(57)【要約】【課題】ツルレイシに含まれる成分の機能を解明し、その用途を見出す。【解決手段】ツルレイシ抽出物は、免疫賦活剤、血糖値抑制剤、ＡＧＥｓ生産抑制剤に用いることができる。ツルレイシは着花した花および着蕾した蕾の少なくとも一部を除去しながら栽培されることが好ましい。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ツルレイシの抽出物を含有する免疫賦活剤。
【請求項２】
前記ツルレイシは着花した花および着蕾した蕾の少なくとも一部を除去しながら栽培されたものであることを特徴とする請求項１に記載の免疫賦活剤。
【請求項３】
ツルレイシの抽出物を含有する血糖値抑制剤。
【請求項４】
ツルレイシの抽出物を含有するＡＧＥｓ生産抑制剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ツルレイシの抽出物を含有する免疫賦活剤、血糖値抑制剤およびＡＧＥｓ生産抑制剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
にがうり（ツルレイシ属ツルレイシ：ｍｏｍｏｒｄｉｃａ  ｃｈａｒａｎｔｉａ  ｖａｒ．  ｐａｖｅｌ。以下「ツルレイシ」という。）は、カルシウム含有食品に用いられる場合がある。また、ツルレイシの抽出物を有効成分として含有する育毛剤・白癬症治療剤・アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）の活性抑制剤・防虫剤が知られている。
【０００３】
ツルレイシの果実には、キニーネが含まれている。キニーネは、視神経障害、血液障害等の副作用を引き起こす場合がある。このため、ツルレイシの果実を原料とする加工食品を大量に摂取しても、ツルレイシに含まれる有効成分の効能を得にくい。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２０１３−１５８３２６号公報
【特許文献２】特開２００３−１７６２１３号公報
【特許文献３】特開２０１３−１７３６８２号公報
【特許文献４】特開２００８−２３９６２６号公報
【特許文献５】特開平５−２７１０６０号公報
【特許文献６】特開２０００−１５４１０９号公報
【特許文献７】特開２０１３−２１６５８７号公報
【特許文献８】特開２０１４−２１７３０６号公報
【特許文献９】特開２０１６−０１７０４５号公報
【特許文献１０】特開２００２−５３４１５号公報
【特許文献１１】特開２００６−３４２１８３号公報
【特許文献１２】国際公開２０１７−０２２０３０号公報
【特許文献１３】特開平６−１４１８１３号公報
【特許文献１４】国際公開２００９−０９３６２９号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、ツルレイシに含まれる成分の機能を解明し、その用途を見出すことを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
上述の目的を達成するため、本発明は、免疫賦活剤、血糖値抑制剤またはＡＧＥｓ生産抑制剤がツルレイシ抽出物を含有することを特徴とする。
【発明の効果】
【０００７】
本発明によれば、ツルレイシ抽出物を免疫賦活剤、血糖値抑制剤およびＡＧＥｓ生産抑制剤に用いることができることを見出した。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１】本発明に係る一実施の形態におけるツルレイシ抽出物のＯＲＡＣ値の分析結果を示す表である。
【図２】本発明に係る一実施の形態におけるツルレイシ抽出物の細胞賦活性の分析結果を示す表である。
【図３】本発明に係る一実施の形態におけるツルレイシ抽出物のマクロファージ機能賦活試験でのマクロファージ細胞の細胞毒性試験の結果を示すグラフである。
【図４】本発明に係る一実施の形態におけるツルレイシ抽出物のマクロファージ機能賦活試験に用いたプライマー配列を示す表である。
【図５】本発明に係る一実施の形態におけるツルレイシ抽出物のマクロファージ機能賦活試験のＰＣＲ反応条件を示すグラフである。
【図６】本発明に係る一実施の形態におけるツルレイシ抽出物のマクロファージ機能賦活試験のマクロファージでのサイトカイン遺伝子ＴＮＦ−α発現に及ぼす被験物質の効果を示すグラフである。
【図７】本発明に係る一実施の形態におけるツルレイシ抽出物のマクロファージ機能賦活試験のマクロファージでのサイトカイン遺伝子ＩＬ−８発現に及ぼす被験物質の効果を示すグラフである。
【図８】本発明に係る一実施の形態におけるツルレイシ抽出物のマクロファージ機能賦活試験のマクロファージでのサイトカイン遺伝子ＩＬ−１ａ発現に及ぼす被験物質の効果を示すグラフである。
【図９】本発明に係る一実施の形態におけるツルレイシ抽出物のマクロファージ機能賦活試験のマクロファージでのサイトカイン遺伝子ＩＬ−１ｂ発現に及ぼす被験物質の効果を示すグラフである。
【図１０】本発明に係る一実施の形態におけるツルレイシ抽出物のマクロファージ機能賦活試験のマクロファージでのサイトカイン遺伝子ＩＬ−１２Ａ発現に及ぼす被験物質の効果を示すグラフである。
【図１１】本発明に係る一実施の形態におけるツルレイシ抽出物のマクロファージ機能賦活試験のマクロファージでのサイトカイン遺伝子ＩＬ−１５発現に及ぼす被験物質の効果を示すグラフである。
【図１２】本発明に係る一実施の形態におけるツルレイシ抽出物のマクロファージ機能賦活試験のマクロファージでのサイトカイン遺伝子ＩＬ−１８発現に及ぼす被験物質の効果を示すグラフである。
【図１３】本発明に係る一実施の形態におけるツルレイシ抽出物のツルレイシ試料の相対ＡＧＨ活性の分析結果のグラフである。
【図１４】本発明に係る一実施の形態におけるツルレイシ抽出物のツルレイシ試料の相対ＡＣＥ活性の分析結果のグラフである。
