(57)【要約】【課題】血液中の成分を簡便にかつ精度よく測定することを可能とする、マイクロ流路チップを提供する。【解決手段】ラテックス及び該ラテックスに吸着された抗原及び／又は抗体を含むラテックス溶液と凝集剤とを混合しラテックス凝集させる、ラテックス凝集法による測定に用いられるマイクロ流路チップ１であって、対向し合う第１の主面２ａ及び第２の主面２ｂを有する基板２と、基板２内に設けられているマイクロ流路６と、を備え、マイクロ流路６が、ラテックス溶液及び凝集剤を含む溶液の透過強度を測定するための第１の検出部７と、第１の検出部７の下流側に連なっており、ラテックス溶液及び凝集剤を混合するための混合流路８と、混合流路８の下流側に連なっており、混合流路８で混合されたラテックス溶液及び凝集剤の混合液の透過強度を測定する第２の検出部９と、を有するマイクロ流路チップ１。【選択図】図２
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ラテックス及び該ラテックスに吸着された抗原及び／又は抗体を含むラテックス溶液と凝集剤とを混合しラテックス凝集させる、ラテックス凝集法による測定に用いられるマイクロ流路チップであって、
対向し合う第１の主面及び第２の主面を有する基板と、
前記基板内に設けられているマイクロ流路と、
を備え、
前記マイクロ流路が、
前記ラテックス溶液及び前記凝集剤を含む溶液の透過強度を測定するための第１の検出部と、
前記第１の検出部の下流側に連なっており、前記ラテックス溶液及び前記凝集剤を混合するための混合流路と、
前記混合流路の下流側に連なっており、前記混合流路で混合された前記ラテックス溶液及び前記凝集剤の混合液の透過強度を測定する第２の検出部と、
を有する、マイクロ流路チップ。
【請求項２】
前記第１の検出部及び前記２の検出部が、前記基板の前記第１の主面及び前記第２の主面を結ぶ方向に延びている、請求項１に記載のマイクロ流路チップ。
【請求項３】
前記基板が、前記第１の主面及び前記第２の主面を結んでおり、対向し合う第１の側面及び第２の側面をさらに有し、
前記混合流路が、前記第１の側面側に拡大されている第１の流路部と、前記第２の側面側に拡大されている第２の流路部とを有し、
前記第１の流路部と前記第２の流路部とが、前記混合流路における流体の進行方向においてずれるように配置されている、請求項１又は２に記載のマイクロ流路チップ。
【請求項４】
前記第１の流路部と前記第２の流路部とが交互に設けられている、請求項１〜３のいずれか１項に記載のマイクロ流路チップ。
【請求項５】
光源と、
請求項１〜４のいずれか１項に記載のマイクロ流路チップと、
前記第１の検出部において前記ラテックス溶液及び前記凝集剤を含む溶液の透過強度を測定するための第１の検出器と、
前記第２の検出部において前記ラテックス溶液及び前記凝集剤の混合液の透過強度を測定するための第２の検出器と、
を備える、マイクロ流体デバイス。
【請求項６】
前記抗原が、ヘモグロビンＡ１ｃであり、
請求項５に記載のマイクロ流体デバイスを用いたヘモグロビンＡ１ｃ濃度の測定方法であって、
前記第１の検出部に、前記ラテックス溶液及び前記凝集剤を送液し、時間Ｔ０秒における前記ラテックス溶液及び前記凝集剤を含む溶液の透過強度を測定する工程と、
前記第１の検出部から前記混合流路に、前記ラテックス溶液及び前記凝集剤を送液し、前記ラテックス溶液及び前記凝集剤を混合する工程と、
前記混合流路から前記第２の検出部に、前記ラテックス溶液及び前記凝集剤の混合液を送液し、時間Ｔ秒における前記ラテックス溶液及び前記凝集剤の混合液の透過強度を測定する工程と、
前記Ｔ０秒及び前記Ｔ秒における透過強度を用いて、前記ヘモグロビンＡ１ｃの濃度を得る工程と、
