(57)【要約】      （修正有）【課題】CYP4A阻害化合物を有効成分として含む、糖尿病及び脂肪肝の予防又は治療用組成物の提供。【解決手段】化学式１で表示される化合物又はこれの薬学的に許容可能な塩を有効成分として含む、糖尿病及び脂肪肝の予防又は治療用薬学的組成物。2019001779.tif 000025（Ｒ：置換／非置換のフェニル又はＮ、Ｏ及びＳからなる群より選ばれる１つ以上のヘテロ原子を含有する５員環又は６員環のヘテロアリール）【選択図】図１
2019001779.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記化学式１で表示される化合物又はこれの薬学的に許容可能な塩を有効成分として含む、糖尿病及び脂肪肝の予防又は治療用薬学的組成物：
【化１３】
2019001779.tif 000015
前記式で、
Ｒは、非置換又は一つ以上の置換基で置換されたフェニル又はＮ、Ｏ及びＳからなる群より選ばれる１つ以上のヘテロ原子を含有する５員環又は６員環のヘテロアリールであり、
置換基は、直鎖状又は分枝状のC1-C6アルキル；環内に1つ以上のヘテロ原子を含み、C1-C6アルキル又はC1-C6アルキルカルボニルで置換されたヘテロ環又はヘテロアリール環；ハロゲンに置換されたフェニルにより置換されたC2-C4のアルケニレン；C1-C6アルキルオキシカルボニル；C1-C6アルキルオキシ；ハロゲン；C1-C6アルキルアミノ基で置換されたC1-C6アルキルオキシ；ヒドロキシカルボニルC1-C6アルキル；C1-C6アルキルアミノ；フェニル；直鎖状又は分枝状のC1-C6アルキル、直鎖状又は分枝状のC1-C6アルキルオキシ、直鎖状又は分枝状のC1-C6アルキルオキシカルボニル、ハロゲン原子及びフルオロ原子１個以上に置換されたアルキルからなる群から選ばれる１つ以上の置換基で置換されたフェニル；フェノキシエタノール；直鎖状又は分枝状のC1-C6アルキル、ハロゲン原子及び直鎖状又は分枝状のC1-C6アルキルオキシからなる群から選ばれる1つ以上の置換基で置換されたフェノキシ；アミノスルホニル；ハロ；シアノ；アセチル；ニトロ；エチニル；ヒドロキシ；モルホリノ；ナフチル；チエニル；ピリジル；テトラヒドロフラニル；インドリル；直鎖状又は分枝状のC1-C6アルキルオキシで置換されたインドリル；ジヒドロベンゾオキシニル；及びフリルメチルスルホニルからなる群から1つ以上選ばれるものであり、前記アリール、ヘテロ環及びヘテロアリール環は、それぞれ２つ以上の環が縮合した複素環構造でもあって、また、環内にカルボニル基を含むことができる。
【請求項２】
前記化学式１の化合物は、下記化学式２乃至化学式10の中から選ばれるいずれか一つであることを特徴とする、請求項１記載の薬学的組成物：
【化１４】
2019001779.tif 000016
【化１５】
2019001779.tif 000017
【化１６】
2019001779.tif 000018
【化１７】
2019001779.tif 000019
【化１８】
2019001779.tif 000020
【化１９】
2019001779.tif 000021
【化２０】
2019001779.tif 000022
【化２１】
2019001779.tif 000023
【化２２】
2019001779.tif 000024
【請求項３】
前記糖尿病は、２型糖尿病であることを特徴とする、請求項１記載の薬学的組成物。
【請求項４】
前記糖尿病は、肥満から由来したことを特徴とする、請求項１記載の薬学的組成物。
【請求項５】
前記化合物は、肝臓でのブドウ糖吸収を促進する効果を示すことを特徴とする、請求項１記載の薬学的組成物。
【請求項６】
前記化合物は、ミトコンドリアで活性酸素(reactive oxygen)の生成を抑制する活性を示すことを特徴とする、請求項１記載の薬学的組成物。
【請求項７】
糖尿病と脂肪肝の予防又は治療用製剤の製造のための、上記の化学式１で表される化合物又はその薬学的に許容可能な塩の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、CYP4A阻害化合物を有効成分として含む、糖尿病及び脂肪肝の予防又は治療用組成物に関するもので、より詳細には、肝細胞へのブドウ糖の吸収を促進し、肝細胞での脂肪蓄積を抑制し、ミトコンドリアでの活性酸素の生成を抑制する活性を示す、CYP4A阻害化合物を有効成分として含む、糖尿病及び脂肪肝の予防又は治療用組成物に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
糖尿病は、疾病率及び死亡率の主な要因である。慢性的に上昇した血糖量は、体を衰弱させる次のような合併症を誘発する：多くの場合、透析又は腎臓移植を必要とする腎臓病症；末梢神経障害；失明をもたらす網膜症；切断をもたらす脚（leg）及び足(foot)の潰瘍；時には肝硬変に発展することもある脂肪肝疾患；及び冠状動脈疾患及び心筋梗塞の発症。
【０００３】
糖尿病には二つの主要な種類がある。タイプ I、又はインスリン依存性糖尿病（IDDM）は、膵臓島のインスリン生成ベータ細胞の自己免疫的破壊によりもたらされる。前記疾患は、通常、幼児期又は思春期に発生する。前記疾患の治療は、主にインスリンを一日に数回注入することで構成されており、この時、インスリン投与量の調節のために、血糖量を数回検査する。これは過量のインスリンが低血糖を引き起こして、脳又は他の機能の損傷をもたらすからである。
【０００４】
