(57)【要約】【課題】追加免疫ワクチンのアジュバント化された処方物を提供すること。【解決手段】本発明は、ＴｄａＰワクチンの中にＴＬＲアゴニストを含むことによってそれらを改善する。このアゴニストは、より強い保護、より長く持続する保護を提供することができ、かつ／またはある特定の免疫応答を達成するのに必要とされる抗原の量を低減させることができる。一局面において、ジフテリアトキソイド、破傷風トキソイド、百日咳トキソイド、アルミニウム塩アジュバント、およびＴＬＲアゴニストを含む免疫原性組成物が提供され、この組成物は、ジフテリアトキソイドと比較して、過剰の（Ｌｆ単位で測定）破傷風トキソイドを含む。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ジフテリアトキソイド、破傷風トキソイド、百日咳トキソイド、および水中油型エマルジョンアジュバントを含む免疫原性組成物であって、ジフテリアトキソイドと比較して、過剰の（Ｌｆ単位で測定）破傷風トキソイドを含む、組成物。
【請求項２】
前記エマルジョンがスクアレンおよび／またはポリソルベート８０を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記エマルジョン中の油滴のうち、数で少なくとも８０％が２２０ｎｍ未満の直径を有する、請求項１または請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
ジフテリアトキソイド濃度が≦４Ｌｆ／ｍｌである、請求項１から３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５】
破傷風トキソイド濃度が≦９Ｌｆ／ｍｌである、請求項１から４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６】
百日咳トキソイド濃度が≦４μｇ／ｍｌである、請求項１から５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７】
三価の不活化ポリオウイルス抗原成分もまた含む、請求項１から６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項８】
６．１から７．９のｐＨを有する、請求項１から７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項９】
百日咳トキソイド、線維状赤血球凝集素およびペルタクチンが、１：１：２の質量比で存在する、無細胞性百日咳成分と水中油型エマルジョンとを含む免疫原性組成物。
【請求項１０】
前記百日咳トキソイドがＰＴ−９Ｋ／１２９Ｇ二重変異体である、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
単位用量形態であり、１単位用量あたり、４μｇの百日咳トキソイド、４μｇのＦＨＡおよび８μｇのペルタクチンを含む、請求項９または請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
ジフテリアトキソイドおよび破傷風トキソイドもまた含む、請求項９から１１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１３】
アルミニウム塩アジュバントもまた含む、請求項９から１２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１４】
前記アルミニウム塩に吸着されているＴＬＲアゴニストを含む、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
被験体において免疫応答を上昇させるための、請求項１から１４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１６】
前記被験体が、小児のときにＤＴＰワクチンを以前に受けたことがある、請求項１５に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
この出願は、米国仮出願第６１／６０８，３９８号（２０１２年３月８日出願）および同第６１／６９７，７３０号（２０１２年９月６日出願）の利益を主張する。これら出願の両方の完全な内容は、全ての目的のために参考として本明細書に援用される。
【０００２】
本発明は、ジフテリア、破傷風および百日咳のための追加免疫ワクチンの分野にある。
【背景技術】
【０００３】
２種の青年ＤＴＰ追加免疫ワクチン（ｂｏｏｓｔｅｒ  ｖａｃｃｉｎｅ）、すなわちＢＯＯＳＴＲＩＸ（商標）およびＡＤＡＣＥＬ（商標）が現在使用可能である［１］。両方のワクチンはジフテリアトキソイド、破傷風トキソイドおよび無細胞性百日咳抗原を含有している。これらはまた不活化ポリオウイルス（ＢＯＯＳＴＲＩＸ  ＰＯＬＩＯ（商標）およびＡＤＡＣＥＬ  ＰＯＬＩＯ（商標））と組み合わせて使用可能である。これらのワクチンすべては、アルミニウム塩アジュバントを含む。
【０００４】
一般的にそれらのワクチンは、小児ＤＴａＰワクチンとは対照的に、ＴｄａＰワクチンとして公知である。一般的な特徴は、それらの小児用の対応物と比較して、抗原用量がより低いことであり、例えば、ＢＯＯＳＴＲＩＸ（商標）のジフテリアトキソイド含有量は、ＩＮＦＡＮＲＩＸ（商標）製品の１０分の１まで低くなり、ＡＤＡＣＥＬ（商標）では、ＤＡＰＴＡＣＥＬ（商標）の１５分の２まで低くなっている。さらに、抗原性成分の比もまた変化している。特に、ジフテリアトキソイドと破傷風トキソイドの比は、ＩＮＦＡＮＲＩＸ（商標）製品では２．５：１であるが、ＢＯＯＳＴＲＩＸ（商標）製品では１：２であり、またＤＡＰＴＡＣＥＬ（商標）製品では３：１であるが、ＡＤＡＣＥＬ（商標）製品では１：２．５である。したがって、これらの追加免疫ワクチンは、絶対量においても、さらに破傷風トキソイド含有量と比較しても、ジフテリアトキソイドの用量において大きな低減を示している。百日咳成分のうちのいくつかもまた、小児用の対応物に見られるレベルと異なるが、ポリオウイルス抗原のレベルは、小児ワクチンおよび青年ワクチンの両方において同じである。公共の情報に基づき、組成は以下のとおりである：
【０００５】
【表１】
2019001832.tif 000002
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Ｂｒｏｄｅｒら、ＭＭＷＲ  Ｒｅｃｏｍｍ  Ｒｅｐ（２００６）５５（ＲＲ−３）：１〜３４
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明の目的は、小児期の免疫化を以前に受けたことがある、成人、青年および４才以上の年齢の小児において追加免疫（ｂｏｏｓｔｅｒ）として、ヒトの使用に適したさらなるおよび改善されたＴｄａＰワクチンを提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
第１の態様では、本発明は、現行のＴｄａＰワクチンの中にＴＬＲアゴニストを含むことによって、それらを改善する。このアゴニストは、より強い保護、より長く持続する保護を提供することができ、かつ／またはある特定の免疫応答を達成するのに必要とされる抗原の量を低減させることができる。
【０００９】
第２の態様では、本発明は、水中油型エマルジョンで現在のＴｄａＰワクチンにアジュバント化する（ａｄｊｕｖａｎｔｉｎｇ）ことによって、それらを改善する。公知のＴｄａＰワクチンと比較して、このエマルジョンは、再度、保護を改善することができる。
【００１０】
したがって、第１の態様に対して本発明は、ジフテリアトキソイド、破傷風トキソイド、百日咳トキソイド、アルミニウム塩アジュバント、およびＴＬＲアゴニストを含む免疫原性組成物であって、ジフテリアトキソイドと比較して、過剰の破傷風トキソイドを含む（Ｌｆ単位で）組成物を提供する。
【００１１】
ＴＬＲアゴニストは、理想的にはＴＬＲ４アゴニストまたはＴＬＲ７アゴニストである。好ましくは、ＴＬＲアゴニストおよび／または少なくとも１種のトキソイドは、アルミニウム塩アジュバントに吸着している。
【００１２】
ＴＬＲアゴニストを含めることによって、同等の免疫原性を有しながらも、組成物が公知のワクチンと比較してより低い量の抗原および／またはより低い量のアルミニウムを有することが可能となる。
【００１３】
理想的には組成物は、以下の特性のうちの１つまたは複数を有する：
・Ａｌ＋＋＋濃度≦０．５ｍｇ／ｍｌ；
・ジフテリアトキソイド濃度≦４Ｌｆ／ｍｌ；
・破傷風トキソイド濃度≦９Ｌｆ／ｍｌ；および／または
・百日咳トキソイド濃度≦４μｇ／ｍｌ。
【００１４】
例えば、患者への投与に対して免疫原性組成物が単位用量形態である場合（例えば、０．５ｍｌの体積で）、免疫原性組成物は、以下の特性のうちの１つまたは複数を有することができる：
・Ａｌ＋＋＋含有量≦０．２５５ｍｇ；
・ジフテリアトキソイド含有量≦２Ｌｆ；
・破傷風トキソイド含有量≦４．５Ｌｆ；および／または
・百日咳トキソイド含有量≦２μｇ。
【００１５】
第２の態様に対して、本発明は、ジフテリアトキソイド、破傷風トキソイド、百日咳トキソイド、および水中油型エマルジョンアジュバントを含む免疫原性組成物であって、ジフテリアトキソイドと比較して、過剰の破傷風トキソイドを含む（Ｌｆ単位で）組成物を提供する。
【００１６】
理想的には組成物は、以下の特性のうちの１つまたは複数を有する：
・ジフテリアトキソイド濃度≦４Ｌｆ／ｍｌ；
・破傷風トキソイド濃度≦９Ｌｆ／ｍｌ；および／または
・百日咳トキソイド濃度≦４μｇ／ｍｌ。
【００１７】
例えば、患者への投与に対して免疫原性組成物が単位用量形態である場合（例えば、０．５ｍｌの体積で）、免疫原性組成物は、以下の特性のうちの１つまたは複数を有することができる：
・ジフテリアトキソイド含有量≦２Ｌｆ；
・破傷風トキソイド含有量≦４．５Ｌｆ；および／または
・百日咳トキソイド含有量≦２μｇ。
【００１８】
両方の態様に対して、本発明の組成物は、ジフテリアトキソイド、破傷風トキソイド、および百日咳トキソイドに加えて抗原を含むことができ、例えばこれらは不活化ポリオウイルス（ＩＰＶ）成分を含むことができる。
【００１９】
アルミニウム塩
ＴＬＲアゴニストは、不溶性アルミニウム塩に吸着することによって、ＴｄａＰ免疫原をアジュバント化させるための吸着されている複合体を形成することができる。このようなアルミニウム塩は、ワクチン中で使用されてきた長い歴史を有する。
【００２０】
有用なアルミニウム塩として、これらに限定されないが、水酸化アルミニウムアジュバントおよびリン酸アルミニウムアジュバントが挙げられる。このような塩は、例えば、参考文献２の第８および９章、ならびに参考文献３の第４章において記載されている。ヒドロキシドイオンを含むアルミニウム塩は、これらのヒドロキシドイオンが容易にリガンド交換できることから、本発明で使用するのに好ましい。したがって、ＴＬＲアゴニストの吸着に好ましい塩は、水酸化アルミニウムおよび／またはヒドロキシリン酸アルミニウムである。これらは、リン含有基（例えばホスフェート、ホスホネート）と容易にリガンド交換して、安定的な吸着をもたらし得る表面ヒドロキシル部分を有する。水酸化アルミニウムアジュバントが最も好ましい。
【００２１】
「水酸化アルミニウム」として一般に公知のアジュバントは典型的には、通常は少なくとも部分的に結晶質であるオキシ水酸化アルミニウム塩である。式ＡｌＯ（ＯＨ）によって表すことができるオキシ水酸化アルミニウムは、赤外（ＩＲ）分光法によって、詳細には１０７０ｃｍ−１での吸着バンドおよび３０９０〜３１００ｃｍ−１での強いショルダーの存在によって、水酸化アルミニウムＡｌ（ＯＨ）３などの他のアルミニウム化合物から識別することができる（参考文献２の第９章）。水酸化アルミニウムアジュバントの結晶化度は、ハーフハイトでの回折バンド幅（ｔｈｅ  ｗｉｄｔｈ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｄｉｆｆｒａｃｔｉｏｎ  ｂａｎｄ  ａｔ  ｈａｌｆ  ｈｅｉｇｈｔ）（ＷＨＨ）に反映され、その際、結晶性が乏しい粒子は、結晶子のより小さなサイズのため、より大きな線の広がりを示す。ＷＨＨが大きくなるほど、表面積は大きくなり、かつより高いＷＨＨ値を有するアジュバントが、抗原吸着についてより高い能力を有することが判明している。繊維状形態（例えば透過電子顕微鏡写真において見られるとおりの）が、例えば直径約２ｎｍを有する針様粒子を伴う水酸化アルミニウムアジュバントでは典型的である。水酸化アルミニウムアジュバントのｐＩは典型的には、約１１であり、即ちそのアジュバント自体が、生理学的ｐＨで正の表面電荷を有する。ｐＨ７．４でＡｌ＋＋＋１ｍｇ当たりタンパク質１．８〜２．６ｍｇの吸着能が、水酸化アルミニウムアジュバントでは報告されている。
【００２２】
「リン酸アルミニウム」として一般に公知のアジュバントは典型的には、ヒドロキシリン酸アルミニウムであり、多くの場合に少量の硫酸塩も含む（即ち、ヒドロキシリン酸硫酸アルミニウム）。それらは沈殿によって得ることができ、沈殿の間の反応条件および濃度が、その塩中のヒドロキシルに対するホスフェートの置換の程度に影響する。ヒドロキシリン酸塩は一般に、０．３から１．２のＰＯ４／Ａｌモル比を有する。ヒドロキシリン酸塩は、ヒドロキシル基の存在によって厳密なＡｌＰＯ４からは区別することができる。例えば３１６４ｃｍ−１でのＩＲスペクトルバンド（例えば、２００℃に加熱した場合）が、構造的ヒドロキシルの存在を示す（参考文献２の第９章）。
【００２３】
リン酸アルミニウムアジュバントのＰＯ４／Ａｌ＋＋＋モル比は、一般に０．３から１．２、好ましくは０．８から１．２、より好ましくは０．９５±０．１である。リン酸アルミニウムは一般に、特にヒドロキシリン酸塩では非晶質である。典型的なアジュバントは、０．８４から０．９２のＰＯ４／Ａｌモル比を有する非晶質のヒドロキシリン酸アルミニウムであり、０．６ｍｇ  Ａｌ＋＋＋／ｍｌで含まれる。そのリン酸アルミニウムは一般に、粒子状である（例えば、透過電子顕微鏡写真で見られるとおりプレート様の形態であり、主要な粒子は５０ｎｍの範囲である）。その粒子の典型的な直径は、任意の抗原の吸着後に、０．５〜２０μｍの範囲（例えば約５〜１０μｍ）である。ｐＨ７．４でＡｌ＋＋＋１ｍｇあたりタンパク質０．７〜１．５ｍｇの吸着能が、リン酸アルミニウムアジュバントで報告されている。
【００２４】
リン酸アルミニウムのゼロ電荷点（ＰＺＣ）は、ヒドロキシルに対するホスフェートの置換の度合いに逆比例し、この置換度は、沈殿によって塩を調製するために使用される反応条件および反応物の濃度に応じて変えることができる。他にも、溶液中の遊離ホスフェートイオンの濃度を変化させることによって（より多くのリン酸塩＝より酸性のＰＺＣ）、またはヒスチジン緩衝液などの緩衝液を添加する（ＰＺＣをより塩基性にする）ことによって、ＰＺＣを変える。本発明によって使用されるリン酸アルミニウムは一般に、４．０から７．０、より好ましくは、５．０から６．５、例えば約５．７のＰＺＣを有するであろう。
【００２５】
溶液であると、リン酸アルミニウムおよび水酸化アルミニウムアジュバントの両方ともが、直径１〜１０μｍの安定的な多孔性凝集体を形成する傾向がある［４］。
【００２６】
アルミニウム塩に吸着しているＴＬＲアゴニストを含む組成物はまた、緩衝液（例えば、リン酸緩衝液またはヒスチジン緩衝液またはトリス緩衝液）も含むことができる。しかしながら、そのような組成物がリン酸緩衝液を含む場合、緩衝液中のホスフェートイオンの濃度は、５０ｍＭ未満、例えば＜４０ｍＭ、＜３０ｍＭ、＜２０ｍＭ、＜１０ｍＭ、もしくは＜５ｍＭ、または１〜１５ｍＭであることが好ましい。ヒスチジン緩衝液は、例えば１〜５０ｍＭ、５〜２５ｍＭ、または約１０ｍＭであるのが好ましい。
【００２７】
本発明で有用な吸着性アルミニウム塩の不溶性のため、吸着されているＴＬＲアゴニストを含有する組成物は概して、濁った外観をもつ懸濁物である。この外観は、混入している細菌増殖を遮蔽してしまうので、本発明の組成物は、チオメルサールまたは２−フェノキシエタノールなどの防腐剤を含み得る。組成物は、実質的に水銀物質を含まない（例えば＜１０μｇ／ｍｌ）、例えばチオメルサールを含まないことが好ましい。水銀を含有しない組成物がより好ましい。防腐剤を含まない組成物もまた可能である。
【００２８】
組成物は、水酸化アルミニウムおよびリン酸アルミニウムの両方の混合物を含むことができ、かつＴＬＲアゴニストは、これらの塩の一方または両方に吸着されていてよい。
【００２９】
患者に投与するための組成物中でのＡｌ＋＋＋の濃度は好ましくは、０．５ｍｇ／ｍｌ未満、例えば≦０．４ｍｇ／ｍｌ、≦０．３ｍｇ／ｍｌ、≦０．２ｍｇ／ｍｌ、≦０．１ｍｇ／ｍｌなどである。ＴＬＲアゴニストの包含によって、アルミニウム塩のアジュバント効果を改善することができるので、本発明は、有利なことには、１用量あたりより低量のＡｌ＋＋＋を可能にし、したがって、本発明の組成物は、有用なことには、１単位用量あたり１０から２５０μｇのＡｌ＋＋＋を含むことができる。現行のＴｄａＰワクチンは、１用量あたり少なくとも３３０μｇのＡｌ＋＋＋を含む。濃度については、本発明の組成物は、１０〜５００μｇ／ｍｌ、例えば１０〜３００μｇ／ｍｌ、１０〜２００μｇ／ｍｌ、または１０〜１００μｇ／ｍｌのＡｌ＋＋＋濃度を有し得る。
【００３０】
一般に、ＴＬＲアゴニストとＡｌ＋＋＋との重量比は、５：１未満、例えば４：１未満、３：１未満、２：１未満、または１：１未満である。したがって、例えば、０．５ｍｇ／ｍｌのＡｌ＋＋＋濃度では、ＴＬＲアゴニストの最大濃度は、２．５ｍｇ／ｍｌであろう。しかし、より高いか、またはより低いレベルを使用することができる。Ａｌ＋＋＋の質量より少ない質量のＴＬＲアゴニストが最も典型的であり、例えば１用量あたり、Ａｌ＋＋＋０．２ｍｇで、ＴＬＲアゴニスト１００μｇなどであり得る。例えば、Ｆｅｎｄｒｉｘ製品は、１用量あたり、５０μｇの３ｄ−ＭＰＬおよび０．５ｍｇ  Ａｌ＋＋＋を含む。
【００３１】
組成物中のＴＬＲアゴニスト（複数可）のうちの少なくとも５０％（質量で）、例えば≧６０％、≧７０％、≧８０％、≧８５％、≧９０％、≧９２％、≧９４％、≧９５％、≧９６％、≧９７％、≧９８％、≧９９％、またはさらに１００％が、アルミニウム塩に吸着されていることが好ましい。
【００３２】
ＴＬＲアゴニスト
第１の態様では、本発明の組成物は、ＴＬＲアゴニスト、すなわち、トール様受容体をアゴナイズすることができる化合物を含む。最も好ましくは、ＴＬＲアゴニストはヒトＴＬＲのアゴニストである。ＴＬＲアゴニストは、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９またはＴＬＲ１１のいずれかを活性化することができる；好ましくは、ＴＬＲアゴニストは、ヒトＴＬＲ４またはヒトＴＬＲ７を活性化することができる。
【００３３】
