(57)【要約】      （修正有）【課題】アジュバント効果を効率よく高めるためのエマルション粒子径を有する乳化型ワクチン製剤、及びその必要なエマルション粒子径を生成することのできるデバイスの提供。【解決手段】連続相中に分散する分散相の分散粒子径が１〜５０μｍである乳化型ワクチン製剤。前記乳化型ワクチン製剤を生成することのできる多孔質構造体を搭載した乳化型製剤生成用デバイス。【効果】前記乳化型製剤生成用デバイスは、１５％の高濃度界面活性剤が添加されているアジュバントオイルでＷ／Ｏ型アジュバントワクチンを生成しても、その水相分散粒子は微細化することなく、目的とする最頻粒子径１０μｍ±５μｍが得られるようにコントロールすることができ、かつその分布を均一に調製できる。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
連続相中に分散する分散相の分散粒子径が１〜５０μｍであることを特徴とする乳化型ワクチン製剤。
【請求項２】
ｏ／ｗ型エマルションの場合、連続相ｗ中に分散する分散ｏ粒子が請求項１記載の分散粒子径であることを特徴とするｏ／ｗ乳化型ワクチン製剤。
【請求項３】
ｗ／ｏ型エマルションの場合、連続相ｏ中に分散する分散ｗ粒子が請求項１記載の分散粒子径であることを特徴とするｗ／ｏ乳化型ワクチン製剤。
【請求項４】
ｗ／ｏ／ｗ型エマルションの場合、連続相ｗ中に分散する分散ｗ／ｏ粒子が請求項１記載の分散粒子径であることを特徴とするｗ／ｏ／ｗ乳化型ワクチン製剤。
【請求項５】
ｏ／ｗ／ｏ型エマルションの場合、連続相ｏ中に分散する分散ｏ／ｗ粒子が請求項１記載の分散粒子径であることを特徴とするｏ／ｗ／ｏ乳化型ワクチン製剤。
【請求項６】
連続相中に分散する分散相の体積割合が、連続相に対して１〜７０％であることを特徴とする請求項１乃至５の何れか一つに記載の乳化型ワクチン製剤。
【請求項７】
請求項１乃至６の何れか一つに記載の乳化型ワクチン製剤を生成することのできる多孔質構造体を搭載した乳化型製剤生成用デバイス。
【請求項８】
連続相が水性液体の場合、接液する内面性状が親水性であることを特徴とする請求項７に記載の乳化型製剤生成用デバイス。
【請求項９】
連続相が油性液体の場合、接液する内面性状が疎水性であることを特徴とする請求項７に記載の乳化型製剤生成用デバイス。
【請求項１０】
多孔質構造体が、一ブロック体に無数の三次元的絡み合い構造の貫通孔を有する所謂ポーラス体であり、その貫通細孔径が２０乃至１００μｍであることを特徴とする請求項７乃至９の何れか一つに記載の乳化型製剤生成用デバイス。
【請求項１１】
多孔質構造体が、無数の固形粒子を焼き固めてその間隙が貫通孔となる所謂焼結体であり、その貫通細孔径が２０乃至１００μｍであることを特徴とする請求項７乃至９の何れか一つに記載の乳化型製剤生成用デバイス。
【請求項１２】
多孔質構造体が、１本或いは無数の細線状のものを絡めてその間隙が貫通孔となる所謂一つの綿状体であり、その貫通細孔径が２０乃至１００μｍであることを特徴とする請求項７乃至９の何れか一つに記載の乳化型製剤生成用デバイス。
【請求項１３】
多孔質構造体が、円柱や多角柱や正六角柱の貫通パイプを束ねた所謂管束体やハニカム状体であり、その貫通細孔径が２０乃至１００μｍであることを特徴とする請求項７乃至９の何れか一つに記載の乳化型製剤生成用デバイス。
【請求項１４】
多孔質構造体が、金属製やガラス製などの無機質や樹脂製など有機質などの一ブロック、または一シートに規則的に配列した微細な穿孔を有する所謂穿孔体であり、その貫通細孔が２０乃至１００μｍであることを特徴とする請求項７乃至９の何れか一つに記載の乳化型製剤生成用デバイス。
【請求項１５】
多孔質構造体が、規則的に配列されたスリット孔やパンチング孔を有するプレートやシートを一または二以上重ね当接して３次元的迷路状の貫通孔とした所謂迷路状間隙体であり、その貫通細孔径が２０乃至１００μｍであることを特徴とする請求項７乃至９の何れか一つに記載の乳化型製剤生成用デバイス。
【請求項１６】
請求項１乃至６の何れか一つに記載の乳化型ワクチン製剤を生成することのできる請求項１０乃至１５の何れか一つに記載の多孔質構造体を搭載したデバイスであって、１ｍＬ乃至１０ｍＬの注射用シリンジと接続できるポリプロピレン樹脂、またはポリエチレン樹脂、または硬質塩化ビニル樹脂、またはポリアミド樹脂、またはフッ素系樹脂で成形された成形コネクター同士を向かい合わせて中央に当該多孔質構造体を挟んで組み立て構成し２つの室に区画したデバイスであり、当該注射用シリンジとはルアーロック式に連結することができる２条ねじ付きの当該成形コネクターであり、注射用シリンジと連結するとき、注射用シリンジのオスルアーテーパーと液密に嵌合するために、当該成形コネクターのメスルアーテーパーが、６／１００以上６．２／１００以下の角度であり、生成された乳化型製剤の残液が０．５ｍＬ以下となることを特徴とするディスポーザブル乳化型製剤生成用デバイス。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】本発明は、がんワクチンや汎用ワクチンなど注射用乳化型ワクチン製剤に係り、その効能をより高めるために連続相に分散する分散粒子径に関し、またその生成用デバイスに関するものである。
【背景技術】
【０００２】例えば、がんなど腫瘍に対する免疫応答のメカニズムが少しずつ明らかになりつつあり、その腫瘍免疫応答には宿主側の免疫監視機構が大きく関係し、この免疫応答を利用したがん免疫治療術の開発が国内外で広く行われてきている。その一つにがんワクチンがあり、これは自己の免疫が腫瘍細胞を認識する際の目印となる抗原を患者に投与することで、腫瘍細胞に対する特異的免疫応答を患者体内に誘導又は増幅するということを目的としている。その結果として、腫瘍への作用を通じた腫瘍増大・転移・再発の抑制、生存期間の延長等が期待される。【０００３】がんワクチンで用いられるワクチン抗原の形態は多様で、大きく分けてペプチドワクチン、タンパク質ワクチン、核酸ワクチン及び細胞ワクチンに分類され、国内では特にペプチドワクチンの開発が進んでおり将来様々な抗原形態のがんワクチンが出現すると考えられる。またがんワクチンの過去に実施された臨床試験成績の分析から、がんワクチンの投与による重篤な副作用のリスクは極めて低いことが示されているようで、一方でがんワクチンの有効性の証明に失敗する場面も続いているようである。そこで、ワクチン抗原の設計を改善し、種々のアジュバント、これは、ワクチンの効果を増強する物質であり、これらを使用することによって、がんワクチンの免疫原性及び効力を高める工夫が広く模索されている。【０００４】がんワクチンは、腫瘍関連抗原（主にタンパク質）に由来し、腫瘍特異的免疫応答を誘導するためのワクチン抗原を含んでおり、例えば一分類の分化抗原に、ｇｐ７５やｈｇｐ１００、ＭＡＲＴ１などがある。また、ワクチン抗原が誘導する特異的免疫応答を増強するためのアジュバントには、自己免疫レセプター賦活型とデリバリーシステム型の２種類に大別されるが、デリバリーシステム型アジュバントとして、アルミニウム塩等の鉱物塩、水／油エマルション、油／水エマルション、リポソーム、パーティクル（ＰＬＧＡ）等が知られている。