タイプ II、又は非インスリン依存性糖尿病（NIDDM)は、典型的に大人で発生する。NIDDMは、脂肪組織、筋肉及び肝臓のようなブドウ糖利用組織が、インスリンの作用に対して耐性を有することと関連している。初期には、膵臓島ベータ細胞は、過量のインスリンを分泌することにより補償をする。完全なランゲルハンス小島の機能不全は、対象不全及び慢性的高血糖症をもたらす。対して、中程度の機能不全は、末梢のインスリン抵抗性より先に、又は同時に発生する。NIDDMの治療に有用な複数群の医薬がある：１)直接的にインスリン分泌を刺激するが、低血糖を誘発する危険性があるインスリン放出剤；２）ブドウ糖誘導インスリン分泌を強化するが、毎食前に摂取をしなければならない食事インスリン放出剤；３）肝臓のブドウ糖新生（これは、糖尿病で大幅に上昇される）を抑制するメトホルミンを含むアセトアミノフェン；４）インスリンに対する末梢の反応性を改善するが、体重増加、浮腫及び肝臓毒性等の副作用を有する、チアゾリジンジオン誘導体のロシグルリタゾン及びピオグリタゾン等のインスリン感作剤；５）慢性的高刺激下でランゲルハンス小島が機能不全になった場合、NIDDMの末期で多くの場合必要とされるインスリン注入。
【０００５】
また、インスリン耐性は相当な高血糖症状なしに発生することもあって、一般的に動脈硬化、肥満、高脂血症及び本態性高血圧と関連している。前記非正常症状の群は「代謝症」又は「インスリン耐性症」を構成する。また、インスリン耐性は、脂肪肝と関連しており、これは慢性的炎症（NASH：「非アルコール性脂肪肝炎」）、繊維症、及び硬変症に発展することもある。結論的に糖尿病を含むインスリン耐性症は、40歳以上のヒトの疾病率及び死亡をもたらす主な多くの要因の基礎となる。
【０００６】
前記の多様な種類の薬剤があるにも関わらず、糖尿病は深刻な公衆健康問題として残っている。従って、糖尿病とこれによって誘発される脂肪肝に対する、安全で効果的な治療剤の開発が必要である。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
そこで、本発明者らは、糖尿病及び脂肪肝の予防又は治療効果を示す化合物を検索するために鋭意努力した結果、一連の化合物群が肝細胞へのブドウ糖吸収を促進し、肝細胞での脂肪蓄積を抑制し、ミトコンドリアでの活性酸素の生成を抑制する活性を示し、糖尿病及び脂肪肝の予防又は治療効果を示すことを見出だして本発明を完成した。
【０００８】
従って、本発明の目的は、下記化学式１で表示される化合物又はこれの薬学的に許容可能な塩を有効成分として含む、糖尿病及び脂肪肝の予防又は治療用薬学的組成物を提供することである：
【０００９】
【化１】
2019001779.tif 000003
【００１０】
前記式で、
Ｒは、非置換又は一つ以上の置換基で置換されたフェニル又はＮ、Ｏ及びＳからなる群より選ばれる１つ以上のヘテロ原子を含有する、５員環又は６員環のヘテロアリールであり、
置換基は、直鎖状又は分枝状のC1-C6アルキル；環内に1つ以上のヘテロ原子を含み、C1-C6アルキル又はC1-C6アルキルカルボニルで置換されたヘテロ環又はヘテロアリール環；ハロゲンに置換されたフェニルにより置換されたC2-C4のアルケニレン；C1-C6アルキルオキシカルボニル；C1-C6アルキルオキシ；ハロゲン；C1-C6アルキルアミノ基で置換されたC1-C6アルキルオキシ；ヒドロキシカルボニルC1-C6アルキル；C1-C6アルキルアミノ；フェニル；直鎖状又は分枝状のC1-C6アルキル、直鎖状又は分枝状のC1-C6アルキルオキシ、直鎖状又は分枝状のC1-C6アルキルオキシカルボニル、ハロゲン原子及びフルオロ原子１個以上に置換されたアルキルからなる群から選ばれる１つ以上の置換基で置換されたフェニル；フェノキシエタノール；直鎖状又は分枝状のC1-C6アルキル、ハロゲン原子及び直鎖状又は分枝状のC1-C6アルキルオキシからなる群から選ばれる１つ以上の置換基で置換されたフェノキシ；アミノスルホニル；ハロ；シアノ；アセチル；ニトロ；エチニル；ヒドロキシ；モルホリノ；ナフチル；チエニル；ピリジル；テトラヒドロフラニル；インドリル；直鎖状又は分枝状のC1-C6アルキルオキシで置換されたインドリル；ジヒドロベンゾオキシニル；及びフリルメチルスルホニルからなる群から１つ以上選ばれるものであり、前記アリール、ヘテロ環及びヘテロアリール環は、それぞれ２つ以上の環が縮合した複素環構造でもあって、また、環内にカルボニル基を含むことができる。
【００１１】
本発明の他の目的は、糖尿病と脂肪肝の予防又は治療用製剤の製造のための、上記の化学式１で表される化合物又はその薬学的に許容可能な塩の使用を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明の目的を達成するために、本発明は、化学式１で表示される化合物又はその薬学的に許容可能な塩を有効成分として含む、糖尿病及び脂肪肝の予防又は治療用薬学的組成物を提供する：
【００１３】
【化２】
2019001779.tif 000004
【００１４】
前記式で、
Ｒは、非置換又は一つ以上の置換基で置換されたフェニル又はＮ、Ｏ及びＳからなる群より選ばれる１つ以上のヘテロ原子を含有する、５員環又は６員環のヘテロアリールであり、
