(57)【要約】      （修正有）【課題】血液中Ａβオリゴマを効率的に除去できる新たなシステムを提供する。【解決手段】アミロイド−β（Ａβ）除去システムは、中空糸膜を含み、アルブミンの透過率が３〜９６％であるデバイスを有し、血液から分離された血漿を中空糸膜内腔から中空糸膜外面に通液させることで血中Ａβオリゴマを除去する。また、中空糸膜内腔に存在する液の一部を廃棄しながら、血漿を中空糸膜内腔から中空糸膜外面に通液させて、中空糸膜内腔中に存在する液中にＡβオリゴマを蓄積させる。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
中空糸膜を含み、アルブミンの透過率が３〜９６％であるデバイスを有し、血液から分離された血漿を中空糸膜内腔から中空糸膜外面に通液させることで血中Ａβオリゴマを除去する、アミロイド−β除去システム。
【請求項２】
中空糸膜内腔に存在する液中にＡβオリゴマが蓄積する、請求項１に記載のアミロイド−β除去システム。
【請求項３】
中空糸膜内腔に存在する液の一部を廃棄しながら、血漿を中空糸膜内腔から中空糸膜外面に通液させる、請求項１または２に記載のアミロイド−β除去システム。
【請求項４】
中空糸膜内腔に存在する液の一部を廃棄しながら、血漿を中空糸膜内腔から中空糸膜外面に通液させて、中空糸膜内腔中に存在する液中にＡβオリゴマが蓄積する、請求項１〜３のいずれか１項に記載のアミロイド−β除去システム。
【請求項５】
血漿分離器をさらに有する、請求項１〜４のいずれか１項に記載のアミロイド−β除去システム。
【請求項６】
血液中Ａβモノマを除去するためのシステムをさらに有する、請求項１〜５のいずれか１項に記載のアミロイド−β除去システム。
【請求項７】
中空糸膜外へ濾過された血漿を体内に戻す回路をさらに有する、請求項１〜６のいずれか１項に記載のアミロイド−β除去システム。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アミロイド−β除去システムに関する。
【背景技術】
【０００２】
アルツハイマー病（Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ；ＡＤ）は脳内の神経細胞が変性することにより認知症になっていくと考えられている疾患である。その発症機構については、アミロイド−β（以下、「Ａβ」と略称する場合がある。）が脳に蓄積することを発端とする「アミロイド仮説」が最も有力であり、可溶性Ａβが記憶の長期増強を強く阻害することが知られている。
【０００３】
Ａβには４０アミノ酸のＡβ1-40、４２アミノ酸のＡβ1-42をメインとして、３８アミノ酸のＡβ1-38、４３アミノ酸のＡβ1-43などが存在することが知られている。中でも、Ａβ1-42は凝集能が強く、神経毒性が強いと考えられている。
Ａβ1-40やＡβ1-42などのＡβモノマが２個以上凝集したＡβオリゴマが存在することも知られている（非特許文献１〜５）。
また、Ａβモノマよりも、Ａβオリゴマが神経毒性の主体であることが報告されている（非特許文献６）。Ａβモノマ、Ａβオリゴマおよびプロトフィブリルの間には平衡が存在し、さらに凝集が進むと、線維状Ａβとして沈着する。
【０００４】
血液中Ａβ量の減少に伴い脳内Ａβが血液中に引き抜かれるという「引き抜き」仮説が提唱されている。特許文献１〜３においても開示されているように、「引き抜き」仮説に鑑みて、血液中Ａβを効率的に除去することが、脳内Ａβの蓄積を減少させアルツハイマー病の治療または予防に有効な手段になると考えられている。
【０００５】
特許文献１には、セルロース、シリカ、ポリビニルアルコールまたは活性炭を担体の材質とするアミロイドβタンパク質除去材が開示されている。
また、特許文献２には、β−アミロイドを吸着させて、血液中のβ−アミロイド濃度を低下させる中空糸膜を備える、β−アミロイド除去システムが開示され、特許文献３には、血液の一部を中空糸内腔から中空糸外へ横断して濾過させて、β−アミロイドを中空糸で除去する、血液中β−アミロイド除去システムが開示されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】国際公開第２０１０／０７３５８０号
【特許文献２】特開２０１２−１６５９５号公報
【特許文献３】特開２０１５−７７３６９号公報
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，  ２００８；１４（８）：８３７−８４２
【非特許文献２】Ｎａｔｕｒｅ，  ２００６；４４０：３５２−３５７
【非特許文献３】Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ  Ｄｉｓ．，  ２０１６；８５：１１１−１２１
【非特許文献４】Ｎｅｕｒｏｎ，  ２０１４；８２：３０８−３１９
【非特許文献５】Ｂｒａｉｎ，  ２０１３；１３６；１３８３−１３９８
【非特許文献６】Ｎａｔｕｒｅ，  ２００２；４１６：５３５−５３９
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
ヘキサデシル基結合セルロース（ＨＤＣ）などの吸着材（特許文献１）、およびポリスルホン（ＰＳｆ）、ポリエーテルスルホン（ＰＥＳ）またはポリメチルメタアクリレート（ＰＭＭＡ）などを主要構成成分とした中空糸膜により（特許文献２，３）、Ａβモノマが膜表面への吸着等により除去することが可能であることが分かってきているが、本発明者らの検討により、Ａβオリゴマは吸着ではあまり除去されないことがわかってきた。
また、特許文献３には、血液中β−アミロイド除去システムにより、血液中Ａβオリゴマを除去し得るが、血液中Ａβオリゴマをより効率的に除去する新たな方法を見出すことも必要であった。
【０００９】
本発明者らは、アルツハイマー病患者の血液中Ａβオリゴマを効率的に除去することが、最終的には脳内Ａβの除去につながり、アルツハイマー病の治療または予防に有効な手段になると考えた。
そこで、本発明においては、血液中Ａβオリゴマを効率的に除去できる新たなシステムを提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは、上記課題を解決するため鋭意検討した結果、Ａβオリゴマが血液透析用の中空糸膜による吸着除去では、十分に除去できないことを発見した。しかしながら、Ａβオリゴマが通過しにくい中空糸膜壁を横断して血漿を通過させると、Ａβオリゴマを効率的に除去できることを見出し、本発明を完成した。
【００１１】
すなわち、本発明は、以下の血液中Ａβオリゴマを除去するアミロイド−β除去システムを提供する。
［１］
中空糸膜を含み、アルブミンの透過率が３〜９６％であるデバイスを有し、血液（好ましくは、ヒト血液）から分離された血漿を中空糸膜内腔から中空糸膜外面に通液させることで血液中Ａβオリゴマを除去する、アミロイド−β除去システム。
［２］
中空糸膜内腔に存在する液中にＡβオリゴマが蓄積する、［１］に記載のアミロイド−β除去システム。
［３］
中空糸膜内腔に存在する液の一部を廃棄しながら、血漿を中空糸膜内腔から中空糸膜外面に通液させる、［１］または［２］に記載のアミロイド−β除去システム。
［４］
中空糸膜内腔に存在する液の一部を廃棄しながら、血漿を中空糸膜内腔から中空糸膜外面に通液させて、中空糸膜内腔中に存在する液中にＡβオリゴマが蓄積する、［１］〜［３］のいずれかに記載のアミロイド−β除去システム。
［５］
血漿分離器をさらに有する、［１］〜［４］のいずれかに記載のアミロイド−β除去システム。
［６］
血液中Ａβモノマを除去するためのシステムをさらに有する、［１］〜［５］のいずれかに記載のアミロイド−β除去システム。
［６−１］
血液中Ａβモノマを同時に除去するシステムである、［１］〜［５］のいずれかに記載のアミロイド−β除去システム。
