(57)【要約】【課題】  抗菌剤投与による療法では、必ずしも、効果的に治療できない重度感染症の治療に役立つ治療用組成物を提供する。【解決手段】  重度感染症に起因し、致死性の多臓器障害が抑制さるのに使用するために、治療用組成物の有効成分として、親水部がポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、疎水部がポリスチレンからなり、その疎水部側鎖にラジカル消去機能を有する環状ニトロキシドラジカルがそれぞれ共有結合したブロック共重合体を含有する組成物、並びに、重度感染症を緩和又は治療するための、該ブロック共重合体と抗菌剤を組み合わせ使用する組成物が提供される。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（Ｉ）で表されるブロック共重合体を有効成分として含んでなる致死性の高い感染症に随伴し、多臓器不全をもたらし得る多臓器障害を抑制するための組成物。
【化１】
2019001786.tif 000010
式中、
Ａは、非置換または置換Ｃ1−Ｃ12アルコキシを表し、置換されている場合の置換基は
、ホルミル基、式Ｒ'Ｒ"ＣＨ−基を表し、ここで、Ｒ'およびＲ"は独立してＣ1−Ｃ4アルコキシまたはＲ'とＲ"は一緒になって−ＯＣＨ2ＣＨ2Ｏ−、−Ｏ（ＣＨ2）3Ｏ−もしくは−Ｏ（ＣＨ2）4Ｏ−を表し、
Ｌ1は、直接結合又は二価の連結基を表し、
Ｘは、Ｌ2−Ｒ1又はクロロ若しくはブロモ若しくはヒドロキシルを表し、Ｌ2は−（Ｃ
Ｈ2）a−Ｏ−（ＣＨ2）a−であり、Ｒ1は、２，２，６，６−テトラメチルピペリジン−
１−オキシル−４−イル、２，２，５，５−テトラメチルピペロリジン−１−オキシル−３−イル、２，２，５，５−テトラメチルピペロリン−１−オキシル−３−イル、２，４，４−トリメチル−１，３−オキサゾリジン−３−オキシル−２−イル、２，４，４−トリメチル−１，３−チアゾリジン−３−オキシル−２−イル、２，４，４−トリメチル−イミダゾリジン−３−オキシル−２−イルから選ばれ、かつ、ｎ個のＸの少なくとも５０％はＬ2−Ｒ1であり、
各ａは、独立して０〜５の整数であり、
ｂは１〜５の整数であり、
ｋは１〜１８の整数であり、
ｍは２〜１０，０００の整数を表し、
ｎは３〜１００の整数を表し、
ＺはＨ、ＳＨまたはＳ（Ｃ＝Ｓ）−Ｐｈであり、Ｐｈは１または２個のメチルまたはメトキシで置換されていてもよいフェニルを表す。
【請求項２】
致死性の高い感染症の予防又は治療用組成物であって、下記式（Ｉ）で表されるブロック共重合体と前記感染症の病原体に対して抗菌活性を有する抗菌剤を有効成分として含んでなる、組成物。
【化２】
2019001786.tif 000011
式中、
Ａは、非置換または置換Ｃ1−Ｃ12アルコキシを表し、置換されている場合の置換基は
、ホルミル基、式Ｒ'Ｒ"ＣＨ−基を表し、ここで、Ｒ'およびＲ"は独立してＣ1−Ｃ4アルコキシまたはＲ'とＲ"は一緒になって−ＯＣＨ2ＣＨ2Ｏ−、−Ｏ（ＣＨ2）3Ｏ−もしくは−Ｏ（ＣＨ2）4Ｏ−を表し、
Ｌ1は、直接結合又は二価の連結基を表し、
Ｘは、Ｌ2−Ｒ1又はクロロ若しくはブロモ若しくはヒドロキシルを表し、Ｌ2は−（Ｃ
Ｈ2）a−Ｏ−（ＣＨ2）a−であり、Ｒ1は、２，２，６，６−テトラメチルピペリジン−
１−オキシル−４−イル、２，２，５，５−テトラメチルピペロリジン−１−オキシル−３−イル、２，２，５，５−テトラメチルピペロリン−１−オキシル−３−イル、２，４，４−トリメチル−１，３−オキサゾリジン−３−オキシル−２−イル、２，４，４−トリメチル−１，３−チアゾリジン−３−オキシル−２−イル、２，４，４−トリメチル−イミダゾリジン−３−オキシル−２−イルから選ばれ、かつ、ｎ個のＸの少なくとも５０％はＬ2−Ｒ1であり、
各ａは、独立して０〜５の整数であり、
ｂは１〜５の整数であり、
ｋは１〜１８の整数であり、
ｍは２〜１０，０００の整数を表し、
ｎは３〜１００の整数を表し、
ＺはＨ、ＳＨまたはＳ（Ｃ＝Ｓ）−Ｐｈであり、Ｐｈは１または２個のメチルまたはメトキシで置換されていてもよいフェニルを表す。
【請求項３】
Ｒ1が、式
【化３】
2019001786.tif 000012
式中、Ｒ’はメチルである、
のいずれかであり、請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項４】
Ｌ1が式
【化４】
2019001786.tif 000013
で表される基から選ばれるか、または
−（ＣＨ2）2−Ｏ−Ｌ1−部分は、単結合、−（ＣＨ2）bＳ−、−ＣＯ（ＣＨ2）bＳ−、
−（ＣＨ2）bＮＨ−、−（ＣＨ2）bＣＯ−、−ＣＯ−、−ＯＣＯＯ−、−ＣＯＮＨ−からなる群より選ばれ連結基により置換されていてもよく、Ｌ2がは−Ｏ−である、請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項５】
