス）、パポバウイルス科、パラミクソウイルス科（例えば、麻疹ウイルス、ムンプスウイルス、およびヒト呼吸器多核体ウイルス）、パルボウイルス科、ピコルナウイルス科（例えば、ポリオウイルス、ライノウイルス、ヘパトウイルス属、およびアフトウイルス属）、ポックスウイルス科（例えば、ワクシニアウイルスおよび天然痘ウイルス）、レオウイルス科（例えば、ロタウイルス）、レトロウイルス科（例えば、レンチウイルス、例えばヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）−１およびＨＩＶ−２）、ラブドウイルス科（例えば、狂犬病ウイルス、麻疹ウイルス、呼吸器多核体ウイルスなど）、トガウイルス科（例えば、風疹ウイルス、デング熱ウイルスなど）、ならびにトティウイルス科。好適なウイルス抗原はまた、デング熱ウイルスのＭタンパク質、Ｅタンパク質、Ｄ１ＮＳ１、Ｄ１ＮＳ２、およびＤ１ＮＳ３の全部または一部を含む。いくつかの態様において、ウイルス抗原は、例えばインフルエンザウイルス由来の断片のような、１つまたはそれ以上のウイルスの断片を含むか、それから構成されていてよい。いくつかの態様において、ウイルスの断片は、１）ウイルスの遺伝物質、２）ウイルスの外被タンパク質の一部、および／または３）ウイルスの脂質エンベロープの一部、の１つまたはそれ以上から提供される。いくつかの態様において、ウイルスの断片は、１）ウイルスの遺伝物質、２）ウイルスの外被タンパク質の一部、および／または３）ウイルスの脂質エンベロープの一部、の２種またはそれ以上から提供され得る。
【０１２９】
ウイルス抗原の例としては、以下のウイルス株に見出されるもの、例えば、アデノウイルス、ボレリア属、シャーガス(Chagas)、コクサッキーウイルス、サイトメガロウイルス、デング熱ウイルス、エプスタイン−バーウイルス（ＥＢＶ）、脳炎ウイルス（例えば、ウマ脳炎および日本脳炎ウイルス）、ハンタウイルス、Ａ型肝炎ウイルス（ＨＡＶ）、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、デルタ肝炎ウイルス（ＨＤＶ）、Ｅ型肝炎ウイルス（ＨＥＶ）、Ｇ型肝炎ウイルス（ＨＧＶ）、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）（すなわち、ＨＳＶ１およびＨＳＶ２）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、ヒトＴ−リンパ球向性ウイルス（ＨＴＬＶ）、インフルエンザウイルス、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）、マラリアウイルス、麻疹ウイルス、マイコプラズマウイルス、パピローマウイルス（例えば、ヒトパピローマウイルス、ＨＰＶ）、パラインフルエンザウイルス、パルボウイルス、ライノウイルス、リフトバレー熱ウイルス、ロタウイルス、風疹ウイルス、ＳＡＲＳ、トキソプラズマウイルス、トレポネーマ属、水痘帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）、ウエストナイル熱ウイルス（ＷＮＶ）、黄熱病ウイルス、ならびにそれらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。
【０１３０】
いくつかの態様において、提供されるナノ粒子および／またはナノ粒子組成物は、１種またはそれ以上の細菌抗原を含んでいてよい。細菌抗原は、アクチノマイセス属、エロモナス属、アナベナ属、アースロバクター属、バチルス属、バクテロイデス属、ブデロビブリオ属、ボルデテラ属、ボレリア属、カンピロバクター属、カウロバクター属、クラミジア属、クロロビウム門、クロマチウム属、シトロバクター属、クロストリジウム属、コリネバクテリウム属、サイトファガ属、デイノコッカス属、エンテロバクター属、大腸菌、フランシセラ属、ヘモフィルス属、ハロバクテリウム属、ヘリコバクター属、ヘモフィルスインフルエンザ菌Ｂ型（ＨＩＢ）、ハイフォミクロビウム属、クレブシエラ属、ラクトコッカス属、レジオネラ属、レプトスピラ属、リステリア属、髄膜炎菌Ａ群、Ｂ群およびＣ群、メタノバクテリウム綱、ミクロコッカス属、モーガネラ属、マイコプラズマ、マイコバクテリウム属、ミキソコッカス属、ナイセリア属、ニトロバクター属、オシラトリア属、ペプトコッカス属、ロドスピリラム属、プレシオモナス属、プロクロロン属、プロテウス属、プロビデンシア属、シュードモナス属、リケッチア属、サルモネラ属、セラチア属、シゲラ属、スピリルム属、スピロヘータ属、スポロラクトバチルス属、スタフィロコッカス属、ストレプトコッカス属、ストレプトマイセス属、スルフォロブス属、テルモプラズマ属、チオバチルス属、梅ウイルス、ビブリオ属、エルシニア属、ならびにこれらの組み合わせを含むが、これらに限定されない細菌に由来し得る。
【０１３１】
いくつかの態様において、提供されるナノ粒子および／またはナノ粒子組成物は、１種またはそれ以上の寄生虫抗原を含み得る。寄生中抗原は、以下の寄生虫から得られ得て、例えば、カンジダ・アルビカンス、カンジダ・トロピカリス、クラミジア・トラコマチス、クラミジア・シッタシ、クリプトコッカス・ネオフォルマンス、赤痢アメーバ、ヒストプラズマ・カプスレータム、肺炎マイコプラズマ、ノカルジア・アステロイデス、熱帯熱マラリア原虫、リケッチア・リケッチイ、発疹熱リケッチア、マンソン住血吸虫、トキソプラズマ原虫、膣トリコモナスならびにブルーストリパノソーマに由来する抗原が含まれるが、これに限定されない。これらは、胞子虫（Sporozoan）抗原、マラリア原虫抗原、例えば、サーカムスポロゾイトタンパク質、スポロゾイト周囲タンパク質、肝ステージ抗原、頂端部膜結合タンパク質、またはメロゾイト表面タンパク質の全部または一部を含む。
【０１３２】
いくつかの態様において、提供されるナノ粒子および／またはナノ粒子組成物は、１種またはそれ以上の環境抗原を含み得る。環境抗原の例としては、天然に存在するアレルゲン、例えば、花粉アレルゲン（樹木、雑草、および草木の花粉アレルゲン）、昆虫アレルゲン（吸入、唾液および毒物アレルゲン）、動物の毛および／または皮屑アレルゲンに由来するものが含まれるが、これに限定されない。
【０１３３】
いくつかの態様において、抗原は、個体にアレルギー反応、特にアナフィラキシーアレルギー反応を誘発し得る特定の食品、毒、薬物またはゴム製品に見出されるアレルゲンであり得る。アナフィラキシーを誘発する可能性のあるアレルゲンの例としては、食品（ピーナッツ、牛乳、卵、小麦）、昆虫毒（すなわち、蜂、毒蛇）、薬物、およびラテックスに見出される数種のタンパク質アレルゲンが含まれる。いくつかの態様において、環境抗原は、１種またはそれ以上の毒物であり得る。昆虫刺傷のような毒液を注入する生物の虫刺されは、該毒にアレルギーを有する個体にアナフィラキシーを引き起こすことが知られている。一般的に、昆虫毒は、ミツバチ、スズメバチ、アシナガバチ、イエロー・ジャケット（黄色スズメバチ）、アリバチ、およびアカヒアリのようなハチ目の毒を含む。例えば、ミツバチ科のミツバチの毒は、を有する個体にアナフィラキシーを引き起こし得る（Weber et al. Allergy 42:464 470）。ミツバチの毒は、広範に研究され、特徴づけられている多数の化合物を含む（Banks and Shipolini. Chemistry and Pharmacology of Honey−bee Venom. Chapter 7 of Venoms of the Hymenoptera. Ed. T. Piek. Academic Press. London. 1986を参照のこと）。ハチ毒の２つの主要成分は、ホスホリパーゼＡ２およびメリチンであり、いくつかの態様において、ハチ毒に対するアレルギーを治療および予防するために用いられ得る。食品に見出されたタンパク質アレルゲンの限定しない例には、ナッツ類（例えば、ピーナッツ、クルミ、アーモンド、ピーカン、カシューナッツ、ヘーゼルナッツ、ピスタチオ、松の実、ブラジルナット）、魚介類（例えば、エビ、カニ、ロブスター、貝）、果物（例えば、プラム、桃、ネクタリン；Ann Allergy Asthma Immunol 7(6):504 8 (1996); cherries, Allergy 51(10):756 7 (1996)）、種子（ゴマ、ケシ、マスタード）、および大豆および乳製品（例えば、卵、牛乳）に見出されたタンパク質が含まれる。
【０１３４】
いくつかの態様において、花粉関連食物アレルギーに見られるタンパク質抗原が用いられ得る（例えば、リンゴアレルギーに関連する樺花粉）。樹木、草木およびバーブの重要な花粉アレルゲンは、バーチ（カバノキ）、アルダー（ハンノキ）、クリ（ハシバミ）、シデ（クマシデ属）およびオリーブ（オレア）、杉（スギ科およびヒノキ科）、プラタナス（プラタナス属）を含むブナ目、モクセイ目、マツ目およびスズカケノキ科の分類群、ライグラス属、アワガエリ属、イネ科、ギョウギシバ（Ｃｙｎｏｄｏｎ）属、カモガヤ属（Dactylis）、シラゲガヤ属、クサヨシ属、ムギ類、およびモロコシ属を含むイネ目の分類群、ブタクサ属、ヨモギ属およびヒカゲミズ属のハーブを含むキク目およびイラクサ目の分類群を起源とする。
【０１３５】
いくつかの態様において、抗原は、ヒョウヒ属(Dermatophagoides)およびユーログリファス属(Euroglyphus)のハウスダストダニ、貯蔵庫ダニ（storage mite）、例えばレピドグリフィス属、イエニクダニ（Glycyphagus）およびケナガコナダニ、ゴキブリ、蚊（midges）およびノミ類、例えば、ワモンゴキブリ属、ワモンゴキブリ属、ユスリカ属およびイヌノミ属、ネコ、イヌおよびウマなどの哺乳動物、鳥類に由来する１種またはそれ以上のアレルゲン、ミツバチ（ミツバチ上科(superfamily Apidae)）、スズメバチ（スズメバチ上科(superfamily Vespidea)）、およびアリ（アリ上科(superfamily Formicoidae)）を含む分類学上のハチ目（Hymenoptera）のような刺すかまたは噛みつく昆虫に由来するものを含む毒物アレルゲンであり得る。使用され得るさらに他のアレルゲン抗原としては、アルテルナリア属およびクラドスポリウム属からのような菌類からの吸入アレルゲンが含まれる。
【０１３６】
いくつかの態様において、単一の化合物（例えば、単一のタンパク質）が観察されたアレルギーの原因となっているシステムにおいて作業することが望ましい場合がある。いくつかの態様において、抗原は、より複雑なアレルゲンおよび／または粗製アレルゲン抽出物を含んでいてよい。従って、複数の抗原に対する免疫応答が単一の態様で変化し得るように、２以上の抗原の集合物を用いることができる。
【０１３７】
優れたいくつかの態様を例示するための努力において、いくつかの態様において使用可能な抗原および／または抗原抽出物（例えば、１種またはそれ以上のアレルゲンおよび／またはアレルゲン抽出物）の典型例には、コナダニ（mite）の脂肪酸結合タンパク質（Ａｃａ ｓ １３）；オニマタタビ（キウイ）のシステインプロテアーゼ（Ａｃｔ ｃ １）；ヤブカ（Aedes aegyptii）（蚊）の抗原（Ａｅｄ ａ ２）；ヤブカ（蚊）の抗原（Ａｅｄ ａ ２）；ヤブカ（蚊）のアピラーゼ（Ａｅｄ ａ １）；ヤブカ（蚊）のアピラーゼ（Ａｅｄ ａ １）；ハンノキ（Alnus glutinosa）（アルダー）の抗原（Ａｌｎ ｇ １）；葉上生息菌（Alternaria alternata ）（菌類）の酸、リボソームタンパク質Ｐ１（Ａｌｔ ａ １２）；葉上生息菌（菌類）のアルデヒドデヒドロゲナーゼ（Ａｌｔ ａ １０）；葉上生息菌（菌類）の抗原（Ａｌｔ ａ １）；葉上生息菌（菌類）の抗原（Ａｌｔ ａ ２）；葉上生息菌（菌類）のエノラーゼ（enolase）（Ａｌｔ ａ １１）；葉上生息菌（菌類）の熱ショックタンパク質（Ａｌｔ ａ ３）；葉上生息菌（菌類）のリボソームタンパク質（Ａｌｔ ａ ６）；葉上生息菌（菌類）のＹＣＰ４タンパク質（Ａｌｔ ａ ７）；ブタクサ(Ambrosia artemisiifolia)（短ブタクサ）の抗原Ｅ（Ａｍｂ ａ １）；ブタクサの抗原Ｋ（Ａｍｂ ａ ２）；ブタクサのＲａ３抗原（Ａｍｂ ａ ３）；ブタクサのＲａ５抗原（Ａｍｂ ａ ５）；ブタクサのＲａ６抗原（Ａｍｂ ａ ６）；ブタクサのＲａ７抗原（Ａｍｂ ａ ７）；オオブタクサ（Ambrosia trifida）（巨大ブタクサ）のＲａ５Ｇ抗原（Ａｍｂ ｔ ５）；アニサキス・シンプレックス（線虫）の抗原（Ａｎｉ ｓ １）；アニサキス・シンプレックス（線虫）のパラミオシン（Ａｎｉ ｓ ２）；セイヨウミツバチ（Apis mellifera）（ミツバチ）の抗原（Ａｐｉ ｍ ６）；セイヨウミツバチのヒアルロニダーゼ（Ａｐｉ ｍ ２）；セイヨウミツバチのメリチン（Ａｐｉ ｍ ４）；セイヨウミツバチのホスホリパーゼＡ２（Ａｐｉ ｍ １）；Ａｐｉｕｍ  ｇｒａｖｅｏｌｅｎｓ（セロリ）の抗原（Ａｐｉ ｇ ５）；Ａｐｉｕｍ  ｇｒａｖｅｏｌｅｎｓ（セロリ）のＢｅｔ ｖ １ホモログ（Ａｐｉ ｇ １）；Ａｐｉｕｍ  ｇｒａｖｅｏｌｅｎｓ（セロリ）のプロフィリン（Ａｐｉ ｇ ４）；ラッカセイ（ピーナッツ）（コングルチンＡｒ ａ ｈ ２）；ラッカセイ（ピーナッツ）（プロフィリンＡｒ ａ ｈ ５）；ラッカセイ（ピーナッツ）のコングルチンホモログ（Ａｒ ａ ｈ ６）；ラッカセイ（ピーナッツ）のコングルチンホモログ（Ａｒ ａ ｈ ７）；ラッカセイ（ピーナッツ）のグリシニン（Ａｒ ａ ｈ ３）；ラッカセイ（ピーナッツ）のグリシニン（Ａｒ ａ ｈ ４）；ラッカセイ（ピーナッツ）のビシリン（Ａｒ ａ ｈ １）；オオヨモギ（Artemisia vulgaris）（ヨモギ）の抗原（Ａｒｔ ｖ １）；オオヨモギの抗原（Ａｒｔ ｖ ２）；豚回虫（Ascaris suum）（回虫）の抗原（Ａｓｃ ｓ １）；アスペルギルス・フラブス (Aspergillus flavus) （真菌）のアルカリセリンプロテアーゼ（Ａｓｐ ｆｌ １３）；アスペルギルス・フミガタス（真菌）の抗原（Ａｓｐ ｆ １）；アスペルギルス・フミガタス（真菌）の抗原（Ａｓｐ ｆ １５）；アスペルギルス・フミガタス（真菌）の抗原（Ａｓｐ ｆ １６）；アスペルギルス・フミガタス（真菌）の抗原（Ａｓｐ ｆ １７）；アスペルギルス・フミガタス（真菌）の抗原（Ａｓｐ ｆ ２）;アスペルギルス・フミガタス（真菌）の抗原（Ａｓｐ ｆ ４）；アスペルギルス・フミガタス（真菌）の抗原（Ａｓｐ ｆ ７）；アスペルギルス・フミガタス（真菌）の抗原（Ａｓｐ ｆ ９）；アスペルギルス・フミガタス（真菌）のアスパラギン酸（aspartis）プロテアーゼ（Ａｓｐ ｆ １０）；アスペルギルス・フミガーツス（菌類）の熱ショックタンパク質Ｐ７０（Ａｓｐ ｆ １２）；アスペルギルス・フミガーツス（菌類）のメタロプロテアーゼ（Ａｓｐ ｆ ５）；アスペルギルス・フミガーツス（菌類）のＭｎ型スーパーオキシドジスムターゼ（Ａｓｐ ｆ ６）；アスペルギルス・フミガーツス（菌類）のペプチジルプロリルイソメラーゼ（Ａｓｐ ｆ １１）；アスペルギルス・フミガーツス（菌類）のペルオキシソームのタンパク質（Ａｓｐ ｆ ３）；アスペルギルス・フミガーツス（菌類）のリボソームタンパク質Ｐ２（Ａｓｐ ｆ ８）；アスペルギルス・フミガーツス（菌類）の液胞セリンプロテアーゼ（Ａｓｐ ｆ １８）；
【０１３８】
アスぺルギルスニガー（菌類）の抗原（Ａｓｐ ｎ １８）；アスぺルギルスニガー（菌類）のベータ−キシロシダーゼ（Ａｓｐ ｎ １４）；アスぺルギルスニガー（菌類）の液胞セリンプロテアーゼ；アスペルギルスオリゼー（菌類）のアルカリ性セリンプロテイナーゼ（Ａｓｐ ｏ １３）；アスペルギルスオリゼー（菌類）のＴＡＫＡ−アミラーゼＡ（Ａｓｐ ｏ ２）；Ｂｅｒｔｈｏｌｌｅｔｉａ  ｅｘｃｅｌｓａ（ブラジルナッツ）の２Ｓ  アルブミン（Ｂｅｒ ｅ １）；Ｂｅｔｕｌａ  ｖｅｒｒｕｃｏｓａ（シラカバ）の抗原（Ｂｅｔ ｖ １）；Ｂｅｔｕｌａ  ｖｅｒｒｕｃｏｓａ（シラカバ）の抗原（Ｂｅｔ ｖ ３）；Ｂｅｔｕｌａ  ｖｅｒｒｕｃｏｓａ（シラカバ）の抗原（Ｂｅｔ ｖ ４）；Ｂｅｔｕｌａ  ｖｅｒｒｕｃｏｓａ（シラカバ）のシクロフィリン（Ｂｅｔ ｖ ７）；Ｂｅｔｕｌａ  ｖｅｒｒｕｃｏｓａ（シラカバ）のイソフラボンレダクターゼホモログ（Ｂｅｔ ｖ ５）；Ｂｅｔｕｌａ  ｖｅｒｒｕｃｏｓａ（シラカバ）のプロフィリン（Ｂｅｔ ｖ ２）；Ｂｌａｔｔｅｌｌａ  ｇｅｒｍａｎｉｃａ（ワモンゴキブリ）のアスパラギンプロテアーゼ（Ｂｌａ ｇ ２）；Ｂｌａｔｔｅｌｌａ  ｇｅｒｍａｎｉｃａ（ワモンゴキブリ）のＢｄ９０ｋ（Ｂｌａ ｇ １）；Ｂｌａｔｔｅｌｌａ  ｇｅｒｍａｎｉｃａ（ワモンゴキブリ）のカリチン（Ｂｌａ ｇ ４）；Ｂｌａｔｔｅｌｌａ  ｇｅｒｍａｎｉｃａ（ワモンゴキブリ）のグルタチオントランスフェラーゼ（Ｂｌａ ｇ ５）；Ｂｌａｔｔｅｌｌａ  ｇｅｒｍａｎｉｃａ（ワモンゴキブリ）のトロポニンＣ（Ｂｌａ ｇ ６）；Ｂｌｏｍｉａ  ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ（ダニ）の抗原（Ｂｌｏ ｔ ５）；Ｂｌｏｍｉａ  ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ（ダニ）のＢｔ１１ａ抗原（Ｂｌｏ ｔ １２）；Ｂｌｏｍｉａ  ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ（ダニ）のＢｔ６  脂肪酸結合タンパク質（Ｂｌｏ ｔ）；Ｂｏｍｂｕｓ  ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉｃｕｓ（マルハナバチ）のホスホリパーゼ（Ｂｏｍ ｐ １）；Ｂｏｍｂｕｓ  ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉｃｕｓ（マルハナバチ）のプロテアーゼ（Ｂｏｍ ｐ ４）；Ｂｏｓ  ｄｏｍｅｓｔｉｃｕｓ（ウシ）のＡｇ３、リポカリン（Ｂｏｓ ｄ ２）；Ｂｏｓ  ｄｏｍｅｓｔｉｃｕｓ（ウシ）のアルファ−ラクトアルブミン（Ｂｏｓ ｄ ４）；Ｂｏｓ  ｄｏｍｅｓｔｉｃｕｓ（ウシ）のベータ−ラクトアルブミン（Ｂｏｓ ｄ ５）；Ｂｏｓ  ｄｏｍｅｓｔｉｃｕｓ（ウシ）のカゼイン（Ｂｏｓ ｄ ８）；Ｂｏｓ  ｄｏｍｅｓｔｉｃｕｓ（ウシ）の免疫グロブリン（Ｂｏｓ ｄ ７）；Ｂｏｓ  ｄｏｍｅｓｔｉｃｕｓ（ウシ）の血清アルブミン（Ｂｏｓ ｄ ６）；セイヨウカラシナ（オリエンタルマスタード）の２Ｓアルブミン（Ｂｒａ ｊ １）；ブラッシカ・ラパ（アブラナ科）のプロヒビン様タンパク質（Ｂａｒ ｒ ２）；カンジダ・アルビカンス（菌類）の抗原（Ｃａｎｄ ａ １）；カンジダ・ボイジニイ（菌類）の抗原（Ｃａｎｄ ｂ ２）；ケイネス・ファミリアリス（イヌ）のアルブミン（Ｃａｎ ｆ ？）；カニスファミリアス（イヌ）の抗原（Ｃａｎ ｆ １）；カニスファミリアス（イヌ）の抗原（Ｃａｎ ｆ ２）；Ｃａｒｐｉｎｕｓ  ｂｅｔｕｌｕｓ（シデ）の抗原（Ｃａｒ ｂ １）；ヨーロッパグリ（Castanea sativa）（クリ）のＢｅｔ ｖ １ホモログ（Ｃａｓ ｓ １）；ヨーロッパグ���（クリ）のキチナーゼ（Ｃａｓ ｓ ５）；Ｃｈｉｒｏｎｏｍｕｓ  ｔｈｕｍｍｉ  ｔｈｕｍｍｉ（ユスリカ）のコンポーネントＩ（Ｃｈｉ ｔ ２．０１０１）；Ｃｈｉｒｏｎｏｍｕｓ  ｔｈｕｍｍｉ  ｔｈｕｍｍｉ（ユスリカ）のコンポーネントＩＡ（Ｃｈｉ ｔ ２．０１０２）；Ｃｈｉｒｏｎｏｍｕｓ  ｔｈｕｍｍｉ  ｔｈｕｍｍｉ  （ユスリカ）のコンポーネントＩＩ−ベータ（Ｃｈｉ ｔ ３）；Ｃｈｉｒｏｎｏｍｕｓ  ｔｈｕｍｍｉ  ｔｈｕｍｍｉ（ユスリカ）のコンポーネントＩＩＩ（Chi t 1.01）；Ｃｈｉｒｏｎｏｍｕｓ  ｔｈｕｍｍｉ  ｔｈｕｍｍｉ（ユスリカ）のコンポーネントＩＩＩＡ（Ｃｈｉ ｔ ４）；Ｃｈｉｒｏｎｏｍｕｓ  ｔｈｕｍｍｉ  ｔｈｕｍｍｉ（ユスリカ）のコンポーネントＩＶ（Chi t 1.02）；Ｃｈｉｒｏｎｏｍｕｓ  ｔｈｕｍｍｉ  ｔｈｕｍｍｉ（ユスリカ）のコンポーネントＩＸ（Ｃｈｉ ｔ ６．０２）；Ｃｈｉｒｏｎｏｍｕｓ  ｔｈｕｍｍｉ  ｔｈｕｍｍｉ（ユスリカ）のコンポーネントＶＩ（Ｃｈｉ ｔ ５）；Ｃｈｉｒｏｎｏｍｕｓ  ｔｈｕｍｍｉ  ｔｈｕｍｍｉ（ユスリカ）のコンポーネントＶＩＩＡ（Ｃｈｉ ｔ ６．０１）；Ｃｈｉｒｏｎｏｍｕｓ  ｔｈｕｍｍｉ  ｔｈｕｍｍｉ（ユスリカ）のコンポーネントＶＩＩＢ（Chi t 7）；Ｃｈｉｒｏｎｏｍｕｓ  ｔｈｕｍｍｉ  ｔｈｕｍｍｉ（ユスリカ）のコンポーネントＶＩＩＩ（Ｃｈｉ ｔ ８）；Ｃｈｉｒｏｎｏｍｕｓ  ｔｈｕｍｍｉ  ｔｈｕｍｍｉ（ユスリカ）のコンポーネントＸ（Ｃｈｉ ｔ ９）；Ｃｈｉｒｏｎｏｍｕｓ  ｔｈｕｍｍｉ  ｔｈｕｍｍｉ（ユスリカ）のヘモグロビン（Ｃｈｉ ｔ １−９）；
【０１３９】
クラドスポリウム属菌（菌類）の酸性リボソームタンパク質Ｐ１（Ｃｌａ ｈ １２）；クラドスポリウム属菌（菌類）のアルデヒドデヒドロゲナーゼ（Ｃｌａ ｈ ３）；クラドスポリウム属菌（菌類）の抗原（Ｃｌａ ｈ １）；クラドスポリウム属菌（菌類）の抗原（Ｃｌａ ｈ ２）；クラドスポリウム属菌（菌類）のエノラーゼ（Ｃｌａ ｈ ６）；クラドスポリウム属菌（菌類）のリボソームタンパク質）；クラドスポリウム属菌（菌類）のＹＣＰ４タンパク質（Ｃｌａ ｈ ５）；Ｃｏｐｒｉｎｕｓ  ｃｏｍａｔｕｓ（シャギーキャップ）の抗原（Ｃｏｐ ｃ １）；Ｃｏｐｒｉｎｕｓ  ｃｏｍａｔｕｓ（シャギーキャップ）の抗原（Ｃｏｐ ｃ ２）；Ｃｏｐｒｉｎｕｓ  ｃｏｍａｔｕｓ（シャギーキャップ）の抗原（Ｃｏｐ ｃ ３）；Ｃｏｐｒｉｎｕｓ  ｃｏｍａｔｕｓ（シャギーキャップ）の抗原（Ｃｏｐ ｃ ５）；Ｃｏｐｒｉｎｕｓ  ｃｏｍａｔｕｓ（シャギーキャップ）の抗原（Ｃｏｐ ｃ ７）；Ｃｏｒｙｌｕｓ  ａｖｅｌｌａｎａ（ハシバミ属）の抗原（Ｃｏｒ ａ １）；Ｃｏｒｙｌｕｓ  ａｖｅｌｌａｎａ（ヘーゼルナッツ）のＢｅｔ ｖ １ホモログ（Ｃｏｒ ａ １．０４０１）；Ｃｒｙｐｔｏｍｅｒｉａ  ｊａｐｏｎｉｃａ（スギ）の抗原（Ｃｒｙ ｊ １）；Ｃｒｙｐｔｏｍｅｒｉａ  ｊａｐｏｎｉｃａ（スギ）の抗原（Ｃｒｙ ｊ ２）；Ｃｔｅｎｏｃｅｐｈａｌｉｄｅｓ  ｆｅｌｉｓ  ｆｅｌｉｓ（ネコノミ）の抗原（Ｃｔｅ ｆ １）；Ｃｙｎｏｄｏｎ  ｄａｃｔｙｌｏｎ（ギョウギシバ）の抗原（Ｃｙｎ ｄ １）；Ｃｙｎｏｄｏｎ  ｄａｃｔｙｌｏｎ（ギョウギシバ）の抗原（Ｃｙｎ ｄ ７）；Ｃｙｎｏｄｏｎ  ｄａｃｔｙｌｏｎ（ギョウギシバ）のプロフィリン（Ｃｙｎ ｄ １２）；Ｄａｃｔｙｌｉｓ  ｇｌｏｍｅｒａｔａ（オーチャードグラス）のＡｇＤｇ１抗原（Ｄａｃ ｇ １）；Ｄａｃｔｙｌｉｓ  ｇｌｏｍｅｒａｔａ（オーチャードグラス）の抗原（Ｄａｃ ｇ ２）；Ｄａｃｔｙｌｉｓ  ｇｌｏｍｅｒａｔａ（オーチャードグラス）の抗原（Ｄａｃ ｇ ３）；Ｄａｃｔｙｌｉｓ  ｇｌｏｍｅｒａｔａ  （オーチャードグラス）の抗原（Ｄａｃ ｇ ５）；Ｄｅｒｍａｔｏｐｈａｇｏｉｄｅｓ  ｆａｒｉｎａｅ（ダニ）の抗原（Ｄｅｒ ｆ １）；Ｄｅｒｍａｔｏｐｈａｇｏｉｄｅｓ  ｆａｒｉｎａｅ（ダニ）の抗原（Ｄｅｒ ｆ ２）；Ｄｅｒｍａｔｏｐｈａｇｏｉｄｅｓ  ｆａｒｉｎａｅ（ダニ）の抗原（Ｄｅｒ ｆ ３）；Ｄｅｒｍａｔｏｐｈａｇｏｉｄｅｓ  ｆａｒｉｎａｅ（ダニ）のＭａｇ３、アポリポフォリン（Ｄｅｒ ｆ １４）；コナヒョウヒダニ（ダニ）のパラミオシン（Ｄｅｒ ｆ １１）；コナヒョウヒダニ（ダニ）のトロポミオシン（Ｄｅｒ ｆ １０）；Ｄｅｒｍａｔｏｐｈａｇｏｉｄｅｓ  ｍｉｃｒｏｃｅｒａｓ（ダニ）の抗原（Ｄｅｒ ｍ １）；Ｄｅｒｍａｔｏｐｈａｇｏｉｄｅｓ  ｐｔｅｒｏｎｙｓｓｉｎｕｓ（ダニ）のアミラーゼ（Ｄｅｒ ｐ ４）；Ｄｅｒｍａｔｏｐｈａｇｏｉｄｅｓ  ｐｔｅｒｏｎｙｓｓｉｎｕｓ（ダニ）の抗原（Ｄｅｒ ｐ ２）；Ｄｅｒｍａｔｏｐｈａｇｏｉｄｅｓ  ｐｔｅｒｏｎｙｓｓｉｎｕｓ（ダニ）の抗原（Ｄｅｒ ｐ ５）；Ｄｅｒｍａｔｏｐｈａｇｏｉｄｅｓ  ｐｔｅｒｏｎｙｓｓｉｎｕｓ（ダニ）の抗原（Ｄｅｒ ｐ ７）；Ｄｅｒｍａｔｏｐｈａｇｏｉｄｅｓ  ｐｔｅｒｏｎｙｓｓｉｎｕｓ（ダニ���の抗原Ｐ１（Ｄｅｒ ｐ １）；Ｄｅｒｍａｔｏｐｈａｇｏｉｄｅｓ  ｐｔｅｒｏｎｙｓｓｉｎｕｓ（ダニ）のアポリポフォリン様ｐ （Ｄｅｒ ｐ １４）；Ｄｅｒｍａｔｏｐｈａｇｏｉｄｅｓ  ｐｔｅｒｏｎｙｓｓｉｎｕｓ（ダニ）のキモトリプシン（Ｄｅｒ ｐ ６）；Ｄｅｒｍａｔｏｐｈａｇｏｉｄｅｓ  ｐｔｅｒｏｎｙｓｓｉｎｕｓ（ダニ）のコラーゲン分解性セリンプロテアーゼ（Ｄｅｒ ｐ ９）；Ｄｅｒｍａｔｏｐｈａｇｏｉｄｅｓ  ｐｔｅｒｏｎｙｓｓｉｎｕｓ（ダニ）のグルタチオントランスフェラーゼ（Ｄｅｒ ｐ ８）；Ｄｅｒｍａｔｏｐｈａｇｏｉｄｅｓ  ｐｔｅｒｏｎｙｓｓｉｎｕｓ（ダニ）のトロポミオシン（Ｄｅｒ ｐ １０）；Ｄｅｒｍａｔｏｐｈａｇｏｉｄｅｓ  ｐｔｅｒｏｎｙｓｓｉｎｕｓ（ダニ）のトリプシン（Ｄｅｒ ｐ ３）；Ｄｏｌｉｃｈｏｖｅｓｐｕｌａ  ａｒｅｎａｒｉａ（黄色スズメバチ）の抗原５（Ｄｏｌ ａ ５）；Ｄｏｌｉｃｈｏｖｅｓｐｕｌａ  ｍａｃｕｌａｔａ（白顔スズメバチ）の抗原５（Ｄｏｌ ｍ ５）；Ｄｏｌｉｃｈｏｖｅｓｐｕｌａ  ｍａｃｕｌａｔａ（白顔スズメバチ）のホスホリパーゼ（Ｄｏｌ ｍ １）；Ｄｏｌｉｃｈｏｖｅｓｐｕｌａ  ｍａｃｕｌａｔｅ（白顔スズメバチ）のヒアルロニダーゼ（Ｄｏｌ ｍ ２）；Ｅｑｕｕｓ  ｃａｂａｌｌｕｓ（ウマ）のリポカリン（Ｅｑｕ ｃ １）；Ｅｑｕｕｓ  ｃａｂａｌｌｕｓ（ウマ）のリポカリン（Ｅｑｕ ｃ ２）；
【０１４０】
Ｅｕｒｏｇｌｙｐｈｕｓ  ｍａｙｎｅｉ（ダニ）のアポリポフォリン（Ｅｕｒ ｍ １４）；Ｆｅｌｉｓ  ｄｏｍｅｓｔｉｃｕｓ（ネコ）のｃａｔ−１抗原（Ｆｅｌ ｄ １）；Ｆｒａｘｉｎｕｓ  ｅｘｃｅｌｓｉｏｒ（ａｓｈ）の抗原（Ｆｒａ ｅ １）；Ｇａｄｕｓ  ｃａｌｌａｒｉａｓ（ｃｏｄ）アレルゲン ｍ （Ｇａｄ ｃ １）；Ｇａｌｌｕｓ  ｄｏｍｅｓｔｉｃｕｓ（ニワトリ）のコンアルブミン；Ａ２２（Ｇａｌ ｄ ３）；Ｇａｌｌｕｓ  ｄｏｍｅｓｔｉｃｕｓ（ニワトリ）のリゾチーム（Ｇａｌ ｄ ４）；Ｇａｌｌｕｓ  ｄｏｍｅｓｔｉｃｕｓ（ニワトリ）のオボアルブミン（Ｇａｌ ｄ ２）；Ｇａｌｌｕｓ  ｄｏｍｅｓｔｉｃｕｓ（ニワトリ）のオボムコイド（Ｇａｌ ｄ １）；Ｇａｌｌｕｓ  ｄｏｍｅｓｔｉｃｕｓ（ニワトリ）の血清アルブミン（Ｇａｌ ｄ ５）；グリシンマックス（大豆）の抗原（Ｇｌｙ ｍ ２）；グリシンマックス（大豆）ＨＰＳ（Ｇｌｙ ｍ １．０１０１）；グリシンマックス（大豆）のＨＰＳ（Ｇｌｙ ｍ １．０１０２）；グリシンマックス（大豆）のプロフィリン（Ｇｌｙ ｍ ３）；Ｈａｌｉｏｔｉｓ  Ｍｉｄａｅ（アワビ）の抗原（Ｈａｌ ｍ １）；Ｈｅｌｉａｎｔｈｕｓ  ａｎｎｕｕｓ（ヒマワリ）の抗原（Ｈｅｌ ａ １）；Ｈｅｌｉａｎｔｈｕｓ  ａｎｎｕｕｓ（ヒマワリ）のプロフィリン（Ｈｅｌ ａ ２）；Ｈｅｖｅａ  ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ（ゴム）の１，３−グルカナーゼ（Ｈｅｖ ｂ ２）；Ｈｅｖｅａ  ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ（ゴム）の抗原（Ｈｅｖ ｂ ３）；Ｈｅｖｅａ  ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ（ゴム）の抗原（Ｈｅｖ ｂ ５）；Ｈｅｖｅａ  ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ（ゴム）のマイクロヘリックスタンパク質複合体の成分（Ｈｅｖ ｂ ４）；Ｈｅｖｅａ  ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ（ゴム）のＣ末端フラグメント抗原（Ｈｅｖ ｂ ６．０３）；Ｈｅｖｅａ  ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ（ゴム）の伸長因子（Ｈｅｖ ｂ １）；Ｈｅｖｅａ  ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ（ゴム）のエノラーゼ（Ｈｅｖ ｂ ９）；Ｈｅｖｅａ  ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ（ゴム）のヘベイン（Ｈｅｖ ｂ ６．０２）；Ｈｅｖｅａ  ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ（ゴム）のヘベイン前駆体（Ｈｅｖ ｂ ６．０１）；Ｈｅｖｅａ  ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ（ゴム）のＭｎ−スーパーオキシドジスムターゼ（Ｈｅｖ ｂ １０）；Ｈｅｖｅａ  ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ（ゴム）のパタチンホモログ（Ｈｅｖ ｂ ７）；Ｈｅｖｅａ  ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ（ゴム）のプロフィリン（Ｈｅｖ ｂ ８）；Ｈｏｌｃｕｓ  ｌａｎａｔｕｓ（シラゲガヤ）の抗原（Ｈｏｌ ｌ １）；ホモサピエンス（ヒト自己アレルゲン）の抗原（Ｈｏｍ ｓ １）；ホモサピエンス（ヒト自己アレルゲン）の抗原（Ｈｏｍ ｓ ２）；ホモサピエンス（ヒト自己アレルゲン）の抗原（Ｈｏｍ ｓ ３）；ホモサピエンス（ヒト自己アレルゲン）の抗原（Ｈｏｍ ｓ ４）；ホモサピエンス（ヒト自己アレルゲン）の抗原（Ｈｏｍ ｓ ５）；Ｈｏｒｄｅｕｍ  ｖｕｌｇａｒｅ（大麦）ＢＭＡＩ−１（Ｈｏｒ ｖ １）；Ｊｕｇｌａｎｓ  ｒｅｇｉａ（セイヨウグルミ）の２Ｓアルブミン（Ｊｕｇ ｒ １）；Ｊｕｇｌａｎｓ  ｒｅｇｉａ（セイヨウグルミ）のビシリン（Ｊｕｇ ｒ ２）；Ｊｕｎｉｐｅｒｕｓ  ａｓｈｅｉ（ｍｏｕｎｔａｉｎ  ｃｅｄａｒ）の抗原（Ｊｕｎ ａ １）；Ｊｕｎｉｐｅｒｕｓ  ａｓｈｅｉ（ｍｏｕｎｔａｉｎ  ｃｅｄａｒ）の抗原（Ｊｕｎ ａ ３）；
