(57)【要約】【課題】生体中のＯＰＨ（酸化蛋白質分解酵素）の活性を増強させることは、酸化蛋白質や糖化蛋白質、いわゆる老化蛋白質などの分解を促進し、老化や疾患を予防・治療できる可能性がある。そこで、ＯＰＨの活性を増強するＯＰＨ活性増強剤を提供することを課題とする。【解決手段】上記課題を解決するために、ユキノシタ、ウメ、トウキ、ウンシュウミカン、マンダリンオレンジ、ヒラミレモン、タチバナ、カワラケツメイ、トウゲシバ、ラカンカの抽出物のいずれか１種類以上を有効成分として含有するＯＰＨ活性増強剤を提供する。また、かかるＯＰＨ活性増強剤を含有することを特徴とするＯＰＨ活性増強用の食品、食品添加物、医薬品、医薬部外品及び化粧品などを提供する。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ユキノシタ、ウメ、トウキ、カワラケツメイ、ウンシュウミカン、マンダリンオレンジ、ヒラミレモン、タチバナ、トウゲシバ、ラカンカの抽出物のいずれか１種類以上を有効成分として含有するＯＰＨ活性増強剤。
【請求項２】
請求項１に記載のＯＰＨ活性増強剤を含有することを特徴とする、ＯＰＨ活性増強用食品。
【請求項３】
請求項１に記載のＯＰＨ活性増強剤を含有することを特徴とする、ＯＰＨ活性増強用食品添加物。
【請求項４】
請求項１に記載のＯＰＨ活性増強剤を含有することを特徴とする、ＯＰＨ活性増強用医薬品。
【請求項５】
請求項１に記載のＯＰＨ活性増強剤を含有することを特徴とする、ＯＰＨ活性増強用医薬部外品。
【請求項６】
請求項１に記載のＯＰＨ活性増強剤を含有することを特徴とする、ＯＰＨ活性増強用化粧品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、酸化蛋白質を分解する生体内酵素である酸化蛋白質分解酵素（ｏｘｉｄｉｚｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｈｙｄｒｏｌａｓｅ：ＯＰＨ）の活性を増強させるＯＰＨ活性増強剤、及び、当該ＯＰＨ活性増強剤を含有する飲食品や医薬品などに関する。
【背景技術】
【０００２】
ＯＰＨは、蛋白のＮ末端アシル化アミノ酸を遊離するセリンプロテアーゼの一種で、アシルアミノ酸遊離酵素（ａｃｙｌａｍｉｎｏ−Ａｃｉｄ Ｒｅｌｅａｓｉｎｇ Ｅｎｚｙｍｅ：ＡＡＲＥ）、アシル化ペプチド分解酵素（ａｃｙｌｐｅｐｔｉｄｅ ｈｙｄｒｏｌａｓｅ：ＡＰＨ）などとも言われている。また、ＯＰＨは、アシル化だけでなく、ホルミル化（Ｆｏｒｍｙｌ）、アセチル化（Ａｃｅｔｙｌ）、ブチル化（Ｂｕｔｙｌ）、プロピル化（Ｐｒｏｐｙｌ）された蛋白質のＮ末端アミノ酸に対しても作用する。
【０００３】
ＯＰＨはブタ肝臓、ラット脳、ヒト血液、角層などの生体組織に広く存在している。ＯＰＨは酸化蛋白質や糖化蛋白質を優先的に分解するとともにプロテアソームと協働して老化蛋白質を分解すること、アルツハイマー病の原因であるアミロイドβ蛋白質を減少させることが報告されている。またＯＰＨがＡＧＥｓ（終末糖化産物）を分解することも確認されている。これらのことから生体中のＯＰＨの活性を増強させることは、老化蛋白質の分解を促進し、老化や疾患を予防・治療できる可能性がある（特許文献１）。
【０００４】
また、ＯＰＨには血中の有機リン系農薬の分解作用（非特許文献１）や、前立腺がんの抑制作用（非特許文献２）、眼レンズ水晶体物質であるクリスタリンの重合抑制作用（非特許文献３）、骨髄腫の抑制作用（非特許文献４）、農薬（クロルフィリホス）による細胞死の抑制（非特許文献５）などがあることも報告されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】国際公開番号ＷＯ２０１１／００４７３３
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Gary B. Quistad, Rebecka Klintenberg, and John E. Casida,  Blood acylpeptide hydrolase activity is a sensitive marker for exposure to some organophosphate toxicants. TOXICOLOGICAL SCIENCES 86(2), 291-299 (2005)