【図１５】本発明に係る一実施の形態におけるツルレイシ抽出物のツルレイシ試料のＡＧＥｓ生産抑制能の分析結果のグラフである。
【図１６】本発明に係る一実施の形態におけるツルレイシ抽出物のヒト皮膚線維芽細胞への賦活作用の検証試験の結果を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
本発明に係るツルレイシ抽出物の一実施の形態を、図面を参照して説明する。なお、この実施の形態は単なる例示であり、本発明はこれに限定されない。
【００１０】
本実施の形態に係るツルレイシ抽出物の一実施の形態の製造方法について説明する。このツルレイシ抽出物は、にがうり（ツルレイシ属ツルレイシ：ｍｏｍｏｒｄｉｃａ  ｃｈａｒａｎｔｉａ  ｖａｒ．  ｐａｖｅｌ。以下「ツルレイシ」という。）を用いる。ツルレイシ抽出物は、たとえばツルレイシの栽培工程、採取工程、乾燥工程、粉砕工程、分級工程、抽出工程、凍結乾燥工程、調製工程を経て製造される。
【００１１】
（栽培工程）
まず、３月中旬から５月中旬、特に４月初旬から４月下旬に、ツルレイシの種を蒔く。その後、着蕾した蕾または着花した花を摘蕾または摘花する。この際、着蕾した蕾または着花した花の全てを摘蕾または摘花することが好ましい。摘蕾および摘花の作業は、収穫直前まで行い、最終的に根、葉および茎の部分のみが残されているツルレイシを収穫する。収穫は６月下旬から１０月上旬まで行うことができる。
【００１２】
本実施の形態の説明において、「着蕾」とは「蕾がつくこと」、「摘蕾」とは「着蕾した蕾を除去すること」をそれぞれ意味する。また、「着花」とは「花がつくこと、すなわち、着蕾した蕾の花弁が開くこと」、「摘花」とは「着花した花を除去すること」を意味する。着蕾を防ぐために、植物ホルモンの投与をしてもよい。あるいは、温度を管理することなどにより、着蕾しにくい環境で育成してもよい。
【００１３】
このように、着花を防ぎ、あるいは着花したものを除去することにより、果実の生成を防ぎ、ツルレイシの有効成分を葉および茎に集中させることができる。より多くの有効成分を葉および茎に集中させるために、着蕾した後できるだけ早く摘蕾することが好ましく、また、着蕾したすべてを摘蕾することが好ましい。
【００１４】
本実施の形態において、ツルレイシの栽培は、種蒔きの後、発芽を経て育成したものに対して摘蕾および摘花を収穫まで繰り返しながら行われる。ツルレイシは、種蒔き後、約１週間で発芽し、発芽から２〜３週間ほどで本葉が出る。その後、葉を付けながら概ね鉛直上方に向かって蔓が延び、早ければ蒔種から１月ほどで着蕾しはじめる。
【００１５】
着蕾した蕾の直径が１ｃｍになる前の段階で、雌雄いずれの蕾も摘み取る。ここで、将来果実になる雌花の蕾を、雄花よりも早期に摘蕾することが好ましい。着蕾を見過ごしてしまった場合などには、着花した段階で速やかに花を摘み取る。
【００１６】
（採取工程）
上述の栽培工程で栽培されたツルレイシの葉および茎をツルレイシ抽出物の原料として採取する。茎は、繊維質が多く葉に比べて粉末化が難しい。そこで、葉のみを原料としてもよい。
【００１７】
（乾燥工程）
次に、採取されたツルレイシの葉および茎を乾燥させる。乾燥方法としては、自然乾燥、温風乾燥、凍結乾燥などを採用することができる。特に、乾燥効率の観点から、温風乾燥が好ましい。乾燥に使用する温風の温度は、６０℃〜８０℃が好ましい。
【００１８】
（粉砕工程）
その後、ツルレイシの葉および茎の乾燥物を粉砕する。粉砕方法としては、ミル、乳鉢、ホモジナイザー、超音波処理などのように、物理的に粉砕する方法を採用してもよいし、セルラーゼ、ペクチナーゼなどの細胞壁を分解する酵素を用いて化学的に粉砕してもよい。物理的な粉砕は、常温で行われてもよいし、乾燥物が凍結する温度まで冷却して凍結させてから粉砕するいわゆる凍結粉砕方法で行ってもよい。特に、凍結粉砕方法により粉砕すれば、粉砕過程での成分の流出を抑制できる。
【００１９】
粉砕物の粒径は数μｍ〜数百μｍである。粉砕物の用途に応じて、粒径が数ｎｍ〜数百ｎｍの大きさになるまでさらに微細化処理（ナノ化処理）を施してもよい。微細化することにより、原料の表面積を増大させ、有効成分の抽出量を増大させることができる。微細化する方法としては、超高圧湿式微粒化法、超音速液滴衝突法、レーザーアブレーション法などを使用することができる。
【００２０】
（分級工程）
粉砕物は、５０ｍｅｓｈ〜２００ｍｅｓｈの目開きの篩にて分級される。篩で分級するための分級機としては、たとえばアンバランスウェイト駆動式、共振式、振動モータ式、電磁式、沿道振動式などの振動篩を用いることができる。また、分級機として、水平運動式、水平円−直線運動式、三次元円運動式などの面内運動篩を用いてもよい。分級機として、可動網式篩、強制撹拌式篩、網面振動式篩、風力篩、音波篩を用いてもよい。
【００２１】
（抽出工程）
次に、分級物を適当な溶媒に浸漬することによって、ツルレイシの有効成分を抽出物を得る。ツルレイシ抽出物の主成分は、モモルディシン（ｍｏｍｏｒｄｉｃｉｎ）、チャランチン（ｃｈａｒａｎｔｉｎ）およびコロソリン酸であるが、抽出物に他の成分が含まれていてもよい。
【００２２】
抽出に使用される溶媒としては、有機溶媒や水を用いることができる。有機溶媒として、一価または多価アルコール、エーテル、エステル、芳香族炭化水素などを抽出に用いることができる。取り扱い・入手の容易さを考慮すると、エタノール、プロピレングリコール（ＰＧ）、ジプロピレングリコール（ＤＰＧ）、エチレングリコール（ＥＧ）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、１，３−ブチレングリコール（ＢＧ）、グリセリンが抽出に用いる溶媒として好ましい。特に、有効成分の抽出率を考慮すると、エタノールが最も好ましい。溶媒として水を使用する場合、塩類や残留塩素などの不純物が除去された状態のものが好ましい。すなわち、蒸留水、逆浸透膜を通したＲＯ水、イオン交換時士などにより金属イオンなどを除去した脱イオン水などの純水であることが好ましい。さらに固相カラムなどを用いて抽出してもよい。