【０１４１】
ケードネズ（Juniperus oxycedrus）（prickly juniper）のカルモジュリン様抗原（Ｊｕｎ ｏ ２）；Ｊｕｎｉｐｅｒｕｓ  ｓａｂｉｎｏｉｄｅｓ（マウンテンシダー）の抗原（Ｊｕｎ ｓ １）；Ｊｕｎｉｐｅｒｕｓ  ｖｉｒｇｉｎｉａｎａ（イースタンレッドシダー）の抗原（Ｊｕｎ ｖ １）；Ｌｅｐｉｄｏｇｌｙｐｈｕｓ  ｄｅｓｔｒｕｃｔｏｒ（貯蔵庫ダニ）の抗原（Ｌｅｐ ｄ ２．０１０１）；Ｌｅｐｉｄｏｇｌｙｐｈｕｓ  ｄｅｓｔｒｕｃｔｏｒ（貯蔵庫ダニ）の抗原（Ｌｅｐ ｄ ２．０１０２）；Ｌｉｇｕｓｔｒｕｍ  ｖｕｌｇａｒｅ（イボタノキ）の抗原（Ｌｉｇ ｖ １）；Ｌｏｌｉｕｍ  ｐｅｒｅｎｎｅ（ライグラス）の抗原（Ｌｏｌ ｐ Ｉｂ）；Ｌｏｌｉｕｍ  ｐｅｒｅｎｎｅ（ライグラス）のグループＩ抗原（Ｌｏｌ ｐ １）；Ｌｏｌｉｕｍ  ｐｅｒｅｎｎｅ（ライグラス）のグループＩＩ抗原（Ｌｏｌ ｐ ２）；Ｌｏｌｉｕｍ  ｐｅｒｅｎｎｅ（ライグラス）のグループＩＩＩ抗原（Ｌｏｌ ｐ ３）；Ｌｏｌｉｕｍ  ｐｅｒｅｎｎｅ（ライグラス）のグループＩＸ抗原（Ｌｏｌ ｐ ５）；Ｌｏｌｉｕｍ  ｐｅｒｅｎｎｅ（ライグラス）のトリプシン（Ｌｏｌ ｐ １１）；マラセチア・フルフル（菌類）の抗原（Ｍａｌ ｆ １）；マラセチア・フルフル（菌類）の抗原（Ｍａｌ ｆ ４）；マラセチア・フルフル（菌類）の抗原（Ｍａｌ ｆ ５）；マラセチア・フルフル（菌類）のシクロフィリンホモログ（Ｍａｌ ｆ ６）；マラセチア・フルフル（菌類）のＭＦ１ペルオキシソーム膜タンパク質（Ｍａｌ ｆ ２）；マラセチア・フルフル（菌類）のＭＦ２ペルオキシソーム膜タンパク質（Ｍａｌ ｆ ３）；Ｍａｌｕｓ  ｄｏｍｅｓｔｉｃａ（リンゴ）のＢｅｔ ｖ １ホモログ（Ｍａｌ ｄ １）；Ｍａｌｕｓ  ｄｏｍｅｓｔｉｃａ（リンゴ）の脂質輸送タンパク質（Ｍａｌ ｄ ３）；一年草（Mercurialis annua）（annual mercury）のプロフィリン（Ｍｅｒ ａ １）；ヨシエビ（エビ）のトロポミオシン（Ｍｅｔ ｅ １）；Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ（マウス）のＭＵＰの抗原（Ｍｕｓ ｍ １）；Ｍｙｒｍｅｃｉａ  ｐｉｌｏｓｕｌａ（オーストラリア・ジャンパー・アリ）の抗原（Ｍｙｒ ｐ １）；Ｍｙｒｍｅｃｉａ  ｐｉｌｏｓｕｌａ（オーストラリア・ジャンパー・アリ）の抗原（Ｍｙｒ ｐ ２）；Ｏｌｅａ  ｅｕｒｏｐｅａ（オリーブ）の抗原（Ｏｌｅ ｅ １）；Ｏｌｅａ  ｅｕｒｏｐｅａ（オリーブ）の抗原（Ｏｌｅ ｅ ３）；Ｏｌｅａ  ｅｕｒｏｐｅａ（オリーブ）の抗原（Ｏｌｅ ｅ ４）；Ｏｌｅａ  ｅｕｒｏｐｅａ（オリーブ）の抗原（Ｏｌｅ ｅ ６）；Ｏｌｅａ  ｅｕｒｏｐｅａ（オリーブ）のプロフィリン（Ｏｌｅ ｅ ２）；Ｏｌｅａ  ｅｕｒｏｐｅａ（オリーブ）のスーパーオキシドジスムターゼ（Ｏｌｅ ｅ ５）；Ｏｒｙｚａ  ｓａｔｉｖａ（コメ）の抗原（Ｏｒｙ ｓ １）；Ｐｅｎａｅｕｓ  ａｚｔｅｃｕｓ（エビ）のトロポミオシン（Ｐｅｎ ａ １）；Ｐｅｎａｅｕｓ  ｉｎｄｉｃｕｓ（エビ）のトロポミオシン（Ｐｅｎ ｉ １）；Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｂｒｅｖｉｃｏｍｐａｃｔｕｍ（菌類）のアルカリセリンプロテイナーゼ（Ｐｅｎ ｂ １３）；Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｃｉｔｒｉｎｕｍ（菌類）のアルカリセリンプロテイナーゼ（Ｐｅｎ ｃ １３）；Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｃｉｔｒｉｎｕｍ（菌類）の熱ショックタンパク質Ｐ７０（Ｐｅｎ ｃ １）；Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｃｉｔｒｉｎｕｍ（菌類）のペルオキシソーム膜タンパク質（Ｐｅｎ ｃ ３）；Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｎｏｔａｔｕｍ（菌類）のアルカリセリンプロテイナーゼ（Ｐｅｎ ｎ １３）；Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｎｏｔａｔｕｍ（菌類）のＮ−アセチルグルコサミニダーゼ（Ｐｅｎ ｎ １）；Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｎｏｔａｔｕｍ（菌類）の液胞性セリンプロテイナーゼ（Ｐｅｎ ｎ １８）；Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｎｏｔａｔｕｍ（菌類）の液胞性セリンプロテイナーゼ（Ｐｅｎ ｏ １８）；Ｐｅｒｉｐｌａｎｅｔａ  ａｍｅｒｉｃａｎａ（ワモンゴキブリ）のＣｒ−ＰＩ（Ｐｅｒ ａ ３）；Ｐｅｒｉｐｌａｎｅｔａ  ａｍｅｒｉｃａｎａ（ワモンゴキブリ）のＣｒ−ＰＩＩ（Ｐｅｒ ａ １）；Ｐｅｒｉｐｌａｎｅｔａ  ａｍｅｒｉｃａｎａ（ワモンゴキブリ）のトロポミオシン（Ｐｅｒ ａ ７）；Ｐｅｒｓｅａ  ａｍｅｒｉｃａｎａ（アボカド）のエンドキチナーゼ（Ｐｅｒｓ ａ １）；Ｐｈａｌａｒｉｓ  ａｑｕａｔｉｃａ（カナリア草）の抗原（Ｐｈａ ａ １）；Ｐｈｌｅｕｍ  ｐｒａｔｅｎｓｅ（オオアワガエリ）の抗原（Ｐｈｌ ｐ １）；Ｐｈｌｅｕｍ  ｐｒａｔｅｎｓｅ（オオアワガエリ）の抗原（Ｐｈｌ ｐ ２）；Ｐｈｌｅｕｍ  ｐｒａｔｅｎｓｅ（オオアワガエリ）の抗原（Ｐｈｌ ｐ ４）；Ｐｈｌｅｕｍ  ｐｒａｔｅｎｓｅ（オオアワガエリ）の抗原（Ｐｈｌ ｐ ６）；Ｐｈｌｅｕｍ  ｐｒａｔｅｎｓｅ（オオアワガエリ）の抗原Ａｇ２５（Ｐｈｌ ｐ ５）；Ｐｈｌｅｕｍ  ｐｒａｔｅｎｓｅ（オオアワガエリ）のポリガラクツロナーゼ（Ｐｈｌ ｐ １３）；
【０１４２】
Ｐｈｌｅｕｍ  ｐｒａｔｅｎｓｅ（オオアワガエリ）のプロフィリン（Ｐｈｌ ｐ １２）；Ｐｏａ  ｐｒａｔｅｎｓｉｓ（ケンタッキーブルーグラス）の抗原（Ｐｏａ ｐ ５）；Ｐｏａ  ｐｒａｔｅｎｓｉｓ（ケンタッキーブルーグラス）のグループＩ抗原（Ｐｏａ ｐ １）；Ｐｏｌｉｓｔｅｓ  ａｎｎｕｌａｒｉｅｓ（ｗａｓｐ）の抗原５（Ｐｏｌ ａ ５）；Ｐｏｌｉｓｔｅｓ  ａｎｎｕｌａｒｉｅｓ（ｗａｓｐ）のヒアルロニダーゼ（Ｐｏｌ ａ ２）；Ｐｏｌｉｓｔｅｓ  ａｎｎｕｌａｒｉｅｓ（ｗａｓｐ）のホスホリパーゼＡ１（Ｐｏｌ ａ １）；Ｐｏｌｉｓｔｅｓ  ｄｏｍｉｎｕｌｕｓ（アシナガバチ）の抗原（Ｐｏｌ ｄ １）；Ｐｏｌｉｓｔｅｓ  ｄｏｍｉｎｕｌｕｓ（アシナガバチ）の抗原（Ｐｏｌ ｄ ５）；Ｐｏｌｉｓｔｅｓ  ｄｏｍｉｎｕｌｕｓ（アシナガバチ）のセリンプロテアーゼ（Ｐｏｌ ｄ ４）；Ｐｏｌｉｓｔｅｓ  ｅｘｃｌａｍａｎｓ（ｗａｓｐ）の抗原５（Ｐｏｌ ｅ ５）；Ｐｏｌｉｓｔｅｓ  ｅｘｃｌａｍａｎｓ（ｗａｓｐ）のホスホリパーゼＡ１（Ｐｏｌ ｅ １）；Ｐｏｌｉｓｔｅｓ  ｆｕｓｃａｔｕｓ（ｗａｓｐ）の抗原５（Ｐｏｌ ｆ ５）；Ｐｏｌｉｓｔｅｓ  ｍｅｔｒｉｃｕｓ（ｗａｓｐ）の抗原５（Ｐｏｌ ｍ ５）；Ｐｒｕｎｕｓ  ａｒｍｅｎｉａｃａ（ａｐｒｉｃｏｔ）のＢｅｔ ｖ １ホモログ（Ｐｒｕ ａｒ １）；Ｐｒｕｎｕｓ  ａｒｍｅｎｉａｃａ（アプリコット）の脂質輸送タンパク質（Ｐｒｕ ａｒ ３）；Ｐｒｕｎｕｓ  ａｖｉｕｍ（スウィートチェリー）のＢｅｔ ｖ １ホモログ（Ｐｒｕ ａｖ １）；Ｐｒｕｎｕｓ  ａｖｉｕｍ（スウィートチェリー）のプロフィリン（Ｐｒｕ ａｖ ４）；Ｐｒｕｎｕｓ  ａｖｉｕｍ（スウィートチェリー）のソーマチンホモログ（Ｐｒｕ ａｖ ２）；Ｐｒｕｎｕｓ  ｐｅｒｓｉｃａ（ピーチ）の脂質輸送タンパク質（Ｐｒｕ ｐ ３）；Ｐｓｉｌｏｃｙｂｅ  ｃｕｂｅｎｓｉｓ（菌類）の抗原（Ｐｓｉ ｃ １）；Ｐｓｉｌｏｃｙｂｅ  ｃｕｂｅｎｓｉｓ（菌類）のシクロフィリン（Ｐｓｉ ｃ ２）；Ｐｙｒｕｓ  ｃｏｍｍｕｎｉｓ（ナシ）のＢｅｔ ｖ １ホモログ（Ｐｙｒ ｃ １）；Ｐｙｒｕｓ  ｃｏｍｍｕｎｉｓ（ナシ）のイソフラボンレダクターゼホモログ（Ｐｙｒ ｃ ５）；Ｐｙｒｕｓ  ｃｏｍｍｕｎｉｓ（ナシ）のプロフィリン（Ｐｙｒ ｃ ４）；Ｑｕｅｒｃｕｓ  ａｌｂａ（ホワイトオーク）の抗原（Ｑｕｅ ａ １）；Ｒａｔｔｕｓ  ｎｏｒｖｅｇｉｕｓ（ラット）の抗原（Ｒａｔ ｎ １）；Ｒｉｃｉｎｕｓ  ｃｏｍｍｕｎｉｓ（トウゴマ）の２Ｓアルブミン（Ric c 1）；Ｓａｌｍｏ  ｓａｌａｒ（タイセイヨウサケ）のパルブアルブミン（Sal ｓ 1）；Ｓｉｎａｐｉｓ  ａｌｂａ（シロガラシ）の２Ｓアルブミン（Sin a 1）；Ｓｏｌａｎｕｍ  ｔｕｂｅｒｏｓｕｍ（ジャガイモ）のパタチン（Sol t 1）；Ｓｏｌｅｎｏｐｓｉｓ  ｇｅｍｉｎａｔａ（アカヒアリ）の抗原（Sol g 2）；Ｓｏｌｅｎｏｐｓｉｓ  ｇｅｍｉｎａｔａ（アカヒアリ）の抗原（Sol g 4）；Ｓｏｌｅｎｏｐｓｉｓ  ｉｎｖｉｃｔａ（ヒアリ）の抗原（Sol i 2）；Ｓｏｌｅｎｏｐｓｉｓ  ｉｎｖｉｃｔａ（ヒアリ）の抗原（Sol i 3）；Ｓｏｌｅｎｏｐｓｉｓ  ｉｎｖｉｃｔａ（ヒアリ）の抗原（Sol i 4）；Ｓｏｌｅｎｏｐｓｉｓ  ｓａｅｖｉｓｓｉｍａ（南米ヒアリ）の抗原（Sol ｓ 2）；Ｓｏｒｇｈｕｍ  ｈａｌｅｐｅｎｓｅ���ジョンソン草）の抗原（Sor ｈ 1）；Ｓｙｒｉｎｇａ  ｖｕｌｇａｒｉｓ（ライラック）の抗原（Syr ｖ 1）；Ｔｏｄａｒｏｄｅｓ  ｐａｃｉｆｉｃｕｓ（イカ）のトロポミオシン（Tod p 1）；Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ  ｒｕｂｒｕｍ（真菌類）の抗原（Tri r 2）；Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ  ｒｕｂｒｕｍ（真菌類）のセリンプロテアーゼ（Ｔｒｉ ｒ ４）；Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ  ｔｏｎｓｕｒａｎｓ（真菌類）の抗原（Tri t 1）；Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ  ｔｏｎｓｕｒａｎｓ（真菌類）のセリンプロテアーゼ（Tri t 4）；Ｖｅｓｐａ  ｃｒａｂｏ（European hornet）の抗原５（Vesp c 5.0101）；Ｖｅｓｐａ  ｃｒａｂｏ（欧州スズメバチ）の抗原５（Vesp c 5.0102）；Ｖｅｓｐａ  ｃｒａｂｏ（欧州スズメバチ）のホスホリパーゼ（Vesp c 1）；Ｖｅｓｐａ  ｍａｎｄａｒｉｎａ（巨大アジアスズメバチ）の抗原（Vesp m 1.01）；Ｖｅｓｐａ  ｍａｎｄａｒｉｎａ（巨大アジアスズメバチ）の抗原（Ｖｅｓｐ ｍ １．０２）；Ｖｅｓｐａ  ｍａｎｄａｒｉｎａ（巨大アジアスズメバチ）の抗原（Vesp m 5）；Ｖｅｓｐｕｌａ  ｆｌａｖｏｐｉｌｏｓａ（黄色スズメバチ）の抗原５（Ves ｆ 5）；Ｖｅｓｐｕｌａ  ｇｅｒｍａｎｉｃａ（黄色スズメバチ）の抗原５（Ves g 5）；Ｖｅｓｐｕｌａ  ｍａｃｕｌｉｆｒｏｎｓ（黄色スズメバチ）の抗原５（Ves m 5）；Ｖｅｓｐｕｌａ  ｍａｃｕｌｉｆｒｏｎｓ（黄色スズメバチ）のヒアルロニダーゼ（Ｖｅｓ ｍ ２）；Ｖｅｓｐｕｌａ  ｍａｃｕｌｉｆｒｏｎｓ（黄色スズメバチ）のホスホリパーゼＡ１（Ｖｅｓ ｍ １）；Ｖｅｓｐｕｌａ  ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉｃａ（黄色スズメバチ）の抗原５（Ｖｅｓ ｐ ５）；Ｖｅｓｐｕｌａ  ｓｑｕａｍｏｓａ（黄色スズメバチ）の抗原５（Ｖｅｓ ｓ ５）；Ｖｅｓｐｕｌａ  ｖｉｄｕａ（ｗａｓｐ）の抗原（Ves vi 5）；Ｖｅｓｐｕｌａ  ｖｕｌｇａｒｉｓ（黄色スズメバチ）の抗原５（Ves ｖ 5）；Ｖｅｓｐｕｌａ  ｖｕｌｇａｒｉｓ（黄色スズメバチ）のヒアルロニダーゼ（Ves ｖ 2）；Ｖｅｓｐｕｌａ  ｖｕｌｇａｒｉｓ（黄色スズメバチ）のホスホリパーゼＡ１（Ｖｅｓ ｖ １）；Ｚｅａ  ｍａｙｓ（トウモロコシ、コーン）の脂質輸送タンパク質（Zea m 14）；および／またはそれらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。
【０１４３】
いくつかの態様において、提供されるナノ粒子および／またはナノ粒子組成物は、癌／腫瘍抗原を含んでいてよい。いくつかの態様において、抗原は、腫瘍抗原であってよく、腫瘍関連抗原または腫瘍特異的抗原が含まれ、例えば、アルファ−アクチニン−４、Ｂｃｒ−Ａｂｌ融合タンパク質、Ｃａｓｐ−８、ベータ−カテニン、ｃｄｃ２７、ｃｄｋ４、ｃｄｋｎ２ａ、ｃｏａ−ｌ、ｄｅｋ−ｃａｎ融合タンパク質、ＥＦ２、ＥＴＶ６−ＡＭＬ１融合タンパク質、ＬＤＬＲ−フコシルトランスフェラーゼＡＳ融合タンパク質、ＨＬＡ−Ａ２、ＨＬＡ−Ａｌｌ、ｈｓｐ７０−２、ＫＩＡＡＯ２０５、Ｍａｒｔ２、Ｍｕｍ−１、２、ａｎｄ  ３、ｎｅｏ−ＰＡＰ、クラスＩミオシン、ＯＳ−９、ｐｍｌＲＡＲａ融合タンパク質、ＰＴＰＲＫ、Ｋ−ｒａｓ、Ｎ−ｒａｓ、トリオースリン酸イソメラーゼ、Ｂａｇｅ−ｌ、Ｇａｇｅ３，４，５，６，７、ＧｎＴＶ、Ｈｅｒｖ−Ｋ−ｍｅｌ、Ｌａｇｅ−１、ＭａｇｅＡｌ、２，３，４，６，１０，１２、Ｍａｇｅ−Ｃ２、ＮＡ−８８、ＮＹ−Ｅｓｏ−１／Ｌａｇｅ−２、ＳＰ１７、ＳＳＸ−２、およびＴＲＰ２−Ｉｎｔ２、ＭｅｌａｎＡ（ＭＡＲＴ−Ｉ）、ｇｐｌＯＯ（Ｐｍｅｌｌ７）、チロシナーゼ、ＴＲＰ−１、ＴＲＰ−２、ＭＡＧＥ−ｌ、ＭＡＧＥ−３、ＢＡＧＥ、ＧＡＧＥ−ｌ、ＧＡＧＥ−２、ｐ１５（５８）、ＣＥＡ、ＲＡＧＥ、ＮＹ−ＥＳＯ（ＬＡＧＥ）、ＳＣＰ−１、Ｈｏｍ／Ｍｅｌ−４０、ＰＲＡＭＥ、ｐ５３、Ｈ−Ｒａｓ、ＨＥＲ−２／ｎｅｕ、ＢＣＲ−ＡＢＬ、Ｅ２Ａ−ＰＲＬ、Ｈ４−ＲＥＴ、ＩＧＨ−ＩＧＫ、ＭＹＬ−ＲＡＲ、エプスタイン・バーウイルス抗原、ＥＢＮＡ、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原Ｅ６およびＥ７、ＴＳＰ−１８０、ＭＡＧＥ−４、ＭＡＧＥ−５、ＭＡＧＥ−６、ｐｌ８５ｅｒｂＢ２、ｐ１８０ｅｒｂＢ−３、ｃ−ｍｅｔ、ｎｍ−２５ ２３Ｈｌ、ＰＳＡ、ＴＡＧ−７２−４、ＣＡ １９−９、ＣＡ ７２−４、ＣＡＭ １７．１、ＮｕＭａ、Ｋ−ｒａｓ、ｐＣａｔｅｎｉｎ、ＣＤＫ４、Ｍｕｍ−１、ｐｌ６、ＴＡＧＥ、ＰＳＭＡ、ＰＳＣＡ、ＣＴ７、テロメラーゼ、４３−９Ｆ、５Ｔ４、７９１Ｔｇｐ７２、ａ−ｆｅｔｏタンパク質、１３ＨＣＧ、ＢＣＡ２２５、ＢＴＡＡ、ＣＡ １２５、ＣＡ１５−３（ＣＡ ２７．２９￥ＢＣＡＡ）、ＣＡ １９５、ＣＡ ２４２、ＣＡ−５０、ＣＡＭ４３、ＣＤ６８￥ＫＰ１、Ｃ０−０２９、ＦＧＦ−５、Ｇ２５０、Ｇａ７３３（ＥｐＣＡＭ）、ＨＴｇｐ−１７５、Ｍ３４４、ＭＡ−５０、ＭＧ７−３０ Ａｇ、ＭＯＶ１８、ＮＢ￥７０Ｋ、ＮＹ−Ｃ０−１、ＲＣＡＳｌ、ＳＤＣＣＡＧ１６、ＴＡ−９０（Ｍａｃ−２結合タンパク質／シクロフィリンＣ関連タンパク質）、ＴＡＡＬ６、ＴＡＧ７２、ＴＬＰ、ならびにＴＰＳであるが、これらに限定されない。
【０１４４】
いくつかの態様において、提供されるナノ粒子および／またはナノ粒子組成物は、表１に列記された１つまたはそれ以上のアレルゲンを含んでいてよい。粗抽出物の例としては、表１に列挙のアレルゲン供給源に由来する抽出物が含まれるが、これに限定されない。
【０１４５】
表１：例示的抗原
【表３】
2019073525.tif 000004
【表４】
2019073525.tif 000005
【０１４６】
【表５】
2019073525.tif 000006
【表６】
2019073525.tif 000007
【０１４７】
【表７】
2019073525.tif 000008
【表８】
2019073525.tif 000009
【０１４８】
【表９】
2019073525.tif 000010
【表１０】
2019073525.tif 000011
【０１４９】
【表１１】
2019073525.tif 000012
【表１２】
2019073525.tif 000013
【０１５０】
【表１３】
2019073525.tif 000014
【表１４】
2019073525.tif 000015
【０１５１】
【表１５】
2019073525.tif 000016
【表１６】
2019073525.tif 000017
【０１５２】
【表１７】
2019073525.tif 000018
【０１５３】
いくつかの態様において、癌抗原は、細胞溶解物または細胞画分のような粗製形態で提供される。細胞溶解物および／または細胞画分の例としては、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）由来の癌細胞；副腎皮質癌腫；ＡＩＤＳ関連リンパ腫を含むＡＩＤＳ関連癌種；肛門癌；虫垂癌；星状細胞腫；基底細胞癌腫；胆管癌；膀胱癌；骨癌（例えば、骨肉腫および悪性線維性組織球腫）；脳幹神経膠腫；脳の癌；脳腫瘍；乳癌；気管支腺腫／カルチノイド；バーキットリンパ腫；カルチノイド腫瘍（例えば、小児腫瘍および消化器腫瘍）；癌腫（起源または発生系譜が不明であるが、上皮細胞の特定の分子的特性、細胞特性および組織学的特性を有する、原発不明の癌腫（ＣＵＰ）を含む）；中枢神経系リンパ腫；小脳星状細胞腫；悪性神経膠腫；子宮頸癌；小児癌；慢性リンパ球性白血病；慢性骨髄性白血病；慢性骨髄増殖性障害；大腸癌；皮膚Ｔ細胞性リンパ腫；線維形成性小細胞腫瘍；子宮内膜癌；上衣腫；食道癌；ユーイング肉腫ファミリー腫瘍；頭蓋外胚細胞腫瘍；性腺外胚細胞腫瘍；卵巣胚細胞腫瘍；肝臓外胆管癌；眼腫瘍；眼内黒色腫；網膜芽細胞腫；胆嚢癌；胃癌；消化管カルチノイド腫瘍；消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）；妊娠性絨毛腫瘍；胃カルチノイド；ヘアリー細胞白血病；頭頸部癌；心臓腫瘍；肝細胞（肝臓）癌；ホジキンリンパ腫；下咽頭癌；視床下部腫瘍および視経路グリオーマ；眼内黒色腫；膵島細胞癌腫（膵臓内分泌）；カポジ肉腫；軟部肉腫；子宮肉腫；腎臓癌（腎細胞癌腫）；喉頭癌；白血病（急性リンパ芽球性白血病または急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病（acute myeloidまたはacute myelogenous leukemia）、慢性リンパ性白血病（chronic lymphocyticまたはchronic lymphocytic leukemia）、慢性骨髄性白血病（chronic myelogenous または chronic myeloid leukemia）を含む）；口唇癌および口腔癌；脂肪肉腫；肝臓癌；肺癌（非小細胞癌および小細胞癌を含む）；リンパ腫（例えば、ＡＩＤＳ関連、バーキット、皮膚Ｔ細胞、ホジキン、非ホジキン、原発性中枢神経系）；ワルデンストレームマクログロブリン血症；髄芽腫；黒色腫；メルケル細胞癌腫；中皮腫（例えば、成人悪性中皮腫、小児中皮腫）；転移性扁平上皮癌；口腔癌；多発性内分泌腫瘍症候群；多発性骨髄腫；菌状息肉腫；骨髄異形成症候群；骨髄異形成／骨髄増殖性疾患；骨髄性(myelogenous)白血病；骨髄性(myeloid)白血病（例えば、成人急性骨髄性白血病）；鼻腔癌および副鼻腔癌；鼻咽頭癌腫；神経芽腫；口腔癌；口腔咽頭癌；卵巣癌；卵巣上皮癌（表層上皮性間質性腫瘍）；卵巣胚細胞腫瘍；卵巣低悪性度腫瘍；膵臓癌；副鼻腔癌および鼻腔癌；副甲状腺癌；陰茎癌；咽頭癌；褐色細胞腫；松果体部の星状細胞腫；松果体胚腫；松果体芽腫およびテント上原始神経外胚葉腫瘍；下垂体腺腫；胸膜肺芽腫；前立腺癌；直腸癌；腎盂および尿管の移行上皮細胞癌；横紋筋肉腫；セザリー症候群；皮膚癌（黒色腫および非黒色腫を含む）；皮膚癌腫；小腸癌；扁平細胞癌腫；胃癌；精巣癌；喉癌；胸腺腫および胸腺癌腫；甲状腺癌；尿道癌；子宮内膜癌；膣癌；外陰癌；および／または、それらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。
【０１５４】
いくつかの態様において、提供されるナノ粒子は、１種以上のアロ抗原を含む。本明細書に記載の通り、アロ抗原は、アロ抗原認識および／または移植片拒絶に関連する抗原（例えば、拒絶免疫応答がそれに対して向けられる抗原）を意味する。アロ抗原は、一般に、同じ種の別の個体とは遺伝的に異なる個体によって発現されるポリペプチドである。用語“アロ抗原ポリペプチド”は、そのアミノ酸配列が、アロ抗原の少なくとも１つの特徴的な配列を含むポリペプチドを意味する。多様なアロ抗原配列が当技術分野で公知である。
【０１５５】
いくつかの態様において、本発明において使用するためのアロ抗原は、主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）ポリペプチドである。いくつかの態様において、本発明において使用するためのアロ抗原は、ＭＨＣクラスＩポリペプチドである。いくつかの態様において、本発明において使用するためのアロ抗原は、ＭＨＣクラスＩＩポリペプチドである。いくつかの態様において、本発明において使用するためのアロ抗原は、ＭＨＣポリペプチドの一部または全ての細胞外ドメインを含む。いくつかの態様において、本発明において使用するためのアロ抗原は、副組織適合性複合体ポリペプチドである。いくつかの態様において、本発明において使用するためのアロ抗原は、共刺激分子（例えば、ＣＤ２８、ＣＤ８０、およびＣＤ８６など）である。いくつかの態様において、本発明において使用するためのアロ抗原は、移植組織によって生産されるか、または移植組織中に存在し、かる宿主によって生産されないか、または宿主に存在しない非ＭＨＣタンパク質である。当業者は、本明細書に記載のアロ抗原が一例であることを認識し得る。アロ抗原認識および／または移植片拒絶に関連するポリペプチドは全て、アロ抗原として分類され得る。
【０１５６】
アロ抗原ポリペプチドは、完全な配列を有していてよいか、あるいは、そのような完全なポリペプチドの機能性断片（すなわち、少なくとも１つの活性配列もしくは部分および／または１つの特徴的配列もしくは部分を有する断片）を表すポリペプチドであり得ることが理解され得る。さらに、当業者は、タンパク質配列は、一般的に、活性を破壊することなく、いくつかの置換を許容することを理解する。従って、活性を有し、少なくとも約３０−４０％、しばしば、約５０％、６０％、７０％、または８０％以上の全配列同一性を共有し、さらに通常、はるかに高い、しばしば、１つまたはそれ以上の高度に保存された領域において９０％以上またはさらに９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性の少なくとも１つの領域(通常、少なくとも３−４個、しばしば２０個まで、またはそれ以上のアミノ酸を含む)を、同じクラスの他のアロ抗原ポリペプチドと共に含むポリペプチドは、本明細書で用いる、関連用語“アロ抗原ポリペプチド”に包含される。
【０１５７】
いくつかの態様において、自己抗原および／またはアロ抗原ポリペプチドのような２種以上のポリペプチドを封入するナノ粒子を含むことが望ましい。いくつかの態様において、ナノ粒子は、２種以上のポリペプチドをカプセル化することができる。いくつかの態様において、１つまたはそれ以上のポリペプチドを各々カプセル化したナノ粒子の混合物は、本発明において使用できる。一例として、少なくとも３つの異なる自己抗原ポリペプチド、膵臓のβ細胞抗原、インスリンおよびグルタミン酸デカルボキシラーゼ（ＧＡＤ）は、インスリン依存型糖尿病（例えば、Ｉ型糖尿病、略してＩＤＤＭ）に寄与すると考えられる。別の非限定的な例として、主要組織適合性ポリペプチド、副組織適合性ポリペプチドポリペプチド、および共刺激成分を含む、いくつかの異なるアロ抗原ポリペプチドは、移植片拒絶反応に寄与すると考えられる。本発明の組成物は、自己抗原またはアロ抗原ポリペプチドの２種以上または全てをカプセル化したナノ粒子の混合物を含んでいてよい。また、複数の自己免疫疾患を同時に治療するように、異なる種類の種々の自己免疫疾患に関連している自己抗原ポリペプチドを含むことが望ましい。
【０１５８】
他の薬剤
いくつかの態様において、提供されるナノ粒子および／またはナノ粒子組成物は、１つまたはそれ以上の他の薬剤（例えば、アジュバント）を含んでいてよい。特定の理論はともかく、いくつかの態様では、微生物（例えば、細菌）細胞の１つまたはそれ以上の特性または特徴を模倣することが可能である。いくつかの態様において、アジュバントは、細菌細胞溶解物および／または細胞溶解物画分を含む、１種またはそれ以上の細菌供給源から提供されてもよい。いくつかの態様において、細菌細胞溶解物画分は、病原体関連分子パターン（“ＰＡＭＰ”）として公知の成分であるか、またはそれを含む。いくつかの態様において、１つまたはそれ以上の疎水性細菌細胞溶解物画分および／または親水性細菌細胞溶解物画分は、親水性細胞成分および／または疎水性細胞成分として１つまたはそれ以上のＰＡＭＰを含む。
【０１５９】
いくつかの態様において、ＰＡＭＰは、自然免疫系の細胞により認識される細菌細胞と関係のある成分である。いくつかの態様において、ＰＡＭＰは、植物および動物の両方においてトール様受容体（ＴＬＲ）および他のパターン認識受容体（ＰＲＲ）により認識される。いくつかの態様において、ＰＡＭＰは、Ｃ型レクチン受容体（ＣＬＲ）により認識される。いくつかの態様において、ＣＬＲは、Ｉ型またはＩＩ型ＣＬＲである。いくつかの態様において、ＰＡＭＰは、膜関連タンパク質および／またはペプチド、細菌膜に埋め込まれている受容体などを含むが、これに限定されない細菌細胞の外表面に関連する成分であるか、またはそれを含む。ＰＡＭＰの例としては、細菌リポ多糖（ＬＰＳ）、細菌フラジェリン、グラム陽性細菌由来のリポテイコ酸、ペプチドグリカン、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、メチル化されていないＣｐＧモチーフ、表２に記載されるＴＬＲリガンドのいずれか、その特徴的部分、および／またはそれらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。
【０１６０】
【表１８】
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【０１６１】
いくつかの態様において、１つまたはそれ以上の他の薬剤は、１つまたはそれ以上のアジュバントであるか、またはそれを含む。いくつかの態様において、アジュバントは、粘膜アジュバント（すなわち、粘膜を介して投与される抗原に対する免疫応答を誘発または増強し得るアジュバント）である。粘膜抗原の例としては、ＴＬＲ４リガンド（例えば、ＬＰＳ、ＭＰＬ）、サイトカイン類（例えば、ＩＬ−１α）、ｃ４８／８０、Ｒ８４８、Ｐａｍ３ＣＳＫ４、ＣｐＧ（ＯＤＮ１８２６）、致死因子（ＬＦ）、およびコレラ毒素が含まれるが、これらに限定されない。特定の粘膜アジュバントは異なる免疫応答を誘導し得ることが当業者に認識され得る。当業者は、特定の製品または複数の製品における使用のために特定のアジュバント（複数可）を選択することができる技術を理解し、かつ知っており、そのような変形は具体的には本発明の範囲内であることが意図される。
【０１６２】
当業者は、複数の抗原分子が本発明の方法によって同時におよび／または連続的にナノ粒子によって送達され得ることを理解し得る。限定することなく、ある抗原タンパク質に対する異なる抗原分子が送達され得る。異なる抗原タンパク質由来の異なる抗原分子もまた、送達され得る。さらに、複数の抗原ポリペプチドおよびタンパク質が、本発明において送達され得る。単一または複数の抗原ポリペプチドおよび単一または複数のサイトカインが、本発明のナノ粒子により個体に送達され得ることもまた理解される。例えば、限定されないが、本発明のアレルゲン抗原および免疫調節分子、例えばインターロイキンは、本発明による方法を用いてナノ粒子により送達され得る。
【０１６３】
本発明は、特定の対象が、抗原の組み合わせ、例えば複数のアレルゲンに暴露されることから利益を得ることができるという認識を包含する。いくつかの態様において、特定の対象に関連する、および／または対象の集団に関連する複数の抗原を含むナノ粒子組成物を提供することが望ましい。例えば、いくつかの態様において、特定の提供される組成物は、特定の対象のアレルギーの幾つかまたは全てに対処するためのアレルゲンの組み合わせ、および／または集団内に一般的に存在する幾つかまたは全てのアレルギーに対処するためのアレルゲンの組み合わせを含んでいてよい。例えば、特定の対象がピーナッツおよび塵ダニに対してアレルギーがあるとき、ナノ粒子組成物は、両方のアレルギーに対処するように設計され、製造され得る。あるいは、またはさらに、いくつかの態様において、複数のアレルゲン由来の抗原であって、（ｉ）特定のコミュニティのメンバーが通常暴露されるもの（例えば、地理的位置のために）；（ｉｉ）対象が一般的な経路（例えば、吸入、注射、接触など）で暴露されるもの；（ｉｉｉ）関連する集団（例えば、地理的な集団、年齢による集団、民族的集団など）内でのアレルギー発生率が指定された閾値を超えているもの；（ｉｖ）１つのアレルゲンに対してアレルギーを有する対象が、他に対するアレルギーも有する傾向があり、例えば、ナッツ類にアレルギーを有する対象は、ピーカン、クルミ、およびピスタチオに対してもアレルギーを有する傾向があり、甲殻類（例えば、ロブスター、カニ、エビ、またはイセエビ）または軟体動物（例えば、アサリ、ムール貝、カキ、またはホタテ）に対してアレルギーを有する対象は、単一の甲殻類または軟体動物だけでなく種々のタイプにアレルギーを有する傾向がある、抗原を含むナノ粒子組成物が製造されることが望ましい。