【０００５】がんワクチンに含まれるワクチン抗原は、生体に投与された後、抗原提示細胞（主として樹状細胞及びマクロファージ）に貪食され、その細胞内部で処理されて、その細胞の表面で抗原とともにＭＨＣと結合した複合体として提示される。これをＣＴＬであるキラーＴ細胞とヘルパーＴ細胞の表面に発現するＴＣＲでその抗原提示を認識する。その結果、これらのＴ細胞は活性化されて抗腫瘍効果を発揮することになる。つまり、抗原提示細胞で抗原が提示されるためには、投与されたワクチン抗原が抗原提示細胞に効率よく貪食され、効率よくその細胞内で処理される必要がある。【０００６】また、デリバリーシステム型アジュバントで古くから効率よく免疫を強化するワクチンとして知られている従来の水／油エマルション（ｗ／ｏエマルション）、所謂オイルアジュバントワクチンは、確かに高い免疫増強効果が認められる反面、接種反応も著しく、接種部位周辺では外面的に浮腫などの問題が観察されることや、その残留性が懸念されている。【０００７】これらの課題において、有効なＣＴＬ誘導活性を示し、低粘度で、かつ安定性に優れた乳化組成物に関する先行技術がある（例えば、特許文献１参照）。また、オイルアジュバントワクチンの短所である注射局所反応や生体内残留性を改善させることを目的として、所謂ｗ／ｏ／ｗ型アジュバントワクチンに関する先行技術がある（例えば、特許文献２参照）。【０００８】
【特許文献１】国際公開２００６／０７８０５９号公報
【特許文献２】特開平９−２６８１３０号公報
【特許文献３】特開平２００１−１３１０８７号公報
【特許文献４】特開２００５−１８６０２６号公報
【特許文献５】国際公開２０１３／１３３２０９号公報
【特許文献６】国際公開２００７／０８３７６３号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】ここで、特許文献１にあるｗ／ｏ型オイルアジュバントワクチンは、主とする特徴として、その組成を工夫することで本来のｗ／ｏ型オイルアジュバントの短所を解決するものであり、ついでの特徴として、連続相ｏ中に分散するｗの平均粒子径が、当該文献段落［０００５］に記載されているように、好ましくは１０００ｎｍ以下であり、より好ましくは５００ｎｍ以下で、さらに好ましくは５０〜５００ｎｍであり、特に好ましくは５０〜３００ｎｍであるとしている。【００１０】次に、特許文献２にあるｗ／ｏ型オイルアジュバントワクチンとｗ／ｏ／ｗ型アジュバントワクチンは、同様主とする特徴として、その組成を工夫することで従来の短所を解決するものであり、特に、ｗ／ｏ／ｗ型アジュバントワクチンを生成する乳化方法は、先ずｗ／ｏ型オイルアジュバントワクチンを調製（乳化）した後、ＨＬＢ１０以上である乳化剤を含む外水相に再乳化する、所謂２段階乳化することで得られるとしており、その手段は、当該文献段落［実施例］［００４７］のとおり、ホモジナイザーを用いて８０００ｒｐｍで５分間攪拌乳化してｗ／ｏ／ｗ型アジュバントワクチンが得られるとしている。【００１１】ここで、該文献２においては、この二段階乳化法の２次乳化ｗ／ｏ／ｗ型ワクチンの分散粒子であるｗ／ｏ粒子径についての明記はないが、１次乳化ｗ／ｏをホモジナイザー８０００ｒｐｍの１０分間で、２次乳化ｗ／ｏ／ｗをホモジナイザーで高速８０００ｒｐｍの５分間攪拌では、何れも微細化する製造条件であることが窺え、当該ｗ／ｏ粒子径に目標とする大きさがあるとは考えられない。【００１２】次に、特許文献３においては、ｗ／ｏ／ｗ型オイルアジュバントの特性に影響を及ぼす大きな要因の一つとして、外水相中に分散しているｗ／ｏエマルションの粒径が挙げられ、一般に外水相に分散するｗ／ｏエマルションの粒径が大きくなれば、ｗ／ｏ／ｗ型オイルアジュバントでありながら、ｗ／ｏ型オイルアジュバントを接種したような挙動が認められ、アジュバント効果は高くなるが、同時に局所反応のような副作用も強くなるとあり、さらに粒子同士の合一が起こりやすく、製剤としての安定性は低くなると明記されている。一方、一般的にｗ／ｏエマルションが比較的小さな粒子である場合は、製剤としての安定性は高くなり、副作用は少ないが、アジュバント効果もまた弱くなると明記されており、当該文献３によるｗ／ｏ／ｗ型オイルアジュバントワクチンではその処方の特徴から、ｗ／ｏエマルション粒子が比較的小さくても高いアジュバント効果を示すといった特徴を有し、製剤としての安定性に優れ、副作用が少ないことに加え、有効性の面でも優れたオイルアジュバントワクチンであるとし、製剤としての安定性と、副作用の軽減の観点から、ｗ／ｏ／ｗ型オイルアジュバントワクチンを構成するｗ／ｏエマルション粒子は、実質上すべてが５０μｍ以下で、かつ平均粒径が２０μｍ以下であることが好ましいと明記されている。つまり、一般にｗ／ｏ／ｗ型ワクチンのｗ／ｏ分散粒子が小さいとアジュバント効果は弱いが、該文献３の処方では、当ｗ／ｏ分散粒子が小さくても優れたアジュバント効果があり、そのｗ／ｏ分散粒子径が実質上すべてが５０μｍ以下で、かつ平均粒子径が２０μｍ以下であることが好ましいということで、裏返すと、従来のアジュバントオイルを用いた一般的な処方で、ｗ／ｏ分散粒子径が実質上すべて５０μｍ以下で、かつ平均粒子径が２０μｍ以下である場合は、アジュバント効果は弱いということである。【００１３】また、該文献３においては、ｗ／ｏエマルションを調製する段階（第１工程）、およびｗ／ｏエマルションを乳化剤と水性成分を含む液に分散・乳化させる段階（第２工程）のいずれにおいても、ホモミキサーやホモジナイザーなどの一般的な乳化装置のほか、多孔質膜を利用した膜乳化装置や、高圧ジェット流乳化装置など、一般に乳化が可能な手段であれば、どのような装置でも使用することができ、必要に応じて、メンブレンフィルター等を通過しろ過させることによりｗ／ｏエマルション粒子の粒径を一定粒径以下に揃えることも可能であるとしている。【００１４】しかしながら、該文献３による処方では前述とおり、製剤としての安定性と副作用軽減の観点から当該ｗ／ｏ／ｗエマルションのｗ／ｏ粒子の平均粒径２０μｍ以下がより好ましいとしているが、その２０μｍ以下の範囲においてさらに優位な粒径については全く不明であり、該文献３を詮索しても本発明に係るそれを窺い知ることができない。【００１５】このように、該文献３では、該ｗ／ｏ粒子が小さくても一般的前述のようなアジュバント効果が弱くなることのない工夫として、該請求項のように界面活性剤としてポリエチレングリコールを採用したり、その組成設計に工夫がなされており、これは、該文献３で明記されているとおり、ｗ／ｏ／ｗ型アジュバントワクチンでも、ｗ／ｏ粒子が大きければ、ｗ／ｏ型アジュバントワクチンの如き効果が得られるが、ｗ／ｏ粒子が小さいと、ｗ／ｏ型アジュバントワクチンの如き効果が得られないため、組成を工夫して、その効果を高めるものであるということを認識することができる。さらに、該文献３からは、当該ｗ／ｏ／ｗ型アジュバントワクチンが従来のｗ／ｏ型アジュバントワクチンより功を奏するという比較例がなく、従来の一般的組成において、ｗ／ｏ型とｗ／ｏ／ｗ型のどちらが優位かということを窺い知ることが全くできない。【００１６】次に、該文献４は、多孔質ガラス製など円盤状の多孔体をコネクター同士を突き合わせた間に挟んだエマルション調製用デバイスであり、本発明に係るような粘度の高いエマルションにおいて、注射用シリンジを連結する際の抜け外れを危惧する対策設計については不明である。