(57)【要約】      （修正有）【課題】親アルブミンの変異体、親アルブミンと比べ変更された血漿半減期を有する変異体に関する。本発明はまた、該変異体をコードしているポリヌクレオチド；該ポリヌクレオチドを含む、核酸構築体、ベクター、及び宿主細胞；並びに、該変異体の使用方法にも関する。【解決手段】特定の配列を持つＦｃＲｎへの変更された結合親和性を有する、アルブミンの変異体、それらの断片、又は該変異アルブミン若しくはそれらの断片を含む融合ポリペプチドを提供する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
親アルブミン、参照アルブミン、それらの断片、又は該親アルブミン、参照アルブミン若しくは断片を含む融合ポリペプチド、又はそれらの融合体のＦｃＲｎへの結合親和性と比べ、ＦｃＲｎへの変更された結合親和性を有する、アルブミンの変異体、それらの断片、又は該変異アルブミン若しくはそれらの断片を含む融合ポリペプチドである、ポリペプチドであって、ここで該ポリペプチドが、配列番号２の位置：（ａ）４９２及び５８０；（ｂ）４９２及び５７４；（ｃ）４９２及び５５０；（ｄ）５５０及び５７３；（ｅ）５５０及び５７４；（ｆ）５５０及び５８０に対応する位置から選択される２以上の位置において変更を含む、ポリペプチド。
【請求項２】
配列番号１の位置４９２及び５８０に対応する位置に変更を含み、配列番号２の５５０、５７３及び５７４からなる群から選択される位置に対応する位置に１又は複数（数個）の変更を更に含む、請求項１記載のポリペプチド。
【請求項３】
配列番号１の位置４９２及び５７４に対応する位置に変更を含み、配列番号２の５５０、５７３及び５８０からなる群から選択される位置に対応する位置に１又は複数（数個）の変更を更に含む、請求項１記載のポリペプチド。
【請求項４】
配列番号１の位置４９２及び５５０に対応する位置に変更を含み、配列番号２の５７３、５７４及び５８０からなる群から選択される位置に対応する位置に１又は複数（数個）の変更を更に含む、請求項１記載のポリペプチド。
【請求項５】
配列番号１の位置５５０及び５７３に対応する位置に変更を含み、配列番号２の４９２、５７４、及び５８０からなる群から選択される位置に対応する位置に１又は複数（数個）の変更を更に含む、請求項１記載のポリペプチド。
【請求項６】
配列番号１の位置５５０及び５７４に対応する位置に変更を含み、配列番号２の４９２、５７３及び５８０からなる群から選択される位置に対応する位置に１又は複数（数個）の変更を更に含む、請求項１記載のポリペプチド。
【請求項７】
配列番号１の位置５５０及び５８０に対応する位置に変更を含み、配列番号２の位置４９２、５７３及び５７４に対応する位置に変更を更に含む、請求項１記載のポリペプチド。
【請求項８】
親アルブミン、参照アルブミン、それらの断片、又は該親アルブミン、参照アルブミン若しくは断片を含む融合ポリペプチド、又はそれらの融合体のＦｃＲｎへの結合親和性と比べ、ＦｃＲｎへの変更された結合親和性を有する、アルブミンの変異体、それらの断片、又は該変異アルブミン若しくはそれらの断片を含む融合ポリペプチドである、ポリペプチドであって、ここで：
（ａ）該ポリペプチドが、２以上の位置において変更を含み、ここで配列番号２の位置４９２に対応する位置に、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｆ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、Ｙ、好ましくはＤからなる群からのアミノ酸を位置に対応する位置に生じる変更が存在し、並びに配列番号２の位置５７３に対応する位置に、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、Ｙ、好ましくはＹ、Ｗ又はＨからなる群からのアミノ酸を位置に対応する位置に生じる変更が存在するか、或いは
（ｂ）配列番号２の位置４９２に対応する位置に、Ｇを生じる変更が存在し、並びに位置５７３に対応する位置に、Ａ又はＰを生じる変更が存在し、並びに該ポリペプチドが、５５０、５７４及び５８０からなる群から選択される位置に追加の変更を含む、ポリペプチド。
【請求項９】
親アルブミン、参照アルブミン、それらの断片、又は該親アルブミン、参照アルブミン若しくは断片を含む融合ポリペプチド、又はそれらの融合体のＦｃＲｎへの結合親和性と比べ、ＦｃＲｎへの変更された結合親和性を有する、アルブミンの変異体、それらの断片、又は該変異アルブミン若しくはそれらの断片を含む融合ポリペプチドである、ポリペプチドであって、ここで：
（ａ）該ポリペプチドが、２以上の位置において変更を含み、ここで配列番号２の位置５７３に対応する位置に、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、Ｙ、好ましくはＹ、Ｗ又はＨからなる群からのアミノ酸を生じる変更が存在し、並びに配列番号２の位置５７４に対応する位置に、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、Ｙ、Ｈ、Ｄ、Ｆ、Ｇ、Ｎ、Ｓ又はＹ、より好ましくはＨ、Ｄ、Ｆ又はＧ、最も好ましくはＨからなる群からのアミノ酸を生じる変更が存在するか、或いは
（ｂ）配列番号２の位置５７３に対応する位置に、Ｐが存在し、並びに配列番号２の位置５７４に対応する位置に、Ｎが存在し、並びに該ポリペプチドが、４９２、５５０、及び５８０からなる群から選択される位置に追加の変更を含む、ポリペプチド。
【請求項１０】
親アルブミン、参照アルブミン、それらの断片、又は該親アルブミン、参照アルブミン若しくは断片を含む融合ポリペプチド、又はそれらの融合体のＦｃＲｎへの結合親和性と比べ、ＦｃＲｎへの変更された結合親和性を有する、アルブミンの変異体、それらの断片、又は該変異アルブミン若しくはそれらの断片を含む融合ポリペプチドである、ポリペプチドであって、ここで：
（ａ）該ポリペプチドが、２以上の位置において変更を含み、ここで配列番号２の位置５７３に対応する位置に、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、Ｙ、好ましくはＹ、Ｗ又はＨからなる群からのアミノ酸を生じる変更が存在し、並びに配列番号２の位置５８０に対応する位置に、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、Ｙからなる群からのアミノ酸を生じる変更が存在するか、或いは
（ｂ）配列番号２の位置５７３に対応する位置に、Ｐを生じる変更が存在し、並びに配列番号２の位置５８０に対応する位置に、Ｋを生じる変更が存在し、並びに該ポリペプチドが、４９２、５５０、及び５７４からなる群から選択される位置に追加の変更を含む、ポリペプチド。
【請求項１１】
親アルブミン、参照アルブミン、それらの断片、又は該親アルブミン、参照アルブミン若しくは断片を含む融合ポリペプチド、又はそれらの融合体のＦｃＲｎへの結合親和性と比べ、ＦｃＲｎへの変更された結合親和性を有する、アルブミンの変異体、それらの断片、又は該変異アルブミン若しくはそれらの断片を含む融合ポリペプチドである、ポリペプチドであって、ここで：
（ａ）該ポリペプチドが、２以上の位置において変更を含み、ここで配列番号２の位置５７４に対応する位置に、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、Ｙ、Ｈ、Ｄ、Ｆ、Ｇ、Ｎ、Ｓ又はＹ、より好ましくはＨ、Ｄ、Ｆ又はＧ、最も好ましくはＨからなる群からのアミノ酸を生じる変更が存在し、並びに配列番号２の位置５８０に対応する位置に、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、Ｙからなる群からのアミノ酸を位置に対応する位置に生じる変更が存在するか、或いは
（ｂ）配列番号２の位置５７４に対応する位置に、Ｎを生じる変更が存在し、並びに配列番号２の位置５８０に対応する位置に、Ｋを生じる変更が存在し、並びに該ポリペプチドが、４９２、５５０、及び５７３からなる群から選択される位置に追加の変更を含む、ポリペプチド。
【請求項１２】
前記ポリペプチドが、配列番号２の位置４９２、５５０、５７３、５７４及び５８０に対応する位置から選択された３以上の位置に変更を含む、請求項１〜１１のいずれか１項記載のポリペプチド。
【請求項１３】
位置４９２、５５０、５７３、５７４及び／又は５８０に対応する位置での変更が、置換である、請求項１〜１２のいずれか１項記載のポリペプチド。
【請求項１４】
位置４９２に対応する位置での置換が、Ｇ、Ｄ、Ｆ、Ｈ、Ｍ又はＲに対するものである、請求項１３のポリペプチド。
【請求項１５】
位置４９２に対応する位置での置換が、Ｇ又はＤに対するものである、請求項１３又は１４のポリペプチド。
【請求項１６】
位置４９２に対応する位置での置換が、Ｇに対するものである、請求項１３〜１５のいずれかのポリペプチド。
【請求項１７】
位置４９２に対応する位置での置換が、Ｄに対するものである、請求項１３〜１５のいずれかのポリペプチド。
【請求項１８】
位置５５０に対応する位置での置換が、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｅ、又はＲに対するものである、請求項１３〜１７のいずれかのポリペプチド。
【請求項１９】
位置５５０に対応する位置での置換が、Ｋ、Ｌ又はＭに対するものである、請求項１３〜１８のいずれかのポリペプチド。
【請求項２０】
位置５５０に対応する位置での置換が、Ｋに対するものである、請求項１３〜１９のいずれかのポリペプチド。
【請求項２１】
位置５７３に対応する位置での変更が、Ｐ、Ｙ、Ｗ、Ｈ、Ｆ、Ｔ、Ｉ又はＶへの置換である、請求項１３〜２０のいずれかのポリペプチド。
【請求項２２】
位置５７３に対応する位置での置換が、Ｐ、Ｙ又はＷに対するものである、請求項１３〜２１のいずれかのポリペプチド。
【請求項２３】
位置５７３に対応する位置での置換が、Ｐに対するものである、請求項１３〜２２のいずれかのポリペプチド。
【請求項２４】
位置５７４に対応する位置での変更が、Ｈ、Ｇ、Ｄ、Ｆ、Ｎ、Ｓ又はＹへの置換である、請求項１３〜２３のいずれかのポリペプチド。
【請求項２５】
位置５７４に対応する位置での置換が、Ｄ、Ｆ、Ｇ又はＨに対するものである、請求項１３〜２４のいずれかのポリペプチド。
【請求項２６】
位置５７４に対応する位置での置換が、Ｈに対するものである、請求項１３〜２５のいずれかのポリペプチド。
【請求項２７】
位置５８０に対応する位置での置換が、Ｋ又はＲに対するものである、請求項１３〜２６のいずれかのポリペプチド。
【請求項２８】
位置５８０に対応する位置での置換が、Ｋに対するものである、請求項１３〜２７のいずれかのポリペプチド。
【請求項２９】
配列番号２において下記の位置に対応する変更を含む、請求項１〜２８のいずれか１項記載のポリペプチド：４９２Ｇ＋５７３Ｐ＋５７４Ｈ＋５８０Ｋ（例えば配列番号１１５）；４９２Ｇ＋５５０Ｋ＋５７３Ｐ＋５７４Ｈ（例えば配列番号２５７）；４９２Ｄ＋５５０Ｋ＋５７３Ｐ＋５７４Ｈ（例えば配列番号２５６）；４９２Ｇ＋５５０Ｋ＋５７３Ｐ（例えば配列番号２５４）；４９２Ｄ＋５５０Ｋ＋５７３Ｐ（例えば配列番号２５３）；５５０Ｍ＋５７３Ｐ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２５２）；５５０Ｌ＋５７３Ｐ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２４８）；５５０Ｌ＋５７３Ｐ＋５７４Ｈ（例えば配列番号２４６）；４９２Ｇ＋５７３Ｐ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２４２）；４９２Ｄ＋５７３Ｐ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２３４）；５７３Ｐ＋５７４Ｈ＋５８０Ｋ（例えば配列番号１３５）；５５０Ｋ＋５７３Ｐ＋５８０Ｋ（例えば配列番号１３３）；５５０Ｋ＋５７３Ｐ＋５７４Ｈ（例えば配列番号１３１）；又は、４９２Ｄ＋５７３Ｐ＋５７４Ｈ＋５８０Ｋ（配列番号１１４）。
【請求項３０】
前記参照アルブミンが、ＨＳＡ（配列番号２）又はそれらの断片、又はＨＡＳ若しくはそれらの断片を含む融合ポリペプチド、最も好ましくは配列番号２である、請求項１〜２９のいずれかのポリペプチド。
【請求項３１】
親アルブミン、参照アルブミン、それらの断片、又は該親アルブミン、参照アルブミン若しくは断片を含む融合ポリペプチド、又はそれらの融合体よりも、より強力なＦｃＲｎへの結合親和性及び／又はより長い血漿半減期を有する、請求項１〜３０のいずれか１項記載のポリペプチド。
【請求項３２】
前記ポリペプチドの配列番号２に対する配列同一性が、８０％より大きい、好ましくは９０％より大きい、より好ましくは９５％より大きい、より好ましくは９６％より大きい、更により好ましくは９７％より大きい、より好ましくは９８％より大きい及び最も好ましくは９９％より大きい、請求項１〜３１のいずれか１項記載のポリペプチド。
【請求項３３】
請求項１〜３２のいずれか１項記載のポリペプチド、及び治療的、予防的、診断的、造影的又は他の有益な部分から選択された融合パートナーポリペプチドを含む、融合ポリペプチド。
【請求項３４】
参照アルブミン、断片又はそれらの融合体のＦｃＲｎへの結合親和性と比べ、変更されているＦｃＲｎへの結合親和性を有する、アルブミンの変異体、それらの断片、又は該変異アルブミン若しくはそれらの断片を含む融合ポリペプチドであるポリペプチドを調製する方法であって：
（ａ）配列番号２と少なくとも８０％の配列同一性を有する親アルブミンをコードしている核酸を提供する工程；
（ｂ）工程（ａ）の配列を、好ましくは請求項１〜１１のいずれかに記載のように、配列番号２の４９２、５５０、５７３、５７４及び５８０から選択される位置に対応する２以上の位置において変更を含む、変異アルブミン、それらの断片、又は該変異アルブミン若しくはそれらの断片を含む融合ポリペプチドであるポリペプチドをコードするように、修飾する工程；
（ｃ）好適な宿主細胞において、工程（ｂ）の修飾された配列を導入する工程；
（ｄ）これらの細胞を、好適な成長培地において、該ポリペプチドの発現につながる条件下で、成長させる工程；並びに
（ｅ）成長培地から該ポリペプチドを回収する工程：を含み；
ここで、該ポリペプチドは、変更されたＦｃＲｎへの結合親和性及び／又は親アルブミン、参照アルブミン、それらの断片、又は該親アルブミン、参照アルブミン若しくは断片を含む融合ポリペプチド、又はそれらの融合体の半減期と比べ、変更された血漿半減期を有する、方法。
【請求項３５】
位置４９２に対応する位置での置換が、Ｇ、Ｄ、Ｆ、Ｈ、Ｍ又はＲ、好ましくはＧ又はＤへの置換である、請求項３４の方法。
【請求項３６】
位置４９２に対応する位置での置換が、Ｇに対するものである、請求項３５の方法。
【請求項３７】
位置４９２に対応する位置での置換が、Ｄに対するものである、請求項３５の方法。
【請求項３８】
位置５５０に対応する位置での置換が、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｅ又はＲ、好ましくはＫ、Ｌ又はＭ、最も好ましくはＫに対するものである、請求項３４〜３７のいずれかの方法。
【請求項３９】
位置５７３に対応する位置での置換が、Ｐ、Ｙ、Ｗ、Ｈ、Ｆ、Ｔ、Ｉ又はＶ、好ましくはＰ、Ｙ、又はＷ、最も好ましくはＰへの置換である、請求項３４〜３８のいずれかの方法。
【請求項４０】
位置５７４に対応する位置での置換が、Ｈ、Ｄ、Ｆ、Ｇ、Ｎ、Ｓ又はＹ、好ましくはＨ、Ｄ、Ｆ、又はＧ、最も好ましくはＨへの置換である、請求項３４〜３９のいずれかの方法。
【請求項４１】
位置５８０に対応する位置での置換が、Ｋ又はＲ、最も好ましくはＲへの置換である、請求項３４〜４０のいずれかの方法。
【請求項４２】
配列番号２において下記の位置に対応する位置に変更を含む、請求項３４〜４１のいずれか１項記載の方法：４９２Ｇ＋５７３Ｐ＋５７４Ｈ＋５８０Ｋ（例えば配列番号１１５）；４９２Ｇ＋５５０Ｋ＋５７３Ｐ＋５７４Ｈ（例えば配列番号２５７）；４９２Ｄ＋５５０Ｋ＋５７３Ｐ＋５７４Ｈ（例えば配列番号２５６）；４９２Ｇ＋５５０Ｋ＋５７３Ｐ（例えば配列番号２５４）；４９２Ｄ＋５５０Ｋ＋５７３Ｐ（例えば配列番号２５３）；５５０Ｍ＋５７３Ｐ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２５２）；５５０Ｌ＋５７３Ｐ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２４８）；５５０Ｌ＋５７３Ｐ＋５７４Ｈ（例えば配列番号２４６）；４９２Ｇ＋５７３Ｐ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２４２）；４９２Ｄ＋５７３Ｐ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２３４）；５７３Ｐ＋５７４Ｈ＋５８０Ｋ（例えば配列番号１３５）；５５０Ｋ＋５７３Ｐ＋５８０Ｋ（例えば配列番号１３３）；５５０Ｋ＋５７３Ｐ＋５７４Ｈ（例えば配列番号１３１）；又は、４９２Ｄ＋５７３Ｐ＋５７４Ｈ＋５８０Ｋ（配列番号１１４）。
【請求項４３】
前記参照アルブミンが、ＨＳＡ（配列番号２）又はそれらの断片、又はＨＡＳ若しくはそれらの断片を含む融合ポリペプチド、最も好ましくは配列番号２である、請求項３４〜４２のいずれか１項記載の方法。
【請求項４４】
前記ポリペプチドの配列番号２に対する配列同一性が、８０％より大きい、好ましくは９０％より大きい、より好ましくは９５％より大きい、より好ましくは９６％より大きい、更により好ましくは９７％より大きい、より好ましくは９８％より大きい、及び最も好ましくは９９％より大きい、請求項３４〜４３のいずれか１項記載の方法。
【請求項４５】
請求項１〜３３のいずれか１項記載の若しくは請求項３４〜４４のいずれか１項記載の方法により入手可能なポリペプチド、及び複合パートナーを含む、複合体。
【請求項４６】
前記複合パートナーが、治療的、予防的、診断的、造影的又は他の有益な部分である、請求項４５記載の複合体。
【請求項４７】
請求項１〜３３のいずれか１項記載の若しくは請求項３４〜４４のいずれか１項記載の方法により入手可能なポリペプチド、及び治療的、予防的、診断的、造影的又は他の有益な部分を含む、会合体。
【請求項４８】
請求項１〜３３のいずれか１項記載の若しくは請求項３４〜４４のいずれか１項記載の方法により入手可能なポリペプチド、請求項４５又は４６記載の複合体、又は、請求項４７記載の会合体を含む、ナノ粒子又は微粒子。
【請求項４９】
請求項１〜３３のいずれか１項記載の若しくは請求項３４〜４４のいずれか１項記載の方法により入手可能なポリペプチド、請求項４５又は４６記載の複合体、請求項４７記載の会合体、又は、請求項４８記載のナノ粒子若しくは微粒子を含有する組成物であって、ここでポリペプチド、融合ポリペプチド、複合体、会合体又はナノ粒子若しくは微粒子の、ＦｃＲｎへの結合親和性が、対応する親アルブミン、参照アルブミン、それらの断片、又は該親アルブミン、参照アルブミン若しくは断片を含む融合ポリペプチド、複合体、会合体又はナノ粒子若しくは微粒子、又はそれらの融合体を含有する組成物の、ＦｃＲｎへの結合親和性よりもより強力である、組成物。
【請求項５０】
前記ポリペプチド、融合ポリペプチド、複合体、会合体又はナノ粒子若しくは微粒子の、ＦｃＲｎへの結合親和性が、ＨＳＡのＦｃＲｎへの結合親和性よりもより強力である、請求項４９記載の組成物。
【請求項５１】
前記ポリペプチドの変異体、融合ポリペプチド、複合体、会合体又はナノ粒子若しくは微粒子の、ＦｃＲｎへの結合係数が、ＨＳＡのＦｃＲｎへのＫＤの０．９×未満、より好ましくはＨＳＡのＦｃＲｎへのＫＤの０．５×未満、より好ましくはＨＳＡのＦｃＲｎへのＫＤの０．１×未満、更により好ましくはＨＳＡのＦｃＲｎへのＫＤの０．０５×未満、更により好ましくはＨＳＡのＦｃＲｎへのＫＤの０．０２×未満、及び最も好ましくはＨＳＡのＦｃＲｎへのＫＤの０．０１×未満である、請求項４９又は５０記載の組成物。
【請求項５２】
請求項１〜３３のいずれか１項記載の若しくは請求項３４〜４４のいずれか１項記載の方法により入手可能なポリペプチド、請求項４５又は４６記載の複合体、請求項４７記載の会合体、又は請求項４８記載のナノ粒子若しくは微粒子を含有し、抗体結合ドメイン（ＡＢＤ）及び治療的、予防的、診断的、造影的又は他の有益な部分を含む化合物を更に含有する、請求項４９〜５１のいずれか１項記載の組成物。
【請求項５３】
医薬として許容し得る担体又は賦形剤を含有する、請求項４９〜５２のいずれか１項記載の組成物。
【請求項５４】
治療的、予防的、診断的、造影的又は他の有益な部分の、好ましくは血漿中の、ＦｃＲｎへの結合親和性又は半減期を変更するための、請求項１〜３３のいずれか１項記載の若しくは請求項３４〜４４のいずれか１項記載の方法により入手可能なポリペプチド、請求項４５又は４６記載の複合体、請求項４７記載の会合体、又は、請求項４８記載のナノ粒子若しくは微粒子、又は、請求項４９〜５３いずれか記載の組成物の使用。
【請求項５５】
ＦｃＲｎへの結合親和性が、ＨＳＡ（配列番号２）又は断片、それらの融合体、複合体、会合体、ナノ粒子若しくは微粒子を含む又はからなる参照体の、ＦｃＲｎへの結合親和性と比べ、増大される、請求項５４記載の使用。
【請求項５６】
ＦｃＲｎへの結合親和性が、ＨＳＡ（配列番号２）又は断片、それらの融合体、複合体、会合体、ナノ粒子若しくは微粒子を含む又はからなる参照体の、ＦｃＲｎへの結合親和性と比べ、減少される、請求項５４記載の使用。
【請求項５７】
分子の、好ましくは血漿中の、ＦｃＲｎへの結合親和性又は半減期を変更する方法であって、ここで：
（ａ）該分子は、請求項１〜３３のいずれか１項記載の若しくは請求項３４〜４４のいずれか１項記載の方法により入手可能なポリペプチドへ、又は請求項４５又は４６記載の複合体へ、該分子を融合するか又は複合するか；請求項１〜３３のいずれか１項記載の若しくは請求項３４〜４４記載の方法により入手可能なポリペプチドへ、又は請求項４５又は４６記載の複合体へ、該分子を会合するか；請求項４７記載の会合体中へ、請求項４８記載のナノ粒子若しくは微粒子中へ、又は請求項４９〜５３のいずれか１項記載の組成物中へ、該分子を取り込んでいる、ポリペプチドであり；
（ｂ）該分子は、請求項１〜３３のいずれか１項記載の若しくは請求項３４〜４４記載の方法により入手可能なポリペプチドへ、又は請求項４５又は４６記載の複合体へ、該分子を複合するか；請求項１〜３３のいずれか１項記載の若しくは請求項３４〜４４記載の方法により入手可能なポリペプチドへ、又は請求項４５又は４６記載の複合体へ、該分子を会合するか；請求項４７記載の会合体中へ、請求項４８記載のナノ粒子若しくは微粒子中へ、又は請求項４９〜５３記載の組成物中へ、該分子を取り込んでいる、ポリペプチドではない；方法。
【請求項５８】
前記分子が、治療的、予防的、診断的、造影的又は他の有益な部分である、請求項５７記載の方法。
【請求項５９】
前記ポリペプチド、融合ポリペプチド、複合体、会合体、ナノ粒子若しくは微粒子又は組成物が、本明細書記載のものから選択された１又は複数（数個）の部分を含む、請求項１〜３３又は４５〜５３のいずれか１項記載の若しくは請求項３４〜４４記載の方法により入手可能な、ポリペプチド、融合ポリペプチド、複合体、会合体、ナノ粒子若しくは微粒子、又はそれらの組成物。
【請求項６０】
請求項１〜３３のいずれかのポリペプチド又は融合ポリペプチドをコードしている核酸。
【請求項６１】
請求項６０記載の核酸を含むベクター。
【請求項６２】
請求項６０記載の核酸又は請求項６１記載のベクターを含む、宿主細胞。
【請求項６３】
前記宿主細胞が、真核細胞、好ましくは酵母（サッカロミセス・セレビシアエなど）又は哺乳動物細胞（ＣＨＯ若しくはＨＥＫなど）又は植物細胞（コメなど）である、請求項６２記載の宿主細胞。
【請求項６４】
請求項１〜３３又は４５〜５３のいずれか１項記載の若しくは請求項３４〜４４記載の方法により入手可能な、ポリペプチド、融合ポリペプチド、複合体、組成物、会合体、ナノ粒子若しくは微粒子、又はポリヌクレオチドを、対象へ投与することを含む、予防、治療又は診断の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
配列表に関する言及
本出願は、コンピュータで読み取り可能な形式の配列表を含み、これは引用により本明細書中に組み込まれている。
【０００２】
発明の分野
本発明は、アルブミン、それらの断片、又はアルブミン若しくはそれらの断片を含む融合ポリペプチドと比べ、ＦｃＲｎへの結合親和性における変化及び／又は半減期における変化を有する、アルブミンの変異体又はそれらの断片、又は変異アルブミン若しくはそれらの断片を含む融合ポリペプチドに関する。本発明は、ユーザー又はアプリケーションの要求及び要望に対する、アルブミンの結合親和性及び／又は半減期の調整を可能にする。
【背景技術】
【０００３】
関連技術の説明
アルブミンは、哺乳動物の血漿中に天然に認められるタンパク質であり、これは血漿中に最も豊富なタンパク質である。血液の望ましい浸透圧の維持、及びまた血流中の様々な物質の輸送において、重要な役割を有する。アルブミンは、ヒト、ブタ、マウス、ラット、ウサギ及びヤギを含む、多くの種から特徴付けられており、且つこれらは高度な配列及び構造の相同性を共有している。
【０００４】
アルブミンは、インビボにおいてその受容体である、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）「Ｂｒａｍｂｅｌｌ」に結合し、そして、この相互作用は、アルブミンの血漿半減期にとって重要であることがわかっている。ＦｃＲｎは、多くの細胞型及び組織型において発現される膜結合型タンパク質である。ＦｃＲｎは、細胞内分解からアルブミンを救済することはわかっている(Roopenian D. C.及びAkilesh, S.、Nat. Rev. Immunol, 7, 715-725 (2007))。ＦｃＲｎは、ヒトなどの哺乳動物における血清中の高レベルのＩｇＧ及びアルブミンの維持に寄与する二官能性分子である。
【０００５】
ＦｃＲｎ−免疫グロブリン（ＩｇＧ）相互作用は、先行技術において特徴付けられているが、ＦｃＲｎ−アルブミン相互作用は、十分には特徴付けられていない。主要なＦｃＲｎ結合部位は、ＤＩＩＩ（３８１−５８５）内に局在化されている(Andersenら、Clinical Biochemistry 43,367-372 (2010))。多くの重要なアミノ酸は、特にヒスチジンＨ４６４、Ｈ５１０及びＨ５３６並びにＬｙｓ５００の結合において重要であることが示されている(Andersenら、Nat. Commun. 3:610. DOI:10.1038/ncomms1607 (2010))。酸性ｐＨでＦｃＲｎへの強力な親和性を有し、加えて中性ｐＨで増大した結合を有するヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）変異体（Ｖ４１８Ｍ＋Ｔ４２０Ａ＋Ｅ５０５Ｇ＋Ｖ５４７Ａ）の結晶構造は、相互作用の境界面のより詳細な理解を可能にすることが報告されている。加えて、著者らは、アミノ酸置換を介してＦｃＲｎへの親和性を変更することができ、且つこれは、マウス及びサルにおける、最も注目すべきはＨＳＡ  Ｅ５０５Ｇ＋Ｖ５４７Ａに関する、増大した循環半減期に翻訳することができることを示している(Schmidtら、Cell Structure. 21, Issue 11, (2012) (doi:10.1016/j.str.2013.08.022))。
【０００６】
データは、ＩｇＧとアルブミンは、ＦｃＲｎ上の個別の部位へ、非協同的に結合することを指摘している(Andersenら、Eur. J. Immunol 36, 3044-3051 (2006)；Chaudhuryら、Biochemistry 45, 4983-4990 (2006))。
【０００７】
マウスＦｃＲｎは、マウス及びヒト由来ＩｇＧに結合するのに対し、ヒトＦｃＲｎは、より差別的であるようにみえることは、知られている(Oberら、Int. Immunol 13, 1551-1559 (2001))。Andersenらの文献(Journal of Biological Chemistry 285(7):4826-36 (2010))は、ヒト及びマウスＦｃＲｎの、マウス及びヒトの各アルブミンへの親和性（可能な組合せ全て）を説明している。いずれかの種由来のアルブミンのいずれかの受容体への結合は、生理的ｐＨでは認められない。酸性ｐＨでは、結合親和性の１００倍の差が認められた。全ての場合において、いずれかの種由来のアルブミン及びＩｇＧの両方の受容体への結合は、追加的であった。
【０００８】
ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）は、アミノ酸５８５個のポリペプチドとして、よく特徴付けられており、その配列は、Peters, T., Jr.の文献(1996)「アルブミンの全て：生化学、遺伝子及び医学適用(All about Albumin:Biochemistry, Genetics and Medical, Applications)」pp10, Academic Press社、オーランド(ISBN 0-12-5521 10-3)に認めることができる。これは、その受容体ＦｃＲｎへ、ｐＨ６．０では結合するが、ｐＨ７．４では結合しないという特徴的結合を有する。
【０００９】
ＨＳＡの血漿半減期は、およそ１９日であることがわかっている。置換Ｄ４９４Ｎを有する、より短い血漿半減期を有する天然の変異体が同定されている(Peach, R. J.及びBrennan, S. 0.、Biochim Biophys Acta.1097:49-54 (1991))。この置換は、この変異体においてＮ−グリコシル化部位を生じ、これは野生型アルブミンには存在しない。グリコシル化又はアミノ酸変化は、血漿半減期の変化に係わっているかどうは、わかっていない。
【００１０】
アルブミンは、長い血漿半減期を有し、この特性のために、アルブミンは、薬物送達における使用が示唆されている。アルブミンは、医薬として有益な化合物に複合されており(WO 2000/69902)、且つこの複合体は、アルブミンの長い血漿半減期を維持することがわかった。得られる複合体の血漿半減期は、概して有益な治療的化合物単独の血漿半減期よりもかなり長い。
【００１１】
更にアルブミンは、治療上有益なペプチドへ遺伝子融合されており(WO 2001/79271 A及びWO 2003/59934)、典型的結果は、この融合体は、治療上有益なペプチドの活性を有し、治療上有益なペプチド単独の血漿半減期よりもかなり長い血漿半減期を有する。
【００１２】
Otagiriら(Biol. Pharm. Bull. 32(4), 527-534 (2009)）は、７０種より多いアルブミン変異体を明らかにしており、これらのうち２５種は、ドメインＩＩＩで変異されていることが分かっている。カルボキシ末端で最後の１７５番目のアミノ酸を欠いている天然の変異体は、短縮された半減期を有することが示されている(Andersenら、Clinical Biochemistry 43, 367-372 (2010))。Iwaoら(2007)は、マウスモデルを用い、天然のヒトアルブミン変異体の半減期を研究し、Ｋ５４１Ｅ及びＫ５６０Ｅは半減期を短縮し、Ｅ５０１Ｋ及びＥ５７０Ｋは延長された半減期を有し、且つＫ５７３Ｅは半減期に対しほとんど効果がなかったことを発見した(Iwaoら、B.B.A. Proteins and Proteomics, 1774, 1582-1590 (2007))。
【００１３】
Gallianoら(Biochim. Biophys. Acta 1225, 27-32 (1993))は、天然の変異体Ｅ５０５Ｋを明らかにしている。Minchiottiら(1990)は、天然の変異体Ｋ５３６Ｅを明らかにしている。Minchiottiら(Biochim. Biophys. Acta 916, 411-418 (1987))は、天然の変異体Ｋ５７４Ｎを明らかにしている。Takahashiら(Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84, 4413-4417 (1987))は、天然の変異体Ｄ５５０Ｇを明らかにしている。Carlsonら(Proc. Nat. Acad. Sci. USA 89, 8225-8229 (1992))は、天然の変異体Ｄ５５０Ａを明らかにしている。
【００１４】
WO 2011/051489及びWO 2012/150319は、アルブミンのＦｃＲｎへの結合を調節する、アルブミンの多くの点変異を明らかにしている。WO 2010/092135は、アルブミンにおける複合に利用可能なチオールの数が増加する、アルブミン中の多くの点変異を明らかにしており、この開示は、アルブミンのＦｃＲｎへの結合に対するこの変異の作用についてはサイレントである。WO 2011/103076は、各々がＨＳＡのドメインＩＩＩに置換を含む、アルブミン変異体を明らかにしている。WO 2012/112188は、ＨＳＡのドメインＩＩＩに置換を含むアルブミン変異体を明らかにしている。
【００１５】
アルブミンは、多くのリガンドを結合する能力を有し、且つリガンドは、アルブミンと会合され始める（会合する）。この特性は、アルブミンへ非共有的に結合する能力を有する薬物の血漿半減期を延長するために利用されている。これはまた、アルブミン結合特性をほとんど有さないか又は全く有さない医薬として有益な化合物を、アルブミン結合特性を有する部分へ結合することにより達成することができ、Kratzの文献(Journal of Controlled Release 132, 171-183 (2008))の総説及びその中の参考文献を参照されたい。
【００１６】
アルブミンは、医薬として有益な化合物の調製物において使用され、ここでそのような調製物は、例えば、アルブミンのナノ粒子若しくは微粒子であることができるが、これらに限定されるものではない。これらの例において、医薬として有益な化合物又は化合物の混合物の送達は、その受容体へのアルブミンの親和性の変更から恩恵を受けることができ、ここで有益な化合物は、送達の手段のためにアルブミンと会合することが示されている。形成された会合体（例えば非限定的にLevemir（登録商標）、Kurtzhals Pら、Biochem. J. 312:725-731 (1995)）、複合体又は融合ポリペプチドの血漿半減期を何が決定するかは、明らかではないが、これはアルブミンと選択された医薬として有益な化合物／ポリペプチドの組合せの結果であるように見える。治療されることが意図された適応症の詳細に従い、特定の薬物を設計することができるように、会合、複合又は融合の成分によりもたらされるものより長い又はより短い血漿半減期が実現され得るので、所与のアルブミン複合体、会合体又はアルブミン融合ポリペプチドの血漿半減期を制御することができることは望ましいであろう。
【００１７】
アルブミンは、腫瘍において蓄積し且つ異化されることが知られており、これはまた、関節リウマチ罹患者の炎症を起こした関節において蓄積することも示されている。Kratzの文献(Journal of Controlled Release 132, 171-183 (2008))の総説及びその中の参考文献を参照されたい。ＦｃＲｎへの親和性の増大したＨＳＡ変異体は、医薬として有益な化合物の送達に関して有利であることが予測される。
【００１８】
Kenanovaらの文献(J. Nucl. Med.；50(補遺2): 1582 (2009))に記載されたように、より短い半減期又は制御された血清薬物動態を提供するために、ＦｃＲｎにほとんど結合しないか又は全く結合しないアルブミンの変異体を有することも望ましい。
【００１９】
Kenanovaらの文献(Protein Engineering, Design & Selection 23(10): 789-798 (2010)；WO 2010/118169)は、ＨＳＡのドメインＩＩＩの構造モデル（ｐＨ７〜８で溶解）とＦｃＲｎの構造モデル（ｐＨ６．４で溶解）を含む、ドッキングモデルを明らかにしている。Kenanovaらは、ドメインＩＩＩ内の位置４６４、５０５、５１０、５３１及び５３５は、ＦｃＲｎと相互作用する可能性があることを明らかにしている。位置４６４、５１０及び５３５のヒスチジンは、Chaudhuryら(2006, 前掲)により特に興味深いものとして同定され、且つKenanovaにより(2010, 前掲)、これらはマウスにおいて親和性を有意に低下し、半減期を短縮することが示された。しかしKenanovaらの研究は、ＨＳＡのドメインＩＩＩに限定されており、結果的にＨＳＡの未変性の無傷の立体配置は考慮していない。更に、同定された位置は、ＦｃＲｎ受容体への親和性の減少を生じる。
