(57)【要約】      （修正有）【課題】歯肉細胞を賦活化して、歯肉を活性化できる、歯肉の活性化剤及び歯肉の修復促進剤の提供。【解決手段】ホスホコリン基含有重合体を含む、歯肉の活性化剤、及び歯肉の修復促進剤。該ホスホコリン基含有重合体は、２−メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリン・メタクリル酸ブチル共重合体であることが好ましい。該歯肉の活性化剤及び歯肉の修復促進剤は、液体歯磨剤、液状歯磨剤、練歯磨剤、又は洗口液の形態であることが好ましい。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ホスホコリン基含有重合体を含む、歯肉の活性化剤。
【請求項２】
前記ホスホコリン基含有重合体が、２−メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリン・メタクリル酸ブチル共重合体である、請求項１に記載の歯肉の活性化剤。
【請求項３】
液体歯磨剤、液状歯磨剤、練歯磨剤、又は洗口液である、請求項１又は２に記載の歯肉の活性化剤。
【請求項４】
ホスホコリン基含有重合体を含む、歯肉の修復促進剤。
【請求項５】
前記ホスホコリン基含有重合体が、２−メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリン・メタクリル酸ブチル共重合体である、請求項４に記載の歯肉の修復促進剤。
【請求項６】
液体歯磨剤、液状歯磨剤、練歯磨剤、又は洗口液である、請求項４又は５に記載の歯肉の修復促進剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、歯肉細胞を賦活化して歯肉を活性化できる歯肉の活性化剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
歯肉（歯茎）は、歯牙を支持する歯周組織であり、歯肉細胞（歯肉上皮細胞や歯肉線維芽細胞等）及び当該歯肉細胞が産生する細胞外基質（コラーゲン等）等によって形成されている。細菌感染等によって歯肉細胞が損傷を受けると、細胞増殖能の低下やコラーゲンの破壊が生じ、歯肉の退縮が生じる。このような歯肉の退縮は、歯周病の進行を招き、歯の喪失要因にもなっている。そのため、歯肉を健康な状態にし、健全な歯周組織を維持することは、口腔内衛生上、重要になっている。
【０００３】
従来、歯肉の活性化に有効な成分について種々報告されている。例えば、特許文献１には、レイシ、アカショウガ、ドクダミ等の植物抽出物には、歯肉線維芽細胞におけるＩＬ−６産生抑制効果等があることが開示されている。また、特許文献２には、アスタキサンチン及び／又はその脂肪酸エステルが、歯肉細胞のアポトーシスを抑制できることが開示されている。しかしながら、口腔衛生製品において歯肉の健康な状態の維持に対する要求特性は年々高まっており、口腔衛生製品剤の処方の多様化にも対応する必要があり、歯肉を効果的に活性化できる新たな製剤の開発が求められている。
【０００４】
一方、２−メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリン・メタクリル酸ブチル共重合体等のホスホコリン基含有重合体は、生体への親和性が高く、更に保湿作用を有していることが報告されており、主に外用製剤において利用されている。しかしながら、ホスホコリン基含有重合体が、口腔内で歯肉に及ぼす影響については明らかにされていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２００９−２６３３３２号公報
【特許文献２】特開２０１５−１１０５２６号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の目的は、歯肉細胞を賦活化して、歯肉を活性化できる歯肉の活性化剤を提供することである。また、本発明の他の目的は、歯肉の修復を促進できる歯肉の修復促進剤を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者は、前記課題を解決すべく鋭意検討を行ったところ、ホスホコリン基含有重合体は、歯肉細胞を賦活化でき、効果的に歯肉の活性化及び修復促進を行い得ることを見出した。本発明は、かかる知見に基づいて、更に検討を重ねることにより完成したものである。
【０００８】
即ち、本発明は、下記に掲げる態様の発明を提供する。
項１．  ホスホコリン基含有重合体を含む、歯肉の活性化剤。
項２．  前記ホスホコリン基含有重合体が、２−メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリン・メタクリル酸ブチル共重合体である、項１に記載の歯肉の活性化剤。
