(57)【要約】      （修正有）【課題】心血管作用等の副作用を引き起こすことなく、徐波睡眠（ＳＷＳ）を誘導する睡眠誘導剤の提供。【解決手段】式（Ｉ）：2019089712.tif 000036（Ｒ１はカルボキシル基であり；ｍ個のＲ２は独立してハロゲン原子、アルキル基、ニトロ基、アルコキシ基、シアノ基又はアリール基であり；ｎ個のＲ３は独立してハロゲン原子、アルキル基、ニトロ基、アルコキシ基、シアノ基又はアリール基であり；ｍは０、１又は２であり；ｎは１又は２である）で表される化合物又はその薬学上許容され得る塩を含む徐波睡眠誘導剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化１】
2019089712.tif 000031
（式中、
環Ａ及び環Ｂは同一又は異なって５又は６員芳香環であり；
Ｒ１はカルボキシル基であり；
ｍ個のＲ２は独立してハロゲン原子、アルキル基、ニトロ基、アルコキシ基、シアノ基又はアリール基であり；
ｎ個のＲ３は独立してハロゲン原子、アルキル基、ニトロ基、アルコキシ基、シアノ基又はアリール基であり；
ｍは０、１又は２であり；
ｎは１又は２である）
で表される化合物またはその医薬上許容される塩を含む、徐波睡眠誘導剤。
【請求項２】
環Ａ及び環Ｂがベンゼンである、請求項１記載の剤。
【請求項３】
ｍが２である、請求項１又は２記載の剤。
【請求項４】
Ｒ２がハロゲン原子である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の剤。
【請求項５】
下記部分構造：
【化２】
2019089712.tif 000032
が、下記式：
【化３】
2019089712.tif 000033
で表される、請求項１〜４のいずれか１項に記載の剤。
【請求項６】
式（Ｉ）で表される化合物が下記化合物群から選択される、請求項１記載の剤。
【化４】
2019089712.tif 000034
【請求項７】
心血管系の副作用が低減された、請求項１〜６のいずれか１項に記載の剤。
【請求項８】
下記化合物群から選択される化合物及びその医薬上許容される塩。
【化５】
2019089712.tif 000035
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、睡眠誘導剤に関する。本発明は、特に熟睡感を与える徐波睡眠を提供可能な睡眠誘導剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
不眠症は最も一般的な睡眠障害の一つであり、推定有病率が一般の集団で１０〜１５％、高齢者集団で３０〜６０％である。不眠症の治療のための最も広く処方されている薬剤は、ベンゾジアゼピン（ＢＤＺ）および非ＢＤＺとして知られている、抑制性神経伝達物質γ−アミノ酪酸のシグナル伝達を増強する中枢神経系抗うつ薬である。しかしながら、これらの薬物療法は、筋肉弛緩、リバウンド不眠症、食欲の変化、翌日の鎮静、認知機能障害、健忘症効果、ならびに薬物耐性および依存性の発生を含む広範囲の副作用に悩まされている。また、オレキシン受容体アンタゴニストは、最近、不眠症治療薬として開発され承認された（非特許文献１）。しかしながら、これらの薬物の主な問題点は、筋力低下、奇妙な夢、夢遊病、他の夜間行動または自殺願望の起こり得る兆候を伴う翌朝の眠気である（非特許文献２）。さらに、オレキシン受容体アンタゴニストは、ほとんどの場合、睡眠から覚醒することを妨げることによって作用するので、寝付きに問題がある人にはあまり効果がない。
【０００３】
極めて選択的なアデノシンＡ２Ａ受容体（Ａ２ＡＲ）アゴニストであるＣＧＳ２１６８０は、ラットの前脳基底部吻側腹側部のくも膜下腔またはマウスの側脳室への注入後に睡眠を著しく増加させる（非特許文献３；非特許文献４；非特許文献５）。しかしながら、Ａ２ＡＲアゴニストの投与は、低血圧や頻脈等の心血管作用のために睡眠障害を治療する臨床的可能性はないと一般に考えられている（非特許文献６）。Ａ２ＡＲアロステリック調節剤の作用は、オルソステリックＡ２ＡＲアゴニストとは対照的に、アデノシンが放出され脳内のアデノシンレベルが覚醒時に上昇する場合に限定されるため、アロステリックＡ２ＡＲ調節は不眠症治療の代替的戦略であり得る（非特許文献７）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】Cox et al, 2010, J Med Chem 53: 5320-5332
【非特許文献２】Jacobson et al, 2014, Expert Rev Clin Pharmacol 7: 711-730
【非特許文献３】Satoh et al, 1999, Eur J Neurosci 11: 1587-1597
【非特許文献４】Scammell et al, 2001, Neuroscience 107: 653-663
【非特許文献５】Urade et al, 2003, Neurology 61: S94-96
【非特許文献６】Lera Ruiz et al, 2014, J Med Chem 57: 3623-3650
【非特許文献７】Porkka-Heiskanen et al, 1997, Science 276: 1265-1268
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、筋肉弛緩、リバウンド不眠症、食欲の変化、翌日の鎮静、認知機能障害、健忘症効果、ならびに薬物耐性および依存性の発生等の副作用がない睡眠誘導剤、特に熟睡感を与える徐波睡眠を提供することが可能な睡眠誘導剤として有用な化合物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、上記課題を解決すべく、アデノシンＡ２Ａ受容体を標的としたポジティブアロステリックモジュレーター（ＰＡＭ）を探索研究し、その過程でＡ２ＡＲ ＰＡＭ活性を有する一連の化合物（以下、Ａ２ＡＲ ＰＡＭと総称する場合がある）を見出し、当該化合物を投与することにより、心血管作用等の副作用を引き起こすことなく、徐波睡眠（ＳＷＳ）を誘導することに成功して本発明を完成するに至った。
即ち、本発明は以下の通りである。
（１）式（Ｉ）：
【０００７】
【化１】
2019089712.tif 000002
【０００８】
（式中、
環Ａ及び環Ｂは同一又は異なって５又は６員芳香環であり；
Ｒ１はカルボキシル基であり；
ｍ個のＲ２は独立してハロゲン原子、アルキル基、ニトロ基、アルコキシ基、シアノ基又はアリール基であり；
ｎ個のＲ３は独立してハロゲン原子、アルキル基、ニトロ基、アルコキシ基、シアノ基又はアリール基であり；
ｍは０、１又は２であり；
ｎは１又は２である）
で表される化合物またはその医薬上許容される塩を含む、徐波睡眠誘導剤。
（２）環Ａ及び環Ｂがベンゼンである、上記（１）記載の剤。
（３）ｍが２である、上記（１）又は（２）記載の剤。
（４）Ｒ２がハロゲン原子である、上記（１）〜（３）のいずれかに記載の剤。
（５）下記部分構造：
【０００９】
【化２】
2019089712.tif 000003
【００１０】
が、下記式：
【００１１】
【化３】
2019089712.tif 000004
【００１２】
で表される、上記（１）〜（４）のいずれかに記載の剤。
（６）式（Ｉ）で表される化合物が下記化合物群から選択される、上記（１）記載の剤。
【００１３】
【化４】
2019089712.tif 000005
【００１４】
（７）心血管系の副作用が低減された、上記（１）〜（６）のいずれかに記載の剤。
（８）下記化合物群から選択される化合物及びその医薬上許容される塩。
【００１５】
【化５】
2019089712.tif 000006
【発明の効果】
【００１６】
本発明によれば、心血管作用等の副作用を引き起こすことなく、徐波睡眠（ＳＷＳ）を誘導することが可能となる。従って本発明は、睡眠誘導剤、特に熟睡感が与える徐波睡眠を提供可能な睡眠誘導剤の提供が可能となる。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】マウスＡ２ＡＲ発現ＣＨＯ細胞の特徴づけ。（ａ）ＦＲＥＴアッセイのための細胞数の最適化。（ｂ）異なる濃度のアデノシンに対するｍＡ２ＡＲ−ＣＨＯ細胞株の応答。
【図２】ｍＡ２ＡＲ−ＣＨＯ細胞におけるＡ２ＡＲ ＰＡＭ及びアデノシンの共処理は、アロステリック調節作用を示した。（ａ）化合物のハイスループットスクリーニング。（ｂ，ｃ）化合物番号３７１（Ａ２ＡＲ ＰＡＭ−１）のアロステリック効果とその構造。（ｄ）ｍＡ２ＡＲ−ＣＨＯ及びネイティブ−ＣＨＯ細胞を用いたＡ２ＡＲ ＰＡＭ−１のアロステリック効果の妥当性確認。（ｅ，ｆ）異なる濃度のアデノシン存在下での異なる濃度のＡ２ＡＲ ＰＡＭ−１のアロステリック効果。データは、平均値±ＳＥＭで示した。*: p<0.05, **: p<0.01 vs. アデノシン、Student’s t-検定による。CMP: 化合物
【図３】ｍＡ２ＡＲ−ＣＨＯ細胞において、Ａ２ＡＲ ＰＡＭは、選択的なＡ２ＡＲアゴニストであるＣＧＳ２１６８０の活性を増強しなかった。Ａ２ＡＲ ＰＡＭ−１（１００μＭ）及び異なる濃度での選択的Ａ２ＡＲアゴニストであるＣＧＳ２１６８０とで共処理されたｍＡ２ＡＲ−ＣＨＯ細胞。**: p<0.01、ＣＧＳ２１６８０及びＡ２ＡＲ ＰＡＭ−１間で。
【図４】Ａ２ＡＲ ＰＡＭ−１のＩＰ投与はマウスにおいてＳＷＳを誘導した。（ａ）生理食塩水及びＡ２ＡＲ ＰＡＭ−１のＩＰ注射後のポリグラフ記録及び対応するヒプノグラムの典型例。（ｂ）Ａ２ＡＲ ＰＡＭ−１を７５ｍｇ／ｋｇで投与したマウスにおける、ＳＷＳ、ＲＥＭ睡眠及び覚醒のタイムコース。（ｃ）Ａ２ＡＲ ＰＡＭ−１（７５ｍｇ／ｋｇ，ＩＰ）注射して８時間後のＳＷＳ、レム睡眠及び覚醒の総量。（ｄ）異なる用量でのＡ２ＡＲ ＰＡＭ−１のＳＷＳ誘導効果。（ｅ）Ａ２ＡＲ ＰＡＭ−１（７５ｍｇ／ｋｇ，ＩＰ）注射して８時間の間のＥＥＧパワー密度。データは、平均値±ＳＥＭで示した。*: p<0.05; **: p<0.01 vs. 生理食塩水、ANOVA Tukey Test又はstudent’s t-検定。(n=5)