［６−２］
Ａβモノマを中空糸膜に吸着させて血液中Ａβモノマを除去する、［６］または［６−１］に記載のアミロイド−β除去システム。
［７］
中空糸膜外へ濾過された血漿を体内に戻す回路をさらに有する、［１］〜［６−２］のいずれかに記載のアミロイド−β除去システム。
【００１２】
また、本発明は、以下の血液中アミロイド−β濃度を低下する方法、また、以下の
アルツハイマー病を治療または予防する方法を提供する。
［８］
血液中アミロイド−β濃度を低下する方法であって、
血液（好ましくは、ヒト血液）を体外に脱血する工程
脱血した血液から血漿を分離する工程、および
分離した血漿を、中空糸膜を含み、アルブミンの透過率が３〜９６％であるデバイスの中空糸膜内腔に通液する工程、を含有し、
血漿を中空糸膜内腔から中空糸膜外面に通液することで血液中Ａβオリゴマを除去する、血液中アミロイド−β濃度を低下する方法。
なお、［８］〜［１４］において共通に、血液中アミロイド−β濃度を低下する方法は、血液中Ａβオリゴマ濃度を低下する方法であってもよい。
また、血液中アミロイド−β濃度を低下する方法における中空糸膜を含み、アルブミンの透過率が３〜９６％であるデバイスとしては、［１］〜［７］のいずれかに記載のアミロイド−β除去システムであってよい。
［９］
中空糸膜内腔に存在する液中にＡβオリゴマが蓄積する、［８］に記載の血液中アミロイド−β濃度を低下する方法。
［１０］
中空糸膜内腔に存在する液の一部を廃棄しながら、血漿を中空糸膜内腔から中空糸膜外面に通液する、［８］または［９］に記載の血液中アミロイド−β濃度を低下する方法。
［１１］
中空糸膜内腔に存在する液の一部を廃棄しながら、血漿を中空糸膜内腔から中空糸膜外面に通液して、中空糸膜内腔中に存在する液中にＡβオリゴマが蓄積する、［８］〜［１０］のいずれかに記載の血液中アミロイド−β濃度を低下する方法。
［１２］
血漿分離器により血液から血漿を分離する、［８］〜［１１］のいずれかに記載の血液中アミロイド−β濃度を低下する方法。
［１３］
血液中Ａβモノマを除去するための工程をさらに有する、［８］〜［１２］のいずれかに記載の血液中アミロイド−β濃度を低下する方法。
［１３−１］
血漿を中空糸膜内腔から中空糸膜外面に通液することで血液中Ａβモノマを除去する、［８］〜［１２］のいずれかに記載の血液中アミロイド−β濃度を低下する方法。
［１３−２］
Ａβモノマを中空糸膜に吸着させて血液中Ａβモノマを除去する、［１３］または［１３−１］に記載の血液中アミロイド−β濃度を低下する方法。
［１４］
中空糸膜外へ濾過された血漿を体内に戻す工程をさらに有する、［８］〜［１３−２］のいずれかに記載の血液中アミロイド−β濃度を低下する方法。
［１５］
それを必要とする対象（好ましくは、ヒト）のアルツハイマー病を治療または予防する方法であって、
対象の血液を体外に脱血する工程、
脱血した血液から血漿を分離する工程、および
分離した血漿を、中空糸膜を含み、アルブミンの透過率が３〜９６％であるデバイスの中空糸内腔に通液する工程を含有し、
血漿を中空糸膜内腔から中空糸膜外面に通液することで血液中Ａβオリゴマを除去して、血液中アミロイド−β濃度を低下することにより、それを必要とする対象（好ましくは、ヒト）のアルツハイマー病を治療または予防する方法。
なお、［１５］〜［２１］において共通に、血液中アミロイド−β濃度を低下するとは、血液中Ａβオリゴマ濃度を低下することであってもよい。
また、アルツハイマー病を治療または予防する方法における中空糸膜を含み、アルブミンの透過率が３〜９６％であるデバイスとしては、［１］〜［７］のいずれかに記載のアミロイド−β除去システムであってよい。
［１６］
中空糸膜内腔に存在する液中にＡβオリゴマが蓄積する、［１５］に記載のアルツハイマー病を治療または予防する方法。
［１７］
中空糸膜内腔に存在する液の一部を廃棄しながら、血漿を中空糸膜内腔から中空糸膜外面に通液する、［１５］または［１６］に記載のアルツハイマー病を治療または予防する方法。
［１８］
中空糸膜内腔に存在する液の一部を廃棄しながら、血漿を中空糸膜内腔から中空糸膜外面に通液して、中空糸膜内腔中に存在する液中にＡβオリゴマが蓄積する、［１５］〜［１７］のいずれかに記載のアルツハイマー病を治療または予防する方法。
［１９］
血漿分離器により血液から血漿を分離する、［１５］〜［１８］のいずれかに記載のアルツハイマー病を治療または予防する方法。
［２０］
血液中Ａβモノマを除去するための工程をさらに有する、［１５］〜［１９］のいずれかにに記載のアルツハイマー病を治療または予防する方法。
［２０−１］
血漿を中空糸膜内腔から中空糸膜外面に通液することで血液中Ａβモノマを除去する、［１５］〜［１９］のいずれかにに記載のアルツハイマー病を治療または予防する方法。
［２０−２］
Ａβモノマを中空糸膜に吸着させて血液中Ａβモノマを除去する、［２０］または［２０−１］に記載のアルツハイマー病を治療または予防する方法。
［２１］
中空糸膜外へ濾過された血漿を体内に戻す工程をさらに有する、［１５］〜［２０−２］に記載のアルツハイマー病を治療または予防する方法。
【発明の効果】
【００１３】
本発明によれば、Ａβオリゴマを効率的に除去できる新たなシステムを提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】本発明のアミロイド−β除去システムを用いる態様の概略図を示す。
【図２】本発明のアミロイド−β除去システムが二重濾過膜血漿交換療法（ＤＦＰＰ）による態様である場合の概略図を示す。実施例２におけるヒトでの二重濾過膜血漿交換療法（ＤＦＰＰ）によるＡβオリゴマ除去実験での回路構成の概略図でもある。
【図３】実施例１におけるＡβオリゴマ除去システムの概略図を示す。図中、Ｐｏｏｌは通液させる溶液のプールを、Ｐｒｅは中空糸膜処理前血漿のサンプリング部位を、Ｆは濾過血漿サンプリング部位を、Ｒは中空糸膜内腔残留血漿サンプリング部位を示す。
【図４】実施例１におけるＰｏｏｌ内ヒト廃血漿中の（Ａ）アルブミン、（Ｂ）Ａβ1-40、（Ｃ）Ａβ1-42および（Ｄ）Ａβオリゴマの各濃度変化を示す。
【図５】実施例１におけるＥＣ−２０Ｗを用いた場合の中空糸膜内腔の血漿中の（Ａ）アルブミン、（Ｂ）Ａβ1-40、（Ｃ）Ａβ1-42および（Ｄ）Ａβオリゴマの各濃度変化を示す。
【図６】実施例１におけるＥＣ−５０Ｗを用いた場合の中空糸膜内腔の血漿中の（Ａ）アルブミン、（Ｂ）Ａβ1-40、（Ｃ）Ａβ1-42および（Ｄ）Ａβオリゴマの各濃度変化を示す。
【図７】実施例１におけるＥＣ−２０Ｗを用いた場合の、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのＡβオリゴマ除去実験の施行前後の（Ａ）アルブミン、（Ｂ）Ａβ1-40、（Ｃ）Ａβ1-42および（Ｄ）Ａβオリゴマの各マスバランスを解析した結果を示す。
【図８】実施例１におけるＥＣ−５０Ｗを用いた場合の、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのＡβオリゴマ除去実験の施行前後の（Ａ）アルブミン、（Ｂ）Ａβ1-40、（Ｃ）Ａβ1-42および（Ｄ）Ａβオリゴマの各マスバランスを解析した結果を示す。
【図９】実施例２におけるＤａｙ１、３、６間の（Ａ）Ａβ1-40および（Ｂ）Ａβ1-42の各濃度変化を示す。
【図１０】実施例２におけるＡβオリゴマの（Ａ）Ｄａｙ１、（Ｂ）Ｄａｙ３および（Ｃ）Ｄａｙ６の各濃度変化を示す。
【図１１】実施例３におけるＡβモノマ除去デバイスとしてＨＤＣ（ヘキサデシル基結合セルロースビーズ）を用い、Ａβオリゴマ除去デバイスとしてＥＣ５０Ｗを用いた、Ａβモノマ・オリゴマ同時除去システムの概略図を示す。
【図１２】実施例３におけるＰｏｏｌ内ヒト廃血漿中の、アルブミン、Ａβ1-40、Ａβ1-42およびＡβオリゴマの各濃度変化を示す。
