(57)【要約】【解決手段】本発明は、バチルスズブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）の発酵培養液を有効成分として含む睡眠障害の予防、改善又は治療用薬学組成物に関する。これによって、本発明の薬学組成物又は食品組成物は、清麹醤由来のバチルスズブチリスを用いてポリガンマグルタミン酸を製造したものであって、不眠症などの睡眠障害を予防、改善又は治療し、睡眠の質を向上させることが可能であるという効果がある。【選択図】図４
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
バチルスズブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）の発酵培養液を有効成分として含む、睡眠障害の予防又は治療用薬学組成物。
【請求項２】
前記バチルスズブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）は、寄託番号ＫＣＴＣ  ０６９７ＢＰで寄託されたバチルスズブチリス清麹醤（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ  Ｃｈｕｎｇｋｏｏｋｊａｎｇ）であることを特徴とする、請求項１に記載の睡眠障害の予防又は治療用薬学組成物。
【請求項３】
前記発酵培養液はポリガンマグルタミン酸（ｐｏｌｙ−ｇａｍｍａ  ｇｌｕｔａｍｉｃ  ａｃｉｄ）を含むことを特徴とする、請求項１に記載の睡眠障害の予防又は治療用薬学組成物。
【請求項４】
前記ポリガンマグルタミン酸の平均分子量は１〜１５，０００ｋＤａであることを特徴とする、請求項３に記載の睡眠障害の予防又は治療用薬学組成物。
【請求項５】
前記薬学組成物はマグネシウム（Ｍｇ）をさらに含むことを特徴とする、請求項１に記載の睡眠障害の予防又は治療用薬学組成物。
【請求項６】
前記薬学組成物は、ポリガンマグルタミン酸とマグネシウムが１：５０〜５０：１の重量比で含まれることを特徴とする、請求項５に記載の睡眠障害の予防又は治療用薬学組成物。
【請求項７】
前記睡眠障害は、不眠症、睡眠関連呼吸障害、睡眠相後退又は前進症候群、及び時差ぼけ症候群から選択された１種以上であることを特徴とする、請求項１に記載の睡眠障害の予防又は治療用薬学組成物。
【請求項８】
ポリガンマグルタミン酸（ｐｏｌｙ−ｇａｍｍａ  ｇｌｕｔａｍｉｃ  ａｃｉｄ）を有効成分として含む、睡眠障害の予防又は治療用薬学組成物。
【請求項９】
バチルスズブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）の発酵培養液を有効成分として含む、睡眠障害の予防又は改善用食品組成物。
【請求項１０】
前記バチルスズブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）は、寄託番号ＫＣＴＣ  ０６９７ＢＰで寄託されたバチルスズブチリス清麹醤（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ  Ｃｈｕｎｇｋｏｏｋｊａｎｇ）であることを特徴とする、請求項９に記載の睡眠障害の予防又は改善用食品組成物。
【請求項１１】
前記発酵培養液はポリガンマグルタミン酸（ｐｏｌｙ−ｇａｍｍａ  ｇｌｕｔａｍｉｃ  ａｃｉｄ）を含むことを特徴とする、請求項９に記載の睡眠障害の予防又は改善用食品組成物。
【請求項１２】
前記食品組成物はマグネシウム（Ｍｇ）をさらに含むことを特徴とする、請求項９に記載の睡眠障害の予防又は改善用食品組成物。
【請求項１３】
ポリガンマグルタミン酸（ｐｏｌｙ−ｇａｍｍａ  ｇｌｕｔａｍｉｃ  ａｃｉｄ）を有効成分として含む、睡眠障害の予防又は改善用食品組成物。
【請求項１４】
（ａ）バチルスズブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）菌株を準備するステップと、
（ｂ）前記菌株を培養液で発酵させて発酵培養液を製造するステップと、
（ｃ）前記発酵培養液を分離及び精製して、ポリガンマグルタミン酸を含む精製物を収得するステップとを含む、睡眠障害の予防又は治療用薬学組成物の製造方法。
【請求項１５】
ステップ（ｂ）の発酵は２８〜４０℃で行われることを特徴とする、請求項１４に記載の睡眠障害の予防又は治療用薬学組成物の製造方法。
【請求項１６】
ステップ（ｃ）の後、前記精製物を粉砕して前記ポリガンマグルタミン酸の粒子の大きさを調節するステップをさらに行うことを特徴とする、請求項１４に記載の睡眠障害の予防又は治療用薬学組成物の製造方法。
【請求項１７】
（ａ）バチルスズブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）菌株を準備するステップと、
（ｂ）前記菌株を培養液で発酵させて発酵培養液を製造するステップと、
（ｃ）前記発酵培養液を分離及び精製して、ポリガンマグルタミン酸を含む精製物を収得するステップとを含む、睡眠障害の予防又は改善用食品組成物の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、睡眠障害の予防又は治療用薬学組成物、及び睡眠障害の予防又は改善用食品組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