【００２３】
有機溶媒を抽出に用いた場合には、溶媒の沸点などを考慮した上で決定した温度まで加熱・維持することにより、抽出時間を短縮することができる。水を抽出に用いた場合も、水の沸点近くまで加熱・維持することにより抽出時間を短縮することができる。溶液の加熱・高温維持中において溶液を撹拌することにより、より多くの成分を溶出させることができる。溶液の撹拌には、回転翼式ミキサーや、熱とともに撹拌可能なヒートプレート付きマグネティックスターラーなどを用いることができる。
【００２４】
次に、ツルレイシ抽出物および溶媒を含む液体部分（抽出物含有溶液）と、葉および茎の残渣部分とを分離する。分離の方法としては、濾過機による自然濾過、加圧濾過、減圧濾過を採用することができる。また、遠心分離器によって、分離を行ってもよい。使用した溶媒をそのまま最終的な経口用剤、皮膚外用剤、および、化粧料として用いない場合には、抽出物含有溶液から溶媒のみをさらに分液すればよい。すなわち、有機溶媒を用いた場合はその有機溶媒のみが溶解する別の溶媒によって分液すればよいし、水を溶媒として用いた場合はたとえば緩やかに加熱して水分を蒸発させればよい。ツルレイシ抽出物の生産量などに応じて、ソックスレー法、高速溶媒抽出法（ＡＳＥ法）、超音波抽出法、マイクロ波抽出法、高圧液体抽出法（ＰＬＥ法）、超臨界流体抽出法（ＳＦＥ）を行う装置を用いてもよい。
【００２５】
ツルレイシ抽出物の添加形態などに応じてツルレイシ抽出物を濃縮してもよい。濃縮方法としては、抽出に使用した溶媒を加熱蒸散させる方法や、塩析法、減圧法などを用いることができる。また、ツルレイシ抽出物に微細化処理（ナノ化処理）を施してもよい。微細処理する方法としては、超高圧湿式微粒化法、超音速液滴衝突法、レーザーアブレーション法などを用いることができる。
【００２６】
（凍結乾燥工程）
このようにして得られたツルレイシ抽出物を凍結乾燥する。凍結乾燥の方法としては、たとえばツルレイシ抽出物をマイナス４０℃まで予備凍結した後、冷却を継続しながら０．１Ｔｏｒｒまで真空引きして凍結乾燥することが好ましい。
【００２７】
（調製工程）
このようにして得られたツルレイシ抽出物を、適当な基材または溶剤と混合して経口用剤、皮膚外用剤および化粧料を調整する。基材としては、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ウラリン酸ナトリウム、ゼラチンなどを用いることができる。基材として、食品添加物として使用可能なカラギーナン、アルギン酸などの海藻由来物や、ローカストビーンガムやグアーガムなどの植物由来物、プルラン、カードランなどの微生物由来物、セルロース類を含む基材なども用いることができる。ゼラチンとしては、牛骨や牛皮、豚皮、魚皮を由来とするものなどを用いてもよい。溶剤としては、上述の溶媒の水溶液などを用いることができる。
【００２８】
経口用剤、皮膚外用剤の剤型としては、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、軟膏剤、クリーム剤、ローション剤、ゲル剤、糊膏剤、チンキ剤、添付剤、スプレー剤、パウダー剤、パウダースプレー剤とすることができる。ツルレイシ抽出物を、歯磨き粉や石鹸、ボディシャンプーのような洗浄剤に配合してもよい。ツルレイシ抽出物を化粧品やスキンクリームなどのスキンケア用品に配合してもよい。
【００２９】
経口用剤には、所望の効果を損なわない範囲で、一般的に皮膚外用剤に用いられる成分である油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、界面活性剤、ｐＨ調整剤、防腐剤、香料、保湿剤、粉体、紫外線吸収剤、増粘剤、色素、酸化防止剤、美白剤、抗炎症剤、抗しわ剤、肌荒れ改善剤、ニキビ用薬剤、アルカリ類、キレート剤、金属封鎖剤、海泥などの成分を配合してもよい。
【００３０】
化粧品には、一般的に化粧料に用いられる成分である硫酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、塩化カリウム、油性成分、乳化剤、コハク酸、生薬、無機顔料、香料、および色素などの成分を配合することもできる。また、化粧品は、スキンケア化粧品、メーキャップ化粧品、ボディケア化粧品またはヘアケア化粧品などとすることができる。スキンケア化粧品としては、スキンクリーム、化粧水、洗顔石鹸、洗顔クリーム、洗顔フォーム、パック、マッサージクリーム、乳液、モイスチャークリーム、リップクリームなどとすることができる。メーキャップ化粧品としては、ファンデーション、白粉、口紅、ほほ紅、アイシャドウなどとすることができる。ボディケア化粧品としては、歯磨き粉、石鹸、液体洗浄料、日焼け止めクリーム、入浴剤などとすることができる。ヘアケア化粧品としては、シャンプー、リンス、ヘアトリートメント、整髪料、ヘアトニック、育毛剤、スカルプトリートメントなどとすることができる。
本実施の形態のツルレイシ抽出物の効能について試験を行った。試験に供したツルレイシ抽出物は、以下の方法で得た。
【００３１】
（原料の栽培、採取及び乾燥）
ツルレイシの種蒔きを４月上旬に行い、着蕾した全ての蕾をハサミを用いて摘蕾しながら８月下旬まで育成し、育成されたツルレイシの葉及び茎を原料として採取した。ここで、摘蕾は、蕾の長直径が１ｃｍに達する前に行った。また、着蕾した全ての蕾を摘蕾しない点以外について上記と同じ条件でツルレイシを育成し、長径２５ｃｍのツルレイシの果実を採取した。この採取されたツルレイシの果実については、比較例として成分分析をおこなった。
【００３２】
採取されたツルレイシの葉及び茎を水洗し、温室にて自然乾燥した後、８０℃の温風にて乾燥した。乾燥後のツルレイシの葉及び茎は、カビや劣化を防ぐため脱酸素用の専用袋にて密封し、１０℃にて冷温保存した。