置換基は、直鎖状又は分枝状のC1-C6アルキル；環内に1つ以上のヘテロ原子を含み、C1-C6アルキル又はC1-C6アルキルカルボニルで置換されたヘテロ環又はヘテロアリール環；ハロゲンに置換されたフェニルにより置換されたC2-C4のアルケニレン；C1-C6アルキルオキシカルボニル；C1-C6アルキルオキシ；ハロゲン；C1-C6アルキルアミノ基で置換されたC1-C6アルキルオキシ；ヒドロキシカルボニルC1-C6アルキル；C1-C6アルキルアミノ；フェニル；直鎖状又は分枝状のC1-C6アルキル、直鎖状又は分枝状のC1-C6アルキルオキシ、直鎖状又は分枝状のC1-C6アルキルオキシカルボニル、ハロゲン原子及びフルオロ原子１個以上に置換されたアルキルからなる群から選ばれる１つ以上の置換基で置換されたフェニル；フェノキシエタノール；直鎖状又は分枝状のC1-C6アルキル、ハロゲン原子及び直鎖状又は分枝状のC1-C6アルキルオキシからなる群から選ばれる1つ以上の置換基で置換されたフェノキシ；アミノスルホニル；ハロ；シアノ；アセチル；ニトロ；エチニル；ヒドロキシ；モルホリノ；ナフチル；チエニル；ピリジル；テトラヒドロフラニル；インドリル；直鎖状又は分枝状のC1-C6アルキルオキシで置換されたインドリル；ジヒドロベンゾオキシニル；及びフリルメチルスルホニルからなる群から1つ以上選ばれるものであり、前記アリール、ヘテロ環及びヘテロアリール環は、それぞれ２つ以上の環が縮合した複素環構造でもあって、また、環内にカルボニル基を含むことができる。
【００１５】
本発明の他の目的を達成するために、糖尿病と脂肪肝の予防又は治療用製剤の製造のための化学式１で表される化合物又はその薬学的に許容可能な塩の使用を提供する。
【００１６】
以下、本発明について、より詳細に説明する。
【００１７】
本発明は、下記化学式１で表示される化合物又はその薬学的に許容可能な塩を有効成分として含む糖尿病及び脂肪肝の予防又は治療用薬学的組成物を提供する：
【００１８】
【化３】
2019001779.tif 000005
【００１９】
前記式で、
Ｒは非置換又は一つ以上の置換基で置換されたフェニル又はＮ、Ｏ及びＳからなる群より選ばれる１つ以上のヘテロ原子を含有する、５員環又は６員環のヘテロアリールであり、
置換基は、直鎖状又は分枝状のC1-C6アルキル；環内に１つ以上のヘテロ原子を含み、C1-C6アルキル又はC1-C6アルキルカルボニルで置換されたヘテロ環又はヘテロアリール環；ハロゲンに置換されたフェニルにより置換されたC2-C4のアルケニレン；C1-C6アルキルオキシカルボニル；C1-C6アルキルオキシ；ハロゲン；C1-C6アルキルアミノ基で置換されたC1-C6アルキルオキシ；ヒドロキシカルボニルC1-C6アルキル；C1-C6アルキルアミノ；フェニル；直鎖状又は分枝状のC1-C6アルキル、直鎖状又は分枝状のC1-C6アルキルオキシ、直鎖状又は分枝状のC1-C6アルキルオキシカルボニル、ハロゲン原子及びフルオロ原子１個以上に置換されたアルキルからなる群から選ばれる１つ以上の置換基で置換されたフェニル；フェノキシエタノール；直鎖状又は分枝状のC1-C6アルキル、ハロゲン原子及び直鎖状又は分枝状のC1-C6アルキルオキシからなる群から選ばれる1つ以上の置換基で置換されたフェノキシ；アミノスルホニル；ハロ；シアノ；アセチル；ニトロ；エチニル；ヒドロキシ；モルホリノ；ナフチル；チエニル；ピリジル；テトラヒドロフラニル；インドリル；直鎖状又は分枝状のC1-C6アルキルオキシで置換されたインドリル；ジヒドロベンゾオキシニル；及びフリルメチルスルホニルからなる群から1つ以上選ばれるものであり、前記アリール、ヘテロ環及びヘテロアリール環は、それぞれ２つ以上の環が縮合した複素環構造でもあって、また、環内にカルボニル基を含むことができる。
【００２０】
また、本発明は、糖尿病と脂肪肝の予防又は治療用製剤の製造のための、上記の化学式１で表される化合物又はその薬学的に許容可能な塩の使用を提供する。
【００２１】
本発明で前記薬学的に許容可能な塩とは、好ましい生物学的活性を保有した化学式（１)の塩又は複合体を意味する。そのような塩の例は、これに限定はされないが、無機酸（例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、硝酸等）で形成される酸付加塩、及び酢酸、シュウ酸、酒石酸、コハク酸、リンゴ酸、フマル酸、マレイン酸、アスコルビン酸、安息香酸、タンニン酸、パモ酸（pamoic acid)、アルギン酸、ポリグルタミン酸、ナフタレンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、及びポリガラクツロン酸（poly-galacturonic acid）のような有機酸で形成された塩を含む。前記化合物はさらに、当業者に知られている薬学的に許容可能な四級塩として投与できるが、特に、塩化物、臭化物、ヨウ化物、Ｏ−アルキル、トルエンスルホン酸塩、メチルスルホン酸塩、スルホン酸塩、リン酸塩、又はカルボン酸塩（例えば、安息香酸塩、コハク酸塩、酢酸塩、グリコール酸塩、マレイン酸塩、リンゴ酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、アスコルビン酸塩、ケイ皮酸塩、マンデル酸塩及びジフェニル酢酸塩）を含む。本発明の化学式１の化合物は、薬学的に許容可能な塩だけでなく、通常の方法によって製造できる全ての塩、水和物、及び溶媒和物を全て含むことができる。
【００２２】
また、本発明の化合物は、一つ以上の非対称炭素原子を含むことができ、ラセミ形態及び光学的な活性形態で存在することもできる。これらの全ての化合物及び部分立体異性体は本発明の範囲に含まれる。
【００２３】
本発明において、用語「ハロゲン」とは、フッ素、塩素、臭素、及びヨウ素を意味し、フッ素、塩素及び臭素が好ましい。
【００２４】
本発明において、用語「アルキルカルボニル」とは、構造式-R'-R"の残基を意味するものの、R'は、オキソであり、R"は、前記で定義されたアルキルである。
【００２５】