項３．  液体歯磨剤、液状歯磨剤、練歯磨剤、又は洗口液である、項１又は２に記載の歯肉の活性化剤。
項４．  ホスホコリン基含有重合体を含む、歯肉の修復促進剤。
項５．  前記ホスホコリン基含有重合体が、２−メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリン・メタクリル酸ブチル共重合体である、項４に記載の歯肉の修復促進剤。
項６．  液体歯磨剤、液状歯磨剤、練歯磨剤、又は洗口液である、項４又は５に記載の歯肉の修復促進剤。
【発明の効果】
【０００９】
本発明によれば、歯肉を活性化できるので、歯肉の賦活化、歯肉の新陳代謝の促進、歯肉の恒常性の維持又は改善等に有効である。更に、本発明によれば、歯肉を活性化することによって歯周病菌や毒素が侵入し難い歯肉状態の維持や改善を図ることができるので、歯周病等歯周疾患の予防又は改善にも有効である。
【００１０】
また、本発明によれば、損傷又は退縮した歯肉を健常な状態への回復を促進させるので、歯肉の損傷又は退縮が関連する疾患や障害の予防又は改善にも有効である。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
１．歯肉の活性化剤
本発明の歯肉の活性化剤は、ホスホコリン基含有重合体を含むことを特徴とする。なお、以下、「歯肉の活性化剤」を単に「活性化剤」と表記することもある。以下、本発明の活性化剤について詳述する。
【００１２】
［ホスホコリン基含有重合体］
本発明の活性化剤は、ホスホコリン基含有重合体を有効成分として使用する。ホスホコリン基含有重合体には、歯肉上皮細胞及び歯肉線維芽細胞の増殖を促進して賦活化する作用があり、歯肉を活性化することができる。
【００１３】
ホスホコリン基含有重合体とは、ホスホコリン基を含む単量体（以下、「ホスホコリン基含有単量体」と表記することがある）が重合したポリマーであり、保湿作用等を有する公知の成分である。
【００１４】
ホスホコリン基含有重合体において、ホスホコリン基含有単量体の種類については、特に制限されないが、例えば、ホスホコリン基とビニル基を有する単量体が挙げられる。ホスホコリン基含有単量体として、より具体的には、２−メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリン、２−メタクリロイルオキシエチルホスホリルエタノールアミン等が挙げられる。ホスホコリン基含有重合体において、ホスホコリン基含有単量体は１種単独で含まれていてもよく、また２種以上組み合わされて含まれていてもよい。これらのホスホコリン基含有単量体の中でも、より一層効果的に歯肉を活性化させるという観点から、好ましくは２−メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリンが挙げられる。
【００１５】
本発明で使用されるホスホコリン基含有重合体は、１種のホスホコリン基含有単量体からなる単重合体であってもよく、また２種以上の単量体からなる共重合体であってもよい。
【００１６】
ホスホコリン基含有重合体が共重合体である場合、２種以上のホスホコリン基含有単量体からなる共重合体であってもよく、また少なくとも１種のホスホコリン基含有単量体と少なくとも１種のホスホコリン基含有単量体以外の単量体からなる共重合体であってもよい。
【００１７】
ホスホコリン基含有重合体に含まれるホスホコリン基含有単量体以外の単量体の種類については、薬学的に許容されるものであってホスホコリン基含有単量とラジカル重合可能であることを限度として特に制限されないが、例えば、ビニル基を有する単量体が挙げられる。ホスホコリン基含有単量体以外の単量体として、具体的には、メチル（メタ）アクリレート、エチル（メタ）アクリレート、ブチル（メタ）アクリレート、ラウリル（メタ）アクリレート、ステアリル（メタ）アクリレート、２−エチルヘキシル（メタ）アクリレート等のアルキル（メタ）アクリレート；ベンジル（メタ）アクリレート、フェノキシエチル（メタ）アクリレート、シクロヘキシル（メタ）アクリレート、ポリプロピレングリコールモノ（メタ）アクリレート、ポリテトラメチレングリコールモノ（メタ）アクリレート、ポリプロピレングリコールジ（メタ）アクリレート、ポリテトラメチレングリコールモノ（メタ）アクリレート、ポリプロピレングリコールポリエチレングリコールモノ（メタ）アクリレート、メタクリル酸ナトリウム、２−ヒドロキシ−３−メタクリロイルオキシプロピルトリメチルアンモニウム等が挙げられる。ホスホコリン基含有重合体において、ホスホコリン基含有単量体以外の単量体は１種単独で含まれていてもよく、また２種以上組み合わされて含まれていてもよい。これらのホスホコリン基含有単量体以外の単量体の中でも、より一層効果的に歯肉を活性化させるという観点から、好ましくはアルキル（メタ）アクリレート、２−ヒドロキシ−３−メタクリロイルオキシプロピルトリメチルアンモニウム、より好ましくはアルキル基の炭素数が１〜１８のアルキル（メタ）アクリレート、更に好ましくはアルキル基の炭素数が３〜５のアルキル（メタ）アクリレート、特に好ましくはブチル（メタ）アクリレートが挙げられる。なお、本明細書において、「（メタ）アクリレート」とは、メタクリレート及び／又はアクリレートを示す。