【００３３】
（乾燥物の粉砕及び分級）
乾燥させたツルレイシの葉及び茎を、ブレード式ミキサーで粉砕して粉砕物を得、さらに粉砕物を２００ｍｅｓｈの篩で分級し、分級物を得た。得られた分級物は、カビや劣化を防ぐため脱酸素用の専用袋にて密封し、１０℃にて冷温保存した。
【００３４】
（分級物の抽出及び濃縮）
冷温保存された分級物を、９９％未変性エタノールにて成分抽出を行い、この抽出液を加熱濃縮し、濃縮前後の重量比から計算される濃縮率で２０倍、２５倍、３０倍、４０倍となるようにツルレイシ抽出物（濃縮エキス）を製造した（以下、濃縮率２０倍のツルレイシ抽出物（濃縮エキス）を、「２０倍濃縮エキス」という。）。さらに、これらの濃縮エキスを乾燥し、濃縮エキス粉末を夫々製造した。一例として、３５ｋｇの分級物を９９％未変性エタノール１８７Ｌで抽出し、この抽出液から、２０倍濃縮エキス３０ｋｇを製造した。また、この２０倍濃縮エキス３０ｋｇから、２０倍濃縮エキス粉末５ｋｇを製造した。なお、この２０倍濃縮エキスについては、実施例として成分分析を行った。
【００３５】
（ナノ化処理）
上記方法で製造された２０倍濃縮エキス２３０ｍｌにイオン交換水４．３７Ｌを添加して希釈液を製造した。この希釈液を、ナノ粒子製造装置（テクノガード社製）に導入して噴射圧力２００ＭＰａにて処理し、ナノ化２０倍濃縮エキス約４．５Ｌを得た。
【００３６】
（凍結乾燥）
上記方法で製造された２０倍濃縮エキス１００ｇを、マイナス４０℃まで冷却して予備凍結し、その後０．１Ｔｏｒｒまで減圧して凍結乾燥させ、凍結乾燥製品７６ｇを得た。
【００３７】
（経口剤、皮膚外用剤、化粧料の調製）
上記方法で製造された２０倍濃縮エキスと、ヒドロキシプロピルセルロースとを重量比１：４９で混合し、加圧成型することにより、経口用剤（錠剤）を得た。また、上記方法で製造されたナノ化２０倍濃縮エキスと、ヒドロキシプロピルセルロースとを重量比１：４９で混合し、加圧成型することにより、経口用剤（錠剤）を得た。さらに、上記方法で製造された凍結乾燥製品と、ヒドロキシプロピルセルロースとを重量比１：４９で混合し、加圧成型することにより、経口用剤（錠剤）を得た。
【００３８】
上記方法で製造された、２０倍濃縮エキスと増粘剤（ヒドロキシプロピルメチルセルロースの２％（Ｗ／Ｗ）水溶液）とを重量比１：４９で混合し、皮膚外用剤（スキンクリーム）を得た。また、上記方法で製造されたナノ化２０倍濃縮エキスと、増粘剤（ヒドロキシプロピルメチルセルロースの２％（Ｗ／Ｗ）水溶液）とを重量比１：４９で混合し、皮膚外用剤（スキンクリーム）を得た。
【００３９】
上記方法で製造された２０倍濃縮エキスと、ラウリン酸ナトリウムとを重量比１：４９で混合して成形し、化粧料（石鹸）を得た。
【００４０】
（成分分析）
２０倍濃縮エキスおよび比較例であるツルレイシの果実の各々に含まれる成分等を分析した。分析項目は、タンパク質含有量、カルシウム含有量、ＯＲＡＣ値、ＡＣＥ活性阻害能力及びキニーネの含有量である。
【００４１】
（タンパク質）
２０倍濃縮エキス（実施例）又はツルレイシの果実（比較例）１００ｇあたりのタンパク質の含有量を、ケルダール法（タンパク質換算係数：６．２５）により測定した。測定結果は、２０倍濃縮エキス（実施例）が１７．０ｇ、ツルレイシの果実（比較例）が１１．７ｇであった。
【００４２】
この分析結果から、２０倍濃縮エキス（実施例）は、ツルレイシの果実（比較例）と比べて、１．５倍以上のタンパク質を含有していることがわかる。また、たとえば、大豆１００ｇあたりに含まれるタンパク質が３３.０ｇ（五訂日本食品標準成分表より）であることを考慮すれば、本発明のツルレイシの葉及び茎は、それと同等量のタンパク質を含有していることがわかる。
【００４３】
（カルシウム含有量）
２０倍濃縮エキス（実施例）およびツルレイシの果実（比較例）１００ｇあたりのカルシウムの含有量を、ＩＣＰ（Ｉｎｄｕｃｔｉｖｅｌｙ  Ｃｏｕｐｌｅｄ  Ｐｌａｓｍａ）発光分析法により測定を行った。測定結果は、２０倍濃縮エキス（実施例）が２５５０ｍｇ、ツルレイシの果実（比較例）が２４．０ｍｇであった。
【００４４】
この分析結果から、２０倍濃縮エキス（実施例）は、ツルレイシの果実（比較例）と比べて、１４０倍弱のカルシウムを含有していることがわかる。カルシウムの栄養素等表示基準値（日本人の１日に必要な量の平均的な値）が７００ｍｇであることを考慮すれば、２０倍濃縮エキス（実施例）を約２０ｇ摂取することとすれば、上記基準値を満たすことができる。
【００４５】
（ＯＲＡＣ値）
２０倍濃縮エキス（実施例）又はツルレイシの果実（比較例）１ｇあたりのＯＲＡＣ（Ｏｘｙｇｅｎ  Ｒａｄｉｃａｌ  Ａｂｓｏｒｂａｎｃｅ  Ｃａｐａｃｉｔｙ：活性酸素吸収能力）値の分析を、Ｗｕらの方法（J. Agric. Food Chem., 2004, 52, 4026-2037）に基づいて行った。ここで、１μｍｏｌのＴｒｏｌｏｘが示す活性を単位とした。
【００４６】
図１は、本実施の形態におけるツルレイシ抽出物のＯＲＡＣ値の分析結果を示す表である。図１中の、Ｈ−ＯＲＡＣ値、Ｌ−ＯＲＡＣ値、Ｔｏｔａｌ−ＯＲＡＣ値は、それぞれ親水性画分のＯＲＡＣ値、親油性画分のＯＲＡＣ値、及びＨ−ＯＲＡＣ値とＬ−ＯＲＡＣ値の合計を示している。
【００４７】
この結果から、２０倍濃縮エキス（実施例）は、ツルレイシの果実（比較例）と比べて、３倍弱のＴｏｔａｌ−ＯＲＡＣ値を有しており、高い活性酸素吸収能力を有していることがわかる。
【００４８】
（ＡＣＥ活性阻害能力）
２０倍濃縮エキス（実施例）またはツルレイシの果実（比較例）における、ＡＣＥ（Ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ−Ｃｏｎｖｅｒｔｉｎｇ  Ｅｎｚｙｍｅ：アンジオテンシン変換酵素）の活性阻害率の測定を行った。測定は、Nakanoらの方法（Biosci. Biotechnol. Biochem.,