【図５】Ａ２ＡＲ ＰＡＭ−１のＩＰ投与後のマウスの睡眠構造。マウスにおける、Ａ２ＡＲ ＰＡＭ−１のＩＰ投与後の各段階のエピソード数（ａ）、平均持続時間（ｂ）及び睡眠遷移段階（ｃ）。
【図６】Ａ２ＡＲ ＰＡＭ−４のＩＰ投与はマウスにおいてＳＷＳを誘導した。Ａ２ＡＲ ＰＡＭ−４を７５ｍｇ／ｋｇ又は９０ｍｇ／ｋｇで投与したマウスにおける、ＳＷＳのタイムコース。Ａ２ＡＲ ＰＡＭ−４（７５ｍｇ／ｋｇ，ＩＰ）投与後のＳＷＳの総量、及びＡ２ＡＲ ＰＡＭ−４（９０ｍｇ／ｋｇ，ＩＰ）注射して８時間の間のＳＷＳのＥＥＧパワー密度をもまた示した。データは、平均値±ＳＥＭで示した。*: p<0.05, **: p<0.01 vs. 生理食塩水、Student’s t-検定。
【図７】マウスにおけるアデノシンＡ２ＡＲに依存したＡ２ＡＲ ＰＡＭ−１の睡眠誘導効果。マウスにおいて、Ａ２ＡＲ ＰＡＭ−１の睡眠誘導効果はＡ２ＡＲアンタゴニストであるＺＭ２４１３８５によって抑制された（ａ，ｂ）。Ａ２ＡＲ ＰＡＭ−１の睡眠誘導効果はＡ２ＡＲ−ＫＯマウスでは見られなかった（ｃ，ｄ）。データは、平均値±ＳＥＭで示した。*: p<0.05; **: p<0.01; ***: p<0.001 vs. 生理食塩水、ANOVA Tukey Test又はstudent’s t-検定。(n=4-5又は8)
【図８】マウスにおいて、Ａ２ＡＲ ＰＡＭ−１のＩＣＶ注入はＳＷＳを誘導した。Ａ２ＡＲ ＰＡＭ−１を２００ｎｍｏｌ／ｈで投与したマウスにおける、ＳＷＳ、ＲＥＭ睡眠及び覚醒の（ａ）タイムコース及び（ｂ）総量。（ｃ）Ａ２ＡＲ ＰＡＭ−１（２００ｎｍｏｌ／ｈ，ＩＣＶ）注入の間のＳＷＳのＥＥＧパワー密度。データは、平均値±ＳＥＭで示した。*: p<0.05; **: p<0.01; ***: p<0.001 vs. 生理食塩水、ANOVA Tukey Test又はstudent’s t-検定。(n=5)
【図９】Ａ２ＡＲ ＰＡＭ−１のＩＰ投与後のマウスの睡眠構築。マウスにおける、Ａ２ＡＲ ＰＡＭ−１のＩＰ投与後の各段階のエピソード数（ａ）、平均持続時間（ｂ）及び睡眠遷移段階（ｃ）。
【図１０】Ａ２ＡＲ ＰＡＭ−１は心血管系に対しては有意な影響はなかった。（ａ）マウスにおける、Ａ２ＡＲ ＰＡＭ−１又はＣＧＳ２１６８０投与の前後でのＥＣＧ（Ｌｅａｄ  Ｉ）及び心臓内心電図（ＩＣＥ）シグナル。（ｂ）マウスにおける、Ａ２ＡＲ ＰＡＭ−１又はＣＧＳ２１６８０注射後の血圧。（ｃ）マウスにおける、Ａ２ＡＲ ＰＡＭ−１又はＣＧＳ２１６８０投与後の心拍数。データは、平均値±ＳＥＭで示した。**: p<0.01 vs. 生理食塩水、Student’s t-検定。(n=5-6)。ＳＢＰ：収縮期血圧；ＤＢＰ：拡張期血圧；ＭＢＰ：平均血圧；ＣＧＳ２１６８０：選択的アデノシンＡ２Ａ受容体アゴニスト。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
以下、本発明を説明する。本明細書において使用される用語は、特に言及しない限り、当該分野で通常用いられる意味を有する。
【００１９】
「ハロゲン原子」とは、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子である。
【００２０】
「アルキル基」とは、１〜１０、好ましくは１〜６の炭素原子を有する直鎖または分岐状のアルキル基を意味し、その具体例は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、イソペンチル、ｔｅｒｔ−ペンチル、ネオペンチル、２−ペンチル、３−ペンチル、ｎ−ヘキシル、２−ヘキシル等が挙げられる。該アルキル基は置換基を有していてもよい。
【００２１】
「アリール基」とは、６〜１０の炭素原子を有するアリール基を意味し、その具体例は、フェニル、ナフチル基等が挙げられる。該アリール基は置換基を有していてもよい。
【００２２】
「アルコキシ基」とは、１〜１０、好ましくは１〜６の炭素原子を有する直鎖または分岐状のアルコキシ基を意味し、その具体例は、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、イソプロポキシ、ｎ−ブトキシ、イソブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ、ｎ−ペンチルオキシ、イソペンチルオキシ、ｔｅｒｔ−ペンチルオキシ、ネオペンチルオキシ、２−ペンチルオキシ、３−ペンチルオキシ、ｎ−ヘキシルオキシ、２−ヘキシルオキシ等が挙げられる。該アルコキシ基は置換基を有していてもよい。
【００２３】
「５又は６員芳香環」としては、例えば、ベンゼン環、ピロール環、ピラゾール環、イミダゾール環、トリアゾール環（１，２，３−ａトリアゾール環、１，２，４−ａトリアゾール環、１，３，４−ａトリアゾール環）、テトラゾール環、オキサゾール環、イソオキサゾール環、チアゾール環、イソチアゾール環、オキサジアゾール環、チアジアゾール環、フラン環、チオフェン環、ピリジン環、ピリダジン環、ピリミジン環、ピラジン環、トリアジン環等が挙げられ、好ましくはベンゼン環である。
【００２４】
「アルキル基」、「アリール基」及び「アルコキシ基」が有してもよい置換基としては、
（１）ハロゲン原子（例えば、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素；好ましくはフッ素）、
（２）ハロゲン原子で置換されていてもよい低級アルキル基（例えば、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、ヘキシル等のＣ１−６アルキル基等）、
（３）シクロアルキル基（例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル等のＣ３−６シクロアルキル基等）、
（４）低級アルキニル基（例えば、エチニル、１−プロピニル、プロパルギル等のＣ２−６アルキニル基等）、
（５）低級アルケニル基（例えば、ビニル、アリル、イソプロペニル、ブテニル、イソブテニル等のＣ２−６アルケニル基等）、
（６）Ｃ１−６アルコキシ基（例えば、メトキシ）で置換されていてもよいアラルキル基（例えば、ベンジル、α−メチルベンジル、フェネチル等のＣ７−１２アラルキル基等）、
（７）アリール基（例えば、フェニル、ナフチル等のＣ６−１０アリール基等、好ましくはフェニル基）、
（８）ハロゲン原子で置換されていてもよい低級アルコキシ基（例えば、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、イソブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ等のＣ１−６アルコキシ基、トリフルオロメトキシ等）、
（９）アリールオキシ基（例えば、フェノキシ等のＣ６−１０アリールオキシ基等）、
（１０）ハロゲン原子で置換されていてもよい、ホルミル基又は低級アルカノイル基（例えば、アセチル、プロピオニル、ブチリル、イソブチリル等のＣ１−６アルキル−カルボニル基等、シクロヘキシルカルボニル等のＣ３−６シクロアルキル−カルボニル基等）、
（１１）アリールカルボニル基（例えば、ベンゾイル、ナフトイル等のＣ６−１０アリール−カルボニル基等）、
（１２）ホルミルオキシ基又は低級アルカノイルオキシ基（例えば、アセチルオキシ、プロピオニルオキシ、ブチリルオキシ、イソブチリルオキシ等のＣ１−６アルキル−カルボニルオキシ基等）、
（１３）アリールカルボニルオキシ基（例えば、ベンゾイルオキシ、ナフトイルオキシ等のＣ６−１０アリール−カルボニルオキシ基等）、
（１４）カルボキシル基、
（１５）低級アルコキシカルボニル基（例えば、メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、プロポキシカルボニル、イソプロポキシカルボニル、ブトキシカルボニル、イソブトキシカルボニル、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル等のＣ１−６アルコキシ−カルボニル基等）、
（１６）アラルキルオキシカルボニル基（例えば、ベンジルオキシカルボニル等のＣ７−１２アラルキルオキシ−カルボニル基等）、
（１７）カルバモイル基、
（１８）モノ−、ジ−又はトリ−ハロゲノ低級アルキル基（例えば、クロロメチル、ジクロロメチル、トリフルオロメチル、２，２，２−トリフルオロエチル等のモノ−、ジ−又はトリ−ハロゲノＣ１−６アルキル基等）、
（１９）オキソ基、
（２０）アミジノ基、
（２１）イミノ基、
（２２）アミノ基、
（２３）モノ−低級アルキルアミノ基（例えば、メチルアミノ、エチルアミノ、プロピルアミノ、イソプロピルアミノ、ブチルアミノ等のモノ−Ｃ１−６アルキルアミノ基等）、
（２４）ジ−低級アルキルアミノ基（例えば、ジメチルアミノ、ジエチルアミノ、ジプロピルアミノ、ジイソプロピルアミノ、ジブチルアミノ、Ｎ−エチル−Ｎ−メチルアミノ等のジ−Ｃ１−６アルキルアミノ基等）、
（２５）置換基を有していてもよい、炭素原子と１個の窒素原子に加えて窒素原子、酸素原子及び硫黄原子から選ばれたヘテロ原子を１〜３個含んでいてもよい３〜８員の含窒素複素環基（例えば、ハロゲン原子、ニトロ基、シアノ基、ヒドロキシ基、ハロゲン化されていてもよいＣ１−６アルキル基、ハロゲン化されていてもよいＣ１−６アルコキシ基、アミノ基、モノ−Ｃ１−６アルキルアミノ基、ジ−Ｃ１−６アルキルアミノ基、カルボキシル基、Ｃ１−６アルキル−カルボニル基、Ｃ１−６アルコキシ−カルボニル基、カルバモイル基、モノ−Ｃ１−６アルキル−カルバモイル基、ジ−Ｃ１−６アルキル−カルバモイル基、Ｃ６−１０アリール−カルバモイル基、Ｃ６−１０アリール基、Ｃ６−１０アリールオキシ基、及びハロゲン化されていてもよいＣ１−６アルキル−カルボニルアミノ基、オキソ基等から選ばれる１〜５個の置換基を有していてもよい、炭素原子と１個の窒素原子に加えて窒素原子、酸素原子及び硫黄原子から選ばれたヘテロ原子を１〜３個含んでいてもよい３〜８員の含窒素複素環基；例えば、アジリジニル、アゼチジニル、ピロリジニル、ピリジル、ピロリニル、ピロリル、イミダゾリル、ピラゾリル、イミダゾリジニル、ピペリジル、オキサジアゾリル、イソオキサゾリル、モルホリニル、ジヒドロピリジル、テトラヒドロピリジル、ピペラジニル、Ｎ−メチルピペラジニル、Ｎ−エチルピペラジニル等）、