任意の特定のトール様受容体に対する化合物のアゴニスト活性は、標準的アッセイによって決定することができる。ＩｍｇｅｎｅｘおよびＩｎｖｉｖｏｇｅｎなどの会社が、ＴＬＲ活性化経路を測定するための、ヒトＴＬＲ遺伝子およびＮＦκＢ、ならびに適切なレポーター遺伝子を安定的に共トランスフェクトされている細胞株を供給している。それらは、感度、幅広い作動範囲（ｗｏｒｋｉｎｇ  ｒａｎｇｅ）動力学に関して設計されており、ハイスループットスクリーニングのために使用することができる。１種または２種の特異的なＴＬＲの構成的発現が、そのような細胞株において典型的である。参考文献５も参照されたい。多くのＴＬＲアゴニストが当技術分野で公知であり、例えば参考文献６には、ＴＬＲ２アゴニストである特定のリポペプチド分子が記載されており、参考文献７〜１０にはそれぞれ、ＴＬＲ７の複数のクラスの小分子アゴニストが記載されており、参考文献１１および１２には、疾患を処置するためのＴＬＲ７およびＴＬＲ８アゴニストが記載されている。
【００３４】
本発明で使用されているＴＬＲアゴニストは、理想的には少なくとも１個の吸着部分を含む。ＴＬＲアゴニスト中にこのような部分を包含することによって、ＴＬＲアゴニストの不溶性アルミニウム塩への吸着（例えば、リガンド交換または任意の他の適切なメカニズムにより）が可能となり、これらの免疫学的挙動を改善する［１３］。リン含有吸着部分は特に有用であり、したがって、吸着部分は、ホスフェート、ホスホネート、ホスフィネート、ホスホニト（ｐｈｏｓｐｈｏｎｉｔｅ）、ホスフィニト（ｐｈｏｓｐｈｉｎｉｔｅ）などを含んでもよい。
【００３５】
好ましくは、ＴＬＲアゴニストは少なくとも１個のホスホネート基を含む。
【００３６】
したがって、好ましい実施形態では、本発明の組成物は、ホスホネート基を含むＴＬＲアゴニスト（より好ましくは、ＴＬＲ７アゴニスト）を含む。このホスホネート基は、アゴニストの不溶性アルミニウム塩への吸着を可能にし得る［１３］。
【００３７】
本発明に有用なＴＬＲアゴニストは、単一の吸着部分を含み得るか、または１個より多く、例えば２個から１５個の吸着部分を含み得る。典型的には、化合物は、１、２または３個の吸着部分を含む。
【００３８】
本発明で有用なリン含有ＴＬＲアゴニストは、式（Ａ１）：
【００３９】
【化１】
2019001832.tif 000003
【００４０】
によって表され得、ここで、
ＲＸおよびＲＹは独立に、ＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルから選択され；
Ｘは、共有結合、ＯおよびＮＨから選択され；
Ｙは、共有結合、Ｏ、Ｃ（Ｏ）、ＳおよびＮＨから選択され；
Ｌは、例えば、ハロ、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、−ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２および−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２から独立に選択される１から４個の置換基でそれぞれ置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルキレン、Ｃ１〜Ｃ６アルケニレン、アリーレン、ヘテロアリーレン、Ｃ１〜Ｃ６アルキレンオキシおよび−（（ＣＨ２）ｐＯ）ｑ（ＣＨ２）ｐ−から選択されるリンカーであり；
ｐはそれぞれ独立に、１、２、３、４、５および６から選択され；
ｑは、１、２、３および４から選択され；
ｎは、１、２および３から選択され；かつ
Ａは、ＴＬＲアゴニスト部分である］。
【００４１】
一実施形態では、式（Ａ１）によるＴＬＲアゴニストは、次のとおりである：ＲＸおよびＲＹはＨであり；ＸはＯであり；Ｌは、１から２個のハロゲン原子でそれぞれ置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルキレンおよび−（（ＣＨ２）ｐＯ）ｑ（ＣＨ２）ｐ−から選択され；ｐは１、２および３から選択され；ｑは、１および２から選択され；かつｎは１である。したがってこれらの実施形態では、吸着部分は、ホスフェート基を含む。
【００４２】
他の実施形態では、式（Ａ１）によるＴＬＲアゴニストは、次のとおりである：ＲＸおよびＲＹはＨであり；Ｘは共有結合であり；Ｌは、１から２個のハロゲン原子でそれぞれ置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルキレンおよび−（（ＣＨ２）ｐＯ）ｑ（ＣＨ２）ｐ−から選択され；ｐは１、２または３から選択され；ｑは１または２から選択され；かつｎは１である。したがってこれらの実施形態では、吸着部分は、ホスホネート基を含む。
【００４３】
式（Ａ１）のための有用な「Ａ」部分には、これらに限られないが、本明細書で定義されているか、または参考文献４〜１３および１４〜４８に開示されているとおりの次の化合物のいずれかのラジカルが含まれる：
【００４４】
【化２】
2019001832.tif 000004
【００４５】
一部の実施形態では、ＴＬＲアゴニスト部分「Ａ」は、１０００Ｄａ未満の分子量を有する。一部の実施形態では、式（Ａ１）のＴＬＲアゴニストは、１０００Ｄａ未満の分子量を有する。
【００４６】
好ましいＴＬＲアゴニストは、水溶性である。したがってこれらは、水性緩衝液中で水と、ｐＨ７、２５℃および１気圧で混合した場合に、均一な溶液を形成して、少なくとも５０μｇ／ｍｌの濃度を有する溶液をもたらし得る。したがって「水溶性」という用語は、これらの条件下でほんの僅かに可溶性である物質を排除するものである。
【００４７】
有用なＴＬＲアゴニストは、以下により詳細に記載されている式（Ｃ）、（Ｄ）、（Ｅ）、（Ｆ）、（Ｇ）、（Ｈ）、（Ｉ）、（ＩＩ）、（Ｊ）または（Ｋ）を有するものを含む。他の有用なＴＬＲアゴニストは、参考文献１３に定義されているとおりの化合物１〜１０２である。好ましいＴＬＲ７アゴニストは、式（Ｋ）、例えば以下に特定されている化合物Ｋ２などを有する。これらは、例えば、Ｋ２のアルギニン塩などの塩として使用することができる。
【００４８】
好ましいＴＬＲ４アゴニストは、以下により詳細に記載されているようなモノホスホリル脂質Ａの類似体（ＭＰＬ）である。例えば、有用なＴＬＲ４アゴニストは３ｄ−ＭＰＬである。
【００４９】
本発明の組成物は１種より多くのＴＬＲアゴニストを含むことができる。これら２種のアゴニストは相互に異なり、それらは同じＴＬＲまたは異なるＴＬＲをターゲットにできる。両方のアゴニストがアルミニウム塩に吸着し得る。
【００５０】
式（Ｃ）、（Ｄ）、（Ｅ）および（Ｈ）−ＴＬＲ７アゴニスト
ＴＬＲアゴニストは、式（Ｃ）、（Ｄ）、（Ｅ）または（Ｈ）：
【００５１】
【化３】
2019001832.tif 000005
【００５２】
のいずれかによる化合物であり得、ここで、
（ａ）Ｐ３は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ＣＦ３および−（（ＣＨ２）ｐＯ）ｑ（ＣＨ２）ｐＯｓ−および−Ｙ−Ｌ−Ｘ−Ｐ（Ｏ）（ＯＲＸ）（ＯＲＹ）から選択され；かつＰ４は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、−Ｃ１〜Ｃ６アルキルアリールおよび−Ｙ−Ｌ−Ｘ−Ｐ（Ｏ）（ＯＲＸ）（ＯＲＹ）から選択されるが；但し、Ｐ３およびＰ４のうちの少なくとも１個は、−Ｙ−Ｌ−Ｘ−Ｐ（Ｏ）（ＯＲＸ）（ＯＲＹ）であることを条件とし、
（ｂ）Ｐ５は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキルおよび−Ｙ−Ｌ−Ｘ−Ｐ（Ｏ）（ＯＲＸ）（ＯＲＹ）から選択され；Ｐ６は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル（Ｃ１〜Ｃ４アルキルおよびＯＨから選択される１から３個の置換基でそれぞれ置換されていてもよい）および−Ｙ−Ｌ−Ｘ−Ｐ（Ｏ）（ＯＲＸ）（ＯＲＹ）から選択され；かつＰ７は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、−（（ＣＨ２）ｐＯ）ｑ（ＣＨ２）ｐＯｓ−、−ＮＨＣ１〜Ｃ６アルキルおよび−Ｙ−Ｌ−Ｘ−Ｐ（Ｏ）（ＯＲＸ）（ＯＲＹ）から選択されるが；但し、Ｐ５、Ｐ６およびＰ７のうちの少なくとも１個は−Ｙ−Ｌ−Ｘ−Ｐ（Ｏ）（ＯＲＸ）（ＯＲＹ）であることを条件とし；
（ｃ）Ｐ８は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、−ＮＨＣ１〜Ｃ６アルキル（それぞれＯＨで置換されていてもよい）および−Ｙ−Ｌ−Ｘ−Ｐ（Ｏ）（ＯＲＸ）（ＯＲＹ）から選択され；かつＰ９およびＰ１０はそれぞれ独立に、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、−ＮＨＣ１〜Ｃ６アルキル（それぞれＯＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルで置換されていてもよい）および−Ｙ−Ｌ−Ｘ−Ｐ（Ｏ）（ＯＲＸ）（ＯＲＹ）から選択されるが；但し、Ｐ８、Ｐ９またはＰ１０のうちの少なくとも１個は−Ｙ−Ｌ−Ｘ−Ｐ（Ｏ）（ＯＲＸ）（ＯＲＹ）であることを条件とし；
（ｄ）Ｐ１６および各Ｐ１８はそれぞれ独立に、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキルおよび−Ｙ−Ｌ−Ｘ−Ｐ（Ｏ）（ＯＲＸ）（ＯＲＹ）から選択され；Ｐ１７は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、アリール、ヘテロアリール、Ｃ１〜Ｃ６アルキルアリール、Ｃ１〜Ｃ６アルキルヘテロアリール、Ｃ１〜Ｃ６アルキルアリール−Ｙ−Ｌ−Ｘ−Ｐ（Ｏ）（ＯＲＸ）（ＯＲＹ）および−Ｙ−Ｌ−Ｘ−Ｐ（Ｏ）（ＯＲＸ）（ＯＲＹ）（Ｃ１〜Ｃ６アルキルまたはヘテロシクリルから選択される１から２個の置換基でそれぞれ置換されていてもよい）から選択されるが、但し、Ｐ１６、Ｐ１７またはＰ１８のうちの少なくとも１個は、−Ｙ−Ｌ−Ｘ−Ｐ（Ｏ）（ＯＲＸ）（ＯＲＹ）部分を含有することを条件とし；
ＲＸおよびＲＹは独立に、ＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルから選択され；
ＲＣ、ＲＤおよびＲＨはそれぞれ独立に、ＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルから選択され；
ＸＣはＣＨおよびＮから選択され；
ＲＥは、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ハロゲンおよび−（（ＣＨ２）ｐＯ）ｑ（ＣＨ２）ｐ−から選択され；
ＸＥは、共有結合、ＣＲＥ２ＲＥ３およびＮＲＥ４から選択され；
ＲＥ２、ＲＥ３およびＲＥ４は独立に、ＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルから選択され；
ＸＨ１−ＸＨ２は、−ＣＲＨ２ＲＨ３−、−ＣＲＨ２ＲＨ３−ＣＲＨ２ＲＨ３−、−Ｃ（Ｏ）ＣＲＨ２ＲＨ３−、−Ｃ（Ｏ）ＣＲＨ２ＲＨ３−、−ＣＲＨ２ＲＨ３Ｃ（Ｏ）−、−ＮＲＨ４Ｃ（Ｏ）−、Ｃ（Ｏ）ＮＲＨ４−、ＣＲＨ２ＲＨ３Ｓ（Ｏ）２および−ＣＲＨ２＝ＣＲＨ２−から選択され；
ＲＨ２、ＲＨ３およびＲＨ４はそれぞれ独立に、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキルおよびＰ１８から選択され；
ＸＨ３は、ＮおよびＣＮから選択され；
Ｘは、共有結合、ＯおよびＮＨから選択され；
Ｙは、共有結合、Ｏ、Ｃ（Ｏ）、ＳおよびＮＨから選択され；
Ｌは、共有結合、Ｃ１〜Ｃ６アルキレン、Ｃ１〜Ｃ６アルケニレン、アリーレン、ヘテロアリーレン、Ｃ１〜Ｃ６アルキレンオキシおよび−（（ＣＨ２）ｐＯ）ｑ（ＣＨ２）ｐ−（それぞれ、ハロ、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、−ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２および−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２から独立に選択される１〜４個の置換基で置換されていてもよい）から選択され；
ｍは、０または１から選択され；
ｐはそれぞれ独立に、１、２、３、４、５および６から選択され；
ｑは、１、２、３および４から選択され；かつ
ｓは、０および１から選択される。
【００５３】
式（Ｇ）−ＴＬＲ８アゴニスト
ＴＬＲアゴニストは、式（Ｇ）：
【００５４】
【化４】
2019001832.tif 000006
【００５５】
による化合物で有り得、ここで、
Ｐ１１は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、ＮＲＶＲＷおよび−Ｙ−Ｌ−Ｘ−Ｐ（Ｏ）（ＯＲＸ）（ＯＲＹ）から選択され；
Ｐ１２は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、−Ｃ（Ｏ）ＮＲＶＲＷによって置換されていてもよいアリールおよび−Ｙ−Ｌ−Ｘ−Ｐ（Ｏ）（ＯＲＸ）（ＯＲＹ）から選択され；
Ｐ１３、Ｐ１４およびＰ１５は独立に、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシおよび−Ｙ−Ｌ−Ｘ−Ｐ（Ｏ）（ＯＲＸ）（ＯＲＹ）から選択されるが；
但し、Ｐ１１、Ｐ１２、Ｐ１３、Ｐ１４またはＰ１５のうちの少なくとも１個は、−Ｙ−Ｌ−Ｘ−Ｐ（Ｏ）（ＯＲＸ）（ＯＲＹ）であることを条件とし；
ＲｖおよびＲｗは独立に、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキルから選択されるか、または結合している窒素原子と一緒に４員から７員の複素環式環を形成しており；
ＸＧは、Ｃ、ＣＨおよびＮから選択され；
【００５６】
【化５】
2019001832.tif 000007
【００５７】
は、任意選択の二重結合を表し、ここで、
【００５８】
【化６】
2019001832.tif 000008
【００５９】
が二重結合である場合、ＸＧはＣであり；かつ
ＲＧは、ＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルから選択され；
Ｘは、共有結合、ＯおよびＮＨから選択され；
Ｙは、共有結合、Ｏ、Ｃ（Ｏ）、ＳおよびＮＨから選択され；
Ｌは、共有結合、Ｃ１〜Ｃ６アルキレン、Ｃ１〜Ｃ６アルケニレン、アリーレン、ヘテロアリーレン、Ｃ１〜Ｃ６アルキレンオキシおよび−（（ＣＨ２）ｐＯ）ｑ（ＣＨ２）ｐ−（それぞれ、ハロ、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、−ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２および−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２から独立に選択される１〜４個の置換基で置換されていてもよい）から選択され；
ｐはそれぞれ独立に、１、２、３、４、５および６から選択され、かつ
ｑは、１、２、３および４から選択される。
【００６０】
式（Ｉ）および（ＩＩ）−ＴＬＲ７アゴニスト［８］
ＴＬＲアゴニストは、式（Ｉ）または（ＩＩ）：
【００６１】
【化７】
2019001832.tif 000009
【００６２】
による化合物で有り得、ここで、
Ｚは、−ＮＨ２または−ＯＨであり；
Ｘ１は、アルキレン、置換アルキレン、アルケニレン、置換アルケニレン、アルキニレン、置換アルキニレン、カルボシクリレン、置換カルボシクリレン、ヘテロシクリレンまたは置換ヘテロシクリレンであり；
Ｌ１は、共有結合、アリーレン、置換アリーレン、ヘテロシクリレン、置換ヘテロシクリレン、カルボシクリレン（ｃａｒｂｏｃｙｃｌｙｌｅｎｅ）、置換カルボシクリレン、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、Ｓ（Ｏ）２、−ＮＲ５−または−Ｏ−であり、
Ｘ２は、共有結合、アルキレンまたは置換アルキレンであり；
Ｌ２は、ＮＲ５−、−Ｎ（Ｒ５）Ｃ（Ｏ）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、Ｓ（Ｏ）２または共有結合であり；
Ｒ３は、Ｈ、アルキル、置換アルキル、ヘテロアルキル、置換ヘテロアルキル、アルケニル、置換アルケニル、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、ヘテロシクリル、置換ヘテロシクリル、ヘテロシクリルアルキルまたは置換ヘテロシクリルアルキルであり；
Ｙ１およびＹ２はそれぞれ独立に、共有結合、−Ｏ−または−ＮＲ５−であるか；または−Ｙ１−Ｒ１および−Ｙ２−Ｒ２はそれぞれ独立に、−Ｏ−Ｎ＝Ｃ（Ｒ６Ｒ７）であり；
Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立に、Ｈ、アルキル、置換アルキル、カルボシクリル、置換カルボシクリル、ヘテロシクリル、置換ヘテロシクリル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリールアルキル、置換アリールアルキル、ヘテロシクリルアルキル、置換ヘテロシクリルアルキル、−アルキレン−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｒ５、−（置換アルキレン）−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｒ５、−アルキレン−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ５、−（置換アルキレン）−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ５、−アルキレン−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｒ５または−（置換アルキレン）−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｒ５であり、
Ｒ４は、Ｈ、ハロゲン、−ＯＨ、−Ｏ−アルキル、−Ｏ−アルキレン−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｒ５、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｒ５、−ＳＨまたは−ＮＨ（Ｒ５）であり；
Ｒ５、Ｒ６およびＲ７はそれぞれ独立に、Ｈ、アルキル、置換アルキル、カルボシクリル、置換カルボシクリル、ヘテロシクリル、置換ヘテロシクリル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリールアルキル、置換アリールアルキル、ヘテロシクリルアルキルまたは置換ヘテロシクリルアルキルである。
【００６３】
式（Ｊ）−ＴＬＲ２アゴニスト［１４］
ＴＬＲアゴニストは、式（Ｊ）：
【００６４】
【化８】