【００２０】
本発明は、変更されたＦｃＲｎ受容体への結合親和性を有する、更なる変異体を提供する。従って単独又は複数のアルブミン部分を使用し、融合ポリペプチド、複合体、会合体、ナノ粒子、及びアルブミン部分を含有する組成物のＦｃＲｎへの結合親和性及び／又は半減期を調整することができる。
【発明の概要】
【００２１】
発明の概要
本発明は、配列番号２の成熟ポリペプチドの位置４９２、５５０、５７３、５７４及び５８０又は他のアルブミン若しくはそれらの断片の同等の位置からなる群の２以上から選択される位置に対応する位置に変更を含む、アルブミン変異体に関する。位置４９２は、サブドメインＤＩＩＩａとサブドメインＤＩＩＩｂの間のコネクターループ内に位置する。位置５５０、５７３、５７４及び５８０は、サブドメインＤＩＩＩｂ中に位置する。サブドメインＩＩＩｂは、サブドメインＤＩＩＩａとサブドメインＤＩＩＩｂの間のコネクターループの近位に位置する。
【００２２】
本発明はまた、該変異体をコードしている単離されたポリヌクレオチド；該ポリヌクレオチドを含む、核酸構築体、ベクター、及び宿主細胞；並びに、該変異体を作製する方法にも関する。
【００２３】
本発明はまた、本発明の変異アルブミン又はそれらの断片、及び有益な治療的部分を含む、複合体又は会合体、或いは本発明の変異アルブミン又はそれらの断片及び融合パートナーポリペプチドを含む融合ポリペプチドにも関する。
【００２４】
本発明は更に、該変異アルブミン、それらの断片、変異アルブミン若しくはそれらの断片を含む融合ポリペプチド、又は本発明の変異アルブミン若しくはそれらの断片を含む複合体、又は本発明の変異アルブミン若しくはそれらの断片を含む会合体を含有する、組成物に関する。この組成物は、医薬組成物が好ましい。
【００２５】
本発明は更に、変異アルブミン、それらの断片、変異アルブミン若しくはそれらの断片を含む融合ポリペプチド、又は変異アルブミン若しくはそれらの断片を含む複合体、又は変異アルブミン若しくはそれらの断片を含む会合体を含有する、医薬組成物に関する。
【００２６】
本発明はまた、変異体、断片、融合ポリペプチド、複合体、会合体、ナノ粒子及び微粒子の使用にも関する。
【００２７】
本発明はまた、変異アルブミン、それらの断片、変異アルブミン若しくはそれらの断片を含む融合ポリペプチド、又は変異アルブミン若しくはそれらの断片を含む複合体、又は変異アルブミン若しくはそれらの断片を含む会合体を調製する方法にも関する。
【図面の簡単な説明】
【００２８】
図面の簡単な説明
【図１−１】図１：(i)完全長成熟ＨＳＡ(Hu_1_2_3)、(ii)ＨＳＡのドメインＩ及びドメインＩＩＩを含む、アルブミン変異体(Hu_1_3)、(iii)ＨＳＡのドメインＩＩ及びドメインＩＩＩを含む、アルブミン変異体(Hu_2_3)、(iv)完全長マカカ・ムラタアルブミン(Mac_mul)、(v)完全長ラッタス・ノルベジクスアルブミン(Rat)、並びに(vi)完全長ムス・ムスキュラスアルブミン(Mouse)の、アミノ酸配列の複数のアラインメント。位置５００、５５０及び５７３（完全長ＨＳＡに対して）は、矢印で示している。図１において、ドメインＩ、ＩＩ及びＩＩＩは、１、２及び３と称する（各々）。
【図１−２】図１−１に同じ。
【図２−１】図２：ヒト、ヒツジ、マウス、ウサギ及びヤギ由来の成熟アルブミン、並びにチンパンジー(”Chimp”)、アカゲザル、ハムスター、モルモット、ラット、ウシ、ウマ、ロバ、イヌ、ニワトリ、及びブタ由来の成熟アルブミンのアミノ酸配列の複数のアラインメント。ドメイン１、２及び３の開始及び末端アミノ酸(Dockalらにより定義(The Journal of Biological Chemistry, Vol. 274(41): 29303-29310 (1999)))は、成熟ヒトアルブミンに関して示している。
【図２−２】図２−１に同じ。
【図２−３】図２−１に同じ。
【図２−４】図２−１に同じ。
【図３】図３：それらの特性を基にした保存されたアミノ酸群。
【図４】図４：ｓｈＦｃＲｎ−ＨＳＡドッキングモデルの代表。（Ａ−Ｂ）該複合物の２つの配向を示している。アルブミンは、空間充填型略図により示されている。ＦｃＲｎは、リボン略図により示されている。ＨＳＡのコア結合境界面は、桃色で強調している（グレースケールにおいては、これは最も暗い（ほぼ黒色）領域；ＤＩ（ＣＢＩ）として認められる）のに対し、この境界面から遠くに配置された領域は、ＤＩＩ（オレンジ）として示され、ＤＩＩは、サブドメインＤＩＩＩａ（カラーでは、これはシアンである）及びＤＩＩＩｂ（カラーでは、これはブルーである）に分割される。
【発明を実施するための形態】
【００２９】
定義
変異体：用語「変異体 (variant)」は、１又は複数（数個）の位置での、１又は複数（数個）の変更（複数可）、すなわち置換、挿入、及び／又は欠失により、親アルブミンから誘導されたポリペプチドを意味する。置換は、異なるアミノ酸による位置を占拠しているアミノ酸の交換を意味し；欠失は、位置を占拠しているアミノ酸の除去を意味し；並びに、挿入は、位置を占拠しているアミノ酸に直ぐ隣の、１個以上の、１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０個の、好ましくは１〜３個のアミノ酸の追加を意味する。置換に関連して、「直ぐ隣の」とは、位置を占拠しているアミノ酸（「指名されたアミノ酸」）のＮ−側（「上流」）又はＣ−側（「下流」）であってよい。従って、「Ｘ」と指名／番号付けされたアミノ酸について、挿入は、位置「Ｘ＋１」（「下流」）又は位置「Ｘ−１」（「上流」）であってよい。
【００３０】
突然変異体：用語「突然変異体 (mutant)」は、変異体をコードしているポリヌクレオチドを意味する。
野生型アルブミン：用語「野生型」（ＷＴ）アルブミンは、動物又はヒトにおいて天然に認められるものと同じアミノ酸配列を有するアルブミンを意味する。
親アルブミン：用語「親」又は「親アルブミン」は、それへ変更が人の手により行われ、本発明のアルブミン変異体を生じるアルブミンを意味する。この親は、天然の（野生型の）ポリペプチド又はそれらの対立遺伝子であってよく、或いはそれらの変異体であってもよい。
【００３１】
アルブミン：アルブミンは、タンパク質であり、且つ哺乳動物の血漿中で最も豊富なタンパク質を構成し、且つ多くの哺乳動物由来のアルブミンが、生化学的方法及び／又は配列情報により特徴付けられている。数種のアルブミン、例えばヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）はまた、結晶学的に特徴付けられており、その構造が決定されている(HSA：He XM, Carter DC (1992年7月)、「ヒト血清アルブミンの原子構造及び化学(Atomic structure and chemistry of human serum albumin)」、Nature 358 (6383): 209-15；「ウマアルブミン(horse albumin)」：Ho, J.X.ら、(2001年)、「解像度0.27nmでのウマ血清アルブミンのX線及び一次構造(X-ray and primary structure of horse serum albumin (Equus caballus) at 0.27-nm resolution)」、Eur J Biochem. 215(1):205-12)。
【００３２】
用語「アルブミン」は、ＨＳＡ又はＨＳＡドメインと同じ及び／又は非常に類似した三次元（三次）構造を有するタンパク質を意味し、且つＨＳＡと又は関連ドメインと類似の特性を有する。類似の三次元構造は、例えば、本明細書に言及した種由来のアルブミンの構造である。アルブミンのいくつかの主な特性は、ｉ）血漿容積を調節するその能力（膠質(oncotic)活性）、ｉｉ）およそ１９日±５日の長い血漿半減期、ｉｉｉ）ＦｃＲｎへの結合、ｉｖ）リガンド結合、例えば、ビリルビン、脂肪酸、ヘミン及びチロキシンを含む、酸性親油性化合物などの内因性分子の結合（引用により本明細書中に組み込まれているKragh-Hansenらの文献(Biol. Pharm. Bull. 25, 695 (2002))の表1も参照のこと）、ｖ）例えば、ワルファリン、ジアゼパム、イブプロフェン及びパクリタキセルなどの薬物の、酸性又は電気陰性の特徴を持つ小型の有機化合物の結合(引用により本明細書中に組み込まれているKragh-Hansenらの文献(Biol. Pharm. Bull. 25, 695 (2002))の表１を参照のこと）。タンパク質又は断片をアルブミンとして特徴付けるためには、これらの特性の全てを満たす必要はない。例えば断片がある種のリガンド又は有機化合物の結合に係わるドメインを含まない場合、そのような断片の変異体は、これらの特性のいずれも有することは予想されないであろう。
【００３３】
アルブミンは一般に、およそ２０日以上の長い血漿半減期を有し、例えば、ＨＳＡは、１９日の血漿半減期を有する。ＨＳＡの長い血漿半減期は、その受容体ＦｃＲｎとの相互作用により媒介されることは知られているが、ＨＳＡの長い半減期の背後の正確な機序の理解又は知識は、本発明にとって本質的ではない。
【００３４】
アルブミンタンパク質の例として、より詳細には本発明のアルブミン変異体を作製するための出発点で親「バックボーン」として使用することができるアルブミンタンパク質として、ヒト血清アルブミン（例えば、ＡＡＡ９８７９７又はＰ０２７６８−１、配列番号２（成熟）、配列番号４（未成熟））、霊長類血清アルブミン（チンパンジー血清アルブミンなど（例えば、予想された配列ＸＰ＿５１７２３３．２、配列番号５）、ゴリラ血清アルブミン又はマカク血清アルブミン（例えば、ＮＰ＿００１１８２５７８、配列番号６）、齧歯類血清アルブミン（ハムスター血清アルブミン（例えば、Ａ６ＹＦ５６、配列番号７など）、モルモット血清アルブミン（例えば、Ｑ６ＷＤＮ９−１、配列番号８）、マウス血清アルブミン（例えば、ＡＡＨ４９９７１又はＰ０７７２４−１バージョン３、配列番号９）及びラット血清アルブミン（例えば、ＡＡＨ８５３５９又はＰ０２７７０−１バージョン２、配列番号１０）））、ウシ血清アルブミン（例えば、ウシ血清アルブミンＰ０２７６９−１、配列番号１１）、ウマ科血清アルブミン、例えばウマ血清アルブミン（例えば、Ｐ３５７４７−１、配列番号１２）又はロバ血清アルブミン（例えば、Ｑ５ＸＬＥ４−１、配列番号１３）、ウサギ血清アルブミン（例えば、Ｐ４９０６５−１バージョン２、配列番号１４）、ヤギ血清アルブミン（例えば、ＡＣＦ１０３９１、配列番号１５）、ヒツジ血清アルブミン（例えば、Ｐ１４６３９−１、配列番号１６）、イヌ血清アルブミン（例えば、Ｐ４９８２２−１、配列番号１７）、ニワトリ血清アルブミン（例えば、Ｐ１９１２１−１バージョン２、配列番号１８）及びブタ血清アルブミン（例えば、Ｐ０８８３５−１バージョン２、配列番号１９）、又はそのようなアルブミンと少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８若しくは少なくとも９９％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを挙げることができる。親又は参照アルブミンは、ＨＳＡ．Ｋ５７３Ｐ（配列番号３）、又はＨＳＡのＮ−末端とマカクアルブミンのＣ−末端（配列番号２０）、ＨＳＡのＮ−末端とマウスアルブミンのＣ−末端（配列番号２１）、ＨＳＡのＮ−末端とウサギアルブミンのＣ−末端（配列番号２２）、ＨＳＡのＮ−末端とヒツジアルブミンのＣ−末端（配列番号２３）などのキメラアルブミンなど、人工の変異体であってよい。
【００３５】
同じく本出願の範囲に含まれる、アルブミンの他の例は、オボアルブミン（例えば、Ｐ０１０１２．ｐｒｏ：ニワトリオボアルブミン；Ｏ７３８６０．ｐｒｏ：シチメンチョウオボアルブミン）を含む。
【００３６】
配列番号２に明らかにされたＨＳＡ又はそれらの天然の対立遺伝子は、好ましい本発明の親アルブミンである。ＨＳＡは、５８５個のアミノ酸残基からなるタンパク質であり、分子量６７ｋＤａを有する。その天然の形状において、これはグリコシル化されない。当業者は、ＨＳＡと本質的に同じ特性を有するが、配列番号２と比べ１又は複数（数個）のアミノ酸変化を有する天然の対立遺伝子が存在し得ることを理解し、且つまた本発明者らは、本発明の親アルブミンとしてのそのような天然の対立遺伝子の使用を企図するであろう。
【００３７】
本発明の親アルブミン、それらの断片、又はアルブミン若しくはそれらの断片を含む融合ポリペプチドのアルブミン部分は、好ましくは、配列番号２に示されたＨＳＡの配列に対し、少なくとも６０％、好ましくは少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、好ましくは少なくとも８６％、好ましくは少なくとも８７％、好ましくは少なくとも８８％、好ましくは少なくとも８９％、好ましくは少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９１％、好ましくは少なくとも９２％、好ましくは少なくとも９３％、好ましくは少なくとも９４％、好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９６％、より好ましくは少なくとも９７％、より好ましくは少なくとも９８％及び最も好ましくは少なくとも９９％の配列同一性を有する。親アルブミンは、アルブミンの主要な特性の少なくとも一つ、及びＨＳＡなどのアルブミンに類似した三次構造を維持することが、好ましい。配列同一性は、配列番号２の完全長に渡ってか、又はドメインＩＩＩからなる若しくは含む分子（例えば配列番号２７）、ドメインＩＩ及びドメインＩＩＩからなる若しくは含む分子（例えば配列番号２５）、ドメインＩ及びドメインＩＩＩからなる若しくは含む分子（例えば配列番号２４）、ドメインＩＩＩの２コピーからなる若しくは含む分子（例えば配列番号２６）、ドメインＩＩＩの３コピーからなる若しくは含む分子（例えば配列番号２８）、又はドメインＩ及びドメインＩＩＩの２コピーからなる若しくは含む分子（例えば配列番号２９）などの、配列番号２の１又は複数（数個）のドメインなどの断片からなる若しくは含む分子に渡ってであることができる。
【００３８】
該親は、好ましくは、配列番号４（ＨＳＡの未成熟配列）又は配列番号２（ＨＳＡの成熟配列）のアミノ酸配列を含む又はからなる。
別の実施態様において、該親は、配列番号２の成熟ポリペプチドの対立遺伝子変異体である。
【００３９】
親アルブミンは、（ｉ）配列番号１の成熟ポリペプチドコード配列又は（ｉｉ）（ｉ）の完全長相補鎖と、非常に低いストリンジェンシー条件、低ストリンジェンシー条件、中ストリンジェンシー条件、中−高ストリンジェンシー条件、高ストリンジェンシー条件、又は非常に高いストリンジェンシー条件の下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされ得る(J. Sambrook、E.F. Fritsch、及びT. Maniatis、1989年、「分子クローニング:実験マニュアル(Molecular Cloning, A Laboratory Manual)」、第2版、コールドスプリングハーバー、NY)。
【００４０】
配列番号１のポリヌクレオチド又はそれらの部分配列に加え、配列番号２のアミノ酸配列又はそれらの断片は、当該技術分野において周知の方法により、異なる属又は種の系統からの親をコードしているＤＮＡを同定し且つクローニングするための核酸プローブを設計するために使用することができる。特にそのようなプローブは、その中の対応する遺伝子を同定及び単離するために、標準サザンブロット手順に従う、関心対象の属又は種のゲノム又はｃＤＮＡとのハイブリダイゼーションに使用することができる。そのようなプローブは、全体の配列よりも、かなり短いことができるが、長さが少なくとも１４、例えば、少なくとも２５、少なくとも３５又は少なくとも７０ヌクレオチドでなければならない。好ましくは、核酸プローブは、長さが少なくとも１００ヌクレオチド、例えば、長さが少なくとも２００ヌクレオチド、少なくとも３００ヌクレオチド、少なくとも４００ヌクレオチド、少なくとも５００ヌクレオチド、少なくとも６００ヌクレオチド、少なくとも７００ヌクレオチド、少なくとも８００ヌクレオチド、又は少なくとも９００ヌクレオチドである。ＤＮＡプローブ及びＲＮＡプローブの両方を使用することができる。これらのプローブは典型的には、対応する遺伝子の検出のために標識される（例えば、32Ｐ、3Ｈ、35Ｓ、ビオチン、又はアビジンなどにより）。そのようなプローブは、本発明に包含される。
【００４１】
そのような他の生物から調製されるゲノムＤＮＡ又はｃＤＮＡライブラリーは、前述のプローブとハイブリダイズし且つ親をコードしているＤＮＡに関してスクリーニングすることができる。そのような他の生物由来のゲノムＤＮＡ又は他のＤＮＡは、アガロース若しくはポリアクリルアミドゲル電気泳動、又は他の分離技術により分離することができる。ライブラリー由来のＤＮＡ又は分離されたＤＮＡは、ニトロセルロース又は他の好適なキャリア物質上に転写され且つ固定される。配列番号１又はそれらの部分配列と相同であるクローン又はＤＮＡを同定するために、キャリア物質をサザンブロットにおいて使用する。
【００４２】
本発明の目的に関して、ハイブリダイゼーションとは、ポリヌクレオチドが、低いから非常に高いまでのストリンジェンシー条件下で、配列番号１に示されたポリヌクレオチド、その相補鎖、又はそれらの部分配列に対応する標識されたヌクレオチドプローブにハイブリダイズすることを示す。それにプローブがハイブリダイズする分子は、例えば、Ｘ線フィルム又は任意の当該技術分野において公知の他の検出手段を用い、検出することができる。
【００４３】
核酸プローブは、配列番号１の成熟ポリペプチドコード配列、すなわち、配列番号１のヌクレオチド１〜１７８５を含むまたはからなることができる。核酸プローブは、配列番号２のポリペプチド又はそれらの断片をコードしているポリヌクレオチドを含む又はからなることができる。
【００４４】
長さが少なくとも１００ヌクレオチドの長いプローブに関して、非常に低いから非常に高いストリンジェンシー条件は、下記のように定義される：非常に低いか低いストリンジェンシーについて２５％ホルムアミド、中から中−高ストリンジェンシーについて３５％ホルムアミド、又は高及び非常に高いストリンジェンシーについて５０％ホルムアミドのいずれかで、及び５×ＳＳＰＥ、０．３％ＳＤＳ、２００μｇ／ｍｌ剪断変性されたサケ精子ＤＮＡ中で、４２℃での、予備ハイブリダイゼーション及びハイブリダイゼーション、引き続きの最適には１２〜２４時間の標準サザンブロット手順。キャリア物質は、最終的には、４５℃（非常に低ストリンジェンシー）、５０℃（低ストリンジェンシー）、５５℃（中ストリンジェンシー）、６０℃（中−高ストリンジェンシー）、６５℃（高ストリンジェンシー）、又は７０℃（非常に高ストリンジェンシー）で、２×ＳＳＣ、０．２％ＳＤＳを用い、３回、各々、１５分間洗浄される。
【００４５】
長さが約１５ヌクレオチド〜約７０ヌクレオチドである短いプローブに関して、ストリンジェンシー条件は、下記のように定義される：０．９Ｍ  ＮａＣｌ、０．０９Ｍトリス−ＨＣｌ  ｐＨ７．６、６ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．５％ＮＰ−４０、１×デンハート溶液、１ｍＭピロリン酸ナトリウム、１ｍＭリン酸一ナトリウム、０．１ｍＭ  ＡＴＰ、及び０．２ｍｇ／ｍｌ酵母ＲＮＡ中で、Bolton及びMcCarthyの文献(Proc. Natl. Acad. Sci. USA 48: 1390(1962))に記載の計算を使用し、算出されたＴｍ以下、約５℃〜約１０℃での、予備ハイブリダイゼーション及びハイブリダイゼーション、引き続きの最適には１２〜２４時間の標準サザンブロット手順。キャリア物質は、最終的には、６×ＳＣＣ＋０．１％ＳＤＳを用い、１回、１５分間、並びに６×ＳＳＣを用い、算出されたＴｍ以下、５℃〜１０℃で、２回、各１５分間洗浄される。
【００４６】
親は、配列番号１の配列をコードしている成熟ポリペプチドに対する、少なくとも６０％、例えば、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の配列同一性を伴うポリヌクレオチドによりコードされることができ、これは、アルブミンとして機能することができるポリペプチドをコードしている。ある実施態様において、親は、配列番号１を含む又はからなるポリヌクレオチドによりコードされる。
【００４７】
アルブミン部分：本発明のアルブミン変異体若しくはそれらの断片を含む、融合ポリペプチド、複合体、会合体、ナノ粒子、又は組成物のアルブミン部分は、「アルブミン部分」又は「アルブミン成分」と称されることができる。本発明のポリペプチドは、アルブミン部分を含む又はからなることができる。
【００４８】
ＦｃＲｎ及びｓｈＦｃＲｎ：用語「ＦｃＲｎ」は、ヒト新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）を意味する。ｓｈＦｃＲｎは、ＦｃＲｎの可溶性組換え型である。ｈＦｃＲｎは、配列番号３０（主要組織適合性複合物クラスＩ−様Ｆｃ受容体（ＦＣＧＲＴ）の切断型重鎖）と配列番号３１（β−２−ミクログロブリン）のヘテロ二量体である。配列番号３０と３１は一緒に、ｈＦｃＲｎを形成する。
【００４９】
単離された変異体：用語「単離された変異体」は、天然には生じない形態又は環境中の変異体を意味する。単離された変異体の非限定的例としては、（１）任意の非天然の変異体；（２）それが天然に会合している１又は複数（数個）の若しくは全ての天然の構成成分から少なくとも部分的に取り除かれた任意の変異体；（３）それが由来するポリペプチドに対し、人工的に修飾された任意の変異体（例えば、それが天然に認められるものから誘導されたポリペプチド）；又は、（４）それが天然に会合される他の成分に対し変異体の量を増加すること（例えば、物質をコードしている遺伝子の多コピー；物質をコードしている遺伝子と天然に会合されるプロモーターよりもより強力なプロモーターの使用）により、修飾された任意の変異体が挙げられる。単離された変異体は、発酵ブロス試料中に存在することができる。
【００５０】
実質的に純粋な変異体：用語「実質的に純粋な変異体」は、それと自然に又は組換え的に会合される他のポリペプチド物質を最大で１０％、最大で８％、最大で６％、最大で５％、最大で４％、最大で３％、最大で２％、最大で１％、及び最大で０．５重量％含む、調製物を意味する。好ましくは、変異体は、調製物中に存在する総ポリペプチド物質の重量に対し、少なくとも純度９２％、例えば、少なくとも純度９４％、少なくとも純度９５％、少なくとも純度９６％、少なくとも純度９７％、少なくとも純度９８％、少なくとも純度９９％、少なくとも純度９９．５％、及び純度１００％である。純度は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ又はＧＰ−ＨＰＬＣにより決定することができる。本発明の変異体は、実質的に純粋な形状であることが好ましい。これは、例えば、周知の組換え方法により、及び精製方法により、変異体を調製することにより達成することができる。
【００５１】
成熟ポリペプチド：用語「成熟ポリペプチド」は、翻訳、及びＮ−末端プロセシング、Ｃ−末端切断、グリコシル化、リン酸化などの任意の翻訳後修飾の後の、その最終的形状のポリペプチドを意味する。成熟ポリペプチドは、例えば、本発明の変更及び／又は任意の翻訳後修飾を包含している、配列番号２のアミノ酸１〜５８５であることができる。
【００５２】
成熟ポリペプチドコード配列：用語「成熟ポリペプチドコード配列」は、成熟アルブミンポリペプチドをコードしているポリヌクレオチドを意味する。成熟ポリペプチドコード配列は、例えば、本発明の変異体をコードするために必要な変更を伴う、配列番号１のヌクレオチド１〜１７５８であることができる。
【００５３】
配列同一性：
２つのアミノ酸配列間の又は２つのヌクレオチド配列間の関連性は、パラメータ「配列同一性」により説明される。
本発明の目的に関して、２つのアミノ酸配列間の配列同一性は、ＥＭＢＯＳＳパッケージのＮｅｅｄｌｅプログラム(EMBOSS：The European Molecular Biology Open Software Suite, Riceら、Trends Genet. 16: 276-277 (2000))、好ましくはバージョン５．０．０以降に実装された、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ−Ｗｕｎｓｃｈアルゴリズム(Needleman及びWunsch、J. Mol. Biol. 48: 443-453 (1970))を用い、決定される。使用されるパラメータは、ギャップオープンペナルティ１０、ギャップイクステンションペナルティ０．５、及びＥＢＬＯＳＵＭ６２(BLOSUM62のEMBOSSバージョン)置換マトリクスである。Ｎｅｅｄｌｅ標識された「最長同一性」（−ｎｏｂｒｉｅｆオプションを使用し入手）の結果は、％同一性として使用され、且つ下記式のように算出される：
(同一残基×100)／(アラインメント長−アラインメント中のギャップ総数)。
【００５４】
本発明の目的に関して、２つのデオキシリボヌクレオチド配列間の配列同一性は、ＥＭＢＯＳＳパッケージのＮｅｅｄｌｅプログラム(EMBOSS：The European Molecular Biology Open Software Suite, Riceら(2000)、前掲)、好ましくはバージョン５．０．０以降に実装された、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ−Ｗｕｎｓｃｈアルゴリズム(Needleman及びWunsch(1970)、前掲)を用い、決定される。使用されるパラメータは、ギャップオープンペナルティ１０、ギャップイクステンションペナルティ０．５、及びＥＤＮＡＦＵＬＬ(NCBI NUC4.4のEMBOSSバージョン)置換マトリクスである。Ｎｅｅｄｌｅ標識された「最長同一性」（−ｎｏｂｒｉｅｆオプションを使用し入手）の結果は、％同一性として使用され、且つ下記式のように算出される：
(同一デオキシリボヌクレオチド×100)／(アラインメント長−アラインメント中のギャップ総数)。
【００５５】
断片：用語「断片」は、ＦｃＲｎに結合する能力を維持している、アルブミンのアミノ末端及び／若しくはカルボキシル末端並びに／又はアルブミンの内部領域から欠失された１又は複数（数個）のアミノ酸を有するポリペプチドを意味する。断片は、ＨＳＡから誘導された１つの非分断配列からなることができるか、又はこれはＨＳＡから誘導された２以上の配列を含むことができる。本発明の断片は、約２０のアミノ酸残基より多い、好ましくは３０アミノ酸残基より多い、より好ましくは４０アミノ酸残基より多い、より好ましくは５０アミノ酸残基より多い、より好ましくは７５アミノ酸残基より多い、より好ましくは１００アミノ酸残基より多い、より好ましくは２００アミノ酸残基より多い、より好ましくは３００アミノ酸残基より多い、更により好ましくは４００アミノ酸残基より多い、及び最も好ましくは５００アミノ酸残基より多いサイズを有する。断片は、アルブミンの１以上のドメイン、例えばＤＩ＋ＤＩＩ、ＤＩ＋ＤＩＩＩ、ＤＩＩ＋ＤＩＩＩ、ＤＩＩＩ＋ＤＩＩＩ、ＤＩ＋ＤＩＩＩ＋ＤＩＩＩ、ＤＩＩＩ＋ＤＩＩＩ＋ＤＩＩＩなど、又はそのようなドメインの断片又はドメインの組合せを含む又はからなることができる。
【００５６】
ドメインＩ、ＩＩ及びＩＩＩは、ＨＳＡ（配列番号２）に関して規定することができる。例えば、ＨＳＡドメインＩは、配列番号２のアミノ酸１〜１９４（±１〜１５アミノ酸）からなる又はを含むことができ、ＨＳＡドメインＩＩは、配列番号２のアミノ酸１９２（±１〜１５アミノ酸）〜３８７（±１〜１５アミノ酸）からなる又はを含むことができ、並びにドメインＩＩＩは、配列番号２のアミノ酸３８１（±１〜１５アミノ酸）〜５８５（±１〜１５アミノ酸）からなる又はを含むことができる。「±１〜１５アミノ酸」とは、残基番号が、開始されたアミノ酸位置のＣ−末端及び／又はＮ−末端に対し、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、又は１５アミノ酸だけ変動し得ることを意味する。ドメインＩ、ＩＩ及びＩＩＩの例は、Dockalらの文献(The Journal of Biological Chemistry, 274(41): 29303-29310 (1999))、及びKjeldsenらの文献(Protein Expression and Purification, 13: 163-169 (1998))に説明されており、且つ下記に一覧される。
【表１】
2019048821.tif 000002
【００５７】
当業者は、例えば、ＥＭＢＯＳＳパッケージのＮｅｅｄｌｅプログラム(EMBOSS：The European Molecular Biology Open Software Suite, Riceら、(2000), Trends Genet. 16: 276-277)、好ましくはバージョン３．０．０以降に実装された、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ−Ｗｕｎｓｃｈアルゴリズム(Needleman及びWunsch、J. Mol. Biol. 48: 443-453 (1970))を使用し、ＨＳＡとのアミノ酸配列アラインメントにより、非−ヒトアルブミンにおいてドメインＩ、ＩＩ及びＩＩＩを同定することができる。使用される任意のパラメータは、ギャップオープンペナルティ１０、ギャップイクステンションペナルティ０．５、及びＥＢＬＯＳＵＭ６２(BLOSUM62のEMBOSSバージョン)置換マトリクスである。他の好適なソフトウェアとしては、ＭＵＳＣＬＥ((Multiple sequence comparison by log-expectation, Robert C. Edgar, バージョン3.6, http://www.drive5.com/muscle；Edgar、Nucleic Acids Research 32(5), 1792-97 (2004)、及びEdgar、BMC Bioinformatics, 5(1):113 (2004))、これは使用説明書（バージョン３．６、２００５年９月）に記載されたデフォルトの設定で使用することができる。ＭＵＳＣＬＥの３．６以降のバージョンも、本発明の任意の態様で使用することができる）が挙げられる。好適なアラインメントの例は、図１及び２に提示している。
【００５８】
ドメインは、ＨＳＡ（配列番号２）のドメインＩ、ＩＩ又はＩＩＩに対し、少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９、９９．５％の同一性又は１００％同一性を有することが好ましい。
【００５９】
対立遺伝子変異体：用語「対立遺伝子変異体」は、同じ染色体座を占拠している遺伝子の２以上の改変型のいずれかを意味する。対立遺伝子変動は、変異を通じて天然に生じ、かつ集団内の多型をもたらす。遺伝子変異は、サイレント（コードされたポリペプチドは変化なし）であるか、又は改変されたアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードすることができる。ポリペプチドの対立遺伝子変異体は、遺伝子の対立遺伝子変異体によりコードされたポリペプチドである。
【００６０】
コード配列：用語「コード配列」は、その翻訳されたポリペプチド産物のアミノ酸配列を直接特定するポリヌクレオチドを意味する。コード配列の境界は一般に、オープンリーディングフレームにより決定され、これは通常、ＡＴＧ開始コドン又はＧＴＧ及びＴＴＧなどの改変開始コドンにより始まり、ＴＡＡ、ＴＡＧ、及びＴＧＡなどの終止コドンで終わる。コード配列は、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、合成、又は組換えポリヌクレオチドであってよい。
【００６１】
cDNA：用語「ｃＤＮＡ」は、真核細胞から得られた成熟しスプライシングされたｍＲＮＡ分子から逆転写により調製することができるＤＮＡ分子を意味する。ｃＤＮＡは、対応するゲノムＤＮＡには存在し得るイントロン配列を欠いている。最初の一次転写産物ＲＮＡは、成熟したスプライシングされたｍＲＮＡとして出現する前の、スプライシングを含む一連の工程を通じてプロセシングされているｍＲＮＡに対する前駆体である。
【００６２】
核酸構築体：用語「核酸構築体」は、天然の遺伝子から単離されたか、又はそうでなければ天然には存在しないか若しくは合成される方式で核酸のセグメントを含むように修飾されている、一本鎖又は二本鎖のいずれかの、核酸分子を意味する。用語核酸構築体は、その核酸構築体が、本発明のコード配列の発現に必要な制御配列を含む場合、用語「発現カセット」と同義である。
【００６３】
制御配列：用語「制御配列」は、本発明の変異体をコードしているポリヌクレオチドの発現に必要な全ての核酸配列を意味する。各制御配列は、変異体をコードしているポリペプチドに対し未変性（すなわち同じ遺伝子由来）又は外来性（すなわち異なる遺伝子由来）であるか、又は互いに未変性若しくは外来性であることができる。そのような制御配列は、リーダー、ポリアデニル化配列、プロペプチド配列、プロモーター、シグナルペプチド配列、及び転写ターミネーターを含むが、これらに限定されるものではない。制御配列は、最低でも、プロモーター、並びに転写及び翻訳終結シグナルを含む。制御配列は、変異体をコードしているポリヌクレオチドのコード領域と制御配列の連結を促進する特異的制限部位を導入する目的で、リンカーを備えることができる。
【００６４】
機能的に連結される：用語「機能的に連結される」は、制御配列がコード配列の発現を指示するように、その中の制御配列が、ポリヌクレオチドのコード配列に対し適切な位置に配置されている立体配置を意味する。
【００６５】
発現：用語「発現」は、非限定的に、転写、転写後修飾、翻訳、翻訳後修飾、及び分泌を含む、変異体の生成に関与した任意の工程を含む。
発現ベクター：用語「発現ベクター」は、変異体をコードしているポリヌクレオチドを含み、且つその発現を提供する制御配列に機能的に連結されている、線状又は環状ＤＮＡ分子を意味する。
【００６６】
宿主細胞：用語「宿主細胞」は、本発明のポリヌクレオチドを含む核酸構築体又は発現ベクターにより、形質転換、トランスフェクション、形質導入などを受けやすい、任意の細胞型を意味する。用語「宿主細胞」は、複製時に生じる変異のために、親細胞と同一でない親細胞の後代を包含している。
【００６７】
血漿半減期：血漿半減期は、好適な個体においてインビボで決定されることが理想である。しかし、これには時間と経費がかかり、且つ動物若しくはヒトにおける実験の実施に関連した倫理的懸念は不可避であるので、血漿半減期が延長されるか又は短縮されるかを決定するためには、インビトロアッセイを使用することが望ましい。アルブミンのその受容体ＦｃＲｎへの結合は、血漿半減期にとって重要であり、且つ受容体結合と血漿半減期の間には、アルブミンのその受容体へのより高い親和性は、より長い血漿半減期に繋がるという相関があることは知られている。従って本発明に関して、アルブミンのＦｃＲｎへのより高い親和性は、増大した血漿半減期の指標であると考えられ、且つアルブミンのその受容体へのより低い親和性は、減少した血漿半減期の指標であると考えられる。
【００６８】
本出願及び請求項において、アルブミンのその受容体ＦｃＲｎへの結合は、用語親和性を用い、「より強い」又は「より弱い」という表現で説明される。従ってＨＳＡよりもより高いＦｃＲｎへの親和性を有する分子は、ＨＳＡよりもＦｃＲｎへより強力に結合し、且つＨＳＡよりもより低いＦｃＲｎへの親和性を有する分子は、ＨＳＡよりもＦｃＲｎへより弱く結合すると考えられることは、理解されるべきである。
【００６９】
用語「より長い血漿半減期」又は「より短い血漿半減期」及び同様の表現は、対応する親又は参照体又は対応するアルブミン分子との関連であることが理解される。従って本発明の変異アルブミンに関してより長い血漿半減期とは、変異体が、本明細書に記載の変更、例えば、ＨＳＡ（配列番号２）の４９２、５５０、５７３、５７４及び５８０に対応する２以上の位置での変更（複数可）以外は同じ配列を有する対応するアルブミンよりもより長い血漿半減期を有することを意味する。