致死性の高い感染症がリステリア（Ｌｉｓｔｅｒｉａ）感染症、マラリア、コレラ、ジカ熱、デング熱、サルモネラ菌感染症、エボラ出血熱から選ばれる、請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項６】
致死性の高い感染症がリステリア（Ｌｉｓｔｅｒｉａ）感染症であり、抗菌剤の投与前後又は同時にブロック共重合体が投与されるものである、請求項２に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、感染症治療又は予防に有用な組成物に関する。具体的には、親水部としてポリエチレングリコール（ＰＥＧ）セグメントを、そして疎水部として、ポリスチレンからなり、その疎水部側鎖にラジカル消去機能を有する環状ニトロキシドラジカルが共有結合したセグメントを含んでなるブロック共重合体を有効成分として含んでなり、さらに適当な抗菌剤が組み合わさっていてもよい、致死性の高い感染症に随伴する多臓器不全をもたらし得る多臓器障害の抑制用、並びに前記感染症の予防又は治療用組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
細菌・ウイルス・寄生虫等の病原体が体内に侵入することで引き起こされる種々の感染症は、感染直後に免疫応答により活性酸素種が大量に産生され、それに伴い大量の炎症性サイトカインが産生されることが知られている。その結果、全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）、さらには多臓器不全が併発され感染症患者を死に至らしめることが、当該技術分野では知られている。現在のところ、各臓器の機能不全を個々に治療することは可能であるが、これらが関連して一時に発生した場合、それぞれに対処していく以外に治療法がない。このことから、多臓器不全の状態に陥る以前にこれを予防することが重要であり、その前段階であるＳＩＲＳの時点で対策を講じることが必要である。勿論、感染症、敗血症等、重症化した感染症治療における伝統的な療法として抗生物質療法等があるが、抗生物質投与による炎症反応の悪化や、抗生物質自体のスペクトル範囲の制限からすべての細菌を駆逐することは困難であり、二次感染の可能性を否定しきれない。
【０００３】
このような観点から、抗酸化物質を投与することにより感染症の治療効果を改善する試みが提案され、また、抗酸化剤（例えば、Ｎ−アセチルシステイン）と特定臓器の障害を軽減するための薬剤（デフェロキサミン）等を併用することも提案されている（非特許文献１：Ｃｒｉｓｔｉａｎｅ  Ｒｉｔｔｅｒ，ｅｔ．ａｌ．，Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ
２００４，Ｖｏｌ．３２，Ｎｏ．２，３４２−３４９及びそこで引用されている他の非特許文献参照）。この他の非特許文献の中には、テンポール（ｔｅｍｐｏｌ：４−ヒドロキシ−２，２，６，６−テトラメチルピペリジン−Ｎ−オキシル）、α−トコフェロール、アロプリノール、デフェロキサミン、カタラーゼ、スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）等について説明されている。例えば、非特許文献２：Ｃｈｒｉｓｔｏｐｈ  Ｔｈｉｅｍｅｒｍａｎｎ，Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ  ２００３，Ｖｏｌ．３１，Ｎｏ．１，Ｓ７６−Ｓ８４には、ｔｅｍｐｏｌは、高分子である組換えＳＯＤとは異なり、生物学的膜透過性であり、細胞質ゾルに蓄積する機序をとおして循環性ショック、虚血再還流障害、炎症を抑制することが示唆されている。
【０００４】
一方、本発明者等は、生体内における過剰な活性酸素種の産生又は存在に起因すると推測される各種障害を予防又は治療するものとして、親水部としてポリエチレングリコール（ＰＥＧ）セグメントを、そして疎水部として、ポリスチレンからなり、その疎水部側鎖にラジカル消去機能を有する環状ニトロキシドラジカルが共有結合したセグメントを含んでなるブロック共重合体を提案した（特許文献１：ＷＯ  ２０１３／１１８７８３参照）。また、同様のブロック共重合体が、抗がん剤の効果を向上させることの知られているデキサメタゾンに代わり一定の抗がん剤の効果を高めるために使用できることも知られている（特許文献２：特開２０１２−０６７０２５）。
【０００５】
しかし、かようなブロック共合体が、細菌の感染、特に、多臓器不全に至るような、敗血症等の重症化した感染症の予防又は治療に役立ち得るかについては知られていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】ＷＯ  ２０１３／１１８７８３