2019001832.tif 000010
【００６５】
による化合物で有り得、ここで、
Ｒ１は、Ｈ、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ７〜Ｃ１８アルキルまたは−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜Ｃ６アルキルであり；
Ｒ２は、Ｃ７〜Ｃ１８アルキルであり；
Ｒ３は、Ｃ７〜Ｃ１８アルキルであり；
Ｌ１は、−ＣＨ２ＯＣ（Ｏ）−、−ＣＨ２Ｏ−、−ＣＨ２ＮＲ７Ｃ（Ｏ）−または−ＣＨ２ＯＣ（Ｏ）ＮＲ７−であり；
Ｌ２は、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｏ−、−ＮＲ７Ｃ（Ｏ）−または−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ７−であり；
Ｒ４は、−Ｌ３Ｒ５または−Ｌ４Ｒ５であり；
Ｒ５は、−Ｎ（Ｒ７）２、−ＯＲ７、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ７）２、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ７、−ＮＲ７Ｃ（Ｏ）Ｌ３Ｒ８、−ＮＲ７Ｃ（Ｏ）Ｌ４Ｒ８、−ＯＬ３Ｒ６、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ７Ｌ３Ｒ８、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ７Ｌ４Ｒ８、−Ｓ（Ｏ）２ＯＲ７、−ＯＳ（Ｏ）２ＯＲ７、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ６アリール、Ｃ１０アリール、Ｃ１４アリール、Ｏ、ＳおよびＮから選択される１から３個のヘテロ原子を含有する５環員から１４環員のヘテロアリール、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキルまたはＯ、ＳおよびＮから選択される１から３個のヘテロ原子を含有する５環員から６環員のヘテロシクロアルキルであり、ここで、Ｒ５の前記アリール、ヘテロアリール、シクロアルキルおよびヘテロシクロアルキルはそれぞれ非置換であるか、またはＲ５の前記アリール、ヘテロアリール、シクロアルキルおよびヘテロシクロアルキルはそれぞれ、−ＯＲ９、−ＯＬ３Ｒ６、−ＯＬ４Ｒ６、−ＯＲ７および−Ｃ（Ｏ）ＯＲ７から独立に選択される１から３個の置換基で置換されており；
Ｌ３は、Ｃ１〜Ｃ１０アルキレンであり、ここで、Ｌ３の前記Ｃ１〜Ｃ１０アルキレンは非置換であるか、またはＬ３の前記Ｃ１〜Ｃ１０アルキレンは、１から４個のＲ６基で置換されているか、またはＬ３の前記Ｃ１〜Ｃ１０アルキレンは同じ炭素原子上で、結合している炭素原子と共にＣ３〜Ｃ８シクロアルキルを一緒に形成している２個のＣ１〜Ｃ６アルキル基で置換されており；
Ｌ４は、−（（ＣＲ７Ｒ７）ｐＯ）ｑ（ＣＲ１０Ｒ１０）ｐ−または−（ＣＲ１１Ｒ１１）（（ＣＲ７Ｒ７）ｐＯ）ｑ（ＣＲ１０Ｒ１０）ｐ−であり、ここで、Ｒ１１はそれぞれ、結合している炭素原子と共にＣ３〜Ｃ８シクロアルキルを一緒に形成しているＣ１〜Ｃ６アルキル基であり；
Ｒ６はそれぞれ独立に、ハロ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、１〜２個のヒドロキシル基で置換されているＣ１〜Ｃ６アルキル、−ＯＲ７、−Ｎ（Ｒ７）２、−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ７）２、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ７）２、Ｃ６アリール、Ｃ１０アリールおよびＣ１４アリールから選択され；
Ｒ７はそれぞれ独立に、ＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルから選択され；
Ｒ８は、−ＳＲ７、−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ７）２ならびにＯおよびＮから選択される１から３個のヘテロ原子を含有する５環員から６環員のヘテロシクロアルキルから選択され；
Ｒ９は、フェニルであり；
Ｒ１０はそれぞれ独立に、Ｈおよびハロから選択され；
ｐはそれぞれ独立に、１、２、３、４、５および６から選択され、かつ  ｑは、１、２、３または４である。
【００６６】
好ましくは、Ｒ５はＰ（Ｏ）（ＯＲ７）２、−ＮＲ７Ｃ（Ｏ）Ｌ３−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ７）２、−ＮＲ７Ｃ（Ｏ）Ｌ４−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ７）２、−ＯＬ３−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ７）２、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ７Ｌ３−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ７）２または−Ｃ（Ｏ）ＮＲ７Ｌ４−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ７）２である。
【００６７】
（Ｊ）の一部の実施形態では、Ｒ１はＨである。（Ｊ）の他の実施形態では、Ｒ１は−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１５アルキルである；
（Ｊ）の一部の実施形態では：（ｉ）Ｌ１は−ＣＨ２ＯＣ（Ｏ）−であり、かつＬ２は−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｏ−、−ＮＲ７Ｃ（Ｏ）−または−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ７−であるか；または（ｉｉ）またはＬ１は−ＣＨ２Ｏ−であり、かつＬ２は−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｏ−、−ＮＲ７Ｃ（Ｏ）−または−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ７−であるか；または（ｉｉｉ）Ｌ１は−ＣＨ２ＮＲ７Ｃ（Ｏ）−であり、かつＬ２は−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｏ−、−ＮＲ７Ｃ（Ｏ）−または−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ７−であるか；または（ｉｖ）Ｌ１は−ＣＨ２ＯＣ（Ｏ）ＮＲ７−であり、かつＬ２は−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｏ−、ＮＲ７Ｃ（Ｏ）−または−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ７−である。
【００６８】
（Ｊ）の一部の実施形態では：（ｉ）Ｌ１は−ＣＨ２ＯＣ（Ｏ）−であり、かつＬ２は−ＯＣ（Ｏ）−であるか；または（ｉｉ）Ｌ１は−ＣＨ２Ｏ−であり、かつＬ２は−Ｏ−であるか；または（ｉｉｉ）Ｌ１は−ＣＨ２Ｏ−であり、かつＬ２は−ＮＨＣ（Ｏ）−であるか；または（ｉｖ）Ｌ１は−ＣＨ２ＯＣ（Ｏ）ＮＨ−であり、かつＬ２は−ＯＣ（Ｏ）ＮＨ−である。
【００６９】
（Ｊ）の一部の実施形態では、（ｉ）Ｒ２は−Ｃ１１アルキルであり、かつＲ３は−Ｃ１１アルキルであるか；または（ｉｉ）Ｒ２は−Ｃ１６アルキルであり、かつＲ３は−Ｃ１６アルキルであるか；または（ｉｉｉ）Ｒ２は−Ｃ１６アルキルであり、かつＲ３は−Ｃ１１アルキルであるか；または（ｉｖ）Ｒ２は−Ｃ１２アルキルであり、かつＲ３は−Ｃ１２アルキルであるか；または（ｖ）Ｒ２は−Ｃ７アルキルであり、かつＲ３は−Ｃ７アルキルであるか；または（ｖｉ）Ｒ２は−Ｃ９アルキルであり、かつＲ３は−Ｃ９アルキルであるか；または（ｖｉｉ）Ｒ２は−Ｃ８アルキルであり、かつＲ３は−Ｃ８アルキルであるか；または（ｖｉｉｉ）Ｒ２は−Ｃ１３アルキルであり、かつＲ３は−Ｃ１３アルキルであるか；または（ｉｘ）Ｒ２は−Ｃ１２アルキルであり、かつＲ３は−Ｃ１１アルキルであるか；または（ｘ）Ｒ２は−Ｃ１２アルキルであり、かつＲ３は−Ｃ１２アルキルであるか；または（ｘｉ）Ｒ２は−Ｃ１０アルキルであり、かつＲ３は−Ｃ１０アルキルであるか；または（ｘｉｉ）Ｒ２は−Ｃ１５アルキルであり、かつＲ３は−Ｃ１５アルキルである。
【００７０】
（Ｊ）の一部の実施形態では、Ｒ２は−Ｃ１１アルキルであり、かつＲ３は−Ｃ１１アルキルである。
【００７１】
（Ｊ）の一部の実施形態では、Ｌ３はＣ１〜Ｃ１０アルキレンであり、ここで、Ｌ３の前記Ｃ１〜Ｃ１０アルキレンは非置換であるか、または１から４個のＲ６基で置換されている。
【００７２】
（Ｊ）の一部の実施形態では：Ｌ４は−（（ＣＲ７Ｒ７）ｐＯ）ｑ（ＣＲ１０Ｒ１０）ｐ−であり；Ｒ１０はそれぞれ独立にＨおよびＦから選択され；かつｐはそれぞれ独立に、２、３および４から選択される。
【００７３】
（Ｊ）の一部の実施形態では、Ｒ６はそれぞれ独立に、メチル、エチル、ｉ−プロピル、ｉ−ブチル、−ＣＨ２ＯＨ、−ＯＨ、−Ｆ、−ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２およびフェニルから選択される。
【００７４】
（Ｊ）の一部の実施形態では、Ｒ７はそれぞれ独立に、Ｈ、メチルおよびエチルから選択される。
【００７５】
ＴＬＲ４アゴニスト
本発明の組成物はＴＬＲ４アゴニストを含むことができ、最も好ましくはヒトＴＬＲ４アゴニストである。ＴＬＲ４は従来の樹状細胞およびマクロファージを含めた先天免疫系の細胞によって発現される［１５］。ＴＬＲ４を介したトリガー（ｔｒｉｇｇｅｒｉｎｇ）により、ＭｙＤ８８依存性経路およびＴＲＩＦ依存性経路の両方を利用するシグナル伝達カスケードが誘発され、それぞれＮＦ−κＢおよびＩＲＦ３／７活性化をもたらす。ＴＬＲ４の活性化は、典型的に確固としたＩＬ−１２ｐ７０の生成を誘発し、Ｔｈ１−タイプ細胞免疫応答および液性免疫応答を強く強化する。
【００７６】
様々な有用なＴＬＲ４アゴニストが当技術分野で公知であり、このうちの多くは内毒素またはリポ多糖類（ＬＰＳ）の類似体である。例えば、ＴＬＲ４アゴニストは以下であってよい：
（ｉ）３ｄ−ＭＰＬ（すなわち３−Ｏ−脱アシル化モノホスホリル脂質Ａ；３−ｄｅ−Ｏ−アシル化モノホスホリル脂質Ａまたは３−Ｏ−デスアシル−４’−モノホスホリル脂質Ａとしても公知）。内毒素のモノホスホリル脂質Ａ部分のこの誘導体は、グルコサミンの還元末端の脱アシル化した３位を有する。それは、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｍｉｎｎｅｓｏｔａのヘプトース欠損変異体から調製され、脂質Ａと化学的に同様であるが、酸に不安定なホスホリル基および塩基に不安定なアシル基が欠如している。３ｄ−ＭＰＬの調製は、参考文献１６にもともと記載されており、製品は、Ｃｏｒｉｘａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎにより製造および販売されている。それはＧＳＫの「ＡＳ０４」アジュバント中に存在する。さらなる詳細は参考文献１７〜２０において見出すことができる。
【００７７】
（ｉｉ）グルコピラノシル脂質Ａ（ＧＬＡ）［２１］またはそのアンモニウム塩：
【００７８】
【化９】
2019001832.tif 000011
【００７９】
（ｉｉｉ）アミノアルキルグルコサミニドホスフェート、例えば、ＲＣ−５２９またはＣＲＸ−５２４［２２〜２４］など。ＲＣ−５２９およびＣＲＸ−５２４は、これらのＲ２基が異なる以下の構造：
【００８０】
【化１０】
2019001832.tif 000012
【００８１】
を有する。
【００８２】
（ｉｖ）ホスフェート含有非環式骨格に連結している脂質を含有する化合物、例えば、ＴＬＲ４アンタゴニストＥ５５６４など［２５、２６］：
【００８３】
【化１１】
2019001832.tif 000013
【００８４】
（ｖ）参考文献２７に定義されているとおりの式Ｉ、ＩＩもしくはＩＩＩの化合物、またはその塩、例えば、化合物「ＥＲ８０３０５８」、「ＥＲ８０３７３２」、「ＥＲ８０４０５３」、「ＥＲ８０４０５８」、「ＥＲ８０４０５９」、「ＥＲ８０４４４２」、「ＥＲ８０４６８０」、「ＥＲ８０３０２２」、「ＥＲ８０４７６４」または「ＥＲ８０４０５７」など。ＥＲ８０４０５７はまた、Ｅ６０２０としても公知であり、以下の構造：
【００８５】
【化１２】
2019001832.tif 000014
【００８６】
を有し、一方で、ＥＲ８０３０２２は以下の構造：
【００８７】
【化１３】
2019001832.tif 000015
【００８８】
を有する。
【００８９】
（ｖｉ）参考文献２８に開示されているポリペプチドリガンドのうちの１種。
【００９０】
これらのＴＬＲ４アゴニストのいずれも本発明で使用することができる。
【００９１】
本発明の組成物は、ＴＬＲ４アゴニストが吸着されるアルミニウム塩を含むことができる。吸着性の特性を有するＴＬＲ４アゴニストは典型的に、アルミニウム塩の表面基、特に表面ヒドロキシル基を有する塩とリガンド交換され得るリン含有部分を含む。したがって有用なＴＬＲ４アゴニストは、ホスフェート、ホスホネート、ホスフィネート、ホスホニト、ホスフィニト、ホスフェートなどを含み得る。好ましいＴＬＲ４アゴニストは、少なくとも１個のホスフェート基［１３］、例えば上記に列挙したアゴニスト（ｉ）〜（ｖ）を含む。
【００９２】
本発明での使用のための好ましいＴＬＲ４アゴニストは３ｄ−ＭＰＬである。それは、リン酸アルミニウムアジュバントに、水酸化アルミニウムアジュバントに、または両方の混合物に吸着され得る［２９］。
【００９３】
３ｄ−ＭＰＬは、それらのアシル化（例えば、３、４、５または６個のアシル鎖を有し、その鎖の長さは異なってもよい）により異なる、関連する分子の混合物の形態をとることができる。２種のグルコサミン（また２−デオキシ−２−アミノ−グルコースとしても公知）単糖は、これらの２位の炭素（すなわち、２および２’位）においてＮ−アシル化しており、３’位にもまたＯ−アシル化が存在する。炭素２に付加している基は、式−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ２−ＣＲ１Ｒ１’を有する。炭素２’に付加している基は式−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ２−ＣＲ２Ｒ２’を有する。炭素３’に付加している基は式−Ｏ−ＣＯ−ＣＨ２−ＣＲ３Ｒ３’を有する。代表的な構造は：
【００９４】
【化１４】
2019001832.tif 000016
【００９５】
である。基Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、それぞれ独立に、−（ＣＨ２）ｎ−ＣＨ３である。ｎの値は、好ましくは８から１６、より好ましくは９から１２、最も好ましくは１０である。
【００９６】
基Ｒ１’、Ｒ２’およびＲ３’は、それぞれ独立に：（ａ）−Ｈ；（ｂ）−ＯＨ；または（ｃ）−Ｏ−ＣＯ−Ｒ４（式中、Ｒ４は、−Ｈまたは−（ＣＨ２）ｍ−ＣＨ３のいずれかであり、ｍの値は好ましくは８から１６であり、より好ましくは１０、１２または１４である）であることができる。２位において、ｍは好ましくは１４である。２’位において、ｍは好ましくは１０である。３’位において、ｍは好ましくは１２である。したがって、基Ｒ１’、Ｒ２’およびＲ３’は、好ましくは、ドデカン酸、テトラデカン酸またはヘキサデカン酸からの−Ｏ−アシル基である。
【００９７】
Ｒ１’、Ｒ２’およびＲ３’のすべてが−Ｈである場合、３ｄ−ＭＰＬは３個のアシル鎖しか有さない（２、２’および３’位のそれぞれの上に１個）。Ｒ１’、Ｒ２’およびＲ３’のうちの２個だけが−Ｈである場合、３ｄ−ＭＰＬは４個のアシル鎖を有することができる。Ｒ１’、Ｒ２’およびＲ３’のうちの１個だけが−Ｈである場合、３ｄ−ＭＰＬは５個のアシル鎖を有することができる。Ｒ１’、Ｒ２’およびＲ３’のいずれも−Ｈでない場合、３ｄ−ＭＰＬは６個のアシル鎖を有することができる。本発明に従い使用される３ｄ−ＭＰＬは、３〜６個のアシル鎖を有するそれらの形態の混合物であってよいが、混合物中に６個のアシル鎖を有する３ｄ−ＭＰＬを含むこと、特に６個のアシル鎖形態が３ｄ−ＭＰＬ全体の少なくとも１０重量％、例えば≧２０％、≧３０％、≧４０％、≧５０％またはこれ以上を占めることを確実にすることが好ましい。６個のアシル鎖を有する３ｄ−ＭＰＬが最もアジュバント活性のある形態であることが判明している。
【００９８】
したがって、本発明での使用に対して最も好ましい形態の３ｄ−ＭＰＬは：
【００９９】
【化１５】
2019001832.tif 000017
【０１００】
である。３ｄ−ＭＰＬが混合物の形態で使用される場合、本発明の組成物において、３ｄ−ＭＰＬの量または濃度に関する言及は、混合物中で組み合わせた３ｄ−ＭＰＬ種を指す。
【０１０１】
典型的な組成物は、２５μｇ／ｍｌから２００μｇ／ｍｌ、例えば５０〜１５０μｇ／ｍｌ、７５〜１２５μｇ／ｍｌ、９０〜１１０μｇ／ｍｌの範囲、または約１００μｇ／ｍｌの濃度で３ｄ−ＭＰＬを含む。１用量あたり２５〜７５μｇの３ｄ−ＭＰＬ、例えば１用量あたり４５〜５５μｇ、または約５０μｇの３ｄ−ＭＰＬを投与することが通常である。
【０１０２】
水性条件では、３ｄ−ＭＰＬは、異なるサイズ、例えば、直径＜１５０ｎｍまたは＞５００ｎｍを有するミセル凝集体または粒子を形成することができる。それらのうちのいずれかまたは両方を本発明に使用することができ、より良い粒子は、慣用的なアッセイにより選択することができる。それらの優れた活性のため、より小さな粒子（例えば、３ｄ−ＭＰＬの透明な水性懸濁物を得るために十分に小さい）が本発明による使用に対して好ましい［３０］。好ましい粒子は、１５０ｎｍ未満、より好ましくは１２０ｎｍ未満の平均直径を有し、１００ｎｍ未満の平均直径さえも有することができる。しかし、ほとんどの場合には、平均直径は、５０ｎｍ以上である。３ｄ−ＭＰＬがアルミニウム塩に吸着されている場合、３Ｄ−ＭＰＬの粒径を直接測定することができないこともあるが、粒径は吸着が行われる前に測定することができる。粒子直径は、動的光散乱の慣用的な技法で評価することができ、これによって平均粒子直径が明らかとなる。粒子がｘｎｍの直径を有するということであれば、一般に、この平均の周囲に粒子の分布が存在することになり、少なくとも５０％の数（例えば≧６０％、≧７０％、≧８０％、≧９０％、またはそれ以上）の粒子がｘ±２５％の範囲内の直径を有することになる。
【０１０３】
式（Ｋ）［３１］
ＴＬＲアゴニストは、式（Ｋ）：
【０１０４】
【化１６】
2019001832.tif 000018
【０１０５】