【００７０】
参照体：参照体は、それに対しアルブミン変異体、融合体、複合体、組成物、会合体又はナノ粒子が比較される、アルブミン、融合体、複合体、組成物、会合体又はナノ粒子である。参照体は、完全長アルブミン（ＨＳＡ又はそれらの天然の対立遺伝子など）又はそれらの断片を含む又はからなってよい。参照体はまた、それに対しアルブミン変異体、融合体、複合体、組成物、会合体又はナノ粒子が比較される、「対応する」アルブミン、融合体、複合体、組成物、会合体又はナノ粒子として言及されてもよい。参照体は、ＨＳＡ（配列番号２）又はそれらの断片、融合体、複合体、会合体、ナノ粒子若しくは微粒子を含む又はからなってよい。好ましくは、参照体は、アルブミン部分以外は、本発明の（「研究される」）ポリペプチド、融合ポリペプチド、複合体、組成物、会合体、ナノ粒子若しくは微粒子と同一である。好ましくは、参照体のアルブミン部分は、アルブミン（例えば、ＨＳＡ、配列番号２）又はそれらの断片を含む又はからなる。参照体のアルブミン部分のアミノ酸配列は、本発明の（「研究される」）ポリペプチド、融合ポリペプチド、複合体、組成物、会合体、ナノ粒子若しくは微粒子のアルブミン部分のアミノ配列よりも、より長いか、より短いか、又は好ましくはこれと同じ長さ（±１〜１５アミノ酸）であってよい。
【００７１】
同等アミノ酸位置：本明細書を通じて、アミノ酸位置は、完全長成熟ヒト血清アルブミン（すなわち、リーダー配列を伴わない、配列番号２）に関して規定される。しかし、当業者は、本発明はまた、非ヒトアルブミン（例えば、本明細書に開示されたもの）及び／又はヒト若しくは非ヒトアルブミンの断片の変異体にも関することを理解する。同等位置は、対のあるアラインメント（例えばＣｌｕｓｔａｌＷ）又はマルチアラインメント（例えばＭＵＳＣＬＥ）を用い、アミノ酸配列を比較することにより、ヒト血清アルブミンの断片において、動物アルブミンにおいて及びそれらの断片において、融合体及び他の誘導体又は変異体において同定することができる。例えば、図１は、完全長ヒト血清アルブミンにおいて５００、５５０及び５７３と同等の位置は、ヒト血清アルブミンの断片において及び他の種のアルブミンにおいて容易に同定されることを示している。位置５００、５５０及び５７３は、矢印で示されている。更なる詳細は、下記表１に提供する。
【００７２】
表１：ＨＳＡ、動物アルブミン及びアルブミン断片における同等位置の同定の例
【表２】
2019048821.tif 000003
【００７３】
図１は、ＣｌｕｓｔａｌＷ１．８１フォーマットにおける出力を含む、デフォルトパラメータを使用し、ＭＵＳＣＬＥにより作製した。生の出力データは、出力フォーマット：ＲＴＦ＿ｎｅｗ；フォントサイズ：１０；コンセンサスライン：コンセンサスラインなし；配列のフラクション（影付けと一致しなければならない）：０．５；入力配列フォーマット：ＡＬＮを用い、ＢｏｘＳｈａｄｅ３．２１(http://www.ch.embnet.org/software/BOX form.html)を使用し、影付けした。従って、本明細書を通じて、ヒト血清アルブミンにおいて規定されたアミノ酸位置はまた、ヒト血清アルブミンの断片、誘導体又は変異体及び融合体、他の種由来の動物並びにそれらの断片及び融合体における同等位置にも適用される。そのような同等位置は、（ｉ）その未変性のタンパク質において異なる残基番号、及び／又は（ｉｉ）その未変性のタンパク質において異なる未変性のアミノ酸を有することができる。
【００７４】
同様に、図２は、同等位置は、配列番号２（ＨＳＡ）に対する参照体により、アルブミンの断片（例えば、ドメイン）において同定することができることを示している。
【００７５】
変異体の指定のための慣習
本発明の目的に関して、配列番号２に明らかにされた成熟ポリペプチドは、別のアルブミンにおける対応するアミノ酸残基を決定するために使用される。別のアルブミンのアミノ酸配列は、配列番号２に明らかにされた成熟ポリペプチドと並置され、且つこのアラインメントを基に、ＥＭＢＯＳＳパッケージのＮｅｅｄｌｅプログラム(EMBOSS：The European Molecular Biology Open Software Suite, Riceら、2000, Trends Genet. 16: 276-277)、好ましくはバージョン５．０．０以降に実装された、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ−Ｗｕｎｓｃｈアルゴリズム(Needleman及びWunsch、J. Mol. Biol. 48: 443-453 (1970))を使用し、配列番号２に明らかにされた成熟ポリペプチドにおける任意のアミノ酸残基に対応するアミノ酸位置番号が決定される。使用されるパラメータは、ギャップオープンペナルティ１０、ギャップイクステンションペナルティ０．５、及びＥＢＬＯＳＵＭ６２(BLOSUM62のEMBOSSバージョン)置換マトリクスである。
【００７６】
別のアルブミンにおける対応するアミノ酸残基の同定は、非限定的に、ＭＵＳＣＬＥ(Multiple sequence comparison by log-expectation；バージョン3.5以降；Edgar、Nucleic Acids Research 32(5), 1792-1797 (2004))、ＭＡＦＦＴ(バージョン6.857以降；Katoh及びKuma、Nucleic Acids Research 30: 3059-3066 (2002)；Katohら、Nucleic Acids Research 33: 511-518 (2005)；Katoh及びToh、Bioinformatics 23: 372-374 (2007)；Katohら、Methods in Molecular Biology, 537:_39-64 (2009)；Katoh及びToh、Bioinformatics 26:_1899-1900 (2010))、並びにＣｌｕｓｔａｌＷを利用するＥＭＢＯＳＳ  ＥＭＭＡ(1.83以降；Thompsonら、Nucleic Acids Research 22: 4673-4680 (1994))を含む、数種のコンピュータプログラムを使用し、それらの各デフォルトのパラメータを用い、多数のポリペプチド配列のアラインメントにより決定又は確認することができる。
【００７７】
他のポリペプチド（又はタンパク質）が、配列番号２の成熟ポリペプチドから分岐される場合、従来の配列ベースの比較はそれらの関係を検出するのに失敗し(Lindahl及びElofsson、J. Mol. Biol. 295: 613-615 (2000))、他の対のある配列比較アルゴリズムを使用することができる。配列ベースの検索におけるより大きい感度は、データベースを検索するために、ポリペプチドファミリーの確率的表現（プロファイル）を利用する検索プログラムを使用し達成することができる。例えば、ＰＳＩ−ＢＬＡＳＴプログラムは、反復データベース検索法によりプロファイルを作成し、且つ遠隔ホモログを検出することが可能である(Atschulら、Nucleic Acids Res. 25: 3389-3402 (1997))。更により大きい感度は、ポリペプチドに関するファミリー又はスーパーファミリーが、タンパク質構造データベースにおいて１又は複数の代表を有する場合に、達成され得る。ＧｅｎＴＨＲＥＡＤＥＲなどのプログラム(Jones、J. Mol. Biol. 287: 797-815 (1999)；McGuffin及びJones、Bioinformatics 19: 874-881 (2003))は、クエリー配列に関する構造折り畳みを予測する、ニュートラルネットワークへの入力として、様々な給源（ＰＳＩ−ＢＬＡＳＴ、二次構造予測、構造的アラインメントプロファイル、及び溶媒和ポテンシャル）からの情報を利用する。同様に、Goughらの方法(J. Mol. Biol. 313: 903-919 (2000))を使用し、未知の構造の配列をＳＣＯＰデータベースに存在するスーパーファミリーモデルと、並置することができる。次にこれらのアラインメントを使用し、そのポリペプチドの相同モデルを作成することができ、且つそのようなモデルは、その目的のために開発された様々なツールを用い、精度に関して評価することができる。
【００７８】
既知の構造のタンパク質に関して、いくつかのツール及びリソースが、構造アラインメントを読み出し且つ作成するために、利用可能である。例えばタンパク質のＳＣＯＰスーパーファミリーは、構造的に並置されており、且つこれらのアラインメントは、アクセス及びダウンロードが可能である。２種以上のタンパク質構造は、距離アラインメントマトリクス(Holm及びSander、Proteins 33: 88-96 (1998))又は組合せ拡張法(Shindyalov及びBourne、Protein Engineering 11: 739-747 (1998))などの、様々なアルゴリズムを用いて、並置することができ、且つこれらのアルゴリズムの実行は追加的に、可能な構造的ホモログを発見するために、関心対象の構造を持つ構造データベースを紹介するよう利用することができる(例えば、Holm及びPark、Bioinformatics 16: 566-567 (2000))。
【００７９】
本発明のアルブミン変異体の説明において、以下に説明する命名法が、参照を容易にするために適用される。容認されたＩＵＰＡＣ一文字又は三文字アミノ酸略語が利用される。用語「点変異」及び／又は「変更」は、欠失、挿入及び置換を含む。
【００８０】
置換：アミノ酸置換に関して、以下の命名法が使用される：当初のアミノ酸、位置、置換されたアミノ酸。従って位置２２６のトレオニンのアラニンによる置換は、「Ｔｈｒ２２６Ａｌａ」又は「Ｔ２２６Ａ」と指定される。複数の変異（又は変更）は、加算記号（”＋”）により分離され、例えば、「Ｇｌｙ２０５Ａｒｇ＋Ｓｅｒ４１１Ｐｈｅ」又は「Ｇ２０５Ｒ＋Ｓ４１１Ｆ」は、位置２０５及び４１１での、各々、グリシン（Ｇ）のアルギニン（Ｒ）による、及びセリン（Ｓ）のフェニルアラニン（Ｆ）による置換を表す。図面は、（”／”）、例えば、「Ｅ４９２Ｔ／Ｎ５０３Ｄ」も使用し、これは（”＋”）と互換的にみなされるべきである。
【００８１】
欠失：アミノ酸欠失に関して、以下の命名法が使用される：当初のアミノ酸、位置＊。従って、位置１９５でのグリシンの欠失は、「Ｇｌｙ１９５＊」又は「Ｇ１９５＊」と指定される。複数の欠失は、加算記号（”＋”）により分離され、例えば、「Ｇｌｙ１９５＊＋Ｓｅｒ４１１＊」又は「Ｇ１９５＊＋Ｓ４１１＊」である。
【００８２】
挿入：先に明らかにしたように、挿入は、位置を占拠するアミノ酸（「言及された（又は当初の）アミノ酸」、「Ｘ」）のＮ−側（「上流」、「Ｘ−１」）又はＣ−側（「下流」、「Ｘ＋１」）であることができる。
当初のアミノ酸（「Ｘ」）のＣ−側（「下流」、「Ｘ＋１」）へのアミノ酸挿入に関して、以下の命名法が使用される：当初のアミノ酸、位置、当初のアミノ酸、挿入されたアミノ酸。従って、位置１９５のグリシンの後のリジンの挿入は、「Ｇｌｙ１９５ＧｌｙＬｙｓ」又は「Ｇ１９５ＧＫ」と指定される。複数のアミノ酸の挿入は、［当初のアミノ酸、位置、当初のアミノ酸、挿入されたアミノ酸＃１、挿入されたアミノ酸＃２；など］として指定される。例えば、位置１９５のグリシンの後のリジン及びアラニンの挿入は、「Ｇｌｙ１９５ＧｌｙＬｙｓＡｌａ」又は「Ｇ１９５ＧＫＡ」として指定される。
【００８３】
そのような場合、挿入されたアミノ酸残基（複数可）は、挿入されたアミノ酸残基（複数可）に先行するアミノ酸残基の位置番号により低い側の文字を加えて番号付けされる。前記例の場合、従ってこの配列は、下記である：
【表３】
2019048821.tif 000004
【００８４】
当初のアミノ酸（「Ｘ」）のＮ−側（「上流」、「Ｘ−１」）へのアミノ酸挿入に関して、以下の命名法が使用される：当初のアミノ酸、位置、挿入されたアミノ酸、当初のアミノ酸。従って、位置１９５のグリシン（Ｇ）の前のリジン（Ｋ）の挿入は、「Ｇｌｙ１９５ＬｙｓＧｌｙ」又は「Ｇ１９５ＫＧ」と指定される。複数のアミノ酸の挿入は、［当初のアミノ酸、位置、挿入されたアミノ酸＃１、挿入されたアミノ酸＃２；など、当初のアミノ酸］として指定される。例えば、位置１９５のグリシンの前のリジン（Ｋ）及びアラニン（Ａ）の挿入は、「Ｇｌｙ１９５ＬｙｓＡｌａＧｌｙ」又は「Ｇ１９５ＫＡＧ」として指定される。そのような場合、挿入されたアミノ酸残基（複数可）は、挿入されたアミノ酸残基（複数可）に続くアミノ酸残基の位置番号にダッシュ付きのより低い側の文字を加えて番号付けされる。前記例の場合、従ってこの配列は、下記である：
【表４】
2019048821.tif 000005
【００８５】
複数の変更：複数の変更を含む変異体は、加算記号（”＋”）により分離され、例えば、「Ａｒｇ１７０Ｔｙｒ＋Ｇｌｙ１９５Ｇｌｕ」又は「Ｒ１７０Ｙ＋Ｇ１９５Ｅ」は、位置１７０及び１９５での、アルギニン及びグリシンの、各々チロシン及びグルタミン酸による置換を表している。
【００８６】
異なる変更：ある位置に異なる変更が導入され得る場合、異なる変更はコンマにより分離され、例えば、「Ａｒｇ１７０Ｔｙｒ，Ｇｌｕ」は、位置１７０のアルギニンの、チロシン又はグルタミン酸による置換を表している。従って、「Ｔｙｒ１６７Ｇｌｙ，Ａｌａ＋Ａｒｇ１７０Ｇｌｙ，Ａｌａ」は、以下の変異体を指定している：
「Ｔｙｒ１６７Ｇｌｙ＋Ａｒｇ１７０Ｇｌｙ」、「Ｔｙｒ１６７Ｇｌｙ＋Ａｒｇ１７０Ａｌａ」、「Ｔｙｒ１６７Ａｌａ＋Ａｒｇ１７０Ｇｌｙ」、及び「Ｔｙｒ１６７Ａｌａ＋Ａｒｇ１７０Ａｌａ」。
【００８７】
発明の詳細な説明
本発明は、配列番号２の成熟ポリペプチドの位置４９２、５５０、５７３、５７４及び５８０からなる群から選択される２以上の位置に、又は他のアルブミン若しくはそれらの断片の同等位置に、変更を含む、アルブミン変異体に関する。
【００８８】
変異体
本発明の第一の態様は、配列番号２の成熟ポリペプチドの位置４９２、５５０、５７３、５７４及び５８０からなる群から選択される位置に対応する２以上の位置において変更を含む、親アルブミンの、変異アルブミン又はそれらの断片、又は変異アルブミン若しくはそれらの断片を含む融合ポリペプチドであるポリペプチドを提供する。好ましくは、該２以上の変更は、配列番号２の下記の位置に対応する位置に変更を含み：
（ａ）４９２及び５８０；及び／又は
（ｂ）４９２及び５７４；及び／又は
（ｃ）４９２及び５５０；及び／又は
（ｄ）５５０及び５７３；及び／又は
（ｅ）５５０及び５７４；及び／又は
（ｆ）５５０及び５８０；及び／又は
【００８９】
並びに／或いは
（ｇ）該２以上の変更は、下記を含み：
・配列番号２の位置４９２に対応する位置に、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｆ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、Ｙ、好ましくはＤからなる群からのアミノ酸を生じる変更、並びに、配列番号２の位置５７３に対応する位置に、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、Ｙ、好ましくはＹ、Ｗ若しくはＨからなる群からのアミノ酸を生じる変更、或いは
・配列番号２の位置４９２に対応する位置にＧを生じる変更、並びに、位置５７３に対応する位置にＡ若しくはＰを生じる変更、並びに、５５０、５７４及び５８０からなる群から選択される位置に追加の変更；並びに／又は
（ｈ）該２以上の変更は、下記を含み：
・配列番号２の位置５７３に対応する位置に、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、Ｙ、好ましくはＹ、Ｗ若しくはＨからなる群からのアミノ酸を生じる変更、並びに、配列番号２の位置５７４に対応する位置に、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、Ｙ、Ｈ、Ｄ、Ｆ、Ｇ、Ｎ、Ｓ若しくはＹ、より好ましくはＨ、Ｄ、Ｆ若しくはＧ、最も好ましくはＨからなる群からのアミノ酸を生じる変更、或いは
・配列番号２の位置５７３に対応する位置に、Ｐを生じる変更、並びに、配列番号２の位置５７４に対応する位置に、Ｎを生じる変更、並びに、４９２、５５０、及び５８０からなる群から選択される位置に追加の変更；並びに／又は
【００９０】
（ｉ）該２以上の変更は、下記を含み：
・配列番号２の位置５７３に対応する位置に、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、Ｙ、好ましくはＹ、Ｗ若しくはＨからなる群からのアミノ酸を生じる変更、並びに、配列番号２の位置５８０に対応する位置に、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、Ｙからなる群からのアミノ酸を生じる変更、或いは
・配列番号２の位置５７３に対応する位置に、Ｐを生じる変更、並びに、配列番号２の位置５８０に対応する位置に、Ｋを生じる変更、並びに、４９２、５５０、及び５７４からなる群から選択される位置に追加の変更；並びに／又は
（ｊ）該２以上の変更は、下記を含む：
・配列番号２の位置５７４に対応する位置に、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、Ｙ、Ｈ、Ｄ、Ｆ、Ｇ、Ｎ、Ｓ若しくはＹ、より好ましくはＨからなる群からのアミノ酸を生じる変更、並びに、配列番号２の位置５８０に対応する位置に、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、Ｙからなる群からのアミノ酸を生じる変更、或いは
・配列番号２の位置５７４に対応する位置に、Ｎを生じる変更、並びに、配列番号２の位置５８０に対応する位置に、Ｋを生じる変更、並びに、４９２、５５０、及び５７３からなる群から選択される位置に追加の変更。
【００９１】
このポリペプチドは、段落（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）、（ｉ）及び（ｊ）に説明された３以上の、４以上の、又は５以上の変更を含むことができる。
好ましい変更は、置換である。
【００９２】
親アルブミン及び／又は変異アルブミンは、下記を含む又はからなることが好ましい：
（ａ）配列番号２の成熟ポリペプチドに対し少なくとも６０％の配列同一性を有するポリペプチド；
（ｂ）（ｉ）配列番号１の成熟ポリペプチドコード配列、又は（ｉｉ）（ｉ）の完全長補体と、低ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされたポリペプチド；
（ｃ）配列番号１の成熟ポリペプチドコード配列と少なくとも６０％の同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされたポリペプチド；及び／又は
（ｄ）配列番号２の成熟ポリペプチドの断片。
【００９３】
アルブミンの変異体又はそれらの断片、又はアルブミン若しくはそれらの断片を含む融合ポリペプチドは、配列番号２の成熟ポリペプチドの位置４９２、５５０、５７３、５７４及び５８０からなる群から選択される位置、又は他のアルブミン若しくは変異体若しくはそれらの断片の同等の位置の２以上に、置換、欠失又は挿入などの変更を含む。終止コドンは、本明細書記載の変更に加えて導入されることができ、導入される場合は位置５７４又は更に下流においてである（例えば配列番号２において、これは位置５７４から５８５に導入される）。
【００９４】
本発明の変異アルブミン、それらの断片、又は変異アルブミン若しくはそれらの断片を含む融合ポリペプチドのアルブミン部分は、一般に、配列番号２に示されたＨＳＡの配列に対し、少なくとも６０％、好ましくは少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９６％、より好ましくは少なくとも９７％、より好ましくは少なくとも９８％及び最も好ましくは少なくとも９９％の配列同一性を有する。変異体は、配列番号２に対し１００％未満の同一性を有する。
【００９５】
本発明の変異アルブミン、それらの断片、又は変異アルブミン若しくはそれらの断片を含む融合ポリペプチドのアルブミン部分は、一般に、親アルブミンの配列に対し、少なくとも６０％、好ましくは少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９６％、より好ましくは少なくとも９７％、より好ましくは少なくとも９８％及び最も好ましくは少なくとも９９％の配列同一性を有する。変異体は、親アルブミンの配列に対し１００％未満の同一性を有する。
【００９６】
一態様において、本発明の変異体中の変更の数は、配列番号２に対し又は親アルブミンの配列に対し、１〜２０、例えば、１〜１０及び１〜５、例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０の変更である。
配列番号２の位置４９２（又は他のアルブミン若しくは変異体若しくはそれらの断片の同等の位置）において、変更は、未変性のアミノ酸から、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、Ｙへの、より好ましくはＧ、Ｄ、Ｆ、Ｈ、Ｍ若しくはＲへの、更により好ましくはＧ、若しくはＤへの、並びに最も好ましくはＧへの置換であることが好ましい。配列番号２において、位置４９２の未変性のアミノ酸はＥであり、従ってＥへの置換は好ましくない。
【００９７】
配列番号２の位置５５０（又は他のアルブミン若しくは変異体若しくはそれらの断片の同等の位置）において、変更は、未変性のアミノ酸から、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、Ｙへ、より好ましくはＫ、Ｌ、Ｍ、Ｅ若しくはＲへ、更により好ましくはＫ、Ｌ若しくはＭへ、及び最も好ましくはＫへの置換であることが好ましい。配列番号２において、位置５５０の未変性のアミノ酸はＤであり、従ってＤへの置換は好ましくない。
【００９８】
配列番号２の位置５７３（又は他のアルブミン若しくは変異体若しくはそれらの断片の同等の位置）において、変更は、未変性のアミノ酸から、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、Ｙへ、より好ましくはＰ、Ｙ、Ｗ、Ｈ、Ｆ、Ｔ、Ｉ若しくはＶへ、更により好ましくはＰ、Ｙ若しくはＷへ、及び最も好ましくはＰへの置換であることが好ましい。配列番号２において、位置５７３の未変性のアミノ酸はＫであり、従ってＫへの置換は好ましくない。
【００９９】
配列番号２の位置５７４（又は他のアルブミン若しくは変異体若しくはそれらの断片の同等の位置）において、変更は、未変性のアミノ酸から、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、Ｙへ、より好ましくはＨ、Ｇ、Ｄ、Ｆ、Ｎ、Ｓ若しくはＹへ、更により好ましくはＤ、Ｆ、Ｇ若しくはＨへ、及び最も好ましくはＨへの置換であることが好ましい。配列番号２において、位置５７４の未変性のアミノ酸はＫであり、従ってＫへの置換は好ましくない。
【０１００】
配列番号２の位置５８０（又は他のアルブミン若しくは変異体若しくはそれらの断片の同等の位置）において、変更は、未変性のアミノ酸から、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、Ｙへ、より好ましくはＫ若しくはＲへ、最も好ましくはＫへの置換であることが好ましい。配列番号２において、位置５８０の未変性のアミノ酸はＱであり、従ってＱへの置換は好ましくない。
【０１０１】
変異アルブミンは、配列番号２の位置４９２＋５５０に対応する位置（又は他のアルブミン若しくは変異体若しくはそれらの断片の同等の位置）に、変更を含むことができる。そのような変更は、４９２Ｄ＋５５０Ｋ（例えば配列番号２３１）、又は４９２Ｇ＋５５０Ｋ（例えば配列番号２４０）を含むことができる。
【０１０２】
変異アルブミンは、配列番号２の位置４９２＋５７３に対応する位置（又は他のアルブミン若しくは変異体若しくはそれらの断片の同等の位置）に、変更を含むことができる。そのような変更は、４９２Ｆ＋５７３Ｐ（例えば配列番号１０９）、４９２Ｇ＋５７３Ｐ（例えば配列番号１１０）、４９２Ｈ＋５７３Ｐ（例えば配列番号１１１）又は４９２Ｒ＋５７３Ｐ（例えば配列番号１１３）を、又はより好ましくは４９２Ｄ＋５７３Ｐ（例えば配列番号１０８）を含むことができる。しかし、該変異体は、変更４９２Ｇ＋５７３Ａ、４９２Ｇ＋５７３Ａ、４９２Ｇ＋Ｎ５０３Ｋ＋５７３Ａ、４９２Ｇ＋Ｎ５０３Ｈ＋５７３Ａ、４９２Ｇ＋５７３Ｐ、４９２Ｇ＋Ｎ５０３Ｋ＋５７３Ｐ又は４９２Ｇ＋Ｎ５０３Ｈ＋５７３Ｐのみを伴う配列番号２からはならないことが好ましい。
【０１０３】
変異アルブミンは、配列番号２の位置４９２＋５７４に対応する位置（又は他のアルブミン若しくは変異体若しくはそれらの断片の同等の位置）に、変更を含むことができる。そのような変更は、４９２Ｄ＋５７４Ｈ（例えば配列番号２３２）、４９２Ｇ＋５７４Ｈ（例えば配列番号２４１）又は４９２Ｄ＋５７４Ｈ（例えば配列番号２３２）を含むことができる。
【０１０４】
変異アルブミンは、配列番号２の位置４９２＋５８０に対応する位置（又は他のアルブミン若しくは変異体若しくはそれらの断片の同等の位置）に、変更を含むことができる。
変異アルブミンは、配列番号２の位置５５０＋５７３に対応する位置（又は他のアルブミン若しくは変異体若しくはそれらの断片の同等の位置）に、変更を含むことができる。そのような変更は、５５０Ｋ＋５７３Ｐ（例えば配列番号１１７）を含むことができる。
【０１０５】
変異アルブミンは、配列番号２の位置５５０＋５７４に対応する位置（又は他のアルブミン若しくは変異体若しくはそれらの断片の同等の位置）に、変更を含むことができる。そのような変更は、５５０Ｋ＋５７４Ｈ（例えば配列番号１３０）、５５０Ｍ＋５７４Ｈ（例えば配列番号２４９）、５５０Ｍ＋５７４Ｈ（例えば配列番号２４９）又は５５０Ｌ＋５７４Ｈ（例えば配列番号２４５）を含むことができる。
【０１０６】
変異アルブミンは、配列番号２の位置５５０＋５８０に対応する位置（又は他のアルブミン若しくは変異体若しくはそれらの断片の同等の位置）に、変更を含むことができる。そのような変更は、５５０Ｋ＋５８０Ｋ（例えば配列番号１３１）、５５０Ｍ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２５１）又は５５０Ｌ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２４７）を含むことができる。
【０１０７】
変異アルブミンは、配列番号２の位置５７３＋５７４に対応する位置（又は他のアルブミン若しくは変異体若しくはそれらの断片の同等の位置）に、変更を含むことができる。そのような変更は、５７４Ｄ＋５７３Ｐ（例えば配列番号１２１）、５７４Ｆ＋５７３Ｐ（例えば配列番号１２２）、５７４Ｇ＋５７３Ｐ（例えば配列番号１２３）、５７４Ｈ＋５７３Ｐ（例えば配列番号１２４）、５７４Ｎ＋５７３Ｐ（例えば配列番号１２５）又は５７４Ｓ＋５７３Ｐ（例えば配列番号１２６）を含むことができる。該変異体は、変更Ｋ５７３Ｐ＋Ｋ５７４Ｎ＋Ａ５７７Ｔ＋Ａ５７８Ｒ＋Ｓ５７９Ｃ＋Ｑ５８０Ｋ＋Ａ５８１Ｄ＋Ｇ５８４Ａのみを伴う配列番号２からはならないことが好ましい。
【０１０８】
変異アルブミンは、配列番号２の位置５７３＋５８０に対応する位置（又は他のアルブミン若しくは変異体若しくはそれらの断片の同等の位置）に、変更を含むことができる。そのような変更は、５８０Ｋ＋５７３Ｐ（例えば配列番号１２８）又は５８０Ｒ＋５７３Ｐ（例えば配列番号１２９）を含むことができる。しかし、該変異体は、変更Ｋ５７３Ｐ＋Ａ５７７Ｅ＋Ａ５７８Ｓ＋Ｑ５８０Ｋ＋Ａ５８２Ｔのみを伴う配列番号２からはならないことが好ましい。
【０１０９】
変異アルブミンは、配列番号２の位置５７４＋５８０に対応する位置（又は他のアルブミン若しくは変異体若しくはそれらの断片の同等の位置）に、変更を含むことができる。
変異アルブミンは、配列番号２の位置４９２＋５５０＋５７３に対応する位置（又は他のアルブミン若しくは変異体若しくはそれらの断片の同等の位置）に、変更を含むことができる。そのような変更は、４９２Ｇ＋５５０Ｋ＋５７３Ｐ（例えば配列番号２５４）又は４９２Ｄ＋５５０Ｋ＋５７３Ｐ（例えば配列番号２５３）を含むことができる。
【０１１０】
変異アルブミンは、配列番号２の位置４９２＋５５０＋５７４に対応する位置（又は他のアルブミン若しくは変異体若しくはそれらの断片の同等の位置）に、変更を含むことができる。そのような変更は、４９２Ｇ＋５５０Ｋ＋５７４Ｈ（例えば配列番号２５５）を含むことができる。
【０１１１】
変異アルブミンは、配列番号２の位置４９２＋５５０＋５８０に対応する位置（又は他のアルブミン若しくは変異体若しくはそれらの断片の同等の位置）に、変更を含むことができる。そのような変更は、４９２Ｄ＋５５０Ｋ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２５８）又は４９２Ｇ＋５５０Ｋ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２５９）を含むことができる。
【０１１２】
変異アルブミンは、配列番号２の位置４９２＋５７３＋５７４に対応する位置（又は他のアルブミン若しくは変異体若しくはそれらの断片の同等の位置）に、変更を含むことができる。そのような変更は、４９２Ｄ＋５７３Ｐ＋５７４Ｈ（例えば配列番号２３３）を含むことができる。
【０１１３】
変異アルブミンは、配列番号２の位置４９２＋５７３＋５８０に対応する位置（又は他のアルブミン若しくは変異体若しくはそれらの断片の同等の位置）に、変更を含むことができる。そのような変更は、４９２Ｄ＋５７３Ｐ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２３４）又は４９２Ｇ＋５７３Ｐ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２４２）を含むことができる。
【０１１４】
変異アルブミンは、配列番号２の位置４９２＋５７４＋５８０に対応する位置（又は他のアルブミン若しくは変異体若しくはそれらの断片の同等の位置）に、変更を含むことができる。そのような変更は、４９２Ｄ＋５７４Ｈ＋５８０Ｋ（配列番号２６２）又は４９２Ｇ＋５７４Ｈ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２６３）を含むことができる。
【０１１５】
変異アルブミンは、配列番号２の位置５０＋５７３＋５７４に対応する位置（又は他のアルブミン若しくは変異体若しくはそれらの断片の同等の位置）に、変更を含むことができる。そのような変更は、５５０Ｋ＋５７４Ｈ＋５７３Ｐ（例えば配列番号１３１）、５５０Ｌ＋５７３Ｐ＋５７４Ｈ（例えば配列番号２４６）又は５５０Ｍ＋５７３Ｐ＋５７４Ｈ（例えば配列番号２５０）を含むことができる。
【０１１６】
変異アルブミンは、配列番号２の位置５５０＋５７３＋５８０に対応する位置（又は他のアルブミン若しくは変異体若しくはそれらの断片の同等の位置）に、変更を含むことができる。そのような変更は、５５０Ｌ＋５７３Ｐ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２４８）又は５５０Ｍ＋５７３Ｐ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２５２）を含むことができる。
【０１１７】
変異アルブミンは、配列番号２の位置５５０＋５７４＋５８０に対応する位置（又は他のアルブミン若しくは変異体若しくはそれらの断片の同等の位置）に、変更を含むことができる。
変異アルブミンは、配列番号２の位置５７３＋５７４＋５８０に対応する位置（又は他のアルブミン若しくは変異体若しくはそれらの断片の同等の位置）に、変更を含むことができる。そのような変更は、５７４Ｈ＋５８０Ｋ＋５７３Ｐ（例えば配列番号１３５）を含むことができる。
【０１１８】
変異アルブミンは、配列番号２の位置４９２＋５５０＋５７３＋５７４に対応する位置（又は他のアルブミン若しくは変異体若しくはそれらの断片の同等の位置）に、変更を含むことができる。そのような変更は、４９２Ｇ＋５５０Ｋ＋５７３Ｐ＋５７４Ｈ（例えば配列番号２５７）又は４９２Ｄ＋５５０Ｋ＋５７３Ｐ＋５７４Ｈ（例えば配列番号２５６）を含むことができる。
【０１１９】
変異アルブミンは、配列番号２の位置４９２＋５５０＋５７３＋５８０に対応する位置（又は他のアルブミン若しくは変異体若しくはそれらの断片の同等の位置）に、変更を含むことができる。そのような変更は、４９２Ｄ＋５５０Ｋ＋５７３Ｐ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２６０）又は４９２Ｇ＋５５０Ｋ＋５７３Ｐ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２６１）を含むことができる。
変異アルブミンは、配列番号２の位置４９２＋５５０＋５７４＋５８０に対応する位置（又は他のアルブミン若しくは変異体若しくはそれらの断片の同等の位置）に、変更を含むことができる。
【０１２０】
変異アルブミンは、配列番号２の位置４９２＋５７３＋５７４＋５８０に対応する位置（又は他のアルブミン若しくは変異体若しくはそれらの断片の同等の位置）に、変更を含むことができる。そのような変更は、４９２Ｄ＋５７３Ｐ＋５７４Ｈ＋５８０Ｋ（例えば配列番号１１４）又は４９２Ｇ＋５７３Ｐ＋５７４Ｈ＋５８０Ｋ（例えば配列番号１１５）、４９２Ｆ＋５７３Ｐ＋５７４Ｇ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２３８）、４９２Ｇ＋５７３Ｐ＋５７４Ｇ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２３４）、４９２Ｄ＋５７３Ｐ＋５７４Ｇ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２３５）、４９２Ｆ＋５７３Ｐ＋５７４Ｈ＋５８０Ｒ（例えば配列番号２３９）、４９２Ｄ＋５７３Ｐ＋５７４Ｈ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２６４）、４９２Ｇ＋５７３Ｐ＋５７４Ｈ＋５８０Ｒ（例えば配列番号２４４）、４９２Ｄ＋５７３Ｐ＋５７４Ｈ＋５８０Ｒ（例えば配列番号２３６）又は４９２Ｆ＋５７３Ｐ＋５７４Ｈ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２３７）を含むことができる。
【０１２１】
変異アルブミンは、配列番号２の位置５５０＋５７３＋５７４＋５８０に対応する位置（又は他のアルブミン若しくは変異体若しくはそれらの断片の同等の位置）に、変更を含むことができる。そのような変更は、５５０Ｋ＋５７３Ｐ＋５７４Ｈ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２６５）を含むことができる。
【０１２２】
変異アルブミンは、配列番号２の位置４９２＋５５０＋５７３＋５７４＋５８０に対応する位置（又は他のアルブミン若しくは変異体若しくはそれらの断片の同等の位置）に、変更を含むことができる。そのような変更は、４９２Ｄ＋５５０Ｋ＋５７３Ｐ＋５７４Ｈ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２６６）又は４９２Ｇ＋５５０Ｋ＋５７３Ｐ＋５７４Ｈ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２６７）を含むことができる。そのような変更は、４９２Ｄ＋５５０Ｋ＋５７３Ｐ＋５７４Ｈ（例えば配列番号２５６）を含むことができる。
【０１２３】
特に好ましい変異体としては、以下が挙げられる：
配列番号２の位置４９２及び５８０に対応する位置に、例えば（ｉ）Ｅ４９２Ｇ及びＱ５８０Ｋ、又は（ｉｉ）Ｅ４９２Ｄ及びＱ５８０Ｋ（又は他のアルブミン若しくは変異体若しくはそれらの断片の同等の位置）の変更を含む、変異アルブミン；
配列番号２の位置４９２及び５７４に対応する位置に、例えば（ｉ）Ｅ４９２Ｇ及びＫ５７４Ｈ、（ｉｉ）Ｅ４９２Ｄ及びＫ５７４Ｈ、（ｉｉｉ）Ｅ４９２Ｄ及びＫ５７４Ｋ、又は（ｉｖ）Ｅ４９２Ｇ及びＫ５７４Ｋ（又は他のアルブミン若しくは変異体若しくはそれらの断片の同等の位置）の変更を含む、変異アルブミン；