また、ｏ／ｗ系エマルションを生成する場合、当該多孔体を親水性、ｗ／ｏ系エマルションを生成する場合、当該多孔体を疎水性にすることを特徴としているが、エマルション生成において、特に本発明に係る粘度の高い傾向であるｗ／ｏ型乳化ワクチン製剤の場合、例えば本発明に係る多孔質構造体のみを疎水性にしておいて、これを通過してきちんと水相分散粒子を得ても、通過した後コネクター内部が親水性であると、その水相分散粒子がコネクター内面に付着して次第に合一が促進され、注射用シリンジの往復稼働により再び乳化物が多孔質構造体に通過し水相分散粒子が得られる可能性はあるが、このようにコネクター内面で分散相粒子が濡れるような表面性状では、��っかく整粒した水相分散粒子がコネクター壁面に付着し当該多孔質構造体が形成する細孔由来の分散粒子が得られないという懸念が十分考えられる。【００１７】次に、該文献５は、文献４と同様にコネクター同士の間に繊維状の多孔質構造体を介在し、両側のシリンジをポンピング動作することで油相と水相を乳化するデバイスが記載されている。当文献における実施例では、連続相となる油相にＳＥＰＰＩＣ社のモンタナイドＩＳＡ５１ＶＧが使用されており、ｗ／ｏ型エマルション調製例が示されているが、当文献５に係るデバイスにより得られる分散相粒子径については一切記載がない。そもそもこのモンタナイドＩＳＡ５１ＶＧは、正に乳化型ワクチン製剤を調製する際に用いられるインコンプリートフロイントアジュバント（以下、ＩＦＡと言う）であり、ｗ／ｏ型乳化ワクチン製剤を生成する際に、汎用的に使用されるアジュバント用オイルである。このＩＦＡで、例えば前記モンタナイドＩＳＡ５１ＶＧには、マンナイドモノオレエートという界面活性剤が１５％添加されており、これはエマルションを容易にｗ／ｏ型に形成する目的と、さらに水相分散粒子を容易に微細化させる目的がある。【００１８】乳化においては連続相に添加される界面活性剤は、一般的に０．５％〜３％程度で十分安定したエマルションが得られるもので、和光純薬工業（株）製のＩＦＡには界面活性剤スパン８０が同様１５ｗｔ％添加されており、従来のｗ／ｏ型乳化ワクチン製剤は、兎に角水相分散粒子を微細化して、ｏ／ｗ型に転相しないよう完璧なｗ／ｏ型を形成させるための組成になっている。そのために、当文献５の実施例ではｗ／ｏ型であることを重視し、確認テストとして所謂「ドロップテスト」が行われている。つまり調製した乳化製剤を水の表面に滴下して表面に滴下液が拡散した場合は、当エマルションが未形成のため、つまり転相してｏ／ｗ型となってしまっていると看取できる不具合であるため、テスト結果を「×」と示している。【００１９】そして、該文献６は、生理活性ペプチド水溶液とオイルアジュバントの混合液を、当文献のキットにより生理活性ペプチドエマルション製剤として調製する方法が記載されており、当文献記載実施例のドロップテストのとおりｗ／ｏ型エマルションということが看取でき、該文献５と同様、ＩＦＡとしてＳＥＰＰＩＣ社のモンタナイドＩＳＡ５１ＶＧが使用されており、そのエマルション径、所謂分散相粒子径は１μｍ前後という極めて微細なエマルションを得ることを特徴とする方法とその生成用キットが記載されている。
【課題を解決するための手段】
【００２０】本発明は、上記課題に鑑みなされたもので、従来のとおり１５％の高濃度界面活性剤が添加されているアジュバントオイルでｗ／ｏ型アジュバントワクチンを生成しても、その水相分散粒子は微細化することなく、目的とする最頻粒子径１０μｍ±５μｍが得られるようにコントロールすることができ、かつその分布を均一に調製できる乳化型ワクチン製剤生成用デバイスを提供することである。【００２１】つまり本発明では、該文献３で記載されていることとは全く異なり、高いアジュバント効果が期待できるｗ／ｏ型でも、従来１μｍ前後の水相分散粒子よりも、また従来一般的な処方での１０μｍ前後の範囲において特異的にそのアジュバント効果がより発揮されるということを、鋭意研究を重ね見出したことによるものである。【００２２】また、該文献４では、医療用注射用製剤を厳密にエマルション形態ｏ／ｗ系、ｗ／ｏ系乳化製剤を安心して得ることには不安が残るもので、これに対し、本発明に係るデバイスはエマルション形態に合わせて、接液するその内面全部を親水性または疎水性にすることでｏ／ｗ系またはｗ／ｏ系を確実に形成するということを鋭意研究を重ね見出したものである。【００２３】更に、該文献５や該文献６からは、本発明に係るとおり、乳化型ワクチン製剤として有効な１０μｍ±５μｍの分散相粒子径を得ると功を奏すると看取できる説明は全くなく、当明細からその予測すら立てることはできない。【００２４】以上、本発明に係るデバイスは、抗原提示するために樹状細胞やマクロファージが接種されたワクチンを貪食する際、ｗ／ｏ型アジュバントワクチンの場合、当該貪食細胞より遥かに大きい接種されたｗ／ｏ型ワクチンを辺縁部から貪食する過程で、連続相ｏ中に分散する分散相の有効水性成分ｗ粒子が微細であるか、ある程度の粒子径であるかで、そのアジュバント効果の優位性に違いがあるということを鋭意研究により見出すことができたものである。【００２５】またさらに本発明では、該文献３でも明記されている一般にアジュバント効果が高いとされるｗ／ｏ型より、ｗ／ｏ／ｗ型の方が、連続相に分散するｗ／ｏ粒子を１０μｍ±５μｍの範囲に制御することで、特異的に高いアジュバント効果が得られることも、鋭意研究を重ね見出すことができた。【００２６】これは、前記同様、抗原提示するために樹状細胞やマクロファージが接種されたワクチンを貪食する際、ｗ／ｏ／ｗ型アジュバントワクチンでは、連続相水溶液中に分散するｗ／ｏ粒子を当該貪食細胞が容易に貪食できる大きさで、その中でも結果的にアジュバント効果を高めるのに適したｗ／ｏ粒子があることを鋭意研究により見出すことができたものである。【００２７】すなわち、本発明は、以下の製剤とデバイスに係る。
項１．連続相中に分散する分散相の分散粒子径が１〜５０μｍであることを特徴とする乳化型ワクチン製剤。
項２．ｏ／ｗ型エマルションの場合、連続相ｗ中に分散する分散ｏ粒子が項１記載の分散粒子径であることを特徴とするｏ／ｗ乳化型ワクチン製剤。
項３．ｗ／ｏ型エマルションの場合、連続相ｏ中に分散する分散ｗ粒子が項１記載の分散粒子径であることを特徴とするｗ／ｏ乳化型ワクチン製剤。
項４．ｗ／ｏ／ｗ型エマルションの場合、連続相ｗ中に分散する分散ｗ／ｏ粒子が項１記載の分散粒子径であることを特徴とするｗ／ｏ／ｗ乳化型ワクチン製剤。
項５．ｏ／ｗ／ｏ型エマルションの場合、連続相ｏ中に分散する分散ｏ／ｗ粒子が項１記載の分散粒子径であることを特徴とするｏ／ｗ／ｏ乳化型ワクチン製剤。
項６．連続相中に分散する分散相の体積割合が、連続相に対して１〜７０％であることを特徴とする項１乃至５の何れか一つに記載の乳化型ワクチン製剤。
項７．項１乃至６の何れか一つに記載の乳化型ワクチン製剤を生成することのできる多孔質構造体を搭載した乳化型製剤生成用デバイス。
項８．連続相が水性液体の場合、接液する内面性状が親水性であることを特徴とする項７に記載の乳化型製剤生成用デバイス。
項９．連続相が油性液体の場合、接液する内面性状が疎水性であることを特徴とする項７に記載の乳化型製剤生成用デバイス。
項１０．多孔質構造体が、一ブロック体に無数の三次元的絡み合い構造の貫通孔を有する所謂ポーラス体であり、その貫通細孔径が２０乃至１００μｍであることを特徴とする項７乃至９の何れか一つに記載の乳化型製剤生成用デバイス。