【特許文献２】特開２０１２−０６７０２５
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Ｃｒｉｓｔｉａｎｅ  Ｒｉｔｔｅｒ，ｅｔ．ａｌ．，Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ  ２００４，Ｖｏｌ．３２，Ｎｏ．２，３４２−３４９
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本願発明は、細菌・ウイルス・寄生虫の感染、特に、多臓器不全に至るような、敗血症等の重症化した感染症の緩徐、予防又は治療に役立ち得る手段を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
前述したブロック共重合体は、必ずしも、抗生物質等の抗菌剤による治療が効果的に行われない感染症であって、敗血症等をもたらし、多臓器不全を併発し得ることで患者を死に至らしめるリステリア症又はリステリア（Ｌｉｓｔｅｒｉａ）感染症において、多臓器不全をもたらし得る多臓器障害を抑制でき、また、マラリア又はマラリアの感染モデル(Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｓｐｐ．)を有意に延命できることが、ここに、見出された。さらに、前記感染症において、多臓器障害を抑制できる態様で、を前記感染症に適用するとともに、前記感染症の感染体に対して前記ブロック共重合体する抗菌剤を併用すると、抗菌剤による療法では効果的に予防又は治療できない感染症であっても、効果的に感染症を予防又は治療できることも、ここに見いだされた。
【００１０】
かような、前記ブロック共重合体の作用効果は、リステリア症又はマラリアと同様に感染直後に大量のサイトカインと活性酸素種を産生し得る感染症の予防又は治療において、同等に見出された。
【００１１】
したがって、本発明の課題は、主として、次のような態様又は特徴を備えた発明を提供することにより解決できる。
【００１２】
態様１：  下記式（Ｉ）で表されるブロック共重合体を有効成分として含んでなる、致死性の高い感染症に随伴し、多臓器不全をもたらし得る多臓器障害を抑制するための組成物。
【００１３】
【化１】
2019001786.tif 000002
【００１４】
式中、
Ａは、非置換または置換Ｃ1−Ｃ12アルコキシを表し、置換されている場合の置換基は、ホルミル基、式Ｒ'Ｒ"ＣＨ−基を表し、ここで、Ｒ'およびＲ"は独立してＣ1−Ｃ4アルコキシまたはＲ'とＲ"は一緒になって−ＯＣＨ2ＣＨ2Ｏ−、−Ｏ（ＣＨ2）3Ｏ−もしくは−Ｏ（ＣＨ2）4Ｏ−を表し、
Ｌ1は、直接結合又は二価の連結基、例えば、式
【００１５】
【化２】
2019001786.tif 000003
【００１６】
で表される基から選ばれるか、または
−（ＣＨ2）2−Ｏ−Ｌ1−部分は、単結合、−（ＣＨ2）bＳ−、−ＣＯ（ＣＨ2）bＳ−、
−（ＣＨ2）bＮＨ−、−（ＣＨ2）bＣＯ−、−ＣＯ−、−ＯＣＯＯ−、−ＣＯＮＨ−からなる群より選ばれ連結基により置換されていてもよく、
Ｘは、Ｌ2−Ｒ1又はクロロ若しくはブロモ若しくはヒドロキシルを表し、Ｌ2は−（Ｃ
Ｈ2）a−Ｏ−（ＣＨ2）a−であり、Ｒ1は、２，２，６，６−テトラメチルピペリジン−
１−オキシル−４−イル、２，２，５，５−テトラメチルピペロリジン−１−オキシル−３−イル、２，２，５，５−テトラメチルピペロリン−１−オキシル−３−イル、２，４，４−トリメチル−１，３−オキサゾリジン−３−オキシル−２−イル、２，４，４−トリメチル−１，３−チアゾリジン−３−オキシル−２−イル、２，４，４−トリメチル−イミダゾリジン−３−オキシル−２−イルから選ばれ、かつ、ｎ個のＸの少なくとも５０％はＬ2−Ｒ1であり、
各ａは、独立して０〜５の整数であり、
ｂは１〜５の整数であり、
ｋは１〜１８の整数であり、
ｍは２〜１０，０００の整数を表し、
ｎは３〜１００の整数を表し、
ＺはＨ、ＳＨまたはＳ（Ｃ＝Ｓ）−Ｐｈであり、Ｐｈは１または２個のメチルまたはメトキシで置換されていてもよいフェニルを表す。
【００１７】
態様２：  致死性の高い感染症の予防又は治療用組成物であって、下記式（Ｉ）で表されるブロック共重合体と前記感染症の病原体に対して抗菌活性を有する抗菌剤を有効成分として含んでなる、組成物。
【００１８】
【化３】
2019001786.tif 000004
【００１９】
式中、
Ａは、非置換または置換Ｃ1−Ｃ12アルコキシを表し、置換されている場合の置換基は
、ホルミル基、式Ｒ'Ｒ"ＣＨ−基を表し、ここで、Ｒ'およびＲ"は独立してＣ1−Ｃ4アルコキシまたはＲ'とＲ"は一緒になって−ＯＣＨ2ＣＨ2Ｏ−、−Ｏ（ＣＨ2）3Ｏ−もしくは−Ｏ（ＣＨ2）4Ｏ−を表し、