【０１６４】
いくつかの態様において、特定の提供される組成物は、アレルゲン以外の抗原の組み合わせを含んでいてよい。例えば、いくつかの態様において、特定の提供される組成物は、特定の疾患、障害または病状（例えば、特定の癌、特定の感染性疾患、特定の移植片対宿主もしくは宿主対移植片症候群など）と関係のある抗原の組み合わせを含んでいてよい。
【０１６５】
当業者は、抗原の組み合わせを利用する可能性のある多様な用途を認識し得る。これらは各々、本発明の範囲内であると意図される。
【０１６６】
種々の態様によれば、抗原または他のタンパク質剤を含む提供される組成物は、抗原または他のタンパク質剤を種々の形態のいずれかで含み得る。例示的な形態としては、ＲＮＡ、ＤＮＡ、タンパク質、およびそれらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。いくつかの態様において、抗原またはタンパク質剤は、細胞、組織またはその抽出物の一部として提供されてもよい。
【０１６７】
ナノ粒子組成物
本発明は、種々の新規および／または改良されたナノ粒子組成物を提供する。本発明は、ある既知のナノ粒子組成物（例えば、米国特許第７，５３４，４４８号、同第７，５３４，４４９号、同第７，５５０，１５４号、ＵＳ２００９０２３９７８９Ａ１、ＵＳ２００９０２６９３９７Ａ１、ＵＳ２０１００１０４５０３Ａ１、ＵＳ２０１００１５１４３６Ａ１、ＵＳ２０１００２８４９６５Ａ１、ＷＯ２００６０８０９５１、ＷＯ２００８１１５６４１、ＷＯ２００８１０９３４７、ＷＯ２００９０９４２７３、ＷＯ２０１２１６７２６１、およびＷＯ２０１３００３１５７（各々は引用により本明細書中に包含される）の１つまたはそれ以上に記載のもの）の多くの利点は、１つまたはそれ以上の微生物細胞抽出物および／または１つまたはそれ以上の粗製抗原調製物と共に使用することにより有利に利用され、かつ改善され得るという認識を包含する。本発明によれば、いくつかの態様において、（要すれば、１つもしくはそれ以上の抗原および／または１つもしくはそれ以上の他の薬剤と共に）複数の微生物細胞成分を含む微生物細胞抽出物を含むナノ粒子の組み合わせは、微生物細胞の特定の免疫学的に関連する特徴を具現化する改良されたナノ粒子を提供する。
【０１６８】
本発明はさらに、既知のナノ粒子組成物（例えば、米国特許第７，５３４，４４８号、同第７，５３４，４４９号、同第７，５５０，１５４号、ＵＳ２００９０２３９７８９Ａ１、ＵＳ２００９０２６９３９７Ａ１、ＵＳ２０１００１０４５０３Ａ１、ＵＳ２０１００１５１４３６Ａ１、ＵＳ２０１００２８４９６５Ａ１、ＷＯ２００６０８０９５１、ＷＯ２００８１１５６４１、ＷＯ２００８１０９３４７、ＷＯ２００９０９４２７３、ＷＯ２０１２１６７２６１、およびＷＯ２０１３００３１５７（各々は引用により本明細書中に包含される）の１つまたはそれ以上に記載のもの）は、アレルギーの処置および／または予防に有利に利用され得るという認識を包含する。いくつかの態様において、本発明は、１つまたはそれ以上のアレルゲンと共にナノ粒子を含むナノ粒子組成物を提供する。特定のこのような態様において、本発明は、１つまたはそれ以上の比較的粗いアレルゲン調製物と共にナノ粒子を含むナノ粒子組成物を提供する。
【０１６９】
本発明はさらに、既知のナノ粒子組成物（例えば、米国特許第７，５３４，４４８号、同第７，５３４，４４９号、同第７，５５０，１５４号、ＵＳ２００９０２３９７８９Ａ１、ＵＳ２００９０２６９３９７Ａ１、ＵＳ２０１００１０４５０３Ａ１、ＵＳ２０１００１５１４３６Ａ１、ＵＳ２０１００２８４９６５Ａ１、ＷＯ２００６０８０９５１、ＷＯ２００８１１５６４１、ＷＯ２００８１０９３４７、ＷＯ２００９０９４２７３、ＷＯ２０１２１６７２６１、およびＷＯ２０１３００３１５７（各々は引用により本明細書中に包含される）の１つまたはそれ以上に記載のもの）は、１つまたはそれ以上の抗原調製物および／または１つまたはそれ以上の微生物細胞抽出物および／または１つまたはそれ以上の本明細書に記載の他の薬剤と組み合わせて種々の状況で望ましく利用および／または改善され得るという認識を包含する。
【０１７０】
特定の態様において、提供されるナノ粒子組成物は、特定の組み合わされた要素がナノ粒子の内腔内に捕捉されるように、１つまたはそれ以上の細胞抽出物、１つまたはそれ以上の抗原調製物、および／または１つまたはそれ以上の他の薬剤と組み合わせたナノ粒子を含む。いくつかの態様において、提供されるナノ粒子組成物は、特定の組み合わされた要素がナノ粒子の外表面に結合するように、１つまたはそれ以上の細胞抽出物、１つまたはそれ以上の抗原調製物、および／または１つまたはそれ以上の他の薬剤と組み合わせたナノ粒子を含む。いくつかの態様において、提供されるナノ粒子組成物は、特定の組み合わされた要素がナノ粒子中およびナノ粒子上の両方に存在するように、１つまたはそれ以上の細胞抽出物、１つまたはそれ以上の抗原調製物、および／または１つまたはそれ以上の他の薬剤と組み合わせたナノ粒子を含む。いくつかの態様において、提供されるナノ粒子組成物は、特定の組み合わされた要素がナノ粒子と混合されるが、ナノ粒子上またはナノ粒子中の任意の部位に特異的に結合されていないように、１つまたはそれ以上の細胞抽出物、１つまたはそれ以上の抗原調製物、および／または１つまたはそれ以上の他の薬剤と組み合わせたナノ粒子を含む。
【０１７１】
ある特定の態様において、本発明は、親水性細胞抽出物の成分がナノ粒子の内腔内に局在化されているナノ粒子組成物を提供する。いくつかのかかる態様において、親水性細胞抽出物の全ての成分は、ナノ粒子の内腔内に優先的に局在化されている。いくつかのかかる態様において、親水性細胞抽出物の全ての成分は、ナノ粒子の内腔内に実質的に排他的に局在化されている。
【０１７２】
ある特定の態様において、本発明は、疎水性細胞抽出物の成分がナノ粒子の外表面に局在化されているナノ粒子組成物を提供する。いくつかのかかる態様において、疎水性細胞抽出物の全ての成分は、ナノ粒子の外表面上に優先的に局在化されている。いくつかのかかる態様において、疎水性細胞抽出物の全ての成分は、ナノ粒子の外表面上に実質的に排他的に局在化されている。
【０１７３】
ある特定の態様において、本発明は、親水性細胞抽出物の成分が、（例えば、優先的に、または実質的に排他的に）ナノ粒子の内腔内に局在化されており、かつ疎水性細胞抽出物の成分が、（例えば、優先的に、または実質的に排他的に）ナノ粒子の外表面に局在化されている、ナノ粒子組成物を提供する。
【０１７４】
いくつかの態様において、１つまたはそれ以上の微生物成分、１つまたはそれ以上の抗原調製物、および／または１つまたはそれ以上の他の薬剤の全てまたは実質的に全ては、例えば、感受性の個体に対してアナフィラキシー反応のアレルゲンを投与するとき、提供される組成物中のナノ粒子の内腔内に捕捉されていることが望ましい。いくつかの態様において、１つまたはそれ以上の微生物成分、抗原調製物、および／または他の薬剤が、ナノ粒子の内腔内ならびにナノ粒子の外表面上の両方に局在されることが望ましい。
【０１７５】
関連付け(Associating)
生分解性および／または生体適合性ポリマーと１つまたはそれ以上の細胞調製物、細胞抽出物、１つまたはそれ以上の抗原調製物、および／または１つまたはそれ以上の他の薬剤を合わせる種々の方法のいずれかが、種々の態様に従って使用され得る。関連付けの例示的方法には、大気圧にほぼ等しい圧力下での混合、ブレンドまたは組み合わせ、大気圧以上の圧力下（例えば、真空下）での混合、ブレンドまたは組合せ、大気圧未満の圧力下での混合、ブレンドまたは組合せが含まれるが、これに限定されない。
【０１７６】
いくつかの態様において、１つまたはそれ以上の抽出物、調製物および／または薬剤は、ナノ粒子の表面に共有結合されている。いくつかの態様において、１つまたはそれ以上の抽出物、調製物および／または薬剤は、ナノ粒子の表面に非共有結合されている。いくつかの態様において、非共有結合は、ナノ粒子の膜中への１つまたはそれ以上の成分の組み込みを伴う。いくつかの態様において、非共有結合は、ナノ粒子の膜またはその中に組み込まれた要素との特異的結合を伴う。いくつかの特定の態様において、抽出物、調製物、または薬剤の１つまたはそれ以上の特定の成分は、ナノ粒子の膜中の標的と特異的に結合するリガンドと結合することができる。いくつかの態様において、このような態様に利用されるリガンド−標的の組合せは、例えば、ビオチン−アビジン、抗体−抗原、ＧＳＴ−グルタチオン、マンノース結合タンパク質−マンノース、タンパク質Ａ−ＩｇＧ、および／またはＳ−タグであり得る。
【０１７７】
いくつかの態様において、提供されるナノ粒子組成物は、１つまたはそれ以上の構造的および／または機能的特徴を共有するナノ粒子の複数のセットを含んでいてよい。例えば、いくつかの態様において、提供されるナノ粒子組成物は、ナノ粒子の複数のセットを含んでいてよく、各々が、特定の標的部位へ該セットのメンバーを局在化する標的化薬剤を含む（米国特許第７，５３４，４４８号、および同第７，５３４，４４９号（引用により本明細書中に包含される）、例えば、標的化薬剤およびナノ粒子中に標的化薬剤を組み込むための方法、参照）。あるいは、またはさらに、いくつかの態様において、提供されるナノ粒子組成物は、複数のセットを含んでいてよく、各々が、異なる半減期（例えば、関連する組織または対象の臓器における）、異なる成分（例えば、内腔内のまたは外表面に結合した、抗原の異なる集団など）を有するように、および／またはそれにより特徴付けられるように設計されている。
【０１７８】
医薬組成物
いくつかの態様において、本発明は、１つまたはそれ以上の薬学的に許容される賦形剤と共に提供されるナノ粒子組成物を含む、医薬組成物を提供する。
【０１７９】
いくつかの態様において、提供される医薬組成物は、例えば、薬理学の分野で公知の、または今後開発される、いずれかの適当な方法により製造され得る。一般的に、そのような製造方法は、１つまたはそれ以上の薬学的に許容される賦形剤と結合された提供されるナノ粒子組成物をもたらす工程、その後、要すれば、および／または所望により、成形され、および／または投与に適する形態に、例えば単回用量単位または複数回用量単位に包装される工程を含む。
【０１８０】
いくつかの態様において、組成物は、製造され、包装され、および／または単回単位用量として、および／または複数の単回単位用量として大量に販売されてよい。本明細書で用いる“単位用量”は、所定量の提供されるナノ粒子組成物を含む医薬組成物の個別量である。提供されるナノ粒子組成物の量は、一般的に、対象に投与され得る提供されるナノ粒子の投与量および／またはかかる投与量の便利な画分、例えば、かかる投与量の２分の１もしくは３分の１に等しい。
【０１８１】
多くの態様において、提供される医薬組成物は、特に、粘膜による送達（例えば、経口、経鼻、経直腸または舌下送達）のために剤形化される。
【０１８２】
いくつかの態様において、提供される医薬組成物に使用するのに適当な賦形剤には、例えば、１つまたはそれ以上の薬学的に許容される溶媒、分散媒体、造粒媒体、希釈剤、または他の液体ビークル、分散もしくは懸濁助剤、界面活性剤および／または乳化剤、等張剤、増粘剤もしくは乳化剤、防腐剤、固体結合剤、滑剤、崩壊剤、結合剤、防腐剤、緩衝剤などを、所望の特定の投与量形態に適するように含んでいてよい。あるいは、またはさらに、薬学的に許容される賦形剤、例えばカカオバターおよび／または坐薬ワックス、着色剤、コーティング剤、甘味剤、香味剤、および／または芳香剤を使用することができる。レミントンの“The Science and Practice of Pharmacy, 21st Edition, A. R. Gennaro (Lippincott, Williams ＆ Wilkins, Baltimore, MD, 2005；引用により本明細書中に包含される）は、医薬組成物の剤形化に使用される種々の賦形剤およびその製造のための公知の技術を記載している。
【０１８３】
いくつかの態様において、適当な賦形剤は、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の純度である。いくつかの態様において、賦形剤は、米国食品医薬品局によって承認されている。いくつかの態様において、賦形剤は、医薬品グレードである。いくつかの態様において、賦形剤は、米国薬局方（ＵＳＰ）、欧州薬局方（ＥＰ）、英国薬局方、および／または他の国際薬局方の基準を満たしている。
【０１８４】
いくつかの態様において、液体投与量形態（例えば、経口および／または非経腸投与のための）には、エマルジョン、マイクロエマルジョン、溶液、懸濁液、シロップ剤、および／またはエリキシル剤が含まれるが、これに限定されない。提供されるナノ粒子組成物に加えて、液体投与量形態は、当技術分野で一般的に用いられる不活性希釈剤、例えば、水または他の溶媒、可溶化剤および乳化剤、例えばエチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ジメチルホルムアミド、油（特に、綿実油、ラッカセイ油、コーン油、胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油、およびゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリエチレングリコールおよびソルビタンの脂肪酸エステル、ならびにそれらの混合物を含み得る。不活性希釈剤以外に、経口組成物は、アジュバント、例えば湿潤剤、乳化剤および懸濁化剤、甘味剤、香味剤、および／または芳香剤を含んでいてよい。非経腸投与のための特定の態様において、組成物は、可溶化剤、例えば、ＣＲＥＭＯＰＨＯＲ（登録商標）、アルコール類、油、変性油、グリコール類、ポリソルベート、シクロデキストリン、ポリマー、および／またはそれらの組み合わせと混合される。
【０１８５】
いくつかの態様において、注射可能調製物、例えば、滅菌水性または油性懸濁液は、好適な分散剤、湿潤剤、および／または懸濁化剤を用いて公知の方法によって剤形化され得る。滅菌液体調製物は、例えば、非毒性の非経腸的に許容される希釈剤および／または溶媒中の、溶液、懸濁液、および／またはエマルジョン、例えば、１，３−ブタンジオール溶液であり得る。使用され得る、許容されるビークルおよび溶媒は、例えば、水、リンゲル溶液、Ｕ．Ｓ．Ｐ．、および等張性塩化ナトリウム溶液である。滅菌された不揮発性油は、溶媒または懸濁媒体として常用されている。この目的のために、いかなる刺激性のない不揮発性油（bland fixed oil）は、合成モノ−またはジグリセリドを含めて使用され得る。オレイン酸のような脂肪酸は、液体製剤の製造に使用できる。
【０１８６】
液体製剤は、例えば、細菌保持フィルターを通して濾過することにより、および／または使用前に滅菌水もしくは他の滅菌注射可能媒体中に溶解または分散され得る滅菌固体組成物の形態で滅菌剤を組み込むことにより、滅菌され得る。
【０１８７】
いくつかの態様において、１つまたはそれ以上の戦略を、送達後に提供されるナノ粒子組成物の効果を延長および／または遅延するのに利用することができる。
【０１８８】
いくつかの態様において、提供される医薬組成物は、例えば、直腸または膣送達のために、坐剤として剤形化され得る。いくつかの態様において、坐剤製剤は、環境温度で固体であるが、体温で液体であり、それ故に体内（例えば、直腸または膣腔内）で溶けて、提供されるナノ粒子組成物を放出する、カカオバター、ポリエチレングリコールまたは坐剤ワックスのような非刺激性賦形剤を利用して混合することにより製造され得る。
【０１８９】
いくつかの態様において、固体投与量形態（例えば、経口投与のための）には、カプセル剤、錠剤、丸剤、粉剤、および／または顆粒剤が含まれる。かかる固体投与量形態において、提供されるナノ粒子組成物は、少なくとも１つの不活性な薬学的に許容される賦形剤、例えばクエン酸ナトリウムまたはリン酸二カルシウムおよび／または充填剤もしくは増量剤（例えば、デンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール、およびケイ酸）、結合剤（例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリジノン、スクロース、およびアカシア）、湿潤剤（例えば、グリセロール）、崩壊剤（例えば、寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモデンプン、タピオカデンプン、アルギン酸、特定のケイ酸塩、および炭酸ナトリウム）、溶解遅延剤（例えば、パラフィン）、吸収促進剤（例えば、４級アンモニウム化合物）、湿潤剤（例えば、セチルアルコールおよびモノステアリン酸グリセロール）、吸収剤（例えば、カオリンおよびベントナイト粘土）、および滑剤（例えば、タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム）、ならびにそれらの混合物と混合されてもよい。カプセル剤、錠剤および丸剤の場合において、投与量形態は緩衝剤を含んでもよい。
【０１９０】
いくつかの態様において、同様のタイプの固体組成物は、ラクトースまたは乳糖ならびに高分子量ポリエチレングリコールなどのような賦形剤を用いて、軟および／または硬質充填ゼラチンカプセル中の充填剤として使用することができる。錠剤、糖衣錠、カプセル剤、丸剤、および顆粒剤の固体投与量形態は、医薬製剤分野で周知の腸溶コーティング剤および他のコーティング剤のようなコーティングおよびシェルを用いて製造することができる。
【０１９１】
腸溶性コーティングの例としては、以下の１つまたはそれ以上：酢酸フタル酸セルロース；アクリル酸メチル−メタクリル酸コポリマー；セルロースアセテートスクシネート；ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート；ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネート（ヒプロメロース酢酸エステルコハク酸エステル）；ＨＰ５５；ポリビニルアセテートフタレート（ＰＶＡＰ）；メタクリル酸メチル−メタクリル酸コポリマー；メタクリル酸コポリマー、酢酸セルロース（および、そのコハク酸塩およびフタル酸塩バージョン）；スチロールマレイン酸コポリマー；ポリメタクリル酸／アクリル酸コポリマー；ヒドロキシエチルエチルセルロースフタレート；ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネート；酢酸セルローステトラヒドロフタレート；アクリル樹脂；シェラック、ならびにそれらに組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。
【０１９２】
いくつかの態様において、固体投与量形態は、所望により乳白剤を含んでいてよく、任意に、遅延様式で、腸管の特定の部分においてのみ、またはそこに優先的に提供されるナノ粒子組成物（複数可）を放出する組成物であり得る。使用できる包埋組成物の例としては、ポリマー物質およびワックスが含まれる。同様のタイプの固体組成物は、ラクトースまたは乳糖ならびに高分子量ポリエチレングリコールなどの賦形剤を用いて、軟質および硬質充填ゼラチンカプセル中の充填剤として用いられ得る。
【０１９３】
いくつかの態様において、本発明は、局所および／または経皮送達のための組成物、例えば、クリーム、リニメント、軟膏、油、泡、スプレー、ローション、液体、粉末、増粘ローション、またはゲルを提供する。かかる製剤の特定の例は、皮膚軟化剤、栄養ローション型エマルジョン、クレンジングローション、クレンジングクリーム、スキンミルク、皮膚軟化ローション、マッサージクリーム、エモリエントクリーム、メークアップベース、口紅、フェイシャルパックもしくはフェイシャルゲル、クリーナー製剤、例えばシャンプー、リンス、ボディクレンザー、ヘアトニック、もしくは石鹸、または皮膚科学的組成物、例えばローション、軟膏、ゲル、クリーム、リニメント剤、パッチ、脱臭剤もしくはスプレー剤のような製品として製造され得る。
【０１９４】
いくつかの態様において、アジュバントは、アジュバントおよび提供されるナノ粒子組成物が個体に実質的に同時に送達されるように、提供されるナノ粒子組成物（複数可）と同じ製剤中に提供される。いくつかの態様において、アジュバントは、別個の製剤で提供される。別個のアジュバントは、提供されるナノ粒子組成物の投与前に、その投与と同時に、またはその投与後に投与され得る。
【０１９５】
いくつかの態様において、提供される組成物は、例えば、１週間、２週間、１ヶ月、２ヶ月、６ヶ月、１年、２年、３年、またはそれ以上の長期間の間安定である。いくつかの態様において、提供される組成物は、容易に輸送可能であり、従来の宅配便または他のパッケージ配送サービスによる輸送も可能である。従って、いくつかの態様は、長期貯蔵が可能であり、迅速、容易かつ安全な輸送が可能であるために、少なくとも部分的に、伝染病または生物学的薬剤（例えば、炭疽菌、天然痘、ウイルス性出血熱、ペストなど）による攻撃のような疾患の発症状況において有用であり得る。このような属性は、必要としている対象に提供される組成物を迅速に分配するのを可能にし得る。
【０１９６】
いくつかの態様において、カプセル化剤、例えば、抗原を、対象の胃腸（ＧＩ）管に沿う種々の位置で放出することが有利であり得る。いくつかの態様において、カプセル化剤、例えば、抗原を、対象の口腔ならびに内、ならびに対象の胃腸管に沿う１つまたはそれ以上の位置で放出することが有利であり得る。従って、いくつかの態様において、複数の提供される組成物（例えば、２以上）は、複数の位置でカプセル化剤の放出を容易にするために単一の対象に投与され得る。いくつかの態様において、複数の組成物の各々は、例えば、種々の腸溶性コーティングによって提供されるように、異なる放出プロファイルを有する。いくつかの態様において、複数の組成物の各々は、同様の放出プロファイルを有する。いくつかの態様において、複数の組成物は、１つまたはそれ以上の抗原を含む。いくつかの態様において、複数の投与される組成物の各々は、異なる抗原を含む。いくつかの態様において、複数の組成物の各々は、同じ抗原を含む。
【０１９７】
いくつかの態様において、１つまたはそれ以上の薬剤が含まれてよく、ナノ粒子からの薬剤（例えば、抗原）の放出の速度および／または程度に影響を与え得る。いくつかの態様において、かかる薬剤は、（例えば、標的部位以外の部位および／または所望の時間以外の時間での）漏れまたは望ましくない放出により放出の速度および／または程度に影響を与え得る。特定の理論はともかく、いくつかの態様において、かかる薬剤は、ナノ粒子表面上の放出部位をコーティングするか、または塞ぎ得る。いくつかの態様において、かかる薬剤は、タンニン酸であり得るか、またはタンニン酸を含み得る。
【０１９８】
投与経路
いくつかの態様において、提供されるナノ粒子組成物は、送達の適当な経路のために剤形化され得る。いくつかの態様において、提供されるナノ粒子および／またはナノ粒子組成物は、気管支内点滴注入、および／または吸入；口腔内、経腸、皮内、動脈内（ＩＡ）、皮内、胃内（ＩＧ）、髄内、筋肉内（ＩＭ）、鼻腔内、腹腔内（ＩＰ）、髄腔内、気管内注入（ｂｙ）、静脈内（ＩＶ）、脳室内、粘膜、鼻腔スプレー、および／またはエアロゾル、経口（ＰＯ）、経口スプレーとして、直腸（ＰＲ）、皮下（ＳＱ）、舌下；局所および／または経皮（例えば、ローション、クリーム、リニメント剤、軟膏、粉末、ゲル、ドロップなどにより）、経皮、膣、硝子体、および／または門脈カテーテルを通して；および／または、それらの組み合わせを含むが、これに限定されない、何れかの送達経路のために剤形化され得る。いくつかの態様において、本発明は、粘膜投与による提供されるナノ粒子組成物の投与方法を提供する。いくつかの態様において、本発明は、経口投与による提供されるナノ粒子組成物の投与方法を提供する。いくつかの態様において、本発明は、舌下投与による提供されるナノ粒子組成物の投与方法を提供する。
【０１９９】
治療方法
本発明は、とりわけ、各々が、内腔および外表面を画定するナノ粒子構造中に配置された生分解性または生体適合性ポリマー、および少なくとも１つの内腔内に封入された親水性細胞成分の調製物および／または少なくとも１つのナノ粒子の外表面に結合した疎水性細胞成分から構成されている、複数のナノ粒子を含むナノ粒子組成物をそれを必要とする対象に投与する方法を提供する。
【０２００】
いくつかの態様において、本発明は、種々の疾患、障害および／または病状の治療方法を提供する。いくつかの態様において、提供される組成物は、アレルギー、感染症、癌、およびそれらの組み合わせの処置および／または予防のために対象に投与され得る。好適な組成物の例としては、本明細書に記載のものが含まれる。
【０２０１】
アレルギー
本発明は、とりわけ、アレルギーの処置および／または予防のための方法および組成物を提供する。いくつかの態様において、提供されるナノ粒子組成物は、アレルギー反応の発症を予防および／または遅延するためのワクチンとして有用である。いくつかの態様において、提供されるナノ粒子組成物は、将来のアレルギー反応の重症度および／または持続期間の低減のためのワクチンとして有用である。いくつかの態様において、提供されるナノ粒子組成物は、進行中のアレルギー反応の軽減および／または停止のための治療剤として有用である。いくつかの態様において、それを必要とする対象は、アレルギー性鼻炎、喘息、アトピー性湿疹、アナフィラキシー、昆虫毒、薬物アレルギー、食物アレルギー、および／またはそれらの組み合わせを含むが、これに限定されない、本明細書に記載のアレルギー状態に罹患に罹患している。
【０２０２】
いくつかの態様において、提供されるナノ粒子組成物は、アナフィラキシー性アレルゲン、例えば、食物アレルゲン、昆虫アレルゲン、およびラバーアレルゲン（例えば、ラテックス由来）に関連するアレルギーの処置および／または予防のために使用できる。
【０２０３】
いくつかの態様において、提供されるナノ粒子組成物は、食品に関連するアレルギーの処置および／または予防のために使用できる。食物アレルギーは、食品中に含まれる特定のタンパク質に対するＩｇＥの相互作用によって仲介される。一般的な食物アレルゲンの例としては、ナッツ類由来のタンパク質（例えば、ピーナッツ、クルミ、アーモンド、ピーカン、カシューナッツ、ヘーゼルナッツ、ピスタチオ、松の実、ブラジルナット由来）、乳製品（例えば、卵、牛乳）、種子（例えば、ゴマ、ケシ、マスタード）、大豆、小麦、および魚（例えば、エビ、カニ、ロブスター、ハマグリ、ムール貝、カキ、ホタテ、ザリガニ）が含まれる。
【０２０４】
いくつかの態様において、提供されるナノ粒子組成物は、昆虫アレルゲンに関連するアレルギーの処置および／または予防のために使用できる。一般的な昆虫アレルゲンの例としては、例えばノミ、ダニ、アリ、ゴキブリ、およびミツバチなどの昆虫由来のタンパク質が含まれるが、これに限定されない。
【０２０５】
いくつかの態様において、摂取、吸入、および／または注入されたとき、アレルゲンが反応を誘発する。アレルゲンはまた、単に皮膚との接触によって反応を惹起し得る。ラテックスは周知の例である。ラテックス製品は、ゴムの木（パラゴムノキ）由来の乳液および他の加工剤から製造されている。ラテックス中のタンパク質の多くは、広範なアレルギー反応を引き起こし得る。多くの製品が、医療用品や個人用保護具として、ラテックスを含んでいる。局所的なアレルギー性皮膚炎および即座の全身過敏症（または、アナフィラキシー）の２種の反応が、ラテックスに敏感な人に生じ得る。
【０２０６】
いくつかの態様において、提供されるナノ粒子組成物は、局所的アレルギー性皮膚炎に関連するアレルギーの処置および／または予防のために使用できる。局所的アレルギー性皮膚炎は、ラテックスへの暴露後に短時間で発症し、一般的に、蕁麻疹（urticaria or hives）の症状が含まれる。該反応はアレルギー性反応であり、吸入ではなく、直接接触することにより誘発されると考えられている（Sussman et al., 1991, JAMA, 265：2844；引用により本明細書中に包含される）。即時型全身過敏症の症状は、皮膚および呼吸器系の問題（例えば、蕁麻疹、じんましん、鼻炎結膜炎、唇、まぶた、および喉の腫れ、喘鳴、ならびに咳）から、低血圧およびショックに進行し得るアナフィラキシーへと変化する。このような反応は、アレルゲンへの吸入または皮膚暴露によって誘発され得る。
【０２０７】
いくつかの態様において、提供されるナノ粒子組成物は、対象のＴＨ２型応答を抑制および／または低減させ、および／または対象のＴＨ１型応答を増強および／または増加させるために機能し得る。いくつかの態様において、提供されるナノ粒子組成物は、対象のＴＨ２型応答を増強および／または増加させ、および／または対象のＴＨ１型応答を抑制および／または低減させるために機能し得る。いくつかの態様において、対象のＴＨ２型応答は、ＣｐＧオリゴヌクレオチドに対する細胞表面受容体（例えば、ＤＥＣ２０５）の標的化により増強される。
【０２０８】
いくつかの態様において、提供されるナノ粒子組成物は、アレルギーの特定のクラスに分類される対象のアレルギーの全てを効果的に処置および／または予防する。いくつかの態様において、アレルギーの“クラス”の例には、アナフィラキシー性アレルギーおよび非アナフィラキシー性アレルギーが含まれるが、これに限定されない。いくつかの態様において、アレルギーの“クラス”の例には、食物アレルギー、昆虫アレルギー、ペットの毛のアレルギー、花粉アレルギー、草アレルギー、ゴムアレルギーなどが含まれるが、これらに限定されない。従って、いくつかの態様において、提供されるナノ粒子組成物は、対象の食物アレルギーの全てを処置するために有用であり得る。いくつかの態様において、アレルギーの“クラス”の例には、複数のアレルゲンを含む、特定の個々の食品が含まれるが、これに限定されない。例えば、少なくとも１１の公知のピーナッツアレルゲンタンパク質がある。従って、いくつかの態様において、アレルギーの“クラス”は、“ピーナッツ”アレルギーであり、提供されるナノ粒子組成物は、７つの異なるピーナッツアレルゲンタンパク質の全てと関連する対象のアレルギーの全てを処置するために有用であり得る。
【０２０９】
いくつかの態様において、提供されるナノ粒子組成物は、アレルギー特異的抗原が含まれていないにも関わらず、単一のアレルギーを処置および／または予防するのに有用であり得る。いくつかの態様において、提供されるナノ粒子組成物は、複数の異なるアレルギーを処置および／または予防するのに有用であり得る。いくつかの態様において、提供されるナノ粒子組成物は、対象のアレルギーの実質的に全てを処置および／または予防するのに有用であり得る。例えば、アレルギーを有する、および／またはアレルギーになりやすい対象は、しばしば、２以上のアレルゲン、例えば、少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、またはそれ以上の異なるアレルゲンに対してアレルギー性である。従って、いくつかの態様において、提供されるナノ粒子組成物は、単一の患者において、少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、またはそれ以上の異なるアレルギーを処置および／または予防するために使用できる。いくつかの態様において、提供されるナノ粒子組成物は、複数の異なるアレルギー、例えば、少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、またはそれ以上の異なるアレルギーを有し、および／または該アレルギーになりやすい対象に、対象の症状が軽減され、および／または改善されるように投与される。いくつかの態様において、提供されるナノ粒子組成物は、アレルギー、例えば、少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、またはそれ以上の異なるアレルギーを有し、および／または該アレルギーになりやすい対象に、該対象の症状の発症が遅延されるように投与される。
【０２１０】
いくつかの態様において、提供される組成物は、アレルギーを処置するための経口ワクチンとして用いられ得る。経口ワクチンの主な利点の１つは、粘膜免疫および全身性免疫の両方を作製する能力である。経口ワクチンは以前から開発されてきたが、それらはほとんど、感染性疾患の予防に向けられており、成功の度合いが大きく変化している。例えば、経口ワクチンは、とりわけ、炭疽菌、コレラ、胃腸炎、小児下痢、マラリア、麻疹、および結核のために開発されている（Aziz et al., Oral Vaccines: New Needs, New Possibilities, 2007, BioEssays 29.6: 591−604を参照; また、 Silin et al., Oral Vaccination: Where are we?, Exp. Opin. Drug Deliv., 2007, 4(4):323−340も参照、両文献は、引用によりその全体を本明細書中に包含される）。そのような予期しない結果の理由の一部は、腸粘膜の複雑な性質である。簡単に言うと、腸内の粘膜のベースは、上皮内リンパ球（拡散リンパ組織とも言われる）に豊む下層の粘膜固有層と共に、腸管関連または粘膜関連リンパ系組織によって裏打ちされている。腸粘膜におけるＴ細胞の大部分は、αβ型またはγδ型のいずれかである。ＣＤ４およびＣＤ８細胞は両方とも、腸粘膜において見出され、腸粘膜はまた、Ｂ細胞、単球／マクロファージ、樹状細胞（dendrocyte）および他の免疫細胞も保持する。実際に、腸管には、総リンパ球の〜２％のみ含まれる循環リンパ球と共に、ヒト身体内の免疫細胞の総数の〜９０％が存在することが知られている（Silin et al.を参照のこと）。さらに、腸管には、全ての免疫グロブリンまたはＩｇ産生細胞の〜８０％が存在することが知られており、それは、分泌型ＩｇＡの２〜３倍に当たる循環ＩｇＧの総生産量を放出する（Silin et al.を参照のこと）。従って、腸環境に暴露されるいずれかの治療は、種々の応答を生じる可能性があるために、いくつかの免疫細胞または他の細胞のいずれかによって影響を受ける。
【０２１１】
アレルギーを処置するのに有効な経口ワクチンを得るために、抗原提示細胞（ＡＰＣ）に１つまたはそれ以上の抗原の有効な提示が必要である。Ｍ細胞およびパイエル板は、経口治療の一般的な標的であるが、さらなる標的としては、エンテロサイト、腸間膜リンパ節、および腸上皮細胞が含まれるが、これらに限定されない。各ＡＰＣは、種々の態様により標的化され得る。経口免疫は、病原体に対する粘膜防御において重要な役割を果たすことが知られている分泌型ＩｇＡ（ｓＩｇＡ）の有意な量を生産することが知られている。しかしながら、ｓＩｇＡの量は、非粘膜病原体または感染症状を考慮すると、疑問である。種々の態様が、このこと、および実質的にＴｈ２応答を生じる代わりに、大量のｓＩｇＡの放出を誘発しないことを認識する。
【０２１２】
有効な経口ワクチンを提供することの主な既知の障壁は、腸内での抗原のタンパク質分解、腸内の適切な放出プロファイルの調整、および合理的なサイズの用量での十分な抗原の送達の問題が含まれる。さらに、抗原に対する経口免疫寛容の発達は、一般的に経口ワクチンの開発において最も関心のある点であると考えられる。経口免疫寛容とは、経口抗原暴露が免疫寛容をもたらし得る現象、およびその後の暴露に対する全身性免疫応答の抑制である。経口寛容の発達は、経口抗原暴露の自発的な機能ではなく、むしろ、対象の年齢、ＭＨＣ分子拘束（restriction）、送達部位、性質、抗原のサイズおよび用量、抗原の取り込みの程度、ならびに抗原の投与の処理および頻度を含むが、これに限定されない種々の因子に依存する。経口寛容は、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、およびＴＧＦ−βを含む特定のサイトカインを下方制御する調節性Ｔ細胞（サプレッサー）の誘導、エフェクター細胞のクローン除去の機能、および抗体が介在する抑制を含むいくつかの免疫学的機構によって仲介されると考えられる（Silin et al.を参照のこと）。
【０２１３】
いくつかの態様において、提供される組成物は、経口寛容を誘導することなく、ＡＰＣに抗原を提示することができる。特定の理論はともかく、特定の態様は、経口免疫の従来から公知の方法よりも、免疫系に対してより多量の抗原を提示することができる。経口寛容は、少なくとも部分的には、ＡＰＣに提示される抗原が顕著に少ないために起こり得ると予期されている（Silin et al., Overcoming immune tolerance during oral vaccination against actinobacillus pleuropneumoniae, 2002, J Vet. Med. 49：169−175参照）。いくつかの態様において、提供される組成物は、免疫寛容を促進するような方法で、ＡＰＣに抗原を提示する。特定の理論はともかく、アナフィラキシー反応、自己免疫疾患、またはデング熱およびＲＳＶを含むが、これに限定されない特定の感染性疾患の場合のように、いくつかの臨床状況において、免疫寛容を促進することが有利であり得る。
【０２１４】
感染症
いくつかの態様において、それを必要とする対象は、ウイルス、プリオン、細菌、ウイロイド、大寄生虫、真菌、および／またはそれらの組み合わせ（これらに限定されない）によって引き起こされる感染症に罹患している。いくつかの態様において、対象は、一次感染症に罹患している。いくつかの態様において、対象は、二次感染症に罹患している。いくつかの態様において、対象は、活動性症候性感染症に罹患している。いくつかの態様において、対象は、活動性無症候性感染症に罹患している（すなわち、感染症は活動性であるが、自覚症状を生じない；例えば、無症状感染症または不顕性感染症）。いくつかの態様において、対象は、潜伏感染症（すなわち、不活性な、または休眠状態の感染症）に罹患している。
【０２１５】
いくつかの態様により処置され得る感染症の例には、放線菌症、アフリカ睡眠病、ＡＩＤＳ、炭疽病、出血熱、細菌性肺炎、カンジダ症、蜂巣炎、シャーガス病、水痘症、コレラ、クロストリジウム・ディフィシル感染症、クロイツフェルト−ヤコブ病、デング熱、ジフテリア、エボラ、腸球菌感染症、食中毒、壊疽、淋病、連鎖球菌感染症、Ａ〜Ｅ型肝炎、ヘルペス、鉤虫症、単核球症、リーシュマニア症、ハンセン病、ライム病、マラリア、はしか、髄膜炎、おたふくかぜ、結膜炎、百日咳、狂犬病、呼吸器合胞体ウイルス、ライノウイルス、風疹、ＳＡＲＳ、疥癬、敗血症、帯状疱疹、梅毒、破傷風、旋毛虫症、結核、野兎病、ウイルス性肺炎、西ナイル熱、および黄熱病が含まれるが、これらに限定されない。
【０２１６】
特定の理論はともかく、いくつかの態様は、他の免疫無防備状態の対象において抗細菌免疫監視を維持してもよいことが意図される。例えば、ウイルスまたは他の免疫無防備状態の対象は、通常、低下した細菌耐性を示すが、提供される組成物の投与により、対象によって示される低下した細菌耐性の程度を低減または排除し得る。いくつかの態様において、提供される組成物は、抗細菌免疫監視を維持するために定期的な間隔で投与される。いくつかの態様において、いくつかの態様において、提供される組成物は、非細菌性の免疫暴露を有する対象またはそれに感受性の対象に投与される。いくつかの態様において、提供される組成物は、非細菌性の免疫暴露を最近有した対象に投与される。
【０２１７】
癌
いくつかの態様において、それを必要とする対象は、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）；副腎皮質癌腫；ＡＩＤＳ関連リンパ腫を含むＡＩＤＳ関連癌；肛門癌；虫垂癌；星状細胞腫；基底細胞癌腫；胆管癌；膀胱癌；骨腫瘍（例えば、骨肉腫および悪性線維性組織球腫）；脳幹神経膠腫；脳の癌；脳腫瘍；乳癌；気管支腺腫／カルチノイド；バーキットリンパ腫；カルチノイド腫瘍（例えば、小児癌および消化管腫瘍）；癌腫（起源または発達系統不明であるが、上皮性細胞の特定の分子、細胞および組織学的特性を有する原発不明の癌腫（ＣＵＰ）を含む）；中枢神経系リンパ腫；小脳星状細胞腫；悪性神経膠腫；頚部癌；小児癌；慢性リンパ球性白血病；慢性骨髄性白血病；慢性骨髄増殖性疾患；大腸癌；皮膚Ｔ細胞リンパ腫；線維形成小円形細胞腫瘍；子宮内膜癌；上衣腫；食道癌；ユーイングファミリーの腫瘍のユーイング肉腫；頭蓋外胚細胞腫瘍；性腺外胚細胞腫瘍；卵巣胚細胞腫瘍；肝外胆管癌；眼の癌；眼内黒色腫；網膜芽細胞腫；胆嚢癌；胃癌；消化管カルチノイド腫瘍；消化器間質腫瘍（ＧＩＳＴ）；妊娠性絨毛腫瘍；胃カルチノイド；有毛細胞白血病；頭頸部癌；心臓癌；肝細胞（肝臓）癌；ホジキンリンパ腫；下咽頭癌；視床下部および視覚経路の神経膠腫；眼内黒色腫；膵島細胞癌腫（膵臓内分泌）；カポジ肉腫；軟部肉腫；子宮肉腫；腎臓癌（腎臓細胞癌）；喉頭癌；白血病（急性リンパ芽球性白血病または急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病（acute myeloidまたはacute myelogenous leukemia）、慢性リンパ性白血病（chronic lymphocyticまたはchronic lymphocytic leukemia）、慢性骨髄性白血病（chronic myelogenous または chronic myeloid leukemia）を含む）；口唇癌および口腔癌；脂肪肉腫；肝臓癌；肺癌（非小細胞癌および小細胞癌を含む）；リンパ腫（例えば、ＡＩＤＳ関連、バーキット、皮膚Ｔ細胞、ホジキン、非ホジキン、原発性中枢神経系）；マクログロブリン血症；髄芽腫；黒色腫；メルケル細胞癌腫；中皮腫（例えば、成人悪性中皮腫、小児中皮腫）；転移性扁平上皮癌；口腔癌；多発性内分泌腫瘍症候群；多発性骨髄腫；菌状息肉腫；骨髄異形成症候群；骨髄異形成／骨髄増殖性疾患；骨髄性(myelogenous)白血病；骨髄性(myeloid)白血病（例えば、成人急性骨髄性白血病）；鼻腔癌および副鼻腔癌；鼻咽頭癌腫；神経芽腫；口腔癌；口腔咽頭癌；卵巣癌；卵巣上皮癌（表層上皮性間質性腫瘍）；卵巣胚細胞腫瘍；卵巣低悪性度腫瘍；膵臓癌；副鼻腔癌および鼻腔癌；副甲状腺癌；陰茎癌；咽頭癌；褐色細胞腫；松果体部の星状細胞腫；松果体胚腫；松果体芽腫およびテント上原始神経外胚葉腫瘍；下垂体腺腫；胸膜肺芽腫；前立腺癌；直腸癌；腎盂および尿管の移行上皮細胞癌；横紋筋肉腫；セザリー症候群；皮膚癌（黒色腫および非黒色腫を含む）；皮膚癌腫；小腸癌；扁平細胞癌腫；胃癌；精巣癌；喉癌；胸腺腫および胸腺癌腫；甲状腺癌；尿道癌；子宮内膜癌；膣癌；外陰癌；および／または、それらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。
【０２１８】
投薬
いくつかの態様において、提供される医薬組成物は、所望の免疫反応を達成するのに十分な投与レジメンに従って投与される。例えば、いくつかの態様において、投与レジメンは、関連する患者集団へのその投与が、所望の免疫反応の達成に統計的に有意な相関関係を示すとき、所望の免疫反応を達成するのに十分である。
【０２１９】
いくつかの態様において、所望の免疫応答とは、少なくとも約２０％、約２５％；約３０％；約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、約５０％、約５１％、約５２％、約５３％、約５４％、約５５％、約５６％、約５７％、約５８％、約５９％、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、またはそれ以上のアレルギー症状の程度および／または罹患率の低減である。
【０２２０】
いくつかの態様において、提供される医薬組成物は、組成物が投与される患者の集団の一定の割合のアレルギー症状の程度および／または罹患率の低減を達成するのに十分な投与レジメンに従って投与される。いくつかの態様において、組成物が投与される患者の集団の特定の割合は、少なくとも約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、約５０％、約５１％、約５２％、約５３％、約５４％、約５５％、約５６％、約５７％、約５８％、約５９％、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、またはそれ以上である。
【０２２１】
いくつかの例示的例として、いくつかの態様において、投与レジメンに従う少なくとも１つの提供される医薬組成物の投与は、組成物が投与された患者集団の少なくとも約５０％において少なくとも約２０％のアレルギーの程度および／または罹患率の低減を達成するのに十分である。いくつかの態様において、投与レジメンに従う少なくとも１つの提供される医薬組成物の投与は、組成物が投与された患者集団の少なくとも約５０％において少なくとも約３０％のアレルギーの程度および／または罹患率の低減を達成するのに十分である。
【０２２２】
いくつかの態様において、少なくとも１つの提供される医薬組成物は、アレルギー症状の発症の遅延を達成するのに十分な投与レジメンに従って投与される。いくつかの態様において、少なくとも１つ提供される医薬組成物は、アレルギーの１つまたはそれ以上の症状の発症を予防するのに十分な投与レジメンに従って投与される。
【０２２３】
いくつかの態様において、提供される投与レジメンは、単回用量を含むか、またはそれから構成される。いくつかの態様において、提供される投与レジメンは、変化しても、しなくてもよい間隔で互いに分離された複数回用量を含むか、またはそれから構成される。いくつかの態様において、提供される投与レジメンは、２０年に１回、１０年に１回、５年に１回、４年に１回、３年に１回、２年に１回、１年に１回、１年に２回、１年に３回、１年に４回、１年に５回、１年に６回、１年に７回、１年に８回、１年に９回、１年に１０回、１年に１１回、１月に１回、１月に２回、１月に３回、週に１回、週に２回、週に３回、週に４回、週に５回、週に６回、１日１回、１日２回、１日３回、１日４回、１日５回、１日６回、１日７回、１日８回、１日９回、１日１０回、１日１１回、１日１２回、または１時間に１回の投与を含むか、またはそれから構成される。
【０２２４】
いくつかの態様において、提供される投与レジメンは、１回またはそれ以上の追加用量(booster doses)を含む初回用量(initial dose)を含むか、またはそれから構成される。いくつかの態様において、初回投与後、１回またはそれ以上の追加用量は、初回投与後、１日、２日、３日、４日、５日、６日、１週間、２週間、１ヶ月、２ヶ月、６ヶ月、１年、２年、５年、１０年、または１０年以上後に投与される。いくつかの態様において、初回用量は、長期間に亘って投与される一連の用量を含む。例えば、いくつかの態様において、初回用量は、一定期間の間隔で、例えば、５分間隔、１０分間隔、１５分間隔、２０分間隔、２５分間隔、３０分間隔、４５分間隔、１時間間隔、２時間毎などの近い時間間隔で投与される一連の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、またはそれ以上の用量を含む。
【０２２５】
いくつかの態様において、初回用量および追加用量は、同量の提供されるナノ粒子および／またはナノ粒子組成物を含む。いくつかの態様において、初回用量および追加用量は、異なる量の提供されるナノ粒子組成物を含む。特定の態様において、提供されるナノ粒子組成物は、１日当たり、１日１回またはそれ以上当たり、対象の体重１ｋｇ当たり、約０．００１ｍｇから約１００ｍｇ、約０．０１ｍｇから約５０ｍｇ、好ましくは約０．１ｍｇから約４０ｍｇ、約０．５ｍｇから約３０ｍｇ、約０．０１ｍｇから約１０ｍｇ、約０．１ｍｇから約１０ｍｇ、または約１ｍｇから約２５ｍｇを送達するのに十分な投与量レベルである。いくつかの態様において、提供されるナノ粒子組成物は、単位用量で剤形化される。いくつかの態様において、単位用量は、約１０ｍｇ、約２５ｍｇ、約５０ｍｇ、約１００ｍｇ、約２５０ｍｇ、約５００ｍｇ、約１ｇ、約５ｇ、約１０ｇ、約２５ｇ、約５０ｇ、約１００ｇ、または約１００ｇ以上である。いくつかの態様において、特定の単位用量中に存在する提供されるナノ粒子組成物の量は、該組成物が投与されるべき対象によって変わる。いくつかの例としては、いくつかの態様において、マウスに適当な単位用量は、ラットに適当な単位用量よりも少量であり、それは、ヒトに適当な単位用量よりも少量であるイヌに適当な単位用量よりも少量である。
【０２２６】
いくつかの態様において、提供される投与レジメンは、対象の全生涯に亘って複数回用量の投与を含むか、またはそれから構成される。いくつかの態様において、提供される投与レジメンは、数年（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、または１００年）に亘って複数回用量の投与を含む。いくつかの態様において、提供される投与レジメンは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２ヶ月に亘って複数回用量の投与を含むか、またはそれから構成される。
【０２２７】
いくつかの態様において、提供される組成物がアレルギーの処置に用いられるとき、最初の投与の前に、対象のベースライン時のアレルギー反応を、（１）対象の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、または２０以上のアレルゲンの１つまたはそれ以上の皮膚プリックテスト（ＰＳＴ）を行い、ＰＳＴの膨疹および発赤反応を測定すること；（２）血清ＩｇＥレベルを測定すること；（３）対象の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、または２０以上のアレルゲンの１つまたはそれ以上に暴露されることによる、対象自身の説明する自覚症状（例えば、性質、重症度および／または症状の持続期間）に注意すること；（４）対象をその１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、または２０以上のアレルゲンの１つまたはそれ以上の特定の用量に暴露すること（例えば、アナフィラキシーの危険性がわずかか、または存在しない場合）；（５）Ｔ細胞マーカーであるＣＤ４＋および／またはＣＤ８＋を含むが、これに限定されない、１つまたはそれ以上の分子マーカーの発現（例えば、レベル、空間的分布、時間的分布など）を測定すること；（６）好塩基球ヒスタミン放出アッセイを行うこと；および／またはそれらの組み合わせを含むが、これに限定されない種々の方法の１つまたはそれ以上により決定する。いくつかの態様において、対象のアレルギー反応は、処置レジメン中に、および／または処置レジメンの完了後に、例えば、定期的に、任意の方法、例えば上記の方法（１）〜（６）の組み合わせを用いてモニターされる。いくつかの態様において、アレルギー反応は、毎日、毎週、隔週、毎月、１年に６回、１年に４回、１年に３回、１年に２回、１年に１回、２年毎、５年毎、および／または１０年毎などにモニターされる。
【０２２８】
いくつかの態様において、対象は、単一のアレルゲンおよび／または複数のアレルゲン、例えば、対象のアレルゲンのサブセット（例えば、対象がアレルギーであることが知られているアレルゲン）および／または対象の全アレルゲン（例えば、対象がアレルギーであることが知られているアレルゲン）に暴露される。いくつかの態様において、アレルゲン暴露は、処置の開始の１週間後、２週間後、１ヶ月後、２ヶ月後、６ヶ月後、および１年後に実施される。
【０２２９】
いくつかの態様において、提供される組成物は、いずれかの医学的に許容される経路で投与され得る。例えば、いくつかの態様において、提供される組成物は、静脈内投与、皮内投与、経皮投与、経口投与、皮下投与、経粘膜投与、および／またはそれらの組み合わせにより投与され得る。いくつかの態様において、経粘膜投与の例示的経路としては、口腔投与、経鼻投与、気管支投与、膣投与、直腸投与、舌下投与、および／またはそれらの組み合わせが含まれるが、これに限定されない。
【０２３０】
併用療法
いくつかの態様において、提供される医薬組成物は、例えば、関連する提供される医薬組成物によって処置される１つまたはそれ以上の疾患、障害、または病状の処置において有用な１つまたはそれ以上の他の治療薬またはモダリティ（治療法）と組み合わせて対象に投与されれ、そのため、該対象は、同時に両方に暴露される。いくつかの態様において、提供されるナノ粒子組成物は、他の治療薬を含む医薬製剤から独立した別個の医薬製剤中に利用される。いくつかの態様において、提供されるナノ粒子組成物は、他の治療薬を含む組成物と混合される。言い換えれば、いくつかの態様において、提供されるナノ粒子組成物は、個別に製造され、提供されるナノ粒子組成物は、別の治療薬を含む別の組成物と単に混合される。
【０２３１】
併用レジメンに使用する治療法の特定の組み合わせ（物質および／または方法）は、所望の物質および／または方法の適合性ならびに達成すべき所望の治療効果を考慮に入れ得る。いくつかの態様において、提供されるナノ粒子組成物は、１つまたはそれ以上の他の治療薬（例えば、所望の既知のアレルギー治療薬）と同時に、その前に、またはその後に、投与され得る。
【０２３２】
用いる療法は、同じ障害に対して所望の効果を達成し得る（例えば、アレルギーの処置に有用な提供されるナノ粒子組成物は、アレルギーの処置にも有用である既知のアレルギー治療薬と同時に投与することができる）こと、またはそれらは異なる効果を達成し得る（例えば、アレルギーの処置に有用である提供されるナノ粒子組成物は、有害な副作用、例えば炎症、悪心などを軽減するのに有用な治療薬と同時に投与され得る）ことが理解され得る。いくつかの態様において、本発明の提供されるナノ粒子組成物は、米国食品医薬品局（ＦＤＡ）により承認されている第二の治療薬と共に投与される。
【０２３３】
本明細書で用いる、用語“〜と併用して”および“〜と組み合わせて”は、提供されるナノ粒子組成物が、１つまたはそれ以上の他の所望の治療薬と同時に、その前に、またはその後に、投与され得ることを意味する。一般的に、各物質は、その薬剤について決定さ
【０２３４】
例えば、いくつかの態様において、アレルギーの処置のために提供される医薬組成物は、いくつかの態様において、例えば、１つまたはそれ以上の抗ヒスタミン薬（すなわち、ヒスタミンアンタゴニスト）、グルココルチコイド類を含むコルチコステロイド；エピネフリン（アドレナリン）；テオフィリン（ジメチルキサンチン）；クロモリンナトリウム；抗ロイコトリエン；抗コリン作用薬；鬱血除去剤；マスト細胞安定化剤；免疫療法剤（漸増用量の特定のアレルゲン）；モノクローナル抗ＩｇＥ抗体（例えば、オマリズマブ）；および／またはそれらの組み合わせと組み合わせて投与することができる。
【０２３５】
抗ヒスタミン薬の例としては、アゼラスチン；ブロムフェニラミン；ブクリジン；ブロモジフェンヒドラミン；カルビノキサミン；セチリジン；シクリジン；クロルフェニラミン；クロロジフェンヒドラミン；クレマスチン；シプロヘプタジン；デスロラタジン；デキスブロムフェニルアミン；デスクロルフェニラミン；デクスクロルフェニラミン；ジメチンデン；ジフェンヒドラミン（ベネドリル）；ドキシラミン；エバスチン；エンブラミン；フェキソフェナジン；レボセチリジン；ロラタジン；オロパタジン（パタノール）；フェニンダミン（ＮｏｌａｈｉｓｔおよびＴｈｅｐｈｏｒｉｎ）；フェニラミン（Ａｖｉｌ）；フェニルトロキサミン；プロメタジン；ピリラミン；ルパタジン；トリペレナミン；トリプロリジン；および／またはそれらの組み合わせが含まれるが、これに限定されない。
【０２３６】
コルチコステロイドおよびグルココルチコイドの例としては、プロピオン酸ベクロメタゾンおよびベクロメタゾン（Ｃｌｅｎｉｌ、Ｑｖａｒ、Ｂｅｃｏｎａｓｅ  ＡＱ、Ａｌａｎａｓｅ、Ｖａｎｃｅｎａｓｅ）；ブデソニド（Ｒｈｉｎｏｃｏｒｔ、Ｒｈｉｎｏｓｏｌ、Ｐｕｌｍｉｃｏｒｔ、Ｂｕｄｉｃｏｒｔ、Ｓｙｍｂｉｃｏｒｔ、Ｎｏｅｘ）；シクレソニド（Ａｌｖｅｓｃｏ、Ｏｍｎａｒｉｓ、Ｏｍｎｉａｉｒ）；フルニソリド（Ａｅｒｏｂｉｄ）；フルチカゾン（Ｖｅｒａｍｙｓｔ）；フルチカゾン（Ｆｌｏｎａｓｅ）；モメタゾンおよびフランカルボン酸モメタゾン（Ｎａｓｏｎｅｘ）；トリアムシノロン（Ｎａｓａｃｏｒｔ  ＡＱ）；プレドニゾン；メチルプレドニゾロン（Ｄｅｐｏ−Ｍｅｄｒｏｌ）；トリアムシノロン（Ｋｅｎａｌｏｇ）；および／またはそれらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。
【０２３７】
クロモリンナトリウム例示的形態としては、Ｒｙｎａｃｒｏｍ；Ｎａｓａｌｃｒｏｍ；Ｐｒｅｖａｌｉｎ；インタール；Ｏｐｔｏｃｒｏｍ；Ｏｐｔｒｅｘ；Ｇａｓｔｒｏｃｒｏｍ；Ｉｎｔｅｒｃｒｏｎ；および／またはそれらの組み合わせが含まれるが、これに限定されない。
【０２３８】
抗ロイコトリエン薬およびロイコトリエン阻害剤（または調節剤）の例としては、モンテルカスト（Ｓｉｎｇｕｌａｉｒ、Ｍｏｎｔｅｌｏ−１０、およびＭｏｎｔｅｆｌｏ）；ザフィルカスト（アコレート、Ａｃｃｏｌｅｉｔ、Ｖａｎｔｉｃｏｎ）；プランルカスト；ジロートン（Ｚｙｆｌｏ、Ｚｙｆｌｏ  ＣＲ）；および／またはそれらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。
【０２３９】
抗コリン作動薬の例としては、臭化イプラトロピウム（Ａｔｒｏｖｅｎｔ（登録商標）、Ａｐｏｖｅｎｔ、Ｉｐｒａｘａ、Ａｅｒｖｏｅｎｔ）；Ｃｏｍｂｉｖｅｎｔ（臭化イプラトロピウムおよびアルブテロール）；ベンズトロピン（Ｃｏｇｅｎｔｉｎ）；オキシトロピウム（Ｏｘｉｖｅｎｔ）；チオトロピウム（Ｓｐｉｒｉｖａ）；グリコピロレート（Ｒｏｂｉｎｕｌ）；オキシブチニン（Ｄｉｔｒｏｐａｎ、Ｄｒｉｐｔａｎｅ、Ｌｙｒｉｎｅｌ  ＸＬ）；トルテロジン（デトロール、Ｄｅｔｒｕｓｉｔｏｌ）；クロルフェニラミン（Ｃｈｌｏｒ−Ｔｒｉｍｅｔｏｎ）；ジフェンヒドラミン（ベナドリル、Ｓｏｍｉｎｅｘ、Ａｄｖｉｌ  ＰＭ、など）；ジメンヒドリナート（ドラマミン）；ブプロピオン（ザイバン、Ｗｅｌｌｂｕｔｅｒｉｎ）；ヘキサメトニウム；ツボクラリン；デキストロメトルファン；メカミラミン；ドキサクリウム；および／またはそれらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。
【０２４０】
鬱血除去剤の例としては、エフェドリン；レボ−メタンフェタミン；ナファゾリン；オキシメタゾリン；フェニレフリン；フェニルプロパノールアミン；プロピルヘキセドリン；シネフリン；テトラヒドロゾリン；および／またはそれらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。