【図１３】実施例４におけるＡβモノマ除去デバイスとしてダイアライザを用い、Ａβオリゴマ除去デバイスとしてＥＣ５０Ｗを用いた、Ａβモノマ・オリゴマ同時除去システムの概略図を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
以下、本発明を実施するための形態（以下、「本実施形態」という。）について以下詳
細に説明する。なお、本発明は、以下の実施形態に限定されるものではなく、その要旨の
範囲内で種々変形して実施することができる。
【００１６】
本実施形態のアミロイド−β除去システムは、中空糸膜を含み、アルブミンの透過率が３〜９６％であるデバイスを有し、血液から分離された血漿を中空糸膜内腔から中空糸膜外面に通液させることで血液中Ａβオリゴマを除去する、アミロイド−β除去システムである。
Ａβモノマ（アミロイド−β）、Ａβオリゴマおよびプロトフィブリルの間には平衡が存在するため、血液中Ａβオリゴマを除去することにより、本実施形態においては、アミロイド−β（Ａβ）が除去される。
【００１７】
本実施形態におけるアミロイド−β除去システムにより除去されるＡβオリゴマは、２個以上のＡβモノマの凝集体であり、特に限定されるものではなく、１００個以上のＡβモノマの凝集体であってもよいが、血液中で可溶性である範囲内での大きさであることが必要であり、２個以上１００個程度の凝集体であることが好ましい。
Ａβオリゴマにおいては、電子顕微鏡により観察すると繊維化を確認することはできないが、プロとフィブリルにおいては、電子顕微鏡により観察すると繊維化が確認される。
【００１８】
本実施形態において、中空糸膜を含み、アルブミンの透過率が３〜９６％であるデバイスを用いることで、血液中Ａβオリゴマは、主として、膜厚方向に血漿を通液することによる濾過、すなわち、中空糸膜厚の壁内部へのＡβオリゴマの捕捉により除去されるものではなく、血漿から除去される。
本実施形態においては、アルブミンの透過率が３〜９６％であることは、血漿から除去されるＡβオリゴマが膜厚方向での濾過（中空糸膜厚の壁内部へのＡβオリゴマの捕捉）に拠らずとも除去し得ることを示す指標である。
アルブミンの透過率が３％以上であることにより、中空糸膜内腔から中空糸膜外面に血漿を通過させる際に、通過圧を適切な範囲に制御することが可能である。
アルブミンの透過率が９６％以下であることにより、血漿中のＡβオリゴマを効率よく除去することが可能となる。
本実施形態において、中空糸膜を含むデバイスのアルブミンの透過率は３〜９６％であり、かかる数値範囲内にあって、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％または９６％であってもよい。
中空糸膜を含むデバイスのアルブミンの透過率は、ここで例示した数値のいずれか２つの数値を上限下限とする範囲内であってよく、好ましくは５〜９５％であり、より好ましくは１０〜９０％であり、さらに好ましくは３５〜９０％である。
本実施形態においては、中空糸膜を含むデバイスであって、アルブミンの透過率が３〜９６％であるデバイスを用いることにより、通液される血漿からＡβオリゴマは除去される。
【００１９】
中空糸膜を含むデバイスのアルブミンの透過率は、分画曲線を求めて、アルブミンの阻止率から算出することも可能であるし、ふるい係数から算出することも可能であるが、分画曲線を用いて算出された値とすることが好適である。
分画曲線は、従来公知の方法により作成することが可能である。
【００２０】
本実施形態においては、デバイスに用いる中空糸膜の平均細孔径が、約５〜約５０ｎｍであり、好ましくは８〜４０ｎｍであり、より好ましくは１０〜３０ｎｍである。
中空糸膜の平均細孔径が、当該範囲内にあることにより、中空糸膜を含むデバイスのアルブミンの透過率を好適な範囲に制御することができる。
中空糸膜の内径および膜厚は、適宜選択される。
当該デバイスとしては、血漿成分分画膜として知られるデバイスを用いることができる。
【００２１】
本実施形態においては、血液から分離された血漿中のＡβオリゴマの除去は、血漿中Ａβオリゴマの濃度の低下により確認される。
本実施形態のアミロイド−β除去システムにおいては、血液をそのまま通液すると血球も中空糸膜内腔に溜まってしまうため、効率的なＡβオリゴマの除去のためにも、中空糸膜内腔に通液する前の血液の血漿分離が不可欠なものとなる。
【００２２】
本実施形態においては、Ａβオリゴマの除去率は、アルブミンの透過率が３〜９６％であるデバイスの血漿の入口と出口のＡβオリゴマ濃度の比較により、好ましくは２０％以上であり、より好ましくは３０％以上であり、さらに好ましくは５０％以上であり、よりさらに好ましくは７０％以上である。
【００２３】
本実施形態におけるアミロイド−β除去システムを用いる態様の概略図を図１に示す。図１においては、血漿分離に用いられるデバイスとして、血漿分離器が記載されているが、血漿分離器としては、公知のものを用いることができ特に限定されないが、連続遠心分離機でもよく、血漿分離膜でもよい。
血液から分離された血漿は、図１においては、Ａβオリゴマ除去器として記載される中空糸膜を含み、アルブミンの透過率が３〜９６％であるデバイスの中空糸膜内腔を通液される。
Ａβオリゴマ除去器に中空糸膜内腔から中空糸膜外面に向けて血漿が通液されるが、Ａβオリゴマは、主として、中空糸膜壁を透過せずに、血漿から分離除去される。
好ましくは、Ａβオリゴマは、中空糸膜内腔に存在する液中に蓄積することで血漿から分離除去される。したがって、本実施形態におけるアミロイド−β除去システムを用いることにより、中空糸膜内腔の存在する液中のＡβオリゴマの濃度は上昇していくことになる。
中空糸膜内腔のＡβオリゴマ濃度の上昇に併せて、中空糸膜内腔に存在する液の一部を廃棄することで、Ａβオリゴマは、本実施形態におけるアミロイド−β除去システムにより血漿中から除去される。
本実施形態においては、さらに、血液中Ａβモノマを除去するためのシステムをさらに有していてもよい。血液中Ａβモノマを除去するためのシステムとして、Ａβモノマ除去器を本実施形態のアミロイド−β除去システムに組み込んで、ＡβオリゴマとＡβモノマを高効率で同時除去するシステムも本実施態様に含まれる。
血液中Ａβモノマを除去するためのシステムをさらに有する場合、本実施形態におけるアミロイド−β除去システムは、血漿分離器および血液中Ａβモノマを除去するためのシステム（例えば、Ａβモノマ除去器）をさらに有することが好ましい。Ａβモノマ除去器、血漿分離器およびＡβオリゴマ除去器の接続は、血漿分離器からＡβオリゴマ除去器に血漿が通液されるように構成されていれば特に限定されないが、Ａβモノマ除去器、血漿分離器、そして、Ａβオリゴマ除去器と通液される回路を構成していることが好ましい。
また、図１において示されるＡβオリゴマ除去器が、Ａβモノマを同時に除去できる場合も好適な態様となる。この場合、本実施形態におけるアミロイド−β除去システムは、血漿分離器をさらに有することが好ましい。
中空糸膜壁を濾過された血漿においては、Ａβオリゴマが除去されており、好適には、Ａβモノマの一部も除去され、本実施形態のアミロイド−β除去システムを通液された血漿においてはＡβが除去されている。Ａβが除去された血漿は、血液回路より返血されることが好ましい。
なお、本実施形態において、Ａβオリゴマの除去は、血漿中から完全に除去されることを意味するものではなく、血漿中のＡβオリゴマ濃度の減少が確認されることを意味する。Ａβモノマの除去においても同様に、血液中ないし血漿中のＡβオリゴマ濃度の減少が確認されることを意味する。
【００２４】
本実施形態におけるアミロイド−β除去システムが血漿分離器をさらに有する場合、血漿分離器は、連続遠心分離機でもよく、血漿分離膜でもよい。アミロイド−β除去システムとしては、血漿分離膜を用いた二重濾過膜血漿交換療法によることも好ましい実施態様の一つである。