Ｌ1は、直接結合又は二価の連結基、例えば、式
【００２０】
【化４】
2019001786.tif 000005
【００２１】
で表される基から選ばれるか、または
−（ＣＨ2）2−Ｏ−Ｌ1−部分は、単結合、−（ＣＨ2）bＳ−、−ＣＯ（ＣＨ2）bＳ−、
−（ＣＨ2）bＮＨ−、−（ＣＨ2）bＣＯ−、−ＣＯ−、−ＯＣＯＯ−、−ＣＯＮＨ−からなる群より選ばれ連結基により置換されていてもよく、
Ｘは、Ｌ2−Ｒ1又はクロロ若しくはブロモ若しくはヒドロキシルを表し、Ｌ2は−（Ｃ
Ｈ2）a−Ｏ−（ＣＨ2）a−であり、Ｒ1は、２，２，６，６−テトラメチルピペリジン−
１−オキシル−４−イル、２，２，５，５−テトラメチルピペロリジン−１−オキシル−３−イル、２，２，５，５−テトラメチルピペロリン−１−オキシル−３−イル、２，４，４−トリメチル−１，３−オキサゾリジン−３−オキシル−２−イル、２，４，４−トリメチル−１，３−チアゾリジン−３−オキシル−２−イル、２，４，４−トリメチル−イミダゾリジン−３−オキシル−２−イルから選ばれ、かつ、ｎ個のＸの少なくとも５０％はＬ2−Ｒ1であり、
各ａは、独立して０〜５の整数であり、
ｂは１〜５の整数であり、
ｋは１〜１８の整数であり、
ｍは２〜１０，０００の整数を表し、
ｎは３〜１００の整数を表し、
ＺはＨ、ＳＨまたはＳ（Ｃ＝Ｓ）−Ｐｈであり、Ｐｈは１または２個のメチルまたはメトキシで置換されていてもよいフェニルを表す。
【００２２】
態様３：  Ｒ1が、式
【００２３】
【化５】
2019001786.tif 000006
【００２４】
式中、Ｒ’はメチルである、
のいずれかであり、態様１又は２に記載の組成物。
【００２５】
態様４：  Ｌ1が−ＣＨ2ＣＨ2Ｓ−又はパラキシリレン又はメタキシリレンであり、Ｌ2がは−Ｏ−である、態様１又は２に記載の組成物。
【００２６】
態様５：  致死性の高い感染症がリステリア（Ｌｉｓｔｅｒｉａ）感染症、マラリア、コレラ、ジカ熱、デング熱、サルモネラ菌感染症、エボラ出血熱から選ばれる、態様１又は２に記載の組成物。
【００２７】
態様６：  致死性の高い感染症がリステリア（Ｌｉｓｔｅｒｉａ）感染症であり、患者への抗菌剤の投与前に前記ブロック共重合体が投与されるものである、態様２に記載の組成物。
【００２８】
態様７：致死性の高い感染症がマラリアであり、マラリア原虫(Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ
ｓｐｐ．)の感染の前又は後に患者へ前記ブロック共重合体が投与されるものである、態様２に記載の組成物。
【発明の効果】
【００２９】
本発明によれば、致死性の高い感染症に随伴し、多臓器不全をもたらし得る多臓器障害を抑制するための有効成分として、式（Ｉ）で表されるブロック共重合体を含んでなる組成物が提供でき、また、かようなブロック共重合体と重度感染症に用いられてきた抗菌剤を組み合わせて使用することにより、効果的に前記感染症の予防又は治療をするための組成物が提供できる。このような組成物の有効成分たる共重合体の効果は、高分子である組換えＳＯＤとは異なり、非特許文献２に記載の低分子化合物ｔｅｍｐｏｌが生物学的膜透過性であることから循環性ショック、虚血再還流障害、炎症を効果的に抑制すると示唆されることに照らせば予想外のことである。
【図面の簡単な説明】
【００３０】
【図１】本発明に従う典型的なブロック共重合体とそれから調製されるレドックスナノ粒子（ＲＮＰ）の概念図
【図２】試験例１における、Ｌ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓによる肝臓障害の抑制作用を示す。
【図３】試験例１における、Ｌ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓによる肺障害の抑制作用を示す。
【図４】試験例１における、Ｌ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓによる脾臓障害の抑制作用を示す。
【図５】試験例２で実施される感染及び治療プログラムを示す。
【図６】試験例２の結果を表すグラフである。
【図７】試験例３で実施される感染及び治療プログラムを示す。
【図８】試験例３の結果を表すグラフである。
【図９】試験例４で実施される感染及びその処置プログラムを示す。
【図１０】試験例４におけるマラリア原虫感染後の増殖曲線を表す。
【図１１】試験例４におけるマラリア感染のＲＮＰ処置によるモデル動物の生存曲線を表す。
【図１２】試験例４における試験６日目のモデル動物について観察した結果を表す図に代わる写真を示す。
【発明の詳細な記述】
【００３１】
本願発明に関して用いる用語は、特に定義又は説明しない限り、それぞれ、当該技術分野で常用されている意味内容を有するものと、理解される。