による化合物で有り得、ここで、
Ｒ１は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、−Ｃ（Ｒ５）２ＯＨ、−Ｌ１Ｒ５、−Ｌ１Ｒ６、−Ｌ２Ｒ５、−Ｌ２Ｒ６、−ＯＬ２Ｒ５または−ＯＬ２Ｒ６であり；
Ｌ１は、−Ｃ（Ｏ）−または−Ｏ−であり；
Ｌ２は、Ｃ１〜Ｃ６アルキレン、Ｃ２〜Ｃ６アルケニレン、アリーレン、ヘテロアリーレンまたは−（（ＣＲ４Ｒ４）ｐＯ）ｑ（ＣＨ２）ｐ−であり、ここで、Ｌ２の前記Ｃ１〜Ｃ６アルキレンおよびＣ２〜Ｃ６アルケニレンは、１から４個のフルオロ基で置換されていてもよく；
Ｌ３はそれぞれ独立に、Ｃ１〜Ｃ６アルキレンおよび−（（ＣＲ４Ｒ４）ｐＯ）ｑ（ＣＨ２）ｐ−から選択され、ここで、Ｌ３の前記Ｃ１〜Ｃ６アルキレンは、１から４個のフルオロ基で置換されていてもよく；
Ｌ４は、アリーレンまたはヘテロアリーレンであり；
Ｒ２は、ＨまたはＣ１〜Ｃ６アルキルであり；
Ｒ３は、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、−Ｌ３Ｒ５、−Ｌ１Ｒ５、−Ｌ３Ｒ７、−Ｌ３Ｌ４Ｌ３Ｒ７、−Ｌ３Ｌ４Ｒ５、−Ｌ３Ｌ４Ｌ３Ｒ５、−ＯＬ３Ｒ５、−ＯＬ３Ｒ７、−ＯＬ３Ｌ４Ｒ７、−ＯＬ３Ｌ４Ｌ３Ｒ７、−ＯＲ８、−ＯＬ３Ｌ４Ｒ５、−ＯＬ３Ｌ４Ｌ３Ｒ５および−Ｃ（Ｒ５）２ＯＨから選択され；
Ｒ４はそれぞれ独立に、Ｈおよびフルオロから選択され；
Ｒ５は、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ９）２であり、
Ｒ６は、−ＣＦ２Ｐ（Ｏ）（ＯＲ９）２または−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１０であり；
Ｒ７は、−ＣＦ２Ｐ（Ｏ）（ＯＲ９）２または−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１０であり；
Ｒ８は、ＨまたはＣ１〜Ｃ４アルキルであり；
Ｒ９はそれぞれ独立に、ＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルから選択され；
Ｒ１０は、ＨまたはＣ１〜Ｃ４アルキルであり；
ｐはそれぞれ独立に、１、２、３、４、５および６から選択され、かつ
ｑは、１、２、３または４である。
【０１０６】
式（Ｋ）の化合物は、好ましくは、式（Ｋ’）：
【０１０７】
【化１７】
2019001832.tif 000019
【０１０８】
であり、ここで、
Ｐ１は、Ｈ、ＣＯＯＨで置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルキルおよび−Ｙ−Ｌ−Ｘ−Ｐ（Ｏ）（ＯＲＸ）（ＯＲＹ）から選択され；
Ｐ２は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシおよび−Ｙ−Ｌ−Ｘ−Ｐ（Ｏ）（ＯＲＸ）（ＯＲＹ）から選択されるが；
但し、Ｐ１およびＰ２のうちの少なくとも１個が−Ｙ−Ｌ−Ｘ−Ｐ（Ｏ）（ＯＲＸ）（ＯＲＹ）であることを条件とし；
ＲＢは、ＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルから選択され；
ＲＸおよびＲＹは独立に、ＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルから選択され；
Ｘは、共有結合、ＯおよびＮＨから選択され；
Ｙは、共有結合、Ｏ、Ｃ（Ｏ）、ＳおよびＮＨから選択され；
Ｌは、共有結合、ハロ、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、−ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２および−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２から独立に選択される１から４個の置換基でそれぞれ置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルキレン、Ｃ１〜Ｃ６アルケニレン、アリーレン、ヘテロアリーレン、Ｃ１〜Ｃ６アルキレンオキシおよび−（（ＣＨ２）ｐＯ）ｑ（ＣＨ２）ｐ−から選択され；
ｐはそれぞれ独立に、１、２、３、４、５および６から選択され；かつ
ｑは、１、２、３および４から選択される。
【０１０９】
式（Ｋ’）の一部の実施形態では：Ｐ１は、ＣＯＯＨで場合によって置換されているＣ１〜Ｃ６アルキルおよび−Ｙ−Ｌ−Ｘ−Ｐ（Ｏ）（ＯＲＸ）（ＯＲＹ）から選択され；Ｐ２は、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシおよび−Ｙ−Ｌ−Ｘ−Ｐ（Ｏ）（ＯＲＸ）（ＯＲＹ）から選択され；ＲＢはＣ１〜Ｃ６アルキルであり；Ｘは共有結合であり；Ｌは、ハロ、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、−ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２および−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２から独立に選択される１〜４個の置換基でそれぞれ場合によって置換されている、Ｃ１〜Ｃ６アルキレンおよび−（（ＣＨ２）ｐＯ）ｑ（ＣＨ２）ｐ−から選択され；各ｐは、独立に、１、２および３から選択され；ｑは、１および２から選択される。
【０１１０】
式（Ｆ）−ＴＬＲ７アゴニスト［９］
ＴＬＲアゴニストは、式（Ｆ）：
【０１１１】
【化１８】
2019001832.tif 000020
【０１１２】
による化合物で有り得、ここで、
Ｘ３は、Ｎであり；
Ｘ４は、ＮまたはＣＲ３であり、
Ｘ５は、−ＣＲ４＝ＣＲ５−であり；
Ｒ１およびＲ２はＨであり；
Ｒ３は、Ｈであり；
Ｒ４およびＲ５はそれぞれ独立に、Ｈ、ハロゲン、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ７、−Ｃ（Ｏ）Ｒ７、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１１Ｒ１２）、−Ｎ（Ｒ１１Ｒ１２）、−Ｎ（Ｒ９）２、−ＮＨＮ（Ｒ９）２、−ＳＲ７、−（ＣＨ２）ｎＯＲ７、−（ＣＨ２）ｎＲ７、−ＬＲ８、−ＬＲ１０、−ＯＬＲ８、−ＯＬＲ１０、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６ヘテロアルキル、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル、Ｃ２〜Ｃ８アルケン、Ｃ２〜Ｃ８アルキン、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルコキシ、アリール、ヘテロアリール、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキルおよびＣ３〜Ｃ８ヘテロシクロアルキルから選択され、ここで、Ｒ４およびＲ５の前記Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６ヘテロアルキル、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル、Ｃ２〜Ｃ８アルケン、Ｃ２〜Ｃ８アルキン、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルコキシ、アリール、ヘテロアリール、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキルおよびＣ３〜Ｃ８ヘテロシクロアルキル基はそれぞれ、ハロゲン、−ＣＮ、−ＮＯ２、−Ｒ７、−ＯＲ８、−Ｃ（Ｏ）Ｒ８、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ８、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ８、−Ｎ（Ｒ９）２、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ８）２、−ＯＰ（Ｏ）（ＯＲ８）２、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ１０）２、−ＯＰ（Ｏ）（ＯＲ１０）２、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ９）２、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ８、−Ｓ（Ｏ）Ｒ８、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ９）２および−ＮＲ９Ｓ（Ｏ）２Ｒ８から独立に選択される１から３個の置換基で置換されていてもよいか；  
または、Ｒ３およびＲ４またはＲ４およびＲ５またはＲ５およびＲ６は、隣接する環原子上に存在する場合、場合によって一緒に連結して、５員〜６員の環を形成することができ、その際、前記５員〜６員の環は、Ｒ７で置換されていてもよく；
Ｌはそれぞれ独立に、結合、−（Ｏ（ＣＨ２）ｍ）ｔ−、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニレンおよびＣ２〜Ｃ６アルキニレンから選択され、ここで、Ｌの前記Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニレンおよびＣ２〜Ｃ６アルキニレンはそれぞれ、ハロゲン、−Ｒ８、−ＯＲ８、−Ｎ（Ｒ９）２、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ８）２、−ＯＰ（Ｏ）（ＯＲ８）２、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ１０）２および−ＯＰ（Ｏ）（ＯＲ１０）２から独立に選択される１から４個の置換基で置換されていてもよく；
Ｒ７は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、アリール、ヘテロアリール、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、Ｃ１〜Ｃ６ヘテロアルキル、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル、Ｃ２〜Ｃ８アルケン、Ｃ２〜Ｃ８アルキン、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルコキシおよびＣ３〜Ｃ８ヘテロシクロアルキルから選択され、ここで、Ｒ７の前記Ｃ１〜Ｃ６アルキル、アリール、ヘテロアリール、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、Ｃ１〜Ｃ６ヘテロアルキル、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル、Ｃ２〜Ｃ８アルケン、Ｃ２〜Ｃ８アルキン、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルコキシおよびＣ３〜Ｃ８ヘテロシクロアルキル基はそれぞれ、１から３個のＲ１３基で置換されていてもよく、Ｒ１３はそれぞれ独立に、ハロゲン、
【０１１３】
【化１９】
2019001832.tif 000021
【０１１４】
から選択され；
Ｒ８はそれぞれ独立に、Ｈ、−ＣＨ（Ｒ１０）２、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ２〜Ｃ８アルケン、Ｃ２〜Ｃ８アルキン、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６ヘテロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、Ｃ２〜Ｃ８ヘテロシクロアルキル、Ｃ１〜Ｃ６ヒドロキシアルキルおよびＣ１〜Ｃ６ハロアルコキシから選択され、ここで、Ｒ８の前記Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ２〜Ｃ８アルケン、Ｃ２〜Ｃ８アルキン、Ｃ１〜Ｃ６ヘテロアルキル、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、Ｃ２〜Ｃ８ヘテロシクロアルキル、Ｃ１〜Ｃ６ヒドロキシアルキルおよびＣ１〜Ｃ６ハロアルコキシ基はそれぞれ、−ＣＮ、Ｒ１１、−ＯＲ１１、−ＳＲ１１、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１１、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ１１、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ９）２、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１１、−ＮＲ９Ｃ（Ｏ）Ｒ１１、−ＮＲ９Ｒ１０、−ＮＲ１１Ｒ１２、−Ｎ（Ｒ９）２、−ＯＲ９、−ＯＲ１０、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１１Ｒ１２、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１１ＯＨ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ１１、−Ｓ（Ｏ）Ｒ１１、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ１１Ｒ１２、−ＮＲ１１Ｓ（Ｏ）２Ｒ１１、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ１１）２および−ＯＰ（Ｏ）（ＯＲ１１）２から独立に選択される１から３個の置換基で置換されていてもよく；
Ｒ９はそれぞれ独立に、Ｈ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ８、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ８、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１０、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１０、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ１０、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６ヘテロアルキルおよびＣ３〜Ｃ６シクロアルキルから選択されるか、またはＲ９はそれぞれ独立に、結合しているＮと一緒にＣ３〜Ｃ８ヘテロシクロアルキルを形成しているＣ１〜Ｃ６アルキルであり、ここで、前記Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクロアルキル環は場合によって、Ｎ、ＯおよびＳから選択される追加のヘテロ原子を含有してもよく、Ｒ９の前記Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６ヘテロアルキル、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキルまたはＣ３〜Ｃ８ヘテロシクロアルキル基はそれぞれ、−ＣＮ、Ｒ１１、−ＯＲ１１、−ＳＲ１１、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１１、ＯＣ（Ｏ）Ｒ１１、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１１、−ＮＲ１１Ｒ１２、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１１Ｒ１２、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１１ＯＨ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ１１、−Ｓ（Ｏ）Ｒ１１、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ１１Ｒ１２、−ＮＲ１１Ｓ（Ｏ）２Ｒ１１、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ１１）２および−ＯＰ（Ｏ）（ＯＲ１１）２から独立に選択される１から３個の置換基で置換されていてもよく；
Ｒ１０はそれぞれ独立に、アリール、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクロアルキルおよびヘテロアリールから選択され、ここで、前記アリール、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクロアルキルおよびヘテロアリール基は、ハロゲン、−Ｒ８、−ＯＲ８、−ＬＲ９、−ＬＯＲ９、−Ｎ（Ｒ９）２、−ＮＲ９Ｃ（Ｏ）Ｒ８、−ＮＲ９ＣＯ２Ｒ８、−ＣＯ２Ｒ８、−Ｃ（Ｏ）Ｒ８および−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ９）２から選択される１から３個の置換基で置換されていてもよく；
Ｒ１１およびＲ１２は独立に、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６ヘテロアルキル、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル、アリール、ヘテロアリール、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキルおよびＣ３〜Ｃ８ヘテロシクロアルキルから選択され、ここで、Ｒ１１およびＲ１２の前記Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６ヘテロアルキル、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル、アリール、ヘテロアリール、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキルおよびＣ３〜Ｃ８ヘテロシクロアルキル基はそれぞれ、ハロゲン、−ＣＮ、Ｒ８、−ＯＲ８、Ｃ（Ｏ）Ｒ８、ＯＣ（Ｏ）Ｒ８、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ８、−Ｎ（Ｒ９）２、−ＮＲ８Ｃ（Ｏ）Ｒ８、−ＮＲ８Ｃ（Ｏ）ＯＲ８、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ９）２、Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクロアルキル、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ８、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ９）２、−ＮＲ９Ｓ（Ｏ）２Ｒ８、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキルおよびＣ１〜Ｃ６ハロアルコキシから独立に選択される１から３個の置換基で置換されていてもよいか；