【００１８】
本発明で使用されるホスホコリン基含有重合体として、具体的には、ポリメタクリロイルオキシエチルホスホリルコリン単重合体、２−メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリン・メタクリル酸ブチル共重合体（ポリクオタニウム−５１）、２−メタクリロイルオキシエチレンホスホリルコリン・メタエリル酸ブチル・メタエリル酸ナトリウム共重合体（ポリクオタニウム−６５）、２−メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリン・２−ヒドロキシ−３−メタクリロイルオキシプロピルトリメチルアンモニウム共重合体（ポリクオタニウム−６４）、２−メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリン・メタクリル酸ステアリル共重合体（ポリクオタニウム−６１）等が挙げられる。なお、ホスホコリン基含有重合体に関する前記表記において、括弧内の名称は化粧品成分表示名称を示す。
【００１９】
本発明の活性化剤において、有効成分として、１種のホスホコリン基含有重合体を使用してもよく、また２種以上のホスホコリン基含有重合体を組み合わせて使用してもよい。
【００２０】
これらのホスホコリン基含有重合体の中でも、より一層効果的に歯肉を活性化させるという観点から、好ましくは、２−メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリン・メタクリル酸ブチル共重合体、ポリメタクリロイルオキシエチルホスホリルコリン単重合体、２−メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリン・２−ヒドロキシ−３−メタクリロイルオキシプロピルトリメチルアンモニウム共重合体；より好ましくは、２−メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリン・メタクリル酸ブチル共重合体、２−メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリン・２−ヒドロキシ−３−メタクリロイルオキシプロピルトリメチルアンモニウム共重合体；更に好ましくは、２−メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリン・メタクリル酸ブチル共重合体が挙げられる。
【００２１】
本発明の活性化剤において、ホスホコリン基含有重合体の含有量については、使用するホスホコリン基含有重合体の種類、活性化剤の製剤形態等に応じて適宜設定すればよいが、例えば、０．００５〜０．５重量％、好ましくは０．０２５〜０．２５重量％、より好ましくは０．０５〜０．１重量％が挙げられる。
【００２２】
［その他の成分］
本発明の活性化剤は、ホスホコリン基含有重合体以外に、本発明の効果を損なわない範囲で、製剤形態に応じて、当該技術分野で通常使用される成分を含有していてもよい。このような成分としては、例えば、防腐剤、殺菌剤、抗菌剤、消炎剤、研磨剤、グルコシルトランスフェラーゼ（ＧＴａｓｅ）阻害剤、プラーク抑制剤、知覚過敏抑制剤、歯石予防剤、歯質強化／再石灰化剤、増粘剤、湿潤剤、賦形剤、香料、甘味剤、色素、消臭剤、界面活性剤、溶剤、ｐＨ調整剤等が挙げられる。
【００２３】
防腐剤、殺菌剤、抗菌剤としては、例えば、ヒノキチオール、安息香酸類、サリチル酸類、ソルビン酸類、パラベン類、塩化デカリニウム、塩化ベンゼトニウム、塩化ベンザルコニウム、塩化クロルヘキシジン、グルコン酸クロルヘキシジン、イソプロピルメチルフェノール、トリクロサン、塩化セチルピリジニウム、塩化リゾチーム、塩酸クロルヘキシジン、ヨウ化カリウム等が挙げられる。
【００２４】
消炎剤としては、例えば、グリチルリチン酸二カリウム、グリチルレチン酸、アラントイン、トラネキサム酸、イプシロンアミノカプロン酸、アズレン、塩化ナトリウム、ビタミン類等が挙げられる。