【００３２】
致死性の高い感染症とは、それに随伴し、敗血症又は多臓器不全をもたらし得る多臓器障害を引き起こし、患者を死に至らしめる可能性の高い感染症を意味する。かような感染症の感染体としては、上記に定義した感染症を惹起するものであれば限定されるものでないが、リステリア感染症の感染体であるリステリア  モノサイトゲネス（Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）、マラリアの感染体であるマラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｓｓｐ．例えば、Ｐ．ｆａｌｃｉｐａｒａｎｓ等）、コレラの感染体であるコレラ菌（Ｖｉｂｒｉｏ  ｃｈｏｌｅｒａｅ）、ジカ熱の感染体であるジカウイルス（Ｚｉｋａ  ｖｉｒｕｓ）、デング熱の感染体であるデングウイルス（Ｄｅｎｇｕｅ  ｖｉｒｕｓ）、サルモネラ菌感染症の感染体であるサルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｅｎｔｅｒｉｃａ）、エボラ出血熱の感染体であるエボラウィルス（Ｅｂｏｌａ  ｖｉｒｕｓ）等を挙げることができる。
【００３３】
多臓器不全にいう多臓器は、生命を維持するために必須の臓器であって、特に、肝臓、肺、脾臓、腎臓をはじめとする臓器である。このような臓器の２つ以上に生じる障害が本発明で抑制することが意図されている多臓器障害である。このような障害は、動物における細胞又は臓器損傷の機構として知られている脂質過酸化反応の過程で生じる主要なマーカーであるマロンジアルデヒド（ＭＤＡ）を測定する、チオバルビツール酸反応生成物（ＴＢＡＲＳ：  Ｔｈｉｏｂａｒｂｉｔｕｒｉｃ  ａｃｉｄ  Ｒｅａｃｔｉｖｅ  Ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ）アッセイ法により評価できる（例えば、上記の非特許文献１にもＴＢＡＲＳについて言及されている）。したがって、当業者であれば、本発明にいう、致死性の高い感染症に随伴し、多臓器不全をもたらし得る多臓器障害を抑制するための組成物は、上記式（Ｉ）のブロック共重合体の定義に照らして、容易に確認できる。上記の抑制のためのブロック共重合体の個体（又は患者）への投与は、感染の前又は感染の後であっても新たな感染が生じるか若しくは感染の領域が拡大（亢進）する可能性がある場合に行われる。投与経路は、非経口の、腸管外の（胃腸管や肺を通過する以外の）方法による、静脈、皮下、筋肉、髄内、腹腔内等への注射による経路が選ばれる。
【００３４】
致死性の高い感染症の予防又は治療用組成物では、上記式（Ｉ）で表されるブロック共重合体と、適する場合には、前記感染症の病原体に対して抗菌活性又は抗原虫活性を有する抗菌剤又は抗原虫ワクチンが有効成分として含まれる。ここにいう、抗菌活性は、病原体を完全に死滅せしめる活性までを要求するものでなく、前述ブロック共重合体の多臓器障害の抑制作用若しくは効果と相俟って、感染症患者を回復させ、有意に生存率を高めるように作用するものであればよい。このような抗菌剤としては、病原体により変動するため特定できないが、一般的に、通常の感染症や敗血症の治療に用いられている各種抗菌剤又は抗ウイルス剤、例えば、アミノグリコシド系抗抗生物質、抗真菌薬、カルバペネム系抗菌薬、ペニシリン系抗生物質、セファロスポリン系抗生物質、フルオロキノロン系抗菌薬、マクロライド系抗生物質、テトラサイクリン系抗生物質、抗ウイルス剤、等を挙げる
ことができる。
【００３５】
前記の予防又は治療用組成物は、前記のブロック共重合体と、適する場合には、抗菌剤又は病原体に対するワクチンを含んでなるが、両者を同時に、またはいずれかを前後して投与する態様で含むことができるので、合剤として含有することのみを意味するものでない。好ましくは、組成物では、ブロック共重合体は、感染の前又は感染の後であっても新たな感染が生じるか若しくは感染の領域が拡大する可能性としがある時点で投与できる態様で含有され、一方、抗菌剤は、ブロック共重合体の投与と同時に、又は投与前若しくは後に投与される態様で含有される。ブロック共重合体が投与された後、とくに多臓器障害が抑制され得る状態になった後、に抗菌剤が投与されるのが、抗菌剤の効能を向上せしめる上で、望ましい。抗菌剤の投与経路は非経口に限定されない。
【００３６】
上記式（Ｉ）で表されるブロック共重合体における各連結基が、結合する方向性によって基の実体が変化する場合は、記載されている方向性のまま結合することを意味する。
【００３７】