二重濾過膜血漿交換療法においては、体外に取り出した血液を血漿分離器により血球成分と血漿成分に分離した後、分離された血漿を、血漿成分分画膜を用いて免疫グロブリンやＬＤＬ、さらには、フィブリノーゲンなどの除去を行う。本実施形態においては、血漿成分分画膜に代えて、本実施形態におけるアミロイド−β除去システムにおける中空糸膜を含み、アルブミンの透過率が３〜９６％であるデバイスを用いることで、二重濾過膜血漿交換療法による本実施形態におけるアミロイド−β除去システムとすることができる。
本実施形態においては、対象（好ましくは、ヒト）から脱血された血液から分離された血漿が前記デバイスに通液されることが好ましい。二重濾過膜血漿交換療法により、本実施形態における血液中アミロイド−β濃度を低下する方法や、アルツハイマー病を治療または予防する方法を実施する場合、血漿分離器に対象（好ましくは、ヒト）の体外に脱血された血液が通液され、血液が血球成分と血漿成分に分離されて実施される。
【００２５】
血漿分離器として、連続遠心分離機を用いる場合、血液成分分離装置として知られる装置を用いてもよい。
連続遠心分離機としては、具体的には、特に限定されるものではないが、フレゼニウス社製血液成分分離装置  ＣＯＭ．ＴＥＣおよびＣＯＢＥ  ＳＰＥＣＴＲＡ（日本での販売はテルモＢＣＴ）などが挙げられる。
【００２６】
血漿分離器として、血漿分離膜を用いる場合、二重濾過膜血漿交換療法に用いる中空糸デバイスを用いてもよい。当該中空糸デバイスとしては、約０．１〜約０．３μｍの細孔径（ポアサイズ）を有して、赤血球、白血球および血小板などの血球が抜けない血漿分離膜であってよい。
血漿分離膜としては、具体的には、特に限定されるものではないが、旭化成メディカル社製プラズマフローＯＰ（ポリエチレン製多孔質膜をエチレンービニルアルコール共重合体でコーティング）や、フレゼニウス社製Ｐｌａｓｍａ  Ｆｉｌｔｅｒ（ポリスルホン製多孔質膜）などが挙げられる。
【００２７】
本実施形態で用いられる中空糸膜を含み、アルブミンの透過率が３〜９６％であるデバイスに含まれる中空糸膜は、血液を通液、濾過することができる中空糸膜であれば、特に限定されるものではないが、例えば、人工透析、血液濾過および血漿分離などにおいて用いられる中空糸膜が挙げられ、市販の中空糸膜を用いてもよい。
本実施形態においては、二重濾過膜血漿交換療法（ＤＦＰＰ）において用いられる血漿成分分離器（本実施形態においては、血漿成分分画膜または血漿分画器ともいう。）が、好適には、中空糸膜を含み、アルブミンの透過率が３〜９６％であるデバイスとして用いられる。
中空糸膜の材質としては、例えば、エチレンビニルアルコール共重合体（ＥＶＡＬ）、ポリスルホン（ＰＳｆ）、ポリエーテルスルホン（ＰＥＳ）、ポリアクリロニトリル（ＰＡＮ）、ポリメチルメタアクリレート（ＰＭＭＡ）、ポリエチレン（ＰＥ）、ポリフッ化ビニリデン、ポリエーテルスルホンポリアリレートポリマーアロイ（ＰＥＰＡ）、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリアミド、ポリイミド、ポリフェニルエーテル等の合成高分子、セルロースアセテート（ＣＴＡやＣＤＡ）、改質セルロース、銅アンモニアセルロース等のセルロース系高分子などが挙げられる。
【００２８】
Ａβオリゴマと共にＡβモノマも一つのデバイスで同時除去するためには、デバイスが、アルブミンの透過率が３〜９６％であることに加え、静電的結合および／または疎水結合を利用してＡβモノマを吸着除去するために、中空糸膜の材質として、疎水性の高分子を用いることが好適である。
当該デバイスが、ポリスルホン、ポリメチルメタアクリレート、ポリエーテルスルホンポリアリレートポリマーアロイ、ポリエーテルスルホン、ポリアクリロニトリルなどの合成高分子から形成される中空糸膜であって、アルブミンの透過率が３〜９６％であることが好ましい。
【００２９】
疎水性の高分子を材質として用いた場合の中空糸膜の親水化材料としては、血液適合性を含めて、ポリビニルピロリドン、ポリエチレングリコール、エチレンビニルアルコール共重合体、ポリハイドロキシエチルメタクリレートなどが挙げられる。
例えば、ポリビニルピロリドンなどの親水化材料を用いる場合には、ポリスルホンなどの合成高分子と、混合して紡糸して用いてもよいが、ポリスルホンなどの合成高分子を用いて紡糸して得られる中空糸膜にコーティングするために用いてもよい。
【００３０】
本実施形態において用いられる中空糸膜は、公知の方法により製造することができるが、中空糸膜の内径は、特に限定されないが、好ましくは、０．０１〜１ｍｍである。
【００３１】
血漿成分分離器としては、例えば、エチレンビニルアルコール共重合体を材質とする血漿成分分画膜や、ポリスルホンを材質とする血漿成分分画膜が挙げられる。
エチレンビニルアルコール共重合体を材質とする血漿成分分画膜としては、具体的には、特に限定されるものではないが、旭化成メディカル社製カスケードフローＥＣ−２０Ｗ、ＥＣ−３０Ｗ、ＥＣ−４０ＷおよびＥＣ−５０Ｗ、並びに川澄化学工業社製エバフラックス２Ａ、３Ａ４Ａおよび５Ａなどが挙げられる。
ポリスルホンを材質とする血漿成分分画膜としては、具体的には、特に限定されるものではないが、フレゼニウス社製ＡｌｂｕＦｌｏｗやＭＯＮＥＴなどが挙げられる。
アルブミンの透過率は、各製品における製品情報に基づいて求めてもよく、例えば、旭化成メディカル社製カスケードフローＥＣ−２０Ｗ、ＥＣ−３０Ｗ、ＥＣ−４０ＷおよびＥＣ−５０Ｗを用いる場合には、製品情報（http://www.asahi-kasei.co.jp/medical/pdf/apheresis/plasmapheresis_document_01.pdf）を利用して、アルブミンの透過率としてもよい。
当該製品情報９頁において、ＥＣ−２０Ｗの場合、アルブミン阻止率が約６５％と記載され、ＥＣ−５０Ｗの場合、アルブミン阻止率が約１０％と記載されているので、アルブミンの透過率は、それぞれ、約３５％、約９０％と算出される。
【００３２】
本実施形態において、ポリエーテルスルホンポリアリレートポリマーアロイを材質とするヘモダイアフィルターを中空糸膜として含み、アルブミンの透過率が３〜９６％であるデバイスとして用いてもよい。
当該ヘモダイアフィルターとしては、具体的には、特に限定されるものではないが、日機装製ＧＤＦなどが挙げられる。
【００３３】
本実施形態において、中空糸膜は、通液される血漿を中空糸膜内腔から中空糸膜外面へ濾過することができれば、ハウジング内での形状は特に限定されるものではないが、中空糸膜は、ハウジング内に収納された中空糸膜型モジュールとして用いることができる。
本実施形態におけるアミロイド−β除去システムにおいて、中空糸膜を含み、アルブミンの透過率が３〜９６％であるデバイスに代えて、多孔質平面膜（平膜）を積層し、中空糸膜内腔に相当するＡβオリゴマ蓄積層と、中空糸膜外面に相当するＡβオリゴマ除去血漿層とからなり、アルブミン透過率が３〜９６％を有するデバイスを用いてもよい。
また、本実施形態におけるアミロイド−β除去システムにおいて、血液から分離された血漿を、中空糸膜内腔ではなく、中空糸膜外面に通液し、血漿を中空糸膜外面から中空糸膜内腔へ通液させることで血液中Ａβオリゴマを除去するアミロイド−β除去システムであってもよい。この場合、Ａβオリゴマは、中空糸膜外面側において蓄積されるので、中空糸膜外に存在する液を廃棄することが好ましい。
【００３４】
中空糸膜がハウジング内に備えられている形態としては、中空糸膜カラム様の中空糸膜型モジュールとして、筒型のハウジング内に多数本の中空糸膜からなる中空糸膜束として収納されていてもよい。
ハウジングの組成は特に限定されないが、例えば、ポリカーボネート樹脂などが挙げられる。
この場合、中空糸膜束の両端が、ポリウレタン等の樹脂組成物を充填して形成する封止部としての樹脂層部により接着固定（シール）されていてもよい。