【００２５】
研磨剤としては、例えば、無水ケイ酸、含水ケイ酸、酸化アルミニウム、水酸化アルミニウム、リン酸水素カルシウム、リン酸カルシウム、ピロリン酸カルシウム、炭酸カルシウム、結晶セルロース、ポリエチレン末、炭粒等が挙げられる。
【００２６】
ＧＴａｓｅ阻害剤としては、例えば、アカバナ科マツヨイグサ属植物の抽出物、ブドウ科ブドウ属植物の抽出物、デキストラナーゼ、ムタナーゼ、タステイン、タンニン類、エラグ酸、ポリフェノール、ウーロン茶抽出物、緑茶抽出物、センブリ、タイソウ、ウイキョウ、芍薬、ゲンチアナ、センソ、龍胆、黄連等が挙げられる。
【００２７】
プラーク抑制剤としては、例えばクエン酸亜鉛やグルコン酸等が挙げられる。
【００２８】
知覚過敏抑制剤としては、例えば、硝酸カリウム、乳酸アルミニウム、塩化ストロンチウム等が挙げられる。
【００２９】
歯石予防剤としては、例えば、ポリリン酸塩類、ゼオライト、エタンヒドロキシジホスフォネート等が挙げられる。
【００３０】
歯質強化／再石灰化剤としては、例えば、フッ素、フッ化ナトリウム、フルオロリン酸ナトリウム、フッ化第一スズ等が挙げられる。
【００３１】
増粘剤としては、例えば、プルラン、プルラン誘導体、デンプン等の多糖類；ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース塩類（カルボキシメチルセルロースナトリウム、カルボキシメチルセルロースカリウム等）、メチルセルロース、エチルセルロース、ポリアクリル酸、ポリアクリル酸塩（ポリアクリル酸ナトリウム、アクリル酸・アクリル酸オクチルエステル共重合体等）、メタアクリル酸類の共重合体（メタアクリル酸とアクリル酸 ｎ−ブチルの重合体、メタアクリル酸とメタアクリル酸メチルの重合体及びメタアクリル酸とアクリル酸エチルの重合体等）等のセルロース系高分子物質；カルボキシビニルポリマー、ポリエチレングリコール、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン等の合成高分子物質；レクチン、アルギン酸、アルギン酸塩（アルギン酸ナトリウム、アルギン酸カリウム、アルギン酸マグネシウム、アルギン酸プロピレングリコールエステル、アルギン酸トリエタノールアミン、アルギン酸トリイソプロパノールアミン、アルギン酸アンモニウム、アルギン酸ブチルアミン、アルギン酸ジアミルアミン等）、コンドロイチン硫酸ナトリウム、寒天、キトサン、カラギーナン等の天然系高分子物質；コラーゲン、ゼラチン等のアミノ酸系高分子物質；アラビアガム、カラヤガム、トラガカントガム、キサンタンガム、ローカストビーンガム、グアガム、タマリンドガム、ジェランガム等のゴム系高分子物質等が挙げられる。
【００３２】
湿潤剤としては、例えば、グリセリン、ソルビトール、エチレングリコール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、キシリトール、マルチトール、ラクトール、エリスリトール等が挙げられる。
【００３３】
賦形剤としては、例えば、乳糖、白糖、マンニトール、デンプン、デキストリン、結晶セルロース、シリカ（軽質無水ケイ酸等）等が挙げられる。
【００３４】
香料としては、例えば、天然香料（ウイキョウ油等）、合成香料、これらの調合香料等が挙げられる。
【００３５】
甘味剤としては、サッカリンナトリウム、ステビオサイド、ステビアエキス、アスパルテーム、キシリトール、水飴、蜂蜜、ソルビトール、マルチトール、マンニトール、エリスリトール、糖類（乳糖、白糖、果糖、ブドウ糖等）等が挙げられる。
【００３６】
色素としては、例えば、天然色素、合成色素、これらの混合物が挙げられる。
【００３７】
消臭剤としては、例えば、塩化亜鉛、銅クロロフィリンナトリウム、コーヒー生豆抽出物、ゴボウパウダー、緑茶、焙煎米糠エキス等が挙げられる。
【００３８】
界面活性剤としては、例えば、ポリオキシエチレンラウリルエーテル硫酸ナトリウム、ラウリル硫酸ナトリウム、ミリスチル硫酸ナトリウム、Ｎ−ラウロイルサルコシン酸ナトリウム、Ｎ−ミリストリルサルコシン酸ナトリウム、ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム、水素添加ココナッツ脂肪酸モノグリセリドモノ硫酸ナトリウム、ラウリルスルホ酢酸ナトリウム、α−オレフィンスルホン酸ナトリウム、Ｎ−パルミトイルグルタルミン酸ナトリウム、Ｎ−メチル−Ｎ−アシルタウリンナトリウム等の陰イオン性界面活性剤；ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ショ糖脂肪酸エステル、マルトース脂肪酸エステル、マルチトール脂肪酸エステル、ラクトール脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレート、ポリオキシエチレン高級アルコールエーテル、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレン共重合体、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル等の非イオン性界面活性剤；ヤシ油脂肪酸アミドプロピルベタイン、ラウリルジメチルアミノ酢酸ベタイン、ラウリルジメチルアミンオキシド、２-アルキル−Ｎ−カルボキシメチル−Ｎ−ヒドロキシエチルイミダゾリウムベタイン、Ｎ−ラウリルジアミノエチルグリシン、Ｎ−ミリスチルジアミノエチルグリシン、Ｎ−アルキル−１−ヒドロキシエチルイミダゾリンベタインナトリウム等の両性界面活性剤；塩化ラウリルトリメチルアンモニウム、塩化ステアリルトリメチルアンモニウム、塩化ベンゼトニウム、塩化ベンザルコニウム、塩化ステアリルジメチルベンジルアンモニウム等の陽イオン性界面活性剤が挙げられる。
【００３９】
溶剤としては、例えば、水；エタノール、プロパノール、ブタノール、ペンタノール、ヘキサノール、イソプロパノール等の１価アルコール等が挙げられる。
【００４０】
ｐＨ調整剤としては、例えば、酢酸、塩酸、硫酸、硝酸、クエン酸、リンゴ酸、乳酸、リン酸、安息香酸、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、酢酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、クエン酸水素ナトリウム、乳酸ナトリウム、乳酸カルシウム、リン酸ナトリウム、リン酸水素ナトリウム、安息香酸ナトリウム等が挙げられる。
【００４１】
本発明の活性化剤において、これらの成分を含有させる場合、その含有量については、当該技術分野で通常使用される範囲で適宜設定すればよい。
【００４２】
［剤型・製剤形態］
本発明の活性化剤の剤型については、口腔内に適用可能であることを限度として特に制限されないが、例えば、液状又は半固形状（ゲル状、ペースト状）が挙げられる。
【００４３】
本発明の活性化剤の製剤形態は、口腔内に適用されて口腔内で一定時間滞留し得るものである限り特に制限されないが、例えば、液体歯磨剤、液状歯磨剤、練歯磨剤、洗口液（液体歯磨剤、洗口液は、一般にマウスリンス、マウスウォッシュ、デンタルリンス等と呼称されることがある）、口中清涼剤（マウススプレー等）、口腔用軟膏剤等の口腔衛生剤が挙げられる。これらの中でも、好ましくは液体歯磨剤、液状歯磨剤、練歯磨剤、洗口液、より好ましくは液体歯磨剤、練歯磨剤、洗口液、特に好ましくは練歯磨剤が挙げられる。
【００４４】
［用途・使用方法］
本発明の活性化剤は、歯肉の活性化の目的で、口腔内に適用して使用される。本発明において、「歯肉の活性化」とは、歯肉細胞（歯肉上皮細胞、歯肉線維芽細胞）の増殖能を向上させることである。
【００４５】
歯肉の活性化は、歯肉の賦活化、歯肉の新陳代謝の促進、歯肉の恒常性の維持又は改善等をもたらすので、本発明の活性化剤は、歯肉の賦活化剤、歯肉の新陳代謝促進剤、歯肉の恒常性の維持又は改善剤等として使用することもできる。
【００４６】
また、歯肉の活性化は、歯周組織の健康状態の維持又は改善にも寄与し、歯周病菌や毒素が侵入し難い歯肉状態の維持や改善を図ることができ、歯周病の予防又は改善に有効であるので、本発明の活性化剤は、歯周病の予防又は改善剤として使用することもできる。
【００４７】
本発明の活性化剤は、その製剤形態に応じた形式で口腔内に適用して口腔内で一定時間滞留させればよい。本発明の活性化剤の使用量及び使用頻度については、特に制限されないが、例えば、１回当たりホスホコリン基含有重合体が０．０５〜５ｍｇ程度となる量を、１日当たり１〜数回、好ましくは１〜３回程度の頻度で使用すればよい。
【００４８】
２．歯肉の修復促進剤
ホスホコリン基含有重合体は、損傷又は退縮した歯肉を健常な状態への修復を促進できるので、ホスホコリン基含有重合体は、歯肉の修復促進剤として使用することもできる。
【００４９】
本発明の歯肉の修復促進剤において、使用するホスホコリン基含有重合体の種類や含有量、配合する他の成分、剤型・製剤形態、使用方法等については、前記「１．歯肉の活性化剤」の欄に記載の通りである。
【００５０】
歯肉の修復促進は、損傷又は退縮した歯肉を健常な状態への回復を促進させるので、本発明の歯肉の修復促進剤は、歯肉が関連する疾患や障害の予防又は改善剤、特に、歯周病の予防又は改善剤として使用することができる。
【実施例】
【００５１】