米国の不眠症治療剤の市場規模は約２兆ウォンに達し、最近は、毎年２０％以上の成長率を示している。米国の代表的な睡眠障害医薬品はスティルノックスという製品であって、米国のみならず、韓国の睡眠剤市場において約５０％の市場占有率を有している。一般に、睡眠剤は、短期的な使用時には効果が良好であるが、４週間以上の長期服用は依存性及び副作用の問題を有しており、特に、不眠症の有病率が高い老人にとっては、服用時に副作用を注意する必要がある。したがって、睡眠剤を代替し得る天然ハーブ睡眠補助剤に対する関心が益々高まり、その市場規模が拡大しているのが実情である。現在、米国と欧州諸国で最もよく使用されている天然睡眠補助剤は１０種以上となっているが、不眠症治療に対するこれらの睡眠補助剤の効果を科学的研究によって示した報告は非常に限られている。米国の消費者報告書によると、睡眠剤を利用した人の６４％、睡眠補助剤を利用した人の２０％が睡眠増進の効果を経験したものと示されており、実際の睡眠補助剤の有用性は非常に低いことがわかる。韓国の場合、現在、食品医薬品安全処で認めた睡眠の増進及び改善用健康機能食品である韓国の天然睡眠補助剤製品は皆無であり、関連機能性原料に対する研究も限られている。今後、老人人口の増加に伴い、医療費を低減しながら不眠症を解決しようとする要求度が高まると予測され、医師の処方なしに安価で購入可能な天然睡眠増進食品素材の発掘が要求されている。
【０００３】
ポリガンマグルタミン酸は、食品医薬品安全処によって健康機能性原料として認定告示されている。ポリガンマグルタミン酸は、１０００ｍｇ／日の用量の摂取で免疫力増進の機能性が現在まで認定告示されている。その他、認定告示された機能性ではないが、論文発表によって知られた機能には、肥満の改善、高脂血症の改善、腸内カルシウム吸収の改善などがある。ポリガンマグルタミン酸の摂取による睡眠障害の改善に関連する研究はまだ行われていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】韓国登録特許公報第１０−０９４７３５３号
【特許文献２】韓国登録特許公報第１０−１６９０１７５号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明の目的は、清麹醤（チョングッチャン）由来のバチルスズブチリスを用いてポリガンマグルタミン酸を製造し、これを投与することによって不眠症などの睡眠障害を予防又は治療し、睡眠の質を向上させることが可能な薬学組成物を提供することにある。
【０００６】
また、本発明の他の目的は、清麹醤由来のバチルスズブチリスを用いてポリガンマグルタミン酸を製造し、これを機能性食品として応用して不眠症などの睡眠障害を予防又は改善し、睡眠の質を向上させることができる食品組成物を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明の一側面によれば、バチルスズブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）の発酵培養液を有効成分として含む睡眠障害の予防又は治療用薬学組成物が提供される。
【０００８】
前記バチルスズブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）は、寄託番号ＫＣＴＣ  ０６９７ＢＰで寄託されたバチルスズブチリス清麹醤（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ  Ｃｈｕｎｇｋｏｏｋｊａｎｇ）であってもよい。
【０００９】
前記発酵培養液はポリガンマグルタミン酸（ｐｏｌｙ−ｇａｍｍａ  ｇｌｕｔａｍｉｃ  ａｃｉｄ）を含むことができる。
【００１０】
前記ポリガンマグルタミン酸の平均分子量は１〜１５，０００ｋＤａであってもよい。
【００１１】
前記薬学組成物はマグネシウム（Ｍｇ）をさらに含むことができる。
【００１２】
前記薬学組成物は、ポリガンマグルタミン酸とマグネシウムが１：５０〜５０：１の重量比で含まれてもよい。
【００１３】
前記睡眠障害は、不眠症、睡眠関連呼吸障害、睡眠相後退又は前進症候群、及び時差ぼけ症候群から選択された１種以上であってもよい。
【００１４】
本発明の他の側面によれば、ポリガンマグルタミン酸（ｐｏｌｙ−ｇａｍｍａ  ｇｌｕｔａｍｉｃ  ａｃｉｄ）を有効成分として含む睡眠障害の予防又は治療用薬学組成物が提供される。
【００１５】
本発明のさらに他の側面によれば、バチルスズブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）の発酵培養液を有効成分として含む睡眠障害の予防又は改善用食品組成物が提供される。
【００１６】
前記バチルスズブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）は、寄託番号ＫＣＴＣ  ０６９７ＢＰで寄託されたバチルスズブチリス清麹醤（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ  Ｃｈｕｎｇｋｏｏｋｊａｎｇ）であってもよい。
【００１７】