2006, 70, 1118-1126）に基づいて行った。具体的には、ＡＣＥにより基質（Ｈｉｐ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ）が分解されてジペプチドが生じ、この生じたジペプジドをオルトフタルアルデヒドにより蛍光化した後、反応物の蛍光強度を測定することにより、ＡＣＥの活性阻害率を分析した。測定に使用したマイクロプレートリーダーはＳｐｅｃｔｒａＭａｘ  Ｍ２ｅ、測定条件は蛍光（ｅｎｄｐｏｉｎｔモード、ボトムリード）、励起波長は３５５ｎｍ、蛍光波長は４６０ｎｍであった。測定結果のＡＣＥの活性阻害率は、２０倍濃縮エキス（実施例）が８７％、ツルレイシの果実（比較例）が３８％であった。
【００４９】
この分析結果から、２０倍濃縮エキス（実施例）は、ツルレイシの果実（比較例）と比べて、２倍以上のＡＣＥ活性阻害機能を有していることが分かり、２０倍濃縮エキス（実施例）が極めて高いＡＣＥ活性阻害能力を有していることがわかる。
【００５０】
（キニーネの含有量）
２０倍濃縮エキス（実施例）およびツルレイシの果実（比較例）１００ｇにおけるキニーネの含有量を測定した。測定は、高速液体クロマトグラフ法により行った。測定結果は、２０倍濃縮エキス（実施例）が５ｐｐｍ未満、ツルレイシの果実（比較例）が５ｐｐｍ以上であった。
【００５１】
この分析結果から、２０倍濃縮エキス（実施例）にはキニーネが５ｐｐｍ未満であり、これにより、２０倍濃縮エキス（実施例）を含有する経口用剤、皮膚外用剤、化粧料を、摂取・使用した場合、キニーネによる阻害を受けることなく、ツルレイシの有効成分を身体に対して効果的に摂取・利用することができることがわかる。
【００５２】
（ヒト皮膚線維芽細胞への賦活作用の検証試験）
２０倍濃縮エキス（実施例）におけるヒト皮膚線維芽細胞への賦活作用の検証試験を行った。具体的な試験方法としては、２０倍濃縮エキス（実施例）を培養液で１．５６μｇ／ｍｌ、３．１２５μｇ／ｍｌ、６．２５μｇ／ｍｌ、１２．５μｇ／ｍｌ、２５μｇ／ｍｌ、５０μｇ／ｍｌ、１００μｇ／ｍｌの７段階の濃度に希釈したものを、正常ヒト線維芽細胞（ＮＥＤＦ：Ｌｏｎｚａ社製）に対してそれぞれ添加し、培養した。４８時間後の細胞内脱水素酵素活性値をＭＴＴ法で測定することにより、細胞賦活性を分析した。
【００５３】
図２は、本実施の形態におけるツルレイシ抽出物の細胞賦活性の分析結果を示す表である。
【００５４】
図２中の検体のうち、Ｃｏｎｔｒｏｌは培養液のみでの試験結果を示している。また、陽性対象として、アスコルビン酸マグネシウムエステル（１ｍＭ）での試験結果も併せて示した。この分析結果から、２０倍濃縮エキス（実施例）の１．５６μｇ／ｍｌ、３．１２５μｇ／ｍｌ、６．２５μｇ／ｍｌにおいて、細胞生存率がそれぞれ１１６．２％、１１５．４％、１１４．９％と顕著な効果を示すことが明らかとなった。特に、２０倍濃縮エキス（実施例）の濃度１．５６μｇ／ｍｌでの細胞生存率は、陽性対象であるアスコルビン酸マグネシウムエステル（１ｍＭ）と比較しても、概ね同程度の細胞生存率を示した。これにより、陽性対象の濃度（１ｍＭ）の１／１８５の低濃度（１．５６μｇ／ｍｌ）において、２０倍濃縮エキス（実施例）は顕著な細胞増殖活性を示すことが分かった。
【００５５】
（マクロファージ機能賦活試験）
上述の２０倍濃縮エキスと同様の製法で、ツルレイシ葉の濃縮率を３０倍とした３０倍濃縮エキスを別途製造した。この３０倍濃縮エキスを粉末状にした被験物質について、マクロファージ機能賦活試験を行った。
【００５６】
ヒト単球系細胞株であるＴＨＰ−１細胞をＰＭＡ（マクロファージ分化誘導剤）存在下で、さらに被験物質処理下でＴＨＰ−１細胞をマクロファージ細胞へ分化させる。その後、疑似的に免疫反応を再現するために病原体の一部としてＬＰＳ（リボ核酸）を添加（被験物質も再処理）し、それにより誘導される免疫系サイトカイン遺伝子の発現を測定した。
【００５７】
（ヒト単球系細胞ＴＨＰ−１培養条件と分化誘導処理）
ヒト単球系細胞ＴＨＰ−１は、１０％のＦＢＳ、１％の抗生物質を添加したＲＰＭＩ−１６４０培地を用いて、ＣＯ２インキュベーター内で必要細胞数に達するまで培養した。インキュベーター内の雰囲気は、５％ＣＯ２、３７℃である。
【００５８】
マクロファージ分化処理は、以下のように行った。ヒト単球系細胞ＴＨＰ−１を３×１０５ｃｅｌｌｓ／０．３ｍＬ／ｗｅｌｌ：４８ｗｅｌｌ  Ｐｌａｔｅの各ウェルに播種した。播種と同時に、終濃度０．５ｍｇ／ｍＬとなるようにＰｈｏｒｂｏｌ  １２−Ｍｙｒｉｓｔａｔｅ  １３−Ａｃｅｔａｔｅ（ＰＭＡ）を添加した。その後、ＣＯ２インキュベーター内で培養した。インキュベーター内の雰囲気は、５％ＣＯ２、３７℃である。培養期間は、４日間である。
【００５９】
マクロファージに分化した細胞は、プレート底面に接着する。マクロファージへと分化したことを確認するため、非特異的エステラーゼ染色を施した。これにより、単球（マクロファージ前駆細胞）およびマクロファージ細胞へ分化したことを確認した。
【００６０】
（被験物質の調整）
被験物質の調整は、以下の通り行った。被験物質が０．１ｗ／ｖ％、０．２ｗ／ｖ％、０．５ｗ／ｖ％、１、５ｗ／ｖ％、および、１０ｗ／ｖ％となるようにＴＨＰ−１培養培地に添加し、６つの濃度の被験物質のそれぞれを１０分間撹拌した（ボルテックス処理）。撹拌後に、１２，０００ｇ、５分間の遠心分離により、不溶性成分（沈殿物）を除去した。その後、上清を滅菌フィルターにてろ過滅菌して、試験に供した。
【００６１】
（細胞毒性試験）