（２６）アルキレンジオキシ基（例えば、メチレンジオキシ、エチレンジオキシ等のＣ１−３アルキレンジオキシ基等）、
（２７）ヒドロキシ基、
（２８）ニトロ基、
（２９）シアノ基、
（３０）メルカプト基、
（３１）スルホ基、
（３２）スルフィノ基、
（３３）ホスホノ基、
（３４）スルファモイル基、
（３５）モノ−低級アルキルスルファモイル基（例えば、Ｎ−メチルスルファモイル、Ｎ−エチルスルファモイル、Ｎ−プロピルスルファモイル、Ｎ−イソプロピルスルファモイル、Ｎ−ブチルスルファモイル等のモノ−Ｃ１−６アルキルスルファモイル基等）、
（３６）ジ−低級アルキルスルファモイル基（例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルスルファモイル、Ｎ，Ｎ−ジエチルスルファモイル、Ｎ，Ｎ−ジプロピルスルファモイル、Ｎ，Ｎ−ジブチルスルファモイル等のジ−Ｃ１−６アルキルスルファモイル基等）、
（３７）低級アルキルチオ基（例えば、メチルチオ、エチルチオ、プロピルチオ、イソプロピルチオ、ブチルチオ、ｓｅｃ−ブチルチオ、ｔｅｒｔ−ブチルチオ等のＣ１−６アルキルチオ基等）、
（３８）アリールチオ基（例えば、フェニルチオ、ナフチルチオ等のＣ６−１０アリールチオ基等）、
（３９）低級アルキルスルフィニル基（例えば、メチルスルフィニル、エチルスルフィニル、プロピルスルフィニル、ブチルスルフィニル等のＣ１−６アルキルスルフィニル基等）、
（４０）アリールスルフィニル基（例えば、フェニルスルフィニル、ナフチルスルフィニル等のＣ６−１０アリールスルフィニル基等）、
（４１）低級アルキルスルホニル基（例えば、メチルスルホニル、エチルスルホニル、プロピルスルホニル、ブチルスルホニル等のＣ１−６アルキルスルホニル基等）、
（４２）アリールスルホニル基（例えば、フェニルスルホニル、ナフチルスルホニル等のＣ６−１０アリールスルホニル基等）、
（４３）低級アルキルカルボニルアミノ基（例えば、メチルカルボニルアミノ等のＣ１−６アルキルカルボニルアミノ基等）等からなる群（本明細書中、置換基群Ａという）、
（４４）アラルキルアミノ（例えば、ベンジルアミノ等のＣ７−１２アラルキルアミノなど）、及び
（４５）置換基（例えば、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１−６アルキル基）を有していてもよいアリールスルホニルアミノ基（例えば、フェニルスルホニルアミノ、ナフチルスルホニルアミノ等のＣ６−１０アリールスルホニルアミノ基等）（本明細書中、置換基群Ａという）から選択される置換基が用いられる。
【００２５】
以下に、式（Ｉ）で表される化合物（以下、化合物（Ｉ）と称する場合もある）について説明する。尚、特に記載のない限り、各基の定義は上述したものと同義である。
【００２６】
【化６】
2019089712.tif 000007
【００２７】
（式中、
環Ａ及び環Ｂは同一又は異なって５又は６員芳香環であり；
Ｒ１はカルボキシル基であり；
ｍ個のＲ２は独立してハロゲン原子、アルキル基、ニトロ基、アルコキシ基、シアノ基又はアリール基であり；
ｎ個のＲ３は独立してハロゲン原子、アルキル基、ニトロ基、アルコキシ基、シアノ基又はアリール基であり；
ｍは０、１又は２であり；
ｎは１又は２である）。
環Ａは、ｍ個のＲ２に加えて置換可能な位置で置換基を有していてもよい。環Ｂは、ｎ個のＲ３に加えて置換可能な位置で置換基を有していてもよい。環Ａ及び環Ｂがさらに有していてもよい置換基としては、上記[置換基群Ａ]として例示されたものが挙げられる。
環Ａ及び環Ｂの「５又は６員芳香環」としては、好ましくは６員芳香環（例えば、ベンゼン環、ピリジン環、ピリダジン環、ピリミジン環、ピラジン、トリアジン）が挙げられる。中でも、ベンゼンが好ましい。
Ｒ２のハロゲン原子としては、フッ素原子が好ましい。
Ｒ２のアルキル基としては、メチルが好ましい。
Ｒ２のアルコキシ基としては、メトキシが好ましい。
Ｒ２のアリール基としては、フェニル基が好ましい。
Ｒ２は、好ましくはハロゲン原子及びアルキル基であり、より好ましくはフッ素原子である。
Ｒ３のハロゲン原子としては、フッ素原子、ヨウ素原子及び臭素原子が好ましい。
Ｒ３のアルキル基としては、プロピルが好ましい。
Ｒ３のアルコキシ基としては、メトキシが好ましい。
Ｒ３のアリール基としては、フェニル基が好ましい。
Ｒ３は、好ましくはハロゲン原子及びアルキル基であり、より好ましくはフッ素原子及びヨウ素原子である。
ｍは好ましくは１又は２であり、より好ましくは２である。
ｎは好ましくは２である。
式（Ｉ）で表される化合物のうち、下記部分構造：
【００２８】
【化７】
2019089712.tif 000008
【００２９】
が、下記式：
【００３０】
【化８】
2019089712.tif 000009
【００３１】
で表される化合物。
【００３２】
式（Ｉ）で表される化合物のうち、下記化合物群から選択される化合物が特に好ましい。
【００３３】
【化９】
2019089712.tif 000010
【００３４】
特に、下記化合物は新規化合物である。
【００３５】
【化１０】
2019089712.tif 000011
【００３６】
化合物（Ｉ）の塩としては、医薬上許容され得る塩等が挙げられる。含まれる例は、トリフルオロ酢酸、酢酸、乳酸、コハク酸、マレイン酸、酒石酸、クエン酸、グルコン酸、アスコルビン酸、安息香酸、メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ケイ皮酸、フマル酸、ホスホン酸、塩酸、硝酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、スルファミン酸、硫酸等の酸との酸付加塩；ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム等の金属塩；トリメチルアミン、トリエチルアミン、ピリジン、ピコリン、Ｎ−メチルピロリジン、Ｎ−メチルピペリジン、Ｎ−メチルモルホリン等の有機塩基との塩等が挙げられる。
【００３７】
化合物（Ｉ）が、光学異性体、立体異性体、位置異性体、回転異性体等の異性体を有する場合には、いずれか一方の異性体も、異性体の混合物も化合物（Ｉ）に包含される。例えば、化合物（Ｉ）に光学異性体が存在する場合には、ラセミ体から分割された光学異性体も化合物（Ｉ）に包含される。これらの異性体は、自体公知の合成手法、分離手法（濃縮、溶媒抽出、カラムクロマトグラフィー、再結晶等）によりそれぞれを単品として得ることができる。また、化合物（Ｉ）には、互変異性体等の構造異性体及び幾何異性体が存在し、かかる異性体も本発明の範囲内である。
【００３８】
化合物（Ｉ）は、結晶であっても無晶形であってもよい。化合物（Ｉ）が結晶である場合、結晶形が単一であっても結晶形混合物であっても化合物（Ｉ）に包含される。結晶は、自体公知の結晶化法を適用して、結晶化することによって製造することができる。
【００３９】
化合物（Ｉ）は、溶媒和物（例えば、水和物等）であっても、無溶媒和物であってもよく、いずれも化合物（Ｉ）に包含される。
【００４０】
化合物（Ｉ）は、同位元素（例、３Ｈ，１４Ｃ，３５Ｓ，１２５Ｉ等）等で標識されていてもよい。
【００４１】
化合物（Ｉ）は、アデノシンＡ２Ａ受容体を活性化する作用を有する。アデノシンＡ２Ａ受容体は睡眠／覚醒サイクルに密接に関与し、アデノシンＡ２Ａ受容体を活性化することによって睡眠を誘導することができる。アデノシンＡ２Ａ受容体を活性化する作用は、当分野で通常実施されている方法に準じて、あるいは当該方法を必要に応じて改変することによって測定することができる。例えば、実施例で示されるように、Ａ２ＡＲを発現しているチャイニーズハムスター卵巣細胞を用い、Ａ２ＡＲ活性化によって産生されるｃＡＭＰの量を蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）イムノアッセイにより測定することによって評価され得る。
【００４２】
アデノシンＡ２Ａ受容体は、睡眠／覚醒サイクルに密接に関与する一方で、大脳皮質、海馬、線条体、冠血管、肺、白血球、血小板などに分布しており、睡眠調節以外の、血管拡張、痛み、内臓平滑筋の弛緩など、様々な生理機能に関与している。従って、アデノシンＡ２Ａ受容体活性化剤は、心血管系の副作用が懸念される。しかしながら、化合物（Ｉ）は、内在性リガンドの作用するオルソステリック部位とは異なる部位に作用することで、上記副作用が生じることがない。すなわち、化合物（Ｉ）はアデノシンＡ２Ａ受容体のポジティブアロステリックモジュレーターとして作用する。
【００４３】
優れたアデノシンＡ２Ａ受容体活性化作用を有する化合物（Ｉ）は、哺乳動物（例、ヒト、サル、ネコ、ブタ、ウマ、ウシ、マウス、ラット、モルモット、イヌ、ウサギ等）に対し、睡眠誘導剤、特に熟睡感を与える徐波睡眠を提供することができる睡眠誘導剤として有用である。
【００４４】
本発明化合物を有効成分として含有する医薬（例えば睡眠誘導剤等）中における化合物（Ｉ）の含有量は製剤全体に対して通常、約０．０１〜約９９．９重量％、好ましくは約０．１〜約５０重量％である。
【００４５】
化合物（Ｉ）の用量は、年令、体重、一般的健康状態、性別、食事、投与時間、投与方法、排泄速度、薬物の組み合わせ、患者のその時に治療を行なっている病状の程度に応じ、それらあるいはその他の要因を考慮して決められる。
用量は対象疾患、症状、投与対象、投与方法等によって異なるが、例えば、本発明化合物を化合物（Ｉ）の量として、約０．１〜１００ｍｇ／ｋｇ（体重）、好ましくは約１〜１０ｍｇ／ｋｇ（体重）、更に好ましくは約１〜３ｍｇ／ｋｇ（体重）を1日あたり、１回又は２ないし３回に分けて投与するのが好ましい。
【００４６】
化合物（Ｉ）は、例えば睡眠誘導剤として用いる場合、対象となる睡眠障害の程度に応じて、他の薬剤と組み合せて用いることができる。これらの併用薬剤は低分子量の化合物であってもよく、また高分子量のタンパク、ポリペプチド、抗体あるいはワクチンなどでもよい。この場合、化合物（Ｉ）と併用薬剤の投与時期は限定されず、投与時に化合物（Ｉ）と併用薬剤とが組み合わされていればよい。