本実施形態においては、ハウジングには、ハウジング内に血液を通液させ、排出させるための、血液の注入口と、排出口を供えている。ハウジングの排出口を出た後に血液は混合されてもよく、混合された血液がハウジングの排出口から出てもよい。
【００３５】
このような中空糸膜を備えるモジュール形状としては、例えば、血漿成分分離器における形状と同様の形状とすることができるが、他にも、中空糸膜の好適な孔径は異なるものの、いわゆるダイアライザとして用いられるモジュール（透析カラム）や、特開２００５−５２７１６号、国際公開第２００６／０２４９０２号、国際公開第２００４／０９４０４７号などに記載されているモジュールと同様の形状であってもよく、これらモジュールにおけるハウジングを本実施形態における中空糸膜が収容されたデバイスのハウジングとして用いてもよい。ハウジングとしては、血液透析用カラムに用いられるハウジングを用いてもよく、中空糸膜を備えるモジュールとして、市販の血漿成分分離等において用いられるカラムをそのまま用いてもよい。
【００３６】
本実施形態において、アルブミンの透過率が３〜９６％であることにより、中空糸膜内腔に存在する液中にＡβオリゴマが蓄積する。
中空糸膜内腔に蓄積されるＡβオリゴマは、中空糸膜内腔に存在する液中で濃度が高くなる。したがって、中空糸膜内腔に存在する液の一部を廃棄しながら、血漿を中空糸膜内腔から中空糸膜外面に通液させることで、Ａβオリゴマを効率よく、血漿から除去することができ、ひいては、対象における血液中アルブミン−β濃度を低下させることができる。
本実施形態におけるアミロイド−β除去システムは、血液から分離された血漿が前記デバイスに通液され中空糸膜内腔に存在する液の一部を廃棄しながら、血漿を中空糸膜内腔から中空糸膜外面に通液させて、中空糸膜内腔中に存在する液中にＡβオリゴマが蓄積する、アミロイド−β除去システムであることが好ましい。
本実施形態において、中空糸膜内腔に存在する液の一部の廃棄は、連続して、間欠的に、あるいは終了後に行ってよい。
本実施形態においては、血液から分離された血漿が前記デバイスに通液され中空糸膜内腔に存在する液の一部を廃棄しながら、血漿を中空糸膜内腔から中空糸膜外面に通液させる場合には、
（１）廃棄を連続的に行いながら、血漿を中空糸膜内腔から中空糸膜外面に通液させてもよく、
（２）廃棄を間欠的に行いながら、血漿を中空糸膜内腔から中空糸膜外面に通液させてもよい。
また、本実施形態においては、血液から分離された血漿が前記デバイスに通液され中空糸膜内腔に存在する液の一部の廃棄を、Ａβオリゴマの除去完了後に一度に行ってもよいが、連続して、あるいは間欠的ににかかわらず、中空糸膜内腔に存在する液の一部を廃棄しながら行うことが好適である。
【００３７】
本実施形態のアミロイド−β除去システムは、
血漿の注入口と排出口を備えるハウジングと、
前記注入口からの血液が中空糸膜内腔に流入するように前記ハウジング内に収容される中空糸膜と、および
血漿を前記注入口に連結する血液回路と、を含み、
血漿の一部を中空糸膜内腔から中空糸膜外面へ通液させて、中空糸膜内腔中に存在する液中にＡβオリゴマを蓄積させて除去する、アミロイド−β除去システムであってもよい。
中空糸膜を収容するハウジングが、本実施形態のアミロイド−β除去システムにおける中空糸膜を含むデバイスとして用いられるため、当該ハウジングにおいて、アルブミンの透過率が３〜９６％である。
本実施形態のアミロイド−β除去システムは、流入したのちに中空糸膜内腔から中空糸膜外面へ通液された血漿を返血するための血液回路を備えていてもよい。
当該血液回路は、図２に示すように、アルブミン液や新鮮凍結血漿などの補液を供給する回路と結合していてもよい。
本実施形態におけるアミロイド−β除去システムが血漿分離器を有する場合には、血漿の注入口は、血漿分離器からの回路となっていてもよく、また、血漿分離器からの返血回路と中空糸膜外面へ通液された血漿を返血するための血液回路とが結合していてもよい。
【００３８】
本実施形態においては、血漿を中空糸膜の膜厚方向に通液することにより、デバイスがアルブミンの透過率が３〜９６％であるので、Ａβオリゴマが、中空糸膜内腔に蓄積され、通液された血漿中Ａβオリゴマ濃度が低下する。なお、中空糸膜内腔から中空糸膜外面へ血漿を横断させて、血漿を濾過することで、中空糸膜壁でＡβオリゴマが濾過除去されることを排除するものではない。
【００３９】
本実施形態においては、血漿中のＡβオリゴマを効率よく除去することができるため、Ａβオリゴマと平衡関係にあるＡβの効率的な除去に繋がり、よって、対象の血液中Ａβを効率的に除去できる。したがって、Ａβ引き抜き仮説をも考慮すると、患者において、脳内Ａβの蓄積を減少させアルツハイマー病の治療または予防に有効な手段になると考えられる。
【００４０】
本実施形態において、対象とは、特に限定されないが、脳にＡβが蓄積した、あるいは、蓄積し始めた患者であってもよく、アルツハイマー病を発症している患者であってもよく、アルツハイマー病を発症する前の患者であってもよく、ヒトであることが好ましい。
【００４１】
本実施形態においては、中空糸膜を横断的に膜厚方向に血液を通液することにより、中空糸膜表面（中空糸膜内腔表面および中空糸膜外表面を含む）並びに中空糸膜壁内の細孔での濾過や吸着により、Ａβモノマや、Ａβプロトフィブリルの除去も同時に行うことができればより効率的に血液中アミロイド−βを除去することができる。
【００４２】
本実施形態において、Ａβモノマを吸着しやすい素材からなる中空糸膜を用いれば、血漿を中空糸膜の膜厚方向に誘導することにより、Ａβモノマが、中空糸膜内腔表面だけでなく膜厚方向の表面にも吸着され、血漿中Ａβモノマ濃度が低下することも期待できる。また、中空糸膜内腔から中空糸膜外面へ血漿を濾過させることで、中空糸膜内腔表面または中空糸膜壁内でＡβオリゴマが濾過除去されていてもよい。
そして、中空糸膜内腔を通過した血漿を血漿分離器の返血用の回路と連結して対象へ返血することにより、血液中Ａβモノマおよび血液中Ａβオリゴマを同時に効率的に、すなわち、血液中アミロイド−βを効率的に除去することができる。
【００４３】
本実施形態について図１を参照して以下説明する。
脱血流量（ＱＢ）は２０〜４００ｍＬ／ｍｉｎであり、留置カテーテル設置時は５０〜２００ｍＬ／ｍｉｎであり、通常の１９−１６Ｇ（ゲージ）程度の穿刺針では３０〜６０ｍＬ／ｍｉｎ程度である。
血漿分離器から、Ａβオリゴマ除去器へ送液されてくるＡβオリゴマ含有血漿は、中空糸膜の中空糸膜内腔に通液されるが、中空糸膜内腔へ流入させる血漿流量（ＱＰ）は、脱血流量の３分の１前後、好ましくは７〜１００ｍＬ／ｍｉｎであり、より好ましくは１０〜７０ｍＬ／ｍｉｎである。また、Ａβオリゴマ高含有血漿としての中空糸膜内腔液の廃棄液流量は、０ｍＬ／ｍｉｎでもよいが、好ましくは、中空糸膜内腔に通液される血漿流量の約５分の１〜約３０分の１を連続的にまたは間欠的に廃棄することが、膜の目詰まりを防ぐために好ましい。
廃棄液流量を大きくすると、循環系から早期にＡβオリゴマを廃棄できるので好ましいが、廃棄液量が多くなるとアルブミンや新鮮凍結血漿などの補液が必要となることがある。また、中空糸膜内腔にＡβオリゴマが高度に濃縮されてくる期間（例えば、循環開始２０〜４０分）のみ、廃棄液流量を大きくすることも可能である。
Ａβオリゴマ除去器へ送液されたＡβオリゴマ含有血漿は、中空糸膜外へ濾過され、Ａβオリゴマ低含有血漿として返血される。
これらの、血液流量、血漿流量、廃棄液流量は、図１の各ポンプで制御できるが、圧損回路をＡβオリゴマ除去器の廃棄液側に設置することでも制御できる。
図１においては、特に限定されるものではないが、ポンプ３およびポンプ４を図示しているが、一方により流量制御は可能である。
【００４４】