前記発酵培養液はポリガンマグルタミン酸（ｐｏｌｙ−ｇａｍｍａ  ｇｌｕｔａｍｉｃ  ａｃｉｄ）を含むことができる。
【００１８】
前記食品組成物はマグネシウム（Ｍｇ）をさらに含むことができる。
【００１９】
本発明のさらに他の側面によれば、ポリガンマグルタミン酸（ｐｏｌｙ−ｇａｍｍａ  ｇｌｕｔａｍｉｃ  ａｃｉｄ）を有効成分として含む睡眠障害の予防又は改善用食品組成物が提供される。
【００２０】
本発明のさらに他の側面によれば、（ａ）バチルスズブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）菌株を準備するステップ；（ｂ）前記菌株を培養液で発酵させて発酵培養液を製造するステップ；及び（ｃ）前記発酵培養液を分離及び精製してポリガンマグルタミン酸を含む精製物を収得するステップ；を含む睡眠障害の予防又は治療用薬学組成物の製造方法が提供される。
【００２１】
ステップ（ｂ）の発酵は２８〜４０℃で行われてもよい。
【００２２】
ステップ（ｃ）の後、前記精製物を粉砕して前記ポリガンマグルタミン酸の粒子の大きさを調節するステップをさらに行うことができる。
【００２３】
本発明のさらに他の側面によれば、（ａ）バチルスズブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）菌株を準備するステップ；（ｂ）前記菌株を培養液で発酵させて発酵培養液を製造するステップ；及び（ｃ）前記発酵培養液を分離及び精製してポリガンマグルタミン酸を含む精製物を収得するステップ；を含む睡眠障害の予防又は改善用食品組成物の製造方法が提供される。
【発明の効果】
【００２４】
本発明の薬学組成物は、清麹醤由来のバチルスズブチリスを用いてポリガンマグルタミン酸を製造し、それの投与で不眠症などの睡眠障害を予防又は治療し、睡眠の質を向上させることが可能となるという効果がある。
【００２５】
また、本発明の食品組成物は、清麹醤由来のバチルスズブチリスを用いてポリガンマグルタミン酸を製造し、それを機能性食品として応用して不眠症などの睡眠障害を予防又は改善し、睡眠の質を向上させることが可能となるという効果がある。
【図面の簡単な説明】
【００２６】
【図１】試験例１による臨床試験のデザインを概略的に示した図である。
【図２】ピッツバーグ睡眠質問票（Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ  Ｓｌｅｅｐ  Ｑｕａｌｉｔｙ  Ｉｎｄｅｘ、ＰＳＱＩ）に対する設問を示した図である。
【図３】試験例２による動物試験のデザインを概略的に示した図である。
【図４】試験例２による総睡眠時間及び覚醒時間の結果を示した図である。
【図５】試験例３による動物試験のデザインを概略的に示した図である。
【図６】試験例３による総睡眠時間及び覚醒時間の結果を示した図である。
【発明を実施するための形態】
【００２７】
本発明は、様々な変更を加えることができ、種々の実施例が存在するが、特定の実施例を図面に例示し、詳細な説明で詳細に説明する。しかし、これは、本発明は、特定の実施形態に限定されるのではなく、本発明の思想及び技術範囲に含まれる全ての変更、均等物及び代替物を含むものと理解しなければならない。本発明を説明するにおいて、関連する公知の技術についての具体的な説明が本発明の要旨を不明瞭にする可能性があると判断した場合、その詳細な説明を省略する。
【００２８】
以下、本発明の睡眠障害の予防又は治療用薬学組成物について説明する。
【００２９】
本発明の薬学組成物は、バチルスズブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）の発酵培養液を有効成分として含む。
【００３０】
好ましくは、前記バチルスズブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）は、寄託番号ＫＣＴＣ  ０６９７ＢＰで寄託されたバチルスズブチリス清麹醤（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ  Ｃｈｕｎｇｋｏｏｋｊａｎｇ）であってもよい。
【００３１】
前記バチルスズブチリスは、供試菌株であって、分譲を受けて使用することができ、場合によっては、清麹醤の伝統的な発酵によって得ることができる。
【００３２】
前記発酵培養液はポリガンマグルタミン酸（ｐｏｌｙ−ｇａｍｍａ  ｇｌｕｔａｍｉｃ  ａｃｉｄ）を含むことを特徴とする。
【００３３】
前記ポリガンマグルタミン酸の平均分子量は１〜１５，０００ｋＤａであることが好ましく、より好ましくは１００〜１０，０００ｋＤａ、さらに好ましくは１，０００〜７，０００ｋＤａであってもよい。
【００３４】
ポリガンマグルタミン酸の分子量が増加するに伴い、分子構造内のガラスカルボキシル基の数が増加することによって、陽イオンミネラルとの反応性が高くなり、ミネラル伝達体の役割を効果的に果たすことができる。高分子（２，０００ｋＤａ）のポリガンマグルタミン酸を投与した実験動物でのみ抗癌能を示した結果がある。
【００３５】
従来のバチルスズブチリスナットウ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ  Ｎａｔｔｏ）によって製造されたポリガンマグルタミン酸が３００〜７００ｋＤａの分子量を有することに比べて、分子量が非常に大きいことを特徴とする。