式（Ｉ）で表されるブロック共重合体において、Ｌ1について定義する二価の連結基は、ポリ（エチレングリコール）（以下、ＰＥＧと略記する場合あり。）セグメントと側鎖としての環状ニトロキシドラジカルが結合したセグメントの機能が本発明の目的に沿うものであれば、限定されるものでない。しかし、二価の連結基は、一般的には、最大３４個、好ましくは１８個、より好ましくは最大１０個の炭素、並びに任意に酸素及び窒素原子を含有する基を意味する。かような連結基として、具体的には下式で表される次の基を挙げることができる：
【００３８】
【化６】
2019001786.tif 000007
【００３９】
で表される基から選ばれるか、又は−（ＣＨ2）bＳ−、−ＣＯ（ＣＨ2）bＳ−、−（ＣＨ2）bＮＨ−、−（ＣＨ2）bＣＯ−、−ＣＯ−、−ＯＣＯＯ−、−ＣＯＮＨ−からなる群より選ばれ、各ｂは独立して、１〜５の整数である、で表される。
【００４０】
式（Ｉ）中のＬ1が、式
【００４１】
【化７】
2019001786.tif 000008
【００４２】
で表される連結基から選ばれる場合の、ブロック共重合体は、ＷＯ  ２０１６／０５２４
６３  Ａ１に記載されており、また、−（ＣＨ2）2−Ｏ−Ｌ1−部分は、結合、−（ＣＨ2）bＳ−、−ＣＯ（ＣＨ2）bＳ−、−（ＣＨ2）bＮＨ−、−（ＣＨ2）bＣＯ−、−ＣＯ−
、−ＯＣＯＯ−、−ＣＯＮＨ−からなる群より選ばれる連結基である場合のブロック共重合体は、特許文献１や特許文献２に記載されているか、記載されている方法により、入手できる。これら以外の二価の連結基も、前記文献に記載の方法を参考に、当該技術分野で周知の方法により入手できる。
【００４３】
これらのブロック共重合体は、両文献にそれぞれ記載されているように、生理食塩水やリン酸緩衝化生理食塩水や注射用水等を包含する水性媒体中で、ポリスチレンからなり、その疎水部側鎖にラジカル消去機能を有する環状ニトロキシドラジカルが共有結合したセグメントの疎水部をコアとし、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）セグメントの親水部をシェルとする、所謂、コア−シェル型高分子ミセルを形成することができる。かような高分子ミセルは、水性溶液中で動的光散乱光（ＤＬＳ）測定により、平均数ｎｍ〜数百ｎｍ、好ましくは、１０ｎｍ〜４００ｎｍ，より好ましくは、１５ｎｍ〜１００ｎｍを有する粒子として提供できる。このような粒子を本明細書ではＲＮＰ又はＲＮＰ−Ｏ若しくはＲＮＰ（Ｏ）と称することもある。このようなＲＮＰでは、本発明の作用を発揮するのに必須のレドックス機能を有する環状ニトロキシドラジカル部分（ｍｏｉｅｔｙ）が疎水性コア部に存在し、その周囲を水性環境下で高い可動性を示すことが知られているＰＥＧセグメントのシェルにより覆われていると推測されるにもかかわらず、感染症に起因して、多臓器障害の生じる局所で本発明所期の作用効果が発揮される。
【００４４】
本発明で使用するのに適するブロック共重合体は、式（Ｉ）のａは整数０である。ｎは５〜８０、好ましくは、５〜６０、より好ましくは５〜５０の整数である。ｍは１２〜５０００、好ましくは１５〜２０００、より好ましくは４０〜５００の整数である。ｎ個のＸの少なくとも５０％、好ましくは７０％，より好ましくは８０％、最も好ましくは１００％がＬ2−Ｒ1である。
【００４５】
前記ブロック共重合体は、そのまま、好ましくは、ＲＮＰの形態で、上記の投与経路に適する剤型として、患者に投与するのが好ましい。使用前には、単糖又は二糖類やポリビニルピロリドン、ポリエチレングリコール、等を含んでいてもよいＲＮＰの凍結乾燥調製物として提供することができる。ブロック共重合体又はＲＮＰの用量は、後述するモデル動物を用いたＴＢＡＲＳアッセイにより感染症による多臓器障害を抑制できる用量を確認した後、専門医等の判断に従い、決定することができる。一方、抗菌剤は、すでに処置することを目的とする感染症の処置に用いられたことのある用量を参考に、専門医等の判断に従い、決定することができる。
【実施例】
【００４６】
以下、具体例を以って本発明をより詳細に説明するが、これらに本発明の限定することを意味するものでない。
【００４７】
製造例１：ポリ（エチレングリコール）−ブロック−ポリ（クロロメチルスチレン）（ＰＥＧ−ｂ−ＰＣＭＳ）ジブロック共重合体の合成及びＴＥＭＰＯの導入
ＰＥＧ−ｂ−ＰＣＭＳは、次の合成スキーム１に従い合成した：
【００４８】
【化８】
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【００４９】