本発明において、用語「アルキル」とは、単独で、又は他の基と組合わされて、1乃至20個の炭素原子、好ましくは1乃至16個の炭素原子、より好ましくは1乃至10個の炭素原子の、１つの分岐鎖又は直鎖の飽和脂肪族炭化水素基を意味する。下記開示された通り、低級アルキル基が、さらに好ましいアルキル基である。
【００２６】
本発明において、用語「アリール」とは、一価の単環又は二環芳香族炭化水素基を意味するか、又はより具体的に、実施例で記述した具体的な化合物の基を意味する。これらの基は、このような基だけでなく、第1又は第2の優先権又は前記二つの優先権で記載している基を包括する群に分類することができるものと理解され、ここで、前記基は、一つ以上の置換体、好ましくは一つ、二つ又は三つの置換体で独立的に置換され、前記置換体は、好ましくはアルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、ハロアルキル、ハロアルコキシ、Y-C(O)-R（この時、Yは存在しないか又はアルキレン基であり、Rは水素、アルキル、ハロアルキル、ハロアルコキシ、ヒドロキシ、アルコキシ、アミノ、モノアルキルアミノ又はジアルキルアミノである）、ヘテロアルキル、ヘテロアルキルオキシ、ヘテロアルキルアミノ、ハロ、ニトロ、シアノ、アミノ、モノアルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アルキルスルホニルアミノ、ヘテロアルキルスルホニルアミノ、スルホンアミド、メチレンジオキシ、エチレンジオキシ、ヘテロシクリル又はヘテロシクリルアルキルからなる群から選ばれたもの、又はより具体的には、実施例で述べた具体的な化合物の基を意味する。これらの基は、このような基だけでなく、第1又は第2の優先権又は前記二つの優先権で記載している基を包括する群に分類することができるものと理解される。より具体的にはアリールという用語は、フェニル、クロロフェニル、メトキシフェニル、2-フルオロフェニル、2,4-ジフルオロフェニル、1-ナフチル、2-ナフチル、及びこれらの誘導体を挙げられるが、これにより限定されるものではない。
【００２７】
本発明において、用語「ヘテロアリール」とは芳香族であって、単環又は多環の芳香族環システムで、前記にて定義されたようなヘテロシクリル基であって、任意の具体的な例では、約5乃至20員環の一つ又はそれ以上の、一つの具体的な例では、環系内の1乃至5個の原子がヘテロ原子、つまり炭素以外の元素であって、限定されない例としては、窒素、酸素又は硫黄を含む。ヘテロアリール基は選択的に縮合されてベンゼン環を形成することができる。ヘテロアリール基は、任意のヘテロ原子又は炭素原子で主な構造に結合することができ、これにより安定化合物を生成することができる。そのようなヘテロアリール基の限定されない例には、アクリジニル、ベンズイミダゾリル、ベンズインドリル、ベンズイソキサジニル、ベンゾ[4,6]イミダゾ[1,2-a]ピリジニル、ベンゾフラニル、ベンゾナフトフラニル、ベンゾチアゾリル、ベンゾチオフェニル、ベンゾトリアゾリル、ベンゾチオピラニル、ベンゾキサジニル、ベンゾチアゾリル、ベンゾチアゾリル、β−カルボリニル、カルバゾリル、シンノリニル、ジベンゾフラニル、フラニル、イミダゾリル、イミダゾピリジニル、イミダゾチアゾリル、インダゾリル、インドリジニル、インドリル、イソベンゾチエニル、イソインドリニル、イソキノリニル、イソチアゾリジニル、イソチアゾリル、ナフチリジニル、オクタヒドロインドリル、オクタヒドロイソインドリル、オキサゾリジノニル、オキサゾリジニル、オキサゾロピリジニル、オキサゾリル、イソキサゾリル、オキシラニル、ペリミジニル、フェナントリジニル、フェナントロリニル、フェナルスルホニル、フェナジニル、フェノチアジニル、フェノキサジニル、フタラジニル、プテリジニル、フリジニル、ピラジニル、ピラゾリル、ピリダジニル、ピリジニル、ピリドピリジニル、ピリミジニル、ピロリル、キナゾリニル、キノサリニル、テトラゾリル、チアジアゾリル、チアゾリル、チエニル、トリアジニル及びトリアゾルリルを含む。
【００２８】
本発明で、用語「アルケニレン」又は「アルケニレン鎖」とは、単に炭素及び水素原子のみからなり、２乃至８個の炭素原子を有する直鎖又は分岐鎖不飽和２価の基であり、不飽和は、単に二重結合によってのみ存在し、二重結合が鎖内の任意の二つの炭素原子間に存在することができ、その例としては、エテニレン、プロパ−１−エチレン、ブタ−２−エチレン等がある。アルケニレン鎖は鎖内の任意の2つの炭素原子を介して分子の残りの部分に結合することができる。
【００２９】
好ましくは、本発明において、前記化学式1の化合物は、下記構造を有する化合物の中から選択することができる：
【００３０】
【化４】
2019001779.tif 000006
【００３１】
【化５】
2019001779.tif 000007
【００３２】
【化６】
2019001779.tif 000008
【００３３】
【化７】
2019001779.tif 000009
【００３４】
【化８】
2019001779.tif 000010
【００３５】
【化９】
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【００３６】
【化１０】
2019001779.tif 000012
【００３７】
【化１１】
2019001779.tif 000013
【００３８】
【化１２】
2019001779.tif 000014
【００３９】