【００３６】
前記発酵培養液は、分離及び精製工程を経ることによって、ポリガンマグルタミン酸以外に、バチルスズブチリス菌株、培養液、不純物を除去することができる。
【００３７】
前記薬学組成物はマグネシウム（Ｍｇ）をさらに含むことができ、この場合、ポリガンマグルタミン酸とマグネシウムが１：５０〜５０：１の重量比で含まれていてもよく、好ましくは１：１０〜１０：１、より好ましくは１：５〜５：１の重量比であってもよい。
【００３８】
前記睡眠障害には、不眠症、睡眠関連呼吸障害、睡眠相後退症候群又は睡眠相前進症候群、時差ぼけ症候群などがあるが、本発明の範囲はこれに限定されるものではなく、様々な形態の睡眠障害を含むものであってもよい。
【００３９】
また、本発明は、ポリガンマグルタミン酸（ｐｏｌｙ−ｇａｍｍａ  ｇｌｕｔａｍｉｃ  ａｃｉｄ）を有効成分として含む睡眠障害の予防又は治療用薬学組成物が提供される。前記ポリガンマグルタミン酸は、バチルスズブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）の発酵培養液から収得できるものに限定されない。
【００４０】
以下、本発明の睡眠障害の予防又は治療用薬学組成物の製造方法について説明する。
【００４１】
まず、バチルスズブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）菌株を準備する（ステップａ）。
【００４２】
前記バチルスズブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）は、寄託番号ＫＣＴＣ  ０６９７ＢＰで寄託されたバチルスズブチリス清麹醤（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ  Ｃｈｕｎｇｋｏｏｋｊａｎｇ）であることが好ましい。
【００４３】
前記菌株は、供試菌株であって、分譲を受けて使用することができ、場合によっては、清麹醤の伝統的な発酵方法によって得ることも可能である。
【００４４】
次に、前記菌株を培養液で発酵させて発酵培養液を製造する（ステップｂ）。
【００４５】
発酵は２８〜４０℃で行うことが好ましく、より好ましくは３５〜３９℃で行うことができる。
【００４６】
その後、前記発酵培養液を分離及び精製して、ポリガンマグルタミン酸を含む精製物を収得する（ステップｃ）。
【００４７】
分離及び精製は、濾過及びアルコール沈殿法などによって行うことができる。
【００４８】
最後に、ポリガンマグルタミン酸の粒子の大きさを調節するために粉砕工程をさらに行うこともできる。
【００４９】
一方、本明細書において「有効成分として含む」という用語は、ポリガンマグルタミン酸の効能又は活性を達成するのに十分な量を含むことを意味する。本発明の一具体例において、本発明の組成物内でポリガンマグルタミン酸は、例えば、０．００１ｍｇ／ｋｇ以上、好ましくは０．１ｍｇ／ｋｇ以上、より好ましくは１ｍｇ／ｋｇ以上、さらに好ましくは１０ｍｇ／ｋｇ以上含まれる。ポリガンマグルタミン酸は天然物であって、過量投与しても人体に副作用がないため、本発明の組成物内に含まれるポリガンマグルタミン酸の量的上限は、当業者が適切な範囲内で選択して実施することができる。
【００５０】
本発明の薬学組成物は、前記有効成分以外に、薬学的に適し、且つ生理学的に許容される補助剤を使用して製造することができる。前記補助剤としては、賦形剤、崩解剤、甘味剤、結合剤、被覆剤、膨張剤、潤滑剤、滑沢剤又は香味剤などを使用することができる。
【００５１】
前記薬学組成物は、投与のために、前記記載した有効成分以外に追加で薬学的に許容可能な担体を１種以上含む薬学組成物として好ましく製剤化することができる。
【００５２】
前記薬学組成物の製剤の形態は、顆粒剤、散剤、錠剤、被覆錠、カプセル剤、坐剤、液剤、シロップ、汁、懸濁剤、乳剤、点滴剤、又は注射可能な液剤などであってもよい。例えば、錠剤又はカプセル剤の形態への製剤化のために、有効成分は、エタノール、グリセロール、水などのような経口、無毒性の薬学的に許容可能な不活性担体と結合されてもよい。また、望ましい又は必要な場合、適宜な合剤、潤滑剤、崩解剤及び発色剤もまた混合物として含まれてもよい。適宜な結合剤は、これらに限定されるものではないが、澱粉、ゼラチン、グルコース又はβ−ラクトースのような天然糖、トウモロコシ甘味剤、アカシア、トラガカント又はオレイン酸ナトリウムのような天然及び合成ガム、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウムなどを含む。崩解剤は、これらに限定されるものではないが、澱粉、メチルセルロース、アガー、ベントナイト、キサンタンガムなどを含む。
【００５３】
液状溶液に製剤化される組成物において許容可能な薬学的担体としては、滅菌及び生体に適したものであって、食塩水、滅菌水、リンゲル液、緩衝食塩水、アルブミン注射溶液、デキストロース溶液、マルトデキストリン溶液、グリセロール、エタノール及びこれらの成分のうち１成分以上を混合して使用することができ、必要に応じて、抗酸化剤、緩衝液、静菌剤などの他の通常の添加剤を添加することができる。また、希釈剤、分散剤、界面活性剤、結合剤及び潤滑剤を付加的に添加して、水溶液、懸濁液、乳濁液などのような注射用剤形、丸薬、カプセル、顆粒又は錠剤に製剤化することができる。