【０２４１】
マスト細胞安定化剤の例としては、クロモグリク酸；ケトチフェンおよびフマル酸ケトチフェン（Ｚａｄｉｔｏｒ、ザジテン、Ａｌａｗａｙ、ジルテック点眼薬、クラリチンアイ）；メチルキサンチン；および／またはそれらの組み合わせが含まれるが、これに限定されない。
【０２４２】
いくつかの態様において、本発明の提供されるナノ粒子組成物と組み合わせて投与され得る公知のアレルギー治療薬の例としては、米国特許第５，５５８，８６９号、同第５，９７３，１２１号、同第６，８３５，８２４号、同第６，４８６，３１１号、および／または同第７，４８５，７０８号、および／または米国特許公開番号２００３／００３５８１０、２００３／０２０２９８０、２００４／０２０８８９４、２００４／０２３４５４８、２００７／０２１３５０７、２０１０／０１６６８０２、および／または２０１１／００２７２９８（それらは全て、引用により本明細書中に包含される）に記載の治療薬のいずれかを含むが、これらに限定されない。
【０２４３】
さらなる例としては、いくつかの態様において、感染性疾患の処置のための提供される医薬組成物は、例えば、抗菌剤、抗ウイルス剤、および／または抗真菌剤のような抗生物質と組み合わせて投与され得る。いくつかの態様において、提供される医薬組成物は、ワクチンワクチンと組み合わせて投与され得る。
【０２４４】
抗菌剤の例としては、スルファニルアミド；葉酸類縁体；ペニシリン、セファロスポリン、およびカルバペネムのようなベータ−ラクタム；ストレプトマイシン、カナマイシン、ネオマイシン、およびゲンタマイシンのようなアミノグリコシド；クロルテトラサイクリン、オキシテトラサイクリン、およびドキシサイクリンのようなテトラサイクリン；マクロライド；リンコサミド；ストレプトグラミン；フルオロキノロン、リファンピン、ムピロシン、シクロセリン、アミノサイクリトール、グリコペプチド、オキサゾリジノン、およびそれらの誘導体／類縁体および／またはそれらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。
【０２４５】
抗ウイルス剤の例としては、アバカビル、アシクロビル(Aciclovir)、アシクロビル(Acyclovir)、アデフォビル、アマンタジン、アンプレナビル、アンプリジェン、アルビドール、アタザナビル、アトリプラ、ボセプレビル（Boceprevirertet）、シドフォビル、コンビビル、ダルナビル、デラビルジン、ジダノシン、ドコサノール、エドクスジン、エファビレンツ、エムトリシタビン、エンフュービルタイド、エンテカビル、侵入阻害剤、ファムシクロビル、ホミビルセン、ホスアンプレナビル、フォスカーネット、ホスホネット、イムノビル（imunovir）、イドクスウリジン、イミキモド、インジナビル、イノシン、ＩＩＩ型インターフェロン、ＩＩ型インターフェロン、Ｉ型インターフェロン、インターフェロン、ラミブジン、ロピナビル、ロビライド（loviride）、マラビロク、モロキシジン、メチサゾン、ネルフィナビル、ネビラピン、ネクサバール、ヌクレオシド類縁体、オセルタミビル、ペグインターフェロンアルファ−２ａ、ペンシクロビル、ペラミビル、プレコナリル、ポドフィロトキシン、ラルテグラビル、逆転写酵素阻害剤、リバビリン、リマンタジン、リトナビル、ピリミジン、サキナビル、スタブジン、ティーツリー油、テラプレビル、テノフォビル、テノフォビルジソプロキシル、チプラナビル、トリフルリジン、トリジビル、トロマンタジン、ツルバダ、バラシクロビル、バルガンシクロビル、ビクリビロック、ビダラビン、ビラミジン、ザルシタビン、ザナミビル、ジドブジン、およびその誘導体／類縁体および／またはそれらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。
【０２４６】
抗真菌剤の例としては、アンホテリシン、カンジシジン、フィリピン、ハマイシン、ナタマイシン、ニスタチン、およびリモシジンのようなポリエン系薬剤；ビホナゾール、ブトコナゾール、クロトリマゾール、エコナゾール、フェンチコナゾール、イソコナゾール、ケトコナゾール、ミコナゾール、オモコナゾール、オキシコナゾール、セルタコナゾール、スルコナゾール、チオコナゾール、アルバコナゾール、フルコナゾール、イサブコナゾール、ポサコナゾール、ラブコナゾール、テルコナゾール、ボリコナゾール、およびアバフンギン（abafungin）のような、イミダゾール、トリアゾールおよびチアゾール剤；アモロルフィン、ブテナフィン、ナフチフィン、およびテルビナフィンのようなアリルアミン剤；ならびに、アニデュラファンギン、カスポファンギン、およびミカファンギンのようなエキノカンジン系薬剤ならびにその誘導体／類縁体ならびに／またはそれらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。
【０２４７】
さらなる例としては、いくつかの態様において、癌の処置のために提供される医薬組成物は、例えば、アルキル化剤、代謝拮抗剤、および／または他の抗癌剤と組み合わせて投与され得る。
【０２４８】
アルキル化剤の例としては、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ）、メクロレタミン、メルファラン（ｍｅｌｐｈａｎ）（Ａｌｋｅｒａｎ）、クロラムブシル（Ｌｅｕｋｅｒａｎ）、チオテパ(thiopeta)（Ｔｈｉｏｐｌｅｘ）、およびブスルファン（Ｍｙｌｅｒａｎ）のような、多官能性アルキル化剤；プロカルバジン、ダカルバジン、アルトレタミン、シスプラチン、ならびに、その誘導体／類縁体ならびに／またはそれらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。
【０２４９】
代謝拮抗剤の例としては、メトトレキサート；メルカプトプリン（６−ＭＰ）、チオグアニン（６−ＴＧ）、リン酸フルダラビン、クラドリビン、およびペントスタチンのような、プリン受容体アンタゴニスト；フルオロウラシル、シタラビン、およびアザシチジンのような、ピリミジン系アンタゴニスト；ビンブラスチン（Ｖｅｌｂａｎ）、ビンクリスチン（Ｏｎｃｏｖｉｎ）、エトポシド（ＶＰ−１６）、テニポシド（Ｖｉｍｏｎ）、トポテカン（Ｈｙｃａｍｔｉｎ）、イリノテカン（Ｃａｍｐｔｏｓａｒ）、パクリタキセル（タキソール）、およびドセタキセル（タキソテール）のような植物性アルカロイド、およびその誘導体／類縁体および／またはそれらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。
【０２５０】
他の抗癌剤の例としては、アムサクリン；ヒドロキシウレア（Ｈｙｄｒｅａ）；アスパラギナーゼ（Ｅｌ−ｓｐａｒ）；ミトキサントロン（Ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ）；ミトタン；レチノイン酸、骨髄増殖因子、アミホスチン、およびその誘導体／類縁体および／またはそれらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。
【０２５１】
キット
本発明は、提供されるナノ粒子を含むワクチンおよび／または治療用組成物を包含するキットを提供する。いくつかの態様において、キットは、（ｉ）少なくとも１つの提供されるナノ粒子組成物；および（ｉｉ）少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤；および、必要に応じて、（ｉｉｉ）使用説明書、を含んでいてよい。
【０２５２】
いくつかの態様において、キットは、提供されるナノ粒子組成物の複数（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、またはそれ以上）の用量を含む。いくつかの態様において、キットは、異なる機能的要素（例えば、微生物を模倣した要素）を有する提供されるナノ粒子の複数（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、またはそれ以上）の集合物を含む。いくつかの態様において、提供されるナノ粒子の複数の集合物は、提供されるキットにおいて互いに別個に包装されている。いくつかの態様において、提供されるキットは、提供される組成物および提供される組成物と共に投与されることが意図される１つまたはそれ以上の他の治療薬を含んでいてよい。
【０２５３】
いくつかの態様において、本発明は、本発明の処置法に使用されるべき提供されるナノ粒子組成物を含む医薬パッケージまたはキットを提供する。いくつかの態様において、医薬パッケージまたはキットは、本発明の医薬組成物の１つまたはそれ以上のさらなる成分を任意に充填した１つまたはそれ以上の容器中に提供されるナノ粒子組成物を含む調製物または医薬組成物を含む。いくつかの態様において、医薬パッケージまたはキットは、本明細書に記載のとおり、併用療法に使用するためのさらなる承認された治療薬を含む。場合によっては、このような容器（複数可）に関連する事項が、医薬品の製造、使用または販売を規制する政府機関によって定められた様式で通知され、該通知は、ヒトへの投与のための製造、使用または販売の機関による承認に含まれる。
【０２５４】
いくつかの態様において、キットは、提供されるナノ粒子組成物および使用説明書を含んで提供される。医薬用量またはその指示書は、アレルギーを有するか、および／またはアレルギーになりやすい個体に投与するためのキット中に提供され得る。
【実施例】
【０２５５】
実施例
実施例１：大腸菌水性抽出物の製造
本実施例は、本発明における使用のための、微生物細胞、ここでは大腸菌の親水性成分を含む、該細胞の水性抽出物の製造を記載する。
【０２５６】
本実施例は、標準的な利用可能な方法を用いる大腸菌水性抽出物（すなわち、大腸菌細胞培養物の水性抽出物；“ＡＥＥ”）の製造を記載する。生産菌株は、大腸菌の一般的な、かつ非病原性株であってよい。生産菌株のマスターおよびワーキング細胞バンクは、臨床的製造の前に確立されていてよい。
【０２５７】
細胞は、高細胞密度発酵物から回収され、その後、培地をプロテアーゼ阻害剤として５ｍＭのエチレンジアミンテトラ酢酸（ＥＤＴＡ）を含むリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）に交換する。ＰＢＳ−ＥＤＴＡに懸濁した細胞を均質化し（例えば、フレンチプレスを用いて）、次いで、細胞残屑を除去して澄明にする。澄明な抽出物を、残存酵素を不活性化するために、例えば穏やかな熱処置を用いて処理する。得られた抽出物を必要に応じて再度濾過し、ナノ粒子製造工程で使用する前に凍結保存する。細菌タンパク質およびＤＮＡに加えて、ＡＥＥは、ＬＰＳもまた含み得ると予想される。いくつかの態様において、ＡＥＥの１つまたはそれ以上の成分は、ナノカプセル化を容易にするようないくつかの方法で、例えば、大きなストレッチをナノカプセル化するためのより適切な小片に分断するためにＤＮＡを剪断して処理され得る。
【０２５８】
ＡＥＥの典型例を表３に示す。タンパク質およびＬＰＳの両方が、ドデシル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）分析におけるバンドパターンを与えることを考慮すると、ＳＤＳ−ＰＡＧＥプロファイルは、バッチ間の意味のある比較を提供するのには複雑すぎるであろうことが予想される。ケト−デオキシオクツロソン酸（ＫＤＯ）は、細菌ＬＰＳ中に専ら見出された炭水化物であり、抽出物のＬＰＳ内容物の代理アッセイ（surrogate assay）として使用され得る。
【０２５９】
【表１９】
2019073525.tif 000020
【０２６０】
実施例２：疎水性大腸菌抽出物の製造
本実施例は、本発明における使用のための、微生物細胞の疎水性成分を含む、該細胞の有機抽出物の製造を記載する。
【０２６１】
本実施例は、標準的な利用可能な方法を用いる疎水性（有機）大腸菌抽出物（すなわち、大腸菌細胞培養物の有機抽出物“ＯＥＥ”）の製造を記載する。ＡＥＥを製造するのに用いた同じ生産菌株を、ＯＥＥのために用いてよい。ＡＥＥにおいて記載の通り、該生産菌株は、大腸菌の一般的な、かつ非病原性株であってよい。生産菌株のマスターおよびワーキング細胞バンクは、臨床的製造の前に確立されていてよい。
【０２６２】
簡単には、抽出物は、石油エーテルが薬学的に許容されない溶媒であるとして、石油エーテルの代わりにヘキサンを用いること以外、周知のフェノール−クロロホルム−石油エーテル法を用いて製造される。乾燥させた細菌細胞を、フェノール−クロロホルム−ヘキサン（ＰＣＨ）混合物中に約３０分間懸濁する。その後、スラリーを遠心して、残りの細胞を取り出す。その後、残りの細胞をＰＣＨで２回以上処理する。合わせた有機抽出物を蒸発させて、揮発性有機溶媒を除去する。フェノール濃縮物に水を滴下して、ＬＰＳおよび脂質を沈殿させる。その後、沈殿したＯＥＥを９５％フェノールで洗浄し、次いでアセトンで洗浄し、水に懸濁し、凍結乾燥させて、ナノ粒子製造工程で使用する前に凍結保存する。ＯＥＥは、主に細菌ＬＰＳおよび脂質から構成され得ることが予期される。
【０２６３】
ＯＥＥの典型例を表４に示す。タンパク質または核酸が実質的にＯＥＥ中に抽出されないことが予想される。
【０２６４】
【表２０】
2019073525.tif 000021
【０２６５】
実施例３：封入された大腸菌親水性成分および表面結合大腸菌疎水性成分を含むナノ粒子組成物の製造
本実施例は、二重エマルジョン（水中油中水）工程を用いる、Ｅ−ナノ粒子（すなわち、親水性および／または疎水性大腸菌抽出調製物を含むナノ粒子）の例示的製造法を記載する。簡単には、ＡＥＥを約６０ｍｇ／ｍＬのタンパク質濃度で用いて、アレルゲン抽出物（例えば、塵ダニまたはピーナッツ）を６０ｍｇ／ｍＬの濃度で再構成する。より高濃度または低濃度の両方のＡＥＥおよび／またはアレルゲン抽出物を用いることができる。ＡＥＥ−アレルゲン抽出物溶液を、水溶液：有機溶媒の比が０．２０ｍＬ：２８ｍＬであるＰＬＧＡのジクロロメタン溶液（約３５．７ｍｇ／ｍＬ）を用いて均質化する。この混合物を最初のエマルジョンとして指定し、ＯＥＥ中にＡＥＥのナノ液滴（この実施例において、抗原、ＤＮＡ、およびＬＰＳを含む）を含むか、または本質的にそれから構成される。
【０２６６】
いくつかの態様において、例えば、表面結合疎水性成分（例えば、ＬＰＳ）のレベルを増大することが望ましい場合、例えば実施例２に記載のように、ＯＥＥを、約２．２ｍｇ／ｍＬの総ＬＰＳの濃度で５％ＰＶＡ水溶液中に溶解する。より高濃度または低濃度のＰＶＡ溶液中のＯＥＥを用いることもできる。第一エマルジョンの半量（１４ｍＬ）を該ＯＥＥ−ＰＶＰ溶液（１４ｍＬ）に添加し、均質化する。この混合物を第二のエマルジョンとして指定し、上記（すなわち、ＯＥＥ中のＡＥＥのナノ液滴）の第一エマルジョンとおくつかの構造的類似性を含む。
【０２６７】
第一または、作製したとき、第二のエマルジョン（２８ｍＬ）を、９３５ｍＬの０．３３％のＰＶＡ水溶液に加え、約４時間撹拌して、ジクロロメタンを蒸発させる。ナノ粒子懸濁液を濃縮し、ナノ粒子を遠心分離によって単離する。上清を除去後、ナノ粒子を水で２〜３回洗浄し、水に再懸濁し、凍結乾燥によって単離する。本実施例では、ＤＮＡ、ＬＰＳおよび抗原は、ナノ粒子の全体に分布しており、ＬＰＳおよび脂質は表面にコーティングされている。本実施例におけるナノ粒子は、直径がおよそ４５０ｎｍ＋／−１５０ｎｍである。
【０２６８】
実施例４：経口投与されたＣｐＧコーティングされた、ＰＬＧＡ封入されたピーナッツ抽出物ナノ粒子のインビボでの脱感作実験
本実施例は、ＣｐＧでコーティングされたＰＬＧＡナノ粒子中の比較的粗製の抗原（特に、ピーナッツ抽出物）を含む経口投与されたナノ粒子組成物のインビボでの脱感作の有効性を評価し、さらに、ピーナッツ感作動物の潜在的なアナフィラキシー反応を評価することにより、該ナノ粒子の安全性を評価する例示的実験を記載する。
【０２６９】
とりわけ、本実施例は、ピーナッツ感作マウスに経口投与されたとき、ビークル対照マウスと比較して、その後の経口ピーナッツ暴露に対する脱感作がもたらされた、例示的ナノ粒子組成物の投与を記載する。
【０２７０】
材料および方法
ＣｐＧコーティングされた、ＰＬＧＡ封入されたピーナッツ抽出物ナノ粒子
とりわけ、本実施例は、ピーナッツ類、ラッカセイの封入されたアレルゲン抽出物を含むナノ粒子を記載する。簡単には、市販のローストされた殻付きピーナッツ（White Rose Brand, NJ）の殻を剥き、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ、ｐＨ７．４）中で均質化し、アセトン抽出する。ＰＢＳ中ピーナッツタンパク質の終濃度は、ビシンコニン酸（ＢＣＡ）アッセイにより、１３．２ｍｇ／ｍＬであると決定された。
【０２７１】
ナノ粒子製造の前に、ピーナッツ抽出物溶液１ｍＬあたり１３．２ｍｇのタンパク質を、Ｕｌｔｒａｃｅｌ−３膜を有するＡｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−４  遠心式フィルターユニット（３ｋＤａのカットオフ；Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、カタログ番号ＵＦＣ８−００３）を用いて濃縮した。タンパク質の終濃度をを、ＢＣＡアッセイにより、２７．３ｍｇ／ｍＬであると決定した。
【０２７２】
ＣｐＧコーティングされた、ＰＬＧＡ封入されたピーナッツ抽出物のナノ粒子を、二重エマルジョン法を用いて製造した。最終生成物中のエンドトキシンを最小限に抑えるために、全てのガラス製品を２５０℃にて２時間焼成し、プラスチック器具をパイロクリーン（AlerChek, Inc., catalog no. I30103）で３０分間除染し、その後、超純水（Millipore, カタログ番号H20CC1006）で洗浄した。
【０２７３】
０．７ｍＬの、ＰＢＳ中、濃ピーナッツ抽出物（１９ｍｇのピーナッツタンパク質）の全量を、４つのチューブに分けた、１４ｍＬの２５ｍｇ／ｍＬ  ＰＬＧＡ塩化メチレン溶液（Thermo Fisher Scientific、カタログ番号Ｄ６５１００）に滴下した。ＮＰ−４０１製造に使用したＰＬＧＡは、エステル末端基および０．９５−１．２ｄＬ／ｇの固有粘度を有する５０：５０のポリ（ＤＬ−ラクチド−コ−グリコリド）（Ｄｕｒｅｃｔ、製品番号Ｂ６０１０−４）であった。得られた懸濁液を短時間ボルテックスし、その後、ＣＶ２６ソニケーター（３８％振幅）を装着したＴｅｋｍａｒ  Ｓｏｎｉｃ  Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｏｒを用いて、１０秒間隔で３０秒間超音波処理し、ソニケーションの間に３０秒間氷結した。
【０２７４】
第二のエマルジョンの場合、第一のエマルジョンを集め、４つのチューブに分けた１４ｍＬの１．２５％ポリビニルアルコール（ｗ／ｖ）（ＰＶＡ、Sigma Aldrich、カタログ番号Ｐ８１３６）、１％デオキシコール酸ナトリウム（ｗ／ｖ）、１．２５ｍｇ／ｍＬ  アビジン−パルミチンに滴下した。得られた懸濁液を短時間ボルテックスし、その後、ＣＶ２６ソニケーター（３８％振幅）を装着したＴｅｋｍａｒ  Ｓｏｎｉｃ  Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｏｒを用いて、氷上で３０秒間超音波処理した。
【０２７５】
ナノ粒子製造に用いたアビジン−パルミチンは、２％デオキシコール酸ナトリウム（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、カタログ番号Ｄ６７５０）中５ｍｇ／ｍＬアビジン（ＥＭＤ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、カタログ番号１８９７２５）を、１５倍のモル過剰量のパルミチン酸Ｎ−ヒドロキシ−スクシンイミドエステル（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、カタログ番号Ｐ１１６２）と共に、３７℃にて３時間インキュベートして製造した。過剰量のパルミチン酸を、２％デオキシコール酸ナトリウム浴中、３７℃にて２４時間かけて、透析により除去した。
【０２７６】
第二のエマルジョンを集め、直ちに１つのビーカー中の、３５０ｍＬの室温（ＲＴ）の０．３％  ＰＶＡ（ｗ／ｖ）に添加した。塩化メチレンを、室温にて３時間、スターラーバーを用いて撹拌することにより蒸発させた。ナノ粒子を、４℃にて、１８，５００ｇにて１５分間の遠心により集めた。ペレットを１０ｍＬの超純水に再懸濁し、１８，５００ｇにて１５分間、４℃にて遠心し、上清を捨てた。この洗浄工程を計３回繰り返した。その後、ナノ粒子を急速冷凍し、凍結乾燥させて、−２０℃にて貯蔵した。
【０２７７】
ナノ粒子を、使用前に即時にＣｐＧ−ビオチンで標識した。ホスホロチオエート骨格を有するＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド１８２６（５’−ＴＣＣ  ＡＴＧ  ＡＣＧ  ＴＴＣ  ＣＴＧ  ＡＣＧ  ＴＴ−３’  配列番号１）を合成し、ビオチンを結合させた（５’末端）。標識のために、ＰＬＧＡ−封入されたピーナッツ抽出物ナノ粒子およびＣｐＧ−ビオチンを、滅菌したＰＢＳ、ｐＨ（７．４）中、それぞれ７．３４ｍｇのナノ粒子／ｍＬおよび３．６７μｇ／ｍＬ（０．５μｇ／ｍｇ  ナノ粒子）を懸濁し、ボルテックスし、その後、室温にて１５分間インキュベートした。標識した物質をさらに処理することなく実験に直ちに用いた。
【０２７８】
ＣｐＧコーティングされた、ＰＬＧＡ封入されたピーナッツ抽出物ナノ粒子の特性化
粒子サイズを、ｌｉｑｕｉｄ  ｐｈａｓｅ  Ｓｔｏｋｅｓ  ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ  ｐａｒｔｉｃｌｅ−ｔｒａｃｋｉｎｇ  ｓｙｓｔｅｍ（ＮａｎｏＳｉｇｈｔ；Ｗｉｌｔｓｈｉｒｅ、Ｕ．Ｋ．）により測定した。ＣｐＧコーティングされた、ＰＬＧＡ封入されたピーナッツ抽出物ナノ粒子（以降、“ＣｐＧコーティングされた、ＰＬＧＡ封入されたピーナッツ抽出物ナノ粒子”および／または“薬剤”と互換的に言う）は、２１４±３９ｎｍの平均粒径を有していた。
【０２７９】
総タンパク質を、０．２Ｎ  ＮａＯＨ中にＲＴにて一晩、ナノ粒子を溶解し、マイクロＢＣＡタンパク質アッセイ（Ｐｉｅｒｃｅ、カタログ番号２３２３５）を用いてアッセイすることにより測定した。次の２種のタンパク質標準を用いた。ＰＢＳ、０．２Ｎ  ＮａＯＨ中のピーナッツ抽出物、およびＰＢＳ、０．２Ｎ  ＮａＯＨ中のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ；ＢＣＡキットに付属）。アビジン不含有のピーナッツ抽出物をカプセル化するＰＬＧＡナノ粒子、空のアビジン−パルミチン酸ナノ粒子、および空のアビジン不含有ナノ粒子を含む対照ナノ粒子を、同じ緩衝液に溶解し、アビジンおよびＰＬＧＡからアッセイのバックグラウンドシグナルを補正するために用いた。ＣｐＧコーティングされた、ＰＬＧＡ封入されたピーナッツ抽出物ナノ粒子を、５４．５３μｇのタンパク質／ｍｇ  ナノ粒子と共に充填した。
【０２８０】
総アビジンを、表面タンパク質を定量するために、無傷の(intact)ナノ粒子にマイクロＢＣＡアッセイを行って測定した。ＣｐＧコーティングされた、ＰＬＧＡ封入されたピーナッツ抽出物ナノ粒子は、ナノ粒子１ｍｇ当たり、２５．２８±０．３１μｇのアビジンを有した。この実験に使用されるＣｐＧ−ビオチン標識化条件下（上記）で、添加した全てのＣｐＧ−ビオチンは、溶液中、ＣｐＧ不含有のナノ粒子に結合されることが予想される。故に、ＣｐＧコーティングされた、ＰＬＧＡ封入されたピーナッツ抽出物ナノ粒子は、０．５μｇ／ｍｇ  ＣｐＧ−ビオチン／ｍｇ  ナノ粒子でコーティングされることが予想される。
【０２８１】
投与量製剤および分析
最終のＣｐＧコーティングされた、ＰＬＧＡ封入されたピーナッツ抽出物ナノ粒子を、それぞれの用量の投与の日に新たに剤形化した。簡単には、ＰＬＧＡ−カプセル化ピーナッツ抽出物ナノ粒子およびＣｐＧ−ビオチンを滅菌ＰＢＳ、ｐＨ７．４中に懸濁し、その後、室温にて１５分インキュベートして、標識した（上記）。ＣｐＧ−ビオチン標識したＰＬＧＡ−封入されたピーナッツ抽出物ナノ粒子を、投与が完了するまで室温で保持し、製造の３０分以内に使用した。用量製剤分析はこの実験について行っていない。
【０２８２】
実験デザインおよび実験手順（Ａ−Ｈ）
この実験に用いるマウスは、ジャクソン研究所、バーハーバー、メイン州から入手したメスのＣ３Ｈ／ＨｅＪである。マウスは、感作の開始時に、６週令であり、およそ１５グラムであって、４−６匹／ケージ（ＪＡＧ  ７５ケージ、Allentown Caging Equipment, Allentown, NJ）で飼育した。餌および水を自由に与えた。マウスを実験に使用する前に６日間順応させた。実験デザインを表５にまとめ、以下に詳細に記載する。
【０２８３】
表５：実験デザインのまとめ
【表２１】
2019073525.tif 000022
ａ 実験０、１、２、３、４、５、６、および８週での感作処理。
ｂ 最後の感作投与の１８日後。
ｃ ナノ粒子の用量濃度。ピーナッツタンパク質およびＣｐＧ−ビオチンの対応する濃度は、それぞれ４００および３．６７μｇ／ｍＬである。
ｄ ナノ粒子の用量。ピーナッツタンパク質およびＣｐＧ−ビオチンの対応する濃度は、それぞれ２００および１．８３５μｇ／マウスである。
ｅ 最後の脱感作投与の５日後。
【０２８４】
Ａ．感作（第０、１、２、３、４、５、６、および８週）
６週齢−全てメスのＣ３Ｈ／ＨｅＪマウス、体重各およそ１５ｇ、の３つのグループ（グループ１−３）を、この実験に用いた。グループ１は８匹、グループ２は１２匹、そしてグループ３は１０匹のマウスであった。グループ１および２は、ピーナッツ＋コレラ毒素で８週間感作し、一方、グループ３（未処理対照）は感作処理を受けなかった。
【０２８５】
簡単には、全てのマウス（グループ３のマウスを含む）を、２時間絶食させた。２時間の絶食後、感作すべきマウスにそれぞれ（グループ１−２）、１０ｍｇの新鮮に挽いた全ピーナッツ（すなわち、殻なしのピーナッツおよび薄皮）、２０μｇのコレラ毒素、１６．５μｌのアルコール、および１．５％の重炭酸ナトリウム（ｗ／ｖ）を含む０．５ｍＬのＰＢＳ溶液を強制的に摂取させた。これを３日間連続して繰り返した。初回の感作（０週）後、同じ工程をさらに５週間の間、毎週繰り返した（第１−５週）；しかしながら、感作は、１週間に１回のみ投与した（０週目には１週間に３日間連続で投与したが）。１週および３週間後（すなわち、それぞれ第６週および第８週）に、新鮮に挽いた全ピーナッツの量をマウス当たり５０ｍｇまで増加したこと以外、マウスを上記のように感作した（すなわち、１週間に１回）。
【０２８６】
Ｂ．脱感作（第１１、１２、１３、および１４週）
最後の追加用量の感作の１８日後（第１１週）に、未処理マウス（グループ３）以外の全てのマウスを、脱感作処理レジメンを開始した。マウスに、マウス１匹当たり、１週間に１回強制経口投与により、４週間連続して、０（ビークル；グループ１）または３．６７ｍｇのＣｐＧコーティングされた、ＰＬＧＡ封入されたピーナッツ抽出物ナノ粒子（グループ２）を投与した。３．６７ｍｇ／マウスのナノ粒子用量は、２００μｇのピーナッツタンパク質および１．８３５μｇのＣｐＧ−ビオチンに相当する。各脱感作処理のための投与量は、０．５ｍＬ／マウスであった。全てのマウス（グループ３のマウスを含む）を、脱感作処理の前に２時間絶食させた。
【０２８７】
Ｃ．食物経口負荷（第１４、１８、２２、２６および３０週）
第１４週（最後の脱感作処理の５日後）、１８、２２、２６、および３０週に、脱感作処理したマウス（グループ１および２）を、新鮮に挽いた全乾燥ローストピーナッツを経口投与した。未処理マウス（グループ３）は、第３０週のみで暴露した。簡単には、全てのマウス（グループ３のマウスを含む）を一晩絶食させた。次の日の朝、グループ１−２の各マウスを、１００ｍｇの新鮮に挽いた全ピーナッツ、１０μｇのコレラ毒素、８．２５μｌのアルコール、および１．５％の重炭酸ナトリウム（ｗ／ｖ）を含む０．５ｍＬのＰＢＳ溶液を経口負荷した。３０分後、マウスをさらに０．５ｍＬの上記の溶液を経口投与した（すなわち、マウス当たりの２００ｍｇの挽いた全ピーナッツの全量）。
【０２８８】
各食物経口負荷（ＯＦＣ）の２４時間後、グループ１−２中のマウスを、１０ｍｇの新鮮に挽いた全ピーナッツ、２０μｇのコレラ毒素、１６．５μｌのアルコール、および１．５％の重炭酸ナトリウム（ｗ／ｖ）を含む０．５ｍＬのＰＢＳ溶液を経口投与した。これは、長期間の実験のためにマウスの反応性を維持するために行われた。
【０２８９】
Ｄ．アナフィラキシー症状のスコア
マウスを、各脱感作処理（第１１、１２、１３、および１４週）後の１時間および各ＯＦＣ（第１４、１８、２２、２６および３０週）後の３０分間、アナフィラキシー症状について観察した。以下の評価システムをアナフィラキシー症状を評価するために用いた。０は症状なし、１は鼻や頭の周りの掻き傷および擦り傷、２は、眼および鼻の周りの腫れ、下痢、鳥肌（pilar erecti）、活動低下、および／または増加した呼吸数を伴う活動低下、３は喘鳴、苦しい呼吸、および口の尾の周りのチアノーゼ、４は、緩い刺激または振動後の無活動、および痙攣；５は死亡。
【０２９０】
Ｅ．体温
各ＯＦＣ投与（第１４、１８、２２、２６および３０週）の３０分後、マウスを、直腸体温計を用いて体温を評価した。第１４、１８、２２および２６週に暴露されていないグループ３のマウスは、それらの体温を、グループ１および２の動物と同じ時点で記録された。