本発明者らは、先行研究を通じて、CYP4A（cytochrome P450 4A）の阻害が、小胞体（ER）ストレスに誘導された肝インスリン耐性及びアポトーシス（apoptosis)に対する有力な（potent）治療ターゲットであることを確認しており、前記酵素の阻害剤を、肥満から由来した糖尿病と脂肪肝の予防又は治療用薬学的組成物として使用できることを確認している。また、CYP4A阻害剤が小胞体のストレスを抑制し、血中インスリン濃度を減少させ、肝細胞のアポトーシスを抑制するメカニズムにおいて、これらの効果を示すことを確認している（韓国登録特許10-1235811）。
【００４０】
そこで、本発明者らは、化合物ライブラリスクリーニングを介して、CYP4A阻害活性を示す前記化学式１の化合物を選別し、これらの化合物が、糖尿病及び脂肪肝の予防又は治療効果を示すことができることを、実験的に確認した。
【００４１】
本発明で、前記の治療とは、別に言及がない限り、前記用語が適用される疾患又は疾病又は前記疾患又は疾病の一つ以上の症状を逆転させるか、又は緩和させるか、その進行を抑制する、又は予防することを意味し、本願で使用された前記治療という用語は治療する行為を意味する。
【００４２】
本発明で「糖尿病」とは、糖代謝機能異常を特徴とする慢性疾患である。前記糖尿病は、血中のブドウ糖濃度を調節する最も重要なホルモンであるインスリンの完全な産生不全の結果（インスリン依存型糖尿病又は１型糖尿病）、又は標的臓器でのインスリンの作用低下の結果により誘発される（インスリン非依存型糖尿病又は２型糖尿病）。
【００４３】
好ましくは、本発明で糖尿病は、インスリン非依存型糖尿病（２型糖尿病）を意味する。前記インスリン非依存型糖尿病は、一般的に糖代謝及び脂質代謝異常を示す。つまり、前記インスリン非依存型糖尿病患者の場合、飲食摂取後のインスリン分泌が遅くなり、又は十分な量が分泌されず、肝臓での糖生成が減らず、筋肉、肝臓、及び脂肪のような末梢組織による血糖の利用率を増加できない。このために生じた食後の過血糖症状は、インスリン分泌を常に促進し、結果的に慢性的なインスリン過多症を誘発し、このような状態が続くと、ベータ細胞がこれ以上増加したインスリンの分泌率を保持できなくなって、最終的にインスリン抵抗性が現れる。継続的なインスリン抵抗性は、インスリン生成に問題をもたらして、低インスリン血症を誘導するようになる。特にグルカゴンに対するインスリン比が減少すると、肝臓での糖新生が増加する。
【００４４】
また、インスリン抵抗性の原因として、血中遊離脂肪酸の増加が提示されている。血中遊離脂肪酸の増加は、末梢組織でインスリンによる糖利用を抑制して、肝組織で糖新生抑制を妨害することにより、血糖値を高める。前記インスリン非依存型糖尿病では、血中遊離脂肪酸の増加だけでなく、血中コレステロールと中性脂質の増加現象及びHDL-コレステロールの減少現象が表われ、これらの脂質異常症（dyslipidemia）の発症は、正常な人に比べて２〜４倍程度高い。
【００４５】
一方、糖尿病と糖尿合併症に関連した研究で、糖尿病は、酸化的ストレスと密接な関連があることが報告されている。糖尿病で表われる慢性的な高血糖は、ブドウ糖の自動酸化、タンパク質糖化等、多様な経路によって遊離基の生成を増加させ、反応性の高いこれらの物質により、酸化的ストレスが高くなる。また、高血糖で誘発された酸化的ストレスを防御するには抗酸化酵素の発現と活性が不十分なため、抗酸化酵素活性が非正常的に増加するようになり、これら酵素間で維持されていた均衡状態が崩れるようになる。
【００４６】
本発明の一実施例で、前記化学式１の化合物が、糖尿病及び高血糖に因る酸化的ストレスを緩和できることを確認した。すなわち、前記化学式１の化合物は、肝細胞への血糖吸収を促進する効果を示し、ミトコンドリアで活性酸素種（reactive oxygen species）の発生を抑制する効果があることを確認した。
【００４７】
一方、本発明において、前記「脂肪肝」とは、過度な脂肪やアルコール摂取、肝の脂肪合成増加、中性脂肪排出及び燃焼の減少等により、肝臓に脂肪が蓄積されて発生し、一般的に肝臓で蓄積された脂肪の比重が5％以上の時、脂肪肝と定義する。脂肪肝で蓄積された脂肪の殆どはトリグリセリド（triglyceride）である。
【００４８】
脂肪肝は、大別して、飲み過ぎによるアルコール性脂肪肝と、肥満、糖尿病、高脂血症、又は薬剤等による非アルコール性脂肪肝に分けることができる。アルコール性脂肪肝は、アルコールを過多摂取して肝臓で脂肪合成が促進され、正常的なエネルギー代謝が行われないため発生するようになる。反面、非アルコール性脂肪肝は、肥満、インスリン過敏症、糖尿病等を患っている人々から多く発生する。このような現象は、インスリン抵抗性や過度の脂肪分解により、血液中の遊離脂肪酸の濃度が高くなることによって、非アルコール性脂肪肝が発生することを示唆している（A. B. Mayersonら、Diabetes、51：797-802（2002）； KF Petersenら、Diabetes、54：603-608（2005））。
【００４９】
本発明で、前記脂肪肝は、アルコール性脂肪肝、非アルコール性脂肪肝、栄養性脂肪肝、飢餓性脂肪肝、肥満性脂肪肝、糖尿病性脂肪肝からなる群から選ばれたいずれか一つ以上でもあって、好ましくは、肥満性脂肪肝、糖尿病性脂肪肝でもあり、最も好ましくは、糖尿病性脂肪肝でもあるが、これらに限定されるものではない。
【００５０】
本発明の一実施例によると、前記化学式１の化合物は、肝細胞において脂肪蓄積を抑制する効果を示して、脂肪肝の予防又は治療効果を示すことを確認した。
【００５１】
本発明に係る薬学的組成物において、前記化学式１の化合物又はその薬学的に許容可能な塩は、臨床投与時に経口及び非経口の多様な剤形で投与することができるが、製剤化する場合には、通常使用される充填剤、増量剤、結合剤、湿潤剤、崩解剤、界面活性剤等の希釈剤又は賦形剤を使用して製造することができる。