を備える、ヘモグロビンＡ１ｃ濃度の測定方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、基板内にマイクロ流路が設けられている、マイクロ流路チップ、並びに該マイクロ流路チップを用いたマイクロ流体デバイス及びヘモグロビンＡ１ｃ濃度の測定方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来、血液試料中の微量物質を測定するために免疫反応を利用する方法が広く用いられている。このような免疫学的方法としては、例えば、ラテックス凝集法や標識抗体法などが知られている。
【０００３】
下記の非特許文献１には、マイクロチップ内における抗原抗体反応を検出する方法が開示されている。非特許文献１では、予めマイクロチップ内に抗原が表面に吸着した粒子を導入する。次に、標識抗体をマイクロチップ内に導入し、抗原抗体反応がなされている。非特許文献１では、熱レンズ顕微鏡によりこの抗原抗体反応が検出されている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｖｏｌ．  ７２，  Ｎｏ．６，  Ｍａｒｃｈ  １５，  ２０００，  １１４４−１１４７
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
近年、血液試料中におけるヘモグロビンＡ１ｃのようなヘモグロビン誘導体の定量に免疫学的測定が用いられており、その測定精度を高めることが求められている。特に、マイクロ流路チップスケールにおける測定では、より一層測定精度を高めることが求められている。
【０００６】
しかしながら、非特許文献１のような標識抗体法でヘモグロビンＡ１ｃ濃度の測定を行った場合、測定精度がなお十分でなかった。また、標識抗体法では、抗原と反応しなかった標識抗体を洗浄する必要があり、余分な手間や工数がかかるという問題があった。さらに、十分に洗浄しないと測定精度に悪影響を及ぼすことから、この点からも実質的に測定精度を高めることが困難であった。
【０００７】
本発明の目的は、血液中の成分を簡便にかつ精度よく測定することを可能とする、マイクロ流路チップ、並びに該マイクロ流路チップを用いたマイクロ流体デバイス及びヘモグロビンＡ１ｃ濃度の測定方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明に係るマイクロ流路チップは、ラテックス及び該ラテックスに吸着された抗原及び／又は抗体を含むラテックス溶液と凝集剤とを混合しラテックス凝集させる、ラテックス凝集法による測定に用いられるマイクロ流路チップであって、対向し合う第１の主面及び第２の主面を有する基板と、前記基板内に設けられているマイクロ流路と、を備え、前記マイクロ流路が、前記ラテックス溶液及び前記凝集剤を含む溶液の透過強度を測定するための第１の検出部と、前記第１の検出部の下流側に連なっており、前記ラテックス溶液及び前記凝集剤を混合するための混合流路と、前記混合流路の下流側に連なっており、前記混合流路で混合された前記ラテックス溶液及び前記凝集剤の混合液の透過強度を測定する第２の検出部と、を有する。
【０００９】
本発明に係るマイクロ流路チップのある特定の局面では、前記第１の検出部及び前記２の検出部が、前記基板の前記第１の主面及び前記第２の主面を結ぶ方向に延びている。
【００１０】
本発明に係るマイクロ流路チップの他の特定の局面では、前記基板が、前記第１の主面及び前記第２の主面を結んでおり、対向し合う第１の側面及び第２の側面をさらに有し、前記混合流路が、前記第１の側面側に拡大されている第１の流路部と、前記第２の側面側に拡大されている第２の流路部とを有し、前記第１の流路部と前記第２の流路部とが、前記混合流路における流体の進行方向においてずれるように配置されている。好ましくは、前記第１の流路部と前記第２の流路部とが交互に設けられている。
【００１１】
本発明に係るマイクロ流体デバイスは、光源と、本発明に従って構成されるマイクロ流路チップと、前記第１の検出部において前記ラテックス溶液及び前記凝集剤を含む溶液の透過強度を測定するための第１の検出器と、前記第２の検出部において前記ラテックス溶液及び前記凝集剤の混合液の透過強度を測定するための第２の検出器と、を備える。
【００１２】