【００５４】
本発明の薬学組成物は、経口又は非経口で投与することができ、非経口投与の場合には、静脈内注入、皮下注入、筋肉注入、腹腔注入、経皮投与などで投与することができ、好ましくは経口投与である。
【００５５】
本発明の薬学組成物の適した投与量は、製剤化方法、投与方式、患者の年齢、体重、性別、病的状態、食物、投与時間、投与経路、排泄速度及び反応感応性のような要因によって様々であるが、通常の熟練した医師であれば、所望の治療又は予防に効果的な投与量を容易に決定及び処方することができる。本発明の好ましい具現例によれば、本発明の薬学組成物の１日投与量は０．００１〜１０ｇ／ｋｇである。
【００５６】
本発明の薬学組成物は、当該発明の属する技術分野における通常の知識を有する者が容易に実施できる方法によって、薬学的に許容される担体及び／又は賦形剤を用いて製剤化することによって、単位用量の形態で製造されるか、又は多用量容器内に入れて製造されてもよい。このとき、剤形は、オイル又は水性媒質中の溶液、懸濁液又は乳化液の形態であるか、エキストラクト、粉末剤、顆粒剤、錠剤又はカプセル剤の形態であってもよく、分散剤又は安定化剤をさらに含むことができる。
【００５７】
また、本発明は、前記バチルスズブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）の発酵培養液を個体（ｓｕｂｊｅｃｔ）に投与するステップを含む睡眠障害の予防又は治療方法を提供する。
【００５８】
また、本発明は、ポリガンマグルタミン酸（ｐｏｌｙ−ｇａｍｍａ  ｇｌｕｔａｍｉｃ  ａｃｉｄ）を個体（ｓｕｂｊｅｃｔ）に投与するステップを含む睡眠障害の予防又は治療方法を提供する。
【００５９】
また、本発明は、バチルスズブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）の発酵培養液を有効成分として含む睡眠障害の予防又は改善用食品組成物を提供する。
【００６０】
前記バチルスズブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）は、寄託番号ＫＣＴＣ  ０６９７ＢＰで寄託されたバチルスズブチリス清麹醤（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ  Ｃｈｕｎｇｋｏｏｋｊａｎｇ）であることが好ましい。
【００６１】
前記食品組成物に対する説明は、上述した本発明の睡眠障害の予防又は治療用薬学組成物に対する説明と同一であるので、具体的な内容はその部分が参考とされる。
【００６２】
また、本発明は、ポリガンマグルタミン酸（ｐｏｌｙ−ｇａｍｍａ  ｇｌｕｔａｍｉｃ  ａｃｉｄ）を有効成分として含む睡眠障害の予防又は改善用食品組成物が提供される。前記ポリガンマグルタミン酸は、バチルスズブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）の発酵培養液から収得できるものに限定されない。
【００６３】
また、本発明は、睡眠障害の予防又は改善用食品組成物の製造方法を提供する。
【００６４】
前記食品組成物の製造方法に対する説明は、上述した本発明の睡眠障害の予防又は治療用薬学組成物の製造方法に対する説明と同一であるので、具体的な内容はその部分が参考にされる。
【００６５】
本発明に係る食品組成物は、機能性食品として用いたり、各種食品に添加したりすることができる。本発明の組成物を添加できる食品としては、例えば、飲料類、アルコール飲料類、菓子類、ダイエットバー、乳製品、肉類、チョコレート、ピザ、パン類、ラーメン、その他の麺類、ガム類、アイスクリーム類、ビタミン複合剤、健康補助食品類などがある。
【００６６】
本発明の食品組成物は、有効成分として、ポリガンマグルタミン酸だけでなく、食品の製造時に一般的に添加される成分を含むことができ、例えば、蛋白質、炭水化物、脂肪、栄養素、調味剤及び香味剤を含む。上述した炭水化物の例は、モノサッカライド、例えば、ブドウ糖、果糖など；ジサッカライド、例えば、マルトース、スクロース、オリゴ糖など；及びポリサッカライド、例えば、デキストリン、シクロデキストリンなどのような通常の糖、及びキシリトール、ソルビトール、エリスリトールなどの糖アルコールである。香味剤として、天然香味剤［タウマチン、ステビア抽出物（例えば、レバウディオサイドＡ、グリシルリジンなど）］及び合成香味剤（サッカリン、アスパルテームなど）を使用することができる。例えば、本発明の食品組成物がドリンク剤と飲料類として製造される場合には、ポリガンマグルタミン酸以外に、クエン酸、液状果糖、砂糖、ブドウ糖、酢酸、リンゴ酸、果汁、及び各種植物抽出液などをさらに含めることができる。
【００６７】