細胞毒性試験は、以下の通り行った。ヒト単球系細胞ＴＨＰ−１を１．２×１０５ｃｅｌｌｓ／０．３ｍＬ／ｗｅｌｌ：９６ｗｅｌｌ  Ｐｌａｔｅの各ウェルに播種した。播種と同時に、終濃度０．５ｍｇ／ｍＬとなるようにＰｈｏｒｂｏｌ  １２−Ｍｙｒｉｓｔａｔｅ  １３−Ａｃｅｔａｔｅ（ＰＭＡ）を添加した。また、終濃度０．０００００６４％〜１０％となるように被験物質を添加した。その後、ＣＯ２インキュベーター内で培養した。インキュベーター内の雰囲気は、５％ＣＯ２、３７℃である。培養期間は、４日間である。
【００６２】
培養終了後に培養上清を除去し、終濃度１０％の性細胞数測定試薬（ＷＳＴ−８）を含む培地をウェルごとに１００ｍＬ添加した。その後、再び培養し、３０分後および９０分後の各ウェルの吸光度を測定した。吸光度の測定の際の測定波長は４５０ｎｍ、参照波長は６３０ｎｍである。これらの値から１時間当たりの吸光度変化量を求め、生細胞数を算出した。
【００６３】
図３は、本実施の形態におけるマクロファージ機能賦活試験でのマクロファージ細胞の細胞毒性試験の結果を示すグラフである。図３には、被験物質ごとの細胞生存率を示した。図３において、コントロールは、被験物質を含まない培地のみの処理区の生細胞数である。
【００６４】
図３から、被験物質濃度が０．００４％以下であれば、生細胞数は被験物質と同程度であることがわかる。このため、０．００４％以下の濃度であれば、被験物質の細胞毒性はないと言える。
【００６５】
被験物質濃度が０．０２％濃度区では、コントロールの約５０％の生細胞数であった。一般にコントロールの８０％以下の生細胞数で細胞毒性ありと判断することから、０．０２％濃度区では細胞毒性ありと認められる。また、０．１％濃度以上では強い毒性を示していると言える。これらの結果から、限界の被験物質作用を検証するため、本試験での最高濃度は０．０１％とした。
【００６６】
（本試験）
本試験は、以下の通り行った。ヒト単球系細胞ＴＨＰ−１を３×１０５ｃｅｌｌｓ／０．３ｍＬ／ｗｅｌｌ：４８ｗｅｌｌ  Ｐｌａｔｅの各ウェルに播種した。播種と同時に、終濃度０．５μｇ／ｍＬとなるようにＰｈｏｒｂｏｌ  １２−Ｍｙｒｉｓｔａｔｅ  １３−Ａｃｅｔａｔｅ（ＰＭＡ）を添加した。また、終濃度０．００２５％、０．００５％、０．０１％となるように被験物質を添加した。その後、ＣＯ２インキュベーター内で培養した。インキュベーター内の雰囲気は、５％ＣＯ２、３７℃である。培養期間は、４日間である。
【００６７】
その後、各濃度の被験物質を含むＬＰＳ含有培地に交換し、２時間、５時間、および、２４時間培養した。ＬＰＳの終濃度は１μｇ／ｍＬである。培養終了後、各細胞からトータルＲＮＡを回収し、リアルタイムＰＣＲ法によって、各種サイトカイン遺伝子発現解析を行った。
【００６８】
（ＲＮＡ回収とリアルタイムＰＣＲ解析）
培養終了後の各接着細胞プレートを４８ウェルプレートのウェルに移し替え、トータルＲＮＡの抽出を行った。
【００６９】
図４は、本実施の形態におけるマクロファージ機能賦活試験に用いたプライマー配列を示す表である。図４には、試験に使用したＴＮＦ−α、ＩＬ−８、ＩＬ−１ａ、ＩＬ−１ｂ、ＩＬ−１２Ａ、ＩＬ−１５、ＩＬ−１８の特異的プライマー、および、内部標準としたＧＡＤＰＨの特異的プライマーのプライマー配列を示した。図５は、本実施の形態におけるマクロファージ機能賦活試験のＰＣＲ反応条件を示すグラフである。
【００７０】
各遺伝子に対するプライマーは、各遺伝子３対を遺伝子配列情報から設計し、リアルタイムＰＣＲを行い、非特異的ＰＣＲ産物（プライマーダイマー、複数のＰＣＲ産物、推定とは異なるＰＣＲ産物）がないことを確認した。
【００７１】
各遺伝子の増幅曲線と閾値線との交点より、Ｃｔ値（ＰＣＲサイクル数）を算出した。目的遺伝子のＣＴ値より内部標準ＧＡＰＤＨ２遺伝子のＣｔ値を引いたＣｔ（目的遺伝子）−Ｃｔ（ＧＡＰＤＨ２）＝ΔＣｔ値である。さらに、ΔＣｔ値よりプランクの平均ΔＣｔ値を引いたΔＣｔ（サンプル処理区）−ΔＣｔ（ブランク区）＝ΔΔＣｔ値とする。ΔΔＣｔ値を乗数項に代入した２ΔΔＣｔ値が相対発現量となる。
【００７２】
図６は、本実施の形態におけるマクロファージ機能賦活試験のマクロファージでのサイトカイン遺伝子ＴＮＦ−α発現に及ぼす被験物質の効果を示すグラフである。図７は、本実施の形態におけるマクロファージ機能賦活試験のマクロファージでのサイトカイン遺伝子ＩＬ−８発現に及ぼす被験物質の効果を示すグラフである。図８は、本実施の形態におけるマクロファージ機能賦活試験のマクロファージでのサイトカイン遺伝子ＩＬ−１ａ発現に及ぼす被験物質の効果を示すグラフである。図９は、本実施の形態におけるマクロファージ機能賦活試験のマクロファージでのサイトカイン遺伝子ＩＬ−１ｂ発現に及ぼす被験物質の効果を示すグラフである。図１０は、本実施の形態におけるマクロファージ機能賦活試験のマクロファージでのサイトカイン遺伝子ＩＬ−１２Ａ発現に及ぼす被験物質の効果を示すグラフである。図１１は、本実施の形態におけるマクロファージ機能賦活試験のマクロファージでのサイトカイン遺伝子ＩＬ−１５発現に及ぼす被験物質の効果を示すグラフである。図１２は、本実施の形態におけるマクロファージ機能賦活試験のマクロファージでのサイトカイン遺伝子ＩＬ−１８発現に及ぼす被験物質の効果を示すグラフである。図６〜図１２において、縦軸は、遺伝子の発現率である。
【００７３】
ＬＰＳ短期刺激（２〜５時間）では促進的に被験物質が作用していた。一方、ＬＰＳ長期刺激（２４時間）では逆に抑制的に被験物質が作用していた。
【００７４】
細菌やウイルスなどの病原体が体内に侵入した場合、それらに冒されることを防ぐために免疫機構が動物には一般的に備わっている。肺や気管を通じて体内に侵入した病原体は、まず、マクロファージ細胞によって異物として認識され、少数の病原体であればマクロファージ自体が病原体を捕食し、除去する。しかし、多数の病原体が侵入した場合、マクロファージ細胞だけでは対処できないので、他の免疫細胞に助けを求める。このとき助けを求める信号としてサイトカインが用いられる。今回の試験では、マクロファージから発せられる全てのサイトカイン種（ＴＮＦ−α、ＩＬ−１ａ、ＩＬ−１ｂ、ＩＬ−１２Ａ、ＩＬ−８、ＩＬ−１５およびＩＬ−１８）を測定した。