【００４７】
化合物（Ｉ）は、薬学的に許容される担体と配合し、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤等の固形製剤；シロップ剤、注射剤等の液状製剤；貼付剤、軟膏剤、硬膏剤等の経皮吸収剤；吸入剤；坐剤として、適宜製剤化することができる。
化合物（Ｉ）を含有する医薬は、経口又は非経口投与され、上記した化合物を１種単独で用いてもよく、又は２種以上を併用して用いてもよい。
【００４８】
薬学的に許容される担体としては、製剤素材として慣用されている各種有機あるいは無機担体物質を用いることができる。具体的には、固形製剤における賦形剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤、液状製剤における溶剤、溶解補助剤、懸濁化剤、等張化剤、緩衝剤、無痛化剤等を配合することができる。又、必要に応じて、防腐剤、抗酸化剤、着色剤、甘味剤等の製剤添加物を用いることもできる。
【００４９】
賦形剤の例としては、乳糖、白糖、ブドウ糖、でんぷん、蔗糖、結晶セルロース、カンゾウ末、マンニトール、炭酸水素ナトリウム、リン酸カルシウム、硫酸カルシウム等が挙げられる。
【００５０】
滑沢剤の例としては、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、ステアリン酸カルシウム、精製タルク、コロイドシリカ等が挙げられる。
【００５１】
結合剤の例としては、結晶セルロース、白糖、マンニトール、デキストリン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン等が挙げられる。
【００５２】
崩壊剤の例としては、でんぷん、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム、クロスカルメロースナトリウム、カルボキシメチルスターチナトリウム等が挙げられる。
【００５３】
溶剤の好適な例としては、例えば注射用水、アルコール、プロピレングリコール、マクロゴール、ゴマ油、トウモロコシ油等が挙げられる。
【００５４】
溶解補助剤の好適な例としては、例えばポリエチレングリコール、プロピレングリコール、Ｄ−マンニトール、安息香酸ベンジル、エタノール、トリスアミノメタン、コレステロール、トリエタノールアミン、炭酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム等が挙げられる。
【００５５】
懸濁化剤の例としては、例えばステアリルトリエタノールアミン、ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリルアミノプロピオン酸、レシチン、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、モノステアリン酸グリセリン等の界面活性剤；ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース等が挙げられる。
【００５６】
等張化剤の好適な例として、例えば塩化ナトリウム、グリセリン、Ｄ−マンニトール等が挙げられる。
【００５７】
緩衝剤の好適な例として、例えばリン酸塩、酢酸塩、炭酸塩及びクエン酸塩等の緩衝液等が挙げられる。
無痛化剤の好適な例として、例えばベンジルアルコール等が挙げられる。
【００５８】
防腐剤の好適な例として、例えばパラオキシ安息香酸エステル類、クロロブタノール、ベンジルアルコール、フェネチルアルコール、デヒドロ酢酸、ソルビン酸等が挙げられる。
抗酸化剤の好適な例として、例えば亜硫酸塩、アスコルビン酸等が挙げられる。
着色剤の好適な例として、例えばタール色素、カラメル、三二酸化鉄、酸化チタン、リボフラビン類等が挙げられる。
甘味剤の好適な例として、ブドウ糖、果糖、転化糖、ソルビトール、キシリトール、グリセリン、単シロップ等が挙げられる。
【００５９】
製造法
本発明の式（Ｉ）で表される化合物、その異性体、溶媒和物及びそれらの医薬上許容され得る塩は、その基本骨格あるいは置換基の種類に基づく特徴を利用し、種々の公知の合成法を適用して製造することができる。例えば以下の合成法に従って製造することができるが、これらに限定されるものではなく、所望に応じて適宜修飾できる。かかる修飾としては、アルキル化、アシル化、アミノ化、イミノ化、ハロゲン化、還元、酸化等が挙げられ、通常当分野で用いられる反応又は方法が利用される。その際、官能基の種類によっては、当該官能基を原料もしくは中間体の段階で適当な保護基（容易に当該官能基に転化可能な基）に置き換えておくことが製造技術上効果的な場合がある。保護基の化学的特性、その導入の手法、及びその除去は例えばT. Greene and P. Wuts “Protective Groups in Organic Synthesis” (3rded.), John Wiley & Sons NY (1999)に詳述されている。
【００６０】
原料化合物は、特に述べない限り、市販されているものを容易に入手できるか、あるいは、自体公知の方法又はこれらに準ずる方法に従って製造することができる。
【００６１】
各反応および原料化合物合成の各反応において、反応中に一般的に知られる溶媒を用いる場合がある。
一般的に知られる溶媒としては、例えば、テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル、１，２−ジメトキエタン、１，４−ジオキサン等のエーテル類、酢酸エチル、酢酸ブチル等のエステル類、ベンゼン、トルエン等の芳香族炭化水素、ピリジン、ルチジン等の芳香族へテロ環化合物、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ−メチルピロリドン等のアミド類、クロロホルム、塩化メチレン等のハロゲン化物、メタノール、エタノール、２−プロパノール、２，２−ジメチルエタノール等のアルコール類、ヘキサン、ヘプタン、石油エーテル等の炭化水素化合物、ギ酸、酢酸等のカルボン酸類、あるいは、水等が挙げられる。
反応において用いられる溶媒は、単一の溶媒を用いる場合も、２種類から６種類の溶媒を混合して用いる場合もある。
又、反応において、例えば、トリエチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミン、ピリジン、Ｎ−メチルモルホリン等のアミン類、又は塩基を共存させて行なう場合がある。
塩基としては、例えば、トリエチルアミン、トリ−ｎ−ブチルアミン、ピペリジン、ピリジン、４−ジメチルアミノピリジン等の有機塩基、水酸化リチウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等の水酸化アルカリ金属類、炭酸水素ナトリウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム等の炭酸塩類、りん酸一水素二カリウム、りん酸三ナトリウム等のリン酸塩類、水素化ナトリウム等の水素化アルカリ金属類、ナトリウムメトキシド、ナトリウムエトキシド等のアルカリ金属アルコラート類、ｎ−ブチルリチウム等の有機リチウム類、エチルマグネシウムブロミド等のグリニャール試薬類、リチウムアミド、リチウムジイソプロピルアミド等を例示すことができる。
又、反応において、例えば、塩酸、硫酸、酢酸等の酸を共存させて行なう場合がある。
【００６２】
本発明化合物の合成スキームを以下に示す（詳細な反応は実施例に準じる）。尚、スキーム中、具体的な基、化合物で記載されている場合があるが、代替可能な基、化合物が用いられ得ることは当業者には明らかである。
【００６３】
【化１１】
2019089712.tif 000012
【００６４】
式中、Ｌはハロゲン原子（例、塩素原子）等の脱離基を意味し、それ以外の各記号の定義は上述の通りである。
適当な溶媒中、適当な塩基の存在下で、等モル量の化合物（１）及び化合物（２）を反応させて式（Ｉ）で表される化合物を得る工程である。
溶媒は、特に限定されないが、通常、化合物（１）に対して１〜１０倍モル当量の範囲で適宜選択して使用すればよい。
塩基は、特に限定されないが、通常、化合物（１）に対して０．０１から５倍モル当量の範囲で適宜選択して使用すればよい。
反応温度は、通常、約−８０〜約１５０℃、好ましくは約０〜約１００℃である。
反応時間は、通常、約０．５〜約２０時間である。
以下に実施例を用いて本発明を詳述するが、本発明は何ら限定されるものではない。使用する試薬及び材料は特に限定されない限り商業的に入手可能である。
【実施例】
【００６５】
Ａ２ＡＲ ＰＡＭ−１３を除く全ての化合物は一般的方法に基づいて合成される。
［フェナム酸誘導体の合成についての一般的方法］
５ｍＬのマイクロ波バイアルに安息香酸、アニリン、ＬｉＮＨ２及びＴＨＦを充填した。容器を２００℃で３分間マイクロ波加熱した。その後、反応チューブを室温まで冷却し、混合物を１Ｍ ＨＣｌ ａｑ．(20mL)で希釈しＣＨＣｌ３(20mL×3)で抽出した。有機層をあわせ、食塩水で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＣＨＣｌ３／１０％ＡｃＯＨ−ＭｅＯＨ溶液＝１００／０→９０／１０）で精製して標題化合物を得た。
【００６６】
実施例１：Ａ２ＡＲ ＰＡＭ−１の合成
【００６７】
【化１２】
2019089712.tif 000013
【００６８】
２，３，４−フルオロ安息香酸(126.1 mg, 0.716 mmol)、２−フルオロ−４−ヨードアニリン(171.4 mg, 0.723 mmol)及びＬｉＮＨ２(82.2 mg, 3.58 mmol)のＴＨＦ(3 mL)溶液を一般的方法に従って反応させＡ２ＡＲ ＰＡＭ−１(155.2 mg, 55%)を褐色固体として得た； 1H NMR (CD3OD) δ 7.89 (1 H, ddd, J = 2.3, 6.0, 9.2 Hz), 7.48 (1 H, dd, J = 1.8, 10.5 Hz), 7.41 (1 H, td, J =1.8, 8.7 Hz), 6.91 (1 H, td, J = 7.3, 9.6 Hz), 6.75 (1 H, td, J = 5.9, 8.2 Hz).