配列番号２の位置４９２及び５５０に対応する位置に、例えば（ｉ）Ｅ４９２Ｇ及びＤ５５０Ｋ、又は（ｉｉ）Ｅ４９２Ｄ及びＤ５５０Ｋ（又は他のアルブミン若しくは変異体若しくはそれらの断片の同等の位置）の変更を含む、変異アルブミン；
【０１２４】
配列番号２の位置５５０及び５７３に対応する位置に、例えば（ｉ）Ｄ５５０Ｋ及びＫ５７３Ｐ、（ｉｉ）Ｄ５５０Ｌ及びＫ５７３Ｐ、又は（ｉｉｉ）Ｄ５５０Ｍ及びＫ５７３Ｐ（又は他のアルブミン若しくは変異体若しくはそれらの断片の同等の位置）の変更を含む、変異アルブミン；
配列番号２の位置５５０及び５７４に対応する位置に、例えば（ｉ）Ｄ５５０Ｋ及びＫ５７４Ｈ、又は（ｉｉ）Ｄ５５０Ｌ及びＫ５７４Ｈ（又は他のアルブミン若しくは変異体若しくはそれらの断片の同等の位置）の変更を含む、変異アルブミン；
配列番号２の位置５５０及び５８０に対応する位置に、例えば（ｉ）Ｄ５５０Ｍ及びＱ５８０Ｋ、（ｉｉ）Ｄ５５０Ｌ及びＱ５８０Ｋ、又は（ｉｉｉ）Ｄ５５０Ｋ及びＱ５８０Ｋ（又は他のアルブミン若しくは変異体若しくはそれらの断片の同等の位置）の変更を含む、変異アルブミン；
【０１２５】
配列番号２の位置５８０及び５７３に対応する位置に、例えばＱ５８０Ｋ及びＫ５７３Ｐ（又は他のアルブミン若しくは変異体若しくはそれらの断片の同等の位置）の変更、並びに４９２、５５０及び５７４から選択される位置に、好ましくは１又は複数（数個）の他の変更を伴う（例えば変更を含む）、変異アルブミン。位置５８０にＫが及び位置５７３にＰが存在する場合、該ポリペプチドは、４９２、５５０、及び５７４からなる群から選択される位置に、追加の変更を含むことが好ましい；
【０１２６】
配列番号２の位置４９２及び５７３に対応する位置に、下記のような変更を伴う（例えば変更を含む）、変異アルブミン、例えば：
配列番号２の位置４９２及び５７３に対応する位置に、例えば（ｉ）Ｅ４９２Ｄ及びＫ５７３Ｐ（又は他のアルブミン若しくは変異体若しくはそれらの断片の同等の位置）、又は（ｉｉ）Ｅ４９２Ｇ及びＫ５７３Ｐ、又は（ｉｉｉ）Ｅ４９２Ｇ及びＫ５７３Ａ（又は他のアルブミン若しくは変異体若しくはそれらの断片の同等の位置）の変更、並びに５５０、５７４及び５８０から選択される位置に、好ましくは１又は複数（数個）の他の変更を含む、変異アルブミン。位置４９２にＧが及び位置５７３にＡ又はＰが存在する場合、該ポリペプチドは、５５０、５７４及び５８０からなる群から選択される位置（又は他のアルブミン若しくは変異体若しくはそれらの断片の同等の位置）に、追加の変更を含むことが好ましい；
【０１２７】
配列番号２の位置５７３及び５７４に対応する位置に、例えばＫ５７３Ｐ及びＫ５７４Ｈ（又は他のアルブミン若しくは変異体若しくはそれらの断片の同等の位置）の変更、並びに４９２、５５０及び５８０から選択される位置に、好ましくは１又は複数（数個）の他の変更を含む、変異アルブミン。位置５７３にＰが及び位置５７４にＮが存在する場合、該ポリペプチドは、４９２、５５０、及び５８０からなる群から選択される位置（又は他のアルブミン若しくは変異体若しくはそれらの断片の同等の位置）に、追加の変更を含むことが好ましい；
【０１２８】
配列番号２の位置５７４及び５８０に対応する位置に、例えば５７４Ｈ及び５８０Ｋ（又は他のアルブミン若しくは変異体若しくはそれらの断片の同等の位置）の変更、並びに４９２、５５０及び５７３から選択される位置に、好ましくは１又は複数（数個）の他の変更を含む、変異アルブミン。位置５７４にＮが及び位置５８０にＫが存在する場合、該ポリペプチドは、４９２、５５０、及び５７３からなる群から選択される位置（又は他のアルブミン若しくは変異体若しくはそれらの断片の同等の位置）に、追加の変更を含むことが好ましい；
【０１２９】
配列番号２の位置４９２、５５０及び５７３に対応する位置に、例えばＥ４９２Ｇ、Ｄ５５０Ｋ及びＫ５７３Ｐ、例えば配列番号２５４など、又はＥ４９２Ｄ、Ｄ５５０Ｋ及びＫ５７３Ｐ、例えば配列番号２５３などの変更を含む、変異アルブミン；
配列番号２の位置５５０、５７３及び５８０に対応する位置に、例えばＤ５５０Ｋ、Ｋ５７３Ｐ及びＱ５８０Ｋ、例えば配列番号１３３などの変更を含む、変異アルブミン；
配列番号２の位置５５０、５７３及び５８０に対応する位置に、例えばＤ５５０Ｌ、Ｋ５７３Ｐ及びＱ５８０Ｋ、例えば配列番号２４８など、又はＤ５５０Ｍ、Ｋ５７３Ｐ及びＱ５８０Ｋ、例えば配列番号２５２などの変更を含む、変異アルブミン；
【０１３０】
配列番号２の位置５５０、５７３及び５７４に対応する位置に、例えばＤ５５０Ｌ、Ｋ５７３Ｐ及びＫ５７４Ｈ、例えば配列番号２４６などの変更を含む、変異アルブミン；
配列番号２の位置５５０、５７３及び５７４に対応する位置に、例えばＤ５５０Ｋ、Ｋ５７３Ｐ及びＫ５７４Ｈ、例えば配列番号１３１などの変更を含む、変異アルブミン；
配列番号２の位置４９２、５７３及び５８０に対応する位置に、例えばＥ４９２Ｇ、Ｋ５７３Ｐ及びＱ５８０Ｋ、例えば配列番号２４２などの変更を含む、変異アルブミン；
配列番号２の位置４９２、５７３及び５８０に対応する位置に、例えばＥ４９２Ｄ、Ｋ５７３Ｐ及びＱ５８０Ｋ、例えば配列番号２３４などの変更を含む、変異アルブミン；
【０１３１】
配列番号２の位置４９２、５５０、５７３及び５７４に対応する位置に、例えばＥ４９２Ｄ、Ｄ５５０Ｋ、Ｋ５７３Ｐ及びＫ５７４Ｈ、例えば配列番号２５６などの変更を含む、変異アルブミン；
配列番号２の位置４９２、５５０、５７３及び５７４に対応する位置に、例えばＥ４９２Ｇ、Ｄ５５０Ｋ、Ｋ５７３Ｐ及びＫ５７４Ｈ、例えば配列番号２５７などの変更を含む、変異アルブミン；
配列番号２の位置５７３、５７４及び５８０に対応する位置に、例えばＫ５７３Ｐ、Ｋ５７４Ｈ及びＱ５８０Ｋ、例えば配列番号１３５などの変更を含む、変異アルブミン；
【０１３２】
配列番号２の位置４９２、５７３、５７４及び５８０に対応する位置に、例えばＥ４９２Ｄ、Ｋ５７３Ｐ、Ｋ５７４Ｈ及びＱ５８０Ｋ（又は他のアルブミン若しくは変異体若しくはそれらの断片の同等の位置）、例えば配列番号１１４などの変更を伴う（例えば変更を含む）、変異アルブミン；
配列番号２の位置４９２、５７３、５７４及び５８０に対応する位置に、例えばＥ４９２Ｇ、Ｋ５７３Ｐ、Ｋ５７４Ｈ及びＱ５８０Ｋ（又は他のアルブミン若しくは変異体若しくはそれらの断片の同等の位置）、例えば配列番号１１５などの変更を伴う（例えば変更を含む）、変異アルブミン。
【０１３３】
変異アルブミンは、下記の変更のみを伴う配列番号２からならないことが好ましい：Ｋ５７３Ｐ＋Ｋ５７４Ｎ＋Ａ５７７Ｔ＋Ａ５７８Ｒ＋Ｓ５７９Ｃ＋Ｑ５８０Ｋ＋Ａ５８１Ｄ＋Ｇ５８４Ａ；Ｋ５７３Ｐ＋Ａ５７７Ｅ＋Ａ５７８Ｓ＋Ｑ５８０Ｋ＋Ａ５８２Ｔ；Ｅ４９２Ｇ＋Ｋ５７３Ａ；Ｅ４９２Ｇ＋Ｎ５０３Ｋ＋Ｋ５７３Ａ；Ｅ４９２Ｇ＋Ｎ５０３Ｈ＋Ｋ５７３Ａ；Ｅ４９２Ｇ＋Ｋ５７３Ｐ；Ｅ４９２Ｇ＋Ｎ５０３Ｋ＋Ｋ５７３Ｐ；Ｅ４９２Ｇ＋Ｎ５０３Ｈ＋Ｋ５７３Ｐ。そのような変異アルブミンは、WO 2011/051489に開示されている。
【０１３４】
変異アルブミンは、（ａ）ＫＫＬＶＡＡＳＱＡＡＬＧＬ、（ｂ）ＰＫＦＶＡＡＳＱＡＡＬＡ、（ｃ）ＰＮＬＶＴＲＣＫＤＡＬＡ、（ｄ）ＰＫＬＶＥＳＳＫＡＴＬＧ、又は（ｅ）ＰＫＬＶＡＳＴＱＡＡＬＡと置き換えられたアミノ酸５７３〜５８５を伴う配列番号２からならないことが好ましい。
【０１３５】
変異アルブミン、それらの断片、又は該変異アルブミン若しくはそれらの断片を含む融合ポリペプチドは、対応する親又は参照アルブミン、それらの断片、又は該変異アルブミン若しくはそれらの断片を含む融合ポリペプチドと比べ、変更されたＦｃＲｎへの結合親和性及び／又は変更された血漿半減期、及び／又は変更されたＦｃＲｎへの結合親和性を有することが好ましい。
【０１３６】
特に好ましい実施態様において、親又は参照アルブミンは、ＨＳＡ（配列番号２）であり、並びに変異アルブミン、それらの断片、又は該変異アルブミン若しくはそれらの断片を含む融合ポリペプチドは、ＨＳＡ、対応する断片又はＨＳＡ若しくはそれらの断片を含む融合ポリペプチドと比べ、変更されたＦｃＲｎへの結合親和性及び／又は変更された血漿半減期、及び／又は変更されたＦｃＲｎへの結合親和性を有する。
【０１３７】
アルブミンのその受容体への結合と血漿半減期の間の相関は、ＨＳＡ  Ｄ４９４Ｎの天然の対立遺伝子を基に、本発明者らにより認められている。本発明者らは先に、この対立遺伝子を分析し、且つこれは、その受容体ＦｃＲｎに対し、ＷＴ  ＨＳＡのＦｃＲｎに対する親和性よりも、より低い親和性を有することを認めた。
【０１３８】
更に、ヒトＦｃＲｎと置き換えられた天然のマウスＦｃＲｎを有するトランスジェニックマウスは、正常マウスよりも、より高い血清アルブミンレベルを有することが明らかにされている(J Exp Med. 197(3):315-22 (2003))。ヒトＦｃＲｎは、マウス血清アルブミンに対し、マウス血清アルブミンに対しマウスＦｃＲｎが持つ親和性よりも、より高い親和性を有し、結果的にトランスジェニックマウスにおいて認められた血清アルブミンの増加は、血清アルブミンとその受容体の間のより高い親和性に対応することが先に発見されており、このことはＦｃＲｎへ結合するアルブミンと血漿半減期の間の相関を確認している。加えて、ＦｃＲｎへほとんど又は全く結合しないアルブミンの変異体は、マウスモデルにおいて減少された半減期を有する(Kenanovaら、J. Nucl. Med.；50 (補遺2): 1582 (2009))。
【０１３９】
変異アルブミンのＦｃＲｎへの親和性は、親又は参照アルブミンよりも高いか低いかを決定するひとつの方法は、以下に説明する表面プラズモン共鳴アッセイ（ＳＰＲ）の使用である。当業者は、例えば、結合定数ＫＤの決定及び比較など、他の方法が、変異アルブミンのＦｃＲｎへの親和性は、親又は参照アルブミンのＦｃＲｎへの親和性よりも高いか低いかを決定するために有用であることを理解するであろう。第一の分子（例えばリガンド）と第二の分子（例えば受容体）の間の結合親和性（ＫＤ）は、結合（オンレート、ｋa）及び解離（オフレート、ｋd）に関する反応速度定数の関数であり、ＫＤ＝ｋd−ｋaに従う。従って本発明に従い、天然のＨＳＡに関するＫＤよりも低いＫＤを有する変異アルブミンは、ＨＳＡよりもより高い血漿半減期を有すると考えられ、並びに天然のＨＳＡに関するＫＤよりも高いＫＤを有する変異アルブミンは、ＨＳＡよりもより低い血漿半減期を有すると考えられる。
【０１４０】
本発明の実施態様において、本発明のアルブミンの変異体又はそれらの断片、又は変異アルブミン若しくはそれらの断片を含む融合ポリペプチドは、親又は参照アルブミン、それらの断片、又は親若しくは参照アルブミン若しくはそれらの断片を含む融合ポリペプチドの血漿半減期よりも、より長い血漿半減期、並びに／又はより強力なＦｃＲｎへの結合親和性を有する。
【０１４１】
更なる実施態様において、本発明のアルブミンの変異体又はそれらの断片、又は変異アルブミン若しくはそれらの断片を含む融合ポリペプチドは、親又は参照アルブミン、それらの断片、又は親若しくは参照アルブミン若しくはそれらの断片を含む融合ポリペプチドの血漿半減期よりも、より短い血漿半減期、並びに／又はより弱いＦｃＲｎへの結合親和性を有する。
【０１４２】
４９２、５５０、５７３、５７４及び／又は５８０から選択される２以上の位置（又は他のアルブミン若しくは変異体若しくはそれらの断片の同等の位置）での変更に加え、本発明の変異アルブミン又はそれらの断片、又は変異アルブミン若しくはそれらの断片を含む融合ポリペプチドは、該分子の他の位置に、追加の置換、欠失又は挿入を含むことができる。そのような追加の置換、欠失又は挿入は、該分子の他の特性を変更するために有用であることができ、例えばこれは非限定的に、変更されたグリコシル化；チオール基などの表面の反応基の導入、カルバモイル化部位の除去／作製；などである。
【０１４３】
本発明に有利に適用されるよう表面上に反応性残基を提供するために変更される残基は、WO 2010/092135(引用により本明細書中に組み込まれている)に開示されている。特に好ましい残基は、配列番号2の位置に対応する位置を含む。
例として、表面上に反応性チオール基を提供するために、配列番号２において又は他のアルブミンの対応する位置において作製され得る変更は、配列番号２における以下の変更に対応する変更を含む：Ｌ５８５Ｃ、Ｄ１Ｃ、Ａ２Ｃ、Ｄ５６２Ｃ、Ａ３６４Ｃ、Ａ５０４Ｃ、Ｅ５０５Ｃ、Ｔ７９Ｃ、Ｅ８６Ｃ、Ｄ１２９Ｃ、Ｄ５４９Ｃ、Ａ５８１Ｃ、Ｄ１２１Ｃ、Ｅ８２Ｃ、Ｓ２７０Ｃ、Ａ５７８Ｃ、Ｌ５９５ＬＣ、Ｄ１ＤＣ、Ａ２ＡＣ、Ｄ５６２ＤＣ、Ａ３６４ＡＣ、Ａ５０４ＡＣ、Ｅ５０５ＥＣ、Ｔ７９ＴＣ、Ｅ８６ＥＣ、Ｄ１２９ＤＣ、Ｄ５４９ＤＣ、Ａ５８１ＡＣ、Ａ５８１ＡＣ、Ｄ１２１ＤＣ、Ｅ８２ＥＣ、Ｓ２７０ＳＣ、Ａ５７９ＡＣ、Ｃ３６０＊、Ｃ３１６＊、Ｃ７５＊、Ｃ１６８＊、Ｃ５５８＊、Ｃ３６１＊、Ｃ９１＊、Ｃ１２４＊、Ｃ１６９＊及びＣ５６７＊。或いは、システイン残基を、アルブミンのＮ末端又はＣ末端に付加することができる。用語「反応性チオール」は、システインに結合されたジスルフィドでないＣｙｓ及び／又は共役パートナーなどのパートナーへの結合に立体的に利用可能であるＣｙｓにより提供されるチオール基を意味する及び／又は含む。
【０１４４】
融合ポリペプチド
本発明の第二の態様は、融合ポリペプチドに関する。そのために、本発明のアルブミンの変異体又はそれらの断片は、非−アルブミンポリペプチド融合パートナーと融合されることができる。この融合パートナーは、原則として、任意のポリペプチドであるが、一般に融合パートナーは、治療的、予防的（ワクチンを含む）、診断的、造影的又は他の有益な特性を有するポリペプチドであることが好ましい。そのような特性は、「医薬として有益な特性」と称することができる。アルブミン又はそれらの断片を含む融合ポリペプチドは、当該技術分野において公知である。アルブミン又はそれらの断片及び融合パートナーポリペプチドを含むそのような融合ポリペプチドは、融合されない融合パートナーポリペプチド単独と比べ、より長い血漿半減期を有することはわかっている。本発明により、先行技術の対応する融合ポリペプチドと比べ、本発明の融合ポリペプチドの血漿半減期を変更することは可能である。「変更」とは、血漿半減期の増加又は血漿半減期の減少の両方を含む。血漿半減期の増加が、好ましい。本発明は、半減期を望ましい期間へ、調整することが可能である。
【０１４５】
１又は複数（数個）の治療的、予防的（ワクチンを含む）、診断的、造影的又は他の有益なポリペプチドは、アルブミンのＮ−末端、Ｃ−末端へ融合されるか、アルブミン構造のループへ挿入されるか、又はそれらの任意の組合せであることができる。融合ポリペプチドの様々な成分を分離するリンカー配列を含んでも含まなくともよい。
【０１４６】
アルブミン又はそれらの断片の融合に関連する教示は、当該技術分野において公知であり、且つ当業者は、そのような教示もまた、本発明に適用することができることを理解するであろう。WO 2001/79271 A(特に9頁及び／又は表1)、WO 2003/59934(特に表1)、WO 03/060071(特に表1)及びWO 01/079480(特に表1)(各々それらの全体が引用により本明細書中に組み込まれている)も、アルブミン又はそれらの断片に融合することができる治療的、予防的（ワクチンを含む）、診断的、造影的又は他の有益なポリペプチドの例を含んでおり、且つこれらの例も本発明に適用される。
【０１４７】
本発明の第二の態様に関する更なる優先(preference)は、本発明の第一の態様のもの、及び下記の本発明の１２番目の態様に提供されるものを含む。当業者は、本発明の任意の態様は、本発明の別の態様若しくは態様類、及び／又は本発明の態様の１又は複数（数種）の優先及び／又は本明細書で作製される他の開示と組み合わせることができることを理解している。
【０１４８】
ポリヌクレオチド
本発明の第三の態様は、本発明の変異体又は融合ポリペプチドのいずれかをコードしている単離されたポリヌクレオチドに関する。該ポリヌクレオチドは、単離されたポリヌクレオチドである。該ポリヌクレオチドは、ベクター(プラスミドなど)中及び／又は宿主細胞中に含まれてよい。
【０１４９】
本発明の第三の態様に関する更なる優先は、本発明の第一の態様のもの、及び下記の本発明の１２番目の態様に提供されるものを含む。当業者は、本発明の任意の態様は、本発明の別の態様若しくは態様類、及び／又は本発明の態様の１又は複数（数種）の優先及び／又は本明細書で作製される他の開示と組み合わせることができることを理解している。
【０１５０】
核酸構築体
本発明の第四の態様は、制御配列と適合した条件下で好適な宿主細胞においてコード配列の発現を指示する１又は複数（数個）の制御配列に機能的に連結されている、本発明の変異体又は融合ポリペプチドをコードしているポリヌクレオチドを含む、核酸構築体に関する。
【０１５１】
ポリヌクレオチドは、変異体の発現に備える様々な方式で操作されることができる。ポリペプチドのベクターへの挿入前のポリヌクレオチドの操作は、発現ベクターに応じて望ましい又は必要とされる。組換えＤＮＡ法を利用するポリヌクレオチドを修飾する技術は、当該技術分野において周知である。
【０１５２】
制御配列は、ポリヌクレオチドの発現のために宿主細胞により認識される、プロモーター配列であることができる。プロモーター配列は、変異体の発現を媒介する転写制御配列を含む。プロモーターは、変異型、切断型、及びハイブリッド型プロモーターを含む、宿主細胞において転写活性を示す任意の核酸配列であることができ、且つ宿主細胞と同種又は異種のいずれかの細胞外若しくは細胞内ポリペプチドをコードしている遺伝子から得ることができる。
【０１５３】
酵母宿主において、有用なプロモーターは、サッカロミセス・セレビシアエエノラーゼ（ＥＮＯ−１）、サッカロミセス・セレビシアエプロテアーゼＡ（ＰＲＡ１）、サッカロミセス・セレビシアエプロテアーゼＢ（ＰＲＢ１）、サッカロミセス・セレビシアエ翻訳延長因子（ＴＥＦ１）、サッカロミセス・セレビシアエ翻訳延長因子（ＴＥＦ２）、サッカロミセス・セレビシアエガラクトキナーゼ（ＧＡＬ１）、サッカロミセス・セレビシアエアルコールデヒドロゲナーゼ／グリセルアルデヒド−３−リン酸デヒドロゲナーゼ（ＡＤＨ１、ＡＤＨ２／ＧＡＰ）、サッカロミセス・セレビシアエトリオースリン酸イソメラーゼ（ＴＰＩ）、サッカロミセス・セレビシアエメタロチオネイン（ＣＵＰ１）、及びサッカロミセス・セレビシアエ３−ホスホグリセリン酸キナーゼの遺伝子から得られる。酵母宿主細胞に関する他の有用なプロモーターは、Romanosらの文献(Yeast, 8: 423-488(1992))に説明されている。
【０１５４】
当業者は、コメ細胞及びＣＨＯ又はＨＥＫなどの哺乳動物細胞における使用に関する有用なプロモーターを知っている。コメ宿主において、有用なプロモーターは、カリフラワーモザイクウイルス３５Ｓ  ＲＮＡ遺伝子（ＣａＭＶ３５Ｓ）、メイズアルコールデヒドロゲナーゼ（Ａｄｈ１）及びαＡｍｙ３から得られる。
ＣＨＯ又はＨＥＫなどの哺乳動物宿主細胞において、有用なプロモーターは、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）及びＣＡＧハイブリッドプロモーター（ＣＭＶ初期エンハンサーエレメントとニワトリβ−アクチンプロモーターのハイブリッド）、サル空胞ウイルス４０（ＳＶ４０）から得られる。
【０１５５】
制御配列はまた、転写を終結するために宿主細胞により認識される、好適な転写ターミネーター配列であることができる。ターミネーター配列は、変異体をコードしているポリヌクレオチドの３’−末端へ、機能的に連結される。宿主細胞において機能する任意のターミネーターを、使用することができる。
【０１５６】
酵母宿主細胞にとって好ましいターミネーターは、サッカロミセス・セレビシアエエノラーゼ、サッカロミセス・セレビシアエシトクロムＣ（ＣＹＣ１）、サッカロミセス・セレビシアエアルコールデヒドロゲナーゼ（ＡＤＨ１）及びサッカロミセス・セレビシアエグリセルアルデヒド−３−リン酸デヒドロゲナーゼの遺伝子から得られる。酵母宿主細胞のための他の有用なターミネーターは、Romanosらの文献(1992, 前掲)に記載されている。当業者は、コメ細胞及びＣＨＯ又はＨＥＫなどの哺乳動物細胞における使用に関する有用なターミネーターを知っている。例えば、コメ宿主において、好ましいターミネーターは、アグロバクテリウム・ツメファシエンスのノパリンシンターゼ（Ｎｏｓ）及びカリフラワーモザイクウイルス３５Ｓ  ＲＮＡ遺伝子（ＣａＭＶ３５Ｓ）から得られる。
【０１５７】
制御配列はまた、宿主細胞による翻訳に重要であるｍＲＮＡの非翻訳領域である、好適なリーダー配列であることができる。リーダー配列は、変異体をコードしているポリヌクレオチドの５’−末端に機能的に連結される。宿主細胞において機能する任意のリーダー配列を、使用することができる。
【０１５８】
酵母宿主細胞にとって好適なリーダーは、サッカロミセス・セレビシアエエノラーゼ（ＥＮＯ−１）、サッカロミセス・セレビシアエ３−ホスホグリセリン酸キナーゼ、サッカロミセス・セレビシアエα因子、及びサッカロミセス・セレビシアエアルコールデヒドロゲナーゼ／グリセルアルデヒド−３−リン酸デヒドロゲナーゼ（ＡＤＨ２／ＧＡＰ）の遺伝子から得られる。
【０１５９】
制御配列はまた、変異体コード配列の３’−末端に機能的に連結され、且つ転写時に、転写されたｍＲＮＡへポリアデノシン残基を付加するためのシグナルとして宿主細胞により認識される配列である、ポリアデニル化配列であることができる。宿主細胞において機能する任意のポリアデニル化配列を、使用することができる。
酵母宿主細胞にとって有用なポリアデニル化配列は、Guo及びShermanの文献(Mol. Cellular Biol. 15: 5983-5990 (1995))に説明されている。
【０１６０】
制御配列はまた、変異体のＮ−末端に連結されたシグナルペプチドをコードし、且つ細胞の分泌経路に変異体を方向づける、シグナルペプチドコード領域であることができる。ポリヌクレオチドのコード配列の５’−末端は本来、翻訳リーディングフレームにおいて、変異体をコードしているコード領域のセグメントと、天然に連結されたシグナルペプチドコード領域を含むことができる。或いは、コード配列の５’−末端は、コード配列にとって外来であるシグナルペプチドコード領域を含むことができる。外来シグナルペプチドコード領域は、コード配列がシグナルペプチドコード領域を天然に含まない場合に、必要とされる。或いは、変異体の分泌を増強するために、外来シグナルペプチドコード領域を、天然のシグナルペプチドコード領域と、単純に置き換えることができる。しかし、発現された変異体を宿主細胞の分泌経路に方向づけるシグナルペプチドコード領域が、使用される。
【０１６１】
酵母宿主細胞にとって有用なシグナルペプチドは、サッカロミセス・セレビシアエα因子及びサッカロミセス・セレビシアエインベルターゼの遺伝子から得られる。他の有用なシグナルペプチドコード配列は、Romanosらの文献((1992)前掲)に説明されている。当業者は、コメ細胞及びＣＨＯ又はＨＥＫなどの哺乳動物細胞における使用に関する有用なシグナルペプチドを知っている。
【０１６２】
シグナルペプチド領域及びプロペプチド領域の両方が、変異体のＮ−末端に存在する場合、プロペプチド領域は、変異体のＮ−末端の隣に位置し、且つシグナルペプチド領域は、プロペプチド領域のＮ−末端の隣に位置する。
【０１６３】
本発明の第四の態様に関する更なる優先は、本発明の第一の態様のもの、及び下記の本発明の１２番目の態様に提供されるものを含む。当業者は、本発明の任意の態様は、本発明の別の態様若しくは態様類、及び／又は本発明の態様の１又は複数（数種）の優先及び／又は本明細書で作製される他の開示と組み合わせることができることを理解している。
【０１６４】
変異体の調製
本発明の第五の態様は、変異アルブミン又はそれらの断片、又は変異アルブミン若しくはそれらの断片を含む融合ポリペプチド、又は変異アルブミン若しくはそれらの断片の会合体を調製又は入手する方法であって、下記の工程を含む方法に関する：
（ａ）親アルブミン又はそれらの断片、又は親アルブミン若しくはそれらの断片を含む融合ポリペプチドへ、４９２、５５０、５７３、５７４及び５８０から選択される２以上の位置で、好ましくは本発明の第一の態様に説明された様に、変更を導入する工程；並びに
（ｂ）変異アルブミン又はそれらの断片、又は変異アルブミン若しくはそれらの断片を含む融合ポリペプチドを回収する工程。
【０１６５】
好ましい変更は、本発明の第一の態様に関連して説明されている。生じる変異アルブミン又はそれらの断片は、該変更を含まない親アルブミン又は断片などの参照体のＦｃＲｎ−結合親和性と比べ、変更されたＦｃＲｎ−結合親和性を有することができる。より好ましくは、生じる変異アルブミン又はそれらの断片は、より強力なＦｃＲｎ−結合親和性を有する。
【０１６６】
本発明は、参照アルブミン、それらの断片若しくは融合体のＦｃＲｎへの結合親和性と比べ、変更されているＦｃＲｎへの結合親和性を有する、アルブミンの変異体、それらの断片、又は該変異アルブミン若しくはそれらの断片を含む融合ポリペプチドである、ポリペプチドを調製する方法であって：
（ａ）配列番号２と少なくとも６０％の配列同一性を有するアルブミンなどの親アルブミンをコードしている核酸を提供する工程；
（ｂ）配列番号２の位置４９２、５５０、５７３、５７４及び５８０からなる群の２以上から選択される位置に対応する２以上の位置において変更を含む、変異アルブミン、それらの断片、又は該変異アルブミン若しくはそれらの断片を含む融合ポリペプチドであるポリペプチドをコードするように、工程（ａ）の配列を修飾する工程；
（ｃ）任意に、工程（ｂ）の修飾された配列を、好適な宿主細胞へ導入する工程；
（ｄ）任意に、該細胞を、好適な成長培地において、該ポリペプチドの発現に繋がる条件下で、成長させる工程；並びに
（ｅ）任意に、成長培地から該ポリペプチドを回収する工程：を含み；
ここで、該ポリペプチドは、親アルブミン、参照アルブミン、それらの断片、又は該親アルブミン、参照アルブミン若しくは断片を含む融合ポリペプチド、又はそれらの融合体の半減期に比べ、変更されたＦｃＲｎへの結合親和性及び／又は変更された血漿半減期を有する。
【０１６７】
親アルブミン及び／又は変異アルブミンは、以下を含む又はからなることが好ましい：
（ａ）配列番号２の成熟ポリペプチドと少なくとも６０％の配列同一性を有するポリペプチド；
（ｂ）（ｉ）配列番号１の成熟ポリペプチドコード配列、又は（ｉｉ）（ｉ）の完全長相補体と、低ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされたポリペプチド；
（ｃ）配列番号１の成熟ポリペプチドコード配列と少なくとも６０％の同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされたポリペプチド；及び／又は
（ｄ）配列番号２の成熟ポリペプチドの断片。
【０１６８】
変異体は、位置指定変異誘発、合成遺伝子構築、半合成遺伝子構築、ランダム変異誘発、シャッフリングなどの、当該技術分野において公知の変異誘発手法を使用し、当業者により調製することができる。
【０１６９】
位置指定変異誘発は、１又は複数（数個）の変異（変更）を、親をコードしているポリヌクレオチド中の１又は複数（数個）の規定された位置に作出する技術である。
位置指定変異誘発は、インビトロにおいて、所望の変異を含むオリゴヌクレオチドプライマーの使用に関連している、ＰＣＲにより実現することができる。位置指定変異誘発はまた、インビトロにおいて、親をコードしているポリヌクレオチドを含むプラスミド内の部位での制限酵素による切断、それに続くポリヌクレオチド中の変異を含むオリゴヌクレオチドの連結に関連している、カセット変異誘発により、実行することができる。通常、プラスミド及びオリゴヌクレオチドを消化する制限酵素は、同じであり、これはプラスミド及び挿入断片の別のものとの連結を可能にする。例えば、Scherer及びDavis、Proc. Natl. Acad. Sci. USA 76: 4949-4955 (1979)；並びに、Bartonら、Nucleic Acids Res. 18: 7349-4966 (1990)を参照されたい。
【０１７０】
位置指定変異誘発はまた、インビボにおいて、当該技術分野において公知の方法により達成することができる。例えば、米国特許出願公開番号2004/0171154；Storiciら、Nature Biotechnol. 19: 773-776 (2001)；Krenら、Nat. Med. 4: 285-290 (1998)；並びに、Calissano及びMacino、Fungal Genet. Newslett. 43: 15-16 (1996)を参照されたい。
任意の位置指定変異誘発手法を、本発明において使用することができる。変異体を調製するために使用することができる、入手可能な多くの市販のキットが存在する。
【０１７１】
合成遺伝子構築は、関心対象のポリペプチドをコードするための、指定されたポリヌクレオチド分子のインビトロ合成を伴う。遺伝子合成は、Tianらの文献(Nature 432: 1050-1054 (2004))に説明されたマルチプレックスマイクロチップ-ベースの技術、及びオリゴヌクレオチドが合成され、光-プログラム可能な(photo-programmable)微小流体チップ上で集成される類似の技術など、数多くの技術を利用し、実行することができる。
【０１７２】
単独又は複数のアミノ酸の置換、欠失、及び／又は挿入は、変異誘発、組換え、及び／又はシャッフリング、それに続く関連するスクリーニング手順の公知の方法、例えばReidhaar-Olson及びSauer, Science, 241: 53-57 (1988)；Bowie及びSauer, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 86: 2152-2156 (1989)；WO 95/17413；又は、WO 95/22625に明らかにされたものなどを使用し、作製及び試験することができる。使用することができる他の方法は、エラープローンＰＣＲ、ファージディスプレイ(例えば、Lowmanら、Biochemistry, 30: 10832-10837 (1991)；米国特許第5,223,409号；WO 92/06204)、並びに領域指定変異誘発(Derbyshireら、Gene 46: 145 (1986)；Nerら、DNA, 7: 127 (1988))を含む。
【０１７３】
変異誘発／シャッフリング法は、宿主細胞により発現されたクローニングされ、変異誘発されたポリペプチドの活性を検出するために、ハイスループット自動スクリーニング法と組合せることができる(Nessら、Nature Biotechnology, 17: 893-896 (1999))。活性ポリペプチドをコードしている変異誘発されたＤＮＡ分子は、宿主細胞から回収され、且つ当該技術分野における標準方法を用い、迅速に配列決定され得る。これらの方法は、ポリペプチド内の個別のアミノ酸残基の重要性の迅速な決定を可能にする。
【０１７４】
半合成遺伝子構築は、合成遺伝子構築、及び／又は位置指定変異誘発、及び／又はランダム変異誘発、及び／又はシャッフリングの態様を組合せることにより、実現される。半合成構築は、ＰＣＲ技術と組み合わせて、合成されるポリヌクレオチド断片を利用するプロセスにより、代表される。従って遺伝子の規定された領域は、新規に合成することができ、他方で他の領域は、部位特異的変異誘発プライマーを使用し増幅することができ、また他方で他の領域は、エラープローンＰＣＲ又は非エラープローンＰＣＲ増幅に供することができる。その後ポリヌクレオチド部分配列は、シャッフリングされる。
【０１７５】
本発明の第五の態様に関する更なる優先は、本発明の第一の態様のもの、及び下記の本発明の１２番目の態様に提供されるものを含む。当業者は、本発明の任意の態様は、本発明の別の態様若しくは態様類、及び／又は本発明の態様の１又は複数（数種）の優先及び／又は本明細書で作製される他の開示と組み合わせることができることを理解している。
【０１７６】
作製方法
本発明の第六の態様は、本発明の変異体の調製方法に関する。本発明の変異体は、当業者に周知の技術を用いて調製することができる。一つの簡便な方式は、親アルブミン又はそれらの断片、又はアルブミン若しくはそれらの断片を含む融合ポリペプチドをコードしている核酸のクローニング、好ましくは本発明の第一又は第五の態様に説明されたような、配列番号２の成熟ポリペプチドの４９２、５５０、５７３、５７４及び５８０から選択される位置に対応する２以上の位置（又は他のアルブミン若しくはそれらの断片の同等の位置）に、所望の置換（複数可）を導入するための、該核酸の修飾、修飾された核酸が、プロモーター、ターミネーター、活性化部位、リボソーム結合部位などの、好適な調節遺伝子エレメントと機能可能な結合で配置される好適な遺伝子構築体の調製、該遺伝子構築体の好適な宿主生物への導入、変異体の発現に繋がる条件下での、形質転換された宿主生物の培養、並びに変異体の回収による。これらの技術は全て、当該技術分野において公知であり、且つこれは、本発明の特定の変異体を調製するのに適した方法を設計する上で、平均的実務者の技術の範囲内である。
【０１７７】
本発明の変異体ポリペプチドはまた、形質転換された宿主生物の培養時に、成長培地へ分泌される変異体ポリペプチドを有するために、シグナル配列に結合することができる。回収及び精製を容易にするために、成長培地へ分泌された変異体ポリペプチドを有することは、一般に有利である。
変異体ポリペプチドを調製する技術はまた、WO 2009019314(引用により含まれる)に開示されており、且つこれらの技術も、本発明に適用され得る。
【０１７８】
アルブミンは、真菌（非限定的に、アスペルギルス(WO 06066595)、クルイベロミセス(Fleer、Bio/technology 9, 968-975 (1991))、ピキア(Kobayashi、Therapeutic Apheresis 2, 257-262 (1998))及びサッカロミセス(Sleep、Bio/technology 8, 42-46 (1990))を含む）、細菌(Pandjaitab、J. Allergy Clin. Immunol. 105, 279-285 (2000)))、動物(Barash、Transgenic Research 2, 266-276 (1993))、及び植物(非限定的に、ジャガイモ及びタバコ(Sijmons、Bio/technology 8, 217 (1990)、及びFarran、Transgenic Research 11, 337-346 (2002))、及びライス、例えば、オリザ・サティバを含む)、並びに哺乳動物細胞、例えばＣＨＯ及びＨＥＫを含む、広範な宿主において、組換えタンパク質として巧く発現される。本発明の変異体ポリペプチドは、好適な宿主細胞において、組換えにより生成されることが好ましい。原則的に、適量のポリペプチドを生成することが可能な任意の宿主細胞を、使用することができ、且つこれは本発明の好適な宿主細胞を選択する上で、平均的実務者の技術の範囲内である。好ましい宿主生物は、酵母であり、好ましくはサッカロミセス属から選択され、より好ましくはサッカロミセス・セレビシアエである。
【０１７９】
本発明の変異体ポリペプチドは、濾過、遠心分離、クロマトグラフィー、及びアフィニティ分離技術などの、公知の分離技術の組合せを用い、成長培地から回収及び精製することができる。そのような公知の分離工程の特定の組合せを用い、本発明の変異体を、精製することは、平均的実務者の技術の範囲内である。本発明の変異体に適用することができる精製技術の例として、WO 00/44772の教示を挙げることができる。
【０１８０】
本発明の変異体ポリペプチドは、治療上有益な化合物（ワクチンなど予防上有益な化合物を含む）の、それを必要とする動物又はヒト個体への送達に使用することができる。そのような治療上有益な化合物としては、様々な造影技術などの、診断に使用するための標識物及び容易に検出可能な化合物；薬物などの医薬活性化合物、又は抗体などの特異的結合部分が挙げられるが、これらに限定されるものではない。本発明の変異体は更に、２種以上の異なる治療上有益な化合物、例えば、抗体と薬物に結合することもでき、これは組合せた分子に、所望の標的に特異的に結合する能力をもたらし、これにより特定の標的に結合された薬物の高濃度を提供する。
【０１８１】
本発明の第六の態様に関する更なる優先は、本発明の第一の態様のもの、及び下記の本発明の１２番目の態様に提供されるものを含む。当業者は、本発明の任意の態様は、本発明の別の態様若しくは態様類、及び／又は本発明の態様の１又は複数（数種）の優先及び／又は本明細書で作製される他の開示と組み合わせることができることを理解している。