項１１．多孔質構造体が、無数の固形粒子を焼き固めてその間隙が貫通孔となる所謂焼結体であり、その貫通細孔径が２０乃至１００μｍであることを特徴とする項７乃至９の何れか一つに記載の乳化型製剤生成用デバイス。
項１２．多孔質構造体が、１本或いは無数の細線状のものを絡めてその間隙が貫通孔となる所謂一つの綿状体であり、その貫通細孔径が２０乃至１００μｍであることを特徴とする項７乃至９の何れか一つに記載の乳化型製剤生成用デバイス。
項１３．多孔質構造体が、円柱や多角柱や正六角柱の貫通パイプを束ねた所謂管束体やハニカム状体であり、その貫通細孔径が２０乃至１００μｍであることを特徴とする項７乃至９の何れか一つに記載の乳化型製剤生成用デバイス。
項１４．多孔質構造体が、金属製やガラス製などの無機質や樹脂製など有機質などの一ブロック、または一シートに規則的に配列した微細な穿孔を有する所謂穿孔体であり、その貫通細孔が２０乃至１００μｍであることを特徴とする項７乃至９の何れか一つに記載の乳化型製剤生成用デバイス。
項１５．多孔質構造体が、規則的に配列されたスリット孔やパンチング孔を有するプレートやシートを一または二以上重ね当接して３次元的迷路状の貫通孔とした所謂迷路状間隙体であり、その貫通細孔径が２０乃至１００μｍであることを特徴とする項７乃至９の何れか一つに記載の乳化型製剤生成用デバイス。
項１６．項１乃至６の何れか一つに記載の乳化型ワクチン製剤を生成することのできる項１０乃至１５の何れか一つに記載の多孔質構造体を搭載したデバイスであって、１ｍＬ乃至１０ｍＬの注射用シリンジと接続できるポリプロピレン樹脂、またはポリエチレン樹脂、または硬質塩化ビニル樹脂、またはポリアミド樹脂、またはフッ素系樹脂で成形された成形コネクター同士を向かい合わせて中央に当該多孔質構造体を挟んで組み立て構成し２つの室に区画したデバイスであり、当該注射用シリンジとはルアーロック式に連結することができる２条ねじ付きの当該成形コネクターであり、注射用シリンジと連結するとき、注射用シリンジのオスルアーテーパーと液密に嵌合するために、当該成形コネクターのメスルアーテーパーが、６／１００以上６．２／１００以下の角度であり、生成された乳化型製剤の残液が０．５ｍＬ以下となることを特徴とするディスポーザブル乳化型製剤生成用デバイス。
【発明の効果】
【００２８】本発明によれば、従来の乳化型ワクチン製剤より免疫誘導効率をさらに高めることができる。
【発明を実施するための形態】
【００２９】以下、本発明の実施の形態を、図面に示す実施例に基づいて説明するが、本発明が、以下の例示及び説明の内容により何ら限定されるものではないことは言うまでもない。
【実施例】
【００３０】（多孔質構造体）
本発明に係る多孔質構造体ｓ１の材質は、例えばガラス製、セラミック製、金属製、木製、樹脂製、繊維製などが挙げられ、その成形体は、ガラス分相法による多孔質（ポーラス）体、焼結体、綿状体、管束体、穿孔体、迷路状間隙体などが挙げられる。【００３１】先ず、ガラス分相法で形成される所謂多孔質（ポーラス）体には、分相法多孔質ガラス体として、周知のＮａ２Ｏ−Ｂ２Ｏ３−ＳｉＯ２を基礎ガラス組成とし骨格ＳｉＯ２組成となる多孔質ガラス、Ｎａ２Ｏ−Ｂ２Ｏ３−ＳｉＯ２−ＧｅＯ２を基礎ガラス組成とし骨格ＳｉＯ２−ＧｅＯ２組成となる多孔質ガラス、ＣａＯ−Ｂ２Ｏ３−ＴｉＯ２−ＳｉＯ２を基礎ガラス組成とし骨格ＴｉＯ２−ＳｉＯ２組成となる多孔質ガラス、Ｎａ２Ｏ−Ｂ２Ｏ３−ＺｒＯ２−ＳｉＯ２を基礎ガラス組成とし骨格ＺｒＯ２−ＳｉＯ２組成となる多孔質ガラス、ＣａＯ−Ｂ２Ｏ３−Ａｌ２Ｏ３−ＳｉＯ２を基礎ガラス組成とし骨格Ａｌ２Ｏ３−ＳｉＯ２組成となる多孔質ガラスがあるが、ＣａＯ−Ｂ２Ｏ３−ＳｉＯ２−Ａｌ２Ｏ３系の多孔質ガラス、ＣａＯ−Ｂ２Ｏ３−ＳｉＯ２−Ａｌ２Ｏ３−Ｎａ２Ｏ系の多孔質ガラス及びＣａＯ−Ｂ２Ｏ３−ＳｉＯ２−Ａｌ２Ｏ３−Ｎａ２Ｏ−ＭｇＯ系の多孔質ガラス等を適宜当該デバイスの成形コネクターの形状に合わせて成形される。【００３２】これらの多孔質ガラス体の中でも、特に、相対累積細孔分布曲線において、細孔容積が全体の１０％を占める時の細孔径を細孔容積が全体の９０％を占める時の細孔径で除した値が、実質的に１〜１．５までの範囲内にあるマイクロポーラス多孔質ガラス膜を用いることが望ましい。このような膜は、特に細孔が均一であり、膜乳化に適している。この膜乳化に最も適する多孔質ガラス膜に、シラス多孔質ガラス（以下、ＳＰＧという）膜がある。【００３３】次に、ガラスやセラミックなど無機質のものや樹脂など有機質のものの粒度を揃えた無数の固形粉末を集めて、融点よりも低い温度で加熱し固め、その間隙を貫通孔とする焼結体（図示しない）がある。【００３４】また、ガラス繊維など無機質のものや樹脂など有機質のものの１本または無数の細線状のものを絡めて一つの集合体としてその間隙を貫通孔とする綿状体（図示しない）がある。【００３５】また、金属製や樹脂製など、円柱や多角柱や正六角柱の貫通パイプを束ねた管束体（例えば図１３（ａ））やハニカム状管束体（例えば図１３（ｂ））がある。この超微細貫通パイプについては、例えば、株式会社ルスコム製の延伸法や電気鋳造法により得られるマイクロチューブなどを用いることができる。【００３６】また、金属製やガラス製などの無機質や樹脂製など有機質などの一ブロック、または一シートに微細な穿孔を設けた穿孔体がある（例えば図１４）。【００３７】ここで穿孔する手段としては、細径ドリルやレーザーなど切削によるものや、特に無機質に対しては、機械的せん断、切削加工とは異なり、エッチング液などの化学薬品による化学反応・腐食作用を応用して被加工物を溶解・化学切削する所謂エッチング法により微細な穿孔を実現することができる。そのためのマスキング技術が必要なフォトエッチング加工では、ＣＡＤ／ＣＡＭシステムにより作成されたデータを基にしてレーザープロッターから高精度の描画パターンを作成することにより、非常に精密な目的形状の所謂フィルムマスクを作成することができ、この方法により数μｍ単位の穿孔を有する穿孔体を得ることができる。またエッチング法とは異なり、アディティブ法により、微細な孔を有する高精度フィルター、所謂スクリーン板を形成することができる。【００３８】また、前段加工法により得られる規則的に配列されたスリット孔やパンチング孔を有するプレートやシートなど、所謂スクリーン板などを板厚方向に二以上当接して、三次元的迷路状の貫通孔とした迷路状間隙体がある。この当該三次元的迷路状間隙体の詳細について、次のとおり一実施例を示す。【００３９】例えば、図９（ａ）に、本発明に係る三次元的迷路状間隙体の一区域内部の三次元的迷路状の貫通孔の一例を示すが、これを図９（ｂ）のように、矢視ｘ１方向へ連結延長し、さらに図９（ｃ）のように、矢視ｚ１方向へ連結延長すると、当該三次元的迷路状間隙体内部に三次元的迷路状の貫通孔が形成されることになる。この三次元的迷路状貫通孔は、当実施例に限定されることなく、パズルのようにあらゆる構成が可能である。また、図９（ｃ）をさらにｙ１方向へ連結延長し、多断層にすることもできる。【００４０】次に、図１０にその貫通孔を立体三面ｘ１ｙ１ｚ１の各平面で説明するが、図１０（ａ）は図９（ｃ）のｘ１矢視図であり、貫通孔ｐ１が底面から上面に連通して屈曲しながら貫通している。