または、Ｒ１１およびＲ１２はそれぞれ独立に、結合しているＮ原子と一緒になって、置換されていてもよく、Ｎ、ＯおよびＳから選択される追加のヘテロ原子を含有してもよいＣ３〜Ｃ８ヘテロシクロアルキル環を形成しているＣ１〜Ｃ６アルキルであり；
環Ａは、アリールまたはヘテロアリールであり、ここで、環Ａの前記アリールおよびヘテロアリール基は、１から３個のＲＡ基で置換されていてもよく、ここで、ＲＡはそれぞれ独立に、
【０１１５】
【化２０】
2019001832.tif 000022
【０１１６】
から選択されるか、または環Ａ上の２個の隣接するＲＡ置換基は、環員として２個までのヘテロ原子を含有する５員〜６員の環を形成しており；
ｎは、出現する毎に独立に、０、１、２、３、４、５、６、７または８であり；
ｍはそれぞれ独立に、１、２、３、４、５および６から選択され、かつ
ｔは、１、２、３、４、５、６、７または８である。
【０１１７】
式（Ｃ）、（Ｄ）、（Ｅ）、（Ｇ）および（Ｈ）
前記で検討されているとおり、ＴＬＲアゴニストは、式（Ｃ）、（Ｄ）、（Ｅ）、または（Ｈ）であり得る。
【０１１８】
式（Ｃ）、（Ｄ）、（Ｅ）および（Ｈ）の「親」化合物は、有用なＴＬＲ７アゴニストであるが（参考文献７〜１０および３２〜４８を参照されたい）、本明細書では、好ましくは、リン含有部分の付着によって修飾されている。
【０１１９】
式（Ｃ）、（Ｄ）および（Ｅ）の一部の実施形態では、化合物は、下記に示されている式（Ｃ’）、（Ｄ’）および（Ｅ’）による構造を有する：
【０１２０】
【化２１】
2019001832.tif 000023
【０１２１】
式（Ｃ）、（Ｄ）、（Ｅ）および（Ｈ）の本発明の実施形態はまた、式（Ｃ’）、（Ｄ’）、（Ｅ’）および（Ｈ’）にも当てはまる。
【０１２２】
式（Ｃ）、（Ｄ）、（Ｅ）および（Ｈ）の一部の実施形態では：ＸはＯであり；Ｌは、ハロ、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、−ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２および−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２から独立に選択される１から４個の置換基でそれぞれ置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルキレンおよび−（（ＣＨ２）ｐＯ）ｑ（ＣＨ２）ｐ−から選択され；ｐはそれぞれ独立に、１、２および３から選択され；かつｑは、１および２から選択される。
【０１２３】
式（Ｃ）の他の実施形態では：Ｐ３は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ＣＦ３および−（（ＣＨ２）ｐＯ）ｑ（ＣＨ２）ｐＯｓ−および−Ｙ−Ｌ−Ｘ−Ｐ（Ｏ）（ＯＲＸ）（ＯＲＹ）から選択され；Ｐ４は、−Ｃ１〜Ｃ６アルキルアリールおよび−Ｙ−Ｌ−Ｘ−Ｐ（Ｏ）（ＯＲＸ）（ＯＲＹ）から選択され；ＸｃはＣＨであり；Ｘは共有結合であり；Ｌは、ハロ、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、−ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２および−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２から独立に選択される１から４個の置換基でそれぞれ置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルキレンおよび−（（ＣＨ２）ｐＯ）ｑ（ＣＨ２）ｐ−から選択され；ｐはそれぞれ独立に１、２および３から選択され；ｑは、１または２である。
【０１２４】
式（Ｃ）、（Ｄ）、（Ｅ）および（Ｈ）の他の実施形態では：Ｘは共有結合であり；Ｌは、ハロ、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、−ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２および−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２から独立に選択される１から４個の置換基でそれぞれ置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルキレンおよび−（（ＣＨ２）ｐＯ）ｑ（ＣＨ２）ｐ−から選択され；ｐはそれぞれ独立に、１、２および３から選択され；かつｑは、１および２から選択される。
【０１２５】
式（Ｃ）の他の実施形態では：Ｐ３は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ＣＦ３および−（（ＣＨ２）ｐＯ）ｑ（ＣＨ２）ｐＯｓ−および−Ｙ−Ｌ−Ｘ−Ｐ（Ｏ）（ＯＲＸ）（ＯＲＹ）から選択され；Ｐ４は、−Ｃ１〜Ｃ６アルキルアリールおよび−Ｙ−Ｌ−Ｘ−Ｐ（Ｏ）（ＯＲＸ）（ＯＲＹ）から選択され；ＸｃはＮであり；Ｘは共有結合であり；Ｌは、ハロ、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、−ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２および−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２から独立に選択される１から４個の置換基でそれぞれ置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルキレンおよび−（（ＣＨ２）ｐＯ）ｑ（ＣＨ２）ｐ−から選択され；ｐはそれぞれ独立に１、２および３から選択され；ｑは、１および２から選択される。
【０１２６】
式（Ｄ）の他の実施形態では：Ｐ５は、Ｃ１〜Ｃ６アルキルおよび−Ｙ−Ｌ−Ｘ−Ｐ（Ｏ）（ＯＲＸ）（ＯＲＹ）から選択される。
【０１２７】
式（Ｄ）の他の実施形態では：ＸはＯであり；Ｌは、ハロ、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、−ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２および−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２から独立に選択される１から４個の置換基でそれぞれ置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルキレンおよび−（（ＣＨ２）ｐＯ）ｑ（ＣＨ２）ｐ−から選択され；ｐはそれぞれ独立に１、２および３から選択され；ｑは、１および２から選択される。
【０１２８】
式（Ｄ）の他の実施形態では：Ｘは共有結合であり；Ｌは、ハロ、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、−ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２および−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２から独立に選択される１から４個の置換基でそれぞれ置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルキレンおよび−（（ＣＨ２）ｐＯ）ｑ（ＣＨ２）ｐ−から選択され；ｐはそれぞれ独立に１、２および３から選択され；ｑは、１および２から選択される。
【０１２９】
式（Ｅ）の他の実施形態では：ＸはＯであり；Ｌは、ハロ、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、−ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２および−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２から独立に選択される１から４個の置換基でそれぞれ置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルキレンおよび−（（ＣＨ２）ｐＯ）ｑ（ＣＨ２）ｐ−から選択され；ｐはそれぞれ独立に、１、２および３から選択され；かつｑは、１および２から選択される。
【０１３０】
式（Ｅ）の他の実施形態では：Ｘは共有結合であり；Ｌは、ハロ、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、−ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２および−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２から独立に選択される１から４個の置換基でそれぞれ置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルキレンおよび−（（ＣＨ２）ｐＯ）ｑ（ＣＨ２）ｐ−から選択され；ｐはそれぞれ独立に、１、２および３から選択され；かつｑは、１および２から選択される。
【０１３１】
式（Ｅ）の他の実施形態では：ＸＥはＣＨ２であり、Ｐ８は、−Ｙ−Ｌ−Ｘ−Ｐ（Ｏ）（ＯＲＸ）（ＯＲＹ）で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルコキシである。
【０１３２】
式（Ｅ）の他の実施形態では：Ｐ９は、ＯＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルで置換されていてもよい−ＮＨＣ１〜Ｃ６アルキルならびに−Ｙ−Ｌ−Ｘ−Ｐ（Ｏ）（ＯＲＸ）（ＯＲＹ）である。
【０１３３】
一部の実施形態では、式（Ｃ）の化合物は、Ｐ４が−Ｙ−Ｌ−Ｘ−Ｐ（Ｏ）（ＯＲＸ）（ＯＲＹ）である化合物ではない。
【０１３４】
一部の実施形態では、式（Ｃ）の化合物では、Ｐ４は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、−Ｃ１〜Ｃ６アルキルアリールから選択される。
【０１３５】
式（Ｈ）の一部の実施形態では：ＸＨ１−ＸＨ２はＣＲＨ２ＲＨ３であり、ＲＨ２およびＲＨ３はＨであり、ＸＨ３はＮであり、Ｘは共有結合であり；Ｌは、ハロ、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、−ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２および−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２から独立に選択される１から４個の置換基でそれぞれ置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルキレンおよび−（（ＣＨ２）ｐＯ）ｑ（ＣＨ２）ｐ−から選択され；ｐはそれぞれ独立に１、２および３から選択され；かつｑは、１および２から選択される。
【０１３６】
式（Ｈ）の一部の実施形態では：ＸＨ１−ＸＨ２はＣＲＨ２ＲＨ３であり、ＲＨ２およびＲＨ３はＨであり、ＸＨ３はＮであり、ＸはＯであり；Ｌは、ハロ、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、−ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２および−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２から独立に選択される１から４個の置換基でそれぞれ置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルキレンおよび−（（ＣＨ２）ｐＯ）ｑ（ＣＨ２）ｐ−から選択され；ｐはそれぞれ独立に１、２および３から選択され；かつｑは、１および２から選択される。
【０１３７】
式（Ｇ）の「親」化合物は、有用なＴＬＲ８アゴニストであるが（参考文献１１および１２を参照されたい）、好ましくは吸着を可能にするように、本明細書では、リン含有部分の付着によって修飾されている。式（Ｇ）の一部の実施形態では、化合物は、式（Ｇ’）：
【０１３８】
【化２２】
2019001832.tif 000024
【０１３９】
による構造を有する。
【０１４０】
式（Ｇ）または（Ｇ’）の一部の実施形態では：ＸＧはＣであり、
【０１４１】
【化２３】
2019001832.tif 000025
【０１４２】
は二重結合を表している。
【０１４３】
式（Ｇ）または（Ｇ’）の一部の実施形態では：Ｘは共有結合であり；Ｌは、ハロ、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、−ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２および−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２から独立に選択される１から４個の置換基でそれぞれ置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルキレンおよび−（（ＣＨ２）ｐＯ）ｑ（ＣＨ２）ｐ−から選択され；ｐはそれぞれ独立に１、２および３から選択され；ｑは、１および２から選択される。
【０１４４】
式（Ｇ）または（Ｇ’）の一部の実施形態では：ＸはＯであり；Ｌは、ハロ、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、−ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２および−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２から独立に選択される１から４個の置換基でそれぞれ置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルキレンおよび−（（ＣＨ２）ｐＯ）ｑ（ＣＨ２）ｐ−から選択され；ｐはそれぞれ独立に１、２および３から選択され；かつｑは、１および２から選択される。
【０１４５】
水中油型エマルジョンアジュバント
本発明の第２の態様に従い、ワクチンは水中油型エマルジョンでアジュバント化される。様々なこのようなエマルジョンが公知であり、例えばＭＦ５９およびＡＳ０３が両方とも欧州で認可されている。
【０１４６】
有用なエマルジョンアジュバントは、少なくとも１種の油および少なくとも１種の界面活性剤を典型的に含み、油（複数可）および界面活性剤（複数可）は生分解性（代謝可能な）かつ生体適合性である。エマルジョン内の油滴は一般にサブミクロンの直径を有し、それらの小さなサイズは、安定したエマルジョンを得るためのマイクロフルダイザー（ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｓｅｒ）を用いて、または、例えば位相反転などの代替法により、容易に達成することができる。小滴の少なくとも８０％（数で）が２２０ｎｍ未満の直径を有するエマルジョンは、濾過滅菌に供することができるので好ましい。
【０１４７】
上記エマルジョンは、動物（例えば魚類）供給源および／または植物供給源からの油を含むことができる。植物油の供給源としては、堅果、種子および穀類が挙げられる。ラッカセイ油、ダイズ油、ヤシ油およびオリーブ油が、最も一般的に利用できる堅果油の例である。例えばホホバ豆から得られる、ホホバ油を使用することができる。種子油としては、紅花油、綿実油、ヒマワリ種子油、ゴマ種子油およびこれらに類するものが挙げられる。穀類の群の中で、トウモロコシ油が最も容易に入手できるが、他の穀物粒（ｃｅｒｅａｌ  ｇｒａｉｎ）、例えばコムギ、オートムギ、ライムギ、イネ、テフ、ライコムギおよびこれらに類するものの油も使用することができる。グリセロールおよび１，２−プロパンジオールの６〜１０炭素脂肪酸エステルは、種子油中に天然に存在しないが、堅果油および種子油から出発して適切な材料の加水分解、分離およびエステル化によって調製することができる。哺乳動物の乳からの脂肪および油は代謝性であり、従って、本発明で使用することができる。動物供給源から純粋な油を得るために必要な分離、精製、鹸化および他の手段についての手順は、当該技術分野において周知である。
【０１４８】
殆どの魚類は、容易に回収できる代謝性の油を含有する。例えば、タラ肝油、サメ肝油、および鯨油、例えば鯨ろうが、ここで使用することができる魚油のいくつかの例である。多数の分岐鎖油が５炭素イソプレン単位で生化学的に合成されており、一般にテルペノイドと呼ばれる。サメ肝油は、スクアレン、２，６，１０，１５，１９，２３−ヘキサメチル−２，６，１０，１４，１８，２２−テトラコサヘキサン、として公知の、分岐した不飽和テルペノイドを含有し、これは、本発明での使用に特に好ましい（下記を参照のこと）。スクワラン、スクアレンの飽和類似体も有用な油である。スクアレンおよびスクワランを含む、魚油は、商業的供給源から容易に入手することができ、または当該技術分野において公知の方法によって得ることができる。他の好ましい油は、トコフェロール類（下記参照）である。油の混合物を使用することができる。
【０１４９】
アジュバントエマルジョン中の油の好ましい全量（体積％）は、１から２０％、例えば２〜１０％である。５体積％のスクアレン含有量が特に有用である。
【０１５０】
界面活性剤は、これらの「ＨＬＢ」（親水性／親油性バランス）により分類することができる。本発明の好ましい界面活性剤は、少なくとも１０、例えば約１５の周囲のＨＬＢを有する。本発明は、これらに限定されないが、以下を含む界面活性剤を使用することができる：ポリオキシエチレンソルビタンエステル界面活性剤（一般的にＴｗｅｅｎと呼ばれる）、特にポリソルベート２０またはポリソルベート８０；エチレンオキシド（ＥＯ）、プロピレンオキシド（ＰＯ）、および／またはブチレンオキシド（ＢＯ）のコポリマー、（ＤＯＷＦＡＸ（商標）の商標名で販売）、例えば、線形ＥＯ／ＰＯブロックコポリマーなど；オクトキシノール（繰返しのエトキシ（オキシ−１，２−エタンジイル）基の数において異なることができる）であり、オクトキシノール−９（トリトンＸ−１００、またはｔ−オクチルフェノキシポリエトキシエタノール）が特に興味深い；（オクチルフェノキシ）ポリエトキシエタノール（ＩＧＥＰＡＬ  ＣＡ−６３０／ＮＰ−４０）；リン脂質、例えば、ホスファチジルコリン（レシチン）など；ノニルフェノールエトキシレート、例えば、Ｔｅｒｇｉｔｏｌ（商標）ＮＰシリーズなど；ラウリル、セチル、ステアリルおよびオレイルアルコールに由来するポリオキシエチレン脂肪エーテル（Ｂｒｉｊ界面活性剤として公知）、例えば、トリエチレングリコールモノラウリルエーテル（Ｂｒｉｊ３０）など；およびソルビタンエステル（一般にＳｐａｎｓとして公知）、例えば、トリオレイン酸ソルビタン（Ｓｐａｎ８５）またはモノラウリン酸ソルビタンなど。