【０１８２】
複合体
本発明の第七の態様は、複合体（複合）に関する。従って、本発明のアルブミンの変異体又はそれらの断片又は融合ポリペプチドは、当該技術分野において公知の技術を使用し、第二の分子（「複合パートナー」）と複合されることができる。複合パートナーは、治療的、予防的（ワクチンを含む）、診断的、造影的又は他の有益な部分であることができる。該複合パートナーは、ポリペプチド又は非ポリペプチド化学物質であることができる。複合パートナーは、ポリペプチド、化学物質（例えば、化学的に合成された薬物）又は核酸（例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ）であることができる。
【０１８３】
該第二の分子は、診断的又は造影的部分を含むことができ、且つこの実施態様において、複合体は、造影における診断ツールとして有用であることができるか；又は、第二の分子は、治療的若しくは予防的（例えば、ワクチン）化合物であることができ、且つこの実施態様において、複合体は、治療的又は予防的（例えば、ワクチン接種）目的で使用することができ、ここで複合体は、治療的又は予防的化合物の治療的又は予防的特性に加え、複合体のアルブミン部分により提供される望ましい血漿半減期を有する。アルブミンと治療的分子の複合体は、当該技術分野において公知であり、且つそのような複合体は、従って複合されない遊離の治療的分子に比べ、長い血漿半減期を有することが証明されている。本発明により、本発明の複合体のＦｃＲｎへの結合親和性及び／又は血漿半減期を、先行技術の対応する複合体に比べ、変更することが可能である。「変更」は、血漿半減期の増加及び血漿半減期の減少及び／又はＦｃＲｎの結合親和性の増加及びＦｃＲｎへの結合親和性の減少の両方を含む。血漿半減期及び／又はＦｃＲｎへの結合親和性の増加が好ましい。複合体は好都合なことに、周知の化学を用い、ＨＳＡの表面上に存在する遊離チオール基（成熟ＨＳＡのアミノ酸残基３４）を介して連結される。
【０１８４】
一つの特に好ましい態様において、変異アルブミン又はそれらの断片は、有益な治療的又は予防的（ワクチンを含む）化合物へ複合され、且つこの複合体は、それを必要とする患者の状態の治療に使用され、その状態は、特定の選択された治療的化合物に反応する。そのような治療的に有用な化合物を変異アルブミン又はそれらの断片へ複合する技術は、当該技術分野において公知である。WO 2009/019314(その全体は引用により本明細書中に組み込まれている)は、治療的化合物のポリペプチドへの複合に適した技術の例を明らかにしており、それらの技術も本発明に適用することができる。更にWO 2009/019314は、置換されたトランスフェリンに複合され得る化合物及び部分の例を明らかにしており、且つこれらの例もまた、本発明に適用することができる。WO 2009/019314の教示は、引用により本明細書中に含まれている。
【０１８５】
ＨＳＡは、好都合なことにその天然型において複合に使用することができる１個の遊離チオール基（Ｃｙｓ３４）を含む。この態様の特定の実施態様のように、変異アルブミン又はそれらの断片は、表面上に追加の遊離チオール基を生じるために提供された更なる修飾を含むことができる。このことは、変異アルブミン又はそれらの断片の搭載(payload)が増加し、その結果１個より多い治療的（例えば予防的）化合物の分子を、変異アルブミン又はそれらの断片の各分子に複合することができるか、或いは２種以上（数種）の異なる治療的化合物、例として、例えば腫瘍に特異的な抗体などの、標的化特性を有する化合物；及び、変異アルブミン又はそれらの断片に複合された細胞毒性薬を、変異アルブミン又はそれらの断片の各分子に複合することができ、これにより腫瘍に対し高度に特異的薬物を作製するという恩恵を有する。更なる遊離のチオール基を表面上に提供するように修飾され得る特定の残基の教示は、同時係属出願WO 2010/092135に認めることができ、これは引用により組み込まれている。
【０１８６】
複合パートナーは代わりに、融合ポリペプチド（本明細書記載）に複合され、アルブミンに融合された融合パートナーに加え、同じアルブミン又は更には融合パートナーに複合された複合パートナーを含む分子を生じてもよい。
【０１８７】
本発明の第七の態様に関する更なる優先は、本発明の第一の態様のもの、及び下記の本発明の１２番目の態様に提供されるものを含む。当業者は、本発明の任意の態様は、本発明の別の態様若しくは態様類、及び／又は本発明の態様の１又は複数（数種）の優先及び／又は本明細書で作製される他の開示と組み合わせることができることを理解している。
【０１８８】
会合体
本発明の第八の態様は、会合体に関する。従って、アルブミンの変異体又はそれらの断片又は融合ポリペプチドは更に、「会合体」の形で使用することができる。この結合において、用語「会合体」は、アルブミンの変異体又はそれらの断片、並びに変異アルブミン又はそれらの断片に非共有結合により結合された若しくは会合された他の化合物を含む化合物を意味することが意図されている。そのような会合体の例として、変異アルブミン及び疎水性相互作用によりアルブミンへ会合された脂質からなる会合体を挙げることができる。そのような会合体は、当該技術分野において公知であり、且つこれらは、周知の技術を用いて調製することができる。本発明の好ましい会合体の例として、変異アルブミンと、タキサン、タキソール又はタキソール誘導体（例えばパクリタキセル）を含む会合体を挙げることができる。会合体の更なる例は、治療的、予防的（ワクチンを含む）、診断的、造影的又は他の有益な部分を含む。
【０１８９】
本発明のアルブミン会合体の半減期は、「他の化合物」単独の半減期よりも、より長いか又はより短いことができる。本発明のアルブミン会合体の半減期は、未変性のＨＳＡなどの参照アルブミン（本発明のアルブミン変異体又は誘導体の代わりに）と「他の化合物」を含む又はからなる類縁の／同等のアルブミン会合体の半減期よりも、より長いか又はより短いことができる。同様に、本発明のアルブミン会合体のＦｃＲｎへの結合親和性は、未変性のＨＳＡなどの参照アルブミン（本発明のアルブミン変異体又は誘導体の代わりに）と「他の化合物」を含む又はからなる類縁の／同等のアルブミン会合体のＦｃＲｎへの結合親和性よりもより強力又はより弱いことができる。会合体の調製方法は、当業者に周知であり、例えば、ＨＳＡのリポ化合物との製剤（会合による）は、Hussain, R.及びSiligardi, G.、International Journal of Peptide Research and Therapeutics, Vol. 12, NO: 3, pp. 311-315 (2006)に記載されている。
【０１９０】
本発明の第八の態様に関する更なる優先は、本発明の第一の態様のもの、及び下記の本発明の１２番目の態様に提供されるものを含む。当業者は、本発明の任意の態様は、本発明の別の態様若しくは態様類、及び／又は本発明の態様の１又は複数（数種）の優先及び／又は本明細書で作製される他の開示と組み合わせることができることを理解している。
【０１９１】
組成物
本発明の第九の態様は、組成物に関する。従って、本発明は、医薬組成物の製造のための、アルブミンの変異体又はそれらの断片、又は変異アルブミン若しくはそれらの断片を含む融合ポリペプチド、又は変異アルブミン若しくはそれらの断片を含む複合体、又は変異アルブミン若しくはそれらの断片を含む会合体の使用にも関し、ここでアルブミンの変異体又はそれらの断片、又は変異アルブミン若しくはそれらの断片を含む融合ポリペプチド、又は変異アルブミン若しくはそれらの断片を含む複合体、又は変異アルブミン若しくはそれらの断片を含む会合体は、ＨＳＡ又は対応するそれらの断片、又はＨＳＡ若しくはそれらの断片を含む融合ポリペプチド、又はＨＳＡを含む複合体と比べ、変更されたＦｃＲｎへの結合親和性及び／又は変更された血漿半減期を有する。
【０１９２】
これに関連して、ＨＳＡの対応する断片とは、それが比較される変異アルブミンの断片と並置され且つこの断片と同じ数のアミノ酸を有するＨＳＡの断片を意味することが意図される。同様に対応するＨＳＡを含む融合ポリペプチド又はＨＳＡを含む複合体とは、それが比較される変異アルブミンを含む複合体の融合ポリペプチドと同じサイズ及びアミノ酸配列を有する分子を意味することが意図される。
組成物は、水、ポリソルベート８０又はヒトアルブミンに関して米薬局方に指定されたものなど、医薬として許容し得る担体又は賦形剤を含むことができる。
【０１９３】
本発明の第九の態様に関する更なる優先は、本発明の第一の態様のもの、及び下記の本発明の１２番目の態様に提供されるものを含む。当業者は、本発明の任意の態様は、本発明の別の態様若しくは態様類、及び／又は本発明の態様の１又は複数（数種）の優先及び／又は本明細書で作製される他の開示と組み合わせることができることを理解している。
【０１９４】
ナノ粒子
本発明の第十の態様は、本明細書開示の変異体、融合体、複合体、会合体、ナノ粒子、組成物又はポリヌクレオチドを含む、ナノ粒子に関する。
【０１９５】
分子をナノ粒子又は微粒子へ取り込む技術は、当該技術分野において公知である。本発明のアルブミン変異体、それらの断片、融合体、複合体又は会合体に適用することができるナノ粒子又は微粒子を調製する好ましい方法は、WO 2004/071536、又はWO 2008/007146、又はOner及びGrovesの文献(Pharmaceutical Research, 10(9)巻, 1387-1388頁, (1993))に明らかにされており、これらは引用により本明細書中に組み込まれている。好ましくは、ナノ粒子の平均直径は、５〜１０００ｎｍ、より好ましくは５、１０、２０、３０、４０、５０、８０、１００、１３０、１５０、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、又は９９９ｎｍから、５、１０、２０、３０、４０、５０、８０、１００、１３０、１５０、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、又は１０００ｎｍまでである。平均の直径２００ｎｍ未満、より特定すると１３０ｎｍ未満である微粒子は、０．２μｍ（ミクロン）フィルターを通す濾過により滅菌することができる。好ましくは、微粒子の平均直径は、１０００ｎｍ（１μｍ（ミクロン））〜１００μｍ（ミクロン）、より好ましくは１、２、５、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００μｍ（ミクロン）から１、２、５、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００μｍ（ミクロン）までである。
【０１９６】
本発明の第十の態様に関する更なる優先は、本発明の第一の態様のもの、及び下記の本発明の１２番目の態様に提供されるものを含む。当業者は、本発明の任意の態様は、本発明の別の態様若しくは態様類、及び／又は本発明の態様の１又は複数（数種）の優先及び／又は本明細書で作製される他の開示と組み合わせることができることを理解している。
【０１９７】
使用
本発明の第十一の態様は、変異アルブミン、それらの断片、融合体又は複合体又はナノ粒子又はそれらの会合体の使用に関する。使用は、例えば、治療、予防、診断又は造影の方法においてであることができる。本発明の変異アルブミン又はそれらの断片、又は変異アルブミン若しくはそれらの断片を含む融合ポリペプチドは、それらのＦｃＲｎへの結合親和性及び／又は血漿半減期は、親又は参照アルブミン又はそれらの断片、又は親若しくは参照アルブミン若しくはそれらの断片を含む融合ポリペプチドと比べ、変更される点で、恩恵を有する。これは、本発明の変異アルブミン若しくはそれらの断片を含む複合体、又は変異アルブミン若しくはそれらの断片を含む融合ポリペプチド、又は変異アルブミン若しくはそれらの断片を含む会合体のＦｃＲｎへの結合親和性及び／又は血漿半減期は、特定の治療目的に応じて選択することができるという利点を有する。
【０１９８】
いくつかの状況において、参照分子又は組成物よりも、より長い血漿半減期を有するアルブミン変異体、断片、融合体、複合体若しくは会合体、又はそれらの組成物の使用は、有利であり、その理由は、このアルブミン変異体、断片、融合体、複合体若しくは会合体又はそれらの組成物の投与は、参照分子又は組成物を使用した場合に比べ、より少ない回数又はより少ない投与量（及び結果的により少ない副作用）が必要とされるという恩恵があるからである。アルブミン部分の変異体、融合体、複合体、会合体、ナノ粒子、組成物又はポリヌクレオチドの使用に関して、本明細書に開示されたようなもう一つの変更を含むことができる。
【０１９９】
別の状況において、参照分子又は組成物よりも、より短い血漿半減期を有するアルブミン変異体、断片、融合体、複合体若しくは会合体、又はそれらの組成物の使用は、有利であり、その理由は、このアルブミン変異体、断片、融合体、複合体若しくは会合体又はそれらの組成物の投与は、参照分子又は組成物を使用した場合に比べ、より高い投与量で実行することができ、これは投与された化合物が、参照分子又は組成物が使用される場合よりもより迅速に、レシピエントから消失されるという恩恵があるからである。アルブミン部分の変異体、融合体、複合体、会合体、ナノ粒子、組成物又はポリヌクレオチドの使用に関して、本明細書に開示されたようなもう一つの変更を含むことができる。
【０２００】
例えば、動物又はヒトにおいて造影目的で使用される複合体、会合体又は融合ポリペプチドに関して、ここで造影的部分は、非常に短い半減期を有し、且つHSAを含む複合体又は融合ポリペプチドは、造影目的で必要とされるよりもはるかに長い血漿半減期を有する場合、親又は参照アルブミン又はそれらの断片よりも、より短い血漿半減期を有する本発明の変異アルブミン又はそれらの断片の使用は、造影目的には十分な長さであるが、適用される特定の患者の体から消失されるのに十分に短い血漿半減期を有する融合ポリペプチドの複合体を提供するために、有利であろう。
【０２０１】
そのような治療を必要とする患者において特定の状態を治療又は緩和するのに効果がある治療的化合物を含む複合体、会合体又は融合ポリペプチドに関する別の例において、より長い血漿半減期を有する会合体又は複合体又は融合ポリペプチドを提供するために、親又は参照アルブミン又はそれらの断片よりもより長い血漿半減期を有する変異アルブミン又はそれらの断片の使用は、本発明の会合体又は複合体又は融合ポリペプチドの投与が、親又は参照アルブミン又はそれらの会合体又はそれらの断片が使用される状況と比べ、より少ない頻度又は減少された投与量を必要とし、これはより少ない副作用を伴うという恩恵を有するので、有利であろう。例えば、本発明は、会合体が、タキサン、タキソール又はタキソール誘導体（例えばパクリタキセル）を含有するような、本発明の会合体の有効量を個体に投与することを含む、個体において増殖性疾患を治療する方法を提供する。
【０２０２】
更なる態様において、本発明は、本発明の変異アルブミン、それらの会合体又はそれらの断片、変異アルブミン断片又はそれらの会合体、又は変異アルブミン若しくはそれらの断片を含む融合ポリペプチドを含有する組成物に関する。これらの組成物は、好ましくは医薬組成物である。この組成物は、医薬分野の公認のハンドブックに開示されたような、本分野において公知の技術を使用し、調製することができる。アルブミン変異体、断片、それらの融合体、複合体又は会合体は、参照分子のものよりも、調節された（すなわちより強い又はより弱い、及び／又はより長い又はより短い）ＦｃＲｎへの結合親和性及び／又は血漿半減期を有するので、この組成物はまた、本明細書に記載のアルブミン変異体、断片、それらの融合体、複合体又は会合体の代わりに、参照分子を含有する同等の組成物に対し、ＦｃＲｎへの結合親和性及び／又は調節された血漿半減期を有する。該組成物は、ワクチンであることができる。本発明のポリペプチドは、活性医薬物質又は賦形剤であってよい。任意に、該組成物は、単位剤形で提供される。
【０２０３】
好ましくは、アルブミン変異体、断片、それらの融合体、複合体又は会合体は、参照分子の血漿半減期、例えばアルブミン成分（例えば、アルブミン変異体、断片、融合体、複合体又は会合体）が、野生型アルブミン（例えばＨＳＡ）又は変異体、断片、融合体、複合体又は会合体であること以外は同じ組成物の血漿半減期よりも、より長い血漿半減期を有する。
【０２０４】
特定の実施態様において、該組成物は、本発明の変異アルブミン又はそれらの断片、並びに医薬として有益な部分及びアルブミン結合ドメイン（ＡＢＤ）を含む化合物を含有する。本発明により、ＡＢＤは、インビボにおいて循環アルブミンに結合することが可能であり、これによりＡＢＤ及び該ＡＢＤに結合された任意の化合物又は部分の循環における輸送をもたらす、部位、部分又はドメインを意味する。ＡＢＤは、当該技術分野において公知であり、且つアルブミンへ非常に強固に結合し、その結果アルブミンへ結合されたＡＢＤを含む化合物は、ある程度単独の分子として挙動することが示されている。本発明者らは、本発明の変異アルブミン又はそれらの断片を、医薬として有益な部分及びＡＢＤを含む化合物と一緒に使用することにより、該化合物をそれを必要とする患者にそのまま注射した場合又は天然のアルブミン又はそれらの断片を含む製剤で投与した場合に比べ、医薬として有益な部分及びＡＢＤを含む化合物のＦｃＲｎへの結合親和性及び／又は血漿半減期を変更することが可能になることを認めている。
【０２０５】
本発明の変異アルブミン又はそれらの断片、又は変異アルブミン若しくはそれらの断片を含む複合体、又は変異アルブミン若しくはそれらの断片を含む融合ポリペプチド、又は変異アルブミン若しくはそれらの断片を含む会合体は、当該技術分野において周知の技術を使用し、ナノ粒子又は微粒子へ取り込むこともできる。本発明の変異アルブミン又はそれらの断片に適用することができるナノ粒子又は微粒子を調製する好ましい方法は、WO 2004/071536、又はWO 2008/007146、又はOner及びGrovesの文献(Pharmaceutical Research, 10(9), 1387-1388 (1993))に明らかにされており、これらは引用により本明細書中に組み込まれている。
【０２０６】
本発明の第十一の態様に関する更なる優先は、本発明の第一の態様のもの、及び下記の本発明の１２番目の態様に提供されるものを含む。当業者は、本発明の任意の態様は、本発明の別の態様若しくは態様類、及び／又は本発明の態様の１又は複数（数種）の優先及び／又は本明細書で作製される他の開示と組み合わせることができることを理解している。
【０２０７】
分子のＦｃＲｎ−結合親和性又は半減期を変更する方法
本発明の第十二の態様は、分子のＦｃＲｎ−結合親和性又は半減期を変更する方法を提供し、これは下記の事項を含む：
（ａ）ここで、分子は、該分子を、本明細書に開示されたポリペプチドへ、又は本明細書に開示された複合体へ融合又は複合しているか；該分子を、本明細書に開示されたポリペプチドへ、又は本明細書に開示された複合体へ会合しているか；該分子を、本明細書に開示されたナノ粒子中、又は本明細書に開示された組成物へ取り込んでいる、ポリペプチドである；
（ｂ）ここで、分子は、該分子を、本明細書に開示されたポリペプチドへ、又は本明細書に開示された複合体へ複合しているか；該分子を、本明細書に開示されたポリペプチドへ、又は本明細書に開示された複合体へ会合しているか；該分子を、本明細書に開示されたナノ粒子中、又は本明細書に開示された組成物へ取り込んでいる、ポリペプチドではない。
【０２０８】
「分子」の例は、本明細書に説明されたものなど、治療、予防（活性医薬成分又は賦形剤のいずれかとしてワクチンにおいて使用されるものを含む）、造影及び診断において有用なものを含む。
【０２０９】
本発明の第十二の態様に関する更なる優先は、本発明の第一の態様のもの、及び下記の本発明の１２番目の態様に提供されるものを含む。当業者は、本発明の任意の態様は、本発明の別の態様若しくは態様類、及び／又は本発明の態様の１又は複数（数種）の優先及び／又は本明細書で作製される他の開示と組み合わせることができることを理解している。
【０２１０】
本発明の全ての態様の優先は、以下に提供される。当業者は、本発明のいずれの態様も、本発明の別の態様又は態様類と及び／又は本発明の態様の１又は複数（数種）の優先と及び／又は本明細書で作製される他の開示と、組み合わせることができることを理解している。
【０２１１】
アルブミンの変異体又はそれらの断片、又は変異アルブミン若しくはそれらの断片を含む融合ポリペプチド、それらの断片、複合体、ナノ粒子、会合体又は組成物は、対応するアルブミン又はそれらの断片、又はアルブミン若しくはそれらの断片を含む融合ポリペプチド、それらの断片、複合体、ナノ粒子、会合体又は組成物の血漿半減期よりも、より長い又はより短いのいずれかの、好ましくはより長い血漿半減期を、或いは、より強い又はより弱い、好ましくはより弱い、ＦｃＲｎへの結合を有することができる。好ましくは、アルブミンの変異体又はそれらの断片、又は変異アルブミン若しくはそれらの断片を含む融合ポリペプチド、それらの断片、複合体、ナノ粒子、会合体又は組成物は、ＨＳＡ又は対応するアルブミン若しくはそれらの断片、又はアルブミン若しくはそれらの断片を含む融合ポリペプチド、それらの断片、複合体、ナノ粒子、会合体又は組成物の血漿半減期よりもより長い血漿半減期を有する。
【０２１２】
或いは、これは、ＨＳＡの又は対応するそれらの断片、又はＨＳＡ若しくはそれらの断片を含む融合ポリペプチドの対応するＦｃＲｎへのＫＤよりも低い、ＦｃＲｎ（例えばｓｈＦｃＲｎ）へのＫＤを有する、アルブミンの変異体又はそれらの断片、又は変異アルブミン若しくはそれらの断片を含む融合ポリペプチド、それらの断片、複合体、ナノ粒子、会合体又は組成物として、表現することができる。好ましくは、アルブミンの変異体又はそれらの断片、又は変異アルブミン若しくはそれらの断片を含む融合ポリペプチド、それらの断片、複合体、ナノ粒子、会合体又は組成物のＫＤは、ＨＳＡのＦｃＲｎへのＫＤの０．９×未満、より好ましくはＨＳＡのＦｃＲｎへのＫＤの０．５×未満、より好ましくはＨＳＡのＦｃＲｎへのＫＤの０．１×未満、更により好ましくはＨＳＡのＦｃＲｎへのＫＤの０．０５×未満、更により好ましくはＨＳＡのＦｃＲｎへのＫＤの０．０２×未満、及び最も好ましくはＨＳＡのＦｃＲｎへのＫＤの０．０１×未満（ここで×は「かけ算される」ことを意味する）。アルブミンの変異体又はそれらの断片、又は変異アルブミン若しくはそれらの断片を含む融合ポリペプチド、それらの断片、複合体、ナノ粒子、会合体又は組成物のＫＤは、ＦｃＲｎに関するＷＴアルブミン（例えば配列番号２）のＫＤと、ＦｃＲｎに関するＨＳＡ  Ｋ５７３Ｐ（配列番号３）のＫＤの間である。そのようなＫＤは、ＨＳＡとＦｃＲｎの間の結合親和性よりもより高い結合親和性を表している。より高い結合親和性は、より長い半減期、例えば血漿半減期を示している。
【０２１３】
或いは、アルブミンの変異体又はそれらの断片、又は変異アルブミン若しくはそれらの断片を含む融合ポリペプチド、それらの断片、複合体、ナノ粒子、会合体又は組成物は、ＨＳＡ又は対応するそれらの断片、又はＨＳＡ若しくはそれらの断片を含む融合ポリペプチドの血漿半減期よりも短い血漿半減期を有する。
【０２１４】
これは、ＨＳＡの又は対応するアルブミン又はそれらの断片、又はアルブミン若しくはそれらの断片を含む融合ポリペプチド、それらの断片、複合体、ナノ粒子、会合体又は組成物の対応するＦｃＲｎへのＫＤよりも高い、ＦｃＲｎへのＫＤを有する、アルブミンの変異体又はそれらの断片、又は変異アルブミン若しくはそれらの断片を含む融合ポリペプチド、それらの断片、複合体、ナノ粒子、会合体又は組成物として表現することができる。好ましくは、アルブミンの変異体又はそれらの断片、又は変異アルブミン若しくはそれらの断片を含む融合ポリペプチド、それらの断片、又はアルブミンの変異体若しくはそれらの断片を含む複合体のＫＤは、ＨＳＡのＦｃＲｎへのＫＤの２×より大きい、より好ましくはＨＳＡのＦｃＲｎへのＫＤの５×より大きい、より好ましくはＨＳＡのＦｃＲｎへのＫＤの１０×より大きい、更により好ましくはＨＳＡのＦｃＲｎへのＫＤの２５×より大きい、最も好ましくはＨＳＡのＦｃＲｎへのＫＤの５０×より大きい、ＨＳＡのＦｃＲｎへのＫＤの６０×より大きい、７０×より大きい、８０×より大きい、９０×より大きい又は１００×より大きい。アルブミンの変異体又はそれらの断片、又は変異アルブミン若しくはそれらの断片を含む融合ポリペプチド、それらの断片、複合体、ナノ粒子、会合体又は組成物は、ＦｃＲｎへのヌル結合体であることができる。
【０２１５】
アルブミンの変異体又はそれらの断片、又は変異アルブミン若しくはそれらの断片を含む融合ポリペプチド、それらの断片、又はアルブミンの変異体若しくはそれらの断片を含む複合体若しくはナノ粒子若しくは会合体若しくは組成物は、好ましくは、本発明のアルブミンの変異体又はそれらの断片、又は変異アルブミン若しくはそれらの断片を含む融合ポリペプチド、それらの断片、又はアルブミンの変異体若しくはそれらの断片を含む複合体若しくはナノ粒子若しくは会合体若しくは組成物である。より低い結合親和性は、より短い半減期、例えば血漿半減期を示している。
【０２１６】
一つの本発明の利点は、ユーザーの必要性に合致する結合親和性又は半減期を達成するために、アルブミン、アルブミンの変異体又はそれらの断片、又は変異アルブミン若しくはそれらの断片を含む融合ポリペプチド、それらの断片、複合体、ナノ粒子、会合体又は組成物の半減期の調整が可能であることである。
【０２１７】
ＫＤを決定及び／又は比較する場合、下記パラメータの１又は複数（及び好ましくは全て）を使用することができる：
装置：Ｂｉａｃｏｒｅ  ３０００装置(GE Healthcare社)
フローセル：ＣＭ５センサーチップ
ＦｃＲｎ：ヒトＦｃＲｎ、好ましくは可溶性ヒトＦｃＲｎ、任意にＧＳＴ又はＨｉｓ、最も好ましくはＨｉｓなどのタグに結合され、例えばβ−２−ミクログロブリン（配列番号３１）Ｃ−末端での６ヒスチジンに結合されている
ＦｃＲｎの定量：１２００−２５００  ＲＵ
カップリング化学：アミンカップリング化学（例えば、前記装置の製造業者により提供されるプロトコールに記載されたように）。
カップリング法：カップリングは、１０ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ５．０）(GE Healthcare社)中のタンパク質２０μｇ／ｍｌの注入により実行される。リン酸緩衝液（６７ｍＭリン酸緩衝液、０．１５Ｍ  ＮａＣｌ、０．００５％Ｔｗｅｅｎ  ２０のｐＨ５．５）を、試行緩衝液及び希釈緩衝液として使用する。表面の再生は、ＨＢＳ−ＥＰ緩衝液（０．０１Ｍ  ＨＥＰＥＳ、０．１５Ｍ  ＮａＣｌ、３ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．００５％界面活性剤Ｐ２０のｐＨ７．４(Biacore AB社)の注入を用いて行う。
被験分子（例えば、ＨＳＡ又は変異体）の注入量：２０〜０．０３２μＭ。
注入流量：一定、例えば３０μｌ／ｍｌ
注入温度：２５℃
データ評価ソフトウェア：ＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ４．１ソフトウェア(BIAcore AB社)。
ＫＤを決定するのに好ましい方法は、実施例２に提示されている。
【０２１８】
本発明は、アルブミン、断片、融合体、複合体、会合体、ナノ粒子若しくは組成物の結合親和性及び／又は半減期を、例えば血漿半減期を、調節（増加又は減少）するために、配列番号２の位置４９２、５５０、５７３、５７４及び５８０（従って、ヒト血清由来のアルブミン及び断片中の並びにアルブミン及び非ヒト血清アルブミンの同等の位置）からなる群から選択される２以上の位置を、変更することができることを明らかにしている。変更は、置換、挿入又は欠失であることができる。置換が好ましい。
【０２１９】
置換又は挿入は、保存されたアミノ酸の、すなわち関心対象の位置のアミノ酸に関して保存されたアミノ酸の導入を含んでも含まなくともよい。保存されたアミノ酸の例は、図３の群により示されている：脂肪族、芳香族、疎水性、帯電性、極性、陽性、極小型(tiny)及び小型。配列番号２の位置４９２（或いは他のアルブミン又は変異体又はそれらの断片の同等の位置）で、変更は、好ましくは、例えば未変性のアミノ酸から、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、Ｙへの、より好ましくはＧ、Ｄ、Ｆ、Ｈ、Ｍ又はＲへの、更により好ましくはＧ又はＤへの、並びに最も好ましくはＧへの置換である。配列番号２において、位置４９２の未変性のアミノ酸はＥであり、従ってＥへの置換は好ましくない。
【０２２０】
配列番号２の位置５５０（或いは他のアルブミン又は変異体又はそれらの断片の同等の位置）で、変更は、好ましくは、例えば未変性のアミノ酸から、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、Ｙへの、より好ましくはＫ、Ｌ、Ｍ、Ｅ又はＲへの、更により好ましくはＫ、Ｌ又はＭへの、並びに最も好ましくはＫへの置換である。配列番号２において、位置５５０の未変性のアミノ酸はＤであり、従ってＤへの置換は好ましくない。
【０２２１】
配列番号２の位置５７３（或いは他のアルブミン又は変異体又はそれらの断片の同等の位置）で、変更は、好ましくは、例えば未変性のアミノ酸から、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、Ｙへの、より好ましくはＰ、Ｙ、Ｗ、Ｈ、Ｆ、Ｔ、Ｉ又はＶへの、更により好ましくはＰ、Ｙ又はＷへの、並びに最も好ましくはＰへの置換である。配列番号２において、位置５７３の未変性のアミノ酸はＫであり、従ってＫへの置換は好ましくない。
【０２２２】
配列番号２の位置５７４（或いは他のアルブミン又は変異体又はそれらの断片の同等の位置）で、変更は、好ましくは、例えば未変性のアミノ酸から、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、Ｙへの、より好ましくはＤ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｎ、Ｓ又はＹへの、更により好ましくはＨ、Ｄ、Ｆ又はＧへの、並びに最も好ましくはＨへの置換である。配列番号２において、位置５７４の未変性のアミノ酸はＫであり、従ってＫへの置換は好ましくない。
【０２２３】
配列番号２の位置５８０（或いは他のアルブミン又は変異体又はそれらの断片の同等の位置）で、変更は、好ましくは、例えば未変性のアミノ酸から、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、Ｙへの、より好ましくはＫ又はＲへの、最も好ましくはＫへの置換である。配列番号２において、位置５８０の未変性のアミノ酸はＱあり、従ってＱへの置換は好ましくない。
【０２２４】
変異アルブミンは、配列番号２の位置４９２＋５５０に対応する位置（或いは他のアルブミン又は変異体又はそれらの断片の同等の位置）に、変更を含むことができる。そのような変更は、４９２Ｄ＋５５０Ｋ（例えば配列番号２３１）、又は４９２Ｇ＋５５０Ｋ（例えば配列番号２４０）を含むことができる。
変異アルブミンは、配列番号２の位置４９２＋５７３に対応する位置（或いは他のアルブミン又は変異体又はそれらの断片の同等の位置）に、変更を含むことができる。そのような変更は、４９２Ｆ＋５７３Ｐ（例えば配列番号１０９）、４９２Ｇ＋５７３Ｐ（例えば、配列番号１１０）、４９２Ｈ＋５７３Ｐ（例えば配列番号１１１）、若しくは４９２Ｒ＋５７３Ｐ（例えば配列番号１１３）、又はより好ましくは４９２Ｄ＋５７３Ｐ（例えば配列番号１０８）を含むことができる。しかし、該変異体は、変更４９２Ｇ＋Ｋ５７３Ａ、Ｅ４９２Ｇ＋Ｋ５７３Ａ、Ｅ４９２Ｇ＋Ｎ５０３Ｋ＋Ｋ５７３Ａ、Ｅ４９２Ｇ＋Ｎ５０３Ｈ＋Ｋ５７３Ａ、Ｅ４９２Ｇ＋Ｋ５７３Ｐ、Ｅ４９２Ｇ＋Ｎ５０３Ｋ＋Ｋ５７３Ｐ又はＥ４９２Ｇ＋Ｎ５０３Ｈ＋Ｋ５７３Ｐのみを伴う配列番号２からはならないことが、好ましい。
【０２２５】
変異アルブミンは、配列番号２の位置４９２＋５７４に対応する位置（或いは他のアルブミン又は変異体又はそれらの断片の同等の位置）に、変更を含むことができる。そのような変更は、４９２Ｄ＋５７４Ｈ（例えば配列番号２３２）、４９２Ｇ＋５７４Ｈ（例えば配列番号２４１）、又は４９２Ｄ＋５７４Ｈ（例えば配列番号２３２）を含むことができる。
変異アルブミンは、配列番号２の位置４９２＋５８０に対応する位置（或いは他のアルブミン又は変異体又はそれらの断片の同等の位置）に、変更を含むことができる。
【０２２６】
変異アルブミンは、配列番号２の位置５５０＋５７３に対応する位置（或いは他のアルブミン又は変異体又はそれらの断片の同等の位置）に、変更を含むことができる。そのような変更は、Ｄ５５０Ｋ＋Ｋ５７３Ｐ（例えば配列番号１１７）を含むことができる。
変異アルブミンは、配列番号２の位置５５０＋５７４に対応する位置（或いは他のアルブミン又は変異体又はそれらの断片の同等の位置）に、変更を含むことができる。そのような変更は、５５０Ｋ＋５７４Ｈ（例えば配列番号１３０）、５５０Ｍ＋５７４Ｈ（例えば配列番号２４９）、５５０Ｍ＋５７４Ｈ（例えば配列番号２４９）又は５５０Ｌ＋５７４Ｈ（例えば配列番号２４５）を含むことができる。
【０２２７】
変異アルブミンは、配列番号２の位置５５０＋５８０に対応する位置（或いは他のアルブミン又は変異体又はそれらの断片の同等の位置）に、変更を含むことができる。そのような変更は、５５０Ｋ＋５８０Ｋ（例えば配列番号１３１）、５５０Ｍ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２５１）又は５５０Ｌ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２４７）を含むことができる。
変異アルブミンは、配列番号２の位置５７３＋５７４に対応する位置（或いは他のアルブミン又は変異体又はそれらの断片の同等の位置）に、変更を含むことができる。そのような変更は、５７４Ｄ＋５７３Ｐ（例えば配列番号１２１）、５７４Ｆ＋５７３Ｐ（例えば配列番号１２２）、５７４Ｇ＋５７３Ｐ（例えば配列番号１２３）、５７４Ｈ＋５７３Ｐ（例えば配列番号１２４）、５７４Ｎ＋５７３Ｐ（例えば配列番号１２５）又は５７４Ｓ＋５７３Ｐ（例えば配列番号１２６）を含むことができる。該変異体は、変更Ｋ５７３Ｐ＋Ｋ５７４Ｎ＋Ａ５７７Ｔ＋Ａ５７８Ｒ＋Ｓ５７９Ｃ＋Ｑ５８０Ｋ＋Ａ５８１Ｄ＋Ｇ５８４Ａのみを伴う配列番号２からはならないことが、好ましい。
【０２２８】
変異アルブミンは、配列番号２の位置５７３＋５８０に対応する位置（或いは他のアルブミン又は変異体又はそれらの断片の同等の位置）に、変更を含むことができる。そのような変更は、５８０Ｋ＋５７３Ｐ（例えば配列番号１２８）又は５８０Ｒ＋５７３Ｐ（例えば配列番号１２９）を含むことができる。しかし、該変異体は、変更Ｋ５７３Ｐ＋Ａ５７７Ｅ＋Ａ５７８Ｓ＋Ｑ５８０Ｋ＋Ａ５８２Ｔのみを伴う配列番号２からはならないことが、好ましい。
変異アルブミンは、配列番号２の位置５７４＋５８０に対応する位置（或いは他のアルブミン又は変異体又はそれらの断片の同等の位置）に、変更を含むことができる。
【０２２９】
変異アルブミンは、配列番号２の位置４９２＋５５０＋５７３に対応する位置（或いは他のアルブミン又は変異体又はそれらの断片の同等の位置）に、変更を含むことができる。そのような変更は、４９２Ｇ＋５５０Ｋ＋５７３Ｐ（例えば配列番号２５４）又は４９２Ｄ＋５５０Ｋ＋５７３Ｐ（例えば配列番号２５３）を含むことができる。
変異アルブミンは、配列番号２の位置４９２＋５５０＋５７４に対応する位置（或いは他のアルブミン又は変異体又はそれらの断片の同等の位置）に、変更を含むことができる。そのような変更は、Ｅ４９２Ｇ＋Ｄ５５０Ｋ＋Ｋ５７４Ｈ（例えば配列番号２５５）を含むことができる。
【０２３０】
変異アルブミンは、配列番号２の位置４９２＋５５０＋５８０に対応する位置（或いは他のアルブミン又は変異体又はそれらの断片の同等の位置）に、変更を含むことができる。そのような変更は、４９２Ｄ＋５５０Ｋ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２５８）又は４９２Ｇ＋５５０Ｋ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２５９）を含むことができる。