また、図１０（ｂ）は図９（ｃ）のｚ１矢視図であり、貫通孔ｐ１が底面から上面に連通してここでも屈曲しながら貫通している。そして図１０（ｃ）は図９（ｂ）のｙ１矢視図であり、当該三次元的迷路状間隙体Ｍがｙ１矢視の面に広がる図１２に示すプレート状またはシート状である場合、全体のエマルション液送方向がｙ１方向である場合のものを示している。以上のとおり、本発明に係る多孔質構造体の一実施例である三次元的迷路状間隙体Ｍは、ｙ１方向に貫通していながらその内部では少なくともｙ１方向において１回の屈曲点があることが好ましく、さらにはポーラス体の貫通孔のように三次元的絡み合い構造の様に形成されることがより好ましい。【００４１】次に、図１１（ａ）は本発明に係る当該三次元的迷路状間隙体一例である図９（ａ）を、図１１（ｂ）のとおりｙ１矢視の平面で階層別にｋ１〜ｋ５のとおり５分割し、その各階層で形成される間隙を図１１（ｃ）のとおり示すものであり、この各階層を図１１（ｄ）のように当接（所謂、積層）させて、図１１（ｅ）のとおり一体化した当該三次元的迷路状間隙体の一区域を示すもので、この内部には図１１（ａ）（これは、図９（ａ）に同じ）の三次元的迷路状の貫通孔が形成されていることになる。これを、ｘ１とｚ１の方向へ連結延長した当該三次元的迷路状間隙体Ｍ全体が図１１（ｆ）のとおりとなる。【００４２】図１２（ａ）は、図１０（ｃ）をｚ１方向に連結延長したｙ１矢視平面図であり、外と連絡する出入口ｐ１とその奥の階層、その内部で連通するｐ２を示しており、外観上では図１２（ｂ）のとおり、ｐ１孔だけが目視されることになる。つまり図１２（ｂ）は、図１１（ｅ）のｙ１矢視部をｘ１とｚ１方向へ連結延長した多孔質構造体のｙ１矢視図である。別���表現をすると、図１２（ｂ）は、図１１（ｃ）の第１階層ｒ１をｘ１とｚ１方向へ連結延長したｙ１矢視の成形プレートまたは成形シート、所謂、前述のスクリーン板である。よって、当該三次元迷路状間隙体の全体構造は、同様に、他の階層をｘ１とｚ１方向へ連結延長して成形プレートまたは成形シートとしたこれらを図１１（ｄ）のように当接（所謂、積層）させることにより当該三次元的迷路状間隙体Ｍ全体が完成し、よってその内部間隙構造は、図９（ｃ）の迷路状の貫通孔を有することになる。ここで図１２の囲い破線部Ｄは、当該一区域の図１１（ｅ）ｙ１矢視部に相当する。【００４３】この三次元的迷路状間隙体Ｍの貫通孔は、入口と出口は直管のパイプ状を束ねた管束体の貫通孔のようなストレート孔ではなく、必ず内部で三次元的に屈曲して連通する貫通孔構造であるので、ポンピング乳化する際に分散相に剪断力が加わり、より分裂しやすくストレート孔の多孔質構造体より効率よくエマルション生成が行えることになる。【００４４】その図１１（ｃ）に示すこれら各階層のスクリーン板（所謂成形プレートまたは成形シート）は、例えば前述のエッチング法やアディティブ法などによりそれぞれ作製することが可能で、特に困難な要素はない。また有機質で当該各スクリーン板を作成する場合は、精密樹脂成型技術により容易に作成することができる。【００４５】（ディスポーザブル乳化型ワクチン製剤生成用デバイス）
図１に示す本発明に係るディスポーザブル乳化型ワクチン製剤生成用デバイスｄについて説明すると、当該デバイスの両側は、国際規格ＩＳＯなどで規格化された医療用の角度６／１００オスルアーテーパー、特に注射用シリンジ１，２のオスルアーテーパーＴ２に連結可能なメスルアーテーパーＴ１を有する成形コネクターｄ１であり、その成形コネクターｄ１を向かい合わせてその間に、四角形板状、あるいは多角形板状、あるいは円形板状の当該多孔質構造体ｓが介在しており、その多孔質構造体を隔てて左右の室が形成され、当該多孔質構造体を介して乳化用液体が当該左の室と右の室を行き来することで当該乳化型ワクチン製剤の油性成分Ｙと水性成分Ｎが効率よく乳化できるもので、その貫通細孔径に応じて、目標とする分散粒子径をコントロールすることができる。【００４６】ここで、当該デバイスｄはその両側に注射用シリンジ１、２を連結して室内の油性成分Ｙと水性成分ＮをプランジャーＪ１、Ｊ２を交互に往復移動させることで当該多孔質構造体ｓを介して乳化させるものなので、当該シリンジのプランジャーを時には高い力で押圧しても連結している当該コネクターから当該シリンジが突発的に抜け外れることのないように、図１（ｂ）とその囲い破線部Ａの拡大図（ｃ）に示すとおり、当該デバイスの当成形コネクターｄ１の注射用シリンジとの連結部には２条ねじａ１を有するのツバを設け、注射用シリンジのオスルアーテーパーと単なる圧入による連結ではなく、２条ねじａ２を有するルアーロック式の注射用シリンジ１とルアーロック式に連結でき、この突発的な抜け外れが起こらない様に左右のシリンジによる押圧に十分耐えうる安全な構造になっている。【００４７】或いは、例えば医療現場において、ルアーロック式に連結することが困難な場面で、圧入式だけで連結する場合、容易に前記抜け外れが起こらないように、注射用シリンジのようにＩＳＯなどで規定されているオスルアーテーパー６／１００角度に対し、図２（ａ）（ｂ）のとおり当成形コネクターのメスルアーテーパーＴ１において奥のほうで接面する、つまり当該オスルアーテーパーＴ２においては先のほうで接面するように、当該成形コネクターのメスルアーテーパー角度を６／１００以上の鈍角にすることが好ましく、６／１００以上６．２／１００以下にすることがより好ましい。これを、図３（ａ）のとおり、逆に、当該成形コネクターのメスルアーテーパー角度を６／１００以下の鋭角にすると、当注射用シリンジのオスルアーテーパーＴ２の奥で接面することになり、図３（ｂ）のとおり、当メスルアーテーパーＴ１と当オスルアーテーパーＴ２と嵌合したテーパー同士の隙間に液体ｅ２が介在することになり、そこに矢印ｘ方向に内圧が加わるとメスルアーテーパーＴ１を広げる方向とオスルアーテーパーＴ２を吐き出す方向へ力が加わり、抜け外れを促進する悪い傾向であるため好ましくない。【００４８】次に、この本発明に係るデバイスを構成する当該成形コネクターの材質は、ディスポーザブル型一般医療機器として量産性を前提として、安価で優れた成形性と耐薬品性を有する樹脂製が好適であり、その例として、ポリプロピレン樹脂、ポリエチレン樹脂、硬質塩化ビニル樹脂、ポリアミド樹脂、フッ素系樹脂が好適である。ここで、医薬用として耐薬品性を考慮すると、ポリカーボネイト樹脂はケシ油のような薬液を用いる乳化の場合、クラックなどの劣化を起こす可能性があり耐薬品性としては万全ではないため、好ましくない。【００４９】また、乳化型ワクチン製剤のエマルション形態において、連続相を水性液体とする所謂ｏ／ｗ系エマルションの場合、当該デバイスの接液する内面は全て親水性であることが好ましく、連続相を油性液体とする所謂ｗ／ｏ系エマルションの場合、当該デバイスの接液する内面は全て疎水性であることが好ましい。因みに、ｏ／ｗ系エマルションとは、複合的なｗ／ｏ／ｗ型エマルション、ｏ／ｗ／ｏ／ｗ型エマルションなどを含み、ｗ／ｏ系エマルションとは、複合的なｏ／ｗ／ｏ型エマルション、ｗ／ｏ／ｗ／ｏ型エマルションなどを含む。【００５０】ここで、ｏ／ｗ系エマルションを形成するために最も重要な当該多孔質構造体は、公知技術であるとおり、連続相に濡れやすい親水性が好ましいが、それ以外で接液するデバイス内面に疎水面が存在すると、乳化で得られた分散相ｏ粒子がその疎水面に濡れて合一により粗大粒子となり、当該多孔質構造体の細孔由来の分散粒子を得ることが困難になってしまう。