【非特許文献２】Christopher A McGoldrick1, Yu-Lin Jiang, Victor Paromov, Marianne Brannon, Koyamangalath Krishnan and William L Stone,  Identification of oxidized protein hydrolase as apotential prodrug target in prostate cancer. http://www.biomedcentral.com/1471-2407/14/77
【非特許文献３】R. Senthilkumar, P. Neelakanta Reddy AND K. Krishna Sharma,  Studies on trypsin-modified bovine and human lens acylpeptide hydrolase. Exp. Eye Res. (2001) 72, 301±310
【非特許文献４】Rosanna Palumbo, Marta Gogliettino , Ennio Cocca, Roberta Iannitti, Annamaria Sandomenico, Menotti Ruvo, Marco Balestrieri, Mose Rossi and Gianna Palmieri,  APEH inhibition affects osteosarcoma cell viability via downregulation of the proteasome. Int. J. Mol. Sci. 2016, 17, 1614
【非特許文献５】Diana Cardona, Caridad Lopez-Granero, Fernando Canadas, Jordi Llorens, Pilar Flores, Floria Pancetti and Fernando Sanchez-Santed,  Does-dependent regional brain acetylcholinesterase and acylpeptide hydrolase inhibition without cell death after chlorpyrifos administration. The Journal of Toxicological Sciences Vol.38, No.2, 193-203, 2013
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
上記の事情を鑑み、本発明は、ＯＰＨの活性を増強させるＯＰＨ活性増強剤を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
上記課題を解決するための手段として、以下の発明などを提供する。すなわち、ユキノシタ、ウメ、トウキ、カワラケツメイ、ウンシュウミカン、マンダリンオレンジ、ヒラミレモン、タチバナ、トウゲシバ、ラカンカのいずれか一種類以上を有効成分として含有するＯＰＨ活性増強剤を提供する。
【０００９】
また、前記いずれか一のＯＰＨ活性増強剤を含有することを特徴とする、ＯＰＨ活性増強用食品、ＯＰＨ活性増強用食品添加物、ＯＰＨ活性増強用医薬品、ＯＰＨ活性増強用医薬部外品及びＯＰＨ活性増強用化粧品を提供する。
【００１０】
本発明により、酸化蛋白質を分解する生体内酵素であるＯＰＨの活性を増強させるＯＰＨ活性増強剤などを提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】各試料のＯＰＨ活性増強作用を示す表
【発明を実施するための形態】
【００１２】
以下、本発明の実施例について説明する。なお、本発明は、これらの実施例に何ら限定されるべきものではなく、その要旨を逸脱しない範囲において、種々なる態様で実施し得る。
＜実施形態＞
＜構成＞
【００１３】
本実施例に係るＯＰＨ活性増強剤は、ユキノシタ、ウメ、トウキ、カワラケツメイ、ウンシュウミカン、マンダリンオレンジ、ヒラミレモン、タチバナ、トウゲシバ、ラカンカの抽出物のいずれか１種類以上を有効成分として含有するＯＰＨ活性増強剤である。「ＯＰＨ活性増強剤」とは、酸化蛋白質の分解酵素であるＯＰＨの酸化蛋白質分解活性（以下、単にＯＰＨ活性）を増強させる剤を意味する。