変異アルブミンは、配列番号２の位置４９２＋５７３＋５７４に対応する位置（或いは他のアルブミン又は変異体又はそれらの断片の同等の位置）に、変更を含むことができる。そのような変更は、４９２Ｄ＋５７３Ｐ＋５７４Ｈ（例えば配列番号２３３）を含むことができる。
【０２３１】
変異アルブミンは、配列番号２の位置４９２＋５７３＋５８０に対応する位置（或いは他のアルブミン又は変異体又はそれらの断片の同等の位置）に、変更を含むことができる。そのような変更は、４９２Ｄ＋５７３Ｐ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２３４）又は４９２Ｇ＋５７３Ｐ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２４２）を含むことができる。
変異アルブミンは、配列番号２の位置４９２＋５７４＋５８０に対応する位置（或いは他のアルブミン又は変異体又はそれらの断片の同等の位置）に、変更を含むことができる。そのような変更は、４９２Ｄ＋５７４Ｈ＋５８０Ｋ（配列番号２６２）又は４９２Ｇ＋５７４Ｈ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２６３）を含むことができる。
【０２３２】
変異アルブミンは、配列番号２の位置５５０＋５７３＋５７４に対応する位置（或いは他のアルブミン又は変異体又はそれらの断片の同等の位置）に、変更を含むことができる。そのような変更は、５５０Ｋ＋５７４Ｈ＋５７３Ｐ（例えば配列番号１３１）、５５０Ｌ＋５７３Ｐ＋５７４Ｈ（例えば配列番号２４６）又は５５０Ｍ＋５７３Ｐ＋５７４Ｈ（例えば配列番号２５０）を含むことができる。
変異アルブミンは、配列番号２の位置５５０＋５７３＋５８０に対応する位置（或いは他のアルブミン又は変異体又はそれらの断片の同等の位置）に、変更を含むことができる。そのような変更は、５５０Ｌ＋５７３Ｐ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２４８）又は５５０Ｍ＋５７３Ｐ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２５２）を含むことができる。
【０２３３】
変異アルブミンは、配列番号２の位置５５０＋５７４＋５８０に対応する位置（或いは他のアルブミン又は変異体又はそれらの断片の同等の位置）に、変更を含むことができる。
変異アルブミンは、配列番号２の位置５７３＋５７４＋５８０に対応する位置（或いは他のアルブミン又は変異体又はそれらの断片の同等の位置）に、変更を含むことができる。そのような変更は、５７４Ｈ＋５８０Ｋ＋５７３Ｐ（例えば配列番号１３５）を含むことができる。
【０２３４】
変異アルブミンは、配列番号２の位置４９２＋５５０＋５７３＋５７４に対応する位置（或いは他のアルブミン又は変異体又はそれらの断片の同等の位置）に、変更を含むことができる。そのような変更は、４９２Ｇ＋５５０Ｋ＋５７３Ｐ＋５７４Ｈ（例えば配列番号２５７）又は４９２Ｄ＋５５０Ｋ＋５７３Ｐ＋５７４Ｈ（例えば配列番号２５６）を含むことができる。
変異アルブミンは、配列番号２の位置４９２＋５５０＋５７３＋５８０に対応する位置（或いは他のアルブミン又は変異体又はそれらの断片の同等の位置）に、変更を含むことができる。そのような変更は、４９２Ｄ＋５５０Ｋ＋５７３Ｐ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２６０）又は４９２Ｇ＋５５０Ｋ＋５７３Ｐ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２６１）を含むことができる。
【０２３５】
変異アルブミンは、配列番号２の位置４９２＋５５０＋５７４＋５８０に対応する位置（或いは他のアルブミン又は変異体又はそれらの断片の同等の位置）に、変更を含むことができる。
変異アルブミンは、配列番号２の位置４９２＋５７３＋５７４＋５８０に対応する位置（或いは他のアルブミン又は変異体又はそれらの断片の同等の位置）に、変更を含むことができる。そのような変更は、４９２Ｄ＋５７３Ｐ＋５７４Ｈ＋５８０Ｋ（例えば配列番号１１４）又は４９２Ｇ＋５７３Ｐ＋５７４Ｈ＋５８０Ｋ（例えば配列番号１１５）、４９２Ｆ＋５７３Ｐ＋５７４Ｇ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２３８）、４９２Ｇ＋５７３Ｐ＋５７４Ｇ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２３４）、４９２Ｄ＋５７３Ｐ＋５７４Ｇ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２３５）、４９２Ｆ＋５７３Ｐ＋５７４Ｈ＋５８０Ｒ（例えば配列番号２３９）、４９２Ｄ＋５７３Ｐ＋５７４Ｈ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２６４）、４９２Ｇ＋５７３Ｐ＋５７４Ｈ＋５８０Ｒ（例えば配列番号２４４）、４９２Ｄ＋５７３Ｐ＋５７４Ｈ＋５８０Ｒ（例えば配列番号２３６）又は４９２Ｆ＋５７３Ｐ＋５７４Ｈ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２３７）を含むことができる。
【０２３６】
変異アルブミンは、配列番号２の位置５５０＋５７３＋５７４＋５８０に対応する位置（或いは他のアルブミン又は変異体又はそれらの断片の同等の位置）に、変更を含むことができる。そのような変更は、５５０Ｋ＋５７３Ｐ＋５７４Ｈ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２６５）を含むことができる。
変異アルブミンは、配列番号２の位置４９２＋５５０＋５７３＋５７４＋５８０に対応する位置（或いは他のアルブミン又は変異体又はそれらの断片の同等の位置）に、変更を含むことができる。そのような変更は、４９２Ｄ＋５５０Ｋ＋５７３Ｐ＋５７４Ｈ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２６６）又は４９２Ｇ＋５５０Ｋ＋５７３Ｐ＋５７４Ｈ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２６７）を含むことができる。そのような変更は、４９２Ｄ＋５５０Ｋ＋５７３Ｐ＋５７４Ｈ（例えば配列番号２５６）を含むことができる。
【０２３７】
特に好ましい変異体としては、以下が挙げられる：
（ｉ）Ｅ４９２Ｇ及びＱ５８０Ｋ、又は（ｉｉ）Ｅ４９２Ｄ及びＱ５８０Ｋなど、配列番号２の位置４９２及び５８０に対応する位置（或いは他のアルブミン又は変異体又はそれらの断片の同等の位置）の変更を含む、変異アルブミン；
（ｉ）Ｅ４９２Ｇ及びＫ５７４Ｈ、（ｉｉ）Ｅ４９２Ｄ及びＫ５７４Ｈ、（ｉｉｉ）Ｅ４９２Ｄ及びＫ５７４Ｋ、又は（ｉｖ）Ｅ４９２Ｇ及びＫ５７４Ｋなど、配列番号２の位置４９２及び５７４に対応する位置（或いは他のアルブミン又は変異体又はそれらの断片の同等の位置）の変更を含む、変異アルブミン；
【０２３８】
（ｉ）Ｅ４９２Ｇ及びＤ５５０Ｋ、又は（ｉｉ）Ｅ４９２Ｄ及びＤ５５０Ｋなど、配列番号２の位置４９２及び５５０に対応する位置（或いは他のアルブミン又は変異体又はそれらの断片の同等の位置）の変更を含む、変異アルブミン；
（ｉ）Ｄ５５０Ｋ及びＫ５７３Ｐ、（ｉｉ）Ｄ５５０Ｌ及びＫ５７３Ｐ、又は（ｉｉｉ）Ｄ５５０Ｍ及びＫ５７３Ｐなど、配列番号２の位置５５０及び５７３に対応する位置（或いは他のアルブミン又は変異体又はそれらの断片の同等の位置）の変更を含む、変異アルブミン；
【０２３９】
（ｉ）Ｄ５５０Ｋ及びＫ５７４Ｈ、又は（ｉｉ）Ｄ５５０Ｌ及びＫ５７４Ｈなど、配列番号２の位置５５０及び５７４に対応する位置（或いは他のアルブミン又は変異体又はそれらの断片の同等の位置）の変更を含む、変異アルブミン；
（ｉ）Ｄ５５０Ｍ及びＱ５８０Ｋ、（ｉｉ）Ｄ５５０Ｌ及びＱ５８０Ｋ、又は（ｉｉｉ）Ｄ５５０Ｋ及びＱ５８０Ｋなど、配列番号２の位置５５０及び５８０に対応する位置（或いは他のアルブミン又は変異体又はそれらの断片の同等の位置）の変更を含む、変異アルブミン；
【０２４０】
Ｑ５８０Ｋ及びＫ５７３Ｐなど、配列番号２の位置５８０及び５７３に対応する位置（或いは他のアルブミン又は変異体又はそれらの断片の同等の位置）の変更、並びに好ましくは４９２、５５０及び５７４から選択される位置などに１又は複数（数個）の他の変更を伴う、変異アルブミン。位置５８０にＫ及び位置５７３にＰが存在する場合、該ポリペプチドは４９２、５５０、及び５７４からなる群から選択される位置に追加の変更を含むことが好ましい；
【０２４１】
（ｉ）Ｅ４９２Ｄ及びＫ５７３Ｐ、又は（ｉｉ）Ｅ４９２Ｇ及びＫ５７３Ｐ、又は（ｉｉｉ）Ｅ４９２Ｇ及びＫ５７３Ａなど、配列番号２の位置４９２及び５７３に対応する位置（或いは他のアルブミン又は変異体又はそれらの断片の同等の位置）の変更、並びに好ましくは５５０、５７４及び５８０から選択される位置などに１又は複数（数個）の他の変更を含む、変異アルブミンなど、配列番号２の位置４９２及び５７３に対応する位置の変更を伴う（例えば、変更を含む）変異アルブミン。位置４９２にＧ及び位置５７３にＡ又はＰが存在する場合、該ポリペプチドは５５０、５７４及び５８０からなる群から選択される位置（或いは他のアルブミン又は変異体又はそれらの断片の同等の位置）に追加の変更を含むことが好ましい； 
【０２４２】
Ｋ５７３Ｐ及びＫ５７４Ｈなど、配列番号２の位置５７３及び５７４に対応する位置（或いは他のアルブミン又は変異体又はそれらの断片の同等の位置）の変更、並びに好ましくは４９２、５５０及び５８０から選択される位置などに１又は複数（数個）の他の変更を伴う（例えば変更を含む）、変異アルブミン。位置５７３にＰ及び位置５７４にＮが存在する場合、該ポリペプチドは４９２、５５０及び５８０からなる群から選択される位置（或いは他のアルブミン又は変異体又はそれらの断片の同等の位置）に追加の変更を含むことが好ましい；
【０２４３】
５７４Ｈ及び５８０Ｋなど、配列番号２の位置５７４及び５８０に対応する位置（或いは他のアルブミン又は変異体又はそれらの断片の同等の位置）の変更を含む、変異アルブミン。位置５７４にＮ及び位置５８０にＫが存在する場合、該ポリペプチドは４９２、５５０、及び５７３からなる群から選択される位置（或いは他のアルブミン又は変異体又はそれらの断片の同等の位置）に追加の変更を含むことが好ましい；
【０２４４】
Ｅ４９２Ｇ、Ｄ５５０Ｋ及びＫ５７３Ｐ、例えば配列番号２５４など、又はＥ４９２Ｄ、Ｄ５５０Ｋ及びＫ５７３Ｐ、例えば配列番号２５３など、配列番号２の位置４９２、５５０及び５７３に対応する位置の変更を含む、変異アルブミン；
Ｄ５５０Ｋ、Ｋ５７３Ｐ及びＱ５８０Ｋ、例えば配列番号１３３など、配列番号２の位置５５０、５７３及び５８０に対応する位置の変更を含む、変異アルブミン；
【０２４５】
Ｄ５５０Ｌ、Ｋ５７３Ｐ及びＱ５８０Ｋ、例えば配列番号２４８など、又はＤ５５０Ｍ、Ｋ５７３Ｐ及びＱ５８０Ｋ、例えば配列番号２５２など、配列番号２の位置５５０、５７３及び５８０に対応する位置の変更を含む、変異アルブミン；
Ｄ５５０Ｌ、Ｋ５７３Ｐ及びＫ５７４Ｈ、例えば配列番号２４６など、配列番号２の位置５５０、５７３及び５７４に対応する位置の変更を含む、変異アルブミン；
【０２４６】
Ｄ５５０Ｋ、Ｋ５７３Ｐ及びＫ５７４Ｈ、例えば配列番号１３１など、配列番号２の位置５５０、５７３及び５７４に対応する位置の変更を含む、変異アルブミン；
Ｅ４９２Ｇ、Ｋ５７３Ｐ及びＱ５８０Ｋ、例えば配列番号２４２など、配列番号２の位置４９２、５７３及び５８０に対応する位置の変更を含む、変異アルブミン；
【０２４７】
Ｅ４９２Ｄ、Ｋ５７３Ｐ及びＱ５８０Ｋ、例えば配列番号２３４など、配列番号２の位置４９２、５７３及び５８０に対応する位置の変更を含む、変異アルブミン；
Ｅ４９２Ｄ、Ｄ５５０Ｋ、Ｋ５７３Ｐ及びＫ５７４Ｈ、例えば配列番号２５６など、配列番号２の位置４９２、５５０、５７３及び５７４に対応する位置の変更を含む、変異アルブミン；
【０２４８】
Ｅ４９２Ｇ、Ｄ５５０Ｋ、Ｋ５７３Ｐ及びＫ５７４Ｈ、例えば配列番号２５７など、配列番号２の位置４９２、５５０、５７３及び５７４に対応する位置の変更を含む、変異アルブミン；
Ｋ５７３Ｐ、Ｋ５７４Ｈ及びＱ５８０Ｋ、例えば配列番号１３５など、配列番号２の位置５７３、５７４及び５８０に対応する位置の変更を含む、変異アルブミン；
【０２４９】
Ｅ４９２Ｄ、Ｋ５７３Ｐ、Ｋ５７４Ｈ及びＱ５８０Ｋ（或いは他のアルブミン又は変異体又はそれらの断片の同等の位置）、例えば配列番号１１４など、配列番号２の位置４９２、５７３、５７４及び５８０に対応する位置の変更を含む、変異アルブミン；
Ｅ４９２Ｇ、Ｋ５７３Ｐ、Ｋ５７４Ｈ及びＱ５８０Ｋ（或いは他のアルブミン又は変異体又はそれらの断片の同等の位置）、例えば配列番号１１５など、配列番号２の位置４９２、５７３、５７４及び５８０に対応する位置の変更を含む、変異アルブミン。
【０２５０】
位置４９２での変更が、Ｄ又はＥに関して保存されていることは、好ましい。位置５７４での変更が、Ｈに関して保存されていることは、好ましい。位置５８０での変更が、Ｋに関して保存されていることは、好ましい。
【０２５１】
有利なことに、このポリペプチドは、ＨＳＡなどの参照又は親アルブミンと同じ三次構造（又は断片に関しては、その構造の相対部分）を実質的に保持している。当業者は、三次構造におけるある程度の変動を念頭に、用語「実質的に同じ三次構造」とは、全てのタンパク質はある程度の構造の柔軟性を有すると予測されることを理解している。このことは、親又は参照アルブミン（例えばＨＳＡ）がＦｃＲｎに対し有するものよりも、より高いＦｃＲｎへの結合親和性を有するポリペプチドに、特に適用される。
【０２５２】
１個又は複数（数個）のＨｉｓ残基は、親アルブミンに対し維持されてもされなくともよい。例えば、配列番号２に関連して、下記のＨｉｓ残基の１個又は複数（数個）が維持されてよい：３、９、３９、６７、１０５、１２８、１４６、２４２、２４７、２８８、３３８、３６７、４４０、４６４、５１０、５３５。ドメインＩ中のＨｉｓ残基の１個又は複数（数個）、好ましくは全ては、維持される（すなわち、３、９、３９、６７、１０５、１２８、１４６）。ドメインＩＩ中のＨｉｓ残基の１個又は複数（数個）、好ましくは全ては、維持される（すなわち、２４２、２４７、２８８、３３８、３６７）。ドメインＩＩＩ中のＨｉｓ残基の１個又は複数（数個）、好ましくは全ては、維持される（すなわち、４４０、４６４、５１０、５３５）。Ｈｉｓ４６４、５１０、５３５の１又は複数（数個）又は全ては、維持されてよい。
【０２５３】
アルブミンのジスルフィド結合の少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６又は１７は、該ポリペプチドにおいて維持されることが好ましい。完全長アルブミン由来のポリペプチドに関して、そのアルブミンに通常存在する全てのジスルフィド結合は、維持されることが好ましい。アルブミンの断片由来のポリペプチドに関して、それらの断片中に通常存在する全てのジスルフィド結合は、維持されることが好ましい。Ｃｙｓ３４（又は非ヒトアルブミン中の同等物）は、維持されることが好ましい。
【０２５４】
本発明の全ての態様に関して、融合パートナーポリペプチド及び／又は複合体は、以下の１又は複数（数種）を含むことができる：４−１ＢＢリガンド、５−ヘリックス、ヒトＣ−Ｃケモカイン、ヒトＬ１０５ケモカイン、ｈｕＬ１０５＿３．と称されるヒトＬ１０５ケモカイン、γ−インターフェロンにより誘導されたモノカイン（ＭＩＧ）、部分的ＣＸＣＲ４Ｂタンパク質、血小板塩基性タンパク質（ＰＢＰ）、α１−アンチトリプシン、ＡＣＲＰ−３０相同体；補体成分Ｃ１ｑＣ、アデノイド−発現したケモカイン（ＡＤＥＣ）、ａＦＧＦ；ＦＧＦ−１、ＡＧＦ、ＡＧＦタンパク質、アルブミン、エトポシド、アンギオスタチン、炭疽菌ワクチン、コラスピンに特異的な抗体、アンチスタシン、抗−ＴＧＦβファミリー抗体、抗トロンビンＩＩＩ、ＡＰＭ−１；ＡＣＲＰ−３０；ファモキシン、アポ−リポタンパク種、アリールスルファターゼＢ、ｂ５７タンパク質、ＢＣＭＡ、β−トロンボグロブリンタンパク質（β−ＴＧ）、ｂＦＧＦ；ＦＧＦ２、血液凝固因子、ＢＭＰプロセシング酵素フーリン、ＢＭＰ−１０、ＢＭＰ−１２、ＢＭＰ−１５、ＢＭＰ−１７、ＢＭＰ−１８、ＢＭＰ−２Ｂ、ＢＭＰ−４、ＢＭＰ−５、ＢＭＰ−６、ＢＭＰ−９、骨形態形成タンパク質−２、カルシトニン、カルパイン−１０ａ、カルパイン−１０ｂ、カルパイン−１０ｃ、癌ワクチン、カルボキシペプチダーゼ、Ｃ−Ｃケモカイン、ＭＣＰ２、ＣＣＲ５変異体、ＣＣＲ７、ＣＣＲ７、ＣＤ１１ａ  Ｍａｂ、ＣＤ１３７；４−１ＢＢ受容体タンパク質、ＣＤ２０  Ｍａｂ、ＣＤ２７、ＣＤ２７Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０リガンド、ＣＤ３３イムノトキシン、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ５２  Ｍａｂ、ケルベロスタンパク質、ケモカインエオタキシン、ケモカインｈＩＬ−８、ケモカインｈＭＣＰ１、ケモカインｈＭＣＰ１ａ、ケモカインｈＭＣＰ１ｂ、ケモカインｈＭＣＰ２、ケモカインｈＭＣＰ３、ケモカインｈＳＤＦ１ｂ、ケモカインＭＣＰ−４、ケモカインＴＥＣＫ及びＴＥＣＫ変異体、ケモカイン様タンパク質ＩＬ−８Ｍ１完全長及び成熟型、ケモカイン様タンパク質ＩＬ−８Ｍ１０完全長及び成熟型、ケモカイン様タンパク質ＩＬ−８Ｍ３、ケモカイン様タンパク質ＩＬ−８Ｍ８完全長及び成熟型、ケモカイン様タンパク質ＩＬ−８Ｍ９完全長及び成熟型、ケモカイン様タンパク質ＰＦ４−４１４完全長及び成熟型、ケモカイン様タンパク質ＰＦ４−４２６完全長及び成熟型、ケモカイン様タンパク質ＰＦ４−Ｍ２完全長及び成熟型、コレラワクチン、コンドロモジュリン−様タンパク質、ｃ−ｋｉｔリガンド；ＳＣＦ；マスト細胞増殖因子；ＭＧＦ；線維肉腫由来幹細胞因子、ＣＮＴＦ及びそれらの断片（ＣＮＴＦＡｘ１５(Axokine(商標))など）、プレ活性型及び活性型の両方の凝固因子、コラーゲン、補体Ｃ５  Ｍａｂ、結合組織活性化タンパク質−ＩＩＩ、ＣＴＡＡ１６．８８  Ｍａｂ、ＣＴＡＰ−ＩＩＩ、ＣＴＬＡ４−Ｉｇ、ＣＴＬＡ−８、ＣＸＣ３、ＣＸＣ３、ＣＸＣＲ３；ＣＸＣケモカイン受容体３、シアノビリン−Ｎ、ダルベポエチン、指定されたエクソダス、指定されたｈｕＬ１０５＿７．、ＤＩＬ−４０、ＤＮａｓｅ、ＥＤＡＲ、ＥＧＦ受容体Ｍａｂ、ＥＮＡ−７８、エンドスタチン、エオタキシン、上皮好中球活性化��ンパク質−７８、ＥＰＯ受容体；ＥＰＯＲ、エリスロポエチン（ＥＰＯ）及びＥＰＯ擬体、ユートロピン、エクソダスタンパク質、ＩＸ因子、ＶＩＩ因子、ＶＩＩＩ因子、Ｘ因子及びＸＩＩＩ因子、ＦＡＳリガンド阻害タンパク質（ＤｃＲ３）、ＦａｓＬ、ＦａｓＬ、ＦａｓＬ、ＦＧＦ、ＦＧＦ−１２；線維芽細胞増殖因子相同因子−１、ＦＧＦ−１５、ＦＧＦ−１６、ＦＧＦ−１８、ＦＧＦ−３；ＩＮＴ−２、ＦＧＦ−４；ゲロニン、ＨＳＴ−１；ＨＢＧＦ−４、ＦＧＦ−５、ＦＧＦ−６；ヘパリン結合分泌型トランスフォーミング因子−２、ＦＧＦ−８、ＦＧＦ−９；グリア活性化因子、フィブリノゲン、ｆｌｔ−１、ｆｌｔ−３リガンド、卵胞刺激ホルモンαサブユニット、卵胞刺激ホルモンβサブユニット、フォリトロピン、フラクタルカイン、断片、筋原線維タンパク質トロポニンＩ、ＦＳＨ、ガラクトシダーゼ、ガレクチン−４、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＤＦ−１、遺伝子治療、神経膠腫由来増殖因子、グルカゴン、グルカゴン−様ペプチド、グルコセレブロシダーゼ、グルコースオキシダーゼ、グルコシダーゼ、グリコデリン−Ａ；プロゲステロン会合型子宮内膜タンパク質、ＧＭ−ＣＳＦ、ゴナドトロピン、顆粒球走化性タンパク質−２（ＧＣＰ−２）、顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子、成長ホルモン、成長関連癌遺伝子−α（ＧＲＯ−α）、成長関連癌遺伝子−β（ＧＲＯ−β）、成長関連癌遺伝子−γ（ＧＲＯ−γ）、ｈＡＰＯ−４；ＴＲＯＹ、ｈＣＧ、Ｂ型肝炎表面抗原、Ｂ型肝炎ワクチン、ＨＥＲ２受容体Ｍａｂ、ヒルジン、ＨＩＶ  ｇｐ１２０、ＨＩＶ  ｇｐ４１、ＨＩＶ阻害ペプチド、ＨＩＶ阻害ペプチド、ＨＩＶ阻害ペプチド、ＨＩＶプロテアーゼ阻害ペプチド、ＨＩＶ−１プロテアーゼ阻害剤、ＨＩＶワクチン、ヒト６ＣＫｉｎｅタンパク質、ヒトＡｃｔ−２タンパク質、ヒト脂肪生成抑制因子、ヒトＢ細胞刺激因子−２受容体、ヒトβ−ケモカインＨ  １３０５（ＭＣＰ−２）、ヒトＣＣケモカインＤＧＷＣＣ、ヒトＣＣケモカインＥＬＣタンパク質、ヒトＣＣ型ケモカインインターロイキンＣ、ヒトＣＣＣ３タンパク質、ヒトＣＣＦ１８ケモカイン、ＳＬＣ（二次リンパ性ケモカイン）と称されるヒトＣＣ型ケモカインタンパク質、ヒトケモカインβ−８短縮型、ヒトケモカインＣ１０、ヒトケモカインＣＣ−２、ヒトケモカインＣＣ−３、ヒトケモカインＣＣＲ−２、ヒトケモカインＣｋβ−７、ヒトケモカインＥＮＡ−７８、ヒトケモカインエオタキシン、ヒトケモカインＧＲＯα、ヒトケモカインＧＲＯα、ヒトケモカインＧＲＯβ、ヒトケモカインＨＣＣ−１、ヒトケモカインＨＣＣ−１、ヒトケモカインＩ−３０９、ヒトケモカインＩＰ−１０、ヒトケモカインＬ１０５＿３、ヒトケモカインＬ１０５＿７、ヒトケモカインＭＩＧ、ヒトケモカインＭＩＧ−βタンパク質、ヒトケモカインＭＩＰ−１α、ヒトケモカインＭＩＰ１β、ヒトケモカインＭＩＰ−３α、ヒトケモカインＭＩＰ−３β、ヒトケモカインＰＦ４、ヒトケモカインタンパク質３３１Ｄ５、ヒトケモカインタンパク質６１１６４、ヒトケモカイン受容体ＣＸＣＲ３、ヒトケモカインＳＤＦ１α、ヒトケモカインＳＤＦ１β、ヒトケモカインＺＳＩＧ−３５、ヒトＣｈｒ１９Ｋｉｎｅタンパク質、ヒトＣＫβ−９、ヒトＣＫβ−９、���トＣＸ３Ｃ  １１１アミノ酸ケモカイン、ヒトＤＮＡＸインターロイキン−４０、ヒトＤＶｉｃ−１Ｃ−Ｃケモカイン、ヒトＥＤＩＲＦＩタンパク質配列、ヒトＥＤＩＲＦＩＩタンパク質配列、ヒト好酸球ＣＣ型ケモカインエオタキシン、ヒト好酸球−発現性ケモカイン（ＥＥＣ）、ヒト速収縮骨格筋トロポニンＣ、ヒト速収縮骨格筋トロポニンＩ、ヒト速収縮骨格筋トロポニンサブユニットＣ、ヒト速収縮骨格筋トロポニンサブユニットＩタンパク質、ヒト速収縮骨格筋トロポニンサブユニットＴ、ヒト速収縮骨格筋トロポニンＴ、ヒト胎児脾臓で発現されたケモカイン、ＦＳＥＣ、ヒトＧＭ−ＣＳＦ受容体、ヒトｇｒｏ−αケモカイン、ヒトｇｒｏ−βケモカイン、ヒトｇｒｏ−γケモカイン、ヒトＩＬ−１６タンパク質、ヒトＩＬ−１ＲＤ１０タンパク質配列、ヒトＩＬ−１ＲＤ９、ヒトＩＬ−５受容体α鎖、ヒトＩＬ−６受容体、ヒトＩＬ−８受容体タンパク質ｈＩＬ８ＲＡ、ヒトＩＬ−８受容体タンパク質ｈＩＬ８ＲＢ、ヒトＩＬ−９受容体タンパク質、ヒトＩＬ−９受容体タンパク質変異体＃３、ヒトＩＬ−９受容体タンパク質変異体断片、ヒトＩＬ−９受容体タンパク質変異体断片＃３、ヒトインターロイキン１δ、ヒトインターロイキン１０、ヒトインターロイキン１０、ヒトインターロイキン１８、ヒトインターロイキン１８誘導体、ヒトインターロイキン−１β前駆体、ヒトインターロイキン−１β前駆体、ヒトインターロイキン−１受容体アクセサリータンパク質、ヒトインターロイキン−１受容体アンタゴニストβ、ヒトインターロイキン−１タイプ３受容体、ヒトインターロイキン−１０（前駆体）、ヒトインターロイキン−１０（前駆体）、ヒトインターロイキン−１１受容体、ヒトインターロイキン−１２  ４０ｋＤサブユニット、ヒトインターロイキン−１２β−１受容体、ヒトインターロイキン−１２β−２受容体、ヒトインターロイキン−１２  ｐ３５タンパク質、ヒトインターロイキン−１２  ｐ４０タンパク質、ヒトインターロイキン−１２受容体、ヒトインターロイキン−１３α受容体、ヒトインターロイキン−１３β受容体、ヒトインターロイキン−１５、クローンＰ１由来のヒトインターロイキン−１５受容体、ヒトインターロイキン−１７受容体、ヒトインターロイキン−１８タンパク質（ＩＬ−１８）、ヒトインターロイキン−３、ヒトインターロイキン−３受容体、ヒトインターロイキン−３変異体、ヒトインターロイキン−４受容体、ヒトインターロイキン−５、ヒトインターロイキン−６、ヒトインターロイキン−７、ヒトインターロイキン−７、ヒトインターロイキン−８（ＩＬ−８）、ヒト細胞内ＩＬ−１受容体アンタゴニスト、ヒトＩＰ−１０及びＨＩＶ−１  ｇｐ１２０超可変領域融合タンパク質、ヒトＩＰ−１０及びヒトＭｕｃ−１コアエピトープ（ＶＮＴ）融合タンパク質、ヒト肝臓及び活性化調節ケモカイン（ＬＡＲＣ）、ヒトＬｋｎ−１完全長及び成熟型タンパク質、ヒト乳房関連ケモカイン（ＭＡＣＫ）タンパク質完全長及び成熟型、ヒト成熟型ケモカインＣｋβ−７、ヒト成熟型ｇｒｏ−α、敗血症治療に使用されるヒト成熟型ｇｒｏ−γポリペプチド、ヒトＭＣＰ−３及びヒトＭｕｃ−１コアエピトープ（ＶＮＴ）融合タンパク質、ヒトＭＩ１０タンパク質、ヒトＭＩ１Ａタンパク質、ヒト単球化学誘引因子ｈＭＣＰ−１、ヒト単球化学誘引因子ｈＭＣＰ−３、ヒト単球走化性プロタンパク質（ＭＣＰＰ）配列、ヒトニューロタクチンケモカイン様ドメイン、ヒト非ＥＬＲ  ＣＸＣケモカインＨ１７４、ヒト非ＥＬＲ  ＣＸＣケモカインＩＰ１０、ヒト非ＥＬＲ  ＣＸＣケモカインＭｉｇ、ヒトＰＡＩ−１突然変異体、ＩＬ−１６活性を持つヒトタンパク質、ＩＬ−１６活性を持つヒトタンパク質、ヒト二次リンパ性ケモカイン（ＳＬＣ）、ヒトＳＩＳＤタンパク質、ヒトＳＴＣＰ−１、ヒト間質細胞由来ケモカイン、ＳＤＦ−１、ヒトＴ細胞混合型リンパ球反応発現ケモカイン（ＴＭＥＣ）、ヒト胸腺及び活性化調節サイトカイン（ＴＡＲＣ）、発現されたヒト胸腺、ヒトＴＮＦ−α、ヒトＴＮＦ−α、ヒトＴＮＦ−β（ＬＴ−α）、ヒトＣＣ型ケモカインエオタキシン３タンパク質配列、ヒトＩＩ型インターロイキン−１受容体、ヒト野生型インターロイキン−４（ｈＩＬ−４）タンパク質、ヒトＺＣＨＥＭＯ−８タンパク質、ヒト化抗−ＶＥＧＦ抗体及びそれらの断片、ヒト化抗−ＶＥＧＦ抗体及びそれらの断片、ヒアルロニダーゼ、ＩＣＥ  １０ｋＤサブユニット、ＩＣＥ  ２０ｋＤサブユニット、ＩＣＥ  ２２ｋＤサブユニット、イデュロネート−２−サルファターゼ、イデュロニダーゼ、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−１インヒビター（ＩＬ−１ｉ）、ＩＬ−１成熟型、ＩＬ−１０受容体、ＩＬ−１１、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２  ｐ４０サブユニット、ＩＬ−１３、ＩＬ−１４、ＩＬ−１５、ＩＬ−１５受容体、ＩＬ−１７、ＩＬ−１７受容体、ＩＬ−１７受容体、ＩＬ−１７受容体、ＩＬ−１９、ＩＬ−１ｉ断片、ＩＬ１−受容体アンタゴニスト、ＩＬ−２１（ＴＩＦ）、ＩＬ−３含有融合タンパク質、ＩＬ−３変異型タンパク質、ＩＬ−３変異体、ＩＬ−３変異体、ＩＬ−４、ＩＬ−４ムテイン、ＩＬ−４ムテインＹ１２４Ｇ、ＩＬ−４ムテインＹ１２４Ｘ、ＩＬ−４ムテイン、ＩＬ−５受容体、ＩＬ−６、ＩＬ−６受容体、ＩＬ−７受容体クローン、ＩＬ−８受容体、ＩＬ−９成熟タンパク質変異体（Ｍｅｔ１１７型）、非限定的にプラスミノーゲンを含む免疫グロブリン又は免疫グロブリン−ベースの分子又はいずれかの断片（例えば、小型モジュラー免疫医薬（商標）(”SMIP”)又はｄＡｂ、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＡｂ、ｓｃＦｖ又はｓｃＦｖ断片の
いずれか）、インフルエンザワクチン、インヒビンα、インヒビンβ、インスリン、インスリン−様増殖因子、インテグリンＭａｂ、インターアルファトリプシンインヒビター、インターアルファトリプシンインヒビター、インターフェロンγ−誘導性タンパク質（ＩＰ−１０）、インターフェロン（インターフェロンα種及び亜種、インターフェロンβ種及び亜種、インターフェロンγ種及び亜種など）、インターフェロン（インターフェロンα種及び亜種、インターフェロンβ種及び亜種、インターフェロンγ種及び亜種など）、インターロイキン６、インターロイキン８（ＩＬ−８）受容体、インターロイキン８受容体Ｂ、インターロイキン−１α、インターロイキン−２受容体関連タンパク質ｐ４３、インターロイキン−３、インターロイキン−４ムテイン、インターロイキン−８（ＩＬ−８）タンパク質、インターロイキン−９、インターロイキン−９（ＩＬ−９）成熟タンパク質（Ｔｈｒ１１７型）、インターロイキン（ＩＬ１０、ＩＬ１１及びＩＬ２）、インターロイキン（ＩＬ１０、ＩＬ１１及びＩＬ２など）、日本脳炎ワクチン、カリクレインインヒビター、ケラチノサイト増殖因子、クニッツドメインタンパク質（アルブミン融合体を含む又は含まない、アプロチニン、アミロイド前駆体タンパク質、及びWO 03/066824に記載のものなど）、クニッツドメインタンパク質（アルブミン融合体を含む又は含まない、アプロチニン、アミロイド前駆体タンパク質、及びWO 03/066824に記載のものなど）、ＬＡＣＩ、ラクトフェリン、潜在型ＴＧＦ−β結合タンパク質ＩＩ、レプチン、肝臓発現型ケモカイン−１（ＬＶＥＣ−１）、肝臓発現型ケモカイン−２（ＬＶＥＣ−２）、ＬＴ−α、ＬＴ−β、黄体化ホルモン、ライム病ワクチン、リンホタクチン、マクロファージ由来ケモカインアナログＭＤＣ（ｎ＋１）、マクロファージ由来ケモカイン  アナログＭＤＣ−ｅｙｆｙ、マクロファージ由来ケモカインアナログＭＤＣ−ｙｌ、マクロファージ由来ケモカイン、ＭＤＣ、マクロファージ−由来ケモカイン（ＭＤＣ）、マスピン；プロテアーゼインヒビター５、ＭＣＰ−１受容体、ＭＣＰ−１ａ、ＭＣＰ−１ｂ、ＭＣＰ−３、ＭＣＰ−４受容体、Ｍ−ＣＳＦ、メラノーマ阻害タンパク質、膜結合型タンパク質、Ｍｅｔ１１７ヒトインターロイキン９、ＭＩＰ−３α、ＭＩＰ−３β、ＭＩＰ−γ、ＭＩＲＡＰ、修飾型ランテス、モノクローナル抗体、ＭＰ５２、変異型インターロイキン６  Ｓ１７６Ｒ、筋原線維収縮タンパク質トロポニンＩ、ナトリウム利尿ペプチド、神経成長因子−β、神経成長因子−β２、ニューロピリン−１、ニューロピリン−２、ニューロタクチン、ニューロトロフィン−３、ニューロトロフィン−４、ニューロトロフィン−４ａ、ニューロトロフィン−４ｂ、ニューロトロフィン−４ｃ、ニューロトロフィン−４ｄ、好中球活性化ペプチド−２（ＮＡＰ−２）、ＮＯＧＯ−６６受容体、ＮＯＧＯ−Ａ、ＮＯＧＯ−Ｂ、ＮＯＧＯ−Ｃ、ＰＴＥＣと称される新規β−ケモカイン、Ｎ−末端修飾ケモカインＧｒｏＨＥＫ／ｈＳＤＦ−１α、Ｎ−末端修飾ケモカインＧｒｏＨＥＫ／ｈＳＤＦ−１β、Ｎ−末端修飾ケモカインｍｅｔ−ｈＳＤＦ−１α、Ｎ−末端修飾ケモカインｍｅｔ−ｈＳＤＦ−１β、ＯＰＧＬ、骨形成タン���ク質−１；ＯＰ−１；ＢＭＰ−７、骨形成タンパク質−２、ＯＸ４０；ＡＣＴ−４、ＯＸ４０Ｌ、オキシトシン（ニューロフィシンＩ）、副甲状腺ホルモン、Ｐａｔｃｈｅｄ、Ｐａｔｃｈｅｄ−２、ＰＤＧＦ−Ｄ、百日咳トキソイド、下垂体発現ケモカイン（ＰＧＥＣ）、胎盤増殖因子、胎盤増殖因子−２、プラスミノーゲン活性化因子インヒビター−１；ＰＡＩ−１、プラスミノーゲン活性化因子インヒビター−２；ＰＡＩ−２、プラスミノーゲン活性化因子インヒビター−２；ＰＡＩ−２、血小板由来増殖因子、血小板由来増殖因子Ｂｖ−ｓｉｓ、血小板由来増殖因子前駆体Ａ、血小板由来増殖因子前駆体Ｂ、血小板Ｍａｂ、血小板由来内皮細胞増殖因子（ＰＤ−ＥＣＧＦ）、血小板由来増殖因子Ａ鎖、血小板由来増殖因子Ｂ鎖、敗血症治療に使用されるポリペプチド、プレプロアポリポタンパクミラノ型変異体、プレプロアポリポタンパクパリ型変異体、プレトロンビン、霊長類ＣＣケモカイン”ＩＬＩＮＣＫ”、霊長類ＣＸＣケモカイン”ＩＢＩＣＫ”、プロインスリン、プロラクチン、プロラクチン２、プロサプチド、プロテアーゼ阻害ペプチド、プロテインＣ、プロテインＳ、プロトロンビン、プロウロキナーゼ、ＲＡＮＴＥＳ、ＲＡＮＴＥＳ  ８−６８、ＲＡＮＴＥＳ  ９−６８、ＲＡＮＴＥＳペプチド、ＲＡＮＴＥＳ受容体、組換えインターロイキン−１６、レシスチン、レストリクトシン、レトロウイルスプロテアーゼ阻害因子、リシン、ロタウイルスワクチン、ＲＳＶ  Ｍａｂ、サポリン、サルシン、分泌型及び膜貫通型ポリペプチド、分泌型及び膜貫通型ポリペプチド、血清コリンエステラーゼ、血清タンパク質（血液凝固因子など）、可溶性ＢＭＰ受容体キナーゼタンパク質−３、可溶性ＶＥＧＦ受容体、幹細胞抑制因子、ブドウ球菌ワクチン、ストロマ細胞由来因子−１α、ストロマ細胞由来因子−１β、サブスタンスＰ（タキキニン）、Ｔ１２４９ペプチド、Ｔ２０ペプチド、Ｔ４エンドヌクレアーゼ、ＴＡＣＩ、Ｔａｒｃ、ＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２、Ｔｈｒ１１７ヒトインターロイキン９、トロンビン、トロンボポエチン、トロンボポエチン誘導体１、トロンボポエチン誘導体２、トロンボポエチン誘導体３、トロンボポエチン誘導体４、トロンボポエチン誘導体５、トロンボポエチン誘導体６、トロンボポエチン誘導体７、胸腺発現ケモカイン（ＴＥＣＫ）、甲状腺刺激ホルモン、ダニ抗凝固ペプチド、Ｔｉｍ−１タンパク質、ＴＮＦ−α前駆体、ＴＮＦ−Ｒ、ＴＮＦ−ＲＩＩ；ＴＮＦ  ｐ７５受容体；デス受容体、ｔＰＡ、トランスフェリン、トランスフォーミング増殖因子β、トロポニンペプチド、切断型単球走化性タンパク質２（６−７６）、切断型単球走化性タンパク質２（６−７６）、切断型ＲＡＮＴＥＳタンパク質（３−６８）、腫瘍壊死因子、尿酸オキシダーゼ、ウロキナーゼ、バゾプレシン（ニューロフィシンＩＩ）、ＶＥＧＦ  Ｒ−３；ｆｌｔ−４、ＶＥＧＦ受容体；ＫＤＲ；ｆｌｋ−１、ＶＥＧＦ−１１０、ＶＥＧＦ−１２１、ＶＥＧＦ−１３８、ＶＥＧＦ−１４５、ＶＥＧＦ−１６２、ＶＥＧＦ−１６５、ＶＥＧＦ−１８２、ＶＥＧＦ−１８９、ＶＥＧＦ−２０６、ＶＥＧＦ−Ｄ、ＶＥＧＦ−Ｅ；ＶＥＧＦ−Ｘ、フォン・ビレブランド因子、野生型単球走化性タンパク質２、野生型単球走化性タンパク質２、ＺＴＧＦ−β９、交互抗体スカフォールド、例えばアンチカリン（類）、アドネクチン（類）、フィブリノゲン断片（類）など、ナノボディ、例えばラクダ科ナノボディなど、インフェスチン、及び／又はWO01/79271(特に９頁及び／又は表１)、WO 2003/59934(特に表１)、WO03/060071(特に表１)若しくはWO 01/079480(特に表１)に言及された任意の分子(各々それらの全体が引用により本明細書中に組み込まれている)。
【０２５５】