【００５２】
経口投与のための固形製剤には、錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤トローチ等が含まれて、これらの固形製剤は、一つ以上の本発明の前記化学式１の化合物又はその薬学的に許容可能な塩に少なくとも一つ以上の賦形剤、例えば、澱粉、炭酸カルシウム、スクロース（sucrose)又はラクトース（lactose)又はゼラチン等を混ぜて調剤することができる。また、単純な賦形剤以外に、ステアリン酸マグネシウム、タルク等の潤滑剤も使用することができる。経口投与のための液状製剤には、懸濁剤、内用液剤、乳剤又はシロップ剤等が該当するが、広く使用される単純希釈剤である水、リキッドパラフィン以外に、さまざまな賦形剤、例えば湿潤剤、甘味剤、芳香剤、保存剤等が含まれる。
【００５３】
非経口投与のための製剤には、滅菌された水溶液、非水性溶剤、懸濁溶剤、乳剤、凍結乾燥製剤、坐剤が含まれる。非水性溶剤、懸濁溶剤にはプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブオイルのような植物性油、オレイン酸エチルのような注射可能なエステル等が使用できる。坐剤の基剤には前記ウィテップゾー（witepsol）、マクロゴール、ツイーン（tween）61、カカオ脂、ラウリン脂、グリセロール、ゼラチン等が使用できる。
【００５４】
また、本発明の前記化学式１の化合物又はこれの薬学的に許容可能な塩の人体に対する投与量は、患者の年齢、体重、性別、投与形態、健康状態及び疾患の程度によって異なり、体重が70kgの成人患者を基準にすると、一般的に0.1〜1000mg/日であり、好ましくは1〜500mg/日であって、また、医師又は薬剤師の判断により、一定の時間間隔で、1日1回から数回に分割投与することもできる。
【００５５】
本発明の薬学的組成物は、単独で、又は、手術、ホルモン療法、化学療法及び生物学的反応調節剤を使用する方法等と併用して、使用することができる。
【００５６】
一方、本発明に係る前記化合物は、目的により多様な形態で剤形化が可能である。下記において、本発明の組成物のための製剤例を例示する。
【００５７】
＜製剤例１＞薬学的製剤の製造
１．散剤の製造
本発明に係る化学式１の化合物 2g
乳糖 1g
前記の成分を混合して、機密包に充填して散剤を製造した。
【００５８】
２．錠剤の製造
本発明に係る化学式１の化合物 100mg
トウモロコシの澱粉 100mg
乳糖 100mg
ステアリン酸マグネシウム 2mg
前記の成分を混合した後、通常の錠剤の製造方法によって打錠して製剤を製造した。
【００５９】
３．カプセル剤の製造
本発明に係る化学式１の化合物 100mg
トウモロコシの澱粉 100mg
乳糖 100mg
ステアリン酸マグネシウム 2mg
前記の成分を混合した後、通常のカプセル剤の製造方法によってゼラチンカプセルに充填してカプセル剤を製造した。
【００６０】
４．丸剤の製造
本発明に係る化学式１の化合物 1g
乳糖 1.5g
グリセリン 1g
キシリトール 0.5g
前記の成分を混合した後、通常の方法によって1丸当たり4gになるように製造した。
【００６１】
５．顆粒の製造
本発明に係る化学式１の化合物 150mg
大豆抽出物 50mg
ブドウ糖 200mg
澱粉 600mg
前記の成分を混合した後、30％エタノール100mgを添加して、60℃で乾燥して顆粒を形成した後、包に充填した。
【発明の効果】
【００６２】
本発明の化学式１の化合物は、肝細胞へのブドウ糖の吸収を促進し、肝細胞での脂肪蓄積を抑制して、ミトコンドリアでの活性酸素の生成を抑制する活性を示し、糖尿病及び脂肪肝の治療剤の開発に極めて有用に活用することができる。
【図面の簡単な説明】
【００６３】
【図１】図１は、本発明のCYP4Aの活性抑制能力を、発光値で測定した結果である。具体的には、本発明の化合物と培養した肝細胞にCYP4A細胞溶解物等を添加して、CYP4A反応が十分に発するようにした場合の、各化合物のCYP4A活性阻害能を細胞の発光値を比較して測定した結果である。
【図２】図２は、CYP4A阻害活性を示す化合物の発光値を比較することにより、CYP4Aの活性が阻害された程度を測定した。
【図３】図３は、本発明のブドウ糖吸収促進効果を、蛍光で確認したものである。具体的には、本発明の化合物と培養した肝細胞に、小胞体ストレスを誘導するタプシガルギン（thapsigargin）やツニカマイシン（Tunicamycin）を反応させた後、インスリンと2-NBDGを反応させて、本発明の化合物のブドウ糖吸収促進効果を確認した結果である(励起：488 nm、発光：508 nm)。
【図４】図４は、本発明の、肝細胞での脂肪蓄積抑制活性を示した結果である。具体的には、本発明の化合物と培養した肝細胞において、脂肪の蓄積を誘導する脂肪酸であるパルミチン酸（Palmitate）を入れて反応させた場合、脂肪蓄積抑制活性を蛍光で確認したものである(励起：530 nm、発光：635 nm)。
【図５】図５は、本発明の化合物の活性酸素消去能を示した結果である。具体的には、本発明の化合物と培養した肝細胞の小胞体ストレスを誘導するタプシガルギン（thapsigargin）やツニカマイシン（Tunicamycin）を反応させた場合、活性酸素消去能を発光度で確認したものである(励起：488 nm、発光：508 nm)。
【発明を実施するための形態】
【００６４】
［発明を実施するための具体的な内容］
以下、本発明を詳細に説明する。
但し、下記実施例は、本発明を例示するのみで、本発明の内容が下記の実施例に限定されるものではない。
【００６５】
＜実施例１＞