実施例２：Ａ２ＡＲ ＰＡＭ−２の合成
【００６９】
【化１３】
2019089712.tif 000014
【００７０】
２−フルオロ安息香酸(116.5 mg, 0.651 mmol)、２−フルオロ−４−ヨードアニリン(164.5 mg, 0.694 mmol)及びＬｉＮＨ２(19.3 mg, 0.845 mmol)のＴＨＦ(3 mL)溶液を一般的方法に従って反応させＡ２ＡＲ ＰＡＭ−２(168.2 mg, 72%)を褐色固体として得た； 1H NMR (Acetone - d6) δ 9.75 (1 H, br), 8.06 (1 H, dd, J = 1.4, 8.2 Hz), 7.60 (1 H, dd, J = 1.8, 10.1 Hz), 7.53 (1 H, d, J = 8.2 Hz), 7.46 (1 H, ddd, J = 1.4, 7.6, 8.7 Hz), 7.37 (1 H, t, J = 8.7 Hz), 7.24 (1 H, d, J = 8.7 Hz), 6.90 (1 H, t, J = 7.6 Hz).
実施例３：Ａ２ＡＲ ＰＡＭ−３の合成
【００７１】
【化１４】
2019089712.tif 000015
【００７２】
２，３，４−トリフルオロ安息香酸(43.1 mg, 0.241 mmol)、２−フルオロアニリン(25.3 μL, 0.264 mmol)及びＬｉＮＨ２(28.1 mg, 1.22 mmol)のＴＨＦ(1 mL)溶液を一般的方法に従って反応させＡ２ＡＲ ＰＡＭ−３(29.1 mg, 45%)を褐色の結晶として得た； 1H NMR (Acetone - d6) δ 9.37 (1 H, br), 7.96 (1 H, ddd, J = 2.3, 6.0, 9.2 Hz), 7.21-7.04 (4 H, m), 6.97 (1 H, td, J = 7.3, 9.2 Hz).
実施例４：Ａ２ＡＲ ＰＡＭ−４の合成
【００７３】
【化１５】
2019089712.tif 000016
【００７４】
２，３，４−トリフルオロ安息香酸(86.7 mg, 0.484 mmol)、４−プロピルアニリン(70 μL, 0.492 mmol)及びＬｉＮＨ２(55.5 mg, 2.42 mmol)のＴＨＦ(1 mL)溶液を一般的方法に従って反応させＡ２ＡＲ ＰＡＭ−４(68.2 mg, 48%)を白色固体として得た； 1H NMR (Acetone - d6) δ 9.37 (1 H, br), 7.93 (1 H, ddd, J = 2.3, 6.0, 9.2 Hz), 7.13 (1 H, td, J = 2.3, 8.7 Hz), 6.97 (2 H, m), 6.97 (1 H, td, J = 7.3, 9.2 Hz), 2.55 (2 H, t, J = 7.6 Hz), 1.61 (2 H, tq, J = 7.3, 7.6 Hz) 0.92 (3 H, t, J = 7.3 Hz).
実施例５：Ａ２ＡＲ ＰＡＭ−５の合成
【００７５】
【化１６】
2019089712.tif 000017
【００７６】
２，３，４−トリフルオロ安息香酸(94.1 mg, 0.526 mmol)、３−ヨードアニリン(63.3 μL, 0.526 mmol)及びＬｉＮＨ２(59.9 mg, 2.61 mmol)のＴＨＦ(1 mL)溶液を一般的方法に従って反応させＡ２ＡＲ ＰＡＭ−５(149.0 mg, 76%)を褐色の結晶として得た； 1H NMR (Acetone - d6) δ 9.37 (1 H, br), 7.94 (1 H, ddd, J = 2.3, 6.0, 9.2 Hz), 7.42 (1 H, s), 7.37 (1 H, td, J = 1.4, 7.3 Hz), 7.09-6.95 (3 H, m).
実施例６：Ａ２ＡＲ ＰＡＭ−６の合成
【００７７】
【化１７】
2019089712.tif 000018
【００７８】
２−フルオロ−３−メチル安息香酸(30.8 mg, 0.200 mmol)、２−フルオロ−４−ヨードアニリン(53.2 mg, 0.225 mmol)及びＬｉＮＨ２(23.0 mg, 1.00 mmol)のＴＨＦ(1 mL)溶液を一般的方法に従って反応させＡ２ＡＲ ＰＡＭ−６(35.0 mg, 47%)を褐色の結晶として得た； 1H NMR (Acetone - d6) δ 7.97 (1 H, dd, J = 1.4, 7.8 Hz), 7.53-7.48 (2 H, m), 7.33 (1 H, qd, J = 0.9, 8.2 Hz), 7.21 (1 H, t, J = 7.5 Hz), 6.25 (1 H, t, J = 8.7 Hz), 2.14 (3 H, s).
実施例７：Ａ２ＡＲ ＰＡＭ−７の合成
【００７９】
【化１８】
2019089712.tif 000019
【００８０】
２，３，４−トリフルオロ安息香酸(138.0 mg, 0.771 mmol)、２−ブロモアニリン(88.0 μL, 0.778 mmol)及びＬｉＮＨ２(89.0 mg, 3.88 mmol)のＴＨＦ(5 mL)溶液を一般的方法に従って反応させＡ２ＡＲ ＰＡＭ−７(194.6 mg, 77%)を白みがかった赤色の固体として得た； 1H NMR (Acetone - d6) δ 9.40 (1 H, br), 7.98 (1 H, ddd, J = 2.3, 6.0, 8.8 Hz), 7.62 (1 H, dd, J = 1.4, 8.0 Hz), 7.31 (1 H, dd, J = 1.4, 7.3 Hz), 7.08-6.95 (3 H, m).
実施例８：Ａ２ＡＲ ＰＡＭ−８の合成
【００８１】
【化１９】
2019089712.tif 000020
【００８２】
２，３，４−トリフルオロ安息香酸(100.0 mg, 0.568 mmol)、２−メトキシ−５−ブロモアニリン(126.2 mg, 0.625 mmol)及びＬｉＮＨ２(65.3 mg, 2.85 mmol)のＴＨＦ(2.8 mL)溶液を一般的方法に従って反応させＡ２ＡＲ ＰＡＭ−８(151.9 mg, 75%)を褐色の固体として得た； 1H NMR (Acetone - d6) δ 9.21 (1 H, br), 7.95 (1 H, ddd, J = 2.3, 6.4, 8.7 Hz), 7.01 (1 H, dd, J = 2.3, 8.7 Hz), 7.04-6.46 (3 H, m), 3.92 (3 H, s)．
実施例９：Ａ２ＡＲ ＰＡＭ−９の合成
【００８３】
【化２０】
2019089712.tif 000021
【００８４】
２，３，４−トリフルオロ安息香酸(100.0 mg, 0.568 mmol)、２−クロロ−５−ブロモアニリン(133.5 mg, 0.647 mmol)及びＬｉＮＨ２(65.1 mg, 2.84 mmol)のＴＨＦ(2.8 mL)溶液を一般的方法に従って反応させＡ２ＡＲ ＰＡＭ−９(171.1 mg, 83%)を褐色固体として得た； 1H NMR (Acetone - d6) δ 9.45 (1 H, br), 7.99 (1 H, ddd, J = 2.3, 6.4, 8.7 Hz), 7.40 (1 H, d, J = 8.7 Hz), 7.19-7.08 (3 H, m).
実施例１０：Ａ２ＡＲ ＰＡＭ−１０の合成
【００８５】
【化２１】
2019089712.tif 000022
【００８６】
２，３，４−トリフルオロ安息香酸(100.0 mg, 0.568 mmol)、４−ヨードアニリン(141.7 mg, 0.647 mmol)及びＬｉＮＨ２(65.2 mg, 2.84 mmol)のＴＨＦ(2.8 mL)溶液を一般的方法に従って反応させＡ２ＡＲ ＰＡＭ−１０(195.8 mg, 92%)を白みがかった褐色の固体として得た； 1H NMR (Acetone - d6) δ 7.95 (1 H, ddd, J = 2.3, 6.0, 9.2 Hz), 7.63 (1 H, td, J = 2.3, 8.7 Hz), 7.00 (1 H, td, J = 7.3, 9.2 Hz), 6.90 (2 H, m).
実施例１１：Ａ２ＡＲ ＰＡＭ−１１の合成
【００８７】
【化２２】
2019089712.tif 000023
【００８８】
２，３，４−トリフルオロ安息香酸(100.0 mg, 0.568 mmol)、２−クロロアニリン(68.0 μL, 0.647 mmol)及びＬｉＮＨ２(65.3 mg, 2.84 mmol)のＴＨＦ(2.8 mL)溶液を一般的方法に従って反応させＡ２ＡＲ ＰＡＭ−１１(129.1 mg, 92%)を褐色固体として得た； 1H NMR (Acetone - d6) δ 9.45 (1 H, br), 7.98 (1 H, ddd, J = 2.3, 6.0, 9.2 Hz), 7.44 (1 H, dd, J = 1.4, 8.5 Hz), 7.25 (1 H, dt, J = 1.4, 8.5 Hz), 7.06-6.99 (3 H, m).
実施例１２：Ａ２ＡＲ ＰＡＭ−１２の合成
【００８９】
【化２３】
2019089712.tif 000024
【００９０】
２，３，４−トリフルオロ安息香酸(100.0 mg, 0.568 mmol)、３−エチニルアニリン(72.9 μL, 0.647 mmol)及びＬｉＮＨ２(65.3 mg, 2.84 mmol)のＴＨＦ(2.8 mL)溶液を一般的方法に従って反応させＡ２ＡＲ ＰＡＭ−１２(63.0 mg, 41%)を褐色の結晶として得た； 1H NMR (Acetone - d6) δ 9.31 (1 H, br), 7.95 (1 H, ddd, J = 2.3, 6.0, 9.2 Hz), 7.31 (1 H, d, J = 8.2 Hz), 7.09-6.95 (3 H, m), 7.37 (1 H, dt, J = 7.3, 9.2 Hz), 3.61(1 H, s).