更に、複合体は、以下の１又は複数（数種）の化学療法薬物を含むことができる：１３−ｃｉｓ−レチノイン酸、２−ＣｄＡ、２−クロロデオキシアデノシン、５−アザシチジン、５−フルオロウラシル、５−ＦＵ、６−メルカプトプリン、６−ＭＰ、６−ＴＧ、６−チオグアニン、Ａ、アブラキサン、アキュテイン（登録商標）、アクチノマイシン−Ｄ、アドリアマイシン（登録商標）、アドルシル（登録商標）、アグリリン（登録商標）、アラ−コート（登録商標）、アルデスロイキン、アレムツズマブ、ＡＬＩＭＴＡ、アリトレチノイン、アルカバン−ＡＱ（登録商標）、アルケラン（登録商標）、全−トランスレチノイン酸、αインターフェロン、アルトレタミン、アメトプテリン、アミホスチン、アミノグルテチミド、アナグレリド、アナンドロン（登録商標）、アナストロゾール、アラビノシルシトシン、Ａｒａ−Ｃ、アラネスプ（登録商標）、アレディア（登録商標）、アリミデクス（登録商標）、アロマシン（登録商標）、アラノン（登録商標）、三酸化ヒ素、アスパラギナーゼ、ＡＴＲＡ、アバスチン（登録商標）、アザシチジン、ＢＣＧ、ＢＣＮＵ、ベバシズマブ、ベキサロテン、ＢＥＸＸＡＲ（登録商標）、ビカルタミド、ＢｉＣＮＵ、ブレノキサン（登録商標）、ブレオマイシン、ボルテゾミブ、ブスルファン、ブスルフェクス（登録商標）、Ｃ２２５、カルシウムロイコボリン、キャンパス（登録商標）、カンプトサー（登録商標）、カンプトテシン−１１、カペシタビン、キャラック（商標）、カルボプラチン、カルムスチン、カルムスチンウエハ、カソデックス（登録商標）、ＣＣ−５０１３、ＣＣＮＵ、ＣＤＤＰ、ＣｅｅＮＵ、セルビジン（登録商標）、セツキシマブ、クロラムブシル、シスプラチン、シトロボラム因子、クラドリビン、コルチゾン、コスメゲン（登録商標）、ＣＰＴ−１１、シクロホスファミド、シタドレン（登録商標）、シタラビン、シタラビンリポソーム、サイトサール−Ｕ（登録商標）、サイトキサン（登録商標）、ダカルバジン、ダコゲン、ダクチノマイシン、ダルベポエチンα、ダサチニブ、ダウノマイシン、ダウノルビシン、塩酸ダウノルビシン、ダウノルビシンリポソーム、ダウノキソーム（登録商標）、デカドロン、デシタビン、δ−コルテフ（登録商標）、デルタゾン（登録商標）、デニロイキンディフチトクス、ＤｅｐｏＣｙｔ（商標）、デキサメタゾン、酢酸デキサメタゾン、デキサメタゾンリン酸ナトリウム、デキサゾン、デキスラゾキサン、ＤＨＡＤ、ＤＩＣ、ディオデックス、ドセタキセル、ドキシル（登録商標）、ドキソルビシン、ドキソルビシンリポソーム、ドロキシア（商標）、ＤＴＩＣ、ＤＴＩＣ−Ｄｏｍｅ（登録商標）、デュラロン（登録商標）、エフデックス（登録商標）、エリガード（商標）、エレンス（商標）、エロキサチン（商標）、エルスパー（登録商標）、エムシト（登録商標）、エピルビシン、エポエチンα、エルビタックス（商標）、エルロチニブ、エルウィニアＬ−アスパラギナーゼ、エストラムスチン、エチヨル、エトポホス（登録商標）、エトポシド、リン酸エトポシド、エウレキシン（登録商標）、エビスタ（登録商標）、エクセメスタン、フェアストン（登録商標）、ファスロデックス（登録商標）、フェマー���（登録商標）、フィルグラスチム、フロキシウリジン、フルダラ（登録商標）、フルダラビン、フルオロプレクス（登録商標）、フルオロウラシル、フルオロウラシル（クリーム）、フルオキシメステロン、フルタミド、フォリン酸、ＦＵＤＲ（登録商標）、フルベストラント、Ｇ−ＣＳＦ、ゲフィチニブ、ゲムシタビン、ゲムツズマブオゾガマイシン、ジェムザール（登録商標）、グリーベック（商標）、グリアデル（登録商標）ウエハ、ＧＭ−ＣＳＦ、ゴセレリン、顆粒球−コロニー刺激因子、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、ハロテスチン（登録商標）、ハーセプチン（登録商標）、ヘキサドロール、ヘキサレン（登録商標）、ヘキサメチルメラミン、ＨＭＭ、ハイカムチン（登録商標）、ハイドレア（登録商標）、ヒドロコート酢酸塩（登録商標）、ヒドロコルチゾン、ヒドロコルチゾンリン酸ナトリウム、ヒドロコルチゾンコハク酸ナトリウム、ヒドロコルチゾンリン酸塩、ヒドロキシ尿素、イブリツモマブ、イブリツモマブチウキセタン、イダマイシン（登録商標）、イダルビシン、Ｉｆｅｘ（登録商標）、ＩＦＮ−α、イホスファミド、ＩＬ−１１、ＩＬ−２、イマチニブメシラート、イミダゾールカルボキサミド、インターフェロンα、インターフェロンα−２ｂ（ＰＥＧ複合物）、インターロイキン−２、インターロイキン−１１、イントロンＡ（登録商標）（インターフェロンα−２ｂ）、イレッサ（登録商標）、イリノテカン、イソトレチノイン、キドロラーゼ（登録商標）、ラナコート（登録商標）、ラパチニブ、Ｌ−アスパラギナーゼ、ＬＣＲ、レナリドミド、レトロゾール、ロイコボリン、ロイケラン、リューカイン（商標）、ロイプロリド、ロイロクリスチン、ロイスタチン（商標）、リポソームＡｒａ−Ｃ、Ｌｉｑｕｉｄ  Ｐｒｅｄ（登録商標）、ロムスチン、Ｌ−ＰＡＭ、Ｌ−サルコリシン、リュープリン（登録商標）、リュープリンデポ（登録商標）、Ｍ、マチュレーン（登録商標）、マキシデックス、メクロレタミン、塩酸メクロレタミン、メドラロン（登録商標）、メロドール（登録商標）、メゲース（登録商標）、メゲストロール、酢酸メゲストロール、メルファラン、メルカプトプリン、メスナ、メスネックス（商標）、メトトレキセート、メトトレキセートナトリウム、メチルプレドニゾロン、メチコルテン（登録商標）、マイトマイシン、マイトマイシン−Ｃ、ミトキサントロン、Ｍ−プレドニゾール（登録商標）、ＭＴＣ、ＭＴＸ、ムスタルゲン（登録商標）、ムスチン、ムタマイシン（登録商標）、ミレラン（登録商標）、マイロセル（商標）、マイロターグ（登録商標）、ナベルビン（登録商標）、ネララビン、ネオサール（登録商標）、ニューラスタ（商標）、ニューメガ（登録商標）、ニューポジェン（登録商標）、ネクサバール（登録商標）、ニランドロン（登録商標）、ニルタミド、ナイペント（登録商標）、ナイトロジェンマスタード、ノバルデックス（登録商標）、ノバントロン（登録商標）、オクトレオチド、酢酸オクトレオチド、オンコスパー（登録商標）、オンコビン（登録商標）、オンタック（登録商標）、オンキサル（商標）、オプレルベキン、オラプレッド（登録商標）、オラソン（登録商標）、オキサリプラチン、タキソール又はタキソール誘導体、例えばパクリタキセル又はパクリタキセルタンパク質結合型、パミドロネート、パニツムマブ、パンレチン（登録商標）、パラプラチン（登録商標）、ペジアプレッド（登録商標）、ＰＥＧインターフェロン、ペガスパルガーゼ、ペグフィルグラスチム、ＰＥＧ−イントロン（商標）、ＰＥＧ−Ｌ−アスパラギナーゼ、ペメトレキセド、ペントスタチン、フェニルアラニンマスタード、プラチノル（登録商標）、プラチノル−ＡＱ（登録商標）、プレドニソロン、プレドニソン、プレロン（登録商標）、プロカルバジン、プロクリット（登録商標）、プロリュウキン（登録商標）、カルムスチンインプラントを伴うプロリフェプロスパン２０、プリネトール（登録商標）、Ｒ、ラロキシフェン、レブリミド（登録商標）、リウマトレックス（登録商標）、リツキサン（登録商標）、リツキシマブ、ロフェロン−Ａ（登録商標）（インターフェロンα−２ａ）、リューベックス（登録商標）、塩酸ルビドマイシン、サンドスタチン（登録商標）、サンドスタチンＬＡＲ（登録商標）、サルグラモスチム、ソル・コーテフ（登録商標）、ソルメドロール（登録商標）、ソラフェニブ、スプリセル（商標）、ＳＴＩ−５７１、ストレプトゾシン、ＳＵ１１２４８、スニチニブ、スーテント（登録商標）、タモキシフェン、タルセバ（登録商標）、ターグレチン（登録商標）、タキソール（登録商標）、タキソテレ（登録商標）、テモダール（登録商標）、テモゾロミド、テニポシド、ＴＥＳＰＡ、サリドマイド、サロミド（登録商標）、セラシス（登録商標）、チオグアニン、チオグアニンタブロイド（登録商標）、チオホスホアミド、チオプレックス（登録商標）、チオテパ、ＴＩＣＥ（登録商標）、トポサール（登録商標）、トポテカン、トレミフェン、トシツモマブ、トラスツズマブ、トレチノイン、トレクサール（商標）、トリセノックス（登録商標）、ＴＳＰＡ、ＴＹＫＥ  ＲＢ（登録商標）、ＶＣＲ、ベクチビックス（商標）、ベルバン（登録商標）、ベルケード（登録商標）、ベペシド（登録商標）、ベサノイド（登録商標）、Ｖｉａｄｕｒ（商標）、ビダザ（登録商標）、ビンブラスチン、硫酸ビンブラスチン、ビンカサーＰＦＳ（登録商標）、ビンクリスチン、ビノレルビン、酒石酸ビノレルビン、ＶＬＢ、ＶＭ−２６、ボリノスタット、ＶＰ−１６、ブモン（登録商標）、キセロダ（登録商標）、ザノサール（登録商標）、ゼバリン（商標）、ザインカード（登録商標）、ゾラデックス（登録商標）、ゾレドロン酸、ゾリンザ、ゾメタ（登録商標）；放射性医薬品、例えば：炭素−１１、炭素−１４、クロム−５１、コバルト−５７、コバルト−５８、エルビウム−１６９、フッ素−１８、ガリウム−６７、金−１９８、インジウム−１１１、インジウム−１１３ｍ、ヨウ素−１２３、ヨウ素−１２５、ヨウ素−１３１、鉄−５９、クリプトン−８１ｍ、窒素−１３、酸素−１５、リン−３２、レニウム−１８６、ルビジウム−８２、サマリウム−１５３、セレン−７５、ストロンチウム−８９、テクネチウム−９９ｍ、タリウム−２０１、トリチウム、キセノン−１２７、キセノン−１３３、イットリウム−９０；造影剤、例えばガドリニウム、マグネタイト、マンガン、テクネチウム、Ｉ１２５、Ｉ１３��、Ｐ３２、ＴＩ２０１、ロパミドドール、ＰＥＴ−ＦＤＧ。
【０２５６】
更なる本発明の融合パートナー、複合パートナー及び／又はナノ粒子、会合体又は組成物に封入するための分子は、下記を含む：末端肥大症治療薬、例えば、ソマチュリン、ランレオチド、オクトレオチド、サンドスタチンなど；抗血栓薬、例えば、ビバリルジン、アンジオマックス、ダルテパリン、フラグミン、エノキサパリン、ロベノックス、ドロトレコギンα（例えば活性化型）、ザイグリス、ヘパリンなど；生殖治療を補助する化合物、例えば、コリオゴナドトロピン、オビドレル、フォリトロピンα／βなど；酵素、例えば、ヒアルロニダーゼ、ハイレネックスなど；糖尿病治療薬、例えば、エキセナチド、バイエッタ、グルカゴン、インスリン、リラグルチド、アルビグルチド、ＧＬＰ−１アゴニスト、エキセンディン又はエキセンディンアナログなど；診断に有用な化合物、例えば、プロチレリン、Ｔｈｙｒｅｌ  ＴＲＨチピノン、セクレチン（例えば合成ヒト用）、シロスチム、チロトロピン（例えばα）、タイロゲン赤血球生成薬、例えば、ダルベポエチンα、アラネスプ、エポエチンα、エポジェン、エプレックスなど、遺伝子欠損治療薬、例えば、ペグアデマーゼ、成長不良治療薬、例えば、アダジェン、メカセルミン、リンファベートなど、嚢胞性線維症治療薬、例えば、ドルナーゼα、パルモザイム、代謝障害治療薬、例えば、アガルシダーゼβ、ファブラザイム、アルグルコシダーゼα、マイオザイム、ラロニダーゼ、アルドラザイムなど、病巣内陰部疣贅治療薬、例えば、インターフェロンα−ｎ３、Ａｌｆｅｒｏｎ  Ｎなど、肉芽腫性疾患治療薬、例えば、インターフェロンγ−１ｂ、アクティミューンなど；成長不良治療薬物、例えば、ペグビソマント、ソマバート、ソマトロピン、ジェノトロピン、ニュートロピン、ヒューマトロープ、セロスティム、プロトロピンなど；心不全治療薬、例えば、ネシリチド、ナトレコールなど；血友病治療薬、例えば、凝固因子、例えばＶＩＩＩ因子、Ｈｅｌｉｘａｔｅ  ＦＳ、コージネイトＦＳ、ＩＸ因子、ＢｅｎｅＦＩＸ、ＶＩＩａ因子、ノボセブン、デスモプレシン、Ｓｔｉｍａｔｅ、ＤＤＡＶＰなど；造血薬、例えば、フィルグラスチム（Ｇ−ＣＳＦ）、ニューポジェン、オプレルベキン、ニューメガ、ペグフィルグラスチム、ニューラスタ、サルグラモスチム、リューカインなど；Ｃ型肝炎治療薬、例えば、インターフェロンα−２ａ、ロフェロンＡ、インターフェロンα−２ｂ、イントロンＡ、インターフェロンアルファコン−１、インファージェン、ペグインターフェロンα−２ａ、ペガシス、ペグインターフェロンα−２ｂ、ＰＥＧ−イントロンなど；ＨＩＶ治療薬、例えば、エンフビルチド、フゼオンなど；Ｆａｂ類、例えば、Ｆａｂ（アンチトロンビン）、アブシキシマブ、レオプロなど；モノクローナル抗体、例えば、ダクリツマブ、ゼナパックスなど；抗ウイルス薬のモノクローナル抗体、例えば、パリビズマブ、シナジスなど；喘息治療のモノクローナル抗体、例えば、オマリズマブ、ゾレア；診断造影で使用するモノクローナル抗体、例えば、アルシツモマブ、ＣＥＡ−Ｓｃａｎ、カプロマブペンデチド、プロスタシント、サツモマブペンデチド、オンコシントＣＲ／ＯＶ、診断造影で使用するＦａｂ、例えば、ノフェツモマブ、ベルルマなど；免疫抑制性モノクローナル抗体、例えば、バシリキシマブ、シムレクト、ムロモナブ−ＣＤ３、オルトクローンＯＫＴ３など；悪性腫瘍治療のモノクローナル抗体、例えば、アレムツズマブ、キャンパス、イブリツモマブチウキセタン、ゼバリン、リツキシマブ、リツキサン、トラスツズマブ、ハーセプチンなど；関節リウマチ（ＲＡ）治療のモノクローナル抗体、例えば、アダリムマブ、ヒュミラ、インフリキシマブ、レミケードなど；放射性−免疫療法薬として使用のモノクローナル抗体、例えば、トシツモマブ及びヨウ素Ｉ131、トシツモマブ、ベキサールなど；黄斑変性治療薬、例えば、ペガプタニブ、マクジェンなど；悪性腫瘍治療薬、例えば、アルデスロイキン、プロリュウキン、インターロイキン−２、アスパラギナーゼ、エルスパー、ラスブリカーゼ、エリテック、デニロイキンディフチトクス、オンタック、ペガスパルガーゼ、オンカスパー、ゴセレリン、ロイプロリドなど；多発性硬化症（ＭＳ）治療薬、例えば、酢酸ガラティラメル（例えば、コポリマー−１）、コパクソン、インターフェロンβ−１ａ、アボネックス、インターフェロンβ−１ａ、レビフ、インターフェロンβ−１ｂ、ベタセロンなど；粘膜炎治療薬、例えば、パリフェルミン、ケピバンスなど；ジストニア治療薬、例えば、神経毒、Ａ型ボツリヌス毒素、ボトックス、ボトックス化粧品、Ｂ型ボツリヌス毒素、ミオブロックなど；骨粗鬆症治療薬、例えば、テリパラチド、フェルテオなど；乾癬治療薬、例えば、アレファセプト、アメビブなど；ＲＡ治療薬、例えば、アバタセプト、オレンシア、アナキンラ、キネレト、エタネルセプト、エンブレルなど；血栓溶解薬、例えば、アルテプラーゼ、アクチバーゼ、ｒｔＰＡ、アニストレプラーゼ、エミナーゼ、レテプラーゼ、レタバーゼ、ストレプトキナーゼ、ストレプターゼ、テネクテプラーゼ、ＴＮＫａｓｅ、ウロキナーゼ、アボキナーゼ、Ｋｉｎｌｙｔｉｃなど；骨粗鬆症治療薬、例えば、カルシトニン（例えば、サケ）、ミアカルシン、フォルチカルなど、皮膚潰瘍治療薬、例えば、ベカプレルミン、レグラネクス、コラゲナーゼ、サンティルなど。
【０２５７】
そのようなポリペプチド及び化学化合物は、診断的部分、治療的部分、予防的部分又は有益な部分と称される。
好ましくは、融合パートナー及び／又は複合パートナーは、アルブミン変異体又はそれらの断片ではない。
【０２５８】
１又は複数（数個）の治療的又は予防的ポリペプチドは、アルブミンのＮ−末端、Ｃ−末端に融合されるか、アルブミン構造内のループに挿入されるか、又はそれらの任意の組合せであることができる。融合ポリペプチドの様々な成分を分離するリンカー配列を含んでも含まなくともよい。
【０２５９】
アルブミン又はそれらの断片の融合に関連する教示は、当該技術分野において公知であり、及び当業者は、そのような教示もまた本発明に適用することができることを理解するであろう。WO 2001/79271A及びWO 2003/59934(引用により本明細書中に組み込まれている)も、アルブミン又はそれらの断片へ融合され得る治療的及び予防的ポリペプチドの例を含み、これらの例もまた、本発明に適用する。 
【０２６０】
本発明は下記実施態様により更に規定される：
１．  親アルブミン、参照アルブミン、それらの断片、又は該親アルブミン、参照アルブミン若しくはそれらの断片を含む融合ポリペプチド、又はそれらの融合体のＦｃＲｎへの結合親和性と比べ、変更されたＦｃＲｎへの結合親和性を有する、アルブミンの変異体、それらの断片、又は該変異アルブミン若しくはそれらの断片を含む融合ポリペプチドである、ポリペプチドであって、ここで該ポリペプチドが、配列番号２の位置４９２、５５０、５７３、５７４及び５８０に対応する位置から選択される２以上の位置において変更を含む、ポリペプチド。
【０２６１】
２．  ポリペプチドが、配列番号２の位置（ａ）４９２及び５８０；（ｂ）４９２及び５７４；（ｃ）４９２及び５５０；（ｄ）５５０及び５７３；（ｅ）５５０及び５７４；（ｆ）５５０及び５８０に対応する位置から選択される２以上の位置において変更を含む、実施態様１記載のポリペプチド。
３．  配列番号１の位置４９２及び５８０に対応する位置に変更を含み、配列番号２の５５０、５７３及び５７４からなる群から選択される位置に対応する位置に１又は複数（数個）の変更を更に含む、実施態様１又は２記載のポリペプチド。
【０２６２】
４．  配列番号１の位置４９２及び５７４に対応する位置に変更を含み、配列番号  の５５０、５７３及び５８０からなる群から選択される位置に対応する位置に１又は複数（数個）の変更を更に含む、実施態様１、２又は３記載のポリペプチド。
５．  配列番号１の位置４９２及び５５０に対応する位置に変更を含み、配列番号２の５７３、５７４及び５８０からなる群から選択される位置に対応する位置に１又は複数（数個）の変更を更に含む、先行する実施態様のいずれか記載のポリペプチド。
６．  配列番号１の位置５５０及び５７３に対応する位置に変更を含み、配列番号２の４９２、５７４、及び５８０からなる群から選択される位置に対応する位置に１又は複数（数個）の変更を更に含む、先行する実施態様のいずれか記載のポリペプチド。
【０２６３】
７．  配列番号１の位置５５０及び５７４に対応する位置に変更を含み、配列番号２の４９２、５７３及び５８０からなる群から選択される位置に対応する位置に１又は複数（数個）の変更を更に含む、先行する実施態様のいずれか記載のポリペプチド。
８．  配列番号１の位置５５０及び５８０に対応する位置に変更を含み、配列番号２の４９２、５７３及び５７４に対応する位置に変更を更に含む、先行する実施態様のいずれか記載のポリペプチド。
【０２６４】
９．  （ａ）配列番号２の位置４９２に対応する位置に、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｆ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、Ｙ、好ましくはＤからなる群からのアミノ酸を生じる変更が存在し、並びに配列番号２の位置５７３に対応する位置に、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、Ｙ、好ましくはＹ、Ｗ又はＨからなる群からのアミノ酸を生じる変更が存在するか、或いは
（ｂ）配列番号２の位置４９２に対応する位置に、Ｇを生じる変更が存在し、並びに位置５７３に対応する位置に、Ａ又はＰを生じる変更が存在し、並びにこのポリペプチドが、５５０、５７４及び５８０からなる群から選択される位置（又は、他のアルブミン若しくは変異体若しくはそれらの断片の同等の位置）に追加の変更を含む：先行する実施態様のいずれか記載のポリペプチド。
【０２６５】
１０．  （ａ）配列番号２の位置５７３に対応する位置に、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、Ｙ、好ましくはＹ、Ｗ又はＨからなる群からのアミノ酸を生じる変更が存在し、並びに配列番号２の位置５７４に対応する位置に、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、Ｙ、Ｈ、Ｄ、Ｆ、Ｇ、Ｎ、Ｓ又はＹ、より好ましくはＨ、Ｄ、Ｆ又はＧ、最も好ましくはＨからなる群からのアミノ酸を生じる変更が存在するか、或いは
（ｂ）配列番号２の位置５７３に対応する位置に、Ｐが存在し、並びに配列番号２の位置５７４に対応する位置に、Ｎが存在し、並びにこのポリペプチドが、４９２、５５０、及び５８０からなる群から選択される位置（又は、他のアルブミン若しくは変異体若しくはそれらの断片の同等の位置）に追加の変更を含む：先行する実施態様のいずれか記載のポリペプチド。
【０２６６】
１１．  （ａ）配列番号２の位置５７３に対応する位置に、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、Ｙ、好ましくはＹ、Ｗ又はＨからなる群からのアミノ酸を生じる変更が存在し、並びに配列番号２の位置５８０に対応する位置に、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、Ｙからなる群からのアミノ酸を生じる変更が存在するか、或いは
（ｂ）配列番号２の位置５７３に対応する位置に、Ｐを生じる変更が存在し、並びに配列番号２の位置５８０に対応する位置に、Ｋを生じる変更が存在し、並びにこのポリペプチドが、４９２、５５０、及び５７４からなる群から選択される位置（又は、他のアルブミン若しくは変異体若しくはそれらの断片の同等の位置）に追加の変更を含む：先行する実施態様のいずれか記載のポリペプチド。
【０２６７】
１２．  （ａ）配列番号２の位置５７４に対応する位置に、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、Ｙ、Ｈ、Ｄ、Ｆ、Ｇ、Ｎ、Ｓ又はＹ、より好ましくはＨ、Ｄ、Ｆ又はＧ、最も好ましくはＨからなる群からのアミノ酸を生じる変更が存在し、並びに配列番号２の位置５８０に対応する位置に、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、Ｙからなる群からのアミノ酸を生じる変更が存在するか、或いは
（ｂ）配列番号２の位置５７４に対応する位置に、Ｎを生じる変更が存在し、並びに配列番号２の位置５８０に対応する位置に、Ｋを生じる変更が存在し、並びにこのポリペプチドが、４９２、５５０、及び５７３からなる群から選択される位置（又は、他のアルブミン若しくは変異体若しくはそれらの断片の同等の位置）に追加の変更を含む：先行する実施態様のいずれか記載のポリペプチド。
【０２６８】
１３．  ポリペプチドが、配列番号２の位置４９２、５５０、５７３、５７４及び５８０に対応する位置から選択された３以上の位置に変更を含む、先行する実施態様のいずれか記載のポリペプチド。
１４．  位置４９２、５５０、５７３、５７４及び／又は５８０に対応する位置での変更が、置換である、先行する実施態様のいずれか記載のポリペプチド。
１５．  位置４９２に対応する位置での置換が、Ｇ、Ｄ、Ｆ、Ｈ、Ｍ又はＲに対するものである、実施態様１４のポリペプチド。
【０２６９】
１６．  位置４９２に対応する位置での置換が、Ｇ又はＤに対するものである、実施態様１４又は１５のポリペプチド。
１７．  位置４９２に対応する位置での置換が、Ｇに対するものである、実施態様１３〜１５のいずれかのポリペプチド。
１８．  位置４９２に対応する位置での置換が、Ｄに対するものである、実施態様１３〜１５のいずれかのポリペプチド。
【０２７０】
１９．  位置５５０に対応する位置での置換が、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｅ、又はＲに対するものである、実施態様１３〜１８のいずれかのポリペプチド。
２０．  位置５５０に対応する位置での置換が、Ｋ、Ｌ又はＭに対するものである、実施態様１３〜１９のいずれかのポリペプチド。
２１．  位置５５０に対応する位置での置換が、Ｋに対するものである、実施態様１３〜２０のいずれかのポリペプチド。
【０２７１】
２２．  位置５７３に対応する位置での変更が、Ｐ、Ｙ、Ｗ、Ｈ、Ｆ、Ｔ、Ｉ又はＶへの置換である、実施態様１３〜２１のいずれかのポリペプチド。
２３．  位置５７３に対応する位置での置換が、Ｐ、Ｙ又はＷに対するものである、実施態様１３〜２２のいずれかのポリペプチド。
２４．  位置５７３に対応する位置での置換が、Ｐに対するものである、実施態様１３〜２３のいずれかのポリペプチド。
【０２７２】
２５．  位置５７４に対応する位置での変更が、Ｈ、Ｇ、Ｄ、Ｆ、Ｎ、Ｓ又はＹへの置換である、実施態様１３〜２４のいずれかのポリペプチド。
２６．  位置５７４に対応する位置での置換が、Ｄ、Ｆ、Ｇ又はＨに対するものである、実施態様１３〜２５のいずれかのポリペプチド。
２７．  位置５７４に対応する位置での置換が、Ｈに対するものである、実施態様１３〜２６のいずれかのポリペプチド。
【０２７３】
２８．  位置５８０に対応する位置での置換が、Ｋ又はＲに対するものである、実施態様１３〜２７のいずれかのポリペプチド。
２９．  位置５８０に対応する位置での置換が、Ｋに対するものである、実施態様１３〜２８のいずれかのポリペプチド。
３０．  ポリペプチドが、配列番号２の位置（ｉ）５７３及び５８０；（ｉｉ）４９２及び５７３；又は、（ｉｉｉ）５７３及び５７４に対応する位置に変更を含む、先行する実施態様のいずれかのポリペプチド。
【０２７４】
３１．  ポリペプチドが、配列番号２の下記の位置に対応する２以上の位置において変更を含む、先行する実施態様のいずれかのポリペプチド：５８０Ｋ＋５７３Ｐ（例えば配列番号１２８）；５８０Ｒ＋５７３Ｐ（例えば配列番号１２９）；５７４Ｄ＋５７３Ｐ（例えば配列番号１２１）；５７４Ｆ＋５７３Ｐ（例えば配列番号１２２）；５７４Ｇ＋５７３Ｐ（例えば配列番号１２３）；５７４Ｈ＋５７３Ｐ（例えば配列番号１２４）；５７４Ｎ＋５７３Ｐ（例えば配列番号１２５）；５７４Ｓ＋５７３Ｐ（例えば配列番号１２６）；５５０Ｋ＋５８０Ｋ（例えば配列番号１３２）；５５０Ｋ＋５７４Ｈ（例えば配列番号１３０）；５５０Ｋ＋５７３Ｐ（例えば配列番号１１７）；４９２Ｄ＋５７３Ｐ（例えば配列番号１０８）；４９２Ｆ＋５７３Ｐ（例えば配列番号１０９）；４９２Ｈ＋５７３Ｐ（例えば配列番号１１１）；４９２Ｒ＋５７３Ｐ（例えば配列番号１１２）；５７４Ｈ＋５８０Ｋ（例えば配列番号１３４）；５５０Ｌ＋５７４Ｈ（例えば配列番号２４５）；５５０Ｌ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２４７）；５５０Ｍ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２５１）；４９２Ｄ＋５５０Ｋ（例えば配列番号２３１）；５５０Ｍ＋５７４Ｈ（例えば配列番号２４９）；４９２Ｄ＋５７４Ｈ（例えば配列番号２３２）；４９２Ｇ＋５５０Ｋ（例えば配列番号２４０）；５５０Ｍ＋５７４Ｈ（例えば配列番号２４９）；又は、４９２Ｇ＋５７４Ｈ（例えば配列番号２４１）。
【０２７５】
３２．  ポリペプチドが、配列番号２の下記の位置に対応する位置からなる群から選択される位置に３以上の変更を含む、先行する実施態様のいずれか記載のポリペプチド：４９２、５５０、５７３、５７４及び５８０。
【０２７６】
３３．  ポリペプチドが、配列番号２の下記の位置に対応する位置に変更を含む、実施態様３２のポリペプチド：５７４Ｈ＋５８０Ｋ＋５７３Ｐ（例えば配列番号１３５）；５５０Ｋ＋５７４Ｈ＋５７３Ｐ（例えば配列番号１３１）；４９２Ｄ＋５５０Ｋ＋５７３Ｐ（例えば配列番号２５３）；５５０Ｍ＋５７３Ｐ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２５２）；５５０Ｌ＋５７３Ｐ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２５３）；４９２Ｇ＋５７３Ｐ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２４２）；５５０Ｍ＋５７３Ｐ＋５７４Ｈ（例えば配列番号２５０）；４９２Ｇ＋５５０Ｋ＋５７３Ｐ（例えば配列番号２５４）；５５０Ｌ＋５７３Ｐ＋５７４Ｈ（例えば配列番号２４６）；４９２Ｄ＋５７３Ｐ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２３４）；４９２Ｄ＋５７３Ｐ＋５７４Ｈ（例えば配列番号２３３）；４９２Ｇ＋５７４Ｈ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２６３）；４９２Ｇ＋５５０Ｋ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２５９）；４９２Ｄ＋５５０Ｋ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２５８）；４９２Ｄ＋５７４Ｈ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２６２）；又は、４９２Ｇ＋５５０Ｋ＋５７４Ｈ（例えば配列番号２５５）。
【０２７７】
３４．  ポリペプチドが、配列番号２の下記の位置に対応する位置からなる群から選択される位置に４以上の変更を含む、先行する実施態様のいずれか記載のポリペプチド：４９２、５５０、５７３、５７４及び５８０。
【０２７８】
３５．  ポリペプチドが、配列番号２の下記の位置に対応する位置に変更を含む、実施態様３４のポリペプチド：４９２Ｇ＋５７３Ｐ＋５７４Ｈ＋５８０Ｋ（例えば配列番号１１５）；４９２Ｄ＋５７３Ｐ＋５７４Ｈ＋５８０Ｋ（例えば配列番号１１４）；５５０Ｋ＋５７３Ｐ＋５７４Ｈ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２６５）；４９２Ｇ＋５５０Ｋ＋５７３Ｐ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２６１）；４９２Ｆ＋５７３Ｐ＋５７４Ｈ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２３７）；４９２Ｇ＋５７３Ｐ＋５７４Ｇ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２４３）；４９２Ｄ＋５７３Ｐ＋５７４Ｈ＋５８０Ｒ（例えば配列番号２３６）；４９２Ｇ＋５７３Ｐ＋５７４Ｈ＋５８０Ｒ（例えば配列番号２４４）；４９２Ｄ＋５５０Ｋ＋５７３Ｐ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２６０）；４９２Ｄ＋５５０Ｋ＋５７３Ｐ＋５７４Ｈ（例えば配列番号２５６）；４９２Ｆ＋５７３Ｐ＋５７４Ｈ＋５８０Ｒ（例えば配列番号２３９）；４９２Ｄ＋５７３Ｐ＋５７４Ｇ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２３５）；又は、４９２Ｆ＋５７３Ｐ＋５７４Ｇ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２３８）。
【０２７９】
３６．  ポリペプチドが、配列番号２の下記の位置に対応する位置からなる群から選択される位置に５以上の変更を含む、先行する実施態様のいずれかのポリペプチド：４９２、５５０、５７３、５７４及び５８０。
【０２８０】
３７．  ポリペプチドが、配列番号２の下記の位置に対応する位置に変更を含む、実施態様記載のポリペプチド：４９２Ｇ＋５５０Ｋ＋５７３Ｐ＋５７４Ｈ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２６７）、又は４９２Ｄ＋５５０Ｋ＋５７３Ｐ＋５７４Ｈ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２６６）。
【０２８１】
３８．  配列番号２の下記の位置に対応する変更を含む、先行する実施態様のいずれか記載のポリペプチド：４９２Ｇ＋５７３Ｐ＋５７４Ｈ＋５８０Ｋ（例えば配列番号１１５）；４９２Ｇ＋５５０Ｋ＋５７３Ｐ＋５７４Ｈ（例えば配列番号２５７）；４９２Ｄ＋５５０Ｋ＋５７３Ｐ＋５７４Ｈ（例えば配列番号２５６）；４９２Ｇ＋５５０Ｋ＋５７３Ｐ（例えば配列番号２５４）；４９２Ｄ＋５５０Ｋ＋５７３Ｐ（例えば配列番号２５３）；５５０Ｍ＋５７３Ｐ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２５２）；５５０Ｌ＋５７３Ｐ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２４８）；５５０Ｌ＋５７３Ｐ＋５７４Ｈ（例えば配列番号２４６）；４９２Ｇ＋５７３Ｐ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２４２）；４９２Ｄ＋５７３Ｐ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２３４）；５７３Ｐ＋５７４Ｈ＋５８０Ｋ（例えば配列番号１３５）；５５０Ｋ＋５７３Ｐ＋５８０Ｋ（例えば配列番号１３３）；５５０Ｋ＋５７３Ｐ＋５７４Ｈ（例えば配列番号１３１）；又は、４９２Ｄ＋５７３Ｐ＋５７４Ｈ＋５８０Ｋ（配列番号１１４）。
【０２８２】
３９．  参照アルブミンが、ＨＳＡ（配列番号２）又はそれらの断片、又はＨＡＳ若しくはそれらの断片を含む融合ポリペプチド、最も好ましくは配列番号２である、実施態様１〜３８のいずれかのポリペプチド。
４０．  親アルブミン、参照アルブミン、それらの断片、又は該親アルブミン、参照アルブミン若しくは断片を含む融合ポリペプチド、又はそれらの融合体よりも、より強力なＦｃＲｎへの結合親和性及び／又はより長い血漿半減期を有する、実施態様１〜３９のいずれか記載のポリペプチド。
４１．  ポリペプチドの配列番号２に対する配列同一性が、８０％より大きい、好ましくは９０％より大きい、より好ましくは９５％より大きい、より好ましくは９６％より大きい、更により好ましくは９７％より大きい、より好ましくは９８％より大きい及び最も好ましくは９９％より大きい、実施態様１〜４０のいずれか記載のポリペプチド。
【０２８３】
４２．  実施態様１〜４１のいずれか記載のポリペプチド、及び治療的、予防的、診断的、造影的又は他の有益な部分から選択された融合パートナーポリペプチドを含む、融合ポリペプチド。
４３．  参照アルブミン、断片又はそれらの融合体のＦｃＲｎへの結合親和性と比べ変更されている、ＦｃＲｎへの結合親和性を有する、アルブミンの変異体、それらの断片、又は該変異アルブミン若しくはそれらの断片を含む融合ポリペプチドであるポリペプチドを調製する方法であって；
（ａ）配列番号２と少なくとも８０％の配列同一性を有する親アルブミンをコードしている核酸を提供する工程；
（ｂ）工程（ａ）の配列を、配列番号２の４９２、５５０、５７３、５７４及び５８０から選択される位置に対応する２以上の位置に、好ましくは実施態様１〜１３のいずれかに記載のように、変更を含む、変異アルブミン、それらの断片、又は該変異アルブミン若しくはそれらの断片を含む融合ポリペプチドであるポリペプチドをコードするように修飾する工程；
（ｃ）好適な宿主細胞において工程（ｂ）の修飾された配列を導入する工程；
（ｄ）これらの細胞を、好適な成長培地において、該ポリペプチドの発現につながる条件下で、成長させる工程；並びに
（ｅ）成長培地から該ポリペプチドを回収する工程：を含み；
ここで、該ポリペプチドは、ＦｃＲｎへの変更された結合親和性及び／又は親アルブミン、参照アルブミン、それらの断片、又は該親アルブミン、参照アルブミン若しくは断片を含む融合ポリペプチド、又はそれらの融合体の半減期と比べ、変更された血漿半減期を有する、方法。
【０２８４】
４４．  位置４９２に対応する位置での置換が、Ｇ、Ｄ、Ｆ、Ｈ、Ｍ又はＲ、好ましくはＧ又はＤへの置換である、実施態様４３の方法。
４５．  位置４９２に対応する位置での置換が、Ｇに対するものである、実施態様４４の方法。
４６．  位置４９２に対応する位置での置換が、Ｄに対するものである、実施態様４４の方法。
【０２８５】
４７．  位置５５０に対応する位置での置換が、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｅ又はＲ、好ましくはＫ、Ｌ又はＭ、最も好ましくはＫに対するものである、実施態様４３〜４６のいずれかの方法。
４８．  位置５７３に対応する位置での置換が、Ｐ、Ｙ、Ｗ、Ｈ、Ｆ、Ｔ、Ｉ又はＶ、好ましくはＰ、Ｙ、又はＷ、最も好ましくはＰへの置換である、実施態様４３〜４７のいずれかの方法。
４９．  位置５７４に対応する位置での置換が、Ｈ、Ｄ、Ｆ、Ｇ、Ｎ、Ｓ又はＹ、好ましくはＨ、Ｄ、Ｆ、又はＧ、最も好ましくはＨへの置換である、実施態様４３〜４８のいずれかの方法。
【０２８６】
５０．  位置５８０に対応する位置での置換が、Ｋ又はＲ、最も好ましくはＲへの置換である、実施態様４３〜４９のいずれかの方法。
【０２８７】
５１．  ２以上の変更が、配列番号２の位置（ｉ）５７３及び５８０；（ｉｉ）４９２及び５７３；又は、（ｉｉｉ）５７３及び５７４に対応する位置である、実施態様４３〜５０のいずれかの方法。
５２．  ２以上の変更が、配列番号２の下記の位置に対応する位置である、実施態様４３〜５１のいずれか記載の方法：５８０Ｋ＋５７３Ｐ（例えば配列番号１２８）；５８０Ｒ＋５７３Ｐ（例えば配列番号１２９）；５７４Ｄ＋５７３Ｐ（例えば配列番号１２１）；５７４Ｆ＋５７３Ｐ（例えば配列番号１２２）；５７４Ｇ＋５７３Ｐ（例えば配列番号１２３）；５７４Ｈ＋５７３Ｐ（例えば配列番号１２４）；５７４Ｎ＋５７３Ｐ（例えば配列番号１２５）；５７４Ｓ＋５７３Ｐ（例えば配列番号１２６）；５５０Ｋ＋５８０Ｋ（例えば配列番号１３２）；５５０Ｋ＋５７４Ｈ（例えば配列番号１３０）；５５０Ｋ＋５７３Ｐ（例えば配列番号１１７）；４９２Ｄ＋５７３Ｐ（例えば配列番号１０８）；４９２Ｆ＋５７３Ｐ（例えば配列番号１０９）；４９２Ｈ＋５７３Ｐ（例えば配列番号１１１）；４９２Ｒ＋５７３Ｐ（例えば配列番号１１２）；５７４Ｈ＋５８０Ｋ（例えば配列番号１３４）；５５０Ｌ＋５７４Ｈ（例えば配列番号２４５）；５５０Ｌ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２４７）；５５０Ｍ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２５１）；４９２Ｄ＋５５０Ｋ（例えば配列番号２３１）；５５０Ｍ＋５７４Ｈ（例えば配列番号２４９）；４９２Ｄ＋５７４Ｈ（例えば配列番号２３２）；４９２Ｇ＋５５０Ｋ（例えば配列番号２４０）；５５０Ｍ＋５７４Ｈ（例えば配列番号２４９）；又は、４９２Ｇ＋５７４Ｈ（例えば配列番号２４１）。
【０２８８】
５３．  配列番号２の下記の位置に対応する位置からなる群から選択される位置に３以上の変更を含む、実施態様４３〜５２のいずれか記載の方法：４９２、５５０、５７３、５７４及び５８０。