またその逆も同様、ｗ／ｏ系エマルションを形成するために最も重要な当該多孔質構造体は、同様公知技術であるとおり、連続相に濡れやすい疎水性が好ましいが、それ以外で接液するデバイス内面に親水面が存在すると、乳化で得られた分散相ｗ粒子がその親水面で濡れて合一により粗大粒子となり、当該多孔質構造体の細孔由来の分散粒子を得ることが困難になってしまう。よって、接液する全面をエマルション形態の連続相と同じ性状にすることが最も好ましい。【００５１】また、本発明の当該デバイスｄは、乳化型ワクチン製剤生成用であり、乳化後生成したワクチン製剤の残液が極力少ない方がよく、図４に示す残留する液体ｚ、所謂溜まり部容積の少ない設計がより好ましい。よって、両側に連結される注射用シリンジ１、２のオス部が挿入されたお互い直後に当該多孔質構造体ｓが近接していることが良く、要するに、当該デバイスの中央に当該多孔質構造体ｓが介在することが最も好ましい場所ということである。【００５２】ここで、当該多孔質構造体を本発明に係るデバイスに組み込む方法については様々で、当該多孔質構造体が前記多孔質ガラス体や焼結体、管束体や穿孔体、迷路状間隙体などブロック状にそのものが形成できるものは、円盤型や四角型、ブロック型などに整えて、当該成形コネクター同士を向かい合わせた中央に設置し、接着や超音波溶着、嵌め込みなど一般的技術手段により当該デバイスを構成することができる。また、当該多孔質構造体が前記綿状体であれば、これを支える所謂一般的にサポートメッシュと言われる網目状の板で挟んでこれを当該成形コネクター同士を向かい合わせた中央に設置し、同様に接着や超音波溶着、嵌め込みなど一般的技術手段により当該デバイスを構成することができる。【００５３】何れにおいても、当該多孔質構造体は、本発明に係る乳化型ワクチン製剤の分散相粒子径が１０μｍ±５μｍ程度のエマルションが形成できるように、多孔質ガラス体においてはその細孔径、焼結体においてはその間隙による貫通孔径、綿状体においてはその間隙による貫通孔径、管束体や穿孔体、迷路状間隙体においてはパイプ内径、穿孔径、間隙径などを調整することで所望の分散粒子径を容易に得ることができる。【００５４】その中で、本発明に係るデバイスに搭載する多孔質構造体として好ましいのは、ガラス分相法による多孔質ガラス体であり、本発明に深く係わる分散粒子径を得るためにより好ましい多孔質構造体は、細孔径分布が略正規分布であり単分散性のより高い精度の良い最頻細孔径０．０５〜１００μｍの範囲において、目標とする最頻細孔径を選択的に製造することができるシラス多孔質ガラスである。特にその相対累積細孔分布曲線において、１０％径を９０％径で除した値が１〜２．０である単分散な細孔径を有するエス・ピー・ジーテクノ株式会社製のシラス多孔質ガラス（以下、「ＳＰＧ」という）が最も好ましい。【００５５】（実験例Ａ）
本発明に係るｗ／ｏ型アジュバントワクチン製剤とその生成用デバイス
本発明に係るｗ／ｏ型アジュバントワクチン製剤の特定の分散相粒子径を得るために実施した実験例の物質について説明する。油相は、前記文献５、６の実施例にもあるように、ＩＦＡとして一般的にＳＥＰＰＩＣ社のモンタナイドＩＳＡ５１ＶＧが連続相として使用されているが、当実験例では、当モンタナイドＩＳＡ５１ＶＧと同組成であるＳＩＧＭＡ社のＩＦＡを用いた。そのベースとなるｗ／ｏ型ワクチン製剤の組成は表１に示すとおりである。【００５６】つまり、分散相ｗを、１０００μｇのペプチドｈｇｐ１００を１００μＬの滅菌水に溶解した溶液と、４００μｇの核酸ＣｐＧを４００μＬのリン酸緩衝生理食塩水（以下、ＰＢＳという）に溶解した溶液とＰＢＳ５００μＬの総計１０００μＬとし、連続相ｏを、ＳＩＧＭＡ社のＩＦＡ１０００μＬとした。【００５７】
【表１】
2019001770.tif 000003
【００５８】次に、乳化手段として用いたデバイスとその乳化条件を表２に示す。特に本発明に係る実験例１の乳化デバイスは、図１に示すとおり注射用シリンジとの連結部が二条ねじを有するルアーロック式の硬質塩ビ製の成形コネクターであり、多孔質構造体として最頻細孔径５０μｍを有するＳＰＧを搭載したデバイスで、当ＳＰＧを含め、接液する当該コネクター内面は疎水性としている。疎水性を施す手段としては、特に制限されることはなく、例えばシリコン系の塗布剤でコーティングすることや、当該多孔質構造体は前記通りコーティングして、成形コネクターには疎水性を示す樹脂、前述したポリプロピレン樹脂、ポリエチレン樹脂、硬質塩化ビニル樹脂などで成形することで賄うことができる。ただし、当該成形コネクターが油相に濡れ性のよい樹脂であれば、ポンピング乳化前には乳化手順上、当該デバイス内を油相で満たすので、内面が全て水相より先に油相で濡れることになり、ｗ／ｏエマルションの水相ｗで濡れてｗ粒子が粗大化するというリスクが減り、当該成形コネクターを疎水性コーティングする必要はない。当実験例では、硬質塩化ビニル樹脂製の成形コネクターを用い、搭載のＳＰＧはシリコン系塗布剤で疎水処理を行った。【００５９】そこで、表２に示す本発明に係る実験例１〜８においては、当該ＳＰＧを通過するパス回数別で分散粒子径を差別できる例を示し、比較例１として、トミー精工社製攪拌機ＴｏｍｙＭｉｃｒｏＳｍａｓｈ（ＭＳ−１００Ｒ）を用いた乳化による微細ｗ／ｏエマルションを、また前述の該文献６に係る二プロ製ＧＰシリンジコネクターを用いた乳化による微細ｗ／ｏエマルションを示し、それぞれ、島津製作所社製のレーザー回折式粒度分布測定装置（ＳＡＬＤ２０００）にて測定した。【００６０】
【表２】
2019001770.tif 000004
【００６１】ここで、比較例１や比較例２において１０μｍ程度の分散粒子径を得ようとして乳化条件を緩めたり、ポンピング回数を少なくしたりしても、前述文献５や文献６の実施例に記載されているとおり、所謂水面上へのドロップテストを行うと水面上に拡散されて、本来のｗ／ｏ型エマルションが得られないこととなり、比較例１や比較例２の乳化デバイスでは、ｗ／ｏ型を得るためにはしっかり念入りに乳化する必要があり、そうすると１μｍ前後の微細エマルションとなることが分かった。【００６２】これに対し、本発明に係る実験例１〜８の本発明デバイスは、粘度の高い乳化型ワクチン製剤に対しても接液する内面を連続相と同じ性状に保つことで、緩い乳化条件でも、しっかりｗ／ｏ型エマルションが得られるということが分かった。ここで、図５（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）にそれぞれ実験例１、２、比較例１、２のエマルション粒度分布を示し、図６に実験例１、実験例５、実験例６、比較例１に係るエマルション写真を示す。【００６３】また、実験例８は、実験例１〜７と同様に、細孔径２０μｍのＳＰＧを搭載し、接液部を疎水性とした乳化デバイスを用いて、少ないパス回数で分散粒子径１０μｍを得ようとするが、前述とおり一般に用いられているＩＦＡには、界面活性剤が１５％と大量に添加されているため、当該多孔質構造体の細孔径が、所望の分散粒子径に近いもののデバイスであると、分散粒子が容易に小さくなってしまい目標とする粒子径が得られなかった。したがって、実験例５、７のように、細孔径３０μｍ以上でポンピング回数を調整することで、所望の１０μｍ前後の分散粒子径を得ることができ、本発明に係るデバイスの当該多孔質構造体の貫通細孔径は限定的であるということが分かる。因みに、実験例８の細孔径２０μｍの当デバイスで少ないポンピング回数１、２パスで、１０μｍ近い分散粒子は得られるが、分散粒子を整粒するという意味ではポンピング回数が不足で、より単分散の分布を得るために少なくとも３パス以上が好ましく、そのためには、当実験例のようなｗ／ｏ乳化型ワクチン製剤の場合、表２のとおり当該多孔質構造体の貫通細孔は３０μｍ以上のものを選択するのが好ましいということが言える。【００６４】（実験例Ｂ）