以下に実施例を示して本発明をより具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００５２】
試験例１：歯肉細胞の賦活化効果の検証
ヒト口腔歯肉扁平上皮細胞Ca9-22（JCRB0625、JCRB生物資源バンク)及びヒト口腔歯肉繊維芽細胞HGF-1（CRL-2014、ATCC）を、ヒト口腔歯肉扁平上皮細胞は10%FBS（ウシ胎仔血清）を含むE-MEM培地に、ヒト口腔歯肉繊維芽細胞は10%FBSを含むD-MEM培地に各々懸濁し、96wellプレートにそれぞれ5×103cells/wellとなるように播種した。細胞播種1日後、培養液を除去し、表１に示す試験液を100μL/wellとなるように各ウェルに添加した。
【００５３】
【表１】
2019116424.tif 000002
【００５４】
表１に示す試験液を添加した後に、37℃5％CO2インキュベーターで培養した。試験液の添加から48時間後に培養液を除去し、Cell Couting kit-8（同仁化学製  製品コードCK04）を用いて、生存している細胞の指標となる450nmの吸光度を測定した。別途、既知細胞数に対して、前記Cell Couting kit-8を用いて450nmの吸光度を測定して細胞数VS吸光度の検量線を作成し、当該検量線を用いて試験液添加後の細胞数を算出した。次いで、下記式に従って、増殖向上率（％）を算出した。なお、本試験はｎ＝３の条件で実施し、増殖向上率は、それらの平均値として算出した。
【数１】
2019116424.tif 000003
【００５５】
得られた結果を表２に示す。この結果、歯肉上皮細胞及び歯肉線維芽細胞の双方において、2-メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリン・メタクリル酸ブチル共重合体を添加した場合（実施例１）に、無添加の場合（比較例１）に比して、細胞数の増加が認められ、細胞が賦活化されていることが確認された。即ち、本結果から、2-メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリン・メタクリル酸ブチル共重合体は、歯肉細胞を賦活化し、歯肉を活性化し得ることが明らかとなった。
【００５６】
【表２】
2019116424.tif 000004
【００５７】
試験例２：歯肉細胞の賦活化効果の検証
ヒト口腔歯肉扁平上皮細胞Ca9-22（JCRB0625、JCRB生物資源バンク)を10%FBSを含むE-MEM培地に懸濁し、24wellプレートにそれぞれ1×105cells/wellとなるように播種した。細胞播種1日後、細胞がコンフルエントの状態になったことを確認し、セルスクラッチャーを使用してウェルの真ん中に2mm幅の傷をつけた。次いで、培養液を除去し、表３に示す試験液を500μL/wellとなるように各ウェルに添加した。
【００５８】
【表３】
2019116424.tif 000005
【００５９】
表３に示す試験液を添加した後に、37℃5％CO2インキュベーターで培養した。試験液の添加前、添加から24時間後及び48時間後に、倒立顕微鏡を用いて、ウェル内の細胞を観察し、傷部分を撮影した。下記式に従って、組織修復率（％）を算出した。なお、本試験はｎ＝４の条件で実施し、組織修復率は、それらの平均値として算出した。
【数２】
2019116424.tif 000006
【００６０】
得られた結果を表４に示す。この結果、2-メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリン・メタクリル酸ブチル共重合体を添加した場合（実施例２）は、無添加の場合（比較例２）に比して、組織修復率が大幅に向上していた。即ち、本結果から、2-メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリン・メタクリル酸ブチル共重合体には、歯肉の修復を促進する作用に優れていることが明らかとなった。
【００６１】
【表４】
2019116424.tif 000007
【００６２】
処方例
表５に示す練歯磨剤、及び表６に示すマウスリンスを調製した。当該練歯磨剤及びマウスリンスは、ホスホコリン基含有重合体（２−メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリン・メタクリル酸ブチル共重合体、ポリメタクリロイルオキシエチルホスホリルコリン、又はポリクオタニウム-64）が含まれており、歯肉を活性化する効果が得られるものである。
【００６３】
【表５】
2019116424.tif 000008
【００６４】
【表６】
2019116424.tif 000009