５４．  配列番号２の下記の位置に対応する位置に変更を含む、実施態様４３〜５３のいずれか記載の方法：５７４Ｈ＋５８０Ｋ＋５７３Ｐ（例えば配列番号１３５）；５５０Ｋ＋５７４Ｈ＋５７３Ｐ（例えば配列番号１３１）；４９２Ｄ＋５５０Ｋ＋５７３Ｐ（例えば配列番号２５３）；５５０Ｍ＋５７３Ｐ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２５２）；５５０Ｌ＋５７３Ｐ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２５３）；４９２Ｇ＋５７３Ｐ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２４２）；５５０Ｍ＋５７３Ｐ＋５７４Ｈ（例えば配列番号２５０）；４９２Ｇ＋５５０Ｋ＋５７３Ｐ（例えば配列番号２５４）；５５０Ｌ＋５７３Ｐ＋５７４Ｈ（例えば配列番号２４６）；４９２Ｄ＋５７３Ｐ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２３４）；４９２Ｄ＋５７３Ｐ＋５７４Ｈ（例えば配列番号２３３）；４９２Ｇ＋５７４Ｈ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２６３）；４９２Ｇ＋５５０Ｋ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２５９）；４９２Ｄ＋５５０Ｋ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２５８）；４９２Ｄ＋５７４Ｈ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２６２）；又は、４９２Ｇ＋５５０Ｋ＋５７４Ｈ（例えば配列番号２５５）。
【０２８９】
５５．  配列番号２の下記の位置に対応する位置からなる群から選択される位置に４以上の変更を含む、実施態様４３〜５４のいずれか記載の方法：４９２、５５０、５７３、５７４及び５８０。
５６．  配列番号２の下記の位置に対応する位置に変更を含む、実施態様４３〜５５のいずれか記載の方法：４９２Ｇ＋５７３Ｐ＋５７４Ｈ＋５８０Ｋ（例えば配列番号１１５）；４９２Ｄ＋５７３Ｐ＋５７４Ｈ＋５８０Ｋ（例えば配列番号１１４）；５５０Ｋ＋５７３Ｐ＋５７４Ｈ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２６５）；４９２Ｇ＋５５０Ｋ＋５７３Ｐ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２６１）；４９２Ｆ＋５７３Ｐ＋５７４Ｈ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２３７）；４９２Ｇ＋５７３Ｐ＋５７４Ｇ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２４３）；４９２Ｄ＋５７３Ｐ＋５７４Ｈ＋５８０Ｒ（例えば配列番号２３６）；４９２Ｇ＋５７３Ｐ＋５７４Ｈ＋５８０Ｒ（例えば配列番号２４４）；４９２Ｄ＋５５０Ｋ＋５７３Ｐ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２６０）；４９２Ｄ＋５５０Ｋ＋５７３Ｐ＋５７４Ｈ（例えば配列番号２５６）；４９２Ｆ＋５７３Ｐ＋５７４Ｈ＋５８０Ｒ（例えば配列番号２３９）；４９２Ｄ＋５７３Ｐ＋５７４Ｇ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２３５）；又は、４９２Ｆ＋５７３Ｐ＋５７４Ｇ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２３８）。
【０２９０】
５７．  配列番号２の下記の位置に対応する位置からなる群から選択される位置に５以上の変更を含む、実施態様４３〜５６のいずれか記載の方法：４９２、５５０、５７３、５７４及び５８０。
５８．  配列番号２の下記の位置に対応する位置に変更を含む、実施態様４３〜５７のいずれか記載の方法：４９２Ｇ＋５５０Ｋ＋５７３Ｐ＋５７４Ｈ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２６７）又は４９２Ｄ＋５５０Ｋ＋５７３Ｐ＋５７４Ｈ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２６６）。
【０２９１】
５９．  配列番号２の下記の位置に対応する位置に変更を含む、実施態様４３〜５８のいずれか記載の方法：４９２Ｇ＋５７３Ｐ＋５７４Ｈ＋５８０Ｋ（例えば配列番号１１５）；４９２Ｇ＋５５０Ｋ＋５７３Ｐ＋５７４Ｈ（例えば配列番号２５７）；４９２Ｄ＋５５０Ｋ＋５７３Ｐ＋５７４Ｈ（例えば配列番号２５６）；４９２Ｇ＋５５０Ｋ＋５７３Ｐ（例えば配列番号２５４）；４９２Ｄ＋５５０Ｋ＋５７３Ｐ（例えば配列番号２５３）；５５０Ｍ＋５７３Ｐ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２５２）；５５０Ｌ＋５７３Ｐ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２４８）；５５０Ｌ＋５７３Ｐ＋５７４Ｈ（例えば配列番号２４６）；４９２Ｇ＋５７３Ｐ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２４２）；４９２Ｄ＋５７３Ｐ＋５８０Ｋ（例えば配列番号２３４）；５７３Ｐ＋５７４Ｈ＋５８０Ｋ（例えば配列番号１３５）；５５０Ｋ＋５７３Ｐ＋５８０Ｋ（例えば配列番号１３３）；５５０Ｋ＋５７３Ｐ＋５７４Ｈ（例えば配列番号１３１）；又は、４９２Ｄ＋５７３Ｐ＋５７４Ｈ＋５８０Ｋ（配列番号１１４）。
【０２９２】
６０．  参照アルブミンが、ＨＳＡ（配列番号２）又はそれらの断片、又はＨＡＳ若しくはそれらの断片を含む融合ポリペプチド、最も好ましくは配列番号２である、実施態様４３〜５９のいずれかの方法。
６１．  ポリペプチドの配列番号２に対する配列同一性が、８０％より大きい、好ましくは９０％より大きい、より好ましくは９５％より大きい、より好ましくは９６％より大きい、更により好ましくは９７％より大きい、より好ましくは９８％より大きい及び最も好ましくは９９％より大きい、実施態様４３〜６０のいずれか記載の方法。
【０２９３】
６２．  実施態様１〜４２のいずれか記載の若しくは実施態様４３〜６１のいずれか記載の方法により入手可能なポリペプチド、及び複合パートナーを含む、複合体。
６３．  複合パートナーが、治療的、予防的、診断的、造影的又は他の有益な部分である、実施態様６２記載の複合体。
６４．  実施態様１〜４２のいずれか記載の若しくは実施態様４３〜６１のいずれか記載の方法により入手可能なポリペプチド、及び治療的、予防的、診断的、造影的又は他の有益な部分を含む、会合体。
６５．  実施態様１〜４２のいずれか記載の若しくは実施態様４３〜６１のいずれか記載の方法により入手可能なポリペプチド、実施態様６２又は６３記載の複合体、又は、実施態様６４記載の会合体を含む、ナノ粒子又は微粒子。
【０２９４】
６６．  実施態様１〜４２のいずれか記載の若しくは実施態様４３〜６１のいずれか記載の方法により入手可能なポリペプチド、実施態様６２又は６３記載の複合体、実施態様６４記載の会合体、又は、実施態様６５記載のナノ粒子若しくは微粒子を含有する、組成物であって、ここで該ポリペプチド、融合ポリペプチド、複合体、会合体又はナノ粒子若しくは微粒子の、ＦｃＲｎへの結合親和性が、対応する親アルブミン、参照アルブミン、それらの断片、又は該親アルブミン、参照アルブミン若しくは断片を含む融合ポリペプチド、複合体、会合体又はナノ粒子若しくは微粒子、又はそれらの融合体を含有する組成物の、ＦｃＲｎへの結合親和性よりもより強力である、組成物。
【０２９５】
６７．  ポリペプチド、融合ポリペプチド、複合体、会合体又はナノ粒子若しくは微粒子のＦｃＲｎへの結合親和性が、ＨＳＡのＦｃＲｎへの結合親和性よりもより強力である、実施態様６６記載の組成物。
６８．  ポリペプチドの変異体、融合ポリペプチド、複合体、会合体又はナノ粒子若しくは微粒子のＦｃＲｎへの結合係数が、ＨＳＡのＦｃＲｎへのＫＤの０．９×未満、より好ましくはＨＳＡのＦｃＲｎへのＫＤの０．５×未満、より好ましくはＨＳＡのＦｃＲｎへのＫＤの０．１×未満、更により好ましくはＨＳＡのＦｃＲｎへのＫＤの０．０５×未満、更により好ましくはＨＳＡのＦｃＲｎへのＫＤの０．０２×未満、及び最も好ましくはＨＳＡのＦｃＲｎへのＫＤの０．０１×未満である、実施態様６６又は６７記載の組成物。
【０２９６】
６９．  実施態様１〜４２のいずれか記載の若しくは実施態様４３〜６１記載の方法により入手可能なポリペプチド、実施態様６２又は６３記載の複合体、実施態様６４記載の会合体、又は、実施態様６５記載のナノ粒子若しくは微粒子を含有し、抗体結合ドメイン（ＡＢＤ）及び治療的、予防的、診断的、造影的又は他の有益な部分を含む化合物を更に含有する、実施態様６６〜６８のいずれか記載の組成物。
７０．  医薬として許容し得る担体又は賦形剤を含有する、実施態様６６〜６９のいずれか記載の組成物。
【０２９７】
７１．  治療的、予防的、診断的、造影的又は他の有益な部分の、好ましくは血漿中の、ＦｃＲｎへの結合親和性又は半減期を変更するための、実施態様１〜４２のいずれか記載の若しくは実施態様４３〜６１記載の方法により入手可能なポリペプチド、実施態様６２又は６３記載の複合体、実施態様６４記載の会合体、又は、実施態様６５記載のナノ粒子若しくは微粒子、又は、実施態様６６〜７０のいずれか記載の組成物の使用。
【０２９８】
７２．  ＦｃＲｎへの結合親和性が、ＨＳＡ（配列番号２）又は断片、それらの融合体、複合体、会合体、ナノ粒子若しくは微粒子を含む又はからなる参照体の、ＦｃＲｎへの結合親和性と比べ、増大される、実施態様７１記載の使用。
７３．  ＦｃＲｎへの結合親和性が、ＨＳＡ（配列番号２）又は断片、それらの融合体、複合体、会合体、ナノ粒子若しくは微粒子を含む又はからなる参照体の、ＦｃＲｎへの結合親和性と比べ、減少される、実施態様７１記載の使用。
７４．  分子の、好ましくは血漿中の、ＦｃＲｎへの結合親和性又は半減期を変更する方法であって、ここで：
（ａ）該分子は、実施態様１〜４２のいずれか記載の若しくは実施態様４３〜６１記載の方法により入手可能なポリペプチド、又は実施態様６２又は６３の複合体へ、該分子を融合するか又は複合するか；実施態様１〜４２のいずれか記載の若しくは実施態様４３〜６１記載の方法により入手可能なポリペプチド、実施態様６２又は６３記載の複合体へ、該分子を会合するか；実施態様６４記載の会合体中、実施態様６５記載のナノ粒子若しくは微粒子中へ、又は実施態様６６〜７０のいずれか記載の組成物中へ該分子を組み込む、ポリペプチドであり；
（ｂ）該分子は、実施態様１〜４２のいずれか記載の若しくは実施態様４３〜６１記載の方法により入手可能なポリペプチド、又は実施態様６２又は６３記載の複合体へ、該分子を複合するか；実施態様１〜４２のいずれか記載の若しくは実施態様４３〜６１記載の方法により入手可能なポリペプチド、又は実施態様６２又は６３記載の複合体へ、該分子を会合するか；実施態様６４記載の会合体中、実施態様６５記載のナノ粒子若しくは微粒子中へ、又は実施態様６６〜７０のいずれか記載の組成物中へ該分子を組み込む、ポリペプチドではない；方法。
【０２９９】
７５．  分子が、治療的、予防的、診断的、造影的又は他の有益な部分である、実施態様７４記載の方法。
７６．  ポリペプチド、融合ポリペプチド、複合体、会合体、ナノ粒子若しくは微粒子又は組成物が、本明細書記載のものから選択された１又は複数（数個）の部分を含む、実施態様１〜４２又は６２〜７０のいずれか記載の若しくは実施態様４３〜６１記載の方法により入手可能な、ポリペプチド、融合ポリペプチド、複合体、会合体、ナノ粒子若しくは微粒子、又はそれらの組成物。
【０３００】
７７．  実施態様１〜７６のいずれかのポリペプチド又は融合ポリペプチドをコードしている核酸。
７８．  実施態様７７記載の核酸を含むベクター。
７９．  実施態様７７記載の核酸又は実施態様７８記載のベクターを含む、宿主細胞。
８０．  宿主細胞が、真核細胞、好ましくは酵母（サッカロミセス・セレビシアエなど）又は哺乳動物細胞（ＣＨＯ若しくはＨＥＫなど）又は植物細胞（コメなど）である、実施態様７９記載の宿主細胞。
８１．  実施態様１〜４２又は６２〜７０のいずれか記載の若しくは実施態様４３〜６１のいずれか記載の方法により入手可能な、ポリペプチド、融合ポリペプチド、複合体、組成物、会合体、ナノ粒子若しくは微粒子、又はポリヌクレオチドを、対象へ投与することを含む、予防、治療又は診断の方法。
【実施例】
【０３０１】
本発明は、本発明の範囲を制限するように構築されるものではない、下記実施例により更に説明される。
実施例１  ＨＳＡのためのＨＳＡ変異体発現プラスミドの調製
ＨＳＡ変異体は、Sambrook J.及びD.W. Russellの文献(2001年、「分子クローニング：実験マニュアル」第3版、Cold Spring Harbor Laboratory Press社、コールドスプリングハーバー、NY)に記載されているような、標準の分子技術を使用し、発現した。
【０３０２】
方法１：位置Ｅ４９２、Ｄ５５０、Ｋ５７４Ｈ及びＱ５８０Ｋの並べ替えライブラリーを、表２に記載されたような、変異原性フォワードプライマー及び非変異原性リバースプライマーを使用し、野生型ＨＳＡをコードしている（下記記載）ｐＤＢ４０８１のＰＣＲ増幅により作製した。ＰＣＲ条件は、表３に示し、且つ反応生成物４．２μｌを、アガロースゲル電気泳動により評価し、残余を、１０×緩衝液４(New England Biolabs-５０ｍＭ酢酸カリウム、２０ｍＭトリス−酢酸塩、１０ｍＭ酢酸マグネシウム、１ｍＭ  ＤＴＴ、２５℃でｐＨ７．９）５μｌ及びＤｐｎＩ（ＮＥＢ）１μｌにより、３７℃で１時間処理した。これらの反応物を、水５０μｌの添加、その後２０分間の真空適用により、精製した。更に水５０μｌを添加し、ウェルが乾燥するまで、真空に適用した。プラスミドＤＮＡを、水３０μｌの添加、及び１分間のインキュベーションにより回収した。この精製産物２μｌを、標準プロトコールに従いＴＯＰ１０大腸菌細胞１５μｌを形質転換させた。クローンを選択し、アンピシリン１００μｇ／ｍｌを補充したＬＢにおいて一晩成長させ、Ｑｉａｇｅｎ  ＱＩＡｐｒｅｐ  ９６ミニプレップキットを製造業者の指示に従い用いて精製した。変異体を配列決定により証明した。
【０３０３】
ｐＤＢ４０８１を、ＰＲＢ１プロモーターの３’領域、修飾された融合リーダー配列、ＨＳＡをコードしているヌクレオチド配列、及び修飾されたＡＤＨ１ターミネーターの５’領域を含む、遺伝子集成（ＤＮＡ２．０社、米国）により作製された、ＢｓａＩ／ＳｐｈＩ消化された、合成ＤＮＡ断片を、ＨｉｎｄＩＩＩ／ＳｐｈＩ−消化されたｐＤＢ４００５へライゲーションすることにより作製した。ｐＤＢ４００５は、WO 2011/051489(引用により本明細書中に組み込まれている)に記載されている。
表２：プラスミド及びアミノ酸置換及び関連プライマー
【表５−１】
2019048821.tif 000006
【表５−２】
2019048821.tif 000007
【表５−３】
2019048821.tif 000008
【０３０４】
表３：ＰＣＲ反応成分
【表６】
2019048821.tif 000009
（＊ＨＦ緩衝液及びＰｈｕｓｉｏｎポリメラーゼは、New England Biolabs社から得た）
【０３０５】
表４：ＰＣＲ反応条件
【表７】
2019048821.tif 000010
【０３０６】
方法２：表５及び６に記載された変異体を、下記の変更を伴い、WO 2012/150319実施例６方法２「Ｋ５７３Ｐを持つ組合せ変異体の作製」（引用により本明細書中に組み込まれている）に記載のように作製した。表５に記載の変異体に関して、Ｋ５７３Ｐ変異をコードしている断片を、ＳａｌＩ及びＢｓｕ３６Ｉ制限部位によりｐＤＢ４６７３から除去し、且つ表５に指定したように、同様に消化された親プラスミドへ挿入した。ｐＤＢ４６７３（ＨＳＡ  Ｋ５７３Ｐ）は、ＳａｌＩ及びＨｉｎＤＩＩＩ制限酵素による、ｐＤ４２８３の消化により（引用により本明細書中に組み込まれているWO 2011/051489に記載）作製された断片の、同様に消化されたｐＤＢ４０８１への挿入により、構築した。表６記載の変異体に関して、Ｋ５７３Ｐ＋Ｋ５７４Ｈ＋Ｑ５８０Ｋをコードしている断片を、ｐＤＢ５０３２から、ＳａｌＩ及びＢｓｕ３６Ｉ制限部位を用いて除去し、表６に指定したように、同様に消化された親プラスミドへ挿入した。
表５：プラスミド及びアミノ酸置換
【表８】
2019048821.tif 000011
【０３０７】
表６：プラスミド及びアミノ酸置換
【表９】
2019048821.tif 000012
【０３０８】
方法３：表７記載の変異体は、WO 2012/150319実施例６方法１（引用により本明細書中に組み込まれている）に記載のように、ＰＣＲ反応のための鋳型としてこれらの表に指定されたプラスミドを使用し、作製した。表８及び９に記載した条件を、ｐＤＢ４９９７−５００４、ｐＤＢ５０４２−４６、及びｐＤＢ５０３０−１を作製するために使用した。表１０及び１１に記載した条件を使用し、ｐＤＢ５０２７−２９及びｐＤＢ５０３２を作製した。変異されたＰＣＲ産物を、ＳａｌＩ及びＢｓｕ３６Ｉ制限酵素を用い消化し、野生型ＨＳＡをコードしている、同様に消化されたｐＤＢ４０８１へ挿入した（前述のように）。
表７：プラスミド及びアミノ酸置換及び関連プライマー
【表１０】
2019048821.tif 000013
【０３０９】
表８：ＰＣＲ反応成分
【表１１】
2019048821.tif 000014
【０３１０】
表９：ＰＣＲ反応条件
【表１２】
2019048821.tif 000015
【０３１１】
表１０：ＰＣＲ反応成分
【表１３】
2019048821.tif 000016
【０３１２】
表１１：ＰＣＲ反応条件
【表１４】
2019048821.tif 000017
【０３１３】
発現プラスミドの調製及びＳ・セレビシアエの形質転換は、WO 2012/150319(引用により本明細書中に組み込まれている）に記載のように、２４時間（ｐＤＢ５０２７−９、ｐＤＢ５０３２及びｐＤＢ５０９１−９２）、又は４８時間ストック法（残りの変異体全て）を使用し、行った。ｐＤＢ４９９０−５、ｐＤＢ４９９７−５００４、ｐＤＢ５０４２−５０４６、ｐＤＢ５０２７−３２及びｐＤＢ５０９１−２に関する宿主株は、ゲノムへ組み込まれたＰＤＩ  ４コピーを伴う、Ｓ・セレビシアエＤＹＢ７(Payneら、Applied and Enviromental Microbiology, 74(24): 7759-7766 (2008))であった。残りのプラスミドに関する宿主株は、WO 2012/150319(引用により本明細書中に組み込まれている）に記載のＳ・セレビシアエＢＸＰ１０ｃｉｒ0であった。振盪フラスコからのタンパク質の単離及び精製は、WO 2011/051489に記載されているように実行した。
【０３１４】
実施例２  ＷＴ  ＨＳＡ及び変異体のｓｈＦｃＲｎに対する結合親和性のＳＰＲ分析
ＳＰＲ分析を、Ｂｉａｃｏｒｅ  ３０００装置(GE Healthcare社)において行った。固定化は、製造業者の指示に従い、GE Healthcare社アミンカップリング化学を使用し、Ｈｉｓ−タグ付けしたｓｈＦｃＲｎに結合されたＣＭ５チップ(GeneArt, Life Technologies社により生成されたＦｃＲｎ）上で実行した。ｓｈＦｃＲｎ−ＨＩＳ（β−２−ミクログロブリンＣ−末端上に６−Ｈｉｓ尾部を伴うｓｈＦｃＲｎ）の固定化されたレベルは、１２００〜２５００ＲＵであり、且つ酢酸ナトリウム（ｐＨ４．５）(G E Healthcare社)を用い希釈したｓｈＦｃＲｎ  ２０μｇ／ｍＬの注入により実施した。チップ表面を、試行緩衝液−二塩基性／一塩基性リン酸緩衝液（ｐＨ５．５）（（６７ｍＭリン酸緩衝液、０．１５Ｍ  ＮａＣｌ、０．００５％Ｔｗｅｅｎ２０（ｐＨ５．５））の定常流（５μＬ／分）により、２５℃（すなわち外界温度）で、一晩安定化させた。リガンドの安定化後、チップ表面を、５〜１２×４５μｌ二塩基性／一塩基性リン酸緩衝液の３０μｌ／分の注入、それに続く各注入間のＨＢＳ＿ＥＰ（０．０１Ｍ  ＨＥＰＥＳ、０．１５Ｍ  ＮａＣｌ、３ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．００５％界面活性剤Ｐ２０）のｐＨ７．４(GE Healthcare社))の再生工程（１２秒間）により、馴化させた。その後表面を、３×４５μｌ陽性対照（野生型ＨＳＡ（配列番号２））の３０μｌ／分の注入、それに続く１２秒間の再生パルスにより、活性についてチェックした。反応速度の測定は、固定されたｓｈＦｃＲｎ上、２５℃（すなわち外界温度）での、ＨＳＡ及びＨＳＡ変異体の希釈物（１００μＭ〜０．０１６μＭ）の３０μＬ／分での注入により行った。次に、参照細胞値を減算し、且つＢｉａｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェア４．１を使用し、反応速度のデータを入手し、ＫＤ値を確認した。変異体は、野生型アルブミン（配列番号２）並びに位置４９２、５５０、５７３、５７４及び５８０に１又は複数の変更を伴うアルブミンであった。変異体は、ＳＰＲにより分析し、それらのｓｈＦｃＲｎに対する結合反応（ＲＵ）を決定した。一部の変異体は、ＫＤ値を決定するために、更に特徴付けた。このデータは、表１２〜１８に示している。
【０３１５】
表１２：選択されたアルブミン変異体（１つの変更を持つ）のｓｈＦｃＲｎへ対する結合親和性
【表１５】
2019048821.tif 000018
表１２のデータは、位置４９２、５５０、５７４及び５８０に１つの変更を含む変異体は、ＷＴアルブミンよりも、より高いＦｃＲｎ結合親和性を示すことを示している。
【０３１６】
表１３：ｓｈＦｃＲｎに対するアルブミン変異体（２つの変更を持つ）の結合親和性
【表１６】
2019048821.tif 000019
表１３のデータは、Ｋ５７３Ｐ変異体を持つ複合体における位置４９２での変更を含む変異体は、ＷＴアルブミンよりもより高い結合親和性を示すことを示している。
【０３１７】
表１４：ｓｈＦｃＲｎへのアルブミン変異体の結合親和性
【表１７】
2019048821.tif 000020
【０３１８】
変異体ＨＳＡ−Ｅ４９２Ｄ＋Ｋ５７３Ｐ及びＨＳＡ−Ｅ４９２Ｇ＋Ｋ５７３Ｐを、それらのみかけの遅い「オフレート」（すなわち解離定数（Ｋｄ））を基にした更なる分析のために選択した。表１４のデータは、変異体ＨＳＡ−Ｅ４９２Ｄ＋Ｋ５７３Ｐ及びＨＳＡ−Ｅ４９２Ｇ＋Ｋ５７３Ｐは、ＷＴアルブミン及び単独のＫ５７３Ｐ変異体と比べ、より高いｓｈＦｃＲｎへの親和性を示すことを示している。
【０３１９】
表１５：アルブミン変異体（２つの変更を持つ）のｓｈＦｃＲｎへの結合親和性
【表１８】
2019048821.tif 000021
表１５のデータは、ｓｈＦｃＲｎへの改善された親和性が個別に明らかにされた（表１２）Ｋ５７３Ｐ変異体への置換の導入は、ＷＴアルブミンと比べ減少した親和性から、増加した親和性を示す変異体まで、幅のある結合反応を生じたことを示している。
【０３２０】
表１６：ｓｈＦｃＲｎへのアルブミン変異体の結合親和性
【表１９】
2019048821.tif 000022
表１６のデータは、変異体ＨＳＡ−Ｋ５７４Ｈ＋Ｋ５７３Ｐ及びＨＳＡ−Ｑ５８０Ｋ＋Ｋ５７３Ｐは、ＷＴアルブミン及び単独のＫ５７３Ｐ変異体と比べ、ｓｈＦｃＲｎについてかなり高い親和性を有することを示している。
【０３２１】
表１７：ｓｈＦｃＲｎへのアルブミン変異体の結合親和性
【表２０】
2019048821.tif 000023
表１７のデータは、位置５５０、５７３、５７４及び５８０での変異の導入の変動する効果を示している。例えば、ＨＳＡ−Ｋ５７４Ｈ＋Ｋ５７３Ｐは、ＷＴアルブミンと比べ増加した結合を示した（表１６）。Ｋ５７４Ｈ変異のＨＳＡ−Ｑ５８０Ｋ＋Ｋ５７３Ｐ（表１６）への導入は、ＨＳＡ−Ｋ５７４Ｈ＋Ｑ５８０Ｋ＋Ｋ５７３Ｐを生じ、これはＨＳＡ−Ｑ５８０Ｋ＋Ｋ５７３Ｐに勝る結合親和性（ＷＴアルブミンに比べ）の改善を生じなかった。対照的に、この変異のＨＳＡ−Ｄ５５０Ｋ＋Ｋ５７３Ｐへの導入は、ＨＳＡ−Ｄ５５０Ｋ＋Ｋ５７４Ｈ＋Ｋ５７３Ｐを生じ、これはＷＴアルブミン及びＨＳＡ−Ｄ５５０Ｋ＋Ｋ５７３Ｐと比べ、親和性の増加を生じた。
【０３２２】
表１８：ｓｈＦｃＲｎへのアルブミン変異体の結合親和性
【表２１】
2019048821.tif 000024
表１８のデータは、位置４９２、５７３Ｐ、５７４及び５８０に、４つの置換を含む変異体は、ＨＳＡ−Ｋ５７４Ｈ＋Ｑ５８０Ｋ＋Ｋ５７３Ｐ（表１７）などの３つの変異を含む変異体、Ｋ５７４Ｈ＋Ｋ５７３Ｐ及びＱ５８０Ｋ＋Ｋ５７３Ｐ（表１６）などの２つの変異を含む変異体、並びに単独のＫ５７３Ｐ変異体又はＷＴアルブミンと比べ、結合親和性の著しい増加を示すことを示している。
【０３２３】
実施例３  更なる組合せ変異体の作製
単独又は複数の更なる変異を、表１９に列記された鋳型プラスミドに導入し、指定された変異体を生じた。変異原性フォワードプライマー及び非変異原性リバースプライマーを使用し、表２０に列記されたような、所望の変化を導入した。鋳型プラスミドは、表２１に記載された成分を用いメチル化し、３７℃で１時間インキュベーションし、その後Ｑｉａｇｅｎ  ＱｉａＱｕｉｃｋ  ＰＣＲ精製キットを製造業者の指示に従い使用し、精製した。次にこのメチル化された鋳型を、表１９に詳述されたオリゴヌクレオチド／鋳型組合せに従う、変異原性ＰＣＲ反応（表２２及び２３）において使用し、必要とされるＨＳＡ変異体を作製した。ＰＣＲ反応後、各ＰＣＲ反応混合物の５μｌを、アガロースゲル電気泳動により視覚化し、プラスミドの生成を評価し、且つプラスミド５μｌを、更なる分析のために保持した。
【０３２４】
表１９：変異原性ＰＣＲ増幅に関する変異体及び関連した鋳型及びオリゴヌクレオチド
【表２２】
2019048821.tif 000025
（ｆ＝フォワード、ｒ＝リバース）
【０３２５】
表２０：  変異原性ＰＣＲ増幅のためのオリゴヌクレオチド
【表２３】
2019048821.tif 000026
（ｆ＝フォワード、ｒ＝リバース）
【０３２６】
表２１：メチル化反応成分
【表２４】
2019048821.tif 000027
表２２：ＰＣＲ反応成分
【表２５】
2019048821.tif 000028
表２３：表１９に列記された変異体の構築のためのＰＣＲ反応条件
【表２６】
2019048821.tif 000029
【０３２７】
ＰＣＲ−作製されたプラスミドの各々４０μｌを、ＤｐｎＩ、ＮｓｉＩ、及びＰｖｕＩ制限酵素(New England Biolabs社)の各０．５μｌの添加、引き続きの３７℃で１時間のインキュベーションにより、インビボ組換えのために調製した。調製したプラスミド３μｌ、Ａｃｃ６５Ｉ／ＢａｍＨＩ−消化したｐＤＢ３９３６  ３μｌ、及びサケ精子ＤＮＡ  １μｌを使用し、実施例１記載のプロトコールに従い、Ｓ・セレビシアエを形質転換させた。使用した宿主株は、ゲノムへ組み込まれたＰＤＩ１の２追加コピーを伴う、ＤＹＢ７  ｕｒａ３(Payneら、Appl. Environ. Microbiol. 74(24): 7759-7766 (2008))由来の、Ｓ・セレビシアエ株であった。単独のコロニーを、ＢＭＭＤ＋ＣＳＭ−ｌｅｕプレート（引用により本明細書中に組み込まれている、WO 2012/150319記載のもの）上に貼り付け、酵母ストック生成前の発現の評価を可能にした。ストックは、実施例１に記載した４８時間法により作製した。各酵母株２００μｌを使用し、５０ｍｌ振盪フラスコ内での１０ｍｌ  ＢＭＭＳを接種し、引き続き３０℃で２００ｒｐｍ、４日間インキュベーションした。培養上清を、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離することにより、収集した。
【０３２８】
アルブミン変異体を、１０ｍｌ振盪フラスコから、アルブミンアフィニティマトリクス(AlbuPure(商標)-ProMetic Biosciences社)による、単回クロマトグラフィー工程を使用し、精製した。マイクロ−スケールアフィニティクロマトグラフィーを、２００μｌのカスタムパックしたＡｔｏｌｌカラムを備える自動プラットフォーム(Perkin Elmer社、Janus)上で、WO 2011/051489(引用により本明細書中に組み込まれている)記載と同じ手順を使用し、適宜容積を縮小し、９６−ウェルフォーマットと平行して、８回試行し、行った。
【０３２９】
試料の最終濃度は、ＵＶマイクロプレート及びプレートリーダーを使用し、２８０ｎｍでの吸光度により決定し、読み値はＰＢＳに対しブランク補正し、且つ１ｍｇ／ｍｌ溶液に関する０．５２ＡＵ／ｃｍの減衰係数を使用し、濃度（ＡＵ：吸光度単位）を算出した。
【０３３０】
実施例４  変異体の更なる組合せの分析
バイオレーヤー干渉計法を使用する反応速度の分析を、Ｏｃｔｅｔ  Ｒｅｄ−９６装置(ForteBio社)において行った。ＧＳＴ−タグ付けしたｓｈＦｃＲｎ（ｓｈＦｃＲｎ−ＧＳＴ／ＦＬＡＧ）の固定化を、ＦｏｒｔｅＢｉｏアミンカップリング化学を使用し、ＡＲ２Ｇバイオセンサー上で、製造業者の指示に従い行った。ｓｈＦｃＲｎ−ＧＳＴ／ＦＬＡＧ−は、ＦｃＲｎのα鎖のＣ−末端上のＧＳＴ−タグ（グルタチオン−転移酵素）及びＦＬＡＧ−タグ（ＤＹＫＤＤＤＤＫ）を意味する。使用前にＧＳＴ／ＦＬＡＧ−タグ付けｓｈＦｃＲｎを、ＩｇＧアフィニティクロマトグラフィーを用いて精製した。より詳細には、ＧＳＴ／ＦＬＡＧ−タグ付けｓｈＦｃＲｎを、ＧＳＴｒａｐカラム上に捕獲し、還元グルタチオンにより溶離した。ｓｈＦｃＲｎを、ＰＢＳに対しｐＨ７．４で透析し、ＩｇＧ  Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（商標）６  Ｆａｓｔ  Ｆｌｏｗ(GE Healthcare社)を使用し、更に精製した。ｓｈＦｃＲｎは、５０ｍＭ酢酸Ｎａ、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ（ｐＨ５．５）中、樹脂上に捕獲し、且つＰＢＳ（ｐＨ７．４）により溶離した。溶離したｓｈＦｃＲｎを、２〜５ｍｇ／ｍｌに濃縮し、使用時まで、−２０℃で貯蔵した。ｓｈＦｃＲｎ−ＧＳＴ／ＦＬＡＧの固定されたレベルは、反応レベルで、１ｎｍより大きく、酢酸ナトリウム中ＦｃＲｎ濃度２〜１０μｇ／ｍＬを使用し行い、引き続きアミンカップリング反応をエタノールアミンで停止した。センサーは、直接又は１５％（ｗ／ｖ）ショ糖中浸漬のいずれかを使用し、使用時まで乾燥した。
【０３３１】
反応速度の分析を、１００ｍＭ酢酸ナトリウムを補充し且つｐＨ５．５に調節したＢＭＭＤ発酵培地（引用により本明細書中に組み込まれている、WO 2011/051489に記載）中に、２−、４−及び８−倍希釈された、マイクロ−スケールアフィニティ精製されたアルブミン変異体を使用し行った。会合（１２０秒）及び解離（３００秒）を、３０℃で１０００ｒｐｍ振盪し、行った。データ評価のために、ＦｏｒｔｅＢｉｏソフトウェアを使用し、ＫＤ値を算出し、更に会合及び解離定数を、ＯＤ２８０ｎｍ測定により決定されたＨＳＡ濃度を使用し計算した。
表２４：アルブミン変異体のｓｈＦｃＲｎに対する結合親和性
【表２７】
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【０３３２】
実施例５  選択された変異体組合せの更なる分析
表１９に記載した変異体のサブセット（表２５）を、更なる分析のために選択した。ＰＣＲ反応液の３μｌを、１０μｌ緩衝液４(New England Biolabs社)、５μｌ  ＤｐｎＩ及び５５μｌ水を含有する反応混合物７μｌにより消化した。この反応混合物を、３７℃で１．５時間インキュベーションし、その後Ｑｉａｇｅｎ  ＱｉａＱｕｉｃｋ  ＰＣＲ精製キットを製造業者の指示に従い使用し、精製した。調製したプラスミド２μｌを使用し、コンピテント大腸菌１０−β細胞(New England Biolabs社)を形質転換させた。プラスミドＤＮＡを、Ｑｉａｇｅｎ  Ｐｌｕｓ  Ｍａｘｉｐｒｅｐキットを製造業者の指示に従い利用し、調製した。得られたプラスミドを、配列決定し、所望の変異が導入されたことを確認した。プラスミド調製及び酵母形質転換は、実施例１のように、ＢＸＰ１０  ｃｉｒ0株を用いて行った。２４時間酵母ストックは、実施例１記載のように作製した。
【０３３３】
表２５：変異体及びプラスミド番号
【表２８】
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表２６及び２７に列記した変異体を、使用前にＨｉｓ−タグ付けしたｓｈＦｃＲｎを、ＩｇＧアフィニティクロマトグラフィーを用いて精製したこと以外は、実施例２記載のようにＢｉａｃｏｒｅ  ３０００装置を用いる、ＳＰＲにより分析した。より詳細には、Ｈｉｓ−タグ付けｓｈＦｃＲｎを、Ｎｉ−ＨｉＴｒａｐカラム上に捕獲し、イミダゾールで溶離した。ｓｈＦｃＲｎを、５０ｍＭ酢酸Ｎａ、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ（ｐＨ５．５）中樹脂上に捕獲し、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）で溶離した。溶離したｓｈＦｃＲｎを、２〜５ｍｇ／ｍｌまで濃縮し、ｓｈＦｃＲｎ−ＨＩＳを使用する、使用時まで−２０℃で貯蔵した。
【０３３４】
表２６：ＨＳＡ変異体のｓｈＦｃＲｎへの結合親和性のＳＰＲ分析
【表２９】
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表２７：ＨＳＡ変異体のｓｈＦｃＲｎへの結合親和性のＳＰＲ分析
【表３０】
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【０３３５】
表２６及び２７のデータは、置換の組合せを含む変異体における、ＷＴ  ＨＳＡに勝る親和性の改善を示している。一般に、３又は４つの置換を含む変異体は、２つの置換を含むものに勝る改善された結合特徴を示している。一般に、Ｑ５８０Ｋの封入は、改善された結合親和性に実質的に寄与している。
【０３３６】
本明細書に記載及び請求された発明は、本明細書に開示された具体的態様により範囲を限定されることはなく、その理由はこれらの態様は、本発明の数種の態様の例証を意図しているからである。任意の同等の態様は、本発明の範囲内であることが意図される。実際、本明細書に示され且つ記載されるものに加え、本発明の様々な改変が、前記説明から、当業者には明らかであろう。そのような改変はまた、添付された請求項の範囲内に収まることが意図されている。矛盾する場合、定義を含む本開示が、支配するであろう。
【図１−１】
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【図１−２】
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【図２−１】
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【図２−２】
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【図２−３】
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【図２−４】
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【図３】
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【図４】
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【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】平成30年11月13日(2018.11.13)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
親アルブミン、参照アルブミン、それらの断片、又は該親アルブミン、参照アルブミン若しくは断片を含む融合ポリペプチド、又はそれらの融合体のＦｃＲｎへの結合親和性と比べ、ＦｃＲｎへの変更された結合親和性を有する、アルブミンの変異体、それらの断片、又は該変異アルブミン若しくはそれらの断片を含む融合ポリペプチドである、ポリペプチドであって、ここで該ポリペプチドが、配列番号２の位置：（ａ）４９２及び５８０；（ｂ）４９２及び５７４；（ｃ）４９２及び５５０；（ｄ）５５０及び５７３；（ｅ）５５０及び５７４；（ｆ）５５０及び５８０に対応する位置から選択される２以上の位置において変更を含む、ポリペプチド。
【外国語明細書】
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