【０２９１】
Ｆ．血漿ヒスタミンレベル
血漿ヒスタミンレベルを、各ＯＦＣ投与（第１４、１８、２２、２６および３０週）後に測定した。簡単には、ＯＦＣの投与の３０分後に、血液を採取し、血漿を分離し、該血漿をアッセイまで−８０℃で貯蔵した。血漿ヒスタミンレベルを、提供された標準曲線との比較によって算出したヒスタミンの濃度で、市販のヒスタミン酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）キット（Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈ、Ｍａｒｓｅｉｌｌｅ、Ｆｒａｎｃｅ）を用いて測定した。
【０２９２】
Ｇ．血清ピーナッツ特異的ＩｇＥおよびＩｇＧ２ａレベル
ピーナッツ特異的ＩｇＥおよびＩｇＧ２ａの血清レベルを、第１１週での最初の脱感作の前日、および各ＯＦＣ（第１４、１８、２２、２６および３０週）の前日に測定した。上記の指定された時間点で、血液を採取し、血清を分離し、該血清をアッセイまで−８０℃で貯蔵した。
【０２９３】
ピーナッツ特異的ＩｇＥを以下の通り測定した。９６ウェルのＩｍｍｕｌｏｎ  ４ＨＢ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｍｉｌｆｏｒｄ、ＭＡ）プレートを粗ピーナッツ抽出物（５００μｇ／ｍｌ  脱脂ピーナッツ調製物）またはラット抗マウスＩｇＥ（２μｇ／ｍｌ、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）でコーティングした。一晩４℃にてインキュベート後、プレートを３回洗浄し、その後、３７℃にて３時間、２％ＢＳＡ（Ｓｉｇｍａ、Ｓｔ. Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）のＰＢＳ溶液でブロッキングした。プレートを３回洗浄し、次いで、１：５０希釈した試験血清サンプルを粗ピーナッツ抽出物でコーティングしたウェルに添加し、そして１０種の連続希釈した（１：２、１，０００ｎｇ／ｍＬから開始）精製したマウスＩｇＥ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）を、ラット抗マウスＩｇＥでコーティングしたウェルに添加し、基準曲線を作成した。全ての希釈は、２％ＢＳＡのＰＢＳ溶液で行った。一晩インキュベーション後、プレートを３回洗浄し、次いで、ビオチニル化ラット抗マウスＩｇＥ（１μｇ／ｍｌ、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）を、室温にて１時間添加した。プレートを６回洗浄し、次いで、１：４，０００希釈したストレプトアビジン−西洋ワサビペルオキシダーゼ（１ｍｇ／ｍｌ、Ｓｉｇｍａ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）と共に１５分間インキュベートした。プレートを６回洗浄し、次いでＡＢＴＳ（登録商標）ペルオキシダーゼ基質（ＫＰＬ、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ）で３０分間発色させた。吸光度を、マイクロプレートリーダーにより４０５ｎｍで測定した。
【０２９４】
ピーナッツ特異的ＩｇＧ２ａを以下の通り測定した。９６ウェルのＩｍｍｕｌｏｎ  ４ＨＢプレートを粗ピーナッツ抽出物（２μｇ／ｍｌ）またはジニトロフェニル（ＤＮＰ、２μｇ／ｍｌ、Ｓｉｇｍａ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）でコーティングした。一晩４℃にてインキュベート後、プレートを３回洗浄し、その後、３７℃にて３時間、０．５％  Ｔｗｅｅｎ−２０（Ｓｉｇｍａ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）含有ＰＢＳ中の１％ヒト血清アルブミン（Ｓｉｇｍａ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）でブロッキングした。プレートを３回洗浄し、次いで、希釈した試験血清サンプル（ＩｇＧ２ａ法について１：１，０００）を粗ピーナッツ抽出物でコーティングしたウェルに添加し、そして１０種の連続希釈した（１：３、２，０００ｎｇ／ｍＬから開始）マウス抗ＤＮＰ  ＩｇＧ２ａ（Ａｃｃｕｒａｔｅ、ＮＹ）を、ＤＮＰでコーティングしたウェルに添加して、基準曲線を作成した。全ての希釈は、２％ＢＳＡのＰＢＳ溶液で行った。一晩インキュベーション後、０．５％  Ｔｗｅｅｎ−２０含有ＰＢＳ中の１％ヒト血清アルブミンで行った。一晩インキュベーション後、プレートを３回洗浄し、次いで、ビオチニル化ラットＩｇＧ２ａ（０．２５μｇ／ｍｌ、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）を、室温にて１時間添加した。プレートを６回洗浄し、次いで、１：４，０００希釈したストレプトアビジン−西洋ワサビペルオキシダーゼ（１ｍｇ／ｍＬ、Ｓｉｇｍａ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）と共に１５分間インキュベートした。プレートを６回洗浄し、次いで、ＡＢＴＳ（登録商標）ペルオキシダーゼ基質で３０分間発色させた。吸光度を、マイクロプレートリーダーにより４０５ｎｍで測定した。
【０２９５】
Ｈ．脾細胞サイトカインレベル
第５回目のＯＦＣの３０〜４０分後、全てのマウスを殺し、その脾臓を取り出し、脾細胞を単離し、得られた脾細胞培養物を、粗ピーナッツ抽出物の存在下または不存在下でサイトカイン（ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、ＩＦＮ−γ、およびＴＧＦ−β）についてアッセイした。個々の培養物を各動物について用意した。脾細胞を、１０％ウシ胎仔牛血清（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）および１％ペニシリン／ストレプトマイシン（ＭＰ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ、Ｓｏｌｏｎ、ＯＨ）を添加したＲＰＭＩ１６４０（Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ、Ｈｅｒｎｄｏｎ、ＶＡ）中に懸濁し、粗ピーナッツ抽出物の存在下または不存在下で２４ウェルプレートに播種した。７２時間後、培養上清を集め、サイトカインレベルを、市販のＥＬＩＳＡキットによりアッセイした。ＯｐｔＥＩＡ  ＥＬＩＳＡキット（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）を、Ｒ＆Ｄシステム（Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ＭＮ）からのｄｕｏ−ｓｅｔキットを用いて測定したＴＧＦ−βおよびＩＬ−１３以外は、全てのサイトカインについて用いた。
【０２９６】
結果
１．血清ピーナッツ特異的ＩｇＥレベル
第１１週での脱感作の前日（処理前）ならびに第１４、１８、２２、２６および３０週でのＯＦＣの前日の、ピーナッツ特異的ＩｇＥの血清濃度の平均値±平均値の標準偏差（ＳＥＭ）の例を、図５に示す。いずれの処理も受けていないマウス（未処理対照）は、実験中に検出可能なピーナッツ特異的ＩｇＥレベルを有しなかった。感作処理を受けた両グループのマウスは、第１１から第３０週にてピーナッツ特異的ＩｇＥレベルの存在を示した。第１１週（脱感作の前日；ビークル対照：６，８４４±１，４１１ｎｇ／ｍＬ、薬剤：６，５２５±７２９ｎｇ／ｍＬ）にビークルグループと薬剤処理グループの間で観察された、平均ピーナッツ特異的ＩｇＥに統計的な差異はなかった。
【０２９７】
脱感作処理の完了の４日後（第１４週、初めのＯＦＣの前日）、薬剤処理マウスは、ビークルを投与したマウスと比較したとき（６，６６２±８６１ｎｇ／ｍＬ、Ｐ＜０．０７）、低減したレベルのピーナッツ特異的ＩｇＥ（４，９８０±７３２ｎｇ／ｍＬ）の傾向を示した。実験の残りの期間中、薬剤処理したマウスにおける平均ピーナッツ特異的ＩｇＥレベルは、ビークル処理したマウスで観察される値よりも顕著に低かった（Ｐ＜０．０５−０．００１）。
【０２９８】
２．ピーナッツ特異的ＩｇＧ２ａレベル
第１１週での感作の前日（処理前）ならびに第１４、１８、２２、２６および３０週でのＯＦＣの前日の、ピーナッツ特異的ＩｇＧ２ａの血清濃度の平均±ＳＥＭの例を、図６に示す。いずれの処理も受けていないマウス（未処理対照）は、実験中に検出可能なピーナッツ特異的ＩｇＧ２ａレベルを有しなかった。感作処理を受けた両グループのマウスは、第１１から第３０週にてピーナッツ特異的ＩｇＧ２ａレベルの存在を示した。第１１週（脱感作の前日；ビークル対照：３１８，２８６±３２，５８６ｎｇ／ｍＬ、薬剤：３３９，５９２±５１，４９４ｎｇ／ｍＬ）にビークルグループと薬剤処理グループの間で観察された、平均ピーナッツ特異的ＩｇＧ２ａに統計的な差異はなかった。
【０２９９】
脱感作処理の完了の４日後（第１４週、初めのＯＦＣの前日）、薬剤処理マウスは、平均ピーナッツ特異的ＩｇＧ２ａレベルの増加を示し（４４４，４２６±６０，２８８ｎｇ／ｍＬ）、一方、ビークル処理したマウスは、平均ピーナッツ特異的ＩｇＧ２ａレベルの減少を示した（２０７，７４１±５３，４９４ｎｇ／ｍＬ、Ｐ＜０．０５）。第１４週の後、平均ピーナッツ特異的ＩｇＧ２ａレベルはビークル処理および薬剤処理したマウスの両方で減少した。しかしながら、第１１週以降の全ての時間点において、薬剤処理したマウスにおけるピーナッツ特異的ＩｇＧ２ａの平均レベルは、ビークル処理したグループで観察される値より顕著に高い値を維持していた（Ｐ＜０．０５−０．０１）。
【０３００】
３．脱感作期間中のアナフィラキシー症状スコア
ビークル対照または３．６７ｍｇ／マウスの薬剤（２００μｇ  ピーナッツタンパク質および１．８３５μｇ  ＣｐＧ−ビオチン）で処理したマウスは、各脱感作処理後の１時間の観察時間中にアナフィラキシーの徴候を示さなかった。全てのマウスは、アナフィラキシー症状スコア０（０＝症状なし）を有した。
【０３０１】
４．ＯＦＣ後のアナフィラキシー症状スコア
第１４週、第１８週、第２２週、第２６週、および第３０週でのＯＦＣ後の個々の、および平均アナフィラキシー症状スコアを、それぞれ図７、８および９に示す。いずれのタイプの感作／処理も受けていないマウス（すなわち、未処理対照）は、第３０週でのＯＦＣの後に、アナフィラキシー症状を示さなかった（すなわち、全てのマウスが、アナフィラキシー症状スコア０であった）。未処理対照マウスは、第１４週、１８週、２２週、および２６週では暴露されなかった。
【０３０２】
ビークル対照で処理した感作マウスは、第１４週でのＯＦＣ後にをアナフィラキシーの徴候を示した。具体的には、１匹のマウスはスコア３（喘鳴、苦しい呼吸、および口の尾の周りのチアノーゼ）であり、４匹のマウスは、スコア２（眼および鼻の周りの腫れ、下痢、鳥肌（pilar erecti）、活動低下、および／または増加した呼吸数を伴う活動低下）であり、そして１匹のマウスは、スコア１（鼻や頭の周りの掻き傷および擦り傷）であった。２匹のマウスは症状を示さなかった（スコア０）。これらのマウスにおけるアナフィラキシー症状は、その後の暴露の第２６週までの間に、１匹のマウスがスコア４（緩い刺激または振動後の無活動、および痙攣）および残りの７匹のマウスがスコア３に悪化した。第３０週にて、第２６週でスコア３であった１匹のマウスが症状の低減を有した（スコア２）。
【０３０３】
ピーナッツ感作されたマウスにおいて、３．６７ｍｇ／マウスの薬剤（２００μｇ  ピーナッツタンパク質および１．８３５μｇ  ＣｐＧ−ビオチン）を、４週間連続して１週間に１回経口投与した結果、５回全てのＯＦＣにて、アナフィラキシー症状スコアの統計的に有意な低減が得られた（Ｐ＜０．０５）。１２匹のうち９匹のマウス（７５％）が、最初の暴露後、アナフィラキシー症状から完全に保護され（スコア０）、残りの３匹が、それぞれスコア１、２および３の症状を有した。２回目の暴露により、最初の暴露でスコア１であったマウスは、スコア０になり、完全に保護された総数は１０匹となった（８３％）。このことは、４回目の暴露後も同じであった（すなわち、脱感作処理を停止した３ヶ月後）。脱感作処理を停止した４ヶ月後、第２６週で完全に保護されていた１０匹中２匹のマウスは、症状が増した（スコア２）。
【０３０４】
５．ＯＦＣ後の体温
第１４週、第１８週、第２２週、第２６週、および第３０週でのＯＦＣ後の個々の、および平均体温の例を、それぞれ図１０、１１および１２に示す。第１４、１８、２２および２６週で暴露されていないグループ３のマウスは、グループ１および２の動物と同じ時点で体温を記録された。各ＯＦＣ後、ビークル対照グループは、未処理対照マウスの対応よりも一貫して低い体温を有した。ピーナッツ感作されたマウスにおいて、３．６７ｍｇ／マウスの薬剤（２００μｇ  ピーナッツタンパク質および１．８３５μｇ  ＣｐＧ−ビオチン）を、４週間連続して１週間に１回経口投与した結果、５回全てのＯＦＣにて、ビークル対照動物の平均体温と比較して高い体温が得られた。体温の上昇は、最初の暴露以外の全ての暴露で統計的に有意であった（２回目、３回目、および４回目の暴露でＰ＜０．０５、および５回目の暴露でＰ＜０．００１）。
【０３０５】
６．ＯＦＣ後の血漿ヒスタミンレベル
第１４週、第１８週、第２２週、第２６週、および第３０週でのＯＦＣ後の個々の、および平均血漿ヒスタミンレベルの例を、それぞれ図１３、１４および１５に示す。第１４、１８、２２および２６週で暴露されていないグループ３のマウスは、グループ１および２の動物と同じ時点で血漿ヒスタミンレベルを記録された。各ＯＦＣの３０分後の平均血漿ヒスタミンレベルは、未処理対照グループと比較してビークル対照グループで高かった。ピーナッツ感作されたマウスにおいて、３．６７ｍｇ／マウスの薬剤（２００μｇ  ピーナッツタンパク質および１．８３５μｇ  ＣｐＧ−ビオチン）を、４週間連続して１週間に１回経口投与した結果、５回全てのＯＦＣにて、ビークル対照動物の平均血漿ヒスタミンレベルと比較して統計的に有意に低い平均血漿ヒスタミンレベルが得られた（Ｐ＜０．０５−０．００１）。
【０３０６】
７．ＯＦＣ（第３０週）後の、粗製ピーナッツ抽出物と共にインキュベートされた脾細胞培養物におけるサイトカインレベル
ＯＦＣ（第３０週）後の、粗製ピーナッツ抽出物と共にインキュベートされた脾細胞培養物における平均±ＳＥＭサイトカインレベルを図１６に示す。図１６Ａは、平均±ＳＥＭ  ＩＬ−４  サイトカインレベルの例示的結果を示す。図１６Ｂは、平均±ＳＥＭ  ＩＬ−１０  サイトカインレベルの例示的結果を示す。図１６Ｃは、平均±ＳＥＭ  ＩＦＮ−γ サイトカインレベルの例示的結果を示す。図１６Ｄは、平均±ＳＥＭ  ＩＬ−５  サイトカインレベルの例示的結果を示す。図１６Ｅは、平均±ＳＥＭ  ＩＬ−１３  サイトカインレベルの例示的結果を示す。図１６Ｆは、平均±ＳＥＭ  ＴＧＦ−β  サイトカインレベルの例示的結果を示す。
【０３０７】
粗製ピーナッツ抽出物の存在下における、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、ＩＦＮ−γ、およびＴＧＦ−βの平均脾細胞生産は、未処理対照グループと比較してビークル対照グループでより高かった。ピーナッツ感作されたマウスにおいて、３．６７ｍｇ／マウスの薬剤（２００μｇ  ピーナッツタンパク質および１．８３５μｇ  ＣｐＧ−ビオチン）を、４週間連続して１週間に１回経口投与した結果、ビークル対照と比較して、ＩＬ−４（ｐ＜０．００１）、ＩＬ−５（ｐ＜０．００１）、およびＩＬ−１３（ｐ＜０．００１）の平均脾細胞生産の統計的に有意な減少がもたらされ、かつビークル対照と比較してＩＦＮ−γ（ｐ＜０．００１）の平均脾細胞生産の統計的に有意な増加がもたらされた。ＩＬ−１０およびＴＧＦ−βについて、ビークルおよび薬剤処理グループ間で観察された統計的差異はなかった。
【０３０８】
結果
３．６７ｍｇ／マウスの薬剤（２００μｇ  ピーナッツタンパク質および１．８３５μｇ  ＣｐＧ−ビオチン；すなわち、ＣｐＧコーティングされた、ＰＬＧＡ封入されたピーナッツ抽出物ナノ粒子）を、４週間連続して１週間に１回経口投与されたピーナッツ感作されたマウスは、脱感作期間中にアナフィラキシー症状を示さず、このことは、ＣｐＧコーティングされた、ＰＬＧＡ封入されたピーナッツ抽出物ナノ粒子が、ピーナッツ感作されたマウスにおいてアナフィラキシー反応の可能性を欠くことを示す。
【０３０９】
さらに、ピーナッツ感作されたマウスにおいて、３．６７ｍｇ／マウスの薬剤を、４週間連続して１週間に１回経口投与した結果、ビークル対照マウスと比較して、その後の経口ピーナッツ暴露に対して脱感作がもたらされた。これは、ビークル処理マウスと比較して、より低い平均アナフィラキシー症状スコア、より高い平均体温（未処理マウスと実質的に同程度）、より低い平均血漿ヒスタミンレベル、平均血清ピーナッツ特異的ＩｇＥレベルの低下、平均血清ピーナッツ特異的ＩｇＧ２ａレベルの増加、ＩＬ−４、ＩＬ−５およびＩＬ−１３の平均脾細胞生産の減少、ならびにＩＦＮ−γの平均脾細胞生産の増加により証明された。薬剤での処理を終えた４ヶ月後での脱感作が未だ明らかであり、このことは、免疫寛容（tolerance）がいくつかの動物で達成され得たことを示唆する。
【０３１０】
実施例５：ラッカセイ（ピーナッツ）アレルゲン抽出物の製造
本実施例は、本発明における使用のための、ラッカセイ（ピーナッツ）アレルゲン抽出物（すなわち、粗製ピーナッツ抽出物）の製造を記載する。
【０３１１】
本実施例は、本発明における使用のための、とりわけ、Ａｒａ ｈ １、Ａｒａ ｈ ２およびＡｒａ  ｈ３  抗原を含むピーナッツアレルゲン抽出物の製造を記載する。
【０３１２】
本実施例はまた、本発明における使用のための、組み換え修飾ピーナッツタンパク質（ｍＡｒａ ｈ １、ｍＡｒａ ｈ ２、およびｍＡｒａ ｈ ３、ここで、ｍは、修飾されていることを示す）の製造を記載する。
【０３１３】
ラッカセイ（ピーナッツ）アレルゲン抽出物（すなわち、粗製ピーナッツ抽出物）は、以下の通りに製造することができる。市販の殻付きのローストピーナッツ（Ｗｈｉｔｅ  Ｒｏｓｅ  Ｂｒａｎｄ、ＮＪ）を殻を剥がし、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ、ｐＨ７．４）中で均質化して、アセトン抽出した。ＰＢＳのピーナッツタンパク質の終濃度は、ビシンコニン酸（ＢＣＡ）アッセイにより決定された。その後、ピーナッツアレルゲン抽出物を、大腸菌水性抽出物（ＡＥＥ）と合わせ、例えば実施例３に記載のとおり、実質的に製造し得た。
【０３１４】
組み換えピーナッツタンパク質は、以下の通り製造された。３つの組み換え修飾ピーナッツタンパク質（ｍＡｒａ ｈ １、ｍＡｒａ ｈ ２、およびｍＡｒａ ｈ ３）を、大腸菌株ＢＬＲ（ＤＥ３）で別個に発現させ、その後、該大腸菌を熱およびフェノールを用いて殺した。発現されたタンパク質は、死んだ大腸菌内に封入されたままであり、得られた３つの全細胞懸濁液を、ＥＭＰ−１、ＥＭＰ−２、およびＥＭＰ−３（すなわち、それぞれ封入されたｍＡｒａ ｈ １、ｍＡｒａ ｈ ２、およびｍＡｒａ ｈ ３）と称する。その後、各全細胞懸濁液を、実施例１に記載のとおり、大腸菌水性抽出物（ＡＥＥ）の製造に用い、それは、実施例３に記載のとおり、実質的にナノ粒子組成物の製造のために、水相中に発現された組み換えピーナッツタンパク質を含んだ。
【０３１５】
実施例６：インビトロでの、アレルギー患者の末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）中のナノ粒子組成物のサイトカインの実験
本実施例は、本発明における使用のための提供されるナノ粒子組成物（すなわち、親水性および／または疎水性大腸菌抽出調製物を含むナノ粒子）の免疫原性を評価するための、患者の末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）のインビトロ刺激の例を記載する。
【０３１６】
本実施例は、本発明における使用のための、粗製アレルゲン抽出物（例えば、ラッカセイ、コナヒョウヒダニまたはヤケヒョウヒダニ）を含む１つまたはそれ以上の抗原を含む提供されるナノ粒子組成物の免疫原性を評価するための、患者の末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）のインビトロ刺激の例を記載する。
【０３１７】
本実施例は、有機大腸菌抽出物（“ＯＥＥ”）でコーティングされたポリラクチド コ−グリコリド−（“ＰＬＧＡ−“）に封入されたコナヒョウヒダニおよびヤケヒョウヒダニの塵ダニ抽出物および大腸菌水性抽出物（ＡＥＥ）ナノ粒子（以降、“薬剤”と言う）の免疫原性を評価するための、インビトロでのサイトカイン実験の例を記載する。
【０３１８】
いくつかの態様において、アレルギー患者のＰＢＭＣの刺激を含む、本明細書に記載の実験は、本発明の任意の対応の免疫学的特徴または効果を評価するために用いることができる。
【０３１９】
いくつかの態様において、提供される組成物は、対象における免疫学的機能を調節し得る。いくつかの態様において、そのような調節は、脱感作を含み得る。いくつかの態様において、そのような調節は、過敏性を減じること（densitization）を含まない。いくつかの態様において、免疫学的特徴または効果は、Ｔｈ１／Ｔｈ０−様表現型に対する塵ダニアレルギー患者の改変されたアレルゲン特異的なＴｈ２が有意な表現型を含む。
【０３２０】
このインビトロでの実験の目的は、Ｔｈ１／Ｔｈ０−様表現型に対する塵ダニアレルギー患者の末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）のアレルゲン特異的なＴｈ２が有意な表現型を改変する該薬剤の能力を評価することである。このモデルシステムは、単一の培養物中でのポリクローナルＴ細胞およびＢ細胞抗原提示細胞（ＡＰＣ）を含む。
【０３２１】
この実施例における薬剤は、２種の一般的なハウスダストダニ、コナヒョウヒダニおよびヤケヒョウヒダニの、アレルギーユニットで１：１混合物の標準化アレルゲン抽出物を含む。塵ダニ抽出物は、皮下免疫療法（ＳＣＩＴ）で使用するためにＦＤＡによって承認され、市販されている標準化された塵ダニ抽出物に見られるものと同じである。塵ダニ抽出物は、塵ダニ抽出物および細菌タンパク質、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、ならびにＡＥＥのリポ多糖（ＬＰＳ）が、ナノ粒子の内部に封入され、細菌ＬＰＳおよびＯＥＥの脂質がナノ粒子の外側に被覆されている、ＰＬＧＡナノ粒子内に封入されている。
【０３２２】
特定の理論はともかく、提供されるナノ粒子組成物中の塵ダニ抽出物の封入のための薬理学的根拠は、舌下粘膜中のＡＰＣによる取り込みの促進および自然免疫系の活性化であり、従って、抽出物のみを用いる舌下免疫療法（ＳＬＩＴ）の有効性を改善する可能性があることである。具体的には、薬剤は、公知のトール様受容体（ＴＬＲ  アゴニスト、細菌ＬＰＳおよびＣｐＧ  ＤＮＡモチーフ、ならびに細菌細胞中に存在し得る何らかの可能性のある未知のアゴニストの取り込みを最大にして、薬剤製剤の潜在的有効性を増強するように設計されている。
【０３２３】
この実験は、大腸菌成分を欠くナノ粒子内に封入された塵ダニ抽出物（アジュバントを含まない薬剤）、塵ダニ抽出物を含まない半合成細菌細胞（塵ダニ抽出物を含まない薬剤）、および空のナノ粒子（アジュバントおよび塵ダニ抽出物を含まない薬剤）と比較して薬剤での処理後の、塵ダニアレルギー患者のＰＢＭＣ中の、インビトロでの、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１０、ＩＬ−５、およびＩＬ−４レベルを評価し得る。
【０３２４】
本実施例の一般的方法（以下にまとめる）は、樺花粉アレルギー実験についてのＢｏｈｌｅらによって公表された方法（Bohle et al., J. Immunology, 2004；172：6642−6648）に実質的に基づいている。この方法は、実験デザインを改良するために必要に応じて変更され得る。特に、当業者は、１ウェル当たりの細胞数、培養期間、培養条件、ならびに薬剤および刺激剤の投与量を含むが、これに限定されない特定のパラメーターが、特定の抗原および患者集団のために最適化される必要があり得ることを理解し得る。
【０３２５】
末梢血液を、１０名の塵ダニアレルギー患者から静脈穿刺によりヘパリン添加シリンジ中に集める。全ての患者は、採血前に最低１年の通年性アレルギー性鼻炎の既往歴を有し、採血時のポジティブ皮膚プリックテスト（ＰＳＴ）によりコナヒョウヒダニまたはヤケヒョウヒダニに感受性であることが実証されていなければならない。ＰＳＴは、１５−２０分で陰性対照（生理食塩水）によって誘発されるものよりも平均直径３ｍｍ大きい膨疹と定義される。患者は、採血前の６ヶ月以内および３ヶ月以内のそれぞれにアレルゲン免疫療法または免疫調節療法を受けていてはならない。患者は、該対象が定期的に曝されているのと別のアレルゲン（すなわち、塵ダニ以外）による顕著な症候性通年性アレルギー性鼻炎および／または喘息の病歴を有していてはならない。
【０３２６】
ＰＢＭＣは、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅ密度勾配遠心分離（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）により塵ダニアレルギー患者の末梢血液から単離される。全血は、採血後できるだけ早く、理想的には８−１２時間以内にＰＢＭＣに処理されるべきである。ＰＢＭＣは、典型的にアッセイ前に凍結されていない。
【０３２７】
ＰＢＭＣは、９６ウェルプレート（Ｎｕｎｃｌｏｎｅ；Ｎｕｎｃ）中、２ｍＭのＬ−グルタミン、２ｘ１０−５Ｍの２−メルカプトエタノール、および試験薬／対照を添加した、血清不含有のＵｌｔｒａ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｕｍ（ＢｉｏＷｈｉｔｔａｋｅｒ、Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ、ＭＤ）中で培養する。１ｘ１０６／２００μｌの三連のウェルおよび２ｘ１０５／２００μＬの三連のウェルを、各塵ダニアレルギー患者のＰＢＭＣについての以下の試験薬／対照のそれぞれについて設定し得る。
１．低用量の薬剤［用量は、培養培地中のナノ粒子の終濃度（ｍｇ／ｍｌ）として表される］；
２．中間用量の薬剤；
３．高用量の薬剤；
４．アジュバントなしの薬剤（３と同じ用量）；
５．塵ダニ抽出物なしの薬剤（３と同じ用量）；
６．アジュバントおよび塵ダニ抽出物なしの薬剤（３と同じ用量）；
７．培地のみの対照。
【０３２８】
上記の通り、三連のウェルを１ｘ１０６／２００μｌに設定し、Ｔｈ１関連サイトカインを追跡するために用いる。試験薬／対照と共に培養の４８時間後、上清を回収し、ｅｎｄｏｇｅｎのマッチドＡｂペア（Ｅｎｄｏｇｅｎ、Ｗｏｂｕｒｎ、ＭＡ）を用いる酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）を製造者の指示書に従って用いて、ＩＦＮ−γおよびＩＬ−１０含有量について分析する。
【０３２９】
さらに、三連のウェルを２ｘ１０５／２００μＬに設定し、Ｔｈ２関連サイトカインを追跡するために用いる。試験薬／対照と共に培養の６日後、細胞を洗浄し、計数し、そして１ｘ１０６／２００μｌ濃度で、ホルボールミリステートアセテート（ＰＭＡ、１０ｎｇ／ｍｌ）＋イオノマイシン（１μＭ）で２４時間、再刺激した。再刺激の２４時間後、上清を集め、ｅｎｄｏｇｅｎのマッチドＡｂペア（Ｅｎｄｏｇｅｎ、Ｗｏｂｕｒｎ、ＭＡ）を用いるＥＬＩＳＡを用いて、ＩＬ−５およびＩＬ−４含有量について分析する。
【０３３０】
実施例７：通年性アレルギー性鼻炎およびコナヒョウヒダニまたはヤケヒョウヒダニに感受性を有する成人対象に舌下投与された塵ダニアレルギーワクチンの、フェーズ１、無作為化、二重盲検、プラセボ対照安全性、薬力学的、および予備的有効性試験
本実施例は、本発明に使用するための、通年性アレルギー性鼻炎（喘息の有無を含む）およびコナヒョウヒダニまたはヤケヒョウヒダニに感受性を有する成人対象における、提供されるナノ粒子組成物（本実施例において、親水性および／または疎水性大腸菌抽出物調製物を含むナノ粒子）の例示的フェーズ１、単一施設、無作為化、二重盲検、プラセボ対照、安全性、薬力学、および予備的有効性試験を記載する。
【０３３１】
いくつかの態様において、提供されるナノ粒子組成物は、大腸菌有機抽出物（“ＯＥＥ”）コーティングされたポリ（乳酸−コ−グリコール酸）−（“ＰＬＧＡ−“）カプセル化コナヒョウヒ（D. farinae）およびヤケヒョウヒダニ塵ダニ抽出物ならびに大腸菌水性抽出物（ＡＥＥ）ナノ粒子（以降、“薬剤処理”および／または“塵ダニアレルギーワクチン”と言う）である。
【０３３２】
本実施例は、本発明における使用のための、提供されるナノ粒子組成物（本実施例において、親水性および／または疎水性大腸菌抽出物調製物を含むナノ粒子）の薬力学および予備有効性を評価するための典型的な臨床試験設計を記載する。
【０３３３】
本実施例は、本発明における使用のための、コナヒョウヒダニまたはヤケヒョウヒダニ抽出物（すなわち、抗原）および細菌成分を含む特定の提供されるナノ粒子組成物の舌下投与の薬力学および予備有効性を評価するための例示的なプロトコルの概要を記載する。