【００７５】
マクロファージ細胞から「助け」の信号を受け取った交代細胞は、病原菌に対する特異的な抗体を生産、分泌する。これにより抗体が病原菌と結合し、包み込むことで病原菌が封じ込められる。一方、「助け」の信号を受け取った脂肪細胞は、かゆみの成分でヒスタミンを分泌する。これにより、喉などの気管では咳・くしゃみ・痰、眼では涙が分泌され、病原菌を体外に流しだそうとする。また、マクロファージ細胞からは、細胞を死に導くサイトカイン（ＴＮＦ−α）も分泌される。病原菌による破壊された細胞を速やかに除去し、新たな細胞に亢進するためである。これらヒスタミンや細胞死を導くサイトカインの作用を炎症という。
【００７６】
このような免疫反応では、病原菌感染初期、今回の試験ではＬＰＳ処理時間２〜５時間に相当、では、素早い応答が必要である。多くのサイトカイン種において被験物質によりサイトカインが促進的に作用していた。これから、病原菌に対し素早く応答することができることがわかる。
【００７７】
一方、感染後期において病原体を制圧したにもかかわらず、免疫応答反応が進行したままであると、過剰な炎症反応を起こす可能性がある。本実施の形態の被験物質処理でＬＰＳ処理２４時間後には、多くのサイトカイン種で抑制的に作用していた。このことから、過剰な炎症反応を抑制していることがわかる。
【００７８】
以上の結果から、本実施の形態の被験物質には、感染初期では素早い免疫反応（賦活性）があり、感染後期では過剰な炎症を抑える働きがあることがわかった。つまり、ツルレイシ抽出物は免疫賦活剤として用いることができる。また、ツルレイシ抽出物を抗ＴＮＦ−α剤として用いることができる。
【００７９】
（αグルコシターゼ（ＡＧＨ）活性阻害）
ツルレイシのαグルコシターゼ（ＡＧＨ）活性阻害を分析した。ここでは、摘蕾あるいは摘花しないツルレイシについて分析した。
【００８０】
まずツルレイシの粉黛試料約１．０ｇを５０％エタノール溶液２０ｍｌで抽出後、０．０５ｍｏｌ／ｌリン酸塩緩衝液（ｐＨ６．７）にて１０倍に希釈して資料溶液を調整した。この試料溶液について、八巻らの方法（八巻幸二、森隆、「簡便なα―グルコシターゼ抑制活性測定法：抑制曲線の傾きを用いる方法」、日本食品化学工学会誌、５３、４、２２９−２３１（２００６））により、α−グルコシターゼ（ＡＧＨ）活性を測定した。すなわち、基質としてｐ−ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｌ−α―Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｌａｎｏｓｉｄｅを用い、ＡＧＨにより分解して生じるｐ−ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｌの吸光度を測定してＡＧＨ活性を分析した。
【００８１】
試験溶液を加えない未処理区の活性を１００％とした場合の相対ＡＧＨ活性を求めた。この際、ＡＧＨの阻害薬であるデオキシノジリマイシン溶液（濃度０．２μｇ／ｍｌ）について同条件について試験を行い、陽性対照区とした。
【００８２】
図１３は、本実施の形態におけるツルレイシ試料の相対ＡＧＨ活性の分析結果のグラフである。
【００８３】
ツルレイシ試料の抽出液の相対ＡＧＨ活性は、未処理区の８６％であった。したがって、ツルレイシの抽出液には、ＡＧＨ活性阻害成分が存在することがわかった。よって、ツルレイシ抽出物は、血糖値抑制剤として用いることができる。
【００８４】
（アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）活性阻害）
ツルレイシのアンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）活性阻害を分析した。ここでは、摘蕾あるいは摘花しないツルレイシについて分析した。
【００８５】
まずツルレイシの粉黛試料約１．０ｇを５０％エタノール溶液２０ｍｌで抽出後、０．０５ｍｏｌ／ｌのＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ８．３）にて１０倍に希釈して試料溶液５ｍｇ／ｍｌを調整した。この試料溶液について、Ｎａｋａｎｏらの方法（Ｎａｋａｎｏ  ｅｔ．  ａｌ．、Ｂｉｏｓｃｉ．  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．、７０、１１１８−１１２６（２００６））により、α−グルコシターゼ（ＡＧＨ）活性を測定した。すなわち、基質から、ＡＣＥにより分解して生じるジペプチドをオルトフタルアルデヒドにより蛍光化した後、反応物の蛍光強度を測定してＡＣＥ活性を分析した。
【００８６】
試験溶液を加えない未処理区の活性を１００％とした場合の相対ＡＣＥ活性を求めた。この際、アンジオテンシン阻害薬であるデオカプトプリル溶液（濃度１０ｎｍｏｌ／ｍｌ）について同条件について試験を行い、陽性対照区とした。
【００８７】
図１４は、本実施の形態におけるツルレイシ試料の相対ＡＣＥ活性の分析結果のグラフである。
【００８８】
ツルレイシ試料の抽出液の相対ＡＣＥ活性は、未処理区の１３％であった。したがって、ツルレイシの抽出液には、ＡＣＥ活性阻害成分が存在することがわかった。
【００８９】
（ＡＧＥ産生抑制能測定試験）
ツルレイシのＡｄｖａｎｃｅｄ  Ｇｌｙｃａｔｉｏｎ  Ｅｎｄｐｒｏｄｕｃｔｓ（ＡＧＥｓ）生産抑制能を分析した。ここでは、摘蕾あるいは摘花しないツルレイシについて分析した。
【００９０】