実施例１３：Ａ２ＡＲ ＰＡＭ−１４の合成
【００９１】
【化２４】
2019089712.tif 000025
【００９２】
２，３，４−トリフルオロ安息香酸(489.3 mg, 2.78 mmol)、２−フルオロ−４−ニトロアニリン(455.7 mg, 2.92 mmol)及びＬｉＮＨ２(318.7 mg, 13.9 mmol)のＴＨＦ(15 mL)溶液を一般的方法に従って反応させＡ２ＡＲ ＰＡＭ−１４(63.0 mg, 41%)をオレンジ色の固体として得た；(CD3OD) δ 8.08-8.01 (2 H, m), 7.94 (1 H, ddd, J = 2.3, 6.0, 8.5 Hz), 7.13 (1 H, td, J = 7.3, 9.6 Hz), 6.95 (1 H, dt, J = 6.5, 8.52 Hz).
実施例１４：Ａ２ＡＲ ＰＡＭ−１３の合成
【００９３】
【化２５】
2019089712.tif 000026
【００９４】
（１）Ａ２ＡＲ ＰＡＭ−１からの化合物Ａの合成
【００９５】
【化２６】
2019089712.tif 000027
【００９６】
Ａ２ＡＲ ＰＡＭ−１(105.7 mg, 0.269 mmol)のＭｅＯＨ(5 mL)中の撹拌溶液にＳＯＣｌ２(0.13 mL, 1.6 mmol)を室温で添加した。得られた混合物を９０℃で９時間撹拌し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン，１／１０→１／５）で精製して化合物Ａ(86.0 mg, 79%)を白色粉末として得た； 1H NMR (CDCl3) δ 9.05 (1 H, br), 8.06 (1 H, ddd, J = 2.3, 6.0, 9.2 Hz), 7.42 (1 H, dd, J = 1.8, 10.1 Hz), 7.35 (1 H, td, J =1.4, 8.2 Hz), 6.77 (1 H, td, J = 7.3, 9.2 Hz), 6.68 (1 H, td, J = 5.5, 8.2 Hz), 3.91 (3 H, s).
（２）化合物Ａからの化合物Ｂの合成
【００９７】
【化２７】
2019089712.tif 000028
【００９８】
化合物Ａ(54.5 mg, 0.134 mmol)及びフェニルボロン酸(32.6 mg, 0.267 mmol)の１，４−ジオキサン(4 mL)中の撹拌溶液にＰｄＣｌ２・ｄｐｐｆ・ＣＨ２Ｃｌ２(10 mg, 0.0122 mmol)、Ｋ２ＣＯ３(92.6 mg, 0.670 mmol)及びＨ２Ｏ(1 mL)を室温で添加した。得られた混合物を１２０℃で１時間撹拌し、セライト濾過した。濾液をＣＨ２Ｃｌ２(20 mL)及びＨ２Ｏ(20 mL)で希釈し、ＣＨＣｌ３で抽出した。有機層をあわせ、食塩水で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧濃縮した。残渣を分取薄層クロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン，１／１０）で精製し、化合物Ｂ(39.4 mg, 82%)を黄色固体として得た； 1H NMR (CDCl3) δ 9.14 (1 H, br), 7.81 (1 H, ddd, J = 2.3, 6.0, 9.2 Hz), 7.57-7.54 (2 H, m), 7.43 (2 H, tt, J = 1.4, 7.4 Hz), 7.34-7.28 (3 H, m), 7.02 (1 H, td, J = 5.5, 8.2 Hz), 6.76 (1 H, td, J = 7.3, 9.2 Hz), 3.92 (3 H, s).
（３）化合物ＢからのＡ２ＡＲ ＰＡＭ−１３の合成
【００９９】
【化２８】
2019089712.tif 000029
【０１００】
化合物Ｂ(20.5 mg, 0.0574 mmol)のＭｅＯＨ(2 mL)中の撹拌溶液に５Ｍ ＮａＯＨ ａｑ．(0.6 mL)を室温で添加し、２時間撹拌した。反応混合物を１Ｍ ＨＣｌ ａｑ．(20 mL)で希釈しＣＨＣｌ３(20mL×3)で抽出した。有機層をあわせ、食塩水で洗浄し無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し減圧濃縮した。残渣を分取薄層クロマトグラフィー（ＣＨ３Ｃｌ／ＭｅＯＨ／ＡｃＯＨ，２０／１／０．１）で精製しＰＡＭ−１３(13.2 mg, 67%)を褐色の結晶として得た； 1H NMR (Acetone - d6) δ 7.94 (1 H, ddd, J = 2.3, 6.2, 8.6 Hz), 7.66-7.64 (2 H, m), 7.49-7.90 (4 H, m), 7.32 (1 H, tt, J = 1.4, 7.3 Hz), 7.14 (1 H, td, J = 5.5, 8.6 Hz), 6.97 (1 H, td, J = 7.3, 9.4 Hz).
実施例１５：Ａ２ＡＲ ＰＡＭ−１のナトリウム塩の合成
【０１０１】
【化２９】
2019089712.tif 000030
【０１０２】
Ａ２ＡＲ ＰＡＭ−１(265.5 mg, 0.6754 mmol)のＥｔＯＨ(20 mL)中の撹拌溶液に１００μＭ ＮａＯＨ ａｑ．(828 μL)を０℃で添加し室温で４５分間撹拌した。反応混合物を減圧濃縮し、凍結乾燥した。残渣を水に溶解し濾過した。濾液を凍結乾燥してＡ２ＡＲ ＰＡＭ−１(265.3 mg, 89%)のナトリウム塩を灰色の固体として得た； M.p. 290-291°C, Anal. Calcd for C13H6NO2・Na・1.5H2O: C, 35.32; H, 2.05; N, 3.17. Found: C, 35.34; H, 1.91; N, 3.14.
【０１０３】
実験例
［材料と方法］
（１）動物
体重２１〜２７ｇ（１０〜１５週齢）の雄性Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ近交系マウスを動物資源センター（つくば、日本）から入手しこれらの実験に用いた。動物は、室温２３±０．５°Ｃ、相対湿度５０±５％の、１２時間明／１２時間暗のサイクル（８時ちょうどに点灯、照度およそ１００ ｌｕｘ）に自動制御された断熱や防音を施した記録室で飼育した。全ての動物は自由飲水・摂餌とした。実験プロトコルは、関連する日本及び機関の法令及びガイドラインに準拠するものであり、筑波大学動物実験委員会によって許可されたものである（１４−３２２）。使用する動物の数、被検体が経験する任意の痛みや不快感を最小限にするあらゆる努力を行った。
【０１０４】
（２）ＥＥＧ／ＥＭＧ電極と注入カニューレを設置するための定位固定手術
腹腔内（ＩＰ）ペントバルビタール（ソムノペンチル、５０ｍｇ／ｋｇ；共立製薬、東京、日本）によりマウスを麻酔し、次いで定位固定装置に置いた。睡眠ポリグラフの記録の為の脳波計（ＥＥＧ）及び筋電図（ＥＭＧ）の電極を慢性的にマウスに埋め込んだ。フランクリンとパキノスのアトラス(Paxinos and Franklin, 2004)に従って、皮質の頭蓋骨を通って２つのステンレス鋼ネジ（直径１ｍｍ）からなるインプラントを挿入し（ブレグマ又はラムダから、前後，＋１．０ｍｍ；左右，−１．５ｍｍ）ＥＥＧ電極として用いた。２つの絶縁されたステンレス鋼のテフロンコートされたワイヤーを両方の僧帽筋の筋肉内に両側性に配置しＥＭＧ電極として用いた。全ての電極にはマイクロコネクターをつけ、歯科用セメントで頭蓋骨に固定した。Ａ２ＡＲ ＰＡＭ−１の脳室内（ＩＣＶ）注入のために、マウスの手術中に、ブレグマの前方０．５ｍｍおよび外側１．６ｍｍの位置に、硬膜下１．６ｍｍの深さまで２０度の角度でステンレス鋼カニューレを挿入した。この方法でカニューレを側脳室に挿入した。実験の間、マウスには、輸液ポンプを用いて、脳の側脳室領域に人工脳脊髄液（ＡＣＳＦ）を１μｌ／ｈの速度で持続注入した。各化合物注入に対して、３６時間の期間、睡眠−覚醒状態をモニターした。各動物において、３６時間（２０時ちょうどに開始）の生理食塩水注入の記録をとり同じ動物に対するコントロールとして用いた。次の実験の際には、Ａ２ＡＲ ＰＡＭ−１（２００ｎｍｏｌ／ｈ）を１２時間（２０時ちょうど−８時ちょうど）の間マウスの側脳室領域に注入した。
【０１０５】
（３）ＥＥＧ／ＥＭＧポリグラフ記録を用いたビジランス状態評価
手術後１０日目に、マウスを断熱及び防音が施された記録室の透明バレルに個々に収容し、ポリグラフ記録を開始する前の順化の３−５日間の記録が可能なＥＥＧ−ＥＭＧ記録ケーブルにつないだ。自発的な睡眠−覚醒サイクルを調べる為に、各動物について２４時間（２０時ちょうどに開始、暗期のはじまり）の記録をとった。次いで動物は、睡眠−覚醒のパラメーターが３６時間記録される、検査の薬理学的フェーズに入った。最初の２４時間の間に集積したデータもまた実験日に対するベースラインとなる比較データとして用いた。皮質ＥＥＧ／ＥＭＧを増幅し、フィルタリングし（ＥＥＧ ０．５−３０Ｈｚ；ＥＭＧ ２０−２００Ｈｚ）、次いでサンプリング速度１２８Ｈｚでデジタル化し、データ収集プログラムＳｌｅｅｐＳｉｎｇ（登録商標）レコーダーソフトウェア（キッセイコムテック、長野、日本）を用いて記録した。ビジランス状態は、ＳｌｅｅｐＳｉｇｎ（ｖｅｒ３．４）ソフトウェア（キッセイコムテック、長野、日本）によって、標準的な基準に従って(Mizoguchi et al、2001)、覚醒、急速眼球運動（ＲＥＭ）睡眠、および徐波睡眠（ＳＷＳ）の３段階に１０秒エポックでオフライン記録された。最終工程として、定義づけられたビジランス状態を視覚的に調べ、必要な場合には補正した。