CYP4A阻害活性を示す化合物の選別
【００６６】
本発明者らは、CYP4A阻害活性を示す化合物が、糖尿病及び脂肪肝に予防又は治療効果を示すことができるとの先行発明の内容に基づいて、市販されている化合物のライブラリスクリーニングを介して、CYP4A阻害剤を選別した。
【００６７】
ヒトの肝細胞株であるHepG2細胞に、CYP4A11 DNAをトランスフェクションの方法で導入してタンパク質が発現するように、24時間インキュベーターに入れて培養した。その後、RIPAバッファー（20 mM Tris-HCl（pH 7.5）、150 mM NaCl、1 mM Na2EDTA、1 mM EGTA、1％ NP-40、1％ sodium deoxycholate、2.5 mM sodium pyrophosphate、1 mM β-glycerophosphate、1 mM Na3VO4、1μg/ml leupeptin）を入れて細胞を破砕して、タンパク質を抽出した後、次のような方法でCYP4A活性実験を行った。
【００６８】
まず、96ウェルプレート（white opaque polystyrene nontreated flat-bottom well）に、CYP4A阻害活性を示す化合物を水に濃度別に混ぜた後、1M KPO4バッファー（13.94g K2HPO4、2.72g KH2PO4、100 ml当たり）、5 mM Luciferin-4A、1 pmol CYP4A細胞溶解物を入れて室温で10分間反応させた。NADPH Regeneration system（20X sol.A、100X sol.B in water、Cal．Number：D399、Thermo Fisher SCIENTIFIC）を入れた後、1時間、常温でCYP4A反応が十分に行われるようにした後、Luciferin Detection reagentを入れることにより、CYP4A反応は終わり、発光反応が起こるように誘導して、20分間常温で反応させた。マイクロプレートリーダー（microplate reader)でそれぞれのウェルから出る発光値を比較することにより、CYP4Aの活性が阻害された程度を測定した。
【００６９】
その結果、図１及び図２に示した通り、本発明の化学式２乃至１０の化合物が、CYP4Aの阻害能を有することを確認することができた。併せて、スクリーニングされた化合物は、公知のCYP4A特異的阻害剤であるHET0016（N-ヒドロキシ-N'-（4-ブチル-2-メチルフェニル）ホルムアミジン）よりも優れたIC50値を示すことが確認された。
【００７０】
＜実施例２＞
ブドウ糖の吸収促進効果
【００７１】
ヒトの肝細胞株であるHepG2細胞を、10％FBS（fetal bovine serum）が存在する高濃度グルコースDMEM培地(Dulbecco's modified Eagle's medium、25 mM グルコース)で培養した後、次のような方法でブドウ糖の吸収実験を行った。
【００７２】
まず、96ウェルプレート（black、clear bottom culture plate）においてHepG2細胞を1 X104 細胞／ウェルで育てた後、CYP4A阻害活性を示すそれぞれの化合物を5μM入れた後、6時間培養した。ここで小胞体ストレスを誘導するタプシガルギン（thapsigargin）やツニカマイシン（Tunicamycin)を入れた後、24時間、37℃のインキュベーターに入れて反応させた。その後、インスリンと2-NBDG(2-(N-(7-nitrobenz-2-oxa-1,3-diazol-4-yl)amino)-2-deoxyglucose)を入れて、37℃インキュベーターで3時間反応させた後、PBSで洗浄をした後で、マイクロプレートリーダーで蛍光(励起：488 nm、発光：508 nm)を測定した。
【００７３】
その結果、図３に示した通り、本発明の化合物を処理した試験群で、陽性対照群と類似した程度でブドウ糖の吸収が促進されたが、タプシガルギン又はツニカマイシンを処理した対照群の細胞は、本発明化合物及び陽性対照群と比べて、ブドウ糖の吸収が極めて抑制されたことを確認できた。
【００７４】
＜実施例３＞
肝細胞での脂肪蓄積抑制活性
【００７５】
ヒトの肝細胞株であるHepG2細胞を、10％FBSが存在する高濃度グルコースDMEM培地（グルコース 25 mM）で培養した後、次のような方法で脂肪蓄積を測定する実験を行った。
【００７６】
まず、96ウェルプレート（black、clear bottom culture plate）にHepG2細胞を5 X 103 細胞／ウェルで育てた後、CYP4A阻害活性を示す化合物を5μM入れた後、6時間培養した。ここで、肝細胞で脂肪蓄積を誘導する脂肪酸であるパルミチン酸（Palmitate)を入れた後、72時間、37℃のインキュベーターに入れて反応させた。その後、4％パラホルムアルデヒド（paraformaldehyde）を入れて常温で15分間反応させて固定させた後、ナイルレッド溶液（Nile-Red solution)を入れ、光を遮断して37℃で10分間反応させた。反応時間が終了すると、マイクロプレートリーダーで蛍光(励起：530 nm、発光：635 nm)を測定した。
【００７７】
その結果、図４に示した通り、本発明の化合物を処理した試験群で、陽性対照群と類似した程度に肝細胞での脂肪蓄積が抑制された。一方、脂肪の蓄積を誘導する脂肪酸であるパルミチン酸を反応させた細胞の場合、本発明の化合物及び陽性対照群と比べて脂肪が多量蓄積された様子を確認することができた。
【００７８】
＜実施例４＞
活性酸素消去能
【００７９】