【０３３４】
化学名および構造
本実施例の塵ダニアレルギーワクチンの薬剤物質は、２種の一般的なハウスダストダニ、コナヒョウヒダニおよびヤケヒョウヒダニを、アレルギーユニット（ＡＵ）で１：１で混合した標準的なアレルゲン抽出物である。このように、塵ダニアレルギーワクチン薬剤物質に常套の化学名または構造はない。
【０３３５】
塵ダニアレルギーワクチンにおける塵ダニ抽出物は、皮下免疫療法（ＳＣＩＴ）に使用するために食品医薬品局（ＦＤＡ）により承認された市販の標準化された塵ダニ抽出物［標準化されたダニ抽出物（コナヒョウヒダニ）および標準化されたダニ抽出物（ヤケヒョウヒダニ）、Ｇｒｅｅｒ、Ｌｅｎｏｉｒ、ＮＣ］に見出されるものと同じであり得る。
【０３３６】
塵ダニ抽出物は、二重エマルジョンプロセスを用いて製造されたＰＬＧＡナノ粒子内に封入される。第一エマルジョンにおいて、塵ダニ抽出物および細菌のデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）を含むＡＥＥは、有機溶媒中のＰＬＧＡと混合され得る。得られたエマルジョンは、粒子内に封入された塵ダニ抽出物およびＡＥＥを含むナノ粒子を製造するために、マイクロ流体化または均質化される。その後、５％ポリビニルアルコール溶液中の、主に細菌脂質およびＬＰＳを含むＯＥＥが添加され、第一のエマルジョン中に生成されたナノ粒子をコーティングするために、得られた第二のエマルジョンをマイクロ流体化／均質化される。
【０３３７】
このようにして、最終のＰＬＧＡナノ粒子は、ＧＩ管中の抗原提示細胞（ＡＰＣ）による取り込みを容易にし、自然免疫系の活性化を増強して、裸の塵ダニ抽出物のみでの従来のＳＬＩＴ（舌下免疫療法）の有効性を潜在的に改善するために、細菌を模倣するように設計されている。塵ダニアレルギーワクチンバルクナノ粒子は、ＡＥＥの添加を含んでいてよく、第二のエマルジョンは、ＬＰＳ単独ではなくＯＥＥを使用してよい。言い換えれば、これらのＰＬＧＡナノ粒子は、塵ダニ抽出物およびＡＥＥの細菌タンパク質、ＤＮＡ、およびＬＰＳがナノ粒子の内部にカプセル化され、細菌ＬＰＳおよびＯＥＥの脂質がナノ粒子の外側にコーティングされている、“半合成細菌細胞”として設計されている。プラセボは、塵ダニ抽出物が存在しないこと以外、同様に製造される。
【０３３８】
予定適応症
塵ダニアレルギーワクチンは、ポジティブプリック皮膚テスト（ＰＳＴ）により決定される通り、コナヒョウヒダニまたはヤケヒョウヒダニに対する感受性が実証された患者における通年性アレルギー性鼻炎の処置のためのＳＬＩＴ用に開発されている。
【０３３９】
投与量形態、投与経路、および投与レジメン
塵ダニアレルギーワクチンの最終投与量形態は、舌下投与に適する固体の経口投与量形態であり得る。製剤開発のアプローチは、ナノ粒子とプラスチックストロー中に包装されるラクトース一水和物のような水溶性賦形剤との乾燥混合物、または直接圧縮された迅速に溶解する錠剤を含み得る。投与は、１，４００ＡＵの最大用量まで用量漸増形態で行われ得る。全ての対象は、６週間の間、１週間に１回、塵ダニアレルギーワクチンを投与され得る。この期間中、用量は、毎週増加され、１，４００ＡＵの最大用量まで３倍増加量で開始して、その後、１．５倍増加に減少する。アレルギー症状が観察されるか、または投与し損ねた場合、プロトコルが指定した用量の変更が必要になる。最初の６週間の用量漸増投与後、塵ダニアレルギーワクチンに耐容性を示す患者は、その後５ヶ月間、ｑｄ（１日１回）の追加用量を受ける（維持投与期間）。維持投与期間中の用量は、対象の用量漸増期に確立された最大耐量（ＭＴＤ）であり得る。
【０３４０】
塵ダニアレルギーワクチンの投与経路は、舌下免疫療法（ＳＬＩＴ）として使用するための舌下投与である。
【０３４１】
コナヒョウヒダニまたはヤケヒョウヒダニに感受性の患者における通年性アレルギー性鼻炎の処置のための塵ダニアレルギーワクチンに使用される提案された投与レジメンは、経口免疫療法（ＯＩＴ）およびＳＬＩＴの過去の臨床試験に基づく。通年性アレルギー性鼻炎のためのＯＩＴおよびＳＬＩＴの投与量レジメンは、一般的に、延長された投与期間に応じた長期使用のために、１日１回（ｑｄ）である。
【０３４２】
追加情報および可能なメカニズム
本実施例の塵ダニアレルギーワクチンは、コナヒョウヒダニまたはヤケヒョウヒダニに感受性の患者における通年性アレルギー性鼻炎の処置のためのＳＬＩＴとして使用されたとき、塵ダニに対する耐容性を誘導するための“アレルギーワクチン”として作用するように設計されている。薬剤に使用する塵ダニアレルゲンは、ＳＣＩＴで使用するためにＦＤＡにより承認された市販の標準化された塵ダニ抽出物［標準化ダニ抽出物（コナヒョウヒダニ）および標準化ダニ抽出物（ヤケヒョウヒダニ）、Ｇｒｅｅｒ、Ｌｅｎｏｉｒ、ＮＣ］に見出されるのと同じアレルゲンである。Ｇｒｅｅｒ製品における抽出物と薬剤との１つの相違は、Ｇｒｅｅｒ製品は、グリセリン中の液体として製剤され、薬剤は、ＡＰＣ認識および粒子の取り込みを促進し、塵ダニアレルゲンに対する脱感作および最終的な耐容性と関連するＴｈ１／Ｔｈ０−様免疫応答を増強することを目的として細菌成分を含むＰＬＧＡナノ粒子に組み込むために凍結乾燥抽出物を用いることである。
【０３４３】
従来のアレルゲン注射ワクチンは、長年に亘ってアレルギー疾患の制御のために用いられてきた。コナヒョウヒダニおよびヤケヒョウヒダニの、個別および混合の両方の標準化抽出物は、塵ダニアレルギーのＳＣＩＴのために市販されている。ＳＣＩＴは、疾患の病歴を修正し（すなわち、鼻炎患者における喘息の発症）、投薬中止後の長期的な効果をもたらし得ることが報告されている。しかしながら、アレルゲン注射によって誘発される副作用についての懸念および３年から５年の期間に亘って病院での定期的な皮下注射の不便さのため、ＳＣＩＴの普及は限定されていた。ＳＬＩＴに使用されるような舌下投与は、アレルゲン抽出物の投与のより実行可能な代替経路であると考えられる。
【０３４４】
塵ダニアレルギーワクチン製品は、細菌ＬＰＳおよび脂質で表面をコーティングされたＰＬＧＡナノ粒子内に塵ダニ抽出物および細菌ＤＮＡをカプセル化するように設計されている（図１７に図示）。薬理学的根拠は以下の通りである。
【０３４５】
塵ダニアレルギーワクチンは、達成されるべき有効性のために、アレルギー反応の原因となる主な塵ダニタンパク質への暴露から保護する必要がある。コナヒョウヒダニおよびヤケヒョウヒダニは、最も一般的なハウスダストダニ種であり、多数のアレルゲンがそれぞれについて同定されている。そのため、薬剤は、抗原として両方の種からの標準化された抽出物を含む。
【０３４６】
細菌細胞を模倣するＰＬＧＡナノ粒子中に封入された塵ダニ抗原の送達は、自然免疫系の活性化を増強し得て、それ故に、塵ダニ抽出物のみのＳＬＩＴの有効性を改善する可能性がある。具体的には、細菌ＬＰＳおよびＣｐＧ ＤＮＡモチーフ、ならびにナノ粒子の内部の任意の可能性のある未知の細菌部分は、薬剤の潜在的有効性を高め、塵ダニアレルゲンに対する脱感作および最終的な耐容性に関連する所望のＴｈ１／Ｔｈ０−様免疫応答を生じ得る。
【０３４７】
さらに、細菌細胞を模倣するＰＬＧＡナノ粒子内の塵ダニ抗原の封入は、舌下粘膜におけるＡＰＣによる取り込みを促進し得て、それ故に、塵ダニ抽出物のみを用いるＳＬＩＴの有効性を改善する可能性がある。具体的には、薬剤は、公知のトール様受容体（ＴＬＲ）アゴニストのナノ粒子外側表面上への提示およびナノ粒子内への組み込みの両方による、封入された塵ダニタンパク質のＡＰＣによる認識および内在化を最大化するように設計されている。
【０３４８】
また、そのままの送達システム（すなわち、ＰＬＧＡナノ粒子）内の塵ダニ抗原の封入は、マスト細胞由来のタンパク質を隠すことによりタンパク質の投与時にアレルギー反応の可能性を減らすことができる。それ故に、薬剤中の塵ダニタンパク質は、細菌細胞を模倣するＰＬＧＡナノ粒子内に封入されている。
【０３４９】
図１７に例示する通り、この実施例では、薬剤の成分間に共有結合は存在しない。水の存在下では、ナノ粒子は、継続的に加水分解され、封入された塵ダニ抽出物タンパク質および細菌タンパク質、ＤＮＡ、およびＬＰＳ、ならびに細菌ＬＰＳおよび脂質のコーティングは、連続的に放出され得る。ＰＬＧＡポリマーの加水分解は、無害な、乳酸（ＬＡ）およびグリコール酸（ＧＡ）モノマーをもたらす。ＰＬＧＡ加水分解の速度は、ＬＡ対ＧＡの比によって変わり、薬剤に使用されるＰＬＧＡポリマーは、インビトロでの薬剤放出アッセイに基づいて、４８から７２時間以内に封入された塵ダニ抽出物タンパク質を放出するように選択され得る。
【０３５０】
舌下投与後、ＡＰＣによって取り込まれず、処理されないナノ粒子は、嚥下され得る。いずれの場合においても、Ｈ２Ｏの存在は、ＰＬＧＡをＬＡおよびＧＡに加水分解し（低ｐＨでより速い）、塵ダニ抽出物（すなわち、抗原）および細菌成分を放出する。放出後、抽出物タンパク質および細菌成分は、塵ダニタンパク質または細菌成分が日常生活の中または食品から摂取されたときと同様に、消化され得る。
【０３５１】
臨床試験および方法
臨床試験デザインは、通年性アレルギー性鼻炎（喘息の有無にかかわらず）およびコナヒョウヒダニまたはヤケヒョウヒダニに感受性の成人対象における薬剤の、第１相、単一施設、無作為化、二重盲検、プラセボ対照、安全性、薬力学、および予備的有効性試験である。
【０３５２】
プラセボまたは薬剤を受容するために、２０名の対象が１：２に無作為化され得る。プラセボ群および薬剤群は、新たな感作のモニタリングを可能にするために、コナヒョウヒダニおよびヤケヒョウヒダニに感受性の対象および該２種の一方のみに感受性の対象の両方を含み得る。
【０３５３】
全ての対象は、６週間の間、週に１回、試験薬（プラセボまたは薬剤）の舌下投与量を投与され得る。この期間中、用量は、１，４００ＡＵの最大用量に達するまで３倍増加で開始して毎週増加され、その後、１．５倍増加に徐々に減少される。用量制限毒性［ＤＬＴ；中程度を超える重度の有害事象（ＡＥ）であって、少なくとも試験薬との因果関係の可能性があるものとして定義される］が生じない場合、その後、対象は、最大耐量を１日１回（ｑｄ）、６ヶ月間、受容し得る。
【０３５４】
Ａ．スクリーニング来院時：
試験薬の最初の投与（第１日）の１４日前以内に、各対象は、臨床試験について記載された情報（インフォームドコンセントフォーム）を提供され、いくつかの質問に答えている。臨床試験に参加するための書面で同意する対象は、全病歴、全身身体検査、身長、体重、バイタルサイン（血圧、脈拍数、呼吸数、および経口体温）、１２誘導心電図（ＥＣＧ）、肺活量測定［１秒間努力呼気容量（ＦＥＶ１）、努力肺活量（ＦＶＣ）、および最大呼気速度（ＰＥＦ）］、鑑別を伴う全血球計算値（ＣＢＣ）、血清化学、尿検査、妊娠の可能性のある女性（ＷＣＢＰ）の尿ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ＨＣＧ）妊娠検査、コナヒョウヒダニ−またはヤケヒョウヒダニ−特異的なＩｇＥおよびＩｇＧ４レベルのための採血、コナヒョウヒダニ−またはヤケヒョウヒダニ−刺激性のＰＢＭＣＴ−リンパ球の表現型のための採血、標準化コナヒョウヒダニおよびヤケヒョウヒダニ抽出物に対する皮膚プリックテスト（ＰＳＴ）および皮膚試験限界希釈法、ならびにクリーニング来院時前３０日以内に処方された薬剤の記録を含む、適格性評価を受ける。
【０３５５】
Ｂ．試験第１日：
スクリーニング時に全ての適格要件を満たす対象は、プラセボまたは薬剤を受容するために１：２に無作為化され、以下のベースライン手順について、１日目の午前中に病院へ来院する：病歴の更新、身体検査、体重、バイタルサイン、ＰＥＦ、鑑別を伴うＣＢＣ、血清化学、尿検査、ＷＣＢＰの尿ＨＣＧ妊娠検査、およびスクリーニング来院時から処方された薬剤の記録。
【０３５６】
ベースライン評価後の適格要件を満たす対象に、試験薬（プラセボまたは薬剤）の単一の舌下用量を処方する。試験薬の投与は、重篤なアレルギー反応の治療の経験を有する病院で行われる。具体的には、クラッシュカートが施設内で使用可能であり、アナフィラキシーを処置するために医療関係者および医師が常駐する。
【０３５７】
ＡＥモニタリングは、試験薬の投与後すぐに開始され、試験を通じて継続される。対象は、投与の４時間後の観察のために病院に残る。バイタルサインを、投与の５、１０、１５および３０分後にモニタリングする。
【０３５８】
対象には、訪問の間のＡＥまたは薬物療法を記録するための日記が与えられ、鼻結膜炎の症状の重症度（視覚的評価スケール）および臨床試験中に日常的な救出薬物（rescue medication）の使用を評価するためのフォームが与えられる。対象には、副作用の発生時に電話するための２４時間対応の緊急電話番号が与えられる。
【０３５９】
Ｃ．試験第２日：
対象は、以下の手順について、第２日と第７日の午前中に病院に戻る：身体検査、バイタルサイン、ＰＥＦ、ＷＣＢＰの尿ＨＣＧ妊娠検査、ＡＥおよび併用薬の日記のレビュー、ならびに鼻結膜炎の症状の重症度および救出薬物の使用を評価するための日記フォームのレビュー。
【０３６０】
Ｄ．用量漸増中の毎週の訪問：
対象は、評価のための用量漸増期間中に週に一度病院に戻り、試験薬の投与を受ける。以下の手順は、第８日、第１５日、第２２日、第２９日、および第３６日の午前中に行われる：身体検査、バイタルサイン、ＰＥＦ、ＷＣＢＰの尿ＨＣＧ妊娠検査、ＡＥおよび併用薬の日記のレビュー、ならびに鼻結膜炎の症状の重症度および救出薬物の使用を評価するための日記フォームのレビュー。安全性への懸念なく、対象は、試験薬（プラセボまたは薬剤）の単一の舌下用量を受け得る。対象は、投与の４時間後に観察するために病院に残る。バイタルサインは、投与の５、１０、１５および３０分後にモニタリングされる。
【０３６１】
Ｅ．維持療法中の毎月の訪問：
対象は、以下の手順のために、用量漸増期の完了後（第４３日の午前中）週に一度、その後は、維持療法期間中の５ヶ月間、１ヶ月に一度、病院を訪問する：身体検査、バイタルサイン、ＰＥＦ、鑑別を伴うＣＢＣ、血清化学、尿検査、ＷＣＢＰの尿ＨＣＧ妊娠検査、ＡＥおよび併用薬の日記のレビュー、ならびに鼻結膜炎の症状の重症度および救出薬物の使用を評価するための日記フォームのレビュー。
【０３６２】
第一、第三、および第五の月次訪問時（すなわち、試験薬処置の２．５、４．５、および６．５月後）、以下の追加の手順が行われる：コナヒョウヒダニ−またはヤケヒョウヒダニ−特異的ＩｇＥおよびＩｇＧ４レベルのための採血、コナヒョウヒダニ−またはヤケヒョウヒダニ−刺激性のＰＢＭＣＴ−リンパ球表現型のための採血、標準化コナヒョウヒダニおよびヤケヒョウヒダニ抽出物に対する限界希釈ＰＳＴ、ならびに非塵ダニ抽出物（スクリーニングで選択）に対する限界希釈ＰＳＴ。さらに、第五の月例訪問時（試験薬処置の６．５ヶ月後）に、標準化コナヒョウヒダニまたはヤケヒョウヒダニ抽出物に対するアレルゲン気管支誘発を行う。
【０３６３】
以下の月次評価の安全性への懸念なく、対象には、４週間の投与についての十分な試験薬および家庭での試験薬の投与の詳細を記録するための日記が提供される。対象は、自宅でｑｄ（１日１回）投与することを指示され、月次評価のために来院するよう指示され得る。来院時毎に、試験薬日記をレビューし、試験薬の容器および未使用の試験薬をコンプライアンスを監視するために回収する。試験薬は、第５回の来院後（すなわち、治療の６．５ヶ月後）には提供されない。
【０３６４】
Ｆ．最終臨床試験来院
全ての対象は、試験薬の最後の投与の４週間後に最終臨床試験のために来院する。以下の手順は、最終来院時に行われる：全身検査、体重測定、バイタルサイン、ＰＥＦ、鑑別を伴うＣＢＣ、血清化学、尿検査、ＷＣＢＰの尿ＨＣＧ妊娠検査、コナヒョウヒダニ−またはヤケヒョウヒダニ−特異的ＩｇＥおよびＩｇＧ４レベルのための採血、コナヒョウヒダニ−またはヤケヒョウヒダニ−刺激性ＰＢＭＣ Ｔ−リンパ球表現型のための採血、標準化コナヒョウヒダニおよびヤケヒョウヒダニ抽出物に対する限界希釈ＰＳＴ、非塵ダニ抽出物（スクリーニング時に選択）に対する限界希釈ＰＳＴ、ＡＥおよび併用薬の日記のレビュー、ならびに鼻結膜炎の症状の重症度および救出薬物の使用を評価するための日記フォームのレビュー。
【０３６５】
診断および主要な組入れ基準：
対象は、１８から５０歳で、通年性アレルギー性鼻炎にスクリーニング前の少なくとも１年間罹患しており、スクリーニング時のポジティブＰＳＴ［１５−２０分で陰性対照（生理食塩水）によって誘発されるものよりも平均３ｍｍ大きい膨疹径］によりコナヒョウヒダニまたはヤケヒョウヒダニに感受性であることが証明されている。
【０３６６】
対象は、喘息を有していても、有していなくてもよい。喘息を有する対象について、該対象は、国立心臓肺血液研究所（ＮＨＬＢＩ）のガイドラインによって定義されるよう、スクリーニング前の最低１年間、間欠型または軽度の永続性の喘息を有すると診断されなければならない。全ての対象について、ＦＥＶ１は、８０％を超えると予測されなければならず、ＦＥＶ１／ＦＶＣは、スクリーニング時に正常である必要がある。
【０３６７】
男性およびＷＣＢＰの両者は、臨床試験中（スクリーニング時から最終臨床試験来院中）、適切な避妊法を使用することに同意する。
【０３６８】
適切な避妊方法は、性交を一切断つこと、ならびにＩＵＤのパートナーによる使用と併用されるいくつかの二重障壁法（殺精子剤を含むコンドーム）、殺精子剤を含むペッサリー、経口避妊薬、避妊用パッチまたは避妊膣リング、経口または注射または移植避妊薬のような、一貫して正しく使用されるとき、失敗率の低い、すなわち年間１％未満のものを含む。
【０３６９】
次の基準のいずれかを満たす対象は、臨床試験から除外される：機械換気または静脈内昇圧剤の使用を必要とする重篤なアナフィラキシー反応の病歴（すなわち、心肺停止となった対象）；スクリーニングの２年以内の、挿管または人工呼吸器を必要とするか、または低酸素発作に至る、生死に関わる喘息の重症化；スクリーニング前６月以内の、経口ステロイドの使用を必要とする喘息；対象定期的にさらされるのと別のアレルゲン（すなわち、塵ダニ以外）による重篤な症状の通年性アレルギー性鼻炎および／または喘息の病歴；対象が臨床試験中にさらされる、重篤な症状の季節性アレルギー性鼻炎および／または喘息の病歴；研究者の意見では、臨床試験を妨げるか、または対象にさらなる危険性をもたらし得る、不安定な狭心症、重篤な不整脈、コントロール不良の高血圧、慢性副鼻腔炎、または他の慢性もしくは免疫疾患；スクリーニングの３０日以内の、臨床的に重要な神経、心臓、肺、肝臓、または腎臓疾患の病歴、身体検査、および／または実験室での研究の徴候；スクリーニングの３０日以内の、ウイルス性上気道感染症；スクリーニングの３０日以内の、抗生物質を必要とする急性感染症；スクリーニングの１８０日前以内のアレルゲン免疫療法の使用；スクリーニングの９０日前以内のオマリズマブまたは免疫調節療法（コルチコステロイドを含まない）の使用；スクリーニングの３０日前以内の静脈内抗ヒスタミン剤またはコルチコステロイドの使用；スクリーニングの３０日前以内の別の試験薬の使用；スクリーニングの１４日以内の三環系抗鬱剤またはベータ−アドレナリン遮断薬の使用；スクリーニングの１４日以内の、アナフィラキシーの治療を妨害することが知られているモノアミン酸化酵素（ＭＡＯ）阻害剤または任意の薬剤の使用；スクリーニングの１４日以内の、（“方法”に上記の救急薬以外の）処方薬の使用；スクリーニングの１４日以内の、任意の市販薬、非処方製剤（“方法”に上記の救急薬を除く、ビタミン、ミネラル、および植物療法剤／ハーブ／植物由来の調製物を含む）の使用；皮膚皮膚テストの前に一時的に中止することのできない抗ヒスタミン剤（抗ヒスタミン剤の５半減期）；妊娠または授乳中（女性の場合）；スクリーニングの６月前以内のタバコを含むか、またはニコチン含有製品（タバコ、パイプ、葉巻、噛みタバコ、ニコチンパッチ、またはニコチンガムを含む）の使用；研究者の意見において、臨床試験プロトコルを理解し協力する対象の能力に影響を与える行動、認知または精神疾患；研究者の意見において、臨床試験を妨害し得る、薬物またはアルコール濫用の病歴；試験薬の不活性成分に対する公知のアレルギー；および肺活量測定の実行不可。
【０３７０】
製品、用量および投与方法：
薬剤の最終投与量形態は、舌下投与に適する固体の経口投与量形態である。製剤開発アプローチは、ナノ粒子とプラスチックストロー中に包装されるラクトース一水和物のような水溶性賦形剤との乾燥混合物、または直接圧縮された迅速に溶解する錠剤を含み得る。上記の通り、本実施例の試験は、１，４００ＡＵの最大用量の用量漸増を含む。
【０３７１】
プラセボは、封入された塵ダニ抽出物（抗原）を含まない、ＡＥＥ−封入されたＯＥＥ−コートされたＰＬＧＡナノ粒子であり得る。プラセボは、活性な固体の経口投与量形態とは視覚的に区別可能である。
【０３７２】
全ての対象は、６週間の間（用量漸増）、１週間に１回舌下に試験薬（プラセボまたは薬剤）を投与される。この期間中、用量は毎週漸増され、３倍増で開始し、徐々に１．５倍増に減少する。アレルギー症状が観察されるか、または用量を間違った場合に、プロトコルが指定した用量の変更が必要となる。
【０３７３】
最初の６週間（用量漸増）の後、試験薬（プラセボまたはＥＮＤＭ−５００）に耐容性の対象に、５ヶ月間（維持投与期）、試験薬をｑｄ投与する。維持療法期中の用量は、対象の用量漸増期に確立されたＭＴＤ（最大耐用量）である。アレルギー症状が観察されるか、または用量を間違った場合に、プロトコルが指定した用量の変更が必要となる。
【０３７４】
試験薬は、舌下に投与される。対象は、試験薬の内容物を２分間舌下に維持し、投与後１５分間は飲食してはならないと指示される。試験薬の各用量は、朝食を食べる前（すなわち、空腹時）に服用される。１日目の用量は、臨床的に投与され、残りの全ての用量は、自宅で自己投与される。
【０３７５】
試験薬は、用量漸増期（投与の最初の６週間）には病院で投与される。残りの全ての用量（維持投与期間）は、自宅で自己投与される。
【０３７６】
実施例８：成人対象に舌下投与されたピーナッツアレルギーワクチンの、フェーズ１、無作為化、二重盲検、プラセボ対照安全性、薬力学的、および予備的有効性試験
提供される組成物および方法がアレルギーの治療に使用可能かどうかのさらなる例として、本実施例は、成人対象の安全性および予備的有効性を評価するためにピーナッツアレルゲンを含む態様を提供する試験を概説する。
【０３７７】
本実施例は、上記の実施例７と同様に、一例として、成人対象における、提供されるナノ粒子組成物（本実施例では、親水性および／または疎水性大腸菌抽出物の調製物を含むナノ粒子）の、フェーズ１、単一施設、無作為化、二重盲検、プラセボ対照、安全性、薬力学、および予備的有効性試験を記載する。本実施例において、対象は、通年性アレルギー性鼻炎（喘息を有するか、または有しない）に罹患し、かつコナヒョウヒダニまたはヤケヒョウヒダニに感受性であるよりむしろ、ピーナッツアレルギーを有する。
【０３７８】
いくつかの態様において、提供されるナノ粒子組成物は、大腸菌有機抽出物（“ＯＥＥ”）でコーティングされたポリ（乳−コ−グリコール酸）−（“ＰＬＧＡ−“）を封入したラッカセイピーナッツ抽出物および大腸菌水性抽出物（ＡＥＥ）ナノ粒子（以降、“薬剤”および／または“ピーナッツアレルギーワクチン”と言う）である。
【０３７９】
本実施例は、本発明における使用のための、提供されるナノ粒子組成物（本実施例において、親水性および／または疎水性大腸菌抽出物の調製物を含むナノ粒子）の、薬力学および予備的有効性を評価するための例示的臨床試験設計を記載している。
【０３８０】
化学名および構造
本実施例のピーナッツアレルギーワクチン中の医薬物質は、一般的なピーナッツ（ラッカセイ）のアレルゲン抽出物である。このように、ピーナッツアレルギーワクチン薬剤物質の常套の化学名または構造はない。
【０３８１】
ピーナッツアレルギーワクチン中のピーナッツ抽出物は、診断に使用するために食品医薬品局（ＦＤＡ）により承認された市販のピーナッツ抽出物［ピーナッツ（ラッカセイ）抽出物、Ｇｒｅｅｒ、Ｌｅｎｏｉｒ、ＮＣ］に見出されるものと同じであり得る。
【０３８２】
ピーナッツ抽出物は、二重エマルジョンプロセスを用いて製造されたＰＬＧＡナノ粒子内に封入される。第一エマルジョンにおいて、ピーナッツ抽出物および細菌のデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）を含むＡＥＥは、有機溶媒中のＰＬＧＡと混合される。得られたエマルジョンは、粒子内に封入されたピーナッツ抽出物およびＡＥＥを含むナノ粒子を製造するために、マイクロ流体化または均質化される。その後、５％ポリビニルアルコール溶液中の、主に細菌脂質およびＬＰＳを含むＯＥＥを添加し、第一のエマルジョン中に生成されたナノ粒子をコーティングするために、得られた第二のエマルジョンをマイクロ流体化／均質化する。
【０３８３】
このようにして、最終のＰＬＧＡナノ粒子は、ＧＩ管中の抗原提示細胞（ＡＰＣ）による取り込みを容易にし、自然免疫系の活性化を増強して、そのままのピーナッツ抽出物のみでの従来のＳＬＩＴ（舌下免疫療法）の有効性を潜在的に改善するために、細菌を模倣するように設計されている。ピーナッツアレルギーワクチンバルクナノ粒子は、ＡＥＥの添加を含んでいてよく、第二のエマルジョンは、ＬＰＳ単独ではなくＯＥＥを使用してよい。言い換えれば、これらのＰＬＧＡナノ粒子は、ピーナッツ抽出物およびＡＥＥの細菌ＤＮＡがナノ粒子の内部にカプセル化され、細菌ＬＰＳおよびＯＥＥの脂質がナノ粒子の外側にコーティングされている、“半合成細菌細胞”として設計されている。プラセボは、ピーナッツ抽出物が存在しないこと以外、同様に製造される。
【０３８４】
投与量形態、投与経路、および投与レジメン
ピーナッツアレルギーワクチンの最終投与量形態は、舌下投与に適する固体の経口投与量形態であり得る。製剤開発のアプローチは、ナノ粒子とプラスチックストロー中に包装されるラクトース一水和物のような水溶性賦形剤との乾燥混合物、または直接圧縮された迅速に溶解する錠剤を含み得る。投与は、２，０００μｇのピーナッツタンパク質の最大用量まで用量漸増形態で行われ得る。全ての対象は、１８週間の間、週に１回、ピーナッツアレルギーワクチンを投与され得る。この期間中、用量は、２週間に１度、２，０００μｇの最大用量まで増加される。アレルギー症状が観察されるか、または投与し損ねた場合、プロトコルが指定した用量の変更が必要になる。最初の１８週間の用量漸増投与後、ピーナッツアレルギーワクチンに耐容性を示す患者は、その後１２週間、ｑｄ（１日１回）の追加用量を受ける（維持投与期間）。維持投与期間中の用量は、対象の用量漸増期に確立された最大耐量（ＭＴＤ）であり得る。
【０３８５】
ピーナッツアレルギーワクチンの投与経路は、舌下免疫療法（ＳＬＩＴ）として使用するための舌下投与である。
【０３８６】
ピーナッツアレルギーの処置のためのピーナッツアレルギーワクチンに使用される提案された投与レジメンは、経口免疫療法（ＯＩＴ）およびＳＬＩＴの過去の臨床試験に基づく。ピーナッツアレルギーのためのＯＩＴおよびＳＬＩＴの投与量レジメンは、一般的に、延長された投与期間に応じた長期使用のために、１日１回（ｑｄ）である。
【０３８７】
臨床試験設計および方法
本実施例の試験は、ピーナッツアレルギーを有する１２名の成人対象における、ピーナッツアレルギーワクチンの、第１相、単一施設、多施設、単一群、安全性および耐容性を評価するための用量漸増試験、ならびに予備的有効性試験である。全ての対象は、１８週間、ピーナッツアレルギーワクチンを舌下にｑｄ投与される（用量漸増）。
【０３８８】
ピーナッツアレルギーワクチンの用量は、１８週の用量漸増期中、２週間毎におよそ２倍に増加される。アレルギー症状が観察されるか、または投与し損ねた場合、プロトコルが指定した用量の変更が必要になる。
【０３８９】
最初の１８週（用量漸増）後、ピーナッツアレルギーワクチンに耐容性を有する対象は、さらに１２週の治療コース（維持療法；一定用量のｑｄ）を受けるためのオプションが与えられる。維持療法期中の投与量は、対象の用量漸増期の間に確立された最大耐量であり得る。
【０３９０】
Ａ．スクリーニング来院
試験薬の最初の投与（第１日）の１４日前以内に、各対象は、臨床試験について記載された情報（インフォームドコンセントフォーム）を提供され、いくつかの質問に答えている。臨床試験に参加するための書面で同意する対象は、臨床試験に参加するための書面で同意する対象は、全病歴、全身身体検査、身長、体重、バイタルサイン（血圧、脈拍数、呼吸数、および経口体温）、１２誘導心電図（ＥＣＧ）、肺活量測定［１秒間努力呼気容量（ＦＥＶ１）、努力肺活量（ＦＶＣ）、および最大呼気速度（ＰＥＦ）］、鑑別を伴う全血球計算値（ＣＢＣ）、血清化学、尿検査、妊娠の可能性のある女性（ＷＣＢＰ）の尿ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ＨＣＧ）妊娠検査、ピーナッツ特異的ＩｇＥおよびＩｇＧ４レベルのための採血、ピーナッツを含む抗原パネルの皮膚プリックテスト（ＰＳＴ）、ピーナッツ抽出物に対するＰＳＴの限界希釈法、ならびにピーナッツに対するＤＢＰＣＦＣを含む、適格性評価を受ける。
【０３９１】
Ｂ．試験第１日
スクリーニング時に全ての適格要件を満たす対象は、以下のベースライン手順について、臨床試験第１日目の午前中に病院へ来院する：病歴更新、身体検査、体重、バイタルサイン、ＰＥＦ、鑑別を伴うＣＢＣ、血清化学、尿検査、ＷＣＢＰの尿ＨＣＧ妊娠検査、およびスクリーニング来院時から処方された薬剤の記録。
【０３９２】