【００１４】
本実施形態における植物の抽出物は、植物のどの部位から抽出したものであってもよく、例えば、全草、花、種子、果実、果皮、枝、茎、葉、樹皮、根などから抽出したものであってよい。また、抽出物の性状を限定するものではない。以下に、本実施形態における各植物について説明する。
【００１５】
また、抽出の方法は特段限定されず、溶媒抽出、蒸留、圧搾などの既知の方法を採用することができる。溶媒についても水や湯の他、エタノール、メタノール、ブチレングリコールなどを用いることができる。
【００１６】
「ユキノシタ（Ｓａｘｉｆｒａｇａ  ｓｔｏｌｏｎｉｆｅｒａ）」は、ユキノシタ科ユキノシタ属の植物である。ユキノシタの抽出物は、全草、花、種子、果実、果皮、枝、茎、葉、樹皮、根のいずれから抽出したものでよい。
【００１７】
「ウメ（Ｐｒｕｎｕｓ  ｍｕｍｅ）」は、バラ科サクラ属の植物である。ウメの抽出物は、全草、花、種子、果実、果皮、枝、茎、葉、樹皮、根のいずれから抽出したものでよい。
【００１８】
「トウキ（Ａｎｇｅｌｉｃａ  ａｃｕｔｉｌｏｂａ）」は、セリ科シシウド属の植物である。トウキの抽出物は、全草、花、種子、果実、果皮、枝、茎、葉、樹皮、根のいずれから抽出したものでよい。
【００１９】
「カワラケツメイ（Ｃｈａｍａｅｃｒｉｓｔａ  ｎｏｍａｍｅ）」は、マメ科カワラケツメイ属の植物である。カワラケツメイの抽出物は、全草、花、種子、果実、果皮、枝、茎、葉、樹皮、根のいずれから抽出したものでよいが、好ましくは茎と葉からの抽出物である。なお、カワラケツメイ茶はハマ茶とも称されている。
【００２０】
「ウンシュウミカン（Ｃｉｔｒｕｓ  ｕｎｓｈｉｕ  Ｍａｒｋｏｖｉｃｈ）」は、ミカン科ミカン属の植物である。ウンシュウミカンの抽出物は、全草、花、種子、果実、果皮、枝、茎、葉、樹皮、根のいずれから抽出したものでよい。
【００２１】
「マンダリンオレンジ（Ｃｉｔｒｕｓ  ｒｅｔｉｃｕｌａｔａ）」は、ミカン科ミカン属の植物である。マンダリンオレンジの抽出物は、全草、花、種子、果実、果皮、枝、茎、葉、樹皮、根のいずれから抽出したものでよい。
【００２２】
「ヒラミレモン（Ｃｉｔｒｕｓ  ｄｅｐｒｅｓｓａ）」は、ミカン科ミカン属の植物であり「シークヮーサー」の名で知られている。ヒラミレモンの抽出物は、全草、花、種子、果実、果皮、枝、茎、葉、樹皮、根のいずれから抽出したものでよい。
【００２３】
「タチバナ（Ｃｉｔｒｕｓ  ｔａｃｈｉｂａｎａ）」は、ミカン科ミカン属の植物である。タチバナの抽出物は、全草、花、種子、果実、果皮、枝、茎、葉、樹皮、根のいずれから抽出したものでよい。
【００２４】
「トウゲシバ（Ｈｕｐｅｒｚｉａ  ｓｅｒｒａｔａ）」は、ヒカゲノカズラ科ヒカゲノカズラ属の植物である。トウゲシバの抽出物は、全草、花、種子、果実、果皮、枝、茎、葉、樹皮、根のいずれから抽出したものでよい。
【００２５】
「ラカンカ（Ｓｉｒａｉｔｉａ  ｇｒｏｓｖｅｎｏｒｉｉ）」は、ウリ科ラカンカ属の植物である。ラカンカの抽出物は、全草、花、種子、果実、果皮、枝、茎、葉、樹皮、根のいずれから抽出したものでよい。
【００２６】
本実施例におけるＯＰＨ活性増強剤は、さらに既知の方法を用いることにより、当該ＯＰＨ活性増強剤を含有する食品、食品添加物、医薬品、医薬部外品、化粧品などとして提供することが可能である。
【００２７】
例えば、医薬品とする場合には、本実施例のＯＰＨ活性増強剤を粉体や粒体としカプセルに充填したり、あるいは、賦形剤、結合剤、崩壊剤などを添加して打錠機等を用いて製造することができる。また、食品とする場合には、各植物を適宜乾燥や破砕をし、湯で煮出すことで提供できる。また、医薬品のようにカプセルや錠剤のような形態に整形して食品として提供してもよいし、他の飲料、調味料、菓子等の各種の食品にＯＰＨ活性増強剤を添加した態様で提供することもできる。
【００２８】