本発明は、ポリガンマグルタミン酸を有効成分として含む睡眠障害の改善又は予防用食品組成物を含む健康機能食品を提供する。健康機能食品とは、ポリガンマグルタミン酸を飲料、茶類、香辛料、ガム、菓子類などの食品素材に添加するか、又はカプセル化、粉末化、懸濁液などで製造した食品であって、これを摂取する場合、健康上、特定の効果をもたらすことを意味するが、一般の薬品とは異なり、食品を原料とするため、薬品の長期服用時に発生し得る副作用などがないという利点がある。このようにして得られる本発明の健康機能食品は、日常的に摂取することが可能であるため、非常に有用である。このような健康機能食品におけるポリガンマグルタミン酸の添加量は、対象である健康機能食品の種類に応じて異なるため、一律的に規定することができないが、食品本来の味を損なわない範囲で添加すればよく、対象食品に対して、通常、０．０１〜５０重量％、好ましくは０．１〜２０重量％の範囲である。また、丸剤、顆粒剤、錠剤又はカプセル剤の形態である健康機能食品の場合には、通常、０．１〜１００重量％、好ましくは０．５〜８０重量％の範囲で添加すればよい。一具体例において、本発明の健康機能食品は、丸剤、錠剤、カプセル剤又は飲料の形態であってもよい。
【００６８】
［実施例］
実施例１：ポリガンマグルタミン酸粉末の製造
（１）発酵工程
【００６９】
伝統発酵食品である清麹醤由来のバチルスズブチリス清麹醤（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ  Ｃｈｕｎｇｋｏｏｋａｎｇ、ＫＣＴＣ  ０６９７ＢＰ）菌株を準備した。
【００７０】
生産用基本培地（グルコース５％、Ｌ−グルタミン酸５％、（ＮＨ４）２ＳＯ４１％、ＫＨ２ＰＯ４０．２７％、Ｎａ２ＨＰＯ４・１２Ｈ２Ｏ０．４２％、ＮａＣｌ０．０５％、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ０．３％、ビタミン溶液１ｍｌ／Ｌ、ｐＨ６．８）を用いて、５０Ｌの発酵槽で３２℃、１５０ｒｐｍ、空気注入速度１ｖｖｍの条件で、２４時間培養して、発酵培養液を製造した。
【００７１】
（２）分離精製工程
前記発酵工程により製造された発酵培養液をフィルタープレス（ｆｉｌｔｅｒ  ｐｒｅｓｓ）で１次濾過した後、ＵＦメンブレイン（Ｕｌｔｒａ−ｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ  Ｍｅｍｂｒａｎｅ）を用いた精製及び濃縮を行い、２次でフィルタープレス濾過を行った。次に、エタノール沈殿させて不純物を除去し、洗浄後、再溶解し、最後に凍結乾燥させた後、粉砕して、平均分子量が約２０００ｋＤａであるポリガンマグルタミン酸粉末を得た。試験例１で使用されたポリガンマグルタミン酸は、実施例１の方法により製造されたものを使用した。
【００７２】
［試験例］
試験例１：臨床試験
本臨床試験のデザインを図１に概略的に示しており、図１に基いて臨床試験方法を説明する。
【００７３】
本研究は、ボディマス指数が２３ｋｇ／ｍ２以上であり、年齢が２０歳以上である成人を対象者として、無作為割り付け二重盲検プラセボ対照交差混合試験研究を行った。しかし、慢性疾患（肝、腎臓、心血管などの慢性疾患、癌、血液関連疾病など）がある者、疾患により薬物を常用する者、妊婦、食品や栄養補充剤を食べたときにアレルギー症状を経験した者、現在栄養補充剤を服用する者、貧血がある者及び３ヶ月前に献血した者は除いた。
【００７４】
選別された対象者は、‘Ａ試験’に１、２グループ、‘Ｂ試験’に１、２グループを定め、各試験に無作為に割り付けられ（ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ  ａｌｌｏｃａｔｉｏｎ）、研究対象者は、どのグループに自身が割り付けられたのかを知らないようにした。試験は、評価する補充剤の種類に応じて‘Ａ試験’と‘Ｂ試験’の２種類に分かれ、Ａ−１群（プラセボ群）にはプラセボ（ｐｌａｃｅｂｏ：トウモロコシ澱粉）、Ａ−２群にはＭｇを投与し、Ｂ−１群（プラセボ群）にはＭｇ、Ｂ−２群にはＭｇとγ−ＰＧＡを補充するものと構成された。Ｍｇは、丸薬の形態を粉にして使用し、一日３００ｍｇのＭｇが補充されるようにし、γ−ＰＧＡは、一日６００ｍｇが補充されるようにした。本研究結果（ｏｕｔｃｏｍｅ）に該当する質問表の作成、人体計測、血圧測定、血液試料採取に関しては、試験開始前後に同じ内容で計４回行われた。
【００７５】
質問調査は、一般的な事項、生活習慣情報、睡眠の質などで構成されており、睡眠の質に対する調査はピッツバーグ睡眠質問票（Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ  Ｓｌｅｅｐ  Ｑｕａｌｉｔｙ  Ｉｎｄｅｘ、ＰＳＱＩ）を使用し、参考に、これに対する質問を図２に示した。ＰＳＱＩ値は、点数が高いほど睡眠の質が低いことを示す。前記ＰＳＱＩ値の統計分析は、ＳＡＳソフトウェア（ＳＡＳ  ９．１．３、ＳＡＳ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、Ｃａｒｙ、ＮＣ、ＵＳＡ）を用いて行われた。
【００７６】