【０１５１】
本発明で使用されるエマルジョンとして、好ましくは非イオン性界面活性剤（複数可）が挙げられる。エマルジョンに含めるのに好ましい界面活性剤は、ポリソルベート８０（ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート；Ｔｗｅｅｎ８０）、Ｓｐａｎ８５（トリオレイン酸ソルビタン）、レシチンまたはトリトンＸ−１００である。界面活性剤の混合物、例えば、ポリソルベート８０とトリオレイン酸ソルビタンの混合物を使用することができる。ポリオキシエチレンソルビタンエステル、例えば、ポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ８０）などと、オクトキシノール、例えば、ｔ−オクチルフェノキシポリエトキシエタノール（トリトンＸ−１００）などとの組合せもまた有用である。もう１つの有用な組合せは、ラウレス９ならびにポリオキシエチレンソルビタンエステルおよび／またはオクトキシノールである。界面活性剤の混合物が使用される場合、混合物のＨＬＢは、これらの相対的な重みづけ（体積による）に従い計算する。例えば、ポリソルベート８０とトリオレイン酸ソルビタンの体積１：１の好ましい混合物は８．４のＨＬＢを有する。
【０１５２】
アジュバントエマルジョン中の全界面活性剤（体積％）の好ましい量は、０．１から２％、例えば０．２５〜２％である。１体積％という全含有量、例えば０．５体積％のポリソルベート８０および０．５体積％のトリオレイン酸ソルビタンは、特に有用である。
【０１５３】
有用なエマルジョンは、公知の技術を使用して調製することができ、例えば、参考文献３および２９−３０３５を参照されたい。
【０１５４】
本発明で有用な特定の水中油型エマルジョンアジュバントとして、これらに限定されないが、以下が挙げられる：
・スクアレン、ポリソルベート８０、およびトリオレイン酸ソルビタンのサブミクロンエマルジョン。体積によるエマルジョンの組成は、約５％のスクアレン、約０．５％のポリソルベート８０および約０．５％のトリオレイン酸ソルビタンとすることができる。重量の点から見ると、これらの比は４．３％のスクアレン、０．５％のポリソルベート８０および０．４８％のトリオレイン酸ソルビタンとなる。このアジュバントは、参考文献２の第１０章および参考文献３の第１２章により詳細に記載されているとおり、「ＭＦ５９」として公知である［３６−３８］。ＭＦ５９エマルジョンは、有利には、シトレートイオン、例えば１０ｍＭのクエン酸ナトリウム緩衝液を含む。
・スクアレン、トコフェロール、およびポリソルベート８０のエマルジョン。エマルジョンはリン酸緩衝生理食塩水を含み得る。これらのエマルジョンは、２〜１０％のスクアレン、２〜１０％のトコフェロールおよび０．３〜３％のポリソルベート８０を有することができ、スクアレン：トコフェロールの重量比は好ましくは≦１（例えば０．９０）であり、これは、より安定したエマルジョンを提供することができるからである。スクアレンおよびポリソルベート８０は、約５：２の体積比、または約１１：５の重量比で存在し得る。したがって、３種の成分（スクアレン、トコフェロール、ポリソルベート８０）は、１０６８：１１８６：４８５または５５：６１：２５辺りの重量比で存在し得る。このアジュバントは「ＡＳ０３」として公知である。このタイプのもう１つの有用なエマルジョンは、ヒト１用量あたり、０．５〜１０ｍｇのスクアレン、０．５〜１１ｍｇのトコフェロール、および０．１〜４ｍｇのポリソルベート８０［３９］を、例えば上記に考察された比で含み得る。
・サポニン（例えばＱｕｉｌＡまたはＱＳ２１）およびステロール（例えばコレステロール）が螺旋状ミセルとして関連するエマルジョン［４０］。
・０．５〜５０％の油、０．１〜１０％のリン脂質、および０．０５〜５％の非イオン性界面活性剤を有するエマルジョン。参考文献４１に記載されているとおり、好ましいリン脂質成分は、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジン酸、スフィンゴミエリンおよびカルジオリピンである。サブミクロン小滴サイズが有利である。
・スクアレン、水性溶媒、ポリオキシエチレンアルキルエーテル親水性の非イオン性界面活性剤（例えば、ポリオキシエチレン（１２）セトステアリルエーテル）および疎水性の非イオン性界面活性剤（例えば、ソルビタンエステルまたはマンナイドエステル、例えば、ソルビタンモノオレエート（ｓｏｒｂｉｔａｎ  ｍｏｎｏｌｅａｔｅ）または「Ｓｐａｎ８０」など）を含むエマルジョン。エマルジョンは、好ましくは熱可逆性があり、かつ／またはサイズ２００ｎｍ未満の油滴（体積による）を少なくとも９０％有する［４２］。エマルジョンはまた以下のうちの１種または複数を含み得る：アルジトール；凍結保護剤（例えば糖、例えば、ドデシルマルトシドおよび／またはスクロース）；および／またはアルキルポリグリコシド。エマルジョンはまた、ＴＬＲ４アゴニスト、例えば、その化学構造が糖環を含まないものなどを含み得る［４３］。そのようなエマルジョンは凍結乾燥されていてもよい。「ＡＦ０３」製品はそのようなエマルジョンの１つである。
【０１５５】
本発明で使用される好ましい水中油型エマルジョンは、スクアレンおよびポリソルベート８０を含む。
【０１５６】
エマルジョンは、ワクチン製造中にＴｄａＰ抗原と混合してもよいし、または送達時に即時調合によりこれらを混合してもよい。したがって、一部の実施形態では、アジュバントおよび抗原は、包装された、または流通したワクチンの中に別々に保持され、使用時にはいつでも最終処方される状態にある。混合の際には（バルク製造中、または使用間際であるかどうかに関わらず）、抗原は一般に水性の形態であることによって、最終ワクチンは、２つの液体を混合することによって調製するようになる。混合用の２つの液体の体積比は異なることができるが（例えば、５：１から１：５）、一般に約１：１である。エマルジョンおよび抗原がキット内で別々に保存されている場合、製品は、アジュバント化した液体ワクチンを得るための混合用に、エマルジョンを含有するバイアルおよび水性抗原を含有するバイアルとして提示されてもよい（単回用量または複数回用量）。
【０１５７】
本発明の好ましいエマルジョンはスクアレン油を含む。これは普通、サメ油から調製されるが、代替の原料は公知であり、例えば参考文献４４（イースト菌）および４５（オリーブ油）を参照されたい。参考文献４６に開示されているとおり、スクアレン（ＴＥＱ）１グラムあたり６６１ピコグラム未満のＰＣＢを含有するスクアレンが本発明での使用に好ましい。エマルジョンは、参考文献４７に開示されているとおり、例えば二回の蒸留により調製した高い純度のスクアレンから好ましくは作製される。
【０１５８】
組成物がトコフェロールを含む場合、α、β、γ、δ、εまたはξトコフェロールのうちのいずれかを使用することができるが，α−トコフェロールが好ましい。トコフェロールは、いくつかの形態、例えば、異なる塩および／または異性体などの形態をとることができる。塩としては、有機酸塩、例えば、コハク酸塩、酢酸塩、ニコチン酸塩などが挙げられる。Ｄ−α−トコフェロールおよびＤＬ−α−トコフェロールは両方とも使用することができる。トコフェロールは、エマルジョンを安定化させるのに役立つことができる抗酸化剤特性を有する［４８］。好ましいα−トコフェロールはＤＬ−α−トコフェロールであり、このトコフェロールの好ましい塩はコハク酸塩である。
【０１５９】
ジフテリアトキソイド
ジフテリアは、グラム陽性の無芽胞性好気性細菌であるＣｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅにより引き起こされる。この生物はプロファージコードＡＤＰ−リボシル化外毒素（「ジフテリア毒素」）を発現し、その毒素は、（例えばホルムアルデヒドを使用して）処理することによって、もはや毒性はないが、抗原性のままであり、注射後に特異的な抗毒素抗体の生成を刺激することができるトキソイドが得られる。ジフテリアトキソイドは、参考文献６９の第１３章により詳細に開示されている。好ましいジフテリアトキソイドは、ホルムアルデヒド処理によって調製されるものである。そのジフテリアトキソイドは、Ｃ．  ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅを増殖培地（例えばＦｅｎｔｏｎ培地、またはＬｉｎｇｇｏｕｄ＆Ｆｅｎｔｏｎ培地）（これらにウシ抽出物を補充してもよい）中で増殖させ、続いてホルムアルデヒド処理、限外濾過および沈殿を行うことによって得ることができる。次いで、トキソイド化した材料を滅菌濾過および／または透析を含むプロセスにより処理してもよい。
【０１６０】
ジフテリアトキソイドの量は、国際単位（ＩＵ）で表現することができる。例えば、ＮＩＢＳＣ［７０］は、「Ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａ  Ｔｏｘｏｉｄ  Ａｄｓｏｒｂｅｄ  Ｔｈｉｒｄ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｓｔａｎｄａｒｄ  １９９９」［７１、７２］を供給し、それは、１アンプルあたり１６０ＩＵを含有する。ＩＵ系の代替として、「Ｌｆ」単位（「凝集単位」、「限界凝集用量」、または「凝集の限界」）が、１国際単位の抗毒素と混合した場合に、最適に凝集する混合物を生成するトキソイドの量として定義される［７３］。例えば、ＮＩＢＳＣは、１アンプルあたり３００Ｌｆを含有する「Ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａ  Ｔｏｘｏｉｄ，Ｐｌａｉｎ」［７４］および１アンプルあたり９００Ｌｆを含有する「Ｔｈｅ  １ｓｔ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  Ｒｅａｇｅｎｔ  Ｆｏｒ  Ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａ  Ｔｏｘｏｉｄ  Ｆｏｒ  Ｆｌｏｃｃｕｌａｔｉｏｎ  Ｔｅｓｔ」［７５］を供給する。組成物中のジフテリア毒素の濃度は、このような基準試薬に対して較正された基準物質との比較によって、凝集アッセイを使用して容易に決定することができる。ＩＵ系とＬｆ系との間の変換は、特定のトキソイド調製物に依存する。
【０１６１】
本発明の組成物中のジフテリアトキソイドの濃度は、典型的に２〜８Ｌｆ／ｍｌの範囲（例えば４Ｌｆ／ｍｌまたは５Ｌｆ／ｍｌ）であるが、理想的には≦４Ｌｆ／ｍｌである。したがって、典型的な０．５ｍｌの単位用量の体積では、ジフテリアトキソイドの量は、２Ｌｆ、２．５Ｌｆ、または２Ｌｆ未満とすることができる。
【０１６２】
組成物中のジフテリアトキソイドは、好ましくはアルミニウム塩上に、好ましくは水酸化アルミニウムアジュバント上に吸着されている（より好ましくは完全に吸着されている）。
【０１６３】
破傷風トキソイド
破傷風は、グラム陽性、芽胞形成性桿菌属である、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｔｅｔａｎｉにより引き起こされる。この生物は、エンドペプチダーゼ（「破傷風毒素」）を発現し、これを処理することによって、もはや毒性はないが、抗原性のままであり、注射後に特異的な抗毒素抗体の生成を刺激することができるトキソイドが得られる。破傷風トキソイドは、参考文献６９の第２７章でより詳細に開示されている。好ましい破傷風トキソイドは、ホルムアルデヒド処理により調製されたものである。破傷風トキソイドは、Ｃ．ｔｅｔａｎｉを増殖培地（例えば、ウシカゼイン由来のＬａｔｈａｍ培地）中で増殖させ、続いてホルムアルデヒド処理、限外濾過法および沈殿を行うことによって得ることができる。次いで、材料は、滅菌濾過および／または透析を含むプロセスによって処理することができる。
【０１６４】
破傷風トキソイドの量は、国際単位（ＩＵ）で表現することができる。例えば、ＮＩＢＳＣは、「Ｔｅｔａｎｕｓ  Ｔｏｘｏｉｄ  Ａｄｓｏｒｂｅｄ  Ｔｈｉｒｄ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｓｔａｎｄａｒｄ  ２０００」［７６、７７］を供給し、それは、１アンプルあたり４６９ＩＵを含有する。ジフテリアトキソイドと同様に、「Ｌｆ」単位はＩＵ系の代替である。ＮＩＢＳＣは、「Ｔｈｅ  １ｓｔ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  Ｒｅａｇｅｎｔ  ｆｏｒ  Ｔｅｔａｎｕｓ  Ｔｏｘｏｉｄ  Ｆｏｒ  Ｆｌｏｃｃｕｌａｔｉｏｎ  Ｔｅｓｔ」［７８］を供給し、それは、１アンプルあたり１０００ＬＦを含有する。組成物中のジフテリア毒素の濃度は、このような基準試薬に対して較正された基準物質との比較によって、凝集アッセイを使用して容易に決定することができる。
【０１６５】
本発明の組成物中の破傷風トキソイドの濃度は、典型的に５〜１５Ｌｆ／ｍｌ（例えば１０Ｌｆ／ｍｌ）の範囲であるが、理想的には≦９Ｌｆ／ｍｌである。したがって、典型的な０．５ｍｌの単位用量の体積では、ジフテリアトキソイドの量は５Ｌｆ、または４．５Ｌｆ未満であることができる。
【０１６６】
組成物中の破傷風トキソイドは、好ましくはその塩上に、好ましくは水酸化アルミニウムアジュバント上に吸着されている（時には完全に吸着されている）。
【０１６７】
百日咳トキソイド
Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓは百日咳を引き起こす。ワクチン中の百日咳抗原は、細胞性（全細胞、不活化Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ細胞の形態；「ｗＰ」）または無細胞性（「ａＰ」）のいずれかである。細胞性百日咳抗原の調製は、十分に記録されており（例えば、参考文献６９の第２１章を参照されたい）、例えばそれは、Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓの第Ｉ相培養物の熱不活化により得ることができる。本発明は、好ましくは無細胞性抗原を使用し、以下の３種の抗原のうちの１種、２種または（好ましくは）３種を含む：（１）無毒化百日咳毒素（百日咳トキソイド、または「ＰＴ」）；（２）線維状赤血球凝集素（「ＦＨＡ」）；（３）ペルタクチン（「６９キロダルトン外膜タンパク質」としても公知）。これら３種の抗原は、改変Ｓｔａｉｎｅｒ−Ｓｃｈｏｌｔｅ液体培地中で増殖させたＢ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ培養物からの単離により調製することができる。ＰＴおよびＦＨＡは、発酵ブロスから（例えば、ヒドロキシアパタイトゲル上への吸着により）単離することができるのに対して、ペルタクチンは、細胞から加熱処理および凝集（例えば塩化バリウムを使用して）により抽出することができる。抗原は、次に続くクロマトグラフィーおよび／または沈殿ステップにおいて精製することができる。ＰＴおよびＦＨＡは、疎水性クロマトグラフィー、親和性クロマトグラフィーおよびサイズ排除クロマトグラフィーにより精製することができる。ペルタクチンは、イオン交換クロマトグラフィー、疎水性クロマトグラフィーおよびサイズ排除クロマトグラフィー、またはＩＭＡＣにより精製することができる。ＦＨＡおよびペルタクチンは、本発明による使用の前に、ホルムアルデヒドで処理することができる。ＰＴは、好ましくは、ホルムアルデヒドおよび／またはグルタルアルデヒドの処理により無毒化される。この化学的解毒作用手順の代替として、ＰＴは、酵素活性が変異誘発によって低減した変異体ＰＴ［７９］（例えば９Ｋ／１２９Ｇ二重変異体［８０］）であってよい。
【０１６８】
本発明は、好ましくはＰＴ含有ａＰ抗原を使用する。ａＰ抗原を使用する場合、本発明の組成物は典型的に、ＰＴに加えて、ＦＨＡおよび、場合によって、ペルタクチンを含むことになる。それはまた場合によって、線毛タイプ２および３も含むことができる。
【０１６９】
無細胞性百日咳抗原の量は、典型的には、マイクログラムで表現される。本発明の組成物中の百日咳トキソイドの濃度は典型的に、２〜２０μｇ／ｍｌの範囲（例えば５μｇ／ｍｌまたは１６μｇ／ｍｌ）であるが、理想的には≦４μｇ／ｍｌである。したがって、典型的な０．５ｍｌの単位用量の体積では、ジフテリアトキソイドの量は、２．５μｇ、８μｇ、または＜２μｇとすることができる。
【０１７０】
百日咳トキソイド、ＦＨＡおよびペルタクチンのそれぞれが本発明の組成物中に存在することが通常である。これらは、様々な比（質量による）、例えば、ＰＴ：ＦＨＡ：ｐ６９の比が１６：１６：５または５：１０：６で存在してもよい。それらの３種の抗原のそれぞれが、一般に＜２０μｇ／ｍｌ、例えばそれぞれ４〜２０μｇ／ｍｌの範囲で存在することになる。百日咳抗原の総濃度＜４０μｇ／ｍｌは典型的である。ペルタクチンと比較して、ＦＨＡの質量が過剰であることが通常である。
【０１７１】
組成物中の百日咳トキソイドは好ましくは、その塩上に、好ましくは水酸化アルミニウムアジュバント上に吸着されている（時には完全に吸着されている）。いずれかのＦＨＡはまた、水酸化アルミニウムアジュバント上に吸着されていることができる。いずれのペルタクチンも、リン酸アルミニウムアジュバントに吸着されていることができる。
【０１７２】
不活化ポリオウイルス抗原（ＩＰＶ）
灰白髄炎は、３つの型のポリオウイルスのうちの１つによって引き起こされ得る。その３つの型は類似しており、同一の症状を引き起こすが、それらは抗原的には極めて異なり、１つの型による感染は、その他による感染を防御しない。したがって、参考文献６９の第２４章で説明されているとおり、本発明と共に３つのポリオウイルス抗原、すなわちポリオウイルス１型（例えばＭａｈｏｎｅｙ菌株）、ポリオウイルス２型（例えばＭＥＦ−１菌株）、およびポリオウイルス３型（例えばＳａｕｋｅｔｔ菌株）を使用することが好ましい。これらの菌株（「Ｓａｌｋ」菌株）の代替として、例えば、参考文献８１および８２に考察されているとおり、１型〜３型のうちのＳａｂｉｎ菌株を使用することができる。これらの菌株は普通のＳａｌｋ菌株より強力であることができる。
【０１７３】
ポリオウイルスは細胞培養物中で増殖してもよい。好ましい培養物は、Ｖｅｒｏ細胞株を使用し、このＶｅｒｏ細胞株は、サル腎臓由来の継続細胞株である。Ｖｅｒｏ細胞は、好都合には、培養されたマイクロキャリアであることができる。ウイルス感染前および感染中のＶｅｒｏ細胞の培養物は、ウシ由来の材料、例えば、子牛血清、およびラクトアルブミン加水分解物（例えば、ラクトアルブミンの酵素分解により得られる）の使用を含み得る。このようなウシ由来の材料は、ＢＳＥも他のＴＳＥも含まない供給源から得られるべきである。最終のワクチンは、好ましくは１０ｎｇ／ｍｌ未満、好ましくは≦１ｎｇ／ｍｌ、例えば≦５００ｐｇ／ｍｌまたは≦５０ｐｇ／ｍｌのＶｅｒｏ細胞ＤＮＡ、例えば≧５０の塩基対の長さである、１０ｎｇ／ｍｌ未満のＶｅｒｏ細胞ＤＮＡを含有する。