まずツルレイシの粉黛試料約１．０ｇを５０％エタノール溶液２０ｍｌで抽出後、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離し、上清を試験溶液とした。この試料溶液について、Ｌｅｅらの方法（Ｌｅｅ  ｅｔ．  ａｌ．、Ｂｉｏｌ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｂｕｌｌ．、３１、１６２６−１６３０（２００８））により、ＡＧＥｓ生産抑制能を測定した。すなわち、１．５ｍｌマイクロチューブに１００ｍｇ／ｍｌ牛血清アルブミン（ＢＳＡ）溶液１００μｌ、２００ｍｇ／ｍｌのＤ−グルコース溶液５００μｌ、試験溶液２０μｌおよび１／１５ｍｏｌ／ｌのリン酸緩衝液（ｐＨ７．２）を３８０μｌ加えた後、６０℃で４８時間維持したものを反応溶液とした。この反応溶液２０μｌをマイクロプレートに加え、水２００μｌを加えた後。マイクロプレートリーダーで蛍光強度を測定した。
【００９１】
反応溶液を加えない未処理区の活性を１００％とした場合のＡＧＥｓ生産抑制能を求めた。励起波長は３７０ｎｍである。蛍光波長は４４０ｎｍである。
【００９２】
図１５は、本実施の形態におけるツルレイシ試料のＡＧＥｓ生産抑制能の分析結果のグラフである。
【００９３】
ツルレイシ試料の抽出液のＡＧＥｓ生産抑制能は、未処理区の４０％であった。したがって、ツルレイシの抽出液には、ＡＧＥｓ生産抑制能を有することがわかった。よって、ツルレイシ抽出物は、ＡＧＥｓ産生抑制剤・糖尿病抑制剤として用いることができる。
【００９４】
（経口毒性試験）
雌マウスを用いてツルレイシの急性経口毒性試験（限度試験）を行った。５週齢のＩＣＲ系雌マウスを用い、約１週間の予備飼育を行って一般状態に異常のないことを確認した。試験群および対照群はいずれも５匹とした。試験群には２０００ｍｇ／ｋｇの用量の検体を、対照群には溶媒対照として注射用水を雌マウスに単回経口投与し、１４日間観察を行った。その結果、観察期間中に異常および死亡例は認められなかった。以上のことから、マウスを用いる単回経口投与において、検体のＬＤ５０値は、雌では２０００ｍｇ／ｋｇを超えるものと評価した。
【００９５】
（抗菌力試験）
ツルレイシのジンジバリス菌およびミュータンス菌に対する抗菌力を分析した。ここでは、摘蕾あるいは摘花しないツルレイシについて分析した。試験方法は、ＪＩＳ  Ｌ  １９０２：２００８「繊維製品の抗菌性試験方法および抗菌効果」９  定性試験（ハロー法）を参考にした。この試験の結果、ジンジバリス菌に対しては、ハロー（増殖禁止帯）の存在が認められた。したがって、ツルレイシは、ジンジバリス菌に対しては抗菌性を有することがわかった。
【００９６】
（ヒト皮膚線維芽細胞への賦活作用）
２０倍濃縮エキス（実施例）におけるヒト皮膚線維芽細胞への賦活作用の検証試験を行った。具体的な試験方法としては、２０倍濃縮エキス（実施例）を培養液で１．５６μｇ／ｍｌ、３．１２５μｇ／ｍｌ、６．２５μｇ／ｍｌ、１２．５μｇ／ｍｌ、２５μｇ／ｍｌ、５０μｇ／ｍｌ、１００μｇ／ｍｌの７段階の濃度に希釈したものを、正常ヒト線維芽細胞（ＮＥＤＦ：Ｌｏｎｚａ社製）に対して夫々添加し、培養した。４８時間後の細胞内脱水素酵素活性値をＭＴＴ法で測定することにより、細胞賦活性の検討を行った。
【００９７】
図１６は、本実施の形態におけるヒト皮膚線維芽細胞への賦活作用の検証試験の結果を示すグラフである。
【００９８】
図１６中の検体のうち、Ｃｏｎｔｒｏｌは培養液のみでの試験結果を示している。また、陽性対象として、アスコルビン酸マグネシウムエステル（１ｍＭ）での試験結果も、表中に併せて示している。この試験結果により、２０倍濃縮エキス（実施例）の１．５６μｇ／ｍｌ、３．１２５μｇ／ｍｌ、６．２５μｇ／ｍｌにおいて、細胞生存率が夫々１１６．２％、１１５．４％、１１４．９％と顕著な効果を示すことが明らかとなった。特に、２０倍濃縮エキス（実施例）の濃度１．５６μｇ／ｍｌでの細胞生存率は、陽性対象であるアスコルビン酸マグネシウムエステル（１ｍＭ）と比較しても、概ね同程度の細胞生存率を示した。これにより、陽性対象の濃度（１ｍＭ）の１／１８５の低濃度（１．５６μｇ／ｍｌ）において、２０倍濃縮エキス（実施例）は顕著な細胞増殖活性を示すことが分かった。
【図１】
2019001764.tif 000002
【図２】
2019001764.tif 000003
【図３】
2019001764.tif 000004
【図４】
2019001764.tif 000005
【図５】
2019001764.tif 000006
【図６】
2019001764.tif 000007
【図７】
2019001764.tif 000008
【図８】
2019001764.tif 000009
【図９】
2019001764.tif 000010
【図１０】
2019001764.tif 000011
【図１１】
2019001764.tif 000012
【図１２】
2019001764.tif 000013
【図１３】
2019001764.tif 000014
【図１４】
2019001764.tif 000015
【図１５】
2019001764.tif 000016
【図１６】
2019001764.tif 000017
【手続補正書】
【提出日】平成30年5月7日(2018.5.7)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ツルレイシの葉または茎の抽出物を含有する免疫賦活剤。
【請求項２】
前記ツルレイシは着花した花および着蕾した蕾の少なくとも一部を除去しながら栽培されたものであることを特徴とする請求項１に記載の免疫賦活剤。
【請求項３】
ツルレイシの葉または茎の抽出物を含有する血糖値抑制剤。
【請求項４】
ツルレイシの葉または茎の抽出物を含有するＡＧＥｓ生産抑制剤。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００６】
上述の目的を達成するため、本発明は、免疫賦活剤、血糖値抑制剤またはＡＧＥｓ生産抑制剤がツルレイシの葉または茎の抽出物を含有することを特徴とする。