ヒトの肝細胞株であるHepG2細胞を、10％FBSが存在する高濃度グルコースDMEM培地（グルコース 25 mM）で培養した後、次のような方法で活性酸素除去能を測定する実験を行った。
【００８０】
まず、96ウェルプレート（black、clear bottom culture plate）にHepG2細胞を1 X 104 細胞／ウェルで育てた後、CYP4A阻害活性を示す化合物を5μM入れて6時間培養した。ここで小胞体ストレスを誘導するタプシガルギン又はツニカマイシンを入れた後、24時間インキュベーターに入れて反応させた。その後5μM H2DCFDA(cell-permeant 2',7'-dichlorodihydrofluorescein diacetate)を入れて37℃のインキュベーターで30分反応させた後、PBSで洗浄した後、30分間、37℃のインキュベーターに入れて発光が起こるように待った。その後、マイクロプレートリーダーで蛍光(励起：488 nm、発光：508 nm)を測定した。
【００８１】
その結果、図５に示した通り、本発明の化合物を処理した試験群で、陽性対照群と類似した程度に活性酸素の除去が促進された。一方、小胞体ストレスを誘導するタプシガルギン又はツニカマイシンを反応させたセルの場合、本発明の化合物及び陽性対照群と比べて、活性酸素除去効果が極めて不足したことを確認した。
【産業上の利用可能性】
【００８２】
本発明の化学式１の化合物は、肝細胞へのブドウ糖の吸収を促進し、肝細胞での脂肪の蓄積を抑制し、ミトコンドリアでの活性酸素の生成を抑制する活性を示し、糖尿病及び脂肪肝の治療剤の開発に極めて有用に活用することができ、産業上の利用可能性が極めて優れている。
【図１】
2019001779.tif 000026
【図２】
2019001779.tif 000027
【図３】
2019001779.tif 000028
【図４】
2019001779.tif 000029
【図５】
2019001779.tif 000030
【手続補正書】
【提出日】平成30年10月9日(2018.10.9)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記化学式１で表示される化合物又はこれの薬学的に許容可能な塩を有効成分として含む、糖尿病及び脂肪肝の予防又は治療用薬学的組成物：
【化１３】
2019001779.tif 000031
前記式で、
Ｒは、非置換又は一つ以上の置換基で置換されたフェニル又はＮ、Ｏ及びＳからなる群より選ばれる１つ以上のヘテロ原子を含有する５員環又は６員環のヘテロアリールであり、
置換基は、直鎖状又は分枝状のC1-C6アルキル；環内に1つ以上のヘテロ原子を含み、C1-C6アルキル又はC1-C6アルキルカルボニルで置換されたヘテロ環又はヘテロアリール環；ハロゲンに置換されたフェニルにより置換されたC2-C4のアルケニレン；C1-C6アルキルオキシカルボニル；C1-C6アルキルオキシ；ハロゲン；C1-C6アルキルアミノ基で置換されたC1-C6アルキルオキシ；ヒドロキシカルボニルC1-C6アルキル；C1-C6アルキルアミノ；フェニル；直鎖状又は分枝状のC1-C6アルキル、直鎖状又は分枝状のC1-C6アルキルオキシ、直鎖状又は分枝状のC1-C6アルキルオキシカルボニル、ハロゲン原子及びフルオロ原子１個以上に置換されたアルキルからなる群から選ばれる１つ以上の置換基で置換されたフェニル；フェノキシエタノール；直鎖状又は分枝状のC1-C6アルキル、ハロゲン原子及び直鎖状又は分枝状のC1-C6アルキルオキシからなる群から選ばれる1つ以上の置換基で置換されたフェノキシ；アミノスルホニル；ハロ；シアノ；アセチル；ニトロ；エチニル；ヒドロキシ；モルホリノ；ナフチル；チエニル；ピリジル；テトラヒドロフラニル；インドリル；直鎖状又は分枝状のC1-C6アルキルオキシで置換されたインドリル；ジヒドロベンゾオキシニル；及びフリルメチルスルホニルからなる群から1つ以上選ばれるものであり、前記アリール、ヘテロ環及びヘテロアリール環は、それぞれ２つ以上の環が縮合した複素環構造でもあって、また、環内にカルボニル基を含むことができる。
【請求項２】
前記化学式１の化合物は、下記化学式２乃至化学式10の中から選ばれるいずれか一つであることを特徴とする、請求項１記載の薬学的組成物：
【化１４】
2019001779.tif 000032
【化１５】
2019001779.tif 000033
【化１６】
2019001779.tif 000034
【化１７】
2019001779.tif 000035
【化１８】
2019001779.tif 000036
【化１９】
2019001779.tif 000037
【化２０】
2019001779.tif 000038
【化２１】
2019001779.tif 000039
【化２２】
2019001779.tif 000040
【請求項３】
前記糖尿病は、２型糖尿病であることを特徴とする、請求項１記載の薬学的組成物。
【請求項４】
前記糖尿病は、肥満から由来したことを特徴とする、請求項１記載の薬学的組成物。
【請求項５】
前記化合物は、肝臓でのブドウ糖吸収を促進する効果を示すことを特徴とする、請求項１記載の薬学的組成物。
【請求項６】
前記化合物は、ミトコンドリアで活性酸素(reactive oxygen)の生成を抑制する活性を示すことを特徴とする、請求項１記載の薬学的組成物。
【請求項７】
糖尿病と脂肪肝の予防又は治療用製剤の製造のための、下記の化学式１で表される化合物又はその薬学的に許容可能な塩の使用。
【化２３】
2019001779.tif 000041
【外国語明細書】
2019001779000001.pdf