【０１７４】
増殖後、ビリオンは、限外濾過法、ダイアフィルトレーション、およびクロマトグラフィーなどの技術を使用して精製することができる。患者への投与の前に、ポリオウイルスを不活化させなければならず、これは、ウイルスが本発明のプロセスで使用される前に、ホルムアルデヒドでの処理により達成することができる。
【０１７５】
ウイルスは、好ましくは、個々に増殖、精製および不活化され、次いで組み合わせることによって、本発明での使用のためのバルク混合物が得られる。
【０１７６】
不活化ポリオウイルス（ＩＰＶ）の量は、典型的には「ＤＵ」単位（「Ｄ−抗原単位」［８３］）で表現される。典型的に、組成物は、ＩＰＶ抗原１／２／３を８０／１６／６４ＤＵ／ｍｌの濃度で有する（０．５ｍｌ用量あたり、４０／８／３２ＤＵ）。しかし、一部の実施形態では組成物は、より少ない抗原を含むことを介して、またはより強力な菌株を使用することにより、より低量のポリオウイルス抗原を含むことができる。１型ポリオウイルスに対して、組成物中のウイルスの濃度は、≦２０ＤＵ／ｍｌ、例えば＜１８、＜１６、＜１４、＜１２、＜１０などとすることができる。２型ポリオウイルスに対して、組成物中のウイルスの濃度は、≦４ＤＵ／ｍｌ、例えば＜３、＜２、＜１、＜０．５などとすることができる。３型ポリオウイルスに対して、組成物中のウイルスの濃度は、≦１６ＤＵ／ｍｌ、例えば＜１４、＜１２、＜１０、＜８、＜６などとすることができる。１型、２型および３型ポリオウイルスの３種すべてが存在する場合、これら３種の抗原は、それぞれＤＵ比５：１：４で存在するか、または任意の他の適切な比、例えば、Ｓａｂｉｎ菌株を使用する場合には１５：３２：４５の比で存在することができる［８１］。Ｓａｂｉｎ菌株由来の低用量の抗原は特に有用であり、これは、１型≦１０ＤＵ、２型≦２０ＤＵ、および３型≦３０ＤＵを有する（１単位用量あたり）。
【０１７７】
ポリオウイルスは、好ましくは、それらが処方される前にはいずれのアジュバントにも吸着されていないが、処方後は、それらは組成物中のアルミニウム塩（複数可）に吸着することができる。
【０１７８】
組合せワクチン
Ｄ、Ｔ、Ｐａ、および／またはポリオウイルス抗原を含むばかりでなく、本発明の免疫原性組成物は、さらなる病原体からの抗原を含むことができる。例えば，これらの抗原は、ＨＢｓＡｇ、結合体化Ｈｉｂ莢膜糖、結合体化Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ莢膜糖（血清群Ａ、Ｃ、Ｗ１３５および／またはＹのうちの１種または複数）または結合体化Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ莢膜糖であってよい。例えば、ＰＥＤＩＡＲＩＸ、ＭＥＮＶＥＯ、ＭＥＮＡＣＴＲＡ、ＮＩＭＥＮＲＩＸ、ＰＲＥＶＮＡＲ、またはＳＹＮＦＬＯＲＩＸの適切な抗原成分のうちのいずれかを使用することができる。
【０１７９】
しかし、好ましくは、ワクチンの唯一の抗原性成分は、（ｉ）ジフテリア、破傷風および百日咳に対するもの、または（ｉｉ）ジフテリア、破傷風、百日咳およびポリオウイルスに対するもののいずれかである。
【０１８０】
本発明の免疫原性組成物は、免疫原性成分として、少なくともジフテリアトキソイド、破傷風トキソイド、および百日咳トキソイドを含む。組成物は、ジフテリアトキソイドと比較して、過剰の破傷風トキソイドを含む。この過剰分は、Ｌｆ単位で測定される（しかし、過剰分はまたＩＵを介しても示すことができる、例えばＡｄａｃｅｌの含有量は、５Ｌｆの破傷風トキソイドおよび２Ｌｆのジフテリアトキソイド、または２０ＩＵの破傷風トキソイドおよび２ＩＵのジフテリアトキソイドとして提示されている）。過剰分は理想的には少なくとも１．５：１（すなわち、ジフテリアトキソイド１Ｌｆごとに対して、少なくとも１．５Ｌｆの破傷風トキソイド）であり、例えば２：１または２．５：１である。過剰分は普通５倍を超えないものとする（再度、Ｌｆ単位で）。
【０１８１】
本開示の独立した実施形態として、本発明は、百日咳トキソイド（例えば、ＰＴ−９Ｋ／１２９Ｇ二重変異体）、線維状赤血球凝集素およびペルタクチンが１：１：２の質量比で存在する、無細胞性百日咳成分を含む免疫原性組成物を提供する。例えば、組成物は、１単位用量あたり４μｇの百日咳トキソイド、４μｇのＦＨＡおよび８μｇのペルタクチンを含むことができる。組成物はまた、ＴｄａＰ組合せを提供するために、ジフテリアトキソイド（例えば、１単位用量あたり２Ｌｆ）および破傷風トキソイド（例えば、１用量あたり５Ｌｆ）を含むことができる。この組成物はまた、アルミニウム塩（例えば、水酸化アルミニウム）を含むアジュバントと、場合によって、本明細書中の他の箇所で記載されているとおりのＴＬＲアゴニストとを含むことができる。
【０１８２】
薬学的組成物および製品
本発明は、種々の免疫原性組成物を提供する。これらは、理想的には、ヒトでの使用に適切な薬学的組成物である。薬学的組成物は、通常、免疫原およびアジュバント成分に加えて成分を含み、例えばそれらは典型的には、１種または複数の薬学的キャリア（複数可）および／または賦形剤（複数可）を含む。そのような成分についての徹底的な検討は、参考文献８４において入手することができる。
【０１８３】
薬学的組成物は好ましくは、特に投与の時点では水性形態であるが、それらはまた、非水性液体形態で、または乾燥形態で、例えばゼラチンカプセル剤として、または凍結乾燥物（ｌｙｏｐｈｉｌｉｓａｔｅ）などとして提供することができる。
【０１８４】
薬学的組成物は、チオメルサールまたは２−フェノキシエタノールなどの１種または複数の防腐剤を含み得る。水銀を含有しない組成物が好ましく、防腐剤を含まないワクチンを調製することができる。
【０１８５】
薬学的組成物は、例えば張度を制御するために、ナトリウム塩などの生理学的塩を含んでもよい。塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）が典型的であり、これは、１から２０ｍｇ／ｍｌ、例えば１０±２ｍｇ／ｍｌまたは９ｍｇ／ｍｌで存在し得る。存在し得る他の塩には、塩化カリウム、二水素リン酸カリウム、リン酸二ナトリウム脱水物（ｄｉｓｏｄｉｕｍ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｄｅｈｙｄｒａｔｅ）、塩化マグネシウム、塩化カルシウムなどが含まれる。
【０１８６】
薬学的組成物は、２００ｍＯｓｍ／ｋｇから４００ｍＯｓｍ／ｋｇ、例えば２４０〜３６０ｍＯｓｍ／ｋｇまたは２９０〜３１０ｍＯｓｍ／ｋｇの質量オスモル濃度を有してよい。組成物は、ヒトと等張性であり得る。
【０１８７】
薬学的組成物は、化合物（不溶性アルミニウム塩を用いるか、または用いずに）を淡水（ｐｌａｉｎ  ｗａｔｅｒ）（例えば注射用水）中に含み得るが、通常は１種または複数の緩衝液を含む。典型的な緩衝液には：リン酸緩衝液（第１５の態様を除く）；トリス緩衝液；ホウ酸緩衝液；コハク酸緩衝液；ヒスチジン緩衝液（特に水酸化アルミニウムアジュバントとともに）；またはクエン酸緩衝液が含まれる。緩衝塩（ｂｕｆｆｅｒ  ｓａｌｔ）は典型的には、５〜２０ｍＭの範囲で含まれる。リン酸緩衝液を使用する場合には、ホスフェートイオンの濃度は一部の実施形態では、＜５０ｍＭ（上記参照）、例えば＜１０ｍＭであるべきである。
【０１８８】
本発明の組成物のｐＨは、一般に６．０から７．５である。したがって、製造プロセスは、包装前に組成物のｐＨを調整するステップを含むことができる。患者に投与する水性組成物は、最適な安定性のため、５．０から７．５、より典型的には５．０から６．０のｐＨを有することができる；ジフテリアトキソイドおよび／または破傷風トキソイドが存在する場合、ｐＨは理想的には６．０から７．０である。
【０１８９】
薬学的組成物は好ましくは無菌である。
【０１９０】
薬学的組成物は好ましくは非発熱性であり、例えば、１用量あたり＜１ＥＵ（内毒素単位、標準的な尺度）、好ましくは１用量あたり＜０．１ＥＵを含有する。１ＥＵは、１用量あたり０．２ｎｇのＦＤＡ参照標準内毒素ＥＣ−２「ＲＳＥ」と等しい。
【０１９１】
薬学的組成物は好ましくはグルテンを含まない。
【０１９２】
製造中に、所望の最終濃度を得るための成分の希釈は、通常ＷＦＩ（注射用蒸留水（ｗａｔｅｒ  ｆｏｒ  ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ））を用いて実施されることになる。
【０１９３】
薬学的組成物は、動物（および、特に、ヒト）患者に投与するのに適しており、したがってヒトおよび獣医学使用の両方を含む。それらは、患者において免疫応答を上昇させる方法において使用することができ、その方法は、組成物を患者に投与するステップを含む。
【０１９４】
本発明は、個々の用量への包装に対して適したバルク材料を提供することができ、次いでこれらを患者への投与のために分配することができる。上記で考察された濃度は、典型的には、最終の包装された用量における濃度であり、よって、バルクワクチン中の濃度はより高くてもよい（例えば、希釈により最終濃度へ低減されるものとする）。
【０１９５】
薬学的組成物は、単位用量形態で調製することができる。一部の実施形態では、単位用量は、筋肉注射に対して、０．０５から１．５ｍｌ、例えば約０．５ｍｌの体積を有し得る。０．５ｍｌ用量についての言及は、通常の分散、例えば０．５ｍｌ±０．０５ｍｌを含むと理解されるはずである。複数回用量の状況に対しては、複数回用量の量を単一容器内に、例えば、１０回用量の複数回用量容器には５ｍｌ（または１０％の過剰充填を入れて５．５ｍｌ）を一緒に抽出および包装することになる。
【０１９６】
本発明はまた、本発明の薬学的組成物を含有する、例えば単位用量を含有する送達デバイス（例えばシリンジ、ネブライザー、噴霧器、吸入器、皮膚パッチなど）を提供する。このデバイスは、組成物を脊椎動物被験体に投与するために使用することができる。
【０１９７】
本発明はまた、本発明の薬学的組成物を含有する、例えば単位用量を含有する滅菌容器（例えばバイアル）を提供する。
【０１９８】
本発明はまた、本発明の薬学的組成物の単位用量を提供する。
【０１９９】
本発明はまた、本発明の薬学的組成物を含有する気密密閉容器を提供する。適切な容器には例えば、バイアルが含まれる。
【０２００】
本発明の薬学的組成物は、様々な形態で調製し得る。例えば組成物は、液体溶液または懸濁物のいずれかとしての注射剤として調製し得る。注射の前に液体ビヒクル中に溶解または懸濁させるのに適した固体形態もまた、調製することができる（例えば、凍結乾燥組成物または噴霧凍結乾燥組成物）が、水性組成物が好ましい。筋肉内注射または皮内注射または皮下注射のための懸濁物が典型的である。
【０２０１】
第１の態様の組成物は、有効量のＴＬＲアゴニスト、即ち、単一用量で、または一連のものの一部として個体に投与した場合に、その同時投与された免疫原に対して免疫応答を増強するのに有効である量を含む。この量は、処置される個体の健康および身体的状態、年齢、処置される固体の分類群（例えば、非ヒト霊長類、霊長類など）、個体の免疫系が抗体を合成する能力、所望の防御程度、ワクチンの処方、医学的状況の処置医師による評価ならびに他の関連要因に応じて変動してよい。
【０２０２】
組成物の単位用量中のＴＬＲアゴニストの量には、常套的な試験を介して決定することができる比較的幅広い範囲が該当する。１〜１０００μｇ／用量の量、例えば１用量当たり５〜１００μｇまたは１用量当たり１０〜１００μｇ、理想的には１用量当たり≦３００μｇ、例えば１用量当たり約５μｇ、１０μｇ、２０μｇ、２５μｇ、５０μｇまたは１００μｇを使用することができる。したがって、本発明の組成物中のＴＬＲアゴニストの濃度は、２〜２０００μｇ／ｍｌ、例えば１０〜２００μｇ／ｍｌ、または約５、１０、２０、４０、５０、１００もしくは２００μｇ／ｍｌ、理想的には≦６００μｇ／ｍｌであってよい。
【０２０３】
処置方法および免疫原性組成物の投与方法
本発明は、ヒトにおいて免疫応答を上昇させるのに適しているが、それらはまた、非ヒト動物（特に哺乳動物）の被験体においても有用となり得る。本発明に従い調製した組成物は、小児および成人の両方を処置するために使用することができる。
【０２０４】
本発明は、被験体において免疫応答を上昇させる方法を提供し、その方法は、被験体に本発明の組成物を投与するステップを含む。本発明はまた、被験体において免疫応答を上昇させる方法で使用するための本発明の組成物を提供する。本発明はまた、被験体において免疫応答を上昇させるための医薬（例えばワクチン）を製造する際の、（ｉ）本明細書で定義されているとおりのＴＬＲアゴニストおよび（ｉｉ）不溶性アルミニウム塩および（ｉｉｉ）少なくともジフテリア、破傷風および百日咳トキソイドの使用を提供する。本発明はまた、被験体において免疫応答を上昇させるための医薬（例えばワクチン）を製造する際の（ｉ）本明細書で定義されているとおりの水中油型エマルジョンアジュバントならびに（ｉｉ）少なくともジフテリア、破傷風および百日咳トキソイドの使用を提供する。
【０２０５】
それらの方法および使用により刺激された免疫応答は一般に、抗体応答、好ましくは防御抗体応答が含まれる。免疫応答はまた、細胞性応答を含むことができる。免疫化の後に、特にジフテリア、破傷風、百日咳およびポリオウイルス抗原に対して、抗体応答および細胞性免疫応答を評価するための方法は当技術分野では周知である。
【０２０６】
本発明の組成物の投与は一般に注射により行われるが、これは、皮下、筋肉内経路の皮内による注射であってよい。筋肉注射が好ましい。
【０２０７】
本発明の免疫原性組成物は一般に、少なくとも３歳の年齢、好ましくは少なくとも４歳の年齢の人々に投与される。例えば、被験体は１０〜６４歳、またはティーンエイジャーであってよい。組成物は、慣用的な小児期免疫化（ＤＴＰワクチンを含む）を以前に受けたことのある人々に最も有用である。
【０２０８】
患者は一般に、必要なだけの頻度で組成物を受けることになる。免疫化の各過程は、単回の追加免疫用量を含むことになる。
【０２０９】
化学基
他に具体的に定義されていない限り、本明細書で検討されている化学基は、本明細書で使用される場合は次の意味を有する：
「アルキル」という用語には、下記を含む飽和炭化水素残基が含まれる：
−１０個までの原子（Ｃ１〜Ｃ１０）または６個までの原子（Ｃ１〜Ｃ６）または４個までの原子（Ｃ１〜Ｃ４）の直鎖基。そのようなアルキル基の例には、これらに限られないが、Ｃ１−メチル、Ｃ２−エチル、Ｃ３−プロピルおよびＣ４−ｎ−ブチルが含まれる。−３から１０個の原子（Ｃ３〜Ｃ１０）または７個までの原子（Ｃ３〜Ｃ７）または４個までの原子（Ｃ３〜Ｃ４）の分岐基。そのようなアルキル基の例には、これらに限られないが、Ｃ３−イソ−プロピル、Ｃ４−ｓｅｃ−ブチル、Ｃ４−イソ−ブチル、Ｃ４−ｔｅｒｔ−ブチルおよびＣ５−ネオ−ペンチルが含まれる。
【０２１０】
「アルキレン」という用語は、アルキル基に由来する二価の炭化水素ラジカルを指し、かつ上記の定義に従って解釈されることとする。
【０２１１】
「アルケニル」という用語には、下記を含むモノ不飽和炭化水素残基が含まれる：
−２から６個の原子（Ｃ２〜Ｃ６）の直鎖基。そのようなアルケニル基の例には、これらに限られないが、Ｃ２−ビニル、Ｃ３−１−プロペニル、Ｃ３−アリル、Ｃ４−２−ブテニルが含まれる。
−３から８個の原子（Ｃ３〜Ｃ８）の分岐基。そのようなアルケニル基の例には、これらに限られないが、Ｃ４−２−メチル−２−プロペニルおよびＣ６−２，３−ジメチル−２−ブテニルが含まれる。
【０２１２】
アルケニレンという用語は、アルケニル基に由来する二価炭化水素ラジカルを指し、上記の定義に従って解釈されることとする。
【０２１３】
「アルコキシ」という用語には、下記を含むＯ−連結炭化水素残基が含まれる：
−１から６個の原子（Ｃ１〜Ｃ６）または１から４個の原子（Ｃ１〜Ｃ４）の直鎖基。そのようなアルコキシ基の例には、これらに限られないが、Ｃ１−メトキシ、Ｃ２−エトキシ、Ｃ３−ｎ−プロポキシおよびＣ４−ｎ−ブトキシが含まれる。
−３から６個の原子（Ｃ３〜Ｃ６）または３から４個の原子（Ｃ３〜Ｃ４）の分岐基。そのようなアルコキシ基の例には、これらに限られないが、Ｃ３−イソ−プロポキシおよびＣ４−ｓｅｃ−ブトキシおよびｔｅｒｔ−ブトキシが含まれる。
【０２１４】
ハロは、Ｃｌ、Ｆ、ＢｒおよびＩから選択される。ハロは好ましくは、Ｆである。
【０２１５】
「アリール」という用語には、６または１０個の炭素原子を含有する単一または縮合芳香環系が含まれ；ここで、別段に述べられていない限り、生じているアリールはそれぞれ、上記で定義されたとおり、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシ、ＯＨ、ハロ、ＣＮ、ＣＯＯＲ１４、ＣＦ３およびＮＲ１４Ｒ１５から独立に選択される５個までの置換基で置換されていてもよい。典型的には、アリールは場合によって、１、２または３個の置換基で置換されていてもよい。場合による置換基は上述されたものから選択される。適切なアリール基の例には、フェニルおよびナフチル（それぞれ上述のとおり置換されていてもよい）が含まれる。アリーレンは、アリール基に由来する二価のラジカルを指し、上記の定義に従って解釈されることとする。
【０２１６】
「ヘテロアリール」という用語には、１または２個のＮ原子および場合によってＮＲ１４原子または１個のＮＲ１４原子およびＳもしくはＯ原子または１個のＳ原子または１個のＯ原子を含有する５、６、９または１０員の単環式または二環式芳香環が含まれ；ここで、別段に述べられていない限り、前記ヘテロアリールは、下記で定義されているとおり、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシ、ＯＨ、ハロ、ＣＮ、ＣＯＯＲ１４、ＣＦ３およびＮＲ１４Ｒ１５から独立に選択される１、２または３個の置換基で置換されていてもよい。適切なヘテロアリール基の例には、チエニル、フラニル、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾイル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、トリアゾリル、オキサジアゾリル、チアジアゾリル、テトラゾリル、ピリジニル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、インドリル、ベンズイミダゾリル、ベンゾトリアゾリル、キノリニルおよびイソキノリニル（場合によって、上述のとおり置換されている）が含まれる。ヘテロアリーレンは、ヘテロアリールに由来する二価のラジカルを指し、上記の定義に従って解釈されることとする。
【０２１７】