本発明に係るヘモグロビンＡ１ｃ濃度の測定方法は、前記抗原が、ヘモグロビンＡ１ｃであり、本発明に従って構成されるマイクロ流体デバイスを用いたヘモグロビンＡ１ｃ濃度の測定方法であって、前記第１の検出部に、前記ラテックス溶液及び前記凝集剤を送液し、時間Ｔ０秒における前記ラテックス溶液及び前記凝集剤を含む溶液の透過強度を測定する工程と、前記第１の検出部から前記混合流路に、前記ラテックス溶液及び前記凝集剤を送液し、前記ラテックス溶液及び前記凝集剤を混合する工程と、前記混合流路から前記第２の検出部に、前記ラテックス溶液及び前記凝集剤の混合液を送液し、時間Ｔ秒における前記ラテックス溶液及び前記凝集剤の混合液の透過強度を測定する工程と、前記Ｔ０秒及び前記Ｔ秒における透過強度を用いて、前記ヘモグロビンＡ１ｃの濃度を得る工程と、を備える。
【発明の効果】
【００１３】
本発明によれば、血液中の成分を簡便にかつ精度よく測定することを可能とする、マイクロ流路チップを提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】本発明の一実施形態に係るマイクロ流体デバイスを構成するマイクロ流路チップの外観を示す斜視図である。
【図２】本発明の一実施形態に係るマイクロ流体デバイスの要部を示す模式的断面図である。
【図３】本発明の一実施形態に係るマイクロ流体デバイスの混合流路を説明するための模式的平面図である
【図４】ヘモグロビンＡ１ｃの濃度を測定する際に用いる検量線の作成方法を説明するための図である。
【図５】ヘモグロビンＡ１ｃの濃度を測定する際に用いる検量線の一例を示す図である。
【図６】実験例で用いたマイクロ流路チップの流路構造を示す模式的平面図である。
【図７】実験例において、第１の検出器及び第２の検出器で検出した透過強度の時間変化を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
以下、図面を参照しつつ、本発明の具体的な実施形態を説明することにより、本発明を明らかにする。
【００１６】
なお、本明細書に記載の各実施形態は、例示的なものであり、異なる実施形態間において、構成の部分的な置換または組み合わせが可能であることを指摘しておく。
【００１７】
（マイクロ流路チップ及びマイクロ流体デバイス）
図１は、本発明の一実施形態に係るマイクロ流体デバイスを構成するマイクロ流路チップの外観を示す斜視図である。図２は、本発明の一実施形態に係るマイクロ流体デバイスの要部を示す模式的断面図である。なお、図２は、図１のＡ−Ａ線に沿う方向におけるマイクロ流体デバイスの要部を示す模式的断面図である。
【００１８】
図２に示すように、マイクロ流体デバイス１１は、第１の光源１２及び第２の光源１３と、マイクロ流路チップ１と、第１の検出器１４及び第２の検出器１５とを備える。
【００１９】
図１に示すように、マイクロ流路チップ１は、板状の基板２を備える。板状の基板２は、対向する第１の主面２ａ及び第２の主面２ｂと、対向する第１の側面２ｃ及び第２の側面２ｄとを有する。第１の側面２ｃ及び第２の側面２ｄは、第１の主面２ａ及び第２の主面２ｂを結んでいる。
【００２０】
基板２は、基板本体３と、基板本体３の上面を覆うように設けられた第１のカバー層４と、基板本体３の下面側に積層された第２のカバー層５とを有する。第１のカバー層４は、第１の主面２ａ側に設けられている。第２のカバー層５は、第２の主面２ｂ側に設けられている。なお、積層構造は特に限定されない。また、基板２は、第１のカバー層４及び基板本体３が一体成形されたものであってもよい。
【００２１】
マイクロ流路チップ１を構成する材料は特に限定されない。例えば、基板２を構成している基板本体３、第１のカバー層４及び第２のカバー層５は、合成樹脂の成形体の積層構造であってもよい。また、基板本体３が、射出成形品からなり、第１のカバー層４及び第２のカバー層５が射出成形品の上面または下面に貼り付けられた合成樹脂フィルムであってもよい。
【００２２】