末端にヒドロキシ基を持つメトキシポリエチレングリコール（ＰＥＧ−ＯＨ）（Ｍｎ：５０００；３ｍｍｏｌ，１５ｇ）を１１０℃で１２時間真空引きすることによって脱水を行った。その後窒素雰囲気下にした後テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）を６０ｍＬを加えた。そこにｎ−ブチルリチウム（ＢｕＬｉ）（０．３８４ｇ，６ｍｍｏｌ）を加えた。更にα，α’−ジクロロパラキシレン（５．２５ｇ，３０ｍｍｏｌ）を加えることによりポリエチレングリコール−クロロパラキシレン（ＰＥＧ−Ｃｌ）を合成した。イソプロピルアルコールに対して沈殿させることで精製処理を行った（収量１３．７７ｇ、収率９１．８％）。二硫化炭素（０．９７４ｇ，１２．８ｍｍｏｌ）とベンゾマグネシウムブロマイド（末端に連鎖開始剤をもつポリエチレングリコール（ＰＥＧ−ＣＴＡ）を回収した（収量７．７６ｇ，収率９７％）。ＰＥＧ−ＣＴＡ（Ｍｎ：５０００；０．７ｍｍｏｌ，３．５ｇ）を反応容器に加えた。次に、反応容器中を真空にした後、窒素ガスを吹き込む操作を３回繰り返すことにより、反応容器内を窒素雰囲気にした。反応容器に１アゾビスイソブチロニトリル（ＡＩＢＮ）（１１４．９ｍｇ，０．７ｍｍｏｌ）とクロロメチルスチレン（２１ｍｍｏｌ，３ｍＬ）を加え、６０℃まで加熱し、２４時間攪拌した。反応混合物をポリクロロエチルスチレンホモポリマーに対しての良溶媒であるジエチルエーテルを用いて３回洗浄操作を行った後、ベンゼン凍結乾燥を行い、肌色の粉体を得た。これによりポリエチレングリコール−ポリクロロメチルスチレン（重合度ｍが約１８である）の合成が完了し、収量は、４．４５ｇだった（収率７２％）。目的のポリスチレンが得られたことは、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）カラムによる分離スペクトルとＮＭＲスペクトル等により、確認できる。
【００５０】
こうして得られた、ＰＥＧ−ｂ−ＰＣＭＳの１０ｇをジメチルフォルムアミド（ＤＭＦ）１５０ｍＬの溶解し、別に調製した４−ヒドロキシ−ＴＥＭＰＯ（２，２，６，６−テトラメチルピペリジン−１−オキシル）１９．７ｇのＬｉ化物を加え、２日間室温下で反応させた。反応混合液を５００ｍＬの冷２−プロパノールに沈殿させ、遠心分離（４℃、９０００ｒｐｍ、２分）後、減圧乾燥した。こうして、ＰＣＭＳ部の８０％がＴＥＭＰＯで置換された生成物（ＰＥＧ−ｂ−ＰＭＯＴ）が得られた。
【００５１】
製造例２：製造例１で得られたＰＥＧ−ｂ−ＰＭＯＴからレドックスナノ粒子ＲＮＰの調製
ガラス容器に上記の製造例１で合成したＴＥＭＰＯ導入物を３００ｍｇ取り、２ｍＬの
ＤＭＦに溶解させ、分画分子量３，０００のホローファイバー型透析モジュール（ｍＰＥＳ  Ｍｉｄｉｋｒｏｓ（登録商標）Ｍｏｄｕｌｅｓ  ３ｋＤ  ＩＣ０．５ｍｍ  Ｄ０６−Ｅ００３−０５−Ｎ）で    ２  Ｌの水に対して透析した。得られた粒子の光散乱スペクトルから、狭い分布範囲にあり、平均粒径が約２０ｎｍにあるＲＮＰ（ＲＮＰ−Ｏ又はＲＮＰ（Ｏ）とも記載する）が得られた。図１にＲＮＰ調製の概念図を示す。
【００５２】
試験例１：リステリア感染モデル動物における多臓器障害に対するＲＮＰの作用
Ｂａｌｂ／ｃ  マウス（７週齢、体重２０ｇ）にリステリア  モノサイトゲネス（Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｎｅｓ：ＡＴＣＣ  から入手。）（１０12ＣＦＵ／ｍＬ）を２００μＬ腹腔内投与し同時にＲＮＰを投与（２００  ｍｇ／ｋｇ）した。一日後に各種臓器を回収しＴＢＡＲＳアッセイ（東京化成工業より試薬を購入した）により臓器障害度を解析した。なお、本試験では、それぞれ、一群４匹の動物が使用された。肝臓、肺及び脾臓において観察される結果を、それぞれ、図２、図３及び図４に示す。これらから、それぞれ、肝臓、肺及び脾臓において、臓器損傷の機構として知られている脂質過酸化反応の過程で生じる主要なマーカーであるマロンジアルデヒド（ＭＤＡ）値が、ＲＮＰを投与した群では、有意に減少することわかる。このことは、本発明にしたがうブロック共重合体が、リステリア  モノサイトゲネスによる多臓器障害を効果的に抑制することを示す。
【００５３】
試験例２：リステリア感染マウスにおけるＲＮＰの生存率及び体重変化の改善効果
図５に示される手順（感染及び治療プログラム）によりリステリア感染マウスにＲＮＰを投与し生存率及び体重変化を解析した。比較対象として小分子の抗酸化剤であるヒドロキシ−ＴＥＭＰＯを投与し効果の比較を行った。各試験は、１群  ５匹について実施した。
【００５４】
１及び２：Ｂａｌｂ／ｃ  マウス（７週齢、体重２０ｇ）にリステリア  モノサイトゲネス（Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｎｅｓ（１０12ＣＦＵ／ｍＬ）の菌液（生理食塩水＋Ｌ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｎｅｓ）（２００μＬ）又は対照としての生理食塩水を投与した（ｄａｙ１）。