「ヘテロシクリル」という用語は、Ｃ連結またはＮ連結している３員から１０員の非芳香族単環式または二環式環であり、ここで、前記ヘテロシクロアルキル環は可能な場合には、Ｎ、ＮＲ１４、Ｓ（Ｏ）ｑおよびＯから独立に選択される１、２または３個のヘテロ原子を含有し；かつ前記ヘテロシクロアルキル環は場合によって可能な場合には、１または２つの二重結合を含有し、かつ炭素上で、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシ、ＯＨ、ＣＮ、ＣＦ３、ハロ、ＣＯＯＲ１４、ＮＲ１４Ｒ１５およびアリールから独立に選択される１または２個の置換基で置換されていてもよい。
【０２１８】
上記の定義において、Ｒ１４およびＲ１５は、Ｈおよび（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルから独立に選択される。
【０２１９】
構造式が、例えば式（Ｃ）の場合には基Ｐ３についてのように、特定されていないか、または「浮動性」結合によって分子の核に付着している置換基と共に定義されている場合、この定義は、浮動性結合が位置している環上のいずれかの原子に、その原子で許容される原子価に応じて特定されていない置換基が付着している場合を含む。
【０２２０】
互変異性体形態で（即ちケトまたはエノール形態で）存在し得る本発明の化合物、例えば式（Ｃ）または（Ｈ）の化合物の場合には、特定の化合物についての言及は場合によって、そのような互変異性体形態の全てを含む。
【０２２１】
一般
「含むこと」という用語は、「含むこと」および「からなること」を内包し、例えば、Ｘを「含む」組成物は、Ｘから専らなることも、または追加の何か、例えば、Ｘ＋Ｙを含むこともある。
【０２２２】
「実質的に」という語は、「完全に」を排除するものではない。例えば、Ｙを「実質的に含まない」組成物は、Ｙを完全に含まないこともある。必要に応じて、「実質的に」という言葉は、本発明の定義から省かれていることもある。
【０２２３】
数値ｘに関連して、「約」という用語は、任意選択であり、例えば、ｘ±１０％を意味する。
【０２２４】
特に述べられていない限り、２つ以上の成分を混合するステップを含む方法は、特定の順序での混合を何ら必要としない。したがって成分を、任意の順序で混合することができる。３つの成分が存在する場合は、２つの成分を互いに組み合わせることができ、次いで、その組合せを、第３の成分などと組み合わせ得る。
【０２２５】
動物（特にウシ）材料を、典型的に細胞培養において使用するので、それらを、伝染性海綿状脳症（ＴＳＥ）がない、特にウシ海綿状脳症（ＢＳＥ）がない供給源から得るべきである。
【０２２６】
化合物が組成物の一部として体内に投与される場合、その化合物は適切なプロドラッグで代わりに置き換えられてもよい。
【０２２７】
本発明で使用されるリン含有基は、周辺環境のｐＨ、例えばそれらが溶解している溶媒のｐＨに応じていくつかのプロトン化および脱プロトン化形態で存在することがある。したがって、特定の形態を例示することはできるが、別段に述べられていない限り、これらの例示は、単なる代表であり、具体的なプロトン化または脱プロトン化形態に限定するものではないことが意図されている。例えば、ホスフェート基の場合には、これは、−ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２として例示されているが、定義には、酸性条件で存在し得るプロトン化形態−［ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ２）（ＯＨ）］＋および−［ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ２）２］２＋ならびに塩基性条件で存在し得る脱プロトン化形態−［ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）（Ｏ）］−および［ＯＰ（Ｏ）（Ｏ）２］２−が含まれる。
【０２２８】
本明細書に開示されている化合物は、薬学的に許容される塩として存在してよい。したがって、化合物は、その薬学的に許容される塩、すなわち生理学的または毒物学的に容認できる塩（適切には、薬学的に許容される塩基付加塩および薬学的に許容される酸付加塩が含まれる）の形態で使用され得る。
例えば、本発明は、以下の項目を提供する：
（項目１）
ジフテリアトキソイド、破傷風トキソイド、百日咳トキソイド、アルミニウム塩アジュバント、およびＴＬＲアゴニストを含む免疫原性組成物であって、ジフテリアトキソイドと比較して、過剰の（Ｌｆ単位で測定）破傷風トキソイドを含む、組成物。
（項目２）
上記ＴＬＲアゴニストがＴＬＲ４アゴニストまたはＴＬＲ７アゴニストである、項目１に記載の組成物。
（項目３）
上記ＴＬＲアゴニストが上記アルミニウム塩アジュバントに吸着されている、上記項目のいずれか一項に記載の組成物。
（項目４）
上記トキソイドのうちの１、２または３種が上記アルミニウム塩アジュバントに吸着されている、上記項目のいずれか一項に記載の組成物。
（項目５）
Ａｌ＋＋＋濃度が≦０．５ｍｇ／ｍｌである、上記項目のいずれか一項に記載の組成物。
（項目６）
上記アルミニウム塩が水酸化アルミニウムである、上記項目のいずれか一項に記載の組成物。
（項目７）
上記ＴＬＲアゴニストが、本明細書の式「Ｋ」の化合物、または薬学的に許容されるその塩である、上記項目のいずれか一項に記載の組成物。
（項目８）
上記ＴＬＲアゴニストが化合物Ｋ２である、上記項目のいずれか一項に記載の組成物。
（項目９）
上記ＴＬＲアゴニストが、上記ＴＬＲアゴニストの不溶性金属塩への吸着を可能にする少なくとも１個の吸着部分を含む、上記項目のいずれか一項に記載の組成物。
（項目１０）
上記吸着部分がホスフェートまたはホスホネートである、項目９に記載の組成物。
（項目１１）
上記ＴＬＲアゴニストが、本明細書において定義されているとおりの式（Ｃ）、（Ｄ）、（Ｅ）、（Ｆ）、（Ｇ）、（Ｈ）、（Ｉ）、（ＩＩ）、（Ｊ）もしくは（Ｋ）を有するか、または３ｄ−ＭＰＬである、上記項目のいずれか一項に記載の組成物。
（項目１２）
上記ＴＬＲアゴニストが、参考文献１３に定義されているとおりの化合物１〜１０２のうちの１種、または薬学的に許容されるその塩である、上記項目のいずれか一項に記載の組成物。
（項目１３）
ヒスチジン緩衝液を含む、上記項目のいずれか一項に記載の組成物。
（項目１４）
ジフテリアトキソイド、破傷風トキソイド、百日咳トキソイド、および水中油型エマルジョンアジュバントを含む免疫原性組成物であって、ジフテリアトキソイドと比較して、過剰の（Ｌｆ単位で測定）破傷風トキソイドを含む、組成物。
（項目１５）
上記エマルジョンがスクアレンおよび／またはポリソルベート８０を含む、項目１４に記載の組成物。
（項目１６）
上記エマルジョン中の油滴のうち、数で少なくとも８０％が２２０ｎｍ未満の直径を有する、項目１４または項目１５に記載の組成物。
（項目１７）
ジフテリアトキソイド濃度が≦４Ｌｆ／ｍｌである、上記項目のいずれか一項に記載の組成物。
（項目１８）
破傷風トキソイド濃度が≦９Ｌｆ／ｍｌである、上記項目のいずれか一項に記載の組成物。
（項目１９）
百日咳トキソイド濃度が≦４μｇ／ｍｌである、上記項目のいずれか一項に記載の組成物。
（項目２０）
三価の不活化ポリオウイルス抗原成分もまた含む、上記項目のいずれか一項に記載の組成物。
（項目２１）
６．１から７．９のｐＨを有する、上記項目のいずれか一項に記載の組成物。
（項目２２）
被験体において免疫応答を上昇させる方法であって、上記項目のいずれか一項に記載の組成物を上記被験体に投与するステップを含む、方法。
（項目２３）
上記被験体が、小児のときにＤＴＰワクチンを以前に受けたことがある、項目２２に記載の方法。
（項目２４）
百日咳トキソイド、線維状赤血球凝集素およびペルタクチンが、１：１：２の質量比で存在する、無細胞性百日咳成分を含む免疫原性組成物。
（項目２５）
上記百日咳トキソイドがＰＴ−９Ｋ／１２９Ｇ二重変異体である、項目２４に記載の組成物。
（項目２６）
単位用量形態であり、１単位用量あたり、４μｇの百日咳トキソイド、４μｇのＦＨＡおよび８μｇのペルタクチンを含む、項目２４または項目２５に記載の組成物。
（項目２７）
ジフテリアトキソイドおよび破傷風トキソイドもまた含む、項目２４から２６のいずれか一項に記載の組成物。
（項目２８）
アルミニウム塩アジュバントもまた含む、項目２４から２７のいずれか一項に記載の組成物。
（項目２９）
上記アルミニウム塩に吸着されているＴＬＲアゴニストを含む、項目２８に記載の組成物。
【図面の簡単な説明】
【０２２９】
【図１】図１は、示された処置群に対するＦＨＡ−特異的記憶Ｂ細胞の％を示している。
【発明を実施するための形態】
【０２３０】
ワクチンの調製
参考文献３１および８５は、上記で検討されたとおりの式（Ｋ）を有するＴＬＲ７アゴニストを開示している。これらの化合物の１つである３−（５−アミノ−２−（２−メチル−４−（２−（２−（２−ホスホノエトキシ）エトキシ）エトキシ）フェネチル）ベンゾ［ｆ］−［１，７］ナフチリジン−８−イル）プロパン酸は、これより以下化合物「Ｋ２」と称す：
【０２３１】
【化２４】
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【０２３２】
化合物Ｋ２を４ｍｇ／ｍｌで水に加え、次いで、室温で１５分間撹拌しながら１Ｍ  ＮａＯＨを加えることによって、完全な可溶化を確実にする。この材料を水酸化アルミニウムアジュバント（Ａｌ−Ｈ）の懸濁物に加えることによって、所望の最終濃度を得る。この混合物を周辺温度で２時間振盪することによって、完全な吸着を確実にし、次いでヒスチジン緩衝液成分を加える（１０ｍＭヒスチジン緩衝液、ｐＨ６．５）。
【０２３３】
化合物はまたアルギニン塩一水和物（９８ｍｇの化合物を、１．７ｍｌの０．１Ｍアルギニンと８０／２０メタノール／水中で混合することによって、５７ｍｇ／ｍｌの溶液を得て、続いて７ｍｌのエタノールを加えて塩を沈殿させることによって得られる）として使用することもでき、この場合、Ａｌ−Ｈとの混合前に、可溶化のためのＮａＯＨは必要ないと考えられる。
【０２３４】
４つの異なる混合物を調製し、最終のＫ２濃度、１０、５０、２５０または５００μｇ／ｍｌを得る（１００μｌの投与量の体積中、Ｋ２の１、５、２５または５０μｇの用量を得る）；Ａｌ−Ｈ濃度は常に３ｍｇ／ｍｌである。すべての強度において、＞９５％の化合物Ｋ２をＡｌ−Ｈに吸着させる。吸着されているアジュバントは、これより以下「Ａｌ−Ｈ／Ｋ２」と称す。
【０２３５】
抗原へのアジュバント吸着
３価（ＤＴａＰ）ワクチンを、Ａｌ−Ｈ単独でまたはＡｌ−Ｈ／Ｋ２でアジュバント化した。これらの処方物は最適なｐＨ（６．５〜６．８±０．１）および容量オスモル濃度値（０．３００±５０ｍＯ）を示した。容量オスモル濃度をＮａＣｌで調節した。アジュバント−抗原複合体を遠心分離で吸着していない抗原から分離することによって吸着を検出した。０．４％ＤＯＣを、吸着していない抗原を含有する上清に加えた。６０％ＴＣＡの添加により抗原を沈殿させ、遠心分離で収集した。ＴＣＡで沈殿した抗原を含有するペレットをローディングバッファー中に再懸濁させ、ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル上にローディングした。アジュバント−抗原複合体を含有するペレットを、脱離緩衝液中に再懸濁させ（４×濃度：０．５Ｍ  Ｎａ２ＨＰＯ４  ｐＨ、８ｇ  ＳＤＳ、２５ｇグリセロール、６．１６ｇ  ＤＴＴおよびブロモフェノールブルー）、水酸化アルミニウムを遠心分離で除去し、上清をＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルに加えた。
【０２３６】
２ｍｇ／ｍｌの濃度でＡｌ−Ｈを単独で使用して、Ｃｏｏｍａｓｓｉｅ  Ｂｌｕｅ染色により検出したＤＴ、ＴＴ、ＰＴ、ＦＨＡおよび６９Ｋに対する吸着プロファイルを完成した。ＤＯＣ−ＴＣＡ処理した上清にはバンドは検出されなかった。Ｗｅｓｔｅｒｎ  Ｂｌｏｔ分析は、ＤＴ、ＴＴ、ＰＴ、ＦＨＡおよび６９Ｋに対して完全なＡｌ−Ｈ吸着を確認した。
【０２３７】
４つの異なるＫ２濃度を試験した（０．１、０．０２５、０．０１、０．００５ｍｇ／ｍｌ）。Ａｌ−Ｈ濃度は２ｍｇ／ｍｌで一定であった。０．１ｍｇ／ｍｌのＫ２においてさえも、すべての抗原が完全に吸着した。
【０２３８】
ＴＬＲアゴニストを用いた免疫原性試験
それぞれが（０．５ｍｌあたり）５Ｌｆの破傷風トキソイド、２Ｌｆのジフテリアトキソイド、および１６μｇの無細胞性百日咳抗原（精製したＰＴ−９Ｋ／１２９Ｇ、ＦＨＡおよびｐ６９ペルタクチンの混合物）を含有している４種のワクチンを試験した。
【０２３９】
４種のワクチンは、（Ａ）アジュバント化していない（Ｂ）２ｍｇ／ｍｌのＡｌ−Ｈでアジュバント化した（Ｃ）２ｍｇ／ｍｌのＡｌ−Ｈおよび１００μｇ／ｍｌの合成モノホスホリル脂質Ａ、すなわちＴＬＲ４アゴニストでアジュバント化した、または（Ｄ）２ｍｇ／ｍｌのＡｌ−Ｈおよび１ｍｇ／ｍｌの化合物「Ｋ２」すなわちＴＬＲ７アゴニストでアジュバント化した。ワクチン（Ｃ）および（Ｄ）中のＴＬＲアゴニストはＡｌ−Ｈに吸着されていた。すべての抗原は、処方物（Ｂ）、（Ｃ）および（Ｄ）中でＡｌ−Ｈに吸着されていた。
【０２４０】
比較のため、ＢＯＯＳＴＲＩＸ（商標）製品もまた試験した。上記で検討されたとおり、それは、（０．５ｍｌあたり）２．５Ｌｆのジフテリアトキソイド、５Ｌｆの破傷風トキソイド、および１８．５μｇの無細胞性百日咳抗原（精製したＰＴ、ＦＨＡおよびｐ６９ペルタクチンの混合物）を含有し、リン酸アルミニウムおよび水酸化物塩の混合物でアジュバント化されている。緩衝液とＡｌ−Ｈの混合物を陰性対照として使用した。
【０２４１】
４種のワクチンは、１００μｌの筋肉内用量で、メスのＢａｌｂ／Ｃマウス（６週齢）に、第０、２１および３５日目に投与した。各用量から２週間後、血清を試験した。
【０２４２】
血清の全ＩｇＧ力価を各抗原に対して測定すると、以下のとおりであった（幾何平均）：
【０２４３】
【表２】
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【０２４４】
したがってすべての場合において、かつすべての時間点で（第４９日でのＰＴを除いて）、これら６つの群の中で最も高い力価は、吸着されているＴＬＲアゴニストでアジュバント化した抗原を与えたマウスに見られ、Ａｌ−ＨへのＴＬＲアゴニストの添加は、Ａｌ−Ｈ単独と比較してＩｇＧ応答を改善した。重要なことに、認可されたＢＯＯＳＴＲＩＸ（商標）ワクチンと比較した場合、改善された応答がすべての場合において見られた。さらに、Ａｌ−Ｈ単独またはＢＯＯＳＴＲＩＸ（商標）とは異なり、吸着されているＴＬＲアゴニストは、アジュバント化していない群と比較して、抗ＰＴ力価を一貫して改善することができた。
【０２４５】
ＴＬＲアゴニストの使用はまた、より急速な応答をもたらす。第２の用量は、すべての抗原についてＩｇＧ応答の明白な増加を示したが、第３の用量後の改善はあまり有意ではなかった。これらの実験のマウスはＤＴＰに対してナイーブであるが、実社会での人間の状況では、ターゲット患者は以前にＤＴＰワクチンを小児のときに受けており、これらの実験における第２の用量後に見られる急速な応答は助けになる。
【０２４６】
水中油型エマルジョンを用いた免疫原性試験
（０．５ｍｌあたり）５Ｌｆの破傷風トキソイド、２Ｌｆのジフテリアトキソイド、および１６μｇの無細胞性百日咳抗原（精製したＰＴ−９Ｋ／１２９Ｇ、ＦＨＡおよびｐ６９ペルタクチンの混合物）を含有するワクチンを調製した。それらは、１００μｌの筋肉内用量で、メスのＢａｌｂ／Ｃマウス（６週齢）に第０、２１および３５日目に投与した。各用量から２週間後血清を試験した。ワクチンは、（Ａ）アジュバント化していないまたは（Ｂ）５０μｌの抗原溶液を５０μｌのＭＦ５９と混合することによって、ＭＦ５９エマルジョンでアジュバント化した。比較のため、ＢＯＯＳＴＲＩＸ（商標）製品も試験し、抗原を含まない陰性対照もまた試験した。
【０２４７】
血清の全ＩｇＧ力価を各抗原について測定すると、以下のとおりであった（幾何平均）：
【０２４８】
【表３】
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【０２４９】
したがって、ＤＴＰに対してナイーブなマウスにおいて２回の用量後、エマルジョンでアジュバント化されているワクチンから、認可されたＢＯＯＳＴＲＩＸ（商標）製品よりもはるかに良好な抗体力価を得た。抗Ｄｔ応答を除いて、この優位性は第３の用量後維持された。さらに、ＢＯＯＳＴＲＩＸ（商標）とは異なり、エマルジョンは、アジュバント化していない群と比較して、抗ＰＴ力価を改善することができた。
【０２５０】
ＦＨＡ特異的な記憶Ｂ細胞
第３の用量から４〜５カ月後、ＦＨＡ特異的記憶Ｂ細胞を、免疫化されたマウスにおいて測定した。マウスを屠殺し、それらの脾臓細胞を５日間ＩＬ−２およびＣｐＧの存在下で培養することによって、すべての記憶Ｂ細胞を増殖させた。次いで脾臓細胞を収集し、事前にＦＨＡ抗原（１０ｍｇ／ｍｌ）または抗マウスＩｇのいずれかをコーティングした９６−ウェルＥＬＩＳＰＯＴプレートに播種した。一晩のインキュベーション後、プレートを洗浄することによって、付着していない脾臓細胞を除去し、ＦＨＡ特異的な記憶Ｂ細胞および全部の記憶Ｂ細胞の両方をビオチン化した抗マウスＩｇおよびＨＲＰ−ストレプトアビジンで検出した。個々の記憶Ｂ細胞を表す有色のスポットをＥＬＩＳＰＯＴリーダー装置でカウントした。次いで、全Ｂ細胞と比較して、ＦＨＡ特異的なＢ細胞のパーセンテージを各試料に対して計算した。図１は、以下の群に対する結果を示す：（Ａ）アジュバント化していない；（Ｂ）Ａｌ−Ｈでアジュバント化した；（Ｃ）Ａｌ−ＨおよびＭＰＬ−Ａでアジュバント化した；（Ｄ）Ａｌ−Ｈおよび「Ｋ２」でアジュバント化した；（Ｅ）ＭＦ５９でアジュバント化した；（Ｆ）ＢＯＯＳＴＲＩＸ（商標）；および（Ｇ）陰性対照。最も高い応答は、群（Ｄ）、すなわち吸着されているＴＬＲ７アゴニストを使用した群において見られた。次に高い応答は、吸着されているＴＬＲ４アゴニストまたはエマルジョンのいずれかを有する群（Ｃ）および（Ｅ）において見られ、これらの群において、応答は本質的に同じであったが、ＢＯＯＳＴＲＩＸ（商標）製品よりも依然として高かった。
【０２５１】
本発明は単なる例で説明されており、本発明の範囲および意図の範囲内で改変がなされ得ることは理解されるはずである。
【０２５２】
【化２５】
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【０２５３】
【化２６】
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【図１】
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【外国語明細書】
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