板状の基板２内には、図２に示すマイクロ流路６が設けられている。マイクロ流路６とは、液体（流体）の搬送に際し、いわゆるマイクロ効果が生じるような微細な流路をいう。このようなマイクロ流路６では、液体は、表面張力の影響を強く受け、通常の大寸法の流路を流れる液体とは異なる挙動を示す。このようなマイクロ流路６の横断面形状は、横断面における小さい方の辺の寸法で、好ましくは５ｍｍ以下、より好ましくは５００μｍ以下、さらに好ましくは２００μｍ以下である。また、横断面における小さい方の辺の寸法で、好ましくは５μｍ以上、より好ましくは５０μｍ以上、さらに好ましくは１００μｍ以上である。
【００２３】
一方、マイクロ流路６の横断面が円形である場合には、マイクロ流路６の直径は、好ましくは５ｍｍ以下、より好ましくは５００μｍ以下、さらに好ましくは２００μｍ以下である。また、マイクロ流路６の直径は、好ましくは５μｍ以上、より好ましくは５０μｍ以上、さらに好ましくは１００μｍ以上である。
【００２４】
マイクロ流路６の途中には、第１の検出部７、混合流路８及び第２の検出部９が設けられている。より具体的には、マイクロ流路６の途中に第１の検出部７が設けられている。第１の検出部７が設けられている部分よりも下流側に混合流路８が設けられている。混合流路８が設けられている部分よりも下流側に第２の検出部９が設けられている。なお、第１の検出部７、混合流路８及び第２の検出部８が設けられている部分を明確にするために図２においては、破線でそれぞれの部分を区画している。
【００２５】
本実施形態において、マイクロ流路チップ１及びマイクロ流体デバイス１１は、ラテックス凝集法による測定に用いられる。ラテックス凝集法では、ラテックス及び該ラテックスに吸着された抗原及び／又は抗体を含むラテックス溶液と凝集剤とを混合し、ラテックス凝集させることができる。なお、凝集剤としては、特に限定されないが、例えば、ラテックスに吸着された抗原と、抗原抗体反応をすることができる抗体を用いることができる。また、ラテックスに吸着された抗体を含むラテックス溶液を用いる場合は、凝集剤としてタンパク、ペプチド、糖鎖、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ウイルス、真菌、細菌、細胞などを用いることができる。
【００２６】
ラテックス凝集法による測定では、例えば、ヘモグロビンＡ１ｃのようなヘモグロビン誘導体を抗原として用いることができ、このヘモグロビン誘導体の血液試料中における濃度を測定することができる。
【００２７】
マイクロ流路チップ１内に設けられている第１の検出部７は、ラテックス溶液及び凝集剤を含む溶液の透過強度を測定するために設けられている。なお、透過強度は、第１の光源１２を用いてラテックス溶液及び凝集剤を含む溶液に光を照射し、照射した光を第１の検出器１４で検出することにより測定することができる。なお、本実施形態において、第１の検出部７は、上述したように図２に示す破線により、区画されている。従って、本実施形態において、第１の検出部７は、第１の主面２ａ及び第２の主面２ｂを結ぶ方向、すなわち基板２の厚み方向に延びている。第１の検出部７は、基板２の厚み方向に延びていなくてもよいが、基板２の厚み方向に延びていることが好ましい。基板２の厚み方向に延びている場合、光路長をより長くすることができ、しかも光路長をより一定にすることができる。また、測定の感度をより一層高めることもできる。よって、血液中の成分をより一層精度よく測定することができる。
【００２８】
混合流路８は、第１の検出部７から送液されたラテックス溶液と凝集剤とを混合するために設けられている。
【００２９】
本実施形態において、混合流路８は、図３に模式的平面図で示すように、第１の流路部８ａと第２の流路部８ｂとを有する。第１の流路部８ａは、第１の側面２ｃ側に流路が拡大されている部分である。他方、第２の流路部８ｂは、第２の側面２ｄ側に流路が拡大されている部分である。なお、本実施形態では、２つの第１の流路部８ａと１つの第２の流路部８ｂとが、第１の流路部８ａから順に交互に設けられている。
【００３０】