また、美容液、クリーム、ローションなどの化粧品とすることもできる。例えば、美容液とする場合には、本実施例のＯＰＨ活性増強剤の他、水、コメヌカ油、ペンチレングリコール、グリセリン、スクワラン、パルミチン酸セチル、ダイマージリノール酸などを主成分とし、ヒアルロン酸Ｎａ、水添ナタネ油アルコール、カルボマー、キサンタンガム、水酸化カリウム、ジメチコン、ポリソルベート−６０、ステアリン酸グリセリル、水添ヒマシ油、フェノキシエタノール、尿素、アルギニン、アルブチン、クエン酸などを添加剤とする。そして、各成分を水溶性原料・油溶性原料に分けて溶解してから、それらを加熱して混合・乳化する。これを冷却しながらエキスなどの添加物を配合し、さらに低温になったところで精油や香料などの揮発性の高いものを添加する。その後、所定の安全性の検査（菌、ｐＨ、温度安定性、粘度等）を行い、瓶などに充填して製品として提供することができる。
＜試験＞
【００２９】
本試験において、上記各植物の抽出物のＯＰＨ活性の増強作用について測定する。本測定ではＯＰＨとその反応基質であるＮ−ａｃｅｔｙｌ−Ｌ−ａｌａｎｉｎｅ  ｐ−ｎｉｔｒｏ−ａｎｉｌｉｄｅ（ＡＡＰＡ）との反応系に試料溶液を添加し、ＯＰＨの酵素反応への影響を評価した。
【００３０】
本試験における各植物抽出物の試料として、化粧品、医薬部外品、食品添加物などの原料として市販されている抽出物を用いた。具体的には、ユキノシタ、ウメ、トウキ、ウンシュウミカン、マンダリンオレンジ、ヒラミレモン、タチバナ、トウゲシバ、ラカンカについては濃縮した抽出液として市販されている原料を試料とした。なお、トウゲシバは製造元が異なる２種類の試料（トウゲシバＡ、トウゲシバＢ）を用いた。また、カワラケツメイについては食品原料として市販されているカワラケツメイ全草を破砕し粉状とした原料を２ｇ秤量し、４０ｍｌの熱水（８０℃）で１時間抽出し、常温まで冷ましてから市販のお茶パックで濾して上清を回収して、他の試料と同様に液状の試料とした。また、すべての試料について、原液、１０倍希釈、１００倍希釈のそれぞれで測定を行った。
＜測定方法＞
【００３１】
ＯＰＨとしてａｃｙｌａｍｉｎｏ−ａｃｉｄ  ｒｅｌｅａｓｉｎｇ  ｅｎｚｙｍｅ（ＡＡＲＥ）（タカラバイオ社）を、５０ｍｍｏｌ／Ｌ リン酸緩衝液（ｐＨ７．２）にて０．０２５Ｕ／ｍＬに調製した。また、反応基質としてＡＡＰＡ溶液（ＢＡＣＨＥＭ社）を、５０％エタノール液で２５ｍｍｏｌ／Ｌに調製した。また、反応緩衝液として、１２０ｍｍｏｌ／Ｌ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．４）を用いた。また、ポジティブコントロールとして１ｍｇ／ｍＬのルブソシド、ネガティブコントロールとして１ｍｇ／ｍＬのＥＧＣｇ（エピガロカテキンガレート）を用いた。
【００３２】
そして、マイクロプレート１ウェルに、試料１０ｕＬ、０．０２５Ｕ／ｍＬ ＯＰＨ １０ｕＬ、反応緩衝液２１０ｕＬを入れて、３７℃で６０分間予備加温（プレインキュベーション）した。一旦、室温に戻してから、２５ｍｍｏｌ／Ｌ ＡＡＰＡ溶液（基質液）２０ｕＬを加え、よく混合してＯＰＨ反応を開始した。反応は３７℃の恒温槽で行った。
【００３３】
３０分、あるいは６０分間隔でマイクロプレートを恒温槽から取り出し、マイクロプレートリーダーにて４０５ｎｍの吸光度を測定し、ＯＰＨ反応によって生じるｐＮＡ（パラニトロアニリン）を測定した。
【００３４】
そして、ＯＰＨの活性の増強作用は、１時間当たりの吸光度変化量（反応速度）を求めるとともに、ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ（Ｒｅｆ）として試料無添加時の反応速度を求め、下式に従ってＲｅｆの反応速度を１００％とした時の活性増強作用を算出した。
（式）ＯＰＨ活性増強作用（％）＝（試料のＯＰＨ反応速度／ＲｅｆのＯＰＨ反応速度）×１００
＜測定結果＞
【００３５】
図１は、各試料のＯＰＨ活性増強作用を示す表である。表に示すように、本実施形態に係る、ユキノシタ、ウメ、トウキ、ウンシュウミカン、マンダリンオレンジ、ヒラミレモン、タチバナ、カワラケツメイ、トウゲシバ、ラカンカの抽出物はいずれもＯＰＨ活性増強作用を有することが分かった。
＜効果＞
【００３６】
試験の結果として示すように、本実施形態により、ユキノシタ、ウメ、トウキ、カワラケツメイ、ウンシュウミカン、マンダリンオレンジ、ヒラミレモン、タチバナ、トウゲシバ、ラカンカのいずれか一種類以上を有効成分として含有するＯＰＨ活性増強剤などを提供することができる。
【図１】
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