本発明に係るｗ／ｏ型アジュバントワクチン製剤を用いたマウス免疫実験
本発明に係る乳化型ワクチン製剤は、腫瘍特異的免疫応答を効果的に誘導するペプチドワクチン製剤であり、その分散相粒子径を従来の微細粒子とするよりも、ある大きさに特定することでより功を奏することを見出したことによるものである。そのため、当実験例におけるワクチンの組成は一実施例であり、本発明に係る分散粒子径に対して、特に制限されるものではない。【００６５】本実験例では、表１に示すとおり、分散相ｗは、１０００μｇのペプチドｈｇｐ１００を１００μＬの滅菌水に溶解した溶液と４００μｇの核酸ＣｐＧを４００μＬのＰＢＳに溶解した溶液とＰＢＳ５００μＬの総計１０００μＬとし、連続相ｏは、当モンタナイドＩＳＡ５１ＶＧと同組成のＳＩＧＭＡ社のＩＦＡを１０００μＬとし、これを当実施例のｗ／ｏ型ワクチン製剤組成のベースとした。そしてこのｗ／ｏ組成で、各乳化手段を違えて、また分散粒子径を区別して、表２に示す実験例５、実験例６、比較例１により得られるそれぞれ異なる分散粒子径の乳化型ワクチン製剤を用いて、予めｈｇｐ１００特異的ＴＣＲ−Ｔｇ細胞を移入したマウス（各ｎ＝５）に、各方法で得たワクチン製剤を皮下接種により免疫し、５日後に脾臓を摘出し、当ペプチドワクチン製剤によって活性化されたｈｇｐ１００特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞を評価した。また、マウス１匹分の接種量１００μＬの組成を表３に示す。【００６６】
【表３】
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【００６７】そして当実験例のワクチン効果の結果として、表４に示す通り、各ワクチン製剤を接種した群では脾臓内に多数のｈｇｐ１００特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞を認め、何れのエマルションもワクチンとして抗原特異的なＣＤ８＋Ｔ細胞を刺激していたが、特にＩＦＮ−γ＋産生を伴う細胞数は、平均して実験例５の中程度の粘度のワクチンによるものが最も多く、効率良く誘導しているということが確認された。比較例３として、免疫していないＣｏｎｒｏｌ群を示す。【００６８】
【表４】
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【００６９】（実験例Ｃ）
本発明に係るｗ／ｏ／ｗ型アジュバントワクチン製剤とその生成用デバイス
本発明に係るｗ／ｏ／ｗ型アジュバントワクチン製剤の特定の分散相ｏ／ｗ粒子径を得るために実施した実験例の物質について説明する。油相は、前実験例同様ＳＩＧＭＡ社のＩＦＡを用いる。また内水相には表１に示す分散相の物質を用いて、その濃度を変えた処方である。外水相には、乳化安定させるための界面活性剤としてポリオキシエチレン硬化ひまし油６０（以下、ＨＣＯ６０という）をＰＢＳに０．５ｗｔ％添加した水溶液を用いた。そのベースとなるｗ／ｏ／ｗ型ワクチン製剤の組成を表５に示す。【００７０】つまり、内水相ｗ１は、５０μｇのペプチドｈｇｐ１００を５０μＬの滅菌水に溶解した溶液と、２０μｇの核酸ＣｐＧを２００μＬのＰＢＳに溶解した溶液と、ＰＢＳ２００μＬの総計５００μＬとし、油相ｏはＩＦＡ５００μＬ、外水相ｗ２は０．５ｗｔ％ＨＣＯ６０水溶液１０００μＬとした。【００７１】
【表５】
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【００７２】ここで、一般的にｗ／ｏ／ｗ型エマルションの場合、二次乳化で内水相ｗ１を油相ｏの液滴内部に十分包含させるために、先ず一次乳化ｗ１／ｏエマルション時に、ｗ１分散粒子を十分微細化しておくことが好ましく、当実験例では、表２に示す比較例１と同様の方法によりこれを一次乳化物とし、次の二次乳化では、ｗ／ｏ分散粒子を１０μｍ±５μｍに整えるために、本発明に係るデバイスとして、前記実験例１〜８の乳化デバイスと同様に、今回は連続相が親水性であるので、接液する内面は、当該ＳＰＧを含め、親水性の乳化デバイスを用いた。当内面を親水性とする手段は、特に制限されることなく、例えば、水に濡れ性のよくなるポリビニルアルコール溶液やポリビニルピロリドン溶液でコーティングすることで賄うことができる。このポリビニルアルコール溶液やポリビニルピロリドン溶液は、溶媒をエタノールで調製できるので、疎水性樹脂でも塗布することができる。ただし、当該成形コネクターが水相に濡れ性のよい樹脂であれば、ポンピング乳化前には乳化手順上、当該デバイス内を外水相で満たすので、内面が全て油相より先に水相で濡れることになり、ｗ／ｏ／ｗエマルションの油相ｗ／ｏで濡れてｗ／ｏ粒子が粗大化するというリスクが減り、当該成形コネクターを親水性コーティングする必要はない。当実験例では、硬質塩化ビニル樹脂製の成形コネクターと親水性のＳＰＧを用い、表６にその細孔径別、ポンピング回数別によるｗ／ｏ／ｗエマルション粒子径を示す。因みに、ポリプロピレン樹脂製の成形コネクターと親水性のＳＰＧの当該デバイスでは、硬質塩化ビニルより撥水性が高いので先に水相で濡らしても、乳化最中にｗ／ｏ粒子がポリプロピレン樹脂に濡れる可能性があるため、強制的に親水コーティングしておくことが賢明である。【００７３】この何れの実験例のとおり、二次乳化で１０μｍ前後の分散ｗ／ｏ粒子を目標とするのに、その油相ｏ粒子内に封入されるｗ１粒子が０．６μｍの微細粒子としては十分であり好適である。また、二次乳化では、当該乳化デバイスのポンピング回数を調整することにより、目標とするｗ／ｏ粒子が得られることがわかる。ここで、実験例９の細孔径１０μｍの当デバイスで最低必要なポンピング回数３パスで、６．２μｍが得られており、これは目標とする分散粒子が１０μｍ前後の乳化型ワクチンとして容認できる最小径であり、よって、当ｗ／ｏ／ｗ乳化型ワクチン製剤では、当該多孔質構造体の貫通細孔は１０μｍ以上のものを選択することが好ましい。ここで、図７（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、図８（ａ）、（ｂ）、（ｃ）に、それぞれ実験例１３、実験例１４、実験例１２に係るエマルション粒度分布とエマルション写真を示す。【００７４】ここで、当実験例での外水相はエマルション安定性を考慮した最低濃度の界面活性剤の０．５ｗｔ％ＨＣＯ６０水溶液であり、場合によっては、この濃度を高めると、益々容易にｗ／ｏ／ｗエマルションが微細化方向へ向かい、当該多孔質構造体の貫通細孔１０μｍでも、目標とする１０μｍ±５μｍ分散粒子以下のワクチン製剤となってしまい、この場合のワクチン組成では、当該多孔質構造体の貫通細孔は１０μｍより大きいものを選択することになる。つまり、外水相の処方に��って、当該貫通細孔１０μｍより大きい当該多孔質構造体を選択することになる。【００７５】
【表６】
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【００７６】（実験例Ｄ）
本発明に係るｗ／ｏ／ｗ型アジュバントワクチン製剤を用いたマウス免疫実験
本発明に係るｗ／ｏ／ｗ乳化型ワクチン製剤は、腫瘍特異的免疫応答を効果的に誘導するペプチドワクチン製剤であり、その分散ｗ／ｏ粒子径を従来のｗ／ｏ乳化型ワクチン製剤の微細ｗ粒子径よりも、ある大きさに特定することでより功を奏することを見出したことによるものである。そのため、当実験例におけるワクチンの組成は一実施例であり、本発明に係る分散粒子径に対して、特に制限されるものではない。【００７７】本実験例では、表５に示すとおり、内水相ｗ１は、５０μｇのペプチドｈｇｐ１００を５０μＬの滅菌水に溶解した溶液と、２０μｇの核酸ＣｐＧを２００μＬのＰＢＳに溶解した溶液と、ＰＢＳ２５０μＬの総計５００μＬとし、油相ｏは、ＳＩＧＭＡ社のＩＦＡを５００μＬとし、外水相ｗ２は、０．５％ＨＣＯ６０水溶液を１０００μＬとし、これを当実施例ｗ／ｏ／ｗ型ワクチン製剤組成とした。このように当ワクチンは、ｗ／ｏ／ｗ＝５００μＬ／５００μＬ／１０００μＬ＝２０００μＬを１回の調製量とした。そしてこのｗ／ｏ／ｗ組成において、目標とする１０μｍ程度の分散ｗ／ｏ粒子である実験例１５のｗ／ｏ／ｗ型ワクチン製剤と、またその一次乳化で得られた従来のｗ／ｏ型ワクチン製剤を比較例４として、予めｈｇｐ１００特異的ＴＣＲ−Ｔｇ細胞を移入したマウス（各ｎ＝３）に、各方法で得たワクチン製剤を皮下接種により免疫し、５日後に脾臓を摘出し、当ペプチドワクチン製剤によって活性化されたｈｇｐ１００特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞を評価した。また、マウス１匹分の接種量２００μＬの組成を表７に示す。【００７８】
【表７】
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【００７９】そして当実験例のワクチン効果の結果として、表８に示す通り、各ワクチン製剤を接種した群では脾臓内に多数のｈｇｐ１００特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞を認め、何れのエマルションもワクチンとして抗原特異的なＣＤ８＋Ｔ細胞を刺激していたが、特にＩＦＮ−γ＋産生を伴う細胞数は、平均して実験例１５のｗ／ｏ／ｗ型ワクチンによるものが最も多く、効率良く誘導しているということが確認された。比較例５として、免疫していないＣｏｎｒｏｌ群を示す。【００８０】
【表８】
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【図面の簡単な説明】
【００８１】
【図１】本発明に係る乳化型ワクチン製剤を生成するためのデバイスの構成図であり、注射用シリンジとの連結部を詳細に説明したものである。
【図２】注射用シリンジのオスルアーテーパーより当該デバイスのメスルアーテーパー角度が鈍角の場合の嵌合と接面位置を示す拡大図である。（ｂ）は（ａ）の破線枠Ｂの詳細図である。
【図３】注射用シリンジのオスルアーテーパーより当該デバイスのメスルアーテーパー角度が鋭角の場合の嵌合と接面位置を示す拡大図である。（ｂ）は（ａ）の破線枠Ｃの詳細図である。
【図４】当該デバイス内に残留する薬液を示す模式図である。
【図５】（ａ）実験例１、（ｂ）実験例２、（ｃ）比較例１、（ｄ）比較例２、それぞれのエマルション分布である。
【図６】（ａ）実験例１、（ｂ）実験例５、（ｃ）実験例６、（ｄ）比較例１、それぞれのエマルション写真である。
【図７】（ａ）実験例１３、（ｂ）実験例１４、（ｃ）実験例１２、それぞれのｗ／ｏ／ｗエマルション分布である。
【図８】（ａ）実験例１３、（ｂ）実験例１４、（ｃ）実験例１２、それぞれのｗ／ｏ／ｗエマルション写真である。
【図９】（ａ）本発明に係る三次元迷路状間隙体の一区域内部の三次元的迷路状の貫通孔の一例を示す模式図、（ｂ）（ａ）の貫通孔一区域をｘ１方向へ連結延長した模式図、（ｃ）（ｂ）をｚ１方向へ連結延長した模式図。
【図１０】（ａ）図９（ｃ）のｘ１矢視の模式図、（ｂ）図９（ｃ）のｚ１矢視の模式図、（ｃ）図９（ｂ）のｙ１矢視の模式図（各方向へ連結延長した程度は揃えていない）。
【図１１】（ａ）図９（ａ）と同等、（ｂ）ｙ１矢視の平面で５分割した階層、（ｃ）各階層毎にそれぞれの間隙を設けた成形プレートまたは成形シートの模式図、（ｄ）（ｃ）の各階層の成形プレートまたは成形シートを当接（積層）させた模式図、（ｅ）（ｄ）を一体化したもので、内部に（ａ）の貫通孔を形成する一区域の三次元迷路状間隙体Ｍの模式図、（ｆ）（ｅ）をｘ１とｚ１方向に延長した全体の三次元迷路状間隙体Ｍの模式図。
【図１２】（ａ）図１０（ｃ）をｚ１方向に連結延長した模式図、（ｂ）（ａ）で奥の階層で連通している貫通孔ｐ２を図示しない平面図で、図１１（ｆ）のｙ１矢視の模式図。
【図１３】本発明に係る当該多孔質構造体の一実施例を示す（ａ）管束体、（ｂ）ハニカム状管束体の模式図。
【図１４】本発明に係る当該多孔質構造体の一実施例を示す穿孔体の模式図。
【符号の説明】
【００８２】１，２        注射用シリンジ
Ｊ１，Ｊ２    プランジャー
ｓ            本発明に係る多孔質構造体
ｄ            本発明デバイス
ｄ１          本発明デバイスを構成する成形パーツ
Ｎ            ｗ／ｏ型ワクチンのｗとなる内水相
Ｙ            ｗ／ｏ型ワクチンのｏとなる油相
ｘ            本発明デバイス内で押圧される方向
ｚ            残留する液体
ａ１          本発明デバイスのツバに設けられた二条ねじ
Ｔ１          本発明デバイスのメスルアーテーパー
ａ２          ロック式注射用シリンジの二条ねじ
Ｔ２          注射用シリンジのオスルアーテーパー
ｅ１、ｅ２    Ｔ１とＴ２の間の空間
Ｍ            本発明に係る三次元的迷路状間隙体
ｐ１          貫通孔
ｐ２          貫通孔ｐ１の階層より奥の階層で連通している貫通孔
ｋ１          上面から第１階層
ｋ２          上面から第２階層
ｋ３          上面から第３階層
ｋ４          上面から第４階層
ｋ５          上面から第５階層
ｒ１          上面から第１階層の成形プレートまたは成形シート
ｒ２          上面から第２階層の成形プレートまたは成形シート
ｒ３          上面から第３階層の成形プレートまたは成形シート
ｒ４          上面から第４階層の成形プレートまたは成形シート
ｒ５          上面から第５階層の成形プレートまたは成形シート
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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