また、本実施形態においては、第１の流路部８ａと第２の流路部８ｂとが、液体の送液方向において完全にずれるように設けられている。このように、第１の流路部８ａと第２の流路部８ｂとは、液体の送液方向において、少なくとも一部がずれるように設けられていることが好ましい。すなわち、液体の送液方向を軸として、第１の流路部８ａと第２の流路部８ｂとが対称にならないように設けられていることが好ましい。この場合、ラテックス溶液と凝集剤とをより一層均一に混合することができる。また、本実施形態のように、第１の流路部８ａと第２の流路部８ｂとが液体の送液方向において交互に設けられていることが好ましい。この場合、ラテックス溶液と凝集剤とをさらに一層均一に混合することができる。なお、本発明においては、混合流路８において、ラテックス溶液と凝集剤とを混合できればよく、第１の流路部８ａ及び第２の流路部８ｂが設けられていなくてもよい。
【００３１】
混合流路８において、ラテックス溶液と凝集剤とを混合することによりラテックス凝集が生じることとなる。
【００３２】
本実施形態において、第２の検出部９は、混合流路８で混合されたラテックス溶液及び凝集剤の混合液の透過強度を測定するために設けられている。透過強度は、第２の光源１３を用いてラテックス溶液及び凝集剤の混合液に光を照射し、照射した光を第２の検出器１５で検出することにより測定することができる。なお、上述したように、ラテックス溶液及び凝集剤の混合液中では、ラテックス凝集が生じている。よって、第２の検出部９ではラテックス凝集反応を検出することができる。
【００３３】
また、本実施形態において、第２の検出部９は、図２に示す破線により、区画されている。従って、本実施形態において、第２の検出部９は、第１の主面２ａ及び第２の主面２ｂを結ぶ方向、すなわち基板２の厚み方向に延びている。第２の検出部９は、基板２の厚み方向に延びていなくてもよいが、基板２の厚み方向に延びていることが好ましい。基板２の厚み方向に延びている場合、光路長をより長くすることができ、しかも光路長をより一定にすることができる。また、測定の感度をより一層高めることもできる。よって、血液中の成分をより一層精度よく測定することができる。
【００３４】
（ヘモグロビンＡ１ｃ濃度の測定方法）
以下、ラテックス凝集法による測定の一例として、ヘモグロビンＡ１ｃ濃度の測定方法を説明する。ヘモグロビンＡ１ｃ濃度の測定方法では、図２に示すマイクロ流体デバイス１１を用いてヘモグロビンＡ１ｃ濃度を測定する。
【００３５】
まず、ラテックス及び該ラテックスに吸着された抗原としてのヘモグロビンＡ１ｃを含むラテックス溶液及び凝集剤を用意する。ラテックスを構成する微粒子としては、例えば、有機系の微粒子を用いることができる。有機系微粒子としては、例えば、スチレン、塩化ビニル、アクリロニトリル、酢酸ビニル、アクリル酸エステル、又はメタクリル酸エステル等のビニル系モノマーの単独重合体又は共重合体や、スチレン−ブタジエン共重合体、メチルメタクリレート−ブタジエン共重合体等のブタジエン系共重合体等が挙げられる。なかでも、抗原や抗体の吸着性により一層優れており、生物学的活性をより一層長期間安定に保持できる観点から、ポリスチレン系のラテックスであることが好ましい。
【００３６】
このようなラテックスと、ヘモグロビンＡ１ｃとを混合することにより、ヘモグロビンＡ１ｃをラテックス中の微粒子に吸着させることができる。なお、ラテックス溶液中には、ヘモグロビンが含まれていてもよい。
【００３７】
凝集剤としては、特に限定されないが、ラテックスに吸着された抗原と、抗原抗体反応をすることができる抗体を用いることができる。このような抗体としては、例えば、一次抗体として、ヘモグロビンＡ１ｃに対する抗体のホスト動物としてのマウス、ラット、ウサギ、山羊等が挙げられ、アイソタイプとして、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＤが挙げられる。本実施形態では、ヘモグロビンとは抗原抗体反応せず、ヘモグロビンＡ１ｃとのみ抗原抗体反応する抗体として、抗ＩｇＧ、抗ＩｇＭ、抗ＩｇＡ、抗ＩｇＥ、抗ＩｇＤを用いている。