血漿（本段落では、血漿をも意味する用語として血液を用いる）の流速を維持するデバイスとして、血液ポンプが血液中アミロイド−β除去システムに備えられていてもよい。
血液ポンプは、中空糸膜に血液を連続的に供給することができれば特に限定されないが、例えば、血液浄化装置用のポンプや人工透析装置用のポンプ、独立したペリスタポンプ（ローラーポンプ）などが挙げられる。
また、通常、血液は、中心膜型モジュール等に通液される場合、血液凝固を防ぐために、血液中に抗凝固剤を含有させて通液させるため、抗凝固剤の注入ポンプと、抗凝固剤を血液と混合するチャンバーが設けられていてもよい。
さらに、通液される血液の圧力を測定するための、圧モニターや、返血される血液中の気泡を確認するためのモニターが設けられていてもよく、血液をサンプリングできるようになっていてもよい。
【００４５】
本実施形態のアミロイド−β除去システムにおいては、補液を供給する補液ポンプや、補液を貯蔵する補液タンクなどが設けられていてもよい。
図２においては、特に限定されるものではないが、ポンプ２により、Ａβオリゴマ除去器に入る血漿量（流速）が制御され、ポンプ３により、Ａβオリゴマ除去器から廃棄液量（流速）と返血側にいれる補液量（流速）が同じになるように制御される。
【００４６】
本実施形態においては、血液中のアミロイド−β濃度を低下させる方法を実施することができる。
本実施形態のアミロイド−β濃度を低下させる方法は、
血液（好ましくは、ヒト血液）を体外に脱血する工程
脱血した血液から血漿を分離する工程、および
分離した血漿を、中空糸膜を含み、アルブミンの透過率が３〜９６％であるデバイスの中空糸膜内腔に通液する工程、を含有し、
血漿を中空糸膜内腔から中空糸膜外面に通液することで血液中Ａβオリゴマを除去する、方法である。
本実施形態において、血液中アミロイド−β濃度を低下する方法を実施するにあたっては、本実施形態のアミロイド−β除去システムを用いることが好ましい。
本実施形態においては、中空糸膜外へ濾過された血漿を体内に戻す工程をさらに有することが好ましい。
【００４７】
血液中のアミロイド−β濃濃度を低下させる方法は、血液を体外に脱血し、脱血した血液を中空糸膜に通液し、通液した血液を体内に返血する体外循環を行うことにより実施することができる。
かかる一連の工程は、いわゆる人工透析や血液ろ過などの血液浄化技術に類似する方法ではあるが、人工透析や血液ろ過では、中空糸外へ通過した血漿成分は廃棄し、中空糸内腔の液は体内に戻す。一方、本実施形態では、中空糸膜内腔に存在する液は廃棄し、中空糸膜外へ通過した血漿成分は体内へ戻すことが好適である。
回路として、患者の血液を体外循環させるべく可撓性チューブから成る血液回路が使用される。
体外循環を行うための血液回路は、一般に、患者から血液を採取する動脈側穿刺針またはカテーテルが先端に取り付けられた動脈側血液回路と、患者に血液を戻す静脈側穿刺針またはカテーテルが先端に取り付けられた静脈側血液回路と、動脈側血液回路と静脈側血液回路との間に中空糸膜とを備える。
本実施形態においては、血漿分離器を備えることが好適であるので、図１に例示されるような回路を有していることが好適である。
動脈側血液回路、血漿分離器、Ａβオリゴマ除去器、必要に応じて補液、必要に応じて他のデバイスなどおよび静脈側血液回路は、可撓性チューブで連結されており、患者から脱血された血液は、可撓性チューブ内を通液され、血漿分離器を介して、Ａβオリゴマ除去器の中空糸膜に血漿として接触させられる。
すなわち、血液は、動脈側血液回路より、患者体内より体外へ脱血されて、血液回路内に導入され、血液回路内の可撓性チューブを通り、血漿分離器へ通液される。血漿分離器により、血液は血漿として分離され、Ａβオリゴマ除去器の中空糸膜へ通液される。通液された血漿中のＡβオリゴマは中空糸膜内腔から中空糸膜外面へと通液させられることで、中空糸膜内腔を通過せず、中空糸膜内腔に蓄積され、中空糸膜を通液後の血漿中のＡβオリゴマ濃度が、すなわち、血液中アミロイド−β濃度が低下する。中空糸内腔液は廃棄する。
本実施形態においては、Ａβオリゴマのみならず、プロトフィブリルなども効率よく除去することができるため、また、Ａβオリゴマ除去器の中空糸膜の素材をポリスルホンやポリエーテルスルホン、ポリアクリロニトリル、ポリメチルメタアクリレート、ポリエーテルスルホンポリアリレートポリマーアロイなどとした場合にはＡβモノマも効率よく除去できて、血液中のアミロイド−βを効率よく除去することができる。それにより、血液中のアミロイド−β濃度を低下させる方法として提供される。
中空糸膜より通液されて出てきた血漿は、血液中アミロイド−β濃度が低下した血漿として、静脈側血液回路より、患者体外から体内へ返血される。
【００４８】
本実施形態の血液中のアミロイド−β濃度を低下させる方法は、対象に、好適には、アルツハイマー病患者に適用されることにより、アルツハイマー病患者における血液中のアミロイド−β濃度を低下させることができる。また、アルツハイマー病の予備軍ともいうべき、アルツハイマー病の症状は発症していないものの脳にＡβが蓄積しはじめた、病理学的にはアルツハイマー病患者と分類することができるような患者において、血液中のアミロイド−β濃度を低下させてもよい。
アルツハイマー病患者または予備軍患者としては、体外循環を行うことができる患者であれば、特に限定されるものではない。また、本実施形態の血液中のアミロイド−β濃度を低下させる方法は、アルツハイマー病を未発症の患者に適用することにより、アルツハイマー病の発症を予防する方法として用いることもできる。
【００４９】
本実施形態においては、除去されるＡβオリゴマは、好ましくは、血液中にＡβモノマのみからなる凝集体として存在していてもよく、アルブミンやＬＤＬといった血液中の成分と結合して存在するものであってもよい。
【００５０】
本実施形態においては、血液中Ａβモノマを除去するためのシステムをさらに備えることが好ましい。
血液中Ａβモノマを除去するためのシステムとしては、特許文献１〜３に記載されるシステム等が挙げられる。
【００５１】
本実施形態においては、血漿中のＡβオリゴマ濃度を低下させることにより、血液中のアミロイド−β濃度を減少させることができ、ひいては、引き抜き仮説等に鑑みれば、アルツハイマー病の治療または予防する方法を提供することもできる。アルツハイマー病の治療または予防する方法において、本実施形態におけるアミロイド−β除去システムを用いてもよい。
本実施形態においては、アルツハイマー病の治療または予防する方法として、それを必要とする対象（好ましくは、ヒト）のアルツハイマー病を治療または予防する方法であって、
対象の血液を体外に脱血する工程、
脱血した血液から血漿を分離する工程、および
分離した血漿を、中空糸膜を含み、アルブミンの透過率が３〜９６％であるデバイスの中空糸膜内腔に通液する工程を含有し、
血漿を中空糸膜内腔から中空糸膜外面に通液することで血液中Ａβオリゴマを除去して、血液中アミロイド−β濃度を低下することにより、それを必要とする対象のアルツハイマー病を治療または予防する方法であってよい。
【実施例】
【００５２】
以下、本実施形態を実施例および比較例によってさらに具体的に説明するが、本実施形態はこれらの実施例のみに限定されるものではない。
【００５３】
実施例１  ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのＡβオリゴマ除去
アルブミンの透過率が約３５％であるＥＣ２０Ｗ（エチレンビニルアルコール共重合体（ＥＶＡＬ）素材の中空糸デバイス。旭化成メディカル社製カスケードフローＥＣ−２０Ｗ）（ｎ＝３）、または、アルブミンの透過率が約９０％であるＥＣ５０Ｗ（ＥＶＡＬ素材の中空糸デバイス。旭化成メディカル社製カスケードフローＥＣ−５０Ｗ）（ｎ＝６）を用いて、さらに、血液透析用回路（日機装社製）を用いてｉｎ  ｖｉｔｒｏのＡβオリゴマ除去システムを図３の如く構成した。血漿ポンプにはＣｏｌｅ  Ｐａｒｍｅｒ  ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ社製ＭＡＳＴＥＲ  ＦＬＥＸ（７５１８−１０）を用いた。
Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｅｌｉｘ純水９００ｍＬを用い回路内のエアー抜きと、中空糸膜内腔および中空糸膜外面の洗浄を行い（まずＲ点から純水を廃棄したのち、Ｒ点を閉としてＦ点から純水を廃棄した）、カルシウム不含リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）（ｐＨ７．２）１５０ｍＬを流速５０ｍＬ／ｍｉｎで流して、通液したＰＢＳをＲ点から廃棄することで、中空糸内腔を洗浄した。ついで、Ｒ点をクランプで閉とし、ＰＢＳをＰｏｏｌ液として、回路内に流速５０ｍＬ／ｍｉｎで５分間循環させた。非特異吸着などを避けるために、さらに５分間循環させた。５ｍｇ／ｍＬに調整したウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）（和光純薬工業製・グロブリン不含生化学用）を含有するＰＢＳ溶液（ＢＳＡ／ＰＢＳ溶液）３００ｍＬを流速５０ｍＬ／ｍｉｎで流して、通液したＢＳＡ／ＰＢＳ溶液をＦ点から廃棄した後、Ｆ点からＢＳＡ／ＰＢＳ溶液をＰｏｏｌに戻すように変えて、５分間回路内を循環させた。ついで、患者に同意を得て採取した血漿交換療法のヒト廃血漿４５０ｍＬをＰｏｏｌ液として、回路内に流速５０ｍＬ／ｍｉｎで２００ｍＬ流して、通液したヒト廃血漿をＦ点から廃棄することで、回路内をヒト廃血漿で置換した。なお、ヒト廃血漿中に、Ａβオリゴマを含むことは、事前に確認した。
この時点を０分として、残った２５０ｍＬのヒト廃血漿を流速５０ｍＬ／ｍｉｎで流して、Ｆ点からＰＢＳ溶液をＰｏｏｌに戻して循環させた。図３に示した各採取ポイントにて、０、１５、３０、６０分時点でサンプリングを行った。６０分経過後、ポンプを停止し、中空糸デバイスの血漿入口（Ｐｒｅ側）から回路をはずし、中空糸デバイスのＲ点から５０ｍＬシリンジで中空糸内腔内の残留液を取り出し、残留液量を測定した。
残留液中のＡβ1-40はｈｕｍａｎβａｍｙｌｏｉｄ（１−４０）ＥＬＩＳＡ  ｋｉｔ  ＷａｋｏＩＩ（和光純薬）、Ａβ1-42はｈｕｍａｎβａｍｙｌｏｉｄ（１−４２）ＥＬＩＳＡ  ｋｉｔ  ｈｉｇｈ  ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ（和光純薬）、Ａβオリゴマは  Ｈｕｍａｎ  Ａｍｙｌｏｉｄβ  Ｏｌｉｇｏｍｅｒｓ  （８２Ｅ１−ｓｐｅｃｉｆｉｃ）  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ−ＩＢＬ（免疫生物研究所）を用いて測定し、アルブミンはＳＲＬ社へ測定委託した。
【００５４】
Ｐｏｏｌ内ヒト廃血漿中の各濃度変化を図４に示す。Ａβ1-40、Ａβ1-42は循環初期にやや低下するが１５分以降は濃度が下がらない。循環初期の濃度低下は、残留ＢＳＡ／ＰＢＳ溶液による希釈の影響が否定できない。一方、Ａβオリゴマは、０分の２０％から１５分の時点で０％にまで低下した。２５０ｍＬのヒト廃血漿を、流速５０ｍＬ／ｍｉｎで循環させているので、２５０ｍＬのヒト廃血漿は１５分で全量が中空糸デバイスを十分通過しているため、中空糸によりＡβオリゴマが除去されたと考えられる。
中空糸内腔に各物質がどれくらい濃縮されたかを図５および図６に示す。ＥＣ２０Ｗでは、Ａβ1-40は、６０分時点でのＰｏｏｌ内ヒト廃血漿中濃度と中空糸内腔中濃度はほぼ同じであり、中空糸内腔に濃縮はされていなかった。一方、Ａβ1-42では２倍程度、アルブミンでは３倍程度中空糸内腔に濃縮された。Ａβオリゴマでは約１０倍に濃縮された。０分時点でのＰｏｏｌ内ヒト廃血漿中濃度と比べても６０分時点での中空糸内腔中濃度は２倍程度濃縮されていた。分子量が約４５００ＤａであるＡβ1-42は、単独のモノマのままではＥＣ２０Ｗの細孔径に比べ小さいためＥＣ２０Ｗで除去されないが、血漿中に存在するアルブミンと結合して中空糸内腔への濃縮が起こったと考えることも可能である。
ＥＣ５０Ｗでは、Ａβ1-40もＡβ1-42も、６０分時点でのＰｏｏｌ内ヒト廃血漿中濃度と中空糸内腔中濃度はほぼ同じであった。アルブミンでは１．２倍程度中空糸内腔に濃縮された。Ａβオリゴマでは約３０倍に濃縮された。０分時点でのＰｏｏｌ内ヒト廃血漿中濃度と比べても中空糸内は６倍程度に濃縮されていた。
さらに、Ｐｏｏｌ内ヒト廃血漿、回路容量、中空糸内腔液などの体積と濃度から、各物質のｉｎ  ｖｉｔｒｏでのＡβオリゴマ除去実験の施行前後のマスバランスを解析した結果を図７および図８に示す。各物質の絶対量を、０時間でのＰｏｏｌ内ヒト廃血漿中濃度を１００％として、６０分後でのＰｏｏｌ内ヒト廃血漿中濃度および中空糸内腔中濃度と比較を行った。
【００５５】
ＥＣ２０Ｗでは、Ａβ1-40は、６０分後のＰｏｓｔ時点でのＰｏｏｌ液と中空糸膜内（Ｒ）にほぼ１：１で分布しているが、Ａβ1-42は６０分後のＰｏｓｔ時点でのＰｏｏｌ液中量の約２．５倍量が中空糸膜内腔に捕捉された。Ａβオリゴマは、６０分後のＰｏｓｔ時点でのＰｏｏｌ液中量のほぼ約１０倍量が中空糸膜内腔に捕捉された。施行前のＰｏｏｌ液中に存在していたＡβオリゴマの大半が、６０分の施行後には中空糸膜内腔に捕捉されていた。中空糸膜内腔液は実際の患者血液浄化では廃棄するので、ＥＣ２０Ｗでは、施行前血液に存在したＡβオリゴマの９１％が除去廃棄されることになる。アルブミンはＰｏｏｌ中の３倍程度量が中空糸膜内腔に捕捉された。
一方、ＥＣ５０Ｗでは、Ａβ1-40は６０分後のＰｏｓｔ時点でのＰｏｏｌ中の１．４倍程度量が中空糸膜内に捕捉され、Ａβ1-42は６０分後のＰｏｓｔ時点でのＰｏｏｌ中の２倍程度量が中空糸膜内に捕捉された。Ａβオリゴマは６０分後のＰｏｓｔ時点でのＰｏｏｌ中の１２倍程度量が中空糸膜内に捕捉された。施行前のＰｏｏｌ液中に存在していたＡβオリゴマの大半が、６０分の施行後には中空糸膜内腔に捕捉されていた。中空糸膜内腔液は実際の患者血液浄化では廃棄するので、ＥＣ５０Ｗでは、施行前血液に存在したＡβオリゴマの９２％が除去廃棄されることになる。アルブミンはＰｏｏｌ中の２倍程度量が中空糸膜内腔に捕捉された。
Ａβ1-40、Ａβ1-42は、施行開始前の絶対量から施行後（Ｐｏｏｌと中空糸膜内腔合計）には若干減少しているようにみえるが、これはモノマが回路に吸着したものと考えられる。モノマからオリゴマの移行の可能性については、Ａβオリゴマの絶対量がほとんど増えていないことから否定できる。
【００５６】
実施例２  ヒトでの二重濾過膜血漿交換療法（ＤＦＰＰ）によるＡβオリゴマ除去
生体間腎移植を目的として、エチレン−ビニルアルコール共重合体（ＥＶＡＬ）製膜型血漿成分分画器（エバフラックス２Ａ２０  川澄化学工業社製。実施例１記載のＥＣ−２０Ｗと同等のポアサイズを持つ。アルブミンの透過率は約３５％）を用いた二重濾過膜血漿交換療法（ＤＦＰＰ）を３回（Ｄａｙ１、３、６）施行した。
血漿分離器には、プラズマフローＯＰ−０８Ｗ（旭化成メディカル社）を用い、血液浄化装置には旭化成メディカル社製ＡＣＨ−Σを用いた。施行条件と回路構成を表１および図２に示す。
【００５７】
【表１】
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【００５８】
表１中、
ＢＰＩ；  患者から脱血する血液流量
ＢＰＩＩ；血漿分離器（プラズマフローＯＰ）から血漿成分分離器（エバフラックス２Ａ２０）へ流入する血漿流量
ＢＰＩＩＩ；血漿成分分離器（エバフラックス２Ａ２０）中空糸内腔から廃棄する血漿流量
をそれぞれ表す。
【００５９】