ＰＳＱＩ質問票は、過去１ヶ月間における睡眠の質を評価するための自己記入式質問票であって、細部項目は、主観的睡眠の質（ｓｕｂｊｅｃｔｉｖｅ  ｓｌｅｅｐ  ｑｕａｌｉｔｙ）、入眠時間（ｓｌｅｅｐ  ｌａｔｅｎｃｙ）、睡眠時間（ｓｌｅｅｐ  ｄｕｒａｔｉｏｎ）、習慣的睡眠効率（ｈａｂｉｔｕａｌ  ｓｌｅｅｐ  ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ）、睡眠障害（ｓｌｅｅｐ  ｄｉｓｔｕｒｂａｎｃｅ）、睡眠剤の服用（ｕｓｅ  ｏｆ  ｓｌｅｅｐ  ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎ）、昼間機能障害（ｄａｙｔｉｍｅ  ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ）で構成され、各項目は０点から３点で、総点２１点である。前記の細部項目のうち‘主観的睡眠の質’の項目は、点数が高くなるほど、主観的睡眠の質が低いことを意味する。すなわち、ＰＳＱＩ  ｇｌｏｂａｌ  ｓｃｏｒｅが５点以下である群は、満足な睡眠群（ｇｏｏｄ  ｓｌｅｅｐｅｒ）、６点以上である群は、不満足な睡眠群（ｐｏｏｒ  ｓｌｅｅｐｅｒ）と分類する。また、ＰＳＱＩの信頼度には大きく問題となる部分がないということがほとんどの論文で指摘されている［参考文献：Ｊｏｏ  ＮＳ．  Ｋｏｒａｎ  Ｊ  Ｆａｍ  Ｍｅｄ．  ２０１０；３１：７４５−７４６］。
【００７７】
主観的睡眠評価方法であるＰＳＱＩ質問の妥当性を評価するために、不眠症患者８０名と健康人４５名を対象としてＰＳＱＩの敏感度（ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ）及び特異度（ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ）を評価した。その結果、ＰＳＱＩ質問の総点６点（不満な睡眠）を基準として不眠症を診断する場合、敏感度が９８．７、特異度が８４．４で示された。これは、不眠症の診断としてＰＳＱＩ質問が信頼性を有することを示す［参考文献：Ｂａｃｋｈａｕｓ  Ｊなど、Ｊ  Ｐｓｙｃｈｏｓｏｍ  Ｒｅｓ．  ２００２；５３：７３７−７４０］。
【００７８】
このように行われた臨床試験の結果を、下記の表１に示す。
【００７９】
【表１】
2019001771.tif 000003
【００８０】
この研究では、Ｂ−２群（Ｍｇ＋γ−ＰＧＡ補充）は、栄養剤の摂取前よりも栄養剤の摂取後のＰＳＱＩ点数が減少した反面、Ｍｇ補充群は、ＰＳＱＩ点数において栄養剤の摂取前後の点数はほとんど変化がないことを示している。（Ｐ＜０．０５）
【００８１】
試験例２：γ−ＰＧＡとＭｇ補充の効果の観察のための動物試験
本動物試験のデザインを図３に概略的に示しており、図３に基いて動物試験方法を説明する。
【００８２】
カフェイン（２０ｍｇ／ｋｇ）の摂取で睡眠を制限した白ネズミ２０匹を４群（比較群、ポリガンマグルタミン酸２５ｍｇ／ｋｇの補充群、マグネシウム３００ｍｇ／ｋｇの補充群、ポリガンマグルタミン酸２５ｍｇ／ｋｇ＋マグネシウム３００ｍｇ／ｋｇの補充群）に同数で割り付け、２週間の口腔投与後、ポリガンマグルタミン酸及びマグネシウムの補充による効果を脳波測定実験によって評価した。これによる総睡眠時間及び覚醒時間の結果を図４に示した。これによれば、ポリガンマグルタミン酸２５ｍｇ／ｋｇ＋マグネシウム３００ｍｇ／ｋｇの補充群が、他の群に比べて総睡眠時間が増加し、覚醒時間は減少したものと示され、ポリガンマグルタミン酸及びマグネシウムの補充が睡眠に助けとなり得ることを示している。
【００８３】
試験例３：γ−ＰＧＡの投与量による効果の観察のための動物試験
本動物試験のデザインを図５に概略的に示しており、図５によって臨床試験方法を説明する。
【００８４】
カフェイン（２０ｍｇ／ｋｇ）の摂取で睡眠を制限した白ネズミにおいて、ポリガンマグルタミン酸２５ｍｇ／ｋｇを１０匹の白ネズミに口腔投与した後、そのうち５匹は２５ｍｇ／ｋｇを、残りの５匹は５０ｍｇ／ｋｇを１週間口腔投与して、ポリガンマグルタミン酸の補充用量の効果を脳波測定実験によって評価した。これによる脳波測定実験からの総睡眠時間及び覚醒時間の結果を図６に示した。これによれば、ポリガンマグルタミン酸５０ｍｇ／ｋｇの補充群は、２５ｍｇ／ｋｇの補充群に比べて総睡眠時間が増加し、覚醒時間は減少したものと示され、ポリガンマグルタミン酸の補充含量が高いほど睡眠時間の増加及び覚醒時間の減少にさらに効果的であることがわかる。
【００８５】
以上、本発明の実施例について説明したが、当該技術分野における通常の知識を有する者であれば、特許請求の範囲に記載された本発明の思想から逸脱しない範囲内で、構成要素の付加、変更、削除又は追加などによって本発明を様々に修正及び変更させることができ、これもまた本発明の権利範囲内に含まれると言える。
【図１】
2019001771.tif 000004
【図２】
2019001771.tif 000005
【図３】
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【図４】
2019001771.tif 000007
【図５】
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【図６】
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【手続補正書】
【提出日】平成30年8月7日(2018.8.7)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
バチルスズブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）の発酵培養液とマグネシウム（Ｍｇ）とを有効成分として含む、睡眠障害の予防又は治療用薬学組成物。