【００３８】
なお、本発明においては、ヘモグロビンＡ１ｃ以外の他の抗原を用いてもよい。このような抗原としては、特に限定されないが、例えば、腫瘍マーカーのＰＳＡ、ＡＦＰ、ＣＥＡ、ＣＡ１２５、ＣＡ１９−９、ＣＡ１５−３や、炎症マーカーのＣＲＰ、心筋マーカーのＢＮＰが挙げられる。凝集剤としての抗体については抗原と抗原抗体反応し得る適宜の抗体を用いればよい。
【００３９】
また、ラテックスに吸着された抗体を含むラテックス溶液を用いる場合は、抗体として各種光源に対する抗体のホスト動物としてのマウス、ラット、ウサギ、山羊等が挙げられ、アイソタイプとして、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＤが挙げられる。本実施形態では、ヘモグロビンとは抗原抗体反応せず、ヘモグロビンＡ１ｃとのみ抗原抗体反応する抗体として、抗ＩｇＧ、抗ＩｇＭ、抗ＩｇＡ、抗ＩｇＥ、抗ＩｇＤを用いることができる。また、凝集剤としては、タンパク、ペプチド、糖鎖、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ウイルス、真菌、細菌、細胞などを用いることができる。
【００４０】
次に、送液手段としてのマイクロポンプを駆動させ、凝集剤を第１の検出部７に送液する。続いて、ラテックス溶液を第１の検出部７に送液する。
【００４１】
なお、送液手段としてマイクロポンプを用いる場合、マイクロポンプによって、マイクロ流路６に液体や空気、又は所定のガスを送り込むことにより、送液することができる。マイクロポンプは、マイクロ流路チップ１の内部に設けられていてもよいし、マイクロ流路チップ１の外部に設けられていてもよい。
【００４２】
また、他の送液手段としては、マイクロ流路６より上流側に連結された空間に配置されたガス発生部材が挙げられる。ガス発生部材とは、光や熱等の外力によりガスを発生する部材である。ガス発生部材に所定のタイミングで外力を加えることによりガスを発生させ、マイクロ流路６にガスを送り込むことができる。それによって、マイクロ流路６内において液体を送液することができる。ガス発生部材としては、例えば、ガス発生テープが挙げられる。
【００４３】
送液後、第１の検出部７において、ラテックス溶液及び凝集剤を含む溶液の時間Ｔ０秒における透過強度を測定する。なお、時間Ｔ０秒とは、第１の検出部７に溶液が満たされ安定した時間であり、好ましくは、５秒以上の時間である。
【００４４】
なお、透過強度は、第１の光源１２を用いてラテックス溶液及び凝集剤を含む溶液に光を照射し、照射した光を第１の検出器１４で検出することにより測定することができる。第１の検出器１４は、透過強度を測定できるものであれば、特に限定はされないが、例えば、浜松ホトニクス社製、「オプティクスモジュール  Ｃ１３３９８−０２」を用いることができる。
【００４５】
次に、ラテックス溶液及び凝集剤を含む溶液を第１の検出部７から混合流路８に送液する。この混合流路８において、ラテックス溶液及び凝集剤を混合し、ラテックス凝集させた混合液を得る。
【００４６】
次に、ラテックス凝集させた混合液を混合流路８から第２の検出部９に送液する。送液後、第２の検出部９において、ラテックス凝集させた混合液の時間Ｔ秒における透過強度を測定する。なお、透過強度は、第２の光源１３を用いてラテックス凝集させた混合液に光を照射し、照射した光を第２の検出器１５で検出することにより測定することができる。第２の検出器１５は、透過強度を測定できるものであれば、特に限定はされないが、例えば、浜松ホトニクス社製、「オプティクスモジュール  Ｃ１３３９８−０２」を用いることができる。なお、第１の光源１２及び第２の光源１３は、１つの光源で兼ねられていてもよい。
【００４７】