ベースライン評価後の適格要件を満たす対象に、試験薬の単一の舌下用量を処方する。試験薬の投与は、一般的な臨床研究センター（ＧＣＲＣ）または重篤なアレルギー反応の治療の経験を有する比較可能な監視下の病院で行われる。具体的には、クラッシュカートが施設内で使用可能であり、アナフィラキシーを処置するために医療関係者および医師が常駐する。
【０３９３】
処置による有害事象（ＡＥ）の発生のモニタリングは、試験薬の投与後すぐに開始され、試験を通じて継続される。対象は、投与の４時間後の観察のために病院に残る。バイタルサインを、投与の０．２５、０．５、１および２時間後にモニタリングする。対象は、ＡＥまたは来院までに使用した併用薬を記録するための日記を提供される。
【０３９４】
Ｃ．試験第２日
対象は、以下の手順について、第２日の午前中に来院する：身体検査、バイタルサイン、ＰＥＦ、ならびにＡＥおよび併用薬の日記のレビュー。試験薬の最初の用量に耐容性の対象は、試験薬の第二の用量が提供され、投与後４時間の間、医師の監視下におかれる。バイタルサインは、投与の０．２５、０．５、１および２時間後にモニタリングされる。
【０３９５】
安全性への懸念なく、対象は、第１週の投与を自宅で完了するために十分な試験薬、および試験薬の投与の詳細を記録するための日記を提供される。対象は、試験薬を舌下に投与するため方法を指示され、毎日およそ同時刻に試験薬をｑｄ投与するように指示される。全ての対象は、ＥｐｉＰｅｎｓが提供され、試験来院までに重篤なアレルギー反応の場合にはそれらを使用するよう指示される。対象は、２４時間対応の緊急電話番号が与えられ、来院までのＡＥ発生時に直ぐに臨床試験サイトを呼び出すように指示される。
【０３９６】
Ｄ．用量漸増中の毎週の訪問
対象は、評価のための用量漸増期間中に週に一度病院に戻り、試験薬の投与（各週の最初の用量）および自宅で服用する追加の用量を供給される。以下の手順は、試験薬を投与する前に、週毎の訪問時に行われる：身体検査、バイタルサイン、ＰＥＦ、ＡＥおよび併用薬の日記のレビュー、ならびに試験薬の毎日の投与日記および返却された試験薬の容器および未使用の試験薬のレビュー（コンプライアンスのモニタリングのため）。
【０３９７】
試験薬の投与後、対象は、投与後４時間の間、医師の監視下におかれる。バイタルサインは、投与の０．２５、０．５、１および２時間後にモニタリングされる。安全性の懸念なく、対象は、自宅での別の週の投与を完了するために十分な試験薬を提供される。電話インタビューが、何らかのＡＥを評価するために次の日に行われる。
【０３９８】
Ｅ．１８週の用量漸増期の完了後の来院
対象は、用量漸増期の最後の用量を投与後に病院を訪問し、以下の手順を行われる：身体検査、バイタルサイン、ＰＥＦ、鑑別を伴うＣＢＣ、血清化学、尿検査、ＷＣＢＰのための尿妊娠検査、ＡＥおよび併用薬の日記のレビュー、試験薬投与日記および返却された試験薬容器および未使用の試験薬のレビュー（コンプライアンスのモニタリングのため）、ピーナッツ特異的ＩｇＥおよびＩｇＧ４レベル用の採血、ならびにピーナッツおよび非ピーナッツ抽出物に対するＰＳＴの限界希釈（スクリーニング時に選択）。対象は、ピーナッツに対するＤＢＰＣＦＣために６日後に再来院する。
【０３９９】
Ｆ．任意の１２週の維持療法中の来院
ピーナッツアレルギーワクチンに耐容性の対象は、ピーナッツアレルギーワクチン維持療法の１２週のコースを受けるオプションを提供される。１８週の用量漸増評価（ピーナッツに対するＤＢＰＣＦＣを含む）の完了後、これらの対象は、２週間の投与に十分な試験薬および自宅での試験薬の投与の詳細を記録するための日記を提供される。対象は、該試験薬を各日のおよそ同時刻にｑｄ服用し、２週間で病院に来院するよう指示される。
【０４００】
オプションの維持療法中の隔週の訪問時、対象は以下の手順を行われる：身体検査、バイタルサイン、ＰＥＦ、ＡＥおよび併用薬の日記のレビュー、試験薬日記のレビュー、ならびに試験薬投与日記および返却された試験薬容器および未使用のピーナッツアレルギーワクチンのレビュー（コンプライアンスのモニタリングのため）。安全性の懸念なく、対象は、別の２週間の自宅での投与を完了するのに十分な試験薬を提供される。
【０４０１】
対象は、維持療法期間の最後の投与の翌日に病院に来院し、以下の手順を受ける：身体検査、バイタルサイン、ＰＥＦ、鑑別を伴うＣＢＣ、血清化学、尿検査、ＷＣＢＰのための尿妊娠検査、ＡＥおよび併用薬の日記のレビュー、試験薬投与日記および返却された試験薬容器および未使用の試験薬のレビュー（コンプライアンスのモニタリングのため）、ピーナッツ特異的ＩｇＥおよびＩｇＧ４レベルのための採血、ならびにピーナッツおよび非ピーナッツ抽出物に対するＰＳＴの限界希釈（スクリーニング時に選択）。対象は、ピーナッツに対するＤＢＰＣＦＣために６日後に再来院する。
【０４０２】
１８週の用量漸増期間中にピーナッツアレルギーワクチンに耐容性の対象またはさらに１２週のピーナッツアレルギーワクチン維持療法に参加することを選択しなかった対象は、最後の病院訪問の試験薬の最後の投与の４週間後に再来院する。
【０４０３】
Ｇ．最終試験来院
全ての対象は、最終試験来院のための試験薬の最後の投与の４週間後に再来院する。以下の手順が行われる：ＡＥおよび併用薬の日記のレビュー、完全身体検査、体重、ＰＥＦ、バイタルサイン、鑑別を伴うＣＢＣ、血清化学、尿検査、ＷＣＢＰの尿妊娠検査、ＷＣＢＰ、ピーナッツ特異的ＩｇＥおよびＩｇＧ４レベルのための採血、ならびにピーナッツおよび非ピーナッツ抽出物（スクリーニング時に選択）に対するＰＳＴの限界希釈。
【０４０４】
対象が早期に試験から除外される場合、可能であれば、最後の試験来院のために記載されている全ての評価が行われる。最終試験来院時に可能性のある試験薬に関連するＡＥを有する対象は、該事象が解消するか、または安定化するまでフォローされる。
【０４０５】
全てのピーナッツアレルギー対象は、臨床試験中、喘息、アレルギー性鼻炎、およびアトピー性皮膚炎のために服用されるものも含めて（除外基準として記載されたものを除く）、常用薬を併用してよい。対象は、皮膚テスト前およびＤＢＰＣＦＣの前（抗ヒスタミン薬の５半減期）に、一時的に抗ヒスタミン薬を中止することができなければならない。定期的な局所ステロイドの使用は、皮膚試験時に許可される。経口ステロイドのバースト療法がアレルギー反応を処置するために試験中に投与された場合、ＤＢＰＣＦＣは、経口ステロイド処置の完了後少なくとも２週間まで投与されることはない。
【０４０６】
該臨床試験は、ピーナッツアレルギーワクチン投与に関連した死亡がある場合には中止される。ピーナッツアレルギーワクチン投与に関連する２以上の重篤なアナフィラキシー反応（チアノーゼまたは何れかの段階でＳｐ０２＜９２％、低血圧、混乱、衰弱、意識の喪失、または失禁）が起こった場合、試験の登録および既に登録された試験対象のさらなる投与は、データ安全性モニタリング委員会（ＤＳＭＢ）が招集され、試験続行の安全性が判断されるまで中止される。
【０４０７】
診断および主要な組入れ基準：
１８から５０歳で、ピーナッツアレルギーの病歴を有し、以下の３つの主要な組入れ基準：１）スクリーニング時のピーナッツに対するポジティブＰＳＴ［１５−２０分で陰性対照（生理食塩水）によって誘発されるものよりも平均３ｍｍ大きい膨疹径］、２）スクリーニング時の、０．３５ｋＵＡ／Ｌ（ＵｎｉＣＡＰ）以上またはそれに等しい血清ピーナッツ特異的ＩｇＥレベル、ならびに３）スクリーニング時のピーナッツタンパク質１ｇ未満の累積用量でのピーナッツに対するポジティブＤＢＰＣＦＣ、を満たす対象は、除外基準の１つまたはそれ以上を満たす対象を除いて、試験に許可される。
【０４０８】
除外基準のいずれかを満たす対象は試験から除外される。除外基準は、機械換気または静脈内昇圧剤の使用を必要とする重篤なアナフィラキシー反応の病歴（すなわち、心肺停止となった対象）；ＮＨＬＢＩ分類当たり軽度以上の永続性の喘息、スクリーニング時に予測される１秒間の努力呼気肺活量（ＦＥＶ１）＜８０％、コントロール不良または永続的に活性化したアトピー性皮膚炎、過去１年間の喘息による入院または過去６ヶ月間の喘息による緊急治療室への搬送、好酸球性胃腸炎、スクリーニングの３０日以内での経口またはＩＶによるコルチコステロイドの使用、皮膚テストおよびＤＢＰＣＦＣのための抗ヒスタミン薬の中止ができない、スクリーニングの１年以内のオマリズマブまたは他の非常套形式のアレルゲン免疫療法もしくは免疫調節療法（コルチコステロイドを含まない）または生物学的療法の使用、スクリーニングの１年以内の他のアレルゲン免疫療法の使用、スクリーニングの３０日以内の免疫抑制剤の使用、ｂ−遮断薬（経口）、アンギオテンシン返還酵素（ＡＣＥ）阻害剤、アンギオテンシン−受容体遮断薬（ＡＲＢ）、またはカルシウムチャネル遮断薬の使用、臨床的に重要な免疫抑制、神経、心臓、肺、肝臓、リウマチ、自己免疫性、または腎臓疾患の、病歴、身体検査、および／または尿検査を含む実験室実験、妊娠または授乳期（女性の場合）の証拠；研究者の意見では、試験プロトコルを理解し協力する対象の能力に影響を与える、行動、認知、または精神疾患、試験薬の不活性成分に公知のアレルギー、麦ぬか（ＤＢＰＣＦＣに対するプラセボ）に対する公知のアレルギー、および／またはスクリーニングの３０日以内の別の試験ワクチンまたは薬剤試験への参加。
【０４０９】
実施例９：１つまたはそれ以上のインフルエンザウイルス粒子の封入されたフラグメントを含むナノ粒子組成物の製造
本実施例は、二重エマルジョン（水−油−水）プロセスを用いる、１つまたはそれ以上のインフルエンザウイルス粒子のフラグメントを含むナノ粒子の製造例を記載する。いくつかの態様において、“インフルエンザ（flu）フラグメント”は、経口免疫によるようなインフルエンザ感染症の発症を処置または予防することが望ましい。簡単には、約６０ｍｇ／ｍＬのタンパク質濃度でのＡＥＥを、１つまたはそれ以上のインフルエンザウイルス粒子のフラグメントを６０ｍｇ／ｍＬの濃度で含む粗抗原抽出物の再構成に使用する。より高濃度または低濃度のＡＥＥおよび／または粗抽出物の両方が使用可能である。ＡＥＥ−粗抽出物溶液は、水性媒体と有機媒体の比が０．２０ｍＬ：２８ｍＬのＰＬＧＡ（約３５．７ｍｇ／ｍＬ）のジクロロメタン溶液で均質化される。この混合物を最初のエマルジョンと言う。
【０４１０】
いくつかの態様において、例えば、表面結合疎水性成分（例えば、ＬＰＳ）のレベルを増加することが望ましい場合、実施例２に上記のようなＯＥＥは、約２．２ｍｇ／ｍＬ濃度の総ＬＰＳで５％ＰＶＡ水溶液中に溶解される。より高濃度または低濃度のＯＥＥのＰＶＡ溶液を使用してもよい。最初のエマルジョンの半量（１４ｍＬ）をＯＥＥ−ＰＶＰ溶液（１４ｍＬ）に添加し、均質化する。この混合物を第二のエマルジョンと言う。
【０４１１】
第一または、生成したとき、第二のエマルジョン（２８ｍＬ）を、９３５ｍＬの０．３３％ＰＶＡ水溶液に添加し、約４時間撹拌して、ジクロロメタンを蒸発させる。ナノ粒子懸濁液を濃縮し、ナノ粒子を遠心により単離する。上清を除去後、ナノ粒子を水で２から３回洗浄し、水に再懸濁し、凍結乾燥によって単離する。
【０４１２】
実施例１０：ナノ粒子組成物の模擬消化
いくつかの態様において、本明細書の他の箇所に記載のとおり、提供されるナノ粒子組成物は、何らかの医学的に好適な経路で、例えば、経口投与により投与され得る。本実施例は、提供されるナノ粒子組成物が、模擬胃液（ＳＧＦ）に４時間まで暴露後および／または人工腸液に１２時間まで暴露後に安定であり、抗原（ここでは、ＯＶＡ）の顕著な漏出が模擬消化後に検出されないことを確認する。
【０４１３】
本実施例において、大腸菌ＤＮＡおよびＯＶＡを封入する大腸菌有機抽出物（ＯＥＥ）でコーティングされたナノ粒子（“ＯＥＥ／ＤＮＡ＋ＯＶＡ”とも言う）を、模擬胃液に４時間まで、および／または人工腸液（ＳＩＦ）に１２時間まで暴露した。暴露後、提供されるナノ粒子を遠心して、破壊されたナノ粒子膜および無傷のナノ粒子を上清から分離し、それは、部分的に消化されたナノ粒子からの“漏出”を有し得る物質を含んでいた。次いで、ウェスタンブロットを各サンプルについて、抗ＯＶＡ血清を用いて行った。手順の流れを図１８に示す。
【０４１４】
図１９は、ＳＧＦに４時間までで消化された提供されるナノ粒子のウェスタンブロットを示し、上清（“ｓｕｐ”）およびペレットを別個に分析した。さらに、無傷のＯＥＥ／ＤＮＡ＋ＯＶＡナノ粒子（未消化）を、ポジティブ対照として用いた。図１９に示す通り、ＯＶＡは試験サンプルの上清中に検出されなかったが、かなりの量のＯＶＡがペレットのナノ粒子中に残っていた。この結果は、提供されるナノ粒子がＳＧＦ中で４時間まで安定であることを示す。
【０４１５】
図２０は、ＳＩＦ中で１２時間までで消化された提供されるナノ粒子のウェスタンブロットを示し、上清（“ｓｕｐ”）およびペレットを別個に分析した。さらに、無傷のＯＥＥ／ＤＮＡ＋ＯＶＡナノ粒子（未消化）をポジティブ対照として用いた。図２０に示す通り、ＯＶＡは試験サンプルの上清中に検出されなかったが、かなりの量のＯＶＡがペレットのナノ粒子中に残っていた。この結果は、提供されるナノ粒子がＳＩＦ中で１２時間まで安定であることを示す。
【０４１６】
図２１は、ＳＧＦで４時間消化後、ＳＩＦで１２時間まで消化した提供されるナノ粒子のウェスタンブロットを示し、上清（“ｓｕｐ”）およびペレットを別個に分析した。さらに、mきずのＯＥＥ／ＤＮＡ＋ＯＶＡナノ粒子（未消化）をポジティブ対照として用いて、部分的に消化された（ＳＧＦのみ）ＯＥＥ／ＤＮＡ＋ＯＶＡサンプルも対照として用いた。図２１に示す通り、ＯＶＡは試験サンプルの上清中に検出されなかったが、かなりの量のＯＶＡがペレットのナノ粒子中に残っていた。この結果は、提供されるナノ粒子がＳＧＦ中で４時間の後、ＳＩＦで１２時間の処理で安定であることを示す。図１９および２０と異なり、図２１は、ＯＶＡ対照レーンも含む。試験した条件での上清中の検出不可能なＯＶＡのレベルは、提供されるナノ粒子が、ＯＶＡの漏出を防止するのに十分な条件で模擬消化処理に持ち堪え得ることを示す。
【０４１７】
本実施例は、いくつかの態様において、提供されるナノ粒子が、生物学的に関連する時間について模擬胃および／または腸条件下で持ち堪え得ることを確認する。このデータもまた、提供されるナノ粒子の経口投与が種々の態様によれば適当であることを確認する。
【０４１８】
実施例１１：ＣＤ８＋またはＣＤ４＋Ｔ細胞活性のインビトロ刺激
本実施例において、提供されるナノ粒子のＣＤ８＋および／またはＣＤ４＋活性を刺激する能力を確認した。提供されるナノ粒子は、以下の表６に記載のとおりに製造した。
【表２２】
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【０４１９】
本実施例において、Ｃ５７／Ｂｌ６マウスの骨髄由来の樹状細胞（ＢＭＤＣ）を、提供されるナノ粒子の１つまたは表６に列記される対照と共に２４時間インキュベートした。その後、暴露された樹状細胞（ＤＣ）をＯＶＡ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞と共に３日間インキュベートし、ＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖ならびにＩＬ−２およびＩＦＮγの生産を測定した。
【０４２０】
図２２Ａは、提供されるナノ粒子または対照で処理されたＤＣに２４時間暴露後の、ＯＶＡ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖倍数を示す。図２２Ａに示す通り、ＯＥＥ／ＤＮＡ＋ＯＶＡ処置は、他の処置または対照グループよりも顕著に高い、抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の最も高い細胞増殖をもたらした。コーティングされていないＤＮＡ＋ＯＶＡナノ粒子、ＯＥＥでコーティングされた空のナノ粒子、コーティングされていないＯＶＡを封入したナノ粒子、またはＣｐＧでコーティングされたＯＶＡを含むナノ粒子での処理はまた、ＯＥＥ／ＤＮＡ＋ＯＶＡ群よりも低いが、増加した増殖を示した。
【０４２１】
図２２Ｂは、上記の通りに処理された抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞により生産されたＩＬ−２の量を示す。興味深いことに、コーティングされていない大腸菌ＤＮＡおよびＯＶＡを含むナノ粒子、およびＯＥＥでコーティングされたＯＶＡのみを含むナノ粒子に暴露されたＤＣは、最も多量のＩＬ−２生産をもたらし、一方、ＯＥＥでコーティングされた大腸菌ＤＮＡおよびＯＶＡの両方を含むナノ粒子に暴露されたＤＣは、比較的低いＩＬ−２応答を示した。
【０４２２】
図２３Ｃは、上記の通りに処理された抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞により生産されたＩＦＮγの量を示す。図２３Ｃに示す通り、ＯＥＥでコーティングされたＯＶＡを含むナノ粒子で処理されたＤＣは、最も高いレベルのＩＦＮγ生産をもたらし、一方、コーティングされていないＯＶＡおよびＣｐＧを含むナノ粒子、ＯＥＥでコーティングされた大腸菌ＤＮＡおよびＯＶＡを含むナノ粒子、またはコーティングされていない大腸菌ＤＮＡおよびＯＶＡナノ粒子のいずれか１つで処理されたＤＣはまた、増加レベルのＩＦＮγ生産を示した。
【０４２３】
提供されるナノ粒子の投与により生じるＩＬ−２の生産は、大腸菌の投与により生じるＩＬ−２生産よりも少なかったが、提供されるナノ粒子の投与は、ＣＤ８＋Ｔ細胞のより高い増殖をもたらし、このことは、提供されるナノ粒子が、いくつかの態様において、ＭＨＣクラスＩの抗原提示が可能であることを示す。
【０４２４】
Ｔ細胞増殖およびＩＦＮγ生産の分析はまた、ＣＤ８＋Ｔ細胞ではなくＣＤ４＋Ｔ細胞を用いる以外、上記の試験と同様の設計を用いて行われた。図２３Ａは、ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖の結果を示し、ここで、ＯＥＥでコーティングされた大腸菌ＤＮＡおよびＯＶＡを含むナノ粒子またはＯＥＥでコーティングされたＯＶＡのみを含むナノ粒子は、顕著に増大されたＣＤ４＋Ｔ細胞増殖をもたらした。加えて、コーティングされていないＯＶＡのみを含むナノ粒子またはコーティングされていないＯＶＡ＋大腸菌ＤＮＡを含むナノ粒子もまた、顕著に増大されたＣＤ４＋Ｔ細胞増殖をもたらした。それぞれの場合において、観察された増殖した増殖レベルは、死んだ大腸菌のみ、またはＯＶＡを含む死んだ大腸菌に暴露されたグループで観察されたものと同程度であった。
【０４２５】
図２３Ｂは、上記の通りに処理後のＣＤ４＋Ｔ細胞のＩＦＮγ生産を示す。この場合において、ＯＥＥでコーティングされた大腸菌ＤＮＡおよびＯＶＡを含むナノ粒子は、顕著な２倍以上の生産増加を誘発した。
【０４２６】
実施例１２：樹状細胞およびＣＤ４＋Ｔ細胞からのサイトカイン生産を誘導する大腸菌有機抽出物（ＯＥＥ）
本明細書の種々の実施例に示す通り、対象の免疫応答は、投与の特定の態様または複数の態様に基づいて異なっていてよい。ＯＥＥでコーティングされたナノ粒子の重要性を部分的に特徴付けるために、樹状細胞およびＣＤ４＋Ｔ細胞のサイトカイン生産を、ＯＥＥ／ＤＮＡ＋ＯＶＡナノ粒子またはコーティングされていない大腸菌ＤＮＡおよびＯＶＡを含むナノ粒子の投与後に、２つの対照グループ：コーティングされていないＯＶＡを含むナノ粒子（ネガティブ対照）、またはＯＶＡを含む死んだ大腸菌（ポジティブ対照）のうち１つと比較アッセイした。
【０４２７】
図２４Ａは、上記の薬剤のうち１つに暴露後の、インターロイキン−１０（ＩＬ−１０）、インターロイキン−１２（ＩＬ−１２）、インターロイキン−６（ＩＬ−６）、または腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦα）の生産を示す。図２４Ａに示す通り、各タイプのナノ粒子の投与は、ＴＮＦαおよびＩＬ−６の生産をもたらし（ＯＥＥ／ＤＮＡ＋ＯＶＡへの暴露は、ＩＬ−１０の生産ももたらし）、一方、ＯＶＡを含む死んだ大腸菌の投与は、ＩＬ−１０、ＴＮＦαの発現およびＤＣ集団で観察された最大量のＩＬ−６発現をもたらした。
【０４２８】
図２４Ｂは、上記の処理のうち１つの後の、ＩＬ−１０、インターロイキン−１３（ＩＬ−１３）、インターロイキン−５（ＩＬ−５）、またはＩＦＮγの生産を示す。図２４Ｂに示す通り、それぞれの処理が、ＩＦＮγの生産を示し、コーティングされていない大腸菌ＤＮＡおよびＯＶＡを含むナノ粒子での処理が最も高レベルのＩＦＮγ生産を示した。興味深いことに、ＯＥＥ／ＤＮＡ＋ＯＶＡナノ粒子およびＯＶＡを含む死んだ大腸菌の両方が、他のグループよりも顕著に高いＩＬ−１０生産を示し、ＯＥＥ／ＤＮＡ＋ＯＶＡナノ粒子もまた、ＩＬ−１３およびＩＬ−５の両方の生産をもたらした。
【０４２９】
図２４ＡおよびＢに示す通り、ＯＥＥ／ＤＮＡ＋ＯＶＡは、コーティングされていないＤＮＡ＋ＯＶＡを含むナノ粒子よりも顕著に少ないＩＬ−１３生産を誘導し、特定の理論はともかく、少ないＩＬ−１３生産を刺激することは、いくつかの態様において、有利であると考えられ得る。加えて、ＯＥＥ／ＤＮＡ＋ＯＶＡは、コーティングされていないＤＮＡ＋ＯＶＡナノ粒子よりも高いＩＬ−１０生産を誘導する。再度、特定の理論はともかく、より多くのＩＬ−１０生産を刺激することは、いくつかの態様において、有利であると考えられる。
【０４３０】
実施例１３：樹状細胞への抗原送達の評価
この実施例において、ＯＥＥ／ＤＮＡ＋ＯＶＡナノ粒子からのＯＶＡの抗原の取り込みを、可溶性ＯＶＡのみのものと比較した。簡単には、ナノ粒子をＣ５７／Ｂｌ６マウスの骨髄由来樹状細胞（ＢＭＤＣ）と共に１時間、４時間、８時間、２４時間、７２時間、または１週間インキュベートした。この実施例において、図２５Ａ−Ｆおよび２６Ａ−Ｆに示す通り、提供されるナノ粒子はテキサスレッドで染色され、ＢＭＤＣは、Ｆ−アクチン染色ファロイジン−ＡＦ４８８で染色した。図２５および２６において、核を青色に染色した。
【０４３１】
図２５Ａ−Ｆは、可溶性ＯＶＡ（パネルＡ、ＢおよびＣ）またはＯＥＥ／ＤＮＡ＋ＯＶＡナノ粒子（パネルＤ、ＥおよびＦ）のいずれかで、それぞれ１、４または８時間暴露された樹状細胞の共焦点顕微鏡画像を示す。明るい輪郭線は、細胞骨格を示し、核は、暗青色で示され、内在化抗原は明るい赤い点で示される（抗原の例を矢印で示す）。図２５Ｄに示す通り、抗原は、投与後早ければ１時間でＯＥＥ／ＤＮＡ＋ＯＶＡナノ粒子に暴露した樹状細胞の内部に検出され、４および８時間にて、樹状細胞に存在する抗原の量が増加する。これとは対照的に、可溶性ＯＶＡのみに暴露された樹状細胞は、投与後８時間までで検出可能なレベルの抗原負荷がほとんどない。
【０４３２】
インキュベーションの１、４または８時間後の提供されるナノ粒子の樹状細胞に対する効果に加えて、より長時間の、２４時間、７２時間、および１週間のインキュベーションも試験した。図２６Ａ−Ｆは、他に特記されない限り、上記の方法と同様に作製された共焦点顕微鏡画像の例を示す。パネルＡ、ＢおよびＣは、可溶性ＯＶＡに、それぞれ２４時間、７２時間、または１週間暴露された樹状細胞を示す。パネルＤ、ＥおよびＦは、ＯＥＥ／ＤＮＡ＋ＯＶＡに、それぞれ２４時間、７２時間、または１週間暴露された樹状細胞を示す。パネルＡおよびＤに示す通り、相応（commensurate）のレベルのＯＶＡが、２４時間後および７２時間後までに各処理グループで観察され、パネルＢおよびＥは、可溶性の抗原が排出されたことを示す。重要なことは、１週間後、パネルＦは、提供されるナノ粒子に封入されたＯＶＡが樹状細胞中に存在し、可溶性ＯＶＡがもはや検出されないことを示す。
【０４３３】
この実施例は、提供されるナノ粒子中の抗原の封入が、可溶性の抗原のみの投与と比較して、樹状細胞により迅速に取り込まれ、より長時間留まる結果をもたらすことを示す。
【０４３４】
実施例１４：提供されるナノ粒子のリンパ節および脾臓蓄積
この実施例において、提供されるナノ粒子の特定の組織（ここでは、リンパ節および脾臓）への蓄積能が確認された。具体的には、ＯＥＥ／ＤＮＡ＋ＯＶＡナノ粒子のリンパ節および／または脾臓への蓄積能を、コーティングされていないＯＶＡを含むナノ粒子および可溶性ＯＶＡのみの両方と比較した。
【０４３５】
簡単には、Ｃ５７／Ｂｌ６マウスを経口胃管栄養法により飼育し、以下の処理のいずれか１つを行った：リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、テキサスレッドで染色した可溶性ＯＶＡ、コーティングされていないテキサスレッドで標識したＯＶＡを含むナノ粒子、または大腸菌有機抽出物（ＯＥＥ）でコーティングされた大腸菌ＤＮＡおよびテキサスレッドで標識されたＯＶＡを含むナノ粒子（本実施例において、“ＯＥＥ／ＤＮＡ＋ＯＶＡ”とも言う）。投与のおよそ２４時間後、マウスを屠殺し、各動物からリンパ節および脾臓を取り出し、リンパ節をタイプ別に集めた。その後、蛍光を読み取り、バックグラウンドとしてリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）マウスリンパ節の蛍光を差し引くことにより、細胞数で除法した。
【０４３６】
図２７は、提供されるナノ粒子または関連する対照の投与の２４時間後の、Ｃ５７／Ｂｌ６マウスにおける頚部、鼠径、および腸間膜リンパ節のそれぞれにおける細胞数当たりの蛍光のグラフを示す。図２７に示す通り、各処理グループは、頚部リンパ節における蓄積を示し、コーティングされていないナノ粒子が最大の蓄積を示した。コーティングされていないナノ粒子のみが、鼠径リンパ節におけるかなりの蓄積を示した。興味深いことに、ＯＥＥ／ＤＮＡ＋ＯＶＡナノ粒子のみが、腸間膜リンパ節における蓄積を示した。
【０４３７】
リンパ節に加えて、脾臓における蓄積を分析した。簡単には、脾臓を取り出し、臓器質量を正規化し、蛍光を上記のように測定した。図２８は、資源グループそれぞれについての蛍光／脾臓質量を示す。図２８Ａは、脾臓における平均ＯＶＡ蓄積を示し、ＯＥＥ／ＤＮＡ＋ＯＶＡは他の２つの試験グループよりも顕著に高い、２４時間後の脾臓におけるＯＶＡ蓄積を示した。図２８Ｂは、総投与蛍光により標準化された、処置グループあたりの脾臓におけるＯＶＡの割合を示す。図２８Ｂに示す通り、ＯＥＥ／ＤＮＡ＋ＯＶＡグループにおいて、投与されたＯＶＡのおよそ２．５％が脾臓に移行する。
【０４３８】
実施例１５：インビボでの抗原特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞応答の刺激
この実施例は、提供されるナノ粒子組成物を経口投与し、インビボで免疫系に重大な抗原特異的な影響を与え得ることを確認する。本実施例において、提供される組成物のＣＤ４＋Ｔ細胞に対するインビボでの効果は、提供される組成物の経口投与後に確認した。
【０４３９】
具体的には、本実施例において、Ｔｈｙ１．１−ＯＴ−ＩＩ  ＣＤ４＋Ｔ細胞を単離し、細胞トレースバイオレットで染色した。次に、Ｃ５７／Ｂｌ６マウスに染色されたＣＤ４＋細胞を静脈内注入した。およそ２４時間後、マウスに、ＰＢＳ（対照として）または大腸菌細胞培養物の有機抽出物（ＯＥＥ）でコーティングされた大腸菌ＤＮＡおよびオボアルブミン（ＯＶＡ）を封入しているナノ粒子のいずれかを強制経口投与した。各用量または提供されるナノ粒子は、およそ以下の量を含んだ：４ｍｇ  ナノ粒子、６９μｇ  ＯＶＡ、１４μｇ  大腸菌ＤＮＡ、および３．１８−１１  ＥＵエンドトキシン。本実施例における提供されるナノ粒子は、便宜上、“ＯＥＥ／ＤＮＡ＋ＯＶＡ”と称される。３日後、マウスを屠殺し、脾臓組織、鼠径リンパ節、腸間膜リンパ節、および頸部リンパ節を単離し、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）のために染色した。実験計画を以下に示す。
【表２３】
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【０４４０】
細胞トレースバイオレット分析を、細胞トレースバイオレット分析は、製造者の指示書に従って行った。簡単に説明すると、注入されたＯＴ−ＩＩ細胞を新たに染色して最大蛍光を示させる。抗原が介在する刺激に対する応答のような、ＯＴ−ＩＩ細胞が分割したとき、染料は娘細胞間で分配される。その結果、蛍光が減少する各ピークは、細胞の新たな世代（娘細胞）を表す。より分裂するほど、存在する抗原特異的細胞数が増えると予期される。特定の理論はともかく、分裂細胞の割合の増加は、提供されるナノ粒子が消化されることなく残り、マウスにおいて、ＡＰＣへ抗原を提供することを意味することが意図される。
【０４４１】
図２９Ａ−Ｄに示す通り、ＯＶＡ特異的Ｔ細胞集団の統計的に有意な増加が、分析した各組織において観察された。図２９Ａは、脾臓におけるＣＤ４＋ＯＶＡ特異的細胞数の増大を示し、一方、図２９Ｂ、ＣおよびＤは、鼠径リンパ節、腸間膜リンパ節、および頸部リンパ節それぞれでの同様の増加を示す。
【０４４２】
本実施例は、提供されるナノ粒子組成物を経口投与すると、インビボにて、対象のＴ細胞に対して、顕著かつ抗原特異的な効果が発揮され得ることを確証する。
【０４４３】
均等
当業者は認識し得るか、または単なる通常の実験を用いて、本明細書に記載の本発明の特定の態様の多くの均等物を確認することができる。本発明の範囲は、上記の明細書の記載に限定されるものではなく、添付の特許請求の範囲に記載される通りであることが意図される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【配列表】
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