【請求項２】
前記発酵培養液はポリガンマグルタミン酸（ｐｏｌｙ−ｇａｍｍａ  ｇｌｕｔａｍｉｃ  ａｃｉｄ）を含むことを特徴とする、請求項１に記載の睡眠障害の予防又は治療用薬学組成物。
【請求項３】
前記ポリガンマグルタミン酸の平均分子量は１〜１５，０００ｋＤａであることを特徴とする、請求項２に記載の睡眠障害の予防又は治療用薬学組成物。
【請求項４】
前記薬学組成物は、ポリガンマグルタミン酸とマグネシウムが１：５０〜５０：１の重量比で含まれることを特徴とする、請求項１に記載の睡眠障害の予防又は治療用薬学組成物。
【請求項５】
前記睡眠障害は、不眠症、睡眠関連呼吸障害、睡眠相後退又は前進症候群、及び時差ぼけ症候群から選択された１種以上であることを特徴とする、請求項１に記載の睡眠障害の予防又は治療用薬学組成物。
【請求項６】
ポリガンマグルタミン酸（ｐｏｌｙ−ｇａｍｍａ  ｇｌｕｔａｍｉｃ  ａｃｉｄ）とマグネシウム（Ｍｇ）とを有効成分として含む、睡眠障害の予防又は治療用薬学組成物。
【請求項７】
バチルスズブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）の発酵培養液とマグネシウム（Ｍｇ）とを有効成分として含む、睡眠障害の予防又は改善用食品組成物。
【請求項８】
前記発酵培養液はポリガンマグルタミン酸（ｐｏｌｙ−ｇａｍｍａ  ｇｌｕｔａｍｉｃ  ａｃｉｄ）を含むことを特徴とする、請求項７に記載の睡眠障害の予防又は改善用食品組成物。
【請求項９】
ポリガンマグルタミン酸（ｐｏｌｙ−ｇａｍｍａ  ｇｌｕｔａｍｉｃ  ａｃｉｄ）とマグネシウム（Ｍｇ）とを有効成分として含む、睡眠障害の予防又は改善用食品組成物。
【請求項１０】
（ａ）バチルスズブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）菌株を準備するステップと、
（ｂ）前記菌株を培養液で発酵させて発酵培養液を製造するステップと、
（ｃ）前記発酵培養液を分離及び精製して、ポリガンマグルタミン酸を含む精製物を収得するステップとを含む、睡眠障害の予防又は治療用薬学組成物の製造方法。
【請求項１１】
ステップ（ｂ）の発酵は２８〜４０℃で行われることを特徴とする、請求項１０に記載の睡眠障害の予防又は治療用薬学組成物の製造方法。
【請求項１２】
ステップ（ｃ）の後、前記精製物を粉砕して前記ポリガンマグルタミン酸の粒子の大きさを調節するステップをさらに行うことを特徴とする、請求項１０に記載の睡眠障害の予防又は治療用薬学組成物の製造方法。
【請求項１３】
（ａ）バチルスズブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）菌株を準備するステップと、
（ｂ）前記菌株を培養液で発酵させて発酵培養液を製造するステップと、
（ｃ）前記発酵培養液を分離及び精製して、ポリガンマグルタミン酸を含む精製物を収得するステップとを含む、睡眠障害の予防又は改善用食品組成物の製造方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００７】
本発明の一側面によれば、バチルスズブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）の発酵培養液とマグネシウム（Ｍｇ）とを有効成分として含む睡眠障害の予防又は治療用薬学組成物が提供される。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００８
【補正方法】削除
【補正の内容】
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１１
【補正方法】削除
【補正の内容】
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１４】
本発明の他の側面によれば、ポリガンマグルタミン酸（ｐｏｌｙ−ｇａｍｍａ  ｇｌｕｔａｍｉｃ  ａｃｉｄ）とマグネシウム（Ｍｇ）とを有効成分として含む睡眠障害の予防又は治療用薬学組成物が提供される。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１５】
本発明のさらに他の側面によれば、バチルスズブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）の発酵培養液とマグネシウム（Ｍｇ）とを有効成分として含む睡眠障害の予防又は改善用食品組成物が提供される。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１６
【補正方法】削除
【補正の内容】
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１９】
本発明のさらに他の側面によれば、ポリガンマグルタミン酸（ｐｏｌｙ−ｇａｍｍａ  ｇｌｕｔａｍｉｃ  ａｃｉｄ）とマグネシウム（Ｍｇ）とを有効成分として含む睡眠障害の予防又は改善用食品組成物が提供される。
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２０
【補正方法】削除
【補正の内容】