次に、ヘモグロビンＡ１ｃの濃度を求めるための検量線を作成する。検量線は、例えば、以下のようにして作成することができる。まず、濃度既知の複数のヘモグロビンＡ１ｃの試料Ａ，Ｂ，Ｃを用意する。なお、試料Ａ，Ｂ，Ｃの濃度は異なっているものとする。続いて、試料Ａ，Ｂ，Ｃについて、上述した方法により時間Ｔ０秒及びＴ秒における透過強度を測定する。次に、試料Ａ，Ｂ，Ｃについて、それぞれ、横軸に時間、縦軸に得られた透過強度をプロットし、図４に示すグラフを作成する。図４に示すグラフから、試料Ａ，Ｂ，Ｃの傾きを求める。次に、横軸に試料Ａ，Ｂ，Ｃの濃度、縦軸に得られた試料Ａ，Ｂ，Ｃの上記傾きをプロットし、それによって、図５に示す検量線を作成することができる。
【００４８】
このようにして得られた検量線を用いて、濃度未知のヘモグロビンＡ１ｃ濃度を測定することができる。具体的には、上述した方法により、濃度未知のヘモグロビンＡ１ｃの時間Ｔ０秒及びＴ秒における透過強度を測定する。次に、得られた時間Ｔ０秒及びＴ秒における透過強度から、図４に示すようなグラフを作成し、傾きを求める。得られた傾きと検量線から、濃度未知のヘモグロビンＡ１ｃ濃度を定量することができる。
【００４９】
このように、本発明においては、時間Ｔ０秒及びＴ秒における透過強度を測定するだけで、簡便にヘモグロビンＡ１ｃの濃度を測定することができる。特に、本発明の測定方法では、標識抗体法とは異なり、抗原と反応しなかった標識抗体を洗浄する必要がない。そのため、余分な洗浄工程を設ける必要がなく、簡便にヘモグロビンＡ１ｃ濃度を測定することができる。さらに、抗原と反応しなかった標識抗体による測定への悪影響が生じ難いことから、ヘモグロビンＡ１ｃ濃度の測定精度を高めることもできる。
【００５０】
（実験例）
以下、時間Ｔ０秒及び時間Ｔ秒における透過強度測定の具体的な実験例について説明する。実験例においては、図６に示すマイクロ流路チップ２１を用いて測定を行った。
【００５１】
図６に示す、マイクロ流路チップ２１では、マイクロ流路１０の途中に上流側から、ラテックス溶液導入部２２、凝集剤導入部２３、第１の検出部７、混合流路８及び第２の検出部９がこの順に設けられている。第１の検出部７及び第２の検出部９は、それぞれ、基板２の厚み方向に延びるように設けられている。混合流路８においては、４つの第１の流路部８ａと４つの第２の流路部８ｂが第２の流路部８ｂから順に交互に設けられている。
【００５２】
実験例では、まず、凝集剤導入部２３に凝集剤を充填し、ラテックス溶液導入部２２にラテックス溶液を充填した。次に、送液手段としてのマイクロポンプを駆動させ、凝集剤導入部２３及びラテックス溶液導入部２２から、それぞれ、凝集剤及びラテックス溶液を第１の検出部７に送液した。次に、ラテックス溶液及び凝集剤を含む溶液を第１の検出部７から混合流路８に送液した。混合流路８において、ラテックス溶液及び凝集剤を混合し、ラテックス凝集させた混合液を得た。次に、ラテックス凝集させた混合液を混合流路８から第２の検出部９に送液した。
【００５３】
なお、本実験例においては、ラテックス溶液及び凝集剤の送液を開始した時点から、第１の検出部７及び第２の検出部９にそれぞれ光源から光を照射し、第１の検出器及び第２の検出器にて検出した。第１の検出器及び第２の検出器で検出した透過強度の時間変化を図７に示した。図７において、３５秒をＴ０秒、２１０秒をＴ秒とした。得られたＴ０秒及びＴ秒における透過強度を用いて、例えば、上述した方法で検量線を作製し、ヘモグロビンＡ１ｃの濃度を測定することができる。
【符号の説明】
【００５４】
１，２１…マイクロ流路チップ
２…基板
２ａ，２ｂ…第１，第２の主面
２ｃ，２ｄ…第１，第２の側面
３…基板本体
４，５…第１，第２のカバー層
６，１０…マイクロ流路
７，９…第１，第２の検出部
８…混合流路
８ａ，８ｂ…第１，第２の流路部
１１…マイクロ流体デバイス
１２，１３…第１，第２の光源
１４，１５…第１，第２の検出器
２２…ラテックス溶液導入部
２３…凝集剤導入部
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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