各施行日において、ＤＦＰＰ施行前（０分）、６０分、終了時（９０分）に血液回路脱血側（施行前に関してはバスキュラーアクセスから）よりシリンジで各３ｍＬ、血漿用真空採血管（ＥＤＴＡ−２Ｋ）にサンプリングを行い、４℃の冷蔵庫に保管、採取から２時間以内に遠心分離を行ない、得られた血漿を１．５ｍＬチューブに分注して−８０℃の冷凍庫で保管した。
Ａβ1-40、Ａβ1-42、Ａβオリゴマは、実施例１と同様にＥＬＩＳＡキットを用いて測定した。結果を図９および図１０に示す。
９０分間のＤＦＰＰでＡβ1-40、Ａβ1-42はどちらも血中濃度はほとんど変わらなかった。一方、Ａβオリゴマは、ＤＦＰＰ終了時点でＤａｙ１、３、６ともほぼゼロ（検出限界以下）になった。すなわち、Ａβオリゴマは、本発明の中空糸デバイスで極めて効率よくヒト循環血から除去された。
さらに、Ｄａｙ１、３、６間の血中Ａβオリゴマ濃度の推移をみると、Ｄａｙ１の９０分間のＤＦＰＰ施行後で血中濃度がゼロとなったが、Ｄａｙ３のＤＦＰＰ開始時には、Ｄａｙ１開始時の１５７％に大きく増加していた。これはＤａｙ１のＤＦＰＰでＡβオリゴマが血液中から減少したことにより、Ａβオリゴマ含有臓器（おそらく脳）と血液とのＡβオリゴマの濃度差が大きくなり、Ａβオリゴマが脳から血液へ湧き出す（移行する）可能性を示唆している。血中に存在するＡβモノマが結合しＡβオリゴマを形成しているためとも考えられなくはないが、Ａβモノマの濃度はＤａｙ１からＤａｙ６の３回のＤＦＰＰで大きな変化はなかったので、この考えはほぼ否定できよう。また、Ｄａｙ３、Ｄａｙ６では６０分時点のサンプルで血中Ａβオリゴマ濃度がゼロとなっており、血中Ａβオリゴマの除去速度が速くなっていることが示唆された。３日後のＤａｙ６でのＤＦＰＰ開始時の血中Ａβオリゴマ濃度はＤａｙ１ＤＦＰＰ開始時の３９％で、Ｄａｙ１施行終了時からＤａｙ３施行開始時の増加率に比べ、１／４程度しか増加しておらず、こちらもＤａｙ３と同様に６０分時点のサンプルで血中濃度はゼロとなっていた。Ｄａｙ３からＤａｙ６の間での血中濃度の増加が少なかったのは、Ａβオリゴマ含有臓器（おそらく脳）に存在していたＡβオリゴマが、Ｄａｙ１とＤａｙ３のＤＦＰＰによって除去され、血液中への湧き出し量が減少したためだと考えることができる。
【００６０】
実施例３  Ａβモノマ除去デバイスとしてＨＤＣ（ヘキサデシル基結合セルロース）ビーズを用い、Ａβオリゴマ除去デバイスとしてＥＣ５０Ｗを用いた、Ａβモノマ・オリゴマ同時除去システム
Ａβモノマ除去デバイスとして、市販のＨＤＣ（リクセル（登録商標）、カネカ社製）であるＳ−２５を解体し、中のＨＤＣビーズを取り出して純水で洗浄した。このＨＤＣ６６ｍＬを５０ｍＬ用のシリンジ（テルモ社）に充填して、ＨＤＣミニカラムを作成した。ミニカラム中のＨＤＣ量は、使用する血漿量６００ｍＬを勘案して決定した。すなわち、ヒト臨床で体重６５ｋｇの患者の全血は５Ｌであり、ヘマトクリットを４０％と仮定すると３０００ｍＬが血漿量となる。この患者に市販の３５０ｍＬ入りＨＤＣカラムを使用することを想定すると、血漿６００ｍＬではＨＤＣは７０ｍＬとなるが、５０ｍＬシリンジに最大量ＨＤＣを充填しても６６ｍＬだったので、本実施例ではＨＤＣを６６ｍＬとした。
実際のヒトでの施行では、ＨＤＣは全血で流すので、それを模して、Ｐｏｏｌからの血漿流量を３０ｍＬ／ｍｉｎ（ヘマトクリット値を４０％とすると、全血での血液流量５０ｍＬ／ｍｉｎに相当）とし、ＨＤＣ出口からの血漿を１５ｍＬ／ｍｉｎでＥＣ５０Ｗへ流入させ、ＨＤＣ出口からの残りの１５ｍＬ／ｍｉｎはそのままＰｏｏｌへ戻した。
実際のヒトＤＦＰＰと同様に、ＥＣ５０Ｗの中空糸内腔出口から、ペリスタポンプ（ＳＪ−１２１１  ＩＩ  −Ｌ、ＡＴＴＯ社）で１ｍＬ／ｍｉｎで中空糸内腔液を廃棄しつつ（排液）、残りの１４ｍＬ／ｍｉｎは中空糸膜内腔から中空糸膜外面へ通過させたのちＰｏｏｌへ戻した。回路を図１１に示す。サンプリング箇所は図１１の丸数字の１から６で、０、５、１０、３０、６０、７５ｍｉｎでサンプリングを行った。また、循環するＰｏｏｌのヒト血漿量は６００ｍＬとした。それ以外は実施例１と同様に施行した。施行時間は、３０分で終了したもの、６０分で終了したもの、３０分以降のＰｏｏｌからの血漿流量を２０ｍＬ／ｍｉｎに減少させて７５分行ったもの（これのみ同一実験を２回実施）の３通りであった。施行開始から３０分までは、同一条件で４回施行したことになる。
施行した結果のＰｏｏｌ濃度推移の平均値（０分の濃度を１００％として表記）を図１２に示す。アルブミンは、初期の回路内残留ＰＢＳによる希釈の影響か、少し濃度が低下するが、その後は一定であった。一方、Ａβ1-40およびＡβ1-42もＡβオリゴマも効率よく除去された。すなわち、３０分の施行時点で０分の濃度に比べていずれも有意に（ｐ＜０．００１）低下し、施行継続とともにさらに低下した。なお、ＨＤＣは全血漿流を処理しているが、ＥＣ５０Ｗはその半量処理ゆえ、Ａβオリゴマの減少カーブはＡβモノマに比べて緩やかになる。
また、ＥＣ５０Ｗからの排液（図１１の丸数字４）のＡβオリゴマ濃度は、開始時のＰｏｏｌ液が６４ｐｍｏｌ／Ｌであったのが、３０分時点では１８８ｐｍｏｌ／Ｌとなり、ＥＣ５０Ｗの中空糸内に濃縮され除去（廃棄）されていることがわかる。
ＨＤＣカラムの入口・出口（カラム前後）のＡβ1-40除去率は施行時間を通して６０〜８０％であり、カラム前後のＡβ1-42除去率は６０〜７０％であったが、Ａβオリゴマのカラム前後の除去率は、施行時間を通して１９から２７％程度と低かった。
【００６１】
実施例４  Ａβモノマ除去デバイスとしてダイアライザを用い、Ａβオリゴマ除去デバイスとしてＥＣ５０Ｗを用いた、Ａβモノマ・オリゴマ同時除去システム
Ａβモノマ除去デバイスとして、市販のポリスルホン素材のダイアライザ（膜面積１．１ｍ2のＡＰＳ１１ＥＡ、旭化成メディカル社）をそのまま用いた。ダイアライザでは３ｍＬ／ｍｉｎの濾過流量で、中空糸内腔へのＡβ吸着を促進する濾過吸着を行った。このダイアライザの濾液はＰｏｏｌに戻さず廃棄した。回路を図１３に示した。それ以外は、実施例３と同様にＡβモノマ・オリゴマ同時除去を行った。
ヒト臨床で体重６５ｋｇの患者の全血は５Ｌであり、ヘマトクリットを４０％と仮定すると３０００ｍＬが血漿量となる。この患者に市販の膜面積２．１ｍ2のポリスルホン素材のダイアライザＡＰＳ２１ＥＡを使用することを想定すると、血漿６００ｍＬでは膜面積は０．４ｍ2程度となるが、このような膜面積のものは入手できなかったので、入手可能な最少膜面積１．１ｍ2のＡＰＳ１１ＥＡを使用した。よって、Ａβモノマ除去用としては、ヒトでの想定デバイスのほぼ３倍程度の膜面積を使用したことになる。よって、４０分間施行した結果（ｎ＝３）のＰｏｏｌ濃度推移の平均値（施行前のＰｏｏｌ中の濃度を１００％として表記）は、Ａβ1-40は３．５±０．４（ＳＤ）％、Ａβ1-42は６．５±３．４％、Ａβオリゴマは２４．４±１３．０％と減少していた。
また、施行開始直前のＰｏｏｌ液中のＡβオリゴマ濃度は平均４６ｐｍｏｌ／Ｌであったが、施行４０分時点のＥＣ５０Ｗからの排液（図１３の丸数字の１）のＡβオリゴマ濃度は、平均１１８ｐｍｏｌ／Ｌとなり、ＥＣ５０Ｗの中空糸内に濃縮され除去（廃棄）されていることがわかる。
ダイアライザＡＰＳの入口・出口（カラム前後）のＡβ1-40除去率は施行時間を通して９４〜６７％であり、カラム前後のＡβ1-42除去率は８５〜７６％であったが、Ａβオリゴマのカラム前後の除去率は、０．９〜８．２％程度と低かった。
【産業上の利用可能性】
【００６２】
本発明のアミロイド−β除去システムにより血液中Ａβオリゴマ濃度を減少させることができるので、本発明のアミロイド−β除去システムはアルツハイマー病の治療または予防に有効である可能性がある。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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