【０１０６】
（４）化合物と試薬
種々のＡ２ＡＲ ＰＡＭを上記した実施例に従って合成した。アデノシンはナカライテスク株式会社から購入した。ＺＭ２４１３８５はTocris Bioscienceから購入した。ＣＧＳ２１６８０及びＣｒｅｍｏｐｈｏｒ（登録商標）ＥＬはSigma-Aldrichから購入した。ＤＭＳＯはナカライテスク株式会社から購入した。PerkinElmer Ultrance cAMP-kitはPerkinElmer, Incから購入した。
【０１０７】
（５）薬理治療
ベースラインとなるデータの為に、２２時ちょうどに生理食塩水のみ（１０ｍｌ／ｋｇ体重）をマウスにＩＰ注射した。使用直前にＡ２ＡＲ ＰＡＭ−１を生理食塩水に溶解し、実験日の２２時ちょうどに、３０、６０、７５ｍｇ／ｋｇの用量でＩＰ投与した。ＺＭ２４１３８５(15 mg/kg, IP; Tocris Bioscience)を生理食塩水（５％ＤＭＳＯ，５％Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ（登録商標）ＥＬ）に溶解し２２時ちょうどにＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスに注射した。
【０１０８】
（６）データ解析と統計
全ての結果は平均値±平均の標準誤差（ＳＥＭ）で表した。２群間の統計的比較の為には、両側Student’s t-検定を用いた。ＳＷＳ、ＲＥＭ睡眠及び覚醒の量における用量−応答効果の為には二元配置反復測定ＡＮＯＶＡとそれに続くTukey’s検定を使用した。全ケースにおいて、有意水準としてp<0.05を用いた。
【０１０９】
（７）細胞培養
マウスＡ２ＡＲ発現チャイニーズハムスター卵巣細胞（ｍＡ２ＡＲ−ＣＨＯ）を５％ＦＢＳ、１％ＮＥＡＡ、１％Ｐ／Ｓ、０．５％ ５０ｍｇ／ｍｌ Ｈｙｇｒｏｍｙｃｉｎ  Ｂを添加したＤＭＥＭで増殖させた。細胞は全て、５％ＣＯ２インキュベーター内で、３７℃で維持した。
【０１１０】
（８）ｃＡＭＰアッセイ
アデノシンＡ２Ａ受容体の活性化は、マウスアデノシンＡ２Ａ受容体を発現しているＣＨＯ細胞における環状アデノシン一リン酸（ｃＡＭＰ）の蓄積によって定量した。ＣＨＯ細胞を、３８４−ウェルマイクロプレート（１ウェルあたり２×１０３細胞）中、１Ｍ ＨＥＰＥＳ、０．２５Ｍ ＩＢＭＸを含むHanks’平衡塩溶液（ＨＢＳＳ）に懸濁し、アデノシン、ＣＧＳ２１６８０、所定の濃度のＡ２ＡＲ ＰＡＭ−１で３０分間、２５°Ｃでインキュベートした。Ｅｕ−ｃＡＭＰトレーサー及びＵＬｉｇｈｔ−抗−ｃＡＭＰ抗体を含む検出混合液を添加し１時間２５℃でインキュベートした。マイクロプレートリーダー（ＡＲＶＯＸ５；励起：３４０ｎｍ；発光：６６５ｎｍ）を用いてＦｏｒｓｔｅｒ共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）シグナルを測定した。全ての実験は、製造元の指示のガイドラインのもとに実施した。(LANCE Ultra cAMP Kit, PerkinElmer)
【０１１１】
（９）血圧及び心拍数測定
マウスの血圧をＢＰ−９８Ａ血圧計（ソフトロン、東京、日本）を用い、テールカフ法により測定した。マウス（９〜１２週齢）の血圧および心拍数を試験するために、血圧の正常な日々の変動を避けるために、同じ時間枠（１〜４ｐｍ）を選択した。装置へのマウスの訓練の為に５日間連続して使用した。心血管循環を最適化するために、尾部を除いてマウスをシリンダーヒーター内で３７℃に保ち、さらに綿シートの内側カバーで覆った。テール（または膨張式バルーン）カフに取り付けられたプログラム可能なセンサーを使用して、テールパルス波をモニターし、パルス波が安定して周期的であるときの血圧および心拍数を測定する。血圧及び心拍を測定しソフトウェアにより記録した。連続した５日間の訓練の後、マウスにＡ２ＡＲ ＰＡＭ−１（７５ｍｇ／ｋｇ，ＩＰ）を注射した。注射後、３０分、１時間３０分及び２時間３０分で血圧及び心拍数を測定した（各マウスについて２０測定値を収集した）。次いで、マウスに、ＣＧＳ２１６８０（１ｍｇ／ｋｇ，ＩＰ）注射前の連続２日間、訓練を続けさせた。ＣＧＳ２１６８０（１ｍｇ／ｋｇ，ＩＰ）注射後、３０分、１時間３０分及び２時間３０分で血圧及び心拍数を測定した（各マウスについて２０測定値を収集した）。試験後、マウスを尾からそっと持ち上げて静かにケージに戻した。全ての実験は、マウスにとって最もストレスのかからない条件下で実施された。
【０１１２】
［結果］
（１）アロステリックＡ２ＡＲ調節に対する１１７４の低分子化合物のスクリーニング
我々は、マウスＡ２ＡＲを発現するチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞を確立し（図１）、続いて、それを用いてＡ２ＡＲにおけるアロステリック効果について１１７４の低分子化合物をスクリーニングした。化合物は筑波大学の長瀬博博士の研究室で合成された。ＣＨＯ細胞におけるＡ２ＡＲ活性は、アデノシンと低分子化合物とを添加した後に産生される環状アデノシン一リン酸（ｃＡＭＰ）を、蛍光共鳴エネルギー移動イムノアッセイキットを用いて測定することによって評価した。まず、我々は、一次スクリーニングで３つの化合物の混合物を調べ、８つの混合物がＡ２ＡＲにおけるアデノシン効果を増幅することを見つけた（図２ａ）。さらに、個々の化合物３７０、３７１及び３７２について調べたところ、アデノシンによるＡ２ＡＲ活性化の増強に化合物３７１が寄与していることがわかった（図２ｂ）。アデノシンの非存在下でのＡ２ＡＲを発現している、あるいはネイティブなＣＨＯ細胞の化合物３７１による処理、あるいはネイティブなＣＨＯのアデノシン及び化合物３７１での処理は、細胞培養バイオアッセイにおいてｃＡＭＰレベルを変化させなかった（図２ｄ）。このことは、化合物３７１がおそらくＡ２ＡＲに対するポジティブアロステリックモジュレーターであることを示唆している。そして我々はこの化合物をＡ２ＡＲ ＰＡＭ−１と命名した（図２ｃ）。Ａ２ＡＲ発現ＣＨＯ細胞を１５０μＭアデノシンと種々の濃度でのＡ２ＡＲ ＰＡＭ−１（即ち、２５、５０、及び１００μＭ）とで共処理することにより、アデノシンＡ２ＡＲ−誘発性のｃＡＭＰの蓄積が、それぞれ、４２％±１．４，４６％±１．１，及び５０％±１．０と、用量依存的に増幅された（図２ｅ）。同様に、１００μＭのＡ２ＡＲ ＰＡＭ−１および５０、１００、または１５０μＭのアデノシンによるＡ２ＡＲ発現ＣＨＯ細胞の共処理は、用量依存的に５５％±０．４、６６％±１．５及び７２％±１．７でＣＨＯ細胞におけるＡ２ＡＲ活性を増加させた。一方、１００μＭのＡ２ＡＲ ＰＡＭ−１は２５０μＭのアデノシンで処理したＡ２ＡＲ発現ＣＨＯ細胞の細胞活性を有意に増強しなかった（図２ｆ）。驚くべきことに、１００μＭのＡ２ＡＲ ＰＡＭ−１および異なる濃度の高い選択性を有するＡ２ＡＲアゴニストであるＣＧＳ２１６８０とのＡ２ＡＲ発現ＣＨＯ細胞の共処理は、ｃＡＭＰ産生の増強を全くもたらさなかった（図３）。
【０１１３】
（２）Ａ２ＡＲ ＰＡＭ−１の腹腔内投与はマウスにおいてＳＷＳを誘導する
次に、我々は、野生型マウスの睡眠／覚醒行動におけるＡ２ＡＲ ＰＡＭ−１の腹腔内（ＩＰ）投与の効果について調べた。従って、我々は、暗期の間、２２時にベヒクル又はＡ２ＡＲ ＰＡＭ−１を注射した後、脳波図（ＥＥＧ）と筋電図（ＥＭＧ）を記録した。マウスは通常、この時間の大半を起きて過ごしている。Ａ２ＡＲ ＰＡＭ−１は用量依存的に８時間までの間、ＳＷＳ（低速で高振幅の脳波を特徴とする睡眠の大部分である非急速眼球運動（ｎｏｎ−ＲＥＭ）睡眠としても知られている）を増加させた（図４ａ、ｂ、ｄ）。ＳＷＳの合計量は、最も高用量のＡ２ＡＲ ＰＡＭ−１（即ち、７５ｍｇ／ｋｇ）で、８時間の間に、ベヒクル処理と比較して、６０．８±１１．４分増加した。一方、覚醒は５９．２±１２．８分減少した（図４ｃ）。Ａ２ＡＲ ＰＡＭ−１のＩＰ注射は、ベヒクル注射と比べて、暗期におけるＲＥＭ睡眠時間には何ら有意な変化を与えなかった。
暗期中の８時間の間、マウスにＡ２ＡＲ ＰＡＭ−１（７５ｍｇ／ｋｇ，ＩＰ）を投与してもＳＷＳ及びＲＥＭ睡眠エピソード数に有意な影響を与えることはなかった（図５ａ）。一方、生理食塩水での測定に比べ、暗期中の８時間の間の１２０〜２３９秒続く覚醒エピソードの数が７５％（ｐ＝０．００６）増加し、暗期中の８時間の間の４８０〜９５９秒あるいは９６０〜１９０９秒続く覚醒エピソードの数はそれぞれ４７％（ｐ＝０．０２）、８８％（ｐ＝０．０２）減少した。覚醒エピソードの平均持続時間は生理食塩水での測定に比べ３８％（ｐ＝０．０１）減少したが、ＳＷＳ及びＲＥＭ睡眠には、Ａ２ＡＲ ＰＡＭ−１（７５ｍｇ／ｋｇ，ＩＰ）投与の後に有意な違いはなかった（図５ｂ）。Ａ２ＡＲ ＰＡＭ−１（７５ｍｇ／ｋｇ，ＩＰ）はまた、ＳＷＳ、覚醒及びＲＥＭ睡眠間の遷移の数にも有意な影響は与えなかった（図５ｃ）。