３：リステリア  モノサイトゲネス（Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｎｅｓ（１０12ＣＦＵ／ｍＬ）の菌液（２００μＬ）投与後一日後から五日間にわたりアモキシリン（Ａｍｏｘｉｃｉｌｌｉｎ）（ｉ．ｐ．１５ｍｇ／ｋｇ）を投与した。
４：ヒドロキシＴＥＭＰＯ  （ｉ．ｐ．６０ｍｇ／ｋｇ）を投与して一日後リステリア
モノサイトゲネス（Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｎｅｓ（１０12ＣＦＵ／ｍＬ）の菌液（２００μＬ）を投与し、その一日後から五日間にわたりＡｍｏｘｉｃｉｌｌｉｎ  （ｉ．ｐ．１５ｍｇ／ｋｇ）を投与した。
５：ＲＮＰ（Ｏ）（ｉ．ｐ．２００ｍｇ／ｋｇ）を投与して一日後リステリア  モノサイトゲネス（Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｎｅｓ（１０12ＣＦＵ／ｍＬ）の菌液（２００μＬ）を投与し、その一日後から五日間にわたりＡｍｏｘｉｃｉｌｌｉｎ  （ｉ．ｐ．１５ｍｇ／ｋｇ）を投与した。
【００５５】
これらの試験の結果を図６に示す。これらの図のデータから、小分子の抗酸化剤（ヒドロキシ−ＴＥＭＰＯ）では顕著な改善効果は見られなかった一方で、ＲＮＰ投与群においては生存率の有意な改善が確認された。さらに生存したマウス（５匹中４匹）は減少した体重が回復していることが確認された。これらの結果はリステリア感染初期段階においてＲＮＰを投与することにより、死に至る多臓器障害が抑制され、リステリア感染症が効果的に治療できることを示している。
【００５６】
試験例３：リステリア感染マウスにおけるＲＮＰ（感染後投与）の生存率の改善効果
図７に示される手順（感染及び治療プログラム）によりリステリア感染マウスにＲＮＰ
を投与し生存率及び体重変化を解析した。比較対象としてアモキシシリン（Ａｍｏｘｉｃｉｌｌｉｎ  ）のみを投与し効果の比較を行った。各試験は、１群  ５匹について実施した。
【００５７】
１及び２：Ｂａｌｂ／ｃ  マウス（７週齢、体重２０ｇ）にリステリア  モノサイトゲネス（Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｎｅｓ（１０12ＣＦＵ／ｍＬ）の菌液（生理食塩水＋Ｌ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｎｅｓ）（２００μＬ）又は対照としての生理食塩水を投与した（ｄａｙ０）。
３：リステリア  モノサイトゲネス（Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｎｅｓ（１０12ＣＦＵ／ｍＬ）の菌液（２００μＬ）投与後一日後から五日間にわたりアモキシシリン（Ａｍｏｘｉｃｉｌｌｉｎ）（ｉ．ｐ．１５ｍｇ／ｋｇ）を投与した。
４：リステリア  モノサイトゲネス（Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｎｅｓ（１０12ＣＦＵ／ｍＬ）の菌液（２００μＬ）投与日及び投与後一日後にＲＮＰ（Ｏ）（ｉ．ｐ．２００ｍｇ／ｋｇ）を投与し、更に投与後一日後から五日間にわたりアモキシリン（Ａｍｏｘｉｃｉｌｌｉｎ）（ｉ．ｐ．１５ｍｇ／ｋｇ）を投与した。
【００５８】
これらの試験の結果を図８に示す。これらの図のデータから、アモキシシリン（Ａｍｏｘｉｃｉｌｌｉｎ）では顕著な改善効果は見られなかった一方で、ＲＮＰ投与群においては生存率の有意な改善が確認された。これらの結果はリステリア感染後にＲＮＰを投与することにより、死に至る多臓器障害が抑制され、リステリア感染症が効果的に治療できることを示している。
【００５９】
試験例４：マラリア感染モデル動物におけるＲＮＰの作用
本試験で実施された感染及びその処置は、図９に示される手順にしたがった。簡潔には、雌Ｃ５７ＢＬ／６  マウス（８週齢、体重  約２０ｇ）に０．２ｍＬのマラリア原虫（強毒株Ｐｌａｓｍｏｄｉｉｕｍ  ｂｅｒｇｈｅｌ（Ｐｂ）：ＭＲ４から入手。）溶液（１０6  Ｐｂ  ＡＮＫＡ）を腹腔内投与した。原虫投与の１日後から，上記のごとく調製されたＲＮＰ（２００ｍｇ／ｋｇ）を腹腔内に毎日投与した。なお、本試験では、一群３匹の動物が使用された。
【００６０】
マラリア原虫感染後における、マラリア原虫の増殖及びモデル動物の生存について観察した結果を、それぞれ、図１０及び図１１にグラフ表示する。また、試験６日目のモデル動物について観察した結果を表す図に代わる写真を図１２に示す。マラリア原虫の増殖速度は、ＲＮＰ処置群と非処置群の間に有意差は見られないものの、ＲＮＰ処置群には延命効果が認められる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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