ＥＥＧ活性がＡ２ＡＲ ＰＡＭ−１投与によって変化したかどうかを評価するために、ベヒクル又はＡ２ＡＲ ＰＡＭ−１で処理した後のマウスにおけるＳＷＳの正規化ＥＥＧパワースペクトルを比較した（図４ｅ）。ＳＷＳ中の０．５〜２５Ｈｚの周波数範囲でのＥＥＧ活性は、Ａ２ＡＲ ＰＡＭ−１誘発性の睡眠と自然（ベヒクル治療）な睡眠との間で区別がつかなかった。これらのデータは、Ａ２ＡＲ ＰＡＭ−１は正常でない睡眠ではなく、生理学的な睡眠を誘導しているということを示唆している。
同様の結果がＡ２ＡＲ ＰＡＭ−４を投与した場合でも得られた（図６）。
【０１１４】
（３）Ａ２ＡＲ ＰＡＭ−１の睡眠誘導効果はＡ２ＡＲを阻害することによって抑制される
我々は、さらにＡ２ＡＲがＡ２ＡＲ ＰＡＭ−１の睡眠誘導効果を仲介するのかどうかを調べた。まず、我々は、野生型のマウスを、２２時にＡ２ＡＲ ＰＡＭ−１を注射する前に、選択的Ａ２ＡＲアンタゴニストであるＺＭ２４１３８５（１５ｍｇ／ｋｇ，ＩＰ）又はベヒクルで３０分間前処理した。ＺＭ２４１３８５の用量は、以前の研究(El Yacoubi et al, 2000; Nakamura et al, 2016)に基づいて選択された。Ａ２ＡＲ ＰＡＭ−１の注射は、ＺＭ２４１３８５存在下では、ＳＷＳに有意な変化を与えなかった（図７ａ、７ｂ）。このことは、ＺＭ２４１３８５が、Ａ２ＡＲ ＰＡＭ−１により誘導されるＳＷＳを完全に阻害していることを示している。我々が、ＩＰ注射後４時間でのＳＷＳの合計量を算出したところ（図７ａ）、Ａ２ＡＲ ＰＡＭ−１は、ＺＭ２４１３８５で前処理した後ではＳＷＳの合計量に有意な変化を与えなかった。ベヒクル前処理に比べてＺＭ２４１３８５前処理のみではＳＷＳに対し有意な効果はなかった（図７ｂ）。
次いで、我々は、Ａ２ＡＲノックアウトマウスとその野生型の同腹仔に、７５ｍｇ／ｋｇのＡ２ＡＲ ＰＡＭ−１を２２時に腹腔内投与した。Ａ２ＡＲノックアウトマウスにおいて、ベヒクル処理に比べてＳＷＳに有意な変化は観察されなかった（図７ｃ）。一方、Ａ２ＡＲノックアウトマウスの野生型同腹仔では、６時間の間でＳＷＳが７４．３±１２．０分増加した（図７ｄ）。
これらの知見は、Ａ２ＡＲ ＰＡＭ−１がＳＷＳを誘導するにはＡ２ＡＲが必要であることを示唆している。
【０１１５】
（４）Ａ２ＡＲ ＰＡＭ−１の脳室内投与はマウスにおいてＳＷＳを誘発する
Ａ２ＡＲ ＰＡＭ−１の睡眠誘導効果が脳で発現されるＡ２ＡＲにより仲介されているかどうかを明らかにするために、我々は、暗期（２０：００〜８：００）の間に２００ｎｍｏｌ／ｈで野生型マウスの側脳室にＡ２ＡＲ ＰＡＭ−１を注入した。そしてそれらのＥＥＧおよびＥＭＧを記録した。注入後３時間で、１２時間のＡ２ＡＲ ＰＡＭ−１注入によるＳＷＳに費やす時間が増加した。結果、ＳＷＳの合計量は、暗期の間、ベヒクル処理に比べて１４１．６±１２．５分増加した。付随的に、覚醒の合計量は、Ａ２ＡＲ ＰＡＭ−１の１２時間脳室内（ＩＣＶ）注入の間に１４５．５±１５．８分減少したが、ＲＥＭ睡眠はＡ２ＡＲ ＰＡＭ−１注入の影響を受けなかった（図８ａ、８ｂ）。
Ａ２ＡＲ ＰＡＭ−１（２００ｎｍｏｌ／ｈ）のマウスへのＩＣＶ注入は、暗期の間のＳＷＳ及び覚醒エピソードの数に影響を与えた（図９ａ）。ＳＷＳ及び覚醒エピソードの数は暗期中の注入の間増加し、０〜２９秒、３０〜５９秒、６０〜１２０秒続くものは、それぞれ生理食塩水での測定に比べて、７３％（ｐ＜０．０００１）、６６％（ｐ＝０．００８）、６１％（ｐ＝０．０２）であり、６７％（ｐ＝０．０４）、６４％（ｐ＝０．００７）、５８％（ｐ＝０．０２）であった。ＲＥＭ睡眠エピソードの数はＡ２ＡＲ ＰＡＭ−１（２００ｎｍｏｌ／ｈ，ＩＣＶ）により有意な影響は受けなかった。覚醒エピソードの平均持続時間は、生理食塩水での測定に比べて７２％（ｐ＝０．０１）にまで減少したが、ＳＷＳ及びＲＥＭ睡眠にはＡ２ＡＲ ＰＡＭ−１（２００ｎｍｏｌ／ｈ，ＩＣＶ）投与後も有意な違いは見られなかった（図９ｂ）。Ａ２ＡＲ ＰＡＭ−１（２００ｎｍｏｌ／ｈ，ＩＣＶ）は、ＳＷＳ及び覚醒間遷移の数を６０％（ｐ＝０．００１）増加させ、生理食塩水での測定に比べて覚醒からＳＷＳの遷移の数を５６％（ｐ＝０．００２）増加させた（図９ｃ）。
さらに、ＳＷＳエピソード中の０．５〜２５Ｈｚの周波数範囲でのＥＥＧ活性は、ベヒクル又はＡ２ＡＲ ＡＭ−１で処理した後のマウスで区別がつかなかった（図８ｃ）。これらのデータは、Ａ２ＡＲ ＰＡＭ−１は正常でない睡眠ではなく、生理学的な睡眠を脳で発現しているであろうＡ２ＡＲを介して誘導しているということを示唆している。
【０１１６】
（５）Ａ２ＡＲ ＰＡＭ−１の腹腔内投与は血圧及び心拍リズムに影響しない
Ａ２ＡＲアゴニストは、低血圧と頻脈等の心血管系の作用を誘発することが知られている(Hutchison et al, 1989; Kirkup et al, 1998; Nekooeian and Tabrizchi, 1996)。従って、我々は、野生型マウスの血圧及び心拍リズムに対するＡ２ＡＲ ＰＡＭ−１のＩＰ投与の影響を調べた。まず、我々は、電気血圧計を用いて７５ｍｇ／ｋｇのＡ２ＡＲ ＰＡＭ−１あるいは１ｍｇ／ｋｇのＡ２ＡＲアゴニストであるＣＧＳ２１６８０をマウスにＩＰ投与した後、３０、９０、及び１５分後に血圧を測定した。Ａ２ＡＲアゴニストであるＣＧＳ２１６８０の用量は以前の研究(Ledent et al, 1997)に基づいて選択された。ベヒクル処理したものと比べて、Ａ２ＡＲアゴニストＣＧＳ２１６８０注射後９０分までは収縮期、拡張期及び平均血圧が有意に低下したが、Ａ２ＡＲアゴニストＣＧＳ２１６８０での処理後１５０分では通常のレベルに戻った。対照的に、血圧は、７５ｍｇ／ｋｇのＡ２ＡＲ ＰＡＭ−１をＩＰ投与しても、処理後３０、９０、及び１５０分で測定した際には変化はなかった（図１０ｂ）。さらに、我々は、７５ｍｇ／ｋｇのＡ２ＡＲ ＰＡＭ−１又は１ｍｇ／ｋｇのＡ２ＡＲアゴニストＣＧＳ２１６８０をＩＰ注射した後の麻酔をかけたマウスについて、心房内心電図を用いて心拍数及びリズムをモニタリングした。マウスの心拍数は、Ａ２ＡＲアゴニストＣＧＳ２１６８０のＩＰ投与後に、わずかに上昇した。一方、７５ｍｇ／ｋｇのＡ２ＡＲ ＰＡＭ−１で処理したマウスでは心拍数は影響を受けなかった（図１０ｃ）。Ａ２ＡＲ ＰＡＭ−１投与とは対照的に、Ａ２ＡＲアゴニストＣＧＳ２１６８０のＩＰ投与はマウスにおいて心房期外収縮を伴う洞性不整脈を引き起こした（図１０ａ）。
【０１１７】
リファレンス：
(1) El Yacoubi M, Ledent C, Parmentier M, Costentin J, Vaugeois J (2000). SCH 58261 and ZM 241385 differentially prevent the motor effects of CGS 21680 in mice: evidence for a functional “atypical” adenosine A(2A) receptor. Eur J Pharmacol 401: 63-77.
(2) Hutchison AJ, Webb RL, Oei HH, Ghai GR, Zimmerman MB, Williams M (1989). CGS 21680C, an A2 selective adenosine receptor agonist with preferential hypotensive activity. J Pharmacol Exp Ther 251: 47-55.
(3) Kirkup AJ, Eastwood C, Grundy D, Chessell IP, Humphrey PP (1998). Characterization of adenosine receptors evoking excitation of mesenteric afferents in the rat. Br J Pharmacol 125: 1352-1360.
(4) Ledent C, Vaugeois JM, Schiffmann SN, Pedrazzini T, El Yacoubi M, Vanderhaeghen JJ, et al (1997). Aggressiveness, hypoalgesia and high blood pressure in mice lacking the adenosine A2a receptor. Nature 388: 674-678.
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(7) Paxinos G, Franklin KBJ (Gulf Professional Publishing: 2004). The Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates.
【産業上の利用可能性】
【０１１８】
本発明によれば、心血管系作用等の副作用を引き起こすことなく、徐波睡眠（SWS）を誘導することができる。従って、本発明は睡眠導入剤、特に熟睡感を与える徐波睡眠の提供が可能な睡眠導入剤の提供が可能となる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【外国語明細書】
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